CN109575136A - 新型抗dpep3抗体和使用方法 - Google Patents

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D·罗卡姆
D·刘
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Abstract

本文提供了新型抗DPEP3抗体和抗体药物缀合物(ADC)，包括其衍生物，以及使用其来治疗增殖性病症的方法。

Description

新型抗DPEP3抗体和使用方法
本申请是中国发明专利申请号201480073038.X(PCT国际申请号PCT/US2014/070110)的分案申请。
交叉引用的申请
本申请要求于2013年12月12日提交的美国临时申请号61/915,321的权益，所述美国临时申请以其整体通过引用并入本文。
序列表
本申请含有已经由EFS-Web以ASCII格式提交的序列表，并且在此以其整体通过引用并入。2014年12月11日创建的所述ASCII副本被命名为sc3401pct_S69697_1050WO_SEQL_121114.txt，并且大小为264,346字节。
发明领域
本申请总体涉及新型抗DPEP3抗体或其免疫反应性片段和包括抗体药物缀合物、包含其的组合物，其用于治疗、诊断或预防癌症和其任何复发或转移。本发明的所选实施方案提供此类抗DPEP3抗体或抗体药物缀合物用于治疗癌症的用途，其包括降低致瘤性细胞频率。
发明背景
干细胞和祖细胞的分化和增殖是正常的进行过程，其一致作用以支持器官形成、细胞修复和细胞替代期间的组织生长。紧密调节系统以确保基于生物的需要而仅产生适当的信号。细胞增殖和分化通常仅在对于替换损伤的或正在死亡的细胞或对于生长必要时发生。然而，这些过程的破坏可以通过许多因素触发，所述因素包括，各种信号传导化学物的不足或过多，改变的微环境的存在，遗传突变或其组合。正常细胞增殖和/或分化的破坏可以导致各种病症，包括增殖性疾病，诸如癌症。
用于癌症的常规治疗性治疗包括化疗、放疗和免疫治疗。通常这些治疗无效且外科手术切除不可提供可行的临床替代手段。现有护理标准的限制在患者经历第一线治疗且随后复发的那些情况下尤其明显。在此类情况下，难治性肿瘤频繁出现，其通常为侵袭性和不可治愈的。许多实体瘤的总体生存率经多年主要维持不变，这至少部分由于现有防止复发、肿瘤复发和转移的疗法的失败。因此，仍然非常需求针对增殖性病症开发更靶向和有效的疗法。本发明解决了该需求。
发明概述
在一个广泛的方面，本发明提供了特异性结合人DPEP3蛋白的分离的抗体。在某些实施方案中，DPEP3蛋白表达在肿瘤起始细胞上。在其它实施方案中，本发明的抗体结合DPEP3并与结合DPEP3上的表位的抗体竞争结合。
在本发明的特定方面，本发明的抗体结合DPEP3蛋白中的表位，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的E217、R242、Q248、Q372、K375和E379的三个或更多个残基。例如，这样的表位可包含：(1)R242,Q248,Q372；(2)R242,Q248,K375(3)R242,Q248,E379；(4)R242,Q372,K375；(5)R242,Q372,E379；(6)R242,K375,E379；(7)Q248,Q372,K375；(8)Q248,Q372,E379；(9)Q248,K375,E379；(10)Q372,K375,E379；(11)R242,Q248,Q372,K375；(12)R242,Q248,Q372,E379；(13)R242,Q248,K375,E379；(14)R242,Q372,K375,E379；(15)Q248,Q372,K375,E379；(16)R242,Q248,Q372,K375,E379；(17)E217,R242,Q248；(18)E217,R242,Q372；(19)E217,R242,K375；(20)E217,R242,E379；(21)E217,Q248,Q372；(22)E217,Q248,K375；(23)E217,Q248,E379；(24)E217,Q372,K375；(25)E217,K375,E379；(26)E217,Q372,E379；(27)E217,R242,Q248,Q372；(28)E217,R242,Q248,E379；(29)E217,Q248,Q372,K375；(30)E217,R242,Q372,K375；(31)E217,R242,Q248,K375；(32)E217,Q372,K375,E379；(33)E217,Q248,K375,E379,(34)E217,Q248,Q372,E379；(35)E217,R242,K375,E379；(36)E217,R242,Q372,E379；(37)E217,Q248,Q372,K375,E379；(38)E217,R242,Q372,K375,E379；(39)E217,R242,Q248,K375,E379；(40)E217,R242,Q248,Q372,E379；或(41)E217,R242,Q248,Q372,K375；或(42)E217,R242,Q248,Q372,K375E379。
在本发明的其它特定方面，本发明的抗体结合DPEP3蛋白中的表位，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的Q248、S380、S384和V386的三个或更多个残基。例如，这样的表位可包含(1)R46,R48,R54；(2)R46,R48,S55；(3)R46,R54,S55；(4)R48,R54,S55；或(5)R46,R48,R54,S55。
在本发明的其它特定方面，本发明的抗体结合DPEP3蛋白中的表位，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的Q248、S380、S384和V386的三个或更多个残基。例如，这样的表位可包含(1)S380,S384,V386；(2)S380,S384,Q248；(3)S380,V386,Q248；(4)S384,V386,Q248；或(5)S380,S384,V386,Q248。
在本发明的其它特定方面，所述抗体特异性结合DPEP3并且与包含下述区域的抗体竞争结合：SEQ ID NO：21的轻链可变区(VL)和SEQ ID NO：23的重链可变区(VH)；或SEQID NO：25的VL和SEQ ID NO：27的VH；或SEQ ID NO：29的VL和SEQ ID NO：31的VH；或SEQ IDNO：33的VL和SEQ ID NO：35的VH；或SEQ ID NO：37的VL和SEQ ID NO：39的VH；或SEQ ID NO：41的VL和SEQ ID NO：43的VH；或SEQ ID NO：45的VL和SEQ ID NO：47的VH；或SEQ ID NO：49的VL和SEQ ID NO：51的VH；或SEQ ID NO：53的VL和SEQ ID NO：55的VH；或SEQ ID NO：57的VL和SEQ ID NO：59的VH；或SEQ ID NO：61的VL和SEQ ID NO：63的VH；或SEQ ID NO：65的VL和SEQ ID NO：67的VH；或SEQ ID NO：69的VL和SEQ ID NO：71的VH；或SEQ ID NO：73的VL和SEQ ID NO：75的VH；或SEQ ID NO：77的VL和SEQ ID NO：79的VH；或SEQ ID NO：81的VL和SEQID NO：83的VH；或SEQ ID NO：85的VL和SEQ ID NO：87的VH；或SEQ ID NO：89的VL和SEQ IDNO：91的VH；或SEQ ID NO：93的VL和SEQ ID NO：95的VH；或SEQ ID NO：97的VL和SEQ ID NO：99的VH；或SEQ ID NO：101的VL和SEQ ID NO：103的VH；或SEQ ID NO：105的VL和SEQ ID NO：107的VH；或SEQ ID NO：109的VL和SEQ ID NO：111的VH；或SEQ ID NO：113的VL和SEQ IDNO：115的VH；或SEQ ID NO：117的VL和SEQ ID NO：119的VH；或SEQ ID NO：121的VL和SEQ IDNO：123的VH；或SEQ ID NO：125的VL和SEQ ID NO：127的VH；或SEQ ID NO：129的VL和SEQ IDNO：131的VH；或SEQ ID NO：133的VL和SEQ ID NO：135的VH；或SEQ ID NO：137的VL和SEQ IDNO：139的VH；或SEQ ID NO：141的VL和SEQ ID NO：143的VH；或SEQ ID NO：145的VL和SEQ IDNO：147的VH；或SEQ ID NO：149的VL和SEQ ID NO：151的VH；或SEQ ID NO：153的VL和SEQ IDNO：155的VH；或SEQ ID NO：157的VL和SEQ ID NO：159的VH；或SEQ ID NO：161的VL和SEQ IDNO：163的VH；或SEQ ID NO：165的VL和SEQ ID NO：167的VH；或SEQ ID NO：169的VL和SEQ IDNO：171的VH；或SEQ ID NO：173的VL和SEQ ID NO：175的VH；或SEQ ID NO：177的VL和SEQ IDNO：179的VH；或SEQ ID NO：181的VL和SEQ ID NO：183的VH；或SEQ ID NO：185的VL和SEQ IDNO：187的VH。在本发明的一些方面中，抗体是嵌合的、CDR移植的、人源化的或重组的抗体或其片段。在本发明的其它方面中，包含前述序列的抗体是内化抗体。
在优选的实施方案中，本发明提供了人源化抗体，其结合DPEP3并且与包含下述的抗体竞争结合：SEQ ID NO：189所示的三个可变轻链CDR(CDRL)；和SEQ ID NO：191所示的三个可变重链CDR(CDRH)；或SEQ ID NO：193所示的三个CDRL和SEQ ID NO：195所示的三个CDRH；或SEQ ID NO：197所示的三个CDRL和SEQ ID NO：199所示的三个CDRH；或SEQ ID NO：201所示的三个CDRL和SEQ ID NO：203所示的三个CDRH；或SEQ ID NO：205所示的三个CDRL和SEQ ID NO：207所示的三个CDRH；或SEQ ID NO：209所示的三个CDRL和SEQ ID NO：211所示的三个CDRH；或SEQ ID NO：213所示的三个CDRL和SEQ ID NO：215所示的三个CDRH。
在本发明的另一个方面，人源化抗体包含VH和VL，其中VL具有包含SEQ ID NO：232的CDRL1、SEQ ID NO：233的CDRL2和SEQ ID NO：234的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQID NO：238的CDRL1、SEQ ID NO：239的CDRL2和SEQ ID NO：240的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：244的CDRL1、SEQ ID NO：245的CDRL2和SEQ ID NO：246的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：250的CDRL1、SEQ ID NO：251的CDRL2和SEQ ID NO：252的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：256的CDRL1、SEQ ID NO：257的CDRL2和SEQ ID NO：258的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：262的CDRL1、SEQ ID NO：263的CDRL2和SEQID NO：264的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：268的CDRL1、SEQ ID NO：269的CDRL2和SEQ ID NO：270的CDRL3的3个CDRL。
在本发明的另一个方面，人源化抗体包含VH和VL，其中VH具有包含SEQ ID NO：235的CDRH1、SEQ ID NO：236的CDRH2和SEQ ID NO：237的CDRH3的3个CDR(CDRH)；或VH具有包含SEQ ID NO：241的CDRH1、SEQ ID NO：242的CDRH2和SEQ ID NO：243的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：247的CDRH1、SEQ ID NO：248的CDRH2和SEQ ID NO：249的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：253的CDRH1、SEQ ID NO：254的CDRH2和SEQ ID NO：255的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：259的CDRH1、SEQ ID NO：260的CDRH2和SEQ IDNO：261的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：265的CDRH1、SEQ ID NO：266的CDRH2和SEQ ID NO：267的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：271的CDRH1、SEQ ID NO：272的CDRH2和SEQ ID NO：273的CDRH3的3个CDRH。
在本发明的进一步的实施方案中，人源化抗体包含VL和VH，其中VL具有包含SEQID NO：232的CDRL1、SEQ ID NO：233的CDRL2和SEQ ID NO：234的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：235的CDRH1、SEQ ID NO：236的CDRH2和SEQ ID NO：237的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：238的CDRL1、SEQ ID NO：239的CDRL2和SEQ ID NO：240的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：241的CDRH1、SEQ ID NO：242的CDRH2和SEQ ID NO：243的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ IDNO：244的CDRL1、SEQ ID NO：245的CDRL2和SEQ ID NO：246的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：247的CDRH1、SEQ ID NO：248的CDRH2和SEQ ID NO：249的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：250的CDRL1、SEQ ID NO：251的CDRL2和SEQID NO：252的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：253的CDRH1、SEQ ID NO：254的CDRH2和SEQ ID NO：255的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ IDNO：256的CDRL1、SEQ ID NO：257的CDRL2和SEQ ID NO：258的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：259的CDRH1、SEQ ID NO：260的CDRH2和SEQ ID NO：261的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：262的CDRL1、SEQ ID NO：263的CDRL2和SEQID NO：264的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：265的CDRH1、SEQ ID NO：266的CDRH2和SEQ ID NO：267的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ IDNO：268的CDRL1、SEQ ID NO：269的CDRL2和SEQ ID NO：270的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：271的CDRH1、SEQ ID NO：272的CDRH2和SEQ ID NO：273的CDRH3的3个CDRH。
在另一个方面，本发明提供了结合DPEP3的人源化抗体，其包含SEQ ID NO：216所示的全长轻链和SEQ ID NO：217所示的全长重链；或SEQ ID NO：218所示的全长轻链和SEQID NO：219所示的全长重链；或SEQ ID NO：220所示的全长轻链和SEQ ID NO：221所示的全长重链；或SEQ ID NO：222所示的全长轻链和SEQ ID NO：223所示的全长重链；或SEQ IDNO：224所示的全长轻链和SEQ ID NO：225所示的全长重链；或SEQ ID NO：224所示的全长轻链和SEQ ID NO：226所示的全长重链；或SEQ ID NO：227所示的全长轻链和SEQ ID NO：228所示的全长重链；或SEQ ID NO：229所示的全长轻链和SEQ ID NO：230所示的全长重链。
本发明还提供了抗DPEP3抗体药物缀合物，其中本文公开的抗体缀合至有效载荷。
在一个实施方案中，本发明涉及编码本文公开的任一种抗DPEP3的重链或轻链氨基酸序列的核酸。在另一个实施方案中，本发明涉及包含这样的核酸的载体或表达这样的核酸的宿主细胞。
本发明的相容的抗DPEP3抗体药物缀合物(ADC)一般包含式Ab-[L-D]n，其中Ab包括结合DPEP3的抗体；L是任选的连接体；D是药物；并且n是约1至约20的整数。在特别优选的实施方案中，D包括吡咯并苯并二氮杂(PBD)。还提供了包含本文公开的抗DPEP3 ADC的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗癌症例如卵巢癌(例如，卵巢浆液性癌或卵巢乳头状浆液性癌)、肺癌、乳腺癌和子宫内膜癌的方法，其包括施用包含本文公开的抗DPEP3 ADC的药物组合物。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗癌症的方法，其包括施用本文公开的抗DPEP3 ADC且进一步包括给受试者施用至少一种另外的治疗部分。
本发明还提供了减少肿瘤细胞群体中的肿瘤起始细胞的方法，其中所述方法包括使包含肿瘤起始细胞和除了肿瘤起始细胞以外的肿瘤细胞的肿瘤细胞群体与抗DPEP3 ADC接触(例如体外地或体内地)；由此降低肿瘤起始细胞的频率。
本文进一步公开了将细胞毒素递送至细胞的方法，其包括将细胞与抗DPEP3 ADC接触。
附图简述
图1A和1B显示在使用SOLiD(图1A)或Illumina平台(图1B)分析的所选患者来源的异种移植(PDX)肿瘤中通过全转录组测序测定的DPEP3 mRNA表达水平；
图2A显示在卵巢PDX肿瘤亚型中通过qRT-PCR测定的DPEP3 mRNA表达；
图2B显示来自具有各种肿瘤类型的患者的整个肿瘤样本(黑色点)或正常组织(白色点)中如通过qRT-PCR Origene阵列测定的DPEP3 mRNA表达；
图3显示来源于Cancer Genome Atlas数据库的卵巢、肺和皮肤肿瘤和正常组织中DPEP3的mRNA表达；
图4是本发明的抗DPEP3抗体(包括同种型)的各种特征的表格表示，其显示针对DPEP3的亲和性以及与DPEP2和DPEP3的直向同源物的交叉反应性；
图5A-5D提供小鼠和人源化抗DPEP3抗体的氨基酸和核酸序列。图5A和5B显示示例性鼠和人源化抗DPEP3抗体的轻链(图5A)和重链(图5B)可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：21-215，奇数)。图5C显示示例性小鼠和人源化抗DPEP3抗体的轻链和重链可变区的核酸序列(SEQ ID NO：20-214，偶数)。图5D显示示例性人源化抗DPEP3抗体的轻链和重链的全长氨基酸序列(SEQ ID NO：216-230)。
图5E-5K显示鼠抗DPEP3抗体SC34.2(图5E)、SC34.11(图5F)、SC27.14(图5G)、SC34.25(图5H)、SC34.28(图I)、SC34.38(图5J)和SC34.87(图5K)的轻链和重链可变区的注释的氨基酸序列(根据Kabat等人编号)，其中使用Kabat、Chothia、ABM和Contact(MacCallum)方法推导CDR。
图6显示各种BR和OV PDX肿瘤亚群中的DPEP3蛋白表达；
图7A显示使用流式细胞术检测的许多抗DPEP3抗体结合过表达DPEP3的HEK-293T细胞的能力，其中结果显示为直方图，其中黑色实线指示相较于同种型对照，所示抗体与过表达DPEP3的细胞的结合(灰色填充)；
图7B-7D显示在卵巢肿瘤细胞群的三个亚型中，相较于使用同种型对照的染色(灰色填充)，如通过使用特异性抗DPEP3抗体的流式细胞术测定的肿瘤起始细胞(黑色实线)相较于非致瘤性细胞(虚线)的表面上DPEP3蛋白的表达；
图8A和8B显示如通过免疫组织化学(图8A)和原位杂交(图8B)测量的高分级浆液性卵巢癌的组织微阵列中的DPEP3表达；
图9显示多个抗DPEP3-皂草素抗体药物缀合物内化至过表达DPEP3的HEK-293T细胞中和通过介导皂草素细胞毒素的体外递送杀死细胞的能力；
图10A和10B显示位点特异性抗DPEP3抗体药物缀合物的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析(图10A)和分析性疏水相互作用色谱(图10B)；
图11显示多个抗DPEP3-PBD1抗体药物缀合物内化至过表达DPEP3的HEK-293T细胞中和通过介导PBD细胞毒素的体外递送杀死细胞的能力；
图12显示抗DPEP3-PBD1抗体药物缀合物在体内减小表达DPEP3的卵巢PDX肿瘤(OV27MET)相较于不表达DPEP3的卵巢肿瘤(OV87MET)的体积的能力。
发明详述
本发明可以多种不同形式实施。本文公开例举本发明的原理的其非限制性说明性实施方案。本文所使用的任何章节标题仅用于组织目的且不应解释为限制所述主题。为了本公开的目的，除非另有说明，否则所有鉴定序列登录号可见于NCBI参考序列(RefSeq)数据库和/或NCBI 存档序列数据库。
已经令人惊讶地发现DPEP3是许多肿瘤类型的生物标志物，且可以利用该关联用于治疗此类肿瘤。也已经出乎意料地发现，DPEP3与致瘤性细胞相关，并且可以有效地用来抑制或消除它们。已知下面将更详细描述的致瘤性细胞表现出对许多常规治疗的耐受性。与现有技术的教导相反，公开的化合物、组合物和方法有效地克服该固有的耐受性。
本发明提供抗DPEP3抗体(包括抗体药物缀合物)及其在预后、诊断、治疗诊断、治疗和/或预防多种DPEP3相关癌症而不管任何特定作用机制或特异性靶向的细胞或分子组分的用途。
I DPEP3生理学
二肽酶3(DPEP3；也称为MBD3)是来自二肽酶蛋白的DPEP家族的糖基磷脂酰肌醇锚定的膜蛋白，其参与各种二肽和一些含酰胺样键联的抗生素(例如，β-内酰胺和青霉烯)的水解代谢。小鼠DPEP3已被显示切割胱氨酰-双-甘氨酸(谷胱甘肽切割产物)(Habib等人,PMID:12738806)。代表性DPEP3蛋白直向同源物包括但不限于：人(UniProtKB Q9H4B8.2[SEQ ID NO:4],NP_071752.3[SEQ ID NO:5])、黑猩猩(NP_001266956)、食蟹猴(NP_00180985)、大鼠(NP_001008384,[SEQ ID NO:10])、和小鼠(NP_082236,[SEQ ID NO:8])。
在人中，DPEP3基因由16号染色体上跨越约2kBp的10个外显子组成，其与相关基因DPEP2处于头接尾簇中，该DPEP2在蛋白质水平上享有约75％的同一性。在DPEP3基因座的转录产生两个已知的RNA转录物，编码513个氨基酸前蛋白(NP_071752.3)的1.76kBp的较长成熟转录物(NM_022357)和编码512个氨基酸前蛋白(NP_001 123230)的1.75kBp的可变剪接较短成熟转录物(NM_00129758)。除了两个较长的转录物外，还提供了具有较短前导序列并含有488个氨基酸的DPEP3前蛋白替代形式(UniProtKB Q9H4B8.2,SEQ ID NO:4)。对于较长的512和513个氨基酸的同工型，所提出的前导序列包含约60个氨基酸残基，而对于较短的488个氨基酸的DPEP3分子，前导序列包含35个氨基酸。在每种情况下，前蛋白的分泌信号肽(60或35个氨基酸)被去除以提供453个氨基酸的成熟蛋白(UniProtKB Q9H4B8.2,SEQ IDNO:3)，其随后被进一步加工以去除最后25个氨基酸和通过GPI锚定物将成熟蛋白质连接至细胞膜。成熟DPEP3的其余胞外域包含428个氨基酸(SEQ ID NO：3的A1至S428)。除非另有指明，否则DPEP3抗原的所有残基编号(例如，对于表位组成)将基于SEQ ID NO：3。
DPEP3蛋白是肽酶M19家族(其全都需要用于酶功能的锌辅因子)的成员。至少在小鼠睾丸生殖细胞中，催化复合物被形成为二硫化物连接的同二聚体(Yoshitake等人,2011:PMID:21724266)。除了如本文所示的，关于人DPEP3蛋白的功能和表达存在有限的信息。小鼠DPEP3蛋白表达已被报道局限于睾丸，并且已被显示切割胱氨酰-双-甘氨酸(谷胱甘肽切割产物)(Habib等人,PMID:12738806)。目前不存在发明人已知的关于DPEP3和癌症之间的功能联系或关联的已出版的报道。
II癌症干细胞
根据当前模型，肿瘤包含非致瘤性细胞和致瘤性细胞。非致瘤性细胞不具有自我更新的能力，并且不能可再现地形成肿瘤，甚至当以过量细胞数移植至免疫功能低下的小鼠中时。占肿瘤的细胞群体的0.1-40％(更通常地0.1-10％)的致瘤性细胞，在本文中也称为“肿瘤起始细胞”(TICs)，具有形成肿瘤的能力。致瘤性细胞涵盖可互换地称为癌症干细胞(CSCs)的肿瘤永存细胞(TPC)和肿瘤祖细胞(TProg)两者。
CSC，如支持在正常组织中的细胞层次的正常干细胞，能够无限自我复制，同时维持多谱系分化的能力。CSC能够生成致瘤性后代和非致瘤性后代两者，并且能够完全概括亲本肿瘤的异质细胞组成，如通过将少量分离的CSC连续分离和移植入免疫功能低下小鼠中所表明。
TProg，如CSC，具有刺激原代移植中的肿瘤生长的能力。然而，不同于CSC，它们不能概括亲代肿瘤的细胞异质性，并且在随后的移植物中重新起始肿瘤发生的效率较低，因为TProg通常仅能够有限数目的细胞分裂，如通过将少量高度纯化的TProg连续移植入免疫功能低下小鼠所表明。TProg可以进一步被分为早期TProg和晚期TProg，其可以通过表型(例如，细胞表面标志物)和它们不同的概括肿瘤细胞架构的能力进行区分。尽管都不能与CSC概括肿瘤至相同的程度，早期TProg比晚期TProg具有概括亲代肿瘤的特征的更大能力。尽管存在上述区别，已经显示，一些TProg群体，在稀有情况下，可以获得通常归因于CSC的自我更新能力，并且可以自身变为CSC。
CSC表现出比以下更高的致瘤性且相对更静息：(i)TProg(早期和晚期TProg两者)；和(ii)非致瘤性细胞，诸如肿瘤浸润的细胞，例如，成纤维细胞/基质、内皮细胞和造血细胞，其可以衍生自CSC，且通常构成肿瘤块。鉴于常规疗法和方案，在很大程度上，已经被设计为减瘤且攻击快速增殖细胞，CSC比更快速增殖TProg和其它大量肿瘤细胞群体诸如非致瘤性细胞对常规疗法和方案更耐受。可以使得CSC对常规疗法相对更化学耐受的其它特征是多药耐药转运蛋白的增加的表达、增强的DNA修复机制和抗凋亡基因表达。CSC中的这些特性构成确保具有晚期肿瘤的大部分患者的长期利益的标准肿瘤学治疗方案的失败的关键原因，因为标准化疗不靶向实际刺激继续肿瘤生长和复发的CSC。
已经令人惊讶地发现，DPEP3表达与各种致瘤性细胞群相关。本发明提供抗DPEP3抗体，其可特别用于靶向致瘤性细胞，并且可以用于沉默、敏化、中和、降低频率、阻断、废除、干扰、降低、阻碍、制止、控制、消耗、减轻、介导、减少、重编、消除或以其它方式抑制(统称为“抑制”)致瘤性细胞，由此促进增殖性疾病(例如癌症)的治疗、控制和/或预防。有利地，可以选择本发明的新型抗DPEP3抗体，使得它们优选在施用于受试者后降低致瘤性细胞的频率或致瘤性，而无论DPEP3决定簇的形式(例如，表型或基因型的)。致瘤性细胞频率的降低可以作为以下的结果而发生：(i)致瘤性细胞的抑制或消除；(ii)控制致瘤性细胞的生长、扩增或复发；(iii)中断致瘤性细胞的起始、繁殖、维持或增殖；或(iv)通过以其它方式阻碍致瘤性细胞的生存、再生和/或转移。在一些实施方案中，致瘤性细胞的抑制可以作为一种或多种生理通路变化的结果而发生。通路中的变化，无论通过抑制致瘤性细胞、改变它们的潜能(例如，通过诱导分化或生态位破坏(niche disruption))或以其它方式干扰致瘤性细胞影响肿瘤环境或其它细胞的能力，允许通过抑制肿瘤发生、肿瘤维持和/或转移和复发而更有效地治疗DPEP3相关病症。
可用于评价致瘤性细胞的频率的降低的方法包括但不限于细胞计数或免疫组织化学分析，优选通过体外或体内有限稀释分析(Dylla等人2008，PMID:PMC2413402和Hoey等人，2009，PMID：19664991)。
体外有限稀释分析可以通过在促进集落形成的固体培养基上培养分级或未分级的肿瘤细胞(例如，分别来自处理和未处理的肿瘤)和计数和表征生长的集落来进行。或者，可以将肿瘤细胞连续稀释至具有含有液体培养基的孔的板上，且可以在接种之后的任何时间、但优选在接种之后多于10天将各孔评分为集落形成阳性或阴性的。
体内有限稀释通过将来自未处理的对照或来自暴露于所选治疗剂的肿瘤的肿瘤细胞以连续稀释移植至免疫功能低下的小鼠中并随后将小鼠评分为肿瘤形成阳性或阴性来进行。所述评分可以在植入的肿瘤可检测之后任何时间、但优选在移植之后60天或更多天进行。有限稀释实验测定致瘤性细胞的频率的结果的分析优选使用泊松分布统计学或评价预定义的确定性事件(诸如是否在体内生成肿瘤的能力)的频率来进行(Fazekas等人,1982,PMID:7040548)。
流式细胞术和免疫组织化学也可以用于测定致瘤性细胞频率。两种技术均采用结合本领域公认的已知富集致瘤性细胞的细胞表面蛋白或标志物的一种或多种抗体或试剂(参见WO 2012/031280)。如本领域中已知，流式细胞术(例如，荧光激活的细胞分选(FACS))也可用于表征、分离、纯化、富集或分选各种细胞群体，包括致瘤性细胞。流式细胞术通过将其中悬浮细胞的混合群体的流体流传递通过电子检测装置来测量致瘤性细胞水平，所述电子检测装置能够测量高达每秒数千颗粒的物理和/或化学特征。免疫组织化学提供额外信息，因为其能够通过用结合致瘤性细胞标志物的标记的抗体或试剂染色组织样品而原位(例如，在组织切片中)显现致瘤性细胞。
本发明的抗体可用于通过方法诸如，例如，流式细胞术、磁性激活的细胞分选(MACS)、激光介导的切片或FACS鉴定、表征、监测、分离、切片或富集致瘤性细胞的群体或亚群。FACS是用于基于特定细胞表面标志物以高于99.5％纯度分离细胞亚群的可靠方法。用于表征和操作致瘤性细胞(包括CSC)的其它相容技术可以见于，例如，U.S.P.N.12/686,359、12/669,136和12/757,649。
下面列出已经与CSC群体相关，并已用于分离或表征CSC：ABCA1、ABCA3、ABCG2、ADAM9、ADCY9、ADORA2A、AFP、AXIN1、B7H3、BCL9、Bmi-1、BMP-4、C20orf52、C4.4A、羧肽酶M、CAV1、CAV2、CD105、CD133、CD14、CD16、CD166、CD16a、CD16b、CD2、CD20、CD24、CD29、CD3、CD31、CD324、CD325、CD34、CD38、CD44、CD45、CD46、CD49b、CD49f、CD56、CD64、CD74、CD9、CD90、CEACAM6、CELSR1、CPD、CRIM1、CX3CL1、CXCR4、DAF、核心蛋白聚糖、easyh1、easyh2、EDG3、eed、EGFR、ENPP1、EPCAM、EPHA1、EPHA2、FLJ10052、FLVCR、FZD1、FZD10、FZD2、FZD3、FZD4、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、GD2、GJA1、GLI1、GLI2、GPNMB、GPR54、GPRC5B、IL1R1、IL1RAP、JAM3、Lgr5、Lgr6、LRP3、LY6E、MCP、mf2、mllt3、MPZL1、MUC1、MUC16、MYC、N33、Nanog、NB84、巢蛋白、NID2、NMA、NPC1、制癌蛋白M、OCT4、OPN3、PCDH7、PCDHA10、PCDHB2、PPAP2C、PTPN3、PTS、RARRES1、SEMA4B、SLC19A2、SLC1A1、SLC39A1、SLC4A11、SLC6A14、SLC7A8、smarcA3、smarcD3、smarcE1、smarcA5、Sox1、STAT3、STEAP、TCF4、TEM8、TGFBR3、TMEPAI、TMPRSS4、转铁蛋白受体、TrkA、WNT10B、WNT16、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT5A、YY1和β-联蛋白。参见，例如，Schulenburg等人,2010,PMID:20185329,U.S.P.N.7,632,678和U.S.P.N.2007/0292414、2008/0175870、2010/0275280、2010/0162416和2011/0020221。
类似地，与某些肿瘤类型的CSC相关的细胞表面表型的非限制性实例包括CD44高CD24低、ALDH+、CD133+、CD123+、CD34+CD38-、CD44+CD24-、CD46高CD324+CD66c-、CD133+CD34+CD10-CD19-、CD138-CD34-CD19+、CD133+RC2+、CD44+α2β1 高CD133+、CD44+CD24+ESA+、CD271+、ABCB5+以及本领域中已知的其它CSC表面表型。参见例如，Schulenburg等人,2010,同上,Visvader等人,2008,PMID:18784658和U.S.P.N.2008/0138313。关于本发明的特别感兴趣的是包含CD46高CD324+表型的CSC制备物。
“阳性”、“低”和“阴性”表达水平当它们适用于标志物或标志物表型时如下定义。具有阴性表达(即“-”)的细胞在本文中定义为表达小于或等于在荧光发射的额外通道中在染色针对其它目的蛋白的鸡尾酒混合物标记的完全抗体存在的情况下在荧光通道中用同种型对照抗体观察到的表达的95百分位数的那些细胞。本领域技术人员将理解，用于定义阴性事件的该程序被称为“荧光减一”或“FMO”染色。表达大于使用上述FMO染色程序用同种型对照抗体观察到的表达的95百分位数的细胞在本文中被定义为“阳性”(即”+”)。如本文所定义，存在广泛定义为“阳性”的各种细胞群体。如果抗原的平均观察表达高于使用如上所述用同种型对照抗体的FMO染色测定的95百分位数，则细胞被定义为阳性的。如果平均观察表达高于通过FMO染色测定的95百分位数并且在95百分位数的一个标准偏差内，则阳性细胞可被称为具有低表达(即“低”)的细胞。或者，如果平均观察表达高于通过FMO染色测定的95百分位数并且高于95百分位数的大于一个标准偏差，则阳性细胞可被称为具有高表达(即“高”)的细胞。在其它实施方案中，99百分位数可优选用作阴性和阳性FMO染色之间的分界点，并且在特别优选的实施方案中，百分位数可以大于99％。
CD46高CD324+标志物表型和刚刚上面例举的那些可以与标准流式细胞术分析和细胞分选技术结合使用，以表征、分离、纯化或富集TIC和/或TPC细胞或细胞群体用于进一步分析。
本发明的抗体降低致瘤性细胞的频率的能力因此可以使用上述技术和标志物来确定。在一些情况下，抗DPEP3抗体可使致瘤性细胞的频率降低10％、15％、20％、25％、30％或甚至35％。在其它实施方案中，致瘤性细胞的频率可降低约40％、45％、50％、55％、60％或65％。在某些实施方案中，公开的化合物可使致瘤性细胞的频率降低70％、75％、80％、85％、90％或甚至95％。应当理解，致瘤性细胞的频率的任何降低可能导致赘瘤形成的致瘤性、持续性、复发和侵袭性的相应降低。
III抗体
A.抗体结构
抗体及其变体和衍生物(包括公认的命名法和编号系统)已广泛描述于例如Abbas等人(2010),Cellular and Molecular Immunology(第6版),W.B.Saunders Company；或Murphey等人(2011),Janeway’s Immunobiology(第8版),Garland Science。
如本文所使用，“抗体”或“完整抗体”通常是指Y形四聚蛋白，其包含两个重(H)多肽链和两个轻(L)多肽链，所述多肽链通过共价二硫键和非共价相互作用结合在一起。各轻链由一个可变结构域(VL)和一个恒定结构域(CL)构成。各重链包含一个可变结构域(VH)和一个恒定区，该恒定区在IgG、IgA和IgD情况下包含三个名为CH1、CH2和CH3的结构域(IgM和IgE具有第四个结构域CH4)。在IgG、IgA和IgD抗体类别中，CH1和CH2结构域是由柔性铰链区分离，该柔性铰链区为具有可变长度(在各种IgG亚类中为约10个至约60个氨基酸)的富含脯氨酸和半胱氨酸的区段。轻链和重链两者中的可变结构域通过约12个或更多个氨基酸的“J”区域与恒定结构域接合，且重链也具有约10个额外氨基酸的“D”区域。各类别的抗体进一步包含由配对半胱氨酸残基形成的链间和链内二硫键。
如本文所使用，术语“抗体”包括多无性繁殖系抗体(polyclonal antibody)、多克隆抗体(multiclonal antibody)、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化和灵长类动物化(primatized)抗体、CDR移植抗体、人抗体、重组产生的抗体、细胞内抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、单价抗体、多价抗体、抗个体基因型抗体、合成抗体(包括其突变蛋白和变体)、免疫特异性抗体片段(诸如Fd、Fab、F(ab')2、F(ab')片段)、单链片段(例如ScFv和ScFvFc)；及其衍生物，包括Fc融合体和其它修饰，和任何其它免疫应答性分子，只要其呈现与决定簇的优先缔合或结合。此外，除非由上下文约束条件说明，否则该术语进一步包含所有类别的抗体(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和所有亚类(即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。对应于不同类别抗体的重链恒定结构域通常分别由相应小写希腊字母α、δ、ε、γ和μ表示。来自任何脊椎动物物种的抗体的轻链可基于其恒定结构域的氨基酸序列而指定为两种明确相异类型(称为κ和λ)之一。
抗体的可变结构域显示一种抗体与另一种抗体的氨基酸组成的显著变化且主要负责抗原识别和结合。各轻链/重链配对的可变区形成抗体结合位点，使得完整IgG抗体具有两个结合位点(即其为二价的)。VH和VL结构域包含三个具有极端可变性的区域，其称为高变区，或更通常称为互补决定区(CDR)，其由四个可变性较低的区域(称为构架区(FR))构架和分离。VH和VL区域之间的非共价缔合形成Fv片段(对于“可变片段”)，其含有抗体的两个抗原结合位点之一。ScFv片段(对于单链可变片段)，其可通过遗传改造获得，在单一多肽链(由肽连接体分离的抗体的VH区和VL区)中缔合。
如本文所使用，除非另有说明，否则将氨基酸指定至各结构域、构架区和CDR可根据由以下文献提供的编号方案之一来进行：Kabat等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest(第5版),US Dept.of Health and Human Services,PHS,NIH,NIH Publication no.91-3242；Chothia等人,1987,PMID:3681981；Chothia等人,1989,PMID:2687698；MacCallum等人,1996,PMID:8876650；或Dubel,编(2007)Handbook ofTherapeutic Antibodies,第3版,Wily-VCH Verlag GmbH and Co或AbM(OxfordMolecular/MSI Pharmacopia)。包含如由Kabat、Chothia、MacCallum(也称为Contact)和AbM定义的CDR的氨基酸残基(如获得自Abysis网站数据库(参见下文))描述于下文中。
表1
抗体序列中的可变区和CDR可根据在本领域中已开发的一般规则(如上文描述，诸如，例如Kabat编号系统)或通过将序列针对已知可变区的数据库比对来鉴定。用于鉴定这些区域的方法描述于Kontermann和Dubel,编,Antibody Engineering,Springer,NewYork,NY,2001和Dinarello等人,Current Protocols in Immunology,John Wiley andSons Inc.,Hoboken,NJ,2000。抗体序列的示例性数据库描述于“Abysis”网站,www.bioinf.org.uk/abs(由A.C.Martin in the Department of Biochemistry&Molecular Biology University College London,London,England维护)和VBASE2网站,www.vbase2.org(如描述于Retter等人,Nucl.Acids Res.,33(Database issue):D671-D674(2005))中且可通过前述网站获得。优选地，序列使用Abysis数据库分析，所述Abysis数据库整合来自Kabat、IMGT和Protein Data Bank(PDB)的序列数据与来自PDB的结构数据。参见Dr.Andrew C.R.Martin的书本章节Protein Sequence and Structure Analysisof Antibody Variable Domains.:Antibody Engineering Lab Manual(编辑:Duebel,S.和Kontermann,R.,Springer-Verlag,Heidelberg,ISBN-13:978-3540413547，也可得自网站bioinforg.uk/abs)。Abysis数据库网站进一步包括已开发用于鉴定可根据本文中的教导使用的CDR的一般规则。本文所附的图5E至5K显示在几种示例性重链和轻链可变区的注释中的这样的分析的结果。除非另有说明，否则本文中描述的所有CDR都根据Abysis数据库网站按照Kabat等人衍生。
对于本发明中讨论的重链恒定区氨基酸位置，编号根据首先描述于Edelman等人,1969,Proc,Natl.Acad.Sci.USA 63(1):78-85中的Eu索引进行，其描述据报道为第一个测序的人IgG1的骨髓瘤蛋白Eu的氨基酸序列。Edelman的EU索引也描述于Kabat等人,1991(参见上文)中。因此，重链的上下文中的术语“如Kabat中描述的EU索引”或“Kabat的EU索引”或“EU索引”是指基于如Kabat等人,1991(参见上文)中描述的Edelman等人的人IgG1Eu抗体的残基编号系统。用于轻链恒定区氨基酸序列的编号系统类似地描述于Kabat等人(同上)中。
与本发明相容的示例性κ轻链恒定区氨基酸序列描述于紧随下方：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:1)。
类似地，与本发明相容的示例性IgG1重链恒定区氨基酸序列描述于紧随下方：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:2)。
可使用标准分子生物学技术，将公开的恒定区序列或其变型或衍生物与公开的重链和轻链可变区可操作缔合以提供可以原样使用或并入本发明的抗DPEP3 ADC的全长抗体。
更通常，本发明的抗体或免疫球蛋白可以由特异性识别相关决定簇或与相关决定簇缔合的任何抗体生成。如本文所使用，“决定簇”或“目标”意指任何可检测的特性、性质、标志物或因子，其可与特定细胞、细胞群体或组织可鉴定地关联或特定地在特定细胞、细胞群体或组织之中或之上被发现。决定簇或目标在性质上可为形态的、功能的或生物化学的，且优选为表型的。在某些优选实施方案中，决定簇为由特定细胞类型或在某些条件下(例如在特定生态位(niche)中的细胞周期或细胞的特定时间点期间)由细胞差异表达(过表达或表达不足)的蛋白。为了本发明的目的，决定簇优选差异表达于异常癌细胞上且可包含DPEP3蛋白或其剪接变体、同工型、同源物或家族成员中的任一种，或其特定结构域、区域或表位。“抗原”、“免疫原性决定簇”、“抗原决定簇”或“免疫原”意指当引入免疫活性动物时可刺激免疫应答且由免疫应答产生的抗体识别的任何蛋白或其任何片段、区域或结构域。本文中考虑的DPEP3决定簇的存在或不存在可用于鉴定细胞、细胞亚群或组织(例如肿瘤、致瘤性细胞或CSC)。
在免疫球蛋白分子中存在两种类型的二硫桥或键：链间和链内二硫键。如本领域中众所周知，链间二硫键的位置和数目根据免疫球蛋白类别和种类而不同。尽管本发明不限于抗体的任何特定类别或亚类，为了说明的目的，应当在本公开中使用IgG1免疫球蛋白。在野生型IgG1分子中，存在十二个链内二硫键(每条重链上四个和每条轻链上两个)和四个链间二硫键。链内二硫键通常有点受保护，且比链间键对还原相对较不敏感。相反，链间二硫键位于免疫球蛋白的表面上，可接近于溶剂，且通常相对容易还原。两个链间二硫键存在于重链之间，且一个从每条重链至其各自的轻链。已经表明，链间二硫键对于链缔合不是必要的。IgG1铰链区在重链中含有形成链间二硫键的半胱氨酸，其提供结构支持连同促进Fab运动的柔性。重/重IgG1链间二硫键位于残基C226和C229(EU编号)，而IgG1的轻链和重链(重/轻)之间的IgG1链间二硫键形成于κ或λ轻链的C214和重链的上铰链区中的C220之间形成。
B.抗体生成和产生
本发明的抗体可以使用本领域中已知的各种方法来产生。
1.在宿主动物中生成多无性繁殖系抗体
在各种宿主动物中产生多无性繁殖系抗体在本领域中是众所周知的(参见例如Harlow和Lane(编)(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,CSH Press；和Harlow等人(1989)Antibodies,NY,Cold Spring Harbor Press)。为了生成多无性繁殖系抗体，用抗原性蛋白或包含抗原性蛋白的细胞或制备物免疫免疫活性的动物(例如，小鼠、大鼠、兔、山羊、非人灵长类动物等)。在一段时间之后，通过使动物出血或处死动物而获得含有多无性繁殖系抗体的血清。血清可以获得自动物的形式使用，或者所述抗体可被部分或完全纯化以提供免疫球蛋白级分或分离的抗体制备物。
任何形式的抗原或含有抗原的细胞或制备物可用于生成对于决定簇特异性的抗体。术语“抗原”在广义上使用，并且可以包含所选目标的任何免疫原性片段或决定簇，包括单一表位，多个表位，单个或多个结构域或整个细胞外结构域(ECD)。所述抗原可以是分离的全长蛋白，细胞表面蛋白(例如，用在其表面上表达抗原的至少一部分的细胞免疫)或可溶性蛋白(例如，用仅具有蛋白的ECD部分免疫)。所述抗原可以在遗传修饰的细胞中产生。任何上述抗原可以单独使用或与本领域中已知的一种或多种免疫原性增强佐剂组合使用。编码抗原的DNA可以是基因组的或非基因组的(例如，cDNA)，并且可以编码足以引发免疫原性应答的ECD的至少一部分。任何载体都可以用于转化其中表达所述抗原的细胞，包括但不限于腺病毒载体，慢病毒载体，质粒和非病毒载体，诸如阳离子脂质。
2.单克隆抗体
在所选实施方案中，本发明涵盖单克隆抗体的用途。术语“单克隆抗体”或mAb是指获得自基本上均质抗体的群体的抗体，即组成该群体的个别抗体除了可少量存在的可能突变(例如天然存在的突变)以外是相同的。
单克隆抗体可使用多种技术制备，所述技术包括杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、转基因动物(例如)或其一些组合。例如，在优选实施方案中，单克隆抗体可使用杂交瘤和生物化学和遗传改造技术产生，所述技术诸如更详细地描述于：An,Zhigiang(编)Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic,John Wileyand Sons,第1版2009；Shire等人(编)Current Trends in Monoclonal AntibodyDevelopment and Manufacturing,Springer Science+Business Media LLC,第1版2010；Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版1988；Hammerling,等人,:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier,N.Y.,1981)。生成许多特异性结合至决定簇的单克隆抗体之后，具体地，合适的抗体可以通过各种筛选过程基于例如对于决定簇的亲和力或内化的速率进行选择。在特别优选的实施方案中，如本文所述产生的单克隆抗体可以用作“源”抗体，且进一步修饰，例如，以改善对于目标的亲和力，改善其在细胞培养物中的产生，降低体内免疫原性，生成多特异性构建体，等。单克隆抗体产生和筛选的更详细说明描述于下面和所附实施例中。
3.人抗体
所述抗体可包含完全人抗体。术语“人抗体”是指具有对应于由人产生和/或已经使用任一种用于产生本文所述的人抗体的技术制备的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体(优选单克隆抗体)。
在一个实施方案中，可通过筛选使用噬菌体展示制备的重组组合抗体文库来分离重组人抗体。在一个实施方案中，所述文库是scFv噬菌体或酵母展示文库，其使用人VL和VHcDNA产生，所述人VL和VH cDNA由分离自B细胞的mRNA制备。
人抗体也可通过将人免疫球蛋白基因座引入转基因动物(例如，其中内源免疫球蛋白基因已部分或完全失活且已引入人免疫球蛋白基因的小鼠)中来制备。在攻击后，观察到抗体生成，其在所有方面均密切地类似于人中所见，包括基因重排、组装和完全人抗体库。该方法描述于例如关于技术的U.S.P.N.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016，和U.S.P.N.6,075,181和6,150,584；以及Lonberg和Huszar,1995,PMID:7494109)。或者，人抗体可经由使产生针对目标抗原的抗体的人B淋巴细胞(这样的B淋巴细胞可从患有肿瘤性病症的个体回收或可在体外进行免疫)永生化来制备。参见例如Cole等人,Monoclonal Antibodies和Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,1991,PMID:2051030；和U.S.P.N.5,750,373。与其它单克隆抗体一样，这样的人抗体可用作源抗体。
4.衍生的抗体
一旦已经如上所述生成、选择和分离源抗体，它们可以进一步改变，以提供具有改善的药物特征的抗DPEP3抗体。优选地，所述源抗体使用已知的分子改造技术修饰或改变，以提供具有期望的治疗特性的衍生的抗体。
4.1嵌合和人源化的抗体
本发明的所选实施方案包含免疫特异性结合至DPEP3的鼠单克隆抗体，且为了本公开的目的，可视为“源”抗体。在所选实施方案中，与本发明相容的抗体可通过源抗体的恒定区和/或抗原结合氨基酸序列的任选的修饰而从这样的源抗体获得。在某些实施方案中，如果源抗体中的所选氨基酸通过缺失、突变、取代、整合或组合而改变，则抗体“衍生”自源抗体。在另一个实施方案中，衍生的抗体是其中源抗体的片段(例如一个或多个CDR或整个重链和轻链可变区)与受体抗体序列组合或并入受体抗体序列中以提供衍生物抗体(例如嵌合或人源化抗体)的抗体。可以使用如下所述的标准分子生物学技术生成这些衍生的抗体，诸如例如，以改善对决定簇的亲和力；改善抗体稳定性；改善细胞培养物中的产量和产率；降低体内免疫原性；降低毒性；促进活性部分的缀合；或产生多特异性抗体。这样的抗体也可通过化学方式或翻译后修饰通过成熟分子(例如糖基化模式或聚乙二醇化)的修饰而衍生自源抗体。
在一个实施方案中，本发明的嵌合抗体包含已经共价接合的衍生自来自至少两种不同物种或类别的抗体的蛋白区段的嵌合抗体。术语“嵌合的”抗体涉及构建体，其中重链和/或轻链的部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的剩余部分与来自另一物种或属于另一种抗体类别或亚类的抗体中的相应序列以及这样的抗体的片段相同或同源(U.S.P.N.4,816,567；Morrison等人,1984,PMID:6436822)。在一些优选实施方案中，本发明的嵌合抗体可以包含可操作连接至人轻链和重链恒定区的所选鼠重和轻链可变区中的所有或大部分。在其它特别优选的实施方案中，抗DPEP3抗体可以“衍生自”本文公开的小鼠抗体。
在其它实施方案中，本发明的嵌合抗体是“CDR移植的”抗体，其中所述CDR(如使用Kabat、Chothia、McCallum等定义)衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的CDR，而抗体的剩余部分衍生自来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体。对于在人中使用，可将一种或多种所选啮齿动物CDR(例如小鼠CDR)移植至人受体抗体中，取代人抗体中一个或多个天然存在的CDR。这些构建体通常具有提供完全强度人抗体功能(例如补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))同时降低受试者对抗体的不想要的免疫应答的优点。在特别优选的实施方案中，CDR移植的抗体将包含并入人构架序列的获得自小鼠的一个或多个CDR。
CDR移植的抗体与“人源化”抗体类似。如本文所使用，“人源化”抗体是包含衍生自一种或多种非人抗体(供体或源抗体)的一种或多种氨基酸序列(例如CDR序列)的人抗体(受体抗体)。在某些实施方案中，“回复突变”可以引入人源化抗体，其中受体人抗体的可变区的一个或多个FR中的残基被替代为来自非人物种供体抗体的相应残基。这样的回复突变可以帮助维持移植CDR的适当三维构型且由此改善亲和力和抗体稳定性。可以使用来自不同供体物种的抗体，所述供体物种包括但不限于，小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。此外，人源化抗体可包含未在受体抗体或供体抗体中发现的新残基以例如进一步改进抗体表现。如下面实施例8中所述提供与本发明相容的CDR移植和人源化的抗体。
各种本领域公认的技术可用于确定何种人序列用作受体抗体以提供根据本发明的人源化构建体。相容的人种系序列和确定它们作为受体序列的方法的汇编公开于例如Tomlinson,I.A.等人(1992)J.Mol.Biol.227:776-798；Cook,G.P.等人(1995)Immunol.Today 16:237-242；Chothia,D.等人(1992)J.Mol.Biol.227:799-817；和Tomlinson等人(1995)EMBO J 14:4628-4638，其各自以其整体并入本文。The V-BASE目录(VBASE2–Retter等人,Nucleic Acid Res.33；671-674,2005)，其提供人免疫球蛋白可变区序列的综合性目录(由Tomlinson,I.A.等人编译MRC Centre for Protein Engineering,Cambridge,UK)，也可用于鉴定相容的受体序列。此外，描述于例如U.S.P.N.6,300,064中的共有人构架序列也可证明是可以根据本发明教导使用的相容的受体序列。通常，基于与鼠源构架序列的同源性连同源和受体抗体的CDR规范结构的分析选择人构架受体序列。衍生抗体的重和轻链可变区的衍生序列然后可以使用本领域公认的技术合成。
通过实例的方式，CDR移植和人源化的抗体和相关方法描述于U.S.P.N.6,180,370和5,693,762。对于进一步细节，参见例如Jones等人,1986,PMID:3713831)；和U.S.P.N.6,982,321和7,087,409。
CDR移植或人源化的抗体可变区与人受体可变区的序列同一性或同源性可如本文所讨论来确定，且当以此方式测量时，将优选共享至少60％或65％序列同一性，更优选至少70％、75％、80％、85％或90％序列同一性，甚至更优选至少93％、95％、98％或99％序列同一性。优选地，不相同的残基位置的不同在于保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被取代为具有具有类似化学特性(例如电荷或疏水性)侧链(R基团)的另一氨基酸残基的取代。通常，保守氨基酸取代将实质上不改变蛋白的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列与彼此的不同在于保守取代的情况下，百分比序列同一性或相似性程度可上调以校正取代的保守性质。
应当理解，如附图5A和5B中提供的注释的CDR和构架序列根据Kabat等人使用专有Abysis数据库定义。然而，如本文中所讨论和图5E-5K中所显示的，本领域技术人员可以根据Chothia等人、ABM或MacCallum等人以及Kabat等人提供的定义容易地鉴定CDR。如此，包含根据任何前述系统衍生的一个或多个CDR的抗DPEP3人源化抗体明确地包含在本发明的范围内。
4.2位点特异性抗体
可以将本发明的抗体改造以促进与细胞毒素或其它抗癌剂的缀合(如下面更详细讨论)。在抗体上的细胞毒素的位置和药物抗体比(DAR)方面，抗体药物缀合物(ADC)制备物包含ADC分子的均质群体是有利的。基于本公开内容，本领域技术人员可容易地制造如本文所述的位点特异性的改造的构建体。如本文所使用，“位点特异性抗体”或“位点特异性构建体”意指抗体或其免疫反应性片段，其中将重链或轻链中的至少一个氨基酸缺失、改变或取代(优选用另一种氨基酸)，以提供至少一个游离半胱氨酸。类似地，“位点特异性缀合物”应保持为意指包含位点特异性抗体和缀合至一个或多个未配对的半胱氨酸的至少一个细胞毒素或其它化合物的ADC。在某些实施方案中，未配对的半胱氨酸残基将包含未配对链内的残基。在其它优选的实施方案中，游离半胱氨酸残基将包含未配对链间半胱氨酸残基。改造的抗体可以是各种同种型，例如IgG、IgE、IgA或IgD；且那些类别内，抗体可以是各种亚类，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。对于IgG构建体，抗体的轻链可包含各自并入C214的κ或λ同种型，在优选的实施方案中，由于在IgG1重链中缺乏C220残基，C214可以是未配对的。
在一个实施方案中，改造的抗体包含至少一个氨基酸缺失或链内或链间半胱氨酸残基的取代。如本文所使用，“链间半胱氨酸残基”意指参与抗体的轻链和重链之间或抗体的两条重链之间的天然二硫键的半胱氨酸残基，而链内半胱氨酸残基是在相同重链或轻链中与另一个半胱氨酸自然配对的半胱氨酸残基。在一个实施方案中，缺失或取代的链间半胱氨酸残基参与轻链和重链之间的二硫键的形成。在另一个实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基参与两个重链之间的二硫键。在一个典型的实施方案中，由于抗体的互补结构(其中所述轻链与重链的VH和CH1结构域配对，并且其中一个重链的CH2和CH3结构域与互补的重链的CH2和CH3结构域配对)，在轻链或重链中的单个半胱氨酸的突变或缺失将导致在该改造抗体中的两个未配对的半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，链间半胱氨酸残基缺失。在其它实施方案中，链间半胱氨酸被取代为另一个氨基酸(例如，天然存在的氨基酸)。例如，所述氨基酸取代可导致将链间半胱氨酸替换为中性(例如丝氨酸、苏氨酸或甘氨酸)或亲水性(例如甲硫氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)残基。在一个特别优选的实施方案中，链间半胱氨酸被替换为丝氨酸。
在本发明考虑的一些实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基是在轻链(κ或λ)上，从而留下重链上的游离半胱氨酸。在其它实施方案中，缺失或取代的半胱氨酸残基是在重链上，留下轻链恒定区上的游离半胱氨酸。组装后，应当理解，在完整抗体的轻链或重链中的单个半胱氨酸的缺失或取代导致产生具有两个未配对的半胱氨酸残基的位点特异性抗体。
在一个特别优选的实施方案中，将IgG轻链(κ或λ)的位置214的半胱氨酸(C214)缺失或取代。在另一个优选的实施方案中，将IgG重链上的位置220的半胱氨酸(C220)缺失或取代。在进一步的实施方案中，将重链上的位置226或位置229的半胱氨酸缺失或取代。在一个实施方案中，重链上的C220被取代为丝氨酸(C220S)，以提供轻链中的期望的游离半胱氨酸。在另一个实施方案中，轻链中的C214被取代为丝氨酸(C214S)，以提供重链中的期望的游离半胱氨酸。这样的位点特异性构建体提供于实施例15中。这些优选构建体的概述显示于紧随下方的表2，其中所有编号都是根据Kabat中所述的EU索引，且WT代表“野生型”或没有改变的天然恒定区序列，且δ(Δ)指定氨基酸残基的缺失(例如，C214Δ表明在位置214的半胱氨酸已缺失)。
表2
如本文所公开，用于生成具有药物负荷的确定位点和化学计量的抗体-药物缀合物的策略广泛适用于所有抗DPEP3抗体，因为它主要涉及抗体的保守恒定结构域的改造。因为各类别和亚类的抗体的氨基酸序列和天然二硫键是充分记录的，本领域技术人员无需过度实验就可容易地制造各种抗体的改造的构建体，因此，这样的构建体明确地考虑为在本发明的范围内。
4.3恒定区修饰和改变的糖基化
本发明的所选实施方案也可包含恒定区(即Fc区)的取代或修饰，包括但不限于氨基酸残基取代、突变和/或修饰，其导致产生具有优选特征的化合物，所述特征包括但不限于：药代动力学改变、血清半衰期延长、结合亲和力增加、免疫原性降低、产量增加、Fc配体与Fc受体(FcR)的结合改变、ADCC或CDC增强或降低、糖基化/或二硫键改变和结合特异性改变。
具有改善的Fc效应子功能的化合物可以例如通过参与Fc结构域和Fc受体(例如FcγRI、FcγRIIA和B、FcγRIII和FcRn)之间的相互作用的氨基酸残基的改变来生成，其可导致细胞毒性增加和/或药代动力学改变，诸如血清半衰期延长(参见例如Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；和deHaas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。
在所选实施方案中，可通过修饰(例如取代、缺失或添加)经鉴定为参与Fc结构域与FcRn受体之间的相互作用的氨基酸残基来生成体内半衰期延长的抗体(参见例如国际公开WO 97/34631；WO 04/029207；U.S.P.N.6,737,056和U.S.P.N.2003/0190311)。关于这样的实施方案，Fc变体在哺乳动物(优选为人)中可提供以下半衰期：大于5天、大于10天、大于15天、优选大于20天、大于25天、大于30天、大于35天、大于40天、大于45天、大于2个月、大于3个月、大于4个月或大于5个月。半衰期延长导致较高血清效价，其因此降低抗体的施用频率和/或降低待施用的抗体的浓度。可在例如转基因小鼠或经转染的表达人FcRn的人细胞系中，或在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定人FcRn高亲和力结合多肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期。WO 2000/42072描述与FcRn的结合改善或降低的抗体变体。还参见例如Shields等人J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
在其它实施方案中，Fc变化可导致ADCC或CDC活性增强或降低。如本领域中已知，CDC是指目标细胞在补体存在的情况下的裂解，且ADCC是指细胞毒性的一种形式，其中结合至某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的FcR的分泌的Ig使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合至载荷抗原的目标细胞且随后用细胞毒素杀死目标细胞。在本发明的背景中，提供具有“改变”的FcR结合亲和力的抗体变体，其与亲本或未修饰的抗体或包含天然序列FcR的抗体相比结合增强或降低。这样的表现出降低的结合的变体可具有极少或不可感知的结合，例如与FcR的结合为天然序列的0-20％，例如如通过本领域中众所周知的技术测定。在其它实施方案中，与天然免疫球蛋白Fc结构域相比，变体将呈现增强的结合。应当理解，这些类型的Fc变体可有利地用于增强公开的抗体的有效抗肿瘤特性。在还有其它实施方案中，这样的变化导致结合亲和力增加、免疫原性降低、产量增加、糖基化改变和/或二硫键(例如对于缀合点)、结合特异性改变、吞噬作用增加；和/或细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调等。
还有其它实施方案包含一种或多种改造的糖形，例如包含改变的糖基化模式或改变的碳水化合物组成的位点特异性抗体，其共价连接至蛋白(例如在Fc结构域中)。参见例如Shields,R.L.等人(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740。改造的糖形可用于多种目的，包括但不限于增强或降低效应子功能、增加抗体对目标的亲和力或促进抗体产生。在其中期望降低效应子功能的某些实施方案中，分子可经改造以表达无糖基化形式。可导致消除一个或多个可变区构架糖基化位点以由此消除该位点处的糖基化的取代是众所周知的(参见例如U.S.P.N.5,714,350和6,350,861)。相反，可通过在一个或多个额外糖基化位点进行改造来为含有Fc的分子赋予增强的效应子功能或改善的结合。
其它实施方案包括Fc变体，其具有改变的糖基化组成，诸如具有降低量的岩藻糖基残基的次岩藻糖基化抗体或具有增加的二分型GlcNAc结构的抗体。已表明这样的改变的糖基化模式增加抗体的ADCC能力。改造的糖形可通过本领域技术人员已知的任何方法生成，例如通过使用改造或变体表达菌株、通过与一种或多种酶(例如N-乙酰葡糖氨基转移酶III(GnTIII))共表达、通过在各种生物体或来自各种生物体的细胞系中表达包含Fc区的分子或通过在已经表达包含Fc区的分子之后修饰碳水化合物(参见例如WO 2012/117002)。
4.4片段
无论选择何种形式的抗体(例如嵌合、人源化等)以实践本发明，应当理解，可根据本文中的教导使用其免疫反应性片段(自身或作为抗体药物缀合物的部分)。“抗体片段”包含完整抗体的至少一部分。如本文所使用，术语抗体分子的“片段”包括抗体的抗原结合片段，且术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体的多肽片段，其免疫特异性结合所选抗原或其免疫原性决定簇或与所选抗原或其免疫原性决定簇反应或与衍生所述片段的完整抗体竞争特异性抗原结合。
示例性位点特异性片段包括：可变轻链片段(VL)、可变重链片段(VH)、scFv、F(ab')2片段、Fab片段、Fd片段、Fv片段、单结构域抗体片段、双功能抗体、线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。此外，活性位点特异性片段包含抗体的部分，其保留其与抗原/底物或受体相互作用且以与完整抗体类似的方式(尽管效率可能稍微较低)修饰抗原/底物或受体的能力。这样的抗体片段可以进一步改造以包含一个或多个游离半胱氨酸。
在其它实施方案中，抗体片段是包含Fc区域且保留当完整抗体中存在时通常与Fc区域相关的生物功能(诸如FcRn结合、抗体半衰期调节、ADCC功能和补体结合)中的至少一种的片段。在一个实施方案中，抗体片段是单价抗体，其具有与完整抗体实质上类似的体内半衰期。例如，这样的抗体片段可包含连接至Fc序列的抗原结合臂，其包含能够赋予片段体内稳定性的至少一个游离半胱氨酸。
如本领域技术人员将公认，可通过分子改造或经由完整或完全抗体或抗体链的化学或酶促处理(诸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶)或通过重组方式获得片段。关于抗体片段的更详细描述，参见例如Fundamental Immunology,W.E.Paul，编,Raven Press,N.Y.(1999)。
4.5多价构建体
在其它实施方案中，本发明的抗体和缀合物可为单价或多价(例如二价、三价等)。如本文所使用，术语“效价”是指与抗体相关的潜在目标结合位点的数目。各目标结合位点特异性结合一个目标分子或目标分子上的特定位置或基因座。当抗体为单价时，分子的各结合位点将特异性结合至单一抗原位置或表位。当抗体包含多于一个目标结合位点(多价)时，各目标结合位点可特异性结合相同或不同分子(例如可结合至不同配体或不同抗原，或相同抗原上的不同表位或位置)。参见例如U.S.P.N.2009/0130105。
在一个实施方案中，所述抗体为双特异性抗体，其中两条链具有不同特异性，如描述于Millstein等人,1983,Nature,305:537-539。其它实施方案包括具有额外特异性的抗体，诸如三特异性抗体。其它更复杂的相容多特异性构建体和其制造方法描述于U.S.P.N.2009/0155255，以及WO 94/04690；Suresh等人,1986,Methods in Enzymology,121:210；和WO96/27011。
多价抗体可免疫特异性结合至期望的目标分子的不同表位，或可免疫特异性结合至目标分子以及异源表位，诸如异源多肽或固体支持物质。尽管优选实施方案仅结合两种抗原(即双特异性抗体)，但本发明也涵盖具有额外特异性的抗体(诸如三特异性抗体)。双特异性抗体也包括交联或“异缀合物”抗体。例如，异缀合物中的抗体之一可与抗生物素蛋白偶联，另一者与生物素偶联。例如，已提出这样的抗体使免疫系统细胞靶向不需要的细胞(U.S.P.N.4,676,980)和用于治疗HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373和EP 03089)。异缀合物抗体可使用任何便利的交联方法制备。合适交联剂连同多种交联技术在本领域中是众所周知的，且公开于U.S.P.N.4,676,980。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体可用于过继免疫基因治疗以治疗肿瘤。在一个实施方案中，本发明的抗体(例如，ScFv片段)可用于生成嵌合抗原受体(CAR)。“CAR”是由包含本发明的抗DPEP3抗体或其免疫反应性片段(例如ScFv片段)、跨膜结构域和至少一个细胞内结构域的ECD构成的融合蛋白。在一个实施方案中，已经遗传改造以表达CAR的T细胞、自然杀伤细胞或树突细胞可以引入患有癌症的受试者，以刺激受试者的免疫系统特异性靶向表达DPEP3的肿瘤细胞。在优选的实施方案中，本发明的CAR将包含起始初始细胞质信号传导序列(即，用于起始经由T细胞受体复合物的抗原依赖性的初始活化的序列)的细胞内结构域，例如，衍生自CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的细胞内结构域。在其它优选的实施方案中，本发明的CAR将包含起始二级或共刺激信号的细胞内结构域，例如，衍生自CD2、CD4、CD5、CD8α、CD8β、CD28、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的细胞内结构域(参见U.S.P.N.US/2014/0242701)。
在还有其它实施方案中，使用本领域普通技术人员众所周知的方法将具有期望的结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原组合位点)与免疫球蛋白恒定结构域序列(诸如包含铰链、CH2和/或CH3区的至少一部分的免疫球蛋白重链恒定结构域)融合。
5.抗体的重组产生
抗体及其片段可使用获得自产生抗体的细胞的遗传物质和重组技术产生或修饰(参见例如Berger和Kimmel,Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods inEnzymology vol.152Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Sambrook和Russell(编)(2000)Molecular Cloning:A Laboratory Manual v,NY,Cold Spring HarborLaboratory Press；Ausubel等人(2002)Short Protocols in Molecular Biology:ACompendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Wiley,John&Sons,Inc.；和U.S.P.N.7,709,611)。
本发明的另一个方面涉及编码本发明的抗体的核酸分子。核酸可存在于全细胞中、细胞裂解物中或以部分纯化或实质上纯的形式存在。当通过标准技术(包括碱性/SDS处理、CsCl分带(banding)、柱层析法、琼脂糖凝胶电泳和本领域中众所周知的其它技术)从其它细胞组分或其它污染物(例如其它细胞核酸或蛋白)分离时，核酸是“分离的”或变成实质上纯的。本发明的核酸可为例如DNA(例如基因组DNA、cDNA)、RNA及其人工变体(例如肽核酸)(无论单链或双链或RNA)，RNA，且可以含有或不含内含子。在一个优选实施方案中，所述核酸为cDNA分子。
本发明的核酸可使用标准分子生物学技术获得。对于通过杂交瘤(例如，如下面实施例中所述制备的杂交瘤)表达的抗体，编码抗体的轻链和重链的cDNA可通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于获得自免疫球蛋白基因文库的抗体(例如使用噬菌体展示技术)，编码抗体的核酸可从文库回收。
编码VH和VL区段的DNA片段可进一步通过标准重组DNA技术操作，例如以便将所述可变区基因转化为全长抗体链基因，转化为Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VL或VH的DNA片段可操作连接至编码另一蛋白(诸如抗体恒定区或柔性连接体)的另一DNA片段。如上下文中所使用的术语“可操作连接”意指接合两个DNA片段以便使由两个DNA片段编码的氨基酸序列保留于构架中。
可通过将编码VH的DNA可操作连接至编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子而将编码VH区的分离DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如Kabat,等人(1991)(同上))且涵盖这些区域的DNA片段可通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最优选为IgG1或IgG4恒定区。示例性IgG1恒定区描述于SEQ ID NO:2。对于Fab片段重链基因，可将编码VH的DNA可操作性连接至另一仅编码重链CH1恒定区的DNA分子。
可通过将编码VL的DNA可操作连接至编码轻链恒定区(CL)的另一DNA分子，将编码VL区的分离DNA转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如Kabat,等人(1991)(同上))且涵盖这些区域的DNA片段可通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可为κ或λ恒定区，但最优选为κ恒定区。在这方面，示例性相容κ轻链恒定区描述于SEQ ID NO:1。
本文考虑表现出与本发明的多肽的“序列同一性”、“序列相似性”或“序列同源性”的某些多肽(例如，抗原或抗体)。“同源”多肽可以表现出65％、70％、75％、80％、85％或90％序列同一性。在其它实施方案中，“同源”多肽可以表现出93％、95％或98％序列同一性。如本文所使用，两个氨基酸序列之间的百分比同源性与两个序列之间的百分比同一性等效。两个序列之间的百分比同一性是由所述序列共享的相同位置的数目的函数(即％同源性＝相同位置数目/总位置数目×100)，其考虑对于两个序列的最佳比对所需引入的缺口的数目和各缺口的长度。两个序列之间的序列的比较和百分比同一性的测定可使用数学算法完成，如以下非限制性实施例中所述。
可使用已并入ALIGN程序(2.0版本)中的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17(1988))的算法、使用PAM120权数残基表、缺口长度处罚12和缺口罚分4来测定两个氨基酸序列之间的百分比同一性。此外，可使用已并入GCG软件包(可得自www.gcg.com)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453(1970))算法、使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵和缺口权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来测定两个氨基酸序列之间的百分比同一性。
此外或替代地，本发明的蛋白序列可进一步用作“查询序列”以进行针对公共数据库的搜索，以便例如鉴定相关序列。这样的搜索可使用Altschul,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的XBLAST程序(版本2.0)进行。BLAST蛋白搜索可以用XBLAST程序、得分＝50、字长＝3进行以获得与本发明的抗体分子同源的氨基酸序列。为了获得缺口比对以用于比较目的，可如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402中所述利用Gapped BLAST。当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，可使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。
不相同的残基位置的不同可在于保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被取代为具有具有类似化学特性(例如电荷或疏水性)的侧链的另一氨基酸残基的取代。通常，保守氨基酸取代将实质上不改变蛋白的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列与彼此的不同在于保守取代的情况下，百分比序列同一性或相似性的程度可上调以校正取代的保守性质。在存在用非保守氨基酸取代的情况下，在优选的实施方案中，表现出序列同一性的多肽将保留本发明多肽(例如，抗体)的期望功能或活性。
本文还考虑表现出与本发明的核酸的“序列同一性”、“序列相似性”或“序列同源性”的核酸。“同源序列”意指表现出至少约65％、70％、75％、80％、85％或90％序列同一性的核酸分子的序列。在其它实施方案中，核酸的“同源序列”可以表现出与参考核酸的93％、95％或98％序列同一性。
本发明还提供包含可操作连接至启动子的上述这样的核酸的载体(参见例如WO86/05807；WO 89/01036；和U.S.P.N.5,122,464)；和真核生物分泌途径的其它转录调节和处理控制元件。本发明还提供具有那些载体和宿主表达系统的宿主细胞。
如本文所使用，术语“宿主表达系统”包括可经改造以产生本发明的核酸或多肽和抗体的任何类型的细胞系统。这样的宿主表达系统包括但不限于用重组噬菌体DNA或质粒DNA转化或转染的微生物(例如大肠杆菌(E.coli)或枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用重组酵母表达载体转染的酵母(例如酵母属(Saccharomyces))；或具有重组表达构建体的哺乳动物细胞(例如COS、CHO-S、HEK-293T、3T3细胞)，所述重组表达构建体含有来源于哺乳动物细胞或病毒的基因组的启动子(例如腺病毒晚期启动子)。宿主细胞可用两种表达载体共转染，例如第一载体编码重链衍生的多肽且第二载体编码轻链衍生的多肽。
转化哺乳动物细胞的方法是本领域中众所周知的。参见例如U.S.P.N.4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455。宿主细胞也可经改造以允许产生具有各种特征的抗原结合分子(例如修饰的具有GnTIII活性的糖形或蛋白)。
为了长期高产率产生重组蛋白，稳定表达是优选的。因此，稳定表达所选抗体的细胞系可使用标准领域公认的标准技术改造且形成本发明的一部分。宿主细胞可用适当表达控制元件(例如启动子或增强子序列、转录终止子、多聚腺苷酸化位点等)控制的DNA和可选择标记物转化，而非使用含有病毒复制起点的表达载体。可使用本领域中众所周知的任何选择系统，包括谷氨酰胺合酶基因表达系统(GS系统)，其提供用于在某些条件下增强表达的有效方法。完全或部分结合EP 0 216 846、EP 0 256 055、EP 0 323 997和EP 0 338 841以及U.S.P.N.5,591,639和5,879,936讨论GS系统。另一种用于开发稳定细胞系的优选表达系统为FreedomTM CHO-S试剂盒(Life Technologies)。
一旦通过重组表达或任何其它公开的技术产生本发明的抗体，则其可通过本领域中已知的方法纯化或分离，意味着所述抗体经鉴定且从其天然环境分离和/或回收且与将干扰抗体的诊断或治疗用途的污染物分离。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。
这些分离的制备物可使用各种本领域公认的技术纯化，所述技术诸如离子交换和大小排阻层析、透析、渗滤和亲和层析，特别是蛋白A或蛋白G亲和层析。
6.产生后选择
无论如何获得，可以选择、克隆抗体产生细胞(例如杂交瘤、酵母集落等)，并针对期望特征(包括例如稳健生长、高抗体产量和期望抗体特征，诸如针对目的抗原的高亲和力)而进一步筛选。杂交瘤可以在细胞培养物中体外扩增或可以在同系免疫功能低下的动物中体内扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤和/或集落的方法是本领域普通技术人员众所周知的。一旦鉴定期望抗体，则可使用常用的本领域公认的分子生物学和生物化学技术分离、操作和表达相关遗传物质。
由未处理的文库产生的抗体(或天然或合成)可以具有中等亲和力(约106至107M-1的Ka)。为了增强亲和力，可通过构建抗体文库(例如通过经由使用易错聚合酶体外引入随机突变)和从那些二级文库再选择针对抗原具有高亲和力的抗体(例如通过使用噬菌体或酵母展示)来体外模拟亲和力成熟。WO9607754描述用于诱导免疫球蛋白轻链的CDR中的诱变以产生轻链基因的文库的方法。
可使用多种技术来选择抗体，包括但不限于噬菌体或酵母展示，其中在噬菌体或酵母上合成人组合抗体或scFv片段的文库，用目的抗原或其抗体结合部分筛选文库，且分离结合抗原的噬菌体或酵母，由此可以获得抗体或免疫反应性片段(Vaughan等人,1996,PMID:9630891；Sheets等人,1998,PMID:9600934；Boder等人,1997,PMID:9181578；Pepper等人,2008,PMID:18336206)。用于生成噬菌体或酵母展示文库的试剂盒是商业可得的。还存在其它可用于生成和筛选抗体展示文库的方法和试剂(参见U.S.P.N.5,223,409；WO 92/18619,WO 91/17271,WO 92/20791,WO 92/15679,WO 93/01288,WO 92/01047,WO 92/09690；和Barbas等人,1991,PMID:1896445)。这样的技术有利地允许筛选大量候选抗体且提供相对容易的序列操作(例如通过重组改组)。
IV抗体的特征
在所选实施方案中，可以选择、克隆抗体产生细胞(例如杂交瘤、酵母集落)，并针对有利特性(包括例如稳健生长、高抗体产量和如下文更详细讨论，期望的位点特异性抗体特征)而进一步筛选。在其它情况下，可通过针对动物的接种选择特定抗原(例如特异性DPEP3同工型)或目标抗原的免疫反应性片段来赋予抗体的特征。在还有其它实施方案中，所选抗体可如上所述改造以增强或改进免疫化学特征，诸如亲和力或药代动力学。
A.中和抗体
在所选实施方案中，本发明的抗体可以是“拮抗剂”或“中和”抗体，意味着所述抗体可以直接或通过防止决定簇与结合伴侣诸如配体或受体的缔合而与决定簇缔合和阻断或抑制所述决定簇的活性，由此中断否则将由分子的相互作用导致的生物反应。当过量抗体使结合至决定簇的结合伴侣的量降低至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更多(如例如通过目标分子活性或在体外竞争性结合测定中所测量)时，中和或拮抗剂抗体将实质上抑制决定簇与其配体或底物的结合。应当理解，改变的活性可使用本领域公认的技术直接测量或可通过活性改变对下游的影响(例如肿瘤发生或细胞存活)来测量。
B.内化抗体
有证据证明大部分表达的DPEP3蛋白保持与致瘤性细胞表面缔合，由此允许公开的抗体或ADC的局部化和内化。在优选实施方案中，这样的抗体将与在内化后杀死细胞的一种或多种药物缔合或缀合。在特别优选实施方案中，本发明的ADC将包含内化位点特异性ADC。
如本文所使用，“内化”的抗体是在与相关抗原或受体结合后由细胞摄取(连同任何细胞毒素)的抗体。对于治疗性应用，内化将优选在有需要的受试者中在体内发生。内化的ADC的数目可足以杀死表达抗原的细胞，尤其表达抗原的癌症干细胞。根据作为整体的细胞毒素或ADC的效价，在一些情况下，细胞中摄取单一抗体分子足以杀死抗体结合的目标细胞。例如，某些药物高度有效，使得少量的与抗体缀合的毒素的分子的内化足以杀死肿瘤细胞。可通过本领域公认的测定法(包括以下实施例中描述的测定法)确定抗体在与哺乳动物细胞结合后是否内化。检测抗体是否内化至细胞中的方法也描述于U.S.P.N.7,619,068。
C.消耗抗体
在其它实施方案中，本发明的抗体是消耗抗体。术语“消耗”抗体是指优选结合至细胞表面上或附近的抗原且诱导、促进或引起细胞的死亡(例如通过CDC、ADCC或引入细胞毒性剂)的抗体。在一些实施方案中，所选消耗抗体将与细胞毒素缀合。优选地，消耗抗体将能够杀死定义细胞群体中的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％或99％的表达DPEP3的细胞。在一些实施方案中，细胞群体可包含富集、切分、纯化或分离的致瘤性细胞，包括癌症干细胞。在其它实施方案中，细胞群体可包含包含癌症干细胞的完全肿瘤样品或异源肿瘤提取物。标准生物化学技术可用于根据本文中的教导监测和定量致瘤性细胞的消耗。
D.结合亲和力
本文公开具有对于特定决定簇(例如，DPEP3)的高结合亲和力的抗体。术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离常数或表观亲和力。当解离常数KD(koff/kon)为≤10-7M时，本发明的抗体可以免疫特异性结合其目标抗原。当KD为≤5x10-9M时，抗体以高亲和力特异性结合抗原，且当KD为≤5x10-10M时，抗体以非常高亲和力特异性结合抗原。在本发明的一个实施方案中，抗体具有≤10-9M的KD和约1x10-4/sec的解离速率。在本发明的一个实施方案中，解离速率为<1x10-5/sec。在本发明的其它实施方案中，抗体将以约10-7M至10-10M的KD结合至决定簇，并且在又另一个实施方案中，它将以KD≤2x10-10M结合。本发明的还有其它所选实施方案包含具有以下KD(koff/kon)的抗体：小于10-6M、小于5x10-6M、小于10-7M、小于5x10-7M、小于10-8M、小于5x10-8M、小于10-9M、小于5x10-9M、小于10-10M、小于5x10-10M、小于10-11M、小于5x10-11M、小于10-12M、小于5x10-12M、小于10-13M、小于5x10-13M、小于10-14M、小于5x10-14M、小于10-15M或小于5x10-15M。
在某些实施方案中，本发明的免疫特异性结合至决定簇(例如，DPEP3)的抗体可以具有以下结合速率常数或kon(或ka)速率(抗体+抗原(Ag)k on←抗体-Ag)：至少105M-ls-l、至少2x105M-ls-l、至少5x105M-ls-l、至少106M-ls-l、至少5x106M-ls-l、至少107M-ls-l、至少5x107M-ls-l或至少108M-ls-l。
在另一个实施方案中，本发明的免疫特异性结合至决定簇(例如，DPEP3)的抗体可以具有以下解离速率常数或koff(或kd)速率(抗体+抗原(Ag)k off←抗体-Ag)：小于l0-ls-l、小于5xl0-ls-l、小于l0-2s-l、小于5xl0-2s-l、小于l0-3s-l、小于5xl0-3s-l、小于l0-4s-l、小于5xl04s-l、小于l0-5s-l、小于5xl0-5s-l、小于l0-6s-l、小于5xl0-6s-l、小于l0-7s-l、小于5xl0-7s-l、小于l0-8s-l、小于5xl0-8s-l、小于l0-9s-l、小于5xl0-9s-l或小于l0-10s-l。
结合亲和力可以使用本领域中已知的各种技术测定，所述技术例如，表面等离振子共振、生物层干涉、双极化干涉、静态光散射、动态光散射、等温滴定量热法、ELISA、分析超速离心和流式细胞术。
E.分仓和表位作图
如本文所使用，术语“分仓(binning)”是指用于基于抗体的抗原结合特征和它们是否与彼此竞争而将抗体分组至“仓室(bin)”中的方法。仓室的初始测定可通过如本文所述的表位作图和其它技术进一步改进和证实。然而，应当理解，凭经验将抗体分配至各个仓室提供可指示公开的抗体的治疗潜能的信息。
更具体地，可通过使用本领域中已知和本文实施例中描述的方法确定第一参考抗体(或其片段)是否竞争结合第二测试抗体(即处于相同仓室)。在一个实施方案中，参考抗体与DPEP3抗原在饱和条件下缔合，且然后使用标准免疫化学技术测定一种或多种测试抗体结合至DPEP3的能力。如果测试抗体能够实质上与参考抗DPEP3抗体同时结合至DPEP3，则与参考抗体相比，测试抗体结合至不同表位。然而，如果测试抗体不能实质上同时结合至DPEP3，则测试抗体结合至相同表位、重叠表位或与由参考抗体结合的表位紧邻(至少位阻上)的表位。即，测试抗体竞争抗原结合且与参考抗体处于同一仓室中。
当在公开的抗体的上下文中使用时，术语“竞争”或“竞争抗体”意指抗体之间的竞争，如由其中测试抗体或所测试的免疫功能性片段抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合的测定法所测定。通常，这样的测定法涉及使用结合至固体表面或细胞的纯化的抗原(例如DPEP3或其结构域或片段)、未标记的测试抗体和标记的参考抗体。通过在测试抗体存在的情况下测定结合至固体表面或细胞的标记量来测量竞争性抑制。通常，测试抗体以过量存在和/或允许首先结合。关于测定竞争性结合的方法的额外细节提供于本文实施例中。通常，当竞争抗体以过量存在时，其使参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，使结合抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。
相反，当结合参考抗体时，其优选使随后添加的测试抗体(即，抗DPEP3抗体)的结合抑制至少30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，使测试抗体的结合抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。
通常，分仓或竞争性结合可以使用各种本领域公认的技术来确定，所述技术诸如例如，免疫测定法，诸如western印迹，放射免疫测定法，酶联免疫吸附测定法(ELISA)，“夹心”免疫测定法，免疫沉淀测定法，沉淀素反应，凝胶扩散沉淀素反应，免疫扩散测定法，凝集测定法，补体-固定测定法，免疫放射测定法，荧光免疫测定法和蛋白A免疫测定法。这样的免疫测定法是常规和本领域中众所周知的(参见，Ausubel等人，编，(1994)CurrentProtocols in Molecular Biology,Vol.1,John Wiley&Sons,Inc.,New York)。此外，也可以使用交叉阻断测定法(参见，例如，WO 2003/48731；和Harlow等人(1988)Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow and David Lane)。
用于确定竞争性抑制的其它技术(且因此为“仓室”)，包括：表面等离振子共振，其使用，例如，BIAcoreTM 2000系统(GE Healthcare)；使用生物层干涉，其使用，例如， Octet RED(ForteBio)；或流式细胞术珠阵列，其使用，例如，FACSCanto II(BDBiosciences)或多重LUMINEXTM检测阵列(Luminex)。
Luminex是能够实现大规模多重抗体配对的基于珠粒的免疫分测定平台。所述测定比较抗体对与目标抗原的同时结合模式。配对中的一种抗体(捕获mAb)结合至Luminex珠粒，其中各捕获mAb结合至不同颜色的珠粒。另一种抗体(检测mAb)结合至荧光信号(例如藻红蛋白(PE))。所述测定分析抗体与抗原的同时结合(配对)且将具有类似配对概况的抗体分组在一起。检测mAb和捕获mAb的类似概况表明两种抗体结合至相同或密切相关的表位。在一个实施方案中，配对概况可以使用Pearson相关系数确定，以鉴定与测试的抗体的实验对象组上的任何特定抗体最密切相关的抗体。在优选的实施方案中，如果抗体对的Pearson相关系数为至少0.9，则将确定测试/检测mAb与参考/捕获mAb在相同的仓室中。在其它实施方案中，Pearson相关系数为至少0.8、0.85、0.87或0.89。在进一步实施方案中，Pearson相关系数为至少0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1。分析获得自Luminex测定的数据的其它方法描述于U.S.P.N.8,568,992。Luminex同时分析100种不同类型的珠粒(或更多)的能力提供几乎无限的抗原和/或抗体表面，导致生物传感器测定中的抗体表位概况分析中的通量和分辨率改善(Miller,等人,2011,PMID:21223970)。
“表面等离振子共振”是指允许通过检测生物传感器基质内蛋白浓度的变化来分析实时特异性相互作用的光学现象。
在其它实施方案中，可用于确定测试抗体是否“竞争”与参考抗体结合的技术是“生物层干涉测量术”，即这样的光学分析技术，其分析从两个表面反射的白光的干涉模式：生物传感器尖端上固定的蛋白的层，和内部参考层。结合至生物传感器尖端的分子数目的任何变化均引起可实时测量的干涉模式的偏移。这样的生物层干涉测定可以如下使用 Octet RED机器进行。将参考抗体(Ab1)捕获于抗小鼠捕获芯片上，然后使用高浓度非结合抗体以封闭芯片且收集基线。然后通过特异性抗体(Ab1)捕获单体、重组目标蛋白，且将尖端浸入具有作为对照的相同抗体(Ab1)的孔或具有不同测试抗体(Ab2)的孔中。如果未发生进一步结合(如通过与对照Ab1比较结合水平确定)，则确定Ab1和Ab2是“竞争”抗体。如果用Ab2观察到额外结合，则确定Ab1和Ab2不与彼此“竞争”。可扩展该方法以使用代表独特仓室的96孔板中的一整列抗体筛选独特抗体的大型文库。在优选的实施方案中，如果参考抗体使测试抗体与共同抗原的特异性结合降低至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％，则测试抗体将与参考抗体竞争。在其它实施方案中，使结合抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。
一旦已经定义涵盖一组竞争抗体的仓室，则可以实施进一步表征以确定仓室中的抗体结合的抗原上的特定结构域或表位。结构域-水平表位作图可以使用由Cochran等人,2004,PMID:15099763描述的方案的改良方案来进行。精细表位作图是确定抗原上包含抗体结合的决定簇的表位的特定氨基酸的方法。术语“表位”在其常用生物化学意义上使用，并且是指目标抗原的能够被识别且被特定抗体特异性结合的该部分。在某些实施方案中，表位或免疫原性决定簇包括分子的化学活性表面分组，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，且在某些实施方案中，可具有特定三维结构特征和/或比电荷特征。在某些实施方案中，当抗体优先识别蛋白和/或大分子的复杂混合物中的其目标抗原时，则抗体被称为特异性结合抗原。
当抗原是多肽(诸如DPEP3)时，表位通常可由连续氨基酸和通过蛋白的三级折叠而相邻的非连续氨基酸(“构象表位”)形成。在这样的构象表位中，存在跨越蛋白上的彼此线性分离的氨基酸残基的相互作用点。由连续氨基酸形成的表位(有时称为“线性”或“连续”表位)通常在蛋白变性后保留，而由三级折叠形成的表位通常在蛋白变性后损失。抗体表位通常包括独特空间构象中的至少3个氨基酸，例如4个氨基酸、5个氨基酸、6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸或更多。表位确定或“表位作图”的方法是本领域中众所周知的，并且可以与本公开内容结合使用以鉴定DPEP3上由公开的抗体结合的表位。
相容表位作图技术包括丙氨酸扫描突变体、肽印迹法(Reineke(2004)MethodsMol Biol 248:443-63)或肽裂解分析。此外，可使用诸如表位切除、表位提取和抗原的化学修饰的方法(Tomer(2000)Protein Science 9:487-496)。其它相容方法包括如本文所附实施例10中所显示的酵母展示法。在其它实施方案中，修饰辅助概况分析(Modification-Assisted Profiling；MAP)，也称为基于抗原结构的抗体概况分析(Antigen Structure-based Antibody Profiling；ASAP)提供根据各抗体与化学或酶促修饰的抗原表面的结合概况的相似性来将大量针对相同抗原的单克隆抗体归类的方法(U.S.P.N.2004/0101920)。该技术允许快速过滤遗传相同抗体，使得表征可集中于遗传相异抗体。应当理解，MAP可用于将本发明的抗DPEP3抗体分选至结合不同表位的抗体组。
如将在下文实施例10中更详细讨论的，使用前述方法测定三个示例性DPEP3抗体(SC34.2、SC34.28和SC34.10)的表位。SC34.2抗体被发现结合至包含选自E217、R242、Q248、Q372、K375和E379(残基按照SEQ ID NO：3编号)的人DPEP3氨基酸残基的构象表位。此外，虽然每个残基可以在较大或较小的程度上参与定义表位，但应当理解的是，抗体可与较不完整或部分形成的表位缔合。因此，本发明明确地涵盖了与包含选自E217、R242、Q248、Q372、K375和E379的三个或更多个氨基酸残基的表位结合或缔合的抗体或与结合抗体竞争的任何抗体。更具体地，本发明涵盖与包含下面表3中所示的任何特定残基组合的表位结合的抗体，其中X包含具有根据SEQ ID NO：3编号的残基的任何天然存在的氨基酸。
表3
SC34.10抗体被发现结合至包含选自R46、R48、R54和S55(按照SEQ ID NO：3编号)的人DPEP3氨基酸残基的构象表位。如上所述，虽然每个残基可以在较大或较小的程度上参与定义表位，但应当理解的是，抗体可与较不完整或部分形成的表位缔合。因此，本发明明确地涵盖了与包含选自R46、R48、R54和S55的三个或更多个氨基酸残基的表位结合或缔合的抗体或与结合抗体竞争的任何抗体。更具体地，本发明涵盖与如下表4中所示的任何表位1-5结合的抗体，其中X包含具有根据SEQ ID NO：3编号的残基的任何天然存在的氨基酸。
表4
1 R46 R48 R54 -
2 R46 R48 - S55
3 R46 - R54 S55
4 - R48 R54 S55
5 R46 R48 R54 S55
SC34.28抗体被发现结合至包含选自S380、S384、V386、Q248(按照SEQ ID NO：3编号)的人DPEP3氨基酸残基的构象表位。在此情况下，(i)人DPEP3和食蟹猴DPEP3的氨基酸序列；和(ii)hSC34.28对于所述两种DPEP3直向同源物的每一种的亲和力的差异的比较数据表明，V386和Q248形成常规作图残基以及表位的一部分。再次，虽然每个残基可以在较大或较小的程度上参与定义表位，但应当理解的是，抗体可与较不完整或部分形成的表位缔合。因此，本发明明确地涵盖了与包含选自S380、S384、V386、Q248的三个或更多个氨基酸残基的表位结合或缔合的抗体或与结合抗体竞争的任何抗体。更具体地，本发明涵盖与如下表5中所示的任何表位1-5结合的抗体，其中X包含具有根据SEQ ID NO：3编号的残基的任何天然存在的氨基酸。
表5
1 Q248 S380 S384 -
2 Q248 S380 - V386
3 Q248 - S384 V386
4 - S380 S384 V386
5 Q248 S380 S384 V386
一旦确定抗原上的期望的表位，则可能生成针对该表位的抗体，例如通过使用本发明中描述的技术用包含表位的肽进行免疫。或者，在发现过程期间，抗体的生成和表征可阐明关于位于特定结构域或基序中的期望的表位的信息。从该信息，则可能针对与相同表位的结合来竞争筛选抗体。一种实现这一点的方法是进行竞争研究以发现竞争结合抗原的抗体。用于基于抗体的交叉竞争而对抗体进行分仓的高通量方法描述于WO 03/48731中。其它分仓或结构域水平或表位作图的其它方法(包含抗体竞争或酵母上的抗原片段表达)是本领域中众所周知的。
V抗体缀合物
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体可以与药学活性或诊断部分缀合以形成“抗体药物缀合物”(ADC)或“抗体缀合物”。术语“缀合物”被广泛使用，并且是指任何药学活性或诊断部分与本发明的抗体的共价或非共价缔合，而无论缔合的方法。在某些实施方案中，所述缔合通过抗体的赖氨酸或半胱氨酸残基来实现。在特别优选的实施方案中，药物活性或诊断部分可以经由一个或多个位点特异性游离的半胱氨酸缀合至抗体。公开的ADC可用于治疗和诊断目的。
本发明的ADC可用于将细胞毒素或其它有效载荷递送至目标位置(例如，致瘤性细胞和/或表达DPEP3的细胞)。如本文所使用，术语“药物”或“弹头”可以互换使用，并且将意指生物活性或可检测的分子或药物，包括如下所述的抗癌剂。“有效载荷”可以包含与任选的连接体化合物组合的药物或“弹头”。缀合物上的“弹头”可以包含肽，蛋白或在体内代谢为活性剂的前体药物，聚合物，核酸分子，小分子，结合剂，模拟剂，合成药物，无机分子，有机分子和放射性同位素。在一个有利实施方案中，公开的ADC在释放并激活有效载荷之前将结合的有效载荷以相对非活性、无毒状态导向至目标位点。这种有效载荷的靶向释放优选通过以下来实现：有效载荷的稳定缀合(例如经由抗体上的一个或多个半胱氨酸)和最小化过度缀合的毒性物质种类的ADC制备物的相对均匀的组成。连同被设计为一旦药物连接体已经被递送至肿瘤位点、则大量释放有效载荷的药物连接体，本发明的缀合物可以实质上降低不期望的非特异性毒性。这有利地提供在肿瘤位点的相对高水平的活性细胞毒素，同时最小化非靶向细胞和组织的暴露，从而提供增强的治疗指数。
应当理解，尽管本发明的优选实施方案包含治疗性部分(例如，细胞毒素)，但其它有效载荷诸如诊断剂和生物相容的修饰剂可以得益于由公开的缀合物提供的靶向释放。因此，涉及示例性的治疗有效载荷的任何公开内容也适用于如本文讨论的包含诊断剂或生物相容性修饰剂的有效载荷，除非上下文另有规定。所选有效载荷可以共价或非共价地连接至抗体，并表现出各种化学计量摩尔比，这至少部分地取决于用于实现缀合的方法。本发明的缀合物可通过下式表示：
Ab-[L-D]n或其药学上可接受的盐，其中
a)Ab包含抗DPEP3抗体；
b)L包含任选的连接体；
c)D包含药物；且
d)n是约1至约20的整数。
本领域技术人员将理解，可以使用许多不同的连接体和药物来制造根据上式的缀合物，且缀合方法将取决于组分的选择而变化。因此，与公开的抗体的反应性残基(例如，半胱氨酸或赖氨酸)缔合的任何药物或药物连接体化合物与本文的教导相容。类似地，允许所选药物与抗体的位点特异性缀合的任何反应条件都在本发明的范围之内。尽管上述内容，本发明的特别优选的实施方案包括使用与温和的还原剂组合的稳定剂将药物或药物连接体选择性缀合至游离半胱氨酸，如本文所述。这样的反应条件趋于提供具有较少的非特异性缀合和污染物和相应较少毒性的更均匀的制剂。
与本文的教导相容的示例性有效载荷示于下文：
A.治疗剂
本发明的抗体也可缀合、连接或融合至或以其它方式缔合至药学活性部分，所述药学活性部分为治疗性部分或药物，诸如抗癌剂，包括但不限于，细胞毒性剂，细胞生长抑制剂，抗血管生成剂，减积剂，化疗剂，放疗剂，靶向抗癌剂，生物反应调节剂，癌症疫苗，细胞因子，激素疗法，抗转移剂和免疫治疗剂。
优选的示例性抗癌剂(包括同系物和其衍生物)包含1-去氢睾酮、安曲霉素类、放线菌素D、博莱霉素、卡里奇霉素、秋水仙素、环磷酰胺、细胞松弛素B、更生霉素(以前为放线菌素)、二羟基炭疽菌素、二酮、吐根碱、表柔比星、溴化乙锭、依托泊苷、糖皮质激素、短杆菌肽D、利多卡因、美登素诸如DM-1和DM-4(免疫原)、光神霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、紫杉酚、普鲁卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、替尼泊苷、丁卡因和上述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。
额外的相容的细胞毒素包括多拉司他汀类和阿里他汀类(auristatins)，包括单甲基阿里他汀E(MMAE)和单甲基阿里他汀F(MMAF)(Seattle Genetics)，鹅膏蕈碱类诸如α-鹅膏蕈碱，β-鹅膏蕈碱，γ-鹅膏蕈碱或ε-鹅膏蕈碱(Heidelberg Pharma)，DNA小沟结合剂诸如多卡米星衍生物(Syntarga)，烷化剂诸如修饰或二聚的吡咯并苯并二氮杂(PBD)，氮芥，thioepa，苯丁酸氮芥，美法仑，卡莫司汀(BCNU)，洛莫司汀(CCNU)，环磷酰胺，白消安，二溴甘露醇，链脲霉素，丝裂霉素C和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂，剪接抑制剂诸如meayamycin类似物或衍生物(例如，FR901464，如U.S.P.N.7825267中所述)，管状结合剂诸如埃博霉素类似物和紫杉酚和DNA损伤剂诸如刺孢霉素和埃斯波霉素，抗代谢物诸如甲氨喋呤，6-巯基嘌呤，6-硫鸟嘌呤，阿糖胞苷，和5-氟尿嘧啶达卡巴，抗有丝分裂剂诸如长春碱和长春新碱，和蒽环类诸如柔红霉素(以前为道诺霉素)和多柔比星和上述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。
在一个实施方案中，本发明的抗体可以与抗-CD3结合分子缔合，以招募细胞毒性T细胞，并让它们靶向致瘤性细胞(BiTE technology；参见例如Fuhrmann等人(2010)AnnualMeeting of AACR Abstract No.5625)。
在进一步实施方案中，本发明的ADC可以包含使用适当的连接体缀合的治疗性放射性同位素。可以与这样的实施方案相容的示例性放射性同位素包括，但不限于，碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、铜(62Cu、64Cu、67Cu)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115In、113In、112In、111In)、铋(212Bi、213Bi)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、镓(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、117Tin、225Ac、76Br和211At。其它放射性核素也可以作为诊断和治疗剂，特别是60至4,000keV的能量范围内的那些。
在某些特别优选的实施方案中，本发明的ADC可以包含作为弹头的PBD及其药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。PBD是烷化剂，其通过在小沟共价结合至DNA和抑制核酸合成而发挥抗肿瘤活性。PBD已显示具有有效的抗肿瘤特性，同时表现出最小的骨髓抑制。与本发明相容的PBD可以使用几种类型的连接体(例如，包含具有游离巯基的马来酰亚胺基部分的肽基连接体)连接至抗体，并且在某些实施方案中，是二聚体形式(即，PBD二聚体)。可缀合至公开的抗体的相容的PBD(和任选的连接体)描述于例如：U.S.P.N.6,362,331、7,049,311、7,189,710、7,429,658、7,407,951、7,741,319、7,557,099、8,034,808、8,163,736、2011/0256157和PCT申请WO2011/130613、WO2011/128650、WO2011/130616和WO2014/057074。与本发明相容的PBD化合物的实例显示如下：
本发明的抗体也可以缀合至生物反应调节剂。例如，在特别优选的实施方案中，药物部分可以是具有期望生物学活性的多肽。这样的蛋白可以包括，例如，毒素，诸如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、豹蛙酶(或另一种细胞毒性RNase)、假单胞菌外毒素、霍乱毒素、白喉毒素；细胞凋亡剂，诸如肿瘤坏死因子，例如，TNF-α或TNF-β，α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原激活物、AIM I(WO 97/33899)、AIM II(WO 97/34911)、Fas配体(Takahashi等人，1994,PMID:7826947)、和VEGI(WO 99/23105)；血栓形成药，抗血管发生药，例如制管张素或内皮生长抑制素；淋巴因子，例如，白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、或生长因子，例如，生长激素(GH)。
B.诊断或检测剂
在其它优选的实施方案中，本发明的抗体或其片段或衍生物与诊断或可检测试剂、标记物或报道分子缀合，所述诊断或可检测试剂、标记物或报道分子可以是例如生物分子(例如，肽或核苷酸)、小分子、荧光团或放射性同位素。标记的抗体可用于监测过度增殖性病症的发展或进展或作为临床测试程序的部分来测定特定疗法(包括公开的抗体(即治疗诊断剂))的效力或测定治疗的将来进程。这样的标记物或报道分子也可以用于纯化选择的抗体用于抗体分析(例如，表位结合或抗体分仓)、分开或分离致瘤性细胞或用于临床前程序或毒理学研究中。
可以通过将抗体与可检测物质偶联来实现这样的诊断、分析和/或检测，所述可检测物质包括但不限于：各种酶，包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，诸如但不限于链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；荧光材料，诸如但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素(dichlorotriazinylamine fluorescein)、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料，例如但不限于鲁米诺；生物发光物质，诸如但不限于荧光素酶、荧光素和水母蛋白；放射性物质，诸如但不限于碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115In、113In、112In、111In)和锝(99Tc)、铊(201Ti)、镓(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、和117Tin；使用各种正电子发射断层显像的正电子发射金属、非放射性顺磁金属离子和放射性标记或与特定放射性同位素缀合的分子。在这样的实施方案中，适当的检测方法是本领域中众所周知的，并且可以容易地从许多商业来源获得。
在其它实施方案中，可以将抗体或其片段与标记物序列或化合物诸如肽或荧光团融合或缀合，以促进纯化或诊断或分析程序诸如免疫组织化学、生物层干涉测量、表面等离振子共振、流式细胞术、竞争性ELISA、FACs等。在优选的实施方案中，所述标记物包含组氨酸标签，诸如pQE载体提供的标签(Qiagen)等等，其中许多可商业获得。可用于纯化的其它肽标签包括但不限于：对应于源自流感血凝素蛋白的表位的血凝素“HA”标签(Wilson等人，1984，Cell 37：767)和“flag”标签(U.S.P.N.4,703,004)。
C.生物相容的修饰剂
在所选实施方案中，本发明的抗体可以与生物相容的修饰剂缀合，所述生物相容的修饰剂可用于如期望地调整、改变、改进或调节抗体特征。例如，可以通过结合相对高分子量聚合物分子诸如商业可得的聚乙二醇(PEG)或类似的生物相容的聚合物而生成具有增加的体内半衰期的抗体或融合构建体。本领域技术人员将理解，可以以许多不同分子量和分子构型获得PEG，可以选择所述分子量和分子构型为抗体赋予特定特性(例如，可以定制半衰期)。可以通过将PEG缀合至抗体或抗体片段的N-或C-末端，或经由赖氨酸残基上存在的ε-氨基而将PEG连接至有或没有多功能连接体的所述抗体或抗体片段或衍生物。可以使用导致生物学活性最小损失的直链或支链聚合物衍生化。可以通过SDS-PAGE和质谱密切监测缀合程度，从而确保PEG分子与抗体分子最佳缀合。可以通过例如大小排阻层析或离子交换层析将未反应的PEG与抗体-PEG缀合物相分离。以类似的方式，可以将公开的抗体与白蛋白缀合，以使抗体或抗体片段在体内更稳定或具有更长的体内半衰期。该技术是本领域众所周知的，参见，例如，WO 93/15199、WO 93/15200和WO 01/77137；和EP 413,622。其它生物相容的缀合物对于普通技术人员是显而易见的，并且可以根据本文的教导容易地鉴定。
D.连接体化合物
许多连接体化合物可用于将本发明的抗体缀合至相关弹头。连接体仅需要与抗体上的反应性残基(优选地，半胱氨酸或赖氨酸)和所选药物化合物共价结合。因此，与所选抗体残基反应且可用于提供本发明的相对稳定的缀合物(位点特异性的或以其它方式)的任何连接体与本文教导相容。
许多相容的连接体可以有利地结合至亲核的还原的半胱氨酸和赖氨酸。涉及还原的半胱氨酸和赖氨酸的缀合反应包括但不限于，硫醇-马来酰亚胺，硫醇-卤代(酰卤)，硫醇-烯，硫醇-炔，硫醇-乙烯基砜，硫醇-二砜，硫醇-硫代磺酸盐(或酯)，硫醇-吡啶基二硫化物和硫醇-对氟(parafluoro)反应。如本文进一步讨论，硫醇-马来酰亚胺生物缀合是最广泛使用的方法之一，这是由于其快速反应速率和温和的缀合条件。这种方法的一个问题是，逆向迈克尔反应(retro-Michael reaction)，和马来酰亚胺基连接的有效载荷从抗体损失或转移至血浆中的其它蛋白(诸如例如，人血清白蛋白)的可能性。然而，在优选实施方案中，如本文实施例14和16中描述的选择性还原和位点特异性抗体的使用可用于稳定缀合物并降低这种不期望的转移。硫醇-酰卤反应提供不能经受逆向迈克尔反应，因此更稳定的生物缀合物。然而，与基于马来酰亚胺的缀合相比，硫醇-卤化物反应通常具有较慢的反应速率，因此在提供不期望的药物抗体比上效率不高。硫醇-吡啶基二硫化物反应是另一种流行的生物缀合路线。吡啶基二硫化物经历与游离硫醇的快速交换，导致产生混合二硫化物和释放吡啶-2-硫酮。混合二硫化物可在还原性细胞环境中裂解，释放有效载荷。在生物缀合中获得更多关注的其它方法是硫醇-乙烯基砜和硫醇-二砜反应，其各自都与本文教导相容且明确地包括在本发明的范围之内。
在优选实施方案中，相容连接体将为细胞外环境中的ADC赋予稳定性，防止ADC分子的聚集，并保持在ADC易溶于在含水介质中游离可溶，并处于单体状态。在转运或递送至细胞中之前，ADC优选是稳定的且保持完整，即，抗体保持连接至药物部分。尽管连接体在目标细胞以外是稳定的，但是它们被设计为在细胞内以一定有效的速率被裂解或降解。因此，有效的连接体将：(i)保持抗体的特异性结合特性；(ii)允许缀合物或药物部分的细胞内递送；(iii)保持稳定和完整，即不裂解或降解，直至缀合物已被递送或转运至其目标位点；和(iv)维持药物部分的细胞毒性、细胞杀伤作用或细胞抑制效果(在一些情况下，包括任何旁观者效应)。ADC的稳定性可通过标准分析技术进行测定，所述标准分析技术诸如HPLC/UPLC、质谱法、HPLC和分离/分析技术LC/MS和LC/MS/MS。如上面所描述，抗体和药物部分的共价结合需要连接体具有两个反应性官能团，即在反应意义上是二价的。可用于连接两个或更多个官能或生物活性部分(诸如MMAE和位点特异性抗体)的二价连接体试剂是已知的，并且已描述用于提供其所得缀合物的方法。
与本发明相容的连接体可以广义地被分类为可裂解和不可裂解的连接体。可裂解的连接体(其可以包括酸不稳定连接体、蛋白酶可裂解的连接体和二硫化物连接体)被内化至目标细胞中且在细胞内的内体-溶酶体途径中裂解。细胞毒素的释放和活化依赖于内体/溶酶体酸性隔室，所述内体/溶酶体酸性隔室促进酸不稳定的化学键诸如腙或肟的裂解。如果溶酶体特异性蛋白酶裂解位点被改造为进入连接体，则细胞毒素将在它们的细胞内目标附近释放。或者，含有混合二硫化物的连接体提供一种方法，通过所述方法，细胞毒性有效载荷在细胞内释放(因为它们在细胞的还原环境中是选择性裂解的)，但不能在血流中的富氧环境中释放。通过比较的方式，含有酰胺连接的聚乙二醇或烷基间隔基的相容性非可裂解连接体在目标细胞内ADC的溶酶体降解期间释放毒性的有效载荷。在一些方面，连接体的选择将取决于缀合物中使用的特定药物、特定适应症和抗体靶。
因此，本发明的某些实施方案包含通过细胞内环境(例如，在溶酶体或内体或胞膜窖内)中存在的裂解剂可裂解的连接体。所述连接体可以是，例如，由细胞内肽酶或蛋白酶(包括，但不限于，溶酶体或内体蛋白酶)裂解的肽基连接体。在一些实施方案中，所述肽基连接体是至少两个氨基酸长，或至少三个氨基酸长。裂解剂可包括组织蛋白酶B和D以及纤溶酶，已知其各自水解二肽药物衍生物，导致活性药物在目标细胞内的释放。可通过硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶B裂解的示例性肽基连接体是包含Phe-Leu的肽，因为已经发现组织蛋白酶-B在癌组织中高度表达。这样的连接体的其它实例描述于，例如，U.S.P.N.6,214,345。在一个特定优选的实施方案中，可由细胞内蛋白酶裂解的肽基连接体是Val-Cit连接体、Val-Ala连接体或Phe-Lys连接体，诸如U.S.P.N.6,214,345中所述。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是，所述药剂当缀合时通常减弱，且所述缀合物的血清稳定性通常高。
在其它实施方案中，可裂解的连接体是pH敏感的。通常，pH敏感的连接体在酸性条件下是可水解的。例如，可使用在溶酶体中可水解的酸不稳定连接体(例如，腙，肟，缩氨基脲，缩氨基硫脲，顺式乌头酰胺，原酸酯，缩醛，缩酮，等)(参见例如，U.S.P.N.5,122,368；5,824,805；5,622,929)。这样的连接体在中性pH条件(诸如在血液中的条件)下是相对稳定的，但在低于pH 5.5或5.0(溶酶体的近似pH)是不稳定的。
在还有其它实施方案中，连接体在还原条件下是可裂解的(例如，二硫化物连接体)。多种二硫化物连接体是本领域已知的，包括，例如，可使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯)，SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)，SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)来形成的二硫化物连接体。在还有其它具体实施方案中，连接体是丙二酸酯连接体(Johnson等人,1995,Anticancer Res.15:1387-93)，马来酰亚胺基苯甲酰基连接体(Lau等人,1995,Bioorg-Med-Chem.3(10):1299-1304)，或3'-N-酰胺类似物(Lau等人,1995,Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12)。
在特别优选的实施方案中(描述于U.S.P.N.2011/0256157)，相容的肽基连接体将包含：
其中星号表示与药物的连接点，CBA是抗DPEP3抗体，L1是连接体，A是将L1连接至抗体上的反应性残基的连接基团(任选地包含间隔基)，L2是共价键或与-OC(＝O)-一起形成自脱落(self-immolative)连接体，并且L1或L2是可裂解的连接体。
L1优选为可裂解的连接体，并且可以被称为用于针对裂解活化连接体的触发器。
L1和L2(当存在时)的性质可以广泛地变化。这些基团基于它们的裂解特性进行选择，这可以通过在被递送缀合物的位点的条件来决定。通过酶的作用裂解的那些连接体是优选的，尽管也可以使用通过pH(例如，酸或碱不稳定的)、温度或照射后(例如光不稳定的)的变化可裂解的连接体。在还原或氧化条件下可裂解的连接体也可以用于本发明。
L1可以包含氨基酸的连续序列。氨基酸序列可以是用于酶促裂解的目标底物，从而允许释放药物。
在一个实施方案中，L1是通过酶的作用可裂解的。在一个实施方案中，酶是酯酶或肽酶。
在一个实施方案中，L1包含二肽。二肽可以被表示为-NH-X1-X2-CO-，其中-NH-和-CO-分别表示氨基酸基团X1和X2的N-和C-末端。二肽中的氨基酸可以是天然氨基酸的任何组合。当连接体是组织蛋白酶不稳定的连接体时，二肽可以是组织蛋白酶介导的裂解的作用位点。
另外，对于具有羧基或氨基侧链官能团的那些氨基酸基团，分别例如Glu和Lys，CO和NH可表示侧链官能团。
在一个实施方案中，二肽-NH-X1-X2-CO-中的基团-X1-X2-选自：-Phe-Lys-，-Val-Ala-，-Val-Lys-，-Ala-Lys-，-Val-Cit-，-Phe-Cit-，-Leu-Cit-，-Ile-Cit-，-Phe-Arg-和-Trp-Cit-，其中Cit为瓜氨酸。
优选的是，二肽-NH-X1-X2-CO-中的基团-X1-X2-选自：-Phe-Lys-，-Val-Ala-，-Val-Lys-，-Ala-Lys-和-Val-Cit-。
最优选的是，二肽-NH-X1-X2-CO-中的基团-X1-X2-是-Phe-Lys-或-Val-Ala-。
在一个实施方案中，L2存在并与-C(＝O)O-一起形成自脱落连接体。在一个实施方案中，L2是酶促活性的底物，从而允许释放药物。
在一个实施方案中，当L1通过酶的作用可裂解并且L2存在时，酶裂解L1和L2之间的键。
L1和L2，当存在时，可以通过选自以下的键连接：-C(＝O)NH-，-C(＝O)O-，-NHC(＝O)-，-OC(＝O)-，-O-C(＝O)O-，-NH-C(＝O)O-，-OC(＝O)NH-和-NHC(＝O)NH-。
连接至L2的L1的氨基可以是氨基酸的N-末端，或者可以从氨基酸侧链，例如赖氨酸氨基酸侧链的氨基衍生。
连接至L2的L1的羧基可以是氨基酸的C-末端，或者可以从氨基酸侧链，例如谷氨酸氨基酸侧链的羧基衍生。
连接至L2的L1的羟基可以由氨基酸侧链，例如丝氨酸氨基酸侧链的羟基衍生。
术语“氨基酸侧链”包括在以下中发现的那些基团：(i)天然存在的氨基酸，诸如丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，和缬氨酸；(ii)次要氨基酸诸如鸟氨酸和瓜氨酸；(iii)非天然氨基酸，β-氨基酸，天然存在的氨基酸的合成的类似物和衍生物；和(iv)前述物质的所有对映异构体，非对映异构体，异构体富集的，同位素标记的(例如2H，3H，14C，15N)，受保护的形式，和外消旋混合物。
在一个实施方案中，-C(＝O)O-和L2一起形成以下基团：
其中星号表示与药物或细胞毒性剂位置的连接点，波浪线表示与连接体L1的连接点，Y为-N(H)-，-O-，-C(＝O)N(H)-或-C(＝O)O-，并且n为0至3。亚苯基环任选被一个、两个或三个如本文所述的取代基取代。在一个实施方案中，亚苯基任选被卤素、NO2、R或OR取代。
在一个实施方案中，Y是NH。
在一个实施方案中，n是0或1。优选的是，n为0。
当Y是NH且n是0时，自脱落连接体可被称为对氨基苄基羰基连接体(PABC)。
在另一特别优选的实施方案中，连接体可以包括自脱落连接体，且二肽一起形成基团-NH-Val-Ala-CO-NH-PABC-，其如下所示：
其中星号表示与所选细胞毒性部分的连接点，且波浪线表示与可被缀合至抗体的连接体(例如，间隔基-抗体结合区段)的剩余部分的连接点。在二肽的酶促裂解后，当远程位点被活化时，自脱落连接体将允许受保护的化合物(即，细胞毒素)的彻底释放，这沿着下面所示的路线进行：
其中L*是连接体的剩余部分的活化形式，所述连接体包含现在已经裂解的肽基单元。药物的彻底释放确保它们将保持期望的毒性活性。
在一个实施方案中，A为共价键。因此，L1与抗体直接相连。例如，当L1包含连续氨基酸序列时，该序列的N-末端可以直接连接至抗体残基。
在另一个实施方案中，A是间隔基团。因此，L1与抗体间接地连接。
L1和A可以通过选自以下的键连接：-C(＝O)NH-、-C(＝O)O-、-NHC(＝O)-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NHC(＝O)O-、-OC(＝O)NH-、和-NHC(＝O)NH-。
如将在下面更详细地讨论，本发明的药物连接体将优选连接至半胱氨酸(包括游离半胱氨酸)上的反应性硫醇亲核体。为此，通过用各种还原剂诸如DTT或TCEP或如本文所述的温和还原剂处理，可以使抗体的半胱氨酸具有与连接体试剂缀合的反应性。在其它实施方案中，本发明的药物连接体将优选连接至赖氨酸。
优选的是，连接体含有亲电官能团，其用于与抗体上的亲核官能团反应。抗体上的亲核基团包括，但不限于：(i)N末端胺基团，(ii)侧链胺基团，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基团，例如半胱氨酸，和(iv)当抗体被糖基化时的糖羟基或氨基。胺、硫醇和羟基基团是亲核的，并且能够反应以便与包括以下的连接体部分和连接体试剂上的亲电基团形成共价键：(i)马来酰亚胺基团，(ii)活化的二硫化物，(iii)活性酯，诸如NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)酯，HOBt(N-羟基苯并三唑)酯，卤代甲酸酯，和酰卤；(iv)烷基和苯甲基卤化物，诸如卤代乙酰胺；和(v)醛类，酮类，羧基，且，其中的一些例举如下：
在特别优选的实施方案中，位点特异性抗体和药物-连接体部分之间的连接是通过位点特异性抗体的游离半胱氨酸的硫醇残基和存在于连接体上的末端马来酰亚胺基团。在这样的实施方案中，抗体和药物-连接体之间的连接是：
其中星号表示与药物-连接体的剩余部分的连接点，并且波浪线表示与抗体的剩余部分的连接点。在本实施方案中，S原子优选衍生自位点特异性的游离半胱氨酸。关于其它相容的连接体，结合部分包含可与活化的残基反应以提供期望的缀合物的末端碘乙酰胺。在任何情况下，鉴于本公开内容，本领域技术人员可容易地将公开的药物-连接体化合物各自与相容抗DPEP3位点特异性抗体缀合。
E.缀合
应当理解，许多众所周知的不同的反应可用于将药物部分和/或连接体连接至所选抗体。例如，利用半胱氨酸的巯基的各种反应可用于缀合期望部分。特别优选的实施方案将包括缀合包含一个或多个游离半胱氨酸的抗体，如下面详细讨论。在其它实施方案中，本发明的ADC可以通过将药物缀合至所选抗体中存在的赖氨酸残基的溶剂暴露的氨基而生成。还有其它实施方案包括活化N-末端的苏氨酸和丝氨酸残基，其然后可用于将公开的有效载荷连接至抗体。所选缀合方法将优选地适合于优化连接至抗体的药物的数目，并提供相对高的治疗指数。
用于将治疗性化合物缀合至半胱氨酸残基的各种方法是本领域中已知的，并且对于本领域技术人员是显而易见的。在碱性条件下，半胱氨酸残基将被去质子化，以生成硫醇盐亲核体，所述硫醇盐亲核体可以与软亲电体诸如马来酰亚胺和碘乙酰胺反应。通常，用于这样的缀合的试剂可以与半胱氨酸的半胱氨酸硫醇直接反应以形成缀合的蛋白，或与连接体-药物直接反应以形成连接体-药物中间体。在连接体的情况下，采用有机化学反应、条件和试剂的几个途径是本领域技术人员已知的，包括：(1)本发明的蛋白的半胱氨酸基团与连接体试剂经由共价键反应，以形成蛋白-连接体中间体，随后与活化的化合物反应；和(2)化合物的亲核基团与连接体试剂经由共价键反应，以形成药物-连接体中间体，随后与本发明的蛋白的半胱氨酸基团反应。如本领域技术人员从前述将显而易见，双官能连接体可用于本发明中。例如，所述双官能连接体可以包含用于共价连接至一个或多个半胱氨酸残基的硫醇修饰基团和用于共价或非共价连接至所述化合物的至少一个连接部分(例如，第二硫醇修饰部分)。
缀合前，可通过用还原剂(诸如二硫苏糖醇(DTT)或(三(2-羧乙基)膦(TCEP))处理使抗体具有与连接体试剂缀合的反应性。在其它实施方案中，可通过赖氨酸与试剂(包括但不限于2-亚氨基硫杂环戊烷(Traut氏试剂)、SATA、SATP或SAT(PEG)4)的反应将其它亲核基团引入抗体中，导致胺转化为硫醇。
关于这样的缀合，半胱氨酸硫醇或赖氨酸氨基团是亲核的，且能够反应以便与连接体试剂或化合物-连接体中间体或药物上的亲电基团形成共价键，所述亲电基团包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯类，HOBt酯类，卤代甲酸酯类和酸性卤化物；(ii)烷基和苄基卤化物，诸如卤代乙酰胺类；(iii)醛类，酮类，羧基和马来酰亚胺基团类；和(iv)二硫化物，包括吡啶基二硫化物，经由硫化物交换。化合物或连接体上的亲核基团包括，但不限于：胺，硫醇，羟基，酰肼，肟，肼，缩氨基硫脲，肼羧酸酯，和芳基酰肼基团，其能够反应以便与连接体部分和连接体试剂上的亲电基团形成共价键。
优选的标记试剂包括马来酰亚胺，卤代乙酰基，碘乙酰胺琥珀酰亚胺基酯，异硫氰酸酯，磺酰氯，2,6-二氯三嗪基，五氟苯基酯和亚磷酰胺，尽管也可以使用其它官能团。在某些实施方案中，方法包括，例如，使用马来酰亚胺、碘乙酰胺或卤代乙酰/烷基卤化物、氮杂环丙烷(aziridne)、丙烯酰基衍生物与半胱氨酸的硫醇反应以产生硫醚，所述硫醚与化合物反应。用活化的piridyldisulphide二硫化物交换游离的硫醇也可用于产生缀合物(例如，使用5-硫代-2-硝甲酸(TNB))。优选地，使用马来酰亚胺。
如上所示，赖氨酸也可用作反应性残基以实现缀合，如本文所述。亲核赖氨酸残基通常通过胺-反应的琥珀酰亚胺酯靶向。为了获得去质子的赖氨酸残基的最佳数目，水溶液的pH必须低于赖氨酸铵基团的pKa，其为约10.5，所以反应的典型pH为约8和9。用于偶联反应的常见试剂是NHS-酯，其通过赖氨酸酰化机制与亲核赖氨酸反应。经历类似反应的其它相容的试剂包含异氰酸酯和异硫氰酸酯，其也可以与本文的教导结合使用以提供ADC。一旦已经活化赖氨酸，上述连接基团中的许多可用于将弹头共价结合至抗体。
用于将化合物缀合至苏氨酸或丝氨酸残基(优选N-末端残基)的方法也是本领域中已知的。例如，已经描述方法，其中羰基前体衍生自丝氨酸或苏氨酸的1,2-氨基醇，其可以通过高碘酸盐氧化选择性且迅速转化为醛形式。醛与待连接至本发明的蛋白的化合物中的半胱氨酸的1,2-氨基硫醇的反应形成稳定的噻唑烷产物。该方法特别可用于在N-末端丝氨酸或苏氨酸残基标记蛋白。
在特别优选的实施方案中，可以通过引入一个、两个、三个、四个或多个游离半胱氨酸残基(例如，制备包含一个或多个游离的非天然半胱氨酸氨基酸残基的抗体)而将反应性硫醇基团引入所选抗体(或其片段)。这样的位点特异性抗体或改造的抗体允许缀合物制备物表现出增强的稳定性和实质均质性，这至少部分由于，提供本文所述的改造的一个或多个游离半胱氨酸位点和/或新型缀合程序。不同于完全或部分地还原每个链内或链间抗体二硫键以提供缀合位点(且与本发明完全相容)的常规的缀合方法，本发明额外地提供某些制备的游离半胱氨酸位点的选择性还原和将药物-连接体导向至某些制备的游离半胱氨酸位点。由改造的位点和选择性还原促进的缀合特异性允许在期望位置的位点定向缀合的高百分比。显著的是，这些缀合位点中的一些，诸如存在于轻链恒定区的末端区域中的缀合位点，通常难以有效地缀合，因为它们倾向于与其它游离半胱氨酸发生交叉反应。然而，通过分子改造和选择性还原所得游离半胱氨酸，可以获得有效缀合率，这大大减少了不希望的高DAR污染物和非特异性毒性。更一般地，改造构建体和包括选择性还原的公开的新型缀合方法提供具有改善的药代动力学和/或药效学和潜在地改善的治疗指数的ADC制备物。
位点特异性构建体呈现一个或多个游离半胱氨酸，其当还原时包含硫醇基团，其是亲核的并且能够反应以与连接体部分上的亲电基团(诸如上面公开的那些)形成共价键。本发明的优选的抗体将具有可还原的非配对链间或链内半胱氨酸，即提供这样的亲核基团的半胱氨酸。因此，在某些实施方案中，还原的未配对的半胱氨酸的游离巯基与公开的药物-连接体的末端马来酰亚胺基或卤代乙酰胺基的反应将提供期望的缀合。在这样的情况下，可以通过用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或(三(2-羧乙基)膦(TCEP)处理，使得抗体的游离半胱氨酸对与连接体试剂的缀合具有反应性。因此每个游离半胱氨酸将理论上呈现反应性硫醇亲核体。尽管这样的试剂是相容的，但应当理解，可以使用本领域技术人员已知的各种反应、条件和试剂，实现位点特异性抗体的缀合。
此外，已经发现，可以选择性还原所述改造抗体的游离半胱氨酸以提供增强的位点定向缀合并减少不希望的、潜在毒性的污染物。更具体地，已经发现“稳定剂”诸如精氨酸在蛋白中调节蛋白中的分子内和分子间的相互作用，并且可以与选择的还原剂(优选相对温和的)结合使用，以选择性还原游离半胱氨酸并便于如本文所述的位点特异性缀合。如本文所使用，术语“选择性还原(selective reduction)”或“选择性地还原(selectivelyreducing)”可以互换使用，并应当意指一个或多个游离半胱氨酸的还原，而同时基本上不断裂存在于改造抗体中的天然二硫键。在所选实施方案中，这可以通过某些还原剂来实现。在其它优选的实施方案中，改造构建体的选择性还原将包括，使用与还原剂(包括温和还原剂)组合的稳定剂。应当理解的是，术语“选择性缀合”应意指，如本文所述的已经被选择性还原的改造抗体与细胞毒素的缀合。在这方面，组合使用这样的稳定剂与所选还原剂可显著提高位点特异性缀合的效率，如通过在重和轻抗体链上的缀合的程度和制备物的DAR分布所确定。
尽管不希望受任何特定理论所束缚，但这样的稳定剂可发挥作用以调节静电微环境和/或在期望的缀合位点调节构象变化，由此允许相对温和的还原剂(其不实质上还原完整的天然二硫键)以促进在期望的游离半胱氨酸位点的缀合。已知这样的试剂(例如，某些氨基酸)形成盐桥(经由氢键键合和静电相互作用)，并且可以使得赋予稳定效应的方式调节蛋白-蛋白相互作用，所述稳定效应可引起有利的构象变化和/或可减少不利的蛋白-蛋白相互作用。此外，这样的试剂可以发挥作用以在还原后抑制不期望的分子内(和分子间)半胱氨酸-半胱氨酸键的形成，因此促进期望的缀合反应，其中所述改造的位点特异性半胱氨酸(优选经由连接体)结合至药物。由于选择性反应条件不提供完整的天然二硫键的显著还原，随后的缀合反应被自然地驱动到游离半胱氨酸上相对少的反应性硫醇(例如，优选2个游离硫醇/抗体)。如先前所提到，这大大降低如本文所述制成的缀合制备物中的非特异性缀合和相应杂质的水平。
在所选实施方案中，与本发明相容的稳定剂将通常包含至少一个部分具有碱性pKa的化合物。在某些实施方案中，部分将包含伯胺，而在其它优选实施方案中，胺部分将包含仲胺。在还有其它优选实施方案中，胺部分将包含叔胺或胍基。在其它所选实施方案中，胺部分将包含氨基酸，而在其它相容的实施方案中，胺部分将包含氨基酸侧链。在还有其它实施方案中，胺部分将包含蛋白原氨基酸。在还有其它实施方案中，胺部分包含非蛋白原氨基酸。在特别优选的实施方案中，相容的稳定剂可以包含精氨酸，赖氨酸，脯氨酸和半胱氨酸。此外，相容的稳定剂可以包括胍和具有碱性pKa的含氮杂环。
在某些实施方案中，相容的稳定剂包含具有至少一个胺部分具有大于约7.5的pKa的化合物，在其它实施方案中，主题胺部分将具有大于约8.0的pKa，在还有其它实施方案中，胺部分将具有大于约8.5的pKa，且在还有其它实施方案中，稳定剂将包含具有大于约9.0的pKa的胺部分。其它优选实施方案将包含稳定剂，其中胺部分将具有大于约9.5的pKa，而某些其它实施方案将包含稳定剂，其表现出具有大于约10.0的pKa的至少一个胺部分。在还有其它优选实施方案中，稳定剂将包含具有pKa大于约10.5的胺部分的化合物，在其它实施方案中，稳定剂将包含具有pKa大于约11.0的胺部分的化合物，而在还有其它实施方案中，稳定剂将包含pKa大于约11.5的胺部分。在还有其它实施方案中，稳定剂将包含具有pKa大于约12.0的胺部分的化合物，而在还有其它实施方案中，稳定剂将包含pKa大于约12.5的胺部分。本领域技术人员将理解，可以使用标准技术容易地计算或测定相关的pKa并且将其用来确定使用所选化合物作为稳定剂的适用性。
公开的稳定剂显示在与某些还原剂组合时特别有效地将缀合靶向至游离位点特异性半胱氨酸。对于本发明的目的，相容的还原剂可包括，产生用于缀合的还原的游离位点特异性半胱氨酸而不显著破坏改造抗体天然二硫键的任何化合物。在这样的条件下，由所选稳定剂和还原剂的组合提供，活化的药物连接体主要限于结合至期望的游离位点特异性半胱氨酸位点。相对温和的还原剂或在相对低的浓度使用以提供温和条件的还原剂是特别优选的。如本文所使用，术语“温和的还原剂”或“温和的还原条件”应被保持为意指任何试剂或由还原剂产生的状态(任选地在稳定剂的存在下)，所述试剂或状态提供，在一个或多个游离半胱氨酸位点的硫醇，而基本上不破坏存在于改造抗体中的天然二硫键。即，温和的还原剂或条件能够有效地还原一个或多个游离半胱氨酸(提供硫醇)，而不显著破坏蛋白的天然二硫键。期望的还原条件可以通过许多基于巯基的化合物来提供，所述基于巯基的化合物建立用于选择性缀合的适当环境。在优选的实施方案中，温和的还原剂可以包含具有一个或多个游离硫醇的化合物，而在特别优选的实施方案中，温和的还原剂将包含具有单一游离硫醇的化合物。与本发明相容的还原剂的非限制性实例包括谷胱甘肽，n-乙酰基半胱氨酸，半胱氨酸，2-氨基乙烷-1-硫醇和2-羟基乙烷-1-硫醇。
应当理解的是，以上所述选择性还原方法在靶向缀合至游离半胱氨酸中是特别有效的。在这方面，可通过各种本领域公认的技术来确定缀合至位点特异性抗体中的期望的目标位点的程度(本文定义为“缀合效率”)。可以通过评估目标缀合位点(在本发明中，轻链的c-末端上的游离半胱氨酸)上的缀合相对于所有其它缀合位点上的缀合的百分比，确定药物与抗体的位点特异性缀合的效率。在某些实施方案中，本文方法提供有效地将药物缀合至包含游离半胱氨酸的抗体。在一些实施方案中，缀合效率为至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少98％或更多，如由目标缀合相对于所有其它缀合位点的百分比来测量。
应当进一步理解的是，能够缀合的改造抗体可以含有游离半胱氨酸残基，所述游离半胱氨酸残基包含巯基，所述巯基在抗体产生或存储时被封闭或加帽。这样的帽包括与巯基相互作用并防止或抑制缀合形成的小分子、蛋白、肽、离子和其它物质。在一些情况下，未缀合的改造抗体可以包含游离半胱氨酸，所述游离半胱氨酸结合在相同或不同的抗体上的其它游离半胱氨酸。如本文所讨论，这样的交叉反应性可在制造程序期间导致各种污染物。在一些实施方案中，改造抗体可在缀合反应之前要求脱帽。在具体的实施方案中，本文的抗体是脱帽的，并表现出能够缀合的游离巯基。在具体实施方案中，本文抗体进行脱帽反应，所述脱帽反应不扰乱或重新排列天然存在的二硫键。应当理解，在大多数情况下，在正常的还原反应(还原或选择性还原)过程中发生脱帽反应。
F.DAR分布和纯化
与本发明的位点特异性抗体缀合的优点之一是生成包含狭窄DAR分布的相对均匀的ADC制备物的能力。在这方面，在药物和改造抗体之间的化学计量比方面，公开的构建体和/或选择性缀合提供样品内的ADC物质种类的均质性。如上面简要讨论，术语“药物抗体比”或“DAR”是指，药物与抗体的摩尔比。在一些实施方案中，缀合物制备物在它的DAR分布方面可以是基本上均质的，这意味着在所述制备物中存在具有特定DAR(例如，2或4的DAR)的位点特异性ADC的主要物质种类，其在载荷位点方面(即在游离半胱氨酸上)也是均匀的。在本发明的某些实施方案中，可能通过使用位点特异性抗体和/或选择性还原和缀合，实现期望的均质性。在其它优选的实施方案中，可通过组合使用位点特异性构建体与选择性还原而实现期望的均质性。在还有其它特别优选的实施方案中，可以使用分析或制备色谱技术进一步纯化制备物。在每个这些实施方案中，可以使用本领域已知的各种技术分析ADC样品的均质性，所述技术包括但不限于质谱，HPLC(例如，大小排阻HPLC，RP-HPLC，HIC-HPLC等)或毛细管电泳。
关于ADC制备物的纯化，应当理解，可以采用标准的药物的制备方法，以获得期望的纯度。如本文所讨论，液相色谱法诸如反相(RP)和疏水性相互作用色谱法(HIC)可以通过药物载荷值分离混合物中的化合物。在一些情况下，离子交换(IEC)或混合模式色谱(MMC)也可以用于分离具有特定的药物载荷的物质种类。
公开的ADC及其制备物可以包含各种化学计量摩尔比的药物和抗体部分，这取决于抗体的构型，并且至少部分地取决于用于实现缀合的方法。在某些实施方案中，药物载荷/ADC可以包含1-20个弹头(即，n是1-20)。其它所选实施方案可以包含具有1至15个弹头的药物载荷的ADC。在还有其它实施方案中，所述ADC可以包含1-12个弹头或，更优选，1-10个弹头。在某些优选的实施方案中，所述ADC将包含1至8个弹头。
虽然理论药物载荷可以是相对高的，但由于聚集体和其它污染物，实际限制诸如游离半胱氨酸交叉反应性和弹头疏水性倾向于限制包含这样的DAR的均质制备物的生成。即，较高的药物载荷，例如>6，可引起某些抗体-药物缀合物的聚集，不溶性，毒性，或细胞通透性的损失。鉴于这样的顾虑，由本发明提供的实际药物载荷的优选范围是1至8个药物/缀合物，即，其中1、2、3、4、5、6、7或8个药物共价连接至每个抗体(例如，对于IgG1，其它抗体可以具有不同的载荷能力，这取决于二硫键的数目)。优选地，本发明的组合物的DAR将为约2、4或6，且在特别优选的实施方案中，DAR将包含约2。
尽管本发明提供相对高水平的均质性，但公开的组合物实际上包含具有一定范围(在IgG1抗体的情况下为1至8个)的药物化合物的缀合物的混合物。因此，公开的ADC组合物包含这样的缀合物的混合物，其中大多数组成抗体共价连接至一个或多个药物部分并且(尽管选择性还原的缀合特异性)其中药物部分可通过各种硫醇基团附接至抗体。也就是说，在缀合后，本发明的ADC组合物将包含具有各种浓度的不同药物载荷(例如1至8个药物/IgG1抗体)的缀合物(连同主要由游离半胱氨酸交叉反应性引起的某些反应污染物)的混合物。使用选择性还原和制造后纯化，可使缀合物组合物达到其主要含有单一主要的期望的ADC物质种类(例如药物载荷为2)和相对低水平的其它ADC物质种类(例如药物载荷为1、4、6等)的点。平均DAR值表示完整组合物(即合在一起的所有ADC物质种类)的药物载荷的加权平均值。由于所用定量方法的固有不确定性和在商业环境中完全移除非主要ADC物质种类的困难，可接受的DAR值或说明通常呈现为平均值、范围或分布(即平均DAR为2+/-0.5)。医药环境中优选使用包含该范围(即1.5至2.5)内的所测量的平均DAR的组合物。
因此，在某些优选实施方案中，本发明将包含平均DAR为1、2、3、4、5、6、7或8(各自+/-0.5)的组合物。在其它优选实施方案中，本发明将包含2、4、6或8+/-0.5的平均DAR。最终，在所选优选实施方案中，本发明将包含2+/-0.5的平均DAR。应当理解，在某些优选实施方案中，范围或偏差可小于0.4。因此，在其它实施方案中，组合物将包含1、2、3、4、5、6、7或8(各自+/-0.3)的平均DAR；2、4、6或8+/-0.3的平均DAR或甚至更优选2或4+/-0.3的平均DAR或甚至2+/-0.3的平均DAR。在其它实施方案中，IgG1缀合物组合物将优选包含平均DAR为1、2、3、4、5、6、7或8(各自+/-0.4)的组合物和相对低水平(即小于30％)的非主要ADC物质种类。在其它优选实施方案中，ADC组合物将包含2、4、6或8(各自+/-0.4)的平均DAR和相对低水平(<30％)的非主要ADC物质种类。在特别优选实施方案中，ADC组合物将包含2+/-0.4的平均DAR和相对低水平(<30％)的非主要ADC物质种类。在还有其它实施方案中，当针对其它DAR物质种类测量时，主要的ADC物质种类(例如，2的DAR)将以以下浓度存在：大于65％的浓度，大于70％的浓度，大于75％的浓度，大于80％的浓度，大于85％的浓度，大于90％的浓度，大于93％的浓度，大于95％的浓度，或甚至大于97％的浓度。
如下面实施例中详述，来自缀合反应的ADC制备物中每抗体的药物分布可通过常规方式表征，诸如UV-Vis分光光度法、反相HPLC、HIC、质谱、ELISA和电泳。也可确定在药物数/抗体的方面的ADC的定量分布。通过ELISA，可确定特定ADC制备物中药物数/抗体的平均值。然而，药物数/抗体值的分布无法由抗体-抗原结合和ELISA的检测限制辨别。此外，用于检测抗体-药物缀合物的ELISA测定法不确定药物部分在何处连接至抗体(诸如重链或轻链片段)或特定氨基酸残基。
VI诊断和筛选
A.诊断剂
本发明提供用于检测、诊断或监测增殖性病症的体外和体内方法和筛选来自患者的细胞以鉴定肿瘤细胞(包括致瘤性细胞)的方法。这样的方法包括鉴定具有癌症的个体用于治疗癌症或监测癌症的进展，包括使患者或从患者获得的样品(在体内或体外)与如本文所述的抗体接触，并检测抗体与样品中结合或游离的目标分子的缔合的存在或不存在或水平。在一些实施方案中，所述抗体将包含如本文所述的可检测的标记或报道分子。
在一些实施方案中，所述抗体与样品中的特定细胞的缔合可以表示该样品可以含有致瘤性细胞，从而表明，可以用如本文所述的抗体有效治疗具有癌症的个体。
样品可以通过许多测定法分析，所述测定法例如放射免疫测定，酶免疫测定(例如，ELISA)，竞争性结合测定法，荧光免疫测定法，免疫印迹测定法，Western印迹分析和流式细胞术测定法。相容的体内治疗诊断或诊断测定法可包括本领域公认的成像或监测技术，例如磁共振成像，计算机断层扫描(例如CAT扫描)，正电子断层扫描(例如，PET扫描)、射线成像，超声波等。
在一个特别优选的实施方案中，可以使用本发明的抗体以检测和定量患者样品(例如，血浆或血液)中的特定决定簇(例如，DPEP3)的水平，其可以进而，可用于检测、诊断或监测与相关决定簇相关的增殖性病症。在相关的实施方案中，可以使用本发明的抗体以在体内或体外检测、监测和/或定量循环肿瘤细胞(WO 2012/0128801)。在还有其它优选实施方案中，循环肿瘤细胞可包含致瘤性细胞。
在本发明的某些实施方案中，可以在治疗或方案之前使用公开的抗体评估或表征受试者或来自受试者的样品中的致瘤性细胞，以建立基线。在其它实施方案中，可以从衍生自所治疗的受试者的样品评估所述致瘤性细胞。
B.筛选
在某些实施方案中，所述抗体可用于通过与决定簇相互作用筛选样品以鉴定改变肿瘤细胞的功能或活性的化合物或试剂(例如，抗体或ADC)。在一个实施方案中，使肿瘤细胞与抗体或ADC接触，且所述抗体或ADC可用于筛选表达特定目标(例如，DPEP3)的细胞，以便鉴定这样的细胞而用于目的，包括但不限于，诊断目的，且监测这样的细胞以确定治疗效力或针对表达这样的目标的细胞富集细胞群体。
在又另一个实施方案中，方法包括使肿瘤细胞与测试剂或化合物直接或间接地接触，且确定所述测试剂或化合物是否调节决定簇相关肿瘤细胞的活性或功能，例如，细胞形态或活力、标志物的表达、分化或去分化、细胞呼吸、线粒体活性、膜完整性、成熟、增殖、活力、凋亡或细胞死亡中的变化。直接相互作用的一个实例是物理相互作用，而间接相互作用包括，例如，组合物对中间分子作用，所述中间分子进而作用于引用的实体(例如，细胞或细胞培养物)。
筛选方法包括高通量筛选，其可以包括任选定位或放置在预先确定的位置(例如，培养皿、管、烧瓶、滚瓶或板上)的细胞的阵列(例如，微阵列)。高通量机器人或手动处理方法可以在短时段内探测化学相互作用，并确定许多基因的表达水平。已经开发出利用分子信号(例如，经由荧光团或微阵列(Mocellin and Rossi,2007,PMID:17265713))和以非常快的速度处理信息的自动分析的技术(例如，参见Pinhasov等人,2004,PMID:15032660)。可以筛选的文库包括，例如，小分子文库，噬菌体展示文库，全人抗体酵母展示文库(Adimab)，siRNA文库和腺病毒转染载体。
VII医药制备物和治疗性用途
A.制剂和施用途径
本发明的抗体或ADC可以使用本领域公认的技术以各种方式配制。在一些实施方案中，本发明的治疗性组合物可以纯施用或以含有最少额外组分的形式施用，而其它组合物可任选配制以含有合适的药学上可接受的载体。如本文所使用，“药学上可接受的载体”包含本领域中众所周知的赋形剂、媒介物、助剂和稀释剂，并且可得自用于药物制剂中使用的商业来源(参见例如Gennaro(2003)Remington:The Science and Practice ofPharmacy with Facts and Comparisons:Drugfacts Plus,第20版,Mack Publishing；Ansel等人(2004)Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版,Lippencott Williams and Wilkins；Kibbe等人(2000)Handbook of PharmaceuticalExcipients,第3版,Pharmaceutical Press.)。
合适的药学上可接受的载体包含相对惰性且可以有助于缀合物的施用或可以帮助将活性化合物加工成药学优化以递送至作用位点的制备物的物质。
这样的药学上可接受的载体包括可以改变制剂的形式、稠度、粘度、pH、张力、稳定性、摩尔渗透压浓度、药代动力学、蛋白聚集或溶解度的试剂，且包括缓冲剂、润湿剂、乳化剂、稀释剂、包封剂和皮肤渗透增强剂。载体的某些非限制性实例包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、精氨酸、蔗糖、水、甘油、乙醇、山梨糖醇、葡聚糖、羧甲基纤维素钠及其组合。用于全身施用的抗体可配制以用于经肠、肠胃外或局部施用。实际上，所有三种类型的制剂可同时使用以实现活性成分的全身施用。用于肠胃外和非肠胃外药物递送的赋形剂和制剂描述于Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2000)第20版Mack Publishing。
用于经肠施用的合适制剂包括硬或软明胶胶囊、丸剂、片剂，包括包衣片剂、酏剂、悬浮液、糖浆剂或吸入剂和其控释形式。
适用于肠胃外施用(例如通过注射)的制剂包括水性或非水性、等张、无热原、无菌液体(例如溶液、悬浮液)，其中溶解、悬浮或以其它方式提供活性成分(例如于脂质体或其它微粒中)。这样的液体可额外含有其它药学上可接受的载体，诸如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、悬浮剂、增稠剂，和使制剂与所欲受体的血液(或其它相关体液)等张的溶质。赋形剂的实例包括例如水、醇类、多元醇类、甘油、植物油类等。用于这样的制剂中的合适的等张的药学上可接受的载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液(Ringer'sSolution)或乳酸盐化的林格氏注射液(Lactated Ringer's Injection)。
用于肠胃外施用(例如静脉内注射)的相容制剂将包含约10μg/mL至约100mg/mL的ADC或抗体浓度。在某些所选实施方案中，抗体或ADC浓度将包含20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300、μg/mL、400μg/mL、500μg/mL、600μg/mL、700μg/mL、800μg/mL、900μg/mL或1mg/mL。在其它优选实施方案中，ADC浓度将包含2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、8mg/mL、10mg/mL、12mg/mL、14mg/mL、16mg/mL、18mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL或100mg/mL。
可以通过各种途径将本发明的化合物和组合物体内施用于有需要的受试者，所述途径包括，但不限于，口服、静脉内、动脉内、皮下、肠胃外、鼻内、肌内、心内、心室内、气管内、经颊、直肠、腹膜内、皮内、局部、经皮、和鞘内、或以其它方式通过植入或吸入进行。主题组合物可以配制成固体、半固体、液体、或气体形式的制剂；包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、粒剂、药膏、溶液剂、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂、和气雾剂。可以根据预期的应用和治疗方案选择适当的制剂和施用途径。
B.剂量
特定剂量方案(即剂量、时机和重复)将取决于特定个体以及经验上的考虑，诸如药代动力学(例如半衰期、清除率等)。施用频率的确定可以由本领域技术人员诸如主治医师基于考虑病况和所治疗的病况的严重度和所治疗的受试者的年龄和总体健康状况等来进行。施用频率可以经疗法进程基于所选组合物的效力和给药方案的评价进行调整。这样的评价可以基于特定疾病、病症或状况的标志物来进行。在其中个体具有癌症的实施方案中，这些包括经由触诊或目视观察的肿瘤大小的直接测量；通过x-射线或其它成像技术的肿瘤大小的间接测量；如通过直接肿瘤活检和肿瘤样品的显微镜检查所评价的改善；根据本文所述方法鉴定的间接肿瘤标志物(例如，对于前列腺癌的PSA)或抗原的测量；增殖或致瘤性细胞的数目的减少，这样的肿瘤细胞的减少的维持；肿瘤细胞的增殖的减少；或转移的发展的延迟。
本发明的DPEP3抗体或ADC可以各种范围施用。这些包括5μg/kg体重至约100mg/kg体重/剂量；约50μg/kg体重至约5mg/kg体重/剂量；约100μg/kg体重至约10mg/kg体重/剂量。其它范围包括约100μg/kg体重至约20mg/kg体重/剂量和约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重/剂量。在某些实施方案中，剂量为至少约100μg/kg体重，至少约250μg/kg体重，至少约750μg/kg体重，至少约3mg/kg体重，至少约5mg/kg体重，至少约10mg/kg体重。
在所选实施方案中，将以约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100μg/kg体重/剂量施用(优选静脉内)DPEP3抗体或ADC。其它实施方案可以包括以约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000μg/kg体重/剂量施用ADC。在其它优选实施方案中，将以2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、9或10mg/kg施用公开的缀合物。在还有其它实施方案中，可以12、14、16、18或20mg/kg体重/剂量施用缀合物。在还有其它实施方案中，可以25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90或100mg/kg体重/剂量施用缀合物。用本文中的教导，本领域技术人员可基于临床前动物研究、临床观察以及标准医药和生物化学技术和测量容易地确定各种DPEP3抗体或ADC的适当剂量。
其它给药方案可以基于如U.S.P.N.7,744,877中公开的体表面积(BSA)计算。如众所周知，BSA使用患者的身高和体重来计算，并提供由他或她身体的表面积代表的受试者大小的量度。在某些实施方案中，可以1mg/m2至800mg/m2、50mg/m2至500mg/m2的剂量和100mg/m2、150mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、300mg/m2、350mg/m2、400mg/m2或450mg/m2的剂量施用所述缀合物。还应当理解的是，本领域公认和凭经验的技术可用于确定适当剂量。
抗DPEP3抗体或ADC可以特定时间表施用。通常，将有效剂量的DPEP3缀合物一次或多次施用于受试者。更具体地，以一个月一次、一个月多于一次或一个月少于一次将有效剂量的ADC施用于受试者。在某些实施方案中，DPEP3抗体或ADC的有效剂量可多次施用，包括持续至少一个月、至少六个月、至少一年、至少两年或几年的时段。在还有其它实施方案中，CLDN抗体或ADC的施用之间可经过几天(2、3、4、5、6或7)、几周(1、2、3、4、5、6、7或8)或几个月(1、2、3、4、5、6、7或8))或甚至一年或几年。
在某些优选实施方案中，涉及缀合的抗体的疗程将包含所选药物产品在数周或数月时段内的多次剂量。更具体地，本发明的抗体或ADC可以每天一次、每两天一次、每四天一次、每周一次、每十天一次、每两周一次、每三周一次、每个月一次、每六周一次、每两个月一次、每十周一次或每三个月一次施用。在这方面，应当理解，可基于患者反应和临床实践改变剂量或调节时间间隔。
对于已经给予一次或多次施用的个体中公开的治疗组合物，也可以凭经验确定剂量和方案。例如，可以给予个体增量剂量的如本文所述产生的治疗组合物。在所选实施方案中，剂量可分别基于凭经验确定或观察的副作用或毒性而逐渐增加或降低或减少。为了评价所选组合物的效力，可以如前所述跟踪特定疾病、病症或状况的标志物。对于癌症，这些包括经由触诊或目视观察的肿瘤大小的直接测量，通过x-射线或其它成像技术的肿瘤大小的间接测量；如通过直接肿瘤活检和肿瘤样品的显微镜检查所评价的改善；根据本文所述方法鉴定的间接肿瘤标志物(例如，对于前列腺癌的PSA)或致瘤性抗原的测量，疼痛或麻痹的减少；改善的与肿瘤相关的讲话、视觉、呼吸或其它残疾；增加的食欲；或如通过接受的测试或生存的延长所测量的生活质量的增加。对本领域技术人员将显而易见的是，剂量将取决于个体、肿瘤状况的类型、肿瘤状况的阶段、个体中肿瘤状况是否已经开始转移至其它位置和过去和同时正在使用的治疗而变化。
C.组合疗法
组合疗法可用于预防或治疗癌症和预防癌症的转移或复发。如本文所使用，“组合疗法”意指包含至少一种抗DPEP3抗体或ADC和至少一种治疗性部分(例如，抗癌剂)的组合的施用，其中所述组合优选与(i)单独使用的抗DPEP3抗体或ADC，或(ii)单独使用的治疗性部分，或(iii)与另一治疗性部分组合使用治疗性部分(不加入抗DPEP3抗体或ADC)相比具有癌症的治疗的治疗性协同作用或改善癌症的治疗的可测量的治疗效果。如本文所使用，术语“治疗性协同作用”意指，抗DPEP3抗体或ADC和一个或多个治疗性部分的组合，其具有比抗DPEP3抗体或ADC和所述一个或多个治疗性部分的组合的累加效应更高的治疗效果。
通过与对照或基线测量比较而定量公开的组合的期望的结果。如本文所使用，相对术语诸如“改善”、“增加”或“减少”分别表示相对于对照的值，所述对照诸如在开始本文所述的治疗之前在同一个体中的测量值，或在不存在本文中所述的抗DPEP3抗体或ADC、但存在其它治疗性部分(诸如护理治疗的标准)的情况下的对照个体(或多个对照个体)中的测量值。代表性对照个体是患有与所治疗的个体相同形式的癌症的个体，其与所治疗的个体的年龄约相同(以确保治疗的个体和对照个体的疾病的阶段是相当的。)
对疗法的响应的变化或改善通常是统计学显著的。如本文所使用，术语“显著性”或者“显著的”涉及在两种或更多种实体之间存在非随机关联性的概率的统计分析。为了确定关系是否为“显著的”或具有“显著性”，可以计算“p值”。低于用户定义的截止点的p值被认为是显著的。小于或等于0.1、小于0.05、小于0.01、小于0.005、或小于0.001的p值可被认为是显著的。
协同治疗效果可以是由单一治疗性部分或抗DPEP3抗体或ADC引起的治疗效果，或由给定组合的抗DPEP3抗体或ADC或单一治疗性部分引起的治疗效果的总和的至少约两倍、或至少约五倍、或至少约十倍、或至少约二十倍、或至少约五十倍、或至少约一百倍的效果。协同治疗效果也可观察为，与单一治疗性部分或抗DPEP3抗体或ADC引起的治疗效果，或由给定组合的抗DPEP3抗体或ADC或单一治疗性部分引起的治疗效果的总和相比，治疗效果增加至少10％或至少20％、或至少30％、或至少40％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少100％或更多。协同效果还是允许在组合使用治疗剂时减少治疗剂的给药的效果。
在实施组合疗法中，可以使用相同或不同的施用途径或以单一组合物、或作为两种或更多种不同组合物将抗DPEP3抗体或ADC和一种或多种治疗性部分同时施用于受试者。或者，用抗DPEP3抗体或ADC的治疗可以在抗癌部分治疗之前，或之后，例如，间隔为数分钟至数周。在一个实施方案中，在彼此的约5分钟至约两周内施用治疗性部分和抗体或ADC两者。在还有其它实施方案中，在施用所述抗体和治疗性部分之间可以经过几天(2、3、4、5、6或7)、几周(1、2、3、4、5、6、7或8)或几个月(1、2、3、4、5、6、7或8)。
所述组合疗法可以以各种时间表(诸如每天一次、两次或三次，每两天一次，每三天一次，每周一次，每两周一次，每个月一次，每两个月一次，每三个月一次，每六个月一次)施用，直至所述病况得到治疗、减轻或治愈，或者可以连续地施用。所述抗体和治疗性部分可以交替几天或几周施用；或者给予抗DPEP3抗体或ADC治疗的顺序，随后为一次或多次用额外的治疗部分治疗。在一个实施方案中，抗DPEP3抗体或ADC与一个或多个治疗部分组合施用，持续短治疗周期。在其它实施方案中，施用所述组合疗法，持续长治疗周期。所述组合疗法可以经由任何途径施用。
在一些实施方案中，所述抗DPEP3抗体或ADC可以与各种第一线癌症治疗组合使用。在一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和细胞毒性剂例如异环磷酰胺、丝裂霉素C、长春地辛、长春碱、依托泊苷、ironitecan、吉西他滨、紫杉烷类、长春瑞滨、甲氨喋呤和培美曲塞)和任选一种或多种其它治疗部分。
在另一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和基于铂的药物(例如，卡铂或顺铂)和任选一种或多种其它治疗性部分(例如，长春瑞滨；吉西他滨；紫杉烷诸如例如，多西他赛或紫杉酚；irinotican；或培美曲塞)。
在一个实施方案中，例如，在BR-ERPR、BR-ER或BR-PR癌症的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和被描述为“激素疗法”的一种或多种治疗部分。本文使用的“激素疗法”指的是例如他莫昔芬；促性腺激素或促黄体释放激素(GnRH或LHRH)；依维莫司和依西美坦；托瑞米芬；或芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑，来曲唑，依西美坦或氟维司群)。
在另一个实施方案中，例如，在BR-HER2的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和曲妥珠单抗或ado-曲妥单抗emtansine和任选地一种或多种其它治疗部分(例如帕妥珠单抗和/或多西他赛)。
在一些实施方案中，例如，在转移性乳腺癌的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和紫杉烷(例如多西他赛或紫杉酚)和任选地另外的治疗部分，例如，蒽环类(例如，多柔比星或表柔比星)和/或艾立布林。
在另一个实施方案中，例如，在转移性或复发性乳腺癌或BRCA突变乳腺癌的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和甲地孕酮和任选地另外的治疗部分。
在其它实施方案中，例如，在BR-TNBC的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂(例如BMN-673，奥拉帕尼，rucaparib和veliparib)和任选地另外的治疗部分。
在另一个实施方案中，例如，在乳腺癌的治疗中，组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和环磷酰胺和任选地另外的治疗部分(例如多柔比星，紫杉烷，表柔比星，5-FU和/或甲氨蝶呤。
在另一个实施方案中，用于治疗EGFR阳性NSCLC的组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和阿法替尼和任选一种或多种其它治疗性部分(例如，埃罗替尼和/或贝伐单抗)。
在另一个实施方案中，用于治疗EGFR阳性NSCLC的组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和埃罗替尼和任选一种或多种其它治疗性部分(例如，贝伐单抗)。
在另一个实施方案中，用于治疗ALK阳性NSCLC的组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和色瑞替尼和任选一种或多种其它治疗性部分。
在另一个实施方案中，用于治疗ALK阳性NSCLC的组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和克唑替尼和任选一种或多种其它治疗性部分。
在另一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和贝伐单抗和任选一种或多种其它治疗性部分(例如，紫杉烷，诸如，例如，多西他赛或紫杉酚；和/或铂类似物)。
在另一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和贝伐单抗和任选一种或多种其它治疗性部分(例如，吉西他滨和/或铂类似物)。
在一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和基于铂的药物(例如，卡铂或顺铂)类似物和任选一种或多种其它治疗性部分(例如紫杉烷，诸如，例如，多西他赛和紫杉酚)。
在一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和基于铂的药物(例如，卡铂或顺铂)类似物和任选一种或多种其它治疗性部分(例如紫杉烷，诸如，例如，多西他赛和紫杉酚和/或吉西他滨和/或多柔比星)。
在一个具体实施方案中，用于治疗铂耐受的肿瘤的组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和多柔比星和/或依托泊苷和/或吉西他滨和/或长春瑞滨和/或异环磷酰胺和/或亚叶酸调节的5-氟尿嘧啶和/或贝伐单抗和/或他莫昔芬；和任选一种或多种其它治疗性部分。
在另一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和PARP抑制剂和任选一种或多种其它治疗性部分。
在另一个实施方案中，所述组合疗法包括使用抗DPEP3抗体或ADC和贝伐单抗和任选环磷酰胺。
组合疗法可以包括抗DPEP3抗体或ADC和对于包含突变的或异常表达的基因或蛋白(例如BRCA1)的肿瘤有效的化学治疗部分。
T淋巴细胞(例如，细胞毒性淋巴细胞(CTL))在对抗恶性肿瘤的宿主防御中起重要作用。CTL通过将肿瘤相关抗原呈递到抗原呈递细胞上激活。活性特异性免疫疗法是可用于通过用来源于已知癌症相关抗原的肽接种患者来增加针对癌症的T淋巴细胞应答的方法。在一个实施方案中，组合疗法可包括抗DPEP3抗体或ADC和针对癌症相关抗原(例如黑素细胞谱系特异性抗原酪氨酸酶、gp100、Melan-A/MART-1或gp75)的疫苗。在其它实施方案中，组合疗法可以包括施用抗DPEP3抗体或ADC以及体外扩增、活化和过继再引入自体CTL或自然杀伤细胞。CTL活化还可通过增强抗原呈递细胞的肿瘤抗原呈递的策略来促进。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)促进树突状细胞的招募和树突状细胞交叉致敏的活化。在一个实施方案中，组合疗法可包括分离抗原呈递细胞、用刺激性细胞因子(例如GM-CSF)活化这样的细胞、用肿瘤相关抗原致敏、以及随后将抗原呈递细胞再引入到患者中，组合使用抗DPEP3抗体或ADC和任选一种或多种不同的治疗部分。
本发明还提供抗DPEP3抗体或ADC与放疗的组合。如本文所使用，术语“放疗”意指，用于诱导肿瘤细胞内局部DNA损伤的任何机制，诸如γ-辐射、X-射线、UV-辐射、微波、电子发射等。还考虑使用将放射性同位素定向递送至肿瘤细胞的组合疗法，并且可以与本文公开的抗DPEP3抗体组合使用或作为其缀合物使用。通常，经约1至约2周的时间段以脉冲施用放疗。任选地，所述放疗可以作为单一剂量或作为多个连续剂量施用。
在其它实施方案中，抗DPEP3抗体或ADC可以与下述抗癌剂中的一种或多种组合使用。
D.抗癌剂
如本文所使用，术语“抗癌剂”或“化疗剂”是“治疗部分”的一个子集，其进而是被描述为“药物活性部分”的药剂的子集。更具体地，“抗癌剂”意指可用于治疗细胞增殖性病症诸如癌症的任何试剂，包括但不限于细胞毒性剂、细胞生长抑制剂、抗血管生成剂、减积剂、化疗剂、放疗和放疗剂、靶向的抗癌剂、生物反应调节剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞因子、激素疗法、抗转移剂和免疫治疗剂。应当理解，在如上面所讨论的所选实施方案中，这样的抗癌剂可以包含缀合物，并且可以在施用前与抗体缔合。在某些实施方案中，将公开的抗癌剂与抗体连接，以提供如本文公开的ADC。
也可以是抗癌剂的术语“细胞毒性剂”意指对细胞有毒性且降低或抑制细胞的功能和/或引起细胞的破坏的物质。通常，该物质是源自活生物体的天然存在的分子(或合成制备的天然产物)。细胞毒性剂的实例包括但不限于小分子毒素或细菌的酶学活性毒素(例如，白喉毒素、假单胞菌内毒素和外毒素、葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxinA))，真菌的酶学活性毒素(例如，α-八叠球菌、局限曲菌素(restrictocin))、植物的酶学活性毒素(例如，相思豆毒蛋白、蓖麻毒素、蒴莲素(modeccin)、槲寄生素(viscumin)、美洲商陆抗病毒蛋白、皂素、白树毒素、momoridin、天花粉蛋白、大麦毒素、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白(PAPI、PAPII、和PAP-S)、观赏苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂、丝林霉素(mitegellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素、伊诺霉素和tricothecenes)或动物的酶学活性毒素(例如，细胞毒性RNase，诸如细胞外胰Rnase；DNaseI，包括其片段和/或变体)。
抗癌剂可以包括抑制、或设计为抑制癌细胞或可能变为癌性或生成致瘤性后代的细胞(例如，致瘤性细胞)的任何化学剂。这样的化学试剂经常针对对于细胞生长或分裂必需的细胞内过程，并且因此针对通常迅速生长和分裂的癌细胞特别有效。例如，长春新碱使微管解聚，并且因此抑制细胞进入有丝分裂。这样的试剂经常施用，并且经常在组合中，例如，在制剂CHOP中是最有效的。再次，在所选实施方案中，这样的抗癌剂可缀合至公开的抗体。
可与本发明的抗体组合(或缀合)使用的抗癌剂的实例包括但不限于烷化剂、烷基磺酸盐(或酯)、阿那曲唑、鹅膏蕈碱类、氮丙啶、乙烯亚胺和甲基阿美胺(methylamelamine)、多聚乙酰(acetogenin)、喜树碱(camptothecin)、BEZ-235、硼替佐米(bortezomib)、苔藓抑素(bryostatin)、卡利士他汀(callystatin)、CC-1065、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、克瑞托欣(cryptophycins)、多拉司他汀(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)、艾榴素(eleutherobin)、埃罗替尼(erlotinib)、水鬼蕉碱(pancratistatin)、沙克迪因(sarcodictyin)、海绵素(spongistatin)、氮芥、抗生素、烯二炔、烯二炔蒽环类抗生素(dynemicin)、双膦酸盐(或酯)、埃斯波霉素(esperamicin)、色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素类(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、放线菌素C、canfosfamide,卡拉宾辛(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素类(chromomycinis)、环磷酰胺、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正白氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、依西美坦(exemestane)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、伊达比星(idarubicin)、拉帕替尼(lapatinib)、来曲唑(letrozole)、洛那法尼(lonafarnib)、麻西罗霉素(marcellomycin)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、丝裂霉素类(mitomycins)、霉酚酸、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、帕唑帕尼(pazopanib)、培洛霉素(peplomycin)、博地霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、雷帕霉素(rapamycin)、罗多比星(rodorubicin)、索拉非尼(sorafenib)、链黑霉素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、他莫昔芬(tamoxifen)、他莫昔芬柠檬酸盐(tamoxifen citrate)、替莫唑胺(temozolomide)、tepodina、替吡法尼(Tipifarnib)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、凡德他尼(vandetanib)、伏氯唑(vorozole)、XL-147、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物叶酸类似物、嘌呤类似物、雄激素、抗肾上腺素、叶酸补充剂(诸如弗林酸(frolinic acid))、醋葡醛内酯(aceglatone)、醛磷酰胺醣苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、贝斯布希(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依达曲沙(edatraxate)、迪夫法明(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、艾夫尼辛(elfornithine)、依利醋铵(elliptinium acetate)、爱波喜龙(epothilone)、依托格鲁(etoglucid)、硝酸镓、羟基脲、香菇多醣(lentinan)、氯尼达明(lonidainine)、美坦生类化合物(maytansinoids)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫丹摩尔(mopidanmol)、尼特林(nitraerine)、喷司他汀(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、足叶草酸(podophyllinic acid)、2-乙基肼、丙卡巴肼、多醣复合物、丙亚胺；根霉素(rhizoxin)；SF-1126、西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙基胺；单端孢霉烯类(trichothecenes)(T-2毒素、维拉库林A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；卡西托欣(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)；环磷酰胺；噻替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoids)、苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物、长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)；异环磷酰胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨( vinorelbine)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；柔红霉素；氨基喋呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(或酯)(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)、拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸；类视色素；卡培他滨(capecitabine)；考布他汀(combretastatin)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；草酸铂；XL518、PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR和VEGF-A的抑制剂(其降低细胞增殖)和以上任一者的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。该定义中还包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体抗体、抑制调节肾上腺中的雌激素产生的芳香酶的芳香酶抑制剂和抗雄激素；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸；核糖核酸酶，诸如VEGF表达抑制剂和HER2表达抑制剂；疫苗、 rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂； rmRH；长春瑞滨和埃斯波霉素(Esperamicin)，和以上任一者的药学上可接受的盐或溶剂化物、酸或衍生物。
特别优选的抗癌剂包含商业或临床可用的化合物，诸如埃罗替尼(erlotinib)(Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(docetaxel)(Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，CAS号51-21-8)、吉西他滨(gemcitabine)(Lilly)、PD-0325901(CAS号391210-10-9，Pfizer)、顺铂(顺二胺，二氯铂(II)，CAS号15663-27-1)、卡铂(CAS号41575-94-4)、紫杉酚(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂双环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺，CAS号85622-93-1，Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺， )和多柔比星(doxorubicin)其它市售或临床可用抗癌剂包含草酸铂(Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)(Millennium Pharm.)、索坦(sutent)(SU11248，Pfizer)、来曲唑(letrozole)(Novartis)、甲磺酸伊马替尼(imatinib Mesylate)(Novartis)、XL-518(Mek抑制剂，Exelixis，WO2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制剂，AZD6244，Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂，SemaforePharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂，Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(fulvestrant)(AstraZeneca)、甲酰四氢叶酸(leucovorin/folinic acid)、雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)，Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(GSK572016，Glaxo Smith Kline)、氯那法尼(lonafarnib)(SARASARTM，SCH 66336，Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006，Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(CPT-11，Pfizer)、替匹法尼(tipifarnib)(ZARNESTRATM，Johnson&Johnson)、ABRAXANETM(无十六醇聚氧乙烯醚(乳浮))、紫杉酚(paclitaxel)的经白蛋白改造的纳米粒子制剂(AmericanPharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、凡他尼布(vandetanib)(rINN，ZD6474，AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、坦罗莫司(temsirolimus)(Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib)(GlaxoSmithKline)、坎磷酰胺(canfosfamide)(Telik)、噻替派和环磷酰胺 长春瑞滨卡培他滨(capecitabine)(Roche)、他莫昔芬(包括柠檬酸他莫昔芬、(柠檬酸托瑞米芬(托米芬)(toremifine citrate))、(乙酸甲地孕酮)、(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、服美坦(formestanie))、法倔唑(fadrozole)、(伏罗唑(vorozole))、(来曲唑(letrozole)；Novartis)和(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)。
术语“药学上可接受的盐”或“盐”意指分子或大分子的有机或无机盐。酸加成盐可以与氨基形成。示例性盐包括，但不限于，硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1′亚甲基双-(2-羟基3-萘甲酸盐))。药学上可接受的盐可以涉及包括另一种分子诸如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。所述抗衡离子可以是稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐可以在其结构中具有多于一个带电原子。当多个带电原子是药学上可接受的盐的部分时，该盐可以具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可以具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
“药学上可接受的溶剂化物”或“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子和分子或大分子的缔合。形成药学上可接受的溶剂化物的溶剂的实例包括，但不限于，水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
在其它实施方案中，本发明的抗体或ADC可与当前处于临床试验或商业可得的多种抗体(或免疫治疗剂)中的任一者组合使用。公开的抗体可与选自以下的抗体组合使用：阿巴伏单抗(abagovomab)、阿德木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、阿仑珠单抗(alemtuzumab)、阿妥莫单抗(altumomab)、阿玛图单抗(amatuximab)、阿纳图单抗(anatumomab)、阿西莫单抗(arcitumomab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝妥莫单抗(bectumomab)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、比伐珠单抗(bivatuzumab)、兰妥莫单抗(blinatumomab)、贝土西单抗(brentuximab)、坎土珠单抗(cantuzumab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、西他珠单抗(citatuzumab)、西妥木单抗(cixutumumab)、西瓦图单抗(clivatuzumab)、可那木单抗(conatumumab)、达雷木单抗(daratumumab)、多兹图单抗(drozitumab)、杜利图单抗(duligotumab)、杜斯图单抗(dusigitumab)、地莫单抗(detumomab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达洛图单抗(dalotuzumab)、依美昔单抗(ecromeximab)、依洛珠单抗(elotuzumab)、恩斯图单抗(ensituximab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、法利珠单抗(farletuzumab)、非拉珠单抗(ficlatuzumab)、芬妥木单抗(figitumumab)、福沃图单抗(flanvotumab)、福图西单抗(futuximab)、盖尼图单抗(ganitumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、吉瑞昔单抗(girentuximab)、吉乐木单抗(glembatumumab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、伊戈伏单抗(igovomab)、伊加图单抗(imgatuzumab)、因达西单抗(indatuximab)、依珠单抗(inotuzumab)、英妥木单抗(intetumumab)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、lambrolizumab、来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、洛沃图单抗(lorvotuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫西图单抗(moxetumomab)、拉纳图单抗(narnatumab)、那图莫单抗(naptumomab)、奈昔木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nivolumab、诺非图单抗(诺莫单抗)(nofetumomabn)、obinutuzumab、奥卡拉单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉珠单抗(olaratumab)、奥拉帕尼(olaparib)、奥纳珠单抗(onartuzumab)、奥珀珠单抗(oportuzumab)、奥戈伏单抗(oregovomab)、帕木单抗(panitumumab)、帕撒图单抗(parsatuzumab)、帕瑞图单抗(patritumab)、派图单抗(pemtumomab)、培妥珠单抗(pertuzumab)、pidilizumab、平妥单抗(pintumomab)、普立木单抗(pritumumab)、雷妥莫单抗(racotumomab)、radretumab、雷莫芦单抗(ramucirumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、罗妥木单抗(robatumumab)、沙妥莫单抗(satumomab)、司美替尼(selumetinib)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、斯图珠单抗(simtuzumab)、索利托单抗(solitomab)、塔卡珠单抗(tacatuzumab)、他普莫单抗(taplitumomab)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替妥木单抗(teprotumumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、图土珠单抗(tucotuzumab)、乌利昔单抗(ublituximab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、沃瑟珠单抗(vorsetuzumab)、伏妥莫单抗(votumumab)、扎芦木单抗(zalutumumab)、CC49、3F8、MDX-1105和MEDI4736及其组合。
其它特别优选的实施方案包括使用批准用于癌症疗法的抗体，包括，但不限于，利妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、阿仑单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、托西莫单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、patitumumab、奥法木单抗(ofatumumab)、伊匹单抗和brentuximab vedotin。本领域技术人员将能够容易地鉴定与本文的教导相容的额外抗癌剂。
E.放疗
本发明还提供抗体或ADC与放疗(即，用于诱导肿瘤细胞内局部DNA损伤的任何机制，如γ辐射、X-射线、UV辐射、微波、电子发射等)的组合。还考虑使用将放射性同位素靶向递送至肿瘤细胞的组合治疗，并且公开的抗体或ADC可以与靶向的抗癌剂或其它靶向方式结合使用。通常，在约1至约2周的时间段以脉冲形式施用放疗。可以将放疗施用于患有头颈癌的受试者持续约6至7周。任选地，可以作为单一剂量或作为多个连续剂量施用放疗。
VIII适应症
本发明提供本发明的抗体和ADC用于诊断、治疗诊断、治疗和/或预防各种病症(包括肿瘤、炎症、血管生成和免疫病症和病原体引起的病症)的用途。具体地，关键治疗目标是肿瘤病况，包含实体瘤，尽管血液恶性肿瘤在本发明的范围内。在某些实施方案中，本发明的抗体将用于治疗表达特定决定簇(例如，DPEP3)的肿瘤或致瘤性细胞。优选地，待治疗的“受试者”或“患者”将是人，尽管如本文所使用，术语应当清楚地包括任何哺乳动物物种。
经受根据本发明的治疗的肿瘤病况可以是良性或恶性的；实体瘤或其它血液肿瘤；并且可以选自包括但不限于以下的组：肾上腺瘤、AIDS相关癌症、软组织腺泡状肉瘤、星状细胞肿瘤、自主神经节肿瘤、膀胱癌(鳞状细胞癌和移行细胞癌)、囊胚腔病症、骨癌(釉质瘤、动脉瘤性骨嚢肿、骨软骨瘤、骨肉瘤)、脑和脊髓癌、转移性脑肿瘤、乳癌、颈动脉体瘤、子宫颈癌、软骨肉瘤、脊索癌、嫌色性肾脏细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、结缔组织增殖性小圆细胞肿瘤、室管膜细胞瘤、上皮病症、尤因肿瘤、骨外粘液样软骨肉瘤、骨纤维发育不全、骨纤维性结构不良、胆嚢和胆管癌、胃癌、胃肠道疾病、妊娠滋养层成瘤性疾病、生殖细胞瘤、腺体病症、头颈癌、下丘脑癌、肠癌、胰岛细胞瘤、卡波氏肉瘤、肾脏癌(肾脏母细胞瘤、乳头状肾脏细胞癌)、白血病、脂肪瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性脂肪瘤、肝癌(肝母细胞瘤、肝细胞癌)、淋巴瘤、肺癌(小细胞癌、腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌等)、巨噬细胞病症、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌肿瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、神经母细胞瘤、神经内分泌瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、小儿癌症、外周神经鞘膜肿瘤、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、前列腺癌、后代眼色素层黑色素瘤(posterious unveal melanoma)、罕见性血液性病症、肾脏转移性癌、横纹肌样瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、间质病症、滑膜肉瘤、睾丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌和子宫癌(子宫颈癌、子宫内膜癌和平滑肌瘤)。
在其它优选实施方案中，公开的抗体和ADC可尤其有效治疗肺癌，包括以下亚型：小细胞肺癌和非小细胞肺癌(例如，鳞状细胞非小细胞肺癌或鳞状细胞小细胞肺癌)。在所选实施方案中，所述抗体和ADC可以施用于表现出有限期疾病或广泛期疾病的患者。在其它优选的实施方案中，公开的缀合抗体将施用于难治性患者(即，其疾病在完成初始疗法的进程期间或之后不久复发的那些)；敏感的患者(即，其复发在初始治疗之后长于2-3个月的那些)；或表现出对基于铂的药剂(例如，卡铂、顺铂、奥沙利铂)和/或紫杉烷(例如，多西他赛、紫杉酚、larotaxel或卡巴他赛)的耐受性的患者。
在特别优选的实施方案中，公开的抗体和ADC在治疗卵巢癌，包括卵巢浆液性癌和卵巢乳头状浆液性癌上是有效的。
本发明还提供呈现具有良性或癌前期的肿瘤的受试者的防止或预防性治疗。不从使用本发明的抗体的治疗中排除任何特定类型的肿瘤或增殖性病症。
IX制品
本发明包括包含一个或多个容器的药学包装和试剂盒，其中容器可以包含一个或多个剂量的本发明的抗体或ADC。在某些实施方案中，所述包装和试剂盒含有单位剂量，意指预定量的包含例如本发明的抗体或ADC的组合物(具有或不具有一种或多种额外试剂和任选一种或多种抗癌剂)。
本发明的试剂盒将通常在合适容器中含有本发明的抗体或ADC的药学上可接受的制剂和相同或不同容器中的任选的一种或多种抗癌剂。试剂盒也可含有用于诊断或组合疗法的其它药学上可接受的制剂或装置。诊断装置或装置的实例包括可用于检测、监测、定量与增殖性病症相关的细胞或标志物(对于这样的标志物的完全列表，参见上文)或分析其概况的那些。在特别优选实施方案中，所述装置可用于体内或体外检测、监测和/或定量循环肿瘤细胞(参见例如WO2012/0128801)。在还有其它优选实施方案中，循环肿瘤细胞可包含致瘤性细胞。本发明考虑的试剂盒还可以含有适当药剂以组合本发明的抗体或ADC与抗癌剂或诊断剂(例如，参见U.S.P.N.7,422,739)。
当试剂盒的组分提供于一种或多种液体溶液中时，所述液体溶液可以是非水性的，然而，水溶液是优选的，其中无菌水溶液是特别优选的。试剂盒中的制剂也可以作为干燥粉末或冻干形式提供，所述干燥粉末或冻干形式可以在添加适当液体后重构。用于重构的液体可以含于分开的容器中。这样的液体可以包含无菌的药学上可接受的缓冲剂或其它稀释剂，诸如注射用抑菌水、磷酸缓冲盐水、林格氏溶液或右旋糖溶液。当所述试剂盒包含与额外的治疗剂或药剂组合的本发明的抗体或ADC，所述溶液可以摩尔当量组合或以一种组分超过另一种组合的方式预混合。或者，本发明的抗体或ADC和任何任选的抗癌剂或其它药剂在施用于患者前可以分开地保持在不同的容器内。
试剂盒可以包含一个或多个容器和容器中、容器上或与容器相关的标签或包装插页，其表明封闭的组合物用于诊断或治疗选择的疾病病况。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。所述容器可以由多种材料诸如玻璃或塑料形成。所述容器可以包含无菌入口，例如容器可以是静脉内用溶液袋或具有皮下注射针可穿透塞子的小瓶。
在一些实施方案中，所述试剂盒可以含有这样的装置，通过所述装置将抗体和任何任选组分施用于患者，例如，一个或多个针或注射器(预填充的或空的)，眼滴管、移液管、或其它这样的类似装置，可以从所述装置将制剂注射或引入受试者或应用于身体的病变区域。本发明的试剂盒也将通常包括用于包含小瓶的装置，或这样的类似物，和用于商业销售的密闭的其它组分，诸如，例如，吹塑成型的塑料容器，其中放置并保留期望的小瓶和其它装置。
X其它内容
除非本文另有定义，与本发明结合使用的科学和技术术语应当具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步，除非上下文另外需要，单数术语应该包括复数，并且复数术语应该包括单数。此外，在说明书和随附的权利要求中提供的范围包括两端点和端点之间的所有点。因此，2.0至3.0的范围包括2.0、3.0、和2.0和3.0之间的所有点。
通常，本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和化学的技术是本领域众所周知并且通常使用的那些。本文所使用的命名法以及这样的技术也是本领域中常用的。通常根据本领域众所周知的常规方法，并且如本说明书通篇引用的各种参考文献中所述，进行本发明的方法和技术，除非另有指明。
XI参考文献
无论关于特定参考文献是否使用表述“通过引用并入”，本文引用的所有专利、专利申请和出版物和电子可得材料(包括例如核苷酸序列提交(例如GenBank和RefSeq中的)和氨基酸序列提交(例如SwissProt、PIR、PRF、PBD中的)，以及来自GenBank和RefSeq中的标注的编码区的翻译)均通过引用并入。仅出于清楚理解的目的给出上文详细描述和随后的实施例。不应从其理解为不必要的限制。本发明不限于所示和所述的精确细节。对本领域技术人员显而易见的变型将包括于通过权利要求定义的本发明中。本文使用的任何部分的标题仅用于组织的目的，而不应被解释为限制所描述的主题。
XII序列表概述
本申请附有包含多种核酸和氨基酸序列的序列表。以下表6提供包括的序列的概述。
表6
上表6还可用于鉴定与图5A和5B中描绘的示例性CDR关联的SEQ ID NO。图5A和5B指示每个重链(CDRH)和轻链(CDRL)可变区序列的三个Kabat CDR并且上文的表3提供针对所选人源化抗体的可应用至轻链的每个CDRL1、CDRL2和CDRL3和重链的每个CDRH1、CDRH2和CDRH3的SEQ ID命名。例如hSC34.2轻链(SEQ ID NO：189)包含如图5A中所示的CDRL1(SEQID NO：232)(即，SASQGITNYLN)。类似地，hSC34.2轻链的CDRL2(SEQ ID NO：233)也将为如图5A中所示的(即，YTSRLHS)。在所附的序列表中也提供了相同的CDR序列。
XIII实施例
通过参考以下实施例将更容易理解因此上面通常描述的本发明，所述实施例通过举例的方式提供，而不是意在限制本发明。所述实施例不意在表示以下实验是所有或唯一进行的实验。除非另外指明，份是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是处于或接近大气压。
PDX肿瘤细胞类型通过缩写和随后的数字表示，其指示特定肿瘤细胞系。测试样品的代数由随附样品名称的p0-p#表示，其中p0表明直接获得自患者肿瘤的未传代的样品，且p#表明在测试前肿瘤已经通过小鼠传代的次数。如本文所使用，肿瘤类型和亚型的缩写如下显示于表7中：
表7
实施例1
使用全转录组测序鉴定差异DPEP3表达
为了表征实体瘤当存在于癌症患者中时的细胞异质性、使用特定表型标志物鉴定TIC和鉴定临床相关的治疗目标，使用本领域公认的技术开发并维护大型PDX肿瘤库。通过多次传代肿瘤细胞在免疫功能低下的小鼠中增殖包含大量离散肿瘤细胞系的PDX肿瘤库，所述肿瘤细胞最初获自受各种实体瘤恶性肿瘤影响的癌症患者。早代PDX肿瘤代表在其天然环境中的肿瘤并且响应于治疗剂，诸如伊立替康(即)，从而为驱动肿瘤生长和对现有治疗的耐受性的根本机制提供临床相关见解。
为了从PDX肿瘤细胞系生成RNA，在肿瘤达到800-2,000mm3之后从小鼠切出肿瘤，并使用本领域公认的酶促消化技术(参见例如，U.S.P.N.2007/0292414)将肿瘤解离成单细胞悬浮液。将选择解离的PDX肿瘤细胞制备物耗尽小鼠细胞，并基于其CD46高和CD324+(TIC亚群的标志物)的表达进行分选(参见U.S.P.N 2013/0260385、2013/0061340和2013/0061342)。表达人EpCAM且具有CD46高/CD324+表型(即TIC)或EpCAM且具有CD46低/-/CD324+表型(即NTG细胞)的细胞通过使用FACSAria细胞分选仪(BD Biosciences)的FACS分离，并根据制造商的说明裂解于RLTplus RNA裂解缓冲液中。然后将裂解物储存在-80℃，并解冻用于RNA提取。解冻后，根据供应商的说明使用RNeasy分离试剂盒(Qiagen)提取总RNA，且然后再次使用制造商的方案和推荐的仪器设置使用NanoDrop分光光度计(Thermo Scientific)和/或生物分析仪2100(Agilent Technologies)上进行定量。所得总RNA制备物通过基因测序和基因表达分析来评估。
使用两种不同的系统进行定量的高质量RNA的全转录组测序。一些样品使用Applied Biosystems(ABI)边寡核苷酸连接/检测边测序(SOLiD)4.5或SOLiD 5500xl下一代测序系统(Life Technologies)进行分析。其它样品使用Illumina HiSeq 2000或2500下一代测序系统(Illumina)进行分析。
SOLiD全转录组分析使用cDNA来进行，所述cDNA使用来自ABI的被设计用于低输入总RNA的改良的全转录组方案，或Ovation RNA-Seq系统V2TM(NuGEN Technologies)，从1ng总RNA样品生成。将所得cDNA文库片段化，并在测序运行过程中添加条形码适配子以允许合并来自不同样品的片段文库。由SOLiD平台生成的数据作图到使用公布的人基因组的NCBI版本hg19.2的RefSeq版本47注释的34609个基因，并且在大多数样品中提供RNA水平的可验证的测量。使用作图至基因的外显子区域的度量RPM(每百万次读取)和RPKM(每百万次每千碱基读取)，将来自SOLiD平台的测序数据名义上表示为转录物表达值，从而实现基础基因表达分析被标准化和计算为RPM_转录物或RPKM_转录物。
Illumina全转录组分析使用cDNA来进行，所述cDNA使用5ng总RNA利用TruSeq RNA样品制备试剂盒v2(Illumina)产生。将所得cDNA片段化和加条形码。使用作图至基因的外显子区域的度量FPM(每百万次的片段)和FPKM(每百万次每千碱基的片段)，将来自Illumina平台的测序数据名义上表示为片段表达值，从而实现基础基因表达分析被标准化和计算为FPM_转录物或FPKM_转录物。
SOLiD全转录组测序的结果显示相较于正常的主要重要器官组织，包括结肠、心脏、肾、肝脏、肺、卵巢和胰腺组织，BR36和OV106MET PDX细胞系的TIC肿瘤细胞亚群中的DPEP3 mRNA表达升高(图1A)。类似地，Illumina全转录组测序显示相较于NTG群体以及正常组织，包括结肠、心脏、肾、肝脏、肺、卵巢、胰腺、皮肤、脾、胃和气管，OV27的TIC肿瘤细胞亚群中的DPEP3 mRNA表达升高(图1B)。在乳腺和卵巢人肿瘤中的升高的DPEP3 mRNA表达的鉴定表明该抗原值得作为潜在的诊断和/或免疫治疗目标进一步评价。
实施例2
使用qRT-PCR的肿瘤中的DPEP3 mRNA的表达
为了在肿瘤细胞中证实DPEP3的表达，在各种PDX细胞系使用FluidigmBioMarkTMHD系统根据行业标准方案进行qRT-PCR。使用高容量cDNA Archive试剂盒(LifeTechnologies)根据制造商的说明将1ng如实施例1所述制备的RNA转化为cDNA。使用DPEP3特异性Taqman测定法预扩增的cDNA材料然后用于随后的qRT-PCR实验。
将正常组织(NormTox或Norm)中的表达与OV-S/PS PDX细胞系中的表达相比较(图2A；每个点代表每个个体组织或PDX肿瘤细胞系的平均相对表达，其中水平线表示几何平均值)。在OV-S/PS肿瘤的亚群中观察到DPEP3高表达，如下文更详细讨论的。表达DPEP3的正常组织包括睾丸、背根神经节、胃、小肠、黑素细胞、脑、B细胞、脂肪组织、嗜中性粒细胞和单核细胞。“NormTox”代表在抗体药物缀合物治疗剂的背景下具有较高毒性风险的器官的正常组织的下列样品：动脉，静脉，背根神经节，血管平滑肌细胞，脾，气管，皮肤，肾，胃，肝脏，肺，食管，小肠，肾上腺，骨骼肌，胰腺，心脏和结肠。指定为“Norm”的另一组正常组织代表在抗体药物缀合物治疗剂的背景下具有较低风险的正常组织的下列样品：卵巢，乳腺，睾丸，子宫，甲状腺，外周血单核细胞，NK细胞，B细胞，T细胞，单核细胞，嗜中性粒细胞，正常骨髓，胸腺，脂肪，唾液腺，脑，前列腺和黑素细胞。
为了将该分析进一步扩展至较大组的原代人肿瘤样品以及正常组织样品，如上所述使用TissueScanTM qPCR(Origene Technologies)384-孔阵列进行相同的Taqman qRT-PCR测定。该阵列能够跨越18个不同实体瘤类型比较基因表达，每个肿瘤类型采用多个患者来源的样品。对于所分析的每个肿瘤类型，将各种全肿瘤样本(黑点)中的DPEP3 mRNA的表达水平针对β肌动蛋白标准化，并相对于正常组织(白点)中的表达进行绘制。未扩增的样本指定为45的循环计数值(Ct)，其代表在实验方案中最后的扩增循环。各点代表单一组织样本，其中平均几何值表示为黑线。在BR、EN和OV肿瘤中见到DPEP3相对于匹配的正常组织的过表达(图2)。其它正常样品缺乏DPEP3的表达，包括肾上腺、子宫颈、结肠、食管、肾、肝脏、淋巴结、胰腺、前列腺、甲状腺、膀胱和子宫(数据未显示)。
这些数据表明，DPEP3在BR、EN和OV肿瘤中表达并且可以是用于开发在这些适应症中的基于抗体的治疗剂的良好靶标。
实施例3
来自癌症基因组集的肿瘤中的DPEP3表达
使用称为癌症基因组集(TCGA，美国国家癌症研究所)的肿瘤和正常样品的大型公开可得的数据集在各种肿瘤中证实DPEP3 mRNA的过表达。来自IlluminaHiSeq_RNASeqV2平台的外显子水平3表达数据下载自TCGA数据入口(https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/ tcgaDownload.jsp)，并解析以聚集来自各基因的个体外显子的读取值，以便生成单一读取值/千碱基外显子/百万绘制的读取值(RPKM)。图3显示相较于TCGA中的正常组织样品，DPEP3表达在OV、SK、LU-SCC和LU-Ad肿瘤类型的子集中升高。这些数据证实了来自实施例1和2中的全转录和qRT-PCR分析的先前观察结果，即升高的DPEP3 mRNA可以在OV、SK和LU肿瘤中发现，表明抗DPEP3抗体可以是用于这些肿瘤的有用的治疗剂。
实施例4
重组DPEP2和DPEP3蛋白的克隆
编码人DPEP3和DPEP2蛋白的DNA片段。
为了生成本发明中涉及人DPEP3(hDPEP3)蛋白(UniProtKB/Swiss-Prot.Q9H4B8.2)所需的所有分子和细胞材料，购买了编码全长hDPEP3开放阅读框(GenBank登录号BC037243,[SEQ ID NO:6])的cDNA克隆(ThermoFisher)。该cDNA克隆用于表达成熟hDPEP3蛋白或其片段的构建体的所有后续改造。
为了生成针对hDPEP3蛋白的免疫反应或免疫特异性抗体，生成了嵌合融合基因，其中hDPEP3蛋白的胞外域(ECD)(包含来自登录号NP_071752的残基A61-S488)与组氨酸标签或人IgG2 Fc标记在框内融合。这如下进行：通过使用标准分子技术，编码hDPEP3蛋白的ECD的DNA片段从hDPEP3 cDNA克隆PCR扩增并在框内亚克隆到CMV驱动的表达载体中并处于IgK信号肽序列的下游和组氨酸标签或人IgG2 Fc cDNA的上游。CMV驱动的hDPEP3表达载体允许在HEK-293T和/或CHO-S细胞中的高水平瞬时表达。HEK-293T细胞的悬浮或贴壁培养物或悬浮CHO-S细胞用编码hDPEP3-ECD-His或hDPEP3-ECD-Fc蛋白的表达构建体使用聚乙烯亚胺聚合物作为转染试剂进行转染。转染后3至5天，使用AKTA Explorer和镍-EDTA(Qiagen)或MabSelect SuReTM蛋白A(GE Healthcare Life Sciences)柱分别从澄清的细胞上清液纯化hDPEP3-ECD-His或hDPEP3-ECD-Fc蛋白。
为了生成用于交叉反应研究的hDPEP2蛋白，从Origene购买编码人DPEP2(hDPEP2)蛋白的主要部分的cDNA克隆，尽管该克隆的翻译产物相对于hDPEP2的RefSeq登录号(NP_071750,[SEQ ID NO:7])的序列分析显示，RefSeq蛋白的氨基末端序列的一部分从Origene克隆缺失。因此，0.62kBp的合成DNA被制造(GeneWiz)以编码对应于RefSeq蛋白的序列的hDPEP2 ORF的所需前端。按照制造商的说明使用体外无缝克隆技术(In Fusion,Clontech)来组装编码对应于hDPEP2 RefSeq的蛋白的全长ORF。此组装的cDNA克隆用于表达成熟hDPEP2蛋白或其片段的构建体的所有后续改造。
人DPEP2蛋白通过生成嵌合融合基因来制备，其中hDPEP2蛋白的ECD(包含来自登录号NP_071750的残基A33-S463)与组氨酸标签或人IgG2 Fc标签以与上文关于具有hDPEP3的嵌合基因构建体所描述的相同方式在框内融合。类似地，组氨酸标记的或人IgG2标记的重组hDPEP2在HEK-293T和/或CHO-S细胞中使用上文关于hDPEP3描述的方法来产生。
编码小鼠、人和食蟹猴DPEP3蛋白的DNA片段。
如下生成关于小鼠、大鼠和食蟹猴DPEP3蛋白的分子和细胞材料。
对于小鼠DPEP3蛋白(mDPEP3)，购买(ThermoFisher)编码与小鼠RefSeq DPEP3蛋白(GenBank登录号NP_082236)相同的蛋白的cDNA克隆(GenBank登录号BC051148,[SEQ IDNO:9])。对于大鼠DPEP3蛋白(rDPEP3)，购买(ThermoFisher)编码与大鼠RefSeq DPEP3蛋白(GenBank登录号NP_001008384)相同的蛋白的cDNA克隆(GenBank登录号BC085826,[SEQ IDNO:11])。对于食蟹猴(Macaca fascicularis)DPEP3蛋白(cDPEP3)，首先通过在NCBI将编码hDPEP3蛋白的DNA序列相对于食蟹猴全基因组鸟枪重叠群序列数据库进行BLAST和用从恒河猴(恒河猴(Rhesus monkey))基因组推导出的基因组序列填充食蟹猴基因组序列内的任何间隙来推导出食蟹猴DPEP3序列。然后将预测的食蟹猴DPEP3 ORF序列合成为密码子优化的DNA片段(GeneWiz)。
这些DNA克隆用作用于各种PCR反应的模板以产生用于小鼠、大鼠或食蟹猴DPEP3ECD的具有组氨酸标签或人IgG2 Fc标签的嵌合融合基因。这些构建体在HEK-293T和/或CHO-S细胞中使用上文针对hDPEP3描述的方法产生。
细胞系改造
通过使用本领域中公知的分子生物学技术，使用慢病毒载体以转导HEK-293T细胞系而构建过表达上面列出的各种DPEP3蛋白的改造的细胞系。首先，使用PCR以使用上述特异性DNA片段作为模板扩增编码目的蛋白(例如，hDPEP3,mDPEP3,rDPEP3或cDPEP3)的DNA片段。然后，将个体PCR产物亚克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-IRES-GFP(SystemBiosciences)的多克隆位点(MCS)中，以生成一组慢病毒载体。所得pCDH-EF1-DPEP3-IRES-GFP载体中的内部核糖体进入位点(IRES)序列允许第二蛋白从单个mRNA转录物的帽非依赖性起始。IRES上游编码的DPEP3蛋白的高水平表达与IRES元件的下游编码的GFP标记蛋白的共表达相关联。该组慢病毒载体用于生成过表达个体DPEP3蛋白的分开的稳定的HEK-293T细胞系。使用高表达HEK-293T亚克隆基于其阳性GFP信号的FACS来选择DPEP3阳性细胞。
实施例5
抗DPEP3抗体的生成
如下产生抗DPEP3小鼠抗体。用以等体积的佐剂乳化的10μghDPEP3-His蛋白接种六只小鼠(以下菌株各自两个：Balb/c，CD-1，FVB)。初始接种之后，用以等体积的明矾佐剂加CpG乳化的5μg hDPEP3-His蛋白注射小鼠，每周两次，持续4周。
将小鼠处死并对引流淋巴结(腘，腹股沟，和内侧髂)进行解剖并将其用作抗体产生细胞的来源。通过使用模型BTX Hybrimmune系统(BTX Harvard Apparatus)的电细胞融合，将B细胞的单细胞悬浮液(430x106个细胞)与非分泌性P3x63Ag8.653骨髓瘤细胞(ATCC#CRL-1580)以1:1的比例融合。将细胞重悬浮于杂交瘤选择培养基，其由补充有重氮丝氨酸、15％胎克隆I血清、10％BM condimed、1mM非必需氨基酸、1mM HEPES、100IU青霉素-链霉素和50μM 2-巯基乙醇的DMEM培养基组成，并在四个T225烧瓶中在每烧瓶100mL选择培养基中培养。将烧瓶置于含有5％CO2和95％空气的加湿37℃培养箱中六天。
融合后，从烧瓶收集杂交瘤文库细胞，并以每孔一个细胞(使用FACSAria I细胞分选仪)在90μL的补充的杂交瘤选择培养基(如上所述)中将细胞铺板入12块Falcon384孔板。其余文库在液氮中保存。
将杂交瘤培养10天，并使用流式细胞术，针对对于hDPEP3特异性的抗体，筛选上清液，流式细胞术如下进行：将每孔1×105个用hDPEP3稳定转导的HEK-293T细胞与25μL杂交瘤上清液孵育30分钟。用PBS/2％FCS洗涤细胞，然后将细胞与每样品25μL DyeLight 649标记的山羊-抗-小鼠IgG，Fc片段特异性二抗(在PBS/2％FCS中稀释(1：300))孵育。15分钟孵育之后，将细胞用PBS/2％FCS洗涤两次，并且将细胞再悬浮于含有DAPI的PBS/2％FCS中，并通过流式细胞术，针对超过用同种型对照抗体染色的细胞荧光的荧光进行分析。剩余未使用的杂交瘤文库细胞在液氮中被冷冻用于将来文库测试和筛选。
hDPEP3-His免疫接种活动产生结合至表达hDPEP3的HEK-293T细胞的表面的许多小鼠抗体。
实施例6
抗DPEP3抗体的特性
各种方法被用于在同种型、针对hDPEP3的亲和力、针对hDPEP1、hDEP2、mDPEP3、rDPEP3和cDPEP3的交叉反应性、结合和建立由各自抗体占据的独特表位仓室的动力学方面表征所产生的抗DPEP3抗体(实施例5)。
根据制造商的方案使用Milliplex小鼠免疫球蛋白分型试剂盒(Millipore)测定代表性数量的抗体的同种型。针对独特的DPEP3特异性抗体的结果可见于图4中。
抗DPEP3抗体通过ELISA就与小鼠、大鼠和食蟹猴DPEP3的交叉反应性和就针对hDPEP2(最接近DPEP3家族成员)的交叉反应性进行筛选。ELISA如下进行。板用纯化的小鼠、大鼠或食蟹猴DPEP3-His或hDPEP2-His以0.2M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液，pH 9.4中的0.3μg/mL在4℃下涂覆过夜。除去蛋白质溶液，并用PBS中的1％(w/v)BSA(PBSA)以100μL/孔在37℃封闭孔1小时。随后以50μL PBSA中的1μg/mL加入抗DPEP3抗体或小鼠同种型对照抗体，在室温下持续1小时。在用水洗涤后，加入在PBSA中1:10000稀释的50μL/孔HRP标记的山羊抗小鼠IgG抗体，在室温下持续30分钟。将板洗涤并通过在室温加入40μL/孔的TMB底物溶液(Thermo Scientific)进行显影。加入等体积的0.2M H2SO4以停止底物显影。然后将样品用分光光度计在OD 450进行分析。具有大于背景1.5倍的OD 450的样品被认为是交叉反应的。对于示例性DPEP3特异性抗体的交叉反应性的结果可在图4中看到。
抗体针对hDPEP3-His的亲和力如下所述从使用ForteBio RED产生的动力学曲线来定性测定。将抗DPEP3抗体固定到抗小鼠Fc捕获生物传感器上，接触时间为3分钟，流速为1000rpm。从基线的捕获抗体装载为0.3-1单位恒定。在抗体捕获和30秒基线后，将生物传感器浸入hDPEP3-His的200nM溶液，持续4分钟，随后是3分钟的缔合相，解离相处于1000rpm的摇动速率下。将生物传感器通过在每个循环后浸入10mM甘氨酸，pH 1.7中再生。将数据通过从特异性抗体应答减去对照小鼠IgG表面应答进行处理并将数据截取至缔合和解离相。缔合和解离曲线用于定性估计所选抗体的亲和力。图4显示选择的抗体的亲和力，其中具有小于5nM的针对hDPEP3-His的估计表观亲和力(KD)的抗体以“+++”表示，具有5-10nM的估计KD的抗体以“++”表示，以及具有大于10nM的估计KD的抗体以“+”表示。“ND”的指示意指所估计的KD未确定。
许多抗DPEP3抗体的亲和力通过使用BIAcore 2000仪器(GE Healthcare)的表面等离子体共振确认。抗小鼠抗体捕获试剂盒用于将小鼠抗DPEP3抗体固定在CM5生物传感器芯片上。在每个抗原注射周期之前，将0.1-2μg/mL浓度的小鼠抗体以2分钟的接触时间和5μL/min的流速捕获在表面上。在抗体捕获和基线后，将如实施例4所述产生的单体hDPEP3-His抗原以不同浓度流过表面，持续2-4分钟，然后为4-15分钟的缔合相，解离相处于5μL/min的流速。将数据通过从特异性抗体应答减去对照非结合抗体表面应答进行处理并将数据截取至缔合和解离相。将所得的应答曲线用于拟合1:1Langmuir结合模型，并用于使用所计算的kon和koff动力学常数利用BiaEvaluation软件3.1(GE Healthcare)生成表观亲和力(数据未示出)。通过使用抗人抗体捕获试剂盒，使用类似的方案来测量人源化抗体(hSC34.2,hSC34.11,hSC34.14,hSC34.25,hSC34.28,hSC34.38,hSC34.87-见实施例8)的亲和力，以确认与hDPEP3-His,rDPEP3-His,hDPEP1-His和hDPEP2-蛋白的交叉反应性。测试的抗体均没有被发现与大鼠DPEP3-His或hDPEP1–His交叉反应。在BIAcore测定中测试的那些中，仅hSC34.14被发现与hDPEP2-His交叉反应。
对于各种抗DPEP3抗体测定抗体分仓。按照制造商的说明使用ForteBio RED以鉴定结合于相同的或不同的表位仓室的竞争抗体。将参考抗DPEP3抗体(Ab1)捕获到抗小鼠捕获芯片上，随后使用高浓度的非结合抗体来封闭芯片并收集基线。随后通过特异性抗体(Ab1)捕获单体的重组hDPEP3-His(来自实施例4)并将尖端浸入具有作为对照的任一相同抗体(Ab1)的孔中或具有不同测试抗体(AB2)的孔中。如果观察到与新抗体的额外结合，则Ab1和Ab2被确定为在不同的仓室中。如果没有进一步的结合发生，如通过与对照Ab1比较结合水平来确定的，则Ab2被确定为在同一仓室中。该方法可以扩展到使用代表独特仓室的96孔板中的全排抗体筛选独特抗体的大型文库。在图4中所示的竞争性测定的结果证明了经筛选的抗体可被分组成hDPEP3蛋白上的至少四个独特仓室(A-D)，其中每个组或仓室的成员彼此竞争结合hDPEP3蛋白。第五仓室(命名为“Bin U”)包含不与仓室A-D中的抗体竞争的抗体，但可彼此竞争结合。
实施例7
抗-DPEP3抗体的测序
如上所述生成抗DPEP3抗体，然后测序。将所选的杂交瘤细胞在试剂中裂解( Plus RNA RNA纯化系统，Life Technologies)，以制备RNA。将104和105之间的细胞重悬浮于1mL Trizol中并在加入200μL氯仿后剧烈摇动。然后将样品在4℃下离心10分钟，将水相转移到新的微量离心管中，并加入等体积的70％乙醇。将样品装载在RNeasyMini离心柱上，放置在2毫升收集管中，根据制造商的说明进行处理。通过洗脱提取总RNA，直接置于具有100μL无RNA酶水的旋转柱膜。通过在1％琼脂糖凝胶中分馏3μL测定RNA制剂的质量，随后存储在-80℃直至使用。
使用5'引物混合物组合3’小鼠Cγ引物扩增各杂交瘤的Ig重链的可变区，所述5'引物混合物包含32个小鼠特异性前导序列引物，所述前导序列引物被设计为靶向完整小鼠VH库，所述3’小鼠Cγ引物特异性于所有小鼠Ig同种型。类似地，将含有32个被设计以用于扩增每个VK小鼠家族的5’VK前导序列的引物混合物与对于小鼠κ恒定区特异性的单一反向引物组合使用，以扩增和测序κ轻链。如下使用Qiagen一步RT-PCR试剂盒，从100ng总RNA扩增VH和VL转录物。针对各杂交瘤运行总共8个RT-PCR反应，4个用于VK轻链和4个用于Vγ重链。PCR反应混合物包括，3μLRNA,0.5μL 100μM的重链或κ轻链引物(由IDT定制合成)，5μL5x RT-PCR缓冲液，1μL dNTP，1μL含有逆转录酶和DNA聚合酶的酶混合物和0.4μL核糖核酸酶抑制剂RNasin(1单位)。热循环仪程序为：RT步骤50℃持续30分钟，95℃持续15分钟，随后30个循环的(95℃持续30秒，48℃持续30秒，72℃持续1分钟)，随后为在72℃持续10分钟的最终孵育。
使用与上文对于扩增可变区所述相同的特异性可变区引物，对提取的PCR产物进行测序。使用IMGT序列分析工具(http://www.imgt.org/IMGTmedical/sequence_analysis.html)分析核苷酸序列以鉴定具有最高序列同源性的种系V、D和J基因成员。图5A描绘了42个新型小鼠抗DPEP3抗体(SEQ ID NO：21-185，奇数)的VL链的连续氨基酸序列和图5B描绘了相同的42个新型小鼠抗DPEP3抗体(SEQ ID NO 23-187，奇数)的VH链的连续氨基酸序列。图5A和5B中指定的CDR和构架区按照Kabat等人(同上)解析，并使用Abysis数据库的专有版本进行测定。综合起来，图5A和5B提供了42个小鼠抗DPEP3抗体的注释的可变区序列，所述抗体命名为：SC34.2,SC34.4,SC34.5,SC34.6(SC34.21的复本),SC34.7,SC34.11,SC34.13,SC34.14,SC34.16,SC34.18,SC34.19,SC34.20,SC34.23,SC34.24,SC34.25,SC34.26,SC34.27,SC34.28,SC34.33,SC34.36,SC34.38,SC34.39,SC34.40,SC34.41(SC34.61的复本),SC34.46,SC34.48,SC34.49,SC34.50,SC34.53,SC34.58,SC34.63,SC34.67,SC34.71,SC34.76,SC34.78,SC34.83,SC34.86,SC34.87,SC34.89,SC34.90,SC34.91和SC34.95。图5C显示了图5A和5B中的各氨基酸序列的对应核酸序列(SEQID NO 20-186，偶数)。
实施例8
嵌合和人源化抗DPEP3抗体的生成
如下使用本领域公认的技术生成嵌合抗DPEP3抗体(包含鼠VH和VL以及人恒定区)。使用实施例1中描述的方法从产生抗DPEP3抗体的杂交瘤提取总RNA且PCR扩增RNA。关于小鼠抗体的VH和VL链的V、D和J基因区段的数据获自本发明的抗DPEP3抗体的核酸序列(对于核酸序列，参见图5C)。使用以下限制性位点，设计对于抗体的VH和VL链的构架序列特异性的引物组：用于VH片段的AgeI和XhoI，以及用于VL片段的XmaI和DraIII。用QiaquickPCR纯化试剂盒(Qiagen)纯化PCR产物，然后用限制性酶AgeI和XhoI进行针对VH片段的消化，和用限制性酶XmaI和DraIII进行针对VL片段的消化。对VH和VL消化的PCR产物分别进行纯化并连接入IgH或IgK表达载体。在10μL的总体积中用200U T4-DNA连接酶(New EnglandBiolabs)，7.5μL的消化和纯化的基因特异性PCR产物和25ng线性化的载体DNA，进行连接反应。在42℃下用3μL连接产物经由热休克转化感受态大肠杆菌DH10B细菌(LifeTechnologies)，并以100μg/mL的浓度将感受态大肠杆菌DH10B细菌铺板于氨苄青霉素板上。在扩增的连接产物的纯化和消化之后，将VH片段克隆入包含HuIgG1的pEE6.4表达载体(Lonza)(pEE6.4HuIgG1)的AgeI-XhoI限制性位点且将VL片段克隆入包含人κ轻链恒定区的pEE12.4表达载体(Lonza)(pEE12.4Hu-Kappa)的XmaI-DraIII限制性位点。
通过用pEE6.4HuIgG1和pEE12.4Hu-κ表达载体共转染HEK-293T细胞而表达所选的嵌合抗体。转染前，在标准条件下，在150mm板中，在Dulbecco氏改良Eagle氏培养基(DMEM)(其补充有10％热灭活的FCS，100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素G)中培养HEK-293T细胞。为了瞬时转染，使细胞生长至80％汇合。12.5μgpEE6.4HuIgG1和pEE12.4Hu-κ载体DNA各自添加至1.5mL Opti-MeM中的50μLHEK-293T转染试剂。将该混合物在室温下孵育30分钟，并添加至细胞。在转染之后三至六天收获上清液。通过以800×g离心10分钟从细胞碎片使含有重组嵌合抗体的培养上清液澄清并将其保存在4℃。重组嵌合抗体用蛋白A珠纯化。
如下使用专有计算机辅助的CDR移植方法(Abysis Database,UCL Business)和标准分子改造技术将小鼠抗DPEP3抗体(与用于生成嵌合抗体的相同)人源化。基于人种系抗体序列的构架序列和CDR规范结构以及相关小鼠抗体的构架序列和CDR之间的最高同源性设计可变区的人构架区。为了分析的目的，根据Kabat等人编号进行将氨基酸分配至各CDR结构域。一旦选择可变区，它们由合成基因区段生成(Integrated DNA Technologies)。使用上面对于嵌合抗体所述的分子方法克隆和表达人源化抗体。
人源化抗体hSC34.2、hSC34.11、hSC34.14、hSC34.25、hSC34.28、hSC34.38和hSC34.87(图5A和5B；SEQ ID NO:189–215，奇数)的VL和VH氨基酸序列衍生自相应小鼠抗体的VL和VH氨基酸序列(例如，hSC34.2衍生自SC34.2)。人源化抗DPEP3抗体的VL和VH的相应的核酸序列示于图5C中(SEQ ID NO：188-214，偶数)。图5D显示示例性人源化抗DPEP3抗体hSC34.2、hSC34.11、hSC34.14、hSC34.25、hSC34.28、hSC34.38和hSC34.87(SEQ ID NO：216-230)的轻链和重链的全长氨基酸序列，而图5E-5K显示了鼠源抗体(即，SC34.2，SC34.11，SC34.14，SC34.25，SC34.28，SC34.38和SC34.87)的轻链和重链可变区的CDR，如通过Kabat、Chothia、ABM和Contact方法确定的。
为了维持所选抗体的有利性质，在分别地hSC34.14和hSC34.38的VH的位置94和93上仅存在单个构架修饰(见下表8)。
表8
FW 变
实施例9
肿瘤中的DPEP3蛋白表达
鉴于与实施例1和2中描述的各种肿瘤相关的升高的DPEP3 mRNA转录水平，进行了工作来测试DPEP3蛋白表达是否也在PDX肿瘤中升高。为了检测和定量DPEP3蛋白表达，使用MSD Discovery平台(Meso Scale Discovery)开发了电化学发光DPEP3夹心ELISA测定法。
从小鼠PDX切取肿瘤并快速冷冻在干冰/乙醇中。将蛋白提取缓冲液(BiochainInstitute)加入到解冻的肿瘤块并使用TissueLyser系统(Qiagen)粉碎肿瘤。通过离心(20000g，20分钟，4℃)澄清裂解物并使用二辛可宁酸定量每个裂解物中的总蛋白质浓度。随后将蛋白质裂解物标准化至5mg/mL，并在-80℃储存直到进行测定。正常组织裂解物从商业来源购买。
来自裂解物样品的DPEP3蛋白浓度通过从使用具有组氨酸标签的纯化的重组DPEP3蛋白生成的标准蛋白质浓度曲线(实施例4)内插值来确定。DPEP3蛋白标准曲线和蛋白定量测定如下进行：
MSD标准板用15μL的PBS中1μg/mL的SC34.14抗体在4℃涂覆过夜。在PBST中洗涤板，并在35μL MSD 3％封闭剂A溶液中封闭一小时，伴随摇动。再次在PBST中洗涤板。还将在含有10％蛋白质提取缓冲液的MSD 1％封闭剂A中的10μL 10x稀释的裂解物(或连续稀释的重组DPEP3标准品)加入到孔中并孵育2小时，伴随摇动。再次在PBST中洗涤板。然后将SC34.96抗体进行磺基标记和将10μL标记的SC34.96以MSD 1％封闭剂A中的0.5μg/mL在室温下加入经洗涤的板，持续1小时，同时摇动。在PBST中洗涤板。将具有表面活性剂的MSD读数缓冲液T在水中稀释至1X并将35μL加入到每个孔中。使用集成的软件分析程序在MSDSector Imager 2400上读取板以通过从标准曲线的内插推导PDX样品中的DPEP3浓度。然后通过将值除以总蛋白质浓度以产生纳克的DPEP3/毫克的总裂解物蛋白。所得的浓度示于图6中，其中每个点代表从单个PDX肿瘤系衍生的DPEP3蛋白浓度。虽然每个点从单个PDX系衍生，但在大多数情况下，从同一PDX系测试多个生物样品，将值平均以提供数据点。
图6显示卵巢肿瘤的代表性样品具有高DPEP3蛋白表达。OV27MET显示DPEP3的高表达(35ng/ml)，而OV87MET没有显示DPEP3的表达(0ng/ml)。此外，乳腺肿瘤的子集显示出DPEP3的中度表达。正常组织裂解物(“Norm”)没有显示DPEP3蛋白的表达。结合前述实施例中关于DPEP3表达的mRNA转录数据，这些数据强化了DPEP3提供用于治疗性干预的有吸引力的靶的提议。
实施例10
抗DPEP3抗体的表位作图
使用改进的先前描述的酵母展示方法(Chao等人,Nat Protoc.1(2):755-768,2007)在所选的抗DPEP3抗体上进行表位作图。
两种方法被用来鉴定用于进一步筛选以确定所选的抗DPEP3抗体的表位的胞外域(ECD)上的残基子集。第一种方法涉及使用SWISS-MODEL和DPEP1的结构(蛋白质数据库(PDB)：1ITU)对DPEP3同源建模以鉴定DPEP3的表面暴露残基。基于这些结果，使用Quikchange定点诱变试剂盒(Agilent)构建DPEP3上至丙氨酸的个体突变，并以酵母展示形式表达。如下所示将所得的文库进行筛选。
第二种方法涉及就结合所选抗DPEP3抗体的损失进行筛选的DPEP3的突变体文库的生成。简要地说，用易错PCR使用核苷酸类似物8-氧代-2’脱氧鸟苷5’-三磷酸和2’-脱氧-对-核苷-5’三磷酸(TriLink Bio)以一个氨基酸突变/克隆的靶诱变率生成DPEP3突变体的文库。将DPEP3突变体转化到酵母展示形式中。文库用鸡抗c-myc(Life Technologies)以1：250稀释度和10或20nM的鼠或人源化抗DPEP3抗体染色，随后通过Alexa 488缀合的山羊抗鸡抗体和Alexa 647缀合的山羊抗小鼠IgG抗体或山羊抗人IgG抗体染色。通过使用FACSAria(BD Biosciences)的FACS选择与野生型DPEP3 ECD相比表现出结合损失的克隆。将所选克隆再生长，并通过FACS就针对靶抗体的结合损失进行重新筛选。使用Zymoprep YeastPlasmid Miniprep试剂盒(Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep)，个体ECD克隆被分离和测序。在必要时，使用Quikchange定点诱变试剂盒(Agilent)将突变重新格式化作为单突变ECD克隆或作为至丙氨酸的点突变。
通过两种方法鉴定出的个体ECD突变克隆然后通过流式细胞仪术筛选，以确定在整个构象特异性抗体组中是否有相对于野生型ECD的结合损失。来自酵母文库方法的包括半胱氨酸、脯氨酸或终止密码子的突变由于导致错误折叠的突变的高可能性而被自动丢弃。如上所述，除了目的抗DPEP3抗体以100pM至33nM的范围染色外，如上所述使用抗体染色个体ECD突变克隆和野生型ECD。当在组间比较时，导致与目的抗体和非竞争性抗体的结合损失的任何点突变被推断为引起DPEP3的错误折叠。导致仅目的抗体的结合损失而非组中的其它抗体的结合损失的任何点突变被推断为不影响ECD的折叠。这些残基被推断为目的抗体的表位的一部分。
三个示例性抗体的作图的结果示于下表9中，其中特定突变与受试抗体结合突变DPEP3同源物的能力一起指示。在表9中，牵涉为表位成分的那些残基通过受试突变残基前的#来指示。被发现导致DPEP3错误折叠的突变通过*指示，并且在确定表位成分时未进行考虑。
表9
#-涉及表位组分
*-明显的错误折叠突变
基于从突变的同源物衍生的数据，每个测试的抗体的潜在表位成分示于下表10中。
表10
抗体克隆 表位相关残基
SC34.2 E217,R242,Q248,Q372,K375,E379
SC34.10 R46,R48,R54,S55
SC34.28 Q248,S380,S384,V386
实施例11
通过流式细胞术检测肿瘤群体中的DPEP3表面表达
将流式细胞术用来评估本发明的抗DPEP3抗体特异性检测过表达hDPEP3的HEK-293T细胞系的表面上和各种PDX肿瘤细胞系的表面上的hDPEP3蛋白质的存在的能力。
收获过表达hDPEP3的HEK-293T细胞或HEK-293T亲代细胞并分离到具有Versene(Life Technologies)的单细胞悬液中。将分离的细胞用抗DPEP3抗体孵育30分钟并在PBS/2％FCS中洗涤两次。将细胞用每样品50μL的AlexaFluor-647标记的山羊抗小鼠IgG、PBS/2％FCS中1:200稀释的Fc片段特异性二抗孵育15分钟，用PBS/2％FCS洗涤两次和再悬浮于具有DAPI(以检测活细胞)的PBS/2％FCS中。将细胞用抗DPEP3抗体在BD FACS Canto II流式细胞仪上分析。图7A显示了本发明的多个示例性抗DPEP3抗体能够特异性结合过表达hDPEP3的HEK-293T细胞但不结合亲代HEK-293T对照细胞。
本发明的抗体结合卵巢PDX肿瘤细胞系包括卵巢肿瘤肿瘤起始细胞(TIC)的能力还通过使用流式细胞术来评估。收获卵巢PDX肿瘤并使用本领域公认的酶组织消化技术解离以获得PDX肿瘤细胞的单细胞悬浮液(参见，例如，U.S.P.N.2007/0292414)。将PDX肿瘤单细胞悬浮液用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)孵育以排除死细胞，用抗小鼠CD45和H-2Kd抗体孵育以鉴定小鼠细胞，和用抗人EPCAM抗体孵育以鉴定人细胞。此外，肿瘤细胞用抗人CD46和/或CD324和ESA孵育以分离TIC(见U.S.P.N.s2013/0260385,2013/0061340和2013/0061342以及上述实施例1)。对于CD45和H-2Kd阳性染色的小鼠细胞被排除在分析外。肿瘤细胞然后通过流式细胞术使用BD FACS Canto II流式细胞仪用抗DPEP3抗体进行分析。
图7B-7D显示了抗hDPEP3抗体SC34.53检测一些OV-S PDX系(例如，OV27MET，OV44)和以较小程度的其它OV-S PDX系(例如OV72MET和OV87MET)的活人TIC亚群(黑色实线)上的DPEP3蛋白表达(图7B)，而NTG细胞(不表达CD324，或ESA)(虚线)表现出与抗DPEP3抗体的显著较少染色。抗hDPEP3抗体SC34.53还检测OV-PS(例如OV63MET，OV91MET，OV119MET)(图7C)和OV-MMMT(例如OV124)(图7D)中的活人TIC亚群上相较于NTG细胞的DPEP3蛋白表达。同种型对照抗体用来确认染色的特异性(灰色填充)。总结在TIC和NTG细胞的表面上观察到的抗DPEP3抗体的差异染色的表显示为图7B-7D中的插图，其中表达列举为各个肿瘤细胞亚群的所示抗DPEP3抗体和同种型对照之间的几何平均荧光强度(ΔMFI)的变化。
实施例12
使用免疫组织化学和原位杂交检测肿瘤表面上的DPEP3
免疫组织化学(IHC)在PDX肿瘤组织切片上进行，以评估在肿瘤细胞中的DPEP3表达和定位。
为了鉴定IHC相容的抗DPEP3抗体，使用本发明的许多抗DPEP3抗体在过表达DPEP3的HEK-293T细胞沉淀或HEK-293T亲代细胞沉淀上进行IHC。如下所述，在如本领域中标准的经福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)的HEK-293T细胞沉淀上进行IHC。切取细胞沉淀块的平面切片并安装在显微镜载玻片上。在二甲苯去石蜡化后，用抗原修复液(Dako)在99℃预处理5μm切片20分钟，冷却至75℃，然后用PBS中0.3％的过氧化氢处理，随后用抗生物素蛋白/生物素封闭液(Vector Laboratories)处理。然后用PBS缓冲液中3％BSA中的10％马血清封闭FFPE载玻片，并用在3％BSA/PBS中稀释至10μg/ml的本发明的主要抗DPEP3抗体在室温下孵育30分钟。FFPE载玻片用在3％BSA/PBS中稀释至2.5μg/ml的生物素缀合的马抗小鼠抗体(Vector Laboratories)在室温下孵育30分钟，然后在链霉亲和素-HRP(ABC Elite试剂盒；Vector Laboratories)中孵育。生色检测用3,3'-二氨基联苯胺(Thermo Scientific)在室温显影5分钟并且组织用Meyer苏木素(IHC World)复染，用醇洗涤并浸入二甲苯中。抗DPEP3抗体SC34.58能够比所测试的本发明的其它抗DPEP3抗体更有效地特异性检测过表达DPEP3的HEK-293T细胞沉淀(数据未显示)。SC34.58抗体特异性检测DPEP3的能力通过竞争实验确认，其中SC34.58抗体与5x摩尔比过量的hDPEP3-His蛋白混合，然后用表达DPEP3的HEK-293T FFPE切片孵育。阳性染色的不存在表明，hDPEP3-His蛋白干扰抗DPEP3 SC34.58抗体与过表达DPEP3的HEK-293T细胞的结合(数据未显示)。
图8A显示在组织微阵列(TMA)(University of Oklahoma)上分析的125例原发性患者卵巢肿瘤样品中的hDPEP3表达。使用IHC利用抗DPEP3 SC34.58抗体检测表达。用定量细胞表面染色的强度和提供最终“H-得分”的自动图像分析软件包(Leica Biosystems)分析膜表达，所述最终“H-得分”反映了在各个强度水平染色下的肿瘤细胞的百分比(0表示没有染色，3表示强染色)。该H-得分如下计算：(在0的％)*0+(在1+的％)*1+(在2+的％)*2+(在3+的％)*3。因此，该H-得分产生范围从0到300的连续变量。图8A显示，TMA上17％的肿瘤表达hDPEP3。还测定了许多PDX肿瘤细胞系的DPEP3表达，所述PDX肿瘤细胞系包括OV27MET，其有DPEP3的高表达(H-得分＝113)，和OV87MET，其有DPEP3的非常低的表达(H-得分＝3)。
使用2.0试剂的试剂盒(Advanced Cell Diagnostics；Wang等人，2011，PMID：22166544)进行DPEP3 mRNA的RNA原位杂交。用于DPEP3的RNAscope探针被设计在核苷酸187-1696之间。使用特异于肽基脯氨酰异构酶B(PPIB)(位于所有细胞的内质网中的环孢素结合蛋白)的RNAscope探针就RNA完整性对每个样品进行质量控制。使用特异于二氨基庚二酸(dapB)RNA的探针测定背景染色。简单地说，包含原发性患者卵巢肿瘤的125个样品(University of Oklahoma)的TMA用热和蛋白酶预处理，随后用靶寡核苷酸探针杂交。随后依次杂交前置放大器、放大器和HRP标记的寡核苷酸，然后用3,3'-二氨基联苯胺进行生色沉淀物显影。特异性RNA染色信号被鉴定为棕色、点状的点。TMA用Gill苏木素复染色。HALOTM图像分析软件(Indica Labs)用于分析数据。具体地，在每个组织微阵列核心的肿瘤区域中计数个体原位杂交点并生成“平均点/细胞”得分。具有小于0.20的“平均点/细胞得分”的所有核心被认为是阴性的。图8B显示所测试的TMA上的40％的肿瘤表达hDPEP3。水平线代表所有被测试的核心的平均得分，其为0.4。图8B中的原位杂交结果显示表达DPEP3基因的肿瘤相较于图8A中显示的IHC结果(其检测DPEP3蛋白质的表达)的总体更大的百分比。这是由于原位杂交测定相对于IHC测定的增加的敏感性引起的。
数据表明，所测试的卵巢肿瘤的显著部分表达DPEP3并且抗DPEP3抗体在卵巢癌中具有诊断效用。
实施例13
抗-DPEP3抗体促进细胞毒性剂的体外递送
为了确定本发明的抗DPEP3抗体是否能够内化以介导细胞毒性剂至活肿瘤细胞的递送，使用所选的抗DPEP3抗体和连接至二级抗小鼠抗体Fab片段的皂草素进行体外细胞杀伤测定法。皂草素是一种植物毒素，其使核糖体失活，从而抑制蛋白质的合成，并导致细胞的死亡。皂草素只有在细胞内当它可以接近核糖体时是细胞毒性的，但其自身不能够内化。因此，在这些测定中皂草素-介导的细胞毒性指示仅在小鼠抗DPEP3抗体的结合和内化后抗小鼠FAB-皂草素缀合物内化到靶细胞中的能力。
过表达hDPEP3的HEK-293T细胞的单细胞悬液以500个细胞/孔铺板到BD组织培养板(BD Biosciences)中。一天后，将不同浓度的纯化的抗DPEP3抗体与固定浓度的2nM抗小鼠IgG FAB-皂草素缀合物(Advanced Targeting Systems)一起使用加入到培养物中。过表达DPEP3的HEK-293T细胞孵育72小时。在孵育后，活细胞用(Promega)按照生产商的说明计数。使用含有仅用二级FAB-皂草素缀合物孵育的细胞的培养物的原始发光计数被设定为100％参考值，并且所有其它计数计算作为参考值的百分比。20pM浓度的抗大子集DPEP3抗体以不同功效有效地杀死过表达hDPEP3的HEK-293T细胞(图9)，而在相同的浓度下小鼠lgG1同种型对照抗体(mlgG1)没有如此。
上述结果证明抗DPEP3抗体介导内化的能力以及它们递送细胞毒性有效载荷的能力，从而支持抗DPEP3抗体可具有作为抗体药物缀合物的靶向部分的治疗效用的假设。
实施例14
抗DPEP3抗体-药物缀合物的制备
制备具有上述Ab-[L-D]结构的抗DPEP3抗体药物缀合物(ADC)。每个ADC包含共价连接至连接体-药物的抗DPEP3抗体，所述连接体-药物包含具有游离巯基的末端马来酰亚胺部分和吡咯并苯并二氮杂(PBD)二聚体。在所有情况下，使用PBD1，其结构是上文所提供的。
使用本领域认可的技术如下合成和纯化抗DPEP3 ADC。用三(2-羧乙基)-膦(TCEP)的预先确定的摩尔添加/mol抗体在含有5mM EDTA的磷酸缓冲盐水(PBS)中在20℃下部分还原所选的抗DPEP3鼠抗体(SC34.25，SC34.83，SC34.97和SC34.95)和人源化抗体(hSC34.2，hSC34.11，hSC34.14，hSC34.25，hSC34.28和hSC34.38)的半胱氨酸键，持续90分钟。将溶解于二甲基乙酰胺(DMA)中的马来酰亚胺连接体有效载荷以3.0mol/mol抗DPEP3抗体的比率加入。使反应进行30分钟。然后将反应通过加入相较于使用在水中制备的10mM储备溶液的连接体-药物过量的N-乙酰半胱氨酸(NAC)来进行淬灭。在20分钟的最小淬火时间后，通过添加0.5M的乙酸将pH调节至6.0，并通过使用30kDa膜的渗滤来进行缓冲液交换至渗滤缓冲液中。经渗滤的抗DPEP3 ADC然后用蔗糖和聚山梨醇酯20配制到目标最终浓度。最终的ADC“HIC纯化的DAR＝2”制剂使用RP-HPLC来分析以测定HC和LC上的缀合百分比和DAR分布。样品还分析采用分析性HIC分析以测定DAR＝2种类相对于不想要的DAR>2和DAR<2种类的量(见实施例16)。
所得的抗DPEP3 ADC被称为SC34.25-PBD1,SC34.83-PBD1,SC34.97-PBD1,SC34.95-PBD1,hSC34.2-PBD1,hSC34.11-PBD1,hSC34.14-PBD1,hSC34.25-PBD1,hSC34.28-PBD1和hSC34.38-PBD1。
实施例15
位点特异性抗DPEP3抗体的生成
构建改造的人IgG1/κ抗DPEP位点特异性抗体，其包含天然轻链(LC)恒定区和重链(HC)恒定区，其中在HC的上铰链区中的半胱氨酸220(C220)(其与HC中的半胱氨酸214(C214)形成链间二硫键)被取代为丝氨酸(C220S)。当组装时，HC和LC形成抗体，所述抗体包含两个适合于缀合至治疗剂的游离半胱氨酸。除非另有说明，恒定区残基的所有编号是根据如在Kabat等人所述的EU编号方案。
如下生成改造的抗体。编码人源化抗DPEP3抗体hSC34.28HC(SEQ ID NO：207)的表达载体被用作PCR扩增和定点诱变的模板。使用系统(AgilentTechnologies)根据制造商的说明进行定点诱变。
将编码hSC34.28的突变C220S HC的载体与hSC34.28(SEQ ID NO:205)的天然IgG1κLC一起共转染于CHO-S细胞中，并使用哺乳动物瞬时表达系统表达。改造的含有C220S突变体的抗DPEP3位点特异性抗体被称为hSC34.28ss1。hSC34.28ss1位点特异性抗体的全长LC和HC的氨基酸序列显示于图5D(SEQ ID NO:224和226)。LC中的反应性半胱氨酸加以下划线，HC中位置220上的突变残基也加以下划线。通过SDS-PAGE表征改造的抗DPEP3抗体，以证实已经生成正确的突变体。在还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)的存在和不存在的情况下，在来自Life Technologies的预制10％Tris-甘氨酸微型凝胶上进行SDS-PAGE。电泳后，用胶体考马斯溶液染色凝胶。在还原条件下，观察到对应于游离LC和游离HC的两个条带。该模式是还原条件下的IgG分子典型的。在非还原条件下，条带模式不同于天然IgG分子，表明HC和LC之间不存在二硫键。观察到对应于HC-HC二聚体的约98kD的条带。此外，观察到对应于游离LC的模糊条带和对应于LC-LC二聚体的约48kD的主要条带。由于在各LC的C-末端上的游离半胱氨酸，预计形成一定量的LC-LC物质种类。
实施例16
使用选择性还原方法缀合位点特异性抗DPEP3抗体
如上面实施例15中所述生成的位点特异性抗体hSC34.28ss1通过具有游离巯基的末端马来酰亚胺部分缀合至PBD1。期望产物是这样的ADC，其在各LC恒定区上的未配对的半胱氨酸(C214)上最大限度地缀合，且尽可能减少具有大于2(DAR>2)的药物抗体比(DAR)的ADC，同时尽可能增加具有2的DAR(DAR＝2)的ADC。
为了进一步改善缀合的特异性和最终位点特异性ADC的均匀性，使用，方法选择性还原hSC34.28ss1抗体，所述方法包括稳定剂(例如，L-精氨酸)和温和的还原剂(例如谷胱甘肽)，然后与连接体-药物缀合，随后为制备型疏水性相互作用层析(HIC)，其用于分离不同的DAR物质种类。如下所述进行上述程序。
在室温在含有1M L-精氨酸/5mM还原型谷胱甘肽(GSH)/5mM EDTA(pH 8.0)的缓冲液中部分还原hSC34.28ss1的制备物，持续最少1小时。然后使用30kDa膜(MilliporeAmicon Ultra)将所有制备物缓冲液交换至20mM Tris/3.2mM EDTA(pH 8.2)缓冲液中，以去除还原缓冲液。然后在室温将所得部分还原的制备物经由马来酰亚胺连接体缀合至PBD1，持续最少30分钟。然后通过加入相较于使用在水中制备的10mM储备溶液的连接体-药物过量的NAC来淬灭反应。20分钟的最少淬灭时间之后，通过添加0.5M乙酸将pH调节至6.0。通过使用30kDa膜来将hSC34.28ss1-PBD1缀合制剂进行缓冲液交换至渗滤缓冲液中，然后用高盐缓冲液稀释以增加导电率，以促进结合至树脂上，然后上样至丁基HP树脂层析柱(GELife Sciences)上。采用渐降的盐梯度以基于疏水性分离不同的DAR物质种类，其中DAR＝0物质种类首先洗脱，随后是DAR＝1，DAR＝2，然后是更高的DAR物质种类。
使用RP-HPLC分析最终抗体-药物“HIC纯化的DAR＝2”制备物，以测定HC和LC上的百分比缀合和DAR分布。结果显示93％的药物缀合至LC和5％的药物缀合至HC(图10A)。还使用分析型HIC分析样品以测定DAR＝2物质种类相对于不想要的DAR>2和DAR<2物质种类的量。结果表明，96％的样品是DAR＝2种类(图10B)。与改造的构建体和HIC纯化方法组合的选择性缀合方法导致大于95％的DAR＝2水平，以及轻链缀合水平高于90％，表明最终样品中的高度同质性，其中缀合基本上局限于轻链恒定区的C末端上的所需游离半胱氨酸残基。
实施例17
抗-DPEP3 ADC促进细胞毒性剂的体外递送
为了确定本发明的抗DPEP3抗体是否能够内化以介导细胞毒性剂至活肿瘤细胞的递送，使用抗DPEP3 ADC hSC34.28-PBD1进行体外细胞杀伤测定法。
过表达hDPEP3的HEK-293T细胞或幼稚HEK293T细胞的单细胞悬液以500个细胞/孔铺板到BD组织培养板(BD Biosciences)中。一天后，将不同浓度的纯化的hSC34.28-PBD1加入到培养物中。将细胞孵育96小时。在孵育后，活细胞用(Promega)按照生产商的说明计数。使用含有未处理细胞的培养物的原始发光计数被设定为100％参考值，并且所有其它计数计算作为参考值的百分比。图11显示过表达DPEP3的HEK-293T细胞系相较于幼稚HEK-293T细胞对于hSC34.28-PBD1 ADC远更敏感。
上述结果证明了抗DPEP3 ADC特异性介导内化和递送细胞毒性有效载荷至表达DPEP3的细胞的能力。
实施例18
人源化抗DPEP3抗体药物缀合物在体内抑制肿瘤生长
测试如上面实施例14所述生成的抗DPEP3 ADC，以表明其抑制免疫缺陷小鼠中的卵巢肿瘤生长的能力。
使用本领域公认的技术在雌性NOD/SCID小鼠的侧腹中皮下生长表达DPEP3的OV-SPDX肿瘤系(OV27MET)和显示低水平DPEP3表达的OV-S肿瘤系(OV87MET)。每周一次或两次监测肿瘤体积和小鼠重量。当肿瘤体积达到150-250mm3时，将小鼠随机分配至治疗组，并用2个剂量的5mg/kg顺铂(标准护理)、1或2mg/kghSC34.28-PBD1的单一剂量、2mg/kg抗-半抗原对照人IgG-PBD1或媒介物对照(0.9％盐水或5％葡萄糖)的单一剂量腹膜内注射。治疗后，监测肿瘤体积和小鼠重量，直至肿瘤超过800mm3或小鼠变得生病。用hSC34.28-PBD1治疗的小鼠不表现出超出免疫缺陷的荷瘤NOD/SCID小鼠中常见的那些的任何有害健康影响。图12显示，在表达DPEP3的卵巢PDX肿瘤(OV27MET)中，抗DPEP3 ADC hSC34.28-PBD1的施用导致肿瘤抑制持续超过100天，而标准护理顺铂和对照抗体IgG-PBD1的施用不导致任何肿瘤体积减小。相反地，抗DPEP3 ADC相较于顺铂或其它对照在OV87MET肿瘤中没有效果，所述OV87MET肿瘤是具有如通过IHC(实施例12)、化学发光测定法(实施例9)和流式细胞术(实施例11)测量的低得多的DPEP3表达水平的卵巢PDX细胞系。
hSC34.28-PBD1特异性杀死表达DPEP3的卵巢肿瘤细胞和以延长时期剧烈抑制体内肿瘤生长的能力进一步验证了抗DPEP3 ADC在卵巢癌和特别是卵巢癌的OV-S亚型的治疗性治疗中的用途。
实施例19
抗DPEP3抗体药物缀合物降低肿瘤起始细胞频率
如实施例11中所证明的，DPEP3表达与致瘤细胞相关。因此，为了表明用抗DPEP3ADC治疗降低已知耐药且刺激肿瘤复发和转移的TIC的频率，进行体内有限稀释测定(LDA)，例如，基本上如下所述。
在免疫缺陷小鼠中皮下生长PDX肿瘤(例如黑色素瘤或卵巢肿瘤)。当肿瘤体积平均大小为150mm3–250mm3时，将小鼠随机分成两组。一组腹膜内注射缀合至药物的人IgG1作为阴性对照；且另一组腹膜内注射抗DPEP3 ADC(例如，如实施例14和16中制备)。给药后一周，使来自各组的两个代表性小鼠安乐死，并收获它们的肿瘤并分散至单细胞悬浮液。然后如先前实施例1中所述收获、合并和分解来自各处理组的肿瘤细胞。所述细胞用FITC缀合的抗小鼠H2kD和抗小鼠CD45抗体标记来检测小鼠细胞；用EpCAM标记来检测人体细胞；且用DAPI来检测死细胞。然后通过FACS使用BD FACS Canto II流式细胞仪分选所得悬浮液，并分离和收集活的人肿瘤细胞。
用1250、375、115或35个用抗DPEP3 ADC处理的分选的来自肿瘤的人细胞注射小鼠的四个组群。作为阴性对照，用1000、300、100或30个用对照IgG1 ADC处理的分选的来自肿瘤的活的人细胞移植小鼠的四个组群。每周测量受体小鼠中的肿瘤，且在肿瘤达到1500mm3之前使个别小鼠安乐死。受体小鼠被评分为具有阳性或阴性肿瘤生长。阳性肿瘤生长被定义为超过100mm3的肿瘤生长。
泊松分布统计学(L-Calc软件，Stemcell Technologies)用于计算各群体中的TIC的频率。
序列表
<110> Stem CentRx, LLC
<120> 新型抗DPEP3抗体和使用方法
<130> sc3401.pct // S69697 1050WO
<150> 61/915,321
<151> 2013-12-12
<160> 273
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Κ轻链(LC)恒定区蛋白
<400> 1
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
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Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 2
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> IgGI重链(HC)恒定区蛋白
<400> 2
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
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Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
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Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
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Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
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Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
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Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 3
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<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人DPEP3同工型成熟蛋白(UniProtKB /Swiss-Prot. Q9H4B8.2; 残基36-488)
<400> 3
Ala Glu Thr Thr Pro Gly Ala Pro Arg Ala Leu Ser Thr Leu Gly Ser
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Pro Ser Leu Phe Thr Thr Pro Gly Val Pro Ser Ala Leu Thr Thr Pro
20 25 30
Gly Leu Thr Thr Pro Gly Thr Pro Lys Thr Leu Asp Leu Arg Gly Arg
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Ala Gln Ala Leu Met Arg Ser Phe Pro Leu Val Asp Gly His Asn Asp
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Leu Pro Gln Val Leu Arg Gln Arg Tyr Lys Asn Val Leu Gln Asp Val
65 70 75 80
Asn Leu Arg Asn Phe Ser His Gly Gln Thr Ser Leu Asp Arg Leu Arg
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Asp Gly Leu Val Gly Ala Gln Phe Trp Ser Ala Ser Val Ser Cys Gln
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Ser Gln Asp Gln Thr Ala Val Arg Leu Ala Leu Glu Gln Ile Asp Leu
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Ile His Arg Met Cys Ala Ser Tyr Ser Glu Leu Glu Leu Val Thr Ser
130 135 140
Ala Glu Gly Leu Asn Ser Ser Gln Lys Leu Ala Cys Leu Ile Gly Val
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Glu Gly Gly His Ser Leu Asp Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Ser Phe
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Tyr Val Leu Gly Val Arg Tyr Leu Thr Leu Thr Phe Thr Cys Ser Thr
180 185 190
Pro Trp Ala Glu Ser Ser Thr Lys Phe Arg His His Met Tyr Thr Asn
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Val Ser Gly Leu Thr Ser Phe Gly Glu Lys Val Val Glu Glu Leu Asn
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Arg Leu Gly Met Met Ile Asp Leu Ser Tyr Ala Ser Asp Thr Leu Ile
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Arg Arg Val Leu Glu Val Ser Gln Ala Pro Val Ile Phe Ser His Ser
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Ala Ala Arg Ala Val Cys Asp Asn Leu Leu Asn Val Pro Asp Asp Ile
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Leu Gln Leu Leu Lys Lys Asn Gly Gly Ile Val Met Val Thr Leu Ser
275 280 285
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Asp His Phe Asp His Ile Arg Ala Val Ile Gly Ser Glu Phe Ile Gly
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Ile Gly Gly Asn Tyr Asp Gly Thr Gly Arg Phe Pro Gln Gly Leu Glu
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Asp Val Ser Thr Tyr Pro Val Leu Ile Glu Glu Leu Leu Ser Arg Ser
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Trp Ser Glu Glu Glu Leu Gln Gly Val Leu Arg Gly Asn Leu Leu Arg
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Val Phe Arg Gln Val Glu Lys Val Arg Glu Glu Ser Arg Ala Gln Ser
370 375 380
Pro Val Glu Ala Glu Phe Pro Tyr Gly Gln Leu Ser Thr Ser Cys His
385 390 395 400
Ser His Leu Val Pro Gln Asn Gly His Gln Ala Thr His Leu Glu Val
405 410 415
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Pro Tyr Leu Val Pro Gly Leu Val Ala Ala Ala Thr Ile Pro Thr Phe
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Thr Gln Trp Leu Cys
450
<210> 4
<211> 488
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人DPEP3同工型前体(UniProtKB /Swiss-Prot. Q9H4B8.2; 残基1-488)
<400> 4
Met Gln Pro Thr Gly Arg Glu Gly Ser Arg Ala Leu Ser Arg Arg Tyr
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Leu Arg Arg Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Gln Pro
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Val Thr Arg Ala Glu Thr Thr Pro Gly Ala Pro Arg Ala Leu Ser Thr
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Leu Gly Ser Pro Ser Leu Phe Thr Thr Pro Gly Val Pro Ser Ala Leu
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Thr Thr Pro Gly Leu Thr Thr Pro Gly Thr Pro Lys Thr Leu Asp Leu
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Arg Gly Arg Ala Gln Ala Leu Met Arg Ser Phe Pro Leu Val Asp Gly
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His Asn Asp Leu Pro Gln Val Leu Arg Gln Arg Tyr Lys Asn Val Leu
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Gln Asp Val Asn Leu Arg Asn Phe Ser His Gly Gln Thr Ser Leu Asp
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Arg Leu Arg Asp Gly Leu Val Gly Ala Gln Phe Trp Ser Ala Ser Val
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Ser Cys Gln Ser Gln Asp Gln Thr Ala Val Arg Leu Ala Leu Glu Gln
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Ile Asp Leu Ile His Arg Met Cys Ala Ser Tyr Ser Glu Leu Glu Leu
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Ile Gly Val Glu Gly Gly His Ser Leu Asp Ser Ser Leu Ser Val Leu
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Arg Ser Phe Tyr Val Leu Gly Val Arg Tyr Leu Thr Leu Thr Phe Thr
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Cys Ser Thr Pro Trp Ala Glu Ser Ser Thr Lys Phe Arg His His Met
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Tyr Thr Asn Val Ser Gly Leu Thr Ser Phe Gly Glu Lys Val Val Glu
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Phe Ile Gly Ile Gly Gly Asn Tyr Asp Gly Thr Gly Arg Phe Pro Gln
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Leu Glu Val Thr Lys Gln Pro Thr Asn Arg Val Pro Trp Arg Ser Ser
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485
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<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人DPEP3同工型前体(GenBank Accession No. NP_071752.3)
<400> 5
Met Ile Arg Thr Pro Leu Ser Ala Ser Ala His Arg Leu Leu Leu Pro
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Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Gln Pro Val Thr Arg Ala Glu Thr Thr
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Pro Gly Ala Pro Arg Ala Leu Ser Thr Leu Gly Ser Pro Ser Leu Phe
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Thr Thr Pro Gly Val Pro Ser Ala Leu Thr Thr Pro Gly Leu Thr Thr
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Pro Gly Thr Pro Lys Thr Leu Asp Leu Arg Gly Arg Ala Gln Ala Leu
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Met Arg Ser Phe Pro Leu Val Asp Gly His Asn Asp Leu Pro Gln Val
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Leu Arg Gln Arg Tyr Lys Asn Val Leu Gln Asp Val Asn Leu Arg Asn
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Thr Ala Val Arg Leu Ala Leu Glu Gln Ile Asp Leu Ile His Arg Met
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Ser Leu Asp Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Ser Phe Tyr Val Leu Gly
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Val Arg Tyr Leu Thr Leu Thr Phe Thr Cys Ser Thr Pro Trp Ala Glu
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Ser Ser Thr Lys Phe Arg His His Met Tyr Thr Asn Val Ser Gly Leu
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Thr Ser Phe Gly Glu Lys Val Val Glu Glu Leu Asn Arg Leu Gly Met
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Met Ile Asp Leu Ser Tyr Ala Ser Asp Thr Leu Ile Arg Arg Val Leu
290 295 300
Glu Val Ser Gln Ala Pro Val Ile Phe Ser His Ser Ala Ala Arg Ala
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Val Cys Asp Asn Leu Leu Asn Val Pro Asp Asp Ile Leu Gln Leu Leu
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Gln Cys Asn Leu Leu Ala Asn Val Ser Thr Val Ala Asp His Phe Asp
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Glu Phe Pro Tyr Gly Gln Leu Ser Thr Ser Cys His Ser His Leu Val
450 455 460
Pro Gln Asn Gly His Gln Ala Thr His Leu Glu Val Thr Lys Gln Pro
465 470 475 480
Thr Asn Arg Val Pro Trp Arg Ser Ser Asn Ala Ser Pro Tyr Leu Val
485 490 495
Pro Gly Leu Val Ala Ala Ala Thr Ile Pro Thr Phe Thr Gln Trp Leu
500 505 510
Cys
<210> 6
<211> 1724
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> misc_feature
<223> 人DPEP3 cDNA克隆(GenBank登录号BC037243)
<400> 6
gtcgtcatga tccggacccc attgtcggcc tctgcccatc gcctgctcct cccaggctcc 60
cgcggccgac ccccgcgcaa catgcagccc acgggccgcg agggttcccg cgcgctcagc 120
cggcggtatc tgcggcgtct gctgctcctg ctactgctgc tgctgctgcg gcagcccgta 180
acccgcgcgg agaccacgcc gggcgccccc agagccctct ccacgctggg ctcccccagc 240
ctcttcacca cgccgggtgt ccccagcgcc ctcactaccc caggcctcac tacgccaggc 300
acccccaaaa ccctggacct tcggggtcgc gcgcaggccc tgatgcggag tttcccactc 360
gtggacggcc acaatgacct gccccaggtc ctgagacagc gttacaagaa tgtgcttcag 420
gatgttaacc tgcgaaattt cagccatggt cagaccagcc tggacaggct tagagacggc 480
ctcgtgggtg cccagttctg gtcagcctcc gtctcatgcc agtcccagga ccagactgcc 540
gtgcgcctcg ccctggagca gattgacctc attcaccgca tgtgtgcctc ctactctgaa 600
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ctgggggtgc gctacctgac acttaccttc acctgcagta caccatgggc agagagttcc 780
accaagttca gacaccacat gtacaccaac gtcagcggat tgacaagctt tggtgagaaa 840
gtagtagagg agttgaaccg cctgggcatg atgatagatt tgtcctatgc atcggacacc 900
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agagctgtgt gtgacaattt gttgaatgtt cccgatgata tcctgcagct tctgaagaag 1020
aacggtggca tcgtgatggt gacactgtcc atgggggtgc tgcagtgcaa cctgcttgct 1080
aacgtgtcca ctgtggcaga tcactttgac cacatcaggg cagtcattgg atctgagttc 1140
atcgggattg gtggaaatta tgacgggact ggccggttcc ctcaggggct ggaggatgtg 1200
tccacatacc cagtcctgat agaggagttg ctgagtcgta gctggagcga ggaagagctt 1260
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gagagcaggg cgcagagccc cgtggaggct gagtttccat atgggcaact gagcacatcc 1380
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cagccaacca atcgggtccc ctggaggtcc tcaaatgcct ccccatacct tgttccaggc 1500
cttgtggctg ctgccaccat cccaaccttc acccagtggc tctgctgaca cagtcggtcc 1560
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tatgctgaga ataaacatgt tacacatgga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 1724
<210> 7
<211> 486
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 人DPEP2蛋白(GenBank登录号NP_071750)
<400> 7
Met Gln Pro Ser Gly Leu Glu Gly Pro Gly Thr Phe Gly Arg Trp Pro
1 5 10 15
Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Pro Val Thr Cys
20 25 30
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35 40 45
Pro Arg Ala His Thr Met Pro Gly Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Pro Ser Thr Gln Gly Leu Gln Glu Gln Ala Arg Ala Leu Met
65 70 75 80
Arg Asp Phe Pro Leu Val Asp Gly His Asn Asp Leu Pro Leu Val Leu
85 90 95
Arg Gln Val Tyr Gln Lys Gly Leu Gln Asp Val Asn Leu Arg Asn Phe
100 105 110
Ser Tyr Gly Gln Thr Ser Leu Asp Arg Leu Arg Asp Gly Leu Val Gly
115 120 125
Ala Gln Phe Trp Ser Ala Tyr Val Pro Cys Gln Thr Gln Asp Arg Asp
130 135 140
Ala Leu Arg Leu Thr Leu Glu Gln Ile Asp Leu Ile Arg Arg Met Cys
145 150 155 160
Ala Ser Tyr Ser Glu Leu Glu Leu Val Thr Ser Ala Lys Ala Leu Asn
165 170 175
Asp Thr Gln Lys Leu Ala Cys Leu Ile Gly Val Glu Gly Gly His Ser
180 185 190
Leu Asp Asn Ser Leu Ser Ile Leu Arg Thr Phe Tyr Met Leu Gly Val
195 200 205
Arg Tyr Leu Thr Leu Thr His Thr Cys Asn Thr Pro Trp Ala Glu Ser
210 215 220
Ser Ala Lys Gly Val His Ser Phe Tyr Asn Asn Ile Ser Gly Leu Thr
225 230 235 240
Asp Phe Gly Glu Lys Val Val Ala Glu Met Asn Arg Leu Gly Met Met
245 250 255
Val Asp Leu Ser His Val Ser Asp Ala Val Ala Arg Arg Ala Leu Glu
260 265 270
Val Ser Gln Ala Pro Val Ile Phe Ser His Ser Ala Ala Arg Gly Val
275 280 285
Cys Asn Ser Ala Arg Asn Val Pro Asp Asp Ile Leu Gln Leu Leu Lys
290 295 300
Lys Asn Gly Gly Val Val Met Val Ser Leu Ser Met Gly Val Ile Gln
305 310 315 320
Cys Asn Pro Ser Ala Asn Val Ser Thr Val Ala Asp His Phe Asp His
325 330 335
Ile Lys Ala Val Ile Gly Ser Lys Phe Ile Gly Ile Gly Gly Asp Tyr
340 345 350
Asp Gly Ala Gly Lys Phe Pro Gln Gly Leu Glu Asp Val Ser Thr Tyr
355 360 365
Pro Val Leu Ile Glu Glu Leu Leu Ser Arg Gly Trp Ser Glu Glu Glu
370 375 380
Leu Gln Gly Val Leu Arg Gly Asn Leu Leu Arg Val Phe Arg Gln Val
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405 410 415
Phe Pro Asp Glu Gln Leu Ser Ser Ser Cys His Ser Asp Leu Ser Arg
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Leu Arg Gln Arg Gln Ser Leu Thr Ser Gly Gln Glu Leu Thr Glu Ile
435 440 445
Pro Ile His Trp Thr Ala Lys Leu Pro Ala Lys Trp Ser Val Ser Glu
450 455 460
Ser Ser Pro His Met Ala Pro Val Leu Ala Val Val Ala Thr Phe Pro
465 470 475 480
Val Leu Ile Leu Trp Leu
485
<210> 8
<211> 493
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 小鼠DPEP3蛋白(GenBank登录号NP_082236)
<400> 8
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1 5 10 15
Leu Gly His Arg Leu Ser Leu Leu Gly Val Leu Leu Leu Val Pro Ser
20 25 30
Leu Trp Val Thr Cys Thr Leu Thr Thr Pro Ser Pro Ser Ser Ala Pro
35 40 45
Thr Thr Pro Glu Ala Ser Asn Ala Thr Thr Ala Pro Gly Ile Pro Asn
50 55 60
Asp Thr Ala Thr Ser Gly Val Thr Ser Asp Pro Arg Leu Arg Glu Gln
65 70 75 80
Ala Leu Ala Leu Met Arg Asp Phe Pro Leu Val Asp Gly His Asn Asp
85 90 95
Leu Pro Leu Leu Leu Arg Glu Leu Phe Gln Asn Gln Leu Gln Asp Val
100 105 110
Asn Leu Arg Asn Phe Thr Arg Gly Gln Thr Asn Leu Asp Arg Leu Arg
115 120 125
Asp Gly Leu Val Gly Ala Gln Phe Trp Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Gln
130 135 140
Thr Gln Asp Arg Asp Ala Val Arg Leu Ala Leu Glu Gln Ile Asp Leu
145 150 155 160
Ile Arg Arg Met Cys Ser Ala Tyr Pro Glu Leu Glu Leu Val Thr Ser
165 170 175
Ala Asp Gly Leu Asn Asn Thr Gln Lys Leu Ala Cys Leu Ile Gly Val
180 185 190
Glu Gly Gly His Ser Leu Asp Thr Ser Leu Ala Val Leu Arg Ser Phe
195 200 205
Tyr Glu Leu Gly Val Arg Tyr Leu Thr Leu Thr Phe Thr Cys Ser Thr
210 215 220
Pro Trp Ala Glu Ser Ala Thr Lys Phe Arg His His Phe Tyr Thr Asn
225 230 235 240
Ile Ser Gly Leu Thr Ser Phe Gly Glu Lys Val Val Glu Glu Met Asn
245 250 255
Arg Leu Gly Met Met Ile Asp Leu Ser His Ala Ser Asp Thr Leu Val
260 265 270
Lys Gln Thr Leu Glu Val Ser Gln Ala Pro Val Ile Phe Ser His Ser
275 280 285
Ala Ala Arg Ser Val Cys Asp Asn Leu Leu Asn Ile Pro Asp Asp Ile
290 295 300
Leu Gln Leu Leu Lys Lys Asn Gly Gly Ile Val Met Val Thr Leu Ser
305 310 315 320
Met Gly Val Leu Gln Cys Ser Leu Phe Ala Asn Val Ser Thr Val Ala
325 330 335
Asp His Phe Asp His Ile Arg Thr Val Ile Gly Ser Glu Phe Ile Gly
340 345 350
Ile Gly Gly Ser Tyr Asp Gly Ser Gly Arg Phe Pro Gln Gly Leu Glu
355 360 365
Asp Val Ser Thr Tyr Pro Val Leu Ile Glu Glu Leu Leu Ser Arg Gly
370 375 380
Trp Asp Glu Arg Glu Leu Gln Gly Val Leu Arg Gly Asn Leu Leu Arg
385 390 395 400
Val Phe Arg Gln Val Glu Gln Val Arg Glu Lys Ser Leu Gly Gln Ser
405 410 415
Pro Val Glu Val Lys Phe Pro Glu Arg Gln Gln Ser Asn Thr Cys His
420 425 430
Ser His Leu Leu Pro Gln Pro Gln Glu Asp Gln His Gln Asp Thr His
435 440 445
Leu Lys Val Thr Lys Leu Pro Asn Ile Leu Gln Arg Ala Ser Lys Ala
450 455 460
Pro Pro His Pro Leu Pro Gly Leu Met Ala Thr Leu Thr Ser Leu Ala
465 470 475 480
Leu Ile Leu Trp Leu Cys Cys Ser Gly His Arg Ala Val
485 490
<210> 9
<211> 1726
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> 小鼠DPEP3 cDNA克隆(GenBank登录号BC051148)
<400> 9
gttgcgcagc agggtgactg gaagcccttc caagcgaggc cacgtcctag ggaccctgaa 60
tcgaaggtcc gaacccattg tcgccctctg ccctatccct gcccttctca agcgctcttg 120
tgaccaagac tgagcaccat gcagcccgcg ggtcttgagg gtccacgcgc gctcggcctg 180
cggcctctgg ggcaccggct gtccctgctg ggggtgttac ttctagttcc gtctctgtgg 240
gtaacctgca ccctgactac tccgagcccc tccagtgctc cgacaacacc ggaagcctcc 300
aatgccacga ccgctccagg cattcctaat gacacggcca cgtcaggtgt gaccagtgac 360
cctcgccttc gagagcaagc actggctctg atgcgagact tcccacttgt ggatggccac 420
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cgcaatttca cccgtggcca gaccaacctg gataggctca gggacggcct tgtgggtgcc 540
cagttctggt cagcctacat cccgtgccaa acccaggacc gggatgccgt acgcctagcc 600
ctggagcaga ttgatctcat tcgtcgcatg tgctctgctt accctgagct ggagctggtg 660
acctcagctg atggtctgaa taacactcag aagctggcct gcctcattgg tgtagagggt 720
ggtcactcac tggacaccag cctcgctgtg ttgcgcagtt tctatgagct aggagtgcgc 780
tacctgactc ttaccttcac ctgcagcaca ccgtgggcag aaagcgccac aaaattcaga 840
caccatttct acaccaacat tagtgggttg acaagctttg gtgagaaagt agtggaagaa 900
atgaaccgtc tgggcatgat gatagacttg tcccacgcct cggacacctt agtgaagcag 960
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gacaatttgc tgaatattcc tgatgacata ttgcaacttc tgaagaagaa cggtggcatc 1080
gtgatggtga cactatccat gggggtgcta cagtgcagtc tgtttgctaa cgtgtccact 1140
gtagcagatc attttgacca catcaggaca gtcattggat ctgagttcat tgggatcggt 1200
ggaagctatg acgggtctgg aaggttccct cagggactgg aggatgtatc tacataccca 1260
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cgaggaaacc tgcttcgggt cttcagacaa gtggaacagg tgagagagaa aagccttggg 1380
cagagccctg tggaggtcaa gtttccagag aggcagcaga gcaacacctg ccactcccac 1440
ctgctgcctc agcctcagga ggaccaacac caggatacac acctgaaggt gacaaagctg 1500
ccaaacatcc tccagagagc ctcaaaagcc cctccccacc ccttgccagg cctcatggct 1560
acgctcacct ccctagccct catcctttgg ctatgttgct ctggccacag ggcagtttag 1620
caaaacccac aaagttcccc tcctcattgc tgagacccca gcttatgttg agaataaata 1680
cctgaaacat cacgacaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1726
<210> 10
<211> 488
<212> PRT
<213> 褐家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> 大鼠DPEP3蛋白(GenBank登录号NP_001008384)
<400> 10
Met Gln Pro Thr Gly Pro Glu Gly Pro Arg Ala Leu Ser Leu Arg Pro
1 5 10 15
Leu Gly His Arg Leu Ser Leu Leu Gly Val Leu Leu Ile Ile Pro Ser
20 25 30
Leu Trp Val Thr Cys Asn Gln Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ser Ala Pro
35 40 45
Thr Ser Pro Gly Ala Ser Ser Ala Met Thr Thr Pro Gly Ile Pro Asn
50 55 60
Asp Thr Thr Thr Ser Gly Val Thr Ser Asp Pro Arg Leu Arg Glu Gln
65 70 75 80
Ala Leu Ala Leu Met Arg Asp Phe Pro Leu Val Asp Gly His Asn Asp
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Leu Pro Leu Leu Leu Arg Glu Leu Phe Gln Asn Lys Leu Gln Asp Val
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Asn Leu His Asn Phe Thr Arg Gly Gln Thr Ser Leu Asp Arg Leu Arg
115 120 125
Asp Gly Leu Val Gly Ala Gln Phe Trp Ser Ala Tyr Ile Pro Cys Gln
130 135 140
Thr Gln Asp Arg Asp Ala Val Arg Val Ala Leu Glu Gln Ile Asp Leu
145 150 155 160
Ile Arg Arg Met Cys Ser Ala Tyr Pro Glu Leu Glu Leu Val Thr Ser
165 170 175
Ala Asp Gly Leu Asn Ser Thr Gln Lys Leu Ala Cys Leu Ile Gly Leu
180 185 190
Glu Gly Gly His Ser Leu Asp Thr Ser Leu Ala Val Leu Arg Ser Phe
195 200 205
Tyr Glu Leu Gly Val Arg Tyr Leu Thr Leu Thr Phe Thr Cys Ser Thr
210 215 220
Pro Trp Ala Glu Ser Ala Thr Lys Phe Arg His His Phe Tyr Thr Asn
225 230 235 240
Ile Ser Gly Leu Thr Ser Phe Gly Glu Lys Val Val Glu Glu Met Asn
245 250 255
Arg Ile Gly Met Met Ile Asp Leu Ser His Ala Ser Asp Thr Leu Val
260 265 270
Lys Gln Thr Leu Glu Ala Ser Arg Ala Pro Val Ile Phe Ser His Ser
275 280 285
Ala Ala Arg Ser Val Cys Asp Asn Leu Leu Asn Val Pro Asp Asp Ile
290 295 300
Leu Gln Leu Leu Lys Lys Asn Gly Gly Ile Val Met Val Thr Leu Ser
305 310 315 320
Met Gly Val Leu Gln Cys Ser Leu Leu Ala Asn Val Ser Thr Val Ala
325 330 335
Asp His Phe Asp His Ile Arg Thr Val Ile Gly Ser Glu Phe Ile Gly
340 345 350
Ile Gly Gly Ser Tyr Asp Gly Ser Gly Arg Phe Pro Gln Gly Leu Glu
355 360 365
Asp Val Ser Thr Tyr Pro Val Leu Leu Glu Glu Leu Leu Arg Arg Gly
370 375 380
Trp Gly Glu Gln Glu Leu Gln Gly Val Leu Arg Gly Asn Leu Leu Arg
385 390 395 400
Val Phe Arg Gln Val Glu Gln Val Arg Glu Lys Ser Leu Gly Gln Ser
405 410 415
Pro Val Glu Val Val Phe Pro Glu Arg Gln Gln Ser Ser Thr Cys His
420 425 430
Ser His Leu Leu Pro Gln Ser Gln Asp Ala His Leu Lys Val Thr Lys
435 440 445
Leu Pro Ser Ser Gln Val Leu Gln Arg Ala Ser Lys Ala Pro Pro Cys
450 455 460
Pro Leu Leu Gly Leu Val Ala Ala Val Thr Ser Pro Ala Phe Thr Leu
465 470 475 480
Trp Leu Cys Cys Ser Gly His Arg
485
<210> 11
<211> 1692
<212> DNA
<213> 褐家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> 大鼠DPEP3 cDNA克隆(GenBank登录号BC085826)
<400> 11
gcccttacaa gcaaggcgac gtcctagggt accctgaatc gaaggtccga accccattgt 60
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acccacgggt cctgagggtc cacgcgcgct cagcttgagg cctctggggc accggctatc 180
cctgttgggg gtgttactta taattccgtc actatgggta acctgcaacc agactactcc 240
gagcctctcc agtgctccga cctcaccggg agcctccagt gccatgacca ctccaggcat 300
tcctaatgac acaactacgt caggcgtgac cagtgaccct cgccttcgag agcaagcact 360
ggccctgatg cgagacttcc cacttgtgga tggccacaac gacctgcctc tgctcctgag 420
agaacttttc cagaacaagc tgcaggatgt gaatctgcac aatttcaccc gtggccagac 480
cagcctggat aggctcaggg atggccttgt gggtgcccag ttctggtcag cctacatccc 540
atgccaaacc caggatcggg atgccgtgcg cgtagccctg gagcagattg acctcatccg 600
acgcatgtgt tctgcttacc cggagttgga gcttgtgacc tcagctgatg gtctgaatag 660
cactcagaag ctggcctgcc tcattggact agagggtggt cactcactgg acaccagcct 720
cgctgtgctg cgcagtttct acgagctagg agtccgctac ctgacactta ccttcacgtg 780
cagcacaccc tgggcagaaa gtgccacgaa attcagacac catttctaca ccaacatcag 840
cgggttgacg agctttggag agaaagtagt ggaagaaatg aaccgcatag gtatgatgat 900
agatttgtcc cacgcctcag acaccttagt gaagcaaacc ctggaggcgt ctcgggctcc 960
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tgacatactg cagcttctga agaagaatgg tggcattgtg atggtgacac tgtccatggg 1080
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caggacagtc attggatctg aattcattgg gattggtgga agctatgatg ggtctggaag 1200
gttccctcag gggctggagg atgtgtctac atacccagtg ctcttagagg agttgctgag 1260
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cagacaagtg gaacaggtga gagaaaaaag ccttgggcag agccctgtgg aggtcgtgtt 1380
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acacttgaag gtgaccaagc tgccaagtag ccaggtgctc cagagggcct ccaaagcccc 1500
gccatgcccc ttgctaggcc tcgtggctgc tgtcacctcc ccagccttca ccctttggct 1560
ttgttgctct ggccacaggt gagtttagca aaacccacac cgttcccctc ctcactgccc 1620
aggccccagc ttatgttaag aataaatacc tgaaacacca ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1680
aaaaaaaaaa aa 1692
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<400> 12
000
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<400> 13
000
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<400> 14
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<400> 15
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<400> 16
000
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000
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.2轻链可变区
<400> 20
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gaagatattg ccacttacta ttgtcagcag tatagtaaac ttccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.2轻链可变区
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Thr Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Arg Thr
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Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Leu
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Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 22
<211> 375
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.2重链可变区
<400> 22
cagatccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcact gactactata taaattggtt gaagcagagg 120
cctggacagg gacttgagtg gattggatgg acttatcctg gaagcggtcc tactaagtac 180
aatgggaagt tcaggggcaa ggccacattg actgtagaca catcctccag cacagtctac 240
atgcagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagacggggg 300
atttattact acgatggtat ctacccaaat tactttgact actggggcca aggcaccact 360
ctcacagtct cctca 375
<210> 23
<211> 127
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.2重链可变区
<400> 23
Glu Val Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
Asp Tyr Tyr Ile Asn Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu
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50 55 60
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<210> 24
<211> 340
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.4轻链可变区
<400> 24
ggacattgtg atgtcacagt ctccatcctc cctaactgtg tcagttggag agaaggttac 60
tatgagctgc aagtccagtc agagcctttt atatagtcgc aatcaaaaga actacttggc 120
ctggtaccag cagaaaccag ggcagtctcc taaactgctg atttactggg catccactag 180
ggactctggg gtccctgatc gcttcacagg cactggatct gggacagatt tctctctcac 240
catcagcagt gtgaaaactg aagacctggc agtttattac tgtcaccaac attataggta 300
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<210> 25
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.4轻链可变区
<400> 25
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
His Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 26
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.4重链可变区
<400> 26
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgaa ctggcgaggc caggggcctc agtgaagctg 60
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aatgagaagt ttaagggcaa ggccatactg actactgata aatcctccaa cacagcctac 240
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gattacggtt cctggtttcc ttactgggcc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.4重链可变区
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Ile Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
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<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.5轻链可变区
<400> 28
gacattgtga tgacacagtt tccatcctcc ctggctatgt cagtaggaca gaaggtcact 60
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ccattcacgt tcggctcggg gacaaaattg gaaataaaa 339
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<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.5轻链可变区
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Leu Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.5重链可变区
<400> 30
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
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<210> 31
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.5重链可变区
<400> 31
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
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Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
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Gly Leu Ile Tyr Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Lys Gln Lys Phe
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Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Pro Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<211> 333
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.6轻链可变区
<400> 32
gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagtaggaca gaatatcact 60
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.6轻链可变区
<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Asn Ile Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn
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Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Thr Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.6重链可变区
<400> 34
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggaacttc aatgaagata 60
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.6重链可变区
<400> 35
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
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Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
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Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Cys Tyr Cys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.7轻链可变区
<400> 36
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.7轻链可变区
<400> 37
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
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Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.7重链可变区
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<210> 39
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.7重链可变区
<400> 39
Gln Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Gly Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Lys Leu Thr Thr Asp Asn Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Ile Asn Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<210> 40
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.11轻链可变区
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.11轻链可变区
<400> 41
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 42
<211> 351
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.11重链可变区
<400> 42
caggtccagc ttcagcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaagatg 60
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.11重链可变区
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
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Trp Met Ile Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Tyr Ile Asp Pro Thr Thr Asp Tyr Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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115
<210> 44
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.13轻链可变区
<400> 44
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<210> 45
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.13轻链可变区
<400> 45
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
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Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
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Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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100 105 110
Lys
<210> 46
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.13重链可变区
<400> 46
caggttcagg tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatgcta taagctgggt gaagcagaga 120
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gattacggtt cctggtttcc ttattggggc caagggactc tggtcactgt gtctgca 357
<210> 47
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.13重链可变区
<400> 47
Gln Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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115
<210> 48
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.14轻链可变区
<400> 48
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<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.14轻链可变区
<400> 49
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ala Pro Ala Ser Leu Ser Pro Ser Val Gly
1 5 10 15
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Arg Leu Leu Val
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<210> 50
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.14重链可变区
<400> 50
gaggtccaac tgcagcagtc tggacctgag atggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggata catattcact gactactaca tgcactgggt gaagcagagc 120
catggagaga gccttgactg gattggacgt gttaatccta aaaaaggtgg tactacctac 180
aaccagaagt tcgagggcaa ggccatattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240
atggacctca acagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aatgggtatc 300
tactatagtt acgacgcctc ctttgactac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 360
tca 363
<210> 51
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.14重链可变区
<400> 51
Glu Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Met Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp
20 25 30
Tyr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Asp Trp
35 40 45
Ile Gly Arg Val Asn Pro Lys Lys Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys
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65 70 75 80
Tyr Met Asp Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.16轻链可变区
<400> 52
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagat atcaaaagaa ttacctggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactggtc atccactcgg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gattattact gtcagcaata ttataggtat 300
ccactcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 53
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.16轻链可变区
<400> 53
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 54
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.16重链可变区
<400> 54
caggttcagc tgcagcagtc tggaactgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctgaata caccttcaca agctatgcta taacctgggt gaggcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcccg gaagtggtaa tacttactac 180
aatgagactt tcaagggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctcc 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 55
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.16重链可变区
<400> 55
Glu Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Ala Arg Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Tyr Thr Phe Thr Ser
20 25 30
Tyr Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Thr
50 55 60
Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala
65 70 75 80
Ser Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 56
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.18轻链可变区
<400> 56
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcgcctgca aggccggtca gaatgtgggt actagtgtag cctggtatca acagaaacca 120
ggacattctc ctaaatcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctaat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagactattt ctgtcagcaa tatatcacct atccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataat a 321
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.18轻链可变区
<400> 57
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Ser Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 58
<211> 369
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<223> SC34.18重链可变区
<400> 58
caggtttctc tgaaagagtc gggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttctggta tgggtgtagg ctggattcgt 120
cagccttcag ggaagggtct ggagtggctg gccaacattt ggtgggatga tagtatttac 180
tataacacag ccctgaagag tcggctcaca atctccaagg atacctccaa aaaccaggtc 240
ttcctcaaga tcgccagtgt ggacactgca gatactgcca catactcctg tgctcgaata 300
gaatcctact atggtaaccg ggcctggttt gcttactggg gccaagggac tctggtcact 360
gtctctgca 369
<210> 59
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.18重链可变区
<400> 59
Gln Val Ser Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Ser Ile Tyr Tyr Asn Thr Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Ser
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Glu Ser Tyr Tyr Gly Asn Arg Ala Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 60
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.19轻链可变区
<400> 60
gacattgtga tgtcacagtc tccttccgcc ctagctgtgt cagttggaga gaagattact 60
atgagctgca agtgtagtca gagcctctta catagtcgcg atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtatcagc agaaaccagg gcagtctccc aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcaacactg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaaca ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
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<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.19轻链可变区
<400> 61
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ala Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Cys Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Arg Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Thr Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 62
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.19重链可变区
<400> 62
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatgcta taacctgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtaa tactttcttc 180
aatgagaagt tcaagggcag ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc tagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
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<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.19重链可变区
<400> 63
Gln Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser
20 25 30
Tyr Ala Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Phe Phe Asn Glu Lys
50 55 60
Phe Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 64
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.20轻链可变区
<400> 64
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctaactgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtacct atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggttccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
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<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.20轻链可变区
<400> 65
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Thr Tyr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 66
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.20重链可变区
<400> 66
caggttcagc tgcagcagtc tggatctgaa ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaga agctatgcta taagctgggt gaggcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg aaagtggtaa tactgactac 180
aatgcgcagt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggcc tctgcagtct atttctgtgc aagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 67
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.20重链可变区
<400> 67
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ala Gln Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 68
<211> 312
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.23轻链可变区
<400> 68
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga ggagatcacc 60
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acttctccca aactcttgat ttatagcact tccaacctgg cttctggagt cccttctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gaccttttat tctctcacaa tcaacactgt ggaggctgaa 240
gatgctgccg attattactg ccatcagtgg agtagttgga cgttcggtgg aggcaccaag 300
ctggaaatca aa 312
<210> 69
<211> 104
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.23轻链可变区
<400> 69
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Glu Ile Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Thr Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Trp Thr Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100
<210> 70
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.23重链可变区
<400> 70
gaggtgcagc ttcaggagtc aggacctagc ctcgtgaaac cttctcagac tctgtccctc 60
acctgttctg tcactggcga ctccatcacc agtggttcct ggaactggat ccggaaattc 120
ccagggaata aacttgagta catgggatac ataaactaca gtggtggcac ttactacaat 180
ccatctctca aaagtcgaat ctccatcact cgagacacat ccaagaacca ctactacctg 240
cagttgaatt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatt actgtggaag acgactggga 300
tcggggggct ggtttggtta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354
<210> 71
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.23重链可变区
<400> 71
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Ser Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn His Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly
85 90 95
Arg Arg Leu Gly Ser Gly Gly Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 72
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.24轻链可变区
<400> 72
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgaactgca agtccagtca gagcctttta tatagtagat atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 73
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.24轻链可变区
<400> 73
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 74
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.24重链可变区
<400> 74
caggttcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctgaata caccttcaca agctatgcta taacctgggt gaagcagaga 120
gctggacagg gccttgagtg gattggggag atttatcctg gaagtggtga tacttactac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 75
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.24重链可变区
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Ala Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 76
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.25轻链可变区
<400> 76
gacatagtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt caggtggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtaggt atcaaaagaa ctacgtggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagtagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 77
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.25轻链可变区
<400> 77
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Gly Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 78
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.25重链可变区
<400> 78
caggtgcagc tgcagcagtc tggagttgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatgcta taagctgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtga aacttactac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcatccag tacggcctac 240
atgcacctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttatgtgg aagagtcaat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 79
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.25重链可变区
<400> 79
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Val Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Glu Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys
85 90 95
Gly Arg Val Asn Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 80
<211> 336
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.26轻链可变区
<400> 80
gatgttgtgc tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctct 60
atctcttgca agtcaagtca gagcctctta tatagtaata gaagaaccta tttgaattgg 120
ttattacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac 180
tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcgggaa cagattttac actgaaaatc 240
agcagggtgg aggctgagga tttgggagtt tattactgcg tacaaggtac acattttccg 300
tacacgttcg gtactgggac caagctggag ctgaaa 336
<210> 81
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.26轻链可变区
<400> 81
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Arg Arg Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 82
<211> 366
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.26重链可变区
<400> 82
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgacattg 60
tcttgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tctactgggt gaagcagagg 120
cctggagaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaatggtgg tcctaacttc 180
aatgagagat tcaagaacaa ggccacactg actgttgaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagaggcctg 300
ctctactatg attacgacag ggggtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
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<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.26重链可变区
<400> 83
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Pro Asn Phe Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Leu Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<400> 84
gacattgtga tgtctcagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtcgca atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcaacagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcaccaata ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gaactgaaa 339
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.27轻链可变区
<400> 85
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.27重链可变区
<400> 86
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaga agttatggta taaactgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagaggtga tgtttactac 180
aatgagaatt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.27重链可变区
<400> 87
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Arg Gly Asp Val Tyr Tyr Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<400> 88
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga acgggtcacc 60
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ccaggatcct cccccaaact ctggattcat agcacatcca acctggcttc tggagtccca 180
ggtcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgccac cagtatcatc gttccccgta cacgttcgga 300
ggggggacca agctggaaat aaaa 324
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.28轻链可变区
<400> 89
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Ser Phe
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Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
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Ile His Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
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Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
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Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.28重链可变区
<400> 90
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt agctactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtggtaa tacttactac 180
aatgagagat tcaaggacaa ggccacattc actgcagata catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaagac tctgccgtct attactgtgc aagaagggcg 300
gccgcctact atagtaaccc cgagtggttt gcttactggg gccaagggac tctggtcact 360
gtctctgca 369
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.28重链可变区
<400> 91
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
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Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
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Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Ala Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.33轻链可变区
<400> 92
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga acgggtcacc 60
atgacctgca ctgccagctc aagtgtaaat tccttttact tacactggta ccagcagaag 120
ccaggatcct cccccaaact ctggattcat agcacatcca acctggcttc tggagtccca 180
ggtcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccactta ttactgccac cagtatcatc gttccccgta cacgttcgga 300
ggggggacca agctggaaat aaaa 324
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<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.33轻链可变区
<400> 93
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Ser Phe
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Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile His Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 94
<211> 369
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.33重链可变区
<400> 94
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt agctactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtgataa aacttactac 180
aatgagaggt tcaaggacaa ggccacattc acggcagata catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaagac tctgccgtct attactgtac aagaagggcg 300
gccgcctact atagtaaccc cgagtggttt gcttactggg gccaagggac tctggtcact 360
gtctctgca 369
<210> 95
<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.33重链可变区
<400> 95
Glu Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser
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Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Lys Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg
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Phe Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala
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Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
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Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.36轻链可变区
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gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
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gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.36轻链可变区
<400> 97
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.36重链可变区
<400> 98
caggtccaac tgcagcagcc tgggtctgtg ctggtgaggc ctggagcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacattcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagag atttctccta ctagtggtag gcctaactac 180
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ggctactatg gtaaagcctt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.36重链可变区
<400> 99
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Ser Pro Thr Ser Gly Arg Pro Asn Tyr Asn Ala Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
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Val Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Gly Glu Gly Tyr Tyr Gly Lys Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
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<210> 100
<211> 336
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.38轻链可变区
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ttcacgttcg gtactgggac caagctggag ctgaaa 336
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<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.38轻链可变区
<400> 101
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
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Asn Arg Arg Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
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Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly
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Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 102
<211> 366
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.38重链可变区
<400> 102
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgacattg 60
tcttgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggagaag gccttgagtg gattggagag attaatccta gcaatggtgg tgctaacttc 180
aatgagagat tcaagaacaa ggccacactg actgttgaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct tttactgtac aagaggcctg 300
ctctactatg attacgacag ggggtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 103
<211> 122
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.38重链可变区
<400> 103
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
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<210> 104
<211> 324
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.39轻链可变区
<400> 104
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctcaagggga acgggtcacc 60
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ccaggatcct cccccaaact ctggatttat agcacatccc acctggcttc tggagtccca 180
gttcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240
gctgaagatg ctgccaccta ttactgccac cagtatcatc gttccccgta cacgttcgga 300
ggggggacca agctggaaat caaa 324
<210> 105
<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.39轻链可变区
<400> 105
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Gln Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
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50 55 60
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85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 106
<211> 369
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.39重链可变区
<400> 106
caggttcaac tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt aactactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtgatag tacttacttc 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagata catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtac aataaggtcg 300
gccgcctact atagtaaccc cgagtggttt gcttactggg gccaagggac tctggtcact 360
gtctctgca 369
<210> 107
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.39重链可变区
<400> 107
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Tyr Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Arg Ser Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 108
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.40轻链可变区
<400> 108
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atgacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcaggtcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtgaatc aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttatggta ctccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.40轻链可变区
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Val Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 372
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.40重链可变区
<400> 110
gaggtgcagc ttcaggagtc aggacctggc ctggcaaaac cttctcagac tctgtccctc 60
acctgttctg tcactggcta ctccatcacc agtgattact ggaactggat ccggaaattc 120
ccagggaata aacttgagta catggggtac ataacctaca gtggtagtac ttactacaat 180
ccatctctca aaagtcgaat ctccatcact cgagacacat ccaagaacca gtattacctg 240
cagttgaatt ctgtgactac tgaggacaca gccacatatt actgtgcaag agcgagggtt 300
tattactacg atggtagata cggccgcgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc 360
accgtctcct ca 372
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<211> 124
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.40重链可变区
<400> 111
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ala Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Arg Val Tyr Tyr Tyr Asp Gly Arg Tyr Gly Arg Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.41轻链可变区
<400> 112
gacatccaga tgattcagtc tccatcgtcc atgtttgcct ctctgggaga cagagtcagt 60
ctctcttgtc gggctagtca gggcattaga ggtaatttag actggtatca gcagaaacca 120
ggtggaacta ttaaactcct gatctactcc acatccaatt taaattctgg tgtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag cctagagtct 240
gaagattttg cagactatta ctgtctacag cgtgatgcgt atccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.41轻链可变区
<400> 113
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Met Phe Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Gly Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gly Thr Ile Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Arg Asp Ala Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.41重链可变区
<400> 114
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcact agctatacca tgtcttgggt tcgtcagact 120
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tacgatggta gctacaacta ctggtacttc gatgtctggg gcgcagggac cacggtcacc 360
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.41重链可变区
<400> 115
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Ala Thr Ile Ser Thr Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Phe Tyr Asp Gly Ser Tyr Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
100 105 110
Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<400> 116
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.46轻链可变区
<400> 117
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
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Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
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Lys Tyr Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Asn Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu
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Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.46重链可变区
<400> 118
caggttcagc tgcagcagtc tggaactgaa ctggcgaggc cagggacttc agtgaagctg 60
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<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.46重链可变区
<400> 119
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.48轻链可变区
<400> 121
Glu Val Asp Ile Gln Met Thr Gln Ala Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser
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Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gly His Ile Tyr
20 25 30
Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu
35 40 45
Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Thr Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr
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Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.48重链可变区
<400> 122
gaggtccagc tgcaacagtc tggacttgag atggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
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tca 363
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<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.48重链可变区
<400> 123
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Leu Glu Met Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
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Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Asp Trp Ile
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Gly Arg Val Asn Pro Lys Lys Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
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65 70 75 80
Met Asp Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Met Gly Ile Tyr Phe Ser Tyr Asp Ala Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
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Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
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<210> 124
<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.49轻链可变区
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.49轻链可变区
<400> 125
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Tyr Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu His Ile Asn Asn Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Pro Pro Arg Leu Leu Ile
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Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Gly Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Thr Pro Phe
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Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.49重链可变区
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.49重链可变区
<400> 127
Gln Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ser Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp
20 25 30
Tyr His Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp
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Ile Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Asn
50 55 60
Leu Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala
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Tyr Met Glu Leu Arg Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Arg Ala Met Asp Ser Pro Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<211> 321
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
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gggacaaagt tggaaataaa a 321
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<211> 108
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.50轻链可变区
<400> 129
Gln Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu
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Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn
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Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu
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Thr Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Ile
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Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 130
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.50重链可变区
<400> 130
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.50重链可变区
<400> 131
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 132
<211> 336
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.53轻链可变区
<400> 132
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tacacgttcg gtactgggac caagctggag atcaaa 336
<210> 133
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.53轻链可变区
<400> 133
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
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50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 134
<211> 366
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.53重链可变区
<400> 134
caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgacattg 60
tcttgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tctactgggt gaagcagagg 120
cctggagaag gccttgagtg gattggagag attgatccta gcaatggtgg tcctaacttc 180
aatgacagat tcaagaacaa ggccacactg actgttgaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagaggcctg 300
ctctactatg attacgacag ggggtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360
tctgca 366
<210> 135
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.53重链可变区
<400> 135
Glu Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser
20 25 30
Tyr Tyr Ile Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asn Gly Gly Pro Asn Phe Asn Asp Arg
50 55 60
Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Thr Arg Gly Leu Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Arg Gly Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 136
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.58轻链可变区
<400> 136
gacattgtga tgtctcagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtcgca atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcaccaaca ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gaactgaga 339
<210> 137
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.58轻链可变区
<400> 137
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
His Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Arg
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.58重链可变区
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caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
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<213> 小家鼠
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Glu Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly
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Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser
20 25 30
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35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Arg Gly Asp Val Tyr Tyr Asn Asp Asn
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<213> 小家鼠
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<213> 小家鼠
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Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
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Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Val Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
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Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
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caggttcaac tgcagcagtc tggagttgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
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<213> 小家鼠
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<221> MISC_FEATURE
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Val Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Gly Ile Asp Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.67重链可变区
<400> 146
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgagactg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatggta taaactgggt gaagcagaga 120
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.67重链可变区
<400> 147
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.71轻链可变区
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.71重链可变区
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
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<213> 小家鼠
<220>
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Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.76重链可变区
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.76重链可变区
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
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<213> 小家鼠
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.78轻链可变区
<400> 157
Asp Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
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100 105
<210> 158
<211> 354
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.78重链可变区
<400> 158
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<210> 159
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.78重链可变区
<400> 159
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Arg Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Leu Thr Ser Asp
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115
<210> 160
<211> 318
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.83轻链可变区
<400> 160
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<210> 161
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.83轻链可变区
<400> 161
Gln Ile Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
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<210> 162
<211> 363
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.83重链可变区
<400> 162
caggttcagc tgcagcagtc tggggctgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaaag cttctggcta cgcattcagt cactcctgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggaaagg gtcttgagtg gattggacgg atttatcctg gagatggaga tattaattat 180
aatgggaagt tcaagggcaa agccacactg actgcagaca agtcctccag cacagcctac 240
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ccctcctata ataattactg ttttgactat tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 360
tca 363
<210> 163
<211> 121
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.83重链可变区
<400> 163
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser His Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ile Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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115 120
<210> 164
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.86轻链可变区
<400> 164
gacactgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagcggtgt cagttggaga gaaggttact 60
ctgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtaggt atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaattgctgc tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgaccg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaaca ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 165
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.86轻链可变区
<400> 165
Asp Thr Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 166
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.86重链可变区
<400> 166
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgtaagg cttctggata caccttcaca agctatacta taacctgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtaa tacttactac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagagtccat 300
gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 167
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.86重链可变区
<400> 167
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Val His Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.87轻链可变区
<400> 168
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.87轻链可变区
<400> 169
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Gly Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
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Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.87重链可变区
<400> 170
caggtccagc ttcagcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agctactgga tgctctgggt aaaacagagg 120
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aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtac aagagggggg 300
aatgtggcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 171
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.87重链可变区
<400> 171
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Leu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Arg Asn Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Gly Asn Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.89轻链可变区
<400> 172
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctaggtgtgt ccgttggaga gaaggttacg 60
ctgagctgca agtccagtca gagccttttt aataaaagag atcaaaagaa ctacctggcc 120
tggtaccaac agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacgggc agtggatctg ggacagattt cattctcacc 240
atcaggagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcaccaatc ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggcgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
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<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.89轻链可变区
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Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Gly Val Ser Val Gly
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Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Lys
20 25 30
Arg Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Thr
65 70 75 80
Ile Arg Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
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Ser Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
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<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.89重链可变区
<400> 174
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatgcta taagctgggt gaaacagaga 120
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gattacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
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<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.89重链可变区
<400> 175
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.90轻链可变区
<400> 176
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ggggggacca agctggaaat taaa 324
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<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.90轻链可变区
<400> 177
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Gln Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
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Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 178
<211> 369
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.90重链可变区
<400> 178
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
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gtctctgca 369
<210> 179
<211> 123
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.90重链可变区
<400> 179
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Ile Arg Arg Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 180
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.91轻链可变区
<400> 180
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
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gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttataggtat 300
ccgctcacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 181
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.91轻链可变区
<400> 181
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
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Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 182
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.91重链可变区
<400> 182
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaga agctatgcta taagctgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtga tacttactac 180
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gataacggtt cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 183
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.91重链可变区
<400> 183
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr
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Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Asn Glu Asn Phe
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 184
<211> 339
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.95轻链可变区
<400> 184
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gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat 300
ccgctcacgg tcggtgccgg gaccaagctg gagctgaaa 339
<210> 185
<211> 113
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.95轻链可变区
<400> 185
Asp Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Val Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 186
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.95重链可变区
<400> 186
caggttcagg tgaagcagtc tggagctgag ctggcgaggc caggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaca agctatgcta taaactggct gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatcctg gaagtggtaa tacttactac 180
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atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgcgc aagagtccat 300
gattacggtt cttggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 187
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> SC34.95重链可变区
<400> 187
Gln Val Gln Val Lys Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2轻链可变区
<400> 189
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65 70 75 80
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100 105
<210> 190
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2重链可变区
<400> 190
gaagttcagc ttgtacagag cggcgccgag gttaagaaac caggcgaatc cttgaagatc 60
tcctgcaaag gttccggata ctcatttaca gattactata ttaactgggt cagacagatg 120
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2重链可变区
<400> 191
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1 5 10 15
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100 105 110
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<210> 192
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11轻链可变区
<400> 192
gatattcaaa tgacccagtc tccttctagt ttgtccgcta gtgtgggaga ccgagtcacc 60
atcacatgta agagcagtca aagtctgctg aacagccgta ccagaaaaaa ttatcttgct 120
tggtaccagc aaaaaccagg gaaagttcca aagctgctta tctactgggc ttctacccga 180
gaatccggag tgcccagtcg gttcagtggg tccggttcag gaacagattt caccctgaca 240
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11轻链可变区
<400> 193
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20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Glu
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 194
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11重链可变区
<400> 194
gaagtgcagc tcgtccagag tggcgctgaa gtcaaaaagc ctggggagag tttgaagatc 60
tcctgcaaag gcagcggcta tagcttcaca aactattgga tgatttgggt ccgccagatg 120
cccggcaagg gccttgagtg gatgggatat atcgatccaa ccactgatta caccgcatat 180
aaccagaagt tcaaagacca ggtaactatc tcagccgaca aaagtataag caccgcatat 240
cttcagtggt catcactgaa agcctccgac accgctatgt actattgcgc tcgtggaggc 300
aacgtggctc tcgacttttg ggggcagggg actctggtta ccgtctcgag c 351
<210> 195
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11重链可变区
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ile Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Thr Thr Asp Tyr Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Asn Val Ala Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 196
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14轻链可变区
<400> 196
gatatccaga tgactcagtc cccctcctct ctctctgcat ctgtcgggga cagggtgact 60
attacttgcc gcacctctga gcatatctac tcttaccttg cctggtacca gcaaaagcca 120
ggaaaagctc ctaagctgtt gatttataat gcaaagacac tggccgaagg agtgccctcc 180
aggtttagcg ggtccggatc tggtacagac tttaccctca ccatcagtag cctgcaaccc 240
gaggactttg ctacttacta ctgtcaacac cactatgata ccccatacac attcggccag 300
gggacaaaac tggagattaa a 321
<210> 197
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14轻链可变区
<400> 197
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 198
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14重链可变区
<400> 198
caggtgcagc tcgttcagag cggggccgag gtgaaaaagc ctggcgcatc tgtcaaggtc 60
tcctgtaaag ccagtggata tacattcact gactattaca tgcattgggt ccgccaggct 120
ccaggccaga ggctggagtg gatgggccgt gtcaacccaa agaaaggtgg aactacctat 180
aatcagaagt tcgaaggccg ggtcacaatc accagagaca ctagtgccag cactgcatat 240
atggaactca gtagcctccg cagtgaggat accgctgtgt actattgtgc tatgggaatt 300
tactactcct atgacgcctc ctttgattac tggggacagg gaaccactgt gactgtgtcc 360
tcc 363
<210> 199
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14重链可变区
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Lys Lys Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Met Gly Ile Tyr Tyr Ser Tyr Asp Ala Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 200
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25轻链可变区
<400> 200
gatattgtga tgacacagtc tcccgatagc cttgctgtta gtctcggaga acgtgccacc 60
attaactgca agtctagtca gagtttgttg tactctcgat accagaaaaa ttatgtggca 120
tggtaccagc agaagccagg ccagccacca aaactcctga tctactgggc ctcaaccagg 180
gaaagcggag tgccagatag attcagcggc agtgggtcag gtaccgattt cactctcaca 240
atcagctcac tgcaagctga ggatgtggca gtgtattatt gtcagcagta ctatcgctat 300
cccctgacct ttggacaggg cacaaagttg gaaatcaaa 339
<210> 201
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25轻链可变区
<400> 201
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 202
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25重链可变区
<400> 202
caagtacagt tggtgcagag cggggctgag gtgaaaaaac ccggcgctag cgtgaaggtt 60
agctgcaaag cctccggtta cacatttaca tcctacgcca tttcttgggt gcgccaggca 120
cctggccaac ggcttgagtg gatgggcgaa atctaccctg gttccggtga gacttattac 180
aatgaaaagt tcaagggacg cgtcactatc accagggaca ccagcgcaag caccgcttat 240
atggagctgt cctctcttag atctgaagac actgctgtct actactgtgc aagggtgaac 300
gactatggat cttggttccc ttattgggga cagggcaccc tggttacagt ctcttct 357
<210> 203
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25重链可变区
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Glu Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asn Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 204
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28轻链可变区
<400> 204
gaaatagtac tgacccagag ccccgctaca ctctccttga gccctggaga gcgggcaaca 60
ctctcctgca cagcatcttc cagcgtcaat tccttttacc tgcattggta ccagcagaaa 120
cctgggctgg ctccacgact cctcatttat tctacctcta atcttgctag cgggatcccc 180
gatcggtttt caggcagtgg tagcgggacc gacttcacct tgaccatttc ccggctggag 240
cctgaggact tcgctgtata ttactgccat caataccata gatctcccta taccttcggc 300
caggggacca aactggagat taag 324
<210> 205
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28轻链可变区
<400> 205
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Ser Phe
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 206
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28重链可变区
<400> 206
caagtgcaac tggtgcagtc cggcgctgaa gtgaaaaaac ccggatcttc tgtgaaagtg 60
agctgtaaag catccggggg cacattcagc agctactgga tcgaatgggt gcgtcaggcc 120
cccggacagg gactggaatg gatgggtgaa atcttgcctg gttccggcaa tacttactac 180
aatgagcgct tcaaggatcg agtcaccatc accgctgatg agtcaacctc aactgcttac 240
atggagctgt cttccctgcg atctgaggac acagctgtat actactgtgc tagacgggca 300
gccgcttact attctaaccc agagtggttc gcttattggg gccaaggaac cctggtcaca 360
gtgagttct 369
<210> 207
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28重链可变区
<400> 207
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 208
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38轻链可变区
<400> 208
gacgtcgtca tgacacagtc ccccctgagc ctccctgtga ctctgggtca gccagcttcc 60
atctcttgca aatctagcca gtccctcctg tatagtaacc gtcgcaccta tctgaactgg 120
tttcagcagc gcccaggcca aagtcccagg cggctcatct acctggtgtc taagttggat 180
agtggagttc ccgataggtt tagtggatcc ggttctggca ctgatttcac actgaagatt 240
agtagggtcg aggcagaaga tgtgggagtg tattactgtg tgcaggggac acattttcct 300
tttaccttcg gccagggcac caagctggaa atcaag 336
<210> 209
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38轻链可变区
<400> 209
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Arg Arg Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 210
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38重链可变区
<400> 210
gaggtgcagc ttgtccaatc aggggccgaa gtcaagaaac ctggagaatc tctgaagata 60
tcttgtaagg gatccggtta ttccttcact tcctattaca tgtactgggt gagacagatg 120
ccaggcaaag gcttggaatg gatgggcgag atcaacccca gcaatggtgg ggccaacttc 180
aacgagagat tcaagaacca ggttactatc tccgcagaca agagcatatc aaccgcttac 240
cttcagtggt cttcccttaa ggcatccgac accgctatgt actactgcac ccgaggcctg 300
ctttattacg attatgatag aggttttgct tactggggac agggaacatt ggtcactgtg 360
tccagt 366
<210> 211
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38重链可变区
<400> 211
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ala Asn Phe Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asn Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Leu Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 212
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87轻链可变区
<400> 212
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtttatta aacagccgca cccgtaagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtaagcaatc ttataatctg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336
<210> 213
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87轻链可变区
<400> 213
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 214
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87重链可变区
<400> 214
caggtccagc ttgtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcact agctattgga tgctttgggt gcgccaggcc 120
cccggacaaa ggcttgagtg gatgggatac atcgacccta gaaatggtta cacagaatat 180
aatcagaagt tcaaggacag agtcaccatt accagggaca catccgcgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagagggggg 300
aatgtggcta tggactactg gggtcaagga accctagtca ccgtctcgag t 351
<210> 215
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87重链可变区
<400> 215
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Arg Asn Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Asn Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 216
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2轻链
<400> 216
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 217
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2重链
<400> 217
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Thr Tyr Pro Gly Ser Gly Pro Thr Lys Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ile Tyr Tyr Tyr Asp Gly Ile Tyr Pro Asn Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450
<210> 218
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11轻链
<400> 218
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Glu
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 219
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11重链
<400> 219
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ile Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Thr Thr Asp Tyr Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Asn Val Ala Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 220
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14轻链
<400> 220
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Asp Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 221
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14重链
<400> 221
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Lys Lys Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Met Gly Ile Tyr Tyr Ser Tyr Asp Ala Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly
450
<210> 222
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25轻链
<400> 222
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 223
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25重链
<400> 223
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Glu Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asn Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 224
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28轻链
<400> 224
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Ser Phe
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 225
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28重链
<400> 225
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 226
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28ss1重链
<400> 226
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 227
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38轻链
<400> 227
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Arg Arg Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 228
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38重链
<400> 228
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ala Asn Phe Asn Glu Arg Phe
50 55 60
Lys Asn Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Leu Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly
450
<210> 229
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87轻链
<400> 229
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 230
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87重链
<400> 230
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Arg Asn Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Asn Val Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 231
<400> 231
000
<210> 232
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRL1
<400> 232
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 233
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRL2
<400> 233
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 234
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRL3
<400> 234
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 235
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRH1
<400> 235
Asp Tyr Tyr Ile Asn
1 5
<210> 236
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRH2
<400> 236
Trp Thr Tyr Pro Gly Ser Gly Pro Thr Lys Tyr Asn Gly Lys Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 237
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.2 CDRH3
<400> 237
Arg Gly Ile Tyr Tyr Tyr Asp Gly Ile Tyr Pro Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 238
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRL1
<400> 238
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 239
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRL2
<400> 239
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 240
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRL3
<400> 240
Lys Glu Ser Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRH1
<400> 241
Asn Tyr Trp Met Ile
1 5
<210> 242
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRH2
<400> 242
Tyr Ile Asp Pro Thr Thr Asp Tyr Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 243
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.11 CDRH3
<400> 243
Gly Gly Asn Val Ala Leu Asp Phe
1 5
<210> 244
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRL1
<400> 244
Arg Thr Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 245
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRL2
<400> 245
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 246
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRL3
<400> 246
Gln His His Tyr Asp Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRH1
<400> 247
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 248
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRH2
<400> 248
Arg Val Asn Pro Lys Lys Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 249
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.14 CDRH3
<400> 249
Gly Ile Tyr Tyr Ser Tyr Asp Ala Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 250
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRL1
<400> 250
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Arg Tyr Gln Lys Asn Tyr Val
1 5 10 15
Ala
<210> 251
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRL2
<400> 251
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 252
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRL3
<400> 252
Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRH1
<400> 253
Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 254
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRH2
<400> 254
Glu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Glu Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 255
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.25 CDRH3
<400> 255
Val Asn Asp Tyr Gly Ser Trp Phe Pro Tyr
1 5 10
<210> 256
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRL1
<400> 256
Thr Ala Ser Ser Ser Val Asn Ser Phe Tyr Leu His
1 5 10
<210> 257
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRL2
<400> 257
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 258
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRL3
<400> 258
His Gln Tyr His Arg Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 259
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRH1
<400> 259
Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 260
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRH2
<400> 260
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 261
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.28和hSC34.28ss1 CDRH3
<400> 261
Arg Ala Ala Ala Tyr Tyr Ser Asn Pro Glu Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 262
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRL1
<400> 262
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Arg Arg Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 263
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRL2
<400> 263
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1 5
<210> 264
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRL3
<400> 264
Val Gln Gly Thr His Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 265
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRH1
<400> 265
Ser Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 266
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRH2
<400> 266
Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ala Asn Phe Asn Glu Arg Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 267
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.38 CDRH3
<400> 267
Gly Leu Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Arg Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 268
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRL1
<400> 268
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 269
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRL2
<400> 269
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 270
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRL3
<400> 270
Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Trp Thr
1 5
<210> 271
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRH1
<400> 271
Ser Tyr Trp Met Leu
1 5
<210> 272
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRH2
<400> 272
Tyr Ile Asp Pro Arg Asn Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 273
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hSC34.87 CDRH3
<400> 273
Gly Gly Asn Val Ala Met Asp Tyr
1 5

Claims (38)

1.一种结合表达DPEP3的肿瘤起始细胞的抗体。
2.权利要求1的分离的抗体，其是内化抗体。
3.一种结合DPEP3蛋白中的表位的分离的抗体，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的E217、R242、Q248、Q372、K375和E379的三个或更多个残基。
4.权利要求3的分离的抗体，其中所述表位包含：(1)R242,Q248,Q372；(2)R242,Q248,K375(3)R242,Q248,E379；(4)R242,Q372,K375；(5)R242,Q372,E379；(6)R242,K375,E379；(7)Q248,Q372,K375；(8)Q248,Q372,E379；(9)Q248,K375,E379；(10)Q372,K375,E379；(11)R242,Q248,Q372,K375；(12)R242,Q248,Q372,E379；(13)R242,Q248,K375,E379；(14)R242,Q372,K375,E379；(15)Q248,Q372,K375,E379；(16)R242,Q248,Q372,K375,E379；(17)E217,R242,Q248；(18)E217,R242,Q372；(19)E217,R242,K375；(20)E217,R242,E379；(21)E217,Q248,Q372；(22)E217,Q248,K375；(23)E217,Q248,E379；(24)E217,Q372,K375；(25)E217,K375,E379；(26)E217,Q372,E379；(27)E217,R242,Q248,Q372；(28)E217,R242,Q248,E379；(29)E217,Q248,Q372,K375；(30)E217,R242,Q372,K375；(31)E217,R242,Q248,K375；(32)E217,Q372,K375,E379；(33)E217,Q248,K375,E379,(34)E217,Q248,Q372,E379；(35)E217,R242,K375,E379；(36)E217,R242,Q372,E379；(37)E217,Q248,Q372,K375,E379；(38)E217,R242,Q372,K375,E379；(39)E217,R242,Q248,K375,E379；(40)E217,R242,Q248,Q372,E379；或(41)E217,R242,Q248,Q372,K375。
5.权利要求3的分离的抗体，其中所述表位包含E217,R242,Q248,Q372,K375,E379。
6.一种结合DPEP3蛋白中的表位的分离的抗体，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的R46、R48、R54和S55的三个或更多个残基。
7.权利要求6的分离的抗体，其中所述表位包含：(1)R46,R48,R54；(2)R46,R48,S55；(3)R46,R54,S55；或(4)R48,R54,S55。
8.权利要求6的分离的抗体，其中所述表位包含R46、R48、R54、S55。
9.一种结合DPEP3蛋白中的表位的分离的抗体，其中所述表位包含选自SEQ ID NO：3的Q248、S380、S384和V386的三个或更多个残基。
10.权利要求9的分离的抗体，其中所述表位包含：(1)S380,S384,V386；(2)S380,S384,Q248；(3)S380,V386,Q248；或(4)S384,V386,Q248。
11.权利要求9的分离的抗体，其中所述表位包含S380,S384,V386,Q248。
12.权利要求3至11中任一项的分离的抗体，其结合肿瘤起始细胞。
13.权利要求3至11中任一项的分离的抗体，其是内化抗体。
14.一种分离的抗体，其特异性结合DPEP3并且与包含下述区域的抗体竞争结合：
SEQ ID NO：21的轻链可变区(VL)和SEQ ID NO：23的重链可变区(VH)；或
SEQ ID NO：25的VL和SEQ ID NO：27的VH；或
SEQ ID NO：29的VL和SEQ ID NO：31的VH；或
SEQ ID NO：33的VL和SEQ ID NO：35的VH；或
SEQ ID NO：37的VL和SEQ ID NO：39的VH；或
SEQ ID NO：41的VL和SEQ ID NO：43的VH；或
SEQ ID NO：45的VL和SEQ ID NO：47的VH；或
SEQ ID NO：49的VL和SEQ ID NO：51的VH；或
SEQ ID NO：53的VL和SEQ ID NO：55的VH；或
SEQ ID NO：57的VL和SEQ ID NO：59的VH；或
SEQ ID NO：61的VL和SEQ ID NO：63的VH；或
SEQ ID NO：65的VL和SEQ ID NO：67的VH；或
SEQ ID NO：69的VL和SEQ ID NO：71的VH；或
SEQ ID NO：73的VL和SEQ ID NO：75的VH；或
SEQ ID NO：77的VL和SEQ ID NO：79的VH；或
SEQ ID NO：81的VL和SEQ ID NO：83的VH；或
SEQ ID NO：85的VL和SEQ ID NO：87的VH；或
SEQ ID NO：89的VL和SEQ ID NO：91的VH；或
SEQ ID NO：93的VL和SEQ ID NO：95的VH；或
SEQ ID NO：97的VL和SEQ ID NO：99的VH；或
SEQ ID NO：101的VL和SEQ ID NO：103的VH；或
SEQ ID NO：105的VL和SEQ ID NO：107的VH；或
SEQ ID NO：109的VL和SEQ ID NO：111的VH；或
SEQ ID NO：113的VL和SEQ ID NO：115的VH；或
SEQ ID NO：117的VL和SEQ ID NO：119的VH；或
SEQ ID NO：121的VL和SEQ ID NO：123的VH；或
SEQ ID NO：125的VL和SEQ ID NO：127的VH；或
SEQ ID NO：129的VL和SEQ ID NO：131的VH；或
SEQ ID NO：133的VL和SEQ ID NO：135的VH；或
SEQ ID NO：137的VL和SEQ ID NO：139的VH；或
SEQ ID NO：141的VL和SEQ ID NO：143的VH；或
SEQ ID NO：145的VL和SEQ ID NO：147的VH；或
SEQ ID NO：149的VL和SEQ ID NO：151的VH；或
SEQ ID NO：153的VL和SEQ ID NO：155的VH；或
SEQ ID NO：157的VL和SEQ ID NO：159的VH；或
SEQ ID NO：161的VL和SEQ ID NO：163的VH；或
SEQ ID NO：165的VL和SEQ ID NO：167的VH；或
SEQ ID NO：169的VL和SEQ ID NO：171的VH；或
SEQ ID NO：173的VL和SEQ ID NO：175的VH；或
SEQ ID NO：177的VL和SEQ ID NO：179的VH；或
SEQ ID NO：181的VL和SEQ ID NO：183的VH；或
SEQ ID NO：185的VL和SEQ ID NO：187的VH。
15.权利要求14的分离的抗体，其中所述分离的抗体是嵌合的、CDR移植的、人源化的或重组的抗体或其片段。
16.权利要求14的分离的抗体，其是内化抗体。
17.权利要求14的分离的抗体，其中所述分离的抗体是包含VH和VL的人源化抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：232的CDRL1、SEQ ID NO：233的CDRL2和SEQ ID NO：234的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：238的CDRL1、SEQ ID NO：239的CDRL2和SEQ ID NO：240的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：244的CDRL1、SEQ ID NO：245的CDRL2和SEQ IDNO：246的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：250的CDRL1、SEQ ID NO：251的CDRL2和SEQ ID NO：252的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：256的CDRL1、SEQ ID NO：257的CDRL2和SEQ ID NO：258的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：262的CDRL1、SEQ ID NO：263的CDRL2和SEQ ID NO：264的CDRL3的3个CDRL；或VL具有包含SEQ ID NO：268的CDRL1、SEQ ID NO：269的CDRL2和SEQ ID NO：270的CDRL3的3个CDRL。
18.权利要求14的分离的抗体，其中所述分离的抗体是包含VL和VH的人源化抗体，其中VH具有包含SEQ ID NO：235的CDRH1、SEQ ID NO：236的CDRH2和SEQ ID NO：237的CDRH3的3个CDR(CDRH)；或VH具有包含SEQ ID NO：241的CDRH1、SEQ ID NO：242的CDRH2和SEQ ID NO：243的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：247的CDRH1、SEQ ID NO：248的CDRH2和SEQ ID NO：249的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：253的CDRH1、SEQ ID NO：254的CDRH2和SEQ ID NO：255的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：259的CDRH1、SEQID NO：260的CDRH2和SEQ ID NO：261的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ ID NO：265的CDRH1、SEQ ID NO：266的CDRH2和SEQ ID NO：267的CDRH3的3个CDRH；或VH具有包含SEQ IDNO：271的CDRH1、SEQ ID NO：272的CDRH2和SEQ ID NO：273的CDRH3的3个CDRH。
19.权利要求14的分离的抗体，其中所述分离的抗体是包含VL和VH的人源化抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：232的CDRL1、SEQ ID NO：233的CDRL2和SEQ ID NO：234的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：235的CDRH1、SEQ ID NO：236的CDRH2和SEQ ID NO：237的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：238的CDRL1、SEQ IDNO：239的CDRL2和SEQ ID NO：240的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：241的CDRH1、SEQ ID NO：242的CDRH2和SEQ ID NO：243的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：244的CDRL1、SEQ ID NO：245的CDRL2和SEQ ID NO：246的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：247的CDRH1、SEQ ID NO：248的CDRH2和SEQ ID NO：249的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：250的CDRL1、SEQ IDNO：251的CDRL2和SEQ ID NO：252的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：253的CDRH1、SEQ ID NO：254的CDRH2和SEQ ID NO：255的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：256的CDRL1、SEQ ID NO：257的CDRL2和SEQ ID NO：258的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：259的CDRH1、SEQ ID NO：260的CDRH2和SEQ ID NO：261的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：262的CDRL1、SEQ IDNO：263的CDRL2和SEQ ID NO：264的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：265的CDRH1、SEQ ID NO：266的CDRH2和SEQ ID NO：267的CDRH3的3个CDRH；或包含VL和VH的抗体，其中VL具有包含SEQ ID NO：268的CDRL1、SEQ ID NO：269的CDRL2和SEQ ID NO：270的CDRL3的3个CDRL和VH具有包含SEQ ID NO：271的CDRH1、SEQ ID NO：272的CDRH2和SEQ ID NO：273的CDRH3的3个CDRH。
20.结合DPEP3的人源化抗体，其包含SEQ ID NO：216所示的全长轻链和SEQ ID NO：217所示的全长重链；或SEQ ID NO：218所示的全长轻链和SEQ ID NO：219所示的全长重链；或SEQ ID NO：220所示的全长轻链和SEQ ID NO：221所示的全长重链；或SEQ ID NO：222所示的全长轻链和SEQ ID NO：223所示的全长重链；或SEQ ID NO：224所示的全长轻链和SEQ IDNO：225所示的全长重链；或SEQ ID NO：224所示的全长轻链和SEQ ID NO：226所示的全长重链；或SEQ ID NO：227所示的全长轻链和SEQ ID NO：228所示的全长重链；或SEQ ID NO：229所示的全长轻链和SEQ ID NO：230所示的全长重链。
21.权利要求1-20中任一项的抗体，其中所述抗体缀合至有效载荷。
22.一种核酸，其编码权利要求1-20中任一项的抗体。
23.一种载体，其包含权利要求22的核酸。
24.一种宿主细胞，其包含权利要求22的核酸或权利要求23的载体。
25.式Ab-[L-D]n的ADC或药学上可接受的盐，其中：
a)Ab包括抗DPEP3抗体；
b)L包括任选的连接体；
c)D包括药物；和
d)n是约1至约20的整数。
26.权利要求25的ADC，其中D是吡咯并苯并二氮杂(PBD)。
27.权利要求25的ADC，其中Ab是权利要求1-20中任一项的抗体。
28.一种将细胞毒素递送至细胞的方法，其包括将细胞与权利要求25至27中任一项的ADC接触。
29.一种药物组合物，其包含权利要求25至27中任一项的ADC。
30.一种治疗癌症的方法，其包含将权利要求29的药物组合物施用至有此需要的受试者。
31.权利要求30的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、肺癌、乳腺癌和子宫内膜癌。
32.权利要求31的方法，其中所述癌症是卵巢癌。
33.权利要求32的方法，其中所述癌症是卵巢浆液性癌。
34.权利要求32的方法，其中所述癌症是卵巢乳头状浆液性癌。
35.权利要求34的方法，还包括给所述受试者施用至少一种另外的治疗部分。
36.减少肿瘤细胞群体中的肿瘤起始细胞的方法，其中所述方法包括使包含肿瘤起始细胞和除了肿瘤起始细胞以外的肿瘤细胞的肿瘤细胞群体与抗DPEP3ADC接触；由此降低肿瘤起始细胞的频率。
37.权利要求36的方法，其中所述接触在体内进行。
38.权利要求36的方法，其中所述接触在体外进行。
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