SA112330278B1 - مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام - Google Patents

مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام Download PDF

Info

Publication number
SA112330278B1
SA112330278B1 SA112330278A SA112330278A SA112330278B1 SA 112330278 B1 SA112330278 B1 SA 112330278B1 SA 112330278 A SA112330278 A SA 112330278A SA 112330278 A SA112330278 A SA 112330278A SA 112330278 B1 SA112330278 B1 SA 112330278B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
antibody
variable region
chain variable
cell
tumor
Prior art date
Application number
SA112330278A
Other languages
English (en)
Inventor
ارويت فورد
سكوت جيه ديلا
روبرت ايه ستل
اليكس بانكوفيش
الكسندرا ليدا ليانا لازتيك
جيفري برنستاين
Original Assignee
ستيم سينتركس، انك.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US2011/050451 external-priority patent/WO2012031280A2/en
Application filed by ستيم سينتركس، انك. filed Critical ستيم سينتركس، انك.
Publication of SA112330278B1 publication Critical patent/SA112330278B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Abstract

بسم الله الرحمن الرحيم مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام NOVEL MODULATORS AND METHODS OF USE الملخص يتعلق الاختراع الحالي بمواد ضابطة (modulators) جديدة، متضمنة أجسام مضادة (antibodies) ومشتقات منها، وطرق (methods) استخدام تلك المواد الضابطة لعلاج اضطرابات انقسام مفرط (hyperproliferative disorders).

Description

Y
‏مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام‎
Novel modulators and methods of use ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏يتعلق هذا الطلب بصفة عامة بتركيبات وطرق جديدة لاستخدامها في منع؛ علاج أو‎ ‏وأي زيادة‎ «(ameliorating hyperproliferative disorders) ‏تحسين اضطرابات الاتقسام المفرط‎ ‏أو الانتشار‎ (relapse) ‏الانتكاسة‎ (recurrence) ‏عودة الإصابة‎ «(expansion) ‏في الحجم‎ ‏لأماكن غير المنشأ من ذلك. في جانب واسع النطاق؛ يتعلق الاختراع الحالي‎ (metastasis) © ‏متضمنة أجسام مضادة ضد‎ «(PTK7) protein tyrosine kinase 7 ‏باستخدام مواد ضابطة‎ ‏تشخيص أو الوقاية من اضطرابات‎ dalled (fusion constructs) ‏وبنيات اندماج‎ 7 ‏تنسج ورمي. توفر تطبيقات مفضلة بصفة خاصة للاختراع الحالي استخدام تلك المواد‎ ‏الضابطة 71167 لمعالجة علاجية مناعية للأمراض الخبيثة مشتملة التقليل في معدل تكرار‎ .(tumor initiating cell frequency) ‏الخلية البادئة لورم‎ ٠ ‏وانقسام الخلية‎ (stem and progenitor cell differentiation) ‏إن تباين خلية جذعية وسلفية‎ : ‏عمليات طبيعية مستمرة تؤثر بدرجة متناسقة لتدعيم نمو النسيج أثناء‎ (cell proliferation) ‏تكوين العضو واستبدال الخلبة وإصلاح معظم الأنسجة أثناء فترة حياة كل الكائئات الحية. إن‎ ‏قرارات التباين والانقسام دائمًا ما تتحكم فيها عوامل وإشارات كثيرة تعمل بصورة متوازنة‎ ‏مصير الخلية وبنية النسيج. تستبقى بصورة واسعة البنية الطبيعية للنسيج‎ SLE ‏لاستبقاء‎ ٠ ‏ونضوج النسيج‎ (cell division) ‏بواسطة خلايا مستجيبة لظروف بيئية دقيقة تنظم تكاثر الخلية‎ ‏فقط حسب الضرورة‎ Landa ‏طبقًا لذلك؛ فإن انقسام وتباين الخلية يتم‎ (tissue maturation) ‏لاستبدال خلايا تالفة أو معرضة للموت أو من أجل النمو. لسوء الحظ» فإن إعاقة انقسام و/أو‎ ‏تباين الخلية يمكن أن ينتج من عدد كبير من العوامل المتضمنة؛ على سبيل المثال؛ الوفرة‎ ‏القليلة أو الزائدة لمواد كيميائية مختلفة للإشارات»؛ وجود ظروف بيئية دقيقة متغيرة؛ طفرات‎ ٠ ‏أو بعض اتحاد من ذلك. عندما يضطرب الانقسام و/أو التباين‎ (genetic mutations) ‏جينية‎ ‏الخلوي الطبيعي أو تتم إعاقتها بدرجة ما فإن ذلك يمكن أن يؤدي إلى أمراض أو اضطرابات‎ ‏كثيرة تتضمن اضطرابات اتقسام مفرط مثل سرطان.‎
;
تتضمن معالجات تقليدية للسرطان علاج كيميائي؛ علاج بالأشعة؛ جراحة؛ علاج مناعي (مثل ؛ مواد ضبط استجابة حيوية ‎(biological response modifiers)‏ لقاحات أو علاجات مستهدفة ‎(vaccines or targeted therapeutics)‏ أو اتحادات من ذلك. مما يثير الحزن» فإن عدد كبير للغاية من السرطانات لا يستجيب أو يستجيب بدرجة ضئيلة لتلك المعالجات التقليدية © تاركة خيارات قليلة للمرضى. على سبيل ‎(JU‏ تظهر بعض السرطانات في بعض المرضى طفرات جين ‎(gene mutations)‏ تجعلها غير مستجيبة على الرغم من الفعالية العامة لعلاجات منتقاة. إضافة لذلك؛ اعتمادًا على نوع السرطان» فإن بعض المعالجات المتوافرة» ‎Jie‏ الجراحة؛ قد لا تشكل بدائل حيوية. إن القيود المتأصلة في المعايير القياسية الحالية لعلاجات الرعاية تكون واضحة بصفة خاصة عند محاولة العناية بالمرضى الذين خضعا لمعالجات سابقة ‎٠‏ وحدثت لهم انتكاسة بعد ذلك. في تلك الحالات فإن البرامج العلاجية الفاشلة والتدهور الناتج للمريض قد يساهمان في وجود أورام مقاومة للعلاج تعبر عن نفسها دائمًا في شكل مرض متوحش نسبيا يثبت في النهاية أنه غير قابل للشفاء. على الرغم من وجود تحسينات كبيرة في تشخيص ومعالجة السرطان مع مرور السنوات؛ فإن معدلات البقاء على ‎ad‏ الحياة الكلية لكثير من الأورام الصلبة لا تزال غير متغيرة بدرجة كبيرة بسبب فشل العلاجات الموجودة في منع ‎٠‏ الانتكاسة؛ عودة الورم والانتشار بعيدًا عن المنشاً. لذلك؛ فإن التحدي ما ‎Ul J‏ لإيجاد
علاجات استهدافية وفعالة بدرجة أكبر. يشمل مجال واعد للبحث استخدام العلاجات الاستهدافية للسعي وراء خلايا "البذرة ‎(seed)‏ ‏المولدة للورم التي تبدو أنها السبب وراء سرطانات كثيرة. حتى هذه النقطة فإن معظم الأنسجة الصلبة معروفة الآن بأنها تحتوي على مجموعات خلية جذعية قاطنة في النسيج خاصة ‎٠‏ بالبالغين تولد الأنواع المتباينة من الخلية التي تشمل الغالبية العظمى من ذلك النسيج. إن الأورام الناشئة في هذه الأنسجة تتكون بدرجة متشابهة من مجموعات مغايرة من الخلايا التي ‎Las‏ أيضًا من خلايا جذعية؛ لكنها تختلف بدرجة كبيرة في انقسامها وتنظيمها الكلي. برغم أنه من الملاحظ بدرجة متزايدة أن غالبية ‎LA‏ الورم لها مقدرة محدودة على الانقسام؛ فهناك مجموعة ضئيلة جدًا من خلايا السرطان (تسمى شيوعًا خلايا سرطان جذعية ‎(cancer stem‏ ‎cells) Yo‏ أو ‎(CSC‏ لها القدرة الحصرية على التجدد التلقائي بدرجة شديدة وذلك يمكن من وجود قدرة متأصلة على إعادة ابتداء الورم. بصفة خاصة أكثر؛ تفترض نظرية خلية السرطان الجذعية أن هناك مجموعة فرعية مميزة من الخلايا ‎(CSC esl)‏ في كل ورم (تقريبًا ‎١0١‏ -
¢ ‎٠‏ ) قادرة على التجديد الذاتي غير المحدود وعلى توليد خلايا ورم مقيدة بدرجة مستفحلة في قدرتها على الانقسام نتيجة لتباينها إلى ‎LOA‏ ورم سلفية و؛ بعد ذلك؛ إلى خلايا ورم متباينة بصورة نهائية ‎.(terminally differentiated tumor cells)‏ في السنوات الحديثة فقد ثبت بدرجة واضحة أكثر أن هذه ‎CSC‏ (المعروفة أيضًا بأنها ‎oe‏ خلايا ورم سرمدية ‎(tumor perpetuating cells)‏ أو ‎(TPC‏ قد تكون مقاومة أكثر للعوامل العلاجية الكيميائية التقليدية أو للأشعة ولذلك يظل تواجدها بعد المعايير القياسية لعلاجات رعاية إكلينيكية من أجل التدعيم لاحقًا لنمو أورام مستعصية ‎(refractory tumors)‏ أورام ثانوية ‎(secondary tumors)‏ وتحث الانتشار بعيدًا عن المنشاً. علاوة على ذلك»؛ هناك دليل متزايد يقترح أن المسارات التي تنظم تكوين العضو و/أو التجديد الذاتي للخلايا الجذعية الطبيعية ‎٠‏ القاطنة في النسيج ‎(normal tissue-resident stem cells)‏ يتغير تنظيمها أو تتغير في ‎«CSC‏ ‏مما يؤدي إلى الزيادة المستمرة في نمو خلايا السرطان ذاتية التجديد ‎(self-renewing cancer‏ ‎cells)‏ وتكوين الورم. انظر بصفة عامة؛ ‎Al-Hajj et al., 2004, PMID: 15378067: and Dalerba et al., 2007, PMID: 17548814;‏ المندمج هنا بالإشارة الكاملة. لذلك؛ فإن ‎gli‏ طرق المعالجة التقليدية؛ بالإضافة إلى ‎١‏ الاستهدافية الحديثة أكثر» محدودة بدرجة واضحة من خلال وجود و/أو نشوء خلايا سرطان مقاومة ‎(resistant cancer cells)‏ قادرة على جعل السرطان مستديمًا حتى في مواجهة هذه الطرق الكثيرة للمعالجة. ‎Huff et al., European Journal of Cancer 42: 1293-1297 (2006) and Zhou et al.,‏ ‎Nature Reviews Drug Discovery 8: 806-823 (2009)‏ ‎٠‏ المندمج هنا بالإشارة الكاملة. تؤكد هذه الملحوظات عدم القدرة الثابتة للعوامل التقليدية المقللة للحجم على أن تزيد جوهريا فترة بقاء المريض على قيد الحياة عندما يعاني من أورام صلبة ‎tumors)‏ 66015» ومن خلال نشوء إدراك معقد بدرجة متزايدة لكيفية نمو الأورام»؛ رجوعها وانتشارها بعيدًا عن المنشاً. طبقًا لذلك؛ فقد أدركت السياسات الحديثة لعلاج اضطرابات التنسج الورمي ‎(neoplastic disorders)‏ أهمية إزالة؛ إنقاص؛ إخماد ونشاط أو حث تباين الخلايا ‎Yo‏ الورمية السرمدية ‎(tumor perpetuating cells)‏ بحيث تقلل إلى أدنى حد إمكانية رجوع الورم؛ أو انتشاره بعيدًا عن المنشاً ‎Lage‏ إلى انتكاسة المريض.
°
لقد تضمنت الجهود لتطوير تلك السياسات عملا حديثًا يشمل نماذج رقعة وخلية غير تقليدية ‎«(NTX) (non-traditional xenograft)‏ يتم ‎Led‏ ازدراع عينات ورم صلب أدمي أولي وتمريرها حصريًا في فئران غير منسقة المناعة. في سرطانات كثيرة تؤكد تلك التقنيات وجود مجموعات فرعية من الخلايا التي لها القدرة الفريدة على توليد أورام مغايرة وتدعيم نموها بدرجة © غير محدودة. حسب الاقتراح مسبقًا؛ فإن العمل في نماذج 11175 أكد أن المجموعات الفرعية المحددة من ‎CSC‏ لخلايا ورم تبدو مقاومة أكثر لبرامج إنقاص الحجم مثل علاج كيميائي وأشعة؛ وربما يفسر ذلك بدرجة محتملة التفاوت بين معدلات الاستجابة الإكلبنيكية ومعدل البقاء الكلي على ‎ad‏ الحياة. ‎(Gila)‏ فإن استعمال نماذج ‎NTX‏ في أبحاث ‎CSC‏ قد أدى إلى تنشيط تغير أساسي في اكتشاف عقار والتقييم الإكلينيكي الأولي للعقاقير المرشحة التي قد ‎٠‏ تنتج علاجات تستهدف ‎CSC‏ لها تأثير عظيم على رجوع الورم وانتشاره بعيدًا عن المنشاً وبذلك تتحسن معدلات بقاء المريض على ‎ad‏ الحياة. برغم حدوث تقدم؛ فإن الصعوبات ‎All‏ ‏المتأاصلة المصاحبة لتداول نسيج ورم أولي ‎(primary tumor tissue)‏ و/أو رقعة دخبلة همده إلى جانب نقصر. البرامج التجريبية لتمييز نوعية وإمكانية تباين ‎(CSC‏ تشكل تحديات كبرى. حسب ذلك؛ لا تزال هناك ‎dala‏ جوهرية للاستهداف انتفائيًا لخلايا سرطان ‎٠‏ جذعية ولتطوير مركبات تشخيصية؛ وقائية أو علاجية أو طرق يمكن استخدامها في معالجة؛
منع و/أو التعامل مع اضطرابات الانقسام المفرط.
الوصف العام للاختراع
يوفر الاختراع الحالي هذه الأهداف وأهداف أخرى والتي؛ مع نطاق كبير؛ تتعلق بطرق؛ مركبات؛ تركيبات وأدوات مصنعة يمكن استخدامها في معالجة اضطرابات مصاحبة ‎PTK7‏ ‎“٠‏ (مثل اضطرابات انقسام مفرط أو اضطرابات تنسج ورمي ‎«(proliferative disorders)‏ حتى هذه النقطة؛ يوفر الاختراع الحالي مواد ضابطة 7 ‎protein tyrosine kinase‏ (أو ‎(PTK7‏ ‏جديدة تستهدف بدرجة مؤثرة خلايا ورم و/أو خلايا سرطان جذعية ويمكن استخدامها لعلاج مرضى يعانون من تشكيلة كبيرة من الأمراض الخبيثة. حسب الشرح بتفصيل أكثر هنا ‎(Bay‏ ‏توجد ‎Lilla‏ أشكال متمائلة معروفة متعددة 71167 ويفضل أن تشمل أو تصاحب المواد ‎Ye‏ الضابطة المعلنة واحد أو ‎HAST‏ منهم. إضافة لذلك؛ في تجسيدات خاصة فقد تشمل المواد الضابطة 01167 المعلنة أي مركب يدرك؛ ‎aang «ily‏ يعارض؛ يتفاعل مع؛ يربط أو يصاحب ‎polypeptide‏ 77167 أو جين (أو جزء من ذلك) ويضبطء يبدل؛ يغير أو يعدل تأثير
ٍ ‎protein‏ 01167 على واحد أو أكثر من مسارات فسيولوجية ‎(physiological pathways)‏ لذلك؛ في نطاق واسع يتعلق الاختراع الحالي عموما بمواد ضابطة 71167 معزولة واستخدامها. في تجسيدات مفضلة يتعلق الاختراع بصفة خاصة أكثر بمواد ضابطة 77167 معزولة تشمل أجسام مضادة (أي؛ أجسام مضادة ترتبط وتتفاعل مع أو تصاحب على الأقل شكل متماثل © واحد من 01167). إضافة لذلك» حسب الشرح بدرجة مكثفة أدناه فإن تلك المواد الضابطة يمكن استخدامها لتوفير تركيبات دوائية مفيدة للوقاية؛ تشخيص أو لمعالجة اضطرابات تنسج وزرمي٠‏ في تجسيدات منتقاة للاختراع؛ فقد تشتمل مواد ضابطة ‎PTK7‏ على ‎PTK7 polypeptide‏ أو أجزاء منه؛ إما في شكل معزول أو مندمج أو ملازم لأجزاء أخرى ‎Sia)‏ ‎٠‏ 26201167 ؛ 280-1167 أو 01167 مصاحب لجزء استهدافي). في تجسيدات أخرى منتقاة فقد تشمل المواد الضابطة 01167 مضادات 01167 ‎ally‏ من أجل أغراض الطلب الحاضرء سوف تعني أي بنية أو مركب يدرك؛ ينافس؛ يتفاعل مع؛ يربط أو يصاحب 71167 ويعادل؛ ا يزبل؛ يقلل؛ يكسب حساسية؛ يعيد برمجة؛ ‎haat‏ أو يسيطر على نمو خلايا التنسج الورمي متضمنة الخلايا البادئة للورم. ني تجسيدات مفضلة تشم المواد الضابطة 71167 من الاختراع ‎٠‏ الحالي مضادات أجسام مضادة 1167©؛ أو أجزاء أو مشتقات منها اتضح أنها بدرجة غير متوقعة تخمد نشاط؛ تعادل؛ تختزل؛ تقلل» تنقص؛ تضبط؛ تقلل إلى أدنى حد؛ تعيد برمجة؛ تزيل» أو بطريقة أخرى تثبط قدرةٍ الخلايا البادئة للورم على انتشار؛ استبقاء؛ زيادة حجم؛ انقسام أو بطريقة أخرى تيسير إحباء؛ عودة؛ تجدد و/أو انتشار بعيدًا عن المنشاً لخلايا الورم. في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة فإن الأجسام المضادة أو الأجزاء النشطة مناعيًا قد تكون ‎Y-‏ مصاحبة أو متحدة مع واحد أو أكثر من العوامل المضادة للسرطان ‎lie)‏ عامل سام للخلايا . (cytotoxic agent) ‏في تجسيدات منتقاة قد تشتمل المواد الضابطة 21167 الملائمة على جسم مضاد له منطقة‎ (heavy chain ‏ومنطقة متغيرة سلسلة ثقيلة‎ (light chain variable region) ‏متغيرة سلسلة خفيفة‎ ‏حيث تشتمل المنطقة المتغيرة سلسلة خفيفة المذكورة على ترتيب حمض‎ variable region) ‏بنسبة 770 مع ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة‎ Bila ‏أميني له على الأقل‎ ©
YATE 077 0 ‏من ترتيبات حمض أميني كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم‎ ‏وحيث‎ ٠١و‎ OA OT (Of (OY ‏نف‎ (fA (£1 (££ (fF ‏الى‎ (TA FT (FE ‏نا كت‎
Y
تشتمل المنطقة المتغيرة سلسلة ثقيلة المذكورة على ترتيب حمض أميني له على الأقل تماثل بنسبة 770 مع ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيبات حمض أميني كما هو مذكور في تعريف الترثيب رقم: 1ت ‎(YT‏ فكت لات كت لكت ىت ‎(FO‏ الت ‎FA‏ ‏فى ‎(oF (0) (£9 (EV (fo (EV‏ 00( لاف كف روا ° بالتأكيد؛ في ضوء التوضيح الحالي يمكن لأولئك المهرة في ‎Gall‏ بسهولة تحديد ‎CDRs‏ ‏تصاحب كل من المناطق المتغيرة لسلسلة خفيفة وثقيلة سابقة الذكر واستخدام ‎CDRs‏ تلك لهندسة أو تصنيع أجسام مضادة مطعمة ‎(CDR grafted) CDR‏ أو مكتسبة السمة الآدمية؛ هجينة بدون تجارب إضافية. بالتالي» في تجسيدات مختارة يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة تضاد 71167 تشمل ‎CDR‏ واحد أو أكثر من ترتيب منطقة متغيرة مذكور سابقا في ‎٠‏ الشكل 1( والشكل 1(ب). في تجسيدات مفضلة تشتمل هذه الأجسام المضادة على أجسام مضادة أحادية النسخ و؛ في تجسيدات مفضلة أكثر أيضا تشتمل على أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية أو مطعمة مع ‎«CDR‏ هجينة ‎(chimeric)‏ كما يتضح بتفصيل أكثر أدناه تشتمل تجسيدات أحرى أيضا على هذه الأحسام المضادة مقترنة أو مصاحبة لواحد أو أكثر من العرامل السامة للخلية. ‎PTK7 ‏ضابطة‎ sale ‏طبقا لذلك؛ في تجسيدات أخرى سوف يشتمل الاختراع الحالي على‎ yo ‏تتعلق‎ .hSC6.58 5 hSC6.41 hSC6.24 <hSC6.23 ‏منتقاة من المجموعة المتكونة من‎ ‏تجسيدات أخرى إضافية بمادة ضابطة 71167 تشتمل على جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية‎ ‏حيث يشتمل الجسم المضاد المكتسب السمة الآدمية المذكور على منطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ ‏ومنطقة متغيرة سلسلة ثقيلة حيث تشتمل منطقة متغيرة سلسلة خفيفة المذكورة على ترتيب‎ ‎٠‏ حمض أميني له على الأقل تماثل بنسبة 770 مع ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيبات حمض أميني كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎TUTE CY‏ و14 وحيث تشتمل منطقة متغيرة ‎ALLL‏ ثقيلة المذكورة على تريب حمض أميني له على الأقل ‎Jil‏ بنسبة 7710 مع ترتيب حمض أميني منتقى من المجموعة المتكونة من ترتيبات حمض أميني كما هو مذكور في تعريف الترتيب رقم: ‎ATV 26 AY‏ ‎Yo‏ كما هو مبين مسبقا يشتمل أحد جوانب الاختراع على رابطة غير متوقعة من ‎polypeptides‏ 01167 مع خلايا جذعية سرطانية؛ بالتالي؛ في تجسيدات أخرى معينة سوف يشمل الاختراع مادة ضابطة 71167 تقلل معدل تواجد الخلايا البادئة لورم عند الإعطاء لكائن.
A
‏بصورة مفضلة يتحدد التقليل في معدل التواجد باستخدام تحليل تخفيف مقيد في المعمل أو في‎ ‏الجسم. في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة يجرى ذلك التحليل باستخدام تحليل تخفيف مقيد‎ ‏في الجسم يشمل ازدراع خلايا ورم آدمي حية في فئران غير متسقة المناعة. بطريقة بديلة؛‎ ‏يمكن إجراء تحليل التخفيف المقيد باستخدام تحليل تخفيف مقيد في المعمل يشمل ترسيب‎ ‏تخفيف مقيد لخلايا ورم آدمي حية في شروط تدعيم مستعمرة في المعمل. في أي من الحالتين؛‎ © ‏فإن التحليل؛ الحساب أو التقدير الكمي للتقليل في معدل التواجد يفضل أن يشمل استخدام‎ ‏لتوفير حساب دقيق. لابد من إدراك أنه على الرغم من أن تلك‎ Poisson ‏إحصائيات توزيع‎ ‏الطرق للتقدير الكمي مفضلة؛ فمن الممكن أيضنًا استخدام طرق أخرى أقل كثافة في الجهد مثل‎ ‏القياس الخلوي الانسيابي أو الكيمياء النسيجية المناعية لتوفير القيم المطلوبة؛ طبقًا لذلك؛ فهي‎ ‏مأمولة بدرجة واضحة على أنها في نطاق الاختراع الحالي. في تلك الحالات فإن التقليل في‎ ٠ ‏معدل التواجد يمكن تحديده باستخدام تحليل قياس خلوي انسيابي أو تحديد كيميائي نسيجي‎ ‏مناعي لدلالات سطح خلية ورم المعروفة بأنها مغذية للخلايا البادئة للورم.‎ ‏طريقة لعلاج اضطراب‎ Malle hua! ‏مفضل يشمل‎ Hal ‏حسب ذلك؛ في تجسيد‎ : ‏مصاحب 71767 تشمل إعطاء كدية مؤثرة علاحبًا من مادة ضابطة 71167 لكائن بحاجة لذلك‎
PTK7 ‏بحيث يقل معدل تواجد الخلايا البادئة للورم. يفضل أن يشتمل الاضطراب المصاحب‎ ١ ‏على اضطراب ورمي. مرة ثانية؛ فإن التقليل في معدل تواجد خلية بادئة لورم يتحدد بدرجة‎ ‏مفضلة باستخدام تحليل تخفيف مقيد في المعمل أو في الجسم الحي.‎ ‏على‎ Um ‏في هذا الجانب؛ لابد من إدراك أن الاختراع الحالي يعتمد؛ على الأقل‎ ‏الورم السرمدية (أي؛ خلايا الورم الجذعية‎ WA ‏الاكتشاف بأن جينات مناعية 01167 تصاحب‎ ‏يوضح الطلب‎ ST ‏المشتملة في سبب تنسج ورم عديد. بصفة خاصة‎ (cancer stem cells) ٠٠ ‏عديدة يمكن أن يضبط؛‎ Alia 71167 ‏الحاضر بصورة غير متوقعة أن إعطاء مواد ضابطة‎ ‏يثبط أو يزيل الإشارات المولدة لورم بواسطة الخلايا البادئة للورم (أي؛ تقليل‎ (Gadi (Jl, ‏سواء‎ ALIN ‏إن هذه الإشارات‎ «(tumor initiating cells) ‏معدل تواجد الخلايا البادثة للورم‎ ‏برمجة أو إخماد نشاط الخلايا البادئة للورم‎ sale (All) ‏كانت بواسطة تخفيض؛ تعادل؛ تقليل»‎ (niche ‏تمزيق بيئي‎ «(induced differentiation) ‏تباين حث‎ Sia) ‏أو بضبط شكل خلية الورم‎ vo 1167 ‏(تا0ر9:)؛ تسمح في المقابل بوجد معالجة مؤثرة أكثر للاضطرابات الملازمة‎ ‏بواسطة تثبيط تكوين الورم» استبقاء الورم؛ زيادة حجم و/أو انتشاره بعيدًا عن المنشأ ورجوعه.‎
بالإضافة إلى المصاحبة المذكورة سابقا مع خلايا نخاع ‎(lay‏ توجد شواهد على أن الأشكال المماثلة 21167 يمكن أن تدخل في تكوين وعائي دموي»؛ هجرة ‎WDA‏ بطانية وشلالات إشارة تطويرية معينة تشترك مع تكوين الورم (أي؛ مسارات إشارة ‎(Wnt‏ إن التدخل في تلك التفاعلات بين ‎(LO‏ باستخدام المواد الضابطة 71167 الجديدة الموصوفة ‎(Lis‏ قد تحس بذلك أو تعالج اضطرابًا بأكثر من آلية واحدة (أي؛ تقليل الخلايا البادئة للورم وتمزيق إشارة مسار مكون الورم ‎(disruption oncogenic pathway signaling)‏ لتوفير تأثيرات إضافية أو معاونة. هناك ‎Wal‏ تجسيدات أخرى مفضلة تستفيد من التذوت الخلوي لسطح خلية ‎PTK7‏ ‏لتوصيل عامل مضاد للسرطان من خلال مادة ضابطة. في هذا الجانب لابد من إدراك أن الاختراع الحالي غير مقيد بأي آلية خاصة للتأثير لكنه يشتمل بالأحرى الاستخدام واسع ‎٠‏ النطاق للمواد الضابطة المعلنة لعلاج اضطرابات مصاحبة 21167 (متضمنة تنسج ورمي عديد ‎-((various neoplasia)‏ بالتالي» توضح جوانب أخرى للاختراع الحالي قدرة المعدلات الموضحة على ‎idle)‏ ‏مسارات نجاة مولدة للورم بصورة 5؟ة بينما تخمد باستمرار ‎LDA‏ تحث الورم. يمكن إثبات أن 0 . معدلات 21167 عديدة النشاط هذ: ‎Ci‏ مضادات 01167) تكون فعالة بالتحديد عد الاستخدام ‎١٠‏ في اتحاد مع عوامل مضادة للسرطان للعناية قياسية أو عوامل إزالة كتلة قياسية. طبقا لذلك تشتمل تجسيدات مفضلة من الاختراع الحالي على استخدام المعدلات الموضحة مثل عوامل تضاد للانبثات لأجل علاج استبقائي بعد المعالجة المبدئية. ‎(Lila)‏ يمكن استخدام واحد أو أكثر من مضادات 71167 (مثل أجسام مضادة ترتبط بالتحديد مع ‎epitopes‏ اثنين معينين على 7) في اتحاد طبقا للدراسات الحالية. إضافة لذلك؛ كما يتضح بتفصيل أكثر أدناه؛. يمكن ‎٠‏ استخدام معدلات 71167 من الاختراع الحالي في حالة مقترنة أو غير مقترنة ‎cg‏ اختيارياء ‎Jie‏ ‏عامل تحسس في اتحاد مع عوامل مضادة للسرطان حيويا أو كيميائيا عديدة. طبقا لذلك يشتمل تجسيد مفضل آخر للاختراع الحالي على طريقة تحسس للورم في ‎D8‏ ‏للمعالجة مع عامل مضاد للسرطان يشمل خطوة إعطاء المعدل 71167 للفردٍ المذكور. تشتمل تجسيدات أخرى على طريقة لخفض الانبثات بعد معالجة تشمل إعطاء معدل 01167 ‎DU‏ في ‎Yo‏ حاجة لذلك. في جانب مفضل محدد للاختراع فإن المعدل 71167 يتسبب بالتحديد في تقليل الورم يكون تواتر خلية محثة كما يتحدد باستخدام تحليل تخفيف محدد في الكائن الحي أو في المعمل.
Ys ‏يصاحب‎ PTK7 ‏إن تجسيدات مفضلة عموما أكثر من الاختراع تشمل طريقة لمعالجة‎ ‏لذلك تشمل خطوة إعطاء 71167 للفرد. في تجسيدات معينة‎ dala ‏اضطراب في فردٍ في‎ ‏مفضلة يصاحب المعدل 71167 (مثل يقترن معه) عامل مضاد للسرطان. في تجسيدات أخرى‎ ‏أيضا يذوت المعدل 71167 بعد المصاحبة أو الارتباط مع 77167 على أو بالقرب من سطح‎ ‏الخلية. إضافة لذلك؛ فإن الجوانب المفيدة للاختراع الحالي» تتضمن أي إعاقة لمسار إشارة‎ © ‏وفوائد جانبية؛ يمكن تحقيقها سواء كان نسيج الورم في الفرد له مستويات مرتفعة من 71167 أو‎ ‏مستويات منخفضة من 71167 كالمقارن مع نسيج مجاور طبيعي.‎ ‏في جانب آخر أيضا يشتمل الاختراع الحالي على طريقة معالجة فرد يعاني من اضطراب‎ ‏ورمية تشمل خطوة إعطاء كمية فعالة علاجيا من على الأقل واحد من معدل 71167 تذوت.‎ ‏تشتمل تجسيدات مفضلة على إعطاء معدلات جسم مضاد تذوت حيث؛ في تجسيدات منتقاة‎ ٠ ‏أخرى. فإن معدلات جسم مضاد تذوت تكون مقترنة أو مصاحبة لعامل مسمم للخلية.‎ ‏تتعلق تجسيدات أخرى بطريقة معالجة 358 يعاني من اضطراب يصاحبه 71167 تشمل‎ ‏من على الأقل واحد من معدل 71167 استتفاذ.‎ bade ‏خطوة إعطاء كمية فعالة‎ ‏في تجسيد آخر يوفر الاختراع الحالي طرى لعلاج استبقاء حيث تعطى المعدلات أو‎ ‏علاج كيميائي؛ إشعاعي‎ Jie) ‏المستجيبات الموضحة على مدار فترة زمنية بعد إجراء مبدئي‎ ١ ‏أو جراحي) مصمم لإزالة على الأقل قسم من كتلة الورم. يمكن إعطاء الأنظمة العلاجية هذه‎ ‏خلال فترة زمنية من أسابيع؛ مدة زمنية من شهور أو حتى من سنوات حيث يمكن أن تعمل‎
Ob ‏معدلات 01167 بصورة وقائية لتثبيط الانبثات و/أو الانتكاس. في تجسيدات أخرى أيضا‎ ‏المعدلات الموضحة يمكن إعطاؤها بالاشتراك مع أنظمة إزالة تكتل معروفة لمنع أو تقليل‎ ‏الانبثات؛ بقاء الورم أو انتكاسه.‎ ve ‏من المقدر إضافيا أنه بمكن تصنيع وانتقاء معدلات 71167 من الاختراع الحالي لتتفاعل‎ ‏متوفر بواسطة متغيرات‎ Jha) ‏مع شكل مماثل 01167 وحيد أو أشكال ممائلة قليلة منتقاة‎ ‏أو؛ على العكس؛ يمكن أن تشتمل على معدل 080-01167 يتفاعل مع أو‎ protein ‏الجدالة) مع‎ ‏يصاحب بعض أو كل الأشكال المماثلة 71167 (يتحدد خمس أشكال مماثلة حتى الآن).‎ ‏بتحديد أكثر؛ كما يتضح هنا فإن معدلات مفضلة مثل أجسام مضادة يمكن توليدها وانتقاؤها‎ Yo ‏مع مجالات سيطرة توجد بواسطة متغيرات الجدالة المفردة (مثل؛ عند تقاطعات‎ Jeli ‏بحيث‎ ‏التي يحافظ عليها عبر العديد من أو كل الأشكال‎ Ig ‏معينة) أو مع مجالات سيطرة‎ exon
١ ‏المماثلة 01167. يكون ذلك مميزا بالنسبة إلى الاختراع الحالي حيث أن أشكال مماثلة معينة‎ ‏ويمكن بالتالي أن تعمل‎ TIC (tumor initiating cells) ‏يمكن أن تظهر بصورة مفضلة على‎ ‏مثل مستهدفات علاجية لتوفير الانخفاض الانتقائي في تواتر خلية مولدة للورم و/أو استتفاذ‎ ‏مجموعات خلية جذعية سرطانية.‎
‎ula °‏ لذلك؛ في تجسيد منتقى يشمل الاختراع مادة ضابطة شاملة ‎PTK7 JS‏ في تجسيد منتقى ‎jal‏ يشتمل الاختراع على ‎bale‏ ضابطة ‎PTK7‏ تصاحب بدرجة خاصة ‎Ue lie‏ واحد أو أكثر من متغيرات الجدالة أو الأشكال المماثلة. يفضل انتقاء متغيرات الجدالة من المجموعة المشتملة على شكل مماثل ‎aa‏ شكل مماثل ‎cb‏ شكل مماثل ‎co‏ وشكل مماثل ‎Ad‏ تجسيدات أخرى أيضنًا يشمل الاختراع ‎Ma‏ طريقة لعلاج كائن بحاجة لذلك تشمل إعطاء كمية مؤثرة
‎AS ‏تشمل تجسيدات أخرى أيضًا طريقة لعلاج‎ .01167 JS ‏علاجيًا من مواد ضابطة شاملة‎ ٠ ‏بحاجة لذلك تشمل إعطاء كمية مؤثرة علاجيًا من مادة ضابطة 171167 تصاحب بدرجة خاصة‎ ‏مناعيًا واحد أو أكثر من شكل مماثل.‎
‎Laid‏ وراء نطاق الاستخدامات ‎Yall‏ 2 المش ‎dag‏ أعلاه لابد ‎Load‏ من إدراك أن المواد ‎oo‏ الضابطة من الاختراع الحالي ‎galanin (an‏ لتشخيص اضطرابات تخص 71167 و؛ بصفة
‎١‏ خاصة.؛ اضطرابات الانقسام المفرط. في بعض التجسيدات يمكن إعطاء المادة الضابطة للكائن وتحديدها أو مراقبتها في الجسم. سيدرك أصحاب المهارة في الفن أن تلك المواد الضابطة يمكن أن تكون معلمة أو متلازمة مع دلالات أو مواد مخبرة كما هو معلن أدناه وتحديدها باستخدام أي واحدة من عدد من التقنيات القياسية ‎MRI Si)‏ أو مسح ‎CAT‏ مسح ‎«PET‏ إلخ).
‎٠‏ بالتالي؛ في بعض التجسيدات يشتمل الاختراع على طريقة تشخيصية؛ تحديدية أو مراقبة اضطراب يصاحبه 01167 في الكائن الحي في فرد بحاجة لذلك تشمل خطوة إعطاء معدل ‎PTK7‏
‏بالتالي؛ في حالات أخرى يمكن استخدام المواد الضابطة في جلسات تشخيصية في المعمل باستخدام إجراءات يدركها الفن. حسب ذلك؛ يشمل تجسيد مفضل طريقة لتشخيص اضطراب
‎Yo‏ انقسام مفرط في كائن بحاجة لذلك تشمل خطوات:
‏(أ) الحصول على عينة نسيج من الكائن المذكور؛ (ب) تلامس عينة النسيج مع مادة ضابطة 71167 واحدة على الأقل؛ و
VY
‏تحديد أو تقدير كمي للمادة الضابطة 71167 الملازمة للعينة.‎ (2) ‏يمكن بسهولة توضيح تلك الطرق في اتحاد مع الطلب الحالي ويمكن إجراؤها بسهولة‎ (automatic ‏باستخدام تقنية تجارية متوافرة بصفة عامة مثل الأدوات القارئة الأوتوماتيكية لطبق‎ ‏160108160)؛ إلخ. في تجسيدات‎ reporter systems) ‏أنظمة مخبرة مخصصة‎ 01816 readers) (tumor perpetuating ‏منتقاة فإن المادة الضابطة 701167 سوف تصاحب خلايا ورم سرمدية‎ © ‏موجودة في العينة. في تجسيدات أخرى مفضلة تشمل خطوة التحديد أو التقدير الكمي‎ cells) ‏وتحديد ذلك. إضافة لذلك؛‎ (tumor initiating cell) ‏البادئة لورم‎ DAY ‏التقليل في معدل تواجد‎ ‏إجراء تحليل تخفيف مقيد حسب التوضيح مسبقًا أعلاه ويفضل استعمال إحصائيًا توزيع‎ (Sa ‏لتوفير حساب دقيق لتقليل معدل التواجد.‎ 2 ‎١‏ في جانب مشابه يوفر الاختراع الحالي ‎Lad‏ مجموعات مفيدة في تشخيص ومراقبة اضطرابات ملازمة ‎Jie PTK7‏ سرطان. عند هذه النقطة يوفر الاختراع الحالي بصورة مفضلة أداة مصطنعة مفيدة لتشخيص أو لعلاج اضطرابات ملازمة 71167 تشمل وعاء يشمل ‎sale‏ ‏- ضابظة 17167 ومواد إرشادية لاستخدام ‎sali‏ الضابطة 71167 المذكورة لعلاج أو لتشخيص الاضطراب الملازم ‎PTK7‏ ‎yo‏ هناك تجسيدات أخرى مفضلة للاختراع تستغل أيضنًا خواص المواد الضابطة المعلنة كأداة مفيدة لتحديد؛ عزل- تجزئة أو تغذية المجموعات أو المجموعات الفرعية للخلايا البادئة للورم من خلال طرق ‎Jie‏ تحليل ‎flow cytometric‏ تصنيف خلية ينشطه استشعاع ‎fluorescence‏ ‎activated cell sorting (FACS)‏ أو تجزئة بواسطة الليزر. ‏حسب ذلك؛ يتعلق تجسيد آخر مفضل للاختراع الحالي بطريقة ‎(Jie canal‏ تجزئة أو ‎٠‏ تغذية مجموعة خلايا بادئة لورم تشمل خطوة تلامس الخلايا البادثة للورم المذكورة مع مادة ‏ضابطة ‎PTK7‏ ‏إن ما سبق هو ملخص ولذلك يحتوي؛ بالضرورة؛ على تبسيطات؛ تعميمات؛ وحذف لتفاصيل؛ ‎dag‏ لذلك؛ سيدرك المهرة في الفن أن الملخص توضيحي فقط ولا يقصد به بأي طريقة التحديد. هناك جوانب؛ سمات؛ ومزايا للطرق؛ التركيبات و/أو الأدوات و/أو مادة ‎Yo‏ موضوع أخرى موصوفة هنا سوف تصبح واضحة في التعاليم المذكورة هنا. يتوافر الملخص لإدخال انتقاء للمفاهيم في شكل مبسط موصوف إضافيًا أدناه في الوصف التفصيلي. لا يقصد
VY
‏بهذا الملخغص تحديد سمات رئيسية أو سمات أساسية لمادة الموضوع المحددة؛ ولا يقصد‎ ‏استخدامه كوسيلة مساعدة في تحديد نطاق مادة الموضوع المحددة.‎ ‏شرح مختصر للرسومات‎
PTK7 ‏توضح الأشكال ١(أ)-١(ج)؛ على التوالي؛ ترتيب حمض نووي الذي يحمل شفره‎ ‏آدمي (تعريف الترتيب رقم: ١)؛ ترتيب حمض أميني لمتغير 71167 آدمي تمثيلي (تعريف‎ ٠ ‏الترتيب رقم: 7) والشكل ١(ج) يوضح الترتيبات المصطفة والمرمزة لأربعة أشكال مماثلة‎ ‏حيث يمثل المقطع الذي تحته خط في الشكل‎ (T= ‏تمثيلية من 71167 (تعريف الترتيب أرقام:‎ ‏إن المقطع الذي تحته خط في الشكل ١(ب) يمثل مجال‎ PTK7-1 ‏إطار القراءة المفتوح‎ )أ(١‎ ‏من‎ protein ‏سيطرة خارج الخلية من 01147 كما يتضح هنا ويوضح الشكل ١(ج) اصطفاف‎ ‏كما يسجل في قاعدة بيانات‎ = PTK7 protein ‏أربعة أشكال مماثلة معروفة تمثيلية من‎ ٠ b ‏الشكل المماثل‎ (NP 002812 = a ‏الشكل المماثل‎ Protein ‏(انضمامات‎ NCBI ‏عند‎ Gene
A(NP_690621 = 4 ‏الشكل المماشثل‎ €NP_690620 = ¢ ‏الشكل المماشل‎ €NP_690619 = "SDVWSXG" 5 «"HRDLxxxN" "GxGxiT2V" ‏النمط‎ »optides (=) ١ ‏يوضح الشكل‎ : ‏على ألنواني.‎ OTN ‏تعريف الترتيب أرقام:‎ Je ‏هو تمثيل تخطيطي يوضح مستويات إظهار جين من 71167 في فئران غير‎ ١ ‏الشكل‎ ‎transcriptome ‏ما يقاس باستخدام ترتيب‎ Jia (+) irinotecan ‏معالجة () وفئران معالجة مع‎ highly enriched tumor progenitor cell ‏كامل من مجموعات وفيرة من خلية أصل ورم‎ ‏وخلية غير مولدة لورم‎ tumor perpetuating cell (TPC) ‏(17:08)؛ خلية استدامة مسبقة لورم‎ ‏ناتجة من مجموعة فرعية من عينة ورم قولوني شرجي‎ non-tumorigenic cell (NTG) ‏كاملة؛‎ (colorectal tumor specimen) ٠ od PTKT Ja Li 0s Le) ligand ibis Lh ¥ JS ny ‏ناتجة من‎ (TPC) ‏وخلية استدامة مسبقة لورم‎ (TProg) ‏مجموعات وفيرة من خلية أصلية لورم‎ ‏فثران تحمل واحد من ثلاثة خطوط خلية ورم بنكرياسي أو قولوني شرجي من رقعة دخيلة غير‎
Jia (NTG) ‏مختلفة؛ وتتعادل في مقابل مجموعات خلية وفيرة غير مولدة للورم‎ (NTX) ‏تقليدية‎ ‏كمي؛‎ RT-PCR ‏.ما يقاس باستخدام‎ Yo
PTK7 ‏يوضح الشكلان 4 () و؛(ب) تمثيليين تخطيطيين لمستويات إظهار جين نسبية‎ ‏في عينات ورم قولوني شرجي كاملة من مرضى‎ RT-PCR ‏آدمي مثل ما يقاس باستخدام‎
Y¢
بمرض 1-17 ‎Stage‏ وتتعادل في مقابل الإظهار المتوسط في نسيج شرج وقولون طبيعي (الشكل 4()) أو تتماشى مع نسيج مجاور طبيعي (الشكل ؛ (ب))؛
يوضح الشكلان #(ا) و*(ب) تمثيليين تخطيطيين لمستويات إظهار جين نسبية أو مطلفة؛ على التوالي؛ من جينات 01167 آدمية كما يقاس بواسطة ‎RT-PCR‏ في عينات ورم كاملة
‎٠‏ (نقطة رمادية) أو ‎NAT‏ متماشي (نقاط بيضاء) من مرضى مع واحد من ثمانية عشر نوع ورم
‏صلب مختلف؛
‏يوفر الشكلان ‎(NT‏ و1(ب)؛ في شكل جدولي؛ ترتيبات حمض أميني متجاورة لمناطق متغيرة لسلسلة ثقيلة وخفيفة من عدد من معدلات 71167 تمثيلية مكتسبة السمة الآدمية وفأرية معزولة؛ منسوخة ومهندسة كما يوصف في الأمثلة هنا؛
‎١‏ توفر الأشكال ا(أ)-7"(ه)؛ في تمثيلات تخطيطية وجدولية؛ مميزات كيميائية فسيولوجية لمعدلات 01167 تمثيلية حيث يوضح الشكل #(أ) مميزات ارتباط معدلات معينة بالنسبة إلى 7 آدمي وفأري؛ يوفر الشكل ‎(Q)Y‏ بيانات الانجذاب؛ الارتباط والنشاط المتداخل لمعدلات
‎٠ |‏ منتقاة؛ يوضح ‎(2)V SIKH‏ و ا(د) مميزات ارتباط مقارنة لمعدل فأري, منتقى ونظير مكتسب
‏| : السمة الآدمية ويوفر الشكل ‎La)V‏ انجذابات ارنباد!. لأجل معدلات منتقاة بالنسبة إلى ‎PTK7‏ ‎١٠‏ آدمي والنظير الفأري له؛
‏توضح الأشكال 8(أ)-+(ز) بناءات 01167 مختلفة طبقا للاختراع الحالي حيث توفر
‏الأشكال 8(أ)-4(و) ترتيبات حمض أميني من ستة متغيرات معدل 71167 في شكل بناءات
‏18-0112700 حيث يتنوع قسم مجال السيطرة خارج الخلية لكل بناء ويوضح تخطيطيا
‏الشكل *(ز) مجالات السيطرة ‎Ig‏ السبعة لأجل ‎portion‏ خارج الخلية من أجل 71167 مع
‎ Y-‏ مناطق ارتباط مشتقة من ‎ELISA‏ لمعدلات 77167 عديدة كالمشار إليها بواسطة الأقواس؛
‏توضح الأشكال 4()-5(ه) مستويات إظهار ‎protein‏ 71167 في مواد تحلل ورم مختلفة
‏وفي عينات ‎NTX‏ حيث توضح الأشكال 4()-4(د) مستويات مادة تحلل الورم لمراحل مرض
‏وأورام مختلفة كالمقارنة مع أمثلة مقارنة من نسيج مجاور طبيعي ويوفر الشكل 4(ه)
‏مخططات نسيجية توضح صبغ رقع دخيلة غير تقليدية آدمية مع معدلات منتفاة حيث يقارن
‎Yo‏ صبغ المثال المقارن (رمادي) بالصبغ على مجموعات خلية جذعية سرطانية غير مولدة للورم
‎(putative ‏(خط متقطع) ومجموعات خلية جذعية سرطانية مفترضة‎ (non-tumorogenic) ‏(خط مستقيم)؛‎ cancer stem cell populations)
توضح تخطيطيا الأشكال ‎٠١‏ (أ)-٠٠(ه)‏ قدرة المعدل المنتقى من الاختراع الحالي على
التذوت عند الارتباط مع ‎PTT‏ على سطح خلية حيث يوضح الشكل ١٠(ج)‏ التغير
الفلورسيني المصاحب للمعدل التمثيلي ‎sf)‏ أن 506.10.2 يعني 1110 في الشكل ‎٠١‏ (ج))
ويمثل الشكلان ١٠(أ)‏ و١٠(ب)‏ مثالين مقارنين» يوضح الشكل ‎٠١‏ (د) أن المعدلات التمثيلية
© من مواد طافية لورم هجين يمكن مسحها لأجل التذوت مقارنة مع أمثلة مقارنة نقية
‎SC6.10.2 »806.2.35(‏ و506.25.1 يعني 112.35 1110.2 و 1125.1 على التوالي) ويوضح
‏الشكل ‎٠١‏ (ه مدى تذوت المعدلات المختلفة (تمتل كل نقطة بيانات معدل معين) حيث يشير
‏الخط المتقطع إلى الحصة الأساسية من عدد المعدلات 71167 التي تم تذويتها بواسطة الخلية استجابة للارتباط كما يوضح على المحور ‎ty‏
‎٠١‏ توضح تخطيطيا الأشكال ١١ل(أ)-١١(د)‏ قدرة المعدلات الموضحة على أن تسبب بصورة خاصة مناعيا في توصيل عوامل سامة للخلية وقتل خلية الحث حيث يوضح الشكل ‎(NY‏ ‏استخدام ثلاثة معدلات تمثيلية (566.2.35؛ ‎SC6.10.2‏ و506.25.3 يعني 112.35 1110.2
‏و1125.3 على التوالي) مثل أجزاء مه تهدفة ‎dail‏ --مولات السامة للخلية إلى خلايا تظهر فز 7 وحيث توضح الأشكال ‎١‏ زب)- )3( ار؟ أربعة معدلات تمثيلية إضافية على إلغاء ‎١‏ ثلاثة خطوط خلية معينة حيث في كل شكل يشير منحنى ينحدر لأسفل إلى قتل خلية من
‏خلال ‎toxin‏ مذوت؛
‏يوضح الشكل ‎١١‏ قدرة ثلاثة معدلات 01167 تمثيلية على أن تسبب بصورة خاصة مناعيا توصيل عوامل سامة للخلية وبالتالي خفض حيوية خلية الورم في خطوط خلية ورم ‎NTX‏ ‏مختلفة؛
‏أ تشير الأشكال “١(أ)-١‏ (ج) إلى قدرةٍ المعدلات الموضحة على خفض تواتر خلايا استدامة مسبقة لورم وتثبيط قدرتها المولدة للورم حيث يوضح الشكلان ‎(NTs (NF‏ أن توصيل يتوسطه المعدل (أي؛ 506.112 المعلم مع ‎(8C6.2.35‏ لعوامل سامة للخلية يؤثر على حيوية مجموعتين لخلية ورم ثديي ‎NTX‏ معينين ويوضح الشكل ١١٠(ج)‏ التولد الورمي المنخفض لخطوط خلية معالجة عند زراعتها داخل فأر ناقص المناعة؛ و
‎Yo‏ يوضح الشكل ‎١4‏ قدرة معدلات 21167 مكتسبة السمة الآدمية تمثيلية من الاختراع الحالي
‏ض على التسبب بصورة فعالة في توصيل خاص مناعيا وتذوت عوامل سامة للخلية إلى خلايا ‎PTK7 lek)‏
‎.١‏ المقدمة برغم أن الاختراع الحالي ‎(Say‏ تجسيده بصور كثيرة مختلفة؛ فإن المعلنة هنا هي تجسيدات خاصة توضيحية له تمثل المبادئ الأساسية للاختراع. لابد من التأكيد على أن الاختراع الحالي غير مقيد بالتجسيدات الخاصة الموضحة. إضافة لذلك»؛ فإن أي عناوين لجزء مستخدمة هنا غرضها التنظيم فقط ولا يجب اعتبارها مقيدة لمادة الموضوع الموصوفة. حسب الإشارة إلى ذلك مسبقًاء اتضح على نحو مثير للدهشة أن إظهار ‎PTK7‏ متضمنا أشكال متماثلة متنوعة؛ يصاحبه نمو تنسج ورمي واضطرابات انقسام مفرط وأن تلك المركبات الترابطية توفر دلالات ورم مفيدة يمكن استغلالها في معالجة الأمراض المتعلقة بذلك. بصفة ‎٠‏ خاصة ‎«if‏ اتضح أن المواد الضابطة 71167 مثل تلك المعلنة هنا يمكن استخدامها بدرجة مفيدة في تشخيص» علاج؛ معالجة أو منع اضطرابات تنسج ورمي في كائنات بحاجة لذلك. طبقًا لذلك؛ برغم أن هناك تجسيدات مفضلة للاخترا 5 سيتم شرحها بصورة مكثفة أدناه؛ تحديدًا في سياق خلايا سرطان جذعية وتفاعلاتها مع المواد الضابطة المعلنة؛ فإن هؤلاء المهرة في " الفن سيدركون أن نطاق الاختراخ الحالي غير مقيد بتلك التجسيدات التمثيلية. بالأحرى» فإن ‎٠‏ الاختراع الحالي وعناصر الحماية المكملة له يتعلقان على نطاق واسع وبصورة واضحة بمواد ضابطة 71167 واستخدامها في تشخيص؛ علاج؛ ‎dallas‏ أو منع تشكيلة من الاضطرابات الملازمة أو التي يتوسطها ‎PTKT‏ متضمنة اضطرابات التنسج الورمي أو الانقسام المفرط؛ بغض النظر عن أي آلية تأثير خاصة أو مكون ورم مستهدف بصفة خاصة. لابد إضافيًا من إدراك ‎asl‏ على النقيض من اختراعات فن سابق متنوعة؛ فإن الاختراع ‎Ye‏ الحالي يتعلق عموما بمواد ضابطة محددة ‎Lelie‏ من أشكال مماثلة متنوعة من 71167 بخلاف مواد ضابطة ‎protein tyrosine kinase‏ عامة. معنى ‎dll)‏ برغم أن فئات من مستقبلات ‎protein tyrosine kinase‏ متورطة بدرجة كبيرة في أنواع كثيرة من الاضطرابات وتكون مستهدفة بصفة عامة من أجل التدخل العلاجي؛ فإن مواد ضابطة محددة ‎PTK7‏ قد ‎ila‏ ‏حتى الآن قدر قليل من الانتباه. بصورة جزئية يمكن أن يرجع ذلك إلى الاعتقاد أن التداخل مع ‎Yo‏ نشاط ‎PTK‏ (بالتحديد مع جزيئات صغيرة تتفاعل مع مجالات سيطرة ‎kinase‏ محمية) يكون فعالا أكثر من ناحية علاجية حيث أن وفرة ‎kinase‏ يمكن أن تعوض عن أي تعضد خاص لأعضاء معينين من هذه الفئة. إضافة لذلك؛ من المسجل أن 01167 يشمل مجال سيطرة
لا
‎kinase‏ غير نشط (أو مجال سيطرة ‎kinase‏ كاذب) الذي يمكن أن يعوق استخدامه كهدف
‏علاجي. ‏على النقيض؛ يشتمل الاختراع الحالي على استخدام معدلات خاصة مناعية تتفاعل بصورة مفضلة مع واحد أو أكثر من أشكال مماثلة من 01167 لتوفير فوائد علاجية. كما يتضح © بإيجاز أعلاه في تجسيدات معينة فإن المعدلات من الاختراع الحالي يمكن توليدها وانتقاؤها لتصاحب شكل مماثل 71167 وحيد بينما في تجسيدات أخرى يمكن أن تتفاعل المعدلات المنتقاة مع أكثر من شكل مماثل واحد أو كل الأشكال المماثلة المدركة من ‎PTKT7‏ في التجسيدات الأخيرة يمكن أن يشتمل الاختراع الحالي على معدلات تصاحب أو ‎delim‏ مع أكثر من شكل مماثل 01167 واحد بالتالي توفر تأثير تآزري أو إضافي غير متوقع يمكن أن
‎٠‏ يسمح بتسكين أكثر من مسار يتوسطه 71167 واحد.
‏بعموم أكثر؛ كما يتضح في الطلب الحالي؛ فإن معدلات 71167 الخاصة مناعيا يمكن أن
‏تستخدم بطريقة فعالة لاستهداف ‎fo Lally‏ إعاقة خلايا مولدة للورم ومعالجة اضطرابات
‏| : يصاحبها 01167 (مثل؛ تكوين ورم ‎(neoplasia)‏ كما يستخدم هنا فإن اضطراب يصاحبه ض ٍ 7 يعني أي اضطراب أو ‎ape‏ زا في ‎Cds‏ عراب التكائر ‎(including proliferative‏
‎(disorders) ٠‏ يعلم ‎٠‏ يشخص أو يحدد بواسطة انحراف من نوع أصلي من إظهار 71127 أثناء مسار أو أسباب المرض أو الاضطراب. في هذا الخصوص فإن الانحراف من نوع أصلي يمكن؛ على سبيل المثال؛ أن يشتمل على مستويات متزايدة أو منخفضة من إظهار 07167 إظهار ‎PTK‏ بصورة غير طبيعية على تجمعات خلية يمكن تحديدها معينة أو إظهار ‎PTK7‏ ‏بصورة غير طبيعية عند طور أو ‎Ala‏ غير ملائمين لدورة حياه الخلية.
‏7 إلى جانب التلازم العام المشروح في الحال أعلاه؛ ‎ad‏ اكتشف المخترعون إضافيًا تلازم نوعي شكلي غير معلوم حتى الآن بيني ‎WIA"‏ بادثة لورم ‎(TIC) "(tumor initiating cells)‏ منتقاة و71167 في هذا الجانب؛ اتضح أن ‎WAY‏ البادئة لورم المنتقاة تظهر مستويات عالية من 71167 عند المقارنة مع ‎LDA‏ نسيج طبيعي وغير مولدة للورم ‎(NTG)‏ والتي تشمل مع بعضها كثير من ورم صلب. لذلك؛ تشمل الأشكال المماثلة 01167 دلالات مصاحبة للورم (أو
‎Yo‏ مولدات مضاد ‎(antigens)‏ أو جينات مناعية ‎((immunogens)‏ واتضح أنها توفر عوامل مؤثرة لتحديد وكبح خلية بادثة لورم والتنسج الورمي المصاحب يسبب المستويات المتغيرة من ‎proteins‏ على أسطح الخلية أو في البيئة الدقيقة للورم . بصفة خاصة أكثر؛ اكتشف
YA
‏متضمنة مضادات وأجسام مضادة نشطة‎ (PTK7 ‏المخترعون إضافيًا أن المواد الضابطة‎ ‏تقلل بدرجة مؤثرة معدل تواجد الخلايا البادئة للورم ولذلك‎ proteins ‏مناعيًا تربط أو تتفاعل مع‎ ‏حث تباين؛ أو بطريقة أخرى تعوق أو تحد من‎ (Juli ‏خفض؛ إضعاف؛‎ All) ‏فهي مفيدة في‎ ‏قدرة هذه الخلايا البادئة للورم على أن تظل هاجعة و/أو تستمر في تدعيم نمو الورم؛ الانتشار‎ ‏أو رجوع الورم في مريض. حسب الشرح بتفصيل أكثر أدناه؛ فإن المجموعة‎ Lindl ‏بعيدًا عن‎ ‏تتكون من كل من خلايا‎ (TIC tumor cell subpopulation) ‏الفرعية لخلية ورم خلية بادثة لورم‎ highly ‏وخلايا ورم سلفية انقسامية للغاية‎ (tumor perpetuating cells (TPC)) ‏ورم سرمدية‎ .proliferative tumor progenitor cells (TProg) ‏على ضوء هذه الاكتشافات» سيدرك المهرة في الفن أن الاختراع الحالي يوفر مواد ضابطة‎ ‏واستخدامها في تقليل معدل وجود الخلايا البادئة لورم. حسب الشرح بدرجة مكتفة أدناه؛‎ 71127 ٠ ‏فإن المواد الضابطة 01167 من الاختراع تشتمل على نطاق كبير أي مركب يدرك؛ يتفاعل‎ ‏مع؛ ينافس؛ يعارض؛ يتدخل مع؛ يربط؛ يعضد؛ أو بصاحب 71167 أو 21167 أو جينات من‎ . ‏بواسطة هذه التداشلات: فل المواد الضابطة 7117 تقلل بذلك أو تعدل معدل وجود‎ cell «oligonucleotides nucleotides Lia ‏خلايا بادثة لورم. تشمل مواد صابطة تمثيلية معلنة‎ ‏أو 505 . في تجسيدات خاصة مفضلة سوف تشمل‎ peptides «polynucleotides 1° ‏المواد الضابطة المنتقاة أجسام مضادة مضادة 71167 أو أجزاء أو مشتقات منها نشطة مناعيًا.‎ ‏قد تكون تلك الأجسام المضادة معارضة أو معضدة في طبيعتها وقد تكون اختياريًا مصاحبة أو‎ ‏ملازمة لعامل سام للخلايا. في تجسيدات أخرى؛ سوف تشمل المواد الضابطة في الاختراع‎ ‏أو جزء منه نشط. لابد من إدراك أن تلك البنيات‎ 71167 Giles ‏الحالي بنية 01167 تشمل شكل‎ ‏أخرى‎ polypeptides ‏اندماج ويمكن أن تتضمن مجالات سيطرة نشطة من‎ proteins ‏تشمل‎ Yo ‏سوف تشمل‎ (all ‏مناعية أو مواد ضبط استجابة حيوية. في جوانب أخرى‎ globulins Jie ‏المادة الضابطة 71167 تجميع حمض نووي يحدث التأثيرات المطلوبة عند المستوى الجينومي.‎ ‏لازالت هناك مواد ضابطة أخرى متوائمة مع التعاليم الحالية سيتم شرحها بالتفصيل أدناه.‎ ‏أيا كان شكل المادة الضابطة المنتقاة في النهاية فمن المفضل أن تكون في حالة معزولة‎ 07167 ‏ونقية قبل إدخالها في الكائن. في هذا الجانب سوف يتم تأويل المصطلح 'مادة ضابطة‎ vo ‏على نطاق واسع وطبقًا للممارسة الدوائية القياسية‎ (isolated 01167 modulator) ‏معزولة‎ ‏خالية جوهريًا من ملوثات غير‎ Alla ‏ليعني أي مستحضر أو تركيبة تشمل المادة الضابطة في‎
مرغوبة (حيوية أو أخرى). حسب الشرح ببعض التفصيل أدناه فإن هذه المستحضرات قد تكون نقية ومصاغة حسب الطلب باستخدام تقنيات عديدة يدركها الفن. بالطبع؛ لابد من إدراك أن تلك المستحضرات "المعزولة ‎(isolated)‏ يمكن بصورة متعمدة صياغتها أو اتحادها مع مقومات خاملة أو نشطة حسب الطلب لتحسين الجوانب التجارية؛ التصنيعية أو العلاجية © للمنتج النهائي وتوفير تركيبات دوائية. ‎II‏ فسيولوجية ‎PTK7‏ ‏إن ‎«(PTK7) protein tyrosine kinase‏ يعرف أيضا مثل 4 ‎kinase‏ الورم السرطاني القولوني ‎«((CCK4)‏ يكون ‎tyrosine kinase‏ مستقبل منسوخ أساسيا من خلايا ميلانوما آدمية طبيعية )1993 ,)8(12 ‎(Lee et al, Oncogene‏ وبصورة منفصلة من نسيج ورم سرطاني قولوني ‎.(Mossie et al., Oncogene 11(10), 1995( ٠‏ يقع الجين ‎PTK7‏ عند 6021.1-012.2. تنسخ خمسة أشكال مماثلة الجدالة لأجل ‎PTK7‏ آدمي من ‎cDNA‏ لخصية: ‎.(Jung, Ji et al., Biochim Biophys Acta 1579, 2002)‏ ‎٠ |‏ إن الوفرة النسبية من الأشكال المماثلة بالنسبة لبعضها تختلف بين الخصية وورم كبدي ‎(hepatoma) |‏ أو خطوط ورم مارطادي قونوني ‎(colon carcinoma lines)‏ لكن تكون الأهمية ‎١‏ _الوظيفية لتلك الأشكال المماثلة؛ إذا وجدت؛ غير معروفة. تقترح تحليلات معلوماتية حيوية أن ‎lal‏ يمكن أن يظهر شكل ممائل 0:7 قابل للذوبان من ‎MRNAS‏ مجدولة بصورة بديلة: ‎(Forrest, Taylor et al., Genome Biol 7, 2006(‏ لأغراض هذا الطلب يقدر استخدام المصطلحين ‎“CCK4” 5 “PTK7”‏ بصورة متبادلة ويتضمنان متغيرات جدالة؛ أشكال مماثلة؛ نظائر نوعية ونظائر من 71167 آدمي ما لم يشار ‎٠‏ إلى خلاف ذلك بواسطة قيود سياقية. يقدر إضافيا أن المصطلحين يمكن أيضا أن يشيرا إلى أي مشتق أو جزء من شكل أصلي أو متغير من 01167 يشمل ‎epitope‏ يمكن أن يربط إليه بالتحديد معدل ‎Die) 71167 protein‏ جزء نشط ‎Lelie‏ أو جسم مضاد). إن ‎protein‏ 01167 كامل الطول هو ‎protein‏ عبر الغشاء من النوع ‎J‏ مع مجال سيطرة خارج الخلية ‎(ECD)‏ من 774 حمض أميني؛ يتبعه ‎portion‏ استطالة ‎TM‏ قصير ومجال ‎Yo‏ سيطرة ‎cytoplasmic‏ من ‎YEO‏ حمض أميني. إن ترتقيب حمض نووي كامل لشكل مماثل تمثيلي من ‎PTK7‏ آدمي (يعني؛ ‎PTK7-1‏ متغير نسخ) له رقم انضمام ‎:Genbank‏ ‏07471 ويتمثل في الشكل ١(أ)‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎.)١‏ بالمتل؛ يوضح ترتيب حمض
Yo
AY ‏في الشكل ١(ب) (تعريف الترتيب رقم:‎ PTKT-1 protein ‏أميني تمثيلي كامل الطول من‎ ‏في تعريف الترتيب رقم: ؟ يختلف عن منتج الترجمة لترتيب حمض‎ 27167 protein ‏يلاحظ أن‎ ‏الموضح في تعريف‎ a ‏(يعني الشكل المماثل‎ ١ ‏نووي الذي تحته خط من تعريف الترتيب رقم:‎ ‏في الشكل ١(ب). بالنسبة‎ AY ‏عند الموضع‎ (P >- L) ‏الترتيب رقم: ؟) في وجود طفرة نقطة‎ ‏إلى الأشكال المماثلة يوضح الشكل ١(ج) الاصطفاف المصاحب لترتيبات حمض أميني من‎ © ‏(انضمامات 0300810: الشكل‎ Genbank ‏كما يسجل في‎ PTK7 ‏أربعة أشكال مماثلة تمثيلية من‎ 01 690619 = b ‏الشكل المماشل‎ ¢F ‏تعريف الترتيب رقم:‎ (NP_002812 = a ‏المماشل‎ ‏تعريف الترتيب رقم: 61 الشكل‎ NP_690620 = » ‏تعريف الترتيب رقم: ¢0 الشكل المماثل‎ ‏المماثئل 8 = 200690621 تعريف الترتيب رقم: 4). مثلما يشار إلى الترتيب المذكور مسبقا‎ 1167 ١ ‏المقابل إلى منتج الترجمة من إطار القراءة المفتوح من متغير‎ a ‏في الشكل المماثل‎ ٠ ‏المذكور في الشكل )1( والذي يمثل أطول الأشكال المماثلة. إن الأشكال المماثلة الجدالة‎ ‏مختلفة‎ Tgcam ‏الأخرى تحمل شفرة مجالات سيطرة خارج الخلية تفتقد إلى مجالات سيطرة‎ ‏ه موضح. تحمل كل الأشكال المماثلة شفرة نفس مجال‎ Wea ‏بالنسبة إلى الشكل؛ المماثل‎ protein ‏سيطرة داخل الخلية. إن انماط فرعية محافظة في مجال السيطرة التحفيزي من‎
PTK7 ‏شروحات للتغيرات في‎ Jie PTK7 ‏توضح أسفل اصطفافات‎ serine/tyrosine kinases ٠
I ‏تغيرات في مجالات السيطرة الفرعية‎ Sis) ‏فيه‎ kinase ‏نتيجة تثبيط مجال سيطرة‎ protein ‏و1711).‎ ‏كامل الطول ناضج على سبعة مجالات سيطرة‎ 01167 ECD ‏في أي حال يشتمل‎ ‏مناعي بينماء كما هو موضح في الشكل ١(ج) فإن متغيرات جدالة مختلفة‎ globulin ‏تشبه‎ ‏لها. تشتمل كل الأشكال المماتلة على‎ BCD ‏تحمل شفرة أشكال مماثلة 71167 تختلف في بناء‎ Yo tyrosine ‏مع تجانس أساسي مع ذلك الموجود في الفئة العامة من‎ cytoplasmic ‏مجال سيطرة‎
Nie ‏يمكن تحديده و؛‎ tyrosine kinase ‏إلى نشاط‎ PTK7 ‏على أية حال؛ يفتقد‎ kinases ‏كاذبة حيث تؤدي تغيرات حمض أميني عديدة في‎ kinases ‏ينتمي إلى العائلة الفرعية من‎ ‏ضعيف:‎ ATP ‏محافظ إلى ارتباط‎ kinase ‏مجالات سيطرة فرعية من‎ .(Kroiher et al. Bioessays 23(1), 2001) Yo
‏بالتحديد؛ تتغير المتخلفات الأساسية في مجالات السيطرة الفرعية 1 و1711 في 71167 بحيث‎ ‏بالإضافة إلى تكليب‎ (ATP ‏غير قابلة للنقل من‎ phosphates ‏تكون التفاعلات المباشرة مع‎ ‏ضعيفة:‎ phosphates ‏الذي يمثل قنطرة بالنسبة إلى‎ Mg? ‏العامل المشترك‎ .(Hanks et al., Methods Enzymol 200, 1991) ‏متماشية مع الاختراع الحالي يمكن أن تكون في‎ 01167 polypeptides ‏يقدر إضافيا أن‎ ° ‏التحام. من المفيد‎ protein Jie ‏أكبر‎ protein ‏ناضج أو يمكن أن تكون جزء من‎ protein ‏شكل‎ ‎protein ‏غالبا تضمن ترتيب حمض أميني إضافي يشمل ترتيبات إفرازية أو أولية؛ ترتيب‎ ‏علامة انجذاب؛ على سبيل‎ Jie ‏أو ترتيب يساعد في التنقية‎ (Gala ‏لاحق؛ سابق أو لاحق‎ ‏أو علامة‎ HA ‏علامة‎ (FLAG ‏عديدة؛ علامة‎ histidine ‏متخلفات‎ ٠ ‏المثال؛ لكن بدون اقتصار‎
‎mye ٠‏ يمكن ‎Lad‏ استخدام ترتيبات إضافية يمكن أن توفر ثبات أثناء الإنتاج المخلق. يمكن اختياريا إزالة هذه الترتيبات عند اللزوم بواسطة إدخال ترتيب قابل للكسر ‎Jie‏ ترتيب إضافي أو جزء منه. بالتالي؛ يمكن أن يشتمل ‎polypeptide‏ 71167 كما يتضح هنا على بناءات ملتحمة مع أجزاء ملحقة تتضمن ‎polypeptides‏ أخرى. تكون الترتيبات الإضافية وعلامات الانجذاب
‎i‏ معروفة جيدا في الفن ويمكن توليدها باستخدام ‎Atlant SLE‏ حيوية قباسية.
‏10 إن الأهمية البيولوجية لوظيفة 71167 بغض النظر عن مجال سيطرة ‎kinase‏ غير النشط يمكن الاستدلال عليها من وجود نظائر محافظة من ‎Hydra‏ عبر ‎Drosophila‏ إلى دجاجة وآدمي؛ يمكن التتبؤ لكل منها بواسطة تحليل الترتيب بافتقاد نشاط ‎kinase‏ ‎.(Kroiher et al., 2001)‏ اعتمادا على الحفظ العالي لنمط مجال سيطرة ‎TM‏ معين يصاحبه ميل إلى اتحاد لولبي- لولبي وأن ‎RTK‏ يصبح ‎dimerized‏ نموذجيا في استجابة لارتباط
‎PTK7 dimerization ‏يمكن أن يتوسط‎ TM ‏المركب الترابطي؛ من المقترح أن مجال سيطرة‎ ٠ ‏لا يحث اتحاد ذاتي‎ 71167 TM ‏«عطذه:16. تقترح دراسة أخيرة أن مجال سيطرة‎ et al., 2001) ‏لكن لا تستبعد الدراسة‎ (Kobus et al, Biochemistry 44)5(, 2005) ‏تفضيلي‎ ‏من م6 أخرى أو أعضاء من معقد‎ TM ‏مع مجالات سيطرة‎ heteromeric ‏تفاعلات‎ ‏كاذب 71167 الإشارة‎ kinase ‏الإشارة. لذلك؛ من غير المتوقع أن يبث مباشرة مجال سيطرة‎
‎ve‏ لكن يمكن أن يتفاعل مثل سقالة لأجل جزيئات أخرى في مسار الإشارة؛ أو يمكن أن يستخدم ‎tyrosine kinase(s)‏ أخرى )2001 ‎.(Kroiher et al.,‏
YY
‏لا يظهر 01167 آدمي في قولون بالغ على الرغم أنه يظهر في قولون جنيني‎ ‏بالإضافة‎ «(Mossie et al. supra, 1995) ‏وخطوط خلية مشتقة من ورم سرطاني قولوني مختلفة‎ ‏إن‎ (Saha et ‏.له‎ Science 294(5545) 2001) ‏إلى ذلك في سرطان قولوني شرجي انبثاثي‎ ‏الدرقية‎ AS ‏أنسجة وخلايا أخرى طبيعية يسجل أنها تظهر 71167 تتضمن‎
CD4+ ‏خلايا 1 مهاجرة توتية حالية‎ (Mossie, Jallal et ‏والمبيض )1995 .له‎ © ‏وخلايا أصلية نخاعية طبيعية وخلايا نخاع‎ «(Haines et ‏.له‎ J Exp Med 206(2) 2009) ‏بالنسبة إلى أنسجة‎ (Prebet et al, Blood 116(13), 2010) CD34+CD38- ‏عظم‎ ‎{(Mossie et al. 1995) ‏سرطانية؛ يوجد أيضا إظهار 71167 في خلايا ورم سرطاني قولوني‎ ‏في خلايا‎ ¢{(Muller-Tidow, et al_Clin Cancer Res 10(4), 2004) AML ‏في عينات‎ ‏وفي ورم‎ (Shangguan et al, J Proteome Res 7(5) 2008) CD34- ‏مسبق‎ TALL ٠ .(Gorringe et al, Genes Chromosomes Cancer 42(3), 2005) ‏سرطاني معدي‎ ‏بصورة ذات أهمية؛ بالرغم من كونه منسوخ أساسا من خلايا صدغية طبيعية؛‎ ٠ .(Easty et al, Int J Cancer 71(6), 1997١ ‏يسجل فقدان 1167 في ميلانما أدثانية‎ chromosome 6p21 ‏يمكن أيضا 28 71167 في سرطانات تدييه معينة تشمل إلغاءات لأجل‎ ‏على الرغم من تنوع خطوط‎ (Piao et al, Genes Chromosomes Cancer 30(2), 2001) ٠ ‏يكون 01167 أيضا ورم سرطاني غدي‎ (Su et al, J Cancer 1 2010) ‏خلية سرطان ثديي‎ ‏أقوى مع نذير مفضل أكثر في تلك‎ leds) ‏حيث تتعلق مستويات‎ AS) ‏ظاهر في‎ ‏إن عمل خريطة دقيقة لتكبيرات‎ .020000 ef al, 1 Clin Oncol 22(5), 2004) ‏الأورام‎ ‏في ساركوما عظمية يوضح أن الزيادات في عدد نسخة الجين لا‎ 6p12-p2] ‏منطقة‎ ‎qRT-PCR ‏كما يتحدد بواسطة‎ (PTKT ‏يتسبب بالضرورة في الإظهار المفرط من‎ Yo -(Lu et al., Mol Cancer Res 6(6), 2008) ‏لا يكون من المعروف المركب الترابطي أو المركبات الترابطية لأجل 77167 على الرغم من‎ ‏ارتباط 01167 مع مسارات إشارة حيوية متتوعة وعمليات تطويرية متنوعة.‎ ‏يقترح أنه يمكن أن يشارك في‎ protein ‏مناعي من‎ globulin ‏يشبه‎ ECD ‏إن بناء مجال سيطرة‎ (PTK7 ‏من‎ Drosophila ‏إن نظير‎ Ada ‏اتصال والتصاق خلية-‎ jus) ‏أو‎ Yo ‏أثناء توجيه‎ semaphorin ‏مثل مستقبل مشترك محتمل لأجل إشارة‎ plexin ‏يصاحبه‎ «OTK
PlexinAl ‏يتضح مؤخرا التفاعل بين‎ .(Winberg et al, Neuron 32(1), 2001) ‏المحاور‎
YY
(Wagner et al., Biochem Biophys Res Commun 402(2) 2010) Xenopus ‏في‎ PTK7 5
SemabD s PlexinAl ‏يتفاعل مع‎ (KLG PTKT ‏بينما يتضح أن نظير كتكوت من‎ .(Toyofuku et al, Genes Dev 18(4), 2004) ‏في معقد مهم لأجل تشكيل قلبي لكتكوت‎ ‏يستخدم (801167) 01167 قابل للذوبان لتوضيح دور 71167 في تكوين وعائي دموي يحثه‎ ‏هجرةٍ وغزو خلايا بطانية آدمية‎ dard ‏بالإضافة إلى تكوين أنبوب في‎ VEGF © ‏فأري يرتبط‎ PTK7 ‏إن‎ -(Shin et al, Biochem Biophys Res Commun 371(4), 2008) ‏وهجرة خلية‎ actin ‏أيضا مع عمليات التثام جروح بشرانية؛ التي تتطلب إدراك هيكلي خلوي‎ .(Caddy et al., Dev Cell 19(1), 2010) ‏يكون مكونا لمسارات‎ PTKT ‏بالنسبة إلى شلالات إشارة معينة؛ يتضح أن‎ ‏إن فئران‎ .(Puppo et al, EMBO Rep 12(1), 2010) ‏عديدة مهمة للتطور‎ Wnt ‏إشارة‎ ٠ ‏تظهر طفرة قليلة التشكل بشدة أو لا في 7007 تموت في الفترة المحيطة بالولادة؛ مما‎ (PCP) ‏يوضح أنماط ظاهرية تتماشى مع دور 71167 في مسار قطبية خلية مستوي‎
PTK7 proteins ‏تشمل‎ chuzhoi Gly ‏بالمتل» فإن‎ .(Lu et ‏,.لة‎ Nature 430(6995), 2004)
PCP-4aili ‏يوضح الأنماط الظاهرية‎ ECD ‏طفري مع ثلاثة إدخالات حمض أميني في‎ ْ
PCP ‏يتضح أن 71167 فأري يتفاعل جينيا مع جينات‎ (Paudyal, Damrau et al. 2010) ‏د‎ «(Paudyal, Damrau et al. 2010) ‏7:ا0‎ «(Lu et al, 2004) Vangl2 ‏تتضمن‎ (gyal ‏لنسيج بيني من‎ metalloproteinase ‏إن‎ .(Caddy et al, 2010) Grhl3 5 Serb] ‏لإطلاق 711627 قابل للذوبان (أي؛‎ PTK7 ‏يكسر‎ (MT1-MMP) ‏غشائي‎ ١ ‏نوع‎ ‏وانتاج 7 إلى عيوب‎ MTI-MMP ‏ويؤدي عدم انتظام اتزان نشاط‎ )) 7
PCP ‏في مسار‎ PTK7 ‏أيضا مع دور‎ (lay zebrafish ‏نطاق متجاورة في‎ © ‏في‎ PTK7 ‏يوجد‎ «Xenopus ‏في‎ .(Golubkov et al, J Biol Chem 285(46), 2010) ‏غير مخروطية‎ Wnt ‏في مسارات إشارة‎ Wnt ‏مستقبل‎ £27 5 dsh ‏معقدات مع‎ ‏حيث يمكن أن يتضح أن التفاعلات بين‎ ¢(Shnitsar et al., Development 135(24), 2008) ‏مخروطية في خلايا فأر‎ Wnt ‏يمكن أن تتأثر حركيا بواسطة إشارة‎ B-catenin y PTK7 ‏محافظ في محث‎ TCF/LEF- ‏إضافياء إن موقع ارتباط عامل نسخ‎ .(Puppo et al, 2010) Yo ‏ويمكن أن يوضح زيادة 01167 في سرطانات قولونية‎ Wnt ‏يفترض وجود جين استجابة‎ 77
د شرجية معينة؛ حيث أن تلك الأورام غالبا تكون غير منظمة لأجل إشارة مسار ‎(Katoh, Wnt‏ ‎Int J Mol Med 20(3), 2007)‏
في أنسجة سرطائية؛ بالإضافة إلى احتمالية تعديل مسارات ‎Wit‏ الموصوفة أعلاه؛ يتضح أن 2116 ينقل إشارات لاحقة للتكائر ومضادة لانتحار الخلية في خط ورم سرطاني قولوني © 1101116؛ أنواع ظاهرية يمكن عكسها بواسطة تقليل يتوسطه ‎RNAi‏ لأجل ‎(Meng et PTK7‏ ‎ 5(11), 2010‏ ع( ‎PLoS‏ ..له. إن إشارات مضادة لانتحار الخلية ‎PTK7‏ ‏تنقل مقاومة لقتل خلية يتوسطه ‎anthracycline‏ في عصفات ‎AML‏ التي يمكن عكسها باستخدام ‎protein‏ 011627-56 قابل للذوبان )2010 ‎et al,‏ ]0606. يستخدم فرط إظهار 7 بواسطة ‎LOA‏ سرطان معينة في إستراتيجية لاستهداف توصيل ‎daunorubicin‏ ‎٠‏ إلى خلايا ‎T-ALL‏ في مزرعة باستخدام ‎aptamers‏ تربط ‎PTK7‏ وتذوت بعد ذلك
‎.(Xiao et al., Chemistry 14(6), 2008)‏ بالإضافة إلى المميزات المذكورة سابقا يوضح الكشف الحالي أن إظهار 71167 يتزايد في مجموعات خلية محثة للورد متنوعة. بالاضادة الى اازيادة المصاحبة من 177167 في بعض ‎٠ |‏ . الخلايا على الأقل غير المولدة ننوزم في أنورم بالكامل؛ يزيد ذلك من احتمالية أن تفاعلات ‎٠‏ مستقبل مركب ترابطي يتوسطه 01167 يمكن أن يحث شلالات إشارة خلية مرتبطة بتكاثر الورم؛ تكوين وعائي دموي جديد و/أو انبثاث ورم. على الرغم من عدم التقيد بنظرية محددة؛ يعتقد أن المعدلات 71167 من الاختراع الحالي (بالتحديد تجسيدات معضدة أو معادلة ‎(antagonistic or neutralizing embodiments)‏ تعمل؛ على الأقل جزئيا؛ بواسطة إما خفض أو إلغاء تواتر خلية محث للورم بالتالي تتداخل مع تكاثر الورم أو نجاته بأسلوب ‎٠‏ مختلف عن الأسلوب القياسي التقليدي من الأنظمة العلاجية للعناية ‎«(irinotecan (Jie)‏ أو عن طريق إرسال إشارة ‎Ladle‏ مناعية أو توصيل حمولة قادرة على قتل ‎WIA‏ تظهر ‎PTK7‏ على سبيل المثال؛ إن انخفاض نشاط خلية جذعية سرطانية بواسطة تعضيد 01167 يمكن أن يتضمن ببساطة حث ‎HLS‏ خلية في واجهة أنظمة العلاج الكيميائي الذي يمنع الخلايا المتكائرة» أو يحث تباين خلية حث ورم ‎(differentiation of the tumor initiating cell)‏ بحيث ‎Ye‏ يتم فقد قدرتها على ‎sale]‏ التجدد الذاتي (أي تكاتر غير محدود ‎(unlimited proliferation)‏ واستبقاء للفعالية المتعددة ‎(maintenance of multipotency)‏ بصورة بديلة؛ في تجسيدات
Yo ‏قوي‎ toxin ‏سامة للخلية على خلايا إظهار 01167 أو توصيل‎ T ‏مفضلة فإن استخدام خلايا‎ ‏انتقائيا.‎ TPC ‏مقترن مع جسم مضاد ضد 71167 يكون قادرا على التذوت؛ يمكن أن يتقل‎ ‏على العكس من تعاليم الفن السابق»؛ يوفر الاختراع الحالي مواد ضابطة 71167 مفيدة‎ ‏«1000)؛ وبصفة خاصة خلايا‎ initiating cells) ‏تنشئ الورم‎ WIA ‏بصفة خاصة في استهداف‎ © ‏مما يسهل معالجة؛ تناول أو منع الاضطرابات‎ <(tumor perpetuating cells) ‏تديم الورم‎ ‏تحديدا أكثرء كما هو مشار إليه سابقاء لقد وجد على‎ (neoplastic disorders) ‏المكوّنة للورم‎ ‏نحو مثير للدهشة أن التجمعات الفرعية لخلية الورم الخاصة التي تظهر 71167 ومن المحتمل‎ ‏أن تعدل التناسق الموضعي لإرسال إشارة مكون الشكل الهام لتجدد الخلية الجذعية السرطانية‎ 1167 ‏ثاتيا وبقاء الخلية على قيد الحياة. لهذاء في تجسيدات مفضلة؛ قد تستخدم مواد ضابطة‎ ٠ ‏لتقليل تكرار الخلية التي تنشئ الورم طبقا للتعاليم الحالية وبهذا تسهل معالجة أو تدبر أمراض‎ .(hyperproliferative diseases) ‏فرط الانقسام‎ ‏كلا‎ (TIC) (tumor initiating cell) ‏كما هو مستحدم هناء يضم مصطلح خلية تنشئ الورم‎ ‏وخلايا سلفية ورمية عالبة‎ (CSC ‏من خلايا تديم الورم (©17؛ أي خلايا جذعية سرطانية أو‎ )7450-0:1 ‏الانقسام (تسمى 17:08)؛ والتي تشتمل كلها وبشكل عام على تجمع فرعي (أي؛‎ Veo ‏لورم كتلي أو كتلة. لأغراض الوصف الحاضر؛ يكون مصطلحات الخلايا التي تديم الورم‎ ‏والخلايا الجذعية السرطانية أو الخلايا الجذعية الورمية متكافئين ويستخدمان بنفس المعنى هنا.‎ ‏في تمكنه التام من تلخيص تركيبة خلايا الورم‎ TProg ‏عن‎ TPC ‏يختلف‎ lia ‏على العكس من‎ ‏الموجودة داخل الورم والتي لها قدرة غير محددة على التجدد الذاتي كما يصوره الازدراع‎ ‏المتسلسل (ممرين أو أكثر خلال الفئران) لعدد قليل من الخلايا المعزولة. كما هو مناقش أدناه‎ ٠ ‏باستخدام علامات‎ (FACS) ‏بمزيد من التفصيل؛ فإن تصنيف الخلية المنشطة بالاستشعاع‎ > ‏سطح خلية ملائمة هو طريقة موثوقة لعزل التجمعات الفرعية لخلية عالية التخصيب (نقاء‎ ‏ويرجع ذلك على الأقل جزئيا إلى قدرتها على التمييز بين الخلايا المفردة وتكتلات‎ ))4 5 ‏الخلايا (أي المزدوجات؛ إلخ). باستخدام هذه التقنيات؛ اتضح أنه عند زرع عدد قليل من خلايا‎ ‏يمكنها أن‎ «(immunocompromised mice) ‏عالية النقاء في فئران ناقصة المناعة‎ TProg Yo ‏فإن الأورام‎ (TPC ‏بخلاف تجمعات فرعية منقاة‎ dla ‏تدعم نمو الورم في زرع أولي. على أية‎ ‏لا توضح تماما الورم الأصلي في التغاير الخلوي من النوع الشكلي وغير‎ TProg ‏التي يولدها‎
فعالة بوضوح عند إعادة بدء تولد الورم المتسلسل في الازدراعات اللاحقة. على النقيض من هذاء فإن التجمعات الفرعية ‎TPC‏ تعيد تشكيل التغاير الخلوي من جديد للأورام الأصلبة ويمكنها إنشاء الأورام بكفاءة عند ‎Lelie‏ تسلسليا وزرعها. لذلك؛ يدرك الماهرون في الفن أن الفرق المميز بين ‎TPC‏ وع117:08؛ على الرغم من أن كليهما يجسد ورما متولدا في ازدراعات ‎oo‏ أولية؛ هو القدرة الفريدة التي تخص ‎TPC‏ على تدعيم نمو ورم مغاير بشكل مستديم عند الازدراع المتسلسل بأعداد ‎ala‏ قليلة. إن الأبحاث الأخرى الشائعة التي تميز ‎TPC‏ تضم فحص بنية وفحص علامات سطح الخلية؛ النمط النسخي؛ واستجابة العقار برغم أن إظهار العلامة قد يتغير مع شروط المزرعة ومع ممر خط الخلية في المعمل.
تبعا لهذاء لأغراض الاختراع ‎Jal‏ يفضل أن تحدد الخلايا التي تديم الورم؛ مثل الخلايا ‎٠‏ الجذعية الطبيعية التي تدعم التسلسل الهرمي الخلوي في النسيج الطبيعي؛ بقدرتها على التجدد بشكل غير دقيق مع حفاظها على قدرتها على التباين متعدد الأنسال. لهذا تكون الخلايا التي تديم الورم قادرة على توليد كل من الذرية الورمية (أي الخلايا التي تتنشئ الورم: ‎TPC‏ ‎(TProg s‏ وانذرية غير الورمية (0776. كما هو ٠.متخدم‏ هناء تشير خلية غير ورمية ‎(NTG)‏ ‏إلى خلية ورم ناشئة من الخلايا التي تنشئ انورم؛ نتن ليس لها القدرة على التجدد الذاتي أو ‎٠‏ توليد ذريات متغايرة من خلايا الورم التي تشمل ورما. تكون خلايا ‎NTG‏ تجريبيا غير قادرة
على تشكيل أورام في الفئران على نحو تكاثري» حتى عند الازدراع في أعداد خلية زائدة. كما هو مشار ‎ca)‏ يصنف أيضا ‎TProg‏ كخلايا تنشئ ورم (أو ‎(TIC‏ بسبب قدرتها المحدودة على توليد أورام في الفثران. إن ‎TProg‏ هو نسل من ‎TPC‏ ويكون قادرا نموذجيا على إجراء عدد غير محدود من عمليات انقسام خلية غير متجددة ذاتيا. علاوة على هذاء؛ قد تنقسم ‎TProg WAY:‏ إضافيا إلى خلايا ورم سلفية مبكرة ‎(ETP)‏ وخلايا ورم سلفية متأخرة ‎(LTP)‏ قد تتميز كل واحدة منهما من خلال نوع شكلها (مثلا علامات سطح خلية) وقدراتها المختلفة على تلخيص الشكل البنائي لخلية الورم. على الرغم من هذه الاختلافات التقنية؛ يختلف كل من ‎LTP, ETP‏ وظيفيا عن ‎TPC‏ في أن لهما عموما قدرة أقل على ‎sale)‏ تشكيل الأورام تسلسليا عند زرعها بأعداد خلية قليلة ولا توضح نموذجيا تغاير الورم الأصلي. برغم الفروق السالفة؛ ‎Yo‏ اتضح أيضا أن التجمعات المتعددة من ‎TProg‏ يمكنها؛ في حالات نادرة؛ اكتساب قدرات التجدد الذاتي التي يرجع سببها غالبا إلى الخلايا الجذعية وتصبح ذاتها ‎TPC‏ (أو ©05). في أي حالة؛ قد تتمثل كل أنواع الخلايا التي تنشئ الورم في كتلة الورم النموذجية لمريض مفرد
فل
وتخضع للمعالجة مع المواد الضابطة كما هو معلن هنا. هذا بمعنى أن التركيبات المعلنة فعالة عموما في تقليل تكرار أو تغيير الحساسية الكيميائية لهذه الخلايا التي تنشئ الورم موجبة
7 بغض النظر عن التجسيد المعين أو الخليط المعين المتمتل في الورم. في سياق الاختراع الحالي؛ يكون ‎TPC‏ أكثر توليدا للورم؛ أكثر خمولا نسبيا وأكثر مقاومة ‎٠‏ كيميائيا عادة عن ‎JS) TProg‏ من ‎(LTP ETP‏ خلايا ‎NTG‏ والخلايا المشتقة غير ‎TPC‏ ‏التي ترشح الورم (مثلا الأرومات الليفية/ الألياف المتشابكة بين ‎(LDA‏ الخلايا البطانية والمكونة للدم) المشتملة على كتلة ورم. بإدراك أن العلاجات والأنظمة التقليدية صممت في أغلبها لإزالة تكتلات الأورام ومهاجمة الخلايا الانقسامية سريعاء من المحتمل أن ‎TPC‏ يكون أكثر مقاومة للعلاجات والأنظمة التقليدية عن ‎TProg‏ الاتقسامي الأسرع والتجمعات الخلوية ‎٠‏ الأخرى للورم الكتلي. علاوة على ما سبق؛ فإن ‎TPC‏ تظهر غالبا سمات مميزة أخرى تجعلها أكثر مقاومة كيميائيا تجاه العلاجات التقليدية؛ مثلا زيادة إظهار ناقلات المقاومة متعددة العقاقير؛ تعزيز آليات إصلاح ‎proteins s DNA‏ المضادة للموت المبرمج للخلايا. إن هذه ‎gal gad]‏ والتي تساهم كل واحدة منها في تحمل العقار بواسطة ‎(TPC‏ تشكل سببا رئيسيا لفل أنظمة المعانجة القياسية للأورام هدا نضمان الفائدة الممتدة لأغلب المرضى المصابين بتنسج ‎٠5‏ ورمي في مرحلة متقدمة؛ أي فشل الاستهداف الملائم والتخلص من هذه الخلايا التي تستمر
في دعم نمو الورم وتكرار حدوثه (أي ‎TPC‏ أو ‎(CSC‏
بخلاف العديد من علاجات الفن السابق المذكورة سالفاء يفضل أن تعمل التركيبات الجديدة من الاختراع الحالي على تقليل تكرار الخلايا التي تنشئ الورم عند إعطائها لكائن بغض النظر عن شكل المادة الضابطة المنتقاة أو هدفها المعين (مثلا مادة ‎di‏ جسم مضاد 21167 أو ‎٠‏ بنية التحام مركب ترابطي). حسب الذكر أعلاه؛ قد يقل تكرار الخلية التي تنشئ الورم نتيجة لحدوث (أ) إزالة؛ استنزاف؛ إكساب حساسية؛ إخماد أو تثبيط الخلايا التي تنشئ الورم؛ (ب) تحكم في نموء توسع أو عودة نشوء الخلايا التي تنشئ الورم؛ (ج) مقاطعة بدء؛ نموء بقاء أو انقسام الخلايا التي تنشئ الورم؛ أو بطريقة أخرى (د) إعاقة بقاء ‎WAY‏ المولدة للورم على قيد الحياة؛ ‎sale)‏ تولدها و/أو انتشارها. في بعض التجسيدات؛ يحدث انخفاض في تكرار الخلايا ‎vo‏ التي تنشئ الورم نتيجة لتغير مسار فسيولوجي واحد أو أكثر. إن تغير المسار؛ سواء بتقليل أو إزالة الخلايا التي تنشئ الورم أو بتعديل احتمالية حدوثها (مثلا تباين معزز؛ تمزق جراب) أو ‎Jail‏ بطريقة أخرى في قدرتها على التأثير على بيئة الورم أو الخلايا ‎«AY‏ يسمح بدوره
YA
‏بمعالجة أكثر فعالية للاضطرابات المصاحبة 71167 بتثبيط تولد الورم؛ استبقاء الورم و/أو‎ ‏انتشاره وعودة نشأته.‎ ‏من بين الطرق التي يمكن استخدامها لتقييم هذا الانتخفاض في تكرار الخلايا التي تنشئ‎ ‏الورم هناك تحليل التخفيف المحدد إما معمليا أو في الجسم الحي؛ يفضل أن يليه الإحصاء‎ ‏أو تقييم تكرار الحالات المحددة المعرفة مسبقا مثل القدرة‎ Poisson ‏باستخدام إحصائيات توزيع‎ © ‏هذه القدرة. عندما يكون تحليل التخفيف المحدد‎ Jie ‏على توليد أورام في الجسم الحي أو انعدام‎ ‏المذكور هو الطريقة المفضلة لحساب انخفاض تكرار الخلية التي تنشئ الورم؛ قد تستخدم أيضا‎ ‏طرق أخرى أقل في متطلباتها لتحديد القيم المرغوبة بكفاءة؛ ولو أنها أقل دقة إلى حد طفيف؛‎ ‏وتكون متوائمة بالكامل مع التعاليم هنا. لذلك؛ كما يدرك الماهرون في الفن أنه يمكن أيضا‎ ‏تحديد قيم انخفاض التكرار بوسيلة معروفة جيدا لقياس التدفق الخلوي أو وسيلة كيميائية‎ ٠
Sie ‏انظر‎ «SA ‏نسيجية مناعية. بالنسبة لجميع الطرق سالفة‎
Dylla et al. 2008, PMCID: PMC2413402 & Hoey et al. 2009, PMID: 19664991; ‏حيث تندمج كل واحدة هنا كمرجع بأكمله.‎ ‏يبرى الإمساء انمعملي لتكرار الخلية التي تنشئ الورم‎ oF ‏بالنسبة لتحديد التخفيف المددد؛‎ 0 ‏مجزأة أو غير مجزأة (مثلا من أورام معالجة وغير معالجة؛ على‎ Lf ‏بترسيب خلايا ورم آدمية‎ Ve ‏الترتيب) في شروط نمو معملية تعزز تكوين مستعمرة. في هذه الطريقة؛ يتم إحصاء الخلايا‎ ‏التي تشكل مستعمرة بواسطة العد البسيط وتمييز المستعمرات؛ أو بواسطة تحليل مكون من‎ ‏مثلا ترسيب خلايا ورم آدمية في الأطباق في تخفيفات متسلسلة وتسجل درجة كل عين إما‎ ‏أيام على الأقل من عملية الفرد. إن‎ ٠١ ‏كقيمة موجبة أو كقيمة سالبة لتشكيل مستعمرة بعد‎ ‏التجارب أو التحاليل المعملية للتخفيف المحدد؛ التي تكون أدق عموما بالنسبة لقدرتها على‎ ٠ ‏تحديد تكرار الخلية التي تنشئ الورم» تشمل ازدراع خلايا ورم آدمية؛ من الشروط المقارنة غير‎ ‏المعالجة أو المعالجة؛ مثلا في فئران ناقصة المناعة في تخفيفات متسلسلة وتسجل لاحقا درجة‎ ‏يوم من الزراعة.‎ Te ‏كل فأر إما كقيمة موجبة أو كقيمة سالبة لتشكيل الورم على الأقل بعد‎ ‏يفضل استنتاج قيم تكرار الخلية بواسطة تحليل تخفيف محدد في المعمل أو في الجسم الحي‎ ‏على التكرار المعروف للحالات الموجبة والسالبة؛ وبهذا‎ Poisson ‏بتطبيق إحصائيات توزيع‎ Yo ‏تشكيل مستعمرة أو ورم؛‎ Aad) ‏يتوفر تكرار للحالات محققا تعريف الحالة الموجبة؛ وفي هذه‎ ‏على الترتيب.‎
YA
‏يتعلق بالطرق الأخرى المتوافقة مع الاختراع الحالي والتي يمكن استخدامها‎ Lad ‏أما‎ ‏لحساب تكرار الخلية التي تنشئ الورم؛ تشتمل معظم الطرق الشائعة على تقنيات قياس تدفق‎ ‏خلوي قادرة على التقدير الكمي وإجراءات التلطيخ الكيميائي النسيجي المناعي. برغم أن هذه‎ ‏الإجراءات ليست دقيقة كتقنيات تحليل التخفيف المحدد الموصوفة أعلاه مباشرة؛ تكون هذه‎ ‏الإجراءات مكثفة معملية أقل بكثير وتقدم قيم معقولة في إطار زمني قصير نسبيا. لهذاء من‎ © ‏المدرك أن الماهرين في الفن يستخدمون طريقة تحديد نمط علامة سطح خلية لقياس التدفق‎ proteins Jays ‏الخلوي باستعمال واحد أو أكثر من الأجسام المضادة أو العوامل الكاشفة التي‎ ‏سطح الخلية المدركة في الفن المعروفة لتخصيب الخلايا التي تنشئ الورم (مثلا علامات‎ ‏من‎ TIC ‏متوائمة بشكل محتمل كما هو مذكور لاحقا في مثال 1 أدناه) وبهذا تقبس مستويات‎ ‏بإحصاء تكرار ©1710 في‎ call ‏عينات عديدة. في طريقة موائمة أخرى أيضاء؛ يقوم الماهرون في‎ ٠ ‏مكان التفاعل (مثلا في مقطع نسيج) بالقياس النسيجي المناعي الذي يستخدم واحدا أو أكثر‎ ‏سطح الخلية والتي يعتقد‎ proteins ‏من الأجسام المضادة أو العوامل الكاشفة التي يمكنها ربط‎ أنها تميز هذه الخلايا. ّ| ٍ باستخدام أي من الطرق المشار إليها ‎del‏ من الممكن عندئذ تقدير كمية انخفاض تكرار ‎TIC ٠‏ أو ‎TPC)‏ في ذلك) الذي توفره المواد الضابطة 71167 المعلنة (متضمنا تلك المقترنة مع عوامل سامة للخلايا) تبعا للتعاليم المدرجة هنا. في بعض الحالات؛ تقوم مركبات الاختراع الحالي بتقليل تكرار ‎TIC‏ (بعدة آليات مذكورة أعلاه؛ متضمنة الإزالة؛ التباين المحث؛ تمزيق الجراب؛ الإخماد؛ إلخ) بنسبة ‎Ye IY 715 7٠١‏ 770 أو أيضا 770. في تجسيدات ‎gyal‏ قد يتراوح انخفاض تكرار ‎TIC‏ في نطاق من ‎ge Jt‏ .قال ‎Jeo‏ 110 أو ‎Xo‏ 25050. في تجسيدات معينة؛ قد تعمل المركبات المعلنة على تقليل تكرار ‎TIC‏ بنسبة 716 ‎(JAW (Vo‏ عمال 10 أو أيضا 790 من المدرك بالطبع أن أي انخفاض في تكرار ‎TIC‏ ‏من المحتمل أن يؤدي إلى انخفاض مقابل في تولد الورم؛ الاستمرار» ‎sage‏ الحدوث وشدة التنشئة الورمية. (PTK7 Modulators) PTK7 ‏مواد ضابطة‎ IV ‏متضمنة مضادات‎ PTKT ‏في أي حالة؛ يتعلق الاختراع الحالي باستخدام مواد ضابطة‎ Yo ‏من‎ daly ‏لتشخيص؛ علاج؛ معالجة و/أو الوقاية من اضطرابات متنوعة تتضمن أي‎ PTKY ‏قد تستعمل المواد الضابطة المذكورة بمفردها أو متحدة مع‎ PTK7 ‏عدة أمراض خبيثة تصاحب‎ ve
تشكيلة كبيرة من المركبات المضادة للسرطان مثلا عوامل العلاج الكيماوي أو عوامل العلاج المناعي ‎Sli)‏ أجسام مضادة ‎(Ladle‏ أو مواد ضابطة للاستجابة البيولوجية. في تجسيدات أخرى مختارة؛ قد يستخدم اتحاد من ؟ أو أكثر من المواد الضابطة 21167 المنفصلة لتوفير
تأثيرات معززة ضد تنشئة الورم أو قد يستخدم لتصنيع أبنية متعددة الخصوصية. ° في تجسيدات معينة؛ تشتمل المواد الضابطة 71167 من الاختراع الحالي على ‎peptides «polynucleotides «oligonucleotides «nucleotides‏ أو ‎polypeptides‏ يفضسل أكثر أيضا أن تشتمل المواد الضابطة على 01167 قابل للذوبان ‎(sPTK7)‏ أو شكل؛ شكل ‎elite‏ مشتق أو جزء من ذلك متضمنا ‎Mie‏ بنيات التحام 01167 (مثلاء ‎PTK7-Fo‏ جزء يستهدف 01167 إلخ) أو مواد متحدة ‎PTK7‏ (مثلاء ‎(PTK7-PEG‏ عامل سام للخلايا ‎PTK7‏ ‎٠‏ «0ط 117 إلخ). من المدرك أيضا في تجسيدات أخرى أن المواد الضابطة 01167 تشمل أجسام مضادة أو أجزاء نشطة مناعيا أو مشتقات منها. في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة؛ تشتمل المواد الضابطة من الاختراع الحالي على أجسام مضادة معادلة أو مشتقات أو أجزاء منها. في تجسيدات ‎gyal‏ قد تشتمل المواد التساسطة 71167 على أجسام مضادة معادلة أو أجزاء منهاء في تجسيدات أخرى ‎Lia‏ قد نشتمل المواد الضابطة 11167 على أجسام مضادة ‎١‏ للاستتزاف أو أجزاء منها. علاوة على هذاء بالنسبة لبنيات الالتحام المذكورة سالفاء قد تتحد هذه المواد الضابطة للجسم المضاد؛ أو ترتّبط أو تتصل بشكل آخر مع عوامل منتقاة سامة للخلايا؛ 0175م مواد ضابطة للاستجابة البيولوجية ‎«biological response modifiers (BRMs)‏ إلخ لتوفير علاجات مناعية موجهة لها آليات تأثير متنوعة (واختياريا متعددة). كما ذكر أعلاه؛ قد تكون هذه الأجسام المضادة عبارة عن أجسام مضادة ‎pan-PTK7‏ وتتصل باثنين أو أكثر ‎٠‏ من أشكال مماثلة 21167 أو الأجسام المضادة الخاصة ‎Lelie‏ التي تتفاعل انتقائيا مع شكل مماثل فردي. في تجسيدات أخرى أيضا؛ قد تؤثر المواد الضابطة على المستوى الجيني وقد
تشمل مركبات كبنيات مضادة للإحساسء ‎emicro RNA «siRNA‏ إلخ.
من المدرك ‎Lilia)‏ أن المواد الضابطة 71167 المعلنة قد تستنزف؛ تخمد؛ تعادل؛ تزيل أو تثبط نمو انتشار أو بقاء خلايا الورم على قيد الحياة» بصفة خاصة ‎(TPC‏ و/أو تنشئة الورم ‎Yo‏ الملازم من خلال عدة ‎cull‏ متضمنة تعضيد أو معارضة المسارات المنتقاة أو إزالة الخلايا الخاصة المعتمدة على مثلا شكل المادة الضابطة ‎PTKT‏ أي حمولة ملازمة أو جرعة ملازمة أو طريقة توصيل ملازمة. تبعا لهذاء عندما تتعلق التجسيدات المفضلة المعلنة هنا باستنزاف؛
نط تثبيط أو إخماد التجمعات الفرعية الخاصة لخلية الورم مثلا الخلايا التي تديم ‎caged)‏ يجب التأكيد على أن هذه التجسيدات هي فقط توضيحية وغير محددة بأي شكل. بخلاف ‎clan‏ كما هو مذكور لاحقا في عناصر الحماية الملحقة؛ يتعلق الاختراع الحالي في نطاقه الواسع بمواد ضابطة 01167 واستخدامها في ‎calles‏ تدبر أو الوقاية من اضطرابات عديدة لفرط الانقسام © الذي يصاحب 01107 بغض النظر عن أي آلية خاصة أو تجمع مستهدف لخلية الورم. في نفس السياق؛ قد تشتمل التجسيدات المعلنة في الاختراع الحاضر على مضاد ‎PTK7‏ ‏واحد أو أكثر المصاحب إلى 21167. لهذا الغرضء من المدرك أن مضادات ‎PTK7‏ من الاختراع الحالي قد تشمل أي مركب ترابطي» ‎protein «peptide «polypeptide‏ التحام»؛ جسم مضاد أو جزء نشط مناعيا أو مشتق من ذلك يدرك؛ يتفاعل؛ ‎cag‏ يتحد؛ ينافس؛ يصاحب أو ‎٠‏ بطريقة ‎(gyal‏ يتفاعل بينيا مع ‎protein‏ 21167 أو جزء من ذلك ويزيل؛ ‎candy‏ يثبط» يعوق؛ يقيد أو يتحكم في نمو الخلايا التي تنشئ الورم أو خلايا نشوء الورم الأخرى متضمنة خلايا ورم كتلي أو خلايا ‎NTG‏ في تجسيدات مختارة؛ تشتمل المادة الضابطة 71167 على مضاد ‎PTK7‏ ‏كما هو مستخدم هناء يشير مسسطلح مضاد ‎(antagonist)‏ إلى جزيء قادر على معادلة؛ ‎٠‏ إعاقة. تثبيط» إبطال؛ تقليل أو التدخل في أنشطة ‎protein‏ خاص أو محدد؛ متضمنا ربط المستقبلات مع مركبات ترابطية أو ‎Lin enzymes Cole ld‏ مع مواد خاضعة. على نحو أكثر عمومية؛ تشتمل مضادات الاختراع على أجسام مضادة وأجزاء ربط مولد مضاد أو مشتقات من ذلنك؛ ‎«glycolipids «glycopeptides «glycoproteins «peptides «proteins‏ ‎«oligosaccharides 001758601811065‏ أحماض نووية؛ بنيات مضادة للإحساس؟؛ ‎SIRNA‏ ‎miRNA ٠٠‏ جزيئات بيولوجية عضوية؛ محاكيات ‎peptide‏ عوامل فارماكولوجية؛ ونواتج أيض منهاء ترتيبات نسخية وتتحكم في الترجمة؛ إلخ. قد تتضمن أيضا المضادات مثبطات جزيء صغيرء ‎proteins‏ التحام؛ جزيئات مستقبل ومشتقات ترتبط بصفة خاصة مع ‎protein‏ وبهذا تحجز ارتباطها مع المادة الخاضعة المستهدفة الخاصة ‎Ley‏ الأشكال المتباينة لمضاد من ‎«protein‏ جزيثات مضادة للإحساس موجهة نحو ‎(RNA aptamers protein‏ ومضاد ‎ribozymes +٠‏ ضد ‎.protein‏ ‏كما هو مستخدم هنا ومطبق على ؟ أو أكثر منه الجزيئات أو المركبات؛ يدل مصطلح يدرك ‎(recognizes)‏ أو يصاحب ‎(associates)‏ على تفاعل الجزيئات؛ ارتباطهاء ربطها
YY
‏الخاص؛ اتحادهاء؛ تفاعلها البيني؛ اتصالهاء توصيلها؛ توحيدهاء؛ اندماجها؛ دمجها أو إلحاقهاء‎ ‏تساهميا أو بشكل غير تساهمي؛ حيث يؤثر أحد الجزيئات على الجزيء الآخر.‎ 1167 ‏إضافة لهذاء كما هو مبين في الأمثلة هناء قد تتفاعل بعض المواد الضابطة من‎ ‏الآدمي؛ في بعض الحالات؛ تفاعلا متقاطعا مع 71167 من فصائل أخرى بخلاف الآدمي‎ ‏(مثلا فأري). في حالات أخرى؛ قد تكون المواد الضابطة النموذجية محددة لواحد أو أكثر من‎ ٠ ‏من‎ 01167 orthologs ‏الأشكال المتماثلة من 01167 الآدمي ولا تظهر تفاعلها المتقاطع مع‎ ‏على أجسام مضادة‎ clin ‏فصائل أخرى. بالطبع قد تشتمل هذه التجسيدات؛ مقترنة مع التعاليم‎ ‏تصاحب ؟ أو أكثر من الأشكال المماقلة من فصيلة واحدة أو أجسام مضاد‎ 0801-7 ‏تصاحب فقط شكل ممائل فردي.‎ ‎١‏ في أي حالة؛ وكما هو مشروح أدناه بمزيد من التفصيل»؛ يعرف الماهرون في الفن أن المواد الضابطة المعلنة قد تستخدم في شكل مقترن أو غير مقترن. هذا بمعنى أن المادة الضابطة قد يصاحبها أو يقترن معها (مثلا تساهميا أو بشكل غير تساهمي) مركبات نشطة دوائياء مواد ضابطة للاستجابة البيولوجية؛ عوامل مضادة للسرطان؛ عوامل سامة للخلايا أو مُخمدة للخلية؛ أجزاء تشخيصية أو مراد ضابعلة موائمة حيويا. في هذا الخصوص؛ من ‎proteins «proteins «polypeptides «peptides ‏المفهوم أن هذه المواد المقترنة قد تشمل‎ ١٠ ‏التحام؛ جزيئات حمض نووي؛ جزيئات صغيرة؛ عوامل محاكية؛ عقاقير مخلقة؛ جزيئات غير‎ ‏عضوية؛ جزيئات عضوية ونظائر مشعة. علاوة على ما سبق؛ وكما هو مشار إليه هنا؛ قد‎ ‏تتصل المادة المقترنة المختارة تساهميا أو بشكل غير تساهمي مع مادة ضابطة 71167 بنسب‎ ‏جزيئية جرامية متنوعة معتمدة على الأقل جزئيا على الطريقة المستخدمة لإحداث الاقتران.‎ ‎(Antibodies) ‏الأجسام المضادة‎ . ٠ dale ‏نظرة‎ a ‏كما هو مشار سابقا إلى التجسيدات المفضلة تحديدا من الاختراع الحالي تشتمل على المواد الضابطة 01167 في شكل أجسام مضادة التي ترتبط بشكل تفاضلي مع واحد أو أكثر من أشكال مماثلة من ‎PTKT‏ يستخدم مصطلح الجسم المضاد ‎(antibody)‏ على نطاقه ‎١ 5‏ لأوسع ويشمل تحديدا أجسام مضادة مخلقة ‎«(synthetic antibodies)‏ أجسام مضادة أحادية النسخ ‎«(monoclonal antibodies)‏ أجسام مضادة قليلة أو عديدة النسخ ‎(oligoclonal or‏ ‎«polyclonal antibodies)‏ أجسام مضادة متعددة النسخ ‎¢«(multiclonal antibodies)‏ أجسام vy
مضادة مختزلة تخليقيا ‎«(recombinantly produced antibodies)‏ أجسام بينية ‎«(intrabodies)‏ ‏أجسام مضادة متعددة الخصوصية ‎«(multispecific antibodies)‏ أجسام مضادة ثثائية الخصوصية ‎(bispecific antibodies)‏ أجسام مضادة أحادية التكافؤ ‎(monovalent‏ ‎cantibodies)‏ أجسام مضادة متعددة التكافؤ ‎((multivalent antibodies)‏ أجسام مضادة آدمية ‎«(human antibodies) ©‏ أجسام مضادة مكتسبة السمة الأدمية ‎«(humanized antibodies)‏ أجسام مضادة هجينة ‎(chimeric antibodies)‏ أجسام مضادة مطعمة مع ‎(CDR‏ أجسام مضادة أصبحت بدائية؛ أجزاء ‎Fab‏ أجزاء ‎FyvFes F(ab")‏ فردية السلسلة ‎Fvs «(scFvFc)‏ فردية السلسلة (801)؛ أجسام مضادة ضد النمط الذاتي (مضاد ‎(1d‏ وأي أجزاء أخرى للجسم المضاد النشطة مناعيا طالما أنها تظهر النشاط البيولوجي المرغوب (أي ملازمة أو ربط ‎٠‏ 01167 مفضل أو محدد مناعيا). بالمعنى الشامل؛ تتضمن الأجسام المضادة من الاختراع الحالي جزيئات ‎globulin‏ مناعي وأجزاء نشطة مناعيا من جزيئات ‎globulin‏ المناعي» أي جزيئات تحتوي على موقع ربط مولد مضاد؛ حيث قد تلتحم هذه الأجزاء أو لا تلتحم مع مجال سيطرة ‎al‏ لأجل ‎otal globulin‏ متضمنة بدون الاقتصار على منطقة ‎Fe‏ أو جزءٍ منها. علاوة على هذاء كما تحدد هنا ببفصيل أكثر. يشتمل مصطلح الجسم المضاد والأجسام ‎٠‏ المضادة تحديدا أشكال متباينة ‎Fe‏ كما وصفت أدناه؛ متضمنة أجسام مضادة كاملة الطول والتحامات ‎Fo‏ متباينة مشتملة على مناطق ‎Fe‏ أو أجزاء من ذلك؛ مشتملة اختياريا على تعديل
متخلف حمض أميني واحد على الأقل وتلتحم مع جزء نشط مناعيا من ‎globulin‏ المناعي. كما هو مشروح أدناه بتفصيل أكثر؛ فإن المصطلحات العامة جسم مضاد ‎(antibody)‏ أو ‎globulin‏ مناعي ‎(immunoglobulin)‏ يشتمل على © فئات مميزة من الجسم المضاد ألتي © يمكن تمييزها على نحو كيميائي بيولوجي؛ وبناء على ترتيب حمض أميني من مجال السيطرة الثابت من سلاسلها الثقيلة؛ يمكن تعيين صنفها الملائم بسهولة. لهذه الأسباب المرجعية؛ يطلق على الفئات الرئيسية من الأجسام المضادة السليمة مصطلحات ذعل ‎IgG (IgE gD‏ ‎IgM‏ الآدميين؛ قد تقسم ‎Lilia)‏ فئة 186 وع1 إلى فئات فرعية معرفة (أنواع متماثلة)؛ أي 01ع1» 1802 1803 1804 ‎<IgAl‏ و 82ع]1 بناء على البناء والخواص المعينة البيولوجية ‎Yeo‏ الكيميائية. من المدرك أن الأنواع المتمائلة 180 في الآدميين تتم تسميتها على حسب وفرتها
في المصل حيث يكون 1901 الأكثر توافرا.
Ye (IeMs IgG IgE «IgD «IgA ‏عندما تدخل كل الفئات الخمس للأجسام المضادة (أي‎ ‏وكذلك أشكالها‎ ((IgA2 ‏و‎ dgAl 1204 1803 1802 «IgGl ‏وكل الأنواع المتمائلة (أي؛‎ ‏من‎ IgG ‏ضمن نطاق الاختراع الحالي؛ توصف تجسيدات مفضلة مشتملة على فئة‎ dull ‏مناعي ببعض من التفصيل بغرض التوضيح فقط. يفهم أن هذا الشرح؛ على أية‎ globulin ‏حال؛ توضيح فقط للتركيبات والطرق التمثيلية لممارسة الاختراع الحالي ولا تقيد بأي شكل‎ ٠ ‏نطاق الاختراع أو عناصر الحماية الملحقة به.‎ polypeptide duds ‏من‎ ١ ‏الآدمي على‎ IgG ‏المناعية‎ globulins ‏في هذا الصدد؛ تشتمل‎ ‏دالتون؛ و7 من السلاسل الثقيلة المتطابقة ذات‎ 7700٠0 ‏الخفيفة المتطابقة ذات الوزن الجزيئي‎ ‏معتمدة على النوع المتمائل. تظهر مجالات السيطرة الثابتة‎ Vous -7080٠0 ‏الوزن الجزيئي‎ ‏ثيلة السلسلة التي تقابل فئات مختلفة من الأجسام المضادة بالأحرف اليونانية غير الاستهلالية‎ ٠ ‏على الترتيب. يمكن تعيين السلاسل الخفيفة من الأجسام المضادة‎ apy ey ce <8 ca ‏المقابلة‎ ‎lambda (1) 5 kappa )© ‏من أي فصيلة فقارية في أحد النوعين المميزين بوضوح؛ يسميان‎ ‏على أساس ترتيبات حمض أميني من مجالات السيطرة الثابتة التابعة لها. يعرف الماهرون في‎ globulins ‏الأمعماد المعررفة من الفئات المختلفة من‎ AEN ‏الفن.بناءات الوحدة الفرعية والهيئات‎ ‏المناعية.‎ ١٠ ‏حيث إن السلاسل الخفيفة تضم‎ Y ‏في هيئة‎ disulfide ‏تتصل السلاسل الأربع بروابط‎ ‏السلاسل الثقيلة بدءا من فم 17 مستمرة حتى المنطقة المتغيرة وصولا إلى الأطراف المزدوجة‎ ‏تساهمية واحدة بينما‎ disulfide ‏من 7. تتصل كل سلسلة خفيفة مع سلسلة ثقيلة بواسطة رابطة‎ ‏في منطقة المفصلة توصل السلاسل الثقيلة. إن السلاسل الثقيلة والخفيفة‎ disulfide Lika) ‏بين السلاسل مباعد بينها بانتظام والتي يتباين عددها بناء‎ disulfide ‏الخاصة لها أيضا جسور‎ Yo .180 ‏على النوع المتماتل من‎ ‏يليه عدد من‎ (Vig) ‏تحتوي كل سلسلة ثقيلة عند أحد أطرافها على مجال سيطرة متغير‎ ‏مجالات السيطرة الثابتة. يكون لكل سلسلة خفيفة مجال سيطرة متغير (:177) عند أحد أطرافها‎ ‏ومجال سيطرة ثابت عند طرفها الآخر؛ يتحاذى مجال السيطرة الثابت من السلسلة الخفيفة مع‎ ‏مجال السيطرة الثابت الأول من السلسلة الثقيلة؛ ويتحاذى مجال السيطرة المتغير للسلسلة‎ Yo ‏الخفيفة مع مجال السيطرة المتغير من السلسلة الثقيلة. في هذا الخصسوص؛ من المدرك أن‎ ‏تحدد إدراك‎ (Vi) ‏والثقيلة‎ (Vi) ‏مجالات السيطرة المتغيرة لأقسام كل من السلسلة الخفيفة‎ yo ‏وخصوصية مولد المضاد. على النقيض من هذاء فإن مجالات السيطرة الثابتة من السلسلة‎ ‏أو 0,3) تضفي خواص بيولوجية هامة وتنظمهاء‎ 0,2 (Cul) ‏والسلسلة الثقيلة‎ (Cy) ‏الخفيفة‎ ‏الحركة عبر المشيمية؛ نصف عمر الدورة الدموية؛ ارتباط مكمل؛ إلخ. عادة يزيد‎ LEY) Jie ‏ترقيم مجالات سيطرة المنطقة الثابتة كلما أصبحت بعيدة أكثر عن موقع ربط مولد المضاد أو‎ ‏من الجسم المضاد على‎ amino SN ‏الجسم المضاد. لهذا يشتمل الطرف‎ (amino ‏الطرف‎ © ‏على المنطقة الثابتة. لذلك؛ تشتمل مجالات‎ carboxy ‏المنطقة المتغيرة ويشتمل الطرف © أو‎ ‏من السلسلة الثقيلة والخفيفة؛ على التوالي.‎ carboxy ‏فعليا على الطرف‎ © Cid ‏سيطرة‎ ‏في الواقع إلى أن أقسام معينة من مجالات السيطرة‎ (variable) ‏يشير مصطلح متغيرة‎ ‏المناعية وتقوم هذه البقع الساخنة بتحديد‎ globulins ‏المتغيرة تختلف بشدة في ترتيبها ما بين‎ ‏سمات الارتباط والخصوصية إلى حد كبير لجسم مضاد خاص. إن أماكن فرط التغير تظهر‎ ٠ ‏مقاطع؛ معروفة بمناطق تحديد تكميلية (0015)؛ في كل من مجالات السيطرة‎ ١ ‏ذاتها في‎ ‏على‎ (FRs) ‏المتغيرة للسلسلة الخفيفة والثقيلة؛ على التوالي. يطلق مسمى مناطق الإطار‎ ‏تحديدا‎ (CDRs ‏السبطرة المتغيرة التي تخصر‎ cies ‏الأقسام التي تمت حمايتها أكثر في‎ ‏الموجودة على‎ CDRs 76 ‏طبيعية الوجود؛ تكون‎ monomeric IgG ‏أكثر ؛ في | لأجسام المضادة‎ ‏كل ذراع من الجسم المضاد هي ترتيبات قصيرة غير متواصلة من أحماض أمينية الموضوعة‎ Ve ‏بشكل خاص لتشكيل مكان ربط مولد المضاد لأن الجسم المضاد يفترض أن هيئته ثلاثية‎ ‏الأبعاد في بيئة مائية.‎ ‏إن مناطق الإطار التي تشمل بقية مجالات السيطرة المتغيرة الثقيلة والخفيفة توضح تباين‎ ‏فإن مناطق الإطار تتخذ إلى حد‎ das ‏أقل بين الجزيئات في ترتيب حمض أميني. بخلاف‎ ‏توصل؛ وفي بعض الحالات تشكل‎ lila ‏على تشكيل‎ CDRs ‏كبير هيئة صفحة م وتعمل‎ ٠ ‏لذلك؛ تقوم مناطق الإطار هذه بتشكيل دعامة توفر تموضع لأجل‎ Lf ‏جزءا من؛ بناء الصفحة‎ ‏في الاتجاه الصحيح بواسطة سلسلة بينية؛ سلاسل بينية غير تساهمية. إن مكان‎ CDRs 7
Ase ‏على‎ epitope ‏المتموضعة يحدد السطح الذي يكمل‎ CDRs ‏ربط مولد المضاد الذي تشكله‎ ‏المضاد النشط مناعيا. إن هذا السطح المكمل يعزز الارتباط غير التساهمي للجسم المضاد مع‎ ‏يمكن أن يحدده‎ CDRs ‏مولد مضاد نشاط مناعيا. من المدرك أن موضع وتركيبة‎ epitope TO ‏بسهولة الماهرون في الفن باستخدام التعريفات المتوفرة هنا.‎
كما هو مبين أدناه بمزيد من التفصيل؛ قد يخلق كل أو جزء من المناطق المتغيرة السلسلة الثقيلة والخفيفة أو يعالج هندسيا باستخدام تقنيات إظهار وتخليق قياسية لإنتاج أجسام مضادة فعالة. هذا بمعنى أن المنطقة المتغيرة السلسلة الثقيلة والخفيفة من جسم مضاد أول (أو أي قسم منها) قد تخلط وتتناسق مع أي قسم منتقى من المنطقة المتغيرة السلسلة الثقيلة أو الخفيفة © .من جسم مضاد ثان. في أحد التجسيدات على سبيل المثال؛ قد تقترن المنطقة المتغيرة الكاملة للسلسلة الخفيفة المشتملة على ؟ ‎CDRs‏ خفيفة السلسلة من جسم مضاد أول مع المنطقة المتغيرة الكاملة للسلسلة الثقيلة المشتملة على © ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة من جسم مضاد ثان لإنتاج جسم مضاد تشغيلي. علاوة على ‎daa‏ في تجسيدات ‎«(gyal‏ قد تختلط ‎CDRs‏ الفردية للسلسلة الثقيلة والخفيفة المشتقة من أجسام مضادة متنوعة وتتناسق لإنتاج الجسم المضاد ‎٠‏ المرغوب الذي له سمات مميزة ‎tie‏ لذلك؛ قد يشتمل جسم مضاد تمثيلي على ¥ ‎CDRs‏ ‏خفيفة السلسلة من جسم مضاد أول؛ ؟ من ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة مشتقة من جسم مضاد ثان
‎ALE CDR‏ السلسلة ثالثة من جسم مضاد ثالث. ٍ: بشكل أكثر تحديدا؛ في سياق الاختراع الحالي» سوف يقدر أن أي من ‎ALE CDRs‏ . وخفيفة السلسلة المبينة المشتقة من ترتببات حمص أميني منطقة متغيرة فأرية المذكورة في ‎٠‏ شكل ‎(D1‏ أو شكل ‎(OT‏ قد يعاد ترتيبها بهذه الطريقة لتوفير أجسام مضادة مثلى ضد ‎PTK7‏ ‏(مثلا مضاد ‎(hPTK7‏ طبقا للتعاليم الحاضرة. أي أنه يمكن دمج واحدة أو أكثر من ‎CDRs‏ ‏المشتقة من ترتيبات حمض أميني منطقة متغيرة سلسلة خفيفة المجاورة المذكورة في شكل ‎)(١‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎10-7١‏ الأعداد الزوجية) أو ترتيبات حمض أميني منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة المجاورة المذكورة في شكل +7(ب) (تعريف الترتيب رقم: ‎»11-7١‏ الأعداد الفردية) ‎٠‏ في مادة ضابطة ‎PTKT‏ وفي تجسيدات مفضلة تحديداء تدمج في ‎CDR‏ مرقعة أو جسم ‎alias‏ مكتسب السمة الآدمية يصاحب شكل مماثل 711627 واحد أو أكثر مصاحبة خاصة مناعيا. إن أمتلة على ترتيبات حمض أميني منطقة متغيرة سلسلة خفيفة (تعريف الترتيب رقم: ‎TAY‏ الأعداد الزوجية) وثقيلة (تعريف الترتيب رقم: 19-77 الأعداد الفردية) لهذه المواد الضابطة المكتسبة السمة الآدمية يتم ذكرها أيضا في الأشكال ١(أ)‏ و71(ب). إضافة لذلك؛ ‎YO‏ تصور ترتيبات حمض أميني الجديدة ‎YY‏ فأر و؛ مواد ضابطة تمثيلية مكتسبة السمة الآدمية طبقا للاختراع الحالي. علاوة على ذلك؛ فإن ترتيبات حمض نووي المقابلة لكل ‎VV‏ مادة ضابطة فأرية تمثيلية و ؛ مواد ضابطة مكتسبة السمة الآدمية المذكورة في الأشكال ‎(N71‏ vv “VY ‏و7(ب) توجد في قائمة الترتيب المرفقة مع التطبيق الحالي (تعريف الترتيب أرقام:‎ (1A ‏في أي حالة؛ قد تحدد أرقام المتخلف لمناطق التحديد التكميلية كما هو في‎
Kabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information
Service, Springfield, Va.), ° ‏في‎ (CDR3) 17-44 4 (CDR2) 01-5٠. ((CDRI) ‏على نحو محدد؛ المتخلفات 4 4-7 ؟‎ ٠١ Y=904(CDR2) ١-٠. (CDRI) Yo-V) yal lll cond ‏مجال السيطرة المتغير‎ ‏تتباين بشكل كبير من‎ CDRs ‏في مجال السيطرة المتغير ثقيل السلسلة. يلاحظ أن‎ (CDR3) ‏جسم مضاد لأخر (وبالتعريف لن تظهر تمائلها مع ترتيبات الإجماع 168084). إن الاصطفاف‎ ‏إقحام متخلفات مباعدة في نظام الترقيم؛ المراد‎ sale ‏الأقصسى لمتخلفات الإطار يتطلب‎ ٠ ‏قد يختلف تعريف متخلفات فردية معينة عند أي رقم‎ (id ‏إضافة‎ Fy ‏استخدامها لمنطقة‎ ‏أو الفروق بين‎ allelic ‏معين من سلسلة جسم مضاد لسلسلة أخرى بسبب التباعد‎ Kabat ‏لمكان‎ ‏الفصائل. انظر أيضا‎
Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342, pp. 877- 883 (1989) and by MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996) Vo ‏أو مجموعات فرعية من متخلفات حمض أميني عند المقارنة‎ aS ‏حيث تتضمن التعريفات‎ ‏مقابل بعضهما البعض. إن كلا من المراجع سالفة الذكر مندمجة هنا بالإشارة الكاملة وإن‎ ‏حسب التحديد بكل من المراجع المذكورة‎ CDRs ‏متخلفات حمض أميني التي تشتمل على‎ ‏أعلاه مذكورة للمقارنة.‎
CDR ‏تعريفات‎ ً vaca’ | choi | ‏اسم‎
YA
‏ورفاقه؛ أعلاه‎ Kabat ‏يتبع ترقيم المتخلف تسمية‎ ' ‏ورفاقه؛ أعلاه‎ Chothia ‏يتبع ترقيم المتخلف تسمية‎ 2 ‏ورفاقه؛ أعلاه‎ MacCallum ‏يتبع ترقيم المتخلف تسمية‎ ?
CDRs ‏كما هو مناقش يمكن للماهر في الفن أن يعين؛ يحدد؛ يستمد /أو ويعد بسهولة‎ ‏وآخرون بالنسبة‎ MacCallum ‏وآخرون أو‎ Chothis ‏وآخرون‎ Kabat ‏حسب التحديد بواسطة‎ © ‏لكل ترتيب سلسلة ثقيلة وخفيفة خاص مذكور في شكل ؟١ل) أو 7(ب). طبقا لذلك؛ فإن كل‎ ‏المحددة بكل تلك التسمية توجد‎ CDRs ‏لكائن والأجسام المضادة المشتملة على‎ CDRs ‏من‎ ‏بوضوح في نطاق الاختراع الحالي. على نطاق أكبر يتضمن المصطلح متخلف‎ ‏حسب التحديد باستخدام أي‎ CDR ‏حمض أميني منطقة متغيرة على أحماض أمينية في‎ CDR ‏طريقة تعتمد على ترثيب أو بناء كما هو مذكور أعلاه.‎ ٠ ‏منطقة متغيرة‎ (FR) ‏حسب الاستخدام هنا يشير المصطلح متخلفات حمض أميني إطار‎ ‏إن المصطلح منطقة إطار أو منطقة‎ Ig ‏إلى تلك أحماض أمينية في منطقة الإطار من سلسلة‎ ‏بتضمن متخلفات حمض أميني تشكل جزءا من المنطقة المتغيرة؛‎ (la ‏خسب الاستخدام‎ FR
OL ‏لذلك؛‎ (CDRs ‏لمناطق‎ Kabat ‏باستخدام تعريف‎ Sis) CDRs ‏لكنها ليست جزء من‎ ‏حمض أميني في الطول‎ ١7١-٠٠١ ‏إطار منطقة متغيرة هو ترتيب غير متجاور بين حوالي‎ ١٠
CDRs ‏لكنه يتضمن فقط تلك أحماض أمينية خارج‎ ‏حسب التحديد بواسطة‎ CDRs ‏بالنسبة للمثال الخاص لمنطقة متغيرة سلسلة ثقيلة ولمناطق‎ ‏تطابق مجال السيطرة للمنطقة المتغيرة المشتملة على‎ ١ ‏ورفاقه؛ فإن منطقة الإطار‎ Kabat ‏منطقة الإطار ¥ تطابق مجال السيطرة من المنطقة المتغيرة المشتملة‎ ¢F .-١ ‏أحماض أمينية‎ ‏على أحماض أمينية 69-71 منطقة الإطار ¥ تطابق مجال السيطرة من المنطقة المتغيرة‎ ‏المشتملة على أحماض أمينية 46-17( ومنطقة الإطار ؛ تطابق مجال السيطرة من المنطقة‎ ‏حتى نهاية المنطقة المتغيرة. إن مناطق الإطار‎ ٠١" ‏المتغيرة المشتملة على أحماض أمينية‎ ‏منطقة متغيرة سلسلة خفيفة.‎ CDRs ‏للسلسلة الخفيفة منفصلة بدرجة مشابهة بواسطة كل من‎ ‏ورفاقه تكون‎ McCallum ‏ورفاقه أو‎ Chothia ‏بواسطة‎ CDRs ‏بصورة مشابهة؛ باستخدام تعريف‎ ‏الخاصة حسب الوصف أعلاه.‎ CDR ‏حدود منطقة الإطار منفصلة بنهايات‎ Yo ‏مع وضع الاعتبارات البنائية سالفة الذكر في الحسبان» فإن المهرة في الفن سيدركون أن‎ ‏لأجسام المضادة من الاختراع الحالي قد تشمل أي واحد من عدد من التجسيدات الوظيفية. في‎
Ya ‏(حسب تحديد‎ Lelie ‏هذا الجانب؛ قد تشمل الأجسام المضادة موائمة أي جسم مضاد نشط‎ ‏المصطلح هنا) يوفر الاستجابة الفسيولوجية المطلوبة في كائن. برغم أن أيا من الأجسام‎ ‏المضادة المعلنة يمكن استخدامه في اتحاد مع التعاليم الحالية؛ فإن تجسيدات خاصة للاختراع‎ ‏سوف تشمل أجسام مضادة هجينة؛ مكتسبة السمة الآدمية أو آدمية أحادية النسخ أو أجزاء‎ ‏منها نشطة مناعيا. تشمل تجسيدات أخرى أيضاء على سبيل المثال؛ بنيات متعددة الوحدة‎ © ‏وأجسام مضادة متحدة أو متغيرة بالنسبة إلى‎ Fe ‏البنائية متماثلة أو مغايرة» أشكال متباينة‎ ‏وأن أجسام‎ WIS ‏لابد من إدراك أن تلك الهيئات غير حصرية‎ «A ‏إضافة‎ glycosylation ‏مضادة منفردة موائمة قد تشمل واحد أو أكثر من الجوانب الوظيفية المعلنة هنا. على سبيل‎ ‏قد يشمل جسم مضاد موائم جسم ثنائي سلسلة وحيدة مع مناطق متغيرة مكتسبة السمة‎ (Jal ‏تغير نمط‎ Fo ‏الآدمية أو جسم مضاد 1903 آدمي كليا كامل الطول مع تعديلات‎ ٠ ‏النصف في المصل. هناك تجسيدات تمثيلية أخرى ظاهرة تماما‎ jee anal glycosylation ‏للمهرة في الفن ويمكن تمييزها بسهولة على أنها في نطاق الاختراع.‎ (Antibody generation) ‏توليد جسم مضاد‎ b ‏هدك. حيوانات عائلة مختلفة؛ تتضمن أرانب؛‎ AB) ‏كما هو معروف جيداء ومبين في‎ ‏قوارض؛ إلخ؛ يمكن تلقيحها واستخدامها لتوفير أجسام مضادة طبقا للتعاليم هنا. تتضمن‎ coli ١ ‏مواد مساعدة معروفة في الفن يمكن استخدامها لزيادة الاستجابة المناعية؛ اعتمادا على النوع‎
Jie ‏(كاملة وغير كاملة)؛ هلامات معدنية‎ Freund ‏الملقح؛ لكن بدون تحديد؛ مادة مساعدة‎ «pluronic ~~ polyols «lysolecithin ‏مثل‎ bala ww ‏مواد نشطة‎ caluminum ~~ hydroxide «dinitrophenol «keyhole limpet hemocyanins ‏مستحلبات زيتء‎ (peptides ¢<polyanions (bacille ~~ Calmette-Guerin) BCG ‏ومواد مساعدة أدمية مفيدة بدرجة ممكنة مقل‎ ٠٠ ‏سنتعاعةطعتنوه». إن تلك المواد المساعدة يمكن أن تحمي مولد المضاد من‎ parvum ‏التشتت السريع بفصله في راسب موضعي؛ أو قد تحتوي على مواد تحاكي العائل لإفراز عوامل‎ ‏جاذبة كيميائيا لخلايا بلعمة كبيرة ومكونات أخرى لجهاز المناعة. بصورة مفضلة؛ عند إعطاء‎ ‏فإن برنامج التحصين سوف يشمل انين أو أكثر من مرات إعطاء‎ polypeptide ‎¢polypeptide Yo‏ متباعدة على مدار عدة أسابيع. بعد تحصين حيوان مع مولد مناعة 71167 (مثلاء ‎SPTK7‏ قابل للذوبان أو ‎(SPTK7‏ يشمل أشكال ممائلة منتقاة و/أو 5م أو خلايا حية أو مستحضرات خلية تظهر ‎protein‏
المطلوب؛ ويمكن الحصول على أجسام مضادة و/أو خلايا تنتج جسم مضاد من الحيوان باستخدام تقنيات يدركها الفن. في بعض التجسيدات؛ ينتج مصل يحتوي على جسم مضاد عديد النسخ مضاد 01167 باستنزاف أو قتل الحيوان. يمكن استخدام المصل لأغراض بحثية في الشكل الناتج من الحيوان أو؛ في طريقة بديلة؛ فإن الأجسام المضادة ضد ‎PTK7‏ قد تكون © نقية جزئيا أو ‎WS‏ لتوفير أجزاء ‎globulin‏ مناعي أو مستحضرات جسم مضاد متماثلة. ‎C‏ أجسام مضادة أحادية النسخ ‎(Monoclonal antibodies)‏ برغم أن الأجسام المضادة عديدة النسخ يمكن استخدامها في اتحاد مع جوانب خاصة للاختراع الحالي؛ فإن التجسيدات المفضلة تشمل استخدام أجسام مضادة أحادية النسخ نشطة ‎(reactive monoclonal antibodies)‏ مع 01167. حسب الاستخدام هناء يشير المصطلح جسم ‎٠‏ مضاد أحادي النسخ إلى جسم مضاد ناتج من مجموعة من أجسام مضادة متماثلة جوهريا؛ أي؛ أن الأجسام المضادة المنفردة المشتملة على المجموعة متماثلة باستثناء وجود طفرات : ممكنة؛ ‎Oia‏ طفرات طبيعية الحدوث؛ قد تكون موجودة بكميات ثانوية. لذلك؛ فإن الكلمة الأولية أحادي النسخ تدل على سمة للجسم المضاد كونه ليس خليطا من أجسام مضادة ‎١‏ منفصلة وقد تستخدم في أتحاد مع أي نوع جسم مضاد. في تجسيدات خاصة؛ فإن تلك ‎I Ye‏ لأجسام المضادة أحادية النسخ تتضمن جسم مضاد يشمل ترتيب ‎polypeptide‏ يرتبط أو يتلازم مع ‎(PTK7‏ حيث ينتج ترتيب ‎polypeptide‏ الرابط-77167 بعملية تتضمن انتقاء ترتيب ‎polypeptide‏ يربط هدف واحد من جمع من ترتيبات ‎-polypeptide‏ ‏في تجسيدات مفضلة؛ تحضر خطوط خلية تنتج جسم مضاد من خلايا معزولة من الحيوان المحصن ‎(immunized animal)‏ بعد التحصين؛ يقتل الحيوان وتصبح خلايا العقد ‎٠‏ الليمفاوية وخلايا ‎B‏ البنكرياسية سرمدية البقاء بواسطة تقنيات معروفة جيدا في الفن كما هو مبين في الأمثلة الملحقة). تتضمن طرق تخليق الخلاياء لكن بدون تحديد؛ استقبالها لحامل جين من العائل مع جينات ‎ayy‏ إصابتها بعدوى مع فيروس مولد ‎(oncogenic. virus) ays)‏ وزراعتها تحت شروط تنتقى الخلايا ‎ala]‏ خضوعها لمركبات مولدة للسرطان أو مولدة لطفرة؛ دمجها مع خلية مخلدة ‎«(immortalized cells)‏ مثل؛ خلية ورم نخاعي ‎(myeloma‏ ‎cell) ٠‏ واخماد نشاط جين كابح لورم ‎(tumor suppressor gene)‏ عند استخدام الاندماج مع خلايا ورم نخاعي؛ يفضل ألا تفرز خلايا الورم النخاعي ‎globulin polypeptides‏ مناعي (خط خلية غير مفرز). كما هو مذكور في الأمثلة أدناه قد تحجب ‎LOAN‏ المخلدة باستخدام 1167
1a ‏(متضمنا أشكال مماثلة منتقاة)؛ أو قسم منه نشط مناعيا. في تجسيد مفضل» يجرى الحجب‎ ‏أو اختبار مناعي إشعاعي.‎ (ELISA) enzyme ‏الأولي باستخدام اختبار مناعي متصل مع‎ ‏بصفة عامة أكثر؛ يمكن تحضير أجسام مضادة أحادية النسخ منفصلة متطابقة مع‎ ‏الاختراع الحالي بتشكيلة كبيرة من تقنيات معروفة في الفن تتضمن تقنيات ورم هجين؛ تقنيات‎ ‏أو‎ XenoMouse® ‏تخليقية؛ تقنيات إظهار بلعم؛ مكتبات خميرة؛ حيوانات طفرية (مثلا؛‎ © ‏أو بعض اتحاد من ذلك. على سبيل المثال؛ يمكن إنتاج أجسام مضادة‎ (HUMAD Mouse® ‏أحادية النسخ بتقنيات ورم هجين حسب الوصف على نطاق كبير أعلاه وحسب التعليم بتفصيل‎ ‏أكثر في:‎
Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 2nd ed. 1988), Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell ٠١
Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981) ‏الأجسام المضادة في‎ Las ‏كل منها مندمج هنا. باستخدام البروتوكولات المعلنة؛ يفضل أن‎ ‏الثدييات بواسطة عدة مرات حقن تحت الجلد أو في البريتون مع مولد المضاد الخاص أو مادة‎ ‏فإن هدا التحصين يحدث بصفة عامة استجابة مناعية تشمل‎ lie ‏مساعدة. حسب الشرح‎ ‏إذا كان الحيوان المحصن‎ LIS ‏مضاد (قد تكون آدمية‎ alge ‏إنتاج أجسام مضادة نشطة ضد‎ ٠ ‏طفريا) من خلايا طحال نشطة أو خلايا ليمفاوية نشطة. برغم أن الأجسام المضادة الناتجة‎ ‏يمكن جمعها من مصل الحيوان لتوفير مستحضرات عديدة النسخ؛ فمن المطلوب أكثر بصفة‎ ‏ليمفاوية منفردة من الطحال؛ الغدد الليمفاوية أو دم طرفي لتوفير مستحضرات‎ WIA Jie dale ‏أجسام مضادة أحادية النسخ متماثلة. نموذجيا أكثرء تنتج الخلايا الليمفاوية من الطحال‎ ‏وتصبح مخلدة لتوفير أورام هجينة.‎ ٠ ‏حسب الوصف أعلاه؛ قد تكون عملية الانتقاء هي انتقاء نسخة مميزة‎ (Jd) ‏على سبيل‎ ‏مخلق. لابد‎ DNA ‏مجموعة من نسخ ورم هجين؛ نسخ بلعم؛ أو نسخ‎ ia ‏من جمع من النسخ؛‎ ‏على سبيل المثال؛ لتحسين‎ (Lila) ‏من إدراك أن ترتيب ربط 71167 منتقى يمكن تعديله‎ ‏انجذابه للهدف؛ لإكساب السمة الآدمية لترتيب يربط الهدف؛ لتحسين إنتاجه في مزرعة خلية؛‎ ‏لتقليل توليده للمناعة في الجسم؛ لتوليد جسم مضاد متعدد الخصوصية؛ إلخ؛ وأن الجسم‎ vo ‏المضاد يشمل ترتيب رابط لهدف معدل هو أيضا جسم مضاد أحادي النسخ من هذا الاختراع.‎ ‏على النقيض من مستحضرات الجسم المضاد عديد النسخ؛ التي تتضمن نموذجيا أجسام‎
1A ‏مختلفة؛ فإن كل جسم مضاد أحادي النسخ‎ (epitopes) ‏مضادة منفصلة موجهة ضد محددات‎ ‏من مستحضر جسم مضاد أحادي النسخ موجه ضد محدد واحد على مولد مضاد. بالإضافة‎ ‏إلى خصوصيتها؛ فإن مستحضرات جسم مضاد أحادي النسخ مفيدة في أنها غير ملوثة‎ ‏مناعية أخرى قد تتفاعل معها بصورة عابرة.‎ globulins ‏نموذجيا مع‎ (Chimeric antibodies) ‏ل أجسام مضادة هجينة‎ (chimeric ‏في تجسيد آخرء يشمل الجسم المضاد من الاختراع أجسام مضادة هجينة‎ ‏متصلة تساهميا مع اثنين على الأقل من أصناف أو‎ protein ‏مشتقة من قطع‎ antibodies) ‏فإن المصطلح‎ clin ‏أنواع مختلفة من أجسام مضادة. لابد من إدراك أنه حسب الاستخدام‎ ‏أجسام مضادة هجينة يتعلق بالبنيات التي يكون فيها قسم من السلسلة الثقيلة و/أو الخفيفة‎ ‏متماثلا مع أو متشابها مع ترتيبات مقابلة في أجسام مضادة مشتقة من أنواع خاصة أو تنتمي‎ ٠ ‏بينما تكون بقية السلسلة (السلاسل) متماثلة‎ ald ‏إلى صنف أو صنف فرعي لجسم مضاد‎ ‏مع أو متشابهة مع ترتيبات مقابلة في أجسام مضادة مشتقة من أنواع أخرى أو تنتمي إلى‎ ‏بالإضافة إلى أجزاء من تلك الأجسام المضادة؛‎ OAT ‏صنف أو صنف فرعي لجسم مضاد‎ ‏طالما أنها تظهر النشاط الحيوي المطلوب:‎ (U.S.
Pat.
No. 4,816,567; Morrison et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA, 81:6851-6855 Yo (1984). ‏حمض أميني‎ Vig ‏في تجسيد تمثيلي؛ يشمل الجسم المضاد الهجين طبقا للتعاليم هنا ترتيبات‎ ‏و7 حمض أميني فأرية ومناطق ثابتة مشتقة من مصادر آدمية. في تجسيدات أخرى موائمة‎ ‏أو مكتسب‎ CDR ‏يشمل الجسم المضاد الهجين من الاختراع الحالي جسم مضاد مطعم مع‎ ‏السمة الآدمية حسب الوصف هنا.‎ YL ‏بصفة عامة؛ فإن الهدف من تصنيع الجسم المضاد الهجين هو توليد هجائن يكون فيها‎ ‏عدد أحماض أمينية من أنواع الكائن المعينة عند حد أقصى. إن مثالا هو جسم مضاد مطعم‎ ‏من نوع خاص أو ينتمي إلى‎ CDRs ‏يشمل فيه الجسم المضاد واحدة أو أكثر من‎ «CDR ‏مع‎ ‏بينما يكون المتبقي من سلسلة (سلاسل) الجسم‎ (pala ‏صنف أو صنف فرعي لجسم مضاد‎ ‏المضاد متماثلا مع أو متشابها مع ترتيب مقابل في أجسام مضادة مشتقة من نوع آخر أو‎ Yo ‏تنتمي إلى صنف أو صنف فرعي لجسم مضاد آخر. للاستخدام في الآدميين؛ فإن المنطقة‎ ‏المنتقاة من جسم مضاد حيوان قارض دائما ما تطعم في جسم مضاد‎ CDRs ‏المتغيرة أو‎
ال ‎«el‏ مستبدلة المناطق المتغيرة أو ‎CDRs‏ طبيعية الوجود في الجسم المضاد الآدمي. إن هذه البنيات لها بصفة عامة مزايا توفير وظائف ضابطة كاملة الفعالية (مل ‎«CDC‏ 00ت إلخ) بينما تقلل الاستجابات غير المطلوبة للجسم المضاد في الكائن. ع. أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية ‎(Humanized antibodies)‏
إن جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية (©2005001 ‎(humanized‏ يشابه الجسم المضاد المطعم ‎(CDR‏ بصفة عامة؛ ينتج الجسم المضاد المكتسب السمة الآدمية من جسم مضاد أحادي النسخ ناشئ أوليا في حيوان وليس في الآدمي. حسب الاستخدام هنا فإن أشكال مكتسبة السمة الآدمية من أجسام مضادة غير آدمية ‎(Al Ol)‏ هي أجسام مضادة هجينة تحتوي على ترتيب أدنى مشتق من ‎globulin‏ مناعي غير أدمي. في أحد التجسيدات؛ يكون
‎٠‏ الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية عبارة عن ‎globulin‏ مناعي آدمي (جسم مضاد متلقي أو قابل) مستبدلة فيه متخلفات ‎CDR‏ من الجسم المضاد المتلقي بمتخلفات من ‎CDR‏ من نوع غير آدمي (جسم مضاد معطي) مثل فأرء حيوان قارض» أرنب؛ أو حيوان رئيس له الخصوصية؛ الانجذاب و/أو القدرة المطلوبة.
‏ْ عموما يشتمل اكتساب السمة الآدمية لجسم ‎alias‏ على تحليل تماثل الترتيب وبناءات
‎ve‏ قانونية لكل الأجسام المضادة المانحة والمستقبلة. في تجسيدات منتقاة؛ قد يشمل الجسم المضاد المتلقي ترتيبات متفق عليها. لتوليد إطارات آدمية متفق عليها؛ تصطف إطارات من ترتيبات حمض أميني سلسلة ‎ALE‏ أو خفيفة آدمية عديدة لتحديد ترتيب حمض أميني متفق عليه. إضافة لذلك» في أحوال كثيرة؛ يستبدل واحد أو أكثر من متخلفات إطار في مجال السيطرة المتغير من ‎globulin‏ المناعي الآدمي بمتخلفات غير آدمية مقابلة من الجسم المضاد
‎٠‏ المعطي. إن هذه الاستبدالات للإطار محددة بطرق معروفة جيدا في الفن؛ مثلا؛ بتشكيل نموذج لتفاعلات ‎CDR‏ ومتخلفات إطار لتحديد متخلفات إطار هامة لربط مولد المضاد ومقارنة الترتيب لتحديد متخلفات الإطار المعتادة عند أماكن خاصة. تساعد تلك الاستبدالات على استبقاء الهيئة ثلاثية الأبعاد الملائمة لمناطق ‎CDR(s)‏ المطعمة ‎Lilley‏ ما تحسن الانجذاب أكثر من بنيات مشابهة بدون استبدالات إطار. إضافة لذلك؛ تشمل الأجسام
‎Yo‏ المضادة مكتسبة السمة الآدمية متخلفات غير موجودة في الجسم المضاد المتلقي أو في الجسم المضاد المعطي. يمكن إجراء هذه التعديلات من أجل تنقية إضافية لأداء الجسم المضاد باستخدام تقنيات معروفة جيدا.
إن تطعيم ‎CDR‏ وأجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية موصوفين؛ على سبيل المثال؛ في: ‎U.S.P.Ns. 6,180,370, 5,693,762, 5,693,761, 5,585,089, and 5,530,101.‏ بصفة عامة؛ يشمل الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية جوهريا كل واحد على الأقل؛ ونموذجيا اثنين» من مجالات سيطرة متغيرة؛ التي تطابق فيها كل أو جوهريا كل ‎CDRs‏ تلك © في ‎globulin‏ مناعي غير ‎(gd‏ وتكون كل أو جوهريا كل مناطق الإطار هي تلك من ترتيبات ‎globulin‏ مناعي آدمي. سوف يشمل أيضا اختياريا الجسم المضاد مكتسب السمة الأدمية قسم على الأقل من منطقة ثابتة ‎globulin‏ مناعي ‎(Fe)‏ نموذجيا تلك من ‎globulin‏ مناعي آدمي. من أجل تفاصيل إضافية؛ انظرء مثلا: ‎Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329‏ (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). ٠١ انظر أيضاء مثلا: ‎Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1: 105-115 (1998);‏ ‎Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 )139(: Hurle and Gross, Curr.‏ ‎and 7,087,409.‏ 6,982,321 ...نا ‎Op. Biotech. 5:428-433 (1994); and‏ ‎٠‏ هناك طريقة أخرى إضافية تسمى إكساب الآدمية وهي موصوفة؛ على سبيل المثال في ‎US. 2005/0008625‏ لأغراض الطلب الحالي فإن المصطلح أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية سوف يتضمن بوضوح أجسام مضادة مطعمة ‎CDR‏ (أي؛ أجسام مضادة آدمية تشمل واحد أو أكثر من ‎CDRs‏ غير آدمية مطعمة) مع عدم وجود أو وجود قدر ضئيل جدا من استبدالات إطار. ‏7 إضافياء فإن الجسم المضاد غير الآدمي ضد 71167 يمكن أيضا تعديله بحذف خاص لأجل ‎epitopes‏ خلية ‎T‏ آدمية أو إزالة تحصين بالطرق المعلنة في 98/52976 ‎WO‏ ‏و00/34317 ‎WO‏ بإيجاز؛ يمكن تحليل المناطق المتغيرة السلسلة الثقيلة والخفيفة لجسم مضاد من أجل ‎A peptides‏ ترتبط مع ‎MHC‏ من الصنف ‎II‏ إن هذه ‎peptides‏ تمثل ‎epitopes‏ ‏خلية ‎T‏ ممكنة (كما تحدد في 98/52976 ‎WO‏ و 00/34317 ‎(WO‏ من أجل تحديد ‎epitopes‏ ‎«peptide ‏ممكنة؛ يمكن استخدام طريقة تشكيل نموذج حاسوب تسمى طريقة تنظيم‎ T ‏خلية‎ Ye ‏آدمية من الصنف‎ MHC ‏تربط‎ peptides ‏واضافيا يمكن البحث في قاعدة بيانات‎
WO 98/52976 ‏حسب الوصف في‎ Vis Vig ‏من أجل محفزات موجودة في ترتيبات‎ 1
م و00/34317 1170. ترتبط هذه المحفزات مع أي من الأنواع المتباينة ‎MHC DR‏ الصنف ‎Il‏ ‏الثمانية عشر الكبرى؛ وذلك يشكل ‎epitopes‏ خلية 7 ممكنة. يمكن إزالة ‎epitopes‏ خلية 7 ممكنة باستبدال أعداد قليلة من متخلفات حمض أميني في المناطق المتغيرة؛ أو باستبدالات حمض أميني وحيد. بقدر الإمكان» تجرى استبدالات حامية. غالباء لكن ليس حصريا؛ يمكن ‎oo‏ استخدام حمض أميني شائع لمكان في ترتيبات جسم مضاد خط جرثومة آدمي ‎٠‏ بعد تحديد تغييرات إزالة التحصين؛ يمكن تشييد أحماض نووية تشفر ‎Vig Vir‏ بواسطة تكوين طفري أو طرق تخليقية أخرى ‎lie)‏ تكوين متجدد؛ استبدال حافظة؛ وهكذا). يمكن أن يندمج ترتيب متغير طفري؛ ‎(Ladd‏ مع منطقة ثابتة آدمية. في تجسيدات ‎line‏ يطابق على الأقل ‎Ve AV Te J‏ 780 من متخلفات ‎٠‏ المنطقة المتغيرة لجسم مضاد مكتسب السمة الآدمية تلك لمنطقة الإطار الأصلية ‎(FR)‏ ‏وترتيبات 0018. في تجسيدات أخرى؛ يطابق على الأقل 785 أو 790 من متخلفات جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية تلك لمنطقة الإطار الأصلية ‎(FR)‏ وترتيبات 018. في تجسيد ٍ إصافي ‎(Junie‏ يطابق أكثر من 746 من متخلفات جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية تلك لمنطقة الإطار الأصلية ‎(FR)‏ وترتيبات ‎CDR‏ ‎yo‏ يمكن تصنيع أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية بتقنيات حيوية جزيئية شائعة وهندسة وراثية جزيئية حيوية شائعة حسب الوصف هنا. تتضمن هذه الطرق عزل؛ معالجة؛ وإاظهار ترتيبات حمض نووي تشفر كل أو جزء من مناطق متغيرة ‎globulin Fv‏ مناعي من واحدة على الأقل من السلسلة الثقيلة أو الخفيفة. إن مصادر ذلك حمض نووي معروفة جيدا للمهرة في الفن و؛ على سبيل المثال؛ يمكن الحصول ‎Lede‏ من ورم هجين؛ خلية سوية النواة أو بلعم ‎Te‏ ينتج جسم مضاد أو جزءٍ نشط ‎Lelie‏ ضد هدف مسبق التحديد؛ حسب الوصف أعلاه؛ من جينات ‎globulin‏ مناعي خط جرثومة؛ أو من بنيات مصنعة. يمكن عندئذ نسخ ‎DNA‏ المخلق المشفر للجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية في ناقل إظهار ملائم. إن ترتيبات خط جرثومة آدمي؛ على سبيل المثال؛ معلنة في: ‎Tomlinson, I.
A. et al. (1992) J.
Mol.
Biol. 227:776-798; Cook, G.
P. et al. (1995)‏ ‎Immunol.
Today 16: 237-242; Chothia, D. et al. (1992) J.
Mol.
Bio. 227:799-817; Yo‏ ‎and Tomlinson et al. (1995) EMBO J 14:4628-4638.‏ يوفر دليل ‎VBASE‏ دليل شامل لترتيبات منطقة ‎globulin AL‏ مناعي؛ انظر:
£1 ‎(Retter et al., (2005) Nuc Acid Res 33: 671-674).‏ يمكن استخدام هذه الترتيبات كمصدر لترتيب آدمي؛ ‎lie‏ لمناطق إطار ‎.CDRs sy‏ كما هو مذكور هنا يمكن أيضا استخدام مناطق إطار آدمية متفق عليها؛ ‎Ole‏ حسب الوصف في ‎.U.S.P.N. 6,300,064.‏ ‎If oo‏ أجسام مضادة أدمية ‎(Human antibodies)‏
بالإضافة إلى الأجسام المضادة ‎(human antibodies)‏ سالفة الذكرء فإن المهرة في الفن سيدركون أن الأجسام المضادة من الاختراع الحالي تشمل أجسام مضادة آدمية كليا. لأغراض الطلب الحالي فإن المصطلح جسم مضاد آدمي يشمل جسم مضاد له ترتيب حمض أميني يطابق ذلك لجسم مضاد ناتج بواسطة آدمي و/أو محضر باستخدام أي من التقنيات لتحضير ‎٠‏ أجسام مضادة آدمية حسب الشرح هنا. إن هذا التحديد للأجسام المضادة الآدمية يستثني بصفة
خاصة جسم مضاد مكتسب للسمة الآدمية يشمل متخلفات ربط مولد مضاد غير آدمي. يمكن إنتاج أجسام مضادة آدمية بتقنيات عديدة معروفة في الفن. حسب الإشارة أعلاه؛ نستخدم نقنيات إظهار بلعم لتوفير مناطق ربط نشطة مناعيا طبقا للتعاليم الحاضرة. لذلك. توفر تجسيدات خاصة للاختراع ضرى لإتناج أجسام مضادة ضد 71167 أو أقسام منها تربط ‎٠‏ مولد مضاد تشمل خطوات تكوين مكتبة أجسام مضادة (يفضل آدمية) على ‎cand]‏ حجب المكتبة مع 71167 منتقى أو قسم منه يربط جسم مضاد؛ عزل البلعم الذي يربط ‎PTK7‏ ‏والحصول على الأجزاء النشطة مناعيا من البلعم. على سبيل ‎(JU)‏ تشمل طريقة لتحضير مكتبة الأجسام المضادة للاستخدام في تقنيات إظهار بلعم خطوات تحصين حيوان وليس آدمي يشمل مواقع ‎globulin‏ مناعي أدمي أو غير آدمي مع 71167 المنتقى أو قسم منه مولد لمضاد ‎٠‏ لتوليد استجابة مناعية؛ استخلاص الخلايا المنتجة الجسم المضاد من الحيوان المحصن؛ ‎Jie‏ ‎RNA‏ المشفر للسلاسل الثقيلة والخفيفة من الأجسام المضادة من الاختراع من الخلايا المستخلصة؛ نسخ عكسي لأجل ‎RNA protein‏ لينتج ‎«DNA‏ تكبير ‎cDNA‏ باستخدام مواد أولية؛ وإدخال ‎cDNA‏ في ناقل إظهار بلعم بحيث تظهر الأجسام المضادة على البلعم. بتحديد أكثر؛ يخلق ‎DNA‏ مشفر لمجالات السيطرة ‎Vig Vig‏ مع رابط ‎scFv‏ بواسطة ‎PCR‏ وتنسخ في ‎Yo‏ ناقل ‎.(pComb 3 HSS slp CANTAB 6 i) phagemid‏ يمكن عندئذ إجراء تثقيب كهربي للناقل في ‎coli‏ .8 وعندئذ تكون ‎E.coli‏ مصابة بالبلعم المساعد. إن البلعم المستخدم ty
Vis Vir ‏في هذه الطرق هو بلعم خيطي نموذجيا يتضمن 10 و1413 وإن مجالات السيطرة‎
VIL ‏تندمج تخليقيا عادة مع إما جين البلعم ]11 أو الجين‎ ‏من | لاختراع بحجب مكتبة جسم مضاد‎ PTK7 ‏يمكن عزل أجسام مضادة آدمية مخلقة ضد‎ ‏تكون المكتبة عبارة عن‎ (Jaimie ‏اتحادية مخلقة محضرة كما هو مذكور أعلاه. في تجسيد‎
MRNA ‏آدمية من‎ Vij cDNAs Vi cDNAs ‏مكتبة إظهار بلعم 1ه متولدة باستخدام‎ © ‏معزول من خلايا 8. إن طرق تحضير وحجب تلك المكتبات معروفة جيدا في الفن وإن‎ ‏المجموعات لتوليد مكتبات إظهار بلعم متوافرة تجارياء مثلا:‎ (the Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog no. 27-9400-01; and the Stratagene SurfZAP™ phage display kit, catalog no. 240612). ‏هناك أيضا طرق وعوامل كاشفة أخرى يمكن استخدامها في توليد وحجب مكتبات إظهار جسم‎ ٠ ‏مثلا:‎ ¢ hail ‏مضاد؛‎ ‎(U.S.P.N. 5,223,409; PCT Publication Nos. WO 92/18619, WO 91/1727 WO 92/20791. WO 92/15679, WO 93/01288, WO 92/01047, WO 92/09690; Fuchs ct al,
Bio/Technology 9:1370-1372 (1991); Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:81- : 85 (1992); Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989); McCafferty et al., Nature Vo 348:552-554 (1990); Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993); Hawkins et ‏ملق‎ J.
Mol. Biol. 226:889-896 (1992); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Gram et ‏لة‎ Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3576-3580 (1992); Garrad et al.,
Bio/Technology 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nuc. Acid Res. 19:4133- 4137 (1991); and Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982 (1991). Ye. ‏طبيعية أو مصنعة) يمكن أن يكون‎ Le) ‏إن الأجسام المضادة الناتجة بواسطة مكتبات أولية‎ ‏جزيئي جرامي ')؛ لكن اكتمال الانجذاب يمكن‎ "٠١ ‏إلى‎ "٠١ ‏حوالي‎ Ka) ‏لها انجذاب متوسط‎ ‏محاكاته أيضا في المعمل بتشييد وإعادة انتقاء من مكتبات ثانوية حسب الوصف في الفن.‎ ‏معرض‎ polymerase ‏على سببل المثال؛ يمكن إدخال طفرة عشوائيا في المعمل باستخدام‎ ‏في طريقة:‎ (Leung et al, Technique, 1: 11-15 )1989(( ‏للخطأ ؛» مسجل في‎ Ye
Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226: 889-896 (1992) or Gram et ‏لة‎ Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 89: 3576-3580 (1992).
د إضافيا؛ يمكن إجراء اكتمال للانجذاب بإجراء طفرة عشوائيا لواحدة أو أكثر من ‎«CDRs‏ مثلا باستخدام ‎PCR‏ مع مواد أولية تحمل ترتيب عشوائي يشمل طول ‎CDR‏ ‏الهامة؛ في نسخ ‎Bay dia Fv‏ منتقاة وحجب من أجل النسخ الأعلى انجذابا. تصف ‎WO 9607754‏ طريقة لحث تكوين طفري في منطقة محددة للتكملة من سلسلة خفيفة ‎globulin‏ ‏© مناعي لتوليد مكتبة جينات سلسلة خفيفة. إن طريقة مؤترة أخرى هي تخليق مجالات سيطرة ‎Vy‏ أو ‎Vi‏ منتقاة بإظهار بلعم مع ذخائر لأشكال متباينة لمجال سيطرة ‎V‏ طبيعي الوجود من معطيين غير محصنين وحجب من أجل الانجذاب الأعلى في جولات عديدة من إعادة تدعيم السلسلة حسب الوصف في: ‎Marks et al., Biotechnol, 10: 779-783 (1992).‏ ‎٠‏ تسمح هذه التقنية بإنتاج أجسام مضادة وأجزاء جسم مضاد مع ثبات تفكك ‎(kotilkon) Ka‏ حوالي ‎٠١‏ * جزيئي جرامي أو أقل. لابد إضافيا من إدراك أن هناك إجراءات إضافية يمكن استعمالها تستخدم مكتبات تشمل ‎LIA‏ سوية النواة ‎Sia)‏ خميرة) تظهر أزواج ارتباط على سطحها. مثلما مع تفنية إظهار بلعم؛ يتم حجب المكتبات سوية النواه مقابل ‎alge‏ المضاد الهام (أي؛ 01167) وتعزل ‎٠‏ وتنسخ ‎LOA‏ تظهر أزواج ربط مرشح. يمكن اتخاذ خطوات لجعل محتوى المكتبة في صورة مثلى ولأجل اكتمال الانجذاب للأزواج الرابطة النشطة. ‎«dail‏ على سبيل المثال» ‎USPN.‏ ‎USSN. 12/404,059 5 7,700,302‏ في أحد التجسيدات؛ ينتقى الجسم المضاد الآدمي من مكتبة ‎candy‏ حيث تظهر مكتبة البلعم تلك أجسام مضادة آدمية: ‎(Vaughan et al.
Nature Biotechnology 14:309-314 (1996): Sheets et al.
Proc.
Natl.‏ ‎Acad.
Sci. 95:6157-6162 (1998)); Hoogenboom and Winter, J.
Mol.
Biol, 227:381 Ye‏ ‎Marks et al., J.
Mol.
Biol, 222:581 (1991).‏ ;)1991( في تجسيدات أخرى يمكن عزل أزواج رابطة آدمية من مكتبات جسم مضاد اتحادية متولدة في خلايا سوية النواة ‎Jie‏ خميرة. انظر؛ ‎Mie‏ 7,700,302 .17.5..81. تسمح هذه التقنيات بدرجة مفيدة بحجب أعداد كبيرة من مواد ضابطة مرشحة وتوفير معالجة أسهل نسبيا للترتيبات ‎vo‏ المرشحة ‎lie)‏ باكتمال الانجذاب أو تدعيم تخليقي). يمكن أيضا تحضير الأجسام المضادة الآدمية بإدخال مواضع ‎globulin‏ مناعي آدمي في حيوانات طفرية؛ مثلا؛ فئران يتم فيها جزئيا أو ‎LIS‏ إخماد نشاط جينات ‎globulin‏ مناعي
داخلية. عند ‎(andl‏ يلاحظ إنتاج جسم مضاد أدمي؛ والذي يشبه بدرجة شديدة ذلك المرئي في كل الجوانب؛ متضمنا إعادة ترتيب جين؛ تجميع جين؛ وذخيرة جسم مضاد. إن هذه الطريقة موصوفة؛ ‎ie‏ في: ‎U.S.P.Ns. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, and‏ ‎U.S.P.N 6,075,181 and 6,150,584 °‏ فيما يتعلق بتقنية ‎Xenomouse®‏ مع النشرات العلمية التالية: ‎Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-‏ ‎Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature‏ ;)1994( 859 ‎Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996);‏ ‎Lonberg and Huszar, Intern.
Rev.
Immunol. 13:65-93 (1995). Ye‏ بطريقة بديلة؛ يمكن تحضير جسم مضاد آدمي بتخليد بقاء خلايا ليمفاوية-13 آدمية تنتج جسم مضاد موجه ضد مولد مضاد مستهدف (يمكن استرجاع تلك الخلايا الليمفاوية 1 من كائن يعاني من أضطراب تنسج ورمي أو قد تم تحصينه في المعمل). انظرء مثلا: ;)1985( 77 .م ‎Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R.
Liss,‏ ‎Boerner et al., J.
Immunol, 147 (1):86-95 (1991); and U.S.P.N. 5,750,373. Vo‏ ‎VI‏ السمات المميزة للجسم المضاد ‎(Antibody Characteristics)‏ بغض النظر عن كيفية الحصول عليها أو على أي من الأشكال سالفة الذكر تكون للمادة الضابطة للجسم المضاد (مثلاء مكتسب للسمة الأدمية؛ آأدمي؛ إلخ) فإن التجسيدات المفضلة للمواد الضابطة المعلنة قد تظهر سمات مميزة عديدة. في هذا الجانب يمكن أن تنتقى ‎WIA‏ ‎Yo‏ منتجة جسم مضاد ضد 71167 ‎lik)‏ أورام هجينة أو مستعمرات خميرة)؛ تتنسخ وتحجب إضافيا من أجل السمات المميزة المطلوبة متضمنة؛ على سبيل المثال؛ نمو ‎lad‏ إنتاج كبير لجسم مضاد و؛ حسب الشرح بتفصيل أكثر ‎lial‏ سمات مميزة مطلوبة للجسم المضاد. يمكن أن تنتشر أورام هجينة في الجسم في حيوانات متحدة الأصل؛ في حيوانات تفتقد جهاز مناعة؛ مثل؛ فئران ناقصة المناعة؛ أو في مزرعة خلية في المعمل. إن طرق انتقاء؛ نسخ وانتشار © أورام هجينة و/أو مستعمرات؛ ينتج كل منها نوع جسم مضاد منفصل؛ معروفة جيدا لأصحاب المهارة العادية في الفن.
. أجسام مضادة معادلة ‎(Neutralizing antibodies)‏ في تجسيدات مفضلة تحديدا تشمل المواد الضابطة من الاختراع الحالي أجسام مضادة معادلة ‎(neutralizing antibodies)‏ أو مشتق أو جزء منها. يشير المصطلح جسم مضاد معادل أو مضاد معادل إلى جسم مضاد أو مضاد يرتبط مع أو يتفاعل مع جزيء ‎PTK7‏ ‏© ويمنع ارتباط أو اتحاد المركب الترابطي مع أي شريكه في الارتباط وبذلك تعاق الاستجابة الحيوية (مثلا؛ ‎phosphorylation‏ أو تولد الأوعية المحث مع ‎(VEGF‏ التي قد تنتج بطريقة ما من تفاعل الجزيئات. في تحديد الارتباط والخصوصية لجسم مضاد أو ‎era‏ أو مشتق وظيفي مناعيا منه؛ فإن الجسم المضاد أو جزء منه سوف يثبط جوهريا ارتباط المركب الترابطي مع شريكه في الارتباط أو مادة خاضعة عندما تقلل زيادة من جسم مضاد كمية شريك الارتباط ‎٠‏ المرتبطة مع الجزيء المستهدف بنسبة على الأقل ‎JY 370 Mea‏ يقال قال ال ذال ‎(JAS LA‏ .قال فقال لاقل 2144 أو أكثر حسب القياس»؛ مثلا؛ بواسطة ‎phosphorylation‏ أو مواد خاضعة منتقاة ‎(Shin et al, Biochem and Biophys Res "om.
Vol 371:4)‏ أو في اختبار ارتباط تنافسي في المعمل. في حألة أجسام مضادة من أجل 01167 على سبيل ‎٠‏ المثال ؛ فإن جسم مضاد معادل أو مضاد يفضل أن يقلل قدرة ‎phosphorylation‏ من ‎PTK7‏ ‏بالنسبة إلى مادة خاضعة محددة مع على الأقل حوالي ‎JY Ye‏ ىل قال كال لال ‎dhe JA‏ دحال فقال ‎JAY‏ 244 أو أكثر. لابد من إدراك أن هذا النشاط القليل يمكن قياسه مباشرة باستخدام تقنيات يدركها الفن أو يمكن قياسه بتأثير ذلك التقليل على نشاطات ثانوية مثل تولد الأوعية. ‎bY:‏ أجسام مضادة تذوتية ‎(Internalizing antibodies)‏ برغم وجود دليل على أن 01167 أو أشكاله المماثلة قد يوجد في شكل قابل للذوبان» فإن على الأقل بعض من ‎PTKT‏ بالمثل يظل مصاحبا لسطح الخلية وبذلك يسمح بتذوت المواد الضابطة المعلنة. طبقا لذلك؛ فإن الأجسام المضادة ضد 71167 من الاختراع الحالي قد تكون متذوتة؛ على الأقل بدرجة ماء بواسطة خلايا تظهر مركب ترابطي 0-8::م©. على سبيل ‎YO‏ المثال؛ فإن جسم مضاد ضد 01167 يرتبط مع 171167 على سطح خلية بادئة لورم قد يتذوت بواسطة خلية بادئة لورم. في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة فإن تلك الأجسام المضادة ضد
7 قد تكون مصاحبة أو متحدة مع عوامل مضادة للسرطان مثل أجزاء سامة للخلية تقتل
الخلية عند التذوت. حسب الاستخدام هناء فإن جسم مضاد ضد 71167 متذوت هو واحد تلتقطه الخلية عند الارتباط مع ‎PTK7‏ مصاحب لخلية كائن ثديي. يتضمن الجسم المضاد التذوتي أجزاء جسم © مضاد؛ جسم مضاد آدمي أو مكتسب للسمة الآدمية واتحادات جسم مضاد. قد يحدث التذوت في المعمل أو في الجسم . بالنسبة للاستخدامات العلاجية؛ قد يحدث التذوت في الجسم. إن عدد جزيئات الجسم المضاد المتذوتة قد يكون كافيا أو ملائما لقتل خلية تظهر ‎PTT‏ بصفة خاصة خلية بادئة لورم تظهر ‎PTKT‏ اعتمادا على فعالية الجسم المضاد أو اتحاد جسم مضاد؛ في بعض الحالات؛ يكون امتصاص جزيء جسم مضاد وحيد في الخلية كافيا لقتل ‎٠‏ الخلية المستهدفة التي ترتبط معها الجسم المضاد. على سبيل المثال؛ هناك ‎toxins‏ معينة فعالة للغاية في القتل بحيث يكون تذوت جزيء واحد من ‎toxin‏ متحد مع الجسم المضاد كافيا لقتل خلية الورم. يمكن تحديد تذوت جسم ‎alias‏ ضد 21167 عند ارتباط 01167 على خلية كائن ثديي باختبارات عديدة تتضمن تلك الموصوفة في الأمثلة أدناه (مثلا؛ ‎.)١32 و١١ AB‏ إن طرق تحديد تذوت جسم مضاد في خلية موصوفة في 7,619,068 ‎USPN.‏ التي تندمج
‎Yo‏ هنا كمرجع بالكامل.
‏ه. أجسام مضادة مستتفدة ‎(Depleting antibodies)‏
‏في تجسيدات أخرى مفضلة تشمل المواد الضابطة من الاختراع الحالي أجسام مضادة مستتفدة ‎(depleting antibodies)‏ أو مشتقات أو أجزاء منها. يشير المصطلح جسم مضاد مستنفد إلى جسم مضاد أو جزء منه يرتبط مع أو يصاحب 71107 على أو بالقرب من سطح ‎YS‏ الخلية وبحث؛ يعزز أو يسبب موت؛ عجز أو إزالة الخلية ‎Oli)‏ سمية خلية معتمدة على مكمل أو سمية خلية خلوية معتمدة على جسم مضاد). في بعض التجسيدات المشروحة بصورة ‎dab‏ أكثر أدناه فإن الأجسام المضادة المستنفدة المنتقاة سوف تصاحب أو تتحد مع عامل سام للخلايا. يفضل أن يكون الجسم المضاد المستنفد قادرا على ‎ddl)‏ عجز؛ استئصال أو قتل على الأقل ‎JY‏ .ل قال تقال نكال يلال ‎JAS JA‏ بقل فقال ‎JAY‏ ‎ve‏ اا من خلايا الورم السرمدية في مجموعة خلية محددة. في بعض التجسيدات قد تشمل مجموعة الخلية خلايا ورم سرمدية ‎(TPC)‏ مزودة؛ مجزئة؛ نقية أو معزولة. في تجسيدات أخرى تشمل مجموعة الخلية عينات ورم كامل أو مواد مستخلصة من ورم مغاير تشمل خلية ورم oY ‏سرمدية. سيدرك المهرة في الفن أن تقنيات كيميائية حيوية قياسية حسب الوصف في الأمثلة‎ ‏مولدة للورم أو‎ LDS ‏أدناه (مثلا الأمثلة "١و١) قد تستخدم لمراقبة وتقدير كمي لاستتفاد‎ ‏للتعاليم هنا.‎ da ‏خلايا ورم سرمدية‎ (Epitope binding) epitope ‏ارتباط‎ .d ‏لابد إضافيا من إدراك أن الأجسام المضادة المعلنة ضد 11167 سوف تصاحب؛ أو ترتبط‎ ° ‏منفصلة أو محددات منفصلة موجودة في الهدف (! لأهداف) المنتقى. حسب‎ epitopes «ps ‏ذلك القسم من مولد المضاد المستهدف الذي لديه‎ J) epitope ‏الاستخدام هناء يشير المصطلح‎ ‏القدرة على إدراكه وارتباطه بصفة خاصة بواسطة جسم مضاد خاص. عندما يكون مولد‎ ‏أن تتكون من كل من‎ Sas epitopes ‏فإن‎ «PTK7 ‏مثل‎ polypeptide ‏المضاد عبارة عن‎ ‏أحماض أمينية متجاورة وأحماض أمينية غير متجاورة موضوعة بجانب بعضها بواسطة انثناء‎ ٠ ‏المتكونة من أحماض أمينية متجاورة تستبقى نموذجيا عند‎ epitopes ‏إن‎ protein ‏ثلاثي من‎ ‏بينما 5 المتكونة بالانثناء الثلاثي يتم فقدها نموذجيا عند تغير‎ ¢protein ‏تغيير طبيعية‎ ٠١-6 ‏على الأقل ته أو‎ ٠ ‏وعادة أكثر‎ oF ‏على الأقل‎ epitope ‏يتضمن‎ protein ‏طبيعة‎ ‏أحماض أمينية في هيثة مكانيه فريدة. بصفة خاصة أكثر؛ سيدرك الصانع الماهر أن‎ globulin ‏قادر على الارتباط بصفة خاصة مع‎ protein ‏يتضمن أي محدد‎ epitope ‏المصطلح‎ ٠ epitopic ‏المحددات‎ dale ‏مناعي أو مستقبل خلية 1 أو يتفاعل بطريقة ما مع جزيء. تتكون‎ ‏أو‎ carbohydrate ‏أحماض أمينية أو‎ Jie ‏من تجمعات سطح نشطة كيميائيا من جزيئات‎ ‏بالإضافة إلى سمات شحنة‎ ba) ‏سلاسل جانبية سكر ولها عامة سمات بنائية خاصة ثلاثية‎ ‏خطي؛ تتواجد كل نقاط‎ epitope ‏خطيا أو بناثيا. في‎ epitope ‏خاصة. إضافيا فقد يكون‎ ‏جسم مضاد) خطيا بطول ترتيب حمض أميني‎ Jia) ‏والجزيء المتداخل‎ protein ‏التفاعل بين‎ ٠ ‏بنائي؛ تتواجد نقاط التفاعل عبر متخلفات حمض أميني‎ epitope ‏لأولي من 0:016:0. في‎ ‏منفصلة خطيا عن بعضها البعض.‎ protein ‏على‎ ‎cepitope ‏مطلوب على مولد مضاد؛ يمكن توليد أجسام مضادة لذلك‎ epitope ‏بمجرد تحديد‎ ‏باستخدام التقنيات الموصوفة في الاختراع‎ epitope ‏المشتمل على‎ prptide ‏مثلا بالتحصين مع‎ ‏الحالي. بطريقة بديلة؛ أثناء عملية الاكتشاف؛ فإن توليد وتمييز الأجسام المضادة قد يوضح‎ Ye ‏المطلوبة. من هذه المعلومات؛ يمكن عندئذ حجب الأجسام المضادة‎ epitopes ‏معلومات عن‎ ‏إن طريقة لتحقيق هذا هي إجراء دراسات‎ epitope ‏بصورة ننافسية من أجل الارتباط مع نفس‎ oY ‏منافسة لإيجاد أجسام مضادة ترتبط تنافسيا مع بعضها البعض؛ أي؛ أن الأجسام المضادة‎ ‏تتنافس من أجل الارتباط مع مولد المضاد. توصف عملية عالية الإدخال لأجسام مضادة‎ . ١7/481771 ‏رابطة تعتمد على منافستها المتبادلة في الطلب الدولي رقم‎ ‏يشير المصطلح ربط إلى طريقة لجمع أجسام مضادة اعتمادا على‎ (lia ‏حسب الاستخدام‎ ‏سماتها الرابطة لمولد مضاد. إن تقسيم أماكن الارتباط عشوائي إلى حد ماء اعتمادا على كيفية‎ © ‏اختلاف اختبار شركاء الارتباط الملحوظين للأجسام المضادة. لذلك» برغم أن التقنية هي أداة‎ ‏مفيدة لتصنيف الأجسام المضادة من الاختراع الحالي؛ فإن أماكن الارتباط لا تتطابق دائما‎ ‏لابد من تأكيدها إضافيا‎ epitope ‏وأن تلك التحديدات الأولية من ارتباط‎ epitopes ‏مباشرة مع‎ ‏بطريقة أخرى يدركها الفن كالموصوف هنا.‎
‎٠١‏ مع هذا التوضيح يمكن تحديد ما إذا كان جسم مضاد أولي منتقى (أو جزء منه) يرتبط مع نفس ‎epitope‏ أو ينتافس بصورة متبادلة للارتباط مع جسم مضاد ثاني باستخدام طرق معروفة في الفن ومذكورة في الأمثلة هنا. في أحد التجسيدات؛ يسمح للجسم المضاد الأولي من الاختراع بالارتباط مع 11167 تحت شروط تشبع وعندئذ تقاس قدرة الجسم المضاد الثانوي على
‏| الارتباط مع ‎PTR‏ إذا كان جسم مضاد الاختبار قادرا على الارتباط مع 01167 في نفس
‎١‏ الوقت مثل الجسم المضاد الأولي ضد ‎PTR7‏ فعندئذ يرتبط الجسم المضاد الثانوي مع ‎epitope‏ مختلف عن الجسم المضاد الأولي. على أية حال؛ إذا لم يكن الجسم المضاد الثانوي قادرا على الارتباط مع 71167 في نفس الوقت؛ فعندئذ يرتبط الجسم المضاد الثانوي مع نفس ‎epitope «epitope‏ متراكب؛ أو ‎epitope‏ قريب جدا من ‎epitope‏ المرتبط بالجسم المضاد الأولي. كما هو معلوم في الفن ومفصل في الأمثلة أدناه؛ يمكن الحصول على البيانات
‎٠‏ المطلوبة باستخدام اختبار مناعي إشعاعي طور صلب مباشر أو غير مباشر ‎(RIA)‏ اختبار مناعي ‎enzyme‏ طور صلب مباشر أو غير مباشر (هآ)؛ اختبار منافسة ساندوتش؛ نظام ‎Biacore™‏ (أي؛ رنين ‎plasmon‏ سطح - ‎((GE Healthcare‏ أداة تحليل ‎ForteBio®‏ (أي؛ أداة قياس تداخل طبقة حيوية - مؤسسة ‎(ForteBio‏ أو طريقة قياس خلوي انسيابي. يشير المصطلح رنين ‎plasmon‏ سطح ‎(SPR)‏ حسب الاستخدام هناء إلى ظاهرة بصرية تسمح
‎Ye‏ بتحليل تفاعلات بينية خاصة في زمن حقيقي بتحديد التغيرات في تركيزات ‎protein‏ في بنية أداة إحساس حيوية. في تجسيد مفضل بصفة ‎dials‏ يجرى التحليل باستخدام ‎Biacore laf‏ أو ‎ForteBio‏ كما هو موضح في الأمثلة أدناه.
of ‏إن المصطلح يتنافس عند الاستخدام في سياق الأجسام المضادة التي تتنافس يعني منافسة‎ ‏بين أجسام مضادة محددة باختبار يقوم فيه الجسم المضاد أو جزء وظيفي مناعيا تحت‎ ‏الاختبار بمنع أو تثبيط ارتباط خاص لجسم مضاد مرجعي مع مولد مضاد مشترك. نموذجيا؛‎ ‏تحمل أيا‎ WDA ‏يشتمل ذلك الاختبار على استخدام مولد مضاد نقي مرتبط مع سطح صلب أو‎ ‏مناعي مرجعي معلم. يقاس التثبيط‎ globulin ‏مناعي اختبار غير معلم‎ globulin «pd ‏من‎ © globulin ‏المقارن بتحديد سمية العلامة المرتبطة مع السطح الصلب أو الخلايا في وجود‎ ‏المناعي للاختبار بكمية فائضة. تشتمل الأجسام‎ globulin sale ‏المناعي للاختبار. يتواجد‎ ‏المضادة التي يحددها اختبار التنافس (ا لأجسام المضادة المتنافسة) على أجسام مضادة ترتبط‎ ‏مجاور‎ epitope ‏كلما ارتبط الجسم المضاد وا لأجسام المضادة المرجعية مع‎ epitope ‏مع نفس‎ ‏المرتبط بواسطة الجسم المضاد المرجعي لحدوث إعاقة‎ epitope ‏قريب إلى حد كاف من‎ Ye ‏فراغية. توفر الأمثلة هنا تفاصيل إضافية عن طرق تحديد الارتباط التنافسي. عند وجود الجسم‎ ‏المضاد التنافسي بكمية فائضة عادة؛ يعمل على تثبيط الارتباط الخاص للجسم المضاد‎ ‏أو‎ ل١‎ ae ‏مف يت‎ on fo fe ‏المرجعي مع مولد مضاد شائع بنسبة على الأقل‎ 747 ‏أو‎ 35 (Av che ‏في بعض الحالات؛ يتم تثبيط الارتباط بنسبة على الأقل فى‎ . ‏أو أكثر.‎ ve ‏قد يتم تمييز ا لأجسام المضادة المعلنة باستخدام عدد من‎ epitope ‏بجانب خصوصية‎ ‏تتضمن على سبيل المثال مستويات انجذاب الارتباط» درجة‎ Ally ‏السمات الفيزيائية المختلفة‎ ‏حرارة الانصهار (1)؛ ونقاط التعادل الكهربي.‎ (Binding affinity) ‏انجذاب الارتباط‎ e ‏في هذا الاتجاه؛ يشمل الاختراع الحالي إضافيا استخدام أجسام مضادة لها انجذاب ارتباط‎ 7 ‏يستخدم أكثر من نوع‎ pan ‏عال من أجل 71167 مختار؛ أو في حالات الأجسام المضادة‎ ‏واحد من المركبات الترابطية م-«ةتم». يذكر أن الجسم المضاد من الاختراع يربط بصفة‎
Ve < ‏هو‎ Ky (Kofilkon) ‏خاصة مولد المضاد المستهدف الخاص به عندما يكون ثابت التفكك‎ ‏جزيئي جرامي. إن الجسم المضاد يربط مولد المضاد ربطا خاصا بانجذاب عال عندما يكون‎ * > "TY x 0 > Ky ‏جزيئي جرامي؛ وبانجذاب عال جدا عندما يكون‎ Ye xo>Ky Ye ‏جزيئي جرامي‎ ٠١ > Kg ‏جرامي. في أحد تجسيدات الاختراع؛ يكون للجسم المضاد قيمة‎ ‏يكون المعدل الخارجي‎ ep haa) ‏ثانية. في أحد تجسيدات‎ /" ٠١ x) ‏ومعدل خارجي حوالي‎
مه هو ‎٠١ XY‏ "/ ثانية. في تجسيدات أخرى للاختراع؛ ترتبط الأجسام المضادة مع ‎PTK7‏ ‏بقيمة ‎Ko‏ متراوحة بين ‎٠١‏ ” و١٠‏ ' جزيئي جرامي؛ وفي تجسيد آخر أيضا ترتبط بقيمة ‎Ky‏ ‎٠١ XY <‏ "' جزيئي جرامي. تشتمل أيضا تجسيدات أخرى مختارة للاختراع الحالي على أجسام مضادة لها ثابت التفكك ‎Ky (kofifkon)‏ هو ‎JB‏ من ‎"٠١‏ أفل من 0 ‎٠١ x‏ أقل من م انحل أقل من ‎"٠١ xo‏ أقل من ‎٠١‏ أقل من 0 ‎7٠١»‏ أقل من ‎"٠١‏ أقل من 0 ‎٠ x‏ ” أقل من ‎"٠١‏ أقل من ‎"٠١ x0‏ أقل من ‎٠١‏ أقل من 0 ‎"٠١ x‏ أقل من ‎Ja "٠‏ من ‎"٠١ x0‏ أقل من ‎"٠١‏ أقل من 0 ‎TY. x‏ أقل من ‎Jil ٠١‏ من ‎o‏ ‎X‏ ال أقل من ‎٠١‏ ''ء أقل من ‎CTY x0‏ أقل من ‎CTY‏ أقل من ‎7٠١ xo‏ أقل من ‎CTY‏ أقل من ‎TY x0‏ أقل من ‎TY‏ أقل من © * ‎٠١‏ ا أو أقل من ‎CTV‏ ‎٠‏ أقل من 0 ‎"٠ X‏ جزيئي جرامي. في تجسيدات خاصة؛ فإن الجسم المضاد من الاختراع الذي يرتبط ارتباطا خاصا ‎Lie lie‏ مع 01167 له ثابت معدل تفكك أو معدل ‎(PTK7 (Ab) + antigen (Ag)oncAb-Ag) kon‏ على الأقل ‎"٠١‏ جزيئي جرامي ' ثانية '؛ على الأقل ؟ 7 ‎TY‏ جزيني جرامي ' ثانية ‎١‏ على الأقل © ‎"٠١ x‏ جزيئي جرامي ” ‎TRE‏ على ‎"٠١ IB‏ جزيئي ‎Taha‏ تانية '؛ على ‎٠‏ الأقل 5 ‎pee x‏ جرامي ' ثانية ‎١‏ على الأقل ‎"٠١‏ جزيئي جرامي ' ‎Tat‏ على الأقل 5 ‎٠١ x‏ جزيئي جرامي ' ‎TRE‏ أو على الأقل ‎"٠١‏ جزيئي ‎aha‏ ثانية '. في تجسيد آخرء فإن الجسم المضاد من الاختراع الذي يرتبط ارتباطا ‎Lala‏ مناعيا مع 7 له معدل روا ‎(Ab) + antigen (Ag) or—Ab-Ag)‏ 01177 أقل من ‎Taal "٠١‏ أقل من ‎J TRE TY x0‏ من ‎J TRE "٠١‏ من # ‎TY x‏ ثانية "'ء أقل من ‎٠١ ٠‏ " ثانية 'ء أقل من ‎٠١ xe‏ ” ثانية 'ء أقل من ‎TALE TY‏ أقل من ه ‎“yx‏ ‎TAG‏ أقل من ‎TRE TTY‏ أقل من # * ‎TEE ” ٠١‏ أقل من ‎TRE ٠١‏ أقل من ‎CTA TY xe‏ أقل من ‎J CTA ” ٠١‏ من ‎TEE ” ٠١ x #٠‏ أقل من ‎٠١‏ * ‎TA‏ أقل من ‎TRE * ٠١ xo‏ أقل من ‎٠١‏ * ثانية "؛ أقل من ‎٠١ xo‏ ثانية ' أو أقل من ‎TY‏ ثانية '. ‎Yo‏ في تجسيدات أخرى منتقاة من الاختراع الحالي؛ يكون لدى الأجسام المضادة ضد ‎PTK7‏ ‏ثابت انجذاب أو ‎Ky (Konkan)‏ على الأقل ‎"٠١‏ جزيئي جرامي '؛ على الأقل ‎Vee‏ جزيئي ‎ale‏ على الأقل ‎"٠١‏ جزيئي ‎aba‏ على الأقل 0 * ‎"٠١‏ جزيثي ‎Taba‏ على of ‏جزيئي‎ ”٠١ ‏على الأفل‎ ١" ‏جزيئي جرامي‎ "٠١ x0 ‏جزيئي جرامي '؛ على الأقل‎ "٠١ ‏الأقل‎ ‏جرامي "ء على الأقل‎ ie Vex * ‏على الأقل‎ » ha ‏جزيئي‎ "٠١ ‏الأفل‎ eel ‏جزيئي‎ "٠١ x © ‏جزيئي جرامي '؛ على الأقل‎ "٠ ‏على‎ ١ ‏جزيئي جرامي‎ "٠١ ‏جزيئي جرامي ؛ على الأقل‎ "٠١ * 5 ‏جرامي '؛ على الأقل‎ exo ‏جزيئي جرامي "؛ على الأقل‎ "٠١ ‏جزيئي جرامي "؛ على الأقل‎ Max ‏الأقل ه‎ ٠
Cab ‏جزيئي‎ "٠١ ” 0 ‏جزيئي جرامي ؛ على الأقل‎ ٠١ ‏جزيئي جرامي "؛ على الأقل‎
TL ‏جزيئي جرامي "'ء على الأقل‎ "٠١ ” © ‏جزيئي جرامي أ؛ على الأقل‎ "٠١ ‏على الأقل‎
Seba ‏جزيئي‎ "٠١ ‏جزيئي جرامي ؛ على الأقل‎ "٠١ * 5 ‏جزيئي جرامي '؛ على الأقل‎ xo ‏جزيئي جرامي '؛ على الأقل‎ "٠١ ‏جزيئي جرامي '؛ على الأقل‎ "٠١ xe ‏على الأقل‎ ‏جزيئي‎ "٠١ xo ‏جزيئي جرامي ' أو على الأقل‎ yd ‏جزيئي جرامي "؛ على‎ ٠١ 0٠ .' ‏جرامي‎ ‎(Isoelectric points) ‏نقاط التعادل الكهربي‎ f
PTK7 ‏بالإضافة إلى خواص الارتباط سالفة الذكر؛ يكون لدى الأجسام المضادة ضد‎ ‏والتي تعرف‎ «(pl isoelectric points) ‏نقطة تعادل كهربي‎ polypeptides Jie ‏وأجزاء منهاء‎ ‏أي شحنة صافية. من المعروف في الفن‎ polypeptide ‏الذي عنده لا يحمل‎ pH ‏عموما بأنها‎ ٠ ‏للمحلول نقطة‎ pH ‏تكون عند أدنى مستوياتها نموذجيا عندما يساوي‎ protein ‏أن قابلية ذوبان‎ ‏لهذا يمكن تحسين قابلية الذوبان بتعديل رقم وموضع‎ protein ‏الذي يخص‎ (pI) ‏تعادل كهربي‎ ‏المتخلفات قابلة للتأين في الجسم المضاد وهذا لضبط 1م. على سبيل المثال؛ يمكن استعمال‎ ‏باستبدال حمض‎ Mie) ‏في صنع استبدالات حمض أميني ملائمة‎ polypeptide ‏التي تخص‎ pl ‏دون الرغبة في التقيد‎ (alanine Jie ‏محل متخلف غير مشحون‎ dysine Jie ‏أميني مشحون؛‎ ٠ ‏بأي نظرية خاصة؛ فإن استبدالات حمض أميني في الجسم المضاد التي تؤدي إلى حدوث‎ ‏تغييرات في ]م لهذا الجسم المضاد قد تحسن قابلية ذوبان الجسم المضاد و/أو ثباته. يعرف‎ ‏الماهرون في الفن مدى ملاءمة استبدالات حمض أميني المفيدة للجسم المضاد الخاص والتي‎ ‏تحقق 1م المطلوبة.‎ ‏بطرق متنوعة متضمنة؛ دون تحديد؛ التثبيط المتعادل‎ protein ‏التي تخص‎ pI ‏قد تحدد‎ Yo ‏كهربيا وحسابات بالكمبيوتر متعددة؛ انظر؛ مثلا‎
Bjellqvist et al., 1993, Electrophoresis 14:1023.
oy ‏للأجسام المضادة ضد 01167 من الاختراع بين قيمة أعلى من‎ pl ‏في أحد التجسيدات؛ تتراوح‎ al ‏أو حوالي 4. في تجسيدا‎ Ae ‏حوالي‎ cA ‏حوالي 7,9» حوالي‎ oY ‏حوالي 1,0 حوالي‎
A ‏تتراوح 1م للأجسام المضادة ضد 71167 من الاختراع بين قيمة أعلى من درت ا قرلا‎ ‏أو 9. في تجسيد آخر أيضاء فإن الاستبدالات الناتجة عن التعديلات الواقعة على آم‎ 8 ‏للأجسام المضادة من الاختراع لا تقلل بوضوح انجذاب ارتباط هذه الأجسام المضادة تجاه‎ © ‏كما هو مشروح أدناه بمزيد من التفصيل»؛ من المتصور تحديدا أن استبدال "استبدالات"‎ .7 pl ‏قد ينتج عنه أيضا تغيرا في‎ FoyR ‏الذي ينشئ عن تعديل الارتباط مع‎ Fo ‏لمنطقة‎ ‏بشكل محدد لإجراء كل من التعديل‎ Fe ‏تجسيد مفضل؛ يتم اختيار استبدال "استبدالات" لمنطقة‎ ‏كما هو مستخدم هناء تحدد قيمة آم بأنها‎ pl ‏المرغوب في ارتباط 10718 وأي تغير مرغوب في‎ ‏]م لشكل الشحنة السائدة.‎ ٠ (Thermal stability) ‏ع. الثبات الحر اري‎ ‏في الجسم المضاد قد تكون مؤشرا جيدا للثبات‎ Fab ‏لمجال السيطرة‎ Tm ‏يدرك أيضا أن‎ ٍ ‏للجسم المضاد وقد توفر إضافيا دلالة على عمر النتصف. إن‎ (thermal stability) ‏الحراري‎ ‎Tm Jui ‏من مجال سيطرة أو ترتيب محدد.‎ 78 ٠ ‏هي مجرد درجة حرازة تمدد نسبة‎ Tm ‏المرتفعة على تراكم أقل/ ثبات أعلى.‎ Tm ‏المنخفضة على تراكم أكثر/ ثبات أقل؛ بينما تدل‎ ٠ ‏أعلى. علاوة‎ Tm ‏يفضل استخدام الأجسام المضادة أو أجزاء أو مشتقات منها تمتلك‎ dig] ‏باستخدام التقنيات المعروفة في الفن يمكن تعديل تركيبة الأجسام المضادة ضد‎ haa ‏على‎ ‎USPN. Sie ‏أو مجالات السيطرة منها لزيادة أو تحسين الثبات الجزيئي. انظر‎ 7 ‏لجسم مضاد منتقى قيمة‎ Fab ‏لذلك؛ في أحد التجسيدات؛ يكون لمجال السيطرة‎ . 2 ‏فى ىق 30 نلك فل‎ (Ar (VO (Vu ‏أعلى من على الأقل فى 00 نكت فك‎ 10 ٠ ‏لجسم مضاد منتقى‎ Fab ‏يكون لمجال السيطرة‎ «AT ‏مئوية. في تجسيد‎ ٠٠ ‏أو‎ 11# ٠
Vo ‏حوالي‎ te ‏حوالي‎ Te ‏9؛ حوالي 00 حوالي‎ ٠ ‏من على الأقل حوالي‎ of Tm ‏قيمة‎ ‎eo ‏حوالي ٠؛ حوالي 58؛ حوالي ١٠٠؛ حوالي‎ Ao ‏حوالي‎ Av ‏حوالي‎ Vo ‏حوالي‎ ‏يمكن قياس درجات حرارة الاتصهار‎ Asie) Ve ‏أو حوالي‎ Ve ‏حوالي‎ »٠١١ ‏حوالي‎ ‏باستخدام أي طريقة قياسية‎ (Fab ‏(مثلا مجال سيطرة‎ protein ‏لمجال سبطرة‎ (Tm) ‏الحراري‎ Ye
Dia ‏بقياس سعري فاحص تبياني؛ انظر‎ Mie ‏معروفة في الفن؛‎ oA
Vermeer et al, 2000, Biophys. J. 78:394-404; Vermeer et al., 2000, Biophys. J. 79: 2150-2154 ‏المندمجين هنا كمرجع.‎ (PTK7 Modulator Fragments and Derivatives) PTK7 ‏جزاء ومشتقات مادة ضابطة‎ Iv ‏عندما تشتمل عوامل الاختراع الحالي على بنيات التحام؛ أجسام مضادة؛ أجزاء أو‎ ° ‏الضابطة المنتقاة» تربط؛ تتحد؛ تعقد؛ توصل؛ ترتبط؛ تتصل؛ تتفاعل‎ algal) ‏مشتقات؛ تتفاعل‎ ‏بينياء أو بطريقة أخرى تصاحب 71167 وبهذا تنتج تأثيرات مضادة لنشوء الورم مطلوبة. يدرك‎ ‏الماهرون في الفن أن المواد الضابطة المشتملة على أجسام مضادة ضد 71167 تتفاعل بينيا‎ ‏أو تصاحب 01167 من خلال مكان ارتباط واحد أو أكثر ظاهر على الجسم المضاد. تحديدا‎ ‏على منطقة من‎ (binding site) ‏يشتمل مصطلح مكان ارتباط‎ lin ‏أكثر وكما هو مستخدم‎ ٠
Mis) ‏مسئولة عن الارتباط انتقائيا مع الجزيء المستهدف الذي نحن بصدده‎ polypeptide ‏مركب ترابطي؛ مستقبل؛ مادة خاضعة أو مثبط). تشتمل مجالات‎ cali ‏مولد‎ enzyme ‏السيطرةٍ للارتباط على مكان ارتباط واحد على الأقل (مثلا يحتوي الجسم المضاد 150 السليم‎ ‏على مجالي سيطرة ومكاني ارتباط). تشتمل مجالات السيطرة التمثيلية للارتباط على مجال‎ ‏سيطرة متغير للجسم المضاد؛ مجال سيطرة مركب ترابطي لربط المستقبل» مجال سيطرة‎ ٠ ‏لأغراض الاختراع الحالي؛ قد‎ enzymatic ‏مستقبل لربط المركب الترابطي أو مجال سيطرة‎ ‏على‎ (Fo-PTK7 ‏تشتمل المنطقة النشطة النموذجية في 71167 (مثلا كجزء من بنية التحام‎ . ‏معزز‎ phosphorylation ‏مكان ربط للمادة الخاضعة أو‎ (Fragments) ‏جزاء‎ Yi a ‏مكتسب السمة الآدمية؛‎ «pan ‏بغض النظر عن الشكل المنتقى للمادة الضابطة (مثلا‎ Y. ‏إلخ) لممارسة الاختراع؛ يدرك أن الأجزاء النشطة مناعيا منها قد تستخدم طبقا للتعاليم هنا.‎ ‏على قسم على‎ (antibody fragment) ‏الجسم المضاد‎ ohn ‏بالمعنى الشامل؛ يشتمل مصطلح‎ ‏مناعي طبيعي الوجود). تحديدا أكثر يشير‎ globulin ‏الأقل من جسم مضاد سليم (مثلا‎ ‏إلى كسر أو قسم من جسم مضاد أو سلسلة جسم مضاد (أو جزيء‎ (fragment) ‏مصطلح جزء‎ ‏مشتملا على متخلفات حمض أميني أقل من الجسم المضاد أو‎ (Fe ‏التحامات‎ Als ‏في‎ PTKT YO (antigen- ‏سلسلة الجسم المضاد السليم أو الكامل. يدل المصطلح جزء ربط مولد مضاد‎ ‏مناعي أو جسم مضاد يربط مولد‎ globulin ‏من‎ polypeptide ‏على جزء‎ binding fragment)
oq ‏المضاد أو يتنافس مع الجسم المضاد السليم (أي مع الجسم المضاد السليم الذي يشتق منه‎ ‏ذلك) من أجل ربط مولد المضاد (أي الربط الخاص). كما هو مستخدم هناء يشتمل مصطلح‎ ‏على أجزاء ربط مولد‎ (fragment of an antibody molecule) ‏جزء من جزيء جسم مضاد‎ (Vi) ‏للجسم المضاد؛ سلسلة ثقيلة‎ (V1) ‏مضاد من الأجسام المضادة؛ مثلا سلسلة خفيفة‎ ‏جزء‎ (Fd ‏جزء‎ Fab ‏جزء‎ F(@b)2 ‏جزء‎ «(scFv) ‏للجسم المضاد؛ جسم مضاد فردي السلسلة‎ © ‏جسم‎ lia ‏أجزاء جسم مضاد مجال سيطرة 528( أجسام ثنائية؛ أجسام مضادة خطية؛‎ Fv ‏مضاد فردي السلسلة وأجسام مضادة متعددة الخصوصية متشكلة من أجزاء الجسم المضاد.‎ ‏على نحو مماثل؛ يشتمل الجزء النشط من 71167 على قسم من جزيء 71167 الذي يحافظ‎ ‏على قدرته على التفاعل بينيا مع المواد الخاضعة 01167 أو مستقبلاته ويعدلها بطريقة مماثلة‎ ‏كفاءة‎ Jal ‏على الرغم من أنه قد يكون‎ - phosphorylation ie) ‏لتصبح مثل 01167 السليم‎ ٠ ‏إلى حد ما).‎
يعرف الماهرون في الفن أنه يمكن الحصول على الأجزاء من خلال المعالجة الكيميائية أو ‎enzymatic '‏ لمادة ضابطة سليمة أو كاملة (متلا جسم مضاد أو سلسلة جسم مضاد) أو بوسيلة مخلقة. في هذا الصدد عند تحديد ‎opal‏ الجسم المضاد المتنوعة ‎Led‏ يخص هضم جسم مضاد سليم؛ يدرك الماهرون في الفن أنه يمكن تخليق هذه الأجزاء من جديد إما كيميائيا أو باستخدام أسلوب ‎DNA‏ المخلق. لهذاء يتضمن بوضوح مصطلح الجسم المضاد ((000600ة)؛ كما هو مستخدم؛ أجسام مضادة أو أجزاء أو مشتقات منها إما ناتجة بتعديل الأجسام المضادة بالكامل
أو مخلقة من جديد باستخدام أسلوب ‎DNA‏ المخلق. بصفة أكثر خصوصية؛ يؤدي هضم ‎papain‏ للأُجسام المضادة إلى إنتاج اثنين من ‎shal‏ ‎٠‏ ربط ‎alga‏ مضاد متماثئلة. تسمى ‎Fab shal‏ يكون لكل منهما مكان ربط مولد مضاد فردي؛ وجزء ‎Fo‏ متخلف؛ حيث يدل اسمه على قدرته على التبلور بسهولة. ينتج عن معالجة ‎Pepsin‏ ‏جزء ‎F(ab),‏ له مكاني ربط ‎alse‏ مضاد ولا يزال قادرا على ربط مولد المضاد ربطا متقاطعا. يحتوي أيضا جزء ‎Fab‏ على مجال سيطرة ثابت للسلسلة الخفيفة ومجال سيطرة ثابت أول ‎(Cyl)‏ للسلسلة الثقيلة. تختلف أجزاء ‎Fab’‏ عن أجزاء ‎Fab‏ بإضافة القليل من المتخلفات عند © طرف ‎(carboxy‏ مجال السيطرة ‎Cyl‏ للسلسلة الثقيلة متضمنة واحد أو أكثر من ‎cysteines‏ ‏من منطقة مفصلة الجسم المضاد. إن 180-511 هي رمز ‎Fab'‏ هنا الذي فيه متخلف (متخلفات) ‎cysteine‏ من مجالات السيطرة الثابتة يحمل ‎thiol de gene‏ حرة واحدة على الأقل.
Te ‏مفصلة‎ cysteines ‏التي لها‎ Fab ‏أصليا كأزواج من أجزاء‎ F(ab), ‏تنتج أجزاء الجسم المضاد‎
Fundamental Sie ‏بينها. هناك أيضا اقترانات كيميائية أخرى معروفة لأجزاء الجسم. انظر‎ ‏,0011001087]؛ لمزيد من الوصف الخاص‎ W. E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1999) ‏بأجزاء الجسم المضاد الأخرى.‎ ° من المدرك إضافيا أن جزء ‎FV‏ هو جزء لجسم مضاد محتوي على مكان ربط وإدراك مولد مضاد كامل. تتكون هذه المنطقة من ‎dimer‏ له مجال سيطرة متغير لسلسلة ثقيلة واحدة وسلسلة خفيفة واحدة متلازمين ‎aly‏ واللتين يمكن أن تكونا متكافئتين في طبيعتهماء مثلا في ‎scFv‏ في هذه الهيئة تتفاعل بينيا ‎CDRs‏ الثلاث من كل مجال سيطرة متغير لتحديد مكان ربط مولد مضاد على سطح ‎dimer‏ 17-772. إن ‎CDRs‏ الست إجمالا أو وحدة فرعية منها ‎٠‏ تضفي خصوصية ربط مولد مضاد على الجسم المضاد. على أية حال؛ يمتلك أيضا مجال السيطرة المتغير الفردي (أو نصف ‎Fy‏ المشتمل على © ‎CDRs‏ فقط خاصة لمولد مضاد) القدرة على إدراك وربط ‎alge‏ المضاد؛ على الرغم من كونه عادة عند مستوى انجذاب أقل من مكان الربط الكامل. ‏| في تجسيدات ‎cg al‏ يشتمل ‎da‏ من الجسم المضاد ‎Dia‏ على منطقة ‎(Fo‏ يحتفظ بوظيفة ‎٠‏ واحدة على الأقل من الوظائف الحيوية المصاحبة طبيعيا لمنطقة ‎Fo‏ عند وجودها في الجسم المضاد السليم؛ مثلا ربط 70180 تعديل عمر النصف للجسم المضاد؛ وظيفة ‎ADCC‏ وارتباط مكمل. في أحد التجسيدات؛ يكون جزء من الجسم المضاد عبارة عن جسم مضاد أحادي التكافؤ له عمر نصف في الجسم الحي مماثل جوهريا للجسم المضاد السليم. على سبيل ‎(JU‏ قد يشتمل جزء الجسم المضاد المذكور على ذراع ربط ‎alse‏ مضاد مرتبط بترثيب ‎Fe‏ ‎٠‏ القادر على إضافة ثبات حيوي إلى الجزء. ‎(Derivatives) ‏المشتقات‎ .b
Mia) ‏يدرك أيضا أن المواد الضابطة للاختراع أحادية أو عديدة التكافو‎ «al ‏في تجسيد‎ ‏إلى عدد‎ (valency) ‏ثنائية أو ثلاثية التكافؤ. إلخ). كما هو مستخدم هنا يشير مصطلح التكافؤ‎ ‏أماكن ربط الأهداف الممكنة (أي 01167) المصاحبة للجسم المضاد. يعمل كل مكان ربط‎ ‏مستهدف على ربط جزيء مستهدف أو مكان معين أو موقع معين ربطا خاصا على الجزيء‎ YO ‏المستهدف. عندما يشتمل الجسم المضاد من الاختراع الحالي على أكثر من مكان ربط‎ ‏مستهدف واحد (عديد التكافؤ)؛ يعمل كل مكان ربط مستهدف على ربط نفس الجزيئات أو‎
جزيئات مختلفة ربطا خاصا (مثلا قد يرتبط مع مركبات ترابطية مختلفة أو مولدات مضادة مختلفة؛ أو ‎epitopes‏ أو مواقع مختلفة على نفس مولد المضاد). لأغراض الاختراع الحالي؛ يفضل أن تمتلك الأجسام المضادة المعينة مكان ربط واحد على ‎Ji)‏ خاص لأجل ‎PTK7‏ ‏الآدمي. في أحد التجسيدات؛ تكون الأجسام المضادة في الاختراع الحالي أحادية التكافؤ بحيث © يرتبط كل مكان ربط في الجزيء ارتباطا خاصا مع موقع 1167 فردي أو 0(08اام©. في تجسيدات أخرى؛ تكون الأجسام المضادة عديدة التكافؤ بحيث تشتمل على ما يزيد عن مكان ربط واحد وحيث إن أماكن الربط المختلفة تلازم ما يزيد عن موقع أو ‎epitope‏ فردي ملازمة خاصة. في هذه الحالات قد تتواجد ‎epitopes‏ المتعددة على ‎PTK7 polypeptide‏ المختار أو نوع متباين أو قد يتواجد ‎epitope‏ الفردي على 71167 بينما قد يتواجد ‎epitope‏ الثاني المختلف .17.8.1. 2009/0130105 Mia ‏أو سطح آخر. انظر‎ jal ‏على جزيء‎ ٠
Lelie ‏كما هو مشار إليه أعلاه؛ قد ترتبط الأجسام المضادة عديدة التكافؤ ارتباطا خاصا‎ ‏مع الجزيء‎ Lelia ‏في الجزيء المستهدف المطلوب أو قد ترتبط ارتباطا خاصا‎ epitopes ‏مع‎ ‏مغاير أو مادة تدعيم صلبة. في‎ polypeptide ‏مغير؛ مثلا‎ epitope ‏المستهدف وكذلك‎ ‏تجسيدات مفضلة لأجسام مضادة ضد 71167 تربط مقط إثنين من مولدات المضاد (أي أجسام‎ ‏مضادة ثنائية الخصوصية)؛ يضم أيضا الاختراع الحالي أجسام مضادة ذات خصوصيات‎ Vo ‏إضافية مثلا أجسام مضادة ثلاثية الخصوصية. تشتمل أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛‎ ‏بدون تحديد؛ على تلك التي بها ذراع واحد موجه ضد 71167 والذراع الآخر موجه ضد أي‎ ‏مولد مضاد آخر (مثلا علامة خلية مادة ضابطة). هناك طرق معروفة في الفن لصنع أجسام‎ ‏مضادة ثنائية الخصوصية. يعتمد الإنتاج التقليدي للأجسام المضادة ثنائية الخصوصية كاملة‎ ‏مناعي؛‎ globulin ‏الطول على الإظهار المشترك لاثنين من أزواج سلسلة ثقيلة- سلسلة خفيفة‎ Ye (Millstein et al., 1983, Nature, ‏حيث تمتلك السلسلتان مستويات خصوصية مختلفة‎ ‏متعددة الخصوصية موائمة‎ gyal ‏يذكر 2009/0155255 ...17.5.1 بنيات‎ .305:537-539( أكثر تعقيدا وطرق تصنيعها. في تجسيدات أخرى أيضاء تلتحم مجالات السيطرة المتغيرة في الجسم المضاد التي لها © خصوصيات ارتباط مطلوبة (أماكن اتحاد ‎alge‏ المضاد والجسم المضاد) مع ترتيبات مجال سيطرة ثابت ‎globulin‏ مناعي. يفضل أن يكون الالتحام عبارة عن مجال سيطرة ثابت سلسلة ‎globulin dl‏ مناعي؛ مشتملا على جزء على الأقل من مناطق المفصلة ‎«C2‏ ر/أر 3ن.
في أحد الأمثلة؛ تتواجد منطقة ثابتة سلسلة ثقيلة أولى ‎(Cal)‏ محتوية على المكان الضروري لربط السلسلة الخفيفة في واحد على الأقل من الالتحامات. يتم إقحام ‎DNAs‏ تشفر التحامات سلسلة ثقيلة ‎globulin‏ مناعي؛ عند الرغبة؛ وسلسلة خفيفة ‎globulin‏ مناعي؛ في نواقل إظهار منفصلة؛ ويتم فيها بصورة مشتركة استقبال حامل الجين من العائل في كائن متعض عائل © مناسب. ينتج عن هذا مرونة هائلة لضبط النسبة المزدوجة لأجزاء ‎polypeptide‏ الثلاث عند تطبيق تجسيدات تؤدي فيها النسب غير المتساوية من ؟ سلاسل ‎polypeptide‏ مستخدمة في البنية إلى إعطاء إنتاجيات مثلى. على أية حال؛ يمكن إقحام ترتيبات التشفير لأجل اثنين من سلاسل ‎polypeptide‏ أو كل سلاسل ‎polypeptide‏ الثلاث في ناقل إظهار واحد عندما يؤدي إظهار اثنين على الأقل من سلاسل ‎polypeptide‏ بنسب متساوية إلى إعطاء إنتاجيات عالية ‎٠‏ أو عندما تكون النسب غير ذات أهمية كبيرة.
في أحد التجسيدات لهذا الأسلوب؛ تتكون الأجسام المضادة ثنائية الخصوصية من سلسلة ‎globulin AS‏ مناعي هجين لها خصوصية ارتباط ‎Jl‏ في أحد الأذرع (مثلا 01167)؛ وزوج سلسلة ثقيلة- سلسلة خفيفة ‎globulin‏ مناعي هجين (مما يعطي خصوصية ربط ثانية) في الذراع الآخر. لقد وجد أن هذا البناء غير المتماتل يسهل عملية فصل المركب المرغوب ثنائي ‎١‏ الخصوصية من اتحادات سلسلة ‎globulin‏ مناعي غير المرغوبة؛ حيث إن وجود السلسلة الخفيفة ‎globulin‏ مناعي في نصف واحد فقط من الجزيء ثنائي الخصوصية يوفر طريقة سهلة للفصل. يعلم عن هذا الأسلوب في الطلب الدولي رقم 4748 46/0 لمزيد من التفاصيل
عن توليد أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛ انظر ‎Mia‏ ‎Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology, 121:210.‏ ‎ys‏ طبقا للأسلوب الآخر الموصوف في الطلب الدولي رقم ‎AT [YY N)‏ يمكن معالجة زوج من جزيئات ‎١‏ لأجسام المضادة معالجة هندسية لرفع النسبة المئوية من ‎heterodimers‏ إلى أقصاها المسترجعة من مزرعة خلية مخلقة. يشتمل السطح البيني المفضل على جزء على الأقل من مجال سيطرة ‎Cid‏ من مجال سيطرة ثابت للجسم المضاد. في هذه الطريقة؛ تستبدل واحدة أو أكثر من السلاسل الجانبية الصغيرة من حمض أميني في السطح البيني لجزيء الجسم المضاد © الأول مع سلاسل جانبية أكبر ‎tyrosine ie)‏ أو ‎(tryptophan‏ تخلق فجوات تعويضية ذات مقاس متماثل أو متشابه مع السلسلة (السلاسل) الجانبية الكبيرة على السطح البيني لجزيء الجسم المضاد الثاني وهذا باستبدال السلاسل الجانبية الكبيرة من حمض أميني مع سلاسل
صغيرة ‎alanine Nis)‏ أو ‎٠ (threonine‏ ينتج هذا ‎all‏ لزيادة إنتاجية ‎heterodimer‏ أفضل من المنتجات النهائية غير المرغوبة الأخرى ‎‘homodimer Jie‏ تشتمل أيضا الأجسام المضادة ثنائية الخصوصية على أجسام مضادة متقاطعة الرابطة أو متغايرة الاقتران. على سبيل ‎(JB‏ يمكن أن يقترن أحد الأجسام المضادة في الاقتران المغاير © مع ‎avidin‏ ويقترن آخر مع ‎biotin‏ اقترح أن هذه الأجسام المضادة توجه مثلا ‎LDA‏ الجهاز المناعي ناحية خلايا غير مرغوب فيها (وثيقة براءة الاختراع الأمريكية رقم 41764486)؛ ولمعالجة عدوى ‎HIV‏ (الطلب الدولي رقم 11/007780 الطلب الدولي رقم ‎AY PVE‏ ووثيقة براءة الاختراع رقم ‎٠7084‏ ). قد تصنع الأجسام المضادة متغايرة الاقتران باستخدام أي من طرق الارتباط المتقاطع التقليدية. هناك عوامل مناسبة للارتباط المتقاطع معروفة في الفن ‎٠‏ ومعلم عنها في 4,676,980 ‎(US.P.N.‏ مع عدد من تقنيات الربط المتقاطع. ‎VII‏ مواد ضابطة 21127 - تعديلات منطقة ثابتة ‎(PTK7 Modulators - Constant Region Modifications)‏ ‎a‏ منطقة ‎Fie‏ ومستقبلات ‎(Ec region and Fe receptors) Fe‏ بالإضافة إلى العديد من التعديلات؛ الاستبدالات. الإضافات أو المحذوفات التي تجرى في ‎٠‏ المنطقة المتغايرة أو منطقة الربط للمواد الضابطة المبينة (مثلا 20-7071167 أو أجسام مضادة ضد ‎(PTK7‏ المذكورة أعلاه؛ يعرف الماهرون في الفن أن تجسيدات الاختراع الحالي المختارة قد تشمل أيضا استبدالات أو تعديلات على المنطقة الثابتة (أي منطقة ‎(Fe‏ تحديدا ‎«SH‏ من المتصور أن تحتوي المواد الضابطة 71167 من الاختراع على واحد أو أكثر من استبدالات؛ طفرات و/أو تعديلات إضافية في حمض أميني ‎٠»‏ ضمن ‎ape‏ والتي تنتج مركبا له سمات ‎٠‏ - مفضلة تتضمن؛ دون تحديد: حركيات دوائية معدلة؛ زيادة عمر نصف ‎cual‏ زيادة انجذاب الارتباط؛ قلة التولد المناعي؛ زيادة الإنتاج؛ تعديل ارتباط المركب الترابطي ‎Fe‏ تعزيز أو تقليل نشاط ‎glycosylation «CDC sl ADCC‏ معدلة و/أو روابط ‎disulfide‏ وخصوصية ارتباط معدلة. في هذا المجال يمكن إدراك أن هذه الأشكال المتباينة من ‎Fe‏ قد تستخدم على نحو مفيد في تعزيز الخواص الفعالة المضادة لنشوء الورم التي تخص المواد الضابطة الموضحة. ‎Yo‏ يستخدم هنا مصطلح منطقة ‎(Fe region) Fo‏ يحدد منطقة طرفية © في سلسلة تقيلة ‎globulin‏ مناعي؛ متضمنة مناطق ‎Fo‏ ذات ترتيب أصلي ومناطق ‎Fe‏ متباينة. على الرغم من اختلاف حدود منطقة ‎Fe‏ في السلسلة الثقيلة ‎globulin‏ مناعي؛ تحدد عادة منطقة ‎Fe‏ السلسلة
الثقيلة 10 الآدمي للاستطالة من متخلف حمض أميني عند مكان ‎«Cys226‏ أو من ‎Pro230‏ ‏إلى الطرف ‎carboxyl‏ فيه. قد يزال ‎lysine‏ الطرفي © (المتخلف 447 طبقا لنظام ترقيم ‎(EU‏ ‏في منطقة ‎(Fe‏ مثلا أثناء إنتاج أو تنقية الجسم المضاد؛ أو بتعديل حمض نووي الذي يشفر السلسلة التقيلة من الجسم المضاد تعديلا هندسيا تخليقيا. تبعا لهذاء قد تشتمل تركيبة الأجسام © المضادة السليمة على تجمعات الجسم المضاد مزال منها كل متخلفات ‎(K447‏ تجمعات للجسم المضاد لم يزال ‎Leia‏ متخلفات ‎(R447‏ وتجمعات للجسم المضاد لها خليط من أجسام مضادة مع متخلف ‎K447‏ أو بدونه. إن منطقة ‎Fo‏ الوظيفية تمتلك وظيفة مستجيب من منطقة ‎Fe‏ ‏للترتيب الأصلي. تشتمل وظائف المستجيب النموذجية على ربط و01؛ ‎CDC‏ ربط مستقبل ‎¢tADCC (Fe‏ بلعمة؛ خفض تنظيم مستقبلات خط الخلية (مثلا مستقبل خلية 8؛ ‎¢(BCR‏ إلخ. ‎٠‏ تتطلب وظائف المستجيب المذكورة عموما منطقة ‎Fe‏ تتحد مع مجال سيطرة ربط (مثلا مجال سيطرة متغير للجسم المضاد) ويمكن تقييمها بواسطة اختبارات متعددة كالمبينة مثلا في التعريفات هنا . يصف مستقبل ‎Fo‏ أو 18 مستقبلا مرتبطا مع المنطقة ‎Fo‏ من الجسم المضاد. في بعض التجسيدات؛ يكون 1618 عبارة عن 708 أدمي أصلي. في بعض التجسيدات»؛ يكون 7768 عبارة ‎٠‏ عن مستقبل يربط جسم مضاد 180 (مستقبل ‎(gamma‏ ويتضمن مستقبلات من فئات فرعية ‎<FeyRI‏ ]له و018111؛ متضمنا أشكال متباينة ‎allelic‏ وأشكال مجدولة على نحو مختلف من هذه المستقبلات. تشتمل مستقبلات ‎Feyll‏ على ‎FeyRITA‏ (مستقبل تنشيط) ‎FeyRIIB 5‏ (مستقبل تثبيط)»؛ ويكون لها ترتيبات حمض أميني متمائلة تختلف أساسيا عن مجالات السيطرة ‎cytoplasmic‏ فيها. يحتوي مستقبل تنشيط ‎Foy RIA‏ على حافز تنشيط ‎Vo‏ معتمد على ‎tyrosine‏ مستقبل مناعي ‎(ITAM)‏ في مجال السيطرة ‎cytoplasmic‏ الخاص به. يحتوي مستقبل التثبيط 1718118 على حافز تثبيط معتمد على ‎tyrosine‏ مستقبل مناعي ‎(TIM)‏ في مجال السيطرة ‎cytoplasmic‏ الخاص به. انظر مثلا ‎Daeron, Annu.
Rev.
Immunol. 15:203-234 (1997).‏ راجع ‎FeRs‏ في مثلا ‎Yo‏ ملة ‎Ravetch and Kinet, Annu.
Rev.
Immunol 9:457-92 (1991); Capel et‏ ‎Immunomethods 4:25-34 (1994); and de Haas et al., J.
Lab.
Clin.
Med. 126:330-41‏
يضم أيضا المصطلح ‎FOR‏ هنا مزيدا من 085 الأخرى؛ متضمنة تلك التي يجب تحديدها في المستقبل. يشتمل أيضا مصطلح مستقبل ‎Fe‏ أو ‎FR‏ على مستقبل وليد؛ ‎(FeRn‏ والذي يكون مسئولا في حالات معينة عن نقل ‎IgGs‏ الأصلي إلى الجنين ‎(Guyer ct al., J.
Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al, J.
Immunol. 24:249‏ ° )1994( وتنظيم اتزان ‎globulins‏ المناعية في الجسم. هناك طرق معروفة لقياس الارتباط مع ‎«FcRn‏ ‏انظر مثلا ‎Ghetie and Ward., Immunol.
Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature‏ ‎Biotechnology, 15(7):637-640 (1997); Hinton et al., J.
Biol.
Chem. 279(8):6213-‏ ‎WO 2004/92219 (Hinton et al.). Ve‏ ;)2004( 6216 ‎.b‏ وظائف ‎(Fc functions) Fc‏ كما هو مستخدم ‎lia‏ تشير السمية الخلوية المعتمدة على مكمل ‎CDC‏ إلى تحلل الخلية ْ المستهدفة في وجود المكمل. يبدأ عمل مسار تنشيط المكمل من خلال ارتباط المكون الأول لنظام المكمل ‎(Cl)‏ مع حزيء؛ جسم مضاد مثلا معقد مع مولد مضاد متجانس التكوين. ‎٠‏ التقييم تنشيط المكمل؛ يجرى اختبار ‎Jie CDS‏ الموصوف في ‎Gazzano-Santoro et al., 1996, J.
Immunol.
Methods, 202: 163.‏ إضافة لذلك؛ فإن تسمم خلوي يتوسطه خلية تعتمد على جسم مضاد أو ‎ADCC‏ يشير إلى شكل من التسمم الخلوي حيث يرتبط ‎Ig‏ منطلق على مستقبلات ‎(FCRs) Fo‏ موجودة على خلايا سامة للخلية معينة (مثل خلايا قاتلة طبيعيا ‎(NK)‏ أليفات النواة؛ وخلايا بلعمية) مما ‎٠‏ - يسمح لتلك ‎LA‏ المستجيب السامة للخلية بالارتباط تحديدا مع خلية مستهدفة تحمل مولد مضاد وبالتالي قتل الخلية المستهدفة مع ‎cytotoxins‏ الخلوية. إن أجسام مضادة ‎IgG‏ عالية الانجذابية بالتحديد تستهدف خلايا سامة للخلية الذراعية مستهدفة وتلزم بصورة مطلقة لهذا القتل. يكون تحلل الخلية المستهدفة خارج خلوي؛ يتطلب اتصال خلية مع خلية مباشرة ولا يتضمن خطوة تكميلية. ‎Yo‏ إن متغيرات ‎sale‏ ضابطة 71167 مع انجذابية ارتباط إلى 701 متغيرة أو نشاط ‎ADCC‏ ‏متغير هي التي تحسن أو تفلل نشاط الارتباط إلى ‎FeR‏ و/أو نشاط ‎ADCC‏ بالمقارنة مع جسم مضاد أصلي أو غير مادة ضابطة يشمل منطقة ‎Fo‏ أصلية الترتيب. إن متغير المادة الضابطة
الذي يظهر ارتباط متزايد إلى ‎FoR‏ يرتبط عند ‎FoR‏ واحد على الأقل بانجذابية أفضل من الجسم المضاد الأصلي أو غير المادة الضابطة أو إلى مادة ضابطة يشمل منطقة ‎Fo‏ أصلية الترتيب. إن متغير يظهر ارتباط منخفض إلى ‎FR‏ يرتبط عند ‎FeR‏ واحد على الأقل بانجذابية ‎Toul‏ من الجسم المضاد الأصلي أو غير المادة الضابطة أو إلى مادة ضابطة يشمل © منطقة ‎Fe‏ أصلية الترتيب. إن تلك المتغير التي تظهر ارتباط منخفض إلى ‎FeR‏ يمكن أن تظهر ارتباط ضعيف أو ليس ذو قيمة إلى ‎«Mis FoR‏ صفر ‎٠-‏ 77 ارتباط إلى ‎FcR‏
بالمقارنة مع منطقة ‎IgG Fe‏ أصلية ‎Jie Ola cad all‏ تقنيات محددة معروفة جيدا في الفن. بالنسبة إلى ‎FeRn‏ فإن ‎١‏ لأجسام المضادة للاختراع الحالي تشمل أو تتضمن أيضا متغيرات ‎Fo‏ مع تعديلات في المنطقة الثابتة مما يوفر أنصاف عمر (مثل؛ أنصاف عمر ‎٠‏ مصل) في الثدييات؛ يفضل في آدمي؛ تزيد عن * أيام؛ تزيد عن ‎٠١‏ أيام؛ تزيد عن ‎V0‏ يوم؛ يفضل أن تزيد عن ‎٠١‏ يوم؛ تزيد عن ‎TO‏ يوم تزيد عن ‎٠‏ ؟ يوم؛ تزيد عن ‎TO‏ يوم؛ تزيد عن ‎Wem ٠‏ عن £0 يوم؛ تزيد عن ‎Oped‏ تزيد عن ؟ ‎sed‏ تزيد عن ؛ ‎sed‏ أو تزيد عن © شهور. إن أتصاف ادر المتزايدة للأجسام المضادة (أو الجزيئات المشتملة على ‎(Fo‏ ‏| للاختراع الحالي في الشييات؛ يشال في ادمي؛ يسبب أعلى عيار مصل للأجسام المضادة أو ‎٠‏ أجزاء الجسم المضاد المذكورة في الثديي؛ وبالتالي؛ تقلل تكرار إعطاء الأجسام أو أجزاء الجسم المضاد المذكورة. يمكن توليد أجسام مضادة لها أنصاف عمر في الكائن الحي متزايدة بتقنيات معروفة لهؤلاء المهرة في الفن. على سبيل المثال؛ يمكن توليد أجسام مضادة ذات أنصاف عمر متزايدة في الكائن الحي بواسطة تعديل (مثل؛ استبدال؛ إلغاء أو إضافة) متخلفات حمض أميني محددة تدخل في التفاعل بين مجال سيطرة ‎Fe‏ ومستقبل ‎FeRn‏ (انظر؛ مثلا؛ الطلبات ‎"٠‏ الدولية أرقام ‎Ranier 4/747 09 39/1 457١‏ 17770601 وترجمة ‎YT VT)‏ يمكن اختبار ارتباط مع :170180 آدمي في الجسم الحي وعمر النصف لمصل من ‎polypeptides‏ ارتباط انجذاب عالي ‎(ol FeRn‏ مثلاء في خطوط خلية لفأر حامل للجين أو آدمي حامل للجين من العائل تظهر ‎FeRn‏ آدميء أو في ‎cl lS‏ رئيسية يعطى لها ‎Les polypeptides‏ منطقة ‎Fo‏ متغايرة. يصف الطلب الدولي رقم ‎7٠00/47 VY‏ متغايرات ‎Y0‏ جسم مضاد لها ارتباط محسن أو ضعيف مع ‎.FcRns‏ انظر أيضاء ‎Shields et al.
J. tie‏
.Biol.
Chem. 9(2):6591-6604 (2001)
ب في تجسيدات أخرى أيضاء تتعدل أنماط 0 تركيبات ‎glycosylation‏ للأجسام المضادة من الاختراع. بتحديد ‎٠ Sash‏ يمكن أن يشتمل تجسيد مفضل للاختراع الحالي على أشكال ‎glyco‏ ‏هندسية واحدة أو أكثرء أي؛ نمط ‎glycosylation‏ متغير أو تركيبة ‎carbohydrate‏ متغيرة ترتبط © تساهميا بجزيء يشمل منطقة ‎Fe‏ يمكن أن تكون أشكال ‎glyco‏ هندسية مفيدة لأغراض ‎Bade‏ تتضمن دون اقتصار تحسين أو تقليل وظيفة مستجيب؛ زيادة انجذابية الجسم المضاد للمولد المضاد المستهدف أو تسهيل إنتاج الجسم المضاد. في حالات تكون وظيفة مستجيب منخفضة مطلوبة؛ فإنه من المفضل أن الجزيء قد يعالج هندسيا للظطهور في شكل 0 0. يمكن تحقيق تعديلات ‎carbohydrate‏ هذه بواسطة؛ على سبيل ‎(JU‏ تغبير ‎٠‏ موقع واحد أو أكثر لحدوث ‎A glycosylation‏ ترتيب الجسم المضاد. بحيث؛ يمكن استبدال حمض أميني واحد أو أكثر يؤدي إلى إلغاء موقع ‎glycosylation‏ لإطار منطقة متغيرة واحد أو أكثر الذي بالتالي يلغي ‎aie glycosylation‏ هذا الموقع (انظر؛ مثلا أرقام ‎US.P.‏ ‎AT) 5 09/1 1‏ 170( على النقيض؛ يمكن إحاقة وظيفيات مستجيب محسنة أو ارتباط : محسن الى ‎Fo‏ يشمل جزيء ‎pw da ily‏ عند موقع ‎glycosylation‏ إضافية واحدة أو ‎Vo‏ أكثر .
إضافيا أو بالتبادل؛ يمكن عمل متغير ‎Fe‏ له تركيبة 0 متغيرة؛ مثل جسم مضاد ‎hypofucosylated‏ به كمية منخفضة من متخلفات ‎fucosyl‏ أو جسم مضاد به بناءات ه610 مشطورة متزايدة. توضح تلك التغيرات وأنماط متغيرة مشابهة لزيادة قدرة ‎ADCC‏ للجسم المضاد. ‎(Say‏ توليد أشكال ‎glyco‏ هندسية بأي طريقة معروفة للماهر في ‎٠‏ الفن؛ على سبيل المثال. باستخدام سلالات إظهار هندسية أو لمتغيرة بواسطة الإظهار المشترك مع ‎enzyme‏ واحد أو أكثر (على سبيل المثال ‎N-acetylglucosaminyltransferase‏ ‎«(TIT )601111(‏ بإظهار جزيء يشمل منطقة ‎Fe‏ في كائنات متعضية مختلفة أو خطوط خلية من كائنات متعضية مختلفة أو بتعديل ‎carbohydrate‏ بعد إظهار الجزيء المشتمل على
منطقة ‎«hail Fe‏ على سبيل المثال؛ ‎R.L. etal. (2002) J.
Biol.
Chem. 277:26733-26740; Umana et al. (1999) Nat.
Yo‏ ‎Biotech. 17:176-1,‏
1A ‏منشورات الطلب الدولي رقم‎ WVIAC ‏بالإضافة إلى؛ براءة الاختراع الأوروبية رقم:‎ 4/027 647 ‏الطلب الدولي رقم‎ (PCT ١ ‏؟‎ 5
Umana et al, 1999, Nat. Biotechnol 17:176-180; Davies et al., 20017 Biotechnol
Bioeng 74:288-294; Shields et al, 2002, J Biol Chem 277:26733-26740; Shinkawa et al., 2003, J Biol Chem 278:3466-3473) U.S.P.N. 6,602,684; U.S.S.Ns. 10/277,370; ° 10/113,929; PCT WO 00/61739A1; PCT WO 0 1/292246A1; PCT WO 02/311140A1; PCT WO 02/30954A1; Potillegent™ technology (Biowa, Inc.);
GlycoMAb™ glycosylation engineering technology (GLYCART biotechnology
AG); WO 00061739; EA01229125; U.S.P.N. 2003/0115614; Okazaki et al., 2004,
JMB, 336: 1239-49. Ye (Modulator Expression) ‏إظهار المادة الضابطة‎ LIX ‏نظرة عامة‎ a ‏يحمل شفرة مواد ضابطة 01167 مطلوبة باستخدام‎ DY ‏يمكن بسهولة عزل وتسلسل.‎ ‏باستخدام عمجا 011800061601108 تستطيع الارتباط بالتحديد بجينات‎ (Jie) ‏إجراءات تقليدية‎ ‏ورم هجين معزولة ومستتسخة‎ LOA ‏تحمل شفرة سلاسل خفيفة وثقيلة للجسم المضاد). إن‎ ٠ ‏إذا‎ DNA ‏لذلك‎ Jamie ‏فرعيا (أو مستعمرات مشتقة من بلعم أو خميرة) يمكن أن تمثل مصدر‎ ‏في حمض نووي‎ Lilia) ‏كان المادة الضابطة هو جسم مضاد. عند الطلب؛ يمكن التلاعب‎ (Aan ‏للدمج أو أجسام مضادة‎ proteins ‏كالموصوف في الموضوع لخلق عوامل تتضمن‎ ‏معزول (الذي‎ DNA ‏ليست آدمية في الأساس أو آدمية بالكامل. بتحديد أكثرء. يمكن استخدام‎ ‏يمكن تعديله) لنسخ ترتيبات منطقة ثابتة أو متغيرة لتصنيع أجسام مضادة كما يوصف في‎ ٠ .U.S.P.N. 7,709,611 ‏من الخلايا المنتقاة؛ التحويل إلى‎ RNA ‏إن هذه الطريقة التمثبلية تتضمن استخلاص‎ ‏باستخدام مواد أولية معينة للجسم المضاد. تعرف المواد الأولية‎ PCR ‏والتكبير بواسطة‎ «cDNA ‏المناسبة جيدا في الفن و؛ كما يذكر على سبيل المثال في الموضوع؛ تتاح بسهولة من مصادر‎ ‏تجارية عديدة. من المقدر أنه؛ لإظهار جسم مضاد آدمي أو غير آدمي مخلق معزول بواسطة‎ Ye ‏يحمل شفرة الجسم المضاد داخل ناقل إظهار هجين ويتم‎ DNA ‏مسح مكتبة اندماجية؛ يتم نسخ‎ ‏إدخاله في خلايا عائل تتضمن خلايا ثديية؛ خلايا حشرية؛ خلايا نبات» خميرة؛ أو بكتيريا. في‎
4+ تجسيدات أخرىء؛ تدخل المواد الضابطة في وتظهر بواسطة خلايا ‎COS‏ لقرد؛ خلايا ‎(NSO‏ ‏خلايا مبيض هامستر صيني ‎(CHO)‏ أو خلايا ملانوما لا تنتج البناء المطلوب. كما يتضح بتفصيل أكثر أدناه؛ يمكن أن تنمو خلايا متحولة تُظهر المادة الضابطة المطلوب بكميات كبيرة نسبيا لتوفير إمدادات إكلينيكية وتجارية من بناء الدمج أو ‎globulin‏ مناعي.
° سواء إذا كان حمض نووي الحامل لشفرة قسم مطلوب من مادة ضابطة 01167 ناتج أو مشتق من تقنية عرض بلعم؛ مكتبات خميرة؛ تقنية تعتمد على ورم هجين؛ تخليقي أو من مصادر تجارية؛ فإنه من المفهوم أن الاختراع الحالي يتضمن بوضوح جزيئات حمض نووي وترتيبات تحمل شفرة مواد ضابطة 17 تتضمن ‎proteins‏ للدمج وأجسام مضادة تضاد 7 أو أجزاء ترتبط بالمولد المضاد أو مشتقات منها. يتضمن الاختراع إضافيا أحماض
‎٠‏ نووية أو جزيئات أحماض نووية (مثل» ‎(polynucleotides‏ التي تهجن تحت شروط تهجين صارمة؛ أو بالتبادل؛ تحت شروط ‎uae‏ متوسطة أو منخفضة الصرامة ‎Jia)‏ كما يتضح أدناه) » إلى ‎polynucleotides‏ تكتمل لتصبح أحماض نووية لها ترتيب ‎polynucleotide‏ يحمل
‏. شغرة مادة ضابطة من الاختراع أو جزء أو متغير منه. إر, مصطلح حمض نووي أو جزيء حمض نووي معزول؛ كما يستخدم لي المرضوع؛ بتضمن على الأقل جزينات ‎DNA‏ وجزيئات
‎DNA ‏يمكن أن يكون جزيء حمض نووي مفرد الجديلة أو مزدوج الجديلة؛ لكن يفضل‎ RNA Ve ‏مزدوج الجديلة. إضافة لذلك؛ يشمل الاختراع الحالي أي وسط ناقل أو بناء؛ يتضمن هذا المادة‎ ‏خلايا‎ plasmids ‏يتضمن؛ دون اقتصار» نواقل»‎ polynucleotide ‏الضابطة الذي يحمل شفرة‎ ‏أو بناءات فيروسية.‎ cosmids ‏عائل»‎
‏إن المصطلح حمض نووي معزول يعني أن حمض نووي ‎)١(‏ يُكبر في المعمل؛ على
‎٠‏ سبيل المثال بتفاعل سلسلة ‎(Y) «(PCR) polymerase‏ ينتج هجينا بالنسخ؛ )7( ينتقى؛ على سبيل المثال بالانشقاق أو بتجزئة ارتحال كهربائي لهلام؛ أو (؟) 3180( على سبيل المثال بالتخليق الكيميائي. إن حمض نووي معزول هو حمض نووي متاح للتلاعب فيه بواسطة تقنيات ‎DNA‏ هجين.
‏بتحديد أكثر؛ تتوفر أيضا أحماض نووية تحمل شفرة المادة الضابطة؛ تتضمن أحد أو كلتا
‎YO‏ سلسلتين الجسم المضاد من الاختراع؛ 0 جزء؛ ‎cmutein «(Fide‏ أو متغير منه؛ ‎polynucleotides‏ تكفي للاستخدام كمجسات تهجين؛ مواد بادئة ‎PCR‏ أو مواد بادئة تسلسلية لتحديد؛ تحليل؛ تحوير 0 تكبير ‎polynucleotide‏ يحمل شفرة ‎«polypeptide‏ أحماض أمينية
ولا للإحساس لتثبيط ‎epolynucleotide leds)‏ وترتيبات تكميلية مما سبق. يمكن أن يكون أحماض أمينية لها أي طول. يمكن أن يتكون طولهم؛ على سبيل المثال» من 5 ‎0٠0‏ 16 دي ‎(YO‏ يك فك ب فك لف ‎(VO‏ بد فكد قل قلاك بنك ‎YOu‏ الا ‎(YOu‏ بيك نفل نيف فلك نبل نفل بر ...ه أو أكثرء؛ يمكن أن تشمل ترتيب إضافي واحد أو ‎JS‏ على سبيل المثال؛ ترتيبات تنظيمية؛ و/أو تكون جزء من حمض نووي أكبر؛ على سبيل المثال؛ ناقل. يمكن أن تكون تلك أحماض نووية مفردة الجديلة أو مزدوجة الجديلة ويمكن أن تشمل ‎RNA‏ و/أو ‎(DNA nucleotides‏ ومتغيرات اصطناعية منها (مثل؛ ‎(peptide nucleic acids‏ يفضل ‎Jie‏ أحماض نووية تحمل شفرة مواد ضابطة من ‎cp [aa]‏ تتضمن أجسام مضادة أو أجزاء تفاعلية مناعيا أو مشتقات من ذلك؛ كما يوصف ‎٠‏ أدناه. ‎Lb‏ التهجين والتعريف ‎(Hybridization and Identity)‏ كما يتضح؛ يوفر الاختراع إضافيا أحماض نووية تهجين إلى أحماض نووية أخرى تحت شروط تهجين معينة. تعرف جيدا في اأذن -نرق نهجين حمض نوؤي. انظر مثلاء ‎Current Protocols in Molecular Biciogy, jolin Wiley & Sons, N.Y. (1689), 6.3.1-‏ ‎yo‏ .6.3.6 لأغراض الطلب الحالي؛ يستخدم شرط تهجين صارم نسبيا محلول قبل الغسيل يتضمن ‎sodium chloride/sodium citrate (SSC)‏ «ى 7,8 ‎١ «SDS‏ مللي جزيئي جرامي ‎EDTA‏ ‏(أس هيدروجيني ‎(A‏ مثبت أس هيدروجيني للتهجين من حوالي ‎6xSSC «formamide 78 ٠‏ ودرجة حرارة تهجين © #مئوية (أو أي محاليل تهجين أخرى مماثلة؛ ‎Jie‏ محلول يحتوي على ‎٠٠‏ حوالي ‎formamide 78 ٠‏ مع درجة حرارة تهجين 7؛"مئوية)؛ وشروط غسيل ‎Aes‏ في ‎70.١ xSSC 8‏ 505. إن شرط تهجين صارم يحدث التهجين في ‎6XSSC‏ عند 40 “مئوية؛ ثم يغسل مرة أو أكثر مع ‎SDS 70.7 xSSC ٠.١‏ عند 718*مثوية. إضافة لذلك؛ فإن الماهر في الفن يمكن أن يتلاعب في شروط التهجين و/أو الغسيل لزيادة أو تقليل صرامة التهجين بحيث تبقى نموذجيا أحماض نووية تشمل ترتيبات ‎nucleotide‏ على الأقل فت ‎Yo Ve‏ ‎YO‏ اد ع 34( ‎AA‏ أو 294 متطابقة لبعضها نموذجيا وهجينة لبعضها. عموما أكثرء لأغراض التوضيح الحالي تفسير المصطلح متطابق جوهريا بالنسبة لترتيب حمض نووي مثل
١لا‏ ترتيب ‎nucleotides‏ تطابق تتضمن على الأقل دحال أب ‎7av ol Jae sae‏ في الترتيب بالنسبة لترتيب حمض نووي المرجعي. إن المعايير الأساسية المؤثرة في اختيار شروط التهجين وفي الإرشادات لوضع شروط مناسبة تذكر سالفا بواسطة؛ على سبيل ‎JB‏ ‎Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 5‏ ‎Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 9 and 11;‏ ‎and Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley‏ ‎Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4),‏ & ويمكن تحديدها بسهولة بواسطة هؤلاء المهرة التقليديين في الفن اعتمادا على؛ على سبيل ‎٠‏ المثال؛ طول و/أو التركيبة الأساسية لحمض نووي. يقدر إضافيا أنه يمكن تواجد أحماض نووية؛ طبقا للاختراع؛ بمفردها أو في اتحاد مع أحماض نووية أخرى؛ الذي يمكن أن يكون متماثل أو متغاير. في تجسيدات مفضلة؛ يرتبط حمض نووي وظيفيا بترتيبات تحكم في الإظهار التي يمكن.أن ‎Jalan‏ أو تتغاير بالنسبة ‎Co‏ لحمض نووي المذكور . في هذا السياقء؛ فإن المح ‎pla‏ متماثل يعني أن حمض نووي يرتبط ‎١٠‏ وظيفيا أيضا بترتيب تحكم في الإظهار طبيعيا والمصطلح متغاير يعني أن حمض نووي لا يرتبط وظيفيا بترتيب التحكم في الإظهار طبيعيا. يرتبط وظيفيا حمض نووي؛ مثل حمض 5355( يظهر ‎RNA‏ ر/أر ‎peptide sl protein‏ وترتيب يتحكم في الإظهارء إذا ارتبطا تساهميا ببعضهما بحيث يكون الإظهار أو النسخ حمض نوي المذكور تحت سيطرة أو تحت تأثير ترئيب التحكم في الإظهار المذكور. إذا ‎nf‏ ‏حمض نووي إلى ‎protein‏ وظيفي؛ عندئذ؛ مع ترتيب تحكم في الإظهار مرتبط بترتيب التشفير» ينتج عن حث ترتيب التحكم في الإظهار لنسخ حمض نووي المذكور؛ بدون التسبب في تغيير للإطار في ترتيب التشفير أو أن يصبح ترتيب التشفير غير قادرا على الترجمة إلى ‎protein‏ أو ‎peptide‏ المطلوبان. ‎ve‏ إن المصطلح ترتيب التحكم في الإظهار يشمل طبقا للاختراع مواد تعزيز» مواقع ارتباط ‎ribosome‏ محثات وعناصر تحكم أخرى تنظم نسخ الجين أو ترجمة ‎MRNA‏ في تجسيدات معينة من الاختراع؛ يمكن تنظيم ترتيبات التحكم في الإظهار. إن البناء المحدد لترتيبات
التحكم في الإظهار يمكن أن تختلف كدالة على الفئة أو نوع الخلية؛ لكن تشمل عموما ترتيبات 57 غير منسوخة و-5 و3 غير مترجمة تدخل في حث النسخ والترجمة؛ على التوالي؛ مثل صندوق ‎(TATA‏ ترتيب التغطية؛ ترتيب ‎CAAT‏ والخ. بتحديد أكثر؛ فإن ترتيبات تحكم في الإظهار عند 5 غير منسوخة تشمل منطقة لمادة تعزيز تتضمن ترتيب لمادة تعزيز للتحكم في © نسخ حمض نووي مرتبط وظيفيا. يمكن أيضا أن تشتمل ترتيبات التحكم في الإظهار على ترتيبات لمحث أو ترتيبات منشط سابقة. ‎Lk‏ للاختراع؛ فإن المصطلح ‎ale‏ تعزيز أو منطقة لمادة التعزيز يتعلق بترتيب حمض نووي يقع قبل الطرف (5) لترتيب حمض نووي الظاهر ويتحكم في إظهار الترتيب بتوفير موقع ارتباط وتمييز من أجل ‎.RNA-polymerase‏ يمكن أن تشتمل منطقة مادة التعزيز على ‎٠‏ مواقع ارتباط وتمييز إضافية لعوامل إضافية تدخل في تنظيم نسخ الجين. يمكن أن تتحكم مادة التعزيز في نسخ جين بدائي النواة أو حقيقي النواة. إضافة لذلك؛ يمكن أن تكون مادة التعزيز قابلة للحث ويمكن أن تحث النسخ كاستجابة لجين حث أو يمكن أن تكون تأسيسية إذا لم يكن النسخ متحكم فيه بواسطة عامل حدث. إن جب + بت سيطرة مادة تعزيز قابلة للحث لا يظهر أو يظهر فقط بمقدار صغير في #راب ‎Cale‏ انمث. في وجود عامل الحث يعمل الجين أو ‎٠‏ بيزداد مادة ضابطة النسخ. يحدث ذلك؛ عموماء بواسطة ارتباط عامل نسخ معين. إن مواد تعزيز مفضلة طبقا للاختراع تتضمن مواد تعزيز لأجل ‎T3 SP6‏ ‎<T7 polymerase‏ مادة تعزيز ‎U6 RNA‏ آدمي؛ مادة تعزيز ‎«(CMV‏ ومواد تعزيز هجينة اصطناعية منها (مثل؛ ‎(CMV‏ حيث يتحد جزء أو أجزاء إلى جزء أو أجزاء من مواد تعزيز الجبنات من ‎proteins‏ خلوية أخرى ‎(glyceraldehyde-3-phosphate = GAPDH «is‏ ‎«dehydrogenase) | ٠‏ وتتضمن أو لا تتضمن ‎intron‏ واحد إضافي أو أكثر . طبقا للاختراع؛ يستخدم المصطلح إظهار في معناه الأكثر شمولية ويشمل إنتاج ‎RNA‏ أو ‎RNA‏ وعلنام©0010/0:م. يشتمل أيضا على الإظهار الجزئي أحماض نووية. إضافة ‎(lal‏ ‏يمكن إجراء الإظهار بصورة عابرة أو بثبات. في تجسيد مفضل»؛ يوجد جزيء حمض نووي طبقا للاختراع في ناقل؛ عند ‎dee Dall‏ مع ‎Yo‏ مادة تعزيز؛ التي تتحكم في إظهار حمض نووي. يستخدم المصطلح ناقل في معناه الأكثر شمولية ويشمل أي ناقل وسيط من أجل حمض نووي مما يتيح إدخال هذا حمض نووي؛ ‎lis‏ ‏في خلايا بدائية النواة و/أو حقيقة النواة و؛ عند الملاءمة؛ اندماجه داخل ‎genome‏ يفضل
7ص تكرار و/أو إظهار نواقل من هذا النوع في الخلايا. يمكن أن تشتمل ‎Jill‏ على ‎plasmids‏ ‏5م بلعميات البكتيريا أو جينومات لفيروس ‎٠‏ إن المصطلح ‎LS plasmid‏ يستخدم في الموضوع عموما يتعلق بناء لمادة جينية خارج الكروموسوم ؛ عادة مزدوج من ‎DNA‏ دائري؛ الذي يمكن أن يكرر بصورة مستقلة ‎DNA‏ كروموسومي. 0 عند ممارسة الاختراع الحالي يجب تقدير أن العديد من التقنيات التفليدية في الحيوية الجزيئية؛ الحيوية الدقيقة؛ وتكنولوجيا ‎DNA‏ مخلق تستخدم اختياريا. تتعلق تلك التقنيات التفليدية بنواقلء ‎LDA‏ عائل وطرق تخليقية كالموضحة في الموضوع. تعرف جيدا تلك التقنيات وتتضح في؛ على سبيل المثال؛
Berger and Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in
Enzymology volume 152 Academic Press, Inc., San Diego, Calif.; Sambrook et al., AK
Molecular Cloning-A Laboratory Manual (3rd Ed.), Vol. 1-3, Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 2000 and Current Protocols in Molecular
Biology, F. M. Ausuoel et al., eds., supra Other useful references, ¢.g. for cell or protein isolation) include 35 ‏حمض‎ fsciation and calinre (e.g., for subsequent 3
Freshney (1994) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, third ٠ edition, Wiley-Liss, New York and the references cited therein; Payne et al. (1992)
Plant Cell and Tissue Culture in Liquid Systems John Wiley & Sons, Inc. New
York, N.Y.; Gamborg and Phillips (Eds.) (1995) Plant Cell, Tissue and Organ
Culture; Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin
Heidelberg New York) and Atlas and Parks (Eds.) The Handbook of A
Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton, Fla. تصف المراجع أعلاه طرق لعمل أحماض نووية ‎lie)‏ بواسطة تكبير في المعمل؛ تنقية من ‎(LDA‏ أو تخليق ‎o Shas‏ طرق للتلاعب في أحماض نووية ‎ie)‏ توليد طفرة تستهدف ‏موقع؛ بواسطة هضم ‎Ale] enzyme‏ ربط إلخ)؛ ونواقل مختلفة؛ خطوط خلية وإلخ مفيدة في ‎Yo‏ التلاعب في وعمل أحماض نووية. إضافياء يمكن طلب أي ‎polynucleotide‏ أساسيا (بما في ‏ذلك؛ مثلاء ‎(labeled or biotinylated polynucleotides‏ تخصيصا أو قياسيا من أي مصادر تجارية مختلفة.
غلا لذلك؛ في أحد الجوانب؛ يوفر الاختراع الحالي خلايا عائل مخلقة تسمح بالإظهار التخليقي لأجسام مضادة من الاختراع الحالي أو أقسام منها. يشار إلى أجسام مضادة ناتجة بالإظهار في خلايا العائل التخليقية هذه في هذا الموضوع مثل أجسام مضادة مخلقة. يوفر الاختراع الحالي أيضا خلايا نسلية من خلايا العائل هذه؛ وأجسام مضادة تنتج بالمثل.
° إن المصطلح خلية عائل مخلقة (أو ببساطة خلية عائل)؛ كما يستخدم هناء يعني خلية يدخل فيها ناقل إظهار مخلق. من المفهوم أن خلية عائل مخلقة وخلية العائل لا يعني فقط خلية معينة بالتحديد ولكن أيضا نسل هذه الخلية. بسبب إمكانية حدوث تعديلات معينة في أجيال تالية إما نتيجة تأثيرات بيئية أو طفرة؛ فإن هذا النسل يمكن؛ في الحقيقة؛ ألا يتطابق؛ لكن يظل ضمن منظور المصطلح خلية العائل المستخدم في الموضوع. يمكن أن تشتمل هذه
‎٠‏ الخلايا على ناقل ‎ida‏ للاختراع كما يوصف أعلاه. في جانب آخر » يوفر الاختراع طريقة لعمل جسم مضاد أو قسم منه كما يوصف في الموضوع. طبقا لأحد التجسيدات؛ تشتمل الطريقة المذكورة على زراعة خلية معداة أو متحولة : مع ناقل كالموصوف في الموضوع؛ واسترداد الجسم ؛ ساد أو قسم منه.
‏: كما يتضح أعلاه؛ فإن إظهار حسم مض ادس الاختزاع ‎Sl)‏ جزء أو متغيرات منه) يفضل ‎٠‏ أن يشمل ناقل (نواقل) إظهار يتضمن ‎polynucleotide‏ يحمل شفرة جسم مضاد ضد ‎PTK7‏ ‏مطلوب. يمكن استخدام طرق معروفة جيدا لهؤلاء المهرة في الفن لبناء نواقل إظهار تشمل ترتيبات تحمل شفرة جسم مضاد وإشارات تحكم في الترجمة والنسخ ملائمة. تتضمن تلك الطرق؛ على سبيل المثال؛ تقنيات ‎DNA‏ مخلق في المعمل؛ تقنيات تخليقية» وتخليق جيني في الكائن الحي. توفر تجسيدات للاختراع؛ بالتالي» نواقل ‎ALE‏ للتكرار تشمل ترتيب ‎nucleotide‏ ‎٠‏ يحمل شفرة جسم مضاد ضد 71167 من الاختراع ‎Sie)‏ إجمالي جسم مضاد؛ سلسلة ثقيلة أو خفيفة من الجسم المضاد؛ مجال سيطرة سلسلة متغيرة لسلسلة تقيلة أو خفيفة من جسم مضاد؛ أو قسم منه؛ أو ‎CDR‏ سلسلة 408 أو خفيفة؛ ‎Py‏ سلسلة فردية؛ أو أجزاء أو متغيرات من ذلك)؛ متصل بمعزز بشكل يمكن تشغيله. في تجسيدات مفضلة قد تتضمن هذه النواقل ترتيب ‎nucleotide‏ يشفر السلسلة الثقيلة من جزئ الجسم المضاد (أو جزء منه) « ترتيب ‎nucleotide‏
‎Ye‏ يشفر ‎ALLY‏ الخفيفة من جسم مضاد (أو ‎eda‏ منه) أو السلسلتين الثقيلة والخفيفة.
Yo ‏بالاختراع الحالي وتعديلها طبقا للدراسات هناء فإنه‎ ala) nucleotides ‏بمجرد عزل‎ ‏أو أجزاء‎ PTK7 ‏يمكن استخدامها لإنتاج مواد ضابطة منتقاة متضمنة أجسام مضادة ضد‎ ‏منها.‎ ‎(Modulator Production and Purification) ‏ج وتنقية مادة ضابطة‎ wl LX ‏حالي؛ قد تنتج‎ protein ‏باستخدام تقنيات بيولوجية جزيئية يدركها الفن وطريقة إظهار‎ ° ‏كميات أساسية من المواد الضابطة المطلوبة. تحديدا أكثر؛ قد تندمج جزيئات حمض نووي‎ ‏تشفر مواد ضابطة؛ مثل أجسام مضادة ناتجة ومعدلة هندسيا حسب الوصف أعلاه؛ بأنظمة‎ ‏عائل لتوفير‎ WA ‏معروفة جيدا ومتاحة تجاربا مشتملة على أنواع متنوعة من‎ protein ‏إنتاج‎ ‏كميات طبية مسبقة؛ طبية أو تجارية من المنتج الدوائي المطلوب. يقدر أنه في التجسيدات‎ ‏المفضلة تعدل الجزيئات حمض نووي التي تشفر المواد الضابطة إلى نواقل أو نواقل إظهار‎ ٠ ‏التي تتوافر لاندماج فعال بخلية العائل المنتقاة ومستويات إظهار عالية لاحقة من المادة‎
PTK7 ‏الضابطة المطلوبة‎ ‏يفضل استخدام جزيذات حمض نووي تشفر مواد ضابطة 71167 ونواقفل مشتملة على‎ ٠ 8" ‏جزيئات حمض نووي هذه لإصابة كائن ثديي؛ نبات؛ خلية بكتيرية أو خلية عائل خميرة‎ ٠ ‏ضابطة. قد تكون الإصابة‎ sale ‏مناسبين بعدوى حيث يتم إدراك استخدام أنظمة بدائية لإنتاج‎ ١ ‏إلى خلية عائل. تكون طرف إدخال‎ polynucleotides ‏بالعدوى بأي طريقة معروفة لإدخال‎ ‏وتتضمن إصابة بعدوى‎ Gill ‏1508م متغايرة إلى خلايا كائن ثديي معروفة جيدا في‎ ‏إصابة بعدوى يسببها 00170608 اندماج خلية‎ «calcium phosphate ‏ترسيب‎ dextran ‏يسببها‎ ‏في أجسام دهنية؛ وحقن رقيق مباشر لأجل‎ polynucleotide(s) ‏أولية؛ تثقيب كهربي؛ كبسلة‎ ‏إضافة لذلك؛ قد تدخل جزيئات حمض نووي إلى خلايا كائن ثديي بنواقل‎ nuclei ‏إلى‎ DNA ٠ ‏براءات الاختراع‎ Sia ‏فيروسية. تعرف جيدا في الفن طرق تكوين خلايا ثديية. انظر؛‎ ‏الأمريكية أرقام 4744715 417046 431 :4لا 5 £90900 إضافة لذلك» طرق‎ ‏تحويل بكتريا ترابية؛ تحويل حيوي؛‎ Sle ‏وتتضمن»‎ (Gill ‏تكوين خلية نباتية معروفة جيدا في‎ ‏حقن مباشر؛ تثقيب كهربي وتحويل فيروسي. إن طرق تحويل خلايا بكتيرية وخميرة معروفة‎ ‏جيدا في الفن.‎ Ye ‏إضافة لذلك؛ فإن الخلية العائلة يمكن أن تستقبل بصورة مشتركة حامل الجين من العائل‎ polypeptide ‏مع اثنين من نواقل إظهار من الاختراع؛ على سبيل المثال» يشفر الناقل الأول‎
مشتق من سلسلة ثقيلة ويشفر الناقل الثاني ‎polypeptide‏ مشتق من سلسلة خفيفة. قد يحتوي الناقلان على دلالات متماثلة قابلة للانتقاء تمكن من حدوث إظهار متساوي جوهريا لأجل ‎Aula polypeptides‏ ثقيلة وخفيفة. بطريقة بديلة؛ قد يستخدم ناقل واحد يشفرء ولديه القدرة على ‎leds)‏ كل من ‎polypeptides‏ السلسلة الثقيلة والخفيفة. في تلك الحالات؛ يفضل أن © توضع السلسلة الخفيفة قبل ‎ALL‏ التقيلة لتفادي زيادة من سلسلة ثقيلة حرة سامة. قد تشمل ترتيبات التشفير للسلاسل الثقيلة والخفيفة ‎cDNA‏ أو ‎DNA‏ جينومي. (Host-expression systems) ‏أنظمة إظهار عائل‎ a ‏كثير منها متوافرة‎ o(host-expression systems) ‏هناك تشكيلة من أنظمة ناقل إظهار عائل‎ ‏تجارياء متوائمة مع التعاليم هنا ويمكن استخدامها لإظهار المواد الضابطة من الاختراع. تمثل‎ ‏أنظمة إظهار عائل تلك أوساط حاملة يمكن بواسطتها إظهار ترتيبات التشفير الهامة وتنقيتها‎ ٠ ‏بعد ذلك؛ لكنها تمثل أيضا خلايا تظهر» عند تحويلها أو استقبالها لحامل الجين من العائل مع‎ ‏الملائمة؛ تظهر جزيء من الاختراع في مكانه. تتضمن تلك‎ nucleotide ‏ترتيبات تشفير‎
B. subtilis «E.coli ‏الأنظمة يدون تحديد؛ كائنات حية دقية 2 مثل بكتريا (مثلا‎ ‏أو‎ plasmid ‏نواقل إظهار فلات‎ Gane dha agile TINA ‏متحولة مع‎ (streptomyces Lo «Saccharomyces ‏لنصسوهه تحتوي على ترتيبات تشفير مادة ضابطة؛ خميرة (مثلاء‎ DNA Ve ‏تشفير مادة ضابطة؛‎ lyf ‏متحولة مع نواقل إظهار خميرة مخلقة تحتوي على‎ (Pichia ‏تحتوي على‎ (baculo ‏فبروس‎ Nic) ‏أنظمة خلية حشرة مصابة مع نواقل إظهار فيروس مخلقة‎ ‏الطحلب‎ Arabidopsis «Nicotiana ‏ترتيبات تشفير مادة ضابطة؛ أنظمة خلية نبات (مثلاء‎ ‏البطي؛ الذرة؛ القمح؛ البطاطس؛ إلخ) مصابة مع نواقل إظهار فيروس مخلقة (مثلاء فيروس‎ ‏أو متحولة مع نواقل إظهار‎ (TMV ‏فيروس فسيفساء التبغ؛‎ «CaMV ‏فسيفساء القنبيط»‎ ٠ ‏تحتوي على ترتيبات تشفير مادة ضابطة؛ أو أنظمة خلية‎ (Ti plasmid ‏(مثلا؛‎ 48s plasmid ‏تحمل بنيات إظهار مخلقة تحتوي على‎ (3T3 ‏293؛‎ (BHK «CHO «COS ‏ثديية (مثلاء خلايا‎ ‏فلزي) أو من فيروسات كائن‎ thionein ‏كائن ثديي (مثلاء محث‎ WDA ‏محثات مشتقة من جينوم‎ تديي ‎lie)‏ محث متأخر فيروس غدي؛ محث فيروس الجديري ‎(7.5K‏ ‎Yo‏ في الأنظمة البكتيرية؛ يمكن بدرجة مفيدة انتقاء عدد من نواقل الإظهار اعتمادا على الاستخدام المعني للجزيء المراد إظهاره. على سبيل المثال؛ عندما يراد إنتاج كمية كبيرة من ذلك ‎protein‏ لتوليد تركيبات دوائية لمادة ضابطة؛ فإن النواقل التي تباشر إظهار مستويات
لال عالية من منتجات ‎protein‏ اندماج نقية تماما هي النواقل المطلوبة. تتضمن ثلك النواقل» بدون تحديد» ناقل إظهار ‎:pUR278 E. coli‏ ‎(Ruther et al, EMBO 1. 2:1791 (1983),‏ والذي يتم فيه ربط ترتيب التشفير بصورة منفردة في الناقل في إطار مع منطقة تشفير ‎lac Z‏ © بحيث ينتج بذلك ‎protein‏ اندماج؛ نواقل ‎:pIN‏ ‎(Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke &‏ ‎Schuster, J.
Biol.
Chem. 24:5503-5509 (1989));‏ إلخ. يمكن أيضا استخدام نواقل ‎pGEX‏ لإظهار ‎polypeptides‏ دخيلة ‎proteins Jie‏ اندماج مع ‎glutathione S-transferase‏ (651). بصفة عامة؛ فإن ‎proteins‏ الاندماج تلك قابلة ‎٠‏ للذوبان ويمكن بسهولة تنقيتها من ‎LOA‏ متحللة بالامتزاز والارتباط مع خرزات لمادة بينية ‎Ls glutathione agarose‏ ذلك فصل في وجود ‎glutathione‏ حر . إن نواقل ‎pGEX‏ مصممة لتتضمن أماكن فصل ‎thrombin protease‏ أو عامل ‎Xa‏ بحيث يمكن إطلاق منتج الجين . المستهدف المنسوخ من جزء ‎OST‏ : | في نظام حشرة؛ يمكن ‎١‏ تخدام ‎di ug of‏ متعدد ‎Autographa californica (sys‏ ‎(ACNPV) ٠‏ كناقل لإظهار جينات غريبة. ينمو الفيروس في خلايا ‎.Spodoptera frugiperda‏ يمكن نسخ ترتيبات التشفير بصورة منفردة في مناطق غير أساسية ‎Mie)‏ جين ‎(polyhedrin‏ ‏للفيروس ووضعها تحت سيطرة محث ‎Sia) ACNPV‏ محث ‎.(polyhedrin‏ ‏في خلايا ‎Ale‏ لكائن ثديي؛ يمكن استخدام عدد من أنظمة إظهار معتمدة على فيروس لإدخال ترتيب ‎nucleotide‏ المطلوب. في حالة استخدام فيروس غدي كناقل ‎leds)‏ يمكن ربط ‎٠‏ ترتيب التشفير الهام مع مركب تحكم في نسخ/ ترجمة فيروس غدي؛ ‎Mia‏ المحث المتأخر وترتيب طليعي ثلاثي الأجزاء. يمكن عندئذ إدخال هذا الجين الهجين في جينوم الفيروس الغدي بتخليق في المعمل أو في الجسم. إن الإدخال في منطقة غير أساسية في الجينوم الفيروسي ‎Sli)‏ المنطقة 121 أو ‎(E3‏ سوف ينتج فيروس مخلق حيوي وقادر على إظهار الجزيء في العوائل المصابة؛ ‎Ole‏ انظر: ‎(Logan & Shenk, Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 8 1:355-359 (1984)). Yo‏ قد تكون هناك أيضا ‎dala‏ لإشارات ابتداء خاصة من أجل الترجمة الفعالة لترتيبات التشفير الداخلة. تتضمن هذه الإشارات ‎codon‏ ابتداء ‎ATG‏ وترتيبات مجاورة. إضافة لذلك؛ لابد أن
VA
‏الابتداء في طور مع إطار القراءة لترتيب التشفير المطلوب لتأكيد ترجمة المادة‎ codon ‏يكون‎ ‏الابتداء من‎ codons 5 ‏الداخلة كلها. يمكن أن تكون هذه الإشارات الخارجية للتحكم في الترجمة‎ ‏أي تشكيلة من المصادر؛ كل من الطبيعية والمصنعة. يمكن زيادة كفاية الإظهار بتضمن‎ ‏عناصر ملائمة معززة للنسخ؛ مواد لإنهاء النسخ؛ إلخ؛ انظر» مثلا:‎ (Bittner et al., Methods in Enzymol. 153:51-544 (1987)). 8 ‏لذلك؛ فإن خطوط الخلية التديية الموائمة المتوافرة كعوائل للإظهار معروفة جيدا في الفن‎
American Type Culture Collection ‏وتتضمن خطوط خلية خالدة البقاء كثيرة متوافرة من‎ ‏خلايا‎ (CHO) ‏تتضمن هذه؛ من بين أخرى. خلايا مبيض هامستر صيني‎ (ATCO) ‏خلايا‎ «(Life Technologies) 293 Freestyle Wa 1016-1 ‏خلايا 502؛ خلايا‎ «(NSO ‏خلايا كلى القرد الأخضر‎ ((BHK) ‏خلايا كلية رضيع هامستر‎ (HeLa ‏خلايا‎ 001-313 ٠ ‏وعدد من‎ A549 ‏خلايا‎ «(Hep G2 Mia) ‏خلايا سرطان كبدي خلوي آدمي‎ (COS) ‏الأفريقي‎ ‏خطوط خلية أخرى.‎ ‏مخلقة يفضل الإظهار الثابت.‎ proteins .. + ‏ا : بالنسبة للإنتاج طويل الأمد عالي الإنتاجية‎ ‏طبقا لذلك؛ فإن خطوط الخلية التي نهر بدرربة نابنة المادة الضابطة المنتقاة يمكن معالجتها‎ 0: ‏هندسيا باستخدام تقنيات قياسية يدركها الفن. بخلاف استخدام نواقل إظهار تحتوي على‎ V0 ‏متحكم فيه بعناصر تحكم‎ DNA ‏مصادر فيروسية للنسخ؛ يمكن أن تتحول الخلايا العائلة مع‎ ‏محث؛ معزز؛ ترتيبات؛ مواد لإنهاء النسخ؛ أماكن‎ Sia) ‏ملائمة في الإظهار‎ ‏الدخيل؛ يمكن السماح‎ DNA ‏إلخ)؛ ودلالة قابلة للانتقاء. عقب إدخال‎ polyadenylation ‏وعندئذ نقلها إلى أوساط‎ hag he ‏للخلايا المعالجة هندسيا بالنمو لمدة يوم إلى يومين في أوساط‎ ‏المخلق توفر مقاومة للانتقاء وتسمح للخلايا‎ plasmid ‏انتقائية. إن الدلالة القابلة للانتقاء في‎ ٠ ‏بدرجة ثابتة في كروموسوماتها وتنمو لتكوين بؤر يمكن في المقابل نسخها‎ plasmid ‏بتكامل‎ ‏ونموها لتكوين خطوط خلية. يمكن بدرجة مفيدة استخدام هذه الطريقة لتصميم خطوط خلية‎ ‏تظهر الجزيء. قد تكون تلك خطوط الخلية المصممة مفيدة بصفة خاصة في حجب وتقييم‎ ‏تركيبات تتفاعل بصورة مباشرة أو غير مباشرة مع الجزيء.‎ ‏هناك عدد من أنظمة انتقاء معروفة جيدا في الفن ويمكن استخدامها وتتضمن؛ بدون‎ Yo ‏فيروس القوباء البسيط:‎ thymidine kinase ‏تحديد؛ جينات‎ (Wigler et al., Cell 11:223 (1977),
v4 :hypoxanthineguanine phosphoribosyltransferase (Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202 (1992), :adenine phosphoribosyltransferase ‏و‎ ‎(Lowy et al., Cell 22:8 17 (1980)) ‏على التوالي. أيضاء يمكن استخدام مقاومة‎ caprt- ‏أو‎ heprt- otk ‏ويمكن استعمالها في خلايا‎ © ‏مضادة لمادة أيض كأساس للانتقاء للجينات التالية: 0:8؛ الذي يوفر مقاومة لأجل‎ : ‘methotrexate (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA 77:357 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 78:1527 (1981)); :mycophenolic acid ‏الذي يوفر مقاومة لأجل‎ cgpt ٠ (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); :aminoglycoside G-418 ‏الذي يوفر مقاومة لأجل‎ eo (Clinical Pharmacy 12:488-505; Wu and Wu, Rigthe: op. 3:87-95 (1991);
Tolstostiev, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol 32:373- 720 (1993); Mulligan, Science ٠٠ ‏ب‎ ‎260:926-932 (1993); and Morgan and Anderson, Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217 Vo (1993); TIB TECH 11(5):155-2 15 (May, 1993)); thygromycin ‏الذي يوفر مقاومة لأجل‎ chygro (Santerre et al., Gene 30:147 (1984)). ‏؛ في:‎ JEN ‏المخلقة المطلوية؛ وتلك الطرق موصوفة؛ على سبيل‎ ٠
Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons,
NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual,
Stockton Press, NY (1990); and in Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds),
Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-
Garapin et al., J. Mol. Biol. 150:1 (1981). Yo ‏لابد من إدراك أن طريقة مفضلة تحديدا لترسيخ خط خلية ثابت عالي الإنتاجية تشمل نظام‎ ‏توفر طريقة فعالة لزيادة الإظهار تحت شروط‎ (GS ‏(نظام‎ glutamine synthetase ‏إظهار جين‎
حم خاصة. إن نظام ‎GS‏ مشروح ‎LIS‏ أو جزئيا في براءات الاختراع الأوروبية 711855 00 نتم ى ‎٠ YYY44Y‏ و7441 كل منها مندمج هنا كمرجع. ‎(Lil)‏ يمكن اختيار سلالة خلية ‎Able‏ تضبط إظهار الترتيبات الداخلة؛ أو تعدل وتعالج منتج الجين بالطريقة الخاصة المطلوبة. قد تكون تلك التعديلات (مثلا ‎(glycosylation‏ ‏© والمعالجة ‎Ola)‏ فصل) لمنتجات ‎dala protein‏ لوظيفة و/أو تنقية ‎protein‏ هناك خلايا عائلة مختلفة لها سمات وآليات خاصة لمعالجة وتعديل ‎proteins‏ ومنتجات جين بعد الترجمة. كما هو معلوم في الفن يمكن اختيار خطوط خلية أو أنظمة عائلة ملائمة لتأكيد التعديل والمعالجة المطلوبين لأجل ‎polypeptide‏ الظاهر. عند هذه النقطة؛ فإن الخلايا العائلة سوية النواة التي لها الآلية الخلوية لمعالجة مثلى للنسخة الأولية؛ ‎phosphorylation 5 «glycosylation‏ لمنتج ‎٠‏ الجين هي ‎Wa‏ مؤثرة بصفة خاصة للاستخدام في الاختراع الحالي. طبقا لذلك. تتضمن خلايا عائلة ثديية مفضلة بصفة خاصة؛ لكن بدون تحديد؛ خلايا ‎(BHK (VERY (CHO‏ ‎«W138 313 «293 <MDCK «NSO «COS «Hela‏ بالإضافة إلى خطوط خلية سرطان ٍ .ثديء؛ ‎Ola‏ 3؛ 115781 1132ل 3120 و17 وخط خلية غدة ‎(anh Adi‏ ‎CRL7030 bie oo‏ و1185788:1. ‎el‏ علو ننم 8.7 الضابطة ونظام الإنتاج المنتقى؛ فإن ‎٠‏ المهرة في الفن يمكن بسهولة انتقاء خلايا عائلة ملائمة وجعلها في صورة مثلى من أجل الإظهار الفعال للمادة الضابطة. 5. تكوين كيمبائي ‎(Chemical synthesis)‏ إلى جانب أنظمة الخلية العائلة سالفة الذكرء لابد من إدراك أن المواد الضابطة من الاختراع يمكن تكوينها كيميائيا بتقنيات معروفة في ‎lie ell‏ انظر: ‎(Creighton, 1983, Proteins: Structures and Molecular Principles, W.H.
Freeman & Y.‏ ‎Co., N.Y., and Hunkapiller, M., et al., 1984, Nature 310:105-111).‏ على سبيل المثال ؛ يمكن تكوين ‎peptide‏ مقابل لجزء ‎polypeptide‏ من الاختراع باستخدام أداة تكوين ع06000. إضافة لذلك؛ عند الطلب؛ يمكن إدخال أحماض أمينية غير تقليدية أو مماثلات حمض أميني كيميائية كاستبدال أو إضافة في ترتيب ‎polypeptide‏ تتضمن ‎Yo‏ أحماض أمينية غير تقليدية؛ لكن بدون تحديدء ‎D-isomers‏ من أحماض أمينية الشائعة ‎«Abu «4-aminobutyric acid «a-amino isobutyric acid «2,4-diaminobutyric acid‏ ‎¢Aib <6-amino hexanoic acid <e-Ahx «g-Abu ¢2-amino butyric acid‏
A cnorvaline «norleucine ornithine ¢«3-amino propionic acid «2-amino isobutyric acid «t-butylglycine «cysteic acid chomocitrulline «citrulline «sarcosine <hydroxyproline «fluoro-amino acids <b-alanine <cyclohexylalanine «phenylglycine «t-butylalanine «Ca-methyl amino acids <b-methyl amino acids ‏أحماض أمينية مصممة مثل‎ ‏حمض أميني‎ dl ‏ومماثئلات حمض أميني بصفة عامة. إضافة‎ (Na-methyl amino ‏فلع‎ © ‏قد تكون © (دوارة لليمين) أو .آ (دوارة لليسار).‎ (Transgenic systems) ‏أنظمة طفرية‎ c ‏من الاختراع يمكن أيضا إنتاجها طفريا من خلال توليد كائن‎ PTKT ‏إن المواد الضابطة‎ ‏مناعي (أو أجزاء‎ globulin ‏ثديي أو نبات طفري بالنسبة لترتيبات السلسلة الثقيلة والخفيفة من‎ ‏أو مشتقات أو أشكال متباينة من ذلك) الهامة وإنتاج المركبات المطلوبة في شكل يمكن‎ ٠ ‏استرجاعه. بالنسبة للإنتاج الطفري في الثدييات؛ يمكن إنتاج أجسام مضادة ضد 1167 على‎ ‏براءات‎ ia ail ‏أو تدييات أخرى.‎ OE Geld! ‏سبيل المثال؛ واسترجاعها من؛ لبن‎ ‏في بعض‎ .OVTIA0Y 5 ‏لمعلاف آلا دلا‎ LOATY IA: ‏الاختراع الأمريكية أرقام‎ 0 ‏مناعي آدمي مع 21167 أو قسم منه‎ globulin ‏التطبيقات « تحصن حيوانات طفن 25 10. سواقع‎ ٍْ
Sle ‏للمناعة؛ حسب الوصف أعلاه. توصف طرق تحضير أجسام مضادة في نباتات؛‎ alge VO 0909 ‏في براءات الاختراع الأمريكية أرقام 1045577 و1177‎ ‏طبقا للتعاليم هنا يمكن إنتاج حيوانات أو نباتات طفرية بإدخال واحد أو أكثر من جزيئات‎ ‏حمض نووي تشفر مادة ضابطة 71167 من الاختراع في الحيوان أو النبات بتقنيات طفرية‎ ‏وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 141974749. إن الخلايا الطفرية‎ Hogan ‏قياسية. انظر‎ ‏جسدية أو بيضة‎ LA ‏المستخدمة لتحضير الحيوان الطفري هي خلايا جذعية جنينية أو‎ Yo ‏مخصبة. قد تكون الكائنات الحية الطفرية غير الآدمية هجينة؛ مغايرة الزيجوت غير هجينة؛‎ ‏مثلا:‎ Bol ‏ومتماثلة الزيجوت غير هجينة.‎
Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual 2nd ed., Cold
Spring Harbor Press (1999); Jackson et al., Mouse Genetics and Transgenics: A
Practical Approach, Oxford University Press (2000); and Pinkert, Transgenic Yo
Animal Technology: A Laboratory Handbook, Academic Press (1999).
AY
‏في بعض التجسيدات» يتواجد في الحيوانات الطفرية وليس في الآدميين تمزيق مستهدف‎ ‏واستبدال مع بنية استهدافية تشفر؛ على سبيل المثال؛ سلسلة ثقيلة و/أو سلسلة خفيفة لها‎ ‏أهمية. في أحد التجسيدات؛ تشمل الحيوانات الطفرية وتظهر جزيئات حمض نووي تشفر‎ (7167 ‏سلاسل ثقيلة وخفيفة ترتبط مع 71167 بصفة خاصة. برغم أن الأجسام المضادة ضد‎ ‏يمكن تحضيرها في أي حيوان طفري؛ فإن التجسيدات المفضلة تحديدا للحيوانات تتضمن‎ © ‏ماشية أو خيول. في تجسيدات إضافية يظهر الحيوان‎ cele ‏خراف؛ خنازير؛‎ (als ‏فثران؛‎ ‏اللبن» البولء اللعاب؛ الدموع؛ المخاط وموائع جسدية‎ call ‏الطفري المنتج الدوائي المطلوب في‎ ‏أخرى يمكن الحصول عليه منهم بسهولة باستخدام تقنيات تنقية يدركها الفن.‎ من المحتمل أن تكون للمواد الضابطة؛ المتضمنة أجسام ‎saline‏ الظاهرة بواسطة خطوط ‎٠‏ خلية مختلفة أو في حيوانات طفرية أنماط ‎glycosylation‏ مختلفة عن بعضها البعض. على أية ‎«dls‏ فإن كل المواد الضابطة التي تشفرها جزيئات حمض نوي المتوافرة هناء أو المشتملة على ترتيبات حمض أميني المتوافرة هنا هي جزء من الاختراع ‎(Jal)‏ بغض النظر عن حالة ‎glycosylation‏ للجزيء؛ وبصفة عامة أكثر ‎٠»‏ بغض النظرن عن وجود أو غياب تعديل (تعديلات) بعد الترجمة. يشتمل الاختراع إضافيا على مواد ضابطة معدلة بدرجة متباينة أثناء ‎٠‏ أو بعد الترجمة؛ مكلا بوامطة ‎«phosphorylation «acetylation «glycosylation‏ 8 اشتقاق بواسطة مجموعات حماية/ إخماد معروفة؛ فصل بتحلل ‎proptein‏ اتصال مع جزيء جسم مضاد أو مركب ترابطي خلوي ‎OAT‏ إلخ. يمكن إجراء أي من التعديلات الكيميائية الكثيرة بتقنيات معروفة؛ تتضمن بدون تحديد؛ فصل كيميائي خاص مع ‎cyanogen‏ ‎«acetylation (NaBH 8 protease «papain «chymotrypsin «trypsin ¢bromide‏ ‎coxidation formylation ٠‏ اختزال» تكوين أيضي في وجود ‎ctunicamyein‏ إلخ. تتضمن تعديلات عديدة بعد الترجمة مشتملة أيضا في الاختراع» على سبيل المثال؛ سلاسل ‎carbohydrate‏ متصلة-17 أو متصلة-0؛ معالجة ‎١‏ لأطراف المنتهية مع ‎N‏ أو المنتهية مع ‎«C‏ ‏ارتباط أجزاء كيميائية مع الهيكل الأساسي من الحمض الأميني؛ تعديلات كيميائية لسلاسل ‎carbohydrate‏ متصلة.]1 أو متصلة-0؛ واضافة أو حذف متخلف ‎methionine‏ نهايته-17 ‎Yo‏ نتيجة لإظهار خلية عائلة بدائية النواة. علاوة على ذلك؛ كما هو مذكور في المرجع والأمثلة أدناه فإن ‎polypeptides‏ يمكن أيضا تعديلها مع علامة يمكن تحديدها؛ مثل علامة ‎cenzymatic‏ استشعاعية؛ نظير مشع أو انجذاب للسماح بتحديد وعزل ‎sald)‏ الضابطة.
AY
(Purification) ‏التنقية‎ .d ‏بمجرد إنتاج مادة ضابطة من الاختراع بواسطة إظهار تخليقي أو أي واحدة من التقنيات‎ ‏مناعية؛ أو‎ globulins ‏الأخرى المعلنة هناء يمكن تنقيتها بأي طريقة معروفة في الفن لتنقية‎
Jie ‏يمكن‎ cla) ‏في هذا‎ proteins ‏بصفة عامة أكثر بواسطة أي تقنية قياسية أخرى لتنقية‎ ‏فإن مادة ضابطة 01167 معزولة هي مادة محددة‎ (Lin ‏المادة الضابطة. حسب الاستخدام‎ © ‏ومنفصلة و/أو مستعادة من مكون من بيئتها الطبيعية. إن المكونات الملوثة من بيئتها الطبيعية‎ ‏وقد تتضمن‎ polypeptide ‏هي مواد تتدخل مع الاستخدام التشخيصي أو العلاجي لأجل‎ ‏تتضمن‎ proteinaceous ‏غير‎ 0 proteinaceous ‏هرمونات؛ ومواد ذائبة أخرى‎ enzymes ‏مواد ضابطة معزولة مادة ضابطة في مكانها في خلايا مخلقة لأن مكون واحد على الأقل من‎ ‏سوف لا يكون موجودا.‎ polypeptide ‏البيئة الطبيعية لأجل‎ ٠ ‏جسم مضاد ضد‎ lie) 71127 ‏عند استخدام تقنيات تخليقية؛ يمكن إنتاج المادة الضابطة‎ ‏أو مشتق أو جزء منه) داخل الخلاياء في الحيز البريبلازمي» أو إفرازها مباشرة في‎ 7 ‏شخطوة أولى»؛ يمكن إزالة البقايا الدقائقية؛‎ LA ‏ْم الوسط. عند إنتاج الجزيء المطلوب داخل‎ ‏على ب!؛ 1245 بالطرد المركزي أو بالترشيح الفائق. على‎ adie ‏عائلة أو أجزاء‎ BAW ‏يصف:‎ (JE ‏سبيل‎ ٠
Carter, et al., Bio/Technology 10:163 (1992) ‏يتفكك‎ Glad E.coli ‏إجراء لعزل أجسام مضادة مفرزة إلى الحيز البريبلازمي في‎
EDTA )٠.# ‏(أس هيدروجيني‎ sodium acetate ‏من التجمد معجون الخلية في وجود‎ ‏؟ دقيقة. يمكن إزالة المواد‎ ٠ ‏عبر حوالي‎ (PMSF) phenylmethylsulfonylfluoride ‏و‎ ‏المنفصلة من الخلية بالطرد المركزي. عند إفراز الجسم المضاد في الوسط؛ فإن المواد الطافية‎ ٠ ‏متوافر‎ protein ‏باستخدام مرشح تركيز‎ dale ‏من أنظمة الإظهار تلك يتم تركيزها أولا بصفة‎ ‏يمكن تضمن‎ Millipore Pellicon ‏أو‎ Amicon ‏تجاريا. على سبيل المثال؛ وحدة ترشيح فائق‎ ‏ويمكن تضمن‎ protein ‏في أي من الخطوات السابقة لتثبيط تحلل‎ PMSF ‏مثل‎ protease ‏مثبط‎ ‏مضادات حيوية لمنع نمو الملوثات العارضة.‎ ‏أو جسم مضاد ضد 01167) المحضرة من‎ fe-PTK7 ‏إن تركيبة المادة الضابطة (مثلاء‎ Yo ‏انتقال كهربي‎ chydroxylapatite ‏تحليل كروماتوجرافي‎ Sia ‏يمكن تنقيتها باستخدام»‎ LIA ‏وتحليل كروماتوجرافي بالانجذاب»؛ ويمثل التحليل الكروماتوجرافي بالانجذاب تفنية‎ la eld
At ‏كمركب ترابطي للانجذاب تعتمد على الصنف والنوع‎ protein A ‏التنقية المفضلة. إن ملائمة‎ ‏مناعي موجود في البنية المنتقاة. يمكن استخدام‎ globulin Fe ‏لأي مجال سيطرة‎ Jie ‏أو 1804 آدمية‎ 1202 (IgGl ‏لتنقية أجسام مضادة معتمدة على سلاسل ثقيلة‎ protein A ‏محبذ لكل الأنواع‎ protein © ‏إن‎ -(Lindmark, et ‏لة‎ J Immunol Meth 62:1 )1983(( ‏إن المادة‎ .(Guss, et al, EMBO J 5:1567 (1986) ‏المماثلة الفأرية ولنوع 1803 الآدمي‎ © ‏لكن هناك مواد بينبة‎ agarose ‏البينية التي يرتبط معها المركب الترابطي للانجذاب هي غالبا‎ ‏زجاج متحكم في مسامه أو‎ die Lym ‏أخرى متوافرة. إن المواد البينية الثابتة‎ ‏أقصر من تلك‎ dallas ‏تسمح بمعدلات تدفق أسرع وأزمنة‎ poly(styrenedivinyl)benzene ‏فإن‎ «Cid ‏عندما يشتمل الجسم المضاد على مجال سيطرة‎ agarose ‏الممكن تحقيقها مع‎ ‏مفيد للتنقية. هناك أيضا‎ (J. T. Baker; Phillipsburg, N.J.) Bakerbond ABX™ ‏راتينج‎ ٠
HPLC cethanol ‏تجزئة على عمود استبدال أيون» ترسيب‎ Jie protein ‏تقنيات أخرى لتنقية‎ ‏تحليل‎ cheparin ‏تحليل كروماتوجرافي على‎ silica ‏تحليل كروماتوجرافي على‎ ¢ shall ‏معكوس‎ ‎polyaspartic ‏عمود‎ Jie) ‏على زاتينج استبدال أنيون أو كاتيون‎ sepharose ‏كزوماتوجرافي‎ ٠
Lisl ‏متوائرة‎ ammonium ‏مترسيب عنقا‎ SDS-PAGE «iromato ‏التركيز البؤري‎ «(acid : : ‏اعتمادا على الجسم المضاد المراد استرجاعه. في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة فإن المواد‎ ٠ ‏باستخدام تحليل كروماتوجرافي‎ (Lisa ‏الضابطة من الاختراع الحالي سوف تنقى؛ على الأقل‎ .Protein G ‏أو‎ Protein A ‏بانجذاب‎ (Conjugated PTK7 Modulators) ‏متحدة‎ PTK7 ‏مواد ضابطة‎ XI ‏بمجرد تنقية المواد الضابطة من الاختراع طبقا للتعاليم هنا فإنها قد تتصل مع؛ تندمج مع؛‎ ‏تتحد مع (مثلاء بصورة تساهمية أو غير تساهمية) أو تصاحب بطريقة أخرى أجزاء أو مواد‎ ٠ ‏تعديل موائمة حيويا نشطة دوائيا أو تشخيصية. حسب الاستخدام هنا يستخدم المصطلح اتحاد‎ ‏على نطاق كبير ويقصد به أن يعني أي جزيء مصاحب للمواد الضابطة المعلنة‎ (conjugate) ‏بغض النظر عن طريقة التلازم. في هذا الجانب لابد من إدراك أن تلك الاتحادات قد تشمل‎ ‏صغيرة؛‎ Ol ‏حمض نووي؛‎ Olja polymers «proteins «polypeptides «peptides ‏عوامل مماثلة؛ عقاقير مصنعة؛ جزيئات غير عضوية؛ جزيئات عضوية ونظائر مشعة. إضافة‎ Yo ‏لذلك؛ كما هو مشار إليه أعلاه فإن الاتحاد المنتقى يمكن أن يتصل تساهميا أو بدرجة غير‎
Ao
Lis ‏تساهمية مع المادة الضابطة ويظهر نسب جزيئية جرامية مختلفة اعتمادا؛ على الأقل‎ ‏على الطريقة المستخدمة لإجراء الاتحاد.‎ ‏في تجسيدات مفضلة سوف يتضح أن المواد الضابطة من الاختراع قد تكون متحدة‎ ie) ‏سمات منتقاة‎ Aid peptides ‏أو‎ polypeptides «proteins ‏مع أو متلازمة مع‎ ‏في تجسيدات‎ AST ‏إلخ). بصفة عامة‎ Ain ‏حيوية؛ دلالات حيوية؛ علامات‎ toxins © ‏منتقاة يشتمل الاختراع الحالي على استخدام المواد الضابطة أو أجزاء منها مندمجة تخليقيا أو‎ ‏أو‎ protein ‏متحدة كيميائيا (متضمنة كلا من الاتحادات التساهمية وغير التساهمية) مع‎ ‏على الأقل‎ ٠١ ‏على الأقل‎ ٠ ‏على الأقل‎ polypeptide ‏مغاير حيث يشمل‎ polypeptide ‏على‎ Ae ‏على الأقل‎ ove ‏على الأقل‎ le ‏على الأقل‎ con ‏على الأقل‎ cf ‏على الأقل‎ ٠ ‏حمض أميني. إن البنية ليست بحاجة بالضرورة لأن تكون‎ ٠٠١ ‏الأقل 0 أو على الأقل‎ ٠ ‏يمكن استخدام‎ (JU ‏متصلة مباشرة؛ لكنها قد تتواجد من خلال ترتيبات رابطة. على سبيل‎ ‏إما في‎ (PTK7 ‏مغايرة لأنواع خلية خاصة تظهر‎ polypeptides ‏أجسام مضادة لاستهداف‎ ‏الاختراع الحالي مع أجسام مضادة‎ oo ‏مواد الضات!‎ Sa ‏ا المعمل أو في الجسم؛ بدمج أو‎ ‏فان المواد الضابطة المندمجة أو المتحدة‎ . Mt ca wid ‏تخص مستقبلات سطح خاية‎ . ‏مغايرة قد تستخدم أيضا في اختبارات مناعية في المعمل وقد تكون متوائمة‎ polypeptides ‏مع‎ ١5 ‏مع طريقة تنقية معروفة في الفن. انظر؛ مثلا:‎
International publication No. WO 93/21232; European Patent No. EP 439,095;
Naramura et al., 1994, Immunol. Lett. 39:91-99; U.S. Pat. No. 5,474,981; Gillies et al., 1992, PNAS 89:1428-1432; and Fell et al., 1991, J. Immunol. 146:2446-2452. (Biocompatible modifiers) ‏تعديل موائمة حيويا‎ Alga a ٠ ‏في تجسيد مفضل؛ تتحد المواد الضابطة من الاختراع أو بطريقة أخرى تتلازم مع مواد‎ ‏تعديل موائمة حيويا يمكن استخدامها لضبط؛ تغيير؛ تحسين أو تعديل سمات المادة الضابطة‎ ‏حسب الطلب. على سبيل المثال؛ يمكن توليد أجسام مضادة أو بنيات اندماج لها أعمار نصف‎ polyethylene ‏كبيرة الوزن الجزيئي نسبيا مثل‎ polymer lina ‏زائدة في الجسم بارتباط‎ ‏مشابهة موائمة حيويا. سيدرك المهرة في الفن أن‎ polymers ‏متوافر تجاريا أو‎ (PEG) glycol Yo ‏يمكن الحصول عليه بأوزان جزيئية وهيئات جزيئية كثيرة مختلفة يمكن انتقائها لإضفاء‎ 0 ‏النصف معد خصيصا). يمكن أن‎ jee ‏أن يكون‎ Sle) ‏خواص خاصة على الجسم المضاد‎
حم
يرتبط ‎PEG‏ مع مواد ضابطة أو أجزاء أو مشتقات جسم مضاد مع أو بدون رابط متعدد
الوظيفية إما من خلال اتحاد خاص بالمكان من ‎PEG‏ مع النهاية-؟ أو النهاية© من الأجسام
المضادة المذكورة أو أجزاء جسم مضاد أو من خلال مجموعات ‎epsilon-amino‏ موجودة على
متخلفات ‎lysine‏ يمكن استخدام اشتقاق ‎polymer‏ خطي 0 متفرع يؤدي إلى فقد قليل النشاط 2 الحيوي. إن درجة الاتحاد يمكن مراقبتها عن قرب بواسطة ‎SDS-PAGE‏ وقياس طيف الكتلة
لتأكيد الاتحاد الأمثل لجزيئات ‎PEG‏ مع جزيئات الجسم المضاد. يمكن فصل ‎PEG‏ غير
المتفاعل من اتحادات الجسم ‎PEG-aliadll‏ بواسطة؛ ‎lie‏ تحليل كروماتوجرافي مستثني
للمقاس أو باستبدال أيون . بطريقة مشابهة؛ يمكن أن تتحد المواد الضابطة المعلنة مع
‎albumin‏ من أجل تحضير جسم مضاد أو جزء جسم مضاد ثابت أكثر في الجسم أو له عمر
‎٠‏ نصف أطول في الجسم. إن التقنيات معروفة جيدا في الفن؛ ‎«lil‏ مثلا:
‏المنتشور الدولي أرقام: 4/14 7/1570 و ‎V/YYITY‏ +6 ووثيقة براءة الاختراع
‏الأوروبية رقم 4177677 . ْ
‏هناك اتحادات أخرى, موائمة حيويا واضحة لأصحاب المهارة العادية ويمكن تحديدها بسهءولة
‏طبقا للتعاليم هنا. : ل"
‎(Diagnostic or detection agents) ‏تشخيصية أو للتحديد‎ dale b ٠ ‏في تجسيدات أخرى مفضلة؛ تتحد المواد الضابطة من الاختراع الحالي» أو أجزاء أو‎ ‏مشتقات منهاء مع عامل تشخيصي أو يمكن تحديده؛ دلالة أو مادة مخبرة عبارة عن جزيء‎ ‏حامل استشعاع؛ أو نظير مشع. إن‎ «pia ‏جزيء‎ «(nucleotide ‏أو‎ peptide ‏حيوي (مثلا؛‎ ‏المواد الضابطة المعلمة مفيدة لمراقبة نشوء أو تطور اضطراب انقسام مفرط أو كجزء من إجراء‎ ‏اختبار إكلينيكي لتحديد كفاية علاج خاص يتضمن المواد الضابطة المعلنة (أي؛ مواد‎ Ye ‏علاجية). قد تكون تلك الدلالات أو المواد المخبرة مفيدة أيضا في تنقية المادة الضابطة‎
‏المنتقاة» فصل أو عزل خلايا بادئة لورم أو في إجراءات إكلينيكية أولية أو دراسات سمية. يمكن إجراء ذلك التشخيص أو التحديد باقتران المادة الضابطة مع مواد يمكن تحديدها تتضمن»؛ بدون تحديد» ‎enzymes‏ عديدة تشمل مثلا ‎peroxidase‏ فجل ‎phosphatase ¢ jl 8‏ قلويء؛ ‎«beta-galactosidase‏ أو ‎tacetylcholinesterase‏ مجموعات مصنعة؛ مثل بدون تحديد ‎¢avidin/biotin g streptavidin/biotin‏ مواد استشعاعية؛ مثل بدون ‎«thodamine «fluorescein isothiocynate «fluorescein «umbelliferone <a gash‏
AY
‏مواد مضيئة؛‎ ¢phycoerythrin ‏أو‎ dansyl chloride «dichlorotriazinylamine fluorescein dJuciferin <luciferase ‏مواد حيوية مضيئة؛ مثل بدون تحديت‎ (luminol ‏بدون تحديد؛‎ Jae carbon ‏الث‎ 21, 1231 1217) jodine ‏مواد نشطة إشعاعياء مثل بدون تحديد‎ taequorins technetium 5 «(' In, Br, Wn, Mn) indium «(H) tritium «(*S) sulfur «(**C) molybdenum «(*®Pd) palladium «(**Ga, ~~ ¢’Ga) gallium «(**'Ti) thallium «(PTe) ©
JBYb Ma (Pm ‏ووثتا‎ MTL Sm ‏مث‎ fluorine «(FXe) xenon «(**Mo) 3p Bg S70 Co ‏عوك‎ JRu BRh ‏متكتل معتل تلك‎ Sc OY J661 ‏باستخدام‎ positron ‏فلزات ينبعث منها‎ Tiny «Sn Se Mn Cr Yb 4 ‏أيونات فلز غير نشطة إشعاعيا‎ positron ‏عمليات التصوير السطحي المختلفة بانبعاث‎ ‏متوازية المغناطيسية؛ وجزيئات معلمة إشعاعيا أو متحدة مع نظائر مشعة خاصة. في تلك‎ ٠ ‏التجسيدات تستخدم طرق تحديد ملاثئمة معروفة جيدا في الفن ومتوافرة تماما من مصادر‎ ‏تجارية.‎ ‏كما هو مشار اليه أعلاه؛ في تجسددات أحرى يم6.:. أن تندمج المواد الضابطة أو أجزاء‎ 0 ‏اع «سهيل إجراءات التنقية أو التشخيص‎ Tal ‏م40ن» أو ساسل‎ Jie ‏ل منها مع ترتيبات دلالة؛‎ ‏كيمياء نسيجية مناعية أو 17805. في تجسيدات مفضلة؛ يكون ترتيب حمض أميني‎ Jie ١ ‏الجزء الملحق المتوافر في‎ Jie ؛)١ ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ hexa-histidine peptide ‏للدلالة هو‎ ‏من بين آخرين؛ والكثير منها متوافر تجاريا. حسب الوصف في:‎ «(Qiagen Inc.) pQE ‏ناقل‎ ‎Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824, protein ‏تنقية ملائمة لأجل‎ (V ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ hexa-histidine ‏على سبيل المثال؛ يوفر‎
Gale ‏أخرى ملحقة للتتقية؛ لكن بدون تحديد»ء جزء‎ peptide ‏الاندماج. تتضمن أجزاء‎ ٠ ‏الإنفلونزا‎ hemagglutinin protein ‏مشتق من‎ epitope ‏المقابل إلى‎ (HA) hemagglutinin .(U.S.P.N. 4,703,004) "flag" ‏والجزء الملحق‎ (Wilson et al., 1984, Cell 37:767) (Therapeutic Moieties) ‏جزاء علاجية‎ Ic ‏حسب الإشارة مسبقاء فإن المواد الضابطة أو الأجزاء أو المشتقات منها قد تكون أيضاً‎ ‏علاجي مثل عوامل مضادة‎ cha ‏متحدة؛ متصلة أو مندمجة أو بطريقة أخرى متلازمة مع‎ Yo
Gall ‏خلوي أو عامل سام للخلاياء مثلاء عامل موقف لنمو الخلية أو قاتل‎ toxin ‏للسرطان»‎ ‏حسب الاستخدام‎ beta ‏أو‎ alpha ‏مواد باعثة‎ lie ‏عامل علاجي أو أيون فلز نشط إشعاعياء‎
AA
هنا يتضمن ‎toxin‏ خلية أو عامل سام للخلايا أي عامل أو جزء علاجي ضار للخلايا وقد يثبط نمو الخلية 0 إبقاء حياتها. تتضمن الأمثلة ‎gramicidin «cytochalasin B «paclitaxel‏ بل ‎«vincristine <tenoposide etoposide «mitomycin «emetine «ethidium |. bromide‏ ‎«dihydroxy anthracin «daunorubicin «doxorubicin «colchicin ¢vinblastine‏ ‎maytansinoids ©‏ مقثل ‎«mitoxantrone «dione «(Immunogen, Inc.) DM-4 5 DM-1‏ ‎«procaine glucocorticoids «1-dehydrotestosterone actinomycin ~~ D «mithramycin‏ ‎cyclophosphamide s «epirubicin «puromycin «propranolol «lidocaine «tetracaine‏ ومواد ممائلة ومواد مشابهة لذلك. ‎toxin Je‏ خلية إضافية ‎cauristatins‏ ‏متضمنة ‎(MMAF) monomethyl auristatin F 5 (MMAE) monomethyl auristatin E‏ ‎amanitins «(Seattle Genetics, Inc.) 0٠‏ مثل ‎«beta-amanitin <alpha-amanitin‏ ‎gamma-amanitin‏ أو ‎Julse «(Heidelberg Pharma AG) epsilon-amanitin‏ رابطة لأخدود ثانوي ‎Jie DNA‏ مشتقات ‎pyrrolobenzodiazepine 5 (Syntarga, B.V.) duocarmycin‏ ‎dimers Ce an‏ معدنة ‎Ltd)‏ ,دصر ‎(PBDs,‏ بضافة ‎clay‏ في أحد التجسيدات إن المواد ‎٠ |ّ‏ الضابطة ‎PTKT‏ من الاشتراءٍ الحاني قد دنا زم مع جزيئات رابطة مضادة ‎CD3‏ من أجل حشد ‎٠‏ خلايا-1 سامة للخلية ويكون هدفها ‎WIA‏ بادئة للورم (تقنية ‎BITE‏ انظرء مثلا ‎(Fuhrmann,‏ ‎S. et. al. Annual Meeting of AACR Abstract No. 5625 )2010((‏ المندمج هنا كمرجع. تشمل أجزاء علاجية إضافية موائمة عوامل سامة للخلية متضمنة؛ بدون تحديد؛ مضادات مواد الأيض ‎«cytarabine «6-thioguanine «6-mercaptopurine «methotrexate «>ix)‏ -5 ‎«(fluorouracil ~ decarbazine‏ عوامل ‎alkylating‏ (مثلاء ‎thioepa ~~ ¢mechlorethamine‏ ‎«(CCNU) lomustine s (BCNU) carmustine «melphalan «chlorambucil ٠‏ ‎‘mitomycin © «streptozotocin «dibromomannitol <busulfan <cyclothosphamide‏ ‎anthracyclines «(cisdichlorodiamine platinum (I) (DDP) cisplatin s‏ (مثلاء ‎daunorubicin‏ (سابقا ‎(doxorubicin 5 (daunomycin‏ مضادات حيوية ‎dactinomycin Mis)‏ (سابقا ‎(AMC) anthramycin 5 «mithramycin «bleomycin «(actinomycin‏ وعوامل ‎YO‏ مضادة للانقسام الفتيلي ‎(vinblastine vincristine lie)‏ . هناك قائمة موسعة أكثر للأجزاء العلاجية موجودة في منشور 001: الطلب الدولي رقم 0978481/» براءة الاختراع الأمريكية ‏رقم 0159570505/ ‎٠‏ كل منهما مندمج هنا كمرجع.
قم
تتحد أيضا المواد الضابطة المنتقاة مع أجزاء علاجية ‎Jie‏ مواد نشطة إشعاعيا أو مواد كلابية دائرية كبيرة مفيدة لاتحاد أيونات فلز مشع (انظر أعلاه لأمثلة مواد نشطة إشعاعيا). في تجسيدات ‎dala‏ تكون المادة الكلابية الدائرية الكبيرة عبارة عن -1,4,7,10 ‎(DOTA) tetraazacyclododecane-N,N',N",N"-tetraacetic acid‏ ويمكن أن ترتبط مع جسم © مضاد من خلال جزيء رابط. إن تلك الجزيئات الرابطة معروفة شيوعا في الفن وموصوفة في: ‎Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4:2483; Peterson et al., 1999, Bioconjug.‏ ‎Chem. 10:553; and Zimmerman et al., 1999, Nucl.
Med.
Biol. 26:943.‏ تتضمن نظائر مشعة تمثيلية متوائمة مع هذا الجانب من الاختراع؛ بدون تحديد؛ ‎iodine‏ ‎copper «(**C) carbon 31 1257 123 121‏ لس" ثم“ ‎tritium )378( sulfur «(*’Cu,‏ ‎٠‏ ِلك ‎"In, In) indium‏ معلا ‎bismuth «('"*In,‏ فظن ,نظت ‎«(®Tc) technetium‏ ‎«(**Mo) molybdenum «('**Pd) palladium «(**Ga, Ga) gallium «(**'Ti) thallium‏ ‎fluorine «('*Xe) xenon‏ مك ‎Sm‏ ساك ‎JOH JY (La Pm Gd‏ : لزت وواث ‎Re‏ موثثل مال ‎Ru JOR‏ عوك موث ‎Fun‏ روث ‎3p‏ ووتتا ‎١‏ حظاء اث ويرث وو موت ‎Tn‏ مخ ‎A bat pr‏ هناك أيضا ‎nuclides‏ ‎١‏ مشعة أخرى متوافرة كعوامل تشخيصية وعلاجية؛ بصفة خاصة تلك في نطاق الطاقة من ‎Te‏ ‏إلى 4006 ‎keV‏ اعتمادا على ‎AY‏ المراد علاجها والنمط العلاجي المطلوب؛ فإن المهرة في
الفن ينتقون بسهولة النظير المشع الملائم للاستخدام مع المواد الضابطة المعلنة. إن المواد الضابطة 71167 المعلنة من الاختراع الحالي يمكن أيضا أن تتحد مع جزء علاجي أو عقار يعدل استجابة حيوية محددة ‎Die)‏ مواد تعديل استجابة حيوية أو ‎(BRM‏ ‎٠‏ بمعنى أنء العوامل العلاجية أو الأجزاء المتوائمة مع الاختراع الحالي لا يجب اعتبارها مفيدة للعوامل العلاجية الكيميائية التقليدية. على سبيل ‎(JB‏ في تجسيدات مفضلة بصفة خاصة قد يكون جزء العقار هو ‎protein‏ أو ‎polypeptide‏ أو جزء منه له نشاط حيوي مطلوب. تتضمن تلك ‎proteins‏ على سبيل ‎Onconase «ricin A «abrin Jie toxin «Jal‏ (أو ‎Al RNase‏ سام للخلية) ‎toxin‏ خارجي ‎toxin «pseudomonas‏ كوليراء أو ‎toxin‏ دفتريا؛ ‎protein‏ مثل ‎Yo‏ عامل ‎Jai‏ وري ‎B-interferon co-interferon‏ عامل نمو عصب؛ عامل نمو ‎Gide‏ من صفيحة دموية؛ منشط ‎plasminogen‏ نسيج؛ أو عامل مسبب للموت المبرمج للخلية؛ ‎Sle‏ ‏مطل ‎AIM © ¢TNF-B‏ (انظر المنشور الدولي رقم 4844؟7/7) 11 لتم ‎il)‏
المنشور الدولي رقم 4411 ؟/لا 8(« مركب ترايطي ‎(Takahashi et al, 1994, J.
Fas‏ ‎VEGI dlmmunol., 6:1567(‏ (انظر؛ المنشور الدولي رقم 19/77105)؛ عامل تخثر أو عامل مضاد للتكوين الوعائي » ‎angiostatin «ie‏ أو ‎«of tendostatin‏ مادة تعديل استجابة حيوية متلا ‎«("[L-2") interleukin-2 «("IL-1") interleukin-1 Oia) lymphokine‏ ‎("IL-6") interleukin-6 ©‏ عامل إثارة مستعمرة خلية بلعمة كبيرة خلية حبيبية ‎("GM-CSF")‏ ‏وعامل إثارة مستعمرة خلية حبيبية (0-0877"))؛ أو عامل نمو ‎Nae)‏ هرمون النمو ‎(CGH‏ ‏كما هو مذكور أعلاه؛ فإن طرق اندماج أو اتحاد مواد ضابطة مع أجزاء ‎polypeptide‏ معروفة
في الفنء بالإضافة إلى مراجع الموضوع المعلنة مسبقا انظرء ‎Sia‏ ‎and 5,112,946;‏ ,5,447,851 ;5,349,053 ;5,359,046 ;5,622,929 ;5,336,603 .10.5.5118 ‎EP 307,434; EP 367,166; PCT Publications WO 96/04388 and WO 91/06570; ٠١‏ ‎Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88:10535; Zheng et al., 1995, J Immunol‏ ‎and Vil et al., 1992, PNAS USA §9:11337‏ ;154:5590 ‎OS‏ منها مندمج هنا كمرجع. ان ‎a‏ المادة الضابطة مع جزء ليس بحاجة بالضرورة لأن ض يكون مباشراء لكنه قد يده مر لال ترتيبات ‎Hin,‏ إن تلك الجزيئات الرابطة معروفة شيوعا
‎٠‏ في الفن وموصوفة في: ‎Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res 4:2483; Peterson et al., 1999, Bioconjug‏ ‎Chem 10:553; Zimmerman et al., 1999, Nucl Med Biol 26:943; Garnett, 2002, Adv‏ ‎Drug Deliv Rev 53:171‏ ‎JS‏ منها مندمج هنا كمرجع.
‎Y.‏ بصفة ‎dale‏ أكثر؛ فإن تقنيات اتحاد أجزاء علاجية أو عوامل سامة للخلية مع مواد ضابطة معروفة جيدا. يمكن أن تتحد أجزاء مع مواد ضابطة بأي طريقة يدركها ‎(Gall‏ متضمنة؛ بدون ‎caja‏ ترابط ‎caldehyde/Schiff‏ ترابط ‎Jays csulphydryl‏ متغير مع حمض؛ ترابط ‎cis-‏ ‎caconityl‏ ترابط ‎chydrazone‏ ترابط قابل للتحلل ‎cenzymatically‏ انظر بصفة عامة ‎(Garnett, 2002, Adv Drug Deliv Rev 53:171)‏ انظر أيضاء مثلا:
‎Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Yo
‎Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R.
Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery",
in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel
Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer
Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical
Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And
Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer °
Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), and Thorpe et al, 1982, Immunol.
Rev. 62:119. ‏في تجسيدات مفضلة فإن مادة ضابطة 71167 متحدة مع جزء علاجي أو عامل سام للخلية‎ ‏يمكن أن تتذوت بواسطة خلية عند الارتباط مع جزيء 07167 مصاحب لسطح الخلية وبذلك‎ ٠ ‏يتم توصيل الحمل الصافي العلاجي.‎ (Diagnostics and Screening) ‏طر 3( تشخيصية وحجب‎ XII
SE Miagnastics) ‏د شرق تشخيصية‎ ‏كما هو مشار إليه» يوفر الاختاع الحالي في المعمل أو في الجسم الحي طرق لتحديد؛‎ 0 ‏مراقبة أو تشخيص اضطرابات انقسام مفرط وطرق لحجب خلايا من مريض لتحديد خلايا‎ ٠ ‏مكونة للأورام تتضمن 1708. تتضمن تلك الطرق تحديد كائن لديه سرطان لمعالجة أو مراقبة‎ ‏استفحال السرطان تشمل تلامس المريض أو عينة مأخوذة من المريض مع مادة ضابطة‎ ‏منتقاة حسب الوصف هنا وتحديد وجود أو غياب؛ أو مستوى تلازم المادة الضابطة مع‎ 7 ‏منه نشط‎ ea ‏مرتبط أو حر في العينة. عندما تشمل المادة الضابطة جسم مضاد أو‎ 7 ‏قد تحتوي‎ All ‏مناعيا فإن التلازم مع 71167 خاص في العينة من المحتمل أن يدل على أن‎ . "٠ ‏خلايا سرطان جذعية) مما يدل على أن الكائن المصاب‎ lie) ‏ورم سرمدية‎ WIS ‏على‎ ‏بالسرطان قد تمت معالجته بدرجة مؤثرة مع مادة ضابطة 71167 حسب الوصف هنا. قد تشمل‎ ‏خطوة مقارنة مستوى الارتباط مع مادة مقارنة. على العكس من ذلك؛ عندما‎ Lilia) ‏الطرق‎ ‎ephrin-A ‏تكون المادة الضابطة المنتقاة هي 70-01167 فإن خواص ارتباط المركب الترابطي‎ ‏المنتقاة يمكن الاستفادة منها ومراقبتها (بصورة مباشرة أو غير مباشرة؛ في المعمل أو في‎ Yo ‏الجسم الحي) عند التلامس مع العينة لتوفير المعلومات المطلوبة. هناك طرق تشخيصية أو‎ yY ‏علاجية أخرى متوائمة مع التعاليم هنا معروفة جيدا في الفن ويمكن ممارستها باستخدام مواد‎ ‏أنظمة مخبرة مخصصة لذلك.‎ Jie ‏تجارية‎ ‏في تجسيد مفضل بصفة خاصة تستخدم المواد الضابطة من الاختراع الحالي لتحديد‎ ‏أو دم) والتي قد تستخدم؛‎ plasma ‏وتقدير كمي لمستويات 7 في عينة من مريض (مثلاء‎ ‏في المقابل؛ لتحديدء تشخيص أو مراقبة اضطرابات مصاحبة 171167 متضمنة اضطرابات‎ © ‏انقسام مفرط.‎ enzyme ‏تتضمن طرق اختبار تمثيلية موائمة اختبارات مناعية إشعاعية؛ اختبارات مناعية‎
Western ‏مناعية؛ تحليل‎ dads ‏اختبارات ارتباط تنافسي؛ اختبار مناعي استشعاعي؛ اختبارات‎ ‏بصفة عامة أكثر؛ يمكن تحديد‎ (ELISA ‏اختبارات قياس خلوي انسيابي؛ واختبارات‎ Blot ‏(أو تثبيط ذلك) باستخدام أي‎ PTK7 enzymatic ‏في عينة حيوية أو قياس نشاط‎ 01167 0٠ ‏اختبار معروف في الفن. قد تشتمل العلاجات التشخيصات الموائمة في الجسم الحي على‎ ‏تصوير قطاعي‎ (MRI) ‏تصوير ومتابعة معروفة مثل تصوير رنين مغناطيسي‎ SiS ‏تصوير‎ ((PET ‏(سثلا فحص‎ positron ‏محسوب (مثلا فحص 1ه) تسدير نطاعي‎ ‏هؤلاء المهرة في الفن بسهولة إدراك الكشف‎ arsine 0 ‏إشعاعي» صوت فوق سمعي‎ ٍ ‏المناسب عن أداة؛ تقنيات متابعة أو تصوير (مشتملة على مصادر (متاحة تجاريا) معتمدة‎ ١٠ ‏على مبحث أسباب المرض؛ إيضاح العوامل المسببة للمرض أو التقدم السريري للاضطراب.‎ ‏في تجسيد آخرء يوفر الاختراع طريقة تحليل تقدم السرطان و/أو تطور المرض في الجسم‎ ‏الحي. في تجسيد آخر؛ يشتمل تحليل تقدم السرطان و/أو تطور المرض في الجسم الحي على‎
AT ‏يشتمل التحليل على تعيين الورم. في تجسيد‎ AT ‏تحديد مدى تقدم الورم. في تجسيد‎ ‏يجرى تحليل تقدم الورم على ورم أولي. في تجسيد آخرء يجرى التحليل إضافيا اعتمادا على‎ "٠ ‏يجرى تحليل إضافي في‎ AT ‏نوع السرطان المعروف للشخص الماهر في الفن. في تجسيد‎ ‏الجسم الحي لأورام ثانوية ناشئة من خلايا انتشار لتكوين أورام سرطانية من الورم الأولي. في‎ ‏يحلل مقاس وشكل الأورام الثانوية. في بعض التجسيدات؛ يجرى تحليل إضافي‎ al ‏تجسيد‎ ‏خارج الجسم الحي.‎ ‏يوفر الاختراع طريقة تحليل تقدم السرطان و/أو تطور المرض في الجسم‎ AT ‏تجسيد‎ (3 Yo ‏يشتمل تحليل انتشار‎ (lad ‏الحي متضمنا تحديد انتشار الورم في الخلية. في تجسيد آخر‎ ‏الورم في الخلية على تحديد نمو متقدم للخلايا عند موقع متقطع من الورم الأولي. في تجسيد‎
آخرء يشتمل موقع تحليل انتشار الورم داخل الخلية على طريقة انتشار سرطاني. في بعض التجسيدات؛ يمكن تشتيت الخلايا خلال شبكة أوعية دموية؛ أوعية ليمفاوية؛ في تجاويف الجسم أو اتحادات من ذلك. في تجسيد آخر يجرى تحليل انتشار الورم في الخلية من ناحية انتقال الخلية؛ انتشارها؛ تسربهاء انقسامها أو اتحادات من ذلك. ° في أمثلة خاصة؛ قد تختبر ‎LBA‏ المسببة للمرض في كائن أو عينة من كائن أو تتميز باستخدام المواد الضابطة المذكورة قبل العلاج أو نظام لترسيخ خط القاعدة. في مثال آخرء تشتق العينة من كائن معالج. في بعض الأمثلة تؤخذ العينة من الكائن عند على الأقل حوالي نت ىت ‎AY‏ نل كل كل ذل ‎de Te ١ ١ AAT‏ يوم» 1 شهور 4 شهورء ‎VY‏ شهورء أو > ‎VY‏ شهر بعد بداية معالجة الكائن أو انتهائها. في أمثلة محددة؛ v0 7 ‏بعد‎ Ae) ‏تتحدد الخلايا المسببة للورم 0 تتميز بعد عدد محدد من الجرعات‎ ٠ ‏؟ أو جرعات أعلى من العلاج). في أمثلة أخرى؛ يتم تمييز الخلايا المسببة للورم أو‎ ٠ ٠ ‏تحديدها بعد أسبوع واحد؛ أسبوعين؛ شهر واحد؛ شهرين؛ سنة واحدة؛ سنتين» ؟ سنوات؛ ؛‎
Co Co ‏سنوات أو أكثر بعد تناول علاج واحد أو أكتر.‎ 0 في جانب آخر ؛ وحسب الشرح ‎eli 260 badly‏ يوفر الاختراع الحالي مجموعات ‎١‏ لتحديد؛ مراقبة أو تشخيص اضطراب انقسام مفرط؛» تحديد كائن لديه ذلك الاضطراب من أجل معالجة أو مراقبة ممكنة لتطور (أو تراجع) الاضطراب في المريض؛ حيث تشمل المجموعات مادة ضابطة حسب الوصف ‎clin‏ وعوامل كاشفة لتحديد تأثير المادة الضابطة على عينة. ‎bb‏ الحجب ‎(Screening)‏ ‏يمكن أيضا استخدام المواد الضابطة 1167 والخلاياء المزارع؛ المجموعات والتركيبات التي ‎٠‏ تشملهاء متضمنة أنسالهاء لحجب أو تحديد مركبات أو عوامل (مثلاء عقاقير) تؤثر على وظيفة أو نشاط خلايا بادئة لورم أو نسلها بالتفاعل مع ‎PTK7‏ (مثلاء ‎polypeptide‏ أو المكونات الجينية له). يوفر الاختراع لذلك إضافيا أنظمة وطرق لتقييم أو تحديد مركب أو عامل يمكن أن يؤثر على وظيفة أو نشاط خلايا بادئة لورم أو نسلها بالتلازم مع 01167 أو مواده الخاضعة. قد تكون تلك المركبات أو العوامل عقاقير مرشحة تم حجبها لمعالجة ‏© اضطراب انقسام مفرط؛ على سبيل المثال. في أحد التجسيدات؛ يشمل نظام أو طريقة ‎LO‏ ‏بادئة لورم تظهر 71167 ومركب أو عامل ‎Sia)‏ عقار)؛ حيث تتلامس الخلايا والمركب أو ‎Jalal‏ (مثلا؛ العقار) مع بعضهما البعض.
q¢ ‏يوفر الاختراع إضافيا طرق لحجب وتحديد مواد ضابطة 71167 أو عوامل ومركبات لتعديل‎ ‏نسل. في أحد التجسيدات؛ تتضمن طريقة تلامس‎ WA ‏نشاط أو وظيفة خلايا بادئة لورم أو‎ ‏بادئة لورم أو نسلها مع عامل أو مركب اختبار؛ وتحديد ما إذا كان عامل أو مركب‎ LDA ‏المصاحب خلايا بادئة لورم.‎ ephrin-A ‏الاختبار يضبط نشاط أو وظيفة المركب الترابطي‎
° إن عامل أو مركب اختبار يضبط نشاط أو وظيفة يخص 71167 لتلك الخلايا البادثة لورم ‎(TICS)‏ أو نسلها في مجموعة يحدد عامل أو مركب الاختبار كعامل نشط. يتضمن نشاط أو وظيفة تمثيلي يمكن ضبطه تغيرات في شكل الخلية؛ إظهار دلالة؛ تباين ‎(differentiation)‏ أو ‎aly)‏ تباين ‎¢(de-differentiation)‏ اكتمال النمو والوظيفة؛ الانقسام ‎(proliferation)‏ الحيوية ‎«(viability)‏ الموت المبرمج ‎(apoptosis)‏ أو موت خلية ‎LDA‏ سلفية عصبية ‎(cell death‏
‎neuronal progenitor cells) ٠‏ أو نسلها. إن تلائم؛ عند الاستخدام في الإشارة إلى خلايا أو مزرعة خلية أو خطوة طريقة أو معالجة يعني تفاعل مباشر أو غير مباشر بين التركيبة (مثلاء 101167 مصاحب لخلية أو مزرعة خلية) ‎٠ |‏ > ونوع مرجعي ‎AT‏ إن مثال خاص لتفاءا .اش هو تفاعل فيزيائي. إن مثال خاص لتفاعل : : : غير مباشر هر التفاعل الذي توا ليا ترح ار حار . حزي,ء وسدلي والذي يؤثر في المقابل على ‎Vo‏ النوع المرجعي ‎Ose)‏ خلية ‎(cell)‏ أو مزرعة خلية ‎((cell culture)‏ في هذا الجانب من الاختراع يشير ‎(modulates) Janay’‏ إلى التأثير على نشاط أو وظيفة خلايا بادئة لورم أو نسلها بطريقة متوائمة مع تحديد التأثيرات على نشاط أو وظيفة خلية تم تحديده بأنه خاص بجانب معين ‎lie)‏ انتشار بعيدا عن ‎Land)‏ أو الانقسام) للخلايا البادئة لورم أو نسلها من الاختراع. تتضمن أنشطة ووظائف تمثيلية؛ لكن بدون تحديد؛ قياس الشكل؛ ‎٠‏ دلالات نشوئية؛ التباين؛ الانقسام؛ الحيوية؛ تنفس الخلية؛ نشاط ‎mitochondrial‏ سلامة الغشاء؛ أو إظهار دلالات مصاحبة لحالات خاصة. طبقا لذلك؛ يمكن تقييم مركب أو عامل ‎Sli)‏ عقار مرشح) من أجل تأثيره على خلايا بادئة لورم أو نسلها؛ بتلامس تلك الخلايا أو خلايا النسل مع المركب أو العامل وقياس أي ضبط لنشاط أو وظيفة خلايا ‎Al‏ لورم أو خلايا النسل كما هو موضح هنا أو معلوم للصانع الماهر. ‎Yo‏ تتضمن طرق حجب وتحديد عوامل ومركبات تلك المناسبة لحجب عالي الإدخال؛ التي تتضمن أنظمة خلايا (مثلاء أنظمة دقيقة) متمركزة أو موضوعة؛ اختياريا عند مواقع أو أماكن مسبقة التحديد. يمكن لطرق التداول عالية الإدخال الروبوتية أو اليدوية يمكنها أن تجس qo ‏تفاعلات كيميائية وتحدد مستويات إظهار جينات كثيرة في فترة قصيرة من الوقت. هناك تقنيات‎ ‏حوامل استشعاع) وتحليلات أوتوماتية تعالج المعلومات بمعدل‎ lie) ‏تستعمل إشارات جزيئية‎ ‏سريع جداء انظر؛ مثلا:‎ (Pinhasov et al., Comb. Chem. High Throughput Screen. 7:133 (2004)). ‏على سبيل المثال؛ لقد تم استخدام تقنية الأنظمة الدقيقة بدرجة كبيرة لجس تفاعلات آلاف‎ © ‏مع توفير معلومات لجينات خاصة؛ انظرء مثلا:‎ Jal ‏الجينات في‎ (Mocellin and Rossi, Adv. Exp. Med. Biol. 593:19 (2007)). ‏يمكن لطرق الحجب تلك (مثلا؛ عالية الإدخال) أن تحدد عوامل ومركبات نشطة بسرعة‎ ‏وبدرجة مؤثرة. على سبيل المثال؛ يمكن تمركز الخلايا أو وضعها (بذورها مسبقا) على طبق‎ ‏طبق أو طبق مسطح وحيد متعدد العيون‎ Sie) ‏دورق» زجاجة دوارة أو طبق‎ cal ‏مزرعة؛‎ ٠ ‏عين)؛ اختياريا عند‎ 1١97و‎ FAL (AT (TE 7 153 8 ‏مثل طبق أو طبق مسطح به‎ ‏على‎ lana ‏مواقع محددة؛ لتحديد جزيئات علاجية بصورة ممكنة. تتضمن مكتبات يمكن‎ ‏مكتبات إظهار بلعم؛ مكتبات إظهار خميرة جسم مضاد‎ «pia ‏سبيل المثال؛ مكتبات جزيء‎ > ‏تحويل فيروس غدي.‎ Bla GIRNA ‏مكتدات‎ {Adimab, JTC) WS ‏آدمي‎ : ‏مستحضرات دوائية واستخدامات علاجية‎ XII YO (Pharmaceutical Preparations and Therapeutic Uses) (Formulations and routes of administration) ‏مستحضرات وطرق الإعطاء‎ a ‏اعتمادا على شكل المادة الضابطة إلى جانب أي اتحاد اختياري؛ طريقة التوصيل المعني؛‎ ‏المرض المراد علاجه أو مراقبته ومتغيرات كثيرة أخرى» فإن تركيبات الاختراع الحالي يمكن‎ ‏صياغتها حسب الطلب بتقنيات يدركها الفن. بمعنى أنه؛ في تجسيدات مختلفة من الاختراع‎ ٠ ‏الحالي تصاغ التركيبات المشتملة على مواد ضابطة 71167 مع تشكيلة كبيرة من المواد الحاملة‎ ‏المقبولة دوائيا؛ انظرء؛ مثلا:‎ (Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and
Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical
Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7" ed., Lippencott Williams and Yo
Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3" ed.,
Pharmaceutical Press (2000).
هناك مواد حاملة كثيرة مقبولة دوائيا؛ تتضمن أوساط حاملة؛ مواد مساعدة؛ ومواد تخفيف متوافرة تماما من مصادر تجارية كثيرة. إضافة لذلك؛ هناك تشكيلة متنوعة لمواد مساعدة مقبولة دوائياء ‎Jie‏ عوامل لضبط وتثبيت الأس الهيدروجيني ‎(pH)‏ عوامل لضبط التواتر» مواد . مثبتة؛ عوامل ترطيب»؛ إلخ؛ متوافرة أيضا. تتضمن مواد ‎Alda‏ تمثيلية خاصة غير مقيدة © محلول ملح؛ محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني؛ ‎«dextrose‏ ماف ‎cethanol «glycerol‏ واتحادات من ذلك. بصفة خاصة أكثر لابد من إدراك ‎cdl‏ في بعض التجسيدات؛ فإن التركيبات العلاجية من الاختراع يمكن إعطائها بدون تخفيف أو مع حد أدنى من مكونات إضافية. على النقيض يمكن اختياريا صياغة المواد الضابطة 71167 من الاختراع الحالي لكي تحتوي على مواد حاملة ‎٠‏ مقبولة دوائيا مناسبة تشمل مواد مسوغة ومواد مساعدة معروفة جيدا في الفن وهي مواد خاملة نسبيا تسهل إعطاء المادة الضابطة أو تساعد في تصنيع المركبات النشطة في مستحضرات في صورة مثلى دوائيا للتوصيل إلى مكان التأثير. على سبيل المثال؛ فإن المادة المسوغة يمكن ‎Co‏ أن تعطي. شكل أو قوام أو تؤثر كماد تحفيف. .ب الحركيات الدوائية للمادة الضابطة. ب : تتضمن مواد مسوغة مناسية «دون نحدد .دل انوت؛ عوامل تبلل واستحلاب؛ أملاح لتنويع ‎٠‏ الأوزمولارية؛ عوامل كبسلة؛ مواد مثبتة ‎GO‏ الهيدروجيني؛ ومواد معززة لمستحضر للجلد. إن المواد الضابطة المعلنة للإعطاء العام يمكن صياغتها للإعطاء المعوي؛ عن غير الطريق المعوي؛ أو سطحيا. في الحقيقة؛ فإن كل أنواع المستحضر الثلاثة يمكن استخدامها بصورة متزامنة لإجراء إعطاء عام للمقوم النشط. إن المواد المسوغة بالإضافة إلى المستحضرات لتوصيل عقار عن غير الطريق المعوي وعن طريق غير الطريق المعوي مذكورة ‎٠‏ في: ‎Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.
Mack Publishing‏ .)2000( تتضمن مستحضرات مناسبة للإعطاء عن غير الطريق المعوي محاليل مائية لمركبات نشطة في شكل قابل للذوبان في الماء؛ على سبيل المثال؛ أملاح قابلة للذويان في الماء. ‎ila)‏ ‎Yo‏ يمكن إعطاء معلقات من المركبات النشطة حسب الملائمة لمعلقات حقن زيتية. تتضمن مذيبات أو أوساط حاملة مناسبة محبة للدهن زيوت دهنية؛ على سبيل المثال؛ زيت السمسم؛ أو 8 حمض دهني مصنعة»؛ على سبيل المثال»؛ ‎ethyl oleate‏ أو ‎triglycerides‏ تحتوي av sodium carboxymethyl «Nia ‏معلقات حقن مائية على مواد تزيد لزوجة المعلق وتتضمنء‎ ‏اختيارياء فقد يحتوي المعلق أيضا على مواد مثبتة.‎ dextran ‏و/أو‎ sorbitol «cellulose ‏يمكن أيضا استخدام أجسام دهنية لكبسلة العامل للتوصيل في الخلية.‎ ‏صلبة أو رخوة؛ حبوب؛‎ gelatin ‏تتضمن مستحضرات مناسبة للإعطاء المعوي كبسولات‎ ‏مغلفة؛ إلكسيرات؛ معلقات؛ أشربة أو مواد استنشاق وأشكال من ذلك‎ Galil ‏أقراص؛ تتضمن‎ ٠ ‏متحكم في إطلاقها.‎ ‏بصفة عامة يمكن إعطاء المركبات والتركيبات من الاختراع؛ المشتملة على مواد ضابطة‎ ‏إعطاء بالفم؛ في‎ cand ‏في الجسم ؛» لكائن بحاجة لذلك؛ بطرق متنوعة؛ تتضمن؛ بدون‎ 7 ‏الوريدء في شريان؛ تحت الجلد؛ عن غير الطريق المعوي؛ في الأنف؛ في العضل؛ في القلب؛‎ ‏سطحياء من‎ calall ‏في البطين؛ في القصبة الهوائية؛ وجنياء شرجياء في البريتون؛ في أدمة‎ ٠ ‏خلال الجلد؛ وفي غمد؛ أو بطريقة أخرى بالازدراع أو الاستتشاق. يمكن صياغة تركيبات‎ ‏الموضوع في شكل مستحضرات في أشكال صلبة؛ شبه صلبة؛ سائلة؛ أو غازية؛ متضمنة؛‎ ‏كبسولات؛ مساحيق» حبيبات؛ مراهم؛ محانيل؛ تحاميل؛ حقن شرجية؛‎ (abil ‏بدون تحديد؛‎ ‏أشكال حقن؛ اشكال استتنشاق. ,.ذاذات هوائية. بمكن انتقاء المستحضر الملاتم وطريفة‎ oo ‏الإعطاء الملائمة طبقا للاستخدام المعني والبرنامج أنعلاجي.‎ Ve (Dosages) ‏الجرعات‎ b ‏بطريقة مشابهة؛ فإن نظام التجريع الخاص»؛ أي؛ الجرعة؛ التوقيت والتكرار؛ سوف يعتمد‎ ‏حركيات دوائية‎ Jha dyad ‏على الكائن الخاص والتاريخ الطبي للكائن. هناك اعتبارات‎ ‏النصف؛ معدل التصفية؛ إلخ) سوف تساهم عامة في تحديد الجرعة. يمكن تحديد‎ jee Sli) ‏معدل تكرار الإعطاء وضبطه عبر مسار العلاج؛ وهو يعتمد على تقليل عدد خلايا الانقسام‎ ٠ ‏المفرط أو التنسج الورمي؛ متضمنا خلايا بادئة لورم؛ استبقاء تقليل تلك الخلايا التتسجية‎ ‏الورمية؛ تقليل انقسام خلايا تنسج ورمي؛ أو تأثير حدوث انتشار بعيدا عن المنشاً. بطريقة‎ ‏بديلة؛ فإن المستحضرات مستمرة الإطلاق طويلة بقاء الإطلاق لتركيبة علاجية لكائن قد تكون‎ ‏ملائمة. حسب الإشارة أعلاه هناك مستحضرات وأدوات كثيرة لتحقيق الإطلاق طويل البقاء‎
OA ‏معروفة في‎ YO ‏من وجهة النظر العلاجية تعطى التركيبات الدوائية بكمية مؤثرة لمعالجة أو الوقاية من‎ ‏داعي الاستعمال الخاص. إن الكمية المؤترة علاجيا تعتمد نموذجيا على وزن الكائن المعالج؛‎ aA
الحالة الجسدية أو الصحية للكائن؛ شدة الحالة المراد علاجها؛ أو سن الكائن المعالج. بصفة عامة؛ يمكن إعطاء المواد الضابطة 71167 من الاختراع بكمية في نطاق حوالي ‎٠١‏ ‏ميكروجرام/ كجم من وزن الجسم إلى حوالي ‎٠٠١‏ مجم/ كجم من وزن الجسم/ الجرعة. في تجسيدات خاصة يمكن إعطاء المواد الضابطة 71147 من الاختراع بكمية في نطاق من 0 حوالي ‎5١‏ ميكروجرام/ كجم إلى حوالي © مجم/ كجم من وزن الجسم/ الجرعة. في تجسيدات أخرى خاصة؛ يمكن إعطاء المواد الضابطة 71167 من الاختراع بكمية في نطاق من ‎٠٠١‏ ‏ميكروجرام/ كجم إلى حوالي ‎٠١‏ مجم/ كجم في الجرعة. اختيارياء يمكن إعطاء المواد الضابطة 7 من الاختراع بكمية في نطاق من حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام إلى حوالي ‎٠١‏ مجم/ كجم من وزن الجسم. اختياريا أيضا ؛ يمكن إعطاء المواد الضابطة 71167 من الاختراع بكمية في ‎٠‏ نطاق من حوالي ‎vio‏ إلى حوالي ‎Yo‏ مجم/ كجم من وزن الجسم/ الجرعة. في تجسيدات خاصة تعطى مركبات الاختراع الحالي عند جرعة على الأقل حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ كجم من وزن الجسم؛ على الأقل حوالي ‎Yoo‏ ميكروجرام/ كجم من وزن الجسم؛ على الأقل حوالي ‎VO -‏ ميكروجرام/ كجم من وزن ‎cad‏ على الأقل ‎Via‏ مجم/ كجم من وزن الجسم؛ على ب الأقل جوالي © مجم/ كجد من وز ‎aia‏ .على 50 : ‎٠١ on‏ مجم/ كجم من وزن الجسم. ‎Vo‏ هناك أنظمة تجريع أخرى يمكن التنبؤ بها بواسطة حسابات مساحة الجسم السطحية ‎(BSA)‏ كما معلن في 7.744.877 .17.57.31 المدمجة هنا بالإشارة الكاملة. كما معلوم جيدا في الفن تحسب ‎BSA‏ باستخدام طول ووزن المريض وتوفر مقياسا لمقاس الكائن حسبما يتمثل بالمساحة السطحية لجسده أو لجسدها. في تجسيدات منتقاة للاختراع باستخدام ‎BSA‏ يمكن إعطاء المواد الضابطة بجرعات من ‎٠١‏ إلى 800 مجم/م". في تجسيدات ‎٠٠‏ أخرى مفضلة سوف تعطى المواد الضابطة بجرعات من ‎٠٠‏ إلى 500 مجم/ م" وأيضا يفضل أكثر عند جرعات من ‎٠٠١‏ مجم/ ‎5١ Jo‏ مجم/ ما ‎Sofa ٠٠١‏ ‎vou‏ مجم/ ‎Tor To fama ٠٠١ a‏ مجم/ماء ‎ten‏ مجم/م' أو ‎tor‏ مجم/م'. لابد بالطبع من إدراك أنه؛ بغض النظر عن كيفية حساب الجرعات؛ يمكن إعطاء جرعات متعددة
خلال مدة زمنية منتقاة لتوفير جرعة مطلقة أعلى جوهريا من الإعطاءات المنفردة. ‎Yo‏ على أية حال؛ يفضل إعطاء المواد الضابطة 01167 حسب الحاجة للكائن المحتاج لذلك. إن تحديد معدل الإعطاء يمكن أن يقوم به الأشخاص المهرة في الفن؛ مثل الطبيب المعالج على أساس اعتبارات ‎Jie‏ الحالة المعالجة؛ سن الكائن المعالج؛ شدة الحالة المعالجة؛ الحالة
الصحية العامة للكائن المعالج؛ إلخ. بصفة ‎cele‏ تعطى جرعة مؤثرة من المادة الضابطة 7 لكائن مرة واحدة أو أكثر من مرة. بصفة خاصة ‎ST‏ ¢ تعطى جرعة مؤثرة من المادة الضابطة مرة في الشهرء أكثر من مرةٍ واحدة في الشهرء أو أقل من مرة واحدة في الشهر. في تجسيدات خاصة؛ يمكن إعطاء الجرعة المؤثرة من المادة الضابطة 01167 عدة مرات؛ ‎٠‏ متضمنة لفترات على الأقل شهر؛ على الأقل 7 شهور؛ أو على الأقل سنة. في تجسيد آخر ‎(Lad‏ قد تنقضي عدة أيام ‎(VST © cf FY)‏ عدة أسابيع )0 ‎Uo 4 FY‏ ل أو ‏4) أو عدة شهور ‎cf FY)‏ 5 1 7 أو ‎(A‏ بين إعطاء المواد الضابطة المعلنة. يمكن أيضا إعطاء جرعات وأنظمة تجريبيا للتركيبات العلاجية المعلنة في الكائئات التي تم الإعطاء لهم مرة واحدة أو أكثر من مرة. على سبيل المثال؛ يمكن إعطاء الكائنات جرعات ‎٠‏ متزايدة تدريجيا من التركيبة العلاجية الناتجة حسب الوصف هنا. لتحديد فعالية التركيبة المنتقاة؛ يمكن تتبع المرض» الاضطراب أو الحالة الخاصة كما هو موصوف مسبقا. في تجسيدات مصاب فيها الكائن بالسرطان؛ فإن هذه تتضمن قياسات مباشرة لمقاس الورم من : © خلال الإحساس باليد أ المنحظة البصرية؛ قياس غير مباشر لمقاس الورم بأشعة ل أو : ا ‎CLES‏ تصوير 5 ى: تحسن ‎Bias‏ سيد دعبنة مباشرة من الورم وفحص مجهري لعينة ‎٠‏ الورم؛ مقياس لدلالة ورم غير مباشرة ‎PSA Oia)‏ لسرطان البروستاتا) أو مولد مضاد محدد طبقا للطرق الموصوفة هناء تقليل في الألم أو الشكل؛ تحسن في الكلام؛ الرؤية؛ التنفس أو إعاقة أخرى ملازمة للورم؛ شهية زائدة؛ أو زيادة في جودة نوعية الحياة حسب القياس باختبارات مقبولة أو إطالة أمد البقاء على قيد الحياة. سوف يتضح للماهر في الفن أن الجرعة سوف تختلف اعتمادا على الكائن؛ نوع ‎Alls‏ التنسج الورمي؛ مرحلة حالة التنسج الورمي؛ ما إذا كانت ‎٠‏ حالة التنسج الورمي قد بدأت في الانتشار بعيدا عن ‎Lindl‏ إلى مكان آخر في الكائن؛ ‏والمعالجات الماضية والملازمة المستخدمة. ‎(Combination therapies) ‏علاجات اتحاد‎ (a) ‏إن علاجات الاتحاد التي يتوقعها الاختراع مفيدة بصفة خاصة في تقليل أو تثبيط انقسام‎ ‏تقليل معدل‎ (endothelial cells) Adley Alay LA Slik) ‏غير مطلوب لخلية تنسج ورمي‎ ‏الإصابة بالسرطان. تقليل أو منع عودة السرطان» أو تقليل أو منع انتشار السرطان أو انتشاره‎ Yo ‏بعيدا عن المنشاً. في تلك الحالات فإن مركبات الاختراع الحالي قد تقوم بوظيفة عامل لكسب‎
Sia) ‏التي تزيد من وتخلد بقاء كتلة الورم‎ TPC AL ‏الحساسية أو مكسب لحساسية كيميائية‎
١
خلايا ‎(NTG‏ وتسمح باستخدام مؤثر أكثر للمعايير القياسية للعناية بواسطة عوامل مقللة لحجم الورم أو مضادة للسرطان. بمعنى أنه؛ يمكن استخدام علاج اتحاد يشمل مادة ضابطة 1167 وواحد أو أكثر من عوامل مضادة للسرطان لتقليل السرطان الراسخ؛ ‎lie‏ تقليل عدد خلايا السرطان الموجودة و/أو تقليل حمل الورم؛ أو تحسين عرض أو تأثير جانبي واحد على الأقل 0 للسرطان. حسب ذلك؛ فإن علاج اتحاد يشير إلى إعطاء ‎sale‏ ضابطة 21167 وعامل مضاد للسرطان واحد أو أكثر يتضمن؛ لكن بدون تحديد؛ عوامل سامة للخلية؛ عوامل موثقة لنمو الخلية؛ عوامل كيميائية علاجية؛ عوامل مضادة للسرطان استهدافية؛ مواد تعديل استجابة حيوية؛ عوامل مناعية علاجية؛ لقاحات سرطان؛ عوامل مضادة للتكوين الوعائي؛ سيتوكينات؛
علاجات ‎(sen‏ علاج بالأشعة؛ وعوامل مضادة لمواد الأيض.
‎١‏ طبقا لطرق الاختراع الحالي؛ ليست هناك حاجة لأن تضيف النتائج المتحدة شيئا إلى التأثيرات الملحوظة عند إجراء كل معالجة ‎ie)‏ جسم مضاد مضاد 21167 وعامل مضاد للسرطان) بصورة منفصلة. برغم أن التأثيرات الإضافية على الأقل مطلوبة بصفة عامة؛ فإن
‏. أي تأثير زائد مضاد لورم لأكثر من واحد من ‎laced‏ إلمنفردة مفيد. إصافة لذلك؛ فإن ٍ الاختراع لا يحتاج إلى أن ‎gl‏ الممالىة الما جدة رات تعاونية. على أية حال؛ سيدرك
‎٠‏ المهرة في الفن أنه مع اتحادات خاصة منتقاة تشمل تجسيدات مفضلة؛ فقد يلاحظ تعضيد.
‏لممارسة علاج اتحاد طبقا للاختراع؛ يمكن إعطاء عامل مضاد لسرطان واحد أو أكثر لكائن بحاجة لذلك بطريقة مؤثرة لينتج نشاط مضاد للورم في الكائن. تتوافر المادة الضابطة 7 والعامل المضاد للسرطان بكميات مؤثرة ولفترات زمنية مؤثرة تؤدي إلى وجودهما المتحد وتأثيراتهما المتحدة في بيئة الورم حسب الطلب. لتحقيق هذا الهدف؛ يمكن إعطاء المادة
‎٠‏ الضابطة 21167 والعامل المضاد للسرطان للكائن بصورة متزامنة؛ إما في تركيبة واحدة؛ أو في ‎Y‏ أو أكثر من تركيبات منفصلة باستخدام نفس طرق الإعطاء أو بطرق مختلفة.
‏بطريقة بديلة؛ فإن المادة السابقة قد تسبق؛ أو تلي؛ المعالجة بالعامل المضاد للسرطان
‏بواسطة؛ مثلا؛ فترات زمنية فاصلة تتراوح من دقائق إلى أسابيع. في تجسيدات خاصة يستخدم
‏فيها العامل المضاد للسرطان والجسم المضاد بصورة منفصلة للكائن؛ فإن المدة الزمنية بين
‎YO‏ زمن كل توصيل هي تلك بحيث يكون العامل المضاد للسرطان والمادة الضابطة لديهما القدرة على إحداث تأثير متحد على الورم. في تجسيد خاص؛ من المتوقع إعطاء كل من العامل
٠١١
Lad ‏المضاد للسرطان والمادة الضابطة 01167 خلال حوالي © دقائق إلى حوالي أسبوعين‎ ٠( ‏عدة أسابيع‎ (YT © of FY) ‏في تجسيدات أخرى أيضا؛ قد تنقضي عدة أيام‎ ‏بين إعطاء المادة‎ (A ‏لا أو‎ Tce 4 FY )) ‏أو عدة شهور‎ (A ‏تن كك ف 1 ا أو‎ ‏الضابطة والعامل المضاد للسرطان. يمكن إعطاء المادة الضابطة 71167 والعامل المضاد‎ © ‏واحدة؛ مرتين أو على الأقل لمدة من الوقت حتى‎ spe ‏للسرطان الواحد أو أكثر (علاج اتحاد)‎ ‏يتم علاج؛ تحسين أو شفاء الحالة. بصورة مفضلة؛ يعطى علاج الاتحاد عدة مرات. يمكن‎ ‏إعطاء علاج الاتحاد من ؟ مرات يوميا إلى مرة واحدة كل 7 شهور. يمكن أن يتم الإعطاء‎ ٠ ‏كل‎ Bye ‏مرة كل يومين؛‎ lias ‏مرة واحدة‎ cag ‏طبقا لبرنامج مثل ؟ مرات يومياء مرتين‎ ‏أيام؛ مرة أسبوعيا؛ مرة كل أسبوعين» مرة كل شهرء مرة كل شهرين» مرة كل ؟ شهور؛ مرة كل‎ ٠ ‏شهور أو قد يعطى بصورة مستمرة بواسطة مضخة صغيرة. كما مشار إليه مسبقا يعطى‎ ١ ‏في الوريد؛‎ (FLATLY ‏علاج الاتحاد عن طريق الفم؛ غشاء مخاطي؛ وجنياء في الأنف؛‎ ‏المعون؛ في الورم أو سطحيا. قد يعطى علاج‎ Guhl ‏تحت الجلد؛ شي العضل» عن بير‎ ْ 0 ‏عامة طالما أن الورم‎ | day ‏الاتحاد عند مكان بعيد عن كان الورم. إن تع الاتحاد سوف‎ ‏موجود بشرط أن علاج الاتحاد يسبب توقف نمو الورم أو السرطان أو تقليل في وزنه أو‎ ٠ ‏حجمه.‎ ‏في تجسيد تعطى المادة الضابطة 71167 في اتحاد مع واحدة أو أكثر من العوامل المضادة‎ ‏للسرطان لدورة معالجة قصيرة الأمد لكائن بحاجة لذلك. قد تختلف مدة المعالجة مع الجسم‎ ‏المضاد طبقا للعامل الخاص المضاد للسرطان المستخدم. يتوقع الاختراع أيضا إعطاء غير‎ ‏مستمر أو جرعات يومية مقسمة إلى عدة مرات إعطاء جزئية. إن مرة المعالجة الملائمة لعامل‎ ٠ ‏خاص مضاد للسرطان سيقدرها الصانع الماهر » ويتوقع الاختراع التحديد المستمر لبرامج‎ ‏المعالجة المثلى لكل عامل مضاد للسرطان.‎ ‏يتوقع الاختراع الحالي دورة واحدة على الأقل؛ يفضل أكثر من دورة واحدة يعطى خلالها‎ ‏بالإضافة إلى‎ all ‏علاج الاتحاد. إن المدة الزمنية الملائمة لدورة واحدة سيقدرها الصانع‎ ‏العدد الكلي للدورات؛ والفترات الزمنية الفاصلة بين الدورات. يتوقع الاختراع تحديد مستمر‎ Yo ‏لبرامج المعالجة المثلى لكل مادة ضابطة وعامل مضاد للسرطان. إضافة لذلك» يوفر الاختراع‎ ‏أكثر من مرة إعطاء واحدة من إما الجسم المضاد المضاد 71167 أو العامل المضاد‎ Lia
٠١١
للسرطان. يمكن إعطاء المادة الضابطة والعامل المضاد للسرطان بصورة تبادلية؛ في أيام أو أسابيع متبادلة: أو قد يحدد تسلسل إعطاء معالجة الجسم المضاد؛ ويلي ذلك واحدة أو أكثر من المعالجات مع علاج بالعامل المضاد للسرطان. على ‎al‏ حال؛ كما سيدرك أصحاب المهارة العادية في الفن؛ فإن الجرعات الملائمة من العوامل الكيميائية العلاجية سوف تكون © بصفة عامة في نطاق تلك المستعملة تماما في العلاجات الإكلينيكية حيث تعطى العوامل
العلاجية الكيميائية وحدها أو في اتحاد مع عوامل علاجية كيميائية أخرى. في تجسيد آخر مفضل تستخدم المواد الضابطة 01167 من الاختراع الحالي في علاج استبقائي لتقليل أو إزالة فرصة رجوع الورم عقب الوجود الأولي للمرض. يفضل أن الاضطراب سوف يتم معالجته وتزال ‎ABS‏ الورم الأولية؛ تقل أو تتحسن بطريقة أخرى بحيث لا يشعر ‎٠‏ المريض بأعراض أو يشعر بتراجع المرض. عند ذلك الوقت قد يعطى الكائن كميات مؤترة دوائيا من المواد المستجيبة المعلنة مرة أو أكثر من مرة حتى عند عدم وجود أو وجود قدر ضئيل من داعي الاستعمال للمرض باستخدام إجراءات تشخيصية قياسية. في بعض ‎oe‏ : التجننيدات ‎dead‏ المواد المستجيبة فى برنامن مننظم “لل مدة من الوقت. .على سبيل المثال؛ :.., يمكن إعطاء ‎algal‏ الضابطة 01167 ‎need‏ شن أصبوعين» شهرياء كل ‎١‏ أسابيع؛ كل ‎١٠‏ شهرين» كل 7 شهور؛ كل 1 شهور أو سنويا. على ضوء التعاليم هناء يمكن للماهر في الفن أن يحدد بسهولة الجرعات وأنظمة التجريع المحبذة لتقليل إمكانية رجوع الورم. إضافة لذلك؛ فإن تلك المعالجات يمكن أن تستمر لمدة ‎canal‏ شهور؛ سنوات أو حتى لمدة غير محددة
اعتمادا على استجابة المريض والمعايير الإكلينيكية والتشخيصية.
في تجسيد آخر مفضل أيضا يمكن استخدام المواد الضابطة من الاختراع الحالي وقائيا ‎٠‏ لمنع أو تقليل إمكانية انتشار الورم بعيدا عن منشأة عقب إجراء لتقليل الحجم. حسب الاستخدام في الاختراع الحالي فإن إجراء تقليل الحجم محدد على نطاق كبير ويعني أي إجراء؛ تقنية أو طريقة تزيل؛ ‎(JUS‏ تعالج أو تحسن ورم أو انقسام ورم. تتضمن إجراءات تقليل حجم تمثيلية؛ لكن بدون تحديد؛ جراحة. معالجة بالأشعة (أي؛ إشعاع حزمة)؛ علاج كيميائي أو استتصال. عند أوقات ملائمة يحددها بسهولة الماهر في الفن على ضوء الاختراع الحالي يمكن إعطاء ‎Yo‏ المواد الضابطة 71167 حسبما تحدد الإجراءات الإكلينيكية والتشخيصية لتقليل انتشار الورم بعيدا عن منشأه. يمكن إعطاء المواد الضابطة مرة أو أكثر عند جرعات مؤثرة علاجيا حسب
٠١ ‏التحديد بتقنيات قياسية. يفضل نظام تجريع مصحوب بتقنيات تشخيصية أو للمتابعة ملائمة‎ ‏تسمح بالتعديل حسب الضرورة.‎ (Anti-cancer agents) ‏عوامل مضادة للسرطان‎ (D) ‏أي عامل يمكن‎ (anti-cancer agent) ‏حسب الاستخدام هنا يعني العامل المضاد للسرطان‎ ‏استخدامه لعلاج اضطراب انقسام مفرط لخلية مل سرطان؛ يتضمن عوامل سامة للخلية؛‎ ٠ ‏عوامل توقف نمو الخلية؛ عوامل مضادة للتكوين الوعائي؛ عوامل مقللة للحجم؛ عوامل كيميائية‎ ‏علاجية؛ علاج بالأشعة؛ وعوامل علاجية مشعة؛ عوامل مضادة للسرطان استهدافية» مواد‎ ‏تعديل استجابة حيوية؛ أجسام مضادة؛ وعوامل علاجية مناعية. لابد من إدراك أنه»؛ في‎ ‏تجسيدات منتقاة حسب الشرح أعلاه؛ قد تشمل عوامل مضادة للسرطان اتحادات وقد تكون‎ ‏مصاحبة للمواد الضابطة قبل الإعطاء.‎ ٠ ‏يعني المصطلح عامل سام للخلية مادة تقلل أو تثبط وظيفة الخلايا و/أو تسبب تحطيم‎ ‏عن جزيء طبيعي الوجود‎ ble ‏الخلاياء أي؛ أن المادة سامة للخلايا. نموذجياء فإن المادة‎ ‏سامة ننخلية؛ لكن بدون تحديد؛ تكسينات جزيء‎ Gude TR ‏من كائن. جي. تتضمن‎ Gide
Pseudomonas ‏داخلي‎ toxin « ‏الدفتريا‎ 612 hw) Lipsy oo ‏صغبر أو 5 نشطة انزرما‎ 0
Jt) ‏العنقودية)؛ فطريات‎ yy SANA ‏معوي‎ toxin ‏وعضللاه خارجي»‎ ٠ ‏عنب‎ protein «viscumin «modeccin «icin ‏نباتات (مثلء مط‎ (restrictocin a-sarcin ‏الشعيرء‎ toxin «trichosanthin «momoridin ¢gelonin «saporin ‏الذئب مضاد للفيروسات؟؛‎
PAPI) Phytolacca mericana proteins «dianthin proteins ¢Aleurites fordii proteins saponaria ~~ ‏مقبط‎ ccrotin ¢curcin «Momordica charantia ‏متبط‎ «(PAP-S § (PAPI «neomycin «phenomycin ~~ «restrictocin ~~ «mitegellin = «gelonin «officinalis ٠٠ ‏بنكرياسية خارج‎ RNases ‏مثل‎ «LAY ‏سامة‎ RNases «Jie ‏أو حيوانات؛‎ (tricothecenes ‏و‎ ‏متضمنا أجزاء و/أو أشكال متباينة من ذلك.‎ (DNase 1 ‏الخلايا؛‎ ‏إن عامل كيميائي علاجي يعني مركب كيميائي يقلل أو يثبط بطريقة غير خاصة نمو؛‎ ‏عوامل سامة للخلية أو توقف نمو الخلية). إن‎ lie) ‏السرطان‎ WA ‏انقسام؛ و/أو إبقاء حياة‎ ‏العوامل الكيميائية غالبا ما تكون موجهة إلى عمليات داخل الخلية ضرورية لنمو أو تكاثر‎ os vo ‏الخلية؛ ولذلك فهي مؤثرة بصفة خاصة ضد الخلايا السرطانية؛ التي تنمو وتتكاثر عامة‎ ‏الأنيبيبات الدقيقة؛ وبالتالي‎ polymerization ‏يزيل‎ vincristine ‏بسرعة. على سبيل المثال» فإن‎
٠ يبط دخول الخلايا إلى ‎١‏ لانقسام المنيوسي. بصفة عامة؛ تتضمن العوامل العلاجية الكيميائية أي عامل كيميائي يثبط» أو مصمم ليثبط» ‎As‏ سرطانية أو خلية يمكن أن تصبح سرطانية أو يولد نسل ‎alga‏ لورم (مثلا « ‎(TIC‏ غالبا ما تعطي تلك العوامل؛ ‎Le Wey‏ تكون أكثر تأثيراء في
CHOP ‏في مستحضر‎ Sie ‏اتحاد؛‎ ‏تتضمن أمثلة عوامل مضادة للسرطان يمكن استخدامها في اتحاد مع (أو مع تلازم مع)‎ 0 alkyl «alkylation ‏عوامل‎ «aaa ‏المواد الضابطة من الاختراع الحالي؛ لكن بدون‎ cacetogenins ~~ «methylamelamines ‏و‎ ethylenimines «aziridines «sulfonates «dolastatin «cryptophycins «CC-1065 «callystatin <bryostatin «camptothecin ‏خردلات‎ «spongistatin «sarcodictyin «pancratistatin celeutherobin «duocarmycin bisphosphonates «dynemicin cenediyne ‏مضادات حيوية؛ مضادات حيوية‎ nitrogen ٠ caclacinomysins ‏صبغي»‎ protein enediyne Lusi ‏صبغ مضادة‎ Jalsa cesperamicin «carabicin «cactinomycin «bleomycins <azaserine «authramycin <actinomycin «dauporubicin «dactinomycin «chro momycinis «carzinophilin <carminomycin : :ADRIAMYCIN® doyorubicin «A-diazo-5-oxo-L-norleucine ¢detorubiciu : mycophenolic «mitomycins ¢marcellomycin «idarubicin «<esorubicin epirubicin ٠ «puromycin «potfiromycin «peplomycin ¢olivomycins «nogalamycin 4 «ubenimex «tubercidin ¢streptozocin «streptonigrin «rodorubicin ‏هيفاعيو‎ ‎«purine ‏مماثلات‎ folic acid ‏لأيض « مماتلات‎ ١ ‏مضادات مواد‎ ¢zorubicin ¢zinostatin caceglatone «frolinic acid Jie folic acid ‏المضادات الكظرية؛ مواد تعزيز‎ candrogens camsacrine «eniluracil <aminolevulinic acid «aldophosphamide glycoside ٠ «diaziquone «demecolcine «defofamine «edatraxate «bisantrene <bestrabucil «gallium nitrate «etoglucid <epothilone <elliptinium acetate «elfornithine «mitoxantrone «mitoguazone «maytansinoids ¢lonidainine ¢lentinan <hydroxyurea losoxantrone «pirarubicin «phenamet «pentostatin «nitraerine «mopidanmol
PSK® polysaccharide ‏معد‎ <procarbazine 2- ethylhydrazide «podophyllinic acid Ye ¢sizofiran ¢rhizoxin ¢razoxane «(OR «Eugene «JHS Natural ‏(منتجات‎ ‎¢2,2',2"-trichlorotriethylamine ¢triaziquone ¢tenuazonic acid ¢spirogermanium
0 ¢(anguidine 5 roridin ‏م‎ «verracurin A «T-2 toxin ‏(بصفة خاصة‎ trichothecenes ¢mitolactol ¢mitobronitol ¢mannomustine ¢decarbazine ¢vindesine ¢urethan sthiotepa ¢cyclophosphamide ¢arabinoside ("Ara-C") ¢gacytosine ¢pipobroman ‘mercaptopurine ¢6-thioguanine ¢GEMZAR® gemcitabine tchloranbucil ¢taxoids tetoposide (VP-16) ¢platinum ¢vinblastine ¢platinum ‏ممائثلات‎ tmethotrexate © snovantrone ‘NAVELBINE® vinorelbine ¢vincristine ¢mitoxantrone ¢ifosfamide irinotecan ¢ibandronate ¢xeloda taminopterin ‘daunomycin ¢edatrexate tteniposide difluorometlhylornithine ¢RFS 2000 topoisomerase lai ¢(Camptosar, CPT-11) toxaliplatin leucovorin (LV) ¢combretastatin ¢capecitabine tretinoids ¢(DMFO) ‏تقلل انقسام الخلية وأملاح؛‎ VEGF-A y EGFR H-Ras «Raf (PKC-alpha ‏مثبطات‎ ٠ ‏أحماض مقبولة دوائيا أو مشتقات من أي مما أعلاه. يتضمن هذا التعريف أيضا عوامل‎ estrogens ‏مضادة للهرمونات تؤثر لتنظيم أو تثبيط تأثير الهرمون على أورام مثل مضادات‎ enzyme ‏تقيط‎ aromatase alate ‏امتحانز)‎ trogen ‏وموادٍ ضائطة انتقائية لمسنثبل‎ 8" ‏بالإضافة‎ tandrogens ‏:»بر الغدد الكظرية؛ ومضادات‎ on ‏الذي ينظم إنتاج‎ 80008886 oligonucleotides ¢(1,3- dioxolane nucleoside cytosine ‏(مماثل‎ troxacitabine ‏إلى‎ ٠ ‏لقاحات؛‎ ¢tHER2 ‏ومثبط إظهار‎ VEGF ‏مثل مثبط إظهار‎ ribozymes ‏مضادة للإحساس؛‎
ABARELIX® ¢LURTOTECAN® topoisomerase 1 Jari ¢PROLEUKIN® ‏ته‎ ‏وأملاح؛ أحماض أو مشتقات مقبولة دوائيا من أي مما‎ Esperamicins ‏و‎ Vinorelbine ¢rmRH ‏الأجسام المضادة المصرح‎ Jie ‏أعلاه. تشمل تجسيدات أخرى استخدام عوامل علاجية مناعية؛‎ gemtuzumab ctrastuzumab crituximab ‏بها لعلاج السرطان متضمنة؛ بدون تحديد‎ ٠ <bevacizumab «tositumomab <ibritumomab tiuxetan «alemtuzumab <ozogamcin ‏سوف‎ .brentuximab vedotin y ipilimumab «ofatumumab «patitumumab cetuximab ‏يكون للمهرة في الفن مقدرة على التحديد بسهولة لعوامل إضافية مضادة للسرطان متوائمة مع‎ . ‏التعاليم هنا‎ (Radiotherapy) ‏علاج بالإشعة‎ )( Ye ‏يوفر الاختراع الحالي أيضا اتحاد للمواد الضابطة 11167 مع علاج بالأشعة‎ ‏موضعيا في خلايا الورم مثل أشعة جاماء‎ DNA ‏(أي؛ أي آلية لحث تلف‎ (radiotherapy)
٠١ ‏موجات صغيرة؛ انبعاثات إلكترونية إلخ). إن العلاج المتحد الذي‎ (UV - ‏أشعة‎ X ‏أشعة‎ ‏الورم متوقع أيضا هناء ويمكن استخدامه مع‎ WDA ‏يستخدم التوصيل المباشر لنظائر مشعة إلى‎ ‏عامل استهدافي مضاد للسرطان أو وسائل استهدافية أخرى. نموذجيا؛ يعطى العلاج بالأشعة‎ ‏في نبضات عبر مدة من الوقت من حوالي أسبوع إلى حوالي أسبوعين. يمكن إعطاء علاج‎ ‏إلى 7 أسابيع. اختياريا؛ يمكن‎ ١ ‏بالأشعة للكائنات المصابة بسرطان الرأس والرقبة لحوالي‎ ٠ ‏إعطاء العلاج بالأشعة كجرعة واحدة أو كجرعات متعددة متعاقبة.‎ (Neoplastic conditions) ‏حالات تنسج ورمي‎ (f) ‏سواء تم إعطائها وحدها أو في اتحاد مع عامل مضاد للسرطان أو علاج بالأشعة؛ فإن‎ ‏المواد الضابطة 71167 من الاختراع الحالي مفيدة بصفة خاصة لعلاج حالات تنسج ورمي‎ ‏سرطان كلى؛ كبد؛‎ lia) ‏تتضمن أورام حميدة أو خبيثة‎ GEIS ‏بصفة عامة في مرضى أو‎ ٠ ‏غدة درقية؛ كبدي؛‎ (Ad) ‏معدة؛ مبيض؛ قولون ومستقيم؛ بروستاتا؛ بنكرياس؛‎ (gal ‏مثانة؛‎ ‏سرقومات؛ أورام دبقية أولية؛ وأورام عديدة في الرأس والرقبة)؛ سرطانات الدم وأمراض خبيثة‎ ‏شبيهة ليمفاوية؛ اضطرابات أخرى مثل اضطرابات خلية عصبية؛ دبقية؛ خلية نجمية؛‎ : 0 ‏هيبوتالموس وأخرى عديدة؛ في خاية بلعمية كبيرة؛ ظهارية؛ نسيج لحمي وبلاستوسيلية؛‎ 0 ‏واضطرابات التهابية؛ تكوين وعائي؛ مناعية واضطرابات تسببها مولدات للمرض. إن الأهداف‎ ١ ‏المفضلة تحديدا للمعالجة مع التركيبات والطرق العلاجية من الاختراع الحالي هي حالات تنسج‎ ‏ورمي تشمل أورام صلبة. في تجسيدات أخرى مفضلة تستخدم المواد الضابطة من الاختراع‎ ‏الحالي لتشخيص؛ منع أو معالجة أمراض دموية خبيثة. بصورة مفضلة يكون الكائن أو‎ ‏حسب الاستخدام هناء تشمل المصطلحات بصورة جلية أي‎ ail ‏المريض المعالج آدمي برغم‎ ‏نوع من الثدييات.‎ Ye ‏للاختراع الحالي‎ Lids ‏تنتفى حالات التنسج الورمي الممكن معالجتها‎ «ST ‏بصفة خاصة‎ ‏من المجموعة المتضمنة؛ بدون تحديد»؛ أورام غدة كظرية؛ سرطانات مصاحبة للإيدز؛ سرقوم‎ ‏جزء رخو حويصلي؛ أورام خلية نجمية؛ سرطان المثانة (سرطان خلية محرشفة وسرطان خلية‎ ‏ورم عظمي غضروفي؛‎ caneurismal ‏انتقالية)؛ سرطان العظام (ورم بالفك؛ أكياس عظمية‎ ‏سرقوم عظمي) » سرطانات المخ والحبل الشوكي؛ أورام مخ منتشرة بعيدا عن منشأهاء سرطان‎ Yo ‏سرقوم غضروفي؛ ورم غضروفي» سرطان‎ andl ‏الثدي؛ أورام الجسم الثباتي»؛ سرطان عنق‎ ‏خلية كلوية صادة لصبغ؛ سرطان خلية نقية؛ سرطان القولون» سرطان القولون والمستقيم» أورام‎
0
خلية نسيجية ليفية حميدة جلدية؛ أورام خلية مستديرة صغيرة رباطية تنسجية»؛ أورام البطينات المخية؛ أورام 48 سرقوم غضروفي شبيه مخاطي هيكلي خارجي؛ التكوين العظمي غير المتقن المكون لتليف»؛ خلل تنسج ليفي للعظم» سرطانات المرارة والقناة ‎Ayal‏ مرض جرثومة غذائية مع الحمل» أورام خلية جرثومية»؛ سرطانات الرأس والرقبة» أورام خلية جزيرة في © البنكرياس» سرقوم 1680081 سرطان الكلى (ورم كلوي أولي؛ سرطان خلية كلى حليمي)؛ سرطانات الدم؛ ورم دهني/ أورام دهنية ‎Bases‏ سرقوم دهني/ أورام دهنية خبيثة؛ سرطان الكبد (ورم كبدي أولي» سرطان كبدي خلوي)؛ أورام ليمفاوية؛ سرطانات الرئة (سرطان خلية صغيرة؛ سرطان غدي؛ سرطان خلية محرشفة؛ سرطان خلية كبيرة؛ ‎dl‏ ورم أولي نخاعي؛ ورم قتاميني» أورام الأغشية المحيطة بالمخ؛ تنسج ورمي متعدد في الغدد الصماء؛ ورم نخاعي ‎٠‏ متعدد؛ متلازمة خلل التنسج النخاعي؛ ورم عصبي أولي؛ أورام عصبية غدية صماء؛ سرطان المبيض؛ سرطانات البنكرياس؛ سرطانات درقية حليمية؛ أورام جار درقية؛ سرطانات الأطفال؛ أورام غلاف عصب طرفي؛ ورم النسيج الكرومافيني الكظري؛ أورام الغدة النخامية؛ سرطان ‎Bling ll‏ ورم قتاميني خلفي في عنبية العين» اضطرابات دموية 800 سرطان كلوي منتشر بعيدا عن ‎Lindl‏ ورم شبيه بالقضيب» سرقو > نسلات مخططة. سرقومات؛ سرطان الجلد؛ ‎٠‏ سرقومات نسيج رخو؛ سرطان خلية محرشفة؛ سرطان المعدة؛ سرطان الغشاء المصلي؛ سرطان الخصية؛ سرطان صعتري؛ ورم صعتري؛ سرطان درقي منتشر؛ وسرطانات الرحم (سرطان عنق الرحم؛ سرطان بطائة الرحم؛ ورم عضلة غير مخططة). في تجسيدات خاصة مفضلة؛ تنتقى الخلايا السرطانية من مجموعة أورام صلبة تتضمن بدون تحديد سرطان الثدي؛ سرطان رثة في خلية غير صغيرة ‎(NSCLC)‏ سرطان رئة في خلية صغيرة»؛ سرطان البنكرياس؛ ‎٠٠‏ سرطان القولون؛ سرطان البروستاتاء سرقومات؛ سرطان قلوي منتشرء سرطان درقي منتشر؛
وسرطان خلية نقية. بالنسبة لأمراض الدم الخبيثة لابد إضافيا من إدراك أن المركبات والطرق من الاختراع الحالي مؤثرة بصفة خاصة في علاج تشكيلة من أورام ليمفاوية لخلية ‎(B‏ متضمنة ورم ليمفاوي في خلية جريبية قليل الدرجة/ ‎«grade/NHL follicular cell lymphoma (FCC) NHL‏ ورم ‎Ye‏ ليمفاوي لخلية جدارية ‎cmantle cell lymphoma (MCL)‏ ورم ليمفاوي في خلية كبيرة منتشر ‎NHL «diffuse large cell lymphoma (DLCL)‏ خلوي ليمفاوي ‎small lymphocytic sa‏ ‎NHL «(SL)‏ متوسط الدرجة/ جريبي؛ ‎NHL‏ منتشر متوسط الدرجة؛ ‎NHL‏ مناعي أولي كبير؛
٠
NHL ‏خلية غير منفصلة صغيرة عالي الدرجة؛‎ NHL ‏كبير الدرجة؛‎ sl ‏ليمفاوي‎ NHL ‏خلوي‎ and ‏ورم ليمفاوي‎ <Waldenstrom ‏كبير الحجم في الدم‎ globulin ‏مرض ضخم؛ زيادة‎ ‏ورم ليمفاوي في خلية جدارية‎ clymphoplasmacytoid lymphoma (LPL) ‏بلازمي ليمفاوي‎ ‏ورم‎ «follicular lymphoma (FL) ‏ورم ليمفاوي جريبي‎ «mantle cell lymphoma (MCL) ‏اعتلال غدي ليمفاوي‎ diffuse large cell lymphoma (DLCL) ‏ليمفاوي في خلية كبيرة منتشر‎ ٠ ‏مناعي أولي وعائي؛ ورم ليمفاوي أولي مناعي أولي في خلية ليمفاوية صغيرة؛ جريبي؛ في‎ ‏خلية كبيرة منتشرء في خلية منفصلة صغيرة منتشرة في خلية كبيرة؛ أورام ليمفاوية صغيرة؛ غير‎ ‏جريبية؛ خلية كبيرة بدرجة سائدة؛ جريبي؛ خلية منفصلة‎ Burkitt ‏منفصلة وغير‎ ‏صغيرة بدرجة سائدة؛ وجريبي؛ مختلطة من خلية منفصلة صغيرة وكبيرة. انظرء‎
Gaidono et al., "Lymphomas", IN CANCER: PRINCIPLES & PRACTICE OF Ve
ONCOLOGY, Vol. 2: 2131-2145 (DeVita et al., eds., S.sup.th ed. 1997). ‏لابد أن يكون واضحا للمهرة في الفن أن هذه الأورام الليمفاوية سوف يكون لها دائما أسماء‎ ‏مختلفة بسبب تغير أنظمة التصنيفء وأن المرضى المصابين بأورام ليمفاوية مصنفة تحت‎ : Conia) ‏الأنظمة العلاجية المتحدة من الاختراع‎ pie ‏مسميات مختلذة قد‎ ‏في تجسيدات أخرى مفضلة أيضا تستخدم المواد الضابطة 71167 لمعالجة بدرجة مؤثرة‎ 10 ‏لأمراض خبيثة خاصة شبيهة نخاعية ودموية تتضمن سرطانات الدم مثل سرطان دم مزمن‎ (acute myeloid leukemia) ‏سرطان دم نخاعي حاد‎ 0 (B-CLL ‏أو‎ CLL) ‏لخلية ليمفاوية‎ ‏إن سرطان الدم بدرجة سائدة مرض كبار السن يبدأ في تزايد معدل حدوثه بعد سن‎ AML ‏يشتمل عامة انقسام‎ CLL ‏الخمسين ويصل إلى الذروة في أواخر الستينات من العمر. إن‎
CLL ‏خلايا لميفاوية تتسجية ورمية من دم طرفي. تشتمل الإصابات الإكلينيكية الموجودة مع‎ XY ‏زيادة تكوين الخلايا الليمفاوية؛ اعتلال الغدد الليمفاوية؛ تضخم الطحال؛ فقر الدم ونقص خلايا‎ ‏سرطان دم لخلية نقوية أولية‎ cals ‏سرطان دم نقوي المنشاً‎ AML ‏التخثر في الدم. يسمى أيضا‎ ‏وسرطان دم لخلية غير ليمفاوية. تتكون الفسيولوجية‎ cola ‏سرطان دم لخلية حبيبية‎ cola ‏من توقف النضج لخلايا نخاع العظم في مراحل مبكرة للتطور.‎ AML ‏المرضية المستنبطة في‎ ‏في حالة قدرة الشخص الماهر في الفن على اشتقاق معالجة اضطراب بسهولة من ناحية‎ Yo ‏الكشف الحالي باستخدام إجراءات مقبولة إكلينيكيا.‎
٠
يوفر الاختراع الحالي أيضا معالجة مانعة أو وقائية لكائنات لديها أورام حميدة أو سابقة
للسرطان. لا يعتقد أن أي نوع خاص لورم أو اضطراب تنسج ورمي يجب إقصائه من المعالجة باستخدام الاختراع الحالي. على أية حال؛ فإن نوع ‎LA‏ الورم قد يكون هاما لاستخدام الاختراع الحالي في اتحاد مع عوامل علاجية ثانوية؛ تحديدا عوامل كيميائية علاجية وعوامل
© استهدافية مضادة للسرطان.
‎Jodi‏ تجسيدات أخرى مفضلة ‎Lad‏ للاختراع ‎Mall‏ استخدام مواد ضابطة 01167 لعلاج
‏كائنات تعاني من أورام صلبة. في تلك الكائنات يشمل كثير من هذه الأورام الصلبة نسيج يظهر طفرات جينية تجعلها حساسة بصفة خاصة للمعالجة مع المواد المؤثرة المستجيبة. على سبيل ‎(JU)‏ فإن الطفرات ‎APC (KRAS‏ و0170131 5 ‎CDHI‏ شائعة نسبيا في مرضى
‎٠‏ سرطان القولون والمستقيم. إضافة لذلك؛ فإن المرضى الذين يعانون من أورام مع هذه الطفرات يمثلون عادة الأكثر مقاومة للعلاجات الحالية؛ بصفة خاصة هؤلاء المرضى مع طفرات ‎.KRAS‏ إن الطفرات المنشطة ‎(KRAS‏ التي تنتج نموذجيا استبدالات حمض أميني وحيد؛ متورطة أيضا في أمراض خبيثة أخرى صعبة المعالجة؛ تتضمن سرطان غدي في الرئة؛ ورم
‏| غدي مخاطي؛ وسرطان قنوي للبنكرياس.
‏00 حالياء فإن التوقع الأكثر تعويلا عليه لتحديد ما إذا كان مرضى سرطان القولون والمستقيم سوف يستجيبون لعقاقير تشبط ‎BGFR‏ أو ‎«VEGF‏ على سبيل ‎(JU‏ هو اختبار من أجل طفرات 'تنشيط" ‎KRAS‏ خاصة. تحدث طفرة من أجل 8م1688 في 45-75 7 من سرطانات القولون والمستقيم؛ والمرضى الذين لديهم أورام تظهر ‎KRAS‏ طفري لا يستجيبون جيدا لهذه العقاقير. على سبيل المثال؛ فإن الطفرات ‎KRAS‏ تنبا بنقص الاستجابة لعلاج ‎panitumumab‏
‎٠‏ وطاعصت«دهع» في سرطان القولون والمستقيم
‎(Lievre et al.
Cancer Res 66:3992-5: Karapetis et al.
NEJM 359:1757-1765).
‏إن 785 تقريبا من مرضى سرطان القولون والمستقيم لديهم طفرات في جين ‎APC‏ ‎(Markowitz & Bertagnolli.
NEJM 361:2449-60(‏ وقد تم تمييز أكثر من 800 طفرة
‎APC‏ في مرضى التكوين الوراثي الزائد لزوائد قولونية غدية وسرطان القولون والمستقيم. تؤدي
‎Yo‏ غالبية هذه الطفرات إلى وجود ‎APC protein‏ مشذب له قدرة وظيفية قليلة على إحداث تكسير لجين ‎beta-catenin‏ إن الطفرات في جين ‎«CTNNBI «beta-catenin‏ يمكن أن تؤدي أيضا
‏إلى ثبات زائد لأجل دنعاه«م. لإنتاج أهمية نووية وبعد ذلك تنشيط لبرامج نسخية عديدة مولدة
١٠ ‏طفري في التوسط بدرجة ملائمة في‎ APC ‏وهي أيضا آلية تكوين الورم الناتجة من فشل‎ cpl ‏المطلوب لاستبقاء برامج انقسام طبيعي للخلية وتباين طبيعي تحت‎ beta-catenin ‏تكسير‎ ‏الفحص.‎ ‏حدث آخر شائع أيضا في سرطان القولون والمستقيم؛‎ (E-cadherin) 00111 ‏إن فقد إظهار‎ ‏هو العضو المركزي‎ E-cadherin ‏ملجوظ دائما في المراحل المتقدمة أكثر من المرض. إن‎ ©
E-cadherin ‏التي توصل وتنظم الخلايا في الطبقات الظهارية. طبيعيا فإن‎ adherin ‏لاتصالات‎ ‏في‎ E-cadherin ‏إن فقد إظهار‎ ¢plasma ‏عند غشاء‎ (CTNNBI) beta-catenin ‏يفصل فيزيائيا‎ ‏تنشيط نسخي لمسار‎ Aly ‏في النواة‎ beta-catenin ‏سرطان القولون والمستقيم يؤدي إلى تمركز‎ ‏شاذة محور مركزي لتكوين الورم‎ WNT [beta-catenin ‏إن إشارات‎ .11711 [beta —catenin (Schmalhofer et al., 2009 ‏النووي متورط في التكوين الجذعي للسرطان‎ beta-catenin ‏وإن‎ IK ‏وهو شريك ارتباط‎ EphA2 ‏مطلوب لإظهار ووظيفة‎ E-cadherin ‏إن‎ .PMID 19153669) ‏معروف للمركبات الترابطية 01167 في خلايا الظهارة‎ (Dodge Zantek et al., 1999 PMID 10511313; Orsulic 8 and Kemler R, 2000 PMID 10769210). ‏إن استخدام المواد الضابطة التي ترتبط مع المركبات الترابطية 01167 وتعضد أو تعارض‎ 10 ‏يمكن أن تعدل؛ تعوق أو تعكس العمليات الممهدة لتكوين الورم. بطريقة‎ Eph ‏ارتباط مستقبل‎
PTK7 ‏بديلة فإن المواد الضابطة 71167 قد ترتبط بصورة مفضلة مع خلايا الورم مع تفاعلات‎ ‏لذلك فإن المرضى بسرطانات‎ PTK7 ‏شاذة على أساس أفضليات ارتباط المواد الضابطة‎ ‏تحمل السمات الجينية المذكورة أعلاه قد تستفيد من المعالجة مع المواد الضابطة 171167 سالفة‎ ‏الذكر.‎ ٠ (Articles of Manufacture) ‏أدوات مصنعة‎ XIV ‏تتوافر ايضا عبوات ومجموعات دوائية تشمل واحدة أو أكثر من الحاويات؛ تشمل واحدة أو‎ ‏في تجسيدات خاصة؛ تتوافر جرعة وحدة حيث تحتوي جرعة‎ PTK7 ‏ضابطة‎ sale ‏أكثر من‎ ‏مع‎ PTK7 ‏الوحدة على كمية محددة مسبقا من تركيبة تشمل؛ على سبيل المثال؛ جسم مضاد‎ ‏أو بدون واحد أو أكثر من العوامل الإضافية. بالنسبة للتجسيدات الأخرى؛ تتوافر جرعة الوحدة‎ Yo ‏تلك في محقن مسبق التعبئة من أجل الحقن للاستخدام مرة واحدة. في تجسيدات أخرى أيضاء‎ ‏إلخ؛ مثبت أس‎ sucrose ple ‏فإن التركيبة الموجودة في جرعة الوحدة قد تشمل محلول‎
١ ‏إلخ؛ و/أو تصاغ في نطاق أس هيدروجيني ثابت ومؤثر.‎ phosphate ‏هيدروجيني؛ مثل‎ ‏بطريقة بديلة؛ في تجسيدات خاصة؛ قد تتوافر التركيبة كمسحوق مجفف بالتبريد يعاد تشكيله‎ ‏ماء معقم. في تجسيدات خاصة مفضلة؛ تشمل التركيبة واحدة‎ Sle ‏عند إضافة سائل ملائم؛‎ .arginine ‏و‎ SUCrose ‏متضمنة؛ بدون تحديد؛‎ «protein ‏أو أكثر من المواد التي تبط تجمع‎ ‏أو تتلازم مع؛ الحاوية (الحاويات) لتشير إلى التركيبة الموجودة‎ (Ao ‏تستخدم أي علامة‎ © ‏بداخلها لتشخيص أو علاج الحالة المرضية المختارة.‎ ‏يوفر الاختراع الحالي أيضا مجموعات من أجل إعطاء جرعة وحيدة أو جرعة متعددة من‎ ‏اختياريا؛ واحد أو أكثر من العوامل المضادة للسرطان. تشمل‎ « PTK7 ‏وحدات مادة ضابطة‎ ‏المجموعة حاوية وعلامة أو نشرة عبوة على أو ملازمة للحاوية. تتضمن حاويات مناسبة؛ على‎
Jie ‏قارورات؛ زجاجات؛ محاقن؛ إلخ. قد تتكون الحاوية من تشكيلة من المواد‎ (Jd ‏سبيل‎ ٠ ‏زجاج أو مادة لدنة. تحوي الحاوية تركيبة مؤثرة لعلاج الحالة ولها منفذ وصول معقم (على‎ ‏سبيل المثال قد تكون الحاوية عبارة عن كيس محلول في الوريد أو زجاجة بها سدادة يمكن‎ ‏ثقبها بواسطة إبرة حقن تحت الأدمة). سوف تحتوي تلك المجموعات عامة في حاوية مناسبة‎ ‏اختيارياء واحد أو أكثر من العوامل‎ oi 177 arias ‏مستحضر مقبول دوائيا من السادة‎ : ‏المضادة للسرطان في نفس الحاوية أو في حاوية مختلفة. قد تحتوي المجموعات أيضا على‎ ٠ ‏إما للتشخيص أو لعلاج متحد. على سبيل المثال؛ بالإضافة‎ (Liles ‏مستحضرات أخرى مقبولة‎ ‏إلى المادة الضابطة 71167 من الاختراع فقد تحتوي تلك المجموعات على أي واحد أو أكثر‎ ‏من نطاق عوامل مضادة للسرطان مثل عقاقير كيميائية علاجية أو علاجية مشعة؛ عوامل‎ ‏مضادة للتكوين الوعائي؛ عوامل مضادة للانتشار بعيدا عن المنشاً؛ عوامل استهدافية مضادة‎ ‏للسرطان؛ عوامل سامة للخلية؛ و/أو عوامل أخرى مضادة للسرطان. قد توفر أيضا تلك‎ ٠ ‏المجموعات عوامل كاشفة ملاثمة لملازمة المادة الضابطة 171167 مع عامل مضاد للسرطان‎ ‏المندمجة محتوياتها هنا كمرجع‎ USPN. 7,422,739 ‏أو عامل تشخيصي (انظر مثلا‎ ‏بالكامل).‎ ‎71167 ‏بصفة خاصة أكثر قد تكون للمجموعات حاوية واحدة تحتوي على المادة الضابطة‎ ‏مع أو بدون مكونات إضافية؛ أو قد تكون لها حاويات مميزة لكل عامل مطلوب. عند توافر‎ YO ‏إما في اتحاد متكافئ‎ cline ‏علاجات متحدة من أجل الملازمة؛ فإن محلول واحد يمكن خلطه‎ ‏جزيئيا؛ أو مع المكونات بكميات مساوية لبعضها. بطريقة بديلة؛ يمكن استبقاء المادة الضابطة‎
١٠١ ‏وأي عامل مضاد للسرطان اختياري في المجموعة بصورة مفضلة في حاويات مميزة‎ 7 ‏قبل الإعطاء للمريض. قد تشمل المجموعات أيضا حاوية ثانية/ ثالثة لاحتواء مثبت الأس‎ ‏الهيدروجيني معقم مقبول دوائيا أو مادة تخفيف أخرى مثل ماء موقف لنمو البكتيريا للحقن‎
Ringer ‏(0135)؛ محلول‎ phosphate ‏محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني مع‎ «( BWFI) .dextrose ‏ومحلول‎ © ‏عندما تتوافر مكونات المجموعة في واحد أو أكثر من المحاليل السائلة؛. يفضل أن يكون‎ ‏المحلول السائل محلول مائي؛ وبفضل تحديدا محلول مائي معقم. على أية حال؛ يمكن توفير‎ ‏مكونات المجموعة كمسحوق (مساحيق) جاف. عندما تتوافر عوامل كاشفة أو مكونات‎ ‏كمسحوق جاف؛ يمكن إعادة تشكيل المسحوق بإضافة مذيب مناسب. من المتوقع أن يتوافر‎ ‏المذيب أيضا في حاوية أخرى.‎ ٠ ‏كما هو مشار إليه بإيجاز أعلاه فإن المجموعات تحتوي أيضا على وسيلة يمكن بها‎ ‏من الإبر‎ SST ‏واحدة أو‎ Me ‏إعطاء الجسم المضاد وأي مكونات اختيارية لحيوان أو لمريضء‎ ‏حقن‎ ADA ‏ذلك؛ يمكن من‎ Jie ‏والمحاقن؛ أو أيضا قطارة للعين؛ ماصة؛ أو جهاز آخر‎ ‏في الحيوان أو إعطائه للمنطقة المريضة في الجسم. إن مجمرعات‎ atin] ‏المستحضر أو‎ ‏الاختراع الحالي سوف تتضمن نموذجيا أيضا وسيلة لاحتواء الزجاجات؛ إلخ؛ ومكون آخر مع‎ ve ‏حاويات؛ حقن أو لدنة مقولبة بالنفخ توضع بها الزجاجات‎ Sie ‏تقيد محكم للنطاق التجاري؛‎ ‏المطلوبة وجهاز آخر وتستبقى فيها. تستخدم أي علامة أو نشرة عبوة إلى أن تركيبة المادة‎
CRC ‏تستخدم لعلاج السرطان؛ على سبيل المثال‎ PTK7 ‏الضابطة‎ ‎(Research Reagents) ‏عوامل كاشفة بحثية‎ XV ‏هناك تطبيقات أخرى مفضلة للاختراع تستفيد أيضا من خواص المواد الضابطة المعلنة‎ ٠ ‏كأداة مفيدة لتحديد؛ عزل؛ تجزئة أو تزويد مجموعات أو مجموعات فرعية من خلايا بادئة لورم‎ ‏تصنيف‎ (FACS) ‏مقياس خلوي للتدفق؛ تصنيف خلية ينشطها استشعاع‎ Jie ‏من خلال طرق‎ ‏أو تجزئة من خلال الليزر. إن المهرة في الفن سيدركون أن‎ (MACS) ‏خلية منشطة مغناطيسيا‎ ‏متضمنة خلايا‎ TIC ‏استخدامها في تقنيات موائمة عديدة لتمييز ومعالجة‎ (Say ‏المواد الضابطة‎ 7/114137 17/187764 ‏وثائق براءة الاختراع الأمريكية أرقام‎ Sie) ‏سرطان جذعية‎ To ‏المندمج محتوياتهم هنا كمرجع بالكامل).‎ ١/4
١٠١ (Miscellaneous) ‏موضوعات متنوعة‎ XVI ‏إذا لم يحدد خلاف ذلك هناء فإن المصطلحات العلمية والفنية المستخدمة في الاختراع‎ ‏الحالي سوف تكون لها المعاني التي يدركها شيوعا أصحاب المهارة العادية في الفن. إضافياء‎ ‏إذا لم يطلب خلاف ذلك بواسطة السياق؛ فإن مصطلحات المفرد سوف تتضمن إشارات إلى‎ ‏حسب الاستخدام في‎ JST ‏الجمع وأن مصطلحات الجمع سوف تتضمن المفرد. بصفة خاصة‎ © "the" ‏هذه المواصفة وعناصر الحماية المكملة للموضوع؛ فإن أشكال المفرد "و" "صم"‎ ‏تتضمن إشارات للجمع إذا لم يفرض السياق خلاف ذلك بطريقة واضحة. لذلك؛ على سبيل‎ "(cell) ‏تتضمن الإشارة إلى "خلية‎ tproteins ‏من‎ dae "protein" ‏تتضمن الإشارة إلى‎ (JE ‏تتضمن النطاقات المتوافرة في المواصفة وعناصر الحماية‎ (Lilia) ‏إلخ.‎ (LOA ‏خلطات‎ ‏النقاط بين نقاط النهاية. لذلك؛ فإن نطاق من ؟‎ JS ‏المكملة للموضوع كلا من نقاط النهاية‎ ٠ ‏وكل النقاط بين ؟ و ؟.‎ oF oF ‏إلى ؟ يتضمن‎ ‏الأحياء‎ ale ‏بصفة عامة؛ فإن التسمية المستخدمة مع؛ وتقنيات؛ مزرعة خلية ونسيج؛‎ ‏وكيمباء حمض نووي‎ proteins ‏الجزيئية؛ علم المناعة؛ علم الأحياء الدقيقة» الوراثة‎ ‏الموصوفة هناء المعروفه :ت..و:.-ندم بطريقة شائعة في الفن. تجرى بصفة ّي‎ hybridization 0 0 ‏عامة طرق وتقنيات الاختراع الحالي طبقا لطرق تقليدية معروفة جيدا في الفن وحسب الوضف‎ ١ ‏في المراجع المختلفة العامة والخاصة أكثر المذكورة والمشروحة على مدار المواصفة الحالية إذا‎ ‏لم يشار بخلاف ذلك. انظر؛ على سبيل المتال؛‎
Sambrook J. & Russell D. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2000); Ausubel et ‏علق‎ ‎Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Ye
Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002); Harlow and Lane
Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,
Cold Spring Harbor, N.Y. (1998); and Coligan et al., Short Protocols in Protein
Science, Wiley, John & Sons, Inc. (2003). ‏تجرى التفاعلات الإنزيمية وتقنيات التنقية طبقا لمواصفات الصانع؛ حسبما موجود بطريقة‎ Yo ‏شائعة في الفن أو حسب الوصف هنا. إن التسمية المستخدمة بخصوص؛ والإجراءات‎
‎YY ¢‏ والتقنيات المعملية من أجلء الكيمياء التحليلية؛ الكيمياء العضوية التخليقية؛ والكيمياء الطبية والدوائية الموصوفة هنا هي تلك المعروفة جيدا والشائعة الاستخدام في الفن. إن كل المراجع أو الوتائق المعلنة أو المذكورة في هذه المواصفة؛ بدون تحديد؛ مدمجة هنا بالإشارة الكاملة؛ إضافة ‎alld)‏ فإن أي عناوين جزء مستخدمة هنا هي لأغراض التنظيم فقط © ولا يجب اعتبارها مقيدة لمادة الموضوع الموصوفة. الأمثلة إن الاختراع ‎Jal‏ الموصوف بذلك أعلاه بصفة عامة؛ سيتم إدراكه بسهولة أكثر بالإشارة إلى الأمثلة التالية؛ المتوافرة على سبيل التوضيح ولا يقصد بها تحديد الاختراع الحاضر. لا يقصد بالأمتلة التحديد بأن التجارب أدناه هي كل أو هي فقط التجارب المجراة. إذا لم يشار ‎٠‏ بخلاف ذلك؛ فإن الأجزاء هي أجزاء وزن؛ الوزن الجزيئي هو متوسط وزن الوزن الجزيئي؛ درجة الحرارة بالدرجات المئوبة؛ والضغط عند أو قريب من الضغط الجوي. مثال ‎١‏ ‏ض تزويد مجموعات خلية بادئة لورم لتمييز التغلير الخلوي للأورام الصلبة حسب تواجدها في مرضى السرطان. لتوضيح نوعية ‎٠‏ خلايا الورم السرمدية (خلية ورم سرمدية؛ أي؛ ‎LWIA‏ سرطان جذعية: ‎(CSC‏ باستخدام دلالات نوع شكلي خاصة وتحديد الأهداف العلاجية الهامة إكلينيكيا؛ تم إنشاء بنك ورم رقعة دخيلة غير تقليدي ‎(NTX)‏ واستبقائه باستخدام ‎cll‏ يدركها الفن. إن بنك ورم ‎(NTX‏ المشتمل على عدد كبير من خطوط خلية ورم منفصلة؛ يتم نشره في فئران غير متسقة المناعة من خلال دورات متعددة لخلايا ورم مغايرة ناتجة أصليا من مرضى سرطان كثيرين مصابين بتشكيلة من 1 أمراض ورم صلب خبيثة. إن التوافر المستمر لعدد كبير من خطوط خلية ورم ‎NTX‏ دورة مبكرة منفصلة لها أنسال محددة جيدا يسهل بدرجة كبيرة تحديد وعزل خلية ورم سرمدية لأنها تسمح بالتمييز المتجدد والمتكرر للخلايا المنقاة من خطوط الخلية. بصفة خاصة أكثر؛ إن خلية ورم سرمدية المعزولة أو النقية محددة بصورة أكثر دقة بدرجة استعادية طبقا لقدرتها على توليد أورام مغايرة بالنسبة للنوع الشكلي وبالنسبة للشكل في الفئران التي تعيد باختصار ‎Ae‏ ‎Yo‏ ورم المريض الناشئة منها الخلايا. لذلك؛ فإن القدرة على استخدام مجموعات صغيرة من الخلايا المعزولة لتوليد أورام مغايرة تماما في الفئران تدل بدرجة قوية على الحقيقة بأن الخلايا المعزولة تشمل خلية ورم سرمدية. في ذلك العمل فإن استخدام خطوط خلية ‎NTX‏ خضعت
١١
للحد الأدتى من الدورات يبسط بدرجة كبيرة التجريب في الجسم ويوفر نتائج يمكن تحديدها بسهولة. إضافة ‎clin)‏ فإن أورام ‎NTX‏ مبكرة الدورة تستجيب أيضا لعوامل علاجية مثتل ‎irinotecan‏ (مثات ‎(Camptosar®‏ ؛» توفر بصائر هامة إكلينيكيا بخصوص الآليات الكائنة التي
تقود نمو الخلية؛ المقاومة للعلاجات الحالية وعودة الورم. © لأن خطوط خلية ورم ‎NTX‏ راسخة فإن الأنواع الشكلية المكونة لخلية الورم يتم تحليلها باستخدام قباس خلوي انسيابي لتحديد الدلالات المميزة التي يجب استخدامها لتمييز؛ عزل؛ تنقية أو تزويد خلية بادئة لورم وفصل أو تحليل خلية ورم سرمدية 5 ‎TProg‏ في تلك المجموعات. في هذا الجانب استعمل المخترعون برنامج مسجل معتمد على ‎protein‏ (أي؛ نظام ‎His: (PhenoPrint™‏ تمييز سريع للخلايا اعتمادا على إظهار ‎protein‏ والتحديد الملازم ‎٠‏ ا لدلالات مفيدة بدرجة قوية. إن نظام ‎PhenoPrint‏ هو برنامج ‎protein‏ مسجل يشمل مئات من جزيئات رابطة منفصلة؛ الكثير منها مصادر تجارية؛ مرتبة في أطباق من 97 عين حيث تحتوي كل عين على جسم مضاد مميز في القناة الاستشعاعية لأجل ‎phycoerythrin‏ وأجسام مضادة عديدة إضافية في أصباغ استشعاعية مختلفة مرتبة في كل عين عبر الطبق. يسمح
0 هذا بتجديد مستويات إظهار مولد ‎er, se‏ الأهمية في مجموعة فرعية من خلايا ورم .. منتقاة من خلال التضمن السريع لخلايا هامة أو إزالة خلايا غير هامة من خلال قنوات غير ‎phycoerythrin‏ عند استخدام نظام ‎PhenoPrint‏ في اتحاد مع تقنيات تفكك نسيج؛ ازدراع وخلية جذعية معروفة ‎lus‏ في الفن ) ‎Al-Hajj et al., 2004, Dalerba et al., 2007 and Dylla‏ ‎cet al, 2008, all supra‏ المندمج محتواها بالكامل هنا كمرجع)؛ كان من الممكن التحديد بدرجة مؤثرة لدلالات هامة وبعد ذلك عزل وازدراع مجموعات فرعية لخلية ورم أدمي خاصة ‎٠‏ بفعالية كبيرة.
طبقا لذلك؛ عند ترسيخ خطوط خلية ورم ‎NTX‏ مختلفة كما يتم بطريقة شائعة للأورام الآدمية في الفئران غير متسقة المناعة بدرجة شديدة؛ يتم استشصال الأورام من الفئران عند الوصول إلى ‎٠00-8050‏ مم" وتتفكك الخلايا في معلقات خلية وحيدة باستخدام تقنيات هضم إنزيمي يدركها الفن (انظر؛ على سبيل المثال 2007/0292414 .17.5.0.131 المندمج محتواها ‎Yo‏ هنا). إن البيانات الناتجة من هذه المعلقات باستخدام نظام ‎PhenoPrint‏ توفر كلا من إظهار ‎protein‏ سطح مطلق (في الخلية) ونسبي (مقابل خلايا أخرى في المجموعة) على أساس خلية نجلية؛ وذلك يؤدي إلى تمييز ومطابقة معقدين أكثر لمجموعات الخلية. بصفة خاصة ‎OT‏
١١
فإن استخدام نظام ‎PhenoPrint‏ من أجل التحديد السريع لأجل ‎proteins‏ أو دلالات تميز بدرجة منظورية خلية بادئة لورم أو خلية ورم سرمدية عن خلايا ورم حجم ‎NTG‏ والنسيج اللحمي للورم»؛ عند العزل من نماذج ورم ‎NTX‏ المتوافرة من أجل التمييز السريع نسبيا للمجموعات الفرعية لخلية الورم التي تظهر مستويات مختلفة من ‎proteins‏ سطح خلية خاصة. © بصفة خاصة؛ فإن ‎proteins‏ التي لها إظهار مغاير عبر مجموعة خلية الورم تسمح بعزل وازدراع مجموعات فرعية لخلية ورم مميزة ونقية للغاية تظهر مستويات إما عالية أو منخفضة من ‎protein‏ خاص أو دلالة خاصة في فئران غير متسقة المناعة؛ وبذلك تحديد ما إذا كانت
‎AA‏ ورم سرمدية مزودة في مجموعة فرعية واحدة أو أخرى. يستخدم المصطلح تزويد ليدل على نفس المعنى مثل عزل خلايا ويعني أن إنتاجية (جزء) ‎٠‏ الخلايا من نوع واحد يزداد أكثر من الجزء من أنواع الخلايا الأخرى مقارنة بمجموعة الخلية البادئة أو الأولية. يفضل؛ أن يشير التزويد إلى زيادة النسبة المئوية بحوالي + ‎J)‏ بحوالي ‎٠‏ بحوالي 770 بحوالي 746 بحوالي ‎Lon‏ أو أكبر من ‎٠‏ 78 لنوع خلية واحد في
‏مجموعة خلايا مقارنة بمجموعة الخلايا البادئة.
‏.حسب الاستخدام هنا فإن دلالة» في سياق خلية أو نسيج؛ تعني أي سمة مميزة في شكل ‎٠‏ نوع كيميائي أو حيوي مصاحبة معه بصورة يمكن تحديدها؛ أو موجودة بصفة خاصة في أو على خلية خاصة؛ مجموعة خلية أو نسيج يتضمن تلك المحددة في أو على نسيج أو مجموعة خلية مصابة بمرض أو اضطراب. حسب ظهورهاء فإن الدلالات قد تكون شكلية؛ وظيفية أو ‎alias Algo ge Ble lal (3p Aline Clint Linas 8 pn Ales‏ خلية يظهر بدرجة متباينة أو بدرجة مفضلة بواسطة أنواع خلية خاصة (مثلاء خلية ورم ‎٠‏ سرمدية) أو بواسطة خلايا تحت شروط خاصة (مثلا أثناء نقاط خاصة في دورة حياة الخلية أو خلايا في بيثة ملائمة خاصة). بصورة ‎Alinta‏ تكون تلك الدلالات عبارة عن ‎«proteins‏ ‏وبدرجة مفضلة أكثر؛ يكون بها ‎epitope‏ للأجسام المضادة؛ ‎aptamers‏ أو جزيئات رابطة أخرى كما هو معلوم في الفن. على أية حال؛ قد تتكون دلالة من أي جزيء موجود على السطح أو في خلية تتضمن» بدون تحديد؛ ‎peptides) proteins‏ و ‎lipids «(polypeptides‏ ‎polysaccharides Yo‏ أحماض نووية 5 ‎steroids‏ تتضمن أمثلة لسمات أو مميزات دلالة شكلية؛ لكن بدون تحديد؛ الشكل؛ المقاس» والنسبة النووية إلى ‎cytoplasmic‏ تتضمن أمثلة سمات أو مميزات دلالة وظيفية؛ لكن بدون تحديد؛ القدرة على الالتصاق مع مواد خاضعة؛ القدرة على
و دمج أو إقصاء صبغات خاصة؛ على سبيل المثال لكن بدون تحديد إقصاء صبغات محبة للدهن؛ القدرة على الهجرة تحت شروط خاصة والقدرة على التباين عبر أنسال خاصة. قد تكون الدلالات ‎Lad‏ عبارة عن ‎protein‏ يظهر من جين مخبر؛ على سبيل المثال جين مخبر تظهره الخلية نتيجة لإدخال ترتيب الحمض النووي المشفر للجين المخبر في الخلية ونسخة ليؤدي إلى ‎٠‏ إنتاج ‎protein‏ المخبر الذي يمكن استخدامه ‎ANS‏ إن تلك الجينات المخبرة التي يمكن استخدامها كدلالات هي؛ على سبيل المثال لكن بدون تحديد ‎proteins enzymes‏ استشعاعية؛ ‎proteins‏ مولدة لصبغ؛ جينات مقاومة؛ إلخ. في جانب خاص بذلك فإن المصطلح نوع شكلي لدلالة في سياق نسيج؛ خلية أو مجموعة خلية ‎Bie)‏ نوع شكلي لخلية ورم سرمدية ثابت) يعني أي دلالة أو اتحاد دلالات يمكن ‎٠‏ استخدامها ‎cad Gal‏ فصل؛ عزل أو تزويد خلية أو مجموعة خلية خاصة ‎ie)‏ بواسطة ‎(FACS‏ . في تجسيدات خاصة؛ فإن النوع الشكلي للدلالة هو نوع شكلي سطح خلية يمكن تحديده بتحديد أو التعرف على إظهار اتحاد دلالات سطح خلية. سبدرك المهرة في الفن أن هناك دلالات كثيرة (أو غيابها) مصاحبة لمجموعات كثيرة لخلايا سرطان جذعية وتستخدم نعزل.أو تمييز مجموعات فرعية لخلية ورم. في هذا الجانب ٍ 00 تشمل دلالات تمثيلية لخلية سرطان جذعية 0014 ‎«CD24 EPCAM (STAT3 (Nanog‏ ‎«CD46 (B7H3 «CD29 «CD56 «CD20 «CD133 «GD2 «TrkA «(NB84 «CD34‏ مستقبل ‎«Lgr6 «LgrS oncostatin 11 <ADAMO9 «carboxypeptidase M <JAM3 «transferrin‏ ‎«mf2 ceasyh2 «easyhl eed Bmi-1 «Soxl «nestin «CD325 «CD324‏ انون ‎«FZD4 FZD3 FZD2 FZD1 mllt3 «smarcE1 ¢smarcD3 ¢smarckAS ¢smarcA3‏ ‎FZD9 208 FZD7 FZD6 ٠٠‏ فاق 12 ‎(WNTS5A «WNT3 «WNT2B‏ ‎«<WNTI10B‏ 116لا ‎«TEMS (LIRAP «(TCF4) SLC7A8 MYC BCL9 (AXIN1‏ ‎(PPAP2C «SLC4A11 «SLC6A14 «GPRC5B <MUC16 «(TMPRSS4‏ انه ‎«CAV2‏ ‎«FLJ10052 «<MPZL1 <ADORA2A «CX3CL1 SLC1Al (EPHA2 (EPHA1 PTPN3‏ ‎CEACAM6 PTS IMEPAI ((RARRES1 003 «C4.4A‏ سيد ‎«STEAP‏ ‎«<ADAM9 (NMA «CPD MCP MUCI1 DAF «OPN3 <IL1R1 «CRIMI «ABCA3 ¥°‏ ‎«PCDH7 ¢ABCA1 «(SLCI9A2 «GJAl‏ ولف ‎«N33 <ENPP1 «(NPC1 «SLC39A1‏ ‎«PCDHA10 FLVCR TMEPAI «C20o0rf52 «LRP3 «CELSR1 (LY6E «GPNMB‏
لا ‎(TGFBR3 +4‏ للمنطق ‎PCDHB2‏ 002طف ‎(BMP-4 (AFP «CD166‏ ‎«CD90 «CD74 «CD45 «CD44 «CD38 «CD31 «CD14 «CD9 «CD3 002 «B-catenin‏ ‎«CD16b «CD16a «CD16 (CD64 «CD105 EGFR «decorin «CXCR4‏ 11ت ‎«GLI2‏ ‎.CD49f 5 «CD49b‏ انظر؛ على سبيل المثال؛ ‎Schulenburg et al., 2010, PMID:‏ © 20185329 براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎VATYIVA‏ وبراءات الاختراع الأمريكية أرقام 144 لنت الامعلاد اتيت الختفا ال نكت تلكنتحدا٠‏ و١001/.07077؟‏ المندمج محتواهم هنا كمرجع. لابد من إدراك أن هناك عدد من هذه الدلالات متضمنة في نظام ‎PhenoPrint‏ الموصوف أعلاه.
بصورة مشابهة تتضمن أمثلة غير مقيدة لأنواع شكلية لسطح خلية ‎٠‏ مصاحبة لخلايا سرطان جذعية لأنواع ورم خاصة ‎(ALDH" «CD44"CD24""‏ ‎ «CD34'CD38” 00123 0013‏ 4دص ‏ بعص ل مو6صن ‏ 24دصحتوعدرن. ‎«CD133"RC2" 00138 0034 CD19" 0133 00340010 009‏ 003 يه 6044؛ ‎«CD2717 «CD44'CD24 ESA”‏ 9085م بالإضافة إلى أنواع . . شكلية لسطح خلية سرطان جذعية أخرى معروثة في الذ ن. أنظر+ على سبيل المثال ‎Schulenburg et al., 2010, supra, Visvader et al., 2008, PMID: 18784658 ٠‏ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 10004/01748717 المندمج محتواها هنا بالكامل كمرجع. سيدرك المهرة في الفن أنه يمكن استخدام أنوا ع شكلية للدلالة مثل تلك الممثلة في الحال أعلاه في اتحاد مع تحليل قياس خلوي انسيابي قياسي وتقنيات تصنيف خلية من أجل ‎(Jie ud‏ تنقية أو تزويد خلايا بادئة لورم و/أو خلايا ورم سرمدية أو مجموعات خلية من أجل تحليل إضافي. ‎٠‏ حالة أهمية بالنسبة للاختراع الحالي هو أن ‎«CD46‏ 00324 5 « اختيارياء 0666© تظهر إما بدرجة كبيرة للغاية أو بدرجة مغايرة على سطح ورم كثيرة مثل ورم قولون ومستقيم آدمي ‎«(“CR”)‏ ثدي ‎«(“BR”)‏ رئوي في خلية غير صغيرة ‎(NSCLC)‏ رثوي في خلية صغيرة ‎(SCLC)‏ بنكرياسي ‎(“PA”)‏ بروستاتا ‎(“PR”)‏ ورم قتاميني ‎(“Mel”)‏ في المبيض ‎(OV?)‏ وسرطان الرأس والرقبة ‎(HN)‏ بغض النظر ‎Lee‏ إذا كانت عينات الورم المحللة
‎Yo‏ هي عينات ورم مرض أولي أو أورام ‎NTX‏ مشتقة من مريض. إن الخلايا سالبة الإظهار (أي؛ "-") محددة هنا على أنها تلك الخلايا التي تظهر أقل من؛ أو يساوي 745 من الإظهار الملحوظ مع جسم مضاد مقارن نوع مماثل في قناة استشعاع في
١٠
وجود كوكتيل صبغ الجسم المضاد الكامل الذي يعلم من أجل ‎proteins‏ أخرى هامة في قنوات
إضافية لانبعاث استشعاع. سيدرك المهرة في الفن أن هذا الإجراء لتحديد أحداث سالبة يشار
إليه بأنه صبغ "استشعاع-١ ‎"(fluorescence minus one)‏ أو ‎L“FMO”‏ إن الخلايا مع إظهار
أكبر من 292 من الإظهار الملحوظ مع جسم مضاد مقارن نوع مماثل باستخدام صبغ ‎FMO‏
‎Sel ٠‏ محددة هنا على أنها 'موجبة ‎"(positive)‏ (أي؛ 47( حسب التحديد هناء هناك
‏مجموعات عديدة من الخلايا محددة على نطاق كبير ‎Lesh‏ 'موجبة ‎Yl (positive)‏ فإن
‏الخلايا قليلة الإظهار (أي؛ ‎(“l0”‏ محددة عامة على أنها تلك الخلايا التي لها إظهار ملحوظ
‏أعلى من 790 المحددة باستخدام صبغ ‎FMO‏ مع جسم مضاد مقارن نوع مماثل وفي نطاق
‏حيود قياسي واحد من نسبة 790 للإظهار الملحوظ مع جسم مضاد ‎lia‏ نوع ‎Files‏
‎٠‏ باستخدام إجراء صبغ ‎FMO‏ الموصوف أعلاه. إن الخلايا "عالية ‎(high)‏ الإظهار (أي؛ ”نط“)
‏يمكن تحديدها على أنها تلك الخلايا التي لها إظهار ملحوظ أعلى من نسبة 790 المحددة
‏بصبغ ‎FMO‏ مع جسم مضاد مقارن نوع مماثل وأكبر من حيود قياسي واحد أعلى من نسبة
‏الإظهار 745 الملحوظ مع جسم مضاد مقارن نوع مماثل باستخدام إجراء صبغ ‎FMO‏ ‏الموصوف أعلاه. في ترسيدات أ<رى؛ يفضل استخدام نسبة 798 كنقطة تحديد بين صبغ 0
‎.7989 ‏السالبة والموجبة وفي تجسيدات مفضلة تحديدا قد تكون النسبة المئوية أكبر من‎ 2100© ٠
‏باستخدام تقنيات مثل تلك الموصوفة أعلاه من أجل التحديد السريع والتصنيف لمولدات
‏مضاد قولون ومستقيم اعتمادا على شدة الإظهار والتغاير عبر أورام ‎NTX‏ كثيرة من مرضى
‏سرطان القولون والمستقيم؛ تختبر إضافيا مولدات مضاد لخلية ورم سرمدية مرشحة بمقارنة
‏نسيج الورم مقابل النسيج الطبيعي المجاور وعندئذ انتقاء اعتمادا على» على الأقل ‎(Wise‏ زيادة
‎٠‏ أو خفض مستوى تنظيم ‎alge‏ المضاد الخاص في الخلايا الخبيثة. إضافة لذلك؛ فإن التحليل
‏النظامي لتشكيلة من دلالات سطح خلية من أجل قدرتها على تزويد القدرة على ازدراع أورام
‏مغايرة ‎LS‏ في فئران ‎(sl)‏ قدرة توليد ورم)؛ واتحاد تالي لهذه الدلالات يحسن جوهريا اضمحلال
‏الطريقة ويحسن القدرة على تفصيل تقنيات تصنيف خلية ينشطه استشعاع ‎(FACS)‏ لتحديد
‏وتمييز مجموعات فرعية لخلية ورم مزودة للغاية تحتوي حصريا على كل القدرة على توليد ورم
‎(TIC) ‏عند الازدراع (أي؛ خلايا بادئة لورم). من أجل التكرار؛ فإن المصطلح خلية بادئة لورم‎ vo
‏أو خلية مولدة لورم ‎(TG)‏ يشتمل كلا من خلايا الورم السرمدية (خلية ورم سرمدية؛ أي خلايا
‏سرطان جذعية) وخلايا ورم سلفية انقسامية للغاية ‎«(TProg)‏ ويشملان معا بصفة عامة
YY.
مجموعة فرعية فريدة (أي ‎(V0)‏ من ورم حجمي أو كتلة؛ المحددة سماتها المميزة أعلاه. إن الغالبية العظمى من خلايا الورم المميزة بهذه الطريقة تفتقد هذه الضرورة على تكوين ورم؛ ويمكن لذلك تمييزها كخلايا غير مولدة لورم (0410. مما يثير الدهشة؛ لوحظ أن معظم الدلالات المميزة المحددة باستخدام نظام ‎PhenoPrint‏ المسجل لا تظهر قدرة على تزويد © مجموعات خلية بادئة لورم في أورام القولون والمستقيم باستخدام بروتوكولات ‎FACS‏ قياسية؛ لكن اتحادات الدلالة المميزة يمكن استخدامها لتحديد ¥ من المجموعات الفرعية لخلايا بادئة للورم: خلية ورم سرمدية و17:08. سيدرك المهرة في الفن أن الفرق المحدد بين خلية ورم سرمدية 5 ‎(TProg‏ برغم أن كلا منهما ‎Ral‏ لورم في ازدراعات أولية؛ هو قدرة خلية ورم سرمدية على تدعيم نمو الورم بصورة مستديمة عند الازدراع المتسلسل عند أعداد خلية قليلة. إضافة ‎٠‏ لذلك » فإن الدلالة/ ‎proteins‏ المستخدمة في اتحاد لتزويد كلا من خلية ورم سرمدية وع177:0 غير معروفة بأنها تصاحب خلايا تحتوي على ذلك النشاط في أي نسيج أو نسيج ورم قبل ‎al SKY)‏ بواسطة المخترعون الحاليون برغم أن أخرين قد حددوا دلالات سطح خلية أو نشاط إنزيمي يمكن استخدامها بدرجة مشابهة لتزويد الخلايا المولدة لورم ‎Dylla et al 2008) 0‏ أعلاه). كما هو ‎elf sie‏ دان المجموعة الفرعية لخلية ورم خاصة ‎٠‏ المعزولة باستخدام اتحادات دلالة سطح خلية مشار إليها أعلاه يتم تحليلها عندئذ بأستخدام
ترتيب جيل تالي ‎transcriptome‏ كامل لتحديد وتمييز جينات ظاهرة بدرجة متباينة.
مثال ‎١‏ ‎Jie‏ وتحليل عينات ‎RNA‏ من مجموعات خلية بادئة لورم مزودة
يمر خط ورم ‎NTX‏ قولون ومستقيم الراسخ ‎SCRX-CR4‏ حسب الوصف في المثال ‎١‏ ‎٠‏ ويستخدم لابتداء أورام في ‎ph‏ متساوية المناعة. بمجرد وصول متوسط حمل الورم حوالي ‎Yoo‏ مم تقسم الفئران عشوائيا وتعالج مع 10 مجم/ كجم 100016680 ‎YO‏ مجم/ كجم ‎cgemcitabine‏ أو وسط ناقل مقارن ‎(PBS)‏ مرتين أسبوعيا لمدة على الأقل ‎7١‏ يوم قبل القتل برفق. تزال بعدئذ الأورام وتعزل خلايا ‎TProg «TPC‏ و0170 على التوالي» من أورام ‎NTX‏ ‏قولون ومستقيم حديثة الاستئصال و؛ بدرجة مشابهة؛ تعزل خلايا ‎NTG 5 TG‏ من أورام ‎NTX‏ ‎Yo‏ بنكرياسية؛ بصفة عامة باستخدام التقنيات المذكورة في مثال ‎.١‏ بصفة خاصة ‎ST‏ تعزل مجموعات الخلية بواسطة ‎FACS‏ وتتكور في الحال وتتحلل في مثبت أس هيدروجيني تحلل ‎Qiagen RLTplus RNA (Qiagen, Inc.)‏ تخزن مواد التحلل عندئذ عند -<0/*مثوية حتى
١7١
Qiagen ‏الكلي باستخدام مجموعة عزل‎ RNA ‏يستخلص‎ ٠» ‏الاستخدام. عند الذوبان من التجمد‎
Nanodrop (Thermo ‏باتباع إرشادات البائع وتقدر كميا على‎ RNeasy (Qiagen, Inc.) ‏مرة أخرى باستخدام‎ Scientific) and a Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies) ‏الكلي الناتج مناسب للترتيب‎ RNA ‏بروتوكولات البائع وضبط الأداة الموثقة. إن مستحضر‎ ‏الجيني والتحليل.‎ ‏الناتجة من مجموعات الخلية المقابلة المعزولة حسب الوصف‎ ASH RNA ‏إن عينات‎ ‏أعلاه من فئران معالجة مع وسط ناقل أو عامل كيميائي علاجي تجهز من أجل ترتيب‎
Applied Biosystems SOLID 3.0 JU ‏كامل باستخدام برنامج ترتيب جيل‎ transcriptome ‏بالبدء مع © نانوجرام‎ «(Life Technologies) (Sequencing by Oligo Ligation/Detection) ‏مخططة لعدد‎ SOLID ‏من هالغ الكلي في العينة. إن البيانات المتولدة بواسطة برنامج‎ ٠ ‏في عينات عديدة.‎ PTKT ‏؟ جين من الجينوم الآدمي وقادرة على تحديد‎ 4 ‏يمكن من ترتيب متزامن لأجزاء‎ SOLID3 ‏بصفة عامة فإن برنامج ترتيب جيل تالي‎ ‏مكبرة نسخيا متصلة مع خرزات. يستخدم عندئذ ترتيب بالربط مع‎ RNA/DNA ‏ما ب‎ Alea) ‏قراءة لكل جزء موجود في العينة مع‎ ٠ ‏معلمة بصيغة لتوليد‎ oligonucleotides ‏لأجل‎ MRNA ‏مليون قراءة لتوليد تمثيل أكثر دقة بكثير لمستوى إظهار نسخة‎ ٠٠ ‏يزيد عن‎ ١ (SNPs ‏قادر على تحديد ليس فقط إظهارء ولكن‎ SOLID3 ‏في الجينوم. إن برنامج‎ proteins ‏جديدة اعتمادا فقط‎ exon ‏لأحداث جدل تبادلي معلومة وغير معلومة؛ ومن المحتمل اكتشافات‎ ‏على تغطية القراءة (القراءات مخططة بدرجة مميزة للمواقع الجينومية). لذلك؛ فإن استخدام‎ ‏برنامج الجيل التالي هذا يسمح بتحديد الاختلافات في إظهار مستوى النسخة بالإضافة إلى‎ ‏الظاهرة. علاوة‎ MRNA ‏الاختلافات أو الأفضليات لأشكال متباينة لجديلة خاصة لتلك النسخ‎ ٠ ‏كامل معدل‎ transcriptome ‏على ذلك؛ فإن التحليل مع برنامج 50103 باستخدام بروتوكول‎ ‏يتطلب فقط © نانوجرام تقريبا من مادة بادئة قبل التكبير. إن هذا‎ Applied Biosystems ‏من‎ ‏كلي من مجموعات خلية مصنفة من مجموعة فرعية لخلية ورم‎ RNA ‏مقيد لأن استخلاص‎ ‏على سبيل المثال؛ أقل بكثير جدا في العدد من 1170 أو أورام حجمية‎ LDA) ‏سرمدية من‎ ‏والتالي تنتج كميات قليلة جدا من مادة بادئة يمكن استخدامها.‎ Ye ‏إن تجارب مضاعفة لبيانات الترتيب من برنامج 501403 تتم معادلتها وتحويلها وتحسب‎ ‏نسب المضاعفة كما في الممارسة الصناعية القياسية. كما يتضح في الشكل ؟؛ تقاس‎
مستويات إظهار جين ‎PTK‏ (تتضح كقراءات لكل مليون مخطط لها على ‎RPM- ¢exons‏ ‎(exon‏ في مجموعات فرعية لخلية ورم ‎ScRx-CR4‏ خاصة. يبين تحليل للبيانات أن 7167 يزداد مستوى تنظيمه عند مستوى النسخة بين 7-؛ مرات أكثر من مجموعة 0170 5 +0 ‎٠٠‏ مرة ‎Sil‏ من مجموعة ‎(TProg‏ في فئران معالجة مع وسط ناقل أو 100 على © التوالي. إن الملاحظات المفصلة أعلاه تبين أن إظهار 71167 يرتفع بصفة عامة في مجموعات ‎TPC‏ ويقترح أن 01167 قد تلعب دورا هاما في تكوين الورم واستبقاء الورم؛ وبذلك تشكل أهداف ممتازة لأساليب علاجية مناعية. مثال ؟ ‎٠١‏ تحليل ‎“PCR‏ زمن حقيقي لأجل 01167 في مجموعات خلية بادئة ‎ap)‏ مزودة لتحديد صلاحية إظهار 71167 المتباين الملحوظ بواسطة ترتيب ‎transcriptome‏ كامل في مجموعات خلية ورم سرمدية مقابل خلايا ‎NTG 5 TProg‏ في سرطان قولون ومستقيم؛ وخلايا ‎TG‏ مقابل 1010 في سرطان بنكرياس؛ يستخدم ‎PCR‏ زمن حقيقي كمي ‎TagMan®‏ لقياس ا ال مستويات إظهار الجين في مجموعات خلية ‎als‏ © معزولة من خطوط ‎age NTX‏ كما هو ‎٠‏ مذكور أعلاه. لابد من إدراك أن ذلك التحليل ‎PCR‏ زمن حقيقي يسمح بقياس مباشر وسريع بدرجة أكبر لمستويات إظهار الجين لأهداف مميزة باستخدام مجموعات مواد أولية ومجس خاصة بجين خاص له أهمية. يجرى 708 كمي ‎TagMan®‏ على ‎Applied Biosystems 7900111 Machine (Life Technologies)‏ والتي تستخدم لقياس إظهار ‎PTK7‏ وجين ‎PTK7‏ في مجموعات خط خلية ‎NTX‏ عديدة مشتقة من مريض ‎٠‏ ومجموعات مقارنة مقابلة. إضافة لذلك؛ يجرى التحليل حسب التحديد في الإرشادات المتوافرة مع ‎TagMan®‏ وباستخدام مجموعات مادة أولية/ مجس ‎PTK7 5 PTK7‏ متوافر تجاريا ‎(Life‏ ‎Technologies)‏ . كما هو مبين في الشكل ‎oF‏ يجرى استفهام عن ‎PCR‏ زمن حقيقي كمي من إظهار الجين باستخدام ‎TPC 0110 ile sana‏ معزولة من خطين ورم ‎NTX‏ قولون ومستقيم واضحة ‎CRS 5 SCRx-CR4) Yo‏ وخط ورم بتنكرياسي 60872083). تنفصل أيضا مجموعات خلية ‎TProg‏ وتحلل لأجل 084-<508. توضح البيانات المذكورة في شكل ؟ أن إظهار جين 7 يزيد عن مقدار ضعفين في ‎TPC‏ القولون والمستقيم؛ عند المقارنة مع خلايا ‎NTG‏ من
YYY
‏في فأر يخضع للمعالجة مع‎ TPC ‏نفس الأورام. يزداد أيضا 71167 عند مقدار ضعفين في‎ ‏إن‎ -(SCRx-PA3 ia) ‏من الأورام البنكرياسية‎ TIC ‏وفي مجموعة الخلية‎ cirinotecan
NTG ‏بالمقارنة مع مقارنات خلية‎ NTX TPC ‏ملاحظة إظهار 21167 العالية في مستحضرات‎ ‏قولون ومستقيم وبنكرياس مشتقة من مريض باستخدام الطريقة المقبولة بشكل‎ NTX ‏من أورام‎ ‏أكثر‎ SOLID3 ‏كامل‎ transcriptome ‏حقيقية الزمن تؤكد بيانات ترتيب‎ SPCR ‏عام‎ © ‏حساسية في المثال السابق. تدعم أيضا هذه النتائج الارتباط الملاحظ بين مستويات إظهار‎ ‏وخلايا خاضعة لتكوين الورم؛ مقاومة للعلاج وتكرار الورم.‎ 7 ‏مثال ؛‎ ‏إظهار 01167 في عينات ورم قولون ومستقيم غير مجزئة‎ ‎١‏ على ضوء الحقيقة بأن مستويات إظهار جين 71167 اتضح أنها مرتفعة في (مجموعات ‎(TPC‏ من أورام قولون ومستقيم عند المقارنة مع خلايا ‎TProg‏ و1170 من نفس الأورام؛ فقد أجريت تجارب لتحديد ما إذا كان الإظهار المرتفع لأجل 71167 يمكن أيضا الكشف عنه في عينات ورم قولون ومستقيم غير مجزثة مقابل نسيج مجاور طبيعي ‎(NAT)‏ تتم القياسات ‎Co‏ ‏أيضا لتحديد. كيفية مقارنة إظهار 01167 في أورام مع المستويات في عينات نسيج طبيعي : ‎| | (NL) ٠ ‏بصفة خاصة أكثر تصمم وتصنع باستخدام تقنيات معروفة في الفن أنظمة معتادة‎ ‏عينة ورم‎ ٠١١ ‏عين تحتوي على‎ YAS ‏بها‎ TumorScan qPCR (Origene Technologies) ‏نسيج طبيعي.‎ EA ‏قولون ومستقيم من مريض عند مراحل مختلفة؛ نسيج مجاور طبيعي؛‎ ‏باستخدام الإجراءات المفصلة في المثال 3 ونفس مجموعات المادة الأولية/ المجس التي تخص‎ ‎٠‏ 01167 يجرى ‎PCR‏ زمن حقيقي كمي ‎TagMan®‏ في عيون الأطباق المعتادة. يبين الشكلان ؛ (أ) ‎(Qe‏ نتائج بيانات الإظهار في هيئة بيانية معادلة مقابل متوسط الإظهار في نسيج قولون ومستقيم طبيعي. بصفة خاصة أكثرء يلخص الشكل 4 () بيانات متولدة باستخدام ‎de VTA‏ نسيج؛ ناتجة من ‎٠١١‏ مريض سرطان قولون ومستقيم عند مراحل متنوعة من المرض ‎(IVI)‏ )10 عينة نسيج منها عبارة عن نسيج طبيعي مجاور ‎(NAT)‏ من ‎YO‏ مرضى قولون ومستقيم) و4؛ نسيج طبيعي من مواضع أخرى (نسيج ‎(NL‏ في الرسم البياني؛ تتمثل البيانات من كل عينة نسيج/ مريض بواسطة نقطة؛ ويتمثل متوسط القيمة الهندسية لكل مجموعة محددة على المحور- في شكل خط. بصورة مشابهة؛ يحتوي شكل ؛ (ب) على
١١6 ‏عينة مريض قولون ومستقيم متطابقة ناتجة من ورم (1) أو نسيج طبيعي‎ YE ‏بيانات من‎ ‏هنا على‎ Lily ‏تتمثل البيانات المرسومة‎ .)4-١( ‏عند مراحل مختلفة من المرض‎ (N) ‏مجاور‎ ‏أساس عينة معينة مع وصلة بين الورم الخاص والنسيج الطبيعي المجاور من مرضى منفردين.‎ ‏إن إظهار 71167 أعلى بوضوح في غالبية الورم المتطابق مقابل نسيج طبيعي مجاور؛ مع‎ (0, YY < ‏م‎ of <n) ‏وصول الإظهار التبياني في المراحل © و؟؛ إلى دلالة إحصائية‎ © ‏يدل كل من الشكلين ؛ 00( و؛(ب) على أنه في كل المراحل الأربعة الممثلة؛ يكون‎ ‏المستوى الظاهر من جين 71167 عاليا في غالبية أورام القولون والمستقيم وفي عينات ورم‎ ‏متطابقة مقابل نسيج طبيعي مجاور. علاوة على ذلك؛ فإن متوسط إظهار جين 71167 في أي‎ ‏مرحلة من سرطان القولون والمستقيم يظهر مرتفعا مقابل أنسجة طبيعية أكثر التي تكون مرتفعة‎ ‏(الشكل 4 (ا)). توضح هذه النتائج أن إظهار 71167 يزداد في سرطان القولون والمستقيم وعند‎ ٠ ‏الاقتران مع الملحوظات أعلاه بأن إظهار 21167 يكون في أعلى مستوى في خلية ورم سرمدية‎ ‏قولون ومستقيم وخلية بادئة لورم بنكرياس» وتقترح أن الاستهداف العلاجي للخلايا الجذعية‎ ‏السرطانية التي تظهر 77167 قد يوفر فائدة علاجية لمرضى السرطان.‎ ‏الإظهار التبياني لأجل 01167 في عينات ورم تمثيلية‎ Yo ‏في عينات ورم مريض سرطان قولون‎ PTKT ‏من أجل التحديد الإضافي لإظهار جين‎ ‏نوع ورم صلب مختلف؛‎ VA ‏من‎ ١ ‏ومستقيم إضافية وعينات ورم من مرضى مشخصين مع‎
TissueScan qPCR (Origene Technologies) ‏باستخدام أنظمة‎ Tagman® qRT-PCR ‏يجرى‎ ‏تصنع بطريقة مضادة حسب الوصف في المثال 4 لكن تتضمن عينات‎ Ally ‏عين‎ YAS ‏بها‎ ‏نوع ورم مختلفين بخلاف عينات قولون ومستقيم فقط. إن نتائج القياسات‎ VA ‏ورم صلبة من‎ Ye ‏ممثلة في الأشكال #(أ) و#(ب) وتبين أن إظهار جين 71167 مرتفع بدرجة ملحوظة في عدد‎ ‏من أنواع الورم الصلبة.‎ ‏في هذا الجانب؛ يبين الشكلان 1)0( و*(ب) المستويات النسبية والمطلقة لإظهار الجين؛‎ ‏على الترتيب؛ من أجل 71167 آدمي في عينات ورم كامل (نقاط رمادية) أو نسيج مجاور‎ ‏نوع ورم صلب مختلف. في‎ VA ‏من‎ ١ ‏نقاط بيضاء) من مرضى مع‎ (NAT) ‏طبيعي مطابق‎ Yo ‏من كل نوع ورم محلل.‎ NAT ‏تتم معادلة البيانات مقابل متوسط إظهار الجين في‎ o(f)o Ja) ‏في الشكل #*(ب)؛ يتحدد الإظهار المطلق من أجل 7 في أنسجة/ أورام عديدة؛ وترسم‎
١ ‏زمن حقيقي‎ PCR ‏المطلوبة للوصول إلى تكبير أسي بواسطة‎ (Ct) ‏البيانات بياني كعدد الدورات‎ ‏مقدارها £0 والتي تمثل آخر دورة تكبير في‎ Ct ‏كمي. تعطى العينات غير المكبرة قيمة‎ ‏البروتوكول التجريبي. تمثل كل نقطة عينة نسيج منفردة؛ ويتمتل متوسط القيمة كخط أسود.‎ ‏المتجمع المعتاد؛ لوحظ أن غالبية المرضى‎ OriGene 1159065680 Array ‏باستخدام‎ ‎saad) ‏المشخصين مع سرطان قولون ومستقيم ومعظم المرضى المشخصين على سرطان‎ 0 ‏الكظرية؛ بطانة الرحم» المريء» الكبد؛ الغدة الدرقية والمثانة لديهم بدرجة ملحوظة مزيد من‎ ‏وذلك يقترح أن 21167 لابد أن يلعب دورا في‎ (NAT ‏إظهار جين 71167 في أورامهم مقابل‎ ‏تكوين الورم و/أو تطور الورم في هذه الأورام. توجد أيضا مجموعات فرعية من مرضى سرطان‎ ‏يتضح أيضا من هذه الدراسات أن‎ (NAT ‏الرثة والبروستاتا مع إظهار 71167 مرتفع مقابل‎ ‏ويلاحظ أعلى إظهار في‎ NAT ‏إظهار جين 711607 متوسط بصفة عامة في معظم عينات‎ ٠ ‏الغدة الكظرية؛ الثدي؛ عنق الرحم والمبيض» البنكرياس؛ الخصية والمثانة. مرة أخرى؛ تقترح‎ ‏هذه البيانات أن إظهار 71167 المرتفع له دلالة؛ وحاسم بدرجة قوية؛ بالنسبة لتكوين ورم أو‎ ‏دوامة ورم في مرضى يعانون من اضطرابات انقسام مفرط منتقاة.‎ 1 ‏مثال‎ oo
PTK7 ‏بناء واظهار مولدات مناعية‎ yo ‏من أجل توليد وتمييز معدلات 01167 معينة طبقا للاختراع الحالي يتم بناء وإظهار شكلين‎ ‏يشترى من‎ (pCMV6-XLA-PTKT «glad ‏مبدئيا فإن ناقل إظهار‎ PTK7 ‏من مولد مناعي‎ ))(( ١ ‏تحته خط في الشكل‎ portion) ‏كامل الطول‎ ORF ‏يتم تأكيد ترتقيب‎ .Inc. «Origene pCDH-EF1-MCS- ‏من ناقل‎ NotI 5 EcoRI ‏داخل الموقعين‎ PCR ‏عندئذ ينسخ فرعيا بواسطة‎
PTK7 protein ‏يظهر‎ lentiviral ‏إن ناقل‎ .(System Biosciences) T2A-GFP lentiviral ‏ا‎ ٠ ‏مما يتيح‎ «GFP ‏ومعلم قابل لانتقاء‎ T2A ribosomal ‏طفرة‎ peptide ‏كامل الطول ملتحم مع‎ ‏هذا لتنبيغ خلايا 2937 أو‎ lentiviral ‏في خلايا منبغة. يستخدم ناقل‎ multicistronic ‏إظهار‎ ‎pCMV6-XL4-PTK7 ‏طبقا للبروتوكولات قياسية. إضافة لذلك» يستخدم‎ BALB/C 3T3 ‏خلايا‎ ‏ساعة من النقل في‎ $A ‏بصورة عابرة على سطح خلايا 2931 بعد‎ 01167 protein ‏لإظهار‎ ‏من خلايا فرط إظهار‎ plasma ‏الخلايا باستخدام عصنصص01760م. تنتج مستحضرات غشاء‎ Ye ‏باستخدام طرد مركزي متباين.‎ 7
١7 ‏في حالات أخرى؛ تحضر مولدات مناعة 21167 قابلة للذوبان وتظهر باستخدام ناقل‎ ‏يحمل شفرة مجال‎ PTK7 cDNA ‏من‎ portion ‏الذي فيه‎ (Lonza AG) pEE12.4 ‏إظهار‎ ‏من «نع1ه:م» وتحمل شفرتها بواسطة الترتيب المشار إليه بواسطة‎ (ECD) ‏السيطرة خارج الخلية‎
ECD ‏أحماض أمينية تحتها خط في الشكل ١(ب). في الحالة الأولى ينسخ فرعيا جزءء‎ ‏ينتج مولد‎ (A ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ 8xHis epitope ‏وقبل علامة‎ IgK ‏إطار بعد ترتيب رئيسي‎ © «CHO-KSV ‏قابل للذوبان بواسطة نقل عابر في خلايا‎ His ‏معلم مع‎ PTK7 ECD ‏مناعي‎ ‏وطرق قياسية‎ Ni-NTA resins ‏المفرز من المادة الطافية من الخلية باستخدام‎ protein ‏وينقى‎ ‏فإن مستحضرات‎ (lu ‏المذكور‎ PTK7-ECD-His ‏«عع018). بالإضافة إلى بناء‎ Inc.) ‏وخلايا العائل الحاملة للجين الموصوفة أعلاه؛ يتولد ويظهر أيضا‎ plasma ‏المذكور‎ ECD ‏من الجزء‎ PCR ‏بناء 26-01127-20. تحث هذه العملية بواسطة تكبير‎ ٠ ‏عالي الدقة‎ KOD Hot Start DNA Polymerase ‏باستخدام‎ («) ١ ‏سابقا في الشكل‎ ‏لها ترتيب‎ PCR ‏إن المادة الأولية الأمامية المستخدمة في تفاعل‎ (EMD Chemicals) ‏(تعريف الترتيب رقم: 4( وتتضمن أيضا‎ GCCATTGTCTTCATCAAGCAGCC :7 ‏فأري/ ترتيب رئيسي لإفراز المنتج في‎ 187 pa 1 ‏وعلتامعم ب‎ 5° HindIII ‏موقع التقييد‎ : ‏المادة الطافية للمزرعة. إن المادة الأولية المعكوسة المستخدمة لتكبير تلك البناءات لها ترتيب‎ ٠5 ‏وتتضمن‎ ( ٠: ‏(تعريف الترتيب رقم‎ CTGGATCATCTTGTAGGGGGGAG :7 ‏آدمي الذي يتحدد‎ 1:02 Fe protein ‏مما يسمح بالنسخ قبل‎ Bgllly 5 Dralll ‏موقع التقييد‎ ‏ذ011.‎ 2.0 Inc.) ‏جين مخلق‎ Jia إن منتجات مكبرة أو منسوخة فرعيا تنقل عندئذ ‎Jab‏ ناقل الإظهار النهائي ‎PEE12.4‏ ‎(Lonza AG) Ye‏ باستخدام مواقع التقييد ‎(EcoRI HindIII‏ ويتم تأكيد الدقة بواسطة ترتيبب ‎.DNA‏ تنقل ‎plasmids‏ بصورة عابرة إما في ‎WDA‏ معلق 0110-8 أو 2937 وتنقى بواسطة إما عمود انجذاب ‎nickel‏ لأجل ‎protein‏ معلم مع ‎His‏ أى ‎Protein A‏ لأجل منتج التحام 16. تنقى المنتجات إضافيا بواسطة تحليل كروماتوجرافي يستثني المقاس باستخدام عمود ‎Superdex200‏ ‎(GE Healthcare)‏ في محلول ملحي مثبت الأس الهيدروجيني ‎«(PBS) phosphate‏ أس ‎YO‏ هيدروجيني ‎VY‏ مع تحديد كمية ‎protein‏ الالتحام النقي باستخدام طريقة ‎Bradford‏ .(Bradford, 1976: PMID 942051) ١ ‏مثال‎
٠
PTK7 ‏توليد أجسام مضادة ضد 21167 باستخدام مولدات مناعة‎ تنتج معدلات 0116-7 في شكل أجسام مضادة فأرية طبقا للدراسات هنا من خلال التلقيح؛ على التوالي» مع خلايا ‎BALB/3T3‏ أو 293 ‎HEK‏ خلال إظهار ‎hPTK7-His ¢hPTK7‏ أو ‎hPTKT-Fe‏ كامل الطول مصنع كالمذكور سابقا في ‎JU‏ السابق. في هذا الخصوص © تحصن ثلاث سلالات لفئران إناث (؟ لكل: ‎(FVB «CD-1 «Balb/e‏ مع مستحضرات المولدات المناعية 71167 المذكورة سابقا. تحصن كل الفئران عن طريق كف القدم مع ‎٠١‏ ‏ميكروجرام من بناء 21167 منتقى أو ‎"٠١7١‏ خلية في كل ‎Alla‏ على شكل مستحلب مع حجم مساوي من ‎TiterMax®‏ أو مادة مساعدة حجر الشب. يستخدم اختبارات إما ‎FACS‏ أو ‎ELISA‏ طور صلب لمسح أمصال فأرية من أجل أجسام ‎٠‏ مضادة ‎IgG‏ فأرية تخص 71167 آدمي. من أجل ‎ELISAs‏ تغطى الأطباق مع ‎PTK7-His‏ ‏عند تركيزات مختلفة تتراوح من ‎١-0١.‏ ميكروجرام/ ملليلتر في ‎PBS‏ طوال الليل. بعد الغسل مع ‎PBS‏ يحتوي على 70,07 (حجم/ حجم) 20 ‎(Tween‏ تعاق العيون مع 77 (وزن/ حجم) ‎BSA‏ في ‎PBS‏ أو 77 ‎FCS‏ في ‎Yoo (PBS‏ ميكرولتر/ عين لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. تحضن تخفيفات المصل الفأري على أطباق مغطاة مع ‎PTK7-His‏ عند 0 ‎١٠‏ ميكرولتر/ عين عند درجة حرارة الغرفة ‎sad‏ ساعة واحدة. تغسل الأطباق وعندئذ تحضن مع ‎٠‏ ميكرولتر/ عين مضاد 190 فأري من ماعز معلم مع ‎HRP‏ مخفف بنسبة ‎٠٠٠٠١١‏ في ‎BSA-PBS /Y‏ أو ‎FCS ZY‏ في ‎PBS‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. تغسل الأطباق ويضاف ‎٠٠١‏ ميكرولتر/ عين من محلول مادة خاضعة ‎(Thermo Scientific TMB‏ (34028 لمدة ‎V0‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. أخيرا يضاف حجم متساوي من +1190 ‎Y‏ ‎٠‏ جزيئي جرامي لوقف تطور المادة الخاضعة وتتحلل بواسطة مقياس ضوئي طيفي عند ‎OD‏ 0 كما يشار إليه تختبر أيضا أمصال فأرية لأجل أجسام مضادة ضد ‎PTK7‏ بواسطة ‎FACS‏ ‏مقابل خلايا وفيرة خلال إظهار 71167 آدمي مشترك التنبيغ مع ‎(GFP‏ باختصار يتم تنبيغ ‎"٠١7١‏ خلية 313/3113 لكل عين مع ‎PTK7 5 GFP‏ آدمي وتحضن لمدة ‎Ye‏ دقيقة مع ‎٠٠١ YO‏ ميكرولتر مصل فأري مخفف بنسبة ‎٠٠١:١‏ في 77/088 ‎(FCS‏ تغسل الخلايا مع 208 وعندئذ تحضن مع ‎٠٠‏ ميكرولتر لكل عينة مضاد 180 فأري لماعز معلم مع ‎DyeLight 649‏ يخص جزء ‎Fe‏ يخفف تانويا بنسبة ‎7٠0:١‏ في 77/088 ‎FCS‏ بعد
YYA
77/085 ‏ويعاد تعليقها في‎ FCS 77/088 ‏دقيقة تغسل الخلايا مرتين مع‎ ١١ ‏التحضين لمدة‎
FACS ‏وتحلل بواسطة‎ DAPI ‏مع‎ FCS تقتل ‎ghd‏ محصنة موجبة الأمصال ويتم استتصال عقد ليمفاوية مستنزفة (مأبضية وأربية؛ إذا تضخمت) وتستخدم مثل مصدر لخلايا إنتاج جسم مضاد. في 0 معلق خلية مفرد من ‎XTY0) 8 LDA‏ )1 خلية) تلتحم مع خلايا ورم ناعي لا تفرز ‎(ATCC #CRL-1580) P3x63Ag8.653‏ عند نسبة ‎١:١‏ بواسطة الالتحام الكهربي. يجرى التحام كهربي لخلية باستخدام ‎BTX Hybrimmune System‏ أو 1 (كلاهما ‎Lauda (BTX Harvard Apparatus‏ لإرشادات الصانعين. بعد إجراء الالتحام الكهربي يعاد تعليق الخلايا في وسط انثقاء ورم هجين ‎peda‏ مع وسط ‎(Sigma #A9666) Azaserine‏ ‎Jad (Cellgro cat#15-017-CM) DMEM) ٠‏ 716 مصل ‎«(Hyclone) Fetal Clone I‏ ‎١ sodium pyruvate «(Roche Applied Sciences) BM Condimed TN‏ مللي جزيثي جرامي؛ ‎L-glutamine‏ § مللي جزيئي ‎٠٠١ ¢ aba‏ وحدة دولية ‎(Penicillin-Streptomycin‏ ‎٠ 2-mercaptoethanol‏ © ميك روجزيئي جرامي ؛ ‎٠٠١ hypoxanthine s‏ ميكروجزيئي جرامي). في التحام أول تزرع الخلايا عند 7< 1[ ‎Cae‏ في ‎GL‏ دقيقة العيار مسطحة القاع؛ يليها ا ‎Vo‏ تحضين لمدة أسبوعين في وسط ‎HAT‏ انتقائي ‎(Sigma, CRL P-7185)‏ في التحام ثان تزرع الخلايا بعد الالتحام في أربع قوارير 7225 عند 0 ملليلتر وسط انتقاء لكل قارورة. توضع عندئذ القوارير في حضانة رطبة عند 7١"مئوية‏ تشمل 75 ‎CO,‏ و7495 هواء لمدة 7-7 أيام. بعد النمو فإن المكتبة المشتملة على الخلايا من الالتحام الثاني في 12255 ترتب باستخدام جهاز ترتيب خلية ‎FACSAria I‏ وتزرع عند خلية واحدة لكل عين في أطباق بقاع على شكل ‎٠‏ حرف لآ لها 95 عين ‎Falcon‏ (كلاهما ‎(BD Biosciences‏ تجمد أي خلايا مكتبة ورم هجين غير مستخدمة متبقية لأجل الاختبار في المستقبل عند اللزوم. عندئذ تنمو الأورام الهجينة المنتقاة في ‎٠٠١‏ ميكرولتر من وسط مزرعة يشمل 719 مصل ‎«(Hyclone) Fetal Clone I‏ ‎Ak ١ sodium pyruvate «(Roche Applied Sciences) BM-Condimed IY‏ > جرامي» ‎L-glutamine‏ ؛ مللي جزيئي جرامي»؛ ‎٠٠١‏ وحدة دولية ‎«Penicillin-Streptomycin‏ ‎ins See ٠ 2-mercaptocthanol Yo‏ جرامي»؛ 5 ‎٠٠١ hypoxanthine‏ ميك روجزيئي جرامي). بعد ‎١5-٠١‏ يوم من النمو لكلا اللحامين في أطباق لها 97 عين تقيم المواد الطافية من كل عين لأجل أجسام مضادة نشطة لأجل 71167 فأري باستخدام اختبار ‎ELISA‏ أو ‎FACS‏
١١ ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ١ ‏مع‎ (VWR, 610744) ‏باختصارء تغطى أطباق لها 37 عين‎
Aged ‏طوال الليل عند‎ sodium carbonate ‏فأري في مثبت أس هيدروجيني‎ PTK7-His ‏لمدة واحدة عند 7١7"مئوية وتستخدم فورا أو تحفظ‎ FCS-PBS 77 ‏تغسل الأطباق وتعاق مع‎ ‏عند ؛"مئوية. تحضن المواد الطافية لورم هجين غير مخففة على الأطباق لمدة ساعة واحدة‎
HRP ‏فأري لماعز معلم مع‎ [9G alias ‏مع‎ pani ‏عند درجة حرارة الغرفة. تغسل الأطباق‎ © ‏لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. بعد‎ BSA-PBS 7١ ‏في‎ ٠٠٠٠١١:1 ‏مخفف بنسبة‎ .0 450 ‏التحضين مع محلول مادة خاضعة كما هو موصوف أعلاه يتم قراءة الأطباق عند‎ ‏مناعية فأرية لأجل‎ globulins ‏يتم أيضا مسح عيون ورم هجين موجب النمو والتي تفرز‎ ‏يشبه ذلك الموصوف أعلاه. باختصار فإن‎ FACS ‏خصوصية 01167 آدمي باستخدام اختبار‎ ‏؟‎ ١ ‏آدمي وتحضن لمدة‎ PTK7 5 GFP ‏إل خلية 313/8113 لكل عين يتم تنبيغها مع‎
FCS 71/085 ‏طافية لورم هجين. تغسل الخلايا مع‎ sale ‏ميكرولتر‎ ٠٠١-7٠ ‏دقيقة مع‎ ‏فأري لماعز معلم مع‎ IgG ‏ميكرولتر لكل عينة مضاد‎ ٠٠ ‏مرتين وعندئذ تحضن مع‎ © ‏بعد‎ FCS 77/038 ‏بخفف ثانويا بنسبة 700:1 في‎ Fe ‏يخص جزء‎ Dyelight 649 7/7/8858 ‏ويعاد تعليقها في‎ FCS 77/0138 ‏مع‎ (ize WAN ‏التحضين لمدة 10 دقيقة نخ ل‎ ‏لأورام‎ ١ ‏للالتحام الثاني فإن‎ FACS ‏بواسطة‎ Hang (Life Technologies) DAPI pe FCS ٠ 08-10 ‏الهجينة النسخية التي تخص 71167 الناتجة تفرد وتحفظ بالتبريد في وسط تجميد‎ ‏ساثل.‎ nitrogen ‏وتخزن في‎ (Biolife Solutions) ‏للالتحام الأول يجرى نسخ فرعي على عيون موجبة المولد المضاد منثقاة باستخدام زراعة‎ ‏تخفيف محددة. تفحص الأطباق بصريا لوجود نمو مستعمرة مفردة وعندئذ تمسح المواد الطافية‎ ‏كالموصوف‎ FACS ‏مضاد وتشكيل‎ alge ‏تخص‎ ELISAs ‏من عيون المستعمرة المفردة بواسطة‎ Yo 7٠١ (FBS 78+) ‏أعلاه. تفرد التجمعات النسخية الناتجة وتحفظ بالتبريد في وسط تجميد‎ ‏سائل.‎ nitrogen ‏وتخزن في‎ (DMSO ‏للالتحام الأول فإن أورام هجينة تفرز 01167 من عيون موجبة (؛ مشاهدات 01405 عند‎ ‏دقيقة >5ل7,٠) تنتفى لأجل تمييز إضافي.‎ ٠ ‏طبق )£104 عين) ينتج عنه حوالي 715 فعالية نسخ مع‎ EA ‏إن التحام ثاني يبذر فوق‎ Yo
Lelie ‏مئات المشاهدات. إن نسخ منتقاة توفر رزم عديدة من أجسام مضادة فأرية تكون خاصة‎ ‏بعضها أيضا يتفاعل بصورة متداخلة مع 71167 فأري.‎ «eal 71167 ‏لأجل‎
YY.
A ‏مثال‎ ‎PTK7 ‏الترتيب واكساب السمة الآدمية لمواد ضابطة‎ ‏الترتيب:‎ 8(a) ‏اعتمادا على ما سبق؛ ينتقى عدد من الأجسام المضادة أحادية النسخ المحددة التي ترتبط‎ ‏مع آدمي ثابت وأجسام مضادة تتفاعل عكسيا مع 71167 فأري له انجذاب عالي بوضوح من‎ © ‏أجل ترتيب وتحليل إضافي. كما يتضح بطريقة مجدولة في الأشكال ١(ا) و7(ب)؛ فإن تحليل‎
J) ‏ومناطق مغايرة للسلسلة الثقيلة‎ ))(١ ‏ترتيب مناطق مغايرة للسلسلة الخفيفة (شكل‎ ‏7(ب)) من أجسام مضادة أحادية النسخ منتقاة ناشئة في مثال 7 تؤكد على أن العديد له‎ ‏جديدة. يلاحظ تعيين مناطق التحديد‎ VDJ ‏مناطق تحديد تكميلية جديدة ويظهر أيضا ترتيبات‎ ‏وآخرون؛ أعلاه.‎ Chothia ‏التكميلية المذكورة في الأشكال ١(أ) و1(ب) لكل‎ ٠ ‏منطقة متغايرة‎ 7١ ‏ترتيبات حمض أميني المجاورة من‎ )(١ ‏تحديد أكثر؛ يصور شكل‎ mY ‏(تعريف الترتيب أرقام:‎ PTT ‏لسلسلة خفيفة فأرية جديدة من أجسام مضادة ضد‎ ‏أرقام زوجية) وأربع مناطق مغايرة لسلسلة خفيفة مكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب أرقام:‎ ‏لفأر. بالتماثل» يصور شكل 1(ب)‎ Alte on LOL . ‏أرقام زوجية) مشتقة من‎ (TASTY ‏م‎ ‏منطقة متغايرة لسلسلة ثفيلة فأرية جديدة (تعريف‎ YY ‏ترتيبات حمض أميني المجاورة من‎ ٠ ‏أرقام مفردة) من نفس الأجسام المضادة ضد 71167 وأربع مناطق‎ 11-7١ ‏الترتيب أرقام:‎ ‏متغايرة لسلسلة ثقيلة مكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب أرقام: 14-7 أرقام مفردة) من‎ ‏نفس الأجسام المضادة الفأرية مثل التي توفر سلاسل خفيفة مكتسبة السمة الآدمية. بذلك.‎ ‏جسم مضاد ضد‎ YY ‏إضافيا توفر الأشكال ١(أ) و7(ب) الترتيبات المذكورة في الحاشية من‎ «SC6.4 06.3 «SC6.50.1 <SC6.4.1 «SC6.10.2 65 ‏(تسمى:‎ ol PTK7 Y- 80623 80621 80620 «SC6.19 «SC6.15 «SC6.14 «SC6.13 «SC6.7 6 ‏وأربعة أجسام مضادة مكتسبة‎ SC6.59) 5 SC6.58 «SC6.41 <SC6.29 «SC6.26 «SC6.24 ‏يلاحظ أن المعاني‎ (hSC6.58 5 hSCE.41 806.24 806.23 ‏السمة الآدمية (تسمى:‎ ‏تعكس فقط تسمية شاذة وتشتمل المواد الضابطة فعليا على جسمين‎ SC6.4 5 SC6.4.1 ‏مضادين منفصلين لهما ترتيبات مناطق متغايرة لسلسلة ثقيلة وسلسلة خفيفة جديدة.‎ ٠ ‏من أجل التطبيق الحالي تكون أرقام تعريف الترتيب لكل جسم مضاد خاص متتابعة. بذلك‎ ‏؟ لأجل المناطق المتغايرة ذات‎ ١و‎ Ye ‏على تعريف الترتيب رقم:‎ mAb 506.2.35 ‏يشتمل‎
١١ ‏السلسلة الخفيفة والثقيلة على التوالي. في هذه الحالة يشتمل 506.10.2 على تعريف الترتيب‎ ‏وهكذا. علاوة على‎ (Yo 5 YE ‏يشتمل 5064.1 على تعريف الترتيب رقم:‎ YT ‏و‎ YY ‏رقم:‎ ‏ذلك؛ توجد ترتيبات حمض نووي المقابلة لكل ترتيب حمض أميني بالجسم المضاد في شكل‎ ‏و7(ب) في التطبيق الحالي كقائمة ترتيب مرفقة معه. تشتمل ترتيبات حمض نووي‎ (01 ‏من ترتيب حمض أميني‎ ٠٠١ ‏الموجودة على أرقام تعريف الترتيب والتي تكون أكبر بمقدار‎ ٠ ‏المقابل (سلسلة ثقيلة أو خفيفة). بذلك؛ تشتمل ترتيبات حمض نووي التي تشفر ترتيبات حمض‎ tad) ‏(بمعنى» تعريف الترتيب‎ mAb 506.2.35 ‏أميني بمنطقة مغايرة ثقيلة وخفيفة السلسلة من‎ ‏ترقم بالتماثل ترتيبات حمض نووي أخرى‎ NYY ٠7١ ‏رقم:‎ Quill ‏على تعريف‎ (YY ٠ ‏للجسم المضاد؛ متضمنة تلك التي تشفر بناءات مكتسبة السمة الآدمية. أيضا نظرا للتسمية‎
‎٠‏ الشاذة.
‏كخطوة أولى في ترتيب المواد الضابطة التمثيلية تحلل خلايا الورم الهجين المنتقاة في عامل كاشف ‎(Life Technologies) Trizol”‏ لتحضير ‎RNA‏ نظرا لهذاء يعاد تعليق ما بين ‎٠‏ و١٠‏ خلية في ‎١‏ ملليلتر ‎Trizol‏ ويرج بقوة بعد إضافة ‎٠٠١‏ ميكرواتر من ‎Male chloroform‏ تطرد العينات مركزيا عند ؛؟*مئوية لمدة ‎٠١‏ دقائق وينقل الطور ‎shall‏ ‎٠‏ إلى أنبوب ‎microfuge‏ عند إضافة حجم متساوي من ‎isopropanol‏ ترج الأنابيب بقوة مرة ثانية ويسمح لها بالتحضين عند درجة حرارة الغرفة لمدة ‎٠١‏ دقائق قبل طردها مركزيا عند ؛“مثوية لمدة ‎٠١‏ دقائق. تغسل الكريات الناتجة ‎RNA‏ مرة مع ‎١‏ ملليلتر من 790 ‎ethanol‏ ‏وتجفف باختصار عند درجة حرارة الغرفة قبل إعادة تعليقها في ‎٠‏ ميكرولتر من ‎ele‏ معالج مع ‎.DEPC‏ تتحدد جودة مستحضرات ‎RNA‏ بواسطة تجزثة ؟ ميكرولتر في هلام ‎agarose‏
‎2١ ٠‏ قبل تجزينها عند 0٠8*مئوية‏ حتى الاستخدام. يتم تكبير المنطقة المغايرة للسلسلة الثقيلة ‎Ig‏ من كل ورم هجين باستخدام خليط ‎sale‏ أولية '5 مشتمل على ‎sale YY‏ أولية لترتيب أساسي خاص ‎Old‏ مصممة لتستهدف ذخائر ‎ALIS‏ ‏1 فأريء بالاتحاد مع مادة أولية ‎Cy‏ لفأر '3 خاصة لكل الأنواع المماثلة ع1 للفأر. يتم ترتيب ‎bp £0»‏ جزء ‎PCR‏ من 1711 من كل الأطراف باستخدام نفس المواد الأولية ‎PCR‏ بالتماثل ‎Yo‏ يستخدم ‎Yo‏ خلط ‎sale‏ أولية لترتيب أساسي ‎SVE‏ محدد لتكبير كل العائلات الفأرية ‎Vk‏ ‏المتحدة مع مادة أولية معكوسة فردية تخص المنطقة الثابتة ‎kappa‏ للفأر لتكبير وترتيب سلسلة
خفيفة ‎kappa‏ يتم تكبير النسخ ‎Vis Vi‏ من ‎٠٠١‏ نانوجرام ملل كلي باستخدام تفاعل سلسلة ‎polymerase‏ لنسخة معكوسة ‎(RT-PCR)‏ ‏يجرى إجمالي ‎A‏ تفاعلات ‎RT-PCR‏ لأجل كل ورم هجين: ؛ لأجل سلسلة خفيفة ‎“١7‏ ‏38 وأربعة ‎JaY‏ سلسلة ثقيلة ‎(v1) V gamma‏ تستخدم مجمرعة ‎QIAGEN One Step‏ ‎RT-PCR ©‏ لأجل التكبير؛ ‎(Qiagen, Inc.)‏ توفر هذه المجموعة خليط من ‎Sensiscript‏ ‎(HotStarTaq DNA Polymerase «Omniscript Reverse Transcriptases‏ خليط ‎«dNTP‏ ‏مثبت أس هيدروجيني ومحلول 0؛ مادة إضافة جديدة تمكن من تكبير فعال لنماذج معايرة ‎Dla) "ania‏ غنية مع ‎(GC‏ مباشرة يتم ترتيب المنتجات ‎PCR‏ المستخلصة باستخدام مواد أولية لمنطقة ‎١‏ خاصة. يتم تحليل ترتيبات ‎nucleotide‏ باستخدام ‎IMGT‏ لتحديد أعضاء جين ‎٠‏ 7 2و1 لخط جرثومة مع تماثل أعلى للترتيب. تقارن الترتيبات المشتقة مع ترتيبات ‎DNA‏ ‏لخط جرثومة معروفة للمناطق ‎V‏ -18 و-1 باستخدام 17-3512 ‎Retter)‏ وآخرون؛ أعلاه) بمحاذاة الجينات ‎Vs Vi‏ مع بيانات القاعدة لخط جرثومة فأرية. تحضر خلطات التفاعل المتضمنة ؟ ميكرولتر ‎(RNA‏ 0+ من ‎٠٠١‏ ميكروجزيئي جرامي 3 من مواد أولية إما سلسلة ثقيلة أو ساسله 2 ‎dpe‏ © ميكرولتر من مثبت أس هيدروجيني : ‎١ Sx RT-PCR ٠‏ ميكرولتر ‎١ «dNTPs‏ ميكرولتر خلطة ‎enzyme‏ تحتوي على ‎transcriptase‏ ‎polymerase 5 Sc‏ ذلا ‎١,4‏ ميكرولتر من مثبط ‎(Promega RNasin ribonuclease‏ ‎BioSystems.)‏ يحتوي خليط التفاعل على كل العوامل الكاشفة المطلوبة لكل من النسخ العكسي ‎PCR‏ إن برنامج أداة الدورة الحرارية عبارة عن خطوة درجة حرارة الغرفة عند 4441000 لمدة ‎٠‏ دقيقة 15"مئوية لمدة ‎١١‏ دقيقة يليها ‎Te‏ دورة من )500090 لمدة ‎٠١‏ ‎Ye.‏ ثانيةء 446 *مئوية لمدة ‎٠‏ ؟ ‎Al‏ "لا*"مثوية لمدة دقيقة واحدة). يجرى عندئذ التحضين النهائي عند 77ا*مثوية لمدة ‎٠١‏ دقائق. لتحضير منتجات ‎PCR‏ من أجل ترتيب ‎DNA‏ مباشرة؛ فإنها تنقى باستخدام ‎PCR Purification Kit‏ "لامعدومروه طبقا لبروتوكول الصانع. ينفصل ‎DNA‏ من عمود التدويم باستخدام ماء معقم ‎٠‏ © ميكرولتر وعندئذ يتم الترتيب مباشرة من كل من الشريطين. مرة ‎vo‏ أخرى؛ ‎Jas‏ ترتيبات ‎DNA‏ الناتجة باستخدام ‎VBASE2‏ (بيانات غير موضحة) لتوفير الترتيبات المذكورة في الحاشية المذكورة في الأشكال ١ل(أ)‏ و71(ب). بوجه خاص أكثر؛ حسب
١77 ‏الوصف أعلاه؛ تذكر في الأشكال 1ل) و1(ب) ترتيبات حمض أميني المذكورة في الحاشية‎ ‏منطقة متغايرة ثقيلة وخفيفة السلسلة لجسم مضاد ضد 71167 لفأر.‎ YY ‏من‎ ‏إكساب السمة الآدمية‎ (A ‏باستخدام‎ ١7 ‏يتم إكساب السمة الآدمية لأربعة من الأجسام المضادة الفأرية من المثال‎ ‏تنتقى إطارات آدمية للسلاسل الثقيلة والخفيفة على‎ (CDR) ‏تطعيم منطقة محددة التكملة‎ © ‏أساس تشابه الترتيب والبناء بالنسبة لجينات خط جرثومة آدمي وظيفية. في هذا الجانب يتم‎
Cle Lil) ‏فأرية قانونية مع بناءات مرشحة آدمية لها نفس‎ CDR ‏تقييم تشابه البناء بمقارنة بناء‎ . ‏(أعلاه)‎ Chothia et al. ‏القانونية حسب الوصف في‎ 806.23 ‏بصفة خاصة أكثر يتم إكساب السمة الآدمية لأجسام مضادة فأرية‎ ‏بمساعدة حاسوب‎ CDR ‏باستخدام طريقة تطعيم‎ SC6.58 5 80641 <SC6.24 ٠ ‏وتقنيات معالجة هندسية جزيئية قياسية لتوفير مواد‎ (Abysis Database, UCL Business Plc.) ‏تنتقى مناطق الإطار الآدمية للمناطق‎ .hSC6.58 5 1806.41 5806.24 ¢hSC6.23 ‏ضابطة‎ ‏المتغيرة على أساس أعلى تشابه ترتيب لها مع ترتيب الإطار الفأري وبناءه القانوني. لأغراض‎
Kabat ail ‏يتم طبقا‎ CDR ‏التحليل فإن إنتساب أحماض أمينية إلى كل من مجالات سيطرة‎ ‏ورفاقه. تحضر متغيرات جسم مضاد مكتسبة السمة الآدمية كثيرة من أجل توليد جسم مضاد‎ ٠ ‏مكتسب السمة الآدمية الأمثل مع احتفاظ الأجسام المضادة المكتسبة السمة الآدمية بصفة‎ ‏مضاد من الورم الهجين الفأري المصاحب لمناطق الإطار‎ alge ‏بمناطق و0018- تربط‎ dale ‏أن 56623 586624 806.41 وواهده 5806.58 مكتسبة السمة الآدمية‎ aay ‏الآدمية.‎ ‏مرتبطة مع مولد مضاد 01167 بانجذاب مشابه لأجزائها المضادة الفأرية حسب القياس‎
Biacore ‏باستخدام نظام‎ ٠٠ ‏تجرى إجراءات الهندسة الجزيئثية باستخدام تقنيات يدركها الفن. عند‎ ‏الكلي من الأورام الهجينة طبقا لبروتوكول الصانع‎ mRNA ‏هذه النقطة يستخلص‎ ‏تستخدم خلطة مادة أولية‎ ٠. (Trizol® Plus RNA Purification System, Life Technologies) ‏آدمية‎ Cyl ‏أساسية 0 خاصة بالترتيب؛ مصممة لتكبير كل ورم هجين في اتحاد مع مادة أولية‎ ‏مكتسب السمة الآأدمية. بالتماثل؛ يستخدم‎ alias ‏لتكبير ونسخ المناطق المتغايرة لكل جسم‎ © vo ‏المتحدة مع مادة أولية‎ VE ‏مصمم تحديدا لتكبير كل المناطق المتغايرة‎ 5' Vk ‏ترتيب طليعي‎ ‏تنسخ‎ kappa ‏آدمية لتكبير ونسخ السلسلة الخفيفة‎ kappa ‏معكوسة أولية خاصة بمنطقة ثابتة‎
١ ‏مكتسب‎ mAb ‏وتعمل كعلامة إسناد لكل‎ kappa [gammal ‏الأجزاء المكبرة كسلاسل آدمية‎ ‏السمة الأدمية.‎ ‏نحصل على بيانات تخص قطع جين 7 و1‎ cnucleotide ‏من معلومات ترتيب‎ ‏اعتمادا على‎ .506.58 mAbs 5 806.41 5066.24 ‏للسلاسل الثقيلة والخفيفة من 8066.23؛‎ : ‏بيانات الترتيب تم تصميم مجموعات مادة أولية جديدة تخص الترتيب الطليعي للسلسلة‎ © ‏من أجسام مضادة من أجل نسخ الجسم المضاد أحادي النسخ المخلق. عقب‎ Vis Ig Vi ‏فأري. تحددت جينات السلسلة‎ Tg ‏ذلك؛ تصف ترتيبات [-(7-00 مع ترتيبات خط جرثومة‎ ‏و1113. تحددت جينات السلسلة‎ 0872.3 )0( «VH36096 (V) ‏الثقيلة من 5066.23 على أنها‎ ‏و1114. تحددت جينات السلسلة‎ 0572.7 )0( «VHISS8 (V) ‏الثقيلة من 806.24 على أنها‎ ‏التقيلة من 80641 على أنها (7) 10117144 (0) 017116.1 و112. تحددت جينات‎ ٠ ‏و1134. إن كل السلاسل‎ DFL16.1 )0( (IGHV4-1 (V) ‏السلسلة الثقيلة 506.58 على أنها‎ ‏تحددت جينات السلاسل الخفيفة على أنها‎ JK ‏الخفيفة الأربعة كانت من الصنف‎ ‏و1161 من‎ [GKV3-5 ‏و1165 من أجل جسم مضاد أحادي النسخ 806.23؛‎ IGKV14-111 ‏وترتقيب خط جرثومة 1164 من أجل ب‎ 101617 557 SUF 20 ‏أجل جسم مضاد أحادي النسخ‎ - ‏وترتيبات خط جرثومة 1164 من أجل‎ IGKV17-121 5 806.41 ‏جسم مضاد أحادي النسخ‎ ٠ ‏مباشرة أدناه.‎ ١ ‏إن هذه النتائج ملخصة في جدول‎ .506.58 kappa ‏سلسلة خفيفة‎ ١ ‏جدول‎ ‏تصطف ترتيبات السلسلة الثقيلة والخفيفة الناتجة من كل النسخ الأربعة مع ترتيبات المنطقة‎ ‏المتغيرة الآدمية الوظيفية وتتم مراجعتها من أجل التشابه والبناء القانوني. إن نتائج تحليل‎ ‏والخفيفة مبينة أدناه في جدول ؟ و7 على الترتيب.‎ ALE) ‏السلسلة‎ ٠ "١ ‏جدول‎ ‎SEER] en ِ wl JH ‏ادمى‎ DH | ‏ادمى‎ VH mAb ‏خط جرثومة أدمي ترتيب فأري‎ | : ©
١١٠
AN 91 TH4 IGHD5-5 | VH2-5 | hSC6.23 ‏جدول ؟‎ ‏التشابه7 إلى ترتيب خط | التشابه” إلى ترتيب‎ ‎wes‏ م ا ‎Tw‏ 0 ااا لأن عمليات انتقاء خط الجرثومة وعمليات تطعيم ‎CDR‏ يبدو أنها توفر أجسام مضادة ‎Abs‏ تحتفظ بصفة ‎dale‏ بالسمات المميزة لارتباطهاء فإن هناك حاجة ضئيلة بدرجة واضحة ‏ض ‎Jay‏ متخلفات فأرية في معظم البناءات. 0 كما هو مشار أعلاه؛ توضح الأشكال ‎(D1‏ و7(ب) ترتيبات حمض أميني لسلاسل مناطق متغايرة ثقيلة مكتسبة السمة الآدمية وسلاسل خفيفة ‎kappa‏ لأجل كل الأجسام المضادة الأربعة (تعريف الترتيب رقم: 19-77) وتذكر ترتيبات حمض نووي المقابلة (تعريف الترتيب رقم: ‎)١19-7‏ في قائمة الترتيب الملحقة. ‏بصفة خاصة أكثر فإن ترتيبات حمض أميني وترتيبات حمض نووي المقابلة لسلسة خفيفة ‎٠‏ 5806.23 مكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترثيب رقم: ‎TY‏ و167) والسلسلة الثقيلة المكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب رقم: ‎(VIF, TY‏ مبينة في الأشكال 1(ا) و71(ب) وفي قائمة الترتيب. بصورة مشابهة؛ فإن ترتيبات حمض أميني وترتيبات حمض نووي المقابلة للسلسة الخفيفة 506.24 مكتسبة السمة الآدمية (تعريف ‎ui Al‏ رقم: 14 و765١‏ )؛ والسلسلة الثقيلة المكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب رقم: 10 1105( مبينة في نفس الشكل. هناك تجسيد ‎vo‏ آخر للاختراع موضح بواسطة ترتيبات حمض أميني وترتيبات حمض نووي المقابلة من السلسة الخفيفة 506.41 المكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب رقم: 17 و717١‏ )؛ والسلسلة الثقيلة المكتسبة السمة الآدمية (تعريف الترتيب رقم: ‎TV‏ و117). في تجسيد آخر أيضا توضح
Yr ‏ترتيبات حمض أميني وترتيبات حمض نووي المقابلة من السلسة الخفيفة 506.58 المكتسبة‎ ‏والسلسلة الثقيلة المكتسبة السمة الآدمية‎ (VTA 5 TA ‏السمة الآدمية (تعريف الترتيب رقم:‎ ‏(تعريف الترتيب رقم: 19 1195( كما هو موضح في الأمثلة أدناه فإن كل من الأجسام‎ ‏مؤثرة طبقا‎ PTK7 ‏المضادة مكتسبة السمة الآدمية سالفة الذكر تقوم بوظيفة مادة ضابطة‎ ‏للتعاليم هنا.‎ oo ‏على أية حال تظهر المواد الضابطة المعلنة وتنعزل بتقنيات يدركها الفن. عند‎ ‏المتغيرة المصنعة المكتسبة السمة الآدمية‎ DNA ‏هذه النقطة تنسخ أجزاء‎ ‏آدمي.‎ IgGl ‏لكل من السلاسل الثقيلة في ناقل إظهار‎ (Integrated DNA Technologies) ‏تنسخ أجزاء السلسلة الخفيفة المتغيرة في ناقل إظهار 6-002 الآدمي. تظهر الأجسام‎
CHO ‏المضادة بالاستقبال المشترك لحامل الجين من العائل للسلسلة الثقيلة والخفيفة في خلايا‎ ٠ ‏جين‎ PCR ‏بصفة خاصة أكثر؛ بالنسبة لإنتاج الجسم المضاد يجرى نسخ اتجاهي لمنتجات‎ ‏آدمي. إن كل المواد الأولية‎ Tg ‏متغير فأري ومكتسب السمة الآدمية في نواقل إظهار‎ dgH ‏لأجل‎ Xhol 5 Agel) ‏الخاصة بجين 18 تتضمن أماكن تحديد‎ PCRs ‏المستخدمة في‎ © IgGl ‏دح باسح المباشر في نواقل إظهار تحتوي على‎ 5 o(igK ‏لأجل‎ Dralll 5 Xmal ‏مع مجموعة تنقية‎ PCR ‏على الترتيب. بإيجاز؛ تنقى منتجات‎ JGK ‏الآدمي؛ ومناطق تابتة‎ Vo
Dralll 5 Xmal «Xho (IgH) ‏و‎ Agel ‏ذلك هضم مع‎ Lis (Qiagen, Inc.) Qiaquick PCR ‏المهضومة قبل الربط في نواقل الإظهار.‎ PCR ‏على الترتيب. تنقى منتجات‎ (IgK) 74118 Ligase ‏وحدة‎ ٠٠١ ‏ميكرولتر مع‎ ٠١ ‏تجرى تفاعلات الربط في حجم كلي‎ ‏الخاص بالجين المهيضوم‎ PCR ‏ميكرولتر من منتج‎ V,0 «(New England Biolabs) ‏مؤهلة‎ 8. coli . 011108 ‏نانوجرام 0118 ناقل خطي. تتحول بكتريا‎ Yo, ‏والنقي‎ ٠ ‏من خلال صدمة حرارية عند 7؛*مئوية مع ؟ ميكرولتر من منتج‎ (Life Technologies)
Agel- ‏ميكروجرام/ ملليلتر). يدخل عندئذ الجزء‎ ٠٠١( ampicillin ‏الربط وتزرع فوق أطباق‎ ‏بينما‎ pEE6.4HulgGl (Lonza AG) ‏في نفس أماكن ناقل إظهار‎ Vig ‏من المنطقة‎ EcoRI ‏من ناقل الإظهار المقابل‎ Xmal-Dralll ‏الداخل المصنع في أماكن‎ Xmal-Dralll Vy ‏ينسخ‎ ‎.pEE12.4Hu-Kappa
HEK 293 ‏تتولد خلايا منتجة أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية باستقبال خلايا‎ ٍ ‏الملائمة باستخدام 29378000. في هذا الجانب‎ plasmids ‏لحامل الجين من العائل مع‎
ا ينقى ‎plasmid DNA‏ مع أعمدة ‎(Qiagen) QIAprep Spin‏ تزرع خلايا كلية جنين آدمي ‎(ATCC No CRL-11268) (HEK) 293T‏ في أطباق ‎٠٠‏ مم ‎(Falcon, Becton‏ ‎Dickinson)‏ تحت شروط قياسية في وسط ‎Eagle‏ معدل ‎(DMEM) Dulbecco‏ مدعم مع ‎FCS ٠‏ خامد النشاط بالحرارة» ‎٠٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر ‎٠٠١ streptomycin‏ وحدة/ © ملليلتر © ‎iS) penicillin‏ من ‎.(Life Technologies‏ بالنسبة لعمليات الاستقبال المؤقت لحامل الجين من العائل تنمو الخلايا حتى تلبد 77860. تضاف كميات متساوية من ‎IgH‏ و0118 ناقل سلسلة ‎[gL‏ مقابل ‎Y,0)‏ 1 ميكروجرام من كل ‎DNA‏ ناقل) إلى ‎٠,5‏ ملليلتر من ‎Opti-MEM‏ يخلط مع ‎٠٠‏ ميكرولتر من عامل كاشف استقبال حامل الجين من العاثئل 293 11516 في ‎٠,9‏ ملليلتر ‎Opti-MEM‏ تحضن الخلطة ‎٠‏ لمدة ‎٠‏ ؟ دقيقة عند درجة ‎Bla‏ الغرفة وتتوزع بالتساوي على طبق مزرعة. تجمع المواد الطافية ¥ أيام بعد استقبال حامل الجين من العائل؛ تستبدل بواسطة ‎7٠‏ ملليلتر من ‎DMEM‏ حديث التحضير مدعم مع ‎FBS 7٠١0‏ وتجمع مرة ثانية عند اليوم +7 بعد استقبال حامل الجين من العائل. تنقى المواد الطافية من المزرعة من بقايا الخلية بالطرد المركزي عند ‎JE XA‏ نوعي لمدة ‎٠١‏ دقائق وتخزن عند ؟"مئوية. تنقى الأجسام المضادة الهجينة ومكتسبة السمة الآدمية ‎٠‏ المخلقة مع خرزات ‎.(GE Healthcare) Protein G‏ مثال 9 السمات المميزة للمواد الضابطة ‎PTK7‏ ‎-9(a)‏ السمات المميزة العامة للمادة الضابطة تستخدم طرق عديدة لتحليل السمات المميزة الكيميائية المناعية للمواد الضابطة ‎PTK7‏ ‎٠‏ المنتقاة (الفأرية والمكتسبة السمة الآدمية) المتولدة كما ذكر أعلاه. تحديداء يتميز عدد من هذه الأجسام المضادة بالانجذاب؛ الحركيات؛ تصنيفء التفاعلية العكسية بملاحظة التماثلات في قرد سينومولجس وفأر (مثلا؛ بواسطة ‎.(ForteBio‏ تقاس أيضا تفاعلية المواد الضابطة بواسطة بقعة ‎Western‏ باستخدام عينات مختزلة وغير مختزلة لتوفير بعض التحديدات حيث تكون ‎ds epitopes‏ أو غير خطية. بالإضافة إلى ارتباط المولد المضاد الفأري والآدمي تذكر ‎Ye‏ البيانات في شكل ‎(TY‏ تذكر نتائج تمييز الجسم المضاد لأجل المواد الضابطة لفأر منتقاة في شكل جدولي في شكل ‎hal (GY‏ كما يتضح في الأشكال ا(ج) = ‎(A)‏ تقاس انجذابات لأجل فأر منتقى له مواد ضابطة مكتسبة السمة الآدمية باستخدام تحليل مقياس تداخل حيوي
١6 ‏مضاد. عموماء‎ Algal ‏مع سلاسل تركيز قياسية‎ ForteBio RED (ForteBio, Inc.) ‏الطبقة على‎ ‏تظهر المواد الضابطة المنتقاة انجذابات عالية نسبيا في نطاق بالنانوجزيئي جرامي.‎ ‏طبقا للاختراع الحالي يقاس انجذاب المادة الضابطة بثلاث طرق لضمان الحدوث. أولا؛‎ ‏يقاس إشارة الارتباط لأجل كمية ثابتة من تخفيفات متسلسلة مضادة تفحص بدقة الجسم‎ ‏لتحديد نشاط نسبي للمادة الضابطة (بيانات غير‎ ELISA ‏المضاد من مولد مضاد في‎ ٠ ‏و».»ا للمستجيبات المنتقاة باستخدام‎ kon ‏موضحة). ثانياء عندئذ تقاس انجذابات وثوابت حركية‎ ‏مع سلاسل تركيز‎ ForteBio RED (ForteBio, Inc.) ‏تحليل مقياس التداخل حيوي الطبقة على‎ plasmon ‏قياسية لمولد مضاد. أخيراء يقاس انجذاب المواد الضابطة المنتقاة بواسطة رنين‎ ‏اعتمادا على سلاسل تركيز قياسية للمولد‎ .(Biacore System, GE Healthcare) ‏السطح‎ ‏لارتباط الجسم المضاد مع المولد‎ Ky ‏تتحدد‎ Langmuir ٠:١ ‏المضاد باستخدام نموذج ارتباط‎ ٠ ‏(مثلا؛ انظر الأشكال ١(ج) و7١(ه) باستخدام تقنيات‎ Kote Kon ‏المضاد والثوابت الحركية‎ ‏شائعة في الفن. عموما تظهر المستجيبات المنتقاة» سواء كانت فأرية أو مكتسبة السمة‎ (QV ‏الأدمية؛ انجذابات عالية نسبيا في النطاق بالنانوجزيئي جرامي. في الجدول في الشكل‎ 0 ‏بينما يحدد الرمز العلوي ت‎ Biacore ‏المجراة على‎ lis ‏يحدد الرمز العلوي 3[ قياسات‎ ‏ض‎ ForteBio ‏القياسات المجراة على‎ ٠ ‏الذي يدركه المستجيب 07167 مشتمل على‎ epitope ‏يجرى أيضا عمل تمهيدي لتحديد‎ ‏أحماض أمينية متجاورة أو متشكل بواسطة أحماض أمينية غير متجاورة متقاربة بواسطة البناء‎ ٠# ‏تحت شروط اختزال (مثلاء باستخدام‎ Western ‏الثانوي للمولد المضاد. بذلك تجرى بقع‎ ‏وشروط عدم اختزال. تحديدا أكثر؛ باستخدام تقنيات الارتحال الكهربي‎ (DTT ‏جزيئي جرامي‎ ‏في كلا الحالتين على الهلامات‎ PTR ‏القياسية المعروفة جيدا في الفن؛ يستمر المولد المضاد‎ ve ‏تختبر مادتان ضابطتان‎ (Q)Y ‏ويلطخ قبل تعرضه للمواد الضابطة المنتقاة. كما ذكر في شكل‎ ‏سليمة‎ disulphide ‏اللاتي تتفاعلان بوضوح فقط مع مولد مضاد عندما تكون روابط‎ 7
Western ‏لا تختبر المواد الضابطة 71167 المتبقية لأجل نشاط بقعة‎ .048(
ForteBio Octet Red96 ‏بملاحظة تصنيف الجسم المضاد بوضعه في خانة؛ يستخدم‎ ‏يدركها الفن‎ sandwich ‏لكل تعليمات الصانع وطريقة‎ (ForteBio, Inc.) Analyzer Yo ‏لأجسام المضادة التي ترتبط مع‎ ١ ‏لتحديد‎ [Analytical Biochemistry 386:172-180 (2009)] ‏خانات متماثلة أو مختلفة. باختصار؛ يمسك الجسم المضاد (851) على رقاقة إمساك فأر‎
١59 ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ١١5 ‏مضاد قبل استخدام تركيز عالي من جسم مضاد غير مرتبط عند‎ ‏تخليقي‎ hPTK7-His ‏نانوجزيئي جرامي) لتثبيط الرقاقة وترسيخ خط القاعدة عندئذ يمسك‎ ٠٠١( ‏نانوجزيئي جرامي) بواسطة‎ ٠٠ ‏(عند‎ ١ ‏كما توافر في مثال‎ (a ‏(شكل مماتئل‎ 6 (AbD) ‏ويغمس الطرف إما داخل عين بها نفس الجسم المضاد‎ (ADT) ‏الجسم المضاد الخاص‎ ‏كمقارن أو داخل عين بها جسم مضاد مختلف (862) حيث يكون الجسمين المضادين عند ؛‎ ‏نانوجزيئي جرامي). عند ملاحظة ارتباط إضافي مع جسم مضاد‎ YO ( ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ‏ليكون في خانة مختلفة. عند عدم حدوث ارتباط إضافي؛‎ AB2 5 Ab] ‏جديد؛ عندئذ يتحدد‎ ‏عندئذ يتحدد 802 ليكون في نفس الخانة. يمكن توسيع هذه العملية‎ (AbD ‏مماثل للمقارن‎ ‏لفحص مكتبات كبيرة من أجسام مضادة فريدة باستخدام صف كامل من الأجسام المضادة‎ ‏بيانات تمثيلية لأجل ثلاث مواد‎ (DY ‏تمثل خانات فريدة في طبق به 97 عين. يوضح جدول‎ ٠ ‏أنه عند عدم ارتباط‎ (NY ‏مضاد 1167© آدمي وفأري. يوضح شكل‎ alge ‏ضابطة تمثيلية تخص‎ ‏من آدمي ويرتبط‎ 7٠١ ‏مع فأر مطلقاء فإن 806.2.35 يرتبط عند حوالي‎ 2 ‏فأري له انجذاب مماثل (ملاحظة: يرمز إلى الأجسام المضادة‎ PTK7-His ‏مع‎ 611 ‏يد مدد إضافيا أن كل الأجسام المضادة‎ NY ‏بالرموز 112.35؛ 1110.2 و1125.1 في شكل‎ ‏المختبرة هذه تسكن في خانة مختلفة. بطريقة مماثلة يجرى تحليل تصنيف بوضع في خانة‎ Ve ‏تحدد هذه‎ (QV ‏المواد الضابطة 71167 التسعة الإضافية مع النتائج الموضحة في الشكل‎ ‏الجداول‎ AND ‏خانات واضحة على الأقل يدركها المواد الضابطة المختبرة. يشير‎ ١ ‏البيانات‎ ‏إلى أن البيانات غير محددة.‎ ‏لقرد سينومولجس وفأر مع‎ 71167 bled ‏يتم تقييم التفاعلية العكسية الخاصة‎ opal monomeric ‏باستخدام سلاسل تركيز مشتملة على مولد مضاد موضح تخليقياء‎ ForteBio ٠٠ ‏كما سجل في شكل 7(ب) يتفاعل عدد من المواد الضابطة التمثيلية مع 71167 فأري؛ بينما‎ ‏كل الأجسام المضادة مع 71167 لقرد سينومولجس المماتل لشكل كبير.‎ Luke ‏تتفاعل‎ ‏السمات المميزة لمادة ضابطة مكتسبة السمة الأدمية‎ -9(b) ‏باستخدام التقنيات المذكورة أعلاه في هذا المثال تحلل البنيات مكتسبة السمة الآدمية‎ ‏ارتباطها. إضافة لذلك؛ فإن ارتباط‎ law ‏لتحديد‎ hSC6.58 5 1806.41 806.24 hSC6.23 Yo ‏الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية يقارن مباشرة مع الجسم المضاد الفأري الأصلي لكل من‎
Yeo ‏الأجسام المضادة لتحديد أي تغيرات دقيقة في ثوابت المعدل تسببها عملية إكساب السمة‎ ‏الآدمية.‎ ‏باستخدام رنين‎ Biacore ‏بصفة خاصة أكثرء يقاس انجذاب 506.23 الفأري بواسطة‎ ‏على أساس سلسلة تركيز‎ ٠ (=) ‏لتوفير النتائج المذكورة في الشكل‎ (SPR) ‏سطح‎ plasmon ‏و19, نانوجزيئي جرامي (المولد لمنحنيات من القمة إلى القاع في الشكلين‎ A Y,0 (Yo 0 ‏لارتباط الجسم المضاد‎ Ky ‏قدرت‎ ؛1:١‎ Langmuir ‏لا(ج) وا(د)) وباستخدام نموذج ارتباط‎ 506.23 ‏مع مولد المضاد بأنها ,7 نانوجزيئي جرامي. تجرى عندئذ تجارب مشابهة مع بنية‎ ‏مكتسبة السمة الآدمية وتظهر نتائج مكافئة (الشكل 7(د)) تدل على أن عملية إكساب السمة‎ ‏الآدمية لا تؤثر على الانجذاب بدرجة سيئة. في هذا الجانب تدل القياسات على أن البنية‎ ‏مكتسبة السمة الآدمية لها انجذاب قيمته 7,9 نانوجزيئي جرامي الذي يكون جيدا خلال‎ ٠ ‏التحديدات المقبولة للأجسام المضادة العلاجية. يذكر في شكل 7(ه) قياسات ممائلة لكل‎ ‏خلال التقنيات الأخرى المذكورة في هذا‎ cp A ‏البناءات المكتسبة السمة الآدمية في مثال‎ ‏توضح أن المواد الضابطة 21167 المعلنة المكتسبة السمة الآدمية لها جودات مرغوبة‎ Jal) :
CL | 0 ١ ‏العلاجية.‎ salad ‏للأجسام‎ ‎٠١ ‏مثال‎ re ‏منتقاة‎ PTK7 ‏لمواد ضابطة‎ Epitope ‏تحديد‎ ‏تحددها مواد‎ epitope ‏لتنقية بيانات تصنيف بالوضع في خانة إضافية وتحديد مناطق‎ ‏ضابطة 71167 منتقاة متوالدة حسب الذكر أعلاه؛ يتم بناء وتوضيح متغايرات مختلفة عديدة‎ ‏تحديدا أكثر تتعين طفرات إلغاء 71167 باستخدام المواد الأولية التي‎ .1167 ECD ‏تخص‎ ‏قبل مجال السيطرة‎ Bglll ‏متنوعة وتدمجها مع موقع تقييد‎ 21167 Ig ‏تكبر مجالات سيطرة‎ Yo ‏هذه‎ Fc ‏اندماج‎ proteins ‏الآدمي؛ مرتب كجين تخليق )2.0 0178). عندئذ يتم نسخ‎ 1202 Fo .EcoRI 5 Hindlll ‏باستخدام مواقع تقييد‎ (Lonza AG) pEE12.4 ‏داخل الوسط الناقل لإظهار‎ 293 ‏لإصابة خلية‎ (Qiagen Inc.) ‏معزول‎ endotoxin ‏خالية من‎ Plasmids DNA ‏تستخدم‎ ‎YAY ‏تحصد المواد الطافية من‎ (Life Technologies) 293Fectin ‏ملتصقة بالعدوى باستخدام‎ ‏ساعة من الإصابة بالعدوى. تحديدا؛ تتعين بناءات الإلغاء‎ VY ‏خلية مصابة بالعدوى بعد‎ Yo
Fe ‏التالية المندمجة مع المنطقة‎ (DA ‏شكل‎ (V+ ‏مجالات سيطرة 1-2 2116720018 (تعريف الترتيب رقم:‎ ١
Ye) (QA ‏شكل‎ (V) ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ PTK7 ECD Ig 3-7 ‏مجالات سيطرة‎ " ‏شكل 8#(ج)‎ (VY ‏مجالات سيطرة 1-5 11167120018 (تعريف الترتيب رقم:‎ VF (YA ‏شكل‎ (VF ‏؛ مجالات سيطرة 6-7 71167120018 (تعريف الترتيب رقم:‎ (2)A ‏شكل‎ (VE ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ PTK7 ECD Ig 2-3 ‏مجالات سيطرة‎ © (A ‏شكل‎ (Vo ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ PTK7 ECD Ig 1-4 ‏مجالات سيطرة‎ 1
ECD-(2)) ‏شكل‎ (Vip) ‏(تعريف الترتيب‎ PTK7 ECD Ig 1-7 ‏سيطرة‎ laa VY ‏(المشتملة‎ (HA = (NA ‏تذكر ترتيبات حمض أميني لأجل أول ستة بناءات في الأشكال‎ ‏يشتمل الترتيب لأجل 7 بناءات على مجال سيطرة خارج‎ «(Fo ‏مع المنطقة‎ 01167 ECD ‏على‎ ‏الخلية من شكل مماثل (تعريف الترتيب رقم: ؟) كما يذكر في شكل ١(ج) المندمج مع مجال‎
Fe ‏السيطرة‎ ‏باستخدام هذه البناءات تختبر مواد ضابطة عديدة من أجل قدرتها على إدراك‎ ° ‏المشتمل‎ ELISA ‏المحددة. خلال اختبار‎ Ig ‏مع إلغاءات لمجالات السيطرة‎ 01167 proteins ‏على استخدام بناءات ملغاة لمجال السيطرة والمجراة تحت شروط قياسية. بذلك يتم إمساك‎ ‏مغطاة مع جسم مضاد يخص‎ FLISA ‏على ثش‎ PTR Tg ‏لمجال سيطرة‎ Fe ‏اندماجات‎ : : ‏عندئذ يتم الكشف عن قدرة كل جسم‎ (Jackson Immunoresearch) ‏أدمي ضد ماعز‎ IgG Fe ‏عديدة للإلغاء مع جسم مضاد يخص‎ Fe ‏اندماج‎ proteins ‏فأري على ربط‎ PTK7 ‏مضاد ضد‎ ٠
HRP ‏مع‎ plas ‏ماعز‎ aa SW Fe ‏باستخدام هذه الاختبار تتعين مواد ضابطة تمثيلية كالموجهة ضد مجالات سيطرة‎ ‏تمثيلي تم الكشف عنه أو‎ epitope ‏كل‎ ELISA ‏خاصة. يحدد المثال على نتائج‎ PTKT Ig ‏نمط ارتباط ويوجد مباشرة في جدول ؟ أدناه.‎
١7 ‏جدول ؛‎ ‏مجالات سيطرة‎ . . 17 | 67] 37 | 155 | 14 | 23 | 12 | ‏مجالات سيطرة‎ ‏للارتباط‎ Ig ‏مجالات سيطرة‎ 7 + | + + $C6.2.35
Ig 1-2 ‏مجال سيطرة‎ + + + + + SC6.39
Ig 2 ‏مجالات سيطرة‎ + + | + | + 061
Ig 2-3 ‏مجالات سيطرة‎ + | + 8062
Ig 1-4 ‏مجالات سيطرة‎ 0 0 068
Ig 3-7 ‏مجالات سيطرة‎ + SC6.11
Ig 1-7 ‏مختلفة عديدة‎ epitopes ‏تدرك بوضوح‎ PTK7 ‏إن الأجسام المضادة أحادية النسخ ضد‎ |ّ ‏(جدول ؛ وشكل 8(ج)).‎ ELISA ‏معتمدة على الأنماط المختلفة للارتباط الإيجابي في اختبار‎ ‏بخلاف تسجيل 806 و506.2.35‎ 6M ‏يلاحظ في شكل 8(ج) أن المواد الضابطة تسجل كأنها‎ ‏خلال‎ epitope ‏و806.102 كأنها 112.35 و1110.2. لا ترتبط الأجسام المضادة فقط مع‎ © ‏مجالات السيطرة 6-7 ع]» لكن قد يساهم مجالين السبطرة مع البناء الثانوي/ الثالثي لبنية‎ ‏(ليست مدونة في جدول). علاوة‎ SC6.31 5 806.18 ‏التي ترتبط بواسطة‎ [g3-7 Fe ‏الاندماج‎ ‎Js! ‏في‎ epitope ‏و506.10.2) تدرك‎ SC6.4.1 ¢SC6.2.35) ‏على هذاء فإن الأجسام المضادة‎ ‏خلال مجالات السيطرة 6-7 ع1.‎ epitope ‏ولا ترتبط الأجسام المضادة مع‎ Ig ‏؛ مجالات سيطرة‎ ‏خلال مجالات السيطرة 1-2. إن‎ epitope ‏يرتبط 506.2.35 مع‎ Ig ‏في أول ؛ مجالات سيطرة‎ ٠ ‏خلال حدود من مجالات السيطرة 2-3 18. على العكس؛ يبين‎ epitope ‏يدرك‎ 1 ‏وبذلك تستخدم بالمثل كل‎ dg ‏حساسية لأي إلغاء خلال أول ؛ مجالات سيطرة‎ 2 ‏بالتمائتل ترتبط بعض الأجسام‎ epitope 506.10.2 ‏في تحديد‎ Ig Jie ‏مجالات السيطرة الأربعة‎ ‏قد‎ Ig ‏تشير إلى أن إلغاءات‎ dg 1-7 ‏المضادة فقط مع بناء كامل الطول؛ مجالات سيطرة‎ ‏هذه. يوفر شكل *(ز) تمثيلي تخطيطي‎ epitopes ‏تعطل بعض مواقع الربط أو بناء ثانوي من‎ Vo ‏لأنماط الربط هذه المتضمنة على أجسام مضادة إضافية وبيانات مقارنة توضح تحديد موقع‎
١ ‏في شكل‎ 01167 ECD ‏من‎ Ig ‏مجالات سيطرة‎ ١ ‏ربط المواد الضابطة المعلنة عندما تتمثل‎ ‏هذا للأجسام المضادة‎ BCD ‏الموضح خلال‎ epitope ‏متبط وتستخدم الأفواس لتشير إلى موقع‎
PTK7 aca ‏التمثيلية‎ ‎١١ ‏مثال‎ ‏في عينات ورم تمثيلية‎ 01167 protein ‏إظهار‎ ° ‏في‎ PTK7 ‏بعد توثيق مستويات إظهار جين مرتفعة وتوليد الأجسام المضادة ضد‎ ‏المقابل في مجموعات‎ PTK7 protein ‏إظهار‎ Je ‏الأمثلة السابقة؛ يعتقد وجود دليل‎ ‏سرطان طور‎ protein ‏تحلل‎ sale ‏ورم مريض منتقاة. في هذا الجانب؛ تتوافر أنظمة‎ ‏تشمل ؛ تخفيفات من‎ (ProteoScan™ Arrays; OriGene Technologies) ‏معكوس‎ ‏نوع ورم؛ أو النسيج الطبيعي الخاص المجاور لهاء إلى‎ ١١ ‏مادة تحلل نسيج من‎ £7Y ٠
TPS3 ‏بدون أو مع إظهار زائد من‎ 11016 293 LOA ‏جانب عينات مقارنة تتكون من‎ ‏في مواد التحلل على هذا النظام‎ 01167 protein ‏بسبب محث خارجي. إن إظهار‎ ‏أحادي النسخ فأري 71167 متولد كما ذكر في‎ alias ‏يتم الكشف عنه باستخدام جسم‎ ‏عدماء). تتوافر ا‎ SC6.2.35 ‏(مثلا‎ Wester: 30 "ale PTK7 protein ‏ويدرك‎ ١ ‏مثال‎ ‎© «ProteoScan ‏العوامل الكاشفة والبروتوكولات لتحديد بقياس اللون بواسطة صاتنع نيم‎ ١ ‏تتحول البقع على النظام المصنع إلى صورة رقمية باستخدام أداة ماسحة مسطحة القاع‎ ‏للتقدير الكمي لكثافة البقعة.‎ 375002 Java Software (INSERM-TAGC) ‏باستخدام‎ ‏يزداد‎ 01167 protein ‏على أن إظهار‎ Jai ‏يبين شكل 4 نتائج منتقاة لتلك الاختبارات» وهي‎ ‏مستوى تنظيمه في مجموعة فرعية لعينات ورم مشتق من مريض يعاني من سرطان قولون‎ ‏يبين شكل 4() أن‎ ST ‏ومستقيم بنكرياسي؛ سرطان الثدي وسرطان المبيض. بصفة خاصة‎ ٠ ‏يبدو مرتفعا بدرجة ملحوظة في مجموعة فرعية من عينات ورم قولون‎ 71167 protein ‏إظهار‎ ‏ومستقيم ؛ بصفة خاصة في مرضى مع مرض في المرحلة ؛ عند المقارنة مع نسيج طبيعي‎ ‏مجاور أو نسيج ورم من عينات ناتجة من مراحل مبكرة للمرض. كما يتضح في شكل 4(ب)‎ ‏في معظم الأورام البنكرياسية لغدة صماء عصبية؛ بالإضافة‎ 71167 protein ‏يزيد أيضا إظهار‎ ‏إلى مجموعات فرعية من مرضى يعانون من سرطان الثدي (شكل 4(ج)) وسرطان المبايض‎ YO ‏(شكل 4(د)). تتولد البيانات حسب الوصف أعلاه وتتمثتل كمتوسط شدة البيكسل/ البقعة (كثافة‎ ‏القضيب الأسود الأفقي في كل عينة المتوسط للعينات في كل صنف مقابل.‎ Jig ‏بقعة).‎
Yee
تدعم هذه البيانات الملحوظات في الأمثلة أعلاه بأن الإظهار الزائد من ‎PTK7‏ يصاحب ‎TIC‏ و/أو ‎TPC‏ في سرطان القولون والمستقيم» وقد يكون مشتملا في الانقسام و/أو إبقاء الحياة. على ضوء ما تبينه الأمثلة السابقة بأن: (أ) إظهار جين ‎PTK7‏ يصاحب غالبا مجموعة فرعية لخلية ‎TPC‏ في ‎CRC‏ ومجموعة فزعية لخلية ‎TG‏ في أورام بنكرياسية؛ (ب) © إظهار ‎protein‏ 01167 أعلى على مجموعة فرعية لخلية ‎¢TIC‏ (ج) إظهار ‎protein‏ 01167 مرتفع في عينات ورم كامل من ‎CRC‏ مرحلة متأخرة؛ و(د) الملحوظة العامة هي أن ‎TIC‏ متكررة أكثر في وجودها في الأورام في المرحلة الأخيرة؛ فيبدو أن ‎PTK7‏ ‏يصاحب هذه الخلايا المسببة ‎sail‏ الورم» مقاومة العلاج وعودة الورم؛ مما يؤيد أن 71167 له
دور تكاملي في تدعيم ‎TPC‏ و/أو ‎TIC‏ في الأورام المذكورة أعلاه.
(CSC) ‏ضمن تجمعات خلية جذعية سرطان‎ PTKT ‏في ضوء تلك النتائج يقيم إظهار‎ ١ (OV) ‏مبيض‎ (LU) 45) «(BR) ‏لرقعات دخيلة لورم ثدي‎ (NTG) ‏وتجمعات غير مولدة للورم‎ ‏آدمية باستخدام مقياس تدفق الخلية. كما يذكر في المثال 1 يمكن‎ (KDY) ‏قولون (©)؛ وكلية‎ ‏تحديد تجمعات وفيرة 1416 و050؛ مراقبتها وتعزيزها باستخدام معلمات نمطية ظاهرية‎ ‏و 003247 “0046؛ على التوالي. طبقا لذلك؛ فإن رقعات دخيلة لورم آدمية‎ ©0467" 04
‎١٠ |‏ من ‎hi‏ منقوصة المناعة تجمع؛ ‎(SUSE‏ وتصبغ بصورة مشتركة مع أجسام مضادة ضد ‎«CD46‏ ضد ‎«CD324‏ وضد ‎(Miltenyi Biotech) PTK7‏ متاحة تجاريا قبل تقييم إظهار 7 باستخدام مقياس تدفق خلية في تجمع ‎NTG‏ 0324 “00467 وتجمع "0046 ‎CSC‏ *00324. بتحديد ‎«ST‏ يجرى تحليل مقياس تدفق الخلية باستخدام تقنيات قياسية على مقياس تدفق خلية 11 ‎(BD Biosciences) BD FACSCanto™‏ مع مقارنات مصبوغة بنوع
‎٠‏ _مماثل واستشعاع ناقص ‎(FMO) ١‏ تستخدم لتأكيد خصوصية الصبغ.
‏إن النتائج لأجل عينات أورام ثديية؛ رئوية؛ مبيضية؛ شرجية قولونية وكلوية تمثيلية توضح
‏في ‎Jill‏ 4(ه) حيث يعلم مقارن النوع المماثل بتظليل رمادي؛ يتمثل تجمع خلية ‎NTG‏
‏بواسطة الخط المتقطع ويوضح تجمع وفير ‎CSC‏ بواسطة الخط غير المتقطع. يدرك أن؛ حيث
‏تكون صبغ 71167 السطح قليلة نسبيا في تجمعات 1170 لكل من تلك الأورام» تزداد بصورة
‎Yo‏ كبيرة صبغ 7 السطح في تجمعات وفيرة ©08. يتم تأكيد تلك النتائج (بيانات غير
‏موضحة) باستخدام عدد من المعدلات الموضحة وتتمثل في أكثر من ‎Yo‏ خط ‎LANTX‏ ‏مختبر (مشتملة على العديد من الأورام الصلبة).
Yeo ٠١ ‏مثال‎ ‏و6401‎ K562 ‏تذوت مواد ضابطة 71167 منتقاة بواسطة خلايا‎ ‏إن معدلات 71167 من أورام هجينة متولدة بواسطة فئران محصنة كالموصوف أعلاه‎ ‏تختبر قدرتها على التذوت في خلايا 16562 و0401.‎
0 في هذا الخصوص يتم إخماد خلايا 16562 عند تركيزات بداية ‎/"٠١‏ ملليلتر (معلق خلية وحيدة) مع ‎(Biolegend, Inc., 422302) Human TruStain‏ لمدة ‎٠١‏ دقائق عند درجة حرارة الغرفة. تخفف الخلايا إلى ‎TY exon‏ خلية لكل تفاعل. تصبغ عينات مزدوجة لمدة ‎7١‏ دقيقة على ثلج مع مادة طافية لجسم مضاد حتى حجم نهائي ‎٠٠‏ ميكرولتر؛ ثم تغسل مع وسط صبغ ‎(FSM) FACS‏ 77 مصل جنين بقري/ محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني
‎Yo HEPES/Hank ٠‏ مللي جزيئي جرامي [أس هيدروجيني ‎(Mediatech, Inc. ¢[Y,¢‏ لإزالة جسم ‎alias‏ غير مرتبط. عقب هذا تتم صبغ ثانية مع مضاد فأري من حمار 416647 ‎(Life Technologies)‏ لمدة ‎٠١‏ دقيقة على ثلج. بعدئذ تغسل الخلايا مرة أخرى لإزالة جسم مضاد غير مرتبط ويعاد تعليق العينات في وسط تذويت (77 مصل جنين بقري/ وسط ‎Iscove‏ ‎(Modified Dulbecco‏ وتحضن ف . 6.075 ند #77مئوية 0 ؟“مئوية لأجل المقارن) :
‏5 ا لمدة ساعة واحدة للسماح بحدوث التذوت. يوقف التفاعل عن طريق نقل العينات إلى ثلج وإضافة 41 بارد كالثلج. لإزالة أي جسم مضاد لم يتذوت ومتبقي على سطح الخلية؛ تعالج العينات مع محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني ‎phosphate‏ منخفض الأس الهيدروجيني ‎PBS)‏ [أس هيدروجيني ؟]) لمدة ‎٠١‏ دقائق على ثلج. عقب هذا الإجراء 'نزع حمض"؛ تغسل العينات بكثافة مع ‎(FSM‏ يعاد تعليقها في ‎١٠٠١‏ ميكرولتر من ‎FSM‏ يحتوي على ‎١‏
‎BD ‏وتتحلل على مقياس تدفق الخلية‎ (Life Technologies) DAPI ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ٠ ‏إن أي زيادة في الاستشعاع تتعدى المحددة من خلايا محضنة على تلج في‎ -FACS Canto ‏هذه التجربة تكون نتيجة 508 الجسم المضاد على التذوت؛ مما يحمي جزيء الاستشعاع من‎ ‏منخفض الأس‎ phosphate ‏نزعه من على سطح الخلية أثناء معالجة بمثبت أس هيدروجيني‎ ‏مالم يذكر خلاف ذلك.‎ FACS ‏الهيدروجيني . تجرى كل التحضينات في وسط صبغ‎
‎Yo‏ عند مسح نسخ مفردة من مواد طافية لورم هجين يشمل جسم مضاد 71107 باستخدام بروتوكول نزع الحمض الموصوف أعلاه؛ توضع مواد طافية عديدة توضح تحول موجب في الاستشعاع مقابل ‎LAY‏ غير المصبوغة وأجسام مضادة مقارنة سالبة ‎IgG‏ (الشكلان +(
ye ‏يلاحظ تذوت جسم مضاد مع أجسام مضادة ضد 71167 عديدة؛ كما يوضح‎ .))ب(٠١و‎ ‏لأجسام المضادة على حماية جسم مضاد ثانوي 168647 من نزع حمض‎ ١ ‏بواسطة قدرة تلك‎ ‏والتسبب في تحول الاستشعاع إلى اليمين. إن نسخة جسم مضاد 806.10.2 (أي؛ 1110 في‎ ‏(ج)) تكون مثال على قدرة التذوت النموذجية بواسطة أجسام مضادة ضد 71167 مع‎ ٠١ ‏الشكل‎ ‏من مواد طافية تشمل جسم مضاد‎ ١١ ‏فإن حوالي‎ gC ‏هذا النشاط. بالمقارنة مع مقارنات‎ ٠ ‏تحث التذوت. باستخدام خلايا 16562 توضح هذه البيانات أن مجموعة‎ (YY ‏(؟؛ من‎ 7 ‏يربط المولد المضاد الموجود‎ 71167 ECD ‏فرعية من الأجسام المضادة تكون قادرة على ربط‎ ‏على خلايا وتكون قادرة على التذوت بفعالية.‎ ‏إن دليل آخر يشير إلى أن المعدلات الموضحة يمكن أن تسبب تذوت في خطوط خلية‎ ‏تمثيلية عديدة يوضح في الشكل ١٠(د) . بخصوصية أكثر وجد أن خط خلية ورم أرومي دبقي‎ ٠ ‏يظهر مستويات عالية من 71167 (بيانات غير موضحة) مما‎ (G401 Wilm Tumor WA) ‏يفترض أن خط الخلية هذا يمكن أن يكون أكثر تحسسا تحت شروط اختبار منتقاة وبالتالي‎ ‏يكون قادرا على تحدبد معدلات بصورة أكثر فعالبة التي تكون 5508 على حث التذوت. عموما‎ ‏باستخدام تلك الخلايا مع إجراء نزع حمض مدكور سابقا فإن 170 مادة طافية لورم هجين‎ ‏يتم مسحها لتحديد اشتمالها على أجسام مضادة للتذويت. إن أجسام مضادة‎ ١ ‏فريدة من المثال‎ Ne ‏و 1125.3 في الشكل‎ 1110.2 112.35 Jie ‏نقية 506.2.35؛ 506.10.2 و506.25.3 (يشار إليها‎ ‏(د)).‎ ٠١ ‏(د)) المحددة في المسح المراقب أعلاه تستخدم مثل أمثلة مقارنة موجبة (الشكل‎ ٠ ‏إن سعة التذوت للمعدلات الموجودة في ست مواد طافية تمثيلية (تحدد بواسطة تصميم جيد)‎ ‏توضح على الفور أدنى الأمثلة المقارنة. مع هذه الاختبارات الأكثر دقة توضح البيانات أن‎
PTK7 ‏معدلات عديدة متوفرة بواسطة إجراء التحصين الموضح أعلاه تكون قادرة على ربط‎ ٠ ‏التذويت (كما يثبت بواسطة 1802 1702 2803 و2710) على الرغم من كل النسخ‎ le ‏لا تمتلك هذه المقدرة.‎ (2F09 4 2F11) ‏في توضيح إضافي أيضا يتعلق بخصائص المعدلات الموضحة؛ فإن كل الأجسام المضادة‎ ‏الممسرحة المرتبطة مع خلايا 06401 بطريقة معينة وجد أنها تذوت إلى حد ما (الشكل‎ ‏كما يتمثل بواسطة الخط المتقطع في الشكل ١٠(ه) تضبط صبغ خلية موجبة إلى‎ .))ه(٠١‎ Yo ‏؛ اعتمادا على أجسام مضادة مقارنة من نوع مماثل فأري التي توضح صبغ غير خاصة‎ ‏من الخلايا. إن متوسط شدة الاستشعاع لخلايا 6401 مصبوغة مع كل‎ Y= jaa ‏بالنسبة إلى‎
ا جسم مضاد يقاس بعد خطوة نزع الحمض (أي؛ بعد التذوت) عند 7١7"مئوية‏ و؛“مئوية ويستكمل إلى أعداد المستقبل المقابلة لكل خلية باستخدام خرزات ‎Rainbow‏ لها ‎A‏ ذروات ‎(BD Spherotech #559123)‏ التي تشمل عدد معروف من جزيئات الاستشعاع. تحسب أعداد المستقبلات المذوتة بواسطة طرح أعداد المستقبل الناتجة من عينات تخضع إلى خطوة تذوت © عند ‎sf‏ (مثال مقارن) من أعداد مستقبل ناتجة من عينات تخضع إلى خطوة تذوت عند ١؟"مئوية.‏ يلاحظ أن أجسام مضادة تخص 71167 تكون مغايرة في قدرتها على حث تذوت يعطي فرق بعشرة أضعاف في أعداد مستقبلات التذوت بغض النظر عن مستوى ارتباط الخلية (المربع اليميني العلوي من الشكل ١٠(ه)).‏ مثال ‎OY‏ ‎Ve‏ معدلات 01167 تسهل توصيل عوامل سامة للخلية إن استهداف ثبات عقار مسمم للخلية مرتبط مع جسم مضاد يمثل طريقة جسم مضاد مساعدة قد تكون لها فائدة علاجية كبيرة للمرضى مع أورام صلبة. لتحديد ما إذا كانت الأجسام المضادة التي تخص 711647 الموصوفة أعلاه قادرة ٍ على القيام بتوصيل عامل ‎La‏ «اخاء © الى ‎LDA‏ حية؛ يجرى اختبار قتل خلية في ب ‎٠‏ المعمل حيث يرتبط ‎streptavidin‏ مفترن مع ‎protein saporin‏ المخمد لنشاط ‎ribosome‏ ‎(Advanced Targeting Systems)‏ مع أجسام مضادة ‎cbiotinylated PTK7‏ وتقاس قدرة معقدات ‎saporin‏ هذه على التذوت وقتل الخلايا بعد ‎VY‏ ساعة بواسطة قياس حيوية الخلية. بصفة خاصة؛ تزرع ‎"٠١١‏ خلية ورم ‎Wilm‏ 6401 لكل عين في طبق به 97 عين. تنقى معدلات 71167 في شكل أجسام مضادة ضد 71167 كالموصوف أعلاه من المواد الطافية؛ ‎Yo‏ تجرى لها ‎biotinylated‏ وتخفف عندئذ إلى ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر. يخلط قسم تام من كل جسم مضاد بنسبة ‎1:١‏ مع ‎((Advanced Targeting Systems) streptavidin-ZAP‏ يدوم لمدة © ثواني ويحضن عندئذ عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تحضر عندئذ ثلاثة تخفيفات متسلسلة إضافية ‎٠‏ أضعاف من معقدات جسم مضاد ‎saporin‏ ويضاف ‎٠٠‏ ‏ميكرولتر من كل خليط؛ على التوالي؛ إلى عيون تحتوي على خلية 6401. يحضن بعدئذ ‎Yo‏ خليط الخلية/ جسم مضاد ‎saporin‏ عند ١7"مئوية/75 ‎CO,‏ لمدة ‎Yi‏ ساعة. بعد هذه الحضانة؛ تدوم الخلايا لأسفل في أطباق بها ‎AT‏ عين مستديرة القاعدة؛ تزال المادة الطافية؛ ويضاف ‎٠٠١‏ ميكرولتر من وسط مزرعة حديث التحضير إلى كل عين. تحضن الخلايا
YEA
CellTiter-Glo ‏ساعة أخرى وعندئذ تعد أعداد الخلية الحية باستخدام‎ VY ‏عندئذ لمدة‎ ‏طبقا لبروتوكول الصانع.‎ (Promega Corp.) ‏باستخدام اختبار قتل الخلية الموصوف أعلاه؛ يتضح أن معدلات 77167 للتذويت تمثيلية‎ ‏تشمل أجسام مضادة من النسخ 806.2.35؛ 806.10.2 و506.25.3 (المشار إليها مثل‎ ‏وقتل الخلية. بتحديد‎ saporin toxin ‏و 1125.3 في الشكل ١١لأ)) تسبب تذوت‎ 1110.2 (H2.35 © ‏أكثر؛ يوضح الشكل ١١ل(أ) بوضوح قدرة تأثير المعدلات هذه قتل خلية عن طريق تذوت‎ ‏توضح‎ (MOPC ‏يتوسطه 71167 مقارنة مع جسم مضاد مقارن لنوع مماثل غير خاص (أي‎ ‏هذه البيانات أن المعدلات الموضحة تكون خاصة مناعيا من أجل 71167 وتكون قادرة بكفاءة‎ ‏على القيام بتوصيل حمولة صافية سامة للخلايا وقتل خلايا موجبة 171167 من خلال ارتباط‎ ‏لسطح الخلية.‎ ٠ ‏في نطاق اختبار القتل المذكور سابقا يوضح توصيل حمولة صافي سامة للخلايا عن‎ ‏طريق أجسام مضادة تخص 01167 باستخدام أربعة معدلات تمثيلية إضافية (506.23؛‎ ‏مقارن موجب. إلى هذا الحد تزرع‎ Jie ‏و506.58) مع 506.10.2 مستخدم‎ 806.51 «SC6.41 *00( ‏أنواع الخلايا التالية في أطباق زراعة نسيج لها 07 عين في أوساط الزراعة المقابلة لها‎ . ‏خلايا‎ toxin g ‏خلية لكل عين) قبل يوم واحد من إضافة الأجسام المضادة‎ oe ‏باستخدام تنبيغ فيروسي ارتجاعي لإظهار‎ HEK293T ‏6401؛ يتم هندسة‎ Wilm Tumor
HEK293T 5 (293. PTK7 ‏خلايا‎ Jie ‏جزيئات 01167 على سطح هذه الخلايا (يشار إليها هنا‎ ‏الذي يستخدم كمثال مقارن.‎ ‏من أجل هذا الاختبار تضاف معدلات 01167 نقية عند تركيزات مختلفة إلى العيون‎ ‏ضد‎ Fab cia ‏المحتوية على الخلايا المزروعة. بعد إضافة المعدلات تضاف كمية ثابتة من‎ ٠ (Fab-ZAP, Advanced Targeting Systems, #1T-48) saporin ‏فأري مرتبط تساهميا مع‎ IgG ‏ساعة. تتحدد أعداد‎ VY ‏عند تركيز 4 نانوجزيئي جرامي إلى العيون وتحضن المزارع لمدة‎ ‏تضبط عدات وميض خام باستخدام‎ Cell Titer-Glo ‏الخلايا الحية كما يوصف أعلاه باستخدام‎ ‏قيم مرجعية‎ 7/٠٠١ ‏(ليست معدل) مثل‎ Fab ‏جزء‎ -saporin ‏مزارع تحتوي على خلايا مع‎ (“Normalized RLU” Jie ‏وتحسب كل العدات الأخرى طبقا لذلك (يشار إليها‎ Yo ‏باستخدام هذا الاختبار؛ يتضح أن كل أجسام مضادة 71167 مختبرة (لكن ليست أجسام‎ ‏(د))‎ ١ ١-)ب(‎ ١١ ‏مضادة مقارنة لنوع مماثل) تكون قادرة على قتل خلايا مستهدفة (ا لأشكال‎
١٠8
حيث توضح الأشكال ١١(ب)؛‏ ١١(ج)‏ و١١‏ (د) تأثير المعدل على خلايا 6401؛ خلايا
7 وخلايا ‎HEK293T‏ على التوالي. يدرك أن قتل وتذوت بسبب معدل يعتمد على
نوع الخلية (بمقارنة الشكلين ١١(ب)‏ - خلايا 6401 و ١١(د)‏ - ‎((HEK293T LDA‏
مستويات إظهار 21167 على الخلايا المستهدفة (بمقارنة الشكل ١١(ج)‏ - خلايا ‎293.PTK7‏ ‏© و١١‏ (د) - ‎(HEK293T LOA‏ والقدرة الجوهرية لمعدلات مختلفة على التذويت. يومضح
الاختبار إضافيا أن تذوت يحدث أساسا بسبب ارتباط جسم مضاد يخص 77167 بسطح الخلية
دون الحاجة إلى ارتباط متقاطع إضافي. اعتمادا على البيانات المستخدمة لتوليد منحنيات
الجرعة- الاستجابة في الأشكال ١١(ب)-١١(د)‏ (وقيم مشتقة ‎Jidl‏ لمعدلات إضافية - غير
موضحة) يتحدد نصف التركيز الفعال الأقصى ‎(“ECS507)‏ لكل اتحاد معدلات مختبرة/ خلية ‎٠‏ مستهدفة. بتحديد أكثر فإن الجدول © أدناه يدرج على الفور ‎ECS0 aid‏ (بالبيكوجزيئي جرامي)
لأجل ‎2١0‏ معدل كما تحدد لكل من الخلايا المستهدفة الثلاثة باستخدام الاختبار الموصوف
على الفور أعلاه. يشير 100 إلى أن القيمة تكون غير محددة.
© Us ‏مسل 21167 لعامل مسمم للخلية‎ ton ‏توصيل‎ ‎HEK293T WA | 293.117 Wa ‏المعدل‎ ‏ا ا ا سن‎
You ‏بينما تتم ملاحظة بعض التغيرات بالنسبة للقتل ضمن المعدلات المفردة تظهر بعض‎ ‏هذا الخصوص تكون المعدلات أكثر‎ do ‏الاتجاهات العامة المثبتة من البيانات في الجدول‎ ‏مهندسة عنه بالنسبة‎ PTK ‏تفرط إظهار‎ 293 LOA ‏فعالية عموما في تسبب قتل خلية من‎ ‏يكون العديد من المعدلات المختبرة‎ aga ‏من نوع بري. بصورة‎ 293 WIA ‏للخلايا 06401 أو‎ ‏على‎ PTK7 ‏فعال نسبيا في تسبب قتل لخلايا ورم 6401 غير مهندسة التي تعرف بإظهار‎ © ‏سطح الخلية. إن هذه النتائج القابلة لإعادة الإنتاج تمثل القدرة العلاجية لمدى واسع من‎ ‏معدلات 21767 للتذويت كما هو متمثل هنا.‎ ٠ dhe ‏معدلات 71167 تسهل توصيل عوامل سامة للخلايا إلى خلايا مولدة للورم‎ toxin ‏لتوثيق نتائج المثال السابق وتحديد ما إذا كانت المعدلات 171167 تسبب تذوت‎ ١ ‏مستنفذة نسل فأري (أي؛ خلايا‎ NTX 190 ‏تر ع‎ sf ‏وتسبب قتل خلية في خلايا ورم آدمي‎ ‏ورم آدمي منتشرة كرقع دخيلة قليلة الدورات في فتران غير مشتقة المناعة) وتتعرض بعد ذلك‎
Fab-ZAP ‏و‎ PTK7 ‏لأجسام مضادة ضد‎ (OV) ‏المبيض‎ (IU) ‏تتفكك أورام 11176 مشتقة من مرضى بسرطان الرئة‎ cals ‏بصفة‎ ‎Primaria™ ‏داخل معلق خلية وحيدة وتزرع على أطباق‎ (SK) ‏وميلانوما‎ ٠ ‏في أوساط خالية من مصل مدعمة باستخدام تقنيات موضحة لفن شائع‎ (BD Biosciences) [CO ‏؟"مثوية/75‎ ١7 ‏يدعم تكاثر خلية جذعية سرطانية. بعد 5-7 أيام من الزراعة عند‎ ‏تتصل الخلايا مع جسم مضاد مقارن لنوع مماثل (و1802 أو واحد من ثلاثة أجسام‎ (0, ‏5806.10.2؛ أو 806.25.1 عند )+ نانوجزيئي جرامي؛‎ ¢SC6.2.35) ‏مضادة ضد 71167 فأرية‎ ‏نانوجزيئي جرامي) كما ذكر‎ 4 ٠ ‏(عند‎ Fab-ZAP 5 «(idles SC6.H25 5 8061110 «SC6.H2 ٠ ‏يسببه المعدل بتقدير كمي‎ saporin ‏عموما في المثال السابق. عندئذ تقيم السمية الخلوية لأجل‎ ‏أيام. تتعادل‎ V=0 ‏تبعا لإرشادات الصانعين بعد‎ Cell Titer Glo ‏لعدد الخلايا المتبقي باستخدام‎ ‏النتائج بالنسبة إلى خلايا غير معالجة.‎
Yo) ‏فإن التعرض لكل من المعادلات المختبرة (بدون المثال المقارن‎ ١١ ‏كما يتضح في الشكل‎ ‏من نوع مماثل) يتسبب في انخفاض أعداد الخلية الحية في كل أنواع الأورام. في هذا‎ ‏الخصوص يدرك أن كمية قتل الخلية تعتمد بوضوح على خط خلية الورم المعين بالإضافة إلى‎ ‏على المعدل المعين. تشير تلك البيانات إلى أن معدلات الاختراع الحالي يمكن أن تصاحب‎ ‏عديدة؛ تذوت وبالتالي‎ abl ‏بصورة خاصة مناعية خلايا تظهر مولد مضاد عديدة من أنواع‎ © ‏تتسبب في قتل الخلايا الأساسية. إضافة إلى هذاء فإن قدرة المعدلات الموضحة على فعل ذلك‎ ‏بالنسبة إلى خطوط خلايا ورم 18176 تحت شروط تدعم تكاثر خلية جذعية سرطانية‎ ‏كالموصوفة أعلاه في الفن تدل بقوة على قدرتها على إلغاء الخلايا الجذعية السرطانية بصورة‎ ‏انتقائية.‎ ‎١ ‏مثال‎ ١ ‏معدلات 01167 تقلل التوليد الورمي لخلية جذعية سرطانية‎ ‏لتأكيد إضافيا قدرة المعدلات الموضحة على تقليل تواتر الخلايا الجذعية السرطانية‎ ‏وتزرع بعد ذلك في‎ SC6.2.35 ‏مع‎ NTX ‏وتوضيح قدرتها المولدة للورم؛ تعالج خلايا ورم ثدي‎ ‏منقوصة المناعة. . . ض ْ م‎ oly
BR13) ‏مشتقين من مريض بسرطان الثدي‎ NTX ‏في هذا الخصوص يتم فصل ورمين‎ ‏وتزرع خلايا الورم الآدمية تحت شروط معروفة في الفن لاستبقاء الخلايا المولدة‎ (BR64 ‏كما هو مذكور في‎ Fab-ZAP ‏للورم؛ وتعالج مع معدل 71167 (ومقارن من نوع مماثل) و‎
Cell Titer Glo ‏السابق. عندئذ تقاس السمية الخلوية من حيث حيوية الخلية باستخدام‎ Jl) ‏لإرشادات الصانعين قبل 50 يوم من المعالجة. مرة أخرى تتعادل النتائج بالنسبة إلى‎ Luh ‏خلايا غير معالجة.‎ ٠ ‏و ١٠(ب) على التوالي يتم بصورة كبيرة إلغاء خلايا ورم‎ (NF ‏كما يتضح في الشكلين‎ ‏الشدي المشتقة من 8813 (الشكل 7 )1( ومن 3864 (الشكل ١١٠(ب)) من خلال تذوت‎ ‏بتحديد أكثر فإن‎ saporin ‏واتحاد خاص مناعيا يسببه معدل 71167 لعامل مسمم للخلية‎ ‏نانوجزيئي جرامي ينتج عنها إلغاء‎ ١,7 ‏عند‎ 506.2.35 (SC6.H2) 01167 ‏المعالجة مع معدل‎ ‏حوالي 780-70 من الخلايا بينما لا تتأثر بصورة كبيرة الخلايا المعالجة مع المثال المقارن‎ Yo ‏وتوضح إضافيا الاستعمال الواسع‎ ١١ ‏تتماشى النتائج مع النتائج الموضحة في المثال‎ .54
١٠١ ‏للاختراع الحالي اعتمادا على قدرة المعدلات الموضحة على إلغاء خلايا استدامة مسبقة لورم‎ ‏مشتقة من أورام مختلفة.‎ ‏لتأكيد أن المعدلات الموضحة تلغي خلايا تحث الورم؛ فإن المستحضرات المعالجة من‎ ‏خطين خلية سرطان ثدي تزدرع في فئران لتحديد بقاء الخلايا المحثة للورم على قيد‎ ‏يشمل‎ PBS ‏الحياة. بتحديد أكتر؛ تجمع بصورة مستقلة الخلايا من كل ثلاثة عيون» تغسل في‎ © ‏ميكرولتر وعندئذ تزدرع في فئران منقوصة المناعة مفردة‎ ٠٠١ ‏يعاد تعليقها في‎ (BSA 7 ‏باستخدام عموما الإجراءات المذكورة سابقا في المثال 1. تراقب الفئران أسبوعيا من حيث نمو‎ ‏الورم وتقاس أي أورام ناشئة لحساب أحجامها. إن الفئران المزدرع فيها خلايا‎ ‏فقط التي يتم معالجتها مع مثال مقارن 186 تظهر أورام بينما تلك‎ BR64s 11136 3 ‏يتم‎ TIC ‏المزدرع فيها خلايا متصلة بمعدلات 71167 لا تظهر أورام. توضح تلك النتائج أن‎ ٠ (ENT ‏(الشكل‎ toxin ‏إلغاءها بواسطة معدلات 71167 قادرة على القيام بتوصيل‎ ‏إن مراجعة البيانات توضح أن زراعة خلايا حية متبقية بعد معالجة خط خلية سرطان ثدي‎ ‏لا تتسبب في تكوين أورام. على النقيض؛ فإن الخلايا المقارنة من‎ saporin s 01167 ‏مع معدل‎ ‏تاك السعازمة مع جسم مضاد مقارن من نوع مماثل)‎ may) ‏كلا خطي خلية سرطان ثدي‎ : ‏مزدرع‎ OLA ‏من ثلاثة‎ GU ‏تكون قادرة على إعادة حث نمو ورم عند الزراعة. بالتحديد» فإن‎ ٠ ‏و818264) يطوران أورام قابلة للقياس مما يشير إلى أن‎ BR22) ‏فيها كل خطي خلية مقارنة‎ ‏تحديداء إن عدم مقدرة خلايا‎ JST ‏استدامة مسبقة للورم. بصورة‎ LWIA ‏الخلايا المزدرعة تتضمن‎ ‏معالجة بمعدل على تكوين أورام يشير بقوة إلى أن الخلايا المزدرعة لم تتضمن خلية استدامة‎ ‏يستهدف‎ saporin [PTK7 ‏مسبقة للورم. بحيث؛ من المرجح أن المعالجة مع اتحاد من معدل‎ ‏ويلغي بصورة انتقائية خلايا استدامة سابقة للورم طبقا للاختراع الحالي. في أي حال توضح‎ ٠ ‏تلك البيانات أن المعالجة مع المعدلات الموضحة تكون مؤثرة في خفض القدرة المولدة للورم‎ ‏لخلايا الورم.‎ 3 ‏مثال‎ ‏معدلات 21167 مكتسبة السمة الآدمية تقوم بتوصيل عوامل سامة للخلية‎ ‏إن تجسيدات مفضلة من الاختراع الحالي تستخدم غالبا معدلات 71167 مكتسبة السمة‎ Yo ‏الآدمية في إطار علاجي؛ يجرى اختبار لتوضيح أن أجسام مضادة ضد 71167 مكتسبة السمة‎
YoY ‏مواد مسببة فعالة في قتل خلية عن‎ Jie ‏تعمل‎ (A ‏الأدمية (مصنعة كالمذكور سابقا في المثال‎ ‏طريق توصيل عوامل سامة للخلية.‎ hSC6.23) ‏بتحديد أكثر ؛ تستخدم ثلاثة معدلات 77167 مكتسبة السمة الآدمية تمثيلية‎ ‏مولدة‎ LOA ‏و050624) للقيام بإدخال حمولة صافية سامة للخلية وإلغاء‎ 8 ١١ ‏للدراسات هنا. عموما باستخدام البروتوكول المذكور سابقا في المثال‎ Liga ‏للورم‎ ٠ ‏أعلاه فإن خلايا 11816293 مهندسة لإظهار 21167 (أي خلايا 293.01167) تتعرض‎ ‏أدمي‎ Fab ‏ومعدلات منتقاة مرتبطة مع مضاد‎ saporin ‏إلى تركيزات مختلفة من‎ ‏©7-طه. بعد التحضين تغسل الخلايا وتقيم‎ Human, Advanced Targeting Systems) ‏عندئذ السمية الخلوية من أجل 20 يتوسطه معدل بواسطة تحديد كمية العدد المتبقي من‎ ‏أيام. تتعادل النتائج‎ 7-7١ ‏لإرشادات الصانعين بعد‎ Lag 08111: Glo ‏الخلايا باستخدام‎ ٠
NE ‏بالنسبة إلى خلايا غير معالجة وتتمتل تخطيطيا في الشكل‎ ‏إن فحص المنحنيات المذكورة سابقا في الشكل ؛١ يوضح أن كل معدلات 71167 المختبرة‎
Adal ‏الثلاثة تكون فعالة جدا في حث تذوت الحمولة الصافبة السامة للخلايا التي تقلل حيوية‎ . ‏و2008‎ ١ ‏انخفاض في حيوية الخلية عند تركيز بين‎ 75٠ ‏في هذا الخصوص يوفر كل معدل‎ ْ ‏بيكوجزيئي‎ ٠٠١ ‏في حيوية الخلية عند تركيز‎ TA ‏بيكوجزيئي جرامي وانخفاض يتعدى‎ ٠ ‏جرامي. مرة أخرى؛ طبقا للتوضيح الحالي تشير تلك البيانات إلى معدلات عالية الفعالية التي‎ ‏يمكن أن تقوم بصورة خاصة مناعيا بتوصيل عوامل سامة للخلية إلى تجمعات خلية منتقاة.‎ ‏سيدرك المهرة في الفن إضافيًا أن الاختراع الحالي يمكن تجسيده في أشكال أخرى خاصة‎ ‏بدون التخلي عن الجوهر أو السمات المركزية له. برغم أن الوصف السابق للاختراع الحالي‎ ‏فلابد من إدراك أن هناك تباينات أخرى متوقعة بأن تكون‎ (al ‏يكشف فقط عن تجسيدات تمثيلية‎ ٠ ‏في نطاق الاختراع الحالي. طبقًا لذلك؛ فإن الاختراع الحالي غير مقيد بالتجسيدات الخاصة‎ ‏التي تم وصفها بالتفصيل هنا. بالأحرى؛ لابد من الإشارة إللى عناصر الحماية المكملة‎ ‏للموضوع كدلالة على نطاق ومحتوى الاختراع.‎
<<"
قوائم التسلسل ستيم سنتركس؛ء إنك. >110< مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام <120> ‎1030US.PCT‏ 569697 >130< >140< >141< ‎PCT/US2011/050451‏ >150< 2011-09-02 >151< 61/444,614 >150< 2011-02-18 >151< 169 >160< ‎PatentIn version 3.5‏ >170< 1 >210< 4249 >211< ‎DNA‏ >212< ‎Homo sapiens‏ >213< 1 <400> ‎gcggcgcegeg gggactcgga ggtactggge gcgegceggcet ccggetcggg acgceccteggg 60‏ ‎acgccteggg gtegggectec ggctgegget gectgctgcgg cgccegegct ccggtgeget 120‏ ‎ccgectectg tgeccgeccge ggagcecgcagt ctgecgegece gecgtgegece ctcagetect 180‏ ‎tttcectgage ccgcegegat gggagctgcg cggggatcce cggccagacce ccgecggttg 240‏ ‎cctetgetea gegtectget getgecgetg ctgggeggta cccagacage cattgtcette 300‏ ‎atcaagcagc cgtectccca ggatgcactyg caggggcgec gggegetget tegetgtgag 360‏ ‎gttgaggctc cgggeceggt acatgtgtac tggctgetcg atggggcccec tgtccaggac 420‏ ‎acggagcggce gtttcgecca gggcagcage ctgagctttg cagctgtgga ccggctgceag 480‏ ‎gactctggca ccttccagtyg tgtggctcgg gatgatgtca ctggagaaga agcccgceagt 540‏ ‎gccaacgcect ccttcaacat caaatggatt gaggcaggtc ctgtggtcct gaagcatcca 600‏ ‎gcctcggaag ctgagatcca gccacagacce caggtcacac ttegttgeca cattgatggg 660‏ ‎caccctcgge ccacctacca atggttccga gatgggacce ccctttetga tggtcagage 720‏ ‎aaccacacag tcagcagcaa ggagcggaac ctgacgctce ggccagctgg tcctgagcecat 780‏
Yoo agtgggctgt attcctgctg cgcccacagt gettttggcecc aggcttgcag cagccagaac 840 ttcaccttga gcattgctga tgaaagcttt gccagggtgg tgctggcacc ccaggacgtg 900 gtagtagcga ggtatgagga ggccatgttc cattgccagt tctcagccca gccacccecg 960 agcctgcagt ggctctttga ggatgagact cccatcacta accgcagtcg ccccccacac 1020 ctccgcagag ccacagtgtt tgccaacggg tctctgectgce tgacccaggt ccggccacgce 1080 aatgcaggga tctaccgctg cattggccag gggcagaggg gcccacccat catcctggaa 1140 gccacacttc acctagcaga gattgaagac atgccgctat ttgagccacg ggtgtttaca 1200 gctggcagcg aggagcgtgt gacctgectt cecccccaagg gtcectgccaga gceccagegtg 1260 tggtgggagc acgcgggagt ccggcectgecce acccatggca gggtctacca gaagggccac 1320 gagctggtgt tggccaatat tgctgaaagt gatgctggtg tctacacctg ccacgeggec 1380 aacctggctg gtcagcggag acaggatgtc aacatcactg tggccactgt gccctectgg 1440 ctgaagaagc cccaagacag ccagctggag gagggcaaac ccggctactt ggattgectg 1500 acccaggcca caccaaaacc tacagttgtc tggtacagaa accagatgcect catctcagag 1560 gactcacggt tcgaggtctt caagaatggg accttgcgca tcaacagcegt gogeggtgtat 1620 gatgggacat ggtaccgttg tatgagcagc accccagecg gcagcatcga ggcgcaagcece 16890 cgtgtccaag tgctggaaaa gctcaagttc acaccaccac cccagccaca gcagtgcatg 1740 gagtttgaca aggaggccac ggtgccecctgt tcagccacag gccgagagaa geccactatt 1800 aagtgggaac gggcagatgg gagcagcctc ccagagtggg tgacagacaa cgctgggacce 1860 ctgcattttg cccgggtgac tcgagatgac gectggcaact acacttgcat tgcctccaac 1920 gggccgcagg gccagattceg tgcccatgtce cagctcactg tggcagtttt tatcacctte 1980 aaagtggaac cagagcgtac gactgtgtac cagggccaca cagccctact gcagtgcgag 2040 gcecaggggg accccaagec gctgattcag tggaaaggca aggaccgcat cctggaccce 2100 accaagctgg gacccaggat gcacatcttc cagaatggct ccctggtgat ccatgacgtg 2160 gccectgagg actcaggeccg ctacacctgce attgcaggca acagctgeaa catcaagcac 2220 acggaggccce ccctctatgt cgtggacaag cctgtgeccgg aggagtcgga gggccctgge 2280 agccctccece cctacaagat gatccagacc attgggttgt cggtgggtge cgctgtggece 2340 tacatcattg ccgtgctggg cctcatgtte tactgcaaga agcgctgceaa agccaagcgg 2400
١١١ ctgcagaagc agcccgaggg cgaggagcca gagatggaat gcctcaacgg tgggectttg 2460 cagaacgggc agccctcagc agagatccaa gaagaagtgg ccttgaccag cttgggcetcec 2520 ggccccgecgg ccaccaacaa acgccacagce acaagtgata agatgcactt cccacggtcet 2580 agcctgcage ccatcaccac gctggggaag agtgagtttg gggaggtgtt cctggcaaag 2640 gctcagggct tggaggaggg agtggcagag accctggtac ttgtgaagag cctgcagagce 2700 aaggatgagc agcagcagct ggacttccgg agggagttgg agatgtttgg gaagctgaac 2760 cacgccaacg tggtgcggct cctggggcectg tgccgggagg ctgagcccca ctacatggtg 2820 ctggaatatg tggatctggg agacctcaag cagttcctga ggatttccaa gagcaaggat 2880 gaaaaattga agtcacagcc cctcagcacc aagcagaagg tggccctatg cacccaggta 2940 gccctgggca tggagcacct gtccaacaac cgectttgtge ataaggactt ggctgegegt 3000 aactgcctgg tcagtgccca gagacaagtg aaggtgtctg ccctgggect cagcaaggat 3060 gtgtacaaca gtgagtacta ccacttccgce caggecctggg tgceccgctgeg ctggatgtcce 3120 cccgaggeca tcctggaggg tgacttctcect accaagtctg atgtctggge cttcecggtgtg 3180 . ctgatgtggg aagtgtttac acatggagag atgcrccatas gtgggcaggc agatgatgaa 3240 gtactggcag atttgcaggc tgggaaggcet ‏ماه افقو‎ agecceccgaggg ctgccecttcee 3300 aaactctatc ggctgatgca gcgctgctgg gccecctcagcece ccaaggaccyg gcecctectte 3360 agtgagattg ccagcgccct gggagacagc accgtggaca gcaagccgtg aggagggagce 3420 ccgctcagga tggcctgggc aggggaggac atctctagag ggaagctcac agcatgatgg 3480 gcaagatccc tgtcctectg ggceccctgagg cccctgeccct agtgcaacag gcattgcectga 3540 ggtctgagca gggcecctggcec tttcctecte ttectcacce tcatcctttg ggaggctgac 3600 ttggacccaa actgggcgac tagggctttg agctgggcag ttttccctge cacctcecttece 3660 tctatcaggg acagtgtggg tgccacaggt aaccccaatt tectggceccttc aacttctccece 3720 cttgaccggg tccaactctyg ccactcatct gccaactttg cctggggagg gctaggettg 3780 ggatgagctg ggtttgtggg gagttcctta atattctcaa gttctgggca cacagggtta 3840 atgagtctct tggcccactg gtcccacttg ggggtctaga ccaggattat agaggacaca 3900 gcaagtgagt cctccccact ctgggcttgt gcacactgac ccagacccac gtcttcccea 3960 cccttetete ctttectcat cctaagtgee tggcagatga aggagttttc aggagetttt 4020 gacactatat aaaccgccct ttttgtatgc accacgggeg gettttatat gtaattgcag 4080
وا ‎cgtggggtgg gtgggcatgg gaggtagggg tgggeccctgg agatgaggag ggtgggcecat 4140‏ ‎ccttacccca cacttttatt gttgtcgttt tttgtttgtt ttgttttttt gtttttgttt 4200‏ ‎ttgtttttac actcgctget ctcaataaat aagccttttt tacaacctg 4249‏ 2 >210< 1070 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Homo sapiens‏ >213< 2 >400< ‎Met Gly Ala Ala Arg Gly Ser Pro Ala Arg Pro Arg Arg Leu Pro Leu‏ 10 5 1 ‎Leu Ser Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ile‏ 25 20 ‎Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly Arg Arg‏ 40 35 ‎Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro val His Val Tyr‏ 60 55 50 ‎Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg Phe Ala‏ 80 75 70 65 ‎Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Pro Gln Asp Ser‏ 95 90 85 ‎Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu Glu Ala‏ 110 105 100 ‎Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala Gly Pro‏ 125 120 115 ‎Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro Gln Thr‏ 140 135 130 ‎Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro Thr Tyr‏ 160 155 150 145 ‎Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser Asn His‏
٠١ 165 170 175
Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala Gly Pro 180 185 190
Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe Gly Gln 195 200 205
Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu Ser Phe 210 215 220
Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala Arg Tyr Glu 225 230 235 240
Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255
Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro 260 265 270 : Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Pi ‏ب > :2 ل‎ Ser Leu Leu Leu 275 280 285
Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile Gly Gln 290 295 300
Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His Leu Ala 305 310 315 320
Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly 325 330 335
Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro 340 345 350
Ser Val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg 355 360 365
Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser 370 375 380
١4
Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg 385 390 395 400
Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys 405 410 415
Lys Pro Gln Asp Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp 420 425 430
Cys Leu Thr Gln Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr Arg Asn 435 440 445
Gln Met Leu Ile Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys Asn Gly 450 455 460
Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu Val Tyr Asp Gly Thr Trp Tyr Arg 465 470 475 480
Cys Met Ser Ser Thr Pro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Gln Ala Arg Val 485 490 495
Gln Val Leu Glu Lys Leu Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gin Pro Gin Gln 500 505 510
Cys Met Glu Phe Asp Lys Glu Ala Thr Val Pro Cys Ser Ala Thr Gly 515 520 525
Arg Glu Lys Pro Thr Ile Lys Trp Glu Arg Ala Asp Gly Ser Ser Leu 530 535 540
Pro Glu Trp Val Thr Asp Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val 545 550 555 560
Thr Arg Asp Asp Ala Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro 565 570 575
Gln Gly Gln Ile Arg Ala His Val Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile 580 585 590
Thr Phe Lys Val Glu Pro Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr 595 600 605
٠٠
Ala Leu Leu Gln Cys Glu Ala Gln Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln 610 615 620
Trp Lys Gly Lys Asp Arg Ile Leu Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg 625 630 635 640
Met His Ile Phe Gln Asn Gly Ser Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro 645 650 655
Glu Asp Ser Gly Arg Tyr Thr Cys Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile 660 665 670
Lys His Thr Glu Ala Pro Leu Tyr Val Val Asp Lys Pro Val Pro Glu 675 680 685
Glu Ser Glu Gly Pro Gly Ser Pro Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln Thr 690 695 700
Tle Gly Leu Ser Val Gly Ala Ala val Ala Tyr Ile Ile Ala Val Leu 705 710 ‏ىم‎ 720
Gly Leu Met Phe Tyr Cys Lys Lys Arg Cys Lys Ala Lys Arg Leu Gln 725 730 735
Lys Gln Pro Glu Gly Glu Glu Pro Glu Met Glu Cys Leu Asn Gly Gly 740 745 750
Pro Leu Gln Asn Gly Gln Pro Ser Ala Glu Ile Gln Glu Glu Val Ala 755 760 765
Leu Thr Ser Leu Gly Ser Gly Pro Ala Ala Thr Asn Lys Arg His Ser 770 775 780
Thr Ser Asp Lys Met His Phe Pro Arg Ser Ser Leu Gln Pro Ile Thr 785 790 795 800
Thr Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gly Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln 805 810 815
Gly Leu Glu Glu Gly Val Ala Glu Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu
ا 830 825 820 ‎Gln Ser Lys Asp Glu Gln Gln Gln Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu‏ 845 840 835 ‎Met Phe Gly Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu‏ 860 855 850 ‎Cys Arg Glu Ala Glu Pro His Tyr Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu‏ 880 875 870 865 ‎Gly Asp Leu Lys Gln Phe Leu Arg Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys‏ 895 890 885 ‎Leu Lys Ser Gln Pro Leu Ser Thr Lys Gln Lys Val Ala Leu Cys Thr‏ 910 905 900 ‎Gln Val Ala Leu Gly Met Glu His Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His‏ 925 920 915 ‎Lys Asp Leu Ala Ala Arg Aon Cys Iw Jal Ser Ala Gln Arg Gln Val‏ 940 92% 930 ‎Lys Val Ser Ala Leu Gly Leu Ser Lys Asp Val Tyr Asn Ser Glu Tyr‏ 960 955 950 945 ‎Tyr His Phe Arg Gln Ala Trp Val Pro Leu Arg Trp Met Ser Pro Glu‏ 975 970 965 ‎Ala Ile Leu Glu Gly Asp Phe Ser Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe‏ 990 985 980 ‎Gly Val Leu Met Trp Glu Val Phe Thr His Gly Glu Met Pro His Gly‏ 1005 1000 995 ‎Gly Gln Ala Asp Asp Glu Val Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys‏ 1020 1015 1010 ‎Ala Arg Leu Pro Gln Pro Glu Gly Cys Pro Ser Lys Leu Tyr Arg‏ 1035 1030 1025
يا
Leu Met Gln Arg Cys Trp Ala Leu Ser Proc Lys Asp Arg Pro Ser 1040 1045 1050
Phe Ser Glu Ile Ala Ser Ala Leu Gly Asp Ser Thr Val Asp Ser 1055 1060 1065
Lys Pro 1070 <210> 3 <211> 1070 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3
Met Gly Ala Ala Arg Gly Ser Pro Ala Arg Pro Arg Arg Leu Pro Leu 1 5 10 15
Leu Ser Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ile
Val Phe ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly Arg Arg ‘ 45
Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His Val Tyr 60
Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg Phe Ala 65 70 75 80
Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln Asp Ser 85 90 95
Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu Glu Ala 100 105 110
Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala Gly Pro 115 120 125
Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro Gln Thr 130 135 140
Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro Thr Tyr yy 145 150 155 160
Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser Asn His 165 170 175
Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala Gly Pro 180 185 190
Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe Gly Gln 195 200 205
Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu Ser Phe 210 215 220
Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala Arg Tyr Glu 225 230 235 240
Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255
Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro 260 LY 270
Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu Leu Leu 275 280 285
Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile Gly Gln 290 295 300
Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His Leu Ala 305 310 315 320
Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly 325 330 335
Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro 340 345 350
Ser Val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg 355 360 365
Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser 370 375 380
Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg 385 390 395 400
Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys 405 410 415
Lys Pro Gln Asp Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp 420 425 430
Cys Leu Thr Gln Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr Arg Asn 435 440 445
Gln Met Leu Ile Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys Asn Gly 450 455 460
Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu Val Tyr Asp Gly Thr Trp Tyr Arg 465 470 475 480
Cys Met Ser Ser Thr Fro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Gln Ala Arg Val 485 490 495
Gln Val Leu Glu Lys Leu Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gln Pro Gln Gln 500 505 510
Cys Met Glu Phe Asp Lys Glu Ala Thr Val Pro Cys Ser Ala Thr Gly 515 520 525
Arg Glu Lys Pro Thr Ile Lys Trp Glu Arg Ala Asp Gly Ser Ser Leu 530 535 540
Pro Glu Trp Val Thr Asp Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val 545 550 555 560
Thr Arg Asp Asp Ala Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro 565 570 575
Gln Gly Gln Ile Arg Ala His Val Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile 580 585 590
٠١
Thr Phe Lys Val Glu Pro Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr 595 600 605
Ala Leu Leu Gln Cys Glu Ala Gln Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln 610 615 620
Trp Lys Gly Lys Asp Arg Ile Leu Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg 625 630 635 640
Met His Ile Phe Gln Asn Gly Ser Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro 645 650 655
Glu Asp Ser Gly Arg Tyr Thr Cys Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile 660 665 670
Lys His Thr Glu Ala Pro Leu Tyr Val Val Asp Lys Pro Val Pro Glu 675 680 685
Glu Ser Glu Gly Pro Gly Ser Pro Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln Thr 690 695 700
Ile Gly Leu Ser Val Gly Ala Ala Val Ala Tyr Ile Ile Ala Val Leu 705 710 715 720
Gly Leu Met Phe Tyr Cys Lys Lys Arg Cys Lys Ala Lys Arg Leu Gln 725 730 735
Lys Gln Pro Glu Gly Glu Glu Pro Glu Met Glu Cys Leu Asn Gly Gly 740 745 750
Pro Leu Gln Asn Gly Gln Pro Ser Ala Glu Tle Gln Glu Glu Val Ala 755 760 765
Leu Thr Ser Leu Gly Ser Gly Pro Ala Ala Thr Asn Lys Arg His Ser 770 775 780
Thr Ser Asp Lys Met His Phe Pro Arg Ser Ser Leu Gln Pro Ile Thr 785 790 795 800
Thr Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gly Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln 805 810 815
١+7
Gly Leu Glu Glu Gly Val Ala Glu Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu 820 825 830
Gln Ser Lys Asp Glu Gln Gln Gln Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu 835 840 845
Met Phe Gly Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu 850 855 860
Cys Arg Glu Ala Glu Pro His Tyr Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu 865 870 875 880
Gly Asp Leu Lys Gln Phe Leu Arg Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys 885 890 895
Leu Lys Ser Gln Pro Leu Ser Thr Lys Gln Lys Val Ala Leu Cys Thr 900 905 910
Gln Val Ala Leu Gly Met Glu His Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His 915 920 925
Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Leu Val Ser Ala Gln Arg Gln Val 930 935 940
Lys Val Ser Ala Leu Gly Leu Ser Lys Asp Val Tyr Asn Ser Glu Tyr 945 950 955 960
Tyr His Phe Arg Gln Ala Trp Val Pro Leu Arg Trp Met Ser Pro Glu 965 970 975
Ala Tle Leu Glu Gly Asp Phe Ser Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe 980 985 990
Gly val Leu Met Trp Glu Val Phe Thr His Gly Glu Met Pro His Gly 995 1000 1005
Gly Gln Ala Asp Asp Glu Val Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys 1010 1015 1020
Ala Arg Leu Pro Gln Pro Glu Gly Cys Pro Ser Lys Leu Tyr Arg
يخي 1025 1030 1035
Leu Met Gln Arg Cys Trp Ala Leu Ser Pro Lys Asp Arg Pro Ser 1040 1045 1050
Phe Ser Glu Ile Ala Ser Ala Leu Gly Asp Ser Thr Val Asp Ser 1055 1060 1065
Lys Pro 1070 <210> 4 <211> 1014 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4
Met Gly Ala Ala Arg Gly Ser Pro Ala Arg Pro Arg Arg Leu Pro Leu 1 5 10 15
Leu Ser Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ile
Val Phe Ile Lys Gln Pro 3er Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly Arg Arg
Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His Val Tyr 60
Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg Phe Ala 65 70 75 80
Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln Asp Ser 85 90 95
Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu Glu Ala 100 105 110
Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala Gly Pro 115 120 125
Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro Gln Thr 130 135 140
محا ‎Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro Thr Tyr‏ 160 155 150 145 ‎Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser Asn His‏ 175 170 165 ‎Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala Gly Pro‏ 190 185 180 ‎Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe Gly Gln‏ 205 200 195 ‎Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu Ser Phe‏ 220 215 210 ‎Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala Arg Tyr Glu‏ 240 235 230 225 ‎His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro: Pro Ser Levu‏ عطق ‎Glu Ala Met‏ 255 250 245 ‎Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro‏ 270 265 260 ‎Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu Leu Leu‏ 285 280 275 ‎Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile Gly Gln‏ 300 295 290 ‎Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His Leu Ala‏ 320 315 310 305 ‎Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly‏ 335 330 325 ‎Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro‏ 350 345 340 ‎Ser Val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg‏
355 360 365
Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser 370 375 380
Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg 385 390 395 400
Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys 405 410 415
Lys Pro Gln Asp Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp 420 425 430
Cys Leu Thr Gln Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr Arg Asn 435 440 445
Gln Met Leu Ile Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys Asn Gly 450 455 460
Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu +. ‏مث‎ “+n Fly Thr Trp Tyr Arg 465 470 47 480
Cys Met Ser Ser Thr Pro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Gln Ala Arg Val 485 490 495
Gln Val Leu Glu Lys Leu Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gln Pro Gln Gln 500 505 510
Cys Met Glu Phe Asp Lys Glu Ala Thr Val Pro Cys Ser Ala Thr Gly 515 520 525
Arg Glu Lys Pro Thr Ile Lys Trp Glu Arg Ala Asp Gly Ser Ser Leu 530 535 540
Pro Glu Trp Val Thr Asp Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val 545 550 555 560
Thr Arg Asp Asp Ala Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro 565 570 575
VV.
Gln Gly Gln Ile Arg Ala His Val Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile 580 585 590
Thr Phe Lys Val Glu Pro Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr 595 600 605
Ala Leu Leu Gln Cys Glu Ala Gln Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln 610 615 620
Trp Lys Asp Lys Pro Val Pro Glu Glu Ser Glu Gly Pro Gly Ser Pro 625 630 635 640
Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln Thr Ile Gly Leu Ser Val Gly Ala Ala 645 650 655
Val Ala Tyr Ile Ile Ala Val Leu Gly Leu Met Phe Tyr Cys Lys Lys 660 665 670
Arg Cys Lys Ala Lys Arg Leu Gln Lys Gln Pro Glu Gly Glu Glu Pro 675 680 : 585
Glu Met Glu Cys Leu #sn Gly Gly Pro Leu Gln Asn Gly Gln Pro Ser 690 695 700
Ala Glu Ile Gln Glu Glu Val Ala Leu Thr Ser Leu Gly Ser Gly Pro 705 710 715 720
Ala Ala Thr Asn Lys Arg His Ser Thr Ser Asp Lys Met His Phe Pro 725 730 735
Arg Ser Ser Leu Gln Pro Ile Thr Thr Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gly 740 745 750
Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln Gly Leu Glu Glu Gly val Ala Glu 755 760 765
Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu Gln Ser Lys Asp Glu Gln Gln Gln 770 775 780
Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu Met Phe Gly Lys Leu Asn His Ala 785 790 795 800
١7١
Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu Cys Arg Glu Ala Glu Pro His Tyr 805 810 815
Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu Gly Asp Leu Lys Gln Phe Leu Arg 820 825 830
Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys Leu Lys Ser Gln Pro Leu Ser Thr 835 840 845
Lys Gln Lys Val Ala Leu Cys Thr Gln Val Ala Leu Gly Met Glu His 850 855 860
Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys 865 870 875 880
Leu Val Ser Ala Gln Arg Gln Val Lys Val Ser Ala Leu Gly Leu Ser 885 890 895
Lys Asp Val Tyr Asn Sey Clu Tvr Tyr His Phe Arg Gln Ala Trp Val } 900 acs 510
Pro Leu Arg Trp Met Cer Pro Glu ‏02م‎ Ile Leu Glu Gly Asp rhe Ser 915 920 925
Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe Gly Val Leu Met Trp Glu Val Phe 930 935 940
Thr His Gly Glu Met Pro His Gly Gly Gln Ala Asp Asp Glu Val Leu 945 950 955 960
Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys Ala Arg Leu Pro Gln Pro Glu Gly Cys 965 970 975
Pro Ser Lys Leu Tyr Arg Leu Met Gln Arg Cys Trp Ala Leu Ser Pro 980 985 990
Lys Asp Arg Pro Ser Phe Ser Glu Ile Ala Ser Ala Leu Gly Asp Ser 995 1000 1005
Thr Val Asp Ser Lys Pro
<210> 5 <211> 1030 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5
Met Gly Ala Ala Arg Gly Ser Pro Ala Arg Pro Arg Arg Leu Pro Leu 1 5 10 15
Leu Ser Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ile
Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly Arg Arg
Ala Leu Leu Arg Cys Glu val Glu Ala Pro Gly Pro Val His Val Tyr 60
Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg Phe Ala
Lh 70 75 80
To Gln Gly Sex ‏عمق‎ Leu Ser i= Al. Ala Val Asp Avy Leu Gln Asp Ser 85 20 95 =
Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu Glu Ala 100 105 110
Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala Gly Pro 115 120 125
Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro Gln Thr 130 135 140
Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro Thr Tyr 145 150 155 160
Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser Asn His 165 170 175
Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala Gly Pro 180 185 190
Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe Gly Gln 195 200 205
Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu Ser Phe 210 215 220
Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala Arg Tyr Glu 225 230 235 240
Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255
Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro 260 265 270
Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu Leu Leu 275 280 285
Thr Gln val Arg Pro Arg Asr ‏عمج‎ Glv Tle Tyr Arg Cys Ile Gly Gln 290 295 “LU
Ce Gly Gin Arg Gly Pro Pro Ile 11- Leu Gli» Ala ni Leu His Leu Ala 305 310 315 320
Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly 325 330 335
Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro 340 345 350
Ser Val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg 355 360 365
Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser 370 375 380
Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg 385 390 395 400
Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys 405 410 415
ل ‎Lys Pro Gln Asp Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp‏ 430 425 420 ‎Cys Leu Thr Gln Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr Arg Asn‏ 445 440 435 ‎Gln Met Leu Ile Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys Asn Gly‏ 460 455 450 ‎Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu Val Tyr Asp Gly Thr Trp Tyr Arg‏ 480 475 470 465 ‎Cys Met Ser Ser Thr Pro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Gln Ala Arg Val‏ 495 430 485 ‎Gln Val Leu Asp Gly Ser Ser Leu Pro Glu Trp Val Thr Asp Asn Ala‏ 510 505 500 ‎Cly Thr-Leu His Phe Ala Arg Val Tit Arg Asp sp Ala Gly Asn Tyr .‏ : 525 520 515 ‎Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro Gln Gly Gln Ile Arg Ala His Val‏ 540 535 530 ‎Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile Thr Phe Lys Val Glu Pro Glu Arg‏ 560 555 550 545 ‎Thr Thr val Tyr Gln Gly His Thr Ala Leu Leu Gln Cys Glu Ala Gln‏ 575 570 565 ‎Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln Trp Lys Gly Lys Asp Arg Ile Leu‏ 590 585 580 ‎Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg Met His Ile Phe Gln Asn Gly Ser‏ 605 600 595 ‎Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro Glu Asp Ser Gly Arg Tyr Thr Cys‏ 620 615 610 ‎Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile Lys His Thr Glu Ala Pro Leu Tyr‏
دن 640 635 630 625 ‎Val Val Asp Lys Pro Val Pro Glu Glu Ser Glu Gly Pro Gly Ser Pro‏ 655 650 645 ‎Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln Thr Ile Gly Leu Ser Val Gly Ala Ala‏ 670 665 660 ‎Val Ala Tyr Ile Ile Ala Val Leu Gly Leu Met Phe Tyr Cys Lys Lys‏ 685 680 675 ‎Arg Cys Lys Ala Lys Arg Leu Gln Lys Gln Pro Glu Gly Glu Glu Pro‏ 700 695 690 ‎Glu Met Glu Cys Leu Asn Gly Gly Pro Leu Gln Asn Gly Gln Pro Ser‏ 720 715 710 705 ‎Ala Glu Ile Gln Glu Glu Val Ala Leu Thr Ser Leu Gly Ser Gly Pro‏ 735 730 725 ‎T.rs Mel His Phe Pro‏ قوعت 2 0 ‎Ala Thr Asn Lys Arg His Se.‏ ملت ‎Ts 750‏ 740 ‎Arg Ser Ser Leu Gln Pro Ile Thr Thr Leu Gly Lys Ser Glu Phe Gly‏ 765 760 755 ‎Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln Gly Leu Glu Glu Gly Val Ala Glu‏ 780 775 770 ‎Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu Gln Ser Lys Asp Glu Gln Gln Gln‏ 800 795 790 785 ‎Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu Met Phe Gly Lys Leu Asn His Ala‏ 815 810 805 ‎Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu Cys Arg Glu Ala Glu Pro His Tyr‏ 830 825 820 ‎Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu Gly Asp Leu Lys Gln Phe Leu Arg‏ 845 840 835
7 ٍ
Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys Leu Lys Ser Gln Pro Leu Ser Thr 850 855 860
Lys Gln Lys Val Ala Leu Cys Thr Gln Val Ala Leu Gly Met Glu His 865 870 875 880
Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys 885 890 895
Leu Val Ser Ala Gln Arg Gln Val Lys Val Ser Ala Leu Gly Leu Ser 900 905 910
Lys Asp Val Tyr Asn Ser Glu Tyr Tyr His Phe Arg Gln Ala Trp Val 915 920 925
Pro Leu Arg Trp Met Ser Pro Glu Ala Ile Leu Glu Gly Asp Phe Ser 930 935 940
Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe Gly Val Leu Met Trp Glu Val Phe 945 950 255 960
Thr His Sly’ Glu Mev “ro His Gly Gly Slr Ala Asp Asp Glu Val Leu 965 979 975
Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys Ala Arg Leu Pro Gln Pro Glu Gly Cys 980 985 990
Pro Ser Lys Leu Tyr Arg Leu Met Gln Arg Cys Trp Ala Leu Ser Pro 995 1000 1005
Lys Asp Arg Pro Ser Phe Ser Glu Ile Ala Ser Ala Leu Gly Asp 1010 1015 1020
Ser Thr Val Asp Ser Lys Pro 1025 1030 <210> 6 <211> 940 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6
Met Gly Ala Ala Arg Gly Ser Pro Ala Arg Pro Arg Arg Leu Pro Leu
\VYY 1 5 10 15
Leu Ser Val Leu Leu Leu Pro Leu Leu Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ile
Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly Arg Arg
Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His Val Tyr 60
Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg Phe Ala 65 70 75 80
Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln Asp Ser 85 90 95
Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu Glu Ala 100 105 110 } .Ar~ Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn 1 ‏الات‎ Ter Glu tla Gly Pro : 115 120 i Co L25 . val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro Gln Thr 130 135 140
Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro Thr Tyr 145 150 155 160
Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser Asn His 165 170 175
Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala Gly Pro 180 185 190
Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe Gly Gln 195 200 205
Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu Ser Phe 210 215 220
YYA
Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val val Ala Arg Tyr Glu 225 230 235 240
Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255
Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro 260 265 270
Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu Leu Leu 275 280 285
Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile Gly Gln 290 295 300
Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His Leu Ala 305 310 315 320
Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly 325 330 335
Ser Glu Glu Arg Val Thr {vs Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro 340 345% 350
Ser Val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg 355 360 365
Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser 370 375 380
Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg 385 390 395 400
Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Asn Gly Ser Ser Leu Pro Glu 405 410 415
Trp Val Thr Asp Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val Thr Arg 420 425 430
Asp Asp Ala Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro Gln Gly 435 440 445
Gln Ile Arg Ala His Val Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile Thr Phe 450 455 460
Lys Val Glu Pro Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr Ala Leu 465 470 475 480
Leu Gln Cys Glu Ala Gin Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln Trp Lys 485 490 495
Gly Lys Asp Arg Ile Leu Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg Met His 500 505 510
Ile Phe Gln Asn Gly Ser Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro Glu Asp 515 520 525
Ser Gly Arg Tyr Thr Cys Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile Lys His 530 535 540
Thr Glu Ala Pro Leu Tyr Val Val Asn Lys Pro Val Pro Glu Glu Ser 545 550 555 560
Glu Gly Pro Gly Ser Pro Proc Pro Tyr Lys Mec Ile Gln Thr Ile Gly 565 570 575
Leu Ser Val Gly Ala Ala Val Ala Tyr Ile Ile Ala Val Leu Gly Leu 580 585 5390
Met Phe Tyr Cys Lys Lys Arg Cys Lys Ala Lys Arg Leu Gln Lys Gln 595 600 605
Pro Glu Gly Glu Glu Pro Glu Met Glu Cys Leu Asn Gly Gly Pro Leu 610 615 620
Gln Asn Gly Gln Pro Ser Ala Glu Ile Gln Glu Glu Val Ala Leu Thr 625 630 635 640
Ser Leu Gly Ser Gly Pro Ala Ala Thr Asn Lys Arg His Ser Thr Ser 645 650 655
Asp Lys Met His Phe Pro Arg Ser Ser Leu Gln Pro Ile Thr Thr Leu 660 665 670
YA
Gly Lys Ser Glu Phe Gly Glu Val Phe Leu Ala Lys Ala Gln Gly Leu 675 680 685
Glu Glu Gly Val Ala Glu Thr Leu Val Leu Val Lys Ser Leu Gln Ser 690 695 700
Lys Asp Glu Gln Gln Gln Leu Asp Phe Arg Arg Glu Leu Glu Met Phe 705 710 715 720
Gly Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Arg Leu Leu Gly Leu Cys Arg 725 730 735
Glu Ala Glu Pro His Tyr Met Val Leu Glu Tyr Val Asp Leu Gly Asp 740 745 750
Leu Lys Gln Phe Leu Arg Ile Ser Lys Ser Lys Asp Glu Lys Leu Lys 755 760 765 - Ser Gln Pro Leu Ser Thr Lys Cia Lys Vel Ala Leu Cys Thr Gin Val : 770 75 780
Ala Leu Gly Met Glu His Leu Ser Asn Asn Arg Phe Val His Lys Asp 785 790 795 800
Leu Ala Ala Arg Asn Cys Leu Val Ser Ala Gln Arg Gln Val Lys Val 805 810 815
Ser Ala Leu Gly Leu Ser Lys Asp Val Tyr Asn Ser Glu Tyr Tyr His 820 825 830
Phe Arg Gln Ala Trp Val Pro Leu Arg Trp Met Ser Pro Glu Ala Ile 835 840 845
Leu Glu Gly Asp Phe Ser Thr Lys Ser Asp Val Trp Ala Phe Gly Val 850 855 860
Leu Met Trp Glu Val Phe Thr His Gly Glu Met Pro His Gly Gly Gln 865 870 875 880
Ala Asp Asp Glu Val Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Lys Ala Arg Leu
اا 895 830 885 ‎Pro Gln Pro Glu Gly Cys Pro Ser Lys Leu Tyr Arg Leu Met Gln Arg‏ 910 905 900 ‎Cys Trp Ala Leu Ser Pro Lys Asp Arg Pro Ser Phe Ser Glu Ile Ala‏ 925 920 915 ‎Ser Ala Leu Gly Asp Ser Thr Val Asp Ser Lys Pro‏ 940 935 930 7 >210< 6 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Artificial Sequence‏ >213< >220< ‎source‏ >221< ‎/note="Description of Artificial Sequence: Synthetic‏ >223< ‎6xHis tag"‏ 7 >400< ‎His His His His His His‏ ‎Co‏ 5 - 8 >210< 8 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Artificial Sequence‏ >213< >220< ‎source‏ >221< ‎/note="Description of Artificial Sequence: Synthetic‏ >223< ‎8xHis tag"‏ 8 >400< ‎His His His His His His His His‏ 1 9 >210< ’ 23 >211< ‎DNA‏ >212< ‎Artificial Sequence‏ >213< >220< ‎source‏ >221< ‎/note="Description of Artificial Sequence: Synthetic‏ >223< ‎primer"‏
VAY
<400> 9 gccattgtct tcatcaagca gcc 23 <210> 10 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic primer" <400> 10 ctggatcatc ttgtaggggg gag 23 <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> Unknown <220> <221> source <223> /note="Description of Unknown: motif peptide” >220< : <221> MOD RES <222> (2)..(2) <223> Any amino acid <220> <221> MOD RES <222> (4)..(4) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (7) ..(7) <223> Any amino acid <400> 11
Gly Xaa Gly Xaa Phe Gly Xaa Val 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Unknown <220> <221> source
YAY
<223> /note="Description of Unknown: motif peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(7) <223> Any amino acid <400> 12
His Arg Asp Leu Xaa Xaa Xaa Asn 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Unknown <220> <221> source <223> /note="Description of Unknown: motif peptide" <220> <221> MOD RES <222> (6)..(6) ’ <Z23> Any amino ‏مدع‎ ‎<400> 13 ser Asp Val Trp Ser Xaa Gly . 1 5 <210> 14 <400> 14 000 <210> 15 <400> 15 000 <210> 6 <400> 6 000 <210> 17 <400> 17
YAEL
<210> 18 <400> 18 000 <210> 9 <400> 18 000 <210> 20 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 20
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
GIn Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Glo ‏ص‎ Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ala 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ser Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95
Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Ser Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 21 <211> 113 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 21
Gln Val Gln Met Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
Y Ao 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Arg Ser Asn Ser Asn Glu Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Thr Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Lys Leu Ser Trp Gly Gin Ciy Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 : 1190
Ala <210> 22 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 22
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30
Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45
His Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Ser Asn Val Gln Ser
د 80 75 70 65 ‎Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln His Tyr Asn Ser Phe Pro Tyr‏ 95 90 85 ‎Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg‏ 105 . 100 23 >210< 115 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 23 >400< ‎Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Val‏ 10 5 1 ‎Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asp Tyr‏ 25 20 ‎Pro Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile‏ - 45 40 35 ‎Gly Ile Ile Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Val Thr Asn Asn Pro Lys Phe‏ 60 55 50 ‎Arg Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr‏ 80 75 70 65 ‎Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys‏ 95 90 85 ‎Ala Arg Asn Asp Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr‏ 110 105 100 ‎Val Ser Ala‏ 115 24 >210< 94 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 24 >400<
YAY
Leu Gly Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp His Ile Asn 1 5 10 15
Asn Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu
Leu Ile Ser Gly Ala Thr Thr Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu 60
Gln Thr Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Ile 65 70 75 80
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 85 90 <210> 25 <211> 123 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 25
Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser 20 25 30
Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu 35 40 45
Trp Met Val Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu 65 70 75 80
Gln Leu Ile Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly Asp Ala Tyr Asp Val Arg Arg Ser Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
YAA
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 26
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asn
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Ala Ser Pro Arg Leu Leu Ile
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Trp Pro Arg 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 27 <211> 114 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 27
Gln Leu Glu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Met Gln Pro Gly Ala Ser Val 1 5 10 15
Lys Val Ser Cys Lys Ala Thr Leu Glu Glu Gly Tyr Thr Phe Thr Val 20 25 30
YAQ
Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45
Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys 50 55 60
Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Ser Ser Ser Asn Thr Ala 65 70 75 80
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Thr Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Gly Lys Leu His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ala <210> 28 <211> 114 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly 1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly
Gly Asn Gln Gln Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr 65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 85
Asp His Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile 100 105 110
١
Lys Arg <210> 29 <211> 118 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 29
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Lys Asp
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Arg Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg ‏اه‎ As: ‏قاط‎ tys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Asp Tyr Asp Gly Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 >211< 6 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Glu Thr val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30
٠
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln 35 40 45
Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val His Asn Ala Asn Thr Leu Ala Glu 50 55 60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser 65 70 75 80
Leu Arg Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys 85 90 95
Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100 105 110
Glu Val Glu Arg 115 <210> 31 <211> 118 <212> PRT > 213< Mus sp. <400> 31
Glu val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
١7
Ala Arg Pro Gly Tyr Gly Asn Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 32 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 32
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Val Phe Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Asp Tyr Asn
Gly Met Ser Tyr Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Sei. run iu: . As, 2:r Gly Ile Pro Ala 5h 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Cys Ile 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Met Leu Glu Val Lys 100 105 110 <210> 33 <211> 122 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 33
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
١١7
Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Asn Pro Phe Ser Asp Gly Thr Lys Phe Thr Glu Lys 50 55 60
Phe Lys Gly Lys Bla Ser Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80
Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly 1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
Asn Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ile Thr Pro Phe 85 90 95
Y4¢
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Arg Lys 100 105 <210> 35 <211> 122 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Gly Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Asp Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Ile Tyr
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Pro Gln Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ser Thr Leu Ser Ala ‏رت‎ Lys we. Ser Asn Thr Ala Ser 65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ser Arg Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp 100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 36 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 36
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30
٠١5
Gly Ile Ser Phe Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Leu Glu Glu Ala Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95
Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 37 <211> 113 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 37
Gln Val Gin Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Lys Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser 100 105 110
١7
Ser <210> 38 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 38
Ser Ile Val Leu Thr Gln Ser Leu Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
Tyr Tyr Ala Ser Lys His Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 116 %er Thr Val Gln Ala 65 70 5 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 39 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 39
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45
Yay
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala His Tyr Tyr Asp Gly Ser Tyr Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 40
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ara Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly : 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
Thr Ser Ile Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Ile Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 85 90 95
Glu Tle Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110
محا 41 >210< 118 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 41 >400< ‎Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly‏ 10 5 1 ‎Ser Leu Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr‏ 25 20 ‎Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile‏ 40 35 ‎Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu‏ 60 55 50 ‎Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr‏ 80 75 70 65 ‎Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys‏ 95 90 85 ‎Ala Arg Pro Gly Tyr Gly Asn Leu Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr‏ 110 105 100 ‎Leu Val Thr Val Ser Ser‏ 115 42 >210< 114 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 42 >400< ‎Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly‏ 15 10 5 1 ‎Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser‏ 30 25 20 ‎Gly Asn Pro Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln‏ 45 40 35
١
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95
Asp His Thr Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110
Lys Arg <210> 43 <211> 116 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 43 .
Glu Val Lys Leu Leu (iu ‏عاك موة‎ Ty “ly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Lys Asp
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ala Leu 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Ser Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110
7 “a
Thr Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Ser Asn Tyr
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
Tyr Tyr Ala Ser Ile Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly 60
Ser Glv:.Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr teu Glu Gln 65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 116 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Ser Thr Ser 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45
٠١١
Gly Arg Ile Tyr Leu Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60
Thr Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Arg Gly Asp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110
Thr Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 113 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 46
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser riu "=. Zur Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 fu 15
Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
Ser Thr Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110
١١
Lys <210> 47 <211> 118 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 47
Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 1 5 10 15
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Pro Asp Tyr Ser Ile Thr Ser
Asp Tyr His Trp His Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu
Trp Met Gly Tyr Ile Ser Ser Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 60
Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr His Asp Thr Ser Glu Asn Gln Phe
GE 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Gly Leu Ser Gln Leu Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 48 <211> 107 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 48
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Pro Tyr 20 25 30
١
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45
Tyr Arg Thr Asn Arg Leu Leu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Asp Tyr 65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 9 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 49
Gln val Thr Leu Lys Glu Sex Giy Proc ‏ات‎ ile ‏تاه‎ Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
Asn Met Gly val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser 60
Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val 65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 85
Cys Val Arg Ser Asn Tyr Gly Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110
Yel
Gly Thr Leu Val Thr val Ser Ala 115 120 <210> 50 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 50
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser val Asp Ser Tyr
Gly Lys Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 51 <211> 119 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 51
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Arg Pro Gly 1 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Ala Val His Trp Val Lys Leu Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45
7 «0
Gly val Ile Ser Thr Tyr Asn Asp Tyr Thr Tyr Asn Asn Gln Asp Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Asn Ser Tyr Phe Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 52 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 52
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Ser Pro a:a Ser =u Lia Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Ser
Gly Ile Cys Phe Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Met Glu Lys Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110
١١ <210> 3 <211> 121 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 53
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Ser Pro Gly Thr 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Phe Tyr
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Lys Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr Asn Ala Tyr Tyr Asn Asp Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met: Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Pro Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 54 <211> 111 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 54
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30
Thr Phe Asn Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Pro Pro 35 40 45
١
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 85 90 95
Glu Ile Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 55 <211> 118 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 55
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Gln Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser G.y Fhe ‏ممت‎ Phe Ser Arg Tyr
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Val Asn Tyr Thr Pro Ser Leu 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Pro Gly Tyr Gly Asn Leu Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
٠١ <210> 6 <211> 113 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 56
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ala Thr Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Thr
Lys Gly Asp Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Ty: Tyr Cys Met Gln His 85 90 85
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110
Arg <210> 57 <211> 118 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 57
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Ser Val Arg Ser Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Leu Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30
Tyr Met His Trp Val Asn Leu Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45
١
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Glu Phe 50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Asn Ala Cys Asn Tyr Gly Ser Ala Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 58
Glu Thr Thr Val Thr Gln Ser Pro ‏دل‎ Ser Leu Ser Met Ala Ile Gly 1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Ile Thr Asn Thr Asp Ile Asp Asp Asp
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Leu Leu Ile
Ser Glu Gly Asn Gly Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Met Leu Ser 65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asp Asn Leu Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105
>210< 9 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 59
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
Gly Asp Leu Asn Pro Asp Ser Ser Ala Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu 60
Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Glri Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95
Thr Leu Ile Thr Thr Leu Val Pro Tyr Thr Met Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 60 <211> 113 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15
Val Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30
Gly Asp Gln Lys Asn Cys Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110
Lys <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 1
Glu Ile His Leu Val Glu Ser ‏يدت‎ iy “ly Leu Jal Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Leu Val 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Arg Thr Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Thr Ala Arg Ala Ser Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 62 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Pro Tyr
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 49 45
Tyr Arg Thr Asn Ary Leu Leu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 63 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide”
Yy\Y <400> 63
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
Asn Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95
Cys Val Arg Ser Asn Tyr Gly Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30
Gly Lys Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45
١٠
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 >210< 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 65
Gln Val Gln Leu Val Gin 3er Gly ‏معط‎ Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
Ala Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile
Gly Val Ile Ser Thr Tyr Asn Asp Tyr Thr Tyr Asn Asn Gln Asp Phe 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Asn Ser Tyr Phe Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110
Yio
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 66 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 66
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Thr
Lys Gly Asp Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 43 45
Fro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110
Arg <210> 7 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence
١ >221< source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Asp Tyr
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Glu Phe 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser ‏دن‎ Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Asn Ala Cys Asn Tyr Gly Ser Ala Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 68 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 8
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly 1 5 10 15
Asp Lys Val Asn Ile Ser Cys Ile Thr Asn Thr Asp Ile Asp Asp Asp 20 25 30
و ‎Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Ala Ile Leu Leu Ile‏ 45 40 35 ‎Ser Glu Gly Asn Gly Leu Arg Pro Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly‏ 60 55 50 ‎Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser‏ 80 75 70 65 ‎Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Leu Gln Ser Asp Asn Leu Pro Leu‏ 95 90 85 ‎Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys‏ 105 100 69 >210< 120 >211< ‎PRT‏ >212< ‎Artificial Sequence‏ >213< ‎<Z220>‏ ‎source‏ >221< ‎/note="Description of Artificial Sequence: Synthetic‏ >223< ‎polypeptide"‏ ‏69 >400< ‎Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly‏ 10 5 1 ‎Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr‏ 25 20 ‎Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile‏ 40 35 ‎Gly Asp Leu Asn Pro Asp Ser Ser Ala Ile Asn Tyr Val Asp Ser Val‏ 60 55 50 ‎Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr‏ 80 75 70 65 ‎Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys‏ 95 90 85
YA
Thr Leu Ile Thr Thr Leu Val Pro Tyr Thr Met Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr val Ser Ser 115 120 <210> 70 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 70
Ala Ile Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly 1 5 10 15
Arg Arg Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His
Val Tyr Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg
Phe Ala Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln 60
Asp Ser Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu 65 70 75 80
Glu Ala Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala 85 90 95
Gly Pro Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro 100 105 110
Gln Thr Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro 115 120 125
Thr Tyr Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser 130 135 140
٠
Asn His Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala 145 150 155 160
Gly Pro Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe 165 170 175
Gly Gln Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu 180 185 190
Ser Phe Ala Arg val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val His Pro 195 200 205 val Arg Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 210 215 220
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 225 230 235 240
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu } 245 250 255
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 260 265 270
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 275 280 285 val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 290 295 300
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 305 310 315 320
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 325 330 335
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 340 345 350
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 355 360 365
YY.
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 370 375 380
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 385 390 395 400
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 405 410 415
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 420 425 430
Gly Lys <210> 71 <211> 702 <212> PRT <213> Artificial Sequence : <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 71
Ala Pro Gln Asp Val val Val Ala Arg Tyr Glu Glu Ala Met Phe His 1 5 10 15
Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro Ser Leu Gln Trp Leu Phe Glu
Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser Arg Pro Pro His Leu Arg Arg
Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu Leu Leu Thr Gln Val Arg Pro 60
Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile Gly Gln Gly Gln Arg Gly Pro 65 70 75 80
Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His Leu Ala Glu Ile Glu Asp Met 85 90 95
YY)
Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr Ala Gly Ser Glu Glu Arg Val 100 105 110
Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro Glu Pro Ser Val Trp Trp Glu 115 120 125
His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His Gly Arg Val Tyr Gln Lys Gly 130 135 140
His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala Glu Ser Asp Ala Gly Val Tyr 145 150 155 160
Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly Gln Arg Arg Gln Asp Val Asn 165 170 175
Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp Leu Lys Lys Pro Gln Asp Ser 180 185 190
Gin Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr Leu Asp Cys T.eu Thi Gln Ala 195 200 205 :
Thr Pro Lys Pro Thr val Val Trp Tyr Arg Asn Gln Met Leu Ile Ser 210 215 220
Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys Asn Gly Thr Leu Arg Ile Asn 225 230 235 240
Ser Val Glu Val Tyr Asp Gly Thr Trp Tyr Arg Cys Met Ser Ser Thr 245 250 255
Pro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Gln Ala Arg Val Gln val Leu Glu Lys 260 265 270
Leu Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gln Pro Gln Gln Cys Met Glu Phe Asp 275 280 285
Lys Glu Ala Thr Val Pro Cys Ser Ala Thr Gly Arg Glu Lys Pro Thr 290 295 300
YYy
Ile Lys Trp Glu Arg Ala Asp Gly Ser Ser Leu Pro Glu Trp Val Thr 305 310 315 320
Asp Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val Thr Arg Asp Asp Ala 325 330 335
Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro Gln Gly Gln Ile Arg 340 345 350
Ala His Val Gln Leu Thr val Ala Val Phe Ile Thr Phe Lys Val Glu 355 360 365
Pro Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr Ala Leu Leu Gln Cys 370 375 380
Glu Ala Gln Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln Trp Lys Gly Lys Asp 385 390 395 400
Arg Ile Leu Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg Met His Ile Phe Gln 405 410 415
Asn Gly Ser Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro Glu Asp Ser Gly Arg 420 425 430
Tyr Thr Cys Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile Lys His Thr Glu Ala 435 440 445
Pro Leu Tyr Val Val Asp Lys Pro Val Pro Glu Glu Ser Glu Gly Pro 450 455 460
Gly Ser Pro Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln His Pro Val Arg Ser Val 465 470 475 480
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 485 490 495
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 500 505 510
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 1 515 520 525
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 530 535 540
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 545 550 555 560
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 565 570 575
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 580 585 590
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 595 600 605
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 610 615 620
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 625 630 635 640
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 645 650 655
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 660 665 670
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 675 680 685
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 690 695 700 <210> 72 <211> 708 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide”
<400> 2
Ala Ile Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly 1 5 10 15
Arg Arg Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His val Tyr Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg
Phe Ala Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln 60
Asp Ser Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu 65 70 75 80
Glu Ala Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala 85 90 95
Gly Pro Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro 100 10°F 110
Gln Thr Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg Pro 115 120 125
Thr Tyr Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser 130 135 140
Asn His Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala 145 150 155 160
Gly Pro Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe 165 170 175
Gly Gln Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu 180 185 130
Ser Phe Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val val Val Ala Arg 195 200 205
Tyr Glu Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro 210 215 220
7,١
Ser Leu Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser 225 230 235 240
Arg Pro Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu 245 250 255
Leu Leu Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile 260 265 270
Gly Gln Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His 275 280 285
Leu Ala Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg Val Phe Thr 290 295 300
Ala Gly Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro 305 310 315 320
Glu Proc Ser val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr 5 525 330 335
Gly Arg Val Tyr Gln Lys Gly His Glu Leu Val Leu Ala Asn Ile Ala 340 345 350
Glu Ser Asp Ala Gly Val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly 355 360 365
Gln Arg Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala Thr Val Pro Ser Trp 370 375 380
Leu Lys Lys Pro Gln Asp Ser Gln Leu Glu Glu Gly Lys Pro Gly Tyr 385 390 395 400
Leu Asp Cys Leu Thr Gln Ala Thr Pro Lys Pro Thr Val Val Trp Tyr 405 410 415
Arg Asn Gln Met Leu Ile Ser Glu Asp Ser Arg Phe Glu Val Phe Lys 420 425 430 yy
Asn Gly Thr Leu Arg Ile Asn Ser Val Glu Val Tyr Asp Gly Thr Trp 435 440 445
Tyr Arg Cys Met Ser Ser Thr Pro Ala Gly Ser Ile Glu Ala Glin Ala 450 455 460
Arg Val Gln Val Leu Glu Lys Leu Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gln Pro 465 470 475 480
His Pro Val Arg Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val 485 490 495
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 500 505 510
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 515 520 525
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 530 £35 540 val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg $lu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 545 550 555 560
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val val His Gln Asp Trp Leu Asn 565 570 575
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 580 585 590
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 595 600 605
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 610 615 620
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 625 630 635 640
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 645 650 655
أ
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 660 665 670 val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser val 675 680 685
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 690 695 700
Ser Pro Gly Lys 705 <210> 3 <211> 429 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 73
Lys Phe Thr Pro Pro Pro Gln Pro Gln Gln Cys Met Glu Phe Asp Lys 1 5 10 15
Glu Ala Thr Val Pro Cys Ser Ala Thr Gly Arg Glu Lys Pro Thr Ile
Lys Trp Glu Arg Ala Asp Gly Ser Ser Leu Pro Glu Trp Val Thr Asp
Asn Ala Gly Thr Leu His Phe Ala Arg Val Thr Arg Asp Asp Ala Gly 60
Asn Tyr Thr Cys Ile Ala Ser Asn Gly Pro Gln Gly Gln Ile Arg Ala 65 70 75 80
His Val Gln Leu Thr Val Ala Val Phe Ile Thr Phe Lys Val Glu Pro 85 90 95
Glu Arg Thr Thr Val Tyr Gln Gly His Thr Ala Leu Leu Gln Cys Glu 100 105 110
YYA
Ala Gln Gly Asp Pro Lys Pro Leu Ile Gln Trp Lys Gly Lys Asp Arg 115 120 125
Ile Leu Asp Pro Thr Lys Leu Gly Pro Arg Met His Ile Phe Gln Asn 130 135 140
Gly Ser Leu Val Ile His Asp Val Ala Pro Glu Asp Ser Gly Arg Tyr 145 150 155 160
Thr Cys Ile Ala Gly Asn Ser Cys Asn Ile Lys His Thr Glu Ala Pro 165 170 175
Leu Tyr Val val Asp Lys Pro Val Pro Glu Glu Ser Glu Gly Pro Gly 180 185 190
Ser Pro Pro Pro Tyr Lys Met Ile Gln His Pro Val Arg Ser Val Glu 195 200 205
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Proc Val Ala Gly ‘ro Ser Val Phe Leu 210 215 220
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 225 230 235 240
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln 245 250 255
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 260 265 270
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 275 280 285
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 290 295 300
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 305 310 315 320
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
325 330 335
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 340 345 350
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 355 360 365
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 370 375 380
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 385 390 395 400
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 405 410 415
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 420 425 <210> 74 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 74
Glu Glu Ala Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu 1 5 10 15
Ala Gly Pro Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln
Pro Gln Thr Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Asp Gly His Pro Arg
Pro Thr Tyr Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln 60
Ser Asn His Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro
YY
65 70 75 80
Ala Gly Pro Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala 85 90 95
Phe Gly Gln Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp 100 105 110
Glu Ser Phe Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala 115 120 125
Arg Tyr Glu Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro 130 135 140
Pro Ser Leu Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg 145 150 155 160
Ser Arg Pro Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser 165 170 175
Leu Leu Leu Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ale iy lle Tyr Arg Cys 180 185 190
Ile Gly Gln Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu 195 200 205
His Leu Ala Glu His Pro Val Arg Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 325 330 335
Arg Glu Pro Gln val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Fhe Phe Leu Tyr 385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 75 <211> 607 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide” <400> 75
Ala Ile Val Phe Ile Lys Gln Pro Ser Ser Gln Asp Ala Leu Gln Gly 1 5 10 15
YYY
Arg Arg Ala Leu Leu Arg Cys Glu Val Glu Ala Pro Gly Pro Val His
Val Tyr Trp Leu Leu Asp Gly Ala Pro Val Gln Asp Thr Glu Arg Arg
Phe Ala Gln Gly Ser Ser Leu Ser Phe Ala Ala Val Asp Arg Leu Gln 60
Asp Ser Gly Thr Phe Gln Cys Val Ala Arg Asp Asp Val Thr Gly Glu 65 70 75 80
Glu Ala Arg Ser Ala Asn Ala Ser Phe Asn Ile Lys Trp Ile Glu Ala 85 90 95
Gly Pro Val Val Leu Lys His Pro Ala Ser Glu Ala Glu Ile Gln Pro 100 105 110
Gln Thr Gln Val Thr Leu Arg Cys His Ile Rsp Gly His Pro Arg Pro : 115 120 125
Thr Tyr Gln Trp Phe Arg Asp Gly Thr Pro Leu Ser Asp Gly Gln Ser 130 135 140
Asn His Thr Val Ser Ser Lys Glu Arg Asn Leu Thr Leu Arg Pro Ala 145 150 155 160
Gly Pro Glu His Ser Gly Leu Tyr Ser Cys Cys Ala His Ser Ala Phe 165 170 175
Gly Gln Ala Cys Ser Ser Gln Asn Phe Thr Leu Ser Ile Ala Asp Glu 180 185 190
Ser Phe Ala Arg Val Val Leu Ala Pro Gln Asp Val Val Val Ala Arg 195 200 205
Tyr Glu Glu Ala Met Phe His Cys Gln Phe Ser Ala Gln Pro Pro Pro 210 215 220
Ser Leu Gln Trp Leu Phe Glu Asp Glu Thr Pro Ile Thr Asn Arg Ser 225 230 235 240 yy
Arg Pro Pro His Leu Arg Arg Ala Thr Val Phe Ala Asn Gly Ser Leu 245 250 255
Leu Leu Thr Gln Val Arg Pro Arg Asn Ala Gly Ile Tyr Arg Cys Ile 260 265 270
Gly Gln Gly Gln Arg Gly Pro Pro Ile Ile Leu Glu Ala Thr Leu His 275 280 285
Leu Ala Glu Ile Glu Asp Met Pro Leu Phe Glu Pro Arg val Phe Thr 290 295 300
Ala Gly Ser Glu Glu Arg Val Thr Cys Leu Pro Pro Lys Gly Leu Pro 305 310 315 320
Glu Pro Ser val Trp Trp Glu His Ala Gly Val Arg Leu Pro Thr His 325 330 335
Gly Arg Val Tyr Gln Lys Gly His i Leu -1 Leu Ala Asn Ile Ala 340 345 350
Glu Ser Asp Ala Gly val Tyr Thr Cys His Ala Ala Asn Leu Ala Gly 355 360 365
Gln Arg Arg Gln Asp Val Asn Ile Thr Val Ala His Pro Val Arg Ser 370 375 380 val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser val 385 390 395 400
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 405 410 415
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 420 425 430
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 435 440 445
"7*7
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 450 455 460
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 465 470 475 480
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 485 490 495
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 500 505 510
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 515 520 525
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 530 535 540
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 545 550 555 560
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 565 570 575
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 580 585 590
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 595 600 605 <210> 6 <400> 76 000 <210> 77 <400> 77 000 <210> 8 <400> 78
١١
000 <210> 79 <400> 79 000 <210> 80 <400> 80 000 <210> 81 <400> 81 000 <210> 82 <400> 82 000 <210> 83 <400> 83 000 <210> 84 <400> 84 000 <210> 85 <400> 85 000 <210> 86 <400> 86 000 <210> 87 <400> 87
>210< 8 <400> 88 000 <210> 89 <400> 89 000 <210> 90 <400> 90 000 <210> 91 <400> 91 000 <210> 92 <400> 92 000 <210> 3 <400> 93 000 <210> 94 <400> 94 000 <210> 95 <400> 95 000 <210> 96 <400> 96
YYv
<210> 97 <400> 97 000
<210> 98 <400> 98 000
<210> 99 <400> 9 000
<210> 100 <400> 100 000
<21C> 101 <400> 101 000
<210> 2 <400> 102 000
<210> 103 <400> 103 000
<210> 104 <400> 104 000
<210> 105 <400> 105
7 ْ <210> 106 <400> 106 000 <210> 107 <400> 7 000 <210> 108 <400> 108 000 <210> 109 <400> 9 000 <210> 110 <400> 110 000 <210> 111 <400> 111 000 <210> 112 <400> 112 000 <210> 113 <400> 113 000 <210> 114 <400> 114 000 <210> 115
<400> 115 000 <210> 116 <400> 6 000 <210> 117 <400> 117 000 <210> 118 <400> 118 000 <210> 119 <400> 119 000 <210> 120 <211> 336 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 120 gacattgtgc tgacccaatc tccagettct ttggetgtgt ctctagggca gagggccacc 60 atatcctgca gagccagtga aagtgttgat agttttggca atagttttat gcactggtac 120 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cctaggatcc 180 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240 cctgtggagg aggatgattc tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttcctcgg 300 acgttcggtg gaggctccag gctggaaatc aaacgg 336 <210> 121 <211> 339 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 121 caggtccaaa tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcectc agtgaagcett 60 tcctgcaagg ctactggcta cacattcact ggctactgga ttgagtgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gecttgagtyg gattggagag attttacctg gaagtggtcg ttctaactce 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgctgata catcctccaa cacagectac 240 atgcaactca gcagcctgac aactgaggac tctgccatct attactgtgce aagagggaag 300 ctttcctggg gccaagggac tctggtcact gtctcetgcea 339 <210> 122
<211> 324
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 122 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag tctggtatca acagaaaaca 120 gggcaatctc ctaaagcact gattcactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccctcagcaa tgtacagtct 240 gaagacttygg cagagtattt ctatcagcac tataacagcect ttccgtacac gttceggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa acygg 324 <210> 123
<211> 345
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 123 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggtgagge ctggggtctc agtgaagatt 60 tcctgcaagg gttctggcta cagattcact gattatccta tacactgggt gaagcagagt 120 catgcaaaga gtctagagtg gattggaatt attagtactt actatggtga tgttaccaac 180 aacccgaagt tcaggggcaa ggccacaatg actgtagaca aatcctccac cacagcectat 240 atggaacttg ccagactgac atctgaggat tctgccatct attactgtgc aagaaatgat 300 ctttttgctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 124
<211> 282
<212> DNA
<213> Mus sp.
١ <400> 4 ctaggaggca gagtcaccat tacttgcaag gcaagtgacc acattaataa ttggttagcc 60 tggtatcagc agaaaccagg aaatgctcct aggctcttaa tatctggtgce taccactttg 120 gaaactgggg ttccttcaag attcagtggc agtggatctg gaaaggatta cactctcagc 180 ataaccagtc ttcagactga agatgttgct acttattact gtcaacagta ttggagtatt 240 ccgtacacgt tcggaggggg gaccaagctg gaaataaaac gg 282 <210> 125 <211> 375 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 125 tctgatgtgec agcttcagga gtcgggacct ggcctggtga aaccttctca gtctctgtcce 60 ctcacctgca ctgtcactgg ctactcaatc accagtgatt atgcctggaa ctggatccgg 120 cagtttccag gaaacaaact ggagtggatg ggctacataa gctacagtgg ttacactaac 180 tacaacccat ctctcaaaag tcgaatctct atcactcgag acacatccaa gaaccagtte 240 tteotgecagt tgatttetgt gactactgag aacacageca catettacty tgcaagaggyg 300 : gatgcttacg acgtccggag aagtacgtac tactttgact actggggcca aggcaccact 360 ctcacagtct cctcg 375 <210> 126 <211> 324 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 1206 gatattgtgc taactcagtc tccagccacc ctgtcggtga ctccaggaga tagcecgtcagt 60 ctttcctgca gggccagcca aagtgttagc aacaacctac actggtatca acaaaaatca 120 catgcgtctc caaggcttct catcaagtat gcttcccagt ccatctctgg gatcccectcece 180 aggttcagtg gcagtggatc agggacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 240 gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agttacagct ggcctecggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa acgg 324 <210> 127 <211> 333 <212> DNA
VEY
<213> Mus sp. <400> 127 cagctggagg agtcaggtgc tgagctgatg cagcctgggg cctcagtgaa ggtttcctge 60 aaggccactg gctacacatt cactgtctac tggatagagt gggtaaaaca gaggcctgga 120 catggccttg aatggattgg agagatttta cctggaagtg gtagtactga ttacaatgag 180 aagttcaagg gcaaggccac attcactgca gattcatcct ccaacacagc ctacatgcaa 240 ctcagcagcc tgacaactga ggactctgcc atctattact gtgcaagagg gaagcttcac 300 tggggccaag ggactctggt cacagtctct ‏3ه‎ 333 <210> 128 <211> 341 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 128 gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctgagtgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagtctgtta aacggtggaa atcaacagaa ctccttggcec 120 tggtaccagc agaaaccaga gcagcctect aaactgotgya tctacgggge ttccactagg 180 gaatctagggg tccctgatcg cttcacagge agtggatctg gaaccgattt cgctcttacce 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga tcatacttat 300 ccgtacacgt tcggaggggg gaccgagctg gaaataaaac ‏و‎ 341 <210> 129 <211> 354 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 129 gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggce ctggtgcagce ctggaggatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cgattttagt aaagactgga tgagttgggt ccggcaggcet 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagccgtac gataaattat 180 gcaccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaga acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga gtaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgc aagatgggat 300 tacgacggtg gtatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354 <210> 130
١
<211> 323
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 130 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcecc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacce 60 atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtccacaat gcaaacacct tagcagaagg tgtgccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga ggatcaacag cctgcagcect 240 gaagattttg ggagttatta ttgtcagcat cattatggta ttccgttcac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaagtaga acg 323
<210> 131
<211> 354
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 131 gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag-cectcaggatt cgattttagt agaractggn tgagttgagt ccogcaggcet 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcagtac ygataaactat 180 acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgc aagaccggga 300 tatggtaact tgtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctce ‏معو‎ 354
<210> 132
<211> 334
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 132 gacattgtgc tgacccaatc tccagecttct ttggctgtgt ctctaggaca gagagccact 60 gtcttctgca gagccagcca gactgtcgat tataatggaa tgagttatat gcactggttce 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cctagattct 180 gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaagatgc tgcaacctat tactgtcagce aatgtattga ggatccgetce 300 acgttcggtg ctgggaccat gctggaggtg aaac 334
Yee
<210> 133
<211> 363
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 133 gaggtccagce tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgecaagg cttctggata cacattcact agctatgtta tacactgggt gaagcagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt tcagtgatgg tactaagttt 180 actgagaagt tcaaaggcaa ggcctcactg acttcagaca aatcgtccag cacagcctac 240 atggagctca acagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaagaggt 300 ccttattatt acggtaccgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctec 360 tca 363 <210> 134
<211> 322
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 134 cacatccaga tgactcagtc tccagectce ..atctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca acagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtcaatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgtcatceg 180 aggttccgtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgcagtct 240 gaagattttg ggagttatta ttgtcaacat ttttggatta ctccattcac gttcggctceg 300 gggacaaagt tggaaagaaa ac 322 <210> 135
<211> 366
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 135 caggttcagc tccagcagtc aggggctgag ctgggaagac ctggggcttce agtgaaactg 60 tcectgeaagg attctggcta caccattact atctactgga tgcagtgggt aaaacagagg 120 cctggacagg gtctggaatg gattggggcet atttatcctyg gagatggtga tactaggtac 180 cctcagaagt tcaagggcaa gtccacattg tctgcagata aatcctccaa cacagectcce 240
Yé¢o atgcacctca gcagettgge atctgatgac tctgcggtct attactgttc aagaggaggg 300 tcaaccaact atgattacga cggatttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgte 360 tctgca 366 <210> 136
<211> 334
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 136 gacattgtgc tgacccaatc tccagettet ttggctgtgt ctctagggca gagggecacc 60 atctcctgeca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttat gcactggttc 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cctaggatcc 180 ggggtcectg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagect caacatccat 240 cctctggagg aggctgatac tgcaatgtat ttctgtcagce agagtaagga ggttcctcgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334 <210> 137
<ZL11> 9
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 137 caggttcagce tgcagcagtc tggagctgaa ctgatgaagce ctggggectc agtgaagata 60 tcctgcaagyg ctactggcta cacattcagt aactactgga tagagtgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gcecttgagtg gattggagag attttacctg gaaggggtag tactaactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagata cttcctccaa cacagectac 240 atgcaactca gcagcctgac ctctgaggac tctgccgtcect attactgtgce aagagggaaa 300 caatactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctca 339 <210> 138
<211> 323
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 138 agtattgtgc tgacccagtc tctcaaattc ctgcttgtgt cagcaggaga cagggttacc 60 atgacctgca aggccagtca gagtgtgact aatgatgtag cttggtacca acagaagcca 120
يت ‎gggcagtctc ctaaactgct gatatactat gcatccaaac actacactgg agtccctgat 180‏ ‎cgcttcactg gcagtggata tgggacggat ttcactttca ccatcagcac tgtgcaggct 240‏ ‎gaagacctgg cagtttattt ctgtcagcag gattatagct ctccgtacac gttcggaggg 300‏ ‎gggaccaagc tggaaataaa acg 323‏ 139 >210< 360 >211< ‎DNA‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 139 >400< ‎caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctagtgaagc ctggggcettce agtgaagctg 60‏ ‎tcctgecaagg cttcectggecta caccttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcadgagg 120‏ ‎cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaacggtcg ttctaactac 180‏ ‎aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240‏ ‎atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtge acattactac 300‏ ‎gatrggtagtt acagggtftctt tgactattgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360‏ 140 >210< 334 >211< ‎DNA‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 140 >400< ‎gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttce ttagctgtat ctcectggggca gagggccacce 60‏ ‎atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctacct ctatttatat gcactggtac 120‏ ‎caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 180‏ ‎ggggtccctyg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag aaatcaccct caacatccat 240‏ ‎cctgtggagg aggaggatac tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattccgtgg 300‏ ‎acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334‏ 141 >210< 354 >211< ‎DNA‏ >212< ‎Mus sp.‏ >213< 141 >400< ‎gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggce ctggtgcage ctggaggatc cctgaaagtce 60‏
١ tcctgtacag cctcaggatt cgattttagt agatattgga tgagttgggt ccggcaggcet 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcagtac gataaactat 180 acgccatcte tgaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgc aagaccggga 300 tatggtaacc tctttgttta ctggggccaa gggactctgg tcactgtcte ctca 354 <210> 142 <211> 341 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 142 gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctgagtgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagtctgtta aacagtggaa atccaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaagccagg gcagcctcct aaactgttga tctacgggge atccactagg 180 ggatctgggg tccctgatceg cttcacagge agtggatctg ggaccgattt cactcttacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggea qatttactact gtcagaatga tcatactttt 300 : ccgtacacgt tcggaggggy gaccaagctg gaaataaaac ‏و‎ 341 <210> 143 <211> 348 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 143 gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagce ctggaggatc cctgagactce 60 tcctgtgecag cctcaggatt cgattttagt aaagactgga tgagttgggt ccggcaggcet 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag acagtagtac gataaactat 180 gcaccagctc taaaggataa attcatcatc tccagagaga acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga acaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgce aagatggtca 300 actgggcttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcectcea 348 <210> 144 <211> 321 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 144
YEA gatatccaga tgacacagac tccatcctcc ctgtctgect ctctgggaga cagagtcacc 60 atcaattgca gggcaagtca gggcctcagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctactac gcatcaatat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcactg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcac cctggagcaa 240 gaggatattg gcacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtggac gttcggtgga 300 ggcaccaaac tggaaatcaa c 321 <210> 145 <211> 348 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 145 caggttcaac tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggectc agtgaagatt 60 tcctgcaagg cttctggcecta tccattcagt acctcctgga tgaactgggt gaagcagagg 120 cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcttg gagatggaga tactaactac 180 aatgggaagt tcacgggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagtttac 240 atgcaactca gcagcctgac atctgaggar ‏انوك‎ oF anthtctgtge aagatggagg 300 ‘ggtgactacg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcectceca 348 >210< 6 >211< 0 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 140 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagetgtgt cagttggaga gaaggttact 60 ctgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagca ctcaaaacaa ctacttggece 120 tggtaccagc agacaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactggge atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacce 240 atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat 300 ccgtggacgt tcggtggagg caccaagctg gaaatcaaac 340 <210> 147 <211> 354 <212> DNA <213> Mus sp.
Yea <400> 147 tctgatgtge agcttcagga gtcaggacct ggcctegtga aaccttctca gactctgtct 60 ctcacctget ctgtccctga ctactccatce accagtgatt atcactggca ctggatcagg 120 cagtttccag gaaacaaact ggagtggatg ggatacataa gctcaagggg tagtactaac 180 tacaacccat ctctcaaaaa tcgaatctcc atcactcatg acacatctga gaatcagttc 240 ttcctgaaat tgacttctgt gactactgag gactcagcca catattattg tgcaggcttg 300 tcccagttag ctcttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcea 354 <210> 148 <211> 322 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 148 gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60 atcacttgca aggcgagtca ggacatttat ccctatttaa actggttcca acaaaaacca 120 gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt acaaatagat tgctagatgg ggtcccatca 180 aggttcagtyg gcagtggatc tggacaagat tattctctca ccatcagcag cctggactat 240 gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt ttccgctcac gttcggtget 300 gggaccaagc tggagctgaa ac 322 <210> 149 <211> 360 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 149 caagttactc taaaagagtc tggccctggg atattgaagce cctcacagac cctcagtctyg 60 acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctaata tgggtgtagg ctggattcgt 120 cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gcacacattt ggtgggatga tgataagtat 180 tataacccat ccctgaagag ccagctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggtc 240 ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgaa gatactgcca cttactactg tgttcgaagt 300 aactatggtt acgcctggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgcea 360 <210> 150 <211> 334
7 On
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 150 gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggetgtgt ctctagggca gagggccace 60 atatcctgca gagccagtga aagtgttgat agctatggca aaagttttat gcactggtac 120 cagcagagac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180 gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240 cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcaac aaagtaatga ggatccgtgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334 <210> 151
<211> 357
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 151 caggtccagt tgcagcagtc tgggcctgag gtggtgaggc ctggggtctce agtgaagatt 60 tcctgcaagg gttccggcecta cacattcact cattatgetg tgcactgggt gaagctgagt 120 catgcaaaga gtctggagtg gattggagtt at Lagcactt coaatgatta tacatacaac 180 aaccaggatt ttaagggcaa ggccacaatg actgtagaca aatcctccag cacagcctat 240 atggaacttg ccagattgac atctgaggat tctgccatct attactgtgc aagaggtaac 300 tcctacttet atgectttgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ‏قمعم‎ 357 <210> 152
<211> 334
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 152 gacattgcgce tgacccaatc tccagcttcet ttggetgtgt ctectggggea gagggccacce 60 atttcctgeca gagccagcga aagtgttgat aattctggca tttgttttgt gaactggttce 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa ccaaggatcc 180 ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagect caacatccat 240 cctatggaga aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaagga ggttccgtgg 300 acgttcggtyg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334
١١
<210> 153
<211> 363
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 153 caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgagec ctgggacttce agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcaca ttctatggta taagctgggt gaagcagaaa 120 actggacagg gccttgagtyg gattggagag atttatcctg gaagttataa tgcttactac 180 aatgacaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca gatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca gcagcctgac atctgaggac ‏لماوعو‎ atttctgtge cagagactat 300 ggtgacccgt attactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcce 360 tca 363 <210> 154
<211> 334
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 4 gacattgtgc tuacacagte oTtgoti Io Ttaactgtgt cteotggggca gagggccacc 50 atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt acatctacct ttaattatat gaactggtac 120 caacagaaac taggacagcc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct 180 ggggtccctyg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatat tgcaacatat tactgtcagc acagttggga gattccgtgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334 <210> 155
<211> 4
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 155 gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc ccagaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cgatttcagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggcet 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attaatccag atagcagtac ggtaaactat 180 acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga gtaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtgec aagaccggga 300
YoY tatggtaacc tctttgttta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ctca 354 <210> 156
<211> 337
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 156 gatattgtgt tgactcagge tacaccctct gtacctgtca ctecctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catactaagg gcgacactta cttgtattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgec 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgttttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatcca 300 ttcacgttcg gectcggggac aaagttggaa ataaaac 337 <210> 157
<211> 354
<212> DNA
<Z13> Mus <p.
<400> 157 gaggttcagc tgcagcagtc tggggcagag tctgigaggt caggggcctc agtcaagttg 60 tcctgecaccg cttctggect caatattaaa gactactata tgcactgggt gaacctgagg 120 cctgaacagg gcctggagtg gattggatgg attgatcctg agaatggtga tactgaatat 180 gccecggagt tccagggcaa ggccactatg actgcagaca catcttccaa cacagcectac 240 ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtcect attactgtaa tgcttgcaac 300 tacggtagtg cctacggcta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354 <210> 158
<211> 2
<212> DNA
<213> Mus sp.
<4Q00> 158 gaaacaactg tgacccagtc tccagcatcc ctgtccatgg ctataggaga aaaagtcacc 60 atcagatgca taaccaacac tgatattgat gatgatatga actggtacca gcagaagcca 120 ggggaacctc ctaagctcct tatttcagaa ggcaatggtc ttegtcctgg agtcccatcc 180 cgattctcca gcagtggcta tggcacagat tttgttttta caattgaaaa catgctctca 240
YoY gaagatgttg cagattacta ctgtttgcaa agtgataact tgcctctcac gttcggcetcg 300 gggacaaagt tggaaataaa ac 322 <210> 159 <211> 360 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 159 gaggtgaagc ttctcgagtc tggaggtggce ctggtgcagce ctggaggatc cctgaaactce 60 tcctgtgecag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgagttgggt ccggcaggct 120 ccagggaaag gactagaatg gattggagat cttaatccag atagcagtgc gataaactat 180 acgccatctc taaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgcetgtac 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atctgaggac acagcccttt attactgtac actcattact 300 acgttagtac cctatactat ggacttctgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctcea 360 <210> 160 ‏ا‎ ‎>211< 0 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 160 gacattgtga tgactcagtc tccatcctcc ctgactgtga cagcaggagt gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagtctgtta aacagtggag atcaaaagaa ctgcttgact 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagccacct aaactgttga tctactgggce atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacagge agtggatctg gaacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatagttat 300 ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaac 340 <210> 161 <211> 360 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 161 gaaatacatc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaagtc 60 tcectgtgcag cctcectggatt cactttcagt aggtatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120 ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtggtg gtggtcgtta cacctactat 180
Yot ccagaccttg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca ttgccaggac caccctgtac 240 ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagaacagcet 300 cgggcttcga attatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcectcea 360
<210> 162
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide"
<400> 162 gacatccaga tgacccagtc tccatcttce ctgtctgecat ctgtaggaga tagagtcact 60 atcacttgca aggcgagtca ggacatttat ccctatttaa actggttcca acaaaaacca 120 gggaaagctc ctaagaccct gatctatcgt acaaatagat tgctagatgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggaacagat tttactttca ccatcagcag cctgcaacct 240 : gaagatattg caacttatta ttgtcte.o ‏الوق ارا‎ 2 Tcgctcac gttcggtget 300 gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 163
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide”
<400> 163 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgetg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcage actagtaaca tgggtgtggg ctggatccgt 120 cagccccecag gaaaggccet ggagtggcectt gcacacattt ggtgggatga tgataagtac 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacce atcaccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240 gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgttcgaagt 300 aactatggtt acgcctggtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctcttca 360
Yoo
<210> 164 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 4 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtga gagtgttgac agctatggca aaagttttat gcactggtac 120 caacagaaac ctggccaggc tcccaggctc ctcatctata gggcatccaa cctggaatct 180 ggcatcccag ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcactct caccatcage 240 agcctagage ctgaagattt tgcagtttat tactgtcagc agagtaatga ggatccgtgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 333 <210> 5 <211> 7 <212> DNA > 213< Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 165 caggtccagce ttgtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagce ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gactatgectg tgcattgggt gcgccaggece 120 cccggaaaaa ggcttgagtg gattggagtg atcagcactt acaatgatta cacatacaat 180 aaccaggact tcaagggcag agtcaccatg accagggaca catccgcgag cacagcctac 240 atggagctga gcagactgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaggtaac 300 tcctacttcet atgcectttgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357 <210> 6 <211> 337 <212> DNA <213> Artificial Sequence
You
<220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 166 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccecctggaga gccggcectee 60 atctcctgca ggtctagtaa gagcctcctg catactaaag gagacaccta tttgtattgg 120 ttcctgcaga agccagggca gtctccacag ctcecctgatcect atcggatgtc taatcgggec 180 tccggggtec ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgta tgcaacatct agaatatcca 300 ttcacgttecg gccaggggac aaagttggaa atcaaac 337 <210> 167 <211> 355 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source
0 <223> /note="Description of Arcificizl ‏موجمج‎ Synthetic polynucleotide” <400> 167 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggectc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcaaa gactactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtyg gatgggatgg atcgaccctg aaaatggtga cacagaatac 180 gcaccggagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcectgag atctgaggac acggccgtgt attactgtaa tgcttgceaac 300 tacggtagtg cctacggcta ctggggccaa ggcaccactc tcaccgtctc ctcag 355 <210> 168 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide” <400> 168 gaaacgacac tcacgcagtc tccagcattc atgtcagcga ctccaggaga caaagtcaac 60
Yov atctcctgca taaccaacac agacattgat gatgatatga actggtacca acagaaacca 120 ggagaagctg ctattctcct tatttcagaa ggtaatggtc tccgtcctgg aatcccacct 180 cgattcagtg gcagcgggta tggaacagat tttaccctca caattaataa catagaatct 240 gaggatgctg catattactt ctgtctacaa agtgataact tgcctctcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 169 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 169 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggce ttggtccagc ctggggggtc cctgagactce 60 tcctgtgecag cctcectggatt cgactttagt agotattgga tyagctgggt ccegecagget 120 ccagggaagg 1072395831570 gatsogrecgac ctaaacccag attcaagtgce gataaactac 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtac actcattact 300 acgttagtac cctatactat ggacttctgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360

Claims (1)

  1. YoA
    عناصر_ الحماية ‎-١ ١‏ جسم مضاد معزول ‎(isolated antibody)‏ يرتبط على وجه التحديد مع ‎PTK7‏ = ويتنافس من أجل الارتباط إلى 71167 آدمي مع جسم مضاد يشمل: 1 0 منطقة متغيرة سلسلة خفيفة ‎(light chain variable region)‏ مذكورة كتعريف الترتيب ¢ رقم: 44 ومنطقة متغيرة سلسلة ‎(heavy chain variable region) Ali‏ مذكورة كتعريف ° الترتيب رقم: 49؛ أو 1 (ب) منطقة متغيرة سلسلة خفيفة ‎(light chain variable region)‏ مذكورة كتعريف الترتيب 7 رقم: ‎٠‏ © ومنطقة متغيرة سلسلة ‎(heavy chain variable region) Aldi‏ مذكورة ‎A‏ كتعريف الترتيب رقم: 0 ‎١‏ ”- الجسم المضاد ‎(antibody)‏ لعنصر الحماية )0 حيث يثبط جسم مضاد ‎(antibody)‏ ‏7 مذكور الارتباط للجسم المضاد ‎(antibody)‏ من (أ) أو (ب) عن طريق حوالي ‎74٠0‏ على الأقل. ‎=F)‏ الجسم المضاد ‎(antibody)‏ وفقا لعنصر الحماية ١ء‏ الذي يكون اختيارياً جسم مضاد ‎Y‏ متعادل؛ جسم مضاد ‎aut adil‏ مبطن. ‎So‏ ‎١‏ ؛- الجسم المضاد ‎(antibody)‏ وفقا لعنصر الحماية ١؛‏ الذي يرتبط على وجه التحديد إلى " شكل متطابق 71167 منتقى من المجموعة المتكونة من شكل متطابق ‎a‏ شكل متطابق ‎b‏ ‎Y‏ شكل متطابق ‎cc‏ وشكل متطابق ‎od‏ ‎١‏ *- الجسم المضاد ‎(antibody)‏ وفقا لعنصر الحماية ‎١‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody) ¥‏ أحادي النسخ ‎(monoclonal)‏ هجين ‎¢(chimeric)‏ مطعم مع ‎(CDR- CDR‏ ‎cgrafted) ¥‏ مكتسب السمة الآدمية ‎(humanized)‏ أو جسم مضاد آدمي مخلق ‎(recombinant‏ ‏؛ ‎human antibody)‏ أو جزء ‎Ade‏ ‎-١ ١‏ الجسم المضاد ‎(antibody)‏ وفقا لعنصر الحماية ‎١‏ يشتمل على: ‎Y‏ 0( منطقة متغيرة سلسلة خفيفة ‎(light chain variable region)‏ المشتملة على ثلاثة ‎CDRs‏ من تعريف الترتيب رقم: 54 ؛ و/أو 1 (ب)منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة ‎(heavy chain variable region)‏ المشتملة على ثلاثة هه ‎CDRs‏ من تعريف الترتيب رقم: 49 .
    ٠*4 ‏يشتمل على منطقة متغيرة سلسلة‎ ١ ‏وفقا لعنصر الحماية‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -7 ١ ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم: 17 و منطقة متغيرة‎ (light chain variable region) ‏خفيفة‎ ¥ ‏اختيارياً‎ UY ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم:‎ (heavy chain variable region) Ald ‏سلسلة‎ ¥ ‏؛ استبدال؛ حذف أو إضافة واحدة أو أكثر للحمض الأميني.‎ ‏يشتمل على:‎ ١ ‏وفقا لعنصر الحماية‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ =A) ‏المشتملة على ثلاثة‎ (light chain variable region) Adda ‏منطقة متغيرة سلسلة‎ (0 Y ‏و/أو‎ €0 ٠ ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ CDRs Y ‏المشتملة على ثلاثة‎ (heavy chain variable region) Als ‏(ب)منطقة متغيرة سلسلة‎ 0) ‏من تعريف الترتيب رقم:‎ CDRs ° ‏المشتمل على منطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ ١ ‏لعنصر الحماية‎ (antibody) ‏5؟- الجسم المضاد‎ ١ ‏ومنطقة متغيرة سلسلة ثقيلة‎ TE ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم:‎ (light chain variable region) ada ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم: 10 اختيارياً استبدال؛‎ (heavy chain variable ‏(صمتعء:‎ ‏؛ أو إضافة واحدة أو أكثر للحمض الأميني. ا‎ ‏يشتمل على منطفة متغيرة سلسلة‎ ١ ‏اند اية‎ aid ‏وفقا‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -<.. ١ 0 Ss 1 ‏.أو‎ AY ١ ‏كتعريف الترتيب رقم: ف‎ (light chain variable region) ‏خفيفة‎ 7 ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم: 44 ؛‎ (heavy chain variable region) Ali ‏منطقة متغيرة سلسلة‎ " Jo ‏أو‎ 27 د١‎ 4 ‏يشتمل على:‎ ١ ‏وفقا لعنصر الحماية‎ (antibody) ‏الجسم المضاد‎ -١١ ١ ‏مذكورة كتعريف الترتيب‎ (heavy chain variable region) ‏منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة‎ (0 Y ‏مذكورة‎ (light chain variable region) ‏ومنطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ (TV ‏رقم:‎ 1 SET ‏كتعريف الترثيب رقم:‎ ‏مذكورة كتعريف الترتيب‎ (heavy chain variable region) ‏(ب) منطقة متغيرة سلسلة ثقيلة‎ ‏مذكورة‎ (light chain variable region) ‏رقم : 15 ومنطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ 1 .64 ‏كتعريف الترتيب رقم:‎ v ‏يرتبط على وجه‎ (antibody) ‏مقترن يشتمل على جسم مضاد‎ (antibody) ‏مضاد‎ مسج-١١7‎ ١ ‏التحديد مع 01167 حيث يقترن الجسم المضاد ((200000)؛ أو يرتبط مع عامل مسمم‎
    Yi. ‏يتم اختياره أي عنصر من عناصر الحماية‎ (antibody) ‏للخلاياء واختيارياً حيث الجسم المضاد‎ ¥ ANY ؛11-١ ‏وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية‎ (antibody) ‏تركيبة دوائية الجسم المضاد‎ VY) AY ‏المقترن المذكور في عنصر الحماية‎ (antibody) ‏أو الجسم المضاد‎ " ‏مذكورة‎ (heavy chain variable region) ‏حمض نووي يشفر لمنطقة متغيرة سلسلة ثقيلة‎ -١ 40١ (light chain ‏و/أو منطقة متغيرة سلسلة خفيفة‎ To ‏أو‎ TF 0) (£9 ‏كتعريف الترثيب رقم:‎ " ‏مذكورة كتعريف الترتيب رقم دل نف اك أو ا‎ variable region) ¥ ‏خلية ناقل أو عائل الحمض النووي تشتمل على الحمض النووي المذكور في عنصر‎ -١١ ١ Af ‏الحماية‎ "
SA112330278A 2011-02-18 2012-02-15 مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام SA112330278B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161444614P 2011-02-18 2011-02-18
PCT/US2011/050451 WO2012031280A2 (en) 2010-09-03 2011-09-02 Identification and enrichment of cell subpopulations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA112330278B1 true SA112330278B1 (ar) 2015-10-09

Family

ID=46672972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA112330278A SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2012-02-15 مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام

Country Status (31)

Country Link
US (3) US9409995B2 (ar)
EP (2) EP2675827B1 (ar)
JP (2) JP6296796B2 (ar)
KR (1) KR102022734B1 (ar)
CN (2) CN107056945A (ar)
AR (1) AR085281A1 (ar)
AU (3) AU2012219313C1 (ar)
BR (1) BR112013021134B1 (ar)
CA (1) CA2827637C (ar)
CO (1) CO6791571A2 (ar)
CY (1) CY1123551T1 (ar)
DK (1) DK2675827T3 (ar)
ES (1) ES2829206T3 (ar)
HR (1) HRP20201399T1 (ar)
HU (1) HUE050657T2 (ar)
IL (3) IL228018A (ar)
LT (1) LT2675827T (ar)
MX (1) MX356434B (ar)
MY (1) MY173880A (ar)
PE (2) PE20141028A1 (ar)
PH (1) PH12018500452A1 (ar)
PL (1) PL2675827T3 (ar)
PT (1) PT2675827T (ar)
RS (1) RS60841B1 (ar)
RU (2) RU2627176C2 (ar)
SA (1) SA112330278B1 (ar)
SG (2) SG192816A1 (ar)
SI (1) SI2675827T1 (ar)
TW (2) TWI696635B (ar)
WO (1) WO2012112943A1 (ar)
ZA (1) ZA201306958B (ar)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106434561A (zh) 2010-09-03 2017-02-22 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 细胞亚群的鉴定和富集
US9778264B2 (en) 2010-09-03 2017-10-03 Abbvie Stemcentrx Llc Identification and enrichment of cell subpopulations
US20130061340A1 (en) * 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc. Identification and Enrichment of Cell Subpopulations
SA112330278B1 (ar) * 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
WO2013004841A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Genmab A/S Modulation of complement-dependent cytotoxicity through modifications of the c-terminus of antibody heavy chains
WO2014089493A1 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 Vanderbilt University Antibodies against factor xii and uses thereof
KR20160029027A (ko) * 2013-07-04 2016-03-14 프라운호퍼-게젤샤프트 추르 푀르데룽 데어 안제반텐 포르슝 에 파우 급성 골수성 백혈병 세포를 표적으로 하고 치료하는 새로운 융합 단백질
CN105980852B (zh) * 2014-04-17 2019-07-26 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 细胞分析方法和系统、装置
CA2947148C (en) * 2014-04-30 2022-02-08 Pfizer Inc. Anti-ptk7 antibody-drug conjugates
WO2018175833A1 (en) * 2017-03-23 2018-09-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Anti-c5a antibodies and uses thereof
US10767164B2 (en) 2017-03-30 2020-09-08 The Research Foundation For The State University Of New York Microenvironments for self-assembly of islet organoids from stem cells differentiation
KR20200128116A (ko) 2018-02-28 2020-11-11 화이자 인코포레이티드 Il-15 변이체 및 이의 용도
MX2020012607A (es) 2018-05-23 2021-01-29 Pfizer Anticuerpos especificos para gucy2c y sus usos.
MX2020012539A (es) 2018-05-23 2021-02-16 Pfizer Anticuerpos especificos para cd3 y sus usos.
WO2020014175A1 (en) * 2018-07-10 2020-01-16 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions for analyzing immortalized megakaryocyte progenitor cell lines and platelet-like particles derived therefrom
JP2022509017A (ja) 2018-11-07 2022-01-20 クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 抗ｐｔｋ７免疫細胞癌療法
WO2020128893A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Pfizer Inc. Combination treatments of cancer comprising a tlr agonist
US11339159B2 (en) 2019-07-17 2022-05-24 Pfizer Inc. Toll-like receptor agonists
JP2023506262A (ja) * 2019-12-16 2023-02-15 ２セブンティ バイオ インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ ｃａｒ抗体、コンジュゲートおよび使用方法
JP7369297B2 (ja) 2019-12-17 2023-10-25 ファイザー・インク Ｃｄ４７、ｐｄ－ｌ１に特異的な抗体、およびその使用
BR112022009470A2 (pt) 2019-12-18 2022-08-16 Pfizer Regime de tratamento diário para o câncer com um inibidor de prmt5
JP2023517044A (ja) 2020-03-09 2023-04-21 ファイザー・インク 融合タンパク質およびその使用
US20230192878A1 (en) 2020-05-13 2023-06-22 Pfizer Inc. Methods, therapies and uses for treating cancer
EP4182346A1 (en) 2020-07-17 2023-05-24 Pfizer Inc. Therapeutic antibodies and their uses
TW202224703A (zh) 2020-09-14 2022-07-01 美商輝瑞股份有限公司 治療癌症之方法、治療劑及用途
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
WO2022153161A1 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Pfizer Inc. Treatment of cancer using a prmt5 inhibitor
CN115894696A (zh) * 2021-08-18 2023-04-04 和迈生物科技有限公司 抗ptk7单域抗体及其应用
WO2023108101A1 (en) * 2021-12-09 2023-06-15 Emory University Antibodies that inhibit glycoprotein ib-ix mediated platelet signaling and uses in managing bleeding conditions
WO2023218320A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Anti-lymphotoxin beta receptor antibodies and methods of use thereof
WO2023242769A1 (en) 2022-06-17 2023-12-21 Pfizer Inc. Il-12 variants, anti-pd1 antibodies, fusion proteins, and uses thereof
WO2024003773A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Pfizer Inc. 2,7-naphthyridine compounds as mastl inhibitors
WO2024009191A1 (en) 2022-07-05 2024-01-11 Pfizer Inc. Pyrido[4,3-d]pyrimidine compounds
GB202212077D0 (en) 2022-08-18 2022-10-05 Tribune Therapeutics Ab Agents that inhibit ccn ligand-induced signalling for treating disease
WO2024074977A1 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Pfizer Inc. Substituted 1 h-pyrazolo-pyridine and-pyrimidine compounds

Family Cites Families (131)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4265551A (en) 1977-07-13 1981-05-05 U.S. Philips Corporation Drive for transporting and reversing an ink ribbon, and for withdrawing the printing head in printing devices
US4111824A (en) 1977-07-21 1978-09-05 Gulf Research & Development Co. Liquid dielectric composition based on a fraction derived from the alkylation product of benzene with ethylene
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4703004A (en) 1984-01-24 1987-10-27 Immunex Corporation Synthesis of protein with an identification peptide
DE3668186D1 (de) 1985-04-01 1990-02-15 Celltech Ltd Transformierte myeloma-zell-linie und dieselbe verwendendes verfahren zur expression eines gens, das ein eukaryontisches polypeptid kodiert.
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
CA2062795A1 (en) 1989-06-29 1990-12-30 Michael W. Fanger Bispecific reagents for aids therapy
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
WO1992000373A1 (en) 1990-06-29 1992-01-09 Biosource Genetics Corporation Melanin production by transformed microorganisms
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ES2139598T3 (es) 1990-07-10 2000-02-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de miembros de parejas de union especifica.
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
ATE145428T1 (de) 1990-12-14 1996-12-15 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
EP1820858B1 (en) 1991-03-01 2009-08-12 Dyax Corporation Chimeric protein comprising micro-protein having two or more disulfide bonds and embodiments thereof
AU662148B2 (en) 1991-04-10 1995-08-24 Scripps Research Institute, The Heterodimeric receptor libraries using phagemids
JPH06507398A (ja) 1991-05-14 1994-08-25 リプリジェン　コーポレーション Ｈｉｖ感染治療のための異種複合抗体
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
FR2686901A1 (fr) 1992-01-31 1993-08-06 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides antithrombotiques, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
JPH08500017A (ja) 1992-08-17 1996-01-09 ジェネンテク，インコーポレイテッド 二特異的免疫アドヘジン
WO1994004670A1 (en) 1992-08-26 1994-03-03 President And Fellows Of Harvard College Use of the cytokine ip-10 as an anti-tumor agent
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
DK0804070T3 (da) 1993-03-09 2000-08-07 Genzyme Corp Fremgangsmåde til isolering af proteiner fra mælk
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
EP0770135A1 (en) 1994-07-29 1997-05-02 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6046037A (en) 1994-12-30 2000-04-04 Hiatt; Andrew C. Method for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
DE69621940T2 (de) 1995-08-18 2003-01-16 Morphosys Ag Protein-/(poly)peptidbibliotheken
WO1997033899A1 (en) 1996-03-14 1997-09-18 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
AU728657B2 (en) 1996-03-18 2001-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1997034911A1 (en) 1996-03-22 1997-09-25 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule ii
ATE319745T1 (de) 1997-05-21 2006-03-15 Biovation Ltd Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
AU753157B2 (en) 1997-11-03 2002-10-10 Georgetown University Medical Center VEGI, an inhibitor of angiogenesis and tumor growth
PT1034298E (pt) 1997-12-05 2012-02-03 Scripps Research Inst Humanização de anticorpo murino
DE69942021D1 (de) 1998-04-20 2010-04-01 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
ES2278463T3 (es) 1998-12-08 2007-08-01 Biovation Limited Metodo para reducir la inmunogenicidad de proteinas.
EP2386574A3 (en) 1999-01-15 2012-06-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
DK2270147T4 (da) 1999-04-09 2020-08-31 Kyowa Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle
AU7950400A (en) 1999-10-19 2001-04-30 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Process for producing polypeptide
JP2003530839A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 プリンシピア ファーマスーティカル コーポレイション アルブミン融合タンパク質
ES2651952T3 (es) 2000-10-06 2018-01-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células que producen unas composiciones de anticuerpo
JPWO2002030954A1 (ja) 2000-10-06 2004-02-19 協和醗酵工業株式会社 抗体を精製する方法
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7138496B2 (en) 2002-02-08 2006-11-21 Genetastix Corporation Human monoclonal antibodies against human CXCR4
EP2357187A1 (en) 2000-12-12 2011-08-17 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
JP2005512044A (ja) 2001-12-03 2005-04-28 アブジェニックス・インコーポレーテッド 結合特性に基づく抗体分類
AU2003217930A1 (en) 2002-03-04 2003-09-22 Medimmune, Llc The prevention or treatment of cancer using integrin alphavbeta3 antagonists in combination with other agents
GB0219776D0 (en) * 2002-08-24 2002-10-02 Oxford Glycosciences Uk Ltd A protein involved in carcinoma
US8461119B2 (en) 2002-09-24 2013-06-11 The Burnham Institute Agents that modulate Eph receptor activity
DK1553975T3 (da) 2002-09-27 2012-05-07 Xencor Inc Optimerede Fc-varianter og fremgangsmåder til generering heraf.
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2004072266A2 (en) 2003-02-13 2004-08-26 Kalobios Inc. Antibody affinity engineering by serial epitope-guided complementarity replacement
CA2525899C (en) 2003-05-09 2016-03-08 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
RU2366716C2 (ru) * 2003-10-24 2009-09-10 Эсбатек Аг Способ идентификации и/или проверки ингибиторов рецепторных тирозинкиназ
US7709611B2 (en) 2004-08-04 2010-05-04 Amgen Inc. Antibodies to Dkk-1
AU2005277567A1 (en) 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Llc Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
WO2006052409A2 (en) 2004-10-23 2006-05-18 Case Western Reserve University Peptide and small molecule agonists of epha and their uses
AU2006287416A1 (en) 2005-09-07 2007-03-15 Medimmune, Llc Toxin conjugated Eph receptor antibodies
US20070123448A1 (en) 2005-11-23 2007-05-31 The Hospital For Sick Children Novel chemical entities affecting neuroblastoma tumor-initiating cells
JP5401639B2 (ja) * 2005-12-08 2014-01-29 メダレックス エル．エル．シー． タンパク質チロシンキナーゼ７（ｐｔｋ７）に対するヒトモノクローナル抗体およびそれらの使用
US8058252B2 (en) 2005-12-30 2011-11-15 Institut Gustave Roussy Use of inhibitors of scinderin and/or ephrin-A1 for treating tumors
US8343461B2 (en) 2006-03-08 2013-01-01 Wake Forest University Health Sciences Molecular signature of cancer
CN103073639A (zh) 2006-03-17 2013-05-01 比奥根艾迪克Ma公司 稳定的多肽组合物
EP2032694A4 (en) 2006-06-06 2010-09-15 Univ Tennessee Res Foundation COMPOSITIONS ENRICHED IN NEOPLASTIC STEM CELLS AND METHODS INVOLVING THEM
CA3153438C (en) 2006-09-07 2024-03-12 Scott & White Memorial Hospital Methods and compositions based on diphtheria toxin-interleukin-3 conjugates
EP2109668A4 (en) 2007-01-22 2011-10-05 Macrogenics West Inc HUMAN CANCER STEM CELLS
WO2008149803A1 (ja) 2007-06-06 2008-12-11 The University Of Tokyo 表面抗原マーカーを用いた急性リンパ性白血病における癌幹細胞の分離同定方法
EP2190481B1 (en) 2007-07-17 2014-12-24 The General Hospital Corporation Methods to identify and enrich for populations of ovarian cancer stem cells and somatic ovarian stem cells and uses thereof
EP2022848A1 (en) 2007-08-10 2009-02-11 Hubrecht Institut A method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells
JP2010538012A (ja) 2007-08-28 2010-12-09 バイオジェン アイデック マサチューセッツ インコーポレイテッド Ｉｇｆ−１ｒの複数のエピトープに結合する組成物
WO2009043051A2 (en) 2007-09-27 2009-04-02 Biogen Idec Ma Inc. Cd23 binding molecules and methods of use thereof
WO2009070767A2 (en) 2007-11-28 2009-06-04 Whitehead Institute For Biomedical Research Systemic instigation systems to study tumor growth or metastasis
AU2008334076A1 (en) * 2007-11-30 2009-06-11 Bristol-Myers Squibb Company Monoclonal antibody partner molecule conjugates directed to protein tyrosine kinase 7 (PTK7)
KR101123130B1 (ko) * 2008-03-17 2012-03-30 연세대학교 산학협력단 Ｐｔｋ７ 단백질의 기능 저해를 통한 세포의 이동, 침윤 또는 혈관신생 억제제
US8384551B2 (en) 2008-05-28 2013-02-26 MedHab, LLC Sensor device and method for monitoring physical stresses placed on a user
US8197809B2 (en) 2008-06-25 2012-06-12 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology CD9-specific human antibodies
US20100162416A1 (en) 2008-09-29 2010-06-24 Stemlifeline, Inc. Multi-stage stem cell carcinogenesis
US20120003235A1 (en) * 2008-12-31 2012-01-05 Biogen Idec Ma Inc. Anti-lymphotoxin antibodies
WO2010081171A2 (en) 2009-01-12 2010-07-15 Cyntellect, Inc. Laser mediated sectioning and transfer of cell colonies
US20110020221A1 (en) 2009-04-09 2011-01-27 The Johns Hopkins University Cancer stem cell expression patterns and compounds to target cancer stem cells
US10817851B2 (en) 2009-12-23 2020-10-27 Aristocrat Technologies Australia Pty Limited System and method for cashless gaming
FR2964148A1 (fr) 2010-08-30 2012-03-02 Peugeot Citroen Automobiles Sa Boite de degazage destinee au circuit de refroidissement d'un moteur thermique de vehicule automobile
US9778264B2 (en) 2010-09-03 2017-10-03 Abbvie Stemcentrx Llc Identification and enrichment of cell subpopulations
US20130061342A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc. Identification and Enrichment of Cell Subpopulations
WO2013119964A2 (en) 2012-02-08 2013-08-15 Stem Centrx, Inc. Identification and enrichment of cell subpopulations
US20130061340A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc. Identification and Enrichment of Cell Subpopulations
CN106434561A (zh) 2010-09-03 2017-02-22 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 细胞亚群的鉴定和富集
EP2446895A1 (en) 2010-10-01 2012-05-02 Stemgen S.P.A. EPH receptor expression in tumor stem cells
SA112330278B1 (ar) * 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
JP2016531915A (ja) 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
CA2947148C (en) * 2014-04-30 2022-02-08 Pfizer Inc. Anti-ptk7 antibody-drug conjugates
EP3209334A2 (en) 2014-10-20 2017-08-30 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
US11392902B2 (en) 2017-06-06 2022-07-19 United Parcel Service Of America, Inc. Systems, methods, apparatuses and computer program products for providing notification of items for pickup and delivery

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012112943A1 (en) 2012-08-23
DK2675827T3 (da) 2020-09-07
IL254062A0 (en) 2017-10-31
MX2013009541A (es) 2014-04-30
MX356434B (es) 2018-05-29
US20140105888A1 (en) 2014-04-17
CA2827637C (en) 2020-08-11
BR112013021134B1 (pt) 2022-12-27
RU2017126476A (ru) 2019-01-31
NZ708615A (en) 2017-02-24
US20180162952A1 (en) 2018-06-14
SG192816A1 (en) 2013-09-30
ES2829206T3 (es) 2021-05-31
CN107056945A (zh) 2017-08-18
PT2675827T (pt) 2020-10-29
JP2018104409A (ja) 2018-07-05
HUE050657T2 (hu) 2021-01-28
PH12018500452A1 (en) 2019-11-18
EP3763388A1 (en) 2021-01-13
NZ615285A (en) 2015-09-25
RU2013141976A (ru) 2015-03-27
BR112013021134A8 (pt) 2017-07-11
KR102022734B1 (ko) 2019-09-19
US9914784B2 (en) 2018-03-13
AU2012219313A1 (en) 2013-05-02
SG10201603926SA (en) 2016-07-28
RU2627176C2 (ru) 2017-08-03
JP2014511179A (ja) 2014-05-15
IL263020A (en) 2018-12-31
CN103547597B (zh) 2017-03-15
IL228018A0 (en) 2013-09-30
US9409995B2 (en) 2016-08-09
JP6296796B2 (ja) 2018-03-28
BR112013021134A2 (pt) 2016-11-29
IL228018A (en) 2017-09-28
CN103547597A (zh) 2014-01-29
TWI624476B (zh) 2018-05-21
MY173880A (en) 2020-02-26
AU2012219313B2 (en) 2017-02-02
PE20181076A1 (es) 2018-07-04
CO6791571A2 (es) 2013-11-14
AR085281A1 (es) 2013-09-18
HRP20201399T1 (hr) 2020-11-27
CY1123551T1 (el) 2022-03-24
CA2827637A1 (en) 2012-08-30
TW201309729A (zh) 2013-03-01
PL2675827T3 (pl) 2021-01-25
US20160272723A1 (en) 2016-09-22
US10836831B2 (en) 2020-11-17
LT2675827T (lt) 2020-10-26
IL254062B (en) 2018-11-29
TW201800421A (zh) 2018-01-01
AU2017202934A1 (en) 2017-05-25
SI2675827T1 (sl) 2020-11-30
PE20141028A1 (es) 2014-08-30
EP2675827B1 (en) 2020-08-05
RS60841B1 (sr) 2020-10-30
ZA201306958B (en) 2022-03-30
AU2012219313C1 (en) 2017-05-25
EP2675827A1 (en) 2013-12-25
KR20140018905A (ko) 2014-02-13
TWI696635B (zh) 2020-06-21
AU2019201258A1 (en) 2019-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA112330278B1 (ar) مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
JP6491701B2 (ja) 新規モジュレーターと使用の方法
JP2022174167A (ja) Ｒｏｒ１癌の治療および転移の阻害に使用するための抗体およびワクチン
EP2611464B1 (en) Novel modulators and methods of use
CN109970857A (zh) 抗pd-l1抗体及其用途
CN108383909A (zh) 抗sez6抗体及使用方法
JP2017532025A (ja) 交差反応性ｓｉｇｌｅｃ抗体
CN107106671A (zh) 靶向afp肽/mhc复合体的构建体及其用途
KR20150003169A (ko) Ｄｌｌ3 조절물질들 및 사용 방법
KR20140018837A (ko) 노텀 단백질 조절 인자 및 사용 방법
CN109575136A (zh) 新型抗dpep3抗体和使用方法
KR20160046914A (ko) 신규한 ｓｅｚ6 조절물질 및 사용방법
CN109970856A (zh) 抗lag-3抗体及其用途