JP2017500035A - 遺伝子編集用のｃａｓ多様体 - Google Patents

遺伝子編集用のｃａｓ多様体 Download PDF

Info

Publication number
JP2017500035A
JP2017500035A JP2016539218A JP2016539218A JP2017500035A JP 2017500035 A JP2017500035 A JP 2017500035A JP 2016539218 A JP2016539218 A JP 2016539218A JP 2016539218 A JP2016539218 A JP 2016539218A JP 2017500035 A JP2017500035 A JP 2017500035A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cas9
deaminase
nucleic acid
protein
domain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2016539218A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2017500035A5 (ja
Inventor
リウ，デービッド，アール．
コモール，アレクシス，クリスティーン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harvard College
Original Assignee
Harvard College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harvard College filed Critical Harvard College
Publication of JP2017500035A publication Critical patent/JP2017500035A/ja
Publication of JP2017500035A5 publication Critical patent/JP2017500035A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/50—Hydrolases (3) acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5), e.g. asparaginase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6472—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/22—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
    • C12Y304/22062—Caspase-9 (3.4.22.62)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
    • C12Y305/04001—Cytosine deaminase (3.5.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
    • C12Y305/04004—Adenosine deaminase (3.5.4.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/04—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in cyclic amidines (3.5.4)
    • C12Y305/04005—Cytidine deaminase (3.5.4.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/22—Endodeoxyribonucleases producing 3'-phosphomonoesters (3.1.22)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

本開示のいくつかの態様は、細胞または対象のゲノム内の、例えばヒトゲノム内の単一部位の編集等の標的を定めた核酸編集に有用である戦略、システム、試薬、方法およびキットを提供する。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９と、核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメイン、例えばデアミナーゼドメインとの融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、標的を定めた核酸編集の方法が提供される。いくつかの実施形態では、標的を定めた核酸編集タンパク質、例えばＣａｓ９と核酸編集酵素または核酸編集ドメインとの融合タンパク質を生成するための試薬およびキットが提供される。

Description

関連出願
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で、２０１３年１２月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／９１５，３８６号明細書および２０１４年４月１６日に出願された米国仮特許出願第６１／９８０，３３３号明細書に対する優先権を主張し、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２０の下で、米国特許出願第１４／３２５，８１５号明細書、米国特許出願第１４／３２６，１０９号明細書、米国特許出願第１４／３２６，１４０号明細書、米国特許出願第１４／３２６，２６９号明細書、米国特許出願第１４／３２６，２９０号明細書、米国特許出願第１４／３２６，３１８号明細書および米国特許出願第１４／３２６，３０３号明細書（全て２０１４年７月８日に出願されている）に対する優先権も主張し、これらはそれぞれ参照により本明細書に援用される。
政府支援
本発明は、国防高等研究計画局（ＤＡＲＰＡ）により付与された助成金ＨＲ００１１−１１−２−０００３、国立衛生研究所（ＮＩＨ）により付与された助成金ＧＭ０９５５０１、ならびに宇宙および海軍戦闘システムセンター（Ｓｐａｃｅ ａｎｄ Ｎａｖａｌ Ｗａｒｆａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｅｎｔｅｒ）（ＳＰＡＷＡＲ）により付与された助成金Ｎ６６００１−１２−Ｃ−４２０７の下で米国政府の支援によってなされた。米国政府は本発明においてある程度の権利を有する。
核酸配列の標的を定めた編集、例えば特定の修飾のゲノムＤＮＡへの導入は、遺伝子機能の研究にとって非常に有望なアプローチであり、ヒト遺伝性疾患の新たな治療法を提供する可能性も有する１。理想的な核酸編集技法は下記の３つの特徴を有する：（１）所望の修飾の高効率の導入、（２）最小限のオフターゲット活性、および（３）所与の核酸における任意の部位、例えばヒトゲノム内の任意の部位を正確に編集するようにプログラムされる能力２。現在のゲノム操作ツールにより、例えば操作されたジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）３、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）４およびごく最近ではＲＮＡ誘導性ＤＮＡエンドヌクレアーゼＣａｓ９５により、ゲノム中で配列特異的なＤＮＡ切断がもたらされる。このプログラム可能な切断によって、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）により切断部位でＤＮＡの変異が生じ得るか、または相同組み換え修復（ｈｏｍｏｌｏｇｙ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｒｅｐａｉｒ）（ＨＤＲ）により切断部位の周囲のＤＮＡの置換が生じ得る６、７。
現在の技法の１つの欠点は、ＮＨＥＪおよびＨＤＲの両方が、中程度の遺伝子編集効率と、所望の改変と競合する可能性がある望ましくない遺伝子改変とが概してもたらされる確率的プロセスであるということである８。原理上、ゲノム中の特定の位置で特定のヌクレオチド変化（例えば、疾患関連遺伝子の特定のコドンにおけるＣからＴへの変化）を生じさせることにより、多くの遺伝性疾患を処置し得ることから９、そのような正確な遺伝子編集を達成するようにプログラム可能な方法の開発により、遺伝子編集をベースとするヒト治療法に対する強力な新規の調査ツールおよび潜在的な新規のアプローチの両方が示されるであろう。
クラスター化され、規則的に間隔が開いた短パリンドローム反復（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔ）（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、様々な生物および細胞株において頑強で一般的なゲノム操作を可能にするように修飾されている１１最近発見された原核生物の適応免疫システムである１０。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連）システムはタンパク質−ＲＮＡ複合体であり、この複合体は、この複合体を塩基対合により標的ＤＮＡ配列に局在化させるためのガイドとしてＲＮＡ分子（ｓｇＲＮＡ）を使用する１２。天然のシステムでは、Ｃａｓタンパク質は次いで、標的としたＤＮＡ配列を切断すべくエンドヌクレアーゼとして作用する１３。標的ＤＮＡ配列はｓｇＲＮＡに対して相補的でなければならず、また、このシステムを機能させるために相補領域の３’末端で「プロトスペーサー隣接モチーフ（ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ−ａｄｊａｃｅｎｔ ｍｏｔｉｆ）」（ＰＡＭ）ジヌクレオチドを含まなければならない（図１）１４。既知のＣａｓタンパク質の中でも、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のＣａｓ９がゲノム操作用のツールとしてほぼ広範に使用されている１５。このＣａｓ９タンパク質は、２種の異なるヌクレアーゼドメインを含む大きくてマルチドメインのタンパク質である。点変異をＣａｓ９に導入してヌクレアーゼ活性を失活させることができ、その結果、ｓｇＲＮＡプログラム方式でＤＮＡに結合する能力を依然として保持する失活型Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）が生じる１６。原理上、別のタンパク質またはドメインに融合した場合、ｄＣａｓ９は、このタンパク質の標的を、適切なｓｇＲＮＡとの同時発現によってのみ、実質的にはあらゆるＤＮＡ配列に定めることができる。
ゲノム操作目的でのｄＣａｓ９複合体の潜在力は非常に大きい。理論上、ｓｇＲＮＡによりプログラムされるゲノム中の特定の部位にタンパク質を導く独特の能力を、ヌクレアーゼを超えた様々な部位特異的ゲノム編集ツール、例えば転写活性化因子、転写抑制因子、ヒストン修飾タンパク質、インテグラーゼおよびリコンビナーゼへと発展させることができる１１。これらの潜在的用途のうちのいくつかは、ＲＮＡ誘導性の転写活性化因子１７、１８、転写抑制因子１６、１９、２０およびクロマチン修飾酵素２１を供給するために、転写活性化因子を有するｄＣａｓ９融合体により最近実施されている。この融合体と様々なｓｇＲＮＡとの単純な同時発現により、標的遺伝子の特定の発現が生じる。この将来性のある研究は、ゲノムの正確な操作のための容易にプログラム可能な配列特異的エフェクタの設計および構築のために道を開いている。
重要なことに、ヒト疾患の原因となるタンパク質変異の８０〜９０％が、１個のみのヌクレオチドの置換、欠失または挿入により起こる６。しかしながら、一般的で直接的な方法で１個のヌクレオチドの操作を可能にするゲノム操作ツールは依然として開発されていない。一塩基遺伝子修正のための最近の戦略として、操作されたヌクレアーゼ（二本鎖切断（ＤＳＢ）の構築、続いて確率的で非効率的な相同組み換え修復（ＨＤＲ）に依存する）およびＤＮＡ−ＲＮＡキメラオリゴヌクレオチドが挙げられる２２。後者の戦略は、編集するヌクレオチドを除くゲノムＤＮＡ中の特定の配列と塩基対を作るＲＮＡ／ＤＮＡ配列の設計を含む。結果として生じるミスマッチは、細胞の内因性修復システムにより認識されて修復され、キメラまたはゲノムのいずれかの配列中に変化を引き起こす。これらの戦略は両方とも、低い遺伝子編集効率および望ましくない遺伝子改変に悩まされる。なぜならば、これらの戦略は、ＨＤＲの偶然性およびＨＤＲと非相同末端結合（ＮＨＥＪ）との間の競合の両方を受けることになるからである２３〜２５。ＨＤＲ効率は、ゲノム内の標的遺伝子の位置２６、細胞周期の状態２７および細胞／組織の種類２８に従って変化する。従って、酵素のような効率でおよび偶然性ではないゲノムＤＮＡ中の正確な位置での特定のタイプの塩基修飾の導入のための直接的でプログラム可能な方法の開発により、遺伝子編集をベースとする調査ツールおよびヒト治療法に対する強力な新規のアプローチが示されるであろう。
本開示のいくつかの態様は、対象のゲノム内の、例えばヒトゲノム内の単一部位の編集等の標的を定めた核酸編集に有用である戦略、システム、試薬、方法およびキットを提供する。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９と、核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメイン、例えばデアミナーゼドメインとの融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、標的を定めた核酸編集の方法が提供される。いくつかの実施形態では、標的を定めた核酸編集タンパク質、例えばＣａｓ９と核酸編集酵素または核酸編集ドメインとの融合タンパク質を生成するための試薬およびキットが提供される。
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）ヌクレアーゼ不活性型ＣＡＳ９ドメインと、（ｉｉ）核酸編集ドメインとを含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、この核酸編集ドメインはＤＮＡ編集ドメインである。いくつかの実施形態では、この核酸編集ドメインはデアミナーゼドメインである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはシチジンデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはアポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集複合体（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリのデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＰＯＢＥＣ１ファミリのデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼは活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）である。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＣＦ１／ＡＳＥデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはアデノシンデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＤＡＴファミリのデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、この核酸編集ドメインはＣＡＳ９ドメインのＮ末端に融合している。いくつかの実施形態では、この核酸編集ドメインはＣＡＳ９ドメインのＣ末端に融合している。いくつかの実施形態では、このＣＡＳ９ドメインおよびこの核酸編集ドメインはリンカーを介して融合している。いくつかの実施形態では、このリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）（例えばＧｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２を参照されたい。内容全体が参照により本明細書に援用される）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎは独立して１〜３０の整数である。
本開示のいくつかの態様は、ＤＮＡ編集の方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、ＤＮＡ分子と、（ａ）ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインおよびデアミナーゼドメインを含む融合タンパク質、および（ｂ）（ａ）の融合タンパク質の標的をＤＮＡ鎖の標的ヌクレオチド配列に定めるｓｇＲＮＡとを接触させることを含み、ＤＮＡ分子が、ヌクレオチド塩基の脱アミノ化に有効な量で、およびこの脱アミノ化に適した条件下で融合タンパク質およびｓｇＲＮＡと接触させられる。いくつかの実施形態では、この標的ＤＮＡ配列は疾患または障害に関連する配列を含み、ヌクレオチド塩基の脱アミノ化により、疾患または障害に関連しない配列が生じる。いくつかの実施形態では、このＤＮＡ配列は、疾患または障害に関連するＴ＞ＣまたはＡ＞Ｇ点変異を含み、変異ＣまたはＧ塩基の脱アミノ化により、疾患または障害に関連しない配列が生じる。いくつかの実施形態では、この脱アミノ化により、疾患または障害に関連する配列における点変異が修正される。いくつかの実施形態では、疾患または障害に関連する配列はタンパク質をコードし、脱アミノ化により、疾患または障害に関連する配列に終止コドンが導入され、その結果、コードされたタンパク質が短縮される。いくつかの実施形態では、脱アミノ化によりＰＩ３ＫＣＡ遺伝子における点変異が修正され、そのためＨ１０４７Ｒ変異および／またはＡ３１４０Ｇ変異が修正される。いくつかの実施形態では、接触させることが、疾患もしくは障害を有しやすいか、疾患もしくは障害を有するか、または疾患もしくは障害と診断されている対象においてインビボで実施される。いくつかの実施形態では、この疾患または障害は、ゲノム中における点変異または単一塩基変異に関連する疾患である。いくつかの実施形態では、この疾患は、遺伝性疾患、がん、代謝性疾患またはリソソーム蓄積症である。
本開示のいくつかの態様は、Ｃａｓ９：ＤＮＡ編集ドメイン融合タンパク質の核酸編集活性を検出するためのレポーター構築物を提供する。いくつかの実施形態では、この構築物は、（ａ）Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質用の標的部位を含むレポーター遺伝子であって、標的を定めたＤＮＡ編集によりレポーター遺伝子の発現が増加する、レポーター遺伝子と、（ｂ）レポーター遺伝子の発現を制御するプロモーター配列とを含む。いくつかの実施形態では、この構築物は、（ｃ）Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質の標的をレポーター遺伝子の標的部位に定めるｓｇＲＮＡをコードする配列であって、ｓｇＲＮＡの発現がレポーター遺伝子の発現から独立している、配列を更に含む。いくつかの実施形態では、レポーター遺伝子の標的部位は未成熟終止コドンを含み、Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質による鋳型鎖の標的を定めたＤＮＡ編集により、未成熟終止コドンがアミノ酸残基をコードするコドンに変換される。いくつかの実施形態では、このレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質または抗生物質耐性マーカーをコードする。
本開示のいくつかの態様は、ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９配列をコードする配列、このＣａｓ９をコードする配列と核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインをコードする配列とのインフレームでのクローニングを可能にするように位置するクローニング部位を含む配列、および任意選択的に、Ｃａｓ９をコードする配列とクローニング部位との間に位置するリンカーをコードする配列を含む核酸構築物を含む、キットを提供する。加えて、いくつかの実施形態では、このキットは、Ｃａｓ９核酸編集融合タンパク質を生成するための、核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインをコードする配列の核酸構築物中へのインフレームでのクローニングに好適な試薬、緩衝液および／または使用説明書を含む。いくつかの実施形態では、このクローニング部位を含む配列はＣａｓ９配列のＮ末端である。いくつかの実施形態では、このクローニング部位を含む配列はＣａｓ９配列のＣ末端である。いくつかの実施形態では、コードされたリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）（例えばＧｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２を参照されたい。内容全体が参照により本明細書に援用される）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎは独立して１〜３０の整数である。
本開示のいくつかの態様は、ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインと核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインとを含む融合タンパク質、および任意選択的な、Ｃａｓ９ドメインと核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインとの間に位置するリンカーを含むキットを提供する。加えて、いくつかの実施形態では、このキットは、例えばインビトロでのまたはインビボでのＤＮＡまたはＲＮＡの編集に好適な試薬、緩衝液、および／または融合タンパク質の使用説明書を含む。いくつかの実施形態では、このキットは、核酸配列の標的を定めた編集に好適なｓｇＲＮＡの設計および使用に関する使用説明書を含む。
上記概要は、本明細書に開示する技法の実施形態、利点、特徴および使用のうちのいくつかを非限定的な方法で説明するように意図されている。本明細書に開示する技法のその他の実施形態、利点、特徴および使用は、詳細な説明、図面、実施例および特許請求の範囲から明らかであるであろう。
Ｃａｓ９／ｓｇＲＮＡ−ＤＮＡ複合体である。ｓｇＲＮＡの３’末端はＣａｓ９ヌクレアーゼとリボ核タンパク質複合体を形成し、ｓｇＲＮＡの２０ｎｔの５’末端は、ＤＮＡにおけるこの５’末端の相補ストレッチを認識する。ＤＮＡ結合には、標的ＤＮＡに対して３−ｎｔのＰＡＭ配列５’が必要である。ｗｔＣａｓ９の場合には、ＰＡＭから３ｎｔで二本鎖ＤＮＡ切断が起きて平滑末端が生成される（矢印で示す）。このバブルの大きさは未知であることに留意すべきである。 ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ（ＰＤＢ ＩＤ ３Ｅ１Ｕ）の触媒ドメインの結晶構造である。全ファミリにわたり保存されると考えられるコアの二次構造は、６つのαヘリクスが隣接する５本鎖のβシート（矢印）からなる。活性中心ループ（活性部位ループ）が脱アミノ化の特異性の決定に関与すると考えられる。触媒活性に関与するＺｎ２＋を球形で示す。配列は完全に配列番号９７〜９８に対応する。 ルシフェラーゼをベースとするレポーターアッセイの設計である。変異した開始コドンを標的とするために、ルシフェラーゼ遺伝子の前の領域およびこの遺伝子を含む領域に対応する多くの配列を標的とするようにｓｇＲＮＡが変更される（Ｃ末端に下線を引いている）。開始コドンとルシフェラーゼ遺伝子との間に「バッファー」領域を追加してＡのみのコドンおよびＴのみのコドン（（ＺＺＺ）Ｘとして示す）を含ませる。シャイン・ダルガノ配列を示す。いくつかの実施形態では、オフターゲット効果を防ぐために全てのＣの塩基対を維持することが好ましい。 デアミナーゼアッセイである。配列は完全に配列番号９９〜１０５に対応する。 Ｃａｓ９−ＡＰＯＢＥＣ１融合タンパク質で編集したｓｓＤＮＡのＳＤＳ ＰＡＧＥゲルである。
定義
本明細書および特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別途明確に示さない限り単数への言及および複数への言及を含む。そのため、例えば「薬剤」への言及は、単一の薬剤および複数のそのような薬剤を含む。
用語「Ｃａｓ９」または「Ｃａｓ９ヌクレアーゼ」は、Ｃａｓ９タンパク質またはこの断片（例えば、Ｃａｓ９の活性ＤＮＡ切断ドメインもしくは不活性ＤＮＡ切断ドメインおよび／またはＣａｓ９のｇＲＮＡ結合ドメインを含むタンパク質）を含むＲＮＡ誘導性ヌクレアーゼを意味する。Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ｃａｓｎ１ヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ（クラスター化され、規則的に間隔が開いた短パリンドローム反復）関連ヌクレアーゼと称されるときもある。ＣＲＩＳＰＲは、可動遺伝因子（ウイルス、転位因子および接合性プラスミド）に対する防御を提供する適応免疫システムである。ＣＲＩＳＰＲクラスターは、スペーサー、先行する可動因子に相補的な配列、および核酸に侵入する標的を含む。ＣＲＩＳＰＲクラスターは転写されてプロセシングされ、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）になる。ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムでは、プレｃｒＲＮＡの正確なプロセシングには、トランスにコードされた低分子ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、内因性リボヌクレアーゼ３（ｒｎｃ）およびＣａｓ９タンパク質が必要である。ｔｒａｃｒＲＮＡは、プレｃｒＲＮＡのリボヌクレアーゼ３によるプロセシングのガイドとして機能する。その後、Ｃａｓ９／ｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒＲＮＡは、スペーサーに相補的な直鎖のまたは環状のｄｓＤＮＡ標的をエンドヌクレアーゼ的に切断する。ｃｒＲＮＡに相補的でない標的鎖が最初にエンドヌクレアーゼ的に切断され、次いで３’−５’エクソヌクレアーゼ的に整えられる。天然では、ＤＮＡの結合および切断は、タンパク質および両方のＲＮＡを概して必要とする。しかしながら、単一のガイドＲＮＡ（「ｓｇＲＮＡ」または単に「ｇＲＮＡ」）を、ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡの両方の態様を単一のＲＮＡ種に組み込むように操作し得る。例えばＪｉｎｅｋ Ｍ．，Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．，Ｆｏｎｆａｒａ Ｉ．，Ｈａｕｅｒ Ｍ．，Ｄｏｕｄｎａ Ｊ．Ａ．，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６−８２１（２０１２）を参照されたい。この内容全体を参照により援用する。Ｃａｓ９は、ＣＲＩＳＰＲ反復配列中の短いモチーフ（ＰＡＭまたはプロトスペーサー隣接モチーフ）を認識し、自己と非自己との区別に役立つ。Ｃａｓ９ヌクレアーゼの配列および構造は当業者に公知である（例えば“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ Ｍ１ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ．”Ｆｅｒｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｊ．，ＭｃＳｈａｎ Ｗ．Ｍ．，Ａｊｄｉｃ Ｄ．Ｊ．，Ｓａｖｉｃ Ｄ．Ｊ．，Ｓａｖｉｃ Ｇ．，Ｌｙｏｎ Ｋ．，Ｐｒｉｍｅａｕｘ Ｃ．，Ｓｅｚａｔｅ Ｓ．，Ｓｕｖｏｒｏｖ Ａ．Ｎ．，Ｋｅｎｔｏｎ Ｓ．，Ｌａｉ Ｈ．Ｓ．，Ｌｉｎ Ｓ．Ｐ．，Ｑｉａｎ Ｙ．，Ｊｉａ Ｈ．Ｇ．，Ｎａｊａｒ Ｆ．Ｚ．，Ｒｅｎ Ｑ．，Ｚｈｕ Ｈ．，Ｓｏｎｇ Ｌ．，Ｗｈｉｔｅ Ｊ．，Ｙｕａｎ Ｘ．，Ｃｌｉｆｔｏｎ Ｓ．Ｗ．，Ｒｏｅ Ｂ．Ａ．，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ Ｒ．Ｅ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８：４６５８−４６６３（２００１）、“ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓ−ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｆａｃｔｏｒ ＲＮａｓｅ ＩＩＩ．”Ｄｅｌｔｃｈｅｖａ Ｅ．，Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．，Ｓｈａｒｍａ Ｃ．Ｍ．，Ｇｏｎｚａｌｅｓ Ｋ．，Ｃｈａｏ Ｙ．，Ｐｉｒｚａｄａ Ｚ．Ａ．，Ｅｃｋｅｒｔ Ｍ．Ｒ．，Ｖｏｇｅｌ Ｊ．，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．，Ｎａｔｕｒｅ ４７１：６０２−６０７（２０１１）および“Ａ ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｄｕａｌ−ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ＤＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．”Ｊｉｎｅｋ Ｍ．，Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．，Ｆｏｎｆａｒａ Ｉ．，Ｈａｕｅｒ Ｍ．，Ｄｏｕｄｎａ Ｊ．Ａ．，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６−８２１（２０１２）を参照されたい。これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される）。Ｃａｓ９の相同分子種が様々な種で説明されており、この種としてＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）およびＳ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。追加の好適なＣａｓ９のヌクレアーゼおよび配列が、本開示をベースとして当業者に明らかであるであろう。そのようなＣａｓ９のヌクレアーゼおよび配列として、Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ，Ｒｈｕｎ，ａｎｄ Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ，“Ｔｈｅ ｔｒａｃｒＲＮＡ ａｎｄ Ｃａｓ９ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ＩＩ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｓｙｓｔｅｍｓ”（２０１３）ＲＮＡ Ｂｉｏｌｏｇｙ １０：５，７２６−７３７（この内容全体が参照により本明細書に援用される）に開示されている生物および座位からのＣａｓ９配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、不活性（例えば不活性化）ＤＮＡ切断ドメインを有する。
ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９タンパク質を、（ヌクレアーゼ「失活」Ｃａｓ９の場合に）「ｄＣａｓ９」タンパク質と互換的に称することもできる。不活性ＤＮＡ切断ドメインを有するＣａｓ９タンパク質（またはこの断片を）を生成する方法は既知である（例えば、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３７：８１６−８２１（２０１２）、Ｑｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ ａｓ ａｎ ＲＮＡ−Ｇｕｉｄｅｄ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”（２０１３）Ｃｅｌｌ．２８；１５２（５）：１１７３−８３を参照されたい。これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される）。例えば、Ｃａｓ９のＤＮＡ切断ドメインは、２個のサブドメイン、即ちＨＮＨヌクレアーゼサブドメインおよびＲｕｖＣ１サブドメインを含むことが知られている。ＨＮＨサブドメインはｇＲＮＡに相補的な鎖を切断し、ＲｕｖＣ１サブドメイは非相補鎖を切断する。これらのサブドメイン内の変異により、Ｃａｓ９のヌクレアーゼ活性を沈黙させることができる。例えば、変異Ｄ１０Ａおよび変異Ｈ８４１Ａは、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のＣａｓ９のヌクレアーゼ活性を完全に不活性化する（Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３７：８１６−８２１（２０１２）、Ｑｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．２８；１５２（５）：１１７３−８３（２０１３）。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９の断片を含むタンパク質が提供される。例えば、いくつかの実施形態では、タンパク質は、下記の２種のＣａｓ９ドメインのうちの一方を含む：（１）Ｃａｓ９のｇＲＮＡ結合ドメインまたは（２）Ｃａｓ９のＤＮＡ切断ドメイン。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９またはこの断片を含むタンパク質は「Ｃａｓ９多様体」と称される。Ｃａｓ９多様体は、Ｃａｓ９またはこの断片と相同性を共有する。例えば、Ｃａｓ９多様体は、野生型Ｃａｓ９と少なくとも約７０％同一であるか、少なくとも約８０％同一であるか、少なくとも約９０％同一であるか、少なくとも約９５％同一であるか、少なくとも約９６％同一であるか、少なくとも約９７％同一であるか、少なくとも約９８％同一であるか、少なくとも約９９％同一であるか、少なくとも約９９．５％同一であるか、または少なくとも約９９．９％ある。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９多様体は、野生型Ｃａｓ９の対応する断片と少なくとも約７０％同一であるか、少なくとも約８０％同一であるか、少なくとも約９０％同一であるか、少なくとも約９５％同一であるか、少なくとも約９６％同一であるか、少なくとも約９７％同一であるか、少なくとも約９８％同一であるか、少なくとも約９９％同一であるか、少なくとも約９９．５％同一であるか、または少なくとも約９９．９％であるようなＣａｓ９の断片（例えばｇＲＮＡ結合ドメインまたはＤＮＡ切断ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、野生型Ｃａｓ９は、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のＣａｓ９（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＣ＿０１７０５３．１、配列番号１（ヌクレオチド）；配列番号２（アミノ酸））に対応する。
（一重下線：ＨＮＨドメイン、二重下線：ＲｕｖＣドメイン）
いくつかの実施形態では、野生型Ｃａｓ９は、配列番号３（ヌクレオチド）および／または配列番号４（アミノ酸）に対応するか、またはそれを含む。
（一重下線：ＨＮＨドメイン、二重下線：ＲｕｖＣドメイン）
いくつかの実施形態では、ｄＣａｓ９は、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ活性を不活性化する１種または複数種の変異を有するＣａｓ９アミノ酸配列の一部または全体に対応するか、またはこのアミノ酸配列の一部または全体を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ｄＣａｓ９ドメインはＤ１０Ａ変異および／またはＨ８２０Ａ変異を含む。
ｄＣａｓ９（Ｄ１０ＡおよびＨ８４０Ａ）：
（一重下線：ＨＮＨドメイン、二重下線：ＲｕｖＣドメイン）
その他の実施形態では、Ｄ１０ＡおよびＨ８２０Ａ以外の変異を有するｄＣａｓ９多様体が提供され、このｄＣａｓ９多様体によりヌクレアーゼが不活性化されたＣａｓ９（ｄＣａｓ９）が生じる。そのような変異として、例えば、Ｄ１０およびＨ８２０でのその他のアミノ酸置換、またはＣａｓ９のヌクレアーゼドメイン内のその他の置換（例えば、ＨＮＨヌクレアーゼサブドメインおよび／もしくはＲｕｖＣ１サブドメイン中での置換）が挙げられる。いくつかの実施形態では、配列番号３４と少なくとも約７０％同一であるか、少なくとも約８０％同一であるか、少なくとも約９０％同一であるか、少なくとも約９５％同一であるか、少なくとも９８％同一であるか、少なくとも約９９％同一であるか、少なくとも約９９．５％同一であるか、または少なくとも約９９．９％であるｄＣａｓ９の多様体または相同体（例えば配列番号３４の多様体）が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号３４と比べて約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約７５個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸またはより多くのアミノ酸だけ短いまたは長いアミノ酸配列を有するｄＣａｓ９の多様体（例えば配列番号３４の多様体）が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載したＣａｓ９融合タンパク質は、Ｃａｓ９タンパク質の完全長アミノ酸、例えば上記に記載した配列のうちの１つを含む。しかしながら、その他の実施形態では、本明細書に記載した融合タンパク質は完全長Ｃａｓ９配列を含まず、この断片のみを含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載したＣａｓ９融合タンパク質は、Ｃａｓ９断片であって、ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡまたはｓｇＲＮＡに結合するが、例えばヌクレアーゼドメインの短縮バージョンのみを含むまたはヌクレアーゼドメインを全く含まないという点で機能的ヌクレアーゼドメインを含まないＣａｓ９断片を含む。好適なＣａｓ９ドメインおよびＣａｓ９断片の例示的なアミノ酸配列を本明細書に記載しており、Ｃａｓ９のドメインおよび断片の追加の好適な配列が当業者に明らかであるであろう。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９は、コリネバクテリウム・ウルセランス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０１５６８３．１、ＮＣ＿０１７３１７．１）、コリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０１６７８２．１、ＮＣ＿０１６７８６．１）、スピロプラズマ・シルフィディコーラ（Ｓｐｉｒｏｐｌａｓｍａ ｓｙｒｐｈｉｄｉｃｏｌａ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０２１２８４．１）、プレボテラ・インテルメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０１７８６１．１）、スピロプラズマ・タイワネンス（Ｓｐｉｒｏｐｌａｓｍａ ｔａｉｗａｎｅｎｓｅ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０２１８４６．１）、ストレプトコッカス・イニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｉａｅ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０２１３１４．１）、ベルリエラ・バルティカ（Ｂｅｌｌｉｅｌｌａ ｂａｌｔｉｃａ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０１８０１０．１）、シクロフレキサス・トルキスＩ（Ｐｓｙｃｈｒｏｆｌｅｘｕｓ ｔｏｒｑｕｉｓＩ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＣ＿０１８７２１．１）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＹＰ＿８２０８３２．１）、リステリア・イノキュア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｉｎｎｏｃｕａ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿４７２０７３．１）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＹＰ＿００２３４４９００．１）またはネイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（ＮＣＢＩ参照番号：ＹＰ＿００２３４２１００．１）に由来するＣａｓ９を意味する。
用語「デアミナーゼ」は、脱アミノ化反応を触媒する酵素を意味する。いくつかの実施形態では、デアミナーゼはシチジンデアミナーゼであり、シチジンまたはデオキシシチジンのウラシルまたはデオキシウラシルそれぞれへの加水分解性脱アミノ化を触媒する。
用語「有効量」は本明細書で使用する場合、所望の生物学的反応を誘発するのに十分である生物学的活性な薬剤の量を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼの有効量は、特異的に結合してヌクレアーゼにより切断される標的部位の切断を誘発するのに十分であるヌクレアーゼの量を意味し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した融合タンパク質の有効量、例えばヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインと核酸編集ドメイン（例えばデアミナーゼドメイン）とを含む融合タンパク質の有効量は、特異的に結合して融合タンパク質により編集される標的部位の編集を誘発するのに十分である融合タンパク質の量を意味し得る。当業者に正しく認識され得るように、ある薬剤の有効量、例えば融合タンパク質、ヌクレアーゼ、デアミナーゼ、リコンビナーゼ、ハイブリッドタンパク質、タンパク質二量体、タンパク質（もしくはタンパク質二量体）とポリヌクレオチドとの複合体またはポリヌクレオチドの有効量は、様々な要因に応じて変動することができ、例えば所望の生物学的反応に応じて、例えば編集される具体的なアレル、ゲノムまたは標的部位に応じて、標的とされる細胞または組織に応じて、および使用される薬剤に応じて変動し得る。
用語「リンカー」は本明細書で使用する場合、２種の分子または部分、例えば融合タンパク質の２種のドメイン、例えばヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインおよび核酸編集ドメイン（例えばデアミナーゼドメイン）等を連結する化学基または分子を意味する。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼドメイン等のＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼのｇＲＮＡ結合ドメインと核酸編集タンパク質の触媒ドメインとを連結する。いくつかの実施形態では、リンカーはｄＣａｓ９と核酸編集タンパク質とを連結する。典型的には、リンカーは、２種の基、分子、またはその他の部分の間に位置しており、またはこれらに隣接しており、共有結合によりそれぞれに連結されており、そのため、これら２種を連結する。いくつかの実施形態では、リンカーは１個のアミノ酸または複数個のアミノ酸（例えばペプチドまたはタンパク質）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、有機分子、基、ポリマーまたは化学部分である。いくつかの実施形態では、リンカーは５〜１００個のアミノ酸長であり、例えば５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３０〜３５個、３５〜４０個、４０〜４５個、４５〜５０個、５０〜６０個、６０〜７０個、７０〜８０個、８０〜９０個、９０〜１００個、１００〜１５０個または１５０〜２００個のアミノ酸長である。より長いまたはより短いリンカーも考慮される。
用語「変異」は本明細書で使用する場合、配列内での、例えば核酸配列内でのもしくはアミノ酸配列内での残基の別の残基への置換、または配列内での１個もしくは複数個の残基の欠失もしくは挿入を意味する。本明細書では概して、元々の残基を特定し、続いて配列内の残基の位置を特定し、続いて新たに置換した残基の素性を特定することにより変異を記載する。本明細書に記載したアミノ酸置換（変異）を生じさせる様々な方法が当技術分野で公知であり、例えばＧｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（４ｔｈｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２０１２））により提供される。
用語「核酸」および「核酸分子」は本明細書で使用する場合、核酸塩基と、酸性部分、例えばヌクレオシド、ヌクレオチド、またはヌクレオチドのポリマーとを含む化合物を意味する。典型的には、ポリマー核酸、例えば３個以上のヌクレオチドを含む核酸分子は直鎖分子であり、この直鎖分子では、隣接するヌクレオチドがホスホジエステル連結により互いに連結されている。いくつかの実施形態では、「核酸」は個々の核酸残基（例えばヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を意味する。いくつかの実施形態では、「核酸」は、３個以上の個々のヌクレオチド残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を意味する。本明細書で使用する場合、「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」を、ヌクレオチドのポリマー（例えば少なくとも３個のヌクレオチドのひも）を意味するように互換的に使用し得る。いくつかの実施形態では、「核酸」はＲＮＡならびに一本鎖ＤＮＡおよび／または二本鎖ＤＮＡを包含する。核酸は天然に存在することができ、例えばゲノム、転写産物、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、プラスミド、コスミド、染色体、染色分体またはその他の天然に存在する核酸分子と関連して天然に存在し得る。一方、核酸分子は天然には存在しない分子であることができ、例えば組み換えＤＮＡまたは組み換えＲＮＡ、人工染色体、操作されたゲノムもしくはこの断片、もしくは合成ＤＮＡ、合成ＲＮＡ、合成ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドであることができる、または天然には存在しないヌクレオチドもしくはヌクレオシドを含むことができる。更に、用語「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」および／または類似の用語は、核酸類似体、例えばリン酸ジエステル骨格以外を有する類似体を含む。核酸を、例えば天然源から精製し得、組み換え発現系を使用して産生して任意選択的に精製し得、化学的に合成し得る。例えば化学的に合成される分子の場合では、必要に応じて、核酸は、化学的に修飾された塩基または糖および骨格修飾を有する類似体等のヌクレオシド類似体を含むことができる。別途示さない限り、核酸配列を５’から３’への方向で表す。いくつかの実施形態では、核酸は、天然ヌクレオシド（例えばアデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）、ヌクレオシド類似体（例えば２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニンおよび２−チオシチジン）、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えばメチル化塩基）、インターカレートされた塩基（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ ｂａｓｅ）、修飾された糖（例えば２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース）ならびに／もしくは修飾されたホスフェート基（例えばホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホラミダイト連結）であるか、またはそれを含む。
用語「増殖性疾患」は本明細書で使用する場合、細胞または細胞集団が増殖速度の異常な上昇を示すという点で細胞または組織の恒常性が妨げられているあらゆる疾患を意味する。増殖性疾患として、過増殖性疾患、例えば前腫瘍性の過形成状態および腫瘍性疾患が挙げられる。腫瘍性疾患は細胞の異常増殖を特徴とし、この腫瘍性疾患として良性の腫瘍および悪性の腫瘍の両方が挙げられる。悪性腫瘍はがんとも称される。
用語「タンパク質」、「ペプチド」および「ポリペプチド」を本明細書では互換的に使用し、これらは、ペプチド（アミド）結合により互いに連結されたアミノ酸残基のポリマーを意味する。この用語は、あらゆるサイズの、構造のまたは機能のタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドを意味する。典型的には、タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドは、少なくとも３個のアミノ酸長である。タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドは、個々のタンパク質または一群のタンパク質を意味し得る。タンパク質中の、ペプチド中のまたはポリペプチド中のアミノ酸のうちの１個または複数個を、例えば化学物質、例えば炭水化物基、水酸基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、接合用の、機能化用のまたはその他の修飾用のリンカー等の付加により修飾し得る。タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドはまた、単一種の分子であることもできる、または複数種の分子の複合体であることもできる。タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドは、天然に存在するタンパク質またはペプチドの単なる断片であることができる。タンパク質、ペプチドまたはポリペプチドは、天然に存在し得るか、組み換えであり得るか、もしくは合成であり得るか、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。用語「融合タンパク質」は本明細書で使用する場合、少なくとも２種の異なるタンパク質に由来するタンパク質ドメインを含むハイブリッドポリペプチドを意味する。一方のタンパク質は、融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）部分またはカルボキシ末端（Ｃ末端）タンパク質に位置することができ、そのため「アミノ末端融合タンパク質」または「カルボキシ末端融合タンパク質」をそれぞれ形成する。タンパク質は様々なドメインを含むことができ、例えば核酸結合ドメイン（例えば、タンパク質の標的部位への結合を誘導するＣａｓ９のｇＲＮＡ結合ドメイン）および核酸切断ドメインまたは核酸編集タンパク質の触媒ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、タンパク様部分、例えば核酸結合ドメインを構成するアミノ酸配列と、有機化合物、例えば核酸切断剤として作用し得る化合物とを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、核酸、例えばＲＮＡとの複合体中に存在する、またはこの核酸と関連している。本明細書に記載したタンパク質のうちのいずれかを、当技術分野で既知の任意の方法により製造し得る。例えば、本明細書に記載したタンパク質を組み換えタンパク質発現および精製により製造することができ、この組み換えタンパク質発現および精製は、ペプチドリンカーを含む融合タンパク質に特に適している。組み換えタンパク質発現および精製の方法は公知であり、この方法として、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（４ｔｈｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２０１２））により説明されているものが挙げられ、この内容全体が参照により本明細書に援用される。
用語「ＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼ」および「ＲＮＡ誘導性ヌクレアーゼ」を本明細書では互換的に使用し、これらは、切断の標的ではない１種または複数種のＲＮＡと複合体を形成する（例えばこのＲＮＡに結合するまたは関連する）ヌクレアーゼを意味する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼは、ＲＮＡとの複合体中の場合にヌクレアーゼ：ＲＮＡ複合体と称され得る。典型的には、結合したＲＮＡはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と称される。ｇＲＮＡは、２種以上のＲＮＡの複合体として存在し得るか、または単一種のＲＮＡ分子として存在し得る。単一種のＲＮＡ分子として存在するｇＲＮＡは単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と称され得るが、「ｇＲＮＡ」は、単一種の分子または２種以上の分子の複合体のいずれかとして存在するガイドＲＮＡを意味するように互換的に使用される。典型的には、単一ＲＮＡ種として存在するｇＲＮＡは、２種のドメイン、即ち（１）標的核酸と相同性を共有する（例えば、およびＣａｓ９複合体の標的への結合を誘導する）ドメインならびに（２）Ｃａｓ９タンパク質に結合するドメインを含む。いくつかの実施形態では、ドメイン（２）は、ｔｒａｃｒＲＮＡとして既知である配列に対応し、ステム−ループ構造を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ドメイン（２）は、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６−８２１（２０１２）の図１に示すようにｔｒａｃｒＲＮＡと相同であり、この内容全体が参照により本明細書に援用される。ｇＲＮＡのその他の例（例えばドメイン２を含むもの）を、２０１３年９月６日に出願された「Ｓｗｉｔｃｈａｂｌｅ Ｃａｓ９ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ Ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国仮特許出願第６１／８７４，６８２号明細書および２０１３年９月６日に出願された「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ Ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ」という名称の米国仮特許出願第６１／８７４，７４６号明細書に見出すことができ、これらの内容全体は、それらの全体を参照することにより援用される。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは２種以上のドメイン（１）およびドメイン（２）を含み、「伸張ｇＲＮＡ」と称され得る。例えば、伸張ｇＲＮＡは、本明細書に記載したように、例えば２種以上のＣａｓ９タンパク質に結合することでき、２箇所以上の別々の領域で標的核酸に結合し得る。このｇＲＮＡは、標的部位を補完するヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列はヌクレアーゼ／ＲＮＡ複合体の前記標的部位への結合を媒介し、ヌクレアーゼ：ＲＮＡ複合体の配列特異性を付与する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼは（ＣＲＩＳＰＲ関連システム）Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼであり、例えばストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由来するＣａｓ９（Ｃｓｎ１）である（例えば、“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ Ｍ１ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ．”Ｆｅｒｒｅｔｔｉ Ｊ．Ｊ．，ＭｃＳｈａｎ Ｗ．Ｍ．，Ａｊｄｉｃ Ｄ．Ｊ．，Ｓａｖｉｃ Ｄ．Ｊ．，Ｓａｖｉｃ Ｇ．，Ｌｙｏｎ Ｋ．，Ｐｒｉｍｅａｕｘ Ｃ．，Ｓｅｚａｔｅ Ｓ．，Ｓｕｖｏｒｏｖ Ａ．Ｎ．，Ｋｅｎｔｏｎ Ｓ．，Ｌａｉ Ｈ．Ｓ．，Ｌｉｎ Ｓ．Ｐ．，Ｑｉａｎ Ｙ．，Ｊｉａ Ｈ．Ｇ．，Ｎａｊａｒ Ｆ．Ｚ．，Ｒｅｎ Ｑ．，Ｚｈｕ Ｈ．，Ｓｏｎｇ Ｌ．，Ｗｈｉｔｅ Ｊ．，Ｙｕａｎ Ｘ．，Ｃｌｉｆｔｏｎ Ｓ．Ｗ．，Ｒｏｅ Ｂ．Ａ．，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ Ｒ．Ｅ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８：４６５８−４６６３（２００１）、“ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓ−ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｆａｃｔｏｒ ＲＮａｓｅ ＩＩＩ．”Ｄｅｌｔｃｈｅｖａ Ｅ．，Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．，Ｓｈａｒｍａ Ｃ．Ｍ．，Ｇｏｎｚａｌｅｓ Ｋ．，Ｃｈａｏ Ｙ．，Ｐｉｒｚａｄａ Ｚ．Ａ．，Ｅｃｋｅｒｔ Ｍ．Ｒ．，Ｖｏｇｅｌ Ｊ．，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．，Ｎａｔｕｒｅ ４７１：６０２−６０７（２０１１）および“Ａ ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｄｕａｌ−ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ＤＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．”Ｊｉｎｅｋ Ｍ．，Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．，Ｆｏｎｆａｒａ Ｉ．，Ｈａｕｅｒ Ｍ．，Ｄｏｕｄｎａ Ｊ．Ａ．，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６−８２１（２０１２）を参照されたい。これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される。
ＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼ（例えばＣａｓ９）は、標的ＤＮＡ切断部位に対するＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションを使用することから、原理上、このタンパク質の標的を、ガイドＲＮＡにより指定される任意の配列に定めることができる。部位特異的切断のための（例えばゲノムを修飾するための）Ｃａｓ９等のＲＮＡプログラム可能なヌクレアーゼの使用方法は当技術分野で既知である（例えば、Ｃｏｎｇ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９，８１９−８２３（２０１３）、Ｍａｌｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｖｉａ Ｃａｓ９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９，８２３−８２６（２０１３）、Ｈｗａｎｇ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｎ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｕｓｉｎｇ ａ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１，２２７−２２９（２０１３）、Ｊｉｎｅｋ， Ｍ．ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ−ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ．ｅＬｉｆｅ ２，ｅ００４７１（２０１３）、Ｄｉｃａｒｌｏ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）、Ｊｉａｎｇ， Ｗ．ｅｔ ａｌ．ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｅｄｉｔｉｎｇ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｅｎｏｍｅｓ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１，２３３−２３９（２０１３）を参照されたい。これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される）。
用語「対象」は本明細書で使用する場合、個々の生物を意味しており、例えば個々の哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、対象は齧歯動物である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ネコまたはイヌである。いくつかの実施形態では、対象は、脊椎動物、両生動物、爬虫類、魚類、昆虫、ハエまたは線形動物である。いくつかの実施形態では、対象は研究動物である。いくつかの実施形態では、対象は遺伝子操作されており、例えば遺伝子操作された非ヒト対象である。対象は、どちらか一方の性別および任意の発達段階であることができる。
用語「標的部位」は、デアミナーゼまたはデアミナーゼを含む融合タンパク質（例えば、本明細書に記載したｄＣａｓ９−デアミナーゼ融合タンパク質）により脱アミノ化される核酸分子内の配列を意味する。
用語「処置」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、本明細書に記載したように、疾患もしくは障害またはこれらの１種もしくは複数種の症状を回復させるか、緩和するか、これらの発症を遅延させるか、またはこれらの進行を阻害することを目的とした臨床的介入を意味する。本明細書で使用する場合、用語「処置」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、本明細書に記載したように、疾患もしくは障害またはこれらの１種もしくは複数種の症状を回復させるか、緩和するか、これらの発症を遅延させるか、またはこれらの進行を阻害することを目的とした臨床的介入を意味する。いくつかの実施形態では、１種もしくは複数種の症状が発症した後におよび／または疾患が診断された後に、処置を施すことができる。その他の実施形態では、例えば、症状の発症を予防するためにもしくは遅延させるために、または疾患の発症もしくは進行を阻害するために、症状がない状態で処置を施すことができる。例えば、（例えば症状歴を考慮しておよび／または遺伝因子もしくはその他の感受性因子を考慮して）症状の発症前に、感受性個体に処置を施すことができる。症状が消散された後も処置を続けて、例えばこの症状の再発を予防するまたは遅延させることもできる。
本開示のいくつかの態様は、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡまたはｓｇＲＮＡとも称される）に結合し、次いで鎖ハイブリダイゼーションにより標的核酸配列に結合するＣａｓ９ドメインと、ＤＮＡ編集ドメイン、例えば核酸塩基（例えばシチジン等）を脱アミノ化し得るデアミナーゼドメインとを含む融合タンパク質を提供する。デアミナーゼによる核酸塩基の脱アミノ化により各残基で点変異を引き起こすことができ、この点変異は本明細書では核酸編集と称される。そのため、Ｃａｓ９多様体またはＣａｓ９ドメインとＤＮＡ編集ドメインとを含む融合タンパク質を、核酸配列の標的を定めた編集に使用し得る。そのような融合タンパク質は、インビトロでのＤＮＡの標的を定めた編集に有用であり、例えば変異細胞または変異動物の生成；標的を定めた変異の導入、例えばエキソビボでの細胞における遺伝的欠陥の修正、例えば、ある対象から得て、後に同じまたは別の対象に再導入する細胞における遺伝的欠陥の修正；および標的を定めた変異の導入、例えば、遺伝的欠陥の修正または対象における疾患関連遺伝子での不活性化変異の導入に有用である。典型的には、本明細書に記載した融合タンパク質のＣａｓ９ドメインは、いかなるヌクレアーゼ活性も有しておらず、代わりにＣａｓ９断片またはｄＣａｓ９タンパク質もしくはｄＣａｓ９ドメインである。本明細書に記載したＣａｓ９融合タンパク質の使用方法も提供される。
非限定的で例示的なヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインを本明細書に記載する。好適なヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインの一例は、下記のＤ１０Ａ／Ｈ８４０Ａ Ｃａｓ９ドメイン変異体である：
（配列番号３７、例えばＱｉ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ ａｓ ａｎ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５２（５）：１１７３−８３を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）。
追加の好適なヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインが、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。そのような追加の好適なヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインの例として、Ｄ１０Ａ変異ドメイン、Ｄ１０Ａ／Ｄ８３９Ａ／Ｈ８４０Ａ変異ドメインおよびＤ１０Ａ／Ｄ８３９Ａ／Ｈ８４０Ａ／Ｎ８６３Ａ変異ドメインが挙げられるがこれらに限定されない（例えばＰｒａｓｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，ＣＡＳ９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｐａｉｒｅｄ ｎｉｃｋａｓｅｓ ｆｏｒ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１３；３１（９）：８３３−８３８を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）。
Ｃａｓ９と核酸編集酵素または核酸編集ドメインとの融合タンパク質
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９酵素またはヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインと、（ｉｉ）核酸編集酵素または核酸編集ドメインとを含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、この核酸編集酵素または核酸編集ドメインは、ＤＮＡ編集酵素またはＤＮＡ編集ドメインである。いくつかの実施形態では、この核酸編集酵素はデアミナーゼ活性を有する。いくつかの実施形態では、この核酸編集酵素または核酸編集ドメインは、デアミナーゼドメインを含む、またはデアミナーゼドメインである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはシチジンデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼは、アポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集複合体（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリのデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＰＯＢＥＣ１ファミリのデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼは活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）である。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＣＦ１／ＡＳＥデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはアデノシンデアミナーゼである。いくつかの実施形態では、このデアミナーゼはＡＤＡＴファミリのデアミナーゼである。数種類の核酸編集酵素および核酸編集ドメイン、ならびにそのような酵素またはドメインを含むＣａｓ９融合タンパク質を本明細書において詳細に説明する。追加の好適な核酸編集酵素または核酸編集ドメインが、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。
本開示は、様々な構成のＣａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、核酸編集酵素または核酸編集ドメインはＣａｓ９ドメインのＮ末端に融合している。いくつかの実施形態では、核酸編集酵素または核酸編集ドメインはＣａｓ９ドメインのＣ末端に融合している。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９ドメインおよび核酸編集編集酵素または核酸編集編集ドメインは、リンカーを介して融合している。いくつかの実施形態では、このリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）（例えばＧｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎは独立して１〜３０の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０であるか、または複数個のリンカーもしくは複数個のリンカーモチーフが存在する場合には、これらのいずれかの組み合わせである。追加の好適なリンカーモチーフおよびリンカーの構成が当業者に明らかであろう。いくつかの実施形態では、好適なリンカーのモチーフおよび構成として、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｙ，ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３；６５（１０）：１３５７−６９に記載されているものが挙げられ、この内容全体が参照により本明細書に援用される。追加の好適なリンカー配列が、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載した例示的なＣａｓ９融合タンパク質の一般的な構成は下記の構造を含む：
［ＮＨ２］−［核酸編集酵素または核酸編集ドメイン］−［Ｃａｓ９］−［ＣＯＯＨ］、または
［ＮＨ２］−［Ｃａｓ９］−［核酸編集酵素または核酸編集ドメイン］−［ＣＯＯＨ］
（上記構造中、ＮＨ２は融合タンパク質のＮ末端であり、ＣＯＯＨは融合タンパク質のＣ末端である）。
追加の特徴、例えばＮＬＳと融合タンパク質の残部との間のおよび／または核酸編集酵素もしくは核酸編集ドメインとＣａｓ９との間の１種または複数種のリンカー配列が存在し得る。存在し得るその他の例示的な特徴は、局在化配列、例えば核局在化配列、細胞質局在化配列、核外輸送配列等の輸送配列またはその他の局在化配列、ならびに融合タンパク質の可溶化、精製または検出に有用な配列タグである。好適な局在化シグナル配列およびタンパク質タグの配列を本明細書に記載しており、ビオチンカルボキシラーゼキャリアタンパク質（ＢＣＣＰ）タグ、ｍｙｃ−タグ、カルモジュリン−タグ、ＦＬＡＧ−タグ、ヘマグルチニン（ＨＡ）−タグ、ヒスチジンタグまたはＨｉｓ−タグとも称されるポリヒスチジンタグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）−タグ、ｎｕｓ−タグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）−タグ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）−タグ、チオレドキシン−タグ、Ｓ−タグ、Ｓｏｆタグ（例えばＳｏｆタグ１、Ｓｏｆタグ３）、ｓｔｒｅｐ−タグ、ビオチンリガーゼタグ、ＦｌＡｓＨタグ、Ｖ５タグおよびＳＢＰ−タグが挙げられるがこれらに限定されない。追加の好適な配列が当業者に明らかであろう。
いくつかの実施形態では、核酸編集酵素または核酸編集ドメインはデアミナーゼである。例えば、いくつかの実施形態では、デアミナーゼ酵素またはデアミナーゼドメインを有する例示的なＣａｓ９融合タンパク質の一般的な構成は下記の構造を含む：
［ＮＨ２］−［ＮＬＳ］−［Ｃａｓ９］−［デアミナーゼ］−［ＣＯＯＨ］、
［ＮＨ２］−［ＮＬＳ］−［デアミナーゼ］−［Ｃａｓ９］−−［ＣＯＯＨ］、
［ＮＨ２］−［Ｃａｓ９］−［デアミナーゼ］−［ＣＯＯＨ］、または
［ＮＨ２］−［デアミナーゼ］−［Ｃａｓ９］−［ＣＯＯＨ］
（上記構造中、ＮＬＳは核局在化シグナルであり、ＮＨ２は融合タンパク質のＮ末端であり、ＣＯＯＨは融合タンパク質のＣ末端である）。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９とデアミナーゼとの間にリンカーが挿入されている。いくつかの実施形態では、ＮＬＳはデアミナーゼおよび／またはＣａｓ９ドメインのＣ末端に位置している。いくつかの実施形態では、ＮＬＳはデアミナーゼとＣａｓ９ドメインとの間に位置している。配列タグ等の追加の特徴も存在し得る。
好適な種類の核酸編集酵素および核酸編集ドメインの一例はシトシンデアミナーゼであり、例えばＡＰＯＢＥＣファミリのシトシンデアミナーゼである。シトシンデアミナーゼ酵素のアポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集複合体（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリは、制御されているおよび有利な方法で変異誘発を開始するのに役立つ１１種のタンパク質を包含する２９。ファミリの一メンバーである活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）は、転写依存的で鎖が偏向した様式でｓｓＤＮＡ中のシトシンをウラシルに変換することにより、抗体の成熟に関与する３０。アポリポタンパク質Ｂ編集複合体３（ＡＰＯＢＥＣ３）酵素は、逆転写されたウイルスｓｓＤＮＡ中のシトシンの脱アミノ化により、ある種のＨＩＶ−１株からヒト細胞を保護する３１。これらのタンパク質は全て、触媒活性にＺｎ２＋配位モチーフ（Ｈｉｓ−Ｘ−Ｇｌｕ−Ｘ２３〜２６−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｘ２〜４−Ｃｙｓ）および結合した水分子を必要とする。Ｇｌｕ残基は、脱アミノ化反応における求核攻撃用に水分子を水酸化亜鉛に活性化するように作用する。ファミリの各メンバーはそれ自体の特定の「ホットスポット」で優先的に脱アミノ化し、ｈＡＩＤの場合のＷＲＣ（ＷはＡまたはＴであり、ＲはＡまたはＧである）からｈＡＰＯＢＥＣ３Ｆの場合のＴＴＣまで多岐にわたる３２。ＡＰＯＢＥＣ３Ｇの触媒ドメインの最近の結晶構造（図２）から、６つのαヘリクスが隣接する５本鎖のβシートコアで構成されている二次構造が明らかになっており、この構造は全ファミリにわたり保存されると考えられる３３。活性中心ループがｓｓＤＮＡ結合および「ホットスポット」の同一性の決定の両方に関与することが分かっている３４。これらの酵素の過剰発現はゲノムの不安定性およびがんと関連しており、そのため配列特異的に標的を定めることの重要性が強調される３５。
好適な種類の核酸編集酵素および核酸編集ドメインの別の例はアデノシンデアミナーゼである。例えば、ＡＤＡＴファミリのアデノシンデアミナーゼを、Ｃａｓ９ドメイン、例えばヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインに融合させることができ、このようにしてＣａｓ９−ＡＤＡＴ融合タンパク質が得られる。
本開示のいくつかの態様は、Ｃａｓ９と、デアミナーゼ酵素、例えばＡＰＯＢＥＣ酵素等のシトシンデアミナーゼ酵素またはＡＤＡＴ酵素等のアデノシンデアミナーゼ酵素との系統立った一連の融合体を提供し、この融合体は、これらのデアミナーゼの酵素活性をゲノムＤＮＡ中の特定の部位に誘導するために生成されている。認識剤としてＣａｓ９を使用する利点は下記の２つである：（１）ｓｇＲＮＡ配列を変えるだけでＣａｓ９の配列特性を容易に変更させることができる、および（２）ｄｓＤＮＡを変性させることによりＣａｓ９がその標的配列に結合し、単鎖であるＤＮＡのストレッチが生じ、従って、デアミナーゼにとって実行可能な基質が生じる。ヒトデアミナーゼドメインおよびマウスデアミナーゼドメイン、例えばＡＩＤドメインとの融合タンパク質の生成に成功している。ヒトＡＩＤおよびマウスＡＩＤの触媒ドメインとＣａｓ９との様々なその他の融合タンパク質も考慮される。その他の触媒ドメイン、またはその他のデアミナーゼからの触媒ドメインを使用してＣａｓ９との融合タンパク質も生成することができ、本開示はこの点に関して限定されないことが理解されるであろう。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９とＡＩＤとの融合タンパク質が提供される。ｓｓＤＮＡ中での変異率を高めるようにＣａｓ９融合タンパク質を操作するために、マウスＡＩＤおよびヒトＡＩＤの両方を繊維状ファージの遺伝子Ｖ（非特異的ｓｓＤＮＡ結合タンパク質）に繋ぎ止めた。結果として生じた融合タンパク質は、細胞ベースのアッセイにおいて野生型酵素と比較して変異活性の増強を示した。この研究は、このタンパク質の酵素活性が維持され、融合タンパク質により、この酵素活性の標的を遺伝子配列にうまく定めることできることを実証する３６。
Ｃａｓ９（更にＣａｓ９のｓｇＲＮＡおよび標的ＤＮＡとの複合体におけるＣａｓ９）のいくつかの結晶構造が報告されているが（例えばＪｉｎｅｋ Ｍ，Ｊｉａｎｇ Ｆ，Ｔａｙｌｏｒ ＤＷ，Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ＳＨ，Ｋａｙａ Ｅ，Ｍａ Ｅ，Ａｎｄｅｒｓ Ｃ，Ｈａｕｅｒ Ｍ，Ｚｈｏｕ Ｋ，Ｌｉｎ Ｓ，Ｋａｐｌａｎ Ｍ，Ｉａｖａｒｏｎｅ ＡＴ，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ，Ｎｏｇａｌｅｓ Ｅ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｃａｓ９ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ ｒｅｖｅａｌ ＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４；３４３（６１７６）：１２４７９９７．ＰＭＩＤ：２４５０５１３０およびＮｉｓｈｉｍａｓｕ Ｈ，Ｒａｎ ＦＡ，Ｈｓｕ ＰＤ，Ｋｏｎｅｒｍａｎｎ Ｓ，Ｓｈｅｈａｔａ ＳＩ，Ｄｏｈｍａｅ Ｎ，Ｉｓｈｉｔａｎｉ Ｒ，Ｚｈａｎｇ Ｆ，Ｎｕｒｅｋｉ Ｏ．Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃａｓ９ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｇｕｉｄｅ ＲＮＡ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔ ＤＮＡ．Ｃｅｌｌ．２０１４；１５６（５）：９３５−４９．ＰＭＩＤ：２４５２９４７７を参照されたい。これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に援用される）、ＤＮＡにおいてＣａｓ９−ＤＮＡ複合体中で単鎖である部分（Ｃａｓ９−ＤＮＡバブルの大きさ）は未知である。しかしながら、複合体が転写を妨げるために特に設計されているｓｇＲＮＡを有するｄＣａｓ９システムでは、転写干渉が、ｓｇＲＮＡが非鋳型鎖に結合する場合にのみ起こることが分かっている。この結果は、ＤＮＡ−Ｃａｓ９複合体におけるＤＮＡのある部分がＣａｓ９により保護されておらず、融合タンパク質中のデアミナーゼの潜在的な標的となる可能性があることを示唆する（Ｑｉ ＬＳ，Ｌａｒｓｏｎ ＭＨ，Ｇｉｌｂｅｒｔ ＬＡ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＪＳ，Ａｒｋｉｎ ＡＰ，Ｌｉｍ ＷＡ．Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ ａｓ ａｎ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５２（５）：１１７３−８３．ＰＭＩＤ：２３４５２８６０を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）。エクソヌクレアーゼＩＩＩおよびヌクレアーゼＰ１（基質としてのｓｓＤＮＡにのみ作用する）によるフットプリント実験により、非鋳型鎖上の少なくとも２６塩基がこれらの酵素により消化されやすいことが明らかになっており（Ｊｉｎｅｋ Ｍ，Ｊｉａｎｇ Ｆ，Ｔａｙｌｏｒ ＤＷ，Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ＳＨ，Ｋａｙａ Ｅ，Ｍａ Ｅ，Ａｎｄｅｒｓ Ｃ，Ｈａｕｅｒ Ｍ，Ｚｈｏｕ Ｋ，Ｌｉｎ Ｓ，Ｋａｐｌａｎ Ｍ，Ｉａｖａｒｏｎｅ ＡＴ，Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ，Ｎｏｇａｌｅｓ Ｅ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｃａｓ９ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ ｒｅｖｅａｌ ＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４；３４３（６１７６）：１２４７９９７．ＰＭＩＤ：２４５０５１３０を参照されたい）、この考えが更に支持されている。ある場合には、Ｃａｓ９が、１５％の高さの頻度にてＤＮＡの感受性の鎖中で単一塩基置換変異を誘発することも報告されている（Ｔｓａｉ ＳＱ，Ｗｙｖｅｋｅｎｓ Ｎ，Ｋｈａｙｔｅｒ Ｃ，Ｆｏｄｅｎ ＪＡ，Ｔｈａｐａｒ Ｖ，Ｒｅｙｏｎ Ｄ，Ｇｏｏｄｗｉｎ ＭＪ，Ａｒｙｅｅ ＭＪ，Ｊｏｕｎｇ ＪＫ．Ｄｉｍｅｒｉｃ ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５６９−７６．ＰＭＩＤ：２４７７０３２５を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）。これらの変異の導入の機構は不明ではあるが、全ての場合において変異される塩基はシトシンであり、このことは、シトシンデアミナーゼ酵素の関与を示す可能性がある。まとめると、これらのデータは、単鎖でありその他の酵素に対して感受性である標的ＤＮＡの一部と明確に一致する。複合体が転写を妨げるために特に設計されているｓｇＲＮＡを有するｄＣａｓ９システムでは、転写干渉が、ｓｇＲＮＡが非鋳型鎖に結合する場合にのみ起こることが分かっている。この結果は、ＤＮＡ−Ｃａｓ９複合体中のＤＮＡのある部分がＣａｓ９で保護されておらず、融合タンパク質中のＡＩＤの潜在的な標的となる可能性があることを示唆する１６。従って、デアミナーゼドメインとのＣａｓ９のＮ末端融合体およびＣ末端融合体の両方が本開示の態様に従って有用である。
いくつかの実施形態では、デアミナーゼドメインおよびＣａｓ９ドメインがリンカーにより互いに融合されている。特定の用途を目的とするデアミナーゼ活性のために最適な長さを達成すべく、デアミナーゼドメイン（例えばＡＩＤ）とＣａｓ９ドメインとの間のリンカーの様々な長さおよび柔軟性を利用し得る（例えば、非常に柔軟なリンカーである形（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（ＧＧＳ）ｎおよび（Ｇ）ｎからより強固なリンカーである形（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）（例えばＧｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２を参照されたい。内容全体が参照により本明細書に援用される）および（ＸＰ）ｎまで多岐にわたる）３７。
本開示の態様に従ってＣａｓ９ドメインに融合され得る好適な核酸編集酵素および核酸編集ドメインのいくつかの例、例えばデアミナーゼおよびデアミナーゼドメインを下記に記載する。いくつかの実施形態では、各配列の活性ドメイン、例えば局在化シグナル（核局在化シグナル、核外輸送シグナルを除く、細胞質局在化シグナル）を有しないドメインを使用し得ることが理解されるであろう。
ヒトＡＩＤ：
（下線：核局在化シグナル、二重下線：核外輸送シグナル）
マウスＡＩＤ：
（下線：核局在化シグナル、二重下線：核外輸送シグナル）
イヌＡＩＤ：
（下線：核局在化シグナル、二重下線：核外輸送シグナル）
ウシＡＩＤ：
（下線：核局在化シグナル、二重下線：核外輸送シグナル）
マウスＡＰＯＢＥＣ−３：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ラットＡＰＯＢＥＣ−３：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
アカゲザルＡＰＯＢＥＣ−３Ｇ：
（イタリック：核酸編集ドメイン、下線：細胞質局在化シグナル）
チンパンジーＡＰＯＢＥＣ−３Ｇ：
（イタリック：核酸編集ドメイン、下線：細胞質局在化シグナル）
ミドリザルＡＰＯＢＥＣ−３Ｇ：
（イタリック：核酸編集ドメイン、下線：細胞質局在化シグナル）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｇ：
（イタリック：核酸編集ドメイン、下線：細胞質局在化シグナル）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｆ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｂ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｃ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ａ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｈ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｄ：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＰＯＢＥＣ−１：
マウスＡＰＯＢＥＣ−１：
ラットＡＰＯＢＥＣ−１：
ヒトＡＤＡＴ−２：
マウスＡＤＡＴ−２：
マウスＡＤＡＴ−１：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
ヒトＡＤＡＴ−１：
（イタリック：核酸編集ドメイン）
いくつかの実施形態では、上記に記載した融合タンパク質は、核酸編集酵素の完全長アミノ酸、例えば上記に記載した配列のうちの１つを含む。しかしながら、その他の実施形態では、本明細書に記載した融合タンパク質は核酸編集酵素の完全長配列を含まず、この断片のみを含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した融合タンパク質は、Ｃａｓ９ドメインと、核酸編集酵素の断片であって、例えば核酸編集ドメインを含む断片とを含む。核酸編集ドメインの例示的なアミノ配列を上記配列中においてイタリック体で示しており、そのようなドメインの追加の好適な配列が当業者に明らかであろう。
本発明の態様に従って使用することができ、例えばヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインに融合させることができる追加の好適な核酸編集酵素配列、例えばデアミナーゼ酵素配列およびデアミナーゼドメイン配列が、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。いくつかの実施形態では、そのような追加の酵素配列は、本明細書に記載した配列と少なくとも７０％類似するか、少なくとも７５％類似するか、少なくとも８０％類似するか、少なくとも８５％類似するか、少なくとも９０％類似するか、少なくとも９５％類似するか、少なくとも９６％類似するか、少なくとも９７％類似するか、少なくとも９８％類似するか、または少なくとも９９％類似するデアミナーゼ酵素配列またはデアミナーゼドメイン配列を含む。追加の好適なＣａｓ９ドメイン、Ｃａｓ９多様体およびＣａｓ９配列も当業者に明らかであろう。そのような追加の好適なＣａｓ９ドメインの例として、Ｄ１０Ａ変異ドメイン、Ｄ１０Ａ／Ｄ８３９Ａ／Ｈ８４０Ａ変異ドメインおよびＤ１０Ａ／Ｄ８３９Ａ／Ｈ８４０Ａ／Ｎ８６３Ａ変異ドメインが挙げられるがこれらに限定されない（例えばＰｒａｓｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，ＣＡＳ９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｐａｉｒｅｄ ｎｉｃｋａｓｅｓ ｆｏｒ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１３；３１（９）：８３３−８３８を参照されたい。この内容全体が参照により本明細書に援用される）。
Ｃａｓ９ドメインとデアミナーゼドメインとを含む融合タンパク質を生成するのに好適な追加の戦略は、当技術分野での一般的知識と組み合わせた本開示をベースとして当業者に明らかであろう。リンカーを使用してまたはリンカーを使用することなく本開示の態様に従って融合タンパク質を生成するのに好適な戦略も、本開示および当技術分野での知識を考慮して当業者に明らかであろう。例えば、Ｇｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＣＲＩＳＰＲ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｄｕｌａｒ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５４（２）：４４２−５１は、リンカー（ＳＰＫＫＫＲＫＶＥＡＳ、配列番号２９）として２ＮＬＳを使用したＣａｓ９とＶＰ６４とのＣ末端融合体を転写活性化に利用し得ることを示した。Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＣＡＳ９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｐａｉｒｅｄ ｎｉｃｋａｓｅｓ ｆｏｒ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３；３１（９）：８３３−８は、リンカーを介さないＶＰ６４とのＣ末端融合体を転写活性化に利用し得ることを報告した。更に、Ｍａｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１３；１０：９７７−９７９は、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ（配列番号９１）リンカーを使用したＶＰ６４とのＣ末端融合体を転写活性化剤として使用し得ることを報告した。最近では、ｄＣａｓ９−ＦｏｋＩヌクレアーゼ融合体の生成が成功しており、このｄＣａｓ９−ＦｏｋＩヌクレアーゼ融合体は、親Ｃａｓ９酵素と比較して改善された酵素特異性を示す（Ｇｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２およびＴｓａｉ ＳＱ，Ｗｙｖｅｋｅｎｓ Ｎ，Ｋｈａｙｔｅｒ Ｃ，Ｆｏｄｅｎ ＪＡ，Ｔｈａｐａｒ Ｖ，Ｒｅｙｏｎ Ｄ，Ｇｏｏｄｗｉｎ ＭＪ，Ａｒｙｅｅ ＭＪ，Ｊｏｕｎｇ ＪＫ．Ｄｉｍｅｒｉｃ ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５６９−７６．ＰＭＩＤ：２４７７０３２５、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９融合タンパク質においてＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）リンカーまたはＧＧＧＧＳ（配列番号９１）リンカーがそれぞれ使用された）。
疾患関連変異を修正するためのＣａｓ９ ＤＮＡ編集融合タンパク質の使用
いくつかの実施形態は、本明細書に記載したＣａｓ９ ＤＮＡ編集融合タンパク質の使用方法を提供する。いくつかの実施形態では、この融合タンパク質を使用して、標的核酸塩基、例えばＣ残基を脱アミノ化させることにより核酸に点変異を導入する。いくつかの実施形態では、標的核酸塩基の脱アミノ化により遺伝的欠陥が修正され、例えば遺伝子産物の機能の喪失を引き起こす点変異が修正される。いくつかの実施形態では、遺伝的欠陥は疾患または障害に関連しており、例えばＩ型糖尿病等のリソソーム蓄積障害または代謝性疾患に関連している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した方法を使用して、疾患または障害に関連する遺伝子産物をコードする遺伝子またはアレルに不活性型の点変異を導入する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書において、（例えば増殖性疾患の処置で）Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集融合タンパク質を利用して発がん遺伝子に不活性型の点変異を導入する方法が提供される。いくつかの実施形態では、不活性型の変異によりコート配列中に未成熟終止コドンが生成され得、これにより短縮遺伝子産物が発現され、例えば完全長タンパク質の機能を欠く短縮タンパク質が発現され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載した方法の目的は、ゲノム編集により機能不全遺伝子の機能を回復させることである。本明細書に記載したＣａｓ９デアミナーゼ融合タンパク質は、例えばヒト細胞培養物中において疾患関連変異を修正することによる、インビトロでの遺伝子編集に基づくヒト治療に有効であることができる。本明細書に記載した融合タンパク質、例えばＣａｓ９ドメインと核酸デアミナーゼドメインとを含む融合タンパク質を使用して任意の単一点Ｔ−＞ＣまたはＡ−＞Ｇ変異を修正し得ることが当業者に理解されるであろう。前者のケースでは、Ｕに戻る変異Ｃの脱アミノ化により変異が修正され、後者のケースでは、変異Ｇと塩基対を作るＣの脱アミノ化後の一連の複製により変異が修正される。
提供する融合タンパク質によりインビトロまたはインビボで修正され得る疾患関連変異の一例は、ＰＩ３ＫＣＡタンパク質におけるＨ１０４７Ｒ（Ａ３１４０Ｇ）多型である。触媒アルファサブユニット（ＰＩ３ＫＣＡ）タンパク質であるホスホイノシチド−３−キナーゼは、ホスファチジルイノシトールのイノシトール環の３−ＯＨ基をリン酸化するように作用する。ＰＩ３ＫＣＡ遺伝子は多様ながん腫で変異することが分かっており、そのため、このＰＩ３ＫＣＡ遺伝子は強力な発がん遺伝子であると見なされる５０。実際には、Ａ３１４０Ｇ変異が数種のＮＣＩ−６０がん細胞株、例えばＨＣＴ１１６細胞株、ＳＫＯＶ３細胞株およびＴ４７Ｄ細胞株等で存在しており、これらの細胞株はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から容易に入手可能である５１。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３ＫＣＡタンパク質中でＨ１０４７Ｒ置換を生じさせる、修正される変異を保有する細胞、例えば点変異を保有する細胞、例えばＰＩ３ＫＣＡ遺伝子のエクソン２０中にＡ３１４０Ｇ点変異を保有する細胞を、Ｃａｓ９デアミナーゼ融合タンパク質をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をコーディングＰＩ３ＫＣＡ遺伝子中の各変異部位に定める適切に設計されたｓｇＲＮＡと接触させる。ｓｇＲＮＡが、この融合酵素の標的をＰＩ３ＫＣＡ遺伝子内である非Ｃ残基に定めるように設計されているコントロール実験を実施し得る。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、ＰＩ３ＫＣＡ遺伝子の関連配列をＰＣＲ増幅させてヒト細胞培養物での融合タンパク質の活性を評価するために配列決定し得る。
ＰＩ３ＫＣＡ中の点変異の修正に関するこの例は説明を目的として記載されており、本開示を限定することは意図されていないことが理解されるであろう。本開示のＤＮＡ編集融合タンパク質を使用して、その他の点変異ならびにその他のがんおよびその他の増殖性疾患等のがん以外の疾患に関連する変異を修正し得ることを当業者は理解するであろう。
疾患に関連した遺伝子およびアレルにおける点変異の修正の成功により、治療および基礎研究での適用による遺伝子修正の新たな戦略が開発される。Ｃａｓ９とデアミナーゼ酵素またはデアミナーゼドメインとの本開示の融合体のような部位特異的な単一塩基修飾システムは、ある種の遺伝子機能が意図的に抑制されているまたは無効にされている「逆」遺伝子治療での適用も有する。この場合では、未成熟終止コドン（ＴＡＡ、ＴＡＧ、ＴＧＡ）に部位特異的に変異するＴｒｐ（ＴＧＧ）残基、Ｇｌｎ（ＣＡＡおよびＣＡＧ）残基またはＡｒｇ（ＣＧＡ）残基を使用して、インビトロで、エキソビボでまたはインビボでタンパク質機能を無効にし得る。
本開示は、本明細書に記載したＣａｓ９ ＤＮＡ編集融合タンパク質により修正され得る点変異に関連するまたはこの点変異に起因する疾患と診断されている対象の処置方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、そのような疾患、例えば上記に記載したＰＩ３ＫＣＡ点変異に関連するがんを有する対象に、点変異を修正するまたは疾患関連遺伝子に不活性化変異を導入する有効量のＣａｓ９デアミナーゼ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、この疾患は増殖性疾患である。いくつかの実施形態では、この疾患は遺伝性疾患である。いくつかの実施形態では、この疾患は腫瘍性疾患である。いくつかの実施形態では、この疾患は代謝性疾患である。いくつかの実施形態では、この疾患はリソソーム蓄積症である。点変異の修正によりまたは不活性化変異の疾患関連遺伝子への導入により処置し得るその他の疾患は当業者に既知であり、本開示はこの点において限定されない。
本開示は、追加の疾患または障害、例えばデアミナーゼにより媒介される遺伝子編集により修正され得る点変異に関連するまたはこの点変異に起因する疾患または障害の処置方法を提供する。数種のそのような疾患が本明細書に記載されており、本明細書に記載した戦略および融合タンパク質により処置され得る追加の好適な疾患が、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。好適な疾患および障害の例を下記に列挙する。各配列での具体的な位置または残基のナンバリングは、使用する特定のタンパク質およびナンバリングスキームに依存することが理解されるであろう。ナンバリングは例えば成熟タンパク質の前駆体およびこの成熟タンパク質で異なる場合があり、種毎の配列の差異がナンバリングに影響を及ぼす可能性がある。当業者は、当技術分野で公知の方法により、例えば相同残基の配列アラインメントおよび決定により、任意の相同タンパク質中のおよび各コード核酸中の各残基を同定し得るであろう。好適な疾患および障害の例として、下記が挙げられるがこれらに限定されない：嚢胞性線維症（例えば、Ｓｃｈｗａｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ＣＦＴＲ ｂｙ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｏｒｇａｎｏｉｄｓ ｏｆ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ．２０１３；１３：６５３−６５８およびＷｕ ｅｔ．ａｌ．，Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｖｉａ ｕｓｅ ｏｆ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９．Ｃｅｌｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ．２０１３；１３：６５９−６６２を参照されたい。これらはいずれも遺伝的欠陥を修正するためにデアミナーゼ融合タンパク質を使用しない）；フェニルケトン尿症 − 例えばフェニルアラニンヒドロキシラーゼ遺伝子における８３５位（マウス）もしくは２４０位（ヒト）または相同残基でのフェニルアラニンからセリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＭｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９７；３９：４０２−４０５を参照されたい；ベルナール・スーリエ症候群（ＢＳＳ）− 例えば血小板膜糖タンパク質ＩＸにおける５５位もしくは相同残基でのフェニルアラニンからセリンへの変異または残基２４もしくは相同残基でのシステインからアルギニン（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＮｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ．１９９７；９７：３１２−３２０およびＡｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１４；９３：３８１−３８４を参照されたい；表皮剥離性角化症（ＥＨＫ）− 例えばケラチン１における１６０位もしくは１６１位（開始メチオニンを含む場合）または相同残基でのロイシンからプロピンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＣｈｉｐｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１９９２；７０：８２１−８２８を参照されたい。また、ｗｗｗ［ｄｏｔ］ｕｎｉｐｒｏｔ［ｄｏｔ］ｏｒｇでのＵＮＩＰＲＯＴデータベースにおける受入番号Ｐ０４２６４も参照されたい；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）− 例えば、プロセシングされた形態のα１−抗トリプシンにおける５４位もしくは５５位（開始メチオニンを含む場合）または相同残基でのまたはプロセシングされていない形態または相同残基における残基７８でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＰｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９３；１７：７４０−７４３を参照されたい。また、ＵＮＩＰＲＯＴデータベースにおける受入番号Ｐ０１０１１も参照されたい；Ｃｈａｒｃｏｔ−Ｍａｒｉｅ−Ｔｏｏｔ病４Ｊ型 − 例えばＦＩＧ４における４１位または相同残基でのイソロイシンからトレオニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＬｅｎｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２０１１；７：ｅ１００２１０４を参照されたい；神経芽細胞腫（ＮＢ）− 例えばカスパーゼ−９における１９７位または相同残基でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＫｕｎｄｕ ｅｔ ａｌ．，３ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１３，３：２２５−２３４を参照されたい；フォン・ウィルブランド病（ｖＷＤ）− 例えばプロセシングされた形態のフォン・ウィルブランド因子における５０９位もしくは相同残基でのまたはプロセシングされていない形態のフォン・ウィルブランド因子における１２７２位もしくは相同残基でのシステインからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＬａｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１９９２を参照されたい。また、ＵＮＩＰＲＯＴデータベースにおける受入番号Ｐ０４２７５；８２：６６−７２も参照されたい；先天性筋強直症 − 例えば筋肉の塩化物チャンネル遺伝子ＣＬＣＮ１における２７７位または相同残基でのシステインからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＷｅｉｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊ．ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．２０１２；５９０：３４４９−３４６４を参照されたい；遺伝性腎アミロイドーシス − 例えばプロセシングされた形態のアポリポタンパク質ＡＩＩにおける７８位もしくは相同残基でのまたはプロセシングされていない形態における１０１位もしくは相同残基での終止コドンからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）− 例えばＹａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２００３；６４：１１−１６を参照されたい；拡張型心筋症（ＤＣＭ）− 例えばＦＯＸＤ４遺伝子における１４８位または相同残基でのトリプトファンからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）、例えばＭｉｎｏｒｅｔｔｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２００７；１９：３６９−３７２を参照されたい；遺伝性リンパ水腫 − 例えばＶＥＧＦＲ３チロシンキナーゼにおける１０３５位または相同残基でのヒスチジンからアルギニンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）、例えばＩｒｒｔｈｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．２０００；６７：２９５−３０１を参照されたい；家族性アルツハイマー病 − 例えばプレセニリン１における１４３位または相同残基でのイソロイシンからバリンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）、例えばＧａｌｌｏ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．２０１１；２５：４２５−４３１を参照されたい；プリオン病 − 例えばプリオンタンパク質における１２９位または相同残基でのメチオニンからバリンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）− 例えばＬｅｗｉｓ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２００６；８７：２４４３−２４４９を参照されたい；慢性乳児神経皮膚関節症候群（ＣＩＮＣＡ）− 例えばクリオピリンにおける５７０位または相同残基でのチロシンからシステインへの変異（Ａ＞Ｇ変異）− 例えばＦｕｊｉｓａｗａ ｅｔ．ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００７；１０９：２９０３−２９１１を参照されたい；ならびにデスミン関連心筋症（ＤＲＭ）− 例えばαＢクリスタリンにおける１２０位または相同残基でのアルギニンからグリシンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）− 例えばＫｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９；２７４：２４１３７−２４１４１を参照されたい。全ての参考文献およびデータベースエントリの内容全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書で開示したＣａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質の標的を標的部位、例えば編集する点変異を有する部位に定めるためには、Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質とガイドＲＮＡ、例えばｓｇＲＮＡとを同時に発現させることが概して必要であることが当業者に明らかであろう。本明細書の別の箇所でより詳細に説明するように、ガイドＲＮＡは、Ｃａｓ９結合を可能にするｔｒａｃｒＲＮＡフレームワークとガイド配列とを概して含み、このガイド配列は、Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質に配列特異性を付与する。いくつかの実施形態では、このガイドＲＮＡは構造５’−［ガイド配列］−ｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号３８）を含み、この構造中、ガイド配列は、標的配列に相補的である配列を含む。このガイド配列は、典型的には２０ヌクレオチド長である。Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質の標的を特定のゲノム標的部位に定めるのに好適なガイドＲＮＡの配列は、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。そのような好適なガイドＲＮＡ配列は、編集する標的ヌクレオチドの５０ヌクレオチド上流内のまたは下流内の核酸配列に相補的であるガイド配列を概して含む。Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質の標的を特定の標的配列に定めるのに適したガイドＲＮＡ配列のいくつかの例を下記に記載する。
ホスホイノシチド−３−キナーゼ触媒アルファサブユニット（ＰＩ３ＫＣＡまたはＰＩＫ３ＣＡ）におけるＨ１０４７Ｒ（Ａ３１４０Ｇ）多型（変異したヌクレオチドの位置および各コドンに下線を引いている）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号３９、タンパク質配列 − 配列番号４０）。
Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質の標的を変異Ａ３１４０Ｇ残基に定めるのに好適なガイド配列の例として、５’−ａｕｃｇｇａａｕｃｔａｕｕｕｕｇａｃｕｃ−３’（配列番号４１）、５’−ｕｃｇｇａａｕｃｕａｕｕｕｕｇａｃｕｃｇ−３’（配列番号４２）、５’−ｃｕｕａｇａｕａａａａｃｕｇａｇｃａａｇ−３’（配列番号４３）、５’−ａｕｃｕａｕｕｕｕｇａｃｕｃｇｕｕｃｕｃ−３’（配列番号４４）、５’−ｕａａａａｃｕｇａｇｃａａｇａｇｇｃｕｕ−３’（配列番号４５）、５’−ｕｇｇｕｇｇｃｕｇｇａｃａａｃａａａａａ−３’（配列番号４６）、５’−ｇｃｕｇｇａｃａａｃａａａａａｕｇｇａｕ−３’（配列番号４７）、５’−ｇｕｇｕｕａａｕｕｕｇｕｃｇｕａｃｇｕａ−３’（配列番号４８）が挙げられるがこれらに限定されない。Ｃａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質の標的を、変異ＰＩ３ＫＣＡ配列、下記に記載する追加の配列のうちのいずれか、または疾患と関連する追加の変異配列に定めるのに好適な追加のガイド配列が、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。
フェニルケトン尿症 フェニルアラニンヒドロキシラーゼ遺伝子における残基２４０でのフェニルアラニンのセリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）（変異したヌクレオチドの位置および各コドンの位置に下線を引いている）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号４９、タンパク質配列 − 配列番号５０）。
ベルナール・スーリエ症候群（ＢＳＳ）− 血小板膜糖タンパク質ＩＸにおける残基２４でのシステインからアルギニン（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号５１、タンパク質配列 − 配列番号５２）。
表皮剥離性角化症（ＥＨＫ）− ケラチン１における残基１６１でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号５３、タンパク質配列 − 配列番号５４）。
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）− α１−抗トリプシンにおける残基５４でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号５５、タンパク質配列 − 配列番号５６）。
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）− α１−抗キモトリプシンにおける残基７８でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号８９、タンパク質配列 − 配列番号９０）。
神経芽細胞腫（ＮＢ）− カスパーゼ−９における残基１９７でのロイシンからプロリンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号５７、タンパク質配列 − 配列番号５８）。
シャルコー・マリー・トゥース病４Ｊ型 − ＦＩＧ４における残基４１でのイソロイシンからトレオニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号５９、タンパク質配列 − 配列番号６０）。
フォン・ウィルブランド病（ｖＷＤ）− フォン・ウィルブランド因子における残基１２７２でのシステインからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号６１、タンパク質配列 − 配列番号６２）。
先天性筋強直症 − 筋肉の塩化物チャンネル遺伝子ＣＬＣＮ１における２７７位でのシステインからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号６３、タンパク質配列 − 配列番号６４）。
遺伝性腎アミロイドーシス − アポリポタンパク質ＡＩＩにおける残基１１１での終止コドンからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号６５、タンパク質配列 − 配列番号６６）。
拡張型心筋症（ＤＣＭ）− ＦＯＸＤ４遺伝子における１４８位でのトリプトファンからアルギニンへの変異（Ｔ＞Ｃ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号６７、タンパク質配列 − 配列番号６８）。
遺伝性リンパ水腫 − ＶＥＧＦＲ３チロシンキナーゼにおける残基１０３５でのヒスチジンからアルギニンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号６９、タンパク質配列 − 配列番号７０）。
家族性アルツハイマー病 − プレセニリン１における残基１４３でのイソロイシンからバリンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号７１、タンパク質配列 − 配列番号７２）。
プリオン病 − プリオンタンパク質における残基１２９でのメチオニンからバリンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号７３、タンパク質配列 − 配列番号７４）。
慢性乳児神経皮膚関節症候群（ＣＩＮＣＡ）− クリオピリンにおける残基５７０でのチロシンからシステインへの変異（Ａ＞Ｇ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号７５、タンパク質配列 − 配列番号７６）。
デスミン関連心筋症（ＤＲＭ）− αＢクリスタリンにおける残基１２０でのアルギニンからグリシンへの変異（Ａ＞Ｇ変異）：
（ヌクレオチド配列 − 配列番号７７、タンパク質配列 − 配列番号７８）。
ベータ−サラセミア − 一例は、ヘモグロビンＢにおける残基１１５でのロイシンからプロリンへの変異である。
（ヌクレオチド配列 − 配列番号７９、タンパク質配列 − 配列番号８０）。
上記に記載した配列は例示であり、本開示の範囲を限定することは意図されていないことを理解しなければならない。疾患と関連しているおよびＣａｓ９：核酸編集酵素／ドメイン融合タンパク質による修正に適している点変異の好適な追加の配列、ならびに好適なガイドＲＮＡ配列が、本開示をベースとして当業者に明らかであろう。
レポーターシステム
本開示のいくつかの態様は、本明細書に記載した融合タンパク質のデアミナーゼ活性の検出に使用し得るレポーターシステムを提供する。いくつかの実施形態では、このレポーターシステムは、デアミナーゼ活性がルシフェラーゼの発現をもたらすルシフェラーゼベースのアッセイである。デアミナーゼドメイン（例えばＡＩＤドメイン）の潜在的な基質無差別性の影響を最小化するために、非意図的に脱アミノ化の標的となる可能性がある残基（例えば、レポーターシステム内のｓｓＤＮＡ上に潜在的に存在する可能性があるオフターゲットＣ残基）の数を最小化する。いくつかの実施形態では、目的の標的残基は、翻訳を開始することができないルシフェラーゼ遺伝子のＡＣＧ変異した開始コドンに位置し得る。所望のデアミナーゼ活性によりＡＣＧ＞ＡＵＧ修飾が生じ、そのため、ルシフェラーゼの翻訳ならびにデアミナーゼ活性の検出および定量化が可能になる。
いくつかの実施形態では、一本鎖Ｃ残基を最小化するために、変異した開始コドンと、Ｌｙｓ（ＡＡＡ）、Ａｓｎ（ＡＡＴ）、Ｌｅｕ（ＴＴＡ）、Ｉｌｅ（ＡＴＴ、ＡＴＡ）、Ｔｙｒ（ＴＡＴ）、またはＰｈｅ（ＴＴＴ）残基のストレッチからなるルシフェラーゼ遺伝子の先頭との間にリーダー配列が挿入されている。リーダー配列がルシフェラーゼの発現または活性に悪影響を及ぼさないことを確認するために、結果として生じた変異体を試験し得る。変異した開始コドンによるルシフェラーゼのバックグラウンド活性も決定し得る。
このレポーターシステムを使用して多くの異なるｓｇＲＮＡを試験し、例えば各デアミナーゼ（例えばＡＩＤ酵素）が標的にし得る標的ＤＮＡ配列に対する残基を決定し得る（図３）。Ｃａｓ９−ＤＮＡのバブルの大きさが未知であることから、特定のＣａｓ９デアミナーゼ融合タンパク質のオフターゲット効果を評価するために、非鋳型鎖を標的とするｓｇＲＮＡも試験し得る。いくつかの実施形態では、そのようなｓｇＲＮＡは、変異した開始コドンがｓｇＲＮＡと塩基対を作り得ないように設計される。
プログラム可能で部位特異的なＣからＵへの修飾が可能である融合タンパク質を同定すると、このタンパク質の活性を更に特徴付けることができる。ルシフェラーゼアッセイからのデータを、例えば、ｓｇＲＮＡ標的ＤＮＡに対するヌクレオチドが特定の融合タンパク質による脱アミノ化の標的とされることを説明するヒートマップに組み込むことができる。いくつかの実施形態では、各融合体に関するルシフェラーゼアッセイにおいて最高活性が生じる位置が「標的」位置と見なされ、その他の全てがオフターゲット位置と見なされる。
いくつかの実施形態では、様々なＡＰＯＢＥＣ３酵素またはこのデアミナーゼドメインとのＣａｓ９融合体が提供される。いくつかの実施形態では、その他の核酸編集酵素または触媒ドメインとのＣａｓ９融合タンパク質が提供され、このＣａｓ９融合タンパク質として、例えばシチジンデアミナーゼＡＰＯＢＥＣ１およびＡＣＦ１／ＡＳＦ等のｓｓＲＮＡ編集酵素、ならびにＣａｓ９に融合するとｓｓＤＮＡ編集活性に使用され得るアデノシンデアミナーゼのＡＤＡＴファミリ３８が挙げられる。そのような融合タンパク質の活性を、上記に記載した同じレポーターシステムおよびアッセイを使用して試験し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書において、不活性化された開始コドン、例えば３’−ＴＡＣ−５’から３’−ＣＡＣ−５’の鋳型鎖上の変異を含むレポーター遺伝子を含むレポーターシステムが提供される。標的Ｃの脱アミノ化に成功すると、対応するｍＲＮＡを５’−ＧＵＧ−３’の代わりに５’−ＡＵＧ−３’として転写することができ、レポーター遺伝子の翻訳が可能になる。好適なレポーター遺伝子は当業者に明らかであろう。
上記レポーターシステムの例示的な実施形態の説明は説明のみを目的として記載されており、限定することは意図されていない。追加のレポーターシステム、例えば上記で詳細に説明した例示的なシステムの変形も本開示に包含される。
実施例１：融合タンパク質
例示的なＣａｓ９：デアミナーゼ融合タンパク質を下記に記載する。
Ｃａｓ９：ヒトＡＩＤ融合体（Ｃ末端）
（下線：核局在化シグナル、二重下線：核外搬出シグナル、太字：リンカー配列）
Ｃａｓ９：ヒトＡＩＤ融合体（Ｎ末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー配列）
Ｃａｓ９：マウスＡＩＤ融合体（Ｃ末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー配列、二重下線：核外搬出シグナル）
Ｃａｓ９：ヒトＡＰＯＢＥＣ−３Ｇ融合体（Ｎ末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー（１ＮＬＳ）
Ｃａｓ９：ヒトＡＰＯＢＥＣ−１融合体（Ｎ末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー（１ＮＬＳ）、（配列番号９２）
Ｃａｓ９：ヒトＡＤＡＴ１融合体（Ｎ末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー配列）
Ｃａｓ９：ヒトＡＤＡＴ１融合体（末端）
（下線：核局在化シグナル、太字：リンカー配列）
実施例２：Ｃａｓ９融合タンパク質によるＰＩ３Ｋ点変異の修正
結果としてＰＩ３Ｋタンパク質においてＨ１０４７Ｒアミノ酸置換が生じる、ＰＩ３ＫＣＡ遺伝子のエクソン２０におけるＡ３１４０Ｇ点変異を、この変異タンパク質をコードする核酸と、Ｃａｓ９：ＡＩＤ（配列番号３０）融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１（配列番号９２）融合タンパク質およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングＰＩ３ＫＣＡ遺伝子中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させることにより修正する。各エクソン２０配列のゲノムＰＣＲ、例えば３０００〜３２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物の生成、およびその後のＰＣＴ増幅産物の配列決定により、Ａ３１４０Ｇ点変異を確認する。
エクソン２０中にＡ３１４０Ｇ点変異を含む変異ＰＩ３Ｋタンパク質を発現する細胞と、Ｃａｓ９：ＡＩＤ（配列番号３０）融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１（配列番号９２）融合タンパク質をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングＰＩ３ＫＣＡ遺伝子のアンチセンス鎖中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させる。このｓｇＲＮＡは、配列５’−ａｕｃｇｇａａｕｃｔａｕｕｕｕｇａｃｕｃｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａ ｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ ３’（配列番号８１）；５’−ｕｃｇｇａａｕｃｕａｕｕｕｕｇａｃｕｃｇｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａ ｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８２）；５’−ｃｕｕａｇａｕａａａａｃｕｇａｇｃａａｇｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａ ａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８３）；５’−ａｕｃｕａｕｕｕｕｇａｃｕｃｇｕｕｃｕｃｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇ ａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８４）；５’−ｕａａａａｃｕｇａｇｃａａｇａｇｇｃｕｕｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａ ｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８５）；５’−ｕｇｇｕｇｇｃｕｇｇａｃａａｃａａａａａｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａ ｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８６）；５’−ｇｃｕｇｇａｃａａｃａａａａａｕｇｇａｕｇｕｕｕｕａ ｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ−３’（配列番号８７）；または５’−ｇｕｇｕｕａａｕｕｕｇｕｃｇｕａｃｇｕａｇｕｕｕｕａｇａｇｃｕａｇａａａｕａｇｃａａｇｕｕａａａａｕａａａｇｇｃｕａ ｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃｕｕｕｕｕ（配列番号８８）である。
Ｃａｓ９：ＡＩＤ融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１融合タンパク質のシトシンデアミナーゼ活性により、変異Ｇ３１４０と塩基対を形成するシトシンのウリジンへの脱アミノ化が生じる。１回の複製後に野生型Ａ３１４０を回復させる。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、３０００〜３２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を適切なＰＣＲプライマーで増幅させる。このＰＣＲ増幅産物の配列決定により、融合タンパク質による細胞の処置後のＡ３１４０Ｇ点変異の修正を確認する。
実施例３：Ｃａｓ９融合タンパク質によるプレセニリン１点変異の修正
結果としてＰＳＥＮ１タンパク質においてＩ１４３Ｖアミノ酸置換が生じる、プレセニリン１（ＰＳＥＮ１）遺伝子のコドン１４３におけるＡ−＞Ｇ点変異を、この変異ＰＳＥＮ１タンパク質をコードする核酸と、Ｃａｓ９：ＡＩＤ（配列番号３０）融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１（配列番号９２）融合タンパク質およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングＰＳＥＮ１遺伝子中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させることにより修正する。家族性アルツハイマー病に関連する例示的なＰＳＥＮ１ Ｉ１４３Ｖ変異の説明に関して例えばＧａｌｌｏ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．２０１１；２５：４２５−４３１を参照されたい。各ＰＳＥＮ１配列のゲノムＰＣＲ、例えばエクソン１４３を中心とする約１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物の生成、およびその後のＰＣＴ増幅産物の配列決定により、Ａ−＞Ｇ点変異を確認する。
この変異ＰＳＥＮ１タンパク質を発現する細胞と、Ｃａｓ９：ＡＩＤ（配列番号３０）融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１（配列番号９２）融合タンパク質をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングＰＳＥＮ１遺伝子のアンチセンス鎖中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させる。Ｃａｓ９：ＡＩＤ融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１融合タンパク質のシトシンデアミナーゼ活性により、コドン１４３中の変異Ｇと塩基対を形成するシトシンのウリジンへの脱アミノ化が生じる。１回の複製後に野生型Ａを回復させる。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を適切なＰＣＲプライマーで増幅させる。このＰＣＲ増幅産物の配列決定により、融合タンパク質による細胞の処置後のＡ−＞Ｇ点変異の修正を確認する。
実施例４：Ｃａｓ９融合タンパク質によるα１−抗トリプシン点変異の修正
結果としてα１−抗トリプシンタンパク質においてＬ５５Ｐアミノ酸置換が生じる、α１−抗トリプシン遺伝子のコドン５５におけるＴ−＞Ｃ点変異を、この変異α１−抗トリプシンタンパク質をコードする核酸と、Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質（配列番号３５または配列番号３６）およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングα１−抗トリプシン遺伝子中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させることにより修正する。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に関連する例示的なコドン５５ Ｔ−＞Ｃ変異のより詳細な説明に関して例えばＰｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９３；１７：７４０−７４３を参照されたい。コドン５５をコードする各α１−抗トリプシン配列のゲノムＰＣＲ、例えば約１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物の生成、およびその後のＰＣＴ増幅産物の配列決定により、Ｔ−＞Ｃ点変異を確認する。
この変異α１−抗トリプシンタンパク質を発現する細胞と、Ｃａｓ９：ＡＩＤ（配列番号３０）融合タンパク質またはＣａｓ９：ＡＰＯＢＥＣ１（配列番号９２）融合タンパク質をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングα１−抗トリプシン遺伝子中のセンス鎖上のコドン５５における変異ヌクレオチドに定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させる。Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質のシトシンデアミナーゼ活性により変異シトシンのウリジンへの脱アミノ化が生じ、そのため、この変異が修正される。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を適切なＰＣＲプライマーで増幅させる。このＰＣＲ増幅産物の配列決定により、融合タンパク質による細胞の処置後のα１−抗トリプシン遺伝子のコドン５５におけるＴ−＞Ｃ点変異の修正を確認する。
実施例５：Ｃａｓ９融合タンパク質によるフォン・ウィルブランド因子点変異の修正
結果としてフォン・ウィルブランド因子タンパク質においてＣ５０９Ａアミノ酸置換が生じる、フォン・ウィルブランド因子遺伝子のコドン５０９におけるＴ−＞Ｃ点変異を、この変異フォン・ウィルブランド因子タンパク質をコードする核酸と、Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質（配列番号３５または配列番号３６）およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングフォン・ウィルブランド因子遺伝子のセンス鎖中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させることにより修正する。フォン・ウィルブランド病（ｖＷＤ）に関連する例示的なフォン・ウィルブランド因子Ｃ５０９Ａ変異の説明に関して例えばＬａｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１９９２；８２：６６−７を参照されたい。各フォン・ウィルブランド因子ゲノム配列のゲノムＰＣＲ、例えばエクソン５０９を中心とする約１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物の生成、およびその後のＰＣＴ増幅産物の配列決定により、Ｔ−＞Ｃ点変異を確認する。
この変異フォン・ウィルブランド因子タンパク質を発現する細胞と、Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質（配列番号３５または配列番号３６）をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングフォン・ウィルブランド因子遺伝子のセンス鎖における変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させる。Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質のシトシンデアミナーゼ活性によりコドン５０９中の変異シトシンのウリジンへの脱アミノ化が生じ、そのため、この変異が修正される。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を適切なＰＣＲプライマーで増幅させる。このＰＣＲ増幅産物の配列決定により、融合タンパク質による細胞の処置後のフォン・ウィルブランド因子遺伝子のコドン５０９におけるＴ−＞Ｃ点変異の修正を確認する。
実施例６：Ｃａｓ９融合タンパク質によるカスパーゼ９点変異の修正 − 神経芽細胞腫
結果としてカスパーゼ−９タンパク質においてＬ１９７Ｐアミノ酸置換が生じる、カスパーゼ−９遺伝子のコドン１９７におけるＴ−＞Ｃ点変異を、この変異カスパーゼ−９タンパク質をコードする核酸と、Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質（配列番号３５または配列番号３６）およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングカスパーゼ−９遺伝子のセンス鎖中の変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させることにより修正する。神経芽細胞腫（ＮＢ）に関連する例示的なカスパーゼ−９ Ｌ１９７Ｐ変異の説明に関して例えばＬｅｎｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２０１１；７：ｅ１００２１０４を参照されたい。各カスパーゼ−９ゲノム配列のゲノムＰＣＲ、例えばエクソン１９７を中心とする約１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物の生成、およびその後のＰＣＴ増幅産物の配列決定により、Ｔ−＞Ｃ点変異を確認する。
この変異カスパーゼ−９タンパク質を発現する細胞と、Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質（配列番号３５または配列番号３６）をコードする発現構築物およびこの融合タンパク質の標的をこのコーディングカスパーゼ−９遺伝子のセンス鎖における変異部位に定める適切に設計したｓｇＲＮＡとを接触させる。Ｃａｓ９：ＡＤＡＴ１融合タンパク質のシトシンデアミナーゼ活性によりコドン１９７中の変異シトシンのウリジンへの脱アミノ化が生じ、そのため、この変異が修正される。処置した細胞のゲノムＤＮＡを抽出し、１００〜２５０個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を適切なＰＣＲプライマーで増幅させる。このＰＣＲ増幅産物の配列決定により、融合タンパク質による細胞の処置後のカスパーゼ−９遺伝子のコドン１９７におけるＴ−＞Ｃ点変異の修正を確認する。
実施例７：２種のｄＣａｓ９−ＡＰＯＢＥＣ１融合タンパク質のデアミナーゼ活性
下記の異なるリンカーを有する２種のｄＣａｓ９−ＡＰＯＢＥＣ１融合タンパク質を生成した。
ｒＡＰＯＢＥＣ１＿ＧＧＳ＿ｄＣａｓ９：
下線＝ｒＡＰＯＢＥＣ１、二重下線＝ｄＣａｓ９。
ｒＡＰＯＢＥＣ１＿（ＧＧＳ）３＿ｄＣａｓ９：
下線＝ｒＡＰＯＢＥＣ１、二重下線＝ｄＣａｓ９。
両方の融合タンパク質のデアミナーゼ活性を調べた。デアミナーゼアッセイはＮｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１４，４２，ｐ．１０９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４，２７９，ｐ５３３７９、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２０１４，８８，ｐ．３８５０およびＪ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２００６，８０，ｐ．５９９２を出典としており、これらのそれぞれの内容全体が参照により援用される。
これらの融合タンパク質をコードする発現構築物を、ＣＭＶ主鎖プラスミド（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド５２９７０、Ｇｕｉｌｉｎｇｅｒ ＪＰ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＤＢ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｌｙ ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｃａｓ９ ｔｏ ＦｏｋＩ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４；３２（６）：５７７−８２を参照されたい）に挿入した。ＴＮＴ Ｑｕｉｃｋ Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、これらの融合タンパク質を発現させた。９０分後、５μＬの溶解物を、５’−標識したｓｓＤＮＡ基質（Ｃｙ３−ＡＴＴＡＴＴＡＴＴＡＴＴＣＣＧＣＧＧＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴ、配列番号９６）およびＵＤＧ（ウラシルＤＮＡグリコシラーゼ）と共に３７℃で３時間にわたりインキュベートした。次いで、ＮａＯＨの１Ｍ溶液（１０μＬ）を添加し、脱塩基部位でＤＮＡを切断した。図４を参照されたい。このＤＮＡを、１０％ＴＢＥ ＰＡＧＥゲル上で分解させた（図５）。ｐＵＣ１９をＴＮＴシステム中でインキュベートした陰性コントロール、およびこのＤＮＡを標的Ｃの代わりに「Ｕ」で合成している陽性コントロールも含めた。図５には、両方の融合タンパク質がシトシンデアミナーゼ活性を示すことが図示されている。
参考文献
１．Ｈｕｍｂｅｒｔ Ｏ，Ｄａｖｉｓ Ｌ，Ｍａｉｚｅｌｓ Ｎ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ：ｔｏｏｌｓ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ．２０１２；４７（３）：２６４−８１．ＰＭＩＤ：２２５３０７４３．
２．Ｐｅｒｅｚ−Ｐｉｎｅｒａ Ｐ，Ｏｕｓｔｅｒｏｕｔ ＤＧ，Ｇｅｒｓｂａｃｈ ＣＡ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０１２；１６（３−４）：２６８−７７．ＰＭＩＤ：２２８１９６４４．
３．Ｕｒｎｏｖ ＦＤ，Ｒｅｂａｒ ＥＪ，Ｈｏｌｍｅｓ ＭＣ，Ｚｈａｎｇ ＨＳ，Ｇｒｅｇｏｒｙ ＰＤ．Ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ．２０１０；１１（９）：６３６−４６．ＰＭＩＤ：２０７１７１５４．
４．Ｊｏｕｎｇ ＪＫ，Ｓａｎｄｅｒ ＪＤ．ＴＡＬＥＮｓ：ａ ｗｉｄｅｌｙ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１３；１４（１）：４９−５５．ＰＭＩＤ：２３１６９４６６．
５．Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｒｅｗｒｉｔｉｎｇ ａ ｇｅｎｏｍｅ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１３；４９５，（７４３９）：５０−１．ＰＭＩＤ：２３４６７１６４．
６．Ｐａｎ Ｙ，Ｘｉａ Ｌ，Ｌｉ ＡＳ，Ｚｈａｎｇ Ｘ，Ｓｉｒｏｉｓ Ｐ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，Ｌｉ Ｋ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３；５５（１）：５４−６２．ＰＭＩＤ：２３０８９９４５．
７．Ｄｅ Ｓｏｕｚａ，Ｎ．Ｐｒｉｍｅｒ：ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１２；９（１）：２７．ＰＭＩＤ：２２３１２６３８．
８．Ｓａｎｔｉａｇｏ Ｙ，Ｃｈａｎ Ｅ，Ｌｉｕ ＰＱ，Ｏｒｌａｎｄｏ Ｓ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｕｒｎｏｖ ＦＤ，Ｈｏｌｍｅｓ ＭＣ，Ｇｕｓｃｈｉｎ Ｄ，Ｗａｉｔｅ Ａ，Ｍｉｌｌｅｒ ＪＣ，Ｒｅｂａｒ ＥＪ，Ｇｒｅｇｏｒｙ ＰＤ，Ｋｌｕｇ Ａ，Ｃｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄ ＴＮ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｚｉｎｃ−ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８；１０５（１５）：５８０９−１４．ＰＭＩＤ：１８３５９８５０．
９．Ｃａｒｇｉｌｌ Ｍ，Ａｌｔｓｈｕｌｅｒ Ｄ，Ｉｒｅｌａｎｄ Ｊ，Ｓｋｌａｒ Ｐ，Ａｒｄｌｉｅ Ｋ，Ｐａｔｉｌ Ｎ，Ｌａｎｅ ＣＲ，Ｌｉｍ ＥＰ，Ｋａｌｙａｎａｒａｍａｎ Ｎ，Ｎｅｍｅｓｈ Ｊ，Ｚｉａｕｇｒａ Ｌ，Ｆｒｉｅｄｌａｎｄ Ｌ，Ｒｏｌｆｅ Ａ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ Ｊ，Ｌｉｐｓｈｕｔｚ Ｒ，Ｄａｌｅｙ ＧＱ，Ｌａｎｄｅｒ ＥＳ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．１９９９；２２（３）：２３１−８．ＰＭＩＤ：１０３９１２０９．
１０．Ｊａｎｓｅｎ Ｒ，ｖａｎ Ｅｍｂｄｅｎ ＪＤ，Ｇａａｓｔｒａ Ｗ，Ｓｃｈｏｕｌｓ ＬＭ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＤＮＡ ｒｅｐｅａｔｓ ｉｎ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００２；４３（６）：１５６５−７５．ＰＭＩＤ：１１９５２９０５．
１１．Ｍａｌｉ Ｐ，Ｅｓｖｅｌｔ ＫＭ，Ｃｈｕｒｃｈ ＧＭ．Ｃａｓ９ ａｓ ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１３；１０（１０）：９５７−６３．ＰＭＩＤ：２４０７６９９０．
１２．Ｊｏｒｅ ＭＭ，Ｌｕｎｄｇｒｅｎ Ｍ，ｖａｎ Ｄｕｉｊｉｎ Ｅ，Ｂｕｌｔｅｍａ ＪＢ，Ｗｅｓｔｒａ ＥＲ，Ｗａｇｈｍａｒｅ ＳＰ，Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ Ｂ，Ｐｕｌ Ｕ，Ｗｕｒｍ Ｒ，Ｗａｇｎｅｒ Ｒ，Ｂｅｉｊｅｒ ＭＲ，Ｂａｒｅｎｄｒｅｇｔ Ａ，Ｓｈｏｕ Ｋ，Ｓｎｉｊｄｅｒｓ ＡＰ，Ｄｉｃｋｍａｎ ＭＪ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ，Ｂｏｅｋｅｍａ ＥＪ，Ｈｅｃｋ ＡＪ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｏｏｓｔ Ｊ，Ｂｒｏｕｎｓ ＳＪ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ＤＮＡ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｃａｓｃａｄｅ．Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１；１８（５）：５２９−３６．ＰＭＩＤ：２１４６０８４３．
１３．Ｈｏｒｖａｔｈ Ｐ，Ｂａｒｒａｎｇｏｕ Ｒ．ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ，ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ａｒｃｈａｅａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１０；３２７（５９６２）：１６７−７０．ＰＭＩＤ：２００５６８８２．
１４．Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ Ｂ，Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ＳＨ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ．ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ａｒｃｈａｅａ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１２；４８２（７３８５）：３３１−８．ＰＭＩＤ：２２３３７０５２．
１５．Ｇａｓｉｕｎａｓ Ｇ，Ｓｉｋｓｎｙｓ Ｖ．ＲＮＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＤＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｃａｓ９ ｏｆ ｔｈｅ ＣＲＩＳＰＲ ｓｙｓｔｅｍ：Ｈｏｌｙ Ｇｒａｉｌ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ？Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３；２１（１１）：５６２−７．ＰＭＩＤ：２４０９５３０３．
１６．Ｑｉ ＬＳ，Ｌａｒｓｏｎ ＭＨ，Ｇｉｌｂｅｒｔ ＬＡ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＪＳ，Ａｒｋｉｎ ＡＰ，Ｌｉｍ ＷＡ．Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ ａｓ ａｎ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５２（５）：１１７３−８３．ＰＭＩＤ：２３４５２８６０．
１７．Ｐｅｒｅｚ−Ｐｉｎｅｒａ Ｐ，Ｋｏｃａｋ ＤＤ，Ｖｏｃｋｌｅｙ ＣＭ，Ａｄｌｅｒ ＡＦ，Ｋａｂａｄｉ ＡＭ，Ｐｏｌｓｔｅｉｎ ＬＲ，Ｔｈａｋｏｒｅ ＰＩ，Ｇｌａｓｓ ＫＡ，Ｏｕｓｔｅｒｏｕｔ ＤＧ，Ｌｅｏｎｇ ＫＷ，Ｇｕｉｌａｋ Ｆ，Ｃｒａｗｆｏｒｄ ＧＥ，Ｒｅｄｄｙ ＴＥ，Ｇｅｒｓｂａｃｈ ＣＡ．ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｇｅｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９−ｂａｓｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１３；１０（１０）：９７３−６．ＰＭＩＤ：２３８９２８９５．
１８．Ｍａｌｉ Ｐ，Ａａｃｈ Ｊ，Ｓｔｒａｎｇｅｓ ＰＢ，Ｅｓｖｅｌｔ ＫＭ，Ｍｏｏｓｂｕｒｎｅｒ Ｍ，Ｋｏｓｕｒｉ Ｓ，Ｙａｎｇ Ｌ，Ｃｈｕｒｃｈ ＧＭ．ＣＡＳ９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｐａｉｒｅｄ ｎｉｃｋａｓｅｓ ｆｏｒ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３；３１（９）：８３３−８．ＰＭＩＤ：２３９０７１７１．
１９．Ｇｉｌｂｅｒｔ ＬＡ，Ｌａｒｓｏｎ ＭＨ，Ｍｏｒｓｕｔ Ｌ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｂｒａｒ ＧＡ，Ｔｏｒｒｅｓ ＳＥ，Ｓｔｅｒｎ−Ｇｉｎｏｓｓａｒ Ｎ，Ｂｒａｎｄｍａｎ Ｏ，Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ ＥＨ，Ｄｏｕｄｎａ ＪＡ，Ｌｉｍ ＷＡ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＪＳ，Ｑｉ ＬＳ．ＣＲＩＳＰＲ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｄｕｌａｒ ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５４（２）：４４２−５１．ＰＭＩＤ：２３８４９９８１．
２０．Ｌａｒｓｏｎ ＭＨ，Ｇｉｌｂｅｒｔ ＬＡ，Ｗａｎｇ Ｘ，Ｌｉｍ ＷＡ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ ＪＳ，Ｑｉ ＬＳ．ＣＲＩＳＰＲ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（ＣＲＩＳＰＲｉ） ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．２０１３；８（１１）：２１８０−９６．ＰＭＩＤ：２４１３６３４５．
２１．Ｍａｌｉ Ｐ，Ｙａｎｇ Ｌ，Ｅｓｖｅｌｔ ＫＭ，Ａａｃｈ Ｊ，Ｇｕｅｌｌ Ｍ，ＤｉＣａｒｌｏ ＪＥ，Ｎｏｒｖｉｌｌｅ ＪＥ，Ｃｈｕｒｃｈ ＧＭ．ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｖｉａ Ｃａｓ９．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３；３３９（６１２１）：８２３−６．ＰＭＩＤ：２３２８７７２２．
２２．Ｃｏｌｅ−Ｓｔｒａｕｓｓ Ａ，Ｙｏｏｎ Ｋ，Ｘｉａｎｇ Ｙ，Ｂｙｒｎｅ ＢＣ，Ｒｉｃｅ ＭＣ，Ｇｒｙｎ Ｊ，Ｈｏｌｌｏｍａｎ ＷＫ，Ｋｍｉｅｃ ＥＢ．Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｓｉｃｋｌｅ ｃｅｌｌ ａｎｅｍｉａ ｂｙ ａｎ ＲＮＡ−ＤＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９６；２７３（５２８０）：１３８６−９．ＰＭＩＤ：８７０３０７３．
２３．Ｔａｇａｌａｋｉｓ ＡＤ，Ｏｗｅｎ ＪＳ，Ｓｉｍｏｎｓ ＪＰ．Ｌａｃｋ ｏｆ ＲＮＡ−ＤＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ｃｈｉｍｅｒａｐｌａｓｔ） ｍｕｔａｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｓ．Ｍｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ Ｄｅｖ．２００５；７１（２）：１４０−４．ＰＭＩＤ：１５７９１６０１．
２４．Ｒａｙ Ａ，Ｌａｎｇｅｒ Ｍ．Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ：ｅｎｄｓ ａｓ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．２００２；７（１０）：４３５−４０．ＰＭＩＤ １２３９９１７７．
２５．Ｂｒｉｔｔ ＡＢ，Ｍａｙ ＧＤ．Ｒｅ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｇｅｎｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．２００３；８（２）：９０−５．ＰＭＩＤ：１２５９７８７６．
２６．Ｖａｇｎｅｒ Ｖ，Ｅｈｒｌｉｃｈ ＳＤ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ＤＮＡ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｖａｒｉｅｓ ａｌｏｎｇ ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ．Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１９８８；１７０（９）：３９７８−８２．ＰＭＩＤ：３１３７２１１．
２７．Ｓａｌｅｈ−Ｇｏｈａｒｉ Ｎ，Ｈｅｌｌｅｄａｙ Ｔ．Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｐａｉｒｓ ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｓ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００４；３２（１２）：３６８３−８．ＰＭＩＤ：１５２５２１５２．
２８．Ｌｏｍｂａｒｄｏ Ａ，Ｇｅｎｏｖｅｓｅ Ｐ，Ｂｅａｕｓｅｊｏｕｒ ＣＭ，Ｃｏｌｌｅｏｎｉ Ｓ，Ｌｅｅ ＹＬ，Ｋｉｍ ＫＡ，Ａｎｄｏ Ｄ，Ｕｒｎｏｖ ＦＤ，Ｇａｌｌｉ Ｃ，Ｇｒｅｇｏｒｙ ＰＤ，Ｈｏｌｍｅｓ ＭＣ，Ｎａｌｄｉｎｉ Ｌ．Ｇｅｎｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ｚｉｎｃｅ ｆｉｎｇｅｒ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒａｓｅ−ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００７；２５（１１）：１２９８−３０６．ＰＭＩＤ：１７９６５７０７．
２９．Ｃｏｎｔｉｃｅｌｌｏ ＳＧ．Ｔｈｅ ＡＩＤ／ＡＰＯＢＥＣ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｍｕｔａｔｏｒｓ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．２００８；９（６）：２２９．ＰＭＩＤ：１８５９８３７２．
３０．Ｒｅｙｎａｕｄ ＣＡ，Ａｏｕｆｏｕｃｈｉ Ｓ，Ｆａｉｌｉ Ａ，Ｗｅｉｌｌ ＪＣ．Ｗｈａｔ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＡＩＤ：ｍｕｔａｔｏｒ，ｏｒ ａｓｓｅｍｂｌｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｍｕｔａｓｏｍｅ？Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；４（７）：６３１−８．
３１．Ｂｈａｇｗａｔ ＡＳ．ＤＮＡ−ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅｓ：ｆｒｏｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｔｏ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｅｆｅｎｓｅ．ＤＮＡ Ｒｅｐａｉｒ（Ａｍｓｔ）．２００４；３（１）：８５−９．ＰＭＩＤ：１４６９７７６３．
３２．Ｎａｖａｒａｔｎａｍ Ｎ，Ｓａｒｗａｒ Ｒ．Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｃｙｔｉｄｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ．２００６；８３（３）：１９５−２００．ＰＭＩＤ：１６７２０５４７．
３３．Ｈｏｌｄｅｎ ＬＧ，Ｐｒｏｃｈｎｏｗ Ｃ，Ｃｈａｎｇ ＹＰ，Ｂｒａｎｓｔｅｉｔｔｅｒ Ｒ，Ｃｈｅｌｉｃｏ Ｌ，Ｓｅｎ Ｕ，Ｓｔｅｖｅｎｓ ＲＣ，Ｇｏｏｄｍａｎ ＭＦ，Ｃｈｅｎ ＸＳ．Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ−ｖｉｒａｌ ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５６（７２１８）：１２１−４．ＰＭＩＤ：１８８４９９６８．
３４．Ｃｈｅｌｉｃｏ Ｌ，Ｐｈａｍ Ｐ，Ｐｅｔｒｕｓｋａ Ｊ，Ｇｏｏｄｍａｎ ＭＦ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ＤＮＡ−ｔａｒｇｅｔｅｄ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｉｄｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ａｎｄ ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００９；２８４（４１）．２７７６１−５．ＰＭＩＤ：１９６８４０２０．
３５．Ｐｈａｍ Ｐ，Ｂｒａｎｓｔｅｉｔｔｅｒ Ｒ，Ｇｏｏｄｍａｎ ＭＦ．Ｒｅｗａｒｄ ｖｅｒｓｕｓ ｒｉｓｋ：ＤＮＡ ｃｙｔｉｄｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅｓ ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００５；４４（８）：２７０３−１５．ＰＭＩＤ １５７２３５１６．
３６．Ｂａｒｂａｓ ＣＦ，Ｋｉｍ ＤＨ．Ｃｙｔｉｄｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｆｕｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ．ＰＣＴ Ｉｎｔ Ａｐｐｌ．２０１０；ＷＯ２０１０１３２０９２Ａ２ ２０１０１１１８．
３７．Ｃｈｅｎ Ｘ，Ｚａｒｏ ＪＬ，Ｓｈｅｎ ＷＣ．Ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｙ，ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３；６５（１０）：１３５７−６９．ＰＭＩＤ：２３０２６６３７．
３８．Ｇｅｒｂｅｒ ＡＰ，Ｋｅｌｌｅｒ Ｗ．ＲＮＡ ｅｄｉｔｉｎｇ ｂｙ ｂａｓｅ ｄｅａｍｉｎａｔｉｏｎ：ｍｏｒｅ ｅｎｚｙｍｅｓ，ｍｏｒｅ ｔａｒｇｅｔｓ，ｎｅｗ ｍｙｓｔｅｒｉｅｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ．２００１；２６（６）：３７６−８４．ＰＭＩＤ：１１４０６４１１．
３９．Ｙｕａｎ Ｌ，Ｋｕｒｅｋ Ｉ，Ｅｎｇｌｉｓｈ Ｊ，Ｋｅｅｎａｎ Ｒ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ．２００５；６９（３）：３７３−９２．ＰＭＩＤ：１６１４８３０３．
４０．Ｃｏｂｂ ＲＥ，Ｓｕｎ Ｎ，Ｚｈａｏ Ｈ．Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ａｓ ａ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１３；６０（１）：８１−９０．ＰＭＩＤ：２２４６５７９５．
４１．Ｂｅｒｓｈｔｅｉｎ Ｓ，Ｔａｗｆｉｋ ＤＳ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２００８；１２（２）：１５１−８．ＰＭＩＤ：１８２８４９２４．
４２．Ｈｉｄａ Ｋ，Ｈａｎｅｓ Ｊ，Ｏｓｔｅｒｍｅｉｅｒ Ｍ．Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２００７；５９（１５）：１５６２−７８．ＰＭＩＤ：１７９３３４１８．
４３．Ｅｓｖｅｌｔ ＫＭ，Ｃａｒｌｓｏｎ ＪＣ，Ｌｉｕ ＤＲ．Ａ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１１；４７２（７３４４）：４９９−５０３．ＰＭＩＤ：２１４７８８７３．
４４．Ｈｕｓｉｍｉ Ｙ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｃｅｌｌｓｔａｔ．Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９８９；２５：１−４３．ＰＭＩＤ：２６９６３３８．
４５．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ，Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．Ｔｈｅ Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ＴｏｌＡ ｉｓ ｔｈｅ ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｃｅｌｌ．１９９７；９０（２）：３５１−６０．ＰＭＩＤ：９２４４３０８．
４６．Ｎｅｌｓｏｎ ＦＫ，Ｆｒｉｅｄｍａｎ ＳＭ，Ｓｍｉｔｈ ＧＰ．Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ：ａ ｎｏｎｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｎｐｏｌａｒ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ｇｅｎｅ ＩＩＩ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．１９８１；１０８（２）：３３８−５０．ＰＭＩＤ：６２５８２９２．
４７．Ｒａｋｏｎｊａｃ Ｊ，Ｍｏｄｅｌ Ｐ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｐＩＩＩ ｉｎ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｐｈａｇｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９９８；２８２（１）：２５−４１．
４８．Ｓｍｉｔｈ ＧＰ．Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｓｉｏｎ ｐｈａｇｅ：ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｖｉｒｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９８５；２２８（４７０５）：１３１５−７．ＰＭＩＤ：４００１９４４．
４９．Ｓｈｅｒｉｄａｎ Ｃ．Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｉｎｄｓ ｉｔｓ ｎｉｃｈｅ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１；２９（２）：１２１−８．ＰＭＩＤ：２１３０１４３５．
５０．Ｌｅｅ ＪＷ，Ｓｏｕｎｇ ＹＨ，Ｋｉｍ ＳＹ，Ｌｅｅ ＨＷ，Ｐａｒｋ ＷＳ，Ｎａｍ ＳＷ，Ｋｉｍ ＳＨ，Ｌｅｅ ＪＹ，Ｙｏｏ ＮＪ，Ｌｅｅ ＳＨ．ＰＩＫ３ＣＡ ｇｅｎｅ ｉｓ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ｍｕｔａｔｅｄ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００５；２４（８）：１４７７−８０．ＰＭＩＤ：１５６０８６７８．
５１．Ｉｋｅｄｉｏｂｉ ＯＮ，Ｄａｖｉｅｓ Ｈ，Ｂｉｇｎｅｌｌ Ｇ，Ｅｄｋｉｎｓ Ｓ，Ｓｔｅｖｅｎｓ Ｃ，Ｏ’Ｍｅａｒａ Ｓ，Ｓａｎｔａｒｉｕｓ Ｔ，Ａｖｉｓ Ｔ，Ｂａｒｔｈｏｒｐｅ Ｓ，Ｂｒａｃｋｅｎｂｕｒｙ Ｌ，Ｂｕｃｋ Ｇ，Ｂｕｔｌｅｒ Ａ，Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｊ，Ｃｏｌｅ Ｊ，Ｄｉｃｋｓ Ｅ，Ｆｏｒｂｅｓ Ｓ，Ｇｒａｙ Ｋ，Ｈａｌｌｉｄａｙ Ｋ，Ｈａｒｒｉｓｏｎ Ｒ，Ｈｉｌｌｓ Ｋ，Ｈｉｎｔｏｎ Ｊ，Ｈｕｎｔｅｒ Ｃ，Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ Ａ，Ｊｏｎｅｓ Ｄ，Ｋｏｓｍｉｄｏｕ Ｖ，Ｌｕｇｇ Ｒ，Ｍｅｎｚｉｅｓ Ａ，Ｍｉｒｏｎｅｎｋｏ Ｔ，Ｐａｒｋｅｒ Ａ，Ｐｅｒｒｙ Ｊ，Ｒａｉｎｅ Ｋ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ Ｄ，Ｓｈｅｐｈｅｒｄ Ｒ，Ｓｍａｌｌ Ａ，Ｓｍｉｔｈ Ｒ，Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｈ，Ｓｔｅｐｈｅｎｓ Ｐ，Ｔｅａｑｕｅ Ｊ，Ｔｏｆｔｓ Ｃ，Ｖａｒｉａｎ Ｊ，Ｗｅｂｂ Ｔ，Ｗｅｓｔ Ｓ，Ｗｉｄａａ Ｓ，Ｙａｔｅｓ Ａ，Ｒｅｉｎｈｏｌｄ Ｗ，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ ＪＮ，Ｓｔｒａｔｔｏｎ ＭＲ，Ｆｕｔｒｅａｌ ＰＡ，Ｗｏｏｓｔｅｒ Ｒ．Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ２４ ｋｎｏｗｎ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＮＣＩ−６０ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｓｅｔ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００６；５（１１）：２６０６−１２．ＰＭＩＤ：１７０８８４３７．
本明細書で言及した、例えば背景、概要、詳細な説明、実施例および／または参考文献セクションで言及した全ての刊行物、特許、特許出願、公報およびデータベースエントリ（例えば配列データベースエントリ）は、個々の刊行物、特許、特許出願、公報およびデータベースエントリが参照により本明細書に具体的におよび個々に援用されたかのようにその全体が参照により援用される。矛盾する場合には、本出願、例えば本明細書における任意の定義が統制するであろう。
均等物および範囲
当業者は、本明細書に記載した実施形態の多くの均等物を認識し得るか、または通常の実験のみを使用して確認することができる。本開示の範囲は上記の説明に限定されることを意図されておらず、特許請求の範囲で規定されている通りである。
「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」等の冠詞は、反対の指示がない限りまたは文脈から別途明らかでない限り、１つまたは複数を意味し得る。ある群の２つ以上のメンバーの間に「または（ｏｒ）」を含む請求項または記載は、反対の指示がない限りまたは文脈から別途明らかでない限り、この群のメンバーのうちの１つ、複数または全てが存在する場合に満たされると見なされる。群の２つ以上のメンバーの間に「または（ｏｒ）」を含む群の開示は、この群の厳密に１つのメンバーが存在する実施形態、この群の複数のメンバーが存在する実施形態、およびこの群のメンバーの全てが存在する実施形態を提供する。簡略化のために、これらの実施形態は本明細書において個々に詳述されていないが、これらの実施形態のそれぞれが本明細書に記載されており、具体的に特許請求されるまたは特許請求されない場合があることが理解されるであろう。
本発明は、１つもしくは複数の請求項からのまたは本明細書の１つもしくは複数の関連部分からの１つまたは複数の限定、要素、節または記述用語が別の請求項に導入される全ての変形形態、組み合わせおよび順列を包含することを理解しなければならない。例えば、別の請求項に依存する請求項を改変して、同じ基礎の請求項に依存する任意のその他の請求項中に見出される限定のうちの１つまたは複数を含ませることができる。更に、特許請求の範囲が組成物を列挙する場合、別途示さない限りまたは矛盾もしくは不一致が生じるであろうことが当業者に明らかでない限り、本明細書に開示した製造方法もしくは使用方法のうちのいずれかに従ってまたは当技術分野で既知の方法（存在する場合）に従って、この組成物を製造する方法または使用する方法が包含されることを理解しなければならない。
要素がリストとして示される場合、例えばマーカッシュ群形式で示される場合、この要素のあらゆる可能な部分群も開示されており、任意の要素または要素の部分群をこの群から除去し得ることを理解しなければならない。用語「含む」は開放的であることが意図されており、追加の要素または工程の包含を許容することも留意される。一般に、ある実施形態、ある製品またはある方法が特定の要素、特徴または工程を含むと見なされる場合、そのような要素、特徴または工程からなるまたは本質的になる実施形態、製品または方法も提供されることを理解すべきである。簡略化のために、これらの実施形態は本明細書において個別に詳述されていないが、これらの実施形態のそれぞれが本明細書に記載されており、具体的に特許請求されるまたは特許請求されない場合があることが理解されるであろう。
範囲が示されている場合には終点が含まれる。更に、別途示さない限りまたは文脈および／もしくは当業者の知識から別途明らかでない限り、範囲として表される値は、文脈が別途明確に規定しない限り、いくつかの実施形態では、述べられた範囲内の任意の具体的な値をこの範囲の下限の単位の十分の一まで仮定し得ることを理解しなければならない。簡略化のために、各範囲中の値は本明細書において個別に詳述されていないが、これらの値のそれぞれが本明細書に記載されており、具体的に特許請求されるまたは特許請求されない場合があることが理解されるであろう。別途示さない限りまたは文脈および／もしくは当業者の知識から別途明らかでない限り、範囲として表される値は、示された範囲内の任意の部分範囲を仮定することができ、この部分範囲の終点は、この範囲の下限の単位の十分の一と同程度の正確さまで表されることも理解しなければならない。
加えて、本発明の任意の特定の実施形態が請求項のうちの任意の１つまたは複数から明確に除外される場合があることを理解しなければならない。範囲が示されている場合、この範囲内の任意の値が請求項のうちの任意の１つまたは複数から明確に除外される場合がある。本発明の組成物および／または方法の任意の実施形態、要素、特徴、用途または態様を任意の１つまたは複数の請求項から除外し得る。簡略化のために、１つまたは複数の要素、特徴、目的または態様が除外されている実施形態の全てが本明細書において明確に規定されているわけではない。

Claims (62)

  1. （ｉ）ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインと、
    （ｉｉ）核酸編集ドメインと
    を含む融合タンパク質。
  2. 前記核酸編集ドメインがＤＮＡ編集ドメインである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  3. 前記核酸編集ドメインがデアミナーゼドメインである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  4. デアミナーゼがシチジンデアミナーゼである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  5. デアミナーゼがアポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集複合体（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリのデアミナーゼである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  6. デアミナーゼがＡＰＯＢＥＣ１ファミリのデアミナーゼである、請求項５に記載の融合タンパク質。
  7. デアミナーゼが活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）である、請求項５に記載の融合タンパク質。
  8. デアミナーゼがＡＣＦ１／ＡＳＥデアミナーゼである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  9. デアミナーゼがアデノシンデアミナーゼである、請求項１に記載の融合タンパク質。
  10. デアミナーゼがＡＤＡＴファミリのデアミナーゼである、請求項９に記載の融合タンパク質。
  11. 前記核酸編集ドメインが前記Ｃａｓ９ドメインのＮ末端に融合している、請求項１に記載の融合タンパク質。
  12. 前記核酸編集ドメインが前記Ｃａｓ９ドメインのＣ末端に融合している、請求項１に記載の融合タンパク質。
  13. 前記Ｃａｓ９ドメインおよび前記核酸編集ドメインがリンカーを介して融合している、請求項１に記載の融合タンパク質。
  14. リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎが独立して１〜３０の整数である、請求項１に記載の融合タンパク質。
  15. ＤＮＡ編集の方法であって、ＤＮＡ分子と、
    （ａ）ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９ドメインおよび核酸編集ドメインを含む融合タンパク質、および
    （ｂ）前記（ａ）の融合タンパク質の標的を前記ＤＮＡ分子の標的ＤＮＡ配列に定めるｓｇＲＮＡ
    とを接触させることを含み、
    前記ＤＮＡ分子が、前記ＤＮＡ分子のヌクレオチド塩基の脱アミノ化に有効な量で、および前記脱アミノ化に適した条件下で前記融合タンパク質および前記ｓｇＲＮＡと接触させられる、方法。
  16. 前記核酸編集ドメインがデアミナーゼドメインである、請求項１５に記載の方法。
  17. デアミナーゼがシチジンデアミナーゼである、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記デアミナーゼがアポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集複合体（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリのデアミナーゼである、請求項１６または１７に記載の方法。
  19. デアミナーゼがＡＰＯＢＥＣ１ファミリのデアミナーゼである、請求項１６に記載の方法。
  20. デアミナーゼが活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）である、請求項１６に記載の方法。
  21. デアミナーゼがＡＣＦ１／ＡＳＥデアミナーゼである、請求項１６に記載の方法。
  22. デアミナーゼがアデノシンデアミナーゼである、請求項１６に記載の方法。
  23. デアミナーゼがＡＤＡＴファミリのデアミナーゼである、請求項１６に記載の方法。
  24. 前記核酸編集ドメインが前記Ｃａｓ９ドメインのＮ末端に融合している、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記核酸編集ドメインが前記Ｃａｓ９ドメインのＣ末端に融合している、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記Ｃａｓ９ドメインおよび前記核酸編集ドメインがリンカーを介して融合している、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎが独立して１〜３０の整数である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記標的ＤＮＡ配列が疾患または障害に関連する配列を含み、前記ヌクレオチド塩基の前記脱アミノ化により、疾患または障害に関連しない配列が生じる、請求項１５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記標的ＤＮＡ配列が疾患または障害に関連する点変異を含み、前記脱アミノ化により前記点変異が修正される、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記標的ＤＮＡ配列が、疾患または障害に関連するＴ→ＣまたはＡ→Ｇ点変異を含み、変異ＣまたはＧ塩基の脱アミノ化により、疾患または障害に関連しない配列が生じる、請求項１５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記疾患または障害に関連する前記配列がタンパク質をコードし、前記脱アミノ化により、前記疾患または障害に関連する前記配列に終止コドンが導入され、その結果、前記コードされたタンパク質が短縮される、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記接触させることが、疾患もしくは障害を有するか、または疾患もしくは障害と診断されている対象中におけるインビボである、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記疾患または障害が、嚢胞性線維症、フェニルケトン尿症、表皮剥離性角化症（ＥＨＫ）、シャルコー・マリー・トゥース病４Ｊ型、神経芽細胞腫（ＮＢ）、フォン・ウィルブランド病（ｖＷＤ）、先天性筋強直症、遺伝性腎アミロイドーシス、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、遺伝性リンパ水腫、家族性アルツハイマー病、プリオン病、慢性乳児神経皮膚関節症候群（ＣＩＮＣＡ）、デスミン関連心筋症（ＤＲＭ）または変異ＰＩ３ＫＣＡタンパク質に関連する腫瘍性疾患である、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記標的ＤＮＡ配列が、野生型ＰＩ３Ｋタンパク質と比較してＰＩ３ＫＣＡタンパク質においてアミノ酸配列変異が生じるＴ→Ｃおよび／またはＡ→Ｇ点変異を含み、前記方法により変異ＣまたはＧ塩基が脱アミノ化される、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記点変異が、Ｈ１０４７Ｒ置換が生じるＡ３１４０Ｇ変異である、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記標的ＤＮＡ配列が、野生型ＰＳＥＮ１タンパク質と比較してＰＳＥＮ１タンパク質においてアミノ酸配列変異が生じるＴ→Ｃおよび／またはＡ→Ｇ点変異を含み、前記方法により変異ＣまたはＧ塩基が脱アミノ化される、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記ＰＳＥＮ１タンパク質がＰＳＥＮ１遺伝子のコドン１４３におけるＡ→Ｇ点変異に起因するＩ１４３Ｖ置換を含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記ＰＳＥＮ１点変異がアルツハイマー病に関連している、請求項３６または３７に記載の方法。
  39. 前記接触させることにより、前記ＰＳＥＮ１遺伝子のコドン１４３における変異シチジン残基が脱アミノ化され、そのため前記Ａ→Ｇ点変異が修正される、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記標的ＤＮＡ配列が、野生型α−抗トリプシンタンパク質と比較してα−抗トリプシンタンパク質においてアミノ酸配列変異が生じるＴ→Ｃおよび／またはＡ→Ｇ点変異を含み、前記方法により変異ＣまたはＧ塩基が脱アミノ化される、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記α−抗トリプシンタンパク質がα−抗トリプシン遺伝子のコドン５５におけるＴ→Ｃ点変異に起因するＬ５５Ｐ置換を含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記α−抗トリプシン点変異が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に関連する、請求項４０または４１に記載の方法。
  43. 前記接触させることにより、前記α−抗トリプシン遺伝子のコドン５５における変異シチジン残基が脱アミノ化され、そのため前記Ｔ→Ｃ点変異が修正される、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記標的ＤＮＡ配列が、野生型ｖＷＦタンパク質と比較してｖＷＦタンパク質においてアミノ酸配列変異が生じるＴ→Ｃおよび／またはＡ→Ｇ点変異を含み、前記方法により変異ＣまたはＧ塩基が脱アミノ化される、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記ｖＷＦタンパク質がｖＷＦ遺伝子のコドン５０９におけるＴ→Ｃ点変異に起因するＣ５０９Ａ置換を含む、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記ｖＷＦ点変異がフォン・ウィルブランド病に関連する、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記接触させることにより、前記ｖＷＦ遺伝子のコドン５０９における変異シチジン残基が脱アミノ化され、そのため前記Ｔ→Ｃ点変異が補正される、請求項４４または４５に記載の方法。
  48. 前記標的ＤＮＡ配列が、野生型カスパーゼ−９タンパク質と比較してカスパーゼ−９タンパク質においてアミノ酸配列変異が生じるＴ→Ｃおよび／またはＡ→Ｇ点変異を含み、前記方法により変異ＣまたはＧ塩基が脱アミノ化される、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記カスパーゼ−９タンパク質がカスパーゼ−９遺伝子のコドン１９７におけるＴ→Ｃ点変異に起因するＬ１９７Ｐ置換を含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記カスパーゼ−９点変異が神経芽細胞腫に関連する、請求項４８または４９に記載の方法。
  51. 前記接触させることにより、前記カスパーゼ−９遺伝子のコドン１９７における変異シチジン残基が脱アミノ化され、そのため前記Ｔ→Ｃ点変異が修正される、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記ヌクレオチド塩基の前記脱アミノ化を検出することを更に含む、請求項１５〜５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記検出することがＰＣＲによる、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記融合タンパク質が請求項１〜１４のいずれか一項に記載の融合タンパク質である、請求項１５〜５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質のＤＮＡ編集活性を検出するためのレポーター構築物であって、
    （ａ）Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質用の標的部位を含むレポーター遺伝子であって、標的を定めたＤＮＡ編集により前記レポーター遺伝子の発現が増加する、レポーター遺伝子と、
    （ｂ）前記レポーター遺伝子の発現を制御するプロモーター配列と
    を含むレポーター構築物。
  56. 前記構築物が、
    （ｃ）前記Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質の標的を前記レポーター遺伝子の標的部位に定めるｓｇＲＮＡをコードする配列であって、前記ｓｇＲＮＡの発現が前記レポーター遺伝子の前記発現から独立している、配列
    を更に含む、請求項５５に記載のレポーター構築物。
  57. 前記レポーター遺伝子の前記標的部位が未成熟終止コドンを含み、前記Ｃａｓ９ ＤＮＡ編集タンパク質による鋳型鎖の標的を定めたＤＮＡ編集により、前記未成熟終止コドンがアミノ酸残基をコードするコドンに変換される、請求項５５または５６に記載のレポーター構築物。
  58. 前記レポーター遺伝子が、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質または抗生物質耐性マーカーをコードする、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のレポーター構築物。
  59. 核酸構築物であって、
    ヌクレアーゼ不活性型Ｃａｓ９配列をコードする配列、
    前記Ｃａｓ９をコードする配列と核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインをコードする配列とのインフレームでのクローニングを可能にするように位置するクローニング部位を含む配列、
    任意選択的に、前記Ｃａｓ９をコードする配列と前記クローニング部位との間に位置するリンカーをコードする配列
    を含む核酸と、
    Ｃａｓ９核酸編集融合タンパク質を生成するための、核酸編集酵素または核酸編集酵素ドメインをコードする配列の前記核酸構築物中へのインフレームでのクローニングに好適な試薬、緩衝液および／または使用説明書と
    を含むキット。
  60. 前記クローニング部位を含む前記配列が前記Ｃａｓ９配列のＮ末端である、請求項５９に記載のキット。
  61. 前記クローニング部位を含む前記配列が前記Ｃａｓ９配列のＣ末端である、請求項５９に記載のキット。
  62. 前記コードされたリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号９１）、（Ｇ）ｎ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号５）、（ＧＧＳ）ｎ、ＳＧＳＥＴＰＧＴＳＥＳＡＴＰＥＳ（配列番号９３）もしくは（ＸＰ）ｎモチーフまたはこれらのうちのいずれかの組み合わせを含み、ｎが独立して１〜３０の整数である、請求項５９〜６２のいずれか一項に記載のキット。
JP2016539218A 2013-12-12 2014-12-12 遺伝子編集用のｃａｓ多様体 Pending JP2017500035A (ja)

Applications Claiming Priority (19)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361915386P 2013-12-12 2013-12-12
US61/915,386 2013-12-12
US201461980333P 2014-04-16 2014-04-16
US61/980,333 2014-04-16
US14/326,109 US9840699B2 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for nucleic acid editing
US14/326,290 US20150166984A1 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for correcting alpha-antitrypsin point mutations
US14/326,303 2014-07-08
US14/326,269 US9068179B1 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for correcting presenilin point mutations
US14/326,109 2014-07-08
US14/326,290 2014-07-08
US14/326,140 US20150166982A1 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for correcting pi3k point mutations
US14/326,318 2014-07-08
US14/325,815 2014-07-08
US14/326,140 2014-07-08
US14/326,303 US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for correcting caspase-9 point mutations
US14/326,318 US20150166985A1 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Methods for correcting von willebrand factor point mutations
US14/326,269 2014-07-08
US14/325,815 US11053481B2 (en) 2013-12-12 2014-07-08 Fusions of Cas9 domains and nucleic acid-editing domains
PCT/US2014/070038 WO2015089406A1 (en) 2013-12-12 2014-12-12 Cas variants for gene editing

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020082201A Division JP2020164529A (ja) 2013-12-12 2020-05-07 遺伝子編集用のｃａｓ多様体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2017500035A true JP2017500035A (ja) 2017-01-05
JP2017500035A5 JP2017500035A5 (ja) 2018-02-01

Family

ID=53367126

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016539218A Pending JP2017500035A (ja) 2013-12-12 2014-12-12 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
JP2020082201A Pending JP2020164529A (ja) 2013-12-12 2020-05-07 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
JP2021188589A Pending JP2022043042A (ja) 2013-12-12 2021-11-19 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
JP2024000252A Pending JP2024061716A (ja) 2013-12-12 2024-01-04 遺伝子編集用のｃａｓ多様体

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020082201A Pending JP2020164529A (ja) 2013-12-12 2020-05-07 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
JP2021188589A Pending JP2022043042A (ja) 2013-12-12 2021-11-19 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
JP2024000252A Pending JP2024061716A (ja) 2013-12-12 2024-01-04 遺伝子編集用のｃａｓ多様体

Country Status (12)

Country Link
US (10) US20150165054A1 (ja)
EP (2) EP3080265B1 (ja)
JP (4) JP2017500035A (ja)
CN (2) CN105934516B (ja)
AU (3) AU2014362208B2 (ja)
CA (1) CA2933625C (ja)
DK (1) DK3080265T3 (ja)
ES (1) ES2754433T3 (ja)
HU (1) HUE046398T2 (ja)
PL (1) PL3080265T3 (ja)
PT (1) PT3080265T (ja)
WO (1) WO2015089406A1 (ja)

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020510038A (ja) * 2017-03-09 2020-04-02 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ がんワクチン
JP2020520654A (ja) * 2017-05-18 2020-07-16 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のための系、方法、及び組成物
JP2020528761A (ja) * 2017-06-26 2020-10-01 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ−アデニンデアミナーゼ系の組成物、系及び方法
JP2020537516A (ja) * 2017-10-04 2020-12-24 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のためのシステム、方法、及び組成物
JP2021500036A (ja) * 2017-10-16 2021-01-07 ザ ブロード インスティテュート, インコーポレーテッドThe Broad Institute, Inc. アデノシン塩基編集因子の使用
JP2022043042A (ja) * 2013-12-12 2022-03-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
US11578343B2 (en) 2014-07-30 2023-02-14 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
US11643652B2 (en) 2019-03-19 2023-05-09 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences
US11661590B2 (en) 2016-08-09 2023-05-30 President And Fellows Of Harvard College Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US11732274B2 (en) 2017-07-28 2023-08-22 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE)
US11820969B2 (en) 2016-12-23 2023-11-21 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR2 receptor gene to protect against HIV infection
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11912985B2 (en) 2020-05-08 2024-02-27 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
US11920181B2 (en) 2013-08-09 2024-03-05 President And Fellows Of Harvard College Nuclease profiling system
US11932884B2 (en) 2017-08-30 2024-03-19 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising Gam

Families Citing this family (263)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
LT3401400T (lt) 2012-05-25 2019-06-10 The Regents Of The University Of California Būdai ir kompozicijos, skirtos rnr molekulės nukreipiamai tikslinės dnr modifikacijai ir rnr molekulės nukreipiamam transkripcijos moduliavimui
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
CA3109801C (en) 2013-08-22 2024-01-09 Andrew Cigan Plant genome modification using guide rna/cas endonuclease systems and methods of use
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
US10584358B2 (en) 2013-10-30 2020-03-10 North Carolina State University Compositions and methods related to a type-II CRISPR-Cas system in Lactobacillus buchneri
LT3066201T (lt) 2013-11-07 2018-08-10 Editas Medicine, Inc. Su crispr susiję būdai ir kompozicijos su valdančiomis grnr
US10787654B2 (en) 2014-01-24 2020-09-29 North Carolina State University Methods and compositions for sequence guiding Cas9 targeting
CA2938669A1 (en) 2014-02-04 2015-08-13 Igenomx International Genomics Corporation Genome fractioning
EP3957735A1 (en) 2014-03-05 2022-02-23 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa
WO2015133554A1 (ja) * 2014-03-05 2015-09-11 国立大学法人神戸大学 標的化したｄｎａ配列の核酸塩基を特異的に変換するゲノム配列の改変方法及びそれに用いる分子複合体
US11339437B2 (en) 2014-03-10 2022-05-24 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for treating CEP290-associated disease
EP3553176A1 (en) 2014-03-10 2019-10-16 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (lca10)
US11141493B2 (en) 2014-03-10 2021-10-12 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for treating CEP290-associated disease
EP3122880B1 (en) 2014-03-26 2021-05-05 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating sickle cell disease
WO2015155686A2 (en) 2014-04-08 2015-10-15 North Carolina State University Methods and compositions for rna-directed repression of transcription using crispr-associated genes
CA2948429A1 (en) 2014-05-09 2015-11-12 Universite Laval Prevention and treatment of alzheimer's disease by genome editing using the crispr/cas system
CN113789317B (zh) * 2014-08-06 2024-02-23 基因工具股份有限公司 使用空肠弯曲杆菌crispr/cas系统衍生的rna引导的工程化核酸酶的基因编辑
EP3186375A4 (en) 2014-08-28 2019-03-13 North Carolina State University NEW CAS9 PROTEINS AND GUIDING ELEMENTS FOR DNA TARGETING AND THE GENOME EDITION
WO2016036754A1 (en) * 2014-09-02 2016-03-10 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification
CA2957737A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene expression modulating anti-viral transfer vector immune responses
US10920208B2 (en) 2014-10-22 2021-02-16 President And Fellows Of Harvard College Evolution of proteases
ES2800168T3 (es) * 2014-11-04 2020-12-28 Univ Kobe Nat Univ Corp Procedimiento de modificación de una secuencia genómica para introducir una mutación específica en una secuencia de ADN diana por reacción de eliminación de base, y complejo molecular usado en el mismo
KR20240013283A (ko) 2014-12-03 2024-01-30 애질런트 테크놀로지스, 인크. 화학적 변형을 갖는 가이드 rna
KR102656470B1 (ko) 2014-12-10 2024-04-09 리전츠 오브 더 유니버스티 오브 미네소타 질환을 치료하기 위한 유전적으로 변형된 세포, 조직 및 장기
US20210395729A1 (en) * 2014-12-12 2021-12-23 Tod M. Woolf Compositions and methods for Editing Nucleic Acids in Cells Utilizing Oligonucleotides
EP3256487A4 (en) 2015-02-09 2018-07-18 Duke University Compositions and methods for epigenome editing
JP6873911B2 (ja) 2015-04-06 2021-05-19 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 初代細胞において標的核酸の遺伝子調節を誘導するためにインビトロで行う方法
JP2018522249A (ja) 2015-04-24 2018-08-09 エディタス・メディシン、インコーポレイテッド Ｃａｓ９分子／ガイドｒｎａ分子複合体の評価
KR102451796B1 (ko) 2015-05-29 2022-10-06 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 크리스퍼 핵산을 사용하여 박테리아, 고세균, 조류 및 효모를 스크리닝하는 방법
KR20220158846A (ko) 2015-06-15 2022-12-01 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 핵산 및 rna-기반 항미생물제를 효율적으로 전달하기 위한 방법 및 조성물
EP3313989A4 (en) 2015-06-29 2018-12-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified crispr rna and modified single crispr rna and uses thereof
CA3168241A1 (en) * 2015-07-15 2017-01-19 Rutgers. The State University of New Jersey Nuclease-independent targeted gene editing platform and uses thereof
WO2017015637A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
IL295616A (en) 2015-07-31 2022-10-01 Us Health Adapted cells and treatment methods
WO2017024047A1 (en) * 2015-08-03 2017-02-09 Emendobio Inc. Compositions and methods for increasing nuclease induced recombination rate in cells
WO2017031483A1 (en) * 2015-08-20 2017-02-23 Applied Stemcell, Inc. Nuclease with enhanced efficiency of genome editing
ES2929110T3 (es) 2015-08-25 2022-11-24 Univ Duke Composiciones y métodos para mejorar la especificidad en ingeniería genética usando endonucleasas guiadas por ARN
ES2902338T3 (es) * 2015-09-09 2022-03-28 Univ Kobe Nat Univ Corp Método para modificar una secuencia genómica que convierte específicamente una nucleobase de una secuencia de ADN diana, y complejo molecular utilizado en dicho método
JP6940262B2 (ja) * 2015-09-09 2021-09-22 株式会社日本触媒 ゲノム配列が特異的に変換された遺伝子改変クロストリジウム・サッカロパーブチルアセトニカム種微生物、その製造方法およびその用途
DK3348638T3 (da) * 2015-09-09 2023-02-13 Univ Kobe Nat Univ Corp Fremgangsmåde til at konvertere genomsekvens fra gram-positiv bakterie ved specifikt at konvertere nukleinsyrebase i tilsigtet dna-sekvens, og molekylkompleks anvendt dertil
US11286480B2 (en) 2015-09-28 2022-03-29 North Carolina State University Methods and compositions for sequence specific antimicrobials
US11970710B2 (en) 2015-10-13 2024-04-30 Duke University Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells
GB2559922A (en) * 2015-10-23 2018-08-22 Harvard College Nucleobase editors and uses thereof
EP3365357B1 (en) * 2015-10-23 2024-02-14 President and Fellows of Harvard College Evolved cas9 proteins for gene editing
JP2019500899A (ja) 2015-11-23 2019-01-17 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９の核送達を通じた細胞ＲＮＡの追跡と操作
EP3382019B1 (en) * 2015-11-27 2022-05-04 National University Corporation Kobe University Method for converting monocot plant genome sequence in which nucleic acid base in targeted dna sequence is specifically converted, and molecular complex used therein
EP3384024B1 (en) * 2015-12-01 2022-02-02 CRISPR Therapeutics AG Materials and methods for treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency
WO2017112620A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 North Carolina State University Methods and compositions for delivery of crispr based antimicrobials
US11339427B2 (en) 2016-02-12 2022-05-24 Jumpcode Genomics, Inc. Method for target specific RNA transcription of DNA sequences
EP3433364A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for treating alpha 1-antitrypsin (a1at) deficiency
TWI773666B (zh) 2016-03-30 2022-08-11 美商英特利亞醫療公司 Crispr/cas 組分之脂質奈米粒子調配物
EP3443081A4 (en) * 2016-04-13 2019-10-30 Duke University CRISPR / CAS9-BASED REPRESSORS FOR IN VIVO SHUT-OFF OF GEN-TARGETS AND METHOD OF USE
CA3022319A1 (en) * 2016-05-06 2017-11-09 Tod M. Woolf Improved methods for genome editing with and without programmable nucleases
US10767175B2 (en) 2016-06-08 2020-09-08 Agilent Technologies, Inc. High specificity genome editing using chemically modified guide RNAs
CN107522787A (zh) * 2016-06-15 2017-12-29 中国科学院上海生命科学研究院 在细胞内产生点突变的融合蛋白、其制备及用途
JP7074345B2 (ja) * 2016-06-22 2022-05-24 プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ 一本鎖ｒｎａ編集オリゴヌクレオチド
WO2018005445A1 (en) 2016-06-27 2018-01-04 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting and treating diabetes
US20230151341A1 (en) * 2016-07-13 2023-05-18 Qihan Chen Method for specifically editing genomic dna and application thereof
CA3032822A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for treating cep290 associated disease
AU2017306676B2 (en) 2016-08-03 2024-02-22 President And Fellows Of Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
US11920151B2 (en) 2016-09-13 2024-03-05 Toolgen Incorporated Method for identifying DNA base editing by means of cytosine deaminase
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
WO2018075664A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Regents Of The University Of Minnesota Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy
US20180245065A1 (en) 2016-11-01 2018-08-30 Novartis Ag Methods and compositions for enhancing gene editing
US11447785B2 (en) * 2016-11-14 2022-09-20 Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academv of Sciences Method for base editing in plants
CN107043779B (zh) * 2016-12-01 2020-05-12 中国农业科学院作物科学研究所 一种CRISPR/nCas9介导的定点碱基替换在植物中的应用
CN106609282A (zh) * 2016-12-02 2017-05-03 中国科学院上海生命科学研究院 一种用于植物基因组定点碱基替换的载体
US11192929B2 (en) 2016-12-08 2021-12-07 Regents Of The University Of Minnesota Site-specific DNA base editing using modified APOBEC enzymes
US10975388B2 (en) 2016-12-14 2021-04-13 Ligandal, Inc. Methods and compositions for nucleic acid and protein payload delivery
MX2019007594A (es) 2016-12-22 2019-12-16 Intellia Therapeutics Inc Composiciones y metodos para tratar la deficiencia de alfa-1 antitripsina.
GB2605925B (en) * 2016-12-23 2023-02-22 Harvard College Gene editing of PCSK9
US20200385753A1 (en) * 2016-12-23 2020-12-10 Institute For Basic Science Composition for base editing for animal embryo and base editing method
EP3565608A4 (en) * 2017-01-05 2020-12-16 Rutgers, The State University of New Jersey TARGETED GENEDITATION PLATFORM INDEPENDENT OF DNA DOUBLE STRAND BREAKAGE AND USES THEREOF
WO2018130830A1 (en) * 2017-01-11 2018-07-19 Oxford University Innovation Limited Crispr rna
US20180258418A1 (en) * 2017-01-17 2018-09-13 Institute For Basic Science Method of identifying genome-wide off-target sites of base editors by detecting single strand breaks in genomic dna
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
US10995333B2 (en) 2017-02-06 2021-05-04 10X Genomics, Inc. Systems and methods for nucleic acid preparation
WO2018145041A1 (en) * 2017-02-06 2018-08-09 10X Genomics, Inc. Systems and methods for nucleic acid preparation
WO2018149915A1 (en) * 2017-02-15 2018-08-23 Keygene N.V. Methods of targeted genetic alteration in plant cells
BR112019017138A2 (pt) * 2017-02-20 2020-04-14 Inst Genetics & Developmental Biology Cas sistema e método de edição de genoma
US11542496B2 (en) 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
EP3596217A1 (en) 2017-03-14 2020-01-22 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies
IL306092A (en) 2017-03-23 2023-11-01 Harvard College Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins
CA3062595A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 The Regents Of The University Of California Directed editing of cellular rna via nuclear delivery of crispr/cas9
EP3622070A2 (en) 2017-05-10 2020-03-18 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease systems and methods
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
EP3625342B1 (en) * 2017-05-18 2022-08-24 The Broad Institute, Inc. Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
CN107177625B (zh) * 2017-05-26 2021-05-25 中国农业科学院植物保护研究所 一种定点突变的人工载体系统及定点突变方法
WO2019006418A2 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Intima Bioscience, Inc. ADENO-ASSOCIATED VIRAL VECTORS FOR GENE THERAPY
WO2019003193A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Novartis Ag METHODS FOR TREATING DISEASES USING GENE EDITING SYSTEMS
EP3712272A4 (en) * 2017-07-25 2021-10-13 Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences METHOD FOR MODULATION OF RNA SPLICE BY INDUCTION OF A BASE MUTATION AT THE SPLICE POINT OR A BASE SUBSTITUTION IN THE POLYPYRIMIDINE REGION
US11021719B2 (en) 2017-07-31 2021-06-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for assessing CRISPER/Cas-mediated disruption or excision and CRISPR/Cas-induced recombination with an exogenous donor nucleic acid in vivo
CA3067872A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cas-transgenic mouse embryonic stem cells and mice and uses thereof
US20190136249A1 (en) 2017-08-22 2019-05-09 Napigen, Inc. Organelle genome modification using polynucleotide guided endonuclease
WO2019041296A1 (zh) * 2017-09-01 2019-03-07 上海科技大学 一种碱基编辑系统及方法
US11649442B2 (en) 2017-09-08 2023-05-16 The Regents Of The University Of California RNA-guided endonuclease fusion polypeptides and methods of use thereof
CN107557373A (zh) * 2017-09-19 2018-01-09 安徽大学 一种基于I‑B型CRISPR‑Cas系统基因cas3的基因编辑方法
WO2019067992A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Intellia Therapeutics, Inc. Formulations
EP3687581A1 (en) 2017-09-29 2020-08-05 Intellia Therapeutics, Inc. Polynucleotides, compositions, and methods for genome editing
CN111417728A (zh) 2017-09-29 2020-07-14 因特利亚治疗公司 用于ttr基因编辑及治疗attr淀粉样变性的组合物及方法
US20200308603A1 (en) 2017-09-29 2020-10-01 Intellia Therapeutics, Inc. In vitro method of mrna delivery using lipid nanoparticles
JP7427584B2 (ja) 2017-10-13 2024-02-05 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド 抗ウイルス導入ベクターｉｇｍ応答を減弱化するための方法および組成物
AR114025A1 (es) 2017-10-31 2020-07-15 Limagrain Europe Trigo que comprende alelos restauradores de la fertilidad masculina
EP3704245A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Novartis AG Synthetic rnas and methods of use
WO2019104094A2 (en) 2017-11-21 2019-05-31 The Regents Of The University Of California Fusion proteins and methods for site-directed genome editing
CA3078682A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptide-mediated targeted protein degradation
CN110157727A (zh) * 2017-12-21 2019-08-23 中国科学院遗传与发育生物学研究所 植物碱基编辑方法
US20230193242A1 (en) * 2017-12-22 2023-06-22 The Broad Institute, Inc. Cas12b systems, methods, and compositions for targeted dna base editing
WO2019126716A1 (en) * 2017-12-22 2019-06-27 The Broad Institute, Inc. Cas12b systems, methods, and compositions for targeted rna base editing
CN108165543B (zh) * 2017-12-26 2021-01-22 山东省农业科学院生物技术研究中心 水稻腺苷脱氨酶OsAD1及其编码基因在叶绿体基因RNA编辑中的应用
WO2019138083A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Basf Se Gene underlying the number of spikelets per spike qtl in wheat on chromosome 7a
CN111742051A (zh) * 2018-01-23 2020-10-02 基础科学研究院 延伸的单向导rna及其用途
KR102210700B1 (ko) * 2018-01-25 2021-02-02 주식회사 툴젠 아데노신 디아미나아제를 이용한 염기 교정 확인 방법
WO2019147743A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Massachusetts Institute Of Technology Structure-guided chemical modification of guide rna and its applications
CN111699254A (zh) 2018-02-08 2020-09-22 齐默尔根公司 使用crispr在棒状杆菌属中进行基因组编辑
CN109021111B (zh) * 2018-02-23 2021-12-07 上海科技大学 一种基因碱基编辑器
US20190264232A1 (en) * 2018-02-23 2019-08-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel cas9 orthologs
WO2019165436A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Antolrx Tolerogenic liposomes and methods of use thereof
US20210155959A1 (en) 2018-04-06 2021-05-27 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for somatic cell reprogramming and modulating imprinting
GB201805865D0 (en) 2018-04-09 2018-05-23 Innes John Centre Genes
AU2019265018A1 (en) * 2018-05-11 2020-11-26 Beam Therapeutics Inc. Methods of suppressing pathogenic mutations using programmable base editor systems
KR20210010555A (ko) * 2018-05-17 2021-01-27 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타 약물 저항성 면역 세포 및 그의 사용 방법
EP3797160A1 (en) 2018-05-23 2021-03-31 The Broad Institute Inc. Base editors and uses thereof
WO2019234132A1 (en) 2018-06-05 2019-12-12 KWS SAAT SE & Co. KGaA Base editing in polymerase theta deficient plants
SG11202011975WA (en) 2018-06-05 2020-12-30 Lifeedit Inc Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
US11608506B2 (en) 2018-06-26 2023-03-21 Regents Of The University Of Minnesota Delivery of developmental regulators to plants for the induction of meristematic tissue with genetic alterations
BR112021001546A2 (pt) 2018-07-31 2021-05-04 Intellia Therapeutics, Inc. composições e métodos para a edição de gene do hidroxiácido oxidase 1 (hao1) para o tratamento da hiperoxalúria primária tipo 1 (ph1)
AU2019314433A1 (en) * 2018-07-31 2021-03-25 Massachusetts Institute Of Technology Novel CRISPR enzymes and systems
WO2020041751A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 The Broad Institute, Inc. Cas9 variants having non-canonical pam specificities and uses thereof
WO2020047498A1 (en) * 2018-08-31 2020-03-05 The Regents Of The University Of California Directed modification of rna
WO2020051360A1 (en) 2018-09-05 2020-03-12 The Broad Institute, Inc. Base editing for treating hutchinson-gilford progeria syndrome
US20210317436A1 (en) * 2018-09-08 2021-10-14 Blueallele, Llc Methods and compositions for modifying the von willebrand factor gene
JP2022502055A (ja) 2018-09-28 2022-01-11 インテリア セラピューティクス，インコーポレイテッド 乳酸デヒドロゲナーゼ（ｌｄｈａ）遺伝子編集のための組成物及び方法
US10711267B2 (en) 2018-10-01 2020-07-14 North Carolina State University Recombinant type I CRISPR-Cas system
US20220290113A1 (en) 2018-10-15 2022-09-15 University Of Massachusetts Programmable dna base editing by nme2cas9-deaminase fusion proteins
EP3867379A1 (en) 2018-10-16 2021-08-25 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
US20210340562A1 (en) * 2018-10-19 2021-11-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Engineered long interspersed element (line) transposons and methods of use
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
US20210403901A1 (en) 2018-11-01 2021-12-30 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences Targeted mutagenesis using base editors
WO2020102659A1 (en) 2018-11-15 2020-05-22 The Broad Institute, Inc. G-to-t base editors and uses thereof
JP2022514493A (ja) 2018-12-14 2022-02-14 パイオニア ハイ－ブレッド インターナショナル， インコーポレイテッド ゲノム編集のための新規なｃｒｉｓｐｒ－ｃａｓシステム
MX2021007835A (es) 2018-12-27 2021-08-11 Lifeedit Therapeutics Inc Polipeptidos utiles para edicion de genes y metodos de uso.
AU2020206997A1 (en) * 2019-01-07 2021-08-26 Crisp-Hr Therapeutics, Inc. A non-toxic Cas9 enzyme and application thereof
WO2020157164A1 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Enobraq Modified plant with improved rubisco activity
CA3127494A1 (en) * 2019-01-31 2020-08-06 Beam Therapeutics Inc. Nucleobase editors having reduced off-target deamination and methods of using same to modify a nucleobase target sequence
US20220098572A1 (en) * 2019-01-31 2022-03-31 Beam Therapeutics Inc. Nucleobase editors having reduced non-target deamination and assays for characterizing nucleobase editors
US11384353B2 (en) * 2019-02-02 2022-07-12 Shanghaitech University Inhibition of unintended mutations in gene editing
US20220145330A1 (en) 2019-02-10 2022-05-12 The J. David Gladstone Institutes, a testamentary trust established under the Will of J. David Glads Modified mitochondrion and methods of use thereof
US20220235347A1 (en) 2019-02-13 2022-07-28 Beam Therapeutics Inc. Compositions and methods for treating hemoglobinopathies
KR20210139265A (ko) 2019-02-13 2021-11-22 빔 테라퓨틱스, 인크. 표적 서열에서 핵염기를 변형하기 위한 아데노신 데아미나제 염기 편집기 및 이의 사용 방법
WO2020181178A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through thymine alkylation
WO2020181202A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. A:t to t:a base editing through adenine deamination and oxidation
WO2020181195A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through adenine excision
WO2020181180A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. A:t to c:g base editors and uses thereof
WO2020181193A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through adenosine methylation
WO2020209959A1 (en) 2019-03-08 2020-10-15 Crispr Therapeutics Ag Nucleobase-editing fusion protein systems, compositions, and uses thereof
EA202192636A1 (ru) 2019-03-28 2022-03-17 Интеллиа Терапьютикс, Инк. Композиции и способы, содержащие гидовую рнк ttr и полинуклеотид, кодирующий днк-связывающий агент, гидируемый рнк
MA55527A (fr) 2019-03-28 2022-02-09 Intellia Therapeutics Inc Polynucléotides, compositions et procédés d'expression de polypeptides
AU2020248337A1 (en) 2019-03-28 2021-11-04 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for ttr gene editing and treating ATTR amyloidosis comprising a corticosteroid or use thereof
WO2020206325A2 (en) * 2019-04-05 2020-10-08 The Broad Institute, Inc. A pseudo-random dna editor for efficient and continuous nucleotide diversification in human cells
JP2022528722A (ja) 2019-04-12 2022-06-15 アストラゼネカ・アクチエボラーグ 改善された遺伝子編集のための組成物及び方法
WO2020214842A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
US20220220495A1 (en) 2019-05-10 2022-07-14 Basf Se Regulatory nucleic acid molecules for enhancing gene expression in plants
US20220249697A1 (en) 2019-05-20 2022-08-11 The Broad Institute, Inc. Aav delivery of nucleobase editors
US20200390718A1 (en) 2019-05-28 2020-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response
US20220315906A1 (en) 2019-08-08 2022-10-06 The Broad Institute, Inc. Base editors with diversified targeting scope
EP4013864A1 (en) 2019-08-12 2022-06-22 Lifeedit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2021030666A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 The Broad Institute, Inc. Base editing by transglycosylation
TW202118873A (zh) 2019-08-27 2021-05-16 美商維泰克斯製藥公司 用於治療與重複性ｄｎａ有關之病症之組合物及方法
WO2021048316A1 (en) 2019-09-12 2021-03-18 Basf Se Regulatory nucleic acid molecules for enhancing gene expression in plants
WO2021069387A1 (en) 2019-10-07 2021-04-15 Basf Se Regulatory nucleic acid molecules for enhancing gene expression in plants
WO2021108717A2 (en) 2019-11-26 2021-06-03 The Broad Institute, Inc Systems and methods for evaluating cas9-independent off-target editing of nucleic acids
CA3159944A1 (en) 2019-12-02 2021-06-10 David HUSS Therapeutic editing
AU2020396138A1 (en) 2019-12-03 2022-06-16 Basf Se Regulatory nucleic acid molecules for enhancing gene expression in plants
CN112979823B (zh) * 2019-12-18 2022-04-08 华东师范大学 一种用于治疗和/或预防β血红蛋白病的产品及融合蛋白
US11746352B2 (en) 2019-12-30 2023-09-05 Eligo Bioscience Microbiome modulation of a host by delivery of DNA payloads with minimized spread
US11584781B2 (en) 2019-12-30 2023-02-21 Eligo Bioscience Chimeric receptor binding proteins resistant to proteolytic degradation
WO2021138247A1 (en) 2019-12-30 2021-07-08 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
EP4090760A4 (en) * 2020-01-17 2024-01-24 Jumpcode Genomics Inc METHOD FOR SAMPLE NORMALIZATION
US20230073514A1 (en) 2020-01-21 2023-03-09 Limagrain Europe Wheat haploid inducer plant and uses
WO2021155065A1 (en) 2020-01-28 2021-08-05 The Broad Institute, Inc. Base editors, compositions, and methods for modifying the mitochondrial genome
EP4100519A2 (en) 2020-02-05 2022-12-14 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors and uses thereof
US20230123669A1 (en) 2020-02-05 2023-04-20 The Broad Institute, Inc. Base editor predictive algorithm and method of use
WO2021158999A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 The Broad Institute, Inc. Gene editing methods for treating spinal muscular atrophy
EP4110913A2 (en) * 2020-02-28 2023-01-04 University of Massachusetts Oligonucleotides for prnp modulation
EP4118206A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 The Broad Institute Inc. Stat3-targeted base editor therapeutics for the treatment of melanoma and other cancers
WO2021183622A1 (en) * 2020-03-12 2021-09-16 Novozymes A/S Crispr-aid using catalytically inactive rna-guided endonuclease
AU2021236683A1 (en) 2020-03-19 2022-11-17 Intellia Therapeutics, Inc. Methods and compositions for directed genome editing
US11617773B2 (en) 2020-04-08 2023-04-04 Eligo Bioscience Elimination of colonic bacterial driving lethal inflammatory cardiomyopathy
TW202208626A (zh) 2020-04-24 2022-03-01 美商生命編輯公司 Rna引導核酸酶及其活性片段與變體，以及使用方法
EP4143315A1 (en) 2020-04-28 2023-03-08 The Broad Institute Inc. <smallcaps/>? ? ?ush2a? ? ? ? ?targeted base editing of thegene
WO2021222287A2 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Intellia Therapeutics, Inc. Methods of in vitro cell delivery
WO2021224633A1 (en) 2020-05-06 2021-11-11 Orchard Therapeutics (Europe) Limited Treatment for neurodegenerative diseases
WO2021231437A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleic acid binding proteins and active fragments and variants thereof and methods of use
US20230175010A1 (en) * 2020-05-12 2023-06-08 City Of Hope Compositions and methods for base specific mitochondrial gene editing
US20220096606A1 (en) 2020-09-09 2022-03-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and Methods for Treatment of Duchenne Muscular Dystrophy
US20230414648A1 (en) 2020-11-06 2023-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and Methods for Treatment of DM1 with SLUCAS9 and SACAS9
AU2021396403A1 (en) 2020-12-11 2023-06-29 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for reducing mhc class ii in a cell
WO2022125968A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Intellia Therapeutics, Inc. Polynucleotides, compositions, and methods for genome editing involving deamination
CR20230320A (es) 2020-12-23 2023-10-23 Intellia Therapeutics Inc Composiciones y métodos para reducir los hla-a en una célula
WO2022140587A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for genetically modifying ciita in a cell
WO2022144382A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Eligo Bioscience Chimeric receptor binding proteins resistant to proteolytic degradation
CN114686454B (zh) * 2020-12-31 2024-04-26 北京市农林科学院 Pe-p3引导编辑系统及其在基因组碱基编辑中的应用
WO2022170172A1 (en) 2021-02-08 2022-08-11 Intellia Therapeutics, Inc. Natural killer cell receptor 2b4 compositions and methods for immunotherapy
EP4288088A2 (en) 2021-02-08 2023-12-13 Intellia Therapeutics, Inc. Lymphocyte activation gene 3 (lag3) compositions and methods for immunotherapy
EP4288089A2 (en) 2021-02-08 2023-12-13 Intellia Therapeutics, Inc. T-cell immunoglobulin and mucin domain 3 (tim3) compositions and methods for immunotherapy
TW202246510A (zh) 2021-02-26 2022-12-01 美商維泰克斯製藥公司 以crispr/slucas9治療第1型肌強直性營養不良之組合物及方法
WO2022182957A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 with crispr/sacas9
CA3216875A1 (en) 2021-04-17 2022-10-20 Intellia Therapeutics, Inc. Inhibitors of dna-dependent protein kinase and compositions and uses thereof
BR112023021445A2 (pt) 2021-04-17 2024-01-23 Intellia Therapeutics Inc Composições de nanopartículas lipídicas
BR112023021477A2 (pt) 2021-04-17 2024-01-30 Intellia Therapeutics Inc Composições de nanopartículas lipídicas
WO2022229851A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using slucas9 scaffold sequences
WO2022234519A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using sacas9 scaffold sequences
IL308172A (en) 2021-05-12 2023-12-01 Eligo Bioscience Production of lytic phages
WO2022261509A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 The Broad Institute, Inc. Improved cytosine to guanine base editors
CA3173953A1 (en) 2021-06-11 2023-12-10 Tyson D. BOWEN Rna polymerase iii promoters and methods of use
WO2023018637A1 (en) 2021-08-09 2023-02-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gene editing of regulatory elements
WO2023028471A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Intellia Therapeutics, Inc. Programmed cell death protein 1 (pd1) compositions and methods for cell-based therapy
WO2023039444A2 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 51 for treatment of duchenne muscular dystrophy
AU2022343300A1 (en) 2021-09-10 2024-04-18 Agilent Technologies, Inc. Guide rnas with chemical modification for prime editing
WO2023064367A1 (en) 2021-10-12 2023-04-20 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses
WO2023077148A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Tome Biosciences, Inc. Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
WO2023081070A1 (en) 2021-11-02 2023-05-11 University Of Massachusetts Nme2Cas9 INLAID DOMAIN FUSION PROTEINS
AU2022382975A1 (en) 2021-11-03 2024-05-02 Intellia Therapeutics, Inc. Polynucleotides, compositions, and methods for genome editing
WO2023081200A2 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Intellia Therapeutics, Inc. Cd38 compositions and methods for immunotherapy
US11753677B2 (en) 2021-11-10 2023-09-12 Encodia, Inc. Methods for barcoding macromolecules in individual cells
WO2023086973A1 (en) * 2021-11-12 2023-05-19 Arbor Biotechnologies, Inc. Type ii nucleases
WO2023102537A2 (en) 2021-12-03 2023-06-08 The Broad Institute, Inc. Self-assembling virus-like particles for delivery of nucleic acid programmable fusion proteins and methods of making and using same
WO2023107902A1 (en) 2021-12-06 2023-06-15 Napigen, Inc. Phosphite dehydrogenase as a selectable marker for mitochondrial transformation
WO2023121964A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterials comprising disulfides
WO2023121970A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Beam Therapeutics Inc. Ionizable amine and ester lipids and lipid nanoparticles
WO2023121965A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterial comprising diamines
WO2023121971A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterials comprising tetravalent lipid compounds
WO2023121975A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Beam Therapeutics Inc. Ionizable amine lipids and lipid nanoparticles
WO2023122764A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Tome Biosciences, Inc. Co-delivery of a gene editor construct and a donor template
WO2023139557A1 (en) 2022-01-24 2023-07-27 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2023155901A1 (en) * 2022-02-17 2023-08-24 Correctsequence Therapeutics Mutant cytidine deaminases with improved editing precision
WO2023172927A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 44, 50, and 53 for treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2023172926A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exons for treatment of duchenne muscular dystrophy
US20230357437A1 (en) 2022-03-09 2023-11-09 Selecta Biosciences, Inc. Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing
WO2023196802A1 (en) 2022-04-04 2023-10-12 The Broad Institute, Inc. Cas9 variants having non-canonical pam specificities and uses thereof
WO2023205744A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion compositions
WO2023212715A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 The Broad Institute, Inc. Aav vectors encoding base editors and uses thereof
WO2023225670A2 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Tome Biosciences, Inc. Ex vivo programmable gene insertion
WO2023230613A1 (en) 2022-05-27 2023-11-30 The Broad Institute, Inc. Improved mitochondrial base editors and methods for editing mitochondrial dna
WO2023240137A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 The Board Institute, Inc. Evolved cas14a1 variants, compositions, and methods of making and using same in genome editing
WO2023245113A1 (en) 2022-06-16 2023-12-21 Intellia Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genetically modifying a cell
WO2024020346A2 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Renagade Therapeutics Management Inc. Gene editing components, systems, and methods of use
WO2024020352A1 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tandem guide rnas (tg-rnas) and their use in genome editing
WO2024019936A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterials comprising triols
WO2024020587A2 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Tome Biosciences, Inc. Pleiopluripotent stem cell programmable gene insertion
WO2024033901A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2024040083A1 (en) 2022-08-16 2024-02-22 The Broad Institute, Inc. Evolved cytosine deaminases and methods of editing dna using same
WO2024044723A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Engineered retrons and methods of use
WO2024052681A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 The University Court Of The University Of Edinburgh Rett syndrome therapy
WO2024077247A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 The Broad Institute, Inc. Base editing methods and compositions for treating triplet repeat disorders
WO2024083579A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Basf Se Regulatory nucleic acid molecules for enhancing gene expression in plants
CN117821462B (zh) * 2024-03-04 2024-05-07 上海贝斯昂科生物科技有限公司 基因编辑修复阿尔兹海默症相关psen1位点突变

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010132092A2 (en) * 2009-05-12 2010-11-18 The Scripps Research Institute Cytidine deaminase fusions and related methods
US20110104787A1 (en) * 2009-11-05 2011-05-05 President And Fellows Of Harvard College Fusion Peptides That Bind to and Modify Target Nucleic Acid Sequences
WO2013176772A1 (en) * 2012-05-25 2013-11-28 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification and for rna-directed modulation of transcription
WO2014144288A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The General Hospital Corporation Using rna-guided foki nucleases (rfns) to increase specificity for rna-guided genome editing

Family Cites Families (1585)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4182449A (en) 1978-04-18 1980-01-08 Kozlow William J Adhesive bandage and package
US4501728A (en) 1983-01-06 1985-02-26 Technology Unlimited, Inc. Masking of liposomes from RES recognition
US4880635B1 (en) 1984-08-08 1996-07-02 Liposome Company Dehydrated liposomes
US4921757A (en) 1985-04-26 1990-05-01 Massachusetts Institute Of Technology System for delayed and pulsed release of biologically active substances
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US4837028A (en) 1986-12-24 1989-06-06 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH0825869B2 (ja) 1987-02-09 1996-03-13 株式会社ビタミン研究所 抗腫瘍剤包埋リポソ−ム製剤
US4911928A (en) 1987-03-13 1990-03-27 Micro-Pak, Inc. Paucilamellar lipid vesicles
US4917951A (en) 1987-07-28 1990-04-17 Micro-Pak, Inc. Lipid vesicles formed of surfactants and steroids
AU607975B2 (en) 1987-04-23 1991-03-21 Fmc Corporation Insecticidal cyclopropyl-substituted di(aryl) compounds
US5580737A (en) 1990-06-11 1996-12-03 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High-affinity nucleic acid ligands that discriminate between theophylline and caffeine
US6872816B1 (en) 1996-01-24 2005-03-29 Third Wave Technologies, Inc. Nucleic acid detection kits
JPH05274181A (ja) 1992-03-25 1993-10-22 Nec Corp ブレークポイント設定・解除方式
US5651981A (en) 1994-03-29 1997-07-29 Northwestern University Cationic phospholipids for transfection
US5449639A (en) 1994-10-24 1995-09-12 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company Ltd. Disposable metal anti-reflection coating process used together with metal dry/wet etch
US5767099A (en) 1994-12-09 1998-06-16 Genzyme Corporation Cationic amphiphiles containing amino acid or dervatized amino acid groups for intracellular delivery of therapeutic molecules
US6057153A (en) 1995-01-13 2000-05-02 Yale University Stabilized external guide sequences
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5851548A (en) 1995-06-07 1998-12-22 Gen-Probe Incorporated Liposomes containing cationic lipids and vitamin D
US5962313A (en) 1996-01-18 1999-10-05 Avigen, Inc. Adeno-associated virus vectors comprising a gene encoding a lyosomal enzyme
US5981182A (en) 1997-03-13 1999-11-09 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Vector constructs for the selection and identification of open reading frames
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
EP2298728A1 (en) 1998-11-12 2011-03-23 Life Technologies Corporation Transfection reagents
US6599692B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Sangamo Bioscience, Inc. Functional genomics using zinc finger proteins
US6453242B1 (en) 1999-01-12 2002-09-17 Sangamo Biosciences, Inc. Selection of sites for targeting by zinc finger proteins and methods of designing zinc finger proteins to bind to preselected sites
US6534261B1 (en) 1999-01-12 2003-03-18 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
US7013219B2 (en) 1999-01-12 2006-03-14 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
US20090130718A1 (en) 1999-02-04 2009-05-21 Diversa Corporation Gene site saturation mutagenesis
WO2000058480A1 (fr) 1999-03-29 2000-10-05 Kansai Technology Licensing Organization Co., Ltd. Nouvelle cytidine desaminase
DK1230268T3 (da) 1999-11-18 2010-02-08 Epimmune Inc Heteroklitiske analoger af klasse I-epitoper
AU785007B2 (en) 1999-11-24 2006-08-24 Mcs Micro Carrier Systems Gmbh Polypeptides comprising multimers of nuclear localization signals or of protein transduction domains and their use for transferring molecules into cells
ATE309536T1 (de) 1999-12-06 2005-11-15 Sangamo Biosciences Inc Methoden zur verwendung von randomisierten zinkfingerprotein-bibliotheken zur identifizierung von genfunktionen
WO2001059450A2 (en) 2000-02-08 2001-08-16 Sangamo Biosciences, Inc. Cells expressing zinc finger protein for drug discovery
MXPA03003690A (es) 2000-10-27 2004-05-05 Chiron Spa Acidos nucleicos y proteinas de los grupos a y b de estreptococos.
MXPA03003895A (es) 2000-10-30 2003-07-28 Euro Celtique Sa Formulaciones de hidrocodona de liberacion controlada.
US20040003420A1 (en) 2000-11-10 2004-01-01 Ralf Kuhn Modified recombinase
AU2002227882B2 (en) 2001-01-25 2007-06-28 Evolva Ltd Concatemers of differentially expressed multiple genes
US20050222030A1 (en) 2001-02-21 2005-10-06 Anthony Allison Modified annexin proteins and methods for preventing thrombosis
US20040115184A1 (en) 2001-02-27 2004-06-17 Smith Harold C Methods and compositions for modifying apolipoprotein b mrna editing
EP2796546B1 (en) 2001-04-19 2017-08-09 The Scripps Research Institute Incorporation of unnatural amino acids
WO2002103028A2 (en) * 2001-05-30 2002-12-27 Biomedical Center In silico screening for phenotype-associated expressed sequences
US20040175719A1 (en) 2002-07-12 2004-09-09 Affymetrix, Inc. Synthetic tag genes
EP2322535A3 (en) 2002-09-20 2011-09-28 Yale University Riboswitches, methods for their use, and compositions for use with riboswitches
CA2515850A1 (en) 2003-04-14 2004-10-28 Caliper Life Sciences, Inc. Reduction of migration shift assay interference
EP1666604B1 (en) 2003-07-07 2008-02-13 The Scripps Research Institute Compositions of orthogonal lysyl-tRNA and aminoacyl-tRNA synthetase pairs and uses thereof
EP3222715A1 (en) 2003-08-08 2017-09-27 Sangamo BioSciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
US7192739B2 (en) 2004-03-30 2007-03-20 President And Fellows Of Harvard College Ligand-dependent protein splicing
US7919277B2 (en) 2004-04-28 2011-04-05 Danisco A/S Detection and typing of bacterial strains
US9012140B2 (en) 2004-07-06 2015-04-21 Societe de Commercialisation des Produits de la Recherche Appliquée Socpra Sciences et Génie S.E.C. Target-dependent nucleic acid adapter
WO2006023207A2 (en) 2004-08-19 2006-03-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services, Nih Coacervate of anionic and cationic polymer forming microparticles for the sustained release of therapeutic agents
US9315862B2 (en) 2004-10-05 2016-04-19 California Institute Of Technology Aptamer regulated nucleic acids and uses thereof
JP2006248978A (ja) 2005-03-10 2006-09-21 Mebiopharm Co Ltd 新規なリポソーム製剤
DK2336362T3 (en) 2005-08-26 2019-01-21 Dupont Nutrition Biosci Aps USE OF CRISPR-ASSOCIATED GENES (CAS)
AU2012244264B2 (en) 2005-08-26 2015-08-06 Dupont Nutrition Biosciences Aps Use
AU2015252023B2 (en) 2005-08-26 2017-06-29 Dupont Nutrition Biosciences Aps Use
US20080051317A1 (en) 2005-12-15 2008-02-28 George Church Polypeptides comprising unnatural amino acids, methods for their production and uses therefor
EP2015780B1 (en) 2006-05-05 2012-12-12 Molecular Transfer, Inc. Novel reagents for transfection of eukaryotic cells
ATE530669T1 (de) 2006-05-19 2011-11-15 Danisco Markierte mikroorganismen und entsprechende markierungsverfahren
AU2007256780B2 (en) 2006-06-02 2013-08-29 President And Fellows Of Harvard College Protein surface remodeling
WO2008108989A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Danisco A/S Cultures with improved phage resistance
WO2009033027A2 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Medtronic, Inc. Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain
CA2700231C (en) 2007-09-27 2018-09-18 Sangamo Biosciences, Inc. Rapid in vivo identification of biologically active nucleases
US9029524B2 (en) 2007-12-10 2015-05-12 California Institute Of Technology Signal activated RNA interference
AU2009212247A1 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Sangamo Therapeutics, Inc. Treatment of chronic pain with zinc finger proteins
WO2009146179A1 (en) 2008-04-15 2009-12-03 University Of Iowa Research Foundation Zinc finger nuclease for the cftr gene and methods of use thereof
WO2009134808A2 (en) 2008-04-28 2009-11-05 President And Fellows Of Harvard College Supercharged proteins for cell penetration
US8394604B2 (en) 2008-04-30 2013-03-12 Paul Xiang-Qin Liu Protein splicing using short terminal split inteins
US9400597B2 (en) 2008-07-23 2016-07-26 Microsoft Technology Licensing, Llc Presenting dynamic grids
US8546553B2 (en) 2008-07-25 2013-10-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Prokaryotic RNAi-like system and methods of use
EP2159286A1 (en) 2008-09-01 2010-03-03 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Method for obtaining oligonucleotide aptamers and uses thereof
EP2331071A1 (en) 2008-09-05 2011-06-15 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Novel multimodular assembly useful for intracellular delivery
US8636884B2 (en) 2008-09-15 2014-01-28 Abbott Diabetes Care Inc. Cationic polymer based wired enzyme formulations for use in analyte sensors
US20100076057A1 (en) 2008-09-23 2010-03-25 Northwestern University TARGET DNA INTERFERENCE WITH crRNA
WO2010054108A2 (en) 2008-11-06 2010-05-14 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Cas6 polypeptides and methods of use
MX337838B (es) 2008-11-07 2016-03-22 Dupont Nutrition Biosci Aps Secuencias de repetidos palindromicos cortos regularmente intercalados agrupados de bifidobacterias.
US9175338B2 (en) 2008-12-11 2015-11-03 Pacific Biosciences Of California, Inc. Methods for identifying nucleic acid modifications
EP2370598B1 (en) 2008-12-11 2017-02-15 Pacific Biosciences Of California, Inc. Classification of nucleic acid templates
WO2010075424A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 The Regents Of University Of California Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes
WO2010091294A2 (en) 2009-02-05 2010-08-12 The Regents Of The University Of California New targeted antimicrobial moieties
CN102421897B (zh) 2009-03-06 2015-12-16 合成基因组股份有限公司 用于克隆和操作基因组的方法
AU2010245304B2 (en) 2009-04-27 2015-06-04 Pacific Biosciences Of California, Inc. Real-time sequencing methods and systems
JP2012525146A (ja) 2009-04-28 2012-10-22 プレジデント アンド フェロウズ オブ ハーバード カレッジ 細胞透過のための過剰に荷電されたタンパク質
US9063156B2 (en) 2009-06-12 2015-06-23 Pacific Biosciences Of California, Inc. Real-time analytical methods and systems
AU2010266705B2 (en) 2009-06-30 2014-06-05 Sangamo Therapeutics, Inc. Rapid screening of biologically active nucleases and isolation of nuclease-modified cells
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US20120178647A1 (en) 2009-08-03 2012-07-12 The General Hospital Corporation Engineering of zinc finger arrays by context-dependent assembly
DK2462230T3 (en) 2009-08-03 2015-10-19 Recombinetics Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETED RE-MODIFICATION
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
DK2494060T3 (en) 2009-10-30 2016-08-01 Synthetic Genomics Inc Coding of text for nucleic acid sequences
HUE032166T2 (en) 2009-11-02 2017-09-28 Univ Washington Therapeutic nuclease preparations and methods
WO2011068916A1 (en) 2009-12-01 2011-06-09 Intezyne Technologies, Incorporated Pegylated polyplexes for polynucleotide delivery
WO2011075627A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Use of cytidine deaminase-related agents to promote demethylation and cell reprogramming
GEP201606544B (en) 2010-01-22 2016-09-26 Dow Agrosciences Llc Excision of transgenes in genetically modified organisms
JP2013520989A (ja) 2010-03-05 2013-06-10 シンセティック ジェノミクス インコーポレーテッド ゲノムのクローニングおよび操作のための方法
WO2011123830A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
SG185481A1 (en) 2010-05-10 2012-12-28 Univ California Endoribonuclease compositions and methods of use thereof
EP2571512B1 (en) 2010-05-17 2017-08-23 Sangamo BioSciences, Inc. Novel dna-binding proteins and uses thereof
GB201008267D0 (en) 2010-05-18 2010-06-30 Univ Edinburgh Cationic lipids
DK2575767T3 (en) 2010-06-04 2017-03-13 Sirna Therapeutics Inc HOWEVER UNKNOWN LOW MOLECULAR CATIONIC LIPIDS TO PROCESS OIGONUCLEOTIDES
CA2802360A1 (en) 2010-06-14 2011-12-22 Iowa State University Research Foundation, Inc. Nuclease activity of tal effector and foki fusion protein
JP6173912B2 (ja) 2010-09-20 2017-08-02 エスピーアイ ファーマ，インコーポレイテッド マイクロカプセル化プロセスおよび製品
EP2630156B1 (en) 2010-10-20 2018-08-22 DuPont Nutrition Biosciences ApS Lactococcus crispr-cas sequences
WO2012070031A1 (en) 2010-11-26 2012-05-31 University Of The Witwatersrand, Johannesburg Polymeric matrix of polymer-lipid nanoparticles as a pharmaceutical dosage form
KR101255338B1 (ko) 2010-12-15 2013-04-16 포항공과대학교 산학협력단 표적 세포에 대한 폴리뉴클레오티드 전달체
WO2012083017A2 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Celgene Corporation Controlled release oral dosage forms of poorly soluble drugs and uses thereof
US9499592B2 (en) 2011-01-26 2016-11-22 President And Fellows Of Harvard College Transcription activator-like effectors
US9528124B2 (en) 2013-08-27 2016-12-27 Recombinetics, Inc. Efficient non-meiotic allele introgression
US20140123330A1 (en) 2012-10-30 2014-05-01 Recombinetics, Inc. Control of sexual maturation in animals
US9200045B2 (en) 2011-03-11 2015-12-01 President And Fellows Of Harvard College Small molecule-dependent inteins and uses thereof
US9164079B2 (en) 2011-03-17 2015-10-20 Greyledge Technologies Llc Systems for autologous biological therapeutics
US20120244601A1 (en) 2011-03-22 2012-09-27 Bertozzi Carolyn R Riboswitch based inducible gene expression platform
US8709466B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 International Business Machines Corporation Cationic polymers for antimicrobial applications and delivery of bioactive materials
EP3320910A1 (en) 2011-04-05 2018-05-16 Cellectis Method for the generation of compact tale-nucleases and uses thereof
US10092660B2 (en) 2011-04-25 2018-10-09 Stc.Unm Solid compositions for pharmaceutical use
CA2834375C (en) 2011-04-27 2020-07-14 Amyris, Inc. Methods for genomic modification
WO2012158986A2 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Methods for site-specific genetic modification in stem cells using xanthomonas tal nucleases (xtn) for the creation of model organisms
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
WO2012158985A2 (en) 2011-05-17 2012-11-22 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Methods for site-specific genetic modification in spermatogonial stem cells using zinc finger nuclease (zfn) for the creation of model organisms
WO2012164565A1 (en) 2011-06-01 2012-12-06 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes
EP2732038B1 (en) 2011-07-15 2018-09-05 The General Hospital Corporation Methods of transcription activator like effector assembly
US20140289882A1 (en) 2011-07-19 2014-09-25 Oregon Health And Science University Compositions and methods for re-programming cells without genetic modification for repairing cartilage damage
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
AU2012317323B2 (en) 2011-09-28 2017-10-05 Fujimoto Pharmaceutical Corporation NGF aptamer and application thereof
GB2496687A (en) 2011-11-21 2013-05-22 Gw Pharma Ltd Tetrahydrocannabivarin (THCV) in the protection of pancreatic islet cells
IN2014MN00974A (ja) 2011-12-16 2015-04-24 Targetgene Biotechnologies Ltd
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
GB201122458D0 (en) 2011-12-30 2012-02-08 Univ Wageningen Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof
WO2013119602A1 (en) 2012-02-06 2013-08-15 President And Fellows Of Harvard College Arrdc1-mediated microvesicles (armms) and uses thereof
EP3272356A1 (en) 2012-02-24 2018-01-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
JP6490426B2 (ja) 2012-02-29 2019-03-27 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド ハンチントン病を治療するための方法および組成物
AU2013235340B2 (en) 2012-03-17 2019-05-23 The Regents Of The University Of California Fast diagnosis and personalized treatments for acne
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
WO2013152359A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 The Regents Of The University Of California Novel tetrazines and method of synthesizing the same
US11518997B2 (en) 2012-04-23 2022-12-06 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome engineering in plants
MX369788B (es) 2012-05-02 2019-11-21 Dow Agrosciences Llc Modificacion dirigida de deshidrogenasa de malato.
RU2650819C2 (ru) 2012-05-07 2018-04-17 Сангамо Терапьютикс, Инк. Способы и композиции для опосредованной нуклеазой направленной интеграции трансгенов
US11120889B2 (en) 2012-05-09 2021-09-14 Georgia Tech Research Corporation Method for synthesizing a nuclease with reduced off-site cleavage
MA37681B2 (fr) 2012-05-25 2020-07-29 Cellectis Procédés pour modifier des lymphocytes t résistants allogéniques et immunosuppresseurs pour l'immunothérapie
US20150017136A1 (en) 2013-07-15 2015-01-15 Cellectis Methods for engineering allogeneic and highly active t cell for immunotherapy
MX2014014650A (es) 2012-05-30 2015-10-14 Univ Washington Minivectores superenrollados como una herramienta para la reparacion, alteración y reemplazo de ácido desoxirribonucleico.
WO2013188037A2 (en) 2012-06-11 2013-12-19 Agilent Technologies, Inc Method of adaptor-dimer subtraction using a crispr cas6 protein
CN104540382A (zh) 2012-06-12 2015-04-22 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于产生条件性敲除等位基因的方法和组合物
EP2674501A1 (en) 2012-06-14 2013-12-18 Agence nationale de sécurité sanitaire de l'alimentation,de l'environnement et du travail Method for detecting and identifying enterohemorrhagic Escherichia coli
US9688971B2 (en) 2012-06-15 2017-06-27 The Regents Of The University Of California Endoribonuclease and methods of use thereof
EP2861737B1 (en) 2012-06-19 2019-04-17 Regents Of The University Of Minnesota Gene targeting in plants using dna viruses
CA2877962C (en) 2012-06-29 2018-06-05 Massachusetts Institute Of Technology Massively parallel combinatorial genetics
US9125508B2 (en) 2012-06-30 2015-09-08 Seasons 4, Inc. Collapsible tree system
CA2878037C (en) 2012-07-11 2021-08-31 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for delivery of biologics
HUE041553T2 (hu) 2012-07-11 2019-05-28 Sangamo Therapeutics Inc Lizoszomális tárolási betegségek (LSD) kezelése és génterápia
PT3494997T (pt) 2012-07-25 2019-12-05 Massachusetts Inst Technology Proteínas de ligação a adn indutíveis e ferramentas de perturbação do genoma e aplicações destas
JP6340366B2 (ja) 2012-07-31 2018-06-06 イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド 運動ニューロン疾患を診断および処置する方法
US10058078B2 (en) 2012-07-31 2018-08-28 Recombinetics, Inc. Production of FMDV-resistant livestock by allele substitution
WO2014022702A2 (en) 2012-08-03 2014-02-06 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlling gene expression by rna processing
ES2812599T3 (es) 2012-08-29 2021-03-17 Sangamo Therapeutics Inc Procedimientos y composiciones para el tratamiento de una afección genética
CN104769103B (zh) 2012-09-04 2018-06-08 塞勒克提斯公司 多链嵌合抗原受体和其用途
WO2014039513A2 (en) 2012-09-04 2014-03-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibition of diacylglycerol kinase to augment adoptive t cell transfer
BR112015004696B1 (pt) 2012-09-04 2022-07-19 The Scripps Research Institute Polipeptídeos quiméricos tendo especificidade de ligação direcionada, método de geração de um domínio n-terminal (ntd) de proteína efetora tipo ativador de transcrição (tale) e método para a recombinação sítio-específica
TWI670004B (zh) 2012-09-07 2019-09-01 美商陶氏農業科學公司 用來產生植物之螢光激活細胞分選富增技術
UA118090C2 (uk) 2012-09-07 2018-11-26 ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі Спосіб інтегрування послідовності нуклеїнової кислоти, що представляє інтерес, у ген fad2 у клітині сої та специфічний для локусу fad2 білок, що зв'язується, здатний індукувати спрямований розрив
UA119135C2 (uk) 2012-09-07 2019-05-10 ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі Спосіб отримання трансгенної рослини
CN105264067B (zh) 2012-09-07 2020-11-10 美国陶氏益农公司 Fad3性能基因座及相应的能够诱导靶向断裂的靶位点特异性结合蛋白
WO2014043143A1 (en) 2012-09-11 2014-03-20 Life Technologies Corporation Nucleic acid amplification
GB201216564D0 (en) 2012-09-17 2012-10-31 Univ Edinburgh Genetically edited animal
WO2014047103A2 (en) 2012-09-18 2014-03-27 The Translational Genomics Research Institute Isolated genes and transgenic organisms for producing biofuels
ES2824024T3 (es) 2012-10-10 2021-05-11 Sangamo Therapeutics Inc Compuestos modificadores de células T y usos de los mismos
EP2906602B1 (en) 2012-10-12 2019-01-16 The General Hospital Corporation Transcription activator-like effector (tale) - lysine-specific demethylase 1 (lsd1) fusion proteins
DE202013012597U1 (de) 2012-10-23 2017-11-21 Toolgen, Inc. Zusammensetzung zum Spalten einer Ziel-DNA, umfassend eine für die Ziel-DNA spezifische guide-RNA und eine Cas-Protein-codierende Nukleinsäure oder ein Cas-Protein, sowie deren Verwendung
US20140115728A1 (en) 2012-10-24 2014-04-24 A. Joseph Tector Double knockout (gt/cmah-ko) pigs, organs and tissues
US20150291967A1 (en) 2012-10-31 2015-10-15 Luc Mathis Coupling herbicide resistance with targeted insertion of transgenes in plants
WO2014068346A2 (en) 2012-10-31 2014-05-08 Mezögazdásagi Biotechnológiai Kutatóközpont Identification of a xanthomonas euvesicatoria resistance gene from pepper (capsicum annuum) and method for generating plants with resistance
RU2711249C2 (ru) 2012-11-01 2020-01-15 Фэктор Байосайенс Инк. Способы и продукты для экспрессии белков в клетках
US20150315576A1 (en) 2012-11-01 2015-11-05 Massachusetts Institute Of Technology Genetic device for the controlled destruction of dna
US20140127752A1 (en) 2012-11-07 2014-05-08 Zhaohui Zhou Method, composition, and reagent kit for targeted genomic enrichment
WO2014072941A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Marco Archetti Diffusible factors and cancer cells
WO2014081730A1 (en) 2012-11-20 2014-05-30 Cold Spring Harbor Laboratory Mutations in solanaceae plants that modulate shoot architecture and enhance yield-related phenotypes
EP2922959A4 (en) 2012-11-20 2016-04-20 Simplot Co J R TAL-MEDIATED TRANSFER DNA INTRODUCTION
WO2014081855A1 (en) 2012-11-20 2014-05-30 Universite De Montreal Methods and compositions for muscular dystrophies
PT3502240T (pt) 2012-11-27 2021-08-11 Childrens Medical Ct Corp Elementos reguladores distais de bcl11a como alvo para a reindução de hemoglobina fetal
US20140150135A1 (en) 2012-11-29 2014-05-29 North Carolina State University Synthetic Pathway for Biological Carbon Dioxide Sequestration
US20150299702A1 (en) 2012-11-30 2015-10-22 Aarhus Universitet Circular rna for inhibition of microrna
WO2014085830A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 The Parkinson's Institute Screening assays for therapeutics for parkinson's disease
US9255250B2 (en) 2012-12-05 2016-02-09 Sangamo Bioscience, Inc. Isolated mouse or human cell having an exogenous transgene in an endogenous albumin gene
CA2892821C (en) 2012-12-06 2022-04-26 Synthetic Genomics, Inc. Algal mutants having a locked-in high light acclimated phenotype
EP3138911B1 (en) 2012-12-06 2018-12-05 Sigma Aldrich Co. LLC Crispr-based genome modification and regulation
US9447422B2 (en) 2012-12-06 2016-09-20 Synthetic Genomics, Inc. Autonomous replication sequences and episomal DNA molecules
WO2014089541A2 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Haplomics, Inc. Factor viii mutation repair and tolerance induction
US9914931B2 (en) 2012-12-07 2018-03-13 Synthetic Genomics, Inc. Nannochloropsis spliced leader sequences and uses therefor
WO2014093479A1 (en) 2012-12-11 2014-06-19 Montana State University Crispr (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) rna-guided control of gene regulation
EP2931899A1 (en) 2012-12-12 2015-10-21 The Broad Institute, Inc. Functional genomics using crispr-cas systems, compositions, methods, knock out libraries and applications thereof
EP2931892B1 (en) 2012-12-12 2018-09-12 The Broad Institute, Inc. Methods, models, systems, and apparatus for identifying target sequences for cas enzymes or crispr-cas systems for target sequences and conveying results thereof
ES2576128T3 (es) 2012-12-12 2016-07-05 The Broad Institute, Inc. Modificación por tecnología genética y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias con dominios funcionales
ES2658401T3 (es) 2012-12-12 2018-03-09 The Broad Institute, Inc. Suministro, modificación y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias y aplicaciones terapéuticas
PT2921557T (pt) 2012-12-12 2016-10-19 Massachusetts Inst Technology Engenharia de sistemas, métodos e composições guia otimizadas para a manipulação de sequências
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
WO2014093694A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 The Broad Institute, Inc. Crispr-cas nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation in eukaryotes
DK2898075T3 (en) 2012-12-12 2016-06-27 Broad Inst Inc CONSTRUCTION AND OPTIMIZATION OF IMPROVED SYSTEMS, PROCEDURES AND ENZYME COMPOSITIONS FOR SEQUENCE MANIPULATION
PL2784162T3 (pl) 2012-12-12 2016-01-29 Broad Inst Inc Opracowanie systemów, metod oraz zoptymalizowanych kompozycji przewodnikowych do manipulacji sekwencyjnej
EP4234696A3 (en) 2012-12-12 2023-09-06 The Broad Institute Inc. Crispr-cas component systems, methods and compositions for sequence manipulation
ES2861623T3 (es) 2012-12-12 2021-10-06 Broad Inst Inc Sistemas, métodos y composiciones de componentes de CRISPR-Cas para manipulación de secuencias
KR20150096696A (ko) 2012-12-13 2015-08-25 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 메이즈에서 특정 유전자좌로의 정밀 유전자 표적화
BR102013032129B1 (pt) 2012-12-13 2022-06-07 Dow Agrosciences Llc Método para identificar a presença de um polinucleotídeo de dna doador exógeno inserido dentro de um único locus genômico eucariótico alvo
US9691017B2 (en) 2012-12-13 2017-06-27 Massachusetts Institute Of Technology Recombinase-based logic and memory systems
CA3081054A1 (en) 2012-12-17 2014-06-26 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided human genome engineering
CN105120656A (zh) 2012-12-21 2015-12-02 塞尔克蒂斯股份有限公司 冷诱导甜味降低的马铃薯
WO2014104878A1 (en) 2012-12-27 2014-07-03 Keygene N.V. Method for removing genetic linkage in a plant
LT2943579T (lt) 2013-01-10 2018-11-12 Dharmacon, Inc. Molekulių bibliotekos ir molekulių generavimo būdai
WO2014110552A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Recombinetics, Inc. Hornless livestock
AU2014207618A1 (en) 2013-01-16 2015-08-06 Emory University Cas9-nucleic acid complexes and uses related thereto
CN103233028B (zh) 2013-01-25 2015-05-13 南京徇齐生物技术有限公司 一种无物种限制无生物安全性问题的真核生物基因打靶方法及螺旋结构dna序列
BR112015018493A2 (pt) 2013-02-05 2017-08-22 Univ Georgia Linhagens celulares para produção de vírus e métodos de uso
US10660943B2 (en) 2013-02-07 2020-05-26 The Rockefeller University Sequence specific antimicrobials
PT2963113T (pt) 2013-02-14 2020-02-14 Univ Osaka Método para isolar região genómica específica utilizando molécula que se liga especificamente a sequência de adn endógena
WO2014127287A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Massachusetts Institute Of Technology Method for in vivo tergated mutagenesis
EP3561050B1 (en) 2013-02-20 2021-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetic modification of rats
US20150353885A1 (en) 2013-02-21 2015-12-10 Cellectis Method to counter-select cells or organisms by linking loci to nuclease components
ES2522765B2 (es) 2013-02-22 2015-03-18 Universidad De Alicante Método para dectectar inserciones de espaciadores en estructuras CRISPR
AU2014218621B2 (en) 2013-02-25 2019-11-07 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for enhancing nuclease-mediated gene disruption
WO2014131833A1 (en) 2013-02-27 2014-09-04 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum Für Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) Gene editing in the oocyte by cas9 nucleases
WO2014138379A1 (en) 2013-03-06 2014-09-12 The Johns Hopkins University The telomerator-a tool for chromosome engineering
US10612043B2 (en) 2013-03-09 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. Methods of in vivo engineering of large sequences using multiple CRISPR/cas selections of recombineering events
EP2970886B1 (en) 2013-03-12 2018-05-23 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modification of hla
CA2905289C (en) 2013-03-12 2023-03-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for the identification of variant recognition sites for rare-cutting engineered double-strand-break-inducing agents and compositions and uses thereof
US20160138027A1 (en) 2013-03-14 2016-05-19 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Treatment of diseases and conditions associated with dysregulation of mammalian target of rapamycin complex 1 (mtorc1)
KR101780885B1 (ko) 2013-03-14 2017-10-11 카리부 바이오사이언시스 인코포레이티드 핵산-표적화 핵산의 조성물 및 방법
US9234213B2 (en) 2013-03-15 2016-01-12 System Biosciences, Llc Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems
US11332719B2 (en) 2013-03-15 2022-05-17 The Broad Institute, Inc. Recombinant virus and preparations thereof
US10760064B2 (en) 2013-03-15 2020-09-01 The General Hospital Corporation RNA-guided targeting of genetic and epigenomic regulatory proteins to specific genomic loci
US20140273230A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Sigma-Aldrich Co., Llc Crispr-based genome modification and regulation
US20140349400A1 (en) 2013-03-15 2014-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Programmable Modification of DNA
WO2014145736A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Reproducible method for testis-mediated genetic modification (tgm) and sperm-mediated genetic modification (sgm)
US20140363561A1 (en) 2013-03-15 2014-12-11 J.R. Simplot Company Tal-mediated transfer dna insertion
MX2015011985A (es) 2013-03-15 2016-04-07 Univ Minnesota Ingenieria genomica de plantas utilizando sistemas crispr/cas.
KR20240036153A (ko) 2013-03-15 2024-03-19 시버스 유에스 엘엘씨 올리고뉴클레오타이드 매개 유전자 보수를 사용한 표적화된 유전자 변형의 효율을 증가시키기 위한 방법 및 조성물
US9937207B2 (en) 2013-03-21 2018-04-10 Sangamo Therapeutics, Inc. Targeted disruption of T cell receptor genes using talens
US20160053274A1 (en) 2013-04-02 2016-02-25 Bayer Cropscience Nv Targeted genome engineering in eukaryotes
EP3789487A1 (en) 2013-04-03 2021-03-10 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Effective generation of tumor-targeted t-cells derived from pluripotent stem cells
EP4286517A3 (en) 2013-04-04 2024-03-13 President and Fellows of Harvard College Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems
JP6576904B2 (ja) 2013-04-04 2019-09-18 トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ ＨＩＶ−１プロウイルスＤＮＡのｉｎｖｉｖｏ切除のための組成物及び方法
CN105263312A (zh) 2013-04-05 2016-01-20 美国陶氏益农公司 用于在植物基因组内整合外源序列的方法和组合物
US20150056629A1 (en) 2013-04-14 2015-02-26 Katriona Guthrie-Honea Compositions, systems, and methods for detecting a DNA sequence
US20160186208A1 (en) 2013-04-16 2016-06-30 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods of Mutating, Modifying or Modulating Nucleic Acid in a Cell or Nonhuman Mammal
US20160040155A1 (en) 2013-04-16 2016-02-11 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Activating an alternative pathway for homology-directed repair to stimulate targeted gene correction and genome engineering
BR112015026197B1 (pt) 2013-04-16 2022-12-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Método para modificação marcada de um lócus genômico de interesse em uma célula de rato pluripotente
EP2796558A1 (en) 2013-04-23 2014-10-29 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Improved gene targeting and nucleic acid carrier molecule, in particular for use in plants
CN103224947B (zh) 2013-04-28 2015-06-10 陕西师范大学 一种基因打靶系统
EP3546485A1 (en) 2013-05-10 2019-10-02 Whitehead Institute for Biomedical Research In vitro production of red blood cells with sortaggable proteins
CA2910427C (en) 2013-05-10 2024-02-20 Sangamo Biosciences, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
WO2014184744A1 (en) 2013-05-13 2014-11-20 Cellectis Methods for engineering highly active t cell for immunotherapy
FI3546572T3 (fi) 2013-05-13 2024-05-06 Cellectis Cd19-spesifinen kimeerinen antigeenireseptori ja sen käyttötapoja
CA2910489A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment of a genetic condition
WO2014186686A2 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Two Blades Foundation Targeted mutagenesis and genome engineering in plants using rna-guided cas nucleases
EP2999788B1 (en) 2013-05-22 2020-07-08 Northwestern University Rna-directed dna cleavage and gene editing by cas9 enzyme from neisseria meningitidis
US9890393B2 (en) 2013-05-29 2018-02-13 Cellectis Methods for engineering T cells for immunotherapy by using RNA-guided CAS nuclease system
US9873907B2 (en) 2013-05-29 2018-01-23 Agilent Technologies, Inc. Method for fragmenting genomic DNA using CAS9
JP6670743B2 (ja) 2013-05-29 2020-03-25 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｉｉ型ｃｒｉｓｐｒシステムにおける新規のコンパクトなｃａｓ９足場
EP3004349B1 (en) 2013-05-29 2018-03-28 Cellectis S.A. A method for producing precise dna cleavage using cas9 nickase activity
WO2014194190A1 (en) 2013-05-30 2014-12-04 The Penn State Research Foundation Gene targeting and genetic modification of plants via rna-guided genome editing
EP3004149B1 (en) 2013-05-31 2018-12-19 Cellectis S.A. A laglidadg homing endonuclease cleaving the c-c chemokine receptor type-5 (ccr5) gene and uses thereof
EP3004338B1 (en) 2013-05-31 2019-01-02 Cellectis SA A laglidadg homing endonuclease cleaving the t cell receptor alpha gene and uses thereof
US20140359796A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Recombinetics, Inc. Genetically sterile animals
US20140356956A1 (en) 2013-06-04 2014-12-04 President And Fellows Of Harvard College RNA-Guided Transcriptional Regulation
AU2014274939B2 (en) 2013-06-04 2020-03-19 President And Fellows Of Harvard College RNA-guideded transcriptional regulation
EP3417880A1 (en) 2013-06-05 2018-12-26 Duke University Rna-guided gene editing and gene regulation
EP3008181B1 (en) 2013-06-11 2019-11-06 The Regents of The University of California Methods and compositions for target dna modification
US20150315252A1 (en) 2013-06-11 2015-11-05 Clontech Laboratories, Inc. Protein enriched microvesicles and methods of making and using the same
EP3008192B1 (en) 2013-06-11 2019-07-17 Takara Bio USA, Inc. Protein enriched microvesicles and methods of making and using the same
US20160145631A1 (en) 2013-06-14 2016-05-26 Cellectis Methods for non-transgenic genome editing in plants
EP3011034B1 (en) 2013-06-17 2019-08-07 The Broad Institute, Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using viral components
WO2014204725A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Optimized crispr-cas double nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation
KR20160030187A (ko) 2013-06-17 2016-03-16 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 간의 표적화 및 치료를 위한 ＣＲＩＳＰＲ­Ｃａｓ 시스템, 벡터 및 조성물의 전달 및 용도
WO2014204727A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems, compositions methods, screens and applications thereof
WO2014204723A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Oncogenic models based on delivery and use of the crispr-cas systems, vectors and compositions
DK3011032T3 (da) 2013-06-17 2020-01-20 Broad Inst Inc Fremføring, modificering og optimering af systemer, fremgangsmåder og sammensætninger til målretning mod og modellering af sygdomme og forstyrrelser i postmitotiske celler
ES2777217T3 (es) 2013-06-17 2020-08-04 Broad Inst Inc Suministro, modificación y optimización de sistemas de guía en tándem, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias
SG11201510297QA (en) 2013-06-19 2016-01-28 Sigma Aldrich Co Llc Targeted integration
US10011850B2 (en) 2013-06-21 2018-07-03 The General Hospital Corporation Using RNA-guided FokI Nucleases (RFNs) to increase specificity for RNA-Guided Genome Editing
EP3013939A1 (en) 2013-06-25 2016-05-04 Cellectis Modified diatoms for biofuel production
US20160369268A1 (en) 2013-07-01 2016-12-22 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Transcription activator-like effector (tale) libraries and methods of synthesis and use
IL243475B2 (en) 2013-07-09 2023-11-01 Harvard College Multiplex RNA-guided genome engineering
EP3019595A4 (en) 2013-07-09 2016-11-30 THERAPEUTIC USES OF A GENERIC CHANGE WITH CRISPR / CAS SYSTEMS
JP6443811B2 (ja) 2013-07-10 2018-12-26 エフストック リミテッド ライアビリティ カンパニー Ｍｒａｐ２ノックアウト
CN105517579B (zh) 2013-07-10 2019-11-15 哈佛大学校长及研究员协会 用于RNA向导的基因调节和编辑的正交Cas9蛋白
DK3019602T3 (en) 2013-07-10 2018-11-12 Glykos Finland Oy MULTIPLE PROTEASE-DEFECTED FILAMENTARY FUNGAL CELLS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
HRP20211563T1 (hr) 2013-07-11 2022-01-07 Modernatx, Inc. Pripravci koji sadrže sintetske polinukleotide koji kodiraju proteine srodne crispr-u i sintetske sgrna, te postupci njihove uporabe
WO2015007194A1 (zh) 2013-07-16 2015-01-22 中国科学院上海生命科学研究院 植物基因组定点修饰方法
CN105392885B (zh) 2013-07-19 2020-11-03 赖瑞克斯生物科技公司 用于产生双等位基因敲除的方法和组合物
GB201313235D0 (en) 2013-07-24 2013-09-04 Univ Edinburgh Antiviral Compositions Methods and Animals
CN103388006B (zh) 2013-07-26 2015-10-28 华东师范大学 一种基因定点突变的构建方法
US11306328B2 (en) 2013-07-26 2022-04-19 President And Fellows Of Harvard College Genome engineering
US10421957B2 (en) 2013-07-29 2019-09-24 Agilent Technologies, Inc. DNA assembly using an RNA-programmable nickase
CA2920253A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Enevolv, Inc. Processes and host cells for genome, pathway, and biomolecular engineering
ITTO20130669A1 (it) 2013-08-05 2015-02-06 Consiglio Nazionale Ricerche Vettore adeno-associato ricombinante muscolo-specifico e suo impiego nel trattamento di patologie muscolari
WO2015021426A1 (en) 2013-08-09 2015-02-12 Sage Labs, Inc. A crispr/cas system-based novel fusion protein and its application in genome editing
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
WO2015024017A2 (en) 2013-08-16 2015-02-19 President And Fellows Of Harvard College Rna polymerase, methods of purification and methods of use
WO2015021990A1 (en) 2013-08-16 2015-02-19 University Of Copenhagen Rna probing method and reagents
AU2014310564B2 (en) 2013-08-20 2020-04-09 Katholieke Universiteit Leuven, K.U.Leuven R&D Inhibition of a lncRNA for treatment of melanoma
CA3109801C (en) 2013-08-22 2024-01-09 Andrew Cigan Plant genome modification using guide rna/cas endonuclease systems and methods of use
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
GB201315321D0 (en) 2013-08-28 2013-10-09 Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen Transduction Buffer
CA2920899C (en) 2013-08-28 2023-02-28 Sangamo Biosciences, Inc. Compositions for linking dna-binding domains and cleavage domains
EA037850B1 (ru) 2013-08-29 2021-05-27 Тэмпл Юниверсити Оф Зе Коммонвэлс Систем Оф Хайе Эдьюкейшн Способы и композиции для рнк-направленного лечения вич-инфекции
SG10201801782PA (en) 2013-09-04 2018-04-27 Csir Site-specific nuclease single-cell assay targeting gene regulatory elements to silence gene expression
JP6649258B2 (ja) 2013-09-04 2020-02-19 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー ドナー挿入を判定するための作物における迅速ターゲッティング解析
EP3041345B1 (de) 2013-09-04 2024-05-01 KWS SAAT SE & Co. KGaA Helminthosporium turcicum-resistente pflanze
WO2015034872A2 (en) 2013-09-05 2015-03-12 Massachusetts Institute Of Technology Tuning microbial populations with programmable nucleases
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
WO2016070129A1 (en) 2014-10-30 2016-05-06 President And Fellows Of Harvard College Delivery of negatively charged proteins using cationic lipids
ES2844174T3 (es) 2013-09-18 2021-07-21 Kymab Ltd Métodos, células y organismos
WO2015040075A1 (en) 2013-09-18 2015-03-26 Genome Research Limited Genomic screening methods using rna-guided endonucleases
JP6595459B2 (ja) 2013-09-23 2019-10-23 レンセラール ポリテクニック インスティチュート 種々の細胞集団におけるナノ粒子媒介遺伝子送達、ゲノム編集およびリガンド標的化修飾
US10822606B2 (en) 2013-09-27 2020-11-03 The Regents Of The University Of California Optimized small guide RNAs and methods of use
US20160237455A1 (en) 2013-09-27 2016-08-18 Editas Medicine, Inc. Crispr-related methods and compositions
EP3052659A4 (en) 2013-09-30 2017-06-14 The Regents of the University of California Identification of cxcr8, a novel chemokine receptor
WO2015048707A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Regents Of The University Of Minnesota Conferring resistance to geminiviruses in plants using crispr/cas systems
US20160208214A1 (en) 2013-10-02 2016-07-21 Northeastern University Methods and compositions for generation of developmentally-incompetent eggs in recipients of nuclear genetic transfer
JP5774657B2 (ja) 2013-10-04 2015-09-09 国立大学法人京都大学 エレクトロポレーションを利用した哺乳類の遺伝子改変方法
CN105916977A (zh) 2013-10-07 2016-08-31 东北大学 用于使用自体细胞系统从生殖系细胞离体产生有发育能力的卵的方法和组合物
WO2015052231A2 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Technical University Of Denmark Multiplex editing system
US20150098954A1 (en) 2013-10-08 2015-04-09 Elwha Llc Compositions and Methods Related to CRISPR Targeting
DE102013111099B4 (de) 2013-10-08 2023-11-30 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Permanente Genkorrektur mittels nukleotidmodifizierter messenger RNA
WO2015052335A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Cellectis Methods and kits for detecting nucleic acid sequences of interest using dna-binding protein domain
WO2015057671A1 (en) 2013-10-14 2015-04-23 The Broad Institute, Inc. Artificial transcription factors comprising a sliding domain and uses thereof
EP3057994B1 (en) 2013-10-15 2020-09-23 The Scripps Research Institute Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
KR102357968B1 (ko) 2013-10-15 2022-02-03 더 스크립스 리서치 인스티튜트 키메라 항원 수용체 t 세포 스위치 및 이의 용도
CN105899665B (zh) 2013-10-17 2019-10-22 桑格摩生物科学股份有限公司 用于核酸酶介导的基因组工程改造的递送方法和组合物
WO2015057976A1 (en) 2013-10-17 2015-04-23 Sangamo Biosciences, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering in hematopoietic stem cells
US10508289B2 (en) 2013-10-25 2019-12-17 Cellectis Rare-cutting endonucleases for efficient and specific targeting DNA sequences comprising highly repetitive motives
WO2015065964A1 (en) 2013-10-28 2015-05-07 The Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems, compositions, methods, screens and applications thereof
US10584358B2 (en) 2013-10-30 2020-03-10 North Carolina State University Compositions and methods related to a type-II CRISPR-Cas system in Lactobacillus buchneri
AU2014341929B2 (en) 2013-11-04 2017-11-30 Corteva Agriscience Llc Optimal maize loci
WO2015066634A2 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Dow Agrosciences Llc Optimal soybean loci
UY35816A (es) 2013-11-04 2015-05-29 Dow Agrosciences Llc ?locus óptimos de la soja?.
CA2926534A1 (en) 2013-11-04 2015-05-07 Dow Agrosciences Llc A universal donor system for gene targeting
UA120503C2 (uk) 2013-11-04 2019-12-26 Дау Агросайєнсиз Елелсі Спосіб одержання трансгенної клітини рослини кукурудзи
WO2015069682A2 (en) 2013-11-05 2015-05-14 President And Fellows Of Harvard College Precise microbiota engineering at the cellular level
LT3066201T (lt) 2013-11-07 2018-08-10 Editas Medicine, Inc. Su crispr susiję būdai ir kompozicijos su valdančiomis grnr
US20160282354A1 (en) 2013-11-08 2016-09-29 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for selecting a treatment for b-cell neoplasias
BR112016010175A2 (pt) 2013-11-11 2017-10-03 Sangamo Biosciences Inc Repressor genético, seus usos, e composição farmacêutica
WO2015070193A1 (en) 2013-11-11 2015-05-14 Liu Oliver Compositions and methods for targeted gene disruption in prokaryotes
EP3960856A1 (en) 2013-11-13 2022-03-02 Children's Medical Center Corporation Nuclease-mediated regulation of gene expression
WO2015073867A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Engineering neural stem cells using homologous recombination
EP3071695A2 (en) 2013-11-18 2016-09-28 Crispr Therapeutics AG Crispr-cas system materials and methods
JP2016538342A (ja) 2013-11-18 2016-12-08 イエール ユニバーシティ トランスポゾンを使用する組成物および方法
US9074199B1 (en) 2013-11-19 2015-07-07 President And Fellows Of Harvard College Mutant Cas9 proteins
WO2015075056A1 (en) 2013-11-19 2015-05-28 Thermo Fisher Scientific Baltics Uab Programmable enzymes for isolation of specific dna fragments
US10787684B2 (en) 2013-11-19 2020-09-29 President And Fellows Of Harvard College Large gene excision and insertion
CA2930282A1 (en) 2013-11-20 2015-05-28 Fondazione Telethon Artificial dna-binding proteins and uses thereof
AU2014351871B2 (en) 2013-11-22 2020-02-13 Cellectis Method for generating batches of allogeneic T-cells with averaged potency
JP6621409B2 (ja) 2013-11-22 2019-12-18 ミナ セラピューティクス リミテッド Ｃ／ＥＢＰα小分子活性化ＲＮＡ組成物
EP3071687B1 (en) 2013-11-22 2019-07-31 Cellectis Method of engineering chemotherapy drug resistant t-cells for immunotherapy
CN103642836A (zh) 2013-11-26 2014-03-19 苏州同善生物科技有限公司 一种基于crispr基因敲除技术建立脆性x综合症灵长类动物模型的方法
CN103614415A (zh) 2013-11-27 2014-03-05 苏州同善生物科技有限公司 一种基于crispr基因敲除技术建立肥胖症大鼠动物模型的方法
AU2014356400A1 (en) 2013-11-28 2016-06-02 Horizon Discovery Limited Somatic haploid human cell line
EP3757116A1 (en) 2013-12-09 2020-12-30 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genome engineering
RU2685914C1 (ru) 2013-12-11 2019-04-23 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Способы и композиции для направленной модификации генома
US9994831B2 (en) 2013-12-12 2018-06-12 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for modifying a single stranded target nucleic acid
MX2016007324A (es) 2013-12-12 2017-03-06 Broad Inst Inc Suministro, uso y aplicaciones terapeuticas de los sistemas y composiciones crispr-cas para actuar sobre hbv y trastornos y enfermedades virales.
MX2016007327A (es) 2013-12-12 2017-03-06 Broad Inst Inc Suministro, uso y aplicaciones terapeuticas de sistemas y composiciones crispr-cas para dirigirlos a trastornos y enfermedades usando componentes para suministro de particulas.
KR20160097327A (ko) 2013-12-12 2016-08-17 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 유전자 산물, 구조 정보 및 유도성 모듈형 ｃａｓ 효소의 발현의 변경을 위한 ｃｒｉｓｐｒ-ｃａｓ 시스템 및 방법
WO2015089364A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Crystal structure of a crispr-cas system, and uses thereof
US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting caspase-9 point mutations
WO2015089473A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation
WO2015089354A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Compositions and methods of use of crispr-cas systems in nucleotide repeat disorders
WO2015089486A2 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Systems, methods and compositions for sequence manipulation with optimized functional crispr-cas systems
KR20160089527A (ko) 2013-12-12 2016-07-27 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 게놈 편집을 위한 ｃｒｉｓｐｒ-ｃａｓ 시스템 및 조성물의 전달, 용도 및 치료적 응용
EP3080275B1 (en) 2013-12-13 2020-01-15 Cellectis Method of selection of transformed diatoms using nuclease
WO2015086795A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Cellectis Cas9 nuclease platform for microalgae genome engineering
US20150191744A1 (en) 2013-12-17 2015-07-09 University Of Massachusetts Cas9 effector-mediated regulation of transcription, differentiation and gene editing/labeling
JP6652489B2 (ja) 2013-12-19 2020-02-26 アミリス， インコーポレイテッド ゲノム組込みのための方法
JP6721508B2 (ja) 2013-12-26 2020-07-15 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 多重ガイドｒｎａ
WO2015103057A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Fusion genes associated with progressive prostate cancer
WO2015103153A1 (en) 2013-12-31 2015-07-09 The Regents Of The University Of California Cas9 crystals and methods of use thereof
CN103668472B (zh) 2013-12-31 2014-12-24 北京大学 利用CRISPR/Cas9系统构建真核基因敲除文库的方法
WO2015105928A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided gene drives
MX2016009243A (es) 2014-01-14 2017-03-08 Lam Therapeutics Inc Métodos de mutagénesis.
US10774338B2 (en) 2014-01-16 2020-09-15 The Regents Of The University Of California Generation of heritable chimeric plant traits
GB201400962D0 (en) 2014-01-21 2014-03-05 Kloehn Peter C Screening for target-specific affinity binders using RNA interference
WO2015109752A1 (en) 2014-01-21 2015-07-30 The Institute Of Genetics And Developmental Biology Chinese Academy Of Sciences Modified plants
JP6479024B2 (ja) 2014-01-24 2019-03-06 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 抗体親和性の最適化のための高スループットマウスモデル
CA2936646C (en) 2014-01-24 2024-04-30 North Carolina State University Methods and compositions for sequences guiding cas9 targeting
WO2015113063A1 (en) 2014-01-27 2015-07-30 Georgia Tech Research Corporation Methods and systems for identifying crispr/cas off-target sites
CN104805078A (zh) 2014-01-28 2015-07-29 北京大学 用于高效基因组编辑的rna分子的设计、合成及其应用
US9850525B2 (en) 2014-01-29 2017-12-26 Agilent Technologies, Inc. CAS9-based isothermal method of detection of specific DNA sequence
WO2015116969A2 (en) 2014-01-30 2015-08-06 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Method, vectors, cells, seeds and kits for stacking genes into a single genomic site
WO2015117041A1 (en) 2014-01-30 2015-08-06 Nair Ramesh B Gene modification-mediated methods and compositions for generating dominant traits in eukaryotic systems
KR20220100078A (ko) 2014-01-31 2022-07-14 팩터 바이오사이언스 인크. 핵산 제조 및 송달을 위한 방법 및 산물
GB201401707D0 (en) 2014-01-31 2014-03-19 Sec Dep For Health The Adeno-associated viral vectors
WO2015115903A1 (en) 2014-02-03 2015-08-06 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Site-specific dna break-induced genome editing using engineered nucleases
PL3102673T3 (pl) 2014-02-03 2020-11-02 Sangamo Therapeutics, Inc. Sposoby i kompozycje do leczenia talasemii beta
CA2938669A1 (en) 2014-02-04 2015-08-13 Igenomx International Genomics Corporation Genome fractioning
USRE48856E1 (en) 2014-02-07 2021-12-21 Vib Vzw Inhibition of NEAT1 for treatment of solid tumors
CN106164271B (zh) 2014-02-11 2020-06-02 科罗拉多州立大学董事会（法人团体） Crispr支持的多路基因组工程化
CN106232814B (zh) 2014-02-13 2021-05-11 宝生物工程（美国)有限公司 从核酸的初始集合中耗尽靶分子的方法、以及用于实践其的组合物和试剂盒
US10836998B2 (en) 2014-02-14 2020-11-17 Cellectis Cells for immunotherapy engineered for targeting antigen present both on immune cells and pathological cells
CA2940084A1 (en) 2014-02-18 2015-08-27 Duke University Compositions for the inactivation of virus replication and methods of making and using the same
US10041135B2 (en) 2014-02-20 2018-08-07 Dsm Ip Assets B.V. Phage insensitive Streptococcus thermophilus
AU2015220762B2 (en) 2014-02-21 2019-05-02 Cellectis Method for in situ inhibition of regulatory T cells
US20170015994A1 (en) 2014-02-24 2017-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Methods for in vivo genome editing
JP6606088B2 (ja) 2014-02-24 2019-11-13 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド ヌクレアーゼ媒介性標的化組み込みのための方法および組成物
US10301636B2 (en) 2014-02-25 2019-05-28 National Research And Development Agency National Agriculture And Food Research Organization Plant cell comprising mutation introduced in target DNA, and method for producing the plant cell
CA3194412A1 (en) 2014-02-27 2015-09-03 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for site directed genomic modification
CN103820454B (zh) 2014-03-04 2016-03-30 上海金卫生物技术有限公司 CRISPR-Cas9特异性敲除人PD1基因的方法以及用于特异性靶向PD1基因的sgRNA
CN103820441B (zh) 2014-03-04 2017-05-17 黄行许 CRISPR‑Cas9特异性敲除人CTLA4基因的方法以及用于特异性靶向CTLA4基因的sgRNA
EP3957735A1 (en) 2014-03-05 2022-02-23 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa
WO2015133554A1 (ja) 2014-03-05 2015-09-11 国立大学法人神戸大学 標的化したｄｎａ配列の核酸塩基を特異的に変換するゲノム配列の改変方法及びそれに用いる分子複合体
EP3553176A1 (en) 2014-03-10 2019-10-16 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (lca10)
ES2782125T3 (es) 2014-03-11 2020-09-10 Cellectis Método para generar linfocitos T compatibles para trasplante alogénico
ES2821149T3 (es) 2014-03-12 2021-04-23 Prec Biosciences Inc Eliminación del exón del gen de la distrofina mediante nucleasas modificadas genéticamente
WO2015138870A2 (en) 2014-03-13 2015-09-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for targeted epigenetic modification
US20170088845A1 (en) 2014-03-14 2017-03-30 The Regents Of The University Of California Vectors and methods for fungal genome engineering by crispr-cas9
CN106455514A (zh) 2014-03-14 2017-02-22 希博斯美国有限公司 采用寡核苷酸介导的基因修复提高靶向基因修饰的效率的方法和组合物
US9624498B2 (en) 2014-03-18 2017-04-18 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for regulation of zinc finger protein expression
EP3126498A4 (en) 2014-03-20 2017-08-23 Université Laval Crispr-based methods and products for increasing frataxin levels and uses thereof
AU2015231231B2 (en) 2014-03-21 2021-09-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Genome editing without nucleases
US10451633B2 (en) 2014-03-24 2019-10-22 IMMCO Diagnostics, Inc. Anti-nuclear antibody detection and diagnostics for systemic and non-systemic autoimmune disorders
DK3122870T3 (da) 2014-03-25 2022-09-12 Ginkgo Bioworks Inc Fremgangsmåder og genetiske systemer til celleteknik
AU2015236128A1 (en) 2014-03-25 2016-11-10 Editas Medicine Inc. CRISPR/CAS-related methods and compositions for treating HIV infection and AIDS
EP3122880B1 (en) 2014-03-26 2021-05-05 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating sickle cell disease
WO2015148860A1 (en) 2014-03-26 2015-10-01 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating beta-thalassemia
JP6815986B2 (ja) 2014-03-26 2021-01-20 ユニバーシティ オブ メリーランド， カレッジ パーク 大型家畜の接合体における標的化ゲノム編集
US9609415B2 (en) 2014-03-26 2017-03-28 Bose Corporation Headphones with cable management
US9993563B2 (en) 2014-03-28 2018-06-12 Aposense Ltd. Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules
AU2015237746B2 (en) 2014-03-28 2020-01-30 Aposense Ltd. Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules
WO2015153791A1 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating herpes simplex virus type 2 (hsv-2)
EP3126497B1 (en) 2014-04-01 2018-12-12 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating herpes simplex virus type 1 (hsv-1)
WO2015153760A2 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of a nervous system disorder
WO2015153889A2 (en) 2014-04-02 2015-10-08 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Materials and methods for the treatment of latent viral infection
WO2015153780A1 (en) 2014-04-02 2015-10-08 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
CN103911376B (zh) 2014-04-03 2017-02-15 黄行许 CRISPR‑Cas9靶向敲除乙肝病毒cccDNA及其特异性sgRNA
EP3126503A1 (en) 2014-04-03 2017-02-08 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for the production of guide rna
WO2015155686A2 (en) 2014-04-08 2015-10-15 North Carolina State University Methods and compositions for rna-directed repression of transcription using crispr-associated genes
WO2015157070A2 (en) 2014-04-09 2015-10-15 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP3129488B1 (en) 2014-04-10 2019-06-12 The Regents of The University of California Methods and compositions for using argonaute to modify a single stranded target nucleic acid
WO2015155341A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Cellectis Method for generating immune cells resistant to arginine and/or tryptophan depleted microenvironment
CN106536739B (zh) 2014-04-14 2021-08-03 内梅西斯生物有限公司 治疗剂
SG11201608503UA (en) 2014-04-14 2016-11-29 Maxcyte Inc Methods and compositions for modifying genomic dna
CN103923911B (zh) 2014-04-14 2016-06-08 上海金卫生物技术有限公司 CRISPR-Cas9特异性敲除人CCR5基因的方法以及用于特异性靶向CCR5基因的sgRNA
GB201406968D0 (en) 2014-04-17 2014-06-04 Green Biologics Ltd Deletion mutants
GB201406970D0 (en) 2014-04-17 2014-06-04 Green Biologics Ltd Targeted mutations
KR20230152175A (ko) 2014-04-18 2023-11-02 에디타스 메디신, 인코포레이티드 암 면역요법을 위한 crispr-cas-관련 방법, 조성물 및 구성성분
CN105039399A (zh) 2014-04-23 2015-11-11 复旦大学 多能干细胞-遗传性心肌病心肌细胞及其制备方法
WO2015163733A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 Institute For Basic Science A method of selecting a nuclease target sequence for gene knockout based on microhomology
CA2945393C (en) 2014-04-24 2021-03-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Application of induced pluripotent stem cells to generate adoptive cell therapy products
WO2015164748A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 Sangamo Biosciences, Inc. Engineered transcription activator like effector (tale) proteins
AR100216A1 (es) 2014-04-28 2016-09-21 Recombinetics Inc Edición de genes multiplexados
WO2015168158A1 (en) 2014-04-28 2015-11-05 Fredy Altpeter Targeted genome editing to modify lignin biosynthesis and cell wall composition
WO2015167956A1 (en) 2014-04-28 2015-11-05 Dow Agrosciences Llc Haploid maize transformation
US10494422B2 (en) 2014-04-29 2019-12-03 Seattle Children's Hospital CCR5 disruption of cells expressing anti-HIV chimeric antigen receptor (CAR) derived from broadly neutralizing antibodies
EP3156493B1 (en) 2014-04-30 2020-05-06 Tsinghua University Use of tale transcriptional repressor for modular construction of synthetic gene line in mammalian cell
WO2015165276A1 (zh) 2014-04-30 2015-11-05 清华大学 利用tale转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路的试剂盒
WO2015168404A1 (en) 2014-04-30 2015-11-05 Massachusetts Institute Of Technology Toehold-gated guide rna for programmable cas9 circuitry with rna input
CN104178506B (zh) 2014-04-30 2017-03-01 清华大学 Taler蛋白通过空间位阻发挥转录抑制作用及其应用
US20170037431A1 (en) 2014-05-01 2017-02-09 University Of Washington In vivo Gene Engineering with Adenoviral Vectors
GB201407852D0 (en) 2014-05-02 2014-06-18 Iontas Ltd Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
WO2015171603A1 (en) 2014-05-06 2015-11-12 Two Blades Foundation Methods for producing plants with enhanced resistance to oomycete pathogens
MX2016014565A (es) 2014-05-08 2017-05-23 Sangamo Biosciences Inc Metodos y composiciones para tratar la enfermedad de huntington.
CA2948580A1 (en) 2014-05-09 2015-11-12 Adam Zlotnick Methods and compositions for treating hepatitis b virus infections
CA2948429A1 (en) 2014-05-09 2015-11-12 Universite Laval Prevention and treatment of alzheimer's disease by genome editing using the crispr/cas system
WO2015171894A1 (en) 2014-05-09 2015-11-12 The Regents Of The University Of California Methods for selecting plants after genome editing
CA2947622A1 (en) 2014-05-13 2015-11-19 Sangamo Biosciences, Inc. Genome editing methods and compositions for prevention or treatment of a disease
WO2015173436A1 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Vrije Universiteit Brussel Genetic correction of myotonic dystrophy type 1
CN103981212B (zh) 2014-05-16 2016-06-01 安徽省农业科学院水稻研究所 将黄色颖壳的水稻品种的颖壳颜色改为褐色的育种方法
CN103981211B (zh) 2014-05-16 2016-07-06 安徽省农业科学院水稻研究所 一种创制闭颖授粉水稻材料的育种方法
CN104017821B (zh) 2014-05-16 2016-07-06 安徽省农业科学院水稻研究所 定向编辑颖壳颜色决定基因OsCHI创制褐壳水稻材料的方法
CN104004782B (zh) 2014-05-16 2016-06-08 安徽省农业科学院水稻研究所 一种延长水稻生育期的育种方法
JP2017517256A (ja) 2014-05-20 2017-06-29 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ 遺伝子配列を編集する方法
CA2852593A1 (en) 2014-05-23 2015-11-23 Universite Laval Methods for producing dopaminergic neurons and uses thereof
WO2015183885A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods and compositions for perturbing gene expression in hematopoietic stem cell lineages in vivo
KR101886381B1 (ko) 2014-05-28 2018-08-10 기초과학연구원 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제를 이용한 표적 dna의 분리 방법
CA2949710A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods to treat latent viral infections
US9970001B2 (en) 2014-06-05 2018-05-15 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for nuclease design
ES2784754T3 (es) 2014-06-06 2020-09-30 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para modificar un locus objetivo
KR20170010893A (ko) 2014-06-06 2017-02-01 더 캘리포니아 인스티튜트 포 바이오메디칼 리써치 아미노 말단 면역글로불린 융합 단백질 및 이의 조성물을 구축하는 방법
WO2015188094A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 President And Fellows Of Harvard College Methods for targeted modification of genomic dna
WO2015188135A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 The California Institute For Biomedical Research Constant region antibody fusion proteins and compositions thereof
CN104004778B (zh) 2014-06-06 2016-03-02 重庆高圣生物医药有限责任公司 含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用
US11030531B2 (en) 2014-06-06 2021-06-08 Trustees Of Boston University DNA recombinase circuits for logical control of gene expression
US11274302B2 (en) 2016-08-17 2022-03-15 Diacarta Ltd Specific synthetic chimeric Xenonucleic acid guide RNA; s(XNA-gRNA) for enhancing CRISPR mediated genome editing efficiency
CA2951707A1 (en) 2014-06-10 2015-12-17 Massachusetts Institute Of Technology Method for gene editing
CA2951882A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Tom E. HOWARD Factor viii mutation repair and tolerance induction and related cdnas, compositions, methods and systems
AU2015324564B2 (en) 2014-06-11 2021-07-01 Duke University Compositions and methods for rapid and dynamic flux control using synthetic metabolic valves
WO2015191911A2 (en) 2014-06-12 2015-12-17 Clontech Laboratories, Inc. Protein enriched microvesicles and methods of making and using the same
US11584936B2 (en) 2014-06-12 2023-02-21 King Abdullah University Of Science And Technology Targeted viral-mediated plant genome editing using CRISPR /Cas9
CA2952697A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The Johns Hopkins University Compositions and methods for the expression of crispr guide rnas using the h1 promoter
WO2015195547A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 University Of Washington Methods for controlling stem cell potential and for gene editing in stem cells
JP2017518082A (ja) 2014-06-17 2017-07-06 ポセイダ セラピューティクス， インコーポレイテッド ゲノム中の特異的遺伝子座にタンパク質を指向させるための方法およびその使用
US10301637B2 (en) 2014-06-20 2019-05-28 Cellectis Potatoes with reduced granule-bound starch synthase
PL3155099T3 (pl) 2014-06-23 2018-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Łączenie dna mediowane nukleazą
IL286474B2 (en) 2014-06-23 2023-11-01 Massachusetts Gen Hospital Genome-wide random identification of DSBS assessed by sequencing (guide-sequence)
WO2015200555A2 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Caribou Biosciences, Inc. Rna modification to engineer cas9 activity
DK3161128T3 (en) 2014-06-26 2018-11-05 Regeneron Pharma METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETED GENTICAL MODIFICATIONS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
GB201411344D0 (en) 2014-06-26 2014-08-13 Univ Leicester Cloning
JP6090535B2 (ja) 2014-06-30 2017-03-08 日産自動車株式会社 内燃機関
EP3162328B1 (en) 2014-06-30 2022-01-19 Kao Corporation Adhesive sheet for cooling
US20180187172A1 (en) 2014-07-01 2018-07-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Regulated gene expression from viral vectors
WO2016007604A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Gen9, Inc. Compositions and methods for site-directed dna nicking and cleaving
EP2966170A1 (en) 2014-07-10 2016-01-13 Heinrich-Pette-Institut Leibniz-Institut für experimentelle Virologie-Stiftung bürgerlichen Rechts - HBV inactivation
BR122023024818A2 (pt) 2014-07-11 2023-12-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rna guia, polinucleotídeo e complexo de ribonucleoproteínas
AU2015288157A1 (en) 2014-07-11 2017-01-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods for producing plants resistant to glyphosate herbicide
CN104109687A (zh) 2014-07-14 2014-10-22 四川大学 运动发酵单胞菌CRISPR-Cas9系统的构建与应用
WO2016011080A2 (en) 2014-07-14 2016-01-21 The Regents Of The University Of California Crispr/cas transcriptional modulation
WO2016011210A2 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells for adoptive cell therapy
EP3193944B1 (en) 2014-07-17 2021-04-07 University of Pittsburgh - Of the Commonwealth System of Higher Education Methods of treating cells containing fusion genes
US9944933B2 (en) 2014-07-17 2018-04-17 Georgia Tech Research Corporation Aptamer-guided gene targeting
US20160053272A1 (en) 2014-07-18 2016-02-25 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods Of Modifying A Sequence Using CRISPR
US10975406B2 (en) 2014-07-18 2021-04-13 Massachusetts Institute Of Technology Directed endonucleases for repeatable nucleic acid cleavage
US20160053304A1 (en) 2014-07-18 2016-02-25 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods Of Depleting Target Sequences Using CRISPR
US10174095B2 (en) 2014-07-21 2019-01-08 Novartis Ag Nucleic acid encoding a humanized anti-BCMA chimeric antigen receptor
EP3172321B2 (en) 2014-07-21 2023-01-04 Illumina, Inc. Polynucleotide enrichment using crispr-cas systems
CN106415742B (zh) 2014-07-22 2019-07-26 松下知识产权经营株式会社 复合磁性材料、使用其的线圈部件以及复合磁性材料的制造方法
US10244771B2 (en) 2014-07-24 2019-04-02 Dsm Ip Assets B.V. Non-CRISPR-mediated phage resistant Streptococcus thermophilus
WO2016014837A1 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Sangamo Biosciences, Inc. Gene editing for hiv gene therapy
WO2016012544A2 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Enhanced reprogramming to ips cells
US9816074B2 (en) 2014-07-25 2017-11-14 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating nuclease-mediated genome engineering in hematopoietic stem cells
EP3194600B1 (en) 2014-07-26 2019-08-28 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Compositions and methods for treatment of muscular dystrophy
US9616090B2 (en) 2014-07-30 2017-04-11 Sangamo Biosciences, Inc. Gene correction of SCID-related genes in hematopoietic stem and progenitor cells
FR3024464A1 (fr) 2014-07-30 2016-02-05 Centre Nat Rech Scient Ciblage de vecteurs integratifs non-viraux dans les sequences d'adn nucleolaires chez les eucaryotes
US10077453B2 (en) 2014-07-30 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
US9850521B2 (en) 2014-08-01 2017-12-26 Agilent Technologies, Inc. In vitro assay buffer for Cas9
US20160076093A1 (en) 2014-08-04 2016-03-17 University Of Washington Multiplex homology-directed repair
EP2982758A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) Genome editing for the treatment of huntington's disease
CN113789317B (zh) 2014-08-06 2024-02-23 基因工具股份有限公司 使用空肠弯曲杆菌crispr/cas系统衍生的rna引导的工程化核酸酶的基因编辑
KR101826904B1 (ko) 2014-08-06 2018-02-08 기초과학연구원 조직적합성항원 유전자들의 교정을 통하여 구축한, 면역적합형 세포
WO2016022866A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Agilent Technologies, Inc. Cis-blocked guide rna
WO2016022931A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 The Rockefeller University Compositions and methods for transcription-based crispr-cas dna editing
CA2959130A1 (en) 2014-08-11 2016-02-18 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Prevention of muscular dystrophy by crispr/cas9-mediated gene editing
US10513711B2 (en) 2014-08-13 2019-12-24 Dupont Us Holding, Llc Genetic targeting in non-conventional yeast using an RNA-guided endonuclease
CN104178461B (zh) 2014-08-14 2017-02-01 北京蛋白质组研究中心 携带cas9的重组腺病毒及其应用
US11071289B2 (en) 2014-08-14 2021-07-27 Biocytogen Boston Corp DNA knock-in system
US9879270B2 (en) 2014-08-15 2018-01-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Constructs and methods for genome editing and genetic engineering of fungi and protists
EP3180426B1 (en) 2014-08-17 2019-12-25 The Broad Institute, Inc. Genome editing using cas9 nickases
EP3183367B1 (en) 2014-08-19 2019-06-26 Pacific Biosciences Of California, Inc. Compositions and methods for enrichment of nucleic acids
KR20170036801A (ko) 2014-08-19 2017-04-03 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산의 프로빙 및 맵핑을 위한 ｒｎａ-가이드된 시스템
US20190045758A1 (en) 2014-08-20 2019-02-14 Shanghai Institutes For Biological Sciences, Chinese Academy Of Sciences Biomarker and Therapeutic Target for Triple Negative Breast Cancer
EP3186368B1 (en) 2014-08-25 2020-01-15 Geneweave Biosciences Inc. Non-replicative transduction particles and transduction particle-based reporter systems
CA2958767A1 (en) 2014-08-26 2016-03-03 The Regents Of The University Of California Hypersensitive aba receptors
AU2015308910B2 (en) 2014-08-27 2017-12-07 Caribou Biosciences, Inc. Methods for increasing Cas9-mediated engineering efficiency
EP3186375A4 (en) 2014-08-28 2019-03-13 North Carolina State University NEW CAS9 PROTEINS AND GUIDING ELEMENTS FOR DNA TARGETING AND THE GENOME EDITION
WO2016036754A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification
WO2016037157A2 (en) 2014-09-05 2016-03-10 The Johns Hopkins University Targeting capn9/capns2 activity as a therapeutic strategy for the treatment of myofibroblast differentiation and associated pathologies
EP3189140B1 (en) 2014-09-05 2019-10-23 Vilnius University Programmable rna shredding by the type iii-a crispr-cas system of streptococcus thermophilus
WO2016040594A1 (en) 2014-09-10 2016-03-17 The Regents Of The University Of California Reconstruction of ancestral cells by enzymatic recording
CN108064129A (zh) 2014-09-12 2018-05-22 纳幕尔杜邦公司 玉米和大豆中复合性状基因座的位点特异性整合位点的产生和使用方法
ES2886012T3 (es) 2014-09-16 2021-12-16 Sangamo Therapeutics Inc Métodos y composiciones para la ingeniería y corrección de genomas mediadas por nucleasas en células madre hematopoyéticas
JP2017526730A (ja) 2014-09-16 2017-09-14 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｔｏｌｌ様受容体モジュレーターの固体形態
WO2016049163A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Use and production of chd8+/- transgenic animals with behavioral phenotypes characteristic of autism spectrum disorder
ES2856090T3 (es) 2014-09-24 2021-09-27 Hope City Variantes de vectores de virus adenoasociados para la edición genómica de alta eficacia y sus métodos
WO2016049024A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for modeling competition of multiple cancer mutations in vivo
WO2016049251A1 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for modeling mutations in leukocytes
WO2016049258A2 (en) 2014-09-25 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Functional screening with optimized functional crispr-cas systems
WO2016046635A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 Institut Pasteur Methods for characterizing human papillomavirus associated cervical lesions
US20160090603A1 (en) 2014-09-30 2016-03-31 Sandia Corporation Delivery platforms for the domestication of algae and plants
CA2963080A1 (en) 2014-10-01 2016-04-07 The General Hospital Corporation Methods for increasing efficiency of nuclease-induced homology-directed repair
AU2015330775B2 (en) 2014-10-09 2021-06-24 Seattle Children' S Hospital (Dba Seattle Children' S Research Institute) Long poly (A) plasmids and methods for introduction of long poly (A) sequences into the plasmid
EP3204513A2 (en) 2014-10-09 2017-08-16 Life Technologies Corporation Crispr oligonucleotides and gene editing
CN107530399B (zh) 2014-10-10 2022-03-18 马萨诸塞眼科耳科诊所 治疗分子在体外和体内的有效递送
US20180250424A1 (en) 2014-10-10 2018-09-06 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for promoting homology directed repair
WO2016061073A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Composition and method for in vivo engineering of chromosomal rearrangements
ES2741387T3 (es) 2014-10-15 2020-02-10 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para generar o mantener células pluripotentes
CN104342457A (zh) 2014-10-17 2015-02-11 杭州师范大学 一种将外源基因定点整合到靶标基因的方法
WO2016061481A1 (en) 2014-10-17 2016-04-21 The Penn State Research Foundation Methods and compositions for multiplex rna guided genome editing and other rna technologies
US11174506B2 (en) 2014-10-17 2021-11-16 Howard Hughes Medical Institute Genomic probes
CA2965137A1 (en) 2014-10-20 2016-04-28 Envirologix, Inc. Compositions and methods for detecting an rna virus
US20170247762A1 (en) 2014-10-27 2017-08-31 The Board Institute Inc. Compositions, methods and use of synthetic lethal screening
EP3212770B1 (en) 2014-10-29 2022-06-29 Massachusetts Eye & Ear Infirmary Methods for efficient delivery of therapeutic molecules in vitro and in vivo
MA40880A (fr) 2014-10-30 2017-09-05 Temple Univ Of The Commonwealth Éradication guidée par l'arn du virus jc humain et d'autres polyomavirus
DK3212789T3 (da) 2014-10-31 2020-07-27 Massachusetts Inst Technology Massiv parallel kombinatorisk genetik til crispr
US9816080B2 (en) 2014-10-31 2017-11-14 President And Fellows Of Harvard College Delivery of CAS9 via ARRDC1-mediated microvesicles (ARMMs)
EP3215166B1 (en) 2014-10-31 2024-04-24 The Trustees of the University of Pennsylvania Altering gene expression in car-t cells and uses thereof
SG11201703528YA (en) 2014-11-03 2017-05-30 Univ Nanyang Tech A recombinant expression system that senses pathogenic microorganisms
CN104504304B (zh) 2014-11-03 2017-08-25 深圳先进技术研究院 一种成簇的规律间隔的短回文重复序列识别方法及装置
CN104404036B (zh) 2014-11-03 2017-12-01 赛业（苏州）生物科技有限公司 基于CRISPR/Cas9技术的条件性基因敲除方法
ES2800168T3 (es) 2014-11-04 2020-12-28 Univ Kobe Nat Univ Corp Procedimiento de modificación de una secuencia genómica para introducir una mutación específica en una secuencia de ADN diana por reacción de eliminación de base, y complejo molecular usado en el mismo
US20180291382A1 (en) 2014-11-05 2018-10-11 The Regents Of The University Of California Methods for Autocatalytic Genome Editing and Neutralizing Autocatalytic Genome Editing
AU2015343307B2 (en) 2014-11-06 2021-05-20 Iff Us Holding, Llc Peptide-mediated delivery of RNA-guided endonuclease into cells
CA2963820A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Editas Medicine, Inc. Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing
WO2016077273A1 (en) 2014-11-11 2016-05-19 Q Therapeutics, Inc. Engineering mesenchymal stem cells using homologous recombination
WO2016077350A1 (en) 2014-11-11 2016-05-19 Illumina, Inc. Polynucleotide amplification using crispr-cas systems
KR101828933B1 (ko) 2014-11-14 2018-02-14 기초과학연구원 유전체에서 유전자 가위의 비표적 위치를 검출하는 방법
WO2016075662A2 (en) 2014-11-15 2016-05-19 Zumutor Biologics, Inc. Dna-binding domain, non-fucosylated and partially fucosylated proteins, and methods thereof
US11470826B2 (en) 2014-11-17 2022-10-18 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University Method of conveniently producing genetically modified non-human mammal with high efficiency
WO2016080795A1 (ko) 2014-11-19 2016-05-26 기초과학연구원 두 개의 벡터로부터 발현된 cas9 단백질을 이용한 유전자 발현 조절 방법
WO2016081924A1 (en) 2014-11-20 2016-05-26 Duke University Compositions, systems and methods for cell therapy
LT3221457T (lt) 2014-11-21 2019-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas
US10227661B2 (en) 2014-11-21 2019-03-12 GeneWeave Biosciences, Inc. Sequence-specific detection and phenotype determination
US20180334732A1 (en) 2014-11-25 2018-11-22 Drexel University Compositions and methods for hiv quasi-species excision from hiv-1-infected patients
CN107208070B (zh) 2014-11-26 2021-09-07 技术创新动力基金（以色列）有限合伙公司 细菌基因的靶向消除
CN105695485B (zh) 2014-11-27 2020-02-21 中国科学院上海生命科学研究院 一种用于丝状真菌Crispr-Cas系统的Cas9编码基因及其应用
US20180105834A1 (en) 2014-11-27 2018-04-19 Institute Of Animal Sciences, Chinese Academy Of Agrigultural Sciences A method of site-directed insertion to h11 locus in pigs by using site-directed cutting system
GB201421096D0 (en) 2014-11-27 2015-01-14 Imp Innovations Ltd Genome editing methods
KR20170081268A (ko) 2014-11-27 2017-07-11 단지거 이노베이션즈 엘티디. 게놈 편집용 핵산 구조체
WO2016089866A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided systems for in vivo gene editing
US10479997B2 (en) 2014-12-01 2019-11-19 Novartis Ag Compositions and methods for diagnosis and treatment of prostate cancer
KR20240013283A (ko) 2014-12-03 2024-01-30 애질런트 테크놀로지스, 인크. 화학적 변형을 갖는 가이드 rna
CN104450774A (zh) 2014-12-04 2015-03-25 中国农业科学院作物科学研究所 一种大豆CRISPR/Cas9体系的构建及其在大豆基因修饰中的应用
US10975392B2 (en) 2014-12-05 2021-04-13 Abcam Plc Site-directed CRISPR/recombinase compositions and methods of integrating transgenes
CN104531704B (zh) 2014-12-09 2019-05-21 中国农业大学 利用CRISPR-Cas9系统敲除动物FGF5基因的方法
CN104531705A (zh) 2014-12-09 2015-04-22 中国农业大学 利用CRISPR-Cas9系统敲除动物myostatin基因的方法
KR102656470B1 (ko) 2014-12-10 2024-04-09 리전츠 오브 더 유니버스티 오브 미네소타 질환을 치료하기 위한 유전적으로 변형된 세포, 조직 및 장기
WO2016094845A2 (en) 2014-12-12 2016-06-16 Woolf Tod M Compositions and methods for editing nucleic acids in cells utilizing oligonucleotides
WO2016094874A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems
WO2016094872A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Dead guides for crispr transcription factors
EP3985115A1 (en) 2014-12-12 2022-04-20 The Broad Institute, Inc. Protected guide rnas (pgrnas)
CN104480144B (zh) 2014-12-12 2017-04-12 武汉大学 用于艾滋病基因治疗的CRISPR/Cas9重组慢病毒载体及其慢病毒
WO2016094880A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs)
EP3230460B2 (en) 2014-12-12 2023-11-29 James Zhu Methods and compositions for selectively eliminating cells of interest
WO2016100272A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Danisco Us Inc Fungal genome modification systems and methods of use
CA2971205A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Synthetic Genomics, Inc. Compositions of and methods for in vitro viral genome engineering
DK3234134T3 (da) 2014-12-17 2020-07-27 Proqr Therapeutics Ii Bv Målrettet rna-redigering
US20170296623A1 (en) 2014-12-17 2017-10-19 Cellectis INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR OR N-CAR) EXPRESSING NON-T CELL TRANSDUCTION DOMAIN
CA2971391C (en) 2014-12-17 2023-05-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods for efficient gene editing in e. coli using guide rna/cas endonuclease systems in combination with circular polynucleotide modification templates.
WO2016097751A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 The University Of Bath Method of cas9 mediated genome engineering
US9840702B2 (en) 2014-12-18 2017-12-12 Integrated Dna Technologies, Inc. CRISPR-based compositions and methods of use
CN104745626B (zh) 2014-12-19 2018-05-01 中国航天员科研训练中心 一种条件性基因敲除动物模型的快速构建方法及应用
EP3234192B1 (en) 2014-12-19 2021-07-14 The Broad Institute, Inc. Unbiased identification of double-strand breaks and genomic rearrangement by genome-wide insert capture sequencing
CN114438169A (zh) 2014-12-20 2022-05-06 阿克生物公司 使用CRISPR/Cas系统蛋白靶向消减、富集、和分割核酸的组合物及方法
US10190106B2 (en) 2014-12-22 2019-01-29 Univesity Of Massachusetts Cas9-DNA targeting unit chimeras
CN104560864B (zh) 2014-12-22 2017-08-11 中国科学院微生物研究所 利用CRISPR‑Cas9系统构建的敲除IFN‑β基因的293T细胞系
US11053271B2 (en) 2014-12-23 2021-07-06 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for nucleic acid integration
WO2016106236A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 The Broad Institute Inc. Rna-targeting system
US20170369855A1 (en) 2014-12-24 2017-12-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Systems and methods for genome modification and regulation
CN104651398A (zh) 2014-12-24 2015-05-27 杭州师范大学 利用CRISPR-Cas9特异敲出microRNA基因家族的方法
CA2970370A1 (en) 2014-12-24 2016-06-30 Massachusetts Institute Of Technology Crispr having or associated with destabilization domains
AU2015101792A4 (en) 2014-12-24 2016-01-28 Massachusetts Institute Of Technology Engineering of systems, methods and optimized enzyme and guide scaffolds for sequence manipulation
WO2016104716A1 (ja) 2014-12-26 2016-06-30 国立研究開発法人理化学研究所 遺伝子のノックアウト方法
WO2016108926A1 (en) 2014-12-30 2016-07-07 The Broad Institute Inc. Crispr mediated in vivo modeling and genetic screening of tumor growth and metastasis
US20180002706A1 (en) 2014-12-30 2018-01-04 University Of South Florida Methods and compositions for cloning into large vectors
CN104498493B (zh) 2014-12-30 2017-12-26 武汉大学 CRISPR/Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒的方法以及用于特异性靶向HBV DNA的gRNA
CN104651399B (zh) 2014-12-31 2018-11-16 广西大学 一种利用CRISPR/Cas系统在猪胚胎细胞中实现基因敲除的方法
WO2016109840A2 (en) 2014-12-31 2016-07-07 Synthetic Genomics, Inc. Compositions and methods for high efficiency in vivo genome editing
WO2016110453A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Dsm Ip Assets B.V. A crispr-cas system for a filamentous fungal host cell
EP3242948B1 (en) 2015-01-06 2021-12-22 DSM IP Assets B.V. A crispr-cas system for a yarrowia host cell
CN104651392B (zh) 2015-01-06 2018-07-31 华南农业大学 一种利用CRISPR/Cas9系统定点突变P/TMS12-1获得温敏不育系的方法
CN108064280B (zh) 2015-01-06 2021-10-29 延世大学校产学协力团 利用以凝血因子viii基因为靶的核酸内切酶的a型血友病治疗用组合物
DK3242949T3 (da) 2015-01-06 2022-01-24 Dsm Ip Assets Bv Crispr-cas-system til en gærværtscelle
CN104593422A (zh) 2015-01-08 2015-05-06 中国农业大学 一种抗蓝耳病克隆猪的制备方法
US20180155708A1 (en) 2015-01-08 2018-06-07 President And Fellows Of Harvard College Split Cas9 Proteins
EP3242938B1 (en) 2015-01-09 2020-01-08 Bio-Rad Laboratories, Inc. Detection of genome editing
US11208638B2 (en) 2015-01-12 2021-12-28 The Regents Of The University Of California Heterodimeric Cas9 and methods of use thereof
JP7278027B2 (ja) 2015-01-12 2023-05-19 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー マイクロ流体送達による遺伝子編集
WO2016112963A1 (en) 2015-01-13 2016-07-21 Riboxx Gmbh Delivery of biomolecules into cells
MA41349A (fr) 2015-01-14 2017-11-21 Univ Temple Éradication de l'herpès simplex de type i et d'autres virus de l'herpès associés guidée par arn
CN107429263A (zh) 2015-01-15 2017-12-01 斯坦福大学托管董事会 调控基因组编辑的方法
CN104611370A (zh) 2015-01-16 2015-05-13 深圳市科晖瑞生物医药有限公司 一种剔除β2-微球蛋白基因片段的方法
US20180073035A1 (en) 2015-01-19 2018-03-15 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences A method for precise modification of plant via transient gene expression
CN104725626B (zh) 2015-01-22 2016-06-29 漳州亚邦化学有限公司 一种适用于人造石英石的不饱和树脂的制备方法
CN105821072A (zh) 2015-01-23 2016-08-03 深圳华大基因研究院 用于DNA组装的CRISPR-Cas9系统及DNA组装方法
US20180023139A1 (en) 2015-01-26 2018-01-25 Cold Spring Harbor Laboratory Methods of identifying essential protein domains
CN104561095B (zh) 2015-01-27 2017-08-22 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 一种能够生产人神经生长因子的转基因小鼠的制备方法
US10059940B2 (en) 2015-01-27 2018-08-28 Minghong Zhong Chemically ligated RNAs for CRISPR/Cas9-lgRNA complexes as antiviral therapeutic agents
KR102319192B1 (ko) 2015-01-28 2021-10-28 카리부 바이오사이언시스 인코포레이티드 Crispr 하이브리드 dna/rna 폴리뉴클레오티드 및 사용 방법
US11180792B2 (en) 2015-01-28 2021-11-23 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for labeling a single-stranded target nucleic acid
WO2016120480A1 (fr) 2015-01-29 2016-08-04 Meiogenix Procede pour induire des recombinaisons meiotiques ciblees
EP3929296A1 (en) 2015-01-30 2021-12-29 The Regents of The University of California Protein delivery in primary hematopoietic cells
AU2016215454B2 (en) 2015-02-02 2022-05-19 Meiragtx Uk Ii Limited Regulation of gene expression by aptamer-mediated modulation of alternative splicing
CN104593418A (zh) 2015-02-06 2015-05-06 中国医学科学院医学实验动物研究所 一种人源化大鼠药物评价动物模型建立的方法
EP3256487A4 (en) 2015-02-09 2018-07-18 Duke University Compositions and methods for epigenome editing
KR101584933B1 (ko) 2015-02-10 2016-01-13 성균관대학교산학협력단 항생제 내성 억제용 재조합 벡터 및 이의 용도
WO2016130697A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods and kits for generating vectors that co-express multiple target molecules
CN104726494B (zh) 2015-02-12 2018-10-23 中国人民解放军第二军医大学 CRISPR-Cas9技术构建染色体易位干细胞及动物模型的方法
CN104928321B (zh) 2015-02-12 2018-06-01 中国科学院西北高原生物研究所 一种由Crispr/Cas9诱导的鳞片缺失斑马鱼模式及建立方法
EP3256170B1 (en) 2015-02-13 2020-09-23 University of Massachusetts Compositions and methods for transient delivery of nucleases
US20160244784A1 (en) 2015-02-15 2016-08-25 Massachusetts Institute Of Technology Population-Hastened Assembly Genetic Engineering
WO2016132122A1 (en) 2015-02-17 2016-08-25 University Of Edinburgh Assay construct
JP6354100B2 (ja) 2015-02-19 2018-07-11 国立大学法人徳島大学 Ｃａｓ９ ｍＲＮＡを哺乳動物の受精卵にエレクトロポレーションにより導入する方法
EP3262172A2 (en) 2015-02-23 2018-01-03 Crispr Therapeutics AG Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies
US20180200387A1 (en) 2015-02-23 2018-07-19 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies
US20180245073A1 (en) 2015-02-23 2018-08-30 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
EP3262176A1 (en) 2015-02-25 2018-01-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Composition and methods for regulated expression of a guide rna/cas endonuclease complex
KR20160103953A (ko) 2015-02-25 2016-09-02 연세대학교 산학협력단 Crispr 시스템을 이용한 다중 위치 염기서열의 동시 포획 방법
WO2016135507A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 University Of Edinburgh Nucleic acid editing systems
CN104805099B (zh) 2015-03-02 2018-04-13 中国人民解放军第二军医大学 一种安全编码Cas9蛋白的核酸分子及其表达载体
EP3265559B1 (en) 2015-03-03 2021-01-06 The General Hospital Corporation Engineered crispr-cas9 nucleases with altered pam specificity
CN104651401B (zh) 2015-03-05 2019-03-08 东华大学 一种mir-505双等位基因敲除的方法
CN104673816A (zh) 2015-03-05 2015-06-03 广东医学院 一种pCr-NHEJ载体及其构建方法及其用于细菌基因定点敲除的应用
WO2016145150A2 (en) 2015-03-11 2016-09-15 The Broad Institute Inc. Selective treatment of prmt5 dependent cancer
EP3309255A4 (en) 2015-03-12 2018-08-01 Institute Of Genetics And Developmental Biology, Chinese Academy Of Sciences Method for increasing ability of plant to resist invading dna virus
GB201504223D0 (en) 2015-03-12 2015-04-29 Genome Res Ltd Biallelic genetic modification
AU2016233648B2 (en) 2015-03-13 2019-11-07 The Jackson Laboratory A three-component crispr/cas complex system and uses thereof
CN106032540B (zh) 2015-03-16 2019-10-25 中国科学院上海生命科学研究院 CRISPR/Cas9核酸内切酶体系的腺相关病毒载体构建及其用途
KR102194612B1 (ko) 2015-03-16 2020-12-23 인스티튜트 오브 제네틱스 앤드 디벨롭멘털 바이오롤지, 차이니즈 아카데미 오브 사이언시스 비-유전성 물질을 이용한 식물 게놈의 부위-특이적인 변형 방법
CN107430646B (zh) 2015-03-17 2021-10-22 生物辐射实验室股份有限公司 检测基因组编辑
WO2016149484A2 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions and methods for specific reactivation of hiv latent reservoir
EP3271461A1 (en) 2015-03-20 2018-01-24 Danmarks Tekniske Universitet Crispr/cas9 based engineering of actinomycetal genomes
MA41382A (fr) 2015-03-20 2017-11-28 Univ Temple Édition génique basée sur le système crispr/endonucléase à induction par tat
CN104726449A (zh) 2015-03-23 2015-06-24 国家纳米科学中心 一种用于预防和/或治疗HIV的CRISPR-Cas9系统及其制备方法和用途
CN106148416B (zh) 2015-03-24 2019-12-17 华东师范大学 Cyp基因敲除大鼠的培育方法及其肝微粒体的制备方法
EP3274454B1 (en) 2015-03-25 2021-08-25 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods, compositions and components
EP3851530A1 (en) 2015-03-26 2021-07-21 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-mediated gene conversion
US11046959B2 (en) 2015-03-30 2021-06-29 The Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education On Behalf Of The University Of Nevada, Las Vegas Compositions comprising TALENs and methods of treating HIV
EP3277805A1 (en) 2015-03-31 2018-02-07 Exeligen Scientific, Inc. Cas 9 retroviral integrase and cas 9 recombinase systems for targeted incorporation of a dna sequence into a genome of a cell or organism
EP3277816B1 (en) 2015-04-01 2020-06-17 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating duchenne muscular dystrophy and becker muscular dystrophy
CA3000187A1 (en) 2015-04-02 2016-10-06 Agenovir Corporation Gene delivery methods and compositions
ES2959608T3 (es) 2015-04-03 2024-02-27 Dana Farber Cancer Inst Inc Composición y métodos de edición del genoma de células B
US20170166928A1 (en) 2015-04-03 2017-06-15 Whitehead Institute For Biomedical Research Compositions And Methods For Genetically Modifying Yeast
CN106167810A (zh) 2015-04-03 2016-11-30 内蒙古中科正标生物科技有限责任公司 基于CRISPR/Cas9技术的单子叶植物基因敲除载体及其应用
JP6873911B2 (ja) 2015-04-06 2021-05-19 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 初代細胞において標的核酸の遺伝子調節を誘導するためにインビトロで行う方法
US11214779B2 (en) 2015-04-08 2022-01-04 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Activatable CRISPR/CAS9 for spatial and temporal control of genome editing
US11390860B2 (en) 2015-04-13 2022-07-19 The University Of Tokyo Set of polypeptides exhibiting nuclease activity or nickase activity with dependence on light or in presence of drug or suppressing or activating expression of target gene
US10155938B2 (en) 2015-04-14 2018-12-18 City Of Hope Coexpression of CAS9 and TREX2 for targeted mutagenesis
GB201506509D0 (en) 2015-04-16 2015-06-03 Univ Wageningen Nuclease-mediated genome editing
US10738290B2 (en) 2015-04-21 2020-08-11 Novartis Ag RNA-guided gene editing system and uses thereof
CN104805118A (zh) 2015-04-22 2015-07-29 扬州大学 一种苏禽黄鸡胚胎干细胞特定基因进行靶向敲除方法
CN104762321A (zh) 2015-04-22 2015-07-08 东北林业大学 基于CRISPR/Cas9系统靶向敲除KHV基因的敲除载体构建方法及其crRNA原件
US11268158B2 (en) 2015-04-24 2022-03-08 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Assay for safety assessment of therapeutic genetic manipulations, gene therapy vectors and compounds
JP2018522249A (ja) 2015-04-24 2018-08-09 エディタス・メディシン、インコーポレイテッド Ｃａｓ９分子／ガイドｒｎａ分子複合体の評価
WO2016172359A2 (en) 2015-04-24 2016-10-27 The Regents Of The University Of California Systems for detecting, monitoring or treating diseases or conditions using engineered cells and methods for making and using them
US11104897B2 (en) 2015-04-27 2021-08-31 Genethon Compositions and methods for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders
JP6851319B2 (ja) 2015-04-27 2021-03-31 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア ヒト疾患のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性の修正のためのデュアルＡＡＶベクター系
EP3087974A1 (en) 2015-04-29 2016-11-02 Rodos BioTarget GmbH Targeted nanocarriers for targeted drug delivery of gene therapeutics
DK3289080T3 (da) 2015-04-30 2021-11-08 Univ Columbia Genterapi til autosomalt dominante sygdomme
US20190002920A1 (en) 2015-04-30 2019-01-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and kits for cloning-free genome editing
US20160346359A1 (en) 2015-05-01 2016-12-01 Spark Therapeutics, Inc. Adeno-associated Virus-Mediated CRISPR-Cas9 Treatment of Ocular Disease
ES2905181T3 (es) 2015-05-01 2022-04-07 Prec Biosciences Inc Deleción precisa de secuencias cromosómicas in vivo
CN104894068A (zh) 2015-05-04 2015-09-09 南京凯地生物科技有限公司 一种利用CRISPR/Cas9制备CAR-T细胞的方法
CN108026566A (zh) 2015-05-04 2018-05-11 特拉维夫大学拉莫特有限公司 用于使dna片段化的方法和试剂盒
GB2531454A (en) 2016-01-10 2016-04-20 Snipr Technologies Ltd Recombinogenic nucleic acid strands in situ
PL3291679T3 (pl) 2015-05-06 2022-04-25 Snipr Technologies Limited Zmiana populacji drobnoustrojowych i modyfikowanie mikrobioty
WO2016182893A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Teh Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems for saturating mutagenesis of non-coding elements, compositions, methods, libraries and applications thereof
ES2835861T3 (es) 2015-05-08 2021-06-23 Childrens Medical Ct Corp Direccionamiento de regiones funcionales del potenciador de BCL11A para la reinducción de hemoglobina fetal
EP3294888A1 (en) 2015-05-11 2018-03-21 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating hiv infection and aids
JP7030522B2 (ja) 2015-05-11 2022-03-07 エディタス・メディシン、インコーポレイテッド 幹細胞における遺伝子編集のための最適化ｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９システムおよび方法
US10808020B2 (en) 2015-05-12 2020-10-20 Sangamo Therapeutics, Inc. Nuclease-mediated regulation of gene expression
KR101785847B1 (ko) 2015-05-12 2017-10-17 연세대학교 산학협력단 선형 이중가닥 ＤＮＡ를 활용한 ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ 시스템을 이용한 표적 유전체 교정
US20180119174A1 (en) 2015-05-13 2018-05-03 Seattle Children's Hospita (dba Seattle Children's Research Institute Enhancing endonuclease based gene editing in primary cells
WO2016183402A2 (en) 2015-05-13 2016-11-17 President And Fellows Of Harvard College Methods of making and using guide rna for use with cas9 systems
US11267899B2 (en) 2015-05-13 2022-03-08 Zumutor Biologics Inc. Afucosylated protein, cell expressing said protein and associated methods
CN105886498A (zh) 2015-05-13 2016-08-24 沈志荣 CRISPR-Cas9特异性敲除人PCSK9基因的方法以及用于特异性靶向PCSK9基因的sgRNA
WO2016183438A1 (en) 2015-05-14 2016-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Self-targeting genome editing system
CN107614680A (zh) 2015-05-14 2018-01-19 南加利福尼亚大学 利用重组核酸内切酶系统的最佳化基因编辑
US20180142236A1 (en) 2015-05-15 2018-05-24 Ge Healthcare Dharmacon, Inc. Synthetic single guide rna for cas9-mediated gene editing
KR20180008572A (ko) 2015-05-15 2018-01-24 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 Cas 엔도뉴클레아제 시스템, pam 서열 및 가이드 rna 요소의 신속한 특성화
US11896651B2 (en) 2015-05-16 2024-02-13 Genzyme Corporation Gene editing of deep intronic mutations
CN104846010B (zh) 2015-05-18 2018-07-06 安徽省农业科学院水稻研究所 一种删除转基因水稻筛选标记基因的方法
EP3298149A1 (en) 2015-05-18 2018-03-28 King Abdullah University Of Science And Technology Method of inhibiting plant virus pathogen infections by crispr/cas9-mediated interference
EP3095870A1 (en) 2015-05-19 2016-11-23 Kws Saat Se Methods for the in planta transformation of plants and manufacturing processes and products based and obtainable therefrom
CN106011104B (zh) 2015-05-21 2019-09-27 清华大学 利用拆分Cas系统进行基因编辑和表达调控方法
WO2016187904A1 (zh) 2015-05-22 2016-12-01 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪CMAH基因的方法及用于特异性靶向CMAH基因的sgRNA
CN105518135B (zh) 2015-05-22 2020-11-24 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪CMAH基因的方法及用于特异性靶向CMAH基因的sgRNA
WO2016187717A1 (en) 2015-05-26 2016-12-01 Exerkine Corporation Exosomes useful for genome editing
US20180148711A1 (en) 2015-05-28 2018-05-31 Coda Biotherapeutics, Inc. Genome editing vectors
CN104894075B (zh) 2015-05-28 2019-08-06 华中农业大学 CRISPR/Cas9和Cre/lox系统编辑伪狂犬病毒基因组制备疫苗方法和应用
CN105624146B (zh) 2015-05-28 2019-02-15 中国科学院微生物研究所 基于CRISPR/Cas9和酿酒酵母细胞内源的同源重组的分子克隆方法
CA3000170A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Agenovir Corporation Antiviral methods and compositions
US20160346362A1 (en) 2015-05-29 2016-12-01 Agenovir Corporation Methods and compositions for treating cytomegalovirus infections
GB2543873A (en) 2015-05-29 2017-05-03 Agenovir Corp Compositions and methods for cell targeted HPV treatment
JP2018516983A (ja) 2015-05-29 2018-06-28 アジェノビア コーポレーション ウイルス感染を処置するための組成物および方法
KR102451796B1 (ko) 2015-05-29 2022-10-06 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 크리스퍼 핵산을 사용하여 박테리아, 고세균, 조류 및 효모를 스크리닝하는 방법
US10117911B2 (en) 2015-05-29 2018-11-06 Agenovir Corporation Compositions and methods to treat herpes simplex virus infections
US20180148486A1 (en) 2015-05-29 2018-05-31 Clark Atlanta University Human cell lines mutant for zic2
JP2018516597A (ja) 2015-05-29 2018-06-28 アジェノビア コーポレーション 移植のために細胞を処置する方法および組成物
WO2016191869A1 (en) 2015-06-01 2016-12-08 The Hospital For Sick Children Delivery of structurally diverse polypeptide cargo into mammalian cells by a bacterial toxin
CN108025188A (zh) 2015-06-01 2018-05-11 天普大学-联邦高等教育系统 用于hiv感染的rna导向治疗的方法和组合物
CN105112445B (zh) 2015-06-02 2018-08-10 广州辉园苑医药科技有限公司 一种基于CRISPR-Cas9基因敲除技术的miR-205基因敲除试剂盒
CN108368502B (zh) 2015-06-03 2022-03-18 内布拉斯加大学董事委员会 使用单链dna的dna编辑
US10392607B2 (en) 2015-06-03 2019-08-27 The Regents Of The University Of California Cas9 variants and methods of use thereof
WO2016197132A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
US10626393B2 (en) 2015-06-04 2020-04-21 Arbutus Biopharma Corporation Delivering CRISPR therapeutics with lipid nanoparticles
CA3001683A1 (en) 2015-06-05 2016-12-08 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for generating crispr/cas guide rnas
CN105039339B (zh) 2015-06-05 2017-12-19 新疆畜牧科学院生物技术研究所 一种以RNA介导的特异性敲除绵羊FecB基因的方法及其专用sgRNA
WO2016201047A1 (en) 2015-06-09 2016-12-15 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for improving transplantation
WO2016198500A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for rna-guided treatment of human cytomegalovirus (hcmv) infection
US20160362667A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 Caribou Biosciences, Inc. CRISPR-Cas Compositions and Methods
JP6961494B2 (ja) 2015-06-10 2021-11-05 フイルメニツヒ ソシエテ アノニムFirmenich Sa 匂い物質および芳香の受容体をスクリーニングするための細胞株
SG10202011241TA (en) 2015-06-10 2020-12-30 Firmenich & Cie Method of identifying musk compounds
CN106414740A (zh) 2015-06-11 2017-02-15 深圳市第二人民医院 CRISPR‑Cas9特异性敲除猪SLA‑3基因的方法及用于特异性靶向SLA‑3基因的sgRNA
WO2016197355A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪SALL1基因的方法及用于特异性靶向SALL1基因的sgRNA
WO2016197354A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪PDX1基因的方法及用于特异性靶向PDX1基因的sgRNA
WO2016197359A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪SLA-1基因的方法及用于特异性靶向SLA-1基因的sgRNA
WO2016197356A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪SLA-2基因的方法及用于特异性靶向SLA-2基因的sgRNA
CN105518138B (zh) 2015-06-11 2021-07-27 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪GFRA1基因的方法及用于特异性靶向GFRA1基因的sgRNA
WO2016197362A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪vWF基因的方法及用于特异性靶向vWF基因的sgRNA
WO2016197361A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪GGTA1基因的方法及用于特异性靶向GGTA1基因的sgRNA
WO2016197358A1 (zh) 2015-06-11 2016-12-15 深圳市第二人民医院 CRISPR-Cas9特异性敲除猪FGL2基因的方法及用于特异性靶向FGL2基因的sgRNA
US20180142222A1 (en) 2015-06-12 2018-05-24 The Regents Of The University Of California Reporter cas9 variants and methods of use thereof
GB201510296D0 (en) 2015-06-12 2015-07-29 Univ Wageningen Thermostable CAS9 nucleases
US20180187190A1 (en) 2015-06-12 2018-07-05 Erasmus University Medical Center Rotterdam New crispr assays
KR20220158846A (ko) 2015-06-15 2022-12-01 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 핵산 및 rna-기반 항미생물제를 효율적으로 전달하기 위한 방법 및 조성물
WO2016205728A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Crispr mediated recording of cellular events
WO2016205623A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 North Carolina State University Methods and compositions for genome editing in bacteria using crispr-cas9 systems
AU2016278982A1 (en) 2015-06-17 2018-01-18 The Uab Research Foundation CRISPR/Cas9 complex for genomic editing
EP3310931B1 (en) 2015-06-17 2021-11-17 The UAB Research Foundation Crispr/cas9 complex for introducing a functional polypeptide into cells of blood cell lineage
US10954513B2 (en) 2015-06-18 2021-03-23 University Of Utah Research Foundation RNA-guided transcriptional regulation and methods of using the same for the treatment of back pain
WO2016205759A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Engineering and optimization of systems, methods, enzymes and guide scaffolds of cas9 orthologs and variants for sequence manipulation
WO2016205745A2 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Cell sorting
WO2016205749A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
AU2016280893B2 (en) 2015-06-18 2021-12-02 Massachusetts Institute Of Technology CRISPR enzyme mutations reducing off-target effects
US9957501B2 (en) 2015-06-18 2018-05-01 Sangamo Therapeutics, Inc. Nuclease-mediated regulation of gene expression
CA3012631A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
EP3313989A4 (en) 2015-06-29 2018-12-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified crispr rna and modified single crispr rna and uses thereof
GB201511376D0 (en) 2015-06-29 2015-08-12 Ecolab Usa Inc Process for the treatment of produced water from chemical enhanced oil recovery
US11279928B2 (en) 2015-06-29 2022-03-22 Massachusetts Institute Of Technology Compositions comprising nucleic acids and methods of using the same
EP4043556B1 (en) 2015-06-30 2024-02-07 Cellectis Methods for improving functionality in nk cell by gene inactivation using specific endonuclease
CN108350446A (zh) 2015-07-02 2018-07-31 约翰霍普金斯大学 基于crispr/cas9的治疗
US20190055544A1 (en) 2015-07-06 2019-02-21 Dsm Ip Assets B.V. Guide rna assembly vector
US20170009242A1 (en) 2015-07-06 2017-01-12 Whitehead Institute For Biomedical Research CRISPR-Mediated Genome Engineering for Protein Depletion
CN105132451B (zh) 2015-07-08 2019-07-23 电子科技大学 一种CRISPR/Cas9单一转录单元定向修饰骨架载体及其应用
AU2016291778B2 (en) 2015-07-13 2021-05-06 Sangamo Therapeutics, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
EP3322797B1 (en) 2015-07-13 2023-11-29 Institut Pasteur Improving sequence-specific antimicrobials by blocking dna repair
US20170014449A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Elwha LLC, a limited liability company of the State of Delaware Site-specific epigenetic editing
EP3323890A4 (en) 2015-07-14 2019-01-30 Fukuoka University METHOD FOR INDUCING SITE SPECIFIC RNA MUTATIONS, TARGET EDITION GUIDING RNA-GUIDE USED IN THE METHOD, AND TARGET EDITING GUID-RNA TARGET RNA COMPLEX
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
CA3168241A1 (en) 2015-07-15 2017-01-19 Rutgers. The State University of New Jersey Nuclease-independent targeted gene editing platform and uses thereof
US20170020922A1 (en) 2015-07-16 2017-01-26 Batu Biologics Inc. Gene editing for immunological destruction of neoplasia
WO2017015101A1 (en) 2015-07-17 2017-01-26 University Of Washington Methods for maximizing the efficiency of targeted gene correction
WO2017015015A1 (en) 2015-07-17 2017-01-26 Emory University Crispr-associated protein from francisella and uses related thereto
WO2017015637A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
US10392674B2 (en) 2015-07-22 2019-08-27 President And Fellows Of Harvard College Evolution of site-specific recombinases
EP3325668B1 (en) 2015-07-23 2021-01-06 Mayo Foundation for Medical Education and Research Editing mitochondrial dna
US20180360994A1 (en) 2015-07-25 2018-12-20 Habib Frost System, device and a method for providing a therapy or a cure for cancer and other pathological states
CN106399360A (zh) 2015-07-27 2017-02-15 上海药明生物技术有限公司 基于crispr技术敲除fut8基因的方法
CN105063061B (zh) 2015-07-28 2018-10-30 华南农业大学 一种水稻千粒重基因tgw6突变体及其制备方法与应用
WO2017019867A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 Danisco Us Inc Genome editing systems and methods of use
CN106701808A (zh) 2015-07-29 2017-05-24 深圳华大基因研究院 Dna聚合酶i缺陷型菌株及其构建方法
US10612011B2 (en) 2015-07-30 2020-04-07 President And Fellows Of Harvard College Evolution of TALENs
WO2017069829A2 (en) 2015-07-31 2017-04-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York High-throughput strategy for dissecting mammalian genetic interactions
IL295616A (en) 2015-07-31 2022-10-01 Us Health Adapted cells and treatment methods
US20180230450A1 (en) 2015-08-03 2018-08-16 President And Fellows Of Harvard College Cas9 Genome Editing and Transcriptional Regulation
WO2017024047A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Emendobio Inc. Compositions and methods for increasing nuclease induced recombination rate in cells
AU2016301195B2 (en) 2015-08-06 2022-09-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Targeted protein degradation to attenuate adoptive T-cell therapy associated adverse inflammatory responses
EP3332014A4 (en) 2015-08-07 2019-01-23 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation METHOD FOR PRODUCING ANIMAL WITH GENETIC GLAND CARBON MODIFICATION
US9580727B1 (en) 2015-08-07 2017-02-28 Caribou Biosciences, Inc. Compositions and methods of engineered CRISPR-Cas9 systems using split-nexus Cas9-associated polynucleotides
CN104962523B (zh) 2015-08-07 2018-05-25 苏州大学 一种测定非同源末端连接修复活性的方法
JP2018522907A (ja) 2015-08-11 2018-08-16 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｃｄ３８抗原を標的とするためおよびｃｄ３８遺伝子を不活化するために操作された、免疫療法用の細胞
CN105255937A (zh) 2015-08-14 2016-01-20 西北农林科技大学 一种真核细胞III型启动子表达CRISPR sgRNA的方法及其应用
JP2018527920A (ja) 2015-08-14 2018-09-27 インスティテュート・オブ・ジェネティクス・アンド・ディヴェロプメンタル・バイオロジー、チャイニーズ・アカデミー・オブ・サイエンシズＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 部位特異的ヌクレオチド置換によりグリホサート耐性イネを取得するための方法
CA2995983A1 (en) 2015-08-19 2017-02-23 Arc Bio, Llc Capture of nucleic acids using a nucleic acid-guided nuclease-based system
WO2017031483A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Applied Stemcell, Inc. Nuclease with enhanced efficiency of genome editing
CN105112519A (zh) 2015-08-20 2015-12-02 郑州大学 一种基于crispr的大肠杆菌o157:h7菌株检测试剂盒及检测方法
CN105177126B (zh) 2015-08-21 2018-12-04 东华大学 一种利用荧光pcr技术对小鼠的分型鉴定方法
ES2929110T3 (es) 2015-08-25 2022-11-24 Univ Duke Composiciones y métodos para mejorar la especificidad en ingeniería genética usando endonucleasas guiadas por ARN
CN106480083B (zh) 2015-08-26 2021-12-14 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 CRISPR/Cas9介导的大片段DNA拼接方法
JP6799586B2 (ja) 2015-08-28 2020-12-16 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 遺伝子操作ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ヌクレアーゼ
US9512446B1 (en) 2015-08-28 2016-12-06 The General Hospital Corporation Engineered CRISPR-Cas9 nucleases
US9926546B2 (en) 2015-08-28 2018-03-27 The General Hospital Corporation Engineered CRISPR-Cas9 nucleases
WO2017040709A1 (en) 2015-08-31 2017-03-09 Caribou Biosciences, Inc. Directed nucleic acid repair
KR20180037297A (ko) 2015-08-31 2018-04-11 애질런트 테크놀로지스, 인크. 상동 재조합에 의한 crispr/cas-기반 게놈 편집을 위한 화합물 및 방법
CN105087620B (zh) 2015-08-31 2017-12-29 中国农业大学 一种过表达猪共刺激受体4‑1bb载体及其应用
CA2996599A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Dana-Farber Cancer Institute Inc. Systems and methods for selection of grna targeting strands for cas9 localization
US11390908B2 (en) 2015-09-02 2022-07-19 University Of Massachusetts Detection of gene loci with CRISPR arrayed repeats and/or polychromatic single guide ribonucleic acids
WO2017040786A1 (en) 2015-09-04 2017-03-09 Massachusetts Institute Of Technology Multilayer genetic safety kill circuits based on single cas9 protein and multiple engineered grna in mammalian cells
CN105400810B (zh) 2015-09-06 2019-05-07 吉林大学 采用敲除技术建立低磷性佝偻病模型的方法
WO2017044419A1 (en) 2015-09-08 2017-03-16 University Of Massachusetts Dnase h activity of neisseria meningitidis cas9
ES2902338T3 (es) 2015-09-09 2022-03-28 Univ Kobe Nat Univ Corp Método para modificar una secuencia genómica que convierte específicamente una nucleobase de una secuencia de ADN diana, y complejo molecular utilizado en dicho método
DK3348638T3 (da) 2015-09-09 2023-02-13 Univ Kobe Nat Univ Corp Fremgangsmåde til at konvertere genomsekvens fra gram-positiv bakterie ved specifikt at konvertere nukleinsyrebase i tilsigtet dna-sekvens, og molekylkompleks anvendt dertil
WO2017044776A1 (en) 2015-09-10 2017-03-16 Texas Tech University System Single-guide rna (sgrna) with improved knockout efficiency
WO2017044857A2 (en) 2015-09-10 2017-03-16 Youhealth Biotech, Limited Methods and compositions for the treatment of glaucoma
CN105274144A (zh) 2015-09-14 2016-01-27 徐又佳 通过CRISPR/Cas9技术得到敲除铁调素基因斑马鱼的制备方法
CN105210981B (zh) 2015-09-15 2018-09-28 中国科学院生物物理研究所 建立可应用于人类疾病研究的雪貂模型的方法及其应用
US10301613B2 (en) 2015-09-15 2019-05-28 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Targeted remodeling of prokaryotic genomes using CRISPR-nickases
CN105112422B (zh) 2015-09-16 2019-11-08 中山大学 基因miR408和UCL在培育高产水稻中的应用
US11261439B2 (en) 2015-09-18 2022-03-01 President And Fellows Of Harvard College Methods of making guide RNA
CN105132427B (zh) 2015-09-21 2019-01-08 新疆畜牧科学院生物技术研究所 一种以RNA介导的特异性敲除双基因获得基因编辑绵羊的方法及其专用sgRNA
JP6799058B2 (ja) 2015-09-21 2020-12-09 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． アレル選択的な遺伝子編集およびその使用
EP3352795B1 (en) 2015-09-21 2020-08-12 The Regents of The University of California Compositions and methods for target nucleic acid modification
EA037993B1 (ru) 2015-09-23 2021-06-21 Сангамо Терапьютикс, Инк. Репрессоры htt и их применение
CA2998287A1 (en) 2015-09-24 2017-04-20 Crispr Therapeutics Ag Novel family of rna-programmable endonucleases and their uses in genome editing and other applications
US11268144B2 (en) 2015-09-24 2022-03-08 Sigma-Aldrich Co. Llc Methods and reagents for molecular proximity detection using RNA-guided nucleic acid binding proteins
EP3786294A1 (en) 2015-09-24 2021-03-03 Editas Medicine, Inc. Use of exonucleases to improve crispr/cas-mediated genome editing
KR101745863B1 (ko) 2015-09-25 2017-06-12 전남대학교산학협력단 Crispr/cas9 시스템을 이용한 프로히비틴2 유전자 제거용 시발체
WO2017053729A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nuclease-mediated genome editing of primary cells and enrichment thereof
WO2017053713A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Tarveda Therapeutics, Inc. Compositions and methods for genome editing
KR101795999B1 (ko) 2015-09-25 2017-11-09 전남대학교산학협력단 Crispr/cas9 시스템을 이용한 베타2-마이크로글로불린 유전자 제거용 시발체
EP3147363B1 (en) 2015-09-26 2019-10-16 B.R.A.I.N. Ag Activation of taste receptor genes in mammalian cells using crispr-cas-9
CN108779447A (zh) 2015-09-28 2018-11-09 天普大学-联邦高等教育系统 用于hiv感染的rna引导治疗的方法和组合物
EP3355954A4 (en) 2015-09-29 2020-01-08 Agenovir Corporation METHODS AND COMPOSITIONS OF ADMINISTRATION
CN105177038B (zh) 2015-09-29 2018-08-24 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种高效定点编辑植物基因组的CRISPR/Cas9系统
JP2018534258A (ja) 2015-09-29 2018-11-22 アジェノビア コーポレーション 潜伏ウイルスの転写制御のための組成物および方法
WO2017058791A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Agenovir Corporation Compositions and methods for treatment of latent viral infections
WO2017058796A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Agenovir Corporation Antiviral fusion proteins and genes
CN105331627B (zh) 2015-09-30 2019-04-02 华中农业大学 一种利用内源CRISPR-Cas系统进行原核生物基因组编辑的方法
WO2017059241A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lentiviral protein delivery system for rna-guided genome editing
US11497816B2 (en) 2015-10-06 2022-11-15 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for treating fragile X syndrome and related syndromes
US10760081B2 (en) 2015-10-07 2020-09-01 New York University Compositions and methods for enhancing CRISPR activity by POLQ inhibition
IL297017A (en) 2015-10-08 2022-12-01 Harvard College Multiplexed genome editing
WO2017062886A1 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Cellink Corporation Battery interconnects
CN108513579B (zh) 2015-10-09 2022-10-04 孟山都技术公司 新颖的rna导向性核酸酶及其用途
AU2016335572B2 (en) 2015-10-09 2022-12-08 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for treating Huntington's disease and related disorders
DK3362560T3 (da) 2015-10-12 2022-11-07 Dupont Us Holding Llc Beskyttede dna-templater til genmodificering og forøget homolog rekombination i celler og fremgangsmåder til anvendelse
US11970710B2 (en) 2015-10-13 2024-04-30 Duke University Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells
WO2017066707A1 (en) 2015-10-14 2017-04-20 Life Technologies Corporation Ribonucleoprotein transfection agents
CN105400779A (zh) 2015-10-15 2016-03-16 芜湖医诺生物技术有限公司 嗜热链球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CCR5基因的靶序列和sgRNA及其应用
CA3001130A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods and compositions utilizing cpf1 for rna-guided gene editing
US10947559B2 (en) 2015-10-16 2021-03-16 Astrazeneca Ab Inducible modification of a cell genome
FR3042506B1 (fr) 2015-10-16 2018-11-30 IFP Energies Nouvelles Outil genetique de transformation de bacteries clostridium
CN105331607A (zh) 2015-10-19 2016-02-17 芜湖医诺生物技术有限公司 嗜热链球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CCR5基因的靶序列和sgRNA及其应用
WO2017070169A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 The Methodist Hospital Crispr-cas9 delivery to hard-to-transfect cells via membrane deformation
CN105316337A (zh) 2015-10-20 2016-02-10 芜湖医诺生物技术有限公司 嗜热链球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CXCR4基因的靶序列和sgRNA及其应用
CN105316324A (zh) 2015-10-20 2016-02-10 芜湖医诺生物技术有限公司 嗜热链球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CXCR4基因的靶序列和sgRNA及其应用
KR20180059535A (ko) 2015-10-20 2018-06-04 파이어니어 하이 부렛드 인터내쇼날 인코포레이팃드 마커-프리 게놈 변형을 위한 방법 및 조성물
CN105331609A (zh) 2015-10-20 2016-02-17 芜湖医诺生物技术有限公司 脑膜炎双球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CCR5基因的靶序列和sgRNA及其应用
US10968253B2 (en) 2015-10-20 2021-04-06 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods and products for genetic engineering
CN105331608A (zh) 2015-10-20 2016-02-17 芜湖医诺生物技术有限公司 脑膜炎双球菌CRISPR-Cas9系统识别的人CXCR4基因的靶序列和sgRNA及其应用
WO2017070284A1 (en) 2015-10-21 2017-04-27 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating hepatitis b virus
CN105219799A (zh) 2015-10-22 2016-01-06 天津吉诺沃生物科技有限公司 一种基于CRISPR/Cas系统的多年生黑麦草的育种方法
US20170211142A1 (en) 2015-10-22 2017-07-27 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
EP3159407A1 (en) 2015-10-23 2017-04-26 Silence Therapeutics (London) Ltd Guide rnas, methods and uses
ES2699848T3 (es) 2015-10-23 2019-02-13 Caribou Biosciences Inc Acido nucleico CRISPR clase 2 de tipo cruzado modificado que se dirige a ácidos nucleicos
EP3365357B1 (en) 2015-10-23 2024-02-14 President and Fellows of Harvard College Evolved cas9 proteins for gene editing
TW201715041A (zh) 2015-10-26 2017-05-01 國立清華大學 細菌基因編輯方法
US9988637B2 (en) 2015-10-26 2018-06-05 National Tsing Hua Univeristy Cas9 plasmid, genome editing system and method of Escherichia coli
EP3367788A4 (en) 2015-10-27 2019-07-31 Recombinetics, Inc. ENGINEERING OF HUMANIZED PLAQUETTES AND LYMPHOCYTES BY GENETIC COMPLEMENTATION
US10280411B2 (en) 2015-10-27 2019-05-07 Pacific Biosciences of California, In.c Methods, systems, and reagents for direct RNA sequencing
BR112018008519A2 (pt) 2015-10-28 2018-11-06 Sangamo Therapeutics Inc construtos específicos de fígado, cassetes de expressão de fator viii e métodos de uso dos mesmos
US11369692B2 (en) 2015-10-28 2022-06-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Materials and methods for treatment of Duchenne Muscular Dystrophy
US20180230489A1 (en) 2015-10-28 2018-08-16 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
WO2017075475A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating herpes simplex virus
US11111508B2 (en) 2015-10-30 2021-09-07 Brandeis University Modified CAS9 compositions and methods of use
CN105238806B (zh) 2015-11-02 2018-11-27 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种用于微生物的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建及其应用
CN105316327B (zh) 2015-11-03 2019-01-29 中国农业科学院作物科学研究所 小麦TaAGO4a基因CRISPR/Cas9载体及其应用
WO2017079428A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 President And Fellows Of Harvard College Site specific germline modification
CA3004053A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for gene editing in hematopoietic stem cells
CN108368520B (zh) 2015-11-04 2023-01-17 菲特治疗公司 多能细胞的基因组工程改造
GB2544270A (en) 2015-11-05 2017-05-17 Fundació Centre De Regulació Genòmica Nucleic acids, peptides and methods
EP3371300A1 (en) 2015-11-05 2018-09-12 Centro en Investigación Biomédica en Red Process of gene-editing of cells isolated from a subject suffering from a metabolic disease affecting the erythroid lineage, cells obtained by said process and uses thereof
EP3370513A1 (en) 2015-11-06 2018-09-12 The Jackson Laboratory Large genomic dna knock-in and uses thereof
WO2017078751A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 The Methodist Hospital Micoluidic cell deomailiy assay for enabling rapid and efficient kinase screening via the crispr-cas9 system
WO2017081097A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 Ifom Fondazione Istituto Firc Di Oncologia Molecolare Crispr-cas sgrna library
EP3374494A4 (en) 2015-11-11 2019-05-01 Coda Biotherapeutics, Inc. CRISPR COMPOSITIONS AND METHODS OF USE FOR GENE THERAPY
EP3374501B1 (en) 2015-11-11 2023-07-12 Lonza Ltd Crispr-associated (cas) proteins with reduced immunogenicity
WO2017083368A1 (en) 2015-11-12 2017-05-18 Pfizer Inc. Tissue-specific genome engineering using crispr-cas9
WO2017083766A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 Massachusetts Institute Of Technology High-throughput crispr-based library screening
US20170191047A1 (en) 2015-11-13 2017-07-06 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Adenosine-specific rnase and methods of use
KR101885901B1 (ko) 2015-11-13 2018-08-07 기초과학연구원 5' 말단의 인산기가 제거된 rna를 포함하는 리보핵산단백질 전달용 조성물
BR112018009954A2 (pt) 2015-11-16 2018-11-13 Res Inst Nationwide Childrens Hospital materiais e métodos para o tratamento de miopatias baseadas em titinas e outras titinopatias
CN106893739A (zh) 2015-11-17 2017-06-27 香港中文大学 用于靶向基因操作的新方法和系统
JP2019500899A (ja) 2015-11-23 2019-01-17 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９の核送達を通じた細胞ＲＮＡの追跡と操作
CN105602987A (zh) 2015-11-23 2016-05-25 深圳市默赛尔生物医学科技发展有限公司 一种高效的dc细胞xbp1基因敲除方法
US20170145438A1 (en) 2015-11-24 2017-05-25 University Of South Carolina Viral Vectors for Gene Editing
US10240145B2 (en) 2015-11-25 2019-03-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University CRISPR/Cas-mediated genome editing to treat EGFR-mutant lung cancer
US10612044B2 (en) 2015-11-25 2020-04-07 National University Corporation Gunma University DNA methylation editing kit and DNA methylation editing method
WO2017091510A1 (en) 2015-11-27 2017-06-01 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for the production of hydrocarbons, hydrogen and carbon monoxide using engineered azotobacter strains
CN105505979A (zh) 2015-11-28 2016-04-20 湖北大学 一种以CRISPR/Cas9基因编辑技术打靶Badh2基因获得香稻品系的方法
CN106811479B (zh) 2015-11-30 2019-10-25 中国农业科学院作物科学研究所 利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用
WO2017095111A1 (ko) 2015-11-30 2017-06-08 기초과학연구원 F. novicida 유래 Cas9을 포함하는 유전체 교정용 조성물
RU2634395C1 (ru) 2015-12-01 2017-10-26 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Балтийский Федеральный Университет имени Иммануила Канта" (БФУ им. И. Канта) Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека
CN105296518A (zh) 2015-12-01 2016-02-03 中国农业大学 一种用于CRISPR/Cas9技术的同源臂载体构建方法
EP3383409A4 (en) 2015-12-02 2019-10-02 The Regents of The University of California COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFYING TARGET NUCLEIC ACID
BR112018011242B1 (pt) 2015-12-02 2023-11-28 Ceres, Inc. Método de produção de uma planta com um traço agronômico desejável
WO2017093370A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Technische Universität München T-cell specific genome editing
CN105779449B (zh) 2015-12-04 2018-11-27 新疆农业大学 一种棉花启动子GbU6-5PS及应用
CN105779448B (zh) 2015-12-04 2018-11-27 新疆农业大学 一种棉花启动子GbU6-7PS及应用
CN106845151B (zh) 2015-12-07 2019-03-26 中国农业大学 CRISPR-Cas9系统sgRNA作用靶点的筛选方法及装置
CN105462968B (zh) 2015-12-07 2018-10-16 北京信生元生物医学科技有限公司 一种靶向apoCⅢ的CRISPR-Cas9系统及其应用
AU2016366229A1 (en) 2015-12-09 2018-05-17 Excision Biotherapeutics, Inc. Gene editing methods and compositions for eliminating risk of JC virus activation and PML (progressive multifocal leukoencephalopathy) during immunosuppresive therapy
WO2017100158A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 Danisco Us Inc. Methods and compositions for enhanced nuclease-mediated genome modification and reduced off-target site effects
CN105463003A (zh) 2015-12-11 2016-04-06 扬州大学 一种消除卡那霉素耐药基因活性的重组载体及其构建方法
CN105296537A (zh) 2015-12-12 2016-02-03 西南大学 一种基于睾丸内注射的基因定点编辑技术
WO2017105350A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cellresearch Corporation Pte Ltd A method of generating a mammalian stem cell carrying a transgene, a mammalian stem cell generated by the method and pharmaceuticals uses of the mammalian stem cell
CN105400773B (zh) 2015-12-14 2018-06-26 同济大学 应用于大规模筛选癌症基因的CRISPR/Cas9富集测序方法
CN105463027A (zh) 2015-12-17 2016-04-06 中国农业大学 一种高肌肉量及肥厚型心肌病模型克隆猪的制备方法
WO2017106616A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Varicella zoster virus encoding regulatable cas9 nuclease
NO343153B1 (en) 2015-12-17 2018-11-19 Hydra Systems As A method of assessing the integrity status of a barrier plug
EP3390624A4 (en) 2015-12-18 2019-07-10 The Regents of The University of California MODIFIED POLYPEPTIDES AND METHOD OF USE THEREOF
AU2016369490C1 (en) 2015-12-18 2021-12-23 Sangamo Therapeutics, Inc. Targeted disruption of the T cell receptor
WO2017106414A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Danisco Us Inc. Methods and compositions for polymerase ii (pol-ii) based guide rna expression
DK3390631T3 (da) 2015-12-18 2020-07-13 Danisco Us Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til t-rna-baseret guide-rna-ekspression
EP3392337B1 (en) 2015-12-18 2024-03-06 Japan Science and Technology Agency Genetic modification non-human organism, egg cells, fertilized eggs, and method for modifying target genes
WO2017106767A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 The Scripps Research Institute Production of unnatural nucleotides using a crispr/cas9 system
US20190233814A1 (en) 2015-12-18 2019-08-01 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
CN108699132B (zh) 2015-12-18 2023-08-11 桑格摩生物治疗股份有限公司 Mhc细胞受体的靶向破坏
CN108778308A (zh) 2015-12-22 2018-11-09 库瑞瓦格股份公司 生产rna分子组合物的方法
WO2017112620A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 North Carolina State University Methods and compositions for delivery of crispr based antimicrobials
BR112018012894A2 (pt) 2015-12-23 2018-12-04 Crispr Therapeutics Ag materiais e métodos para tratamento de esclerose lateral amiotrófica e/ou degeneração lobular frontotemporal
CN105543270A (zh) 2015-12-24 2016-05-04 中国农业科学院作物科学研究所 双抗性CRISPR/Cas9载体及应用
CN105505976A (zh) 2015-12-25 2016-04-20 安徽大学 一种维吉尼亚链霉菌ibl14产青霉素重组菌株的构建方法
CN105543266A (zh) 2015-12-25 2016-05-04 安徽大学 一种维吉尼亚链霉菌IBL14中的CRISPR-Cas系统及应用其进行基因编辑的方法
JP2019500043A (ja) 2015-12-28 2019-01-10 ノバルティス アーゲー 異常ヘモグロビン症の治療用組成物および方法
EP4159848A1 (en) 2015-12-29 2023-04-05 Monsanto Technology LLC Novel crispr-associated transposases and uses thereof
CN105441451B (zh) 2015-12-31 2019-03-22 暨南大学 一种特异靶向人ABCB1基因的sgRNA导向序列及应用
CN105567735A (zh) 2016-01-05 2016-05-11 华东师范大学 一种凝血因子基因突变的定点修复载体系统及方法
US20190024123A1 (en) 2016-01-08 2019-01-24 Novozymes A/S Genome Editing In Bacillus Host Cells
CN105647922A (zh) 2016-01-11 2016-06-08 中国人民解放军疾病预防控制所 基于一种新gRNA序列的CRISPR-Cas9系统在制备乙肝治疗药物中的应用
US11441146B2 (en) 2016-01-11 2022-09-13 Christiana Care Health Services, Inc. Compositions and methods for improving homogeneity of DNA generated using a CRISPR/Cas9 cleavage system
US11427837B2 (en) 2016-01-12 2022-08-30 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for enhanced genome editing
CA3011458A1 (en) 2016-01-14 2017-07-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Genome editing for treating glioblastoma
SG11201806002SA (en) 2016-01-14 2018-08-30 Memphis Meats Inc Methods for extending the replicative capacity of somatic cells during an ex vivo cultivation process
CN109414001A (zh) 2016-01-15 2019-03-01 杰克逊实验室 通过cas9蛋白的多循环电穿孔产生的遗传修饰的非人哺乳动物
CN105567738A (zh) 2016-01-18 2016-05-11 南开大学 使用基因组编辑技术CRISPR-Cas9诱导CCR5Δ32缺失的方法
CN105567734A (zh) 2016-01-18 2016-05-11 丹弥优生物技术（湖北）有限公司 一种基因组dna序列精准编辑方法
WO2017126987A1 (ru) 2016-01-18 2017-07-27 Анатолий Викторович ЗАЗУЛЯ Эритроциты для направленного транспорта лекарственного средства
US20190264186A1 (en) 2016-01-22 2019-08-29 The Broad Institute Inc. Crystal structure of crispr cpf1
EP3408392A4 (en) 2016-01-25 2019-08-14 Excision Biotherapeutics RNA-induced clearance of the human JC-virus and other polymorphs
CN105567689B (zh) 2016-01-25 2019-04-09 重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司 CRISPR/Cas9靶向敲除人TCAB1基因及其特异性gRNA
CN105543228A (zh) 2016-01-25 2016-05-04 宁夏农林科学院 一种快速将水稻转化为香稻的方法
RU2018130640A (ru) 2016-01-25 2020-02-25 Эксижн Биотерапьютикс Способы и композиции для направляемого рнк лечения вич-инфекции
EP3199632A1 (en) 2016-01-26 2017-08-02 ACIB GmbH Temperature-inducible crispr/cas system
CN105567688A (zh) 2016-01-27 2016-05-11 武汉大学 一种可用于艾滋病基因治疗的CRISPR/SaCas9系统
FI3408292T3 (fi) 2016-01-29 2023-06-30 Univ Princeton Jaettuja inteiinejä, joilla on poikkeuksellinen silmukoitumisaktiivisuus
AU2017213405B2 (en) 2016-01-30 2021-02-04 Bonac Corporation Artificial single guide RNA and use thereof
CN107022562B (zh) 2016-02-02 2020-07-17 中国种子集团有限公司 利用CRISPR/Cas9系统对玉米基因定点突变的方法
CN105647968B (zh) 2016-02-02 2019-07-23 浙江大学 一种CRISPR/Cas9工作效率快速测试系统及其应用
CN105671083B (zh) 2016-02-03 2017-09-29 安徽柯顿生物科技有限公司 PD‑1基因重组病毒质粒及构建、重组逆转录病毒Lenti‑PD‑1‑Puro及包装与应用
US11845933B2 (en) 2016-02-03 2023-12-19 Massachusetts Institute Of Technology Structure-guided chemical modification of guide RNA and its applications
WO2017136520A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 President And Fellows Of Harvard College Mitochondrial genome editing and regulation
US20190038780A1 (en) 2016-02-05 2019-02-07 Regents Of The University Of Minnesota Vectors and system for modulating gene expression
US11746349B2 (en) 2016-02-09 2023-09-05 President And Fellows Of Harvard College DNA-guided gene editing and regulation
RU2016104674A (ru) 2016-02-11 2017-08-16 Анатолий Викторович Зазуля Устройство модификации эритроцита с механизмом направленного транспорта лекарственного средства для функций генной терапии crispr/cas9
WO2017139505A2 (en) 2016-02-11 2017-08-17 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for modifying a mutant dystrophin gene in a cell's genome
US9896696B2 (en) 2016-02-15 2018-02-20 Benson Hill Biosystems, Inc. Compositions and methods for modifying genomes
CN109415728A (zh) 2016-02-15 2019-03-01 天普大学-联邦高等教育系统 逆转录病毒核酸序列的切除
CN105647962A (zh) 2016-02-15 2016-06-08 浙江大学 运用CRISPR-Cas9系统敲除水稻MIRNA393b茎环序列的基因编辑方法
CN105594664B (zh) 2016-02-16 2018-10-02 湖南师范大学 一种基因敲除选育stat1a基因缺失型斑马鱼的方法
CN109476706A (zh) 2016-02-16 2019-03-15 耶鲁大学 用于促进靶向基因编辑的组合物及其使用方法
CN105647969B (zh) 2016-02-16 2020-12-15 湖南师范大学 一种基因敲除选育stat1a基因缺失型斑马鱼的方法
CN105624187A (zh) 2016-02-17 2016-06-01 天津大学 酿酒酵母基因组定点突变的方法
CN109072243A (zh) 2016-02-18 2018-12-21 哈佛学院董事及会员团体 通过crispr-cas系统进行的分子记录的方法和系统
CN105646719B (zh) 2016-02-24 2019-12-20 无锡市妇幼保健院 一种高效定点转基因的工具及其应用
US11530253B2 (en) 2016-02-25 2022-12-20 The Children's Medical Center Corporation Customized class switch of immunoglobulin genes in lymphoma and hybridoma by CRISPR/CAS9 technology
US20170247703A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Agenovir Corporation Antiviral nuclease methods
US20170246260A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Agenovir Corporation Modified antiviral nuclease
CA3015353A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Agenovir Corporation Viral and oncoviral nuclease treatment
CA3015665C (en) 2016-02-26 2020-09-22 Lanzatech New Zealand Limited Crispr/cas systems for c1-fixing bacteria
WO2017151444A1 (en) 2016-02-29 2017-09-08 Agilent Technologies, Inc. Methods and compositions for blocking off-target nucleic acids from cleavage by crispr proteins
CN105671070B (zh) 2016-03-03 2019-03-19 江南大学 一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法
AU2017226172B9 (en) 2016-03-04 2023-08-24 Editas Medicine, Inc. CRISPR/Cpf1-related methods, compositions and components for cancer immunotherapy
CN105821039B (zh) 2016-03-09 2020-02-07 李旭 联合免疫基因抑制HBV复制的特异性sgRNA、表达载体及其应用
CN107177591A (zh) 2016-03-09 2017-09-19 北京大学 利用CRISPR技术编辑CCR5基因的sgRNA序列及其用途
CN105821040B (zh) 2016-03-09 2018-12-14 李旭 联合免疫基因抑制高危型HPV表达的sgRNA、基因敲除载体及其应用
CN105861547A (zh) 2016-03-10 2016-08-17 黄捷 身份证号码永久嵌入基因组的方法
WO2017155717A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel cas9 systems and methods of use
WO2017160752A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 Intellia Therapeutics, Inc. Methods and compositions for gene editing
EP3430142A1 (en) 2016-03-14 2019-01-23 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating beta hemoglobinopathies
US11530394B2 (en) 2016-03-15 2022-12-20 University Of Massachusetts Anti-CRISPR compounds and methods of use
EP3430332B1 (en) 2016-03-15 2020-01-01 Carrier Corporation Refrigerated sales cabinet
EP3219799A1 (en) 2016-03-17 2017-09-20 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Conditional crispr sgrna expression
WO2017161068A1 (en) 2016-03-18 2017-09-21 President And Fellows Of Harvard College Mutant cas proteins
US11597924B2 (en) 2016-03-25 2023-03-07 Editas Medicine, Inc. Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use
EP3433364A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for treating alpha 1-antitrypsin (a1at) deficiency
CN106047803A (zh) 2016-03-28 2016-10-26 青岛市胶州中心医院 CRISPR/Cas9靶向敲除兔BMP2基因的细胞模型及其应用
AU2017241592A1 (en) 2016-03-28 2018-10-18 The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. Bacteriophage engineering methods
TWI773666B (zh) 2016-03-30 2022-08-11 美商英特利亞醫療公司 Crispr/cas 組分之脂質奈米粒子調配物
WO2017173004A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 Mikuni Takayasu A method for in vivo precise genome editing
US20190093128A1 (en) 2016-03-31 2019-03-28 The Regents Of The University Of California Methods for genome editing in zygotes
US20190112599A1 (en) 2016-03-31 2019-04-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and Compositions for the Single Tube Preparation of Sequencing Libraries Using Cas9
CN106167525B (zh) 2016-04-01 2019-03-19 北京康明百奥新药研发有限公司 筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用
US10301619B2 (en) 2016-04-01 2019-05-28 New England Biolabs, Inc. Compositions and methods relating to synthetic RNA polynucleotides created from synthetic DNA oligonucleotides
KR20180132705A (ko) 2016-04-04 2018-12-12 에테하 취리히 단백질 생산 및 라이브러리(Library) 생성을 위한 포유동물 세포주
US20190093091A1 (en) 2016-04-06 2019-03-28 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions for eradicating flavivirus infections in subjects
CN105802980A (zh) 2016-04-08 2016-07-27 北京大学 Gateway兼容性CRISPR/Cas9系统及其应用
CN106399306B (zh) 2016-04-12 2019-11-05 西安交通大学第一附属医院 靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的sgRNA、基因载体及其应用
WO2017180694A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Editas Medicine, Inc. Cas9 fusion molecules gene editing systems, and methods of use thereof
WO2017180711A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Editas Medicine, Inc. Grna fusion molecules, gene editing systems, and methods of use thereof
EP3443081A4 (en) 2016-04-13 2019-10-30 Duke University CRISPR / CAS9-BASED REPRESSORS FOR IN VIVO SHUT-OFF OF GEN-TARGETS AND METHOD OF USE
CN109312308A (zh) 2016-04-14 2019-02-05 亿阳集团美国硅谷公司 通过使用核酸酶来进行人神经干细胞的基因组编辑
US20190167814A1 (en) 2016-04-14 2019-06-06 Université de Lausanne Treatment And/Or Prevention Of DNA-Triplet Repeat Diseases Or Disorders
CN105821116A (zh) 2016-04-15 2016-08-03 扬州大学 一种绵羊mstn基因定向敲除及其影响成肌分化的检测方法
US20200172935A1 (en) 2016-04-16 2020-06-04 Ohio State Innovation Foundation Modified cpf1 mrna, modified guide rna, and uses thereof
EP3445852A1 (en) 2016-04-18 2019-02-27 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Means and methods for inactivating therapeutic dna in a cell
WO2017184334A1 (en) 2016-04-18 2017-10-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Generation of genetically engineered animals by crispr/cas9 genome editing in spermatogonial stem cells
CA3026112A1 (en) 2016-04-19 2017-10-26 The Broad Institute, Inc. Cpf1 complexes with reduced indel activity
CN106086062A (zh) 2016-04-19 2016-11-09 上海市农业科学院 一种获得番茄基因组定点敲除突变体的方法
EP3445848A1 (en) 2016-04-19 2019-02-27 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
AU2017257274B2 (en) 2016-04-19 2023-07-13 Massachusetts Institute Of Technology Novel CRISPR enzymes and systems
CN105886616B (zh) 2016-04-20 2020-08-07 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 一种用于猪基因编辑的高效特异性sgRNA识别位点引导序列及其筛选方法
CN105821075B (zh) 2016-04-22 2017-09-12 湖南农业大学 一种茶树咖啡因合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建方法
CN107304435A (zh) 2016-04-22 2017-10-31 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种Cas9/RNA系统及其应用
CN105861552B (zh) 2016-04-25 2019-10-11 西北农林科技大学 一种T7 RNA聚合酶介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法
WO2017189336A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for genomic editing
CN107326046A (zh) 2016-04-28 2017-11-07 上海邦耀生物科技有限公司 一种提高外源基因同源重组效率的方法
CN105886534A (zh) 2016-04-29 2016-08-24 苏州溯源精微生物科技有限公司 一种抑制肿瘤转移的方法
CN105821049B (zh) 2016-04-29 2019-06-04 中国农业大学 一种Fbxo40基因敲除猪的制备方法
WO2017186550A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Basf Plant Science Company Gmbh Improved methods for modification of target nucleic acids
AU2017260714B2 (en) 2016-05-01 2023-10-05 Duane CHUNG Harnessing heterologous and endogenous CRISPR-Cas machineries for efficient markerless genome editing in clostridium
WO2017192544A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Massachusetts Institute Of Technology AMPHIPHILIC NANOPARTICLES FOR CODELIVERY OF WATER-INSOLUBLE SMALL MOLECULES AND RNAi
CN105950639A (zh) 2016-05-04 2016-09-21 广州美格生物科技有限公司 金黄色葡萄球菌CRISPR/Cas9系统的制备及其在构建小鼠模型中的应用
WO2017191210A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Novozymes A/S Genome editing by crispr-cas9 in filamentous fungal host cells
CN105907785B (zh) 2016-05-05 2020-02-07 苏州吉玛基因股份有限公司 化学合成的crRNA用于CRISPR/Cpf1系统在基因编辑中的应用
WO2017190664A1 (zh) 2016-05-05 2017-11-09 苏州吉玛基因股份有限公司 化学合成的crRNA和修饰crRNA在CRISPR/Cpf1基因编辑系统中的应用
US20190093092A1 (en) 2016-05-05 2019-03-28 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Rna guided eradication of varicella zoster virus
CN106244591A (zh) 2016-08-23 2016-12-21 苏州吉玛基因股份有限公司 修饰crRNA在CRISPR/Cpf1基因编辑系统中的应用
ES2957660T3 (es) 2016-05-05 2024-01-23 Univ Duke Composiciones relacionadas con crispr/cas para tratar la distrofia muscular de duchenne
CA3022319A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 Tod M. Woolf Improved methods for genome editing with and without programmable nucleases
CN105985985B (zh) 2016-05-06 2019-12-31 苏州大学 Crispr技术编辑并用igf优化的异体间充质干细胞的制备方法及在治疗心梗中应用
US20190161743A1 (en) 2016-05-09 2019-05-30 President And Fellows Of Harvard College Self-Targeting Guide RNAs in CRISPR System
CN105861554B (zh) 2016-05-10 2020-01-31 华南农业大学 一种基于对Rbmy基因进行编辑来实现动物性别控制的方法和应用
EP3455347A4 (en) 2016-05-10 2019-10-02 United States Government as Represented by The Department of Veterans Affairs LENTIVIRAL DELIVERY OF CRISPR / CAS CONSTRUCTS COLUMNS ESSENTIAL GENES FOR HIV-1 INFECTION AND REPLICATION
CN107365786A (zh) 2016-05-12 2017-11-21 中国科学院微生物研究所 一种将spacer序列克隆至CRISPR-Cas9系统中的方法及其应用
US20190345483A1 (en) 2016-05-12 2019-11-14 President And Fellows Of Harvard College AAV Split Cas9 Genome Editing and Transcriptional Regulation
WO2017197301A1 (en) 2016-05-12 2017-11-16 Hanley Brian P Safe delivery of crispr and other gene therapies to large fractions of somatic cells in humans and animals
CN106011171B (zh) 2016-05-18 2019-10-11 西北农林科技大学 一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法
CN105907758B (zh) 2016-05-18 2020-06-05 世翱（上海）生物医药科技有限公司 CRISPR-Cas9引导序列及其引物、转基因表达载体及其构建方法
CN105838733A (zh) 2016-05-18 2016-08-10 云南省农业科学院花卉研究所 Cas9 介导的香石竹基因编辑载体和应用
KR20240016444A (ko) 2016-05-20 2024-02-06 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 다중 가이드 RNAs를 이용한 면역학적 내성 파괴 방법
CN106446600B (zh) 2016-05-20 2019-10-18 同济大学 一种基于CRISPR/Cas9的sgRNA的设计方法
WO2017205290A1 (en) 2016-05-23 2017-11-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Bypassing the pam requirement of the crispr-cas system
US20190201551A1 (en) 2016-05-23 2019-07-04 Washington University Pulmonary targeted cas9/crispr for in vivo editing of disease genes
CN105950560B (zh) 2016-05-24 2019-07-23 苏州系统医学研究所 人源化pd-l1肿瘤细胞系及具有该细胞系的动物模型与应用
CN106011167B (zh) 2016-05-27 2019-11-01 上海交通大学 雄性不育基因OsDPW2的应用及水稻育性恢复的方法
CN109642232A (zh) 2016-06-01 2019-04-16 Kws种子欧洲股份公司 用于基因组改造的杂合核酸序列
EP3907286A1 (en) 2016-06-02 2021-11-10 Sigma-Aldrich Co., LLC Using programmable dna binding proteins to enhance targeted genome modification
US20190100732A1 (en) 2016-06-02 2019-04-04 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Assay for the removal of methyl-cytosine residues from dna
WO2017213896A1 (en) 2016-06-03 2017-12-14 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Negative feedback regulation of hiv-1 by gene editing strategy
US11140883B2 (en) 2016-06-03 2021-10-12 Auburn University Gene editing of reproductive hormones to sterilize aquatic animals
US20190256844A1 (en) 2016-06-07 2019-08-22 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Rna guided compositions for preventing and treating hepatitis b virus infections
CN106119275A (zh) 2016-06-07 2016-11-16 湖北大学 基于CRISPR/Cas9技术将非糯性水稻株系改造成糯性株系的打靶载体和方法
US10767175B2 (en) 2016-06-08 2020-09-08 Agilent Technologies, Inc. High specificity genome editing using chemically modified guide RNAs
CN106086008B (zh) 2016-06-10 2019-03-12 中国农业科学院植物保护研究所 烟粉虱MED隐种TRP基因的CRISPR/cas9系统及其应用
US11779657B2 (en) 2016-06-10 2023-10-10 City Of Hope Compositions and methods for mitochondrial genome editing
CN106434752A (zh) 2016-06-14 2017-02-22 南通大学附属医院 敲除Wnt3a基因的过程及其验证方法
MX2018014993A (es) 2016-06-14 2019-09-06 Pioneer Hi Bred Int Uso de endonucleasa cpf1 para modificaciones de genoma de planta.
CN105950633B (zh) 2016-06-16 2019-05-03 复旦大学 基因OsARF4在控制水稻粒长和千粒重中的应用
CN106167821A (zh) 2016-06-16 2016-11-30 郑州大学 一种金黄色葡萄球菌crispr位点检测试剂盒及检测方法
CN106167808A (zh) 2016-06-16 2016-11-30 郑州大学 一种基于CRISPR/Cas9技术消除mecA质粒的方法
JP7267013B2 (ja) 2016-06-17 2023-05-01 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド Ｖｉ型ｃｒｉｓｐｒオルソログ及び系
US20190330603A1 (en) 2016-06-17 2019-10-31 Genesis Technologies Limited Crispr-cas system, materials and methods
EP3472311A4 (en) 2016-06-17 2020-03-04 Montana State University BIDIRECTIONAL TARGETING FOR GENOMEDITATION
CN105950626B (zh) 2016-06-17 2018-09-28 新疆畜牧科学院生物技术研究所 基于CRISPR/Cas9获得不同毛色绵羊的方法及靶向ASIP基因的sgRNA
US20170362635A1 (en) 2016-06-20 2017-12-21 University Of Washington Muscle-specific crispr/cas9 editing of genes
WO2017223107A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Unity Biotechnology, Inc. Genome modifying enzyme therapy for diseases modulated by senescent cells
JP7160465B2 (ja) 2016-06-20 2022-10-25 キージーン ナムローゼ フェンノートシャップ 植物細胞における標的化ｄｎａ変更のための方法
US20190100745A1 (en) 2016-06-20 2019-04-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Novel cas systems and methods of use
CN106148370A (zh) 2016-06-21 2016-11-23 苏州瑞奇生物医药科技有限公司 肥胖症大鼠动物模型和构建方法
JP2019522481A (ja) 2016-06-22 2019-08-15 アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ 自己切断リボザイムを利用したｒｎａのウイルス送達およびそのｃｒｉｓｐｒベースの適用
JP7074345B2 (ja) 2016-06-22 2022-05-24 プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ 一本鎖ｒｎａ編集オリゴヌクレオチド
CN105925608A (zh) 2016-06-24 2016-09-07 广西壮族自治区水牛研究所 一种利用CRISPR-Cas9靶向敲除ALK6基因的方法
CN106047877B (zh) 2016-06-24 2019-01-11 中山大学附属第一医院 一种靶向敲除FTO基因的sgRNA及CRISPR/Cas9慢病毒系统与应用
CN106119283A (zh) 2016-06-24 2016-11-16 广西壮族自治区水牛研究所 一种利用CRISPR‑Cas9靶向敲除MSTN基因的方法
WO2018005691A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Efficient genetic screening method
WO2018005873A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Broad Institute Inc. Crispr-cas systems having destabilization domain
CA3029121A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for gene editing
CN106148286B (zh) 2016-06-29 2019-10-29 牛刚 一种用于检测热原的细胞模型的构建方法和细胞模型及热原检测试剂盒
US10927383B2 (en) 2016-06-30 2021-02-23 Ethris Gmbh Cas9 mRNAs
US10669558B2 (en) 2016-07-01 2020-06-02 Microsoft Technology Licensing, Llc Storage through iterative DNA editing
US20180004537A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Microsoft Technology Licensing, Llc Molecular State Machines
US10892034B2 (en) 2016-07-01 2021-01-12 Microsoft Technology Licensing, Llc Use of homology direct repair to record timing of a molecular event
WO2018009562A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 The Johns Hopkins University Crispr/cas9-based compositions and methods for treating retinal degenerations
US20190185847A1 (en) 2016-07-06 2019-06-20 Novozymes A/S Improving a Microorganism by CRISPR-Inhibition
CN106191057B (zh) 2016-07-06 2018-12-25 中山大学 一种用于敲除人CYP2E1基因的sgRNA序列、CYP2E1基因缺失细胞株的构建方法及其应用
CN106051058A (zh) 2016-07-07 2016-10-26 上海格昆机电科技有限公司 用于航天贮箱和粒子治疗仪的旋转机架及其传动机构
WO2018009822A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Ohio State Innovation Foundation Modified nucleic acids, hybrid guide rnas, and uses thereof
CN107586777A (zh) 2016-07-08 2018-01-16 上海吉倍生物技术有限公司 人PDCD1基因sgRNA的用途及其相关药物
CN106047930B (zh) 2016-07-12 2020-05-19 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 一种PS1基因条件性敲除flox大鼠的制备方法
US11466269B2 (en) 2016-07-13 2022-10-11 Dsm Ip Assets B.V. CRISPR-Cas system for an algal host cell
US20190330659A1 (en) 2016-07-15 2019-10-31 Zymergen Inc. Scarless dna assembly and genome editing using crispr/cpf1 and dna ligase
CN106190903B (zh) 2016-07-18 2019-04-02 华中农业大学 鸭疫里氏杆菌Cas9基因缺失突变株及其应用
CN106191062B (zh) 2016-07-18 2019-06-14 广东华南疫苗股份有限公司 一种tcr-/pd-1-双阴性t细胞及其构建方法
CN106191061B (zh) 2016-07-18 2019-06-18 暨南大学 一种特异靶向人ABCG2基因的sgRNA导向序列及其应用
EP3487523B1 (en) 2016-07-19 2023-09-06 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
CN106434651B (zh) 2016-07-19 2021-05-18 广西大学 根癌农杆菌和CRISPR-Cas9介导的基因定点插入失活方法及其应用
US20190247436A1 (en) 2016-07-21 2019-08-15 Maxcyte, Inc. Methods and compositions for modifying genomic dna
WO2018015444A1 (en) 2016-07-22 2018-01-25 Novozymes A/S Crispr-cas9 genome editing with multiple guide rnas in filamentous fungi
CN106191064B (zh) 2016-07-22 2019-06-07 中国农业大学 一种制备mc4r基因敲除猪的方法
CN106191107B (zh) 2016-07-22 2020-03-20 湖南农业大学 一种降低水稻籽粒落粒性的分子改良方法
US20190270980A1 (en) 2016-07-25 2019-09-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating cancer
US11168313B2 (en) 2016-07-26 2021-11-09 The General Hospital Corporation Variants of CRISPR from Prevotella and Francisella 1 (Cpf1)
WO2018018979A1 (zh) 2016-07-26 2018-02-01 浙江大学 植物重组载体及无转基因成分的基因编辑植株的筛选方法
CN106222193B (zh) 2016-07-26 2019-09-20 浙江大学 一种重组载体及无转基因基因编辑植株的筛选方法
CN106086061A (zh) 2016-07-27 2016-11-09 苏州泓迅生物科技有限公司 一种基于CRISPR‑Cas9系统的酿酒酵母基因组编辑载体及其应用
CN106191099A (zh) 2016-07-27 2016-12-07 苏州泓迅生物科技有限公司 一种基于CRISPR‑Cas9系统的酿酒酵母基因组并行多重编辑载体及其应用
CN106191113B (zh) 2016-07-29 2020-01-14 中国农业大学 一种mc3r基因敲除猪的制备方法
GB201613135D0 (en) 2016-07-29 2016-09-14 Medical Res Council Genome editing
CN106191124B (zh) 2016-07-29 2019-10-11 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 一种利用鱼卵保存液提高CRISPR-Cas9基因编辑和传代效率的鱼类育种方法
CN106434748A (zh) 2016-07-29 2017-02-22 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 一种热激诱导型 Cas9 酶转基因斑马鱼的研制及应用
CN106191114B (zh) 2016-07-29 2020-02-11 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 利用CRISPR-Cas9系统敲除鱼类MC4R基因的育种方法
CN106434688A (zh) 2016-08-01 2017-02-22 云南纳博生物科技有限公司 一种水稻直立密穗dep1基因人工定点突变体及其应用
CN106011150A (zh) 2016-08-01 2016-10-12 云南纳博生物科技有限公司 一种水稻穗粒数Gn1a基因人工定点突变体及其应用
WO2018026723A1 (en) 2016-08-01 2018-02-08 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Human induced pluripotent stem cells for high efficiency genetic engineering
WO2018025206A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 Kyoto University Method for genome editing
CA3032822A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for treating cep290 associated disease
AU2017306676B2 (en) 2016-08-03 2024-02-22 President And Fellows Of Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
CN106282241A (zh) 2016-08-05 2017-01-04 无锡市第二人民医院 通过CRISPR/Cas9得到敲除bmp2a基因的斑马鱼的方法
AU2017308889B2 (en) 2016-08-09 2023-11-09 President And Fellows Of Harvard College Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
CN106222203A (zh) 2016-08-10 2016-12-14 云南纳博生物科技有限公司 利用CRISPR/Cas技术获得家蚕丝素重链基因突变体及突变方法和应用
KR101710026B1 (ko) 2016-08-10 2017-02-27 주식회사 무진메디 Cas9 단백질 및 가이드 RNA의 혼성체를 함유하는 나노 리포좀 전달체 조성물
CN106172238B (zh) 2016-08-12 2019-01-22 中南大学 miR-124基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用
CN106222177B (zh) 2016-08-13 2018-06-26 江苏集萃药康生物科技有限公司 一种靶向人STAT6的CRISPR-Cas9系统及其用于治疗过敏性疾病的应用
WO2018035300A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 The Regents Of The University Of California Split trans-complementing gene-drive system for suppressing aedes aegypti mosquitos
US11810649B2 (en) 2016-08-17 2023-11-07 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying novel gene editing elements
US20210166783A1 (en) 2016-08-17 2021-06-03 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying class 2 crispr-cas systems
US20200340012A1 (en) 2016-08-18 2020-10-29 The Regents Of The University Of California Crispr-cas genome engineering via a modular aav delivery system
WO2018035423A1 (en) 2016-08-19 2018-02-22 Bluebird Bio, Inc. Genome editing enhancers
US20190185850A1 (en) 2016-08-20 2019-06-20 Avellino Lab Usa, Inc. Single guide rna/crispr/cas9 systems, and methods of use thereof
CN106191116B (zh) 2016-08-22 2019-10-08 西北农林科技大学 基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用
CN106191071B (zh) 2016-08-22 2018-09-04 广州资生生物科技有限公司 一种CRISPR-Cas9系统及其用于治疗乳腺癌疾病的应用
CN106086028B (zh) 2016-08-23 2019-04-23 中国农业科学院作物科学研究所 一种通过基因组编辑提高水稻抗性淀粉含量的方法及其专用sgRNA
CN106244555A (zh) 2016-08-23 2016-12-21 广州医科大学附属第三医院 一种提高基因打靶的效率的方法及β‑球蛋白基因位点的碱基原位修复方法
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
AU2017315414B2 (en) 2016-08-24 2024-02-15 Sangamo Therapeutics, Inc. Engineered target specific nucleases
KR101856345B1 (ko) 2016-08-24 2018-06-20 경상대학교산학협력단 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여 APOBEC3H 및 APOBEC3CH 이중-넉아웃 고양이를 제조하는 방법
CN106244609A (zh) 2016-08-24 2016-12-21 浙江理工大学 一种调节pi3k‑akt信号通路的非编码基因的筛选系统及筛选方法
WO2018039440A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 Sangamo Therapeutics, Inc. Regulation of gene expression using engineered nucleases
CN106109417A (zh) 2016-08-24 2016-11-16 李因传 一种肝细胞膜仿生脂质体药物载体、制作方法及其应用
CN106544357B (zh) 2016-08-25 2018-08-21 湖南杂交水稻研究中心 一种培育镉低积累籼稻品种的方法
CN107784200B (zh) 2016-08-26 2020-11-06 深圳华大生命科学研究院 一种筛选新型CRISPR-Cas系统的方法和装置
CN106318973B (zh) 2016-08-26 2019-09-13 深圳市第二人民医院 一种基于CRISPR-Cas9的基因调控装置及基因调控方法
CN106350540A (zh) 2016-08-26 2017-01-25 苏州系统医学研究所 一种由慢病毒介导的高效可诱导型CRISPR/Cas9基因敲除载体及其应用
CN106399375A (zh) 2016-08-31 2017-02-15 南京凯地生物科技有限公司 利用CRISPR/Cas9敲除人PD‑1基因构建靶向CD19CAR‑T细胞的方法
CN106480097A (zh) 2016-10-13 2017-03-08 南京凯地生物科技有限公司 利用CRISPR/Cas9技术敲除人PD‑1基因构建可靶向MSLN新型CAR‑T细胞的方法及其应用
CN106399367A (zh) 2016-08-31 2017-02-15 深圳市卫光生物制品股份有限公司 提高crispr介导的同源重组效率的方法
CN107794272B (zh) 2016-09-06 2021-10-12 中国科学院上海营养与健康研究所 一种高特异性的crispr基因组编辑体系
CN106399377A (zh) 2016-09-07 2017-02-15 同济大学 一种基于CRISPR/Cas9高通量技术筛选药物靶点基因的方法
WO2018048827A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 Massachusetts Institute Of Technology Rna-guided endonuclease-based dna assembly
CN106367435B (zh) 2016-09-07 2019-11-08 电子科技大学 一种水稻miRNA定向敲除的方法
CN106399311A (zh) 2016-09-07 2017-02-15 同济大学 用于Chip‑seq全基因组结合谱的内源蛋白标记的方法
CN107574179B (zh) 2016-09-09 2018-07-10 康码（上海）生物科技有限公司 一种为克鲁维酵母优化的CRISPR/Cas9高效基因编辑系统
WO2018049168A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High-throughput precision genome editing
WO2018051347A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Yeda Research And Development Co. Ltd. Crisp-seq, an integrated method for massively parallel single cell rna-seq and crispr pooled screens
CN106318934B (zh) 2016-09-21 2020-06-05 上海交通大学 胡萝卜β(1,2)木糖转移酶的基因全序列及用于转染双子叶植物的CRISPR/CAS9的质粒构建
WO2017216392A1 (en) 2016-09-23 2017-12-21 Dsm Ip Assets B.V. A guide-rna expression system for a host cell
EP3516058A1 (en) 2016-09-23 2019-07-31 Casebia Therapeutics Limited Liability Partnership Compositions and methods for gene editing
CN106957858A (zh) 2016-09-23 2017-07-18 西北农林科技大学 一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除绵羊MSTN、ASIP、BCO2基因的方法
WO2018062866A2 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Cellivery Therapeutics, Inc. CELL-PERMEABLE (CP)-Cas9 RECOMBINANT PROTEIN AND USES THEREOF
WO2018064371A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 The Regents Of The University Of California Rna-guided nucleic acid modifying enzymes and methods of use thereof
WO2018064352A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 The Regents Of The University Of California Rna-guided nucleic acid modifying enzymes and methods of use thereof
CN107880132B (zh) 2016-09-30 2022-06-17 北京大学 一种融合蛋白及使用其进行同源重组的方法
CN106480027A (zh) 2016-09-30 2017-03-08 重庆高圣生物医药有限责任公司 CRISPR/Cas9 靶向敲除人PD‑1基因及其特异性gRNA
CN107881184B (zh) 2016-09-30 2021-08-27 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 一种基于Cpf1的DNA体外拼接方法
EP3518656A4 (en) 2016-09-30 2020-09-30 Monsanto Technology LLC METHOD OF SELECTING TARGETS FOR SITE-SPECIFIC GENOME MODIFICATION IN PLANTS
WO2018067546A1 (en) 2016-10-03 2018-04-12 President And Fellows Of Harvard College Delivery of therapeutic rnas via arrdc1-mediated microvesicles
WO2018067846A1 (en) 2016-10-05 2018-04-12 President And Fellows Of Harvard College Methods of crispr mediated genome modulation in v. natriegens
US10669539B2 (en) 2016-10-06 2020-06-02 Pioneer Biolabs, Llc Methods and compositions for generating CRISPR guide RNA libraries
CN110462034A (zh) 2016-10-07 2019-11-15 综合Dna技术公司 化脓链球菌cas9突变基因和由其编码的多肽
CN106479985A (zh) 2016-10-09 2017-03-08 上海吉玛制药技术有限公司 病毒介导的Cpf1蛋白在CRISPR/Cpf1基因编辑系统中的应用
CN106434663A (zh) 2016-10-12 2017-02-22 遵义医学院 CRISPR/Cas9靶向敲除人ezrin基因增强子关键区的方法及其特异性gRNA
WO2018071623A2 (en) 2016-10-12 2018-04-19 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Combination therapies for eradicating flavivirus infections in subjects
IT201600102542A1 (it) 2016-10-12 2018-04-12 Univ Degli Studi Di Trento Plasmide e sistema lentivirale contenente un circuito autolimitante della Cas9 che ne incrementa la sicurezza.
CN106434782B (zh) 2016-10-14 2020-01-10 南京工业大学 一种产顺式-4-羟脯氨酸的方法
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
US20190330620A1 (en) 2016-10-14 2019-10-31 Emendobio Inc. Rna compositions for genome editing
CN110290813A (zh) 2016-10-14 2019-09-27 通用医疗公司 表观遗传学调控的位点特异性核酸酶
WO2018074979A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Nanyang Technological University Truncated crispr-cas proteins for dna targeting
US10640810B2 (en) 2016-10-19 2020-05-05 Drexel University Methods of specifically labeling nucleic acids using CRISPR/Cas
EP3532616A1 (en) 2016-10-28 2019-09-04 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating herpes simplex virus
US20180119141A1 (en) 2016-10-28 2018-05-03 Massachusetts Institute Of Technology Crispr/cas global regulator screening platform
WO2018081535A2 (en) 2016-10-28 2018-05-03 Massachusetts Institute Of Technology Dynamic genome engineering
WO2018081728A1 (en) 2016-10-31 2018-05-03 Emendobio Inc. Compositions for genome editing
EP3534384A4 (en) 2016-10-31 2020-06-24 Eguchi High Frequency Co., Ltd. REACTOR
US20180245065A1 (en) 2016-11-01 2018-08-30 Novartis Ag Methods and compositions for enhancing gene editing
US11787795B2 (en) 2016-11-01 2023-10-17 President And Fellows Of Harvard College Inhibitors of RNA guided nucleases and uses thereof
GB201618507D0 (en) 2016-11-02 2016-12-14 Stichting Voor De Technische Wetenschappen And Wageningen Univ Microbial genome editing
CN106544353A (zh) 2016-11-08 2017-03-29 宁夏医科大学总医院 一种利用CRISPR‑Cas9清除鲍曼不动杆菌耐药性基因的方法
CN106755088A (zh) 2016-11-11 2017-05-31 广东万海细胞生物科技有限公司 一种自体car‑t细胞制备方法及应用
EP3538561A4 (en) 2016-11-11 2020-10-21 The Regents of The University of California RNA-GUIDED POLYPEPTIDE VARIANTS AND METHOD OF USING
CN106566838B (zh) 2016-11-14 2019-11-01 上海伯豪生物技术有限公司 一种基于CRISPR-Cas9技术的miR-126全长基因敲除试剂盒及其应用
US11447785B2 (en) 2016-11-14 2022-09-20 Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academv of Sciences Method for base editing in plants
CN106554969A (zh) 2016-11-15 2017-04-05 陕西理工学院 基于抑菌杀菌的多靶点CRISPR/Cas9表达载体
CN106754912B (zh) 2016-11-16 2019-11-08 上海交通大学 一类定向清除肝细胞中HBVcccDNA的质粒及制剂
JP7210029B2 (ja) 2016-11-16 2023-01-23 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９の阻害因子
US20180282722A1 (en) 2016-11-21 2018-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Chimeric DNA:RNA Guide for High Accuracy Cas9 Genome Editing
CN106480067A (zh) 2016-11-21 2017-03-08 中国农业科学院烟草研究所 烟草NtNAC096基因控制烟草衰老的应用
JP2019535287A (ja) 2016-11-22 2019-12-12 インテグレイテツド・デイー・エヌ・エイ・テクノロジーズ・インコーポレイテツド Ｃｒｉｓｐｒ／ｃｐｆ１システム及び方法
US20200046854A1 (en) 2016-11-28 2020-02-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Prevention of muscular dystrophy by crispr/cpf1-mediated gene editing
CN106755091A (zh) 2016-11-28 2017-05-31 中国人民解放军第三军医大学第附属医院 基因敲除载体，mh7a细胞nlrp1基因敲除方法
CN106480036B (zh) 2016-11-30 2019-04-09 华南理工大学 一种具有启动子功能的dna片段及其应用
CN106834323A (zh) 2016-12-01 2017-06-13 安徽大学 一种基于维吉尼亚链霉菌IBL14基因cas7‑5‑3的基因编辑方法
CN107043779B (zh) 2016-12-01 2020-05-12 中国农业科学院作物科学研究所 一种CRISPR/nCas9介导的定点碱基替换在植物中的应用
US20200056206A1 (en) 2016-12-01 2020-02-20 UNIVERSITé LAVAL Crispr-based treatment of friedreich ataxia
US9816093B1 (en) 2016-12-06 2017-11-14 Caribou Biosciences, Inc. Engineered nucleic acid-targeting nucleic acids
CN106701830B (zh) 2016-12-07 2020-01-03 湖南人文科技学院 一种敲除猪胚胎p66shc基因的方法
WO2018103686A1 (zh) 2016-12-07 2018-06-14 中国科学院上海生命科学研究院 叶绿体基因组编辑方法
US11192929B2 (en) 2016-12-08 2021-12-07 Regents Of The University Of Minnesota Site-specific DNA base editing using modified APOBEC enzymes
SG10202106058WA (en) 2016-12-08 2021-07-29 Intellia Therapeutics Inc Modified guide rnas
CN106544351B (zh) 2016-12-08 2019-09-10 江苏省农业科学院 CRISPR-Cas9体外敲除耐药基因mcr-1的方法及其专用细胞穿透肽
EP4119663A1 (en) 2016-12-09 2023-01-18 The Broad Institute, Inc. Crispr effector system based diagnostics
WO2018107103A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 The Broad Institute, Inc. Crispr-systems for modifying a trait of interest in a plant
US11293022B2 (en) 2016-12-12 2022-04-05 Integrated Dna Technologies, Inc. Genome editing enhancement
WO2018111946A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Integrated Dna Technologies, Inc. Genome editing detection
CN107893074A (zh) 2016-12-13 2018-04-10 广东赤萌医疗科技有限公司 一种用于敲除CXCR4基因的gRNA、表达载体、敲除系统、试剂盒
WO2018109101A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Wageningen Universiteit Thermostable cas9 nucleases
JP7182545B2 (ja) 2016-12-14 2022-12-02 ヴァーヘニンゲン ユニヴェルシテット 熱安定性ｃａｓ９ヌクレアーゼ
WO2018112336A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Ohio State Innovation Foundation Systems and methods for dna-guided rna cleavage
KR101748575B1 (ko) 2016-12-16 2017-06-20 주식회사 엠젠플러스 Ins 유전자 녹아웃 당뇨병 또는 당뇨병 합병증 동물모델 및 이의 제조방법
CN110268269A (zh) 2016-12-18 2019-09-20 赛隆特拉有限公司 使用apoe4基序介导的基因以用于诊断和治疗阿尔茨海默氏病
CN106755026A (zh) 2016-12-18 2017-05-31 吉林大学 sgRNA表达载体的构建及牙釉质钙化不全模型的建立
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
GB2605925B (en) 2016-12-23 2023-02-22 Harvard College Gene editing of PCSK9
CN106755424B (zh) 2016-12-26 2020-11-06 郑州大学 一种基于crispr的大肠杆菌st131系菌株检测引物、试剂盒及检测方法
CN107354173A (zh) 2016-12-26 2017-11-17 浙江省医学科学院 基于crispr技术和水动力尾静脉注射建立肝脏特异性敲除小鼠模型的方法
CN106755097A (zh) 2016-12-27 2017-05-31 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 一种山羊tlr4基因敲除载体及其构建方法
CN106834347A (zh) 2016-12-27 2017-06-13 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 一种山羊cdk2基因敲除载体及其构建方法
CN106701763B (zh) 2016-12-30 2019-07-19 重庆高圣生物医药有限责任公司 CRISPR/Cas9靶向敲除人乙肝病毒P基因及其特异性gRNA
CN106868008A (zh) 2016-12-30 2017-06-20 重庆高圣生物医药有限责任公司 CRISPR/Cas9靶向敲除人Lin28A基因及其特异性gRNA
CN106755077A (zh) 2016-12-30 2017-05-31 华智水稻生物技术有限公司 利用crispr‑cas9技术对水稻cenh3基因定点突变的方法
CN106834341B (zh) 2016-12-30 2020-06-16 中国农业大学 一种基因定点突变载体及其构建方法和应用
CN106701818B (zh) 2017-01-09 2020-04-24 湖南杂交水稻研究中心 一种培育水稻普通核不育系的方法
WO2018130830A1 (en) 2017-01-11 2018-07-19 Oxford University Innovation Limited Crispr rna
CN107012164B (zh) 2017-01-11 2023-03-03 电子科技大学 CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元、包含该功能单元的载体及其应用
US20180258418A1 (en) 2017-01-17 2018-09-13 Institute For Basic Science Method of identifying genome-wide off-target sites of base editors by detecting single strand breaks in genomic dna
JP2020513783A (ja) 2017-01-18 2020-05-21 エクシジョン バイオセラピューティクス インコーポレイテッド Ｃｒｉｓｐｒ
CN107058372A (zh) 2017-01-18 2017-08-18 四川农业大学 一种应用于植物上的CRISPR/Cas9载体的构建方法
CN106701823A (zh) 2017-01-18 2017-05-24 上海交通大学 生产无岩藻糖单克隆抗体的cho细胞系建立及其应用
CN106801056A (zh) 2017-01-24 2017-06-06 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种sgRNA及其构建的慢病毒载体和应用
DK3574101T3 (da) 2017-01-30 2023-07-31 Kws Saat Se & Co Kgaa Reparationsskabelonbinding til endonukleaser til genommodifikation
TWI608100B (zh) 2017-02-03 2017-12-11 國立清華大學 Ｃａｓ９表達質體、大腸桿菌基因剪輯系統及其方法
WO2018148246A1 (en) 2017-02-07 2018-08-16 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for rna-guided genetic circuits
AU2018218280A1 (en) 2017-02-07 2019-08-29 The Regents Of The University Of California Gene therapy for haploinsufficiency
US11866699B2 (en) 2017-02-10 2024-01-09 University Of Washington Genome editing reagents and their use
IT201700016321A1 (it) 2017-02-14 2018-08-14 Univ Degli Studi Di Trento Mutanti di cas9 ad alta specificita' e loro applicazioni.
WO2018152197A1 (en) 2017-02-15 2018-08-23 Massachusetts Institute Of Technology Dna writers, molecular recorders and uses thereof
CN106957855B (zh) 2017-02-16 2020-04-17 上海市农业科学院 使用CRISPR/Cas9技术靶向敲除水稻矮杆基因SD1的方法
WO2018152418A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Gene editing therapy for hiv infection via dual targeting of hiv genome and ccr5
BR112019017138A2 (pt) 2017-02-20 2020-04-14 Inst Genetics & Developmental Biology Cas sistema e método de edição de genoma
US20200040061A1 (en) 2017-02-22 2020-02-06 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of early onset parkinson's disease (park1) and other synuclein, alpha (snca) gene related conditions or disorders
US11559588B2 (en) 2017-02-22 2023-01-24 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of Spinocerebellar Ataxia Type 1 (SCA1) and other Spinocerebellar Ataxia Type 1 Protein (ATXN1) gene related conditions or disorders
WO2018156372A1 (en) 2017-02-22 2018-08-30 The Regents Of The University Of California Genetically modified non-human animals and products thereof
US11407997B2 (en) 2017-02-22 2022-08-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of primary hyperoxaluria type 1 (PH1) and other alanine-glyoxylate aminotransferase (AGXT) gene related conditions or disorders
US20200216857A1 (en) 2017-02-22 2020-07-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of spinocerebellar ataxia type 2 (sca2) and other spinocerebellar ataxia type 2 protein (atxn2) gene related conditions or disorders
EP3585896A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Materials and methods for treatment of merosin-deficient cogenital muscular dystrophy (mdcmd) and other laminin, alpha 2 (lama2) gene related conditions or disorders
US20190365929A1 (en) 2017-02-22 2019-12-05 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of dystrophic epidermolysis bullosa (deb) and other collagen type vii alpha 1 chain (col7a1) gene related conditions or disorders
EP3585895A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Compositions and methods for gene editing
EP3585894A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 CRISPR Therapeutics AG Compositions and methods for treatment of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (pcsk9)-related disorders
CN106868031A (zh) 2017-02-24 2017-06-20 北京大学 一种基于分级组装的多个sgRNA串联并行表达的克隆方法及应用
US20200010903A1 (en) 2017-03-03 2020-01-09 Yale University AAV-Mediated Direct In vivo CRISPR Screen in Glioblastoma
US11111492B2 (en) 2017-03-06 2021-09-07 Florida State University Research Foundation, Inc. Genome engineering methods using a cytosine-specific Cas9
WO2018165504A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11542496B2 (en) * 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
US11332727B2 (en) 2017-03-14 2022-05-17 The Regents Of The University Of California Method for reducing an immune response by administering an immune evading adeno-associated AAV8 or AAVDJ viral vector
CN106978428A (zh) 2017-03-15 2017-07-25 上海吐露港生物科技有限公司 一种Cas蛋白特异结合靶标DNA、调控靶标基因转录的方法及试剂盒
BR112019019087A2 (pt) 2017-03-15 2020-05-12 The Broad Institute, Inc. Diagnóstico baseado em sistema efetor de crispr para detecção de vírus
CN106906242A (zh) 2017-03-16 2017-06-30 重庆高圣生物医药有限责任公司 一种提高CRIPSR/Cas9靶向敲除基因产生非同源性末端接合效率的方法
EP3600382A4 (en) 2017-03-21 2020-12-30 Anthony P. Shuber TREATMENT OF CANCER WITH CAS ENDONUCLEASE COMPLEXES
IL306092A (en) 2017-03-23 2023-11-01 Harvard College Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins
CN107012213A (zh) 2017-03-24 2017-08-04 南开大学 结直肠癌的生物标记物
CN106947780A (zh) 2017-03-28 2017-07-14 扬州大学 一种兔mstn基因的编辑方法
PT3526324T (pt) 2017-03-28 2021-10-20 Locanabio Inc Proteína associada a crispr (cas)
CN106906240A (zh) 2017-03-29 2017-06-30 浙江大学 运用CRISPR‑Cas9系统敲除大麦VE合成通路中的关键基因HPT的方法
WO2018179578A1 (ja) 2017-03-30 2018-10-04 国立大学法人京都大学 ゲノム編集によるエクソンスキッピング誘導方法
CN108660161B (zh) 2017-03-31 2023-05-09 中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心 基于CRISPR/Cas9技术的制备无嵌合基因敲除动物的方法
CN107058358B (zh) 2017-04-01 2020-06-09 中国科学院微生物研究所 一种双spacer序列识别切割CRISPR-Cas9载体构建及其在疣孢菌中的应用
CN106967726B (zh) 2017-04-05 2020-12-29 华南农业大学 一种创建亚洲栽培稻与非洲栽培稻种间杂种亲和系的方法和应用
US9938288B1 (en) 2017-04-05 2018-04-10 President And Fellows Of Harvard College Macrocyclic compound and uses thereof
CN107142282A (zh) 2017-04-06 2017-09-08 中山大学 一种利用CRISPR/Cas9在哺乳动物细胞中实现大片段DNA定点整合的方法
CN107034229A (zh) 2017-04-07 2017-08-11 江苏贝瑞利生物科技有限公司 一种植物中高效筛选CRISPR/CAS9基因编辑系统候选sgRNA系统及应用
CN107058320B (zh) 2017-04-12 2019-08-02 南开大学 Il7r基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用
CN106916852B (zh) 2017-04-13 2020-12-04 上海科技大学 一种碱基编辑系统及其构建和应用方法
CN108728476A (zh) 2017-04-14 2018-11-02 复旦大学 一种利用crispr系统产生多样性抗体文库的方法
CN107298701B (zh) 2017-04-18 2020-10-30 上海大学 玉米转录因子ZmbZIP22及其应用
SG11201909797QA (en) 2017-04-20 2019-11-28 Egenesis Inc Methods for generating genetically modified animals
CN106957844A (zh) 2017-04-20 2017-07-18 华侨大学 一种能有效敲除HTLV‑1病毒基因组的CRISPR/Cas9的gRNA序列
US11773409B2 (en) 2017-04-21 2023-10-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University CRISPR/Cas 9-mediated integration of polynucleotides by sequential homologous recombination of AAV donor vectors
WO2018195545A2 (en) 2017-04-21 2018-10-25 The General Hospital Corporation Variants of cpf1 (cas12a) with altered pam specificity
CN107043775B (zh) 2017-04-24 2020-06-16 中国农业科学院生物技术研究所 一种能促进棉花侧根发育的sgRNA及其应用
EP3615665A1 (en) 2017-04-24 2020-03-04 DuPont Nutrition Biosciences ApS Novel anti-crispr genes and proteins and methods of use
CN206970581U (zh) 2017-04-26 2018-02-06 重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司 一种用于辅助CRISPR/cas9基因敲除的试剂盒
WO2018197020A1 (en) 2017-04-27 2018-11-01 Novozymes A/S Genome editing by crispr-cas9 using short donor oligonucleotides
WO2018202800A1 (en) 2017-05-03 2018-11-08 Kws Saat Se Use of crispr-cas endonucleases for plant genome engineering
CA3062165A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for gene editing in t cells using crispr/cpf1
CN107012174A (zh) 2017-05-04 2017-08-04 昆明理工大学 CRISPR/Cas9技术在获得家蚕锌指蛋白基因突变体中的应用
CN107254485A (zh) 2017-05-08 2017-10-17 南京农业大学 一种能够快速构建植物基因定点敲除载体的新反应体系
CN107129999A (zh) 2017-05-09 2017-09-05 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 利用稳转CRISPR/Cas9系统对病毒基因组进行靶向编辑的方法
WO2018208755A1 (en) 2017-05-09 2018-11-15 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for tagging target proteins in proximity to a nucleotide sequence of interest
CA3062595A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 The Regents Of The University Of California Directed editing of cellular rna via nuclear delivery of crispr/cas9
EP3622070A2 (en) 2017-05-10 2020-03-18 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease systems and methods
CN107130000B (zh) 2017-05-12 2019-12-17 浙江卫未生物医药科技有限公司 一种同时敲除KRAS基因和EGFR基因的CRISPR-Cas9系统及其应用
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
CN106957830B (zh) 2017-05-16 2020-12-25 上海交通大学 一种Cas9核酸酶ΔF916及其用途
CN106987570A (zh) 2017-05-16 2017-07-28 上海交通大学 一种Cas9核酸酶R780A及其用途
CN106947750B (zh) 2017-05-16 2020-12-08 上海交通大学 一种Cas9核酸酶Q920P及其用途
CN106939303B (zh) 2017-05-16 2021-02-23 上海交通大学 一种Cas9核酸酶R919P及其用途
CN107326042A (zh) 2017-05-16 2017-11-07 上海交通大学 水稻tms10基因的定点敲除系统及其应用
CN106916820B (zh) 2017-05-16 2019-09-27 吉林大学 能有效编辑猪ROSA26基因的sgRNA及其应用
CN106967697B (zh) 2017-05-16 2021-03-26 上海交通大学 一种Cas9核酸酶G915F及其用途
CN106957831B (zh) 2017-05-16 2021-03-12 上海交通大学 一种Cas9核酸酶K918A及其用途
CN107012250B (zh) 2017-05-16 2021-01-29 上海交通大学 一种适用于CRISPR/Cas9系统的基因组DNA片段编辑精准度的分析方法及应用
US11591620B2 (en) 2017-05-18 2023-02-28 Cargill, Incorporated Genome editing system
EP3625342B1 (en) 2017-05-18 2022-08-24 The Broad Institute, Inc. Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
AU2018270088A1 (en) 2017-05-18 2020-01-16 Massachusetts Institute Of Technology Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
US20200171068A1 (en) 2017-05-18 2020-06-04 Children's National Medical Center Compositions comprising aptamers and nucleic acid payloads and methods of using the same
CN107236737A (zh) 2017-05-19 2017-10-10 上海交通大学 特异靶向拟南芥ILK2基因的sgRNA序列及其应用
CN107043787B (zh) 2017-05-19 2017-12-26 南京医科大学 一种基于CRISPR/Cas9获得MARF1定点突变小鼠模型的构建方法和应用
WO2018217852A1 (en) 2017-05-23 2018-11-29 Gettysburg College Crispr based tool for characterizing bacterial serovar diversity
CN107034188B (zh) 2017-05-24 2018-07-24 中山大学附属口腔医院 一种靶向骨的外泌体载体、CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用
WO2018218166A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 The General Hospital Corporation Using split deaminases to limit unwanted off-target base editor deamination
EP3630975A4 (en) 2017-05-26 2021-03-10 North Carolina State University CHANGED GUIDE RNAS FOR MODULATING CAS9 ACTIVITY AND USAGE PROCEDURES
CN107287245B (zh) 2017-05-27 2020-03-17 南京农业大学 一种基于CRISPR/Cas9技术的Glrx1基因敲除动物模型的构建方法
CN107142272A (zh) 2017-06-05 2017-09-08 南京金斯瑞生物科技有限公司 一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法
CN107034218A (zh) 2017-06-07 2017-08-11 浙江大学 用于猪APN基因编辑的靶向sgRNA、修饰载体及其制备方法和应用
CN107119071A (zh) 2017-06-07 2017-09-01 江苏三黍生物科技有限公司 一种降低植物直链淀粉含量的方法及应用
CN107177595A (zh) 2017-06-07 2017-09-19 浙江大学 用于猪CD163基因编辑的靶向sgRNA、修饰载体及其制备方法和应用
CN106987757A (zh) 2017-06-12 2017-07-28 苏州双金实业有限公司 一种耐腐蚀型奥氏体镍基合金
CN107236739A (zh) 2017-06-12 2017-10-10 上海捷易生物科技有限公司 CRISPR/SaCas9特异性敲除人CXCR4基因的方法
CN107083392B (zh) 2017-06-13 2020-09-08 中国医学科学院病原生物学研究所 一种CRISPR/Cpf1基因编辑系统及其在分枝杆菌中的应用
CN107227352A (zh) 2017-06-13 2017-10-03 西安医学院 基于eGFP的GPR120基因表达的检测方法及应用
CN107245502B (zh) 2017-06-14 2020-11-03 中国科学院武汉病毒研究所 Cd2结合蛋白(cd2ap)和其相互作用蛋白
CN107312798B (zh) 2017-06-16 2020-06-23 武汉大学 含特异靶向CCR5基因的gRNA序列的CRISPR/Cas9重组慢病毒载体及应用
CN107099850B (zh) 2017-06-19 2018-05-04 东北农业大学 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法
CN107446951B (zh) 2017-06-20 2021-01-08 温氏食品集团股份有限公司 一种通过CRISPR/Cas9系统快速筛选重组鸡痘病毒的方法及其应用
CN107266541B (zh) 2017-06-20 2021-06-04 上海大学 玉米转录因子ZmbHLH167及其应用
CN107058328A (zh) 2017-06-22 2017-08-18 江苏三黍生物科技有限公司 一种提高植物直链淀粉含量的方法及应用
US9982279B1 (en) 2017-06-23 2018-05-29 Inscripta, Inc. Nucleic acid-guided nucleases
CN107227307A (zh) 2017-06-23 2017-10-03 东北农业大学 一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列及其应用
CN107119053A (zh) 2017-06-23 2017-09-01 东北农业大学 一种特异靶向猪MC4R基因的sgRNA导向序列及其应用
CN107099533A (zh) 2017-06-23 2017-08-29 东北农业大学 一种特异靶向猪IGFBP3基因的sgRNA导向序列及应用
US20200248169A1 (en) 2017-06-26 2020-08-06 The Broad Institute, Inc. Crispr/cas-cytidine deaminase based compositions, systems, and methods for targeted nucleic acid editing
CN107177631B (zh) 2017-06-26 2020-11-24 中国农业大学 利用CRISPR-CAS9技术敲除NRK细胞Slc22a2基因的方法
CN107217075B (zh) 2017-06-28 2021-07-02 西安交通大学医学院第一附属医院 一种构建epo基因敲除斑马鱼动物模型的方法及引物、质粒与制备方法
CN107356793A (zh) 2017-07-01 2017-11-17 合肥东玖电气有限公司 一种防火电表箱
CN107312793A (zh) 2017-07-05 2017-11-03 新疆农业科学院园艺作物研究所 Cas9介导的番茄基因编辑载体及其应用
CN107190006A (zh) 2017-07-07 2017-09-22 南通大学附属医院 一种靶向IGF‑IR基因的sgRNA及其应用
CN107236741A (zh) 2017-07-19 2017-10-10 广州医科大学附属第五医院 一种敲除野生型T细胞TCR alpha链的gRNA及方法
CN107190008A (zh) 2017-07-19 2017-09-22 苏州吉赛基因测序科技有限公司 一种基于Crispr/cas9的捕获基因组目标序列的方法及其在高通量测序中的应用
CN107400677B (zh) 2017-07-19 2020-05-22 江南大学 一种基于CRISPR-Cas9系统的地衣芽孢杆菌基因组编辑载体及其制备方法
CN107354156B (zh) 2017-07-19 2021-02-09 广州医科大学附属第五医院 一种敲除野生型T细胞TCR beta链的gRNA及方法
CN107384922A (zh) 2017-07-28 2017-11-24 重庆医科大学附属儿童医院 CRISPR/Cas9靶向敲除人CNE9基因及其特异性gRNA
JP2020534795A (ja) 2017-07-28 2020-12-03 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ファージによって支援される連続的進化（ｐａｃｅ）を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物
CN107418974A (zh) 2017-07-28 2017-12-01 新乡医学院 一种利用单克隆细胞分选快速获得CRISPR/Cas9基因敲除稳定细胞株的方法
CN107267515B (zh) 2017-07-28 2020-08-25 重庆医科大学附属儿童医院 CRISPR/Cas9靶向敲除人CNE10基因及其特异性gRNA
CN107446954A (zh) 2017-07-28 2017-12-08 新乡医学院 一种sd大鼠t细胞缺失遗传模型的制备方法
CN107435069A (zh) 2017-07-28 2017-12-05 新乡医学院 一种细胞系CRISPR/Cas9基因敲除的快速检测方法
CN107435051B (zh) 2017-07-28 2020-06-02 新乡医学院 一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法
CN107217042B (zh) 2017-07-31 2020-03-06 江苏东抗生物医药科技有限公司 一种生产无岩藻糖基化蛋白的基因工程细胞系及其建立方法
CN107446922A (zh) 2017-08-03 2017-12-08 无锡市第二人民医院 一种敲除人成骨细胞株中hepcidin基因的gRNA序列及其使用方法
CN107502618B (zh) 2017-08-08 2021-03-12 中国科学院微生物研究所 可控载体消除方法及易用型CRISPR-Cas9工具
CN107312785B (zh) 2017-08-09 2019-12-06 四川农业大学 OsKTN80b基因在降低水稻株高方面的应用
CN107446923B (zh) 2017-08-13 2019-12-31 中国人民解放军疾病预防控制所 rAAV8-CRISPR-SaCas9系统及在制备乙肝治疗药物中的应用
CN107365804B (zh) 2017-08-13 2019-12-20 中国人民解放军疾病预防控制所 一种使用温和噬菌体载体包装CRISPR-Cas9系统的方法
CN107384926B (zh) 2017-08-13 2020-06-26 中国人民解放军疾病预防控制所 一种靶向清除细菌耐药性质粒的CRISPR-Cas9系统及应用
CN107815463A (zh) 2017-08-15 2018-03-20 西南大学 CRISPR/Cas9技术介导miR167前体序列编辑体系的建立方法
CN107446924B (zh) 2017-08-16 2020-01-14 中国科学院华南植物园 一种基于CRISPR-Cas9的猕猴桃基因AcPDS编辑载体及其构建方法和应用
CN108034656A (zh) 2017-08-16 2018-05-15 四川省农业科学院生物技术核技术研究所 与水稻红褐色颖壳性状有关的sgRNA、CRISPR/Cas9载体、载体构建、应用
CN107384894B (zh) 2017-08-21 2019-10-22 华南师范大学 功能化氧化石墨烯高效运载CRISPR/Cas9用于基因编辑的方法
CN107299114B (zh) 2017-08-23 2021-08-27 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 一种高效的酵母菌染色体融合方法
CN107557393B (zh) 2017-08-23 2020-05-08 中国科学院上海应用物理研究所 一种磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统及其制备方法和应用
CN107312795A (zh) 2017-08-24 2017-11-03 浙江省农业科学院 运用CRISPR/Cas9系统创制粉色果实番茄的基因编辑方法
CN107488649A (zh) 2017-08-25 2017-12-19 南方医科大学 一种Cpf1和p300核心结构域的融合蛋白、相应的DNA靶向激活系统和应用
CN107460196A (zh) 2017-08-25 2017-12-12 同济大学 一种免疫缺陷小鼠动物模型的构建方法及应用
CN107541525B (zh) 2017-08-26 2021-12-10 内蒙古大学 一种基于CRISPR/Cas9技术介导山羊Tβ4基因定点敲入的方法
CN107446932B (zh) 2017-08-29 2020-02-21 江西省农业科学院 一个控制水稻雄性生殖发育基因及其应用
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
CN107519492B (zh) 2017-09-06 2019-01-25 武汉迈特维尔生物科技有限公司 使用CRISPR技术敲除miR-3187-3p在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的应用
CN107641631A (zh) 2017-09-07 2018-01-30 浙江工业大学 一种由化学转化介导的基于CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌基因的方法
CN107362372B (zh) 2017-09-07 2019-01-11 佛山波若恩生物科技有限公司 使用crispr技术在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的应用
CN107502608B (zh) 2017-09-08 2020-10-16 中山大学 用于敲除人ALDH2基因的sgRNA、ALDH2基因缺失细胞株的构建方法及应用
CN107557455A (zh) 2017-09-15 2018-01-09 国家纳米科学中心 一种基于CRISPR‑Cas13a的特异性核酸片段的检测方法
CN107557390A (zh) 2017-09-18 2018-01-09 江南大学 一种筛选cho细胞系高表达位点的方法
CN107475300B (zh) 2017-09-18 2020-04-21 上海市同济医院 Ifit3-eKO1基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用
CN107557378A (zh) 2017-09-19 2018-01-09 安徽大学 一种基于I型CRISPR‑Cas系统中基因cas7‑3的真核基因编辑方法
CN107630042A (zh) 2017-09-19 2018-01-26 安徽大学 一种源于I型Cas系统4个cas基因的原核生物基因编辑方法
CN107630041A (zh) 2017-09-19 2018-01-26 安徽大学 一种基于维吉尼亚链霉菌IBL14 I‑B型Cas系统的真核基因编辑方法
CN107523583A (zh) 2017-09-19 2017-12-29 安徽大学 一种源于I型CRISPR‑Cas系统中基因cas5‑3的原核基因编辑方法
CN107557373A (zh) 2017-09-19 2018-01-09 安徽大学 一种基于I‑B型CRISPR‑Cas系统基因cas3的基因编辑方法
CN107619837A (zh) 2017-09-20 2018-01-23 西北农林科技大学 利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法
CN107513531B (zh) 2017-09-21 2020-02-21 无锡市妇幼保健院 用于内源性过表达lncRNA-XIST的gRNA靶点序列及其应用
CN107686848A (zh) 2017-09-26 2018-02-13 中山大学孙逸仙纪念医院 转座子协同CRISPR/Cas9系统的稳定敲除单质粒载体及其应用
CN107557394A (zh) 2017-09-29 2018-01-09 南京鼓楼医院 降低CRISPR/Cas9介导的胚胎基因编辑脱靶率的方法
CN107760652A (zh) 2017-09-29 2018-03-06 华南理工大学 CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法
CN107760663A (zh) 2017-09-30 2018-03-06 新疆大学 油莎草pepc基因的克隆及表达载体的构建和应用
CN107630006B (zh) 2017-09-30 2020-09-11 山东兴瑞生物科技有限公司 一种制备tcr与hla双基因敲除的t细胞的方法
CN107828794A (zh) 2017-09-30 2018-03-23 上海市农业生物基因中心 一种水稻耐盐基因OsRR22突变体、其编码的氨基酸序列、植株及该突变体的创制方法
CN107604003A (zh) 2017-10-10 2018-01-19 南方医科大学 一种基于线性化crispr‑cas9慢病毒载体基因敲除试剂盒及其应用
CN108102940B (zh) 2017-10-12 2021-07-13 中石化上海工程有限公司 一株利用CRISPR/Cas9系统敲除XKS1基因的工业酿酒酵母菌株及构建方法
CN107474129B (zh) 2017-10-12 2018-10-19 江西汉氏联合干细胞科技有限公司 特异性增强crispr-cas系统基因编辑效率的方法
CN107557381A (zh) 2017-10-12 2018-01-09 南京农业大学 一种白菜CRISPR‑Cas9基因编辑体系的建立及其应用
CN108103586A (zh) 2017-10-13 2018-06-01 上海科技大学 一种CRISPR/Cas9随机文库及其构建和应用
CN107619829B (zh) 2017-10-14 2018-08-24 南京平港生物技术有限公司 使用crispr-cas系统对间充质干细胞进行gins2基因敲除的方法
CN107586779B (zh) 2017-10-14 2018-08-28 天津金匙生物科技有限公司 使用crispr-cas系统对间充质干细胞进行casp3基因敲除的方法
CN107523567A (zh) 2017-10-16 2017-12-29 遵义医学院 一种敲除人ezrin基因增强子的食管癌细胞株的构建方法
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
CN107760715B (zh) 2017-10-17 2021-12-10 张业胜 一种转基因载体及其构建方法和应用
CN107937427A (zh) 2017-10-20 2018-04-20 广东石油化工学院 一种基于CRISPR/Cas9体系的同源修复载体构建方法
CN107893086B (zh) 2017-10-24 2021-09-03 中国科学院武汉植物园 快速构建配对sgRNA的Cas9双元表达载体文库的方法
CN107760684B (zh) 2017-11-03 2018-09-25 上海拉德钫斯生物科技有限公司 使用crispr-cas系统对间充质干细胞进行rbm17基因敲除的方法
CN107858346B (zh) 2017-11-06 2020-06-16 天津大学 一种敲除酿酒酵母染色体的方法
CN107794276A (zh) 2017-11-08 2018-03-13 中国农业科学院作物科学研究所 一种crispr介导快速有效的农作物定点基因片段或等位基因替换方法和体系
CN107630043A (zh) 2017-11-14 2018-01-26 吉林大学 采用敲除技术建立Gadd45a敲除兔模型的方法
CN108441519A (zh) 2017-11-15 2018-08-24 中国农业大学 在crispr/cas9基因编辑中提高同源修复效率的方法
CN107858373B (zh) 2017-11-16 2020-03-17 山东省千佛山医院 内皮细胞条件性敲除ccr5基因小鼠模型的构建方法
CN108192956B (zh) 2017-11-17 2021-06-01 东南大学 一种基于Cas9核酸酶的DNA检测分析方法及其应用
CN107893075A (zh) 2017-11-17 2018-04-10 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR‑Cas9靶向敲除人肠癌细胞RITA基因及其特异性的sgRNA
CN107828874B (zh) 2017-11-20 2020-10-16 东南大学 一种基于crispr的dna检测和分型方法及其应用
CN107653256A (zh) 2017-11-21 2018-02-02 云南省烟草农业科学研究院 一种烟草多酚氧化酶基因NtPPO1及其定点突变方法与应用
CN107904261A (zh) 2017-11-21 2018-04-13 福州大学 CRISPR/Cas9纳米基因系统的制备及其在转染方面的应用
CN107893076A (zh) 2017-11-23 2018-04-10 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR‑Cas9靶向敲除人乳腺癌细胞RASSF2基因及其特异性的sgRNA
CN107937501A (zh) 2017-11-24 2018-04-20 安徽师范大学 一种快速简便的筛选CRISPR/Cas基因编辑阳性对象的方法
CN107937432B (zh) 2017-11-24 2020-05-01 华中农业大学 一种基于crispr系统的基因组编辑方法及其应用
CN107828738A (zh) 2017-11-28 2018-03-23 新乡医学院 一种dna甲基转移酶缺陷型cho细胞系及其制备方法及应用
CN107988256B (zh) 2017-12-01 2020-07-28 暨南大学 人亨廷顿基因敲入用重组载体及其构建方法和在模型猪构建中的应用
CN108570479B (zh) 2017-12-06 2020-04-03 内蒙古大学 一种基于CRISPR/Cas9技术介导绒山羊VEGF基因定点敲入的方法
CN108148873A (zh) 2017-12-06 2018-06-12 南方医科大学 一种cav-1基因缺失斑马鱼及其制备方法
CN108251423B (zh) 2017-12-07 2020-11-06 嘉兴市第一医院 CRISPR-Cas9系统特异性靶向人RSPO2基因的sgRNA及激活方法和应用
CN108315330B (zh) 2017-12-07 2020-05-19 嘉兴市第一医院 CRISPR-Cas9系统特异性靶向人RSPO2基因的sgRNA及敲除方法和应用
CN107974466B (zh) 2017-12-07 2020-09-29 中国科学院水生生物研究所 一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法
CN108148835A (zh) 2017-12-07 2018-06-12 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR-Cas9靶向敲除SLC30A1基因及其特异性的sgRNA
CN107828826A (zh) 2017-12-12 2018-03-23 南开大学 一种体外高效获得神经干细胞的方法
CN108103098B (zh) 2017-12-14 2020-07-28 华南理工大学 一种化合物皮肤致敏体外评估细胞模型及其构建方法
WO2019118949A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 The Broad Institute, Inc. Systems and methods for predicting repair outcomes in genetic engineering
CN107988268A (zh) 2017-12-18 2018-05-04 湖南师范大学 一种基因敲除选育tcf25基因缺失型斑马鱼的方法
CN108018316A (zh) 2017-12-20 2018-05-11 湖南师范大学 一种基因敲除选育rmnd5b基因缺失型斑马鱼的方法
CN108048466B (zh) 2017-12-21 2020-02-07 嘉兴市第一医院 CRISPR-Cas13a系统特异性靶向人RSPO2基因的crRNA及系统和应用
RU2652899C1 (ru) 2017-12-28 2018-05-03 Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) РНК-проводники для подавления репликации вируса гепатита B и для элиминации вируса гепатита B из клетки-хозяина
CN107893080A (zh) 2017-12-29 2018-04-10 江苏省农业科学院 一种靶向大鼠Inhba基因的sgRNA及其应用
CN107988229B (zh) 2018-01-05 2020-01-07 中国农业科学院作物科学研究所 一种利用CRISPR-Cas修饰OsTAC1基因获得分蘖改变的水稻的方法
CN108103092B (zh) 2018-01-05 2021-02-12 中国农业科学院作物科学研究所 利用CRISPR-Cas系统修饰OsHPH基因获得矮化水稻的系统及其应用
CN107988246A (zh) 2018-01-05 2018-05-04 汕头大学医学院 一种基因敲除载体及其斑马鱼胶质瘤模型
CN108559760A (zh) 2018-01-09 2018-09-21 陕西师范大学 基于CRISPR靶向基因组修饰技术建立荧光素酶knock-in细胞系的方法
CN108148837A (zh) 2018-01-12 2018-06-12 南京医科大学 ApoE-CRISPR/Cas9载体及其在敲除ApoE基因中的应用
CN108559730B (zh) 2018-01-12 2021-09-24 中国人民解放军第四军医大学 利用CRISPR/Cas9技术构建Hutat2:Fc基因敲入单核细胞的实验方法
CN108251451A (zh) 2018-01-16 2018-07-06 西南大学 HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及其应用
CN108251452A (zh) 2018-01-17 2018-07-06 扬州大学 一种表达Cas9基因的转基因斑马鱼及其构建方法和应用
CN108359712B (zh) 2018-02-09 2020-06-26 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 一种快速高效筛选SgRNA靶向DNA序列的方法
CN208034188U (zh) 2018-02-09 2018-11-02 衡阳市振洋汽车配件有限公司 一种快速定位的加工孔用夹具
CN108559745A (zh) 2018-02-10 2018-09-21 和元生物技术（上海）股份有限公司 基于CRISPR-Cas9技术提高B16F10细胞转染效率的方法
CN108359691B (zh) 2018-02-12 2021-09-28 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 利用mito-CRISPR/Cas9系统敲除异常线粒体DNA的试剂盒及方法
CN108486145A (zh) 2018-02-12 2018-09-04 中国科学院遗传与发育生物学研究所 基于CRISPR/Cas9的植物高效同源重组方法
CN109021111B (zh) 2018-02-23 2021-12-07 上海科技大学 一种基因碱基编辑器
CN108396027A (zh) 2018-02-27 2018-08-14 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR-Cas9靶向敲除人肠癌细胞DEAF1基因及其特异性的sgRNA
CN108486159B (zh) 2018-03-01 2021-10-22 南通大学附属医院 一种敲除GRIN2D基因的CRISPR-Cas9系统及其应用
CN108342480B (zh) 2018-03-05 2022-03-01 北京医院 一种基因变异检测质控物及其制备方法
CN108410906A (zh) 2018-03-05 2018-08-17 淮海工学院 一种适用于海洋甲壳类线粒体基因组的CRISPR/Cpf1基因编辑方法
CN108410907B (zh) 2018-03-08 2021-08-27 湖南农业大学 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法
CN108410911B (zh) 2018-03-09 2021-08-20 广西医科大学 基于CRISPR/Cas9技术构建的LMNA基因敲除的细胞系
CN108486108B (zh) 2018-03-16 2020-10-09 华南农业大学 一种敲除人hmgb1基因的细胞株及其应用
CN108486146B (zh) 2018-03-16 2021-02-19 中国农业科学院作物科学研究所 LbCpf1-RR突变体用于CRISPR/Cpf1系统在植物基因编辑中的应用
CN108384784A (zh) 2018-03-23 2018-08-10 广西医科大学 一种利用CRISPR/Cas9技术敲除Endoglin基因的方法
CN108504685A (zh) 2018-03-27 2018-09-07 宜明细胞生物科技有限公司 一种利用CRISPR/Cas9系统同源重组修复IL-2RG缺陷基因的方法
CN108410877A (zh) 2018-03-27 2018-08-17 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR-Cas9靶向敲除人细胞SANIL1基因及其特异性的sgRNA
CN108424931A (zh) 2018-03-29 2018-08-21 内蒙古大学 CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法
CN108486234B (zh) 2018-03-29 2022-02-11 东南大学 一种crispr分型pcr的方法及其应用
CN108753772B (zh) 2018-04-04 2020-10-30 南华大学 基于CRISPR/Cas技术敲除CAPNS1基因的人神经母细胞瘤细胞系的构建方法
CN108504693A (zh) 2018-04-04 2018-09-07 首都医科大学附属北京朝阳医院 利用Crispr技术敲除T合酶基因构建的O-型糖基化异常的结肠癌细胞系
CN108486154A (zh) 2018-04-04 2018-09-04 福州大学 一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法及其应用
CN108441520B (zh) 2018-04-04 2020-07-31 苏州大学 利用CRISPR/Cas9系统构建的基因条件性敲除方法
CN108486111A (zh) 2018-04-04 2018-09-04 山西医科大学 CRISPR-Cas9靶向敲除人SMYD3基因的方法及其特异性sgRNA
CN108504657B (zh) 2018-04-12 2019-06-14 中南民族大学 利用crispr-cas9技术敲除hek293t细胞kdm2a基因的方法
CN108753817A (zh) 2018-04-13 2018-11-06 北京华伟康信生物科技有限公司 增强细胞的抗癌能力的方法及采用该方法获得的增强型细胞
CN108588182A (zh) 2018-04-13 2018-09-28 中国科学院深圳先进技术研究院 基于crispr-链取代的等温扩增及检测技术
CN108823248A (zh) 2018-04-20 2018-11-16 中山大学 一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法
CN108753832A (zh) 2018-04-20 2018-11-06 中山大学 一种利用CRISPR/Cas9编辑大白猪CD163基因的方法
CN108588071A (zh) 2018-04-25 2018-09-28 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR-Cas9靶向敲除人肠癌细胞CNR1基因及其特异性的sgRNA
CN108707621B (zh) 2018-04-26 2021-02-12 中国农业科学院作物科学研究所 一种CRISPR/Cpf1系统介导的以RNA转录本为修复模板的同源重组方法
CN108588128A (zh) 2018-04-26 2018-09-28 南昌大学 一种高效率大豆CRISPR/Cas9系统的构建方法及应用
CN108546712B (zh) 2018-04-26 2020-08-07 中国农业科学院作物科学研究所 一种利用CRISPR/LbCpf1系统实现目的基因在植物中同源重组的方法
CN108642053A (zh) 2018-04-28 2018-10-12 和元生物技术（上海）股份有限公司 CRISPR-Cas9靶向敲除人肠癌细胞PPP1R1C基因及其特异性的sgRNA
CN108611364A (zh) 2018-05-03 2018-10-02 南京农业大学 一种非转基因crispr突变体的制备方法
CN108588123A (zh) 2018-05-07 2018-09-28 南京医科大学 CRISPR/Cas9载体组合在制备基因敲除猪的血液制品中的应用
CN108610399B (zh) 2018-05-14 2019-09-27 河北万玛生物医药有限公司 特异性增强crispr-cas系统在表皮干细胞中进行基因编辑效率的方法
CN108546717A (zh) 2018-05-15 2018-09-18 吉林大学 反义lncRNA介导顺式调控抑制靶基因表达的方法
CN108546718B (zh) 2018-05-16 2021-07-09 康春生 crRNA介导的CRISPR/Cas13a基因编辑系统在肿瘤细胞中的应用
CN108624622A (zh) 2018-05-16 2018-10-09 湖南艾佳生物科技股份有限公司 一种基于CRISPR-Cas9系统构建的能分泌小鼠白细胞介素-6的基因工程细胞株
CN108642055B (zh) 2018-05-17 2021-12-03 吉林大学 能有效编辑猪miR-17-92基因簇的sgRNA
CN108642090A (zh) 2018-05-18 2018-10-12 中国人民解放军总医院 基于CRISPR/Cas9技术获得Nogo-B敲除模式小鼠的方法及应用
CN108642077A (zh) 2018-05-18 2018-10-12 江苏省农业科学院 基于CRISPR/Cas9基因编辑技术选育绿豆不育突变体的方法及专用gRNA
CN108642078A (zh) 2018-05-18 2018-10-12 江苏省农业科学院 基于CRISPR/Cas9基因编辑技术选育绿豆开花传粉突变体的方法及专用gRNA
CN108559732A (zh) 2018-05-21 2018-09-21 陕西师范大学 基于CRISPR/Cas9靶向基因组修饰技术建立KI-T2A-luciferase细胞系的方法
CN108707620A (zh) 2018-05-22 2018-10-26 西北农林科技大学 一种Gene drive载体及构建方法
EP3797160A1 (en) 2018-05-23 2021-03-31 The Broad Institute Inc. Base editors and uses thereof
CN108690844B (zh) 2018-05-25 2021-10-15 西南大学 HTT的CRISPR/Cas9-gRNA打靶序列对、质粒及HD细胞模型
CN108707628B (zh) 2018-05-28 2021-11-23 上海海洋大学 斑马鱼notch2基因突变体的制备方法
CN108707629A (zh) 2018-05-28 2018-10-26 上海海洋大学 斑马鱼notch1b基因突变体的制备方法
CN108823249A (zh) 2018-05-28 2018-11-16 上海海洋大学 CRISPR/Cas9构建notch1a突变体斑马鱼的方法
CN108753835A (zh) 2018-05-30 2018-11-06 中山大学 一种利用CRISPR/Cas9编辑猪BMP15基因的方法
CN108707604B (zh) 2018-05-30 2019-07-23 江西汉氏联合干细胞科技有限公司 表皮干细胞中采用CRISPR-Cas系统进行CNE10基因敲除
CN108753836B (zh) 2018-06-04 2021-10-12 北京大学 一种利用rna干扰机制的基因调控或编辑系统
CN108715850B (zh) 2018-06-05 2020-10-23 艾一生命科技(广东)有限公司 表皮干细胞中采用CRISPR-Cas系统进行GING2基因敲除
CN108753813B (zh) 2018-06-08 2021-08-24 中国水稻研究所 获得无标记转基因植物的方法
CN108753783A (zh) 2018-06-13 2018-11-06 上海市同济医院 Sqstm1全基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用
CN108728486A (zh) 2018-06-20 2018-11-02 江苏省农业科学院 一种茄子CRISPR/Cas9基因敲除载体的构建方法和应用
CN108841845A (zh) 2018-06-21 2018-11-20 广东石油化工学院 一种带有筛选标记的CRISPR/Cas9载体及其构建方法
CN108893529A (zh) 2018-06-25 2018-11-27 武汉博杰生物医学科技有限公司 一种基于CRISPR技术特异性检测人KRAS基因2号及3号外显子突变的crRNA
CN108866093B (zh) 2018-07-04 2021-07-09 广东三杰牧草生物科技有限公司 一种利用CRISPR/Cas9系统对紫花苜蓿基因定点突变的方法
CN108795902A (zh) 2018-07-05 2018-11-13 深圳三智医学科技有限公司 一种安全高效的CRISPR/Cas9基因编辑技术
CN108913714A (zh) 2018-07-05 2018-11-30 江西省超级水稻研究发展中心 一种利用CRISPR/Cas9系统敲除BADH2基因创制香稻的方法
US20220033785A1 (en) 2018-07-09 2022-02-03 The Broad Institute, Inc. Rna programmable epigenetic rna modifiers and uses thereof
CN108913691B (zh) 2018-07-16 2020-09-01 山东华御生物科技有限公司 表皮干细胞中采用CRISPR-Cas系统进行Card3基因敲除
CN108913664B (zh) 2018-07-20 2020-09-04 嘉兴学院 一种CRISPR/Cas9基因编辑方法敲除卵巢癌细胞中CFP1基因的方法
CN108823291B (zh) 2018-07-25 2022-04-12 领航医学科技(深圳)有限公司 基于crispr技术的特异性核酸片段定量检测方法
CN108853133A (zh) 2018-07-25 2018-11-23 福州大学 一种PAMAM与CRISPR/Cas9系统重组质粒递送纳米粒的制备方法
CN108913717A (zh) 2018-08-01 2018-11-30 河南农业大学 一种利用CRISPR/Cas9系统对水稻PHYB基因定点突变的方法
WO2020041751A1 (en) 2018-08-23 2020-02-27 The Broad Institute, Inc. Cas9 variants having non-canonical pam specificities and uses thereof
WO2020051360A1 (en) 2018-09-05 2020-03-12 The Broad Institute, Inc. Base editing for treating hutchinson-gilford progeria syndrome
US20220380740A1 (en) 2018-10-24 2022-12-01 The Broad Institute, Inc. Constructs for improved hdr-dependent genomic editing
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
WO2020102659A1 (en) 2018-11-15 2020-05-22 The Broad Institute, Inc. G-to-t base editors and uses thereof
WO2020154500A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
WO2020181202A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. A:t to t:a base editing through adenine deamination and oxidation
WO2020181193A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through adenosine methylation
WO2020181195A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through adenine excision
WO2020181178A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. T:a to a:t base editing through thymine alkylation
WO2020181180A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 The Broad Institute, Inc. A:t to c:g base editors and uses thereof
JP2022526908A (ja) 2019-03-19 2022-05-27 ザ ブロード インスティテュート，インコーポレーテッド 編集ヌクレオチド配列を編集するための方法および組成物
US20220204975A1 (en) 2019-04-12 2022-06-30 President And Fellows Of Harvard College System for genome editing
WO2020214842A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
US20220249697A1 (en) 2019-05-20 2022-08-11 The Broad Institute, Inc. Aav delivery of nucleobase editors
US20220315906A1 (en) 2019-08-08 2022-10-06 The Broad Institute, Inc. Base editors with diversified targeting scope
WO2021030666A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 The Broad Institute, Inc. Base editing by transglycosylation

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010132092A2 (en) * 2009-05-12 2010-11-18 The Scripps Research Institute Cytidine deaminase fusions and related methods
US20110104787A1 (en) * 2009-11-05 2011-05-05 President And Fellows Of Harvard College Fusion Peptides That Bind to and Modify Target Nucleic Acid Sequences
WO2013176772A1 (en) * 2012-05-25 2013-11-28 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification and for rna-directed modulation of transcription
WO2014144288A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 The General Hospital Corporation Using rna-guided foki nucleases (rfns) to increase specificity for rna-guided genome editing

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
3 BIOTECH., vol. 3, JPN6019005546, 18 September 2012 (2012-09-18), pages 225 - 234, ISSN: 0003979525 *
BRITISH J. HAEMATOL., vol. 82, JPN6019005552, 1992, pages 66 - 72, ISSN: 0003979527 *
FAMILIAN CANCER, vol. 9, JPN6019005543, 2010, pages 125 - 129, ISSN: 0003979524 *
J. ALZHEIMER'S DISEASE, vol. 25, JPN6019005551, 2011, pages 425 - 431, ISSN: 0003979526 *
NATURE METHODS, vol. 10, no. 10, JPN5016012357, 1 October 2013 (2013-10-01), pages 957 - 963, ISSN: 0003979522 *
PROTEIN SCI., vol. 13, JPN6019005553, 2004, pages 694 - 702, ISSN: 0003979528 *
SCIENCE, vol. 333, JPN6015052349, 2011, pages 1843 - 1846, ISSN: 0003979523 *

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11920181B2 (en) 2013-08-09 2024-03-05 President And Fellows Of Harvard College Nuclease profiling system
JP2022043042A (ja) * 2013-12-12 2022-03-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 遺伝子編集用のｃａｓ多様体
US11578343B2 (en) 2014-07-30 2023-02-14 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
US11661590B2 (en) 2016-08-09 2023-05-30 President And Fellows Of Harvard College Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US11820969B2 (en) 2016-12-23 2023-11-21 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR2 receptor gene to protect against HIV infection
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
JP2020510038A (ja) * 2017-03-09 2020-04-02 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ がんワクチン
JP2020520654A (ja) * 2017-05-18 2020-07-16 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のための系、方法、及び組成物
JP7364472B2 (ja) 2017-05-18 2023-10-18 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のための系、方法、及び組成物
US11866697B2 (en) 2017-05-18 2024-01-09 The Broad Institute, Inc. Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
JP2020528761A (ja) * 2017-06-26 2020-10-01 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ−アデニンデアミナーゼ系の組成物、系及び方法
JP7454494B2 (ja) 2017-06-26 2024-03-22 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ－アデニンデアミナーゼ系の組成物、系及び方法
US11732274B2 (en) 2017-07-28 2023-08-22 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE)
US11932884B2 (en) 2017-08-30 2024-03-19 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising Gam
JP2020537516A (ja) * 2017-10-04 2020-12-24 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 標的化された核酸編集のためのシステム、方法、及び組成物
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
JP2021500036A (ja) * 2017-10-16 2021-01-07 ザ ブロード インスティテュート, インコーポレーテッドThe Broad Institute, Inc. アデノシン塩基編集因子の使用
US11795452B2 (en) 2019-03-19 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences
US11643652B2 (en) 2019-03-19 2023-05-09 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences
US11912985B2 (en) 2020-05-08 2024-02-27 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence

Also Published As

Publication number Publication date
US20150166980A1 (en) 2015-06-18
US10465176B2 (en) 2019-11-05
US11053481B2 (en) 2021-07-06
US20190322992A1 (en) 2019-10-24
AU2014362208B2 (en) 2021-02-11
AU2023254972A1 (en) 2023-11-16
JP2022043042A (ja) 2022-03-15
US20150166982A1 (en) 2015-06-18
US20150165054A1 (en) 2015-06-18
JP2020164529A (ja) 2020-10-08
EP3080265A1 (en) 2016-10-19
US20150166985A1 (en) 2015-06-18
AU2014362208A1 (en) 2016-06-30
US9840699B2 (en) 2017-12-12
US20220119785A1 (en) 2022-04-21
EP3604511A1 (en) 2020-02-05
AU2021200375B2 (en) 2023-08-17
PT3080265T (pt) 2019-11-18
US20160304846A1 (en) 2016-10-20
JP2024061716A (ja) 2024-05-08
CN105934516B (zh) 2022-02-08
CN105934516A (zh) 2016-09-07
US20150166984A1 (en) 2015-06-18
AU2021200375A1 (en) 2021-03-18
DK3080265T3 (da) 2019-11-18
CA2933625C (en) 2022-08-30
US20150166983A1 (en) 2015-06-18
CN114516920A (zh) 2022-05-20
HUE046398T2 (hu) 2020-02-28
US11124782B2 (en) 2021-09-21
ES2754433T3 (es) 2020-04-17
EP3604511B1 (en) 2024-02-28
CA2933625A1 (en) 2015-06-18
EP3080265B1 (en) 2019-08-07
US20150166981A1 (en) 2015-06-18
PL3080265T3 (pl) 2020-01-31
US9068179B1 (en) 2015-06-30
WO2015089406A1 (en) 2015-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11124782B2 (en) Cas variants for gene editing
US20220220462A1 (en) Nucleobase editors and uses thereof
US20230348883A1 (en) Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
JP7201153B2 (ja) プログラム可能ｃａｓ９－リコンビナーゼ融合タンパク質およびその使用
CA2956224A1 (en) Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
WO2019168953A1 (en) Evolved cas9 variants and uses thereof
WO2017019895A1 (en) Evolution of talens
CN116867897A (zh) 碱基编辑酶

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20171212

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20171212

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20190219

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20190517

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20190719

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20200106

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200507

C60 Trial request (containing other claim documents, opposition documents)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60

Effective date: 20200507

C11 Written invitation by the commissioner to file amendments

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11

Effective date: 20200519

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20200703

C21 Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21

Effective date: 20200706

A912 Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912

Effective date: 20200904

C211 Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211

Effective date: 20200908

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20210212

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20210408

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20210716

C13 Notice of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C13

Effective date: 20211029

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220126

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20220406

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220502

C23 Notice of termination of proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23

Effective date: 20220527

C03 Trial/appeal decision taken

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03

Effective date: 20220621

C30A Notification sent

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012

Effective date: 20220621