JP2017518082A - ゲノム中の特異的遺伝子座にタンパク質を指向させるための方法およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、2014年6月17日に出願された仮出願USSN62/013,382号および2015年5月19日に出願されたUSSN62/163,565号(これらの内容は、それらの全体が参考としてそれぞれ本明細書に援用される)の利益を主張する。
2015年6月5日に作成され、サイズが2KBである名称「POTH−001/001WO_SeqList.txt」のテキストファイルの内容は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
本開示は一般に、部位指向的ゲノム改変のための組成物および方法に関する。
Claims (36)
- 生物のゲノム中の特異的遺伝子座にタンパク質を指向させるための方法であって、
a.DNA局在化構成成分を提供するステップ;および
b.エフェクター分子を提供するステップ
を含み、
前記DNA局在化構成成分および前記エフェクター分子が、非共有結合的連結を介して作動可能に連結することが可能である、方法。 - 前記DNA局在化構成成分が、特異的DNA配列を結合することが可能である、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、DNA結合性オリゴヌクレオチド、DNA結合性タンパク質、DNA結合性タンパク質複合体、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、前記ゲノム中の前記特異的遺伝子座に指向されるオリゴヌクレオチドを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分がオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドが、DNA、RNA、DNA/RNAハイブリッド、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、RNA−DNAヘテロ二重鎖、R−ループ、およびそれらの組み合わせから選択される特徴を認識することが可能なタンパク質またはタンパク質複合体を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、タンパク質またはタンパク質複合体を含み、前記タンパク質または前記タンパク質複合体が、R−ループを認識することが可能であり、Cas9、カスケード複合体、RecA、RNase H、RNAポリメラーゼ、DNAポリメラーゼ、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーアレイ、TALアレイ、およびそれらの組み合わせから選択される、DNA配列を結合することが可能なタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、天然に存在するDNA結合ドメインを含むタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、天然に存在するDNA結合ドメインを含むタンパク質を含み、前記天然に存在するDNA結合ドメインが、bZIPドメイン、ヘリックス−ループ−ヘリックス、ヘリックス−ターン−ヘリックス、HMG−ボックス、ロイシンジッパー、ジンクフィンガー、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記DNA局在化構成成分が、ゲノム中の標的位置に指向されるオリゴヌクレオチド;および標的DNA配列に結合することが可能なタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子が、前記特異的遺伝子座において所定の効果が可能である、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子が、転写因子(アクチベーターまたはリプレッサー)、クロマチンリモデリング因子、ヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、トランスポザーゼ、メチルトランスフェラーゼ、デメチラーゼ、アセチルトランスフェラーゼ、デアセチラーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、インテグラーゼ、リコンビナーゼ、リガーゼ、トポイソメラーゼ、ジャイラーゼ、ヘリカーゼ、フルオロフォア、またはそれらの組み合わせである、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がヌクレアーゼを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ヌクレアーゼが、制限エンドヌクレアーゼ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、S1ヌクレアーゼ、マングビーンヌクレアーゼ、膵DNase I、小球菌ヌクレアーゼ、酵母HOエンドヌクレアーゼ、またはそれらの組み合わせである、請求項14に記載の方法。
- 前記エフェクター分子が、IIS型制限エンドヌクレアーゼを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子が、AciI、Mn1I、AlwI、BbvI、BccI、BceAI、BsmAI、BsmFI、BspCNI、BsrI、BtsCI、HgaI、HphI、HpyAV、Mbo1I、My1I、PleI、SfaNI、AcuI、BciVI、BfuAI、BmgBI、BmrI、BpmI、BpuEI、BsaI、BseRI、BsgI、BsmI、BspMI、BsrBI、BsrBI、BsrDI、BtgZI、BtsI、EarI、EciI、MmeI、NmeAIII、BbvCI、Bpu10I、BspQI、SapI、BaeI、BsaXI、CspCI、FokI、BfiI、MboII、Acc36IおよびClo051からなる群より選択されるエンドヌクレアーゼを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子が、BmrI、BfiIまたはClo051を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がBmrIを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がBfiIを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がClo051を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がFokIを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記エフェクター分子がトランスポザーゼを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、前記エフェクター分子に共有結合的に結合された抗体断片を含み、前記抗体断片は、前記DNA局在化構成成分に非共有結合的に直接結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、前記DNA局在化構成成分に共有結合的に結合された抗体断片を含み、前記抗体断片は、前記エフェクター構成成分に非共有結合的に直接結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、前記エフェクター分子または前記DNA局在化構成成分のいずれかに共有結合的に結合された抗体断片を含み、前記抗体断片は、反対側の構成成分に共有結合的に結合されたエピトープタグに非共有結合的に結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、前記エフェクター分子または前記DNA局在化構成成分のいずれかに共有結合的に結合されたタンパク質結合ドメインを含み、前記タンパク質結合ドメインは、反対側の構成成分に非共有結合的に結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、反対側の構成成分に共有結合的に結合されたタンパク質に結合することが可能な、前記エフェクター分子または前記DNA局在化構成成分のいずれかに共有結合的に結合されたタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、前記エフェクター分子または前記DNA局在化構成成分のいずれかに共有結合的に結合された小分子を含み、前記小分子は、反対側の構成成分に共有結合的に結合されたタンパク質または他の小分子に非共有結合的に結合する、請求項1に記載の方法。
- 前記非共有結合的連結が、抗体模倣物を含む、請求項1、27または28に記載の方法。
- 前記抗体模倣物が、標的配列を特異的に結合し、天然に存在する抗体とは別個の構造を有する有機化合物を含むまたはそれからなる、請求項30に記載の方法。
- 前記抗体模倣物が、タンパク質、核酸または小分子を含むまたはそれらからなる、請求項31に記載の方法。
- 前記抗体模倣物が、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、およびアビマー、DARPin、フィノマー、クニッツドメインペプチド、もしくはモノボディを含むまたはそれらからなる、請求項32に記載の方法。
- 前記抗体断片が、単鎖可変断片(scFv)、単一ドメイン抗体(sdAB)、小モジュラー免疫医薬品(SMIP)分子もしくはナノボディを含むまたはそれらからなる、請求項24、25または26に記載の方法。
- 生物のゲノムを改変するための方法であって、
a.DNA局在化構成成分を提供するステップ;および
b.エフェクター分子を提供するステップ
を含み、
前記DNA局在化構成成分および前記エフェクター分子が、非共有結合的連結を介して作動可能に連結することが可能である、方法。 - 請求項35に記載の方法に従って改変された細胞。
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