DE69133545T2 - Verfahren zur Herstellung von spezifischen Bindungspaargliedern - Google Patents
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- Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung von Bestandteilen von spezifischen Bindungspaaren. Die vorliegende Erfindung betrifft auch die durch diese Verfahren hergestellten biologischen Bindemoleküle.
- Aufgrund ihrer hohen Spezifität für ein bestimmtes Antigen, stellte das Aufkommen von monoklonalen Antikörpern (Kohler, G. and Milstein C.; 1975 Nature 256: 495) einen bedeutenden technischen Durchbruch mit wichtigen sowohl wissenschaftlichen als auch wirtschaftlichen Konsequenzen dar.
- Monoklonale Antikörper werden herkömmlicherweise hergestellt, indem eine immortalisierte Säugetierzelllinie etabliert wird, die aus einer einzelnen, Immunglobuline produzierenden Zelle, die eine Form eines biologisch funktionellen Antikörpermoleküls mit einer bestimmten Spezifität sekretiert, stammt. Da die Antikörper herstellende Säugetierzelle immortalisiert ist, sind die Eigenschaften des Antikörpers von Charge zu Charge reproduzierbar. Die Schlüsseleigenschaften monoklonaler Antikörper sind deren Spezifität für ein bestimmtes Antigen und die Reproduzierbarkeit, mit der sie hergestellt werden können.
- Strukturell umfaßt der einfachste Antikörper (IgG) vier Polypeptidketten, zwei schwere (H) Ketten und zwei leichte (L) Ketten, die durch Disulfidbindungen miteinander verbunden sind (siehe
1 ). Die leichten Ketten existieren in zwei unterschiedlichen Formen, die kappa (κ) und lambda (λ) genannt werden. Jede Kette weist eine konstante Region (C) und eine variable Region (V) auf. Jede Kette ist in eine Reihe von Domänen aufgeteilt. Die leichten Ketten haben zwei Domänen, wobei eine der C-Region und die andere der V-Region entspricht. Die schweren Ketten weisen 4 Domänen auf, wobei eine der V-Region entspricht und drei Domänen (1,2 und 3) sich in der C-Region befinden. Der Antikörper hat zwei Arme (jeder Arm stellt eine Fab-Region dar), wobei jeder davon eine VL- und eine VH-Region aufweist, die miteinander assoziiert sind. Es ist dieses Paar der V-Regionen (VL und VH), das sich von einem Antikörper zu einem anderen unterscheidet (aufgrund der Aminosäuresequenzvariationen), und welche gemeinsam für die Erkennung des Antigens und die Bereitstellung einer Antigenbindestelle (ABS) verantwortlich sind. Noch detaillierter ist jede V-Region aus drei Komplementaritäts-bestimmenden Regionen (CDR) aufgebaut, die von vier Gerüst-(framework-)Regionen (FR) getrennt werden. Die CDR's sind der variabelste Teil der variablen Regionen, und sie erfüllen die entscheidende Antigenbindefunktion. Die CDR-Regionen werden aus vielen potentiellen Keimliniensequenzen über einen komplexen Vorgang erhalten, an dem Rekombination, Mutation und Selektion beteiligt sind. - Es zeigte sich, daß die Antigenbindefunktion von Fragmenten eines ganzen Antikörpers erfüllt werden kann. Beispiele für Bindefragmente sind (i) das Fab-Fragment, das aus den VL-, VH-, CL- und CH1-Domänen besteht; (ii) das Fd-Fragment, das aus den VH- und CH1-Domänen besteht; (iii) das Fv-Fragment, das aus den VL- und VH-Domänen eines einzelnen Arms eines Antikörpers besteht; (iv) das dAb-Fragment (Ward, E.S. et al., Nature 341, 544-546 (1989)), das aus einer VH-Domäne besteht; (v) isolierte CDR-Regionen; und (vi) F(ab')2-Fragmente, ein bivalentes Fragment, das zwei Fab-Fragmente umfaßt, die durch eine Disulfidbrücke bei der Hinge-("Scharnier")-Region verbunden sind.
- Obwohl die zwei Domänen des Fv-Fragments von verschiedenen Genen kodiert werden, wurde gezeigt, daß es durch rekombinante Verfahren möglich ist, einen synthetischen Linker herzustellen, der es ihnen ermöglicht, als einzelne Proteinkette hergestellt zu werden (bekannt als Einzelketten-Fv (scFv); Bird, R.E. et al., Science 242, 423-426 (1988) Huston, J.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85, 5879-5883 (1988)). Diese scFv-Fragmente werden aus Genen von Monoklonalen zusammengestellt, die zuvor isoliert wurden. In dieser Anwendung beschreiben die Anmelder ein Verfahren, um scFv-Fragmente aus VH- und VL-Domänen zusammenzufügen, die nicht Teil eines Antikörpers sind, der zuvor isoliert wurde.
- Obwohl monoklonale Antikörper, deren Fragmente und Derivate enorme Vorteile mit sich brachten, gibt es nach wie vor eine Anzahl von damit verbundenen Einschränkungen.
- Erstens sind die therapeutischen Anwendungen monoklonaler Antikörper, die von menschlichen, immortalisierten Zelllinien hergestellt werden, sehr vielversprechend für die Behandlung eines weiten Bereichs von Erkrankungen (Clinical Applications of Monoclonal Antibodies. Herausgegeben von E.S. Lennox. British Medical Bulletin 1984; veröffentlicht von Churchill Livingstone). Leider sind menschliche Zelllinien, die immortalisierte Antikörper produzieren, sehr schwierig zu erhalten und diese ergeben geringe Ausbeuten an Antikörper (etwa 1 μg/ml). Im Gegensatz dazu ergeben Nagetierzelllinien hohe Mengen an Antikörpern (etwa 100 μg/ml). Die wiederholte Verabreichung dieses fremden Nagetierproteins an Menschen kann jedoch zu schädlichen Überempfindlichkeitsreaktionen führen. Daher sind diese aus Nagetieren stammenden monoklonalen Antikörper zumeist nur eingeschränkt therapeutisch verwendbar.
- Zweitens ist es ein Schlüsselaspekt bei der Isolierung der monoklonalen Antikörper, wieviele verschiedene Klone der antikörperproduzierenden Zellen mit verschiedenen Spezifitäten praktisch etabliert und geerntet werden können, im Vergleich dazu, wieviele theoretisch geerntet werden müssen, um eine Zelle zu isolieren, die Antikörper mit den gewünschten Spezifitätseigenschaften produziert (Milstein, C., Royal Soc. Croonian Lecture, Proc. R. Soc. London, B. 239; 1-16, (1990)). Beispielweise glaubt man, daß die Anzahl der verschieden Spezifitäten, die zu jedem beliebigen Zeitpunkt durch Lymphozyten des Immunsystems der Maus exprimiert werden, etwa 107 ist und dies ist nur ein kleiner Teil der potentiellen Repertoires der Spezifitäten. Während der Isolierung einer typischen antikörperproduzierenden Zelle mit der gewünschten Spezifität kann der Untersucher jedoch nur von 103 bis 104 einzelne Spezifitäten ernten. Das Problem ist beim Menschen noch größer, da dieser etwa 1012 Lymphozytenspezifitäten aufweist und die Einschränkung besteht, daß davon lediglich 103 oder 104 geerntet werden können.
- Dieses Problem wurde in einem gewissen Ausmaß bei Labortieren durch die Verwendung von Immunisierungsmodellen vermindert. Wenn man monoklonale Antikörper mit einer Spezifität gegen ein bestimmtes Epitop herstellen möchte, wird ein Tier mit einem Immunogen, das dieses Epitop exprimiert, immunisiert. Das Tier baut dann eine Immunreaktion gegen das Epitop auf und es gibt eine Vermehrung von Lymphozyten, die Spezifität gegen dieses Epitop aufweisen. Aufgrund dieser Vermehrung der Lymphozyten mit der gewünschten Spezifität wird es einfacher, diese im Ernteverfahren aufzufinden. Dieser Ansatz ist jedoch nicht in allen Fällen erfolgreich, da möglicherweise ein geeignetes Immunogen nicht zur Verfügung steht. Weiters ist, wenn man menschliche monoklonale Antikörper herstellen möchte (z.B. zur therapeutischen Verabreichung wie oben besprochen), solch ein Ansatz praktisch oder ethisch nicht durchführbar.
- In den letzten Jahren wurden diese Probleme zum Teil durch die Anwendung von rekombinanten DNA-Verfahren zur Isolierung und Produktion von z.B. Antikörpern und Fragmenten von Antikörpern mit Antigenbindefähigkeit, in Bakterien wie z.B. E.coli in Angriff genommen.
- Dieser einfache Ersatz von immortalisierten Zellen durch Bakterienzellen als "Fabrik" vereinfacht die Verfahren zur Herstellung großer Mengen von Bindemolekülen beträchtlich. Weiters gibt ein rekombinantes Produktionssystem Raum für die Herstellung von zurechtgeschnittenen Antikörpern und Fragmenten davon. Beispielsweise ist es möglich, chimäre Moleküle mit neuen Kombinationen von Binde- und Effektorfunktionen, "humanisierte" Antikörper (z.B. variable Regionen aus Mäusen kombiniert mit konstanten Domänen aus Menschen, oder Antikörper-CDR's aus Mäusen auf menschliche FR aufgepfropft) und neue Antigenbindemoleküle zu produzieren. Weiters weist die Verwendung der Polymerasekettenreaktions-("polymerase chain reaction", PCR-)Amplifikation (Saiki, R.K., et al., Science 239, 487-491 (1988)) zur Isolierung von antikörperproduzierenden Sequenzen aus Zellen (z.B. Hybridome und B-Zellen) ein großes Potential zur Beschleunigung des Zeitmaßstabs, mit dem Spezifitäten isoliert werden können, auf. Amplifizierte VH- und VL-Gene werden direkt in Vektoren zur Expression in Bakterien oder Säugetierzellen kloniert (Orlandi, R., et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86, 3833-3837; Ward, E.S., et al., 1989, s.o.; Larrick, J.W., et al., 1989, Biochem. Biophys. Res. Commun. 160, 1250-1255; Sastry, L. et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86, 5728-5732). Von Bakterien sekretierte lösliche Antikörperfragmente werden dann auf Bindeaktivität gescreent.
- Wie das Produktionssystem, das auf immortalisierten Zellen basiert, weist jedoch auch das rekombinante Produktionssystem noch den Nachteil des zuvor diskutierten Selektionsproblems auf und vertraut daher auf die Immunisierung, um den Anteil an Zellen mit der gewünschten Spezifität zu erhöhen. Weiters können einige dieser Verfahren die Screeningprobleme verschlimmern. Beispielsweise wurden große getrennte Bibliotheken der H- und L-Ketten aus immunisierten Mäusen hergestellt und vor dem Screenen nach einem statistischen Kombinationsverfahren miteinander kombiniert (Huse, W.D. et al., 1989, Science 246, 1275-1281, WO 90/14443; WO 90/14424 und WO 90/14430). Jedoch geht dabei die in jeder Zelle enthaltene Information, nämlich die ursprüngliche Paarung einer bestimmten L-Kette mit einer bestimmten H-Kette, verloren. Dies führt zum Verlust einiger der durch die Verwendung von Immunisierungstechniken bei Tieren erlangten Vorteile. Derzeit weisen nur Bibliotheken, die aus einzelnen VH-Domänen stammen (dAbs: Ward, E.S., et al., 1989, s.o.) diesen Nachteil nicht auf. Da jedoch nicht alle Antikörper-VH-Domänen Antigen binden können, müssen mehr gescreent werden. Zusätzlich verbleibt das zu lösende Problem, viele verschiedene Spezifitäten in Prokaryoten direkt zu screenen.
- Somit besteht ein Bedarf an einem Screeningsystem, das eines oder mehrere der obigen oder andere Probleme vermindert oder beseitigt. Das ideale System würde das Ernten einer sehr großen Anzahl an Spezifitäten (z.B. 106 und mehr), ein rasches Sortieren bei jeder Klonierungsrunde und einen raschen Transfer des für das Bindemoleküls kodierenden genetischen Materials von einer Stufe des Produktionsprozesses zur nächsten Stufe gestatten.
- Die attraktivsten Kandidaten für diesem Screeningtyp wären prokaryotische Organismen (da diese schnell wachsen, einfach handzuhaben sind und da eine große Anzahl an Klonen gebildet werden kann), die an ihrer Oberfläche eine funktionelle Bindedomäne exprimieren und aufweisen, z.B. einen Antikörper, Rezeptor, Enzym usw. Im UK-Patent GB-2137631B werden Verfahren zur Co-Expression der Gene der variablen H- und L-Ketten von Immunoglobulinen in einer einzigen Wirtszelle geoffenbart. Doch das Protein wurde intrazellulär exprimiert und war unlöslich. Weiters erforderte das Protein eine ausgedehnte Verarbeitung, um Antikörperfragmente mit Bindeaktivität zu bilden, und dies führte zu einem Material mit nur einem Bruchteil der Bindeaktivität, die für Antikörperfragmente bei dieser Konzentration erwartet wurde. Es wurde bereits gezeigt, daß Antikörperfragmente mit dem geeigneten Signalpeptid durch bakterielle Membranen sekretiert werden können (Skerra, A. und Pluckthun, A. 1988, Science 240, 1041-1043) mit einem darauffolgenden Anstieg der Bindeaktivität der Antikörperfragmente. Diese Verfahren erfordern das Screenen der einzelnen Klone auf Bindeaktivität in derselben Art wie die monoklonalen Antikörper aus Mäusen.
- Es wurde jedoch nicht gezeigt, wie eine funktionelle Bindedomäne, z.B. ein Antikörper, Antikörperfragment, Rezeptor, Enzym, etc., auf der Oberfläche des Bakteriums in einer Konfiguration, die das Ernten, z.B. seiner Antigenbindefragmente, und die Selektion auf Klone mit gewünschten Eigenschaften gestattet, gehalten werden kann. Zu einem großen Teil ist dies deshalb, weil die Oberfläche des Bakteriums eine komplexe Struktur aufweist, und bei den gram-negativen Organismen gibt es eine Außenwand, was die Position weiter kompliziert. Weiters wurde nicht gezeigt, daß sich z.B. eine Antikörperdomäne korrekt faltet, wenn sie als Fusion mit einem Oberflächenprotein von Bakterien oder Bakteriophagen exprimiert wird.
- Bakteriophagen sind für diesen Screeningtyp attraktive, mit Prokaryoten verwandte Organismen. Im allgemeinen weist ihre Oberfläche eine relativ einfache Struktur auf, sie können leicht in großer Zahl gezüchtet werden, sie sind der praktischen Handhabung, die bei vielen potentiellen Massenscreenprogrammen angewendet wird, leicht zugänglich, und sie tragen die genetische Information für ihre eigene Synthese innerhalb einer kleinen einfachen Verpackung. Die Schwierigkeit bestand darin, praktisch das Problem zu lösen, wie Bakteriophagen auf diese Weise verwendet werden können. Eine Genex Corporation Patentanmeldung Nr. WO 88/06630 schlug vor, daß der Bakteriophage λ ein geeignetes Vehikel für die Expression von Antikörpermolekülen ist, aber es wurde nicht gelehrt, wie diese allgemeine Idee ausgeführt werden kann. Beispielsweise zeigt die WO 80/06630 nicht, daß irgendwelche Sequenzen (a) als Fusion mit dem V-Gen exprimiert wurden; (b) auf der Oberfläche von λ exprimiert wurden; (c) so exprimiert wurden, daß das Protein biologische Aktivität beibehält. Weiters wurde nicht gezeigt, wie man nach geeigneten Fusionen screent. Da die λ-Virionen innerhalb der Zelle angeordnet werden, würde das Fusionsprotein intrazellulär exprimiert und daher wurde angenommen, daß es inaktiv ist. Bass et al., Dezember 1990 (nach der frühesten Priorität der vorliegenden Anmeldung) beschreibt die Deletion eines Teils des Gens III des filamentösen Bakteriophagen M13 und die Insertion der Kodiersequenz des menschlichen Wachstumshormons (hGH) an der N-terminalen Stelle des Gens. Das von M13 präsentierte Wachstumshormon erwies sich als funktionell. (Bass, S., et al., Proteins, Structur, Function and Genetics (1990) 8: 309-314). Zusätzlich war immer, wenn diese Fusion exprimiert wurde, eine funktionelle Kopie des Gens III vorhanden. Eine Patentanmeldung der Protein Engineering Corporation WO 90/02809 schlägt die Insertion der Kodiersequenz des Rinderpankreastrypsininhibitors (BPTI) in das Gen VIII von M13 vor. Es zeigte sich jedoch, daß dieser Vorschlag nicht funktionierte. Beispielsweise wurde nicht gezeigt, daß die BPTI-Sequenzen als Fusionen mit dem Gen III exprimiert und an der Oberfläche von M13 gezeigt werden. Weiters lehrt dieses Dokument, daß, wenn eine Fusion mit dem Gen III durchgeführt wird, es notwendig ist, eine zweite synthetische Kopie des Gens III zu verwenden, sodaß auch unverändertes Gen III-Protein vorhanden ist. Die Ausführungsformen der vorliegenden Anmeldung tun dies nicht. In Ausführungsformen, in denen das Phagemid mit dem M13K07-Gen III-Deletions-Phagen gewonnen bzw. wiederhergestellt ("rescued") wird, ist kein unverändertes Gen III vorhanden.
- Die Anmeldung WO 90/02809 lehrt auch, daß Phagemide, die nicht das vollständige Genom von M13 enthalten und Wiederherstellung ("rescue") durch Co-Infektion mit einem Helferphagen erfordern, nicht für diese Zwecke geeignet sind, da die Co-Infektion zur Rekombination führen könnte.
- In allen Ausführungsformen, bei denen die vorliegenden Anmelder Phagemide verwendet haben, haben sie einen Helferphagen verwendet und die einzigen Sequen zen, die in den Phagemiden aus filamentösen Bakteriophagen stammen, sind der Replikationsursprung und die Gen III-Sequenzen.
- Die Anmeldung WO 90/02809 lehrt auch, daß deren Verfahren Information wie z.B. die Nucleotidsequenz des Startmoleküls und dessen dreidimensionale Struktur erforderte. Die Verwendung eines bereits existenten Repertoires an Bindemolekülen, um nach einem Bindebestandteil zu screenen, wie dies hierin offenbart wird, wurde nicht geoffenbart. Weiters diskutieren sie nicht die Bevorzugung der Vielfalt ihrer Bindemoleküle in natürlichen Variationsblöcken, wie z.B. CDR's von Immunglobulinen, um die Bildung von verbesserten Molekülen zu bevorzugen und unvorteilhafte Variationen zu vermeiden. Die Anmeldung WO 90/02809 schließt auch spezifisch die Anmeldung ihres Verfahrens zur Produktion von scFv-Molekülen aus.
- In jedem der oben besprochenen Patente (WO 88/06630 und WO 90/02809), ist das zur Präsentation vorgeschlagene Protein eine einzelne Polypeptidkette. Es gibt keine Offenbarung eines Verfahrens, das ein dimeres Molekül durch Expression eines Monomers als Fusion mit einem Capsidprotein und das andere Protein in freier Form präsentiert.
- WO 91/17271, zitiert gemäß Artikel 54(3) DPC nur in Bezug auf das beanspruchte Prioritätsdatum relevant, beschreibt die Insertion eines Proteins in ein Hüllenprotein eines Bakteriophagen und die Verwendung von Affinitätsreinigungsverfahren, um Phagenpartikel zu selektieren.
- WO92/06204, zitierbar ebenfalls gemäß Artikel 54(3) EPC und nur in Bezug auf das beanspruchte Prioritätsdatum relevant, schlägt das Präsentieren heteromerer Rezeptorproteine an der Oberfläche von Zellen vor, wobei filamentöse Bakteriophagen als bevorzugte Ausführungsform genannt werden.
- Eine weitere Offenbarung, veröffentlicht im Mai 1991 (nach dem frühesten Prioritätsdatum der vorliegenden Anmeldung) beschreibt die Insertion der Kodiersequenzen einer der zwei Ketten des Fab-Abschnitts eines Antikörpers in Gen VIII von M13 mit einer Co-Expression des anderen aus einem Plasmid. Es wurde gezeigt, daß die zwei Ketten als funktionelles Fab-Fragment auf der Oberfläche des Phagen exprimiert wurden (Kang A.S. et al., (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 88 S. 4363-4366). Es erfolgte keine Offenbarung der Insertionsstelle in Gen VIII und der Assay auf pAb-Bindeaktivität durch ELISA benützte ein Reagens, daß für die L-Kette eines Antikörpers und nicht für einen Phagen spezifisch ist. Eine weitere Offenbarung, die im März 1991 (nach dem frühesten Prioritätsdatum der vorliegenden Anmeldung) veröffentlicht wurde, beschreibt die Insertion eines Fragments des gag-Proteins des AIDS-Virus in den N-terminalen Abschnitt des Gen III des Bakteriophagen fd. Die Expression des gag-Proteins wurde durch immunologische Verfahren nachgewiesen, aber es wurde nicht gezeigt, ob das Protein in einer funktionellen Form exprimiert wurde (Tsunetsugu-Yokota Y. et al., (1991) Gene 99 S. 261-265).
- Das Problem, wie Bakteriophagen auf diese Weise zu verwenden sind, ist tatsächlich schwierig. Das Protein muß in den Phagen in einer Weise insertiert werden, daß die Integrität der Phagenhülle nicht verletzt wird, und das Protein selbst sollte funktionell sein und seine biologische Aktivität bezüglich der Antigenbindung beibehalten. Somit sollte, wenn das Protein der Wahl ein Antikörper ist, dieser sich korrekt und effizient falten und zur Antigenbindung präsentiert werden. Eine Lösung des Problems für Antikörpermoleküle und -fragmente würde auch ein allgemeines Verfahren für ein beliebiges Biomolekül, das ein Bestandteil eines spezifischen Bindepaares ist, z.B. Rezeptormoleküle und Enzyme, bereitstellen.
- Überraschenderweise konnten die Anmelder einen Bakteriophagen konstruieren, der an seiner Oberfläche ein großes, biologisch funktionelles Bindemolekül (z.B. Antikörperfragmente, Enzyme und Rezeptoren) exprimiert und präsentiert, und der intakt und infektiös bleibt. Die Anmelder nannten die Struktur, die ein Viruspartikel und ein Bindemolekül umfaßt, eine "Packung" ("package"). Wenn das Bindemolekül ein Antikörperderivat oder -fragment oder eine Domäne ist, die homolog zu einer Immunglobulindomäne ist, nennen die Anmelder die Packung einen "Phagenantikörper" (pAb).
- Es sollte jedoch, außer wenn es der Zusammenhang anders verlangt, wenn der Ausdruck Phagenantikörper allgemein verwendet wird, dieser ebenfalls so interpretiert werden, daß er sich auf eine beliebige Packung, die ein Viruspartikel und ein auf der Virusoberfläche präsentiertes, biologisch funktionelles Bindemolekül umfaßt, bezieht.
- pAbs haben einen Anwendungsbereich bei der Auswahl von Antikörpergenen, die für Antigenbindeaktivität kodieren. Beispielsweise können pAbs zum Klonieren und Auswählen von Hybridomen verwendet werden (Orlandi, R., et al., (1989) PNAS 86 S. 3833-3837), und beim Screenen von großen kombinatorischen Bibliotheken (wie z.B. jene in Huse, W.D. et al., 1989, Science 246, 1275-1281). Insbesondere können Selektionsrunden unter Verwendung von pAbs bei der Auswahl von Antikörpern mit hoher Affinität aus den letzteren Bibliotheken hilfreich sein. Es kann vorzuziehen sein, kleine Bibliotheken zu screenen, die aus Antigen-selektierten Zellen stammen (Casali, P., et al., (1986) Science 234 S. 476-479), um die ursprünglichen VH/VL-Paare, die die Fv-Region eines Antikörpers umfassen, auszuwählen. Die Verwendung von pAbs kann auch die Konstruktion von vollständig synthetischen Antikörpern gestatten. Weiters können Antikörper hergestellt werden, die einige synthetische Sequenzen, z.B. CDRs, und einige natürliche vorkommende Sequenzen aufweisen. Beispielsweise können V-Genrepertoires in vitro hergestellt werden, indem nicht erneut angeordnete V-Gene mit D- und J-Segmenten kombiniert werden. Bibliotheken von pAbs können dann durch die Bindung an Antigen ausgewählt werden, in vitro in den Antigen-bindenden Schleifen oder V-Domänengerüstregionen hypermutiert werden, und weiteren Selektions- und Mutageneserunden unterzogen werden.
- Wie bereits besprochen verlieren getrennte H- und L-Kettenbibliotheken die ursprüngliche Paarung zwischen den Ketten. Es ist schwierig, eine Bibliothek, die groß genug für eine besonders vorteilhafte Kombination von H- und L-Ketten ist, herzustellen und zu screenen.
- Beispielsweise gibt es in einer Maus etwa 107 mögliche H-Ketten und 107 mögliche L-Ketten, und um etwas wie diese Anzahl an Kombinationen zu testen, müßte man eine Bibliothek mit etwa 1014 Klonen herstellen und screenen. Dazu gab es bisher keine praktische Möglichkeit.
- Die vorliegende Erfindung bietet eine Anzahl an Ansätzen, die dieses Problem erleichtern.
- In einem ersten Ansatz (einem statistischen kombinatorischen Ansatz, siehe Beispiele 16 und 17) wird eine größtmögliche Bibliothek gebildet, die so viele wie möglich von den 1014 möglichen Kombinationen exprimiert. Durch die Expression der H- und L-Ketten an der Oberfläche des Phagen, ist es jedoch in vernünftigem Ausmaß durchführbar, die gewünschte Kombination aus allen gebildeten Kombinationen durch Affinitätsverfahren auszuwählen (siehe weiter unten zur Beschreibung der Selektionsformate).
- In einem zweiten Ansatz (von den Anmeldern dualer kombinatorischer Ansatz genannt), siehe Beispiel 22, wird zur Selektion der gewünschten Kombination eine große Bibliothek aus zwei kleineren Bibliotheken gebildet. Dies erleichtert das Problem weiter. Der Ansatz beinhaltet die Bildung von: (i) einer ersten Bibliothek von etwa 107 z.B. H-Ketten, die auf einem Bakteriophagen präsentiert werden (als Fusion mit dem durch Gen III kodierten Gen), die gegen z.B. Tetracyclin resistent ist; und (ii) einer zweiten Bibliothek mit etwa 107 z.B. L-Ketten, in der die Kodiersequenzen für diese leichten Ketten innerhalb eines Plasmidvektors, der einen Replikationsursprung für einen Bakteriophagen (ein Phagemid) enthält, die gegen z.B. Ampicillin resistent ist (d.h. ein unterschiedliches Antibiotikum) und die im periplasmatischen Raum eines Wirtsbakteriums exprimiert werden. Die erste Bibliothek wird dann verwendet, um die Bakterien, die die zweite Bibliothek enthalten, zu infizieren, um 1014 Kombinationen von H- und L-Ketten auf der Oberfläche der resultierenden Phagen im bakteriellen Überstand zu liefern.
- Der Vorteil dieses Ansatzes ist, daß zwei getrennte Bibliotheken mit etwa 107 Elementen gebildet werden, um 1014 Kombinationen herzustellen. Die Bildung einer Bibliothek mit 107 Elementen ist praktisch möglich.
- Die 1014 Kombinationen werden dann einer Selektion unterzogen (siehe weiter unten zur Beschreibung der Selektionsformate) wie dies durch die vorliegende Anmeldung geoffenbart wird. Diese Selektion gibt dann eine Phagenpopulation, die eine bestimmte Kombination von H- und L-Ketten mit der gewünschten Spezifität zeigt. Die ausgewählten Phagen enthalten jedoch nur DNA, die für einen Bestandteil des Paars der H- und L-Ketten kodiert (stammt entweder aus dem Phagen oder aus dem Phagemid). Das Probeneluat, das die Population enthält, wird dann in zwei Teile geteilt. Ein erster Teil wird auf z.B. Tetracyclinplatten gezüchtet, um jene Bakteriophagen auszuwählen, die DNA, die für an der Antigenbindung beteiligte H-Ketten kodiert, enthalten. Ein zweiter Teil wird auf z.B. Ampicillinplatten gezüchtet, um jene Bakteriophagen auszuwählen, die Phagemid-DNA, die für an der Antigenbindung beteiligte H-Ketten kodiert, enthalten. Ein Koloniensatz aus einzeln isolierten Klonen, z.B. von den Tetracyclinplatten werden dann zur Infektion von spezifischen Kolonien z.B. von den Ampicillinplatten verwendet. Dies ergibt Bakteriophagen, die spezifische Kombinationen von H- und L-Ketten exprimieren, die dann auf Antigenbindung untersucht werden können.
- In einem dritten Ansatz (von den Anmeldern hierarchischer dualer Kombinationsansatz genannt) wird eine einzelne Kolonie entweder vom H- oder L-Kettenklon, die durch Züchten auf den Antibiotikaplatten ausgewählt wurde, verwendet, um eine gesamte Bibliothek von Klonen, die für die andere Kette (H oder L) kodieren, zu infizieren. Die Selektion erfolgt wie oben beschrieben. Dies bevorzugt die Isolierung der günstigsten Kombination.
- In einem vierten Ansatz (von den Anmeldern hierarchischer Ansatz genannt, siehe Beispiele 18 und 36) werden beide Ketten in denselben Vektor kloniert. Eine der Ketten, von der man weiß, daß sie gewünschte Eigenschaften aufweist, wird fixiert. Eine Bibliothek der komplementären Kette wird in denselben Vektor insertiert. Geeignete Partner für die fixierte Kette werden nach der Präsentation auf der Oberfläche des Bakteriophagen ausgewählt.
- In einem fünften Ansatz (siehe Beispiel 38) kann, um die Chancen ursprüngliche Paare zu verbessern, die Komplexität der kombinatorischen Bibliotheken reduziert werden, indem kleine B-Populationen von B-Lymphozyten, die zur Bindung an ein gewünschtes Antigen ausgewählt wurden, verwendet werden. Die Zellen bieten z.B. mRNA oder DNA zur Herstellung von Bibliotheken von Antikörpergenen zur Präsentation auf Phagen. Dieses Verfahren kann in Kombination mit den obigen vier Ansätzen zur Selektion von Antikörperspezifitäten verwendet werden.
- Phagemide wurden bereits oben erwähnt. Die Anmelder haben realisiert und gezeigt, daß Phagemide in vielen Fällen gegenüber Phagen zur Klonierung von Antikörper vorzuziehen sind, da sie einfacher zu verwenden sind, um umfassendere Bibliotheken des Immunrepertoires herzustellen. Dies ist so, weil die Phagemid-DNA etwa 100fach effizienter als Bakteriophagen-DNA bei der Transformation von Bakterien ist (siehe Beispiel 15). Die Verwendung von Phagemiden ermöglicht es auch, die Anzahl der Gen III-Bindemolekülfusionsproteine, die auf der Oberfläche des Bakteriophagen präsentiert werden, zu variieren (siehe Beispiel 13). Beispielsweise bestimmt in einem System, das eine Bakterienzelle umfaßt, die ein für ein Gen III-Fusionsprotein kodierendes Phagemid enthält, und die mit einem Helferphagen infiziert ist, die Induktion der Expression der Gen III-Fusionsproteine in unterschiedlichem Ausmaß die Anzahl der Gen III-Fusionsproteine, die nach der Superinfektion in dem zwischen der inneren und äußeren Bakterienmembran definierten Raum vorhanden sind. Dies bestimmt das Verhältnis der Gen III-Fusionsproteine zu nativem Gen III-Protein, das der zusammengesetzte Phagen zeigt.
- Die Expression eines einzelnen Fusionsproteins pro Virion kann die Selektion von Antikörperspezifitäten auf Affinitätsbasis durch die Vermeidung des "Aviditäts"-Effekts, bei dem ein Phage, der zwei Kopien eines Antikörpers mit geringer Affinität exprimiert, dieselbe offensichtliche Afinität aufweist wie ein Phage, der eine Kopie eines Antikörpers mit höherer Affinität exprimiert. in einigen Fällen ist es jedoch wichtig, alle Gen III-Moleküle, die aus der Superinfektion von Phagemid-hältigen Zelle stammen, zu zeigen, um Fusionen zu erhalten (z.B. zur Selektion von Bindemolekülen mit niedriger Affinität oder zur Verbesserung der Sensitivität bei ELISA). Ein gangbarer Weg wäre die Superinfektion mit einem Bakteriophagen, der ein defektes Gen III enthält. Die Anmelder haben daher einen Phagen entwickelt und verwendet, bei dem Gen III deletiert ist. Dies ist völlig neu.
- Die Demonstration, daß eine funktionelle Antigenbindedomäne auf der Oberfläche eines Phagen präsentiert werden kann, hat Auswirkungen auf die Konstruktion von neuen Antikörpern. Beispielsweise könnten, wenn andere Proteindomänen an der Oberfläche des Phagen präsentiert werden können, Phagenvektoren verwendet werden, um Gene durch die Bindeeigenschaften des präsentierten Proteins zu klonieren und auszuwählen. Weiters könnten Proteinvarianten, einschließlich in die Oberfläche des Proteins eingebauter Epitopbibliotheken, hergestellt werden und leicht nach Bindeaktivitäten ausgewählt werden. Andere Proteinarchitekturen könnten als "neuartige" Antikörper dienen.
- Das Verfahren bietet die Möglichkeit, Antikörper nach ersten Prinzipien zu bauen, wobei der Vorteil des strukturellen Gerüsts, in dem sich die Antigen-bindenden Schleifen falten, genützt wird. Im allgemeinen haben diese Schleifen eine begrenzte Anzahl an Konformationen, die eine Vielfalt an Bindestellen durch alternative Schleifenkombinationen und durch verschiedene Seitenketten bilden. Jüngste Erfolge bei der Modellierung von Antigenbindestellen sind für die de novo-Gestaltung vielversprechend. In jedem Fall wird eine hochauflösende Struktur des Antigens benötigt. Der Ansatz ist jedoch zur Herstellung von z.B. katalytischen Antikörpern aussichtsreich, insbesondere für kleine Substrate. Hier können Seitenketten oder Bindestellen für prostethische Gruppen eingebracht werden, nicht nur um den Übergangszustand des Substrats selektiv zu binden, sondern auch um direkt bei der Bindungsbildung und -zerstörung teilzunehmen. Die einzige Frage ist, ob der Antikörperaufbau, der auf Bindung spezialisiert ist, der beste Ausgangspunkt zur Herstellung von Katalysa toren ist. Ursprüngliche Enzymarchitekturen, wie z.B. der Triosephosphat-Isomerase-(TIM-)Rumpf, könnten besser geeignet sein. Wie Antikörper haben auch TIM-Enzyme eine Gerüststruktur (einen Rumpf aus β-Faltblattstrukturen und α-Helices) und Schleifen, um Substrat zu binden. Viele Enzyme mit einer Vielfalt an katalytischen Eigenschaften basieren auf diesem Aufbau und die Schleifen könnten unabhängig von den Gerüsten zur Gestaltung neuer katalytischer und Bindeeigenschaften manipuliert werden. Das Phagenselektionssystem gemäß der vorliegenden Offenbarung kann verwendet werden, um nach Antigenbindeaktivitäten auszuwählen und die so ausgewählten CDR-Schleifen entweder auf einem Antikörpergerüst oder auf einem TIM-Rumpfgerüst verwendet werden. Schleifen, die auf einem z.B. TIM-Rumpfgerüst angeordnet sind, könnten weiter durch Mutagenese modifiziert und weiterer Selektion unterzogen werden. Somit ist es nicht erforderlich, nach Bindeaktivitäten mit hoher Affinität in einem einzelnen Schritt zu selektieren. Die Strategie des Immunsystems, bei der sich niedere Affinität zu hoher Affinität entwickelt scheint realistischer und kann unter Verwendung dieser Erfindung imitiert werden.
- Obwohl innerhalb dieser Anmeldung die Anmelder die Möglichkeit diskutieren, Varianten von pAbs mit höherer Affinität zu screenen, erkennen sie, daß in einigen Anwendungen, beispielsweise Chromatographie mit niederer Affinität (Ohlson, S. et al., Anal. Biochem. 169, S.204-208 (1988)), es wünschenswert sein kann, Varianten mit niederer Affinität zu isolieren.
- Die Beispiele 17 und 19 zeigen, daß die vorliegende Erfindung einen Weg bietet, Antikörper mit niedriger Affinität herzustellen (wie dies in der primären Immunantwort oder in nicht immunisierten Tieren zu sehen ist). Dies wird möglich gemacht, indem vielfache Kopien des Antikörpers auf der Phagenoberfläche in Verbindung mit dem Gen III-Protein präsentiert werden. Somit ermöglichen pAbs die Isolierung von Genen für diese Antikörper und falls nötig die Mutation, um verbesserte Antikörper bereitzustellen.
- pAbs gestatten auch die Selektion von Antikörpern mit verbesserter Stabilität. Es zeigte sich bei vielen Antikörpern, daß die Ausbeute und Stabilität verbessert werden, wenn die Antikörper bei 30°C und nicht bei 37°C exprimiert werden. Wenn pAbs bei 37°C präsentiert werden, sind nur jene zur Affinitätsselektion verfügbar, die stabil sind. Wenn Antikörper in vivo zu therapeutischen oder diagnostischen Zwecken verwendet werden, würde eine erhöhte Stabilität die Halbwertszeit der Antikörper im Blutkreislauf erhöhen.
- Es ist oft notwendig, die Vielfalt einer Population von Genen, die kloniert wurden, um deren Proteine auf Phagen zu präsentieren oder um eine einzelne Nucleotidsequenz zu mutieren, zu erhöhen. Obwohl In-vitro- oder In-vivo-Mutageneseverfahren für beide Zwecke verwendet werden können, wäre die Verwendung von Mutatorstämmen ein besonders geeignetes Verfahren. Ein Mutatorstamm ist ein Stamm, der einen genetischen Defekt aufweist, der bewirkt, daß DNA, die darin repliziert wird, bezüglich ihrer ursprünglichen DNA mutiert wird. Daher wird eine Genpopulation, wenn diese als Gen III-Fusionen in diese Stämme eingebracht wird, in ihrer Vielfalt weiter erhöht und sie kann dann, falls gewünscht, in einen nicht-Mutatorstamm zur Präsentation und Selektion transferiert werden. Beispiel 29 betrifft die Verwendung von Mutatorstämmen mit Phagenantikörpern (ein Beispiel einer In-vitro-Mutagenese und Selektion von Phagenantikörpern wird in Beispiel 35 gegeben).
- Gezielter Gen-Transfer
- Bei einer nützlichen und neuen Gruppe von Anwendungen wird das Bindeprotein auf dem Phagen genutzt, um das Phagen-Genom zu einer bestimmten Zelle oder Gruppe von Zellen zu lenken. Beispielsweise kann ein pAb, der für ein Zelloberflächenmolekül spezifisch ist, verwendet werden, um die Target-Zelle über das Oberflächenmolekül zu binden. Der Phage könnte dann entweder durch die Wirkung des Rezeptors selbst oder als Ergebnis eines anderen Ereignisses (z.B. einer elektrischen Entladung, wie bei der Elektroporationstechnik) internalisiert werden. Das Phagenom wird dann exprimiert, wenn die relevanten Steuerungssignale (für die Transkription und Translation und möglicherweise die Replikation) vorhanden sind. Das wäre besonders nützlich, wenn das Phagengenom eine Sequenz enthielte, deren Expression in der Target-Zelle erwünscht ist (gemeinsam mit der angemessenen Expressionssteuerungssequenzen). Eine nützliche Sequenz kann der Rezipientenzelle Antibiotikaresistenz verleihen oder die Zelle durch die Expression ihres Produktes markieren (beispielsweise, wenn die exprimierte Sequenz ein detektierbares Genprodukt, wie z.B. eine Luciferase ist, siehe M. White et al., Techniques 2(4), 194-201 (1990)), oder der Target-Zelle eine bestimmte Eigenschaft verleihen (z.B. wenn die Target-Zelle eine Tumorzelle ist und die neue Sequenz die Expression eines Tumorunterdrückungsgens lenkt), oder ein Antisense-Konstrukt exprimieren, das dazu bestimmt ist, ein Gen oder einen Satz von Genen in der Target-Zelle auszuschalten, oder ein Gen oder Genprodukt, das dazu bestimmt ist, in der Target-Zelle toxisch zu sein.
- Alternativ dazu kann für die Sequenz, deren Expression in der Target-Zelle gewünscht ist, auf einem Phagemid kodiert werden. Die Phagemid-DNA kann dann in einen Phagen aufgenommen werden, auf dem ein Antikörper freiliegt, der für einen Zelloberflächen-Rezeptor spezifisch ist. Beispielsweise kann die Aufnahme durch Superinfektion von Bakterien erfolgen, die das Phagemid enthalten, mit einem Helfer-Phagen, dessen Genom für das Antikörperfragment kodiert, das für die Target-Zelle spezifisch ist. Die Packung wird dann verwendet, um das Phagemid zur Target-Zelle zu lenken.
- Diese Technik des "gezielten Gentransfers" findet in der Forschung und auch in der Therapie und Diagnose vielfach Anwendung. Beispielsweise zielt Gentherapie oft darauf ab, das Ersatzgen zu einem spezifischen Zelltyp zu lenken, der Defizienz bezüglich dessen Aktivität aufweist. Targetting-pAbs stellen ein Mittel dar, das zu erreichen.
- In der Diagnose ist ein Phage, der für bestimmte Bakterien oder Gruppen von Bakterien spezifisch ist, verwendet worden, um Markergene, beispielsweise Luciferase, zum bakteriellen Wirt zu lenken (siehe beispielsweise S. Ulitzer und J. Kuhn, EPA 85303913.9). Wenn der Wirtsbereich des Phagen angemessen ist, werden nur jene Bakterien, auf die getestet wird, vom Phagen infiziert, exprimieren das Luciferasegen und werden durch das Licht detektiert, das sie aussenden. Dieses System ist eingesetzt worden, um das Vorhandensein von Salmonella zu detektieren. Ein Hauptproblem bei diesem Ansatz ist die anfängliche Isolierung eines Bakteriophagen mit dem korrekten Wirtsbereich und dann das Klonieren einer Luciferasegenkassette in diesen Phagen, so daß es funktionell ist. Das pAb-System ermöglicht es, die Luciferasekassette in ein gut charakterisiertes System (filamentösen Phagen) zu klonieren, und ermöglicht die einfache Selektion eines angemessenen Wirtsbereichs durch Modifikation der Spezifität für Antikörper (oder ein anderes Bindemolekül, für die der pAb kodiert.
- Den Anmeldern der vorliegenden Erfindung ist es auch gelungen, neue Selektionssysteme und Testformate zu entwickeln, die auf den einzigartigen Eigenschaften dieser pAbs basieren.
- TERMINOLOGIE
- Viel der in diesem Abschnitt diskutierten Terminologie wurde bereits, sofern passend, im Text erwähnt.
- Spezifisches Bindepaar
- Dies beschreibt ein Paar von Molekülen (wobei jedes Bestandteil eines spezifischen Bindepaares ist), die aus natürlich vorkommenden erhalten oder synthetisch hergestellt wurden. Eines Teil des Molekülpaars weist eine Fläche oder eine Höhlung an seiner Oberfläche auf, die sich spezifisch an eine bestimmte räumliche und polare Organisation des anderen Moleküls bindet und daher als komplementär mit dieser definiert ist, sodaß das Paar die Eigenschaft besitzt, sich spezifisch aneinander zu binden. Beispiele für Typen von spezifischen Bindepaaren sind Antigen-Antikörper, Biotin-Avidin, Hormon-Hormonrezeptor, Rezeptor-Ligand, Enzym-Substrat, IgG-Protein A.
- Multimeres Element
- Dieser Ausdruck beschreibt ein erstes Polypeptid, das sich mit zumindest einem zweiten Polypeptid assoziiert, wenn die Polypeptide in freier Form und/oder an der Oberfläche eines Substrats exprimiert werden. Das Substrat kann durch einen Bakteriophagen bereitgestellt werden. Wenn zwei assoziierte Polypeptide vorhanden sind, ist der assoziierte Polypeptidkomplex ein Dimer, wenn drei vorhanden sind, ein Trimer usw. Das Dimer, Trimer, Multimer usw. oder das multimere Element kann ein Element eines spezifischen Bindepaares umfassen.
- Beispiele für multimere Elemente sind schwere Domänen auf Basis eines Immunglobulinmoleküls, leichte Domänen auf Basis eines Immunglobulinmoleküls, T-Zellen-Rezeptor-Subeinheiten.
- Packung
- Dies beschreibt ein filamentöses Bakteriophagen-Teilchen, in dem das Teilchen einen Bestandteil eines spezifischen Bindungspaares an seiner Oberfläche präsentiert. Die Packung kann ein Bakteriophage sein, der an seiner Oberfläche eine Antigenbindedomäne präsentiert. Dieser Typ einer Packung wurde Phagenantikörper (pAb) genannt.
- Antikörper
- Dies beschreibt entweder ein natürliches oder ein teilweise oder gänzlich synthetisch hergestelltes Immunglobulin. Der Ausdruck umfaßt auch ein beliebiges Protein mit einer Bindedomäne, die mit einer Immunglobulinbindedomäne homolog ist. Diese Proteine können aus natürlichen Quellen stammen, oder teilweise oder gänzlich synthetisch hergestellt sein. Beispiele für Antikörper sind die Immunglobulinisotypen und die Fab-, F(ab1)2-, scFv-, Fv-, dAb-, Fd-Fragmente.
- Immunglobulin-Überfamilie
- Dies beschreibt eine Familie von Polypeptiden, deren Mitglieder zumindest eine Domäne mit einer Struktur, die mit der der variablen oder konstanten Domäne von Immunglobulinmolekülen verwandt ist, aufweisen. Die Domäne enthält zwei β-Faltblattstrukturen und üblicherweise eine konservierte Disulfidbindung (siehe A.F. Williams und A.N. Barclay 1988 Ann. Rev. Immunol. 6, 381-405).
- Beispiele für die Mitglieder einer Immunglobulinüberfamilie sind CD4, aus Blutplättchen stammender Wachstumsfaktorrezeptor (PDGFR), intrazelluläres Adhäsionsmolekül (ICAM). Außer wenn der Zusammenhang dies anders erfordert, umfaßt der Hinweis auf Immunglobuline und immunglobulinhomologe in dieser Anmeldung Mitglieder der Immunglobulinüberfamilie und Homologe davon.
- Homologe
- Dieser Ausdruck bezeichnet Polypeptide mit denselben oder konservierten Resten an einer entsprechenden Position in deren Primär-, Sekundär- oder Tertiärstruktur. Der Begriff umfaßt auch zwei oder mehr Nucleotidsequenzen, die für die homologen Polypeptide kodieren.
- Beispiele für homologe Peptide sind die Immunglobulinisotypen.
- Funktionell
- Bezüglich eines sbp-Bestandteils, der an der Oberfläche eines filamentösen Bakteriophagenpartikels präsentiert wird, bedeutet dies, daß der sbp-Bestandteil in einer gefalteten Form, in der seine spezifische Bindedomäne für seinen komplementären sbp-Bestandteil die gleiche oder fast analog zu ihrer Nativkonfiguration ist, präsentiert wird, wodurch dieser ähnliche Spezifität bezüglich des komplementären sbp-Bestandteils aufweist. Diesbezüglich unterscheidet sich dieser von den Peptiden von Smith et al., s.o., die keine definierte gefaltete Konfiguration aufweisen und eine Vielzahl an Konfigurationen annehmen können, die durch die komplementären Bestandteile, mit denen sie in Kontakt gebracht werden können, bestimmt sind.
- Genetisch vielfältige Population
- In Verbindung mit sbp-Bestandteilen oder Polypeptidkomponenten davon, bezieht sich dies nicht nur auf die Vielfalt, die in der natürlichen Population von Zellen oder Mikroorganismen vorkommen kann, sondern auch auf die Vielfalt, die durch künstliche Mutation in vitro oder in vivo gebildet wurde.
- Die Mutation in vitro kann z.B. statistische Mutagenese unter Verwendung von Oligonucleotiden mit statistischen Mutationen der Sequenz, die man variieren möchte, umfassen. Bei der In-vivo-Mutagenese können z.B. Mutatorstämme von Wirtsmikroorganismen verwendet werden, um die DNA zu erhalten (siehe Beispiel 38 unten).
- Domäne
- Eine Domäne ist ein Teil eines Proteins, der in sich selbst gefaltet ist und unabhängig von den anderen Teilen des gleichen Proteins und unabhängig vom komplementären Bindebestandteil ist.
- Gefaltete Einheit
- Dies ist eine spezifische Kombination einer α-Helix- und/oder β-Faltblatt- und/oder β-Schleifenstruktur. Domänen und gefaltete Einheiten enthalten Strukturen, die Aminosäuren, welche in der Primärstruktur nicht benachbart sind, zusammenbringen.
- Freie Form
- Dies beschreibt den Zustand eines Polypeptids, das nicht von einer replizierbaren, genetischen Präsentations-Packung präsentiert wird.
- Bedingt defekt
- Dies beschreibt ein Gen, das ein bestimmtes Polypeptid unter einer Bedingungsanordnung nicht exprimiert, aber unter einer anderen doch. Ein Beispiel ist ein Gen, das eine "Amber"-Mutation aufweist, die in nicht-supprimierenden bzw. supprimierenden Wirten exprimiert wird.
- Alternativ dazu kann ein Gen ein Protein exprimieren, das unter einer Bedingungsanordung defekt ist, aber unter einer anderen nicht. Ein Beispiel ist ein Gen mit einer temperatursensitiven Mutation.
- Unterdrückbares Translationsstopcodon
- Dies beschreibt ein Codon, das die Translation von Nucleotidsequenzen stromabwärts von dem Codon unter einer Bedingungsanordnung erlaubt, aber unter einer anderen Bedingungsanordnung die Translation an diesem Codon endet. Beispiele für unterdrückbare Translationsstopcodons sind die "Amber"-, "Ocker"- und "Opal"-Codons.
- Mutatorstamm
- Dies ist eine Wirtszelle, die einen genetischen Defekt aufweist, der bewirkt, daß darin replizierte DNA bezüglich ihrer ursprünglichen DNA mutiert ist. Beispiele für Mutatorstämme sind NR9046mutD5 und NR9046 mut T1 (siehe Beispiel 38).
- Helferphage
- Dies ist ein Phage, der verwendet wird, um Zellen zu infizieren, die ein defektes Phagengenom enthalten, und der eine Beseitigung des Defekts bewirkt. Das defekte Phagengenom kann ein Phagemid oder ein Phage, in dem Gensequenzen für einige Funktionen entfernt wurden, sein. Beispiele für Helferphagen sind M13K07, M13K07 Gen III Nr.3; und Phagen, die ein mit einem Capsidprotein fusioniertes Bindeprotein präsentieren oder dafür kodieren.
- Vektor
- Dies ist ein DNA-Molekül, das in einem Wirtsorganismus, in den ein Gen insertiert wurde, um ein rekombinantes DNA-Molekül zu konstruieren, repliziert werden kann.
- Phagenvektor
- Dies ist ein Vektor, der aus der Modifikation eines Phagengenoms stammt und einen Replikationsursprung für einen Bakteriophagen, aber nicht für ein Plasmid, enthält.
- Phagemidvektor
- Dies ist ein Vektor, der aus der Modifikation eines Plasmidgenoms stammt und einen Replikationsursprung für einen Bakteriophagen sowie den Plasmidreplikationsursprung enthält.
- Sekretiert
- Dies beschreibt ein Bakteriophagenteilchen oder ein Molekül, das mit einem auf dem Bakteriophagenteilchen präsentierten Bestandteil eines sbp verbunden ist, worin der sbp-Bestandteil und/oder das Molekül gefaltet wurden, und die Packung außerhalb des zellulären Cytosols zusammengesetzt wurde.
- Repertoire an neugeordneten Immunglobulingenen
- Eine Sammlung von natürlich vorkommenden Nucleotiden, z.B. DNA-Sequenzen, die für exprimierte Immunglobulingene in einem Tier kodieren. Die Sequenzen werden durch eine In-vivo-Neuordnung von z.B. V-, D-, und J-Segmenten für die H-Ketten und V- und J-Segmenten für die L-Ketten gebildet. Alternativ dazu können die Sequenzen aus einer in vitro immunisierten Zelllinie, in der die Neuordnung als Antwort auf die Immunisierung intrazellulär erfolgte, gebildet werden.
- Bibliothek
- Eine Sammlung von Nucleotid-, z.B. DNA-Sequenzen, in Klonen.
- Repertoire an künstlich neugeordneten Immunglobulingenen
- Eine Sammlung von Nucleotid-, z.B. DNA-Sequenzen, die zur Gänze oder zum Teil aus einer Quelle stammen, die eine andere ist als die der neugeordneten Immunglobulinsequenzen aus einem Tier. Dies kann z.B. DNA-Sequenzen umfassen, die durch die Kombination von nicht neugeordneten V-Segmenten mit D- und J-Segmenten für VH-Domänen kodieren, und DNA-Sequenzen, die durch die Kombination von V- und J-Segmenten für VL-Domänen kodieren.
- Ein Teil der gesamten DNA-Sequenzen kann aus der Oligonucleotidsynthese stammen.
- Sekretionsleaderpeptid
- Dies ist eine Sequenz von Aminosäuren, die mit dem N-terminalen Ende eines Polypeptids verbunden ist und die die Bewegung des Polypeptids aus dem Cytosol hinaus lenkt.
- Eluens bzw. Elutionsmittel
- Dies ist eine Lösung, die verwendet wird, um die Verbindung zwischen zwei Molekülen aufzubrechen. Die Bindung kann eine nicht kovalente oder kovalente Bindungen) sein. Die zwei Moleküle können Bestandteile eines sbp sein.
- Derivat
- Dies ist eine Substanz, die von einem Polypeptid abstammt, welches von der innerhalb eines ausgewählten Bakteriophagenteilchens befindliche DNA kodiert wird. Das Derivatpolypeptid kann sich vom kodierten Polypeptid durch die Addition, Deletion, Substitution oder Insertion von Aminosäuren oder durch die Verbindung von anderen Molekülen mit dem kodierten Polypeptid unterscheiden. Diese Änderungen können auf der Nucleotid- oder der Proteinebene erfolgen. Z.B. kann das kodierte Polypeptid ein Fab-Fragment sein, das dann mit einem Fc-Teil aus einer anderen Quelle verbunden wird. Alternativ dazu können auch Marker wie z.B. Enzyme, Fluoreszenzgruppen usw. mit z.B. Fab-, scFv-Fragmenten verbunden werden.
- Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Herstellung eines filamentösen Bakteriophagenpartikels bereit, das auf seiner Oberfläche ein Bindemolekül präsentiert, das für ein bestimmtes Target-Epitop oder Antigen spezifisch ist, wobei das Verfahren folgende Schritte umfaßt:
das Erzeugen einer Population filamentöser Bakteriophagen-Teilchen, auf deren Oberfläche eine Population von Bindungsmolekülen präsentiert wird, die eine Bandbreite von Bindungsspezifitäten aufweisen, worin die Bindungsmoleküle Fab-Antikörpermoleküle sind, die sich an das Target-Epitop oder -Antigen binden können, und worin jedes filamentöse Bakteriophagen-Teilchen einen Phagenvektor enthält, der eine Nucleinsäure umfaßt, die für das von der Nucleinsäure exprimierte und vom Teilchen an seiner Oberfläche präsentierte Bindungsmolekül kodiert, worin die für die Bindungsmoleküle in der Population kodierende Nucleinsäure durch Kombinieren von nicht neugeordneten V-Segmenten mit D- und J-Segmenten in vitro bereitgestellt oder durch In-vitro-Mutagenese einer bestehenden Antikörper-Kodiersequenz abgeleitet wird und/oder worin die schwere Kette jedes Fab-Antikörpermoleküls, das auf der Oberfläche eines Teilchens präsentiert wird, als Fusion mit einem Gen-III-Protein des filamentösen Bakteriophagen exprimiert wird;
das Selektieren bezüglich eines filamentösen Bakteriophagen-Teilchens, auf dem ein Bindungsmolekül mit einer gewünschten Spezifität präsentiert wird, durch Kontaktieren der Population filamentöser Bakteriophagen-Teilchen mit einem Target-Epitop oder -Antigen, so daß einzelne Bindungsmoleküle, die auf den filamentösen Bakteriophagen-Teilchen präsentiert werden, sich mit der gewünschten Spezifität an das Target-Epitop oder -Antigen binden. - Das Verfahren kann außerdem (i) das Abtrennen von gebundenen filamentösen Bakteriophagen-Teilchen vom Target-Epitop oder -Antigen umfassen. Weiters kann das Verfahren (ii) das Gewinnen von abgetrennten filamentösen Bakteriophagen-Teilchen umfassen, die ein Bindemolekül mit einer gewünschten Spezifität präsentieren. Weiters kann das Verfahren (iii) das Isolieren von Nucleinsäure, die für das Bindemolekül kodiert, aus filamentösen Bakteriophagen-Teilchen, das Durchführen von Antigenbindungsschleifen-Hypermutation an der Nucleinsäure, um Nucleinsäure bereitzustellen, die für eine weitere Population von Bindemolekülen kodiert, die anschließend weiteren Selektions- und Mutageneserunden unterzogen werden, die eine weitere Durchführung des im obigen Absatz dargelegten Verfahrens umfassen, umfassen. Außerdem stellt die vorliegende Erfindung auch ein Verfahren zur Herstellung eines Bindemoleküls bereit, das für ein bestimmtes Target-Epitop oder -Antigen spezifisch ist, wobei das Verfahren umfaßt:
die Durchführung des Verfahrens, wie im obigen Absatz dargelegt, und die obigen Schritte (i) und (ii) und gegebenenfalls (iii) umfassend;
das Isolieren von so gewonnener Nucleinsäure, die für das Bindemolekül kodiert, von abgetrennten filamentösen Bakteriophagen-Teilchen;
das Insertieren von Nucleinsäure, die für das Bindemolekül kodiert, oder eines Fragments oder Derivats davon mit Bindungsspezifität für das Target-Epitop oder -Antigen in einem rekombinanten System; und das Produzieren des Bindemoleküls oder Fragments oder Derivats davon mit Bindespezifität für das Target-Epitop oder -Antigen in einem rekombinanten System, das von den filamentösen Bakteriophagen-Teilchen getrennt ist. - Die vorliegende Erfindung stellt weiters ein filamentöses Bakteriophagen-Teilchen bereit, das auf seiner Oberfläche ein Bindungsmolekül präsentiert, das ein Fab-Antikörpermolekül ist, das eine Bindedomäne umfaßt, die in der Lage ist, an ein Target-Epitop oder -Antigen zu binden, worin das Teilchen einen Phagenvektor enthält, der Nucleinsäure umfaßt, die für das aus der Nucleinsäure exprimierte und vom Teilchen an seiner Oberfläche präsentierte Bindungsmolekül kodiert, worin die schwere Kette jedes Fab-Antikörpermoleküls, das von einem Teilchen an seiner Oberfläche präsentiert wird, als Fusion mit einem Gen-III-Protein des filamentösen Bakteriophagen exprimiert wird. Außerdem wird eine Population solcher filamentöser Bakteriophagen-Teilchen bereitgestellt, die eine Population der Bindungsmoleküle mit einer Bandbreite von Bindungsspezifitäten präsentiert.
- Das Capsidprotein kann im Helferphagen fehlen, defekt oder bedingt defekt sein.
- Die Wirtszelle kann ein Mutatorstamm sein, der genetische Vielfalt in die sbp-Element-Nucleinsäure einführt.
- Der Wirt kann ein Bakterium sein und die Komponente des filamentösen Bakteriophagenteilchens ein Capsidprotein für den Bakteriophagen sein. Der Phage kann ausgewählt sein aus den Klasse I-Phagen fd, M13, f1, Ifl, Ike, ZJ/Z, Ff und den Klasse II-Phagen Xf, Pf1 und Pf3. Der Phage kann fd sein oder ein Derivat von fd. Das Derivat kann gegen Tetracyclin resistent sein. Der sbp-Bestandteil oder die Polypeptidkette davon kann in die N-terminale Region des reifen Capsidproteins stromabwärts von der Sekretionsleadersequenz insertiert sein. Die Sequenz kann nach der Aminosäure +1 des reifen Proteins insertiert sein. Die Insertionsstelle kann von kurzen Nucleotidsequenzen flankiert sein, die den Sequenzen entsprechen, die an jedem Ende der zu insertierenden Nucleinsäure vorkommen. Wenn z.B. die Proteindomäne eine Immunglobulindomäne ist, kann die Insertionsstelle im Phagen von Nucleotidsequenzen flankiert sein, die für die ersten fünf Aminosäuren und die letzten fünf Aminosäuren der Ig-Domäne kodieren. Solche flankierende Nucleotidsequenzen sind in
4(2) B und C gezeigt, worin die die Stelle flankierenden Nucleotidsequenzen für die Aminosäuresequenzen QVQLQ und VTVSS, die an den beiden Enden der VH-Domäne auftreten, oder für QVQLQ und LEIKR, die an den beiden Enden der Fv-(VH + VL kombiniert)-Domäne auftreten, kodieren. Jede dieser Sequenzen, die die Insertionsstelle flankieren, kann eine geeignete Spaltungsstelle einschließen, wie in4 gezeigt. - Alternativ dazu können die in
4(2) B und C gezeigten und oben beschriebenen flankierenden Nucleotidsequenzen verwendet werden, um die Insertionsstelle für eine beliebige zu insertierende Nucleinsäure zu flankieren, ob diese Nucleinsäure ein Immunglobulin kodiert oder nicht. - Der Wirt kann E.coli sein.
- Die für ein sbp-Bestandteilpolypeptid kodierende Nucleinsäure kann stromab durch ein unterdrückbares Translationsstopcodon mit einem viralen Capsidprotein verbunden sein.
- Bei einem Verfahren zur Herstellung eines Bindemoleküls wie oben definiert, wird die Gensequenz, die für das Bindemolekül mit der gewünschten Spezifität kodiert, von einer allgemeinen Population von filmalentösem Bakteriophagen-Teilchen mit einem Bereich an Spezifitäten durch die Tatsache der Bindung an ein spezifisches Ziel (z.B. ein Antigen oder Epitop) abgetrennt. Somit kann das durch diese Expression gebildete filamentöse Bakteriophagen-Teilchen ausgewählt oder gescreent werden, um einen einzelnen sbp-Bestandteil oder eine ausgewählte Mischpopulation der sbp-Bestandteile zu bieten, die in deren jeweiligen Partikeln mit Nucleinsäure, die für diesen sbp-Bestandteil oder eine Polypeptidkette davon kodiert, verbunden sind. Die Partikel können durch Affinität zu einem zu diesem sbp-Bestandteil komplementären Bestandteil ausgewählt werden.
- Beliebige, an diesen zweiten Bestandteil gebundene Teilchen können durch Waschen mit einem Eluens gewonnen werden. Die Waschbedingungen können variiert werden, um Teilchen mit verschiedenen Bindeaffinitäten für das Epitop zu erhalten. Alternativ dazu kann, um z.B. Partikel mit hoher Affinität zu erhalten, der komplementäre Bestandteil (z.B. ein Epitop) der Population von Teilchen (z.B. pAbs), die bereits an einen Bindebestandteil gebunden sind, präsentiert werden, wobei in diesem Fall pAbs mit höherer Affinität für das Epitop die bereits gebundenen Bindebestandteile verdrängen. Somit kann das Eluens ein Molekül enthalten, das mit dem Teilchen um den komplementären sbp-Bestandteil konkurriert. Das Teilchen kann dem komplementären sbp-Bestandteil in Gegenwart eines Moleküls, das mit der Packung um die Bindung an den komplementären sbp-Bestandteil konkurriert, zugegeben werden. Nucleinsäure, die von einem ausgewählten oder gescreenten Bakteriophagenteilchen stammt, kann verwendet werden, um den sbp-Bestandteil oder ein Fragment oder Derivat davon in einem rekombinanten Wirtsorganismus zu exprimieren. Nucleinsäure aus einem oder mehreren Teilchen kann genommen und dazu verwendet werden, Nucleinsäure in einem weiteren Verfahren bereitzustellen, um einzelne sbp-Bestandteile oder eine Mischpopulation von sbp-Bestandteilen, oder dafür kodierende Nucleinsäure zu erhalten. Das Expressionsendprodukt kann modifiziert werden, um ein Derivat davon herzustellen.
- Das Expressionsendprodukt oder ein Derivat davon kann verwendet werden, um ein therapeutisches oder prophylaktisches Medikament oder ein Diagnoseprodukt herzustellen.
- Gemäß vorliegender Erfindung kann ein Helfer-Phage eingesetzt werden, dessen Genom Nucleinsäure fehlt, die für eines seiner Capsidproteine kodiert, oder dessen dafür kodierende Nucleinsäure bedingt defekt ist, oder die für das Capsidprotein in defekter oder bedingt defekter Form kodiert.
- Gemäß vorliegender Erfindung kann eine bakterielle Wirtszelle eingesetzt werden, die ein filamentöses Phagengenom enthält, das in Bezug auf ein Capsidprotein defekt ist und worin die Wirtszelle ein Capsidprotein exprimieren kann, das diesen De fekt komplementiert, so daß infektiöse Phagenteilchen erhalten werden können. Das komplementierende Capsidprotein kann in der Wirtszelle von einem anderen Vektor exprimiert werden, der darin enthalten ist. Das defekte Capsidprotein kann ein Gen III eines Phagen fd oder sein Gegenstück in einem anderen filamentösen Phagen sein.
- Für die vorliegende Erfindung kann rekombinantes E.coli TG1 M13KO7 gIII Nr. 3 (NCTC 12478) eingesetzt werden.
- Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Herstellung von Bindemolekülen, Fragmenten und Derivaten davon bereit. Die Derivate können Elemente des spezifischen Bindungspaares umfassen, die an ein anderes Molekül, wie z.B. ein Enzym oder einen Fc-Schwanz, fusioniert sind.
- Für die vorliegende Erfindung können Sets zur Durchführung ihrer Verfahren eingesetzt werden. Die Sets umfassen die erforderlichen Vektoren. Ein derartiger Vektor weist typischerweise einen Replikationsursprung für einsträngigen Bakteriophagen auf und enthält entweder die sbp-Element-Nucleinsäure oder weist eine Restriktionsstelle für seine Insertion in die 5'-Endregion der reifen Kodierungssequenz eines Phagencapsidproteins auf und mit einer Sekretionsleader-Kodierungssequenz stromauf von dem Ort, der eine Fusion des exogenen Capsidoprotein-Polypeptids zum periplasmatischen Raum lenkt.
- Die Restriktionsstellen in den Vektoren sind vorzugsweise jene von Enzymen, die nur selten in Proteinkodierungssequenzen schneiden.
- Das Set umfaßt vorzugsweise einen Phagemidvektor, der die obigen Eigenschaften aufweisen kann und sbp-Element-Nucleinsäure für die Expression des kodierten Polypeptids in freier Form enthalten oder eine Insertionsstelle dafür aufweisen kann.
- Das Set enthält auch Hilfskomponenten, die zur Durchführung des Verfahrens erforderlich sind, wobei die Beschaffenheit derartiger Komponenten natürlich von dem im Speziellen eingesetzten Verfahren abhängt.
- Nützliche Hilfskomponenten können Helfer-Phagen, PCR-Primer sowie Puffer und Enzyme verschiedener Art sein.
- PCR-Primer und damit verbundene Reagentien zur Verwendung, wenn die sbp-Bestandteile Antikörper sind, können die folgenden Eigenschaften aufweisen:
- (i) Primer mit Homologie zum 5'-Ende des Sense- oder Antisense-Strangs der Sequenzen, die für Antikörperdomänen kodieren; und
- (ii) Primer einschließlich der tag-Sequenzen 5' von diesen homologen Sequenzen, die Restriktionsstellen beinhalten, um eine Insertion in Vektoren zu ermöglichen; zusammen mit Sequenzen, die das Zusammensetzen der amplifizierten VH- und VL-Regionen ermöglichen, um die Expression als Fv-, scFv-, oder Fab-Fragmente zu ermöglichen.
- Puffer und Enzyme werden typischerweise gemäß den hierin beschriebenen Strategien verwendet, um die Herstellung der Nucleotidsequenzen, die für die von neugeordneten oder nicht neugeordneten Immunglobulingenen erhaltenen Fv-, scFv- oder Fab-Fragmente kodieren, zu ermöglichen.
- Die Anmelder haben die filamentösen F-spezifischen Bakteriophagen als Beispiel für den Phagentyp ausgewählt, der als Vehikel für die Präsentation von Bindemolekülen, z.B. Antikörpern und Antikörperfragmente und Derivate davon, auf deren Oberfläche dienen könnte und die darauffolgende Selektion und Manipulation erleichtern könnte.
- Die F-spezifischen Phagen (z.B. f1, fd und M13) haben eine Methode zur Vermehrung entwickelt, das die Wirtszelle nicht tötet, und sie werden üblicherweise als Vehikel für rekombinante DNA verwendet (Kornberg, A., DNA Replication, W.H. Freeman and Co., San Francisco, 1980). Das einzelsträngige DNA-Genom (etwa 6,4 Kb) von fd wird durch die bakterielle Membran extrudiert, wo es Capsid-Untereinheiten absondert, um reife Virionen zu bilden. Diese Virionen weisen eine Durchmesser von 6 nm und eine Länge von 1 μm auf und jedes enthält etwa 2800 Moleküle des Haupthüllenproteins, das vom viralen Gen VIII kodiert wird, und 4 Moleküle des Adsorptionsmolekül-Gen III-Proteins (g3p), wobei sich das letztere an einem Ende des Virions befindet. Diese Struktur wurde von Webster et al., 1978 in The Single Stranded DNA Phages, 557-569, Cold Spring Harbour Press erläutert. Das Gen III-Produkt ist bei der Bindung des Phagen an den bakteriellen F-Pilus beteiligt.
- Obwohl diese Phagen ihre Wirte während der normalen Replikation nicht töten, kann die Zerstörung einiger ihrer Gene zum Zelltod führen (Kornberg, A., 1980, s.o.). Dies beschränkt zum Teil ihre Verwendung. Die Anmelder haben erkannt, daß das Gen III des Phagen fd eine attraktive Möglichkeit zur Insertion von fremden, biologisch aktiven Sequenzen ist. Es gibt jedoch auch andere ausssichtsreiche Sequenzen, einschließlich z.B. das Gen VIII und das Gen VI.
- Das Protein selbst ist nur ein Nebenbestandteil der Phagenhülle und die Unterbrechung des Gens führt nicht zum Zelltod (Smith, G. 1988 Virology 167: 156-165). Weiters ist es möglich, einige Fremdsequenzen (mit keiner biologischen Funktion) an verschiedenen Positionen innerhalb dieses Gens zu insertieren (Smith, G. 1985 Science 228: 1315-1317., Parmley, S.F. and Smith, G.P. Gene 73 (1988) S.305-318). und de la Cruz, V.F., et al., 1988, J. Biol. Chem., 263: 4318-4322). Smith et al., beschrieben die Präsentation von Peptiden an der äußeren Oberfäche des Phagen, aber die Präsentation von Proteindomänen wurde von ihnen nicht beschrieben. Peptide können einen Bereich von Strukturen annehmen, die sich unterscheiden können, wenn sie sich frei in Lösung befinden gegenüber dem Fall, wenn sie an z.B. einen Antikörper gebunden sind oder wenn sie einen Teil eines Proteins bilden (Stanfield, R.I. et al., (1990), Science 248, S.712-719). Proteine haben im allgemeinen eine wohl definierte Tertiärstruktur und erfüllen ihre biologische Funktion nur, wenn sie diese Struktur annehmen. Beispielsweise wurde die Struktur des Antikörpers D1.3 in freier Form und in an Antigen gebundener Form aufgeklärt (Bhat, T.N. et al., (1990) Nature 347, S.483-485). Die Grundstruktur des Proteins ist in jedem Fall mit nur geringfügigen Variationen rund um die Bindungsstelle für das Antigen identisch. Andere Proteine zeigen bei der Bindung eines Liganden deutlichere Konformationsänderungen, beispielsweise die Enzyme Hexokinase und Pyruvat-Dehydrogenase während ihrem katalytischen Zyklus, aber sie behalten ihr Gesamtfaltmuster bei. Diese strukturelle Integrität weisen ganze Proteine nicht auf, aber sie wird von Proteindomänen gezeigt. Dies führt zum Konzept einer gefalteten Einheit, die Teil eines Proteins ist, oft eine Domäne, die eine wohl definierte Primär-, Sekundär- und Tertiärstruktur aufweist und die dasselbe Gesamtfaltmuster aufweist, ob sie sich an einen Bindepartner bindet oder nicht. Die einzige Gensequenz, die Smith et al., beschrieben und die eine ausreichende Größe aufweist, um für eine Domäne zu kodieren (ein Minimum von etwa 50 Aminosäuren), war ein 335 bp-Fragment einer β-Galactosidase, die den Nucleotiden 861-1195 in der β-Glaktosidasegensequenz entspricht (Parmley, S. + Smith, G.P. 188, s.o.). Diese würde für 112 Aminosäuren der viel größeren, 380 Aminosäuren aufweisenden Domäne kodieren. Daher wurde vor der vorliegenden Anmeldung keine im wesentlichen vollständige Domäne oder gefaltete Einheit auf Phagen präsentiert. In diesen Fällen konnten, obwohl die Infektiosität des Phagen zerstört war, die insertierten Sequenzen auf der Phagenoberfläche durch die Verwendung von z.B. Antikörpern detektiert werden.
- Das durch das Gen III kodierte Protein weist mehrere Domänen auf (Pratt, D., et al., 1969 Virology 39: 42-53; Grant, R.A. et al., 1981, J. Biol. Chem. 256: 539-546 und Armstrong, J., et al., FEBS Lett. 135: 167-172, (1981)) einschließlich: (i) einer Signalsequenz, die das Protein zur Zellmembran lenkt und die dann abgespalten wird; (ii) einer Domäne, die das reife Protein in der bakteriellen Zellmembran (und ebenso in der Phagenhülle) verankert; und (iii) einer Domäne, die sich spezifisch an den Phagenrezeptor, den F-Pilus des Wirtsbakteriums, bindet. Kurze Sequenzen, die von Proteinmolekülen stammen, wurden an zwei Stellen innerhalb des reifen Moleküls insertiert (Smith, G., 1985, s.o., und Parmley, S.F. and Smith, G.P., 1988, s.o.), nämlich in die Region zwischen den Domänen und auch zwischen die Aminosäuren 2 und 3 am N-Terminus. Bei den Insertionsstellen am N-Terminus zeigte sich erfolg reich, daß die strukturelle Integrität des Gen III-Proteins aufrechterhalten werden konnte und daß die Peptide an der Oberfläche des Phagen präsentiert wurden. Durch die Verwendung von für die Peptide spezifischen Antisera wurde gezeigt, daß sich die Peptide, die an dieser Stelle insertiert wurden, auf der Oberfläche des Phagen befinden. Diese Autoren konnten auch, unter Verwendung dieser Eigenschaft, den Phagen reinigen. Die vom Phagen exprimierten Peptide wiesen jedoch keine eigenen, meßbaren biologischen Funktionen auf.
- Es ist schwierig, die biologische Funktion eines Moleküls, das in einem gegenüber seinem natürlichen Zustand völlig anderen Zusammenhang exprimiert wird, beizubehalten. Die Anforderungen an die Struktur des Moleküls sind hoch. Im Gegensatz dazu ist die Beibehaltung der Fähigkeit, von spezifischen Antisera gebunden zu werden, ein passiver Vorgang, der wesentlich weniger strenge Anforderungen an die Struktur das Moleküls stellt. Beispielsweise ist es die Regel und nicht die Ausnahme, daß polyklonale Antisera völlig denaturierte und biologisch inaktive Proteine in Western Blots erkennen (siehe z.B. Harlow, E. and Lane, D., Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press 1988). Daher zeigt die Insertion von Peptiden in eine Region, die ihrer Struktur ermöglicht, von Antisera mittels einer Sonde erkannt zu werden, nur, daß die Region es den Peptiden gestattet, dargestellt zu werden, aber sie zeigt nicht, daß die Region für die Insertion darzustellender großer Sequenzen, wobei strukturelle Zwänge für die Präsentation eines Moleküls mit einer biologischen oder Bindefunktion erforderlich sind, geeignet ist. Insbesondere zeigt sie nicht, daß Domänen oder gefaltete Einheiten von Proteinen von in diese Region insertierten Sequenzen präsentiert werden können.
- Diese Erfahrung mit Western Blots ist eine anschauliche praktische Demonstration, die zeigt, daß das Beibehalten der Fähigkeit, durch spezifische Antisera gebunden zu werden, wesentlich weniger strenge Anforderungen an die Struktur eines Polypeptids stellt, als dies das Falten zur Beibehaltung der biologischen Aktivität tut.
- Es wurden Studien durchgeführt, in denen E.coli manipuliert wurde, um das β-adrenergische Rezeptor-Protein als Fusion mit dem äußeren Membranprotein lamB zu exprimieren. Der β-adrenergische Rezeptor wurde in einer funktionellen Form exprimiert, was durch das Vorhandensein von Bindeaktivität bestimmt wurde. Wenn jedoch eine äquivalente Antikörperfusion mit lamB gemacht wurde, war die Antikörperfusion für die Wirtszelle toxisch.
- Die Anmelder haben die Möglichkeit untersucht, die Genkodiersequenz für biologisch aktive Antikörperfragmente in die Gen III-Region von fd zu insertieren, um ein großes Fusionsprotein zu exprimieren. Wie aus der vorhergehenden Diskussion offensichtlich ist, stellt dieser Ansatz große Anforderungen an die Funktionellität des Fusionsproteins. Die Insertion ist groß und kodiert für Antikörperfragmente von zumindest 100-200 Aminosäuren; die vom Antikörper stammende Domäne muß sich effizient und korrekt falten, um Antigenbindung zu zeigen; und die meisten Funktionen des Gen III müssen beibehalten werden. Der Ansatz der Anmelder zur Konstruktion des Fusionsmoleküls wurde so gestaltet, daß das Risiko, diese Funktionen zu unterbrechen, minimiert wurde. In einer Ausführungsform der Erfindung war der verwendete Anfangsvektor fd-tet (Zacher, A.N., et al., 1980, Gene, 9, 127-140) eine gegenüber Tetracyclin resistente Version des fd-Bakteriophagen, die als dem infizierten E.coli-Wirt Tetracyclinresistenz verleihendes Plasmid vermehrt werden kann. Die Anmelder entschlossen sich aus mehreren Gründen, nach der Signalsequenz des fd-Gen III zu insertieren. Insbesondere entschlossen sie sich, nach der Aminosäure 1 des reifen Proteins zu insertieren, um die Umgebung für die Signalpeptidasespaltung beizubehalten. Um die Struktur und Funktion des Gen III selbst beizubehalten, wird der Großteil der ursprünglichen Aminosäuresequenz nach den insertierten Immunglobulinsequenzen synthetisiert. Die insertierten Immunglobulinsequenzen wurden so gestaltet, daß sie Reste aus der Schaltregion ("switch region"), die VH-VL mit CH1-CL verbindet, umfassen (Lesk, A., and Chothia, C., Nature 335, 188-190, 1988).
- Überraschenderweise konnten die Anmelder bei der Manipulation des Gen III des Bakteriophagen fd einen Bakteriophagen konstruieren, der an seiner Oberfläche große biologisch funktionelle Antikörper-, Enzym- und Rezeptormoleküle präsentiert, wobei er intakt und infektiös bleibt. Weiters können die Phagen, die Antikörper mit der gewünschten Spezifität aufweisen, aus einem Hintergrund von Phagen, die diese Spezifität nicht zeigen, ausgewählt werden.
- Die Sequenzen, die für eine Population von Antikörpermolekülen und für die Insertion in den Vektor zur Expression von Antikörperbindefunktionen auf der Phagenoberfläche kodieren, können aus einer Vielzahl an Quellen gewonnen werden. Beispielsweise aus immunisierten und nicht immunisierten Nagetieren oder Menschen, oder aus Organen wie z.B. Milz oder peripheren Blutlymphozyten. Die Kodiersequenzen können aus diesen Quellen mittels dem Fachmann bekannten Verfahren gewonnen werden (Orlandi, R., et al., 1989, s.o.; Larrick, J.W., et al., 1989, s.o.; Chiang, Y.L., et al., 1989, Bio Techniques 7, S.360-366; Ward, E.S., et al., 1989, s.o.; Sastry, L., et al., 1989, s.o.) oder durch in den Beispielen 12, 16, 30 und 32 beschriebene neue Verbindungsstrategien. In den Beispielen 7, 21, 26 und 30 werden neue Strategien zum Präsentieren dimerer Moleküle, z.B. Fab- und Fv-Frgmente auf der Oberfläche eines Phagen beschrieben. Jeder einzelne pAb in der resultierenden Bibliothek von pAbs exprimiert Antikörper oder von Antikörper abstammende Fragmente, die bezüglich ihrer Antigenbindeeigenschaften monoklonal sind.
- Die vorliegende Offenbarung der Anmelder ist wichtig und stellt einen bemerkenswerten Durchbruch in der Technologie, die mit der Herstellung von biologischen Bindemolekülen, ihren Fragmenten und Derivaten durch die Verwendung von rekombinanten Verfahren verbunden ist, dar.
- In rekombinanten Standardverfahren zur Herstellung von Antikörpern wird ein Expressionsvektor, der die für die Antikörperketten kodierenden Sequenzen enthält, zur Transformation von E.coli verwendet. Die Antikörperpolypeptide werden exprimiert und durch die Verwendung von Standardscreeningsystemen detektiert. Wenn beim Screenen ein Antikörperpolypeptid detektiert wird, muß man zu dem speziellen, transformierten E.coli, der das gewünschte Antikörperpolypeptid exprimiert, zurückkehren. Weiters muß dann der Vektor, der die Kodiersequenz für das gewünschte Antikörperpolypeptid enthält, aus E.coli isoliert werden, damit er in weiteren Verarbeitungsschritten verwendet werden kann.
- In der vorliegenden Erfindung jedoch ist das gewünschte Antikörperpolypeptid, wenn es exprimiert wird, bereits mit seiner Genkodiersequenz zusammengepackt. Dies bedeutet, daß, wenn ein Antikörperpolypeptid mit der gewünschten Spezifität ausgewählt wird, man nicht zur ursprünglichen Kultur zur Isolierung dieser Sequenz zurückkehren muß. Weiters mußte bei bisherigen Verfahren in Standardrekombinationstechniken jeder Klon, der Antikörper exprimiert, einzeln gescreent werden. Die vorliegende Anmeldung ermöglicht die Selektion von Klonen, die Antikörper mit den gewünschten Eigenschaften exprimieren, und erfordert dazu nur das Screenen von Klonen aus einem angereicherten Pool.
- Da das sekretierte Bakteriophagenteilchen ein Element eines spezifischen Bindepaares an der Oberfläche einer relativ einfachen replizierbaren Struktur präsentiert, die auch die für diesen Bestandteil kodierende genetische Information enthält, können Teilchen, die sich an den komplementären Bestandteil des spezifischen Bindepaares (Antigen) binden, sehr effizient entweder durch die Elution des komplementären Bestandteils mittels z.B. Diethylamin, hoher Salzkonzentration, usw. und das Infizieren geeigneter Bakterien oder durch das Denaturieren der Struktur und das spezifische Amplifizieren der für diesen Bestandteil kodierenden Sequenzen mittels PCR gewonnen werden. D.h. es ist nicht notwendig, zum ursprünglichen bakteriellen Klon, aus dem der pAb entstand, zurückzukehren.
- Für einige Zwecke, z.B. Immunfällung und einige diagnostische Tests, ist es vorteilhaft, polyklonale Antikörper oder Antikörperfragmente zu verwenden. Die vorliegende Erfindung ermöglicht dies entweder durch die Selektion eines angereicherten Pools von pAbs mit den gewünschten Eigenschaften oder durch das Mischen von einzeln isolierten Klonen mit den gewünschten Eigenschaften. Die Antikörper oder Antikör perfragmente können dann, falls erforderlich, in löslicher Form exprimiert werden. Solch eine ausgewählte polyklonale pAb-Population kann aus Phagenstämmen, Phagemid enthaltenden Bakterien oder Bakterien, die die aus der ausgewählten polyklonalen Population stammenden löslichen Fragmente exprimieren, gezüchtet werden. Somit wird ein zu einem polyklonalen Antiserum äquivalentes Reagens gebildet, das repliziert werden kann und routinemäßig ohne die Verwendung von Tieren in Kultur hergestellt werden kann.
- SELEKTIONSFORMATE UND AFFINITÄTSREIFUNG
- Einzelne filamentöse Bakteriophagenteilchen, die die gewünschte Spezifität, z.B. für ein Antigen, exprimieren, können unter Verwendung von herkömmlichen Screeningverfahren aus der komplexen Bibliothek isoliert werden (z.B. laut der Beschreibung in Harlow, E., and Lane, D., 1988, s.o.; Gherardi, E. et al., 1990. J.Immunol. Meth. 126, S.61-68).
- Die Anmelder haben auch eine Reihe von neuen Selektionsverfahren entwickelt, die nur aufgrund der einzigartigen Eigenschaften der filamentösen Bakteriophagenteilchen praktikabel sind. Die allgemeinen Grundzüge einiger Screenigvorschriften sind in
2 dargestellt. - Die Population/Bibliothek von zu screenenden pAbs kann aus immunisierten oder anderen Tieren gebildet werden; oder kann in vitro durch Mutagenisieren bereits existierender Phagenantikörper (unter Anwendung bekannter Techniken, wie z.B. Oligonucleotid-gerichteter Mutagenese (Sambrook, J., et al., 1989 Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press)) erzeugt werden. Diese Population kann in einem oder mehreren der weiter unten mit Hinweis auf
2 beschriebenen Formate gescreent werden, um jene einzelnen pAbs zu erhalten, deren Antigenbindeeigenschaften sich von Probe c unterscheiden. - Bindeelution
-
2(i) zeigt Antigen (ag), das an ein feste Oberfläche (s) gebunden ist, wobei diese feste Oberfläche (s) von einer Petrischale, von Chromatographieperlen, magnetischen Perlen und dergleichen bereitgestellt werden kann. Die Population/Bibliothek von pAbs wird dann über das ag geschickt, und jene einzelnen p, die sich daran binden, werden nach dem Waschen zurückgehalten, und gegebenenfalls mit dem Detektionssystem d nachgewiesen. Ein auf Anti-fd-Antisera basierendes Detektionssystem wird weiter unten in Beispiel 4 detaillierter dargestellt. Wenn Proben der gebundenen Population p unter ansteigend rauheren Bedingungen entfernt werden, steigt die in jeder Probe vorhandene Bindeaffinität an. Verschärfte Bedingungen können z.B. durch Erhöhen der Weichzeit, oder Ändern des pH-Werts der Weichlösung, etc. erhalten werden. - Konkurrenz
- Bezugnehmend auf
2(ii) kann Antigen ag an einen festen Träger s gebunden werden und bis zur Sättigung durch das ursprüngliche Bindemolekül c gebunden werden. Wenn eine Population eines mutanten pAb (oder ein Satz nicht verwandter pAbs) dem Komplex angeboten wird, werden sich nur jene binden, die eine höhere Affinität für das Antigen ag aufweisen als c. In den meisten Beispielen wird nur ein geringer Teil der Population c durch Individuen aus der Population p verdrängt. Wenn c ein herkömmliches Antikörpermolekül ist, kann das gesamte gebundene Material gewonnen werden und das gebundene p kann durch das Infizieren von geeigneten Bakterien und/oder durch die Anwendung von Standardverfahren wie z.B. PCR gewonnen werden. - Es ist eine vorteilhafte Anwendung, wenn ag ein Antikörper ist und c sein Antigen. Die gewonnene gebundene Population p ist dann ein anti-idiotypischer Antikörper, wobei diese zahlreiche Verwendungen in der Forschung und der pharmazeutischen und diagnostischen Industrie finden.
- Derzeit ist es schwierig, direkt anti-idiotypische Antikörper auszuwählen. pAbs gäben die Möglichkeit, dies direkt durch das Binden von pAb-Bibliotheken (z.B. eine native Bibliothek) an B-Zellen (die Antikörper an ihrer Oberfläche exprimieren) und das Isolieren der gut gebundenen Phagen zu tun.
- In einigen Fällen kann es sich als vorteilhaft erweisen, die Population p vorzuselektieren. Beispielsweise in dem Anti-Idiotyp-Beispiel oben kann p an einen verwandten Antikörper adsorbiert werden, der das Antigen nicht bindet.
- Wenn c jedoch ein pAb ist, dann können jeweils eines oder beide von c und p vorteilhafterweise auf einige Arten markiert werden, um gebundenes p gegenüber gebundenem c sowohl zu unterscheiden wie auch auszuwählen. Dieses Markieren kann physikalisch erfolgen z.B. durch das Vormarkieren von p mit Biotin; oder noch vorteilhafter genetisch. Beispielsweise kann c mit einer EcoB-Restriktionsstelle markiert sein, während p mit einer EcoK-Restriktionsstelle markiert sein kann (siehe Carter, P. et al., 1985, Nucl. Acid Res. 13, 4431-4443). Wenn die gebundenen p+c vom Antigen eluiert werden und zur Infektion von geeigneten Bakterien verwendet werden, gibt es eine Restriktion (und damit kein Wachstum) der Population c (d.h. Bakterien, die EcoB-Restriktion aufweisen in diesem Beispiel). Alle gewachsenen Phagen wären stark mit jenen Individuen von p mit höheren Bindeaffinitäten angereichert. Alternativ dazu kann die genetische Markierung durch das Markieren mit neuen Sequenzen, die verwendet werden können, um unter Verwendung von PCR spezifisch p aus einem Gemisch zu amplifizieren, erreicht werden.
- Da die gebundenen pAbs unter Verwendung von z.B. PCR oder bakterieller Infektion amplifiziert werden können, ist es auch dann möglich, die gewünschte Spezifität zu erzielen, wenn nicht ausreichende Individuen gebunden sind, um die Detektion über herkömmliche Verfahren zu ermöglichen.
- Das bevorzugte Verfahren zur Selektion eines Phagen, der ein Proteinmolekül mit der gewünschten Spezifität oder Affinität präsentiert, ist oft die Elution von einer Affinitätsmatrix mit einem Liganden (siehe z.B. Beispiel 17). Die Elution mit ansteigen den Ligandenkonzentrationen sollte Phagen, die Bindemoleküle mit ansteigender Affinität präsentieren, eluieren. Wenn sich jedoch z.B. ein pAb an sein Antigen mit hoher Affinität oder Avidität bindet (oder ein anderes Protein an seinen Bindungspartner), kann es sein, daß es nicht möglich ist, den pAb aus der Affinitätsmatrix mit einem dem Antigen verwandten Molekül zu eluieren. Alternativ dazu kann es sein, daß es kein geeignetes eluierendes Molekül gibt, das in ausreichend hoher Konzentration hergestellt werden kann. In diesen Fällen ist es notwendig, ein Elutionsverfahren zu verwenden, das nicht für z.B. den Antigen-Antikörper-Komplex spezifisch ist. Einige der allgemein verwendeten, nicht spezifischen Elutionsverfahren verringern die Lebensfähigkeit des Phagen, beispielsweise nimmt die Phagenlebensfähigkeit bei pH 12 mit der Zeit ab (Rossomando, E.F. und Zinder N.D. J. Mol. Biol. 36, 387-399). Es kann Wechselwirkungen zwischen z.B. Antikörper und Affinitätsmatrizen geben, die nicht unterbrochen werden können, ohne die Phageninfektiosität vollständig zu entfernen. In diesen Fällen ist ein Verfahren zur Elution des Phagen notwendig, das sich nicht der Zerstörung der z.B. Antikörper-Antigen-Wechselwirkung bedient. Es wurde daher ein Verfahren entwickelt, das die Elution gebundener pAbs unter schonenden Bedingungen (Reduktion einer Dithiol-Gruppe mit Dithiothreitol), die die Phagenstruktur nicht zerstören, ermöglicht (Beispiel 37).
- Dieses Elutionsverfahren ist nur ein Beispiel eines Elutionsverfahrens unter schonenden Bedingungen. Ein besonders vorteilhaftes Verfahren wäre es, eine Nucleotidsequenz, die für Aminosäuren kodiert, welche eine Erkennungsstelle für die Spaltung durch eine hochspezifische Protease bilden, zwischen dem fremden, insertierten Gen, in diesem Fall ein Gen für ein Antikörperfragment, und dem Rest des Gen III einzubringen. Beispiele solch hochspezifischer Proteasen sind Faktor X und Thrombin. Nach dem Binden des Phagen an die Affinitätsmatrix und der Elution, um nichtspezifisch bindende Phagen zu entfernen, würde der bzw. die stark gebundene(n) Phage(n) durch das Waschen der Säule mit Protease unter Bedingungen, die die für die Spaltung an der Spaltungsstelle geeignet sind, entfernt werden. Dies würde das Antikörperfragment vom Phagenpartikel abspalten und den Phagen eluieren. Es ist zu erwarten, daß dieser Phage infektiös ist, da die einzige Proteasestelle die spezifisch eingebrachte sein sollte. Der stark bindende Phage könnte dann durch das Infizieren von z.B. E.coli TG1-Zellen wiedergewonnen werden.
- Ein zum obigen alternatives Verfahren ist es, die Affinitätsmatrix, die die stark gebundenen pAbs zurückgehalten hat, zu nehmen und die DNA z.B. durch Kochen in SDS-Lösung zu extrahieren. Die extrahierte DNA kann dann dazu verwendet werden, direkt E. coli-Wirtszellen zu transformieren, oder alternativ dazu können die für den Antikörper kodierenden Sequenzen amplifiziert werden, beispielsweise mittels PCR mit geeigneten Primern, wie z.B. jene die hierin geoffenbart sind, und dann zur Expression als löslicher Antikörper für weitere Untersuchungen oder als pAb für weitere Selektionsrunden in einen Vektor insertiert werden.
- Ein weiteres bevorzugtes Selektionsverfahren nach der Affinität wäre die Bindung an eine Affinitätsmatrix, die geringe Mengen an Liganden enthält.
- Wenn man aus einer Proteinmoleküle präsentierenden Phagenpopulation nach hoher Affinität für den Liganden auswählen will, ist es eine bevorzugte Strategie, eine Phagenpopulation an eine Affinitätsmatrix, die geringe Mengen an Liganden enthält, zu binden. Es gibt um die Bindung des Liganden Konkurrenz zwischen Phagen, die Proteine mit hoher und mit niedriger Affinität präsentieren. Phagen, die Protein mit hoher Affinität präsentieren, werden vorzugsweise gebunden und Protein mit niedriger Affinität wird ausgewaschen. Das Protein mit hoher Affinität wird dann durch Elution mit dem Liganden oder durch andere Verfahren, die den Phagen von der Affinitätsmatrix eluieren (Beispiel 25 zeigt dieses Verfahren), gewonnen.
- Zusammenfassend kann zur Wiedergewinnung der gepackten DNA aus dem Affinitätsschritt die Packung einfach eluiert werden, sie kann in Vorhandenseins eines homologen sbp-Bestandteils, der mit dieser Packung um die Bindung an den komplementären sbp-Bestandteil konkurriert, eluiert werden; diese könnte durch Kochen entfernt werden, sie könnte durch proteolytische Spaltung des Proteins entfernt werden; und andere Verfahren, z.B. das Zerstören der Bindung zwischen dem Substrat und dem komplementären sbp-Bestandteil, um die gepackte DNA und den sbp- Bestandteil freizusetzen, sind für Fachleute auf dem Gebiet offensichtlich. Jedenfalls ist es das Ziel, die DNA aus der Packung zu erhalten, sodaß diese direkt oder indirekt verwendet werden kann, um den dadurch kodierten sbp-Bestandteil zu exprimieren.
- Die Effizienz dieses Selektionsverfahrens für pAbs und die Möglichkeit, große Bibliotheken herzustellen, bedeutet, daß die Immunisierungsverfahren, die entwickelt wurden, um den Anteil der gescreenten Zellen, die den Antikörper von Interesse produzieren, erhöht wird, keine absolute Notwendigkeit sind. Das Verfahren ermöglicht die schnelle Isolation von Bindespezifitäten, z.B. Antigen-Bindespezifitäten, einschließlich jenen, die durch herkömmliche Verfahren schwierig oder sogar nicht zu erhalten wären, z.B. katalytische oder anti-idiotypische Antikörper. Der Verzicht auf das Tier ist im gesamten nun möglich, wenn einmal eine vollständige Bibliothek des Immunrepertoires konstruiert wurde.
- Die neuartige Struktur des pAb-Moleküls kann in einer Anzahl von anderen Anwendungen verwendet werden, wobei einige Beispiele davon die folgenden sind:
- Signalamplifikation
- pAbs vereinen, indem sie selbst als eine neuartige molekulare Einheit funktionieren, die Fähigkeit, sich an ein spezifisches Molekül, z.B. ein Antigen, zu binden, mit der Amplifikation, wenn das Haupthüllenprotein verwendet wird, um eine andere Gruppe daran zu binden. Diese Gruppe kann durch immunologische, chemische und beliebige andere Mittel befestigt werden, und dann z.B. verwendet werden, um den Komplex zur Verwendung in vitro oder in vivo mit Detektionsreagentien oder zytotoxischen Molekülen zu markieren.
- Physikalische Detektion
- Die Größe der rgdps-eg-pAbs kann als Marker verwendet werden, insbesondere hinsichtlich physikalischer Detektionsverfahren wie z.B. Elektronenmikroskopie und/oder einige Biosensoren, z.B. Oberflächenplasmonresonanz.
- Diagnoseassays
- Die rgdps-eg-pAbs haben auch vorteilhafte Verwendungen in Diagnoseassays, insbesondere wo eine Trennung aufgrund ihrer physikalischen Eigenschaften bewirkt werden kann, z.B. Zentrifugation, Filtration etc.
- Zum besseren Verständnis der Erfindung werden nun Ausführungsformen mit Hinweis auf die weiter unten beschriebenen Figuren genauer beschrieben, wobei diese Beispiele der Veranschaulichung dienen und die Erfindung in keiner Weise einschränken. Bei allen Ausführungsformen der Erfindung werden Fab-Antikörpermoleküle auf filamentösen Bakteriophagen-Teilchen präsentiert. Die Präsentation von anderen Molekülen ist nicht Teil der Erfindung. Die Erwähnung solcher Moleküle in diesem Dokument dient lediglich der Veranschaulichung.
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1 zeigt die Grundstruktur des einfachsten Antikörpermoleküls IgG. -
2 zeigt schematisch die Selektionsverfahren, die die einzigartigen Eigenschaften der pAbs einsetzen; 2i) zeigt ein Binde-/Elutionssystem; und (2ii) zeigt ein Konkurrenzsystem (p=pAb; ag= Antigen, an das sich pAb binden soll; c= Konkurrenzpopulation z.B. Antikörper, pAb, Ligand; s= Substrat (z.B. Kunststoffperlen etc.); d= Detektionssystem. -
3 zeigt den Vektor fd-tet und ein Schema zur Konstruktion von Vektoren, fdTPs/Bs (zur Insertion von VH-Kodiersequenzen) und fdTPs/Xh zur Insertion von scFv-Kodiersequenzen. -
4 zeigt die Nucleotidsequenzen für die Oligonucleotide und Vektoren. Alle Sequenzen sind von 5' nach 3' aufgezeichnet und gemäß Beck et al., 1978, Nucl. Acid. Res. 5: 4495-4503 numeriert. 4.1 zeigt die zur Mutagenese (oligo's 1 und 2) und zum Sequenzieren (oligo 3) verwendeten Sequenzen. Die präsentierten Sequenzen wurden auf einem Oligonucleotidsynthesegerät von Applied Biosystems synthetisiert und sind zur einsträngigen Form von fd-tet komplementär (sie sind bezüglich Gen III in der Antisense-Form). 4.2 zeigt die Sequenzen der verschiedenen Konstrukte rund um die Gen III-Insertionsstelle. Diese Sequenzen sind in Sense-Richtung bezüglich Gen III aufgezeichnet; (A) fd-tet (und fdTδBst) (B) fdTPs/Bs und (C) fdTPs/Xh. Die Schlüsselrestriktionsstellen sind gemeinsam mit den durch die Vektoren beigetragenen Immunglobulinaminosäuren gezeigt, (der Ein-Buchstaben-Code für Aminosäuren wird verwendet, siehe Harlow, E. und Lane, D. 1988, s.o.). -
5 zeigt die Nucleotid- und Aminosäuresequenzen für scFv im Vektor scFvD1.3 myc. Dies ergibt die Sequenz des aus Einzelketten bestehenden Anti-Lysozym-Fv und die umgebenden Sequenzen in scFvD1.3 myc, wobei die N-terminale pel b-Signalpeptidsequenz und die C-terminale myc tag-Sequenz gezeigt wird (Ward, E.S., et al., 1989, s.o.). Es ist auch die Peptidsequenz gezeigt, die die VH- und VL-Regionen verbindet. Die Aminosäuresequenz ist über der Nucleotidsequenz mit dem Ein-Buchstaben-Code dargestellt, siehe Harlow, E. und Lane, D. 1988, s.o.). -
6 zeigt die Bindung von pAbs an Lysozym und die Wirkung der Variation der Menge des Überstandes. Jeder Punkt ist der Mittelwert einer Doppelprobe. Lysozym wurde mit 1 mg/ml in 50 mm NaHCO3 beschichtet. -
7 zeigt die Wirkung der Variation der Beschichtungskonzentration von Lysozym oder Rinderserumalbumin (BSA) auf die Bindung von pAbs an Lysozym in graphischer Form. Jeder Punkt ist der Mittelwert einer Doppelprobe. -
8 zeigt die Sequenz rund um die Klonierstelle in Gen III von fd-CAT2. Restriktionsenzymstellen werden dargestellt sowie die Aminosäuren, die durch von Antikör per stammende Sequenzen kodiert werden. Diese werden am 5'-Ende vom Gen III-Signalpeptid und am 3'-Ende von 3 Alaninresten (durch die NotI-Restriktionsstelle kodiert) und vom Rest des reifen Gen III-Protein flankiert. Der Pfeil zeigt die Spaltungsstelle zum Abschneiden des Signalpeptids. -
9 zeigt die Bindung von pAb (1.3) an Lysozyme. Bindung von Phagen, wie mittels ELISA detektiert wurde, an (a) Hühnereiweißlysozym (HEL), (b) Puteneiweißlysozym (TEL), (c) menschliches Lysozym (HUL), (d) Rinderserumalbumin (BSA). Ein weiterer Vergleich von (e) fdTPs/Bs an HEL. -
10 zeigt eine Karte von FabD1.3 in pUC19. -
11 zeigt die ELISA-Ergebnisse, die einen Vergleich der Lysozymbindung durch Phagen-Fab und Phagen-scFv bieten. Vektor= fdCAT2 (Beispiel 5); fdscFv (OX)= pAbNQ11 (Beispiel 9); fdVHCH1 (D1.3)= Wachstum in normalen Zellen (d.h. keine L-Kette, siehe Beispiel 7); fdFab(D1.3) d.h. fdVHCH1 (D1.3), gezüchtet in Zellen, die die D1.3 L-Kette enthalten; fdscFv (D1.3)=pAbD1.3. -
12 zeigt die Oligonucleotidsondierung von mittels Affinität gereinigten Phagen. 1012 Phagen in Verhältnis von 1 pAb (D1.3) in 4 × 104 fdTPs/Bs wurden mittels Affinität gereinigt und mit einem Oligonucleotid sondiert, das spezifisch für pAb (D1.3) ist. A ist ein Filter nach einer Affinitätsreinigungsrunde (900 Kolonien gesamt) und B ist ein Filter nach zwei Runden (372 Kolonien gesamt). -
13 zeigt die Sequenz des Anti-Oxazolon-Antikörperfragments NQ11 scFv. Die vom Linker beigesteuerte Sequenz ist in Kleinbuchstaben gezeigt. Die Sequenz für VH ist vor der Linkersequenz und die Sequenz für VL ist nach dem Linker. -
14 zeigt die ELISA-Ergebnisse für die Bindung von pAb NQ11 und pAb D1.3 und Vektor fdTPs/Xh an die angegebenen Antigene. -
15 zeigt die Sequenz rund um die phoA-Insertion in fd-phoAla 166. Die zur Klonierung verwendeten Restriktionsstellen sind gezeigt, sowie die durch phoA kodierten Aminosäuren rund um die Insertionsstellen. Die ersten fünf Aminosäuren der reifen Fusion kommen aus dem Gen III. -
16(1) zeigt die Struktur von Gen III und die native BamHI-Stelle, in die eine scFv-Kodiersequenz in Beispiel 11 insertiert wurde und16(2) zeigt die natürlichen Peptidlinkerstellen A und B zur möglichen Insertion von scFv-Kodiersequenzen. -
17 zeigt schematisch die Arbeitsvorschrift für die PCR-Assemblierung von Mäuse-VH- und VLK-Repertoires zur in Beispiel 12 beschriebenen Phagenpräsentation. -
18 zeigt Beispiele der mit der Vorschrift in Beispiel 12 erhaltenen Endprodukte. Die Spuren a und b zeigen die Produkte der Beginn-PCR unter Verwendung von Primern der schweren bzw. leichten Kette; Spur C zeigt das vollständig assemblierte 700 bp-Produkt vor der Endspaltung mit Not1 und ApaL1; M1, M2 Marker Φ174 Hae-Spaltung bzw. 123 bp-Leiter ("ladder") (BRL Limited, P.O. Box 35, Washington Road, Paisley, Scotland). -
19 zeigt die Ergebnisse eines ELISA der Lysozymbindung durch pCAT-3 scFv D1.3-Phagemid im Vergleich zum pCAT-3-Vektor (beide durch M13K07 wiederhergestellt) und zu fdCAT2 scFv D1.3 wie in Beispiel 13 beschrieben. Der ELISA wurde wie in Beispiel 6 beschrieben mit Modifikationen, die in Beispiel 14 detailliert erklärt sind, durchgeführt. -
20 zeigt das Spaltmuster, das zu sehen ist, wenn einzelne Klone, die statistisch aus einer Bibliothek von Einzelketten-Fv-Antikörpergenen, die aus einer immunisierten Maus stammen, ausgewählt wurden, mit BstN1 gespalten werden. -
21 zeigt VH- und VK-Gensequenzen, die aus der kombinatorischen Bibliothek in Beispiel 17 und der hierarchischen Bibliothek in Beispiel 18 stammen. -
22 zeigt eine Matrix von ELISA-Signalen für Klone, die aus einer statistischen kombinatorischen Bibliothek stammen. Die Bezeichnung der Klone ist wie in21 . Die Anzahl der mit jeder Kombination gefundenen Klone ist durch die Zahlen angegeben. -
23 zeigt a) das Phagemid pHEN1, ein Derivat von pUC119, der in Beispiel 20 beschrieben ist; und b) die Klonierstellen im Phagemid pHEN. -
24 . Die Antikörperkonstrukte, die zur Präsentation auf der Oberfläche des Phagen in fd-CAT2 und pHEN1 kloniert wurden. Die Konstrukte I, II, III und IV wurden sowohl in fd-CAT2 (als ApaLI-NotI-Fragmente) als auch in PHEN1 (als SfiI-NotI-Fragmente) und in PHEN1 (als SfiI-NotI-Fragmente). Alle Konstrukte enthielten die variablen Regionen der schweren Kette (VH) und der leichten Kette (VL) des aus Mäusen stammenden Anti-phOx-Antikörpers NQ10.12.5. Die konstanten Domänen waren menschliches CK und CH1 (γ 1-Isotyp). -
25 . Drei Arten der Präsentation von Antikörperfragmenten auf der Phagenoberfläche durch Fusion mit dem Gen III-Protein. -
26 . Western-Blot des Überstands, der aus pHEN1-II(+)- oder pHEN1(-)-Kulturen von E.coli HB2151 entnommen wurde, wobei dieser die Sekretion nur von PHEN1-II zeigt. Der anti-menschliche Fab detektiert sowohl H- als auch L-Ketten. Aufgrund der Befestigung von c-myc tag, ist die L-Kette, die sowohl durch anti-c-myc tag- als auch durch anti-menschliche CK-Antisera markiert bzw. hervorgehoben ist, etwas größer (berechnetes Mr 24625) als die H-Kette (berechnetes Mr 23145). -
27 ist ein Graph, der die Wirkung der Lysozymverdünnung auf das Verhältnis der ELISA-Signale, die unter Einsatz von pAbD1.3 oder löslichem scFv D1.3 erhalten wurden, zeigt. -
28 ist ein Graph, der die Wirkung der Lysozymverdünnung auf die ELISA-Signale, die unter Einsatz von fdTscFvD1.3 oder löslichem scFv D1.3 erhalten wurden, zeigt. -
29 ist ein Graph, der positive Ergebnisse aus einem ELISA-Screen von Phagen, die scFv-Fragmente präsentieren, die aus der Zelllinie 013 stammen, welche einen gegen Östriol gerichteten Antikörper exprimiert, zeigt. -
30 ist ein Graph, der positive Ergebnisse aus einem ELISA-Screen von Phagen, die scFv-Fragmente präsentieren, die aus der Zelllinie 014 stammen, welche einen gegen Östriol gerichteten Antikörper exprimiert, zeigt. -
31 . Elektrophorese von Proben aus Stufen einer Fab-Assemblierung. Proben von unterschiedlichen Stufen im PCR-Fab-Assemblierungsverfahren, wie in Beispiel 26 beschrieben, wurden Elektrophorese auf einem 1 %igen TAE-Agarosegel unterzogen. Proben von einem vergleichbaren scFv-Assemblierungsverfahren (wie in Beispiel 14) werden zum Vergleich gezeigt. Die Proben von links nach rechts sind:
M = Marker
VHCH1 = durch PCR amplifizierte Sequenzen, die für VHCH1-Domänen kodieren
VKCK = durch PCR amplifizierte Sequenzen, die für VKCK-Domänen kodieren
-L = Fab-Assemblierungsreaktion, in Abwesenheit von Linker durchgeführt
+L = Produkt der Fab-PCR-Assemblierungsreaktion VHCHI plus VKCK plus Linker
M = Marker
VK = durch PCR amplifizierte Sequenzen, die für VK-Domänen kodieren
VL = durch PCR amplifizierte Sequenzen, die für VH-Domänen kodieren
-L = scFv-Assemblierungsreaktion in Abwesenheit von Linker
+L = scFv-Assemblierungsreaktion in Gegenwart von Linker
M = Marker -
32 . Vergleich der ELISA-Signale mit scFv D1.3, der in fd-CAT2 (fd) oder pCAT-3 kloniert wurde. pCAT-3 scFv1.3 wurde mit M13K07 (K07) wiederhergestellt. M13K07ΔgIII Nr.3 (gIII Nr.3) oder M13K07 gIIIΔNr.2 (gIII Nr.2). Die Phagenantikörper sind in 10fachen (10x), 1fachen (1x) oder 0,1fachen (0,1x) Konzentrationen relativ zur Konzentration im Überstand nach Wachstum über Nacht verglichen. Die Signale der nicht rekombinanten Vektoren fdCAT2 und pCAT-3 waren <0,01 bei 10facher Konzentration. M13K07 gIIIΔNr. 1 ergänzte ("rescued") überhaupt nicht, was sich daraus ergibt, daß es in diesem ELISA kein Signal über dem Hintergrund gibt. -
33 . Western-Blot von mit PEG gefällten Phagen, die in dem mit Anti-g3p sondierten ELISA verwendet wurden. Freie g3p- und die g3p-scFvD1.3-Fusionsbanden sind mit Pfeilen gekennzeichnet. - Probe 1 – fd scFvD1.3
- Probe 2 – pCAT3-Vektor
- Probe 3 – pCAT3 scFvD1.3, wiederhergestellt mit M13K07, kein IPTG
- Probe 4 – pCAT3 scFvD1.3, wiederhergestellt mit M13K07, 50 μM IPTG
- Probe 5 – pCAT3 scFvD1.3, wiederhergestellt mit M13K07, 100 μM IPTG
- Probe 6 – pCAT3 scFvD1.3, wiederhergestellt mit M13K07 gIIIΔNr.3 (kein IPTG)
- Probe 7 – pCAT3 scFvD1.3, wiederhergestellt mit M13K07 gIIIΔNr.2 (kein IPTG)
- Die Proben von Feld A enthalten pro Spur das 8 μl-Äquivalent des Phagemidkulturüberstandes, und 80 μl des fd-Überstandes (10fach geringere Phagenausbeute als das Phagemid). Die Phagemidproben von Feld B sind die in Feld A verwendeten bei einer 5fach höheren Probenbeladung (äquivalent zu 40 μl Kulturüberstand pro Spur), um die Fusionsbanden in den Proben, die mit ursprünglichem M13K07 wiederhergestellt wurden, sichtbar zu machen.
-
34 ist ein Graph, der die fdCAT2scFvD1.3-Anreicherung zeigt, die sich aus einem Gemisch von fdCAT2scFvD1.3 und fdCAT2TPB4 durch eine Panningrunde ergibt. -
35 ist ein Graph, der die fdCAT2scFvD1.3-Anreicherung zeigt, die sich aus einem Gemisch von fdCAT2scFvD1.3 und fdCAT2TPB1 durch eine Panningrunde ergibt. -
36 zeigt die DNA-Sequenz von scFv B18 (anti-NP). -
37 zeigt eine schematische Darstellung von Schritten, die an der PCR-Assemblierung von Nucleotidsequenzen beteiligt sind, die für Human-Fab-Fragmente kodieren. Details sind Beispiel 30 zu entnehmen. -
38 zeigt A. eine Karte von Plasmid pJM1-FabD1.3, das für die Expression von löslichen Human-Fab-Fragmenten und als Templat für die Synthese von Linker-DNA für die Fab-Assemblierung verwendet werden. B. eine schematische Darstellung von Sequenzen, die für ein Fab-Konstrukt kodieren. C. Die Sequenz von DNA-Templat für die Synthese von Linker-DNA für die Fab-Assemblierung. -
39 zeigt eine schematische Darstellung der Schritte, die an der PCR-Assemblierung der für die menschlichen scFv-Fragmente kodierenden Nucleotidsequenzen beteiligt sind. Die Details sind in Beispiel 32 zu finden. -
40 . ELISA-Assay von Phagenantikörpern unter Verwendung von mit Puteneilysozym beschichteten Platten. Die zwei Klone B1 und A4, die durch Mutagenese und Selektion von pAbD1.3 erhalten wurden, sind gezeigt (Beispiel 35). Die Konzentration (x-Achse) bezieht sich auf die Konzentration der Phagen für jede Probe relativ zur Konzentration im Kulturüberstand. B1 zeigt, verglichen mit D1.3, eine Bindung an Puteneilysozym. A4 weist, verglichen mit D1.3, eine verringerte Bindung an Hühnereilysozym auf. -
41 . ELISA von Phagenantikörpern, die sich an HEL und TEL binden. Klon 1 ist fdCAT2scFvD1.3. Die Klone 2 bis 10 wurden aus der Bibliothek (Beispiel 36) nach Selektion erhalten. Die Hintergrundwerte, die sich aus der Bindung dieser Klone an BSA ergeben, wurden subtrahiert. -
42 zeigt die DNA-Sequenz der leichten Ketten D1.3 M1F und M21, die durch Selektion aus einer hierarchischen Bibliothek in Beispiel 36 erhalten wurden. -
43 zeigt einen Fv-λ-Expressionsvektor (Beispiel 38), der aus pUC119 erhalten wurde. Er enthält die neugeordneten λ1-Keimliniengene. Die Kassetten der schweren und leichten Ketten enthalten jeweils stromaufwärts vom pel B-Leader eine Ribosomenbindestelle (Restriktionsstellen sind gezeigt als: H=Hind III; Sp=SphI; B=BamHI, E=EcoRI. - Materialien und Verfahren
- Die folgenden von den Anmeldern verwendeten Vorschriften sind in Sambrook, J. et al., 1989, s.o. beschrieben: Restriktion, Spaltung, Ligation, Herstellung von kompetenten Zellen (Hanahan-Verfahren), Transformation, Analyse der Restriktionsenzymspaltprodukte auf Agarosegelen, Reinigung von DNA mittels Phenol/Chloroform, 5'-Endmarkierung von Oligonucleotiden, Filterscreening von bakteriellen Klonen, Herstellung von 2 × TY-Medium und -Platten, Herstellung von Tetracyclin-Stammlösungen, PAGE von Proteinen, Herstellung von Phosphat-gepufferter Salzlösung.
- Alle Enzyme wurden von New England Biolabs (CP Laboratories, PO Box 22, Bishop's Stortford, Herts., England) geliefert und, wenn dies nicht anders erwähnt ist, gemäß den Angaben der Hersteller verwendet.
- Der Vektor fd-tet (Zacher, A.N. et al., 1980, s.o.) wurde von der American Type Culture Collection (ATCC Nr. 37.000) erhalten und in kompetente TG1-Zellen (Genotyp: K12δ (lac-pro), sup E, thi, hsdD5/F traD36, pro A+B+, Lac 1q, lac δM15) transformiert.
- Virale Partikel wurden hergestellt, indem TG1-Zellen, die das gewünschte Konstrukt enthalten, in 10-100 ml 2 × TY-Medium mit 15 μg/ml Tetracyclin 16-24 Stunden lang gezüchtet wurden. Der Kulturüberstand wurde durch 10-minütige Zentrifugation bei 10.000 U/min in einem 8 × 50 ml-Rotor, Sorval RC-5B Zentrifuge, gesammelt. Die Phagenpartikel wurden durch die Zugabe von 1/5 des Volumens an 20%igem Polyethylenglykol (PEG)/2,5 M NaCl und 1-stündiges Stehenlassen bei 4°C gefällt. Diese wurden 15 Minuten lang wie oben beschrieben zentrifugiert und die Pellets wiederum in 10 mM Tris/HCl pH 8, 1 mM EDTA in 1/100 des ursprünglichen Volumens aufgelöst. Der Bakterienrückstand und nicht aufgelöstes Material wurden durch 2-minütige Zentrifugation in einer Mikrozentrifuge entfernt. Einsträngige DNA zur Mutagenese und Sequenzierung wurde aus der konzentrierten Phagenlösung gemäß Sambrook, J. et al., 1989, s.o., hergestellt.
- Liste der Beispiele
- Beispiel 1 Konstruktion der Insertionspunktlinker und Konstruktion der Vektoren
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion von zwei Derivaten des Phagenvektor fd-tet: a) fdTPs/Bs für die Insertion von VH-Kodiersequenzen; und b) fdTPs/Xh für die Insertion von scFv-Kodiersequenzen. Die Derivatvektoren weisen eine neue BstEII-Stelle zur Insertion von Sequenzen auf.
- Beispiel 2 Insertion der Immunglobulin-Fv-Domäne in den Phagen
- Dieses Beispiel betrifft die Insertion von scFv-Kodiersequenzen, die aus einem Anti-Lysozym-Antikörper D1.3 stammen, in fdTPs/Xh, um das Konstrukt fdTscFvD1.3 zu ergeben.
- Beispiel 3 Insertion der Immunglobulin-VH-Domäne in den Phagen
- Dieses Beispiel betrifft die Insertion von VH-Kodiersequenzen, die aus einem Anti-Lysozym-Antikörper D1.3 stammen, in fdTPs/Bs, um das Konstrukt fdTVHD1.3 zu ergeben.
- Beispiel 4 Analyse der Bindespezifität der Phagenantikörper
- Dieses Beispiel untersucht die Bindespezifitäten der Konstrukte fdTscFvD1.3 und fd-TVHD1.3.
- Beispiel 5 Konstruktion von fdCAT2
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion des Derivats fdCAT2 des Phagenvektors fdTPs/Xh. Das Derivat hat Restriktionsstellen für Enzyme, die DNA nicht häufig schneiden.
- Beispiel 6 Spezifische Bindung des Phagenantikörpers (pAb) an Antigen
- Dieses Beispiel zeigt die Bindung von pAb fdTscFvD1.3 an Lysozym durch ELISA.
- Beispiel 7 Expression von FabD1.3
- Dieses Beispiel betrifft die Präsentation eines Antikörper-Fab-Fragment an der Phagen-oberfläche. Die VH-CH1-Kette wird durch fdCAT2 exprimiert. Die VL-CL-Kette wird durch pUC19 in einer bakteriellen Wirtszelle exprimiert, die ebenfalls mit fdCAT2 infiziert wurde.
- Beispiel 8 Isolierung von spezifischen, gewünschten Phagen aus einem Gemisch von Vektorphagen.
- Dieses Beispiel zeigt, wie ein Phage (z.B. fdTscFvD1.3), der ein Bindemolekül präsentiert, von Vektorphagen durch Affinitätsverfahren isoliert werden kann.
- Beispiel 9 Konstruktion von pAb, die Anti-Hapten-Aktivität exprimieren
- Dieses Beispiel betrifft die Insertion von scFv-Kodiersequenzen, die aus dem Anti-Oxazolon-Antikörper NQ11 stammen, in fdTPs/Xh, um das Konstrukt pAbNQ11 zu bilden. Das Beispiel zeigt die Bindung von pAbNQ11 an Oxazolon durch ELISA.
- Beispiel 10 Anreicherung von pAbD1 3 aus Gemischen anderer pAbs durch Affinitätsreinigung
- Dieses Beispiel zeigt, wie ein Phage (z.B. pAbD1.3), der eine Sorte von Bindemolekül präsentiert, durch Affinitätsverfahren von Phagen (z.B. pAbNQ11), die eine andere Sorte von Bindemolekülen präsentieren, isoliert werden kann.
- Beispiel 11 Insertion von Bindemolekülen in alternative Stellen im Phagen
- Dieses Beispiel betrifft die Insertion von scFv-Kodiersequenzen, die aus a) dem Anti-Lysozym-Antikörper D1.3; und b) dem Anti-Oxazolon-Antikörper NQ11 stammen, in eine BamHI-Stelle von fdTPs/Xh, um die Konstrukte fdTBam1 mit einem NQ11-Insert zu ergeben.
- Beispiel 12 PCR-Assemblierung der VH- und VLK-Repertoires aus Mäusen zur Phagenpräsentation
- Dieses Beispiel betrifft ein System für die Präsentation aller durch eine Maus kodierten VH- und VLK-Repertoires auf Phagen. Das System beinhaltet die folgenden Schritte. 1) Herstellung von RNA aus Milz. 2) Herstellung von cDNA aus der RNA. 3) Einsatz von Primern, die für Antikörpersequenzen spezifisch sind, um mittels PCR alle VH- und VLK-cDNA-Kodiersequenzen zu amplifizieren. 4) Einsatz der PCR, um ein Linkermolekül aus verbindenden Paaren der VH- und VLK-Sequenzen zu bilden. 5) Einsatz der PCR, um kontinuierlich DNA-Moleküle, von denen jedes eine VH-Sequenz, einen Linker und eine VLK-Sequenz umfaßt, zu assemblieren. Die spezifische VH/VLK-Kombination wird statistisch erhalten. 6) Einsatz der PCR, um Restriktionstellen einzubringen.
- Beispiel 13 Konstruktion eines Phagemids, das Gen III als Fusion mit der Kodiersequenz für ein Bindemolekül enthält
- Diese Beispiel betrifft die Konstruktion von zwei Phagemiden, die auf pUC119 basieren und die das Gen III von fdCAT2 und die Gen III-Fusion fdCAT2scFvD1.3 getrennt enthalten, um pCAT2 bzw. pCAT3 scFvD1.3 zu bilden.
- Beispiel 14 Ergänzung der Anti-Lysozym-Antikörperspezifität aus pCAT3scFvD1.3 durch M13K07
- Dieses Beispiel betrifft die Ergänzung der Kodiersequenz für die Gen IIIscFv-Fusion von pCAT3scFvD1.3 durch das Wachstum des M13K07-Helferphagen, wobei durch ELISA gezeigt wird, daß die Phagen scFv Anti-Lysozym-Aktivität präsentieren.
- Beispiel 15 Transformationseffizienz der pCAT-3- und pCAT-3 scFvD1.3-Phagemide
- Dieses Beispiel vergleicht die Wirksamkeit der Phagemide pUC119, pCAT-3 und pCAT3scFvD1.3 und des Phagen fdCAT2 bei der Transformation von E.coli.
- Beispiel 16 PCR-Assemblierung einer Einzelketten-Fv-Bibliothek aus einer immunisierten Maus
- Dieses Beispiel betrifft ein System für die Phagenpräsentation von scFv (umfaßt VH und VL) aus einer immunisierten Maus unter Verwendung der Grundtechniken, die in Beispiel 11 erklärt sind (cDNA-Herstellung und PCR-Assemblierung der VH- und VLK-Repertoires aus Mäusen) und die Ligation der PCR-assemblierten Sequenzen in fdCAT2, um eine Phagenbibliothek mit 105 Klonen zu bilden. Die Untersuchung von 500 Klonen zeigte, daß keiner Spezifität gegen phOx zeigte.
- Beispiel 17 Selektion von Antikörpern, die für 2-Phenyl-5-oxazolon spezifisch sind, aus einem Repertoire einer immunisierten Maus
- Dieses Beispiel zeigt, daß Phagen, die aus einer in Beispiel 16 aufgestellten Bibliothek gezüchtet wurden, einer Affinitätsselektion unter Verwendung von phOx unterzogen werden können, um jene Phagen auszuwählen, die scFv mit der gewünschten Spezifität präsentieren.
- Beispiel 18 Bildung weiterer Antikörperspezifitäten durch die Assemblierung von hierarchischen Bibliotheken
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion von hierarchischen Bibliotheken, in denen eine bestimmte VH-Sequenz mit dem gesamten VLK-Repertoire kombiniert wird und eine bestimmte VLK-Sequenz mit dem gesamten VH-Repertoire kombiniert wird und die Selektion neuer VH- und VL-Paarungen aus diesen Bibliotheken.
- Beispiel 19 Selektion von Antikörpern, die auf Bakteriophagen präsentiert werden, mit verschiedenen Affinitäten für 2-Phenyl-5-oxazolon unter Einsatz von Affinitätschromatographie
- Dieses Beispiel betrifft die Trennung von Phagen, die scFv-Fragmente mit verschiedenen Bindeaffinitäten für ein bestimmtes Antigen präsentieren, mittel Affinitätstechniken.
- Beispiel 20 Konstruktion von Phagemid pHEN1 zur Expression von Antikörperfragmenten die auf der Oberfläche von Bakteriophagen nach Superinfektion exprimiert werden
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion des Phagemids pHEN1, das aus pUC119 erhalten wurde. pHEN1 weist die in
26 gezeigten Merkmale auf. - Beispiel 21 Präsentation von Einzelketten-Fv- und Fab-Fragmenten, die vom Anti-Oxazolon-Antikörper NQ 10.12.5 stammen, auf dem Bakteriophagen fd unter Verwendung von pHEN1 und fdCAT2.
- Dieses Beispiel beschreibt die Präsentation eines scFv- und Fab-Fragments mit einer Spezifität gegen phOx auf der Oberfläche eines Bakteriophagen. Zur Präsentation von scFv umfaßt das Phagemid pHEN1 die für scFv (VH und VL) kodierenden Sequenzen zur Ergänzung durch einen der Phagen VSM13 oder fdCAT2. Zur Präsentation von Fab umfaßt der Phage fdCAT2 die Sequenz für die H- oder die L-Kette als Fusion mit g3p, und das Phagemid pHEN1 umfaßt die Sequenz für den entsprechenden H- oder L-Kettenpartner.
- Beispiel 22 Ergänzung von Phagemid, das für eine Gen III-Proteinfusion kodiert, mit Antikörper-Schwer- oder -Leichtketten durch Phagen, der für den komplementären Antikörper kodiert, der auf Phagen präsentiert wird, und die Verwendung dieser Technik zur Schaffung dualer kombinatorischer Bibliotheken
- Dieses Beispiel umfaßt die Verwendung von Phagen-Antikörpern, die für die Antikörper-Schwer- oder -Leichtkette kodieren zur Gewinnung eines Phagemids, das für eine Gen 3-Proteinfusion mit der komplementären Kette kodiert, und den ELISA-Test bezüglich auf Phagen präsentierter Fab-Fragmente. Der Einsatz dieser Technik bei der Herstellung einer dualen kombinatorischen Bibliothek wird erörtert.
- Beispiel 23 Induktion von löslichen scFv- und Fab-Fragmenten unter Verwendung des Phagemid pHEN1
- Dieses Beispiel betrifft die Bildung von löslichen scFv- und Fab-Fragmenten aus Gen III-Fusionen mit für diese Fragmente kodierenden Sequenzen durch Expression der Klone in pHEN1 in einem E.coli-Stamm, der "amber"-Mutationen nicht unterdrückt.
- Beispiel 24 Erhöhte Empfindlichkeit im ELISA von Lysozym unter Verwendung von fdTscFvD1.3 als primärer Antikörper, verglichen mit löslichem scFvD1.3.
- Dieses Beispiel betrifft die Verwendung von fdTscFvD1.3 im ELISA und zeigt, daß mit dem Phagenantikörper fdTscFvD1.3 kleinere Lysozymmengen als mit dem löslichen scFvD1.3 nachgewiesen werden können.
- Beispiel 25 Direkte Ergänzung und Expression von monoklonalen Mäuseantikörpern als Einzelketten-Fv-Fragmente an der Oberfläche des Bakteriophagen fd
- Dieses Beispiel betrifft die Präsentation von zwei Klonen, die direkt von Zellen, die gegen Östriol gerichtete monoklonale Antikörper exprimieren, erhalten wurden, auf Phagen als funktionelle scFv-Fragmente. Die Funktionalität beider Klone wurde unter Einsatz von ELISA ermittelt.
- Beispiel 26 PCR-Assemblierung von DNA, die für das Fab-Fragment eines Antikörpers kodiert, der gegen Oxazolon gerichtet ist
- Dieses Beispiel umfaßt die Konstruktion eines DNA-Inserts, das für ein Fab-Fragment kodiert, durch getrennte Amplifizierung von Schwer- und Leichtketten-DNA-Sequenzen gefolgt von der Assemblierung. Das Konstrukt wurde dann in den Phagenvektor fdCAT2 und den Phagemidvektor pHEN1 insertiert, und es wurde die Funktionalität des auf der Oberfläche präsentierten Fab-Fragments gezeigt.
- Beispiel 27 Konstruktion eines Helferphagen, dem Gen III fehlt
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion eines Helferphagen, der aus M13K07 durch Deletion von Sequenzen in Gen III erhalten wurde. Die Ergänzung von pCAT3-scFvD1.3 ist beschrieben. Der scFvD1.3 wird auf hohem Niveau als Fusion unter Verwendung des Deletionsphagen exprimiert, äquivalent zur Expression unter Verwendung von fdCAT2-scFvD1.3.
- Beispiel 28 Selektion von Bakteriophagen, die gegen Lysozym gerichtete scFv-Fragmente exprimieren, aus Gemischen gemäß der Affinität unter Anwendung eines Panningverfahrens
- Dieses Beispiel betrifft die Selektion von Bakteriophagen gemäß der Affinität des gegen Lysozym gerichteten scFv-Fragments, das auf deren Oberfläche exprimiert wird. Phagen mit verschiedenen Affinitäten wurden an mit Lysozym beschichtete Petrischalen gebunden und nach dem Waschen die gebundenen Phagen mittels Triethylamin eluiert. Es wurden Bedingungen gefunden, bei denen eine beträchtliche Anreicherung für einen Phagen mit einer 5fach höheren Affinität als jene des Phagen, mit dem er vermischt war, erhalten werden konnte.
- Beispiel 29 Bildung und Selektion von Mutanten eines Anti-4-Hydroxy-3-nitrophenylessigsäure-(NP-)Antikörpers, der auf Phagen exprimiert wird, unter Einsatz von Mutatorstämmen
- Diese Beispiel betrifft das Einbringen von Mutationen in ein Gen für einen Antikörper, der in Phagen durch Züchten des Phagen in Stämmen, die statistisch die DNA aufgrund eines Defekts in der DNA-Replikation mutieren, kloniert wurde. Verschiedene Mutationen werden in den Phagen eingebracht, die vom ursprünglichen Phagen ausgewählt werden können.
- Beispiel 30 Eine Technik auf PCR-Basis für einstufige Klonierung von Human-V-Genen als Fab-Konstrukte
- Dieses Beispiel zeigt Verfahren für die Assemblierung von Fab-Fragmenten aus Genen für Antikörper. Beispiele sind für Gene für gegen Rhesus-D gerichtete Antikörper in einer Human-Hybridom- und einer polyklonalen lymphoblastischen Zellinie angeführt.
- Beispiel 31 Selektion eines Phagen, der ein Human-Fab-Fragment präsentiert, das gegen das Rhesus-D-Antigen gerichtet ist, durch Bindung an Zellen, die das Rhesus D-Antigen an ihrer Oberfläche präsentieren
- Dieses Beispiel betrifft die Konstruktion eines Phagemids, das für ein gegen das Rhesus D-Antigen gerichtetes Human-Fab-Fragment kodiert, und die Präsentation von Phagen-Antikörpern davon. Phagen, die dieses Antigen präsentieren, wurden dann auf Basis der Bindung an Rhesus D-positive rote Blutkörperchen über einem Hintergrund von Phagen, die scFvD1.3-Antilysozym präsentieren, Affinitätsselektion unterzogen.
- Beispiel 32 Eine auf PCR basierende Technik zur Ein-Schritt-Klonierung menschlicher scFv-Konstrukte
- Diese Beispiel beschreibt die Bildung von scFv-Fragment-Bibliotheken, die aus einem nichtimmunisierten Menschen erhalten wurden. Es werden Beispiele der Herstellung von Bibliotheken in Phagemiden zur Phagenpräsentation der scFv-Fragmente, die aus den IgG- und IgM-Sequenzen stammen, gezeigt.
- Beispiel 33 Isolierung der Bindeaktivitäten aus einer Bibliothek von scFvs aus einem nichtimmunisierten Menschen
- Dieses Beispiel beschreibt die Isolierung von Klonen für Phagenantikörper, die gegen BSA, Lyszym und Oxazolon gerichtet sind, aus der Bibliothek der scFv- Fragmente, die aus den IgM-Genen eines nicht immunisierten Menschen stammen. Die Selektion erfolgte durch Panning oder durch Affinitätschromatographie und Analyse der Bindespezifitäten durch ELISA. Die Sequenzierung der Klone zeigte, daß diese menschlichen Ursprungs sind.
- Beispiel 34 Ergänzung der menschlichen IgM-Bibliothek unter Verwendung eines Helferphagen, dem das Gen 3 fehlt (Δg3)
- Diese Beispiel betrifft die Isolierung von Klonen für Phagenantikörper, die spezifisch für Thyroglobulin und Oxazolon sind, aus der Bibliothek der aus den IgM-Genen eines nichtimmunisierten Menschen stammenden scFv-Fragmente. In diesem Beispiel erfolgte die Ergänzung mit M13K07gIII Nr.3 (NCTC12478), einem Helferphagen, dem das Gen III fehlt. Es zeigte sich, daß für eine Phagemidbibliothek, die mit diesem Phagen ergänzt wurde, in Vergleich zu einer, die mit M13K07 wiederhergestellt wurde, weniger Selektionsrunden notwendig sind.
- Beispiel 35 Änderung der Feinspezifität von auf Phagen präsentiertem scFvD1.3 durch Mutagenese und Selektion auf immobilisiertem Putenlysozym
- Dieses Beispiel betrifft die In-vitro-Mutagenese von pCATscFvD1.3 durch den statistischen Austausch mit Aminosäuren von Resten, von denen bekannt ist, daß sie bei der bevorzugten Erkennung von Hühnereilysozym gegenüber Puteneilysozym durch scFvD1.3 wichtig sind. Nach der Selektion nach Phagenantikörpern, die Puteneilysozym erkennen, durch Affinitätschromatographie, wurden die Klone auf ihre Spezifität mittels ELISA analysiert. Es wurden zwei Gruppen von Klonen mit gleicher Erkennung von Hühner- und Putenlysozym, eine mit erhöhtem ELISA-Signal mit dem Putenenzym und eine mit verringertem Signal für das Hühnerenzym gefunden.
- Beispiel 36 Modifikation der Spezifität eines Antikörpers durch Austausch der VLK-Domäne durch eine VLK-Bibliothek, die aus einer nicht immunisierten Maus stammt.
- Diese Beispiel zeigt, daß der Austausch der VL-Domäne von scFvD1.3, das spezifisch für Hühnereiweißlysozym (HEL) ist, durch eine Bibliothek von VL-Domänen die Selektion der scFv-Fragmente, die sich auch an Puteneiweißlysozym binden, ermöglicht. Die scFv-Fragmente wurden aus Phagen präsentiert und die Selektion erfolgte durch Panning in mit TEL beschichteten Röhrchen. Die Analyse mittels ELISA zeigte Klone mit im Vergleich zu HEL verstärkter Bindung an TEL. Jene mit der stärksten Bindung an TEL wurden sequenziert.
- Beispiel 37 Selektion einer Phagenantikörperspezifität durch die Bindung an ein Antigen, das an magnetische Perlen gebunden ist. Die Verwendung eines abspaltbaren Reagens, um die Elution der gebundenen Phagen unter schonenden Bedingungen zu ermöglichen.
- Dieses Beispiel betrifft die Verwendung einer spaltbaren Bindung im Affinitätsselektionsverfahren um die Freisetzung von gebundenen Phagen unter schonenden Bedingungen zu ermöglichen. pAbNQ11 wurde aus einem Gemisch mit pAbD1.3 durch die Selektion unter Verwendung von biotinyliertem Ox-BSA, das an magnetische Perlen gebunden ist, etwa 600fach angereichert. Die Spaltung einer Bindung zwischen BSA und dem Biotin ermöglicht die Elution des Phagen.
- Beispiel 38 Anwendung von Zellenselektion, um einen angereicherten Pool von Antigen-spezifischen Antikörpergenen bereitzustellen, Anwendung, um die Komplexität der Repertoires der Antikörperfragmente, die auf der Oberfläche von Bakteriophagen präsentiert werden, zu verringern
- Dieses Beispiel betrifft die Anwendung von Zellselektion, um einen angereicherten Pool von Genen, die für gegen 4-Hydroxy-3-nitrophenylessigsäure gerichtete Antikörper kodieren, herzustellen, und beschreibt, wie dieses Verfahren angewendet werden könnte, um die Komplexität der Antikörperrepertoires, die auf der Oberfläche von Bakteriophagen präsentiert werden, zu verringern.
- Beispiel 1
- Konstruktion der Insertionspunktslinker und Konstruktion der Vektoren
- Der Vektor fd-tet hat zwei BstEII-Restriktionsstellen, die die Tetracyclinresistenzgene flankieren (
3 ). Da es die Strategie zur Insertion der VH-Fragmente war, diese in eine neu innerhalb von Gen III insertierte BstEII-Stelle zu ligieren, war es vorteilhaft, die ursprünglichen BstEII-Stellen aus fd-tet zu löschen. Dies wurde erreicht, indem fd-tet mit dem Restriktionsenzymen BstEII gespalten wurde, die 5'-Überstände aufgefüllt und erneut ligiert wurde, um den Vektor fdTδBst zu bilden. Die Spaltung von fd-tet mit BstEII (0,5 Units/μl) wurde in 1 × KGB-Puffer (100 mM Kaliumglutamat, 23 mM Tris-Acetat (pH 7,5), 10 mM Magnesiumacetat, 50 μg/ml Rinderserumalbumin, 0,5 mM Dithiothreitol (Sambrook, J., et al., 1989, s.o.)) mit DNA bei einer Konzentration von 25 ng/μl durchgeführt. Die 5'-Überstände wurden unter Verwendung von 2 × KGB-Puffer, jeweils 250 μM dNTP's (Pharmacia Ltd., Pharmacia House, Midsummer Bolevark, Milton Keynes, Bucks., UK.) und 0,04 Units/μl Klenow-Fragment (Amersham International, Lincoln Place, Green End, Aylesbury, Bucks., UK) aufgefüllt. Nach einer einstündigen Inkubation bei Raumtemperatur, wurde die DNA mit Phenol/Chloroform extrahiert und mit Ethanol gefällt. - Die Ligationen wurden bei einer DNA-Konzentration von 50 ng/μl durchgeführt. Die Ligationen wurden in kompetente TG1-Zellen transformiert und auf TY-Platten, die mit 15 μg/ ml Tetracyclin versetzt waren, ausplattiert. Dies selektiert Vektoren, bei denen während des Ligationsschrittes das Gen für das Tetracyclinresistenzprotein wieder in den Vektor insertiert wurde. Die Kolonien wurden in 25 ml 2 × TY-Medium, das mit 15 μg/ ml Tetracyclin versetzt war, gegeben und über Nacht bei 37°C gezüchtet.
- Doppelsträngige DNA wurde unter Verwendung des Gene-Clean-II-Sets (Bio101 Inc., PO Box 2284, La Jolla, California, 92038-2284, USA.) aus den resultierenden Klonen und gemäß der darin beschriebenen Vorschrift zur schnellen DNA-Isolierung im kleinen Maßstab gereinigt. Die Orientierung von 5 der resultierenden Klone wurde mit dem Restriktionsenzym ClaI geprüft. Es wurde ein Klon ausgewählt, der dasselbe Restriktionsmuster durch ClaI aufwies wie fd-tet, der aber keine BstEII-Stellen hatte.
- Die In-vitro-Mutagenese von fdTδBst wurde benützt, um Vektoren mit geeigneten Restriktionsstellen, die das Klonieren von Antikörperfragmenten stromabwärts vom Gen III-Signalpeptid und im Rahmen mit der Gen III-Kodiersequenz erleichtern, zu bilden. Das auf Oligonucleotide gerichtete Mutagenesesystem in der Version 2 (Amersham International) wurde mit oligo 1 (
4 ) verwendet, um fdTPs/Bs zu bilden (um das Klonieren der VH-Fragmente zu erleichtern). Die Sequenz offdTPs/Bs (4 ) wurde unter Einsatz des Sequenase-Sets Version 2 (USB Corp., PO Box 22400, Cleveland, Ohio, 11422, USA.) mit oligo 3 (4 ) als Primer bestätigt. - Ein zweiter Vektor fdTPs/Xh (um das Klonieren der Einzelketten-Fv-Fragmente zu erleichtern) wurde durch das Mutagenisieren von fdTPs/Bs mit oligo 2 gemäß dem Verfahren von Venkitaraman, A.R., Nucl. Acid. Res. 17, S.3314 gebildet. Die Sequenz von fdTPs/Xh (
4 ) wurde unter Einsatz des Sequenase-Sets Version 2 (USB Corp.) mit oligo 3 als Primer bestätigt. - Alternative Konstrukte werden für den Fachmann auf dem Gebiet natürlich klar sein. Beispielsweise M13 und/oder seine Wirtsbakterien könnte(n) so modifiziert werden, daß sein Gen III ohne das Auftreten von exzessivem Zelltod unterbrochen werden könnte.
- Darüber hinaus wird erfindungsgemäß ein Plasmid eingesetzt, das einen einsträngigen Phagen-Replikationsursprung enthält, wie pUC119, so daß dort, wo das modifizierte fd-Gen III, oder ein anderes modifiziertes Protein, in das Plasmid eingebaut wird, die Superinfektion mit dem modifizierten Phagen, wie z.B. K07, dann die Einkapselung des Phagenantikörpergenoms in eine Hülle, die zum Teil vom Helferphagen und zum Teil vom Phagenantikörper-Gen III-Konstrukt stammt, ergibt.
- Die detaillierte Konstruktion eines Vektors, wie z.B. fdTPs/Bs, ist nur ein Weg, das Ziel eines Phagenantikörpers zu erreichen. Beispielsweise können Verfahren, wie z.B. die "Sticky feet"-Klonierung/Mutagenese (Clackson, T. and Winter, G. 1989, Nucl. Acids. Res., 17, S. 10163-10170) eingesetzt werden, um die Anwendung von Restriktionsenzymspaltungen und/oder Ligationsschritten zu vermeiden.
- Beispiel 2
- Insertion der Immunglobulin-Fv-Domäne in den Phagen
- Das Plasmid scFv D1.3 myc (zur Verfügung gestellt von G. Winter und A. Griffiths) enthält VH- und VL-Sequenzen aus dem Antikörper D1.3, die über eine Peptidlinkersequenz fusioniert sind, um eine Einzelketten-Fv-Version des Antikörper D1.3 zu bilden. Die Sequenz des scFv und die umgebenden Sequenzen in scFvD1.3 myc sind in
5 gezeigt. - Der D1.3-Antikörper ist gegen Hühnerei-Lysozym gerichtet (M. Harper, et al., 1987, Molec. Immunol. 24, 97-108), und die in E.coli exprimierte scFv-Form weist die gleiche Spezifität auf (persönliche Mitteilung von A. Griffiths und G. Winter).
- Die Spaltung von scFv D1.3 myc mit PstI und XhoI (diese Restriktionsstellen sind in
5 gezeigt) schneidet ein 693 bp-Fragment, das für den Hauptteil von scFv kodiert, heraus. Die Ligation dieses Fragments in fdTPs/Xh, der mit PstI und XhoI gespalten wurde, ergab das Konstrukt fdTscFvD1.3, das für das Gen III-Signalpeptid und die erste Aminosäure, die an den vollständigen D1.3 scFv fusioniert ist, gefolgt von dem reifen Gen III-Protein ab Aminosäure 2, kodiert. - Der Vektor fdTPs/Xh wurde für die Ligation durch 2-stündige Spaltung mit PstI und XhoI, gefolgt von einer 30-minütigen Spaltung mit alkalischer Phosphatase aus Kalbsdarm (Böhringer Mannheim UK Ltd, Bell Lane, Lewes, East Sussex, BN7 1LG) mit einem Unit/μl bei 37°C. Frische alkalische Phosphatase aus Kalbsdarm wurde bis zu einer Endkonzentration von 2 Units/μl zugegeben und weitere 30 Minuten bei 37°C inkubiert. Die Reaktionslösung wurde 3mal mit Phenol/Chloroform extrahiert, mit Ethanol gefällt und in Wasser gelöst. Das Insert wurde aus scFvD1.3 myc mit den geeigneten Restriktionsenzymen (PstI und XhoI) ausgeschnitten, 2mal mit Phenol/Chloroform extrahiert, mit Ethanol gefällt und in Wasser aufgelöst. Die Ligationen wurden wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführt, außer daß sowohl Vektor- als auch die Insertproben jeweils eine Endkonzentration von 5 ng/μl aufwiesen. Die Bildung des richtigen Konstruktes wurde wie in Beispiel 1 beschrieben durch Sequenzieren bestätigt.
- Um zu zeigen, daß Proteine mit der erwarteten Größe hergestellt wurden, wurden die Virionen durch PEG-Fällung wie oben beschrieben konzentriert. Die Proben wurden gemäß der Vorschrift in Sambrook, J. et al., s.o. vorbereitet. Äquivalente von 2 ml des Überstandes wurden auf ein 18%iges SDS-Polyacrylamidgel aufgegeben. Nach der Elektrophorese wurde das Gel 15 Minuten lang in Gellaufpuffer (50 mM Tris, 380 mM Glycin, 0,1 % SDS) mit 20% Methanol geweicht. Der Transfer auf Nitrocellulosefilter erfolgte in frischem 1 × Laufpuffer/20% Methanol unter Verwendung von TE70 Semi Phor, einem "halb-trocken"-Blotting-Gerät ("semi-dry blotting apparatus"; Höffer, 654 Minnesota Street, Box 77387, San Francisco, California 94107, USA.).
- Nach dem Transfer, wurden die Filter durch 1-stündige Inkubation in einer 2%igen Milchpulver-Lösung (Marvel) in Phosphat-gepufferter Salzlösung blockiert. Der Nachweis der scFv- und VH-Proteinsequenzen in den Phagenantikörperfusionsproteinen erfolgte durch 1-stündiges Weichen des Filters mit einer 1/1000-Verdünnung (in 2% Milchpulver) eines polyklonalen Kaninchenantiserums gegen Affinitäts-gereinigtes, bakteriell exprimiertes scFv-Fragment (von G. Winter zur Verfügung gestellt). Nach dem Waschen mit PBS (3 × 5 Minuten-Waschungen) wurde gebundener primärer Antikörper mit 1-stündiger Verwendung eines an Meerrettichperoxidase konjugierten Anti-Kaninchen-Antikörpers (Sigma, Fancy Road, Poole, Dorset, BH17 7NH, UK.) nachgewiesen. Die Filter wurden in PBS/0,1% Triton-X100 gewaschen und mit 0,5 mg/ml 3,3'-Diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB), 0,02% Kobaltchlorid, und 0,03% Wasserstoffperoxid in PBS entwickelt.
- Die Ergebnisse zeigten, daß mit den Klonen fdTVHD1.3 (aus Beispiel 3, beinhaltet für VH kodierende Sequenzen) und fdTscFvD1.3 (beinhaltet für scFv kodierende Sequenzen) ein Protein zwischen 69.000 und 92.500 Dalton durch das Anti-Fv-Serum detektiert wird. Das ist die für die konstruierten Fusionsproteine erwartete Größe. Dieses Produkt wird in von fd-tet, fdTδBst oder fdTPs/Xh gewonnenen Überständen nicht beobachtet.
- Beispiel 3
- Insertion der Immunglobulin-VH-Domäne in Phagenantikörper
- Das VH-Fragment aus D1.3 wurde aus dem Plasmid pSW1-VHD1.3-TAG1 (Ward, E.S. et al., 1989, s.o.) gebildet. Die Spaltung dieses Plasmids mit PstI und BstEII ergibt das in
5 zwischen den Positionen 113 und 432 gezeigte Fragment. Die Klonierung dieses Fragments in die PstI- und BstEII-Stellen von fdTPs/Bs ergab das Konstrukt fdTVHD1.3, das für ein Fusionsprotein mit einer vollständigen VH-Domäne, die zwischen die erste und dritte Aminosäure des reifen Gen III-Proteins (Aminosäure 2 wurde gelöscht) insertiert wurde, kodiert. - Die eingesetzten Verfahren waren genau wie in Beispiel 2, außer daß der verwendete Vektor fdTPs/Bs war, der mit PstI und BstII gespalten wurde.
- Beispiel 4
- Analyse der Bindespezifität der Phagenantikörper
- Die Bindung der spezifischen Phagenantikörper an das spezifische Antigen, Lysozym, wurde mit ELISA-Verfahren analysiert. Die Phagenantikörper (z.B. fdTVHD1.3 und fdTsc/FvD1.3) wurden in E.coli gezüchtet und Phagenantikörperteilchen wurden wie in Materialien und Verfahren beschrieben mit PEG gefällt. Die gebundenen Phagenantikörperteilchen wurden mittels polyklonalen Schafsserums gegen den nahe verwandten Phagen M13 nachgewiesen.
- ELISA-Platten wurden durch die Beschichtung von 96-Napf-Platten (Falcon Microtest III flexible Platte. Falcon: Becton Dickinson Labware, 1950 Williams Drive, Oxnard, California, 93030, USA) mit 200 μl einer Lysozymlösung (1 mg/ml, wenn nicht anders erwähnt) in 50 mM NaHCO3 für 16-24 Stunden vorbereitet. Vor der Verwendung wurde diese Lösung entfernt, die Platte mehrere Male in PBS gespült und mit 200 μl 2% Milchpulver/PBS eine Stunde lang inkubiert. Nach mehreren Spülungen mit PBS wurden 100 μl der Testproben zugegeben und eine Stunde inkubiert. Die Platten wurden gewaschen (3 Spülungen in 0,05% Tween 20/PBS, gefolgt von 3 Spülungen in PBS alleine). Die gebundenen Phagenantikörper wurden durch die Zugabe von 200 μl pro Napf einer 1/1000-Verdünnung von polyklonalem Anti-M13-Schafsserum (von G. Winter zur Verfügung gestellt, obwohl ein gleichwertiger Antikörper unter Anwendung von Standardverfahren von einem Fachmann auf dem Gebiet leicht hergestellt werden kann) in 2% Milchpulver/PBS und 1-stündige Inkubation nachgewiesen. Nachdem wie oben gewaschen wurde, wurden die Platten mit biotinyliertem Anti-Schaf-Antikörper (Amersham International) 30 Minuten lang inkubiert. Die Platten wurden wie oben gewaschen und mit dem Streptavidin-Meerrettichperoxidase-Komplex (Amersham International) inkubiert. Nach einer abschließenden Waschung (wie oben) wurden 0,5 mg/ml ABTS-Substrat in Citratpuffer zugegeben (ABTS: 2'2'-Azinobis(3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure); Citratpuffer = 50 mM Zitronensäure, 50 mM Trinatriumcitrat in einem Verhältnis von 54:46. Wasserstoffperoxid wurde auf eine Endkonzentration von 0,003% zugegeben und die Platten 1 Stunde lang inkubiert. Die optische Dichte bei 405 nm wurde in einem Titersek Multiskan-Plattenlesegerät abgelesen.
-
6 zeigt die Wirkung der Variation der Phagenantikörpermenge. 100 μl verschiedener Verdünnungen von mit PEG gefällten Phagen wurden aufgegeben und die Menge als ursprüngliches Kulturvolumen, aus dem er gewonnen wurde, ausgedrückt. Die Signale, die sowohl vom scFv enthaltenden Phagenantikörper (fdTscFvD1.3) als auch vom VH enthaltenden Phagenantikörper (fdTVHD1.3) erhalten wurden, waren stärker als jene, die vom Phagenantikörpervektor (fdTPs/Xh) erhalten wurden. Das höchste Signal/Rausch-Verhältnis tritt bei der Verwendung des Äquivalents von 1,3 ml der Kultur auf. -
7 zeigt die Ergebnisse der Beschichtung der Platten mit variierenden Konzentrationen an Lysozym oder Rinderserumalbumin (BSA). Das Äquivalent von 1 ml des ursprünglichen Phagenantikörperkulturüberstandes wurde. Die Signale von den Überständen, die mit fdTscFvD1.3 erhalten wurden, waren wieder stärker als jene, die mit fdTPs/Xh erhalten wurden, wenn mit Lysozym beschichtete Näpfe verwendet wurden. Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen den beiden Typen von Überständen, wenn die Platten mit BSA beschichtet waren. Allgemein gesagt ist der Signalwert auf den Platten proportional zur beschichteten Lysozymmenge. Diese Ergebnisse zeigen, daß die detektierte Bindung spezifisch für Lysozym als Antigen ist. - Beispiel 5
- Konstruktion von fd CAT 2
- Es wäre nützlich, Vektoren zu konstruieren, die die Verwendung von die DNA selten schneidenden Restriktionsenzymen ermöglichen, und somit die unerwünschte Spaltung der Antikörpergeninserte innerhalb ihrer Kodiersequenz vermeiden. Insbesondere Enzyme mit einer Erkennungssequenz von 8 Basen sind in diesem Zusammenhang nützlich, beispielsweise NotI und SfiI. Chaudhary (PNAS 87, S.1066-1070, 1990) identifizierten allgemein eine Anzahl von Restriktionsstellen, die im den variablen Genen von Antikörpern selten vorkommen. Die Anmelder haben als Beispiel, wie dieser Enzymtyp verwendet werden kann, einen Vektor gestaltet und konstruiert, der zwei dieser Stellen verwendet. Die für die Enzyme ApaLI und NotI notwendigen Stellen wurden in fdTPs/Xh eingebracht, um fdCAT2 zu bilden.
- Das folgende Oligonucleotid wurde synthetisiert: 5'-ACT TTC AAC AGT TTC TGC GGC CGC CCG TTT GAT CTC GAG CTC CTG CAG TTG GAC CTG TGC ACT GTG AGA ATA GAA-3' (siehe Beschreibung der
4 ) und benützt, um fdTPs/Xh unter Verwendung eines In-vitro-Mutagenese-Sets von Amersham International, wie in Beispiel 1 beschrieben, zu mutagenisieren um fd-CAT2 zu bilden. Die Sequenz von fd-CAT2 wurde rund um die Manipulationsstelle durch DNA-Sequenzieren überprüft. Die endgültige Sequenz rund um den Insertionspunkt innerhalb von Gen III ist in8 gezeigt. - N.B. fdCAT2 wird hierin auch durch die alternativen Begriffe fd-tet-DOG1 und fd-DOG1 bezeichnet.
- Beispiel 6
- Spezifische Bindung des Phagenantikörpers (pAb) an Antigen
- Die Bindung von pAb D1.3 (fdTscFvD1.3 aus Beispiel 2) an Lysozym wurde mittels ELISA weiter analysiert.
- Verfahren
- 1. Phagenwachstum
- Mit Phagen transduzierte Bakterienkulturen wurden in 10-100 ml 2 × TY-Medium mit 15 μg/ml Tetracyclin hergestellt und unter Schütteln bei 37°C 16-24 Stunden lang wachsen gelassen. Der Phagenüberstand wurde durch Zentrifugation der Kultur (10 Minuten bei 10.000 U/min, 8 × 50 ml Rotor, Sorval RC-5B Zentrifuge) gewonnen. Auf dieser Stufe war der Phagentiter 1-5 × 1010/ml transduzierende Einheiten. Die Phagen wurden durch Zugabe von 1/5 des Volumens an 20% PEG in 2,5 M NaCl, 1 Stunde lang Stehenlassen bei 4°C und Zentrifugieren (siehe oben) gefällt. Die Phagenpellets wurden in 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA pH 8,0 in 1/100 des ursprünglichen Volu mens erneut suspendiert, und die Bakterienreste und aggregierten Phagen durch 2-minütiges Zentrifugieren in einer Tisch-Mikrozentrifuge entfernt.
- ELISA
- Die Platten wurden mit Antigen (1 mg/ml Antigen) beschichtet und wie in Beispiel 4 blockiert. 2 × 1010 Phagen transduzierende Einheiten wurden den mit Antigen beschichteten Platten in Phosphat-gepufferter Salzlösung, die 2% Magermilchpulver (MPBS) enthält, zugegeben. Die Platten wurden zwischen jedem Schritt durch 3 Spülungen mit 0,5% Tween-20min PBS, gefolgt von 3 Spülungen mit PBS, gewaschen. Die gebundenen Phagen wurden durch Inkubation mit Anti-M13-Antiserum aus Schafen entwickelt und mit an Meerrettichperoxidase (HRP) konjugiertem Anti-Ziegen-Serum (Sigma, Poole, Dorset, UK), das auch Schafsimmunglobuline detektiert, und ABTS (2'2'-Azinobis(3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure)) nachgewiesen. Die Ablesungen bei 405 nm erfolgten nach einem geeigneten Zeitraum. Die Ergebnisse (
9 ) zeigen, daß der den Antikörper aufweisende Phage dasselbe Reaktivitätsmuster aufwies wie der ursprüngliche D1.3-Antikörper (Harper, M., Lema, F., Boulot, G., and Poljak, F.J. (1987) Molec. Immunol. 24, 97-108), und sich an Hühnereiweißlysozym, aber nicht an Puteneiweißlysozym, menschliches Lysozym oder Rinderserumalbumin band. Die Spezifität des Phagen wird insbesondere durch das Fehlen der Bindung an Puteneiweißlysozym, das sich von Hühnereiweißlysozym durch nur 7 Aminosäuren unterscheidet, veranschaulicht. - Beispiel 7
- Expression von Fab D1.3
- Das Ziel dieses Beispiels bestand darin zu zeigen, daß das in Beispiel 2 verwendete scFv-Format nur eine Möglichkeit zur Präsentation von Antikörperfragmenten im pAb-System war. Ein häufiger verwendetes Antikörperfragment ist das Fab-Fragment (
1 ), und dieses Beispiel beschreibt die Konstruktion eines pAb, der ein Fab-artiges Fragment auf seiner Oberfläche exprimiert, und zeigt, daß es sich spezi fisch an sein Antigen bindet. Die Anmelderin hat sich entschlossen, die Schwerkette des Antikörperfragments zu exprimieren, das aus den VH- und CH1-Domänen von Kodierungssequenzen innerhalb des pAb selbst besteht, und die Leichtkette in der mit dem pAb infizierten bakteriellen Wirtszelle zu co-exprimieren. Die VH- und CH1-Regionen von Anti-Lysozym-Antikörper D1.3 wurden in fd CAT2 kloniert, und die entsprechende Leichtkette in Plasmid pUC19 kloniert. Die Arbeit von Skerra und Pluckthun (Science 240, S. 1038-1040 (1988) und Better et al., 1988, s.o., zeigte, daß multimere Antigen-Bindefragmente des Antikörpermoleküls unter Einsatz geeigneter Signalsequenzen in funktioneller Form in das Periplasma der bakteriellen Zelle sekretiert werden können. In diesen Publikationen wurden jedoch spezielle Maßnahmen beschrieben, die den Ausführungen zufolge erforderlich sind, um das Bindeprotein aus der Zelle zu gwinnen, beispielsweise mussten Skerra und Pluckham das Fv-Fragment durch Affinitätschromatographie aus dem Periplasma gewinnen. Die Erfinder des vorliegenden Anmeldungsgegenstandes haben gezeigt, daß es möglich ist, das Bindemolekül auf einem Phagenteilchen an die Außenseite der Zelle zu lenken, ein Verfahren, für das mehrere Ereignisse eintreten müssen: Assoziation der Ketten des Bindemoleküls; korrektes Assemblieren des Phagenteilchens; und der Export des intakten Phagenteilchens aus der Zelle. - Alternativ dazu ist es jedoch möglich, die Leichtkette von innerhalb des pAb-Genoms beispielsweise durch Klonierung einer Expressionskassette in eine geeignete Stelle im Phagengenom zu exprimieren. Eine derartige geeignete Stelle wäre die Intergen-Region, in der sich die Multiklonierungsstelle befinden, die durch Engineering in Derivate des verwandten Phagen M13 eingebracht wurden (siehe beispielsweise C. Yanisch-Perron, et al., Gene 33, 103-119 (1985)).
- Der Ausgangspunkt für dieses Beispiel war der Klon Fab D1.3 in pUC19, dessen Karte in
10 gezeigt wird. Die mit den nachstehenden Oligonucleotiden KSJ6 und -7 hybridisierenden Regionen sind in10 unterstrichen gezeigt. Die für die VH-CH1-Region kodierende Sequenz (an den 5'- und 3'-Rändern durch die nachstehenden Oligonucleotide KSJ6 und -7 begrenzt) wurde aus Fab D1.3 in pUC19 unter Einsatz der Oligonucleotide KSJ 6 und 7 PCR-amplifiziert, die die PstI-Stelle am 5'-Ende beibehalten und eine Xho I-Stelle am 3'-Ende einführen, um das Klonieren in fd CAT2 zu erleichtern. Die Sequenzen für diese Oligonucleotide KSJ6 und 7 sind nachstehend gezeigt. Die unterstrichene Region von KSJ7 zeigt den Abschnitt, der mit der Sequenz für D1.3 hybridisiert.
KSJ6: 5' AGG TGC AGC TGC AGG AGT CAG G 3'
KSJ7: 5' GGT GAC CTC GAG TGA AGA TTT GGG CTC AAC TTT C 3' - Die PCR-Bedingungen waren wie in Beispiel II beschrieben, mit der Ausnahme, daß 30 Zyklen PCR-Amplifizierung mit Denaturierung bei 92 °C für 45 s, Annelieren bei 55 °C für 1 min und Extension bei 72 °C für 1 min durchgeführt wurden. Das verwendete Templat war DNA aus TG1-Zellen, die Fab D1.3 in pUC19 enthielten, resuspendiert in Wasser und aufgekocht. Die Templat-DNA wurde aus den Kolonien hergestellt, indem etwas Koloniematerial in 100 μl destilliertem H2O aufgenommen und für 10 min gekocht wurde. 1 μl dieses Gemisches wurde in einer 20 μl-PCR verwendet. Diese Vorgangsweise führte zur Amplizierung des erwarteten Fragments mit etwa 600 bp. Dieses Fragment wurde mit Pst I und Xho I geschnitten, auf Agarosegel gereinigt und in Pst 1/Xho 1-geschnittenes fdCAT2 ligiert. Das PCR-Gemisch wurde mit Phenol/Chloroform extrahiert und mit Ethanol gefällt (Sambrook et al., oben), bevor es mit PstI und Xho1 (New England Biolabs) nach den Empfehlung der Hersteller verdaut wurde. Das Fragment wurde auf 1 % Tris-Acetat-EDTA-Agarosegel (BIO 101, Geneclean, La Jolla, San Diego, Kalifornien, USA) gelöst.
- fd-CAT2-Vektor-DNA wurde nach den Empfehlungen der Hersteller mit Pst 1 und Xho 1 verdaut, mit Phenol/Chloroform extrahiert und mit Ethanol gefällt (Sambrook et al., s.o.).
- 75 ng Pst 1/Xho 1-verdaute Vektor-DNA wurde an 40 ng PCR-amplifiziertes Pst1/Xho I-verdautes hEGF-R-Fragment in 12 μl Ligationspuffer (66 mM TrisHCl (pH 7,6), 5 mM MgCl2, 5 mM Dithiothreitol, (100 μg/ml Rinderserumalbumin, 0,5 mM ATP, 0,5 mM Spermidin) und 400 Einheiten T4 DNA-Ligase (New England BioLabs) für 16 h bei 16 °C ligiert.
- 2 μl des Ligationsgemisches wurden in 200 μl kompetente E.coli MC1061-Zellen transformiert, auf 2TY-Agar plattiert, das 15 μg/ml Tetracyclin enthielt, und bei 20 °C für 20 h inkubiert. Ein Abschnitt des Ligationsreaktionsgemisches wurde in E.coli MC1061 transformiert (beispielsweise erhältlich von Clontech Laboratories Inc., Palo Alto, Kalifornien, USA), und Kolonien durch Hybridisierung mit dem Oligonucleotid D1.3CDR3A identifiziert wie in Beispiel 10 beschrieben. Das Vorhandensein des VHCH1-Genfragments wurde ebenfalls durch PCR bestätigt, wobei die Oligonucleotide KSJ6 und -7 verwendet wurden. Ein repräsentativer Klon erhielt die Bezeichnung fd CAT2VHCH1 D1.3. Die Schwerkette wurde von Fab D1.3 in pUC19 durch Sph I-Spaltung von Fab D1.3-Plasmid-DNA deletiert. Das pUC 19 2,7Kb-Fragment, das das Leichtkettengen enthielt, wurde aus einem TAE-Agarosegel gereinigt, und 10 ng dieser DNA Eigenligation unterzogen und in kompetente E.coli TG1 transformiert. Die Zellen wurden auf 2TY Agar ausplattiert, das Ampicillin (100 μg/ml) enthielt, und bei 30 °C über Nacht inkubiert. Die resultierenden Kolonien wurden verwendet, um Miniprep-DNA herzustellen (Sambrook et al., s.o.), und das Fehlen der Schwerkettengens durch Verdauung mit Sph I und Hind III bestätigt. Ein repräsentativer Klon erhielt die Bezeichnung Lcd1.3 DHC.
- Eine Kultur von fd CAT2VHCH.3-Zellen über Nacht wurde bei 13.000 × g 10 min lang mikrozentrifugiert, und 50 μl des Überstands, der Phagenteilchen enthielt, zu 50 μl einer Über-Nacht-Kultur von LCD1.3 DHC-Zellen hinzugefügt. Die Zellen wurden bei 37 °C 10 min lang inkubiert und auf 2TY-Agar plattiert, das Ampicillin (100 μg/ml) und 15 μg/ml Tetracyclin enthielt. Phagen wurden aus einigen der resultierenden Kolonien hergestellt und auf ihre Fähigkeit getestet, Lysozym zu binden, wie in Beispiel 6 beschrieben.
- Die Ergebnisse (
11 ) zeigten, daß sich der pAb an Lysozym band, wenn die Schwer- und Leichtketten-Fab-Derivate vom ursprünglichen Antikörper D1.3 vorhanden waren. Der fd VHCh1-Fragment bindende pAb band sich nur dann an Lysozym, wenn er in Zellen gezüchtet wurde, die auch die Leichtektte exprimieren. Das zeigt, daß ein funktionelles Fab-Fragment durch eine Assoziation der freien Leichtkette mit VHCH1-Fragment erzeugt wurde, das an Gen III fusioniert war, und auf der Oberfläche des pAb exprimiert wurde. - Beispiel 8
- Isolierung von spezifischen, gewünschten Phagen aus einem Gemisch von Vektorhagen
- Die Anmelder reinigten pAb (D1.3) (ursprünglich in Beispiel 2 als fdTscFvD1.3 bezeichnet) aus Gemischen unter Einsatz von Affinitätssäulen. pAb (D1.3) wurde mit dem Vektor fd-Phagen (siehe Tabelle 1) gemischt und etwa 1012 Phagen über eine Lysozym-Sepharose-Säule geschickt (aus mit Bromcyan aktivierter Sepharose 4B (Pharmacia, Milton Keynes, Bucks, UK) gemäß den Anleitungen der Produzenten hergestellt). TG1-Zellen wurden mit geeigneten Verdünnungen der Eluate infiziert und die erhaltenen Kolonien durch den Einsatz einer Oligonucleotid-Sonde, die nur den pAb (D1.3) nachweist, analysiert, siehe Tabelle 1 und
12 . Eine eintausendfache Anreicherung von pAb(D1.3) wurde bei einem einzigen Säulendurchgang beobachtet. Durch das Züchten der angereicherten Phagen und deren erneuten Durchgang durch die Säule wurden Anreicherungen bis hinauf zu einer Million beobachtet. - Die Anreicherung wurde auch unter Verwendung rein immunologischer Kriterien gezeigt. Beispielsweise wurden 1012 Phagen (bei einem Verhältnis von 1 pAb (D1.3) auf 4 × 106 fdTPs/Bs) zwei Affinitätsselektionsrunden unterzogen und dann 26 Kolonien genommen und über Nacht gezüchtet. Die Phagen wurden dann mittels ELISA (wie Beispiel 6) auf Lysozymbindung untersucht. Fünf Kolonien zeigten Phagen mit Lysozymbindeaktivitäten, siehe Tabelle 1, und es wurde mittel PCR-Screenen (Beispiel 13, bei Verwendung von 30 Zyklen mit 1 Minute bei 92°C, 1 Minute bei 60°C, 1 Minute bei 72°C und mit CDR3PCR1 und oligo 3 (
4 ) als Primer) gezeigt, daß diese für scFv (D1.3) kodieren. - Somit können sehr seltene pAbs aus großen Populationen herausgefischt werden, indem Antigen zur Selektion verwendet wird und dann die Phagen gescreent werden.
- In diesem Beispiel wurden die Affinitätschromatographie von pAbs und der Einsatz der Oligonucleotidsonde wie unten beschrieben durchgeführt.
- Etwa 102 Phagenteilchen in 1 ml PBS wurden auf eine 1 ml Lysozym-Sepharose-Affinitätssäule, die in MPBS vorgewaschen wurde, aufgegeben; die Säule wurde nacheinander mit 10 ml PBS; dann 10 ml 50 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl pH 7,5; dann 10 ml 50 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl pH 8,5; dann 5 ml 50 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl pH 9,5 (mit Triethylamin eingestellt) gewaschen und dann mit 5 ml 10 mM Triethylamin eluiert. Das Eluat wurde mit 0,5 M Natriumphosphatpuffer pH 6,8 neutralisiert und die Phagen zur Analyse ausplattiert. Für eine zweite Affinitätschromatographierunde, wurde das erste Säuleneluat auf etwa 30.000 Kolonien pro Petrischale ausplattiert. Nach dem Wachstum über Nacht, wurden die Kolonien dann in 5 ml 2 × TY-Medium gekratzt, und eine 20 μl Aliquote in 10 ml frischem Medium verdünnt und über Nacht gezüchtet. Die Phagen wurden mit PEG, wie oben beschrieben, gefällt, in 1 ml MPBS erneut suspendiert und auf die Säule aufgebracht, gewaschen und wie oben eluiert.
- Die synthetisierten Oligonucleotide waren:
CDR3PCR1 5'-TGA GGA C(A oder T) C(A oder T) GC CGT CTA CTA CTG TGC-3' - 40 pMol des Oligonucleotids VH1FOR (Ward, W.S., et al., (1989) Nature 341, 544-546), der für pAb (D1.3) spezifisch ist, wurde mit 100 μCi α-32P ATP phosphoryliert, an Nitrocellulosefilter bei 67°C in 6 × Natriumcitratsalzlösungs-(SSC) (Sambrook et al., s.o.)-Puffer 30 Minuten lang hybridisiert (1 pMol/ml) und 30 Minuten lang auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, sowie 3 × 1 Minute bei 60°C in 0,1 × SSC gewaschen.
- Beispiel 9
- Konstruktion von pAb die Anti-Hapten-Aktivität exprimieren
- Oxazolon ist ein Hapten, das herkömmlicherweise zur Untersuchung der Details der Immunantwort verwendet wird. Der Anti-Oxazolon-Antikörper NQ11 wurde bereits beschrieben (E. Gherardi, R. Pannell, C. Milstein, J. Immunol. Method 126, 61-68). Ein Plasmid, das die VH- und VL-Gene von NQ11 enthält, wurde in eine scFv-Form umgewandelt, indem das BstEII/SacI-Fragment von scFvD1.3 myc (die Nucleotide 432-499 in
5 ) zwischen die VH- und VL-Gene insertiert wurde, um pscFvNQ11 zu bilden, dessen Sequenz in13 dargestellt ist. Dieser scFv wurde in die PstI/XhoI-Stelle von FdTPs/Xh kloniert (wie früher beschrieben), um pAb zu bilden. NQ11 hat eine innere PstI-Stelle und daher war es notwendig, eine vollständige Spaltung von pscFvNQ11 mit XhoI zu machen, gefolgt von einer teilweisen Spaltung mit PstI. - Die spezifische Bindung von pAb NQ11 wurde mittels ELISA bestätigt. ELISA-Platten wurden bei 37°C bei einer Proteinkonzentration von 200 μg/ml in 50 mM NaHCO3 beschichtet. Die Platten wurden entweder mit Hühnereilysozym (HEL), Rinderserumalbumin (BSA) oder mit an Oxazolon konjugiertem (Konjugationsverfahren in Makela O., Kartinen M., Pelkonen J.L.T., Karfalainen K. (1978) J. Exp. Med. 148, 1644) BSA (OX-BSA) beschichtet. Die Vorbereitung der Phagen, die Bindung an ELISA-Platten, das Waschen und die Detektionwaren wie in Beispiel 6 beschrieben. Die Proben wurden in Doppelversuchen untersucht und die durchschnittliche Absorption nach 10 Minuten ist in
14 dargestellt. - Dieses Ergebnis zeigt, daß der pAb NQ11 sich an das richtige Antigen bindet.
14 zeigt auch, daß pAb D1.3 und pAb NQ11 sich nur an jenes Antigen binden, gegen das der ursprüngliche Antikörper gerichtet war. - Beispiel 10
- Anreicherung von pAbD1 3 aus Gemischen anderer pAbs durch Affinitätsreinigung
- 3 × 1010 Phagen in 10 ml PBSM in den in Tabelle 2 gezeigten Verhältnissen von pAb D1.3 zu pAb NQ11 wurden über eine 1 ml Sepharosesäule geschickt. Das Waschen, die Elution und die anderen Verfahren waren wie in Beispiel 8 beschrieben, wenn nicht anders erwähnt. Die Eluate aus den Säulen wurden zur Infektion von TG1-Zellen verwendet, die dann ausplattiert wurden. Die Kolonien wurden mit einer Sonde untersucht, die zwischen pAb D1.3 und pAb NQ11 unterscheidet. Die Sequenz dieses Oligonucleotids (D1.3CDR3A) ist: 5'-GTA GTC AAG CCT ATA ATC TCT CTC-3'. Tabelle 2 zeigt die Daten aus diesem Experiment. Eine Anreicherung von zumindest 1000fach wurde in einer Runde und einer Anreicherung von über 1 Million-fach in zwei Reinigungsrunden erreicht. Dies gleicht dem in Beispiel 8 beschriebenen Ergebnis.
- Beispiel 11
- Insertion von Bindemolekülen in alternative Stellen im Phagen
- Die Verfügbarkeit einer alternativen Stelle zur Insertion von Bindemolekülen im Phagen würde die Möglichkeit eröffnen, leichter mehr als ein Bindemolekül, z.B. ein Antikörperfragment, in einem einzigen pAb exprimieren zu können. Dies kann verwendet werden, um einzelne oder vielfache Bindespezifitäten zu bilden. Das Vorhandensein von zwei unterschiedlichen Bindeaktivitäten auf einem einzelnen Molekül erhöht die Nützlichkeit und Spezifität dieses Moleküls beträchtlich. Dieses kann bei der Bindung von Viren mit einer hohen Mutationsrate, wie z.B. der menschliche Immunschwäche-Virus ("human immunodeficiency virus", HIV), nützlich sein. Zusätzlich kann es verwendet werden, um Antigene in unmittelbare Nähe (z.B. Arzneimitteldesign ("drug targetting") oder Zellenfusion) zu bringen oder es kann als "molekulare Klammer" ("molecular clamp") in chemischen, immunologischen und enzymatischen Verfahren wirken.
- Der Vektor fd-tet und die hierin beschriebenen Derivate haben eine einzelne BamHI-Stelle in Gen III. Das wurde bereits zur Expression von Peptidfragmenten auf der Oberfläche von filamentösen Bakteriophagen verwendet (Smith GP. (1985) Science 228, S. 1315-1317 und de la Cruz et al., (1988) J. Biol. Chem. 263, S.4318-4322). Dies bietet eine mögliche alternative Stelle zur Insertion von Antikörperfragmenten.
- DNA-Fragmente, die für scFv's aus D1.3 oder NQ11 kodieren, wurden durch PCR unter Verwendung der unten gezeigten Primer hergestellt. Die Primer waren so gestaltet, daß sie ein Fragment mit BamHI-Stellen in der Nähe der beiden Enden aufweisen, um das Klonieren in die BamHI-Stelle von Gen III zu ermöglichen (siehe
16(1) ). Die verwendeten Oligonucleotide stellen ebenfalls sicher, daß dem resultierenden PCR-Produkt PstI- und XhoI-Restriktionsstellen fehlen, die normalerweise verwendet werden, um die scFv's zu manipulieren (siehe16(1) ). Dies erleichtert die nachfolgende Manipulation eines zweiten Antikörpertragments in der herkömmlichen Weise am N-Terminus von Gen III. Die verwendeten Oligonucleotide waren:
G3Bam1 5'-TTT AAT GAG GAT CCA CAG GTG CAG CTG CAA GAG-3'
G3Bam2 5'-AAC GAA TGG ATC CCG TTT GAT CTC AAG CTT-3'. - Herstellung des Vektors und PCR-Insertion
- Die PCR-Reaktion wurde in einer 80 μl-Reaktion wie in Beispiel 11 beschrieben unter Verwendung von 1 ng/μl Templat und 0,25 U/μl Taq-Polymerase und einer Zyklusabfolge von: 94°C 1 Minute lang, 60°C 1 Minute lang und 70°C 2 Minuten lang über 30 Zyklen durchgeführt. Das Templat war entweder pscFvNQ11 (Beispiel 9) oder scFvD1.3 myc (Beispiel 2). Die Reaktionsprodukte wurden mit Phenol/Chloroform extrahiert, gefällt, in Wasser gelöst und mit BamHI gemäß den Angaben des Herstellers gespalten. Die Spaltlösung wurde erneut mit Phenol/Chloroform extrahiert, gefällt und in Wasser gelöst.
- Der Vektor fdTPs/Xh wurde mit BamHI gespalten und mit Kalbsdarmphosphatase behandelt und wie in Beispiel 2 gereinigt. Die Ligationen wurden mit einer Vektorkonzentration von etwa 6 ng/μl und einer PCR-Insertkonzentration von etwa 3 ng/μl angesetzt. Diese wurden 2,5 Stunden lang bei Raumtemperatur vor der Transformation in kompetente Zellen und dem Ausplattieren auf TY-tet-Platten ligiert. Die resultierenden Kolonien wurden wie in Beispiel 8 beschrieben sondiert. Aus einer Anzahl von Kolonien wurde die DNA isoliert und die korrekte Ausrichtung und Insertgröße durch Restriktionsspaltung mit HindIII alleine oder in Kombination mit BamHI bestätigt. (Eine HindIII-Stelle wird von einem der Primer beigetragen und die andere vom Vektor).
- Zwei Klone, die ein D1.3-Insert enthalten (fdTBam1 und fdTBam2) und einer der ein NQ11-Insert enthält (NQ11Bam1) wurden gezüchtet und die Phagen wie bereits früher beschrieben isoliert. ELISA's wurden wie in Beispiel 6 durchgeführt. Es wurde für keinen dieser Klone ein spezifisches Signal gefunden, das vermuten läßt, daß die natürliche BamHI-Stelle keine geeignete Stelle zur Insertion eines funktionellen Antikörpers ist (die Ergebnisse sind nicht gezeigt).
- Es kann möglich sein, in alternative Stellen zu klonieren, um die Bindeaktivität beizubehalten. Die in Gen III vorhandenen Peptidwiederholungen können solch eine Stelle bieten (
16 Block A und B). Dies kann durch Insertion einer BamHI-Stelle und Verwendung des oben beschriebenen PCR-Produktes erfolgen. Um dies zu erleichtern, wurde die natürliche BamHI-Stelle durch Mutagenese mit dem unten gezeigten Oligonucleotid G3mutδBam (unter Verwendung eines In-vitro-Mutagenese-Sets (Amersham International)) entfernt:
G3mutδBam 5'-CA AAC GAA TGG GTC CTC CTC ATT A-3'. - Der unterstrichene Rest ersetzt einen A-Rest, wodurch die BamHI-Stelle entfernt wurde. Die DNA wurde aus einer Anzahl von Klonen isoliert und einige Mutanten ohne BamHI-Stellen durch Restriktionsspaltung identifiziert.
- Das Oligonucleotid G3 Bamlink wurde konstruiert, um eine BamHI-Stelle an einer Anzahl von möglichen Stellen innerhalb der Peptidlinkerstellen A und B einzubringen, siehe
16(2) . Die Sequenz des Linkers ist:
Bamlink 5'-CC (G oder A) CC ACC CTC GGA TCC (G oder A) CC ACC CTC-3' - Seine Beziehung zu den Peptidwiederholungen in Gen III ist in
16 gezeigt. - Beispiel 12
- PCR-Assemblierung der VH- und VLK-κ-Repertoires aus Mäusen zur Phagenpräsentation
- Das Prinzip ist in
17 veranschaulicht. Die Details werden in den Abschnitten A bis F geboten, aber die grobe Richtlinie wird zuerst besprochen. - 1. cDNA wird aus Milz-RNA aus einer geeigneten Maus hergestellt und die VH- und VLK-Repertoires einzeln amplifiziert. Getrennt werden zu VH1FOR-2 (Domäne 1) und VLK1BACK (Domäne 2) umgekehrte und komplementäre Primer verwendet, um eine existierende scFv enthaltende DNA durch PCR zu amplifizieren. (Der Ausdruck FOR bezieht sich z.B. auf einen Primer zur Amplifikation von Sequenzen auf dem Sense-Strang, wodurch sich Antisense-Kodiersequenzen ergeben. Der Ausdruck BACK bezieht sich z.B. auf einen Primer zur Amplifikation von Sequenzen auf dem Antisense-Strang, wodurch sich Sense-Kodiersequenzen ergeben.). Dies ergibt ein "Linker"-Molekül, das für den Linker mit der Aminosäuresequenz (Ein-Buchstaben-Code) (GGGGS)3, der mit den zwei primären (VH und VLK) PCR-Produkten überlappt, kodiert.
- 2. Die getrennt amplifizierten VH-, VLK- und Linkersequenzen müssen jetzt in ein kontinuierliches DNA-Molekül durch die Verwendung einer "Assemblierungs"-PCR angeordnet werden. In der zweiten "Assemblierungs"-PCR werden die VH-, VLK- und Linkerbanden kombiniert und aufgrund des oben bezüglich Ü berlappungen erwähnten assembliert. Dies ergibt ein assembliertes DNA-Fragment, das die Expression der VH- und einer VLK-Domäne lenkt. Die spezifische VH/VLK-Kombination wird statistisch aus den oben erwähnten getrennten VH- und VLK-Repertoires erhalten.
- Die Assemblierungs-PCR wird in zwei Stufen durchgeführt. Zuerst 7 Zyklenrunden nur mit den in der PCP vorhandenen Banden, gefolgt von weiteren 20 Runden in Gegenwart der flankierenden Primer VH1 BACK (bezieht sich auf Domäne 1 von VH) und VLKFOR. Die Oligonucleotidsequenzen für diese Oligonucleotidprimer werden im Abschnitt mit dem Titel "Primersequenzen" gezeigt. Dieses Zweistufen-Verfahren vermeidet das mögliche Problem der bevorzugten Amplifikation der ersten zu assemblierenden Kombinationen.
- Zur Klonierung in das Phagensystem müssen die assemblierten Repertoires mit den geeigneten Restriktionsstellen "markiert" werden. Im weiter unten dargestellten Beispiel wird dies durch das Vorsehen einer ApaLI-Restriktionsstelle am VH-Ende des kontinuierlichen DNA-Moleküls und einer NotI-Stelle am VLK-Ende des Moleküls veranschaulicht. Dies wird durch eine dritte Stufe der PCR unter Verwendung von "markierten" Primern durchgeführt. Die Nucleotidsequenzen für diese Oligonucleotidprimer werden unten im Abschnitt mit dem Titel "Primersequenzen" angeführt. Es gibt jedoch 4 mögliche κ-Sequenzen der leichten Kette (wohingegen eine einzige Konsensussequenz der schweren Kette verwendet werden kann). Daher werden 4 Oligonucleotidsequenzen für VLK vorgesehen.
- In dieser dritten Stufe der PCR wurden Sets von Primern, die eine neue Restriktionsstelle bilden und weitere 10 Nucleotide auf der 5'-Seite der Restriktionsstelle aufweisen, verwendet. Lange "Markierungen" ergeben jedoch ein besseres Schneidergebnis, wobei Überstände mit 15-20 Nucleotiden verwendet werden können.
- Vorschriften für äußerst sauberes Arbeiten müssen zu jeder Zeit während der PCR eingehalten werden, um Kontamination zu vermeiden. Es müssen immer Blindver gleiche ohne DNA eingeschlossen werden, um Kontaminationen festzustellen. Die Gelboxen müssen von Purin befreit werden. Ein dafür vorgesehenes Geneclean Set (B10 101, Geneclean, La Jolla, San Diego, California, USA) kann gemäß den Angaben der Hersteller verwendet werden, um DNA aus einem Agarosegel zu extrahieren. Die Perlen, Nal und die NEW-Waschung sollten in aliquoten Anteilen eingesetzt werden.
- Alle Enzyme wurden von CP Laboratories, P.O. Box 22, Bishop's Stortford, Herts CM20 3DH, erhalten und die von den Herstellern empfohlenen und gelieferten Puffer wurden, wenn nicht anders erwähnt, verwendet.
- A. RNA-Isolierung
- RNA kann durch viele den Fachleuten auf dem Gebiet bekannte Arbeitsvorschriften isoliert werden. Beispielsweise ergibt die folgende Arbeitsvorschrift (Triton X-100-Lyse, Phenol/SDS-RNase-Inaktivierung) hervorragende Ergebnisse mit Milz- und Hybridomzellen (die Zugabe von VRC ("veronal ribosyl complex", Veronal-Ribosom-Komplex) als RNase-Hemmer ist für Milzzellen erforderlich). Guanidin/Isothiocyanat/CsCI-Arbeitsvorschriften (wobei die gesamte zelluläre RNA erhalten wird) geben ebenfalls gute Ergebnisse, sind aber zeitaufwendiger.
- 1. 1-5 × 107 Zellen werden durch 10-minütige Zentrifugation in einer Tischzentrifuge bei 800 g und 4°C geerntet. Diese werden erneut in 50 ml kaltem PBS-Puffer suspendiert. Die Zellen werden wieder bei 800 g und 4°C 10 Minuten lang zentrifugiert und der Überstand verworfen.
- 2. Auf Eis wird 1 ml eiskalter Lysepuffer dem Pellet zugegeben und mit einer 1 ml-Gilsonpipette durch sanftes Auf- und Abpipettieren erneut suspendiert. Dies wird 1 Minute auf Eis stehen gelassen.
- 3. Nach der Lyse werden die Zellenreste durch Zentrifugation bei 1300 U/min fünf Minuten lang in einer Mikrozentrifuge bei 4°C in vorgekühlten Röhrchen entfernt.
- 4. 0,5 ml Überstand werden jeweils in zwei Eppendorfgefäße, die 60 μl 10% (Gew./Vol.) SDS und 250 μl Phenol (zuvor mit 100 mM Tris-HCl pH 8,0 äquilibriert) enthalten, übergeführt. Es wird 2 Minuten stark gevortext, dann fünf Minuten bei Raumtemperatur in einer Mikrozentrifuge (13.000 U/min) zentrifugiert. Die obere, wäßrige Phase wird in ein frisches Röhrchen übergeführt.
- 5. Die obere wäßrige Phase wird erneut fünfmal mit 0,5 ml Phenol extrahiert.
- 6. Mit 1/10 des Volumens 3 M Natriumacetat und 2,5 Volumina Ethanol wird über Nacht bei 20°C oder 30 Minuten mit Trockeneis/Isopropanol gefällt.
- 7. Das RNA-Pellet wird gewaschen und in 50 μl erneut suspendiert, um die Konzentration durch die Messung der optischen Dichte bei 260 nm zu prüfen und 2 μg werden auf einem Agarosegel geprüft. 40 μg RNA wurden von aus einer Maus stammenden Milzzellen erhalten.
- Der Lysepuffer [10 mM Tris-HC. pH 7,4, 1 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 10 mM VRC (New England Biolabs), 0,5% (Gew./Vol.) Triton X-100] wird frisch hergestellt.
- B. cDNA-Isolierung
- cDNA kann durch viele den Fachleuten auf dem Gebiet wohlbekannte Arbeitsvorschriften isoliert werden. Beispielsweise kann die folgende Arbeitsvorschrift verwendet werden:
- 1. Es wird das folgende Reverse-Transkription-Gemisch hergestellt: H2O (mit DEPC behandelt): 20 μl 5 mM dNTP: 10 μl 10 × Erststrang-Puffer: 10 μl 0,1 M DTT: 10 μl FOR-Primer (10 pmol/μl): 2 μl (jeweils) (siehe unten) RNasin (Promega; 40 U/μl): 4 μl NB i.) DEPC ist Diethylpyrocarbonat, dessen Funktion die Inaktivierung aller Enzyme ist, die DNA oder RNA abbauen könnten ii.) dNTP ist Desoxynucleotidtriphosphat iii.) DTT ist Dithiothreitol, dessen Funktion die eines Antioxydans ist, um eine für die Enzymfunktion erforderliche reduzierende Umgebung zu schaffen. iv.) RNasin ist ein Ribonucleaseinhibitor, der von Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road, Madison, Wisconsin, USA, erhalten wurde
- 2. Es wurden 10 μg RNA auf 40 μl Endvolumen mit mit DEPC behandeltem Wasser verdünnt. Dann wurde 3 Minuten lang bei 65°C wärmebehandelt und eine Minute auf Eis gehalten (um die Sekundärstruktur zu entfernen).
- 3. Der RNA wurde das Reverse-Transkription-Gemisch (58 μl) sowie 4 μl klonierte Reverse Transkriptase "Super RT" (Anglian Biotech Ltc., Whitehall House, Whitehall Road, Colchester, Essex) zugegeben und bei 42°C eine Stunde lang inkubiert.
- 4. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Minuten gekocht, eine Minute auf Eis gekühlt und dann in einer Mikrozentrifuge zentrifugiert, um die Zellreste als Pellet zu erhalten. Der Überstand wird in ein neues Röhrchen übergeführt.
- 10 × Erststrang-Puffer ist [1,4 M KCl, 0,5 M Tris-HCl pH 8,1 bei 42°C 80 mM MgCl2].
- Die Primer annelieren an das 3'-Ende. Beispiele für Primer für leichte Ketten vom κ-Typ sind MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX und MJKSFONX (unter "Primersequenzen" unten angegeben) und Beispiele für Primer für die schweren Ketten sind MIGG1, 2 (CTG GAC AGG GAT CCA GAG TTC CA) und MIGG3 (CTG GAC AGG GCT CCA TAG TTC CA), die an CH1 annelieren.
- Alternativ dazu können beliebige Primer, die sich an das 3'-Ende der variablen Regionen VH, VLK, VL, oder an die konstanten Regionen CH1, CK, oder CL binden, verwendet werden.
- C. Primäre PCRs
- Für jede PCR und jeden Blindvergleich, wurden die folgenden Reaktionen angesetzt (z.B. eine Reaktion für jede der vier VLK- und der vier VH-PCRs). In der Folge wurde die Vent-DNA Polymerase, die von C.P.Laboratories Ltd. (New England Biolabs, Adresse weiter oben) verkauft wird, verwendet. Die Puffer sind die durch C.P.Laboratories bereitgestellt.
H2O 32,5 μl 10 × Vent-Puffer 5 μl 20 × Vent-BSA 2,5 μl 5 mM dNTPs 1,5 μl FOR-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl BACK-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl - Die FOR- und BACK-Primer werden weiter unten im Abschnitt mit dem Titel "Primersequenzen" gezeigt. Für VH ist der FOR-Primer VH1 FOR-2 und der BACK-Primer VH1 BACK. Für VLK sind die FOR-Primer MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX und MJK5FONX (für die 4 jeweiligen leichten Ketten vom κ-Typ) und der BACK-Primer ist VK1BACK. Es ist nur ein BACK-Primer für die leichte Kette vom κ-Typ erforderlich, da die Bindung an eine Nucleotidsequenz erfolgt, die den 4 leichten Ketten vom κ-Typ ähnlich ist.
- Dieses Gemisch wird 5 Minuten lang mit UV-Licht bestrahlt. Es werden 2,5 μl cDNA-Präparat (aus B; weiter oben), und 2 Tropfen Paraffinöl (Sigma Chemicals, Poole, Dorset, UK) zugegeben. Dann wird dies auf einen für Zyklen geeigneten Heizblock z.B. einen PHC-2, der von Techne Ltd., Duxford, UK, hergestellt wurde, gegeben, wobei dieser bereits auf 94°C eingestellt ist. Es wird 1 μl Vent-DNA-Polymerase unter das Paraffin zugegeben. Dann wird mit 25 Zyklen mit 94°C 1 Minute, 72°C 2 Minuten amplifiziert. Die Nachbehandlung bei 60°C erfolgt 5 Minuten lang.
- Dies wird auf einem 2% Imp-("low melting point", niedrigschmelzendem/TAE(Tris-Acetat EDTA-)Gel gereinigt und die DNA in 20 μl Wasser pro ursprünglicher PCR unter Verwendung des Geneclean-Sets (siehe oben) gemäß den Angaben der Hersteller extrahiert.
- D. Herstellung der Linker
- In größerer Menge ansetzen (z.B. 10fach).
H2O 34,3 μl 10 × Vent-Puffer 5 μl 20 × Vent-BSA 2,5 μl 5 mM dNTPs 2 μl LINKFOR-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl LINKBACK-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl DNA aus scFv D1.3 (Beispiel 2) 1 μl Vent-Enzym 0,2 μl - Die FOR- und BACK-Primer werden weiter unten im Abschnitt mit dem Titel "Primersequenzen" gezeigt. Der FOR-Primer ist LINKFOR und der BACK-Primer BACKFOR. Es wird mit Paraffinöl überschichtet und auf einen für Zyklen geeigneten Heizblock, siehe oben, mit 94°C gegeben. Dann wird mit 25 Zyklen mit 94°C 1 Minute, 65°C 1 Minute, 72°C 2 Minuten amplifiziert. Die Nachbehandlung bei 60°C erfolgt 5 Minuten lang.
- Dies wird auf einem 2% Imp/TAE-Gel gereinigt (unter Verwendung eines Ladefarbstoffes ohne Bromphenolblau, da ein 93 bp-Fragment gewünscht ist) und mit SPIN-X die Säule (Costar Limited, 205 Broadway, Cambridge, Ma.,USA) eluiert und gefällt.
- Pro PCR-Reaktion wird dies in 5 μl H2O aufgenommen.
- E. Assemblierungs-PCRs
- Ein Viertel jedes PCR-Reaktionsprodukts (5 μl) wird für jede Assemblierung verwendet. Das Gesamtvolumen beträgt 25 μl.
- Für jeden der vier VLK-Primer wird folgendes angesetzt:
H2O 4,95 μl 10 × Vent-Puffer 2,5 μl 20 × Vent-BSA 1,25 μl 5 mM dNTPs 0,8 μl - Dieses Gemisch wird 5 Minuten lang mit UV-Licht bestrahlt. Dann werden jeweils 5 μl der VH- und VLK-Bande aus der primären PCR und 1,5 μl Linker, der aus den präparativen Gelen isoliert und wie oben in C und D beschrieben mittels des Geneclean-Sets extrahiert wurde, zugegeben. Dies wird mit Paraffin überschichtet und auf einen für Zyklen geeigneten Heizblock, der auf 94°C vorgeheizt ist, gegeben. Es wird mit 7 Zyklen mit 94°C 2 Minuten, 72°C 4 Minuten amplifiziert. Dann wird die Temperatur wieder auf 94°C eingestellt.
- Es werden jeweils 1,5 μl VH1 BACK und der geeignete VLKFOR-Primer MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX oder MJK5FONX (10 pMol/μl) bei 94°C zugegeben. Der Primer sollte wie oben mit UV behandelt sein. Es wird mit 20 Zyklen mit 94°C 1,5 Minuten, 72°C 2,5 Minuten amplifiziert. Die Nachbehandlung bei 60°C erfolgt 5 Minuten lang. Dies wird auf einem 2% Imp/TAE-Gel gereinigt und die DNA in 20 μl H2O pro Assemblierungs-PCR unter Verwendung eines Geneclean-Sets (siehe oben) gemäß den Angaben der Hersteller extrahiert.
- F. Addition von Restriktionsstellen
- Für jede Assemblierung und jeden Vergleich wird folgendes angesetzt:
H2O 36,5 μl 10 × Taq-Puffer 5 μl 5 mM dNTPs 2 μl FOR-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl BACK-Primer (10 pMol/μl) 2,5 μl Assemblierungsprodukt 1 μl - Die FOR- und BACK-Primer werden weiter unten im Abschnitt mit dem Titel "Primersequenzen" gezeigt. Der FOR-Primer ist ein beliebiger aus JK1NOT10, JK2NOT10, JK4NOT10 oder JK5NOT10 (für die jeweiligen vier leichten Ketten vom κ-Typ) um eine Not1-Restriktionsstelle am VLK-Ende anzubringen. Der BACK-Primer ist HBKAPA10, um eine ApaL1-Restriktionsstelle am VH-Ende anzubringen.
- Dies wird mit Paraffin überschichtet und auf einen für Zyklen geeigneten Heizblock, der auf 94°C vorgeheizt ist, gegeben. Dann werden 0,5 μl Cetus-Taq-DNA-Polymerase (Cetus/Perkin-Elmer, Beaconsfield, Bucks, UK) unter das Paraffin zugegeben. Die Amplifikation wird mit 11-15 Zyklusrunden (von der Effizienz abhängig) bei 94°C 1 Minute, 55°C 1 Minute, 72°C 2 Minuten durchgeführt. Die 5-minütige Nachbehandlung erfolgte bei 60°C.
- 10 × Taq-Puffer ist [0,1 M Tris-HCl pH 8,3 bei 25°C, 0,5 M KCl, 15 mM MgCl2, 1 mg/ml Gelatine].
- G. Aufarbeitung
- Es wird einmal mit Chloroform/IAA (Isoamylalkohol), einmal mit Phenol, einmal mit Chloroform/IAA gereinigt und alles nachextrahiert, um minimale Verluste zu gewährleisten. Es wird mit 70% Ethanol gefällt und zweimal gewaschen. Dies wird in 70 μl H2O gelöst.
- Über Nacht wird mit NotI bei 37°C gespalten:
DNA (verbundene Sequenz) 70 μl NEB NotI-Puffer × 10 10 μl NEB BSA × 10 10 μl NotI (10 U/μl) 10 μl - "DNA (verbundene Sequenz)" oben bezieht sich auf die assemblierte DNA-Sequenz, die in 5'-3'-Richtung folgendes umfaßt:
ApaL1-Restriktionsstelle
VH-Sequenz
Linker-Sequenz
VLK-Sequenz
Not1-Restriktionsstelle - Die VLK-Sequenz kann eine der vier möglichen Kettensequenzen vom κ-Typ sein.
- Die Enzyme Not 1 (oben), ApaL1 (unten) und die Puffer NEB Not 1, NEB BSA (oben) und der NEB Puffer 4 (unten) können von den C.P.Laboratories, New England Biolabs, s.o., erhalten werden.
- Es wird erneut gefällt, und in 80 μl H2O aufgenommen. Dazu werden 10 μl NEB Puffer 4 und 10 μl ApaL 1 gegeben.
- Das Enzym ApaL 1 wird in Aliquoten über den Tag verteilt zugegeben, da es eine kurze Halbwertszeit bei 37°C hat.
- Dies wird auf einem 2% Imp/TAE-Gel gereinigt und die DNA unter Verwendung eines Geneclean-Sets gemäß den Angaben der Hersteller extrahiert. Wenn notwendig, wird erneut gespalten.
- H. DNA-Endprodukt
- Das DNA-Endprodukt ist ein etwa 700 bp umfassendes Fragment mit ApaL1- und Not1-kompatiblen Enden, das aus durch einen Linker verbundenen, statistisch angeordneten Sequenzen der schweren und der leichten Kette besteht. Ein für diese Art typisches Molekül ist das in fdsdFvD1.3 inkorporierte scFvD1.3-Molekül, das in Beispiel 3 beschrieben ist. Diese Moleküle können dann in geeignete, aus fd gewonnene Vektoren, z.B. fdCAT2 (Beispiel 5), unter Verwendung von Standardverfahren ligiert werden.
- Primersequenzen
-
- Primäre PCR-Oligonucleotide (die Restriktionsstellen sind unterstrichen):
- Mehrdeutige Codes M = A oder C, R = A oder G, S = G oder C, W = A oder T PCR-Oligos zur Linkerherstellung:
- Für die Hinzufügung der Restriktionsstellen:
- Beispiel 13
- Konstruktion eines Phagemids, das Gen III als Fusion mit der Kodiersequenz für ein Bindemolekül enthält
- Es wäre nützlich, die Transfektionseffizienz des Phagen-bindenden Molekülsystems zu verbessern und auch über die Möglichkeit, verschiedene Anzahlen und Spezifitäten der Bindemoleküle auf der Oberfläche desselben Bakteriophagen zu präsentieren, zu verfügen. Die Anmelder haben ein Verfahren entwickelt, das beide Ziele erreicht.
- Der Ansatz kommt aus dem Phagemidsystem, das auf pUC119 [Vieira, J. and Messing, J. (1987) Methods Enzymol. 153:3] basiert. Kurz gesagt, wurde das Gen III aus fd-CAT2 (Beispiel 5) und die Gen III-scFv-Fusion aus fd-CAT2 scFv D1.3 (Beispiel 2) stromab vom lac-Promotor in getrennte Proben von pUC119 kloniert, damit das insertierte Gen III und die Gen III-Fusion durch den M13M07-Helferphagen (Vieira, J. and Messing, J., s.o.), der gemäß Sambrook et al., 1989, s.o., hergestellt wurde, wiederhergestellt werden können. Es wäre zu erwarten, daß die Mehrheit der wiederhergestellten Phagen ein vom pUC119-Plasmid stammendes Genom enthält, das die Bindemolekül-Gen III-Fusion enthält und verschiedene Anzahlen des Bindemoleküls auf der Oberfläche bis hinauf zum normalen Maximum von 3-5 Molekülen von Gen III auf der Oberfläche des Phagen vom Wildtyp exprimieren sollte. Das System wurde unten unter Verwendung eines Antikörpers als Bindemolekül beispielhaft ausgeführt.
- Ein fdCAT2, der die Einzelketten-Fv-Form des D1.3 Anti-Lysozym-Antikörpers enthält, wurde durch Spaltung von fdTscFvD1.3 (Beispiel 2) mit Pst1 und Xho1, Reini gung des das scFv-Fragment enthaltenden Fragments und Ligieren desselben in einen mit Pst1 und Xho1 gespaltenen fdCAT2 gebildet. Der geeignete Klon, mit der Bezeichnung fdCAT2 scFvD1.3, wurde nach dem Ausplattieren auf 2 × TY-Tetracyclin (15 μg/ml) ausgewählt und durch Restriktionsenzym- und Sequenzanalyse bestätigt.
- Gen III aus fd-CAT2 (Beispiel 5) und die Gen III-Fusion aus fd-CAT2 scFvD1.3 wurde mit den unten gezeigten Primern A und B PCR-amplifiziert.
Primer A: TGC GAA GCT TTG GAG CCT TTT TTT TTG GAG ATT TTC AAC G
Primer B: CAG TGA ATT CCT ATT AAG ACT CCT TAT TAC GCA GTA TGT TAG C - Primer A anneliert an das 5'-Ende des Gen III, das die Ribosomenbindestelle umfaßt und beinhaltet eine HindIII-Stelle. Primer B anneliert an das 3'-Ende des Gen III am C-Terminus und beinhaltet zwei UAA-Stopcodons und eine EcoRI-Stelle. 100 ng fd-CAT2 und fd-CAT2 scFv D1.3 wurden als Template zur PCR-Amplifikation in einem Gesamtreaktionsvolumen von 50 μl, wie in Beispiel 7 beschrieben, verwendet, außer daß 20 Amplifikationszyklen durchgeführt wurden: 94°C 1 Minute, 50°C 1 Minute, 72°C 3 Minuten. Dies ergab die Amplifikation des erwarteten 1,2 Kb-Fragments aus fd-CAT2 und ein 1,8 Kb-Fragment aus fd-CAT2 scFv D1.3.
- Die PCR-Fragmente wurden mit EcoRI und HindIII gespalten, auf einem Gel gereinigt und in eine mit EcoRI und HindIII geschnittene und dephosphorylierte pUC119-DNA ligiert und unter Verwendung von Standardverfahren (Sambrook et al., s.o.) in E.coli TG1 transformiert. Die transformierten Zellen wurden auf SOB-Agar (Sambrook et al., 1989, s.o.), der 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose enthält, ausplattiert. Die resultierenden Klone wurden mit pCAT-3 (aus fd-CAT2 erhalten) und pCAT-3 scFv D1.3 (aus fd-CAT2 scFv D1.3 erhalten) bezeichnet.
- Beispiel 14
- Wiederherstellung der Anti-Lysozym-Antikörperspezifität aus pCAT-3 scFv D1.3 durch M13K07
- Einzelne pCAT-3- und pCAT-3 scFv D1.3-Kolonien wurden in 1,5 ml 2TY, das 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose enthält, überführt und 6 Stunden bei 30°C gezüchtet. 30 μl dieser stationären Zellen wurden zu 6 ml 2TY, das 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose enthält, in 50 ml Polypropylenröhrchen (Falcon, Becton Dickinson Labware, 1950 Williams Drive, Oxnard, Ca., USA) zugegeben und 1,5 Stunden bei 30°C in einem New Brunswick Kreisschüttler (New Brunswick Scientific Ltd., Edison House 163 Dixons Hill road, North Mimms, Hatfield, UK) bei 380 U/min gechüttelt. Die Zellen wurden durch 25-minütige Zentrifugation bei 5.000 g zu einem Pellet geformt und die Röhrchen auf Löschpapier getrocknet. Die Zellpellets wurden dann in 6 ml 2TY, das 1,25 × 109 p.f.u. (Plaque forming units, Plaque-bildende Einheiten)/ml zugegebene M13K07-Bakteriophagen enthält, suspendiert. Das Gemisch wurde 5 Minuten auf Eis gelassen und dann 45 Minuten lang bei 450 U/min und 35°C wachsen gelassen. Es wurde dann ein Cocktail zugegeben, der 4 μl 100 μg/ml Ampicillin, 0,5 μl 0,1 M IPTG und 50 μl 10 mg/ml Kanamycin enthält, und die Kulturen über Nacht bei 35°C und 450 U/min wachsen gelassen.
- Am darauffolgenden Tag wurden die Kulturen zentrifugiert und die Phagenpartikel wie in Beispiel 6 mit PEG gefällt. Die Phagenpellets wurden in 100 μl TE (Tris-EDTA, siehe Beispiel 6) erneut suspendiert und die Phagen auf E.coli TG1 titriert. Aliquote der infizierten Zellen wurden auf 2TY, das entweder 100 μg/ml Ampicillin zur Selektion nach pUC119-Phagenpartikel oder 50 μg/ml Kamamycin zur Selektion nach M13K07-Helferphagen enthält, ausplattiert. Die Platten wurden bei 37°C über Nacht inkubiert und die Antibiotika-resistenten Kolonien gezählt:
- Dies zeigt daß die ampR-Phagenpartikel infektiös sind und in der "ergänzten" Phagenpopulation in einem 100fachen Überschuss gegenüber dem kanR-M13K07-Helferphagen vorhanden sind.
- Die Phagen wurden mittels ELISA wie in Beispiel 6 beschrieben auf Anti-Lysozym-Aktivität untersucht, wobei die folgenden Modifikationen vorgenommen wurden:
- 1) Die ELISA-Platten wurden 3 Stunden lang mit 2% Marvel/PBS geblockt.
- 2) 50 μl Phagen, 400 μl 1 × PBS und 50 μl Marvel wurden 20 Minuten lang bei Raumtemperatur durch dauerndes Umdrehen gemischt, bevor jedem Napf 150 μl zugegeben wurden.
- 3) Den Phagen wurde bei Raumtemperatur ein Zeitraum von zwei Stunden zur Bindung gelassen.
- 4) Alle Waschungen nach der Phagenbindung waren: 2 schnelle Spülungen PBS/0,5% Tween 20 3 × 2 Minuten Waschung PBS/0,5% Tween 20 2 schnelle Spülungen PBS ohne Tensid 3 × 2 Minuten Waschung PBS ohne Tensid
- Das Ergebnis dieses ELISA ist in
19 gezeigt und demonstriert, daß die Antikörperspezifität tatsächlich effizient "wiederhergestellt" werden kann. - Es scheint eine Grundregel in der bakteriellen Genetik zu sein, daß, wenn mutante Proteine und Proteine vom Wildtyp in derselben Zelle co-exprimiert werden, das Protein vom Wildtyp bevorzugt verwendet wird. Dies ist analog zur obigen Situation, worin die mutanten Proteine (d.h. Antikörperfusion) und die Gen III-Proteine vom Wildtyp (aus M13K07) in Konkurrenz um die Assemblierung als Teil des pUC119-Phagemidpartikels stehen. Man steht daher der Tatsache gegenüber, daß die Mehrheit der resultierenden pUC119-Phagemidteilchen weniger Gen III-Antikörper-Fusionsmoleküle auf deren Oberfläche aufweisen, als dies bei reinen Phagensystem, wie z.B. in Beispiel 2 beschrieben, der Fall ist. Solche Phagemidantikörper binden daher wahrscheinlich Antigen mit einer niedrigeren Avidität als fd-Phagenantikörper mit drei oder mehr Kopien der Antikörperfusion auf deren Oberfläche (es gibt in dem beschriebenen System, z.B. in Beispiel 2, kein Gen III vom Wildtyp), und sie bieten einen Weg zur Herstellung von Phagenteilchen mit verschiedenen Anzahlen desselben Bindemoleküls (und daher verschiedenen Aviditäten für Ligand/Antigen) oder – durch den Einsatz von Helferphagen wie z.B. M13K07, um Zellen, die zwei oder mehr Gen III-Antikörper-Fusionen exprimieren, zu "ergänzen" – mit mehreren verschiedenen Bindespezifitäten auf deren Oberfläche.
- Es ist auch möglich, Helferphagen zu erhalten, die in deren Genomen für kein funktionelles Gen III kodieren (z.B. durch die Deletion der Gen III-Sequenz oder eines Abschnitts davon oder durch den Einbau einer "amber"-Mutation innerhalb des Gens). Diese defekten Phagen wachsen nur auf geeigneten Zellen (z.B. solche, die ein fuktionelles Gen III in trans bieten, oder ein "amber"-Suppressor-Gen enthalten), aber wenn diese verwendet werden, um Phagenantikörper zu ergänzen, bauen diese nur die vom Phagemid kodierte Gen III-Antikörperfusion in die freigesetzten Phagenteilchen ein.
- Beispiel 15
- Transformationseffizienz der pCAT-3- und pCAT-3 scFvD1.3-Phagemide
- Die DNA's der Plasmide pUC 19, pCAT-3 und pCAT-3 scFvD1.3 sowie die DNA des Phagen fdCAT2 wurden isoliert und zur Transformation von E.coli TG1 verwendet. Die pCAT-3- und pCAT-3 scFvD1.3-Transformationen wurden auf SOB-Agar, der 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose enthält, ausplattiert und über Nacht bei 30°C inkubiert. Die fdCAT-2-Transformationen wurden auf 15 μg/ml enthaltendem TY-Agar ausplattiert und über Nacht bei 37°C inkubiert. Die Transformationseffizienzen sind als Kolonien pro μg eingebrachter DNA angegeben.
DNA Transformationseffizienz pUC 19 1.109 pCAT-3 1.108 pCAT-3 scFvD1.3 1.108 fdCAT-2 8.105 - Wie erwartet ist die Transformation des Phagemidvektors etwa 100fach effizienter als der ursprüngliche fdCAT-2-Vektor. Weiters beeinträchtigt die Gegenwart eines scFv-Antikörperfragments die Effizienz nicht. Diese Verbesserung der Transformationseffizienz ist bei der Bildung von Phagenantikörperbibliotheken, die große Repertoires an verschiedenen Bindespezifitäten aufweisen, von praktischem Nutzen.
- Beispiel 16
- PCR-Assemblierung einer Einzelketten-Fv-Bibliothek aus einer immunisierten Maus
- Um die Nützlichkeit des Phagen zur Selektion von Antikörpern aus Repertoires zu zeigen, ist es zuerst notwendig, eine vielfältige, repräsentative Bibliothek des Antikörperrepertoires eines Tieres herstellen und dieses Repertoire auf der Oberfläche des Bakteriophagen fd präsentieren zu können.
- Zytoplasma-RNA wurde wie in Beispiel 12 aus den vereinten Milzorganen von fünf Balb/c-Mäusen, die 8 Wochen nach der primären Immunisierung mit 2-Phenyl-5-oxarolon (ph OX), das an Hühnerserumalbumin gekuppelt ist, aufgefrischt wurden, isoliert. Die cDNA-Herstellung und PCR-Assemblierung der κ-Repertoires der VHs und VLs aus Mäusen zur Phagenpräsentation war wie in Beispiel 12. Die so erhaltenen Moleküle wurden in fdCAT2 ligiert.
- Der Vektor fdCAT2 wurde gründlich mit Not1 und ApaL1 gespalten, durch Elektroelution gereinigt (Sambrook et al., 1989, s.o.) und 1 μg (5 μg für die hierarchischen Bibliotheken, siehe Beispiel 18) an 0,5 μg der assemblierten scFv-Gene in 1 ml mit 8.000 Units T4-DNA-Ligase (New England Biolabs) ligiert. Die Ligation wurde über Nacht bei 16°C durchgeführt. Das gereinigte Ligationsgemisch wurde in 6 Aliquoten in MC1061-Zellen (W.J.Dower, J.F.Miller & C.W.Ragsdale, Nucl.Acids Res. 16, 6127-6145, 1988) elektroporiert und auf NZY-Medium (Sambrook et al., 1989, s.o.) mit 15 μg/ml in 243 × 243 mm Platten (Nunc) ausplattiert: 90-95% der Klone enthielten scFv-Gene mittels PCR-Screening.
- Rekombinante Kolonien wurden mittels PCR (Bedingungen wie in Beispiel 7) unter Verwendung der Primer VH1 BACK und MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX und MJK5FONX (siehe Beispiel 12) gescreent, gefolgt von einer Spaltung mit dem häufig schneidenden Enzym BstN1 (New England Biolabs, gemäß dem Herstellerangaben verwendet). Die Bibliothek der 2 × 105 Klone schien vielfältig, wie dies durch die Vielfalt der Spaltmuster, die in
20 zu sehen sind, zu beurteilen ist, und das Sequenzieren zeigte das Vorhandensein der meisten VH-Gruppen (R.Dildrop, Immunol. Today, 5, 85-86, 1984) und VK-Untergruppen (Kabat. E.A. et al., s.o.)(keine Daten angegeben). Keiner der 568 untersuchten Klone band sich an phOx, wie durch einen ELISA wie in Beispiel 8 nachgewiesen wurde. - Somit ist die Fähigkeit, Antikörper auszuwählen, die durch die Verwendung von Phagenantikörpern (wie in Beispiel 17) geboten wird, notwendig, um leicht Antikörper mit Antigenbindeaktivität aus statistisch kombinierten VH- und VL-Domänen zu isolieren. Sehr aufwendiges Screenen wäre notwendig, um Antigenbindefragmente zu isolieren, wenn der statistische kombinatorische Ansatz von Huse et al., 1989 (s.o.) verwendet würde.
- Beispiel 17
- Selektion von Antikörpern, die für 2-Phenyl-5-oxazolon spezifisch sind, aus einem Repertoire einer immunisierten Maus
- Die in Beispiel 16 hergestellte Bibliothek wurde verwendet, um diese Fähigkeit des Phagensystems, Antikörper auf der Basis ihrer Antikörperspezifität auzuwählen, zu demonstrieren.
- Keiner der 568 Klone, die aus der nicht selektierten Bibliothek untersucht wurden, band sich an phOx, wie mittels ELISA nachgewiesen wurde.
- Das Screenen nach der Bindung des Phagen an Hapten wurde mittels ELISA durchgeführt: 96-Napf-Platten wurden über Nacht bei Raumtemperatur mit 10 μg/ml phOx-BSA oder 10 μg/ml BSA in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) beschichtet. Die Beimpfung mit Kolonien der mit Phagen transduzierten Bakterien erfolgte in 200 μl 2 × TY mit 12,5 μg/ml Tetracyclin in 96-Napf-Platten ("cell wells", Nuclon); diese wurden 24 Stunden lang bei 37°C unter Schütteln (300 U/min) wachsen gelassen. Auf dieser Stufe waren die Kulturen gesättigt und die Phagentiter reproduzierbar (1010 TU/ml). Dann wurden 50 μl Phagenüberstand, gemischt mit 50 μl PBS, das 4% Magermilchpulver enthält, den beschichteten Platten zugegeben. Weitere Details waren wie in Beispiel 9.
- Die Phagenbibliothek wurde über eine phOx-Affinitätssäule geschickt (Tabelle 3A) und mit Hapten eluiert. Die Kolonien aus der in Beispiel 18 hergestellten Bibliothek wurden in 50 ml 2 × TY-Medium gekratzt und bei 37°C 30 Minuten lang geschüttelt. Die freigesetzten Phagen wurden zweimal mit Polyethylenglykol gefällt und erneut auf 1012 TU (transduzierende Einheiten)/ml Wasser suspendiert (Titer wie in Beispiel 8 bestimmt). Zur Affinitätsselektion wurde eine 1 ml phOx-BSA-Sepharose-Säule (O. Makela, M. Kaartinen, J.L.T. Pelonen and K. Karjalainen, J. Exp. Med. 148, 1644-1660, 1978) mit 300 ml Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS), und 20 ml PBS, die 2% Magermilchpulver enthält (MPBS), gewaschen. Die Säule wurden mit 1012 TU Phagen in 10 ml PBS beladen, mit 10 ml MPBS und abschließend mit 200 ml PBS gewaschen. Die gebundenen Phagen wurden mit 5 ml 1 mM 4-ε-Aminocapronsäuremethylen-2-phenyl-oxazol-5-on (phOx-CAP: O. Makela et al., 1978, s.o.) eluiert. Etwa 106 TU eluierte Phagen wurden mittels Infektion von 1 ml in der log- Phase befindlichem E.coli-TG1 amplifiziert und wie oben ausplattiert. Für eine weitere Selektionsrunde wurden die Kolonien in 10 ml 2 × TY-Medium gekratzt und dann wie oben verarbeitet. Man stellte fest, daß sich nach der ersten Selektionsrunde von den eluierten Klonen 13% an phOx banden, wobei die mittels ELISA nachgewiesene Bindung von schwach bis stark reichte.
- Um die Klone zu sequenzieren, wurde Templat-DNA aus den Überständen von 10 ml Kulturen, die 24 Stunden gewachsen waren, isoliert und unter der Verwendung des Didesoxy-Verfahrens und eines Sequenase-Sets (USB), mit dem Primer LINKFOR (siehe Beispiel 12) für die VH-Gene und dem Primer fdSEQ1 (5'-GAA TTT TCT GTA TGA GG) für die Vk-Gene sequenziert. 23 dieser Hapten-bindenden Klone wurden sequenziert und 8 verschiedene VH-Gene (A bis H) wurden in einer Vielfalt von Paarungen mit sieben verschiedenen Vk-Genen (a bis g) (
21 ) gefunden. Die meisten Domänen, wie z.B. VH-B und Vk-d waren "promiskuiv", und konnten Hapten mit jedem dieser Partner binden. - Die Sequenzen der V-Gene waren mit jenen verwandt, die in der Sekunkärantwort auf phOx zu sehen waren, aber mit Unterschieden (
21 ). So setzen die phOx-Hybridome aus der sekundären Antwort somatisch mutierte Derivate der drei Typen an Vk-Genen-Vkoxl., "Vkox.-ähnliche" und Vk45.1-Gene (C. Berek, G.M. Griffiths & C. Milstein, Nature 316, 412-418 (1985)) – ein. Diese können sich mit VH-Genen aus einigen Gruppen paaren, wobei jene aus Vkox herkömmlicherweise eher mit dem VHoxl-Gen (VH-Gruppe 2. R. Dildrop, s.o.) ein Paar bilden. Vkoxl-Gene werden immer, und Vkox-ähnliche Gene oft, in Verbindung mit schweren Ketten (einschließlich Vhoxl) gefunden und enthalten einen kurzen Fünferrest CDR3, mit der Grundsequenz Asp-X-Gly-X-X, worin das zentrale Glycin zur Bildung einer Kavität für phOx notwendig ist. In der statistischen kombinatorischen Bibliothek gehören jedoch fast alle VH-Gene zu Gruppe 1, und viele der Vk-Gene waren ox-ähnlich und mit VH-Domänen mit einem Fünferrest mit der Sequenz Asp/Asn-X-Gly-X-X (21 ) verbunden. Vkoxl und Vhoxl wurden nur einmal gefunden (Vk-f und VH-E), und nicht miteinander kombiniert. Bei Vk-f fehlt das Trp91, das bei der phOx-Bindung beteiligt ist, und es bildete mit einem VH (VH-C) mit einem Sechserrest-CDR3 ein Paar. - Eine Matrixkombination der VH- und VK-Gene wurde bei phOx-bindenden Klonen, die aus dieser statistischen kombinatorischen Bibliothek ausgewählt wurden, identifiziert. Die Anzahl der mit jeder Kombination gefundenen Klone ist in
22 gezeigt. Es zeigte sich, daß die Bindung an phOx-BSA bei Beurteilung mittels ELISA-Signal variierte (durch Schattierung in22 hervorgehoben). Es zeigte sich keine Bindung an BSA alleine. - Eine zweite Selektionsrunde aus der ursprünglichen statistischen kombinatorischen Bibliothek aus immunen Mäusen ergab, daß 93% der eluierten Klone phOx banden (Tabelle 3). Die meisten dieser Klone waren Vk-d-Kombinationen und banden sich beim ELISA stark an phOx (die Daten sind nicht gezeigt). Einige schwach Bindende waren zu sehen. Dies läßt vermuten, daß die Affinitätschromatographie nicht nur die Bindenden angereichert hat, sondern auch die am besten Bindenden.
- Mittels Fluoreszenzquenchtitrationen wurde der Kd von VH-B/Vk-d für phOx-GABA mit 10-8 M (siehe Beispiel 19) bestimmt, was zeigt, daß Antikörper mit Affinitäten, die repräsentativ für die Sekundärantwort sind, aus der Sekundärantwort ausgewählt werden können; nur zwei (von 11 untersuchten) sekretieren Antikörper mit einer höheren Affinität als VH-B/Vk-d (C. Berek et al., 1985, s.o.). Der Kd von VH-B/Vk-b für phOx-GABA wurde mit 10-5 M bestimmt (Beispiel 19). Es können also Phagen, die scFv-Fragmente mit schwachen Affinitäten aufweisen, mit Antigen selektiert werden, wahrscheinlich aufgrund der Avidität mehrerer Antikörperköpfe auf den Phagen.
- Dieses Beispiel zeigt, daß Antikörperspezifitäten aus Bibliotheken, die von immunisierten Mäusen gewonnen wurden, isoliert werden können. Es wird oft notwendig sein, diese Antikörper in einer löslichen Form für weitere Untersuchungen und zur Verwendung in therapeutischen und diagnostischen Anwendungen zu exprimieren. Beispiel 19 zeigt die Bestimmung der Avidität der löslichen scFv-Fragmente, die mittels Phagenantikörper selektiert wurden. Beispiel 23 zeigt, daß lösliche Frgmente ähnliche Eigenschaften aufweisen wie jene die auf Phagen präsentiert werden. Für viele Zwecke ist es notwendig, ein Antikörpermolekül zu konstruieren und zu exprimieren, das die Fc-Abschnitte der schweren Kette enthält, und vielleicht den Im munglobulin-Isotyp zu variieren. Um dies zu erreichen, ist es notwendig, die Antigenbindestellen, die mittels des Phagenselektionssystems identifiziert wurden, in einen Vektor zur Expression in Säugetierzellen zu subklonieren, wobei ähnliche Verfahren verwendet werden wie jene, die von Orlandi et al., (1989, s.o.) beschrieben wurden. Beispielsweise können die VH- und VL-Gene mittels PCR mit Primern, die geeignete Restriktionsstellen enthalten, getrennt amplifiziert und in Vektoren insertiert werden, wie z.B. in pSV-gpt HuIgG1 (L. Riechmann et al., Nature 332, 323-327, 1988), der die Expression der VH-Domäne als Teil des IgG1-Isotyps mit schwerer Kette ermöglicht, und pSV-hyg HuCK, der die Expression der an die Konstantregion der leichten Kette vom κ-Typ befestigten VL-Domäne ermöglicht. Weiters können Fusionen der VH- und VL-Domänen mit Genen, die für nicht Immunglobulinproteine kodieren, beispielsweise Enzymen, durchgeführt werden.
- Beispiel 18
- Bildung weiterer Antikörperspezifitäten durch die Assemblierung von hierarchischen Bibliotheken
- Weitere Antikörperspezifitäten können aus der in den Beispiel 16 und 17 hergestellten und gescreenten Bibliothek unter Verwendung eines hierarchischen Ansatzes gewonnen werden.
- Die Promiskuität der VH-B- und Vk-d-Domänen veranlaßte die Anmelder weitere Paarungen zu bewirken, indem diese Gene mit dem gesamten Repertoire, sowohl Vk- als auch VH-Genen, aus der gleichen immunisierten Maus assembliert wurden. Die resultierenden "hierarchischen" Bibliotheken, (VH-B × Vk-rep und VH-rep × Vk-d), mit jeweils 4 × 107 Bestandteilen, wurden einer Selektionsrunde unterzogen und die Hapten-bindenden Klone isoliert (Tabelle 3). Wie mittels ELISA gezeigt wurde, waren die meisten stark bindend. Indem 24 Klone aus jeder Bibliothek sequenziert wurden, identifizierten die Anmelder vierzehn neue Partner für VH-B und dreizehn für Vk-d (
21 ). Abgesehen von VH-B und Vk-c wurde keiner der vorherigen Partner (oder andere Klone) aus der statistischen kombinatorischen Bibliothek erneut isoliert. Wieder waren die Vk-Gene hauptsächlich ox-ähnlich und die VH-Gene hauptsächlich aus Gruppe 1 (wie in Dildrop R., s.o. definiert), aber die einzigen Beispiele von Vkoxl (Vk-h, -p, -q und -r) hatten Trp91 und die VH-CDR3-Sequenz Asp-X-Gly-X-X herrscht nun vor. Somit scheinen einige Merkmale der phOx-Hybridome stärker in der hierarchischen Bibliothek in Erscheinung zu treten. Die neuen Partner unterscheiden sich voneinander hauptsächlich durch kleine Änderungen in den CDRs, was anzeigt, daß viel von der feinen Vielfalt vom statistischen kombinatorischen Ansatz ungenützt geblieben ist. Allgemeiner gesagt, wurde gezeigt, daß ein Spektrum an verwandten Antikörpern hergestellt werden kann, indem ein Partner fixiert wird und der andere variiert wird, und dies könnte sich als unbezahlbar für die Feinabstimmung der Antikörperaffinität und -spezifität erweisen. - Daher ermöglichen Phagenantikörper wiederum, daß ein größerer Bereich von Antikörpermolekülen auf gewünschte Eigenschaften untersucht wird.
- Dieses Beispiel und Beispiel 17 zeigen die Isolierung von einzelnen Antikörperspezifitäten durch die Präsentation auf der Phagenoberfläche. Für einige Zwecke kann es gewünscht sein, ein Gemisch an Antikörpern zu haben, äquivalent zu einem polyklonalen Antiserum (beispielsweise zur Immunfällung). Um ein Antikörpergemisch herzustellen, könnte man Klone vermischen und lösliche Antikörper oder Antikörperfragmente exprimieren oder alternativ dazu Klone aus einer Bibliothek selektieren, um einen stark angereicherten Pool an Genen, die für gegen einen Liganden von Interesse gerichtete Antikörper kodieren, zu erhalten und die Antikörper aus diesen Klonen zu exprimieren.
- Beispiel 19
- Selektion von Antikörpern, die auf Bakteriophagen präsentiert werden, mit verschiedenen Affinitäten für 2-Phenyl-5-oxazolon unter Verwendung von Affinitätschromatographie
- Die in Beispiel 17 gezeigten ELISA-Daten lassen vermuten, daß die Affinitätschromatographie nicht nur die Bindenden angereichert hat, sondern auch die am besten Bindenden. Um dies zu bestätigen, wurden die Bindungsaffinitäten eines stark bindenden und eines schwach bindenden Phagen bestimmt und dann gezeigt, daß sie voneinander mittels Affinitätschromatographie getrennt werden können.
- Die Klone VH-B/Vk-b und VH-B/Vk-d wurden mit MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX, MJK5FONX (siehe Beispiel 12) und VH1 BACK-SfiI (5'-TCG CGG CCC AGC CGG CCA TGG CC(G/C) AGG T(C/G)(A/C) A(A/G)C TGC AG(C/G) AGT C(A/T)G G), einem Primer der eine SfiI-Stelle (unterstrichen) am 5'-Ende des VH-Gens einbringt, erneut amplifiziert. VG-B/Vk-d wurde in ein Phagemid, z.B. pJM1 (von A. Griffiths und J. Marks zur Verfügung gestellt), als SfiI-NotI-Kassette, stromabwärts vom pelB-Leader zur periplasmatischen Sekretion (M. Better et al., s.o.), mit einer C-terminalen Peptidmarkierung zur Detektion (siehe Beispiel 20 und Fig.), und unter der Steuerung eines λ-PL-Promotors (H.Shimatake & M. Rosenberg Nature 292, 128-132, 1981) kloniert. Das Phagemid sollte die folgenden Merkmale besitzen: a) einzige SfiI- und NotI-Restriktionsstellen stromab von einem pelB-Leader; b) eine Sequenz, die für eine C-terminale Peptidmarkierung zur Detektion kodiert; und c) einen λ-PL-Promotor, der die Expression steuert. 10 Liter jedes Phagemid beinhaltende Kulturflüssigkeit von E.coli N4830-1 (M.E. Gottesmann, S. Adhya & A. Das J. Mol. Biol. 140, 57-75, 1980) wurden wie in K.Nagai & H.C. Thogerson (Methods Enzymol. 153, 461-481, 1987) induziert und die Überstände mit 50%igem Ammoniumsulfat ausgefällt. Das erneut suspendierte Präzipitat wurde gegen PBS + 0,2 mM EDTA (PBSE) dialysiert, damit eine 1,5 ml phOx-Sepharose-Säule beladen und die Säule nacheinander mit 100 ml PBS; 100 ml 0,1 M Tris-HCl , 0,5 M NaCl, pH 8,0; 10 ml 50 mM Citrat, pH 5,0; 10 ml 50 mM Citrat, pH 4,0; und 20 ml 50 mM Glycin, pH 3,0 gewaschen. Die scFv-Fragmente wurden mit 50 mM Glycin, pH 2,0 eluiert, mit Tris-Base neutralisiert und gegen PBSE dialysiert. VH-B/Vk-b wurde in einen auf pUC119 basierenden Phagenvektor geklont, der für mit pJM1 identische Signal- und Tag-Sequenzen kodierte, und die Expression bei 30°C in einer 10 Liter-Kultur von E.coli TG1, der das Phagemid wie in D. de Bellis & I. Schwartz (1980 Nucl. Acid Res. 18, 1311) beinhaltet, induziert. Die geringe Affinität des Klon VH-B/Vk-b machte seine Reinigung auf phOx-Sepharose unmöglich. Daher wurde nach Konzentrierung durch Ultrafiltration (Filtron, Flowgen) der Überstand (100 ml von 600ml) auf eine 1 ml Säule mit an Protein A-Sepharose gekuppeltem (E. Harlow & D. Lane, s.o.) monoklonalen Antikörper 9E10 (Evan, G.I. et al., Mol. Cell. Biol. 5, 3610-3616, 1985), der die Peptidmarkierung erkennt, aufgebracht. Die Säule wurde mit 200 ml PBS und 50 ml PBS, 0,5 MNaCl gewaschen. Die scFv-Fragmente wurden mit 100 ml 0,2 M Glycin, pH 3,0, eluiert, wobei die Neutralisierung und Dialyse wie zuvor erfolgten.
- Der Kd (1,0 ± 0,2 × 10-8 M) für den Klon VH-B/Vk-d wurde durch Fluoreszenzquenchtitration mit 4-ε-Aminobuttersäuremethylen-2-phenyl-oxazol-5-on (phOx-GABA Co. Makela et al., 1978, s.o.) bestimmt. Die Anregung erfolgte bei 280 nm, die Emmision wurde bei 340 nm überwacht und der Kd berechnet. Der Kd des Klons VH-B/Vk-b mit niedriger Affinität wurde mit 1,8 ± 0,3 × 10-5 M bestimmt (nicht gezeigt). Um die durch die Absorption aufgrund der höheren Konzentrationen von phOx-GABA erforderliche Lichtmenge zu minimieren, erfolgte die Anregung bei 260 nm und die Überwachung der Emission bei 304 nm. Zusätzlich wurden die Fluoreszenzwerte durch jene aus einer parallelen Titration des Lysozym-bindenden Fragments D1.3 dividiert. Der Wert wurde wie in H.N. Eisen Meth. Med. Res. 10, 115-121, 1964 berechnet. Ein Gemisch der Klone VH-B/Vk-b und VH-B/Vk-d, 7 × 1010 TU Phagen im Verhältnis 20 VH-B/Vk-b 1 VH-B/Vk-d, wurde in 10 ml PBS auf die phOx-BSA-Sepharose-Säule aufgebracht und wie oben eluiert. Die eluierten Phagen wurde verwendet, um E.coli TG1 erneut zu infizieren, und die Phagen hergestellt und wie zuvor geerntet. Etwa 1011 TU Phagen wurden auf eine zweite Affinitätssäule aufgebracht und der Vorgang wiederholt, um gesamt drei Säulendurchgänge zu erhalten. Verdünnungen der eluierten Phagen wurden auf jeder Stufe doppelt ausplattiert und getrennt mit für Vk-b (5'-GAG CGG GTA ACC ACT GTA CT) oder Vk-d (5'-GAA TGG TAT AGT ACT ACC CT) spezifischen Oligonucleotid-Sonden untersucht. Nach diesen zwei Runden waren im wesentlichen alle eluierten Phagen VH-B/Vk-d (Tabelle 3). Daher können Phagenantikörper auf der Basis der Antigenaffinität des präsentierten Antikörpers selektiert werden.
- Beispiel 20
- Konstruktion von Phagemid pHEN1 zur Expression von Antikörperfragmenten, die auf der Oberfläche von Bakteriophagen nach Superinfektion exprimiert werden
- Das Phagemid pHEN1 (
23 ) ist ein Derivat von pUC119 (Vieira, J. & Messing, J. Methods Enzymol 153, S.3-11, 1987). Die Kodierregion von g3p aus fdCAT2 wurde durch PCR, unter Verwendung der Primer G3FUFO und G3FUBA (weiter unten gezeigt) (die EcoRI- bzw. HindIII-Stellen enthalten), amplifiziert, und als HindIII-EcoRI-Fragment in pUC119 kloniert. Das HindIII-NotI-Fragment, das für die g3p-Signalsequenz kodiert, wurde durch ein pelB-Signalpeptid (Better, M. et al., Science 240, 1041-1043, 1988) mit einer internen SfiI-Stelle ersetzt, was die Klonierung von Antikörpergenen as SfiI-NotI-Fragmente ermöglicht. Eine Peptidmarkierung, c-myc, (Munro, S. & Pelham, H., Cell 46, 291-300, 1986) wurden direkt nach der NotI-Stelle durch Klonieren einer Oligonucleotid-Kassette eingebracht, und darauffolgend ein "Amber"-Codon durch Stellen-gerichtete Mutagenese unter Verwendung eines In-vitro-Mutagenese-Sets (Amersham International) eingebracht (23b ). - Beispiel 21
- Präsentation von Einzelketten-Fv- und Fab-Fragmenten, die vom Anti-Oxazolon-Antikörper NQ10.12.5 stammen, auf dem Bakteriophagen fd unter Verwendung von pHEN1 und fdCAT2.
- Ein Bereich von Konstrukten (siehe
24 ) wurde aus einem Klon (im wesentlichen Konstrukt II in pUC19) hergestellt, der zur Expression eines löslichen Fab-Fragments (Better et al., 199, s.o.) aus dem Anti-phOx (2-Phenyl-5-oxazolon)-Antikörper NQ-10.12.5 (Griffiths, G.M. et al., Nature 312, 271-275, 1984) in Bakterien konstruiert war. Im Konstrukt II stammen die V-Regionen aus NQ10.12.5 und sind an menschlichen Ck- und CH1-(γ1-Isotyp)Konstantdomänen befestigt. Die C-terminalen Cysteinreste, die normalerweise zwischen den leichten und schweren Ketten des Antikörpers eine kovalente Bindung bilden, sind aus beiden Konstantdomänen gelöscht worden. Um die Gene der schweren und leichten Ketten zusammen als Fab-Fragmente (Konstrukt II) oder als getrennte Ketten (Konstrukte III und IV) zur Phagenpräsentation zu klonen, wurde DNA aus dem Konstrukt II durch PCR amplifiziert, um eine NotI-Restriktionsstelle am 3'-Ende und entweder eine ApaLI-Stelle (zum Klonieren in fdCAT2) oder eine SfiI-Stelle (zum Klonieren in pHEN1) einzubringen. Die Primer FABNOTFOK mit VH1 BACKAPA (oder VH1 BACKSFI15) wurden zur PCR-Amplifikation von Genen, die für Fab-Fragmente (Konstrukt II) kodieren, verwendet, die Primer FABNOTFOH mit VH1 BACKAPA (oder VH1BACKSFI15) für schwere Ketten (Konstrukt III), und die Primer FABNOTFOK und MVKBAAPA (oder MVKBASFI) für leichte Ketten (Konstrukt IV). - Die Einzelketten-Fv-Version von NQ10.12.5 (Konstrukt I) weist die variablen Domänen der schweren (VH) und der leichten Kette (Vakuum) durch einen flexiblen Linker (Gly4Ser)3 (Huston, J.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85, 5879-5883, 1988) verbunden auf und diese wurde aus Konstrukt Π durch "Spleißen durch überlappende Erweiterung" wie in Beispiel 12 konstruiert. Die assemblierten Gene wurden mit den Primern VK3F2NOT und VH1BACKAPA (oder VH1BACKSFI15) erneut amplifiziert, um Restriktionsstellen zum Klonieren in fd-CAT2 (ApaLI-NotI) onder pHEN1 (SfiI-NotI) anzuhängen.
- Restriktionsstellen sind unterstrichen.
- Ergänzung von Phagen- und Phagemidteilchen
- Die Konstrukte I-IV (
24 ) wurden sowohl in fd-CAT2 als auch in pHEN1 eingebracht. Der Phage fd-CAT2 (und fd-CAT2-I, II, III oder IV) wurden aus dem Überstand von infiziertem E.coli TG1, nachdem diese über Nacht bei 37°C in 2 × TY-Medium mit 12,5 μg/ ml Tetracyclin geschüttelt wurden, entnommen und direkt im ELISA verwendet. Das Phagemid pHEN1 (und pHEN1-I und II) in E.coli TG1 (supE) wurden über Nacht in 2 ml 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 1 % Glucose (ohne Glucose verhindert die Expression von g3p die spätere Superinfektion durch den Helferphagen) gezüchtet. 10 μl des Überstandes wurden verwendet, um 2 ml 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 1 % Glucose zu beimpfen, und diese wurden bei 37°C 1 Stunde geschüttelt. Die Zellen wurden gewaschen, und in 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin erneut suspendiert und die Phagemidteilchen durch die Zugabe von 2 μl (108 pfu) VCSM13-Helferphagen (Stratagene) wiederhergestellt. Nach einstündigem Wachstum wurden 4 μl Kanamycin (25 mg/ml) zugegeben und die Kultur über Nacht wachsen gelassen. Die Phagemidteilchen wurden mittels Fällung mit Polyethylenglykol für den ELISA 10fach konzentriert. - ELISA
- Die Detektion der Phagenbindung an 2-Phenyl-5-oxazolon (phOx) wurde wie in Beispiel 9 durchgeführt. 96-Napf-Platten wurden mit 10 μg/ml phOx-BSA oder mit 10 μg/ml BSA in PBS über Nacht bei Raumtemperatur beschichtet, und mit PBSS, die 2% Magermilchpulver enthält, blockiert. Phagen (Phagemid)-Überstand (50 μl), der mit 50 μl 4% Magermilchpulver enthaltender PBS vermischt war, wurde den Näpfen zugegeben und untersucht. Um die Bindung der löslichen scFv- oder Fab-Fragmente, die aus pHEN1 ausgeschieden werden, nachzuweisen, wurde die c-myc-Peptidmarkierung, das von Munro und Pelham 1986, s.o., beschrieben wurde, unter Verwendung des monoklonalen Anti-myc 9-E10 (Evan, G.I. et al., Mol. Cell. Biologisch. 5, 3610-3616, 1985) detektiert, gefolgt von der Detektion mit an Peroxidase konjugiertem Anti-Maus-Ziegenimmunglobulin. Die anderen Details waren wie in Beispiel 9.
- Die Konstrukte in fdCAT2 und pHEN1 präsentieren Antikörperfragmente auf der Oberfläche von filamentösen Phagen. Der Phagenvektor, fd-CAT2 (
8 ) basiert auf dem Vektor fd-tet (Zacher, A.N. et al., Gen 9, 127-140, 1980) und weist Restriktionsstellen (ApaLI und NotI) zum Klonieren von Antikörpergenen (oder anderen Proteingenen) zur Expression als Fusionen mit dem N-Terminus des Phagenhüllenproteins g3p auf. Die Transkription der Antikörper-g3p-Fusionen in fd-CAT2 wird vom Gen III-Promotor gesteuert, und das Fusionsprotein aufgrund des g3p-Leaders in das Periplasma gelenkt. Es wurde durch ELISA (Tabelle 4) gezeigt, daß Fab- und scFv-Fragmente von NQ10.12.5, die zur Präsentation in fd-CAT2 kloniert wurden, sich an phOx-BSA (aber nicht an BSA) binden. Es wurde angenommen, daß sich die Phagen binden, wenn die A405 der Probe zumindest 10fach höher war als der Hintergrund im ELISA. - Der Phagemidvektor, pHEN1 (
23 ) basiert auf pUC119 und enthält Restriktionsstellen (SfiI und NotI) zum Klonieren der Fusionsproteine. Hier wird die Transkription der Antikörper-g3p-Fusionen vom induzierbaren lacZ-Promotor gesteuert und das Fusionsprotein aufgrund des pelB-Leaders in das Periplasma gelenkt. Das Phagemid wurde mit dem VCSM13-Helferphagen in 2 × TY-Medium ohne Glucose oder IPTG wiederhergestellt: unter diesen Bedingungen gibt es eine ausreichende Expression des Antikörper-g3p. Es wurde mittels ELISA (Tabelle 4) gezeigt, daß Fab- und scFv-Fragmente von NQ10.12.5, die zur Präsentation in pHEN1 kloniert wurden, sich an phOx-BSA (aber nicht an BSA) binden, wobei dasselbe Kriterium wie oben verwendet wurde. - Eine alternative Methodik zur Herstellung von Bilbiotheken von Fab-Fragmenten, die auf der Oberfläche des Phagen exprimiert sind, wäre folgende:
- 1. Herstellen einer Bibliothek von Phagen, die Schwerketten (VHCH)-Gene exprimieren, aus Inserts im Phagengenom.
- 2. Herstellten einer Bibliothek von Leichtkettengenen in einem Plasmidexpressionsvektor in E.coli, vorzugsweise einem Phagemid, und Isolieren der löslichen Protein-Leichtketten, die aus dieser Bibliothek exprimiert werden.
- 3. Binden der löslichen Protein-Leichtketten aus der Bibliothek an die auf Phagen präsentierte Schwerketten-Bibliothek.
- 4. Selektieren von Phagen mit den gewünschten Eigenschaften bezüglich Affinität und Spezifität.
- 5. Isolieren der Leichtketten-Gene, die für Leichtketten kodieren, die geeignete Antigenbindungsstellen bilden, in Kombination mit den gewählten Schwerketten, vorzugsweise unter Einsatz von Bakterien-Superinfectin, das Phagemid enthält, das die Leichtkette exprimiert, mit Phagen, die die ausgewählte Schwerkette exprimieren (wie in Beispiel 20 beschrieben) und dann das Testen bezüglich Antigenbindung.
- Beispiel 22
- Ergänzung von Phagemid, das für eine Gen III-Proteinfusion kodiert, mit Antikörper-Schwer- oder -Leichtketten durch Phagen, der für die komplementäre Antikörperkette kodiert, die auf Phagen präsentiert wird, und der Einsatz dieser Technik zur Herstellung dualer kombinatorischer Bibliotheken
- Bei zufälligen kombinatorischen Bibliotheken gibt es aufgrund der Transformationseffizienz bakterieller Zellen eine Beschränkung der potentiellen Vielfat präsentierter Fab-Fragmente. Hier wird eine Strategie (duale kombinatorische Bibliotheken) beschrieben, die die Anzahl an überprüften Phagen um einen Faktor von 107 erhöht.
- Zur Assemblierung von Schwer- und Leichtketten-Expressionsprodukten aus verschiedenen Vektoren wurde Phagemid (pHEN1-III oder IV) in E.coli HB2151 (einem Nicht-Suppressor-Stamm) gezüchtet, um die Produktion löslicher Ketten zu ermöglichen, und wie oben (Beispiel 23) gewonnen, mit der Ausnahme, daß Helfer-Phagen, die Partnerketten als Fusionen zu g3p (109 Tu fd-CAT2-IV bzw. III) exprimieren, und 2 μl Tetracyclin (12,5 mg/ml) anstelle von Kanamycin verwendet wurden.
- Getrennte Vektoren zum Kodieren für Fab-Schwer- und Leichtketten
- Für die Schwer- und Leichtketten von Fab-Fragmenten kann gemeinsam in demselben Vektor (Beispiel 21) oder in unterschiedlichen Vektoren kodiert werden. Um das zu zeigen, wurde diese Schwerkette (Konstrukt III) in pHEN1 (um lösliche Fragmente bereitzustellen), und die Leichtkette (Konstrukt IV) in fd-CAT2 (um die Fusion mit g3p zu erzeugen) kloniert. Das in E.coli HB2151 (Nicht-Supressor) gezüchtete Phagemid pHEN1-III wurde mit fd-CAT2-IV-Phage und Phagemid) gewonnen, von dem gezeigt wurde, daß er bzw. es sich an phOx:BSA, nicht aber an BSA bindet (Tabelle 4). Das zeigt, daß die lösliche Leichtkette korrekt mit der am g3p verankerten Schwerkette assoziiert wird, da weder Schwerkette noch Leichtkette allein Antigen bindet (Tabelle 4).
- Ähnliche Ergebnisse wurden im umgekehrten Versuch (mit Phagemid pHEN-1-IV und fd-CAT2-III-Phage) erzielt, bei dem die Schwerkette als ein lösliches Molekül erzeugt und die Leichtkette an g3p verankert wurde (Tabelle 4). So wird ein Fab-Fragment an der Phagenoberfläche durch Fesion von Schwer- oder Leichtkette an g3p assembliert, mit der Maßgabe, daß die andere Kette unter Verwendung des gleichen oder eines anderen Vektors sekretiert wird (
25 ). - Die resultierende Phagenpopulation ist ein Gemisch aus Phage und wiederhergestelltem Phagemid. Das Verhältnis zwischen den beiden Teilchen-Typen wurde durch Infizieren von log-Phasen-E.coli TG1 und Ausplattieren auf TYE-Platten entweder mit 15 μg/ml Tetracyclin (um bezüglich fd-CAT2 zu selektieren) oder 100 μg/ml Ampicillin (um bezüglich pHEN1 zu selektieren) bewertet. Der Titer von fd-CAT2-Phage war 5 × 101 TE/ml, und der Titer von pHEN1 2 × 1010 war TE/ml, was auf ein Packungsverhältnis von 25 Phagen pro Phagemid hinweist.
- Hier gezeigt wird eine alternative Strategie, die die Präsentation des heterodimeren Antikörper Fab-Fragments auf der Oberfläche von Phagen umfaßt. Eine der Ketten wird an g3p fusioniert, und die andere wird in löslicher Form in den periplasmischen Raum von E.coli sekretiert, wo sie sich nicht-kovalent mit der g3p-Fusion assoziiert, und bindet sich spezifisch an Antigen. Entweder die Leicht- oder die Schwerkette kann an g3p fusioniert werden: sie werden auf dem Phagen als Fab-Fragmente präsentiert und binden Antigen (
25 ). Beschreiben werden sowohl Phagen- als auch Phagemid-Vektoren zur Oberflächen-Präsentation. Phagemid- sind Phagen-Vektoren vermutlich überlegen, was die Schaffung großer Phagenpräsentationsbibliotheken betrifft. Besonders in Hinblick auf ihre höheren Transfektionseffizienzen (zwei bis drei Größenordnungen darüber), was die Konstruktion größerer Bibliotheken ermöglicht. Der Phagemidvektor, pHEN1, ermöglicht auch die Expression löslicher Fab-Fragmente in Nicht-Suppressor E.coli. - Hier ebenfalls gezeigt wird, daß Schwer- und Leichtketten, für die auf demselben Vektor (Konstrukt II) oder auf verschiedenen Vektoren (Konstrukte III und IV) kodiert wird, als Fab-Fragmente präsentiert werden können. Das ermöglicht zwei verschiedene Arten der Bildung zufälliger kombinatorischer Bibliotheken für die Präsentation. Bibliotheken von Schwer- und Leichtkettengenen, die durch PCR amplifiziert sind, können zufällig durch ein "PCR-Assemblierungs"-Verfahren (Beispiel 12) verbunden werden, das auf "Spleißen durch Überlappungsverlängerung" basiert, in Phage(mid)-Präsentationsvektoren kloniert und aus demselben Promotor als Teil des gleichen Transkripts wie oben (Kosntrukt II) exprimiert werden, oder tatsächlich aus verschiedenen Promotoren als getrennte Transkripte. Hier kodiert und präsentiert der Phage(mid)-Vektor beide Ketten. Bei einer kombinatorische Bibliothek aus 107 Schwerketten und 107 Leichtketten ist die potentielle Vielfalt der präsentierten Fab- Fragmente (1014) durch die Transfektionseffizienz bakterieller Zellen durch den Vektor begrenzt (bestenfalls etwa 109 Klone pro μg an geschnittenem und ligiertem Plasmid) (W.J. Dower et al., Nucl. Acids. Res. 16 6127-6145, 1988). So hergestellte Bibliotheken sind zu dem von W.D. Huse et al., Science 246, 1275-1281 (1989) beschriebenen Verfahren der zufälligen kombinatorischen Bibliothek analog, weisen aber das wichtige zusätzliche Merkmal auf, daß Präsentation auf der Oberfläche von Phagen ein wirkungsvolles Verfahren zum Selektieren von Antikörper-Spezifitäten aus der großen Anzahl erzeugter Klone ergibt.
- Alternativ dazu können Bibliotheken aus Schwer- und Leichtketten zur Expression in die gleiche Zelle in unterschiedliche Vektoren kloniert werden, wobei ein Phagenvektor für die g3p-Fusion kodiert und ein Phgemid für die lösliche Kette kodiert. Der Phage wirkt als Hefer, und die infizierten Bakterien erzeugten sowohl gepackten Phagen als auch Phagemid. Jeder Phage oder jedes Phagemid präsentiert beide Ketten, kodiert aber nur für eine Kette, und daher nur für die genetische Information für die Häflte des Antigen-Bindestelle. Die Gene für beide Antikörperketten können jedoch durch Ausplattieren auf dem selektiven Medium getrennt gewonnen werden, was ein Mittel nahelegt, durch das zueinander komplementäre Paare von Antigenbindungs- Schwer- und -Leichtketten-Kombinationen aus zufälligen kombinatorischen Bibliotheken selektiert werden könnten. Beispielsweise kann ein Leichtketten-Repertoire auf fd-Phagen verwendet werden, um Zellen zu infizieren, die eine Bibliothek löslicher Schwerketten auf dem Phagemid umfassen. Die Affinitäts-gereinigte Phagemid-Bibliothek kann dann verwendet werden, um E.coli zu infizieren, mit der Affinitäts-gereinigten Phagen-Bibliothek ergänzt wurden, und die neue kombinatorische Bibliothek einer weiteren Selektionsrunde unterzogen werden. So werden Antikörper-Schwer- und -Leichtketten-Gene nach jeder Reinigungsrunde neugeordnet. Schließlich können nach merheren Runden infizierte Bakterien ausplattiert und einzeln auf Antigen-bindenden Phagen gescreent werden. Derartige "duale" kombinatorische Bibliotheken sind potentiell vielfältiger als jene, für die auf einem einzigen Vektor kodiert wird. Durch die Kombination getrennter Bibliotheken von 107 Leichtketten-Phage(mid)en, ist die Vielfalt präsentierter Fab-Fragmente (potentiell 1014) nur durch die Anzahl an Bakterien (1012 pro Liter) begrenzt. Einfacher sollte die Verwendung von zwei Vektoren auch die Konstruktion "hierarchischer" Bibliotheken erleichtern, in denen eine fixierte Schwer- oder Leichtkette mit einer Bibliothek oder Partnern gepaart ist (Beispiel 18), was ein Mittel zur "Feinabstimmung" von Antikörper-Affinität und -Spezifität darstellt.
- Beispiel 23
- Induktion von löslichen scFv- und Fab-Fragmenten unter Verwendung des Phagemids pHEN1
- Weitere Untersuchungen der Antikörper, die auf der Oberfläche des Phagen exprimiert wurden, würden sehr erleichtert werden, wenn es einfach ist, zur Expression in Lösung umzuschalten.
- E.coli HB2151 wurde mit pHEN-Phagemid (pHEN1-I oder -II) infiziert und auf YTE-Platten mit 100 μg/ml Ampicillin ausplattiert. Kolonien wurden bei 37°C in 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 1 % Glucose bis zu einer optischen Dichte von OD550 = 0,5-1,0 geschüttelt. Die Zellen wurden abzentrifugiert, einmal in 2 × TY-Medium gewaschen, in Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 1 mM Isopropyl-β-D-thiogalaktosid (IPTG) erneut suspendiert und weiter 16 Stunden wachsen gelassen. Die Zellen wurden abzentrifugiert und der Überstand, der die sekretierten Ketten enthält, direkt im ELISA verwendet.
- Das Phagemid pHEN1 hat gegenüber dem Phagen fd-CAT2 den Vorteil, daß der Antikörper enweder zur Phagenpräsentation (durch Wachstum in supE-Stämmen von E.coli) oder als mit einer Markierung markiertes lösliches Fragment (durch Wachstum in Nicht-Suppressor-Stämmen) hergestellt werden kann, da eine Peptidmarkierung (Beispiel 20) und ein "Amber"-Codon zwischen den Antikörper und g3p eingebracht wurde. Die Sekretion von löslichen Fab-Fragmenten aus pHEN1-II oder von scFv-Fragmenten aus pHEN1-I wurde nach Wachstum in E.coli HB2151 und Induktion mit IPTG mittels Western-Blots nachgewiesen. Zur Detektion der ausgeschiede nen Proteine wurden 10 μl Überstand von induzierten Kulturen einer SDS-PAGE unterzogen und die Proteine durch Elektroblotten auf Immobilon-P (Millipore) übertragen. Lösliche leichte und schwere Ketten wurden mit polyklonalem anti-menschlicher Fab-Antiserum aus Ziegen und mit an Peroxidase konjugiertem Anti-Ziegen-Immunglobulin aus Kaninchen (jeweils in einer Verdünnung von 1:1000) nachgewiesen. Die mit dem Anhängsel versehene VK-Domäne wurde mit 9E10-Antikörper (1:1000) und an mit an Peroxidase konjugiertem Anti-Maus-Immunglobulin aus Kaninchen (für Fc spezifisch) (1:1000) (Sigma) oder mit einem mit einer Peroxidase markiertem anti-menschlicher CK-Antiserum (Dako) detektiert. 3,3'-Diaminobenzidin (DAB; Sigma) wurde als Peroxidase-Substrat verwendet (Harlow, E. et al., 1988, s.o.). Mit scFv wurden die Fragmente unter Verwendung des 9E10 Anti-myc tag-Antikörpers detektiert (keine Daten gezeigt). Mit Fab wurden, wie erwartet, nur die leichten Ketten durch 9E10 (oder anti-menschlicher CK)-Antikörper nachgewiesen, während das anti-menschlicher Fab-Antiserum sowohl schwere als auch leichte Ketten detektierte. Die Bindung der löslichen scFv- und Fab-Fragmente an phOx-BSA (aber nicht an BSA) wurde ebenfalls mittels ELISA (Tabelle 4B) gezeigt. Somit können scFv- und Fab-Fragmente auf Phagen präsentiert werden oder als lösliche Fragmente aus demselben Phagemidvektor sekretiert werden.
- Beispiel 24
- Erhöhte Empfindlichkeit im ELISA-Assay mit Lysozym unter Verwendung von FDTscFvD1.3 als primärer Antikörper, verglichen mit löslichem scFvD1.3.
- Prinzipiell sollte die Verwendung von Phagenantikörpern die Durchführung von empfindlicheren Immunassays als mit löslichen Antikörpern ermöglichen. Phagenantikörper kombinieren die Fähigkeit ein spezifisches Antigen zu binden mit der Möglichkeit zur Amplifikation durch das Vorhandensein vielfacher (etwa 2800) Kopien des Haupthüllenproteins (g8p) auf jedem Virion. Dies würde die Befestigung einiger Antikörpermoleküle, die gegen M13 gerichtet sind, an jedem Virion, gefolgt von der Befestigung einiger Moleküle von an Peroxidase konjugiertem Anti-species-Antikörper (Anti-Schaf-IgG im unteren Fall), ermöglichen. Somit gibt es für jeden Phagenanti körper, der an Antigen gebunden ist, die Möglichkeit einige Peroxidasemoleküle zu befestigen, wohingegen bei der Verwendung eines löslichen Antikörpers als primärer Antikörper diese Amplifikation nicht stattfindet.
- ELISA-Platten wurden über Nacht bei Raumtemperatur unter Verwendung von 200 μl von 10fach-Verdünnungen des Hühnereilysozyms (1000, 100, 10, 1, 0,1 und 0,01 μg/ ml) in 50 mM NaHCO3, pH 9,6 beschichtet. Der ELISA wurde wie in Beispiel 4 beschrieben durchgeführt, außer daß (i) die Inkubation mit Anti-Lysozym-Antikörper entweder mit FDTscFvD1.3 (pAb; 1011 Phagen pro Napf; 1,6 nMol) oder mit Affinitäts-gereinigtem scFvD1.3 (18 μg pro Napf; 0,7 nMol) erfolgte; (ii) die Inkubation mit dem zweiten Antikörper mit einer 1/100-Verdünnung von Anti-M13-Schafsserum für FDTscFvD1.3-Proben oder mit einer 1/100-Verdünnung von Anti-scFvD1.3-Kaninchenserum (von S. Ward) für lösliche scFvD1.3-Proben erfolgte; (iii) an Peroxidase konjugiertes Anti-Ziegen-Kaninchenimmunglobulin (Sigma; 1/5000) für FDTscFvD1.3-Proben verwendet wurde und an Peroxidase konjugiertes Anti-Kaninchen-Ziegenimmunglobulin (Sigma; 1/5000) für lösliche scFvD1.3-Proben verwendet wurde. Die Absorption bei 405 nm wurde wurde nach 15 Stunden gemessen. Die Ergebnisse sind in den
30 und31 gezeigt. In diesen Figuren sind die zum Beschichten verwendeten Lysozymkonzentrationen auf einer logarithmischen Verdünnungsskala relativ zu 1 μg/ml gezeigt (d.h. log = -3 = 1 mg/ml; log = 2 = 0,01 μg/ml). - Mit FDTscFvD1.3 wurden bei allen Lysozymkonzentrationen höhere Signale erhalten (
28 ), aber der Unterschied war bei den größten Verdünnungen, wo die Antigenquantitäten am meisten limitierend sind (27 und28 ), sehr deutlich. Dies läßt vermuten, daß die Phagenantikörper für Assays vom Sandwichtyp, wo das Einfangen von geringen Antigenmengen durch den primären Antikörper ein amplifiziertes Signal erzeugt, besonders wertvoll sein können, wenn die Phagenantikörper, die gegen ein unterschiedliches Epitop gerichtet sind, als der zweite Antigen-bindende Antikörper verwendet werden. - Beispiel 25
- Direkte Wiederherstellung und Expression von monoklonalen Mäuseantikörpern als Einzelketten-Fv-Fragmente auf der Oberfläche des Bakteriophagen fd
- Das Prinzip ist jenem in Beispiel 12 beschriebenen sehr ähnlich. Es besteht aus der PCR-Assemblierung von Einzelketten-Antikörpern aus cDNA, die aus Monoklonalen aus Mäuse hergestellt wurde. Als Beispiel wird die Ergänzung und Expression zweier solcher Antikörper aus Monoklonalen, die Antikörper gegen das Steroidhormon Östriol exprimieren, beschrieben.
- A. RNA-Isolierung
- RNA kann mit vielen im Fachgebiet gut bekannten Verfahren isoliert werden. In diesem Beispiel ergab die Verwendung von Triton X-100-Lyse, Phenol/SDS-RNase-Inaktivierung hervorragende Ergebnisse.
- 1. Die hier verwendeten monoklonalen Mäusezellen waren durch Zentrifugation geerntet worden und in Serum-freiem Medium erneut suspendiert worden. Sie wurden dann zentrifugiert und in Salzlösung erneut suspendiert und nach einem abschließenden Zentrifugationsschritt in sterilem Wasser bei 1 × 107 Zellen pro ml erneut suspendiert. (Normalerweise würden die Zellen in PBS-Puffer gewaschen und abschließend erneut suspendiert werden, aber diese speziellen Zellen wurden an die Anmelder, wie beschrieben, in Wasser gefroren geliefert).
- 2. Zu 750 μl Zellen wurden 250 μl eiskalter 4 × Lysepuffer (40 mM Tris-HCl ph 7,4/4 mM MgCl2/600 mM NaCl/40 mM VRC (Veronyl-Ribosyl-Komplex)/2% Triton X-100) zugegeben. Die Suspension wurde gut vermischt und auf Eis 5 Minuten stehen gelassen.
- 3. Die Zentrifugation erfolgte bei 4°C in einer Mikrozentrifuge 5 Minuten lang bei 13.000 U/min.
- Der Überstand wird dann dreimal mit Phenol, dreimal mit Phenol/Chloroform extrahiert und und schließlich wie im Abschnitt Materialien und Verfahren beschrieben mit Ethanol gefällt. Der Niederschlag wird in 50 μl Wasser erneut suspendiert.
- 4. Die optische Dichte der RNA bei 260 nm wurde mit einer 2,5 μl-Probe in 1 ml Wasser gemessen. Die RNA wurde durch Elektrophorese einer 2 μg-Probe auf einem 1 %-Agarosegel überprüft. RNA im Bereich von 32 μg bis 42 μg wurde durch dieses Verfahren erhalten.
- B. cDNA-Herstellung
- Das verwendete Verfahren ist das gleiche wie das in Beispiel 11 beschriebene. Zwei cDNA-Herstellungen wurden durchgeführt. Diese erfolgten aus RNA, die aus den Monoklonalen, die als Zelllinien 013 und 014 bekannt sind, wobei beide Antikörper gegen das Steroidhormon Östriol exprimieren.
- C. Primäre PCRs
- Das verwendete Verfahren ist im wesentlichen das gleiche wie das in Beispiel 14 beschriebene. Die VH-Region wurde mit den Primern VH1 BACK und VH1 FOR-2 amplifiziert. Für die κ-Region wurden vier getrennte Reaktionen unter Verwendung des Primers VK2BACK und mit MJK1 FONX, MJK2FONX, MJK4FONX oder MJK5FONX durchgeführt. Die Proben (5 μl) wurden auf einem 1,5%-Agarosegel überprüft. Dabei wurde beobachtet, daß für cDNA, die aus den zwei Östriol-Monoklonalen hergestellt wurde, die Primer VK2BACK und MJK1FONX die beste Amplifikation der V-κ-Region ergaben. Die VH-Banden und die V-κ-Banden, die mit VK2BACK/MJK1 FONX amplifiziert wurden, wurden auf 2%-Agarosegelen mit niedrigem Schmelzpunkt für alle Monoklonalen gereinigt. Die DNA-Banden wurden aus dem Gel ausgeschnitten und unter Verwendung eines dafür vorgesehenen Geneclean-Sets wie in Beispiel 121 gereinigt.
- D. Herstellung der Linker
- Das verwendete Verfahren ist im wesentlichen das gleiche wie das in Beispiel 12 beschriebene. In diesem Fall wurde die amplifizierte Linker-DNA auf einem 2%-Agarosegel gereinigt und aus dem Gel mit einem dafür vorgesehenen "Mermaid"-Set (BIO 101, Geneclean, La Jolla, San Diego, California, USA) gemäß den Herstellerangaben gewonnen.
- E. Assemblierungs-PCRs
- Das verwendete Verfahren ist im wesentlichen das gleiche wie das in Beispiel 12 beschriebene. In diesem Fall wurde das assemblierte PCR-Produkt auf einem 2%-Agarosegel gereinigt und aus dem Gel mit einem dafür vorgesehenen "Mermaid"-Set gewonnen.
- F. Addition von Restriktionsstellen und Aufarbeitung
- Das assemblierte Produkt wurde mit ApaLI- und NotI-Restriktionsstellen "markiert" bzw. an den Enden versehen. Die DNA wurde dann mit ApaLI und NotI gespalten, um adhäsive Enden zum Klonierenzu bilden, und dann auf einem 2%-Agarosegel mit niedrigem Schmelzpunkt gereinigt und unter Verwendung eines Geneclean-Sets extrahiert. Das angewendete Verfahren ist das gleiche wie das in Beispiel 12 beschriebene.
- G. Klonieren in den Vektor fd-CAT2
- Die Gesamtmenge von 15 μg mit CsCl gereinigter fd-CAT2-DNA wurde mit 100 Units des Restriktionsenzyms NotI (New England Biolabs) in einem Gesamtvolumen von 200 μl 1 × NEB-NotI-Puffer mit 1 × NEB-acetyliertem BSA für einen Zeitraum von 3 Stunden bei 37°C gespalten. Die Vektor-DNA wurden dann zweimal mit 15 μl Strataclean (einem im Handel erhältlichen Harz zur Entfernung von Protein) gemäß den Herstellerangaben (Stratagene, 11099 North Torrey Pines Road, La Jolla, California, USA) behandelt. Die DNA wurde dann mit 100 Units des Restriktionsenzyms ApaLI (New England Biolabs) in einem Gesamtvolumen von 200 μl 1 × NEB-Puffer 4 über Nacht bei 37°C gespalten. Der Vektor wurde dann mit einer Chroma Spin 1000-Säule gemäß den Angaben der Hersteller (Clontech Laboratories Inc, 4030 Fabian way, Palo Alto, California, USA) gereinigt. Dieser Schritt entfernt das ApaLI/NotI-Fragment, um geschnittene Vektor-DNA für eine maximale Ligationseffizienz zu erhalten.
- Die Ligationsreaktionen wurden mit 2,5-10 ng des DNA-Inserts und 10 ng Vektor in einem Gesamtvolumen von 10 μl 1 × NEB-Ligasepuffer mit 1 μl NEB-Ligase (New England Biolabs) bei 16°C über Nacht (etwa 16 Stunden) durchgeführt.
- H. Transformation und Wachstum
- Der E.coli-Stamm TG1 wurde kompetent gemacht und mit der rekombinanten fdCAT2-DNA wie von Sambrook et al., 1989, s.o., transformiert. Die Zellen wurden auf LBtet-Platten (10 g Trypton, 5 g Hefeextrakt, 10 g NaCl, 15 g Bacto-agar pro Liter mit 15 μg/μl Tetracyclin, die erst kurz vor dem Plattengießen zugegeben werden, ausplattiert und über Nacht wachsen gelassen.
- 10 ml LBtet-Nährlösung (LB-Medium mit 15 μg/μl Tetracyclin) wurden dann in 50 ml Röhrchen mit aus einzelnen Näpfen isolierten Kolonien beimpft. Nach dem Wachstum über Nacht bei 35°C/350U/min in einer Tischzentrifuge. Die Überstände wurden in 15 ml Zentrifugenröhrchen übertragen und jedem 2 ml 20% PEG 8000/2,5 M NaCl zugegeben. Nach der Inkubation bei Raumtemperatur für 20 bis 30 Minuten wurde der rekombinante Phage durch Zentrifugation bei 9000 U/min in einem SM24-Rotor für 30 Minuten pelletiert. Der PEG-Überstand wurde verworfen. Noch verbliebenes PEG wurde mit einer Pasteurpipette nach einem kurzen (2 Minuten) Zentrifugationsschritt entfernt. Dieser letzte Schritt wurde wiederholt, um sicherzugehen, daß kein PEG verbleibt. Das Phagenpellet wurde dann in 500 μl PBS-Puffer erneut sus pendiert. Dies wurde in ein Mikrozentrifugenröhrchen übertragen und bei 13.000 U/min zentrifugiert, um übriggebliebene Zellen zu entfernen. Der Phagenüberstand wurde in ein frisches Röhrchen übertragen.
- 1. Assay auf Antikörperexpression
- Die Rekombinanten des Bakteriophagen fd wurden auf die Expression eines Antikörpers gegen Östriol mittels ELISA gescreent. Dieses Verfahren ist in Beispiel 6 bechrieben. In diesem Fall sind die folgenden Änderungen relevant:
- 1. Die Mikrotiterplatten wurden über Nacht mit 40 μg/ml Östriol-6-carboxymethyloxim-BSA (Steraloids, 31 Radcliffe Road, Croydon, CRO 5QJ, England) beschichtet.
- 2. Der erste Antikörper war der mutmaßliche Anti-Östriol-Phagenantikörper. 50 μl Phagen in einem Endvolumen von 200 μl steriler PBS mit 0,25% Gelatine wurden jedem Napf zugegeben.
- 3. Der zweite Antikörper war ein Anti-M13-Schafsantikörper bei einer Verdünnung von 1:1000.
- 4. Der dritte Antikörper war an Peroxidase konjugiertes Anti-Ziegen-Kaninchenimmunglobulin.
- Die Rekombinanten, die funktionelle Antikörper exprimieren, wurden durch Inkubation mit dem chromogenen Substrat 2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure) nachgewiesen. Die Ergebnisse sind in den
29 und30 dargestellt. - Beispiel 26
- PCR-Assemblierung von DNA, die für Fab-Fragmente eines gegen Oxazolon gerichteten Antikörpers kodiert
- Beispiel 21 zeigte, daß Gene, die für Fab-Fragmente kodieren, in die Vektoren fdCAT2 und pHEN1 subkloniert und die Proteindomänen auf der Oberfläche von Phagen präsentiert werden können, wobei Bindefunktion beibehalten wird. Dieses Beispiel zeigt, daß die VHCH- und VKCK-Domänen getrennt amplifiziert und dann durch einen Linker verbunden werden können, der die Expression der Leichtkette als Gen III-Proteinfusion und des VHCH-Fragments als lösliches Molekül zulässt. Ein funktionelles Fab-Fragment wird dann durch Assoziation dieser Domänen auf Phagen präsentiert. Der in diesem Beispiel beschriebene Vorgang des Assemblierens ist für die Präsentation einer Bibliothek von Fab-Fragmenten erforderlich, die vom Immunrepertoire stammen, wenn innerhalb eines einzelnen Vektors sowohl für Schwer- als auch Leichtketten-Domänen kodiert werden soll.
- Die VHCH1- und VKCK-Domänen eines Konstrukts (Beispiel 21; Konstrukt II und pUC19), die von Antikörper NQ10 12.5 stammen, der gegen 2-Phenyl-5-oxazolon gerichtet ist, wurden unter Einsatz von PCR amplifiziert. Zum Klonieren in den Vektor fdCAT2 wurden die Oligonucleotide VH1BACKAPA (Beispiel 21) und HuIgGI-4 CH1FOR (Beispiel 30) verwendet, um die VHCh1-Domänen zu amplifizieren. Zum Klonieren in pHEN1 ersetzte für diese Amplifizierung VH1 BACKSFH5 (Beispiel 21) VH1BACKAPA. Zum Klonieren in beide Vektoren wurden die VKCK-Domänen unter Einsatz von VK2BACK (Beispiel 21) und CKNOTFOR (Beispiel 30) amplifiziert. Ein Linker-Oligonucleotidfragment, das den Bakteriophgen fd-Gen 8-Termintor und den fd Gen 3-Promotor enthielt, durch Amplifizierung der sie enthaltenden Region aus dem Vektor vdCAT2 durch PCR unter Einsatz der Oligonucleotide hergestellt.
- Die Assemblierung des Fab-Fragments von den amplifizierten VHCH1- und VKCK-Domänen und des wie oben hergestellten Linkers erfolgte wie in Beispiel 12E beschrieben, mit der Ausnahme, daß die Primer VH1BACKAPA (beim Klonieren in fdCAT2) oder VH1BACKSFHS (beim Klonieren in pHEN1) und CKNOTFOR für die abschließende Reamplifizierung verwendet wurden, wodurch Restriktionsstellen zum Klonieren in fdCAT 2 (ApaII-NotI) oder pHEN1 (SfiI-NotI) eingeführt wurden. Das zusammengestellte Fab-Fragment wird in
31 gezeigt. In Abwesenheit von Linker ist kein assembliertes Produkt festzustellen. Ein nach Beispiel 12 hergestelltes zusammengestelltes scFv wird zum Vergleich gezeigt. - Phagen-Antikörper wurden wie in Beispiel 21 hergestellt, und ELISA wurde mit Oxazolon als Antigen nach Beispiel 6 durchgeführt. Die Ergebnisse waren für Fab-Fragmente, sowohl in fdCAT2- als auch in pHEN1-Proben kloniert, wie erwartet; Phagen-Teilchen banden sich an Oxazolon, was durch ein positives ELISA-Signal ermittelt wurde.
- Beispiel 27
- Konstruktion eines Helferphagen, dem das Gen III fehlt
- Um das Potential des Phagemidkloniersystems vollständig zu verwirklichen, ist ein Helferphage, dem das Gen III fehlt, wünschenswert. Die Ergänzung von Gen III-Fusionen mit einem solchen Helferphagen würde ergeben, daß alle Phagemid-"Nachkommen" eine Gen III-Fusion auf deren Capsid aufweisen, da es keine Konkurrenz mit dem Wildform-Molekül gibt.
- Die Steuerung der Anzahl an Fusionsmolekülen auf jedem Phagen ist besonders nützlich. Beispielsweise kann ein Helferphage, dem das Gen III fehlt, verwendet werden, um Antikörper mit geringer Affinität aus einem nativen Repertoire zu ergänzen, in dem eine hohe Avidität notwendig ist, um jene Phagen zu isolieren, die die korrekte Antikörperspezifität aufweisen. Der nicht mutierte Helferphage kann dann verwendet werden, wenn Versionen mit höherer Affinität konstruiert werden, wodurch die Aviditätskomponente verringert wird und die Selektion rein auf Basis der Affinität ermöglicht wird. Es zeigt sich, daß dies eine überraschenderweise erfolgreiche Strategie zur Isolierung und Affinitätsreifung von Antikörpern aus nativen Bibliotheken darstellt.
- Die zur Konstruktion des Helferphagen gewählte Vorgehensweise war die teilweise Deletion des Gen III von M13K07 unter Verwendung der Exonuclease Bal31. Phagen, denen das Gen III fehlt, sind jedoch nicht infektiös, daher wurde ein E.coli-Stamm konstruiert, der Gen III exprimiert. M13-Gen III vom Wildtyp wurde mit den Primern gIIIFUFO und gIIIFUBA PCR-amplifiziert, genauso wie dies in Beispiel 20 beschrieben ist. Das PCR-Produkt wurde mit EcoRI und HindIII gespalten und in einen mit EcoRI und HindIII geschnittenen pUC19 (kein Phagemid, da ihm der Ursprung der SS-DNA-Replikation des filamentösen Phagen fehlt) unter der Steuerung des lac-Promotors insertiert. Das Plasmid wurde in E.coli TG1 transformiert und der resultierende Stamm mit TG1/pUC19gIII bezeichnet. Dieser Stamm stellt dem Helferphagen gIII-Protein in trans bereit.
- Es gibt in M13K07 eine einzelne, einzigartige BamHI-Stelle, die sich etwa in der Mitte von gIII befindet. Doppelsträngige M13K07-DNA wurde durch alkalische Lyse und CsCl-Zentrifugation (Sambrook et al., 1989, s.o.) isoliert; 20 μg DNA wurden mit BamHI geschnitten, mit Phenol extrahiert und mit Ethanol gefällt, dann in 50 μl Bal31-Puffer (600 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 12 mM CaCl2, 12 mM MgCl2 und 1 mM EDTA) erneut suspendiert und 4 Minuten lang mit 1 Unit Bal31 (New England Biolabs) gespalten. Diese Behandlung entfernt etwa 1 Kb DNA. EGTA wurde auf 20 mM zugegeben und die Reaktionslösung mit Phenol extrahiert und mit Ethanol gefällt, bevor die Reinigung des geschnittenen Genoms auf einem Agarosegel erfolgte. Die DNA wurde mit Klenow-Enzym repariert und mit T4-DNA-Ligase (New England Biolabs) mit sich selbst ligiert.
- Aliquoten der Ligationsreaktionslösung wurden in kompetente TG1/pUC19gIII-Zellen transformiert und auf SOB-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 50 μg/ml Kanamycin ausplattiert. Die Kolonien wurden auf das Vorhandensein einer Deletion mittels PCR mit den Primern gIIIFUBA und KSJ12 (CGGAATACCCAAAAGAACTGG) gescreent.
- KSJ12 anneliert an Gen VI, das sich unmittelbar stromabwärts von gIII im Phagengenom befindet, wodurch sich gIII auf dem Helferphagen von jenem, das auf dem Plasmid resident ist, unterscheidet. Drei Klone ergaben geschnittene PCR-Produkte, die Deletionen von etwa 200, 400 und 800 bp entsprechen. Diese Klone wurden mit M13K07 gIIIΔNr. 1, 2 bzw. 3 bezeichnet. Keine Klone wurden von den früheren Bal 31-Zeitpunkten erhalten, was vermuten läßt, daß diese auf irgendeine Art für die Wirtszelle tödlich sind. Einige Klone wurden von späteren Zeitpunkten isoliert, aber keiner von diesen ergab ein PCR-Produkt, was anzeigt, daß die Deletionsreaktion zu weit fortgeschritten war.
- M13K07 gIIIΔNr.1, 2 und 3 wurden kultiviert und die resultierenden Helferphagen auf ihre Fähigkeit, eine Antikörper-gIII-Fusion (scFv D1.3) zu ergänzen, mittels ELISA untersucht, genau wie dies in Beispiel 14 beschrieben wurde. Wie in
32 gezeigt ist, wurde nur ein Klon M13K07 gIIIΔNr.3 gefunden, der den Antikörper gut wiederherstellte; das Signal mit diesem Helferphagen war stärker als jenes mit dem ursprünglichen M1307. Mit M13K07 gIIIΔNr.3 wiederhergestellte Phagemide sollten eine viel höhere Dichte von Antikörperfusionen auf ihren Oberflächen aufweisen. Es wurde gezeigt, daß dies wirklich der Fall ist, indem der in diesem ELISA verwendete Phage durch Western-Blotten mit Anti-gIII Protein-Antiserum analysiert wurde (33 ). Diese Analyse ermöglicht eine Abschätzung der Menge an gIII-Fusionsprotein gegenüber dem freien gIII-Protein, das auf den Phagen(Phagemid)-teilchen vorhanden ist. - Nur eine Minutenfraktion des gIII-Proteins auf dem mit M1307 wiederhergestelltem Material ist als intakte Fusion vorhanden (
33 ). Die Fusionsproteinbande wird durch IPTG induziert, sie ist daher unbestreitbar die durch das Phagemid syntheti sierte. Wie erwartet, herrscht gIII-Protein vom Wildtyp mit einer kleineren Kopienanzahl und von einem schwächeren Promotor gesteuert vor, sogar wenn die durch den lac-Promotor gesteuerte gIII-Fusionsproteinsynthese voll induziert ist (100 μM IPTG). Dies steht im Gegensatz zu dem Muster, das durch denselben mit M13K07 gIIIΔNr.3 ergänzten Klon gebildet wurde, und zu dem Muster, das durch fd CAT2-scFv D1.3 gebildet wurde. In diesen beiden letzteren Fällen gibt es keine Konkurrenz mit dem gIII der Wildform und die Fusionsproteinbande ist entsprechend stärker. - Es ist bemerkenswert, daß die Konstruktion von M13K07 gIIIΔNr.3 sehr uneffizient war: ein Klon aus 20 μg Ausgangs-DNA. Darüberhinaus ist die Ausbeute von gIII-Helferphagen aus Über-Nacht-Kulturen mit etwa 106 cfu/ml extrem klein, verglichen mit etwa 1011 cfu/ml für den ursprünglichen Phagen. Abgesehen davon ergänzt M13K07 gIIIΔNr.3 das Phagemid ebenso wie den ursprünglichen Phagen, wie durch die Anzahl der Phagemidpartikel, die nach dem Wachstum über Nacht hergestellt wurden, festgestellt werden kann. Dies deutet darauf hin, daß die trans-Replikation und die Verpackungsfunktionen des Helferphagen intakt sind und läßt vermuten, daß seine eigene Replikation defekt ist. Daher kann es sein, daß die Inaktivierung von gIII normalerweise toxisch für die Wirtszelle ist und daß M13K07 gIIIΔNr.3 aufgrund einer kompensierenden Mutation, die z.B. die Replikation betrifft, isoliert wurde. Der Phage fd-tet ist dahingehend ungewöhnlich, daß er Mutationen in Strukturgenen toleriert, die normalerweise für die Wirtszelle tödlich sind, da er einen Replikationsdefekt aufweist, der die Akkumulierung von toxischen Phagenprodukten verlangsamt; M13K07 gIIIΔNr.3 könnte ebenfalls einen solchen Defekt aufweisen.
- M13K07 gIIIΔNr.3 wurde am 28. Juni 1991 gemäß den Bestimmungen des Budapester Abkommens bei der National Collection of Type Cultures, 61 Colindale Avenue, London, NW9 6HT, UK (Zugangsnr. NCTC 12478) hinterlegt. Er enthält eine Deletion des M13-Genoms von den Basen 1979 bis inklusive 2768 (siehe Van Wezenbeek, P.G.M.F. et al., Gene II, S.129-148, 1980 für die DNA-Sequenz des M13-Genoms).
- Beispiel 28
- Selektion von Bakteriophagen, die gegen Lysozym gerichtete scFv-Fragmente exprimieren, aus Gemischen gemäß der Affinität unter Verwendung eines Panningverfahrens
- Zur Isolierung eines Antikörpers mit einer gewünscht hohen Affinität ist es notwendig, einen Antikörper mit einer Affinität, die nur um ein geringes Vielfaches höher ist als der Rest der Population, auswählen zu können. Dies ist insbesondere wichtig, wenn ein Antikörper mit einer nicht ausreichenden Affinität z.B. aus einem Repertoire, das aus einem immunisierten Tier stammt, isoliert wurde, und die statistische Mutagenese verwendet wird, um Derivate mit möglicherweise erhöhter Affinität herzustellen. In diesem Beispiel wurden Gemische von Phagen, die Antikörper mit verschiedenen Affinität, die gegen Hühnereilysozym gerichtet sind, exprimieren, einem Panningverfahren unterzogen. Es wurde gezeigt, daß Phagenantikörper die Fähigkeit verleihen, einen Antikörper mit einem Kd von 2 nM gegenüber einem mit einem Kd von 13 nM zu selektieren.
-
- Phagen, die gegen Lysozym gerichtete scFv-Fragmente präsentieren, wurden aus in Plasmiden klonierten Fab-Fragmenten gewonnen.
- Variable Regionen der schweren und leichten Kette wurden durch die Polymerase-Kettenreaktion (PCR, polymerase chaim reaction) aus Plasmiden, die "humanisierte", zur Herstellung von Fab-Fragmenten geeignete VH-CH1- und VK-CK-Inserte (von J. Foote zur Verfügung gestellt) amplifiziert. Die Dissoziationskonstante, Kd für verschiedene Kombinationen der zwei Plasmide, die als Fabs kombiniert werden, sind weiter unten gezeigt:
- Primäre PCR
- Die primäre PCR der variablen Regionen wurde durchgeführt, indem folgendes kombiniert wurde:
36,5 μl Wasser
5 μl PCR-Puffer (10x)
2 μl dNTP (5 mM)
2,5 μl Back oligo (10 pMol/μl) (VHBHD13APA oder VKBHD13)
2,5 μl Forward oligo (10 pMol/μl) (VHFHD13 oder VKFHD13NOT) - Die Reaktionslösung wird durch 5-minütige UV-Bestrahlung dekontaminiert, um fremde DNA zu zerstören, und 1 μl Plasmid-DNA zugegeben (0,1 μg/μl). Das PCR-Gemisch wurde mit 2 Tropfen Paraffinöl überschichtet und 5 Minuten lang auf einen PCR-Block mit 94°C gegeben, bevor 0,5 μl Taq-Polymerase unter das Paraffin zu gegeben wurden. Die verwendeten Zyklusbedingungen waren 94°C 1 Minute, 40°C 1 Minute, 72°C 1,5 Minuten bei 17 Zyklen.
- Der Linker (Gly4-Ser)3 wurde aus dem Anti-phOx (2-Phenyloxazol-5-on)-Klon fd-CAT2-scFv NQ11 unter Verwendung der Oligos HD13BLIN und HD13FLIN3 mit 0,1 μg Plasmid-DNA amplifiziert. Die verwendeten PCR-Zyklen waren 94°C 1 Minute, 25°C 1,5 Minuten bei 17 Zyklen.
- Die amplifizierte DNA wurde durch das Trennen der Proben auf einem 2%-Agarosegel mit niedrigem Schmelzpunkt bei 90 mA, Ausschneiden der geeigneten Banden und Extrahieren der DNA mittels des Geneclean-II-Sets (BIO 101 Inc.) für VH und VK, oder durch den Einsatz von Spin-X-Filtern (Costar) für den Linker. Ein Endvolumen von 10 μl wurde verwendet, um die extrahierte DNA erneut zu suspendieren.
- PCR-Assemblierung
- Die Assemblierung der vier "humanisierten" Einzelketten-Fv D1.3 (scFv HuD1.3)-Konstrukte erfolgte durch den Vorgang der "Assemblierung durch überlappende Erweiterung" gemäß Beispiel 12.
- Es wurden folgendes kombiniert:
34,5 μl Wasser
5 μl PCR-Puffer (10x)
2 μl dNTP (5 mM)
2,5 μl Back oligo (10 pMol/μl) (VHBHD13APA)
2,5 μl Forward oligo (10 pMol/μl) (VKFHD13NOT) - Wiederum wird die Reaktionslösung wird durch 5-minütige UV-Bestrahlung dekontaminiert, bevor 1 μl der primären PCR-Produkte; VH-1 oder VH-2, VK-3 oder VK-4, sowie die Linker-DNA; zugegeben wird. Die Reaktionslösung wurde mit 2 Tropfen Paraffinöl überschichtet und 5 Minuten lang auf einen PCR-Block mit 94°C gegeben, bevor 0,5 μl Taq-Polymerase zugegeben wurden. Die verwendeten Zyklusbedingungen waren 94°C 1 Minute, 60°C 1,5 Minuten, 72°C 2,5 Minuten bei 20 Zyklen.
- Die wäßrige Schicht unter dem Paraffin wurde einmal mit Phenol, einmal mit Phenol/Chloroform, einmal mit Ether extrahiert, mit Ethanol gefällt, und in 36 μl Wasser erneut suspendiert. Dazu wurden 5 μl 10 × Puffer für NotI, 5 μl 1 mg/ml BSA und 4 μl (40 U) NotI (New England Biolabs) gegeben. Die Restriktion wurde über Nacht bei 37°C inkubiert.
- Die DNA wurde mit Ethanol gefällt und in 36 μl Wasser erneut suspendiert; dazu wurden 5 μl 10 × NEB-Puffer 4, 5 μl 1 mg/ml BSA und 2 μl (40 U) ApaLI (New England Biolabs) gegeben. Dies wurde 5 Stunden lang bei 37°C inkubiert; weitere 2 μl ApaLI wurden zugegeben und die Reaktion bei 37°C über Nacht inkubiert.
- Die geschnittene DNA wurde durch Gelreinigung auf einem 1,3%-Agarosegel mit niedrigem Schmelzpunkt extrahiert, und dann mit Geneclean gehandelt, um die Insert-DNA zur Klonierung zu erhalten.
- Der Vektor fd CAT2 (wie in Beispiel 16 hergestellt und mit ApaLI und NotI gespalten) und die scFv-DNA wurden wie in Beispiel 16 ligiert.
- Analyse der Klone
- Die Kolonien aus den Ligationen wurden zuerst mittels PCR-Screenen auf Inserte gescreent. Das PCR-Gemisch wurde in größerem Menge hergestellt, indem 14,8 μl 1 × PCR-Puffer, 1 μl dNTP (5 mM), 1 μl Back oligo (FDPCRBAK), 1 μl Forward oligo (FDPCRFOR), und 0,2 μl Taq-Polymerase pro gescreenter Kolonie kombiniert wurden. 20 μl-Aliquoten dieses PCR-Gemisches wurden in eine 96-Napf-Techneplatte gegeben. Die Koloniespitze wurde mit einem Zahnstocher berührt und schnell im PCR-Gemisch gedreht und die Kolonie erhalten, indem der Zahnstocher in eine Cellwell-Platte (Nunc), die 250 μl 2 × TYMedium enthielt, gegeben wurde. Das PCR-Gemisch wird mit 1 Tropfen Paraffin überschichtet und die Platte auf einen Block mit 94°C 10 Minuten lang gegeben, bevor die Zyklen 94°C 1 Minute, 60°C 1 Minute, 72°C 2,5 Minuten durchgeführt.
- Die so erhaltenen Klone wurden wie unten angegeben bezeichnet. Die Affinität der scFv-Fragmente, die von den Fab-Fragmenten erhalten wurden, wurde nicht bestimmt, aber ältere Ergebnisse lassen vermuten, daß diese nahe daran liegen, jedoch nicht notwendigerweise identisch sind (R.E. Bird & B.W. Walker TIBTECH 9, 132-137, 1991).
- Die Herstellung der Phagen und die ELISA waren wie in Beispiel 6 beschrieben. Es wurde gezeigt, daß die in fd CAT2 gebildeten Klone, wie erwartet, Lysozym binden.
- Affinitätsselektion
- Selektion der Phagen die sich mit der höchsten Affinität binden
- Es wurden Mischexperimente durchgeführt, in denen der Phage fd-CAT2 scFvD1.3 (Beispiel 15) entweder mit fd-CAT2 TPB1, fd-CAT2 TPB2 oder mit fd-CAT2 TKPB4 gemischt wurde, und in einer Panningrunde verwendet wurde.
- Das allgemein angewandte Verfahren zur Affinitätselektion durch Anreicherung ist das unten genau beschriebene. Jede Abweichung von dieser Arbeitsvorschrift wird am jeweiligen Punkt beschrieben. Die Anreicherungsplatten wurden zwischen den Manipulationen auf eine Schüttelplattform gestellt.
- Falcon-35 mm-Gewebekulturplatten wurden über Nacht mit 1 ml Lysozym (verschiedene Konzentrationen), das in 50 mM NaHCO3 pH 9,6 gelöst war, beschichtet und mit 2 ml 2% MPBS bei Raumtemperatur für 2 Stunden blockiert. Die Phagen wurden in 1 ml 2% MPBS vorbereitet und bei Raumtemperatur 2 Stunden lang geschüttelt. Die Platten wurden 5 Minuten lang mit 2 ml der folgenden Lösungen gewaschen: 5 mal mit PBS, PBS-Tween, 50 mM Tris-HCl pH 7,5; 500 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl pH 8,5; 500 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl pH 9,5; 500 mM NaCl, 50 mM NaHCO3 pH 9,6; 500 mM NaCl. Die Elution der Phagen erfolgte dann durch Zugabe von 1 ml 100 mM Triethylamin und 5-minütiges Schütteln vor dem Entfernen des Eluats, das mit 100 μl 1,0 M Tris-HCl pH 7,4 neutralisiert wurde.
- Die Platten wurden über Nacht mit Lysozym mit der unten angegebenen Konzentration beschichtet.
- Die Kolonien aus einzelnen Panningrunde wurden entweder mit der Sonde MURDSEQ (für dfCAT scFvD1.3) oder mit der Sonde HUMD13SEQ (für fdCAT2 TPB-Konstrukte) untersucht.
- Nitrocellulosekreise (Schleicher & Schüll, BA 85, 0,45 μm) wurden mit Bleistift markiert, sanft auf die Kolonien, die aus den Anreicherungsexperimenten erhalten wurden, gelegt und eine Minute liegen gelassen. Die Filter wurden dann schnell von einer Kante weggezogen und 5 Minuten lang mit der Kolonieseite nach oben auf ein Stück 3MM-Papier (Whatman), das in Denaturierlösung geweicht war (500 mM Na-OH; 1,5 M NaCl), gelegt. Sie wurden dann auf 3MM, das in Neutralisierlösung (3,0 M NaCl; 500 mM Tris-HCl, pH 7,5) geweicht war, für 1 Minute überführt, und dann 1 Minute auf 3MM, das in 5 × SSC; 250 mM Ammoniumacetat geweicht war. Die Filter wurden dann an der Luft getrocknet, bevor sie in einem Vakuumofen mit 80°C 30 Minuten lang getrocknet wurden.
- Die Oligonucleotidsonde wurde durch Kombinieren der folgenden Lösungen hergestellt:
2 μl Oligonucleotid (1 pMol/μl)
2 μl γ-32P-ATP (3000 Ci/mMol) (Amersham International plc)
2 μl 10 × Kinasepuffer (0,5 M Tris-HCl, pH 7,5; 100 mM MgCl2; 10 mM DTT)
12 μl Wasser
2 μl Polynucleotid-Kinase (20 Units) - Dies wurde 1 Stunde lang bei 37°C inkubiert.
- Die Hybridisierung wurde im Techne HB-1-Hybridisierer durchgeführt. Die getrockneten Filter wurden bei 37°C in 40 ml Hybridisierungspuffer (10 ml 100 mM Natriumpyrophosphat; 180 ml 5,0 M NaCl; 20 ml 50 × Denhardt-Lösung; 90 ml 1,0 M Tris-HCl pH 7,5; 24 ml 250 mM EDTA; 50 ml 10% NP40; mit Wasser auf 1 Liter aufgefüllt 60,3 mg rATP; 200 mg Hefe-RNA (Sigma)) 15 Minuten lang vorhybridisiert und dann wurden 20 μl des kinasierten Oligonucleotids zugegeben. Die Filter wurden bei 37°C zumindest eine Stunde lang inkubiert, und dann 3mal 10 Minuten lang mit 50 ml 6 × SSC bei 37°C gewaschen (Waschung mit geringer Stringenz). Die Filter wurden luftgetrocknet, mit Saran-Umhüllung bedeckt und über Nacht einem Kodak X-AR-Film ausgesetzt.
- Selektion von fd-CAT2 scFv D1.3 aus fd-CAT2 TPB4
-
34 faßt die Ergebnisse aus den Anreicherungsexperimenten mit einem Gemisch des Phagen fd-CAT2 scFv D1.3 mit hoher Affinität (Kd-2 nM) und mit dem Konstrukt fd-CAT2 TPB4 (Kd-52 nM) zusammen. - Bei einer Beschichtungskonzentration von 3000 μg/ml Lysozym konnte nur wenig oder keine Anreicherung erhalten werden. Es war jedoch möglich, eine Anreicherung für den scFv D1.3-Phagen zu erhalten, wenn eine niedrigere Lysozymkonzentration verwendet wurde, um die Platten zu beschichten. Der beste Anreicherungswert, der erhalten wurde, war von 1,5% fd-CAT2 scFv D1.3 in Anfangsgemisch auf 33% fd-CAT2 scFv D1.3 in der eluierten Fraktion, auf einer Platte, die über Nacht mit 30 μg/ml Lysozym beschichtet worden war.
- Selektion von fd-CAT2 scFv D1.3 aus fd-CAT2 TPB1
- Die Anreicherung für den scFv D1.3-Phagen mit hoher Affinität gegenüber dem fd-CAT2 TPB1-Phagen (Kd-13 nM) konnte nur bei Experimenten gezeigt werden, bei denen die Platten über Nacht mit geringen Lysozymkonzentrationen geschichtet wurden, wie in
35 dargestellt ist. - Zusammenfassend wurden Einzelketten-Fv-Versionen einer Reihe von humanisierten D1.3-Antikörpern im Phagen fd konstruiert. Durch Affinitätsselektion von fd-CAT2-Phagengemischen, durch Anreicherung in kleinen Petrischalen, wurde gezeigt, daß der scFv D1.3-Phage mit hoher Affinität bevorzugt gegenüber einem Hintergrund von scFv HuD1.3-Phagen mit geringerer Affinität selektiert werden kann.
- Beispiel 29
- Bildung und Selektion von Mutanten eines Anti-4-Hydroxy-3-nitrophenylessigsäure-(NP-)Antikörpers, der auf Phagen exprimiert wird, unter Einsatz von Mutatorstämmen
- Es ist manchmal wünschenswert, die Vielfalt eines in Phagen klonierten Genpools, z.B. ein Antikörpergenpool, zu erhöhen oder ein größere Anzahl an Varianten eine einzelnen klonierten Gens herzustellen. Es gibt viele geeignete In-vitro-Mutagenese-Verfahren. Ein attraktives Verfahren, insbesondere zur Herstellung einer vielfältigeren Population einer Antikörpergenbibliothek, ist jedoch die Verwendung von Mutatorstämmen. Dies hat den Vorteil, daß eine sehr große Anzahl von Mutanten hergestellt wird, die im wesentlichen nur durch die handhabbare Anzahl der Phagen be schränkt wird. Das Phagenpräsentationssystem ermöglicht die volle Ausnützung dieser Anzahl, um verbesserte oder veränderte Klone zu isolieren.
- Nucleotidsequenzen, die für ein gegen 4-Hydroxy-3-nitrophenylessigsäure (NP) gerichtetes scFv-Antikörperfragment, scFvB18, kodieren, das wie in Beispiel 12 aus einem monoklonalen Antikörper gegen NP gewonnen wurde, wurden wie in Beispiel 11 mittels ApaLI- und NotI-Restriktionsstellen in fdCAT2 kloniert, um fdCAT1scFvB18 zu bilden, oder unter Verwendung von PstI- und NotI-Restriktionsstellen in fdDOGKan (fdCAT2, worin seine Tetracyclinresistenzgene entfernt und durch Kanamycinresistenzgene ersetzt wurden), um fdDOGKanscFvB18 zu bilden oder in den Phagemidvektor pHEN1 mit den Restriktionsstellen SfiI und NotI als Fusionsprotein mit Gen III, um pHEN1scFvB18 zu bilden.
- Die folgenden Mutatorstämme (R.M. Schaaper & R.L. Dunn J. Mol. Biol. 262, 1627-16270, 1987; R.M. Schaaper Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85, 8126-8130, 1988) wurden verwendet: wurden von Dr. R.M. Schaaper zur Verfügung gestellt (Department of Health & Human Services, N1H, PO Box 12233, Research Triangle Park, N.C. 27709)
NR9046mutD5: NR9046 mutD5::Tn10
NR9046mutT1: NR9046 mutT1::Tn10
wurden gemäß Standardverfahren durch P1-Transduktion konstruiert. Die Mutatorstämme wurden mit fdCAT2scFvB18 oder fdDOGKanscFvB18 transfiziert und die Transfektanten nach ihrer Antibiotikaresistenz ausgewählt. Die Transfektanten wurden 24 Stunden lang bei 37°C wachsen gelassen, bevor die mutanten Phagen durch PEG-Fällung gewonnen wurden. Die mutanten Phagen wurden auf einer 1 ml NIP-(4-Hydroxy-3-iod-5-nitrophenylessigsäure-)BSA-Sepharose-Affinitätssäule (die nach den Herstellerangaben hergestellt wurde), die mit 200 ml PBS vorgewaschen und mit 20 ml MPBS blockiert wurde, selektiert. Die Phagen wurden in 10 ml MPBS auf die Säule aufgebracht und nicht gebundenes Material erneut aufgegeben um eine vollständige Bindung sicherzustellen. Die Säule wurde nacheinander mit 10 ml MPBS und 500 ml PBS gewaschen. Die an die Affinitätsmatrix gebundenen Phagen wurden mit 5 Säulenvolumina 0,33 mM NIP-Cap (Beispiel 38) eluiert. - Das Phageneluat wurde 30 Minuten bis 1 Stunde mit E.coli-Mutatorstämmen in der log-Phase (2 × 108 Zellen/ml) ohne Antibiotikaselektion inkubiert. Die infizierten Zellen wurden dann in 2 × TY 1:100 verdünnt und 24 Stunden lang mit Antibiotikaselektion gezüchtet (15 μg/ml Tetracyclin oder 30 μg/ml Kanamycin für fdCAT2scFvB18 bzw. fdDOGKanscFvB18). Die Phagen aus dieser Kultur wurden für eine weitere Affinitätsselektions- und Mutationsrunde verwendet.
- Die Bindung der Phagenantikörper wurde mittels ELISA wie in Beispiel 9 untersucht, außer daß die ELISA-Platten mit NIP-BSA (4-Hydroxy-3-iodo-5-nitrophenylacetysl-BSA; 0,4 mg/ml) beschichtet wurden. Die Kulturüberstände wurden nach dem Wachstum in Cellwells wie in Beispiel 17 beschrieben vorbereitet und 20 μl Kulturüberstand jedem Napf zugegeben und mit MPBS auf 200 μl verdünnt.
- Die Phagenproben, die im ELISA ein Signal ergaben, das mehr als das Doppelte des Hintergrunds betrug, wurden untersucht. Der ELISA erfolgte wie oben für die nicht spezifische Bindung an Lysozym, BSA oder Ox-BSA (Beispiel 9). Die Spezifität für NIP wurde weiters durch einen ELISA bestätigt, in dem Reihenverdünnungen von NIP-Cap zusammen mit Phagenantikörpern zugegeben wurden. Die Zugabe erhöhter Konzentrationen von NIP-Cap verringerte das Signal auf den Hintergrundwert.
- Phagen, die im ELISA positive Signale ergaben, wurden sequenziert und 2 verschiedene Mutanten in das Phagemid pHEN1 subkloniert und in HB2151 zur löslichen Expression und in TG1 zur Phagenpräsentation transformiert (Beispiel 23).
- Zur Expression der löslichen scFv-Fragmente wurden die Transformanten in E.coli HB2151 bei 37°C in einem Liter 2 × TY mit 0,2% Glucose, 0,1 mg/ml Ampicillin bis zu einer optischen Dichte bei 600 nm von 1 gezüchtet und die Expression der löslichen scFv-Fragmente durch die Zugabe von IPTG auf 1 mM induziert. Die Kulturen wurden bei 30°C 16 Stunden lang geschüttelt.
- Die löslichen scFvB18 wurden aus dem rohen bakteriellen Überstand in einer FLOWGEN-Ultrazentrifugationseinheit auf ein Volumen von 200 ml eingeengt.
- Das Konzentrat wurde zweimal über eine 2 ml NIP-BSA-Sepharose-Säule geschickt, die mit 200 ml PBS vorgewaschen wurde. Die Säule wurde mit 500 ml PBS und 200 ml 0,1 M Tris pH7,5, 0,5 m NaCl gewaschen und die Phagenantikörper mit 50 mM Citratpuffer pH 2,3 eluiert. Das Eluat wurde sofort mit 1 M Tris pH 8 neutralisiert. Das Eluat wurde mit zweimaligem Austausch gegen 1 Liter PBS, 0,2 mM EDTA dialysiert. Das gefällte Protein wurde durch Zentrifugation bei 10.000 g entfernt und die Proteinausbeute durch Messung der Absorption des Überstands bei 280 nm bestimmt.
- Nach 4 Mutations- und Selektionsrunden wurden die isolierten Klone gescreent und in einem oder zwei seltenen Beispielen wurden stark positive ELISA-Signale von Phagenantikörpern, die aus der Mutation sowohl von fdCAT2scFvB18 als auch fdDOGKanscFvB18 stammten, im ELISA erhalten. Diese Phagenantikörper, die stark positive ELISA-Signale ergaben, wurden in weiteren Runden um einen Faktor von etwa 2,5 pro Runde angereichert. Vierzig Phagenantikörper, die stark positive Signale ergaben, wurden sequenziert und sie zeigen jeweils einzelne Mutationen an sechs verschiedenen Stellen in den scFvB18-Nucleotidsequenzen, wobei sich fünf davon in der leichten Kette befinden. Mehr als 70% der Mutationen traten an den Positionen 724 und 725 auf, wobei das erste Glycin im J-Segment der leichten Kette (Gerüst 4) zu Serin (in 21 Fällen) oder Aspartat (in 3 Fällen) geändert wurde. Die Sequenz von scFvB18 ist in
36 gezeigt. - Die Nucleotidsequenzen, die für die scFv-Fragmente einer Gerüstmutante mit der obigen Glycin-zu-Serin-Mutation kodieren, sowie eine Mutante, worin Tyr in der CDR3 der leichten Kette zu Aspartat mutiert wurde, wurden durch PCR aus den Phagenantikörperklonen amplifiziert und in das Phagemid pHEN1 subkloniert (im wesenlichen wie in Beispiel 20). Damit vermeidet man mögliche Probleme mit durch die Mutatorstämme verursachten Gen III-Mutationen. Dasselbe ELISA-Signalmuster war zu sehen, wenn die Mutanten nach dem Ergänzen des Phagemids mit dem Helferphagen (wie in Beispiel 21) auf Phagen präsentiert wurden, wie wenn die Mutanten untersucht wurden, wenn diese wie oben aus dem Phagengenom exprimiert wurden.
- Die scFv-Fragmente aus scFvB18 und die scFv-Fragmente, die die Glycin-zu-Serin- bzw. die Tyrosin-zu-Aspartat-Mutationen enthalten, wurden bei 30°C in Lösung exprimiert (nach der Transformation in E.coli HB2151 wie in Beispiel 23). Sie zeigten keine Unterschiede in den ELISA-Signalen zwischen B18 vom Wildtyp und der Gerüstmutante. Das Signal, das vom Phagenantikörper mit der Mutation von Tyrosin zu Aspartat in CDR3 von scFv erhalten wurde, war etwa 10mal stärker. Es zeigte sich, daß die Expressionsausbeuten vergleichbar waren, wie durch Western-Blotten unter Verwendung eines Antiserums gegen g3p (wie oben beschrieben) festgestellt wurde. Affinitätsmessungen wurden mittels Fluoreszenzquenchen wie in Beispiel 19 durchgeführt. Die Affinitätsmessung von mit Affinität gereinigten scFv-Fragmenten zeigte jedoch, daß scFvB18 und die scFvB18-(Gly→Ser) und scFvB18-(Tyr→Asp)Mutanten eine vergleichbare Affinität von 20 nM für NIP-Cap aufweisen.
- Ein Westernblot unter Einsatz eines Anti-Gen III-Antikörpers zeigte, daß die Gerüstmutante deutlich weniger der proteolytischen Spaltung ausgesetzt war als scFvB18.
- Daher ergibt die Verwendung von Mutatorstämmen einen vielfältigen Bereich von Mutanten in Phagenantikörpern, wenn diese als Wirte für Klone zur Gen III-Fusion verwendet werden. In diesem Fall zeigen einige der Klone wahrscheinlich aufgrund der erhöhten Stabilität gegenüber proteolytischem Angriff höhere ELISA-Signale. Die Mutatorstämme können daher verwendet werden, um Vielfalt in einen Klon oder eine Klonpopulation zu bringen. Diese Vielfalt sollte sollte Klone mit den gewünschten Ei genschaften, wie z.B. einer höheren Affinität oder Spezifität, ergeben. Solche Klone können dann nach der Präsentation der Proteine auf Phagen selektiert werden.
- Beispiel 30 Technik auf PCR-Basis zur Klonierung von Human V-Genen als Fab-Konstrukte in einem Schritt
- Dieses Beispiel beschreibt eine Technik auf PCR-Basis zum "Assemblieren" von Human-Fabs durch Vespleißen der Schwer- und der Leichtketten-DNA mit einem getrennten Stück "Linker"-DNA. Es wird ein Gemisch aus universellen Primern verwendet, was die Technik auf alle Human V-Gene anwendbar machen sollte.
- Es wird die allgemeine Technik zur PCR-Assemblierung von Human V-Genen zur Schaffung eines Fab-Konstrukts beschrieben. Die Effizienz dieser Technik wurde durch "Assemblieren", Klonieren und Exprimieren eines Human-Anti-Rhesus-D-(-Rh-D-) Fab von einem monoklonalen IgG-K-Hybridom bewertet. Es wurde auch das Potential gezeigt, monoklonale Human-Antikörper durch Zusammenbauen, Klonieren, Exprimieren und Isolieren eines monoklonalen IgG-λ-anti-Rh-d-Fab von einer polyklonalen Lymphoblasten-Zellinie (LCL) aus polyklonalen Zellpopulationen zu gewinnen.
- Die Gesamtstrategie für die PCR-Assemblierung wird in
37 gezeigt und ist nachstehend detaillierer beschrieben. Für die Fab-Assemblierung werden die VH-CH1- und VK-CK- oder V λ-C λ-Leichtketten von Erststrang-cDNA amplifiziert und gelgereinigt. Schwer- und Leichtketten-DNA werden dann gemeinsam mit Linker-DNA und flankierenden Oligonucleotiden in einer neuen PCR-Reaktion kombiniert. Das ergibt ein Fab-Konstrukt voller Länge, da das 5'-Ende der Linker-DNA zum 3'-Ende der CH1-Domäne komplementär ist und das 3'-Ende des Linkers zum 5'-Ende der Leichtketten-Domäne komplementär ist. Die Linker-DNA enthält terminale Reste der Human-CH1-Domäne, die bakterielle Leadersequenz (pelB) für die Leichtkette und die ersten Reste der VK- oder V-λ-Leichtkette (2 ). Schließlich wird das Fab- Konstrukt nach der Gelreinigung mit Flankierungsoligonucleotiden reamplifiziert, die Restriktionsstellen zur Klonierung enthalten. - Oligonucleotid-Primer: Um die PCR-Klonierung von Human V-Genen zu entwickeln, war es notwendig, einen neuen Bereich spezifischer Human-Oligonucleotid-Primer zu entwickeln.
- Die PCR-Primer am 5'-Ende des VH- und VK- und Vλ-Gen-Exons (BACK-Primer) basieren auf Sequenzdaten, die aus der Kabat-Datenbank (E. A. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. Aufl.. US Department of Health and Human Services. 1987), der EMBL-Datenbank, der Literatur (P. Chuchana et al., Eur. J. Immunol. 1990. 20.1317) und unveröffentlichten Daten entnommen wurden. Die Sequenzen der VH-, VK- und Vλ-Primer sind in Tabelle 1 angeführt. Außerdem wurden auch verlängerte VH-Primer mit SfiI-Stellen am 5'-Ende bezeichnet (Tabelle 6), um nach dem Assemblieren eine Restriktionsstelle hinzuzufügen.
- Tabelle 6 zeigt auch die 3'-Primer (FORWARD-Primer), die für die Klonierung von Human V-Genen auf PCR-Basis konstruiert wurden. Es gibt zwei Sätze davon, je nachdem, ob ein Fab oder ein scFv hergestellt werden soll. Für die Fab-Assemblierung basierte der Forward-Primer am 3'-Ende der CH1-Domäne, CK-Domäne und cλ-Domäne. außerdem wurden die CK- und C2-FORWARD-Primer auch als verlängerte Versionen mit NotI-Stellen an ihren 5'-Enden synthetisiert.
- Zu den CH1-Forward-Primern und den VκK- und Vλ-Back-Primern komplementäre Primer wurden synthetisiert, um die Erzeugung von Linker-DNA durch PCR-Amplifizierung eines Plasmidtemplats zu ermöglichen, das den Fab-Linker enthält (Tabelle 6). Um adäquate Amplifizierung zu gewährleisten, wurden die Primer zu tatsächlichen Linkersequenzen verlängert.
- A RNA-Herstellung
- Dabei handelt es sich im Wesentlichen um das gleiche Verfahren wie in Beispiel 12 beschrieben, wobei jedoch Material menschlichen Ursprungs verwendet wurde. In den in diesem Beispiel angeführten Ergebnissen wurden Human-Hybridom- und polyklonale Human-Lymphoblasten-Zellinien verwendet.
- B cDNA-Herstellung
- Etwa 4 μg Gesamt-RNA in 20 μl Wasser wurde für 3 min auf 65 °C erhitzt, auf Eis abgeschreckt und zu 30 μl Reaktionsgemisch hinzugefügt, was ein 50 μl-Reaktionsgemisch ergab, das 140 mM KCl, 50 mM Tris, HCl (pH 8,1 @ 42 °C), 8 mM MgCl2, 10 mM DTT, 500 μM Desoxythymidintriphosphat, 500 μM Desoxycytosintriphosphat, 500 μM Desoxyadenosintriphosphat und 500 μM Desoxyguanosintriphosphat, 80 Einheiten Human-Plazenta-RNAse-Inhibitor und 10 pMol des geeigneten Forward-Primers (HuIgG1-4CH1FOR, HuIgMFOR, HuCKFOR, HuCLFOR) enthielt. 2 μl (50 Einheiten) Vogel-Myelobastose-Virus-(AMV-)Reverse Transkriptase wurde hinzugefügt, die Reaktion bei 42 °C für 1 h inkubiert, für 3 minauf 100 °C erhitzt, auf Eis abgeschreckt und für 5 min zentrifugiert.
- C Primäre PCRs
- Für die primären PCR-Amplifizierungen wurde ein äquimolares Gemisch aus den auf Basis der Familie geeigneten BACK- und FORWARD-Primern verwendet (siehe die spezifischen Beispiele 30a und 30b, die weiter unten in diesem Beispiel angeführt sind). Es wurde ein Reaktionsgemisch mit 50 μl hergestellt, das 5 μl des Überstands von der cDNA-Synthese, 20 pMol Gesamtkonzentration der FORWARD-Primer, 250 μM dNTPs, 50 mM KCl, 100 mM Tris. HCl (pH 8,3), 1,5 mM MgCl2, 175μg/ml BSA und 1 μl (5 Einheiten) Thermus aquaticus-(Taq-)DNA-Polymerase (Cetus, Emeryville, CA, USA) enthielt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Paraffinöl bedeckt und 30 Ampflizierungszyklen unterzogen, wobei ein Techne Thermalzykler eingesetzt wurde. Der Zyklus bestand aus 94 °C für 1 min (Dentaturierung), 57 °C für 1 min (Annelie rung) und 72 °C für 1 min (Extension). Das Produkt wurde analysiert, idnem 5 μl auf einem 2%-igen Agarosegel laufen gelassen wurden. Der Rest wurde zweimal mit Ether, zweimal mit Phenol/Chloroform, extrahiert, mit Ethanol gefällt und in 50 μl H2O resuspendiert.
- D Herstellung von Linker
- Um die Fab-Linker-DNA herzustellen, wurden 13 getrennte PCR-Reaktionen unter Einsatz von HuIgGI-4CHIFOR und jedes der Umkehr-VK- oder Vλ-Oligonucleotide durchgeführt. Das Templat war etwa 1 ng pJM-1 Fab D1.3 (
38 ). Die PCR-Reaktionsreagenzien wren wie oben beschrieben und der Zyklus bestand auf 94 °: 1 min, 45 °: 1 min und 72°: 1 min. Die Linker wurden auf einem 4%-Agarosegel analysiert, auf einem 2%-Agarosegel gereinigt, aus Gel auf einer Spin-X-Säule eluiert und mit Ethanol gefällt. - E Assemblierungs-PCRs
- Für PCR-Assemblierung eines Human-Fab wurden etwa 1 μg einer primären Schwerketten-Amplifizierung und 1 μg einer primären Leichtketten-Amplifizierung mit etwa 250 ng der entsprechenden Linker-DNA in einem PCR-Reaktionsgemsich ohne Primer gemischt und 7 Zyklen unterzogen (94°: 2 min, 72°: 2,5 min), um die Fragmente zu verbinden. Das Reaktionsgemsich wurde dann für 25 Zyklen (94°: 1 min, 68-72°: 1 min, 72°: 2,5 min) amplifiziert, nachdem 20 pMol der entsprechenden flankierenden BACK- und FORWARD-Primer hinzugegeben worden waren.
- F Hinzufügung von Restriktionsstellen
- Die assemblierten Produkte wurden Gelreinigung unterzogen und für 25 Zyklen (94°: 1 min, 55°: 1 min, 72°: 25 min) mit den flankierenden Oligonucleotiden reamplifiziert, die angehängten Restriktionsstellen enthielten. PCR-Puffer und NTPs waren wie zuvor beschrieben.
- Spezifische Beispiele für PCR-Assemblierung von Human-Immunglobulingenen
-
- a. PCR-Assemblierung eines Fab von einem Human-Hybridom: die monoklonale Human-anti-Rh-D-Zellinie Fog-1 (IgG-)9 wurde durch EBV-Transformation der PBLs eines Rh-D-negativen Blutspenders erhalten, der mit Rh-D-positivem Blut immunisiert war und bereits beschrieben worden ist (M.D. Melamed, eta J. Immunological Methods, 1987. 104:245) (N.C. Hughes-Jones, et al., Biochem. J. 1990. 268:135) (B.D. Gorick, et al., Vox. Sang. 1988, 55:165). Gesamt-RNA wurde aus etwa 107 Hybridomzellen hergestellt. Erststrang-cDNA-Synthese wurde durchgeführt, wie oben beschrieben, indem die Primer HuIgGl-4CH2FOR und HuCKFOR verwendet wurden. Primäre PCRs wurden für VH-CHI unter Verwendung eines Gemisches ausden 6 HuVHBACK-Primern und HuIgGL-4CG1FOR und für VK-CK unter Verwendung eines Gemisches aus den 6 HuVKBACK-Primern und HuCKFOR durchgeführt. Ein Fab-Konstrukt wurde assembliert wie oben beschrieben, mit SfiI und NotI restrigiert, Gelreinigung unterzogen und in pJM-1 Fab D1.3 ligiert, das mit SfiI und NotI restrigiert war. Das Ligationsgemisch wurde verwendet, um kompetente E.coli E.M.G.-Zellen zu transformieren. 96 Klone wurden mit Zahnstochern in Medien in Mikrotiterplatten-Näpfe übertragen, bis zur mid-log-Phase bei 30°C gezüchtet, und dann wurde Expression des Fab durch Wärmeschockbehandlung bei 42°C für 30 min, gefolgt von Züchten für 4 h bei 37°C, herbeigeführt. Die 96 Klone wurden dann auf Anti-Rh-D-Aktivität gescreent wie nachstehend beschrieben.
- b. Assemblierung von Human-Fabs aus einer polyklonalen (LCL): Ein polyklonales LCL "OG" wurde aus EBV-Transformation von etwa 707 peripheren Blutlymphozyten (PBLs) von einem Rh-D-negativen Donor erhalten, der mit Rh-D-positiven roten Blutkörperchen immunisiert wurde. Die Zellen wurde in einer Konzentration von etwa 105 Zellen pro Napf ausplattiert. Positive Näpfe wurden durch Screenen der geernteten Zellen identifiziert und dann einmal subkloniert. Typisierung des Napfs zeigt an, daß ein IgG-λ-Antikörper erzeugt wurde. In diesem Stadium wurde Gesamt-RNA aus etwa 106 Zellen hergestellt. Erststrang-cDNA-Synthese wurde wie oben beschrieben unter Verwendung der Primer HuIgGl-4CG1FOR und HuCLFOR durchgeführt. Pri märe PCRs wurden für VH-CHI unter Verwendung eines Gemisches aus den 6 HuVHBACK2-Primern und HuIgGl-4CG1FOR und für V λ-C-λ unter Verwendung eines Gemisches aus den 7 HuV BACK-Primern und HuC FOR durchgeführt. Restriktion, Klonierung und Screenen fand wie beschrieben statt. Um die Vielfalt der Klone zu bestimmen, wurden die VH- und Vλ-Gene von 15 Klonen PCR-amplifiziert, mit dem häufig schneidenden Restriktionsenzym BstN1 gespalten und auf einem 4%-Agarosegel analysiert (siehe Beispiel 16).
- Test auf Anti-Rh-D-Aktivität und Demonstration der Spezifität: Ein 5 Vol.-%-Suspension von entweder Rh-D-positiven (OR2R2) oder Rh-D-negativen (ORR) Erythrozyten in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS, pH 7,3) wurde mit einer Papainlösung für 10 min bei 37°C inkubiert. Der Erythrozyten wurden dreimal in PBS gewaschen, und eine 1 Vol.-%-Suspension von Erythrozyten wurde in PBS hergestellt, die mit 1 Vol.-% Rinderserumalbumin (BSA) ergänzt war. 50 μl einer Papain-behandelten Erythrozyten-Suspension und 50 μl Phagen-Überstand wurden in die Näpfe von Mikrotiterplatten mit rundem Boden gefüllt, und die Platten wurden für 2 min auf einen Titertek-Plattenrüttler gestellt. Nach 15 min Inkubation bei 37°C wurde jedem Napf 100 μl PBS/BSA hinzugefügt. Die Platten wurden mit 200 g für 1 min zentrifugiert, und der Überstand wurde verworfen. Die Erythrozyten wurden im verbleibenden PBS/BSA resuspendiert, und die Fab-Fragmente wurden durch die Zugabe von monoklonalem 9E10-Antikörper (50 μl einer 1 μg/ml Lösung in PBS/BSA) vernetzt, der gegen die myc-Peptid-Markierung gerichtet war (E.S. Ward, et al., Nature 1989, oben). Die Platten wurden bei Raumtemperatur stehen gelassen, bis Sedimenation stattgefunden hatte. Agglutination der Erythrozyten ergab einen diffusen Erythrozyten-Knoten, und die Ergebnisse wurden makroskopisch bewertet. Die Spezifität wurde mit einer (wie oben) vorpapainisierten Standard-Reihe aus 9 Erythrozyten-Suspensionen in PBS (alle Suspensionen Blutgruppe 0,4 D positiv und 5 D negativ) bestätigt, von denen bekannt war, daß die homozygote Expression aller der klinisch relevanten Erythrozyten-Blutgruppen-Alloantigene aufwiesen. Die Anzahl an Kopien des D-Antigens auf den D-positiven Zellen variierte je nach dem Rh-Genotyp zwischen 10.000 und 20.000 pro Erythrozyt. Kurz zusammengefaßt wurde 50 μl Phagenüberstand in PBS, ergänzt mit 2 Vol.-% Magermilch, mit 50 μl einer 2%igen Erythrozyten-Suspension in PBS in Glasröhrchen vermischt und für 15 min bei 37 °C inkubiert. Nach einer Wäsche mit PBS/BSA wurden die Erythrozyten pelletiert und in 50 μl Esel-Anti-Human-λ-Leichtkette resuspendiert (Sigma L9527, verdünnt 1:40 in PBS/BSA). Die Röhrchen wurden für 1 min mit 200g zentrifugiert, und Agglutination wurden makroskopisch unter Einsatz des "Tip-and-Roll"-Verfahrens abgelesen.
- Ergebnisse
-
- a. PCR-Assemblierung eines Fab von einem Human-Hybridom: Eine einzelne Bande mit korrekter Größe wurde nach der Amplifizierung erhalten. 38 von 96 Klonen (40 %), die spezifisch gescreent wurden, agglutinierten spezifisch RhD-positive, nicht aber Rh-D-negative rote Blutkörperchen. Die Ergebnisse zeigen eine hohe Frequenz erfolgreichen Spleißens im Assemblierungsverfahren und das Potential dieser Technik für einstufige Klonierung von Human-Hybridomen.
- b. Assemblierung von Human-Fabs aus einer polyklonalen Lymphoblasten-Zellinie (LCL): Analyse der Vielfalt der Klone zeigte, daß 3 verschiedene Schwerkettenfamilien und 2 verschiedene Leichtkettenfamilien vorhanden waren. Aus 96 gescreenten wurden 5 Anti-Rh-D-spezifische Klone identifiziert. Die VH- und Vλ-Ketten wiesen identische Nucleotidsequenzen in jedem Klon auf und waren typisch für Anti-Rh-D V-Gene (unveröffentlichte Ergebnisse). Die Ergebnisse zeigen das Potential dieser Technik für das Assemblieren, Klonieren und Isolieren von Human-Antikörper-Fragmenten aus polyklonalen Zellpopulationen (siehe auch den Abschnitt über Isolation spezifischer Bindungsaktivitäten von einer "unimmunisierten" Human-Bibliothek (Beispiele 32 und 33).
- Beispiel 31
- Selektion von Phagen, die ein Human-Fab-Fragment präsentieren, das gegen das Rhesus D-Antigen gerichtet ist, durch Bindung an Zellen, die das Rhesus D-Antigen an ihrer Oberfläche präsentieren
- Eine große Anzahl wichtiger Antigene sind integrale Komponenten von Zelloberflächen-Membranen, d.h. sie sind Zelloberflächen-Antigene. Dazu gehören Tumorspezifische Antigene und Oberflächen-Antigene roter und weißer Blutkörperchen. In vielen Fällen wäre es wichtig, Antikörper gegen diese Antigene zu isolieren. Beispielsweise werden Antikörper, die gegen das Rhesus D-(Rh-D)-Antigen auf roten Blutkörperchen gerichtet sind, sowohl diagnostisch als als auch therapeutisch verwendet. Viele dieser Antigene sind schwer zu reinigen, und einige, wie Rh-D, sind nicht biologisch aktiv, wenn sie von der Membran isoliert sind. Daher wäre es nützlich, Antikörper-Fragmente, die auf der Oberfläche von Bakteriophage präsentiert werden, direkt auf Zelloberflächen-Antigenen Affinitätsreinigung unterziehen zu können. Um die Durchführbarkeit der Affinitätsreinigung auf Zelloberflächen-Antigenen zu tsten, wurde monoklonaler Anti-Rh-D-Human-Antikörper Fog-B als Fab-Fragment auf der Oberfläche von Bakteriophage fd präsentiert. Das präsentierte Fog-B-Fab-Fragment band Antigen, wie durch Agglutinationstest bestimmt, und konnte auf der Basis seiner Bindung auf der Oberfläche der Rh-D-positiven roten Blutkörperchen, nicht aber der Rh-D-negativen roten Blutkörperchen, Affinitätsreinigung unterzogen werden.
- Materialien und Verfahren
- Konstruktion eines Klons, der für ein Anti-Rh-D-Fab-Fragment in Phagemid pHENI kodiert, und Präsentation des Fab-Fragments auf der Oberfläche von Bakteriophage fd
- Das Human-Hybridom Fog-B ist bereits beschrieben worden (N.C. Hughes-Jones et al., Biochem, J. 268 135 (1990). Es erzeugt einen IgG-1/λ-Antikörper, der sich an das Rh-D-Antigen bindet. RNA wurde aus 107 Hybridomzellen hergestellt, wobei ein modifiziertes Verfahren von Cathala eingesetzt wurde (wie in Beispiel 12 beschrieben) und Erststrang-cDNA-synthetisiert wurde, indem spezifische Immunglobulin-Schwer- und Leichtketten-Primer (HuVH1FOR [Beispiel 40] und HuCλFOR (5'-GGA ATT CTT ATG AAG ATT CTG TAG GGG CCA C-3')) verwendet wurden, wie in Beispiel 14 beschrieben. Das VH-Gen wurde daraufhin von einer Aliquote der Erststrang-cDNA unter Verwendung von HuVH4aBACK und HuVH1 FOR amplifiziert. Das Vλ-Gen wurde unter Verwendung eines Vλ-Primers amplifiziert, der für Fog-B spezifisch war (VλFog-B, 5'-AAC CAG CCA TGG CC AGT CTG TGT TGA CGC AGC C-3'). Die PCR-Bedingungen waren wie in Beispiel 40 beschrieben. Die PCR-Produkte wurden analysiert, indem 5 μl über 2%-Agarosegel geschickt wurden. Der Rest wurde zweimal mit Ether, zweimal mit Phenol/Chloroform, extrahiert, mit Ethanol gefällt und in 50 μl H2O resuspendiert. Die amplifizierte VH-DNA wurde mit PstI und BstEII verdaut, und die amplifizierte Vλ-Cλ-DNA mit NcoI und EcoRI. Die Fragmente wurden auf einem 2%-Agarosegel gereinigt, unter Verwendung von Geneclean extrahiert und daraufhin in den löslichen Expressionsvektor pJM-1 Fab D1.3 ligiert (
38 ). Klone, die das korrekte Insert enthielten, wurden zunächst durch Restriktionsanalyse identifiziert und durch Test von exprimiertem löslichem Fab verifiziert (Induktionsbedingungen siehe Beispiel 19). Die Fog-B-Fab-Kassette wurde aus pJM-1 durch PCR amplifiziert, indem HuVH4BACK-Sfi und Hu Cλ-Not verwendet wurde, mit den geeigneten Restriktionsenzymen verdaut und in pHEN1 ligiert. Klone, die das korrekte Insert enthielten, wurden zunächst durch Restriktionsanalyse und daraufhin durch Test identifiziert (Induktionsbedingungen siehe Beispiel 21). - Test auf lösliches Fog-B-Fab-Fragment und auf Phagen präsentiertes Fog-B-Fab-Fragment bezüglich Anti-Rh-D-Aktivität und Dokumentation der Spezifität
- Ein Test auf das lösliche exprimierte Fab wurde mit unkonzentriertem E.coli-Überstand durchgeführt. Ein Test auf auf der Phagen-Oberfläche präsentiertes Fog- B wurde auf Phagen durchgeführt, die durch PEG-Fällung 10-fach eingeengt und dann in PBS resuspendiert worden waren. Die Tests bezüglich der Aktivität und Spezifität erfolgten wie im Beispiel beschrieben.
- Zelloberflächen-Affinitätsreinigung von Phagen, die Fog-B-anti-Rh-D-Fab-Fragment präsentieren
- Gereinigter Fog-B-Phage wurde mit gereinigtem Phagen Fd-Tet CAT-1, der das Anti-Lysozym scFv D1.3 (pAbD1.3) präsentiert, in einem Verhältnis von etwa 1 Fog-B:50 scFvD1.3 vermischt. Vorpapainisierte Erythrozyten (OR2R2 [Rhesus-positiv] oder Orr [Rhesus-negativ] wurden in PBS, die mit 2 % Magermilchpulver ergänzt war, in einer Konzentration von 4 × 107/ml suspendiert. 1 ml dieser Suspension wurde mit 1011 Phagen vermischt, die in 2 ml PBS, ergänzt mit 2 % Magermilch, suspendiert waren, und für 30 min bei Raumtemperatur unter kontinuierlicher Rotation inkubiert. Die Erythrozyten wurden dreimal mit einem Überschuss an eiskalter PBS (10 ml pro Wäsche) gewaschen und daraufhin pelletiert. Die Phagen wurden aus den Zellen durch Resuspendieren in 200 μl 76 mM Zitronensäure, pH 2,8, in PBS 1 min lang eluiert. Die Zellen wurden dann durch Zentrifugieren für 1 min mit 3.000 U/min pelletiert, und der Überstand, der den eluierten Phagen enthielt, wurde durch Zugabe von 200 μl 240 mM Tris-Base, 22 mM Dinatriumwasserstoffphosphat in 1 % (Gew./Vol.) Alubmin neutralisiert. Reihenverdünnung des Eluats wurde eingesetzt, um TG1-Zellen zu infizieren. Fog-B-Fab-Phagen wurden auf Ampicillin-Platten selektiert, und scFvD1.3-Phagen auf Tetracyclin-Platten, und der Titer jedes davon vor der Selektion, nach der Selektion auf Rhesus-D-negativen Zellen und nach der Selektion auf Rhesus-D-positiven Zellen bestimmt.
- Ergebnisse
- Fog-B-Fragment, das auf der Oberfläche des Phagen präsentiert wurde, der vom Phagemid pHEN-Klon stammte, agglutinierte spezifisch Rhesus-D-positive, nicht aber Rhesus D-negative rote Blutkörperchen. Affinitätsreinigung desFog-1 Fab-Phagemids auf Rh-D-positiven roten Blutkörperchen führte zur Anreicherung von 1:50 bis 1.500:1 (Fog-B Fab:scFvD1.3), während Reinigung auf Rh-D-negativen roten Blutkörperchen im Wesentlichen keine Anreicherung zeigte (10fach).
- Beispiel 32
- Eine auf PCR basierende Technik zur einstufigen Klonierung menschlicher scFv-Konstrukte
- Die Assemblierung menschlicher scFv ist der in Beispiel 12 beschriebenen Assemblierung von scFvs aus Mäusen ähnlich. Um die PCR-Klonierung von menschlichen V-Genen zu entwickeln, war es notwendig, einen neuen Bereich der für den Menschen spezifischen Oligonucleotidprimer zu konstruieren (Tabelle 6). Die Verwendung dieser Primer für die Erzeugung von Human-Fabs wird in Beispiel 30 beschrieben. Die Assemblierung der menschlichen scFvs ist im wesentlichen dieselbe, erfordert aber ein Set an FORWARD-Primern, die komplementär zu den J-Segmenten der VH-, VK- und Vλ-Genen sind. (Für Fabs werden FORWARD-Primer verwendet, die komplementär zur Konstantregion sind.) Die für das J-Segment spezifischen Primer wurden basieren auf den veröffentlichten JH-, JK- und Jλ-Sequenzen (Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 4.Ausgabe. US-Department of Health and Human Services. 1987) konstruiert.
- Zusätzlich wird ein anderer Linker für die scFvs benötigt als für Fabs, daher wurde für die menschlichen scFvs ein neues Set von Primern benötigt, um den Linker herzustellen. Primer, die komplementär zu den JH-Forward-Primern und den VK- und Vλ-Back-Primern sind, wurden synthetisiert, um die Bildung von Linker-DNA durch PCR-Amplifikation eins Plasmidtemplats, das den scFv-Linker enthält (Tabelle 6,
39 ), zu ermöglichen. Um eine ausreichende Amplifikation sicherzustellen, wurden die Primer in die tatsächliche Linkersequenz erweitert. Unter Verwendung dieser Primer zur Herstellung der Linker-DNA, wurden 52 getrennte PCR-Reaktionen durchgeführt, wobei jeder der vier umgekehrten JH-Primer in Kombination mit jedem der 13 umgekehrten VK- und Vλ-Oligonucleotide verwendet wurde. Das Templat war etwa 1 ng pSW2scD1.3 (Ward, E.S. 19889, s.o.), das das kurze Peptid (Gly4Ser)3 enthält (Huston, J.S. et al., Gene, 1989, 77: 61). - Spezifisches Beispiel für die PCR-Assemblierung einer menschlichen scFv-Bibliothek
- Dieses Beispiel beschreibt die Bildung einer menschlichen Bibliothek von scFvs, die aus einem nicht immunisiertem Menschen erzeugt wurde:
500 ml Blut, die etwa 108 B-Zellen enthalten, wurden von einem gesunden, freiwilligen Blutspender erhalten. Die weißen Blutkörperchen wurden auf Ficoll abgetrennt und die RNA wie in Beispiel 12 beschrieben isoliert. - 20% der RNA, die das genetische Material von etwa 2 × 107 B-Zellen enthalten, wurden zur cDNA-Isolierung verwendet, wie in Beispiel 30 beschrieben. Die schweren Ketten, die aus IgG- oder IgM-Antikörpern stammen, wurden getrennt gehalten, indem die cDNA-Synthese entweder mit einem IgG-spezifischen Primer (HuIgG1-4CH1 FOR) oder mit einem IgM-spezifischen Primer (HuIgMFOR) geprimt wurde. Aliquoten der cDNA wurden verwendet, um vier getrennte scFv-Bibliotheken zu bilden (IgG-K, IgG-λ, IgM-K und IgM-λ), wie in Beispiel 30 beschrieben. Die resultierenden Bibliotheken wurden auf 1,5%-Agarose gereinigt, elektroeluiert und mit Ethanol gefällt. Zum nachfolgenden Klonieren wurden die K- und λ-Bibliotheken kombiniert, wodurch sich getrennte IgG- und IgM-Bibliotheken ergaben.
- Klonieren der Bibliothek: Die gereinigten scFv-Fragmente (1-4 μg) wurden mit den Restriktionsenzymen NotI und entweder SfiI oder NcoI gespalten. Nach der Spaltung wurden die Fragmente mit Phenol/Chloroform extrahiert und mit Ethanol gefällt. Die gespaltenen Fragmente wurden in entweder mit SfiI-NotI oder mit NcoI-NotI gespalten, durch Agarosegelelektrophorese gereinigte pHEN1-DNA (6 μg) (siehe Beispiel 20) in einem 100 μl Ligationsgemisch mit 2.000 U T4-DNA-Ligase (New England Biolabs) über Nacht bei Raumtemperatur ligiert. Das Ligationsgemisch wurde durch Phenolextraktion gereinigt und mit Ethanol gefällt. Die ligierte DNA wurde in 10 μl Wasser erneut suspendiert und 2,5 μl-Proben in E.coli TG1 (50 μl) elektroporiert. Die Zellen wurden in 1 ml SOC 1 Stunde lang wachsen gelassen und dann auf 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 1 % Glucose (AMP-GLU) in 243 × 243 mm-Platten (Nunc) ausplattiert. Nach Wachstum über Nacht wurden die Kolonien zur Lagerung bei -70°C als Stammbibliothek von den Platten in 10 ml 2 × TY gekratzt, das AMP-GLU und 15% Glycerin enthält.
- Das Klonieren in mit SfiI-NotI und mit NcoI-NotI gespaltenes pHEN1 ergab Bibliotheken von 107 bzw. 2 × 107 Klonen für die IgM-Bibliotheken und etwa 5 × 107 Klonen für jede der beiden IgG-Bibliotheken.
- Beispiel 33
- Isolierung der Bindeaktivitäten aus einer Bibliothek von scFvs aus einem nicht immunisierten Menschen
- Die Fähigkeit, Bindeaktivitäten aus Bibliotheken menschlicher Antikörper, die auf der Oberfläche von Phagen präsentiert werden, zu selektieren, könnte sich als noch wichtiger erweisen als die Isolierung von Bindeaktivitäten aus Mäusebibliotheken. Dies ist so, weil der Standardweg zur Bildung von Antikörpern über die Hybridomtechnik mit menschlichen Antikörpern nicht denselben Erfolg hatte wie jene bei Mäusen. Während es in einigen Fällen möglich ist, Bibliotheken aus immunisierten Menschen zu erhalten, zeigt es sich, daß es in vielen Fällen aufgrund der Toxizität oder der Nicht-Verfügbarkeit eines geeigeneten Immunogens oder aus ethischen Überlegungen nicht möglich ist, zu immunisieren. Alternativ dazu können Bindeaktivitäten aus Bibliotheken isoliert werden, die aus Individuen mit Krankheiten hergestellt wurden, in denen therapeutische Antikörper durch die Immunreaktion gebildet wurden. In vielen Fällen befinden sich die Antikörper-produzierenden Zellen jedoch in der Milz und sind nicht im im Kreislauf befindlichen Pool der peripheren Lymphozyten (das am leichtesten zugängliche Material zur Bildung einer Bibliothek) verfügbar. Zusätzlich kann es sein, daß in Krankheiten in Verbindung mit Immunsuppression keine therapeutischen Antikörper hergestellt werden.
- Ein alternativer Ansatz wäre es, die Bindeaktivitäten aus einer Bibliothek die aus einem nicht immunisiertem Individuum hergestellt wurde, zu isolieren. Dieser Ansatz basiert auf Schätzungen, daß ein primäres Repertoire von 107 verschiedenen Antikörpern mehr als 99% der Epitope mit einer Affinitätskonstante von 105 M-1 oder einer besseren erkennen sollte. Da es sein kann, daß dies keine Antikörper mit hoher Affinität ergibt, kann die Affinität durch die Mutation der V-Gene und/oder durch die Verwendung der isolierten VH-Domäne in einem hierarchischen Ansatz mit einer Bibliothek von leichten Ketten (oder umgekehrt) erhöht werden. In diesem Abschnitt zeigen die Anmelder die Durchführbarkeit dieses Ansatzes durch die Isolierung von spezifischen Antigenbindeaktivitäten gegen drei verschiedene Antigene aus einer Bibliothek von scFvs aus einem nicht immunisierten Menschen.
- Materialien und Verfahren
- Die in diesem Beispiel beschriebene Bildung der menschlichen scFv-Bibliothek, die für die Isolierung der Bindeaktivitäten verwendet wird, ist ausführlich in Beispiel 32 erklärt.
- Schätzung der Vielfalt der ursprünglichen und der selektierten Bibliotheken: Rekombinante Klone wurden vor und nach der Selektion durch PCR (Beispiel 16) mit den Primern LMB3 (der sich 5' von der pelB-Leadersequenz anordnet und identisch mit dem umgekehrten Sequenzierprimer (-40n) von pUC19 ist) und fd-SEQ1 gescreent; dann folgte die Spaltung mit dem häufig schneidenden Enzym BstNI. Die Analyse von 48 Klonen aus jeder nicht selektierten Bibliothek zeigte, daß 90% der Klone Inserts hatten und die Bibliotheken schienen gemäß der Beurteilung durch das BstNI-Restriktionsmuster extrem vielfältig zu sein.
- Gewinnung der Phagemidbibliotheken für Anreicherungsexperimente: Um Phagemidteilchen aus der Bibliothek zu gewinnen, wurden 100 ml 2 × TY, das AMP-GLU (siehe Beispiel 32) enthält, mit 109 Bakterien, die aus der Bibliothek (in Beispiel 32 hergestellt) entnommen wurden (etwa 10 μl), inokuliert und unter Schütteln bei 37°C 1,5 Stunden wachsen gelassen. Die Zellen wurden abzentrifugiert (IEC-Zentrifuge, 4 K, 15 Minuten) und in 100 ml vorgewärmtem (37°C) 2 × TY-AMP-Medium (siehe Beispiel 31) erneut suspendiert, 2 × 1010 pfu VCS-M13 (Stratagene)-Teilchen zugegeben und bei 37°C 30 Minuten lang ohne Schütteln inkubiert. Die Zellen wurden dann in 900 ml 2 × TY mit Ampicillin (100 μg/ml) und Kanamycin (25 μg/ml) (AMP-KAN) überführt und über Nacht unter Schütteln bei 37°C wachsen gelassen. Die Phagenpartikel wurden durch drei PEG-Fällungen (siehe Materialien und Verfahren) gereinigt und konzentriert und in PBS auf 1013 TU/ml (Ampicillin-resistente Klone) erneut suspendiert.
- Anreicherung von phOx:BSA-Bindern durch Selektion in Röhrchen: Zur Anreicherung wurde ein 75 × 12 mm Nunc-Immunröhrchen (Maxisorb; Cat.Nr. 4-44202) über Nacht bei Raumtemperatur mit 4 ml phOx:BSA (1 mg/ml; 14 phOx pro BSA in 50 mM NaHCO3-Puffer pH 9,6) beschichtet. Nach drei Waschungen mit PBS wurde das Röhrchen 2 Stunden lang bei 37°C mit PBS, die 2% Marvel enthält, (2% MPBS) zum Blockieren inkubiert. Nach 3 Waschungen mit PBS wurden die Phagemidteilchen (1013 TU) in 4 ml 2% MPBS zugegeben, 30 Minuten bei Raumtemperatur auf einem rotierenden Drehtisch inkubiert und dann weitere 1,5 Stunden stehen gelassen. Die Röhrchen wurden dann mit 20 Waschungen mit PBS, 0,1% Tween 20 und 20 Waschungen mit PBS (jeder Waschschritt wurde durchgeführt; indem der Puffer hinein- und sofort wieder herausgegossen wurde) gewaschen. Die gebundenen Phagenpartikel wurden vom Röhrchen durch die Zugabe von 10 ml 100 mM Triethylamin pH 11,5 und 15-minütiges Drehen eluiert. Das eluierte Material wurde sofort durch die Zugabe von 0,5 ml 1,0 M Tris-HCl pH 7,4 neutralisiert und gevortext. Die Phagen wurden bei 4°C gelagert.
- Die eluierten Phagen (in 1,5 ml) wurden verwendet, um 8 ml logarithmisch wachsende E.coli TG1-Zellen in 15 ml 2 × TY-Medium zu infizieren, und auf AMP-GLU-Platten wie oben ausplattiert, wobei sich durchschnittlich 107 mit Phagen infizierte Kolonien ergaben.
- Zur Selektion von phOx-Bindern wurde der Ergänzung-Röhrchenanreicherung-Ausplattieren-Zyklus 4mal wiederholt, wonach die Phagemidklone mittels ELISA auf Bindung untersucht wurden.
- Anreicherung von Lysozymbindern durch Anreichern ("panning") und auf Säulen: Eine Petrischale (35 × 10 mm Falcon 3001 Gewebekulturschale) wurde zur Anreicherung durch "Panning" verwendet. Während aller Schritte wurden die Platten auf einer A600 Schüttelplatte (Raven Scientific) geschüttelt. Die Platten wurden über Nacht mit 1 ml Puteneiweißlysozym (3 mg/ml) in 50 mM NaHCO3 (pH 9,6) beschichtet, 3mal mit 2 ml PBS gesachen und mit 2 ml 2% MPBS bei Raumtemperatur 2 Stunden lang blockiert. Nach 3 PBS-Waschungen wurden etwa 1012 TU Phagenteilchen in 1 ml 2% MPBS zugegeben und 2 Stunden lang bei Raumtemperatur schütteln gelassen. Die Platten wurden 5 Minuten lang mit 2 ml der folgenden Lösungen gewaschen: 5mal PBS, PBS-Tween (0,02% Tween-20), 50 mM Tris-HCl (pH 7,5) + 500 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 8,5) + 500 mM NaCl, und abschließend 50 mM NaH-CO3 (pH 9,6). Die gebundenene Phagenpartikel wuden dann durch die Zugabe von 1 ml 100 mM Triethylamin pH 11,5 und 5-minütiges Schütteln eluiert, und dann mit 1 M Tris-HCl (pH 7,4) neutralisiert (wie oben). Alternativ dazu wurden 1 ml Puteneiweißlysozym-Sepharose-Säulen zur Affinitätsreinigung verwendet (McCafferty, J., et al., Nature 1990, 348: 552). Die Säulen wurden gründlich mit PBS gewaschen, mit 15 ml 2% MPBS blockiert, und die Phagen (1012 TU) in 1 ml 2% MPBS aufgebracht. Nach dem Waschen mit 50 ml PBS, 10 ml PBS-Tween (PBS + 0,02% Tween 20), 5 ml 50 mM Tris-HCl (pH 7,5) + 500 mM NaCl, 5 ml Tris-HCl (pH 8,5) + 500 mM NaCl, 5 ml 50 Tris-HCl (pH 9,5) + 500 mM NaCl und abschließend 5 ml 50 mM NaHCO3 pH 9,6. Die gebundenen Phagen wurden mit 1,5 ml 100 mM Triethylamin und mit 1 M Tris-HCl (pH 7,4) neutralisiert.
- Zur Selektion von Puteneiweißlysozym-Bindern wurde der Ergänzung-Röhrchenanreicherung-Ausplattieren-Zyklus oder der Ergänzung-Säule-Ausplattieren-Zyklus 4-mal wiederholt, wonach die Phagemidklone mittels ELISA auf Bindung untersucht wurden.
- Gewinnung von einzelnen Phagemidklonen für ELISA: Mit Klonen, die aus nach 4 Panningrunden eluierten, erneut infizierten und ausplattierten Phagenteilchen resultieren, wurden 150 μl 2 × TY-AMP-GLU in 96-Napf-Platten (Cell wells, Nunclon) beimpft und über Nacht bei 37°C unter Schütteln (250 U/min) wachsen gelassen. Ein 96-Napf-Platten-Replicator ("Plunger") wurde verwendet, um mit etwa 4 μl der Über-Nacht-Kulturen auf der Anfangsplatte ("master plate") 200 μl frisches TY-AMP-GLU zu beimpfen. Nach 1 Stunde wurden 50 μl 2 × TY-AMP-GLU mit 108 pfu VCS-M13 jedem Napf zugegeben, und die Platte 45 Minuten lang bei 37°C inkubiert und dann eine Stunde lang bei 37°C geschüttelt. Die Glucose wurde dann durch Abzentrifugieren der Zellen (4K, 15 Minuten) und Belüften mittels einer ausgezogenen Pasteurpipette entfernt. Die Zellen wurden in 200 μl 2 × TY-AMP-KAN (Kanamycin 50 μg/ml) erneut suspendiert und unter Schütteln bei 37°C 20 Stunden wachsen gelassen. Der nicht konzentrierte, Phagen-hältige Überstand wurde zur Analyse durch ELISA genommen.
- ELISA
- Die Analyse auf Bindung an phOX:BSA, BSA oder Lysozym wurde mittels ELISA (siehe Beispiel 9) durchgeführt, wobei 100 μg/ml phOX:BSA oder BSA, oder 3 mg/ml Puteneiweißlysozym zur Beschichtung verwendet wurden. Die Bestimmung der Kreuzreaktivität der isolierten Klone mit nicht verwandten Antigenen wurde ebenfalls mittel ELISA auf Platten, die mit 100 μg/ml eines nicht relevanten Antigens (Schlüssellochnapfschneckenhämocyanin (KLH), Eialbumin, Chymotrypsinogen, Cytochrom C, Thyroglobulin, GAP-DH (Glyceraldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase), oder Trypsininhibitor) beschichtet wurden, durchgeführt.
- Charakterisierung von ELISA-positiven Klonen: Alle isolierten Antigen-spezifischen Klone wurden gegen ein Anzahl von nicht relevanten Antigenen wie oben beschrieben auf Kreuzreaktivität untersucht. Die Vielfalt der Klone wurde wie oben beschrieben mittels PCR-Screenen bestimmt und zumindest zwei Klone aus jedem Restriktionsmuster wurden mit dem Didesoxykettenabbruch-Verfahren sequenziert.
- Ergebnisse
- Isolierung und Charakterisierung von phOx:BSA-Bindern: Nach 4 Selektionsrunden wurden die für phOx:BSA ELISA-positiven Klone isoliert. Alle Klone stammten aus der IgM-Bibliothek. Von den 96 analysierten Klonen banden sich 43 Klone sowohl an phOx:BSA wie auch an BSA mit optischen Dichten im Bereich von 0,4 bis 1,3 (Hintergrund 0,125). Diese Klone werden als BSA-Binder bezeichnet. Die Bindung an BSA schien spezifisch zu sein, da keiner der 11 analysierten Klone ein Signal über dem Hintergrund ergab, wenn er in einem ELISA mit KLH, Eialbumin, Chymotrypsin, Cytochrom c, Lysozym, Thyroglobulin, GAP-DH oder Trypsininhibitor verwendet wurde. Alle Klone, die sich an BSA binden, hatten dasselbe BstNI-Restriktionsmuster und 14 Klone wurden vollständig sequenziert. Dreizehn der vierzehn Klone hatten dieselbe Sequenz, VH stammte aus einen menschlichen Gen der VH3-Familie und VL aus einem menschlichen Gen der Vλ3-Familie (Tabelle 1). Der andere BSA-Binder stammte aus einem menschlichen Gen der VH4-Familie und einem menschlichen Gen der Vk1-Familie (keine Daten gezeigt).
- Es wurde ein Klon isoliert, der sich nur an phOx:BSA (OD 0,3) band, und der gebundene Phage konnte durch die Zugabe von 0,02 mM 4-ε-Aminocapronsäuremethylen-2-phenyl-oxazol-5-on (phOx-CAP) als Konkurrent ("competitor") vollständig verdrängt werden. Es wurde ebenfalls keine Bindung an die verschiedenen, nicht relevanten, oben beschriebenen Proteine über dem Hintergrund detektiert. Die Sequenz ergab ein VH aus einem menschlichen Gen der VH1-Familie und ein VL aus eine menschlichen Gen der Vλ1-Familie (Tabelle 7).
- Isolierung und Charakterisierung von Lysozym-Bindern: Nach 4 Selektionsrunden wurden für Putenlysozm 50 ELISA-positive Klone isoliert. Die Mehrheit der Klone, nämlich mehr als 95%, stammten aus der IgM-Bibliothek. Die Bindung an Lysozym schien spezifisch zu sein, da keiner der 11 analysierten Klone ein Signal über dem Hintergrund ergab, wenn er in einem ELISA mit KLH, Eialbumin, Chymotrypsin, Cytochrom C, Lysozym, Thyroglobulin, GAP-DH oder Trypsininhibitor verwendet wurde. Die Lysozym-bindenden Klone hatten 3 verschiedene BstNI-Restriktionsmuster und zumindest 2 Klone aus jedem Restriktionsmuster wurden vollständig sequenziert. Die Sequenzen zeigten das Vorhandensein von 4 einzigartigen menschlichen VH-VL-Kombinationen (Tabelle 7).
- Zusammenfassung
- Die Ergebnisse zeigen, daß Antigenbindeaktivitäten aus Repertoires von scFvs, die aus IgM-cDNA von menschlichen Freiwilligen, die nicht spezifisch immunisiert worden waren, isoliert werden kann.
- Beispiel 34
- Gewinnung der menschlichen IpM-Bibliothek unter Verwendung eines Helferphagen, dem das Gen 3 fehlt (δg3)
- Dieses Beispiel beschreibt die Ergänzung von Gen 3-Fusionen aus einer menschlichen Bibliothek unter Verwendung eines Helferphagen mit einer Gen 3-Deletion.
- 100 μl der bakteriellen Stammlösung der IgM-Phagemidbibliothek, die wie beschrieben hergestellt wurde (Beispiel 32) und 5 × 108 Bakterien enthält, wurden verwendet, um 100 ml 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose (TY/Amp/Glu) zu beimpfen. Die wurde bei 37°C 2,5 Stunden wachsen gelassen. 10 ml dieser Kultur wurden 90 ml vorgewärmtem TY/Amp/Glu zugegeben und die Infektion durch die Zugabe von 10 ml eines 200fachen Konzentrats des K07-Helferphagen, dem das Gen 3 fehlt (M13K07gIIIΔNr.3) (Beispiel 27) und 1-stündiger Inkubation bei 37°C ohne Schütteln durchgeführt. Die Herstellung von M13K07gIIIΔNr.3 war wie in Beispiel 27 beschrieben. Nach der 10-minütigen Zentrifugation bei 4.000 U/min wurden die Bakterien erneut in 100 ml 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin (ohne Glucose) suspendiert. Die Titration der Kultur an diesem Punkt ergab, daß es 1,9 × 108 Bakterien gab, wie aufgrund ihrer Fähigkeit, auf Platten zu wachsen, die sowohl Ampicillin (100 μg/ml) wie auch Kanamycin (50 μg/ml) enthalten, festgestellt wurde. Die Inkubation wurde für eine weitere Stunde unter Schütteln fortgesetzt, bevor die Bakterien in 2,5 Liter 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 50 μg/ml Kanamycin, die sich in 5 2,5 Liter-Kolben befinden, überführt wurde. Diese Kultur wurde 16 Stunden inkubiert und der Überstand durch Zentrifugation gewonnen (10-15 Minuten bei 10.000 U/min in einer Sorvall RC5B-Zentrifuge bei 4°C). Die Phagenpartikel wurden durch die Zugabe von 1/5 des Volumens an 20% Polyethylenglykol, 2,5 M NaCl, dann bei 4°C 30 Minuten Stehenlassen und wie oben Zentrifugieren geerntet. Das resultierende Pellet wurde erneut in 40 ml 10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA pH 7,4 suspendiert und die bakteriellen Zellreste durch Zentrifugation wie oben entfernt. Das Präparat der verpackten Phagemide wurde dann erneut gefällt, wie oben gesammelt und erneut in 10 ml 10 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA pH 7,4 suspendiert. Der Liter dieses Präparats enthielt 4,1 × 1013 transduzierende Einheiten/ml (Ampicillinresistenz).
- Mit OX-BSA beschichtete Röhrchen wurden wie in Beispiel 35 zum Panning der Phagemidbibliothek aus Beispiel 32 hergestellt. Die ergänzte Bibliothek wurde auch durch mit Rinderthyroglobulin (Sigma) beschichtete Röhrchen angereichert. Diese wurden über Nacht bei 37°C mit mit einer Konzentration von 1 mg/ml Thyroglobulin in 50 mM NaCO3 pH 9,6 beschichtet. Die Röhrchen wurden mit PBS, die 2% Milchpulver (PBS/M) blockiert und 3 Stunden lang mit 1 ml der ergänzten Phagenbiblio thek (dem Äquivalent von 250 ml Kulturüberstand), gemischt mit 3 ml PBS/M, inkubiert. Waschen, Elution, Neutralisation und Infektion waren wie in Beispiel 35.
- Ergebnisse: Panning mit Oxazolon-BSA
- Die erste Panningrunde mit OX-BSA ergab 2,8 × 106 Phagen. Eine große Bakterienplatte mit 1,4 × 106 Kolonien, die aus diesem Eluat erhalten wurde, wurde in 10 ml 2 × TY, 20% Glycerin geschabt, 10 Minuten geschüttelt und gelagert. Dies wurde auch verwendet, um eine frische Kultur zur Ergänzung mit M13K07gIIIΔNr.3 zu beimpfen. (Bakterien und ergänzte Phagen, die aus der ersten Panningrunde mit OX-BSA stammen, werden mit OXPAN1 bezeichnet. Bakterien oder ergänzte Phagen, die aus der zweiten und dritten Panningrunde stammen, werden mit OXPAN2 bzw. OXPAN3 bezeichnet.) Die Ergänzung der Phagen mit M13K07gIIIΔNr.3 nach jeder Panningrunde war im wesentlichen wie oben beschrieben, aber unter Verwendung von 5 ml-Volumina für die Anfangskulturen in TY/Amp/Glu, unter Einsatz von 1 ml Helferphagen und mit der Überführung in 100-500 ml 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 50 μg/ml Kanamycin. Die zweiten und dritten Panningrundenschritte waren wie oben für die erste beschrieben, aber unter Einsatz von 0,8-1,0 ml 100fach konzentrierten Phagen (das Äquivalent von 80-100 ml Kulturüberstand). Das Eluat aus der zweiten Panningrunde enthielt 8 × 108 infektiöse Partikel und das Eluat aus der dritten Panningrunde enthielt 3,3 × 109 infektiöse Partikel.
- Panning mit Thyroglobulin
- Die erste Panningrunde mit Thyroglobulin ergab 2,52 × 105 infektiöse Partikel. Die Hälfte des Eluats wurde verwendet, um 1,26 × 105 bakterielle Klone auf einer großen Platte zu bilden. Diese Kolonien wurden in 10 ml 2 × TY, 20% Glycerin gekratzt, 10 Minuten geschüttelt, aliquotiert und gelagert. Diese Bakterien und daraus stammende ergänzte Phagen werden mit THYPAN1 bezeichnet, und verwendet, um eine frische Kultur zur Ergänzung mit M13K07gIIIΔNr.3 zu beimpfen, um ein polyklonales ergänztes Phagenpräparat zu ergeben. Material, das auf ähnliche Weise aus Pan nings der zweiten und dritten Runde stammt, wurde mit THYPAN2 bzw. THYPAN3 bezeichnet. Die Pannings mit Thyroblobulin in der zweiten und dritten Runde waren wie oben für die zweite und dritte Runde des Pannings mit OX-BSA beschrieben. Das Eluat aus der zweiten Panningrunde enthielt 8 × 107 transduzierende Einheiten, und das Eluat aus der dritten Panningrunde enthielt 6 × 107 infektiöse Partikel.
- ELISA-Screenen der durch Panning erhaltenen Klone
- 40 Kolonien, die aus der dritten Panningrunde mit Thyroglobulin (THYPAN3) stammten, wurden in eine 96-Napf-Platte gegeben und über Nacht bei 37°C in TY/Amp/Glu wachsen gelassen. In ähnlicher Weise wurden 48 Kolonien aus zwei und 48 Kolonien aus drei Panningrunden mit OX-BSA gezüchtet (OX-PAN2 und OX-PAN3). Zur selben Zeit wurden polyklonale Phagen hergestellt. Am nächsten Tag wurden 5 μl aus jeder Kultur in 100 μl frisches vorgewärmtes TY/Amp/Glu überführt, 1,5 Stunden wachsen gelassen und M13K07gIIINr.3 (2 × 105 infektiöse Phagen pro Napf in 100 μl TY/Amp/Glu) zugegeben. Diese wurden eine Stunde lang ohne Schütteln bei 37°C inkubiert, mit 4.000 U/min 10 Minuten zentrifugiert, erneut in 150 μl 2 × TY-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin suspendiert und eine weitere Stunde unter Schütteln inkubiert, bevor 2 ml Medium mit 100 μg/ml Ampicillin und 50 μg/ml Kanamycin zugegeben wurden. Nachdem die Kulturen über Nacht gewachsen waren, wurden sie mit 4.000 U/min 10 Minuten zentrifugiert, und die Überstände gesammelt. Die zum Screenen der THYPAN3-Klone verwendeten ELISA-Platten wurden bei 37°C über Nacht mit 200 μg/ml Thyroglobulin in 50 mM NaCO3 pH 9,6 beschichtet. Die für OXPAN2 und OXPAN3 verwendeten Platten wurden über Nacht bei 37°C mit 200 μg/ml OX-BSA in PBS beschichtet.
- 120 μl des Kulturüberstandes wurden mit 5 × PBS, 10% Milchpulver gemischt und bei Raumtemperatur 2 Stunden lang inkubiert. Die ELISAs wurden wie in Beispiel 14 durchgeführt.
- Für Thyroglobulin waren 18 von 40 Klonen positiv (0,3-2,0 O.D. nach 30 Minuten). (Ein Phagenvergleich (Vektor pCAT3) ergab einen Wert von 0,07 O.D.). Zusätzlich waren positive Signale auch in den polyklonalen Phagenpräparaten THYPAN1 (0,314 O.D.) und THYPAN2 (0,189 O.D.) zu sehen, verglichen mit den aus der ursprünglichen, nicht gepannten Bibliothek stammenden Phagen (0,069 O.D.). Alle polyklonalen Phagen wurden mit PEG gefällt und in 10facher Konzentration verwendet.
- Die PCR-Reaktionen und BstN1-Spaltungen wurden mit den positiven Klonen wie oben beschrieben durchgeführt und sechs verschiedene DNA-Fragmentmuster erhalten, was zeigt, daß zumindest sechs verschiedene Klone isoliert worden waren.
- Bei OX-BSA waren nach zwei Panningrunden 30 von 48 Klonen im ELISA positiv und nach drei Runden 42 von 48. In einem getrennten Experiment wurde nach 30 Minuten ein positives Signal von den polyklonalen Phagenpräparaten OXPAN1 (0,988 O.D.) und OXPAN2 (1,717 O.D.) erhalten, verglichen mit den aus der ursprünglichen, nicht gepannten Phagemidbibliothek stammenden Phagen (0,186 O.D.).
- Spezifität der Klone für Thyroglobulin oder OX-BSA
- Selektierte Klone (11 Anti-Thyroglobulin, 5 Anti-OX-BSA), wobei jeder ein unterschiedliches BstNI-Restriktionsspaltmuster darstellt, wurden auf ihre Bindung an nicht relevante Antigene untersucht. ELISA-Platten wurden mit Antigen (100 μg/ml in 50 mM NaCO3 pH 9,6) durch Inkubation bei 37°C über Nacht beschichtet. Die Liste der Antigene besteht aus Schlüssellochnapfschneckenhämocyanin, Hühnereilysozym, Rinderserumalbumin, Eialbumin, Chymotrypsinogen, Cytochrom c, GAP-DH (Glyceraldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase), Trypsininhibitor, Rinderthyroglobulin und Oxazolon-BSA. Doppelproben des Phagenüberstandes (80 μl + 20 μl 5 × PBS, 10 Milchpulver) wurden jedem Antigen zugegeben und eine Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Der ELISA wurde wie in Beispiel 14 durchgeführt.
- Jeder der Thyroglobulin-spezifischen Klone (11 von 11) war für Thyroglobulin positiv (O.D. 0,12-0,76), zeigte aber nach 60 Minuten keine Bindung (O.D.<0,03) an eines der nicht relevanten Antigene. In ähnlicher Weise hatten 3 der 5 OX-BSA-spezifischen Klone eine O.D. von 0,07-0,52, im Vergleich zu O.D.s<0,02 für die nicht relevanten Antigene. Keiner der 5 Klone zeigte irgendeine Bindung an BSA alleine.
- Somit können positive Klone nach nur 2 Panningrunden durch Ergänzen mit M13K07gIIIΔNr.3 isoliert werden. Zusätzlich gibt es mit diesem Helferphagen eine höhere Wahrscheinlichkeit für die Bildung von Phagenpartikel mit mehr als einem intakten Antikörpermolekül. Die erhöht möglicherweise die Avidität des Phagenantikörpers und ermöglicht die Isolierung von Klonen mit schwacher Affinität.
- Beispiel 35
- Änderung der Feinspezifität von auf Phagen präsentiertem scFvD1.3 durch Mutagenese und Selektion auf immobilisiertem Putenlysozym
- Der D1.3-Antikörper bindet sich an Hühnereilysozym (HEL) mit einer Affinitätskonstante von 4,5 × 107 M-1, hingegen bindet er sich an Puteneilysozym (TEL) mit einer Affinitätskonstante von <1 × 105 M-1 (Harper et al., 1987, Molecular Immunology 24, S.97-108, Amit et al., (1986) Science 233, S.747-753).
- Es wurde vermutet, daß der Grund dafür ist, daß der an der Position 121 von HEL vorhandene Glutaminrest (gln121) durch einen Histidinrest an derselben Stelle in TEL ersetzt ist. Somit kann die Mutagenisierung der D1.3-Antikörperreste, die mit gln121 von HEL in Wechselwirkung stehen, die Bindung an TEL erleichtern.
- Gemäß Amit et al., s.o., gibt es eine Wechselwirkung zwischen Tyrosin an der Position 32, Phenylalanin an der Position 91 und Tryptophan an der Position 92 der leichten Kette mit gln121 von HEL. Zusätzlich gibt es auch eine Wechselwirkung von Tyrosin an der Position 101 der schweren Kette. Es wird von keinem dieser Reste er wartet, daß er bei der Bestimmung der Hauptkettenkonformation der variablen Regionen des Antikörpers beteiligt ist. (Chothia and Lesk (1987), Journal of Molecular Biology 196, S.901-917).
- Mutagenese von pCAT3SCFvD1.3
- Die Oligonucleotide mutL91,92 wurden hergestellt, um Phenylalanin an der Position 91 (L91) und Tryptophan an der Position 92 (L92) der leichten Kette statistisch abzuwandeln. Die Oligonucleotide mutL32 wurden hergestellt, um Tyrosin an der Position 32 der leichten Kette (L32) statistisch abzuwandeln, und die Oligonucleotide mut101 wurden hergestellt, um Tyrosin an der Position 101 der schweren Kette (H101) statistisch abzuwandeln.
mutL91, 92:
5' CGT CCG AGG AGT ACT NNN NNN ATG TTG ACA GTA ATA 3'
mutL32:
5' CTG ATA CCA TGC TAA NNN ATT GTG ATT ATT CCC 3'
mutH101:
5' CCA GTA GTC AAG CCT NNN ATC TCT CTC TCT GGC 3' - (N stellt eine statistische Insertion gleicher Mengen von A, C, G oder T dar). Die In-vitro-Mutagenese des Phagemidvektors pCAT3scFvD1.3 (Beispiel 13) mit dem Oligonucleotid mutL91,92 wurde unter Verwendung eines In-vitro-Mutagenese-Sets (Amersham) durchgeführt. Die resultierende DNA wurde durch Elektroporation mit einem Bio-Rad-Elektroporator in TG1-Zellen transformiert. Es wurden 78.000 Klone erhalten und diese in 15 ml 2 × TY/20% Glycerin gekratzt. Dieser Pool wurde D1.3L91L92 genannt. Einsträngige DNA wurde durch Ergänzen mit M13K07 wie in Sambrook et al., 1989, s.o., hergestellt und mit dem Primer FDTSEQ1, unter Verwendung eines Sequenase-Sequenziersets (United States Biochemical Corporation) sequenziert.
- Dies zeigte, daß die DNA erfolgreich mutagenisiert wurde, durch das Vorhandensein von Banden in allen vier DNA-Sequenzierspuren an den Nucleotidpositionen, die für L91 und L92 kodieren, bestimmt wurde. Diese mutagenisierte einsträngige DNA wurde wie oben einer weiteren Mutageneserunde mit den Nucleotiden entweder mutL32 oder mutH101 unterzogen. Die Mutagenese mit mut32 ergab 72.000 Klone (der Pool wurde D1.3L32 genannt), während mutH101 102.000 Klone ergab (der Pool wurde D1.3H101 genannt). Diese Klone wurden in 2 × TY/20% Glycerin gekratzt. Einzelstrang-DNA aus jedem Pool wurde mit den Oligonucleotiden D1.3L40 bzw. LINKSEQ1 sequenziert, wie oben beschrieben, und es wurde gezeigt, daß diese korrekt statistisch abgewandelt war.
D1.3L40:
5'-CAG GAG CTG AGG AGA TTT TCC-3'
LINKSEQ1:
5'-TCCGCC TGA ACC GCC TCC ACC-3' - Herstellung von ergänzten Phagen zur Affinitätsreinigung
- 10-20 μl Bakterien, die aus jedem mutagenisiertem Pool stammen (von Platten abgeschabt), wurden zum Beimpfen von 5 ml TY/Amp/Glu verwendet. Alle Bakterien wurden bei 37°C wachsen gelassen. Nach 2-3 Stunden Wachstum wurde 1 ml zur Verdünnung in 5 ml vorgewärmtes TY/Amp/Glu gegeben und durch die Zugabe des in Beispiel 27 beschriebenen M13K07gIIIΔNr.3-Präparats infiziert. Eine Stunde nach der Infektion wurden die Kulturen bei 4.000 U/min 10 Minuten zentrifugiert, erneut in 2 × TY mit 100 μg/ml Ampicillin suspendiert, eine weitere Stunde inkubiert, dann in 500 ml 2 × TY mit 100 μg/ml Ampicillin und 50 μg/ml Kanamycin überführt und dies 16 Stunden wachsen gelassen. Die verbleibenden Phagenherstellungsschritte waren wie in Beispiel 34. Die Phagen wurden schließlich in 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA pH 7,4 in 1/100 des ursprünglichen Kulturvolumens gelöst.
- Affinitätsreinigung
- 100 ml Puteneilysozym mit einer Konzentration von 10 mg/ml in 0,1 M NaHCO3, 0,5 M NaCl pH 8,3 wurden mit demselben Volumen an gequollener, mit Bromcyan aktivierter Sepharose 4B (Pharmacia) gemischt, kovalent gebunden und gemäß den Herstellerangaben gewaschen. Vor der Verwendung wurde diese Matrix (TEL-Sepharose) mit 100 Volumina PBS, gefolgt von 10 Volumina PBSM gewaschen. Die TEL-Sepharose wurde im gleichen Volumen PBSM erneut suspendiert, und 1 ml zu 1 ml eines 50fachen Phagenkonzentrats in PBSM gegeben und auf einer rotierenden Plattform 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die tatsächlich in diesem Schritt eingesetzten Phagen wurden hergestellt, indem gleiche Volumina der unabhängigen Präparate der drei statistisch abgewandelten Pools (D1.3L9L92, D1.3H101 und D1.3L32) vermischt wurden. Nach diesem Bindeschritt wurden die Suspensionen auf eine wegwerfbare Polypropylen-Säule (Poly-Prep-Säulen, Bio-Rad) aufgegeben und mit 200 Volumina PBS mit 0,1% Tween 20 gewaschen. Die gebundenen Phagen wurden mit 1 ml 100 mM Triethylamin eluiert und mit 0,5 ml 1 M Tris-HCl (pH 7,4) neutralisiert. Aus dem Eluat wurde eine Verdünnungsreihe hergestellt und zur Infektion von TG1-Zellen verwendet, die dann auf TY-Platten mit 100 μg/ml Ampicillin und 2% Glucose ausplattiert wurden. Die Platten, die etwa 106 Kolonien aufwiesen, wurden in 3 ml 2 × TY mit 20% Glycerin geschabt und bei -70°C gelagert. 10 μl davon wurden zum Starten einer zweiten Kultivierungsrunde verwendet, die wie oben beschrieben mit M13K07gIIIΔNr.3 wiederhergestellt wurden (mit einem Endvkulturvolumen von 100 ml). Die zweite und dritte Runde von Affinitätssäulenreinigungsschritten wurden wie oben für die erste beschrieben durchgeführt.
- Analyse mittels ELISA
- 40 Kolonien, die aus der dritten Säulenreinigungsrunde auf TEL-Sepharose stammen, wurden in eine 96-Napf-Platte gegeben und über Nacht bei 37°C in 200 μl TY/Amp/Glu gezüchtet. Die Phagemidteilchen wurden wiederhergestellt und für den ELISA wie in Beispiel 13 beschrieben vorbereitet. Die ELISA-Platten wurden über Nacht bei 37°C mit Hühnereilysozym (HEL) oder Puteneilysozym (TEL) mit einer Konzentration von 200 μg/ ml in 50 mM NaCO3 pH 9,6 beschichtet. Die ELISAs wurden wie in Beispiel 14 durchgeführt.
- Nach 15-minütiger Inkubation in Substrat, zeigte sich, daß 13 Klone negativ waren (O.D.< 0,05 bei HEL und TEL) . Bei allen positiven wurde ein Signal von 0,1-0,78 bei HEL erzielt mit Ausnahme von einem, wo das Signal bei HEL 0,078 betrug, jedoch brachte das Signal bei TEL (O.D. 0,169) diesen in die positive Gruppe. Das Vergleichsphagemidpräparat hatte ein prozentuelles Signalverhältnis TEL:HEL von 22%. Es wurde angenommen, daß die Klone eine unveränderte Bindung aufweisen, wenn das Verhältnis TEL:HEL weniger als 40% betrug. 9 Klone fielen in diese Kategorie. Es wurden 18 Proben gefunden, die eine veränderte Bindung mit einem Signalverhältnis von zwischen 40-200% aufwiesen.
- Es wurden Verdünnungsreihen von 10 Klonen hergestellt, die mittels ELISA untersucht wurden. In 6 dieser Klone war das Bindungsprofil an HEL dasselbe wie im ursprünglichen Klon (pCAT2SCFvD1.3), während das Signal mit TEL verstärkt war (siehe
39 , Klon B1). In den verbleibenden 4 Klonen wurde das mit TEL verstärkte Signal von einem Signalabfall mit HEL (siehe40 , Klon A4) begleitet. - Konkurrenz mit löslichem Antigen
- Alle isolierten Klone behielten die Bindung an HEL in verschiedenem Ausmaß. Um zu bestimmen ob ein lösliches Antigen mit dem immobilisierten in Konkurrenz treten kann, wurde wie oben ein Parallelexperiment durchgeführt, aber vor der Inkubation mit dem Phagenpräparat wurde zur TEL-Sepharose Hühnereilysozym (1 mg/ml) zugegeben. Dieses Experiment wurde mit 3 Säulenreinigungsrunden durchgeführt und 40 Kolonien erhalten. Keiner dieser Klone band HEL oder TEL, was zeigt, daß das lösliche Antigen durch Konkurrenz erfolgreich die Bindung an das immobilisierte Antigen unterbunden hatte.
- Beispiel 36
- Modifikation der Spezifität eines Antikörpers durch Austausch der VLK-Domäne durch eine VLK-Bibliothek, die aus einer nicht immunisierten Maus stammt.
- Wenn eine Antikörperspezifität isoliert wird, ist es oft wünschenswert, einige der Eigenschaften zu verändern, insbesondere seine Affinität oder Spezifität. Dieses Beispiel zeigt, daß die Spezifität eines Antikörpers durch die Verwendung einer unterschiedlichen VL-Domäne, die aus einem Repertoire solcher Domänen stammt, geändert werden kann. Dieses Verfahren unter Verwendung der Präsentation auf Phagen wäre für die Verbesserung sowohl von existierenden monoklonalen Antikörpern wie auch von Antikörperspezifität, die von Phagenantikörper erhalten wurden, anwendbar. Dieses Beispiel zeigt, daß der Austausch der VL-Domäne von scFvD1.3, der spezifisch für Hühnereiweißlysozym (HEL) ist, mit einer Bibliothek von VL-Domänen die Selektion von scFv-Fragmenten, die sich auch an Puteneiweißlysozym (TEL) binden, ermöglicht. Allgemeiner gesagt zeigt dieses Beispiel, daß Antikörperspezifitäten durch den Austausch einer variablen Domäne modifiziert werden können, und gibt ein weiteres Beispiel des hierarchischen Ansatzes zur Isolierung von Antikörperspezifitäten.
- Die schwere Kette von D1.3 wurde aus einem bestehenden Konstrukt (pSW1-VHD1.3, Ward et al., 1989, s.o.) mittels PCR unter Verwendung der Primer VH1BACK und VH1 FOR amplifiziert, die Bibliothek der leichten Kette wurde aus der aus der Milz einer nicht immunisierten Maus erhaltenen cDNA-Bibliothek, die unter Verwendung der MJKFONX-Primer 1, 2, 4, 5 für den ersten Strang wie in Beispiel 12 synthetisiert wurde, amplifiziert. Die nachfolgende Amplifikation wurde mit denselben "Forward"-(Vorwärts-)Primern und dem VK2BACK-Primer durchgeführt. Die PCR-Assemblierung der schweren Kette von D1.3 mit der Bibliothek der leichten Kette wurde durch den Signalketten-Fv-Linker wie in Beispiel 12 beschrieben vermittelt.
- Die Klonierung der assemblierten PCR-Produkte (scFv-Sequenzen) wurden nach einem zusätzlichen PCR-Schritt ("pull-through") unter Verwendung eines BACK-Primers, der eine ApaLI-Stelle bereitstellt, und von forward-Primern, die wie in Beispiel 12 eine NotI-Stelle enthalten, durchgeführt. Mit ApaLI/NotI gespaltene PCR-Fragmente wurden in den ebenso gespaltenen Vektor fdCAT2 kloniert. Nach E lektroporation der Ligationsreaktion in MC1061-Zellen wurden 5 × 105 Transformationen erhalten.
- Das Screenen der Phagenbibliothek nach TEL-Bindern wurde durch Panning durchgeführt. Falcon 2058-Polystyrolröhrchen wurden (16 Stunden lang) mit 2 ml TEL-PBS (3 mg/ml) beschichtet und mit 4 ml MPBS (PBS mit 2% Magermilchpulver) blockiert. Aus der Bibliothek erhaltene Phagen (5 × 1010 transduzierende Einheiten) in 2 ml MPBS (2%) wurden 2 Stunden lang in diesen Röhrchen bei Raumtemperatur inkubiert. Die Röhrchen wurden 3x mit PBS, 1x mit 50 mM Tris-HCl (pH 7,5) 0,5 M NaCl; 1x mit 50 mM Tris-HCl (pH 8,5) 0,5 M NaCl; 1x mit 50 mM Tris-HCl (pH 9,5) 0,5 M NaCl gewaschen. Schließlich wurden die Phagen mit 100 mM Triethylamin eluiert. Die eluierten Phagen wurden verwendet, um TG1-Zellen zu infizieren, die Zellen wurden auf 2 × TY-Platten mit 15 μg/ml Tetracyclin ausplattiert und 16 Stunden lang wachsen gelassen. Die Kolonien wurden in 25 ml 2 × TY-Medium gekratzt und die Phagen durch PEG-Fällung erhalten. Nach einer zweiten Selektionsrunde auf TEL-Binder wurden wie in Beispiel 2 beschrieben ELISAs durchgeführt.
- Die Analyse von 100 Klonen aus der Bibliothek durch ELISA auf mit TEL beschichteten Platten zeigte vor der Affinitätsselektion keine Binder. Im Gegensatz dazu zeigten etwa 10% der Phagenklone nach zwei Selektionsrunden auf TEL-bindende Phagen positive ELISA-Signale. Die ELISA-Signale galten als positiv, wenn die Werte um zumindest das Zweifache höher als die des fdCAT2-Vektors ohne Insert waren. Eine genauere Analyse der Bindeeigenschaften der TEL-bindenden Phagen ist in
41 gezeigt. - Wie in
41 gezeigt wurden einige Klone gefunden, die sich im Gegensatz zum ursprünglichen D1.3 scFv, der sich fast ausschließlich an HEL bindet, in gleichem Ausmaß an TEL und HEL binden. Keiner der Klone band sich an BSA. Diese Entdeckungen zeigen, daß die Spezifität dieser scFvs im Vergleich zu D1.3 breiter ist, da beide Lysozyme (TEL und HEL) erkannt werden, daß aber die Spezifität für Lysozym beibehalten wurde, da BSA nicht erkannt wurde. Die abgeleiteten Aminosäuresequenzen (durch DNA-Sequenzieren erhalten) von zwei leichten Ketten aus den Klo nen MF1 und M21, die den Klonen 3 und 9 in41 entsprechen, sind in42 dargestellt. - Im Fall von isolierten Antikörpern kann der in dieser Untersuchung beschriebene Ansatz besonders nützlich sein, wenn die Erkennung eines weiteren Bereich verschiedener, aber eng verwandter Antigene gewünscht ist. Beispielsweise sind monoklonale Antikörper gegen virale Antigene wie die V3-Schleife des HIV1-gp 120 in den meisten Fällen aufgrund der Variabilität in diesem Teil des HIV1-env-Gens ziemlich spezifisch für ein bestimmtes Virusisolat. Die Modifikation solcher Antikörper auf die in diesem Beispiel beschriebene Weise könnte zu Antikörpern führen, die mit einem größeren Bereich von HIV-1-Isolaten kreuzreagieren, und wäre daher möglicherweise von hohem Wert für die Therapie und Diagnose.
- Ein ähnlicher Ansatz könnte durchgeführt werden, bei dem die variable Region der leichten Kette mit den gewünschten Eigenschaften fixiert gehalten wird und mit einer Bibliothek von variablen Domänen der schweren Kette kombiniert wird. Eine schwere Ketten, beispielsweise VHD1.3 behalten ihre Bindeaktivität als Einzeldomänen. Dies könnte zu einer Strategie führen, worin VH-Domänen, wenn sie auf Phagen exprimiert werden, auf Bindeaktivität gescreent werden, und dann die bindenden Domänen mit einer Bibliothek von VL-Domänen zur Selektion von geeigneten Leichtkettenpartnern kombiniert werden.
- Beispiel 37
- Selektion einer Phagenantikörperspezifität durch die Bindung an ein Antigen, das an magnetischen Perlen befestigt ist. Die Verwendung eines spaltbaren Reagens, um die Elution der gebunden Phagen unter schonenden Bedingungen zu ermöglichen.
- Wenn sich ein Phagenantikörper mit hoher Affinität oder Avidität an sein Antigen bindet, kann es sein, daß es nicht möglich ist, den Phagenantikörper mit einem dem Antigen verwandten Molekül von der Affinitätsmatrix zu eluieren. Alternativ dazu kann es sein, daß es kein geeignetes spezifisches Molekül zur Elution gibt, das in ausrei chend hoher Konzentration hergestellt werden kann. In diesen Fällen ist es notwendig, ein Elutionsverfahren zu verwenden, das nicht für den Antigen-Antikörper-Komplex spezifisch ist. Leider zerstören einige der nicht spezifischen Elutionsverfahren die Phagenstruktur, beispielsweise nimmt die Phagenlebensfähigkeit bei pH 12 mit der Zeit ab (Rossomando, E.F. and Zinder, N.D. J. Mol. Biol. 36, 387-399, 1968). Es wurde daher ein Verfahren entwickelt, das die Elution von gebundenen Phagenantikörpern unter schonenden Bedingungen (Reduktion einer Dithiol-Gruppe mit Dithiothreitol), die die Phagenstruktur nicht zerstören, ermöglicht.
- Das Zielantigen wurde mit einem spaltbaren Biotinylierungsreagens biotinyliert. Mit 2-Phenyl-5-oxazolon (O. Makela et al., s.o.) konjugiertes BSA wurde unter Verwendung eines Biotinylierungsreagens mit einer spaltbaren Dithiol-Gruppe (Sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido)ethyl-1,3-dithiopropionat von Pierce) gemäß den Herstellerangaben modifiziert. Diese biotinylierte Antigen wurde an mit Streptavidin beschichtete magnetische Perlen (Dynal) gebunden und der Komplex verwendet, um Phagen zu binden. Die mit Streptavidin beschichteten magnetischen Perlen wurden mit Antigen vorbeschichtet, indem 650 μg biotinyliertes OX-BSA in 1 ml PBS mit 200 μl Perlen zumindest eine Stunde lang bei Raumtemperatur vermischt wurde. Ein Vierzigstel des Komplexes (äquivalent mit 5 μl Perlen und einem Input von 17,5 μg OX-BSA) wurden zu 0,5 ml Phagen in PBSM (PBS mit 2% Magermilchpulver) mit 1,9 × 1010 Phagenteilchen gegeben, und in den in Tabelle 8 gezeigten Verhältnissen von pAbD1.3, der gegen Lysozym (Beispiel 2) gerichtet ist, zu pAbNQ11, der gegen 2-Phenyl-5-oxazolon gerichtet ist, vermischt.
- Nach 1-stündiger Inkubation unter Mischen bei Raumtemperatur wurden die magnetischen Perlen unter Verwendung einer Dynal MPC-E Magnettrennvorrichtung wiedergewonnen. Sie wurden dann in PBS mit 0,5% Tween 20 (3 × 10 Minuten , 2 × 1 Stunde, 2 × 10 Minuten) gewaschen und die Phagen durch 5-minütige Inkubation in 50 μl PBS mit 10 mM Dithiothreitol eluiert. Das Eluat wurde verwendet, um TG1-Zellen zu infizieren und die resultierenden Kolonien wurden mit dem Oligonucleotid NQ11CDR3 (5'-AAACCAGGCCCCGTAATCATAGCC-3'), das aus CDR3 des NQ11-Antikörpers (dieser hybridisiert mit pAbNQ11, aber nicht mit pAb D1.3) stammte.
- Eine 670fache Anreicherung von pAbNQ11 (Tabelle 8) wurde von einem Hintergrund von pAbD1.3 in einer einzigen Panningrunde unter Verwendung des Äquivalents von 17,5 μg biotinyliertem OX-BSA erreicht.
- Dieser Elutionsvorgang ist nur ein Beispiel eines Elutionsvorgangs unter schonenden Bedingungen. Ein besonders vorteilhaftes Verfahren wäre der Einbau einer Nucleotidsequenz, die für Aminosäuren kodiert, welche eine Erkennungsstelle für die Spaltung durch eine hochspezifische Protease darstellen, zwischen den fremden, insertierten Gen, in diesem Fall ein Gen für ein Antikörperfragment, und der verbleibenden Sequenz des Gen III. Beispiele für solch hochspezifische Proteasen sind Faktor X und Thrombin. Nach der Bindung des Phagen an die Affinitätsmatrix und der Elution zur Entfernung von nicht spezifisch bindenden und schwach bindenden Phagen würde der stark bindende Phage durch das Waschen der Säule mit einer Protease unter Bedingungen, die zur Spaltung der Spaltstelle geeignet sind, entfernt werden. Dies würde das Antikörperfragment vom Phagenpartikel abspalten und den Phagen eluieren. Es wäre zu erwarten, daß diese Phagen infektiös sind, da die einzige Proteasestelle die eine spezifisch eingebaute sein sollte. Die stark bindenden Phagen könnten dann durch Infektion von z.B. E.coli TG1-Zellen wiedergewonnen werden.
- Beispiel 38
- Verwendung der Zellenselektion, um einen angereicherten Pool von Antigen-spezifischen Antikörpergenen bereitzustellen, Anwendung, um die Komplexität der Repertoires der Antikörperfragmente, die auf der Oberfläche von Bakteriophagen präsentiert werden, zu verringern
- Es gibt etwa 1014 verschiedene Kombinationen der leicht und schweren Ketten, die aus der Milz einer immunisierten Maus stammen. Wenn der statistische kombinatorische Ansatz verwendet wird, um Fragmente der schweren und leichten Ketten in einen einzelnen Vektor zur Präsentatoin von scFv-, Fv- oder Fab-Fragmenten auf Phagen kloniert werden, ist es kein praktischer Vorschlag, alle 1014 Kombinationen zu präsentieren. Ein Ansatz zur Reduktion der Komplexität, der in diesem Beispiel beschrieben ist, ist es, nur Gene aus nach Antigen selektierten Zellen zu klonieren. (Ein alternativer Ansatz, der sich mit der Komplexität auseinandersetzt, ist die duale kombinatorische Bibliothek, wie in Beispiel 22 beschrieben).
- Das Immunsystem nützt die Bindung von Antigen durch Oberflächenimmunglobuline, um die Zellenpopulation auszuwählen, die mit der Herstellung spezifischer Antikörper reagiert. Dieser Ansatz zur Auswahl Antigen-bindender Zellen wurde untersucht, um die Anzahl der kombinatorischen Möglichkeiten zu verringern und so die Chance, die ursprüngliche Kombination von schweren und leichten Ketten zu erhalten, zu erhöhen.
- Die Immunreaktion auf das Hapten 4-Hydroxy-3-nitrophenylessigsäure (NP) wurde ausführlich untersucht. Da die primäre Immunreaktion auf NP nur eine einzige leichte Kette nützt, konnten die Anmelder die Verwendung des kombinatorischen Verfahrens mit einer fixierten leichten Kette und einer Bibliothek von schweren Ketten untersuchen, um die Häufigkeiten der Gene, die für Antikörper, die sich an NIP (4-Hydroxy-3-iod-5-nitrophenylessigsäure) binden, zu untersuchen. Die Anmelder nutzten somit dieses System, um die Vorteile der Auswahl von Zellpopulationen vor der Herstellung kombinatorischer Bibliotheken zur Präsentation auf Phagen zu untersuchen.
- Verfahren
- 2.1 Haptenkonjugate
- Hühner-γ-Globulin (CGG, Sigma, Poole, UK) und Rinderserumalbumin (BSA, Böhringer-Mannheim, Deutschland) wurden mit NP-O-Succinimid oder NIP-Capronat-O-succinimid (Cambridge Research Biochemicals, Northwich, UK) basierend auf dem Verfahren, das von Brownstone (Brownstone, A. Mitchison, N.A. and Pitt-Rivers, R. Immunology 1966, 10: 465-492) beschrieben wurde, konjugiert. Die aktivierten Ver bindungen wurden in Dimethylformamid gelöst und zu Proteinen in 0,2 M NaHCO3 zugegeben. Diese wurden unter konstantem Rühren 16 Stunden lang vermischt und dann unter mehrfachem Wechseln gegen 0,2 M NaHCO3 dialysiert. Sie wurden schließlich gegen Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung dialysiert (PBS). Die hergestellten Konjugate waren NP12CGG, NIP10BSA. Das NIP10BSA-Derivat wurde darauffolgend unter Verwendung eines von Amersham gelieferten Biotinylierungssets (Amersham International, Amersham, UK) biotinyliert.
- 2.2 Tiere und Immunisierung
- Mäuse des Stammes C57BL/6 wurden durch intraperitoneale Injektion von 100 μg NP-CGG in vollständigem Freund-Adjuvans im Alter von 10 Wochen immunisiert.
- 2.3 Milzpräparierung
- Sieben Tage nach der Immunisierung wurden die Milzzellen wie von Galfre und Milstein (Galfre, G., and Milstein, C., Methods Enzymol. 1981. 73: 3-46) beschrieben, aufgearbeitet. Die roten Blutkörperchen wurden mit Ammoniumchlorid (Boyle, W., Transplantation 1968. 6:71) lysiert und nach der Durchführung der Zellenselektion wurden tote Zellen nach dem Verfahren von Böhmer und Shortman (Böhmer, H., and Shortman, K., J. Immunol. Methods 1973. 1: 273) entfernt. Die Zellen wurden in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS), 1 % Rinderserumalbumin, 0,01 % NaN3 suspendiert; die Zellen wurden während des gesamten Zellselektionsvorganges in diesem Medium auf 4°C gehalten.
- 2.4 Zell-Lösung
- Biotinyliertes NIP-BSA wurde an mit Streptavidin gekuppelte magnetische Perlen (Dynabeads M280 Streptavidin, Dynal, Oslo, Norwegen) gekuppelt, indem 108 Perlen mit 100 μg biotinyliertem Protein eine Stunde lang mit gelegentlichem Rühren inkubiert wurden und dann fünfmal gewaschen wurden um ungebundenes Antigen zu entfernen. Die gekuppelten Perlen wurden bis zur Verwendung in Medium bei 4°C aufbewahrt. Zur Selektion der Antigen-bindenden Zellen wurden die Zellen (2-4 × 107/ml) zuerst 30 Minuten mit nicht gekuppelten Perlen in einem Perlen:Zellen-Verhältnis von 1:1 inkubiert. Die Perlen wurden dann getrennt, indem das Röhrchen für 3-5 Minuten in eine Magnetvorrichtung (MPC-E Dynal) gegeben wurde. Die ungebundenen Zellen wurden entfernt und dann mit an NIP-BSA gekuppelten magnetischen Perlen in einem Perlen:Zellen-Verhältnis von 0,1:1 60 Minuten lang mit gelegentlichem Rühren inkubiert. Die Perlen und die rosettenförmigen Zellen wurden wie oben beschrieben getrennt. Die Perlen wurden dann in 1 ml Medium erneut suspendiert und die Trennung wiederholt; dieser Vorgang wurde 5-7mal wiederholt, bis bei der Zählung mit einem Hämozytometer keine Zellen mehr nachgewiesen werden konnten.
- Zur Ablösung der Zellen mit Oberflächenimmunglobulin wurden die Zellen mit 20 mg biotinyliertem mehrwertigem Anti-Maus-Immunglobulin aus Ziegen (Sigma, Poole, UK) inkubiert. Die Zellen wurden dann zweimal mit Medium gewaschen und mit einem Perlen:Zellen-Verhältnis von 30:1 zu an Streptavidin gekuppelte magnetische Perlen zugegeben. Nach 30 Minuten Inkubation wurden die Perlen und die rosettenförmigen Zellen durch 3maligen Gebrauch der Magnetvorrichtung getrennt, wobei jedesmal der Überstand genommen wurde.
- 2.5 DNA/cDNA-Herstellung, PCR-Amplifikation und Klonieren
- DNA wurde durch ein einfaches Proteinase-K-Spaltverfahren, das insbesondere für geringe Zellzahlen günstig ist (PCR-Protocols: A Guide to Methods and Applications. Hrsg. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J. und Whit T.J., Academic Press), isoliert. Die RNA-Isolierung und nachfolgende cDNA-Synthese wurden wie von Gherardi et al. (Gherardi, E., Pannell, R. und Milstein, C., J. Immunol. Methods, 1990. 126: 61-68) durchgeführt. Die PCR und das Klonieren der Bibliotheken der schweren Kette wurden unter Verwendung der von Ward et al. (Ward, E.S., Güssow, D., Griffiths, A.D., Jones, P.T. and Winter, G., Nature, 1989. 341: 544-546) beschriebenen Primer und Bedingungen durchgeführt. Die verwendeten VH- und Fv-Expressionsvektoren wurden den bereits von Ward et al. beschriebenen angepasst. Sie wurden beide in pUC119 (Vieira and Messing, siehe weiter unten) subkloniert und der Fv-Expressionsvektor wurde dahingegend modifiziert, daß er eine leichte Kette der Keimlinie λ-1 (von T.Simon zur Verfügung gestellt (ursprünglich von Siegfried Weiss, Basel, Immunologie-Institut, kloniert)) umfaßt. Der Vektor ist in
53 gezeigt. - 2.5 Expression und ELISA
- Zum Screenen wurden einzelne Kolonien in einzelne Näpfe von Mikrotiterplatten (Bibby) in 200 μl 2 × TY/100 μg/ml Ampicillin/0,1% Glucose gegeben und dann unter Rühren 5-6 Stunden lang bei 37°C inkubiert. Isopropyl-β-D-thiogalactopyranosid (IPTG, Sigma, Poole, UK) wurde dann auf eine Endkonzentration von 1 mM zugegeben und die Inkubation für weitere 16 Stunden bei 16°C fortgesetzt, bevor die Überstände geerntet wurden. Die Näpfe von Falcon-ELISA-Platten (Becton Dickinson, N.J., USA) wurden über Nacht bei Raumtemperatur mit NIP10-BSA (40 μg/ml in PBS) beschichtet und dann mit 2% Magermilchpulver in PBS 2 Stunden lang blockiert. Die bakteriellen Überstände wurden zugegeben, und 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert und dann wurden die Platten dreimal mit PBS blockiert. An Peroxidase konjugierte Anti-Maus-λ-Kette aus Ziegen (Southern Biotechnology, Birmingham, USA) wurde zugegeben und erneut 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, wonach sechs Waschungen mit PBS und die Entwicklung mit 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonsäure) (Sigma, Poole, UK) als Peroxidasesubstrat erfolgen. Die optische Dichte bei 405 nm unter Einsatz eines Thermomax-Mikroplattenlesegeräts (Molecular Devices, Menlo Park, USA) nach 30 Minuten abgelesen. Western-Blotten erfolgte unter Verwendung des C-terminalen myc tag wie in Beispiel 23.
- 3.1 Vergleich von RNA/DNA und mit Antigen selektierten Zellen
- Die Ergebnisse der Antigenselektion sind in Tabelle 9 gezeigt. Weniger als 1 % der Zellen binden sich an mit NIP-BSA beschichtete Perlen und die nicht spezifische Bindung ist sehr gering. Die Bestimmung des Anteils der exprimierten Gene aus je der VH-Bibliothek mittels Western-Blot zeigte, daß VH-Domänen in der vollen Länge in 95% aller Klone exprimiert wurden, wenn RNA als Ausgangsmaterial verwendet wurde, aber nur 60% (12/20) der Klone, wenn DNA (entweder selektierte Zellen oder von der ganzen Milz) als Ausgangsmaterial verwendet wurde. Dieser Unterschied resultiert wahrscheinlich aus der Tatsache, daß viele neugeordnete Pseudogene mit den Primern der Anmelder amplifiziert werden könnten und es schein so zu sein, daß es auf der Ebene der Transkription einen gewissen Selektionsgrad nach funktionellen Genen geben muß.
- Eine variable Anzahl an Klonen aus jedem Bibliothekstyp wurde zur Herstellung von Fv-Fragmenten, die sich an NIP banden, gescreent. Es wurden zu Beginn Screen-ELISAs durchgeführt und die positiven genommen, um jene mit einer optischen Dichte von zumindest dem Zweifachen des Hintergrunds zu umfassen. Die anfangs Positiven wurden erneut transformiert und die Bindung doppelt überprüft; es wurde bestätigt, daß die Bindung für NIP spezifisch war und für BSA nicht. Die Häufigkeit von bestätigten, NIP-bindenden positiven Klonen ist für jedes Ausgangsmaterial in Tabelle 10 gezeigt. Die Verwendung von DNA als Ausgangsmaterial zur PCR-Amplifikation ist etwa äquivalent zum Probennehmen von Zellen, da es nur ein funktionelles, neugeordnetes Gen der schweren Kette und zumeist ein neugeordnetes Pseudogen pro B-Zelle gibt. Das Amplifizieren aus der RNA eines Tieres beeinflußt das Repertoire in Richtung der reagierenden Zellen, und in einem kurz davor immunisierten Tier würde man erwarten, daß dies einige Nachteile für das Antigen ergibt. Aus den Daten in Tabelle 10 geht klar hervor, wie wirkungsvoll diese Selektion mit der Anzahl der Antigen-spezifischen Gene ist, welche um zumindest das 96fache angereichert werden, wenn RNA, die eine Woche nach der primären Immunisierung hergestellt wurde, als Ausgangsmaterial verwendet wird. Die Daten zeigen auch, daß die Selektion nach Antigen-bindenden Zellen ein alternatives wirkungsvolles Selektionsverfahren für das erforderliche genetische Ausgangsmaterial ist.
- 3.2 Vergleich der gesamten Milz/Milz mit abgelöstem Oberflächenimmunglobulin
- Um die zelluläre Basis der durch die Verwendung von RNA als Ausgangsmaterial erreichten Selektion zu untersuchen, wurde die Milz von Oberflächenimmunglobulinpositiven Zellen unter Verwendung von biotinyliertem anti-mehrwertigen Immunglobulin und von mit Streptavidin konjugierten magnetischen Perlen. die vorherige FACS-Analyse hatte gezeigt, daß dieses Verfahren mehr als 96% der Oberflächenimmunglobulin-positiven Zellen entfernt. RNA wurde sowohl aus Fraktionen, denen das Oberflächenimmunglobulin abgelöst wurde, als auch von abgelösten Fraktionen einer Milz isoliert und aus jeder VH-Bibliotheken hergestellt. Die ELISA-Ergebnisse (Tabelle 10) zeigen die Anzahl von Positiven durch diese Ablösung sicher nicht abnimmt, was vermuten läßt, daß der Hauptteil der selektiven Wirkung der Verwendung von RNA aus Oberflächenimmunglobulin-negativen G-Zellen (wahrscheinlich Plasmazellen) kommen kann.
- Schlußfolgerungen
- Die Anmelder haben die Wichtigkeit der Amplifikation von spezifischer RNA, die durch Immunisierung hergestellt wurde, gezeigt, um zu ermöglichen, daß Bindeaktivität mit beliebiger, annehmbarer Häufigkeit aus einer kombinatorischen Bibliothek erhalten wird. Die Anmelder zeigten auch eine alternative Strategie, die jene des Immunsystems selbst imitiert. Die Verwendung eines einfachen Verfahrens zur Selektion nach Antigen-bindenden Zellen ergab eine vergleichbare Anreicherung und hat den zusätzlichen Vorteil, daß ein größerer Bereich von Genen eingesetzt wird. Auf den ersten Blick scheint es aufgrund der gewaltigen Vielfalt der Immunglobulingene unwahrscheinlich, daß der statistische kombinatorische Ansatz die ursprüngliche Komination der schweren und leichten Kette ergibt. Die Anmelder zeigen hier jedoch, daß nach der Immunisierung, mit einem guten Antigen, 10% der VH-Gene aus der gesamten isolierten RNA der Milz aus den Antigen-spezifischen Zellen kommen, sodaß die wirksame Größe des Repertoires stark reduziert wird. Dies zusammen mit der Tatsache, daß Promiskuität der schweren und leichten Ketten auftritt (Beispiel 17 und 18), erklärt die Tatsache, daß das kombinatorische System Antigen-bindende Klone mit annehmbarer Frequenz ergibt. Die Daten lassen auch vermuten, daß der Hauptteil der Antigen-spezifischen RNA aus Oberflächenimmunglobulin-negativen Zellen, die sehr wahrscheinlich Plasmazellen sind, stammt.
- Die Daten zeigen auch, daß dieses einfache Verfahren zur Antigenselektion bei der Reduktion der Komplexität der kombinatorischen Bibliothek nützlich sein kann. In diesem Fall wurde eine zumindest 56fache Anreicherung von Antigen-spezifischen Genen erreicht, was im Normalfall, wenn schwere und leichte Ketten nicht bekannt sind, eine Verringerung der Komplexität der kombinatorischen Bibliothek um einen Faktor von mehr als 3000 ergeben würde. Ein weiterer Vorteil des Einsatzes von Antigen-selektierten Zellen (und dem Amplifizieren von DNA, um allfällige Nachteile aufgrund des Zustands der Zellen zu verringern) ist es, daß dies einen größeren Bereich von amplifizierten Antikörpergenen ergibt. Es kann sein, daß eine einfache Zellenselektion, wie z.B. jene, die die Anmelder hier beschrieben haben, in Kombination mit der Phagenselektion ideal wäre. Aus diesem Beispiel ist zu sehen, daß durch die Kombination von Zellen- und Phagenselektionsverfahren vernünftigerweise erwartet werden kann, daß man alle Kombinationen der schweren und leichten Ketten (etwa 4 × 1010) screent und somit in der Lage wäre, alle Bindekombinationen zu screenen, obwohl dies zur Zeit nicht aus der ganzen Milz (etwa 4 × 1014 Kombinationen, mit der Annahme von 50% B-Zellen) möglich wäre. Tabelle 1. Anreicherung von pAb (D1.3) aus der Vektorpopulation
- Fußnoten: a Etwa 1012 Phagen mit dem angegebenen Verhältnis von pAb (D1.3) FDTPs/Bs wurden auf 1 ml Lysozym-Sepharose-Säulen aufgebracht, gewaschen und eluiert. b TG1-Zellen wurden mit dem eluierten spezifisch bindenden Phagen infiziert und auf TY-tet-Platten ausplattiert. Nach der Inkubation bei 30-37°C über Nacht, wurden die Platten durch Hybridisierung an das 32P-markierte Oligonucleotid VH1FOR (Ward et al., s.o.), der spezifisch für pAb D1.3 ist, analysiert. c Einzelne Kolonien aus den Über-Nacht-Platten wurden gezüchtet, die Phagen gereinigt und auf Lysozymbindung untersucht. d Die Anreicherung wurde aus den Oligonucleotidsondierungsdaten berechnet. Tabelle 2. Anreicherung von pAb (D1.3) aus der gemischten pAb-Population
- Bemerkungen:
- 1. 1010 Phagen wurden auf die Lysozymsäule wie in Tabelle 1 aufgebracht.
- 2. Das Ausplattieren der Zellen und das Sondieren mit Oligonucleotid erfolgte wie in Tabelle 1, außer daß das Oligonucleotid D1.3CDR3A war.
- 1 1,9 × 1010 Phagen in 0,5 ml wurde 1 Stunde mit 5 μl zuvor mit Antigen (OX-BSA)-beschichteten Streptavidinmagnetperlen
- 2 Die Kolonien wurden mit dem Oligonucleotid NQ11CDR3 sondiert.
- * Anreicherungsgrad, verglichen mit Gesamt-DNA
Claims (7)
- Verfahren zur Produktion eines filamentösen Bakteriophagenpartikels, das an seiner Oberfläche ein Bindungsmolekül präsentiert, das für ein bestimmtes Targetepitop oder -antigen spezifisch ist, worin das Verfahren die folgenden Schritte umfasst: das Herstellen einer Population filamentöser Bakteriophagenpartikel, die an ihrer Oberfläche eine Population von Bindungsmolekülen mit einer Reihe von Bindungsspezifitäten präsentieren, worin die Bindungsmoleküle Fab-Antikörpermoleküle sind, die in der Lage sind, das Targetepitop oder -antigen zu binden, und worin jedes filamentöse Bakteriophagenpartikel einen Phagenvektor enthält, der Nucleinsäure umfasst, die für das aus der Nucleinsäure exprimierte und vom Partikel an seiner Oberfläche präsentierte Bindungsmolekül kodiert, worin die für die Bindungsmoleküle in der Population kodierende Nucleinsäure durch Kombinieren von nicht neugeordneten V-Segmenten mit D- und J-Segmenten in vitro bereitgestellt oder durch In-vitro-Mutagenese einer bestehenden Antikörper-Kodiersequenz abgeleitet wird und/oder worin die schwere Kette jedes Fab-Antikörpermoleküls, das von einem Partikel an seiner Oberfläche präsentiert wird, als Fusion mit einem Gen-III-Protein des filamentösen Bakteriophagen exprimiert wird; das Selektieren auf ein filamentöses Bakteriophagenpartikel, das ein Bindungsmolekül mit einer erwünschten Spezifität aufweist, durch Kontaktieren der Population filamentöser Bakteriophagenpartikel mit einem Targetepitop oder -antigen, so dass sich einzelne Bindungsmoleküle mit der erwünschten Spezifität, die auf filamentösen Bakteriophagenpartikeln präsentiert werden, an das Targetepitop oder -antigen binden.
- Verfahren nach Anspruch 1, zusätzlich umfassend das Trennen von gebundenen filamentösen Bakteriophagenpartikeln vom Targetepitop oder -antigen.
- Verfahren nach Anspruch 2, zusätzlich umfassend das Gewinnen getrennter filamentöser Bakteriophagenpartikel, die ein Bindungsmolekül mit der erwünschten Spezifität präsentieren.
- Verfahren nach Anspruch 3, ferner umfassend das Isolieren von Nucleinsäure, die für das Bindungsmolekül kodiert, aus abgetrennten filamentösen Bakteriophagenpartikeln, das Durchführen von Antigenbindungsschleifen-Hypermutation an der Nucleinsäure, um Nucleinsäure bereitzustellen, die für eine weitere Population von Bindungsmolekülen kodiert, die anschließend weiteren Selektions- und Mutagenese-Durchgängen unterzogen werden, die eine weitere Durchführung eines Verfahrens nach Anspruch 1 umfassen.
- Verfahren zur Produktion eines Bindungsmoleküls, das für ein bestimmtes Targetepitop oder -antigen spezifisch ist, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: das Durchführen eines Verfahrens nach Anspruch 3 oder Anspruch 4; das Isolieren von Nucleinsäure, die für das Bindungsmolekül kodiert, aus abgetrennten filamentösen Bakteriophagenpartikeln, die gemäß einem Verfahren nach Anspruch 3 oder Anspruch 4 gewonnen wurden; das Insertieren von Nucleinsäure, die für das Bindungsmolekül kodiert, oder eines Fragments oder Derivats davon mit Bindungsspezifität für das Targetepitop oder -antigen in ein Rekombinationssystem; und das Produzieren des Bindungsmoleküls oder Fragments oder Derivats davon mit Bindungsspezifität für das Targetepitop oder -antigen im Rekombinationssystem, getrennt von filamentösen Bakteriophagenpartikeln.
- Filamentöses Bakteriophagenpartikel, das an seiner Oberfläche ein Bindungsmolekül präsentiert, das ein Fab-Antikörpermolekül ist, das eine Bindungsdomäne umfasst, die in der Lage ist, ein Targetepitop oder -antigen zu binden, worin das Partikel einen Phagenvektor enthält, der Nucleinsäure umfasst, die für das aus der Nucleinsäure exprimierte und vom Partikel an seiner Oberfläche präsentierte Bindungsmolekül kodiert, worin die schwere Kette jedes Fab-Antikörpermoleküls, das von einem Partikel an seiner Oberfläche präsentiert wird, als Fusion mit einem Gen-III-Protein des filamentösen Bakteriophagen exprimiert wird.
- Population filamentöser Bakteriophagenpartikel nach Anspruch 6, die eine Population der Bindungsmoleküle mit einer Reihe von Bindungsspezifitäten präsentiert.
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WO (1) | WO1992001047A1 (de) |
Families Citing this family (2654)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5534617A (en) * | 1988-10-28 | 1996-07-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone variants having greater affinity for human growth hormone receptor at site 1 |
US5688666A (en) * | 1988-10-28 | 1997-11-18 | Genentech, Inc. | Growth hormone variants with altered binding properties |
KR0184860B1 (ko) * | 1988-11-11 | 1999-04-01 | 메디칼 리써어치 카운실 | 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법) |
US7413537B2 (en) | 1989-09-01 | 2008-08-19 | Dyax Corp. | Directed evolution of disulfide-bonded micro-proteins |
US5427908A (en) * | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
US5723286A (en) * | 1990-06-20 | 1998-03-03 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening systems |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US6916605B1 (en) | 1990-07-10 | 2005-07-12 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US7063943B1 (en) | 1990-07-10 | 2006-06-20 | Cambridge Antibody Technology | Methods for producing members of specific binding pairs |
GB9206318D0 (en) * | 1992-03-24 | 1992-05-06 | Cambridge Antibody Tech | Binding substances |
DK0585287T3 (da) * | 1990-07-10 | 2000-04-17 | Cambridge Antibody Tech | Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer |
US5770429A (en) * | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US7084260B1 (en) | 1996-10-10 | 2006-08-01 | Genpharm International, Inc. | High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens |
US7041871B1 (en) | 1995-10-10 | 2006-05-09 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US6893845B1 (en) | 1990-09-28 | 2005-05-17 | Applied Molecular Evolution, Inc. | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
WO1992006191A1 (en) * | 1990-09-28 | 1992-04-16 | Protein Engineering Corporation | Proteinaceous anti-dental plaque agents |
ES2113940T3 (es) * | 1990-12-03 | 1998-05-16 | Genentech Inc | Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas. |
DE69233697T2 (de) | 1991-03-01 | 2008-01-24 | Dyax Corp., Cambridge | Verfahren zur Entwicklung von bindenden Mikroproteinen |
DE69233750D1 (de) | 1991-04-10 | 2009-01-02 | Scripps Research Inst | Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden |
US6225447B1 (en) | 1991-05-15 | 2001-05-01 | Cambridge Antibody Technology Ltd. | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6492160B1 (en) | 1991-05-15 | 2002-12-10 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
DE69230142T2 (de) | 1991-05-15 | 2000-03-09 | Cambridge Antibody Tech | Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern |
WO1994004679A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
US6800738B1 (en) | 1991-06-14 | 2004-10-05 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
ES2206447T3 (es) | 1991-06-14 | 2004-05-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpo humanizado para heregulina. |
DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
DK0605522T3 (da) * | 1991-09-23 | 2000-01-17 | Medical Res Council | Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer |
ES2136092T3 (es) * | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
US5733731A (en) * | 1991-10-16 | 1998-03-31 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
US5270170A (en) * | 1991-10-16 | 1993-12-14 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
DK1024191T3 (da) * | 1991-12-02 | 2008-12-08 | Medical Res Council | Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker |
EP1696031B1 (de) | 1991-12-02 | 2010-04-07 | MedImmune Limited | Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken |
US5872215A (en) * | 1991-12-02 | 1999-02-16 | Medical Research Council | Specific binding members, materials and methods |
DE69233408T2 (de) * | 1991-12-02 | 2005-09-22 | Cambridge Antibody Technology Ltd., Melbourn | Herstellung von Antikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken. |
CA2131151A1 (en) * | 1992-03-24 | 1994-09-30 | Kevin S. Johnson | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6765087B1 (en) | 1992-08-21 | 2004-07-20 | Vrije Universiteit Brussel | Immunoglobulins devoid of light chains |
ES2162823T5 (es) | 1992-08-21 | 2010-08-09 | Vrije Universiteit Brussel | Inmunoglobulinas desprovistas de cadenas ligeras. |
DE69331278T2 (de) * | 1992-09-04 | 2002-07-18 | Scripps Research Inst | Phagemiden die einen oberflächenrezeptor und ein heterologes oberflächenprotein co-exprimieren |
US5844094A (en) * | 1992-09-25 | 1998-12-01 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization | Target binding polypeptide |
US6936464B1 (en) | 1992-10-02 | 2005-08-30 | Cancer Research Technology Limited | Immune responses to fusion proteins |
GB9220808D0 (en) * | 1992-10-02 | 1992-11-18 | Medical Res Council | Antibody genes |
GB9225453D0 (en) | 1992-12-04 | 1993-01-27 | Medical Res Council | Binding proteins |
JP3720353B2 (ja) * | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
AU6235294A (en) | 1993-02-02 | 1994-08-29 | Scripps Research Institute, The | Methods for producing polypeptide binding sites |
DE614989T1 (de) * | 1993-02-17 | 1995-09-28 | Morphosys Proteinoptimierung | Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine. |
EP0614989A1 (de) * | 1993-02-17 | 1994-09-14 | MorphoSys AG | Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine |
US6027884A (en) * | 1993-06-17 | 2000-02-22 | The Research Foundation Of The State University Of New York | Thermodynamics, design, and use of nucleic acid sequences |
AU680685B2 (en) | 1993-09-22 | 1997-08-07 | Medical Research Council | Retargeting antibodies |
DK145493D0 (da) * | 1993-12-23 | 1993-12-23 | Dako As | Antistof |
US20060078561A1 (en) * | 1994-01-31 | 2006-04-13 | The Trustees Of Boston University | Polyclonal antibody libraries |
DK0744958T3 (da) | 1994-01-31 | 2003-10-20 | Univ Boston | Polyklonale antistofbiblioteker |
US5516637A (en) * | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
US6576236B1 (en) | 1994-07-01 | 2003-06-10 | Dana Farber Cancer Institute | Methods for stimulating T cell responses by manipulating a common cytokine receptor γ chain |
US6010861A (en) * | 1994-08-03 | 2000-01-04 | Dgi Biotechnologies, Llc | Target specific screens and their use for discovering small organic molecular pharmacophores |
US7597886B2 (en) * | 1994-11-07 | 2009-10-06 | Human Genome Sciences, Inc. | Tumor necrosis factor-gamma |
US7820798B2 (en) * | 1994-11-07 | 2010-10-26 | Human Genome Sciences, Inc. | Tumor necrosis factor-gamma |
AUPO591797A0 (en) | 1997-03-27 | 1997-04-24 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | High avidity polyvalent and polyspecific reagents |
US7060808B1 (en) * | 1995-06-07 | 2006-06-13 | Imclone Systems Incorporated | Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody |
EP0859841B1 (de) * | 1995-08-18 | 2002-06-19 | MorphoSys AG | Protein-/(poly)peptidbibliotheken |
US7264963B1 (en) | 1995-08-18 | 2007-09-04 | Morphosys Ag | Protein(poly)peptide libraries |
GB9518731D0 (en) | 1995-09-13 | 1995-11-15 | Innes John Centre | Flowering genes |
ATE455171T1 (de) * | 1995-09-21 | 2010-01-15 | Genentech Inc | Varianten des menschlichen wachstumshormons |
US7368111B2 (en) | 1995-10-06 | 2008-05-06 | Cambridge Antibody Technology Limited | Human antibodies specific for TGFβ2 |
US6090382A (en) | 1996-02-09 | 2000-07-18 | Basf Aktiengesellschaft | Human antibodies that bind human TNFα |
US6537776B1 (en) | 1999-06-14 | 2003-03-25 | Diversa Corporation | Synthetic ligation reassembly in directed evolution |
US7888466B2 (en) | 1996-01-11 | 2011-02-15 | Human Genome Sciences, Inc. | Human G-protein chemokine receptor HSATU68 |
SE506771C2 (sv) * | 1996-02-06 | 1998-02-09 | Gotpat 105 Ab | Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna |
US6046310A (en) * | 1996-03-13 | 2000-04-04 | Protein Design Labs., Inc. | FAS ligand fusion proteins and their uses |
GB9712818D0 (en) | 1996-07-08 | 1997-08-20 | Cambridge Antibody Tech | Labelling and selection of specific binding molecules |
KR20000048820A (ko) | 1996-10-01 | 2000-07-25 | 게론 코포레이션 | 텔로머라제 역전사 효소 |
US7883872B2 (en) * | 1996-10-10 | 2011-02-08 | Dyadic International (Usa), Inc. | Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose |
US5811381A (en) * | 1996-10-10 | 1998-09-22 | Mark A. Emalfarb | Cellulase compositions and methods of use |
GB9701425D0 (en) | 1997-01-24 | 1997-03-12 | Bioinvent Int Ab | A method for in vitro molecular evolution of protein function |
US6497874B1 (en) * | 1997-02-05 | 2002-12-24 | Maardh Sven | Recombinant phages |
DE69842225D1 (de) | 1997-04-16 | 2011-05-26 | Millennium Pharm Inc | Zusammensetzung, umfassend einen Antikörper, der selektiv an ein cysteinreiches sekretiertes Protein (CRSP) bindet |
US6342369B1 (en) | 1997-05-15 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Apo-2-receptor |
US20040241759A1 (en) * | 1997-06-16 | 2004-12-02 | Eileen Tozer | High throughput screening of libraries |
CA2297070A1 (en) * | 1997-08-01 | 1999-02-11 | Morphosys Ag | Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex |
GB9717192D0 (en) | 1997-08-13 | 1997-10-22 | Innes John Centre Innov Ltd | Genetic control of plant growth and development |
US6342220B1 (en) | 1997-08-25 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Agonist antibodies |
US6562599B1 (en) | 1997-09-02 | 2003-05-13 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Single-stranded antibody against hepatitis B virus core protein, gene thereof, and therapeutic agent for hepatitis B containing these |
GB9718455D0 (en) | 1997-09-02 | 1997-11-05 | Mcgregor Duncan P | Chimeric binding peptide library screening method |
AU9395398A (en) * | 1997-09-19 | 1999-04-12 | Chiron Corporation | Subtractive protein screening for gene identification |
GB9722131D0 (en) | 1997-10-20 | 1997-12-17 | Medical Res Council | Method |
WO1999020752A1 (en) | 1997-10-21 | 1999-04-29 | The University Court Of The University Of Glasgow | JMY, A CO-ACTIVATOR FOR p300/CBP, NUCLEIC ACID ENCODING JMY AND USES THEREOF |
US6355244B1 (en) | 1997-11-17 | 2002-03-12 | University Of Kentucky Research Foundation | Methods and compositions for the treatment of psoriasis |
US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US7179892B2 (en) | 2000-12-06 | 2007-02-20 | Neuralab Limited | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
JP2002502977A (ja) | 1998-02-04 | 2002-01-29 | インビトロジェン コーポレイション | マイクロアレイとその使用 |
EP1982990A1 (de) | 1998-03-19 | 2008-10-22 | Human Genome Sciences, Inc. | Zytokinrezeptor wie eine gemeinsame Gammakette |
US20030224001A1 (en) * | 1998-03-19 | 2003-12-04 | Goldstein Neil I. | Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors |
EP0947582A1 (de) * | 1998-03-31 | 1999-10-06 | Innogenetics N.V. | Eine Polypeptidstruktur zur Verwendung als Gerüst |
US7056517B2 (en) | 1998-04-13 | 2006-06-06 | The Forsyth Institute | Glucosyltransferase immunogens |
US7163682B2 (en) | 1998-04-13 | 2007-01-16 | The Forsyth Institute | Glucan binding protein and glucosyltransferase immunogens |
GB2379933B (en) * | 1998-05-13 | 2003-07-09 | Domantis Ltd | Selection system for phagemids using proteolytically sensitive helper phage |
PT1078051E (pt) * | 1998-05-13 | 2008-03-17 | Domantis Ltd | Sistema de apresentação em fagos para a selecção de proteínas correctamente organizadas |
ZA200007412B (en) * | 1998-05-15 | 2002-03-12 | Imclone Systems Inc | Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases. |
GB9810756D0 (en) | 1998-05-19 | 1998-07-15 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Mimotopes of hypervariable region 1 of the e2 glycoprotein of hcv and uses thereof |
PT1086138E (pt) | 1998-06-12 | 2010-01-04 | Genentech Inc | Anticorpos monoclonais, anticorpos de reacção cruzada e método para produzir os mesmos |
US7153655B2 (en) * | 1998-06-16 | 2006-12-26 | Alligator Bioscience Ab | Method for in vitro molecular evolution of protein function involving the use of exonuclease enzyme and two populations of parent polynucleotide sequence |
US6846655B1 (en) | 1998-06-29 | 2005-01-25 | Phylos, Inc. | Methods for generating highly diverse libraries |
US6323325B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-11-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Agents that bind to and inhibit human cytochrome P450 2A6 |
US6335428B1 (en) * | 1998-07-23 | 2002-01-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Agents that bind to and inhibit human cytochrome P450 1A2 |
AU5122499A (en) | 1998-07-27 | 2000-02-21 | Genentech Inc. | Improved transformation efficiency in phage display through modification of a coat protein |
DK1117808T3 (da) * | 1998-10-06 | 2005-04-25 | Mark Aaron Emalfarb | Transformaationssystem inden jfjor området filamentöse svampeværter: I chrysosporium |
US6420110B1 (en) | 1998-10-19 | 2002-07-16 | Gpc Biotech, Inc. | Methods and reagents for isolating biologically active peptides |
US6667176B1 (en) | 2000-01-11 | 2003-12-23 | Geron Corporation | cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells |
US7112661B1 (en) | 1998-10-30 | 2006-09-26 | The Research Foundation Of State University Of New York | Variable heavy chain and variable light chain regions of antibodies to human platelet glycoprotein Ib alpha |
US6395511B1 (en) | 1998-11-27 | 2002-05-28 | Darwin Discovery, Ltd. | Nucleic acids encoding a novel family of TGF-β binding proteins from humans |
CA2363779A1 (en) | 1999-02-26 | 2000-08-31 | Human Genome Sciences, Inc. | Human endokine alpha and methods of use |
EP2301947A3 (de) | 1999-02-26 | 2011-11-23 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Sekretierte Proteine und Verwendungen dafür |
US6914128B1 (en) | 1999-03-25 | 2005-07-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing |
US7883704B2 (en) | 1999-03-25 | 2011-02-08 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Methods for inhibiting the activity of the P40 subunit of human IL-12 |
KR101222450B1 (ko) | 1999-03-25 | 2013-01-16 | 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 | 사람 il-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법 |
DE19915057A1 (de) | 1999-04-01 | 2000-10-19 | Forschungszentrum Borstel | Monoklonale Antikörper gegen das humane Mcm3 Protein, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
GB9908195D0 (en) | 1999-04-09 | 1999-06-02 | Microbiological Res Authority | Treatment of intracellular infection |
EP1169473B1 (de) | 1999-04-14 | 2006-11-22 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Hochsensitiver nachweis von biomolekülen mittels "phage display" |
US6492497B1 (en) | 1999-04-30 | 2002-12-10 | Cambridge Antibody Technology Limited | Specific binding members for TGFbeta1 |
BR0010524A (pt) * | 1999-05-14 | 2002-05-28 | Imclone Systems Inc | Tratamento de tumores humanos refratários com antagonistas de receptor de fator de crescimento epidérmico |
AU777005B2 (en) | 1999-05-15 | 2004-09-30 | University Of California, San Diego | Protein A based binding domains with desirable activities |
US7163686B1 (en) | 1999-05-15 | 2007-01-16 | The Regents Of The University Of California | Protein A based binding domains with desirable activities |
US20020102613A1 (en) * | 1999-05-18 | 2002-08-01 | Hoogenboom Hendricus Renerus Jacobus Mattheus | Novel Fab fragment libraries and methods for their use |
DK2067788T3 (da) * | 1999-05-18 | 2015-10-19 | Dyax Corp | Fab-fragmentbiblioteker og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
US6262265B1 (en) | 1999-06-18 | 2001-07-17 | Microgenics Corporation | Non-hydrolyzable analogs of heroin metabolites suitable for use in immunoassay |
US7291714B1 (en) | 1999-06-30 | 2007-11-06 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
US20040001826A1 (en) | 1999-06-30 | 2004-01-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
EP1990409A3 (de) | 1999-07-20 | 2011-05-18 | MorphoSys AG | Bakteriophage |
US6808710B1 (en) | 1999-08-23 | 2004-10-26 | Genetics Institute, Inc. | Downmodulating an immune response with multivalent antibodies to PD-1 |
TWI248365B (en) | 1999-08-23 | 2006-02-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | HM1.24 antigen expression potentiators |
US7297478B1 (en) | 2000-09-22 | 2007-11-20 | Large Scale Biology Corporation | Creation of variable length and sequence linker regions for dual-domain or multi-domain molecules |
AU783776B2 (en) | 1999-10-12 | 2005-12-01 | Chemocentryx, Inc. | Chemokine receptor |
US20060073509A1 (en) * | 1999-11-18 | 2006-04-06 | Michael Kilpatrick | Method for detecting and quantitating multiple subcellular components |
DE50014247D1 (de) * | 1999-11-26 | 2007-05-24 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur mutagenese von nukleotidsequenzen aus pflanzen, algen, oder pilzen |
PT1234031T (pt) | 1999-11-30 | 2017-06-26 | Mayo Foundation | B7-h1, uma nova molécula imunoregulatória |
EP1254169B1 (de) | 1999-12-30 | 2007-05-09 | President And Fellows of Harvard College | Verfahren zur modulierung der aktivität von th2-zellen durch modulierung der aktivität von xbp-1 |
AU2002219944B2 (en) | 2000-11-28 | 2008-02-21 | Medimmune, Llc | Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment |
TWI373343B (en) | 2000-02-10 | 2012-10-01 | Abbott Gmbh & Co Kg | Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using |
AU2001234125A1 (en) * | 2000-02-22 | 2001-09-03 | Medical And Biological Laboratories Co., Ltd. | Antibody library |
EP1259601A2 (de) * | 2000-02-22 | 2002-11-27 | Ahuva Nissim | Chimäre und tcr phagen-display-bibliotheken, chimäre und tcr reagentien und anwendungsmethoden |
GB2360282A (en) * | 2000-03-17 | 2001-09-19 | Bioinvent Int Ab | Making and using micro-arrays of biological materials |
EP1276849A4 (de) | 2000-04-12 | 2004-06-09 | Human Genome Sciences Inc | Albumin fusionsproteine |
AU2001255436A1 (en) * | 2000-04-17 | 2001-10-30 | Transtech Pharma | Protein expression system arrays and use in biological screening |
US8288322B2 (en) * | 2000-04-17 | 2012-10-16 | Dyax Corp. | Methods of constructing libraries comprising displayed and/or expressed members of a diverse family of peptides, polypeptides or proteins and the novel libraries |
JP5149476B2 (ja) * | 2000-04-17 | 2013-02-20 | ダイアックス コーポレイション | ペプチドの多種多様なファミリーのメンバーとしての、遺伝的パッケージの提示ライブラリーを構築する方法 |
US7495070B2 (en) * | 2000-04-24 | 2009-02-24 | Yale University | Protein binding miniature proteins |
JP2004528802A (ja) * | 2000-04-24 | 2004-09-24 | イエール・ユニバーシテイ | Dnaおよびタンパク質を結合する小型タンパク質 |
US6458589B1 (en) | 2000-04-27 | 2002-10-01 | Geron Corporation | Hepatocyte lineage cells derived from pluripotent stem cells |
US7030219B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-04-18 | Johns Hopkins University | B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules |
ES2316446T3 (es) | 2000-04-29 | 2009-04-16 | University Of Iowa Research Foundation | Diagnostico y terapeutica para trastornos relacionados con la degeneracion macular. |
EP1714661A3 (de) | 2000-05-19 | 2012-03-14 | The Center for Blood Research, INC. | Verfahren zur Diagnose und Behandlung von hämostatischen Störungen durch Modulation der P-Selectin Aktivität |
US20030031675A1 (en) | 2000-06-06 | 2003-02-13 | Mikesell Glen E. | B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation |
DE60141463D1 (de) | 2000-06-08 | 2010-04-15 | Immune Disease Inst Inc | Methoden und verbindungen zur hemmung immunoglobulin-vermittelter reperfusions-verletzungen |
WO2001096528A2 (en) | 2000-06-15 | 2001-12-20 | Human Genome Sciences, Inc. | Human tumor necrosis factor delta and epsilon |
PT2275449T (pt) | 2000-06-16 | 2016-12-27 | Human Genome Sciences Inc | Anticorpos que se ligam imunoespecificamente a blys |
US20020115068A1 (en) * | 2000-06-23 | 2002-08-22 | Ian Tomlinson | Matrix screening method |
US20020055110A1 (en) * | 2000-06-23 | 2002-05-09 | Ian Tomlinson | Matrix screening method |
WO2002000730A2 (en) | 2000-06-28 | 2002-01-03 | Genetics Institute, Llc. | Pd-l2 molecules: novel pd-1 ligands and uses therefor |
DE60137421D1 (de) | 2000-06-29 | 2009-03-05 | Abbott Lab | Antikörper mit zwei spezifizitäten und verfahren zur deren herstellung und verwendung |
AU2001277648A1 (en) | 2000-07-14 | 2002-04-15 | Cropdesign N.V. | Plant cyclin-dependent kinase inhibitors |
US20020019004A1 (en) * | 2000-08-03 | 2002-02-14 | Albert Orfao | Method for isolating molecules, cells and other particles which are specifically bound to a large particle |
JP2004527456A (ja) * | 2000-08-09 | 2004-09-09 | イムクローン システムズ インコーポレイティド | Egf受容体拮抗剤による過増殖性の疾患の治療 |
JP5113314B2 (ja) | 2000-09-01 | 2013-01-09 | ザ センター フォー ブラッド リサーチ インク | 所望のコンホメーションで安定させた改変ポリペプチド及び該ポリペプチドの作製方法 |
GB0022748D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Allied Therapeutics Ltd | Reducing the content of cells in a biological sample |
GB0022978D0 (en) | 2000-09-19 | 2000-11-01 | Oxford Glycosciences Uk Ltd | Detection of peptides |
US6673580B2 (en) * | 2000-10-27 | 2004-01-06 | Genentech, Inc. | Identification and modification of immunodominant epitopes in polypeptides |
AU2002241556B2 (en) | 2000-11-01 | 2007-07-19 | Elusys Therapeutics, Inc. | Method of producing bispecific molecules by protein trans-splicing |
EP1355939A2 (de) | 2000-11-03 | 2003-10-29 | Pestka Biomedical Laboratories, Inc. | Interferone, deren verwendungen und zusammensetzungen |
BR0115728A (pt) | 2000-11-28 | 2003-09-23 | Wyeth Corp | Análise da expressão de ácidos nucléicos kiaa e polipeptìdeos úteis no diagnóstico e tratamento de cáncer de próstata |
NZ526708A (en) | 2000-11-28 | 2005-07-29 | Wyeth Corp | Expression analysis of FKBP nucleic acids and polypeptides useful in the diagnosis and treatment of prostate cancer |
US7396917B2 (en) * | 2000-12-05 | 2008-07-08 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Rationally designed antibodies |
ATE544785T1 (de) | 2000-12-05 | 2012-02-15 | Alexion Pharma Inc | Rationell entworfene antikörper |
US20040253242A1 (en) * | 2000-12-05 | 2004-12-16 | Bowdish Katherine S. | Rationally designed antibodies |
PE20020574A1 (es) | 2000-12-06 | 2002-07-02 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta |
US20020165149A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-11-07 | Kranz David M. | Mutated class II major histocompatibility proteins |
US6958213B2 (en) | 2000-12-12 | 2005-10-25 | Alligator Bioscience Ab | Method for in vitro molecular evolution of protein function |
EP2341060B1 (de) | 2000-12-12 | 2019-02-20 | MedImmune, LLC | Moleküle mit längeren Halbwertszeiten, Zusammensetzungen und deren Verwendung |
JP4860098B2 (ja) | 2000-12-18 | 2012-01-25 | ダイアックス、コープ | 遺伝的パッケージの焦点を合わせたライブラリー |
ES2390425T3 (es) | 2000-12-22 | 2012-11-12 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Uso de moléculas de orientación repulsivas (RGM) y sus moduladores |
US20020086292A1 (en) | 2000-12-22 | 2002-07-04 | Shigeaki Harayama | Synthesis of hybrid polynucleotide molecules using single-stranded polynucleotide molecules |
US7132510B2 (en) | 2000-12-29 | 2006-11-07 | Bio-Technology General (Israel) Ltd. | Specific human antibodies for selective cancer therapy |
AR032028A1 (es) | 2001-01-05 | 2003-10-22 | Pfizer | Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento similar a insulina |
CA2444661A1 (en) | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Idec Pharmaceutical Corporation | Use of cd23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders |
AU2002251913A1 (en) * | 2001-02-02 | 2002-08-19 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid antibodies and uses thereof |
JP3986439B2 (ja) | 2001-02-07 | 2007-10-03 | 中外製薬株式会社 | 造血器腫瘍の治療剤 |
ATE337395T1 (de) * | 2001-02-07 | 2006-09-15 | Wilex Ag | Hybridomzelllinie g250 und deren verwendung zur herstellung monoklonaler antikörper |
JP2005503116A (ja) | 2001-02-09 | 2005-02-03 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ, インコーポレイテッド | ヒトgタンパク質ケモカインレセプター(ccr5)hdgnr10 |
EP2123749A3 (de) | 2001-02-23 | 2010-02-24 | DSM IP Assets B.V. | Neuartige Gene zur Kodierung von neuartigen proteolytischen Enzymen |
ES2360205T3 (es) | 2001-03-02 | 2011-06-01 | Agennix Ag | Sistema de ensayo de tres híbridos. |
AU2002250236A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-19 | Medimmune, Inc. | Cd2 antagonists for treatment of autoimmune or inflammatory disease |
US20080008704A1 (en) * | 2001-03-16 | 2008-01-10 | Mark Rubin | Methods of treating colorectal cancer with anti-epidermal growth factor antibodies |
US20090081199A1 (en) * | 2001-03-20 | 2009-03-26 | Bioxell S.P.A. | Novel receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof |
US8981061B2 (en) | 2001-03-20 | 2015-03-17 | Novo Nordisk A/S | Receptor TREM (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof |
US8231878B2 (en) | 2001-03-20 | 2012-07-31 | Cosmo Research & Development S.P.A. | Receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof |
CA2342376C (en) * | 2001-03-20 | 2013-11-12 | Marco Colonna | A receptor trem (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof |
WO2002076196A1 (en) | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof |
WO2002079499A1 (en) | 2001-04-02 | 2002-10-10 | Wyeth | Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor |
US20030003097A1 (en) * | 2001-04-02 | 2003-01-02 | Idec Pharmaceutical Corporation | Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII |
UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
EP1249499A1 (de) * | 2001-04-10 | 2002-10-16 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung und Selektion von Molekül-Molekül-Wechselwirkungen |
DE60236646D1 (de) | 2001-04-13 | 2010-07-22 | Human Genome Sciences Inc | Anti-VEGF-2 Antikörper |
MXPA03009415A (es) | 2001-04-16 | 2004-01-29 | Wyeth Corp | ESTRUCTURAS NOVEDOSAS DE LECTURA ABIERTA DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE QUE CODIFICAN ANTIGENOS DE POLIPePTIDOS Y USOS DE LAS MISMAS. |
US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
ES2552281T3 (es) | 2001-05-11 | 2015-11-26 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Proteínas de unión específica y usos de las mismas |
US20110313230A1 (en) | 2001-05-11 | 2011-12-22 | Terrance Grant Johns | Specific binding proteins and uses thereof |
EP1990057A1 (de) | 2001-05-22 | 2008-11-12 | Merck & Co., Inc. | Beta-Sekretase-Substrate und ihre Verwendung |
US20020197253A1 (en) * | 2001-05-22 | 2002-12-26 | Cheek Dennis J. | Compositions and methods for promoting or inhibiting NDPK |
JP2004535400A (ja) * | 2001-05-22 | 2004-11-25 | デューク ユニバーシティ | 転移阻害のための組成物及び方法 |
WO2002097033A2 (en) | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to trail receptors |
US6441163B1 (en) | 2001-05-31 | 2002-08-27 | Immunogen, Inc. | Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents |
US7129261B2 (en) * | 2001-05-31 | 2006-10-31 | Medarex, Inc. | Cytotoxic agents |
US20060239533A1 (en) * | 2001-06-04 | 2006-10-26 | Triantafyllos Tafas | Method for detecting infectious agents using computer controlled automated image analysis |
CA2868614A1 (en) | 2001-06-08 | 2002-12-08 | Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. | Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies |
EP2270186A3 (de) | 2001-06-22 | 2012-04-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Defensinpolynucleotide und Verfahren zu ihrer Verwendung |
GB0115841D0 (en) | 2001-06-28 | 2001-08-22 | Medical Res Council | Ligand |
US6867189B2 (en) | 2001-07-26 | 2005-03-15 | Genset S.A. | Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders |
US6833441B2 (en) | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
AU2002355955A1 (en) * | 2001-08-13 | 2003-03-03 | University Of Southern California | Interleukin-2 mutants with reduced toxicity |
US20040142325A1 (en) | 2001-09-14 | 2004-07-22 | Liat Mintz | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
US20050130124A1 (en) * | 2001-10-05 | 2005-06-16 | Wiersma Erik J. | Phagemid display system |
AU2002340167A1 (en) | 2001-10-11 | 2003-06-17 | Protein Design Labs Inc. | Anti-hla-dr antibodies and the methods of using thereof |
WO2003035839A2 (en) * | 2001-10-24 | 2003-05-01 | Dgi Biotechnologies, Inc. | Target specific screening andits use for identifying target binders |
EP1440083B1 (de) | 2001-10-25 | 2013-01-02 | Medical Research Council | Moleküle |
US7175983B2 (en) | 2001-11-02 | 2007-02-13 | Abmaxis, Inc. | Adapter-directed display systems |
AR039067A1 (es) | 2001-11-09 | 2005-02-09 | Pfizer Prod Inc | Anticuerpos para cd40 |
ATE550352T1 (de) | 2001-12-03 | 2012-04-15 | Alexion Pharma Inc | Verfahren zur herstellung von hybridantikörper |
ES2337989T3 (es) | 2001-12-18 | 2010-05-03 | Endocube Sas | Nuevas proteinas asociadas a la muerte de la familia thap y rutas par4 relacionadas implicadas en el control de la apoptosis. |
US7858297B2 (en) | 2001-12-18 | 2010-12-28 | Centre National De La Recherche Scientifique Cnrs | Chemokine-binding protein and methods of use |
EP1463807A4 (de) | 2001-12-19 | 2006-04-12 | Bristol Myers Squibb Co | Formiatdehydrogenase aus pichia pastoris und verwendungen dafür |
GB0130543D0 (en) | 2001-12-20 | 2002-02-06 | Univ Cambridge Tech | Human antibodies and their use |
US20050037358A1 (en) * | 2001-12-21 | 2005-02-17 | Serge Muyldermans | Method for cloning of variable domain sequences |
US20080194481A1 (en) | 2001-12-21 | 2008-08-14 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin Fusion Proteins |
EP2277889B1 (de) | 2001-12-21 | 2014-07-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Fusionsproteine von Albumin und Interferon beta |
US20050069549A1 (en) | 2002-01-14 | 2005-03-31 | William Herman | Targeted ligands |
AU2003209340A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-09-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Predictor sets for tyrosine kinase pathways |
US7094579B2 (en) | 2002-02-13 | 2006-08-22 | Xoma Technology Ltd. | Eukaryotic signal sequences for prokaryotic expression |
JP4364645B2 (ja) | 2002-02-14 | 2009-11-18 | 中外製薬株式会社 | 抗体含有溶液製剤 |
PT2336184E (pt) | 2002-02-25 | 2015-03-09 | Biogen Idec Inc | Administração de agentes para o tratamento da inflamação |
DE60326214D1 (de) * | 2002-03-01 | 2009-04-02 | Siemens Healthcare Diagnostics | Assays zur überwachung von krebspatienten auf grundlage der spiegel von analytenkomponenten des plasminogen-aktivator-systems in proben von körperflüssigkeiten |
DE60329020D1 (de) | 2002-03-01 | 2009-10-08 | Siemens Healthcare Diagnostics | Assays zur überwachung von krebspatienten auf grundlage der spiegel des analyten für die extrazelluläre domäne (ecd) des epidermalen wachstumsfaktor-rezeptors (egfr), allein oder in kombination mit anderen analyten, in proben von körperflüssigkeiten |
ATE475431T1 (de) | 2002-03-04 | 2010-08-15 | Imclone Llc | Kdr-spezifische humane antikörper und deren anwendung |
WO2003075845A2 (en) | 2002-03-07 | 2003-09-18 | The Forsyth Institute | Immunogenicity of glucan binding protein |
ES2327830T3 (es) | 2002-03-29 | 2009-11-04 | Schering Corporation | Anticuerpos monoclonales humanos anti-interleuquina-5 y metodos y composiciones que los contienen. |
WO2003085093A2 (en) * | 2002-04-01 | 2003-10-16 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that specifically bind to gmad |
GB0207533D0 (en) | 2002-04-02 | 2002-05-08 | Oxford Glycosciences Uk Ltd | Protein |
US7745192B2 (en) | 2002-04-03 | 2010-06-29 | Venomics Pty Limited | Prothrombin activating protein |
JP2005535572A (ja) | 2002-04-12 | 2005-11-24 | メディミューン,インコーポレーテッド | 組換え抗インターロイキン−9抗体 |
ATE512989T1 (de) | 2002-04-15 | 2011-07-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Verfahren zur herstellung von scdb-bibliotheken |
ES2342152T3 (es) | 2002-04-17 | 2010-07-02 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts | Metodo para identificacion de un compuesto para modulacion de la cascada de señales wnt. |
US20030206898A1 (en) | 2002-04-26 | 2003-11-06 | Steven Fischkoff | Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug |
JP2005529152A (ja) | 2002-05-17 | 2005-09-29 | プロテイン デザイン ラブス インコーポレイティド | 抗インターフェロンγ抗体を用いたクローン病又は乾癬の治療 |
CA2485506C (en) * | 2002-05-17 | 2012-02-28 | Alligator Bioscience Ab | A method for in vitro molecular evolution of protein function |
ES2347550T3 (es) | 2002-05-21 | 2010-11-02 | Dsm Ip Assets B.V. | Nuevas fosfolipasas y usos de las mismas. |
AU2003240822A1 (en) | 2002-05-30 | 2003-12-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that specifically bind to neurokinin b |
EP1513879B1 (de) * | 2002-06-03 | 2018-08-22 | Genentech, Inc. | Bibliotheken synthetischer antikörperphagen |
EP2305710A3 (de) | 2002-06-03 | 2013-05-29 | Genentech, Inc. | Synthetische Antikörperphagenbibliotheken |
US7304128B2 (en) * | 2002-06-04 | 2007-12-04 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Carbon nanotube binding peptides |
NZ537579A (en) | 2002-06-10 | 2006-10-27 | Vaccinex Inc | C35 peptide epitopes and their analogs |
US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
US20060002935A1 (en) | 2002-06-28 | 2006-01-05 | Domantis Limited | Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor |
AU2002368055B2 (en) | 2002-06-28 | 2008-09-18 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Method of treating autoimmune diseases with interferon-beta and IL-2R antagonist |
US9028822B2 (en) | 2002-06-28 | 2015-05-12 | Domantis Limited | Antagonists against TNFR1 and methods of use therefor |
US9321832B2 (en) | 2002-06-28 | 2016-04-26 | Domantis Limited | Ligand |
US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
BR0312692A (pt) | 2002-07-15 | 2007-06-26 | Univ Texas | anticorpos selecionados e peptìdeos de duramicina que se ligam a fosfolipìdios aniÈnicos e aminofosfolipìdios e seus usos no tratamento de infecções virais e cáncer |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
ES2368733T3 (es) | 2002-07-18 | 2011-11-21 | Merus B.V. | Producción recombinante de mezclas de anticuerpos. |
AU2003267999B2 (en) | 2002-07-19 | 2010-03-11 | Abbvie Biotechnology Ltd | Treatment of TNFalpha related disorders |
US7250551B2 (en) | 2002-07-24 | 2007-07-31 | President And Fellows Of Harvard College | Transgenic mice expressing inducible human p25 |
US7794716B2 (en) | 2002-07-25 | 2010-09-14 | Glenveigh Pharmaceuticals, Llc | Antibody composition and passive immunization against pregnancy-induced hypertension |
US7390898B2 (en) | 2002-08-02 | 2008-06-24 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use |
ATE469913T1 (de) | 2002-08-10 | 2010-06-15 | Univ Yale | Antagonisten des nogo-rezeptors |
US20040067532A1 (en) | 2002-08-12 | 2004-04-08 | Genetastix Corporation | High throughput generation and affinity maturation of humanized antibody |
CN1681531A (zh) | 2002-08-13 | 2005-10-12 | 哈普托恩有限公司 | 用抗内酯或内酯衍生的信号分子的抗体治疗感染性细菌疾病的方法 |
EP1534335B9 (de) | 2002-08-14 | 2016-01-13 | Macrogenics, Inc. | Fcgammariib-spezifische antikörper und verfahren zur verwendung davon |
WO2004018660A2 (en) | 2002-08-19 | 2004-03-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel lipases and uses thereof |
AU2003250518A1 (en) | 2002-08-20 | 2004-03-11 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Akap84 and its use for visualization of biological structures |
CA2496272A1 (en) | 2002-08-20 | 2004-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Integrin b6 markers for compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of cervical cancer |
US20060058511A1 (en) | 2002-08-27 | 2006-03-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for stabilizing protein solution preparation |
CA2496596C (en) | 2002-09-04 | 2016-06-28 | Biopolymer Engineering, Inc. | Cancer therapy using yeast insoluble .beta.-glucan particles and antibodies |
US8557743B2 (en) | 2002-09-05 | 2013-10-15 | Dyax Corp. | Display library process |
CN1688198A (zh) | 2002-09-10 | 2005-10-26 | 金克克国际有限公司 | 使用高浓度糖混合物诱导基因表达 |
ES2558303T3 (es) | 2002-09-11 | 2016-02-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Método de purificación de proteínas |
WO2010011999A2 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-28 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response |
US7432351B1 (en) | 2002-10-04 | 2008-10-07 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | B7-H1 variants |
EP1551876B1 (de) | 2002-10-16 | 2011-03-16 | Purdue Pharma L.P. | Antikörper, die an zellassoziiertes ca 125/0722p binden, und verfahren zu deren anwendung |
US8506959B2 (en) | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
TW200509968A (en) | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
WO2008103472A2 (en) | 2007-02-23 | 2008-08-28 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
CN1787837A (zh) | 2002-11-15 | 2006-06-14 | 希龙公司 | 防止和治疗癌转移以及与癌转移相关的骨质损失的方法 |
ES2362424T3 (es) | 2003-01-07 | 2011-07-05 | Dyax Corporation | Biblioteca del dominio kunitz. |
EP2368578A1 (de) | 2003-01-09 | 2011-09-28 | Macrogenics, Inc. | Identifizierung und Herstellung von Antikörpern mit abweichenden FC-Regionen und Anwendungsverfahren dafür |
AU2004205631A1 (en) * | 2003-01-16 | 2004-08-05 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
JP4477579B2 (ja) | 2003-01-21 | 2010-06-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体の軽鎖スクリーニング方法 |
EP1585815A4 (de) * | 2003-01-21 | 2006-02-22 | Bristol Myers Squibb Co | Ein neues acyl-coenzym a, monoacylglycerin-acyltransferase-3 (mgat3), codierendes polynukleotid sowie verwendungen davon |
EP1592387A4 (de) | 2003-01-24 | 2009-05-06 | Elan Pharm Inc | Zusammensetzung für und behandlung von entmyelinierenden erkrankungen und paralyse durch verabreichung von remyelinierenden mitteln |
MXPA05007940A (es) * | 2003-01-27 | 2007-06-14 | Biogen Idec Inc | Composiciones y metodos para el tratamiento del cancer usando igsf9 y liv-1. |
DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
EP1947116B1 (de) | 2003-02-10 | 2017-06-21 | 2-BBB Medicines B.V. | Differenziell exprimierte Nukleinsäuren der Blut-Hirnschranke bei einer Entzündung |
EP1638587A4 (de) | 2003-02-14 | 2007-04-18 | Univ Missouri | Empfängnisverhütende verfahren und zusammensetzungen betreffend proteasomale störung |
WO2006113909A2 (en) | 2005-04-19 | 2006-10-26 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof |
JP5356648B2 (ja) | 2003-02-20 | 2013-12-04 | シアトル ジェネティックス, インコーポレイテッド | 抗cd70抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用 |
US20040180387A1 (en) | 2003-03-13 | 2004-09-16 | Fujirebio Diagnostics, Inc. | Detection of urinary mesothelin-/megakaryocyte potentiating factor-related peptides for assessment of ovarian cancer |
EP2184298A1 (de) | 2003-03-14 | 2010-05-12 | Wyeth a Corporation of the State of Delaware | Antikörper gegen Il-21-Rezeptor und deren Verwendung |
PT2248899E (pt) | 2003-03-19 | 2015-09-23 | Biogen Ma Inc | Proteína de ligação do receptor nogo |
WO2004083865A2 (en) | 2003-03-20 | 2004-09-30 | Novartis Forschungsstiftung Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Materials and methods for modulating cell motility |
EP1622941A2 (de) * | 2003-03-20 | 2006-02-08 | ImClone Systems Incorporated | Methode zur produktion von anti-egfr antikörpern |
US7294701B2 (en) * | 2003-04-02 | 2007-11-13 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibody fragment capable of modulating multidrug resistance and compositions and kits and methods using same |
KR101224235B1 (ko) | 2003-04-11 | 2013-01-25 | 메디뮨 엘엘씨 | 재조합 il9 항체 및 그의 용도 |
US7321065B2 (en) | 2003-04-18 | 2008-01-22 | The Regents Of The University Of California | Thyronamine derivatives and analogs and methods of use thereof |
US20040208876A1 (en) | 2003-04-18 | 2004-10-21 | Kim Kyung Jin | Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor |
GB2401040A (en) | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
WO2005016970A2 (en) | 2003-05-01 | 2005-02-24 | Imclone Systems Incorporated | Fully human antibodies directed against the human insulin-like growth factor-1 receptor |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
SI2298347T1 (sl) | 2003-05-06 | 2016-03-31 | Biogen Hemophilia Inc. | Himerni proteini s faktorjem strjevanja krvi za zdravljenje hemostatske motnje |
US20050025763A1 (en) | 2003-05-08 | 2005-02-03 | Protein Design Laboratories, Inc. | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
US7709610B2 (en) | 2003-05-08 | 2010-05-04 | Facet Biotech Corporation | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
AU2004239065B2 (en) | 2003-05-14 | 2008-05-15 | Domantis Limited | A process for recovering polypeptides that unfold reversibly from a polypeptide repertoire |
US8088387B2 (en) | 2003-10-10 | 2012-01-03 | Immunogen Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates |
US20050014932A1 (en) | 2003-05-15 | 2005-01-20 | Iogenetics, Llc | Targeted biocides |
PT1633189T (pt) | 2003-05-19 | 2017-10-04 | Prothena Biosciences Ltd | Fragmentos truncados de alfa-sinucleína em doença com corpos de lewy |
US7358331B2 (en) | 2003-05-19 | 2008-04-15 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease |
CA2525130C (en) | 2003-05-20 | 2014-04-15 | Immunogen, Inc. | Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
US9708410B2 (en) | 2003-05-30 | 2017-07-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tissue factor antibodies and compositions |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
CA2527694C (en) | 2003-05-30 | 2015-07-14 | Hendricus Renerus Jacobus Mattheus Hoogenboom | Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs |
CA2542232A1 (en) | 2003-06-09 | 2005-01-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating neurodegenerative disease by inhibiting alpha-synuclein |
US20040248109A1 (en) * | 2003-06-09 | 2004-12-09 | Lawrence Greenfield | Methods for selecting protein binding moieties |
JP4794301B2 (ja) | 2003-06-11 | 2011-10-19 | 中外製薬株式会社 | 抗体の製造方法 |
DE602004028249D1 (de) | 2003-06-18 | 2010-09-02 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fucosetransporter |
US20060162014A1 (en) | 2003-07-07 | 2006-07-20 | Jaffe Eileen K | Alternate morpheeins of allosteric proteins as a target for the development of bioactive molecules |
US8153410B2 (en) | 2003-07-07 | 2012-04-10 | Fox Chase Cancer Center | Alternate morpheein forms of allosteric proteins as a target for the development of bioactive molecules |
WO2005010040A1 (en) | 2003-07-15 | 2005-02-03 | Barros Research Institute | Eimeria tenella antigen for immunotherapy of coccidiosis |
GB0407315D0 (en) | 2003-07-15 | 2004-05-05 | Cambridge Antibody Tech | Human antibody molecules |
WO2005010163A2 (en) * | 2003-07-15 | 2005-02-03 | Barros Research Institute | Compositions and methods for immunotherapy of human immunotherapy of human immunodeficiency virus (hiv) |
CA2533512C (en) | 2003-07-25 | 2013-06-11 | Amgen Inc. | Antagonists and agonists of ldcam and methods of use |
US7727752B2 (en) | 2003-07-29 | 2010-06-01 | Life Technologies Corporation | Kinase and phosphatase assays |
US20050106667A1 (en) | 2003-08-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
US7758859B2 (en) | 2003-08-01 | 2010-07-20 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
HN2004000285A (es) | 2003-08-04 | 2006-04-27 | Pfizer Prod Inc | ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET |
EP2311468B1 (de) | 2003-08-08 | 2014-01-15 | Perseus Proteomics Inc. | In Krebs überexprimiertes Gen |
CA2534661A1 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Genenews Inc. | Osteoarthritis biomarkers and uses thereof |
EP2272566A3 (de) | 2003-08-18 | 2013-01-02 | MedImmune, LLC | Humanisierung von antikörpern |
AR045563A1 (es) | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
US7046714B2 (en) * | 2003-09-10 | 2006-05-16 | Intel Corporation | Method and apparatus for Raman ring resonator based laser/wavelength converter |
IL158287A0 (en) | 2003-10-07 | 2004-05-12 | Yeda Res & Dev | Antibodies to nik, their preparation and use |
EP1670350A4 (de) | 2003-10-07 | 2008-02-13 | Millennium Pharm Inc | Nukleinsäuremoleküle und proteine für die identifizierung, beurteilung, prävention und behandlung von ovarialkrebs |
ES2437491T3 (es) | 2003-10-10 | 2014-01-10 | Alchemia Oncology Pty Limited | Modulación de la síntesis y degradación de hialuronano en el tratamiento de enfermedad |
PL2157192T3 (pl) | 2003-10-10 | 2014-01-31 | Deutsches Krebsforsch | Kompozycje do diagnozowania i terapii chorób związanych z nieprawidłową ekspresją futrin (R-spondin) |
CA2537662A1 (en) * | 2003-10-15 | 2005-05-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of protein asc as a marker for breast cancer |
CA2542638A1 (en) | 2003-10-16 | 2005-04-28 | Imclone Systems Incorporated | Fibroblast growth factor receptor-1 inhibitors and methods of treatment thereof |
US7329725B1 (en) * | 2003-10-29 | 2008-02-12 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Phage displayed Trp cage ligands |
GB0325836D0 (en) * | 2003-11-05 | 2003-12-10 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
CA2545603A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto |
US20050100965A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-12 | Tariq Ghayur | IL-18 binding proteins |
JP4833850B2 (ja) | 2003-11-21 | 2011-12-07 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | Il−17活性阻害による多発性硬化症を治療するための方法 |
JP4949038B2 (ja) | 2003-12-01 | 2012-06-06 | ダコ デンマーク アクティーゼルスカブ | 免疫組織化学的検出のための方法および組成物 |
US20050158323A1 (en) * | 2003-12-04 | 2005-07-21 | Vaccinex, Inc. | Methods of killing tumor cells by targeting internal antigens exposed on apoptotic tumor cells |
CA2546054C (en) | 2003-12-10 | 2014-05-13 | Medarex, Inc. | Interferon alpha antibodies and their uses |
PL1691837T3 (pl) | 2003-12-10 | 2012-11-30 | Squibb & Sons Llc | IP-10 przeciwciała i ich zastosowanie |
TW200530269A (en) | 2003-12-12 | 2005-09-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-Mpl antibodies |
WO2005061532A1 (es) * | 2003-12-23 | 2005-07-07 | Berthet Francois Xavier | Composiciones y procedimientos para detectar infección patógena |
GB0329825D0 (en) * | 2003-12-23 | 2004-01-28 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
JP4943161B2 (ja) | 2003-12-23 | 2012-05-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 新規抗il13モノクローナル抗体での癌の処置 |
DK1704166T3 (en) | 2004-01-07 | 2015-06-01 | Novartis Vaccines & Diagnostic | M-CSF-SPECIFIC MONOCLONAL ANTIBODY AND APPLICATIONS THEREOF |
SV2006001990A (es) | 2004-01-09 | 2006-01-30 | Pfizer | Anticuerpos contra madcam |
EP1737971B1 (de) | 2004-01-20 | 2017-08-16 | Merus N.V. | Gemische bindender proteine |
US20060014211A1 (en) | 2004-01-21 | 2006-01-19 | Fujirebio Diagnostics, Inc. | Detection of mesothelin-/megakaryocyte potentiating factor-related peptides for assessment of the peritoneum and the peritoneal cavity |
GB0401876D0 (en) | 2004-01-28 | 2004-03-03 | Vereniging Het Nl Kanker I | New use for cancer antigen |
BRPI0507026A (pt) | 2004-02-09 | 2007-04-17 | Human Genome Sciences Inc | proteìnas de fusão de albumina |
EP2340850A1 (de) | 2004-02-10 | 2011-07-06 | The Regents of the University of Colorado, a Body Corporate | Hemmung von Faktor B, dem alternativen Komplement-Pfad und relevante Verfahren |
EP2168986A3 (de) | 2004-02-19 | 2010-07-28 | Genentech, Inc. | Antikörper mit korrigiertem CDR |
JP5557982B2 (ja) | 2004-03-01 | 2014-07-23 | イミューン ディズィーズ インスティテュート インコーポレイテッド | 天然IgM抗体およびその阻害剤 |
ES2387809T3 (es) * | 2004-03-19 | 2012-10-02 | Imclone Llc | Anticuerpo frente al receptor del factor de crecimiento epidérmico humano |
KR20110027823A (ko) | 2004-03-24 | 2011-03-16 | 트리패스 이미징, 인코포레이티드 | 자궁경부 질환의 검사 방법 및 조성물 |
US7973139B2 (en) | 2004-03-26 | 2011-07-05 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies against nogo receptor |
GB0407008D0 (en) | 2004-03-27 | 2004-04-28 | Haptogen Ltd | Methods for inducing rapid cell death (autolysis) in infectious bacteria |
MXPA06011199A (es) * | 2004-03-31 | 2007-04-16 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados. |
US7785903B2 (en) | 2004-04-09 | 2010-08-31 | Genentech, Inc. | Variable domain library and uses |
TWI439284B (zh) | 2004-04-09 | 2014-06-01 | Abbvie Biotechnology Ltd | 用於治療TNFα相關失調症之多重可變劑量療法 |
EP2207033B1 (de) | 2004-04-15 | 2014-06-18 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Neuralproteine als Biomarker für Verletzungen des Nervensystems und anderen neuralen Störungen |
WO2005103086A1 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-03 | Bundesrepublik Deutschland letztvertreten durch das Robert-Koch-Institut vertreten durch seinen Präsidenten | Method for the treatment of t cell mediated conditions by depletion of icos-positive cells in vivo |
GB0410627D0 (en) | 2004-05-12 | 2004-06-16 | Scancell Ltd | Specific binding members |
GB0410958D0 (en) | 2004-05-15 | 2004-06-16 | Haptogen Ltd | Methods for reducing biofilm formation in infectious bacteria |
EP1747021B1 (de) * | 2004-05-19 | 2015-09-09 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Selbstimmolative verbinder und arzneimittelkonjugate |
US7691962B2 (en) * | 2004-05-19 | 2010-04-06 | Medarex, Inc. | Chemical linkers and conjugates thereof |
ATE505727T1 (de) | 2004-05-26 | 2011-04-15 | Fraunhofer Ges Forschung | Isolation allergen-spezifischer immunoglobulin- gene aus humanen b-zellen von atopikern |
US9228008B2 (en) | 2004-05-28 | 2016-01-05 | Idexx Laboratories, Inc. | Canine anti-CD20 antibodies |
CA2569240A1 (en) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Domantis Limited | Drug fusion comprising a polypeptide drug and an immunoglobulin heavy chain variable domain specific for serum albumin |
WO2005118810A1 (en) | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Athlomics Pty Ltd | Agents and methods for diagnosing stress |
US7728114B2 (en) | 2004-06-03 | 2010-06-01 | Novimmune S.A. | Anti-CD3 antibodies and methods of use thereof |
WO2005123048A2 (en) | 2004-06-21 | 2005-12-29 | Proteome Sciences Plc | Screening methods using c-abl, fyn and syk in combination with tau protein |
CA2570823C (en) | 2004-06-21 | 2015-02-24 | Medarex, Inc. | Interferon alpha receptor 1 antibodies and their uses |
GB0414054D0 (en) | 2004-06-23 | 2004-07-28 | Owen Mumford Ltd | Improvements relating to automatic injection devices |
ES2395094T3 (es) | 2004-06-24 | 2013-02-08 | Biogen Idec Ma Inc. | Tratamiento de afecciones que implican la desmielinización |
EP2322554A1 (de) | 2004-06-30 | 2011-05-18 | Domantis Limited | Zusammensetzung die ein anti-TNF-alpha Domainantiköper enthält zur Behandlung von Rheumatoide Arthritis |
MX2007000103A (es) * | 2004-07-06 | 2007-05-11 | Bioren Inc | Bibliotecas de anticuerpos universales. |
US7973134B2 (en) * | 2004-07-07 | 2011-07-05 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in anaplastic large cell lymphoma signaling pathways |
US6986264B1 (en) * | 2004-07-15 | 2006-01-17 | Carrier Corporation | Economized dehumidification system |
CA2573821A1 (en) | 2004-07-16 | 2006-01-26 | Pfizer Products Inc. | Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-igf-1r antibody |
US7342093B2 (en) | 2004-07-23 | 2008-03-11 | University Of Massachusetts | Compounds that inhibit Hsp90 protein-protein interactions with IAP proteins |
PL1781321T3 (pl) | 2004-08-02 | 2014-07-31 | Zenyth Operations Pty Ltd | Sposób leczenia raka zawierający antagonistę VEGF-B |
US7846438B2 (en) | 2004-08-03 | 2010-12-07 | Biogen Idec Ma Inc. | Methods of promoting neurite outgrowth with soluble TAJ polypeptides |
WO2006135382A2 (en) | 2004-08-04 | 2006-12-21 | Chemocentryx, Inc. | Enzymatic activities in chemokine-mediated inflammation |
EP1623996A1 (de) * | 2004-08-06 | 2006-02-08 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Verbessertes Verfahren zur Auswahl eines Proteins von einer Bibliothek |
MX2007001679A (es) | 2004-08-09 | 2007-05-23 | Elan Pharm Inc | Prevencion y tratamiento de la enfermedad sinucleinopatica y amiloidogenica. |
ITRM20040406A1 (it) * | 2004-08-10 | 2004-11-10 | Bait Biotecnologie Applicate Italiane Srl | Complesso in grado di rilevare un analita, procedimento per la sua preparazione e usi di esso. |
RS57636B1 (sr) * | 2004-09-03 | 2018-11-30 | Genentech Inc | Humanizovani anti-beta7 antagonisti i njihova upotreba |
JP2008518586A (ja) * | 2004-09-09 | 2008-06-05 | ユニバーシティ オブ ワシントン | オールトランスレチノールすなわちオールトランス13,14−ジヒドロレチノールサチュラーゼ及びその使用方法 |
FI20041204A0 (fi) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | Riikka Lund | Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi |
US7563443B2 (en) | 2004-09-17 | 2009-07-21 | Domantis Limited | Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof |
EP3073267A1 (de) | 2004-09-21 | 2016-09-28 | Medimmune, Inc. | Antikörper gegen und verfahren zur herstellung von impfstoffen für respiratorische synzytialvirus |
GB0421838D0 (en) | 2004-09-30 | 2004-11-03 | Congenia S R L | Cancer markers |
US7935790B2 (en) | 2004-10-04 | 2011-05-03 | Cell Singaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in T-cell receptor signaling pathways |
MX2007004176A (es) | 2004-10-06 | 2007-06-15 | Mayo Foundation | B7-h1 y metodos de diagnosis, prognosis, y tratamiento de cancer. |
CN101724071A (zh) | 2004-10-08 | 2010-06-09 | 杜门蒂斯有限公司 | 抗肿瘤坏死因子受体1的单域抗体及其使用方法 |
WO2006047417A2 (en) | 2004-10-21 | 2006-05-04 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Detection of cannabinoid receptor biomarkers and uses thereof |
WO2006055178A2 (en) | 2004-10-25 | 2006-05-26 | Merck & Co., Inc. | Anti-addl antibodies and uses thereof |
CA2585717A1 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune Inc. | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
WO2006050257A2 (en) * | 2004-10-29 | 2006-05-11 | Massachusetts Institute Of Tecchnology | Detection of ion channel or receptor activity |
DE602005014665D1 (de) | 2004-11-09 | 2009-07-09 | Philogen Spa | Antikörper gegen tenascin-c |
ES2523457T3 (es) | 2004-11-18 | 2014-11-26 | Imclone Llc | Anticuerpos contra el receptor 1 del factor de crecimiento endotelial vascular |
GB0426146D0 (en) | 2004-11-29 | 2004-12-29 | Bioxell Spa | Therapeutic peptides and method |
CA2589374C (en) | 2004-11-30 | 2016-05-03 | Curagen Corporation | Antibodies directed to gpnmb and uses thereof |
CN101128487B (zh) | 2004-12-02 | 2012-10-10 | 杜门蒂斯有限公司 | 靶向血清白蛋白和glp-1或pyy的双特异性结构域抗体 |
GB0521621D0 (en) | 2005-10-24 | 2005-11-30 | Domantis Ltd | Tumor necrosis factor receptor 1 antagonists for treating respiratory diseases |
US7517870B2 (en) | 2004-12-03 | 2009-04-14 | Fondazione Telethon | Use of compounds that interfere with the hedgehog signaling pathway for the manufacture of a medicament for preventing, inhibiting, and/or reversing ocular diseases related with ocular neovascularization |
WO2006061723A2 (en) | 2004-12-06 | 2006-06-15 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Human monoclonal antibodies to influenza m2 protein and methods of making and using same |
TW200635607A (en) | 2004-12-15 | 2006-10-16 | Elan Pharm Inc | Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition |
US7807789B2 (en) * | 2004-12-21 | 2010-10-05 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in EGFR-signaling pathways |
ES2325552T3 (es) * | 2004-12-22 | 2009-09-08 | Merck Serono Sa | Tratamiento de combinacion para la esclerosis multiple. |
US20090061485A1 (en) | 2004-12-22 | 2009-03-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of Producing an Antibody Using a Cell in Which the Function of Fucose Transporter Is Inhibited |
US7850960B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-12-14 | University Of Washington | Methods for regulation of stem cells |
SG173313A1 (en) | 2005-01-05 | 2011-08-29 | Biogen Idec Inc | Cripto binding molecules |
GT200600031A (es) | 2005-01-28 | 2006-08-29 | Formulacion anticuerpo anti a beta | |
EP2520669A3 (de) | 2005-02-07 | 2013-02-27 | GeneNews Inc. | Biomarker für milde Arthrose und Verwendungen davon |
BRPI0607639B1 (pt) | 2005-02-08 | 2022-04-05 | Genzyme Corporation | Moléculas de anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno das mesmas que se ligam e neutralizam tgf-beta1, 2 e 3, uso das mesmas e composição farmacêutica |
US20110166319A1 (en) * | 2005-02-11 | 2011-07-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing purified drug conjugates |
AU2006213662B2 (en) | 2005-02-11 | 2010-08-05 | Immunogen, Inc. | Process for preparing stable drug conjugates |
CN103920142A (zh) | 2005-02-14 | 2014-07-16 | 爱荷华大学研究基金会 | 治疗和诊断年龄相关性黄斑变性的方法和试剂 |
US20060233791A1 (en) | 2005-02-15 | 2006-10-19 | Duke University | Anti-CD19 antibodies and uses in oncology |
JP2008531730A (ja) | 2005-03-04 | 2008-08-14 | キュアーディーエム、インク. | I型真性糖尿病及び他の症状を治療するための方法及び薬学的組成物 |
US20090142338A1 (en) * | 2005-03-04 | 2009-06-04 | Curedm, Inc. | Methods and Compositions for Treating Type 1 and Type 2 Diabetes Mellitus and Related Conditions |
JP5153613B2 (ja) | 2005-03-18 | 2013-02-27 | メディミューン,エルエルシー | 抗体のフレームワーク・シャッフル |
JP2008532559A (ja) | 2005-03-19 | 2008-08-21 | メディカル リサーチ カウンシル | ウイルス感染の治療及び予防又は治療及び予防の改善 |
SG10201912554TA (en) | 2005-03-23 | 2020-02-27 | Genmab As | Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma |
EP1866339B8 (de) | 2005-03-25 | 2021-12-01 | GITR, Inc. | Gitr-bindende moleküle und ihre verwendung |
TW200722518A (en) | 2005-03-31 | 2007-06-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Sc(fv)2 structural isomers |
US10011858B2 (en) | 2005-03-31 | 2018-07-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association |
GB0506912D0 (en) | 2005-04-05 | 2005-05-11 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
US7714016B2 (en) * | 2005-04-08 | 2010-05-11 | Medarex, Inc. | Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates |
US20090099340A1 (en) * | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
CA2605024C (en) | 2005-04-15 | 2018-05-22 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
WO2008157379A2 (en) | 2007-06-21 | 2008-12-24 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
US20060269556A1 (en) * | 2005-04-18 | 2006-11-30 | Karl Nocka | Mast cell activation using siglec 6 antibodies |
ATE505489T1 (de) | 2005-04-22 | 2011-04-15 | Lilly Co Eli | Tgf-beta-1-spezifische antikörper |
EP1877075A4 (de) | 2005-04-25 | 2008-07-30 | Pfizer | Antikörper gegen myostatin |
BRPI0608096A2 (pt) | 2005-04-26 | 2009-11-10 | Pfizer | anticorpos p-caderina |
US7595380B2 (en) | 2005-04-27 | 2009-09-29 | Tripath Imaging, Inc. | Monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of cervical disease |
US7592429B2 (en) | 2005-05-03 | 2009-09-22 | Ucb Sa | Sclerostin-binding antibody |
EP1885755A4 (de) | 2005-05-05 | 2009-07-29 | Univ Duke | Cd19-antikörper-therapie für autoimmunerkrankungen |
LT2439273T (lt) | 2005-05-09 | 2019-05-10 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Žmogaus monokloniniai antikūnai prieš programuotos mirties 1(pd-1) baltymą, ir vėžio gydymo būdai, naudojant vien tik anti-pd-1 antikūnus arba derinyje su kitais imunoterapiniais vaistais |
NZ591701A (en) | 2005-05-16 | 2012-11-30 | Abbott Biotech Ltd | Use of tnf inhibitor for treatment of erosive polyarthritis |
PL1899364T3 (pl) | 2005-05-17 | 2020-08-24 | University Of Connecticut | Kompozycje i sposoby immunomodulacji w organizmie |
US7393919B2 (en) * | 2005-05-25 | 2008-07-01 | Cure Dm, Inc. | Peptides, derivatives and analogs thereof, and methods of using same |
US8911733B2 (en) | 2005-05-26 | 2014-12-16 | Musc Foundation For Research Development | Inhibition of the alternative complement pathway for treatment of traumatic brain injury, spinal cord injury and related conditions |
CN102441163A (zh) | 2005-05-27 | 2012-05-09 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 结合tweak的抗体 |
WO2006129843A2 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Bispecific capturing molecule |
WO2006129828A2 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Target substance capturing molecule |
JP2006333825A (ja) * | 2005-06-03 | 2006-12-14 | Canon Inc | 標的物質捕捉用タンパク質の製造方法及びその構成材料の選択方法 |
JP5085322B2 (ja) | 2005-06-10 | 2012-11-28 | 中外製薬株式会社 | sc(Fv)2を含有する医薬組成物 |
JP5068167B2 (ja) | 2005-06-10 | 2012-11-07 | 中外製薬株式会社 | メグルミンを含有するタンパク質製剤の安定化剤、およびその利用 |
EA015148B1 (ru) | 2005-06-17 | 2011-06-30 | Элан Фарма Интернэшнл Лимитед | СПОСОБЫ ОЧИСТКИ Aβ-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА, СОДЕРЖАЩЕГО ОБЛАСТЬ FC |
EP2937360A1 (de) * | 2005-06-17 | 2015-10-28 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Ilt3-bindende moleküle und verwendungen davon |
WO2007094842A2 (en) | 2005-12-02 | 2007-08-23 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides and uses thereof |
KR20080025174A (ko) | 2005-06-23 | 2008-03-19 | 메디뮨 인코포레이티드 | 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제 |
US7700739B2 (en) * | 2005-06-30 | 2010-04-20 | Abbott Laboratories | IL-12/p40 binding proteins |
JP5142458B2 (ja) * | 2005-06-30 | 2013-02-13 | キヤノン株式会社 | 標的物質捕捉分子、標的物質捕捉用の素子、これらを用いた標的物質検出用の装置及びキット、並びに、標的物質の検出方法 |
CN105330741B (zh) | 2005-07-01 | 2023-01-31 | E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 | 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体 |
EP2476761A3 (de) | 2005-07-07 | 2012-10-17 | Athlomics Pty Ltd | Polynukleotidmarkergene und ihre Expression zur Diagnose von Endotoxämie |
US7482124B2 (en) * | 2005-07-08 | 2009-01-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of identifying a PPARgamma-agonist compound having a decreased likelihood of inducing dose-dependent peripheral edema |
MX2008000253A (es) | 2005-07-08 | 2008-04-02 | Biogen Idec Inc | Anticuerpos de sp35 y usos de los mismos. |
JP5457671B2 (ja) | 2005-07-28 | 2014-04-02 | ノバルティス アーゲー | M−csf特異的モノクローナル抗体およびその使用 |
CN109187944A (zh) | 2005-08-02 | 2019-01-11 | 埃克斯生物科技公司 | 使用IL-1α自身抗体诊断、治疗和预防血管疾病 |
WO2007014433A1 (en) | 2005-08-03 | 2007-02-08 | Grains Research & Development Corporation | Polysaccharide synthases |
SI2573114T1 (sl) | 2005-08-10 | 2016-08-31 | Macrogenics, Inc. | Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo |
AU2006281980A1 (en) * | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Cephalon Australia Pty Ltd | Engineered antibodies with new world primate framework regions |
ATE497392T1 (de) | 2005-08-18 | 2011-02-15 | Genmab As | Therapie mit anti-cd4-antikörpern und bestrahlung |
RU2515108C2 (ru) | 2005-08-19 | 2014-05-10 | Эббви Инк | Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения |
US20090215992A1 (en) * | 2005-08-19 | 2009-08-27 | Chengbin Wu | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
EP2500356A3 (de) | 2005-08-19 | 2012-10-24 | Abbott Laboratories | Immunglobuline mit zweifacher variabler Domäne und ihre Verwendung |
US20070202512A1 (en) * | 2005-08-19 | 2007-08-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Human single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent weight gain and methods of use thereof |
ES2534760T3 (es) | 2005-08-19 | 2015-04-28 | Wyeth Llc | Anticuerpos antagonistas contra GDF-8 y sus usos en el tratamiento de ELA y otros trastornos asociados con GDF-8 |
US7612181B2 (en) * | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
US20070041905A1 (en) | 2005-08-19 | 2007-02-22 | Hoffman Rebecca S | Method of treating depression using a TNF-alpha antibody |
AU2006283726C1 (en) | 2005-08-24 | 2015-05-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing maytansinoid antibody conjugates |
WO2007027906A2 (en) | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in leukemia signaling pathways |
US20100151495A9 (en) * | 2005-08-31 | 2010-06-17 | Cell Signaling Technolgy, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
UA94060C2 (ru) | 2005-09-07 | 2011-04-11 | Эмджен Фримонт Инк. | Моноклональное антитело, которое специфически связывает alk-1 |
US8945573B2 (en) | 2005-09-08 | 2015-02-03 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Targeted identification of immunogenic peptides |
WO2007030560A2 (en) | 2005-09-08 | 2007-03-15 | Philadelphia Health & Education Corporation, D/B/A Drexel University College Of Medicine | Identification of modulators of serine protease inhibitor kazal and their use as anti-cancer and anti-viral agents |
CA2620362A1 (en) * | 2005-09-14 | 2007-03-22 | Ucb Pharma S.A. | Comb polymers |
US9062126B2 (en) | 2005-09-16 | 2015-06-23 | Raptor Pharmaceuticals Inc. | Compositions comprising receptor-associated protein (RAP) variants specific for CR-containing proteins and uses thereof |
EP1934261B1 (de) | 2005-09-26 | 2014-10-29 | Medarex, L.L.C. | Humane monoklonale antikörper gegen cd70 |
CN101312748A (zh) | 2005-09-26 | 2008-11-26 | 梅达莱克斯公司 | 抗体-药物轭合物和使用方法 |
US8906864B2 (en) | 2005-09-30 | 2014-12-09 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Binding domains of proteins of the repulsive guidance molecule (RGM) protein family and functional fragments thereof, and their use |
CA2625773C (en) | 2005-10-14 | 2015-05-12 | Fukuoka University | Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation |
GB0521139D0 (en) | 2005-10-18 | 2005-11-23 | Univ Sheffield | Therapeutic agent |
EP2532679B1 (de) | 2005-10-21 | 2017-04-12 | Novartis AG | Menschliche Antikörper gegen IL13 und therapeutische Verwendungen |
ATE518007T1 (de) | 2005-10-21 | 2011-08-15 | Genenews Inc | Verfahren und vorrichtung zur korrelierung der ebenen von biomarker-produkten mit erkrankungen |
BRPI0617664B8 (pt) | 2005-10-21 | 2021-05-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio |
EP1948675B1 (de) | 2005-10-25 | 2014-07-30 | The Johns Hopkins University | Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von marfan-syndrom und verwandten erkrankungen |
ES2375843T3 (es) | 2005-10-26 | 2012-03-06 | Medarex, Inc. | Procedimientos y compuestos para la preparación de an�?logos de cc-1065. |
EP1948680A4 (de) | 2005-10-28 | 2010-01-13 | Univ California | Verfahren und verbindungen zum nachweis und zum isolieren von lymphomzellen |
EP1948235B1 (de) | 2005-11-01 | 2013-08-28 | AbbVie Biotechnology Ltd | Methoden zur bestimmung der wirksamkeit von adalimumab bei patienten mit morbus bechterew mit ctx-ii und mmp3 als biomarker |
US20070099246A1 (en) * | 2005-11-03 | 2007-05-03 | Sandy John D | Antibodies, assays and kits to quantitate cartilage destruction |
PL2500030T5 (pl) | 2005-11-04 | 2019-02-28 | Genentech, Inc. | Zastosowanie inhibitorów drogi aktywacji dopełniacza w leczeniu chorób oczu |
MX2008005764A (es) | 2005-11-04 | 2008-11-18 | Biogen Idec Inc | Metodos para promover el crecimiento de neuritas y la supervivencia en neuronas dopaminergicas. |
ES2577292T3 (es) | 2005-11-07 | 2016-07-14 | Genentech, Inc. | Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso |
JP5191392B2 (ja) | 2005-11-07 | 2013-05-08 | ザ スクリプス リサーチ インスティチュート | 組織因子シグナル伝達の特異性を調節するための組成物及び方法 |
UA96139C2 (uk) | 2005-11-08 | 2011-10-10 | Дженентек, Інк. | Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1) |
WO2007059404A2 (en) | 2005-11-10 | 2007-05-24 | Medarex, Inc. | Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates |
EP1949109B1 (de) | 2005-11-14 | 2012-02-29 | MetaMol Theranostics, LLC | Tumorinvasionsfördernde peptidsequenz |
EP1964574B1 (de) | 2005-11-14 | 2016-09-07 | Cellmid Limited | Verfahren zur behandlung oder prävention von krankheiten im zusammenhang mit funktionalen störungen der regulatorischen t-zelle |
AR057582A1 (es) | 2005-11-15 | 2007-12-05 | Nat Hospital Organization | Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos |
EP1957541A2 (de) * | 2005-11-21 | 2008-08-20 | Laboratoires Serono SA | Zusammensetzungen und verfahren zur herstellung von antigenbindenden hybridmolekülen und anwendungen davon |
TWI461436B (zh) | 2005-11-25 | 2014-11-21 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 人類cd134(ox40)之人類單株抗體及其製造及使用方法 |
WO2007061029A1 (ja) | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Keio University | 前立腺癌治療剤 |
EP2805971A1 (de) | 2005-11-28 | 2014-11-26 | ZymoGenetics, Inc. | IL-21-Antagonisten |
KR101439828B1 (ko) | 2005-11-30 | 2014-09-17 | 애브비 인코포레이티드 | 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도 |
AU2006319358B2 (en) | 2005-11-30 | 2012-01-19 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Anti-Abeta globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies |
BRPI0619234A2 (pt) | 2005-11-30 | 2011-11-08 | Massachusetts Inst Technology | método e aparelho para detectar antìgeno solúvel, método e aparelho para detectar partìcula alvo e método para identificar uma patogenia em plantas |
US9829494B2 (en) | 2005-12-01 | 2017-11-28 | Adrenomed Ag | Methods of treatment using ADM antibodies |
US20070237764A1 (en) * | 2005-12-02 | 2007-10-11 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
JP5312039B2 (ja) | 2005-12-02 | 2013-10-09 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 脱髄の関与する状態の処置 |
PT1960434E (pt) | 2005-12-08 | 2012-10-02 | Medarex Inc | Anticorpos monoclonais humanos para fucosil-gm1 e métodos para a utilização de anti-fucosil-gm1 |
DK1960430T3 (da) * | 2005-12-09 | 2015-01-05 | Ucb Pharma Sa | Antistofmolekyler der har specificitet for humant il-6 |
DOP2006000277A (es) | 2005-12-12 | 2007-08-31 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización |
US10183986B2 (en) | 2005-12-15 | 2019-01-22 | Industrial Technology Research Institute | Trimeric collagen scaffold antibodies |
US8014957B2 (en) | 2005-12-15 | 2011-09-06 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Genes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia and uses thereof |
US20070264687A1 (en) | 2005-12-15 | 2007-11-15 | Min-Yuan Chou | Recombinant triplex scaffold-based polypeptides |
US7632498B2 (en) | 2005-12-19 | 2009-12-15 | Tripath Imaging, Inc. | MCM6 and MCM7 monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of cervical disease |
EP1803814A1 (de) | 2005-12-27 | 2007-07-04 | SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. | Methode zur Verbesserung der Antikörperselektionskapazität in einer Phagen-Display-Bibliothek |
WO2007074880A1 (ja) | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗体含有安定化製剤 |
EP2025762A3 (de) | 2006-01-17 | 2009-09-30 | Health Research Inc. | Heteroduplex-Trackingassay |
WO2009051846A2 (en) | 2007-10-18 | 2009-04-23 | Cell Signaling Technology, Inc. | Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma |
US20120208824A1 (en) | 2006-01-20 | 2012-08-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | ROS Kinase in Lung Cancer |
JP5184374B2 (ja) | 2006-01-25 | 2013-04-17 | エラスムス・ユニヴァーシティ・メディカル・センター・ロッテルダム | 対立遺伝子排除 |
EP1990060B1 (de) | 2006-01-27 | 2016-09-28 | Keio University | Therapeutische mittel zur behandlung von krankheiten im zusammenhang mit choroidaler neovaskularisation |
CN103215293B (zh) | 2006-01-27 | 2015-10-28 | 比奥根Ma公司 | Nogo受体拮抗剂 |
WO2007090076A2 (en) | 2006-01-27 | 2007-08-09 | Tripath Imaging, Inc. | Methods for identifying patients with an increased likelihood of having ovarian cancer and compositions therefor |
EP1987361A4 (de) * | 2006-01-30 | 2009-03-04 | Invitrogen Corp | Zusammensetzungen und verfahren zur erkennung und quantifizierung toxischer substanzen in krankheitsstadien |
US20070175313A1 (en) * | 2006-01-31 | 2007-08-02 | Kevin Vandervliet | MP3 player holder assembly |
EA017417B1 (ru) * | 2006-02-01 | 2012-12-28 | Сефалон Астралия Пти Лтд. | КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ |
WO2007120975A2 (en) | 2006-02-13 | 2007-10-25 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Variants in complement regulatory genes predict age-related macular degeneration |
US7704953B2 (en) * | 2006-02-17 | 2010-04-27 | Mdrna, Inc. | Phage displayed cell binding peptides |
TWI417301B (zh) | 2006-02-21 | 2013-12-01 | Wyeth Corp | 對抗人類介白素-22(il-22)之抗體及其用途 |
TW200744634A (en) | 2006-02-21 | 2007-12-16 | Wyeth Corp | Methods of using antibodies against human IL-22 |
EP2514824A3 (de) | 2006-03-03 | 2013-01-23 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Verfahren und Zusammensetzungen zum Behandeln und Erkennen von missgefaltetem SOD 1-herbeigeführte Erkrankungen |
EP2540741A1 (de) | 2006-03-06 | 2013-01-02 | Aeres Biomedical Limited | Humanisierte Anti-CD22-Antikörper und ihre Verwendung bei der Behandlung von Krebs, Transplantationen und Autoimmunerkrankungen |
EP2010569A4 (de) | 2006-03-20 | 2009-09-09 | Xoma Technology Ltd | Für gastrin spezifische humane antikörper, materialien und methoden |
CN103641915B (zh) | 2006-03-27 | 2017-04-12 | 医学免疫有限公司 | Gm‑csf受体结合元件 |
CA2646048A1 (en) | 2006-03-30 | 2007-11-08 | Novartis Ag | Compositions and methods of use for antibodies of c-met |
DK3056568T3 (da) | 2006-03-31 | 2021-11-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik |
ES2654040T3 (es) | 2006-03-31 | 2018-02-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos |
CA2638774C (en) | 2006-03-31 | 2015-11-24 | Medarex, Inc. | Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies |
AR059922A1 (es) | 2006-04-01 | 2008-05-07 | Galaxy Biotech Llc | Anticuerpos monoclonales humanizados para el factor de crecimiento de hepatocitos |
NZ611859A (en) | 2006-04-05 | 2014-12-24 | Abbvie Biotechnology Ltd | Antibody purification |
WO2007116962A1 (ja) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Osaka University | 筋再生促進剤 |
KR20090029184A (ko) | 2006-04-07 | 2009-03-20 | 더 가브먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 아메리카, 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 | 항체 조성물 및 신생물성 질병의 치료 방법 |
EP2666478A3 (de) | 2006-04-10 | 2014-10-22 | AbbVie Biotechnology Ltd | Anwendungen und Zusammensetzungen zur Behandlung von Schuppenflechte |
CA2564435A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-10 | Abbott Biotechnology Ltd. | Methods for monitoring and treating intestinal disorders |
US9624295B2 (en) | 2006-04-10 | 2017-04-18 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis |
EP2011870A4 (de) | 2006-04-14 | 2010-09-15 | Medical & Biol Lab Co Ltd | Mutantes polypeptid mit effektorfunktion |
US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
TWI395754B (zh) | 2006-04-24 | 2013-05-11 | Amgen Inc | 人類化之c-kit抗體 |
US20090298093A1 (en) * | 2006-04-27 | 2009-12-03 | Roberto Polakiewicz | Reagents for the Detection of Protein Phosphorylation in ATM & ATR Kinase Signaling Pathways |
US10522240B2 (en) | 2006-05-03 | 2019-12-31 | Population Bio, Inc. | Evaluating genetic disorders |
US7702468B2 (en) | 2006-05-03 | 2010-04-20 | Population Diagnostics, Inc. | Evaluating genetic disorders |
WO2007130520A2 (en) | 2006-05-04 | 2007-11-15 | Abmaxis Inc. | Cross-species and multi-species display systems |
CA2651567A1 (en) * | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with optimized scaffolds |
AU2007249160B2 (en) | 2006-05-15 | 2013-09-12 | I2 Pharmaceuticals, Inc. | Neutralizing antibodies to influenza viruses |
GB0611116D0 (en) | 2006-06-06 | 2006-07-19 | Oxford Genome Sciences Uk Ltd | Proteins |
CN101500608A (zh) | 2006-06-08 | 2009-08-05 | 中外制药株式会社 | 炎性疾病的预防或治疗药 |
SG177907A1 (en) | 2006-06-14 | 2012-02-28 | Macrogenics Inc | Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity |
JP5597793B2 (ja) * | 2006-06-19 | 2014-10-01 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Ilt3結合分子およびその使用 |
CA2743725A1 (en) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Aegis Therapeutics, Llc | Stabilizing alkylglycoside compositions and methods thereof |
LT2029173T (lt) | 2006-06-26 | 2016-11-10 | Macrogenics, Inc. | Fc riib specifiniai antikūnai ir jų panaudojimo būdai |
US7572618B2 (en) | 2006-06-30 | 2009-08-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants |
TWI498137B (zh) | 2006-06-30 | 2015-09-01 | Abbvie Biotechnology Ltd | 自動注射裝置 |
WO2008005429A2 (en) | 2006-07-03 | 2008-01-10 | Charles David Adair | Composition for modulating the expression of cell adhesion molecules |
TWI369402B (en) | 2006-07-05 | 2012-08-01 | Catalyst Biosciences Inc | Protease screening methods and proteases identified thereby |
TW200808351A (en) | 2006-07-13 | 2008-02-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Cell death-inducing agents |
CN101622276B (zh) * | 2006-07-18 | 2015-04-22 | 赛诺菲-安万特 | 用于治疗癌症的抗epha2的拮抗抗体 |
JP5175729B2 (ja) | 2006-07-21 | 2013-04-03 | 中外製薬株式会社 | 腎疾患治療剤 |
RU2009107494A (ru) | 2006-08-04 | 2010-09-10 | Астразенека Аб (Se) | АНТИТЕЛА К ErbB2 |
CA2659820A1 (en) | 2006-08-04 | 2008-02-14 | Novartis Ag | Ephb3-specific antibody and uses thereof |
ES2506065T3 (es) | 2006-08-11 | 2014-10-13 | Csl Limited | Tratamiento de estados patológicos pulmonares |
US7939636B2 (en) | 2006-08-11 | 2011-05-10 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in c-Src signaling pathways |
WO2008018641A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Monoclonal antibodies against stromal derived factor-1 (sdf-1) |
WO2008020586A1 (en) | 2006-08-14 | 2008-02-21 | Forerunner Pharma Research Co., Ltd. | Diagnosis and treatment of cancer using anti-desmoglein-3 antibody |
GEP20125612B (en) | 2006-08-18 | 2012-08-27 | Novartis Ag | Prlr-specific antibody and usage thereof |
EP2057271A2 (de) | 2006-08-22 | 2009-05-13 | University of Copenhagen | An der glucosinolat-biosynthese beteiligte flavin-monooxygenasen und transkriptionsfaktoren |
EP2064243A2 (de) | 2006-08-28 | 2009-06-03 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Antagonistische lichtspezifische menschliche monoklonale antikörper |
US20090258442A1 (en) * | 2006-08-31 | 2009-10-15 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
GB0617429D0 (en) | 2006-09-05 | 2006-10-18 | Electrophoretics Ltd | Markers of renal transplant rejection and renal damage |
US20110182904A1 (en) | 2006-09-05 | 2011-07-28 | Deborah Zimmerman | Antibodies to bone morphogenic proteins and receptors therefor and methods for their use |
ES2902063T3 (es) | 2006-09-08 | 2022-03-24 | Abbvie Bahamas Ltd | Proteínas de unión a interleucina-13 |
US20100297103A1 (en) | 2006-09-14 | 2010-11-25 | Medical & Biological Laboratories Co., Ltd. | Antibody having enhanced adcc activity and method for production thereof |
US9040050B2 (en) | 2006-09-26 | 2015-05-26 | Genmab A/S | Combination treatment of CD38-expressing tumors |
EP2067045B1 (de) | 2006-09-28 | 2020-08-05 | The Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health Limited | Verfahren zur bestimmung der anzahl an cd4+ t-zellen und kit dafür |
SG178712A1 (en) | 2006-10-02 | 2012-03-29 | Medarex Inc | Human antibodies that bind cxcr4 and uses thereof |
AU2007312367B2 (en) | 2006-10-12 | 2012-09-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Diagnosis and treatment of cancer using anti-EREG antibody |
MX2009003774A (es) | 2006-10-12 | 2009-04-22 | Genentech Inc | Anticuerpos para linfotoxina-alfa. |
EP2076287A2 (de) | 2006-10-12 | 2009-07-08 | Wyeth | Verfahren und zusammensetzungen mit verringerter opaleszenz |
JP2010506842A (ja) | 2006-10-16 | 2010-03-04 | メディミューン,エルエルシー | 半減期が短縮された分子、その組成物および使用 |
GB0620729D0 (en) | 2006-10-18 | 2006-11-29 | Ucb Sa | Biological products |
WO2008060813A2 (en) | 2006-10-19 | 2008-05-22 | Merck & Co., Inc. | High affinity antibody antagonists of interleukin-13 receptor alpha 1 |
EP1914242A1 (de) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Neue Antikörper gegen CD38 zur Behandlung von Krebs |
ES2388567T3 (es) | 2006-10-19 | 2012-10-16 | Csl Limited | Anticuerpos anti-il-13r alfa 1 y usos de los mismos |
CN101589058A (zh) | 2006-10-20 | 2009-11-25 | 株式会社未来创药研究所 | 包含抗hb-egf抗体作为活性成分的癌症治疗剂 |
EP2078731A4 (de) | 2006-10-20 | 2012-08-01 | Forerunner Pharma Res Co Ltd | Anti-hb-egf-antikörper als wirkstoff enthaltende pharmazeutische zusammensetzung |
US7846434B2 (en) | 2006-10-24 | 2010-12-07 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Materials and methods for improved immunoglycoproteins |
MX2009004519A (es) | 2006-11-03 | 2009-05-12 | Wyeth Corp | Sustancias que inhiben la glucolisis en un cultivo de celulas. |
EP1921142A1 (de) * | 2006-11-07 | 2008-05-14 | Cytos Biotechnology AG | Auswahl von menschlichen monoklonalen Antikörpern unter Verwendung von eukaryontischem Zell-Display |
CN101573381A (zh) | 2006-11-09 | 2009-11-04 | Irm责任有限公司 | 激动剂TrkB抗体及其用途 |
WO2008063933A2 (en) | 2006-11-10 | 2008-05-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Pak modulators |
MX2009005189A (es) | 2006-11-15 | 2009-06-30 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos monoclonales para btla y metodos de uso. |
EP2094282A4 (de) | 2006-11-15 | 2010-05-05 | Functional Genetics Inc | Antikörper gegen tsg101 und verwendungen davon zur behandlung von virusinfektionen |
WO2008064306A2 (en) | 2006-11-22 | 2008-05-29 | Curedm, Inc. | Methods and compositions relating to islet cell neogenesis |
US7488807B2 (en) | 2006-11-22 | 2009-02-10 | 3M Innovative Properties Company | Antibody with protein A selectivity |
EP2431053A1 (de) | 2006-11-27 | 2012-03-21 | Patrys Limited | Neues glykosyliertes Zielpeptid in neoplastischen Zellen |
TW200831528A (en) | 2006-11-30 | 2008-08-01 | Astrazeneca Ab | Compounds |
US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
MX2009005776A (es) | 2006-12-01 | 2009-06-10 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se enlazan al cd 22 y sus usos. |
WO2008069999A2 (en) | 2006-12-01 | 2008-06-12 | Selexys Pharmaceuticals Corporation | Anti-p-selectin antibodies and methods of using the same to treat inflammatory diseases |
US8455622B2 (en) | 2006-12-01 | 2013-06-04 | Seattle Genetics, Inc. | Variant target binding agents and uses thereof |
AU2007330306B2 (en) | 2006-12-05 | 2013-10-24 | Decode Genetics Ehf. | Genetic markers for risk management of cardiac arrhythmia |
EP2687232A1 (de) | 2006-12-06 | 2014-01-22 | MedImmune, LLC | Verfahren zur Behandlung von systemischem Lupus erythematodes |
WO2008070780A1 (en) | 2006-12-07 | 2008-06-12 | Novartis Ag | Antagonist antibodies against ephb3 |
US20080139790A1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-12 | Jennings Philip A | Chimeric antibodies |
US8680252B2 (en) | 2006-12-10 | 2014-03-25 | Dyadic International (Usa), Inc. | Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi |
US9862956B2 (en) | 2006-12-10 | 2018-01-09 | Danisco Us Inc. | Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi |
CL2007003622A1 (es) | 2006-12-13 | 2009-08-07 | Medarex Inc | Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales. |
WO2008074004A2 (en) | 2006-12-14 | 2008-06-19 | Medarex, Inc. | Human antibodies that bind cd70 and uses thereof |
EP2103628A4 (de) | 2006-12-14 | 2012-02-22 | Forerunner Pharma Res Co Ltd | Monoklonaler anti-claudin-3-antikörper und die behandlung und diagnose von krebs unter dessen verwendung |
US7935791B2 (en) | 2006-12-18 | 2011-05-03 | Genentech, Inc. | Antagonist anti-Notch3 antibodies and their use in the prevention and treatment of Notch3-related diseases |
RU2554747C9 (ru) | 2006-12-20 | 2015-10-20 | Ксома (Сша) Ллс | Способы лечения il-1бета-зависимых заболеваний |
US20080171344A1 (en) * | 2006-12-22 | 2008-07-17 | Kapsner Kenneth P | Methods, Kits and Materials for Diagnosing Disease States by Measuring Isoforms or Proforms of Myeloperoxidase |
WO2008083169A2 (en) | 2006-12-26 | 2008-07-10 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for the treatment of immunologic disorders |
US7989173B2 (en) | 2006-12-27 | 2011-08-02 | The Johns Hopkins University | Detection and diagnosis of inflammatory disorders |
CN101663323A (zh) | 2006-12-27 | 2010-03-03 | 埃默里大学 | 用于治疗传染病和肿瘤的组合物和方法 |
WO2008083239A2 (en) | 2006-12-27 | 2008-07-10 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for stimulating an immune response |
TWI412367B (zh) | 2006-12-28 | 2013-10-21 | Medarex Llc | 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物 |
EP2114443A4 (de) * | 2006-12-29 | 2011-08-10 | Abbott Lab | Doppelt spezifische il-1a/il-1b-antikörper |
EP2123676A4 (de) | 2007-01-05 | 2011-01-05 | Univ Tokyo | Diagnose und behandlung von krebs unter verwendung von anti-prg-3-antikörpern |
DK2740744T3 (da) | 2007-01-09 | 2018-04-23 | Biogen Ma Inc | Sp35-antistoffer og anvendelser deraf |
US8128926B2 (en) | 2007-01-09 | 2012-03-06 | Biogen Idec Ma Inc. | Sp35 antibodies and uses thereof |
WO2008084402A2 (en) | 2007-01-11 | 2008-07-17 | Philipps-Universitaet Marburg | Diagnosis and treatment of alzheimer's and other neurodementing diseases |
NZ578065A (en) | 2007-01-16 | 2012-09-28 | Abbott Lab | Methods for treating psoriasis with an antibody which binds to an epitope |
TWI438208B (zh) | 2007-01-23 | 2014-05-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | 抑制慢性排斥反應之藥劑 |
WO2008098139A2 (en) | 2007-02-07 | 2008-08-14 | The Regents Of The University Of Colorado | Axl tyrosine kinase inhibitors and methods of making and using the same |
AU2008212117B2 (en) | 2007-02-07 | 2014-09-11 | Decode Genetics Ehf. | Genetic variants contributing to risk of prostate cancer |
CA2676766A1 (en) | 2007-02-09 | 2008-08-21 | Genentech, Inc. | Anti-robo4 antibodies and uses therefor |
AR065368A1 (es) | 2007-02-15 | 2009-06-03 | Astrazeneca Ab | Anticuerpos para moleculas de ige |
US8114606B2 (en) * | 2007-02-16 | 2012-02-14 | The Board Of Trustees Of Southern Illinois University | ARL-1 specific antibodies |
PL2716301T3 (pl) | 2007-02-16 | 2017-10-31 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Przeciwciała przeciw ERBB3 i ich zastosowania |
US8685666B2 (en) | 2007-02-16 | 2014-04-01 | The Board Of Trustees Of Southern Illinois University | ARL-1 specific antibodies and uses thereof |
WO2008102380A1 (en) | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Decode Genetics Ehf | Genetic susceptibility variants associated with cardiovascular disease |
WO2008103693A2 (en) | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Medarex, Inc. | Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof |
DK2118300T3 (en) | 2007-02-23 | 2015-07-13 | Prothena Biosciences Ltd | PREVENTION AND TREATMENT OF SYNUCLEINOPATHIC AND AMYLOIDOGENIC DISEASE |
EP2121745A2 (de) | 2007-02-26 | 2009-11-25 | Oxford Genome Sciences (UK) Limited | Proteine |
WO2008104803A2 (en) | 2007-02-26 | 2008-09-04 | Oxford Genome Sciences (Uk) Limited | Proteins |
WO2008104386A2 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Method for the treatment of amyloidoses |
CN101951953A (zh) | 2007-02-27 | 2011-01-19 | 株式会社未来创药研究所 | 含抗grp78抗体作为有效成分的药物组合物 |
US20090081659A1 (en) | 2007-03-07 | 2009-03-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways |
CL2008000719A1 (es) | 2007-03-12 | 2008-09-05 | Univ Tokushima Chugai Seiyaku | Agente terapeutico para cancer resistente a agentes quimioterapeuticos que comprende un anticuerpo que reconoce hla de clase i como ingrediente activo; composicion farmaceutica que comprende dicho anticuerpo; y metodo para tratar cancer resistente a |
GB2447786C (en) | 2007-03-22 | 2011-11-09 | Heptares Therapeutics Ltd | Mutant G-protein coupled receptor proteins and methods for selecting them |
NZ580245A (en) | 2007-03-22 | 2012-01-12 | Biogen Idec Inc | Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 and uses thereof |
EP1975184A3 (de) | 2007-03-26 | 2008-11-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Serin- oder Threonin-Phosphorylationsorte |
US20080238709A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-02 | Faramarz Vaziri | One-way communication apparatus with dynamic key generation |
NZ598881A (en) | 2007-03-29 | 2013-11-29 | Abbvie Inc | Crystalline anti-human il-12 antibodies |
JP5456658B2 (ja) | 2007-03-30 | 2014-04-02 | メディミューン,エルエルシー | 抗体製剤 |
PA8775101A1 (es) | 2007-04-02 | 2008-11-19 | Pfizer | Anticuerpos anti-ige |
CN103275220B (zh) | 2007-04-02 | 2016-01-20 | 菲洛根股份公司 | 与肿瘤转移的新生血管有关的纤连蛋白的ed-a抗原 |
US7807168B2 (en) * | 2007-04-10 | 2010-10-05 | Vaccinex, Inc. | Selection of human TNFα specific antibodies |
MX2009010997A (es) | 2007-04-13 | 2009-11-02 | Catalyst Biosciences Inc | Polipeptidos modificados con el factor vii y usos de los mismos. |
GB0707505D0 (en) * | 2007-04-18 | 2007-05-30 | Medical Res Council | Antibodies against il-25 |
EP1983003A3 (de) | 2007-04-19 | 2009-03-11 | Peter Hornbeck | Tyrosinphosphorylationsstellen und spezifische Antikörper |
EP1983002A3 (de) | 2007-04-19 | 2009-03-11 | Peter Hornbeck | Tyrosinphosphorylations-Stellen und spezifische Antikörper |
US7977462B2 (en) | 2007-04-19 | 2011-07-12 | Cell Signaling Technology, Inc. | Tyrosine phosphorylation sites |
US20090053831A1 (en) | 2007-05-01 | 2009-02-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Tyrosine phosphorylation sites |
EP2164868B1 (de) | 2007-05-04 | 2015-03-25 | Technophage, Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia, SA | Gentechnisch gewonnene variable domänen von kaninchen-antikörpern und deren verwendung |
RU2549701C2 (ru) | 2007-05-07 | 2015-04-27 | Медиммун, Ллк | Анти-icos антитела и их применение в лечении онкологических, связанных с трансплантацией и аутоиммунных заболеваний |
EP2068927B1 (de) | 2007-05-14 | 2015-10-21 | MedImmune, LLC | Verfahren zur reduzierung eosinophiler spiegel |
AU2007353779B2 (en) * | 2007-05-17 | 2013-11-07 | Genentech, Inc. | Crystal structures of neuropilin fragments and neuropilin-antibody complexes |
WO2008146309A2 (en) | 2007-05-25 | 2008-12-04 | Decode Genetics Ehf. | Genetic variants on chr 5pl2 and 10q26 as markers for use in breast cancer risk assessment, diagnosis, prognosis and treatment |
JP5117765B2 (ja) | 2007-05-28 | 2013-01-16 | 国立大学法人 東京大学 | 抗robo1抗体を含むpet用腫瘍診断剤 |
US20090232801A1 (en) * | 2007-05-30 | 2009-09-17 | Abbot Laboratories | Humanized Antibodies Which Bind To AB (1-42) Globulomer And Uses Thereof |
PE20090329A1 (es) * | 2007-05-30 | 2009-03-27 | Abbott Lab | Anticuerpos humanizados contra el globulomero ab(20-42) y sus usos |
US7709215B2 (en) | 2007-06-01 | 2010-05-04 | Cytonics Corporation | Method for diagnosing and treating acute joint injury |
GB0724331D0 (en) | 2007-12-13 | 2008-01-23 | Domantis Ltd | Compositions for pulmonary delivery |
KR20100018040A (ko) | 2007-06-06 | 2010-02-16 | 도만티스 리미티드 | 프로테아제 내성 폴리펩티드를 선택하는 방법 |
US8999337B2 (en) | 2007-06-11 | 2015-04-07 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Methods for treating juvenile idiopathic arthritis by inhibition of TNFα |
CA2691075C (en) | 2007-06-15 | 2017-04-11 | Daniela Gast | Treatment of tumors using specific anti-l1 antibody |
ES2591281T3 (es) | 2007-07-12 | 2016-11-25 | Gitr, Inc. | Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR |
US8153595B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-04-10 | The Johns Hopkins University | B7-DC variants immunogenic compositions and methods of use thereof |
TW200918089A (en) | 2007-07-16 | 2009-05-01 | Genentech Inc | Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
JP5469600B2 (ja) | 2007-07-16 | 2014-04-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗CD79b抗体及びイムノコンジュゲートとその使用方法 |
EP2167541B1 (de) | 2007-07-25 | 2012-12-19 | Philogen S.p.A. | Das fibronektin ed-a-antigen ist mit der neovaskulatur von tumormetastasen assoziiert |
EP2174667B1 (de) | 2007-07-26 | 2017-01-04 | Osaka University | Mittel zur behandlung von augenentzündungen mit interleukin-6-rezeptorhemmer als wirkstoff |
DK2182983T3 (da) | 2007-07-27 | 2014-07-14 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Behandling af amyloidogene sygdomme med humaniserede anti-abeta antistoffer |
MX2010001307A (es) | 2007-08-02 | 2010-07-30 | Novimmune Sa | Anticuerpos anti-proteína regulada con la activación, expresada y secretada por los linfocitos t normales y metodos de uso de los mismos. |
JP5659014B2 (ja) | 2007-08-02 | 2015-01-28 | ジリード バイオロジクス,インク. | 線維症、腫瘍浸潤、血管新生及び転移の治療及び診断のための方法及び組成物 |
WO2009020477A1 (en) * | 2007-08-06 | 2009-02-12 | Yale University | Modified miniature proteins |
US9693539B2 (en) | 2007-08-10 | 2017-07-04 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | HCO32 and HCO27 and related examples |
WO2009021754A2 (en) | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Monospecific and multispecific antibodies and method of use |
EP2190987B1 (de) | 2007-08-21 | 2012-11-14 | MorphoSys AG | Verfahren zur Formung von Disulphid-Bindungen |
EP2185188B1 (de) | 2007-08-22 | 2014-08-06 | Medarex, L.L.C. | Ortsspezifische bindung von wirkstoffen oder anderen mitteln an gentechnisch hergestellte antikörper mit c-terminalen erweiterungen |
CA2698203C (en) | 2007-08-29 | 2018-09-11 | Sanofi-Aventis | Humanized anti-cxcr5 antibodies, derivatives thereof and their use |
NZ599756A (en) * | 2007-08-30 | 2013-09-27 | Curedm Group Holdings Llc | Compositions and methods of using proislet peptides and analogs thereof |
PL2199390T3 (pl) | 2007-08-30 | 2017-06-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Przeciwciało anty-epha2 |
US8415455B2 (en) | 2007-09-04 | 2013-04-09 | Compugen Ltd | Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics |
GB0717337D0 (en) | 2007-09-06 | 2007-10-17 | Ucb Pharma Sa | Method of treatment |
WO2009033071A2 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-12 | Dyadic International, Inc. | Novel fungal enzymes |
US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
EP2193146B1 (de) * | 2007-09-14 | 2016-05-25 | Adimab, LLC | Synthetische antikörperbibliotheken mit rationalem design und ihre verwendung |
CL2008002775A1 (es) | 2007-09-17 | 2008-11-07 | Amgen Inc | Uso de un agente de unión a esclerostina para inhibir la resorción ósea. |
US9377465B2 (en) | 2007-09-18 | 2016-06-28 | Dako Denmark A/S | Rapid and sensitive method for detection of biological targets |
EP2195341B1 (de) | 2007-09-26 | 2017-03-22 | UCB Biopharma SPRL | Fusionsantikörper mit dualer spezifität |
CN106519025B (zh) | 2007-09-26 | 2021-04-23 | 中外制药株式会社 | 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法 |
EP2205280B1 (de) | 2007-09-27 | 2019-09-04 | Amgen Inc. | Pharmazeutische formulierungen |
AU2008305851B2 (en) | 2007-09-28 | 2014-12-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-glypican-3 antibody having improved kinetics in plasma |
EP2196220B1 (de) | 2007-10-02 | 2014-12-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Inhibierende anti-IL-6 Rezeptor Antikörper für die Behandlung von Graft-versus-Host-Reaktion |
US8470560B2 (en) | 2007-10-03 | 2013-06-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | CR-2 binding peptide P28 as molecular adjuvant for DNA vaccines |
EP2205971A4 (de) * | 2007-10-04 | 2011-03-30 | Bionomics Ltd | Endothelzellen-marker und verwendungen davon |
WO2009048072A1 (ja) | 2007-10-11 | 2009-04-16 | Daiichi Sankyo Company, Limited | 破骨細胞関連蛋白質Siglec-15を標的とした抗体 |
AR068767A1 (es) | 2007-10-12 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina |
EP2050764A1 (de) | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Neues polyvalentes bispezifisches Antikörperformat und Verwendung |
US9683027B2 (en) | 2007-10-15 | 2017-06-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for production of antibody |
JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
US20100297115A1 (en) | 2007-10-23 | 2010-11-25 | Novartis Ag | Use of trkb antibodies for the treatment of respiratory disorders |
JP5620106B2 (ja) | 2007-10-24 | 2014-11-05 | 株式会社糖鎖工学研究所 | 増強されたエフェクター機能を有するポリペプチド |
WO2009055656A2 (en) | 2007-10-26 | 2009-04-30 | Centocor, Inc. | Vectors, host cells, and methods of production and uses |
EP2209805B1 (de) | 2007-10-30 | 2017-09-06 | Philogen S.p.A. | Mit rheumatoider arthritis assoziiertes antigen |
EP2851432B1 (de) | 2007-11-01 | 2019-01-09 | University of Iowa Research Foundation | RCA-Locus-Analyse zur Beurteilung der Anfälligkeit für AMD |
PE20091163A1 (es) | 2007-11-01 | 2009-08-09 | Wyeth Corp | Anticuerpos para gdf8 |
DK2567709T3 (en) | 2007-11-02 | 2018-03-12 | Novartis Ag | Molecules and Methods for Modulating Low-Density Lipoprotein Receptor-Related Protein 6 (LRP6) |
AU2008324800B2 (en) | 2007-11-05 | 2014-03-27 | Astrazeneca Ab | Methods of treating scleroderma |
NZ585556A (en) | 2007-11-07 | 2012-07-27 | Celldex Therapeutics Inc | Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (dec-205) |
US8680243B2 (en) | 2007-11-14 | 2014-03-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Diagnosis and treatment of cancer using anti-GPR49 antibody |
BRPI0820543A2 (pt) | 2007-11-15 | 2015-06-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticorpo monoclonal capaz de ligar a anexelekto, e uso do mesmo |
WO2009064838A1 (en) | 2007-11-15 | 2009-05-22 | Amgen, Inc. | Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stablised by antioxidants for parenteral administration |
JP5580205B2 (ja) | 2007-11-19 | 2014-08-27 | セレラ コーポレーション | 肺癌マーカーとその使用 |
CL2008003449A1 (es) | 2007-11-21 | 2010-02-19 | Imclone Llc | Anticuerpo o fragmentos del mismo contra el receptor de proteína estimulante de macrófagos/ron; composición farmacéutica que lo comprende; uso para inhibir angiogénesis, crecimiento tumoral, proliferación, migración e invasión de células tumorales, activación de ron o fosforilación de mapk y/o akt; y uso para tratar cáncer. |
EP2062920A3 (de) | 2007-11-21 | 2009-06-17 | Peter Hornbeck | Proteinphosphorylation durch basophilische Serin-/Threonin-Kinasen in Insulinsignalisierungspfaden |
JP5490714B2 (ja) * | 2007-11-28 | 2014-05-14 | メディミューン,エルエルシー | タンパク質製剤 |
AR069501A1 (es) * | 2007-11-30 | 2010-01-27 | Genentech Inc | Anticuerpos anti- vegf (factor de crecimiento endotelial vascular) |
TW200944231A (en) | 2007-11-30 | 2009-11-01 | Glaxo Group Ltd | Antigen-binding constructs |
US8697360B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-04-15 | Decode Genetics Ehf. | Genetic variants on CHR 11Q and 6Q as markers for prostate and colorectal cancer predisposition |
MY185647A (en) | 2007-12-05 | 2021-05-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Therapeutic agent for pruritus |
BRPI0821110B8 (pt) | 2007-12-05 | 2021-05-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo |
GB0724051D0 (en) | 2007-12-08 | 2008-01-16 | Medical Res Council | Mutant proteins and methods for producing them |
US20110262425A1 (en) | 2007-12-12 | 2011-10-27 | National Cancer Center | Therapeutic agent for mll leukemia and moz leukemia of which molecular target is m-csf receptor, and use thereof |
CN105001333B (zh) | 2007-12-14 | 2019-05-17 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 抗人nkg2d抗体及其用途 |
CN101918447B (zh) | 2007-12-14 | 2014-06-11 | 布里斯托尔-米尔斯·斯奎布公司 | 人ox40受体的结合分子 |
US8779088B2 (en) | 2007-12-17 | 2014-07-15 | Marfl Ab | Vaccine for the treatment of Mycobacterium related disorders |
GB0724860D0 (en) | 2007-12-20 | 2008-01-30 | Heptares Therapeutics Ltd | Screening |
PT2391650E (pt) | 2007-12-20 | 2015-01-14 | Xoma Us Llc | Métodos para o tratamento de gota |
US8414893B2 (en) | 2007-12-21 | 2013-04-09 | Amgen Inc. | Anti-amyloid antibodies and uses thereof |
US8092804B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-01-10 | Medimmune Limited | Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Rα)-173 |
RU2490278C2 (ru) | 2007-12-21 | 2013-08-20 | Медиммун Лимитед | ЭЛЕМЕНТ, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С α-РЕЦЕПТОРОМ ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 (IL-4Rα)-173 |
CA2710680C (en) | 2007-12-26 | 2018-10-16 | Vaccinex, Inc. | Anti-c35 antibody combination therapies and methods |
PE20091174A1 (es) | 2007-12-27 | 2009-08-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo |
ES2544679T3 (es) | 2007-12-28 | 2015-09-02 | Prothena Biosciences Limited | Tratamiento y profilaxis de la amiloidosis |
GB0800277D0 (en) | 2008-01-08 | 2008-02-13 | Imagination Tech Ltd | Video motion compensation |
CN101918555B (zh) | 2008-01-11 | 2013-11-06 | 株式会社遗传科技 | 人源化抗整联蛋白α9抗体及其应用 |
EP3064512B1 (de) | 2008-01-11 | 2023-08-30 | The University of Tokyo | Antikörper gegen cldn6 |
AU2009205995B2 (en) | 2008-01-18 | 2014-04-03 | Medimmune, Llc | Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation |
AU2009206306B2 (en) | 2008-01-25 | 2013-06-06 | Amgen Inc. | Ferroportin antibodies and methods of use |
BRPI0907648B1 (pt) | 2008-01-29 | 2022-01-11 | Institute Of Molecular Biology And Genetics National Academy Of Science Of Ukraine | Anticorpo isolado humanizado, usos de um anticorpo, métodos para preparar um anticorpo, para gerar anticorpos imunorreativos com slc34a2 e para triar ou identificar agentes ou compostos que modulam slc34a2, composições, ácido nucleico isolado, e, microorganismo hospedeiro |
SI2657253T1 (sl) | 2008-01-31 | 2017-10-30 | Genentech, Inc. | Protitelesa proti CD79b in imunokonjugati in postopki za uporabo |
US8039596B2 (en) | 2008-02-05 | 2011-10-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Alpha 5-beta 1 antibodies and their uses |
CN101952454B (zh) | 2008-02-08 | 2014-06-04 | 米迪缪尼有限公司 | 具有减弱的Fc配体亲和性的抗IFNAR1抗体 |
GB0802474D0 (en) | 2008-02-11 | 2008-03-19 | Heptares Therapeutics Ltd | Mutant proteins and methods for selecting them |
EP2245153A4 (de) * | 2008-02-13 | 2011-06-22 | Dyax Corp | Verbesserte verfahren zur herstellung spezifischer bindungspaare |
US8828657B2 (en) | 2008-02-14 | 2014-09-09 | Decode Genetics Ehf. | Susceptibility variants for lung cancer |
AU2009219358A1 (en) | 2008-02-28 | 2009-09-03 | 3M Innovative Properties Company | Antibodies to Clostridium difficile spores and uses thereof |
US20090220991A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-03 | Cell Signaling Technology, Inc. | Reagents for the detection of protein phosphorylation in leukemia signaling pathways |
US8962803B2 (en) | 2008-02-29 | 2015-02-24 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Antibodies against the RGM A protein and uses thereof |
EP2098536A1 (de) | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 4-Antibody AG | Isolation und Identifikation antigen- oder ligandenspezifischer Bindungsproteine |
EP2268672A1 (de) | 2008-03-12 | 2011-01-05 | Imclone LLC | Anti-tyrp1-antikörper |
US9873957B2 (en) * | 2008-03-13 | 2018-01-23 | Dyax Corp. | Libraries of genetic packages comprising novel HC CDR3 designs |
BR122012027456A2 (pt) | 2008-03-14 | 2015-07-14 | Allergan Inc | Composição farmacêutica compreendendo sorotipo de neurotoxina botulínica a |
NZ587765A (en) | 2008-03-18 | 2013-02-22 | Abbott Lab | Methods for treating psoriasis |
EP2260102A1 (de) | 2008-03-25 | 2010-12-15 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Tumorbehandlung mittels herunterregelung von frizzled-4 und/oder frizzled-1 |
JP2011516423A (ja) | 2008-03-28 | 2011-05-26 | シー レーン バイオテクノロジーズ, エルエルシー | ウイルス抗原に対する中和分子 |
EP2631302A3 (de) | 2008-03-31 | 2014-01-08 | Genentech, Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung und Diagnose von Asthma |
NZ588905A (en) | 2008-04-01 | 2012-08-31 | Decode Genetics Ehf | Genetic testing method for determining susceptibility to abdominal aortic aneurysm by assay for selected polymorphisms associated with the disease |
WO2009123894A2 (en) | 2008-04-02 | 2009-10-08 | Macrogenics, Inc. | Her2/neu-specific antibodies and methods of using same |
ES2654937T3 (es) | 2008-04-02 | 2018-02-15 | Macrogenics, Inc. | Anticuerpos específicos para el complejo BCR y procedimientos de uso de los mismos |
CL2009000647A1 (es) | 2008-04-04 | 2010-06-04 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composicion farmaceutica para tratar o prevenir cancer hepatico que comprende una combinacion de un agente quimioterapeutico y un anticuerpo anti-glipicano 3; agente para atenuar un efecto secundario que comprende dicho anticuerpo; metodo para tratar o prevenir un cancer hepatico de un sujeto. |
EP2274437B1 (de) | 2008-04-10 | 2015-12-23 | Cell Signaling Technology, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur erkennung von egfr-mutationen bei krebs |
KR102469853B1 (ko) | 2008-04-11 | 2022-11-22 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자 |
DK2276509T3 (en) | 2008-04-11 | 2016-09-19 | Seattle Genetics Inc | DETECTION AND TREATMENT OF CANCER IN PANCREAS, ovarian and other cancers |
EP2288715B1 (de) | 2008-04-11 | 2014-09-24 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Humanserumalbumin-linker und konjugate davon |
GB0807413D0 (en) | 2008-04-23 | 2008-05-28 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
EP2281078B1 (de) | 2008-04-24 | 2014-10-22 | Dyax Corporation | Bibliotheken von genetischen packungen, umfassend neue hc-cdr1, -cdr2, und -cdr3, und neue lc-cdr1-, -cdr2- und -cdr3-designs |
WO2009131256A1 (en) | 2008-04-24 | 2009-10-29 | Gene Techno Science Co., Ltd. | Humanized antibodies specific for amino acid sequence rgd of an extracellular matrix protein and the uses thereof |
CA2722082C (en) | 2008-04-25 | 2021-11-09 | Christopher Tenhoor | Fc receptor binding proteins |
US20090269786A1 (en) * | 2008-04-25 | 2009-10-29 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | RHO1-Gamma Amino Butyric Acid C Receptor-Specific Antibodies |
SG190572A1 (en) | 2008-04-29 | 2013-06-28 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US8236319B2 (en) | 2008-04-30 | 2012-08-07 | Immunogen, Inc. | Cross-linkers and their uses |
EP2816059A1 (de) | 2008-05-01 | 2014-12-24 | Amgen, Inc | Anti-Hepcidin-Antikörper und Verfahren zu ihrer Verwendung |
ES2458541T3 (es) | 2008-05-02 | 2014-05-06 | Seattle Genetics, Inc. | Métodos y composiciones para elaborar anticuerpos y derivados de anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida |
CN102170903B (zh) | 2008-05-02 | 2016-04-06 | 亮点医疗有限公司 | 用于刺激免疫反应的产品和方法 |
MY159667A (en) | 2008-05-09 | 2017-01-13 | Abbvie Inc | Antibodies to receptor of advanced glycation end products (rage) and uses thereof |
SG176464A1 (en) | 2008-05-09 | 2011-12-29 | Agency Science Tech & Res | Diagnosis and treatment of kawasaki disease |
JP6219556B2 (ja) * | 2008-05-16 | 2017-10-25 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ベータ7インテグリンアンタゴニストを用いた消化管炎症性障害の治療評価のためのバイオマーカーの使用 |
US20090291073A1 (en) * | 2008-05-20 | 2009-11-26 | Ward Keith W | Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same |
EP2304439A4 (de) | 2008-05-29 | 2012-07-04 | Nuclea Biotechnologies Llc | Anti-phospho-akt-antikörper |
WO2009148928A1 (en) | 2008-05-29 | 2009-12-10 | Galaxy Biotech, Llc | Monoclonal antibodies to basic fibroblast growth factor |
AR071891A1 (es) | 2008-05-30 | 2010-07-21 | Imclone Llc | Anticuerpos humanos anti-flt3 (receptor tirosina cinasa 3 tipo fms humano) |
US9226934B2 (en) | 2008-06-02 | 2016-01-05 | The University Of Tokyo | Anti-cancer drug |
RU2010153578A (ru) | 2008-06-03 | 2012-07-20 | Эбботт Лэборетриз (Us) | Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение |
CA2726087A1 (en) | 2008-06-03 | 2009-12-10 | Tariq Ghayur | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
WO2010033279A2 (en) | 2008-06-04 | 2010-03-25 | Macrogenics, Inc. | Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same |
CA2728243C (en) | 2008-06-05 | 2020-03-10 | National Cancer Center | Il-6 inhibitor for suppressing neuroinvasion in pancreatic cancer |
ES2595362T3 (es) | 2008-06-16 | 2016-12-29 | Patrys Limited | Anticuerpos LM, fragmentos funcionales, antígeno diana LM-1 y métodos para prepararlos y usarlos |
EP2319869B1 (de) | 2008-06-20 | 2016-08-17 | National University Corporation Okayama University | ANTIKÖRPER GEGEN DEN OXIDIERTES LDL/ß²GPI-KOMPLEX UND ANWENDUNG DAVON |
KR20110036608A (ko) | 2008-07-07 | 2011-04-07 | 디코드 제네틱스 이에이치에프 | 유방암 위험도 평가를 위한 유전적 변이 |
TW201014602A (en) | 2008-07-08 | 2010-04-16 | Abbott Lab | Prostaglandin E2 binding proteins and uses thereof |
MY155603A (en) | 2008-07-08 | 2015-11-13 | Oncomed Pharm Inc | Notch-binding agents and antagonists and methods of use thereof |
RU2011104348A (ru) | 2008-07-08 | 2012-08-20 | Эбботт Лэборетриз (Us) | Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение |
US8834875B2 (en) | 2010-01-13 | 2014-09-16 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Notch1 binding agents and methods of use thereof |
DK2982695T3 (da) | 2008-07-09 | 2019-05-13 | Biogen Ma Inc | Sammensætninger, der omfatter antistoffer mod lingo eller fragmenter deraf |
US8148088B2 (en) * | 2008-07-18 | 2012-04-03 | Abgent | Regulation of autophagy pathway phosphorylation and uses thereof |
EP2321352B1 (de) | 2008-07-18 | 2016-01-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Für die cd28-bindung monovalente zusammensetzungen und anwendungsverfahren |
US20100173828A1 (en) * | 2008-07-25 | 2010-07-08 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Aß(X - 38 .. 43) oligomers, and processes, compositions, and uses thereof |
EP2316030B1 (de) | 2008-07-25 | 2019-08-21 | Wagner, Richard W. | Proteinscreeningverfahren |
EA027575B1 (ru) | 2008-08-05 | 2017-08-31 | Новартис Аг | Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающий человеческий белок с5, содержащая их композиция, нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие эту кислоту вектор и клетка-хозяин и применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента |
WO2010016806A1 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Agency For Science, Technology And Research (A*Star) | Vhz for diagnosis and treatment of cancers |
AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
US8563697B2 (en) | 2008-08-14 | 2013-10-22 | Cephalon Australia Pty. Ltd. | Anti-IL-12/IL-23 antibodies |
CA3059768A1 (en) | 2008-09-05 | 2010-03-11 | President And Fellows Of Harvard College | Continuous directed evolution of proteins and nucleic acids |
CA2735433C (en) | 2008-09-07 | 2016-02-16 | Glyconex Inc. | Anti-extended type i glycosphingolipid antibody, derivatives thereof and use |
US9075065B2 (en) | 2008-09-12 | 2015-07-07 | Dako Denmark A/S | Prostate cancer biomarker |
CA2739357A1 (en) | 2008-09-23 | 2010-04-08 | Wyeth Llc | Methods for predicting production of activating signals by cross-linked binding proteins |
EP2352841A2 (de) | 2008-09-23 | 2011-08-10 | President and Fellows of Harvard College | Sirt4 und verwendungen davon |
EP2364359A2 (de) | 2008-09-26 | 2011-09-14 | Wyeth LLC | Kompatible display-vektorsysteme |
ES2592216T3 (es) | 2008-09-26 | 2016-11-28 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Anticuerpos anti-PD-1, PD-L1 y PD-L2 humanos y sus usos |
GB0817891D0 (en) | 2008-09-30 | 2008-11-05 | Medical Res Council | Antibodies against il-25 |
WO2010040073A1 (en) * | 2008-10-03 | 2010-04-08 | Xoma Technology Ltd. | Novel triple tag sequences and methods of use thereof |
US9192685B2 (en) * | 2008-10-07 | 2015-11-24 | Bracco Suisse S.A. | Targeting construct comprising anti-polymer antibody and contrast/therapeutic agents binding to the same |
SI2340038T1 (en) | 2008-10-10 | 2018-05-31 | Children's Medical Center Corporation | A biochemically stabilized HIV-1 ENV TRIMER vaccine |
CA2740440A1 (en) | 2008-10-14 | 2010-04-22 | Dyax Corp. | Use of igf-ii/igf-iie binding proteins for the treatment and prevention of systemic sclerosis-associated pulmonary fibrosis |
CA2932207A1 (en) | 2008-10-20 | 2010-12-09 | Abbvie Inc. | Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography |
EP2350270B1 (de) | 2008-10-24 | 2018-03-07 | The Government of the United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health & Human Services | Menschliche ebolavirus-spezies sowie zusammensetzungen und verfahren dafür |
CA2739352C (en) | 2008-10-29 | 2021-07-13 | Wyeth Llc | Methods for purification of single domain antigen binding molecules |
DK3199553T3 (da) | 2008-10-29 | 2019-07-22 | Circular Commitment Company | Fremgangsmåder og midler til diagnosticering og behandling af hepatocellulært carcinom |
KR101581986B1 (ko) | 2008-10-29 | 2016-01-04 | 아블린쓰 엔.브이. | 단일 도메인 항원 결합 분자의 제형 |
US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
KR101683033B1 (ko) | 2008-10-31 | 2016-12-06 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 톨-유사 수용체 3 길항제 |
US9528160B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-12-27 | Adaptive Biotechnolgies Corp. | Rare clonotypes and uses thereof |
US8628927B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-01-14 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
EP2356251A1 (de) | 2008-11-07 | 2011-08-17 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Teneurin und krebs |
DK2356270T3 (da) | 2008-11-07 | 2016-12-12 | Fabrus Llc | Kombinatoriske antistofbiblioteker og anvendelser deraf |
US9506119B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-11-29 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method of sequence determination using sequence tags |
US8298533B2 (en) | 2008-11-07 | 2012-10-30 | Medimmune Limited | Antibodies to IL-1R1 |
ES2523740T3 (es) | 2008-11-07 | 2014-12-01 | Galaxy Biotech, Llc | Anticuerpos monoclonales para el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 2 |
US8748103B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-06-10 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
GB2467704B (en) | 2008-11-07 | 2011-08-24 | Mlc Dx Inc | A method for determining a profile of recombined DNA sequences in T-cells and/or B-cells |
US9365901B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-06-14 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia |
US20110293605A1 (en) | 2008-11-12 | 2011-12-01 | Hasige Sathish | Antibody formulation |
EP2189539B2 (de) | 2008-11-21 | 2018-06-13 | Chimera Biotec GmbH | Konjugatkomplexe zum Analytnachweis |
WO2010062995A2 (en) | 2008-11-26 | 2010-06-03 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for regulating collagen and smooth muscle actin expression by serpine2 |
WO2010062960A2 (en) | 2008-11-26 | 2010-06-03 | Cedars-Sinai Medical Center | METHODS OF DETERMINING RESPONSIVENESS TO ANTI-TNFα THERAPY IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE |
DK2370593T3 (en) | 2008-11-28 | 2016-07-04 | Univ Emory | A method for determining the effect of PD-1 Antagonists |
GB0822011D0 (en) | 2008-12-02 | 2009-01-07 | Queen Mary & Westfield College | Treatment |
CA2745111A1 (en) | 2008-12-03 | 2010-06-10 | Research Development Foundation | Modulation of olfml-3 mediated angiogenesis |
BRPI0922807A2 (pt) * | 2008-12-04 | 2015-12-22 | Abbott Lab | imonuglobulinas de domínio variável duplo e usos dos mesmos |
AU2009324037B2 (en) | 2008-12-05 | 2015-07-30 | Glaxo Group Limited | Methods for selecting protease resistant polypeptides |
AU2009325878B2 (en) | 2008-12-08 | 2014-01-16 | Compugen Ltd. | TMEM154 polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics |
SI2376535T1 (sl) | 2008-12-09 | 2017-07-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t |
EA201100943A1 (ru) | 2008-12-16 | 2012-05-30 | Новартис Аг | Системы дрожжевого дисплея |
SI2786762T1 (sl) | 2008-12-19 | 2019-07-31 | Macrogenics, Inc. | Kovalentna diatelesa in njihove uporabe |
BRPI0923652A2 (pt) | 2008-12-26 | 2016-10-18 | Forerunner Pharma Res Co Ltd | diagnóstico e tratamento de câncer usando anticorpo anti-lgr7 |
US20120003235A1 (en) | 2008-12-31 | 2012-01-05 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-lymphotoxin antibodies |
EP2379116B1 (de) | 2009-01-07 | 2015-08-26 | Philogen S.p.A. | Mit endometriose assoziierte antigene |
US9181315B2 (en) | 2009-01-08 | 2015-11-10 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for induced brown fat differentiation |
GB0900425D0 (en) | 2009-01-12 | 2009-02-11 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
CA2749572A1 (en) | 2009-01-14 | 2010-07-22 | Iq Therapeutics Bv | Combination antibodies for the treatment and prevention of disease caused by bacillus anthracis and related bacteria and their toxins |
PT2387627E (pt) | 2009-01-15 | 2016-06-03 | Adaptive Biotechnologies Corp | Determinação do perfil de imunidade adaptativa e métodos de geração de anticorpos monoclonais |
BRPI1007345A2 (pt) | 2009-01-20 | 2019-04-16 | H. ZADEH Homayoun | regeneração óssea de anticorpo mediado |
CA2750581A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-29 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Pta089 protein |
WO2010085590A1 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Biosynexus Incorporated | Opsonic and protective antibodies specific for lipoteichoic acid gram positive bacteria |
EP2389587B1 (de) | 2009-01-26 | 2013-12-25 | Electrophoretics Limited | Diagnostisches und prognostisches verfahren in verbindung mit morbus alzheimer |
US20110165063A1 (en) * | 2009-01-29 | 2011-07-07 | Abbott Laboratories | Il-1 binding proteins |
KR20110110349A (ko) * | 2009-01-29 | 2011-10-06 | 아보트 러보러터리즈 | Il-1 결합 단백질 |
WO2010087702A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Stichting Katholieke Universiteit | TET2 gene as a marker for diagnosing a myelodysuplastic syndrome (MDS) or an acute myeloid leukemia (AML) and determining the prognosis in a subject |
WO2010087927A2 (en) | 2009-02-02 | 2010-08-05 | Medimmune, Llc | Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus |
EP3360879A1 (de) | 2009-02-05 | 2018-08-15 | ImmunoGen, Inc. | Benzodiazepinderivate als cytotoxischen agenten |
US20120165340A1 (en) | 2009-02-11 | 2012-06-28 | Ludwing Institute For Cancer Research Ltd. | Pten phosphorylation-driven resistance to cancer treatment and altered patient prognosis |
US9364477B2 (en) | 2009-02-12 | 2016-06-14 | Cell Signaling Technology, Inc. | Mutant ROS expression in human cancer |
EP2396035A4 (de) | 2009-02-12 | 2012-09-12 | Human Genome Sciences Inc | Verwendung von antagonisten des b-lymphozyten-stimulatorproteins zur förderung von transplantationstoleranz |
LT2398498T (lt) * | 2009-02-17 | 2019-01-10 | Ucb Biopharma Sprl | Antikūno molekulės, pasižyminčios specifiškumu žmogaus ox40 |
US9671400B2 (en) | 2009-02-19 | 2017-06-06 | Dako Denmark A/S | Conjugate molecules |
CA2753263A1 (en) | 2009-02-24 | 2010-09-02 | Glaxo Group Limited | Multivalent and/or multispecific rankl-binding constructs |
CA2753332A1 (en) | 2009-02-24 | 2010-09-02 | Glaxo Group Limited | Antigen-binding constructs |
US8030026B2 (en) | 2009-02-24 | 2011-10-04 | Abbott Laboratories | Antibodies to troponin I and methods of use thereof |
CA2753287A1 (en) | 2009-02-24 | 2010-09-02 | Glaxo Group Limited | Antigen-binding constructs |
GB0903325D0 (en) | 2009-02-26 | 2009-04-08 | Univ Aberdeen | Antibody molecules |
EP2810652A3 (de) | 2009-03-05 | 2015-03-11 | AbbVie Inc. | IL-17-bindende Proteine |
WO2010102167A1 (en) | 2009-03-05 | 2010-09-10 | Becton, Dickinson And Company | Matrix metalloproteinase-7 (mmp-7) monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of ovarian cancer |
BRPI1009232B1 (pt) | 2009-03-05 | 2022-05-03 | E.R. Squibb & Sons, Llc. | Anticorpo monoclonal isolado ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, ou um fragmento de anticorpo, composição que os compreende, molécula de ácido nucleico, hibridoma e métodos para a preparação de um anticorpo anti-cadm1 |
WO2010100247A1 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Novel therapy for anxiety |
WO2010102177A1 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Becton, Dickinson And Company | Glycodelin monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of ovarian cancer |
KR101667227B1 (ko) | 2009-03-10 | 2016-10-18 | 가부시키가이샤 진 테크노 사이언스 | 인간화된 k33n 단일 클론 항체의 제조, 발현 및 해석 |
GB0904214D0 (en) | 2009-03-11 | 2009-04-22 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
GB0904321D0 (en) | 2009-03-12 | 2009-04-22 | Cambridge Entpr Ltd | Modulation of T-cell mediated immune responses |
US8455203B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-06-04 | Allergan, Inc. | Immuno-based retargeted endopeptidase activity assays |
JP2010210772A (ja) | 2009-03-13 | 2010-09-24 | Dainippon Screen Mfg Co Ltd | 液晶表示装置の製造方法 |
WO2010106542A2 (en) | 2009-03-19 | 2010-09-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | USE OF NKp46 FOR PREVENTING DIABETES |
WO2010108153A2 (en) | 2009-03-20 | 2010-09-23 | Amgen Inc. | Carrier immunoglobulins and uses thereof |
US8883153B2 (en) | 2009-03-27 | 2014-11-11 | The Research for The State University of New York | Methods for preventing and treating angioedema |
CA2787099A1 (en) | 2009-03-30 | 2010-10-14 | Anice C. Lowen | Influenza virus hemagglutinin polypeptides containing stem domains, vaccines and uses thereof |
AU2010236787A1 (en) | 2009-04-01 | 2011-11-10 | Genentech, Inc. | Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use |
AU2010231494B2 (en) | 2009-04-03 | 2016-01-07 | Decode Genetics Ehf | Genetic markers for risk management of atrial fibrillation and stroke |
GB0905972D0 (en) | 2009-04-06 | 2009-05-20 | Medical Res Council | Antibodies against IL-17BR |
ES2581488T3 (es) | 2009-04-08 | 2016-09-06 | Lipum Ab | Nuevos métodos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias |
US8575316B2 (en) | 2009-04-09 | 2013-11-05 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-Siglec-15 antibody |
EP2417984B1 (de) | 2009-04-10 | 2016-03-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Verfahren zur behandlung von blutkrebs mittels anti-tim-antikörper |
EP2241323A1 (de) | 2009-04-14 | 2010-10-20 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Tenascin-W und Hirnkrebs |
US8722860B2 (en) | 2009-04-16 | 2014-05-13 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-TNF-α antibodies and their uses |
US20120052064A1 (en) | 2009-04-17 | 2012-03-01 | Yuuki Ito | Anti-hgf antibody combinational cancer therapies |
SG10201401604VA (en) | 2009-04-20 | 2014-08-28 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Antibodies Specific To Cadherin-17 |
US9062116B2 (en) | 2009-04-23 | 2015-06-23 | Infinity Pharmaceuticals, Inc. | Anti-fatty acid amide hydrolase-2 antibodies and uses thereof |
WO2010126066A1 (ja) | 2009-04-27 | 2010-11-04 | 協和発酵キリン株式会社 | 血液腫瘍治療を目的とした抗IL-3Rα抗体 |
WO2010125566A2 (en) | 2009-04-27 | 2010-11-04 | Technion Research And Development Foundation Ltd. | Markers for cancer detection |
MX2011011338A (es) | 2009-04-27 | 2012-04-19 | Novartis Ag | Composiciones y metodos de uso para anticuerpos terapeuticos especificos para la subunidad beta1 del receptor de il-12. |
JP5766179B2 (ja) | 2009-04-27 | 2015-08-19 | ノバルティス アーゲー | 筋肉増殖を増加させるための組成物および方法 |
EP2424891B1 (de) | 2009-04-29 | 2014-06-11 | The Henry M. Jackson Foundation for the Advancement of Military Medicine, Inc. | Monoklonale erg-antikörper |
MY180699A (en) | 2009-04-29 | 2020-12-07 | Janssen Biotech Inc | Toll-like receptor 3 antagonists |
JP5677411B2 (ja) | 2009-04-29 | 2015-02-25 | アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド | 自動注入機器 |
US8455249B2 (en) | 2009-05-01 | 2013-06-04 | The University Of Tokyo | Highly effective anti-cadherin antibody for induction of antibody-dependent cellular cytotoxicity in vivo |
UY32608A (es) | 2009-05-04 | 2010-12-31 | Pangenetics 110 B V | Anticuerpos contra el factor de crecimiento nervioso (ngf) con una estabilidad in vivo mejorada |
PE20160652A1 (es) | 2009-05-05 | 2016-07-09 | Novimmune Sa | Anticuerpos que se unen a il-17f |
EP2270053A1 (de) | 2009-05-11 | 2011-01-05 | U3 Pharma GmbH | Humanisierte AXL-Antikörper |
CA2762837C (en) | 2009-05-20 | 2021-08-03 | Novimmune S.A. | Synthetic polypeptide libraries and methods for generating naturally diversified polypeptide variants |
AU2010254136B2 (en) | 2009-05-26 | 2016-09-29 | Mount Sinai School Of Medicine | Monoclonal antibodies against influenza virus generated by cyclical administration and uses thereof |
US8685896B2 (en) | 2009-05-29 | 2014-04-01 | Morphosys Ag | Collection and methods for its use |
EP2436397B1 (de) | 2009-05-29 | 2017-05-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pharmazeutische zusammensetzung mit einem antagonisten eines liganden der egf-familie als bestandteil |
ES2726945T3 (es) | 2009-06-03 | 2019-10-10 | Immunogen Inc | Métodos de conjugación |
EP2261242A1 (de) | 2009-06-10 | 2010-12-15 | Universite Catholique De Louvain | Aspartat-N-Acetyltransferaseenzym, Diagnoseverfahren und therapeutisches Verfahren |
MX346002B (es) | 2009-06-17 | 2017-03-01 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Anticuerpos anti-vegf y sus usos. |
WO2011005481A1 (en) | 2009-06-22 | 2011-01-13 | Medimmune, Llc | ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION |
GB0910725D0 (en) | 2009-06-22 | 2009-08-05 | Heptares Therapeutics Ltd | Mutant proteins and methods for producing them |
US20100330571A1 (en) | 2009-06-25 | 2010-12-30 | Robins Harlan S | Method of measuring adaptive immunity |
US20120101262A1 (en) | 2009-06-25 | 2012-04-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Protein purification by caprylic acid (octanoic acid) precipitation |
WO2011000543A1 (en) | 2009-06-30 | 2011-01-06 | Philochem Ag | Murine antibody display library |
EP2272979A1 (de) | 2009-06-30 | 2011-01-12 | Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) | Verfahren zum Testen einer Person, die eine Prädisposition für Krebs aufzuweisen scheint |
CA2766861A1 (en) | 2009-07-09 | 2011-01-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | In vivo tumor vasculature imaging |
NZ598009A (en) | 2009-07-10 | 2013-11-29 | Decode Genetics Ehf | Genetic markers associated with risk of diabetes mellitus |
US9217157B2 (en) | 2009-07-27 | 2015-12-22 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Recombinant influenza viruses and uses thereof |
US8828406B2 (en) | 2009-07-30 | 2014-09-09 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Influenza viruses and uses thereof |
SG10201404340TA (en) | 2009-07-31 | 2014-10-30 | Shin Maeda | Cancer metastasis inhibitor |
US9259476B2 (en) | 2009-07-31 | 2016-02-16 | Wayne State University | Monophosphorylated lipid A derivatives |
CN102596220A (zh) | 2009-07-31 | 2012-07-18 | 韦恩州立大学 | 单磷酸化的脂质a衍生物 |
US8568719B2 (en) | 2009-08-13 | 2013-10-29 | Crucell Holland B.V. | Antibodies against human respiratory syncytial virus (RSV) and methods of use |
AU2010285974A1 (en) | 2009-08-17 | 2012-03-22 | Forerunner Pharma Research Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising anti-HB-EGF antibody as active ingredient |
WO2011021146A1 (en) | 2009-08-20 | 2011-02-24 | Pfizer Inc. | Osteopontin antibodies |
GB0914691D0 (en) | 2009-08-21 | 2009-09-30 | Lonza Biologics Plc | Immunoglobulin variants |
EP2292266A1 (de) | 2009-08-27 | 2011-03-09 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung | Behandlung von Krebs durch Modulation von Copine III |
EP3029070A1 (de) | 2009-08-29 | 2016-06-08 | AbbVie Inc. | Therapeutische dll4-bindende proteine |
WO2011026122A2 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Amplimmune, Inc. | B7-h4 fusion proteins and methods of use thereof |
KR20120060877A (ko) | 2009-09-01 | 2012-06-12 | 아보트 러보러터리즈 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
US20110059111A1 (en) | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center | Mammalian receptors as targets for antibody and active vaccination therapy against mold infections |
WO2011029823A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Novartis Ag | Monoclonal antibody reactive with cd63 when expressed at the surface of degranulated mast cells |
EP2475682B1 (de) | 2009-09-10 | 2018-01-31 | UCB Biopharma SPRL | Polyvalente antikörper |
KR20140048229A (ko) | 2009-09-14 | 2014-04-23 | 애브비 인코포레이티드 | 건선을 치료하는 방법 |
JP2013504602A (ja) * | 2009-09-14 | 2013-02-07 | ダイアックス コーポレーション | 新しく設計したhccdr3を含む遺伝子パッケージライブラリー |
PL2477656T3 (pl) | 2009-09-15 | 2017-09-29 | Csl Limited | Leczenie stanów neurologicznych |
EP2478101A1 (de) | 2009-09-16 | 2012-07-25 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut | Fra-1-zielgene als wirkstofftargets zur behandlung von krebs |
RU2015153109A (ru) | 2009-09-16 | 2019-01-15 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применения |
CA2774260C (en) | 2009-09-16 | 2018-10-09 | Immunomedics, Inc. | Class i anti-cea antibodies and uses thereof |
US20110189183A1 (en) | 2009-09-18 | 2011-08-04 | Robert Anthony Williamson | Antibodies against candida, collections thereof and methods of use |
EP2305717A1 (de) | 2009-09-21 | 2011-04-06 | Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen | Hemmung von TNIK zur Behandlung von Darmkrebs |
EP2480573A1 (de) | 2009-09-22 | 2012-08-01 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Behandlung von krebs durch modulation von mex-3 |
WO2011037983A1 (en) | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Medarex, Inc. | Cation exchange chromatography |
TW201118166A (en) | 2009-09-24 | 2011-06-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | HLA class I-recognizing antibodies |
US8926976B2 (en) | 2009-09-25 | 2015-01-06 | Xoma Technology Ltd. | Modulators |
US9598692B2 (en) | 2009-09-25 | 2017-03-21 | University Of Oslo | Multivalent phage display systems and methods |
US9885711B2 (en) | 2009-09-25 | 2018-02-06 | Xoma Technology Ltd. | Screening methods |
GB201005063D0 (en) | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
WO2011038290A2 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | The U. S. A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 and their use |
US20110076232A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-03-31 | Ludwig Institute For Cancer Research | Specific binding proteins and uses thereof |
WO2011041584A2 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for modulation of autophagy through the modulation of autophagy-enhancing gene products |
WO2011040973A2 (en) | 2009-10-02 | 2011-04-07 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Tnf-immunoconjugates with fibroblast activation protein antibodies and methods and uses thereof |
CA2776037A1 (en) | 2009-10-02 | 2011-04-07 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd | Anti-fibroblast activation protein antibodies and methods and uses thereof |
AR078470A1 (es) | 2009-10-02 | 2011-11-09 | Sanofi Aventis | Anticuerpos que se unen especificamente al receptor epha2 |
EP2486023A4 (de) | 2009-10-06 | 2014-05-07 | Immunogen Inc | Wirkungsstarke konjugate und hydrophile binder |
US9096877B2 (en) | 2009-10-07 | 2015-08-04 | Macrogenics, Inc. | Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use |
EP2470569A1 (de) | 2009-10-13 | 2012-07-04 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Antikörper gegen epha10 |
WO2011045352A2 (en) | 2009-10-15 | 2011-04-21 | Novartis Forschungsstiftung | Spleen tyrosine kinase and brain cancers |
AU2010306677B2 (en) | 2009-10-15 | 2013-05-23 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
RS60577B1 (sr) | 2009-10-20 | 2020-08-31 | Abbvie Inc | Izolacija i prečišćavanje anti-il-13 antitela upotrebom protein a afinitetne hromatografije |
EP2491390B1 (de) | 2009-10-20 | 2014-03-26 | Dako Denmark A/S | Immunochemischer nachweis von single-target-einheiten |
US20110098862A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-04-28 | ExxonMobil Research Engineering Company Law Department | Multi-stage processes and control thereof |
GB0922434D0 (en) | 2009-12-22 | 2010-02-03 | Ucb Pharma Sa | antibodies and fragments thereof |
US9234037B2 (en) | 2009-10-27 | 2016-01-12 | Ucb Biopharma Sprl | Method to generate antibodies to ion channels |
GB0922435D0 (en) | 2009-12-22 | 2010-02-03 | Ucb Pharma Sa | Method |
CN102781963B (zh) | 2009-10-27 | 2018-02-16 | Ucb医药有限公司 | 功能修饰性NAv1.7抗体 |
UY32979A (es) | 2009-10-28 | 2011-02-28 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
TW201122101A (en) | 2009-10-28 | 2011-07-01 | Facet Biotech Corp | Anti-EGFR antibodies and their uses |
US20120213801A1 (en) | 2009-10-30 | 2012-08-23 | Ekaterina Gresko | Phosphorylated Twist1 and cancer |
KR101836217B1 (ko) | 2009-10-30 | 2018-03-08 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | Il-17a 길항제 |
WO2011053707A1 (en) | 2009-10-31 | 2011-05-05 | Abbott Laboratories | Antibodies to receptor for advanced glycation end products (rage) and uses thereof |
WO2011054007A1 (en) | 2009-11-02 | 2011-05-05 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Ror1 as therapeutic and diagnostic target |
AU2010315101B2 (en) | 2009-11-04 | 2016-01-28 | Fabrus Llc | Methods for affinity maturation-based antibody optimization |
EP2496243A2 (de) | 2009-11-04 | 2012-09-12 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Neuartige verbindungen zur modulierung der gefässneubildung und behandlungsverfahren mit diesen verbindungen |
US20110165648A1 (en) | 2009-11-04 | 2011-07-07 | Menno Van Lookeren Campagne | Co-crystal structure of factor D and anti-factor D antibody |
EP2496944A2 (de) | 2009-11-05 | 2012-09-12 | Novartis AG | Prädiktive biomarker für die progression von fibrose |
US9244063B2 (en) | 2009-11-11 | 2016-01-26 | Gentian As | Immunoassay for assessing related analytes of different origin |
EP2499159B1 (de) | 2009-11-13 | 2017-01-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Zusammensetzungen, kits und verfahren zur diagnose, prognose, überwachung, behandlung und modulierung von auf transplantationen folgenden lymphoproliferativen erkrankungen und hypoxievermittelten angiogeneseerkrankungen mithilfe von galectin-1 |
GB0920127D0 (en) | 2009-11-17 | 2009-12-30 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
DK2501822T3 (da) | 2009-11-17 | 2017-11-27 | Squibb & Sons Llc | Fremgangsmåder til forbedret proteinproduktion |
EP2325311A1 (de) | 2009-11-18 | 2011-05-25 | Pierre Fabre Medicament | Neuer Phagenanzeigevektor |
GB0920324D0 (en) | 2009-11-19 | 2010-01-06 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
TW201129379A (en) | 2009-11-20 | 2011-09-01 | Amgen Inc | Anti-Orai1 antigen binding proteins and uses thereof |
US9428586B2 (en) | 2009-12-01 | 2016-08-30 | Compugen Ltd | Heparanase splice variant |
SG181563A1 (en) | 2009-12-08 | 2012-07-30 | Abbott Gmbh & Co Kg | Monoclonal antibodies against the rgm a protein for use in the treatment of retinal nerve fiber layer degeneration |
MX2012006443A (es) | 2009-12-09 | 2012-06-28 | Inst Nat Sante Rech Med | Anticuerpos monoclonales que se enlazan a b7h6 y usos de los mismos. |
EP2513148B1 (de) | 2009-12-16 | 2016-08-31 | AbbVie Biotherapeutics Inc. | Anti-her2-antikörper und ihre verwendung |
US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
EA201270662A1 (ru) | 2009-12-23 | 2013-01-30 | 4-Антибоди Аг | Связывающие элементы для человеческого цитамегаловируса |
WO2011084882A2 (en) | 2010-01-05 | 2011-07-14 | Contrafect Corporation | Methods and compositions for enhanced immunological therapy and targeting of gram-positive bacteria |
SI2521568T1 (sl) | 2010-01-06 | 2019-01-31 | Dyax Corp. | Proteini, ki vežejo plazemski kalikrein |
GB201000467D0 (en) | 2010-01-12 | 2010-02-24 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
WO2011088163A1 (en) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for modulating skeletal remodeling and patterning by modulating shn2 activity, shn3 activity, or shn2 and shn3 activity in combination |
TWI505838B (zh) | 2010-01-20 | 2015-11-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Stabilized antibody solution containing |
US10429384B2 (en) | 2010-01-22 | 2019-10-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of metabolic disorders |
EP2530109A4 (de) | 2010-01-29 | 2013-08-28 | Toray Industries | Harzfolie auf polymilchsäurebasis |
US20120014956A1 (en) | 2010-02-02 | 2012-01-19 | Hartmut Kupper | Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor |
EP2354244A1 (de) | 2010-02-04 | 2011-08-10 | Stichting Top Institute Food and Nutrition | MBL2 als Marker für die leberspezifische Insulinresistenz |
EP2354245A1 (de) | 2010-02-04 | 2011-08-10 | Stichting Top Institute Food and Nutrition | MBL2 als Marker für die hepatische PPAR-Aktivität |
TWI518325B (zh) | 2010-02-04 | 2016-01-21 | 自治醫科大學 | 對alk抑制劑具有先抗性或後抗性癌症的識別、判斷和治療 |
WO2011097511A1 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services | REGULATORY B CELLS (tBREGS) AND THEIR USE |
ES2656168T3 (es) | 2010-02-10 | 2018-02-23 | Fujifilm Ri Pharma Co., Ltd. | Anticuerpo anti cadherina marcado con un metal radioactivo |
MX2012009318A (es) | 2010-02-10 | 2012-09-07 | Novartis Ag | Metodos y compuestos para el crecimiento muscular. |
KR20120117931A (ko) | 2010-02-12 | 2012-10-24 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 확인 및 분리하는 방법 |
EP2536760A4 (de) | 2010-02-17 | 2013-10-16 | Univ Johns Hopkins | Neuartige phosphorylierung von kardialem troponin i als ein monitor einer kardialen verletzung |
US9701723B2 (en) | 2010-02-18 | 2017-07-11 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Vaccines for use in the prophylaxis and treatment of influenza virus disease |
TW202348631A (zh) | 2010-02-24 | 2023-12-16 | 美商免疫遺傳股份有限公司 | 葉酸受體1抗體類和免疫共軛物類及彼等之用途 |
EP2542582A4 (de) | 2010-03-02 | 2013-12-04 | Abbvie Inc | Therapeutische dll4-bindende proteine |
EP2544688B1 (de) | 2010-03-02 | 2016-09-07 | President and Fellows of Harvard College | Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung des angelman-syndroms |
US10435458B2 (en) | 2010-03-04 | 2019-10-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding |
EP2542578A1 (de) | 2010-03-05 | 2013-01-09 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Smoc1, tenascin-c und hirnkrebs |
CN102971012B (zh) | 2010-03-12 | 2016-05-04 | 伊缪诺金公司 | Cd37结合分子及其免疫缀合物 |
WO2011116026A2 (en) | 2010-03-15 | 2011-09-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Inhibitors of beta integrin-g protein alpha subunit binding interactions |
US20110256135A1 (en) | 2010-03-17 | 2011-10-20 | Wolfgang Fraunhofer | Anti-nerve growth factor (ngf) antibody compositions |
US10706955B2 (en) | 2010-03-23 | 2020-07-07 | Iogenetics, Llc | Bioinformatic processes for determination of peptide binding |
ES2717883T3 (es) | 2010-03-25 | 2019-06-26 | Ucb Biopharma Sprl | Moléculas de DVD-LG estabilizadas con disulfuro |
GB201005064D0 (en) | 2010-03-25 | 2010-05-12 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
US20150231215A1 (en) | 2012-06-22 | 2015-08-20 | Randolph J. Noelle | VISTA Antagonist and Methods of Use |
TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
US10745467B2 (en) | 2010-03-26 | 2020-08-18 | The Trustees Of Dartmouth College | VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders |
US9631018B2 (en) | 2010-03-26 | 2017-04-25 | The Trustees Of Dartmouth College | Vista regulatory T cell mediator protein, vista binding agents and use thereof |
AU2011235220B2 (en) | 2010-03-30 | 2016-03-10 | Mount Sinai School Of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
TWI667257B (zh) | 2010-03-30 | 2019-08-01 | 中外製藥股份有限公司 | 促進抗原消失之具有經修飾的FcRn親和力之抗體 |
SI2552961T1 (en) | 2010-03-30 | 2018-02-28 | Janssen Biotech, Inc. | Humanized antibodies against IL-25 |
BR112012026227A2 (pt) | 2010-04-13 | 2020-08-04 | Celldex Therapeutics, Inc. | anticorpo monoclonal humano ou humanizado, molécula biespecífica, vetor de expressão, célula transformada, composição, e, usos de um anticorpo |
CA2796339C (en) | 2010-04-15 | 2020-03-31 | Abbott Laboratories | Amyloid-beta binding proteins |
WO2011131611A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-27 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Modulating xrn1 |
EP2380909A1 (de) | 2010-04-26 | 2011-10-26 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | An Brustkrebs beteiligtes Protein PTK-7 |
NZ629829A (en) | 2010-04-30 | 2015-11-27 | Alexion Pharma Inc | Anti-c5a antibodies and methods for using the antibodies |
WO2011140151A1 (en) | 2010-05-04 | 2011-11-10 | Dyax Corp. | Antibodies against epidermal growth factor receptor (egfr) |
MX2012012441A (es) | 2010-05-04 | 2013-02-26 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento epidermico (egfr) y usos de los mismos. |
ES2949159T3 (es) | 2010-05-06 | 2023-09-26 | Novartis Ag | Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos de proteína 6 relacionada con lipoproteínas de baja densidad (LRP6) |
IL208820A0 (en) | 2010-10-19 | 2011-01-31 | Rachel Teitelbaum | Biologic female contraceptives |
KR20130066631A (ko) | 2010-05-06 | 2013-06-20 | 노파르티스 아게 | 치료적 저밀도 지단백질-관련 단백질 6 (lrp6) 다가 항체에 대한 조성물 및 사용 방법 |
US20110293629A1 (en) | 2010-05-14 | 2011-12-01 | Bastid Jeremy | Methods of Treating and/or Preventing Cell Proliferation Disorders with IL-17 Antagonists |
SI2571532T1 (sl) | 2010-05-14 | 2017-10-30 | Abbvie Inc. | Proteini, ki vežejo IL-1 |
EA027039B1 (ru) | 2010-05-14 | 2017-06-30 | Эмджен Инк. | Композиции с высокой концентрацией антител |
GB201008541D0 (en) | 2010-05-21 | 2010-07-07 | Univ Geneve | Diagnostic methods |
JP5904552B2 (ja) | 2010-05-28 | 2016-04-13 | 国立研究開発法人国立がん研究センター | 膵癌治療剤 |
EP4115906A1 (de) | 2010-05-28 | 2023-01-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Verstärker der antitumor t-zellenantwort |
JP2013534515A (ja) | 2010-06-01 | 2013-09-05 | モナシュ ユニバーシティ | プロセシングされていない受容体型チロシンキナーゼc−METに対する抗体 |
US8747854B2 (en) | 2010-06-03 | 2014-06-10 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Methods of treating moderate to severe hidradenitis suppurativa with anti-TNF-alpha antibodies |
WO2012047324A2 (en) | 2010-06-10 | 2012-04-12 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for amplification and phage display |
US20130089538A1 (en) | 2010-06-10 | 2013-04-11 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute forBiomedical Researh | Treating cancer by modulating mammalian sterile 20-like kinase 3 |
PT2580240T (pt) | 2010-06-14 | 2019-03-29 | Lykera Biomed S A | Anticorpos as100a4 e utilizações terapêuticas dos mesmos |
AU2011268310A1 (en) | 2010-06-16 | 2013-01-10 | Abbvie Inc. | Comparison of protein samples |
NZ603581A (en) | 2010-06-19 | 2015-05-29 | Sloan Kettering Inst Cancer | Anti-gd2 antibodies |
CA2803391C (en) | 2010-06-22 | 2021-11-09 | Neogenix Oncology, Inc. | Npc1 antibodies that bind a muc5ac epitope |
AU2011268780A1 (en) | 2010-06-25 | 2013-02-07 | Aston University | Glycoproteins having lipid mobilizing properties and therapeutic uses thereof |
US20130315895A1 (en) | 2010-07-01 | 2013-11-28 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET |
WO2012004565A1 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Robert White | Cancer biomarker brf1 |
JP2013533746A (ja) | 2010-07-06 | 2013-08-29 | アベオ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 抗ron抗体 |
KR102007045B1 (ko) | 2010-07-07 | 2019-08-05 | 티유비아이티에이케이 | 혈관 내피 성장인자 2(vegfr-2/kdr)에 결합하여 그것의 활성을 차단하는 재조합 항체 구조 |
WO2012006500A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hepatitis c virus core protein |
EA027835B1 (ru) | 2010-07-09 | 2017-09-29 | Круселл Холланд Б.В. | Антитела против респираторно-синцитиального вируса (рсв) и способы их применения |
EA201390085A1 (ru) | 2010-07-09 | 2013-06-28 | Экселиксис, Инк. | Композиции ингибиторов киназ для лечения рака |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
NZ605449A (en) | 2010-07-09 | 2015-03-27 | Genentech Inc | Anti-neuropilin antibodies and methods of use |
MX2013000301A (es) | 2010-07-09 | 2013-05-09 | Biogen Idec Hemophilia Inc | Factores quimericos de coagulacion. |
DK2593475T3 (en) | 2010-07-14 | 2016-05-30 | Merck Sharp & Dohme | Anti-ADDL monoclonal antibody and uses thereof |
WO2012009705A1 (en) | 2010-07-15 | 2012-01-19 | Zyngenia, Inc. | Ang-2 binding complexes and uses thereof |
WO2012007880A2 (en) | 2010-07-16 | 2012-01-19 | Ablynx Nv | Modified single domain antigen binding molecules and uses thereof |
EP4219805A1 (de) | 2010-07-16 | 2023-08-02 | Adimab, LLC | Antikörperbibliotheken |
AU2011283646B2 (en) | 2010-07-30 | 2015-07-09 | Novartis Ag | Fibronectin cradle molecules and libraries thereof |
CA2807127C (en) | 2010-08-02 | 2019-02-12 | Leslie S. Johnson | Covalent diabodies and uses thereof |
WO2012018387A2 (en) | 2010-08-02 | 2012-02-09 | Population Diagnotics, Inc. | Compositions and methods for discovery of causative mutations in genetic disorders |
KR20130100118A (ko) | 2010-08-03 | 2013-09-09 | 아비에 인코포레이티드 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
WO2012019024A2 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Immunogen, Inc. | Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof |
WO2012019061A2 (en) | 2010-08-05 | 2012-02-09 | Stem Centrx, Inc. | Novel effectors and methods of use |
US20120101108A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-04-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer |
AU2011289426A1 (en) | 2010-08-10 | 2013-02-28 | Amgen Inc. | Dual function in vitro target binding assay for the detection of neutralizing antibodies against target antibodies |
EP2420250A1 (de) | 2010-08-13 | 2012-02-22 | Universitätsklinikum Münster | Anti-Syndecan-4-Antikörper |
EP2603526A1 (de) | 2010-08-13 | 2013-06-19 | Medimmune Limited | Monomere polypeptide mit abweichenden fc-regionen und verwendungsverfahren |
EP3533803B1 (de) | 2010-08-14 | 2021-10-27 | AbbVie Inc. | Anti-amyloid-beta antikörper |
WO2012022734A2 (en) | 2010-08-16 | 2012-02-23 | Medimmune Limited | Anti-icam-1 antibodies and methods of use |
MA34472B1 (fr) | 2010-08-17 | 2013-08-01 | Stichting Katholieke Univ | Nouvelle méthode de diagnostic de la fièvre q à l'aide d'un test immunologique cellulaire |
HUE058226T2 (hu) | 2010-08-19 | 2022-07-28 | Zoetis Belgium S A | NGF elleni antitestek és alkalmazásuk |
CU24094B1 (es) | 2010-08-20 | 2015-04-29 | Novartis Ag | Anticuerpos para el receptor 3 del factor de crecimiento epidérmico(her3) |
GB201014033D0 (en) | 2010-08-20 | 2010-10-06 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
CA2809433A1 (en) | 2010-08-26 | 2012-03-01 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
SG10201506782XA (en) | 2010-08-27 | 2015-10-29 | Stem Centrx Inc | Notum protein modulators and methods of use |
ES2715177T3 (es) | 2010-09-01 | 2019-06-03 | Genzyme Corp | Tratamiento de infarto de miocardio usando antagonistas de tgf-beta |
WO2012028703A1 (en) | 2010-09-02 | 2012-03-08 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for the prognosis of the progression of cancer |
CN106620693A (zh) | 2010-09-03 | 2017-05-10 | 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 | 新型调节剂及使用方法 |
US20130171159A1 (en) | 2010-09-10 | 2013-07-04 | Brian Arthur Hemmings | Phosphorylated twist1 and metastasis |
EP2614085B1 (de) | 2010-09-10 | 2016-04-20 | Apexigen, Inc. | Anti-il-1-antikörper und verfahren zu ihrer verwendung |
PL2616090T3 (pl) | 2010-09-17 | 2023-12-18 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Stabilizowanie immunoglobulin poprzez wodną formulację z histydyną o ph od słabo kwaśnego do obojętnego |
WO2012035518A1 (en) | 2010-09-17 | 2012-03-22 | Compugen Ltd. | Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma |
US20120122076A1 (en) | 2010-09-20 | 2012-05-17 | Abbott Laboratories | Purification of antibodies using simulated moving bed chromatography |
CA2811678C (en) | 2010-09-21 | 2019-10-01 | Stichting Katholieke Universiteit | Novel method for diagnosing lyme disease using a cellular immunological test |
EP2619226B1 (de) | 2010-09-22 | 2018-09-12 | Amgen Inc. | Träger-immunglobuline und verwendungen davon |
ES2719624T3 (es) | 2010-09-23 | 2019-07-11 | Prec Biologics Inc | Peptidomiméticos de cáncer de colon y de páncreas |
WO2012039756A2 (en) | 2010-09-24 | 2012-03-29 | Full Spectrum Genetics, Inc. | Method of analyzing binding interactions |
EP3050899B1 (de) | 2010-09-27 | 2019-09-04 | Janssen Biotech, Inc. | Antikörper zur bindung von humanem kollagen ii |
PT2621526T (pt) | 2010-09-29 | 2018-08-02 | Seattle Genetics Inc | Conjugados de anticorpo com fármaco (adc) que se ligam a proteínas 191pad12 |
US9005907B2 (en) | 2010-10-01 | 2015-04-14 | St. Jude Children's Research Hospital | Methods and compositions for typing molecular subgroups of medulloblastoma |
US8525237B1 (en) | 2010-10-04 | 2013-09-03 | The Regents Of The University Of California | Electrically conductive polymer nanowires with incorporated viruses |
CN103154037A (zh) | 2010-10-05 | 2013-06-12 | 诺瓦提斯公司 | 抗IL12Rβ1抗体及它们在治疗自身免疫病和炎性疾病中的用途 |
GB201016864D0 (en) | 2010-10-06 | 2010-11-17 | Univ Aston | Therapeutic methods |
BR112013009083B1 (pt) | 2010-10-13 | 2021-08-10 | Janssen Biotech, Inc. | Anticorpos humanos para oncostatina m, seu processo de fabricação, fragmento de ligação a antígeno, composição farmacêutica, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante estavelmente transformada ou transfectada |
JP6000959B2 (ja) | 2010-10-19 | 2016-10-05 | メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ | ヒト抗体ならびに神経疾患の処置のためのその診断的および治療的使用 |
WO2012052391A1 (en) | 2010-10-19 | 2012-04-26 | Glaxo Group Limited | Polypeptide with jmjd3 catalytic activity |
JP6121906B2 (ja) | 2010-10-22 | 2017-04-26 | シアトル ジェネティクス,インコーポレーテッド | アウリスタチン系抗体薬物複合体とPI3K−AKTmTOR経路インヒビターの間の相乗効果 |
EP2632481A1 (de) | 2010-10-25 | 2013-09-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Therapeutische zusammensetzung zur behandlung eines glioblastoms |
EP3326645B1 (de) | 2010-10-25 | 2020-03-18 | Biogen MA Inc. | Verfahren zur bestimmung von unterschieden in einer alpha-4-integrin-aktivität durch korrelation von unterschieden in svcam- und/oder smadcam-ebenen |
AU2011321374B2 (en) | 2010-10-29 | 2016-04-28 | Daiichi Sankyo Company,Limited | Novel anti-DR5 antibody |
EP3404043B1 (de) | 2010-10-29 | 2022-10-26 | Perseus Proteomics Inc. | Anti-cdh3-antikörper mit hoher internalisierungskapazität |
US20130224116A1 (en) | 2010-11-05 | 2013-08-29 | TransBio Ltd. | Markers of Endothelial Progenitor Cells and Uses Thereof |
WO2012062318A1 (en) | 2010-11-08 | 2012-05-18 | Dako Denmark A/S | Quantification of single target molecules in histological samples |
US20140066431A1 (en) | 2010-11-15 | 2014-03-06 | Exelixis, Inc. | Benzoxazepines as Inhibitors of PI3K/mTOR and Methods of Their Use and Manufacture |
EP2640366A2 (de) | 2010-11-15 | 2013-09-25 | Exelixis, Inc. | Benzoxazepine als pi3k/mtor-hemmer sowie verfahren zur ihrer verwendung und herstellung |
WO2012065937A1 (en) | 2010-11-15 | 2012-05-24 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Anti-fungal agents |
US20140199682A1 (en) | 2010-11-17 | 2014-07-17 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Influenza neutralizing agents |
US9072766B2 (en) | 2010-11-18 | 2015-07-07 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods of treating obesity by inhibiting nicotinamide N-methyl transferase (NNMT) |
CN103874707B (zh) | 2010-11-19 | 2017-04-19 | 卫材R&D管理有限公司 | 中和抗‑ccl20抗体 |
EP2640742B1 (de) | 2010-11-19 | 2018-08-15 | MorphoSys AG | Eine sammlung von antikörpersequenzen und deren verwendungen |
US20140378436A9 (en) | 2010-11-24 | 2014-12-25 | Exelixis, Inc. | Benzoxazepines as Inhibitors of PI3K/mTOR and Methods of Their use and Manufacture |
EP2643353A1 (de) | 2010-11-24 | 2013-10-02 | Novartis AG | Multispezifische moleküle |
EP2643351A1 (de) | 2010-11-24 | 2013-10-02 | Glaxo Group Limited | Auf hgf abzielende multispezifische antigenbindende proteine |
AU2011337704B2 (en) | 2010-11-30 | 2017-06-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly |
AR084053A1 (es) | 2010-11-30 | 2013-04-17 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agente terapeutico que induce citotoxicidad |
SG190938A1 (en) | 2010-12-06 | 2013-07-31 | Seattle Genetics Inc | Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer |
WO2012076010A1 (en) | 2010-12-06 | 2012-06-14 | Dako Denmark A/S | Combined histological stain |
EP2648748A1 (de) | 2010-12-08 | 2013-10-16 | Stem Centrx, Inc. | Neuartige modulatoren und verfahren zu ihrer verwendung |
EP2465928A1 (de) | 2010-12-16 | 2012-06-20 | Academisch Medisch Centrum bij de Universiteit van Amsterdam | Behandlung von Th17-vermittelten Krankheiten |
KR20140003467A (ko) | 2010-12-20 | 2014-01-09 | 메디뮨 리미티드 | 항il-18 항체 및 그의 용도 |
EP2655401B1 (de) | 2010-12-20 | 2016-03-09 | The Regents of the University of Michigan | Hemmer der bindeinteraktion des epidermalen wachstumsfaktor-rezeptor-wärmeschock-proteins 90 |
US20120275996A1 (en) | 2010-12-21 | 2012-11-01 | Abbott Laboratories | IL-1 Binding Proteins |
KR20130133247A (ko) | 2010-12-21 | 2013-12-06 | 애브비 인코포레이티드 | Il-1-알파 및 -베타 이특이적 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
JP6147670B2 (ja) | 2010-12-22 | 2017-06-14 | テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド | 改善された半減期を有する修飾された抗体 |
WO2012088381A2 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Continuous directed evolution |
EP2659269B1 (de) | 2010-12-23 | 2016-10-26 | Roche Diagniostics GmbH | Erkennung von posttranslational modifiziertem polypeptid durch ein bivalentes bindungsmolekül |
CN103384681B (zh) | 2010-12-23 | 2018-05-18 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 结合剂 |
SG191153A1 (en) | 2010-12-23 | 2013-07-31 | Hoffmann La Roche | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
CN103384831B (zh) | 2010-12-23 | 2016-02-10 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 通过二价结合剂来检测多肽二聚体 |
US20140038842A1 (en) | 2010-12-28 | 2014-02-06 | Xoma Technology | Cell surface display using pdz domains |
US9598499B2 (en) | 2010-12-30 | 2017-03-21 | Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) | Antigen binding formats for use in therapeutic treatments or diagnostic assays |
GB201100282D0 (en) | 2011-01-07 | 2011-02-23 | Ucb Pharma Sa | Biological methods |
US10208349B2 (en) | 2011-01-07 | 2019-02-19 | Ucb Biopharma Sprl | Lipocalin 2 as a biomarker for IL-17 inhibitor therapy efficacy |
BR112013017951B1 (pt) | 2011-01-14 | 2022-09-27 | UCB Biopharma SRL | Anticorpo de neutralização, sequência de dna isolada, vetor de clonagem ou expressão, processo para a produção do anticorpo, composição farmacêutica, uso de anticorpo e uso da composição farmacêutica |
WO2012097313A2 (en) | 2011-01-14 | 2012-07-19 | The Regents Of The University Of California | Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same |
KR20140009311A (ko) | 2011-01-18 | 2014-01-22 | 암젠 인크 | Nav1.7 넉아웃 마우스 및 이의 용도 |
MX337208B (es) | 2011-01-24 | 2016-02-17 | Abbvie Biotechnology Ltd | Dispositivos de inyeccion automaticos que tienen superficies de agarre sobremoldeadas. |
EP2668210B1 (de) | 2011-01-26 | 2020-06-17 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-kit-antikörper und ihre verwendungen |
WO2012106615A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-09 | Xoma Technology Ltd. | Methods and materials for enhancing functional protein expression in bacteria |
US9956236B2 (en) | 2011-02-07 | 2018-05-01 | Cornell University | Methods for increasing immune responses using agents that directly bind to and activate IRE-1 |
GB201102189D0 (en) | 2011-02-08 | 2011-03-23 | King S College London | Materials and methods relating to cardiovascular imaging |
PE20140303A1 (es) | 2011-02-10 | 2014-03-22 | Roche Glycart Ag | Polipeptidos interleuquina-2 mutantes |
CA2824252A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | Roche Glycart Ag | Improved immunotherapy |
MX346635B (es) | 2011-02-15 | 2017-03-27 | Immunogen Inc | Derivados citotoxicos de la benzodiazepina. |
WO2012110824A1 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Astrazeneca Ab | Binding agents with specificity for a nucleic acid modification |
SA112330278B1 (ar) | 2011-02-18 | 2015-10-09 | ستيم سينتركس، انك. | مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام |
MX352889B (es) | 2011-02-25 | 2017-12-13 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo de fc especifico para fcyriib. |
WO2012133782A1 (ja) | 2011-03-30 | 2012-10-04 | 中外製薬株式会社 | 抗原結合分子の血漿中滞留性と免疫原性を改変する方法 |
WO2012118903A2 (en) | 2011-03-01 | 2012-09-07 | Amgen Inc. | Bispecific binding agents |
CN103501859B (zh) | 2011-03-02 | 2017-08-25 | 博格有限责任公司 | 基于细胞的探询式分析及其应用 |
JP6097702B2 (ja) | 2011-03-03 | 2017-03-15 | アペクシジェン, インコーポレイテッド | 抗il−6受容体抗体およびその使用方法 |
US9383364B2 (en) | 2011-03-07 | 2016-07-05 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Predictive marker of DNMT1 inhibitor therapeutic efficacy and methods of using the marker |
EP2683736B1 (de) | 2011-03-09 | 2018-01-17 | Cell Signaling Technology, Inc. | Verfahren und reagenzien zur erzeugung monoklonaler antikörper |
CA2827759C (en) | 2011-03-10 | 2018-10-16 | Omeros Corporation | Generation of anti-fn14 monoclonal antibodies by ex-vivo accelerated antibody evolution |
WO2012125735A1 (en) | 2011-03-15 | 2012-09-20 | Abott Laboratories | An integrated approach to the isolation and purification of antibodies |
EP3235508B1 (de) | 2011-03-16 | 2020-12-30 | Sanofi | Zubereitungen enthaltend ein antikörperähnliches protein mit dualer v-region |
TW201239355A (en) | 2011-03-23 | 2012-10-01 | Abbott Lab | Methods and systems for the analysis of protein samples |
CN103517920B (zh) | 2011-03-25 | 2018-04-17 | 安进公司 | 抗硬化蛋白(sclerostin)抗体晶体及其制剂 |
WO2012135517A2 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Immunogen, Inc. | Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process |
ME03353B (de) | 2011-03-29 | 2019-10-20 | Immunogen Inc | Herstellung von maytansinoid-antikörperkonjugaten anhand eines einstufigen verfahrens |
CN103547592A (zh) | 2011-03-30 | 2014-01-29 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 使用针对TNFα的单结构域抗体治疗免疫病症的方法 |
WO2012134813A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | St. Jude Children's Research Hospital | Methods and compositions for identifying minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia |
KR20140027211A (ko) | 2011-04-04 | 2014-03-06 | 유니버시티 오브 아이오와 리써치 파운데이션 | 백신 면역원성의 개선 방법 |
US20140186340A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-07-03 | Gilead Biologics, Inc. | Methods and Compositions for Normalization of Tumor Vasculature by Inhibition of LOXL2 |
US20120328567A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-12-27 | Steven Bushnell | Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to ifnb and uses thereof |
US9150644B2 (en) | 2011-04-12 | 2015-10-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies that bind insulin-like growth factor (IGF) I and II |
WO2012140627A1 (en) | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Compugen Ltd. | Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof for treatment of immune related disorders and cancer |
US20140193420A1 (en) | 2011-04-18 | 2014-07-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Diagnosis and treatment of cancer using anti-itm2a antibody |
EP2699691B1 (de) | 2011-04-19 | 2017-10-18 | Dako Denmark A/S | Neues verfahren zur enzymbasierenden signalamplifikation |
LT2699264T (lt) | 2011-04-20 | 2018-07-10 | Medimmune, Llc | Antikūnai ir kitos molekulės, kurios jungiasi prie b7-h1 ir pd-1 |
RS57279B1 (sr) | 2011-04-25 | 2018-08-31 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Anti-b7-h3 antitelo |
EP2702077A2 (de) | 2011-04-27 | 2014-03-05 | AbbVie Inc. | Verfahren zur steuerung des galactosylierungsprofil von rekombinant exprimierten proteinen |
EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
EP3508500A1 (de) | 2011-04-29 | 2019-07-10 | Apexigen, Inc. | Anti-cd40-antikörper und verfahren zur verwendung |
US9598496B2 (en) | 2011-05-09 | 2017-03-21 | Perseus Proteomics Inc. | Antibody capable of specifically recognizing transferrin receptor |
CN103842383B (zh) | 2011-05-16 | 2017-11-03 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | 多特异性fab融合蛋白及其使用方法 |
GB201108272D0 (en) | 2011-05-17 | 2011-06-29 | Cambridge Entpr Ltd | Methods relating to HCMV infected cells |
KR102030531B1 (ko) | 2011-05-21 | 2019-10-10 | 마크로제닉스, 인크. | 탈면역화된 혈청-결합 도메인 및 혈청 반감기를 연장하기 위한 그것의 용도 |
EP2714738B1 (de) | 2011-05-24 | 2018-10-10 | Zyngenia, Inc. | Multivalente und monovalente multispezifische komplexe und ihre verwendungen |
AR086543A1 (es) | 2011-05-25 | 2014-01-08 | Bg Medicine Inc | Inhibidores de galectina-3 y metodos de uso de los mismos, composicion farmaceutica |
EP2714741B1 (de) | 2011-05-25 | 2019-10-30 | Innate Pharma, S.A. | Anti-kir-antikörper zur behandlung entzündlicher erkrankungen |
EP2726510B1 (de) | 2011-05-27 | 2023-03-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Zweifaches targeting |
WO2012163521A1 (en) | 2011-05-27 | 2012-12-06 | Dutalys | Removal of monomeric targets |
EP2714084B1 (de) | 2011-06-02 | 2019-05-22 | Dyax Corp. | Fc-REZEPTOR-BINDENDE PROTEINE |
US8691231B2 (en) | 2011-06-03 | 2014-04-08 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment of tumors expressing predominantly high affinity EGFR ligands or tumors expressing predominantly low affinity EGFR ligands with monoclonal and oligoclonal anti-EGFR antibodies |
SG10201902706VA (en) | 2011-06-03 | 2019-04-29 | Xoma Technology Ltd | Antibodies specific for tgf-beta |
WO2012168259A1 (en) | 2011-06-06 | 2012-12-13 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung | Protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 11 (ptpn11) and triple-negative breast cancer |
US9561274B2 (en) | 2011-06-07 | 2017-02-07 | University Of Hawaii | Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists |
WO2012170740A2 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-13 | University Of Hawaii | Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma |
AU2012266363A1 (en) | 2011-06-10 | 2014-01-09 | Corimmun Gmbh | Binding compounds to human beta1-adrenoreceptor (beta1-AR) and their use in the measurement of auto-anti-beta1-AR antibodies |
HUE038509T2 (hu) | 2011-06-10 | 2018-10-29 | Medimmune Ltd | Pseudomonas PSL elleni kötõmolekula és alkalmazása |
WO2012172495A1 (en) | 2011-06-14 | 2012-12-20 | Novartis Ag | Compositions and methods for antibodies targeting tem8 |
CA2838973A1 (en) | 2011-06-17 | 2012-12-20 | Adrian L. Harris | Methods of enhancing the response to radiation in tumor therapy using anti-dll4 antibodies |
AU2012271413B2 (en) | 2011-06-17 | 2017-07-13 | President And Fellows Of Harvard College | Frizzled 2 as a target for therapeutic antibodies in the treatment of cancer |
WO2012177837A2 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Immunogen, Inc. | Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof |
SG10201805064SA (en) | 2011-06-23 | 2018-07-30 | Ablynx Nv | Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains |
EP2974737A1 (de) | 2011-06-23 | 2016-01-20 | Ablynx N.V. | Verfahren für vorhersage, nachweis und verringerung von aspezifischer proteininterferenz bei tests mit variablen immunglobulin-einzeldomänen |
EP4350345A2 (de) | 2011-06-23 | 2024-04-10 | Ablynx N.V. | Verfahren zur vorhersage, erkennung und reduzierung von aspezifischer proteininterferenz in tests mit variablen immunglobulin-einzeldomänen |
JP2014527036A (ja) | 2011-06-27 | 2014-10-09 | ザ ジャクソン ラボラトリー | 癌および自己免疫疾患の処置のための方法および組成物 |
PE20140756A1 (es) | 2011-06-28 | 2014-07-04 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Anticuerpos que se unen a bst1 |
ME02632B (de) | 2011-06-28 | 2017-06-20 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Therapeutisches und diagnostisches ziel |
AU2012277376B2 (en) | 2011-06-30 | 2016-11-24 | Compugen Ltd. | Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection |
BR112013032630B1 (pt) | 2011-06-30 | 2022-06-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Polipeptídeo heterodimerizado compreendendo região fc de igg |
ES2692519T3 (es) | 2011-07-01 | 2018-12-04 | Novartis Ag | Método para tratar trastornos metabólicos |
EP2734236A4 (de) | 2011-07-13 | 2015-04-15 | Abbvie Inc | Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von asthma mit anti-il-13-antikörpern |
GB201112056D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Univ Leuven Kath | Antibodies |
US9738707B2 (en) | 2011-07-15 | 2017-08-22 | Biogen Ma Inc. | Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
WO2013010955A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Morphosys Ag | Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (mif) and d-dopachrome tautomerase (d-dt) |
WO2013012747A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Rspo binding agents and uses thereof |
EP2548891A1 (de) | 2011-07-18 | 2013-01-23 | Universiteit Maastricht | Humaner monoklonaler Antikörper gegen die Gamma-Untereinheit des Acetylcholin-Rezeptors zur Verwendung bei der Behandlung von Rhabdomyosarkom |
JP6176849B2 (ja) | 2011-07-19 | 2017-08-09 | 中外製薬株式会社 | アルギニンアミドまたはその類似化合物を含む安定なタンパク質含有製剤 |
WO2013015821A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the b12-transcobalamin receptor |
US9120858B2 (en) | 2011-07-22 | 2015-09-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the B12-transcobalamin receptor |
CA2842099A1 (en) | 2011-07-27 | 2013-01-31 | Glaxo Group Limited | Antigen binding constructs |
PT2739311T (pt) | 2011-08-04 | 2018-03-26 | Amgen Inc | Método para tratamento de defeitos de lacunas ósseas |
US8663637B2 (en) | 2011-08-05 | 2014-03-04 | Research Development Foundation | Methods and compositions for modulation of Olfml3 mediated angiogenesis |
JP5944994B2 (ja) | 2011-08-12 | 2016-07-05 | オメロス コーポレーション | 抗fzd10モノクローナル抗体およびそれらの使用方法 |
AU2012296613B2 (en) | 2011-08-15 | 2016-05-12 | Amplimmune, Inc. | Anti-B7-H4 antibodies and their uses |
RU2617970C2 (ru) | 2011-08-23 | 2017-04-28 | Рош Гликарт Аг | Антитела, не содержащие fc-фрагмента, включающие два fab-фрагмента, и способы их применения |
SI2748202T1 (sl) | 2011-08-23 | 2018-10-30 | Roche Glycart Ag | Bispecifične molekule, ki se vežejo na antigen |
US20130078250A1 (en) | 2011-08-23 | 2013-03-28 | Oliver Ast | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
CN103748114B (zh) | 2011-08-23 | 2017-07-21 | 罗切格利卡特公司 | T细胞活化性双特异性抗原结合分子 |
US9550835B2 (en) | 2011-08-23 | 2017-01-24 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-DDR1 antibody having anti-tumor activity |
DK2748192T3 (en) | 2011-08-23 | 2019-02-25 | Found Medicine Inc | KIF5B-RET-FUSION MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF |
KR101870555B1 (ko) | 2011-08-23 | 2018-06-22 | 로슈 글리카트 아게 | T 세포 활성화 항원 및 종양 항원에 대해 특이적인 이중특이적 항체 및 이의 사용 방법 |
US20130058947A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc | Novel Modulators and Methods of Use |
US20140234903A1 (en) | 2011-09-05 | 2014-08-21 | Eth Zurich | Biosynthetic gene cluster for the production of peptide/protein analogues |
WO2013035824A1 (ja) | 2011-09-07 | 2013-03-14 | ファーマロジカルズ・リサーチ プライベート リミテッド | 癌幹細胞の分離 |
AU2012306341B2 (en) | 2011-09-09 | 2017-08-31 | Cambridge Enterprise Limited | Anti-Siglec-15 antibodies and uses thereof |
US10385475B2 (en) | 2011-09-12 | 2019-08-20 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Random array sequencing of low-complexity libraries |
NZ622260A (en) | 2011-09-12 | 2016-11-25 | Janssen Biotech Inc | Toll-like receptor 3 antagonists |
WO2013039996A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for brown fat induction and activity using fndc5 |
GB201116092D0 (en) | 2011-09-16 | 2011-11-02 | Bioceros B V | Antibodies and uses thereof |
EP2771349B1 (de) | 2011-09-16 | 2020-02-26 | Iogenetics, LLC. | Bioinformatikverfahren zur bestimmung von peptidbindungen |
MX2014003308A (es) | 2011-09-20 | 2015-03-09 | Sinai School Medicine | Vacunas para el virus de la influenza y usos de las mismas. |
EP2759551B1 (de) | 2011-09-21 | 2019-05-22 | Fujirebio Inc. | Antikörper die an einen affinitätskomplex binden der 25oh-vitamin d2 oder d3 und einen dagegen gerichteten antikörper enthält |
LT3485903T (lt) | 2011-09-23 | 2023-02-27 | Mereo Biopharma 5, Inc. | Vegf/ dll4 surišantys agentai ir jų panaudojimas |
EP2760886B1 (de) | 2011-09-26 | 2019-10-02 | Philogen S.p.A. | Immunocytokin-kombinationstherapie |
KR102239138B1 (ko) | 2011-09-30 | 2021-04-12 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 표적 항원에 대한 면역응답을 유도하는 항원 결합 분자 |
TW201817745A (zh) | 2011-09-30 | 2018-05-16 | 日商中外製藥股份有限公司 | 具有促進抗原清除之FcRn結合域的治療性抗原結合分子 |
WO2013047752A1 (ja) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | 中外製薬株式会社 | 抗原の消失を促進する抗原結合分子 |
AU2012313594C1 (en) | 2011-09-30 | 2018-05-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Ion concentration-dependent binding molecule library |
WO2013047748A1 (ja) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | 中外製薬株式会社 | 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子 |
JP6271251B2 (ja) | 2011-10-05 | 2018-01-31 | 中外製薬株式会社 | 糖鎖受容体結合ドメインを含む抗原の血漿中からの消失を促進する抗原結合分子 |
WO2013052933A2 (en) | 2011-10-06 | 2013-04-11 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Myosin binding protein-c for use in methods relating to diastolic heart failure |
JP6239517B2 (ja) | 2011-10-10 | 2017-11-29 | メディミューン リミテッド | 関節リウマチの治療法 |
US10221454B2 (en) | 2011-10-10 | 2019-03-05 | The Hospital For Sick Children | Methods and compositions for screening and treating developmental disorders |
JP2014530816A (ja) | 2011-10-14 | 2014-11-20 | ノバルティスアーゲー | Wnt経路関連疾患のための抗体および方法 |
CA2853088C (en) | 2011-10-21 | 2018-03-13 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells |
MX2014004977A (es) | 2011-10-24 | 2014-09-11 | Abbvie Inc | Inmunoaglutinantes dirigidos contra esclerostina. |
JP2014534218A (ja) | 2011-10-24 | 2014-12-18 | アッヴィ・インコーポレイテッド | Tnfを標的とする免疫結合剤 |
EP3603671A3 (de) | 2011-10-28 | 2020-07-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Krebstammzellenspezifisches molekül |
CN109134658B (zh) | 2011-10-31 | 2022-10-14 | 中外制药株式会社 | 控制了重链与轻链的缔合的抗原结合分子 |
JP2014533247A (ja) | 2011-11-01 | 2014-12-11 | バイオノミクス インコーポレイテッド | 抗体および癌を治療する方法 |
EP2773667A1 (de) | 2011-11-01 | 2014-09-10 | Bionomics, Inc. | Anti-gpr49-antikörper |
AU2012332590B2 (en) | 2011-11-01 | 2016-10-20 | Bionomics, Inc. | Anti-GPR49 antibodies |
ES2697674T3 (es) | 2011-11-01 | 2019-01-25 | Bionomics Inc | Procedimientos para bloquear el crecimiento de células madre cancerosas |
TWI571473B (zh) | 2011-11-02 | 2017-02-21 | 埃派斯進有限公司 | 抗kdr抗體及使用方法 |
WO2013067268A1 (en) | 2011-11-03 | 2013-05-10 | Tripath Imaging, Inc. | Methods and compositions for preparing samples for immunostaining |
WO2013067451A2 (en) | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Population Diagnostics Inc. | Methods and compositions for diagnosing, prognosing, and treating neurological conditions |
CA3161431A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Medimmune Limited | Combination therapies using anti-pseudomonas psl and pcrv binding molecules |
EP2776838A1 (de) | 2011-11-08 | 2014-09-17 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Frühe diagnose neurodegenerativer erkrankungen |
EP2776022A1 (de) | 2011-11-08 | 2014-09-17 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Neue behandlung für neurodegenerative erkrankungen |
BR112014011115A2 (pt) | 2011-11-08 | 2017-06-13 | Pfizer | métodos para tratamento de distúrbios inflamatórios usando anticorpos anti-m-csf |
WO2013071233A1 (en) | 2011-11-10 | 2013-05-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Methods for detecting infectious agents and a novel virus detected thereby |
PT2776466T (pt) | 2011-11-11 | 2017-11-30 | Ucb Biopharma Sprl | Anticorpos de ligação a albumina e seus fragmentos de ligação |
US20140328853A1 (en) | 2011-11-16 | 2014-11-06 | Adrenomed Ag | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for prevention or reduction of organ dysfunction or organ failure in a patient having a chronic or acute disease or acute condition |
PL2780370T3 (pl) | 2011-11-16 | 2020-01-31 | Adrenomed Ag | Przeciwciało przeciwko adrenomedulinie (adm) lub fragment przeciwciała przeciwko adp lub szkielet przeciwko adm inny niż ig do zastosowania do stabilizacji krążenia w terapii ostrej choroby lub ostrego stanu pacjenta |
BR122019027917B1 (pt) | 2011-11-16 | 2023-05-09 | Adrenomed Ag | Uso de um anticorpo anti-adrenomedulina (adm) enxertado em cdr humano ou humanizado ou fragmento de anticorpo anti-adm do mesmo |
ES2617211T3 (es) | 2011-11-16 | 2017-06-15 | Sphingotec Gmbh | Ensayos de adrenomedulina y métodos para determinar la adrenomedulina madura |
EP2594587B1 (de) | 2011-11-16 | 2014-05-21 | AdrenoMed AG | Anti-Adrenomedullin-Antikörper (ADM) oder Anti-ADM-Antikörperfragment oder non-Ig Anti-ADM-Proteingerüst zur Reduzierung des Sterblichkeitsrisikos bei einem Patienten mit chronischer oder akuter Erkrankung oder in einem akuten Zustand |
PT2780371T (pt) | 2011-11-16 | 2019-01-30 | Adrenomed Ag | Anticorpo anti-adrenomedulina (adm) ou fragmento de anticorpo anti-adm ou uma estrutura não ig anti-adm para a regulação do equilíbrio de fluidos num doente com uma doença aguda ou crónica |
US9220775B2 (en) | 2011-11-23 | 2015-12-29 | Medimmune Llc | Binding molecules specific for HER3 and uses thereof |
WO2013081143A1 (ja) | 2011-11-30 | 2013-06-06 | 中外製薬株式会社 | 免疫複合体を形成する細胞内への運搬体(キャリア)を含む医薬 |
EP2786156A2 (de) | 2011-11-30 | 2014-10-08 | AbbVie Deutschland GmbH & Co KG | Verfahren und zusammensetzungen zur bestimmung des ansprechens auf eine behandlung mit einem tnf-alpha-hemmer |
CN104159924B (zh) | 2011-12-05 | 2018-03-16 | 诺华股份有限公司 | 表皮生长因子受体3(her3)的抗体 |
EP2788382A2 (de) | 2011-12-05 | 2014-10-15 | Novartis AG | Antikörper für epidermalen wachstumsfaktor-rezeptor 3 (her3) gegen domäne ii von her3 |
AU2012347460B2 (en) | 2011-12-09 | 2017-05-25 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Diagnosis of lymphoid malignancies and minimal residual disease detection |
US9499865B2 (en) | 2011-12-13 | 2016-11-22 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes |
US9518128B2 (en) | 2011-12-14 | 2016-12-13 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin-binding antibody molecules |
GB201121513D0 (en) | 2011-12-14 | 2012-01-25 | Cambridge Entpr Ltd | Thrombin-binding antibody molecules and uses thereof |
US10118958B2 (en) | 2011-12-14 | 2018-11-06 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
CA2855570A1 (en) | 2011-12-14 | 2013-06-20 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
US20150017157A1 (en) | 2011-12-19 | 2015-01-15 | Xoma (Us) Llc | Methods for treating acne |
JP6306513B2 (ja) | 2011-12-20 | 2018-04-04 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 抗PHF−tau抗体及びその使用 |
PE20150159A1 (es) | 2011-12-21 | 2015-02-08 | Novartis Ag | Composiciones y metodos para anticuerpos que actuan sobre el factor p |
JP2015502397A (ja) | 2011-12-23 | 2015-01-22 | ファイザー・インク | 部位特異的コンジュゲーションのための操作された抗体定常領域、ならびにそのための方法および使用 |
TWI593705B (zh) | 2011-12-28 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Humanized anti-epiregulin antibody and cancer therapeutic agent containing the antibody as an active ingredient |
EP2797953B1 (de) | 2011-12-28 | 2020-06-03 | Amgen Inc. | Verfahren zur behandlung von alveolarknochenverlust durch verwendung von anti-sclerostin-antikörpern |
TW201333035A (zh) | 2011-12-30 | 2013-08-16 | Abbvie Inc | 針對il-13及/或il-17之雙特異性結合蛋白 |
EP2800583A1 (de) | 2012-01-02 | 2014-11-12 | Novartis AG | Cdcp1 und brustkrebs |
GB201200259D0 (en) | 2012-01-09 | 2012-02-22 | Ohlin Per M | Novel therapies |
KR102104686B1 (ko) | 2012-01-10 | 2020-04-24 | 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 | 뇌혈관 장벽을 통한 치료학적 분자의 수송 개선법 |
GB201201332D0 (en) | 2012-01-26 | 2012-03-14 | Imp Innovations Ltd | Method |
MY176695A (en) | 2012-01-27 | 2020-08-19 | Abbvie Inc | Composition and method for the diagnosis and treatment of diseases associated with neurite degeneration |
AU2013216320A1 (en) | 2012-02-01 | 2014-04-03 | Compugen Ltd. | C10RF32 antibodies, and uses thereof for treatment of cancer |
EP2855522A1 (de) | 2012-02-03 | 2015-04-08 | MedImmune Limited | Verfahren zur reduzierung von antikörperaggregatpegeln und dadurch produzierten antikörpern |
EP2809682B1 (de) | 2012-02-03 | 2020-04-08 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Bispezifische antikörpermoleküle mit antigen-transfizierten t-zellen und deren verwendung in der medizin |
SI2812443T1 (sl) | 2012-02-06 | 2019-10-30 | Inhibrx Inc | Protitelesa CD47 in postopki za njihovo uporabo |
EP2812452B1 (de) | 2012-02-09 | 2020-05-27 | Population Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zum screening und zur behandlung von entwicklungsstörungen |
EP2813568A4 (de) | 2012-02-09 | 2016-04-06 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Modifizierte fc-antikörperregionen |
US20150105274A1 (en) | 2012-02-10 | 2015-04-16 | Phylogica Limited | Methods for the Characterisation of Interaction Sites on Target Proteins |
KR20140127854A (ko) | 2012-02-10 | 2014-11-04 | 제넨테크, 인크. | 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체 |
WO2013119990A2 (en) | 2012-02-10 | 2013-08-15 | Seattle Genetics, Inc. | Detection and treatment of cd30+ cancers |
PT2814844T (pt) | 2012-02-15 | 2017-09-18 | Novo Nordisk As | Anticorpos que se ligam e bloqueiam recetor de acionamento expresso em células mieloides-1 (trem-1) |
SI2814842T1 (sl) | 2012-02-15 | 2018-10-30 | Novo Nordisk A/S | Protitelesa, ki vežejo peptidoglikal prepoznan protein 1 |
US9550830B2 (en) | 2012-02-15 | 2017-01-24 | Novo Nordisk A/S | Antibodies that bind and block triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) |
GB201203071D0 (en) | 2012-02-22 | 2012-04-04 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
GB201203051D0 (en) | 2012-02-22 | 2012-04-04 | Ucb Pharma Sa | Biological products |
CA2864702A1 (en) | 2012-02-22 | 2013-08-29 | Amgen Inc. | Autologous mammalian models derived from induced pluripotent stem cells and related methods |
DK2817338T3 (en) | 2012-02-24 | 2017-10-23 | Abbvie Stemcentrx Llc | DLL3 modulators and methods of use |
JP6138108B2 (ja) | 2012-02-24 | 2017-05-31 | 中外製薬株式会社 | FcγRIIBを介して抗原の消失を促進する抗原結合分子 |
US10077478B2 (en) | 2012-03-05 | 2018-09-18 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Determining paired immune receptor chains from frequency matched subunits |
BR122020002414B1 (pt) | 2012-03-15 | 2022-03-03 | Janssen Biotech, Inc | Uso de anticorpos anti-cd27 humanos |
AU2013232114B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-10-18 | Omeros Corporation | Composition and method for diversification of target sequences |
EP2828291A1 (de) | 2012-03-21 | 2015-01-28 | Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Aus der d1-domäne von nkp46 abgeleitete peptide |
CA2866185C (en) | 2012-03-23 | 2021-04-06 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pathogenic phlebovirus isolates and compositions and methods of use |
US9592289B2 (en) | 2012-03-26 | 2017-03-14 | Sanofi | Stable IgG4 based binding agent formulations |
DK2831587T3 (en) | 2012-03-27 | 2018-07-23 | Ventana Med Syst Inc | Signaling conjugates and methods of use |
RU2014139546A (ru) | 2012-03-27 | 2016-05-20 | Дженентек, Инк. | Методы прогнозирования, диагностики и лечения идиопатического легочного фиброза |
WO2013144240A1 (en) | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Inhibition of interleukin- 8 and/or its receptor cxcrl in the treatment her2/her3 -overexpressing breast cancer |
EP2832856A4 (de) | 2012-03-29 | 2016-01-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-lamp5-antikörper und verwendung davon |
KR20140138215A (ko) | 2012-03-30 | 2014-12-03 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 신규 항 Siglec-15 항체 |
KR20200105524A (ko) | 2012-04-02 | 2020-09-07 | 버그 엘엘씨 | 조사적 세포 기반 분석 및 이의 사용 |
KR20150003251A (ko) | 2012-04-04 | 2015-01-08 | 가부시키가이샤 페르세우스 프로테오믹스 | 항 cdh3(p-카드헤린) 항체의 약물 콘쥬게이트 |
WO2013151649A1 (en) | 2012-04-04 | 2013-10-10 | Sialix Inc | Glycan-interacting compounds |
US9714298B2 (en) | 2012-04-09 | 2017-07-25 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-FGFR2 antibodies and methods of use thereof for treating cancer |
IN2014MN02274A (de) | 2012-04-17 | 2015-08-07 | Mayo Foundation | |
DK2838998T3 (en) | 2012-04-18 | 2018-01-15 | Cell Signaling Technology Inc | EGFR AND ROS1 IN CANCER |
MX360109B (es) | 2012-04-20 | 2018-10-23 | Merus Nv | Metodos y medios para la produccion de moleculas de tipo ig. |
WO2013158275A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
US9150645B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-10-06 | Abbvie, Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
DK2841457T3 (da) | 2012-04-27 | 2019-07-22 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Antistof imod ROBO4 |
US9212227B2 (en) | 2012-04-30 | 2015-12-15 | Janssen Biotech, Inc. | ST2L antibody antagonists for the treatment of ST2L-mediated inflammatory pulmonary conditions |
WO2013166290A1 (en) | 2012-05-04 | 2013-11-07 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | P21 biomarker assay |
SG11201407107VA (en) | 2012-05-08 | 2014-11-27 | Adaptive Biotechnologies Corp | Compositions and method for measuring and calibrating amplification bias in multiplexed pcr reactions |
WO2013173364A2 (en) | 2012-05-14 | 2013-11-21 | Biogen Idec Ma Inc. | Lingo-2 antagonists for treatment of conditions involving motor neurons |
JP6122948B2 (ja) | 2012-05-15 | 2017-04-26 | モルフォテック, インコーポレイテッド | 胃癌の治療のための方法 |
US20130309223A1 (en) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Seattle Genetics, Inc. | CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer |
WO2013177115A2 (en) | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Abbvie Inc. | Novel purification of human, humanized, or chimeric antibodies using protein a affinity chromatography |
WO2013177386A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Biomarkers for predicting response to tweak receptor (tweakr) agonist therapy |
CN104603149B (zh) | 2012-05-24 | 2017-06-30 | 万机集团有限公司 | 与预防和治疗狂犬病感染相关的组合物和方法 |
WO2013176754A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Abbvie Inc. | Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
DK2857420T3 (da) | 2012-05-30 | 2020-11-23 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Målvævsspecifikt antigenbindende molekyle |
US20150353630A1 (en) | 2012-05-30 | 2015-12-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule for eliminating aggregated antigens |
EP2859018B1 (de) | 2012-06-06 | 2021-09-22 | Zoetis Services LLC | Anti-ngf-antikörper für hunde und verfahren dafür |
CA2875980A1 (en) | 2012-06-06 | 2013-12-12 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Binding agents that modulate the hippo pathway and uses thereof |
US11142563B2 (en) | 2012-06-14 | 2021-10-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule containing modified Fc region |
AU2013278075B2 (en) | 2012-06-22 | 2018-05-17 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-jagged 1/Jagged 2 cross-reactive antibodies, activatable anti-Jagged antibodies and methods of use thereof |
WO2014039983A1 (en) | 2012-09-07 | 2014-03-13 | The Trustees Of Dartmouth College | Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer |
FI3421486T3 (fi) | 2012-06-22 | 2023-12-15 | Dartmouth College | Uusia vista-ig-rakenteita ja vista-ig:n käyttö autoimmuuni-, allergia- ja tulehdushäiriöiden hoitamiseksi |
US9890215B2 (en) | 2012-06-22 | 2018-02-13 | King's College London | Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer |
RU2015100656A (ru) | 2012-06-27 | 2016-08-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Способ получения конъюгатов fc-фрагмента антитела, включающих по меньшей мере одну связывающую группировку, которая специфически связывается с мишенью, и их применения |
BR112014029888A2 (pt) | 2012-06-27 | 2020-05-12 | Hoffmann La Roche | Métodos de produção de um anticorpo, de determinação de uma combinação de sítios de ligação e de tratamento de um indivíduo com câncer, formulação farmacêutica, anticorpo e uso de um anticorpo |
WO2014001324A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | Hoffmann-La Roche Ag | Method for selection and production of tailor-made highly selective and multi-specific targeting entities containing at least two different binding entities and uses thereof |
WO2014001557A1 (en) | 2012-06-28 | 2014-01-03 | Ucb Pharma S.A. | A method for identifying compounds of therapeutic interest |
WO2014001482A1 (en) | 2012-06-29 | 2014-01-03 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniererlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Treating diseases by modulating a specific isoform of mkl1 |
AR091649A1 (es) | 2012-07-02 | 2015-02-18 | Bristol Myers Squibb Co | Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos |
EP2870242A1 (de) | 2012-07-05 | 2015-05-13 | Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Neue behandlung für neurodegenerative erkrankungen |
AU2013285488B2 (en) | 2012-07-05 | 2018-03-22 | Ucb Pharma S.A. | Treatment for bone diseases |
WO2014006115A1 (en) | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Novartis Ag | Combination of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and an inhibitor of the il-8/cxcr interaction |
WO2014011955A2 (en) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Abbvie, Inc. | Il-1 binding proteins |
HUE061555T2 (hu) | 2012-07-13 | 2023-07-28 | Univ Pennsylvania | CAR-ok tumorellenes hatásának toxicitáskezelése |
GB201213652D0 (en) | 2012-08-01 | 2012-09-12 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Therapeutic and diagnostic target |
WO2014022759A1 (en) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof |
SG10201800535XA (en) | 2012-08-07 | 2018-02-27 | Roche Glycart Ag | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
BR112015002085A2 (pt) | 2012-08-08 | 2017-12-19 | Roche Glycart Ag | proteína, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método para produzir a proteína, composição farmacêutica, uso da proteína, método de tratamento e invenção |
JP2015525792A (ja) | 2012-08-09 | 2015-09-07 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | Asgpr抗体およびその使用 |
US20140044675A1 (en) | 2012-08-10 | 2014-02-13 | Roche Glycart Ag | Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof |
US9645151B2 (en) | 2012-08-17 | 2017-05-09 | California Institute Of Technology | Targeting phosphofructokinase and its glycosylation form for cancer |
EP2887965A1 (de) | 2012-08-22 | 2015-07-01 | ImmunoGen, Inc. | Zytotoxische benzodiazepin-derivate |
SG10201701424QA (en) | 2012-08-23 | 2017-04-27 | Agensys Inc | Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins |
CN104662044B (zh) | 2012-08-24 | 2018-10-30 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗 |
EP3597747B1 (de) | 2012-08-24 | 2023-03-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Maus-fgcgammarii-spezifischer fc-antikörper |
SG10201709559PA (en) | 2012-08-24 | 2017-12-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fcγriib-specific fc region variant |
EP2966088B1 (de) | 2012-08-31 | 2019-10-16 | The Scripps Research Institute | Antikörper, die eukaryotische zellen modulieren |
NZ726258A (en) | 2012-08-31 | 2019-07-26 | Immunogen Inc | Antibodies and uses thereof to detect folate receptor 1 |
US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
KR20150043523A (ko) | 2012-09-02 | 2015-04-22 | 애브비 인코포레이티드 | 단백질 불균일성의 제어 방법 |
JOP20200308A1 (ar) | 2012-09-07 | 2017-06-16 | Novartis Ag | جزيئات إرتباط il-18 |
WO2014039860A2 (en) | 2012-09-07 | 2014-03-13 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for modulating dnmt1 inhibitor activity |
US9976180B2 (en) | 2012-09-14 | 2018-05-22 | Population Bio, Inc. | Methods for detecting a genetic variation in subjects with parkinsonism |
CA2922005A1 (en) | 2012-09-27 | 2014-04-03 | Population Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for screening and treating developmental disorders |
JP6117222B2 (ja) | 2012-09-27 | 2017-04-19 | 中外製薬株式会社 | Fgfr3融合遺伝子およびそれを標的とする医薬 |
WO2014055442A2 (en) | 2012-10-01 | 2014-04-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for targeting stromal cells for the treatment of cancer |
NO2760138T3 (de) | 2012-10-01 | 2018-08-04 | ||
AU2013327423B2 (en) | 2012-10-01 | 2017-06-22 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Immunocompetence assessment by adaptive immune receptor diversity and clonality characterization |
AU2013325443B2 (en) * | 2012-10-03 | 2019-01-31 | Livtech, Inc. | Anti-hDlk-1 antibody having an anti-tumor activity in vivo |
US9695232B2 (en) | 2012-10-03 | 2017-07-04 | Philogen S.P.A. | Anti-ED-A immunoconjugates for inflammatory bowel disease |
NZ707091A (en) | 2012-10-04 | 2018-12-21 | Immunogen Inc | Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates |
WO2014056783A1 (en) | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Roche Glycart Ag | Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use |
UA118441C2 (uk) | 2012-10-08 | 2019-01-25 | Протена Біосаєнсиз Лімітед | Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн |
CN104870014A (zh) | 2012-10-09 | 2015-08-26 | 比奥根Ma公司 | 联合治疗及用于治疗脱髓鞘病症的用途 |
NZ746440A (en) | 2012-10-11 | 2019-11-29 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Glycinamide derivatives and production methods thereof |
EP2906241B1 (de) | 2012-10-12 | 2020-01-08 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Verbesserung der immunreaktion |
KR102308915B1 (ko) | 2012-10-15 | 2021-10-06 | 메디뮨 리미티드 | 아밀로이드 베타에 대한 항체 |
CA2888743C (en) | 2012-10-17 | 2024-01-02 | University Of Maryland, Office Of Technology Commercialization | Device and methods of using device for detection of aminoacidopathies |
WO2014061277A1 (ja) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | 第一三共株式会社 | 親水性構造を含むリンカーで結合させた抗体-薬物コンジュゲート |
EP2912064B1 (de) | 2012-10-24 | 2019-04-24 | Research Development Foundation | Jam-c-antikörper und verfahren zur behandlung von krebs |
CN104918957B (zh) | 2012-10-30 | 2018-11-16 | 埃派斯进有限公司 | 抗-cd40抗体及其使用方法 |
CA2890263C (en) | 2012-11-01 | 2020-03-10 | Abbvie Inc. | Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US10189906B2 (en) | 2012-11-01 | 2019-01-29 | Max-Delrück-Centrum Für Molekulare Medizin | Antibody that binds CD269 (BCMA) suitable for use in the treatment of plasma cell diseases such as multiple myeloma and autoimmune diseases |
CA2890207A1 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Foundation Medicine, Inc. | Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof |
AU2013337354A1 (en) | 2012-11-05 | 2015-05-21 | Genzyme Corporation | Compositions and methods for treating proteinopathies |
LT2918603T (lt) | 2012-11-08 | 2018-10-25 | University Of Miyazaki | Antikūnas, galintis specifiškai atpažinti transferino receptorių |
WO2014074942A1 (en) | 2012-11-08 | 2014-05-15 | Illumina, Inc. | Risk variants of alzheimer's disease |
SG10201608703SA (en) | 2012-11-08 | 2016-12-29 | Eleven Biotherapeutics Inc | Il-6 antagonists and uses thereof |
UY35148A (es) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Amgen Inc | Immunoglobulinas heterodiméricas |
KR20240005211A (ko) | 2012-11-21 | 2024-01-11 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 이중특이성 EGFR/c-Met 항체 |
US10131682B2 (en) | 2012-11-24 | 2018-11-20 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules |
US20140154255A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-vegf antibodies and their uses |
WO2014084859A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-05 | Novartis Ag | Molecules and methods for modulating tmem16a activities |
AU2013355414B2 (en) | 2012-12-05 | 2017-02-02 | Novartis Ag | Compositions and methods for antibodies targeting EPO |
ES2780398T3 (es) | 2012-12-10 | 2020-08-25 | Biogen Ma Inc | Anticuerpo anti-antígeno 2 de células dendríticas sanguíneas y uso de los mismos |
CN108641002A (zh) | 2012-12-18 | 2018-10-12 | 西奈山伊坎医学院 | 流感病毒疫苗及其用途 |
WO2014099997A1 (en) | 2012-12-18 | 2014-06-26 | Novartis Ag | Compositions and methods that utilize a peptide tag that binds to hyaluronan |
GB201223276D0 (en) | 2012-12-21 | 2013-02-06 | Ucb Pharma Sa | Antibodies and methods of producing same |
US9550986B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-01-24 | Abbvie Inc. | High-throughput antibody humanization |
JP6359031B2 (ja) | 2012-12-21 | 2018-07-18 | メディミューン,エルエルシー | 抗h7cr抗体 |
AU2013202668B2 (en) | 2012-12-24 | 2014-12-18 | Adelaide Research & Innovation Pty Ltd | Inhibition of cancer growth and metastasis |
DK2940135T5 (da) | 2012-12-27 | 2021-09-20 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Heterodimeriseret polypeptid |
NZ709828A (en) | 2012-12-28 | 2019-07-26 | Prec Biologics Inc | Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer |
US10717965B2 (en) | 2013-01-10 | 2020-07-21 | Gloriana Therapeutics, Inc. | Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies |
CA3150658A1 (en) | 2013-01-18 | 2014-07-24 | Foundation Medicine, Inc. | Methods of treating cholangiocarcinoma |
WO2014120916A1 (en) | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Pegylated domain antibodies monovalent for cd28 binding and methods of use |
KR102276974B1 (ko) | 2013-02-06 | 2021-07-13 | 인히브릭스, 인크. | 비-혈소판 및 비-적혈구 세포 격감성 cd47 항체 및 이를 이용하는 방법 |
SI2953969T1 (sl) | 2013-02-08 | 2020-01-31 | Novartis Ag | Protitelesa proti-IL-17A in njihova uporaba v zdravljenju avtoimunskih in vnetnih motenj |
GB201302447D0 (en) | 2013-02-12 | 2013-03-27 | Oxford Biotherapeutics Ltd | Therapeutic and diagnostic target |
WO2014129895A1 (en) | 2013-02-19 | 2014-08-28 | Stichting Vu-Vumc | Means and method for increasing the sensitivity of cancers for radiotherapy |
MX2015010682A (es) | 2013-02-22 | 2016-05-31 | Stemcentrx Inc | Nuevos conjugados de anticuerpos y usos de los mismos. |
FR3004184B1 (fr) | 2013-02-26 | 2016-03-18 | Agronomique Inst Nat Rech | Anticorps anti-gluten desamide et utilisations. |
EP2961770A1 (de) | 2013-02-26 | 2016-01-06 | Roche Glycart AG | Bispezifische antigenbindende moleküle zur t-zellen-aktivierung |
MY192312A (en) | 2013-02-26 | 2022-08-17 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
RU2015140915A (ru) | 2013-02-26 | 2017-04-03 | Роше Гликарт Аг | Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки |
CA2902068C (en) | 2013-02-28 | 2023-10-03 | Caprion Proteomics Inc. | Tuberculosis biomarkers and uses thereof |
JP6423804B2 (ja) | 2013-02-28 | 2018-11-14 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体 |
JP6494533B2 (ja) | 2013-02-28 | 2019-04-03 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体 |
EP2830651A4 (de) | 2013-03-12 | 2015-09-02 | Abbvie Inc | An humanes tnf-alpha bindende humane antikörper und verfahren zur herstellung davon |
WO2014142646A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-09-18 | Stichting Katholieke Universiteit | Q-fever diagnostic |
AU2014248515B2 (en) | 2013-03-13 | 2019-03-07 | Prothena Biosciences Limited | Tau immunotherapy |
CA2906688A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Parkash S. Gill | Cancer treatment using antibodies that bind cell surface grp78 |
WO2014159960A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof |
US9302005B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-04-05 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for treating cancer |
WO2014151878A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides |
EP2968526A4 (de) | 2013-03-14 | 2016-11-09 | Abbott Lab | Hcv-antigen-antikörper-kombinationstest sowie verfahren und zusammensetzungen zur verwendung darin |
SG11201504260UA (en) | 2013-03-14 | 2015-10-29 | Abbvie Inc | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
JP6739329B2 (ja) | 2013-03-14 | 2020-08-12 | アボット・ラボラトリーズAbbott Laboratories | Hcvコア脂質結合ドメインモノクローナル抗体 |
WO2014159554A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbvie Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography |
EP2970479B1 (de) | 2013-03-14 | 2019-04-24 | Novartis AG | Antikörper gegen notch 3 |
WO2014159430A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Apexigen, Inc. | Anti-rankl antibodies and methods of use |
WO2014142882A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
CA2902789A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | The Governing Council Of The University Of Toronto | Scaffolded peptidic libraries and methods of making and screening the same |
WO2014159579A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbvie Inc. | MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE |
JP2016512241A (ja) | 2013-03-14 | 2016-04-25 | アボット・ラボラトリーズAbbott Laboratories | 改良された抗体検出のためのhcvns3組換え抗原およびこの突然変異体 |
WO2014144280A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17 |
RU2015144033A (ru) | 2013-03-15 | 2017-04-26 | Эббви Байотекнолоджи Лтд. | Антитела против cd25 и их применения |
WO2014144292A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Sanofi Pasteur Biologics , Llc | Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same |
US9469686B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-10-18 | Abbott Laboratories | Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same |
JP2016515524A (ja) | 2013-03-15 | 2016-05-30 | アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド | 抗cd25抗体およびそれらの使用 |
JP6466904B2 (ja) | 2013-03-15 | 2019-02-06 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | インターフェロンアルファ及びオメガ抗体アンタゴニスト |
SI2968588T1 (sl) | 2013-03-15 | 2019-05-31 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Formulacije konjugatov protitelo proti-EGFR zdravilo |
EA201890895A1 (ru) | 2013-03-15 | 2019-02-28 | Зинджения, Инк. | Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы и их применение |
KR102207859B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-01-27 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 고 친화도 항-gd2 항체 |
CA2903546A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Biogen Ma Inc. | Treatment and prevention of acute kidney injury using anti-alpha v beta 5 antibodies |
CA2899089C (en) | 2013-03-15 | 2021-10-26 | Biogen Ma Inc. | Factor ix polypeptide formulations |
CN105143257B (zh) | 2013-03-15 | 2020-10-27 | 艾伯维生物医疗股份有限公司 | Fc变体 |
JP2016519070A (ja) | 2013-03-15 | 2016-06-30 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 抗体薬物複合体(adc)の精製 |
RS57840B1 (sr) | 2013-03-18 | 2018-12-31 | Biocerox Prod Bv | Humanizovana anti-cd 134 (ox40) antitela i njihove upotrebe |
CN105102985B (zh) | 2013-03-20 | 2018-05-18 | 斯弗因高泰克有限公司 | 用于指导血压下降疗法的肾上腺髓质素 |
CN112870368A (zh) | 2013-03-27 | 2021-06-01 | 西达-赛奈医疗中心 | 通过抑制tl1a的功能和相关信号传导途径来减轻并逆转纤维化和炎症 |
US11267868B2 (en) | 2013-04-02 | 2022-03-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Fc region variant |
UA118028C2 (uk) | 2013-04-03 | 2018-11-12 | Рош Глікарт Аг | Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування |
EP2983711A4 (de) | 2013-04-08 | 2016-11-23 | Cytodyn Inc | Felinisierte antikörper und verfahren zur behandlung von retrovireninfektionen bei katzen |
GB201307501D0 (en) | 2013-04-25 | 2013-06-12 | Univ Aberdeen | Anti-fungal antibody molecules and uses thereof |
CN105308460A (zh) | 2013-05-02 | 2016-02-03 | 天主教大学基金会 | 个性化药物 |
SG10201913751RA (en) | 2013-05-06 | 2020-03-30 | Scholar Rock Inc | Compositions and methods for growth factor modulation |
CA2912526C (en) | 2013-05-16 | 2021-09-14 | Kyoto University | Method for determining prognosis of cancer |
GB201309178D0 (en) | 2013-05-21 | 2013-07-03 | Ucl Business Plc | Enzyme and uses thereof |
AU2014268298B2 (en) | 2013-05-24 | 2019-01-17 | Medlmmune, Llc | Anti-B7-H5 antibodies and their uses |
WO2014194030A2 (en) | 2013-05-31 | 2014-12-04 | Immunogen, Inc. | Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents |
SG11201509982UA (de) | 2013-06-06 | 2016-04-28 | Igenica Biotherapeutics Inc | |
US20160122829A1 (en) | 2013-06-06 | 2016-05-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and Methods for Identification, Assessment, Prevention, and Treatment of Cancer Using PD-L1 Isoforms |
ES2753419T3 (es) | 2013-06-07 | 2020-04-08 | Univ Duke | Inhibidores del factor H del complemento |
EP3009518B1 (de) | 2013-06-11 | 2020-08-12 | National Center of Neurology and Psychiatry | Verfahren zur vorhersage einer posttherapeutischen prognose von patienten mit schubförmig remittierender multipler sklerose (rrms) und verfahren zur bestimmung der anwendbarkeit der neuartigen therapie |
US20160151486A1 (en) | 2013-06-13 | 2016-06-02 | Fast Foward Pharmaceuticals B.V. | CD40 Signalling Inhibitor and a Further Compound, Wherein the Further Compound is a Bile Acid, a Bile Acid Derivative, an TGR5-Receptor Agonist, an FXR Agonist or a Combination Thereof, for the Treatment of Chronic Inflammation, and the Prevention of Gastrointestinal Cancer or Fibrosis |
AR096601A1 (es) | 2013-06-21 | 2016-01-20 | Novartis Ag | Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso |
CN105517571A (zh) | 2013-06-24 | 2016-04-20 | 中外制药株式会社 | 含有人源化抗上皮调节蛋白抗体作为有效成分的腺癌以外的非小细胞肺癌的治疗药 |
US9708657B2 (en) | 2013-07-01 | 2017-07-18 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method for generating clonotype profiles using sequence tags |
WO2015003114A1 (en) | 2013-07-05 | 2015-01-08 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Soluble mic neutralizing monoclonal antibody for treating cancer |
US9850302B2 (en) | 2013-07-12 | 2017-12-26 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies that recognize IAPP |
US9951131B2 (en) | 2013-07-12 | 2018-04-24 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies that recognize IAPP |
US10208125B2 (en) | 2013-07-15 | 2019-02-19 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof |
EP3022295A4 (de) | 2013-07-19 | 2017-03-01 | Cedars-Sinai Medical Center | Signatur des tl1a (tnfsf15)-signalweges |
US20160175401A1 (en) | 2013-07-31 | 2016-06-23 | Dana-Farber Cancer Institute Inc. | Compoitions and methods for modulating thermogenesis using pth-related and egf-related compounds |
JP6510518B2 (ja) | 2013-08-01 | 2019-05-08 | アジェンシス,インコーポレイテッド | Cd37タンパク質に結合する抗体薬物結合体(adc) |
US9770461B2 (en) | 2013-08-02 | 2017-09-26 | California Institute Of Technology | Tailored glycopolymers as anticoagulant heparin mimetics |
US10227370B2 (en) | 2013-08-02 | 2019-03-12 | California Institute Of Technology | Heparan sulfate/heparin mimetics with anti-chemokine and anti-inflammatory activity |
RU2675516C2 (ru) | 2013-08-02 | 2018-12-19 | Пфайзер Инк. | Anti-cxcr4 антитела и конъюгаты антитело-лекарство |
CN104341504B (zh) | 2013-08-06 | 2017-10-24 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 双特异性抗体 |
US20160178610A1 (en) | 2013-08-07 | 2016-06-23 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | New screening method for the treatment Friedreich's ataxia |
US10077304B2 (en) | 2013-08-14 | 2018-09-18 | The Governing Council Of The University Of Toronto | Antibodies against frizzled receptor |
CN105960414A (zh) | 2013-08-14 | 2016-09-21 | 诺华股份有限公司 | 治疗散发性包涵体肌炎的方法 |
EP3036320B2 (de) | 2013-08-19 | 2024-04-03 | Biogen MA Inc. | Steuerung der proteinglykosylierung durch kulturmediumsupplementation und zellkulturprozessparametern |
CN106659909B (zh) | 2013-08-21 | 2022-01-11 | 德克萨斯州大学系统董事会 | 用于靶向连接蛋白半通道的组合物和方法 |
RU2699289C2 (ru) | 2013-08-26 | 2019-09-04 | Байонтек Рисерч Энд Дивелопмент, Инк. | НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ, КОДИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ СИАЛИРОВАННОГО АНТИГЕНА ЛЬЮИСАа ЧЕЛОВЕКА |
EP3892294A1 (de) | 2013-08-28 | 2021-10-13 | AbbVie Stemcentrx LLC | Konjugationsverfahren stellenspezifischer antikörper und zusammensetzungen |
EP3338793A1 (de) | 2013-08-28 | 2018-06-27 | AbbVie Stemcentrx LLC | Neuartige sez6-modulatoren und verfahren zur verwendung |
KR102585409B1 (ko) | 2013-08-30 | 2023-10-05 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 엽산 수용체 1의 검출을 위한 항체 및 분석 |
WO2015035044A2 (en) | 2013-09-04 | 2015-03-12 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Fc VARIANTS WITH IMPROVED ANTIBODY-DEPENDENT CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY |
US10030071B2 (en) | 2013-09-05 | 2018-07-24 | University Of Miyazaki | Antibody which specifically reacts with human integrin A6B4 |
EP3760639A1 (de) | 2013-09-08 | 2021-01-06 | Kodiak Sciences Inc. | Zwitterionische polymerkonjugate |
JP6445440B2 (ja) | 2013-09-20 | 2018-12-26 | 中外製薬株式会社 | 抗プロテインc抗体による出血性疾患の治療 |
EP3048899B1 (de) | 2013-09-25 | 2021-09-08 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Verfahren zur virusinaktivierung auf einer säule |
DK3049521T3 (en) | 2013-09-25 | 2019-04-23 | Univ Cornell | Compounds for inducing antitumor immunity and methods thereof |
EP3049442A4 (de) | 2013-09-26 | 2017-06-28 | Costim Pharmaceuticals Inc. | Verfahren zur behandlung von blutkrebs |
BR112016006197B1 (pt) | 2013-09-27 | 2023-04-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Método para produzir um anticorpo biespecífico de polipeptídeos |
BR112016006502A2 (pt) * | 2013-09-30 | 2017-09-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Método para a produção de molécula de ligação de antígeno usando-se fago auxiliar modificado |
CA2925897A1 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-02 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-lps o11 antibody |
US10259875B2 (en) | 2013-10-01 | 2019-04-16 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods for treating cancer in patients with elevated levels of BIM |
WO2015050959A1 (en) | 2013-10-01 | 2015-04-09 | Yale University | Anti-kit antibodies and methods of use thereof |
KR102501920B1 (ko) | 2013-10-02 | 2023-02-20 | 메디뮨 엘엘씨 | 중화 항-인플루엔자 a 항체 및 이의 용도 |
US9598667B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-03-21 | Abbvie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
KR20160066024A (ko) | 2013-10-08 | 2016-06-09 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항 fgfr2 항체와 타제의 조합 |
NZ718766A (en) | 2013-10-08 | 2020-02-28 | Immunogen Inc | Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens |
US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
WO2015057939A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | Biogen Idec Ma Inc. | Anti-s1p4 antibodies and uses thereof |
US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
EP3733868A3 (de) | 2013-10-28 | 2021-01-13 | DOTS Technology Corp. | Allergennachweis |
WO2015066190A1 (en) | 2013-10-29 | 2015-05-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for inhibting oxidative stress |
GB201319374D0 (en) | 2013-11-01 | 2013-12-18 | Univ Nottingham | Glycans as functional cancer targets abd antibodies thereto |
US9840555B2 (en) | 2013-11-04 | 2017-12-12 | Li-Te Chin | Method for producing human monoclonal antibodies that binds to at least one part of HMGB1 |
BR112016010071A2 (pt) | 2013-11-06 | 2017-12-05 | Janssen Biotech Inc | anticorpos anti-ccl17 |
WO2015070068A1 (en) | 2013-11-07 | 2015-05-14 | Abbvie Inc. | Isolation and purification of antibodies |
TWI652279B (zh) | 2013-11-11 | 2019-03-01 | 中外製藥股份有限公司 | 含改變的抗體可變區之抗原結合分子 |
DK2891722T3 (en) | 2013-11-12 | 2019-01-07 | Population Bio Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR DIAGNOSTICING, PROGRAMMING AND TREATMENT OF ENDOMETRIOSIS |
GB201320061D0 (en) | 2013-11-13 | 2013-12-25 | Electrophoretics Ltd | Materials nad methods for diagnosis and prognosis of liver cancer |
WO2015073884A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
AU2014349828B2 (en) | 2013-11-15 | 2021-01-28 | Centre National De La Recherche Scientifique | A molecular marker of Plasmodium falciparum artemisinin resistance |
US9309314B2 (en) | 2013-12-03 | 2016-04-12 | Agency For Science, Technology And Research (A*Star) | Polypeptides, nucleic acids and uses thereof |
SG11201604495PA (en) | 2013-12-04 | 2016-07-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Antigen-binding molecules, the antigen-binding activity of which varies according to the concentration of compounds, and libraries of said molecules |
WO2015082724A1 (en) | 2013-12-08 | 2015-06-11 | Peptcell Limited | Hiv antigens and antibodies and compositions, methods and uses thereof |
US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
US8980273B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-17 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
CA3225453A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Novartis Ag | Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof |
CN104721225A (zh) | 2013-12-19 | 2015-06-24 | 高露洁-棕榄公司 | 口腔护理组合物 |
JP2017500017A (ja) | 2013-12-20 | 2017-01-05 | バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドBiogen MA Inc. | 生物薬剤フェドバッチ生産能力及び生産物品質を改善するための灌流シード培養の使用 |
US11708411B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-07-25 | Wake Forest University Health Sciences | Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines |
EP2960252A1 (de) | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Institut Pasteur | Phospholipase zur Behandlung von Immunosuppression |
PL3712174T3 (pl) | 2013-12-24 | 2022-07-04 | Janssen Pharmaceutica Nv | Przeciwciała i fragmenty anty-vista |
US11014987B2 (en) | 2013-12-24 | 2021-05-25 | Janssen Pharmaceutics Nv | Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same |
AU2014371934B2 (en) | 2013-12-25 | 2020-01-23 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-TROP2 antibody-drug conjugate |
WO2015099127A1 (ja) | 2013-12-27 | 2015-07-02 | 中外製薬株式会社 | Fgfrゲートキーパー変異遺伝子およびそれを標的とする医薬 |
TWI787590B (zh) | 2013-12-27 | 2022-12-21 | 日商中外製藥股份有限公司 | 等電點低之抗體的精製方法 |
WO2015108719A1 (en) | 2014-01-14 | 2015-07-23 | The Medical College Of Wisconsin, Inc. | Targeting clptm1l for treatment and prevention of cancer |
US10179911B2 (en) | 2014-01-20 | 2019-01-15 | President And Fellows Of Harvard College | Negative selection and stringency modulation in continuous evolution systems |
JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
US11648335B2 (en) | 2014-01-31 | 2023-05-16 | Wake Forest University Health Sciences | Organ/tissue decellularization, framework maintenance and recellularization |
EP3973995A1 (de) | 2014-01-31 | 2022-03-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-her2-antikörper-wirkstoff-konjugat |
WO2015120187A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | The University Of Chicago | Chimeric antigen receptors recognizing cancer-spevific tn glycopeptide variants |
MX370283B (es) | 2014-02-06 | 2019-12-09 | Hoffmann La Roche | Proteinas de fusion de interleucina-2 y usos de las mismas. |
MX2016010360A (es) | 2014-02-11 | 2016-11-30 | Visterra Inc | Moleculas de anticuerpo para el virus del dengue y uso de las mismas. |
JP2017514143A (ja) | 2014-02-21 | 2017-06-01 | アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー | メラノーマに使用するための抗dll3抗体および薬物コンジュゲート |
US9732154B2 (en) | 2014-02-28 | 2017-08-15 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia |
US10464955B2 (en) | 2014-02-28 | 2019-11-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Charged linkers and their uses for conjugation |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
AU2015227054A1 (en) | 2014-03-05 | 2016-09-22 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods using randomer-containing synthetic molecules |
WO2015136469A1 (en) | 2014-03-12 | 2015-09-17 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
EP3116907A1 (de) | 2014-03-12 | 2017-01-18 | Prothena Biosciences Limited | Für lg4-5 spezifische anti-laminin4-antikörper |
TW201623331A (zh) | 2014-03-12 | 2016-07-01 | 普羅帝納生物科學公司 | 抗黑色素瘤細胞黏著分子(mcam)抗體類及使用彼等之相關方法 |
KR20160131082A (ko) | 2014-03-12 | 2016-11-15 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | Lg1-3에 특이적인 항-라미닌4 항체 |
US9738702B2 (en) | 2014-03-14 | 2017-08-22 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies with improved half-life in ferrets |
CN106103484B (zh) | 2014-03-14 | 2021-08-20 | 诺华股份有限公司 | 针对lag-3的抗体分子及其用途 |
EP3122869B2 (de) | 2014-03-24 | 2022-08-10 | Biogen MA Inc. | Verfahren zur überwindung von glutamindeprivation bei einer säugetierzellkultur |
KR20160138494A (ko) | 2014-03-31 | 2016-12-05 | 데비오팜 인터네셔날 에스 에이 | Fgfr 융합물 |
US10066265B2 (en) | 2014-04-01 | 2018-09-04 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Determining antigen-specific t-cells |
CN106536556B (zh) | 2014-04-04 | 2020-02-07 | 生态学有限公司 | 结合lgr5的人源化抗体 |
KR102546611B1 (ko) | 2014-04-08 | 2023-06-22 | 보스턴 파마슈티칼즈, 아이엔씨. | Il-21에 특이적인 결합 분자 및 이들 용도 |
US10562973B2 (en) | 2014-04-08 | 2020-02-18 | Prothena Bioscience Limited | Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein |
NZ722668A (en) | 2014-04-10 | 2024-02-23 | Daiichi Sankyo Europe Gmbh | Anti-her3 antibody-drug conjugate |
US10160812B2 (en) | 2014-04-11 | 2018-12-25 | Medimmune, Llc | Bispecific HER2 antibodies |
GB201406767D0 (en) | 2014-04-15 | 2014-05-28 | Cancer Rec Tech Ltd | Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates |
EP3132059B1 (de) | 2014-04-17 | 2020-01-08 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Quantifizierung von adaptiven immunzellgenomen in einer komplexen mischung von zellen |
JP6998658B2 (ja) * | 2014-04-17 | 2022-01-18 | ユニバーシティ オブ メリーランド, カレッジ パーク | アミノ酸代謝異常の検出のためのデバイス、及びデバイスを使用する方法 |
TW201622746A (zh) | 2014-04-24 | 2016-07-01 | 諾華公司 | 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法 |
WO2015164364A2 (en) | 2014-04-25 | 2015-10-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods to manipulate alpha-fetoprotein (afp) |
US9753036B2 (en) | 2014-04-29 | 2017-09-05 | Edp Biotech Corporation | Methods and compositions for screening and detecting biomarkers |
AU2015254558B2 (en) | 2014-05-02 | 2021-02-25 | Medimmune Limited | Ion channel modulators and uses thereof |
CA2946606C (en) | 2014-05-13 | 2023-06-06 | Bavarian Nordic A/S | Combination therapy for treating cancer with a poxvirus expressing a tumor antigen and an antagonist of tim-3 |
CN106413750B (zh) | 2014-05-16 | 2022-04-29 | 免疫医疗有限责任公司 | 具有增强的治疗和诊断特性的带有改变的新生儿Fc受体结合的分子 |
US10302653B2 (en) | 2014-05-22 | 2019-05-28 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Distinguishing antagonistic and agonistic anti B7-H1 antibodies |
MA47849A (fr) | 2014-05-28 | 2020-01-29 | Agenus Inc | Anticorps anti-gitr et leurs procédés d'utilisation |
GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
SG10201703965SA (en) | 2014-06-03 | 2017-06-29 | Xbiotech Inc | Compositions and methods for treating and preventing staphylococcus aureus infections |
PT3154583T (pt) | 2014-06-04 | 2021-03-24 | Biontech Res And Development Inc | Anticorpos monoclonais humanos para o gangliósido gd2 |
EA037006B1 (ru) | 2014-06-06 | 2021-01-26 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Антитела к индуцируемому глюкокортикоидами рецептору фактора некроза опухолей (gitr) и их применения |
MX2016016310A (es) | 2014-06-11 | 2017-10-20 | A Green Kathy | Uso de agonistas y antagonistas vista para suprimir o aumentar la inmunidad humoral. |
WO2015189816A1 (en) | 2014-06-13 | 2015-12-17 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | New treatment against influenza virus |
TWI695011B (zh) | 2014-06-18 | 2020-06-01 | 美商梅爾莎納醫療公司 | 抗her2表位之單株抗體及其使用之方法 |
TWI713453B (zh) | 2014-06-23 | 2020-12-21 | 美商健生生物科技公司 | 干擾素α及ω抗體拮抗劑 |
US10308935B2 (en) | 2014-06-23 | 2019-06-04 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Methods for triggering de novo formation of heterochromatin and or epigenetic silencing with small RNAS |
WO2015198240A2 (en) | 2014-06-25 | 2015-12-30 | Novartis Ag | Compositions and methods for long acting proteins |
EP3161001A2 (de) | 2014-06-25 | 2017-05-03 | Novartis AG | Il17-a spezifische antikörper die mit hyaluronan bindenden peptid-marker fusioniert sind |
GB201411320D0 (en) | 2014-06-25 | 2014-08-06 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody construct |
WO2015198243A2 (en) | 2014-06-25 | 2015-12-30 | Novartis Ag | Compositions and methods for long acting proteins |
CA2953807A1 (en) | 2014-06-26 | 2015-12-30 | Yale University | Compositions and methods to regulate renalase in the treatment of diseases and disorders |
US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
SG11201609707WA (en) | 2014-07-01 | 2017-01-27 | Pfizer | Bispecific heterodimeric diabodies and uses thereof |
US20170165261A1 (en) | 2014-07-01 | 2017-06-15 | Brian Arthur Hemmings | Combination of a brafv600e inhibitor and mertk inhibitor to treat melanoma |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
WO2016008112A1 (en) | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Medshine Discovery Inc. | Linkers and application towards adc thereof |
GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
MY178347A (en) | 2014-07-17 | 2020-10-08 | Novo Nordisk As | Site directed mutagenesis of trem-1 antibodies for decreasing viscosity |
CN112481283A (zh) | 2014-07-21 | 2021-03-12 | 诺华股份有限公司 | 使用cd33嵌合抗原受体治疗癌症 |
US10517875B2 (en) | 2014-07-23 | 2019-12-31 | Mayo Foundation for Medical Engineering and Research | Targeting DNA-PKcs and B7-H1 to treat cancer |
EP3172228B1 (de) | 2014-07-25 | 2019-02-27 | Theravectys | Lentivirale vektoren zur regulierbaren expression eines chimären antigenrezeptors |
PE20170263A1 (es) | 2014-08-04 | 2017-03-30 | Hoffmann La Roche | Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t |
EP3194437B1 (de) | 2014-08-07 | 2021-01-20 | Novartis AG | Antikörper gegen angiopoietinähnliches protein 4 und deren verwendung |
CN107148428B (zh) | 2014-08-07 | 2021-03-09 | 诺华股份有限公司 | 血管生成素样蛋白4抗体和使用方法 |
WO2016025880A1 (en) | 2014-08-14 | 2016-02-18 | Novartis Ag | Treatment of cancer using gfr alpha-4 chimeric antigen receptor |
MY189028A (en) | 2014-08-19 | 2022-01-20 | Novartis Ag | Anti-cd123 chimeric antigen receptor (car) for use in cancer treatment |
EP3185004A4 (de) | 2014-08-20 | 2018-05-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Verfahren zur messung der viskosität einer proteinlösung |
EP3183002B1 (de) | 2014-08-21 | 2021-03-03 | Walter Reed Army Institute of Research | Monoklonale antikörper zur behandlung mikrobieller infektionen |
JP2017527562A (ja) | 2014-09-03 | 2017-09-21 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | 細胞毒性ベンゾジアゼピン誘導体 |
ES2815353T3 (es) | 2014-09-03 | 2021-03-29 | Immunogen Inc | Derivados de benzodiazepina citotóxicos |
US10724096B2 (en) | 2014-09-05 | 2020-07-28 | Population Bio, Inc. | Methods and compositions for inhibiting and treating neurological conditions |
US10442863B2 (en) | 2014-09-08 | 2019-10-15 | Lutana Gmbh | Construct for the delivery of a molecule into the cytoplasm of a cell |
SG11201701867SA (en) | 2014-09-09 | 2017-04-27 | Janssen Biotech Inc | Combination therapies with anti-cd38 antibodies |
US20160075772A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva |
US9993551B2 (en) | 2014-09-13 | 2018-06-12 | Novartis Ag | Combination therapies of EGFR inhibitors |
CA2960756C (en) | 2014-09-15 | 2023-08-01 | Amgen Inc. | Bi-specific anti-cgrp receptor/pac1 receptor antigen binding proteins and uses thereof |
ES2748295T3 (es) | 2014-09-16 | 2020-03-16 | Symphogen As | Anticuerpos anti-MET y composiciones |
WO2016046768A1 (en) | 2014-09-24 | 2016-03-31 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Lats and breast cancer |
MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
AU2015327064B2 (en) | 2014-09-30 | 2021-03-18 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Binding molecules, especially antibodies, binding to L1CAM (CD171) |
CN106715473B (zh) | 2014-10-01 | 2021-11-23 | 免疫医疗有限公司 | 替格瑞洛的抗体及其使用方法 |
KR20170066546A (ko) | 2014-10-03 | 2017-06-14 | 노파르티스 아게 | 조합 요법 |
AU2015327819B2 (en) | 2014-10-03 | 2021-07-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Antibodies that bind ebola glycoprotein and uses thereof |
CU20170052A7 (es) | 2014-10-14 | 2017-11-07 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 |
MX2017004769A (es) | 2014-10-15 | 2017-10-16 | Amgen Inc | Elementos promotores y reguladores para mejorar la expresion de genes heterologos en celulas hospederas. |
MA41685A (fr) | 2014-10-17 | 2017-08-22 | Biogen Ma Inc | Supplémentation en cuivre pour la régulation de la glycosylation dans un procédé de culture cellulaire de mammifère |
KR20210013299A (ko) | 2014-10-17 | 2021-02-03 | 코디악 사이언시스 인코포레이티드 | 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트 |
US10920208B2 (en) | 2014-10-22 | 2021-02-16 | President And Fellows Of Harvard College | Evolution of proteases |
WO2016069886A1 (en) | 2014-10-29 | 2016-05-06 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from many samples |
SG11201703446RA (en) | 2014-10-31 | 2017-05-30 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Anti-cs1 antibodies and antibody drug conjugates |
MA40864A (fr) | 2014-10-31 | 2017-09-05 | Biogen Ma Inc | Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères |
WO2016073401A1 (en) | 2014-11-03 | 2016-05-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of caprylic acid precipitation for protein purification |
KR102626877B1 (ko) | 2014-11-05 | 2024-01-19 | 애넥슨, 인코포레이티드 | 인간화 항-보체 인자 c1q 항체 및 이의 용도 |
WO2016073157A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-05-12 | Genentech, Inc. | Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof |
WO2016073894A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic agents with increased ocular retention |
CA2967026A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of neonatal hypoxia including impairments or effects thereof |
ES2756275T3 (es) | 2014-11-07 | 2020-04-27 | Sesen Bio Inc | Anticuerpos contra IL-6 mejorados |
AU2015345202B2 (en) | 2014-11-10 | 2021-05-13 | Medimmune Limited | Binding molecules specific for CD73 and uses thereof |
JP6847037B2 (ja) | 2014-11-11 | 2021-03-24 | メディミューン リミテッド | 抗cd73抗体とa2a受容体阻害薬とを含む併用治療薬及びその使用 |
EP4183806A3 (de) | 2014-11-12 | 2023-08-02 | Seagen Inc. | Glycaninteragierende verbindungen und verfahren zur verwendung |
US9879087B2 (en) | 2014-11-12 | 2018-01-30 | Siamab Therapeutics, Inc. | Glycan-interacting compounds and methods of use |
US10246701B2 (en) | 2014-11-14 | 2019-04-02 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture |
EP3224275B1 (de) | 2014-11-14 | 2020-03-04 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Antigenbindende moleküle mit einem ligandentrimer der tnf-familie |
EA201791093A1 (ru) | 2014-11-18 | 2018-04-30 | Янссен Фармацевтика Нв | Антитела к cd47, способы и применение |
BR112017010268B1 (pt) | 2014-11-19 | 2024-01-16 | P & M Venge Ab | Agente de ligação, composição de diagnóstico, kit de diagnóstico, método de diagnóstico de uma infecção bacteriana ou de diferenciação entre uma infecção bacteriana e uma infecção de viral, métodos para descartar uma infecção bacteriana ou viral em um indivíduo, métodos para considerar uma infecção bacteriana ou viral em um indivíduo, método para distinguir entre uma infecção bacteriana ou mista e uma infecção viral em um indivíduo, método para descartar uma doença infecciosa, método para identificação do tipo de infecção e dispositivo para o diagnóstico de infecções bacterianas |
MA40934A (fr) | 2014-11-19 | 2017-09-27 | Immunogen Inc | Procédé de préparation de conjugués agent de liaison cellulaire-agent cytotoxique |
PL3221357T3 (pl) | 2014-11-20 | 2020-11-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Wspólne łańcuchy lekkie i sposoby zastosowania |
RS60631B1 (sr) | 2014-11-21 | 2020-09-30 | Bristol Myers Squibb Co | Antitela protiv cd73 i njihova upotreba |
ES2832802T3 (es) | 2014-11-21 | 2021-06-11 | Univ Maryland | Sistemas de administración dirigida del particulado específico de una estructura |
EP3227332B1 (de) | 2014-12-03 | 2019-11-06 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Multispezifische antikörper |
EP3226900A4 (de) | 2014-12-05 | 2018-09-19 | Immunext, Inc. | Identifizierung von vsig8 als vermeintlicher vista-rezeptor und dessen verwendung zur herstellung von vista/vsig8-modulatoren |
CA2968352A1 (en) | 2014-12-08 | 2016-06-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for upregulating immune responses using combinations of anti-rgmb and anti-pd-1 agents |
CA2970155A1 (en) | 2014-12-09 | 2016-06-16 | Abbvie Inc. | Bcl-xl inhibitory compounds having low cell permeability and antibody drug conjugates including the same |
BR112017012377A2 (pt) | 2014-12-09 | 2018-04-24 | Abbvie Inc | conjugados anticorpo-fármaco com inibidores de bcl-xl permeáveis à célula |
EP3229838B1 (de) | 2014-12-11 | 2020-09-09 | Pierre Fabre Medicament | Anti-c10orf54-antikörper und verwendungen davon |
CA2967224C (en) | 2014-12-11 | 2023-08-22 | Inbiomotion S.L. | Binding members for human c-maf |
US10093733B2 (en) | 2014-12-11 | 2018-10-09 | Abbvie Inc. | LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins |
MA41142A (fr) | 2014-12-12 | 2017-10-17 | Amgen Inc | Anticorps anti-sclérostine et utilisation de ceux-ci pour traiter des affections osseuses en tant qu'élements du protocole de traitement |
EP3233918A1 (de) | 2014-12-19 | 2017-10-25 | Novartis AG | Kombinationstherapien |
PT3233912T (pt) | 2014-12-19 | 2021-08-09 | Regenesance B V | Antocorpos que se ligam a c6 humano e utilizações destes |
UY36449A (es) | 2014-12-19 | 2016-07-29 | Novartis Ag | Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6 |
EP3789039A1 (de) | 2014-12-22 | 2021-03-10 | The Rockefeller University | Anti-mertk-antikörper und verwendungen davon |
TWI708786B (zh) | 2014-12-23 | 2020-11-01 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 針對tigit之抗體 |
MX2017009038A (es) | 2015-01-08 | 2017-10-25 | Biogen Ma Inc | Antagonistas de proteina 1 de interacción con el receptor de nogo que contiene el dominio de inmunoglobulina y repeticiones ricas en leucina (lingo-1) y usos para el tratamiento de trastornos desmielinizantes. |
CA2973978A1 (en) | 2015-01-14 | 2016-07-21 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Treatment of cancer with anti-lap monoclonal antibodies |
US10736956B2 (en) | 2015-01-23 | 2020-08-11 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Influenza virus vaccination regimens |
JP6912386B2 (ja) | 2015-01-26 | 2021-08-04 | ザ ユニバーシティー オブ シカゴ | 癌特異的なIL13Rα2を認識するCAR T細胞 |
JP7264592B2 (ja) | 2015-01-26 | 2023-04-25 | ザ ユニバーシティー オブ シカゴ | IL13Rα2結合剤及び癌治療におけるその使用 |
TWI786505B (zh) | 2015-01-28 | 2022-12-11 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
TWI718121B (zh) | 2015-01-28 | 2021-02-11 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
TWI769570B (zh) | 2015-01-28 | 2022-07-01 | 愛爾蘭商普羅佘納生物科技有限公司 | 抗甲狀腺素運送蛋白抗體 |
CA3185253A1 (en) | 2015-02-02 | 2016-08-11 | Children's Health Care D/B/A Children's Minnesota | Anti-surrogate light chain antibodies |
CA2976074A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Multi-specific antibodies with affinity for human a33 antigen and dota metal complex and uses thereof |
US10266584B2 (en) | 2015-02-09 | 2019-04-23 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Antibodies specific to glycoprotein (GP) of Ebolavirus and uses for the treatment and diagnosis of ebola virus infection |
EP3262070A4 (de) * | 2015-02-24 | 2018-07-25 | Rpeptide, LLC | Anti-amyloid-beta-antikörper |
TWI805046B (zh) | 2015-02-27 | 2023-06-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | Il-6受體抗體用於製備醫藥組成物的用途 |
EP3265491A1 (de) | 2015-03-03 | 2018-01-10 | Xoma (Us) Llc | Behandlung von postprandialer hyperinsulinämie und hyperglykämie nach bariatrischer chirurgie |
WO2016139482A1 (en) | 2015-03-03 | 2016-09-09 | Kymab Limited | Antibodies, uses & methods |
EP3265483B1 (de) | 2015-03-06 | 2019-12-11 | CSL Behring Lengnau AG | Modifizierter von-willebrand-faktor mit verbesserter halbwertzeit |
EP3735982A1 (de) | 2015-03-10 | 2020-11-11 | The University of Massachusetts | Abzielung auf gdf6 und bmp-signalisierung für antimelanomtherapie |
AU2016233557B2 (en) | 2015-03-13 | 2021-06-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of alkaline washes during chromatography to remove impurities |
WO2016146833A1 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance |
US20180105554A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-04-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of dextran sulfate to enhance protein a affinity chromatography |
US20180105555A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-04-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of dextran for protein purification |
EP3274468B1 (de) | 2015-03-25 | 2019-02-20 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren zur bestimmung der c3- und c5- konvertase protease-aktivität im alternativen komplement-pfad |
WO2016151558A1 (en) | 2015-03-25 | 2016-09-29 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | A method for measuring the protease activity of factor d of the alternative complement pathway |
CA2981142A1 (en) | 2015-03-27 | 2016-10-06 | University Of Southern California | Car t-cell therapy directed to lhr for the treatment of solid tumors |
KR102622281B1 (ko) | 2015-03-31 | 2024-01-08 | 소리소 파마슈티컬스 인크. | 폴리펩티드 |
EP3277706A1 (de) | 2015-03-31 | 2018-02-07 | VHsquared Limited | Polypeptid mit immunglobulinkettenvariabler domäne mit bindung an clostridium-difficile-toxin b |
EP3277717B1 (de) | 2015-03-31 | 2020-11-18 | Medimmune Limited | Neuartige il33-form, mutierte formen von il33, antikörper, tests und verfahren zur verwendung davon |
WO2016161410A2 (en) | 2015-04-03 | 2016-10-06 | Xoma Technology Ltd. | Treatment of cancer using inhibitors of tgf-beta and pd-1 |
CN107969128A (zh) | 2015-04-17 | 2018-04-27 | 高山免疫科学股份有限公司 | 具有可调的亲和力的免疫调节蛋白 |
WO2016168755A1 (en) | 2015-04-17 | 2016-10-20 | Distributed Bio, Inc. | Method for mass humanization of non-human antibodies |
US11299729B2 (en) | 2015-04-17 | 2022-04-12 | President And Fellows Of Harvard College | Vector-based mutagenesis system |
US10954515B2 (en) | 2015-04-21 | 2021-03-23 | Institut Gustave Roussy | Therapeutic methods, products and compositions inhibiting ZNF555 |
GB201506869D0 (en) | 2015-04-22 | 2015-06-03 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
GB201506870D0 (en) | 2015-04-22 | 2015-06-03 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
WO2016172726A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-10-27 | The Regents Of The University Of California | Modulators of ror1-ror2 binding |
AU2016256486B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-09-23 | University Of South Australia | Compositions and methods for administering antibodies |
EP3288976B1 (de) | 2015-04-29 | 2020-04-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Behandlung von fibrodysplasia ossificans progressiva |
WO2016173719A1 (en) | 2015-04-30 | 2016-11-03 | Abcheck S.R.O. | Method for mass humanization of rabbit antibodies |
WO2016179518A2 (en) | 2015-05-06 | 2016-11-10 | Janssen Biotech, Inc. | Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof |
SG11201708804WA (en) | 2015-05-07 | 2017-11-29 | Agenus Inc | Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof |
US10900975B2 (en) | 2015-05-12 | 2021-01-26 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Systems and methods of epitope binning and antibody profiling |
WO2016187068A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | The General Hospital Corporation | Antagonistic anti-tumor necrosis factor receptor superfamily antibodies |
EP3095465A1 (de) | 2015-05-19 | 2016-11-23 | U3 Pharma GmbH | Kombination von fgfr4-inhibitor und gallensäurekomplexbildner |
IL300548A (en) | 2015-05-20 | 2023-04-01 | Janssen Biotech Inc | Anti-CD38 antibodies for the treatment of light chain amyloidosis and other CD38-positive hematological malignancies |
EA039951B1 (ru) | 2015-05-27 | 2022-03-31 | Юсб Биофарма Спрл | Ингибитор активности csf-1r, предназначенный для лечения или профилактики эпилепсии или болезни паркинсона, и фармацевтическая композиция на его основе |
HUE048284T2 (hu) | 2015-05-29 | 2020-07-28 | Abbvie Inc | Anti-CD40 antitestek és alkalmazásuk |
SG10201913500TA (en) | 2015-05-29 | 2020-03-30 | Agenus Inc | Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof |
CA2987410A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against ox40 and uses thereof |
EP3302559B1 (de) | 2015-06-04 | 2022-01-12 | University of Southern California | Auf lym-1 und lym-2 abgerichtete car-zellen-immuntherapie |
PE20180041A1 (es) | 2015-06-05 | 2018-01-09 | Novartis Ag | Anticuerpos dirigidos a la proteina morfogenetica osea (bmp9) y metodos a partir de estos |
US10723793B2 (en) | 2015-06-12 | 2020-07-28 | Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd. | TGF-β3 specific antibodies and methods and uses thereof |
TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
GB201510758D0 (en) | 2015-06-18 | 2015-08-05 | Ucb Biopharma Sprl | Novel TNFa structure for use in therapy |
EA036789B1 (ru) | 2015-06-22 | 2020-12-22 | Янссен Байотек, Инк. | Комбинированная терапия гемобластозов антителами к cd38 и ингибиторами сурвивина |
UA124799C2 (uk) | 2015-06-24 | 2021-11-24 | Янссен Байотек, Інк. | Спосіб пригнічення імунної відповіді з використанням антитіла, що специфічно зв’язує cd38 |
JP7026509B2 (ja) | 2015-06-24 | 2022-02-28 | ヤンセン ファーマシューティカ エヌブイ | 抗vista抗体およびフラグメント |
KR20180021723A (ko) | 2015-06-29 | 2018-03-05 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항체-약물 콘주게이트의 선택적 제조 방법 |
AU2016285920A1 (en) | 2015-06-29 | 2018-02-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies to CD40 with enhanced agonist activity |
HUE053619T2 (hu) | 2015-06-29 | 2021-07-28 | Immunogen Inc | Anti-CD123 antitestek és konjugátumok és ezek származékai |
CN113350518A (zh) | 2015-07-12 | 2021-09-07 | 杭州多禧生物科技有限公司 | 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体 |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
WO2017015545A1 (en) | 2015-07-22 | 2017-01-26 | President And Fellows Of Harvard College | Evolution of site-specific recombinases |
US11524983B2 (en) | 2015-07-23 | 2022-12-13 | President And Fellows Of Harvard College | Evolution of Bt toxins |
SI3317301T1 (sl) | 2015-07-29 | 2021-10-29 | Novartis Ag | Kombinirane terapije, ki obsegajo molekule protitelesa na LAG-3 |
EP3316902A1 (de) | 2015-07-29 | 2018-05-09 | Novartis AG | Kombinationstherapien mit antikörpermolekülen gegen tim-3 |
WO2017019895A1 (en) | 2015-07-30 | 2017-02-02 | President And Fellows Of Harvard College | Evolution of talens |
KR20180035852A (ko) | 2015-08-03 | 2018-04-06 | 노파르티스 아게 | Fgf21-연관 장애를 치료하는 방법 |
ES2944982T3 (es) | 2015-08-05 | 2023-06-27 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-CD154 y métodos para utilizarlos |
EP3152570A1 (de) | 2015-08-06 | 2017-04-12 | Yaya Diagnostics GmbH | Vorrichtung und verfahren zur erkennung von zielen |
CA2994841A1 (en) | 2015-08-06 | 2017-02-09 | Xoma (Us) Llc | Antibody fragments against the insulin receptor and uses thereof to treat hypoglycemia |
WO2017031353A1 (en) | 2015-08-19 | 2017-02-23 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Novel methods of generating antibodies |
EP3341415B1 (de) | 2015-08-28 | 2021-03-24 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Anti-hypusin-antikörper und verwendungen davon |
EA201890630A1 (ru) | 2015-09-01 | 2018-10-31 | Эйдженус Инк. | Антитела против pd-1 и способы их применения |
AU2016315892B2 (en) | 2015-09-02 | 2023-06-15 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for modulating T-cell mediated immune response |
RU2731644C2 (ru) | 2015-09-09 | 2020-09-07 | Новартис Аг | Молекулы, связывающиеся с тимусным стромальным лимфопоэтином (tslp), и способы применения таких молекул |
US10000561B2 (en) | 2015-09-09 | 2018-06-19 | Novartis Ag | Thymic stromal lymphopoietin (TSLP)-binding molecules and methods of using the molecules |
CA2997762A1 (en) | 2015-09-10 | 2017-03-16 | Becton, Dickinson And Company | Cyclophosphamide analogs for use as immunogens and assay conjugates for an immunoassay of cyclophosphamide and ifosfamide |
AU2016323440B2 (en) | 2015-09-15 | 2023-07-13 | Amgen Inc. | Tetravalent bispecific and tetraspecific antigen binding proteins and uses thereof |
LT3350220T (lt) | 2015-09-15 | 2021-09-27 | Scholar Rock, Inc. | Anti pro/latentinio miostatino antikūnai ir jų panaudojimas |
JP2018530540A (ja) | 2015-09-16 | 2018-10-18 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | 巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防のための抗mcam抗体の使用 |
WO2017046774A2 (en) | 2015-09-16 | 2017-03-23 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of giant cell arteritis, polymyalgia rheumatica or takayasu's arteritis |
EP3349796A4 (de) | 2015-09-17 | 2019-05-29 | ImmunoGen, Inc. | Therapeutische kombinationen mit anti-folr1-immunkonjugaten |
EP3352784A4 (de) | 2015-09-23 | 2019-06-26 | Cytoimmune Therapeutics, LLC | Flt3-gerichtete car-zellen zur immuntherapie |
WO2017053807A2 (en) | 2015-09-23 | 2017-03-30 | Genentech, Inc. | Optimized variants of anti-vegf antibodies |
IL288784B2 (en) | 2015-09-24 | 2023-10-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Antibodies against GARP, nucleotides encoding them, and vectors, cells and preparations containing them, methods for their preparation and uses thereof |
RU2638457C2 (ru) | 2015-09-28 | 2017-12-13 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Онкомакс" | Антитела, специфически связывающие рецептор 1 типа фактора роста фибробластов, применение антител для лечения онкологического заболевания, способ получения антител |
CN109069622A (zh) | 2015-09-30 | 2018-12-21 | 詹森生物科技公司 | 特异性结合人cd40的拮抗性抗体和使用方法 |
AR106188A1 (es) | 2015-10-01 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización |
JP6937746B2 (ja) | 2015-10-02 | 2021-09-22 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 二重特異性抗cd19×cd3t細胞活性化抗原結合分子 |
CN107849137B (zh) | 2015-10-02 | 2021-11-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双特异性抗ceaxcd3 t细胞活化性抗原结合分子 |
WO2017055385A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xgd2 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055388A2 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
US20170096485A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055392A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xcd44v6 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055393A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xtim-3 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
WO2017055395A1 (en) | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xrob04 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
US11207393B2 (en) | 2015-10-16 | 2021-12-28 | President And Fellows Of Harvard College | Regulatory T cell PD-1 modulation for regulating T cell effector immune responses |
CN108350068A (zh) | 2015-10-27 | 2018-07-31 | Ucb生物制药私人有限公司 | 使用抗-il-17a/f抗体的治疗方法 |
US20180348224A1 (en) | 2015-10-28 | 2018-12-06 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Resear Ch | Tenascin-w and biliary tract cancers |
WO2017075329A2 (en) | 2015-10-29 | 2017-05-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for identification, assessment, prevention, and treatment of metabolic disorders using pm20d1 and n-lipidated amino acids |
US10875923B2 (en) | 2015-10-30 | 2020-12-29 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Antibodies to B7-H1 |
JP6869553B2 (ja) | 2015-10-30 | 2021-05-12 | ギャラクシー バイオテック, エルエルシーGalaxy Biotech, Llc | デスレセプター4及びデスレセプター5に結合する非常に強力な抗体 |
ITUB20155272A1 (it) | 2015-11-02 | 2017-05-02 | Scuola Normale Superiore | Intracellular antibody |
TWI800341B (zh) | 2015-11-03 | 2023-04-21 | 美商健生生物科技公司 | 抗cd38抗體之皮下調配物及其用途 |
BR112018008904A2 (pt) | 2015-11-03 | 2018-11-27 | Janssen Biotech Inc | anticorpos que se ligam especificamente a tim-3 e seus usos |
KR20180088828A (ko) | 2015-11-09 | 2018-08-07 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 아밀로이드 베타에서의 n-말단 에피토프 및 이에 형태적으로-선택적인 항체 |
JP7452829B2 (ja) | 2015-11-09 | 2024-03-19 | ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア | アミロイドベータのエピトープおよびそれに対する抗体 |
US10774120B2 (en) | 2015-11-09 | 2020-09-15 | The University Of British Columbia | Anti-amyloid beta antibodies binding to a cyclic amyloid beta peptide |
RU2710194C9 (ru) | 2015-11-10 | 2020-09-14 | МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи | Связывающие молекулы, специфичные в отношении asct2, и их применения |
CA3004790A1 (en) | 2015-11-10 | 2017-05-18 | Visterra, Inc. | Lipopolysaccharide binding antibody-antimicrobial peptide conjugates and uses thereof |
IL258768B2 (en) | 2015-11-12 | 2023-11-01 | Siamab Therapeutics Inc | Compounds interacting with glycans and methods of use |
JP6925278B2 (ja) | 2015-11-18 | 2021-08-25 | 中外製薬株式会社 | 液性免疫応答の増強方法 |
EP3378487B1 (de) | 2015-11-18 | 2022-03-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Kombinationstherapie mit t-zell-neuausrichtendem antigenbindendem molekül gegen zelle mit immunsuppressiver funktion |
US11208483B2 (en) | 2015-11-19 | 2021-12-28 | Shanghai Kanda Biotechnology Co, Ltd. | CTLA-4 antibodies and uses thereof |
AU2016356780A1 (en) | 2015-11-19 | 2018-06-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) and uses thereof |
MA43308A (fr) | 2015-11-25 | 2018-10-03 | Visterra Inc | Molécules d'anticorps se liant à april et leurs utilisations |
CA3006759A1 (en) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | The Regents Of The University Of California | Tumor-specific payload delivery and immune activation using a human antibody targeting a highly specific tumor cell surface antigen |
WO2017095875A1 (en) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Anti human ip-10 antibodies and their uses |
WO2017095808A1 (en) | 2015-11-30 | 2017-06-08 | Abbvie Inc. | ANTI-huLRRC15 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS FOR THEIR USE |
JP2019500327A (ja) | 2015-11-30 | 2019-01-10 | アッヴィ・インコーポレイテッド | 抗huLRRC15抗体薬物コンジュゲート及びその使用方法 |
AU2016365318B2 (en) | 2015-12-02 | 2024-04-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibodies and molecules that immunospecifically bind to BTN1A1 and the therapeutic uses thereof |
KR20180100122A (ko) | 2015-12-02 | 2018-09-07 | 주식회사 에스티사이언스 | 당화된 btla(b- 및 t-림프구 약화인자)에 특이적인 항체 |
GB201521389D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
GB201521383D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
GB201521382D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521391D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201521393D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
EP3386542B1 (de) | 2015-12-10 | 2020-11-18 | Katholieke Universiteit Leuven | Anti-adamts13-antikörper und deren verwendung zur behandlung oder verhütung von hämorrhagischen störungen aufgrund einer ventrikulären unterstützungsvorrichtung |
JP2019502695A (ja) | 2015-12-17 | 2019-01-31 | ノバルティス アーゲー | PD−1に対する抗体分子とC−Met阻害剤との組合せおよびその使用 |
AU2016371034A1 (en) | 2015-12-17 | 2018-05-31 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies specifically binding HLA-DR and their uses |
CA3007671A1 (en) | 2015-12-17 | 2017-06-22 | Novartis Ag | Antibody molecules to pd-1 and uses thereof |
CA3008102A1 (en) | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Novartis Ag | Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof |
EP3184544A1 (de) | 2015-12-23 | 2017-06-28 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Glycoprotein-v-inhibitoren zur verwendung als koagulansien |
WO2017115773A1 (ja) | 2015-12-28 | 2017-07-06 | 中外製薬株式会社 | Fc領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法 |
RU2744860C2 (ru) | 2015-12-30 | 2021-03-16 | Кодиак Сайенсиз Инк. | Антитела и их конъюгаты |
CN109071645A (zh) | 2016-01-08 | 2018-12-21 | 供石公司 | 抗-原肌生长抑制素/潜伏肌生长抑制素抗体及其使用方法 |
SG11201805493YA (en) | 2016-01-08 | 2018-07-30 | Iontas Ltd | Binding members with altered diversity scaffold domains |
WO2017121880A1 (en) | 2016-01-15 | 2017-07-20 | Philogen S.P.A | Intestinal antigens for pharmacodelivery applications |
EP3851457A1 (de) | 2016-01-21 | 2021-07-21 | Novartis AG | Gegen cll-1 gerichtete multispezifische moleküle |
CN108601848A (zh) | 2016-02-05 | 2018-09-28 | 伊缪诺金公司 | 用于制备细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的有效方法 |
GB201602413D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Nascient Ltd | Method |
CN116920085A (zh) | 2016-02-12 | 2023-10-24 | 詹森药业有限公司 | 抗-vista(b7h5)抗体 |
AU2017224122B2 (en) | 2016-02-26 | 2024-04-11 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Connexin (Cx) 43 hemichannel-binding antibodies and uses thereof |
CN109476731A (zh) | 2016-02-29 | 2019-03-15 | 基础医药有限公司 | 治疗癌症的方法 |
WO2017149513A1 (en) | 2016-03-03 | 2017-09-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
SG11201807677YA (en) | 2016-03-04 | 2018-10-30 | Univ Rockefeller | Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity |
EA201891983A8 (ru) | 2016-03-04 | 2020-05-28 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Комбинированная терапия антителами к cd73 |
WO2017153955A1 (en) | 2016-03-09 | 2017-09-14 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases |
WO2017153953A1 (en) | 2016-03-09 | 2017-09-14 | Prothena Biosciences Limited | Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases |
GB201604124D0 (en) | 2016-03-10 | 2016-04-27 | Ucb Biopharma Sprl | Pharmaceutical formulation |
SG11201807523PA (en) | 2016-03-10 | 2018-09-27 | Viela Bio Inc | Ilt7 binding molecules and methods of using the same |
WO2017156488A2 (en) | 2016-03-10 | 2017-09-14 | Acceleron Pharma, Inc. | Activin type 2 receptor binding proteins and uses thereof |
PL3365368T3 (pl) | 2016-03-11 | 2023-08-21 | Scholar Rock, Inc. | Immunoglobuliny wiążące tgfbeta1 i ich zastosowanie |
WO2017160599A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Use of cd300b antagonists to treat sepsis and septic shock |
TW202342540A (zh) | 2016-03-14 | 2023-11-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 用於癌之治療的細胞傷害誘導治療劑 |
US10947317B2 (en) | 2016-03-15 | 2021-03-16 | Mersana Therapeutics, Inc. | NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
KR20180119670A (ko) | 2016-03-15 | 2018-11-02 | 아스트라제네카 아베 | 아밀로이드 베타의 축적과 관련된 질환의 치료를 위한 bace 억제제와 항체 또는 항원 결합 단편의 조합 |
EP3430058A4 (de) | 2016-03-15 | 2019-10-23 | Generon (Shanghai) Corporation Ltd. | Multispezifische fab-fusionsproteine und verwendungen davon |
SG11201807148RA (en) | 2016-03-16 | 2018-09-27 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | Ephrin receptor a2 (epha2)-targeted docetaxel-generating nano-liposome compositions |
WO2017161071A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc | Treating ephrin receptor a2 (epha2) positive cancer with targeted docetaxel-generating nano-liposome compositions |
WO2017158084A1 (en) | 2016-03-17 | 2017-09-21 | Numab Innovation Ag | ANTI-TNFα-ANTIBODIES AND FUNCTIONAL FRAGMENTS THEREOF |
US11186641B2 (en) | 2016-03-17 | 2021-11-30 | Oslo Universitetssykehus Hf | Fusion proteins targeting tumour associated macrophages for treating cancer |
WO2017161342A1 (en) | 2016-03-17 | 2017-09-21 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods of diagnosing inflammatory bowel disease through rnaset2 |
US10774140B2 (en) | 2016-03-17 | 2020-09-15 | Numab Therapeutics AG | Anti-TNFα-antibodies and functional fragments thereof |
RS61374B1 (sr) | 2016-03-17 | 2021-02-26 | Tillotts Pharma Ag | Anti-tnf alfa-antitela i njihovi funkcionalni fragmenti |
LT3219727T (lt) | 2016-03-17 | 2021-02-10 | Tillotts Pharma Ag | Anti-tnf alfa antikūnai ir jų funkciniai fragmentai |
KR102392746B1 (ko) | 2016-03-17 | 2022-04-29 | 누맙 이노베이션 아게 | 항-TNFα-항체 및 이의 기능성 단편 |
CN109153728A (zh) | 2016-03-21 | 2019-01-04 | 埃尔斯塔治疗公司 | 多特异性和多功能分子及其用途 |
SG11201808085WA (en) | 2016-03-22 | 2018-10-30 | Hoffmann La Roche | Protease-activated t cell bispecific molecules |
US10745487B2 (en) | 2016-03-22 | 2020-08-18 | Bionomics Limited | Method of treating cancer by administering an anti-LGR5 monoclonal antibody |
JP7155009B2 (ja) | 2016-03-25 | 2022-10-18 | ビステラ, インコーポレイテッド | デングウイルスに対する抗体分子の製剤 |
EP3231813A1 (de) | 2016-03-29 | 2017-10-18 | F. Hoffmann-La Roche AG | Trimere kostimulatorische tnf-familien-ligandenhaltige antigenbindende moleküle |
EP3943508B1 (de) | 2016-03-29 | 2024-01-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Zweifach funktionale antikörper, die spezifisch für glykosyliertes pd-l1 sind, und verfahren zur verwendung davon |
EP3436480A4 (de) | 2016-03-30 | 2019-11-27 | Musc Foundation for Research Development | Verfahren zur behandlung und diagnose von krebs durch targeting von glycoprotein a repetitions predominant (garp) und zur effektiven immuntherapie allein oder in kombination |
PT3440208T (pt) | 2016-04-06 | 2020-12-04 | Zumutor Biologics Inc | Vetores para clonagem e expressão de proteínas, métodos e suas aplicações |
CN116333140A (zh) | 2016-04-08 | 2023-06-27 | 埃缇健康公司D/B/A泽尔拜尔 | 网蛋白-1结合抗体及其用途 |
RU2021111187A (ru) | 2016-04-15 | 2021-04-29 | Янссен Фармасьютикалз, Инк. | Антитела против человеческого vista и их применение |
US20170298119A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Visterra, Inc. | Antibody molecules to zika virus and uses thereof |
MA44723A (fr) | 2016-04-18 | 2019-02-27 | Celldex Therapeutics Inc | Anticorps agonistes se liant au cd40 humain et leurs utilisations |
WO2017182561A1 (en) | 2016-04-21 | 2017-10-26 | Sphingotec Therapeutics Gmbh | Methods for determining dpp3 and therapeutic methods |
KR102471787B1 (ko) | 2016-05-02 | 2022-11-29 | 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 | 타우 인식 항체 |
CN109415434B (zh) | 2016-05-02 | 2022-12-30 | 普罗塞纳生物科学有限公司 | 识别tau的抗体 |
EP3455256A1 (de) | 2016-05-09 | 2019-03-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Tl1a-antikörper und verwendungen davon |
EP3243836A1 (de) | 2016-05-11 | 2017-11-15 | F. Hoffmann-La Roche AG | C-terminal-fusionierte antigenbindende moleküle mit ligandentrimer der tnf-familie |
WO2017194442A1 (en) | 2016-05-11 | 2017-11-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and a tenascin binding moiety |
EP3243832A1 (de) | 2016-05-13 | 2017-11-15 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antigenbindende moleküle mit einem ligandentrimer der tnf-familie und pd1-bindungsteil |
JP7084878B2 (ja) | 2016-05-16 | 2022-06-15 | 武田薬品工業株式会社 | 抗第IX因子Padua抗体 |
KR20230028574A (ko) | 2016-05-17 | 2023-02-28 | 애브비 바이오테라퓨틱스 인크. | 항-cMet 항체 약물 컨쥬게이트 및 그들의 이용 방법 |
CN109415441B (zh) | 2016-05-24 | 2023-04-07 | 英斯梅德股份有限公司 | 抗体及其制备方法 |
JP2019523221A (ja) | 2016-05-27 | 2019-08-22 | アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド | 抗cd40抗体とその使用 |
US10875921B2 (en) | 2016-05-27 | 2020-12-29 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-4-1BB antibodies and their uses |
MX2018014387A (es) | 2016-05-27 | 2019-03-14 | Agenus Inc | Anticuerpos anti proteina inmunoglobulina de linfocitos t y dominio de mucina 3 (tim-3) y métodos para usarlos. |
MY194619A (en) | 2016-06-02 | 2022-12-07 | Abbvie Inc | Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof |
WO2017208210A1 (en) | 2016-06-03 | 2017-12-07 | Prothena Biosciences Limited | Anti-mcam antibodies and associated methods of use |
CN109311991B (zh) | 2016-06-06 | 2022-08-30 | 希望之城 | Baff-r靶向嵌合抗原受体修饰的t细胞及其用途 |
JP7275446B2 (ja) | 2016-06-06 | 2023-05-18 | シティ・オブ・ホープ | Baff-r抗体及びその使用 |
SG11201810697QA (en) | 2016-06-07 | 2018-12-28 | Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft | Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma |
WO2017214335A1 (en) | 2016-06-08 | 2017-12-14 | Abbvie Inc. | Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates |
JP7237344B2 (ja) | 2016-06-15 | 2023-03-13 | アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ | インフルエンザウイルス血球凝集素タンパク質及びその使用 |
WO2017216724A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Novartis Ag | Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6) |
KR102512411B1 (ko) | 2016-06-26 | 2023-03-22 | 젠노바 바이오파마슈티컬스 리미티드 | 항체 파지 디스플레이 라이브러리 |
CA3028002A1 (en) | 2016-06-27 | 2018-01-04 | Juno Therapeutics, Inc. | Method of identifying peptide epitopes, molecules that bind such epitopes and related uses |
MA45493A (fr) | 2016-06-27 | 2019-05-01 | Aicuris Anti Infective Cures Gmbh | Inhibiteurs d'entrée de hcmv. |
MA45491A (fr) | 2016-06-27 | 2019-05-01 | Juno Therapeutics Inc | Épitopes à restriction cmh-e, molécules de liaison et procédés et utilisations associés |
US20190233533A1 (en) | 2016-06-28 | 2019-08-01 | Umc Utrecht Holding B.V. | Treatment Of IgE-Mediated Diseases With Antibodies That Specifically Bind CD38 |
WO2018007922A2 (en) | 2016-07-02 | 2018-01-11 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin antibodies |
EP3478715A2 (de) | 2016-07-02 | 2019-05-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin-antikörper |
EP3478716A2 (de) | 2016-07-02 | 2019-05-08 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin-antikörper |
AU2017292172A1 (en) | 2016-07-06 | 2019-01-03 | Prothena Biosciences Limited | Assay for detecting total and S129 phosphorylated alpha-synuclein |
ES2948446T3 (es) | 2016-07-08 | 2023-09-12 | Sphingotec Gmbh | Adrenomedulina para la valoración de la congestión en un sujeto con insuficiencia cardiaca aguda |
KR20190039937A (ko) | 2016-07-08 | 2019-04-16 | 스태튼 바이오테크놀로지 비.브이. | 항-ApoC3 항체 및 이의 사용 방법 |
BR112019000630A2 (pt) | 2016-07-13 | 2019-07-09 | Biogen Ma Inc | regimes de dosagem dos antagonistas de lingo-1 e usos para tratamento de distúrbios desmielinizante |
JP7027401B2 (ja) | 2016-07-14 | 2022-03-01 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | Tim3に対する抗体およびその使用 |
JP7219376B2 (ja) | 2016-07-15 | 2023-02-08 | ノバルティス アーゲー | キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防 |
EP3487506A1 (de) | 2016-07-20 | 2019-05-29 | Hybrigenics SA | Kombinationen von inecalcitol mit einem anti-cd38-mittel und deren verwendungen zur behandlung von krebs |
JP2019528251A (ja) | 2016-07-20 | 2019-10-10 | エスティーキューブ,インコーポレイテッド | グリコシル化pd−l1に結合する抗体の組合せを使用するがんの処置および治療の方法 |
WO2018015573A2 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | Deutsches Zentrum Für Neurodegenerative Erkrankungen E.V. (Dzne) | Trem2 cleavage modulators and uses thereof |
KR102435801B1 (ko) | 2016-07-22 | 2022-08-25 | 암젠 인크 | Fc-함유 단백질의 정제 방법 |
US20190330318A1 (en) | 2016-07-25 | 2019-10-31 | Biogen Ma Inc. | Anti-hspa5 (grp78) antibodies and uses thereof |
BR112019001693A2 (pt) | 2016-07-29 | 2019-07-02 | Ct Hospitalier Universitaire Toulouse | anticorpos direcionados a macrófagos associados a tumores e seus usos |
EP3490600A1 (de) | 2016-08-01 | 2019-06-05 | Xoma (Us) Llc | Parathormon-rezeptor 1 (pth1r)-antikörper und verwendungen davon |
US11858980B2 (en) | 2016-08-02 | 2024-01-02 | Visterra, Inc. | Engineered polypeptides and uses thereof |
WO2018026969A2 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | Achaogen, Inc. | Plazomicin antibodies and methods of use |
WO2018027042A1 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | Bio-Techne Corporation | Identification of vsig3/vista as a novel immune checkpoint and use thereof for immunotherapy |
CN109689090B (zh) | 2016-08-05 | 2023-12-26 | 免疫医疗有限责任公司 | 抗o2抗体及其用途 |
EP3497120A1 (de) | 2016-08-12 | 2019-06-19 | Janssen Biotech, Inc. | Manipulierte antikörper und andere fc-domänen-haltige moleküle mit verbesserten agonismus- und effektorfunktionen |
CN109843916B (zh) | 2016-08-12 | 2023-10-31 | 詹森生物科技公司 | 具有增强的激动活性的Fc工程化抗TNFR超家族成员抗体及其使用方法 |
CN109790201A (zh) | 2016-08-12 | 2019-05-21 | 百时美施贵宝公司 | 纯化蛋白质的方法 |
WO2018044970A1 (en) | 2016-08-31 | 2018-03-08 | University Of Rochester | Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus k envelope (herv-k) and uses thereof |
TW201825674A (zh) | 2016-09-09 | 2018-07-16 | 美商艾斯合顧問有限公司 | 表現雙特異性接合分子的溶瘤病毒 |
HUE051700T2 (hu) | 2016-09-14 | 2021-03-29 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Anti-PD-1 antitestek |
JP2020501508A (ja) | 2016-09-15 | 2020-01-23 | クアドルセプト バイオ リミテッド | 多量体、四量体および八量体 |
WO2018057955A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific antibody molecules comprising lambda and kappa light chains |
CA3038679A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Xoma (Us) Llc | Antibodies that bind interleukin-2 and uses thereof |
GB201616596D0 (en) | 2016-09-29 | 2016-11-16 | Nascient Limited | Epitope and antibodies |
WO2018060453A1 (en) | 2016-09-30 | 2018-04-05 | Vhsquared Limited | Compositions |
EP3519437B1 (de) | 2016-09-30 | 2021-09-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispezifiche antikörper gegen p95her2 |
EP3519824A1 (de) | 2016-10-03 | 2019-08-07 | Abbott Laboratories | Verbesserte verfahren zur beurteilung des uch-l1-status in patientenproben |
WO2018066626A1 (ja) | 2016-10-07 | 2018-04-12 | 第一三共株式会社 | 抗her2抗体-薬物コンジュゲート投与による耐性癌の治療 |
AR110676A1 (es) | 2016-10-07 | 2019-04-24 | Novartis Ag | Tratamiento del cáncer utilizando receptores de antígenos quiméricos |
TW202246349A (zh) | 2016-10-11 | 2022-12-01 | 美商艾吉納斯公司 | 抗lag-3抗體及其使用方法 |
WO2018071822A2 (en) | 2016-10-13 | 2018-04-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Antibodies that bind zika virus envelope protein and uses thereof |
WO2018071576A1 (en) | 2016-10-14 | 2018-04-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Treatment of tumors by inhibition of cd300f |
EP3312290A1 (de) | 2016-10-18 | 2018-04-25 | Ipsen Biopharm Limited | Zellulärer vamp-spaltungstest |
SG11201903063UA (en) | 2016-10-19 | 2019-05-30 | Medimmune Llc | Anti-o1 antibodies and uses thereof |
EP3532489A4 (de) | 2016-10-26 | 2020-07-08 | Cedars-Sinai Medical Center | Neutralisierende monoklonale anti-tl1a-antikörper |
US11249082B2 (en) | 2016-10-29 | 2022-02-15 | University Of Miami | Zika virus assay systems |
WO2018085359A1 (en) | 2016-11-02 | 2018-05-11 | Immunogen, Inc. | Combination treatment with antibody-drug conjugates and parp inhibitors |
WO2018083238A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel anti-py792-ddr1 antibodies |
US11779604B2 (en) | 2016-11-03 | 2023-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods |
WO2018083237A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Roche Diagnostics Operations Inc. | Novel anti-py520-ddr1 antibodies |
WO2018083235A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel anti-py513-ddr1 antibodies |
WO2018083240A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Roche Diagnostics Gmbh | Novel anti-py796-ddr1 antibodies |
WO2018083538A1 (en) | 2016-11-07 | 2018-05-11 | Neuracle Scienc3 Co., Ltd. | Anti-family with sequence similarity 19, member a5 antibodies and method of use thereof |
NZ754407A (en) | 2016-11-09 | 2023-01-27 | Philogen Spa | Il2 and tnf mutant immunoconjugates |
US20180125920A1 (en) | 2016-11-09 | 2018-05-10 | The University Of British Columbia | Methods for preventing and treating A-beta oligomer-associated and/or -induced diseases and conditions |
CA3043528A1 (en) | 2016-11-14 | 2018-05-17 | Amgen Inc. | Bispecific or biparatopic antigen binding proteins and uses thereof |
CN109996809A (zh) | 2016-11-14 | 2019-07-09 | 诺华股份有限公司 | 与促融合蛋白minion相关的组合物、方法和治疗用途 |
NZ752394A (en) | 2016-11-14 | 2021-07-30 | Hangzhou Dac Biotech Co Ltd | Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers |
AU2017362222A1 (en) | 2016-11-16 | 2019-05-30 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating psoriasis with anti-IL-23 specific antibody |
EP3541847A4 (de) | 2016-11-17 | 2020-07-08 | Seattle Genetics, Inc. | Glycaninteragierende verbindungen und verfahren zur verwendung |
AU2017361887B2 (en) | 2016-11-21 | 2019-08-15 | Cureab Gmbh | Anti-GP73 antibodies and immunoconjugates |
WO2018098370A1 (en) | 2016-11-23 | 2018-05-31 | Immunoah Therapeutics, Inc. | 4-1bb binding proteins and uses thereof |
JP7227146B2 (ja) | 2016-11-23 | 2023-02-21 | バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド | 凝固第ix因子および凝固第x因子に結合する二重特異性抗体 |
JPWO2018097308A1 (ja) | 2016-11-28 | 2019-10-17 | 中外製薬株式会社 | リガンド結合活性が調整可能なリガンド結合分子 |
CA3046082A1 (en) | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Agenus Inc. | Antibodies and methods of use thereof |
MX2019006340A (es) | 2016-12-07 | 2019-11-07 | Agenus Inc | Anticuerpos anti antígeno 4 del linfocito t citotóxico (ctla-4) y métodos de uso de los mismos. |
KR20210157471A (ko) | 2016-12-15 | 2021-12-28 | 애브비 바이오테라퓨틱스 인크. | 항-ox40 항체 및 이의 용도 |
EP3339324A1 (de) | 2016-12-22 | 2018-06-27 | sphingotec GmbH | Anti-adrenomedullin (adm)-antikörper oder anti-adm antikörperfragment oder anti-adm-nicht-ig-gerüst zur verwendung in einer intervention und therapie von verstopfung bei einem darauf angewiesenen patienten |
CN110167962A (zh) | 2016-12-16 | 2019-08-23 | 艾德里诺医药公司 | 用于干预和治疗需要的患者的充血的抗肾上腺髓质素(ADM)抗体或抗ADM抗体片段或抗ADM非Ig支架 |
GB201621635D0 (en) | 2016-12-19 | 2017-02-01 | Ucb Biopharma Sprl | Crystal structure |
CN110087682B (zh) | 2016-12-19 | 2023-12-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用靶向性4-1bb(cd137)激动剂的组合疗法 |
EP3559034B1 (de) | 2016-12-20 | 2020-12-02 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Kombinationstherapie von anti-cd20/anti-cd3-bispezifischen antikörpern und 4-1bb (cd137)-agonisten |
JP7202185B2 (ja) | 2016-12-22 | 2023-01-11 | 第一三共株式会社 | 抗cd3抗体及び該抗体を含む分子 |
RU2019123063A (ru) | 2016-12-23 | 2021-01-26 | Вистерра, Инк. | Связывающие полипептиды и способы их получения |
MX2019007642A (es) | 2016-12-23 | 2019-09-09 | Cephalon Inc | Anticuerpos anti-il-5. |
FI3565592T3 (fi) | 2017-01-06 | 2023-05-10 | Scholar Rock Inc | Metabolisten tautien hoitaminen estämällä myostatiinin aktivaatio |
WO2018129395A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Scholar Rock, Inc. | Methods for treating metabolic diseases by inhibiting myostatin activation |
WO2018129329A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Scholar Rock, Inc. | ISOFORM-SPECIFIC, CONTEXT-PERMISSIVE TGFβ1 INHIBITORS AND USE THEREOF |
EP3565845A4 (de) | 2017-01-06 | 2020-10-07 | Biosion, Inc. | Erbb2-antikörper und deren verwendungen |
US20180244785A1 (en) | 2017-01-09 | 2018-08-30 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Anti-fgfr antibodies and methods of use |
WO2018130661A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Academia Sinica | Reloadable hydrogel system for treating brain conditions |
TWI659750B (zh) | 2017-01-13 | 2019-05-21 | 中央研究院 | 用以治療心肌梗塞之可重複裝載之改良水膠系統 |
MX2019008059A (es) | 2017-01-17 | 2019-12-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Anticuerpo anti-gpr20 y conjugado de anticuerpo-medicamento anti-gpr20. |
AU2018209940A1 (en) | 2017-01-18 | 2019-07-11 | Visterra, Inc. | Antibody molecule-drug conjugates and uses thereof |
WO2018137705A1 (en) | 2017-01-26 | 2018-08-02 | Zai Lab (Shanghai) Co., Ltd. | Cd47 antigen binding unit and uses thereof |
EP3574012A1 (de) | 2017-01-27 | 2019-12-04 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Bispezifische her2- und cd3-bindende moleküle |
CA3052095A1 (en) | 2017-01-30 | 2018-08-02 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active psoriatic arthritis |
US10240205B2 (en) | 2017-02-03 | 2019-03-26 | Population Bio, Inc. | Methods for assessing risk of developing a viral disease using a genetic test |
US11623945B2 (en) | 2017-02-06 | 2023-04-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Immunostimulating compositions and uses therefore |
SG10201912368XA (en) | 2017-02-07 | 2020-02-27 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Anti-gprc5d antibody and molecule comprising the antibody |
MA47442A (fr) | 2017-02-07 | 2019-12-18 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-tnf, compositions et méthodes pour le traitement de la spondylarthrite ankylosante active |
CA3052911A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Novartis Ag | Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof |
US20200291089A1 (en) | 2017-02-16 | 2020-09-17 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof |
EP3583124A1 (de) | 2017-02-17 | 2019-12-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Antikörper gegen alpha-synuklein und verwendungen davon |
JP7106560B2 (ja) | 2017-02-28 | 2022-07-26 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | 自己犠牲型ペプチドリンカーを有するメイタンシノイド誘導体及びそのコンジュゲート |
WO2018158719A1 (en) | 2017-03-02 | 2018-09-07 | Novartis Ag | Engineered heterodimeric proteins |
WO2018158398A1 (en) | 2017-03-02 | 2018-09-07 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof |
US10857230B2 (en) | 2017-03-03 | 2020-12-08 | Janssen Biotech, Inc. | Co-therapy comprising a small molecule CSF-1R inhibitor and an agonistic antibody that specifically binds CD40 for the treatment of cancer |
MA47812A (fr) | 2017-03-03 | 2021-04-14 | Seagen Inc | Composés interagissant avec le glycane et méthodes d'utilisation |
JOP20180021A1 (ar) | 2017-03-16 | 2019-01-30 | Janssen Biotech Inc | الأجسام المضادة لتكتلات خيوط بروتين تاو (tau) الحلزونية المزدوجة واستخداماتها |
US11016092B2 (en) | 2017-03-23 | 2021-05-25 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1 |
CN110475790A (zh) | 2017-03-24 | 2019-11-19 | 全药工业株式会社 | 抗IgM/B细胞表面抗原双特异性抗体 |
AU2018240117A1 (en) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods for preventing and treating heart disease |
WO2018176019A1 (en) | 2017-03-24 | 2018-09-27 | The Regents Of The University Of California | Proteoglycan irregularities in abnormal fibroblasts and therapies based therefrom |
CN110382542B (zh) | 2017-03-29 | 2023-06-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子 |
WO2018178074A1 (en) | 2017-03-29 | 2018-10-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Trimeric antigen binding molecules specific for a costimulatory tnf receptor |
CN110573528B (zh) | 2017-03-29 | 2023-06-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子 |
JP7229169B2 (ja) | 2017-03-30 | 2023-02-27 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | 生体高分子の精製のための超分子高アフィニティタンパク質結合系 |
WO2018184965A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody |
LT3606946T (lt) | 2017-04-03 | 2022-10-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-pd-1 antikūno imunokonjugatai su mutantiniu il-2 arba su il-15 |
CN110914300A (zh) | 2017-04-03 | 2020-03-24 | 安康乐济股份有限公司 | 使用ps靶向抗体与免疫肿瘤学药剂治疗癌症的方法 |
BR112019018767A2 (pt) | 2017-04-03 | 2020-05-05 | Hoffmann La Roche | anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, usos, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção |
TWI788340B (zh) | 2017-04-07 | 2023-01-01 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗icos促效劑抗體及其用途 |
CA3058652A1 (en) | 2017-04-07 | 2018-10-11 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Anti-influenza b virus neuraminidase antibodies and uses thereof |
EP3609915A1 (de) | 2017-04-12 | 2020-02-19 | Pfizer Inc | Antikörper mit bedingter affinität und verfahren zur verwendung dafür |
BR112019017241A2 (pt) | 2017-04-13 | 2020-04-14 | Agenus Inc | anticorpos anti-cd137 e métodos de uso dos mesmos |
AU2018250695A1 (en) | 2017-04-14 | 2019-11-07 | Kodiak Sciences Inc. | Complement factor D antagonist antibodies and conjugates thereof |
US10877048B2 (en) | 2017-04-15 | 2020-12-29 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers |
JP2020517256A (ja) | 2017-04-19 | 2020-06-18 | エルスター セラピューティクス, インコーポレイテッド | 多重特異性分子およびその使用 |
WO2018195243A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Immunogen, Inc. | Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof |
CN110506056A (zh) | 2017-04-21 | 2019-11-26 | 斯塔滕生物技术有限公司 | 抗apoc3抗体和其使用方法 |
CA3061206A1 (en) | 2017-04-22 | 2018-10-25 | Immunomic Therapeutics, Inc. | Improved lamp constructs |
EP4328241A2 (de) | 2017-04-28 | 2024-02-28 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multispezifische moleküle mit einer nichtimmunglobulin-heterodimerisierungsdomäne und verwendungen davon |
US10877038B2 (en) | 2017-04-28 | 2020-12-29 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury using early biomarkers on at least two samples from the same human subject |
EP3618863B1 (de) | 2017-05-01 | 2023-07-26 | Agenus Inc. | Anti-tigit antikörper und deren verwendung |
JP7185884B2 (ja) | 2017-05-02 | 2022-12-08 | 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター | Il-6及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法 |
IL270271B2 (en) | 2017-05-02 | 2023-03-01 | Immunomic Therapeutics Inc | LAMP structures containing cancer antigens |
CA3061516A1 (en) | 2017-05-02 | 2018-11-08 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
US10865238B1 (en) | 2017-05-05 | 2020-12-15 | Duke University | Complement factor H antibodies |
JOP20190256A1 (ar) | 2017-05-12 | 2019-10-28 | Icahn School Med Mount Sinai | فيروسات داء نيوكاسل واستخداماتها |
TWI794230B (zh) | 2017-05-15 | 2023-03-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗cdh6抗體及抗cdh6抗體-藥物結合物、以及其製造方法 |
CA3063344A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-11-29 | Helmholtz Zentrum Munchen - Deutsches Forschungszentrum Fur Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) | Novel cd73 antibody, preparation and uses thereof |
AU2018272054A1 (en) | 2017-05-25 | 2019-09-26 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers |
JP7269183B2 (ja) | 2017-05-30 | 2023-05-08 | アボット・ラボラトリーズ | 心臓トロポニンiを使用する、ヒト対象における軽度外傷性脳損傷を診断及び査定する一助となるための方法 |
US20200166515A1 (en) | 2017-05-30 | 2020-05-28 | Nant Holdings Ip, Llc | Circulating tumor cell enrichment using neoepitopes |
EP3630835A1 (de) | 2017-05-31 | 2020-04-08 | STCube & Co., Inc. | Antikörper und moleküle, die immunspezifisch an btn1a1 binden, und therapeutische verwendungen davon |
EP3630834A1 (de) | 2017-05-31 | 2020-04-08 | STCube & Co., Inc. | Verfahren zur behandlung von krebs mit antikörpern und molekülen, die immunspezifisch an btn1a1 binden |
WO2018222901A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-12-06 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof |
WO2018224951A2 (en) | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Janssen Biotech, Inc. | Engineered multispecific antibodies and other multimeric proteins with asymmetrical ch2-ch3 region mutations |
EP3634995A4 (de) | 2017-06-05 | 2021-06-09 | Janssen Biotech, Inc. | Spezifisch an pd-1 bindende antikörper und verwendungsverfahren |
CN110997724A (zh) | 2017-06-06 | 2020-04-10 | 斯特库伯株式会社 | 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法 |
CN110997718B (zh) | 2017-06-07 | 2023-11-10 | 菲洛根股份公司 | 血管内皮生长因子/抗纤连蛋白抗体融合蛋白 |
BR112019024291A2 (pt) | 2017-06-09 | 2020-07-28 | Providence Health & Services-Oregon | utilização de cd39 e de cd103 para a identificação de células t tumorais humanas reativas para o tratamento do câncer |
GB201709379D0 (en) | 2017-06-13 | 2017-07-26 | Univ Leuven Kath | Humanised ADAMTS13 binding antibodies |
WO2018229715A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | Novartis Ag | Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof |
WO2018236904A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Surface Oncology, Inc. | COMBINATION OF ANTI-CD47 ANTIBODIES AND CELL DEATH INDUCING AGENTS, AND USES THEREOF |
WO2018237173A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Novartis Ag | ANTIBODY MOLECULES DIRECTED AGAINST CD73 AND CORRESPONDING USES |
EP3645042A4 (de) | 2017-06-26 | 2021-03-17 | Bio-Techne Corporation | Hybridom-klone, monoklonale antikörper gegen vsig-4 und verfahren zur herstellung und verwendung |
WO2019006007A1 (en) | 2017-06-27 | 2019-01-03 | Novartis Ag | POSOLOGICAL REGIMES FOR ANTI-TIM3 ANTIBODIES AND USES THEREOF |
CN110785433A (zh) | 2017-06-28 | 2020-02-11 | 诺华股份有限公司 | 预防和治疗尿失禁的方法 |
US20200115446A1 (en) | 2017-06-30 | 2020-04-16 | National University Corporation Hokkaido University | Pediatric osteoporosis drug that does not cause growth disorder |
WO2019010131A1 (en) | 2017-07-03 | 2019-01-10 | Abbott Laboratories | IMPROVED METHODS FOR MEASURING CARBOXY TERMINATION HYDROLASE LEVELS OF UBIQUITIN L1 IN BLOOD |
WO2019010164A1 (en) | 2017-07-06 | 2019-01-10 | President And Fellows Of Harvard College | EVOLUTION OF ARNT SYNTHÉTASES |
MX2020000342A (es) | 2017-07-11 | 2020-08-17 | Compass Therapeutics Llc | Anticuerpos agonistas que se unen a cd137 humano y sus usos. |
GB201711208D0 (en) | 2017-07-12 | 2017-08-23 | Iontas Ltd | Ion channel inhibitors |
US20230331827A1 (en) | 2017-07-12 | 2023-10-19 | Maxion Therapeutics Limited | Potassium channel inhibitors |
KR20200027522A (ko) | 2017-07-13 | 2020-03-12 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Pivka에 대한 신규 결합제 및 어세이 |
SG11202000298VA (en) | 2017-07-14 | 2020-02-27 | Pfizer | Antibodies to madcam |
CA3070085A1 (en) | 2017-07-18 | 2019-01-24 | Promis Neurosciences Inc. | Antibodies to amyloid beta |
EP3431496A1 (de) | 2017-07-19 | 2019-01-23 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Anti-isoasp7-amyloid-beta-antikörper und verwendungen davon |
JP2020527572A (ja) | 2017-07-20 | 2020-09-10 | ノバルティス アーゲー | 抗lag−3抗体の投薬量レジメンおよびその使用 |
US11174322B2 (en) | 2017-07-24 | 2021-11-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies and peptides to treat HCMV related diseases |
SG11202000759XA (en) | 2017-07-27 | 2020-02-27 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Anti-cd147 antibody |
EP3658583A1 (de) | 2017-07-28 | 2020-06-03 | Scholar Rock, Inc. | Ltbp-komplex-spezifische inhibitoren von tgf-beta 1 und verwendungen davon |
JP6889328B2 (ja) | 2017-07-31 | 2021-06-18 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 三次元構造に基づくヒト化方法 |
CR20200099A (es) | 2017-08-03 | 2020-07-24 | Amgen Inc | Muteínas de interleucina 21 y métodos de tratamiento |
WO2019030706A1 (en) | 2017-08-10 | 2019-02-14 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE IN ORTHOPEDIC SURGERY |
CN107446050A (zh) | 2017-08-11 | 2017-12-08 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法 |
WO2019035055A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Janssen Pharmaceutica Nv | ANTI-THROMBIN ANTIBODY MOLECULES AND METHODS OF USE WITH PLATELET ANTI-AGGREGATE AGENTS |
EP3444275A1 (de) | 2017-08-16 | 2019-02-20 | Exiris S.r.l. | Monoklonaler antikörper anti-fgfr4 |
WO2019035938A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Elstar Therapeutics, Inc. | MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF |
EP3684811A2 (de) | 2017-08-17 | 2020-07-29 | Massachusetts Institute of Technology | Multispezifitätsbinder von cxc-chemokinen und ihre verwendung |
KR20200038303A (ko) | 2017-08-18 | 2020-04-10 | 캠브리지 엔터프라이즈 리미티드 | 모듈형 결합 단백질 |
JP7379323B2 (ja) | 2017-08-18 | 2023-11-14 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | タンパク質精製のための超分子フィラメント集合体 |
CN111094349A (zh) | 2017-08-23 | 2020-05-01 | 马克思-德布鲁克-分子医学中心亥姆霍兹联合会 | 嵌合抗原受体和结合cxcr5的car-t细胞 |
CA3074317A1 (en) | 2017-08-25 | 2019-02-28 | Janssen Biotech, Inc. | Fc.gamma.rii binding fibronectin type iii domains, their conjugates and multispecific molecules comprising them |
WO2019040780A1 (en) | 2017-08-25 | 2019-02-28 | Five Prime Therapeutics Inc. | ANTI-B7-H4 ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
SG11202001499WA (en) | 2017-09-08 | 2020-03-30 | Amgen Inc | Inhibitors of kras g12c and methods of using the same |
US11464784B2 (en) | 2017-09-15 | 2022-10-11 | The Regents Of The University Of California | Inhibition of aminocylase 3 (AA3) in the treatment of cancer |
US11624130B2 (en) | 2017-09-18 | 2023-04-11 | President And Fellows Of Harvard College | Continuous evolution for stabilized proteins |
CN111108214B (zh) | 2017-09-21 | 2023-10-13 | 贝克顿·迪金森公司 | 危险污染物收集试剂盒和快速测试 |
TW201922780A (zh) | 2017-09-25 | 2019-06-16 | 美商健生生物科技公司 | 以抗il12/il23抗體治療狼瘡之安全且有效之方法 |
EP3854414A1 (de) | 2017-09-25 | 2021-07-28 | AdrenoMed AG | Anti-adrenomedullin (adm)-bindemittel zur verwendung in der therapie oder prävention von symptomen einer krankheit |
CN111164208B (zh) | 2017-09-29 | 2023-08-04 | 第一三共株式会社 | 抗体-吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物 |
WO2019070726A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-11 | Visterra, Inc. | CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF |
EP3461841B1 (de) | 2017-10-02 | 2019-09-11 | Certest Biotec, S.L. | Antikörper gegen dps und testvorrichtungen zum nachweis von bakterien der gattung campylobacter |
CA3078460A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Opko Pharmaceuticals, Llc | Articles and methods directed to personalized therapy of cancer |
JP7384668B2 (ja) | 2017-10-05 | 2023-11-21 | 第一三共株式会社 | 細胞傷害性t細胞枯渇用組成物 |
EP3693013A4 (de) | 2017-10-06 | 2021-06-30 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Bispezifischer antikörper |
WO2019075090A1 (en) | 2017-10-10 | 2019-04-18 | Tilos Therapeutics, Inc. | ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF |
US11707522B2 (en) | 2017-10-13 | 2023-07-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Human antibodies to Tn antigen |
WO2019077082A1 (en) | 2017-10-18 | 2019-04-25 | Adrenomed Ag | SURVEILLANCE OF THERAPY UNDER TREATMENT WITH ANTI-ADRENOMEDULIN BINDER (ADM) |
EP3697816A1 (de) | 2017-10-19 | 2020-08-26 | Debiopharm International S.A. | Kombinationsprodukt zur behandlung von krebs |
KR20200074160A (ko) | 2017-10-20 | 2020-06-24 | 가꼬우호우징 효고 이카다이가쿠 | 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물 |
US20200331975A1 (en) | 2017-10-20 | 2020-10-22 | Institut Curie | Dap10/12 based cars adapted for rush |
WO2019081983A1 (en) | 2017-10-25 | 2019-05-02 | Novartis Ag | CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
US11530276B2 (en) | 2017-10-25 | 2022-12-20 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | DPP3 binder directed to and binding to specific DPP3-epitopes and its use in the prevention or treatment of diseases / acute conditions that are associated with oxidative stress |
WO2019089753A2 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof |
CA3080103A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Staten Biotechnology B.V. | Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof |
KR20200079293A (ko) | 2017-10-31 | 2020-07-02 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 고위험 다발성 골수종을 치료하는 방법 |
WO2019089594A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Immunogen, Inc. | Combination treatment with antibody-drug conjugates and cytarabine |
CA3079036A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy with targeted ox40 agonists |
EP3703821A2 (de) | 2017-11-01 | 2020-09-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispezifische 2+1-contorsbodys |
MX2020004561A (es) | 2017-11-02 | 2020-08-13 | Bayer Ag | Anticuerpos biespecificos que se unen a alk-1 y bmpr-2. |
WO2019094595A2 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Pinteon Therapeutics Inc. | Methods and compositions for the generation and use of humanized conformation-specific phosphorylated tau antibodies |
JP2021503478A (ja) | 2017-11-16 | 2021-02-12 | ノバルティス アーゲー | 組み合わせ治療 |
WO2019100052A2 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof |
WO2019102435A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-31 | Euro-Celtique S.A. | Humanized antibodies targeting human tissue factor |
TWI818934B (zh) | 2017-11-28 | 2023-10-21 | 日商中外製藥股份有限公司 | 可調整配體結合活性的配體結合分子 |
EP3717682A4 (de) | 2017-11-30 | 2021-09-01 | University of Delhi, South Campus | Antikörperfragmentbibliothek und verwendungen davon |
WO2019113375A2 (en) | 2017-12-06 | 2019-06-13 | Magenta Therapeutics, Inc. | Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells |
WO2019113464A1 (en) | 2017-12-08 | 2019-06-13 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific molecules and uses thereof |
US11022617B2 (en) | 2017-12-09 | 2021-06-01 | Abbott Laboratories | Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (TBI), using glial fibrillary acidic protein (GFAP) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1 (UCH-L1) |
BR112020010085A2 (pt) | 2017-12-09 | 2020-10-13 | Abbott Laboratories | métodos para auxiliar no diagnóstico e avaliar uma lesão cerebral traumática em um indivíduo humano usando uma combinação de gfap e uch-l1 |
EP3502139A1 (de) | 2017-12-19 | 2019-06-26 | Philogen S.p.A. | Antikörper gegen tumorantigene |
EP3502140A1 (de) | 2017-12-21 | 2019-06-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Kombinationstherapie von tumorabgezielten icos-agonisten mit t-zellenbispezifischen molekülen |
MX2020006119A (es) | 2017-12-21 | 2020-08-24 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos de union a hla-a2/wt1. |
GB201721600D0 (en) | 2017-12-21 | 2018-02-07 | Plant Bioscience Ltd | Metabolic engineering |
WO2019131988A1 (en) | 2017-12-28 | 2019-07-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
WO2019133652A1 (en) | 2017-12-28 | 2019-07-04 | Immunogen, Inc. | Benzodiazepine derivatives |
EP3735422A1 (de) | 2018-01-05 | 2020-11-11 | AC Immune SA | Fehlgefaltete tdp-43-bindende moleküle |
JP7358361B2 (ja) | 2018-01-12 | 2023-10-10 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | Tim3に対する抗体およびその使用 |
MX2020006976A (es) | 2018-01-12 | 2020-10-05 | Amgen Inc | Anticuerpos del receptor de tipo i del polipeptido activador de la adenilato?ciclasa hipofisaria (pac1) y sus usos. |
CR20200330A (es) | 2018-01-12 | 2020-12-23 | Amgen Inc | Anticuerpos anti-pd-1 y métodos de tratamiento |
US20190225689A1 (en) | 2018-01-22 | 2019-07-25 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of treating cancers with antagonistic anti-pd-1 antibodies |
US20210363238A1 (en) | 2018-01-31 | 2021-11-25 | Motokazu Kato | Therapeutic agent for asthma containing il-6 inhibitor |
WO2019150309A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Hammack Scott | Modulators of gpr68 and uses thereof for treating and preventing diseases |
CN111868082A (zh) | 2018-02-02 | 2020-10-30 | 博奥泰克尼公司 | 调节vista和vsig3的相互作用的化合物及其制备和使用方法 |
SG11202006686SA (en) | 2018-02-08 | 2020-08-28 | Sphingotec Gmbh | Adrenomedullin (adm) for diagnosis and/or prediction of dementia and anti-adrenomedullin binder for use in therapy or prevention of dementia |
TWI804572B (zh) | 2018-02-09 | 2023-06-11 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
TWI829667B (zh) | 2018-02-09 | 2024-01-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合gprc5d之抗體 |
CN111757894A (zh) | 2018-02-14 | 2020-10-09 | Abba 疗法股份公司 | 抗人类pd-l2抗体 |
EP3752195A4 (de) | 2018-02-14 | 2021-11-17 | Viela Bio, Inc. | Antikörper gegen felinen mcdonough-sarkom(fms)-ähnlichen tyrosinkinase-3-rezeptorliganden (flt3l) und verwendungen davon zur behandlung von autoimmun- und entzündungskrankheiten |
GB201802486D0 (en) | 2018-02-15 | 2018-04-04 | Ucb Biopharma Sprl | Methods |
EP3530282A1 (de) | 2018-02-27 | 2019-08-28 | Diaccurate | Therapeutische verfahren |
BR112020017925A2 (pt) | 2018-03-02 | 2020-12-22 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Anticorpos contra b7-h4 e métodos de uso dos mesmos |
CN112105639A (zh) | 2018-03-05 | 2020-12-18 | 詹森药业有限公司 | 抗PHF-tau抗体及其用途 |
JP2021515770A (ja) | 2018-03-05 | 2021-06-24 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 抗il−23特異的抗体を用いたクローン病の治療方法 |
US11859006B2 (en) | 2018-03-05 | 2024-01-02 | Saitama Medical University | Method of treating ectopic ossification or diffuse intrinsic pontine glioma in a subject by administering an anti-ALK2 antibody |
WO2019177690A1 (en) | 2018-03-12 | 2019-09-19 | Zoetis Services Llc | Anti-ngf antibodies and methods thereof |
WO2019175071A1 (en) | 2018-03-13 | 2019-09-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies |
TW202003561A (zh) | 2018-03-13 | 2020-01-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法 |
KR102411489B1 (ko) | 2018-03-14 | 2022-06-23 | 서피스 온콜로지, 인크. | Cd39에 결합하는 항체 및 이의 용도 |
EP3765517A1 (de) | 2018-03-14 | 2021-01-20 | Elstar Therapeutics, Inc. | An calreticulin bindende multifunktionsmoleküle und ihre verwendungen |
EP3765497A1 (de) | 2018-03-14 | 2021-01-20 | F. Hoffmann-La Roche AG | Neuartige anti-troponin-t-antikörper |
BR112020018235A2 (pt) | 2018-03-14 | 2020-12-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Métodos para gerar uma biblioteca de polinucleotídeos, bibliotecas de polinucleotídeos, uso de uma biblioteca, método para gerar uma biblioteca de anticorpos e método de seleção de um anticorpo |
US20210009711A1 (en) | 2018-03-14 | 2021-01-14 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules and uses thereof |
US11332524B2 (en) | 2018-03-22 | 2022-05-17 | Surface Oncology, Inc. | Anti-IL-27 antibodies and uses thereof |
TW202003565A (zh) | 2018-03-23 | 2020-01-16 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗mica及/或micb抗體及其用途 |
WO2019180272A1 (en) | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Fundación Instituto De Investigación Sanitaria De Santiago De Compostela | Anti-leptin affinity reagents for use in the treatment of obesity and other leptin-resistance associated diseases |
HRP20230744T1 (hr) | 2018-03-26 | 2023-10-27 | Glycanostics S.R.O. | Sredstva i metode glikoprofiliranja proteina |
CN112313248A (zh) | 2018-03-29 | 2021-02-02 | 百时美施贵宝公司 | 纯化单体单克隆抗体的方法 |
KR20200138254A (ko) | 2018-03-30 | 2020-12-09 | 암젠 인크 | C-말단 항체 변이체 |
US11155618B2 (en) | 2018-04-02 | 2021-10-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Anti-TREM-1 antibodies and uses thereof |
JP2021521273A (ja) | 2018-04-12 | 2021-08-26 | メディアファーマ エス.アール.エル. | Lgals3bp抗体−薬剤結合体及びがん治療のためのその使用 |
WO2019200357A1 (en) | 2018-04-12 | 2019-10-17 | Surface Oncology, Inc. | Biomarker for cd47 targeting therapeutics and uses therefor |
US20210147547A1 (en) | 2018-04-13 | 2021-05-20 | Novartis Ag | Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof |
AR114284A1 (es) | 2018-04-13 | 2020-08-12 | Hoffmann La Roche | Moléculas de unión a antígeno dirigidas a her2 que comprenden 4-1bbl |
WO2019201995A1 (en) | 2018-04-20 | 2019-10-24 | Medizinische Hochschule Hannover | Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind a herpes virus antigen |
CN112585165A (zh) | 2018-04-25 | 2021-03-30 | 普罗米修斯生物科学公司 | 优化的抗tl1a抗体 |
WO2019207159A1 (en) | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Fondazione Ebri Rita Levi-Montalcini | Antibody directed against a tau-derived neurotoxic peptide and uses thereof |
KR20210005097A (ko) | 2018-04-30 | 2021-01-13 | 메디뮨 리미티드 | 응집체를 표적화하고 제거하는 접합체 |
WO2019222130A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Immunogen, Inc. | Combination treatment with antibody-drug conjugates and flt3 inhibitors |
EP3793595A1 (de) | 2018-05-15 | 2021-03-24 | Immunomic Therapeutics, Inc. | Verbesserte lamp-konstrukte mit allergenen |
KR20210011002A (ko) | 2018-05-16 | 2021-01-29 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 암을 치료하는 방법 및 t-세포 재유도 치료제의 효능을 향상시키는 방법 |
EP3569614A1 (de) | 2018-05-18 | 2019-11-20 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Verbindungen und verfahren zur immobilisierung von myostatin-inhibitoren auf der extrazellulären matrix durch transglutaminase |
KR20210010996A (ko) | 2018-05-21 | 2021-01-29 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 유리 용기에 봉입된 동결건조 제제 |
WO2019226617A1 (en) | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Compass Therapeutics Llc | Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells |
WO2019226658A1 (en) | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific antigen-binding compositions and methods of use |
JOP20200302A1 (ar) | 2018-05-24 | 2020-11-23 | Janssen Biotech Inc | الأجسام المضادة لـ cd3 واستخداماتها |
PE20210634A1 (es) | 2018-05-24 | 2021-03-23 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-tmeff2 monoespecificos y multiespecificos y sus usos |
EP3802609A2 (de) | 2018-05-24 | 2021-04-14 | Janssen Biotech, Inc. | Psma-bindende stoffe und verwendungen davon |
GB201808617D0 (en) | 2018-05-25 | 2018-07-11 | Plant Bioscience Ltd | Scaffold modification |
TW202015726A (zh) | 2018-05-30 | 2020-05-01 | 瑞士商諾華公司 | Entpd2抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 |
US11830582B2 (en) | 2018-06-14 | 2023-11-28 | University Of Miami | Methods of designing novel antibody mimetics for use in detecting antigens and as therapeutic agents |
WO2019241649A1 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | President And Fellows Of Harvard College | Evolution of cytidine deaminases |
AU2019289176A1 (en) | 2018-06-18 | 2020-12-24 | Oxford University Innovation Limited | Gremlin-1 antagonist for the prevention and treatment of cancer |
KR20210035173A (ko) | 2018-06-19 | 2021-03-31 | 아타르가, 엘엘씨 | 보체 성분 5에 대한 항체분자 및 이의 용도 |
CN112533629A (zh) | 2018-06-19 | 2021-03-19 | 阿尔莫生物科技股份有限公司 | 结合使用il-10药剂与嵌合抗原受体细胞疗法的组合物和方法 |
WO2019244107A1 (en) | 2018-06-21 | 2019-12-26 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Compositions including cd3 antigen binding fragments and uses thereof |
EP3586865A1 (de) | 2018-06-21 | 2020-01-01 | Charité - Universitätsmedizin Berlin | Ergänzende anaphylatoxinbindemittel und deren verwendung in der behandlung einer person mit okularer wunde und/oder fibrose |
EA202190092A1 (ru) | 2018-06-21 | 2021-05-18 | Юманити Терапьютикс, Инк. | Композиции и способы лечения и профилактики неврологических расстройств |
WO2020003077A1 (en) | 2018-06-25 | 2020-01-02 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-thrombin antibody molecules for use in patients at risk for gastrointestinal (gi) bleeding |
AU2019297451A1 (en) | 2018-07-03 | 2021-01-28 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
WO2020008083A1 (es) | 2018-07-05 | 2020-01-09 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Diana terapéutica en receptores de quimiocinas para la selección de compuestos útiles para el tratamiento de procesos patológicos que implican la señalización de quimiocinas |
PL3677278T3 (pl) | 2018-07-11 | 2022-02-28 | Scholar Rock, Inc. | Selektywne względem izoformy inhibitory tgfbeta1 i ich zastosowanie |
MX2021000347A (es) | 2018-07-11 | 2021-04-19 | Scholar Rock Inc | Inhibidores de tgf?1 selectivos de isoforma, de alta afinidad y usos de los mismos. |
WO2020014473A1 (en) | 2018-07-11 | 2020-01-16 | Scholar Rock, Inc. | TGFβ1 INHIBITORS AND USE THEREOF |
WO2020016838A2 (en) | 2018-07-18 | 2020-01-23 | Janssen Biotech, Inc. | Sustained response predictors after treatment with anti-il23 specific antibody |
MA53158A (fr) | 2018-07-20 | 2021-05-26 | Aicuris Gmbh & Co Kg | Procédés de criblage et d'identification d'agents inhibant ou modulant le complexe de sortie nucléaire du virus de l'herpès |
BR112021000934A2 (pt) | 2018-07-20 | 2021-04-27 | Pierre Fabre Medicament | receptor para vista |
WO2020021465A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. | Method of treatment of neuroendocrine tumors |
KR20210041586A (ko) | 2018-08-01 | 2021-04-15 | 세파론, 인코포레이티드 | 항-cxcr2 항체 및 이의 용도 |
EP4177356A1 (de) | 2018-08-08 | 2023-05-10 | PML Screening, LLC | Verfahren zur beurteilung des risikos der entwicklung einer viruserkrankung unter verwendung eines genetischen tests |
WO2020033926A2 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Compass Therapeutics Llc | Antibodies that bind cd277 and uses thereof |
WO2020033925A2 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Compass Therapeutics Llc | Antibodies that bind cd277 and uses thereof |
US20210388089A1 (en) | 2018-08-09 | 2021-12-16 | Compass Therapeutics Llc | Antigen binding agents that bind cd277 and uses thereof |
US11548938B2 (en) | 2018-08-21 | 2023-01-10 | Quidel Corporation | DbpA antibodies and uses thereof |
US20220047701A1 (en) | 2018-09-10 | 2022-02-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Combination of her2/neu antibody with heme for treating cancer |
DK3883606T5 (da) | 2018-09-24 | 2024-01-02 | Janssen Biotech Inc | Sikker og effektiv fremgangsmåde til behandling af colitis ulcerosa med anti-il12/il23-antistof |
AU2019346645A1 (en) | 2018-09-27 | 2021-04-29 | Marengo Therapeutics, Inc. | CSF1R/CCR2 multispecific antibodies |
AU2019349958A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-05-06 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | IL-36 antibodies and uses thereof |
CN112969503A (zh) | 2018-10-03 | 2021-06-15 | 斯塔滕生物技术有限公司 | 对人类和食蟹猕猴apoc3具有特异性的抗体和其使用方法 |
JP2022512595A (ja) | 2018-10-05 | 2022-02-07 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 組み換えmva、及び免疫チェックポイントアンタゴニストまたは免疫チェックポイントアゴニストの静脈内投与によって、がんを治療する併用療法 |
JP2022504839A (ja) | 2018-10-10 | 2022-01-13 | ティロス・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 抗lap抗体変異体及びその使用 |
UY38407A (es) | 2018-10-15 | 2020-05-29 | Novartis Ag | Anticuerpos estabilizadores de trem2 |
MA53920A (fr) | 2018-10-17 | 2021-09-15 | Janssen Biotech Inc | Procédé de fourniture d'administration sous-cutanée d'anticorps anti-cd38 |
CA3115102A1 (en) | 2018-10-23 | 2020-04-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-npr1 antibodies and uses thereof |
KR20210080465A (ko) | 2018-10-23 | 2021-06-30 | 스칼러 락, 인크. | RGMc-선택적인 억제제 및 그의 용도 |
GB201817309D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
GB201817311D0 (en) | 2018-10-24 | 2018-12-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
WO2020086408A1 (en) | 2018-10-26 | 2020-04-30 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | A high-yield perfusion-based transient gene expression bioprocess |
WO2020095104A1 (en) | 2018-11-05 | 2020-05-14 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | HUMANIZED AND VARIANT TGF-β3 SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS AND USES THEREOF |
CN113613725A (zh) | 2018-11-05 | 2021-11-05 | 路德维格癌症研究所有限公司 | 人源化和变体TGF-β1特异性抗体及其方法和用途 |
AU2019379858B2 (en) | 2018-11-13 | 2024-01-04 | Janssen Biotech, Inc. | Control of trace metals during production of anti-CD38 antibodies |
MX2021005594A (es) | 2018-11-13 | 2021-10-22 | Compass Therapeutics Llc | Constructos multiespecificos de union contra moleculas de puntos de control y usos de los mismos. |
TW202031298A (zh) | 2018-11-14 | 2020-09-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗cdh6抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物 |
PE20211284A1 (es) | 2018-11-16 | 2021-07-19 | Bristol Myers Squibb Co | Anticuerpos anti-nkg2a y usos de los mismos |
WO2020104943A2 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | Janssen Biotech, Inc. | Safe and effective method of treating psoriasis with anti-il-23 specific antibody |
WO2020106358A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | Takeda Vaccines, Inc. | Novel anti-zika virus antibodies and uses thereof |
CA3119503A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | Bavarian Nordic A/S | Therapy for treating cancer with an intratumoral and/or intravenous administration of a recombinant mva encoding 4-1bbl (cd137l) and/or cd40l |
SG11202105163UA (en) | 2018-11-20 | 2021-06-29 | Perseus Proteomics Inc | Agent for inhibiting iron uptake into cells |
EP3886869A4 (de) | 2018-11-28 | 2022-07-06 | Forty Seven, Inc. | Genetisch modifizierte ablationsresistente hspcs |
US20200197517A1 (en) | 2018-12-18 | 2020-06-25 | Janssen Biotech, Inc. | Safe and Effective Method of Treating Lupus with Anti-IL12/IL23 Antibody |
JP2022514017A (ja) | 2018-12-20 | 2022-02-09 | ノバルティス アーゲー | 医薬の組み合わせ |
WO2020128927A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | Fn14 antibodies and uses thereof |
AR117728A1 (es) | 2018-12-21 | 2021-08-25 | Hoffmann La Roche | Moléculas superagonistas de unión al antígeno cd28 con diana tumoral |
MY198034A (en) | 2018-12-21 | 2023-07-27 | Hoffmann La Roche | Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules |
US20220211798A1 (en) | 2018-12-21 | 2022-07-07 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Therapy guidance and/or therapy monitoring for a treatment with angiotensin-receptor-agonist and/or a precursor thereof |
CN113227135A (zh) | 2018-12-28 | 2021-08-06 | 斯帕克斯治疗公司 | 用于治疗癌症和其他疾病的对紧密连接蛋白18.2具有特异性的结合分子、其组合物和方法 |
TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 前列腺新抗原及其用途 |
US20220119532A1 (en) | 2019-01-14 | 2022-04-21 | University Of Virginia Patent Foundation | Use of integrin inhibitors for treatment or prevention of a neurological immunity disorder and/or nervous system injury |
CN113474371A (zh) | 2019-01-16 | 2021-10-01 | 指南针制药有限责任公司 | 与人cd137结合的抗体的制剂及其用途 |
GB201900732D0 (en) | 2019-01-18 | 2019-03-06 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
CA3127236A1 (en) | 2019-01-22 | 2020-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies against il-7r alpha subunit and uses thereof |
JPWO2020153467A1 (ja) | 2019-01-24 | 2021-12-02 | 中外製薬株式会社 | 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体 |
US11280801B2 (en) | 2019-01-28 | 2022-03-22 | Becton, Dickinson And Company | Hazardous contaminant collection device with integrated swab and test device |
JP2022524281A (ja) | 2019-01-30 | 2022-05-02 | スカラー ロック インコーポレイテッド | TGFβのLTBP複合体特異的阻害剤およびその使用 |
EP3918323A4 (de) | 2019-01-30 | 2022-12-28 | TrueBinding, Inc. | Anti-gal3-antikörper und verwendungen davon |
SG11202107720UA (en) | 2019-01-31 | 2021-08-30 | Agency Science Tech & Res | Cnx/erp57 inhibitor for use in the treatment or prevention of cancer |
US11738050B2 (en) | 2019-02-01 | 2023-08-29 | Regents Of The University Of Minnesota | Compounds binding to fibroblast activation protein alpha |
EP3693063A1 (de) | 2019-02-06 | 2020-08-12 | Diaccurate | Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von krebs |
EP3696191A1 (de) | 2019-02-14 | 2020-08-19 | Fundación Instituto de Investigación contra la Leucemia Josep Carreras (IJC) | Car-t-zellen zur behandlung von cd1a-positivem krebs |
US10871640B2 (en) | 2019-02-15 | 2020-12-22 | Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh | Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects |
WO2020172571A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof |
AU2020226904A1 (en) | 2019-02-21 | 2021-09-16 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
WO2020169840A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Cambridge Enterprise Limited | Bispecific proteins with a chimeric scaffold |
SG11202109056TA (en) | 2019-02-21 | 2021-09-29 | Marengo Therapeutics Inc | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
CN114127111A (zh) | 2019-02-21 | 2022-03-01 | 马伦戈治疗公司 | 与nkp30结合的抗体分子及其用途 |
SG11202109033XA (en) | 2019-02-21 | 2021-09-29 | Marengo Therapeutics Inc | Multifunctional molecules that bind to t cells and uses thereof to treat autoimmune disorders |
GB201902392D0 (en) | 2019-02-21 | 2019-04-10 | Cambridge Entpr Ltd | Modular binding proteins |
MA55080A (fr) | 2019-02-26 | 2022-01-05 | Inspirna Inc | Anticorps anti-mertk à affinité élevée et utilisations associées |
JOP20210233A1 (ar) | 2019-02-26 | 2023-01-30 | Janssen Biotech Inc | علاجات مركبة وتطابق المريض مع الأجسام ثنائية النوعية المضادة لـ EGFR/c-Met. |
JPWO2020175689A1 (de) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | ||
WO2020180819A1 (en) | 2019-03-03 | 2020-09-10 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
JP2022525145A (ja) | 2019-03-14 | 2022-05-11 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 抗il12/il23抗体組成物を生成するための製造方法 |
KR20210141583A (ko) | 2019-03-18 | 2021-11-23 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 항-il-12/il-23 항체를 사용한 소아 대상의 건선 치료 방법 |
US20220153875A1 (en) | 2019-03-19 | 2022-05-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule containing antigen-binding domain of which binding activity to antigen is changed depending on mta, and library for obtaining said antigen-binding domain |
GB201903767D0 (en) | 2019-03-19 | 2019-05-01 | Quadrucept Bio Ltd | Multimers, tetramers & octamers |
WO2020196474A1 (ja) | 2019-03-25 | 2020-10-01 | 第一三共株式会社 | 抗体-ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート |
EP3946435B1 (de) | 2019-03-25 | 2023-12-27 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in der Helmholtz-Gemeinschaft | Erweiterung der wirkung zytolytischer t-zellen durch hemmung von ebag9 |
CA3191804A1 (en) | 2019-03-25 | 2020-10-01 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate |
US20220177558A1 (en) | 2019-03-25 | 2022-06-09 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Treatment of taupathy disorders by targeting new tau species |
CN113811547A (zh) | 2019-03-27 | 2021-12-17 | 国家医疗保健研究所 | 具有cd40激活特性的重组蛋白 |
TW202102226A (zh) | 2019-03-27 | 2021-01-16 | 日商第一三共股份有限公司 | 抗體-吡咯并苯二氮呯衍生物結合物及parp抑制劑之組合 |
WO2020198731A2 (en) | 2019-03-28 | 2020-10-01 | Danisco Us Inc | Engineered antibodies |
TW202102261A (zh) | 2019-03-29 | 2021-01-16 | 美商艾特加有限責任公司 | Fgf23之抗體分子及其用途 |
JP2022527493A (ja) | 2019-03-29 | 2022-06-02 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | クロマトグラフィー樹脂の疎水性を測定する方法 |
TW202102544A (zh) | 2019-04-04 | 2021-01-16 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
SG11202110986YA (en) | 2019-04-10 | 2021-11-29 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for purifying fc region-modified antibody |
CN113677403A (zh) | 2019-04-12 | 2021-11-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 包含脂质运载蛋白突变蛋白的双特异性抗原结合分子 |
WO2020214690A1 (en) | 2019-04-15 | 2020-10-22 | Qwixel Therapeutics | Fusion protein composition(s) comprising targeted masked type i interferons (ifna and ifnb) and an antibody against tumor antigen, for use in the treatment of cancer |
US20220204608A1 (en) | 2019-04-17 | 2022-06-30 | Hiroshima University | Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with il-6 inhibitor and ccr2 inhibitor in combination |
CN113747945A (zh) | 2019-04-19 | 2021-12-03 | 詹森生物科技公司 | 用抗psma/cd3抗体治疗肾癌的方法 |
CN113747944A (zh) | 2019-04-19 | 2021-12-03 | 詹森生物科技公司 | 用抗psma/cd3抗体治疗前列腺癌的方法 |
MX2021012961A (es) | 2019-04-24 | 2021-11-25 | Heidelberg Pharma Res Gmbh | Conjugados de anticuerpo y farmaco de amatoxina y usos de los mismos. |
JOP20210304A1 (ar) | 2019-05-14 | 2023-01-30 | Janssen Biotech Inc | علاجات مركبة باستخدام الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)/ مستقبل عامل نمو خلايا الكبد (c-Met) ومثبطات كيناز التيروسين الخاصة بمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) من الجيل الثالث |
US11850248B2 (en) | 2019-05-14 | 2023-12-26 | Yuhan Corporation | Therapies with 3rd generation EGFR tyrosine kinase inhibitors |
SG11202112453TA (en) | 2019-05-23 | 2021-12-30 | Ac Immune Sa | Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof |
JP2022534020A (ja) | 2019-05-23 | 2022-07-27 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | Il-23及びtnfアルファに対する抗体の併用療法による炎症性腸疾患の治療方法 |
EP3976778A2 (de) | 2019-05-24 | 2022-04-06 | Instituto de Medicina Molecular João Lobo Antunes | Behandlung von alt-karzinomen |
SG11202112429PA (en) | 2019-05-29 | 2021-12-30 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Dosage of an antibody-drug conjugate |
CN114174344A (zh) | 2019-05-30 | 2022-03-11 | 美国安进公司 | 工程改造铰链区以驱动抗体二聚化 |
EP4023230A4 (de) | 2019-06-05 | 2023-11-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antikörper-spaltungsstellenbindendes molekül |
BR112021024938A2 (pt) | 2019-06-12 | 2022-01-25 | Novartis Ag | Anticorpos de receptor 1 de peptídeo natriurético e métodos de uso |
GB201908431D0 (en) | 2019-06-12 | 2019-07-24 | Plant Bioscience Ltd | Biosynthetic genes and polypeptides |
WO2020257289A2 (en) | 2019-06-17 | 2020-12-24 | Visterra, Inc. | Humanized antibody molecules to cd138 and uses thereof |
CN114630675A (zh) | 2019-06-18 | 2022-06-14 | 爱尔兰詹森科学公司 | 乙型肝炎病毒(hbv)疫苗和抗pd-1或抗pd-l1抗体的组合 |
WO2020255009A2 (en) | 2019-06-18 | 2020-12-24 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 antibody |
KR20220063148A (ko) | 2019-06-21 | 2022-05-17 | 소리소 파마슈티컬스 인크. | 조성물 |
EP3986571A1 (de) | 2019-06-21 | 2022-04-27 | Sorriso Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptide |
CA3144566A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-24 | Sorriso Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptides |
GB201909104D0 (en) | 2019-06-25 | 2019-08-07 | Plant Bioscience Ltd | Transferase enzymes |
TW202115124A (zh) | 2019-06-26 | 2021-04-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合至cea之新穎抗原結合分子 |
WO2020260326A1 (en) | 2019-06-27 | 2020-12-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them |
CA3143524A1 (en) | 2019-06-28 | 2020-12-30 | Amgen Inc. | Anti-cgrp receptor/anti-pac1 receptor bispecific antigen binding proteins |
EP3994169A1 (de) | 2019-07-02 | 2022-05-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Immunokonjugate mit einem mutierten interleukin-2 und einen anti-cd8-antikörper |
KR20220030956A (ko) | 2019-07-05 | 2022-03-11 | 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 | Pd-1/cd3 이중 특이성 단백질에 의한 혈액암 치료 |
JP2022542863A (ja) | 2019-07-24 | 2022-10-07 | ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット | 抗mGluR5抗体及びその使用 |
WO2021021606A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Visterra, Inc. | Interleukin-2 agents and uses thereof |
JPWO2021020282A1 (de) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | ||
JP6856183B1 (ja) | 2019-07-30 | 2021-04-07 | 小野薬品工業株式会社 | 二重特異性抗体 |
GB201910899D0 (en) | 2019-07-31 | 2019-09-11 | Scancell Ltd | Binding members |
JP2022543553A (ja) | 2019-07-31 | 2022-10-13 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Gprc5dに結合する抗体 |
JP2022543551A (ja) | 2019-07-31 | 2022-10-13 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Gprc5dに結合する抗体 |
US20220267459A1 (en) | 2019-08-02 | 2022-08-25 | Fundacio Clinic Per A La Recerca Biomedica | Car t-cells against bcma for the treatment of multiple myeloma |
EP4031658A1 (de) | 2019-08-07 | 2022-07-27 | DB Biotech, AS | Verbesserte meerrettichperoxidase-polypeptide |
WO2021025140A1 (ja) | 2019-08-08 | 2021-02-11 | 小野薬品工業株式会社 | 二重特異性タンパク質 |
US20220242962A1 (en) | 2019-08-12 | 2022-08-04 | Aptevo Research And Development Llc | 4-1bb and ox40 binding proteins and related compositions and methods, antibodies against 4-1bb, antibodies against ox40 |
US11680098B2 (en) | 2019-08-30 | 2023-06-20 | Agenus Inc. | Antibodies that specifically bind human CD96 |
EP4021571A1 (de) | 2019-08-30 | 2022-07-06 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Therapieführung und therapieüberwachung zur schockbehandlung |
GB201912657D0 (en) | 2019-09-03 | 2019-10-16 | Scancell Ltd | Binding members |
EP4026560A4 (de) | 2019-09-04 | 2023-10-25 | Perseus Proteomics Inc. | Therapeutisches mittel für polyzythämie |
EP4025303A1 (de) | 2019-09-04 | 2022-07-13 | Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen e.V. (DZNE) | Herv-inhibitoren zur verwendung bei der behandlung von tauopathien |
CA3150807A1 (en) | 2019-09-04 | 2021-03-11 | Y-Biologics Inc. | Anti-vsig4 antibody or antigen binding fragment and uses thereof |
GB201912882D0 (en) | 2019-09-06 | 2019-10-23 | Scancell Ltd | Ssea-4 binding members |
WO2021055329A1 (en) | 2019-09-16 | 2021-03-25 | Surface Oncology, Inc. | Anti-cd39 antibody compositions and methods |
JP2022548881A (ja) | 2019-09-18 | 2022-11-22 | ノバルティス アーゲー | Entpd2抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法 |
TW202124446A (zh) | 2019-09-18 | 2021-07-01 | 瑞士商諾華公司 | 與entpd2抗體之組合療法 |
AU2020353672A1 (en) | 2019-09-25 | 2022-03-31 | Surface Oncology, LLC | Anti-IL-27 antibodies and uses thereof |
JP2022549504A (ja) | 2019-09-26 | 2022-11-25 | エスティーキューブ アンド カンパニー | グリコシル化ctla-4に対して特異的な抗体およびその使用方法 |
WO2021059075A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-ceacam antibodies and uses thereof |
US20220324962A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-10-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-müllerian inhibiting substance antibodies and uses thereof |
WO2021058729A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof |
CA3154710A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | TAE Life Sciences | Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties |
WO2021071830A1 (en) | 2019-10-07 | 2021-04-15 | University Of Virginia Patent Foundation | Modulating lymphatic vessels in neurological disease |
WO2021072277A1 (en) | 2019-10-09 | 2021-04-15 | Stcube & Co. | Antibodies specific to glycosylated lag3 and methods of use thereof |
CA3157509A1 (en) | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
WO2021077051A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Immunomic Therapeutics, Inc | Improved lamp constructs comprising cancer antigens |
MX2022004769A (es) | 2019-10-21 | 2022-05-16 | Novartis Ag | Inhibidores de tim-3 y sus usos. |
CN114786679A (zh) | 2019-10-21 | 2022-07-22 | 诺华股份有限公司 | 具有维奈托克和tim-3抑制剂的组合疗法 |
CN114901311A (zh) | 2019-10-24 | 2022-08-12 | 普罗米修斯生物科学公司 | Tnf样配体1a(tl1a)的人源化抗体及其用途 |
US11459389B2 (en) | 2019-10-24 | 2022-10-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Monoclonal antibodies that bind human CD161 |
EP4049675A4 (de) | 2019-10-25 | 2023-11-22 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Kombination von anti-garp-antikörper und immunregulator |
EP4051298A1 (de) | 2019-11-01 | 2022-09-07 | Magenta Therapeutics, Inc. | Dosierschema zur mobilisierung von hämatopoetischen stammzellen und vorläuferzellen |
WO2021092355A1 (en) | 2019-11-08 | 2021-05-14 | Amgen Inc. | Engineering charge pair mutations for pairing of hetero-igg molecules |
IL293051A (en) | 2019-11-18 | 2022-07-01 | Janssen Biotech Inc | calr and jak2 mutant-based vaccines and their uses |
US20230047631A1 (en) | 2019-11-19 | 2023-02-16 | Amgen Inc. | Novel multispecific antibody format |
IL293009A (en) | 2019-11-20 | 2022-07-01 | Bavarian Nordic As | Recombinant mva viruses for intratumoral and/or intravenous administration for cancer treatment |
CN114787181A (zh) | 2019-11-21 | 2022-07-22 | Inserm(法国国家健康医学研究院) | 用抗pd-1/il-15免疫细胞因子靶向pd-1的新型免疫疗法 |
WO2021107082A1 (ja) | 2019-11-27 | 2021-06-03 | 株式会社ペルセウスプロテオミクス | 癌性腹膜炎の治療薬 |
GB201917480D0 (en) | 2019-11-29 | 2020-01-15 | Univ Oxford Innovation Ltd | Antibodies |
WO2021116119A1 (en) | 2019-12-09 | 2021-06-17 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies having specificity to her4 and uses thereof |
JP2023507083A (ja) | 2019-12-19 | 2023-02-21 | クイデル コーポレーション | モノクローナル抗体融合物 |
GB201919062D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody |
GB201919058D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Multi-specific antibodies |
WO2021123996A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Novartis Ag | Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases |
GB201919061D0 (en) | 2019-12-20 | 2020-02-05 | Ucb Biopharma Sprl | Multi-specific antibody |
TW202138388A (zh) | 2019-12-30 | 2021-10-16 | 美商西根公司 | 以非海藻糖苷化抗-cd70抗體治療癌症之方法 |
WO2021138407A2 (en) | 2020-01-03 | 2021-07-08 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof |
CA3160204A1 (en) | 2020-01-06 | 2021-07-15 | Vaccinex, Inc. | Anti-ccr8 antibodies and uses thereof |
US20230090552A1 (en) | 2020-01-08 | 2023-03-23 | Synthis Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof |
KR20220139886A (ko) | 2020-01-08 | 2022-10-17 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 진행성 골화성 섬유이형성증의 치료 |
CA3162009A1 (en) | 2020-01-09 | 2021-07-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | New 4-1bbl trimer-containing antigen binding molecules |
AU2021205440A1 (en) | 2020-01-11 | 2022-09-01 | Scholar Rock,Inc. | TGF-beta inhibitors and use thereof |
WO2021142427A1 (en) | 2020-01-11 | 2021-07-15 | Scholar Rock, Inc. | TGFβ INHIBITORS AND USE THEREOF |
TW202140553A (zh) | 2020-01-13 | 2021-11-01 | 美商威特拉公司 | C5ar1抗體分子及其用途 |
JP2023511274A (ja) | 2020-01-14 | 2023-03-17 | シンセカイン インコーポレイテッド | Il2オルソログおよび使用法 |
CN114980902A (zh) | 2020-01-17 | 2022-08-30 | 诺华股份有限公司 | 用于治疗骨髓增生异常综合征或慢性粒单核细胞白血病的包含tim-3抑制剂和低甲基化药物的组合 |
WO2021151079A1 (en) | 2020-01-24 | 2021-07-29 | University Of Virginia Patent Foundation | Modulating lymphatic vessels in neurological disease |
IL295129A (en) | 2020-01-30 | 2022-09-01 | Umoja Biopharma Inc | Bispecific transduction enhancer |
CA3167027A1 (en) | 2020-02-05 | 2021-08-12 | Larimar Therapeutics, Inc. | Tat peptide binding proteins and uses thereof |
TW202140012A (zh) | 2020-02-12 | 2021-11-01 | 比利時商健生藥品公司 | 用於治療尿路上皮癌的fgfr酪胺酸激酶抑制劑和抗pd1藥劑 |
US20230096030A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-03-30 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 and cd7 |
EP4103611B1 (de) | 2020-02-13 | 2024-03-27 | UCB Biopharma SRL | Bispezifische, an hvem und cd9 bindende antikörper |
US20230125234A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-04-27 | UCB Biopharma SRL | Anti cd44-ctla4 bispecific antibodies |
EP4103608A1 (de) | 2020-02-13 | 2022-12-21 | UCB Biopharma SRL | Bispezifische antikörper gegen cd9 und cd137 |
US20230151109A1 (en) | 2020-02-13 | 2023-05-18 | UCB Biopharma SRL | Bispecific antibodies against cd9 |
TW202144388A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途 |
TW202144389A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途 |
WO2021167908A1 (en) | 2020-02-17 | 2021-08-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof |
WO2021167964A1 (en) | 2020-02-18 | 2021-08-26 | Alector Llc | Pilra antibodies and methods of use thereof |
EP3871689A1 (de) | 2020-02-26 | 2021-09-01 | sphingotec GmbH | Anti-adm-antikörper, die an den freien n-terminus binden, für einen beschleunigten übergang von adm-gly zu bio-adm bei patienten mit einem adm-gly/bio-adm-verhältnis über einem schwellenwert und kombination mit vitamin c |
MX2022010207A (es) | 2020-02-27 | 2022-11-16 | Adrenomed Ag | Anticuerpo anti-adrenomedulina (adm) o fragmento de anticuerpo anti-adm o andamiaje no ig anti-adm para usarse en terapia o prevencion de choque. |
US20230193348A1 (en) | 2020-02-27 | 2023-06-22 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Dpp3 for therapy guidance, monitoring and stratification of nt-adm antibodies in patients with shock |
JP2023515985A (ja) | 2020-02-27 | 2023-04-17 | アドレノメト アクチェンゲゼルシャフト | ショック状態の患者の治療において使用するための抗アドレノメデュリン(adm)結合剤 |
IL295979A (en) | 2020-03-06 | 2022-10-01 | Ona Therapeutics S L | Anti-cd36 antibodies and their use for cancer treatment |
CN115315446A (zh) | 2020-03-06 | 2022-11-08 | Go医疗股份有限公司 | 抗糖-cd44抗体及其用途 |
IL296241A (en) | 2020-03-10 | 2022-11-01 | Massachusetts Inst Technology | Compositions and methods for immunotherapy for npm1c-positive cancer |
WO2021180890A1 (en) | 2020-03-11 | 2021-09-16 | Fundació Institut De Recerca Contra La Leucèmia Josep Carreras | Cd22 targeting-moiety for the treatment of b-cell acute lymphoblastic leukemia (b-all) |
EP3922993A1 (de) | 2020-06-12 | 2021-12-15 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Dpp3 bei patienten, die mit coronavirus infiziert sind |
BR112022017890A2 (pt) | 2020-03-16 | 2022-11-01 | Sphingotec Gmbh | Proadrenomedulina ou fragmento da mesma em pacientes infectados com coronavírus e tratamentos com ligante contra adrenomedulina |
US20230213519A1 (en) | 2020-03-16 | 2023-07-06 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Dpp3 in patients infected with coronavirus |
WO2021190980A1 (en) | 2020-03-22 | 2021-09-30 | Quadrucept Bio Limited | Multimers for viral strain evolution |
US20230135752A1 (en) | 2020-03-27 | 2023-05-04 | PhotoQ3 Inc. | Medicament for killing tumor cells |
KR20220160598A (ko) | 2020-03-30 | 2022-12-06 | 고쿠리츠다이가쿠호진 미에다이가쿠 | 이중 특이적 항체 |
US20230203191A1 (en) | 2020-03-30 | 2023-06-29 | Danisco Us Inc | Engineered antibodies |
EP4126064A1 (de) | 2020-04-03 | 2023-02-08 | Visterra, Inc. | Antikörpermolekül-wirkstoff-konjugate und verwendungen davon |
US20230149555A1 (en) | 2020-04-06 | 2023-05-18 | PhotoQ3 Inc. | Medicament for killing tumor cells |
US20230295281A1 (en) | 2020-04-10 | 2023-09-21 | Vanudis GmbH | Natural antibodies in prophylaxis and therapy |
WO2021211331A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Abbott Point Of Care Inc. | METHODS, COMPLEXES AND KITS FOR DETECTING OR DETERMINING AN AMOUNT OF A ß-CORONAVIRUS ANTIBODY IN A SAMPLE |
KR20230004494A (ko) | 2020-04-15 | 2023-01-06 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 면역접합체 |
JP2023523011A (ja) | 2020-04-24 | 2023-06-01 | マレンゴ・セラピューティクス,インコーポレーテッド | T細胞関連のがん細胞に結合する多機能性分子およびその使用 |
EP4143302A1 (de) | 2020-04-27 | 2023-03-08 | Magenta Therapeutics, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur transduktion hämatopoetischer stamm- und vorläuferzellen in vivo |
CN115461363A (zh) | 2020-05-01 | 2022-12-09 | 诺华股份有限公司 | 免疫球蛋白变体 |
EP4143236A1 (de) | 2020-05-01 | 2023-03-08 | Novartis AG | Manipulierte immunglobuline |
CA3182697A1 (en) | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for treating multiple myeloma |
EP4149558A1 (de) | 2020-05-12 | 2023-03-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Neues verfahren zur behandlung von kutanen t-zell-lymphomen und tfh-abgeleiteten lymphomen |
US20230183366A1 (en) | 2020-05-13 | 2023-06-15 | Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherch Médicale) | Recombinant proteins with ox40 activating properties |
WO2021231732A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies to garp |
JP2023528235A (ja) | 2020-05-17 | 2023-07-04 | アストラゼネカ・ユーケイ・リミテッド | SARS-CoV-2抗体、並びにこれを選択及び使用する方法 |
KR20230013258A (ko) | 2020-05-19 | 2023-01-26 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | T 세포 재유도 치료제 및 vla-4 부착 경로 억제제를 포함하는 조성물 |
JP7352040B2 (ja) | 2020-05-22 | 2023-09-27 | フィロジェン エッセ.ピー.アー. | 脳腫瘍の治療のためのTNFα免疫コンジュゲート療法 |
WO2021239666A1 (en) | 2020-05-26 | 2021-12-02 | Diaccurate | Therapeutic methods |
MX2022015157A (es) | 2020-06-02 | 2023-01-16 | Arcus Biosciences Inc | Anticuerpos para tigit. |
WO2021247908A1 (en) | 2020-06-03 | 2021-12-09 | Bionecure Therapeutics, Inc. | Trophoblast cell-surface antigen-2 (trop-2) antibodies |
TW202219065A (zh) | 2020-06-19 | 2022-05-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 免疫活化 Fc 域結合分子 |
AR122659A1 (es) | 2020-06-19 | 2022-09-28 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos biespecíficos para linfocitos t activados por proteasa |
US20220017637A1 (en) | 2020-06-23 | 2022-01-20 | Hoffmann-La Roche Inc. | Agonistic cd28 antigen binding molecules targeting her2 |
WO2021261546A1 (ja) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | 国立大学法人 東京大学 | 光増感色素 |
EP4172206A1 (de) | 2020-06-24 | 2023-05-03 | Visterra, Inc. | Antikörpermoleküle gegen april und verwendungen davon |
CN115916830A (zh) | 2020-06-25 | 2023-04-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗cd3/抗cd28双特异性抗原结合分子 |
WO2022010797A2 (en) | 2020-07-07 | 2022-01-13 | Bionecure Therapeutics, Inc. | Novel maytansinoids as adc payloads and their use for the treatment of cancer |
TW202216761A (zh) | 2020-07-16 | 2022-05-01 | 瑞士商諾華公司 | 抗β細胞素抗體、其片段及多特異性結合分子 |
CN116507636A (zh) | 2020-07-20 | 2023-07-28 | 阿斯利康(英国)有限公司 | SARS-CoV-2蛋白、抗SARS-CoV-2抗体以及它们的使用方法 |
WO2022026592A2 (en) | 2020-07-28 | 2022-02-03 | Celltas Bio, Inc. | Antibody molecules to coronavirus and uses thereof |
BR112023000216A2 (pt) | 2020-07-28 | 2023-02-07 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Preparação de seringa pré-carregada com agulha, com proteção de agulha e incluindo anticorpo modificado |
WO2022022662A1 (zh) | 2020-07-31 | 2022-02-03 | 百奥泰生物制药股份有限公司 | Cd47抗体及其应用 |
IL300225A (en) | 2020-07-31 | 2023-03-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | A pharmaceutical composition including chimeric receptor expressing cells |
US20220043000A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Abbott Laboratories | Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample |
EP4192511A1 (de) | 2020-08-07 | 2023-06-14 | Fortis Therapeutics, Inc. | Gegen cd46 gerichtete immunkonjugate und verfahren zur verwendung davon |
TW202221026A (zh) | 2020-08-14 | 2022-06-01 | 瑞士商Ac 免疫有限公司 | 人源化抗tdp-43結合分子及其用途 |
CN116761821A (zh) | 2020-08-18 | 2023-09-15 | 赛福伦有限责任公司 | 抗par-2抗体及其使用方法 |
EP4200338A1 (de) | 2020-08-20 | 2023-06-28 | Amgen Inc. | Antigenbindende proteine mit nichtkanonischem disulfid in der fab-region |
US20240009310A1 (en) | 2020-08-24 | 2024-01-11 | Charité - Universitätsmedizin Berlin | A CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR CONSTRUCT ENCODING A CHECKPOINT INHIBITORY MOLECULE AND AN IMMUNE STIMULATORY CYTOKINE AND CAR-EXPRESSING CELLS RECOGNIZING CD44v6 |
WO2022043312A1 (en) | 2020-08-24 | 2022-03-03 | Charité - Universitätsmedizin Berlin | Chimeric antigen receptor (car)-expressing cells recognizing cea |
CN116761818A (zh) | 2020-08-26 | 2023-09-15 | 马伦戈治疗公司 | 检测trbc1或trbc2的方法 |
CN116249718A (zh) | 2020-08-26 | 2023-06-09 | 马伦戈治疗公司 | 结合至钙网蛋白的多功能性分子及其用途 |
GB2616128A (en) | 2020-08-26 | 2023-08-30 | Marengo Therapeutics Inc | Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof |
EP4206224A1 (de) | 2020-08-26 | 2023-07-05 | National University Corporation Kumamoto University | Menschlicher antikörper oder antigenbindendes fragment davon gegen coronavirus-spike-protein |
CN116322763A (zh) | 2020-08-27 | 2023-06-23 | 学校法人顺天堂 | 抗切断型突变calr-cd3双特异性抗体及医药组合物 |
EP4204448A2 (de) | 2020-08-27 | 2023-07-05 | cureab GmbH | Anti-golph2-antikörper zur makrophagen- und dendritischen zelldifferenzierung |
WO2022043558A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Advanced Accelerator Applications International Sa | Method of treating psma-expressing cancers |
WO2022043557A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Advanced Accelerator Applications International Sa | Method of treating psma-expressing cancers |
EP4208197A1 (de) | 2020-09-04 | 2023-07-12 | Rutgers, The State University of New Jersey | Sars-cov-2-impfstoffe und -antikörper |
BR112023004415A2 (pt) | 2020-09-11 | 2023-05-09 | Medimmune Ltd | Moléculas terapêuticas de ligação a b7-h4 |
EP4211663A2 (de) | 2020-09-12 | 2023-07-19 | MedImmune Limited | Bewertungsverfahren für eine anti-b7h4-antikörper-wirkstoff-konjugattherapie |
KR20230069958A (ko) | 2020-09-14 | 2023-05-19 | 얀센 파마슈티카 엔.브이. | Fgfr 억제제 조합 요법 |
EP4213945A1 (de) | 2020-09-16 | 2023-07-26 | Janssen Biotech, Inc. | Verfahren zur behandlung von multiplem myelom |
US20230374162A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-11-23 | Amgen Inc. | Rational selection of building blocks for the assembly of multispecific antibodies |
EP4227686A1 (de) | 2020-10-08 | 2023-08-16 | National University Corporation Tokai National Higher Education and Research System | Verfahren zur bestimmung der empfindlichkeit oder der medizinischen wirkung eines anti-transferrin-rezeptorantikörpers |
WO2022081718A1 (en) | 2020-10-14 | 2022-04-21 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof |
EP4229086A1 (de) | 2020-10-15 | 2023-08-23 | UCB Biopharma SRL | Bindungsmoleküle, die cd45 multimerisieren |
EP4229081A1 (de) | 2020-10-15 | 2023-08-23 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Für sars-cov-2-rezeptor-bindungsdomäne spezifischer antikörper und therapeutische verfahren |
EP4232475A1 (de) | 2020-10-20 | 2023-08-30 | Kantonsspital St. Gallen | Antikörper oder antigenbindende fragmente mit spezifischer bindung an gremlin-1 und verwendungen davon |
WO2022087274A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibodies that neutralize type-i interferon (ifn) activity |
EP4240765A2 (de) | 2020-11-06 | 2023-09-13 | Novartis AG | Antikörper-fc-varianten |
EP4244246A1 (de) | 2020-11-10 | 2023-09-20 | Amgen Inc. | Neue linker von multispezifischen antigenbindenden domänen |
EP4253415A1 (de) | 2020-11-12 | 2023-10-04 | Mabwell (Shanghai) Bioscience Co., Ltd. | Antikörper und herstellungsverfahren dafür |
WO2022115538A1 (en) | 2020-11-24 | 2022-06-02 | Bio-Techne Corporation | Anti-severe acute respiratory syndrome coronavirus antibodies |
MX2023006426A (es) | 2020-12-01 | 2023-07-17 | Aptevo Res And Development Llc | Antígenos asociados a tumores y proteínas de unión a cd3 y composiciones y métodos relacionados. |
WO2023102384A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Abbott Laboratories | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
CA3198161A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Beth MCQUISTON | Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi |
EP4023218A1 (de) | 2020-12-02 | 2022-07-06 | S-Form Pharma | Kombinationstherapie für patienten mit akuter und/oder anhaltender dyspnoe |
WO2022120224A1 (en) | 2020-12-04 | 2022-06-09 | Visterra, Inc. | Methods of using interleukin-2 agents |
CN116635403A (zh) | 2020-12-04 | 2023-08-22 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | pH依赖性突变型白细胞介素-2多肽 |
WO2022130182A1 (en) | 2020-12-14 | 2022-06-23 | Novartis Ag | Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor 1 (npr1) antibodies and uses thereof |
US20220281914A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-09-08 | Kiniksa Pharmaceuticals, Ltd. | Protein compositions and methods for producing and using the same |
WO2022147147A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
WO2022148853A1 (en) | 2021-01-11 | 2022-07-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoconjugates |
KR20230146521A (ko) | 2021-01-13 | 2023-10-19 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 항체-피롤로벤조디아제핀 유도체 접합체 |
US20240115721A1 (en) | 2021-01-13 | 2024-04-11 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Anti-dll3 antibody-drug conjugate |
KR20230147072A (ko) | 2021-01-20 | 2023-10-20 | 비스테라, 인크. | 인터류킨-2 돌연변이체 및 이의 용도 |
UY39610A (es) | 2021-01-20 | 2022-08-31 | Abbvie Inc | Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr |
JP2024503908A (ja) | 2021-01-22 | 2024-01-29 | バイエル アクチェンゲゼルシャフト | Lrrc15抗体およびそのコンジュゲート |
BR112023015097A2 (pt) | 2021-01-28 | 2023-10-03 | Janssen Biotech Inc | Proteínas de ligação a psma e usos das mesmas |
JP2024505049A (ja) | 2021-01-29 | 2024-02-02 | ノバルティス アーゲー | 抗cd73及び抗entpd2抗体のための投与方式並びにその使用 |
US20220275090A1 (en) | 2021-02-22 | 2022-09-01 | Janssen Biotech, Inc. | Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors |
WO2022182872A2 (en) | 2021-02-24 | 2022-09-01 | Alladapt Immunotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for identification of cross-reactive allergenic proteins and treatment of allergies |
US20220378929A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-12-01 | MediBoston Limted | Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
WO2022184659A1 (en) | 2021-03-01 | 2022-09-09 | Quadrucept Bio Limited | Antibody domains & multimers |
US20240041978A1 (en) | 2021-03-03 | 2024-02-08 | The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | La protein as a novel regulator of osteoclastogenesis |
WO2022184853A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-09-09 | Pierre Fabre Medicament | Anti-vsig4 antibody or antigen binding fragment and uses thereof |
EP4301782A1 (de) | 2021-03-05 | 2024-01-10 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cd44-antikörper und deren verwendungen |
BR112023018278A2 (pt) | 2021-03-09 | 2023-10-31 | Janssen Biotech Inc | Tratamento de cânceres sem mutações de ativação de egfr |
WO2022189380A1 (en) | 2021-03-09 | 2022-09-15 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of pd-1-targeted il-2 variant immunoconjugate and anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies |
BR112023018117A2 (pt) | 2021-03-09 | 2023-10-31 | Hoffmann La Roche | Imunoconjugados |
TW202302143A (zh) | 2021-03-12 | 2023-01-16 | 日商中外製藥股份有限公司 | 重症肌無力症之治療或預防用之醫藥組合物 |
EP4308694A1 (de) | 2021-03-16 | 2024-01-24 | Magenta Therapeutics, Inc. | Dosierschemata zur mobilisierung hämatopoetischer stammzellen für stammzelltransplantationen bei patienten mit multiplem myelom |
CA3208011A1 (en) | 2021-03-17 | 2022-09-22 | Sarah Harris | Methods of treating atopic dermatitis with anti il-13 antibodies |
BR112023018331A2 (pt) | 2021-03-18 | 2023-12-12 | Medimmune Ltd | Molécula terapêutica de ligação que se liga a ccr9 |
CN117321418A (zh) | 2021-03-18 | 2023-12-29 | 诺华股份有限公司 | 癌症生物标志物及其使用方法 |
KR20230141868A (ko) | 2021-03-24 | 2023-10-10 | 와커 헤미 아게 | 불포화된 기를 갖는 유기폴리실록산의 제조 방법 |
WO2022204581A2 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and use thereof |
IL305818A (en) | 2021-03-29 | 2023-11-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Multispecific stable compound and its use |
CN117157312A (zh) | 2021-03-30 | 2023-12-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 蛋白酶活化的多肽 |
EP4067381A1 (de) | 2021-04-01 | 2022-10-05 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Neue tnfr2-bindende moleküle |
TW202304979A (zh) | 2021-04-07 | 2023-02-01 | 瑞士商諾華公司 | 抗TGFβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途 |
BR112023020832A2 (pt) | 2021-04-08 | 2023-12-19 | Marengo Therapeutics Inc | Moléculas multifuncionais ligadas a tcr e seus usos |
EP4326761A1 (de) | 2021-04-20 | 2024-02-28 | Amgen Inc. | Ausgeglichene ladungsverteilung bei der elektrostatischen lenkung von kettenpaarung in einer multispezifischen und monovalenten igg-molekülanordnung |
TW202308689A (zh) | 2021-04-21 | 2023-03-01 | 美商健生生物科技公司 | 高濃度的雙特異性抗體調配物 |
US20220372168A1 (en) | 2021-05-04 | 2022-11-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Multispecific fgf21 receptor agonists and their uses |
JP2024516970A (ja) | 2021-05-07 | 2024-04-18 | サーフィス オンコロジー, エルエルシー | 抗il-27抗体及びその使用 |
TW202309522A (zh) | 2021-05-11 | 2023-03-01 | 美商健生生物科技公司 | 用於監測復發性及/或難治性多發性骨髓瘤之治療的方法及組成物 |
TW202309094A (zh) | 2021-05-18 | 2023-03-01 | 美商健生生物科技公司 | 用於識別癌症患者以進行組合治療之方法 |
AU2022279156A1 (en) | 2021-05-18 | 2023-11-02 | Abbott Laboratories | Methods of evaluating brain injury in a pediatric subject |
AU2022278013A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-01-18 | Janssen Biotech, Inc. | Compositions comprising a t cell redirection therapeutic and an anti-cd44 therapeutic |
CN117412767A (zh) | 2021-05-25 | 2024-01-16 | 雪绒花免疫公司 | C-x-c基序趋化因子受体6(cxcr6)结合分子及其使用方法 |
EP4348263A1 (de) | 2021-05-28 | 2024-04-10 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren zum nachweis von cm-tma-biomarkern |
AR126009A1 (es) | 2021-06-02 | 2023-08-30 | Hoffmann La Roche | Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam |
WO2022256723A2 (en) | 2021-06-03 | 2022-12-08 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and therapeutic use thereof |
BR112023022097A2 (pt) | 2021-06-07 | 2023-12-19 | Agonox Inc | Cxcr5, pd-1 e icos expressando células t cd4 reativas de tumor e seu uso |
WO2022261183A2 (en) | 2021-06-08 | 2022-12-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for treating and/or identifying an agent for treating intestinal cancers |
CA3222291A1 (en) | 2021-06-14 | 2022-12-22 | Jaime MARINO | Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind |
IL309349A (en) | 2021-06-14 | 2024-02-01 | argenx BV | Antibodies against interleukin 9 and methods of using them |
IL308959A (en) | 2021-06-18 | 2024-01-01 | Nammi Therapeutics Inc | Fusion protein composition(s) containing masked type I interferons (IFNalpha and IFNbeta) for use in cancer therapy and methods thereof |
CA3221555A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Kimberly LONG | A myostatin pathway inhibitor in combination with a glp-1 pathway activator for use in treating metabolic disorders |
IL309405A (en) | 2021-06-29 | 2024-02-01 | Seagen Inc | Methods for treating cancer with a combination of non-fucosylated anti-CD70 antibody and CD47 antagonist |
WO2023285878A1 (en) | 2021-07-13 | 2023-01-19 | Aviation-Ophthalmology | Methods for detecting, treating, and preventing gpr68-mediated ocular diseases, disorders, and conditions |
WO2023288267A1 (en) | 2021-07-14 | 2023-01-19 | 2Seventy Bio, Inc. | Engineered t cell receptors fused to binding domains from antibodies |
WO2023286854A1 (ja) | 2021-07-16 | 2023-01-19 | ブライトパス・バイオ株式会社 | 抗Tim-3抗原抗体または抗体誘導体およびその用途 |
WO2023007472A1 (en) | 2021-07-30 | 2023-02-02 | ONA Therapeutics S.L. | Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer |
WO2023015170A2 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Tavotek Biotech (Suzhou) Ltd | Anti-cd38 antibodies, anti-cd3 antibodies, and bispecific antibodies, and uses thereof |
WO2023015169A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-09 | Tavotek Biotech (Suzhou) Ltd | Anti-cdh17 monoclonal and bispecific antibodies and uses thereof |
US11807685B2 (en) | 2021-08-05 | 2023-11-07 | The Uab Research Foundation | Anti-CD47 antibody and uses thereof |
WO2023014863A1 (en) | 2021-08-05 | 2023-02-09 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses |
CA3228576A1 (en) | 2021-08-10 | 2023-02-16 | Byomass Inc. | Anti-gdf15 antibodies, compositions and uses thereof |
CN117836003A (zh) | 2021-08-26 | 2024-04-05 | 株式会社英仙蛋白质科学 | Ros(活性氧类)产生增强剂 |
AU2022335718A1 (en) | 2021-08-26 | 2024-03-28 | Glycanostics S.R.O | Glycoprotein biomarkers for diagnosing cancer |
CN117881784A (zh) | 2021-08-31 | 2024-04-12 | 大正制药株式会社 | 抗生长激素抗体 |
WO2023034777A1 (en) | 2021-08-31 | 2023-03-09 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
AR126971A1 (es) | 2021-09-03 | 2023-12-06 | Univ Of Bern | Composiciones y métodos para tratar el síndrome de qt largo |
TW202325733A (zh) | 2021-09-03 | 2023-07-01 | 美商Go治療公司 | 抗醣化-lamp1抗體及其用途 |
CA3230934A1 (en) | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-cmet antibodies and their uses |
EP4144898A1 (de) | 2021-09-07 | 2023-03-08 | New/era/mabs GmbH | Verfahren zur selektion oder screenen von antikörpern aus einer antikörperbibliothek |
AU2022346688A1 (en) | 2021-09-14 | 2024-04-04 | Glycanostics S.R.O | Use of lectins to determine mammaglobin-a glycoforms in breast cancer |
TW202320861A (zh) | 2021-09-15 | 2023-06-01 | 日商第一三共股份有限公司 | 以抗體-藥物結合物治療耐化療的癌症之方法 |
WO2023044483A2 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
WO2023044094A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof |
AU2022354059A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-03-28 | Abbott Laboratories | Methods and systems of diagnosing brain injury |
WO2023057871A1 (en) | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Novartis Ag | Surfactant stabilizers |
TW202333781A (zh) | 2021-10-08 | 2023-09-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 抗hla-dq2﹒5抗體製劑 |
WO2023062048A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer |
AU2022362681A1 (en) | 2021-10-14 | 2024-04-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | New interleukin-7 immunoconjugates |
CA3232216A1 (en) | 2021-10-18 | 2023-04-27 | Tavotek Biotherapeutics (Hong Kong) Limited | Anti-egfr antibodies, anti-cmet antibodies, anti-vegf antibodies, multispecific antibodies, and uses thereof |
WO2023069421A1 (en) | 2021-10-18 | 2023-04-27 | Byomass Inc. | Anti-activin a antibodies, compositions and uses thereof |
WO2023079494A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Janssen Biotech, Inc. | Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies |
EP4177266A1 (de) | 2021-11-05 | 2023-05-10 | Katholieke Universiteit Leuven | Neutralisierende humane anti-sars-cov-2-antikörper |
WO2023090361A1 (ja) | 2021-11-16 | 2023-05-25 | 国立大学法人鳥取大学 | 改変d領域を含むヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座を有する哺乳動物人工染色体ベクター、及びそのベクターを保持する細胞又は非ヒト動物 |
AR127692A1 (es) | 2021-11-16 | 2024-02-21 | Ac Immune Sa | Anticuerpos anti-asc para uso en tratamientos antiinflamatorios |
WO2023092004A1 (en) | 2021-11-17 | 2023-05-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders |
WO2023089377A2 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-25 | Mirobio Limited | Engineered pd-1 antibodies and uses thereof |
US20230348614A1 (en) | 2021-11-24 | 2023-11-02 | Visterra, Inc. | Engineered antibody molecules to cd138 and uses thereof |
WO2023094569A1 (en) | 2021-11-26 | 2023-06-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies and tyrp1-specific antibodies |
WO2023097119A2 (en) | 2021-11-29 | 2023-06-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions to modulate riok2 |
US20240041981A1 (en) | 2021-12-01 | 2024-02-08 | Visterra, Inc. | Methods of using interleukin-2 agents |
US20230183360A1 (en) | 2021-12-09 | 2023-06-15 | Janssen Biotech, Inc. | Use of Amivantamab to Treat Colorectal Cancer |
GB202117928D0 (en) | 2021-12-11 | 2022-01-26 | Cancer Research Tech Ltd | Immunotherapy for cancer |
WO2023114978A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Abbott Laboratories | Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples |
WO2023122213A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Byomass Inc. | Targeting gdf15-gfral pathway cross-reference to related applications |
WO2023118508A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer |
WO2023129942A1 (en) | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Abbott Laboratories | Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan |
US20230295348A1 (en) | 2022-01-24 | 2023-09-21 | Novimmune Sa | Composition and methods for the selective activation of cytokine signaling pathways |
WO2023147107A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Byomass Inc. | Myeloproliferative conditions |
WO2023144303A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas |
WO2023150652A1 (en) | 2022-02-04 | 2023-08-10 | Abbott Laboratories | Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample |
WO2023150778A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Visterra, Inc. | Anti-idiotype antibody molecules and uses thereof |
TW202342057A (zh) | 2022-02-07 | 2023-11-01 | 美商健生生物科技公司 | 用於減少用egfr/met雙特異性抗體治療之患者的輸注相關反應之方法 |
WO2023154305A2 (en) | 2022-02-10 | 2023-08-17 | Amgen Inc. | Antibody protein product expression constructs for high throughput sequencing |
TW202342519A (zh) | 2022-02-16 | 2023-11-01 | 瑞士商Ac 免疫有限公司 | 人源化抗tdp-43結合分子及其用途 |
WO2023166081A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Heidelberg Immunotherapeutics Gmbh | Vaccine comprising an antibody or an fc-containing fusion protein comprising an fc part of an antibody |
US20240002544A1 (en) | 2022-03-07 | 2024-01-04 | Novimmune Sa | Cd28 bispecific antibodies for targeted t cell activation |
WO2023169896A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-14 | Astrazeneca Ab | BINDING MOLECULES AGAINST FRα |
WO2023170216A1 (en) | 2022-03-11 | 2023-09-14 | Astrazeneca Ab | A SCORING METHOD FOR AN ANTI-FRα ANTIBODY-DRUG CONJUGATE THERAPY |
WO2023175035A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Adrenomed Ag | Stable aqueous formulation of an anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment |
WO2023175171A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Bk polyomavirus antibodies and uses thereof |
TW202402794A (zh) | 2022-03-28 | 2024-01-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 經改良的folr1蛋白酶可活化之t細胞雙特異性抗體 |
WO2023192436A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Singleplex or multiplexed assay for complement markers in fresh biological samples |
US20230416361A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-12-28 | Mirobio Limited | Engineered cd200r antibodies and uses thereof |
WO2023194539A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Heidelberg Pharma Research Gmbh | Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates |
GB202205203D0 (en) | 2022-04-08 | 2022-05-25 | UCB Biopharma SRL | Combination with inhibitor |
GB202205200D0 (en) | 2022-04-08 | 2022-05-25 | Ucb Biopharma Sprl | Combination with chemotherapy |
WO2023194565A1 (en) | 2022-04-08 | 2023-10-12 | Ac Immune Sa | Anti-tdp-43 binding molecules |
WO2023201201A1 (en) | 2022-04-10 | 2023-10-19 | Immunomic Therapeutics, Inc. | Bicistronic lamp constructs comprising immune response enhancing genes and methods of use thereof |
WO2023203177A1 (en) | 2022-04-20 | 2023-10-26 | Kantonsspital St. Gallen | Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof |
TW202400637A (zh) | 2022-04-25 | 2024-01-01 | 美商威特拉公司 | April之抗體分子及其用途 |
WO2023209568A1 (en) | 2022-04-26 | 2023-11-02 | Novartis Ag | Multispecific antibodies targeting il-13 and il-18 |
WO2023209177A1 (en) | 2022-04-29 | 2023-11-02 | Astrazeneca Uk Limited | Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same |
WO2023215498A2 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Modernatx, Inc. | Compositions and methods for cd28 antagonism |
WO2023220695A2 (en) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
WO2023228095A1 (en) | 2022-05-24 | 2023-11-30 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Dosage regimen of an anti-cdh6 antibody-drug conjugate |
WO2023240124A1 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Pseudotyped viral particles for targeting tcr-expressing cells |
WO2023245097A2 (en) | 2022-06-16 | 2023-12-21 | Cephalon Llc | Anti-pd-1 antibody-attenuated il-2 immunoconjugates and uses thereof |
EP4296279A1 (de) | 2022-06-23 | 2023-12-27 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Anti-transthyretin(ttr)-bindende proteine und ihre verwendungen |
GB202209501D0 (en) | 2022-06-29 | 2022-08-10 | Plant Bioscience Ltd | Biosynthetic enzymes |
WO2024006876A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Abbott Laboratories | Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples |
WO2024003837A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Janssen Biotech, Inc. | Use of anti-egfr/anti-met antibody to treat gastric or esophageal cancer |
WO2024006961A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Neoleukin Therapeutics, Inc. | Neo-2/15 variants and uses thereof for preferentially stimulating t-regulatory cells |
WO2024008891A1 (en) | 2022-07-07 | 2024-01-11 | Cambridge Enterprise Limited | Methods for mapping binding sites of compounds |
WO2024015953A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Danisco Us Inc. | Methods for producing monoclonal antibodies |
WO2024013727A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Janssen Biotech, Inc. | Material and methods for improved bioengineered pairing of antigen-binding variable regions |
WO2024023368A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | 4TEEN4 Pharmaceuticals GmbH | Prediction of an increase of dpp3 in a patient with septic shock |
WO2024023369A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Adrenomed Ag | Anti-adrenomedullin (adm) antibody or anti-adm antibody fragment or anti-adm non-ig scaffold for use in therapy or prevention of shock |
WO2024030976A2 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for crossing the blood brain barrier |
WO2024050354A1 (en) | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Washington University | Alphavirus antigen binding antibodies and uses thereof |
WO2024050524A1 (en) | 2022-09-01 | 2024-03-07 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for directing apolipoprotein l1 to induce mammalian cell death |
WO2024050526A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Compositions and methods for treating long qt syndrome |
WO2024054436A1 (en) | 2022-09-06 | 2024-03-14 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Diagnostic and prognostic biomarker profiles in patients with hematopoietic stem cell transplant-associated thrombotic microangiopathy (hsct-tma) |
WO2024052503A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof |
WO2024056668A1 (en) | 2022-09-12 | 2024-03-21 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | New anti-itgb8 antibodies and its uses thereof |
WO2024059708A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Abbott Laboratories | Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury |
WO2024062038A1 (en) | 2022-09-21 | 2024-03-28 | Elthera Ag | Novel binding molecules binding to l1cam |
WO2024068572A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved protease-activatable t cell bispecific antibodies |
WO2024068705A1 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Protease-activated polypeptides |
EP4345109A1 (de) | 2022-09-30 | 2024-04-03 | AdrenoMed AG | Anti-adrenomedullin (adm)-bindemittel zur verwendung bei der behandlung von pädiatrischen patienten mit angeborener herzerkrankung |
WO2024079711A1 (en) | 2022-10-14 | 2024-04-18 | Janssen Research & Development, Llc | Method for detection of antibody-dependent cellular phagocytosis |
Family Cites Families (52)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4593002A (en) * | 1982-01-11 | 1986-06-03 | Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Viruses with recombinant surface proteins |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
CA1277931C (en) | 1984-06-05 | 1990-12-18 | Shimon Ulitzur | Detection and/or identification of microorganisms in a test sample usingbioluminescence or other exogenous genetically-introduced marker |
EP0229046B1 (de) | 1985-03-30 | 1994-05-04 | BALLIVET, Marc | Verfahren zum erhalten von dns, rns, peptiden, polypeptiden oder proteinen durch dns-rekombinant-verfahren |
US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
US4704692A (en) | 1986-09-02 | 1987-11-03 | Ladner Robert C | Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides |
EP0281604B1 (de) | 1986-09-02 | 1993-03-31 | Enzon Labs Inc. | Bindungsmoleküle mit einzelpolypeptidkette |
US4946778A (en) * | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1996-10-22 | Bioinvent International Ab | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
DE3852304T3 (de) | 1987-03-02 | 1999-07-01 | Enzon Lab Inc | Organismus als Träger für "Single Chain Antibody Domain (SCAD)". |
ATE120761T1 (de) * | 1987-05-21 | 1995-04-15 | Creative Biomolecules Inc | Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung. |
US5091513A (en) * | 1987-05-21 | 1992-02-25 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic antibody binding sites |
DE3744595A1 (de) * | 1987-12-31 | 1989-07-13 | Andreas Dr Plueckthun | Verfahren zur gentechnischen herstellung von antikoerpern |
DE768377T1 (de) * | 1988-09-02 | 1998-01-02 | Dyax Corp | Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen |
US5223409A (en) * | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
US5534617A (en) | 1988-10-28 | 1996-07-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone variants having greater affinity for human growth hormone receptor at site 1 |
US5688666A (en) | 1988-10-28 | 1997-11-18 | Genentech, Inc. | Growth hormone variants with altered binding properties |
KR0184860B1 (ko) * | 1988-11-11 | 1999-04-01 | 메디칼 리써어치 카운실 | 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법) |
CA2016841C (en) * | 1989-05-16 | 1999-09-21 | William D. Huse | A method for producing polymers having a preselected activity |
WO1990014443A1 (en) * | 1989-05-16 | 1990-11-29 | Huse William D | Co-expression of heteromeric receptors |
CA2016842A1 (en) * | 1989-05-16 | 1990-11-16 | Richard A. Lerner | Method for tapping the immunological repertoire |
US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
AU7247191A (en) * | 1990-01-11 | 1991-08-05 | Molecular Affinities Corporation | Production of antibodies using gene libraries |
DE4002897A1 (de) | 1990-02-01 | 1991-08-08 | Behringwerke Ag | Herstellung und verwendung von genbanken synthetischer menschlicher antikoerper ("synthetische human-antikoerper-bibliotheken") |
US5747334A (en) | 1990-02-15 | 1998-05-05 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Random peptide library |
CA2075974C (en) | 1990-02-15 | 2001-02-06 | Dana M. Fowlkes | Totally synthetic affinity reagents |
US5498538A (en) | 1990-02-15 | 1996-03-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Totally synthetic affinity reagents |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US7063943B1 (en) | 1990-07-10 | 2006-06-20 | Cambridge Antibody Technology | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6916605B1 (en) | 1990-07-10 | 2005-07-12 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5258289A (en) | 1990-09-05 | 1993-11-02 | Davis Claude G | Method for the selecting of genes encoding catalytic antibodies |
IL99552A0 (en) * | 1990-09-28 | 1992-08-18 | Ixsys Inc | Compositions containing procaryotic cells,a kit for the preparation of vectors useful for the coexpression of two or more dna sequences and methods for the use thereof |
US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
US5780279A (en) | 1990-12-03 | 1998-07-14 | Genentech, Inc. | Method of selection of proteolytic cleavage sites by directed evolution and phagemid display |
ES2113940T3 (es) | 1990-12-03 | 1998-05-16 | Genentech Inc | Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas. |
DE69131017T2 (de) | 1990-12-20 | 1999-07-15 | Ixsys Inc | Optimierung von bindenden proteinen |
DE69233750D1 (de) * | 1991-04-10 | 2009-01-02 | Scripps Research Inst | Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden |
US5858657A (en) | 1992-05-15 | 1999-01-12 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US6225447B1 (en) | 1991-05-15 | 2001-05-01 | Cambridge Antibody Technology Ltd. | Methods for producing members of specific binding pairs |
DE69230142T2 (de) * | 1991-05-15 | 2000-03-09 | Cambridge Antibody Tech | Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern |
DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
DK1024191T3 (da) | 1991-12-02 | 2008-12-08 | Medical Res Council | Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker |
DE69331278T2 (de) | 1992-09-04 | 2002-07-18 | Scripps Research Inst | Phagemiden die einen oberflächenrezeptor und ein heterologes oberflächenprotein co-exprimieren |
JP3720353B2 (ja) | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
US5855885A (en) | 1993-01-22 | 1999-01-05 | Smith; Rodger | Isolation and production of catalytic antibodies using phage technology |
US5561610A (en) * | 1994-06-30 | 1996-10-01 | Caterpillar Inc. | Method and apparatus for indicating a fault condition |
DE20114623U1 (de) | 2001-09-04 | 2004-02-12 | Wilken, Wilhelm, Dr. | Distaler Adapter für T5 Leuchtstofflampen mit Nachrüst-EVG |
US8464209B2 (en) | 2007-03-19 | 2013-06-11 | Microsoft Corporation | Using collaborative development information in a team environment |
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