TW202015726A - Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 - Google Patents

Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 Download PDF

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Abstract

本文提供了特異性結合ENTPD2(例如人ENTPD2蛋白)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，以及使用該等抗體或抗原結合片段之方法。本發明還涉及組合療法，該組合療法包含抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和至少一種另外的治療劑，以及使用該等組合療法之方法。

Description

ENTPD2抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 相關申請的交叉引用
本申請要求2018年5月30日提交的美國臨時申請號62/677,850的權益，所述美國臨時申請的內容藉由引用以其全文結合在此。
本發明提供特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，以及使用該等抗體或抗原結合片段的方法。
本發明還涉及組合療法，該組合療法包含抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和至少一種另外的治療劑。
序列表
本申請含有已經以ASCII格式電子遞交的序列表並且該序列表特此藉由引用以其全文併入。所述ASCII副本創建於2019年4月5日，名稱為PAT058145-WO-PCT_SL.txt並且大小為635,873位元組。
細胞應激和細胞凋亡引發ATP釋放到細胞外空間。增加的ATP濃度促進炎症快速發生，導致T細胞傳訊的放大，抑制調節性T細胞(Treg)，並促進樹突細胞和巨噬細胞中的炎性體活化。胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)係水解5'-三磷酸的外核苷酶家族的一部分，並且是參與嘌呤能傳訊的膜內在蛋白質。ENTPD2催化三磷酸腺苷(ATP)向二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)的轉化。反過來，AMP由分化簇73(CD73，也稱為外-5'-核苷酸酶(外-5'NT))催化為腺苷。分子AMP與幾種受體相互作用，該等受體包括腺苷A1、A2A、A2B和A3受體。A2A受體由於其在免疫細胞上的廣泛表現而受到特別關注。AMP在腫瘤微環境中具有多效性，包括調節性T細胞(Treg)的擴增，干擾素(IFN)-γ介導的效應T細胞(Toff)應答的抑制，以及髓源性抑制細胞(MDSC)的擴增。參見，例如Allard B等人，Curr Opin Pharmacol[藥理學研究現狀]29：7-16(2016)和Allard D等人，Immunotherapy[免疫療法]8：145-163(2016)。
在肝細胞癌的小鼠模型中，顯示ENTPD2將細胞外ATP轉化為AMP，其阻止單核細胞髓源性抑制細胞(MDSC)分化為樹突細胞，從而促進體外和體內MDSC的維持(Chiu等人，Nat Commun.[自然傳播]8：517-28(2017)。
如本文所述，ENTPD2在癌細胞上表現。用於調節ENTPD2活性的新組成物和方法以及相關治療劑係非常需要的。
本發明提供了特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。ENTPD2抗體或其抗原結合片段可用於治療ENTPD2相關疾病，例如癌症。
在一方面，本文提供了特異性結合人ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)。在一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表1中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。在一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包含表1中提供的重鏈可變區(VH)。在一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包含表1中提供的輕鏈可變區(VL)。
另一方面，本文提供了選自以下中的任何一種的抗體或抗原結合片段：1)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；2)包含以下的抗體或其抗原結合片段： 包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；3)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；4)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；5)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、 包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；6)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；7)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID 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NO：51的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；32)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列； 33)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列：34)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：245的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；35)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：256的LCDR3序列；36)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、 包含SEQ ID NO：249的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；37)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：261的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；38)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；39)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：263的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及 包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；40)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：272的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：273的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：285的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；41)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：275的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：276的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；42)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：278的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：279的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：280的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
另一方面，本文提供了選自以下中的任何一種的抗體或抗原結合片段： 1)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；2)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；3)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：33或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；4)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：57或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；5)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：64或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；6)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：70或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：74或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；7)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：78或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；8)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：91或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：102或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 9)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：115或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；10)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：132或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；11)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：145或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：156或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；12)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：169或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：178或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；13)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：225或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；14)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：233或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：237或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；15)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：241或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；16)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：250或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：257或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 17)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：264或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：268或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或18)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：281或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：287或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
另一方面，本文提供了選自以下中的任何一種的抗體或抗原結合片段：1)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；2)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；3)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：35或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；4)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：59或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；5)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：66或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 6)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：72或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：76或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；7)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：80或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；8)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：93或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：104或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；9)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：117或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；10)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：134或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；11)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：147或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：158或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；12)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：171或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：180或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；13)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：227或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 14)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：235或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：239或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；15)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：243或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；16)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：252或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：259或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；17)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：266或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：270或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或18)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：283或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：289或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
本文還提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。
本文還提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Aln393、Arg394、或Asp397。
在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段具有IgG1同種型。在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段包含Fc區，該Fc區選自IgG1 Fc區、IgG2 Fc區、IgG4 Fc區、或IgG2/IgG4雜合Fc區。。在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段包含Fc區，該Fc區選自IgG1 Fc區。在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段包含修飾的Fc區。在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段包含修飾的Fc區，該修飾的Fc區相比於親本抗體具有降低的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。
另一方面，本文提供了與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段競爭結合人ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段。
另一方面，本文提供了與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段基本上結合相同的ENTPD2表位的抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD)小於10nM，例如KD小於5nM或KD小於3nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，在25℃藉由Biacore測量針對人ENTPD2的本文所述的抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段抑制至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%的人ENTPD2酶活性。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量人ENTPD2的酶活性，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。
在一些實施方式中，本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段抑制ENTPD2水解三磷酸腺苷(ATP)的能力。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。
在一些實施方式中，本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段干擾ATP與ENTPD2的結合或在ENTPD2的催化結構域內捕獲ATP。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。
在一些實施方式中，本文所述的抗體或其抗原結合片段係人或人源化抗體或其片段。
另一方面，本文提供了編碼本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸。此類核酸可編碼包含本文所述的ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域的多肽。
還提供了包含編碼本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸的運載體。在一些實施方式中，運載體選自DNA運載體、RNA運載體、質粒、粘粒或病毒運載體。在一些實施方式中，運載體係基於以下病毒中的任何一種的病毒運載體：慢病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、疱疹單純型病毒(HSV)、微小病毒、逆轉錄酶病毒、痘瘡病毒、辛德畢斯病毒、流感病毒、裏奧病毒、新城雞瘟病毒(NDV)、麻疹病毒、水皰性口炎病毒(VSV)、脊髓灰 質炎病毒、痘病毒、塞內卡谷病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、黏液瘤病毒或馬拉巴病毒。在一些實施方式中，運載體係AAV運載體。在一些實施方式中，運載體係慢病毒運載體。在一些實施方式中，運載體進一步包含啟動子，例如組織特異性啟動子。在一些實施方式中，運載體進一步包含可檢測標記。
本文還提供了包含編碼本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸或核酸組的細胞或者包含這種核酸或核酸組的運載體。
另一方面，本文提供了包含以下的藥物組成物：本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、包含這種核酸或核酸組的運載體、或包含本文所述的核酸或核酸組或運載體的細胞、和藥學上可接受的載體運載體。
另一方面，本文提供了藉由如下步驟產生抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的方法：培養包含編碼抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸或核酸組的細胞或包含這種核酸或核酸組的運載體，並從培養基中收集抗體或其抗原結合片段。
另一方面，本文提供了藉由向受試者施用治療有效量的以下各項來治療對有需要的受試者的癌症的方法：本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段；編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸或核酸組；包含編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體；包含這種核酸或核酸組或運載體的細胞；或包含這樣的抗體或抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體或細胞的藥物組成物。在一些實施方式中，將抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向受試者給予。
另一方面，本文提供了藉由以有效刺激受試者中的免疫應答的量向該受試者施用以下各項來刺激該免疫應答的方法：本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段，編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸或核酸組，包含編碼這 種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體，包含這種核酸或核酸組或運載體的細胞，或包含這樣的抗體或抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體或細胞的藥物組成物。
在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括向受試者施用至少一種另外的治療劑。
在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括向受試者施用至少兩種另外的治療劑。
另一方面，本文提供了用作藥物的本文所述的抗體或其抗原結合片段，編碼這種抗體或其抗原結合片段的核酸或核酸組，包含這種核酸或核酸組的運載體或細胞，或包含這樣的抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體或細胞的藥物組成物。
另一方面，本文提供了用於在癌症的治療中使用的本文所述的抗體或其抗原結合片段，編碼這種抗體或其抗原結合片段的核酸，包含這種核酸或核酸組的運載體或細胞，或包含這樣的抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體或細胞的藥物組成物。
另一方面，本文提供了如下藥物組成物，該藥物組成物包含本文所述的抗體或其抗原結合片段，以及至少一種另外的治療劑或治療術。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑或治療術選自化學療法、靶向抗癌療法、溶瘤細胞藥物、細胞毒性劑、基於免疫的療法、細胞介素、外科手術、放射程序、共刺激分子的激活劑、抑制分子的抑制劑、疫苗或細胞療法中的一種或多種。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如PD-1抗體。在一些實施方式中，該PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗 (Nivolumab)、派姆單抗(Pembrolizumab)、匹地利珠單抗(Pidilizumab)、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如PD-L1抗體。在一些實施方式中，該PD-L1抑制劑選自FAZ053、阿特利珠單抗(Atezolizumab)、阿維魯單抗(Avelumab)、度伐魯單抗(Durvalumab)、或BMS-936559。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑係A2AR拮抗劑。在一些實施方式中，該A2AR拮抗劑選自：i. 抗CD73抗體分子或其抗原結合片段，視情況其中該抗CD73抗體選自：a. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：295的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：296的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：295或296具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；b. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：299的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：300的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：299或300具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；c. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：302的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：303的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：302或303具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；d. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：304的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：305的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：304或305具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列； e. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：306的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：307的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：306或307具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或f. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：308的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：309的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：308或309具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或ii. PBF509/NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南(vipadenant)、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南(Tozadenant)/SYN-115、KW-6356、ST-4206、和普瑞迪南(Preladenant)/SCH 420814；或iii. 5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺，或其藥學上可接受的鹽；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋體，或其藥學上可接受的鹽；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；以及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三
Figure 108118358-A0202-12-0026-69
-3-胺，或其藥學上可接受的鹽。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑選自：i. CTLA-4抑制劑，視情況其中該CTLA-4抑制劑選自艾匹利木單抗(Ipilimumab)或曲美利木單抗(Tremelimumab)；ii. TIM-3抑制劑，視情況其中該TIM-3抑制劑選自MBG453、TSR-022、或LY3321367； iii. LAG-3抑制劑，視情況其中該LAG-3抑制劑選自LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280或REGN3767；iv. GITR激動劑，視情況其中該GITR激動劑選自GWN323、BMS-986156、MK-4166、MK-1248、TRX518、INCAGN1876、AMG 228、或INBRX-110；v. 抗CD3多特異性抗體分子，視情況其中該抗CD3多特異性抗體分子係抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子(例如XENP14045)、或抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子(例如XENP13676)；vi. 細胞介素分子，視情況其中該細胞介素分子係與可溶形式的IL-15受體α(IL-15Ra)複合的IL-15；vii. 巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)抑制劑，視情況其中該M-CSF抑制劑係MCS110；viii. CSF-1R抑制劑，視情況其中該CSF-1R抑制劑係BLZ945；ix. 吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和/或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)的抑制劑；x. TGF-β抑制劑；xi. 溶瘤病毒；xii. 嵌合抗原受體(CAR)T細胞療法。
在一些實施方式中，該至少一種另外的治療劑選自：1)蛋白激酶C(PKC)抑制劑；2)熱休克蛋白90(HSP90)抑制劑；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕黴素(rapamycin)靶蛋白(mTOR)的抑制劑；4)細胞色素P450的抑制劑(例如，CYP17抑制劑或17α-羥化酶/C17-20裂解酶抑制劑)；5)鐵螯合劑；6)芳香酶抑制劑；7)p53抑制劑，例如p53/Mdm2相互作用的抑制劑；8)細胞凋亡誘導劑；9)血管生成抑制劑；10)醛固酮合酶抑制劑；11)平滑(smoothened， SMO)受體抑制劑；12)催乳素受體(PRLR)抑制劑；13)Wnt傳訊抑制劑；14)CDK4/6抑制劑；15)纖維母細胞生長因子受體2(FGFR2)/纖維母細胞生長因子受體4(FGFR4)抑制劑；16)巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制劑；17)c-KIT、組胺釋放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中的一種或多種的抑制劑；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中一種或多種的抑制劑；19)生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑；20)間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑；21)似胰島素生長因子1受體(IGF-1R)抑制劑；22)P-醣蛋白1抑制劑；23)血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑；24)BCR-ABL激酶抑制劑；25)FGFR抑制劑；26)CYP11B2的抑制劑；27)HDM2抑制劑，例如HDM2-p53相互作用的抑制劑；28)酪胺酸激酶的抑制劑；29)c-MET的抑制劑；30)JAK的抑制劑；31)DAC的抑制劑；32)11β-羥化酶的抑制劑；33)IAP的抑制劑；34)PIM激酶的抑制劑；35)博庫派恩(Porcupine)的抑制劑；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制劑；37)HER3的抑制劑；38)MEK的抑制劑；39)脂質激酶的抑制劑；或表16中提供的一種或多種藥劑。
在一些實施方式中，將抗體或抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物與該至少一種另外的治療劑同時、在其之前、或在其之後給予。
在一些實施方式中，給予該抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物具有以下效果中的一種或多種：(a)受試者的腫瘤或病變部位中CD45+ CD4- CD8+ CD69+ CD25+細胞的數量增加；(b)受試者的腫瘤或病變部位中CD45+ CD8- CD4+ FOXP3- CD69+ CD25+細胞的數量增加；(c)受試者的血漿MCP1或IL-1β水平降低；或 (d)受試者的腫瘤或病變部位中MCP1水平上升。
另一方面，本文提供了本文所述的抗體或其抗原結合片段，編碼這種抗體或其抗原結合片段的核酸，包含這種核酸的運載體或細胞，或包含這樣的抗體或其抗原結合片段、核酸、運載體或細胞的藥物組成物在用於癌症治療的藥物的生產中之用途。
另一方面，本文提供了一種治療有需要的受試者的癌症之方法，這種方法包括將治療有效量的本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合向該受試者給予。
另一方面，本文提供了一種刺激受試者中的免疫應答的方法，這種方法包括將治療有效量的本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合向該受試者給予。
另一方面，本文提供了包含本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段的組成物，用於與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合在受試者癌症的治療中使用。
另一方面，本文提供了包含本文所述的抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段的組成物，用於與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合在受試者癌症的治療中使用。
在一些實施方式中，PD-1抑制劑係PD-1抗體。在一些實施方式中，該PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
在一些實施方式中，PD-L1抑制劑係PD-L1抗體。在一些實施方式中，該PD-L1抑制劑選自FAZ053、阿特利珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、或BMS-936559。
在一些實施方式中，癌症係ENTPD2+癌症。在一些實施方式中，該癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(例如胃腺癌、胃惡性腫瘤)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌、膽管癌、肺癌(例如小細胞肺癌)、乳癌(例如乳腺癌)或卵巢癌。
本文提及的所有公開物、專利和登錄號均藉由引用以其全文特此併入，如同每個單獨的出版物或專利被明確且單獨地表明藉由引用而併入。
[圖1A]描繪了藉由流式細胞術測定的跨代表性癌細胞系之ENTPD2表現。圖1B係顯示跨代表性癌細胞系的ENTPD2受體密度之表(表20)。
[圖2]描繪了福馬林固定的石蠟包埋的原發性結腸直腸、食道和卵巢腫瘤組織中ENTPD2之代表性IHC染色圖像。
[圖3A]顯示了抗人ENTPD2 FAb22重鏈(SEQ ID NO：330)和輕鏈(SEQ ID NO：334)的胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特(Kabat)定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基針對每個Fab標記為(*)。圖3B顯示了抗人ENTPD2 FAb23重鏈(SEQ ID NO：336)和輕鏈(SEQ ID NO：239)的胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基用(*)標記。圖3C顯示了抗小鼠ENTPD2 FAb24重鏈(SEQ ID NO：338)和輕鏈(SEQ ID NO：340)的胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基用(*)標記。
[圖4A]顯示了晶體學研究中使用的重組人ENTPD2(殘基29-462，Y350A突變體)之胺基酸序列(SEQ ID NO：1014)，其中二級結構元件示於胺基酸序列下面。條狀代表α-螺旋並且箭頭代表β-鏈。由於序列格式化中斷的未標 記箭頭和條狀與前面標記的結構元件相鄰。非結構化區域未標記。人ENTPD2的可溶性細胞外結構域跨越殘基29-462。該構建體利用N-末端GP67分泌訊號肽(前面的以灰色突出顯示的38個殘基)，其具有最後一個殘基後的訊號肽切割位點和C-末端六組胺酸(SEQ ID NO：1010)金屬親和標籤以促進純化。Asn129、Asn294、Asn378和Asn443係預測的N-連接糖基化位點，在晶體結構中觀察到該等糖基化位點並以斜體顯示。Asn64也是在該等晶體結構中未觀察到的預測的N-連接糖基化位點。位於FAb22和FAb23複合物的抗原-Fab介面的殘基分別由胺基酸序列下面的(*)和(：)符號指示。圖4B顯示了用於晶體學研究中的重組鼠ENTPD2(殘基29-462)之胺基酸序列(SEQ ID NO：1015)，其中二級結構元件示於胺基酸序列下面。條狀代表α-螺旋並且箭頭代表β-鏈。由於線條中斷的未標記箭頭和條狀與前面標記的結構元件相鄰。非結構化區域未標記。成熟的小鼠ENTPD2從Thr29開始。該構建體利用N-末端GP67分泌訊號肽(殘基1-38)，其具有殘基38後的訊號肽切割位點和C-末端六組胺酸(SEQ ID NO：1010)金屬親和標籤以促進純化。Asn129、Asn294、Asn378和Asn443係斜體顯示的潛在的N-連接糖基化位點。位於抗原-FAb24介面的殘基用胺基酸序列下的(#)符號指示。
[圖5A]顯示了具有所示殘基33-453的人ENTPD2胞外域apo晶體結構之動畫演示圖。兩個視圖旋轉90度。標記了連續的二級結構元件。二硫化物顯示為棒狀。胺基和羧基末端分別標記為NT和CT。膜近端葉包含N-和C-末端(亞結構域1：Pro36-Ser161和Lys427-Phe461)，並且陰影比膜遠端葉(亞結構域2：Gly162-Gln426)更暗。底物ATP在葉間裂隙內深處結合。ATP結合位點的位置如圖5B所示。顯示的是ATP模擬物AMP-PNP，其疊加在來自大鼠ENTPD2共結構(PDB 3CJA)的人ENTPD2活性位點中。
[圖6]示出了與人ENTPD2複合的抗人ENTPD2 FAb22之概觀。兩個視圖相差90度顯示。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。
[圖7]示出了與人ENTPD2複合的抗人ENTPD2 FAb23之概觀。兩個視圖相差90度顯示。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。
[圖8]示出了與小鼠ENTPD2複合的抗鼠ENTPD2 FAb24之概觀。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。
[圖9]係說明在同基因B16LM3腫瘤模型中抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab組合的長期功效之圖。
[圖10A-10C]係說明在同基因B16F10腫瘤模型中抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab組合的功效之圖，其與治療後第8天腫瘤部位活化的CD8和CD4 T輔助細胞的流入增加相關。
[圖11A-11B]描繪了人ENTPD2工程化模型B16LM3殖株B5之表徵，說明藉由FACS在體外表現人ENTPD2和藉由IHC與Novus抗人CD39L1 Ab(1：40稀釋)在體內腫瘤中人ENTPD2表現的持續性。
[圖12A-12B]係說明人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5模型中抗人ENTPD2 mAb1和mAb6與抗PD-1 Ab組合的劑量應答功效之圖。
[圖13A-13B]係顯示在人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5異種移植模型(C57BL/6隻小鼠)中用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照處理後的血漿IL-1b(圖13A)和MCP-1(圖13B)水平的點狀圖。圖13C-13D係顯示在人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5異種移植模型(C57BL/6隻小鼠)中用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照處理後的IL-1β(圖13C)和MCP-1(圖13D)水平之點狀圖。
[圖14]係顯示抗ENTPD2 mAb1與A2AR拮抗劑NIR178組合在人ENTPD2工程化B16LM3異種移植物模型(C57BL/6隻小鼠)中的體內功效之圖。
[圖15]係顯示抗ENTPD2 Ab在生物化學人ENTPD2功能測定中的代表性活性之圖。抗人ENTPD2 mAb1、mAb17、mAb19和mAb21有效抑制重組人ENTPD2的催化活性。
[圖16A-16B]描繪了在人或食蟹猴ENTPD2 NIH/3T3或RKO的基於細胞的功能測定中抗人ENTPD2抗體之代表性活性。
[圖17]描繪了說明抗小鼠ENTPD2 mAb13、mAb14、mAb15在小鼠ENTPD2 NIH/3T3的基於細胞的功能測定中的體外功能活性之圖。
本發明提供了特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(例如人ENTPD2蛋白)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。ENTPD2抗體或其抗原結合片段可用於治療ENTPD2相關疾病，例如癌症。
定義
如說明書和申請專利範圍中所用，除非上下文另外明確指出，否則單數形式「一個」、「一種」和「該」也包括複數指示物。例如，術語「細胞」包括多個細胞，包括其混合物。
在整個說明書和隨後的申請專利範圍中，除非上下文另有要求，除非另有說明，否則單詞「包含(comprise)」和變體例如「包含(comprises)」和「包含(comprising)」在本文中以其開放式和非限制性的意義使用。
當在本文中使用時，「由......組成」不包括在方面、實施方式和/或申請專利範圍部分中未指定的任何元素、步驟或成分。當在本文中使用時，「基本上由......組成」不排除不會實質上影響該方面、實施方式和/或申請專利範圍的基本和新穎特徵的材料或步驟。
在本文的每個例子中，術語「包含」、「基本上由......組成」和「由......組成」中的任何一個可以用其他兩個術語中的任一個替換。
所有數字標記，例如pH、溫度、時間、濃度和分子量(包括範圍)，都是近似值，其以0.1的增量變化(+)或(-)。應該理解，儘管並非總是明確說明，但所有數字標號前面都有術語「約」。還應理解，儘管並非總是明確說明，但本文描述的試劑僅是實例，並且其等效物係本領域已知的。
如本文所用，外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)(也稱為CD39抗原-樣1、CD39-樣-1、CD39L1、外-ATP二磷酸水解酶2、外-ATP酶、外-ATP酶2、外-ATPD酶2、NTPD酶-2、NTPD酶2)係指外-核苷三磷酸酯二磷酸水解酶家族(E-NTPD酶)(其係水解5'-三磷酸的外-核苷酶家族)的2型酶。ENTPD2酶由基因ENTPD2 編碼。人ENTPD2 基因映射於染色體位置9q34.3，並且人ENTPD2 基因的基因組序列可在GenBank中NC_000009.12處找到。ENTPD2 人轉錄物變體的mRNA和蛋白質序列可在GenBank中找到，其登記號如下：同種型1：NM_203468.2(mRNA)→NP_982293.1(具有495 aa的蛋白質)；同種型2：NM_001246.3(mRNA)→NP_001237.1(具有472 aa的蛋白質)；
外核苷三磷酸二磷酸水解酶2同種型1[智人，NP_982293.1]
Figure 108118358-A0202-12-0034-2
Figure 108118358-A0202-12-0035-3
Figure 108118358-A0202-12-0035-4
(SEQ ID NO：291)
智人外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)，轉錄物變體1，mRNA[NM_203468.2]
Figure 108118358-A0202-12-0035-5
Figure 108118358-A0202-12-0036-6
Figure 108118358-A0202-12-0036-7
(SEQ ID NO：292)
外核苷三磷酸二磷酸水解酶2同種型2[智人，NP_001237.1]
Figure 108118358-A0202-12-0036-8
Figure 108118358-A0202-12-0037-9
Figure 108118358-A0202-12-0037-11
(SEQ ID NO：293)
智人外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)，轉錄物變體2，mRNA[NM_001246.3]
Figure 108118358-A0202-12-0037-10
Figure 108118358-A0202-12-0038-12
Figure 108118358-A0202-12-0038-13
(SEQ ID NO：294)
如本文所用，人ENTPD2蛋白還涵蓋在其全長上與ENTPD2同種型中的任何一種具有至少約70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的蛋白質。鼠、食蟹猴和其他動物ENTPD2蛋白的序列係本領域已知的。
如本文所用，術語「抗體」係指源自與抗原特異性地結合的免疫球蛋白分子的蛋白質或多肽序列。抗體可以是多株或單株、多鏈或單鏈、或完整免疫球蛋白，並且可以源自天然來源或來自重組來源。例如，天然存在的IgG抗體可以是包含藉由二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的醣蛋白。每條重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為VH)和重鏈恒定區。重鏈恒定區包含三個結構域，即CH1、CH2和CH3。每條輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為VL)和輕鏈恒定區。輕鏈恒定區包含一個結構域，即CL。VH和VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，它們散佈著稱為框架區(FR)的較保守的區。每個VH和VL由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統的各種細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統的第一成分(C1q))的結合。抗體可以是單株抗體、人抗體、人源化抗體、駱駝源化(camelised)抗體或嵌合抗體。該等抗體可以屬於任何同種型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亞類。
術語「抗體片段」或「抗原結合片段」係指抗體的至少一部分，該至少一部分保留與抗原表位特異性地相互作用(例如，藉由結合、空間位阻、穩定/去穩定、空間分佈)的能力。抗體片段的實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv抗體片段、二硫鍵連接的Fv(sdFv)、由VH和CH1結構域組成的Fd片段、線性抗體、單結構域抗體如sdAb(VL或VH)、駱駝科VHH結構域、由抗體片段(如包含在鉸鏈區藉由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段)形成的 多特異性抗體、和分離的CDR、或抗體的其他表位結合片段。抗原結合片段還可以摻入到單結構域抗體、大型抗體(maxibodies)、微型抗體(minibodies)、奈米抗體、細胞內抗體、雙體抗體、三體抗體、四體抗體、v-NAR和bis-scFv中(參見例如，Hollinger和Hudson,Nature Biotechnology[自然生物技術]23：1126-1136,2005)。還可以將抗原結合片段移植到基於多肽如纖連蛋白III型(Fn3)的支架中(參見美國專利案號6,703,199，其描述了纖連蛋白多肽微型抗體)。術語「scFv」係指融合蛋白，其包含至少一個包含輕鏈可變區的抗體片段和至少一個包含重鏈可變區的抗體片段，其中該輕鏈可變區和重鏈可變區例如藉由合成接頭(例如短柔性多肽接頭)係連續連接的並且能夠表現為單鏈多肽，並且其中scFv保留了它所來源的完整抗體的特異性。除非另有說明，否則如本文所用，scFv可以例如相對於多肽的N末端和C末端以任何順序具有VL和VH可變區，該scFv可以包含VL-接頭-VH或者可以包含VH-接頭-VL。
如本文所用，術語「互補決定區」或「CDR」係指賦予抗原特異性和結合親和力的抗體可變區內的胺基酸序列。例如，一般來說，每個重鏈可變區中存在三個CDR(例如HCDR1、HCDR2、和HCDR3)，並且每個輕鏈可變區中存在三個CDR(例如LCDR1、LCDR2、和LCDR3)。給定CDR的精確胺基酸序列邊界可以使用許多熟知的方案中的任一種來確定，包括以下中所述的那些：Kabat等人(1991),「Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，」第5版。Public Health Service[公共衛生服務]，National Institutes of Health[國立衛生研究院]，Bethesda,MD(「卡巴特」編號方案)；Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(「喬西亞(Chothia)」編號方案)，或其組合，和免疫遺傳學(IMGT)編號(Lefranc,M.-P.,The Immunologist[免疫學家]，7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人，Dev.Comp.Immunol.[發育免疫學與比較免疫學]，27,55-77(2003)(「IMGT」編號方案)。在針對給定CDR區(例如，HC CDR1、 HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3)的組合卡巴特和喬西亞編號方案中，在一些實施方式中，該等CDR對應於被定義為卡巴特CDR的一部分的胺基酸殘基，以及被定義為喬西亞CDR的一部分的胺基酸殘基。如本文所用，根據「喬西亞」編號方案定義的CDR有時也稱為「高變環」。
例如，根據卡巴特，重鏈可變結構域(VH)中的CDR胺基酸殘基編號為31-35(HCDR1)(例如在位置35後的一個或多個插入)、50-65(HCDR2)、和95-102(HCDR3)；並且輕鏈可變結構域(VL)中的CDR胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)(例如在位置27後的一個或多個插入)、50-56(LCDR2)、和89-97(LCDR3)。作為另一個實例，根據喬西亞，VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)(例如在位置31後的一個或多個插入)、52-56(HCDR2)、和95-102(HCDR3)；並且VL中的胺基酸殘基編號為26-32(LCDR1)(例如在位置30後的一個或多個插入)、50-52(LCDR2)、和91-96(LCDR3)。藉由結合卡巴特和喬西亞的CDR定義，CDR包含例如人VH中的胺基酸殘基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的胺基酸殘基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)或由其組成。根據IMGT，VH中的CDR胺基酸殘基編號為大約26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，並且VL中的CDR胺基酸殘基編號為大約27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)(根據「卡巴特」編號)。在IMGT下，可以使用程式IMGT/DomainGap Align確定抗體的CDR區。通常，除非特別指出，否則該抗體分子可包括一種或多種卡巴特CDR和/或喬西亞CDR的任何組合。
術語「表位」包括能夠特異性結合免疫球蛋白或以其他方式與分子相互作用的任何蛋白質決定簇。表位決定簇通常由分子的化學活性表面基團組成，如胺基酸或碳水化合物或糖側鏈，並且可以具有特定的三維結構特徵以及 特定的電荷特徵。表位可以是「線性的」或「構象的」。構象表位和線性表位差別在於：在變性溶劑的存在下，對構象表位(而不是非構象表位)的結合喪失。
如本文所用的術語「單價抗體」係指結合靶分子上的單個表位的抗體。
如本文所用的術語「二價抗體」係指結合至少兩個相同靶分子上的兩個表位的抗體。二價抗體還可以使靶分子彼此交聯。術語「二價抗體」還指結合至少兩個相同靶分子上的兩個不同表位的抗體。
術語「多價抗體」係指具有多於一個化合價的單個結合分子，其中「化合價」被描述為每分子抗體構建體中存在的抗原結合部分的數目。因此，單個結合分子可以結合靶分子上多於一個結合位點。多價抗體的實例包括但不限於二價抗體、三價抗體、四價抗體、五價抗體等，以及雙特異性抗體和雙互補位抗體。例如，對於ENTPD2，多價抗體(例如，ENTPD2雙互補位抗體)分別具有針對ENTPD2的兩個結構域的結合部分。
術語「多價抗體」還指單個結合分子，其對於兩個分開的靶分子具有多於一個抗原結合部分。例如，結合ENTPD2的抗體(例如，人ENTPD2蛋白)和不是ENTPD2的第二靶分子。在一個實施裡中，多價抗體係具有四個表位結合結構域的四價抗體。對於該靶分子上的每個結合位點，四價分子可以是雙特異性和二價的。
如本文所用的術語「雙特異性抗體」係指結合兩種或更多種不同表位的抗體。在一些實施方式中，雙特異性抗體與兩種不同的靶標結合。在一些實施方式中，雙特異性抗體結合單個靶分子上的兩個不同表位。結合單個靶分子上的兩個不同表位的抗體也稱為「雙互補位抗體」。
如本文所用，短語「單株抗體」或「單株抗體組成物」係指多肽(包括抗體、雙特異性抗體等)，它們具有基本上相同的胺基酸序列或源自相同 的遺傳來源。該術語還包括具有單分子組成的抗體分子的製劑。單株抗體組成物表現出對特定表位的單一結合特異性和親和力。
如本文所用，短語「人抗體」包括具有可變區的抗體，其中框架區和CDR區兩者均源自人來源的序列。此外，如果抗體含有恒定區，則恒定區還源自此類人序列，例如人種系序列或突變形式的人種系序列，或含有衍生自人框架序列分析的共有框架序列的抗體，例如，如描述於Knappik等人(2000.J Mol Biol[分子生物學雜誌]296,57-86)。免疫球蛋白可變結構域(例如CDR)的結構和位置可使用眾所周知的編號方案來定義，例如，卡巴特編號方案，喬西亞編號方案，或卡巴特和喬西亞的組合，和ImMunoGenTics(IMGT)編號(參見，例如Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services)(1991)，編輯Kabat等人；Al Lazikani等人，(1997)J.Mol.Bio.[分子生物學雜誌]273：927 948；Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，第5版，NIH公開案號91-3242美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services)；Chothia等人，(1987)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]196：901-917；Chothia等人，(1989)Nature[自然]342：877-883；Al-Lazikani等人，(1997)J.Mal.Biol.273：927-948和Lefranc,M.-P.,The Immunologist[免疫學家]，7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人，Dev.Comp.Immunol.[發育與比較免疫學]，27,55-77(2003))。
本發明的人抗體可以包括不是由人序列編碼的胺基酸殘基(例如，藉由在體外隨機誘變或位點特異性誘變或藉由在體內體細胞突變來引入的突變，或保守的替代，以促進穩定性或製造)。然而，如本文所用的，術語「人類抗體」不旨在包括其中源自另一種哺乳動物物種(例如小鼠)種系的CDR序列已被移植到人類框架序列中的抗體。
如本文使用的，短語「重組人抗體」包括藉由重組方式製備、表現、產生或分離的所有人抗體，比如從動物(例如，小鼠)(該動物對於人免疫球蛋白係轉基因的或轉染色體的)或由其製備的雜交瘤中分離的抗體；從轉化以表現人抗體的宿主細胞中分離的抗體(例如，來自轉染瘤中)；從重組，組合的人抗體文庫中分離的抗體；以及藉由任何其他方式(涉及將全部或部分的人免疫球蛋白基因、序列剪接到其他DNA序列)製備、表現、產生或分離的抗體。此類重組人抗體具有可變區，其中構架區和CDR區衍生自人種系免疫球蛋白序列。然而，在某些實施方式中，可以對此類重組人抗體進行體外誘變(或，當使用轉基因人Ig序列的動物時，進行體內體細胞誘變)，並因此重組抗體的VH和VL區的胺基酸序列係衍生自人種系VH和VL序列的和與其相關的序列，該等序列在體內可能不天然存在於人抗體種系庫中。
如本文所使用的術語「Fc區」係指包含抗體的CH3、CH2和恒定結構域的鉸鏈區的至少一部分的多肽。視情況，Fc區可以包含在一些抗體種類中存在的CH4結構域。Fc區可以包含抗體恒定區的整個鉸鏈區。在一個實施方式中，本發明包括抗體的Fc區和CH1區。在一個實施方式中，本發明包括抗體的Fc區和CH3區。在另一個實施方式中，本發明包括Fc區、CH1區和來自抗體恒定結構域的Cκ/λ區。在一個實施方式中，本發明的結合分子包含恒定區，例如重鏈恒定區。在一個實施方式中，與野生型恒定區相比，這類恒定區係經修飾的。即，本文公開的本發明的多肽可以包含對三個重鏈恒定結構域(CH1、CH2或CH3)中的一個或多個和/或對輕鏈恒定區結構域(CL)的改變或修飾。實例修飾包括在一個或多個結構域中添加、缺失或取代一個或多個胺基酸。可以包括此類改變，以優化效應子功能、半衰期等。
如本文使用的，術語「親和力」係指抗體和抗原在單個抗原位點處的相互作用強度。在每個抗原位點內，抗體「臂」的可變區藉由弱非共價力在 許多位點處與抗原相互作用；相互作用越多，親和力越強。如本文所使用的，針對IgG抗體或其片段(例如Fab片段)的術語「高親和力」係指對靶抗原具有10-8 M或更小、10-9 M或更小、或10-10 M、或10-11 M或更小、或10-12 M或更小、或10-13 M或更小的敲低的抗體。然而，對於其他抗體同種型，「高親和力」結合可以變化。例如，對於IgM同種型的「高親和力」結合係指抗體具有10-7 M或更低或10-8 M或更低的敲低。
如本文所用，術語「親合力」係指抗體-抗原複合物的總體穩定性或強度的信息量度。它受三個主要因素控制：抗體表位親和力；抗原和抗體二者的化合價；以及相互作用部分的結構佈置。最終，該等因素決定了抗體的特異性，即特定抗體與精確抗原表位結合的可能性。
如本文所用，術語「結合特異性」係指單個抗體結合位點與一種抗原決定簇而不與不同的抗原決定簇反應的能力。抗體的結合位點位於分子的Fab部分中，並且由重鏈和輕鏈的高變區構建。抗體的結合親和力係單個抗原決定簇與抗體上的單個結合位點之間的反應強度。它係在抗原決定簇與抗體的結合位點之間運行的吸引力和排斥力的總和。
術語「治療」(「treat」或「treatment」)係指治療性治療和預防性或防護性措施，其中目的是預防或減緩不期望的生理變化或障礙。出於本發明的目的，有益或期望的臨床結果包括但不限於減輕症狀、降低疾病程度、疾病狀態穩定(即，不惡化)、延遲或減緩疾病進展、改善或緩和疾病狀態以及緩解(無論是部分還是全部)，無論是可檢測的還是不可檢測的。「治療」還可以意指與不接受治療的預期存活相比延長存活。在其他實施方式中，術語「治療(treat、treatment和treating)」係指藉由例如穩定可辨別的症狀來物理地，或藉由例如穩定物理參數來生理地，或藉由兩者，抑制增殖性障礙的進展。在其他實施方式中， 術語「治療(treat、treatment和treating)」係指減少或穩定腫瘤大小或癌細胞計數。
術語「受試者」係指根據提供的本發明方法進行治療的動物、人或非人。考慮了獸醫應用和非獸醫應用。該術語包括但不限於哺乳動物，例如人、其他靈長類動物、豬、齧齒動物如小鼠和大鼠、兔、豚鼠、倉鼠、牛、馬、貓、狗、綿羊和山羊。典型的受試者包括人、農場動物和家養寵物，如貓和狗。在一些實施方式中，受試者係人。
「有效量」係指足以實現有益的或希望的結果的量。例如，治療量為達到所需療效的量。所述量可與預防上有效量相同或不同，所述預防上有效量為預防疾病或疾病症狀的發作所需的量。可以在一次或多次給與或應用或給藥時施用有效量。治療化合物的「治療有效量」(即有效劑量)取決於所選的治療化合物。可以從每天一次或多次至每週一次或多次來給予組成物。技術人員將理解，某些因素可以影響有效治療受試者所需的劑量和時程，包括但不限於疾病或障礙的嚴重性、先前的治療、受試者的一般健康狀況和/或年齡，以及存在的其他疾病。此外，用治療有效量的在此描述的治療化合物對受試者進行的治療可以包括單一治療或一系列治療。
術語「核酸」或「多核苷酸」係指單鏈或雙鏈形式的去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其聚合物。術語「核酸組」可以例如包括編碼抗體的輕鏈和重鏈或雙特異性或多特異性抗體的結構域的分開的分離的核酸。除非特別限定，否則該術語涵蓋含有已知的天然核苷酸類似物的核酸，該等核酸具有與參考核酸類似的結合特性並且以與天然存在的核苷酸類似的方式進行代謝。除非另外指出，否則特定的核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如，簡並密碼子取代)、等位基因、直向同源物、SNP和互補序列以及明確指明的序列。具體地，簡並密碼子取代可以藉由產生如下序列而獲得，在該等序列中，一 個或多個所選的(或全部)密碼子的第三位被混合鹼基和/或去氧肌苷殘基取代(Batzer等人，Nucleic Acid Res.[核酸研究]19：5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]260：2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes[分子與細胞探針]8：91-98(1994))。
術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」可互換使用，並且是指包含由肽鍵共價連接地胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽必須含有至少兩個胺基酸，並且對可構成蛋白質或肽序列的胺基酸的最大數量沒有限制。多肽包括包含由肽鍵彼此相連的兩個或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文所用，該術語係指短鏈，例如其在本領域中通常也稱為肽、寡肽和寡聚體，並且還是指較長的鏈，其在本領域中通常稱為蛋白質，存在有很多類型的蛋白質。「多肽」包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚體、異源二聚體、多肽的變體、經修飾的多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重組肽或其組合。
術語「保守序列修飾」係指不顯著影響或改變含有胺基酸序列的抗體或抗體片段的結合特徵的胺基酸修飾。此類保守修飾包括胺基酸取代、添加和缺失。可以藉由本領域已知的標準技術(如定點誘變和PCR介導的誘變)將修飾引入本發明的抗體或抗體片段中。保守胺基酸取代係其中胺基酸殘基被具有類似側鏈的胺基酸殘基置換的取代。具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族已在本領域中進行了定義。該等家族包括具有鹼性側鏈(例如賴胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、穀胺酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)以及芳香族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。
術語「同源的」或「同一性」係指兩個聚合分子之間，例如兩個核酸分子(如兩個DNA分子或兩個RNA分子)之間或兩個多肽分子之間的亞模體列同一性。當這兩個分子中的亞基位置被相同的單體亞基佔據時；例如，如果兩個DNA分子中的每一個中的位置被腺嘌呤佔據，則它們在該位置係同源的或相同的。兩個序列之間的同源性係匹配位置或同源位置的數量的直接函數；例如，如果兩個序列中一半的位置(例如，長度為十個亞基的聚合物中的五個位置)係同源的，則這兩個序列係50%同源的；如果90%的位置(例如，10個中的9個)係匹配的或同源的，則這兩個序列係90%同源的。「序列同一性」的百分比可以藉由在比較視窗上比較兩個最佳比對的序列來確定，其中該比較視窗中的胺基酸序列的片段與用於這兩個序列的最佳比對的參考序列(其不包含添加或缺失)相比可以包含添加或缺失(例如，缺口或突出)。可以藉由以下方法計算該百分比：測定在這兩個序列中出現相同胺基酸殘基的位置的數目以產生匹配位置數，將該匹配位置數除以該比較視窗中的位置總數，並將結果乘以100，從而得到序列同一性百分比。輸出係主題序列關於查詢序列的百分比同一性。
術語「分離的」意指從天然狀態改變的或去除的。例如，天然存在於活體動物中的核酸或肽不是「分離的」，但是與其天然狀態的共存材料部分或完全分開的相同核酸或肽係「分離的」。分離的核酸或蛋白質能以基本上純化的形式存在，或者可以存在於非天然環境(例如像，宿主細胞)中。「分離的抗體」基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體(例如，特異性結合ENTPD2的分離的抗體基本上不含特異性結合除ENTPD2以外的抗原的抗體)。然而，特異性結合靶分子的分離的抗體可以與來自其他物種的相同抗原具有交叉反應性，例如，特異性結合ENTPD2的分離的抗體可以結合來自其他物種的ENTPD2分子。此外，分離的抗體可以基本上不含其他細胞物質和/或化學品。
除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同含義。儘管可以使用與本文所述那些方法和材料類似或等同的方法和材料來實踐本發明，但是下面描述了合適的方法和材料。本文所提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻均藉由引用以其全文併入。在衝突存在的情況下，則以包括定義在內的本說明書為准。此外，材料、方法和實施方式僅是說明性的而不旨在限制。
本發明的一個或多個實施方式的細節陳述於附圖和下文的描述中。根據說明書和附圖並且根據申請專利範圍，本發明的其他特徵、目標和優點將是顯而易見的。
與人ENTPD2特異性結合的抗體和抗原結合片段
在一方面，本文提供了，特異性結合ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段(「ENTPD2抗體或抗原結合片段」或「抗ENTPD2抗體或抗原結合片段」)。在一些實施方式中，本文提供了特異性結合人ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，例如，單株抗體或其抗原結合片段(「人ENTPD2抗體或抗原結合片段」或「抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段」)。
在一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段(例如，抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括重鏈CDR1(HCDR1)、重鏈CDR2(HCDR2)、重鏈CDR3(HCDR3)和輕鏈CDR1(LCDR1)、輕鏈CDR2(LCDR2)和輕鏈CDR3(LCDR3)。在一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或抗原結合片段(例如，抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括包含CDR1、CDR2和CDR3的重鏈可變區(VH)和包含CDR1、CDR2和CDR3的輕鏈可變區(VL)。在一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或抗原結合片段(例如， 抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括全長重鏈序列(HC)和全長輕鏈序列(LC)。
表1列出了特異性結合人ENTPD2蛋白的ENTPD2抗體或抗原結合片段的示例性序列。
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Figure 108118358-A0202-12-0095-59
在一些實施方式中，抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中所述的任何VH結構域的胺基酸序列的VH結構域。其他合適的抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，所述胺基酸已經突變但在VH結構域中與表1中描述的序列中描繪的VH區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在某些實施方式中，本公開還提供了特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，其中該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR。在具體實施方式中，本發明提供了特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個、四個、五個或更多個具有表1中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR(或視情況，由其組成)。
在一些實施方式中，抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中所述的任何VL結構域的胺基酸序列的VL結構域。其他合適的抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，所述胺基酸已經突變但在VL結構域中與表1中描述的序列中描繪的VL區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。本公開還提供了特 異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR。具體地，本發明提供了特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個或更多個具有表1中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR(或視情況，由其組成)。
本文公開的其他抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包括如下胺基酸，所述胺基酸已經突變但在CDR區中與表1中描述的序列中描繪的CDR區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在一些實施方式中，其包括突變胺基酸序列，其中當與表1中描述的序列中描繪的CDR區相比時，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變。
本文還提供了編碼特異性結合人ENTPD2(例如表1中的核酸序列)的抗體及其抗原結合片段的VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以在哺乳動物細胞中表現。
本文公開的其他抗人ENTPD2抗體包括如下那些抗體，其中該等胺基酸或編碼該等胺基酸的核酸已經突變但與表1中描述的序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段包括突變胺基酸序列，其中當與表1中描述的序列中描繪的可變區相比時，在可變區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變，但同時基本上保持相同的治療活性。
由於每種提供的抗體與人ENTPD2結合，因此VH、VL、全長輕鏈和全長重鏈序列(胺基酸序列和編碼該胺基酸序列的核苷酸序列)可以是「混合且匹配的」以產生本文揭露的其他ENTPD2結合抗體。可以使用本領域已知的結合測定法(例如，ELISA，實例中描述的測定法)測試這種「混合且匹配的」ENTPD2結合抗體。當鏈被混合且匹配時，來自特定VH/VL配對的VH序列應 當用結構上相似的VH序列替代。來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對的全長重鏈序列應當用結構上相似的全長重鏈序列替代。來自特定VH/VL配對的VL序列應當用結構上相似的VL序列替代。來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對的全長輕鏈序列應當用結構上相似的全長輕鏈序列替代。
因此，在一個實施方式中，本發明提供了分離的單株抗體或其抗原結合片段，該單株抗體或其抗原結合片段具有：包含選自以下中任一項的胺基酸序列的重鏈可變區(VH)：SEQ ID NO：10、25、33、46、70、91、115、132、145、169、225、233、241、250、264、281、328；和包含選自以下中任一項的胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)：SEQ ID NO：21、29、57、64、74、78、102、125、156、178、229、237、257、268、287、332；其中該抗體特異性結合人ENTPD2。
在另一個實施方式中，本發明提供了(i)分離的單株抗體，該單株抗體具有：包含選自以下中任一項的胺基酸序列的全長重鏈(HC)：SEQ ID NO：12、27、35、48、72、93、117、134、147、171、227、235、243、252、266、283、330；和包含選自以下中任一項的胺基酸序列的全長輕鏈(LC)：SEQ ID NO：23、31、59、66、76、80、104、127、158、180、231、239、259、270、289、334；或(ii)包含其抗原結合部分的功能性蛋白質。
在另一個實施方式中，本公開提供了人ENTPD2結合抗體或其抗體片段，該抗體或其抗體片段包含如表1中所述的重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，或其組合。抗體的VH CDR1的胺基酸序列示於SEQ ID NO：1、4、6、7、37、40、42、43、82、85、87、88、106、109、111、112、136、139、141、142、160、163、165、166、185、187、188、206、207、208、213、214、215、272、275、277。抗體的VH CDR2的胺基酸序列示於SEQ ID NO：2、5、8、38、41、44、83、86、89、107、110、113、129、130、131、137、140、143、161、164、167、186、189、220、222、223、245、247、 248、261、273、276、279。抗體的VH CDR3的胺基酸序列示於SEQ ID NO：3、39、68、84、108、138、162、221、246、262、277、274、9、45、69、90、114、144、168、190、224、249、263、274、280。抗體的VL CDR1的胺基酸序列示於SEQ ID NO：14、17、20、50、53、56、61、62、63、95、98、101、119、122、124、149、152、155、173、175、177、198、201、254。抗體的VL CDR2的胺基酸序列示於SEQ ID NO：15、18、51、54、96、99、120、150、153、199、285、286。抗體的VL CDR3的胺基酸序列示於SEQ ID NO：16、19、52、55、97、100、121、123、151、154、174、176、200、255、256。
鑒於該等抗體中的每一種都可以與ENTPD2結合且抗原結合特異性主要由CDR1、CDR2和CDR3區提供，VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列可以是「混合且匹配的」(即，來自不同抗體的CDR可以被混合且匹配)，但每種抗體必須含有VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3以產生本文揭露的其他ENTPD2結合分子。可以使用本領域已知的結合測定和實例中描述的那些結合測定(例如，ELISA)來測試這種「混合且匹配的」ENTPD2結合抗體。當VH CDR序列混合且匹配時，來自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列應該用結構上相似的一個或多個CDR序列替代。同樣地，當VL CDR序列混合且匹配時，來自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列應該用結構上相似的一個或多個CDR序列替代。對於普通技術人員來說容易清楚的是，可以藉由取代來自對於本揭露單株抗體的本文所示CDR序列的具有結構相似序列的一個或多個VH和/或VL CDR區序列來產生新的VH和VL序列。
因此，本揭露提供了包含以下的分離的單株抗體或其抗原結合區：重鏈CDR1，該重鏈CDR1包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：1、4、6、7、37、40、42、43、82、85、87、88、106、109、111、 112、136、139、141、142、160、163、165、166、182、187、188、206、207、208、213、214、215、272、275、277；重鏈CDR2，該重鏈CDR2包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：2、5、8、38、41、44、83、86、89、107、110、113、129、130、131、137、140、143、161、164、167、183、189、220、222、223、245、247、248、261、273、276；重鏈CDR3，該重鏈CDR3包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：3、39、68、84、108、138、162、221、246、262、277、274、9、45、69、90、114、144、168、190、224、249、263、274、280；輕鏈CDR1，該輕鏈CDR1包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：14、17、20、50、53、56、61、62、63、95、98、101、119、122、124、149、152、155、173、175、177、195、201、254；輕鏈CDR2，該輕鏈CDR2包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：15、18、51、54、96、99、120、150、153、196、285、286；和輕鏈CDR3，該輕鏈CDR3包含選自下組的胺基酸序列，該組由以下組成：SEQ ID NO：16、19、52、55、97、100、121、123、151、154、174、176、197、255、256；其中該抗體特異性結合人ENTPD2。
在某些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體係表1中描述的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈互補決定區1(HCDR1)，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；重鏈互補決定區2(HCDR2)，其包含SEQ ID NO：2、5或8的胺基酸序列；重鏈互補決定區3(HCDR3)，其包含SEQ ID NO：3或9的胺基酸序列；輕鏈互補決定區1(LCDR1)，其包含SEQ ID NO：14、17或20的胺基酸序列；輕鏈互補決定區2(LCDR2)，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序 列；和輕鏈互補決定區3(LCDR3)，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2， 其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39或45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50、53或56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39或45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；LCDR1， 其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68或69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50、53或56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：82、85、87或88的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83、86或89的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84或90的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：95、98或101的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96或99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97或100的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：98的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1， 其包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106、109、111或112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107、110或113的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108或114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119、122或124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99或120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121或123的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106、109、111或112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：129、130或131的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108或114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119、122或124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99或120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121或123的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：136、139、141或142的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137、140或143的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138或144的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149、152或155的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150或153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151或154的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：136的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：160、163、165或166的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161、164或167的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162或168的胺基酸序列：LCDR1，其包含SEQ ID NO：173、175或177的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150或153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174或176的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：160的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：173的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：163的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：164的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：175的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：176的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：165的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：173的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：166的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：167的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：168的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：177的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220、222或223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221或224的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：222的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：224的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220、222或223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68或69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序 列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：222的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；HCDR2，其 包含SEQ ID NO：245、247或248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246或249的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255或256的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：245的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：256的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：249的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247、248或261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262或263的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：263的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：272、275或278的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273、276或279的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274、277或280的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285或286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：272的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：275的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：276的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：277的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：278的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：279的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：280的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、 95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有 一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：178的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：225的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列(或與其具有至少約 90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：233的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：237的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：241的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：250的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：257的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：264的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：268的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：281的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：287的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列(或與其具有 至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列(或與其具有 至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：93的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列(或與其具 有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：180(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：227的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：235的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：239的胺基酸序列(或與其具 有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：243的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：252的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：259的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：266的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：270的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：283的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：289的胺基酸序列(或與其具 有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。
在一些實施方式中，本發明提供抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數KD 小於10nM，例如KD 小於9nM、小於8nM、小於7nM、小於6nM、小於5nM、小於4nM、小於3nM、小於2nM、小於1nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於5nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於3nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於1nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，在25℃藉由Biacore測量針對人ENTPD2的本文所述的抗體或其抗原結合片段。
本文還提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。在一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包括但不限於如表1中揭露的MAb1、MAb2、MAb3、MAb7、MAb17、MAb19、MAb20、MAb21、和Fab23。
本文還提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、 至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。在一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包括但不限於如表1中揭露的MAb4、MAb5、MAb6、MAb16、MAb18、和Fab22。
一旦確定了抗原上的所需表位，就有可能例如使用本發明中所述的技術生成針對該表位的抗體。可替代地，在發現過程中，抗體的產生和表徵可以闡明關於所需表位的資訊。根據該資訊，然後可以競爭性地篩選抗體以結合相同的表位。實現該目的的方法係進行交叉競爭研究以找到彼此競爭性結合的抗體，例如抗體競爭結合抗原。在國際專利申請號WO 2003/48731中描述了基於抗體的交叉競爭將其「分箱」的高通量方法。如熟悉該項技術者所理解的，實際上抗體可以特異性結合的任何東西都可以是表位。表位可包含抗體結合的那些殘基。
通常，對特定靶抗原有特異性的抗體將優先識別蛋白質和/或大分子的複雜混合物中靶抗原上的表位。
可以使用本領域公知的任何數量的表位作圖技術鑒定包含表位的給定多肽的區域。參見，例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology[分子生物學方法中的表位映射方案]，卷66(Glenn E.Morris，編輯，1996,Humana Press(胡瑪納出版社)，托托華(Totowa)，新澤西州)。例如，線性表位可以藉由例如在固體支持物上同時合成大量肽來確定，所述肽對應於蛋白質分子的部分且肽與抗體反應的同時肽仍然附著於支持物。該等技術在本領域中是已知的並且描述於，例如美國專利案號4,708,871；Geysen等人，(1984)Proc. Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]8：3998-4002；Geysen等人，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]82：78-182；Geysen等人，(1986)Mol.Immunol.[分子免疫學]23：709-715。類似地，藉由測定胺基酸的空間構象如藉由X射線晶體學和二維核磁共振，可以容易地鑒定構象表位。參見例如，Epitope Mapping Protocols[表位作圖方案]，同上。還可以使用標準抗原性和親水性圖來鑒定蛋白質的抗原區域，如使用例如可從牛津分子集團(Oxford Molecular Group)獲得的Omiga 1.0版軟體程式計算的那些圖。該電腦程式採用Hopp/Woods方法(Hopp等人，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci USA[美國國家科學院院刊]78：3824-3828)用於確定抗原性曲線且採用Kyte-Doolittle技術(Kyte等人，(1982)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]157：105-132)用於親水性圖。
抗體分子可以是多株或單株抗體。單株抗體可以藉由雜交瘤技術或不使用雜交瘤技術的方法(例如重組方法)製備。在一些實施方式中，可以重組地產生抗體，例如藉由噬菌體展示或藉由組合方法產生。
用於產生抗體的噬菌體展示和組合方法係本領域已知的(如描述在例如，Ladner等人美國專利案號5,223,409；Kang等人國際公開案號WO 92/18619；Dower等人國際公開案號WO 91/17271；Winter等人國際公開WO 92/20791：Markland等人國際公開案號WO 92/15679；Breitling等人國際公開WO 93/01288；McCafferty等人國際公開案號WO 92/01047；Garrard等人國際公開案號WO 92/09690；Ladner等人國際公開案號WO 90/02809；Fuchs等人(1991)Bio/Technology[生物技術]9：1370-1372；Hay等人(1992)Hum Antibod Hybridomas[人類抗體雜交瘤]3：81-85；Huse等人(1989)Science[科學]246：1275-1281；Griffths等人(1993)EMBO J[歐洲分子生物學學會雜誌]12：725-734；Hawkins等人(1992)J Mol Biol[分子生物學雜誌]226：889-896；Clackson等人(1991)Nature[自然]352：624-628；Gram等人(1992)PNAS[美國國家科學院院刊] 89：3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology[生物技術]9：1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res[核酸研究]19：4133-4137；和Barbas等人(1991)PNAS[美國國家科學院院刊]88：7978-7982)。
在一個實施方式中，抗體係全人抗體(例如，在已經基因工程化為從人免疫球蛋白序列產生抗體的小鼠中製備的抗體)，或非人抗體，例如齧齒動物(小鼠或大鼠)、山羊、靈長類動物(例如，猴)、駱駝抗體。
抗體可以是可變區或其一部分(例如，CDR)在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中產生的抗體分子。嵌合抗體、CDR移植的抗體、和人源化抗體屬於本發明。在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中產生並且然後在例如可變框架或恒定區中修飾以降低在人中的抗原性的抗體屬於本發明。
可以工程化嵌合和/或人源化抗體以使人患者對非人受試者中產生的抗體或來自非人抗體基因表現的抗體的免疫應答最小化。嵌合抗體包含非人動物抗體可變區和人抗體恒定區。此類抗體保留了原始單株抗體的表位結合特異性，但當向人給予時可能具有較低的免疫原性，並且因此更可能被患者耐受。例如，小鼠抗體(例如小鼠單株抗體)的一條或多條輕鏈的可變區中的一個或全部(例如，一個、兩個或三個)和/或一條或多條重鏈的可變區中的一個或全部(例如，一個、兩個或三個)各自都可以連接到人恒定區，例如但不限於IgG1人恒定區。嵌合單株抗體可藉由本領域已知的重組DNA技術產生。例如，編碼非人抗體分子的恒定區的基因可以用編碼人恒定區的基因取代(參見Robinson等人，PCT專利公開PCT/US86/02269；Akira，等人，歐洲專利申請184,187；或Taniguchi,M.，歐洲專利申請171,496)。另外，可以用於產生嵌合抗體的其他合適技術描述於例如美國專利案號4,816,567、4,978,775、4,975,369、和4,816,397。
藉由用來自人可變區的等效部分替換不參與抗原結合的可變區的部分，可以進一步「人源化」嵌合抗體。人源化抗體包含可變區中的一個或多 個人框架區以及重鏈和/或輕鏈的非人(例如小鼠、大鼠或倉鼠)互補決定區(CDR)。在一些實施方式中，人源化抗體包含除CDR區外的完全人序列。相對於非人源化抗體，人源化抗體通常對人類的免疫原性較低，並且因此在某些情況下提供治療益處。可以使用本領域已知的方法產生人源化ENTPD2抗體。參見例如Hwang等人，Methods[方法]36：35,2005；Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：10029-10033,1989；Jones等人，Nature[自然]321：522-25,1986；Riechmann等人，Nature[自然]332：323-27,1988；Verhoeyen等人，Science[科學]239：1534-36,1988；Orlandi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：3833-3837,1989；美國專利案號5,225,539、5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,762、和6,180,370；以及WO 90/07861。
可以使用本領域已知的方法生成人ENTPD2抗體。例如，人類工程化技術用於將非人抗體轉化為工程化人抗體。美國專利公開案號20050008625描述了一種體內方法，其用於採用抗體中的人可變區替代非人抗體可變區，同時保持相對於非人抗體的相同結合特徵或提供更好的結合特徵的體內方法。該方法依賴於表位引導的採用完全人抗體替代非人參考抗體的可變區。得到的人抗體通常與參考非人抗體在結構上不相關，但結合與參考抗體的相同抗原上的相同表位。簡而言之，在存在響應測試抗體與抗原的結合的報告系統的情況下，藉由在細胞中「競爭物」和參考抗體(「lest抗體」)的多種雜合體的文庫之間建立針對結合有限量的抗原的競爭來實現連續表位引導的互補替代方法。競爭物可以是參考抗體或其衍生物，如單鏈Fv片段。競爭物也可以是抗原的天然或人工配位基，其結合與參考抗體相同的表位。對競爭物的唯一要求係它結合與參考抗體相同的表位，並且它與參考抗體競爭抗原結合。測試抗體具有來自非人參考抗體的一個共同的抗原結合V區，以及從多種來源(如人抗體的文庫)中隨機選擇的另一個V區。來自參考抗體的共同V區用作指導，從而將測試抗體定位在抗原 上的相同表位上並且以相同方向定位，使得選擇偏向於對參考抗體的最高抗原結合保真度。
許多類型的報告系統可用於檢測測試抗體與抗原之間的所需的相互作用。例如，互補報告片段可以分別與抗原和測試抗體連接，使得藉由片段互補的報告基因激活僅在該測試抗體與該抗原結合時發生。當測試抗體和抗原報告片段融合物與競爭物共表現時，報告基因激活變得依賴於測試抗體與競爭物競爭的能力，該能力與測試抗體對抗原的親和力成正比。可以使用的其他報告系統包含如美國專利申請系列號10/208,730(公開案號20030198971)中揭露的自身抑制的報告基因再激活系統(RAIR)或美國專利申請系列號10/076,845(公開案號20030157579)中揭露的競爭激活系統的再激活物。
利用連續表位引導的互補替代系統，進行選擇以鑒定表現單個測試抗體以及競爭物、抗原和報告組分的細胞。在該等細胞中，每種測試抗體與競爭物一對一競爭結合有限量的抗原。報告基因的活性與結合至測試抗體的抗原的量成正比，而結合至測試抗體的抗原的量與測試抗體對抗原的親和力和測試抗體的穩定性成比例。當表現為測試抗體時，測試抗體最初基於其相對於參考抗體的活性進行選擇。第一輪選擇的結果係一組「雜合」抗體，其中每個抗體由來自參考抗體的相同非人V區和來自文庫的人V區組成，並且每個抗體都結合與參考抗體相同的抗原表位。在第一輪中選擇的一種或多種雜合抗體具有與參考抗體相當或更高的對抗原的親和力。
在第二V區替代步驟中，在第一步中選擇的人V區用作指導，用於選擇其餘非人參考抗體V區進行多樣的同源人V區文庫的人替代。在第一輪中選擇的雜合抗體也可以用作對於第二輪選擇的競爭物。第二輪選擇的結果係一組完全人抗體，其在結構上不同於參考抗體，但其與參考抗體競爭結合相同抗原。一些選擇的人抗體結合與參考抗體的相同抗原上的相同表位。在該等選擇的人 抗體中，一種或多種以相當於或比參考抗體的親和力更高的親和力與相同表位結合。
使用小鼠或嵌合ENTPD2抗體，可以產生與人ENTPD2結合的具有相同結合特異性和相同或更好結合親和力的人抗體。另外，這種人ENTPD2抗體也可以從通常生產人抗體的公司例如KaloBios,Inc.(山景城(Mountain View)，加利福尼亞州(Calif.))商業獲得。
在一些實施方式中，本發明提供結合人ENTPD2蛋白並調節一種或多種ENTPD2活性/功能的抗體或其抗原結合片段，例如抑制例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%的人ENTPD2的酶活性。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量人ENTPD2的酶活性，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。
在一些實施方式中，本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段抑制ENTPD2水解三磷酸腺苷(ATP)的能力。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。
在一些實施方式中，本文所述的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段干擾ATP與ENTPD2的結合或在ENTPD2的催化結構域內捕獲ATP。在一些實施方式中，使用體外FRET測定法測量對ATP與ENTPD2結合的干擾或在ENTPD2催化結構域內捕獲ATP，該體外FRET測定法藉由在細胞表面上表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP水解成ADP。
與小鼠ENTPD2特異性結合的抗體和抗原結合片段
本發明還提供了特異性結合小鼠ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。表26列出了特異性結合小鼠ENTPD2蛋白的ENTPD2抗體或抗原結合片段的示例性序列。
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在一些實施方式中，抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表26中所述的任何VH結構域的胺基酸序列的VH結構域。其他合適的抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基 酸，所述胺基酸已經突變但在VH結構域中與表26中描述的序列中描繪的VH區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在某些實施方式中，本公開還提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，其中該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表26中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR。在具體實施方式中，本發明提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個、四個、五個或更多個具有表26中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR(或視情況，由其組成)。
在一些實施方式中，抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表26中所述的任何VL結構域的胺基酸序列的VL結構域。其他合適的抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，所述胺基酸已經突變但在VL結構域中與表26中描述的序列中描繪的VL區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。本公開還提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表26中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR。具體地，本發明提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個或更多個具有表26中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR(或視情況，由其組成)。
本文公開的其他抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包括如下胺基酸，所述胺基酸已經突變但在CDR區中與表26中描述的序列中描繪的CDR區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在一些實施方式中，其包括突變胺基酸序列，其中當與表26中描述的序列中描繪的CDR區相比時，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變。
本文還提供了編碼特異性結合小鼠ENTPD2(例如表26中的核酸序列)的抗體及其抗原結合片段的VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以在哺乳動物細胞中表現。
本文還提供了特異性結合小鼠ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Ser74、Cys75、Asp76、Tyr349、Tyr350、Asp353、Phe354、Thr357、Val358、Gly360、Gln385、Ala386、Arg387、Val388、Pro389、Gly390、Gln391、Thr393、Arg394、或Tyr398。
框架和工程化或修飾的抗體
本發明的抗體還可以使用具有一種或多種VH和/或VL序列的抗體作為起始材料來製備，以將修飾的抗體工程化，該修飾的抗體可以具有與起始抗體相比改變的特性。可以藉由修飾一個或兩個可變區(即VH和/或VL)內例如在一個或多個CDR區內和/或在一個或多個框架區內的一個或多個殘基將抗體工程化。另外或可替代地，可以藉由修飾一個或多個恒定區內的殘基將抗體工程化，例如從而改變抗體的一個或多個效應子功能。
可以進行的一種可變區工程化係CDR移植。抗體主要藉由位於六個重鏈和輕鏈互補決定區(CDR)中的胺基酸殘基與靶抗原相互作用。因此，CDR內的胺基酸序列在各個抗體之間比CDR外部的序列更加多樣化。因為CDR序列與大多數抗體-抗原相互作用有關，所以可以藉由構建表現運載體來表現模擬特定天然存在的抗體的特性的重組抗體，所述表現運載體包含被移植在來自具有不同特性的不同抗體的框架序列上的來自所述特定天然存在的抗體的CDR序列(參見例如，Riechmann,L.等人，1998 Nature[自然]332：323-327；Jones,P.等 人，1986 Nature[自然]321：522-525；Queen,C.等人，1989 Proc.Natl.Acad.,U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：10029-10033；Winter的美國專利案號5,225,539和Queen等人的美國專利案號5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370)。
此類框架序列可以從包含種系抗體基因序列或重新排列的抗體序列的公共DNA數據庫或公開參考文獻獲得。例如，人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在「VBase」人種系序列數據庫(可從網際網路www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase獲得)中找到，以及在卡巴特，E.A.，等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，第五版，美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH公開案號91-3242；Tomlinson,I.M.，等人，1992 J.fol.Biol.227：776-798；和Cox,J.P.L.等人，1994 Eur.J Immunol.[歐洲免疫學雜誌]24：827-836中找到。例如，人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列和重新排列的抗體序列可以在「IMGT」數據庫(可從網際網路www.imgt.org獲得；參見Lefranc,M.P.等人，1999 Nucleic Acids Res.[核酸研究]27：209-212)中找到。
用於本發明的抗體及其抗原結合片段的框架序列的實例係與本發明的選擇的抗體及其抗原結合片段所使用的框架序列在結構上相似的那些序列，例如，共有序列和/或本發明的單株抗體使用的框架序列。可以將VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列移植到框架區上，所述框架區具有與框架序列所來源的種系免疫球蛋白基因中發現的序列相同的序列，或可以將CDR序列移植到與種系序列相比含有一個或多個突變的框架區上。例如，已經發現在某些情況下使框架區內的殘基突變以維持或增強抗體的抗原結合能力係有益的(參見例如，Queen等人的美國專利案號5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370)。
另一種類型的可變區修飾係使VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3區內的胺基酸殘基突變，從而改善感興趣的抗體的一種或多種結合特性(例如，親和力)，稱為「親和力成熟」。可以進行定點誘變或PCR介導的誘變以引入一個或多個突變，並且可以在如本文所述且在實例中提供的體外或體內測定中評估對抗體結合或其他感興趣的功能特性的影響。可以引入保守修飾(如上所討論的)。所述突變可以是胺基酸取代、添加或缺失。此外，通常CDR區內不超過一個、兩個、三個、四個或五個殘基被改變。
可以使用多種抗體/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含至少一個特異性結合ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)的結合區即可。這種框架或支架包括5種主要獨特型的人免疫球蛋白、其抗原結合片段，並且包括其他動物物種的免疫球蛋白，較佳的是具有人源化方面。就這點而言，單個重鏈抗體如在駱駝科動物中鑒定的那些抗體係特別令人感興趣的。熟悉該項技術者將繼續發現和開發新的框架、支架和片段。
在一個方面，本發明涉及使用非免疫球蛋白支架生成基於非免疫球蛋白的抗體的方法，在所述非免疫球蛋白支架上可以移植本發明的CDR。可以使用已知的或未來的非免疫球蛋白框架和支架，只要它們包含對靶ENTPD2蛋白有特異性的結合區即可。已知的非免疫球蛋白框架或支架包括但不限於纖連蛋白(化合物治療劑公司(Compound Therapeutics,Inc.)，沃爾瑟姆(Waltham)，麻塞諸塞州(Mass.))、錨蛋白(分子配偶體公司(Molecular Partners AG，蘇黎世(Zurich)，瑞士(Switzerland))、結構域抗體(Domantis,Ltd.，坎布裡奇(Cambridge)，麻塞諸塞州(Mass.)，和Ablynx nv,Zwijnaarde，比利時)、脂質運載蛋白(Pieris Proteolab AG，弗賴辛(Freising)，德國)、小型模組化免疫藥物(Trubion Pharmaceuticals Inc.，西雅圖(Seattle)，華盛頓州(Wash.))、maxybody(Avidia,Inc.，山景城(Mountain View)，加利福尼亞州(Calif.))、蛋白質A (親合體公司(Affibody AG)，瑞典)和affilin(γ-晶體蛋白或泛素)(SciI Proteins GmbH，哈雷(Halle)，德國)。
纖連蛋白支架基於纖連蛋白III型結構域(例如，III型纖連蛋白的第十個模組(10 Fn3結構域))。纖連蛋白III型結構域具有分佈在兩個β片層之間的7或8個β鏈，它們自身彼此包裹以形成蛋白質的核心且還含有將β鏈彼此連接且暴露於溶劑中的環(類似於CDR)。在β片層夾心的每個邊緣處存在至少三個這樣的環，其中所述邊緣係垂直於β鏈方向的蛋白質的邊界(參見美國專利案號6,818,418)。該等基於纖連蛋白的支架不是免疫球蛋白，但整體折疊與最小功能性抗體片段(重鏈可變區)的折疊密切相關，所述最小功能性抗體片段包含駱駝和美洲駝IgG中的完整抗原識別單元。由於這種結構，非免疫球蛋白抗體模擬抗原結合特性，其在性質和親和力上與抗體的那些抗原結合特性相似。該等支架可用於體外環隨機化和改群組原則，其類似於體內抗體親和力成熟的過程。該等基於纖連蛋白的分子可以用作支架，其中可以使用標準選殖技術用本發明的CDR替代分子的環區。
錨蛋白技術基於使用具有錨蛋白衍生的重複模組的蛋白質作為支架，該支架用於承載可用於結合不同的靶標的可變區。錨蛋白重複模組係33個胺基酸多肽，其由兩個反平行的α-螺旋和β-轉角組成。可變區的結合主要藉由使用核糖體展示來優化。
Avimer源自含有天然A結構域的蛋白質，如LRP-1。該等結構域天然地用於蛋白質間相互作用，並且在人類中超過250種蛋白質在結構上基於A結構域。Avimer由經由胺基酸接頭連接的許多不同的「A結構域」單體(2-10)組成。可以使用例如美國專利申請公開案號20040175756、20050053973、20050048512、和20060008844中描述的方法產生可與靶抗原結合的Avimer。
親合體(affibody)親和配位基係由基於蛋白質A的IgG結合結構域之一的支架的三螺旋束組成的小而簡單的蛋白質。蛋白質A係來自細菌金黃色葡萄球菌的表面蛋白。該支架結構域由58個胺基酸組成，其中13個隨機化以生成具有大量配位基變體的親合體文庫(參見例如，美國專利案號5,831,012)。親合體分子類似抗體，其分子量為6kDa，而抗體的分子量為150kDa。儘管其尺寸小，但是親合體分子的結合位點與抗體的結合位點相似。
Anticalin係由Pieris ProteoLab AG公司開發的產品。它們源自脂質運載蛋白，脂質運載蛋白係一種廣泛分佈的小而健壯的蛋白質，其通常參與化學敏感或不溶性化合物的生理運輸或儲存。幾種天然脂質運載蛋白存在於人體組織或體液中。蛋白質結構讓人聯想到免疫球蛋白，其中高變環在剛性框架的頂部。然而，與抗體或其重組片段相反，脂質運載蛋白由僅略微大於單個免疫球蛋白結構域的具有160至180個胺基酸殘基的單個多肽鏈組成。構成結合口袋的四個環的組顯示出明顯的結構可塑性並且容許各種側鏈。因此，結合位點可以在專有過程中重新成形，以便以高親和力和特異性識別不同形狀的規定靶分子。脂質運載蛋白家族的一種蛋白質，歐洲粉蝶的後膽色素結合蛋白(BBP)已被用於藉由誘變四個環的組來產生anticalin。描述anticalin的專利申請的一個實例係PCT公開案號WO 199916873。
Affilin分子係小的非免疫球蛋白蛋白質，其針對對於蛋白質和小分子的特定親和力而設計。可以從兩個文庫中非常快速地選擇新的affilin分子，每個文庫基於不同的人源支架蛋白。Affilin分子不顯示與免疫球蛋白蛋白質的任何結構同源性。目前，使用兩種affilin支架，其中一種係γ晶體，即人結構性眼晶狀體蛋白質，而另一種係「泛素」超家族蛋白質。兩種人支架都非常小，顯示出高溫穩定性並且幾乎耐受pH變化和變性劑。這種高穩定性主要是由於蛋白 質的擴大的β片層結構。WO 200104144中描述了γ晶體衍生蛋白的實例，並且WO 2004106368中描述了「泛素類」蛋白質的實例。
蛋白質表位模擬物(PEM)係中等大小的環狀肽類分子(MW 1-2kDa)，其模擬蛋白質的β-髮夾二級結構，它係參與蛋白質間相互作用的主要二級結構。
本發明的工程化抗體及其抗原結合片段包括如下該等：其中已對VH和/或VL內的框架殘基進行了修飾，例如以改善抗體的特性。通常進行這樣的框架修飾以降低抗體的免疫原性。例如，一種方法係將一個或多個框架殘基「向回突變」為相應的種系序列。更具體地，已經歷體細胞突變的抗體可以含有與衍生抗體的種系序列不同的框架殘基。可以藉由將抗體框架序列與衍生抗體的種系序列進行比較來鑒定這種殘基。為了使框架區序列恢復為其種系構型，可以藉由例如定點誘變將體細胞突變「向回突變」為種系序列。這種「向回突變的」抗體也旨在包括在本發明中。
另一種類型的框架修飾包括使框架區內或甚至一個或多個CDR區內的一個或多個殘基突變以去除T細胞表位，從而降低抗體的潛在免疫原性。該方法也稱為「去免疫化」，並在Carr等人的美國專利公開案號20030153043中進一步詳細描述。
除了在框架或CDR區內進行的修飾之外或作為在框架或CDR區內進行的修飾的替代方案，可以將本發明的抗體工程化以包含Fc區內的修飾，通常是為了改變抗體的一種或多種功能特性，如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合和/或抗原依賴性細胞毒性。此外，本發明的抗體可以被化學修飾的(例如，一個或多個化學部分可以附接至抗體)或被修飾以改變其糖基化，從而再次改變抗體的一種或多種功能特性。以下更詳細地描述了該等實施方式中的每一個。Fc區中殘基的編號係卡巴特的EU索引的編號。
在一個實施方式中，修飾CH1的鉸鏈區，使得鉸鏈區中半胱胺酸殘基的數目改變，例如增加或減少。該方法在Bodmer等人的美國專利案號5,677,425中進一步描述。改變CH1鉸鏈區中半胱胺酸殘基的數目，以便例如促進輕鏈和重鏈的組裝或增加或降低抗體的穩定性。
在另一個實施方式中，使抗體的Fc鉸鏈區突變以降低抗體的生物半衰期。更具體地，將一個或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段的CH2-CH3結構域介面區域中，使得抗體具有相對於天然Fc鉸鏈結構域SpA結合而言受損的葡萄球菌蛋白質A(SpA)結合。該方法在Ward等人的美國專利案號6,165,745中進一步詳細描述。
在另一個實施方式中，修飾抗體以增加其生物半衰期。可以採用各種方法。例如，可以引入以下突變中的一種或多種：T252L、T254S、T256F，如Ward的美國專利案號6,277,375中所述。可替代地，為了增加生物半衰期，可以在CH1或CL區內改變抗體，以含有從IgG的Fc區的CH2結構域的兩個環採集的補救受體結合表位，如Presta等人的美國專利案號5,869,046和6,121,022中所述。
在一個實施方式中，藉由用不同的胺基酸殘基替代至少一個胺基酸殘基來改變Fc區，以改變抗體的效應子功能。例如，可以用不同的胺基酸殘基替代一個或多個胺基酸，使得抗體對效應配位基具有改變的親和力，但保留親本抗體的抗原結合能力。改變親和力的效應配位基可以是例如Fc受體或補體的C1組分。該方法在Winter等人的美國專利案號5,624,821和5,648,260中進一步詳細描述。
在另一個實施方式中，選自胺基酸殘基的一個或多個胺基酸可以用不同的胺基酸殘基替代，使得抗體具有改變的C1q結合和/或降低或消除的補 體依賴性細胞毒性(CDC)。該方法在Idusogie等人的美國專利案號6,194,551中進一步詳細描述。
在另一個實施方式中，改變一個或多個胺基酸殘基，從而改變抗體固定補體的能力。該方法在Bodmer等人的PCT公開WO 94/29351中進一步描述。
在一些實施方式中，ENTPD2結合抗體或其抗原結合片段含有人IgG1恒定區。在一些實施方式中，人IgG1恒定區包括Fc區。
在一些實施方式中，ENTPD2結合抗體或其抗原結合片段的Fc區包括一個或多個突變，該突變介導減少的或不介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基L234和L235被取代為A234和A235。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基N267被取代為A267。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基D265和P329被取代為A265和A329。在某些實施方式中，Fc區視情況包含選自以下中任何一種的賦予降低的效應子功能的突變或突變組合：D265A、P329A、P329G、N297A、D265A/P329A、D265A/N297A、L234/L235A、P329A/L234A/L235A、和P329G/L234A/L235A。在一些實施方式中，Fc區包含選自以下中任何一種的賦予降低的效應子功能的突變或突變組合：D265A、P329A、P329G、N297A、D265A/P329A、D265A/N297A、L234/L235A、P329A/L234A/L235A、和P329G/L234A/L235A(所有位置藉由EU編號)。
在另一個實施方式中，修飾Fc區以增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的能力和/或藉由修飾一個或多個胺基酸來增加抗體對Fc-γ受體的親和力。該方法由Presta在PCT公開WO 00/42072中進一步描述。此外，已經繪製了人IgG1上針對Fc-γ RI、Fc-γ RII、Fc-γ RIII和FcRn的結合位點，並且已經描述了具有改善的結合的變體(參見Shields,R.L.等人，2001 J.Biol. Chen.[生物化學雜誌]276：6591-6604)。例如，Fc區包含選自以下中任何一種的賦予增加的效應子功能的突變或突變組合：S239D、I332E、A330L、S298A、E333A、E333S、K334A、K236A、K236W、F243L、P247I、D280H、K290S、R292P、S298D、S298V、Y300L、V305I、A339D、A339Q、A339T、P396L(所有位置藉由EU編號)。
在又另一個實施方式中，修飾抗體的糖基化。例如，可以製備非糖基化的抗體(即，抗體缺乏糖基化)。可以改變糖基化以例如增加抗體對抗原的親和力。這種碳水化合物修飾可以藉由例如改變抗體序列內的一個或多個糖基化位點來實現。例如，可以進行一個或多個胺基酸取代，其導致消除一個或多個可變區框架糖基化位點，從而消除該位點的糖基化。這種糖基化可以增加抗體對抗原的親和力。這樣的方法在Co等人的美國專利案號5,714,350和6,350,861中進一步詳細描述。
另外或可替代地，可以製備具有改變的糖基化類型的抗體，如具有減少量的岩藻糖基殘基的低岩藻糖基化抗體或具有增加的二等分GlcNac結構的抗體。已經證明這種改變的糖基化模式增加了抗體的ADCC能力。這種碳水化合物修飾可以藉由例如在具有改變的糖基化機制的宿主細胞中表現抗體來實現。具有改變的糖基化機制的細胞已在本領域中描述，並且可用作宿主細胞，在該宿主細胞中表現本發明的重組抗體，從而產生具有改變的糖基化的抗體。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破壞的FUT8基因的細胞系，其編碼岩藻糖基轉移酶，使得在這種細胞系中表現的抗體顯示出低岩藻糖基化。Presta的PCT公開WO 03/035835描述了變體CHO細胞系LecI3細胞，其將岩藻糖附接至Asn(297)連接的碳水化合物的能力降低，還導致在該宿主細胞中表現的抗體的低岩藻糖基化(還參見Shields,R.L.等人，2002 J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]277：26733-26740)。Umana等人的PCT公開WO 99/54342描述了如 下細胞系，該細胞系被工程化以表現醣蛋白修飾糖基轉移酶(例如，β(1,4)-N乙醯基葡糖胺基轉移酶III(GnTIII))，使得在工程化細胞系中表現的抗體顯示出增加的二等分GlcNac結構，該二等分GlcNac結構導致抗體的ADCC活性增加(還參見Umana等人，1999 Nat.Biotech.[自然生物技術]17：176-180)。
在一些實施方式中，ENTPD2抗體具有IgG1同種型，其具有一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一種或多種突變選自N297A、N297Q(BoltS等人(1993)Eur J Immunol[歐洲免疫學雜誌] 23：403-411)、D265A、L234A、L235A(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]， 109：1185-1192)、C226S、C229S(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]， 109：1185-1192)、P238S(Davis等人，(2007)J Rheumatol[風濕病學雜誌]， 34：2204-2210)、E233P、L234V(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]， 109：1185-1192)、P238A、A327Q、A327G、P329A(Shields RL.等人，(2001)J Bioi Chern. 276(9)：6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh等人，(2001)J Viral75, 12161-12168；Oganesyan等人，(2008).Acta Crystallographica[晶體學報]64, 700-704)、P331S(Oganesyan等人，(2008)Acta Crystallographica[晶體學報]64, 700-704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs 5(3)：406-417)、A330L、M252Y、S254T、和/或T256E，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。在某些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，Fc區還在對應於甘胺酸236的位置處包含胺基酸缺失。
在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，抗體具有IgG1同種型，該IgG1同種型具有重鏈恒定區，該重鏈恒定區含有C220S突變。
在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，Fc區含有選自L234F、L235E、P331S、D265A和/或N297Q的一個或多個突變。在一些實施方 式中，根據EU或卡巴特編號慣例，Fc區含有選自L234A、L235A、D265A、P329A、N297A、N297Q的一個或多個突變。
在某些實施方式中，抗體具有IgG2同種型。在一些實施方式中，抗體含有人IgG2恒定區。在一些實施方式中，人IgG2恒定區包括Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個修飾。例如，在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一個或多個突變選自V234A、G237A、P238S、H268A、H268E、H268Q、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T、和/或T256E，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。
在某些實施方式中，抗體具有IgG4同種型。在一些實施方式中，抗體含有人IgG4恒定區。在一些實施方式中，人IgG4恒定區包括Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個修飾。例如，在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一個或多個突變選自E233P、F234V、L234A、L235A、G237A、E318A(Hutchins等人(1995)Proc Natl A cad Sci USA[美國國家科學院院刊]，92：11980-11984)、S228P、L236E、S241P、L248E(Reddy等人，(2000)J Immunol[免疫學雜誌]，164：1925-1933；Angal等人，(1993)Mol Immunol.[分子免疫學] 30(1)：105-8；US 8614299 B2)、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A、和/或N297Q，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。
在一些實施方式中，Fc區還含有一個或多個選自M252Y、S254T和/或T256E的其他突變，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。
在一些實施方式中，本文所述的一種或多種IgG1變體可與A330L突變組合(Lazar等人，(2006)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]，103：4005-4010)，或與L234F、L235E、和/或P331S突變中的一種或多種組合 (Sazinsky等人，(2008)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]，105：20167-20172)以消除補體活化，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。在一些實施方式中，本文所述的IgG變體可與一種或多種突變(例如根據EU或卡巴特編號慣例，M252Y、S254T、T256E突變)組合以增強人血清中的抗體半衰期(Dall' Acqua等人，(2006)J Biol Chern,281：23514-23524；和Strohl等人，(2009)Current Opinion in Biotechnology[生物技術當前觀點]，20：685-691)。
在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，本公開的IgG4變體可以與S228P突變組合(Angal等人，(1993)Mol Immunol[分子免疫學]，30：105-108)和/或與Peters等人，(2012)J Biol Chem.13；287(29)：24525-33中描述的一種或多種突變組合以增強抗體穩定性。
在一些實施方式中，抗體具有如下Fc區，該Fc區選自IgG2 Fc區、IgG4 Fc區、或IgG2/IgG4雜合Fc區。
駱駝科動物抗體
從包括新的世界成員如美洲駝物種(Lama paccos、大羊駝和瘦駝)在內的駱駝和單峰駱駝(雙峰駱駝和Calelus dromaderius)家族成員獲得的抗體蛋白質已經關於大小、結構複雜性和對於人類受試者的抗原性進行了表徵。來自自然界中發現的該哺乳動物家族的某些IgG抗體缺乏輕鏈，因此在結構上不同於來自其他動物的抗體的具有兩條重鏈和兩條輕鏈的典型四鏈四級結構。參見PCT/EP 93/02214(1994年3月3日公開的WO 94/04678)。
藉由基因工程化獲得駱駝科動物抗體的區域(它係被鑒定為VHH的小的單個可變結構域)以產生對靶標具有高親和力的小蛋白質，從而產生稱為「駱駝科動物奈米抗體」的低分子量抗體衍生蛋白。參見提交於1998年6月2日的美國專利案號5,759,808；還參見Stijlemans,B.等人，2004 J Biol Chem[生物化學雜誌]279：1256-1261；Dumoulin,M.等人，2003 Nature[自然]424：783-788； Pleschberger,M.等人，2003 Bioconjugate Chem[生物軛合化學]14：440-448；Cortez-Retamozo,V.等人，2002 Int J Cancer[國際癌症雜誌]89：456-62；和Lauwereys,M.等人，1998 EMBO J[歐洲分子生物學組織雜誌]17：3512-3520。駱駝科動物抗體和抗體片段的工程化文庫可例如從比利時根特(Ghent)的Ablynx公司商購獲得。與非人來源的其他抗體及其抗原結合片段一樣，可以重組改變駱駝科動物抗體的胺基酸序列以獲得更接近地類似於人序列的序列，即奈米抗體可以是「人源化的」。因此，可以進一步降低駱駝科動物抗體對人的天然低抗原性。
駱駝科動物奈米抗體的分子量為人IgG分子的約十分之一，並且該蛋白質的物理直徑僅為幾奈米。小尺寸的一個結果係駱駝科動物奈米抗體結合抗原位點的能力，所述抗原位點對於較大的抗體蛋白質係功能上不可見的，即，駱駝科動物奈米抗體可用作檢測對於使用經典免疫學技術而言隱蔽的抗原的試劑，以及可用作可能的治療劑。因此，小尺寸的又另一個結果係駱駝科動物奈米抗體可以由於結合靶蛋白的溝槽或狹窄裂縫中的特異性位點而抑制，因此可以具有與經典抗體相比更接近地類似於經典低分子量藥物的功能的能力。
低分子量和緊湊的尺寸還導致駱駝科動物奈米抗體極其熱穩定、對極端pH和蛋白水解消化穩定，並且抗原性差。另一個結果係駱駝科動物奈米抗體容易從循環系統移動到組織中，甚至穿過血腦屏障並且可以治療影響神經組織的障礙。奈米抗體還可以促進跨越血腦屏障的藥物轉運。參見2004年8月19日公開的美國專利申請20040161738。該等特徵與對人的低抗原性相結合顯示了巨大的治療潛力。此外，該等分子可以在原核細胞如大腸桿菌中完全表現，並且表現為具有噬菌體的融合蛋白並且是功能性的。
因此，本發明的特徵係對ENTPD2具有高親和力的駱駝科動物抗體或奈米抗體。在本文的一個實施方式中，駱駝科動物抗體或奈米抗體在駱駝科 動物中天然產生，即，在使用對於其他抗體的本文所述的技術用ENTPD2或其肽片段免疫後，由駱駝科動物產生。可替代地，ENTPD2結合駱駝科動物奈米抗體被工程化，即如本文實例中所述藉由以ENTPD2為靶標使用淘選程序，例如從展現出適當誘變的駱駝科動物奈米抗體蛋白質的噬菌體文庫中選擇產生。藉由基因工程可以進一步定製工程化奈米抗體，以在受體受試者中具有45分鐘至兩周的半衰期。在一個具體實施方式中，駱駝抗體或奈米抗體藉由將本發明的人抗體的重鏈或輕鏈的CDR序列移植到奈米抗體或單結構域抗體框架序列中而獲得，如例如PCT/EP 93/02214中所述。
雙特異性分子和多價抗體
在另一方面，本發明的特徵在於包含本發明的ENTPD2結合抗體或其片段的雙特異性或多特異性分子。本發明的抗體或其抗原結合區可以衍生化或連接至另一種功能分子，例如另一種肽或蛋白質(例如，另一種抗體或受體的配位基)，以生成結合至少兩個不同的結合位點或靶分子的雙特異性分子。事實上，本發明的抗體可以衍生化或連接至多於一種的其他功能分子，以生成結合多於兩個不同結合位點和/或靶分子的多特異性分子；這種多特異性分子也旨在由本文所用的術語「雙特異性分子」涵蓋。為了產生本發明的雙特異性分子，本發明的抗體可以功能性地連接(例如，藉由化學偶聯、基因融合、非共價締合或其他方式)至一種或多種其他結合分子，如另一種抗體、抗體片段、肽或結合模擬物，從而產生雙特異性分子。
因此，本發明包括雙特異性分子，其包含對ENTPD2的至少一種第一結合特異性和對第二靶表位的第二結合特異性。例如，第二靶表位係不同於第一靶表位的ENTPD2的另一表位。
另外，對於雙特異性分子係多特異性的發明，除了第一和第二靶表位之外，所述分子還可以包含第三結合特異性。
在一個實施方式中，本發明的雙特異性分子包含至少一種抗體或其抗體片段的結合特異性，包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或單鏈Fv。抗體也可以是輕鏈或重鏈二聚體或其任何最小片段，如Ladner等人的美國專利案號4,946,778中所述的Fv或單鏈構建體。
雙抗體係二價雙特異性分子，其中VH和VL結構域在單個多肽鏈上表現，藉由接頭連接，所述接頭太短而不允許在同一鏈上的兩個結構域之間配對。VH和VL結構域與另一條鏈的互補結構域配對，從而產生兩個抗原結合位點(參見例如，Holliger等人，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]90：6444-6448；Poijak等人，1994 Structure[結構]2：1121-1123)。可以藉由在相同細胞內表現具有結構VHA-VLB和VHB-VLA(VH-VL構型)或VLA-VHB和VLB-VHA(VL-VH構型)的兩條多肽鏈來產生雙抗體。它們中的大多數可以在細菌中以可溶性形式表現。單鏈雙抗體(scDb)藉由將兩個形成雙抗體的多肽鏈與約15個胺基酸殘基的接頭連接而產生(參見Holliger和Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫學，免疫療法]，45(3-4)：128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology[免疫技術]，2(1)：21-36)。scDb可以在細菌中以可溶的活性單體形式表現(參見Holliger和Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫學，免疫療法]，45(34)：128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology[免疫技術]，2(1)：21-36；Pluckthun和Pack,1997 Immunotechnology[免疫技術]，3(2)：83-105；Ridgway等人，1996 Protein Eng.[蛋白質工程]，9(7)：617-21)。雙抗體可以與Fc融合以生成「二-雙抗體」(參見Lu等人，2004 J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，279(4)：2856-65)。
可用於本發明雙特異性分子的其他抗體係鼠嵌合和人源化單株抗體。
本發明的雙特異性分子可以藉由使用本領域已知的方法軛合組分結合特異性來製備。例如，雙特異性分子的每種結合特異性可以單獨生成，然後彼此軛合。當結合特異性係蛋白質或肽時，多種偶聯劑或交聯劑可用於共價軛合。交聯劑的實例包括蛋白質A、碳二亞胺、N-琥珀醯亞胺基-5-乙醯基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、鄰亞苯基二馬來醯亞胺(oPDM)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)和4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-SMCC)(參見例如Karpovsky等人，1984 J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]160：1686；Liu,M A等人，1985 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]82：8648)。其他方法包括Paulus,1985 Behring Ins.Mitt.第78期，118-132；Brennan等人，1985 Science[科學]229：81-83)和Glennie等人，1987 J.Immunol.[免疫學雜誌]139：2367-2375)中描述的那些方法。軛合劑係SATA和磺基-SMCC，兩者均可從Pierce Chemical Co.(羅克福德(Rockford)，伊利諾州)獲得。
當結合特異性係抗體時，它們可以藉由兩條重鏈的C-末端鉸鏈區的巰基鍵合而軛合。在具體實施方式中，鉸鏈區被修飾為例如在軛合之前含有奇數個巰基殘基。
可替代地，兩種結合特異性可以在相同運載體中編碼，並在相同宿主細胞中表現和組裝。當雙特異性分子係mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab')2或配位基×Fab融合蛋白時，該方法特別有用。本發明的雙特異性分子可以是包含一個單鏈抗體和一個結合決定簇的單鏈分子，或包含兩個結合決定簇的單鏈雙特異性分子。雙特異性分子可包含至少兩個單鏈分子。用於製備雙特異性分子的方法描述於例如在美國專利案號5,260,203；美國專利案號5,455,030；美國專利案號4,881,175；美國專利案號5,132,405；美國專利案號5,091,513；美 國專利案號5,476,786；美國專利案號5,013,653；美國專利案號5,258,498；和美國專利案號5,482,858中。
雙特異性分子與其特異性靶標的結合可以藉由例如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(REA)、FACS分析、生物測定(例如生長抑制)或蛋白質印跡測定來證實。該等測定中的每一種通常藉由使用對感興趣的複合物有特異性的標記試劑(例如，抗體)來檢測特別感興趣的蛋白質-抗體複合物的存在。
在另一方面，本發明提供了多價化合物，其包含與ENTPD2結合的本發明抗體及其抗原結合片段的至少兩個相同或不同的抗原結合部分。抗原結合部分可以經由蛋白質融合或共價或非共價連接而連接在一起。可替代地，已經描述了雙特異性分子的連接方法。四價化合物可以例如藉由將本發明的抗體及其抗原結合片段與結合本發明的抗體及其抗原結合片段的恒定區(例如Fc或鉸鏈區)的抗體或抗原結合片段交聯而獲得。
三聚結構域描述於例如Borean專利EP 1 012 280 B1中。五聚模組描述於例如PCT/EP 97/05897中。
在一些實施方式中，ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段係識別第一抗原和第二抗原的雙特異性抗體。在一些實施方式中，該第一抗原係人ENTPD2或其天然存在的變體。在一些實施方式中，第二抗原可以是在一種或多種腫瘤細胞上表現的蛋白質、脂質、多糖或糖脂。
具有延長半衰期的抗體
本發明提供了特異性結合ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)的抗體並在體內具有延長的半衰期。
許多因素可以影響蛋白質在體內的半衰期。例如，腎過濾、肝代謝、蛋白水解酶(蛋白酶)降解和免疫原性應答(例如藉由抗體中和蛋白質和藉 由巨噬細胞和樹突細胞攝取)。可以使用多種策略來延長本發明的抗體及其抗原結合片段的半衰期。例如，藉由與聚乙二醇(PEG)、reCODE PEG、抗體支架、聚唾液酸(PSA)、羥乙基澱粉(HES)、白蛋白結合配位基和碳水化合物遮罩的化學連接；藉由與結合血清蛋白(如白蛋白、IgG、FcRn)的蛋白質的基因融合和轉移；藉由與結合血清蛋白的其他結合部分(如奈米抗體、Fab、DARPin、avimer、親合體和anticalin)偶聯(遺傳地或化學地)；藉由與rPEG、白蛋白、白蛋白的結構域、白蛋白結合蛋白和Fc的基因融合；或藉由摻入奈米載體、緩釋配製品或醫療裝置中。
為了延長體內抗體的血清循環，可以藉由PEG與抗體的N-末端或C-末端的位點特異性軛合或經由賴胺酸殘基上存在的ε-胺基，將惰性聚合物分子(如高分子量PEG)附接至具有或不具有多功能接頭的抗體或其片段。為了使抗體聚乙二醇化，通常在一個或多個PEG基團附接至該抗體或抗體片段的條件下使該抗體、其抗原結合片段與聚乙二醇(PEG)(如PEG的反應性酯或酸衍生物)反應。聚乙二醇化可以藉由醯化反應或烷基化反應採用反應性PEG分子(或類似的反應性水溶性聚合物)來進行。如本文所用，術語「聚乙二醇」旨在涵蓋已用於衍生化其他蛋白質的任何形式的PEG，如單(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來醯亞胺。在一個實施方式中，待聚乙二醇化的抗體係非糖基化抗體。將使用導致最小生物活性損失的線性或支化聚合物衍生化。可以藉由SDS-PAGE和質譜法密切監測軛合程度，以確保PEG分子與抗體的適當軛合。可以藉由尺寸排阻或藉由離子交換層析法將未反應的PEG與抗體-PEG軛合物分離。可以使用熟悉該項技術者公知的方法，例如藉由本文所述的免疫測定，測試PEG衍生化抗體的結合活性以及體內效果。聚乙二醇化蛋白質的方法係本領域已知的，並且可以應用於本發明的抗體及其抗原結合片段。參見，例如，Nishimura等人的EP 0154316和Ishikawa等人的EP 0401384。
其他改良的聚乙二醇化技術包括重構化學正交定向工程技術(ReCODE PEG)，其經由包含tRNA合成酶和tRNA的重構系統將化學上指定的側鏈摻入生物合成蛋白中。該技術能夠將超過30個新胺基酸摻入大腸桿菌、酵母和哺乳動物細胞中的生物合成蛋白中。tRNA在琥珀密碼子所定位的任何位置摻入規範性胺基酸，從而將琥珀從終止密碼子轉換成發出摻入化學上指定的胺基酸的訊號的密碼子。
重組聚乙二醇化技術(rPEG)也可用於血清半衰期延長。該技術一般包括將300-600個胺基酸非結構化蛋白質尾部與現有的藥物蛋白質基因融合。因為這種非結構化蛋白質鏈的表觀分子量比其實際分子量大約15倍，所以蛋白質的血清半衰期大大增加。與需要化學軛合和再純化的傳統PEG化相反，該製備過程大大簡化並且產物係均勻的。
聚唾液酸化係另一種技術，它利用天然聚合物聚唾液酸(PSA)來延長活性壽命和提高治療性肽和蛋白質的穩定性。PSA係唾液酸的聚合物(一種糖)。當用於蛋白質和治療性肽藥物遞送時，聚唾液酸在軛合時提供保護性微環境。這增加了治療性蛋白質在循環中的活性壽命並防止其被免疫系統識別。PSA聚合物天然存在於人體中。它被某些細菌採用，該等細菌已經進化了數百萬年以用它來包被其細胞壁。然後，該等天然的聚唾液酸化細菌憑藉分子模擬能夠阻止身體的防禦系統。PSA可以容易地大量產自這種細菌並具有預定的物理特徵。即使與蛋白質偶聯，細菌PSA也是完全非免疫原性的，因為它在化學上與人體中的PSA相同。
另一種技術包括使用與抗體連接的羥乙基澱粉(「HES」)衍生物。HES係一種源自蠟質玉米澱粉的改性天然聚合物，並可以藉由人體的酶代謝。通常給予HES溶液以替代缺乏的血液體積並改善血液的流變學特性。抗體的Hes化能夠藉由增加分子的穩定性以及藉由降低腎清除率來延長循環半衰期， 從而導致生物活性增加。藉由改變不同的參數如HES的分子量，可以定製多種HES抗體軛合物。
還可以生成具有增加的體內半衰期的抗體，其將一個或多個胺基酸修飾(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定結構域或其FcRn結合片段(較佳的是Fc或鉸鏈Fc結構域片段)。參見，例如，國際公開案號WO 98/23289；國際公佈案號WO 97/34631；和美國專利案號6,277,375。
此外，抗體可以與白蛋白軛合，以使抗體或抗體片段在體內更穩定或在體內具有更長的半衰期。該等技術係本領域中公知的，參見例如，國際公開案號WO 93/15199、WO 93/15200和WO 01/77137；和歐洲專利案號EP 413,622。
增加半衰期的策略尤其可用於奈米抗體、基於纖連蛋白的結合劑以及需要增加體內半衰期的其他抗體或蛋白質。
抗體軛合物
本發明提供了抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性地結合與異源蛋白質或多肽(或其抗原結合片段，較佳的是與至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、或至少100個胺基酸的多肽)重組融合或化學軛合(包括共價和非共價軛合)的ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白質)的細胞外結構域以生成融合蛋白。特別地，本發明提供了融合蛋白，其包含本文所述抗體的抗原結合片段(例如，Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab) 2 片段、VH結構域、VH CDR、VL結構域或VL CDR)和異源蛋白質、多肽或肽。將蛋白質、多肽或肽與抗體或抗體片段融合或軛合的方法係本領域已知的。參見，例如，美國專利案號5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、和5,112,946；歐洲專利案號EP 307,434和EP 367,166；國際公開案號WO 96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等人，1991,Proc.Natl. Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]88：10535-10539；Zheng等人，1995,J.Immunol.[免疫學雜誌]154：5590-5600；和Vil等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]89：11337-11341。
可以藉由基因改組、模體改組、外顯子改組和/或密碼子改組(統稱為「DNA改組」)的技術生成另外的融合蛋白。DNA改組可用於改變本發明的抗體及其抗原結合片段的活性(例如，具有更高親和力和更低解離速率的抗體及其抗原結合片段)。通常參見，美國專利案號5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252、和5,837,458；Patten等人，1997,Curr.Opinion Biotechnol.[當前生物技術觀點]8：724-33；Harayama,1998,Trends Biotechnol.[生物技術趨勢]16(2)：76-82；Hansson，等人，1999,J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]287：265-76；以及Lorenzo和Blasco,1998,Biotechniques[生物技術]24(2)：308-313)。抗體及其抗原結合片段或編碼的抗體及其抗原結合片段可以藉由在重組之前藉由易錯PCR、隨機核苷酸插入或其他方法進行隨機誘變來改變。編碼特異性地結合ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白質)的抗體或其抗原結合片段的多核苷酸可以與一種或多種異源分子的一個或多個組分、模體、區域(section)、部分、結構域、片段等重組。
此外，抗體及其抗原結合片段可以與標記序列如肽融合以促進純化。在一個實施方式中，標記胺基酸序列係六組胺酸肽(SEQ ID NO：1010)，如pQE運載體中提供的標籤(凱傑公司(QIAGEN,Inc.)，伊頓大街(Eton Avenue)9259號，查茨沃思(Chatsworth)，加利福尼亞州，91311)等，其中許多係商購可得的。如Gentz等人，1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]86：821-824中所述，例如六組胺酸(SEQ ID NO：1010)提供了融合蛋白的方便純化。用於純化的其他肽標籤包括但不限於對應於源自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等人，1984,Cell 37：767)的血凝素(「HA」)標記以及「旗幟(FLAG)」標籤。
在一個實施方式中，本發明的抗體及其抗原結合片段與診斷劑或可檢測劑軛合。這種抗體可用於監測或預後疾病或病症的發作、發展、進展和/或嚴重程度，其作為臨床試驗程序(如確定特定療法的效果)的一部分。這種診斷和檢測可以藉由將抗體與可檢測物質偶聯來實現，該可檢測物質包括但不限於各種酶，例如但不限於辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，例如但不限於鏈黴親和素/生物素和親和素/生物素；螢光材料，例如但不限於傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、二氯三
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基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅蛋白；發光材料，例如但不限於魯米諾；生物發光材料，例如但不限於螢光素酶、螢光素和水母素；放射性物質，例如但不限於碘(131I、125I、123I和121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In和111In)、鍀(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn和117Tin；以及使用各種正電子發射斷層掃描的正電子發射金屬和非放射性順磁金屬離子。
此外，抗體及其抗原結合片段可以與治療部分或藥物部分軛合。治療部分或藥物部分不應解釋為限於經典的化學治療劑。例如，藥物部分可以是具有所需生物活性的蛋白質、肽或多肽。這種蛋白質可包括例如毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素；蛋白質，如腫瘤壞死因子、α-干擾素、β-干擾素、神經生長因子、血小板衍生生長因子、組織纖溶酶原活化物、凋亡劑、抗血管生成劑；或生物反應調節劑如淋巴因子。
此外，抗體可以與治療部分如放射性金屬離子(如α-發射體，如213Bi)或用於將放射性金屬離子(包括但不限於131In、131LU、131Y、131Ho、131Sm)與多肽軛合的大環螯合劑軛合。在一個實施方式中，大環螯合劑係 1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N",N'''-四乙酸(DOTA)，其可以經由接頭分子附接至抗體。這種接頭分子係本領域公知的，並描述於Denardo等人，1998,Clin Cancer Res.[臨床癌症研究]4(10)：2483-90；Peterson等人，1999,Bioconjug.Chem.[生物軛合化學]10(4)：553-7；和Zimmerman等人，1999,Nucl.Med.Biol.[核醫學和生物學]26(8)：943-50，該等文獻中的每一個均藉由引用以其全文併入。
用於將治療部分與抗體軛合的技術係公知的，參見例如，Amon等人，"Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy"[癌症療法中用於藥物免疫靶向的單株抗體]，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy[單株抗體和癌症療法]，Reisfeld等人，(編)，第243-56頁(艾倫麗思出版社公司(Alan R.Liss,Inc.)1985)中；Hellstrom等人，"Antibodies For Drug Delivery[用於藥物遞送的抗體]"，在Controlled Drug Delivery[藥物控制釋放](第2版)、Robinson等人(編)，第623-53頁(馬塞爾德克爾出版社公司(Marcel Dekker,Inc.)1987)中；Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：Thorpe,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review[癌症療法中細胞毒性劑的抗體載體：綜述]"，在Monoclonal Antibodies[單株抗體]84：Biological And Clinical Applications[生物和臨床應用]、Pinchera等人(編)，第475-506頁(1985)中；"Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy[放射標記的抗體在癌症療法中的治療用途的未來前景]"，在Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy[用於癌症檢測和治療的單株抗體]，Baldwin等人(編)，第303-16頁(Academic Press[學術出版社]1985)中以及Thorpe等人，1982,Immunol.Rev.[免疫學綜述]62：119-58。
抗體也可以附接至固體支持物，這尤其科用於免疫測定或靶抗原的純化。這種固體支持物包括但不限於玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
編碼抗體的核酸、運載體和宿主細胞
本文還提供的是編碼本文所述的抗體或其抗原結合片段的核酸。此類核酸可以編碼包含上述ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域的多肽。此類核酸或多核苷酸可編碼至少一個CDR區，並且通常編碼來自本文所述的ENTPD2抗體的重鏈或輕鏈的所有三個CDR區。此類核酸或多核苷酸還可以編碼本文所述的ENTPD2抗體的重鏈和/或輕鏈的所有或基本上所有的可變區序列。此類核酸或多核苷酸還可以編碼抗體的可變區和恒定區。由於密碼的簡並性，多種核酸序列將編碼免疫球蛋白胺基酸序列中的每一種。例如，本發明的特徵在於分別編碼選自本文揭露的一種或多種抗體分子的抗人ENTPD2抗體分子的重鏈和輕鏈可變區的第一和第二核酸。核酸可以包含如在表1中列出的核苷酸序列或與其基本上相同的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性，或與表1中示出的序列相差不多於3、6、15、30、或45個核苷酸的序列)。
在某些實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。在其他實施方式中，核酸可以包含編碼來自輕鏈可變區的至少一個、兩個或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。在又 另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個CDR或高變環的核苷酸序列，該等重鏈和輕鏈可變區具有如在表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。
在某些實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。在另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自輕鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。在又另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個CDR或高變環的核苷酸序列，該等重鏈和輕鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。
多核苷酸序列可以藉由從頭固相DNA合成或藉由PCR誘變編碼ENTPD2-結合抗體或其結合片段的現有序列來產生。核酸的直接化學合成可以藉由本領域已知的方法完成，例如Narang等人，1979,Meth.Enzymol.[酶學方法]68：90的磷酸三酯方法；Brown等人，Meth.Enzymol.[酶學方法]68：109,1979的磷酸二酯方法；Beaucage等人，Tetra.Lett.[四面體快報]，22：1859,1981的二乙基亞磷醯胺方法；和美國專利案號4,458,066的固體支持方法。藉由PCR向多核苷酸序列引入突變可以如以下文獻中所述進行，例如PCR Technology：Principles and Applications for DNA Amplification[PCR技術：用於DNA擴增的原理和應 用]，H.A.Erlich(編輯)，弗裡曼出版社，紐約，紐約州(Freeman Press,NY,N.Y.),1992；PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications[PCR方案：方法和應用指南]，Innis等人，(編輯)，學術出版社，聖地牙哥，加利福尼亞州(Academic Press,San Diego,Calif.),1990；Mattila等人，Nucleic Acids Res.[核酸研究]19：967,1991；以及Eckert等人，PCR Methods and Applications[PCR方法和應用]1：17,1991。
本文還提供了運載體(例如，表現運載體)，該運載體包含編碼多肽的核酸，該多肽包含本文所述的ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域。此類運載體可用於表現和/或產生ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段。術語「表現運載體」係指載體核酸分子，其中可以將所需的編碼序列插入以引入可以表現它的細胞中。運載體可以是DNA運載體、RNA運載體、質粒、粘粒、或病毒運載體、或人工染色體(參見，例如，Harrington等人，Nat Genet[自然遺傳學]15：345,1997)。例如，用於在哺乳動物(例如人)細胞中表現ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段的非病毒運載體包括pThioHis A、B和C；pcDNA3.1/His；pEBVHis A、B和C(英傑公司(Invitrogen)，聖地牙哥(San Diego)，加利福尼亞州(Calif.))；MPSV載體；以及本領域已知的用於表現蛋白質的許多其他運載體。例如，一類運載體利用衍生自動物病毒的DNA元件，例如牛乳頭瘤病毒，多瘤病毒、腺病毒、痘瘡病毒、桿狀病毒、逆轉錄酶病毒(勞氏肉瘤病毒，MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一類運載體利用衍生自RNA病毒的RNA元件，例如塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)，東部馬腦炎病毒(Eastern Equine Encephalitis virus)和黃病毒。
有用的病毒運載體包括基於以下病毒中任一種的運載體：逆轉錄酶病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(例如，單純性皰疹病毒(HSV))、基於SV40的運載體、乳頭狀瘤病毒、HBP Epstein Barr病毒、痘瘡病毒、Sinbis病毒、流感病毒、裏奧病毒、新城雞瘟病毒(NDV)、麻疹病毒、水泡性口炎病 毒(VSV)、微小病毒、脊髓灰質炎病毒、痘病毒、塞內卡穀病毒(Seneca Valley virus)、柯薩奇病毒、腸病毒、黏液瘤病毒、馬拉巴病毒(maraba virus)、或塞姆利基森林病毒(SFV)。參見，Brent等人，同上；Smith,Annu.Rev.Microbiol.[微生物學年度評論]49：807,1995；和Rosenfeld等人，Cell[細胞]68：143,1992。
在一些實施方式中，運載體係慢病毒運載體。衍生自逆轉錄病毒如慢病毒的運載體係實現長期基因轉移的合適工具，因為它們允許轉基因的長期穩定整合及其在子細胞中的繁殖。慢病毒運載體相對於衍生自腫瘤逆轉錄病毒如鼠白血病病毒的運載體具有附加優點，因為它們可以轉導非增殖性細胞，例如肝細胞。它們還具有低免疫原性的附加優點。逆轉錄病毒運載體還可以是例如γ逆轉錄病毒運載體。γ逆轉錄病毒運載體可以包括例如啟動子、包裝訊號(ψ)、引物結合位點(PBS)、一個或多個(例如兩個)長末端重複序列(LTR)、和感興趣的轉基因(例如編碼CAR的基因)。γ逆轉錄病毒運載體可能缺少病毒結構基因(如gag、pol、和env)。示例性γ逆轉錄病毒運載體包括鼠白血病病毒(MLV)、形成脾臟病灶病毒(SFFV)、和骨髓增殖性肉瘤病毒(MPSV)，以及由其衍生的運載體。其他γ逆轉錄病毒載體描述於例如Tobias Maetzig等人，「Gammaretroviral Vectors：Biology,Technology and Application[γ逆轉錄病毒載體：生物學/技術和應用]」Viruses.[病毒]2011年6月；3(6)：677-713。
在一些實施方式中，運載體係腺相關病毒(AAV)運載體，例如，重組AAV(rAAV)運載體。「AAV」係腺相關病毒的縮寫，可用於指病毒本身或其衍生物。該術語涵蓋所有亞型以及天然存在的和重組的形式，除非另有要求。縮寫「rAAV」係指重組腺相關病毒，也稱為重組AAV運載體(或「rAAV運載體」)。術語「AAV」包括例如，AAV 1型(AAV1)、AAV 2型(AAV2)、AAV 3型(AAV3)、AAV 4型(AAV4)、AAV 5型(AAV5)、AAV 6型(AAV6)、AAV 7型(AAV7)、AAV 8型(AAV8)、AAV 9型(AAV9)、AAV 10型(AAV10， 包括AAVrh10)、AAV 12型(AAV12)、鳥AAV、牛AAV、犬AAV、馬AAV、靈長類AAV、非靈長類AAV、和綿羊AAV。「靈長類AAV」係指感染靈長類的AAV，「非靈長類AAV」係指感染非靈長類哺乳動物的AAV，「牛AAV」係指感染牛哺乳動物的AAV，等。
各種血清型AAV的基因組序列，以及天然反向末端重複序列(ITR)，Rep蛋白和衣殼亞基的序列係本領域已知的。此類序列可以在文獻中或在諸如GenBank的公共數據庫中找到。參見，例如，GenBank登錄號NC-002077(AAV1)、AF063497(AAV1)、NC-001401(AAV2)、AF043303(AAV2)、NC-001729(AAV3)、NC-001829(AAV4)、U89790(AAV4)、NC-006152(AAV5)、AF513851(AAV7)、AF513852(AAV8)、和NC-006261(AAV8)；或在例如WO 2005033321(AAV1-9)的出版物中，其揭露的內容藉由引用結合在此。還參見，例如，Srivistava等人，(1983)J.Virology[病毒學雜誌]45：555；Chiorini等人，(1998)J.Virology[病毒學雜誌]71：6823；Chiorini等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：1309；Bantel-Schaal等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：939；Xiao等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：3994；Muramatsu等人，(1996)Virology[病毒學]221：208；Shade等人，(1986)J.Virol.[病毒學雜誌]58：921；Gao等人，(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]99：11854；Moris等人，(2004)Virology[病毒學]33：375-383；國際專利公開WO 00/28061、WO 99/61601、WO 98/11244；以及美國專利案號6,156,303。
如本文所用的「rAAV運載體」係指包含非AAV來源的多核苷酸序列(即，與AAV異源的多核苷酸)的AAV運載體，通常是用於細胞遺傳轉化的目的序列。在一些實施方式中，異源多核苷酸可以側接至少一個(有時兩個)AAV反向末端重複序列(ITR)。術語rAAV運載體包括rAAV運載體顆粒和rAAV運載體質粒。rAAV運載體可以是單鏈(ssAAV)或自身互補序列(scAAV)。 「AAV病毒」或「AAV病毒顆粒」或「rAAV運載體顆粒」係指由至少一種AAV衣殼蛋白質(通常由野生型AAV的所有衣殼蛋白質組成)和衣殼化的多核苷酸rAAV運載體組成的病毒顆粒。如果該顆粒包含異源多核苷酸(即，除了野生型AAV基因組的多核苷酸之外的，例如待遞送至哺乳動物細胞的轉基因)，則其通常被稱為「rAAV運載體顆粒」或簡稱為「rAAV運載體」。因此，rAAV顆粒的產生必然包括rAAV運載體的產生，因為這樣的運載體包含在rAAV顆粒內。
在一些實施方式中，運載體可以是含有核酸的重組DNA分子，該核酸編碼結合人ENTPD2蛋白的抗體。如本文所用的「重組」係指運載體、多核苷酸、多肽或細胞係選殖；限制或連接步驟；和/或導致與自然界中發現的產物不同的構建體的其他過程的各種組合的產物(例如，涉及其中包含的多核苷酸或多肽)。重組病毒或運載體係包含重組多核苷酸的病毒顆粒。該術語分別包括原始多核苷酸構建體的複製和原始病毒構建體的重複。
重組運載體通常包括與待表現的核酸序列可操作地連接的一個或多個調節序列。術語「調節序列」包括啟動子、增強子和其他表現控制元件(例如，聚腺苷酸化訊號)。調節序列包括指導核苷酸序列的組成型表現的序列，以及組織特異性調節和/或誘導序列。表現運載體還可以包括設計用於優化信使RNA穩定性和宿主細胞中可翻譯性的元件，和/或用於建立永久、穩定的細胞殖株的藥物選擇標記，該等殖株表現結合人ENTPD2蛋白的抗體。表現運載體的設計可以取決於諸如以下的這樣的因素：待轉化的宿主細胞的選擇、所需蛋白質的表現水平等。用於生成這樣的重組表現運載體的通用方法可以在以下文獻中發現：Sambrook和Russell編輯.(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子選殖：實驗室手冊]，第3版；Ausubel等人編輯系列(2007年更新至2010年)Current Protocols in Molecular Biology[當代分子生物學實驗指南]，以及本領域已知的其他方法。
「啟動子」係控制序列，其係核酸序列的區域，在該區域中控制轉錄的起始和速率。它可能含有遺傳元件，在該等元件上調節蛋白質和分子可能結合如RNA聚合酶和其他轉錄因子。短語「可操作地定位」、「可操作地連接」、「受控制」和「受轉錄控制」意指啟動子處於與核酸序列相關的正確功能位置和/或方向以控制轉錄起始和/或該序列的表現。可以將啟動子與「增強子」結合或不結合使用，該「增強子」係指參與核酸序列轉錄活化的順式作用調節序列。
啟動子可以是與基因或序列天然相關的啟動子，如可以藉由分離位於編碼區段和/或外顯子上游的5'非編碼序列而獲得。這樣的啟動子可以被稱為「內源的」。類似地，增強子可以是與核酸序列天然相關的增強子，位於該序列的下游或上游。可替代地，藉由將編碼核酸區段定位在重組或異源啟動子的控制下，將獲得某些優點，所述重組或異源啟動子係指在其天然環境中通常不與核酸序列相關的啟動子。重組或異源增強子還指在其天然環境中通常不與核酸序列相關的增強子。此類啟動子或增強子可以包括其他基因的啟動子或增強子，以及從任何其他原核、病毒或真核細胞分離的啟動子或增強子，以及非「天然存在的」啟動子或增強子，即含有不同轉錄調節區的不同元件和/或改變表現的突變。除了合成地產生啟動子和增強子的核酸序列之外，可以使用重組選殖和/或核酸擴增技術(例如PCR)結合本文公開的組成物產生序列(參見US 4683202，US 5928906)。此外，預期也可以使用在非核細胞器(如線粒體，葉綠體等)中指導轉錄和/或序列表現的控制序列。
所用的啟動子可以是組成型的、誘導型的、合成的、組織或細胞特異性的、和/或在適當的條件下用於指導所引入的DNA區段的高水平表現係有用的，例如有利於大規模生產重組蛋白和/或肽。另外，還可以摻入其他調節元件以改善編碼結合人ENTPD2蛋白的抗體的核酸表現，例如增強子、核糖體結合位點、轉錄終止序列等。
在一些實施方式中，使用組成型啟動子以提供抗人ENTPD2抗體的恒定表現。組成型啟動子的實例包括但不限於即時早期巨細胞病毒(CMV)啟動子、猿猴病毒40(SV40)早期啟動子、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)啟動子、人免疫缺陷病毒(HIV)長末端重複序列(LTR)啟動子、MoMuLV啟動子、禽類白血病病毒啟動子、愛潑斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)即時早期啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)啟動子、以及人基因啟動子，如但不限於肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、延伸因子-1α啟動子、血紅蛋白啟動子和肌酸激酶啟動子。
誘導型啟動子也被考慮作為本揭露的一部分。誘導型啟動子的使用提供了分子開關，該分子開關能夠當需要該啟動子可操作地連接的多核苷酸序列的表現時啟動這種表現，或者當不需要表現時關閉表現。誘導型啟動子的實例包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子和四環素啟動子。
在一些實施方式中，使用組織或細胞特異性啟動子從而僅在特定組織或細胞中提供抗人ENTPD2抗體的表現。組織或細胞特異性啟動子或元件的特性以及表徵其活性的測定法係熟悉該項技術者熟知的。實例包括人LIMK2基因(Nomoto等人，1999,Gene[基因]，236(2)：259-271)、生長激素抑制素受體2基因(Kraus等人，1998,FEES Lett.[FEES快報]，428(3)：165-170)、鼠科動物附睾視黃酸-結合基因(Lareyre等人，1999,J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，274(12)：8282-8290)、人CD4(Zhao-Emonet等人，1998,Biochirn.Biophys.Acta[生物化學與生物物理學報]，1442(2-3)：109-119)、小鼠α2(XI)膠原(Tsumaki，等人，1998,J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，273(36)：22861-22864)、D1A多巴胺受體基因(Lee,等人，1997,J.Auton.Nerv.Syst.[自主神經系統雜誌]，74(2-3)：86-90)、似胰島素生長因子II(Wu等人，1997,Biochem.Biophys.Res.Commun.[生物化學與生物物 理研究通訊]，233(1)：221-226)、人血小板內皮細胞粘附分子-1(Almendro等人，1996,J.Immunol.[免疫學雜誌]，157(12)：5411-5421)、肌肉肌酸激酶(MCK)啟動子(Wang等人，Gene Ther.[基因治療]2008年11月；15(22)：1489-99)。
在一些實施方式中，使用合成型啟動子以提供抗人ENTPD2抗體的表現。合成型啟動子可以顯著超過天然啟動子的轉錄效力。例如，可以選擇不被內源性細胞機器或因子關閉或降低活性的合成型啟動子。可以將其他元件(包括反式作用因子結合位點和增強子)插入合成型啟動子中以提高轉錄效率。合成型啟動子可以被合理設計和化學合成，以結合合成型和生物型啟動子的最佳特徵。將合成的寡核苷酸退火並藉由若干過程連接以產生全長化學合成的啟動子。合成型啟動子可以是誘導型或細胞型特異性啟動子。
特定的起始訊號也可能需要編碼序列的有效翻譯。該等訊號包括ATG起始密碼子或相鄰序列。可能需要提供外源翻譯控制訊號，包括ATG起始密碼子。熟悉該項技術者將能夠容易地確定這一點並提供必要的訊號。眾所周知，起始密碼子必須與所需編碼序列的閱讀框在「框內」，以確保整個插入物的翻譯。外源翻譯控制訊號和起始密碼子可以是天然的或合成的。藉由包含合適的轉錄增強子元件可以提高表現效率。
表現可以使用本領域已知的任何合適的宿主細胞，例如，哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。原核和真核表現系統都是廣泛可用的。在一些實施方式中，該表現系統係哺乳動物細胞表現，例如CHO細胞表現系統。在一些實施方式中，可以對核酸進行密碼子優化以促進在期望的宿主細胞中表現。重要的是使用啟動子和/或增強子，該啟動子和/或增強子有效指導DNA區段在選擇用於表現的細胞類型、細胞器和生物體中的表現。分子生物學領域中的技術人員通常知道用於蛋白質表現的啟動子、增強子和細胞類型組合的用途，例如，參見Sambrook等人，(2001)。
大多數轉錄的真核RNA分子將經歷RNA剪接以從初級轉錄物中去除內含子。含有基因組真核生物序列的運載體可能需要供體和/或受體剪接位點以確保用於蛋白質表現的轉錄物的正確加工(參見Chandler等人，1997,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]，94(8)：3596-601)。
本揭露的運載體或構建體通常包含至少一個終止訊號。「終止訊號」或「終止子」由參與RNA聚合酶特異性終止RNA轉錄物的DNA序列組成。因此，在某些實施方式中，考慮了終止RNA轉錄物產生的終止訊號。體內可能需要終止子以達到所需的資訊水平。在真核系統中，終止子區還可以包含特定的DNA序列，該序列允許新轉錄物的位點特異性切割，從而暴露聚腺苷酸化位點。這表示特化的內源聚合酶在轉錄物的3'末端添加一段約200個A殘基(聚A)。用這種聚A尾修飾的RNA分子似乎更穩定並且更有效地翻譯。因此，在涉及真核生物的其他實施方式中，較佳的是終止子包含用於切割RNA的訊號，並且更較佳的是終止子訊號促進資訊的聚腺苷酸化。終止子和/或聚腺苷酸化位點元件可用於增強資訊水平和/或使從盒到其他序列的讀數最小化。預期用於本揭露的終止子包括本文所述或熟悉該項技術者已知的任何已知的轉錄終止子，包括但不限於，例如，基因的終止序列(例如像牛生長激素終止子)或病毒終止序列(例如SV40終止子)。在某些實施方式中，終止訊號可以是缺乏可轉錄或可翻譯的序列，例如由於序列截短。
在表現中，特別是真核表現中，通常將包括聚腺苷酸化訊號以實現轉錄物的適當聚腺苷酸化。不認為聚腺苷酸化訊號的性質對於本揭露的成功實踐係至關重要的，和/或可以採用任何這樣的序列。較佳的實施方式包括方便和/或已知在各種靶細胞中良好地起作用的SV40聚腺苷酸化訊號和/或牛生長激素聚腺苷酸化訊號。聚腺苷酸化可以增加轉錄物的穩定性或可以促進細胞質轉運。
為了在宿主細胞中繁殖運載體，它可以含有一個或多個複製位點的起點(通常稱為「ori」)，該起點係啟動複製的特定核酸序列。可替代地，如果宿主細胞係酵母，則可以使用自主複製序列(ARS)。
在本揭露的某些實施方式中，可以藉由在表現運載體中包括標記在體外或體內鑒定含有本揭露的核酸構建體的細胞。此類標記物將賦予細胞可鑒定的變化，從而允許容易地鑒定含有表現運載體的細胞。通常，可選擇標記係賦予允許選擇的屬性的標記。陽性可選擇標記係其中標記的存在允許其選擇的標記，而陰性可選擇標記係其存在阻止其選擇的標記。陽性可選擇標記的實例係抗藥性標記。
通常，包含藥物選擇標記有助於選殖和鑒定轉化體，例如，賦予對新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、DHFR、GPT、博萊黴素和組胺醇的抗性的基因係有用的選擇標記。除了賦予允許基於條件的實施來區分轉化體的表型的標記之外，還考慮了其他類型的標記，包括可篩選的標記(例如GFP)，該標記係基於比色分析。可替代地，可以使用可篩選的酶，如疱疹單純型病毒的胸苷激酶(HSV-tk)或氯黴素乙醯轉移酶(CAT)。熟悉該項技術者還將知道可能結合FACS分析如何使用免疫標記。所使用的標記物不被認為係重要的，只要它能夠與編碼基因產物的核酸同時表現即可。可選擇和可篩選的標記的其他實例係熟悉該項技術者公知的。
表現運載體還可以提供分泌訊號序列位置，以與藉由插入的ENTPD2-結合抗體序列編碼的多肽形成融合蛋白。更常見的是，所插入的ENTPD2-結合抗體序列在包含在運載體中之前與訊號序列連接。用於接收編碼ENTPD2-結合抗體輕鏈和重鏈可變結構域的序列的運載體有時也編碼恒定區或其部分。這種運載體允許可變區表現為具有恒定區的融合蛋白，從而導致產生完整抗體及其抗原結合片段。通常，這種恒定區係人類的。
表現運載體的產生可利用包含多株位點(MCS)的運載體，該多株位點係含有多個限制酶位點的核酸區域，可以將其中任何一個與標準重組技術結合使用以消化運載體。參加Carbonelli等人，1999,Levenson等人，1998，和Cocea,1997。「限制性內切酶消化」係指用僅在核酸分子中的特定位置處起作用的酶催化切割核酸分子。該等限制性內切酶中的許多係可商購的。熟悉該項技術者廣泛理解該等酶的用途。通常，使用在MCS內切割的限制性內切酶使運載體線性化或片段化，以使外源序列與運載體連接。「連接」係指在兩個核酸片段之間形成磷酸二酯鍵的過程，該等核酸片段可以彼此鄰接或不鄰接。涉及限制性內切酶和連接反應的技術係重組技術領域的技術人員所熟知的。
用於引入含有感興趣的多核苷酸序列的表現運載體的方法根據細胞宿主的類型而變化。例如，氯化鈣轉染通常用於原核細胞，而磷酸鈣處理或電穿孔可用於其他細胞宿主(通常參見Sambrook等人，同上)。其他方法包括例如電穿孔、磷酸鈣處理、脂質體介導的轉化、注射和顯微注射、衝擊法/基因槍、病毒體、免疫脂質體、聚陽離子：核酸軛合物、裸DNA、人工病毒粒子、與皰疹病毒結構蛋白VP22的融合物、藥劑增強的DNA攝取、離體轉導、原生質體融合、逆轉錄轉導、病毒轉染、基於脂質的轉染或其他常規技術。在原生質體融合的情況下，使細胞在培養基中生長並篩選適當的活性。對於重組蛋白的長期高產量生產，通常需要穩定的表現。例如，可以使用含有病毒複製起點或內源性表現元件和可選擇標記基因的表現運載體來製備穩定表現多肽的細胞系。在引入運載體後，可以使細胞在富集培養基中生長1-2天，然後將它們轉換為選擇性培養基。所述可選擇標記的目的是給選擇帶來阻力，並且它的存在允許能在選擇性培養基中成功地表現引入的序列的細胞的生長。可以使用適合於細胞類型的組織培養技術來增殖抗性的、穩定轉染的細胞。用於培養所得轉染細胞和回收產生的抗 體分子的方法和條件係熟悉該項技術者已知的，並且可以根據本說明書中所用的特定表現運載體和哺乳動物宿主細胞進行改變或優化。
本文還提供了包含本文所述的任何一種表現運載體的細胞。在一些實施方式中，本揭露內容的特徵在於包括本文所述的核酸分子的宿主細胞。該等細胞可以是宿主細胞或治療細胞。術語「宿主細胞」和「重組宿主細胞」在本文中可互換地使用，不僅指特定的受試細胞，而且指這種細胞的後代或潛在後代。因為某些變化可在後代中由於突變或環境影響而發生，這種子代可能在事實上與親代細胞不同，但是仍然包括在如在此使用的術語範圍內。
在一個實施方式中，該等宿主細胞被基因工程化以包含編碼抗體分子的核酸。在一個實施方式中，藉由使用表現盒使宿主細胞基因工程化。短語「表現盒」係指核苷酸序列，該序列能夠影響在與該等序列相容的宿主中的基因的表現。此類盒可以包括啟動子，具有或不具有內含子的開放閱讀框和終止訊號。還可以使用在實現表現中必需或有幫助的其他因子，例如誘導型啟動子。
用於包含和表現ENTPD2-結合抗體鏈的宿主細胞可以是，但不限於，真核細胞或原核細胞，例如細菌細胞、昆蟲細胞或人細胞。大腸桿菌係一種可用於選殖和表現本發明多核苷酸的原核宿主。適合使用的其他微生物宿主包括桿菌(如枯草桿菌)和其他腸桿菌科(如沙門氏菌屬、沙雷氏菌屬)以及各種假單胞菌屬的種。在該等原核宿主中，還可以製備表現運載體，其通常含有與宿主細胞相容的表現控制序列(例如，複製的起點)。此外，將存在任何數量的各種公知的啟動子，如乳糖啟動子系統、色胺酸(trp)啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ的啟動子系統。啟動子通常視情況採用操縱基因序列控制表現且具有核糖體結合位點序列等，以用於啟動和完成轉錄和翻譯。其他微生物如酵母也可用於表現本發明的ENTPD2-結合多肽。也可以使用與桿狀病毒運載體組合的昆蟲細胞。合適的昆蟲細胞包括，但不限於Sf9細胞。
在一個實施方式中，哺乳動物宿主細胞用於表現和產生本發明的ENTPD2-結合抗體。例如，它們可以是表現內源免疫球蛋白基因的雜交瘤細胞系(例如，1D6.C9骨髓瘤雜交瘤細胞)或含有外源表現運載體的哺乳動物細胞系(例如，SP2/0骨髓瘤細胞)。該等包括任何正常的必死或正常或異常的永生的動物或人類細胞。例如，已經開發了許多能夠分泌完整免疫球蛋白的合適宿主細胞系，包括CHO細胞系、各種Cos細胞系、HeLa細胞、骨髓瘤細胞系、轉化的B細胞和雜交瘤。利用哺乳動物組織細胞培養表現多肽一般在例如Winnacker,FROM GENES TO CLONES[從基因到殖株]，VCH出版商，紐約，紐約州，1987中討論。哺乳動物宿主細胞的表現運載體可包括表現控制序列如複製的起點、啟動子和增強子(參見例如，Queen，等人，Immunol.Rev.[免疫學評論]89：49-68,1986)和必要的處理資訊位點如核糖體結合位點、RNA剪接位點、多腺苷酸化位點和轉錄終止子序列。該等表現運載體通常含有源自哺乳動物基因或源自哺乳動物病毒的啟動子。合適的啟動子可以是組成型的、細胞類型特異性的、階段特異性的和/或可調製的或可調節的。有用的啟動子包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP pol III啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素誘導型CMV啟動子(如人類即早期CMV啟動子)、組成型CMV啟動子和本領域已知的啟動子-增強子組合。
宿主細胞可用於產生或表現結合人ENTPD2蛋白的抗體。因此，本揭露的特徵還在於使用宿主細胞產生結合人ENTPD2蛋白的抗體的方法。在一個實施方式中，該方法包括在合適的培養基中培養宿主細胞(其中已經引入編碼抗體的重組表現運載體)，從而產生結合人ENTPD2蛋白的抗體。在另一個實施方式中，該方法進一步包括從培養基或宿主細胞中分離抗體。適合的真核細 胞包括，但不限於Vero細胞、HeLa細胞、COS細胞、CHO細胞、HEK293細胞、BHK細胞、和MDCKII細胞。
產生單株抗體
單株抗體(mAb)可藉由多種技術產生，包括常規單株抗體方法，例如Kohler和Milstein,1975 Nature[自然]256：495的標準體細胞雜交技術。可以使用許多用於產生單株抗體的技術，例如B淋巴細胞的病毒或致癌轉化。
用於製備雜交瘤的動物系統係鼠系統。小鼠中的雜交瘤產生係建立良好的程序。免疫方案和分離免疫脾細胞用於融合的技術係本領域已知的。融合配偶體(例如鼠骨髓瘤細胞)和融合程序也是已知的。
在一些實施方式中，本發明的該等抗體係人源化的單株抗體。可以基於如上所述製備的鼠單株抗體的序列製備本發明的嵌合或人源化抗體及其抗原結合片段。編碼重鏈和輕鏈免疫球蛋白的DNA可以從感興趣的鼠雜交瘤中獲得，並使用標準分子生物學技術工程化以含有非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，為了產生嵌合抗體，可以使用本領域已知的方法將鼠可變區與人恒定區連接(參見例如Cabilly等人的美國專利案號4,816,567)。為產生人源化抗體，可以使用本領域已知的方法將鼠科動物CDR區域插入人框架中。參見例如，美國專利案號5,225,539(屬於Winter)和美國專利案號5,530,101；5,585,089；5,693,762和6180370(屬於Queen等人)。
在一些實施方式中，本發明的該等抗體係人單株抗體。可以使用攜帶部分人免疫系統而不是小鼠系統的轉基因或轉染色體小鼠來生成這種針對ENTPD2的人單株抗體。該等轉基因和轉染色體小鼠包括在本文中分別稱為HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，並且在本文中統稱為「人Ig小鼠」。
HuMAb Mouse®(Medarex,Inc.)含有編碼未重排的人重鏈(μ和γ)和κ輕鏈免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因miniloci，以及使內源性μ和κ 鏈基因座失活的靶向突變(參見例如，Lonberg，等人，1994 Nature[自然]368(6474)：856-859)。因此，小鼠表現出小鼠IgM或K的表現降低，並且響應於免疫，引入的人重鏈和輕鏈轉基因經歷類別轉換和體細胞突變以產生高親和力人IgG-κ單株(Lonberg,N.等人，1994同上；在Lonberg,N.,1994 Handbook of Experimental Pharmacology[實驗藥理學手冊]113：49-101中的綜述；Lonberg,N.和Huszar,D.,1995 Intern.Rev.Immunol.[國際免疫學評述]13：65-93，以及Harding,F.和Lonberg,N.,1995 Ann.N.Y.Acad.Sci.[紐約科學學術年報]764：536-546)。HuMAb小鼠的製備和用途以及由這樣的小鼠進行的基因組修飾被進一步描述於以下文獻中：Taylor,L.等人，1992 Nucleic Acids Research[核酸研究]20：6287-6295；Chen,J.等人，1993 International Immunology[國際免疫學]5：647-656；Tuaillon等人，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]94：3720-3724；Choi等人，1993 Nature Genetics[自然遺傳學]4：117-123；Chen,J.等人，1993 EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌]12：821-830；Tuaillon等人，1994 J.Immunol.[免疫學雜誌]152：2912-2920；Taylor,L.等人，1994 International Immunology[國際免疫學]579-591；和Fishwild,D.等人，1996 Nature Biotechnology[自然生物技術]14：845-851。另外參見美國專利案號5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；和5,770,429；全部屬於Lonberg和Kay；美國專利案號5,545,807(屬於Surani等人)；PCT公開案號WO 92103918、WO 93/12227、WO 94/25585、WO 97113852、WO 98/24884和WO 99/45962(均屬於Lonberg和Kay)；以及PCT公開案號WO 01/14424(屬於Korman等人)。
在一些實施方式中，人抗體可以使用在轉基因和轉染色體上攜帶人免疫球蛋白序列的小鼠，如攜帶人重鏈轉基因和人輕鏈轉染色體的小鼠中產 生。此類小鼠，在本文中被稱為「KM小鼠」，在PCT公開WO 02/43478(屬於Ishida等人)中有詳細描述。
仍此外，表現人免疫球蛋白基因的備選轉基因動物系統係本領域可獲得的，並且可用於產生ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段。例如，可以使用被稱為Xenomouse(安根尼克斯公司(Abgenix,Inc.))的可替代的轉基因系統。這樣的小鼠描述於例如，美國專利案號5,939,598；6,075,181；6,114,598；6,150,584和6,162,963(屬於Kucherlapati等人)。
此外，表現人免疫球蛋白基因的備選轉基因動物系統係本領域可獲得的，並且可用於產生本發明的ENTPD2-結合抗體。例如，可以使用攜帶人重鏈轉染色體和人輕鏈轉染色體的被稱為「TC小鼠」的小鼠；這樣的小鼠描述於Tomizuka等人，2000 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]97：722-727中。此外，本領域已經描述了攜帶人重鏈和輕鏈轉染色體的牛(Kuroiwa等人，2002 Nature Biotechnology[自然生物技術]20：889-894)，並且可以用於產生本發明的ENTPD2結合抗體。
還可以使用針對篩選人免疫球蛋白基因文庫的噬菌體展示方法來製備人單株抗體。用於分離人抗體的這種噬菌體展示方法在本領域中建立或在以下實例中描述。參見例如：美國專利案號5,223,409；5,403,484；和5,571,698(屬於Ladner等人)；美國專利案號5,427,908和5,580,717(屬於Dower等人)；美國專利案號5,969,108和6,172,197(屬於McCafferty等人)；以及美國專利案號5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915和6,593,081(屬於Griffiths等人)。
本發明的人單株抗體也可以使用SCID小鼠製備，人免疫細胞已經重建至該SCID小鼠中，使得免疫時可以產生人抗體應答。這種小鼠描述於Wilson等人的美國專利案號5,476,996和5,698,767中。
使經修飾的抗體工程化的方法
如上所述，本文所示的具有VH和VL序列或全長重鏈和輕鏈序列的ENTPD2-結合抗體可用於藉由修飾全長重鏈和/或輕鏈序列、VH和/或VL序列或與其附接的一個或多個恒定區來產生新的ENTPD2-結合抗體。因此，在本發明的另一個方面，本發明的ENTPD2-結合抗體的結構特徵用於產生結構上相關的ENTPD2-結合抗體，其保留本發明的抗體及其抗原結合片段的至少一種功能特性，如與人ENTPD2結合並且抑制人ENTPD2的功能特性。
例如，本發明的抗體及其抗原結合片段的一個或多個CDR區或其突變可以與已知的構架區和/或其他CDR重組組合以產生另外的重組工程化的本發明ENTPD2結合抗體及其抗原結合片段，如上所討論。其他類型的修飾包括先前部分中描述的那些修飾。用於工程化方法的起始材料係本文提供的一種或多種VH和/或VL序列，或其一個或多個CDR區。為了產生工程化抗體，不必實際製備(即，表現為蛋白質)具有本文提供的一種或多種VH和/或VL序列的抗體，或其一個或多個CDR區。相反，一種或多種序列中包含的資訊用作起始材料以產生源自一種或多種原始序列的一種或多種「第二代」序列，然後該一種或多種「第二代」序列進行製備並表現為蛋白質。
還可以藉由篩選具有如US 20050255552所述的固定的CDR3序列或最小必需結合決定簇以及CDR1和CDR2序列的多樣性的抗體文庫來製備改變的抗體序列。所述篩選可以根據適合於篩選來自抗體文庫的抗體的任何篩選技術進行，如噬菌體展示技術。
標準分子生物學技術可用於製備和表現改變的抗體序列。由一種或多種改變的抗體序列編碼的抗體係保留本文所述的ENTPD2-結合抗體的一種、一些或全部功能特性的抗體，所述功能特性包括但不限於與人ENTPD2蛋白特異性結合並穩定人ENTPD2蛋白。
可以使用本領域可獲得的和/或本文描述的標準測定如實例中所述的那些測定(例如，ELISA)評估改變的抗體的功能特性。
在一些實施方式中，使本發明的抗體及其抗原結合片段工程化的方法中，可以沿著ENTPD2-結合抗體編碼序列的全部或部分隨機或選擇性地引入突變，並且可以針對結合活性和/或如本文所述的其他功能特性篩選所得的經修飾的ENTPD2-結合抗體。本領域中已經描述了突變方法。例如，PCT公開WO 02/092780描述了使用飽和誘變、合成連接組裝或其組合用於產生並篩選抗體突變的方法。可替代地，PCT公開WO 03/074679描述了使用計算篩選方法來優化抗體的生理化學特性的方法。
抗體的特徵
本發明的抗體及其抗原結合片段可藉由各種功能測定來表徵。例如，他們可以被表徵為結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)的能力。
抗體與ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)結合的能力可以藉由直接標記感興趣的抗體來檢測，或者所述抗體可以是未標記的並且使用本領域已知的各種夾心式測定形式間接檢測結合。
在一些實施方式中，本發明的ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段阻斷參考ENTPD2-結合抗體結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)或與參考ENTPD2-結合抗體競爭結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)。該等可以是上述完全人或人源化ENTPD2-結合抗體。它們還可以是與參考抗體結合相同表位的其他人、小鼠、嵌合或人源化ENTPD2-結合抗體。阻斷參考抗體結合或與參考抗體競爭結合的能力表明測試中的ENTPD2-結合抗體結合與參考抗體所定義的相同或相似的表位，或結合與參考ENTPD2-結合抗體所結合的表位足夠接近的表位。這種抗體尤其可能具有針對參考抗體鑒定的有利特性。阻斷參考抗體或與參考抗體競爭的能力可以藉由例如競爭結合測定來確定。使用 競爭結合測定，檢查所述測試中的抗體抑制參考抗體與共同抗原(如ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白))的特異性結合的能力。如果過量的測試抗體實質上抑制參考抗體的結合，則測試抗體與參考抗體競爭與抗原的特異性結合。實質性抑制意指測試抗體通常使參考抗體的特異性結合降低至少10%、25%、50%、75%或90%。
許多已知的競爭結合測定可用於評估抗體與參考抗體競爭結合特定蛋白質，該特定蛋白質在這種情況下係ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)。該等測定法包括，例如固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心式競爭測定(參見Stahli等人，Methods in Enzymology[酶學方法]9：242-253,1983)；固相直接生物素-親和素EIA(參見Kirkland等人，J.Immunol.[免疫學雜誌]137：3614-3619,1986)；固相直接標記測定，固相直接標記夾心式測定(參見Harlow和Lane，同上)；使用I-125標記的固相直接標記RIA(參見Morel等人，Molec.Immunol.[分子免疫學]25：7-15,1988)；固相直接生物素-親和素EIA(Cheung等人，Virology[病毒學]176：546-552,1990)；和直接標記的RIA(Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.[斯堪的納維亞免疫學雜誌]32：77-82,1990)。典型地，這種測定涉及使用結合固體表面或細胞的純化抗原，該固體表面或細胞攜帶該等未標記的測試ENTPD2-結合抗體和標記的參考抗體中的任何一種。藉由確定在測試抗體存在下結合固體表面或細胞的標籤的量來測量競爭性抑制。通常，測試抗體過量存在。藉由競爭測定(即，競爭抗體)鑒定的抗體包括與參考抗體結合相同表位的抗體和結合鄰近表位的抗體，該鄰近表位與參考抗體所結合的表位足夠接近以發生位阻。
為了確定所選擇的ENTPD2-結合單株抗體是否結合唯一的表位，可以使用可商購獲得的試劑(例如來自伊利諾州羅克福德的皮爾斯公司(Pierce,Rockford,Ill.)的試劑)將每種抗體生物素化。可以使用ENTPD2蛋白包被的 ELISA平板來進行使用未標記單株抗體和生物素化單株抗體的競爭研究。可以用鏈黴親和素-鹼性磷酸酯酶探針檢測生物素化MAb結合。為確定經純化的ENTPD2-結合抗體的同種型，可以進行同種型ELISA。例如，可用1μg/ml抗人IgG在4℃下過夜包被微量滴定板的孔。在用1%BSA封閉之後，將該等板與1μg/ml或更少的單株ENTPD2-結合抗體或經純化的同種型對照在環境溫度下反應1至2個小時。該等孔然後可以與人IgG1或人IgM特異性鹼性磷酸酯酶軛合的探針反應。然後將板顯色，並對其進行分析，以便確定純化抗體的同種型。
為證明單株ENTPD2-結合抗體與表現ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)的肝細胞的結合，可以使用流式細胞術。簡言之，可以將表現ENTPD2的細胞系(在標準生長條件下生長)與含0.1%BSA和10%胎牛血清的PBS中各種濃度的ENTPD2-結合抗體混合，並在37℃下孵育1小時。洗滌後，細胞與螢光素標記的抗人IgG抗體在與一級抗體染色相同的條件下反應。可藉由FACScan儀器使用光和側向散射特性門控單個細胞來分析樣品。(除了或者替代)流式細胞術測定，還可使用利用螢光顯微術的備選測定法。可將細胞如上所述那樣染色並且藉由螢光顯微術檢查。該方法允許視覺化單個細胞，但可以根據抗原的密度具有降低的靈敏度。
可以藉由蛋白質印跡法進一步測試本發明的ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段與ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)或抗原片段的反應性。簡言之，可以製備經純化的ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)或融合蛋白，或來自表現ENTPD2的細胞的細胞提取物，並且進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳。電泳之後，將分離的抗原轉移至硝酸纖維素膜，用10%胎牛血清進行封閉，並且用有待測試的單株抗體進行探測。可以使用抗人IgG鹼性磷酸酯酶檢測人IgG結合，並且用BCIP/NBT底物片劑(密蘇里州聖路易斯的西格瑪化學公司(Sigma Chem.Co.,St.Louis,Mo.))進行顯色。
可以進一步測試本發明的ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段調節一種或多種ENTPD2活性/功能的能力。
還可以使用實例中描述的任何方法或測定測試本發明的ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段。
治療方法和治療用途
本發明的該等抗體具有許多體外和體內診斷和治療用途，涉及診斷和治療具有ENTPD2依賴性病理生理學的障礙。例如，可以將該等分子給予在培養基、體外或離體的細胞中，或給予人受試者(例如，體內)以用ENTPD2依賴性病理生理學治療、預防和診斷多種障礙。因此，在一個方面，本文提供了藉由向受試者給予治療有效量的以下各項來治療對其有需要的受試者的癌症的方法：本文所述的抗體或其抗原結合片段、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、含有編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體、包含這種核酸或運載體的細胞、或包含這種抗體或抗原結合片段、核酸、運載體或細胞的藥物組成物。在一個方面，本發明提供抑制或減少受試者中腫瘤細胞生長的方法，該方法包括向受試者給予治療有效量的本文揭露的抗人ENTPD2抗體。
在另一個方面，提供了一種治療受試者，例如減輕或改善受試者的過度增生性病狀或障礙(例如，癌症)、例如實體瘤、血液癌、軟組織腫瘤或轉移性病灶的方法。
因此，在一個實施方式中，本發明提供了抑制受試者中腫瘤細胞生長的方法，該方法包括將治療有效量的一種或多種如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子或其功能片段單獨地或與其他藥劑(例如治療劑或治療方式)組合給予受試者。
在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括測定獲得自受試者(例如，受試者的組織活檢)的樣品中ENTPD2的表現水平的步驟。
術語「癌症」意欲包括所有類型的癌性生長或致癌性過程、轉移性組織或惡性轉化的細胞、組織或器官，而不考慮組織病理學類型或侵襲的階段。癌症障礙的實例包括，但不限於實體瘤，軟組織腫瘤和轉移性病變。實體瘤的實例包括各種器官系統的惡性腫瘤，例如肉瘤、腺癌和癌，如影響肝、肺、乳腺、淋巴、胃腸(例如結腸)、泌尿生殖道(例如，腎、尿路上皮細胞)、前列腺和咽的那些。腺癌包括惡性腫瘤，例如大多數結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝癌(肝腫瘤，例如晚期肝腫瘤，具有或不具有病毒感染，例如慢性病毒性肝炎)、肺的非小細胞癌、小腸癌和食道癌。鱗狀細胞癌包括惡性腫瘤，例如在肺、食管、皮膚、頭頸部區域、口腔、肛門和子宮頸中。
還可以使用本發明的方法和組成物治療或預防前述癌症的轉移性病灶。
可以使用本文揭露的抗體分子抑制其生長的示例性癌症包括通常對免疫療法有應答的癌症。用於治療的較佳的癌症的非限制性實例包括胃腸癌(例如胃部(胃)癌、結腸直腸癌(CRC))、食管癌(例如食管鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌和膽管癌。另外，可以使用本文描述的抗體分子來治療難治性或復發性惡性腫瘤。
可以治療的其他癌症的實例包括肺癌(例如，非小細胞肺癌(NSCLC)(例如，具有鱗狀和/或非鱗狀組織學的NSCLC，或NSCLC腺癌))、黑素瘤(例如，晚期黑素瘤)、腎癌(例如，腎細胞癌、例如，透明細胞腎細胞癌)、肝癌、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、前列腺癌、乳癌(例如，不表現雌激素受體、孕酮受體、或Her2/neu的一種、兩種或所有的乳癌，例如，三陰性乳癌)、胰腺癌、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC))、肛門癌、胃食管癌、甲狀腺癌、宮頸癌、淋巴增生性疾病(例如，移植後淋巴增生性疾病)或血液癌、T細胞淋巴瘤、非霍奇金氏氏淋巴瘤、或白血病(例如，骨髓性白血 病)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭癌或頸部癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門癌、胃食管癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、食管癌、小腸癌，內分泌系統癌，甲狀腺癌，甲狀旁腺癌，腎上腺癌，軟組織肉瘤，尿道癌、陰莖癌，慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞性白血病)、兒童實體瘤，淋巴細胞性淋巴瘤，膀胱癌，腎癌(例如腎癌，例如腎細胞癌(RCC)(例如，轉移性RCC或透明細胞腎細胞癌))、輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統瘤(CNS)、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導的癌症(包括由石棉誘導的癌症)，和所述癌症的組合。
在一些實施方式中，此處的療法可用於治療患有(或被鑒定為具有)與感染相關的癌症(例如，病毒或細菌感染)的患者。示例性癌症包括宮頸癌、肛門癌、HPV相關的頭頸部鱗狀細胞癌、HPV相關的食管乳頭狀瘤、HHV6相關的淋巴瘤、EBV相關的淋巴瘤(包括伯基特淋巴瘤)、胃MALT淋巴瘤、其他感染相關的MALT淋巴瘤、HCC、和卡波西氏肉瘤。
在其他實施方式中，癌症係血液惡性腫瘤或癌症，包括但不限於白血病或淋巴瘤。例如，可以將抗人ENTPD2抗體分子或其抗原結合片段單獨地或與其他藥劑(例如治療劑)組合用於治療癌症和惡性腫瘤，包括但不限於例如，急性白血病，包括但不限於但不限於，例如，B細胞急性淋巴細胞性白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴細胞性白血病(「TALL」)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)；一種或多種慢性白血病，包括但不限於例如慢性髓細胞性白血病(CML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；另外的血液癌症或血液病狀包括但不限於，例如B細胞幼淋巴細胞性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤、 伯基特淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴組織增生性病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常和骨髓增生異常綜合征、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞腫瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、和為由骨髓血細胞的無效產生(或發育異常)聯合在一起的各種血液病狀集合的「白血病前期」等。
在一個實施方式中，癌症選自結腸癌(例如結腸直腸癌(CRC)或結腸直腸腺癌)、胃癌(例如胃腺癌，胃癌)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌、膽管癌、肺癌(例如，小細胞肺癌)、乳癌(例如，乳腺癌)或卵巢癌。
在一個實施方式中，癌症係結腸直腸癌(CRC)或結腸直腸腺癌。
在另一個實施方式中，癌症係胃癌。
在又另一個實施方式中，癌症係食管鱗狀細胞癌(ESCC)。
在又另一個實施方式中，癌症過表現ENTPD2(ENTPD2陽性/ENTPD2+)，例如ENTPD2+ CRC、ENTPD2+胃癌(例如，ENTPD2胃癌)、ENTPD2+食管鱗狀細胞癌(ENTPD2+ ESCC)。
可以將以下各項藉由靜脈內、瘤內或皮下途徑給予受試者：本文所述的抗體或其抗原結合片段；編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸；或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體或細胞；或包含這種抗體或抗原結合片段、核酸、運載體、或細胞的藥物組成物。在一些實施方式中，將這種抗體或其片段、核酸、運載體、細胞或藥物組成物靜脈內給予。
還提供的是用於在治療癌症中使用的本文所述的抗體或其抗原結合片段、包含這種抗體或抗原結合片段的藥物組成物、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體。
本揭露還包括在生產用於治療癌症的藥物中使用的本文所述的抗體或其抗原結合片段、包含這種抗體或抗原結合片段的藥物組成物、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體。
組合療法
上述各種處理可以與另一種處理組合。本揭露還涉及藥物組成物，該藥物組成物包含根據本文所述的本揭露的組合，特別是與其在癌症治療中同時、分別或相繼使用(尤其是共同活性)的說明書一起。例如，可以將本文所述的ENTPD2抗體或其抗原結合片段與以下的一種或多種組合：護理治療的標準品(例如，針對癌症)、另一種抗體分子、免疫調節劑(例如，共刺激性分子的活化劑或共抑制性分子的抑制劑)；疫苗，例如治療性癌症疫苗；或如下所述的其他形式的細胞療法。
因此，治療本文所述的癌症的方法可以進一步包括將至少一種另外的治療劑給予對其有需要的受試者。本文還提供了治療癌症的方法，該方法包括將至少兩種另外的治療劑給予對其有需要的受試者。
術語「組合」係指一種劑量單位形式的固定組合，或組合給予(其中本發明的化合物與至少一種組合配偶體(partner)(例如下文所解釋的至少一種其他的藥物，也稱為一種或多種「治療劑」或「共同藥劑(co-agent)」)可以在同一時間獨立地給予或在時間間隔內分開地給予，特別是在該等時間間隔允許組合配偶體顯示協作，例如協同效應的情況下)。單個組分可以包裝在一個套組(kit)中或分開包裝。可在給予之前將一種或兩種組分(例如粉末或液體)重構或稀釋至所希望的劑量。如本文所用，術語「共同給予」或「組合給予」等意在涵蓋將所選擇的組合配偶體給予至對其有需要的單個受試者(例如患者)，並且旨在包括其中藥劑不一定藉由相同的給予途徑給予或同時給予的治療方 案。如本文所用，術語「藥物組合」意指由多於一種治療劑的混合或組合所產生的產品，並且包括治療劑的固定和非固定組合兩者。術語「固定組合」意指治療劑(例如，本發明的化合物和組合配偶體)以單一實體或劑量的形式同時地給予至患者。術語「非固定組合」意指治療劑(例如，本發明的化合物和至少一種組合配偶體)作為分開的實體同時地、並行地或依序地給予至患者(沒有特定的時間限制)，其中這種給予在患者體內提供治療有效水平的至少兩種化合物。後者也適用於雞尾酒療法，例如三種或更多種治療劑的給予。
如本文所用，術語「藥物組成物」係指在一個劑量單位形式中的固定組合或用於組合給予的非固定組合或套組，其中兩種或更多種治療劑可以在同一時間獨立地給予或在時間間隔內分開地給予，特別是在該等時間間隔允許組合配偶體顯示協作，例如協同效應的情況下。
術語「組合療法」係指給予兩種或更多種治療劑以治療在本揭露中描述的所治療的病情或障礙。這種給予涵蓋以基本上同時的方式共同給予該等治療劑，如以具有固定比率活性成分的單個膠囊給予。可替代地，這種給予涵蓋在多個容器中或在每種活性成分的獨立容器(例如，片劑、膠囊、粉末、和液體)中共同給予。可以將粉末和/或液體在給予之前重構或稀釋到所需的劑量。此外，這類給予也涵蓋在大致相同的時間或在不同的時間順序使用每種類型的治療劑。在任何一種情況下，治療方案將在治療本文所述的病症或障礙方面提供藥物組合的有益作用。
可以將抗人ENTPD2抗體分子與其他療法組合使用。例如，組合療法可包括與一種或多種另外的治療劑共同配製和/或共同給予的本發明的組成物，例如，一種或多種抗癌劑、細胞毒劑或細胞抑制劑、激素治療、疫苗和/或其他免疫療法。在其他實施方式中，抗體分子與其他治療性治療方式組合給予， 包括手術、放射、冷凍手術和/或熱療。此類組合療法可以有利地使用較低劑量的所給予的治療劑，從而避免與各種單一療法相關的可能的毒性或併發症。
「與......組合」並不旨在暗示必需同時給予該等治療劑或治療性藥劑和/或配製其用於一起遞送，儘管該等遞送方法也在本文所述的範圍內。
抗人ENTPD2抗體分子可以與至少一種或多種其他另外的療法或治療劑同時、在其之前或之後給予。可以按任何順序給予抗人ENTPD2抗體分子和其他至少一種藥劑或治療方案。通常，每種藥劑將以針對該藥劑確定的劑量和/或日程表給予。還應理解，該組合中使用的至少一種另外的治療劑可以以單一組成物一起給予或以不同組成物分開給予。通常，預期組合中使用的其他治療劑的以不超過它們單獨使用時的水平使用。在一些實施方式中，組合中使用的水平將低於單獨使用的水平。
因此，本揭露尤其涉及用於同時、分開或順序使用的組合產品，例如組合製劑或藥物固定組合，或該等製劑和組合的組合。
示例性腺苷A2A受體拮抗劑
在某些實施方式中，將本文所述的該等抗人ENTPD2分子與至少一種腺苷A2A受體(A2AR)拮抗劑組合給予。在某些實施方式中，本文所述的該等抗人ENTPD2分子與至少兩種腺苷A2A受體(A2AR)拮抗劑組合給予。示例性A2AR拮抗劑包括，但不限於例如，PBF509/NIR178(帕羅生物製藥公司/諾華公司(Palobiofarma/Novartis))、CPI444/V81444(卡沃斯公司/基因泰克公司(Corvus/Genentech))、AZD4635/HTL-1071(阿斯利康公司/海普泰公司(AstraZeneca/Heptares))、維帕迪南(Redox/Juno)、GBV-2034(Globavir)、AB928(阿克斯生物科學公司(Arcus Biosciences))、茶鹼、伊曲茶鹼(協和發酵工業株式會社(Kyowa Hakko Kogyo))、托紮迪南/SYN-115(Acorda)、KW-6356(協和發酵工業株式會社(Kyowa Hakko Kogyo))、ST-4206(理地 安生物科學公司(Leadiant Biosciences))、和普瑞迪南/SCH420814(默克公司/謝林公司(Merck/Schering))。
在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係PBF509/NIR178。PBF509/NIR178和其他A2AR拮抗劑在US 8,796,284和WO 2017/025918中揭露，該等申請藉由引用以其全文併入。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺、或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：
Figure 108118358-A0202-12-0193-233
，或其藥學上可接受的鹽。
在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係CPI444/V81444。CPI-444和其他A2AR拮抗劑在WO 2009/156737中揭露，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係(S )-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係(R )-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H -[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：
Figure 108118358-A0202-12-0193-234
，或其藥學上可接受的鹽。
在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係AZD4635/HTL-1071。A2AR拮抗劑在WO 2011/095625中揭露，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三
Figure 108118358-A0202-12-0194-165
-3-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：
Figure 108118358-A0202-12-0194-235
，或其藥學上可接受的鹽。
在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係ST-4206(理地安生物科學公司(Leadiant Biosciences))。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係在US 9,133,197中描述的A2AR拮抗劑，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：
Figure 108118358-A0202-12-0194-236
，或其藥學上可接受的鹽。
在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係在US 8114845、US 9029393、US 20170015758、或US 20160129108中描述的A2AR拮抗劑，藉由引用以其全文並於本文中。
在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係伊曲茶鹼(CAS登記號：155270-99-8)。伊曲茶鹼也稱為KW-6002或8-[(E)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基]- 1,3-二乙基-7-甲基-3,7-二氫-1H-嘌呤-2,6-二酮。例如，在LeWitt等人，(2008)Annals of Neurology [神經病學年鑒]63(3)：295-302)中揭露了伊曲茶鹼。
在某些實施方式中，該A2aR拮抗劑係托紮迪南(Biotie)。托紮迪南也稱為SYN115或4-羥基-N-(4-甲氧基-7-
Figure 108118358-A0202-12-0195-166
啉-4-基-1,3-苯并噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲醯胺。托紮迪南阻斷在A2a受體上的內源性腺苷的作用，導致多巴胺對D2受體的作用增強，並抑制mGluR5受體上的穀胺酸的作用。在一些實施方式中，該A2aR拮抗劑係普瑞迪南(CAS登記號：377727-87-2)。普瑞迪南也稱為SCH 420814或2-(2-呋喃基)-7-[2-[4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-1-哌
Figure 108118358-A0202-12-0195-167
基]乙基]7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺。普瑞迪南被開發為一種藥物，可作為腺苷A2A受體的有效和選擇性拮抗劑。
在某些實施方式中，該A2aR拮抗劑係維帕迪南。維帕迪南也稱為BIIB014、V2006、或3-[(4-胺基-3-甲基苯基)甲基]-7-(呋喃-2-基)三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。
其他示例性A2aR拮抗劑包括例如，ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943、或ZM-241,385。
在一些實施方式中，A2aR拮抗劑係A2aR途徑拮抗劑，例如，CD-73抑制劑，例如，抗CD73抗體。藉由CD73靶向腺苷的細胞外產生可降低腺苷的免疫抑制作用。抗CD73抗體具有一系列活性，例如，抑制CD73外核苷酸酶活性，減輕AMP介導的淋巴細胞抑制，以及抑制同基因腫瘤生長。抗CD73抗體可以驅動腫瘤微環境中骨髓和淋巴浸潤白細胞群的變化。該等變化包括例如CD8效應細胞和活化的巨噬細胞的增加，以及髓源性抑制細胞(MDSC)和調節性T淋巴細胞的比例的減少。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係完整的抗體分子或其抗原結合片段。在一些實施方式中，該抗CD73抗體分子選自表2中列出的任何抗 體分子。在其他實施方式中，抗CD73抗體分子包含如在表2中揭露的重鏈可變結構域序列、輕鏈可變結構域序列、或二者。在某些實施方式中，該抗CD73抗體分子結合CD73蛋白質並減少例如，抑制或拮抗CD73(例如，人CD73)的活性。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2016/075099中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係MEDI 9447，例如，如揭露於WO 2016/075099中。MEDI 9447的可替代的名稱包括殖株10.3或73combo3。MEDI 9447係IgG1抗體，該抗體抑制例如，拮抗CD73的活性。MEDI 9447和其他抗CD73抗體分子還揭露於WO 2016/075176和US 2016/0129108中，該等申請的全部內容藉由引用以其全文並於本文中。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含MEDI 9477的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。MEDI 9477的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：295(參見表2)。MEDI 9477的輕鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：296(參見表2)。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2016/081748中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係11F11，例如，如揭露於WO 2016/081748中。11F11係IgG2抗體，該抗體抑制例如，拮抗CD73的活性。衍生自11F11的抗體，例如，CD73.4和CD73.10；11F11的殖株，例如，11F11-1和11F11-2；和揭露於WO 2016/081748和US 9,605,080中的其他抗CD73抗體分子，該等申請的全部內容藉由引用以其全文並於本文中。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含11F11-1或11F11-2的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。11F11-1的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：302(參見表2)。11F11-1的輕鏈可變結構域的胺基酸 序列被揭露為SEQ ID NO：303(參見表2)。11F11-2的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：299(參見表2)。11F11-2的輕鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：300(參見表2)。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含11F11-1或11F11-2的重鏈、輕鏈、或二者。11F11-1的重鏈和輕鏈胺基酸序列分別被揭露為SEQ ID NO：297和SEQ ID NO：301(參見表2)。11F11-2的重鏈和輕鏈胺基酸序列分別被揭露為SEQ ID NO：294和SEQ ID NO：298(參見表2)。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在例如，US 9,605,080中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係CD73.4，例如，如揭露於US 9,605,080。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含CD73.4的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。CD73.4的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：304(參見表2)。11F11-2的輕鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：305(參見表2)。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係CD73.10，例如，如揭露於US 9,605,080中。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含CD73.10的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。CD73.10的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：306(參見表2)。CD73.10的輕鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：307(參見表2)。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2009/0203538中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係067-213，例如，如揭露於WO 2009/0203538中。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含067-213的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。067-213的重鏈可變結構域的胺基酸序列被揭 露為SEQ ID NO：308(參見表2)。067-213的輕鏈可變結構域的胺基酸序列被揭露為SEQ ID NO：309(參見表2)。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在US 9,090,697中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係TY/23，例如，如揭露於US 9,090,697中。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含TY/23的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2016/055609中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含WO 2016/055609中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2016/146818中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在WO 2016/146818中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2004/079013中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在WO 2004/079013中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2012/125850中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在WO 2012/125850中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2015/004400中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中， 抗CD73抗體分子包含在WO 2015/004400中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在WO 2007/146968中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在WO 2007146968中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在US 2007/0042392中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在US 2007/0042392中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在US 2009/0138977中揭露的抗CD73抗體，該申請藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在US 2009/0138977中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，該抗CD73抗體分子係在Flocke等人，Eur J Cell Biol.[歐洲細胞生物學雜誌]1992年6月；58(1)：62-70中揭露的抗CD73抗體，該文獻藉由引用以其全文併入本文。在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在Flocke等人，Eur J Cell Biol.[歐洲細胞生物學雜誌]1992年6月；58(1)：62-70中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，抗CD73抗體分子係在Stagg等人，PNAS.[美國國家科學院院刊]2010年1月107(4)：1547-1552中揭露的抗CD73抗體，該文獻藉由引用以其全文併入本文。在一些實施方式中，抗CD73抗體分子係如在Stagg等人中揭露的TY/23或TY11.8.在一個實施方式中，抗CD73抗體分子包含在Stagg等人中揭露的抗CD73抗體的重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、或二者。
在一個實施方式中，將如本文所述的抗人ENTPD2抗體與例如如本文所述的抗CD73抗體分子和A2AR拮抗劑組合給予，該拮抗劑視情況選自下組，該組由以下各項組成：PBF509/NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206、和普瑞迪南/SCH 420814。
Figure 108118358-A0202-12-0200-237
Figure 108118358-A0202-12-0201-238
Figure 108118358-A0202-12-0202-239
本文揭露的組合療法中使用的抗CD73抗體分子可以包括表2中公開的任何VH/VL序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與其具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)。CD73抗體的示例性序列包括：(i)分別針對MEDI 9447，SEQ ID NO：295-296的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：295-296具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；(ii)分別針對11F11-2，SEQ ID NO：297-298的HC和LC胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：297-298具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；(iii)分別針對11F11-2，SEQ ID NO：299-300的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：299-300具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；(iv)分別針對11F11-1，SEQ ID NO：297和301的HC和LC胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：297和301具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；(v)分別針對11F11-1，SEQ ID NO：302-303的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：302-303具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；(vi)分別針對CD73.4，SEQ ID NO：304-305的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：304-305具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)； (vii)分別針對CD73.10，SEQ ID NO：306-307的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：306-307具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)；或(viii)分別針對067-213，SEQ ID NO：308-309的VH和VL胺基酸序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與SEQ ID NO：308-309具有至少80%、85%、90%、95%、99%或更高同一性)。
如本文所述的抗人ENTPD2抗體可以與以下各項組合：共抑制性分子的抑制劑(例如，PD-1抑制劑(例如，抗PD-1抗體分子)、PD-L1抑制劑(例如，抗PD-L1抗體分子)、PD-L2抑制劑(例如，抗PD-L2抗體分子)、LAG-3抑制劑(例如，抗LAG-3抗體分子)、TIM-3抑制劑(例如，抗TIM-3抗體分子))、共刺激性分子的活化劑(例如，GITR激動劑(例如，抗GITR抗體分子))、細胞介素(例如，IL-15與IL-15受體α(IL-15Ra)的可溶形式複合)、或其任何組合。
PD-1抑制劑
在某些實施方式中，將如本文所述的ENTPD2抗體與PD-1抑制劑組合給予。在一些實施方式中，PD-1抑制劑選自PDR001(諾華公司(Novartis))、納武單抗(百時美施貴寶公司)、派姆單抗(默克公司(Merck & Co))、匹地利珠單抗(CureTech公司)、MEDI0680(醫學免疫公司)、REGN2810(再生元公司(Regeneron))、TSR-042(Tesaro公司)、PF-06801591(輝瑞製藥公司(Pfizer))、BGB-A317(百濟神州公司(Beigene))、BGB-108(百濟神州公司)、INCSHR1210(因賽特公司(Incyte))、或AMP-224(Amplimmune公司)。
示例性PD-1抑制劑
在一個實施方式中，該PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子。在一個實施方式中，PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子，如題為「PD-1的抗體分子及其用途」 的2015年7月30日公佈的US 2015/0210769中所述，該文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表3(例如，來自表3中揭露的BAP049-殖株-E或BAP049-殖株-B的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列編碼。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特定義(例如，如表3中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據喬西亞定義(例如，如在表3中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特和喬西亞二者的組合CDR定義(例如，如表3中所列出的)。在一個實施方式中，VH CDR1的卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO：541)。在一個實施方式中，相對於表3中所示的胺基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列編碼的，CDR中的一個或多個(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：501的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：502的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：503的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：510的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：511的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：512的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表3中。
在一個實施方式中，抗體分子包含：含有由SEQ ID NO：524的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：525的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：526的核苷酸序列編碼的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO：529的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO：530的核苷酸序列編碼的 VLCDR2、和由SEQ ID NO：531的核苷酸序列編碼的VLCDR3的VL，各自揭露於表3中。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：506的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：506具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：520的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：520具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：516的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：516具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：506的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：520的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：506的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：516的胺基酸序列的VL。
在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：507的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：507具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：521或517的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：521或517具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：507的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：521或517的核苷酸序列編碼的VL。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：508的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：508具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：522的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：522具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗 PD-1抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：518的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：518具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：508的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：522的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：508的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：518的胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：509的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：509具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：523或519的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：523或519具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：509的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：523或519的核苷酸序列編碼的輕鏈。
本文所述的該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2015/0210769中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0206-240
Figure 108118358-A0202-12-0207-241
Figure 108118358-A0202-12-0208-242
Figure 108118358-A0202-12-0209-243
Figure 108118358-A0202-12-0210-244
Figure 108118358-A0202-12-0211-245
其他示例性PD-1抑制劑
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係納武單抗(Bristol-Myers Squibb)，也稱為MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558、或OPDIVO®。納武單抗(殖株5C4)和其他抗PD-1抗體揭露在US 8,008,449和WO 2006/121168中，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下的一種或多種：納武單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表4中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子係派姆單抗(默克公司(Merck & Co))，也稱為Lambrolizumab、MK-3475、MK03475、SCH-900475、或KEYTRUDA®。派姆單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Hamid,O.等人，(2013)New England Journal of Medicine [新英格蘭醫學期刊]369(2)：134-44；US 8,354,509；和WO 2009/114335中，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下的一種或多種：派姆單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表4中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子係匹地利珠單抗(CureTech)，也稱為CT-011。匹地利珠單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Rosenblatt,J.等人，(2011)J Immunotherapy [免疫療法雜誌]34(5)：409-18；US 7,695,715；US 7,332,582；和US 8,686,119中，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下的一種或多種：匹地利珠單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表4中所揭露的。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係MEDI0680(醫學免疫公司)，也稱為AMP-514。MEDI0680和其他抗PD-1抗體在US 9,205,148和WO 2012/145493中揭露，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：MEDI0680的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係REGN2810(再生元公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：REGN2810的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係PF-06801591(輝瑞公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：PF-06801591的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係BGB-A317或BGB-108(百濟神州公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：BGB-A317或BGB-108的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係INCSHR1210(Incyte公司)，也稱為INCSHR01210或SHR-1210。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：INCSHR1210的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係TSR-042(Tesaro公司)，也稱為ANB011。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：TSR-042的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
其他已知的抗PD-1抗體包括描述於例如以下中的那些：WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731、和US 9,102,727，該等文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體係與本文所述的抗PD-1抗體之一競爭與PD-1上的相同表位結合和/或結合PD-1上的相同表位的抗體。
在一個實施方式中，PD-1抑制劑係例如如美國8,907,053中所述抑制PD-1傳訊途徑的肽，該文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，PD- 1抑制劑係免疫粘附素(例如包含融合到恒定區(例如免疫球蛋白序列的Fc區)的PD-L1或PD-L2的細胞外或PD-1結合部分的免疫粘附素)。在一個實施方式中，該PD-1抑制劑係AMP-224(B7-DCIg(安普利公司(Amplimmun))，例如， 揭露於WO 2010/027827和WO 2011/066342中，藉由引用以其全文併入)。
Figure 108118358-A0202-12-0214-246
在一個實施方式中，將如本文所述的抗人ENTPD2抗體與如本文所述的至少一種PD1抑制劑和如本文所述的至少一種A2A受體拮抗劑組合給予。
PD-L1抑制劑
在某些實施方式中，將如本文所述的抗人ENTPD2抗體與PD-L1抑制劑組合給予。該PD-L1抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該PD-L1抑制劑選自FAZ053(諾華公司(Novartis))；阿特利珠單抗，也稱為Tecentriq ® (基因泰克公司/羅氏公司(Genentech/Roche))；阿維魯單抗，也稱為Bavencio®(默克雪蘭諾公司(Merck Serono)和輝瑞製藥公司(Pfizer))；度伐魯單抗，也稱為Imfinzi®(米迪繆尼有限公司/阿斯利康公司(MedImmune/AstraZeneca))；或BMS-936559(百時美施貴寶(Bristol-Myers Squibb))。
示例性PD-L1抑制劑
在一個實施方式中，該PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體分子。在一個實施方式中，該PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體分子，如在題為「PD-L1的抗體分子及其用途」的2016年4月21日公開的US 2016/0108123中所揭露，該文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表5(例如，來自表5中揭露的BAP058-殖株O或BAP058-殖株N的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表5中所示的核苷酸序列編碼。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特定義(例如，如表5中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據喬西亞定義(例如，如在表5中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特和喬西亞二者的組合CDR定義(例如，如表5中所列出的)。在一個實施方式中，VH CDR1的 卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GYTFTSYWMY(SEQ ID NO：647)。在一個實施方式中，相對於表5中所示的胺基酸序列，或由表5中所示的核苷酸序列編碼的，CDR中的一個或多個(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：601的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：602的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：603的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：609的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：610的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：611的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表5中。
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有由SEQ ID NO：628的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：629的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：630的核苷酸序列編碼的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO：633的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO：634的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO：635的核苷酸序列編碼的VLCDR3的VL，各自揭露於表5中。
在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：606的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：606具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：616的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：616具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：620的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：620具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：624的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：624具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：606的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：616的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：620的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：624的胺基酸序列的VL。
在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：607的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：607具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：617的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：617具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：621的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：621具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：625的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：625具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：607的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：617的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：621的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：625的核苷酸序列編碼的VL。
在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：608的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：608具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：618的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：618具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：622的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：622具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一 個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：626的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：626具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：608的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：618的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：622的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：626的胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：615的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：615具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：619的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：619具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：623的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：623具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：627的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：627具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：615的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：619的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：623的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：627的核苷酸序列編碼的輕鏈。
本文所述的該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2016/0108123中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0218-247
Figure 108118358-A0202-12-0219-248
Figure 108118358-A0202-12-0220-249
Figure 108118358-A0202-12-0221-250
Figure 108118358-A0202-12-0222-251
Figure 108118358-A0202-12-0223-252
Figure 108118358-A0202-12-0224-253
其他示例性PD-L1抑制劑
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係阿特利珠單抗(基因泰克公司/羅氏公司(Genentech/Roche))，也稱為MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70、或TECENTRIQ TM 。阿特利珠單抗和其他抗PD-L1抗體在US 8,217,149中揭露，該等抗體藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下的一種或多種：阿特利珠單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表6中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係阿維魯單抗(默克雪蘭諾公司(Merck Serono)和輝瑞製藥公司(Pfizer))，也稱為MSB0010718C或Bavencio®。阿維魯單抗和其他抗PD-L1抗體揭露在WO 2013/079174中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下的一種或多種：阿維魯單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表6中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係度伐魯單抗(米迪繆尼有限公司/阿斯利康公司(MedImmune/AstraZeneca))，也稱為MEDI4736或Imfinzi®。度伐魯單抗和其他抗PD-L1抗體揭露在US 8,779,108中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下的一種或多種：度伐魯單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表6中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係BMS-936559(百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb))，也稱為MDX-1105或12A4。BMS-936559和其他抗PD-L1抗體揭露在US 7,943,743和WO 2015/081158中，該等申請藉由引起以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下的一種或多種：BMS-936559的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表6中所揭露的。
其他已知的抗PD-L1抗體包括描述於例如以下中的那些：WO 2015/181342、WO 2014/100079、WO 2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO 2013/079174、WO 2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927、和US 9,175,082，該等文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，抗PD-1抗體係與本文所述的抗PD-L1抗體之一競爭與PD-L1上的相同表位結合和/或結合PD-L1上的相同表位的抗體。
Figure 108118358-A0202-12-0225-254
Figure 108118358-A0202-12-0226-255
在一個實施方式中，如本文所述的抗人ENTPD2抗體與如本文所述的至少一種PD-L1抑制劑和如本文所述的至少一種A2A受體拮抗劑組合給予。
LAG-3抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體與LAG-3抑制劑組合給予。該LAG-3抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該LAG-3抑制劑選自LAG525(諾華公司(Novartis))、BMS-986016(百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb)、TSR-033(Tesaro公司)、MK-4280(默克公司(Merck & Co))、或REGN3767(再生元公司(Regeneron))。
示例性LAG-3抑制劑
在一個實施方式中，該LAG-3抑制劑係抗LAG-3抗體分子。在一個實施方式中，該LAG-3抑制劑係抗LAG-3抗體分子，如在題為「LAG-3的抗體 分子及其用途」的2015年9月17日公開的US 2015/0259420中所揭露，該文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表7(例如，來自表7中揭露的BAP050-殖株I或BAP050-殖株J的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表7中所示的核苷酸序列編碼。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特定義(例如，如表7中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據喬西亞定義(例如，如表7中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特和喬西亞二者的組合CDR定義(例如，如表7中所列出的)。在一個實施方式中，VH CDR1的卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GFTLTNYGMN(SEQ ID NO：766)。在一個實施方式中，相對於表7中所示的胺基酸序列，或由表7中所示的核苷酸序列編碼的，CDR中的一個或多個(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：701的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：702的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：703的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：710的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：711的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：712的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表7中。
在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：VH，該VH含有由SEQ ID NO：736或737的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：738或739的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：740或741的核苷酸序列編碼的VHCDR3；以及VL，該VL含有由SEQ ID NO：746或747的核苷酸序列編碼的 VLCDR1、由SEQ ID NO：748或749的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO：750或751的核苷酸序列編碼的VLCDR3，該等序列各自揭露於表7中。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：VH，該VH含有由SEQ ID NO：758或737的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：759或739的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：760或741的核苷酸序列編碼的VHCDR3；以及VL，該VL含有由SEQ ID NO：746或747的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO：748或749的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO：750或751的核苷酸序列編碼的VLCDR3，該等序列各自揭露於表7中。
在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：706的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：706具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：718的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：718具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：724的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：724具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：730的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：730具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：706的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：718的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：724的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：730的胺基酸序列的VL。
在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：707或708的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：707或708具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該 VL由SEQ ID NO：719或720的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：719或720具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：725或726的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：725或726具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：731或732的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：731或732具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：707或708的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：719或720的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：725或726的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：731或732的核苷酸序列編碼的VL。
在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：709的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：709具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：721的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：721具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：727的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：727具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：733的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：733具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：709的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：721的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗LAG-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：727的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：733的胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：716或717的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：716或717具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：722或723的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：722或723具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：728或729的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：728或729具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：734或735的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：734或735具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：716或717的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：722或723的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：728或729的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：734或735的核苷酸序列編碼的輕鏈。
本文所述的該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2015/0259420中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0230-256
Figure 108118358-A0202-12-0231-257
Figure 108118358-A0202-12-0232-258
Figure 108118358-A0202-12-0233-259
Figure 108118358-A0202-12-0234-260
Figure 108118358-A0202-12-0235-261
Figure 108118358-A0202-12-0236-262
Figure 108118358-A0202-12-0237-263
Figure 108118358-A0202-12-0238-264
其他示例性LAG-3抑制劑
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係BMS-986016(百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb))，也稱為BMS986016。BMS-986016和其他 抗LAG-3抗體揭露在WO 2015/116539和US 9,505,839中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：BMS-986016的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表8中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係TSR-033(Tesaro公司)。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：TSR-033的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係MK-4280(默克公司(Merck & Co))。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：MK-4280的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係REGN3767(再生元公司(Regeneron))。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：REGN3767的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係IMP731或GSK2831781(GSK和普瑞馬生物醫藥公司(Prima BioMed))。IMP731和其他抗LAG-3抗體揭露在WO 2008/132601和US 9,244,059中，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：IMP731的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表8中所揭露的。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：GSK2831781的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子係IMP761(普瑞馬生物醫藥公司(Prima BioMed))。在一個實施方式中，該抗LAG-3抗體分子包含以下的一種或多種：IMP761的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
其他已知的抗LAG-3抗體可以在例如，WO 2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO 2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839中描述的那些，該等文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，抗LAG-3抗體係與本文所述的抗LAG-3抗體之一競爭與LAG-3上的相同表位結合和/或結合LAG-3上的相同表位的抗體。
在一個實施方式中，該抗LAG-3抑制劑係可溶性LAG-3蛋白質，例如，IMP321(普瑞馬生物醫藥公司(Prima BioMed))，例如，如揭露於WO 2009/044273中，藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0240-265
Figure 108118358-A0202-12-0241-266
TIM-3抑制劑
在某些實施方式中，將如本文所述的抗人ENTPD2抗體與TIM-3抑制劑組合給予。該TIM-3抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該TIM-3抑制劑選自MBG453(諾華公司(Novartis)、TSR-022(Tesaro公司)或LY3321367(禮來製藥公司(Eli Lilly))。
示例性TIM-3抑制劑
在一個實施方式中，該TIM-3抑制劑係抗TIM-3抗體分子。在一個實施方式中，該TTM-3抑制劑係抗TIM-3抗體分子，如在題為「TIM-3的抗體分子及其用途」的2015年8月6日公開的US 2015/0218274中所揭露，該文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表9(例如，來自表9中揭露的ABTIM3-hum11或ABTIM3-hum03的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表9中所示的核苷酸序列編碼。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特定義(例如，如表9中所列出的)。在一些實施方式中，該等CDR根據喬西亞定義(例如，如表9中所列出的)。在一個實施方式中，相對於表9中所示的胺基酸序列，或由表9中所示的核苷酸序列編碼的，CDR中的一個或多個(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：801的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：802的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：803的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：810的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：811的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：812的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表9中。在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：801的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：820的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：803的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：810的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：811的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：812的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表9中。
在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：806的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：806具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：816的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：816具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：822的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：822具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：826的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：826具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：806的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：816的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：822的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：826的胺基酸序列的VL。
在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：807的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：807具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：817的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：817具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：823的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：823具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：827的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：827具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：807的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：817的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：823的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：827的核苷酸序列編碼的VL。
在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：808的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：808具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：818的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：818具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：824的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：824具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：828的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：828具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：808的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：818的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施 方式中，抗TIM-3抗體分子包含：含有SEQ ID NO：824的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：828的胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：809的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：809具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：819的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：819具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：825的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：825具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：829的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：829具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：809的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：819的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：825的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：829的核苷酸序列編碼的輕鏈。
本文所述的該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2015/0218274中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0244-267
Figure 108118358-A0202-12-0245-268
Figure 108118358-A0202-12-0246-269
Figure 108118358-A0202-12-0247-270
Figure 108118358-A0202-12-0248-271
其他示例性TIM-3抑制劑
在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子係TSR-022(AnaptysBio/Tesaro)。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含以下中的一個或多個：TSR-022的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。在一個實施方式中，抗TIM-3抗體分子包含以下中的一個或多個：APE5137或APE5121的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈 或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表10中所揭露的。APE5137、APE5121和其他抗TIM-3抗體在WO 2016/161270中揭露，該等抗體藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子係LY3321367(禮來製藥公司(Eli Lilly))。在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含以下的一種或多種：LY3321367的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子係抗體殖株F38-2E2。在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體分子包含以下的一種或多種：F38-2E2的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
其他已知的抗TIM-3抗體包括例如， 在WO 2016/111947、WO 2016/071448、WO 2016/144803、US 8,552,156、US 8,841,418、和US 9,163,087中描述的那些，該等申請藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗TIM-3抗體係與本文所述的抗TIM-3抗體之一競爭與TIM-3上的相同表位結合和/或結合TIM-3上的相同表位的抗體。
Figure 108118358-A0202-12-0249-272
CTLA-4抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與CTLA-4抑制劑組合給予。該CTLA-4抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該CTLA-4抑制劑係艾匹利木單抗(Yervoy® ，百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb))或曲美利木單抗(輝瑞製藥公司(Pfizer))。抗體艾匹利木單抗和其他抗CTLA-4抗體揭露在US 6,984,720中，藉由引用並於本文中。抗體曲美利木單抗和其他抗CTLA-4抗體揭露在US 7,411,057中，藉由引用並於本文中。
GITR激動劑
在某些實施方式中，將如本文所述的抗人ENTPD2抗體與GITR激動劑組合給予。該GITR激動劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該GITR激動劑係GWN323(諾華公司(Novartis))、BMS-986156(BMS)、MK-4166或MK-1248(默克公司(Merck))、TRX518(利普治療公司(Leap Therapeutics))、INCAGN1876(Incyte/Agenus)、AMG 228(美商安進公司(Amgen))或INBRX-110(Inhibrx公司)。
示例性抗GITR抗體分子
在一個實施方式中，該GITR激動劑係抗GITR抗體分子。在一個實施方式中，該GITR激動劑係抗GITR抗體分子，如題為「用於增強免疫反應和癌症治療的組成物和方法」的2016年4月14日公佈的WO 2016/057846中所述，該文獻藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表11(例如，來自表11中揭露的MAB7的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表11中所示的核苷酸序列編碼。在一些實施方式中，該等CDR根據卡巴特定義(例如，如表11中所列出的)。 在一些實施方式中，該等CDR根據喬西亞定義(例如，如表11中所列出的)。在一個實施方式中，相對於表11中所示的胺基酸序列，或由表11中所示的核苷酸序列編碼的，CDR中的一個或多個(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含：含有SEQ ID NO：909的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：911的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：913的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：914的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：916的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：918的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表11中。
在一個實施方式中，抗GITR抗體分子包含VH，該VH含有SEQ ID NO：901的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：901具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗GITR抗體分子包含VL，該VL含有SEQ ID NO：902的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：902具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含：含有SEQ ID NO：901的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：902的胺基酸序列的VL。
在一個實施方式中，抗體分子包含VH，該VH由SEQ ID NO：905的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：905具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含VL，該VL由SEQ ID NO：906的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：906具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：905的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：906的核苷酸序列編碼的VL。
在一個實施方式中，抗GITR抗體分子包含重鏈，該重鏈含有SEQ ID NO：903的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：903具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，抗GITR抗體分子包含輕鏈，該輕鏈含有SEQ ID NO：904的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：904具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的胺基酸序列。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含：含有SEQ ID NO：903的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：904的胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施方式中，抗體分子包含重鏈，該重鏈由SEQ ID NO：907的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：907具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，抗體分子包含輕鏈，該輕鏈由SEQ ID NO：908的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：908具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼。在一個實施方式中，該抗體分子包含由SEQ ID NO：907的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：908的核苷酸序列編碼的輕鏈。
本文所述的該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在WO 2016/057846中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0252-273
Figure 108118358-A0202-12-0253-274
Figure 108118358-A0202-12-0254-275
Figure 108118358-A0202-12-0255-276
其他示例性抗GITR抗體和激動劑
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係BMS-986156(百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb))，也稱為BMS 986156或BMS986156。BMS-986156和其他抗GITR抗體揭露在例如，US 9,228,016和WO 2016/196792中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含以下的一種或多種：BMS-986156的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表12中所揭露的。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係MK-4166或MK-1248(默克公司(Merck))。MK-4166、MK-1248、和其他抗GITR抗體揭露於例如，US 8,709,424、WO 2011/028683、WO 2015/026684、和Mahne等人，Cancer Res. [癌症研究]2017；77(5)：1108-1118中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含以下的一種或多種：MK-4166或MK-1248的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係TRX518(利普治療公司(Leap Therapeutics))。TRX518和其他抗GITR抗體揭露在例如，US 7,812,135、US 8,388,967、US 9,028,823、WO 2006/105021、和Ponte J等人，(2010)Clinical Immunology [臨床免疫學]；135：S96中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含以下的一種或多種：TRX518的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係INCAGN1876(Incyte/Agenus)。INCAGN1876和其他抗GITR抗體揭露在例如，US 2015/0368349和WO 2015/184099中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含以下的一種或多種：INCAGN1876的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係AMG 228(美商安進公司(Amgen))。AMG 228和其他抗GITR抗體揭露在例如，US 9,464,139和WO 2015/031667中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子包含以下的一種或多種：AMG 228的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體分子係INBRX-110(Inhibrx)。INBRX-110和其他抗GITR抗體揭露在例如，US 2017/0022284和WO 2017/015623中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該GITR激動劑以下的一種或多種：INBRX-110的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。
在一個實施方式中，該GITR激動劑(例如，融合蛋白)係MEDI 1873(米迪繆尼有限公司(MedImmune))，也稱為MEDI1873。MEDI 1873和其他GITR激動劑揭露在例如， US 2017/0073386、WO 2017/025610、和Ross等人，Cancer Res [癌症研究]2016；76(14增刊)：摘要nr 561中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該GITR激動劑包含MEDI 1873的IgG Fc結構域、功能性多聚化結構域、和糖皮質激素誘導的TNF受體配位基(GITRL)的受體結合結構域中的一種或多種。
其他已知的GITR激動劑(例如，抗GITR抗體)包括例如，在WO 2016/054638中描述的那些，該申請藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該抗GITR抗體係與本文所述的抗GITR抗體之一競爭與GITR上的相同表位結合和/或結合GITR上的相同表位的抗體。
在一個實施方式中，該GITR激動劑係活化GITR傳訊途徑的肽。在一個實施方式中，該GITR激動劑係與恒定區(例如，免疫球蛋白序列的Fc區)融合的免疫黏附素結合片段(例如，包含GITRL的細胞外或GITR的結合部分的免疫黏附素結合片段)。
Figure 108118358-A0202-12-0257-277
示例性抗CD3多特異性抗體分子
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與抗CD3多特異性抗體分子(例如，抗CD3雙特異性抗體分子)組合給予。在一個實施方式中，抗CD3多特異性抗體分子結合CD3合靶腫瘤抗原(TTA)。在一個實施方式中，該TTA選自CD19、CD20、CD38、或CD123。在一個實施方式中，抗CD3多特異性抗體分子處於在WO 2016/182751中的圖1A、1B、1C和125中揭露的形式，該申請藉由引用以其全文併入本文。
在一個實施方式中，該抗CD3多特異性抗體分子係抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子，例如，在WO 2016/086189或WO 2016/182751中揭露的XENP14045(例如，如表15中所列出的)或抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子，該等申請藉由引用以其全文併入本文中。在一個實施方式中，抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子包含一個或多個CDR序列(或總體上全部CDR序列)，XENP14045的重鏈或輕鏈可變區序列，或重鏈或輕鏈序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與其具有至少約85%、90%、或95%序列同一性的序列)。
在一個實施方式中，抗CD3多特異性抗體係抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子，例如，XENP13676(例如，如表13中列出的)或在WO 2016/086189或WO 2016/182751中揭露的抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子，藉由引用以其全文並於本文中。在一個實施方式中，抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子包含一個或多個CDR序列(或總體上全部CDR序列)，XENP13676的重鏈或輕鏈可變區序列，或重鏈或輕鏈序列，或與其基本上相同的胺基酸序列(例如，與其具有至少約85%、90%、或95%序列同一性的序列)。
Figure 108118358-A0202-12-0258-278
Figure 108118358-A0202-12-0259-279
IL15/IL-15Ra複合物
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體與IL-15/IL-15Ra複合物組合給予。在一些實施方式中，IL-15/IL-15Ra複合物選自NIZ985(諾華公司(Novartis))、ATL-803(亞拉斯托公司(Altor))或CYP0150(Cytune)。
示例性IL-15/IL-15Ra複合物
在一個實施方式中，IL-15/IL-15Ra複合物包含人IL-15與可溶形式的人IL-15Ra複合。該複合物可包含與可溶形式的IL-15Ra共價或非共價結合的IL-15。在一個具體的實施方式中，人IL-15非共價地與可溶形式的IL-15Ra結合。 在具體的實施方式中，組成物的人IL-15包含表14中SEQ ID NO：1001的胺基酸序列，並且可溶形式的人IL-15Ra包含表14中的SEQ ID NO：1002的胺基酸序列，如在WO 2014/066527中的描述，藉由引用以其全文併入。本文所述的該等分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在WO 2007/084342中描述的方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0260-280
其他示例性IL-15/IL-15Ra複合物
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物係ALT-803，IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白(IL-15N72D：IL-15RaSu/Fc可溶性複合物)。ALT-803揭露在WO 2008/143794中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白包含如表15中揭露的序列。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含與IL-15Ra的sushi結構域融合的IL-15(CYP0150，Cytune)。IL-15Ra的sushi結構域係指在IL-15Ra的訊號肽之後的第一半胱胺酸殘基處開始並且在所述訊號肽之後的第四個半胱胺酸殘基處結束的結構域。與IL-15Ra的sushi結構域融合的IL-15的複合物揭露在WO 2007/04606和WO 2012/175222中，該等申請藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra sushi結構域融合物包含如在表15中揭露的序列。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含IL-15和IL-15Ra的融合蛋白，該融合蛋白可以進一步包含接頭(特別是甘胺酸-絲胺酸接頭)連接如在WO 2014/186469中揭露的IL-15和IL-15Ra(評議委員會，德克薩斯大學系 統)，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra融合蛋白包含如在表15中揭露的序列。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含由甘胺酸-絲胺酸接頭連接的IL-15Ra和IL-15的sushi結構域的融合蛋白，如揭露中WO 2015/109124(卡蒙集團(Kadmon Corp.))中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra融合蛋白包含如在表15中揭露的序列。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含IL-15、IL-15Ra、Fc結構域和RGD肽的融合蛋白，較佳的是配製為RGD多肽-Fc結構域-IL-15多肽-IL-15Ra多肽，如揭露於WO 2017/000913(努木生物製藥公司(Numab Biopharmaceuticals))中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該RGD-Fc-IL-15-IL-15Ra融合蛋白包含如表15中揭露的序列。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含異二聚體蛋白，該蛋白含有與第一Fc結構域連接的IL-15和與第二Fc結構域連接的IL-15Ra。IL-15係人IL-15的成熟形式，並且IL-15Ra係人IL-15Ra或其截短變體(如IL-15Ra-sushi)的細胞外結構域。這兩個Fc結構域可以包含能夠藉由「Knob-into-Hole」相互作用形成異二聚體的突變和在WO 2015/103928(江蘇恒瑞醫藥公司(Jiangsu Hendrui Medicine Co))中揭露的示例性構建體，該申請藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含IL-15(含有cys胺基酸突變)和IL-15Ra(細胞外或其sushi結構域)(含有cys突變)的組合以促進多肽之間形成分子內二硫鍵。具有突變組合的IL-15和IL-15Ra的序列揭露在WO 2016/095642(江蘇恒瑞醫藥公司(Jiangsu Hendrui Medicine Co))中，藉由引用以其全文併入。
在一個實施方式中，該IL-15/IL-15Ra複合物包含異二聚體蛋白，該蛋白含有與第一Fc結構域連接的IL-15和與第二Fc結構域連接的IL-15Ra。第一 和第二Fc結構域可以具有如以下所列的一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S；S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q；L36HD/K370S；L36HD/K370S；S364K；L36HE/K370S；S364K；T411T/E360E/Q362E；D401K；L368D/K370S；S364K/E357L和K370S；S364K/E357Q，根據EU編號，並且另外可以包含其他胺基酸取代和以消除Fcgamma受體結合的取代，如揭露在WO 2018/071919(Xencor公司)中，該申請藉由引用以其全文併入。
Figure 108118358-A0202-12-0262-281
Figure 108118358-A0202-12-0263-282
示例性CSF-1/1R結合劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與CSF-1/1R結合劑組合給予。
在一些實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制劑。M-CSF有時也稱為CSF-1。
在另一個實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑、4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶醯胺(化合物A15)、或在PCT公開案號WO 2005/073224中揭露的化合物。在一些實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係M-CSF抑制劑、化合物A33、或在PCT公開案號WO 2004/045532或PCT公開案號WO 2005/068503中揭露的CSF-1的結合劑(包括RX1或5H4)(例如，抗體分子或針對M-CSF的Fab片段)。
在一些實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係CSF1R抑制劑或4-(2-((1R,2R)-2-羥基環己基胺基)苯并噻唑-6-基氧基)-N-甲基吡啶醯胺。4-(2-((1R,2R)-2-羥基環己基胺基)苯并噻唑-6-基氧基)-N-甲基吡啶醯胺被揭露為PCT公開案號WO 2007/121484在第117頁的實例157。
在一些實施方式中，CSF-1/1R結合劑係培達替尼(pexidartinib)(CAS登記號1029044-16-3)。培達替尼也稱為PLX3397或5-((5-氯-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-3-基)甲基)-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2-胺。培達替尼係KIT、CSF1R和FLT3的小分子受體酪胺酸激酶(RTK)抑制劑。
在一些實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係依米妥珠單抗(emactuzumab)。依米妥珠單抗也稱為RG7155或RO5509554。依米妥珠單抗係人源化IgG1 mAb靶向的CSF1R。
在一些實施方式中，該CSF-1/1R結合劑係FPA008。FPA008係抑制CSF1R的人源化mAb。
示例性IDO/TDO抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和/或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該IDO/TDO抑制劑選自(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-
Figure 108118358-A0202-12-0264-168
二唑-3-胺(也稱為INCB24360或Epacadostat；CAS登記號：1204669-58-8(因塞特公司(Incyte))；英多莫德(Indoximod)(1-甲基-D-色胺酸)；α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇(也稱為NLG919)或BMS-986205(也稱為F001287或ONO-7701)。
在一些實施方式中，該IDO/TDO抑制劑係Epacadostat。它係有效的和選擇性吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO1)抑制劑，其中IC 50 為10nM。Epacadostat對其他相關的酶，例如IDO2或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)具有高度選擇性。
在一些實施方式中，該IDO/TDO抑制劑係英多莫德(紐琳基因公司(New Link Genetics))。英多莫德，1-甲基-色胺酸的D異構物，係一種口服給予的小分子吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)途徑抑制劑，該抑制劑破壞了由腫瘤逃避免疫介導的破壞的機制。NLG919係有效的IDO途徑抑制劑，其中在無細胞測定中Ki/EC 50 分別為7nM/75nM。
在一些實施方式中，該IDO/TDO抑制劑係BMS-986205(也稱為F001287或ONO-7701)(Flexus/BMS)。BMS-986205係吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)的小分子抑制劑。
示例性TGF-β抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與轉化生長因子β(TGF-β)抑制劑組合給予。該TGF-β抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡肽。在一些實施方式中，該TGF-β抑制劑選自夫蘇木單抗(fresolimumab)和XOMA 089(Xoma)。
TGF-β屬於結構相關的細胞介素的大家族，包括例如骨形態發生蛋白(BMP)、生長和分化因子、活化素和抑制素。在一些實施方式中，本文所述的TGF-β抑制劑可以結合和/或抑制一種或多種TGF-β的同種型(例如，TGF-β1、TGF-β2、或TGF-β3中的一種、兩種或全部)。
在一些實施方式中，該TGF-β抑制劑係夫蘇木單抗(CAS登記號：948564-73-6)。夫蘇木單抗也稱為GC1008。夫蘇木單抗係結合和抑制TGF-β同種型1、2和3的人單株抗體。例如，在WO 2006/086469、US 8,383,780、和US 8,591,901中揭露了夫蘇木單抗。
夫蘇木單抗的重鏈具有以下胺基酸序列：
Figure 108118358-A0202-12-0265-283
Figure 108118358-A0202-12-0266-284
Figure 108118358-A0202-12-0266-285
(SEQ ID NO：1012)。
夫蘇木單抗的輕鏈具有以下胺基酸序列：
Figure 108118358-A0202-12-0266-286
Figure 108118358-A0202-12-0266-287
(SEQ ID NO：1013)。
在一些實施方式中，該TGF-β抑制劑係XOMA 089。XOMA 089也稱為XPA.42.089。XOMA 089係完全人單株抗體，該抗體結合並中和TGF-β 1和2配位基，同時保留TGF-β 3。
XOMA 089的重鏈可變區具有以下胺基酸序列：
Figure 108118358-A0202-12-0266-288
Figure 108118358-A0202-12-0266-291
(SEQ ID NO：310)(揭露為WO 2012/167143中的 SEQ ID NO：6)。
XOMA 089的輕鏈可變區具有以下胺基酸序列：
Figure 108118358-A0202-12-0266-289
Figure 108118358-A0202-12-0266-290
(SEQ ID NO：311)(揭露為WO 2012/167143中的SEQ ID NO：8)。
示例性VEGFR抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑(例如，一種或多種VEGFR(例如，VEGFR-1、VEGFR-2、或VEGFR-3)或VEGF的抑制劑)組合給予。
在一些實施方式中，該VEGFR抑制劑係琥珀酸伐他拉尼(化合物A47)或在EP 296122中揭露的化合物。
在一些實施方式中，該VEGFR抑制劑係以下各項中一種或多種的抑制劑：VEGFR-2、PDGFRβ、KIT或Raf激酶C、1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或在PCT公開案號WO 2007/030377中揭露的化合物。
可以在本文揭露的組合中使用的其他示例性VEGFR途徑抑制劑包括，例如，貝伐單抗(AVASTIN®)、阿西替尼(INLYTA®)；丙胺酸布立尼布(BMS-582664，(S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三
Figure 108118358-A0202-12-0267-169
-6-基氧基)丙烷-2-基)2-胺基丙酸酯)；索拉非尼(NEXAVAR®)；帕唑帕尼(VOTRIENT®)；蘋果酸舒尼替尼(SUTENT®)；西地尼布(AZD2171，CAS 288383-20-1)；尼達尼布(BIBF1120，CAS 928326-83-4)；福瑞替尼(Foretinib)(GSK1363089)；替拉替尼(BAY57-9352,CAS 332012-40-5)；阿帕替尼(YN968D1，CAS 811803-05-1)；伊馬替尼(GLEEVEC®)；帕納替尼(AP24534，CAS 943319-70-8)；提瓦紮尼(tivozanib)(AV951，CAS 475108-18-0)；瑞格拉非尼(BAY73-4506，CAS 755037-03-7)；瓦他拉尼二鹽酸鹽(PTK787，CAS 212141-51-0)；布立尼布(BMS-540215，CAS 649735-46-6)；凡德他尼(CAPRELSA®或AZD6474)；二磷酸莫替沙尼(AMG706，CAS 857876-30-3，N-(2,3-二氫-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)胺基]-3-吡啶甲醯胺，在PCT公開案號WO 02/066470中描述)；林夫尼(linfanib)(ABT869，CAS 796967-16-3)；卡博替尼(XL184，CAS 849217-68-1)；來他替尼(CAS 111358-88-4)；N-[5-[[[5-(1,1-二甲基乙基)-2-
Figure 108118358-A0202-12-0267-170
唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲醯胺(BMS38703，CAS 345627-80-7)；(3R,4R)-4-胺基-1-((4-((3-甲氧基苯基)胺基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三
Figure 108118358-A0202-12-0267-172
-5-基)甲基)哌啶-3-醇(BMS690514)；N-(3,4-二氯-2-氟苯 基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氫-2-甲基環戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(XL647，CAS 781613-23-8)；4-甲基-3-[[1-甲基-6-(3-吡啶基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]胺基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]-苯甲醯胺(BHG712，CAS 940310-85-0)；阿柏西普(EYLEA®)和內皮抑素(ENDOSTAR®)。
可以在本文揭露的組合中使用的示例性抗VEGF抗體包括例如， 結合與由雜交瘤ATCC HB 10709產生的單株抗VEGF抗體A4.6.1相同的表位的單株抗體；根據Presta等人，(1997)Cancer Res.[癌症研究]57：4593-4599產生的重組人源化抗VEGF單株抗體。在一個實施方式中，該抗VEGF抗體係貝伐單抗(BV)，也稱為rhuMAb VEGF或AVASTIN®。它包含突變的人IgG1框架區和來自鼠抗hVEGF單株抗體A.4.6.1的抗原結合互補決定區，抗體阻斷人VEGF與其受體的結合。貝伐單抗和其他人源化抗VEGF抗體被進一步描述於2005年2月26日發佈的美國專利6,884,879。另外的抗體包括如在PCT公開案號WO 2005/012359，PCT公開案號WO 2005/044853中所述的G6或B20系列抗體(例如，G6-31，B20-4.1)。對於另外的抗體，參見美國專利案號7,060,269、6,582,959、6,703,020、6,054,297；WO 98/45332、WO 96/30046、WO 94/10202、EP 0666868B1；美國專利申請公開案號2006/009360、2005/0186208、2003/0206899、2003/0190317、2003/0203409、和2005/0112126；以及Popkov等人，Journal of Immunological Methods [免疫學方法雜誌]288：149-164(2004)。其他抗體包括與人VEGF上的功能性表位結合的抗體，包含殘基F17、Ml 8、D19、Y21、Y25、Q89、191、Kl 01、El 03、和C104或可替代地包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183和Q89。
示例性EGFR抑制劑
在一些實施方式中，本文所述的抗人ENTPD2抗體分子(例如，抗ENTPD2抗體分子)與酪胺酸激酶抑制劑(例如，受體酪胺酸激酶(RTK)抑制劑)組合使用。示例性酪胺酸激酶抑制劑包括，但不限於表皮生長因子(EGF) 途徑抑制劑(例如，表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑)、血管內皮生長因子(VEGF)途徑抑制劑(例如，血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑(例如，VEGFR-1抑制劑、VEGFR-2抑制劑、VEGFR-3抑制劑))、血小板衍生生長因子(PDGF)途徑抑制劑(例如，血小板衍生生長因子受體(PDGFR)抑制劑(例如，PDGFR-ß抑制劑))、RAF-1抑制劑、KIT抑制劑和RET抑制劑。在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與表皮生長因子受體(EGFR)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該EGFR抑制劑係(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異煙醯胺(化合物A40)或在PCT公開案號WO 2013/184757中揭露的化合物。
在一些實施方式中，該EGFR抑制劑選自以下各項的一種或多種：埃羅替尼(Tarceva®)、吉非替尼(Iressa®)、西妥昔單抗(Erbitux ®)、帕尼單抗(Vectibix®)、奈西圖單抗(necitumumab)(Portrazza®)、達可替尼、尼妥珠單抗、麥妥珠單抗(Imgatuzumab)、阿法替尼(afatinib)、或奧西替尼(Tagrisso)。
可以在本文揭露的組合中使用的其他抗癌劑，例如，酪胺酸激酶抑制劑途徑抑制劑包括，但不限於所選擇的酪胺酸激酶抑制劑選自舒尼替尼(Sutent®)或索拉非尼(Nexavar®)。
在一些實施方式中，與刺蝟抑制劑組合使用的抗癌劑選自下組，該組由以下組成：阿西替尼(AG013736)、伯舒替尼(SKI-606)、西地尼布(RECENTINTM 、AZD2171)、達沙替尼(SPRYCEL®、BMS-354825)、埃羅替尼(TARCEVA®)、吉非替尼(IRESSA®)、伊馬替尼(Gleevec®、CGP57148B、STI-571)、來他替尼(CEP-701)、來那替尼(HKI-272)、尼祿替尼(TASIGNA®)、司馬沙尼(semaxanib)(司馬西尼(semaxinib)、SU5416)、舒尼替尼(SUTENT®、 SU11248)、toceranib(PALLADIA®)、凡德他尼(ZACTIMA®、ZD6474)、瓦他拉尼(PTK787、PTK/ZK)、曲妥珠單抗(HERCEPTIN®)、貝伐單抗(AVASTIN®)、利妥昔單抗(RITUXAN®)、西妥昔單抗(ERBITUX®)、帕尼單抗(VECTIBIX®)、蘭尼單抗(Lucentis®)、尼祿替尼(TASIGNA®)、索拉非尼(NEXAVAR®)、阿侖單抗(CAMPATH®)、吉妥單抗奧佐米星(MYLOTARG®)、ENMD-2076、PCI-32765、AC220、BIBW 2992(TOVOKTM )、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF 1120(VARGATEF®)、AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、提瓦紮尼(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647、XL228、AEE788、AG-490、AST-6、BMS-599626、CUDC-101、PD153035、培立替尼(EKB-569)、凡德他尼(zactima)、WZ3146、WZ4002、WZ8040、ABT-869(linifanib)、AEE788、AP24534(帕納替尼)、AV-951(提瓦紮尼)、阿西替尼、BAY 73-4506(瑞格拉非尼)、丙胺酸布立尼布(BMS-582664)、布立尼布(BMS-540215)、西地尼布(AZD2171)、CP 673451、CYC116、E7080、Ki8751、馬賽替尼(AB1010)、MGCD-265、二磷酸莫替沙尼(AMG-706)、MP-470、OSI-930、帕唑帕尼鹽酸鹽、PD173074、甲苯磺酸索拉非尼(Bay 43-9006)、SU 5402SU 5402、TSU-68(SU6668)、瓦他拉尼、XL880(GSK1363089、EXEL-2880)。
示例性c-MET抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與c-MET的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係化合物A17或美國專利案號7,767,675和8,420,645中描述的化合物。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係JNJ-38877605。JNJ-38877605係口服可用的c-Met的小分子抑制劑。JNJ-38877605選擇性結合c-MET，從而抑制c-MET磷酸化並破壞c-Met訊號轉導途徑。
在一些實施方式中，該c-Met抑制劑係AMG 208。AMG 208係c-MET的選擇性小分子抑制劑。AMG 208抑制c-MET的配位基依賴性和配位基非依賴性活化，抑制其酪胺酸激酶活性，這可能導致過表現c-Met的腫瘤中的細胞生長抑制。
在一些實施方式中，該c-Met抑制劑係AMG 337。AMG 337係c-Met的口服生物可利用的抑制劑。AMG 337選擇性結合c-MET，從而破壞c-MET訊號轉導途徑。
在一些實施方式中，該c-Met抑制劑係LY2801653。LY2801653係口服可用的c-Met的小分子抑制劑。LY2801653選擇性結合c-MET，從而抑制c-MET磷酸化作用並破壞c-Met訊號轉導途徑。
在一些實施方式中，c-Met抑制劑係MSC2156119J。MSC2156119J係口服生物可利用的c-Met抑制劑。MSC2156119J選擇性結合c-MET，抑制c-MET磷酸化作用並破壞c-Met介導的訊號轉導途徑。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係卡瑪替尼(capmatinib)。卡瑪替尼也稱為INCB028060。卡瑪替尼係口服生物可利用的c-MET抑制劑。卡瑪替尼選擇性結合c-Met，從而抑制c-Met磷酸化作用並破壞c-Met訊號轉導途徑。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係克唑替尼(crizotinib)。克唑替尼也稱為PF-02341066。克唑替尼係口服可用的受體酪胺酸激酶間變性淋巴瘤激酶(ALK)和c-Met/肝細胞生長因子受體(HGFR)的基於胺基吡啶的抑制劑。克唑替尼以ATP競爭方式結合並抑制ALK激酶和ALK融合蛋白。此外，克唑替尼抑制c-Met激酶，並破壞c-Met傳訊途徑。總之，該藥劑抑制腫瘤細胞生長。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係戈伐替尼(golvatinib)。戈伐替尼係口服生物可利用的c-MET和VEGFR-2的雙激酶抑制劑，該抑制劑具有潛在的抗腫瘤活性。戈伐替尼結合並抑制c-MET和VEGFR-2的活性，這可能抑制腫瘤細胞生長和過表現該等受體酪胺酸激酶的腫瘤細胞的存活。
在一些實施方式中，該c-MET抑制劑係替萬替尼(tivantinib)。替萬替尼也稱為ARQ 197。替萬替尼係口服生物可利用的c-MET小分子抑制劑。替萬替尼結合c-MET蛋白並破壞c-Met訊號轉導途徑，可在過表現c-MET蛋白或表現組成型活化的c-Met蛋白的腫瘤細胞中誘導細胞死亡。
示例性IAP抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與細胞凋亡蛋白抑制劑(IAP)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該IAP抑制劑係(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或在美國專利案號8,552,003中揭露的化合物。
示例性mTOR抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與哺乳動物雷帕黴素靶蛋白(mTOR)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該mTOR抑制劑係8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌
Figure 108118358-A0202-12-0272-173
-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)。
在一些實施方式中，該mTOR抑制劑係依維莫司(也稱為RAD001或AFINITOR®；化合物A36)或首先在PCT公開案號WO 94/09010中揭露的化合物。
在一些實施方式中，該mTOR抑制劑選自以下的一種或多種：替西羅莫司(TORISEL®)、PF-4691502、GDC0980、OSI-027、GSK1059615、KU-0063794、WYE-354、Palomid 529(P529)、PF-04691502、吉托利司(gedatolisib)(PF-05212384，PKI-587)、利羅莫司(ridaforolimus)(正式地稱為deferolimus，(1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-二羥基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五氧雜-11,36-二氧雜-4-氮雜三環[30.3.1.04,9]三十六碳-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環己基二甲基次膦酸酯，也稱為AP23573和MK8669，並且描述在PCT公開案號WO 03/064383中)；雷帕黴素(AY22989，SIROLIMUS®)；simapimod(CAS登記號：164301-51-3)；(5-{2,4-雙[(3S)-3-甲基
Figure 108118358-A0202-12-0273-174
啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(AZD8055)；2-胺基-8-[反式-4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF04691502，CAS登記號：1013101-36-4)；N2-[1,4-二側氧基-4-[[4-(4-側氧基-8-苯基-4H-1-苯并哌喃-2-基)
Figure 108118358-A0202-12-0273-177
啉-4-基]甲氧基]丁基]-L-精胺醯基甘胺醯基-L-α-門冬胺醯L-絲胺酸內鹽(SF1126，CAS登記號：936487-67-1)(SEQ ID NO：1011)或XL765(SAR245409)。
示例性PI3K-γ，-δ抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與磷脂醯肌醇-4,5-二磷酸3-激酶(PI3K)，例如，磷脂醯肌醇-4,5-二磷酸3-激酶γ和/或δ(PI3K-γ,δ)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該PI3K抑制劑係PI3K的δ和γ同種型的抑制劑。可以在組合中使用的示例性PI3K抑制劑描述於例如，WO 2010/036380、WO 2010/006086、WO 09/114870、WO 05/113556中。在一些實施方式中，該PI3K抑制劑選自以下的一種或多種：GSK 2126458、GDC-0980、GDC-0941、Sanofi XL147、XL756、XL147、PF-46915032、CAL-101、CAL263、SF1126、PX-886、和雙PI3K抑制劑。
在一些實施方式中，該PI3K-γ,δ抑制劑係艾拉利司(idelalisib)(CAS登記號：870281-82-6)。艾拉利司也稱為ZYDELIG®、GS-1101、CAL-101、或5-氟-3-苯基-2-[(1S)-1-(7H-嘌呤-6-基胺基)丙基]-4(3H)-喹唑啉酮。艾拉利司阻斷P110δ(PI3K的δ同種型)。例如， 在Wu等人，Journal of Hematology & Oncology [血液學和腫瘤學雜誌](2013)6：36中揭露了艾拉利司。
在一些實施方式中，該PI3K-γ,δ抑制劑係8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌
Figure 108118358-A0202-12-0274-178
-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)。
在組合中可以使用的其他示例性PI3K-γ,δ抑制劑包括例如，匹替利司(pictilisib)(GDC-0941)、LY294002、匹雷利司(pilaralisib)(XL147)、PI-3065、PI-103、VS-5584(SB2343)、CZC24832、度維利司(duvelisib)(IPI-145、INK1197)、TG100-115、CAY10505、GSK1059615、PF-04691502、AS-605240、沃他利司(voxtalisib)(SAR245409、XL765)、IC-87114、奧帕利司(omipalisib)(GSK2126458、GSK458)、TG100713、吉托利司(PF-05212384、PKI-587)、PKI-402、XL147類似物、PIK-90、PIK-293、PIK-294、3-甲基腺嘌呤(3-MA)、AS-252424、AS-604850、或阿托利司(apitolisib)(GDC-0980、RG7422)。
在一些實施方式中，該PI3K抑制劑係化合物A8或在PCT公開案號WO 2010/029082中所述的化合物。
在一些實施方式中，該PI3K抑制劑係泛-PI3K抑制劑，(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-
Figure 108118358-A0202-12-0274-179
啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-二嘧啶]-6-基)-4-(羥基甲基)-5-甲基
Figure 108118358-A0202-12-0274-180
唑烷-2-酮(化合物A13)或在PCT公開案號WO 2013/124826中揭露的化合物。
示例性PI3K-γ,-δ抑制劑包括，但不限於度維利司和艾拉利司。艾拉利司(也稱為GS-1101或CAL-101；吉利德公司(Gilead))係阻斷PI3K的δ同種型的小分子。如下示出艾拉利司(5-氟-3-苯基-2-[(1S )-1-(7H -嘌呤-6-基胺基)丙基]-4(3H )-喹唑啉酮)的結構。
Figure 108118358-A0202-12-0275-292
度維利司(也稱為IPI-145；無限制藥公司(Infinity Pharmaceuticals)和艾伯維公司(Abbvie))係阻斷PI3K-δ,γ的小分子。如下示出了度維利司(8-氯-2-苯基-3-[(1S)-1-(9H-嘌呤-6-基胺基)乙基]-1(2H)-異喹啉酮)的結構。
Figure 108118358-A0202-12-0275-293
在一個實施方式中，抑制劑係雙磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)和mTOR抑制劑，選自2-胺基-8-[反式 -4-(2-羥基乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d ]嘧啶-7(8H )-酮(PF-04691502)；N -[4-[[4-(二甲基胺基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N '-[4-(4,6-二-4-
Figure 108118358-A0202-12-0275-181
啉基-1,3,5-三
Figure 108118358-A0202-12-0275-182
-2-基)苯基]脲(PF-05212384，PKI-587)；阿托利司(GDC-0980，RG7422)；2,4-二氟-N-{2-(甲氧基)-5-[4-(4-嗒
Figure 108118358-A0202-12-0275-183
基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺醯胺(GSK2126458)；8-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-(哌
Figure 108118358-A0202-12-0275-184
-1-基)-3-(三氟甲基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2(3H)-酮馬來酸(NVP-BGT226)；3-[4-(4-
Figure 108118358-A0202-12-0275-185
啉基吡啶并[3',2'：4,5]呋喃并[3,2-d] 嘧啶-2-基]苯酚(PI-103)；5-(9-異丙基-8-甲基-2-
Figure 108118358-A0202-12-0276-186
啉代-9H-嘌呤-6-基)嘧啶-2-胺(VS-5584，SB2343)；和N-[2-[(3,5-二甲氧基苯基)胺基]喹
Figure 108118358-A0202-12-0276-187
啉-3-基]-4-[(4-甲基-3-甲氧基苯基)羰基]胺基苯磺醯胺(XL765)。
示例性JAK抑制劑
在某些實施方式中，將本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與Janus激酶(JAK)的抑制劑組合給予。
在一些實施方式中，該JAK抑制劑係2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三
Figure 108118358-A0202-12-0276-188
-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)，或其二鹽酸鹽，或在PCT公開案號WO 2007/070514中揭露的化合物。
在一些實施方式中，該JAK抑制劑係磷酸盧梭替尼(也稱為JAKAFI；化合物A18)或在PCT公開案號WO 2007/070514中揭露的化合物。
在某些實施方式中，本文揭露的任何組合，可替代地或組合地，進一步包括表16中描述的一種或多種藥劑。
Figure 108118358-A0202-12-0276-294
Figure 108118358-A0202-12-0277-295
Figure 108118358-A0202-12-0278-296
Figure 108118358-A0202-12-0279-297
Figure 108118358-A0202-12-0280-298
Figure 108118358-A0202-12-0281-299
Figure 108118358-A0202-12-0282-300
Figure 108118358-A0202-12-0283-301
Figure 108118358-A0202-12-0284-302
Figure 108118358-A0202-12-0285-303
Figure 108118358-A0202-12-0286-304
Figure 108118358-A0202-12-0287-305
Figure 108118358-A0202-12-0288-306
Figure 108118358-A0202-12-0289-307
Figure 108118358-A0202-12-0290-308
Figure 108118358-A0202-12-0291-309
Figure 108118358-A0202-12-0292-310
Figure 108118358-A0202-12-0293-311
可以將如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子與另外的治療劑組合給予。在一些實施方式中，該另外的治療劑選自以下的一種或多種：1)蛋白激酶C(PKC)抑制劑；2)熱休克蛋白90(HSP90)抑制劑；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕黴素靶蛋白(mTOR)的抑制劑；4)細胞色素P450的抑制劑(例如，CYP17抑制劑或17α-羥化酶/C17-20裂解酶抑制劑)；5)鐵螯合劑；6)芳香酶抑制劑；7)p53抑制劑，例如，p53/Mdm2相互作用的抑制劑；8)細胞凋亡誘導劑；9)血管生成抑制劑；10)醛固酮合酶抑制劑；11)平滑(SMO)受體抑制劑；12)催乳素受體(PRLR)抑制劑；13)Wnt傳訊抑制劑；14)CDK4/6抑制劑；15)纖維母細胞生長因子受體2(FGFR2)/纖維母細胞生長因子受體4(FGFR4)抑制劑；16)巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制劑；17)組胺釋放、Flt3(例如，FLK2/STK1)或PKC中一種或多種的抑制劑；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中一種或多種的抑制劑；19)生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑；20)間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑；21)似胰島素生長因子1受體(IGF-1R)抑制劑；22)P-醣蛋白1抑制劑；23)血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑；24)BCR-ABL激酶抑制劑；25)FGFR抑制劑；26)CYP11B2的抑制劑；27)HDM2抑制劑，例如HDM2-p53相互作用的抑制劑；28)酪胺酸激酶的抑制劑；29)c-MET的抑制劑；30)JAK的抑制劑；31)DAC的抑制劑；32)11β-羥化酶的抑制劑；33)IAP的抑制劑；34)PIM激酶的抑制劑；35)博庫派恩的抑制劑；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制劑；37) HER3的抑制劑；38)MEK的抑制劑；或39)脂質激酶(例如，如本文所述並在表1中)的抑制劑。
在一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下各項或與以下各項組合使用用於治療障礙(例如，本文所述的障礙)：PKC抑制劑、索曲滔林(化合物A1)或在PCT公開案號WO 2005/039549中揭露的化合物。在一個實施方式中，該PKC抑制劑係索曲滔林(化合物A1)或在PCT公開案號WO 2005/039549中揭露的化合物。
在一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下各項或與以下各項組合使用用於治療障礙(例如，本文所述的障礙)：BCR-ABL抑制劑、尼祿替尼(化合物A2，Tasigna®)，或在PCT公開案號WO 2004/005281中揭露的化合物。在一個實施方式中，該BCR-ABL抑制劑係尼祿替尼或在PCT公開案號WO 2004/005281中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括HSP90抑制劑或與HSP90抑制劑組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙，例如，癌症)。
在另一個實施方式中，將組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)與PI3K和/或mTOR的抑制劑，8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌
Figure 108118358-A0202-12-0294-189
-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)。在一個實施方式中，PI3K和/或mTOR抑制劑係8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌
Figure 108118358-A0202-12-0294-190
-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：FGFR抑制劑、3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙 基哌
Figure 108118358-A0202-12-0295-191
-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(化合物A5)或在美國專利8,552,002中揭露的化合物。在一個實施方式中，該FGFR抑制劑係3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙基哌
Figure 108118358-A0202-12-0295-193
-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(化合物A5)或在美國專利案號8,552,002中揭露的化合物。化合物A5具有以下結構：
Figure 108118358-A0202-12-0295-312
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：PI3K抑制劑、布帕利司(Buparlisib)(化合物A6)、或在PCT公開案號WO 2007/084786中揭露的化合物。在一個實施方式中，該PI3K抑制劑係布帕利司(化合物A6)或在PCT公開案號WO 2007/084786中揭露的化合物。化合物A6具有以下結構： a.
Figure 108118358-A0202-12-0295-1322
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如， 本文所述的障礙)：FGFR抑制劑、8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹
Figure 108118358-A0202-12-0296-194
啉-5-甲醯胺(化合物A7)或在PCT公開案號WO 2009/141386中揭露的化合物。在一個實施方式中，該FGFR抑制劑係8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹
Figure 108118358-A0202-12-0296-195
啉-5-甲醯胺(化合物A7)或在PCT公開案號WO 2009/141386中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：PI3K抑制劑、(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺(化合物A8)或在PCT公開案號WO 2010/029082中揭露的化合物。在一個實施方式中，該PI3K抑制劑係(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺(化合物A8)或在PCT公開案號WO 2010/029082中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：細胞色素P450(例如，CYP17抑制劑)的抑制劑或在PCT公開案號WO 2010/149755中揭露的化合物。在一個實施方式中，該細胞色素P450抑制劑(例如，CYP17抑制劑)係在PCT公開案號WO 2010/149755；US 8,263,635 B2；或EP 2445903 B1中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：HDM2抑制劑、(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1r,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌
Figure 108118358-A0202-12-0296-196
-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)或在PCT公開案號WO 2011/076786中揭露的化合物。在一個實施方式中，該HDM2抑制劑係(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2- (4-(甲基(((1r,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌
Figure 108118358-A0202-12-0297-197
-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)或在PCT公開案號WO 2011/076786中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：鐵螯合劑，地拉羅司(也稱為EXJADE；化合物A11)，或在PCT公開案號WO 1997/049395中揭露的化合物。在一個實施方式中，該鐵螯合劑係地拉羅司或在PCT公開案號WO 1997/049395中揭露的化合物。在一個實施方式中，該鐵螯合劑係地拉羅司(化合物A11)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：芳香酶抑制劑，來曲唑(也稱為FEMARA；化合物A12)或在US 4,978,672中揭露的化合物。在一個實施方式中，該芳香酶抑制劑係來曲唑(化合物A12)或在美國專利4,978,672中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：PI3K抑制劑，例如，泛-PI3K抑制劑，(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-
Figure 108118358-A0202-12-0297-198
啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-二嘧啶]-6-基)-4-(羥基甲基)-5-甲基
Figure 108118358-A0202-12-0297-200
唑烷-2-酮(化合物A13)或在PCT公開案號WO2013/124826中揭露的化合物。在一個實施方式中，該PI3K抑制劑係(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-
Figure 108118358-A0202-12-0297-201
啉代-4'-(三氟甲基)-[4,5'-二嘧啶]-6-基)-4-(羥基甲基)-5-甲基
Figure 108118358-A0202-12-0297-202
唑烷-2-酮(化合物A13)或在PCT公開案號WO2013/124826中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如， 本文所述的障礙)：p53和/或p53/Mdm2相互作用的抑制劑，(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(化合物A14)或在PCT公開案號WO2013/111105中揭露的化合物。在一個實施方式中，該p53和/或p53/Mdm2相互作用抑制劑係(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(化合物A14)或在PCT公開案號WO 2013/111105中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑，4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶醯胺(化合物A15)或在PCT公開案號WO 2005/073224中揭露的化合物。在一個實施方式中，該CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑係4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶醯胺(化合物A15)或在PCT公開案號WO 2005/073224中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如所述障礙)：細胞凋亡誘導劑和/或血管生成抑制劑(例如甲磺酸伊馬替尼(也稱為GLEEVEC®；化合物A16)或在PCT公開案號WO1999/003854中揭露的化合物。在一個實施方式中，該細胞凋亡誘導劑和/或血管生成抑制劑係甲磺酸伊馬替尼(化合物A16)或在PCT公開案號WO 1999/003854中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：JAK抑制劑，2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三
Figure 108118358-A0202-12-0298-203
-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)，或其二鹽酸鹽，或在PCT公開案號 WO 2007/070514中揭露的化合物。在一個實施方式中，該JAK抑制劑係2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三
Figure 108118358-A0202-12-0299-204
-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)，或其二鹽酸鹽，或在PCT公開案號WO 2007/070514中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：JAK抑制劑，磷酸盧梭替尼(也稱為JAKAFI；化合物A18)或在PCT公開案號WO 2007/070514中揭露的化合物。在一個實施方式中，該JAK抑制劑係磷酸盧梭替尼(化合物A18)或在PCT公開案號WO 2007/070514中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：脫乙醯酶(DAC)抑制劑，帕比司他(化合物A19)，或在PCT公開案號WO 2014/072493中揭露的化合物。在一個實施方式中，該DAC抑制劑係帕比司他(化合物A19)或在PCT公開案號WO 2014/072493中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：細胞色素P450(例如，11B2)、醛固酮或血管生成、奧斯洛左斯特(化合物A20)或在PCT公開案號WO2007/024945中揭露的化合物中的一種或多種的抑制劑。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包含以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：IAP抑制劑，(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或在 US 8,552,003中揭露的化合物。在一個實施方式中，該IAP抑制劑係(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或在美國專利8,552,003中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：平滑(SMO)抑制劑，(R)-2-(5-(4-(6-苄基-4,5-二甲基嗒
Figure 108118358-A0202-12-0300-205
-3-基)-2-甲基哌
Figure 108118358-A0202-12-0300-206
-1-基)吡
Figure 108118358-A0202-12-0300-207
-2-基)丙烷-2-醇(化合物A25)，或在PCT公開案號WO 2010/007120中揭露的化合物。在一個實施方式中，該SMO抑制劑係(R)-2-(5-(4-(6-芐基-4,5-二甲基嗒
Figure 108118358-A0202-12-0300-208
-3-基)-2-甲基哌
Figure 108118358-A0202-12-0300-210
-1-基)吡
Figure 108118358-A0202-12-0300-211
-2-基)丙烷-2-醇(化合物A25)，或在PCT公開案號WO 2010/007120中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：Alk抑制劑、色瑞替尼(ceritinib)(也稱為ZYKADIA；化合物A23)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：JAK和/或CDK4/6抑制劑，7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌
Figure 108118358-A0202-12-0300-232
-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)，或在美國專利8,415,355或美國專利8,685,980中揭露的化合物。在一個實施方式中，該JAK和/或CDK4/6抑制劑係7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌
Figure 108118358-A0202-12-0300-213
-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)，或在美國專利8,415,355或美國專利8,685,980中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如， 本文所述的障礙)：催乳素受體(PRLR)抑制劑、如在美國專利7,867,493中揭露的人單株抗體分子(化合物A26)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：PIM激酶抑制劑，N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶醯胺(化合物A27)或在PCT公開案號WO 2010/026124中揭露的化合物。在一個實施方式中，該PIM激酶抑制劑係N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶醯胺(化合物A27)或在PCT公開案號WO 2010/026124中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：Wnt傳訊抑制劑，2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡
Figure 108118358-A0202-12-0301-215
-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)或在PCT公開案號WO 2010/101849中揭露的化合物。在一個實施方式中，該Wnt傳訊抑制劑係2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡
Figure 108118358-A0202-12-0301-216
-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)或在PCT公開案號WO 2010/101849中揭露的化合物。在一個實施方式中，該Wnt傳訊抑制劑係2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡
Figure 108118358-A0202-12-0301-218
-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括BRAF抑制劑或與BRAF抑制劑組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙，例如，癌症)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：CDK4/6抑制劑，7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9-二氮雜二環[4.2.1]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶- 6-甲醯胺(化合物A30)，或在PCT公開案號WO 2011/101409中揭露的化合物。在一個實施方式中，該CDK4/6抑制劑係7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9-二氮雜二環[4.2.1]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A30)或在PCT公開案號WO 2011/101409中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：HER3抑制劑，化合物A31或在PCT公開案號WO 2012/022814中揭露的化合物。在一個實施方式中，該HER3抑制劑係化合物A31或在PCT公開WO 2012/022814中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：FGFR2和/或FGFR4抑制劑，化合物A32或在出版物PCT公開案號WO 2014/160160中揭露的化合物(例如，針對FGFR2和/或FGFR4的抗體分子藥物軛合物，例如，mAb 12425)。在一些實施方式中，化合物A32係針對FGFR2和/或FGFR4的抗體分子藥物軛合物(例如，mAb 12425)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：M-CSF抑制劑，化合物A33或在PCT公開案號WO 2004/045532中揭露的化合物(例如，抗體分子或針對M-CSF的Fab片段)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括MEK抑制劑或與MEK抑制劑組合使用以治療障礙(例如，如本文所述的癌症)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如， 本文所述的障礙)：c-KIT、組胺釋放、Flt3(例如，FLK2/STK1)或PKC、米哚妥林(Midostaurin)(化合物A35)或在PCT公開案號WO 2003/037347中揭露的化合物中一種或多種的抑制劑。在一個實施方式中，該抑制劑係米哚妥林(化合物A35)或在PCT公開案號WO 2003/037347中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：VEGFR-2、PDGFRβ、KIT或Raf激酶C、1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或在PCT公開案號WO 2007/030377中揭露的化合物中一種或多種的抑制劑。在一個實施方式中，VEGFR-2、PDGFRβ、KIT或Raf激酶C的一種或多種的抑制劑係1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或在PCT公開案號WO 2007/030377中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑、門冬胺酸帕瑞肽(也稱為SIGNIFOR；化合物A38)或在PCT公開案號WO 2002/010192或美國專利案號7,473,761中揭露的化合物。在一個實施方式中，該生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑係門冬胺酸帕瑞肽(化合物A38)或在PCT公開案號WO2002/010192或美國專利案號7,473,761中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括訊號轉導調節劑和/或血管生成抑制劑或與其組合使用，例如，以治療障礙(例如像本文所述的癌症)。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：EGFR抑制劑，(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異煙醯胺(化合物A40)或在PCT公開案號WO 2013/184757中揭露的化合物。在一個實施方式中，該EGFR抑制劑係(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異煙醯胺(化合物A40)或在PCT公開案號WO 2013/184757中揭露的化合物。在一個實施方式中，將抗人ENTPD2抗體分子與(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異煙醯胺(化合物A40)，或在PCT公開案號WO 2013/184757中揭露的化合物組合使用以治療障礙(例如，癌症)。
在一些實施方式中，將EGFR抑制劑、(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異煙醯胺(化合物A40)、或在PCT公開案號WO 2013/184757中揭露的化合物與ENTPD2的抑制劑(例如，抗人ENTPD2抗體分子)組合給予以治療癌症。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：ALK抑制劑，N6 -(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4 -(2-(異丙基磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(化合物A42)或在PCT公開案號WO 2008/073687中揭露的化合物。在一個實施方式中，ALK抑制劑係N6 -(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4 -(2-(異丙基磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(化合物A42)或在PCT公開案號WO 2008/073687中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，所述的障礙)：IGF-1R抑制劑、3-(4-(4-((5-氯-4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷1,1-二氧化物(化合物A43)、5-氯-N2 -(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4 -(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A44)、或5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4 -(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A45)或在PCT公開案號WO 2010/002655中揭露的化合物。在一個實施方式中，該IGF-1R抑制劑係3-(4-(4-((5-氯-4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷1,1-二氧化物(化合物A43)、5-氯-N2 -(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4 -(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A44)、5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4 -(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A45)，或在PCT公開案號WO 2010/002655中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：P-醣蛋白1抑制劑、戊司泊達(也稱為AMDRAY；化合物A46)或在中EP 296122揭露的化合物。在一個實施方式中，P-醣蛋白1抑制劑係戊司泊達(化合物A46)或在EP 296122中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：VEGFR抑制劑、琥珀酸瓦他拉尼(化合物A47)或在EP 296122中揭露的化合物中的一種或多種。在一個實施方式中，該VEGFR抑制劑係琥珀酸瓦他拉尼(化合物A47)或在EP 296122中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：IDH抑制劑或在WO 2014/141104中揭露的化合物。在一個實施方式中，IDH抑制劑係在PCT公開案號WO 2014/141104中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：BCL-ABL抑制劑或在PCT公開案號WO2013/171639、WO2013/171640、WO2013/171641、或WO2013/171642中揭露的化合物。在一個實施方式中，BCL-ABL抑制劑係在PCT公開案號WO 2013/171639、WO 2013/171640、WO 2013/171641、或WO 2013/171642中揭露的化合物。
在另一個實施方式中，組合(例如，包含如本文所述的抗人ENTPD2抗體分子的組合)包括以下項或與以下項組合使用以治療障礙(例如，本文所述的障礙)：c-RAF抑制劑或在PCT公開案號WO 2014/151616中揭露的化合物。在一個實施方式中，c-RAF抑制劑係化合物A50或在PCT公開案號WO 2014/151616中揭露的化合物。在一些實施方式中，c-RAF抑制劑或化合物A50係具有式的(I)的化合物： b.
Figure 108118358-A0202-12-0306-1323
c. 或其藥學上可接受的鹽，其中：d. Z1 係O、S、S(=O)或SO2 ；e. Z2 係N、S或CRa ，其中Ra 係H、鹵素、C1-4 烷基或C1-4 鹵代烷基；f. R1 係CN、鹵素、OH、C1-4 烷氧基、或C1-4 烷基，視情況被選自鹵素、C1-4 烷氧基、CN、和羥基的一個至三個基團取代； g. 環B選自苯基、吡啶、嘧啶、吡
Figure 108118358-A0202-12-0307-219
、嗒
Figure 108118358-A0202-12-0307-220
、吡啶酮、嘧啶酮、吡
Figure 108118358-A0202-12-0307-222
酮、嗒
Figure 108118358-A0202-12-0307-223
酮、和噻唑，其各自視情況被多達兩個基團取代，該基團選自鹵素、OH、CN、C1-4 烷基、C2-4 烯基、-O-(C1-4 烷基)、NH2 、NH-(C1-4 烷基)、-N(C1-4 烷基)2 、-SO2 R2 、NHSO2 R2 、NHC(O)R2 、NHCO2 R2 、C3 -6 環烷基、5-6元雜芳基、-O-C3 -6 環烷基、-O-(5-6元雜芳基)、C4-8 雜環烷基、和-O-(4-8元雜環烷基)，其中每個雜環烷基和雜芳基包含選自N、O和S的多達三個雜原子作為環成員，i. 其中每個C1-4 烷基、C2-4 烯基、C3-6 環烷基、5-6元雜芳基、和4-8元雜環烷基各自視情況被選自側氧基、羥基1、鹵素、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、C1-4 烷氧基、和-(CH2 )1-2 Q的多達三個基團視情況取代，其中Q係OH、C1-4 烷氧基、-CN、NH2 、-NHR3 、-N(R3 )2 、-SO2 R3 、NHSO2 R3 、NHC(O)OR3 、或NHC(O)R3 ；每個R2 和R3 獨立地是C1-4 烷基；以及ii. 環B視情況與含有選自N、O合S的多達兩個雜原子的5-6元芳香族或非芳香族環稠和，其中該5-6元環可以被鹵素、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、或C1-4 烷氧基取代，並且如果該稠和的環係非芳香族的，那麼該等取代基選擇可以進一步包括側氧基；h. 每個Y獨立地選自C1-4 烷基、C1-4 烷氧基、CN、鹵素、側氧基、-(CH2 )P OR4 、-(CH2 )p N(R4 )2 、-(CH2 )pNHC(O)R4 、-(CH2 )p NHCOO(C1-4 烷基)和咪唑，i. 或環A上的兩個Y基團視情況一起形成與環A稠和或橋接的環，其中所述稠和或橋接的環視情況包含選自N、O和S的雜原子作為環成員，並且視情況被選自C1-4 烷基、C1-4 烷氧基、CN、鹵素、側氧基、-(CH2 )p OR4 、-(CH2 )P N(R4 )2 、-(CH2 )p NHC(O)R4 、和-(CH2 )p NHCOO(C1-4 烷基)的多達兩個基團取代；j. 每個R4 獨立地是H或C1-4 烷基；k. 每個p獨立地是0、1、或2；l. q係0、1或2； m. Z3 、Z4 、和Z5 獨立地選自CH和N以及視情況NO；n. L係-C(=O)-NR4 -[CY]或-NR4 -C(=O)-[CY]，其中[CY]表示L的哪個原子附接至CY；以及o. CY係選自苯基、吡啶、嘧啶、吡
Figure 108118358-A0202-12-0308-224
、嗒
Figure 108118358-A0202-12-0308-225
e、吡啶酮、噻唑、異噻唑、
Figure 108118358-A0202-12-0308-226
唑、吡唑、和異
Figure 108118358-A0202-12-0308-227
唑的芳香族環，其中該環視情況與噻吩、咪唑、
Figure 108118358-A0202-12-0308-228
唑酮、或吡咯環稠和；p. 並且CY被多達兩個基團取代，該基團選自鹵素、CN、R5 、OR5 、SO2 R5 、-S(=NH)(=O)R5 、OH、NH2 、NHR5 、和-N(R5 )2 ，i. 其中每個R5 獨立地是C1-4 烷基、C2-4 .烯基、C2-6 雜環基、5元雜芳基(含有選自N、O和S的多達三個雜原子作為環成員)、或C3-8 環烷基，並且R5 視情況被選自側氧基、鹵素、CN、R6 、OH、OR6 、SO2 R6 、NH2 、NHR6 、N(R6 )2 、NHSO2 R6 、NHCOOR6 、NHC(=O)R6 、-CH2 OR7 、-CH2 N(R7 )2 的多達四個基團取代，其中每個q. R6 獨立地是C1-4 烷基，並且每個R7 獨立地是H或C1-4 烷基；r. 並且在相同氮原子上的兩個R4 、R5 、R6 、或R7 可以一起形成5-6元雜環的環，該環視情況含有另外的N、O或S作為環成員並且視情況被選自C1-4 烷基、側氧基、鹵素、OH、和C1-4 烷氧基的多達兩個基團取代。
示例性細胞療法
還可以將抗人ENTPD2抗體分子與細胞療法組合，例如，嵌合抗原受體(CAR)療法、T細胞療法、自然殺傷(NK)細胞療法、或樹突細胞療法。
與CAR療法的組合
本文所述的抗人ENTPD2抗體分子可以與第二治療劑(例如，包含嵌合抗原受體(CAR)的細胞)組合給予。該CAR可以包括i)細胞外抗原結合結構域、ii)跨膜結構域、和iii)細胞內傳訊結構域(可以包含第初級傳訊結構域和共刺激結構域中的一個或兩個第一傳訊結構域和共刺激結構域)。該CAR可 以進一步包含前導序列和/或鉸鏈序列。在具體的實施方式中，CAR構建體包含scFv結構域，其中scFv之前可以是視情況的前導序列，並且之後是視情況的鉸鏈序列、跨膜區和細胞內傳訊結構域，例如，其中該等結構域與相同的閱讀框架鄰接並在其中形成單一的融合蛋白。
在一些實施方式中，CAR分子包含本文所述的CD19 CAR分子，例如，在US 2015/0283178中所述的CD19 CAR分子(例如，CTL019)。在實施方式中，CD19 CAR包含胺基酸，或具有US 2015/0283178中所示的核苷酸序列(藉由引用以其全文併入本文)，或與其基本上相同的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、或95%序列同一性的序列)。
在一個實施方式中，結合CD19的CAR T細胞具有USAN名稱TISAGENLECLEUCEL-T。CTL019藉由T細胞的基因修飾來製備，該CTL019藉由用在EF-1 α啟動子控制下含有CTL019轉基因的自身失活、複製缺陷型慢病毒(LV)運載體的轉導進行穩定插入來介導。CTL019可以是轉基因陽性和陰性T細胞的混合物，其基於轉基因陽性T細胞百分比遞送至受試者。
在一個實施方式中，CD19 CAR包含在PCT公開WO2012/079000中作為SEQ ID NO：12提供的胺基酸序列。在實施方式中，該胺基酸序列係：
Figure 108118358-A0202-12-0309-315
Figure 108118358-A0202-12-0309-316
(SEQ ID NO：312)， 或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、或95%序列同一性的序列)，有或沒有用大寫字母表示的訊號肽序列。
在一個實施方式中，胺基酸序列係：
Figure 108118358-A0202-12-0310-317
(SEQ ID NO：313)，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、或95%序列同一性的序列)。
嵌合抗原受體(CAR)的抗原結合結構域
抗原結合結構域可以是與抗原結合的任何結構域，包括但不限於單株抗體、多株抗體、重組抗體、人抗體、人源化抗體、及其功能片段，包括但不限於單結構域抗體(如駱駝來源的奈米抗體的重鏈可變結構域(VH)、輕鏈可變結構域(VL)、和可變結構域(VHH))，以及本領域已知的用作抗原結合結構域的可替代支架(如重組纖連蛋白結構域等)、T細胞受體(TCR)或其片段(例如，單鏈TCR)等。在一些情況下，抗原結合結構域衍生自其中最終將使用CAR的相同物種係有益的。例如，對於在人中使用，CAR的抗原結合結構域包含抗體或抗體片段的抗原結合結構域的人或人源化殘基可以是有益的。
在一些實施方式中，CAR的抗原結合結構域係scFv抗體片段，該scFv抗體片段與衍生出它的scFv的鼠序列相比係人源化的。
在一些實施方式中，抗原結合結構域結合本文所述的腫瘤抗原。在實施方式中，腫瘤抗原選自：CD19；CD123；CD22；CD30；CD171；CS-1(也稱為CD2亞群1、CRACC、SLAMF7、CD319、以及19A24)；C型凝集素樣分子-1(CLL-1或CLECL1)；CD33；表皮生長因子受體變體III(EGFRvIII)；神經節苷脂G2(GD2)；神經節苷脂GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer)；TNF受體家族成員B細胞成熟(BCMA)；Tn抗原((Tn Ag)或(GalNAcα-Ser/Thr))；前列腺特異性膜抗原(PSMA)；受體酪胺酸激酶樣孤兒受體1(ROR1)；Fms樣酪胺酸激酶3(FLT3)；腫瘤相關醣蛋白72(TAG72)；CD38；CD44v6；癌胚抗原(CEA)；上皮細胞粘附分子(EPCAM)；B7H3(CD276)；KIT(CD117)；白細胞介素-13受體亞基α-2(IL-13Ra2或CD213A2)；間皮素；白細胞介素11受體α(IL-11Ra)；前列腺幹細胞抗原(PSCA)；蛋白酶絲胺酸21(睾蛋白或PRSS21)；血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)；Lewis(Y)抗原；CD24；血小板衍生的生長因子受體β(PDGFR-β)；階段特異性胚胎抗原-4(SSEA-4)；CD20；葉酸受體α；受體酪胺酸蛋白激酶ERBB2(Her2/neu)；黏蛋白1，細胞表面相關的(MUC1)；表皮生長因子受體(EGFR)；神經細胞粘附分子(NCAM)；前列腺酶；前列腺酸性磷酸酶(PAP)；突變的延伸因子2(ELF2M)；肝配蛋白B2；成纖維細胞活化蛋白α(FAP)；似胰島素生長因子1受體(IGF-I受體)，碳酸酐酶IX(CAIX)；蛋白酶體(Prosome，Macropain)亞基，β型，9(LMP2)；醣蛋白100(gp100)；由斷裂點簇集區(BCR)和Abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1(Ab1)組成的致癌基因融合蛋白(ber-ab1)；酪胺酸酶；肝配蛋白A型受體2(EphA2)；岩藻糖基GM1；唾液酸Lewis粘附分子(sLe)；神經節苷脂GM3(aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer)；轉麩醯胺酸酶5(TGS5)；高分子量-黑素瘤相關抗原(HMWMAA)；o-乙醯基-GD2神經節苷脂(OAcGD2)；葉酸受體β； 腫瘤內皮標記1(TEM1/CD248)；腫瘤內皮標記7相關的(TEM7R)；密封蛋白6(CLDN6)；促甲狀腺激素受體(TSHR)；G蛋白偶聯受體C類5組，成員D(GPRC5D)；染色體X開放閱讀框61(CXORF61)；CD97；CD179a；間變性淋巴瘤激酶(ALK)；聚唾液酸；胎盤特異性1(PLAC1)；globoH糖基神經醯胺(GloboH)的六糖部分；乳腺分化抗原(NY-BR-1)；尿溶蛋白2(UPK2)；甲型肝炎病毒細胞受體1(HAVCR1)；腎上腺素受體β 3(ADRB3)；泛連接蛋白3(PANX3)；G蛋白偶聯受體20(GPR20)；淋巴細胞抗原6複合物，基因座K 9(LY6K)；嗅覺受體51E2(OR51E2)；TCR γ替代性閱讀框蛋白(TARP)；腎母細胞瘤蛋白(WT1)；癌/睾丸抗原1(NY-ESO-1)；癌/睾丸抗原2(LAGE-1a)；黑色素瘤相關抗原1(MAGE-A1)；ETS易位變異基因6，位於染色體12p上(ETV6-AML)；精子蛋白17(SPA17)；X抗原家族，成員1A(XAGE1)；血管生成素結合細胞表面受體2(Tie 2)；黑素瘤癌睾丸抗原-1(MAD-CT-1)；黑素瘤癌睾丸抗原-2(MAD-CT-2)；Fos相關的抗原1；腫瘤蛋白p53(p53)；p53突變體；前列腺特異性蛋白(prostein)；存活蛋白(surviving)；端粒酶；前列腺癌腫瘤抗原-1(PCTA-1或半乳醣蛋白8)、T細胞1識別的黑色素瘤抗原(MelanA或MART1)；大鼠肉瘤(Ras)突變體；人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)；肉瘤易位中斷點；黑素瘤細胞凋亡抑制劑(ML-IAP)；ERG(跨膜蛋白酶、絲胺酸2(TMPRSS2)ETS融合基因)；N-乙醯葡糖胺基轉移酶V(NA17)；配對盒蛋白Pax-3(PAX3)；雄激素受體；細胞週期蛋白B1；v-myc禽類骨髓細胞瘤病毒致癌基因神經母細胞瘤來源同源物(MYCN)；Ras同源物家族成員C(RhoC)；酪胺酸酶相關蛋白2(TRP-2)；細胞色素P450 1B1(CYP1B1)；CCCTC-結合因子(鋅指蛋白)樣(BORIS或印記位點調節因子樣蛋白(Brother of the Regulator of Imprinted Sites))，T細胞3識別的鱗狀細胞癌抗原(SART3)；配對盒蛋白Pax-5(PAX5)；前頂體蛋白結合蛋白sp32(OY-TES1)；淋巴細 胞特異性蛋白酪胺酸激酶(LCK)；激酶錨蛋白4(AKAP-4)；滑膜肉瘤，X中斷點2(SSX2)；晚期糖基化終產物受體(RAGE-1)；腎遍在蛋白1(RU1)；腎遍在蛋白2(RU2)；豆莢蛋白；人乳頭狀瘤病毒E6(HPV E6)；人乳頭狀瘤病毒E7(HPV E7)；腸羧酸酯酶；突變的熱休克蛋白70-2(mut hsp70-2)；CD79a；CD79b；CD72；白細胞相關的免疫球蛋白樣受體1(LAIR1)；IgA受體的Fc片段(FCAR或CD89)；白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族A成員2(LILRA2)；CD300分子樣家族成員f(CD300LF)；C型凝集素結構域家族12成員A(CLEC12A)；骨髓基質細胞抗原2(BST2)；含EGF樣模組的粘蛋白樣激素受體樣2(EMR2)；淋巴細胞抗原75(LY75)；磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)；Fc受體樣5(FCRL5)；以及免疫球蛋白λ樣多肽1(IGLL1)。
在一個實施方式中，該CAR分子包含BCMA CAR分子，例如，在US 2016/0046724或WO 2016/014565中所述的BCMA CAR，該等申請藉由引用併入本文中。在實施方式中，該BCMA CAR包含胺基酸，或具有CAR分子的核苷酸序列，或根據US 2016/0046724、或表1或16、WO 2016/014565(藉由引用併入本文中)的SEQ ID NO：271或SEQ ID NO：273的抗原結合結構域，或與前述序列中任一項基本上同一的序列(例如，與前述BCMA CAR序列中的任一項具有至少約85%、90%、或95%序列同一性)。在WO 2016/014565中詳細說明了編碼BCMA CAR分子和抗原結合結構域(例如，包括根據卡巴特或喬西亞的一個、兩個、三個VH CDR和一個、兩個、三個VL CDR)的胺基酸和核苷酸序列。
嵌合抗原受體(CAR)的跨膜結構域
關於跨膜結構域，在各種實施方式中，CAR可以設計為包含附接至CAR的細胞外結構域的跨膜結構域。
跨膜結構域可以源自天然來源或來自重組來源。在來源係天然的情況下，該結構域可以源自任何膜結合或跨膜蛋白。在一方面，每當CAR結合 靶標時，跨膜結構域能夠將傳訊至一個或多個細胞內結構域。跨膜結構域可以至少包括例如T細胞受體的α、β或ζ鏈、CD28、CD27、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154的一個或多個跨膜區。在一些實施方式中，跨膜結構域可以至少包括以下中的一個或多個跨膜區：例如KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1(CD11a、CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2R β、IL2R γ、IL7R α、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D或NKG2C。
在一些情況下，跨膜結構域可以藉由鉸鏈(例如來自人蛋白質的鉸鏈)附接到CAR的細胞外區域(例如CAR的抗原結合結構域)。例如，在一個實施方式中，該鉸鏈可以是人Ig(免疫球蛋白)鉸鏈(例如IgG4鉸鏈、IgD鉸鏈)、GS接頭(例如本文描述的GS接頭)、KIR2DS2鉸鏈或CD8a鉸鏈。
嵌合抗原受體(CAR)的細胞內傳訊結構域
CAR的細胞質結構域或區包含細胞內傳訊結構域。細胞內傳訊結構域通常負責活化已引入CAR的免疫細胞的至少一種正常效應子功能。
用於在CAR中使用的細胞內傳訊結構域的實例包括T細胞受體(TCR)和共受體的細胞質序列(它們協同作用以在抗原受體接合後啟動訊號轉導)以及該等序列的任何衍生物或變體和任何具有相同功能能力的重組序列。
初級傳訊結構域以刺激方式或以抑制性方式調控TCR複合物的初級活化。以刺激方式起作用的初級細胞內傳訊結構域可以含有被稱為基於免疫受體酪胺酸的活化模體或ITAM的傳訊模體。
含有初級細胞內傳訊結構域的ITAM的實例包括以下的那些：CD3 ζ、常見FcR γ(FCER1G)、Fc γ RIIa、FcR β(Fc ε R1b)、CD3 γ、CD3 δ、CD3 ε、CD79a、CD79b、DAP10、和DAP12。在一個實施方式中，CAR包含細胞內傳訊結構域，例如，CD3-ζ的第一傳訊結構域。
CAR的細胞內傳訊結構域可以包含CD3-ζ傳訊結構域本身，或者它可以與在本發明的CAR的背景中使用的任何其他所需細胞內傳訊結構域組合。例如，CAR的細胞內傳訊結構域可以包含CD3 ζ鏈部分和共刺激傳訊結構域。共刺激傳訊結構域係指CAR的包含共刺激分子的細胞內結構域的部分。共刺激分子係除了抗原受體或其配位基之外的細胞表面分子，係淋巴細胞對抗原的有效應答所必需的。此類分子的實例包括CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3和結合CD83的配位基等。例如，已證明CD27共刺激可增強體外人CART細胞的擴增、效應子功能、和存活，並增加體內人T細胞持久性和抗腫瘤活性(Song等人Blood.[血液]2012；119(3)：696-706)。此類共刺激分子的其他實例包括CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2R β、IL2Rγ、IL7R α、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、 CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、NKG2D、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、和CD19a。
免疫效應細胞(例如，T細胞)的活化和擴增
免疫效應細胞(如T細胞)通常可以使用如描述於例如以下中的方法進行活化和擴增：美國專利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；和美國專利申請公開案號2006/0121005，藉由引用併入本文中。
免疫效應細胞的實例包括T細胞，例如α/β T細胞和γ/δ T細胞、B細胞、天然殺傷(NK)細胞、天然殺傷T(NKT)細胞、肥大細胞、和骨髓衍生的吞噬細胞。
製備CAR表現細胞的方法描述於例如，US 2016/0185861中，藉由引用併入本文中。
示例性癌症疫苗
可以將抗人ENTPD2抗體分子與以下項組合：免疫原性劑(例如，癌細胞)、經純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白質、肽、和碳水化合物分子)、細胞和用編碼免疫刺激的細胞介素的基因轉染的細胞(He等人，(2004)J.Immunol. [免疫學雜誌]173：4919-28)。可以使用的腫瘤疫苗的非限制性實例包括黑素瘤抗原的肽，例如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪胺酸酶的肽、轉染以 表現細胞介素GM-CSF的腫瘤細胞、基於DNA的疫苗、基於RNA的疫苗、和基於病毒轉導的疫苗。癌症疫苗可以是預防性或治療性的。
可以將ENTPD2阻斷物與腫瘤中表現的重組蛋白和/或肽的集合結合使用，以便於產生對該等蛋白的免疫應答。
其他腫瘤疫苗可以包括來自與人癌症有關的以下病毒的蛋白質，如人乳頭瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV和HCV)、卡波西氏皰疹肉瘤病毒(KHSV)和EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)。可以與ENTPD2阻斷物結合使用的另一種形式的腫瘤特異性抗原係從腫瘤組織本身分離的經純化的熱休克蛋白(HSP)。該等熱休克蛋白含有來自腫瘤細胞的蛋白質片段，並且該等HSP在遞送至抗原遞送細胞時具有高效率，可引發腫瘤免疫(Suot,R和Srivastava,P(1995)Science [科學]269：1585-1588；Tamura,Y.等人，(1997)Science [科學]278：117-120)。
樹突細胞(DC)係有效的抗原呈遞細胞，可用於引發抗原特異性應答。DC可以離體產生並載入各種蛋白質和肽抗原以及腫瘤細胞提取物(Nestle,F.等人，(1998)Nature Medicine [自然醫學]4：328-332)。DC也可以藉由遺傳手段轉導以表現該等腫瘤抗原。出於免疫目的，DC也已經直接與腫瘤細胞融合(Kugler,A.等人，(2000)Nature Medicine [自然醫學]6：332-336)。作為疫苗接種的方法，DC免疫可以與CD73阻斷物有效組合以活化更有效的抗腫瘤反應。
示例性溶瘤病毒
可以將抗人ENTPD2抗體分子與溶瘤病毒組合給予。在實施方式中，溶瘤病毒能夠選擇性地複製並引發癌細胞的死亡或減緩其生長。在一些情況下，溶瘤病毒對非癌細胞沒有影響或影響很小。在一些實施方式中，將組合用於治療癌症，例如， 本文所述的癌症。溶瘤病毒包括但不限於溶瘤腺病毒、溶瘤性疱疹單純型病毒、溶瘤性逆轉錄病毒、溶瘤性微小病毒、溶瘤性痘苗病毒、溶瘤 性辛奈病毒(oncolytic Sindbis virus)、溶瘤性流感病毒、或溶瘤性RNA病毒(例如，溶瘤性裏奧病毒、溶瘤性新城雞瘟病毒(NDV)、溶瘤性麻疹病毒、或溶瘤性水皰性口炎病毒(VSV))。
示例性溶瘤病毒包括但不限於以下：B組溶瘤腺病毒(ColoAd1)(PsiOxus Therapeutics公司)(參見例如，臨床試驗標識：；NCT02053220)；ONCOS-102(以前稱為CGTG-102)，其係包含粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)(昂克斯治療公司(Oncos Therapeutics))的腺病毒(參見例如，臨床試驗識別字：；NCT01598129)；VCN-01，其係基因修飾的溶瘤人腺病毒，編碼人PH20透明質酸酶(VCN Biosciences，S.L.)(參見，例如，臨床試驗識別字：NCT02045602和NCT02045589)；條件複製型腺病毒ICOVIR-5，其係經修飾以在癌細胞中用失調的視網膜母細胞瘤/E2F途徑選擇性複製的源自野生型人腺病毒血清型5(Had5)的病毒，(Institut Català d'Oncologia公司)(參見例如，臨床試驗標識：NCT01864759)；Celyvir，其包含用ICOVIR5感染的骨髓來源的自體間充質幹細胞(MSC)，該ICOVIR5係溶瘤腺病毒(西班牙馬德里的小耶穌大學兒童醫院(Hospital Infantil Universitario Ni
Figure 108118358-A0202-12-0318-229
o Jesús,Madrid,Spain)/Ramon Alemany)(參見例如，臨床試驗標識：NCT01844661)；CG0070，其係條件性複製的溶瘤血清型5腺病毒(Ad5)，其中人E2F-1啟動子驅動必需E1a病毒基因的表現，從而限制病毒複製和對Rb途徑缺陷型腫瘤細胞的細胞毒性(Cold Genesys公司)(參見例如，臨床試驗標識：NCT02143804)；或 DNX-2401(以前命名為δ-24-RGD)，其係腺病毒，該腺病毒經工程化以在視網膜母細胞瘤(Rb)途徑缺陷型細胞中選擇性地複製並感染更高效地表現某些RGD結合整聯蛋白的細胞(那瓦勒大學醫院(Clinica Universidad de Navarra)，那瓦勒大學(Universidad de Navarra)/德那翠絲有限公司(DNAtrix,Inc.))(參見例如，臨床試驗識別字：NCT01956734)。
在一些實施方式中，將本文所述的溶瘤病毒藉由注射(例如，皮下、動脈內、靜脈內、肌肉內、鞘內、或腹膜內注射)給予。在實施方式中，將本文所述的溶瘤病毒藉由腫瘤內、透皮、經粘膜、口服、鼻內、或經由肺部給藥給予。
另外的示例性癌症療法
抗人ENTPD2抗體分子(單獨地或與其他刺激劑組合)和癌症護理的標準品的示例性組合包括至少以下。在某些實施方式中，將抗人ENTPD2抗體分子(例如，本文所述的抗人ENTPD2抗體分子)與癌症護理的化學治療劑的標準品組合使用，該等化學治療劑包括但不限於阿那曲唑(Arimidex ® )、比卡魯胺(Casodex ® )、硫酸博萊黴素(Blenoxane ® )、白消安(Myleran ® )、白消安注射液(Busulfex ® )、卡培他濱(Xeloda ® )、N4-戊氧基羰基-5-去氧-5--氟胞苷、卡鉑(Paraplatin ® )、卡莫司汀(BiCNU ® )、苯丁酸氮芥(Leukeran ® )、順鉑(Platinol ® )、克拉屈濱(Leustatin ® )、環磷醯胺(Cytoxan ® 或Neosar ® )、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Cytosar-U ® )、阿糖胞苷脂質體注射液(DepoCyt ® )、達卡巴嗪(DTIC-Dome ® )、更生黴素(放線菌素D、Cosmegan)、鹽酸柔紅黴素(Cerubidine ® )、檸檬酸道諾黴素脂質體注射液(DaunoXome ® )、地塞米松、多西他賽(Taxotere ® )、鹽酸阿黴素(Adriamycin ® 、Rubex ® )、依託泊苷(Vepesid ® )、磷酸氟達拉濱(Fludara ® )、5-氟尿嘧啶(Adrucil ® 、Efudex ® )、氟他米特(Eulexin ® )、替紮他濱、吉西他濱(二氟去氧胞二磷膽鹼)、羥基脲(Hydrea ® )、伊達比星 (Idamycin® )、異環磷醯胺(IFEX® )、伊立替康(Camptosar® )、L-天冬醯胺酶(ELSPAR® )、亞葉酸鈣、美法侖(Alkeran® )、6-巰基嘌呤(Purinethol® )、胺甲蝶呤(Folex® )、米托蒽醌(Novantrone® )、吉妥單抗(mylotarg)、紫杉醇(Taxol® )、夫尼斯(phoenix)(釔90/MX-DTPA)、噴司他丁(pentostatin)、具有卡莫司汀灌輸的聚苯丙生20(Gliadel® )、檸檬酸他莫西芬(Nolvadex® )、替尼泊苷(Vumon® )、6-硫鳥嘌呤、噻替派、替拉紮明(tirapazamine)(Tirazone® )、注射用鹽酸拓撲替康(Hycamptin® )、長春花鹼(Velban® )、長春新鹼(Oncovin® )、長春瑞濱(Navelbine® )、依魯替尼、艾拉利司(idelalisib)、和本妥昔單抗。
在某些實施方式中，將抗人ENTPD2抗體分子(例如，本文所述的抗人ENTPD2抗體分子)與烷基化劑組合使用，該烷基化劑包括但不限於氮芥、乙烯亞胺衍生物、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三氮烯)：烏拉莫司汀(Aminouracil Mustard®、Chlorethaminacil®、Demethyldopan®、Desmethyldopan®、Haemanthamine®、Nordopan®、Uracil nitrogen mustard®、Uracillost®、Uracilmostaza®、Uramustin®、Uramustine®)、氮芥(chlormethine)(Mustargen®)、環磷醯胺(Cytoxan®、Neosar®、Clafen®、Endoxan®、Procytox®、RevimmuneTM )、異環磷醯胺(Mitoxana®)、美法侖(Alkeran®)、苯丁酸氮芥(Leukeran®)、哌泊溴烷(Amedel®、Vercyte®)、三乙烯蜜胺(Hemel®、Hexalen®、Hexastat®)、三乙烯硫代磷醯胺、替莫唑胺(Temodar®)、噻替派(Thioplex®)、白消安(Busilvex®、Myleran®)、卡莫司汀(BiCNU®)、洛莫司汀(CeeNU®)、鏈脲佐菌素(Zanosar®)和達卡巴嗪(DTIC-Dome®)。另外的示例性烷化劑包括而不限於奧沙利鉑(Eloxatin®)；替莫唑胺(Temodar®和Temodal®)；更生黴素(也稱為放線菌素-D、Cosmegen®)；美法侖(也稱為L-PAM、L-溶肉瘤素和苯丙胺酸氮芥、Alkeran®)；六甲蜜胺(也稱為六甲基三聚氰胺(HMM)、Hexalen®)；卡莫司汀(BiCNU®)；苯達莫司汀(Treanda®)；白消安(Busulfex® 和Myleran®)；卡鉑(Paraplatin®)；洛莫司汀(也稱為CCNU、CeeNU®)；順鉑(也稱為CDDP、Platinol®和Platinol®-AQ)；苯丁酸氮芥(Leukeran®)；環磷醯胺(Cytoxan®和Neosar®)；達卡巴嗪(也稱為DTIC、DIC和咪唑甲醯胺、DTIC-Dome®)；六甲蜜胺(也稱為六甲基三聚氰胺(HMM)、Hexalen®)；異環磷醯胺(Ifex®)；Prednumustine；丙卡巴肼(Matulane®)；二氯甲基二乙胺(也稱為氮芥、鹽酸氮芥和鹽酸二氯甲基二乙胺、Mustargen®)；鏈脲佐菌素(Zanosar®)；噻替派(也稱為硫代磷醯胺、TESPA和TSPA、Thioplex®)；環磷醯胺(Endoxan®、Cytoxan®、Neosar®、Procytox®、Revimmune®)；和鹽酸苯達莫司汀(Treanda®)。
在某些實施方式中，該抗人ENTPD2抗體分子(例如，本文所述的抗人ENTPD2抗體分子)與蒽環類組合使用，包括但不限於例如，阿黴素(Adriamycin®和Rubex®)；博萊黴素(lenoxane®)；柔紅黴素(鹽酸柔紅黴素、道諾黴素、和鹽酸紅比黴素，Cerubidine®)；柔紅黴素脂質體(柔紅黴素檸檬酸鹽脂質體，DaunoXome®)；米托蒽醌(DHAD，Novantrone®)；表柔比星(EllenceTM )；伊達比星(Idamycin®，Idamycin PFS®)；絲裂黴素C(Mutamycin®)；格爾德黴素；除莠黴素；近灰黴素(ravidomycin)；和去乙醯近灰黴素(desacetylravidomycin)。可以與抗人ENTPD2抗體分子組合使用的示例性長春花鹼，包括但不限於酒石酸長春瑞濱(Navelbine®)、長春新鹼(Oncovin®)、和長春地辛(Eldisine®))；長春鹼(也稱為硫酸長春鹼、長春花鹼和VLB，Alkaban-AQ®和Velban®)；和長春瑞濱(Navelbine®)。
可以與如本文所述的抗人ENTPD2抗體組合使用的示例性蛋白酶體抑制劑包括，但不限於硼替佐米(Velcade®)；卡非佐米(PX-171-007，(S )-4-甲基-N -((S )-1-(((S )-4-甲基-1-((R )-2-甲基環氧乙烷-2-基)-1-側氧基戊-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-2-((S )-2-(2-
Figure 108118358-A0202-12-0321-231
啉代乙醯胺基)-4-苯基丁醯胺基)-戊醯 胺)；marizomib(NPI-0052)；艾沙佐米檸檬酸鹽(MLN-9708)；delanzomib(CEP-18770)；和O -甲基-N -[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-L-絲胺醯-O -甲基-N -[(1S )-2-[(2R )-2-甲基-2-環氧乙烷基]-2-側氧基-1-(苯基甲基)乙基]-L-絲胺醯胺(ONX-0912)。
在某些實施方式中，將抗人ENTPD2抗體分子與放射療法組合給予。放射療法可以藉由若干方法之一或方法的組合來給予，包括但不限於外部束療法、內部放射療法、植入物放射、立體定向放射外科手術、全身放射療法、放射療法和永久或臨時間質近距離放射療法。術語「近距離放射療法」係指藉由將空間限制的放射性物質插入體內在腫瘤或其他增殖性組織疾病部位處或附近而遞送的放射療法。術語意在但不限於包括暴露於放射性同位素(例如，At-211、I-131、I-125、Y-90、Re-186、Re-188、Sm-153、Bi-212、P-32、和Lu的放射性同位素)。適合用作本發明細胞調節劑的輻射源包括固體和液體。藉由非限制性實例，輻射源可以是放射性核素，例如作為固體源的I-125、I-131、Yb-169、Ir-192，作為固體源的I-125，或其他發射光子、β粒子、γ輻射或其他治療射線的放射性核素。放射性材料也可以是由一種或多種放射性核素的任何溶液(例如I-125或I-131的溶液)製成的流體，或可以使用含有小顆粒的固體放射性核素(如Au-198，Y-90)的合適流體的漿液來生產放射性流體。
ENTPD2阻斷物也可以與化學治療方案有效組合。在該等情況下，可以減少所給予的化學治療劑的劑量。
可以與抗人ENTPD2抗體分子組合給予的示例性細胞毒性劑包括抗微管劑、拓撲異構酶抑制劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、烷化劑、蒽環類藥物、長春花生物鹼、嵌入劑、能夠干擾訊號轉導途徑的試劑、促進細胞凋亡的試劑、蛋白酶體抑制劑和輻射(例如局部或全身輻射)。
樣品製備
可以使用本領域已知的任何一種方法(例如藉由活檢或手術)從受試者獲得本文所述方法中使用的樣品。樣品可以快速冷凍並儲存在-80℃以備後用。樣品也可以用固定劑(例如甲醛、多聚甲醛或乙酸/乙醇)固定。可以從新鮮、冷凍或固定的樣品中提取RNA或蛋白質用於分析。
藥物組成物、劑量和給予方法
本文還提供了用於在治療ENTPD2相關的疾病(例如，如本文所述的癌症)中使用的組成物(例如，藥物組成物)。此類組成物包含本文所述的一種或多種抗體或抗原結合片段、編碼此類抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼此類抗體或抗原結合片段的核酸的運載體。此類組成物可以進一步包含另一種藥劑，例如當前針對待治療疾病的護理標準。
藥物組成物典型地包含藥學上可接受的載體。如在此使用，表現「藥學上可接受的載體」包括與藥物給予可相容的鹽、溶劑、分散介質、塗料、抗細菌的和抗真菌的藥劑、等滲劑和吸收延遲劑等。典型地，藥物組成物被配製成與預期的給予途徑相容。給予途徑的實例包括腸胃外(例如，靜脈內、動脈內、腹膜內)、顱內、鞘內或鼻內(例如，吸入)、皮內、皮下或腫瘤內給予。
本文使用的短語「藥學上可接受的」係指在合理的醫學判斷的範圍，適合用於與人類和動物的組織接觸而不產生過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，同時具有相稱的合理受益/風險比的那些化合物、材料、組成物、和/或劑型。
在一些實施方式中，該等藥物組成物包含一種或多種藥學上可接受的載體，包括例如，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶 酮、纖維素基物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟類、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
配製適合的藥物組成物的方法在本領域中是已知的，參見，例如，Remington：The Science and Practice of Pharmacy.[雷明頓：藥物科學與實踐]第21版，2005；和在Drugs and the Pharmaceutical Sciences：a Series of Textbooks and Monographs[藥物和藥物科學：一系列教科書和專著](Dekker,NY)系列中的書籍。例如，被用於胃腸外或皮下應用的溶液或懸浮液可以包括以下組分：無菌稀釋劑，如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細菌劑，如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，如乙二胺四乙酸；緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；並且用於調節滲透壓的試劑如氯化鈉或葡萄糖。可以用酸或鹼(例如鹽酸或氫氧化鈉)調節pH。製劑可以被封裝在由玻璃或塑膠製成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。
適合於可注射使用的藥物組成物可以包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或分散體、以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。對於靜脈內的給予，適當的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM (巴斯夫公司(BASF)，帕西波尼(Parsippany)，新澤西州(NJ))或磷酸酯緩衝鹽水(PBS)。在所有情況下，該組成物必須係無菌的並且必須具有達到容易注射的程度的流動性。它在製造和儲存條件下應該穩定並且必須抗諸如細菌和真菌的微生物污染作用而保存。該載體可以是包含以下物質的溶劑或分散介質：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，以及其適合的混合物。可以例如藉由使用塗層(如卵磷脂)、藉由在分散液的情況下維持所需顆粒大小以及藉由使用表面活性劑來維持適當的流動性。防止微生物的作用可以藉由不同的抗細菌以及抗真菌劑，例如對羥苯甲酸酯、三氯三級丁醇、苯酚、 抗壞血酸、硫柳汞等來實現。在許多情況下，將較佳的是在組成物中包含等滲劑例如糖、多元醇(如甘露醇或山梨糖醇)和氯化鈉。可以藉由在組成物中包含延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實現可注射組成物的長時間吸收。
可以藉由以下各項來製備無菌可注射溶液：將活性化合物以所需的量，根據需要，與一種以上列舉的成分或該等成分的組合併入適當的溶劑中，然後進行過濾滅菌。
總體上，藉由將有效化合物摻入無菌媒介物來製備分散體，該無菌媒介物含有基礎分散介質以及來自以上列舉的所需其他成分。就用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末而言，較佳的製備方法係真空乾燥和冷凍乾燥，該等方法產生活性成分的粉末以及來自其以前的無菌過濾溶液的任何另外的所希望的成分。
胃腸外配製品可以是單次推注劑量，輸注或載入推注劑量，然後是維持劑量。可以按具體的固定或可變的間隔，例如每天一次，或「按需」給予該等組成物。
用於注射的合適的藥物組成物可以包含緩衝液(例如，乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝液)；表面活性劑(例如聚山梨醇酯)；視情況的穩定劑(例如，人白蛋白)等。外周給予的製劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的例子係丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射用有機酯如油酸乙酯。含水載體包括例如水、醇/水溶液、乳劑或懸液，包括鹽水和緩衝的介質。在一些實施方式中，該藥物組成物包含0.01-0.1M磷酸鹽緩衝液或0.8%鹽水。其他常見的胃腸外媒介物包括磷酸鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發性油。靜脈內媒介物可以包括流體和營養補充物、電解質補充物，如基於Ringer右旋糖的那些等。防腐劑和其他添加物也可以存在，如，例如抗微生物藥、抗氧化劑、螯合劑、和惰性氣體等。
在一個實施方式中，將該等治療性化合物與保護該等治療性化合物免於從體內快速消除的載體一起製備，如控釋配製品，包括植入物和微囊化的遞送系統。
藥物組成物可以與給藥的說明書一起包括在容器、包裝、或分配器中。
可以藉由細胞培養或實驗動物中的標準製藥程序來確定治療性化合物的劑量、毒性和治療效果，例如，用於確定LD50(使50%的群體致死的劑量)和ED50(在50%的患者群體中治療有效的劑量)。在毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數，它可以表示為比率LD50/ED50。表現出高治療指數的化合物係較佳的。儘管可以使用表現出有毒副作用的化合物，但是應該小心設計將此類化合物靶向至受影響的組織的部位的遞送系統，從而將對未感染的細胞的潛在損傷最小化，並且由此減少副作用。
從細胞培養測定和動物研究獲得的數據可以用於配製一系列的用於在人類中使用的劑量。較佳的是該等化合物的劑量處於包括ED50在內的有很小毒性或沒有毒性的循環濃度範圍內。該劑量可根據所應用的劑型和所使用的給藥途徑在該範圍內變化。對於用於本發明方法的任何化合物，均可根據細胞培養試驗初步估計治療有效劑量。一種劑量可以在動物模型中被配製以達到在細胞培養中確定的一種循環血漿濃度範圍，該範圍包括IC50(即該測試化合物的完成半最大症狀的抑制的濃度)。該資訊可用於更精確地確定在人中有用的劑量。可以例如藉由高效液相層析法來測量血漿中的水平。
套組
本文還提供了套組，該套組包括一種或多種本文提供的組成物和使用說明書。使用說明書可以包括用於診斷或治療如本文所述的ENTPD2相關疾病(例如癌症)的說明書。本文提供的套組可根據本文所述的任何一種方法使用。 熟悉該項技術者將知道本文提供的套組的其他合適用途，並且將能夠針對此類用途使用該套組。本文提供的套組還可以包括郵寄(例如，郵資支付信封或郵寄包)，其可以用於將樣品返回用於分析，例如，返回實驗室。套組可以包括一個或多個用於樣品的容器，或樣品可以在標準血液收集瓶中。套組還可以包括以下的一種或多種：知情同意書，試驗申請表和關於如何在本文所述方法中使用套組的說明。本文還包括使用此類套組的方法。可以對一個或多個表格(例如，測試申請表)和裝有樣品的容器進行編碼，例如，用條碼來鑒定提供樣品的受試者。
熟悉該項技術者將認識到許多類似於或等同於本文所述那些的方法和材料，該等方法和材料可用於實踐本發明。實際上，本發明決不限於所描述的方法和材料。
實例
雖然已經討論了本發明的特定實施方式，但上述說明係說明性而非限制性的。在綜述本說明書和以下申請專利範圍之後，本發明的許多修改對於熟悉該項技術者將是顯而易見的。應當藉由參考申請專利範圍及其等同形式的全範圍以及說明書連同此類變化來確定本發明的全範圍。在以下實例中進一步描述了本發明，該等實例不限制申請專利範圍中描述的本發明的範圍。
實例1：癌症中ENTPD2的表現
外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(也稱為ENTPD2、NTPD酶2、NTPD酶-2、外-ATP酶2、外-ATPD酶2、CD39抗原樣1、CD39L1、外-ATP-二磷酸水解酶2)屬於調節嘌呤傳訊(特別地ATP、UTP、以及細胞外空間中的ADP和UDP)的細胞外ATP水解酶家族(關於綜述參見Robson等人Purinergic Signaling[嘌呤傳訊]2：409-430(2006))。ATP/ADP水解的終產物5'AMP隨後藉由外-5'-核苷酸酶(也稱為外5'Nt酶或CD73)去磷酸化為腺苷。
ENTPD2在癌症中的功能作用尚未得到很好的描述。早期報導集中在大鼠膠質瘤模型中ENTPD2的過表現，該過表現藉由ADP介導的血小板調節和腫瘤微環境導致體內腫瘤生長增強，並促進增強腫瘤擴散的炎症狀態(Braganhol等人Cancer Sci[癌症科學]100(8)：1434-42(2009)；Braganhol等人Purinergic Signal[嘌呤訊號]8(2)：235-43(2012))。最近報導了在肝細胞癌中ENTPD2的升高的表現，其中該表現與預後較差相關，該預後是由於增強的髓樣來源的抑制細胞積累/維持而導致的(Chiu等人Nature Communications[自然通訊]8(1)：517(2017))。
儘管ENTPD2在癌症中的功能特徵在公共結構域中受到限制，但釋放到細胞外空間的嘌呤介質(如ATP和腺苷)已被證明在免疫和炎症中起重要作用。從受壓、受損或凋亡的細胞釋放的ATP藉由活化P2RX和P2RY受體引發快速炎症，該等受體增強免疫細胞的募集，增強T細胞中TCR傳訊並促進樹突細胞和巨噬細胞活化。另一方面，腺苷傳訊藉由抑制效應T細胞以及單核吞噬細胞的失調而導致免疫抑制性生態位(關於綜述，參見Cekic等人Nature Reviews Immunology[自然免疫學綜述]16：177-192(2016),Antonioli等人Nature Reviews Cancer[自然癌症綜述]13：842-857(2013))。在腫瘤部位的臨床前腺苷傳訊的阻斷物或細胞外ATP的恢復已經證明誘導淋巴細胞募集和抗腫瘤反應(Michaud等人Science[科學]334(6062)：1573-7(2011)；Allard等人Clinical Cancer Research[臨床癌症研究]19(20)：5626-35(2013))。
癌細胞中ENTPD2的升高的表現有可能顯著改變腫瘤微環境中嘌呤傳訊的平衡，使其轉向更具免疫抑制的狀態。因此，ENTPD2催化功能的靶向抑制可提供將平衡轉向ATP驅動的促炎性Th-1樣狀態的機會，從而增強抗腫瘤免疫應答。
尚未在不同的腫瘤亞型中仔細檢查ENTPD2表現。將抗人ENTPD2 mAb1用於評估來自不同適應症的癌細胞系的ENTPD2表現。將細胞用抗人ENTPD2 mAb1按5μg/ml在冰上染色45min，然後與山羊抗人IgG、Fcγ特異性、Alexa Fluor 647或APC軛合的次級Ab(1：400稀釋；傑克遜免疫研究實驗室公司(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，西格羅夫，賓夕法尼亞州)孵育。所有的孵育和洗滌均在FACS緩衝液中進行，該緩衝液由以下項組成：1x HyClone磷酸鹽緩衝鹽水(GE醫療集團(GE Healthcare)，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、1%HyClone胎牛血清(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、2mM EDTA(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)。
如圖1A所示，在來自結腸直腸癌、食管癌、胃癌、乳癌和肺癌適應症的代表性癌細胞系中觀察到ENTPD2的表現升高。根據製造商的說明，使用來自班斯實驗室(Bangs Laboratories)(Fishers,IN)的Quantum Simply Cellular抗人IgG對ENTPD2受體密度進行定量(表20，圖1B)。
為了評估原發性腫瘤組織中ENTPD2蛋白表現，從Cureline(布里斯班，加利福尼亞州)獲得具有匹配的相鄰正常組織的福馬林固定的石蠟包埋的腫瘤組織微陣列。用抗CD39L1/ENTPD2 IHC Ab(NBP1-85752，諾烏斯，立托頓，科羅拉多州(Novus,Littleton,CO))，使用自動Ventana方案進行IHC染色，其中在95℃下標準高pH CC1抗原修復，並隨後與Ventana DISCOVERY® OmniMap抗Rb HRP次級Ab和Ventana DISCOVERY® ChromoMap DAB套組(Ventana，Tuscon AZ)孵育。
在結腸直腸癌、食管癌和卵巢腫瘤樣品的亞組中觀察到定位於細胞膜的升高的ENTPD2表現。在匹配的正常組織切片中未檢測到或檢測到非常低的ENTPD2表現背景水平(圖2)。
實例2：結合人ENTPD2的人源化單株抗體的產生
人、大鼠、小鼠和食蟹猴ENTPD2的表現構建體的產生
編碼來自人、食蟹猴(cyno)、大鼠和小鼠的全長ENTPD2以及來自人和小鼠的ENTPD1(CD39)的核苷酸序列基於來自GenBank ® 或UniProtKB數據庫的胺基酸序列合成(參見表24)。將所有合成的DNA片段選殖到合適的表現載體中。
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Figure 108118358-A0202-12-0331-319
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來自HEK培養基的重組小鼠ENTPD1以及小鼠和大鼠ENTPD2的表現和純化
如下產生重組單體小鼠或大鼠ENTPD2以及小鼠ENTPD1：將FreeStyle TM 293-F細胞(賽默飛世爾科技公司)在Gibco TM FreeStyle TM 293表現介質中培養，並用含有CMV啟動子、小鼠IgK訊號肽、小鼠或大鼠ENTPD2(細胞外結構域)的殘基29-462、或小鼠ENTPD1的殘基38-478、以及聚組胺酸(His 6 )標籤(SEQ ID NO：1010)的質粒暫態轉染。轉染後4天，將來自1L培養物的細胞以2600×g 沈澱10分鐘，並通過0.22μm過濾器過濾使上清液澄清。向上清液中補充20mM Tris-HCl pH 8.0和20mM咪唑，並載入到用6mL Ni-NTA瓊脂糖(Qiagen)預包裝的柱上。將該柱用10倍柱體積的洗滌緩衝液[20mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl、20mM咪唑]洗滌，並用5倍柱體積的洗脫緩衝液[20mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl、250mM咪唑]洗脫。使用PD-10脫鹽柱(GE醫療集團)將蛋白質緩衝液交換到TBS pH 7.4中並冷凍儲存。
來自昆蟲細胞的人ENTPD1以及人和食蟹猴ENTPD2的表現和純化
將Bac-to-Bac ® 桿狀病毒表現系統(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))用於表現重組人ENTPD1以及人和食蟹猴ENTPD2蛋白。將人ENTPD1的殘基38-478或人或食蟹猴ENTPD2的殘基29-462選殖到具有GP67訊號肽和C末端Avi-His 6 標籤(SEQ ID NO：1010)的表現運載體pFastBac TM 1(賽默飛世爾科技公司)中。將該等選殖的運載體轉化到DH10Bac TM 大腸桿菌(Escherichia coli )(賽默飛世爾科技公司)感受態細胞中以製備重組桿粒。然後使用PureLink ® HiPure質粒微量製備套組(賽默飛世爾科技公司)提取重組桿粒，並使用FuGene ® HD(普洛麥格公司(Promega))轉染到Sf9(草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda ))細胞中以產生重組桿狀病毒(BV)。在一輪擴增後，將所得BV用於在1L懸浮培養液中以2×10 6 個細胞/ml的密度且按感染複數(MOI)為10感染High Five TM (粉紋夜蛾(Trichoplusia ni ))細胞(賽默飛世爾科技公司)。在感染後72小時，藉由以2600×g 離心10分鐘將細胞沈澱，並收集含有分泌的、糖基化的重組蛋白的介質。然後向上清液中補充50mM Tris pH 8.0、1mM NiCl 2 、5mM CaCl 2 並然後以2600×g 離心30分鐘。將上清液通過0.22μm過濾器進行過濾，並載入到包裝有6mL Ni-NTA瓊脂糖(凱傑公司(Qiagen))的柱上。用10倍柱體積的上述洗滌緩衝液洗滌柱，並用洗脫緩衝液(也如上所述)洗脫。使用PD-10柱(GE醫療集團)將蛋白質緩衝液交換到TBS(20mM Tris pH 7.4，150mM NaCl)中並冷凍儲存。
穩定表現ENTPD1或ENTPD2的細胞系的產生
使用逆轉錄病毒轉導產生穩定的ENTPD1或ENTPD2表現細胞系。根據製造商的建議，為產生逆轉錄病毒，使用FuGene ® 6轉染試劑(普洛麥 格公司，目錄號E2692)，將293T細胞與表現ENTPD1或ENTPD2的逆轉錄病毒表現運載體和pCL-Eco或pCL-10A1包裝運載體(羅福斯生物製劑公司(Novus Biologicals)，目錄號NBP2-29540或NBP2-2952)共轉染。將細胞在37℃且在5% CO2 下保持在濕潤的培養箱中，並在轉染後48小時收集含病毒的細胞上清液。使NIH/3T3和300.19細胞(ATCC® )在6孔板中生長至接近匯合。從細胞中去除生長介質，並在8ug聚凝胺/ml(EMD密理博公司(EMD Millipore)，目錄號TR-1003-G)的存在下添加病毒上清液。在37℃下孵育3-6小時後，添加新鮮的介質。然後在合適的選擇條件下培養細胞以產生穩定的ENTPD1或ENTPD2表現細胞系。
症毒樣顆粒(VLP)的產生、表現和純化
將300.19細胞保持在具有10% FBS的DMEM中。為製備VLP，將細胞交換到具有4% FBS的DMEM中，然後與人ENTPD2表現質粒和逆轉錄病毒Gag表現質粒按μg比率為3：2共轉染。轉染後48小時，收集細胞上清液，並在台式離心機中藉由以2500×g 離心5分鐘使上清液澄清，並保持在冰上。在Sorvall TM RC 6 Plus超速離心機中的Beckman Coulter ® SW 32 Ti轉子中，藉由以100,000×g 超速離心通過在Ultra-Clear TM 38.5ml離心管(Beckman Coulter ® ，目錄號344058)中的20%蔗糖墊將VLP進行純化。將所得沈澱重懸於300μl冷的無菌PBS中，並使用Pierce BCA測定(賽默飛世爾科技公司，目錄號23225)進行定量。
雜交瘤的產生
使用要求在多個位點處的重複免疫(RIMMS)的步驟，將Bcl-2 轉基因小鼠[C57BL/6-Tgn(bcl-2)22 WEHI株]用抗原進行免疫(K.E.Kilpatrick等人，Hybridoma[雜交瘤]1997)。簡言之，在鄰近外周淋巴結(PLN)的8個特定位點處向小鼠注射22.5μg的His 6 -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD蛋白質("His6"揭露為SEQ ID NO：1010)。該過程在20天期間內重複8次。在第18天，收集測試出血並藉由FACS和ELISA分析血清抗體滴度。在一些情況下，將BALB/c小鼠用以下 項進行免疫：在弗氏完全，西格瑪佐劑系統(SigmaAdjuvant System® )、或弗氏不完全佐劑中的50μg的His6 -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD("His6"揭露為SEQ ID NO：1010)蛋白質；PBS中50μg的人ENTPD2表現VLP；或PBS中穩定過表現人ENTPD2(SEQ ID NO：291)的5x10e6 300.19細胞。間隔兩周對動物皮下或腹膜內注射兩次，隨後在大約兩周後用PBS中的50μg的人ENTPD2表現VLP或His6 -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD蛋白質("His6"揭露為SEQ ID NO：1010)進行靜脈內加強。第二次免疫後十天，收集測試出血並藉由FACS和ELISA分析血清抗體滴度。從高滴度小鼠中取出脾和彙集的外周淋巴結(PLN)。為收穫淋巴細胞，將脾和PLN在PBS中洗滌一次，並然後通過70微米篩網(Falcon#352350)解離。將所得淋巴細胞在Cytofusion® 介質(BTXpress Cytofusion® 電穿孔介質，目錄號47001)中融合之前再洗滌2次。
對於融合，將F0骨髓瘤細胞與淋巴細胞按1：4比率混合。將細胞混合物離心，懸浮在Cytofusion® 介質中，並隨後添加到電熔室(哈佛儀器同軸腔室9ML第470020部分)中。按照製造商的說明書，使用CEEF-50B雜交免疫(Hybrimune)/雜交瘤系統(Cyto Pulse科學公司(Cyto Pulse Sciences,Inc))進行電融合。允許融合的細胞在室中恢復5分鐘，在不含次黃嘌呤-胺喋呤-胸苷(HAT)[DMEM+20% FBS、1%青黴素-鏈黴素-麩醯胺酸(PSG)、1X非必需胺基酸(NEAA)、0.5 X雜交瘤融合和選殖補充(羅氏公司(Roche)；HFCS))的介質中按1：10稀釋，並置於37℃和5% CO2 下持續一小時。接下來，添加4X HAT介質(DMEM+20% FBS、1% PSG、1X NEAA、4X HAT、0.5X HFCS)以使HAT濃度達到1 X，並將密度調節至66,000個細胞/ml。將細胞以60ul/孔鋪板於384孔板中。
FACS篩選
融合後10天，使用流式細胞術篩選雜交瘤平板中ENTPD2特異性抗體的存在，以確認使用以下三種細胞系，候選抗體與細胞表面表現的人ENTPD2的特異性結合：親本NIH/3T3細胞、穩定過表現人ENTPD2的NIH/3T3細胞、和RKO細胞(ATCC® )，其表現內源人ENTPD2。用PBS徹底沖洗細胞，用Accutase(密理博公司#SCR005)處理以將它們從生長板中提起，並重懸於冷的PBS中。根據製造商的說明書，將細胞生物素化並用的螢光染料(FluoReporterTM 細胞表面生物素化套組，賽默飛世爾科技公司目錄號F-20650；PE-Cy7鏈黴親和素，賽默飛世爾科技公司目錄號SA1012)標記。將細胞以大約1X106 個細胞/ml重懸浮與FACS緩衝液(具有2% FBS+0.1% NaN3 的PBS)中。在384孔板中，將20μL的雜交瘤上清液預接種並添加20μL的細胞懸浮液。將細胞在4℃下孵育1小時，用了冷的FACS緩衝液洗滌兩次，並重懸浮於含有按1：400稀釋(別藻藍素軛合的F(ab')2山羊抗小鼠IgG，Fcγ特異性的；傑克遜免疫研究實驗室公司，目錄號115-136-071)的第二抗體的20μL的FACS緩衝液中。在4℃下另外孵育45分鐘後，將細胞用FACS緩衝液洗滌兩次並重懸浮於具有2μg/ml碘化丙啶(西格瑪奧德里奇公司(Sigma Aldrich)目錄號P4864)的20μL的FACS緩衝液中。使用FlowJoTM 軟體在活的單一細胞上計算幾何平均螢光強度。
在二次流式細胞儀篩選中確認來自該基於原代細胞的流式細胞術篩選的命中。將表現與NIH/3T3-hENTPD2和RKO細胞結合的抗體的雜交瘤擴增到雜交瘤無血清介質中的45mL蛋白質生產培養物中，該介質具有在CellStar® AutoflasksTM (Greiner Bio-One)中的HT介質補充物(50×)Hybri-MaxTM (西格瑪公司(Sigma)，目錄號H0137)。將培養物在37℃且在5% CO2下在振盪培養箱中保持約8天，並然後沈澱細胞，並藉由蛋白G樹脂純化獲得上清液。使用NAP-10TM 柱(GE醫療集團)隨後將蛋白質緩衝液交換到PBS中。
重組抗體產生
針對由ENTPD2抑制ATP水解，在基於細胞的測定中篩選雜交瘤衍生的mAb。在該測定中鑒定出兩種先導抑制性mAb：mAb17和mAb16。
製備由鼠可變區和人恒定區組成的嵌合抗體。獲得雜交瘤的可變區(VH和VL)DNA序列用於選殖和抗體優化(人源化，去除潛在的翻譯後修飾等)。使用標準方法，藉由5' RACE從獲自每種所選雜交瘤細胞系的RNA擴增來自鼠單株抗體的可變區DNA。分別針對mAb17和mAb16，將每種鼠可變重鏈/輕鏈的多肽序列示出在表1中。針對每種雜交瘤的對應可變重鏈/輕鏈核苷酸序列示出在SEQ ID NO：234/SEQ ID NO：238和SEQ ID NO：226/SEQ ID NO：230中。為製備嵌合抗體，將編碼藉由5' RACE-PCR擴增的雜交瘤VL和VH的DNA序列選殖到含有相應人野生型重鏈和人輕鏈恒定區序列(IgG1，κ)的表現運載體中。使用QIAprep Spin微量製備套組(凱傑公司，目錄號27106)將該等運載體小量製備，並使用AmaxaTM 4D-NucleofectorTM (龍沙公司(Lonza))核轉染到專有CHO細胞系中。將轉染的細胞置於選擇性培養基中以穩定庫產生，並將所得庫進行14天分批補料蛋白質生產過程。藉由以3000×g 離心15分鐘使含蛋白質的細胞上清液澄清並通過0.22μm過濾器過濾。使用MabSelect SuReTM 樹脂(GE醫療集團)在ÄKTATM Pure或ÄKTATM 純化器上純化蛋白質，並且使用PierceTM IgG洗脫緩衝液(賽默飛世爾科技公司目錄號21004)進行洗脫，然後藉由透析或使用HiPrep脫鹽柱(GE醫療集團)緩衝液交換到PBS中。在藉由分析性尺寸排阻層析(AnSEC)，使用Superdex® 200 Increase所得蛋白質為<95%二聚體的情況下，使用HiLoad® Superdex® 200柱(GE醫療集團)，用PBS作為流動相使蛋白質進行製備型SEC。
人源化
還使用內部軟體程式設計可變區構建體用於人源化和序列優化(例如，去除潛在的翻譯後修飾位點)。在游標帶(Vernier Zones)中選擇具有 回復突變的每個小鼠VH和VL的一個或多個人框架(Foote和Winter 1992,Journal of Molecular Biology[分子生物學雜誌]；224(2)：487-499)以保持親和力和所需的功能活性。使用基於三維晶體結構的設計還對mAb17和mAb16人源化。簡言之，將晶體結構載入到分子操作環境(MOETM )(化學計算組ULC)中，並使用具有Amber10EHT力場的標準結構製備方法製備。然後使用稱為「cdr_grafter SVL」的定製腳本在結構上將Fab與人源化Fab的內部文庫進行比較。該腳本在內部數據庫中將輸入的鼠Fab結構與人Fab結構在結構上進行比較，並列出了關於在鼠(供體)和人(受體)Fab之間的結構相似性的詳細參數。該等參數包括框架和莖區RMSD和CDR長度比較。基於該等參數，選擇四個候選受體Fab用於從mAb17中移植供體CDR，並選擇三個候選受體Fab用於移植來自mAb16的供體CDR。mAb17的人源化導致mAb1、mAb2、mAb3、和mAb7的產生。mAb16的人源化和優化導致mAb4、mAb5、和mAb6的產生。
編碼來自兩種人源化策略的設計的人源化VL和VH結構域的DNA序列從GeneArt(生命技術公司(Life Technologies Inc.)，雷根斯堡(Regensburg)，德國)訂購，其中針對灰倉鼠(Cricetulus griseus )進行密碼子優化。使用標準方法將該等可變區亞選殖到含有相應人野生型重鏈和人輕鏈恒定區序列(IgG1，κ)的表現載體中。
藉由將編碼重鏈和輕鏈的運載體共轉染到FreeStyleTM 293-F細胞(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))中來產生重組抗體。在37℃和5% CO2 下將轉染的細胞在容納於振盪培養箱中的CellStar® AutoflasksTM (Greiner Bio-One)中的Gibco® FreeStyleTM 293表現介質(賽默飛世爾科技公司目錄號12338018)裡保持大約5天，並然後將細胞沈澱，並經MabSelect SuReTM 樹脂(GE醫療集團)藉由純化獲得含蛋白質的上清液。使用NAP-10TM 柱(GE醫療集團)隨後將蛋白質緩衝液交換到PBS中。
實例3.使用噬菌體展示產生人抗人ENTPD2抗體及其Fab片段
使用MorphoSys HuCAL PLATINUM ® 噬菌體展示技術產生特異性結合人ENTPD2(SEQ ID NO：291)的Fab。噬菌粒文庫基於HuCAL ® 概念(Knappik等人，2000,J Mol Biol[分子生物學雜誌]296 ,57-86)採用CysDisplayTM技術在噬菌體表面(Lohning,WO 2001/05950)上展示Fab。
進行四種類型的淘選：針對直接包被的重組人ENTPD2(hENTPD2)的固相淘選、針對ENTPD2的溶液淘選、全細胞淘選和親和力成熟淘選。
基於珠的淘選
在基於珠的淘選之前，將抗原固定在磁性羧酸包被的珠上(Dynabeads TM M-270羧酸，賽默飛世爾科技公司目錄號14306D)。每個噬菌體庫，1x10 7 個抗原包被的珠被封閉1x化學阻斷劑(ChemiBlocker)(EMD密理博公司)。同時，用50%人血清/0.33x化學阻斷劑/0.05% Tween20阻斷適量的噬菌體抗體。為防止選擇珠結合的噬菌體，使用具有固定的無關蛋白質的珠預孵育阻斷的噬菌體顆粒。將阻斷的抗原包被的珠加入到預吸附和阻斷的噬菌體顆粒中，並使噬菌體-抗體與抗原包被的珠結合。藉由磁分離收集與抗原包被的珠結合的噬菌體顆粒。若干洗滌步驟去除了非特異性結合的噬菌體。最後，從抗原包被的珠上洗脫特異性結合的噬菌體。將洗脫液轉移到14ml大腸桿菌TG1培養物中並孵育用於噬菌體感染。
離心後，將感染的細菌沈澱並重懸於2xYT介質中，鋪板於LB/氯黴素瓊脂平板上並孵育過夜。將菌落從平板上刮下並用於噬菌體拯救、所選殖株的多株擴增和噬菌體生產。用經純化的噬菌體開始下一輪淘選。使用與第一輪相同的方案進行第二輪和第三輪固相淘選，除了使用較少的抗原和更嚴格的洗滌條件。
溶液淘選
阻斷適量的鏈黴親和素珠(Dynabeads TM M-280鏈黴親和素，賽默飛世爾科技公司目錄號11206D)。同時，阻斷適量的噬菌體-抗體。為了去除鏈黴親和素或珠結合噬菌體，使用用生物素化的無關蛋白包被的經阻斷的鏈黴親和素珠進行經阻斷的噬菌體顆粒的預吸附。因此，將生物素化的ENTPD2添加到預吸附的和經阻斷的噬菌體顆粒中，並允許噬菌體-抗體在溶液中結合抗原。使用阻斷鏈黴親和素珠捕獲噬菌體-抗原複合物，並且用磁性分離器收集與鏈黴親和素珠結合的噬菌體顆粒。藉由若干洗滌步驟將非特異性結合的噬菌體洗掉。從鏈黴親和素珠中洗脫特異性結合的噬菌體。將洗脫液轉移到14ml大腸桿菌TG1培養物中並孵育用於噬菌體感染。根據基於珠的淘選方案進行隨後的噬菌體感染和噬菌體產生，並開始下一輪淘選。除了應用具有增加嚴格性的洗滌條件之外，使用與第一輪淘選相同的方案進行第二輪和第三輪基於珠的溶液淘選。
全細胞淘選
針對每次淘選，將適量的噬菌體-抗體阻斷。同時，針對每個噬菌體庫，阻斷表現ENTPD2的適量的靶細胞和不表現抗原ENTPD2的適量的吸附細胞。將阻斷的靶細胞旋轉沈降，重懸於預阻斷的噬菌體顆粒中，並允許噬菌體-抗體與細胞上呈遞的抗原結合。將噬菌體-細胞複合物洗滌若干次。從靶細胞中洗脫特異性結合的噬菌體。離心後，將上清液(洗脫液)應用於抗原陰性吸附細胞，以去除與除靶抗原以外的細胞表面分子結合的噬菌體(吸附後)。將最終的上清液轉移到大腸桿菌TG1培養物中用於噬菌體感染。使用與第一輪淘選相同的方案進行第二輪和第三輪全細胞淘選。
親和力成熟淘選
HuCAL PLATINUM ® 成熟文庫的產生
選擇四種Fab候選物用於親和力成熟。為增加所選抗體的親和力和生物活性，使用三核苷酸定向誘變藉由盒誘變優化CDR-L3和CDR-H2區，同時框架區保持恒定(Virnekäs等人，1994,Nucleic Acids Research [核酸研究]22(25),第5600-5607頁)。針對CDR-L3優化，藉由限制酶切消化將編碼CDR-L3、框架4以及輕鏈恒定區的約400bp DNA片段才編碼親本抗體的序列中去除，並且被編碼多樣化的CDR-L3區連同框架4和恒定結構域的DNA片段儲庫替換。在第二個文庫集中，CDR-H2編碼序列係多樣化的，而連接框架區保持恒定。為減少親本非多樣化序列的背景，藉由限制酶切消化和連接，將含有親本CDR-H2和框架3序列的約150bp DNA片段替換為約590bp的虛擬序列，然後還藉由限制酶切消化和連接插入多樣化的CDR-H2盒(包括框架3)。連接混合物的電穿孔在MC1061F'細胞中產生大約>5 x 106 個獨立的菌落中108 至109 。如前所述進行文庫的擴增(Rauchenberger等人，2003,J biol chem [生物化學雜誌]278(40)，第38194-38205頁)。針對質量控制，隨機挑選每個文庫中大約10-20個單一菌落並測序。
為選擇親和力改善的候選物，將衍生自成熟文庫的噬菌體進行2至3輪成熟淘選。藉由降低每輪淘選中的抗原濃度來提高淘選的嚴格性(Low等人，1996，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌] 260，第359-368頁)。除抗原減少外，還進行瞭解離速率選擇(Hawkins等人，1992,J.Mol.Biol. [分子生物學雜誌]226(3),第889-896頁)。該等策略與延長的洗滌步驟相結合。
表現
針對大腸桿菌從展示運載體亞選殖到Fab-表現運載體中
為促進可溶性Fab的快速表現，將所選擇的HuCAL PLATINUM ® 噬菌體的Fab編碼插入物從pMORPH ® 30展示運載體亞選殖到pMORPH ® x11表現運載體pMORPH ® x11_FH中。大腸桿菌TG1 F-單一殖株表現轉化後，並且如前所 述進行含有HuCAL® -Fab片段的周質提取物的製備(Rauchenberger等人，2003,J Biol Chem[生物化學雜誌]278：38194-38205)。
His加標籤的Fab片段的微量生產
在大腸桿菌TG1 F細胞中由細菌表現運載體編碼的Fab片段的表現在50mL Falcon管中使用25mL的2xYT介質進行，該介質補充有0.1%葡萄糖、34μg/mL氯黴素和1mM IPTG(異丙基-ß-D-硫代半乳糖苷)。將培養物在30℃下振盪18h。收穫細胞，並使用溶菌酶和Bug Buster ® 蛋白質提取試劑(默克公司，德國)的組合進行破壞。藉由IMAC(GE醫療集團，德國)分離His6加標籤的Fab片段(「His6」揭露為SEQ ID NO：1010)並使用咪唑進行洗脫。使用‘PD MultiTrap TM G-25'平板(GE醫療集團，德國)進行緩衝液交換到1X Dulbecco的PBS(pH 7.2)中。藉由UV-分光光度法測定蛋白質濃度。在變性的非還原性15% SDS-PAGE中分析代表性所選樣品的純度。
亞選殖到IgG和FabCys表現運載體中並在HKB11細胞中表現
針對HKB11細胞中的全長IgG表現，將所選候選物或候選庫選殖到pMORPH ® 4_IgG1f運載體中。按兩步法進行亞選殖，以便方便且有效地將大量序列特異性Fab選殖轉化為IgG形式。
用編碼IgG的重鏈和輕鏈的哺乳動物表現運載體DNA轉染真核HKB11細胞。在轉染後第3或6天收穫細胞培養物上清液，並進行標準蛋白A親和層析(MabSelect TM SuRe TM ，GE醫療集團)。除非另有說明，將緩衝液交換進行到1x Dulbcecco的PBS(pH 7.2，英傑公司(Invitrogen))中，並將樣品無菌過濾(0.2μm孔徑)。
藉由UV-分光光度法測定蛋白質濃度，並使用CE-SDS(LabChip GXII，珀金埃爾默公司(Perkin Elmer)，美國)在變性、還原和非還原條件下分析IgG的純度。進行HP-SEC以分析處於天然狀態的IgG製劑。
抗體匯總
表1列出了衍生自鼠雜交瘤和噬菌體展示的抗人ENTPD2抗體的序列資訊。
實例4.抗人ENTPD2抗體的生物化學特徵
在以下測定中評估抗人ENTPD2抗體。
FACS篩選：藉由流式細胞術評估候選抗體與內源表現的ENTPD2的特異性結合。用1xPBS徹底沖洗細胞，並用Accutase(密理博公司目錄號SCR005)處理以從生長板上提起，並按大約1 x 10 5 個細胞/90μL重懸浮於1xFACS緩衝液(PBS中2% FBS+0.1% NaN3)中。在96孔U形底平板中，將FACS緩衝液中10μL的10x抗體溶液預接種並添加90μL的細胞懸浮液。將細胞在4℃下孵育30分鐘，用冷的PBS洗滌，並重懸浮於100μL的1：500第二抗體1xFACS緩衝液(別藻藍素軛合的F(ab')2山羊抗人IgG,Fcγ特異性；傑克遜免疫研究公司，目錄號109-136-098)中。在4℃下另外孵育15分鐘後，將細胞用PBS洗滌兩次並重懸浮於具有4μg/mL碘化丙啶(生命技術公司(Life Technologies)，目錄號P3566)的100μL的1xFACS緩衝液中。使用FlowJo軟體在活的單一細胞上計算幾何平均螢光強度。
直接包被的抗原上的ELISA篩選：將Maxisorp TM 384孔板(Thermo Nunc)用稀釋於PBS中的2μg/ml的重組ENTPD2包被。在室溫下，在PBS中用2% BSA(牛血清白蛋白)阻斷1小時，用TBST(TBS中的0.05% Tween 20，西格瑪公司目錄號T9039)將平板洗滌3x，以連續稀釋添加TBST中的第一抗體和2% BSA，並在室溫下孵育1小時。將平板再次洗滌，並藉由與軛合辣根過氧化物酶(HRP；傑克森免疫研究實驗室公司，目錄號115-035-098，在1xTBST+2% BSA中按1：5000稀釋)的抗hFc γ在室溫下孵育1小時來檢測未結合的抗體，隨後用 TBST洗滌並之後添加SureBlue過氧化物酶底物(KPL，目錄號#52-00-03)底物。15分鐘後，記錄在650nM處的吸光度並在GraphPad Prism6中分析。
Biacore篩選：在Biacore T200或T100與T200靈敏度升級儀器(Biacore，GE醫療集團)上使用表面等離振子共振(SPR)藉由測定動力學速率常數來測量親和力。在與表面偶聯的小鼠抗人IgG Fc抗體(賽默飛世爾科技公司目錄號05-4200)胺製備的CM5感測器晶圓(Biacore，GE醫療集團)上捕獲抗體。根據抗體的親和力，在從0.78nM至500nM的濃度範圍內在25℃下檢測人和食蟹猴(cyno)ENTPD2 ECD的結合。允許ENTPD2分析物聯繫180秒並解離長達1800秒，這取決於抗體在30μL/min流速下的解離速率。運行緩衝液係PBS pH 7.2(由Corning 10X儲備液製備，目錄號46-013-CM)+0.05% Tween 20。藉由30秒注射3M或4M的MgCl2完成再生以從表面去除所有捕獲的抗體和剩餘複合物，之後捕獲新鮮抗體。使用Biacore T200評估軟體版本1.0分析原始數據並擬合為1：1結合模型，其中所有參數設置為全域擬合(除了RI被設置為局部擬合)。
確認了mAb1-mAb10的抗體特異性。所有殖株顯示與人ENTPD2的顯著nM與亞nM結合。抗體mAb8、mAb9、和mAb10顯示出對小鼠ENTPD2的弱親和力。所選的抗體均不與大鼠ENTPD2結合。參見表21和表22。
Figure 108118358-A0202-12-0347-164
Figure 108118358-A0202-12-0348-165
Figure 108118358-A0202-12-0348-166
交叉反應性 使用逆轉錄病毒轉導方法產生表現NIH/3T3細胞的人ENTPD1(NP_001767)。轉導後72小時，將工程化的細胞用抗人CD39/ENTPD1APC軛合的抗體(R&D系統公司，明尼阿波里斯市，明尼蘇達州)染色，並且藉由螢光激活細胞分選將表現人ENTPD1的活細胞與其餘群體分離。藉由FACS用上述抗人CD39/ENTPD1 APC軛合的抗體(1：100)定期重新確認ENTPD1的穩定表現。
藉由Taqman將H520細胞鑒定為具有ENTPD3(Ct 25)和ENTPD8(Ct 26)表現的癌細胞系，並用於選擇性篩選。
用任何測試的抗人ENTPD2抗體均未觀察到與任何對照細胞系的顯著結合(表25)。
Figure 108118358-A0202-12-0349-168
使用Octet Red96系統的表位分級(Epitope binning)
使用測量生物膜層干涉技術(BLI)的Octet Red96系統(ForteBio公司，美國)進行抗人ENTPD2抗體的表位分級。根據製造商的建議(Avidity，LLC，美國目錄號BirA500)，藉由AviTag TM ，利用BirA生物素連接酶將人ENTPD2-Avi-His 6 蛋白質(「His6」揭露為SEQ ID NO：1010)生物素化。將生物素化的免疫原支架按0.5μg/mL載入到預平衡的鏈黴親和素感測器(ForteBio公司，美國)上。然後將感測器轉移到含有在1X動力學緩衝液(ForteBio公司，美國)中的100nM抗體A的溶液裡。將感測器在1X動力學緩衝液中簡單洗滌並轉移至含有100nM競爭者抗體的第二溶液中。使用Octet Red96系統分析軟體(版本9.0，ForteBio公司，美國)根據原始數據測定結合動力學。在所有成對組合中測試抗體，作為與hENTPD2結合的第一(阻斷)抗體和作為第二(競爭者)抗體的抗體。在該測定中，所有抗體均顯示出顯著的交叉阻斷，表明mAb1-10可具有相似的表位。
實例5.抗人ENTPD2 FAb22的晶體學和表位作圖
在該實例中，抗人ENTPD2 FAb22與人ENTPD2(Y350A突變體)胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗人ENTPD2 FAb22與人ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。
材料與方法
Fab片段的表現和純化
將編碼經鑒定的VH和VL結構域的DNA序列亞選殖到含有相應人野生型CH1和人κ輕鏈恒定區序列的哺乳動物表現運載體中。藉由使用轉染劑將運載體暫態共轉染到細胞中來產生重組人Fab。轉染後，將細胞培養5-6天，並進行抗體純化。藉由離心(2600xg ，持續10分鐘)沈澱細胞，並通過0.22μm過濾器進行過濾使含有抗體的細胞上清液澄清。藉由蛋白質G(GE醫療生命科學公司集團)柱純化Fab，並使用酸性洗脫緩衝液條件進行洗脫。
人ENTPD2和抗人ENTPD2 FAb22複合物的製備
為製備ENTPD2- FAb22複合物，將1.3倍莫耳過量的FAb22與hENTPD2 Y350A在具有150mM NaCl的20mM Tris pH 7.5中混合以給出終濃度為5.65mg/mL。將複合物樣品在冰上孵育2小時，並進行結晶篩選。
結晶和X射線數據收集
藉由沈滴式蒸氣擴散，使晶體在96孔板(Greiner Bio-One Crystalquick Plus plates)中生長。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。
對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用0.9765Å X射線輻射，用Quantum Q315 CCD檢測器在高級光源 (Advanced Light Source)，BL5.03上收集X射線數據。180個1.0°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離為350mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,"Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]"，Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。
結構確定和分析
使用先前在內部確定的人ENTPD2的精修結構和抗RSV Fab B21m(PDB代碼3QRG)的座標作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb22-ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的反覆運算循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]：66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。
使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程序進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的質量。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗人ENTPD2 FAb22結合後變得溶劑難以接近的人 ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。
結果
與人ENTPD2複合的抗hENTPD2 FAb22的晶體結構
在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散的方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb22在96孔板中結晶。晶體在0.1M HEPES pH 7.5、20%聚乙二醇3350、0.2M氯化鎂中生長。在大約6周後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。
FAb22-ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群C2中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至2.75埃解析度。
使用先前確定的人ENTPD2座標和來自PDB代碼3QRG的Fab座標進行藉由分子置換來進行結構確定。用AutoBuster進行精修可以獲得良好的精修統計數據和整體幾何結構。兩個FAb22殘基(Ala55L和Tyr33H)和四個ENTPD2殘基(Gly120、Thr122、Tyr229、和Ala430)係FAb22-ENTPD2複合物結構中的拉馬錢德蘭異常值。除Fab殘基(Ala55L和Tyr33H)之外的ENTPD2殘基(Gly120和Thr122)在電子密度方面限定明確，並可能是真正的幾何異常值。值得注意的是，如下所述，Tyr33H係參與ENTPD2結合的CDR殘基。ENTPD2殘基(Tyr229和Ala430)在電子密度上鬆散地建模。
圖3A提供了抗人ENTPD2 FAb22重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖6描繪了抗人ENTPD2 FAb22/ENTPD2 Y350A複合物三維結構的整體視圖。
圖4A提供了該實例中使用的重組人ENTPD2的胺基酸序列(SEQ ID NO：291)。人ENTPD2的可溶性細胞外結構域跨越殘基29-462。Y350A的工程化突變存在於構建體中並以灰色斜體突出顯示。在此使用的構建體利用N末端GP67分泌訊號肽(前38個殘基)和C末端6x組胺酸標籤(SEQ ID NO：1010)。Asn64、Asn129、Asn294、Asn378、和Asn443係預測的N-連接糖基化位點，其中僅在以灰色斜體中突出顯示在晶體結構中觀察到糖基化的那些。二級結構元件顯示在胺基酸序列下方，其中條形代表α-螺旋，箭頭代表β-鏈。沒有標記二級結構元件的殘基表示非結構化環和回轉區段。
人ENTPD2胺基酸序列與齧齒動物物種和其他哺乳動物具有高度序列同源性，並且該結構具有與對大鼠ENTPD2描述的幾乎相同的整體折疊(即，PDB代碼3CJA,Zebisch,M.,Strater,N.(2008)Proc.Natl.Acad.Sci.Usa[美國國家科學院院刊]105：6882-6887)。針對Cys75/Cys99、Cys242/Cys284、Cys265/Cys310、Cys323/Cys328和Cys377/Cys399觀察到不變和保守的二硫鍵對。人和大鼠ENTPD2結構之間388個C-α碳的RMSD(均方根偏差)約為0.365Å。
FAb22/ENTPD2複合物的最終模型含有ENTPD2的殘基37-448。ATP水解的活性位點位於兩個亞結構域(亞結構域1：Pro36-Ser161和Lys427-Phe461；亞結構域2：Gly162-Gln426)之間。從最終模型中省略的ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-36和對應於連接鏈β2和β3的環殘基的60-65，對應於膜相互作用環(MIL)的殘基179-193，以及C-末端Ile448以外的殘基。除末端半胱胺酸(Cys228重鏈/Cys218輕鏈)外，所有重鏈和輕鏈Fab殘基都包括在最終精製模型中。
FAb22主要藉由涉及參與重鏈和輕鏈可變結構域的所有6個CDR的相互作用而預測的膜遠端葉的接合來結合ENTPD2抗原。沒有FAb22 CDR殘基似乎明顯滲透到ENTPD2活性位點裂縫中以影響ATP底物結合。重鏈CDR3和 CDR2殘基隔絕殘基，包括和側翼有由鏈β10/β11組成的反平行2鏈β-折疊。末端重鏈CDR3殘基與螺旋α14的N-末端殘基以及α8和α13螺旋形成額外的結合接觸。與ENTPD2的輕鏈可變結構域結合相互作用主要涉及CDR1和CDR3殘基，該等殘基主要結合螺旋α14的N-末端。FAb22/ENTPD2複合物的形成隱藏了總結合溶劑可接觸表面總量的約16700Å2，其中重和輕Fab鏈的貢獻幾乎相等。表17中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基，並在圖3A和4A中標記。總共25個Fab殘基和26個ENTPD2殘基參與直接分子間接觸，其中重鏈CDR比輕鏈CDR產生更多結合殘基。在該等Fab互補位殘基中，CDR酪胺酸與所涉及的14個CDR Tyr殘基中的10個殘基貢獻大量的ENTPD2接觸。分子間接觸中的重鏈CDR殘基包括CDR1殘基Ser31、Gly32、Tyr33、和Tyr34；CDR2殘基Tyr54、Asp55、Asp57；和CDR3殘基Tyr100、Tyr101、Arg102、Tyr103、Ser106、Tyr107、Asp112、Tyr113。重鏈FR1的Tyr27還與ENTPD2抗原接觸。參與ENTPD2結合的輕鏈CDR1殘基包括Tyr31、Asp32、Gly33、和Tyr36；以及CDR2輕鏈殘基Glu59、Ser60；和CDR3殘基Ser95、Asn96、和Asp 98。除了FR3的Gly61之外，其側鏈無序且未以複合結構建模的Glu1在針對ENTPD2抗原的Asn294觀察到的N-連接糖基化的接觸距離內，並在圖3A中突出顯示。
Figure 108118358-A0202-12-0354-169
Figure 108118358-A0202-12-0355-170
實例6.抗人ENTPD2 FAb23的晶體學和表位作圖
在該實例中，抗人ENTPD2 FAb23與人ENTPD2(Y350A突變體)胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗人ENTPD2 FAb23與人ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。
材料與方法
人ENTPD2和抗人ENTPD2 FAb23複合物的製備
為製備ENTPD2-FAb23複合物，將1.6倍莫耳過量的ENTPD2與FAb23在20mM Tris pH 7.5和100mM NaCl中合併，並藉由超濾濃縮至9.08mg/mL，在冰上孵育10分鐘，並進行結晶試驗建立。
結晶和X射線數據收集
在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散的方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb23在96孔板(Greiner Bio-One)中結晶。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。
對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用0.9765Å X射線輻射，用Quantum Q315r CCD檢測器在高級光源(Advanced Light Source)，BL5.03上收集X射線數據集。140個1.0°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離為300mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,"Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]",Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。
結構確定和分析
藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換，使用先前在內部確定的人ENTPD2的精修座標和使用MOE軟體(分子操作環境(MOE),2013.08；化學計算組(Chemical Computing Group)ULC,1010 Sherbooke St.West,Suite #910,Montreal,QC,Canada[加拿大魁北克省蒙特利爾市910號室舍布魯克西街1010號]，H3A 2R7,2018)中的抗體建模工具生成的FAb23的同源模型，來確定FAb23-ENTPD2複合物的結構，該同源模型顯示作為獨立的搜索模型與ICSM 18-抗PRP的Fab片段具有高的序列相似性(PDB代碼4W9D)。使用模型構建的反覆運算循環，隨後用以下程 式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。
使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程序進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的質量。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗人ENTPD2 MAB17 Fab結合後變得溶劑難以接近的人ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。
結果
抗hENTPD2 FAb23/ENTPD2複合物的晶體結構
在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散的方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb23在96孔板中結晶。晶體在0.08M Bis-Tris丙烷(pH 8.8)、0.02M檸檬酸、16% PEG3350中生長。在大約6周後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。
FAb23-ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群P21中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至2.0埃解析度。使用AutoBuster對與ENTPD2複合的FAb23的最終模型進行了精修，具有良好的精修統計和整體幾何形狀。在最終模型中總共存在四個拉馬錢德蘭異常值，其中 兩個殘基來自FAb23輕鏈(Ser39和Thr50)，以及兩個來自ENTPD2(Thr122和Ala430)。針對Fab輕鏈的Ser39的電子密度差並且暫時建模。所有其他殘基都在電子密度中得到了充分的定義，並且可能是真正的拉馬錢德蘭異常值。從最終模型中省略的ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-34和C-末端448以外的殘基。從最終模型中還省略了FAb23鏈恒定區的殘基139-144和末端半胱胺酸(Cys227)。由於無序，FAb23輕鏈的最後兩個殘基(Glu212和Cys213)也不存在於最終模型中。
圖3B提供了抗人ENTPD2 FAb23重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖7描繪了FAb23/ENTPD2 Y350A複合物三維結構的整體視圖。
與FAb22相反，FAb23與ENTPD2的結合涉及重鏈和輕鏈可變結構域對膜近端和遠端葉的顯著接合。重鏈可變區環CDR2和CDR3參與ENTPD2結合，其中沒有來自CDR1的貢獻。來自輕鏈可變區的所有3個CDR的殘基參與ENTPD2結合。與ENTPD2膜遠端葉的接觸主要由以下項賦予：來自重鏈CDR3、輕鏈CDR2的殘基；和與α13和α14之間的ENTPD2環區殘基的殘基結合的輕鏈FR3殘基；以及FR3與反平行鏈β10/β11和螺旋α9的相互作用。CDR3輕鏈和CDR2重鏈殘基賦予與α2螺旋的廣泛結合以及連接ENTPD2的膜近端葉的β3和α1的環殘基。重鏈CDR3將末端殘基Tyr104、Tyr105和Gly106投射到在膜遠端葉的螺旋α8、α11和α14的N-末端之間的ENTPD2活性位點裂縫中。來自結合的大鼠ENTPD2晶體結構PDB 3CJA的ATP類似物AMP-PNP的疊加表明Tyr105位於預測ATP的腺嘌呤環結合的位置，可能在空間上阻礙底物結合。重鏈CDR3末端的Tyr105和Tyr104也可以擾亂ENTPD2活性位點殘基，包括針對π-π和陽離子-π堆積與底物ATP的腺嘌呤環的相互作用所必需的Tyr350和Arg394。FAb23與ENTPD2 的結合隱藏了大約17500Å2的結合溶劑可接觸表面。表18中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基，並在圖3B和4A中標記。25個Fab殘基和29個ENTPD2殘基參與直接分子間接觸。CDR2的重鏈殘基Tyr55、Ile57、Thr59、Gln62，以及CDR3的Phe102、Tyr105、Ile107、Tyr110有助於ENTPD2結合，其中沒有來自CDR1殘基的貢獻。有助於ENTPD2結合的輕鏈殘基包括來自CDR1的Ser27和Tyr31，來自CDR2的Ser49和Asn52，以及來自CDR3的Trp90、Ser91、Ser92、Tyr93、和Trp95。有助於ENTPD2結合的非CDR輕鏈殘基包括Glu1，該Glu1被觀察到並模擬為在晶體結構中的焦穀胺酸，FR1的Thr22，以及FR3的Ser64、Gly65、Ser66、Gly67、Thr68、和Phe69。
Figure 108118358-A0202-12-0359-171
Figure 108118358-A0202-12-0360-172
實例7.抗小鼠ENTPD2 FAb24的晶體學和表位作圖
在該實例中，抗鼠ENTPD2 Fab MAB13與鼠ENTPD2胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗小鼠ENTPD2 FAb24與鼠ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。
材料與方法
鼠ENTPD2和抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物的製備
為製備鼠ENTPD2 FAb24複合物，將經純化的鼠ENTPD2和FAb24在20mM Tris(pH 7.5)和100mM NaCl中按1：1莫耳比合併，在4攝氏度下在冰上孵育過夜。第二天早晨，藉由超濾將樣品濃縮至9.88mg/mL，並進行結晶試驗建立。
結晶和X射線數據收集
在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散的方法，與ENTPD2 Y350A突變體複合的抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物在96孔板中結晶。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。
對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用裝備有ADSC Quantum 315r CCD檢測器的1.1808Å X射線輻射在SSRL，束線7-1處收集X射線數據集。340個0.5°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離 為400mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,"Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]"，Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。
結構確定和分析
使用先前在內部確定的鼠ENTPD2和FAb24的精修結構作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb24-小鼠ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的反覆運算循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。
使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程式進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的質量。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗小鼠ENTPD2 FAb24結合後變得溶劑難以接近的鼠ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。
使用先前在內部確定的鼠ENTPD2和FAb24的精修結構作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb24-小鼠ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的反覆運算循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。
結果
抗小鼠ENTPD2 FAb24/小鼠ENTPD2複合物的晶體結構
在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散的方法，與鼠ENTPD2複合的抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物在96孔板中結晶。晶體在0.2M檸檬酸三銨(pH 7.0)，20% PEG3350中生長。在大約1個月後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。
FAb24-小鼠ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群P21中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至3.0埃解析度。使用AutoBuster對與小鼠ENTPD2複合的FAb24的最終模型進行了精修，具有良好的精修統計和整體幾何形狀。在最終模型中存在兩個拉馬錢德蘭異常值(小鼠ENTPD2的Thr122和FAb24的Ala57)，這兩個異常值在電子密度中限定明確。Asn129和Asn378僅在觀察到N-連接的糖基化處係殘基。觀察到FAb24重鏈的Glu1並將其模擬為焦穀胺酸。從最終模型中省略的小鼠ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-35、對應於連接鏈β2和β3的環殘基的61-66、對應於膜相互作用環(MIL)的殘基182-194、α9和β11之間的環殘基290-293、以及C-末端Ala450以外的殘基。除了重鏈Cys225的末端半胱胺酸，FAb24的所有的重鏈和輕鏈殘基包括在最終精修的模型中。
圖3C提供了抗小鼠ENTPD2 FAb24重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖8描繪了FAb24/mENTPD2複合物三維結構的整體視圖。
抗小鼠ENTPD2 FAb24主要參與ENTPD2抗原的假定的膜遠端葉(殘基G162-E426)。針對重鏈和輕鏈可變結構域的CDR殘基，觀察到對ENTPD2結合的相等貢獻。
與結合人ENTPD2的FAb22和FAb23相比，FAb24從與FAb22中觀察到的方向完全不同的方向接合鼠ENTPD2，並且FAb23與hENTPD2複合。FAb24主要藉由廣泛的重鏈CDR相互作用和相對較少的輕鏈CDR相互作用結合鼠ENTPD2膜遠端葉。與輕鏈CDR1和CDR2殘基結合的重鏈CDR1和CDR3殘基與mENTPD2的螺旋α11和α13結合。重鏈CDR2的殘基與α13和α14之間的互連環殘基發生相互作用。CDR3重鏈CDR3在其彎曲接近90度的構象中被觀察到並且在其末端採用短的β-轉角模體。FR3重鏈的兩個殘基藉由與5鏈反平行折疊的β3相互作用而與小鼠ENTPD2近端葉接觸。沒有觀察到MAB13 CDR延伸足夠遠至小鼠ENTPD2位點，藉由直接阻塞底物結合位點而影響ATP水解活性。FAb24與鼠ENTPD2的結合隱藏了大約16300Å2的總結合溶劑可接觸表面。表19中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基並在圖3C和4B中標記。22個Fab殘基和18個鼠ENTPD2殘基參與直接分子間接觸，並包含在Fab/ENTPD2接合中觀察到的互補位和表位。重鏈CDR殘基包括CDR1Thr28、Thr30、His31、Tyr32、和Gly33；CDR2 Trp50、Asn52、Thr53、和Asp54、Thr55；CDR3 Tyr99、Gly100、Thr101、Leu102、Tyr103、和Phe110。來自重鏈 的兩個FR3殘基(Thr74和Ser75)還有助於結合。有助於結合的輕鏈CDR殘基包括來自CDR1的Thr34和Lys36、來自CDR2的Tyr56、和來自CDR3的Trp97。
Figure 108118358-A0202-12-0364-173
實例8.在同基因的B16LM3腫瘤模型中由抗ENTPD2 MAB13與抗PD-1 Ab組合對腫瘤生長的抑制
在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10 6 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立B16LM3模型。植入後的當天將小鼠隨機化到治療組中(n=10/組)。在第1、5、8、12、15天按15mg/kg的終劑量使小鼠接受抗小鼠ENTPD2 mAb13或非特異的mIgG2a同種型對照(殖株MOPC-173，Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)的治療。
將抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)或非特異性rIgG2a同種型對照(殖株RTK2758，Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)在第1、5、8、12、15天按終劑量為10mg/kg進行腹膜內遞送。將所有劑量調整至個體小鼠體重。
所有測試試劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀。抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab治理的組合相對於無治療(p<0.005)、同種型對照(p<0.05)或抗PD-1 Ab(p<0.01)顯著延長小鼠的存活期(對數秩(Mantel-Cox)測試用於確定存活曲線是否顯著不同))(圖9)。
實例9.在同基因的B16F10腫瘤模型中抗ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab的組合治療誘導活化T細胞的腫瘤流入
在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10 6 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立B16F10模型。在第7天當腫瘤達到大約30mm 3 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=10隻/組)。在第1、5和8天，小鼠接受以下治療：按最終劑量為15mg/kg的抗小鼠ENTPD2 mAb13、按最終劑量為10mg/kg腹膜內給予抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)、或兩種治療的組合。將所有劑量調整至個體小鼠體重。
在用抗小鼠ENTPD2 mAb13或單獨地抗PD-1 Ab治療之後觀察到不顯著的抗腫瘤效果，然而相對於無治療對照，在抗小鼠ENTPD2 mAb13和抗PD-1 Ab的組合臂中觀察到腫瘤生長的顯著降低(p<0.05單向方差分析(One-Way ANOVA)/Tukey多重比較測驗(Tukey's Multiple Comparisons Test))(圖10A-10B)。
為理解治療對腫瘤微環境的影響，在第8天對小鼠實施安樂死，並在HyClone RPMI1640介質(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)中使用gentleMacs C-管(美天旎生物技術公司(Miltenyi Biotec)，奧本，加利福尼亞州)在gentleMacs Octo解離器(美天旎生物技術公司，奧本，加利福尼亞州)中將腫瘤解離。大約2 x 106 個解離的腫瘤細胞被大鼠抗小鼠CD16/CD32 Ab(Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)阻斷以減少非特異性FcyRIII/II結合，並隨後用以下Ab混合物染色：將大鼠抗小鼠CD45-BUV395(殖株30-F11)(BD生物科技公司(BD Biosciences)，聖約瑟，加利福尼亞州B)、大鼠抗小鼠CD8a-BUV737(殖株53-6.7)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)、大鼠抗小鼠CD4-BV510(殖株RM4-5)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)、抗小鼠CD69-PercPCy5.5(殖株H1-2F3)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)和大鼠抗小鼠CD25-eFluor450(殖株eBio3C7)(eBioscience公司，聖地牙哥，加利福尼亞州)按製造商的建議稀釋。所有的孵育和洗滌均在FACS緩衝液中進行，該緩衝液由以下項組成：1x HyClone磷酸鹽緩衝鹽水(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、1% HyClone胎牛血清(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、2mM EDTA(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)。用細胞表面抗原抗體混合物染色後，在FACS緩衝液中洗滌解離的腫瘤細胞，使用eBioscience Foxp3/轉錄因子染色緩衝液套組(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)固定並透化，以允許用小鼠抗小鼠FOXP3-eFluor660(殖株150D/E4)(eBioscience公司，聖地牙哥，加利福尼亞州)進行細胞內染色。
相對於所有其他治療組，用抗小鼠ENTPD2 mAb13和抗PD-1 Ab組合治療時觀察到活化的CD4 T輔助細胞(定義為CD45+ CD8- CD4+ FOXP3- CD69+ CD25+)(相對於無治療，7.0倍增加，p<0.0001單向方差分析/Tukey多重比較測驗)和CD8 T細胞(定義為CD45+ CD4- CD8+ CD69+ CD25+)(相對 於無治療，5.8倍變化，p<0.05單向方差分析/Tukey多重比較測驗)的顯著流入(圖10C)。
實例10.在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3異種移植模型中，抗人ENTPD2 mAb1和mAb6與抗PD-1 Ab組合的劑量依賴性體內效果
為證明體內抗人ENTPD2 Ab的靶向抗腫瘤活性，開發了人ENTPD2工程化的模型，B16LM3殖株5。該模型衍生自B16LM3黑素瘤模型，其中藉由CAS9蛋白的暫態電穿孔敲除內源性小鼠ENTPD2表現，該蛋白具有針對小鼠ENTPD2的CRISPR指導RNA序列，並且使用逆轉錄病毒轉導方法過表現人ENTPD2。藉由FACS用人ENTPD2選擇性抗人ENTPD2 mAb17在體外證實模型中的人ENTPD2表現。使用小鼠ENTPD2選擇性抗小鼠ENTPD2 mAb13來證明內源性小鼠ENTPD2的完全敲除(圖11A)。B16LM3殖株B5顯示出與親本系相當的生長動力學和在同基因宿主中持續的人ENTPD2表現(圖11B)。
在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5x10 6 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立人ENTPD2工.程化的B16LM3殖株B5模型。一旦腫瘤達到大約35-50mm 3 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=8隻/組)。在研究的第1天，小鼠接受按最終劑量為0.1、1或10mg/kg的抗人ENTPD2 mAb1或mAb6或10mg/kg的非特異性人IgG1同種型對照的靜脈內治療。在D1和D5，按最終劑量為10mg/kg腹膜內給予抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)。將所有劑量調整至個體小鼠體重。所有測試試劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀(表23)。
在用抗人ENTPD2 mAb1或mAb6作為單一藥劑或非特異性同種型對照和抗PD-1 Ab的組合之後，觀察到無顯著的抗腫瘤效果。抗人ENTPD2 mAb1與抗PD-1 Ab(固定劑量為10mg/kg)的組合方案表明劑量依賴性抗腫瘤效應，其中△T/△C值為18.4%(10mg/kg)、35.7%(1mg/kg)和33.4%(0.1mg/kg)。 抗人ENTPD2 mAb6與抗PD-1 Ab(固定劑量為10mg/kg)的類似的組合方案還表明劑量依賴性抗腫瘤效應，其中△T/△C值為29.2%(10mg/kg)、27.3%(1mg/kg)和41.0%(0.1mg/kg)(表23和圖12A-12B)。
Figure 108118358-A0202-12-0368-174
實例11.在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5異種移植模型中抗人ENTPD2 mAb活性
為了從免疫途徑參與角度理解ENTPD2阻斷的直接影響，在用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照(10mg/kg)治療後24小時從C57BL/6小鼠中收集血漿和B16LM3殖株B5腫瘤(平均腫瘤體積約170mm 3 )。抗人ENTPD2 mAb1不是小鼠ENTPD2交叉反應，因此在外周中的任何細胞介素調節都將反映腫瘤微環境中的變化。
簡言之，藉由採集血液將血漿分離到Microvette MV-H-300毛細管血漿鋰肝素血液收集管(Capillary Plasma Lithium Heparin Blood Collection tube)(賽輸注技術公司(Sai Infusion technologies)，Lake Villa，IL)中，將其在1000-2000 Xg下旋轉沈降10分鐘。將血漿樣品儲存在-80℃直至使用。藉由外科手術切除腫瘤樣品並立即在液氮中冷凍。然後使用TissueLyser(凱傑公司，德國)儀器，將腫瘤組織在T-PER組織蛋白質提取物試劑(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中勻質化。將腫瘤裂解物樣品以11,000rpm旋轉沈降15分鐘，並且使用Pierce BCA蛋白質測定套組(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)收集上清液用於蛋白質濃度分析。根據製造商的建議，使用V-PLEX小鼠細胞介素29-Plex套組(MSD，羅克維爾市，馬里蘭州)將200μg蛋白質或25μl未稀釋的血漿用於細胞介素分析。
用抗人ENTPD2 mAb1治療(圖13B和13D)觀察到血漿MCP1顯著降低(p<0.05未配對T檢驗)，伴隨腫瘤部位MCP1大約2倍的增加，這可能反映出骨髓細胞接合和腫瘤部位的募集。此外，在來自抗人ENTPD2 mAb1處理的動物的血漿中觀察到IL-1β的大約2倍的降低(p=0.05未配對T檢驗)，和表明腫瘤部位處平行減少的趨勢(圖13A和13C)。
實例12.在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5異種移植模型中與A2AR拮抗劑組合的抗人ENTPD2 mAb活性
在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10 6 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5。一旦腫瘤達到大約50mm 3 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=8隻/組)。在研究的第1天，小鼠接受按最終劑量為10mg/kg的抗ENTPD2 mAb1或10mg/kg的非特異性人IgG1同種型對照的靜脈內(i.v.)治療。在研究開始時以50mg/kg或200mg/kg.按口服(p.o.)給予NIR178，給藥4天和停藥3天。將所有劑量調整至個體小鼠體重。該研究在治療開始後進行了13天，並且每隔一天評估腫瘤體積以評估效果。所有測試試劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀(表27)。
Figure 108118358-A0202-12-0370-175
Figure 108118358-A0202-12-0371-176
在用非特異性同種型對照和A2AR拮抗劑NIR178的組合按50或200mg/kg處理後未觀察到顯著的抗腫瘤效果。抗ENTPD2 mAb1(10mg/kg)與NIR178(50mg/kg)的組合方案表明抗腫瘤效應，其中T/△C值為61.6%(表27和圖14)。該等數據表明，當阻斷腺苷途徑中的多個節點時，抗腫瘤功效增強。
實例13.在生物化學和基於細胞的功能測定中評估抗ENTPD2 Ab
內部開發了生物化學和基於細胞的功能測定，以理解抗ENTPD2 Ab對ENTPD2經純化的細胞外結構域(殘基29-462)的功能影響，以及在基於天然細胞構象的背景下針對完全完整蛋白質的功能影響。ENTPD2將ATP水解為ADP，隨後可以使用HTRF Transcreener ADP2 TR-FRET Red測定(貝爾布魯克實驗室(BellBrook Labs)，麥迪森，威期康辛州)檢測，其中ENTPD2產生的ADP將與ADP示蹤劑競爭結合抗ADP-Tb抗體。所得訊號與樣品中ADP的濃度成反比。
為評估在ENTPD2生物化學測定中抗ENTPD2 Ab的活性，將抗ENTPD2 Ab和重組ENTPD2(殘基29-462)在反應緩衝液(50mM HEPES(pH 7.1)、10mM MgCl 2 、0.01% BSA)中稀釋至所需濃度。將4μL/孔的ENTPD2溶液和2μL/孔的抗ENTPD2 Ab溶液轉移至ProxiPlate(珀金埃爾默公司(PerkinElmer)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中並在室溫下孵育30分鐘。然後藉由添加2μl ATP(最終測定濃度為1μM)開始反應，並將樣品在室溫下孵育25分鐘。用200 mM EDTA/200 mM EGTA(5μL/孔)將反應淬滅，並將檢測試劑添加到孔(5μL/孔)中，其中終濃度為孔中的4nM ADP2抗體和4nM ADP失蹤劑 (貝爾布魯克實驗室，麥迪森，威斯康辛州)。然後將平板在室溫下孵育60分鐘，然後測量HTRF訊號。
為建立基於細胞的功能測定，將具有內源性ENTPD2表現的人/食蟹猴/小鼠ENTPD2工程化的NIH/3T3細胞或RKO(ATCC，Manassa VA)結腸直腸癌細胞按分別針對NIH/3T3小鼠、食蟹猴和人ENTPD2系的150、200和250個細胞/孔鋪板過夜，或針對RKO在384孔組織培養板中1000個細胞/孔以30μl/孔(鉑金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)鋪板。在第二天，在37℃，5% CO2 下將細胞與抗ENTPD2 Ab在劑量反應中預孵育60分鐘(10μl的5X抗體劑量/孔)，並隨後用終濃度為10μM ATP(天惠華公司(Teknova)，霍利斯特，利福尼亞州)在室溫下刺激20分鐘(10μl的5X(50μM)ATP/孔)。用40mM EDTA/40mM EGTA將反應淬滅(25μl/孔)，並且將15μl的淬滅介質轉移到低體積的Proxiplates(珀金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中用於ADP檢測。用Transcreener ADP2 TR-FRET Red測定(貝爾布魯克實驗室，麥迪森，威斯康辛州)檢測ADP產生，其中終濃度為在孔中4nM ADP2抗體和13.4nM的ADP示蹤劑(製備4X溶液，並且將5μL的「檢測試劑混合物」添加至淬滅條件介質中)。將平板與檢測試劑在室溫下孵育1小時，然後以HTRF模式讀板。
使用HTRF模式的Envision讀板器(珀金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)在兩種測定中評估HTRF訊號(620nm和665nm處的發射)。使用以下公式確定HTRF比率：HTRF比率=R=665nm處的發射/620nm處的發射x 10,000。如下確定之後的%殘留活性和%抑制：
Figure 108118358-A0202-12-0372-1077
 100；
Figure 108118358-A0202-12-0372-178
。
其中R0% 係陰性對照(0%酶活性)的HTRF比率，並且R100% 係陽性對照(100%酶活性)的HTRF比率。在Microsoft Excel中分析數據並使用GraphPad 的Prism 7.0軟體繪圖，並使用非線性回歸，log(激動劑)相對反應變數斜率(四個參數)分析獲得IC50 值。
在生物化學人ENTPD2功能測定中抗ENTPD2 Ab的代表性活性
來自雜交瘤和噬菌體展示活動的抗ENTPD2 Ab在生物化學人ENTPD2測定中針對功能活性被分類。抗ENTPD2 Ab的代表性活性和其IC 50 示出在圖15和表28中。針對許多Ab觀察到一系列活性，其中一些在具有亞納莫身IC 50 和完全靶抑制或其他顯示出更弱的活性和僅部分酶抑制(數據未顯示)的測定中顯示出非常有效的活性。
Figure 108118358-A0202-12-0373-179
在基於細胞的人和食蟹猴ENTPD2功能測定中抗ENTPD2 Ab的活性
在生物化學ENPTD2測定中對Ab的初步分析鑒定了許多對ENTPD2的重組細胞外結構域具有強抑制性活性的有效命中，然而在生物化學和基於細胞的功能測定之間觀察到一部分Ab的差異行為特徵，表明在經純化的重組蛋白和基於天然細胞的構象之間可能存在構象差異(數據未顯示)。為了確定Ab對天然ENTPD2的有效活性，使用人或食蟹猴-ENTPD2工程化的NIH/3T3細胞或具有內源ENTPD2表現的RKO細胞系分析抗ENTPD2Ab的抑制性活性。表29中捕獲了針對人或食蟹猴ENTPD2 NIH/3T3或RKO的基於細胞的測定的抗ENTPD2 Ab活性譜的概述。描述針對抗ENTPD2 Ab亞組的所有三種功能測定的有效活性的代表性圖示出在圖16中。
Figure 108118358-A0202-12-0374-180
實例14.結構指導的工程化確定的更有效的替代抗小鼠ENTPD2 Ab
抗ENTPD2 mAb13被鑒定為不與人或食蟹猴ENTPD2結合的小鼠ENTPD2選擇性Ab(FACS EC 50 3-4nM)。使用NIH3T3-小鼠ENTPD2工程化的細胞系評估抗ENTPD2 mAb13的活性，其中抗ENTPD2 mAb13顯示出作為部分酶抑制劑的活性，具有2.8nM IC 50 和最大44%靶抑制。抗ENTPD2 mAb13 Fab/mENTPD2複合物晶體結構的檢測以及來自mENTPD2活性位點內的PDB代碼3CJA rENTPD2的ATP-底物類似物的疊加，揭示了抗ENTPD2 mAb13 HC的CDR1中T30作為其中取代更大的胺基酸將被預計在空間上阻斷ATP結合的最佳位點。在抗ENTPD2 mAb13 CDR1的T30位置處具有取代的構建體的子集被工程 化，包括抗ENTPD2 mAb14和mAb15。在小鼠ENTPD2 NIH/3T3的基於細胞的功能測定中，對抗ENTPD2 mAb14和mAb15的工程化變體的評估表明，與親本抗ENTPD2 mAb13相比顯著改善的靶抑制，達到大約76%-79%的小鼠ENTPD2抑制，其中IC50為5-6nM(表30，圖17)。
Figure 108118358-A0202-12-0375-181
除非另有定義，否則本文使用的技術和科學術語具有與熟知本揭露所屬領域的專業人員通常理解的相同含義。
除非另有說明，否則所有未詳細描述的方法、步驟、技術和操作可以以本身已知如熟悉該項技術者所知的方式執行並且已經以此方式執行。例如，再次參考本文提及的標準手冊和一般背景技術以及其中引用的其他參考文獻。除非另有說明，否則本文引用的每篇參考文獻均藉由引用以其全文併入。
本發明的申請專利範圍係非限制性的，並在下文提供。
儘管本文已經詳細揭露了特定方面和申請專利範圍，但是這僅僅是出於說明的目的藉由示例的方式進行的，並且不旨在限制所附申請專利範圍的範圍或任何相應的未來申請的申請專利範圍的主題的範圍。具體而言，諸位發明人考慮到可以對本揭露進行各種替換、改變和修改而不脫離申請專利範圍所限定的本揭露的精神和範圍。認為核酸起始材料、目標殖株或文庫類型的選擇對於具有本文所述各方面知識的熟悉該項技術者而言係常規工作。認為其他方面、優點和修改在所附申請專利範圍的範圍內。僅使用常規實驗，熟悉該項技術者將 認識到或能夠確定本文所述的本發明具體方面的許多等同物。這種等同物旨在由以下申請專利範圍涵蓋。在後面提交的相應申請中重新起草申請專利範圍範圍可能是由於各個國家的專利法的限制，並且不應該被解釋為放棄申請專利範圍的主題。
<110> 諾華公司(NOVARTIS AG)
<120> ENTPD2抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
<130> PAT058145-WO-PCT
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Figure 108118358-A0202-12-0377-183
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 2
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<400> 3
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<213> 人工序列
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<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
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<212> PRT
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 10
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<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 11
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<210> 12
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 12
Figure 108118358-A0202-12-0381-196
Figure 108118358-A0202-12-0382-195
Figure 108118358-A0202-12-0383-197
<210> 13
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 13
Figure 108118358-A0202-12-0383-198
Figure 108118358-A0202-12-0384-202
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<221> 來源
<400> 14
Figure 108118358-A0202-12-0384-201
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 15
Figure 108118358-A0202-12-0384-200
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 16
Figure 108118358-A0202-12-0384-199
<210> 17
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 17
Figure 108118358-A0202-12-0385-203
<210> 18
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 18
Figure 108118358-A0202-12-0385-204
<210> 19
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 19
Figure 108118358-A0202-12-0385-206
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 20
Figure 108118358-A0202-12-0385-207
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 21
Figure 108118358-A0202-12-0386-208
<210> 22
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 22
Figure 108118358-A0202-12-0386-209
<210> 23
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 23
Figure 108118358-A0202-12-0387-210
Figure 108118358-A0202-12-0388-211
<210> 24
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 24
Figure 108118358-A0202-12-0388-212
<210> 25
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 25
Figure 108118358-A0202-12-0388-213
Figure 108118358-A0202-12-0389-214
<210> 26
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 26
Figure 108118358-A0202-12-0389-215
<210> 27
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 27
Figure 108118358-A0202-12-0390-216
Figure 108118358-A0202-12-0391-217
Figure 108118358-A0202-12-0392-218
<210> 28
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 28
Figure 108118358-A0202-12-0392-219
Figure 108118358-A0202-12-0393-221
<210> 29
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 29
Figure 108118358-A0202-12-0393-220
<210> 30
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 30
Figure 108118358-A0202-12-0394-222
<210> 31
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 31
Figure 108118358-A0202-12-0394-223
Figure 108118358-A0202-12-0395-224
<210> 32
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 32
Figure 108118358-A0202-12-0395-225
Figure 108118358-A0202-12-0396-227
<210> 33
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 33
Figure 108118358-A0202-12-0396-226
<210> 34
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 34
Figure 108118358-A0202-12-0397-228
<210> 35
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 35
Figure 108118358-A0202-12-0397-229
Figure 108118358-A0202-12-0398-230
Figure 108118358-A0202-12-0399-232
<210> 36
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 36
Figure 108118358-A0202-12-0399-233
Figure 108118358-A0202-12-0400-234
<210> 37
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 37
Figure 108118358-A0202-12-0400-235
<210> 38
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 38
Figure 108118358-A0202-12-0401-496
<210> 39
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 39
Figure 108118358-A0202-12-0401-238
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 40
Figure 108118358-A0202-12-0401-237
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 41
Figure 108118358-A0202-12-0401-236
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 42
Figure 108118358-A0202-12-0402-239
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 43
Figure 108118358-A0202-12-0402-240
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 44
Figure 108118358-A0202-12-0402-241
<210> 45
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=”人工序列：合成肽的描述”
<400> 45
Figure 108118358-A0202-12-0402-242
<210> 46
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 46
Figure 108118358-A0202-12-0403-243
<210> 47
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 47
Figure 108118358-A0202-12-0403-244
Figure 108118358-A0202-12-0404-245
<210> 48
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 48
Figure 108118358-A0202-12-0404-246
Figure 108118358-A0202-12-0405-247
Figure 108118358-A0202-12-0406-248
<210> 49
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 49
Figure 108118358-A0202-12-0406-249
Figure 108118358-A0202-12-0407-252
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 50
Figure 108118358-A0202-12-0407-251
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 51
Figure 108118358-A0202-12-0407-250
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 52
Figure 108118358-A0202-12-0408-497
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 53
Figure 108118358-A0202-12-0408-254
<210> 54
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 54
Figure 108118358-A0202-12-0408-255
<210> 55
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 55
Figure 108118358-A0202-12-0408-256
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 56
Figure 108118358-A0202-12-0409-258
<210> 57
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 57
Figure 108118358-A0202-12-0409-257
<210> 58
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 58
Figure 108118358-A0202-12-0410-259
<210> 59
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 59
Figure 108118358-A0202-12-0410-261
Figure 108118358-A0202-12-0411-263
<210> 60
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 60
Figure 108118358-A0202-12-0411-262
Figure 108118358-A0202-12-0412-264
<210> 61
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 61
Figure 108118358-A0202-12-0412-265
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 62
Figure 108118358-A0202-12-0412-266
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 63
Figure 108118358-A0202-12-0412-267
<210> 64
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 64
Figure 108118358-A0202-12-0413-269
<210> 65
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 65
Figure 108118358-A0202-12-0413-268
<210> 66
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 66
Figure 108118358-A0202-12-0414-270
Figure 108118358-A0202-12-0415-273
<210> 67
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 67
Figure 108118358-A0202-12-0415-274
<210> 68
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 68
Figure 108118358-A0202-12-0415-271
<210> 69
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 69
Figure 108118358-A0202-12-0416-275
<210> 70
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 70
Figure 108118358-A0202-12-0416-276
Figure 108118358-A0202-12-0417-279
<210> 71
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 71
Figure 108118358-A0202-12-0417-278
<210> 72
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 72
Figure 108118358-A0202-12-0417-277
Figure 108118358-A0202-12-0418-280
Figure 108118358-A0202-12-0419-281
<210> 73
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 73
Figure 108118358-A0202-12-0420-282
<210> 74
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 74
Figure 108118358-A0202-12-0421-284
<210> 75
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 75
Figure 108118358-A0202-12-0421-283
<210> 76
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 76
Figure 108118358-A0202-12-0422-285
Figure 108118358-A0202-12-0423-288
<210> 77
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 77
Figure 108118358-A0202-12-0423-287
<210> 78
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 78
Figure 108118358-A0202-12-0423-286
Figure 108118358-A0202-12-0424-289
<210> 79
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 79
Figure 108118358-A0202-12-0424-290
<210> 80
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 80
Figure 108118358-A0202-12-0425-291
<210> 81
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 81
Figure 108118358-A0202-12-0426-292
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 82
Figure 108118358-A0202-12-0426-293
<210> 83
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 83
Figure 108118358-A0202-12-0427-294
<210> 84
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 84
Figure 108118358-A0202-12-0427-295
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<221> 來源
<400> 85
Figure 108118358-A0202-12-0427-296
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 86
Figure 108118358-A0202-12-0427-297
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 87
Figure 108118358-A0202-12-0428-298
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 88
Figure 108118358-A0202-12-0428-299
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 89
Figure 108118358-A0202-12-0428-300
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 90
Figure 108118358-A0202-12-0428-301
<210> 91
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 91
Figure 108118358-A0202-12-0429-303
<210> 92
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 92
Figure 108118358-A0202-12-0429-302
Figure 108118358-A0202-12-0430-304
<210> 93
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 93
Figure 108118358-A0202-12-0430-305
Figure 108118358-A0202-12-0431-306
Figure 108118358-A0202-12-0432-307
<210> 94
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 94
Figure 108118358-A0202-12-0432-309
Figure 108118358-A0202-12-0433-312
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 95
Figure 108118358-A0202-12-0433-311
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 96
Figure 108118358-A0202-12-0433-310
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 97
Figure 108118358-A0202-12-0434-313
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 98
Figure 108118358-A0202-12-0434-314
<210> 99
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 99
Figure 108118358-A0202-12-0434-315
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 100
Figure 108118358-A0202-12-0434-316
<210> 101
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 101
Figure 108118358-A0202-12-0435-319
<210> 102
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 102
Figure 108118358-A0202-12-0435-317
<210> 103
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 103
Figure 108118358-A0202-12-0436-320
<210> 104
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 104
Figure 108118358-A0202-12-0436-321
Figure 108118358-A0202-12-0437-322
<210> 105
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 105
Figure 108118358-A0202-12-0437-324
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 106
Figure 108118358-A0202-12-0438-327
<210> 107
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 107
Figure 108118358-A0202-12-0438-326
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 108
Figure 108118358-A0202-12-0438-325
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 109
Figure 108118358-A0202-12-0439-328
<210> 110
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 110
Figure 108118358-A0202-12-0439-329
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 111
Figure 108118358-A0202-12-0439-330
<210> 112
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 112
Figure 108118358-A0202-12-0439-331
<210> 113
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 113
Figure 108118358-A0202-12-0440-332
<210> 114
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 114
Figure 108118358-A0202-12-0440-333
<210> 115
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 115
Figure 108118358-A0202-12-0440-334
Figure 108118358-A0202-12-0441-336
<210> 116
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 116
Figure 108118358-A0202-12-0441-337
<210> 117
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 117
Figure 108118358-A0202-12-0441-335
Figure 108118358-A0202-12-0442-338
Figure 108118358-A0202-12-0443-339
<210> 118
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 118
Figure 108118358-A0202-12-0443-340
Figure 108118358-A0202-12-0444-341
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 119
Figure 108118358-A0202-12-0444-343
<210> 120
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 120
Figure 108118358-A0202-12-0445-345
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 121
Figure 108118358-A0202-12-0445-346
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 122
Figure 108118358-A0202-12-0445-347
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 123
Figure 108118358-A0202-12-0445-349
<210> 124
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 124
Figure 108118358-A0202-12-0446-351
<210> 125
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 125
Figure 108118358-A0202-12-0446-350
<210> 126
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 126
Figure 108118358-A0202-12-0447-352
<210> 127
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 127
Figure 108118358-A0202-12-0447-353
Figure 108118358-A0202-12-0448-355
<210> 128
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 128
Figure 108118358-A0202-12-0448-354
Figure 108118358-A0202-12-0449-356
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 129
Figure 108118358-A0202-12-0449-357
<210> 130
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 130
Figure 108118358-A0202-12-0449-358
<210> 131
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 131
Figure 108118358-A0202-12-0449-359
<210> 132
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 132
Figure 108118358-A0202-12-0450-361
<210> 133
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 133
Figure 108118358-A0202-12-0450-360
Figure 108118358-A0202-12-0451-362
<210> 134
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 134
Figure 108118358-A0202-12-0451-364
Figure 108118358-A0202-12-0452-365
Figure 108118358-A0202-12-0453-366
<210> 135
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 135
Figure 108118358-A0202-12-0453-367
Figure 108118358-A0202-12-0454-368
<210> 136
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 136
Figure 108118358-A0202-12-0454-369
<210> 137
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 137
Figure 108118358-A0202-12-0454-370
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 138
Figure 108118358-A0202-12-0455-374
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 139
Figure 108118358-A0202-12-0455-373
<210> 140
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 140
Figure 108118358-A0202-12-0455-372
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 141
Figure 108118358-A0202-12-0455-371
<210> 142
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 142
Figure 108118358-A0202-12-0456-375
<210> 143
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 143
Figure 108118358-A0202-12-0456-376
<210> 144
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 144
Figure 108118358-A0202-12-0456-377
<210> 145
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 145
Figure 108118358-A0202-12-0456-378
Figure 108118358-A0202-12-0457-379
<210> 146
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 146
Figure 108118358-A0202-12-0457-380
<210> 147
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 147
Figure 108118358-A0202-12-0458-381
Figure 108118358-A0202-12-0459-382
Figure 108118358-A0202-12-0460-383
<210> 148
<211> 1362
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 148
Figure 108118358-A0202-12-0460-384
Figure 108118358-A0202-12-0461-388
<210> 149
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 149
Figure 108118358-A0202-12-0461-387
<210> 150
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 150
Figure 108118358-A0202-12-0461-386
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 151
Figure 108118358-A0202-12-0461-385
<210> 152
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 152
Figure 108118358-A0202-12-0462-389
<210> 153
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 153
Figure 108118358-A0202-12-0462-390
<210> 154
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 154
Figure 108118358-A0202-12-0462-391
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 155
Figure 108118358-A0202-12-0462-392
<210> 156
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 156
Figure 108118358-A0202-12-0463-393
<210> 157
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 157
Figure 108118358-A0202-12-0463-394
Figure 108118358-A0202-12-0464-395
<210> 158
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 158
Figure 108118358-A0202-12-0464-499
Figure 108118358-A0202-12-0465-397
<210> 159
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 159
Figure 108118358-A0202-12-0465-398
<210> 160
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 160
Figure 108118358-A0202-12-0466-404
<210> 161
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 161
Figure 108118358-A0202-12-0466-403
<210> 162
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 162
Figure 108118358-A0202-12-0466-402
<210> 163
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 163
Figure 108118358-A0202-12-0466-400
<210> 164
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 164
Figure 108118358-A0202-12-0467-405
<210> 165
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 165
Figure 108118358-A0202-12-0467-406
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 166
Figure 108118358-A0202-12-0467-407
<210> 167
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 167
Figure 108118358-A0202-12-0467-408
<210> 168
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 168
Figure 108118358-A0202-12-0468-410
<210> 169
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 169
Figure 108118358-A0202-12-0468-409
<210> 170
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 170
Figure 108118358-A0202-12-0469-411
<210> 171
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 171
Figure 108118358-A0202-12-0469-412
Figure 108118358-A0202-12-0470-413
Figure 108118358-A0202-12-0471-414
<210> 172
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 172
Figure 108118358-A0202-12-0471-416
Figure 108118358-A0202-12-0472-417
<210> 173
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 173
Figure 108118358-A0202-12-0472-418
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 174
Figure 108118358-A0202-12-0473-423
<210> 175
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 175
Figure 108118358-A0202-12-0473-421
<210> 176
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 176
Figure 108118358-A0202-12-0473-420
<210> 177
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 177
Figure 108118358-A0202-12-0473-419
<210> 178
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<221> 來源
<400> 178
Figure 108118358-A0202-12-0474-424
<210> 179
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 179
Figure 108118358-A0202-12-0474-425
<210> 180
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 180
Figure 108118358-A0202-12-0475-426
Figure 108118358-A0202-12-0476-427
<210> 181
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 181
Figure 108118358-A0202-12-0476-428
<210> 182
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 182
Figure 108118358-A0202-12-0476-500
<210> 183
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 183
Figure 108118358-A0202-12-0477-432
<210> 184
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 184
Figure 108118358-A0202-12-0477-431
<210> 185
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 185
Figure 108118358-A0202-12-0477-430
<210> 186
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 186
Figure 108118358-A0202-12-0478-433
<210> 187
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 187
Figure 108118358-A0202-12-0478-434
<210> 188
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 188
Figure 108118358-A0202-12-0478-435
<210> 189
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 189
Figure 108118358-A0202-12-0478-436
<210> 190
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 190
Figure 108118358-A0202-12-0479-438
<210> 191
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 191
Figure 108118358-A0202-12-0479-437
<210> 192
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 192
Figure 108118358-A0202-12-0480-439
<210> 193
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 193
Figure 108118358-A0202-12-0480-440
Figure 108118358-A0202-12-0481-441
Figure 108118358-A0202-12-0482-442
<210> 194
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 194
Figure 108118358-A0202-12-0482-443
Figure 108118358-A0202-12-0483-445
<210> 195
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 195
Figure 108118358-A0202-12-0483-444
<210> 196
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 196
Figure 108118358-A0202-12-0484-446
<210> 197
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 197
Figure 108118358-A0202-12-0484-447
<210> 198
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 198
Figure 108118358-A0202-12-0484-448
<210> 199
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 199
Figure 108118358-A0202-12-0484-449
<210> 200
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 200
Figure 108118358-A0202-12-0485-451
<210> 201
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 201
Figure 108118358-A0202-12-0485-452
<210> 202
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 202
Figure 108118358-A0202-12-0485-450
Figure 108118358-A0202-12-0486-453
<210> 203
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 203
Figure 108118358-A0202-12-0486-454
<210> 204
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 204
Figure 108118358-A0202-12-0486-455
Figure 108118358-A0202-12-0487-456
<210> 205
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 205
Figure 108118358-A0202-12-0487-457
Figure 108118358-A0202-12-0488-460
<210> 206
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 206
Figure 108118358-A0202-12-0488-459
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 207
Figure 108118358-A0202-12-0488-458
<210> 208
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 208
Figure 108118358-A0202-12-0489-461
<210> 209
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 209
Figure 108118358-A0202-12-0489-462
<210> 210
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 210
Figure 108118358-A0202-12-0490-464
<210> 211
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 211
Figure 108118358-A0202-12-0490-463
Figure 108118358-A0202-12-0491-465
Figure 108118358-A0202-12-0492-466
<210> 212
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 212
Figure 108118358-A0202-12-0492-467
Figure 108118358-A0202-12-0493-468
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 213
Figure 108118358-A0202-12-0493-469
<210> 214
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 214
Figure 108118358-A0202-12-0493-470
<210> 215
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 215
Figure 108118358-A0202-12-0494-472
<210> 216
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 216
Figure 108118358-A0202-12-0494-471
<210> 217
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 217
Figure 108118358-A0202-12-0495-473
<210> 218
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 218
Figure 108118358-A0202-12-0495-474
Figure 108118358-A0202-12-0496-475
Figure 108118358-A0202-12-0497-476
<210> 219
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 219
Figure 108118358-A0202-12-0497-478
Figure 108118358-A0202-12-0498-479
<210> 220
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 220
Figure 108118358-A0202-12-0498-480
<210> 221
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 221
Figure 108118358-A0202-12-0499-485
<210> 222
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 222
Figure 108118358-A0202-12-0499-484
<210> 223
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 223
Figure 108118358-A0202-12-0499-483
<210> 224
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 224
Figure 108118358-A0202-12-0499-482
Figure 108118358-A0202-12-0500-486
<210> 225
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 225
Figure 108118358-A0202-12-0500-487
<210> 226
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 226
Figure 108118358-A0202-12-0501-488
<210> 227
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 227
Figure 108118358-A0202-12-0501-490
Figure 108118358-A0202-12-0502-491
Figure 108118358-A0202-12-0503-492
<210> 228
<211> 1362
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 228
Figure 108118358-A0202-12-0503-493
Figure 108118358-A0202-12-0504-494
<210> 229
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 229
Figure 108118358-A0202-12-0504-495
Figure 108118358-A0202-12-0505-792
<210> 230
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 230
Figure 108118358-A0202-12-0505-793
<210> 231
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 231
Figure 108118358-A0202-12-0505-794
Figure 108118358-A0202-12-0506-795
<210> 232
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 232
Figure 108118358-A0202-12-0506-796
Figure 108118358-A0202-12-0507-798
<210> 233
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 233
Figure 108118358-A0202-12-0507-797
Figure 108118358-A0202-12-0508-799
<210> 234
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 234
Figure 108118358-A0202-12-0508-800
<210> 235
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 235
Figure 108118358-A0202-12-0508-801
Figure 108118358-A0202-12-0509-802
Figure 108118358-A0202-12-0510-803
<210> 236
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 236
Figure 108118358-A0202-12-0511-804
<210> 237
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 237
Figure 108118358-A0202-12-0512-805
<210> 238
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 238
Figure 108118358-A0202-12-0512-806
<210> 239
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 239
Figure 108118358-A0202-12-0513-807
Figure 108118358-A0202-12-0514-808
<210> 240
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 240
Figure 108118358-A0202-12-0514-809
<210> 241
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 241
Figure 108118358-A0202-12-0514-810
Figure 108118358-A0202-12-0515-811
<210> 242
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 242
Figure 108118358-A0202-12-0515-812
<210> 243
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 243
Figure 108118358-A0202-12-0516-813
Figure 108118358-A0202-12-0517-814
Figure 108118358-A0202-12-0518-815
<210> 244
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 244
Figure 108118358-A0202-12-0518-816
Figure 108118358-A0202-12-0519-817
<210> 245
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 245
Figure 108118358-A0202-12-0519-818
<210> 246
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 246
Figure 108118358-A0202-12-0519-819
<210> 247
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 247
Figure 108118358-A0202-12-0520-820
<210> 248
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 248
Figure 108118358-A0202-12-0520-821
<210> 249
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 249
Figure 108118358-A0202-12-0520-822
<210> 250
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 250
Figure 108118358-A0202-12-0520-823
Figure 108118358-A0202-12-0521-824
<210> 251
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 251
Figure 108118358-A0202-12-0521-825
<210> 252
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 252
Figure 108118358-A0202-12-0522-826
Figure 108118358-A0202-12-0523-827
Figure 108118358-A0202-12-0524-828
<210> 253
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 253
Figure 108118358-A0202-12-0524-829
Figure 108118358-A0202-12-0525-830
<210> 254
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 254
Figure 108118358-A0202-12-0525-831
<210> 255
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 255
Figure 108118358-A0202-12-0525-832
<210> 256
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 256
Figure 108118358-A0202-12-0525-833
<210> 257
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 257
Figure 108118358-A0202-12-0526-835
<210> 258
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 258
Figure 108118358-A0202-12-0526-834
<210> 259
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 259
Figure 108118358-A0202-12-0527-836
Figure 108118358-A0202-12-0528-838
<210> 260
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 260
Figure 108118358-A0202-12-0528-839
<210> 261
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 261
Figure 108118358-A0202-12-0528-837
<210> 262
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 262
Figure 108118358-A0202-12-0529-840
<210> 263
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 263
Figure 108118358-A0202-12-0529-841
<210> 264
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 264
Figure 108118358-A0202-12-0529-842
Figure 108118358-A0202-12-0530-843
<210> 265
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 265
Figure 108118358-A0202-12-0530-844
<210> 266
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 266
Figure 108118358-A0202-12-0530-845
Figure 108118358-A0202-12-0531-846
Figure 108118358-A0202-12-0532-847
Figure 108118358-A0202-12-0533-848
<210> 267
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 267
Figure 108118358-A0202-12-0533-849
Figure 108118358-A0202-12-0534-850
<210> 268
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 268
Figure 108118358-A0202-12-0534-851
<210> 269
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 269
Figure 108118358-A0202-12-0534-852
Figure 108118358-A0202-12-0535-854
<210> 270
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 270
Figure 108118358-A0202-12-0535-853
Figure 108118358-A0202-12-0536-855
<210> 271
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 271
Figure 108118358-A0202-12-0536-856
<210> 272
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 272
Figure 108118358-A0202-12-0537-859
<210> 273
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 273
Figure 108118358-A0202-12-0537-858
<210> 274
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 274
Figure 108118358-A0202-12-0537-857
<210> 275
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 275
Figure 108118358-A0202-12-0538-860
<210> 276
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 276
Figure 108118358-A0202-12-0538-861
<210> 277
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 277
Figure 108118358-A0202-12-0538-862
<210> 278
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 278
Figure 108118358-A0202-12-0538-863
<210> 279
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 279
Figure 108118358-A0202-12-0539-865
<210> 280
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 280
Figure 108118358-A0202-12-0539-866
<210> 281
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 281
Figure 108118358-A0202-12-0539-864
Figure 108118358-A0202-12-0540-867
<210> 282
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 282
Figure 108118358-A0202-12-0540-868
<210> 283
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 283
Figure 108118358-A0202-12-0540-869
Figure 108118358-A0202-12-0541-870
Figure 108118358-A0202-12-0542-871
<210> 284
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 284
Figure 108118358-A0202-12-0543-872
<210> 285
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 285
Figure 108118358-A0202-12-0544-874
<210> 286
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 286
Figure 108118358-A0202-12-0544-875
<210> 287
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 287
Figure 108118358-A0202-12-0544-873
<210> 288
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 288
Figure 108118358-A0202-12-0545-876
<210> 289
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 289
Figure 108118358-A0202-12-0545-877
Figure 108118358-A0202-12-0546-878
<210> 290
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 290
Figure 108118358-A0202-12-0546-879
Figure 108118358-A0202-12-0547-881
<210> 291
<211> 495
<212> PRT
<213> 智人
<400> 291
Figure 108118358-A0202-12-0547-880
Figure 108118358-A0202-12-0548-882
Figure 108118358-A0202-12-0549-883
<210> 292
<211> 2156
<212> DNA
<213> 智人
<400> 292
Figure 108118358-A0202-12-0549-884
Figure 108118358-A0202-12-0550-885
<210> 293
<211> 472
<212> PRT
<213> 智人
<400> 293
Figure 108118358-A0202-12-0551-886
Figure 108118358-A0202-12-0552-887
Figure 108118358-A0202-12-0553-888
<210> 294
<211> 2087
<212> DNA
<213> 智人
<400> 294
Figure 108118358-A0202-12-0553-889
Figure 108118358-A0202-12-0554-890
<210> 295
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 295
Figure 108118358-A0202-12-0554-1076
Figure 108118358-A0202-12-0555-893
<210> 296
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 296
Figure 108118358-A0202-12-0555-892
<210> 297
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 297
Figure 108118358-A0202-12-0556-894
Figure 108118358-A0202-12-0557-895
Figure 108118358-A0202-12-0558-896
<210> 298
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 298
Figure 108118358-A0202-12-0558-897
Figure 108118358-A0202-12-0559-898
<210> 299
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 299
Figure 108118358-A0202-12-0559-899
Figure 108118358-A0202-12-0560-902
<210> 300
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 300
Figure 108118358-A0202-12-0560-900
<210> 301
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 301
Figure 108118358-A0202-12-0560-901
Figure 108118358-A0202-12-0561-903
<210> 302
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 302
Figure 108118358-A0202-12-0562-904
<210> 303
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 303
Figure 108118358-A0202-12-0562-905
Figure 108118358-A0202-12-0563-906
<210> 304
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 304
Figure 108118358-A0202-12-0563-907
Figure 108118358-A0202-12-0564-908
<210> 305
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 305
Figure 108118358-A0202-12-0564-909
<210> 306
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 306
Figure 108118358-A0202-12-0565-910
<210> 307
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 307
Figure 108118358-A0202-12-0565-911
Figure 108118358-A0202-12-0566-912
<210> 308
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 308
Figure 108118358-A0202-12-0566-913
<210> 309
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 309
Figure 108118358-A0202-12-0567-915
<210> 310
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 310
Figure 108118358-A0202-12-0567-914
Figure 108118358-A0202-12-0568-916
<210> 311
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 311
Figure 108118358-A0202-12-0568-917
Figure 108118358-A0202-12-0569-919
<210> 312
<211> 486
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 312
Figure 108118358-A0202-12-0569-918
Figure 108118358-A0202-12-0570-920
Figure 108118358-A0202-12-0571-921
<210> 313
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 313
Figure 108118358-A0202-12-0571-922
Figure 108118358-A0202-12-0572-923
Figure 108118358-A0202-12-0573-924
<210> 314
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 314
Figure 108118358-A0202-12-0574-925
Figure 108118358-A0202-12-0575-926
Figure 108118358-A0202-12-0576-927
<210> 315
<211> 485
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 315
Figure 108118358-A0202-12-0576-928
Figure 108118358-A0202-12-0577-929
Figure 108118358-A0202-12-0578-930
<210> 316
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 316
Figure 108118358-A0202-12-0578-931
Figure 108118358-A0202-12-0579-932
<210> 317
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 317
Figure 108118358-A0202-12-0579-933
Figure 108118358-A0202-12-0580-934
Figure 108118358-A0202-12-0581-935
<210> 318
<211> 485
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 318
Figure 108118358-A0202-12-0582-936
Figure 108118358-A0202-12-0583-937
Figure 108118358-A0202-12-0584-938
<210> 319
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 319
Figure 108118358-A0202-12-0584-939
Figure 108118358-A0202-12-0585-940
<210> 320
<400> 320
000
<210> 321
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<210> 322
<400> 322
000
<210> 323
<400> 323
000
<210> 324
<400> 324
000
<210> 325
<400> 325
000
<210> 326
<400> 326
000
<210> 327
<400> 327
000
<210> 328
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 328
Figure 108118358-A0202-12-0586-941
Figure 108118358-A0202-12-0587-942
<210> 329
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 329
Figure 108118358-A0202-12-0587-943
<210> 330
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 330
Figure 108118358-A0202-12-0587-944
Figure 108118358-A0202-12-0588-945
<210> 331
<211> 681
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 331
Figure 108118358-A0202-12-0588-946
Figure 108118358-A0202-12-0589-947
<210> 332
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 332
Figure 108118358-A0202-12-0589-948
Figure 108118358-A0202-12-0590-949
<210> 333
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 333
Figure 108118358-A0202-12-0590-950
<210> 334
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 334
Figure 108118358-A0202-12-0590-951
Figure 108118358-A0202-12-0591-952
<210> 335
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 335
Figure 108118358-A0202-12-0591-953
Figure 108118358-A0202-12-0592-954
<210> 336
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 336
Figure 108118358-A0202-12-0592-955
Figure 108118358-A0202-12-0593-956
<210> 337
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 337
Figure 108118358-A0202-12-0593-957
Figure 108118358-A0202-12-0594-959
<210> 338
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 338
Figure 108118358-A0202-12-0594-958
Figure 108118358-A0202-12-0595-960
<210> 339
<211> 678
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 339
Figure 108118358-A0202-12-0595-961
<210> 340
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 340
Figure 108118358-A0202-12-0596-962
Figure 108118358-A0202-12-0597-963
<210> 341
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 341
Figure 108118358-A0202-12-0597-964
<210> 342
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 342
Figure 108118358-A0202-12-0597-965
Figure 108118358-A0202-12-0598-966
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<212> PRT
<213> 食蟹猴
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Figure 108118358-A0202-12-0598-967
Figure 108118358-A0202-12-0599-968
Figure 108118358-A0202-12-0600-969
Figure 108118358-A0202-12-0601-970
<210> 344
<211> 1485
<212> DNA
<213> 食蟹猴
<400> 344
Figure 108118358-A0202-12-0601-971
Figure 108118358-A0202-12-0602-973
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 345
Figure 108118358-A0202-12-0602-972
Figure 108118358-A0202-12-0603-974
Figure 108118358-A0202-12-0604-975
<210> 346
<211> 1485
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 346
Figure 108118358-A0202-12-0604-976
Figure 108118358-A0202-12-0605-977
<210> 347
<211> 495
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<400> 347
Figure 108118358-A0202-12-0605-978
Figure 108118358-A0202-12-0606-979
Figure 108118358-A0202-12-0607-980
<210> 348
<211> 1485
<212> DNA
<213> 褐家鼠
<400> 348
Figure 108118358-A0202-12-0607-981
Figure 108118358-A0202-12-0608-982
<210> 349
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 349
Figure 108118358-A0202-12-0608-983
Figure 108118358-A0202-12-0609-984
Figure 108118358-A0202-12-0610-985
Figure 108118358-A0202-12-0611-986
<210> 350
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 350
Figure 108118358-A0202-12-0611-987
Figure 108118358-A0202-12-0612-988
<210> 351
<211> 510
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 351
Figure 108118358-A0202-12-0612-989
Figure 108118358-A0202-12-0613-990
Figure 108118358-A0202-12-0614-991
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<211> 1530
<212> DNA
<213> 小家鼠
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Figure 108118358-A0202-12-0614-992
Figure 108118358-A0202-12-0615-993
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<213> 人工序列
<220>
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<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 501
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<210> 502
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 502
Figure 108118358-A0202-12-0631-994
Figure 108118358-A0202-12-0632-996
<210> 503
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 503
Figure 108118358-A0202-12-0632-997
<210> 504
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 504
Figure 108118358-A0202-12-0632-998
<210> 505
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 505
Figure 108118358-A0202-12-0632-999
<210> 506
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 506
Figure 108118358-A0202-12-0633-1000
<210> 507
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 507
Figure 108118358-A0202-12-0633-1001
<210> 508
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 508
Figure 108118358-A0202-12-0634-1002
Figure 108118358-A0202-12-0635-1003
Figure 108118358-A0202-12-0636-1004
<210> 509
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 509
Figure 108118358-A0202-12-0636-1005
Figure 108118358-A0202-12-0637-1009
<210> 510
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 510
Figure 108118358-A0202-12-0637-1008
<210> 511
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 511
Figure 108118358-A0202-12-0637-1007
<210> 512
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 512
Figure 108118358-A0202-12-0637-1006
Figure 108118358-A0202-12-0638-1010
<210> 513
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 513
Figure 108118358-A0202-12-0638-1011
<210> 514
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 514
Figure 108118358-A0202-12-0638-1012
<210> 515
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 515
Figure 108118358-A0202-12-0638-1013
<210> 516
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 516
Figure 108118358-A0202-12-0638-1014
Figure 108118358-A0202-12-0639-1015
<210> 517
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 517
Figure 108118358-A0202-12-0639-1016
<210> 518
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 518
Figure 108118358-A0202-12-0640-1017
Figure 108118358-A0202-12-0641-1018
<210> 519
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 519
Figure 108118358-A0202-12-0641-1019
<210> 520
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 520
Figure 108118358-A0202-12-0641-1020
Figure 108118358-A0202-12-0642-1021
<210> 521
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 521
Figure 108118358-A0202-12-0642-1022
<210> 522
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 522
Figure 108118358-A0202-12-0643-1023
Figure 108118358-A0202-12-0644-1024
<210> 523
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 523
Figure 108118358-A0202-12-0644-1025
<210> 524
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 524
Figure 108118358-A0202-12-0644-1026
<210> 525
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 525
Figure 108118358-A0202-12-0645-1030
<210> 526
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 526
Figure 108118358-A0202-12-0645-1029
<210> 527
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 527
Figure 108118358-A0202-12-0645-1028
<210> 528
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 528
Figure 108118358-A0202-12-0645-1027
<210> 529
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 529
Figure 108118358-A0202-12-0646-1031
<210> 530
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 530
Figure 108118358-A0202-12-0646-1032
<210> 531
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 531
Figure 108118358-A0202-12-0646-1033
<210> 532
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 532
Figure 108118358-A0202-12-0646-1034
<210> 533
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 533
Figure 108118358-A0202-12-0646-1035
<210> 534
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 534
Figure 108118358-A0202-12-0647-1036
<210> 535
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 535
Figure 108118358-A0202-12-0647-1037
Figure 108118358-A0202-12-0648-1038
Figure 108118358-A0202-12-0649-1039
<210> 536
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 536
Figure 108118358-A0202-12-0649-1040
Figure 108118358-A0202-12-0650-1041
<210> 537
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 537
Figure 108118358-A0202-12-0650-1042
Figure 108118358-A0202-12-0651-1043
Figure 108118358-A0202-12-0652-1044
<210> 538
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 538
Figure 108118358-A0202-12-0652-1045
Figure 108118358-A0202-12-0653-1046
<210> 539
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 539
Figure 108118358-A0202-12-0654-1047
Figure 108118358-A0202-12-0655-1048
Figure 108118358-A0202-12-0656-1049
<210> 540
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 540
Figure 108118358-A0202-12-0656-1050
Figure 108118358-A0202-12-0657-1051
<210> 541
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 541
Figure 108118358-A0202-12-0657-1052
<210> 542
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000
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 601
Figure 108118358-A0202-12-0664-1056
<210> 602
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 602
Figure 108118358-A0202-12-0664-1055
<210> 603
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 603
Figure 108118358-A0202-12-0664-1054
<210> 604
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 604
Figure 108118358-A0202-12-0664-1053
<210> 605
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 605
Figure 108118358-A0202-12-0665-1057
<210> 606
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 606
Figure 108118358-A0202-12-0665-1058
<210> 607
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 607
Figure 108118358-A0202-12-0666-1060
<210> 608
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 608
Figure 108118358-A0202-12-0666-1059
Figure 108118358-A0202-12-0667-1061
Figure 108118358-A0202-12-0668-1062
<210> 609
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 609
Figure 108118358-A0202-12-0668-1063
<210> 610
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 610
Figure 108118358-A0202-12-0668-1064
<210> 611
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 611
Figure 108118358-A0202-12-0669-1068
<210> 612
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 612
Figure 108118358-A0202-12-0669-1067
<210> 613
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 613
Figure 108118358-A0202-12-0669-1066
<210> 614
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 614
Figure 108118358-A0202-12-0669-1065
<210> 615
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 615
Figure 108118358-A0202-12-0670-1069
<210> 616
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 616
Figure 108118358-A0202-12-0671-1071
<210> 617
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 617
Figure 108118358-A0202-12-0671-1070
Figure 108118358-A0202-12-0672-1072
<210> 618
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 618
Figure 108118358-A0202-12-0672-1073
Figure 108118358-A0202-12-0673-1074
<210> 619
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 619
Figure 108118358-A0202-12-0673-1075
<210> 620
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 620
Figure 108118358-A0202-12-0674-1066
<210> 621
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 621
Figure 108118358-A0202-12-0674-1065
Figure 108118358-A0202-12-0675-1067
<210> 622
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 622
Figure 108118358-A0202-12-0675-1068
Figure 108118358-A0202-12-0676-1069
Figure 108118358-A0202-12-0677-1070
<210> 623
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 623
Figure 108118358-A0202-12-0677-1071
Figure 108118358-A0202-12-0678-1073
<210> 624
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 624
Figure 108118358-A0202-12-0678-1072
<210> 625
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 625
Figure 108118358-A0202-12-0679-1074
<210> 626
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 626
Figure 108118358-A0202-12-0679-1075
Figure 108118358-A0202-12-0680-1077
<210> 627
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 627
Figure 108118358-A0202-12-0680-1076
Figure 108118358-A0202-12-0681-1078
<210> 628
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 628
Figure 108118358-A0202-12-0681-1079
<210> 629
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 629
Figure 108118358-A0202-12-0681-1080
<210> 630
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 630
Figure 108118358-A0202-12-0681-1081
<210> 631
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 631
Figure 108118358-A0202-12-0681-1082
<210> 632
<211> 18
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 632
Figure 108118358-A0202-12-0682-1086
<210> 633
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 633
Figure 108118358-A0202-12-0682-1085
<210> 634
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 634
Figure 108118358-A0202-12-0682-1084
<210> 635
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 635
Figure 108118358-A0202-12-0682-1083
<210> 636
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 636
Figure 108118358-A0202-12-0683-1087
<210> 637
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 637
Figure 108118358-A0202-12-0683-1088
<210> 638
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 638
Figure 108118358-A0202-12-0683-1089
<210> 639
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 639
Figure 108118358-A0202-12-0683-1090
Figure 108118358-A0202-12-0684-1091
Figure 108118358-A0202-12-0685-1092
<210> 640
<211> 214
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0686-1093
<210> 641
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<212> PRT
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0687-1094
Figure 108118358-A0202-12-0688-1095
Figure 108118358-A0202-12-0689-1096
<210> 642
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 642
Figure 108118358-A0202-12-0689-1097
Figure 108118358-A0202-12-0690-1098
<210> 643
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 643
Figure 108118358-A0202-12-0690-1099
Figure 108118358-A0202-12-0691-1100
Figure 108118358-A0202-12-0692-1101
<210> 644
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 644
Figure 108118358-A0202-12-0692-1102
Figure 108118358-A0202-12-0693-1103
<210> 645
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 645
Figure 108118358-A0202-12-0694-1105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0694-1104
Figure 108118358-A0202-12-0695-1106
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0695-1107
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 702
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<210> 703
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0701-1110
Figure 108118358-A0202-12-0702-1111
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0702-1112
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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<210> 708
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<212> DNA
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0703-1117
Figure 108118358-A0202-12-0704-1119
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<212> PRT
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 709
Figure 108118358-A0202-12-0704-1118
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 710
Figure 108118358-A0202-12-0706-1122
<210> 711
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 711
Figure 108118358-A0202-12-0706-1123
<210> 712
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 712
Figure 108118358-A0202-12-0707-1127
<210> 713
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 713
Figure 108118358-A0202-12-0707-1126
<210> 714
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 714
Figure 108118358-A0202-12-0707-1125
<210> 715
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 715
Figure 108118358-A0202-12-0707-1124
<210> 716
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 716
Figure 108118358-A0202-12-0708-1128
<210> 717
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 717
Figure 108118358-A0202-12-0709-1129
<210> 718
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 718
Figure 108118358-A0202-12-0710-1131
<210> 719
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 719
Figure 108118358-A0202-12-0710-1130
Figure 108118358-A0202-12-0711-1132
<210> 720
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0711-1133
<210> 721
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<212> PRT
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 721
Figure 108118358-A0202-12-0711-1134
Figure 108118358-A0202-12-0712-1135
<210> 722
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 722
Figure 108118358-A0202-12-0712-1136
Figure 108118358-A0202-12-0713-1137
<210> 723
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 723
Figure 108118358-A0202-12-0713-1138
<210> 724
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 724
Figure 108118358-A0202-12-0714-1140
<210> 725
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 725
Figure 108118358-A0202-12-0714-1139
<210> 726
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 726
Figure 108118358-A0202-12-0715-1141
<210> 727
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 727
Figure 108118358-A0202-12-0715-1142
Figure 108118358-A0202-12-0716-1143
Figure 108118358-A0202-12-0717-1144
<210> 728
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 728
Figure 108118358-A0202-12-0717-1145
Figure 108118358-A0202-12-0718-1146
<210> 729
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 729
Figure 108118358-A0202-12-0718-1147
Figure 108118358-A0202-12-0719-1148
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 730
Figure 108118358-A0202-12-0719-1149
Figure 108118358-A0202-12-0720-1150
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 731
Figure 108118358-A0202-12-0720-1151
<210> 732
<211> 321
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0721-1153
<210> 733
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 733
Figure 108118358-A0202-12-0721-1152
Figure 108118358-A0202-12-0722-1154
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0722-1155
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0723-1156
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0723-1157
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<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0724-1161
<210> 738
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0724-1162
<210> 739
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 739
Figure 108118358-A0202-12-0724-1160
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0724-1159
<210> 741
<211> 48
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0724-1158
<210> 742
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0725-1163
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 743
Figure 108118358-A0202-12-0725-1164
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 744
Figure 108118358-A0202-12-0725-1165
<210> 745
<211> 18
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
<400> 745
Figure 108118358-A0202-12-0725-1166
<210> 746
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0726-1170
<210> 747
<211> 33
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0726-1169
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0726-1167
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0727-1171
<210> 751
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<213> 人工序列
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0727-1172
<210> 752
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0727-1173
<210> 753
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0727-1174
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0727-1175
<210> 755
<211> 9
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0728-1179
<210> 756
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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<210> 757
<211> 18
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0728-1177
<210> 758
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0728-1176
<210> 759
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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<210> 760
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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<210> 761
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<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述〞
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Figure 108118358-A0202-12-0730-1184
Figure 108118358-A0202-12-0731-1185
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<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0734-1188
Figure 108118358-A0202-12-0735-1189
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<220>
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<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
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Figure 108118358-A0202-12-0736-1191
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<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 803
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<210> 804
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<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 804
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<210> 805
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 805
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<210> 806
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 806
Figure 108118358-A0202-12-0741-1198
Figure 108118358-A0202-12-0742-1199
<210> 807
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
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<210> 808
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<212> PRT
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 808
Figure 108118358-A0202-12-0742-1201
Figure 108118358-A0202-12-0743-1202
Figure 108118358-A0202-12-0744-1203
<210> 809
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 809
Figure 108118358-A0202-12-0745-1204
<210> 810
<211> 15
<212> PRT
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<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 810
Figure 108118358-A0202-12-0746-1208
<210> 811
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<221> 來源
<400> 811
Figure 108118358-A0202-12-0746-1207
<210> 812
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 812
Figure 108118358-A0202-12-0746-1206
<210> 813
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 813
Figure 108118358-A0202-12-0746-1205
<210> 814
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 814
Figure 108118358-A0202-12-0747-1209
<210> 815
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 815
Figure 108118358-A0202-12-0747-1211
<210> 816
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 816
Figure 108118358-A0202-12-0747-1210
Figure 108118358-A0202-12-0748-1213
<210> 817
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 817
Figure 108118358-A0202-12-0748-1214
<210> 818
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 818
Figure 108118358-A0202-12-0748-1212
Figure 108118358-A0202-12-0749-1215
<210> 819
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 819
Figure 108118358-A0202-12-0749-1216
Figure 108118358-A0202-12-0750-1219
<210> 820
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 820
Figure 108118358-A0202-12-0750-1218
<210> 821
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 821
Figure 108118358-A0202-12-0750-1217
<210> 822
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 822
Figure 108118358-A0202-12-0751-1220
<210> 823
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 823
Figure 108118358-A0202-12-0751-1221
<210> 824
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 824
Figure 108118358-A0202-12-0752-1222
Figure 108118358-A0202-12-0753-1223
Figure 108118358-A0202-12-0754-1224
<210> 825
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 825
Figure 108118358-A0202-12-0754-1225
Figure 108118358-A0202-12-0755-1227
<210> 826
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 826
Figure 108118358-A0202-12-0755-1226
<210> 827
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 827
Figure 108118358-A0202-12-0756-1228
<210> 828
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 828
Figure 108118358-A0202-12-0756-1229
Figure 108118358-A0202-12-0757-1231
<210> 829
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 829
Figure 108118358-A0202-12-0757-1230
Figure 108118358-A0202-12-0758-1232
<210> 830
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 830
Figure 108118358-A0202-12-0758-1233
<210> 831
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 831
Figure 108118358-A0202-12-0759-1235
<210> 832
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 832
Figure 108118358-A0202-12-0759-1234
Figure 108118358-A0202-12-0760-1236
<210> 833
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 833
Figure 108118358-A0202-12-0760-1237
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<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 901
Figure 108118358-A0202-12-0768-1238
<210> 902
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 902
Figure 108118358-A0202-12-0769-1239
<210> 903
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 903
Figure 108118358-A0202-12-0769-1240
Figure 108118358-A0202-12-0770-1241
Figure 108118358-A0202-12-0771-1242
<210> 904
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 904
Figure 108118358-A0202-12-0772-1243
Figure 108118358-A0202-12-0773-1246
<210> 905
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 905
Figure 108118358-A0202-12-0773-1244
<210> 906
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 906
Figure 108118358-A0202-12-0773-1245
<210> 907
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 907
Figure 108118358-A0202-12-0774-1247
<210> 908
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”
<400> 908
Figure 108118358-A0202-12-0775-1248
<210> 909
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<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 909
Figure 108118358-A0202-12-0775-1249
<210> 910
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 910
Figure 108118358-A0202-12-0775-1250
<210> 911
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 911
Figure 108118358-A0202-12-0776-1254
<210> 912
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 912
Figure 108118358-A0202-12-0776-1253
<210> 913
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 913
Figure 108118358-A0202-12-0776-1252
<210> 914
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 914
Figure 108118358-A0202-12-0776-1251
<210> 915
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 915
Figure 108118358-A0202-12-0777-1258
<210> 916
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 916
Figure 108118358-A0202-12-0777-1255
<210> 917
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 917
Figure 108118358-A0202-12-0777-1256
<210> 918
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 918
Figure 108118358-A0202-12-0777-1257
<210> 919
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”
<400> 919
Figure 108118358-A0202-12-0778-1260
<210> 920
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 920
Figure 108118358-A0202-12-0778-1259
<210> 921
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”
<400> 921
Figure 108118358-A0202-12-0779-1261
<210> 922
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Figure 108118358-A0202-12-0798-1277
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Figure 108118358-A0202-12-0800-1282
Figure 108118358-A0202-12-0801-1283
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Figure 108118358-A0202-12-0803-1286
Figure 108118358-A0202-12-0804-1287
Figure 108118358-A0202-12-0805-1288
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<211> 478
<212> PRT
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Figure 108118358-A0202-12-0805-1289
Figure 108118358-A0202-12-0806-1290
Figure 108118358-A0202-12-0807-1291

Claims (82)

  1. 一種特異性結合人ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表1中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。
  3. 如申請專利範圍第1項或申請專利範圍第2項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的重鏈可變區。
  4. 如申請專利範圍第1-3項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的輕鏈可變區。
  5. 如申請專利範圍第1或申請專利範圍2項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：1)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；2)包含以下的抗體或其抗原結合片段： 包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；3)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；4)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；5)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、 包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；6)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID 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NO：68的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；32)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列； 33)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；34)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：245的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；35)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：256的LCDR3序列；36)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、 包含SEQ ID NO：249的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；37)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：261的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；38)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；39)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：263的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及 包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；40)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：272的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：273的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：285的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；41)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：275的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：276的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；42)包含以下的抗體或其抗原結合片段：包含SEQ ID NO：278的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：279的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：280的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
  6. 如申請專利範圍第1-5項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項： 1)包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；2)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；3)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：33或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；4)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：57或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；5)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：64或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；6)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：70或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：74或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；7)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：78或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 8)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：91或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：102或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；9)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：115或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；10)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：132或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；11)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：145或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：156或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；12)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：169或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：178或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；13)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：225或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；14)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：233或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：237或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；15)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：241或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 16)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：250或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：257或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；17)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：264或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：268或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或18)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：281或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：287或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
  7. 如申請專利範圍第1-6項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：1)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；2)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；3)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：35或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；4)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：59或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 5)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：66或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；6)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：72或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：76或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；7)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：80或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；8)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：93或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：104或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；9)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：117或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；10)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：134或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；11)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：147或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：158或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；12)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：171或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：180或與其具有至少約95%或更高同一性的序列； 13)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：227或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；14)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：235或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：239或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；15)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：243或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；16)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：252或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：259或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；17)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：266或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：270或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或18)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：283或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：289或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
  8. 如申請專利範圍第1-7項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、 包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
  9. 如申請專利範圍第1-7項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列。
  10. 如申請專利範圍第1-7項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、及包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
  11. 如申請專利範圍第1-7項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
  12. 如申請專利範圍第1-7項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；以及包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列的輕鏈。
  13. 如申請專利範圍第1-12項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2中的表位，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。
  14. 如申請專利範圍第1-12項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2中的表位，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。
  15. 一種特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。
  16. 一種特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、 Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。
  17. 一種抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段競爭結合人ENTPD2蛋白。
  18. 一種抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段結合和與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段的表位重疊的表位或與其基本上重疊的表位相同的表位、基本上相同的表位。
  19. 如申請專利範圍第1-18項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於10nM，例如如藉由Biacore測量的。
  20. 如申請專利範圍第1-18項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於5nM，例如如藉由Biacore測量的。
  21. 如申請專利範圍第1-18項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD )小於3nM，例如如藉由Biacore測量的。
  22. 如申請專利範圍第1-21項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段抑制至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%的人ENTPD2酶活性。
  23. 如申請專利範圍第1-22項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段抑制ENTPD2水解三磷酸腺苷(ATP)的能力。
  24. 如申請專利範圍第1-23項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段干擾ATP與ENTPD2的結合或在ENTPD2的催化結構域內捕獲ATP。
  25. 如申請專利範圍第1-24項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。
  26. 如申請專利範圍第1-25項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含Fc區，該Fc區選自IgG1 Fc區、IgG2 Fc區、IgG4 Fc區、或IgG2/IgG4雜合Fc區。
  27. 如申請專利範圍第1-26項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含修飾的Fc區，該修飾的Fc區相比於親本抗體具有降低的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。
  28. 如申請專利範圍第1-27項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係人或人源化抗體或其片段。
  29. 一種核酸或核酸組，該核酸或核酸組編碼如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段。
  30. 一種運載體，該運載體包含如申請專利範圍第29項所述之核酸或核酸組。
  31. 如申請專利範圍第30項所述之運載體，其中該運載體選自DNA運載體、RNA運載體、質粒、粘粒或病毒運載體。
  32. 如申請專利範圍第31項所述之運載體，其中該運載體係基於以下病毒中的任何一種的病毒運載體：慢病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、疱疹單純型病毒(HSV)、微小病毒、逆轉錄酶病毒、痘瘡病毒、辛德畢斯病毒、流感病毒、裏奧病毒、新城雞瘟病毒(NDV)、麻疹病毒、水皰性口炎病毒(VSV)、脊髓灰質炎病毒、痘病毒、塞內卡谷病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、黏液瘤病毒或馬拉巴病毒。
  33. 如申請專利範圍第32項所述之運載體，其中該運載體係AAV運載體。
  34. 如申請專利範圍第31項所述之運載體，其中該運載體係慢病毒運載體。
  35. 如申請專利範圍第30-34項中任一項所述之運載體，該運載體進一步包含啟動子。
  36. 如申請專利範圍第30-35項中任一項所述之運載體，該運載體進一步包含可檢測標記。
  37. 一種細胞，該細胞包含如申請專利範圍第29項所述之核酸或核酸組或如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體。
  38. 一種產生抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包括培養如申請專利範圍第37項所述之細胞，以及從該培養基中收集該抗體或其抗原結合片段。
  39. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸或核酸組、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、或如申請專利範圍第37項所述之細胞、以及藥學上可接受的載體。
  40. 如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸或核酸組、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第37項所述之細胞、或如申請專利範圍第39項所述之藥物組成物，用於作為藥物使用。
  41. 如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第37項所述之細胞、或如申請專利範圍第39項所述之藥物組成物，用於在癌症治療中使用。
  42. 如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第37項所述之細胞、或如申請專利範圍第39項所述之藥物組成物在用於癌症治療的藥物的生產中之用途。
  43. 用於如申請專利範圍第41項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第42項所述之用途，其中該癌症係ENTPD2+癌症。
  44. 用於如申請專利範圍第41項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第42項所述之用途，其中該癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(例如胃腺癌、胃惡性腫瘤)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌、膽管癌、肺癌(例如小細胞肺癌)、乳癌(例如乳腺癌)或卵巢癌。
  45. 用於如申請專利範圍第41項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第42項所述之用途，其中將該抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向受試者給予。
  46. 用於如申請專利範圍第41項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第42項所述之用途，其中將該抗體分子與至少一種另外的治療劑或治療術組合給予。
  47. 用於如申請專利範圍第46項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑或治療術選自化學療法、靶向抗癌療法、溶瘤細胞藥物、細胞毒性劑、基於免疫的療法、細胞介素、外科手術、放射程序、共刺激分子的激活劑、抑制分子的抑制劑、疫苗或細胞療法中的一種或多種。
  48. 用於如申請專利範圍第46項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如PD-1抗體。
  49. 用於如申請專利範圍第48項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第48項所述之用途，其中該PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
  50. 用於如申請專利範圍第46項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如PD-L1抗體。
  51. 用於如申請專利範圍第50項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第50項所述之用途，其中該PD-L1抑制劑選自FAZ053、阿特利珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、或BMS-936559。
  52. 用於如申請專利範圍第46-51項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46-51項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係A2AR拮抗劑，其中該A2AR拮抗劑選自：i. 抗CD73抗體分子或其抗原結合片段，視情況其中該抗CD73抗體選自：a. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：295的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：296的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：295或296具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；b. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：299的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：300的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：299或300具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；c. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：302的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：303的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：302或303具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列； d. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：304的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：305的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：304或305具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；e. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：306的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：307的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：306或307具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或f. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：308的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：309的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：308或309具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或ii. PBF509/NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206、和普瑞迪南/SCH 420814；或iii. 5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺，或其藥學上可接受的鹽；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋體，或其藥學上可接受的鹽；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；以及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三
    Figure 108118358-A0202-13-0026-1064
    -3-胺，或其藥學上可接受的鹽。
  53. 用於如申請專利範圍第46項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑選自： i. CTLA-4抑制劑，視情況其中該CTLA-4抑制劑選自艾匹利木單抗或曲美利木單抗；ii. TIM-3抑制劑，視情況其中該TIM-3抑制劑選自MBG453、TSR-022、或LY3321367；iii. LAG-3抑制劑，視情況其中該LAG-3抑制劑選自LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280或REGN3767；iv. GITR激動劑，視情況其中該GITR激動劑選自GWN323、BMS-986156、MK-4166、MK-1248、TRX518、INCAGN1876、AMG 228、或INBRX-110；v. 抗CD3多特異性抗體分子，視情況其中該抗CD3多特異性抗體分子係抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子(例如XENP14045)、或抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子(例如XENP13676)；vi. 細胞介素分子，視情況其中該細胞介素分子係與可溶形式的IL-15受體α(IL-15Ra)複合的IL-15；vii. 巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)抑制劑，視情況其中該M-CSF抑制劑係MCS110；viii. CSF-1R抑制劑，視情況其中該CSF-1R抑制劑係BLZ945；ix. 吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和/或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)的抑制劑；x. TGF-β抑制劑；xi. 溶瘤病毒；xii. 嵌合抗原受體(CAR)T細胞療法。
  54. 用於如申請專利範圍第46項所述使用之抗體，或如申請專利範圍第46項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑選自：1)蛋白激酶C(PKC)抑制劑；2)熱休克蛋白90(HSP90)抑制劑；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷 帕黴素靶蛋白(mTOR)的抑制劑；4)細胞色素P450的抑制劑(例如，CYP17抑制劑或17α-羥化酶/C17-20裂解酶抑制劑)；5)鐵螯合劑；6)芳香酶抑制劑；7)p53抑制劑，例如，p53/Mdm2相互作用的抑制劑；8)細胞凋亡誘導劑；9)血管生成抑制劑；10)醛固酮合酶抑制劑；11)平滑(SMO)受體抑制劑；12)催乳素受體(PRLR)抑制劑；13)Wnt傳訊抑制劑；14)CDK4/6抑制劑；15)纖維母細胞生長因子受體2(FGFR2)/纖維母細胞生長因子受體4(FGFR4)抑制劑；16)巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制劑；17)c-KIT、組胺釋放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中的一種或多種的抑制劑；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中一種或多種的抑制劑；19)生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑；20)間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑；21)似胰島素生長因子1受體(IGF-1R)抑制劑；22)P-醣蛋白1抑制劑；23)血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑；24)BCR-ABL激酶抑制劑；25)FGFR抑制劑；26)CYP11B2的抑制劑；27)HDM2抑制劑，例如HDM2-p53相互作用的抑制劑；28)酪胺酸激酶的抑制劑；29)c-MET的抑制劑；30)JAK的抑制劑；31)DAC的抑制劑；32)11β-羥化酶的抑制劑；33)IAP的抑制劑；34)PIM激酶的抑制劑；35)博庫派恩的抑制劑；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制劑；37)HER3的抑制劑；38)MEK的抑制劑；39)脂質激酶的抑制劑；或表16中提供的一種或多種藥劑。
  55. 一種治療有需要的受試者的癌症之方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第37項所述之細胞、或如申請專利範圍第39項所述之藥物組成物。
  56. 如申請專利範圍第55項所述之方法，其中該癌症係ENTPD2+癌症。
  57. 如申請專利範圍第55項所述之方法，其中該癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(例如胃腺癌、胃惡性腫瘤)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌、膽管癌、肺癌(例如小細胞肺癌)、乳癌(例如乳腺癌)或卵巢癌。
  58. 如申請專利範圍第55-57項中任一項所述之方法，其中將該抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向該受試者給予。
  59. 一種刺激受試者中的免疫應答的方法，該方法包括向該受試者給予有效刺激該免疫應答的量的如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段、如申請專利範圍第29項所述之核酸或核酸組、如申請專利範圍第30-36項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第37項所述之細胞、或如申請專利範圍第39項所述之藥物組成物。
  60. 如申請專利範圍第55-59項中任一項所述之方法，該方法還包括向該受試者給予至少一種另外的治療劑或治療術。
  61. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑或治療術選自化學療法、靶向抗癌療法、溶瘤細胞藥物、細胞毒性劑、基於免疫的療法、細胞介素、外科手術、放射程序、共刺激分子的激活劑、抑制分子的抑制劑、疫苗或細胞療法中的一種或多種。
  62. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如PD-1抗體。
  63. 如申請專利範圍第62項所述之方法，其中該PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
  64. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如PD-L1抗體。
  65. 如申請專利範圍第64項所述之方法，其中該PD-L1抑制劑選自FAZ053、阿特利珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、或BMS-936559。
  66. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係A2AR拮抗劑，其中該A2AR拮抗劑選自：i. 抗CD73抗體分子或其抗原結合片段，視情況其中該抗CD73抗體選自：a. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：295的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：296的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：295或296具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；b. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：299的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：300的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：299或300具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；c. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：302的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：303的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：302或303具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；d. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：304的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：305的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：304或305具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列； e. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：306的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：307的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：306或307具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或f. 包含以下的抗CD73抗體分子：包含SEQ ID NO：308的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO：309的胺基酸序列的輕鏈可變區，或者與SEQ ID NO：308或309具有至少85%、90%、95%或更高同一性的胺基酸序列；或ii. PBF509/NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206、和普瑞迪南/SCH 420814；或iii. 5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺，或其藥學上可接受的鹽；(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋體，或其藥學上可接受的鹽；7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽；以及6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三
    Figure 108118358-A0202-13-0031-1063
    -3-胺，或其藥學上可接受的鹽。
  67. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑選自：i. CTLA-4抑制劑，視情況其中該CTLA-4抑制劑選自艾匹利木單抗或曲美利木單抗；ii. TIM-3抑制劑，視情況其中該TIM-3抑制劑選自MBG453、TSR-022、或LY3321367； iii. LAG-3抑制劑，視情況其中該LAG-3抑制劑選自LAG525、BMS-986016、TSR-033、MK-4280或REGN3767；iv. GITR激動劑，視情況其中該GITR激動劑選自GWN323、BMS-986156、MK-4166、MK-1248、TRX518、INCAGN1876、AMG 228、或INBRX-110；v. 抗CD3多特異性抗體分子，視情況其中該抗CD3多特異性抗體分子係抗CD3 x抗CD123雙特異性抗體分子(例如XENP14045)、或抗CD3 x抗CD20雙特異性抗體分子(例如XENP13676)；vi. 細胞介素分子，視情況其中該細胞介素分子係與可溶形式的IL-15受體α(IL-15Ra)複合的IL-15；vii. 巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)抑制劑，視情況其中該M-CSF抑制劑係MCS110；viii. CSF-1R抑制劑，視情況其中該CSF-1R抑制劑係BLZ945；ix. 吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和/或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)的抑制劑；x. TGF-β抑制劑；xi. 溶瘤病毒；xii. 嵌合抗原受體(CAR)T細胞療法。
  68. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑選自：1)蛋白激酶C(PKC)抑制劑；2)熱休克蛋白90(HSP90)抑制劑；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕黴素靶蛋白(mTOR)的抑制劑；4)細胞色素P450的抑制劑(例如，CYP17抑制劑或17α-羥化酶/C17-20裂解酶抑制劑)；5)鐵螯合劑；6)芳香酶抑制劑；7)p53抑制劑，例如，p53/Mdm2相互作用的抑制劑；8)細胞凋亡誘導劑；9)血管生成抑制劑；10)醛固酮合酶抑制劑；11)平滑(SMO)受體抑制劑；12)催乳素受體(PRLR)抑制劑；13)Wnt傳訊抑制劑；14)CDK4/6 抑制劑；15)纖維母細胞生長因子受體2(FGFR2)/纖維母細胞生長因子受體4(FGFR4)抑制劑；16)巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制劑；17)c-KIT、組胺釋放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中的一種或多種的抑制劑；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中一種或多種的抑制劑；19)生長激素抑制素激動劑和/或生長激素釋放抑制劑；20)間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑；21)似胰島素生長因子1受體(IGF-1R)抑制劑；22)P-醣蛋白1抑制劑；23)血管內皮生長因子受體(VEGFR)抑制劑；24)BCR-ABL激酶抑制劑；25)FGFR抑制劑；26)CYP11B2的抑制劑；27)HDM2抑制劑，例如HDM2-p53相互作用的抑制劑；28)酪胺酸激酶的抑制劑；29)c-MET的抑制劑；30)JAK的抑制劑；31)DAC的抑制劑；32)11β-羥化酶的抑制劑；33)IAP的抑制劑；34)PIM激酶的抑制劑；35)博庫派恩的抑制劑；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制劑；37)HER3的抑制劑；38)MEK的抑制劑；39)脂質激酶的抑制劑；或表16中提供的一種或多種藥劑。
  69. 如申請專利範圍第60項所述之方法，其中將如申請專利範圍第1-24項中任一項所述之抗體或抗原結合片段、如申請專利範圍第25項所述之核酸或核酸組、如申請專利範圍第26-32項中任一項所述之運載體、如申請專利範圍第33項所述之細胞、或如申請專利範圍第35項所述之藥物組成物與該至少一種另外的治療劑同時、在其之前、或在其之後給予。
  70. 如申請專利範圍第55-69項中任一項所述之方法，其中給予該抗體或其抗原結合片段、核酸或核酸組、運載體、細胞或藥物組成物具有以下效果中的一種或多種：(a)該受試者的腫瘤或病變部位中CD45+ CD4- CD8+ CD69+ CD25+細胞的數量增加； (b)該受試者的腫瘤或病變部位中CD45+ CD8- CD4+ FOXP3- CD69+ CD25+細胞的數量增加；(c)該受試者的血漿MCP1或IL-1β水平降低；或(d)該受試者的腫瘤或病變部位中MCP1水平上升。
  71. 一種治療有需要的受試者的癌症之方法，該方法包括將治療有效量的如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合向該受試者給予。
  72. 一種刺激受試者中的免疫應答的方法，該方法包括將如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合向該受試者給予。
  73. 一種組成物，該組成物包含如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段，用於與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合在受試者的癌症治療中使用。
  74. 一種用於在受試者的癌症治療中使用之組成物，其中該組成物包含與選自PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的第二治療劑組合的如申請專利範圍第1-28項中任一項所述之抗體或抗原結合片段。
  75. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該第二治療劑係PD-1抑制劑。
  76. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該PD-1抑制劑係PD-1抗體。
  77. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該PD-1抑制劑選自PDR001、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
  78. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該第二治療劑係PD-L1抑制劑。
  79. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該PD-L1抑制劑係PD-L1抗體。
  80. 如申請專利範圍第71或72項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該PD-L1抑制劑選自FAZ053、阿特利珠單抗、阿維魯單抗、度伐魯單抗、或BMS-936559。
  81. 如申請專利範圍第71項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該癌症係ENTPD2+癌症。
  82. 如申請專利範圍第71項所述之方法，或如申請專利範圍第73或74項所述之組成物，其中該癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(例如胃腺癌、胃惡性腫瘤)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、胰腺癌、膽管癌、肺癌(例如小細胞肺癌)、乳癌(例如乳腺癌)或卵巢癌。
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