JP2023517044A - 融合タンパク質およびその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、治療的および診断的使用を有するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、ならびにそれを作製するための方法を提供する。本発明はさらに、バリアントＣＤ８０ポリペプチドに関する。本発明はまた、がんの処置における使用のためのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質も提供する。

Description

本発明は、治療的および診断的使用を有するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、ならびにそれを作製するための方法に関する。本発明は、抗体Ｆｃ領域と、バリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を提供する。また、Ｔ細胞機能を促進するため、および抗腫瘍免疫を改善するための方法、ならびにＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を単独で、または１つもしくは複数の追加の薬剤と組み合わせて使用する、障害（例えば、がん）を処置するための方法も提供される。
Ｂ７－１としても知られるＣＤ８０（分化抗原群８０）は、活性化されたＢ細胞、マクロファージ、および樹状細胞によって発現される表面免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＩ型膜タンパク質である。ＣＤ８０は、ＣＤ２８受容体に結合し、抗原認識後にＴ細胞共刺激を提供し、機能不全のＴ細胞の形成を防止する。ＣＤ８０はまた、ＣＴＬＡ－４受容体に、ＣＤ２８よりも高い親和性で結合し、これはＣＤ８０依存的共刺激を阻害する。
この経路を標的とする認可された抗がん剤としては、高用量ＩＬ－２（アルデスロイキン）および抗ＣＴＬＡ－４抗体（イピリムマブ）が挙げられる。ＩＬ－２は、がん療法のために認可された初めてのサイトカインであったが、その効能は全身毒性によって限定されている。抗ＣＴＬＡ－４療法は、ＣＴＬＡ－４がＣＤ８０／ＣＤ８６に遭遇するのを防ぎ、ＣＤ８０／ＣＤ８６がＣＤ２８を刺激し、Ｔ細胞プライミングを促進するのを可能にする。抗ＣＴＬＡ－４療法は、臨床活性を示すが、全身性免疫活性化のため、免疫関連有害効果が生じる。さらに、抗ＣＤ２８抗体の開発は、今まで困難であった。例えば、ＴＧＮ１４１２（ＣＤ２８アゴニストモノクローナル抗体）は２００６年に第Ｉ相臨床試験に入り、急性サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が患者において観察された。これは、ＣＤ２８活性化がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激の非存在下で起こるＣＤ２８スーパーアゴニズムに起因すると決定された。
上記経路に対する治療剤には、臨床においていくらかの成功もあったが、治療および安全特性が改善された、最適化された免疫調節薬の開発に対する大きな臨床的必要性が依然として存在する。
本明細書に開示される発明は、本発明における使用のためのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドに関する。一部の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が本明細書で提供される。
一部の態様では、置換は、Ｋ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位にある。一部の態様では、Ｋ３６位の置換はＫ３６Ｒであり、Ｋ８９位の置換はＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換はＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換はＡ９１Ｓである。 別の態様では、置換は、Ｋ３６Ｒ、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、またはＫ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓを含む。さらなる態様では、置換は、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含む。
一部の態様では、置換は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性を増大させる。
別の態様では、置換は、Ｖ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３および／またはＮ６４位にある。一部の態様では、Ｖ１１位の置換はＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換はＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換はＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換はＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換はＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換はＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換はＱ３３Ｅであり、Ｇ４５位の置換はＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換はＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換はＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換はＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換はＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換はＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換はＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換はＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅである。
一部の態様では、置換は、Ｖ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄ、Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｍ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ａ２６Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｒ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｔ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｆ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｍ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｅ２３Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｙ３１Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｑ３３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｇ４５Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｋ５４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｇ４５Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｋ５４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ５７Ｖ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｑ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｒ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｔ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｉ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｌ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｇ４５Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４ＥまたはＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄおよび／もしくはＮ６４Ｅの任意の他の組合せを含む。
別の態様では、置換は、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
一部の態様では、置換は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を増大させる。一部の態様では、安定性の増大は、熱安定性の増強、熱により強制される凝集の低減および／または粘度の低減をもたらす。
別の態様では、置換は、Ｋ８９Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ
－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｉ６１Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＡ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
一部の態様では、置換は、Ｄ９０Ｑを含む。別の態様では、置換は、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含む。別の態様では、置換は、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃを含む。別の態様では、置換は、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む。
（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＫ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位に第１の置換、およびｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３および／またはＮ６４位に第２の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドを含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含む、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書でさらに提供される。
一部の態様では、ｉ）Ｋ３６位の第１の置換はＫ３６Ｒであり、Ｋ８９位の第１の置換はＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の第１の置換はＤ９０ＫまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の第１の置換はＡ９１Ｓであり、ｉｉ）Ｖ１１位の第２の置換はＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の第２の置換はＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の第２の置換はＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の第２の置換はＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の第２の置換はＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の第２の置換はＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の第２の置換はＱ３３Ｅであり、Ｇ４５位の第２の置換はＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の第２の置換はＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の第２の置換はＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の第２の置換はＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の第２の置換はＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の第２の置換はＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の第２の置換はＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の第２の置換はＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅである。
一部の態様では、ｉ）第１の置換は、Ｋ３６Ｒ、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、またはＫ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓを含み、ｉｉ）第２の置換は、Ｖ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄ、Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｍ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ａ２６Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｒ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｔ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｆ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｍ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｅ２３Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｙ３１Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｑ３３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｇ４５Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｋ５４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｇ４５Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｋ５４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ５７Ｖ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｑ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｒ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｔ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｉ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｌ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｇ４５Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４ＥまたはＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄおよび／もしくはＮ６４Ｅの任意の他の組合せを含む。
別の態様では、ｉ）第１の置換は、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、ｉｉ）第２の置換は、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
一部の態様では、ｉ）第１の置換は、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、ｉｉ）第２の置換は、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃを含む。別の態様では、ｉ）第１の置換は、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋを含み、ｉｉ）第２の置換は、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む。
別の態様では、ｉ）第１の置換は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性を増大させ、ｉｉ）第２の置換は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を増大させる。一部の態様では、安定性の増大は、熱安定性の増強、熱により強制される凝集の低減および／または粘度の低減をもたらす。
ｉ）ＰＤ－Ｌ１への結合を増加させることも、増強することもない、またはｉｉ）ＰＤ－Ｌ１への最小限の、もしくは検出不可能な結合を示す、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書でさらに提供される。
一部の態様では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号２０～６３のいずれかのアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗体Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に由来する。一部の態様では、抗体Ｆｃ領域は、配列番号１３～１８のいずれかのアミノ酸配列を含む。一部の態様では、抗体Ｆｃ領域は、バリアントＣＤ８０ポリペプチドに連結されている。一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号６４～１１４のいずれかのアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、本発明は、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を産生する単離された細胞系を提供する。別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸を提供する。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の核酸を含むベクターを提供する。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の核酸またはベクターを含む宿主細胞を提供する。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を生産する方法であって、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の産生をもたらす条件下で本明細書に記載の宿主細胞を培養すること、および産生されたＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を精製することを含む方法が、本明細書でさらに提供される。
一部の態様では、本発明は、請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
一部の態様では、がんは、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、頭頸部がん（例えば、扁平上皮頭頸部がん）、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、グリオーマ、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、結腸がん、結腸直腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、グリア芽腫、脳腫瘍、骨肉腫、眼がん、黒色腫、または高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を有するがんである。別の態様では、がんは、再発性、抵抗性、難治性、および／または転移性である。別の態様では、がんは、抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または難治性である。
一部の態様では、本発明は、それを必要とする対象における免疫応答を増強するための方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、方法は、有効量の１つまたは複数の追加の薬剤を投与することをさらに含む。一部の態様では、１つまたは複数の追加の薬剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ－７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ－８抗体、抗ＩＬ－１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＩＬ－７Ｒ抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＢＴＮ１Ａ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体からなる群から選択される抗体である。
一部の態様では、１つまたは複数の追加の薬剤は、サイトカイン、イムノサイトカイン、標的サイトカイン、ＴＮＦα、ＰＡＲＰ阻害剤、腫瘍溶解ウイルス、キナーゼ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＧＬＳ１阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＡＲＴ細胞もしくはＴ細胞療法、ＴＬＲアゴニスト、がんワクチン、ＫＲＡＳ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＰＫ１阻害剤、ＣＤＫもしくは他の細胞周期阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤もしくは他のエピジェネティック改変剤、抗エストロゲンもしくは抗アンドロゲン療法、放射線療法、化学療法、ＰＲＲアゴニスト、二重特異性もしくは多重特異性抗体、抗体－薬物コンジュゲートまたは他の自然免疫モジュレーターである。
一部の態様では、１つまたは複数の追加の薬剤は、抗ＰＤ－１抗体、二重特異性抗体、ＣＤＫ阻害剤および／または化学療法である。
一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＦ－０６８０１５９１／ＲＮ８８８である。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２３として記載される重鎖可変領域のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３ならびに／または配列番号１２７として記載される軽鎖可変領域のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２０のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２１のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１２２のＶＨ ＣＤＲ３、ならびに／または配列番号１２４のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１２５のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１２６のＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２３として記載される重鎖可変領域および／または配列番号１２７として記載される軽鎖可変領域を含む。一部の態様では、ＣＤＫ阻害剤は、パルボシクリブ、ＰＦ－０６８７３６００、アベマシクリブまたはリボシクリブである。
薬剤の製造における、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、または医薬組成物、単離された核酸、ベクター、または本明細書に記載の宿主細胞の使用が、本明細書でさらに提供される。一部の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物は、薬剤としての使用のためのものである。一部の態様では、薬剤は、がんの処置における使用のためのものである。一部の態様では、本発明は、療法における使用のための本明細書に開示されるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを提供する。
配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが、本明細書でさらに提供される。一部の態様では、Ｖ１１位の置換はＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換はＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換はＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換はＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換はＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換はＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換はＱ３３Ｅであり、Ｋ３６位の置換はＫ３６Ｒであり、Ｇ４５位の置換はＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換はＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換はＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換はＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換はＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換はＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換はＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換はＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅであり、Ｋ８９位の置換はＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換はＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換はＡ９１Ｓである。
一部の態様では、置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、またはＫ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む。
図１Ａ ＣＤ８０（Ｂ７－１）／ＣＤ８６（Ｂ７－２）とＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４との相互作用によるＴ細胞機能の調節を示す図である。 図１Ｂ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のメカニズムを示す図である。 図２Ａ 標準ＥＬＩＳＡを使用する、組換え可溶性ＣＤ２８タンパク質に対するＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合活性を示す図である。 図２Ｂ 標準ＥＬＩＳＡを使用する、組換え可溶性ＣＴＬＡ－４タンパク質に対するＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合活性を示す図である。 フローサイトメトリーによって測定された、Ｊｕｒｋａｔ細胞で発現しているＣＤ２８に対するＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合親和性を示す図である。 ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での一次Ｔ細胞およびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞の共刺激アッセイで得られたＩＬ－２産生レベルを示す図である。 ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質でのＪｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＨＣＴ１１６－ＣＤ６３の共刺激アッセイで得られたルシフェラーゼレポーター活性に対する正規化された応答を示す図である。 ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質でのＪｕｒｋａｔ－ＮＹＥＳＯ１－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＡ３７５－ＣＤ６４の共刺激アッセイで得られたルシフェラーゼレポーター活性に対する正規化された応答を示す図である。 ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質でのＪｕｒｋａｔ－ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４の共刺激アッセイで得られたルシフェラーゼレポーター活性を示す図である。 図８Ａ ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の熱により強制される凝集を示す図である。 図８ＢＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の熱により強制される凝集を示す図である。 図９Ａ 表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定された、６０ｕｇ／ｍｌ濃度の固定されたヒトＰＤ－Ｌ１での、様々な濃度のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合を示す図である。図９Ｂ 表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定された、６０ｕｇ／ｍｌ濃度の固定されたヒトＰＤ－Ｌ１での、様々な濃度のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合を示す図である。 図９Ｃ 表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定された、７５ｕｇ／ｍｌ濃度の固定されたヒトＰＤ－Ｌ１での、様々な濃度のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合を示す図である。図９Ｄ 表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって測定された、７５ｕｇ／ｍｌ濃度の固定されたヒトＰＤ－Ｌ１での、様々な濃度のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合を示す図である。 様々な濃度で評価された、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の粘度を示す図である。 共培養ＨＣＴ１１６－ＣＤ６４－Ｊｕｒｋａｔ ＩＬ－２レポーターアッセイを使用した、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－２レポーター活性を示す図である。 図１２Ａ ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を用いたヒトＰＢＭＣアッセイで得られた、ＩＬ－２産生レベルを示す図である。 図１２Ｂ ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を用いたヒトＰＢＭＣアッセイで得られた、ＩＬ－２産生レベルを示す図である。図１２Ｃ ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を用いたヒトＰＢＭＣアッセイで得られた、ＩＬ－２産生レベルを示す図である。 図１３Ａ Ｒｅｎｃａマウス腎臓癌モデルにおける、０．３ｍｇ／ｋｇの用量のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。図１３Ｂ Ｒｅｎｃａマウス腎臓癌モデルにおける、１ｍｇ／ｋｇの用量のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１３Ｃ Ｒｅｎｃａマウス腎臓癌モデルにおける、３ｍｇ／ｋｇの用量のＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１４Ａ ＣＴ２６マウス結腸直腸癌モデルにおける、０．１ｍｇ／ｋｇの用量のバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１４Ｂ ＣＴ２６マウス結腸直腸癌モデルにおける、１ｍｇ／ｋｇの用量のバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１５Ａ ＥＭＴ６マウス乳がんモデルにおける、様々な用量のバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１５Ｂ ＥＭＴ６マウス乳がんモデルにおける、様々な用量のバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１６Ａ ＭＣ３８マウス結腸直腸癌モデルにおける、様々な用量で静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与されたバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（システイン安定化されている）で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１６Ｂ ＭＣ３８マウス結腸直腸癌モデルにおける、様々な用量で静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与されたバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（システイン安定化されている）で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１７Ａ ＭＣ３８マウス結腸直腸癌モデルにおける、様々な用量で静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与されたバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（システイン安定化されていない）で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 図１７Ｂ ＭＣ３８マウス結腸直腸癌モデルにおける、様々な用量で静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与されたバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（システイン安定化されていない）で処理した後の腫瘍増殖阻害を示す図である。 ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、全免疫細胞（ＣＤ４５＋）に対するパーセンテージとして表されている腫瘍浸潤性のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを示す図である。 カニクイザルにおける投与の後の様々な時点での、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の血漿中濃度を示す図である。 ヒト新生児Ｆｃ受容体（ｈｕＦｃＲｎ）α鎖導入遺伝子をその天然のヒトプロモーターの制御下で発現するトランスジェニックマウスにおける、投与の後の様々な時点での、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の血漿中濃度を示す図である。 ＣＴ２６マウス結腸直腸癌モデルにおける、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはαＰＤ１抗体単独での処理、ならびにバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびαＰＤ１抗体の組合せ処理の後の、腫瘍増殖阻害を示す図である。 Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫モデルにおける、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはαＰＤ１抗体単独での処理、ならびにバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびαＰＤ１抗体の組合せ処理の後の、腫瘍増殖阻害を示す図である。 ＥＭＴ６乳がんモデルにおける、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはタラゾパリブ単独での処理、ならびにバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびタラゾパリブの組合せ処理の後の、腫瘍増殖阻害を示す図である。 図２４Ａ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＩＬ－２の産生を示す図である。図２４Ｂ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＣＤ２５の発現を示す図である。 図２４Ｃ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、Ｋｉ－６７の発現を示す図である。図２４Ｄ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＩＦＮγの発現を示す図である。 図２４Ｅ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の相対量（％）を示す図である。 図２５Ａ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、およびリンホトキシンアルファ（ＬＴＡ）の遺伝子発現レベルを示す図である。各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。図２５Ｂ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＢＣＬ－ＸＬおよびＣＡＳＰ８の遺伝子発現レベルを示す図である。各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。 図２５Ｃ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＯＸ－４０の遺伝子発現レベルを示す図である。各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。図２５Ｄ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＩＬ－７Ｒαの遺伝子発現レベルを示す図である。各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。図２５Ｅ 一次ヒトＴ細胞における、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理した後の、ＴＩＧＩＴの遺伝子発現レベルを示す図である。各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。
本明細書に開示される本発明は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドを提供する。本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、抗体Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ１）およびバリアントＣＤ８０ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ））を有する。本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、限定されるものではないが、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（すなわち、野生型ＣＤ８０を含む融合タンパク質）と比較して、ＣＤ２８に対する結合親和性の増大または増強および安定性の増大または増強を含む、改善された特性を示した。さらに、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性を増大も増強もさせず、それどころか、ＰＤ－Ｌ１に対する検出可能な結合は観察されなかったことが示されている。
本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、共刺激の増加または増強、ＩＬ－２の産生の増加または増強、有意な腫瘍増殖阻害および腫瘍増殖退縮、脾臓および腫瘍流入領域リンパ節（ＴＤＬＮ）における腫瘍反応性Ｔ細胞レベルの増加ならびに１つまたは複数の追加の薬剤と併用した場合の効能の増強を示した。さらに、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、熱安定性の増強、凝集の減少または低減、粘度の減少または低減および製造可能性の改善を示した。本発明はまた、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を改変し、発現させ、生産するためのプロセスも提供する。本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、障害の診断、予後診断および／または処置と共に、抗腫瘍免疫の増強およびがんの処置において使用することができる、薬剤などの組成物の調製および製造にとって有用である。本発明はさらに、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびその成分をコードする核酸を提供する。
定義および一般的技術
本明細書で別途定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別途要求されない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分析化学、生化学、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学、医薬品化学および薬化学ならびにハイブリダイゼーションと関連して使用される命名法、およびその技術は、当業界で周知であり、一般的に使用されるものである。
本発明の実施では、別途指摘されない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の慣例的な技法を使用し、これらは、当業界の技術の範囲内である。そのような標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２＆１９８９、第２版、２００１、第３版）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ、Ｖｏｌ．２１７、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡなどの文献中で説明されている。標準的な方法はまた、Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１－４、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ、ＮＹにも見られ、細菌細胞中でのクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物細胞および酵母中でのクローニング（Ｖｏｌ．２）、糖コンジュゲートおよびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、およびバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
本発明をより容易に理解するために、ある特定の技術用語および科学用語を、以下で具体的に定義する。本文献中の他の箇所で具体的に定義されない限り、本明細書で使用される他の全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業界における通常の知識を有する者によって一般的に理解される意味を有する。
本明細書および特許請求の範囲を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、述べた整数または整数の群を含めることを意味するが、任意の他の整数または整数の群の除外を意味しないことが理解されるであろう。態様が言い回し「含む」を用いて本明細書で記載されている場合は必ず、「からなる」および／または「から本質的になる」の観点から記載される別途類似する態様も提供されることが理解される。
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、１または１より多い(すなわち、少なくとも１)のその冠詞の文法的目的語を指すように本明細書で使用される。文脈によって別途要求されない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。 用語「例えば（ｅ．ｇ．）」または「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」に続く任意の例は、網羅的または限定的であることを意味しない。
本明細書で使用される場合、互換的に使用される用語「ＣＤ８０」、「Ｂ７－１」、「Ｂ７．１」または「Ｂ７／ＢＢ１」は、ＣＤ８０の活性を少なくとも一部保持する任意の形態のＣＤ８０およびそのバリアントを指す。ヒトＣＤ８０に対する具体的参照などによって示差的に指摘されない限り、ＣＤ８０は、全ての種のＣＤ８０を含む。例示的な野生型ヒトＣＤ８０配列としては、限定されるものではないが、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ３３６８１－１；アイソフォーム１（配列番号１）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ３３６８１－２；アイソフォーム２およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ３３６８１－３；アイソフォーム３が挙げられる。例示的なマウスＣＤ８０配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ３Ｕ４Ｂ５として見出される。例示的なカニクイザルＣＤ８０配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｇ７ＮＸＮ７として見出される。例示的な野生型ヒトＣＤ８０タンパク質は、限定されるものではないが、以下に列挙される配列を含んでいた。
野生型ヒトＣＤ８０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ３３６８１－１；アイソフォーム１）：
ＭＧＨＴＲＲＱＧＴＳＰＳＫＣＰＹＬＮＦＦＱＬＬＶＬＡＧＬＳＨＦＣＳＧＶＩＨＶＴＫＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰＤＮＬＬＰＳＷＡＩＴＬＩＳＶＮＧＩＦＶＩＣＣＬＴＹＣＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰＶ（配列番号１）。
野生型ヒトＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）：
ＶＩＨＶＴＫＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰＤＮ（配列番号２）。
本明細書で使用される場合、互換的に使用される用語「ＣＤ２８」、「ＴＰ４４」、または「Ｔ細胞特異的表面糖タンパク質ＣＤ２８」は、任意の形態のＣＤ２８およびそのバリアントを指し、ＣＤ２８の活性を少なくとも一部保持する。ヒトＣＤ２８に対する具体的参照などによって示差的に指摘されない限り、ＣＤ２８は、全ての種のＣＤ２８を含む。例示的なヒトＣＤ２８配列は、アイソフォーム１～７を含む、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１０７４７として見出されるものである。例示的なマウスＣＤ２８配列は、アイソフォーム１～７を含む、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ３１０４１として見出される。例示的なカニクイザルＣＤ２８配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ０ＯＤＮ３として見出される。
「投与」および「処置」は、それが動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、臓器、または生体液に適用される場合、動物、ヒト、対象、細胞、組織、臓器、または生体液に対する、外因性の医薬品、治療剤、診断剤、または組成物の接触を指す。細胞の処置は、細胞に対する試薬の接触、ならびに細胞と接触する液体に対する試薬の接触を包含する。「投与」および「処置」はまた、例えば、細胞の、試薬、診断化合物、結合化合物による、または別の細胞による、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏでの処置も意味する。用語「対象」は、任意の生物、好ましくは、動物、より好ましくは、哺乳動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）、最も好ましくは、ヒトを含む。
本明細書で使用される「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する、少なくとも１つの抗原認識部位によって、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的を認識し、それに結合することができる免疫グロブリン分子を指す。本明細書で使用される場合、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、抗原結合部分またはその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ、例えば、サメおよびラクダ抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む断片、単鎖可変断片抗体（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖断片（ｂｉｓ－ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、抗イディオタイプ（抗ｉｄ）抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、抗体を有する融合タンパク質、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびポリペプチドへの特異的抗原結合を付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドも包含する。
抗体としては、任意のクラスの抗体（またはそのサブクラス）が挙げられ、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４にさらに分類することができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および３次元構成は、周知である。本発明はまた、他の非抗体分子タンパク質に基づく足場である、「抗体アナログ」、例えば、特異的抗原結合を提供するためにＣＤＲを使用する融合タンパク質および／またはイムノコンジュゲートも含む。本発明の抗体は、限定されるものではないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚、サメ、ヤギ、ウサギ、ニワトリ、およびウシを含む任意の種に由来してもよい。用語「抗体」または「Ａｂ」はさらに、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。ＣＨ１およびＣＨ２ドメインは、ヒンジ領域によって接続されている。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。
本明細書で使用される場合、抗体の「可変領域」は、単独で、または組合せで、抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）または抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）を指す。当業界で公知であるように、重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲによってごく近くに一緒に保持されると共に、他の鎖に由来するＣＤＲは、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。特に、ＣＤＲ領域の外側（すなわち、フレームワーク領域内）のアミノ酸残基中に置換を有する、対象可変領域のバリアントが望まれる場合、適切なアミノ酸置換、好ましくは、保存的アミノ酸置換は、対象可変領域を対象可変領域と同じカノニカルクラスにおいてＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することによって同定することができる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６（４）：９０１～９１７、１９８７）。ある特定の態様では、ＣＤＲ、および抗体の結合部位を含む残基の同定の最終的な描写は、抗体の構造を解明すること、および／または抗体－リガンド複合体の構造を解明することによって達成される。これは、Ｘ線結晶解析などの当業者には公知の様々な技術のいずれかによって達成され得る。
可変領域の「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ、接触、Ｎｏｒｔｈおよび／またはコンフォメーション定義または当業界で周知のＣＤＲ決定の任意の方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲを、Ｋａｂａｔらによって元々定義された超可変領域として同定することができる。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．を参照されたい。また、ＣＤＲの位置を、Ｃｈｏｔｈｉａその他によって元々記載された構造ループ構造として同定することもできる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１～１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７～８３を参照されたい。ＣＤＲのＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の折衷案であり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。ＣＤＲの「接触」定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２～７４５、１９９６に記載された、観察された抗原接触に基づくものである。ＣＤＲの「コンフォメーション」定義は、抗原結合へのエンタルピー寄与をなす残基に基づくものである（例えば、Ｍａｋａｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６～１１６６、２００８を参照されたい）。Ｎｏｒｔｈは、ＣＤＲ定義の異なる好ましいセットを使用してカノニカルなＣＤＲコンフォメーションを同定した（Ｎｏｒｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０６：２２８～２５６、２０１１）。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記手法の１つに厳密には従わないが、それにもかかわらず、これらは、特定の残基または残基の群が抗原結合に有意に影響しないという予測または実験的知見を踏まえると短くまたは長くされ得るがＫａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部と重なるであろう。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、手法の組合せを含む、当業界で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指してもよい。本明細書で使用される方法は、これらの手法のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。１より多いＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触、Ｎｏｒｔｈおよび／もしくはコンフォメーション定義のいずれか、または当業界で周知のＣＤＲ決定の任意の方法に従って定義することができる。本発明の抗体、またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５、または６つ全部のＣＤＲ）を含む。
アミノ酸配列の文脈における用語「同一のパーセント」とは、最大の一致のために整列された場合に同じである２つの配列中の残基の数を意味する。アミノ酸の同一性パーセントを測定するために使用することができる当業界で公知のいくつかの異なるアルゴリズムがある（すなわち、Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ＴｏｏｌまたはＢＬＡＳＴ（登録商標））。別途特定されない限り、特定のプログラムまたはアルゴリズムに関するデフォルトパラメーターが使用される。
当業界で公知であるように、抗体の「定常領域」は、単独で、または組合せで、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
用語「融合タンパク質」は、２つ以上のタンパク質に由来するアミノ酸配列を有するタンパク質またはポリペプチドを指す。融合タンパク質はまた、２つ以上のタンパク質間のアミノ酸の連結領域を含んでもよい。例えば、融合タンパク質は、タンパク質（例えば、ＣＤ８０もしくはそのバリアント）と、抗体もしくは抗体断片（例えば、抗体Ｆｃ領域）と、またはタンパク質（例えば、ＣＤ８０もしくはそのバリアント）と、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とを含んでもよい。
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸の鎖（例えば、ＣＤ８０またはそのバリアント）を指すのに本明細書で互換的に使用される。鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、および／または非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語はまた、天然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは改変によって改変されたアミノ酸鎖も包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ならびに当業界で公知の他の改変を含有するポリペプチドもこの定義の中に含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ鎖」または類似する用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。Ｆｃ領域は、細胞受容体（例えば、Ｆｃ受容体）および補体タンパク質と相互作用する。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。当業界で公知であるように、Ｆｃ領域は、単量体または多量体（例えば、二量体）形態で存在してもよい。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域であっても、バリアントＦｃ配列であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ配列の境界は、様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ配列は、通常、Ｃｙｓ２２６位に近いアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０位の近くから、Ｆｃ配列のカルボキシル末端まで伸びるように定義される。本明細書で別途特定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基のナンバリングは、ＥＵナンバリングシステムによるものであり、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載されたように、ＥＵインデックスとも呼ばれる。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域中で始まり、抗体のＣ末端で終わる。
したがって、Ｆｃ鎖は、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含んでもよい。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ヒンジ（例えば、上側、中央、および／または下側ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはそのバリアント、部分、もしくは断片のうちの少なくとも１つを含む。ある特定の態様では、Ｆｃドメインは、完全なＦｃ鎖（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含む。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合されたヒンジドメイン（またはその一部）を含む。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合されたＣＨ２ドメイン（またはその一部）を含む。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ＣＨ３ドメインまたはその一部からなる。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ＣＨ２ドメイン（またはその一部）およびＣＨ３ドメインからなる。ある特定の態様では、Ｆｃ鎖は、ヒンジドメイン（またはその一部）およびＣＨ２ドメイン（またはその一部）からなる。Ｆｃ鎖は、限定されるものではないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体を含む、任意の種および／または任意のサブタイプの免疫グロブリンに由来してもよい。一部の実施形態では、Ｆｃ鎖は、ジスルフィドによって一緒に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。
当業界で使用される場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が挙げられ、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライスされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が挙げられ、これらは、その細胞質ドメインにおいて主に異なる同様のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、例えば、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７～９２、１９９１；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５～３４、１９９４；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０～４１、１９９５で概説されている。「ＦｃＲ」はまた、新生仔受容体、ＦｃＲｎも含み、これは、母体ＩｇＧの胎仔への移動を担う（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７、１９７６；およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９、１９９４）。
「天然配列Ｆｃ領域」または「野生型Ｆｃ領域」は、自然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。
「バリアントＦｃ領域」または「バリアントＦｃ鎖」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって天然配列Ｆｃ領域のものと異なるが、それでも天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、バリアントＦｃ鎖は、天然配列Ｆｃ鎖または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ鎖または親ポリペプチドのＦｃ鎖内に約１～約１０個のアミノ酸置換、または約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ鎖は、天然配列Ｆｃ鎖および／もしくは親ポリペプチドのＦｃ鎖との少なくとも約８０％の配列同一性を有してもよく、またはそれとの少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有してもよい。
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。用語「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ鎖またはバリアントＦｃ鎖）に起因する生物活性を指し、抗体アイソタイプと共に変化する。抗体のエフェクター機能の例としては、限定されるものではないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体の結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、食作用、Ｃ１ｑの結合、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方調節およびＢ細胞活性化が挙げられる。そのようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合されることを必要とし、そのような抗体エフェクター機能を評価するための当業界で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。エフェクター機能の典型的な測定は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑの結合を介する。
本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、次いで、標的細胞の溶解を生じさせる、細胞媒介性の反応を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または米国特許第５，８２１，３３７号に記載されたものなどの、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣアッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２～６５６に開示されたものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、同族抗原と複合体を形成した分子（例えば抗体）に対する補体系（Ｃ１ｑ）の第１成分の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．、２０２：１６３（１９９６）に記載されたように、ＣＤＣアッセイを行うことができる。
本明細書で使用される場合、用語「結合親和性」は、一般には、分子の単一の結合部位と、その結合パートナーとの間の非共有相互作用（例えば、ポリペプチド－受容体または抗体－抗原相互作用）の総和の強度を指す。例えば、ＣＤ８０と、Ｔ細胞受容体ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４との間の相互作用である。その結合パートナーのための分子の結合親和性を、平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。ＫＤは、「解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）」または「ｋｄ」とも呼ばれる、解離の速度の、結合の速度、または「結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）」もしくは「ｋａ」に対する比である。かくして、ＫＤは、ｋｄ／ｋａに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。ＫＤが小さくなるほど、その結合パートナーに対する分子の結合親和性は大きくなるということになる。したがって、１μＭのＫＤは、１ｎＭのＫＤと比較して弱い結合親和性を示す。ＫＤ値を、本明細書に記載のものを含む、当業界でよく確立された方法を使用して決定することができる。結合親和性およびＫＤを決定するための１つの方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、典型的には、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。ポリペプチドのリガンドに対する結合能力を評価するための他の標準的なアッセイは、当業界で公知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＲＩＡ、およびフローサイトメトリー分析を含む。
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸の鎖を指すために本明細書で互換的に使用される。鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、および／または非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語はまた、天然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、シアル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは改変によって改変されたアミノ酸鎖も包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ならびに当業界で公知の他の改変を含有するポリペプチドもこの定義の中に含まれる。ポリペプチドは、単鎖または会合鎖として存在し得ることが理解される。
本明細書で使用される場合、「標的抗原」、「腫瘍抗原」または「腫瘍関連抗原」とは、標的細胞、例えば、がん細胞または腫瘍間質の細胞などの、腫瘍中の細胞の表面上に提示される抗原決定基を指す。
本明細書で使用される場合、用語「ジスルフィド結合」または「システイン－システインジスルフィド結合」とは、システインの硫黄原子が酸化されてジスルフィド結合を形成する２つのシステイン間の共有相互作用を指す。ジスルフィド結合の平均結合エネルギーは、水素結合に関する１～２ｋｃａｌ／ｍｏｌと比較して、約６０ｋｃａｌ／ｍｏｌである。本発明の文脈では、ジスルフィド結合を形成するシステインは、単鎖抗体のフレームワーク領域内にあり、抗体またはその断片のコンフォメーションを安定化するのに役立つ。安定化するジスルフィド結合を分子内で作製することができるように、システイン残基を、例えば、部位特異的突然変異誘発によって導入することができる。
受容体または抗原（例えば、ＣＤ２８タンパク質）に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」（本明細書では互換的に使用される）ポリペプチドまたは抗体は、当業界でよく理解されている用語であり、そのような特異的または優先的結合を決定するための方法も、当業界で周知である。ある分子が、別の細胞または物質よりも、特定の細胞または物質と、より高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い期間、反応する、または会合する場合、その分子は「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。例えば、標的受容体（例えば、ＣＤ２８）に特異的または優先的に結合するポリペプチド（例えば、ＣＤ８０）は、それが他の標的受容体または非標的受容体に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い期間、この受容体に結合する。
用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除いて同一である。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに特異的であることが多い、その可変ドメイン、特に、そのＣＤＲ中に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができるか、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたものなどの組換えＤＮＡ法によって作製することができる。モノクローナル抗体を、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１～５９７に記載された技術を使用して生成されたファージライブラリーから単離することもできる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
本明細書で使用される場合、「ヒト化」抗体とは、非ヒト（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物）抗体ならびにヒト抗体の配列を含有する抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの１つまたは複数のＣＤＲに由来する残基が、所望の特異性、親和性、能力または他の生物活性を有する、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物などの非ヒト種（ドナー抗体）の１つまたは複数のＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含むであろう。
用語「キメラ抗体」とは、抗体が所望の生物活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種（例えば、ヒト）に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同であるが、鎖の残りの部分が、別の種（例えば、マウス）に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同である抗体、ならびにそのような抗体の断片を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応し、および／または当業者には公知の、もしくは本明細書に開示のヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されたアミノ酸配列を有する抗体を意味する。したがって、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの無作為もしくは部位特異的突然変異誘発またはｉｎ
ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含んでもよい。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
本明細書で使用される場合、用語「単離された」とは、その元の環境（例えば、それが天然に存在する場合、天然の環境）から回収される材料を指す。例えば、生きている動物中に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、天然の系において同時に存在する材料の一部または全部から分離されている同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。そのようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であってよい、および／またはそのようなポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドを含み、ベクターもしくは組成物がその天然の環境の一部ではないという点で依然として単離されている、単離された細胞もしくは培養された細胞を含む組成物、例えば、混合物、溶液もしくは懸濁液の一部であってよい。
当業界で公知のように、互換的に使用される用語「核酸」および「ポリヌクレオチド」とは、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、そのアナログ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖中に組み込むことができる任意の基質を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有してもよく、既知または未知の任意の機能を実行してもよい。ポリヌクレオチドは、天然に存在する、合成の、組換えの、またはその組合せのものであってよい。ポリヌクレオチドは、改変ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびこれらのアナログなどを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する改変は、鎖のアセンブリの前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。本発明のポリペプチドおよび抗体をコードする核酸およびポリヌクレオチドを、発現または増殖のためのベクター中にクローニングすることができる。本発明はまた、ポリペプチドおよび抗体の結合領域を含む、本発明のポリペプチドおよび抗体をコードするポリヌクレオチドも含む。当業界で公知の任意の方法によって、本発明の分子をコードするポリヌクレオチドを取得し、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。対象とするポリペプチドおよび抗体をコードする配列を、宿主細胞内のベクター中に維持することができ、次いで、宿主細胞を拡大し、将来使用するために凍結することができる。細胞培養物内での組換えポリペプチドおよび／または抗体の産生は、当業界で公知の手段によって、Ｂ細胞から遺伝子をクローニングすることによって実行することができる。例えば、Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２９：１１２～１２４、２００８；米国特許第７，３１４，６２２号を参照されたい。
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、宿主細胞内の対象とする１つまたは複数の遺伝子または配列を送達し、好ましくは、発現させることができるコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、限定されるものではないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と結合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある特定の真核細胞が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「発現制御配列」は、核酸の転写を指令する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的もしくは誘導的プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーであってよい。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結されている。
本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物の組込みのためのベクターのレシピエントであってよい、またはそれであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然の、偶発的な、または意図的な突然変異に起因して、必ずしも元の親細胞と完全に同一（形態において、またはゲノムＤＮＡ補体において）でなくてもよい。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、夾雑物を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋、より好ましくは、少なくとも９５％純粋、さらにより好ましくは、少なくとも９８％純粋、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である材料を指す。
本明細書で使用される用語「バイオマーカー」とは、試料中で検出することができる、指標分子または分子のセット（例えば、予測、診断、および／または予後診断指標）を指す。バイオマーカーは、予測バイオマーカーであってよく、特定の処置（例えば、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を用いた処置）に対する、特定の疾患または障害（例えば、増殖性細胞障害（例えば、がん））を有する患者の感受性または利益の尤度の指標として役立つ。バイオマーカーとしては、限定されるものではないが、ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））、ポリヌクレオチドコピー数変化（例えば、ＤＮＡコピー数）、ポリヌクレオチド配列変化（例えば、遺伝子突然変異もしくは遺伝子バリアント）、ポリペプチド、ポリペプチドおよびポリヌクレオチド改変（例えば、翻訳後改変）、炭水化物、ならびに／または糖脂質に基づく分子マーカーが挙げられる。一部の態様では、バイオマーカーは、遺伝子である。
用語「新生物障害」は、細胞が異常に高く制御されない速度、周囲の正常組織のものを超え、それと非協調的な速度で増殖する状態を指す。これは、通常、「腫瘍」として公知の固体病変部または塊をもたらす。この用語は、良性および悪性新生物障害を包含する。用語「悪性新生物障害」は、本開示では用語「がん」と互換的に使用され、腫瘍細胞の体内の他の場所に拡散する能力（「転移」として公知）を特徴とする新生物障害を指す。用語「良性新生物障害」は、腫瘍細胞が転移する能力を欠く新生物障害を指す。
本明細書で使用される場合、用語「がん」、「がん性」または「悪性」とは、典型的には、調節されない細胞増殖、細胞の異常な未制御の増殖の結果生じる新生物または腫瘍を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指す、またはそれを記述する。一部の態様では、がんは、依然として局在化している、転移のない悪性原発腫瘍を指す。他の態様では、がんは、近隣の身体構造に侵入し、破壊し、遠隔部位に拡散した、悪性腫瘍を指す。一部の態様では、がんは、特定のがん抗原と関連する。がんの例としては、限定されるものではないが、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、頭頸部がん（例えば、扁平上皮頭頸部がん）、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、グリオーマ、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、結腸がん、結腸直腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、グリア芽腫、脳腫瘍、骨肉腫、眼がん、黒色腫、および高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を有するがんが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置すること」または「処置」は、有益な、または望ましい臨床結果を得るための手法である。本発明の目的のために、処置は、対象、例えば、患者へのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与と定義される。そのような投与は、例えば、対象への直接投与による、または対象に戻される、対象に由来する単離された組織もしくは細胞への適用によるものであってもよい。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、単独で、または１つもしくは複数の追加の薬剤と組み合わせて投与する。処置は、障害、障害の症状または障害、例えば、がんに対する素因を治癒する、癒やす、軽減する、緩和する、変更する、治療する、改善する、和らげる、改良する、または影響することであってもよい。一部の態様では、処置としては、限定されるものではないが、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる：新生物もしくはがん性細胞の増殖の低減（またはその破壊）、新生物細胞の転移の阻害、腫瘍のサイズの縮小もしくは減少、がんの寛解、がんから生じる症状の減少、がんに罹患している者の生活の質の増大、がんを処置するのに要求される他の薬剤の用量の減少、がんの進行の遅延、がんの治癒、および／またはがんを有する患者の生存期間の延長。
本明細書で使用される場合、用語「改善」は、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を投与しない場合と比較して、１つまたは複数の症状の軽減または改良を意味する。「改善」は、症状の継続時間の短縮または低減も含む。
本明細書で使用される場合、用語「防止する」、「防止すること」および「防止」とは、予防剤または治療剤の投与の結果としての、対象における障害または障害の１つもしくは複数の症状の再発または開始の防止を指す。
本明細書で使用される場合、腫瘍またはがんの「増殖の阻害」とは、その増殖および／または転移を減速させること、中断すること、阻止すること、または停止させることを指し、必ずしも腫瘍増殖の全消失を示すものではない。
用語「免疫エフェクター細胞エンハンサー」または「ＩＥＣエンハンサー」は、哺乳動物の免疫エフェクター細胞の１つまたは複数のタイプの数、品質、または機能を増大させ、または増強することができる物質を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、細胞溶解性ＣＤ８ Ｔ細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＢ細胞が挙げられる。
用語「免疫モジュレーター」は、免疫応答（本明細書で定義される）、または宿主哺乳動物の自然、体液性、もしくは細胞免疫系の任意の成分の働きを変更する（例えば、阻害し、減少させ、増大させ、増強し、または刺激する）ことができる物質を指す。かくして、用語「免疫モジュレーター」は、本明細書で定義される「免疫エフェクター細胞エンハンサー」および本明細書で定義される「免疫抑制細胞阻害剤」、ならびに哺乳動物の免疫系の他の成分に影響する物質を包含する。
用語「免疫応答」は、宿主哺乳動物の免疫系による特定の物質（抗原または免疫原など）に対する任意の検出可能な応答、例えば、自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナル伝達カスケードの活性化）、細胞媒介性免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞などのＴ細胞、および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）、ならびに体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される応答、例えば、血漿、リンパ、および／または組織流体中での抗体の生成および分泌など）などを指す。
用語「免疫原性」は、アジュバントの存在または非存在下で、単独であっても、担体に連結されているときであっても、特定の抗原に対して、免疫応答を引き起こし、惹起し、刺激し、もしくは誘導し、または既存の免疫応答を改善し、増強し、増大させ、もしくは延長する、物質の能力を指す。
用語「免疫抑制細胞阻害剤」または「ＩＳＣ阻害剤」は、哺乳動物の免疫抑制細胞の数または機能を低減または抑制することができる物質を指す。免疫抑制細胞の例としては、調節性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）、骨髄由来抑制細胞、および腫瘍関連マクロファージが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、特定の処置のレシピエントになるべきである、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類などの任意の動物（例えば、哺乳動物）を含むことが意図される。例えば、対象は、がんを有する、患者（例えば、ヒト患者または獣医学的患者）であってもよい。典型的には、用語「対象」、「個体」および「患者」は、ヒト対象を参照して本明細書で互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容できる」とは、米国の連邦政府もしくは州政府の規制当局によって認可された（もしくは認可され得る）、または米国薬局方もしくはヒトを含む動物における使用のための他の一般に認識された薬局方に列挙された生成物または化合物を指す。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」は、活性成分と合わせたとき、成分に生物活性を保持させ、対象の免疫系と非反応性である任意の材料を含む。例としては、限定されるものではないが、任意の標準的な薬学的担体、例えば、リン酸緩衝溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、および様々な型の湿潤剤などが挙げられる。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または通常の（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「有効量」、「治療有効量」、「治療十分量」または「有効投与量」とは、対象への単一または複数用量の投与時に、そのような処置の非存在下で予想されるものを超えて、疾患、障害もしくは副作用を防止し、癒やし、改善し、処置し、もしくは管理する、または疾患もしくは障害の進行速度を減少させるのに、または本明細書に記載の障害を有する対象の状態を延長させ、治癒し、軽減し、緩和し、もしくは改善するのに有効または十分である治療剤の任意の量を指す。この用語はまた、正常な生理学的機能を増強するのに有効な量もその範囲内に含む。有効量は、１つまたは複数の治療剤を投与する状況で考慮することができ、単剤は、１つまたは複数の他の薬剤と併せて、望ましい結果が実現され得る、または実現されている場合、有効量で与えられていると考えることができる。
効力は、所与の強度の効果をもたらすのに必要とされる量を単位として表される治療剤の活性の尺度である。効力の高い薬剤は、低濃度ではより小さい応答を誘発する低効力の薬剤と比較して、低濃度でも高い応答を誘発する。効力は、親和性および効能の関数である。効能とは、標的リガンドへの結合時に生物学的応答をもたらす治療剤の能力およびこの応答の定量的規模を指す。本明細書で使用される場合、用語「半数効果濃度（ＥＣ５０）」とは、ベースラインと、特定の曝露時間後の最大との間の半分である応答を引き起こす治療剤の濃度を指す。治療剤は、阻害または刺激を引き起こしてもよい。ＥＣ５０値は一般的に使用され、効力の尺度として本明細書で使用される。
アミノ酸改変を、当業界で公知の任意の方法によって行うことができ、例えば、突然変異、置換、欠失、および／または付加などの、多くのそのような方法が周知であり、当業者にとっては日常的なものである。例えば、限定されるものではないが、アミノ酸置換、欠失および挿入を、任意の周知のＰＣＲに基づく技術を使用して達成することができる。アミノ酸置換を、部位特異的突然変異誘発によって行うことができる（例えば、ＺｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈ、１９８２、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７～６５００；およびＫｕｎｋｅｌ、１９８５、ＰＮＡＳ ８２：４８８を参照されたい）。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｖｏｌ．１、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学的改変、翻訳後改変、融合タンパク質の生産、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｖｏｌ．２、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．３、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＹ、ＮＹ、ｐｐ．１６．０．５～１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；ｐｐ．４５～８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、ｐｐ．３８４～３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の生産、精製、および断片化は、記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴付けるための標準的な技術は、利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．４、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。
モノクローナル、ポリクローナル、およびヒト化抗体を調製することができる（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、ｐｐ．１３９～２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１～２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８～１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７～４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
ヒト化に対する代替手段は、トランスジェニックマウス中のファージまたはヒト抗体ライブラリー上にディスプレイされるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９～３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７～８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６～１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１～３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７～３９９）。
抗原の精製は、抗体の生成にとって必須ではない。動物を、目的の抗原、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはウイルス様粒子を有する細胞で免疫することができる。次いで、脾細胞を免疫した動物から単離し、脾細胞を骨髄腫細胞系と融合して、ハイブリドーマを生産することができる（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３～２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３～２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら、上掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７～５１６４を参照されたい）。
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、第２版；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、ＮＪを参照されたい）。例えば、診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む、核酸を改変するのに好適な蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）。
免疫系の組織学の標準的な方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ、ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ）を参照されたい）。
例えば、抗原性断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能性ドメイン、グリコシル化部位、および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ、Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１～７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１～７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７～１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７～２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３～４６９０を参照されたい）。
酵素反応および精製技術は、製造業者の明細書に従って、当業界で一般的に達成されるように、または本明細書に記載のように実施される。化学合成、化学分析、医薬品調製、製剤化、および送達、ならびに患者の処置のための標準的な技術が使用される。
本明細書で「約」のついた値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする態様を含む（および記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。数値範囲は、その範囲を規定する数を包含する。一般的には、用語「約」は、示された変数値および示された値の実験誤差以内（例えば、平均の９５％信頼区間以内）または示された値の１０パーセント以内にある全ての変数値のどちらか大きい方を指す。用語「約」が時間間隔（年、カ月、週間、日など）の文脈内で使用される場合、用語「約」は、その時間間隔プラスまたはマイナス次の下位の時間間隔１つ分（例えば、約１年は１１～１３カ月を意味し、約６カ月は６カ月プラスまたはマイナス１週間を意味し、約１週間は６～８日を意味するなど）、または示された値の１０パーセント以内のいずれか大きい方を意味する。
本発明の態様または複数の態様がマーカッシュ群または他の選択肢群の観点から記載される場合、本発明は、全体として列挙された群全体だけでなく、群の各メンバーを個々に、および主群のすべての可能な亜群、また１つまたは複数の群メンバーを欠く主群をも包含する。本発明は、特許請求される発明における群メンバーのいずれかの１つまたは複数を明確に除外することも想定する。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業界における通常の知識を有する者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
例示的な方法および材料を本明細書に記載するが、本明細書に記載のものと類似するか、または等価な方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および例は、例示に過ぎず、限定的であることを意図したものではない。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質
ＣＤ８０（Ｂ７－１、Ｂ．７またはＢ７／ＢＢ１）およびＣＤ８６（Ｂ７－２）は、Ｔ細胞上のＣＤ２８および細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ－４）に結合する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上の共刺激分子である。ＣＤ８０は、２つの細胞外ドメイン、膜遠位Ｉｇ可変様ドメインおよび膜近位Ｉｇ定常様ドメインを含有する４５～６０ｋＤａのＩ型膜貫通糖タンパク質である（Ｓｏｓｋｉｃら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１２４、２０１４、９５～１３６）。
Ｔ細胞は、最適な活性化、増殖および機能のために、複数のシグナルを必要とする（図１Ａ；Ａｌｅｇｒｅら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍ、２００１から適合させた）。シグナル１は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、ＭＨＣ上に提示された抗原との相互作用によって駆動される。シグナル２は、共刺激シグナルであり、最もよく記載された共刺激相互作用は、抗原認識後のＴ細胞上のＣＤ２８とエンゲージするＡＰＣ上のＣＤ８０またはＣＤ８６である。シグナル２は、シグナル１の非存在下では生じない。
ＣＤ２８とＣＴＬＡ－４との両方に対するＣＤ８０の親和性は、ＣＤ８６よりも実質的により高く、ＣＤ８０を、潜在的により強力なリガンドにする。ＴＣＲエンゲージメントの文脈におけるナイーブなＴ細胞と以前に活性化されたＴ細胞との両方の上でのＣＤ２８に対するＣＤ８０／ＣＤ８６の結合は、下流のシグナル伝達経路を活性化し、サイトカインＩＬ－２の産生をもたらす。ＩＬ－２は、Ｔ細胞生存、増殖および分化の重要な原動力である。ＣＴＬＡ－４もＴ細胞上に発現され、ＣＤ２８と構造的に類似する。Ｔ細胞上でのＣＴＬＡ－４に対するＣＤ８０／ＣＤ８６の結合は、Ｔ細胞共刺激の低減をもたらす。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８と比較してＣＤ８０／ＣＤ８６に対する親和性がより高く、したがって、ＣＤ８０／ＣＤ８６への結合についてＣＤ２８を打ち負かし、かくして、ＣＤ２８活性化およびその後のＩＬ２産生を制限するであろう。ＣＤ８０はまた、ｃｉｓにＰＤ－Ｌ１に結合し（同じ細胞表面接触面上で発現されるタンパク質）、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ１との相互作用を防止することができる。
バリアントＣＤ８０ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ））に融合または連結された抗体Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ１）を有するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。本明細書で提供されるそのようなＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ２８に対する結合親和性の増強または増大を示し、全身性免疫活性化なしに共刺激シグナル伝達を増強することによってＴ細胞機能を促進する。
図１Ｂに示されるように、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ２８への結合を容易にし、Ｔ細胞プライミングおよびＣＤ２８活性化、ＩＬ－２産生、Ｔ細胞の腫瘍浸潤および細胞傷害性Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺滅をもたらす。さらに、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１に対する結合を増大も増強もさせず、それどころか、ＰＤ－Ｌ１に対する検出可能な結合は観察されなかったことが示されている（図９Ａ～９Ｄ）。一部の態様では、シグナル１（抗原認識）とＦｃγＲ結合との両方が、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の効能を開始させる。活性は、腫瘍流入領域リンパ節および腫瘍微小環境などの、腫瘍抗原とＦｃγＲ発現細胞との両方を含む部位で確立され、かくして、全身性免疫活性化を制限する。
本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増強または増大を示した。実施例１（標準ＥＬＩＳＡおよびＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞アッセイ）および実施例７（Ｂｉａｃｏｒｅ）を参照されたい。一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合を増大または増強させ、ＣＤ２８媒介性共刺激を増強させた。実施例２（一次Ｔ細胞およびＪｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－Ｌｕｃリポーター共刺激アッセイ）、実施例１０（Ｊｕｒｋａｔ ＩＬ－２リポーターおよびヒト末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）アッセイ）を参照されたい。
一部の態様では、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ２８に対する結合親和性の少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、または少なくとも２５倍の増大を示した。別の態様では、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｔ細胞共刺激の少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、または少なくとも２５倍の増大または増強を示した。
本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、免疫能力のあるマウスにおける腫瘍モデルにおいて効能および腫瘍増殖阻害および／または退縮の増強ならびに処置後の脾臓および／または腫瘍流入領域リンパ節（ＴＤＬＮ）において腫瘍反応性Ｔ細胞のレベルの増大を示した。実施例１２、１３および１４を参照されたい。一部の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）のいずれかで投与した場合、効能および腫瘍増殖阻害の増強を示した。実施例１５を参照されたい。別の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、処置後の腫瘍においてＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加を示した。実施例１６を参照されたい。さらに、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたは複数の追加の治療剤と合わせて、効能および腫瘍増殖阻害および／または退縮の増強を示した。実施例１８および１９を参照されたい。
一部の態様では、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質による処置は、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の腫瘍増殖阻害を示した。別の態様では、１つまたは複数の追加の治療剤と併用した本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質による処置は、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の腫瘍増殖阻害を示した。
本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ジスルフィドおよび非システイン安定化突然変異位置を同定することによって分子安定性の改善または増強を示すと評価された。実施例３を参照されたい。一部の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、熱安定性の増強を示した。実施例５を参照されたい。別の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、熱により強制される凝集の低減を示した。実施例６を参照されたい。別の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、粘度の低減および／または高濃縮粘度の改善を示した。実施例８を参照されたい。別の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、好ましい収率および／または純度パラメーターを示した。実施例９を参照されたい。
一部の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、好ましいヒトＰＫプロファイルと相関する好ましい薬物動態（ＰＫ）評価を示した。実施例４（非特異的結合および自己相互作用アッセイ）および実施例１７（カニクイザルＰＫ評価）を参照されたい。本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、好ましい安全性パラメーターを示し、サイトカイン放出（ＩＬ－２およびＩＦＮγ）の有意な誘導を示さず、ＴＣＲ刺激の非存在下でのスーパーアゴニズムの証拠を示さなかった。実施例１１を参照されたい。
野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示すＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＰＤ－Ｌ１に対する結合の増大または増強を示さないＣＤ８０融合タンパク質が、さらに提供される。 ＰＤ－Ｌ１に対する最小限の結合を示す、または検出可能な結合を示さないＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、さらに提供される。
一態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、ＰＤ－Ｌ１に対する結合を増大も増強もさせない。別の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、ＰＤ－Ｌ１に対する最小限の結合を示すか、または結合を示さない。
一態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、および／またはＰＤ－Ｌ１に対する結合を増大も増強もさせない。別の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ヒトＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、ＰＤ－Ｌ１に対する結合を増大も増強もさせない。
一態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、および／またはＰＤ－Ｌ１に対する最小限の結合を示すか、もしくは結合を示さない。別の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ２８に対する結合の増大または増強を示し、ＰＤ－Ｌ１に対する最小限の結合を示すか、または結合を示さない。
（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）バリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。一態様では、本発明は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）ＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を提供する。バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、本明細書に記載の任意のバリアントであってもよい。
さらに、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１、Ｉ２、Ｈ３、Ｖ４、Ｔ５、Ｋ６、Ｅ７、Ｖ８、Ｋ９、Ｅ１０、Ｖ１１、Ａ１２、Ｔ１３、Ｌ１４、Ｓ１５、Ｃ１６、Ｇ１７、Ｈ１８、Ｎ１９、Ｖ２０、Ｓ２１、Ｖ２２、Ｅ２３、Ｅ２４、Ｌ２５、Ａ２６、Ｑ２７、Ｔ２８、Ｒ２９、Ｉ３０、Ｙ３１、Ｗ３２、Ｑ３３、Ｋ３４、Ｅ３５、Ｋ３６、Ｋ３７、Ｍ３８、Ｖ３９、Ｌ４０、Ｔ４１、Ｍ４２、Ｍ４３、Ｓ４４、Ｇ４５、Ｄ４６、Ｍ４７、Ｎ４８、Ｉ４９、Ｗ５０、Ｐ５１、Ｅ５２、Ｙ５３、Ｋ５４、Ｎ５５、Ｒ５６、Ｔ５７、Ｉ５８、Ｆ５９、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｌ６５、Ｓ６６、Ｉ６７、Ｖ６８、Ｉ６９、Ｌ７０、Ａ７１、Ｌ７２、Ｒ７３、Ｐ７４、Ｓ７５、Ｄ７６、Ｅ７７、Ｇ７８、Ｔ７９、Ｙ８０、Ｅ８１、Ｃ８２、Ｖ８３、Ｖ８４、Ｌ８５、Ｋ８６、Ｙ８７、Ｅ８８、Ｋ８９、Ｄ９０、Ａ９１、Ｆ９２、Ｋ９３、Ｒ９４、Ｅ９５、Ｈ９６、Ｌ９７、Ａ９８、Ｅ９９、Ｖ１００、Ｔ１０１、Ｌ１０２、Ｓ１０３、Ｖ１０４、Ｋ１０５、Ａ１０６、Ｄ１０７、Ｆ１０８、Ｐ１０９、Ｔ１１０、Ｐ１１１、Ｓ１１２、Ｉ１１３、Ｓ１１４、Ｄ１１５、Ｆ１１６、Ｅ１１７、Ｉ１１８、Ｐ１１９、Ｔ１２０、Ｓ１２１、Ｎ１２２、Ｉ１２３、Ｒ１２４、Ｒ１２５、Ｉ１２６、Ｉ１２７、Ｃ１２８、Ｓ１２９、Ｔ１３０、Ｓ１３１、Ｇ１３２、Ｇ１３３、Ｆ１３４、Ｐ１３５、Ｅ１３６、Ｐ１３７、Ｈ１３８、Ｌ１３９、Ｓ１４０、Ｗ１４１、Ｌ１４２、Ｅ１４３、Ｎ１４４、Ｇ１４５、Ｅ１４６、Ｅ１４７、Ｌ１４８、Ｎ１４９、Ａ１５０、Ｉ１５１、Ｎ１５２、Ｔ１５３、Ｔ１５４、Ｖ１５５、Ｓ１５６、Ｑ１５７、Ｄ１５８、Ｐ１５９、Ｅ１６０、Ｔ１６１、Ｅ１６２、Ｌ１６３、Ｙ１６４、Ａ１６５、Ｖ１６６、Ｓ１６７、Ｓ１６８、Ｋ１６９、Ｌ１７０、Ｄ１７１、Ｆ１７２、Ｎ１７３、Ｍ１７４、Ｔ１７５、Ｔ１７６、Ｎ１７７、Ｈ１７８、Ｓ１７９、Ｆ１８０、Ｍ１８１、Ｃ１８２、Ｌ１８３、Ｉ１８４、Ｋ１８５、Ｙ１８６、Ｇ１８７、Ｈ１８８、Ｌ１８９、Ｒ１９０、Ｖ１９１、Ｎ１９２、Ｑ１９３、Ｔ１９４、Ｆ１９５、Ｎ１９６、Ｗ１９７、Ｎ１９８、Ｔ１９９、Ｔ２００、Ｋ２０１、Ｑ２０２、Ｅ２０３、Ｈ２０４、Ｆ２０５、Ｐ２０６、Ｄ２０７、またはＮ２０８位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。
さらに、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。
一態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＫ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含む。別の態様では、Ｋ３６位の置換はＫ３６Ｒであり、Ｋ８９位の置換はＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換はＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換はＡ９１Ｓである。別の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）置換が、配列番号２のアミノ酸配列のＫ３６Ｒ、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、またはＫ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓを含む、１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含む。
別の態様では、置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含む。
一部の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）野生型ＣＤ８０－Ｆｃタンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性を増大または増強させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
さらに、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、および／またはＮ６４位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。
一態様では、配列番号２のアミノ酸配列の、Ｖ１１位の置換はＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換はＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換はＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換はＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換はＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換はＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換はＱ３３Ｅであり、Ｇ４５位の置換はＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換はＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換はＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換はＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換はＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換はＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換はＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換はＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅである。
別の態様では、置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄ、Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｍ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ａ２６Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｒ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｔ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｆ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｍ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｅ２３Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｙ３１Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｑ３３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｇ４５Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｋ５４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｇ４５Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｋ５４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ５７Ｖ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｑ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｒ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｔ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｉ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｌ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｇ４５Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４ＥまたはＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄおよび／もしくはＮ６４Ｅの任意の他の組合せを含む。
別の態様では、置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＤ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
一部の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）野生型ＣＤ８０－Ｆｃタンパク質の安定性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を増大させる１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。一部の態様では、安定性の増大は、熱安定性の増強、熱により強制される凝集の低減および／または粘度の低減をもたらす。
さらに、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）置換が、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ
－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｉ６１Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＡ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む、配列番号２のアミノ酸配列の１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含む、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。
さらに、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＫ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位の１つまたは複数のアミノ酸の第１の置換、およびｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３および／またはＮ６４位の１つまたは複数のアミノ酸の第２の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、本明細書で提供される。
一部の態様では、ｉ）第１の置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、ｉｉ）第２の置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＤ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
一態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１個または複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に２個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に３個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に４個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に５個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に６個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に７個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に８個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に９個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１０個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
別の態様では、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が提供される。
例示的なＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質としては、限定されるものではないが、配列番号６４～１１４に記載のアミノ酸配列が挙げられる。
一部の態様では、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、シアル酸残基を含む。一態様では、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、１分子あたり、平均で約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、約２５個、約２６個、約２７個、約２８個、約２９個、約３０個、約３１個、約３２個、約３３個、約３４個、約３５個の、または３５個より多いシアル酸残基を含んでもよい。別の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質１分子あたりの平均シアル酸残基は、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、５～３５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３５、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３５、１５～３０、２０～２５、２５～３５、２５～３０、または３０～３５の範囲にあってもよい。
バリアントＣＤ８０ポリペプチド
配列番号２のアミノ酸配列のＶ１、Ｉ２、Ｈ３、Ｖ４、Ｔ５、Ｋ６、Ｅ７、Ｖ８、Ｋ９、Ｅ１０、Ｖ１１、Ａ１２、Ｔ１３、Ｌ１４、Ｓ１５、Ｃ１６、Ｇ１７、Ｈ１８、Ｎ１９、Ｖ２０、Ｓ２１、Ｖ２２、Ｅ２３、Ｅ２４、Ｌ２５、Ａ２６、Ｑ２７、Ｔ２８、Ｒ２９、Ｉ３０、Ｙ３１、Ｗ３２、Ｑ３３、Ｋ３４、Ｅ３５、Ｋ３６、Ｋ３７、Ｍ３８、Ｖ３９、Ｌ４０、Ｔ４１、Ｍ４２、Ｍ４３、Ｓ４４、Ｇ４５、Ｄ４６、Ｍ４７、Ｎ４８、Ｉ４９、Ｗ５０、Ｐ５１、Ｅ５２、Ｙ５３、Ｋ５４、Ｎ５５、Ｒ５６、Ｔ５７、Ｉ５８、Ｆ５９、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｌ６５、Ｓ６６、Ｉ６７、Ｖ６８、Ｉ６９、Ｌ７０、Ａ７１、Ｌ７２、Ｒ７３、Ｐ７４、Ｓ７５、Ｄ７６、Ｅ７７、Ｇ７８、Ｔ７９、Ｙ８０、Ｅ８１、Ｃ８２、Ｖ８３、Ｖ８４、Ｌ８５、Ｋ８６、Ｙ８７、Ｅ８８、Ｋ８９、Ｄ９０、Ａ９１、Ｆ９２、Ｋ９３、Ｒ９４、Ｅ９５、Ｈ９６、Ｌ９７、Ａ９８、Ｅ９９、Ｖ１００、Ｔ１０１、Ｌ１０２、Ｓ１０３、Ｖ１０４、Ｋ１０５、Ａ１０６、Ｄ１０７、Ｆ１０８、Ｐ１０９、Ｔ１１０、Ｐ１１１、Ｓ１１２、Ｉ１１３、Ｓ１１４、Ｄ１１５、Ｆ１１６、Ｅ１１７、Ｉ１１８、Ｐ１１９、Ｔ１２０、Ｓ１２１、Ｎ１２２、Ｉ１２３、Ｒ１２４、Ｒ１２５、Ｉ１２６、Ｉ１２７、Ｃ１２８、Ｓ１２９、Ｔ１３０、Ｓ１３１、Ｇ１３２、Ｇ１３３、Ｆ１３４、Ｐ１３５、Ｅ１３６、Ｐ１３７、Ｈ１３８、Ｌ１３９、Ｓ１４０、Ｗ１４１、Ｌ１４２、Ｅ１４３、Ｎ１４４、Ｇ１４５、Ｅ１４６、Ｅ１４７、Ｌ１４８、Ｎ１４９、Ａ１５０、Ｉ１５１、Ｎ１５２、Ｔ１５３、Ｔ１５４、Ｖ１５５、Ｓ１５６、Ｑ１５７、Ｄ１５８、Ｐ１５９、Ｅ１６０、Ｔ１６１、Ｅ１６２、Ｌ１６３、Ｙ１６４、Ａ１６５、Ｖ１６６、Ｓ１６７、Ｓ１６８、Ｋ１６９、Ｌ１７０、Ｄ１７１、Ｆ１７２、Ｎ１７３、Ｍ１７４、Ｔ１７５、Ｔ１７６、Ｎ１７７、Ｈ１７８、Ｓ１７９、Ｆ１８０、Ｍ１８１、Ｃ１８２、Ｌ１８３、Ｉ１８４、Ｋ１８５、Ｙ１８６、Ｇ１８７、Ｈ１８８、Ｌ１８９、Ｒ１９０、Ｖ１９１、Ｎ１９２、Ｑ１９３、Ｔ１９４、Ｆ１９５、Ｎ１９６、Ｗ１９７、Ｎ１９８、Ｔ１９９、Ｔ２００、Ｋ２０１、Ｑ２０２、Ｅ２０３、Ｈ２０４、Ｆ２０５、Ｐ２０６、Ｄ２０７、またはＮ２０８位に１つ以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ））が、本明細書で提供される。
配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが、本明細書でさらに提供される。
一部の態様では、Ｖ１１位の置換はＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換はＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換はＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換はＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換はＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換はＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換はＱ３３Ｅであり、Ｋ３６位の置換はＫ３６Ｒであり、Ｇ４５位の置換はＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換はＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換はＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換はＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換はＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換はＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換はＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換はＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅであり、Ｋ８９位の置換はＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換はＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換はＡ９１Ｓである。
一部の態様では、置換は、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１C、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、またはＫ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む。
さらに、配列番号２のアミノ酸配列の、（ｉ）Ｋ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位の１つまたは複数のアミノ酸の第１の置換と、（ｉｉ）Ｖ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４位の１つまたは複数のアミノ酸の第２の置換とを含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが、本明細書で提供される。
一態様では、第１の置換は、配列番号２のアミノ酸配列の、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０ＫまたはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、（ｉｉ）第２の置換は、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１個または複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に２個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に３個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に４個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に５個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に６個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に７個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に８個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に９個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１０個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
別の態様では、配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドが提供される。
例示的なバリアントＣＤ８０ポリペプチドとしては、限定されるものではないが、配列番号２０～６３に記載のアミノ酸配列が挙げられる。
Ｆｃ領域
本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの突然変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合により改変された抗体を含む、要求された特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構成などの、抗体またはその断片を含んでもよい。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含む）であってよい。一態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域などの、抗体断片を含む。
一部の態様では、抗体またはその断片のアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、およびＩｇＧ４Δｂからなる群から選択される。
一部の態様では、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、抗体のＦｃ領域を含む。一部の態様では、抗体Ｆｃ領域は、Ｃ末端リシン（Ｋ）を含む、または含まない、以下に列挙される配列を有する、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４である。
野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１３）
野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１４）
野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号１５）
本発明のために使用される例示的な抗体Ｆｃ領域としては、限定されるものではないが、本明細書に列挙される配列が挙げられる。
一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１（配列番号１３）の２２０位にアミノ酸改変（例えば、Ｃ２２０Ｓ）を含む。例えば、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、Ｃ末端リシン（Ｋ）を含む、または含まない、
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１（配列番号１３）の２２０、２３４、２３５、２３７、および／または３２２位の１つまたは複数にアミノ酸改変を含む。一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１（配列番号１３）の２２０位（例えば、Ｃ２２０Ｓ）、２３４位（例えば、Ｌ２３４Ａ）、２３５位（例えば、Ｌ２３５Ａ）、および２３７位（例えば、Ｇ２３７Ａ）の１つまたは複数にアミノ酸改変を含む。一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１（配列番号１３）の２２０位（例えば、Ｃ２２０Ｓ）、２３４位（例えば、Ｌ２３４Ａ）、２３５位（例えば、Ｌ２３５Ａ）、および２３７位（例えば、Ｇ２３７Ａ）のそれぞれにアミノ酸改変を含む。例えば、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、Ｃ末端リシン（Ｋ）を含む、または含まない、
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ２（配列番号１４）の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）のうちの１つまたは複数を含む。一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ２（配列番号１４）の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）のそれぞれにアミノ酸改変を含む。例えば、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、Ｃ末端リシン（Ｋ）を含む、または含まない、
ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む。
一部の態様では、本明細書で提供されるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、（ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）抗体Ｆｃ領域に共有結合により連結または融合されたバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含む。一部の態様では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域のＮ末端に連結または融合される。
一部の態様では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域（例えば、配列番号１３）のヒトＣＨ１ドメイン（例えば、ＥＰＫＳＣ；配列番号３）を介して抗体Ｆｃ領域のＮ末端に連結または融合される。他の態様では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域（例えば、配列番号１６）の２２０位（例えば、Ｃ２２０Ｓ）（例えば、ＥＰＫＳＳ；配列番号４）に改変を有するヒトＣＨ１ドメインを介して抗体Ｆｃ領域のＮ末端に連結または誘導される。
一部の態様では、１つまたは複数のポリペプチド（例えば、異種または相同配列）を、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の抗体Ｆｃ領域と、バリアントＣＤ８０ポリペプチドとの間に挿入することができる。一部の態様では、ポリペプチドを、抗体Ｆｃ領域のアミノ末端、カルボキシル末端、またはアミノ末端とカルボキシル末端の両方に挿入またはコンジュゲートすることができる。一部の態様では、ポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域とバリアントＣＤ８０ポリペプチドとをコンジュゲートするポリペプチドリンカーを含む。例えば、ポリペプチドリンカーは、限定されるものではないが、ＧＧＧＧＧＴＳＡＴＡＴＰＧＡ（配列番号５）、ＧＧＧＧＳＧＳＧＧ（配列番号６）、ＧＧＧＧＧＴＳＡＴＡＴＰＧＡ（配列番号７）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号８）、およびＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号９）を含む、グリシン－セリン（ＧＳ）リンカーであってもよい。
一部の態様では、ポリペプチドは、１つまたは複数のリンカーおよびタグを含む。ポリペプチドタグの例としては、限定されるものではないが、ＦＬＡＧタグ、６Ｈｉｓタグ（例えば、ＨＨＨＨＨＨ；配列番号１０）、８Ｈｉｓタグ（例えば、ＨＨＨＨＨＨＨＨ；配列番号１１）、またはＡＶＩタグ（例えば、ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ；配列番号１２）が挙げられる。
一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、Ｗａｎｇら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ．２０１８、Ｊａｎ；９（１）：６３～７３に提供された改変を含んでもよい。例えば、抗体Ｆｃ領域（ＩｇＧ１）改変としては、限定されるものではないが、一方の重鎖中のＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４ＡまたはＬ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８Ａおよび反対の重鎖中のＤ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ／Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４Ｅ（ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増加）；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ（ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増加、ＦｃγＲＩＩｂ結合の減少）などの、ＡＤＣＣを増強する改変；（ｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（ＦｃγＲＩＩａ結合の増加、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増加）などの、ＡＤＣＰを増強する改変；（ｉｉｉ）Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４ＴまたはＩｇＧ１／ＩｇＧ３交差サブクラス（Ｃ１ｑ結合の増加）；Ｅ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙ（六量体化）などの、ＣＤＣを増強する改変；（ｉｖ）Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ（非グリコシル化）；Ｌ２３５ＥまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合の低減）などの、エフェクター機能を低減させる改変；（ｖ）Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥまたはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（ｐＨ６．０でＦｃＲｎ結合を増加させる）などの、半減期を増大させる改変、および（ｖｉ）Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（ＦｃγＲＩＩｂ結合の増加）；Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８Ｆ（ＦｃγＲＩＩａ結合の増加、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の減少）などの、コエンゲージメントを増加させる改変が挙げられる。
例えば、抗体Ｆｃ領域（ＩｇＧ２）改変としては、限定されるものではないが、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、またはＩｇＧ２／ＩｇＧ４交差アイソタイプ（ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合の低減）などの、エフェクター機能を低減させる改変が挙げられる。
例えば、抗体Ｆｃ領域（ＩｇＧ４）改変としては、限定されるものではないが、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合の低減）などの、エフェクター機能を低減させる改変が挙げられる。
別の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１ Ｍａｒ ２；２７６（９）：６５９１～６０４に提供された改変を含んでもよい。例えば、抗体Ｆｃ領域（ＩｇＧ１）改変としては、限定されるものではないが、全てのＦｃγＲに対する結合を低減させる改変（クラス１）：Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６欠失、Ｐ２３８Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ；ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を低減させる改変（クラス２）：Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ａ３２７Ｓ；ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を改善する改変（クラス３）：Ｔ２５６Ａ、Ａ３２７Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する結合を改善し、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する効果がない改変（クラス４）：Ｒ２５５Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｅ２７２Ａ、Ｎ２７６Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｌ３０９Ａ、Ｎ３１５Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ｐ３３１Ａ、Ｓ３３７Ａ、Ａ３７８Ｑ、Ｅ４３０Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する結合を改善し、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を低減させる改変（クラス５）：Ｈ２６８Ａ、Ｒ３０１Ａ、Ｋ３２２Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する結合を低減させ、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する効果がない改変（クラス６）：Ｒ２９２Ａ、Ｋ４１４Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する結合を低減させ、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を改善する改変（クラス７）：Ｓ２９８Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する効果がなく、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を低減させる改変（クラス８）：Ｓ２３９Ａ、Ｅ２６９Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｙ２９６Ｆ、Ｖ３０３Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｋ３３８Ａ、Ｄ３７６Ａ；ＦｃγＲＩＩに対する効果がなく、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合を改善する改変（クラス９）：Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ；およびＦｃＲｎにのみ影響する改変（クラス１０）：Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ａ、Ｋ２８８Ａ、Ｖ３０５Ａ、Ｑ３１１Ａ、Ｄ３１２Ａ、Ｋ３１７Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｑ３６２Ａ、Ｅ３８０Ａ、Ｅ３８２Ａ、Ｓ４１５Ａ、Ｓ４２４Ａ、Ｈ４３３Ａ、Ｎ４３４Ａ、Ｈ４３５Ａ、Ｙ４３６Ａが挙げられる。
一部の態様では、本明細書に記載の抗体Ｆｃ領域は、ヒトＦｃガンマ受容体に対する結合親和性が増大または減少し、免疫学的に不活性または部分的に不活性である改変された定常領域を含む。エフェクター機能の最適レベルおよび／または組合せを達成するために、定常領域の異なる改変を使用することができる。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６：３１９～３２４、１９９５；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７：４９６３～９ １５７：４９６３～４９６９、１９９６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８～４１８４、２０００；Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４３：２５９５～２６０１、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の態様では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３～２６２４、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９９／０５８５７２号に記載されているように改変される。
一部の態様では、定常領域を改変して、Ｆｃガンマ受容体との相互作用ならびに補体および免疫系を回避することができる。そのような抗体を調製するための技術は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。例えば、抗体がヒトにおける臨床試験および処置で使用される場合、定常領域をヒト定常領域により類似するように操作して、免疫応答を回避することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および同第５，８６６，６９２号を参照されたい。
さらに他の態様では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されている。一部の態様では、定常領域は、オリゴ糖付着残基および／または定常領域中のＮ－グリコシル化認識配列の一部であるフランキング残基を突然変異させることによって、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されている。例えば、Ｎ－グリコシル化部位Ｎ２９７を、例えば、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異させることができる。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４３：２５９５～２６０１、１９８９、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の態様では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されている。定常領域は、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによって炭水化物を除去するなど）、またはグリコシル化欠損宿主細胞内での発現によって、Ｎ結合型グリコシル化について非グリコシル化されていてもよい。
例示的な抗体Ｆｃ領域としては、限定されるものではないが、配列番号１３～１８に記載のアミノ酸配列が挙げられる。
ポリヌクレオチド、ベクター、および宿主細胞
本発明はまた、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチド、ならびに該ポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。一態様では、ポリヌクレオチドは、バリアントＣＤ８０ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。別の態様では、ポリヌクレオチドは、抗体Ｆｃ領域をコードするヌクレオチド配列を含む。別の態様では、ポリヌクレオチドは、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。例示的なＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質としては、限定されるものではないが、配列番号１１５～１１９に記載の核酸配列が挙げられる。
目的のバリアントＣＤ８０ポリペプチド、抗体Ｆｃ領域および／またはＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をコードする配列を、宿主細胞内のベクター中で維持した後、宿主細胞を、将来の使用のために拡大および凍結することができる。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞は、本明細書でさらに記載されている。
一態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。ポリヌクレオチドは、当業界で公知の手順によって作製し、発現させることができる。典型的には、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載の組換え法を使用して、これらをコードするポリヌクレオチドを調製し、発現させることによって作製されるが、これらは、例えば、化学合成を含む当業界で公知の他の手段によって調製することもできる。
一態様では、本発明は、発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。一部の態様では、組成物は、本明細書に記載のバリアントＣＤ８０ポリペプチド、抗体Ｆｃ領域およびＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。別の態様では、本明細書に記載のバリアントＣＤ８０ポリペプチド、抗体Ｆｃ領域およびＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を産生する単離された細胞系が提供される。
任意のそのような配列と相補的なポリヌクレオチドも本発明によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）であっても、二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成）であっても、ＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子としては、前駆体ｍＲＮＡ（プレ－ｍＲＮＡ）または異種核内ｍＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）および成熟ｍＲＮＡなどの、成熟および未熟ｍＲＮＡが挙げられる。追加のコード配列または非コード配列が本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよいが、その必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材料に連結されていてもよいが、その必要はない。
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体もしくはその一部をコードする内因性配列）を含んでもよいか、またはそのような配列のバリアントを含んでもよい。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるポリペプチドの免疫反応性が天然の免疫反応性分子と比べて減少しないように、１つまたは複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は、一般に、本明細書に記載するように評価することができる。バリアントは、好ましくは、自然抗体またはその一部をコードするポリヌクレオチド配列に対する、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、さらにより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を示す。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように、最大対応に関してアラインメントされたとき同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、比較ウィンドウにわたって配列を比較して、配列類似性の局部領域を同定および比較することによって実施される。本明細書で使用される「比較ウィンドウ」は、少なくとも約２０の連続した位置、通常３０～約７５、または４０～約５０のセグメントを指し、この中で１つの配列を同じ数の連続した位置の参照配列と、２つの配列を最適にアラインメントさせた後に比較することができる。
比較するための配列の最適なアラインメントは、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式内のＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、デフォルトのパラメーターを使用して行うことができる。
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較のウィンドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定され、ここで、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのための参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常５～１５パーセント、または１０～１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列内に存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を参照配列内の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。
バリアントは、また、またはあるいは、天然遺伝子、またはその一部もしくは相補体と実質的に相同であってよい。そのようなポリヌクレオチドバリアントは、自然抗体（または相補配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
当業者であれば、遺伝子コードの縮重性の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することを理解できるであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列と最小の相同性を持つ。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差異に起因して変化するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。さらに、本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つまたは複数の突然変異、例えば、欠失、付加、および／または置換などの結果として変更されている内因性遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較など）を使用して同定することができる。
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え法、またはＰＣＲを使用して取得することができる。化学的なポリヌクレオチド合成の方法は、当業界で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者であれば、所望のＤＮＡ配列を生産するために、本明細書に提供される配列、および市販のＤＮＡ合成装置を使用することができる。
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに考察されるように、所望の配列を含むポリヌクレオチドを好適なベクター中に挿入することができ、ベクターを次に、複製および増幅のために好適な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当業界で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入することができる。細胞は、直接取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ－接合、または電気穿孔により、外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入されたら、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持し、または宿主細胞ゲノム中に組み込むことができる。このように増幅されたポリヌクレオチドは、当業界で周知の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）によって宿主細胞から単離することができる。
あるいは、ＰＣＲにより、ＤＮＡ配列の複製が可能になる。ＰＣＲ技術は、当業界で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、第４，８００，１５９号、第４，７５４，０６５号、および第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
ＲＮＡは、適切なベクター中で単離ＤＮＡを使用し、好適な宿主細胞内にこれを挿入することによって取得することができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される場合、次いで、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上掲に記載のように、当業者には周知の方法を使用してＲＮＡを単離することができる。
好適なクローニングベクターを標準的な技術によって構築することができ、または当業界で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されるように意図された宿主細胞に応じて変更することができるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有してもよく、および／またはベクターを含有するクローンの選択において使用することができるマーカーのための遺伝子を有してもよい。好適な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらの、および多くの他のクローニングベクターは、商業的供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、ＡｔｕｍおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。
発現ベクターは一般に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能ポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの一体部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないことを意味する。好適な発現ベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号に開示された発現ベクターが挙げられる。ベクター成分としては一般に、限定されるものではないが、以下：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、好適な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）のうちの１つまたは複数が挙げられる。発現（すなわち、翻訳）のために、１つまたは複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、および終止コドンなども通常必要とされる。
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが、ワクシニアウイルスなどの感染性病原体である場合）を含む、いくつかの適切な手段のいずれかによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特徴に依存することが多いであろう。
本発明はまた、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的に使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定例としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞が挙げられる。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。好適な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＢ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）など）、および酵母（Ｓ．セレビサエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、Ｓ．ポンベ（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、またはＫ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）が挙げられる。好ましくは、宿主細胞は、存在する場合、宿主細胞中の目的の対応する内因性タンパク質のレベルより、約５倍高い、より好ましくは１０倍高い、さらにより好ましくは２０倍高いレベルでｃＤＮＡを発現する。
医薬組成物
本発明はまた、有効量の、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはバリアントＣＤ８０ポリペプチドを含む医薬組成物も提供する。そのような組成物の例、ならびに製剤化方法も、本明細書に記載される。一部の態様では、組成物は、１つまたは複数のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む。一部の態様では、組成物は、抗体Ｆｃ領域と、バリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む。一部の態様では、組成物は、抗体Ｆｃ領域と、Ｖ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含み、バリアントＣＤ８０ポリペプチドが抗体Ｆｃ領域に連結または融合されている、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む。
組成物は、１より多いＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、異なるバリアントＣＤ８０ポリペプチドおよび／または異なる抗体Ｆｃ領域を含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の混合物）を含んでもよいことが理解されるであろう。
本発明で使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ 第２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）をさらに含んでもよい。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含む、単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対抗イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含んでもよい。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書でさらに記載されている。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、およびその組成物はまた、薬剤の有効性を増強および／または補完するように働く他の薬剤と併せて使用し、または別個に、同時に、もしくは逐次投与することもできる。
本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む、医薬組成物などの組成物も提供する。一部の態様では、組成物は、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
処置方法
本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドは、限定されるものではないが、治療的処置方法および診断的処置方法などの、様々な用途において有用である。
一態様では、本発明は、がんを処置するための方法を提供する。一部の態様では、対象におけるがんを処置する方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む。本明細書で使用される場合、がんは、固形がんまたは液性がんであってもよい。固形がんとしては、限定されるものではないが、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、頭頸部がん（例えば、扁平上皮頭頸部がん）、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、グリオーマ、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、結腸がん、結腸直腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、グリア芽腫、脳腫瘍、骨肉腫、眼がん、黒色腫、および高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を有するがんが挙げられる。
液性がんとしては、限定されるものではないが、多発性骨髄腫、悪性形質細胞新生物、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーレル病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、有毛細胞白血病、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞型リンパ性リンパ腫、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（下肢型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、炎症を伴うびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病で生じる大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間的特徴を有する未分類のＢ細胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫と古典型ホジキンリンパ腫との間の中間的特徴を有する未分類のＢ細胞性リンパ腫、および他の造血細胞関連がんが挙げられる。
一部の態様では、がんは、再発性、抵抗性、難治性、および／または転移性である。例えば、がんは、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または難治性である。
一部の態様では、がんは、再発性、抵抗性、難治性、および／または転移性である。例えば、がんは、抗ＣＴＬＡ－４療法に対して抵抗性および／または難治性である。
一部の態様では、対象における腫瘍増殖または進行を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む有効量の組成物を投与することを含む方法が提供される。一部の態様では、対象におけるがん細胞の転移を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物を投与することを含む方法が提供される。他の態様では、対象における腫瘍の退縮を誘導する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物を投与することを含む方法が提供される。
別の態様では、がんを検出、診断、および／またはモニタリングする方法が提供される。例えば、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはバリアントＣＤ８０ポリペプチドを、イメージング剤および酵素基質標識などの検出可能部分で標識することができる。本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはバリアントＣＤ８０ポリペプチドを、ｉｎ ｖｉｖｏでのイメージング（例えば、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴ）などのｉｎ ｖｉｖｏでの診断アッセイ、または染色試薬のために使用することもできる。
一部の態様では、本明細書に記載の方法は、追加の形態の療法で対象を処置するステップをさらに含む。一部の態様では、追加の形態の療法は、限定されるものではないが、化学療法、放射線、手術、ホルモン療法、および／または追加の免疫療法などの追加の抗がん療法である。
本明細書に記載の全ての方法に関して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質への言及は、１種または複数の追加の薬剤を含む組成物も含む。これらの組成物は、当業界で周知である、緩衝剤を含む薬学的に許容できる賦形剤などの好適な賦形剤をさらに含んでもよい。本発明は、単独で、または他の処置方法と組み合わせて使用することができる。
本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、任意の好適な経路によって対象に投与することができる。本明細書に記載の例は、利用可能な技術を限定するように意図されておらず、例示するものであるように意図されていることが当業者に明らかであるはずである。したがって、一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、公知の方法、例えば、ボーラスのような静脈内投与、またはある時間にわたる持続注入によるもの、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、経皮、皮下、関節内、舌下、滑液包内によるもの、送気、くも膜下、経口、吸入、または局所経路によるものなどに従って対象に投与される。投与は、全身的、例えば、静脈内投与であっても、局部的であってもよい。ジェット噴霧器および超音波噴霧器などの液体製剤用の市販噴霧器は、投与に有用である。液体製剤を直接噴霧することができ、凍結乾燥粉末を復元後に噴霧することができる。あるいは、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化するか、または凍結乾燥し、粉砕した粉末として吸入することができる。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、部位特異的または標的化された局部送達技術によって投与される。部位特異的、または標的化局部送達技術の例としては、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の様々な移植可能なデポー源、または局部送達カテーテル、例えば、輸注カテーテル、留置カテーテル、もしくはニードルカテーテルなど、合成移植片、外膜ラップ、シャントおよびステントもしくは他の埋め込み型デバイス、部位特異的担体、直接注入、または直接塗布が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号および米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の種々の製剤を、投与のために使用することができる。一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、そのまま投与することができる。一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容できる賦形剤は、種々の製剤中にあってもよい。薬学的に許容できる賦形剤は、当業界で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは粘稠度を与え、または希釈剤として作用することができる。好適な賦形剤としては、限定されるものではないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、オスモル濃度を変化させるための塩、封入剤、緩衝剤、および皮膚浸透促進剤が挙げられる。賦形剤ならびに非経口の、および非経口ではない（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達のための製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００に記載されている。
一部の態様では、これらの薬剤は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために製剤化される。したがって、これらの薬剤は、薬学的に許容できるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液などと組み合わせることができる。特定の投与量レジメン、すなわち、用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体およびその個体の医療歴に依存するであろう。
本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）によるものなどの任意の好適な方法を使用して投与することができる。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、本明細書に記載のように、局所的に、または吸入によって投与することもできる。一般に、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与に関して、治療投与量は、毎日、毎週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、１０週間毎、１２週間毎、または１２週間超毎に投与することができる。状態に応じて数日間またはそれ以上にわたって投与を繰り返すことに関して、処置は、症状の所望の抑制が起こるまで、または例えば、がんに関連した症状を低減するのに十分な治療レベルが達成されるまで持続される。この療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易にモニタリングされる。用量レジメン（使用される特定のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む）は、時間と共に変化してもよい。
一部の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲の投与量を毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの１日投与量を使用することができる。
一部の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲の投与量を毎週（ＱＷ）投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの毎週投与量を使用することができる。
一部の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲の投与量を２週間毎（Ｑ２Ｗ）に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの２週間毎の投与量を使用することができる。
一部の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲の投与量を３週間毎（Ｑ３Ｗ）に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの３週間毎の投与量を使用することができる。
一部の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲の投与量を毎月または４週間毎（Ｑ４Ｗ）に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの毎月投与量を使用することができる。
他の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約０．０１ｍｇ～約１２００ｍｇ以上の範囲の投与量を毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの１日投与量を使用することができる。
他の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約０．０１ｍｇ～約２０００ｍｇ以上の範囲の投与量を毎週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの毎週投与量を使用することができる。
他の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約０．０１ｍｇ～約２０００ｍｇ以上の範囲の投与量を２週間毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの２週間毎の投与量を使用することができる。
他の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約０．０１ｍｇ～約２５００ｍｇ以上の範囲の投与量を３週間毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、または約２５００ｍｇの３週間毎の投与量を使用することができる。
他の態様では、治療投与量は、上記の因子に応じて、約０．０１ｍｇ～約３０００ｍｇ以上の範囲の投与量を４週間毎または毎月投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、または約３０００ｍｇの毎月投与量を使用することができる。
一部の態様では、本発明の治療剤は、約１μｇ／ｋｇ～約６００μｇ／ｋｇ以上、約６μｇ／ｋｇ～約６００μｇ／ｋｇ、約６μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ～約６００μｇ／ｋｇまたは約３０μｇ／ｋｇ～約３００μｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。例えば、用量は、約１μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約３μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約６μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ、約８μｇ／ｋｇ、約９μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ、約４０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約５５μｇ／ｋｇ、約６０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ、約７０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約８０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ、約９０μｇ／ｋｇ、約９５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１１０μｇ／ｋｇ、約１２０μｇ／ｋｇ、約１３０μｇ／ｋｇ、約１４０μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１６０μｇ／ｋｇ、約１７０μｇ／ｋｇ、約１８０μｇ／ｋｇ、約１９０μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２１０μｇ／ｋｇ、約２２０μｇ／ｋｇ、約２３０μｇ／ｋｇ、約２４０μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約２６０μｇ／ｋｇ、約２７０μｇ／ｋｇ、約２８０μｇ／ｋｇ、約２９０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇまたは約６００μｇ／ｋｇで投与され、それらを使用することができる。
本発明の目的に関して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の適切な投与量は、用いられるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（またはその組成物）、処置される症状の型および重症度、薬剤が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴および薬剤に対する応答、投与される薬剤の患者のクリアランス速度、ならびに主治医の自由裁量に依存する。典型的には、臨床医は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、投与量が所望の結果を達成するものに到達するまで投与する。用量および／または頻度は、処置の過程にわたって変化してもよい。半減期などの経験的な考慮事項は一般に、投与量の決定に寄与する。投与の頻度は、療法の過程にわたって決定および調整することができ、必ずではないが、一般的には、症状の処置および／または抑制および／または改善および／または遅延に基づく。あるいは、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の持続的連続放出製剤が適切であってもよい。持続放出を達成するための様々な製剤およびデバイスが当業界で公知である。
一実施形態では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与量を、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の１回または複数回の投与を与えられた個体において経験的に決定することができる。例えば、個体は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の漸増投与量を与えられる。効能を評価するために、疾患の指標を追跡することができる。
本発明の方法による本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与は、例えば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか、または予防的であるか、および熟練した開業医に公知の他の因子に応じて、連続的であっても、断続的であってもよい。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与は、予め選択された時間にわたって本質的に連続的であってもよく、または間隔を置いた一連の投薬におけるものであってもよい。
一部の態様では、１つより多いＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が存在してもよい。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ以上の異なるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が存在してもよい。一般に、これらのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、互いに有害に影響しない補完的な活性を有してもよい。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはバリアントＣＤ８０ポリペプチドを、１つまたは複数の追加の薬剤の投与と組み合わせて投与することができる。これらのものとしては、限定されるものではないが、生物治療剤、化学療法剤、ワクチン、免疫細胞療法（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞に基づく療法）、放射線療法、がんワクチン、別のサイトカイン療法（例えば、インターフェロン、インターロイキン、および造血増殖因子などの、免疫応答を刺激する種々のシグナル伝達タンパク質を含む免疫刺激性サイトカイン）、標的化サイトカイン、他の免疫抑制経路の阻害剤、血管新生の阻害剤、Ｔ細胞活性化因子、代謝経路の阻害剤、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの機構的標的）阻害剤（例えば、ラパマイシン、ラパマイシン誘導体、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、およびデホロリムス）、アデノシン経路の阻害剤、限定されるものではないが、Ｉｎｌｙｔａ、ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）阻害剤（例えば、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、およびスニチニブ）、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブおよびダブラフェニブ）を含むチロシンキナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＰＫ１阻害剤、エピジェネティック改変剤、Ｔｒｅｇ細胞および／または骨髄由来抑制細胞の阻害剤または枯渇剤、ＪＡＫ（Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅ）阻害剤（例えば、ルキソリチニブおよびトファシチニブ、バリシチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、およびウパダシチニブ）、ＳＴＡＴ（シグナル伝達兼転写活性化因子）阻害剤（例えば、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、およびＳＴＡＴ５阻害剤、例えば、フルダラビン）、サイクリン依存的キナーゼ阻害剤、免疫原性薬剤（例えば、弱毒化がん性細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞、例えば、腫瘍由来抗原または核酸をパルスされた樹状細胞など、ＭＥＫ阻害剤（例えば、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、およびセルメチニブ）、ＧＬＳ１阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、タラゾパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ）、腫瘍溶解ウイルス、直接的に、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）もしくはナノ粒子により送達されるＤＮＡ、ＲＮＡを含む遺伝子療法、自然免疫応答モジュレーター（例えば、ＴＬＲ、ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ）、ＩＤＯ（インドールアミン－ピロール２，３－ジオキシゲナーゼ）阻害剤、ＰＲＲ（パターン認識受容体）アゴニスト、ならびに限定されるものではないが、ＧＭ－ＣＳＦなどの免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトされた細胞）の投与が挙げられる。
一部の態様では、生物治療剤は、限定されるものではないが、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ－７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ－８抗体、抗ＩＬ－１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＩＬ－７Ｒ抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＢＴＮ１Ａ１抗体、ＢＣＭＡ抗体、または抗ＧＩＴＲ抗体を含む抗体である。
一部の態様では、本発明のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質との併用のための抗体の他の例は、５Ｔ４；Ａ３３；アルファ葉酸受容体１（例えば、ミルベツキシマブソラブタンシン）；Ａｌｋ－１；ＢＣＭＡ［例えば、ＰＦ－０６８６３１３５（ＵＳ９９６９８０９を参照されたい）］；ＢＴＮ１Ａ１（例えば、ＷＯ２０１８２２２６８９を参照されたい）；ＣＡ－１２５（例えば、アバゴボマブ）；カルボアンヒドラーゼＩＸ；ＣＣＲ２；ＣＣＲ４（例えば、モガムリズマブ）；ＣＣＲ５（例えば、レロンリマブ）；ＣＣＲ８；ＣＤ３［例えば、ブリナツモマブ（ＣＤ３／ＣＤ１９二重特異性）、ＰＦ－０６６７１００８（ＣＤ３／Ｐ－カドヘリン二重特性）、ＰＦ－０６８６３１３５（ＣＤ３／ＢＣＭＡ二重特異性）］；ＣＤ１９（例えば、ブリナツモマブ、ＭＯＲ２０８）；ＣＤ２０（例えば、イブリツモマブチウキセタン、オビヌツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、ウブリツキシマブ）；ＣＤ２２（イノツズマブオゾガマイシン、モキセツモマブパスドトックス）；ＣＤ２５；ＣＤ２８；ＣＤ３０（例えば、ブレンツキシマブベドチン）；ＣＤ３３（例えば、ゲムツズマブオゾガマイシン）；ＣＤ３８（例えば、ダラツムマブ、イサツキシマブ）、ＣＤ４０；ＣＤ－４０Ｌ；ＣＤ４４ｖ６；ＣＤ４７（例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、ＣＣ－９０００２、ＳＲＦ２３１、Ｂ６Ｈ１２）；ＣＤ５２（例えば、アレムツズマブ）；ＣＤ５６；ＣＤ６３；ＣＤ７９（例えば、ポラツズマブベドチン）；ＣＤ８０；ＣＤ８６；ＣＤ１２３；ＣＤ２７６／Ｂ７－Ｈ３（例えば、オムブルタマブ）；ＣＤＨ１７；ＣＥＡ；ＣｌｈＣＧ；ＣＴＬＡ－４（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、ＣＸＣＲ４；デスモグレイン４；ＤＬＬ３（例えば、ロバルピツズマブテシリン）；ＤＬＬ４；Ｅ－カドヘリン；ＥＤＡ；ＥＤＢ；ＥＦＮＡ４；ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、デパツキシズマブマホドチン、ネシツムマブ、パニツムマブ）；ＥＧＦＲｖＩＩＩ；エンドシアリン；ＥｐＣＡＭ（例えば、オポルツズマブモナトックス）；ＦＡＰ；胎児アセチルコリン受容体；ＦＬＴ３（例えば、ＷＯ２０１８／２２０５８４を参照されたい）；４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）［例えば、ウトミルマブ／ＰＦ－０５０８２５６６（ＷＯ２０１２／０３２４３３を参照されたい）またはウレルマブ／ＢＭＳ－６６３５１３］、ＧＤ２（例えばジヌツキシマブ、３Ｆ８）；ＧＤ３；ＧＩＴＲ（例えばＴＲＸ５１８）；ＧｌｏｂｏＨ；ＧＭ１；ＧＭ２；ＨＥＲ２／ｎｅｕ［例えば、マルゲツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ；アド－トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブデュオカルマジン、ＰＦ－０６８０４１０３（ＵＳ８８２８４０１を参照されたい）］；ＨＥＲ３；ＨＥＲ４；ＩＣＯＳ；ＩＬ－１０；ＩＴＧ－ＡｖＢ６；ＬＡＧ－３（例えば、レラトリマブ、ＩＭＰ７０１）；Ｌｅｗｉｓ－Ｙ；ＬＧ；Ｌｙ－６；Ｍ－ＣＳＦ［例えば、ＰＤ－０３６０３２４（ＵＳ７３２６４１４を参照されたい）］；ＭＣＳＰ；メソテリン；ＭＵＣ１；ＭＵＣ２；ＭＵＣ３；ＭＵＣ４；ＭＵＣ５ＡＣ；ＭＵＣ５Ｂ；ＭＵＣ７；ＭＵＣ１６；Ｎｏｔｃｈ１；Ｎｏｔｃｈ３；ネクチン－４（例えば、エンホルツマブベドチン）；ＯＸ４０［例えば、ＰＤ－０４５１８６００（ＵＳ７９６０５１５を参照されたい）］；Ｐ－カドヘリン［例えば、ＰＦ－０６６７１００８（ＷＯ２０１６／００１８１０を参照されたい）］；ＰＣＤＨＢ２；ＰＤ－１［例えば、ＢＣＤ－１００、カムレリズマブ、セミプリマブ、ゲノリムズマブ（ＣＢＴ－５０１）、ＭＥＤＩ０６８０、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＲＮ８８８（ＷＯ２０１６／０９２４１９）、シンチリマブ、スパルタリズマブ、ＳＴＩ－Ａ１１１０、チスレリズマブ、ＴＳＲ－０４２］；ＰＤ－Ｌ１（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、またはＬＹ３３０００５４）；ＰＤＧＦＲＡ（例えば、オララツマブ）；形質細胞抗原；ポリＳＡ；ＰＳＣＡ；ＰＳＭＡ；ＰＴＫ７［例えば、ＰＤ－０６６４７０２０（ＵＳ９４０９９９５を参照されたい）］；Ｒｏｒ１；ＳＡＳ；ＳＣＲｘ６；ＳＬＡＭＦ７（例えば、エロツズマブ）；ＳＨＨ；ＳＩＲＰａ（例えば、ＥＤ９、Ｅｆｆｉ－ＤＥＭ）；ＳＴＥＡＰ；ＴＧＦ－ベータ；ＴＩＧＩＴ；ＴＩＭ－３；ＴＭＰＲＳＳ３；ＴＮＦ－アルファ前駆体；ＴＲＯＰ－２（例えば、サシツズマブゴビテカン）；ＴＳＰＡＮ８；ＶＥＧＦ（例えば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ）；ＶＥＧＦＲ１（例えば、ラニビズマブ）；ＶＥＧＦＲ２（例えば、ラムシルマブ、ラニビズマブ）；およびＷｕｅ－１に対するものであってよい。
一部の態様では、併用のための抗体は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体であってもよい。プログラム細胞死１（ＰＤ－１）受容体ならびにＰＤ－１リガンド１および２（それぞれ、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）は、免疫調節において統合的な役割を果たしている。活性化Ｔ細胞上で発現される、ＰＤ－１は、間質細胞、腫瘍細胞、またはその両方によって発現されるＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１としても知られる）およびＰＤ－Ｌ２によって活性化され、Ｔ細胞死および局在化免疫抑制を開始し（Ｄｏｎｇら、Ｎａｔ Ｍｅｄ １９９９；５：１３６５～６９；Ｆｒｅｅｍａｎら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０００；１９２：１０２７～３４）、潜在的には、腫瘍の発生および増殖のための免疫寛容環境を提供する。逆に、この相互作用の阻害は、局部Ｔ細胞応答を増強し、非臨床動物モデルにおける抗腫瘍活性を媒介することができる（Ｉｗａｉ Ｙら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００２；９９：１２２９３～９７）。本発明の処置方法、薬剤および使用において有用である抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例としては、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、およびＬＹ３３０００５４が挙げられる。本発明の処置方法、薬剤および使用において有用である抗ＰＤ－１抗体の例としては、ＢＣＤ－１００、カムレリズマブ、セミプリマブ、ゲノリムズマブ（ＣＢＴ－５０１）、ＭＥＤＩ０６８０、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＲＮ８８８（ＷＯ２０１６／０９２４１９；ＵＳ１０１５５０３７を参照されたい）、シンチリマブ、スパルタリズマブ、ＳＴＩ－Ａ１１１０、チスレリズマブ、およびＴＳＲ－０４２が挙げられる。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＦ－０６８０１５９１／ＲＮ８８８である。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２３として記載される重鎖可変領域のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３ならびに／または配列番号１２７として記載される軽鎖可変領域のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２０のＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２１のＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号１２２のＶＨ ＣＤＲ３、ならびに／または配列番号１２４のＶＬ ＣＤＲ１、配列番号１２５のＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号１２６のＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１２３として記載される重鎖可変領域および／または配列番号１２７として記載される軽鎖可変領域を含む。
治療抗体は、任意の好適な形式を有してもよい。例えば、治療抗体は、本明細書の他の箇所に記載される任意の形式を有してもよい。一部の態様では、治療抗体は、裸の抗体であってもよい。一部の態様では、治療抗体は、薬物／薬剤に連結されていてもよい（「抗体－薬物コンジュゲート」（ＡＤＣ）としても知られる）。ＡＤＣ形式の抗体に連結することができる薬物または薬剤は、例えば、細胞傷害剤、免疫調節剤、イメージング剤、治療タンパク質、生体ポリマー、またはオリゴヌクレオチドを含んでもよい。ＡＤＣ中に組み込むことができる例示的な細胞傷害剤としては、アントラサイクリン、アウリスタチン、ドラスタチン、コンブレタスタチン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノ－ベンゾジアゼピン二量体、エネジイン、ゲルダナマイシン、メイタンシン、ピューロマイシン、タキサン、ビンカアルカロイド、カンプトテシン、チューブリシン、ヘミアステルリン、スプリセオスタチン、プラジエノリド、およびその立体異性体、等量式、アナログ、または誘導体が挙げられる。
一部の態様では、特定の抗原に対する治療抗体を、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）中に組み込むことができる。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。一部の態様では、二重特異性抗体は、第１の抗体可変ドメインと第２の抗体可変ドメインとを含み、第１の抗体可変ドメインは、ヒト免疫エフェクター細胞上に位置するエフェクター抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員することができ、第２の抗体可変ドメインは、本明細書に提供されるような標的抗原に特異的に結合することができる。ヘテロ二量体タンパク質（例えば、ヘテロ二量体抗体または二重特異性抗体）が結合することができるエフェクター抗原の例としては、限定されるものではないが、ヒトＣＤ３（またはＣＤ３（分化抗原群）複合体）、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ２５、ＣＤ６４、およびＣＤ８９が挙げられる。標的抗原は、典型的には、疾患状態の標的細胞（例えば、がん細胞）上で発現される。二重特異性抗体における特定の目的の標的抗原の例としては、限定されるものではないが、ＢＣＭＡ、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＣＣＲ５（ケモカイン受容体５型）、ＣＤ１９、ＨＥＲ（ヒト上皮増殖因子受容体）－２／ｎｅｕ、ＨＥＲ－３、ＨＥＲ－４、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＭＵＣ－１（ムチン）、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ７、ＣＩｈＣＧ、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３０、ガングリオシドＧＤ３、９－Ｏ－アセチル－ＧＤ３、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、フコシルＧＭ１、ポリＳＡ、ＧＤ２、カルボアンヒドラーゼＩＸ（ＭＮ／ＣＡ ＩＸ）、ＣＤ４４ｖ６、Ｓｈｈ（ソニックヘッジホッグ）、Ｗｕｅ－１、形質細胞抗原、（膜結合型）ＩｇＥ、ＭＣＳＰ（黒色腫コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＣＣＲ８、ＴＮＦ－アルファ前駆体、ＳＴＥＡＰ、メソテリン、Ａ３３抗原、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、Ｌｙ－６；デスモグレイン４、Ｅ－カドヘリンネオエピトープ、胎児アセチルコリン受容体、ＣＤ２５、ＣＡ１９－９マーカー、ＣＡ－１２５マーカーおよびＭＩＳ（ミュラー管抑制物質）受容体ＩＩ型、ｓＴｎ（シアル化Ｔｎ抗原；ＴＡＧ－７２）、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化抗原）、エンドシアリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＬＧ、ＳＡＳ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７、ＳＩＲＰａ、およびＣＤ６３が挙げられる。一部の態様では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の態様では、抗体は、免疫学的に不活性なＦｃ領域を含む。一部の態様では、抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。
免疫刺激サイトカインとしては、インターフェロン、インターロイキン、および造血性増殖因子などの免疫応答を刺激する種々のシグナル伝達タンパク質が挙げられる。一部の態様では、例示的な免疫刺激サイトカインとしては、限定されるものではないが、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＬ－２（例えば、デニロイキンジフィトクス）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、およびＴＮＦαが挙げられる。免疫刺激サイトカインは、任意の好適な形式を有してもよい。一部の態様では、免疫刺激サイトカインは、野生型サイトカインの組換えバージョンであってもよい。一部の態様では、免疫刺激サイトカインは、対応する野生型サイトカインと比較して、１つまたは複数のアミノ酸変化を有する突然変異タンパク質であってもよい。一部の態様では、免疫刺激サイトカインを、サイトカインと、少なくとも１つの他の機能性タンパク質（例えば、抗体）とを含有するキメラタンパク質中に組み込むことができる。一部の態様では、免疫刺激サイトカインを、薬物／薬剤（例えば、あり得るＡＤＣ成分として本明細書の他の箇所に記載される任意の薬物／薬剤）に共有結合により連結することができる。一部の態様では、サイトカインは、ＰＥＧ化されている（例えば、ＰＥＧ化されたＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＦＮγ、およびＩＦＮα）。
パターン認識受容体（ＰＲＲ）は、免疫系の細胞によって発現され、病原体および／または細胞損傷もしくは細胞死と関連する種々の分子を認識する受容体である。ＰＲＲは、自然免疫応答と、適応免疫応答との両方に関与する。ＰＲＲアゴニストを使用して、対象における免疫応答を刺激することができる。ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、およびインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）タンパク質などの、複数のクラスのＰＲＲ分子が存在する。
本明細書に提供される例示的なＴＬＲアゴニストとしては、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９のアゴニストが挙げられる。本発明の処置方法、薬剤、および使用において有用であるＲＬＲアゴニストの例としては、例えば、キャップされていない５’三リン酸を有する短い二本鎖ＲＮＡ（ＲＩＧ－Ｉアゴニスト）；ポリＩ：Ｃ（ＭＤＡ－５アゴニスト）、およびＢＯ－１１２（ＭＤＡ－Ａアゴニスト）が挙げられる。本発明の処置方法、薬剤、および使用において有用であるＮＬＲアゴニストの例としては、例えば、リポソームムラミルトリペプチド／ミファムルチド（ＮＯＤ２アゴニスト）が挙げられる。本発明の処置方法、薬剤、および使用において有用であるＣＬＲアゴニストの例としては、例えば、ＭＤ画分（グリフォラ・フロンドーサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）からの精製可溶性ベータグルカン抽出物）およびＩｍｐｒｉｍｅ ＰＧＧ（酵母由来ベータ１，３／１，６－グルカンＰＡＭＰ）が挙げられる。本発明の処置方法、薬剤、および使用において有用であるＳＴＩＮＧアゴニストの例としては、種々の免疫刺激核酸、例えば、合成二本鎖ＤＮＡ、環状ジＧＭＰ、環状ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、合成環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、例えば、ＭＫ－１４５４およびＡＤＵ－Ｓ１００（ＭＩＷ８１５）、ならびにＰ０－４２４などの低分子が挙げられる。
がんワクチンは、腫瘍関連抗原を含有し（または対象において腫瘍関連抗原を生成するために使用することができる）、かくして、腫瘍関連抗原を含有する腫瘍細胞に対する、対象における免疫応答を誘発するために使用することができる種々の組成物を含む。がんワクチンに含有させることができる例示的な材料としては、弱毒化がん性細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞、例えば、腫瘍由来抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸をパルスされた樹状細胞などが挙げられる。一部の態様では、がんワクチンを、患者自身のがん細胞を用いて調製することができる。一つの態様では、がんワクチンを、患者自身のがん細胞に由来しない生物材料を用いて調製することができる。がんワクチンとしては、例えば、シプリューセルＴおよびタリモジェン
ラヘルパレプベク（Ｔ－ＶＥＣ）が挙げられる。
免疫細胞療法は、がん細胞を標的とすることができる免疫細胞を用いて患者を処置することを含む。免疫細胞療法としては、例えば、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）およびキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）が挙げられる。
化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）など；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなど；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなど；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールオメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含めたエチレンイミンおよびメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９、およびＣＢＩ－ＴＭＩを含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンファイＩ１、例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照；ジネマイシンＡを含めたジネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）など；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクォン；エルフォルミチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサミトシンなど；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２、２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドキセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、カルボプラチンなど；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸、または誘導体が挙げられる。
また、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節する、または阻害するように作用する抗ホルモン剤；例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾール、およびアナストロゾールなどの、副腎におけるエストロゲン産生を調節する、アロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼ阻害剤；ならびに抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、フルリジル、アパルタミド、エンザルタミド、シメチジンおよびゴセレリンなど；ＫＲＡＳ阻害剤；ＭＣＴ４阻害剤；ＭＡＴ２ａ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤／血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体、例えば、スニチニブ、アキシチニブ、ソラフェニブ、チボザニブなど；ａｌｋ／ｃ－Ｍｅｔ／ＲＯＳ阻害剤、例えば、クリゾチニブ、ロルラチニブなど；ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、テムシロリムス、ゲダトリシブなど；ｓｒｃ／ａｂｌ阻害剤、例えば、ボスチニブ；サイクリン依存的キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤、例えば、パルボシクリブ、ＰＦ－０６８７３６００、アベマシクリブおよびリボシクリブなど；ｅｒｂ阻害剤、例えば、ダコミチニブなど；ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、タラゾパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブなど；ＳＭＯ阻害剤、例えば、グラスデギブ、ＰＦ－５２７４８５７など；ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ阻害剤、例えば、ＰＦ－０６７４７７７５など；ＥＺＨ２阻害剤、例えば、ＰＦ－０６８２１４９７など；ＰＲＭＴ５阻害剤、例えば、ＰＦ－０６９３９９９９など；ＴＧＦＲβｒ１阻害剤、例えば、ＰＦ－０６９５２２２９など；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸または誘導体も含まれる。
ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）は、細胞中でＤＮＡ修復の天然に存在するプロセスに従事する。 ＰＡＲＰ阻害は、合成致死性を誘導することによる二本鎖ＤＮＡ修復遺伝子中の生殖系列突然変異と関連する腫瘍に対する有効な治療戦略であることが示されている（Ｓｏｎｎｅｎｂｌｉｃｋ，Ａ．ら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ、２０１５、１２（１）、２７～４）。
タラゾパリブは、ＤＮＡ上のＰＡＲＰタンパク質を捕捉することによって、ＤＮＡ修復、複製、および転写を防止することによって、合成致死性と称される効果である、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）修復を傷つける遺伝子突然変異を有するヒトがん細胞系に対して細胞傷害性である、強力な、経口摂取可能なＰＡＲＰ阻害剤である。化合物としてのタラゾパリブは、「（８Ｓ，９Ｒ）－５－フルオロ－８－（４－フルオロフェニル）－９－（１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）－８，９－ジヒドロ－２Ｈ－ピリド［４，３，２－デ］フタラジン－３（７Ｈ）－オン」および「（８Ｓ，９Ｒ）－５－フルオロ－８－（４－フルオロフェニル）－９－（１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）－２，７，８，９－テトラヒドロ－３Ｈ－ピリド［４，３，２－デ］フタラジン－３－オン」（「ＰＦ－０６９４４０７６」、「ＭＤＶ３８００」および「ＢＭＮ６７３」とも称される）であり、構造式：
Figure 2023517044000001
 を有するＰＡＲＰ阻害剤である。
タラゾパリブ、およびトシル酸塩などのその薬学的に許容できる塩は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０１７０５５号および第ＷＯ２０１２／０５４６９８号に開示されている。タラゾパリブ、およびトシル酸塩などのその薬学的に許容できる塩を調製するさらなる方法は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０９７６０２号、第ＷＯ２０１５／０６９８５１号、および第ＷＯ２０１６／０１９１２５号に記載されている。タラゾパリブ、およびトシル酸塩などのその薬学的に許容できる塩を使用してがんを処置するさらなる方法は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／０９７３３４号および第ＷＯ２０１７／０７５０９１号に開示されている。
単剤としてのタラゾパリブは、ＤＮＡ修復経路異常を示す複数の型の固形腫瘍を有する患者において効能、ならびに許容できる毒性プロファイルを示した。また、固形腫瘍型における化学療法と併用したタラゾパリブの効能を支持するデータも存在する。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、限定されるものではないが、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ８、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２、ＣＤ４７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ２２６、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＬＡＩＲ１、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ１、ＴＩＭ－３、ＴＩＭ４、ＶＩＳＴＡ（ＰＤ－Ｈ１）、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、４－ＢＢＬ、ＤＲ３、ＴＬ１Ａ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０）、ＳＬＡＭＦ２（ＣＤ４８）、ＳＬＡＭＦ３（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（２Ｂ４、ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ５（ＣＤ８４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＣＦ７（ＣＳ１）、ＳＬＡＭＦ８（ＢＬＡＭＥ）、ＳＬＡＭＦ９（ＣＤ２Ｆ）、ＣＤ２８、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７、ＣＥＡＣＡＭ８、ＣＥＡＣＡＭ１－３ＡＳ ＣＥＡＣＡＭ３Ｃ２、ＣＥＡＣＡＭ１－１５、ＰＳＧ１－１１、ＣＥＡＣＡＭ１－４Ｃ１、ＣＥＡＣＡＭ１－４Ｓ、ＣＥＡＣＡＭ１－４Ｌ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＣＣＲ２、ＣＤ３９－ＣＤ７３－アデノシン経路（Ａ２ＡＲ）、ＢＴＫ、ＴＩＫ、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、ＣＣＲ５、ＶＥＧＦ経路、ＣＳＦ－１、または自然免疫応答モジュレーターを標的とする薬剤などの、免疫チェックポイントモジュレーターを標的とする１つまたは複数の他の治療剤と併せて使用される。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質組成物は、タラゾパリブ、クリゾチニブ、パルボシクリブ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、ＦＯＬＦＯＸ、フォリン酸、オキサリプラチン、アキシチニブ、リンゴ酸スニチニブ、トファシチニブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、およびトラスツズマブから選択される１つまたは複数の追加の治療剤を含む。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、生物治療剤および化学療法剤と併せて使用される。例えば、それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、有効量の、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＲＮ８８８（ＷＯ２０１６／０９２４１９を参照されたい）、ニボルマブ、またはペムブロリズマブ）、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサート、または白金アナログ）を対象に投与することを含む方法が提供される。
一部の態様では、それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、有効量の、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、タラゾパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ）、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサート、または白金アナログ）を対象に投与することを含む方法が提供される。
一部の態様では、それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、有効量の、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト抗体（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサート、または白金アナログ）を対象に投与することを含む方法が提供される。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質組成物は、手術、放射線療法、化学療法、標的療法、免疫療法、ホルモン療法、血管新生阻害、および緩和ケアからなる群から選択される伝統的な療法をさらに含む処置レジメンと組み合わされる。
一部の態様では、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質療法は、数分～数週間の範囲の間隔によって他の薬剤処置に先行し、またはそれに続く場合がある。他の薬剤および／またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドが別個に投与される態様では、一般に、有意な時間がそれぞれの送達間で経過せず、その結果、本発明の薬剤および組成物が依然として対象に有利に組み合わされた効果を発揮することができることを保証するはずである。そのような場合、両モダリティーを互いに約１２～２４時間以内に、より好ましくは、互いに約６～１２時間以内に投与することができることが企図される。一部の状況では、投与の時間を大きく延長することが望ましい場合があるが、この場合、数日（２、３、４、５、６、または７）～数週間（１、２、３、４、５、６、７、または８）がそれぞれの投与間で経過する。
製剤
本発明によって使用されるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはバリアントＣＤ８０ポリペプチドの治療製剤は、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で、所望の純度を有するタンパク質と、必要に応じた薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００）とを混合することによって、保存用に調製される。許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントに無毒性であり、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸など；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベンなど；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなど；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなど；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなど；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含んでもよい。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号、および第４，５４４，５４５号に記載されたものなどの、当業界で公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて、逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じるように、規定の孔径のフィルターを通して押し出される。
活性成分を、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）内で、またはマクロエマルジョン内で、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン－マイクロカプセル、およびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入することもできる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に開示されている。
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、造形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にある。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸と７エチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）など、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。治療用ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質組成物は一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル内に入れられる。
本発明による組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくは送気による投与のための単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤もしくは懸濁剤、または坐剤などであってよい。
錠剤などの固体組成物を調製するために、主な活性成分は、薬学的担体、例えば、従来の錠剤化成分、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはガムなど、および他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合されて、本発明の化合物、または無毒性の薬学的に許容できるその塩の均質な混合物を含有する固体予備製剤組成物が形成される。これらの予備製剤組成物が均質である場合、活性成分が組成物全体にわたって均等に分散されており、その結果、組成物が同様に有効な単位剤形、例えば、錠剤、丸剤、およびカプセル剤などに容易にさらに分割され得ることを意味する。次いで、この固体予備製剤組成物は、約０．１～約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記の型の単位剤形にさらに分割される。新規組成物の錠剤または丸剤は、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供するために、被覆するか、または他の方法で化合させることができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与量および外部投与量成分を含んでもよく、後者は、前者の上の外被の形態である。２つの成分は、胃内での崩壊に耐える機能を果たし、内部成分が無傷のまま十二指腸内に入り、または放出が遅延されることを可能にする腸溶性層によって分離することができる。様々な材料を、そのような腸溶性層または被覆に使用することができ、そのような材料は、いくつかのポリマー酸ならびにポリマー酸と、シェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料との混合物を含む。
好適な表面活性剤としては、特に、非イオン性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）、および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、または８５）などが挙げられる。表面活性剤を含む組成物は、好都合には、０．０５～５％の表面活性剤を含み、０．１～２．５％であってもよい。必要に応じて、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルを添加することができることが理解されるであろう。
好適なエマルジョンは、市販の脂肪エマルジョン、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などを使用して調製することができる。活性成分を、予備混合エマルジョン組成物中に溶解させることができ、またはあるいは、活性成分を、油（例えば、ダイズ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、または扁桃油）、ならびにリン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質、またはダイズレシチン）および水と混合して形成されたエマルジョン中に溶解させることができる。エマルジョンの張性を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加してもよいことが理解されるであろう。好適なエマルジョンは、典型的には、最大２０％の油、例えば、５～２０％の油を含有するであろう。脂肪エマルジョンは、０．１～１．０μｍ、特に０．１～０．５μｍの脂肪滴を含み、５．５～８．０の範囲内のｐＨを有してもよい。
エマルジョン組成物は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロール、および水）とを混合することによって調製されるものであってよい。
吸入または送気のための組成物は、薬学的に許容できる水性溶媒もしくは有機溶媒、またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記の好適な薬学的に許容できる賦形剤を含有してもよい。一部の態様では、組成物は、局部的または全身的効果のために、経口呼吸経路または鼻呼吸経路によって投与される。好ましくは滅菌した薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスを使用して霧状化することができる。霧状化溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込むことができ、または噴霧デバイスをフェイスマスク、テント、もしくは間欠的陽圧呼吸機に取り付けてもよい。溶液、懸濁液、または粉末組成物を、適切な様式で製剤を送達するデバイスから、好ましくは経口的または経鼻的に投与することができる。
キット
本発明はまた、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質およびバリアントＣＤ８０ポリペプチドタンパク質のいずれか、または全部を含むキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含む１つまたは複数の容器、および本明細書に記載の本発明の方法のいずれかに従って使用するための使用説明書を含む。一般に、これらの使用説明書は、上記の治療的処置のためのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の投与の説明を含む。一部の態様では、キットは、単回用量投与ユニットを生産するために提供される。ある特定の態様では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器との両方を含有してもよい。ある特定の態様では、シングルおよびマルチチャンバー型予備充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ）を含有するキットが含まれる。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の使用に関する使用説明書は、一般に、意図された処置のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または単位用量未満のものであってよい。本発明のキット内に供給される使用説明書は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キット内に含まれる紙シート）での書面による使用説明書であるが、機械で読取り可能な使用説明書（例えば、磁気または光記憶ディスクに入れて運ばれる使用説明書）も許容できる。
本発明のキットは、好適な包装内にある。好適な包装としては、限定されるものではないが、バイアル、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封されたマイラーバッグまたはプラスチック袋）などが挙げられる。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）、またはミニポンプなどの輸注デバイスなどと組み合わせて使用するためのパッケージも企図されている。キットは、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器もまた、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針で穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含んでもよい。
キットは、追加の成分、例えば、緩衝剤および解釈情報などを必要に応じて提供してもよい。通常、キットは、容器、および容器上の、またはこれに付随したラベルまたは添付文書を含む。
以下の実施例は、例示目的でのみ提供されるものであり、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に入る。
（実施例１）
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の生成および結合活性
Ａ．発現および精製
遺伝子合成を、ＣＤ８０（ＡＴＵＭ、以前はＤＮＡ２．０、Ｎｅｗａｒｋ、ＣＡから入手した）の内因性コドンを使用して行った。野生型（ＷＴ）およびバリアントＣＤ８０細胞外ドメインを有するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、ヒトＩｇＧ１ ＦｃのＮ末端融合タンパク質として発現させた（結晶化可能な断片）。ヒトＣＤ８０（Ｒｅｆｓｅｑ：ＮＭ＿００５１９１．３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ３３６８１）の細胞外ドメインの内因性ヌクレオチド配列を、完全なヒンジを有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０１８５７）の生殖細胞系ヌクレオチド配列とインフレームで遺伝子融合し（Ｃ２２０Ｓ突然変異を有する、ＥＵナンバリング）、哺乳動物発現ベクターｐＤＴ５（ＡＴＵＭ、以前はＤＮＡ２．０、Ｎｅｗａｒｋ、ＣＡから入手した）にサブクローニングした。
融合タンパク質を、Ｅｘｐｉ２９３またはＥｘｐｉＣＨＯ発現系（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵＳＡから入手した）のいずれかを供給業者の指示に従って使用して、一過性トランスフェクションによって発現させた。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、プレパックプロテインＡカラムおよびサイズ排除クロマトグラフィーカラムで、高純度まで精製した。精製された融合タンパク質を濾過滅菌し、使用するまで－８０℃で保存した。
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の純度および均質性を、分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）、キャピラリーゲル電気泳動、および質量分析によって試験した。精製された融合タンパク質のインタクトな質量を、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ Ｃ４（３００Å、１．７μｍ）と繋がれたＸｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ ＱＴｏｆ四重極飛行時間型質量分析計（ＷＡＴＥＲＳから入手した）によって確認した。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をまず非還元条件および還元条件下で、迅速ＰＮＧａｓｅ Ｆ酵素（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓから入手した、Ｐ０７１０ＳおよびＰ０７１１Ｓ）を使用して脱グリコシル化して、インタクトなタンパク質（非還元型）および還元型タンパク質の質量を決定した。
Ｂ． ＥＬＩＳＡ結合親和性
組換え可溶性ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４タンパク質への、精製されたＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（ＷＴおよびバリアント）の結合親和性を、標準ＥＬＩＳＡによって判定した。組換え可溶性ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４タンパク質（Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔから入手した、製品番号ＣＤ２８－３９１０Ｈ、ＣＴＬＡ－４－２２３２Ｈ）を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、製品番号４３６１１０）に、４℃の重炭酸バッファー中で一晩、固定した。０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０（洗浄バッファー）を含有する１×ＰＢＳで洗浄した後、プレートを、ブロックバッファー、すなわちＰＢＳ中の５％ＢＳＡと、室温で１時間インキュベートした。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の連続希釈物およびヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体をブロックバッファー中に調製し、プレートに添加し、そして室温で１時間インキュベートした。洗浄バッファーで３回洗浄した後、二次抗ヒトＩｇＧ１抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ１１０－１００）にコンジュゲートした１：４０００希釈のＨＲＰをプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄し、１００μｌのＬｕｍｉＧｌｏ（ＳｅｒａＣａｒｅ、製品番号５４３０－００４０）試薬を各ウェルに添加し、室温で５分間インキュベートし、その後、発光シグナルをＥｎＳｉｇｈｔ（商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。
図２Ａおよび図２Ｂは、標準ＥＬＩＳＡによる、それぞれ可溶性ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４タンパク質に対する、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合活性を示す。図２Ａは、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ、例えば、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｆｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｆｃと比較して、ＣＤ２８への結合親和性を増大させたことを示している。図２Ｂは、ＣＴＬＡ－４へのＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合親和性を示している。
Ｃ． Ｊｕｒｋａｔ細胞の結合親和性
Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞系（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５２）で発現しているＣＤ２８に対するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（ＷＴおよびバリアント）の結合親和性を、フローサイトメトリーによって測定した。Ｊｕｒｋａｔ細胞（０．５％ＢＳＡ、２ｍＭのＥＤＴＡ、および１０％正常ヤギ血清を添加した１００μＬのＰＢＳ中に懸濁した１０万個の細胞）を、０．０２５～５００ｎＭの濃度範囲のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を次いで、０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭのＥＤＴＡを添加したＰＢＳで２回洗浄した。次に、細胞を、０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭのＥＤＴＡを添加した５０μＬのＰＢＳ中で１：２００希釈したＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９－１１６－１７０）で、氷上で３０分間染色した。その後、細胞を、０．５％ＢＳＡおよび２ｍＭのＥＤＴＡを添加したＰＢＳで２回洗浄した。最後に、細胞を、０．５μｇ／ｍＬの７－アミノ－アクチノマイシンＤを含有するＰＢＳ中に懸濁し、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０フローサイトメーターで取得した。データをＦｌｏｗｊｏ ｖ１０ソフトウェア（Ｆｌｏｗｊｏ、ＬＬＣ）によって分析した。図３および表１は、Ｊｕｒｋａｔ細胞で発現しているＣＤ２８に対するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（ＷＴおよびバリアント）の結合親和性を示している。
Figure 2023517044000002
（実施例２）
共刺激アッセイ
Ａ．共刺激生物活性の測定のための一次Ｔ細胞アッセイ
Ｔ細胞活性化および共刺激での培養培地におけるＩＬ－２の産生を測定するために、一次Ｔ細胞共刺激アッセイを設計した。Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ／ＣＤ３）およびＣＤ２８共刺激受容体の共エンゲージメントは、Ｔ細胞の活性化と、ＩＬ－２プロモーターに結合し、ＩＬ－２の発現を誘導する、転写因子ＮＦＡＴ、ＮＦ－ｋＢ、およびＡＰ－１の調節をもたらす下流の細胞内シグナル伝達経路とを誘導する。
ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、製品番号１７９５１）を使用して、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｌｅｕｋｏ Ｐａｋ、製品番号７０５００．２）から入手した新鮮な末梢血から、ヒト一次Ｔ細胞を単離した。Ｌｅｕｋｏ Ｐａｋ細胞の１ｍＬのアリコートを解凍し、２５ｍＬのリンパ球培地中で再懸濁した。細胞を遠心分離し、２ｍＬのＲｏｂｏＳｅｐ培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２０１０４）中で再懸濁した。細胞密度を調整し、１５ｍＬのＦａｌｃｏｎチューブに移した。単離カクテル、５０μＬ／ｍＬの細胞をチューブに添加し、細胞をインキュベートし、その後、４０μＬ／ｍＬのＲａｐｉｄスフィアを添加し、穏やかに混合した。細胞を有するチューブをＥａｓｙＳｅｐ Ｍａｇｎｅｔ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、製品番号１８００１）内に置き、インキュベートし、そして、細胞上清を別のチューブに移して回収した。濃縮されたリンパ球を遠心分離し、増殖培地（１０％ＨＩ ＦＢＳ、１００μｇ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシンを含有する、ＲＰＭＩ、Ｇｉｂｃｏ－１１８７５）中に再懸濁した。後の使用のために、１ｍＬ当たり４×１０５個の非標識汎Ｔ細胞からなるストックを、増殖培地中で調製した。
ヒト一次Ｔ細胞上のＣＤ３および腫瘍細胞上のＣＤＨ３に結合するＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体を介するＴＣＲエンゲージメントに、ＣＤＨ３（Ｐ－カドヘリン）を発現するヒト結腸がん細胞系ＨＣＴ１１６を使用した。ＨＣＴ１１６細胞をレンチウイルス形質導入によって遺伝子操作して、細胞表面上でヒトＦＣγＲＩ（ＣＤ６４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ５８４１４．１、ＲｅｆＳｅｑ：Ｐ１２３１４．１）を過剰発現させて、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をアセンブリおよび提示させた。
組織培養物で処理した９６ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ）に、ＨＣＴ１１６親細胞およびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞を、ウェル当たり４，０００個細胞で、１００μＬの増殖培地（１０％ＨＩ ＦＢＳ、１００μｇ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシンを含有する、ＲＰＭＩ、Ｇｉｂｃｏ－１１８７５）中に播種し、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で一晩増殖させた。各ウェルに、５０μＬの汎Ｔ細胞（ウェル当たり２万個の細胞）および２５μＬのＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ウェル当たり２０ｎｇ／ｍＬの最終濃度）を添加した。０～１０００ｎｇ／ｍＬ（ウェル当たりの最終濃度）の濃度範囲を有する、２５μＬのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の連続希釈物に、適切なコントロールを加えた。細胞を、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で７２時間培養し、その後、培養上清を採取し、ヒトＩＬ－２の放出を測定した。
Ｔ細胞共刺激アッセイで得られた培養上清におけるＩＬ－２の放出を、標準ＥＬＩＳＡによって判定した。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄの、市販のヒトＩＬ－２ ＥＬＩＳＡキット（製品番号４３１８０３）を使用して、ＩＬ－２の放出レベルを判定した。抗ヒトＩＬ－２捕捉抗体を、Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、製品番号４３６１１０）に、重炭酸バッファー中で、４℃で一晩固定した。１×ＰＢＳで洗浄した後、プレートをブロックバッファーとインキュベートした。アッセイプレートから得た増殖培地をブロックバッファー中で５倍希釈し、１００μＬの希釈培地をＥＬＩＳＡプレートに添加した。プレートをインキュベートし、洗浄バッファーで洗浄した。１：１０００希釈のビオチンコンジュゲート抗ヒトＩＬ－２検出抗体をプレートに添加し、インキュベートした。洗浄バッファーで洗浄した後、１：４０００希釈のアビジン－ＨＲＰをプレートに添加し、インキュベートした。プレートを洗浄し、ＬｕｍｉＧｌｏ（ＳｅｒａＣａｒｅ、製品番号５４３０－００４０）試薬を各ウェルに添加し、５分間インキュベートし、その後、発光をＥｎＳｉｇｈｔ（商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。
図４はＩＬ－２産生のレベルを示しており、表２は、一次Ｔ細胞およびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞の共刺激アッセイで得られたＥＣ５０を示している。表２に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質（ＥＣ５０ １．２ｎＭ、表２）と比較して、様々な程度の増強したＴ細胞の活性化および共刺激を示した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｋ－ＦｃおよびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して約８～１０倍増強したＴ細胞共刺激を示した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｎ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して約３倍増強したＴ細胞共刺激を示した。ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－ＦｃおよびＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｆｃは、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質と比較して約１．２～１．５倍増強したＴ細胞共刺激を示した。さらに、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質よりも高い結合親和性を有していたバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質（実施例１を参照されたい）は、より高いＴ細胞共刺激を示した。
Figure 2023517044000003
Ｂ．共刺激生物活性の測定のためのＪｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－Ｌｕｃレポーターアッセイ
Ｐｒｏｍｅｇａ（製品番号Ｊ１６３１）のＴ細胞活性化バイオアッセイ（ＩＬ－２）キットに基づいて、Ｔ細胞共刺激アッセイを設計した。このアッセイは、ＩＬ－２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現する、遺伝子操作されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞系からなるものであった。Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ／ＣＤ３）およびＣＤ２８共刺激受容体の共エンゲージメントは、Ｔ細胞の活性化および下流の細胞内シグナル伝達経路を誘導し、これが次いで、ルシフェラーゼレポーターの発現を調節する。上記のように、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん細胞系を、ＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体を使用するＴＣＲエンゲージメントに使用し、レンチウイルス形質導入によって遺伝子操作して、ヒトＦＣγＲＩを発現させた。
９６ウェル培養プレートに、ＨＣＴ１１６親またはＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞を、ウェル当たり４万個細胞で、１０％ＨＩ ＦＢＳを含有する１００μＬのＲＰＭＩ中に播種し、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で一晩増殖させた。各ウェルに、Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（ウェル当たり１０万個）および１０μＬのＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体（８ｎｇ／ｍＬの最終濃度）を添加した。０～１０００ｎｇ／ｍＬ（ウェル当たりの最終濃度）の濃度範囲を有する、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の１０μＬの連続希釈物に、適切なコントロールを加えた。アッセイプレートをＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で６時間インキュベートし、その後、培養上清を採取し、そして新たなプレートに移した。平衡化の後、８０μＬのＢｉｏＧｌｏ発光試薬（ＢｉｏＧｌｏルシフェラーゼアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７９４０）を各ウェルに添加した。プレートを５分間インキュベートし、その後、発光をＥｎＳｉｇｈｔ（商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。
図５は、ルシフェラーゼレポーター活性に対する正規化された応答を示しており、表３は、Ｊｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞の共刺激アッセイで得られたＥＣ５０を示している。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、上記の一次Ｔ細胞－腫瘍細胞アッセイで見られたものと同様の共刺激活性の増強を示した。表３に示すように、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質（ＥＣ５０ ０．８９４ｎＭ）と比較して、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－ＦｃおよびＣＤ８０－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃ融合タンパク質は、共刺激を約８倍増強させ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ融合タンパク質は、共刺激を約４倍増強させた。さらなる実験において、ＣＤ８０－Ａ９１Ｓ－Ｆｃは、０．５０のＥＣ５０（ｎＭ）を有すると判定された。
Figure 2023517044000004
Ｃ．内因性ＴＣＲ（ＮＹ－ＥＳＯ１－ＭＨＣＩ）のエンゲージメントによるＪｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－Ｌｕｃ細胞の共刺激アッセイ
Ｊｕｒｋａｔ－ＩＬ－２－Ｌｕｃレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ、製品番号Ｊ１６３１）を、レンチウイルス形質導入系を使用して、ＨＬＡ－Ａ２制限型ＮＹ－ＥＳＯ１（ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ－配列番号１９）エピトープに対するＴ細胞受容体ＴＣＲ（Ｗａｒｇｏ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００９、Ｚｈａｏ Ｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、Ｌｉ Ｙ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５）で操作した。ヒトＨＬＡ－Ａ＊０２０１を発現するヒト黒色腫細胞Ａ３７５に、ＮＹ－ＥＳＯ１遺伝子についての内因性コドン（Ｒｅｆｓｅｑ受託番号ＮＭ＿００１３２７．２、ＣＣＤＳ１４７５８．１）を有するレンチウイルスベクターを形質導入した。発現すると、構築物は、ユビキチン／エピトープジャンクションでタンパク質分解性の切断を受け、こうして、遊離した細胞質エピトープを生じさせ、これが、小胞体に移動し得、クラスＩ ＨＬＡにロードされ得る。Ａ３７５－ＮＹ－ＥＳＯ１陽性細胞をＩＦＮγで処理して、ＨＬＡ発現およびＮＹ－ＥＳＯ１抗原提示を誘導した。ＨＬＡ発現および抗原提示をウェスタンブロットによって確認した。ＮＹ－ＥＳＯ１＋－Ａ３７５細胞をさらに操作して、ヒトＦＣγＲＩ（ＣＤ６４、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ５８４１４．１、ＲｅｆＳｅｑ：Ｐ１２３１４．１）を発現させて、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の細胞表面でのアセンブリおよび提示をさせた。ＦＣγＲＩの発現をフローサイトメトリー分析によって確認した。
９６ウェル培養プレートに、ＮＹ－ＥＳＯ１＋－Ａ３７５細胞またはＮＹ－ＥＳＯ１＋／ＦＣγＲＩ＋－Ａ３７５を、ウェル当たり４万個細胞で、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、製品番号２８５－ＩＦ）を含有する１００μＬの増殖培地（ＲＰＭＩ、１０％熱不活化ＦＢＳ、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭのＭＥＭ ＮＥＡＡ、１μｇ／ｍＬのピューロマイシン）中に播種して、ＭＨＣ－Ａ２の発現を誘導し、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で一晩増殖させた。各ウェルに、１０万個（２０μＬの培地中）のＮＹ－ＥＳＯ１－ＴＣＲ＋Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を添加した。０～１０００ｎｇ／ｍＬ（ウェル当たりの最終濃度）の濃度範囲を有するバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の２０μＬの連続希釈物に、適切なコントロールを加えた。アッセイプレートをＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で６時間インキュベートした。平衡化の後、８０μＬのＢｉｏＧｌｏ発光試薬（ＢｉｏＧｌｏルシフェラーゼアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７９４０）を各ウェルに添加した。プレートを５分間インキュベートし、その後、発光をＥｎＳｉｇｈｔ（商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。
図６は、ルシフェラーゼレポーター活性に対する正規化された応答を示しており、表４は、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＹＥＳＯ１－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＡ３７５－ＣＤ６４細胞の共刺激アッセイで得られたＥＣ５０を示している。表４に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質（ＥＣ５０ ０．３９４ｎＭ）と比較して、様々な程度の増強したＴ細胞共刺激を示した。ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－ＦｃおよびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ融合タンパク質は、共刺激を約８倍増強させ、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｎ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｔ細胞共刺激を約４倍増強させた。さらなる実験において、ＣＤ８０－Ａ９１Ｓ－Ｆｃは、１．１のＥＣ５０（ｎＭ）を有すると判定された。
Figure 2023517044000005
Ｄ．共刺激生物活性の測定のためのＪｕｒｋａｔ－ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－２－Ｌｕｃレポーターアッセイ
ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４の両方の存在下でのＣＤ８０－Ｆｃ分子の活性を調べるためのＴ細胞共刺激アッセイを、ＰｒｏｍｅｇａのＣＴＬＡ－４ブロックバイオアッセイキット（製品番号ＪＡ３００１）に基づいて設計した。このアッセイは、ヒトＣＴＬＡ－４を構成的に発現し、ＩＬ－２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現する、遺伝子操作されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞系を使用する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ／ＣＤ３）およびＣＤ２８共刺激受容体の共エンゲージメントは、Ｔ細胞を活性化させ、ルシフェラーゼレポーターの発現を調節する下流のシグナル伝達経路を誘導する。しかし、この活性化は、共刺激受容体ＣＤ２８からＣＤ８０－Ｆｃ分子を競合的に排除するＣＴＬＡ－４によって弱められ得る。上記のように、ＨＣＴ１１６ヒト結腸がん細胞系を、ＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体を使用するＴＣＲエンゲージメントに使用し、レンチウイルス形質導入によって遺伝子操作して、ヒトＦＣγＲＩを発現させた。
９６ウェル培養プレートに、ＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞を、ウェル当たり４万個細胞で、１０％加熱不活化ＦＢＳを添加した１００μＬのＲＰＭＩ－１６４０培地中に播種し、５％ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で一晩増殖させた。各ウェルに、Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞（ウェル当たり１０万個）および１０μＬのＰＦ－０６６７１００８（８ｎｇ／ｍＬの最終濃度）を添加した。０．０１～２００ｎＭの濃度範囲（ウェル当たりの最終濃度）を有するバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の１０μＬの連続希釈物に、適切なコントロールを加えた。アッセイプレートを、５％ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で６時間インキュベートし、その後、培養上清を採取し、そして新たなプレートに移した。平衡化の後、８０μＬのＢｉｏＧｌｏ発光試薬（ＢｉｏＧｌｏルシフェラーゼアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７９４０）を各ウェルに添加した。プレートをインキュベートし、その後、発光をＥｎＳｉｇｈｔ（商標）プレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。
図７はルシフェラーゼレポーター活性を示しており、表５は、Ｊｕｒｋａｔ－ＣＴＬＡ－４－ＩＬ－２－ＬｕｃおよびＨＣＴ１１６－ＣＤ６４細胞の共刺激アッセイで得られたＥＣ５０を示している。表５に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｄ９０Ｋ－Ｆｃは、（上記の）一次Ｔ細胞－腫瘍細胞アッセイで見られたものと同様の共刺激活性の増強を示した。
Figure 2023517044000006
（実施例３）
安定化したバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質
タンパク質治療薬の正常機能温度よりも数度、温度を上げることによって、それらの機能に影響を与え得るアンフォールディングおよび構造変化が生じ得る。構造ベースの操作アプローチを利用して、本明細書において記載されるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の熱安定性を向上させた。
Ａ．ジスルフィド安定化
ジスルフィド安定化突然変異を同定するために、二量体のＣＤ８０－ＥＣＤの結晶構造を分析して、より高い温度でアンフォールディングする可能性が最も高い、タンパク質の機械的に脆弱な領域を同定した。この領域は、二量体の、２つのＣＤ８０ ＥＣＤの間の界面に位置していた。界面は緩くパッキングされており、不安定性の原因であり得る。同定された二量体の界面を強力にし、安定性を向上させるために、システイン突然変異の導入を介してジスルフィド架橋を操作により作製した。新たなジスルフィド架橋を操作により作製するための位置を、ＭＯＤＥＬＬＥＲに基づくカスタマイズされた計算ツールを使用して評価した（Ｂ．Ｗｅｂｂ、Ａ．Ｓａｌｉ． Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｕｓｉｎｇ Ｍｏｄｅｌｌｅｒ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５４、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、５．６．１～５．６．３７、２０１６）。以下の値：最大Ｃα－Ｃα距離＝７．０Åおよび最大Ｃβ－Ｃβ距離＝５．５Åよりも近いアルファおよびベータ炭素を有する残基が、ジスルフィドの、操作によるに作製のために考慮された。３つのジスルフィド安定化したバリアントをＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質として生成し、さらなる特徴付けおよびプロファイリングのために、一過性のＨＥＫ細胞系および安定なＣＨＯ細胞系にスケールアップした：ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ－Ｆｃ、およびＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃ。
Ｂ．システイン安定化なし
非システイン安定化突然変異を同定するために、ＣＤ８０－ＥＣＤの結晶構造の分析は、一つのＣＤ８０－ＥＣＤ単量体の内部にあるおよび二量体ＣＤ８０－ＥＣＤの界面にある疎水性アミノ酸に面している極性アミノ酸を有する領域を、さらに同定した。ＦｏｌｄＸ（Ｏ．Ｂｕβ、Ｊ．Ｒｕｄａｔ、Ｋ．Ｏｃｈｓｅｎｒｅｉｔｈｅｒ． ＦｏｌｄＸ ａｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｏｏｌ： Ｂｅｔｔｅｒ Ｔｈａｎ Ｒａｎｄｏｍ Ｂａｓｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ？ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １６（２０１８）２５～３３）を使用して、ＣＤ８０界面における単一および二重の突然変異を評価し、その後、複合体のエネルギーおよび系全体のエネルギーを評価した。最も好ましい安定性（内部構造の安定化およびＥＣＤ界面の安定化）に基づいて、２４の非システイン安定化バリアントをＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質として生成し、さらなる特徴付けおよびプロファイリングのために、一過性のＨＥＫ細胞系および安定なＣＨＯ細胞系にスケールアップした：ＣＤ８０－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｆｃ。
（実施例４）
非特異的結合および自己相互作用
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、ＤＮＡ結合およびインスリン結合ＥＬＩＳＡ（Ａｖｅｒｙら、ＭＡｂｓ．２０１８年２月／３月、１０（２）：２４４～２５５）を使用して非特異的結合を測定することによって評価し、自己相互作用について、ＡＣ－ＳＩＮＳアッセイ（アフィニティー－キャプチャー自己相互作用ナノ粒子分光法、Ｌｉｕら、２０１４、ｍＡｂｓ ６：４８３～９２）で評価した。ＤＮＡ結合およびインスリン結合スコアを、Ｆｃ融合タンパク質の非存在下（バッファーのみ）でのＥＬＩＳＡシグナルに対する、１０ｕｇ／ｍｌのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＥＬＩＳＡシグナルのシグナル比として計算した。ＡＣ－ＳＩＮＳアッセイでは、金ナノ粒子上にコーティングした抗ヒトＦｃ抗体によってタンパク質をキャプチャーする。自己相互作用するタンパク質はナノ粒子のクラスター化を示し、このクラスター化は、最大吸光度におけるシフトを生じさせる（ＡＣ－ＳＩＮＳスコア）。これらのインビトロアッセイで得られたスコア範囲は、ｈｕＦｃＲｎトランスジェニック（Ｔｇ３２）マウスを使用してのインビボでのクリアランスと良く相関している。スコアが高い治療用タンパク質は、迅速なクリアランスおよび好ましくないＰＫのリスクが高く、スコアが低い治療薬は、リスクが低く、好ましいＰＫである。表６および表７に示すように、低いＡＣ－ＳＩＮＳおよびＤＮＡ／インスリンスコアが、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で見られた。
Figure 2023517044000007
Figure 2023517044000008
（実施例５）
熱安定性
タンパク質の熱安定性とタンパク質の全体的な安定性との間に相関がある。熱安定性が増強すると、多くの場合、製造性が向上し、保存期間／安定性が長くなる。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価した。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－ＤＳＣ機器を使用して分析した。タンパク質濃度はＰＢＳ中で０．０３ｍＭであり、サンプル細胞および参照細胞を、１時間当たり１００℃の走査速度で、１０℃から１００℃まで加熱した。表８～表１０は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の最初の熱転移温度（Ｔｍ１）と、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ融合タンパク質と比較して増強した、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の熱安定性とを示している。
Figure 2023517044000009
Figure 2023517044000010
Figure 2023517044000011
（実施例６）
熱により強制される凝集
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の凝集傾向を評価するために、１ｍｇ／ｍＬのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をＰＢＳ中で、上昇温度で２４時間インキュベートした。サンプルを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ドイツ）ＨＰＬＣ系で、ＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－２００（ＹＭＣ、ドイツ）分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラム、およびランニングバッファーとしての４００ｍＭのＮａＣｌに添加したＰＢＳを使用して、ＳＥＣによって分析した。凝集の％を、インタクトなピーク領域の減少から計算した。表１１および図８Ａならびに表１２および図８Ｂに示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して顕著に低減した凝集傾向を示した。ＮＤ＝判定されず。
Figure 2023517044000012
Figure 2023517044000013
（実施例７）
結合親和性
組換え可溶性ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４タンパク質に対するＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ＋機器を使用して、回収率１０Ｈｚ、３７℃（生理学的温度）で、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定した。精製された可溶性リガンドを、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、製品番号ＢＲ１０００５０）を製造者の推奨に従って使用して、ＣＭ５センサーチップに共有結合によってカップリングした。９００ｎＭ～１１．１ｎＭの濃度範囲の、ＨＢＳ－ＥＰ＋ランニングバッファー（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０）中のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質分析物の３倍連続希釈物を、直接固定されたリガンドに、５０ｕＬ／分の流量で５５秒間注入した。流れを再びランニングバッファーに戻し、解離を３００秒間モニタリングした。結合親和性および速度定数を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアのバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、得られた二重参照された（Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．Ｇ． Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１２、２７９～２８４（１９９９））センサーグラムデータを１：１ラングミュアモデルにフィットさせることによって、判定した。表１３および表１４は二価の見かけのＫＤ±ＳＥを示しており、ここで、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ－４のいずれかがセンサーチップに固定されており、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質またはＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃの結合は３７℃で行われた。表１３に示すように、ＣＤ２８へのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の親和性は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して増強または増大したが、一方、ＣＴＬＡ－４への結合は不変のままであった。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、より高いＣＴＬＡ－４親和性を示したＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃとは対照的に、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４に対して同様の親和性を有している。
Figure 2023517044000014
表１４に示すように、ヒトＣＤ２８へのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の親和性は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質よりも１８倍増大し、一方、ヒトＣＴＬＡ－４への結合は変化しなかった。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、より高いヒトＣＴＬＡ－４親和性を示したＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃとは対照的に、ヒトＣＤ２８およびヒトＣＴＬＡ－４への同様の親和性を有していた。ＰＤ－Ｌ１へのバリアントＣＤ８０－Ｆｃの結合は検出されなかった。図９Ａ～図９Ｄは、２つの異なる濃度の固定されたヒトＰＤ－Ｌ１（６０μｇ／ｍｌおよび７５μｇ／ｍｌ）への様々な濃度のＣＤ８０－ＷＴ－ＦｃおよびＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃの結合を示すＳＰＲセンサーグラムを示している。ＣＤ８０－ＷＴ－ＦｃはヒトＰＤ－Ｌ１への検出可能な結合を有しているが、ＰＤ－Ｌ１へのＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃの結合は検出不可能である。
Figure 2023517044000015
（実施例８）
粘度
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の粘度を、様々な濃度で評価した。低めの粘度が皮下投与には望ましく、最適な注射針通過性を提供し、患者への痛みが最小である。粘度は、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒレオメーターおよび１５０ｒｐｍでのＣＰ－２５測定システムを使用して測定した。サンプルは、２０ｍＭのヒスチジンおよびｐＨ５．８の８．５％ショ糖中に、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を含んでいた。表１５および図１０に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して低い粘度を示した。
Figure 2023517044000016
（実施例９）
収量および純度
採取した後、培地を遠心分離によって澄明化し、０．２２μｍのフィルターを使用して濾過した。各バリアントを、ＰＢＳ、ｐＨ７．２で平衡化した５ｍｌのプロテインＡ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ）カラムにロードした。カラムを１０ＣＶのＰＢＳ、ｐＨ７．２で洗浄し、その後、生成物を１５０ｍＭのグリシン、４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ３．５で溶出した。溶出した生成物を、２Ｍの１０％（ｖ／ｖ）ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０ですぐに中和した。各バリアントのタンパク質濃度を、２８０ｎｍの吸光度（Ａ２８０）でのＮａｎｏｄｒｏｐ読み取りを介して決定した。各Ａ２８０値をバリアントの減衰係数の各々で割って、ｍｇ／ｍｌ単位の濃度を得た。濃度に溶出体積をかけることによって、各バリアントの総タンパク質量を計算した。総タンパク質量を、作製した馴化培地の体積で割ることによって、各バリアントの収量（ｍｇ／Ｌ）を次いで計算した。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、プロテインＡキャプチャー後の純度を決定した。各バリアントを、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、４００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２で平衡化したＹＭＣジオール－３００カラム（３００×８ｍｍ Ｉ．Ｄ． Ｓ－５μｍ、３０ｎｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００に注入した。メインピークの手動の積分を行って、目的のタンパク質のパーセントを判定した。表１６は、非システイン安定化突然変異を有する様々なバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の、向上した収量および純度を示す。４つのバリアント（＊）を選択して、安定性の試験に進めた。ＮＤ＝判定されず、凝集体＝高分子量種（ＨＭＭＳ）、歪み＝メインピークは低解像度での化学種決定を示し、目的のタンパク質の正確な積分を得ることはできなかった。
Figure 2023517044000017
（実施例１０）
ＩＬ－２の産生を測定する機能的アッセイ
ＴＣＲ刺激の後に、ＣＤ２８にＣＤ８０が結合すると、シグナル伝達カスケードはＩＬ－２の産生を生じさせる。したがって、ＩＬ－２は、ＣＤ２８介在性の共刺激の直接的な読み出しである。２つのＩＬ－２ベースのインビトロアッセイを使用して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質、すなわち、Ａ．ではＪｕｒｋａｔ ＩＬ－２レポーター、およびＢ．ではヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の有効性および機能性を測定した。
Ａ． Ｊｕｒｋａｔ ＩＬ－２レポーターアッセイ
Ｊｕｒｋａｔは不死化されたヒトＴ細胞系であり、Ｊｕｒｋａｔ ＩＬ－２レポーターアッセイは、ＩＬ－２プロモーターの活性化をもたらすＣＤ２８介在性のシグナル伝達を評価する。ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の活性を、実施例２において記載されているような共培養ＨＣＴ１１６－ＣＤ６４－Ｊｕｒｋａｔ ＩＬ－２レポーターアッセイを使用して測定したが、２０ｎｇ／ｍｌのＣＤＨ３×ＣＤ３二重特異性抗体を使用した。表１７（ｎ＝２）は、ＥＣ５０±ＳＥＭおよびバックグラウンド（ＣＤ３の刺激のみ）に対する変化倍率を示し、図１１のＩＬ－２レポーター活性は、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃと比較して増強したＩＬ－２の産生および有効性を示したことを示している。
Figure 2023517044000018
Ｂ．ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）アッセイ
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において抗ＣＤ３の状況下でＩＬ－２の産生を促進する（Ｔ細胞受容体のシグナル伝達を刺激する）能力を試験した。プレート上の抗ＣＤ３抗体に結合させるために、抗ヒト－ＣＤ３（クローンＨＩＴ３ａ、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、９６ウェルプレートにおいて４℃で一晩、別段の記載がない限り１ｕｇ／ｍｌでインキュベートした。ヒトＰＢＭＣを、回収したばかりのヒト全血から、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓを使用して単離した。ヒトＰＢＭＣ（ウェル当たり１０万個）を、プレートに結合した抗ＣＤ３、ならびに、ＲＰＭＩ＋１０％ＨＩ－ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、ピルビン酸ナトリウム、および非必須アミノ酸中の、示された濃度の可溶性ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質とインキュベートした。４８時間のインキュベーションの後、上清を回収し、ＩＬ－２を、Ｒ＆ＤのＱｕａｎｔｉｋｉｎｅヒトＩＬ－２ ＥＬＩＳＡキットによって測定した。
表１８は、ＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＥＣ５０を示している。示されている値は、５人の異なるＰＢＭＣドナーから得た平均ＥＣ５０である。図１２Ａは、１人の個別のＰＢＭＣドナーから得たＩＬ－２産生の用量応答を示している。ＣＤ８０－Ｆｃバリアント、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、およびＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃは、抗ＣＤ３の存在下でのヒトＰＢＭＣにおいて、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃと比較して、ＩＬ－２の産生の促進がより強力であった。
Figure 2023517044000019
さらなるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、同一のＰＢＭＣアッセイにおいて、記載されている抗ヒト－ＣＤ３（クローンＨＩＴ３ａ、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）濃度で試験した。表１９は、個別のＰＢＭＣドナーのＷＴおよびバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＥＣ５０を示しており、図１２Ｂ（ドナー４１８）および図１２Ｃ（ドナー３７９）は、ＩＬ－２産生の用量応答を示している。バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、ＩＬ－２の産生がより強力であった。
Figure 2023517044000020
ＣＤ８０－Ｆｃエフェクター機能ヌル（ＥＦＮ）は、Ｆｃ部分を、ヒトＰＢＭＣに存在する単球／マクロファージによって発現されるＦｃγ受容体に結合できないようにする、突然変異を有していた。ＣＤ８０－Ｆｃ ＥＦＮは、ＪｕｒｋａｔまたはＰＭＢＣアッセイのいずれにおいても、抗ＣＤ３の状況下でＩＬ－２産生を促進せず、このことは、最適なＩＬ－２産生のためにＦｃγ受容体の結合が重要であることを示している。
（実施例１１）
サイトカイン放出の評価
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の、ＴＣＲ刺激の非存在下でサイトカイン放出を促進する能力を、ＲＥＳＴＯＲＥ（ＲＥＳｅｔｔｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）アッセイ（Ｒｏｍｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１）で評価した。数人の健康なドナーの全血から新たに単離した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、１０％自己移植血漿、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１×ＧｌｕｔａＭＡＸ、１×ＰｅｎＳｔｒｅｐ、ベータ２－メルカプトエタノール、ＮＥＡＡ、およびピルビン酸ナトリウムを添加したＲＰＭＩ１６４０培地内で、１０７／ｍＬで４８時間培養した。４８時間インキュベーションした後、ＰＢＭＣをペレット化し、１０６個／ｍｌの最終濃度で、示されている可溶性薬と共に再懸濁した。処理を４８時間行い、次いで上清を採取し、そして、ＩＬ－２およびＩＦＮγ ＥＬＩＳＡで製造者のプロトコル（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に従って評価した。
ポジティブコントロールとしては、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４アイソタイプとしてのＣＤ２８スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８クローンＴＧＮ１４１２、ならびに抗ＣＤ３が挙げられた。表２０は、高密度ＰＢＭＣアッセイでは、４人の異なるドナーの間で１０ｕｇ／ｍｌまではいずれのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質によってもサイトカインの顕著な誘導がなく、一方、ポジティブコントロールである抗ＣＤ３およびスーパーアゴニストＴＧＮ１４１２はサイトカイン産生を促進したことを示している。示されている値は、３回の技術的反復の平均である。Ｄ＝ドナーである。
Figure 2023517044000021
さらなるバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、６人の異なるＰＢＭＣドナーにおいて、５０ｕｇ／ｍｌまで試験した。表２１および表２２に示すように、サイトカインの顕著な誘導は見られなかった。示されている値は、３つの技術的反復の平均である。Ｄ＝ドナーである。
Figure 2023517044000022
Figure 2023517044000023
（実施例１２）
腎臓癌モデルにおけるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の有効性
Ｒｅｎｃａマウス腎臓癌腫瘍細胞（１００万個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの後ろ脇腹に皮下移植した。腫瘍移植の５日後、ＰＢＳ媒体コントロールまたはバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、０．３および１ｍｇ／ｋｇ（０日目および３日目）または３ｍｇ／ｋｇ（０、３、および６日目）に静脈内投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
表２３および図１３Ａ～図１３Ｃに示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、腫瘍増殖を顕著に阻害し、５０％以上の動物が、３ｍｇ／ｋｇのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理の後、研究期間を通して無腫瘍のままであった。ＥＦＮ突然変異を有するＣＤ８０－ＥＦＮ－Ｆｃは、腫瘍増殖を阻害しなかった。
Figure 2023517044000024
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での薬力学的（ＰＤ）調節を、ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔを使用して脾臓における腫瘍反応性Ｔ細胞を測定することによって評価した。単細胞懸濁液を、ＣＤ８０－Ｆｃの初回投与後９日目に採取した脾臓の解離物から作製した。脾細胞を、放射線照射した腫瘍細胞と３７℃で一晩インキュベートし、ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ番号５５１０８３）を使用して、ＩＦＮγ産生スポットの数を測定した。表２４に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、ＰＢＳコントロールと比較して腫瘍反応性Ｔ細胞の量を増大させた。
Figure 2023517044000025
（実施例１３）
結腸直腸癌モデルにおけるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の有効性
ＣＴ２６マウス結腸直腸癌腫瘍細胞（１×１０６個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの後ろ脇腹に皮下移植した。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したら（８日目）、マウスをランダム化した。ＰＢＳ媒体コントロールまたはバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、０および３日目に、０．１および１．０ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
図１４Ａおよび図１４Ｂに示すように、ジスルフィド安定化バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、低用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）および高用量（１ｍｇ／ｋｇ）で、システイン突然変異を有さないバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、腫瘍増殖の制御を向上させた。表２５は、１０日目の腫瘍体積および腫瘍増殖阻害％を示しており、腫瘍体積は１０日目の後にも減少し続け、１ｍｇ／ｋｇ用量の全てのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で、５０％以上の動物で腫瘍が退行している。
Figure 2023517044000026
ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔを使用して、１ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理したマウスの脾臓における腫瘍反応性Ｔ細胞を測定した。表２６に示すように、１ｍｇ／ｋｇのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質で処理すると、ＣＴ２６モデルにおいて、ＰＢＳコントロールと比較して、脾臓における腫瘍反応性Ｔ細胞の量が増大した。
Figure 2023517044000027
（実施例１４）
乳がんモデルにおけるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の有効性
ＥＭＴ６マウス乳がん細胞（３×１０５個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの乳房脂肪体に同所性移植した。腫瘍が約９０ｍｍ３に達したら（移植後５日目）、マウスをランダム化した。ＰＢＳ媒体コントロールまたはバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、０および３日目に、０．０１、０．１、１．０、および３．０ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
図１５Ａおよび図１５Ｂ（表２７）に示すように、両バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理はそれぞれ、０．１ｍｇ／ｋｇから開始して腫瘍増殖を顕著に阻害した。
Figure 2023517044000028
脾臓および腫瘍排出リンパ節（ＴＤＬＮ）における腫瘍反応性Ｔ細胞を、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃで処理したマウスにおいて、ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔによって測定した。表２８に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、ＥＭＴ６モデルにおいて、ＰＢＳコントロールと比較して、脾臓およびＴＤＬＮの両方において、腫瘍反応性Ｔ細胞の量を用量依存的に増大させた。
Figure 2023517044000029
（実施例１５）
皮下投与によるＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の有効性
ＭＣ３８マウス結腸直腸癌細胞（５×１０５個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの後ろ脇腹に皮下移植した。腫瘍が約５０ｍｍ３に達したら（移植後６日目）、マウスをランダム化した。ＰＢＳ媒体コントロールまたはバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を、０および３日目に、０．０１～３．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、静脈内（ＩＶ）または皮下に（ＳＣ）に投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
図１６Ａおよび図１６Ｂ（表２９）ならびに図１７Ａおよび図１７Ｂ（表３０）に示すように、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、０．１ｍｇ／ｋｇで開始して腫瘍増殖を顕著に阻害した。加えて、バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の皮下投与（図１６Ｂおよび図１７Ｂ）は、静脈内投与（図１６Ａおよび図１７Ａ）と同様の有効性を示した。
Figure 2023517044000030
Figure 2023517044000031
（実施例１６）
腫瘍におけるＴ細胞浸潤の分析
細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞はがん細胞の殺滅に関与し、腫瘍に浸潤しているＣＤ８＋Ｔ細胞の測定は、免疫腫瘍学療法のための有効性と一般的に相関する。全てのインビボ研究で、腫瘍は初回投与の約１週間後に回収し、ミンチングによって解離させ、その後、酵素消化カクテル中でのインキュベーションおよびホモジナイゼーションを行った。得られた細胞懸濁液を濾過し、洗浄し、そして、単細胞を、フローサイトメトリーによって、ＣＤ４５、ＣＤ８に対する抗体、および腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を検出するための生細胞染色色素で染色した。データは、ＢＤ ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターまたはＣｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａスペクトラルフローサイトメーターで得た。表３１および図１８は、全免疫細胞（ＣＤ４５＋）に対するパーセンテージとして表されている、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞の量を示している。各値は、群当たりｎ＝４のマウスの平均である。全てのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質での処理は、様々な腫瘍モデルにおいてＣＤ８＋ＴＩＬを増大させた。
Figure 2023517044000032
（実施例１７）
薬物動態学（ＰＫ）
バリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＰＫを、非ヒト霊長類において評価した。メスカニクイザルに、３、１５、および５０ｍｇ／ｋｇのバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を静脈内投与し、そしてグラフで示されている時点で血液を回収した。Ｇｙｒｏｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙプラットフォームを使用するリガンド結合アッセイを使用して、用量を投与した後のカニクイザル血清中のＣＤ８０－Ｆｃ分子を定量した。ＣＤ８０－Ｆｃ構築物を、ビオチン化モノクローナル抗ヒトＣＤ８０抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号１３－０８０９－８２）を使用して、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ ＣＤに捕捉した。結合したＣＤ８０－Ｆｃ構築物を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識したマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈカタログ番号９０４０－０１）を使用して検出した。サンプル濃度を、５パラメータロジスティック回帰モデルを使用してフィットさせた検量線から内挿することによって決定した。アッセイの定量範囲は、１００％血清中で１００～１５０００ｎｇ／ｍＬであった。表３２および図１９に示すように、安定化したバリアントＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質は、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃよりも向上したＰＫを示し、全ての用量でＣｍａｘがより高く、またＡＵＣがより大きかった。ＡＵＣ（曲線下面積）、Ｃｍａｘ（見られた最大濃度）、Ｔｍａｘ（見られた最大濃度時間）
Figure 2023517044000033
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＰＫをまた、その天然のヒトプロモーターの制御下でヒト新生児Ｆｃ受容体（ｈｕＦｃＲｎ）α鎖導入遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおいても評価した。メスマウスに、０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を静脈内投与し、そしてグラフで示されている時点で血液を回収した。マウス血漿中のＣＤ８０－Ｆｃレベルを、上記のように測定した。表３３および図２０は、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＰＫを示しており（群当たり３頭の動物の平均）、試験した全てのバリアントは、ＷＴ ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と比較して同様のまたは向上したＰＫを示している。ＣＬ（クリアランス）、Ｖｄｓｓ（分布体積）、Ｔ１／２（半減期）。
Figure 2023517044000034
（実施例１８）
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質とαＰＤ１抗体との組合せ有効性
Ａ． ＣＴ２６結腸直腸癌モデル
ＣＴ２６マウス結腸直腸癌細胞（１×１０６個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの後ろ脇腹に皮下移植した。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したら（移植後８日目）、マウスをランダム化し、ＰＢＳ媒体コントロール、０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃ、および／または１０ｍｇ／ｋｇのマウスαＰＤ１抗体を投与した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃを０および３日目に投与し、αＰＤ１抗体を０、３、および６日目に投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
図２１（表３４）に示すように、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－ＦｃまたはαＰＤ１抗体での処理は単剤有効性を示し、１３日目に、０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃでは６１．２％、αＰＤ１では３７．９％の腫瘍増殖阻害であった。低用量のＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－ＦｃおよびαＰＤ１抗体の組合せでは有効性が向上し、１３日目に、７７．６％の腫瘍増殖阻害であった。
Figure 2023517044000035
ＩＦＮγ ＥＬＩｓｐｏｔを使用して、１ｍｇ／ｋｇのＤ９０Ｑ、αＰＤ１抗体、または組合せで処理したマウスの脾臓およびＴＤＬＮにおける腫瘍反応性Ｔ細胞を測定した。表３５に示すように、いずれかの薬剤単独での処理では、ＰＢＳコントロールと比較して、脾臓および腫瘍排出リンパ節の両方で腫瘍反応性Ｔ細胞の量が増大した（群当たりｎ＝４）。組合せでは、いずれかの薬剤単独と比較して、ＴＤＬＮにおける腫瘍反応性Ｔ細胞の量がさらに増えた。
Figure 2023517044000036
Ｂ． Ｂ１６Ｆ１０黒色腫モデル
Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞（５０万個）を、メスＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの後ろ脇腹に皮下移植した。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したら、マウスをランダム化し、ＰＢＳ媒体コントロール、３ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃ、および／または１０ｍｇ／ｋｇのマウスαＰＤ１抗体を投与した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃは０および３日目に投与し、αＰＤ１抗体は０、３、および６日目に投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
図２２（表３６）に示すように、ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃでの単剤処理は、１０日目に、２６．３％の腫瘍増殖阻害を示し、αＰＤ１抗体は３２．３％の腫瘍増殖阻害を示した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－ＦｃおよびαＰＤ１抗体の組合せは有効性を向上させ、１０日目に６９．０％の腫瘍増殖阻害であった。
Figure 2023517044000037
（実施例１９）
ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質とタラゾパリブとの組合せ有効性
Ａ． ＥＭＴ６乳がんモデル
ＥＭＴ６マウス乳がん細胞（３×１０５個）を、メスＢａｌｂ／ｃマウスの乳房脂肪体に同所性移植した。腫瘍が約９０ｍｍ３に達したら（移植後５日目）、マウスをランダム化し、ＰＢＳ媒体コントロール、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃ（０．１もしくは１ｍｇ／ｋｇ）、および／または０．３３ｍｇ／ｋｇのタラゾパリブ（Ｔａｌａ）を投与した。ＣＤ８０－Ｄ９０Ｑ－Ｆｃは０および３日目に投与し、タラゾパリブは毎日投与した。腫瘍体積を２次元で得たキャリパー測定によって判定し、幅２×長さ／２として計算した。誤差のバーは±ＳＥＭとして示されている。
表３７および図２３に示すように、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃでの処理は単剤有効性を示し、０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ－Ｆｃでそれぞれ、４３．１％および７０．５％の腫瘍増殖阻害であった。タラゾパリブの単剤有効性はこのモデルでは見られなかったが、ＣＤ８０－Ｆｃ Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃおよびタラゾパリブの組合せでは、ＣＤ８０－Ｆｃ Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ単独よりも有効性が向上した。
Figure 2023517044000038
（実施例２０）
一次ヒトＴ細胞の共刺激
ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－ＦｃおよびＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃの３倍連続希釈物を、完全ＩＭＤＭ培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中で調製した。ＣＥＦＴペプチド（ＰＭ－ＣＥＦＴ、ＪＰＴ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を同一の培地中で復元して、最終濃度１μg／ｍｌとした。凍結ヒトＰＢＭＣを標準的なプロトコルに従って解凍し、平底９６ウェルプレートのウェル当たり２５万個を播種した。ＣＥＦＴペプチドおよび適切な濃度のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を細胞懸濁液に添加した。プレートを、通気性のあるプレートシーラーでシールし、ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で７２時間インキュベートした。細胞採取の６時間前に培養上清を回収し、ＭＳＤ（Ｖ－Ｐｌｅｘ炎症誘発性パネルヒトキット、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によるサイトカイン分析に使用するまで、－２０℃で保存した。同時に、ブレフェルジンＡ溶液を細胞に添加して、フローサイトメトリーによる評価のために、サイトカインを細胞内に蓄積させた。採取したら、細胞を、標準的なフローサイトメトリー染色プロトコルに従って、表面（とりわけＣＤ２５）ならびに細胞内マーカー（とりわけ、Ｋｉ－６７およびＩＦＮγ）について染色した。ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａを使用してデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０ソフトウェアを使用して解析した。
図２４Ａ～図２４Ｅに示すように、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃは、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃと比較して、ヒトＴ細胞における優れたインビトロ有効性および最大応答を示している。図２４Ａは、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（丸のライン）と比較した、増大濃度のＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（四角のライン）と組み合わされたＣＥＦＴペプチドによって刺激されたＴ細胞によるＩＬ－２の産生を示している。ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－ＦｃによるＴ細胞の共刺激は、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃと比較して、ＩＬ－２産生の最大レベルの増大（約１４０％）およびＥＣ５０の１０分の１未満への低下を伴っている。破線（三角）は、ＣＥＦＴペプチドのみでのベースライン応答を表している。
図２４Ｂおよび図２４Ｃは、増大濃度のＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（四角のライン）およびＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（丸のライン）融合タンパク質と組み合わされたＣＥＦＴペプチドによって刺激されたＴ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞にゲートされている）の表面上の、ＣＤ２５（ＩＬ２Ｒα、高親和性ＩＬ－２受容体サブユニット）およびＫｉ－６７（増殖マーカー）の発現をそれぞれ示している。ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃを使用する共刺激は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ２５発現の増大（約３０％）および増殖能力の増大（Ｋｉ－６７染色の増大によって示される、約３０％）を伴っている。
図２４Ｄおよび図２４Ｅは、増大濃度のＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（四角のライン）およびＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（丸のライン）と組み合わされたＣＥＦＴペプチドによって刺激した際の、細胞上清中のＭＳＤによって測定されるサイトカインのｐｇ／ｍｌ数によって表されるＩＦＮγ産生（図２４Ｄ）、およびフローサイトメトリーによって測定されるＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の相対量（％）（図２４Ｅ）を示している。ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃでの刺激は、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃよりも増強したＩＦＮγ産生、およびより高いＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞％を誘導した。
（実施例２１）
一次ヒトＴ細胞における遺伝子発現のパターン
９６ウェルプレートを、１μg／ｍｌの抗ヒトＣＤ３抗体（ＨＩＴ３αクローン、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で一晩コーティングした。翌日、プレートをＰＢＳで２回洗浄し、ウェル当たり２００μlの完全ＩＭＤＭ（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）で１時間ブロックした。ブロック培地を除去したら、プレートに、３つの異なるドナーから派生した２５万個のＰＢＭＣ、ならびに、以下のタンパク質：１）１．２μｇ／ｍｌのＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（類似のアッセイで最大のＩＬ－２産生を伴った濃度）、２）１２μｇ／ｍｌのＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（類似のアッセイで最大のＩＬ－２産生を伴った濃度）、および３）５μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ２８抗体を播種した。
ＣＯ２インキュベーター内で、３７℃で２４時間インキュベーションした後、細胞を採取し、生細胞染色色素および抗ヒトＣＤ３（ＵＣＨＴ１クローン、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。生存能力があるＣＤ３＋Ｔ細胞を流動選別し、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙプロトコルに従ったＲＮＡ抽出に使用した。単離されたＲＮＡを、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇプラットフォームを使用する遺伝子発現分析に使用した。
図２５Ａ～図２５Ｅは、転写産物数として示されている選択された遺伝子の発現レベルを示している（代表的なＰＢＭＣドナーが示されている）。図２５Ａ～図２５Ｅの各グラフにおいて、Ａ＝抗ヒトＣＤ３抗体、Ｂ＝ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ、Ｃ＝ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ、およびＤ＝抗ヒトＣＤ２８抗体である。
図２５Ａは、重要なエフェクターサイトカインであるＩＬ－２、ＩＬ－２１、およびリンホトキシンアルファ（ＬＴＡ）の遺伝子発現レベルを表している。１．２μｇ／ｍｌのＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（Ｃ）または５μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ２８抗体（Ｄ）と組み合わせた抗ヒトＣＤ３抗体での処理は、１２μｇ／ｍｌのＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（Ｂ）での共刺激と比較して、３つのサイトカイン全ての遺伝子発現の増強を伴っている。
図２５Ｂ～図２５Ｅは、生存規定分子（ＢＣＬ－ＸＬおよびＣＡＳＰ８、図２５Ｂ）、共刺激分子（ＯＸ－４０、図２５Ｃ）、エフェクターＴ細胞と負の相関をする分子（ＩＬ－７Ｒα、図２５Ｄ）、および共阻害分子（ＴＩＧＩＴ、図２５Ｅ）をコードする遺伝子の発現レベルを示している。図２５Ｂに示すように、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（Ｃ）および抗ヒトＣＤ２８抗体（Ｄ）での共刺激は、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（Ｂ）での共刺激と比較して、抗アポトーシス性のＢＣＬ－ＸＬの発現の増強およびアポトーシス促進性のＣＡＳＰ８発現の低下を伴っている。図２５Ｃは、共刺激性のＯＸ－４０をコードする遺伝子の発現レベルが、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃ（Ｂ）での処理と比較して、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃ（Ｃ）および抗ヒトＣＤ２８抗体（Ｄ）介在性の共刺激で増強することを示している。図２５Ｄおよび図２５Ｅは、ＣＤ８０－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｆｃおよび抗ヒトＣＤ２８抗体の共刺激が、ＣＤ８０－ＷＴ－Ｆｃでの処理と比較して、ＩＬ７Ｒαコード遺伝子およびＴＩＧＩＴコード遺伝子の、抗ヒトＣＤ３のみでのベースラインと比較した大きな低下を伴っていることを示している。
Figure 2023517044000039
Figure 2023517044000040
Figure 2023517044000041
Figure 2023517044000042
Figure 2023517044000043
Figure 2023517044000044
Figure 2023517044000045
Figure 2023517044000046
Figure 2023517044000047
Figure 2023517044000048
Figure 2023517044000049
Figure 2023517044000050
Figure 2023517044000051
Figure 2023517044000052
Figure 2023517044000053

Claims (52)

  1. （ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  2. 置換が、Ｋ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位にある、請求項１に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  3. Ｋ３６位の置換がＫ３６Ｒであり、Ｋ８９位の置換がＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換がＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換がＡ９１Ｓである、請求項２に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  4. 置換が、Ｋ３６Ｒ、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、またはＫ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓを含む、請求項３に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  5. 置換が、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含む、請求項４に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  6. 置換が、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性を増大させる、請求項１から５のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  7. 置換が、Ｖ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３および／またはＮ６４位にある、請求項１に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  8. Ｖ１１位の置換がＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換がＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換がＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換がＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換がＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換がＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換がＱ３３Ｅであり、Ｇ４５位の置換がＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換がＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換がＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換がＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換がＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換がＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換がＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換がＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅである、請求項７に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  9. 置換が、Ｖ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄ、Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｍ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ａ２６Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｒ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｔ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｆ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｍ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｅ２３Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｙ３１Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｑ３３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｇ４５Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｋ５４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｇ４５Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｋ５４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ５７Ｖ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｑ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｒ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｔ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｉ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｌ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｇ４５Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄおよび／もしくはＮ６４Ｅの任意の他の組合せを含む、請求項８に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  10. 置換が、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む、請求項９に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  11. 置換が、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を増大させる、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  12. 安定性の増大が、熱安定性の増強、熱により強制される凝集の低減および／または粘度の低減をもたらす、請求項１１に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  13. 置換が、Ｋ８９Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｅ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｋ
    ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｉ６１Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ａ９１Ｓ－Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ａ９１Ｓ－Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ａ９１Ｓ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＡ９１Ｓ－Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  14. 置換が、Ｄ９０Ｑを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  15. 置換が、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  16. 置換が、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  17. 置換が、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  18. （ｉ）抗体Ｆｃ領域と、（ｉｉ）ｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＫ３６、Ｋ８９、Ｄ９０、および／またはＡ９１位に第１の置換、およびｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３および／またはＮ６４位に第２の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドを含むバリアントＣＤ８０ポリペプチドとを含むＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  19. ｉ）Ｋ３６位の第１の置換がＫ３６Ｒであり、Ｋ８９位の第１の置換がＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の第１の置換がＤ９０ＫまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の第１の置換がＡ９１Ｓである、およびｉｉ）Ｖ１１位の第２の置換がＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の第２の置換がＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の第２の置換がＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の第２の置換がＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の第２の置換がＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の第２の置換がＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の第２の置換がＱ３３Ｅであり、Ｇ４５位の第２の置換がＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の第２の置換がＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の第２の置換がＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の第２の置換がＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の第２の置換がＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の第２の置換がＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の第２の置換がＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の第２の置換がＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅである、請求項１８に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  20. ｉ）第１の置換が、Ｋ３６Ｒ、Ｋ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｅ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｋ－Ａ９１Ｓ、Ｋ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｎ－Ａ９１Ｓ、またはＫ３６Ｒ－Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ａ９１Ｓを含み、およびｉｉ）第２の置換が、Ｖ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄ、Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｍ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ａ２６Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｑ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｒ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｔ、Ｖ１１Ｌ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ１１Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｆ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ２８Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｅ２３Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ａ２６Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｙ３１Ｑ、Ｖ２２Ｍ－Ｑ３３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｍ－Ｉ６１Ｃ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｆ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｉ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ２２Ｍ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６３Ｅ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｄ、Ｖ２２Ｍ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｅ２３Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｙ３１Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｑ３３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｇ４５Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｋ５４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ２８Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ２８Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｅ２３Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｅ２３Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｙ３１Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｑ３３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ａ２６Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ａ２６Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ａ２６Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｇ４５Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｋ５４Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ５７Ｖ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｑ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｒ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｔ、Ｙ３１Ｑ－Ｄ６０Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｉ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｌ、Ｙ３１Ｑ－Ｔ６２Ｙ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６３Ｅ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｄ、Ｙ３１Ｑ－Ｎ６４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｇ４５Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｑ３３Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｑ３３Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｑ３３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｋ５４Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ５７Ｖ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｑ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｒ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｔ、Ｇ４５Ｃ－Ｄ６０Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｉ６１Ｃ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｆ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｉ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｌ、Ｇ４５Ｃ－Ｔ６２Ｙ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６３Ｅ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｄ、Ｇ４５Ｃ－Ｎ６４Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ５７Ｖ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｑ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｒ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｔ、Ｋ５４Ｅ－Ｄ６０Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｋ５４Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｑ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｒ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｔ、Ｔ５７Ｖ－Ｄ６０Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｉ６１Ｃ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｆ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｉ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｌ、Ｔ５７Ｖ－Ｔ６２Ｙ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ５７Ｖ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｅ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｒ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｔ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｆ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｉ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｅ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｄ、Ｔ６２Ｙ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ１１Ｌ、Ｖ２２Ｃ、Ｖ２２Ｆ、Ｖ２２Ｍ、Ｔ２８Ｖ、Ｅ２３Ｃ、Ａ２６Ｃ、Ｙ３１Ｑ、Ｑ３３Ｅ、Ｇ４５Ｃ、Ｋ５４Ｅ、Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０Ｔ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｔ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２Ｌ、Ｔ６２Ｙ、Ｎ６３Ｄ、Ｎ６３Ｅ、Ｎ６４Ｄおよび／もしくはＮ６４Ｅの任意の他の組合せを含む、請求項１８または１９に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  21. ｉ）第１の置換が、Ｋ８９Ｄ Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、およびｉｉ）第２の置換が、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅを含む、請求項１８から２０のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  22. ｉ）第１の置換がＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑを含み、およびｉｉ）第２の置換がＥ２３Ｃ－Ａ２６Ｃを含む、請求項２１に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  23. ｉ）第１の置換がＫ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋを含み、およびｉｉ）第２の置換がＴ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む、請求項２１に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  24. ｉ）第１の置換が、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ２８に対する結合親和性を増大させ、およびｉｉ）第２の置換が、野生型ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性と比較して、ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を増大させる、請求項１８から２３のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  25. 安定性の増大が、熱安定性の増強、熱により強制される凝集の低減および／または粘度の低減をもたらす、請求項２４に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  26. ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、ｉ）ＰＤ－Ｌ１への結合を増加させることも、増強することもない、またはｉｉ）ＰＤ－Ｌ１への最小限の、もしくは検出不可能な結合を示す、請求項１から２５のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  27. バリアントＣＤ８０ポリペプチドが、配列番号２０～６３のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  28. 抗体Ｆｃ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に由来する、請求項１から２７のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  29. 抗体Ｆｃ領域が、配列番号１３～１８のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  30. 抗体Ｆｃ領域が、バリアントＣＤ８０ポリペプチドに連結されている、請求項１から２９のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  31. ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号６４～１１４のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質。
  32. 請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を産生する単離された細胞系。
  33. 請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸。
  34. 請求項３３に記載の核酸を含むベクター。
  35. 請求項３３に記載の核酸または請求項３４に記載のベクターを含む宿主細胞。
  36. ＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を生産する方法であって、請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質の産生をもたらす条件下で請求項３５に記載の宿主細胞を培養すること、および産生されたＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質を精製することを含む方法。
  37. 請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
  38. それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、対象に、有効量の請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または請求項３７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
  39. がんが、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、頭頸部がん（例えば、扁平上皮頭頸部がん）、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、グリオーマ、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、結腸がん、結腸直腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、グリア芽腫、脳腫瘍、骨肉腫、眼がん、黒色腫、または高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）を有するがんである、請求項３８に記載の方法。
  40. がんが、再発性、抵抗性、難治性、および／または転移性である、請求項３８または３９に記載の方法。
  41. がんが、抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１療法に対して抵抗性および／または難治性である、請求項３８から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. それを必要とする対象における免疫応答を増強するための方法であって、対象に、有効量の請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または請求項３７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
  43. 有効量の１つまたは複数の追加の薬剤を投与することをさらに含む、請求項３８から４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. １つまたは複数の追加の薬剤が、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ－７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ－８抗体、抗ＩＬ－１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＩＬ－７Ｒ抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＢＴＮ１Ａ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体からなる群から選択される抗体である、請求項４３に記載の方法。
  45. １つまたは複数の追加の薬剤が、サイトカイン、イムノサイトカイン、標的サイトカイン、ＴＮＦα、ＰＡＲＰ阻害剤、腫瘍溶解ウイルス、キナーゼ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＧＬＳ１阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＡＲＴ細胞もしくはＴ細胞療法、ＴＬＲアゴニスト、がんワクチン、ＫＲＡＳ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＰＫ１阻害剤、ＣＤＫもしくは他の細胞周期阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤もしくは他のエピジェネティック改変剤、抗エストロゲンもしくは抗アンドロゲン療法、放射線療法、化学療法、ＰＲＲアゴニスト、二重特異性もしくは多重特異性抗体、抗体－薬物コンジュゲートまたは他の自然免疫モジュレーターである、請求項４３に記載の方法。
  46. １つまたは複数の追加の薬剤が、抗ＰＤ－１抗体、二重特異性抗体、ＣＤＫ阻害剤および／または化学療法である、請求項４３から４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 薬剤の製造における、請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または請求項３７に記載の医薬組成物、請求項３３に記載の単離された核酸、請求項３４に記載のベクター、または請求項３５に記載の宿主細胞の使用。
  48. 薬剤としての使用のための、請求項１から３１のいずれか一項に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または請求項３７に記載の医薬組成物。
  49. 薬剤ががんの処置における使用のためのものである、請求項４８に記載のＣＤ８０－Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物。
  50. 配列番号２のアミノ酸配列のＶ１１、Ｖ２２、Ｔ２８、Ｅ２３、Ａ２６、Ｙ３１、Ｑ３３、Ｋ３６、Ｇ４５、Ｋ５４、Ｔ５７、Ｄ６０、Ｉ６１、Ｔ６２、Ｎ６３、Ｎ６４、Ｋ８９、Ｄ９０、またはＡ９１位に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含むバリアントＣＤ８０ポリペプチド。
  51. Ｖ１１位の置換がＶ１１Ｌであり、Ｖ２２位の置換がＶ２２Ｃ、Ｖ２２ＦまたはＶ２２Ｍであり、Ｔ２８位の置換がＴ２８Ｖであり、Ｅ２３位の置換がＥ２３Ｃであり、Ａ２６位の置換がＡ２６Ｃであり、Ｙ３１位の置換がＹ３１Ｑであり、Ｑ３３位の置換がＱ３３Ｅであり、Ｋ３６位の置換がＫ３６Ｒであり、Ｇ４５位の置換がＧ４５Ｃであり、Ｋ５４位の置換がＫ５４Ｅであり、Ｔ５７位の置換がＴ５７Ｖであり、Ｄ６０位の置換がＤ６０Ｆ、Ｄ６０Ｑ、Ｄ６０Ｒ、Ｄ６０ＴまたはＤ６０Ｙであり、Ｉ６１位の置換がＩ６１Ｃであり、Ｔ６２位の置換がＴ６２Ｆ、Ｔ６２Ｉ、Ｔ６２ＬまたはＴ６２Ｙであり、Ｎ６３位の置換がＮ６３ＤまたはＮ６３Ｅであり、Ｎ６４位の置換がＮ６４ＤまたはＮ６４Ｅであり、Ｋ８９位の置換がＫ８９Ｄ、Ｋ８９ＥまたはＫ８９Ｑであり、Ｄ９０位の置換がＤ９０Ｋ、Ｄ９０ＮまたはＤ９０Ｑであり、Ａ９１位の置換がＡ９１Ｓである、請求項５０に記載のバリアントＣＤ８０ポリペプチド。
  52. 置換が、配列番号２のアミノ酸配列のＫ８９Ｄ、Ｋ８９Ｅ、Ｋ８９Ｑ、Ｄ９０Ｋ、Ｄ９０Ｎ、Ｄ９０Ｑ、Ａ９１Ｓ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｎ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｑ、Ｋ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ、Ｄ６０Ｙ、Ｉ６１Ｃ、Ｖ１１Ｌ－Ｖ２２Ｆ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ、Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ、Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｄ６０Ｆ－Ｔ６２Ｉ、Ｄ６０Ｑ－Ｔ６２Ｆ、Ｄ６０Ｒ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｔ－Ｔ６２Ｙ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ、Ｄ６０Ｙ－Ｖ２２Ｍ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ、Ｖ１１Ｌ－Ｔ６２Ｙ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６４Ｅ、 Ｄ６０Ｙ－Ｖ１１Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ、Ｖ２２Ｆ－Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６４Ｅ、Ｖ２２Ｆ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｄ６０Ｙ－Ｋ５４Ｅ－Ｎ６３Ｅ－Ｎ６４Ｄ、Ｄ６０Ｙ－Ｔ６２Ｌ－Ｎ６３Ｄ－Ｎ６４Ｅ、Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、またはＶ２２Ｆ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖ－Ｙ３１Ｑ－Ｑ３３Ｅ－Ｋ５４Ｅ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｉ６１Ｃ、Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、Ｋ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｅ２３Ｃ－Ａ２６Ｃ、またはＫ８９Ｑ－Ｄ９０Ｑ－Ｖ２２Ｃ－Ｇ４５Ｃ、またはＫ８９Ｄ－Ｄ９０Ｋ－Ｔ２８Ｖ－Ｔ５７Ｖを含む、請求項５０または５１に記載のバリアントＣＤ８０ポリペプチド。
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