RU2634395C1 - Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека - Google Patents
Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2634395C1 RU2634395C1 RU2015151558A RU2015151558A RU2634395C1 RU 2634395 C1 RU2634395 C1 RU 2634395C1 RU 2015151558 A RU2015151558 A RU 2015151558A RU 2015151558 A RU2015151558 A RU 2015151558A RU 2634395 C1 RU2634395 C1 RU 2634395C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cas9
- crispr
- mitochondria
- human cells
- cas9 nuclease
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
Abstract
Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для экспрессии нуклеазы Cas9 в клетках человека. Получают генетическую конструкцию pMitoCas9 с SEQ ID NО:1 на основе системы редактирования генома CRISPR/Cas9, которая кодирует нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека. Изобретение обеспечивает эффективный синтез модифицированной нуклеазы Cas9 в клетках человека. 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, терапии наследственных заболеваний и молекулярной биологии и может, в комплексе с направляющей РНК, быть использовано для элиминирования патогенных мутаций митохондриальной ДНК (мтДНК), ассоциированных с различными наследственными митохондриальными патологиями.
Известен «Способ лечения атрофии зрительного нерва различной этиологии» (патент РФ №2375019 2003 г. A61F 9/007, A61K 35/28, A61P 27/02), обеспечивающий улучшение или стойкую стабилизацию зрительных функций на небольшом временном промежутке, поскольку не направлен на коррекцию наследственного материала митохондрий.
Известно изобретение «Митохондриальные таргетные антиоксиданты» (Mitochondrially targeted antioxidants) (патент US 6331532 1998 г., C07F 9/54, C07F 9/572, C07F 9/655, A61K 31/665, A61K 31/66), которое является технологией импорта функциональных молекул в митохондрии, с использованием липофильных агентов с иммобилизованными молекулами антиоксидантов, но не дает возможности осуществлять редактирование патогенных мутаций в митохондриальной ДНК.
Известно изобретение «Система доставки нуклеиновых кислот в митохондрии» (Mitochondrial nucleic acid delivery systems) (патент CA 2678572 2008 г., A61K 48/00D2, C12N15/864A, C12N15/90B4). Недостатками данной технологии является то, что она не подразумевает доставку в митохондрии белков, поэтому не может быть использована для импорта нуклеазы Cas9 в митохондрии, следовательно, не подходит для работы с системой CRISPR/Cas9.
Из данных отечественной и зарубежной литературы, патентов и патентных заявок авторам не известно использование генетических конструкций на базе системы редактирования генома CRISPR/Cas9 для элиминирования патогенных мутаций мтДНК путем доставки нуклеазы Cas9 в митохондрии; генетическая конструкция отличается модификацией последовательности кодирующей Cas9, обеспечивающей доставку данной нуклеазы в митохондрии.
Отличительным признаком изобретения является модификация нуклеазы Cas9, обеспечивающая ее доставку в митохондрии для обеспечения универсального механизма для специфической элиминации дефектной мтДНК, несущей ту или иную мутацию. Новизну представляют нуклеотидные последовательность вектора, который кодирует модифицированный белок Cas9.
Задачей заявляемого изобретения является элиминирование митохондриальной ДНК, содержащей патогенные мутации, ассоциированные с наследственными митохондриальными патологиями.
Поставленная задача решается тем, что генетическая конструкция заявляемого изобретения, после попадания в цитоплазму клеток, обеспечивает экспрессию кодируемой ею молекулы нуклеазы Cas9, которая, используя собственный аппарат клетки, транспортируется в митохондрии, где обеспечивает элиминирование мутантных молекул мтДНК путем распознавания специфического участка последовательности посредством взаимодействия со специфической направляющей РНК и последующей рестрикцией обеих цепей мтДНК. Поскольку в митохондриях отсутствуют системы репарации двухцепочечных разрывов, такие «разрезанные» мтДНК элиминируются экзонуклеазами. Общий пул мтДНК в митохондриях восстанавливается за счет мтДНК, не имеющих мутации.
Техническим результатом изобретения является обеспечение системы элиминации мутантной мтДНК и способа ее доставки в органеллы.
Принцип функционирования предлагаемых веществ базируется на особенностях работы системы CRISPR/Cas9. Нуклеазы Cas9 взаимодействуют с особыми направляющими молекулами РНК, образуя комплекс, который специфически взаимодействует с участком двухцепочечной ДНК комплементарным участку направляющей РНК. В результате такого взаимодействия функциональный домен Cas9 вносит разрывы в обе цепи ДНК.
Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома CRISPR/Cas9, кодирующая нуклеазу Cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека, представляет собой плазмидный вектор, разработанный на базе векторов pUC19 и pTurboGFP-mito. Конструкция обеспечивает возможность трансформации компетентных клеток E. coli с последующей наработкой большого количества копий. Позволяют отбирать трансформированные колонии на селективной среде содержащей антибиотик. Обеспечивают экспрессию нуклеазы Cas9 в клетках млекопитающих и человека, а также доставку продуктов трансляции в митохондрии. Проникая в митохондрии, нуклеаза Cas9 может быть использована для специфической элиминации мтДНК, содержащей любую из описанных мутаций, благодаря взаимодействию с определенной направляющей РНК.
Белок Cas9 обладает нуклеазной активностью и имеет два активных центра, каждый их которых участвует в расщеплении одной из цепей двухцепочечной ДНК. Нуклеаза Cas9 связывается с направляющей РНК, образуя комплекс. Данный комплекс сканирует молекулу ДНК и в случае обнаружения гомологичной последовательности формирует дуплекс с участком направляющей РНК. После образования дуплекса нуклеаза Cas9 вносит разрывы в обе цепи ДНК в определенной структуре дуплекса, названной РАМ (protospacer adjacent motif).
Конструкция pMitoCas9 содержит ориджин репликации, ген устойчивости к ампициллину, промотор цитомегаловируса, митохондриальную лидерную последовательность гена СОХ8А, 3xFLAG, последовательность, кодирующую модифицированную нуклеазу Cas9, Т2А, ген TurboGFP, 3' UTR гена SOD2.
Описание способа получения генетической конструкции заявляемого изобретения.
Карта генетической конструкции pMitoCas9 была построена при помощи программного обеспечения SnapGene. Для сборки использовали фрагменты плазмид pTurboGFP-mito (# FP517, Evrogen), pUC19 и hCas9, а также синтезированные по заказу двухцепочечные фрагменты ДНК - gBloks (IDT, США). Амплификацию фрагментов ДНК проводили при помощи полимеразы Pfu Turbo Сх (Agilent Technologies, США) на амплификаторе С1000 Touch (Bio-Rad, США). Олигонуклеотидные праймеры синтезировали с помощью фосфорамидитного метода на AMS-2000 («Биоссет», Россия), очищали методом обращено-фазовой хроматографии на OPS-1000 («Биоссет») с применением реагентов компании «Glen Research» (США). Сборку плазмид осуществляли с использованием ферментативной системы USER (NEB, США), а также классических методов молекулярного клонирования. «Бесшовное» соединение фрагментов ДНК проводили путем сборки по Гибсону (NEB, США) согласно инструкции фирмы производителя.
На фиг. 1 представлена карта плазмидного вектора pMitoCas9, кодирующего нуклеазу CAS9, импортируемую в митохондрию.
На фиг. 2 представлен снимок конфокального микроскопа препарата клеток Phoenix, трансфецированных плазмидами pMitoCas9 и другими контрольными
плазмидами, включая pMitoCas9-SV40, pEGFP-N1 и pTurboGFP-mito, экспрессирующих GFP с цитоплазматической и митохондриальной локализацией.
Оценка эффективности заявляемой генетической конструкции для реализации указанного назначения проводилась на культуре клеток.
Культуру клеток линии Phoenix трансфецировали конструкцией pMitoCas9. Через 48 часов после трансфекции синтез нуклеазы Cas9 оценивали на живых клетках посредством конфокальной микроскопии по экспрессии GFP. Поскольку Cas9 и GFP разделены последовательностью Т2А, то в случае эффективной экспрессии GFP должен локализоваться в цитоплазме клетки. В качестве контроля внутриклеточной локализации GFP были использованы плазмидные векторы pTurboGFP-mito и pEGFP-N1 с митохондриальной и цитоплазматической локализацией GFP соответственно. Для прижизненного окрашивания митохондрий применяли краситель MitoTracker® Red CMXRos. Результаты прижизненной конфокальной микроскопии представлены на Фиг. 2.
Использование заявляемой генетической конструкции позволяет осуществлять терапию наследственных митохондриальных патологий.
Claims (1)
- Генетическая конструкция pMitoCas9 (SEQ ID N1) на основе системы редактирования генома CRISPR/Cas9, кодирующая нуклеазу Cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека, которая обеспечивает синтез модифицированной нуклеазы Cas9 в клетках человека.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015151558A RU2634395C1 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015151558A RU2634395C1 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2634395C1 true RU2634395C1 (ru) | 2017-10-26 |
Family
ID=60154026
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015151558A RU2634395C1 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2634395C1 (ru) |
Cited By (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9999671B2 (en) | 2013-09-06 | 2018-06-19 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery of negatively charged proteins using cationic lipids |
| US10113163B2 (en) | 2016-08-03 | 2018-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
| US10323236B2 (en) | 2011-07-22 | 2019-06-18 | President And Fellows Of Harvard College | Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity |
| US10465176B2 (en) | 2013-12-12 | 2019-11-05 | President And Fellows Of Harvard College | Cas variants for gene editing |
| RU2706298C1 (ru) * | 2018-09-14 | 2019-11-15 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | НУКЛЕАЗА PaCas9 |
| US10508298B2 (en) | 2013-08-09 | 2019-12-17 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for identifying a target site of a CAS9 nuclease |
| RU2709739C1 (ru) * | 2018-10-29 | 2019-12-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта" (БФУ им. И. Канта) | Генетические конструкции, кодирующие направляемые в митохондрии клеток человека нуклеазы Cas9-BE4-Gam и Cas9-ABE 7.10 |
| RU2710731C1 (ru) * | 2019-04-02 | 2020-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Зеленые линии" | Система редактирования генома дрожжей debaryomyces hansenii на основе crispr/cas9 |
| US10597679B2 (en) | 2013-09-06 | 2020-03-24 | President And Fellows Of Harvard College | Switchable Cas9 nucleases and uses thereof |
| US10704062B2 (en) | 2014-07-30 | 2020-07-07 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
| US10745677B2 (en) | 2016-12-23 | 2020-08-18 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection |
| US10858639B2 (en) | 2013-09-06 | 2020-12-08 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 variants and uses thereof |
| CN112251468A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-22 | 钟刚 | 一种线粒体靶向的基因编辑复合体、制备方法、应用及线粒体基因组编辑方法 |
| RU2749741C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-06-16 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Рибонуклеопротеиновый комплекс для редактирования генома человека |
| US11046948B2 (en) | 2013-08-22 | 2021-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof |
| RU2750939C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-07-06 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Рибонуклеопротеиновый комплекс для редактирования генома человека путем вставки в него интересующей последовательности |
| US11214780B2 (en) | 2015-10-23 | 2022-01-04 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleobase editors and uses thereof |
| US11268082B2 (en) | 2017-03-23 | 2022-03-08 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable DNA binding proteins |
| US11306324B2 (en) | 2016-10-14 | 2022-04-19 | President And Fellows Of Harvard College | AAV delivery of nucleobase editors |
| US11319532B2 (en) | 2017-08-30 | 2022-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
| RU2774631C1 (ru) * | 2018-06-13 | 2022-06-22 | Карибу Байосайенсиз, Инк. | Сконструированные компоненты cascade и комплексы cascade |
| US11447770B1 (en) | 2019-03-19 | 2022-09-20 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences |
| US11542509B2 (en) | 2016-08-24 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
| US11542496B2 (en) | 2017-03-10 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
| US11560566B2 (en) | 2017-05-12 | 2023-01-24 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation |
| US11661590B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-05-30 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
| US11732274B2 (en) | 2017-07-28 | 2023-08-22 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE) |
| US11795443B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
| US11898179B2 (en) | 2017-03-09 | 2024-02-13 | President And Fellows Of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
| US11912985B2 (en) | 2020-05-08 | 2024-02-27 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2678572A1 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | University Of Florida Research Foundation Inc. | Mitochondrial targeting and import of a virus to deliver a nucleic acid |
| WO2013169802A1 (en) * | 2012-05-07 | 2013-11-14 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes |
-
2015
- 2015-12-01 RU RU2015151558A patent/RU2634395C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2678572A1 (en) * | 2007-02-16 | 2008-08-21 | University Of Florida Research Foundation Inc. | Mitochondrial targeting and import of a virus to deliver a nucleic acid |
| WO2013169802A1 (en) * | 2012-05-07 | 2013-11-14 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДЖАГАРОВ Д. Э. Умные ножницы для ДНК. - "Химия и жизнь", 2014, номер 7, c.6-10. * |
Cited By (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10323236B2 (en) | 2011-07-22 | 2019-06-18 | President And Fellows Of Harvard College | Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity |
| US11920181B2 (en) | 2013-08-09 | 2024-03-05 | President And Fellows Of Harvard College | Nuclease profiling system |
| US10508298B2 (en) | 2013-08-09 | 2019-12-17 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for identifying a target site of a CAS9 nuclease |
| US10954548B2 (en) | 2013-08-09 | 2021-03-23 | President And Fellows Of Harvard College | Nuclease profiling system |
| US11046948B2 (en) | 2013-08-22 | 2021-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof |
| US9999671B2 (en) | 2013-09-06 | 2018-06-19 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery of negatively charged proteins using cationic lipids |
| US10912833B2 (en) | 2013-09-06 | 2021-02-09 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery of negatively charged proteins using cationic lipids |
| US11299755B2 (en) | 2013-09-06 | 2022-04-12 | President And Fellows Of Harvard College | Switchable CAS9 nucleases and uses thereof |
| US10858639B2 (en) | 2013-09-06 | 2020-12-08 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 variants and uses thereof |
| US10597679B2 (en) | 2013-09-06 | 2020-03-24 | President And Fellows Of Harvard College | Switchable Cas9 nucleases and uses thereof |
| US10682410B2 (en) | 2013-09-06 | 2020-06-16 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery system for functional nucleases |
| US10465176B2 (en) | 2013-12-12 | 2019-11-05 | President And Fellows Of Harvard College | Cas variants for gene editing |
| US11053481B2 (en) | 2013-12-12 | 2021-07-06 | President And Fellows Of Harvard College | Fusions of Cas9 domains and nucleic acid-editing domains |
| US11124782B2 (en) | 2013-12-12 | 2021-09-21 | President And Fellows Of Harvard College | Cas variants for gene editing |
| US10704062B2 (en) | 2014-07-30 | 2020-07-07 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
| US11578343B2 (en) | 2014-07-30 | 2023-02-14 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
| US11214780B2 (en) | 2015-10-23 | 2022-01-04 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleobase editors and uses thereof |
| US10947530B2 (en) | 2016-08-03 | 2021-03-16 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
| US10113163B2 (en) | 2016-08-03 | 2018-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
| US11702651B2 (en) | 2016-08-03 | 2023-07-18 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
| US11661590B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-05-30 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
| US11542509B2 (en) | 2016-08-24 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
| US11306324B2 (en) | 2016-10-14 | 2022-04-19 | President And Fellows Of Harvard College | AAV delivery of nucleobase editors |
| US10745677B2 (en) | 2016-12-23 | 2020-08-18 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection |
| US11820969B2 (en) | 2016-12-23 | 2023-11-21 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of CCR2 receptor gene to protect against HIV infection |
| US11898179B2 (en) | 2017-03-09 | 2024-02-13 | President And Fellows Of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
| US11542496B2 (en) | 2017-03-10 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
| US11268082B2 (en) | 2017-03-23 | 2022-03-08 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable DNA binding proteins |
| US11560566B2 (en) | 2017-05-12 | 2023-01-24 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation |
| US11732274B2 (en) | 2017-07-28 | 2023-08-22 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE) |
| US11319532B2 (en) | 2017-08-30 | 2022-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
| US11932884B2 (en) | 2017-08-30 | 2024-03-19 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
| US11795443B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
| RU2774631C1 (ru) * | 2018-06-13 | 2022-06-22 | Карибу Байосайенсиз, Инк. | Сконструированные компоненты cascade и комплексы cascade |
| RU2706298C1 (ru) * | 2018-09-14 | 2019-11-15 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | НУКЛЕАЗА PaCas9 |
| WO2020055293A1 (ru) * | 2018-09-14 | 2020-03-19 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Нуклеаза pаcas9 |
| RU2709739C1 (ru) * | 2018-10-29 | 2019-12-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта" (БФУ им. И. Канта) | Генетические конструкции, кодирующие направляемые в митохондрии клеток человека нуклеазы Cas9-BE4-Gam и Cas9-ABE 7.10 |
| US11643652B2 (en) | 2019-03-19 | 2023-05-09 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences |
| US11795452B2 (en) | 2019-03-19 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences |
| US11447770B1 (en) | 2019-03-19 | 2022-09-20 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for prime editing nucleotide sequences |
| RU2710731C1 (ru) * | 2019-04-02 | 2020-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Зеленые линии" | Система редактирования генома дрожжей debaryomyces hansenii на основе crispr/cas9 |
| US11912985B2 (en) | 2020-05-08 | 2024-02-27 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence |
| CN112251468B (zh) * | 2020-10-22 | 2023-04-04 | 钟刚 | 一种线粒体靶向的基因编辑复合体、制备方法、应用及线粒体基因组编辑方法 |
| CN112251468A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-22 | 钟刚 | 一种线粒体靶向的基因编辑复合体、制备方法、应用及线粒体基因组编辑方法 |
| RU2750939C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-07-06 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Рибонуклеопротеиновый комплекс для редактирования генома человека путем вставки в него интересующей последовательности |
| RU2749741C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-06-16 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) | Рибонуклеопротеиновый комплекс для редактирования генома человека |
| RU2800362C1 (ru) * | 2022-12-01 | 2023-07-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (Новосибирский государственный университет, НГУ) | Генетическая конструкция для экспрессии рекомбинантных дезаминаз на основе АРОВЕС1 для направленной модификации цитозиновых оснований митохондриальной ДНК |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2634395C1 (ru) | Генетическая конструкция на основе системы редактирования генома crispr/cas9, кодирующая нуклеазу cas9, специфически импортируемую в митохондрии клеток человека | |
| Yarnall et al. | Drag-and-drop genome insertion of large sequences without double-strand DNA cleavage using CRISPR-directed integrases | |
| Zuris et al. | Cationic lipid-mediated delivery of proteins enables efficient protein-based genome editing in vitro and in vivo | |
| KR102587132B1 (ko) | 암 면역요법을 위한 crispr-cpf1-관련 방법, 조성물 및 구성성분 | |
| EP3222728B1 (en) | Method for regulating gene expression using cas9 protein expressed from two vectors | |
| JP6793547B2 (ja) | 最適化機能ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系による配列操作のための系、方法および組成物 | |
| KR20190072548A (ko) | Rna-가이드된 핵산 변형 효소 및 이의 사용 방법 | |
| JP2020508685A (ja) | サプレッサーｔＲＮＡ及びデアミナーゼによる変異のＲＮＡターゲティング | |
| KR20210077732A (ko) | Nme2cas9-데아미나아제 융합 단백질에 의한 프로그램 가능한 dna 염기 편집 | |
| JP2018533959A (ja) | タイチン系ミオパチー及び他のタイチノパチーの治療のための材料及び方法 | |
| US20180216087A1 (en) | Enhanced hAT Family Transposon-Mediated Gene Transfer and Associated Compositions, Systems and Methods | |
| EP3204032A2 (en) | Efficient delivery of therapeutic molecules in vitro and in vivo | |
| KR20160089530A (ko) | Ｈｂｖ 및 바이러스 질병 및 질환을 위한 ｃｒｉｓｐｒｃａｓ 시스템 및 조성물의 전달，용도 및 치료적 적용 | |
| US11760983B2 (en) | Enhanced hAT family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods | |
| GB2617658A (en) | Class II, type V CRISPR systems | |
| Song et al. | AcrIIA5 inhibits a broad range of Cas9 orthologs by preventing DNA target cleavage | |
| US20180201912A1 (en) | Modified fncas9 protein and use thereof | |
| US11278570B2 (en) | Enhanced hAT family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods | |
| EP4279597A2 (en) | Novel, non-naturally occurring crispr-cas nucleases for genome editing | |
| KR20230003511A (ko) | 안면견갑상완 근이영양증에 대한 crispr-억제 | |
| TW202134439A (zh) | Rna導引之核酸酶及其活性片段與變體以及使用方法 | |
| RU2662994C2 (ru) | Генетическая конструкция pMitoAsCpf1, кодирующая нуклеазу AsCpf1 с детерминантной импорта в митохондрии клеток человека | |
| US20230113805A1 (en) | CRISPR-Cas NUCLEASES FROM CPR-ENRICHED METAGENOME | |
| KR20240017367A (ko) | 클래스 ii, v형 crispr 시스템 | |
| JP2024501892A (ja) | 新規の核酸誘導型ヌクレアーゼ |