JP2022548881A - Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法 - Google Patents

Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法 Download PDF

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Abstract

ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を使用して癌を処置する方法及び癌の処置における使用のための、これらの抗体又は抗原結合断片を含む組成物が本明細書で提供される。本発明は、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片と、少なくとも１つの追加の治療薬とを含む組合せ療法及びこれらの組合せ療法を使用する方法にも関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１８日出願の米国仮特許出願第６２／９０２，１５２号明細書及び２０２０年５月１２日出願の米国仮特許出願第６３／０２３，４４５号明細書の利益を主張するものであり、それらの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２０年９月１５日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、ＰＡＴ０５８６９０－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズが６３８，９７６バイトである。
技術分野
本発明は、エクト酵素エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片及びこれらの抗体又は抗原結合断片を使用する方法を提供する。
本発明は、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片と、少なくとも１つの追加の治療薬とを含む組合せ療法にも関する。
背景
細胞ストレス及びアポトーシスはＡＴＰの細胞外空間への放出を誘発する。ＡＴＰ濃度の上昇は、急速な炎症を促進し、その結果、Ｔ細胞シグナル伝達が増幅され、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が阻害され、樹状細胞及びマクロファージにおけるインフラマソームの活性化が促進される。エクト酵素エクトヌクレオシ三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）は、５’－三リン酸塩を加水分解するエクト－ヌクレオシダーゼのファミリーの一部であり、プリン作動性シグナル伝達に関与する不可欠な膜タンパク質である。ＥＮＴＰＤ２は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）からアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）及びアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）への変換を触媒する。次に、ＡＭＰは、エクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ｅｃｔｏ－５’ＮＴ）としても知られる表面抗原分類７３（ＣＤ７３）によってアデノシンに触媒される。分子ＡＭＰは、アデノシンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体を含むいくつかの受容体と相互作用する。Ａ２Ａ受容体は、免疫細胞におけるその広範な発現のために特別な関心が持たれてきた。ＡＭＰは、腫瘍微小環境において、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増殖、インターフェロン（ＩＦＮ）－γにより媒介されるエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）応答の阻害及び骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の増殖を含む多面的な作用を有する。例えば、Ａｌｌａｒｄ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏ ｌ２９：７－１６（２０１６）及びＡｌｌａｒｄ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ８：１４５－１６３（２０１６）を参照されたい。
肝細胞癌のマウスモデルにおいて、ＥＮＴＰＤ２は、細胞外ＡＴＰをＡＭＰに変換し、単球性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の樹状細胞への分化を妨げることから、インビトロ及びインビボでＭＤＳＣの維持を促進することが示された（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．８：５１７－２８（２０１７））。
ＥＮＴＰＤ２は、本明細書に記載されるように癌細胞上に発現する。ＥＮＴＰＤ２活性を調節する新たな組成物及び方法並びに関連する治療薬が非常に望ましい。
発明の概要
エクト酵素エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。ＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２関連疾患、例えば癌の処置に有用である。
一態様において、癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法が本明細書で提供され、この方法は、治療有効量の、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含み、癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である。
別の態様では、癌の処置であって、それを必要とする対象における処置に使用するための、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物が本明細書で提供され、癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である。
更なる態様では、癌の処置であって、それを必要とする対象における処置のための医薬の製造における、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物の使用が本明細書で提供され、癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である。
更なる態様では、癌の処置であって、それを必要とする対象における処置のための、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物の使用が本明細書で提供され、癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む。いくつかの実施形態では、そのような抗体又は抗原結合断片のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、表１に提供されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列から選択される。いくつかの実施形態では、そのような抗体又は抗原結合断片は、表１に提供される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、そのような抗体又は抗原結合断片は、表１に提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、以下：
１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号５を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号４５を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５６を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号４５を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
１０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
１１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
１２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号５６を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
１３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号８２を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号８３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号８４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号９５を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号９７を含むＬＣＤＲ３配列；
１４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号８５を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号８６を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号８４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号９８を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１００を含むＬＣＤＲ３配列；
１５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号８８を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号８９を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号９０を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１０１を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号９７を含むＬＣＤＲ３配列；
１６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１０６を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１０７を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１１９を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１２０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
１７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１０９を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１１０を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１２２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２３を含むＬＣＤＲ３配列；
１８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１１２を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１１３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
１９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１０６を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１２９を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１１９を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１２０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
２０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１０９を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１３０を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１２２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２３を含むＬＣＤＲ３配列；
２１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１１２を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１３１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
２２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１３６を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１３７を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１３８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１４９を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１５１を含むＬＣＤＲ３配列；
２３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１３９を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１４０を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１３８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１５２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１５４を含むＬＣＤＲ３配列；
２４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１４２を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１４３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１４４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１５５を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１５１を含むＬＣＤＲ３配列；
２５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１６０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１６１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１６２を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１７４を含むＬＣＤＲ３配列；
２６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１６３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１６４を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１６２を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７５を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１７６を含むＬＣＤＲ３配列；
２７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１６６を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号１６７を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号１６８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１７４を含むＬＣＤＲ３配列；
２８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２０を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２２１を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
２９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２２を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２２１を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
３０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２２４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
３１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２０を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
３２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２２を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
３３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２２３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号６９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
３４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２４５を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２４６を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号２５５を含むＬＣＤＲ３配列；
３５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２４７を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２４６を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号２５６を含むＬＣＤＲ３配列；
３６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２４８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２４９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号２５５を含むＬＣＤＲ３配列；
３７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２６１を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２６２を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
３８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２４７を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２６２を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
３９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２４８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２６３を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
４０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号２７２を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２７３を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２７４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号２８５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
４１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号２７５を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２７６を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２７４を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号２８６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
４２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
配列番号２７８を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２７９を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号２８０を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号２８６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
の任意の１つから選択される。
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、以下：
１）配列番号１０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
２）配列番号２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
３）配列番号３３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
４）配列番号４６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号５７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
５）配列番号４６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号６４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
６）配列番号７０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号７４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
７）配列番号２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号７８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
８）配列番号９１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１０２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
９）配列番号１１５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１０）配列番号１３２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１１）配列番号１４５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１５６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１２）配列番号１６９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１７８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１３）配列番号２２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１４）配列番号２３３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２３７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１５）配列番号２４１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１６）配列番号２５０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２５７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
１７）配列番号２６４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２６８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；又は
１８）配列番号２８１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２８７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片
の任意の１つから選択される。
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、以下：
１）配列番号１２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
２）配列番号２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
３）配列番号３５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
４）配列番号４８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号５９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
５）配列番号４８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号６６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
６）配列番号７２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号７６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
７）配列番号２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号８０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
８）配列番号９３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１０４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
９）配列番号１１７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１０）配列番号１３４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１１）配列番号１４７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１５８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１２）配列番号１７１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１８０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１３）配列番号２２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１４）配列番号２３５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１５）配列番号２４３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１６）配列番号２５２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２５９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
１７）配列番号２６６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２７０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；又は
１８）配列番号２８３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２８９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体
の任意の１つから選択される。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号２を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１４を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号５を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
配列番号８を含むＨＣＤＲ２配列、
配列番号９を含むＨＣＤＲ３配列、
配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列及び配列番号２３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに特異的に結合し、エピトープは、以下の残基：Ｈｉｓ５０、Ａｓｐ７６、Ｐｒｏ７８、Ｇｌｙ７９、Ｇｌｙ８０、Ｔｙｒ８５、Ａｓｐ８７、Ａｓｎ８８、Ｇｌｙ９１、Ｇｌｎ９４、Ｓｅｒ９５、Ｇｌｙ９８、Ｇｌｕ１０１、Ｇｌｎ１０２、Ｇｌｎ１０５、Ａｓｐ１０６、Ａｒｇ２４５、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ａｌａ３４７、Ａｌａ３５０、Ｔｈｒ３５１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＴｙｒ３９８の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに特異的に結合し、エピトープは、以下の残基：Ｇｌｙ７９、Ｇｌｎ２５０、Ｌｅｕ２５３、Ｔｒｐ２６６、Ａｒｇ２６８、Ｇｌｙ２６９、Ｐｈｅ２７０、Ｓｅｒ２７１、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｖａｌ２７４、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ｓｅｒ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｇｌｙ３０３、Ｔｈｒ３８０、Ｔｒｐ３８１、Ａｌａ３８２、Ｇｌｙ３９０、Ｇｌｎ３９１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＡｓｐ３９７の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域又はＩｇＧ２／ＩｇＧ４ハイブリッドＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、改変されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、親抗体と比較して低下された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する改変されたＦｃ領域を含む。
別の態様では、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質への結合について、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片と競合する抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。
別の態様では、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片と本質的に同じＥＮＴＰＤ２エピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、１０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）、例えば５ｎＭ未満のＫＤ又は３ｎＭ未満のＫＤでヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に対する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片の解離定数は、Ｂｉａｃｏｒｅにより２５℃で測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２酵素活性を少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％阻害する。いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２の酵素活性は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞の表面に発現したＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＤＰへのＡＴＰの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、アデノシン三リン酸塩（ＡＴＰ）の加水分解のＥＮＴＰＤ２の能力を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＴＰの加水分解のＥＮＴＰＤ２の能力は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞の表面上に発現したＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＴＰのＡＤＰへの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２へのＡＴＰの結合を妨害するか、又はＥＮＴＰＤ２の触媒ドメイン内にＡＴＰを捕捉する。いくつかの実施形態では、ＡＴＰの加水分解のＥＮＴＰＤ２の能力は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞の表面上に発現したＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＴＰのＡＤＰへの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片は、ヒト若しくはヒト化抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、癌は、ＥＮＴＰＤ２＋癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ＰＤ－Ｌ１を発現する。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１時間注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として対象に静脈内投与される。
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗ＣＤ７３ Ａｂ、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）及びＮＩＲ１７８からなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３ Ａｂは、１時間注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として対象に静脈内投与される。いくつかの実施形態では、スパルタリズマブは、３０分注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として対象に静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＮＩＲ１７８は、対象によって経口的に服用される。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、１０ｍｇ、３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、６００ｍｇ、１２００ｍｇ又は２４００ｍｇで２週間又は４週間毎に１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３ Ａｂは、２００ｍｇ又は４００ｍｇで２週間毎に１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、スパルタリズマブは、４００ｍｇで４週間毎に１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＮＩＲ１７８は、８０ｍｇ又は１６０ｍｇで１日２回（ＢＩＤ）、連続して対象に投与される。
本明細書に言及される全ての刊行物、特許及び受入番号は、あたかもそれぞれの個々の刊行物又は特許が参照により組み込まれることを具体的且つ個別に示されるように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
図１：図１Ａは、フローサイトメトリーによって決定された、代表的な癌細胞株にわたるＥＮＴＰＤ２発現を示す。図１Ｂは、代表的な癌細胞株にわたるＥＮＴＰＤ２受容体密度を示す表（表２０）である。 （上記の通り。） 図２は、ホルマリン固定パラフィン包埋原発性結腸直腸、食道及び卵巣腫瘍組織におけるＥＮＴＰＤ２の代表的なＩＨＣ染色画像を示す。 図３：図３Ａは、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２重鎖（配列番号３３０）及び軽鎖（配列番号３３４）のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲに下線が引かれ（Ｋａｂａｔによって定義される）、各Ｆａｂについて抗体－抗原界面に位置する残基を（＊）として標識する。図３Ｂは、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３重鎖（配列番号３３６）及び軽鎖（配列番号２３９）のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲに下線が引かれ（Ｋａｂａｔによって定義される）、抗体－抗原界面に位置する残基を（＊）で標識する。図３Ｃは、抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４重鎖（配列番号３３８）及び軽鎖（配列番号３４０）のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲに下線が引かれ（Ｋａｂａｔによって定義される）、抗体－抗原界面に位置する残基を（＊）で標識する。 （上記の通り。） （上記の通り。） 図４：図４Ａは、結晶学的研究において使用される組換えヒトＥＮＴＰＤ２（残基２９～４６２、Ｙ３５０Ａ変異体）のアミノ酸配列を示し（配列番号１０１４）、二次構造要素は、アミノ酸配列の下に示される。バーは、αへリックスを、矢印は、β鎖を表す。配列フォーマットの中断からの非標識矢印及びバーは、直前の標識構造要素に隣接している。構造化されていない領域は、マークされていない。ヒトＥＮＴＰＤ２の可溶性細胞外ドメインは、残基２９～４６２に及ぶ。この構築物は、最後の残基の後にシグナルペプチド切断部位を有するＮ末端ＧＰ６７分泌シグナルペプチド（灰色で強調された最初の３８残基）及び精製を容易にするためのＣ末端ヘキサヒスチジン（配列番号１０１０）金属親和性タグを利用する。Ａｓｎ１２９、Ａｓｎ２９４、Ａｓｎ３７８及びＡｓｎ４４３は、結晶構造においてグリコシル化が観察され、イタリック体で示される予測されるＮ結合グリコシル化部位である。Ａｓｎ６４は、これらの結晶構造において観察されない予測されるＮ結合グリコシル化部位でもある。ＦＡｂ２２及びＦＡｂ２３複合体の抗原－Ｆａｂ界面に位置する残基は、アミノ酸配列の下にそれぞれ（＊）及び（：）記号で示される。図４Ｂは、結晶学的研究において使用される組換えマウスＥＮＴＰＤ２（残基２９～４６２）のアミノ酸配列を示し（配列番号１０１５）、二次構造要素は、アミノ酸配列の下に示される。バーは、αへリックスを、矢印は、β鎖を示す。標識されていない矢印及び破線からのバーは、標識された先行する構造要素に隣接している。構造化されていない領域は、マークされていない。成熟マウスＥＮＴＰＤ２は、Ｔｈｒ２９から始まる。この構築物は、Ｎ末端ＧＰ６７分泌シグナルペプチド（残基１～３８）、残基３８の後のシグナルペプチド切断部位及びＣ末端ヘキサヒスチジン（配列番号１０１０）金属親和性タグを利用して、精製を容易にする。Ａｓｎ１２９、Ａｓｎ２９４、Ａｓｎ３７８及びＡｓｎ４４３は、イタリック体で示す潜在的なＮ結合グリコシル化部位である。抗原－ＦＡｂ２４界面に位置する残基は、アミノ酸配列の下に（＃）記号によって示される。 （上記の通り。） 図５：図５Ａは、残基３３～４５３を示すヒトＥＮＴＰＤ２外部ドメインアポ結晶構造の漫画描写を示す。２つの図は、９０度回転されている。連続する二次構造要素が標識されている。ジスルフィドは、スティックとして示されている。アミノ及びカルボキシ末端は、それぞれＮＴ及びＣＴと標識される。膜近位葉は、Ｎ末端及びＣ末端の両方を含み（サブドメイン１：Ｐｒｏ３６－Ｓｅｒ１６１及びＬｙｓ４２７－Ｐｈｅ４６１）、膜遠位葉（サブドメイン２：Ｇｌｙ１６２－Ｇｌｎ４２６）よりも暗く陰影付けされている。基質ＡＴＰは、葉間の裂け目の深部に結合する。ＡＴＰ結合部位の位置を図５Ｂに示す。ラットＥＮＴＰＤ２共構造（ＰＤＢ ３ＣＪＡ）由来のヒトＥＮＴＰＤ２活性部位に重ね合わせたＡＴＰ類似体ＡＭＰ－ＰＮＰを示す。 （上記の通り。） 図６は、ヒトＥＮＴＰＤ２との複合体における抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２の概要を示す。２つの図が９０度離れて示されている。ＡＭＰ－ＰＮＰは、ラットＥＮＴＰＤ２共構造ＰＤＢ ３ＣＪＡとの重ね合わせに基づいて、ＥＮＴＰＤ２活性部位においてモデル化される。Ｆａｂの重鎖は、より暗く影付けされている。 図７は、ヒトＥＮＴＰＤ２との複合体における抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３の概要を示す。２つの図が９０度離れて示されている。ＡＭＰ－ＰＮＰは、ラットＥＮＴＰＤ２共構造ＰＤＢ ３ＣＪＡとの重ね合わせに基づいて、ＥＮＴＰＤ２活性部位においてモデル化される。Ｆａｂの重鎖は、より暗く影付けされている。 図８は、マウスＥＮＴＰＤ２との複合体における抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４の概要を示す。ＡＭＰ－ＰＮＰは、ラットＥＮＴＰＤ２共構造ＰＤＢ ３ＣＪＡとの重ね合わせに基づいて、ＥＮＴＰＤ２活性部位においてモデル化される。Ｆａｂの重鎖は、より暗く影付けされている。 図９は、同系Ｂ１６ＬＭ３腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１ Ａｂと組み合わせた抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３による長期有効性を示すプロットである。 図１０：図１０Ａ～１０Ｃは、同系のＢ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１ Ａｂと組み合わせた抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３による有効性を示すグラフであり、処置後８日目の腫瘍部位における活性化ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔヘルパー細胞の流入の増加と関連している。 （上記の通り。） （上記の通り。） 図１１：図１１Ａ～１１Ｂは、ヒトＥＮＴＰＤ２操作モデルＢ１６ＬＭ３クローンＢ５の特徴付けを示し、インビトロでのＦＡＣＳによるヒトＥＮＴＰＤ２の発現及びＮｏｖｕｓ抗ヒトＣＤ３９Ｌ１ Ａｂ（１：４０希釈）を用いたＩＨＣによるインビボでの腫瘍におけるヒトＥＮＴＰＤ２発現の持続性を示す。 （上記の通り。） 図１２：図１２Ａ～１２Ｂは、ヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５モデルにおける抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びｍＡｂ６の用量反応有効性を示すグラフである。 （上記の通り。） 図１３：図１３Ａ～１３Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５異種移植モデルにおいて、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又はアイソタイプ対照で処置した後の血漿ＩＬ－１ｂ（図１３Ａ）及びＭＣＰ－１（図１３Ｂ）レベルを示すドットプロットである。図１３Ｃ～１３Ｄは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５異種移植モデルにおいて、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又はアイソタイプ対照で処置した後の腫瘍におけるＩＬ－１β（図１３Ｃ）及びＭＣＰ－１（図１３Ｄ）レベルを示すドットプロットである。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） 図１４は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３異種移植モデルにおける、Ａ２ＡＲアンタゴニストＮＩＲ１７８と組み合わせた抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１のインビボ効力を示すグラフである。 図１５は、生化学的ヒトＥＮＴＰＤ２機能アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの代表的な活性を示すグラフである。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１、ｍＡｂ１７、ｍＡｂ１９及びｍＡｂ２１は、組換えヒトＥＮＴＰＤ２の触媒活性を強力に阻害する。 図１６：図１６Ａ～１６Ｂは、ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２ ＮＩＨ／３Ｔ３又はＲＫＯ細胞ベースの機能アッセイにおける抗ヒトＥＮＴＰＤ２ Ａｂの代表的な活性を示す。 （上記の通り。） 図１７は、マウスＥＮＴＰＤ２ ＮＩＨ／３Ｔ３細胞ベースの機能アッセイにおける抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３、ｍＡｂ１４、ｍＡｂ１５のインビトロ機能活性を示すグラフを示す。 図１８は、Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－Ｖ１５８レポーター遺伝子アッセイにおいて、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１がＦｃγＲ ＩＩＩａシグナル伝達を増加させることを示すグラフを示す。 図１９は、１日目（実線）及び１５日目（破線）の、雄のカニクイザルへの静脈内投与後の抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の血漿濃度－時間プロファイルを示すグラフを示す。 図２０は、ＦＩＨ、非盲検、第Ｉ／Ｉｂ相、多施設共同研究の試験設計を示すグラフを示す。 図２１は、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１ Ｑ２Ｗ、生検の試験流れ図を示すグラフを示す。 図２２は、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１ Ｑ２Ｗ、スパルタリズマブ Ｑ４Ｗ、生検の試験流れ図を示すグラフを示す。 図２３は、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１ Ｑ２Ｗ、ＮＩＲ１７８ ＢＩＤ、生検の試験流れ図を示すグラフを示す。 図２４は、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１ Ｑ２Ｗ、抗ＣＤ７３ Ａｂ Ｑ２Ｗ、生検の試験流れ図を示すグラフを示す。 図２５は、腫瘍（白色）及び（灰色）正常組織におけるＥＮＴＰＤ２発現の比較を示すグラフを示す。腫瘍データは、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓから取得し、正常組織データは、遺伝子型－組織発現データベースから取得した。図及び発現比較は、ＧＥＰＩＡ（Ｔａｎｇ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＧＥＰＩＡ：ａ ｗｅｂ ｓｅｒｖｅｒ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｘ２４７）を使用して生成した。 図２６は、ＴＣＧＡデータセットの分析が、Ａ２ＡＲ及びＣＤ３９ ＲＮＡ発現が疫シグネチャーと相関する一方、ＥＮＴＰＤ２が免疫シグネチャーと反相関することを示したことを示すグラフを示す。ＣＤ７３は、免疫及び腫瘍細胞の両方で発現する。 図２７は、インビトロでのＦＡＣＳによるマウスＥＮＴＰＤ２の発現を示す、マウスＥＮＴＰＤ２操作モデル４Ｔ１クローン４５の特徴付けを示す。
詳細な記述
エクト酵素エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片が本明細書で提供される。ＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２関連疾患、例えば癌の処置に有用である。
定義
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、文脈上明確に別段の指示がない限り、複数の参照を含む。例えば、「細胞」という用語は、それらの混合物を含む複数の細胞を含む。
文脈上別段の要求がない限り、本明細書及び後続の特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる」などの変形は、特に断らない限り、本明細書ではそれらのオープンエンド及び非限定的な意味で使用される。
本明細書で使用される場合、「からなる」は、態様、実施形態及び／又は特許請求の範囲の要素において特定されていない任意の要素、ステップ又は成分を除外する。本明細書で使用される場合、「から本質的になる」は、態様、実施形態及び／又は特許請求の範囲の基本的且つ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又はステップを除外しない。
本明細書の各場合において、「含む」、「から本質的になる」及び「からなる」という用語のいずれも他の２つの用語のいずれかと置き換えることができる。
全ての数値表示、例えばｐＨ、温度、時間、濃度及び分子量（範囲を含む）は、０．１の増分によって変化する（＋）又は（－）の近似値である。必ずしも明示的に述べられているわけではないが、全ての数字表示には、「約」という用語が先行することを理解するべきである。また、必ずしも明示的に述べられているわけではないが、本明細書に記載されている試薬は、単なる例であり、そのような試薬の均等物は、当技術分野で知られていることも理解するべきである。
本明細書で使用される場合、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）（ＣＤ３９抗原様１、ＣＤ３９様１、ＣＤ３９Ｌ１、エクト－ＡＴＰジホスホヒドロラーゼ２、エクト－ＡＴＰアーゼ、エクト－ＡＴＰアーゼ２、エクト－ＡＴＰＤアーゼ２、ＮＴＰＤアーゼ－２、ＮＴＰＤアーゼ２としても知られる）は、５’－三リン酸を加水分解するエクトヌクレオシダーゼのファミリーであるエクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼファミリー（Ｅ－ＮＴＰＤａｓｅ）のタイプ２酵素を指す。ＥＮＴＰＤ２酵素は、ＥＮＴＰＤ２という遺伝子によってコードされている。ヒトのＥＮＴＰＤ２ゲノムは、９ｑ３４．３の染色体位置にマッピングされ、ヒトのＥＮＴＰＤ２ゲノム配列は、ＮＣ＿０００００９．１２のＧｅｎＢａｎｋに見出すことができる。ＥＮＴＰＤ２ヒト転写物変異体のｍＲＮＡ及びタンパク質配列は、以下の受入番号を有するＧｅｎＢａｎｋに見出すことができる。
アイソフォーム１：ＮＭ＿２０３４６８．２（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿９８２２９３．１（４９５ ａａのタンパク質）；
アイソフォーム２：ＮＭ＿００１２４６．３（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿００１２３７．１（４７２ ａａのタンパク質）；
エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２アイソフォーム１［ホモサピエンス、ＮＰ＿９８２２９３．１］
Figure 2022548881000001
ホモサピエンスエクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、転写物変異体１、ｍＲＮＡ［ＮＭ＿２０３４６８．２］
Figure 2022548881000002
エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２アイソフォーム２［ホモサピエンス、ＮＰ＿００１２３７．１］
Figure 2022548881000003
ホモサピエンスエクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、転写物変異体２、ｍＲＮＡ［ｎＭ＿００１２４６．３］
Figure 2022548881000004
本明細書で使用される場合、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質は、その全長にわたって、ＥＮＴＰＤ２アイソフォームの任意の１つと少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％配列同一性を有するタンパク質も包含する。マウス、カニクイザル及び他の動物のＥＮＴＰＤ２タンパク質の配列は、当技術分野で既知である。
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重又は一本鎖又は無傷の免疫グロブリンであり得、天然供給源又は組換え供給源に由来し得る。例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質であり得る。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略す）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略す）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬを含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシル末端に配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体又はキメラ抗体であり得る。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。
用語「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）能力を保持する抗体の少なくとも一部を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、ｓｄＡｂ（ＶＬ又はＶＨのいずれか）などの単一ドメイン抗体、ラクダＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片から形成された多重特異性抗体及び抗体の単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合断片が含まれるが、これらに限定されない。抗原結合断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖにも組み込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）のようなポリペプチドに基づく足場にも移植され得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、合成リンカー、例えば短い可撓性ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することができ、ｓｃＦｖは、それが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。本明細書で使用する場合、明記されていない限り、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬ及びＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか、又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。
「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）中に３つのＣＤＲ及び各軽鎖可変領域（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）中に３つのＣＤＲが存在する。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）又はそれらの組合せ及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７（２００３）（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）を含む、多くの周知のスキームの任意の１つを使用して決定され得る。所与のＣＤＲ領域（例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＬ２又はＬＣ ＣＤＲ３）についてのＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとを組み合わせたナンバリングスキームにおいて、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの一部として定義されるアミノ酸残基とともに、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの一部として定義されるアミノ酸残基に対応する。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバースキームに従って定義されるＣＤＲは、ときに「超可変ループ」とも呼ばれる。
例えば、Ｋａｂａｔの下では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は３１～３５（ＨＣＤＲ１）（例えば、３５位後の挿入）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）とナンバリングされ；軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）（例えば、２７位後の挿入）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）とナンバリングされる。別の例として、Ｃｈｏｔｈｉａの下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）（例えば、３１位後の挿入）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）とナンバリングされ；ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６～３２（ＬＣＤＲ１）（例えば、３０位後の挿入）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）とナンバリングされる。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲは、例えば、ヒトＶＨにおけるアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）並びにヒトＶＬにおけるアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）を含むか、又はそれらからなる。ＩＭＧＴ下では、ＶＨにおけるＣＤＲアミノ酸残基は、約２６～３５（ＣＤＲ１）、５１～５７（ＣＤＲ２）及び９３～１０２（ＣＤＲ３）とナンバリングされ、ＶＬにおけるＣＤＲアミノ酸残基は、約２７～３２（ＣＤＲ１）、５０～５２（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）とナンバリングされる（「Ｋａｂａｔ」によるナンバリング）。ＩＭＧＴ下では、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ Ａｌｉｇｎを使用して決定され得る。一般に、特に示されない限り、抗体分子は、１つ以上のＫａｂａｔ ＣＤＲ及び／又はＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの任意の組合せを含み得る。
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンに特異的に結合することができるか、又は分子と相互作用することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸、炭水化物又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループからなり、特異的な三次元構造特性及び特異的な電荷特性を有することができる。エピトープは、「線状」又は「コンホメーショナル」であり得る。コンホメーショナル及び線状エピトープは、前者への結合が変性溶媒の存在下で失われるが、後者への結合が失われない点で区別される。
本明細書で使用される用語「一価抗体」は、標的分子上の単一のエピトープに結合する抗体を指す。
「二価抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも２つの同一の標的分子上の２つのエピトープに結合する抗体を指す。二価抗体は、標的分子も互いに架橋し得る。「二価抗体」は、少なくとも２つの同一の標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する抗体も指す。
用語「多価抗体」は、２つ以上の結合価を有する単一の結合分子を指し、ここで「結合価」は、抗体構築物の１分子あたりに存在する抗原結合部分の数として記載される。従って、単一の結合分子は、標的分子上の２つ以上の結合部位に結合することができる。多価抗体の例としては、二価抗体、三価抗体、四価抗体、五価抗体など、並びに二重特異性抗体及びバイパラトピック抗体が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＥＮＴＰＤ２について、多価抗体（例えば、ＥＮＴＰＤ２バイパラトピック抗体）は、それぞれＥＮＴＰＤ２の２つのドメインに対する結合部分を有する。
用語「多価抗体」は、２つの別々の標的分子に対して２つ以上の抗原結合部分を有する単一の結合分子も指す。例えば、ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に結合する抗体及びＥＮＴＰＤ２ではない第２の標的分子である。一実施形態では、多価抗体が４つのエピトープ結合ドメインを有する四価抗体である。四価分子は、その標的分子上の各結合部位に対して二重特異性及び二価であり得る。
「二重特異性抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、２つ以上の異なるエピトープに結合する抗体を指す。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つの異なる標的に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、単一の標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する。単一の標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する抗体は、「バイパラトピック抗体」としても知られている
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という語句は、実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、又は同じ遺伝子源に由来する、抗体、二重特異性抗体などを含むポリペプチドを指す。この用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物も含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。
本明細書で使用する「ヒト抗体」という語句は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。更に、抗体が定常領域を含む場合、定常領域も、そのようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列又はヒト生殖系列配列の変異バージョン又は例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６，５７－８６）に記載されるように、ヒトフレームワーク配列分析に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造及び位置は、周知のナンバリングスキーム、例えばＫａｂａｔナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム又はＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの組合せ及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリングを使用して規定され得る（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１），ｅｄｓ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．；Ａｌ Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２７３：９２７ ９４８）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍａｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７（２００３）を参照されたい）。
本発明のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為若しくは部位特異的変異誘発又はインビボでの体細胞変異によって導入される変異又は安定性若しくは製造を促進するための保存的置換）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことを意図しない。
本明細書で使用する「組換えヒト抗体」という語句は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニック又はトランスクロモソームである動物（例えば、マウス）から単離された抗体又はそれから調製されたハイブリドーマ、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトマから単離された抗体、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子の全部又は一部の配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製又は単離された抗体などの組換え手段によって調製、発現、作製又は単離された全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又はヒトＩｇ配列のための動物トランスジェニックが使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）に供され得、従って、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関連するが、インビボではヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書で使用される場合、ＣＨ３、ＣＨ２及び抗体の定常ドメインのヒンジ領域の少なくとも一部を含むポリペプチドを指す。任意選択的に、Ｆｃ領域は、いくつかの抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインを含むことができる。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含み得る。一実施形態では、本発明は、抗体のＦｃ領域及びＣＨ１領域を含む。一実施形態では、本発明は、抗体のＦｃ領域ＣＨ３領域を含む。別の実施形態では、本発明は、抗体の定常ドメイン由来のＦｃ領域、ＣＨ１領域及びＣκ／λ領域を含む。一実施形態では、本発明の結合分子は、定常領域（例えば、重鎖定常領域）を含む。一実施形態では、このような定常領域は、野生型定常領域と比較して改変される。すなわち、本明細書に開示される本発明のポリペプチドは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の１つ以上及び／又は軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）に対する変更又は改変を含み得る。改変の例には、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失又は置換が含まれる。このような変化は、エフェクター機能、半減期などを最適化するために含まれ得る。
本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、単一の抗原部位における抗体と抗原との間の相互作用の強さを指す。それぞれの抗原部位において、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位において抗原と弱い非共有結合力を介して相互作用する；相互作用が多いほど、親和性が強くなる。本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体又はその断片（例えば、Ｆａｂ断片）についての用語「高親和性」は、標的抗原について、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１１Ｍ以下、１０－１２Ｍ以下又は１０－１３Ｍ以下のノックダウンを有する抗体を指す。しかしながら、高親和性結合は、他の抗体アイソタイプについて変化し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する高親和性結合は、１０－７Ｍ以下又は１０－８Ｍ以下のノックダウンを有する抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「結合活性」は、抗体－抗原複合体の全体的な安定性又は強度の有益な尺度を指す。これは、３つの主要な因子：抗体エピトープ親和性；抗原及び抗体の両方の結合価；並びに相互作用部分の構造配置によって制御される。最終的に、これらの因子は、抗体の特異性、すなわち特定の抗体が正確な抗原エピトープに結合している可能性を規定する。
本明細書で使用される「結合特異性」という用語は、個々の抗体結合部位が異なる抗原決定基と反応するのではなく、１つの抗原決定基と反応する能力を指す。抗体の結合部位は、分子のＦａｂ部分に位置し、重鎖及び軽鎖の超可変領域から構築される。抗体の結合親和性は、単一の抗原決定基と抗体上の単一の結合部位との間の反応の強さである。それは、抗原決定基と抗体の結合部位との間で作用する引力と斥力との合計である。
用語「処置する」及び「処置」は、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）若しくは予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）手順の両方を意味し、対象が望ましくない生理学的変化又は障害を予防又は減速することである。本発明の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、検出可能であるか不可能であるかに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の減少、病状の安定化（すなわち悪化しない）、疾患の進行の遅延又は緩徐化、病状の軽減又は緩和及び寛解（部分的か完全かを問わない）を含むが、これらに限定されない。「処置」は、処置を受けていない場合の期待される生存期間と比較した生存期間の延長も意味し得る。他の実施形態では、用語「処置する」、「処置」及び「処置すること」は、物理的に、例えば識別可能な症状の安定化、生理学的に、例えば物理的パラメーターの安定化又は両方により、増殖性障害の進行を阻害することを指す。他の実施形態では、用語「処置する」、「処置」及び「処置すること」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の減少又は安定化を指す。
「対象」という用語は、本発明の方法による処置が提供される動物、ヒト又は非ヒトを指す。獣医学的及び非獣医学的適用が意図される。この用語には、哺乳動物、例えばヒト、他の霊長類、ブタ、齧歯類、例えばマウス及びラット、ウサギ、モルモット、ハムスター、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ヒツジ及びヤギが含まれるが、これらに限定されない。典型的な対象には、ヒト、農場動物並びにネコ及びイヌなどの家庭用ペットが含まれる。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
「有効量」は、有益又は所望の結果をもたらすのに十分な量を指す。例えば、治療量は、所望の治療効果を達成する量である。この量は、疾患又は疾患症状の発症を予防するのに必要な量である予防有効量と同じであるか又は異なり得る。有効量は、１回以上の投与、適用又は用量で投与することができる。治療化合物の「治療有効量」（すなわち有効用量）は、選択された治療化合物に依存する。組成物は、１日あたり１回以上から１週間あたり１回以上投与することができる。当業者は、疾患又は障害の重症度、以前の処置、対象の一般的な健康及び／又は年齢並びに存在する他の疾患を含むが、これらに限定されない、特定の因子が、対象を効果的に処置するために必要とされる投与量及びタイミングに影響を及ぼし得ることを認識するであろう。更に、本明細書に記載される治療化合物の治療有効量による対象の処置は、単一の処置又は一連の処置を含むことができる。
「核酸」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖又は二本鎖形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。「核酸のセット」という用語は、例えば、抗体の軽鎖及び重鎖又は二重特異性若しくは多重特異性抗体のドメインをコードする別個の単離された核酸を含み得る。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。他に示さない限り、特定の核酸配列は、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ及び相補的配列並びに明示的に示される配列も暗黙に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、タンパク質又はペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに連結された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、当技術分野で一般的に、例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖及び当技術分野で一般的にタンパク質と称される長鎖の両方を指し、多様な種類がある。「ポリペプチド」には、とりわけ、例えば生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が含まれる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド又はそれらの組合せを含む。
用語「保存的配列改変」は、アミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性に有意な影響を与えないか又はそれを変化させないアミノ酸改変を指す。このような保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発など、当技術分野で知られている標準的な技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。
「相同」又は「同一性」という用語は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間のサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方のサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有される場合、例えば２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致又は相同位置の数の直接関数である；例えば、２つの配列中の位置の半分（例えば、長さ１０サブユニットのポリマー中の５つの位置）が相同である場合、２つの配列は、５０％相同であり；位置の９０％（例えば、１０のうちの９）が一致又は相同である場合、２つの配列は、９０％相同である。「配列同一性」のパーセンテージは、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較することによって決定することができ、比較ウィンドウ中のアミノ酸配列の断片は、２つの配列の最適な整列のための参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して、付加又は欠失（例えば、ギャップ又はオーバーハング）を含み得る。パーセンテージは、一致した位置の数を生じるために両方の配列において同一のアミノ酸残基が存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を比較ウィンドウにおける位置の総数で割り、配列同一性のパーセンテージを生じるために結果に１００を掛けることによって計算され得る。出力は、照会配列に関する対象配列のパーセント同一性である。
「単離された」という用語は、天然状態から改変又は除去されたことを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されていない」が、その天然状態の共存物質から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離された核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、又は例えば宿主細胞などの非天然環境内に存在することができる。単離された抗体は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない（例えば、ＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する単離された抗体は、ＥＮＴＰＤ２以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、標的分子に特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来の同じ抗原に対して交差反応性を有し得る（例えば、ＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＥＮＴＰＤ２分子に結合し得る）。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似の又は均等な方法及び材料を使用して本発明を実施することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。全ての刊行物、特許出願、特許並びに本明細書に言及されている他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先される。加えて、材料、方法及び実施例は、あくまで例示であり、限定するものではない。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面及び以下の記載に示されている。本発明の他の特徴、目的及び利点は、詳細な説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかである。
ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片
一態様では、ＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片（「ＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片」又は「抗ＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片」）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片（「ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片」又は「抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片」）が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片（例えば、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片）は、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）並びに軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片（例えば、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片）は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）並びにＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片（例えば、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片）は、全長重鎖配列（ＨＣ）及び全長軽鎖配列（ＬＣ）を含む。
表１は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する例示的なＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片の配列を列挙する。
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いくつかの実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表１に記載される任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。他の適切な抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、変異されているが、ＶＨドメインにおいて、表１に記載される配列に示されるＶＨ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセント同一性を有するアミノ酸を含み得る。特定の実施形態における本開示は、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）も提供し、抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表１に列挙したＶＨ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明は、表１に列挙したＶＨ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超えるＶＨ ＣＤＲを含む（又は代わりにそれからなる）、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）を提供する。
いくつかの実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表１に記載される任意のＶＬドメインのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。他の適切な抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、変異されているが、ＶＬドメインにおいて、表１に記載される配列に示されるＶＬ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセント同一性を有するアミノ酸を含み得る。本開示は、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）も提供し、抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表１に列挙したＶＬ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、本発明は、表１に列挙したＶＬ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ又はそれを超えるＶＬ ＣＤＲを含む（又は代わりにそれからなる）、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）を提供する。
本明細書に開示される他の抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片は、変異されているが、ＣＤＲ領域において、表１に記載される配列に示されるＣＤＲ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセント同一性を有するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、それは、表１に記載される配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域において１、２、３、４又は５以下のアミノ酸が変異されている変異アミノ酸配列を含む。
ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のＶＨ、ＶＬ、全長重鎖及び全長軽鎖をコードする核酸配列、例えば表１の核酸配列も本明細書で提供される。そのような核酸配列は、哺乳動物細胞における発現のために最適化され得る。
本明細書に開示される他の抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、アミノ酸又はアミノ酸をコードする核酸が、変異されているが、表１に記載される配列に示される配列に対して少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセント同一性を有するものを含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、実質的に同じ治療活性を保持するが、表１に記載される配列に示される可変領域と比較した場合、可変領域において１、２、３、４又は５以下のアミノ酸が変異されている変異アミノ酸配列を含む。
提供される各抗体は、ヒトＥＮＴＰＤ２に結合するため、ＶＨ、ＶＬ、全長軽鎖及び全長重鎖配列（アミノ酸配列及びヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列）は、「混合及び一致」されて、本明細書に開示される他のＥＮＴＰＤ２結合抗体を作製し得る。そのような「混合及び一致」されたＥＮＴＰＤ２結合抗体は、当技術分野で既知の結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、例示に記載されているアッセイ）を用いて試験することができる。鎖が混合及び一致された場合、特定のＶＨ／ＶＬ対合に由来するＶＨ配列は、構造的に類似するＶＨ配列と置き換わる筈である。特定の全長重鎖／全長軽鎖対合に由来する全長重鎖配列は、構造的に類似する全長重鎖配列と置き換わる筈である。特定のＶＨ／ＶＬ対合に由来するＶＬ配列は、構造的に類似するＶＬ配列と置き換わる筈である。特定の長重鎖／全長軽鎖対合に由来する全長軽鎖配列は、構造的に類似する全長軽鎖配列と置き換わる筈である。
従って、一実施形態では、本発明は、配列番号１０、２５、３３、４６、７０、９１、１１５、１３２、１４５、１６９、２２５、２３３、２４１、２５０、２６４、２８１、３２８の任意の１つから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び配列番号２１、２９、５７、６４、７４、７８、１０２、１２５、１５６、１７８、２２９、２３７、２５７、２６８、２８７、３３２の任意の１つから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって；抗体はヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。
別の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１２、２７、３５、４８、７２、９３、１１７、１３４、１４７、１７１、２２７、２３５、２４３、２５２、２６６、２８３、３３０の任意の１つから選択されるアミノ酸を含む全長重鎖（ＨＣ）；及び配列番号２３、３１、５９、６６、７６、８０、１０４、１２７、１５８、１８０、２３１、２３９、２５９、２７０、２８９、３３４の任意の１つから選択されるアミノ酸を含む全長軽鎖（ＬＣ）；又は（ｉｉ）その抗原結合断片を含む機能的タンパク質を有する単離されたモノクローナル抗体を提供する。
別の実施形態では、本開示は、表１に記載される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はそれらの組合せを含むヒトＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗体断片を提供する。抗体のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１、４、６、７、３７、４０、４２、４３、８２、８５、８７、８８、１０６、１０９、１１１、１１２、１３６、１３９、１４１、１４２、１６０、１６３、１６５、１６６、１８５、１８７、１８８、２０６、２０７、２０８、２１３、２１４、２１５、２７２、２７５、２７７に示される。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２、５、８、３８、４１、４４、８３、８６、８９、１０７、１１０、１１３、１２９、１３０、１３１、１３７、１４０、１４３、１６１、１６４、１６７、１８６、１８９、２２０、２２２、２２３、２４５、２４７、２４８、２６１、２７３、２７６、２７９に示される。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号３、３９、６８、８４、１０８、１３８、１６２、２２１、２４６、２６２、２７７、２７４、９、４５、６９、９０、１１４、１４４、１６８、１９０、２２４、２４９、２６３、２７４、２８０に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１４、１７、２０、５０、５３、５６、６１、６２、６３、９５、９８、１０１、１１９、１２２、１２４、１４９、１５２、１５５、１７３、１７５、１７７、１９８、２０１、２５４に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５、１８、５１、５４、９６、９９、１２０、１５０、１５３、１９９、２８５、２８６に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１６、１９、５２、５５、９７、１００、１２１、１２３、１５１、１５４、１７４、１７６、２００、２５５、２５６に示される。
抗体のそれぞれがヒトＥＮＴＰＤ２に結合し、抗原結合特異性が、主としてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列により提供されると仮定すると、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、「混合及び一致」され得る（すなわち、異なる抗体由来のＣＤＲは、混合及び一致され得る）が、各抗体は、本明細書に開示される他のヒトＥＮＴＰＤ２結合抗体を作製するために、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３及びＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む必要がある。そのような「混合及び一致」されたＥＮＴＰＤ２結合抗体は、当技術分野で既知の及び実施例に記載される結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて試験することができる。ＶＨ ＣＤＲ配列が混合及び一致された場合、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列と置き換わる筈である。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列が混合及び一致された場合、特定のＶＬ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列と置き換わる筈である。新規なＶＨ及びＶＬ配列は、１つ以上のＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ領域配列を、本開示のモノクローナル抗体について本明細書に示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列と置換することにより作製できることが当業者に容易に明らかとなる。
従って、本開示は、配列番号１、４、６、７、３７、４０、４２、４３、８２、８５、８７、８８、１０６、１０９、１１１、１１２、１３６、１３９、１４１、１４２、１６０、１６３、１６５、１６６、１８２、１８７、１８８、２０６、２０７、２０８、２１３、２１４、２１５、２７２、２７５、２７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号２、５、８、３８、４１、４４、８３、８６、８９、１０７、１１０、１１３、１２９、１３０、１３１、１３７、１４０、１４３、１６１、１６４、１６７、１８３、１８９、２２０、２２２、２２３、２４５、２４７、２４８、２６１、２７３、２７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；配列番号３、３９、６８、８４、１０８、１３８、１６２、２２１、２４６、２６２、２７７、２７４、９、４５、６９、９０、１１４、１４４、１６８、１９０、２２４、２４９、２６３、２７４、２８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；配列番号１４、１７、２０、５０、５３、５６、６１、６２、６３、９５、９８、１０１、１１９、１２２、１２４、１４９、１５２、１５５、１７３、１７５、１７７、１９５、２０１、２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１５、１８、５１、５４、９６、９９、１２０、１５０、１５３、１９６、２８５、２８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号１６、１９、５２、５５、９７、１００、１２１、１２３、１５１、１５４、１７４、１７６、１９７、２５５、２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合領域を提供し；抗体は、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する。
特定の実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、表１に記載される抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）である。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１、４、６又は７のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）；配列番号２、５又は８のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）；配列番号３又は９のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）；配列番号１４、１７又は２０軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）；配列番号１５又は１８のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）；及び配列番号１６又は１９のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７、４０、４２又は４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８、４１又は４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９又は４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０、５３又は５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１又は５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２又は５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７、４０、４２又は４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８、４１又は４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９又は４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１、６２又は６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１又は５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２又は５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７、４０、４２又は４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８、４１又は４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８又は６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０、５３又は５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１又は５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２又は５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号８２、８５、８７又は８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８３、８６又は８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号８４又は９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号９５、９８又は１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９６又は９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号９７又は１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号９８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０６、１０９、１１１又は１１２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１０７、１１０又は１１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８又は１１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１１９、１２２又は１２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９又は１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１又は１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０６、１０９、１１１又は１１２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１２９、１３０又は１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８又は１１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１１９、１２２又は１２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９又は１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１又は１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１３６、１３９、１４１又は１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１３７、１４０又は１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１３８又は１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１４９、１５２又は１５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０又は１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１５１又は１５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６０、１６３、１６５又は１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１６１、１６４又は１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１６２又は１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７３、１７５又は１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０又は１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１７４又は１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７、４０、４２又は４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０、２２２又は２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２２１又は２２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１、６２又は６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１又は５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２又は５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７、４０、４２又は４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０、２２２又は２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８又は６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１、６２又は６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１又は５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２又は５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号６３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１、４、６又は７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４５、２４７又は２４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２４６又は２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７、２０又は２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５又は１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号２５５又は２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１、４、６又は７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４７、２４８又は２６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２６２又は２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７、２０又は２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５又は１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６又は１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２７２、２７５又は２７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２７３、２７６又は２７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２７４、２７７又は２８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７、２０又は２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号２８５又は２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６又は１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２７７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１；配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１；配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２；及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号３３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号４６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６４（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号７０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号９１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１０２（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１１５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１３２（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１４５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１５６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号１６９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１７８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２２５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２２９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２３３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２３７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２４１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２２９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２５０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２５７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２６４（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２６８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又はその抗原結合領域は、配列番号２８１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２８７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１２（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号３５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号４８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号４８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号７２（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号９３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１０４（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１１７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１２７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１３４（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１２７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１４７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１５８（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１７１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２２７（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２３１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２３５（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２３９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２４３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２３１（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２５２（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２６６（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２７０（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２８３（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２８９（又はそれと少なくとも約９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の且つ／又は１つ、２つ、３つ又はそれを超える置換、挿入、欠失又は改変を有する配列）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、１０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）、例えば９ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満のＫＤでヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体又はその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される体又は抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される体又は抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される体又は抗原結合断片は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定して、１ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２に対する、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片の解離定数は、Ｂｉａｃｏｒｅにより２５℃で測定される。
ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片も本明細書で提供され、エピトープは、以下の残基：Ｈｉｓ５０、Ａｓｐ７６、Ｐｒｏ７８、Ｇｌｙ７９、Ｇｌｙ８０、Ｔｙｒ８５、Ａｓｐ８７、Ａｓｎ８８、Ｇｌｙ９１、Ｇｌｎ９４、Ｓｅｒ９５、Ｇｌｙ９８、Ｇｌｕ１０１、Ｇｌｎ１０２、Ｇｌｎ１０５、Ａｓｐ１０６、Ａｒｇ２４５、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ａｌａ３４７、Ａｌａ３５０、Ｔｈｒ３５１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＴｙｒ３９８の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個）を含む。いくつかの実施形態では、そのような抗体又は抗原結合断片は、表１に開示されるＭＡｂ１、ＭＡｂ２、ＭＡｂ３、ＭＡｂ７、ＭＡｂ１７、ＭＡｂ１９、ＭＡｂ２０、ＭＡｂ２１及びＦａｂ２３を含むがこれらに限定されない。
ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片も本明細書で提供され、エピトープは、以下の残基：Ｇｌｙ７９、Ｇｌｎ２５０、Ｌｅｕ２５３、Ｔｒｐ２６６、Ａｒｇ２６８、Ｇｌｙ２６９、Ｐｈｅ２７０、Ｓｅｒ２７１、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｖａｌ２７４、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ｓｅｒ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｇｌｙ３０３、Ｔｈｒ３８０、Ｔｒｐ３８１、Ａｌａ３８２、Ｇｌｙ３９０、Ｇｌｎ３９１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＡｓｐ３９７の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個）を含む。いくつかの実施形態では、そのような抗体又は抗原結合断片は、表１に開示されるＭＡｂ４、ＭＡｂ５、ＭＡｂ６、ＭＡｂ１６、ＭＡｂ１８及びＦａｂ２２を含むがこれらに限定されない。
抗原上の所望のエピトープが決定されたら、例えば本発明に記載される技術を用いてそのエピトープに対する抗体を生成することが可能となる。代わりに、発見プロセス中に、抗体の生成及び特徴付けが所望のエピトープに関する情報を解明し得る。次いで、この情報から、同じエピトープへの結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能となる。これを達成するためのアプローチは、互いに競合的に結合する抗体、例えば抗原に対する結合について競合する抗体を見出す交差競合試験を行うことである。それらの交差競合に基づく「ビニング」抗体のためのハイスループットプロセスは、国際特許出願国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載されている。当業者が認識するように、実際には、抗体が特異的に結合し得るいずれもがエピトープであり得る。エピトープは、抗体が結合する残基を含み得る。
一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／又は巨大分子の複合混合物中の標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。
エピトープを含む所与のポリペプチドの領域は、当技術分野で周知の任意の数のエピトープマッピング技術を用いて同定することができる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ）を参照されたい。例えば、線状エピトープは、例えば、多数のペプチド（タンパク質分子の部分に対応するペプチド）を固体支持体上に同時に合成し、ペプチドが支持体になお結合している間に、抗体をペプチドと反応させることによって決定され得る。そのような技術は、当技術分野で既知であり、例えば米国特許第４，７０８，８７１号明細書；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８：３９９８－４００２；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：７８－１８２；Ｇｅｙｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９－７１５に記載されている。同様に、コンホメーショナルエピトープは、例えば、Ｘ線結晶構造解析及び２次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間コンホメーションを決定することによって容易に同定される。例えば、上記のエピトープマッピングプロトコルを参照されたい。タンパク質の抗原領域は、標準的な抗原性及び疎水性プロット、例えば、例えばＯｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを使用して計算されたものなどを用いて同定することもできる。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルの決定について、Ｈｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ ｍｅｔｈｏｄ，Ｈｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：３８２４－３８２８；及び疎水性プロットについて、Ｋｙｔｅ－Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５－１３２を使用する。
抗体分子は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術又はハイブリドーマ技術を用いない方法（例えば、組換え方法）により、作製することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、組換え的に産生され、例えばファージディスプレイ又はコンビナトリアル方法により産生され得る。
抗体を生成するためのファージディスプレイ及びコンビナトリアル方法は、当技術分野で既知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．米国特許第５，２２３，４０９号明細書；Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．国際公開第９２／２０７９１号パンフレット；Ｍａｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．国際公開第９２／１５６７９号パンフレット；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．国際公開第９３／０１２８８号パンフレット；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．国際公開第９２／０９６９０号パンフレット；Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０－１３７２；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１－８５；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５－７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９－８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８；Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ ８９：３５７６－３５８０；Ｇａｒｒａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３－１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３－４１３７；及びＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ ８８：７９７８－７９８２に記載されるように）。
一実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子操作されたマウスにおいて作製された抗体）又は非ヒト抗体（例えば、齧歯類（マウス又はラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体）である。
抗体は、可変領域又はその一部、例えばＣＤＲが、非ヒト生物、例えばラット又はマウスにおいて生成されるものであり得る。キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体及びヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えばラット又はマウスにおいて生成され、次いでヒトにおける抗原性を減少させるために、例えば可変フレームワーク又は定常領域において改変された抗体は、本発明の範囲内である。
キメラ及び／又はヒト化抗体は、非ヒト対象において産生されるか、又は非ヒト抗体遺伝子の発現に由来する抗体に対するヒト患者による免疫応答を最小限にするように操作され得る。キメラ抗体は、非ヒト動物抗体可変領域及びヒト抗体定常領域を含む。このような抗体は、元のモノクローナル抗体のエピトープ結合特異性を保持するが、ヒトに投与される場合、免疫原性がより低く、従って患者によって耐えられる可能性がより高い。例えば、マウス抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）の軽鎖の可変領域の１つ又は全て（例えば、１つ、２つ又は３つ）及び／又は重鎖の可変領域の１つ又は全て（例えば、１つ、２つ又は３つ）は、それぞれヒト定常領域、例えば非限定的にＩｇＧ１ヒト定常領域に連結され得る。キメラモノクローナル抗体は、当技術分野で既知の組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。例えば、非ヒト抗体分子の定常領域をコードする遺伝子は、ヒト定常領域をコードする遺伝子で置換され得る（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、ＰＣＴ特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号明細書；Ａｋｉｒａ、 ｅｔ ａｌ．、欧州特許出願第１８４，１８７号明細書；又はＴａｎｉｇｕｃｈｉ、Ｍ．．、欧州特許出願第１７１，４９６号明細書を参照されたい）。加えて、キメラ抗体を生成するために使用され得る他の適切な技術は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；同第４，９７８，７７５号明細書；同第４，９７５，３６９号明細書；及び同第４，８１６，３９７号明細書に記載されている。
キメラ抗体は、抗原結合に関与しない可変領域の部分をヒト可変領域由来の均等な部分で置き換えることによって更に「ヒト化」され得る。ヒト化抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の非ヒト（例えば、マウス、ラット又はハムスター）相補性決定領域（ＣＤＲ）とともに、可変領域中に１つ以上のヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域を除いて完全にヒトである配列を含む。ヒト化抗体は、典型的には、非ヒト化抗体と比較して、ヒトに対して免疫原性が低く、従って特定の状況において治療上の利点を提供する。ヒト化ＥＮＴＰＤ２抗体は、当技術分野で既知の方法を使用して生成され得る。例えば、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：３５，２００５；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３３，１９８９；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５，１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６，１９８８；Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：３８３３－３８３７，１９８９；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６１号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；及び同第６，１８０，３７０号明細書；並びに国際公開第９０／０７８６１号パンフレットを参照されたい。
ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、当技術分野で既知の方法を用いて生成され得る。例えば、ヒト化（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）技術は、非ヒト抗体を操作されたヒト抗体に変換するために使用された。米国特許出願公開第２００５０００８６２５号明細書は、非ヒト抗体の可変領域を抗体中のヒト可変領域で置き換える一方、非ヒト抗体のそれと同じ結合特性を維持するか、又は非ヒト抗体のそれと比較してより良好な結合特性を提供するためのインビボ方法を記載する。この方法は、非ヒト参照抗体の可変領域を完全ヒト抗体でエピトープ誘導置換することに依存する。得られるヒト抗体は、一般に、参照非ヒト抗体と構造的に無関係であるが、参照抗体と同じ抗原上の同じエピトープに結合する。簡潔には、連続エピトープ誘導相補性置換アプローチが、試験抗体の抗原への結合に応答するレポーター系の存在下において、限られた量の抗原に結合するための、「競合体」と参照抗体の多様なハイブリッドのライブラリー（「試験抗体」）との間の細胞における競合を設定することによって可能になる。競合体は、参照抗体又はその誘導体、例えば一本鎖Ｆｖ断片であり得る。競合体は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗原の天然又は人工のリガンドでもあり得る。競合体の唯一の要件は、それが参照抗体と同じエピトープに結合すること及びそれが抗原結合について参照抗体と競合することである。試験抗体は、非ヒト参照抗体からの共通の１つの抗原結合Ｖ領域と、ヒト抗体のレパートリーライブラリーなどの多様な供給源から無作為に選択された他のＶ領域とを有する。参照抗体からの共通のＶ領域はガイドとして機能し、試験抗体を抗原上の同じエピトープ上に同じ向きで配置するため、選択は、参照抗体に対して最も高い抗原結合忠実度に偏る。
多くのタイプのレポーター系を用いて、試験抗体と抗原との間の所望の相互作用を検出することができる。例えば、相補的なレポーター断片をそれぞれ抗原及び試験抗体に結合させることにより、試験抗体が抗原に結合した場合にのみ、断片相補によるレポーター活性化が起こるようにすることができる。試験抗体及び抗原－レポーター断片融合体が競合体と共発現される場合、レポーター活性化は、試験抗体の抗原に対する親和性に比例する、競合体と競合する試験抗体の能力に依存するようになる。使用できる他のレポーター系には、米国特許出願第１０／２０８，７３０号明細書（公開第２００３０１９８９７１号明細書）に開示されているような自己阻害レポーター再活性化系（ＲＡＩＲ）の再活性化因子又は米国特許出願第１０／０７６，８４５号明細書（公開第２００３０１５７５７９号明細書）に開示されている競合活性化系が含まれる。
連続エピトープ誘導相補性置換系を用いて、選択を行って、競合体、抗原及びレポーター成分とともに単一の試験抗体を発現する細胞を同定する。これらの細胞において、各試験抗体は、限られた量の抗原への結合について競合体と１対１で競合する。レポーターの活性は、試験抗体に結合した抗原の量に比例し、次いで、これは、抗原に対する試験抗体の親和性及び試験抗体の安定性に比例する。試験抗体は、試験抗体として発現された場合、最初に、参照抗体の活性に対するそれらの活性に基づいて選択される。選択の第１ラウンドの結果は、「ハイブリッド」抗体のセットであり、そのそれぞれは、参照抗体からの同じ非ヒトＶ領域とライブラリーからのヒトＶ領域から構成され、そのそれぞれは、参照抗体と同じ抗原上のエピトープに結合する。第１ラウンドで選択されたハイブリッド抗体の１つ以上は、参照抗体の親和性に匹敵するか、又はそれより高い抗原に対する親和性を有する。
第２のＶ領域置換ステップでは、第１のステップで選択されたヒトＶ領域を、同族ヒトＶ領域の多様なライブラリーを有する残りの非ヒト参照抗体Ｖ領域についてのヒト置換の選択のためのガイドとして使用する。第１ラウンドで選択されたハイブリッド抗体は、選択の第２ラウンドのための競合体としても使用され得る。選択の第２ラウンドの結果は、参照抗体と構造的に異なるが、同じ抗原への結合について参照抗体と競合する完全ヒト抗体のセットである。選択されたヒト抗体のいくつかは、参照抗体と同じ抗原上の同じエピトープに結合する。これらの選択されたヒト抗体の中で、１つ以上が、参照抗体の親和性に匹敵するか又はそれより高い親和性で同じエピトープに結合する。
マウス又はキメラＥＮＴＰＤ２抗体を用いて、同じ結合特異性及び同じ又はより良好な結合親和性でヒトＥＮＴＰＤ２に結合するヒト抗体を生成することができる。加えて、このようなヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、ヒト抗体を慣例的に産生する会社、例えばＫａｌｏＢｉｏｓ，Ｉｎｃ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）から商業的にも入手され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合し、１つ以上のＥＮＴＰＤ２活性／機能を調節する（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２の酵素活性を例えば少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％阻害する）抗体又はその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、ヒトＥＮＴＰＤ２の酵素活性は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞表面上で発現されたＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＴＰのＡＤＰへの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）のＥＮＴＰＤ２の加水分解能を阻害する。いくつかの実施形態では、ＡＴＰのＥＮＴＰＤ２の加水分解能は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞表面上で発現されたＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＴＰのＡＤＰへの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２へのＡＴＰ結合を妨害するか、又はＥＮＴＰＤ２の触媒ドメイン内でＡＴＰを捕捉する。いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２へのＡＴＰ結合の妨害又はＥＮＴＰＤ２の触媒ドメイン内のＡＴＰの捕捉は、組換えＥＮＴＰＤ２又は細胞表面上で発現されたＥＮＴＰＤ２のいずれかによるＡＴＰのＡＤＰへの加水分解を測定するインビトロＦＲＥＴアッセイを用いて測定される。
マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片
マウスＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片、例えばモノクローナル抗体又はその抗原結合断片も本明細書で提供される。表２６は、マウスＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する例示的なＥＮＴＰＤ２抗体又は抗原結合断片の配列を列挙する。
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いくつかの実施形態では、抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表２６に記載される任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。他の適切な抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、変異されているが、ＶＨドメインにおいて、表２６に記載される配列に示されるＶＨ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を含み得る。特定の実施形態における本開示は、マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）も提供し、抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表２６に列挙されるＶＨ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明は、表２６に列挙されるＶＨ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超えるＶＨ ＣＤＲを含む（又は代わりに、それからなる）、マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）を提供する。
いくつかの実施形態では、抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表２６に記載される任意のＶＬドメインのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。他の適切な抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、変異されているが、ＶＬドメインにおいて、表２６に記載される配列に示されるＶＬ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を含み得る。本開示は、マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）も提供し、抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、表２６に列挙されるＶＬ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、本発明は、表２６に列挙されるＶＬ ＣＤＲの任意の１つのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ又はそれを超えるＶＬ ＣＤＲを含む（又は代わりに、それからなる）、マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）を提供する。
本明細書に開示される他の抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体又は抗体断片（例えば、抗原結合断片）は、変異されているが、ＣＤＲ領域において、表２６に記載される配列に示されるＣＤＲ領域と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、それは、表２６に記載される配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域において１、２、３、４又は５以下のアミノ酸が変異されている変異アミノ酸配列を含む。
マウスＥＮＴＰＤ２に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片のＶＨ、ＶＬ、全長重鎖及び全長軽鎖をコードする核酸配列、例えば表２６の核酸配列も本明細書で提供される。そのような核酸配列は、哺乳動物細胞における発現のために最適化され得る。
マウスＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片も本明細書で提供され、エピトープは、以下の残基の少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも２０個）を含む：Ｓｅｒ７４、Ｃｙｓ７５、Ａｓｐ７６、Ｔｙｒ３４９、Ｔｙｒ３５０、Ａｓｐ３５３、Ｐｈｅ３５４、Ｔｈｒ３５７、Ｖａｌ３５８、Ｇｌｙ３６０、Ｇｌｎ３８５、Ａｌａ３８６、Ａｒｇ３８７、Ｖａｌ３８８、Ｐｒｏ３８９、Ｇｌｙ３９０、Ｇｌｎ３９１、Ｔｈｒ３９３、Ａｒｇ３９４又はＴｙｒ３９８。
フレームワーク及び操作又は改変された抗体
本発明の抗体は、改変抗体を操作するために、出発物質としてＶＨ及び／又はＶＬ配列の１つ以上を有する抗体を使用して更に調製され得、この改変抗体は、出発抗体から変化した特性を有し得る。抗体は１つ又は両方の可変領域（すなわちＶＨ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域内の１つ以上の残基を改変することによって操作することができる。加えて又はその代わりに、抗体は、例えば、抗体のエフェクター機能を変化させるために、定常領域内の残基を改変することによって操作することができる。
実施することができる可変領域操作の１つのタイプは、ＣＤＲ移植である。抗体は、６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を主に介して標的抗原と相互作用する。この理由のために、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体からのフレームワーク配列上に移植された特異的天然抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特異的天然抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３３；Ｗｉｎｔｅｒへの米国特許第５，２２５，５３９号明細書並びにＱｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい。）
このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列又は再構成抗体配列を含む公的ＤＮＡデータベース又は公表された参照から得ることができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅでインターネット上において、且つＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６）にて入手可能である。；例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列及び再配列抗体配列は、「ＩＭＧＴ」データベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇでインターネット上において入手可能；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２０９－２１２を参照されたい）に見出すことができる。
本発明の抗体及びその抗原結合断片において使用するためのフレームワーク配列の例は、本発明の選択された抗体及びその抗原結合断片によって使用されるフレームワーク配列、例えば本発明のモノクローナル抗体によって使用されるコンセンサス配列及び／又はフレームワーク配列に構造的に類似するものである。ＶＨ ＣＤＲ１、２及び３配列並びにＶＬ ＣＤＲ１、２及び３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子に見出される配列と同一の配列を有するフレームワーク領域上に移植され得るか、又はＣＤＲ配列は生殖系列配列と比較して１つ以上の変異を含むフレームワーク領域上に移植され得る。例えば、ある場合には、フレームワーク領域内の残基を変異させて抗体の抗原結合能を維持又は増強することが有益であることが見出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい）。
別のタイプの可変領域改変は、ＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それにより、「親和性成熟」として知られる、目的の抗体の１つ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善することである。部位特異的変異誘発又はＰＣＲ媒介変異誘発は、変異を導入するために実施することができ、抗体結合に対する効果又は目的の他の機能的特性は、本明細書に記載され、実施例に提供されるように、インビトロ又はインビボアッセイで評価することができる。保存的改変（上記のような）を導入することができる。変異は、アミノ酸置換、付加又は欠失であり得る。更に、典型的には、ＣＤＲ領域内の１つ、２つ、３つ、４つ又は５つ以下の残基が変更される。
得られるポリペプチドがＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に特異的に結合する少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワーク又は足場を使用することができる。このようなフレームワーク又は足場は、ヒト免疫グロブリンの５つの主要なイディオタイプ、その抗原結合断片を含み、好ましくはヒト化された局面を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。ラクダ科動物で同定されたような単一重鎖抗体は、この点で特に興味深い。新規なフレームワーク、足場及び断片は、当業者によって発見及び開発され続けている。
一態様では、本発明は、本発明のＣＤＲを移植することができる非免疫グロブリン足場を使用して非免疫グロブリンベースの抗体を生成する方法に関する。標的ＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的な結合領域を含む限り、既知又は将来の非免疫グロブリンフレームワーク及び足場を使用することができる。既知の非免疫グロブリンフレームワーク又は足場には、フィブロネクチン（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．）、アンキリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．及びＡｂｌｙｎｘ ｎｖ、Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、リポカリン（Ｐｉｅｒｉｓ Ｐｒｏｔｅｏｌａｂ ＡＧ、Ｆｒｅｉｓｉｎｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、小型モジュラー免疫医薬（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈ．）、マキシボディ（Ａｖｉｄｉａ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．）、タンパク質Ａ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ ＡＧ、Ｓｗｅｄｅｎ）及びアフィリン（γクリスタリン又はユビキチン）（ＳｃｉＩ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＧｍｂＨ、Ｈａｌｌｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が含まれるが、これらに限定されない。
フィブロネクチン足場は、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型（１０ Ｆｎ３ドメイン）の第１０モジュール）に基づく。フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインは、２つのβシート間に分布する７又は８のβ鎖を有し、これらは、それら自体が互いに詰まってタンパク質のコアを形成し、更に、β鎖を互いに連結し、溶媒に暴露されるループ（ＣＤＲに類似）を含む。βシートサンドイッチの各縁には少なくとも３つのこのようなループがあり、ここで縁はβ鎖の方向に垂直なタンパク質の境界である（米国特許第６，８１８，４１８号明細書を参照されたい）。これらのフィブロネクチンベースの足場は免疫グロブリンではないが、全体の折り畳みは、ラクダ及びラマＩｇＧにおける全体の抗原認識単位を含む、最小の機能的抗体断片、重鎖の可変領域の折り畳みと密接に関連している。この構造のために、非免疫グロブリン抗体は、抗体の性質及び親和性が類似している抗原結合特性を模倣する。これらの足場は、インビボでの抗体の親和性成熟のプロセスに類似するインビトロでのループ無作為化及びシャッフリング戦略において使用され得る。これらのフィブロネクチンベースの分子は、分子のループ領域が標準的なクローニング技術を使用して本発明のＣＤＲで置換され得る足場として使用され得る。
アンキリン技術は、アンキリン由来の反復モジュールを有するタンパク質を、異なる標的への結合のために使用され得る可変領域を支持するための足場として使用することに基づく。アンキリン反復モジュールは、２つの逆平行αヘリックス及びβターンからなる３３アミノ酸ポリペプチドである。可変領域の結合は主に、リボソームディスプレイを使用することによって最適化される。
アビマーは、ＬＲＰ－１のような天然のＡドメイン含有タンパク質から誘導される。これらのドメインは本来、タンパク質－タンパク質相互作用のために使用され、ヒトにおいて、２５０を超えるタンパク質はＡドメインに構造的に基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して連結された多数の異なる「Ａドメイン」単量体（２～１０）からなる。アビマーは、例えば、米国特許出願公開第２００４０１７５７５６号明細書；同第２００５００５３９７３号明細書；同第２００５００４８５１２号明細書；及び同第２００６０００８８４４号明細書に記載される方法論を使用して、標的抗原に結合し得るように作製され得る。
アフィボディ親和性リガンドは、タンパク質ＡのＩｇＧ結合ドメインの１つの足場に基づく３ヘリックス束からなる小さな単純タンパク質である。タンパク質Ａは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）由来の表面タンパク質である。この足場ドメインは５８個のアミノ酸からなり、その１３個は、多数のリガンドバリアントを有するアフィボディライブラリーを生成するために無作為化される（例えば、米国特許第５，８３１，０１２号明細書を参照されたい）。アフィボディ分子は抗体を模倣し、それらは、１５０ｋＤａである抗体の分子量と比較して、６ｋＤａの分子量を有する。その小さいサイズにも関わらず、アフィボディ分子の結合部位は、抗体の結合部位と類似している。
アンチカリンは、Ｐｉｅｒｉｓ ＰｒｏｔｅｏＬａｂ ＡＧ社によって開発された製品である。それらは、化学的に感受性又は不溶性の化合物の生理学的輸送又は貯蔵に通常関与する、小型で堅牢なタンパク質の広範な群であるリポカリンに由来する。いくつかの天然リポカリンは、ヒト組織又は体液中に存在する。タンパク質構造は、硬いフレームワークの上に超可変ループを有する免疫グロブリンを思い出させる。しかしながら、抗体又はその組換え断片とは対照的に、リポカリンは、１６０～１８０アミノ酸残基を有する単一のポリペプチド鎖から構成され、単一の免疫グロブリンドメインよりもほんのわずかに大きい。結合ポケットを構成する４つのループのセットは顕著な構造可塑性を示し、種々の側鎖を許容する。従って、結合部位は、高い親和性及び特異性を有する異なる形状の規定された標的分子を認識するために、独自のプロセスにおいて再形成され得る。リポカリンファミリーの１つのタンパク質、Ｐｉｅｒｉｓ Ｂｒａｓｓｉｃａｅのビリン結合タンパク質（ＢＢＰ）は、４つのループのセットの変異誘発によりアンチカリンを開発するために使用されている。アンチカリンを記載する特許出願の一例は、ＰＣＴ公開国際公開第１９９９１６８７３号パンフレットにある。
アフィリン分子は、タンパク質及び小分子に対する特異的親和性のために設計された小非免疫グロブリンタンパク質である。新規なアフィリン分子は２つのライブラリーから非常に迅速に選択され得、そのそれぞれは異なるヒト由来の足場タンパク質に基づく。アフィリン分子は、免疫グロブリンタンパク質と構造的な相同性を示さない。現在、２つのアフィリン足場が使用されており、その１つは、γ結晶性、ヒト構造眼レンズタンパク質であり、及び他方は、「ユビキチン」スーパーファミリータンパク質である。両方のヒト足場は非常に小さく、高温安定性を示し、ｐＨ変化及び変性剤にほとんど抵抗性である。この高い安定性は主にタンパク質の拡大したβシート構造による。ガンマ結晶性由来タンパク質の例は国際公開第２００１０４１４４号パンフレットに記載されており、「ユビキチン様」タンパク質の例は国際公開第２００４１０６３６８号パンフレットに記載されている。
タンパク質エピトープ模倣物（ＰＥＭ）は、タンパク質－タンパク質相互作用に関与する主要な二次構造であるタンパク質のβ－ヘアピン二次構造を模倣する中サイズの環状ペプチド様分子（ＭＷ１～２ｋＤａ）である。
本発明の操作された抗体及びその抗原結合断片には、例えば、抗体の特性を改善するために、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に改変が行われたものが含まれる。典型的には、このようなフレームワーク改変は、抗体の免疫原性を減少させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系列の配列に「復帰変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を起こした抗体は、抗体が由来する生殖系列の配列と異なるフレームワーク残基を含み得る。抗体フレームワーク配列を抗体が由来する生殖系列の配列と比較することにより、そのような残基を同定することができる。フレームワーク領域の配列を生殖系列の構成に戻すために、体細胞変異は、例えば部位特異的変異誘発により生殖系列の配列に「復帰変異」させることができる。このような「復帰変異」抗体も発明に包含されることが意図される。
別のタイプのフレームワーク改変は、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによって抗体の潜在的免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内又は１つ以上のＣＤＲ領域内でさえ、１つ以上の残基を変異させることを含む。このアプローチは「脱免疫化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号明細書に更に詳細に記載されている。
フレームワーク又はＣＤＲ領域内で行われる改変に加えて又はその代わりに、本発明の抗体は、典型的には、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合及び／又は抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つ以上の機能的特性を変更するために、Ｆｃ領域内の改変を含むように操作され得る。更に、本発明の抗体は化学的に改変され得る（例えば、１つ以上の化学的部分が抗体に結合され得る）か、又はそのグリコシル化を変更するように改変され得、再び抗体の１つ以上の機能特性を変更する。これらの実施形態のそれぞれは、以下で更に詳細に説明される。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのナンバリングである。
一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が変更する（例えば、増加又は減少する）ように改変される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号明細書に更に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリを容易にするか、又は抗体の安定性を増加若しくは減少させるために変更される。
別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために変異される。より具体的には、抗体が天然のＦｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較してブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ）タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合を損なうように、１つ以上のアミノ酸変異をＦｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に導入する。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書に更に詳細に記載されている。
別の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を増加させるように改変される。様々なアプローチが可能である。例えば、Ｗａｒｄへの米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記載されるように、以下の変異の１つ以上が導入され得る：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。代わりに、生物学的半減期を増加させるために、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，１２１，０２２号明細書に記載されるように、抗体はＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むように、ＣＨ１又はＣＬ領域内で改変され得る。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を変化させるために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することによって改変される。例えば、１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対して改変された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、異なるアミノ酸残基で置換することができる。親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に更に詳細に記載されている。
別の実施形態では、アミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣ１ｑ結合を変化させ、且つ／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を減少又は消失させるように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に更に詳細に記載されている。
別の実施形態では、１つ以上のアミノ酸残基は、改変され、それにより補体を固定する抗体の能力が改変される。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに更に記載されている。
いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗原結合断片のＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の減少又は無を媒介する１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｌ２３４及びＬ２３５は、Ａ２３４及びＡ２３５に置換される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｎ２６７は、Ａ２６７に置換される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｄ２６５及びＰ３２９は、Ａ２６５及びＡ３２９に置換される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、任意選択的に、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの任意の１つから選択される、エフェクター機能の低下を付与する変異又は変異の組合せを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（全てＥＵナンバリングによる位置）の任意の１つから選択される、エフェクター機能の低下を付与する変異又は変異の組合せを含む。
更に別の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増加させ、且つ／又は１つ以上のアミノ酸を改変することによってＦｃ－γ受容体に対する抗体の親和性を増加させるように改変される。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開国際公開第００／４２０７２号パンフレットに更に記載されている。更に、Ｆｃ－γＲＩ、Ｆｃ－γＲＩＩ、Ｆｃ－γＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされ、改善された結合を有するバリアントが記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｎ．２７６：６５９１－６６０４を参照されたい）。例えば、Ｆｃ領域は、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｅ３３３Ｓ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２３６Ｗ、Ｆ２４３Ｌ、Ｐ２４７Ｉ、Ｄ２８０Ｈ、Ｋ２９０Ｓ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｖ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３９Ｄ、Ａ３３９Ｑ、Ａ３３９Ｔ、Ｐ３９６Ｌ（全てＥＵナンバリングによる位置）の任意の１つから選択される、エフェクター機能の増加を付与する変異又は変異の組合せを含み得る。
更に別の実施形態では、抗体のグリコシル化が改変される。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化を変化させて、例えば抗原に対する抗体の親和性を増大させることができる。このような炭水化物改変は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を変化させることによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらし、それによってその部位でのグリコシル化を排除する、１つ以上のアミノ酸置換を行うことができる。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。このようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に更に詳細に記載されている。
加えて又は代わりに、減少した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体又は増加した二等分ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体のような、変化したタイプのグリコシル化を有する抗体を作製することができる。このような変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。このような炭水化物改変は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野で記載されており、本発明の組換え抗体を発現し、それによって変更されたグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載し、これはフコシルトランスフェラーゼをコードし、そのような細胞株において発現される抗体は低フコシル化を示す。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物にフコースを付着させる能力が低下し、また、その宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化をもたらす、変異ＣＨＯ細胞株ＬｅｃＩ３細胞を記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質改変グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を記載し、その結果、操作された細胞株において発現された抗体は、増加した二等分ＧｌｃＮａｃ構造を示し、これは抗体の増加したＡＤＣＣ活性を生じる（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照されたい）。
いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２抗体は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上の変異を有するＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、１つ以上の変異は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（ＢｏｌｔＳ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，３４：２２０４－２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｉ Ｃｈｅｒｎ．２７６（９）：６５９１－６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ Ｖｉｒａｌ ７５，１２１６１－１２１６８；Ｏｇａｎｅｓｙａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００８）．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ ６４，７００－７０４、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ ６４，７００－７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＭＡｂｓ ５（３）：４０６－４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／又はＴ２５６Ｅ（ここで、アミノ酸位置はＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従う）から選択される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従い、グリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失を更に含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従ってＣ２２０Ｓ変異を含む重鎖定常領域を有するＩｇＧ１アイソタイプを有する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従い、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｄ２６５Ａ及び／又はＮ２９７Ｑから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従い、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑから選択される１つ以上の変異を含む。
特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ２定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は１つ以上の改変を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の変異はＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／又はＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸位置はＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従う。
特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域はＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は１つ以上の改変を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａ ｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５－１９３３；Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－８；米国特許第８６１４２９９ Ｂ２号明細書）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ及び／又はＮ２９７Ｑ（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従う）から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及び／又はＴ２５６Ｅから選択される１つ以上の追加の変異を更に含み、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従う。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩｇＧ１バリアントの１つ以上を、補体活性化を排除するために、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０）又はＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及び／又はＰ３３１Ｓ変異の１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２）と組み合わせ得、ここで、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則に従う。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩｇＧバリアントは、ヒト血清中の抗体半減期を増強するために１つ以上の変異と組み合わされ得る（例えば、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６ｅ変異）（Ｄａｌｌ’ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｒｎ，２８１：２３５１４－２３５２４；及びＳｔｒｏｈｌ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０：６８５－６９１）。
いくつかの実施形態では、本開示のＩｇＧ４変異体は、抗体の安定化を増強するために、ＥＵ又はＫａｂａｔナンバリング規則（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１０５－１０８）に従うＳ２２８Ｐ変異及び／又はＰｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｒｎ．１３；２８７（２９）：２４５２５－３３に記載される１つ以上の変異と組み合わせることができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域又はＩｇＧ２／ＩｇＧ４ハイブリッドＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を有する。
ラクダ科抗体
ラクダ及びヒトコブラクダ（フタコブラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ）及びヒトコブラクダ（Ｃａｌｅｌｕｓ ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓ））ファミリーのメンバーから得られた、ラマ種（アルパカ（Ｌａｍａ ｐａｃｃｏｓ）、リャマ（Ｌａｍａ ｇｌａｍａ）及びビクーニャ属（Ｌａｍａ ｖｉｃｕｇｎａ））のような新しい世界メンバーを含む抗体タンパク質は、ヒト対象について、サイズ、構造的複雑性及び抗原性に関して特徴付けられている。天然に見出されるこの哺乳動物のファミリー由来の特定のＩｇＧ抗体は、軽鎖を欠いており、従って他の動物由来の抗体では２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する典型的な４鎖四次構造と構造的に異なる。ＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４（１９９４年３月３日に公開された国際公開第９４／０４６７８号パンフレット）を参照されたい。
ＶＨＨとして同定される小さな単一可変ドメインであるラクダ科動物抗体の領域は、遺伝子操作によって得られ、標的に対して高い親和性を有する小さなタンパク質を産生し、その結果、「ラクダ科動物ナノボディ」として知られる低分子量抗体由来タンパク質を生じる。１９９８年６月２日に発行された米国特許第５，７５９，８０８号明細書を参照されたく、Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：１２５６－１２６１；Ｄｕｍｏｕｌｉｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２００３ Ｎａｔｕｒｅ ４２４：７８３－７８８；Ｐｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００３ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １４：４４０－４４８；Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．２００２ Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８９：４５６－６２；及びＬａｕｗｅｒｅｙｓ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．１９９８ ＥＭＢＯ Ｊ １７：３５１２－３５２０も参照されたい。ラクダ抗体及び抗体断片の操作されたライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍから市販されている。非ヒト起源の他の抗体及びその抗原結合断片と同様に、ラクダ科動物抗体のアミノ酸配列を組換え的に改変して、ヒト配列により密接に類似する配列を得ることができ、すなわちナノボディを「ヒト化」することができる。従って、ヒトに対するラクダ科動物抗体の天然の低抗原性を更に低下させることができる。
ラクダ科動物のナノボディは、ヒトＩｇＧ分子の約１０分の１の分子量を有し、タンパク質は、ほんの数ナノメートルの物理的直径を有する。小さなサイズの１つの結果は、ラクダ科動物ナノボディがより大きな抗体タンパク質に機能的に不可視である抗原部位に結合する能力であり、すなわち、ラクダ科動物ナノボディは、古典的な免疫学的技術を使用して且つ可能な治療薬を使用して、さもなければ潜在的である抗原を検出する試薬として有用である。従って、小さなサイズの更に別の結果は、ラクダ科動物ナノボディが標的タンパク質の溝又は狭い裂け目における特異的部位への結合の結果として阻害することができ、従って古典的な抗体のものよりも古典的な低分子量薬物の機能により密接に類似する能力において役立ち得ることである。
低分子量及びコンパクトなサイズは、ラクダ科動物ナノボディが極めて熱安定性であり、極端なｐＨ及びタンパク質分解消化に対して安定であり、抗原性に乏しいことを更にもたらす。別の結果として、ラクダ科動物ナノボディは循環系から組織へ容易に移動し、血液脳関門を通過することさえあり、神経組織に影響を及ぼす障害を処置することができる。ナノボディは、血液脳関門を通過する薬物輸送を更に促進することができる。２００４年８月１９日に公開された米国特許出願公開第２００４０１６１７３８号明細書を参照されたい。これらの特徴は、ヒトに対する低い抗原性と組み合わされて、大きな治療可能性を示している。更に、これらの分子は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のような原核細胞において完全に発現され得、バクテリオファージとの融合タンパク質として発現され、機能的である。
従って、本発明の特徴は、ＥＮＴＰＤ２に対して高い親和性を有するラクダ科動物抗体又はナノボディである。本明細書の一実施形態では、ラクダ科動物において、ラクダ科抗体又はナノボディは天然に産生され、すなわち他の抗体について本明細書に記載される技術を使用して、ＥＮＴＰＤ２又はそのペプチド断片での免疫化の後にラクダ科動物によって産生される。代わりに、ＥＮＴＰＤ２結合ラクダ科動物ナノボディが操作され、すなわち例えば本明細書の実施例に記載されるように、標的としてＥＮＴＰＤ２を用いるパニング手順を使用して、適切に変異誘発されたラクダ科動物ナノボディタンパク質を提示するファージのライブラリーからの選択によって産生される。操作されたナノボディは、レシピエント対象において４５分～２週間の半減期を有するように、遺伝子操作によって更にカスタマイズされ得る。特定の実施形態では、ラクダ科動物抗体又はナノボディは、例えばＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１４に記載されているように、本発明のヒト抗体の重鎖又は軽鎖のＣＤＲ配列をナノボディ又は単一ドメイン抗体フレームワーク配列にグラフトすることによって得られる。
二重特異性分子と多価抗体
別の態様では、本発明は、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその断片を含む二重特異性又は多重特異性分子を特徴とする。本発明の抗体又はその抗原結合領域は、少なくとも２つの異なる結合部位又は標的分子に結合する二重特異性分子を生成するために、別の機能的分子、例えば別のペプチド又はタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体又はリガンド）に誘導体化又は連結され得る。本発明の抗体は、実際には２つを超える異なる結合部位及び／又は標的分子に結合する多重特異性分子を生成するために、２つ以上の他の機能的分子に誘導体化又は連結され得る；このような多重特異性分子は、本明細書で使用されるような用語「二重特異性分子」によって包含されることも意図される。本発明の二重特異性分子を生成するために、本発明の抗体は、二重特異性分子が生じるように、１つ以上の他の結合分子、例えば別の抗体、抗体断片、ペプチド又は結合模倣物に機能的に連結され得る（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合又は他の方法によって）。
従って、本発明は、ＥＮＴＰＤ２に対する少なくとも１つの第１の結合特異性及び第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む。例えば、第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープと異なるＥＮＴＰＤ２の別のエピトープである。
加えて、二重特異性分子が多重特異性である本発明について、分子は、第１及び第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性を更に含むことができる。
一実施形態では、本発明の二重特異性分子は、結合特異性として、少なくとも１つの抗体又はその抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は一本鎖Ｆｖを含む）を含む。抗体は、軽鎖若しくは重鎖二量体又はその最小断片、例えばＦｖ又はＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号明細書に記載されているような一本鎖構築物でもあり得る。
ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現され、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによって連結された二価の二重特異性分子である。ＶＨ及びＶＬドメインは別の鎖の相補的ドメインと対合し、それによって２つの抗原結合部位を作製する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｉｊａｋ ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。ダイアボディは、ＶＨＡ－ＶＬＢ及びＶＨＢ－ＶＬＡ（ＶＨ－ＶＬ構造）又はＶＬＡ－ＶＨＢ及びＶＬＢ－ＶＨＡ（ＶＬ－ＶＨ構造）のいずれかを有する２つのポリペプチド鎖を同一細胞内で発現させることによって産生され得る。それらの大部分は、細菌中において可溶型で発現させることができる。一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、２つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を約１５アミノ酸残基のリンカーと連結することによって産生される（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９７ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，４５（３－４）：１２８－３０；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２（１）：２１－３６を参照されたい）。ｓｃＤｂは、可溶性の活性単量体形態で細菌において発現され得る（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，１９９７ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，４５（３４）：１２８－３０；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２（１）：２１－３６；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｐａｃｋ，１９９７ Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（２）：８３－１０５；Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９（７）：６１７－２１を参照されたい）。ダイアボディをＦｃに融合させて「ジ－ダイアボディ」を生成することができる（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（４）：２８５６－６５を参照されたい）。
本発明の二重特異性分子において使用することができる他の抗体は、マウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体である。
本発明の二重特異性分子は、当技術分野で既知の方法を使用して、構成要素の結合特異性をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性を別々に生成し、次いで互いに結合させることができる。結合特異性がタンパク質又はペプチドである場合、様々なカップリング剤又は架橋剤を共有結合に使用することができる。架橋剤の例には、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスルホスクシンイミジル４（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）が含まれる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，１９８４ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，Ｍ Ａ ｅｔ ａｌ．，１９８５ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：８６４８を参照されたい）。他の方法には、Ｐａｕｌｕｓ，１９８５ Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８－１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３）及びＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８７ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７－２３７５）に記載されているものが含まれる。共役剤は、ＳＡＴＡ及びスルホ－ＳＭＣＣであり、両方ともＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）から入手可能である。
結合特異性が抗体である場合、それらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、ヒンジ領域は、コンジュゲート前に奇数個のスルフヒドリル残基、例えば１個を含むように改変される。
代わりに、両方の結合特異性が同じベクター中にコードされ得、同じ宿主細胞中で発現され、アセンブルされ得る。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂ Ｘ ｍＡｂ、ｍＡｂ Ｘ Ｆａｂ、Ｆａｂ Ｘ Ｆ（ａｂ’）２又はリガンドＸ Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。本発明の二重特異性分子は、１つの一本鎖抗体及び結合決定基を含む一本鎖分子又は２つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２つの一本鎖分子を含み得る。二重特異性分子を調製する方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号明細書；米国特許第５，４５５，０３０号明細書；米国特許第４，８８１，１７５号明細書；米国特許第５，１３２，４０５号明細書；米国特許第５，０９１，５１３号明細書；米国特許第５，４７６，７８６号明細書；米国特許第５，０１３，６５３号明細書；米国特許第５，２５８，４９８号明細書；及び米国特許第５，４８２，８５８号明細書に記載されている。
二重特異性分子のそれらの特異的標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）又はウェスタンブロットアッセイによって確認され得る。これらのアッセイのそれぞれは、一般に、目的の複合体に特異的な標識試薬（例えば、抗体）を使用することにより、特に目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。
別の態様では、本発明は、ＥＮＴＰＤ２に結合する本発明の抗体及びその抗原結合断片の少なくとも２つの同一又は異なる抗原結合部分を含む多価化合物を提供する。抗原結合部分は、タンパク質融合又は共有結合若しくは非共有結合を介して一緒に連結され得る。代わりに、結合の方法は、二重特異性分子について記載されている。四価化合物は、例えば、本発明の抗体及びその抗原結合断片を、本発明の抗体及びその抗原結合断片の定常領域（例えば、Ｆｃ又はヒンジ領域）に結合する抗体又は抗原結合断片と架橋することによって得られ得る。
三量体化ドメインは、例えば、Ｂｏｒｅａｎの欧州特許第１ ０１２ ２８０Ｂ１号明細書に記載されている。五量体化モジュールは、例えばＰＣＴ／欧州特許第９７／０５８９７号明細書に記載されている。
いくつかの実施形態では、ＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗原結合断片は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、第１の抗原は、ヒトＥＮＴＰＤ２又はその天然に存在する変異体である。いくつかの実施形態では、第２の抗原は、１つ以上の腫瘍細胞上で発現されるタンパク質、脂質、多糖又は糖脂質であり得る。
延長された半減期を有する抗体
本発明は、ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に特異的に結合し、インビボで延長された半減期を有する抗体を提供する。
多くの因子が、インビボでのタンパク質の半減期に影響を及ぼし得る。例えば、腎臓濾過、肝臓における代謝、タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）による分解及び免疫原性応答（例えば、抗体によるタンパク質中和並びにマクロファージ及び樹状細胞による取り込み）。本発明の抗体及びその抗原結合断片の半減期を延長するために、種々の戦略を使用することができる。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｒｅＣＯＤＥ ＰＥＧ、抗体足場、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合リガンド及び炭水化物シールドへの化学結合による；アルブミン、ＩｇＧ、ＦｃＲｎなどの血清タンパク質に結合するタンパク質への遺伝子融合による；ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、アビマー、アフィボディ及びアンチカリンなどの血清タンパク質に結合する他の結合部分への（遺伝的又は化学的）結合による；ｒＰＥＧ、アルブミン、アルブミンのドメイン、アルブミン結合タンパク質及びＦｃへの遺伝的融合による；又はナノ担体、徐放性製剤又は医療デバイスへの組み込みによる。
インビボでの抗体の血清循環を延長するために、高分子量ＰＥＧなどの不活性ポリマー分子を、抗体のＮ末端又はＣ末端へのＰＥＧの部位特異的結合を介して又はリジン残基上に存在するε－アミノ基を介して、多機能リンカーを用いて又は用いずに、抗体又はその断片に付着させることができる。抗体をペグ化するために、抗体、その抗原結合断片を、典型的には１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に付着するようになる条件下において、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体のようなポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる。ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応によって行うことができる。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ－又はアリールオキシ－ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されてきたＰＥＧの形態の任意の１つを包含することが意図される。一実施形態では、ペグ化される抗体は、アグリコシル化抗体である。生物学的活性の損失を最小限にする線状又は分岐ポリマー誘導体化が使用される。コンジュゲーションの程度は、抗体へのＰＥＧ分子の適切なコンジュゲーションを確実にするために、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び質量分析によって密接にモニターされ得る。未反応ＰＥＧは、サイズ排除又はイオン交換クロマトグラフィーによって抗体－ＰＥＧコンジュゲートから分離することができる。ＰＥＧ誘導体化抗体は、結合活性及びインビボ効力について、当業者に周知の方法を使用して、例えば本明細書に記載されるイムノアッセイによって試験され得る。タンパク質をペグ化する方法は、当技術分野で既知であり、本発明の抗体及びその抗原結合断片に適用することができる。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａらによる欧州特許第０１５４３１６号明細書及びＩｓｈｉｋａｗａらによる欧州特許第０４０１３８４号明細書を参照されたい。
他の修正されたペグ化技術は、ｔＲＮＡシンテターゼ及びｔＲＮＡを含む再構成された系を介して化学的に特定された側鎖を生合成タンパク質に組み込む、再構成化学的直交操作技術（ＲｅＣＯＤＥ ＰＥＧ）を含む。この技術により、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）、酵母、哺乳類細胞内の生合成タンパク質に３０を超える新しいアミノ酸を組み込むことができる。ｔＲＮＡはアンバーコドンが位置する任意の場所に標準アミノ酸を組み込み、アンバーを終止コドンから化学的に特定されたアミノ酸の組み込みを知らせるものに変換する。
組換えペグ化技術（ｒＰＥＧ）も、血清半減期延長のために使用され得る。この技術は、３００～６００アミノ酸の非構造化タンパク質尾部を既存の医薬タンパク質に遺伝的に融合することを含む。このような構造化されていないタンパク質鎖の見かけの分子量はその実際の分子量よりも約１５倍大きいため、タンパク質の血清半減期は大幅に増加する。化学的結合及び再精製を必要とする従来のＰＥＧ化とは対照的に、製造プロセスは大幅に単純化され、製品は均一である。
ポリシアリル化は、天然ポリマーポリシアル酸（ＰＳＡ）を使用して、活性寿命を延長し、治療用ペプチド及びタンパク質の安定性を改善する別の技術である。ＰＳＡは、シアル酸（糖）のポリマーである。タンパク質及び治療用ペプチド薬物送達のために使用される場合、ポリシアル酸は、結合に対する保護微小環境を提供する。これにより、循環中の治療用タンパク質の活性寿命が増大し、免疫系に認識されなくなる。ＰＳＡポリマーは、人体に天然に見出される。それは、何百万年にもわたって進化した特定の細菌により、それらの壁をそれで被覆するために採用された。次いで、これらの天然にポリシアリル化された細菌は、分子模倣によって身体の防御系をフォイルすることができた。ＰＳＡは、このような細菌から大量に、且つ所定の物理的特性で容易に産生することができる。細菌ＰＳＡは、ヒトの体内のＰＳＡと化学的に同一であるため、タンパク質に結合された場合でも完全に非免疫原性である。
別の技術は、抗体に連結されたヒドロキシエチルデンプン（「ＨＥＳ」）誘導体の使用を含む。ＨＥＳは蝋質トウモロコシデンプンに由来する改変天然ポリマーであり、身体の酵素によって代謝され得る。ＨＥＳ溶液は、通常、欠乏した血液容量を置換し、血液のレオロジー特性を改善するために投与される。抗体をヘシル化することにより、分子の安定性を高めるとともに、腎クリアランスを低下させることにより、循環半減期の延長が可能となり、生物学的活性が増大する。ＨＥＳの分子量のような異なるパラメーターを変化させることにより、広範囲のＨＥＳ抗体コンジュゲートをカスタマイズすることができる。
インビボでの半減期が増加した抗体は、ＩｇＧ定常ドメイン又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、Ｆｃ又はヒンジＦｃドメイン断片）に１つ以上のアミノ酸改変（すなわち置換、挿入又は欠失）を導入しても生成され得る。例えば、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット；国際公開第９７／３４６３１号パンフレット；及び米国特許第６，２７７，３７５号明細書を参照されたい。
更に、抗体又は抗体断片をインビボでより安定にするか、又はインビボでより長い半減期を有するために、抗体をアルブミンにコンジュゲートすることができる。これらの技術は当技術分野で周知であり、例えば国際公開第９３／１５１９９号パンフレット、国際公開第９３／１５２００号パンフレット及び国際公開第０１／７７１３７号パンフレット；並びに欧州特許第４１３，６２２号明細書を参照されたい。
半減期を増加させるための戦略は、ナノボディ、フィブロネクチンベースのバインダー及びインビボ半減期の増加が望まれる他の抗体又はタンパク質において特に有用である。
抗体コンジュゲート
本発明は、ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を提供し、この抗体又は抗原結合断片は異種タンパク質又はポリペプチド（又はその抗原結合断片、好ましくは少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０又は少なくとも１００アミノ酸のポリペプチド）に組換え的に融合されるか又は化学的にコンジュゲートされて（共有結合及び非共有結合の両方を含む）、融合タンパク質を生成する。特に、本発明は、本明細書に記載の抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメイン又はＶＬ ＣＤＲ）及び異種タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを含む融合タンパク質を提供する。タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを抗体又は抗体断片に融合又はコンジュゲートするための方法は、当技術分野で既知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、同第５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４９，０５３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書及び同第５，１１２，９４６号明細書；欧州特許第３０７，４３４号明細書及び欧州特許第３６７，１６６号明細書；国際公開第９６／０４３８８号パンフレット及び国際公開第９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５－１０５３９；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－５６００；及びＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－１１３４１を参照されたい。
更なる融合タンパク質は、遺伝子－シャッフリング、モチーフ－シャッフリング、エキソン－シャッフリング及び／又はコドン－シャッフリング（集合的に「ＤＮＡシャッフリング」と称される）の技術を介して生成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、本発明の抗体及びその抗原結合断片の活性を改変するために使用され得る（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体及びその抗原結合断片）。一般的には米国特許第５，６０５，７９３号明細書、同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，２５２号明細書及び同第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２；Ｈａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８－３１３）を参照されたい。抗体及びその抗原結合断片又はコードされた抗体及びその抗原結合断片は、組換えの前に、エラープローンＰＣＲ、無作為ヌクレオチド挿入又は他の方法によって無作為変異誘発に供されることによって改変され得る。ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に特異的に結合するその抗体抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の異種分子の１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、断片などと組換えられ得る。
更に、抗体及びその抗原結合断片は、精製を容易にするために、マーカー配列（例えば、ペプチド）に融合され得る。一実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ヘキサヒスチジンペプチド（配列番号１０１０）、例えばｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、Ｃａｌｉｆ．、９１３１１）において提供されるタグであり、他の多くは、商業的に入手可能である。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２４に記載されているように、例えば、ヘキサヒスチジン（配列番号１０１０）は、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する赤血球凝集素（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７）及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本発明の抗体及びその抗原結合断片は、診断剤又は検出可能な薬剤にコンジュゲートされる。そのような抗体は、特定の治療法の有効性を決定するような、臨床検査手順の一部として、疾患又は障害の発症、発生、進行及び／又は重症度をモニタリング又は予知するために有用であり得る。そのような診断及び検出は、限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼなどの様々な酵素；限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなどの補欠分子族；限定されないが、ウムベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンなどの蛍光物質；限定されないが、ルミノールなどの発光物質；限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンなどの生物発光物質；限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ及び１２１Ｉ）炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ及び１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ及び１１７Ｔｉｎなどの放射性物質；及び種々の陽電子放出断層撮影法を用いた陽電子放出金属及び非放射性常磁性金属イオンを含む検出可能な物質に抗体を結合させることによって達成することができる。
更に、その抗体抗原結合断片は、治療的部分又は薬物部分にコンジュゲートされ得る。治療的部分又は薬物部分は、古典的な化学治療薬に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質、ペプチド又はポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、コレラ毒素又はジフテリア毒素などの毒素；腫瘍壊死因子、α－インターフェロン、β－インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、アポトーシス剤、抗血管新生剤などのタンパク質；又は例えばリンホカインなどの生物学的応答調整剤を挙げることができる。
更に、放射性金属イオン、例えば２１３Ｂｉなどのαエミッタ又は１３１Ｉｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍを含むがこれらに限定されない放射性金属イオンをポリペプチドにコンジュゲートするために有用な大環状キレート剤のような治療的部分に、抗体をコンジュゲートすることができる。一実施形態では、大環状キレート剤は、リンカー分子を介して抗体に結合され得る１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’”－四酢酸（ＤＯＴＡ）である。このようなリンカー分子は当技術分野で一般に既知であり、Ｄｅｎａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４（１０）：２４８３－９０；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０（４）：５５３－７；及びＺｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６（８）：９４３－５０（それぞれその全体が参照により組み込まれる）に記載されている。
治療的部分を抗体にコンジュゲートするための技術は周知であり、例えばＡｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５），ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８を参照されたい。
抗体は、標的抗原のイムノアッセイ又は精製に特に有用である固体支持体にも結合され得る。このような固体支持体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。
抗体をコードする核酸、ベクター及び宿主細胞
本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸も本明細書で提供される。このような核酸は、上記のＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片のセグメント又はドメインを含むポリペプチドをコードし得る。このような核酸又はポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２抗体の重鎖又は軽鎖由来の少なくとも１つのＣＤＲ領域、通常、３つのＣＤＲ領域全てをコードし得る。このような核酸又はポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２抗体の重鎖及び／又は軽鎖の可変領域配列の全て又は実質的に全てもコードし得る。このような核酸又はポリヌクレオチドは、抗体の可変領域及び定常領域の両方もコードし得る。コードの縮重のために、種々の核酸配列が、免疫グロブリンアミノ酸配列のそれぞれをコードする。例えば、本発明は、本明細書に開示される抗体分子の１つ以上から選択される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１及び第２の核酸を特徴とする。核酸は、表１に示されるヌクレオチド配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それに対して少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列又は表１に示される配列と３、６、１５、３０若しくは４５ヌクレオチド以下異なる配列）を含み得る。
特定の実施形態では、核酸は、表１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列及び／又は１つ以上の置換、例えば保存される置換を有する配列）を含むことができる。他の実施形態では、核酸は、表１に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列及び／又は１つ以上の置換、例えば保存される置換を有する配列）を含むことができる。更に別の実施形態では、核酸は、表１に示すアミノ酸配列を有する重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列及び／又は１つ以上の置換、例えば保存される置換を有する配列）を含むことができる。
特定の実施形態では、核酸は、表１に示すヌクレオチド配列を有する重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列）を含むことができる。別の実施形態では、核酸は、表１に示すヌクレオチド配列を有する軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列）を含むことができる。更に別の実施形態では、核酸は、表１に示すヌクレオチド配列を有する重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つのＣＤＲ又は超可変ループをコードするヌクレオチド配列又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列）を含むことができる。
ポリヌクレオチド配列は、デノボ固相ＤＮＡ合成又はＥＮＴＰＤ２結合抗体若しくはその結合断片をコードする既存の配列のＰＣＲ変異誘発によって産生することができる。核酸の直接化学合成は、Ｎａｒａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０；ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９、；Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９，１９８１のジエチルホスホルアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固体支持体方法などの当技術分野で既知の方法によって達成することができる。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への変異の導入は、例えば、ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，１９９２；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９０；Ｍａｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：９６７，１９９１；及びＥｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ １：１７，１９９１に記載されているように行うことができる。
本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片のセグメント又はドメインを含むポリペプチドをコードする核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）も本明細書で提供される。そのようなベクターは、ＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗原結合断片を発現及び／又は産生するために使用され得る。用語「発現ベクター」は、所望のコード配列が、それが発現され得る細胞への導入のために挿入され得る担体核酸分子を指す。ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、コスミド若しくはウイルスベクター又は人工染色体であり得る（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １５：３４５，１９９７を参照されたい）。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞におけるＥＮＴＰＤ２結合抗体又はその抗原結合断片の発現に有用な非ウイルスベクターには、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ及びＣ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、Ｂ及びＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）、ＭＰＳＶベクター並びにタンパク質を発現するための当技術分野で既知の多数の他のベクターが含まれる。例えば、１つのクラスのベクターは、ウシ乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶ又はＭＯＭＬＶ）又はＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス及びフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。
有用なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ））、ＳＶ４０に基づくベクター、乳頭腫ウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルス、シンビスウイルス、インフルエンザウイルス、レオウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、パルボウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、セネカバレーウイルス、コクサッキーウイルス、エンテロウイルス、粘液腫ウイルス、マラバウイルス又はセムリキフォレストウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，前出；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６８：１４３，１９９２を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスのようなレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期にわたる安定した組み込みと娘細胞での増殖を可能にするため、長期的な遺伝子導入を達成するのに適したツールである。レンチウイルスベクターは、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来のベクターよりも、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で付加的な利点を有する。それらは、低い免疫原性という追加の利点も有する。レトロウイルスベクターは、例えば、ガンマレトロウイルスベクターでもあり得る。ガンマレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（Ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２つの）長末端反復（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えばＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。ガンマレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖなどのウイルス構造遺伝子を欠くことがある。例示的なガンマレトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾臓病巣形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）並びにそれらに由来するベクターが含まれる。他のガンマレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ Ｍａｅｔｚｉｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ” Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１ Ｊｕｎ；３（６）：６７７－７１３に記載されている。
いくつかの実施形態では、ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、例えば組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターである。「ＡＡＶ」は、アデノ随伴ウイルスの略語であり、ウイルス自体又はその誘導体を指すように使用され得る。この用語は、別に要求される場合を除き、天然に存在する形態及び組換え形態の両方を包含する。略語「ｒＡＡＶ」は、組換えＡＡＶベクター（又は「ｒＡＡＶベクター」）とも呼ばれる組換えアデノ随伴ウイルスを指す。「ＡＡＶ」という用語は、例えば、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２型（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ３型（ＡＡＶ３）、ＡＡＶ４型（ＡＡＶ４）、ＡＡＶ５型（ＡＡＶ５）、ＡＡＶ６型（ＡＡＶ６）、ＡＡＶ７型（ＡＡＶ７）、ＡＡＶ８型（ＡＡＶ８）、ＡＡＶ９型（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ１０型（ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０を含む）、ＡＡＶ１２型（ＡＡＶ１２）、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ及びヒツジＡＡＶを含む。「霊長類ＡＡＶ」は、霊長類に感染するＡＡＶを指し、「非霊長類ＡＡＶ」は、非霊長類哺乳動物に感染するＡＡＶを指し、「ウシＡＡＶ」は、ウシ哺乳動物に感染するＡＡＶを指すなどである。
ＡＡＶの様々な血清型のゲノム配列並びに天然の逆方向末端反復（ＩＴＲ）、Ｒｅｐタンパク質及びカプシドサブユニットの配列は、当技術分野で既知である。このような配列は、文献又はＧｅｎＢａｎｋのような公的データベースにおいて見出され得る。例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ－００２０７７（ＡＡＶ１）、ＡＦ０６３４９７（ＡＡＶ１）、ＮＣ－００１４０１（ＡＡＶ２）、ＡＦ０４３３０３（ＡＡＶ２）、ＮＣ－００１７２９（ＡＡＶ３）、ＮＣ－００１８２９（ＡＡＶ４）、Ｕ８９７９０（ＡＡＶ４）、ＮＣ－００６１５２（ＡＡＶ５）、ＡＦ５１３８５１（ＡＡＶ７）、ＡＦ５１３８５２（ＡＡＶ８）及びＮＣ－００６２６１（ＡＡＶ８）；又は国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット（ＡＡＶ１－９）などの刊行物（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５：５５５；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６８２３；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：１３０９；Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：９３９；Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：３９９４；Ｍｕｒａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２０８；Ｓｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１；Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１１８５４；Ｍｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３：３７５－３８３；国際公開第００／２８０６１号パンフレット、国際公開第９９／６１６０１号パンフレット、国際公開第９８／１１２４４号パンフレット；及び米国特許第６，１５６，３０３号明細書も参照されたい。
本明細書で使用される「ｒＡＡＶベクター」は、ＡＡＶ起源ではないポリヌクレオチド配列（すなわちＡＡＶに異種のポリヌクレオチド）、典型的には細胞の遺伝子形質転換のための目的の配列を含むＡＡＶベクターを指す。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、少なくとも１つ、ときに２つのＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列が隣接し得る。用語ｒＡＡＶベクターは、ｒＡＡＶベクター粒子及びｒＡＡＶベクタープラスミドの両方を包含する。ｒＡＡＶベクターは、一本鎖（ｓｓＡＡＶ）又は自己相補的（ｓｃＡＡＶ）のいずれかであり得る。「ＡＡＶウイルス」又は「ｒＡＡＶウイルス粒子」又は「ｒＡＡＶベクター粒子」は、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質（典型的には、野生型ＡＡＶのキャプシドタンパク質の全てによって）及びカプシド化ポリヌクレオチドｒＡＡＶベクターからなるウイルス粒子を指す。粒子が異種ポリヌクレオチド（すなわち哺乳動物細胞に送達される導入遺伝子などの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、典型的には「ｒＡＡＶベクター粒子」又は単に「ｒＡＡＶベクター」と呼ばれる。従って、ｒＡＡＶ粒子の産生は、そのようなベクターがｒＡＡＶ粒子内に含まれるため、必然的に、ｒＡＡＶベクターの産生を含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体をコードする核酸を含む組換えＤＮＡ分子であり得る。本明細書で使用される「組換え」は、ベクター、ポリヌクレオチド、ポリペプチド又は細胞がクローニング、制限又はライゲーションステップ（例えば、その中に含まれるポリヌクレオチド又はポリペプチドに関連する）及び／又は天然に見出される産物と異なる構築物を生じる他の手順の様々な組合せの産物であることを意味する。組換えウイルス又はベクターは、組換えポリヌクレオチドを含むウイルス粒子である。この用語は、それぞれ元のポリヌクレオチド構築物の複製及び元のウイルス構築物の子孫を含む。
組換えベクターは、典型的には、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結された１つ以上の調節配列を含む。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。調節配列は、ヌクレオチド配列の構成的発現並びに組織特異的調節配列及び／又は誘導配列を指示するものを含む。発現ベクターには、宿主細胞におけるメッセンジャーＲＮＡの安定性及び翻訳能を最適化するように設計されたエレメント並びに／又はヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体を発現する永久的で安定な細胞クローンを確立するための薬物選択マーカーも含まれ得る。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得る。このような組換え発現ベクターを生成するための一般的な方法は、とりわけ、当技術分野で知られているＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｄｓ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．（２００７ ｗｉｔｈ ｕｐｄａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ２０１０）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙに見出すことができる。
「プロモーター」は、転写の開始及び速度が制御される核酸配列の領域である制御配列である。これは、ＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子のような調節タンパク質及び分子が結合する可能性のある遺伝的要素を含み得る。「操作的に配置された」、「操作的に連結された」、「制御下にある」及び「転写制御下にある」という語句は、プロモーターがその配列の転写開始及び／又は発現を制御する核酸配列に関連して正確な機能的位置及び／又は配向にあることを意味する。プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「エンハンサー」とともに使用され得又はされ得ない。
プロモーターは、コードセグメント及び／又はエキソンの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって得られるように、遺伝子又は配列と天然に関連するものであり得る。このようなプロモーターは、「内因性」と呼ぶことができる。同様に、エンハンサーは、その配列の下流又は上流のいずれかに位置する、核酸配列に天然に関連するものであり得る。代わりに、コード核酸セグメントを、その天然環境において核酸配列に通常関連しないプロモーターを指す組換えプロモーター又は異種プロモーターの制御下に置くことにより、ある利点が得られる。組換え又は異種エンハンサーは、その天然環境において核酸配列と通常関連しないエンハンサーも指す。このようなプロモーター又はエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーター又はエンハンサー及び任意の他の原核細胞、ウイルス細胞又は真核細胞から単離されたプロモーター又はエンハンサー並びに「天然に存在しない」プロモーター又はエンハンサー（すなわち発現を変化させる異なる転写調節領域及び／又は変異の異なるエレメントを含む）を含み得る。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、配列は、組換えクローニング及び／又は核酸増幅技術（例えば、本明細書に開示される組成物に関連するＰＣＲ）を使用して産生され得る（米国特許第４６８３２０２号明細書、米国特許第５９２８９０６号明細書を参照されたい）。更に、ミトコンドリア、葉緑体などの非核オルガネラ内の配列の転写及び／又は発現を指示する制御配列も使用され得ることが意図される。
使用されるプロモーターは、構成的、誘導性、合成、組織特異的若しくは細胞特異的であり得、且つ／又は組換えタンパク質及び／若しくはペプチドの大規模産生において有利であるような、導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指向するための適切な条件下で有用であり得る。加えて、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体をコードする核酸の発現を改善するために、他の調節エレメント（例えば、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結配列など）も組み込まれ得る。
いくつかの実施形態では、構成的プロモーターは、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体の定常発現を提供するために使用される。構成的プロモーターの例としては、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター並びに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子－１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
誘導性プロモーターも本開示の一部として意図される。誘導性プロモーターの使用は、発現が所望される場合、それが作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、又は発現が所望されない場合、発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、組織特異的又は細胞特異的プロモーターは、特定の組織又は細胞においてのみ、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体の発現を提供するために使用される。組織特異的プロモーター又は細胞特異的プロモーター又はエレメントの同一性並びにそれらの活性を特徴付けるアッセイは、当業者に周知である。例としては、ヒトＬＩＭＫ２遺伝子（Ｎｏｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．１９９９，Ｇｅｎｅ，２３６（２）：２５９－２７１）、ソマトスタチン受容体２遺伝子（Ｋｒａｕｓ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＦＥＥＳ Ｌｅｔｔ．，４２８（３）：１６５－１７０）、マウス精巣上体レチノイン酸結合遺伝子（Ｌａｒｅｙｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４（１２）：８２８２－８２９０）、ヒトＣＤ４（Ｚｈａｏ－Ｅｍｏｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｉｏｃｈｉｒｎ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１４４２（２－３）：１０９－１１９）、マウスα２（ＸＩ）コラーゲン（Ｔｓｕｍａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３（３６）：２２８６１－２２８６４）、Ｄ１Ａドーパミン受容体遺伝子（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ａｕｔｏｎ．Ｎｅｒｖ．Ｓｙｓｔ．，７４（２－３）：８６－９０）、インスリン様成長因子ＩＩ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２３３（１）：２２１－２２６）、ヒト血小板内皮細胞接着分子－１（Ａｌｍｅｎｄｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７（１２）：５４１１－５４２１）、筋クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）プロモーター（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ Ｎｏｖ；１５（２２）：１４８９－９９）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、合成プロモーターは、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体の発現を提供するために使用される。合成プロモーターは、天然プロモーターの転写能力を大幅に超えることができる。例えば、内因性の細胞機構又は因子によって活性が遮断又は低下しない合成プロモーターを選択することができる。転写効率を改善するために、トランス作用性因子結合部位及びエンハンサーを含む他のエレメントを合成プロモーターに挿入し得る。合成プロモーターを合理的に設計し、化学的に合成して、合成及び生物学的プロモーターの両方の最良の特徴を組み合わせることができる。合成オリゴをアニーリングし、いくつかのプロセスを通してライゲーションして、完全長の化学合成プロモーターを生成する。合成プロモーターは、誘導性又は細胞型特異的プロモーターであり得る。
特定の開始シグナルは、コード配列の効率的な翻訳のためにも必要とされ得る。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドン又は隣接する配列が含まれる。ＡＴＧ開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルを提供する必要があり得る。当業者は、これを容易に決定し、必要なシグナルを提供することができるであろう。開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと「インフレーム」でなければならないことは周知である。外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然又は合成のいずれかであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメントを含むことによって増強され得る。
発現は、当技術分野で既知の任意の適切な宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞などを使用し得る。原核生物及び真核生物の両方の発現系が広く利用可能である。いくつかの実施形態では、発現系はＣＨＯ細胞発現系などの哺乳動物細胞発現である。いくつかの実施形態では、核酸は、所望の宿主細胞における発現を容易にするためにコドン最適化され得る。発現のために選択された細胞型、オルガネラ及び生物体におけるＤＮＡセグメントの発現を効果的に指示するプロモーター及び／又はエンハンサーを使用することは重要であろう。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー及び細胞型の組合せの使用を知っている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）を参照されたい）。
転写された真核生物のＲＮＡ分子のほとんどは、ＲＮＡスプライシングを受けて、一次転写物からイントロンを除去する。ゲノム真核生物配列を含むベクターは、タンパク質発現のための転写物の適切なプロセシングを確実にするために、ドナー及び／又はアクセプタースプライシング部位を必要とし得る（Ｃｈａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４（８）：３５９６－６０１を参照されたい）。
本開示のベクター又は構築物は、一般に、少なくとも１つの終結シグナルを含む。「終結シグナル」又は「ターミネーター」は、ＲＮＡポリメラーゼによるＲＮＡ転写物の特異的終結に関与するＤＮＡ配列から構成される。従って、特定の実施形態では、ＲＮＡ転写物の産生を終結させる終結シグナルが意図される。ターミネーターは、望ましいメッセージレベルを達成するためにインビボで必要であり得る。真核生物系において、ターミネーター領域は、ポリアデニル化部位を露出させるために、新規転写物の部位特異的切断を可能にする特異的ＤＮＡ配列も含み得る。これは、転写物の３’末端に約２００ Ａ残基（ポリＡ）のストレッチを付加するように、特殊な内因性ポリメラーゼにシグナルを送る。このポリＡテールで修飾されたＲＮＡ分子は、より安定であり、より効率的に翻訳されるようである。従って、真核生物を含む他の実施形態では、ターミネーターがＲＮＡの切断のためのシグナルを含むことが好ましく、ターミネーターシグナルがメッセージのポリアデニル化を促進することがより好ましい。ターミネーター及び／又はポリアデニル化部位エレメントは、メッセージレベルを増強し、且つ／又はカセットから他の配列への読み取りを最小限にするために役立ち得る。本開示での使用が意図されるターミネーターは、本明細書に記載されるか、又は当業者に既知の転写の任意の既知のターミネーターを含み、例えば、限定されるものではないが、例えばウシ成長ホルモンターミネーターのような遺伝子の終結配列又は例えばＳＶ４０ターミネーターのようなウイルス終結配列を含む。特定の実施形態では、終結シグナルは、例えば配列切断による転写可能又は翻訳可能な配列の欠如であり得る。
発現、特に真核生物発現において、転写物の適切なポリアデニル化をもたらすために、典型的にはポリアデニル化シグナルを含む。ポリアデニル化シグナルの性質は、本開示の成功裏の実施に重要であるとは考えられず、且つ／又は任意のこのような配列が使用され得る。好ましい実施形態は、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル及び／又はウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルを含み、便利であり、且つ／又は種々の標的細胞においてよく機能することが知られている。ポリアデニル化は、転写物の安定性を増加させ得るか、又は細胞質輸送を促進し得る。
宿主細胞内でベクターを増殖させるために、複製が開始される特定の核酸配列である１つ以上の複製起点（多くの場合に「ｏｒｉ」と呼ばれる）を含むことがある。代わりに、宿主細胞が酵母である場合、自己複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。
本開示の特定の実施形態では、本開示の核酸構築物を含む細胞は、発現ベクターにマーカーを含めることによってインビトロ又はインビボで同定され得る。このようなマーカーは、細胞に同定可能な変化を与え、発現ベクターを含む細胞の容易な同定を可能にする。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するものである。正の選択マーカーは、マーカーの存在がその選択を可能にするものである一方、負の選択マーカーは、その存在がその選択を妨げるものである。陽性選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
通常、薬物選択マーカーの包含は、形質転換体のクローニング及び同定に役立ち、例えばネオマイシン、ピューロマイシン、ヒグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシン及びヒスチジノールに対する耐性を付与する遺伝子は、有用な選択マーカーである。条件の実施に基づく形質転換体の識別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、その基礎が比色分析でＧＦＰなどのスクリーニング可能なマーカーを含む他のタイプのマーカーも意図される。代わりに、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などのスクリーニング可能な酵素を利用し得る。当業者は、おそらくＦＡＣＳ分析と組み合わせて、免疫学的マーカーをどのように使用するかも知っている。使用されるマーカーは、それが遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現され得る限り、重要であるとは考えられない。選択マーカー及びスクリーニング可能なマーカーの更なる例は、当業者に周知である。
発現ベクターは、挿入されたＥＮＴＰＤ２結合抗体配列によってコードされるポリペプチドと融合タンパク質を形成するための分泌シグナル配列位置も提供し得る。より多くの場合、挿入されたＥＮＴＰＤ２結合抗体配列は、ベクターに含める前にシグナル配列に連結される。ＥＮＴＰＤ２結合抗体軽鎖及び重鎖可変ドメインをコードする配列を受容するために使用されるベクターは、定常領域又はその一部をコードすることもある。このようなベクターは、定常領域との融合タンパク質としての可変領域の発現を可能にし、それによりインタクトな抗体及びその抗原結合断片の産生を導く。典型的には、このような定常領域は、ヒトである。
発現ベクターの生成は、複数の制限酵素部位を含む核酸領域である複数のクローニング部位（ＭＣＳ）を含むベクターを利用することができ、その任意の１つを標準的な組換え技術と組み合わせて用いてベクターを消化することができる。Ｃａｒｂｏｎｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｌｅｖｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ａｎｄ Ｃｏｃｅａ，１９９７を参照されたい。「制限酵素消化」は、核酸分子中の特定の位置でのみ機能する酵素による核酸分子の触媒切断を指す。これらの制限酵素の多くは、市販されている。このような酵素の使用は、当業者に広く理解されている。多くの場合、ベクターは、ＭＣＳ内で切断して外因性配列をベクターに連結できるようにする制限酵素を用いて線状化又は断片化される。「連結」は、２つの核酸断片間にホスホジエステル結合を形成する過程を指し、これは、互いに隣接していてもいなくてもよい。制限酵素及びライゲーション反応を含む技術は、組換え技術の当業者に周知である。
目的のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入するための方法は、細胞宿主の型に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは、原核細胞に一般的に利用される一方、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションは、他の細胞宿主に使用され得る（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記を参照されたい）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注射及びマイクロインジェクション、弾道法／遺伝子銃、ビロソーム、イムノリポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合、ＤＮＡの薬剤増強取り込み、エクスビボ形質導入、プロトプラスト融合、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、脂質ベースのトランスフェクション又は他の従来技術が挙げられる。プロトプラスト融合の場合、細胞を培地中で増殖させ、適切な活性についてスクリーニングする。組換えタンパク質の長期間の高収率産生のために、安定な発現が多くの場合に所望される。例えば、ポリペプチドを安定に発現する細胞株は、ウイルスの複製起点又は内因性発現エレメント及び選択マーカー遺伝子を含む発現ベクターを用いて調製することができる。ベクターの導入後、細胞を選択培地に切り替える前に、濃縮培地中で１～２日間増殖させ得る。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在により、選択培地中で導入された配列をうまく発現する細胞の増殖が可能になる。耐性の、安定にトランスフェクトされた細胞は、細胞型に適切な組織培養技術を使用して増殖され得る。得られたトランスフェクトされた細胞を培養し、産生された抗体分子を回収するための方法及び条件は、当業者に既知であり、本明細書に基づいて、使用される特定の発現ベクター及び哺乳動物宿主細胞に応じて変化又は最適化され得る。
本明細書に記載される発現ベクターの任意の１つを含む細胞も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の核酸分子を含む宿主細胞を特徴とする。このような細胞は、宿主細胞又は治療細胞であり得る。用語「宿主細胞」及び「組換え宿主細胞」は、本明細書で交換可能に使用され、これらは、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫又は潜在的子孫を指す。変異又は環境の影響のいずれかのために、ある種の修飾が次の世代で起こり得るため、このような子孫は、実際には、親細胞と同一ではないことがあり得るが、それでもなお本明細書で使用される用語の範囲内に含まれる。
一実施形態では、宿主細胞は、抗体分子をコードする核酸を含むように遺伝子操作される。一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作される。用語「発現カセット」は、ヌクレオチド配列を指し、このような配列に適合する宿主における遺伝子の効果的発現が可能である。このようなカセットは、プロモーター、イントロンを伴うか又は伴わないオープンリーディングフレーム及び終結シグナルを含み得る。発現を達成するのに必要又は有用な追加の因子、例えば誘導性プロモーターを使用し得る。
ＥＮＴＰＤ２結合抗体鎖を保有し、且つ発現するための宿主細胞は、真核細胞又は細菌細胞、昆虫細胞又はヒト細胞のような原核細胞であり得るが、これらに限定されない。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本発明のポリヌクレオチドのクローニング及び発現に有用な１つの原核生物宿主である。使用に適した他の微生物宿主には、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）といったような桿菌並びにサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）及び様々なシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種といったような他の腸内細菌種が含まれる。これらの原核生物宿主において、典型的には宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することもできる。更に、ラクトースプロモータ系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、βラクタマーゼプロモータ系又はファージλからのプロモーター系など、任意の数の様々な周知のプロモーターが存在する。これらのプロモーターは、典型的には、任意選択的にオペレーター配列を用いて発現を制御し、転写及び翻訳を開始し、完了するためのリボソーム結合部位配列などを有する。酵母のような他の微生物も、本発明のＥＮＴＰＤ２結合ポリペプチドを発現するために使用され得る。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用できる。適切な昆虫細胞としては、Ｓｆ９細胞が挙げられるが、これに限定されない。
一実施形態では、哺乳動物宿主細胞は、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体を発現及び産生するために使用される。例えば、それらは、内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株（例えば、１Ｄ６．Ｃ９骨髄腫ハイブリドーマ細胞）又は外因性発現ベクターを有する哺乳動物細胞株（例えば、ＳＰ２／０骨髄腫細胞）のいずれかであり得る。これらには、任意の正常な死亡又は正常若しくは異常な不死動物又はヒト細胞が含まれる。例えば、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換Ｂ細胞及びハイブリドーマを含む、無傷の免疫グロブリンを分泌し得る多数の適切な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現するための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、一般に、例えばＷｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７において議論される。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター及びエンハンサー（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９－６８，１９８６を参照されたい）などの発現制御配列及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報処理部位を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳動物遺伝子由来又は哺乳動物ウイルス由来のプロモーターを含む。適切なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的及び／又は改変可能若しくは調節可能であり得る。有用なプロモーターには、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ ｐｏｌ ＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト前初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター及び当技術分野で既知のプロモーター－エンハンサーの組合せが含まれるが、これらに限定されない。
宿主細胞は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体を産生又は発現するために使用され得る。従って、本開示は、宿主細胞を用いてヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体を産生するための方法も特徴とする。一実施形態では、本方法は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する抗体が産生されるように、宿主細胞（抗体をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を適切な培地中で培養することを含む。別の実施形態では、方法は、培地又は宿主細胞から抗体を単離することを更に含む。適切な真核細胞としては、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞及びＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
モノクローナル抗体の産生
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えばＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、種々の技術によって産生され得る。モノクローナル抗体を産生するための多くの技術（例えば、Ｂリンパ球のウイルス性又は発癌性の形質転換）が使用され得る。
ハイブリドーマを調製するための動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、十分に確立された手順である。融合のための免疫化脾細胞の単離のための免疫化プロトコール及び技術は、当技術分野で既知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）及び融合手順も既知である。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。本発明のキメラ又はヒト化抗体及びその抗原結合断片は、上記のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製され得る。重鎖及び軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得られ得、標準的な分子生物学技術を使用して、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作され得る。例えば、キメラ抗体を作製するために、マウス可変領域は、当技術分野で既知の方法を使用してヒト定常領域に連結され得る（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらへの米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ領域を、当技術分野で既知の方法を用いてヒトフレームワークに挿入することができる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒへの米国特許第５，２２５，５３９号明細書並びにＱｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６２号明細書及び第６１８０３７０号明細書を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。ＥＮＴＰＤ２に対するこのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を保有するトランスジェニック又はトランスクロモソミックマウスを使用して生成され得る。これらのトランスジェニックマウス及びトランスクロモソミックマウスは、本明細書でそれぞれＨｕＭＡｂマウス及びＫＭマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書で集合的に「ヒトＩｇマウス」と呼ばれる。
ＨｕＭＡｂ Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｉｎｃ．）は、未再配列ヒト重鎖（μ及びγ）及びκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を、内因性μ及びκ鎖遺伝子座を不活性化する標的変異とともに含む（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－８５９を参照されたい）。従って、マウスは、マウスＩｇＭ又はＫの減少した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖及び軽鎖導入遺伝子は、クラススイッチング及び体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧ－κモノクローナルを生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ ｓｕｐｒａ；ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９４ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．，１９９５ Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３及びＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９５ Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６－５４６）。ＨｕＭＡｂマウスの調製及び使用並びにこのようなマウスによって担持されるゲノム改変は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７－６２９５；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：６４７－６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：３７２０－３７２４；Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７－１２３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９３ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：８２１－８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２－２９２０；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７９－５９１；及びＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５－８５１に更に記載されている。更に、全てＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙへの米国特許第５，５４５，８０６号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３，４２５号明細書；第５，７８９，６５０号明細書；第５，８７７，３９７号明細書；第５，６６１，０１６号明細書；第５，８１４，３１８号明細書；第５，８７４，２９９号明細書；第５，７７０，４２９号明細書；Ｓｕｒａｎｉらへの米国特許第５，５４５，８０７号明細書；全てＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙへのＰＣＴ公開国際公開第９２１０３９１８号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９７１１３８５２号パンフレット、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット及び国際公開第９９／４５９６２号パンフレット；並びにＫｏｒｍａｎらへのＰＣＴ公開国際公開第０１／１４４２４号パンフレットを参照されたい。
いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖トランスクロモソームを有するマウスのような、導入遺伝子及びトランスホモソーム上にヒト免疫グロブリン配列を有するマウスを使用して惹起され得る。本明細書で「ＫＭマウス」と呼ばれるこのようなマウスは、ＩｓｈｉｄａらへのＰＣＴ公開国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに詳細に記載される。
また更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスジェニック動物系は、当技術分野で利用可能であり、ＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片を惹起するために使用され得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｉｎｃ．）と呼ばれる別のトランスジェニック系を使用することができる。そのようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらへの米国特許第５，９３９，５９８号明細書；第６，０７５，１８１号明細書；第６，１１４，５９８号明細書；第６，１５０，５８４及び第６，１６２，９６３号明細書に記載されている。
更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスクロモソーム動物系は、当技術分野で利用可能であり、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体を惹起するために使用され得る。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖トランスクロモソーム及びヒト軽鎖トランスクロモソームの両方を保有するマウスを使用することができる；このようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：７２２－７２７に記載されている。更に、ヒト重鎖及び軽鎖トランスクロモソームを保有するウシは、当技術分野において記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：８８９－８９４）、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体を惹起するために使用され得る。
ヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用しても調製され得る。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、当技術分野で確立されているか、又は以下の実施例に記載されている。例えば、Ｌａｄｎｅｒらへの米国特許第５，２２３，４０９号明細書；第５，４０３，４８４号明細書；及び第５，５７１，６９８号明細書；Ｄｏｗｅｒらへの米国特許第５，４２７，９０８号明細書；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらへの米国特許第５，５８０，７１７号明細書、第５，９６９，１０８号明細書及び第６，１７２，１９７号明細書；並びにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらへの米国特許第５，８８５，７９３号明細書；第６，５２１，４０４号明細書；第６，５４４，７３１号明細書；第６，５５５，３１３号明細書；第６，５８２，９１５号明細書及び第６，５９３，０８１号明細書を参照されたい。
本発明のヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫細胞が再構成されたＳＣＩＤマウスを使用しても調製され得、その結果、ヒト抗体応答が、免疫化の際に生成され得る。このようなマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらへの米国特許第５，４７６，９９６号明細書及び第５，６９８，７６７号明細書に記載されている。
改変抗体の操作方法
上記のように、本明細書に示されるＶＨ及びＶＬ配列又は全長重鎖及び軽鎖配列を有するＥＮＴＰＤ２結合抗体は、全長重鎖及び／又は軽鎖配列、ＶＨ及び／又はＶＬ配列又はそれに付着した定常領域を改変することにより、新規ＥＮＴＰＤ２結合抗体を作製するために使用され得る。従って、本発明の別の態様では、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体の構造的特徴は、本発明の抗体及びその抗原結合断片の少なくとも１つの機能的特性（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２への結合及びヒトＥＮＴＰＤ２の阻害）を保持する、構造的に関連するＥＮＴＰＤ２結合抗体を作製するために使用される。
例えば、本発明の抗体及びその抗原結合断片の１つ以上のＣＤＲ領域又はその変異は、上記のように、既知のフレームワーク領域及び／又は他のＣＤＲと組換え的に組み合わされて、更なる組換え的に操作された、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片を作製し得る。他のタイプの改変には、前のセクションに記載されたものが含まれる。操作方法のための出発物質は、本明細書で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列の１つ以上又はその１つ以上のＣＤＲ領域である。操作された抗体を作製するために、本明細書で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列の１つ以上又はその１つ以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（すなわちタンパク質として発現させる）必要はない。むしろ、配列に含まれる情報を出発物質として使用して、元の配列に由来する「第２世代」配列を作製し、次いで「第２世代」配列を調製し、タンパク質として発現させる。
改変された抗体配列は、米国特許出願公開第２００５０２５５５５２号明細書に記載されるような固定ＣＤＲ３配列又は最小必須結合決定基並びにＣＤＲ１及びＣＤＲ２配列上の多様性を有する抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても調製され得る。スクリーニングは、ファージディスプレイ技術など、抗体ライブラリーから抗体をスクリーニングするのに適切な任意のスクリーニング技術に従って行うことができる。
標準的な分子生物学技術を使用して、改変された抗体配列を調製し、発現し得る。改変された抗体配列によってコードされる抗体は、本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２結合抗体の機能的特性の１つ、いくつか又は全てを保持するものであり、その機能的特性は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合し、安定化することを含むが、これらに限定されない。
改変された抗体の機能的特性は、当技術分野で利用可能であり且つ／又は本明細書に記載される標準的なアッセイ、例えば実施例に示されるもの（例えば、ＥＬＩＳＡ）を用いて評価することができる。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体及びその抗原結合断片を操作する方法では、変異をＥＮＴＰＤ２結合抗体コード配列の全部又は一部に沿って無作為に又は選択的に導入することができ、得られた改変ＥＮＴＰＤ２結合抗体を本明細書に記載の結合活性及び／又は他の機能特性についてスクリーニングすることができる。変異方法は、当技術分野で記載されている。例えば、ＰＣＴ公開国際公開第０２／０９２７８０号パンフレットは、飽和変異誘発、合成ライゲーションアセンブリ又はそれらの組合せを使用して、抗体変異を作製及びスクリーニングするための方法を記載する。代わりに、ＰＣＴ公開国際公開第０３／０７４６７９号パンフレットは、抗体の生理化学的特性を最適化するために計算スクリーニング法を使用する方法を記載する。
抗体の特徴付け
本発明の抗体及びその抗原結合断片は、種々の機能的アッセイによって特徴付けることができる。例えば、それらは、ＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に結合するそれらの能力によって特徴付けることができる。
ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）に結合する抗体の能力は、目的の抗体を直接標識することによって検出され得るか、又は抗体は、非標識であり得、結合は、当技術分野で既知の種々のサンドイッチアッセイフォーマットを使用して間接的に検出され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片は、参照ＥＮＴＰＤ２結合抗体のＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）への結合をブロックするか、又はそれと競合する。これらは、上記の完全ヒト又はヒト化ＥＮＴＰＤ２結合抗体であり得る。それらは、参照抗体と同じエピトープに結合する他のヒト、マウス、キメラ又はヒト化ＥＮＴＰＤ２結合抗体でもあり得る。参照抗体結合をブロック又は競合する能力は、試験下のＥＮＴＰＤ２結合抗体が参照抗体により規定されるものと同じ又は類似のエピトープ又は参照ＥＮＴＰＤ２結合抗体と結合するエピトープに十分に近いエピトープに結合することを示す。このような抗体は、特に、参照抗体について同定された有利な特性を共有するようである。参照抗体をブロック又は競合する能力は、例えば、競合結合アッセイによって決定され得る。競合結合アッセイを用いて、試験下の抗体を、ＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）のような共通抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害する能力について試験する。過剰の試験抗体が参照抗体の結合を実質的に阻害する場合、試験抗体は、抗原への特異的結合について参照抗体と競合する。実質的な阻害とは、試験抗体が参照抗体の特異的結合を、通常、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％又は９０％減少させることを意味する。
特定のタンパク質（この場合、ＥＮＴＰＤ２（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質））への結合について、参照抗体との抗体の競合を評価するために使用され得る、多数の既知の競合結合アッセイが存在する。これらには、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接若しくは間接酵素免疫分析（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３，１９８３を参照されたい）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９，１９８６を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ、前出を参照されたい）、Ｉ－１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５，１９８８を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２，１９９０）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２，１９９０）が含まれる。典型的には、このようなアッセイは、固体表面又はこれらのいずれかを有する細胞、非標識試験ＥＮＴＰＤ２結合抗体及び標識参照抗体に結合した精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体及び立体障害が生じるために参照抗体によって結合されるエピトープに十分に近い隣接エピトープに結合する抗体を含む。
選択されたＥＮＴＰＤ２結合モノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを決定するために、各抗体は、市販の試薬（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌからの試薬）を使用してビオチン化され得る。非標識モノクローナル抗体及びビオチン化モノクローナル抗体を用いる競合研究は、ＥＮＴＰＤ２タンパク質コートＥＬＩＳＡプレートを用いて行うことができる。ビオチン化ＭＡｂ結合は、ストレプトアビジン－アルカリホスファターゼプローブを用いて検出することができる。精製ＥＮＴＰＤ２結合抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡを行うことができる。例えば、マイクロタイタープレートのウェルを４℃で一晩、１μｇ／ｍｌの抗ヒトＩｇＧで被覆することができる。１％ ＢＳＡでブロックした後、プレートを周囲温度で１～２時間、１μｇ／ｍｌ以下のモノクローナルＥＮＴＰＤ２結合抗体又は精製アイソタイプ対照と反応させる。次いで、ウェルをヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＭ特異的アルカリホスファターゼ結合プローブのいずれかと反応させることができる。次いで、プレートを展開し、分析して、精製された抗体のアイソタイプを決定し得る。
ＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）を発現する生細胞へのモノクローナルＥＮＴＰＤ２結合抗体の結合を実証するために、フローサイトメトリーを使用することができる。簡潔には、ＥＮＴＰＤ２を発現する細胞株（標準的な増殖条件下で増殖させた）を、０．１％ ＢＳＡ及び１０％ウシ胎仔血清を含有するＰＢＳ中の種々の濃度のＥＮＴＰＤ２結合抗体と混合し、３７℃で１時間インキュベートすることができる。洗浄後、細胞を一次抗体染色と同じ条件下でフルオレセイン標識抗ヒトＩｇＧ抗体と反応させる。サンプルを、光及び側方散乱特性を用いてＦＡＣＳｃａｎ装置によって分析して、単一細胞をゲートオンすることができる。フローサイトメトリーアッセイ（に加えて又はその代わりに）、蛍光顕微鏡法を使用する代替アッセイを使用し得る。細胞は、上記のように正確に染色され得、蛍光顕微鏡によって試験され得る。この方法は、個々の細胞の可視化を可能にするが、抗原の密度に依存して減少した感度を有し得る。
本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）又は抗原性断片との反応性について、ウェスタンブロッティングによって更に試験され得る。簡潔には、精製されたＥＮＴＰＤ２タンパク質（例えば、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質）又は融合タンパク質又はＥＮＴＰＤ２を発現する細胞からの細胞抽出物を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。電気泳動後、分離した抗原をニトロセルロース膜に移し、１０％ウシ胎仔血清でブロックし、試験すべきモノクローナル抗体でプローブする。ヒトＩｇＧ結合は、抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼを使用して検出され得、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質錠剤（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を用いて展開され得る。
本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片は、１つ以上のＥＮＴＰＤ２活性／機能を調節するそれらの能力について更に試験され得る。
本発明のＥＮＴＰＤ２結合抗体及びその抗原結合断片は、実施例に記載される任意の方法又はアッセイを使用しても試験され得る。
処置方法及び治療的使用
本発明の抗体は、ＥＮＴＰＤ２依存性病態生理学を伴う障害の診断及び処置を含む、多数のインビトロ及びインビボの診断及び治療的有用性を有する。例えば、これらの分子は、培養物中の細胞に、インビトロ又はエクスビボで又はヒト対象に例えばインビボで投与して、ＥＮＴＰＤ２依存性病態生理を有する様々な障害を処置、予防及び診断することができる。従って、本明細書で提供される一態様では、治療有効量の本明細書に記載の抗体又はその抗原結合断片、このような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸、このような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含むベクター、このような核酸又はベクターを含む細胞又はこのような抗体又は抗原結合断片、核酸、ベクター又は細胞を含む医薬組成物を対象に投与することにより、処置を必要とする対象における癌を処置する方法が提供される。一態様では、本発明は、治療有効量の本明細書に開示される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体を対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害又は減少させる方法を提供する。
別の態様では、対象における過剰増殖性の状態又は障害（例えば、癌）、例えば固形腫瘍、血液癌、軟組織腫瘍又は転移性病変を処置、例えば減少又は改善する方法が提供される。
従って、一実施形態では、本発明は、治療有効量の、本明細書に記載されるような１つ以上の抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子又はその機能的断片を単独で又は他の薬剤、例えば治療薬又は治療様式と組み合わせて対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、このような方法は、対象から得られたサンプル、例えば対象の組織生検中のＥＮＴＰＤ２の発現レベルをアッセイするステップを更に含むことができる。
用語癌は、病理組織学的種類又は侵襲性の段階に関わらず、全ての種類の癌性増殖又は発癌プロセス、転移性組織又は悪性に形質転換した細胞、組織若しくは臓器を含むものとする。癌性障害の例としては、固形腫瘍、軟部組織腫瘍及び転移巣が挙げられるが、これらに限定されない。固形腫瘍の例としては、肝臓、肺、乳房、リンパ系、胃腸管系（例えば、結腸）、尿生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭を冒すものなど、様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば肉腫、腺癌及び癌腫が挙げられる。腺癌は、悪性腫瘍、例えば殆どの結腸癌（例えば、ＭＳＳ結腸直腸癌）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌、直腸癌、腎－細胞癌腫、肝癌（肝細胞癌、例えばウイルス感染を有する又は有さない進行性細胞癌、例えば慢性ウイルス肝炎）、肺の非小細胞癌、小腸癌及び食道の癌を含む。扁平上皮癌は、例えば、肺、食道、皮膚、頭部及び頸部領域、口腔、肛門並びに子宮頸部内の悪性腫瘍を含む。
前述の癌の転移性病変も、本発明の方法及び組成物を用いて処置又は予防することができる。
本明細書に開示される抗体分子を用いて増殖を阻害することができる例示的な癌には、典型的には、免疫療法に応答する癌が含まれる。処置のための好ましい癌の非限定的な例は、胃腸管癌（例えば、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ））及び食道の癌（例えば、食道扁平上皮癌（ＥＳＣＣ））膵癌及び胆管癌を含む。更に、難治性又は再発性の悪性腫瘍は、本明細書に記載される抗体分子を使用して処置され得る。
処置可能な他の癌の例としては、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮及び／又は非扁平上皮組織を有するＮＳＣＬＣ又はＮＳＣＬＣ腺癌）、黒色腫（例えば、進行黒色腫）、腎癌（例えば、腎細胞癌、例えば腎明細胞癌）、肝臓癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体又はＨｅｒ２／ｎｅｕの１つ、２つ又は全てを発現しない乳癌、例えばトリプルネガティブ乳癌）、膵癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、肛門癌、胃食道癌、甲状腺癌、子宮頸癌、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）又は血液癌、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は白血病（例えば、骨髄性白血病）、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭部又は頸部の癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃食道癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児の固形癌、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓癌（例えば、腎癌、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣ又は明細胞腎細胞癌など））、尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発される癌を含む環境誘発癌及び前記癌の組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書の療法を使用して、感染、例えばウイルス性又は細菌感染と関連する癌を有する（又は有すると診断された）患者を治療することができる。例示的な癌としては、子宮頸癌、肛門癌、ＨＰＶ関連頭頸部扁平上皮癌、ＨＰＶ関連食道性パピローマ、ＨＨＶ６関連リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫（バーキットリンパ腫を含む）、胃のＭＡＬＴリンパ腫、他の感染関連ＭＡＬＴリンパ腫、ＨＣＣ及びカポジ肉腫が挙げられる。
他の実施形態では、癌は、白血病又はリンパ腫を含むが、これらに限定されない血液悪性腫瘍又は癌である。例えば、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子又はその抗原結合フラグメントのみ若しくは治療薬等の他の薬剤との組み合わせを使用して、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含むが、これらに限定されない、例えば急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない１つ以上の慢性白血病；例えば、Ｂ細胞前リンパ性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞又は大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症及び骨髄血液細胞の無効な産生（又は形成異常）によってまとめられる血液学的病態の多様な集合体である「前白血病」などを含むが、これらに限定されない、更なる血液癌又は血液病態を含むが、これらに限定されない癌及び悪性腫瘍を治療することができる。
一実施形態では、癌は、結腸癌（例えば、結腸直腸癌（ＣＲＣ）又は結腸直腸腺癌）、胃癌（例えば、胃腺癌、胃癌種）、食道癌（例えば、食道扁平上皮癌（ＥＳＣＣ））、膵癌、胆管癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌）、乳癌（例えば、乳腺癌）又は卵巣癌から選択される。
一実施形態では、癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）又は結腸直腸腺癌である。
別の実施形態では、癌は、胃癌である。
更に別の実施形態では、癌は、食道扁平上皮癌（ＥＳＣＣ）である。
更に別の実施形態では、癌は、ＥＮＴＰＤ２＋ＣＲＣ、ＥＮＴＰＤ２＋胃癌（例えば、ＥＮＴＰＤ２胃癌）、ＥＮＴＰＤ２＋食道扁平上皮癌（ＥＮＴＰＤ２＋ＥＳＣＣ）などのＥＮＴＰＤ２（ＥＮＴＰＤ２陽性／ＥＮＴＰＤ２＋）を過剰発現している。
本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片、そのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸又はそのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含むベクター又は細胞又はそのような抗体又は抗原結合断片、核酸、ベクター又は細胞を含む医薬組成物は、静脈内、腫瘍内又は皮下経路を介して対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、このような抗体又はその断片、核酸、ベクター、細胞又は医薬組成物は、静脈内に投与される。
また、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片、そのような抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物、そのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸又はそのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含むベクターも提供され、癌の処置に使用される。
本開示は、癌の処置のための薬剤の製造における、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片、そのような抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物、そのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸又はそのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含むベクターの使用も含む。
組合せ療法
上記の様々な処置は、別の処置と組み合わせることができる。本開示は、本明細書に記載される開示による組合せを、特に癌の処置におけるそれらの同時、別々の又は連続的な使用（特に共同で活性であるための）のための説明書とともに含む医薬組成物にも関する。例えば、本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２抗体又はその抗原結合断片は、以下に記載されるように、１つ以上の標準的な治療（例えば、癌について）、別の抗体分子、免疫モジュレーター（例えば、共刺激分子のアクチベーター又は共阻害分子の阻害剤）；ワクチン（例えば、治療的癌ワクチン）；又は他の形態の細胞治療と組み合わせられ得る。
従って、本明細書に記載される癌を処置する方法は、処置を必要とする対象に少なくとも１つの追加の治療薬を投与することを更に含むことができる。処置を必要とする対象に少なくとも２つの追加の治療薬を投与することを含む、癌を処置する方法も本明細書で提供される。
用語「組合せ」は、１つの単位剤形における固定された組合せ又は本発明の化合物と少なくとも１つの組合せパートナー（例えば、以下に説明するような少なくとも１つの他の薬物、「治療薬」又は「補助薬剤」とも呼ばれる）とが、独立して同時に又は時間隔内で別々に投与され得、特に、これらの時間隔が、組合せパートナーが協同的、例えば相乗効果を示すことを可能にする、組み合わされた投与のいずれかを指す。単一の成分は、キットに又は別々に包装され得る。成分の一方又は両方（例えば、粉末又は液体）は、投与前に所望の用量に再構成又は希釈され得る。用語「同時投与」又は「組み合わされた投与」などは、本明細書で使用される場合、選択された組合せパートナーの、それを必要とする単一の対象（例えば、患者）への投与を包含することを意味し、薬剤が必ずしも同じ投与経路によって又は同時に投与されるわけではない処置レジメンを意図する。本明細書で使用される「医薬組合せ」という用語は、２つ以上の治療薬の混合又は組合せから生じる製品を意味し、治療薬の固定された組合せ及び固定されていない組合せの両方を含む。「固定された組合せ」という用語は、治療薬、例えば本発明の化合物及び組合せパートナーの両方が単一の実体又は投与量の形態で同時に患者に投与されることを意味する。「固定されていない組合せ」という用語は、治療薬、例えば本発明の化合物及び少なくとも１つの組合せパートナーが別々の実体として、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）又は特定の時間限界なしに連続して、患者に投与されることを意味し、このような投与は、患者の体内で少なくとも２つの化合物の治療的に有効なレベルを提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の治療薬の投与にも適用される。
本明細書で使用される用語「医薬組合せ」は、１つの単位剤形における固定された組合せ若しくは非固定の組合せ又は組合せ投与のための部分のキットのいずれかを指し、ここで、２つ以上の治療薬は、独立して同時に又は時間隔内で別々に投与され得、特に、これらの時間隔は、組合せパートナーが協同的、例えば相乗効果を示すことを可能にする。
「組合せ療法」という用語は、本開示に記載される治療的状態又は障害を処置するための２つ以上の治療薬の投与を指す。このような投与は、固定された比率の活性成分を有する単一のカプセルにおけるような実質的に同時の様式でのこれらの治療薬の同時投与を包含する。代わりに、このような投与は、各活性成分について、複数の又は別個の容器（例えば、錠剤、カプセル、粉末及び液体）中での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体は、投与前に所望の用量に再構成又は希釈され得る。加えて、このような投与は、ほぼ同時に又は異なる時点のいずれかにおいて、連続的な様式での各型の治療薬の使用も包含する。いずれの場合も、処置レジメンは、本明細書に記載の状態又は障害を処置する際に、薬物組合せの有益な効果を提供する。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、他の療法と組み合わせて使用され得る。例えば、組合せ療法は、１つ以上の追加の治療薬、例えば１つ以上の抗癌剤、細胞傷害性薬剤又は細胞分裂阻害剤、ホルモン治療、ワクチン及び／又は他の免疫療法と同時に製剤化され、且つ／又は同時投与される本発明の組成物を含み得る。他の実施形態では、抗体分子は、外科手術、放射線照射、凍結手術及び／又は温熱療法を含む他の療法の治療モダリティと組み合わせて投与される。このような組合せ療法は、より少ない投与量の投与される治療薬を有利に利用し、それにより様々な単剤療法と関連した起こり得る毒性又は合併症を回避し得る。
「～と組み合わせて」は、療法又は治療薬が同時に投与される必要があり、且つ／又は送達のために合わせて製剤化される必要があることを意味することを意図するものではないが、これらの送達方法は、本明細書に記載される範囲内にある。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、少なくとも１つ以上の他の追加の療法又は治療薬と同時に、その前に又はその後に投与され得る。抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子及び他の少なくとも１つの薬剤又は治療プロトコールは、任意の順序で施され得る。一般に、各薬剤は、その薬剤のために決定された用量及び／又は時間スケジュールで投与されることになる。この組合せにおいて利用される少なくとも１つの追加の治療薬は、単一の組成物中において合わせて投与され得るか、又は異なる組成物中において別々に投与され得ることが更に理解されるであろう。一般に、組合せにおいて利用される追加の治療薬は、それらが個別に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが期待される。いくつかの実施形態では、組合せに利用されるレベルは、個別に利用されるものより低くなるであろう。
従って、とりわけ本開示は、同時の、別々の又は連続した使用のための組合せ産生物、例えば組合せ製剤又は医薬的な固定された組合せ又はそのような製剤及び組合せの組合せに関する。
例示的なアデノシンＡ２Ａ受容体アンタゴニスト
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２分子は、少なくとも１つのアデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）アンタゴニストと組み合わせて投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２分子は、少なくとも２つアデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）アンタゴニストと組み合わせて投与される。例示的なＡ２ＡＲアンタゴニストには、例えば、ＰＢＦ５０９／ＮＩＲ１７８（Ｐａｌｏｂｉｏｆａｒｍａ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＰＩ４４４／Ｖ８１４４４（Ｃｏｒｖｕｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＺＤ４６３５／ＨＴＬ－１０７１（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｈｅｐｔａｒｅｓ）、ビパデナント（Ｒｅｄｏｘ／Ｊｕｎｏ）、ＧＢＶ－２０３４（Ｇｌｏｂａｖｉｒ）、ＡＢ９２８（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、テオフィリン、イストラデフィリン（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ）、トザデナント／ＳＹＮ－１１５（Ａｃｏｒｄａ）、ＫＷ－６３５６（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ）、ＳＴ－４２０６（Ｌｅａｄｉａｎｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びプレラデナント／ＳＣＨ ４２０８１４（Ｍｅｒｃｋ／Ｓｃｈｅ環）が含まれるがこれらに限定されない。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、ＰＢＦ５０９／ＮＩＲ１７８である。ＰＢＦ５０９／ＮＩＲ１７８及び他のＡ２ＡＲアンタゴニストは、米国特許第８，７９６，２８４号明細書及び国際公開第２０１７／０２５９１８号パンフレットに開示されている（それらの全体は、参照により組み込まれる）。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、５－ブロモ－２，６－ジ－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－４－アミン又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、以下の構造：
Figure 2022548881000066
又はその薬学的に許容される塩を有する。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、ＣＰＩ４４４／Ｖ８１４４４である。ＣＰＩ－４４４及び他のＡ２ＡＲアンタゴニストは、全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００９／１５６７３７号パンフレットに開示される。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、（Ｓ）－７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－（（６－（（（テトラヒドロフラン－３－イル）オキシ）メチル）ピリジン－２－イル）メチル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、（Ｒ）－７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－（（６－（（（テトラヒドロフラン－３－イル）オキシ）メチル）ピリジン－２－イル）メチル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン若しくはそのラセミ体又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－（（６－（（（テトラヒドロフラン－３－イル）オキシ）メチル）ピリジン－２－イル）メチル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、以下の構造：
Figure 2022548881000067
又はその薬学的に許容される塩を有する。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、ＡＺＤ４６３５／ＨＴＬ－１０７１である。Ａ２ＡＲアンタゴニストは、全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１／０９５６２５号パンフレットに開示される。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、６－（２－クロロ－６－メチルピリジン－４－イル）－５－（４－フルオロフェニル）－１，２，４－トリアジン－３－アミン又はその薬学的に許容される塩である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、以下の構造：
Figure 2022548881000068
又はその薬学的に許容される塩を有する。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、ＳＴ－４２０６（Ｌｅａｄｉａｎｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）である。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，１３３，１９７号明細書において記載される。特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、以下の構造：
Figure 2022548881000069
又はその薬学的に許容される塩を有する。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８１１４８４５号明細書、米国特許第９０２９３９３号明細書、米国特許出願公開第２０１７００１５７５８号明細書又は米国特許出願公開第２０１６０１２９１０８号明細書において記載されるＡ２ＡＲアンタゴニストである。
特定の実施形態では、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、イストラデフィリン（ＣＡＳ登録番号：１５５２７０－９９－８）である。イストラデフィリンは、ＫＷ－６００２又は８－［（Ｅ）－２－（３，４－ジメトキシフェニル）ビニル］－１，３－ジエチル－７－メチル－３，７－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－２，６－ジオンとしても知られる。イストラデフィリンは、例えば、ＬｅＷｉｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｎａｌｓｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６３（３）：２９５－３０２）に開示される。
特定の実施形態では、Ａ２ａＲアンタゴニストは、トザデナント（Ｂｉｏｔｉｅ）である。トザデナントは、ＳＹＮ１１５又は４－ヒドロキシ－Ｎ－（４－メトキシ－７－モルホリン－４－イル－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－４－メチルピペリジン－１－カルボキサミドとしても知られる。トザデナントは、Ａ２ａ受容体で内在性アデノシンの作用を遮断して、Ｄ２受容体でのドーパミンの作用の増強及びｍＧｌｕＲ５受容体でのグルタミン酸塩の作用の阻害をもたらす。いくつかの実施形態では、Ａ２ａＲアンタゴニストは、プレラデナント（ＣＡＳ登録番号：３７７７２７－８７－２）である。プレラデナントは、ＳＣＨ４２０８１４又は２－（２－フラニル）－７－［２－［４－［４－（２－メトキシエトキシ）フェニル］－１－ピペラジニル］エチル］７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－５－アミンとしても知られる。プレラデナントは、アデノシンＡ２Ａ受容体で強力且つ選択的なアンタゴニストとして作用する薬物として開発された。
特定の実施形態では、Ａ２ａＲアンタゴニストは、ビパデナンである。ビパデナンは、ＢＩＩＢ０１４、Ｖ２００６又は３－［（４－アミノ－３－メチルフェニル）メチル］－７－（フラン－２－イル）トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミンとしても知られる。
他の例示的なＡ２ａＲアンタゴニストとしては、例えば、ＡＴＬ－４４４、ＭＳＸ－３、ＳＣＨ－５８２６１、ＳＣＨ－４１２，３４８、ＳＣＨ－４４２，４１６、ＶＥＲ－６６２３、ＶＥＲ－６９４７、ＶＥＲ－７８３５、ＣＧＳ－１５９４３又はＺＭ－２４１，３８５が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ａ２ａＲアンタゴニストは、Ａ２ａＲ経路アンタゴニスト、例えばＣＤ－７３阻害剤、例えば抗ＣＤ７３抗体である。ＣＤ７３によるアデノシンの細胞外産生を標的化することにより、アデノシンの免疫抑制性の作用が低減され得る。抗ＣＤ７３抗体は、例えば、ＣＤ７３エクトヌクレオチダーゼ活性の阻害、ＡＭＰ媒介性リンパ球抑制からの解放及び同系の腫瘍増殖の阻害などのある範囲の活性を有する。抗ＣＤ７３抗体は、腫瘍微小環境内の骨髄性及びリンパ系の浸潤性白血球集団の両方において変化を促進し得る。これらの変化としては、例えば、ＣＤ８エフェクター細胞及び活性マクロファージの増加並びに骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び制御性Ｔリンパ球の割合における減少が挙げられる。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、完全抗体分子又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、表２に列挙される抗体分子のいずれかから選択される。他の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、表２に開示されている重鎖可変ドメイン配列、軽鎖可変ドメイン配列又は両方を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３タンパク質に結合し、ＣＤ７３、例えばヒトＣＤ７３の活性を低下させ、例えば阻害又は拮抗する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０７５０９９号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば国際公開第２０１６／０７５０９９号パンフレットに開示されているＭＥＤＩ ９４４７である。ＭＥＤＩ ９４４７の代替的な名称は、クローン１０．３又は７３ｃｏｍｂｏ３を含む。ＭＥＤＩ ９４４７は、例えば、ＣＤ７３の活性を阻害する、例えば拮抗するＩｇＧ１抗体である。ＭＥＤＩ ９４４７及び他の抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０７５１７６号パンフレット及び米国特許第２０１６／０１２９１０８号明細書にも開示され、その全容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＭＥＤＩ ９４７７の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＭＥＤＩ ９４７７の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２９５として開示されている（表２を参照されたい）。ＭＥＤＩ ９４７７の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２９６として開示されている（表２を参照されたい）。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレットに開示されている１１Ｆ１１である。１１Ｆ１１は、ＣＤ７３の活性を阻害する、例えば拮抗する、ＩｇＧ２抗体である。１１Ｆ１１由来の抗体、例えばＣＤ７３．４及びＣＤ７３．１０；１１Ｆ１１のクローン、例えば１１Ｆ１１－１及び１１Ｆ１１－２；並びに他の抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０８１７４８号パンフレット及び米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示され、その全容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、１１Ｆ１１－１又は１１Ｆ１１－２の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。１１Ｆ１１－１の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０２として開示されている（表２を参照されたい）。１１Ｆ１１－１の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０３として開示されている（表２を参照されたい）。１１Ｆ１１－２の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２９９として開示されている（表２を参照されたい）。１１Ｆ１１－２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３００として開示されている（表２を参照されたい）。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、１１Ｆ１１－１又は１１Ｆ１１－２の重鎖、軽鎖又は両方を含む。１１Ｆ１１－１の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号２９７及び配列番号３０１として開示されている（表２を参照されたい）。１１Ｆ１１－２の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号２９４及び配列番号２９８として開示されている（表２を参照されたい）。
一実施形態では、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示されているＣＤ７３．４である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３．４の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＣＤ７３．４の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０４として開示されている（表２を参照されたい）。１１Ｆ１１－２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０５として開示されている（表２を参照されたい）。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，６０５，０８０号明細書に開示されているＣＤ７３．１０である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＣＤ７３．１０の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。ＣＤ７３．１０の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０６として開示されている（表２を参照されたい）。ＣＤ７３．１０の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０７として開示されている（表２を参照されたい）。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００９／０２０３５３８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、国際公開第２００９／０２０３５３８号パンフレットに開示されている０６７－２１３である。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、０６７－２１３の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。０６７－２１３の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０８（表２を参照されたい）として開示されている。０６７－２１３の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、配列番号３０９（表２を参照されたい）として開示されている。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，０９０，６９７号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、例えば、米国特許第９，０９０，６９７号明細書に開示されているＴＹ／２３である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＴＹ／２３の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／０５５６０９号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１４６８１８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１６／１４６８１８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００４／０７９０１３号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００４／０７９０１３号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２／１２５８５０号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１２／１２５８５０号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／００４４００号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２０１５／００４４００号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００７／１４６９６８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、国際公開第２００７１４６９６８号パンフレットに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２００７／００４２３９２号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許第２００７／００４２３９２号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２００９／０１３８９７７号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、米国特許第２００９／０１３８９７７号明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＦｌｏｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９２ Ｊｕｎ；５８（１）：６２－７０に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｆｌｏｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９２ Ｊｕｎ；５８（１）：６２－７０に開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｔａｇｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ．２０１０ Ｊａｎ １０７（４）：１５４７－１５５２に開示されている抗ＣＤ７３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｓｔａｇｇらに開示されているＴＹ／２３又はＴＹ１１．８である。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｓｔａｇｇらに開示されている抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン又は両方を含む。
一実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、例えば本明細書に記載される抗ＣＤ７３抗体分子及び任意選択的にＰＢＦ５０９／ＮＩＲ１７８、ＣＰＩ４４４／Ｖ８１４４４、ＡＺＤ４６３５／ＨＴＬ－１０７１、ビパデナント、ＧＢＶ－２０３４、ＡＢ９２８、テオフィリン、イストラデフィリン、トザデナント／ＳＹＮ－１１５、ＫＷ－６３５６、ＳＴ－４２０６及びプレラデナント／ＳＣＨ ４２０８１４からなる群から選択されるＡ２ＡＲアンタゴニストと組み合わせて投与される。
Figure 2022548881000070
Figure 2022548881000071
本明細書に開示される組合せ療法に使用される抗ＣＤ７３抗体分子は、表２に開示されるＶＨ／ＶＬ配列のいずれか又はそれと実質的に同一の（例えば、それと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列を含み得る。ＣＤ７３抗体についての例示的な配列は、以下を含む：
（ｉ）ＭＥＤＩ ９４４７のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号２９５－２９６又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２９５－２９６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｉ）１１Ｆ１１－２のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、それぞれ配列番号２９７－２９８又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２９７－２９８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｉｉ）１１Ｆ１１－２のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号２９９－３００又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２９９－３００と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｉｖ）１１Ｆ１１－１のＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、それぞれ配列番号２９７及び３０１又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号２９７及び３０１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖ）１１Ｆ１１－１のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号３０２－３０３又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号３０２－３０３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖｉ）ＣＤ７３．４のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号３０４－３０５又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号３０４－３０５と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；
（ｖｉｉ）ＣＤ７３．１０のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号３０６－３０７又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号３０６－３０７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列；又は
（ｖｉｉｉ）０６７－２１３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、それぞれ配列番号３０８－３０９又はそれと実質的に同一の（例えば、配列番号３０８－３０９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれを超えて同一の）アミノ酸配列。
本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、共阻害分子の阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体分子）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子）、ＰＤ－Ｌ２阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体分子）、ＬＡＧ－３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体分子）、ＴＩＭ－３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体分子））、共刺激分子の活性化因子（例えば、ＧＩＴＲ作動薬（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子））、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）の可溶型と複合体化されたＩＬ－１５）又は任意のそれらの組合せと組み合わされ得る。
ＰＤ－１阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載されるＥＮＴＰＤ２抗体は、ＰＤ－１阻害剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、ピディリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＢＧＢ－１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）又はＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）から選択される。
例示的なＰＤ－１阻害剤
一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体分子である。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、全体が参照により組み込まれる「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ－１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称で２０１５年７月３０日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書において記載される通りの抗ＰＤ－１抗体分子である。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、表３に示されるか（例えば、表３に開示されるＢＡＰ０４９－クローン－Ｅ又はＢＡＰ０４９－クローン－Ｂの重鎖及び軽鎖可変領域配列）又は表３に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は一括して全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義に従う（例えば、表３に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従う（例えば、表３に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わされたＣＤＲ定義に従う（例えば、表３に記載される通り）。一実施形態では、ＶＨＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号５４１）を含む。一実施形態では、ＣＤＲの１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えば表３に示されるか、又は表３に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対するアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、それぞれ表３に開示される配列番号５０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号５１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号５１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗体分子は、それぞれ表３に開示される配列番号５２４のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号５２５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号５２６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに配列番号５２９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号５３０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号５３１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列又は配列番号５０６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５２０のアミノ酸配列又は配列番号５２０と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５１６のアミノ酸配列又は配列番号５１６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５２０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列又は配列番号５０７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５２１若しくは５１７のヌクレオチド配列又は配列番号５２１若しくは５１７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号５２１又は５１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列又は配列番号５０８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５２２のアミノ酸配列又は配列番号５２２と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％以上同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５１８のアミノ酸配列又は配列番号５１８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、配列番号５０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列又は配列番号５０９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５２３若しくは５１９のヌクレオチド配列又は配列番号５２３若しくは５１９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号５０９のヌクレオチド配列によってコード重鎖及び配列番号５２３又は５１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗体分子は、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製され得る。
Figure 2022548881000072
Figure 2022548881000073
Figure 2022548881000074
Figure 2022548881000075
Figure 2022548881000076
Figure 2022548881000077
他の例示的なＰＤ－１阻害剤
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＭＤＸ－１１０６、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８又はＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他の抗ＰＤ－１抗体は、全体が参照により組み込まれる米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示される。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ニボルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は例えば表４に開示されている重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ－９００４７５又はＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）としても知られるペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）である。ペムブロリズマブ及び他の抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示され、それらの全体は、参照により組み込まれる。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ペムブロリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は例えば表４に開示されている重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＣＴ－０１１としても知られるピディリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）である。ピディリズマブ及び他の抗ＰＤ－１抗体は、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３４（５）：４０９－１８、米国特許第７，６９５，７１５号明細書、米国特許第７，３３２，５８２号明細書及び米国特許第８，６８６，１１９号明細書、に開示されており、それらの全体は、参照により組み込まれる。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ピディリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は例えば表４に開示されている重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＡＭＰ－５１４としても知られるＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）である。ＭＥＤＩ０６８０及び他の抗ＰＤ－１抗体は、米国特許第９，２０５，１４８号明細書及び国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレットに開示され、それらの全体は、参照により組み込まれる。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＭＥＤＩ０６８０のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＲＥＧＮ２８１０のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＰＦ－０６８０１５９１のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＢＧＢ－Ａ３１７又はＢＧＢ－１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＢＧＢ－Ａ３１７又はＢＧＢ－１０８のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ０１２１０又はＳＨＲ－１２１０としても知られるＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＩＮＣＳＨＲ１２１０のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＡＮＢ０１１としても知られるＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＴＳＲ－０４２のＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
更なる既知の抗ＰＤ－１抗体は、例えば、国際公開第２０１５／１１２８００号パンフレット、国際公開第２０１６／０９２４１９号パンフレット、国際公開第２０１５／０８５８４７号パンフレット、国際公開第２０１４／１７９６６４号パンフレット、国際公開第２０１４／１９４３０２号パンフレット、国際公開第２０１４／２０９８０４号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、米国特許第８，７３５，５５３号明細書、米国特許第７，４８８，８０２号明細書、米国特許第８，９２７，６９７号明細書、米国特許第８，９９３，７３１号明細書及び米国特許第９，１０２，７２７号明細書（それらの全体が参照により組み込まれる）に開示されているものを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ－１抗体の１つと結合に関して競合し、且つ／又は本明細書に記載される抗ＰＤ－１抗体の１つと同じＰＤ－１上のエピトープに結合する抗体である。
一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、例えば、その全体が参照により組み込まれる米国特許第８，９０７，０５３号明細書に記載されるように、ＰＤ－１シグナル伝達経路を阻害するペプチドである。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシンである。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレット（それらの全体が参照により組み込まれる）に開示されているＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇ（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）である。
Figure 2022548881000078
一実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、本明細書に記載される少なくとも１つのＰＤ１阻害剤及び本明細書に記載される少なくとも１つのＡ２Ａ受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。
ＰＤ－Ｌ１阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤と組み合わせて投与される。ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）としても知られるアテゾリズマブ、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ及びＰｆｉｚｅｒ）としても知られるアベルマブ、Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）としても知られるデュルバルマブ又はＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）から選択される。
例示的なＰＤ－Ｌ１阻害剤
一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子である。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ－Ｌ１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の２０１６年４月２１日公開の米国特許第２０１６／０１０８１２３号明細書（その全体が参照により組み込まれる）に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子である。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表５に示すアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域からの（例えば、表５に開示したＢＡＰ０５８－クローン Ｏ又はＢＡＰ０５８－クローン Ｎの重鎖及び軽鎖可変領域配列からの）又は表５に示すヌクレオチド配列によりコードされる少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は集合的に、ＣＤＲの全部）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義（例えば、表５に示すような）に従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義（例えば、表５に示すような）に従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わされたＣＤＲ定義（例えば、表５に示すような）に従う。一実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組合せは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹ（配列番号６４７）を含む。一実施形態では、ＣＤＲの１つ以上（又は集合的に、ＣＤＲの全部）は、表５に示すアミノ酸配列又は表５に示すヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えばアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、それぞれ表５に開示されている、配列番号６０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号６０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号６０９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号６１０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号６１１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、それぞれ表５に開示されている、配列番号６２８のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号６２９のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号６３０のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに配列番号６３３のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号６３４のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号６３５のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６０６のアミノ酸配列又は配列番号６０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６１６のアミノ酸配列又は配列番号６１６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２０のアミノ酸配列又は配列番号６２０と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２４のアミノ酸配列又は配列番号６２４と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６２４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号６０７のヌクレオチド配列又は配列番号６０７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６１７のヌクレオチド配列又は配列番号６１７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２１のヌクレオチド配列又は配列番号６２１と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２５のヌクレオチド配列又は配列番号６２５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６０７のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬ及び配列番号６１７のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２１のヌクレオチド配列によりコードされるＶＨ及び配列番号６２５のヌクレオチド配列によりコードされるＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６０８のアミノ酸配列又は配列番号６０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６１８のアミノ酸配列又は配列番号６１８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２２のアミノ酸配列又は配列番号６２２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２６のアミノ酸配列又は配列番号６２６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号６２２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号６１５のヌクレオチド配列又は配列番号６１５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６１９のヌクレオチド配列又は配列番号６１９と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２３のヌクレオチド配列又は配列番号６２３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２７のヌクレオチド配列又は配列番号６２７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％又はそれを超えて同一のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６１５のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖及び配列番号６１９のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号６２３のヌクレオチド配列によりコードされる重鎖及び配列番号６２７のヌクレオチド配列によりコードされる軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗体分子は、その全体が参照により組み込まれる米国特許第２０１６／０１０８１２３号明細書に記載されている、ベクター、宿主細胞及び方法により作製され得る。
Figure 2022548881000079
Figure 2022548881000080
Figure 2022548881000081
Figure 2022548881000082
Figure 2022548881000083
他の例示的なＰＤ－Ｌ１阻害剤
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０又はＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）としても知られるアテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）である。アテゾリズマブ及び他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、その全体が参照により組み込まれる米国特許第８，２１７，１４９号明細書に開示されている。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、例えば、表６に開示されるように、アテゾリズマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ又はＢａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）としても知られるアベルマブ（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ及びＰｆｉｚｅｒ）である。アベルマブ及び他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレットに開示されている。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、例えば、表６に開示されるように、アベルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＭＥＤＩ４７３６又はＩｍｆｉｎｚｉ（登録商標）としても知られるデュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。デュルバルマブ及び他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、その全体が参照により組み込まれる米国特許第８，７７９，１０８号明細書に開示されている。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、例えば、表６に開示されるように、デュルバルマブのＣＤＲ配列の１つ以上（又は集合的にＣＤＲ配列の全部）、重鎖又は軽鎖可変領域配列又は重鎖又は軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＭＤＸ－１１０５又は１２Ａ４としても知られるＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ－９３６５５９及び他の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、全体が参照により組み込まれる米国特許第７，９４３，７４３号明細書及び国際公開第２０１５／０８１１５８号パンフレットに開示される。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、例えば、表６に開示される通りのＢＭＳ－９３６５５９のＣＤＲ配列の１つ以上（又はまとめて全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
更なる既知の抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、全体が参照により援用される国際公開第２０１５／１８１３４２号パンフレット、国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、国際公開第２０１６／０００６１９号パンフレット、国際公開第２０１４／０２２７５８号パンフレット、国際公開第２０１４／０５５８９７号パンフレット、国際公開第２０１５／０６１６６８号パンフレット、国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレット、国際公開第２０１２／１４５４９３号パンフレット、国際公開第２０１５／１１２８０５号パンフレット、国際公開第２０１５／１０９１２４号パンフレット、国際公開第２０１５／１９５１６３号パンフレット、米国特許第８，１６８，１７９号明細書、米国特許第８，５５２，１５４号明細書、米国特許第８，４６０，９２７号明細書及び米国特許第９，１７５，０８２号明細書において記載されるものが挙げられる。
一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体の１つと同じＰＤ－Ｌ１上のエピトープと結合に関して競合し、且つ／又はそれに結合する抗体である。
Figure 2022548881000084
一実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、本明細書に記載される少なくとも１つのＰＤ－Ｌ１阻害剤及び本明細書に記載される少なくとも１つのＡ２Ａ受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。
ＬＡＧ－３阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、ＬＡＧ－３阻害剤と組み合わせて投与される。ＬＡＧ－３阻害剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＭＫ－４２８０（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）又はＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）から選択される。
例示的なＬＡＧ－３阻害剤
一実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、抗ＬＡＧ－３抗体分子である。一実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、全体が参照により組み込まれる「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＬＡＧ－３ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称で２０１５年９月１７日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書において開示される通りの抗ＬＡＧ－３抗体分子である。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、表７に示されるか（例えば、表７に開示されるＢＡＰ０５０－クローンＩ又はＢＡＰ０５０－クローンＪの重鎖及び軽鎖可変領域配列）又は表７に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は一括して全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義に従う（例えば、表７に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従う（例えば、表７に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方の組み合わされたＣＤＲ定義に従う（例えば、表７に記載される通り）。一実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１のＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組合せは、アミノ酸配列ＧＦＴＬＴＮＹＧＭＮ（配列番号７６６）を含む。一実施形態では、ＣＤＲの１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えば表７に示されるか、又は表７に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対するアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、それぞれ表７に開示される配列番号７０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号７０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号７１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号７１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、それぞれ表７に開示される配列番号７３６又は７３７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号７３８又は７３９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号７４０又は７４１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに配列番号７４６又は７４７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号７４８又は７４９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号７５０又は７５１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、それぞれ表７に開示される配列番号７５８又は７３７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ１、配列番号７５９又は７３９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ２及び配列番号７６０又は７４１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ；並びに配列番号７４６又は７４７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ１、配列番号７４８又は７４９のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ２及び配列番号７５０又は７５１のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７０６のアミノ酸配列又は配列番号７０６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７１８のアミノ酸配列又は配列番号７１８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７２４のアミノ酸配列又は配列番号７２４と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７３０のアミノ酸配列又は配列番号７３０と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７１８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７２４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７３０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号７０７若しくは７０８のヌクレオチド配列又は配列番号７０７若しくは７０８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７１９若しくは７２０のヌクレオチド配列又は配列番号７１９若しくは７２０と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７２５若しくは７２６のヌクレオチド配列又は配列番号７２５若しくは７２６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７３１若しくは７３２のヌクレオチド配列又は配列番号７３１若しくは７３２と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７０７又は７０８のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号７１９又は７２０のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７２５又は７２６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号７３１又は７３２のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７０９のアミノ酸配列又は配列番号７０９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７２１のアミノ酸配列又は配列番号７２１と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７２７のアミノ酸配列又は配列番号７２７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７３３のアミノ酸配列又は配列番号７３３と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７０９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７２１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号７２７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７３３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号７１６又は７１７のヌクレオチド配列又は配列番号７１６又は７１７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７２２又は７２３のヌクレオチド配列又は配列番号７２２又は７２３と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７２８又は７２９のヌクレオチド配列又は配列番号７２８又は７２９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７３４又は７３５のヌクレオチド配列又は配列番号７３４又は７３５と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７１６又は７１７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号７２２又は７２３のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号７２８又は７２９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号７３４又は７３５のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗体分子は、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製され得る。
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他の例示的なＬＡＧ－３阻害剤
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＢＭＳ９８６０１６としても知られるＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ－９８６０１６及び他の抗ＬＡＧ－３抗体は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１５／１１６５３９号パンフレット及び米国特許第９，５０５，８３９号明細書に開示される。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、例えば、表８において開示される通りのＢＭＳ－９８６０１６のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＴＳＲ－０３３のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＭＫ－４２８０（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）である。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＭＫ－４２８０のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）である。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＲＥＧＮ３７６７のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＩＭＰ７３１又はＧＳＫ２８３１７８１（ＧＳＫ及びＰｒｉｍａ ＢｉｏＭｅｄ）である。ＩＭＰ７３１及び他の抗ＬＡＧ－３抗体は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２００８／１３２６０１号パンフレット及び米国特許第９，２４４，０５９号明細書に開示される。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、例えば、表８において開示される通りのＩＭＰ７３１のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＧＳＫ２８３１７８１のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＩＭＰ７６１（Ｐｒｉｍａ ＢｉｏＭｅｄ）である。一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＩＭＰ７６１のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
更なる既知の抗ＬＡＧ－３抗体としては、例えば、全体が参照により組み込まれる国際公開第２００８／１３２６０１号パンフレット、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１４０１８０号パンフレット、国際公開第２０１５／１１６５３９号パンフレット、国際公開第２０１５／２００１１９号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８６７２号パンフレット、米国特許第９，２４４，０５９号明細書、米国特許第９，５０５，８３９号明細書に記載されるものが挙げられる。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、本明細書に記載される抗ＬＡＧ－３抗体の１つと同じＬＡＧ－３上のエピトープと結合に関して競合し、且つ／又はそれに結合する抗体である。
一実施形態では、抗ＬＡＧ－３阻害剤は、例えば、全体が参照により組み込まれる国際公開第２００９／０４４２７３号パンフレットに開示される通りの可溶性ＬＡＧ－３タンパク質、例えばＩＭＰ３２１（Ｐｒｉｍａ ＢｉｏＭｅｄ）である。
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ＴＩＭ－３阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、ＴＩＭ－３阻害剤と組み合わせて投与される。ＴＩＭ－３阻害剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ－３阻害剤は、ＭＢＧ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＳＲ－０２２（Ｔｅｓａｒｏ）又はＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）から選択される。
例示的なＴＩＭ－３阻害剤
一実施形態では、ＴＩＭ－３阻害剤は、抗ＴＩＭ－３抗体分子である。一実施形態では、ＴＩＭ－３阻害剤は、全体が参照により組み込まれる「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＴＩＭ－３ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称で２０１５年８月６日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書において開示される通りの抗ＴＩＭ－３抗体分子である。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、表９に示されるか（例えば、表９に開示されるＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１１又はＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０３の重鎖及び軽鎖可変領域配列）又は表９に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は一括して全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義に従う（例えば、表９に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従う（例えば、表９に記載される通り）。一実施形態では、ＣＤＲの１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えば表９に示されるか、又は表９に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対するアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、それぞれ表９に開示される配列番号８０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８０２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号８１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、それぞれ表９に開示される配列番号８０１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８２０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８０３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号８１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号８１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８０６のアミノ酸配列又は配列番号８０６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８１６のアミノ酸配列又は配列番号８１６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２２のアミノ酸配列又は配列番号８２２と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２６のアミノ酸配列又は配列番号８２６と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８２６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号８０７のヌクレオチド配列又は配列番号８０７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８１７のヌクレオチド配列又は配列番号８１７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２３のヌクレオチド配列又は配列番号８２３と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２７のヌクレオチド配列又は配列番号８２７と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８０７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号８１７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２３のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号８２７のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８０８のアミノ酸配列又は配列番号８０８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８１８のアミノ酸配列又は配列番号８１８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２４のアミノ酸配列又は配列番号８２４と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２８のアミノ酸配列又は配列番号８２８と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、配列番号８２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号８０９のヌクレオチド配列又は配列番号８０９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８１９のヌクレオチド配列又は配列番号８１９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２５のヌクレオチド配列又は配列番号８２５と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２９のヌクレオチド配列又は配列番号８２９と少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％同一又はそれを超えるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８０９のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号８１９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号８２５のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号８２９のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗体分子は、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書に記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製され得る。
Figure 2022548881000096
Figure 2022548881000097
Figure 2022548881000098
Figure 2022548881000099
他の例示的なＴＩＭ－３阻害剤
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＴＳＲ－０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ）である。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＴＳＲ－０２２のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、例えば、表１０において開示される通りのＡＰＥ５１３７又はＡＰＥ５１２１のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。ＡＰＥ５１３７、ＡＰＥ５１２１及び他の抗ＴＩＭ－３抗体は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１６／１６１２７０号パンフレットに開示される。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）である。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＬＹ３３２１３６７のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、抗体クローンＦ３８－２Ｅ２である。一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、Ｆ３８－２Ｅ２のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
更なる既知の抗ＴＩＭ－３抗体としては、例えば、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１６／１１１９４７号パンフレット、国際公開第２０１６／０７１４４８号パンフレット、国際公開第２０１６／１４４８０３号パンフレット、米国特許第８，５５２，１５６号明細書、米国特許第８，８４１，４１８号明細書及び米国特許第９，１６３，０８７号明細書に記載されるものが挙げられる。
一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体は、本明細書に記載される抗ＴＩＭ－３抗体の１つと同じＴＩＭ－３上のエピトープと結合に関して競合し、且つ／又はそれに結合する抗体である。
Figure 2022548881000100
ＣＴＬＡ－４阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ＣＴＬＡ－４阻害剤と組み合わせて投与される。ＣＴＬＡ－４阻害剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）又はトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）である。抗体イピリムマブ及び他の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，９８４，７２０号明細書に開示される。抗体トレメリムマブ及び他の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４１１，０５７号明細書に開示される。
ＧＩＴＲアゴニスト
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて投与される。ＧＩＴＲアゴニストは、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＷＮ３２３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ－９８６１５６（ＢＭＳ）、ＭＫ－４１６６又はＭＫ－１２４８（Ｍｅｒｃｋ）、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＩＮＣＡＧＮ１８７６（Ｉｎｃｙｔｅ／Ａｇｅｎｕｓ）、ＡＭＧ２２８（Ａｍｇｅｎ）又はＩＮＢＲＸ－１１０（Ｉｎｈｉｂｒｘ）である。
例示的な抗ＧＩＴＲ抗体分子
一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、抗ＧＩＴＲ抗体分子である。一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、全体が参照により組み込まれる「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」という名称で２０１６年４月１４日に公開された国際公開第２０１６／０５７８４６号パンフレットにおいて記載される通りの抗ＧＩＴＲ抗体分子である。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、表１１に示されるか（例えば、表１１に開示されるＭＡＢ７の重鎖及び軽鎖可変領域配列）又は表１１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域に由来する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（又は一括して全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義に従う（例えば、表１１に記載される通り）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従う（例えば、表１１に記載される通り）。一実施形態では、ＣＤＲの１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える変化、例えば表１１に示されるか、又は表１１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対するアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は欠失を有する。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、それぞれ表１１に開示される配列番号９０９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９１１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号９１３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号９１４のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９１６のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列及び配列番号９１８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０１のアミノ酸配列又は配列番号９０１と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０２のアミノ酸配列又は配列番号９０２と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９０２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０５のヌクレオチド配列又は配列番号９０５と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０６のヌクレオチド配列又は配列番号９０６と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０５のヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ及び配列番号９０６のヌクレオチド配列によってコードされるＶＬを含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０３のアミノ酸配列又は配列番号９０３と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０４のアミノ酸配列又は配列番号９０４と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、配列番号９０３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号９０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０７のヌクレオチド配列又は配列番号９０７と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０８のヌクレオチド配列又は配列番号９０８と少なくとも８５％、９０％、９５％又は９９％以上同一のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、配列番号９０７のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖及び配列番号９０８のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖を含む。
本明細書に記載される抗体分子は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０５７８４６号パンフレットに記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製され得る。
Figure 2022548881000101
Figure 2022548881000102
Figure 2022548881000103
Figure 2022548881000104
他の例示的な抗ＧＩＴＲ抗体及びアゴニスト
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＢＭＳ ９８６１５６又はＢＭＳ９８６１５６としても知られるＢＭＳ－９８６１５６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。ＢＭＳ－９８６１５６及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許第９，２２８，０１６号明細書及び国際公開第２０１６／１９６７９２号パンフレットに開示される。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、例えば、表１２において開示される通りのＢＭＳ－９８６１５６のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＭＫ－４１６６又はＭＫ－１２４８（Ｍｅｒｃｋ）である。ＭＫ－４１６６、ＭＫ－１２４８及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許第８，７０９，４２４号明細書、国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、国際公開第２０１５／０２６６８４号パンフレット及びＭａｈｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７；７７（５）：１１０８－１１１８に開示される。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＭＫ－４１６６又はＭＫ－１２４８のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）である。ＴＲＸ５１８及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第９，０２８，８２３号明細書、国際公開第２００６／１０５０２１号パンフレット及びＰｏｎｔｅ Ｊ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；１３５：Ｓ９６に開示される。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＴＲＸ５１８のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＩＮＣＡＧＮ１８７６（Ｉｎｃｙｔｅ／Ａｇｅｎｕｓ）である。ＩＮＣＡＧＮ１８７６及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０３６８３４９号明細書及び国際公開第２０１５／１８４０９９号パンフレットに開示される。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＩＮＣＡＧＮ１８７６のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＡＭＧ ２２８（Ａｍｇｅｎ）である。ＡＭＧ ２２８及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許第９，４６４，１３９号明細書及び国際公開第２０１５／０３１６６７号パンフレットに開示される。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＡＭＧ ２２８のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体分子は、ＩＮＢＲＸ－１１０（Ｉｎｈｉｂｒｘ）である。ＩＮＢＲＸ－１１０及び他の抗ＧＩＴＲ抗体は、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１７／００２２２８４号明細書及び国際公開第２０１７／０１５６２３号パンフレットに開示される。一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＩＮＢＲＸ－１１０のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列を含む。
一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、融合タンパク質）は、ＭＥＤＩ１８７３としても知られるＭＥＤＩ １８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）である。ＭＥＤＩ １８７３及び他のＧＩＴＲアゴニストは、例えば、全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第２０１７／００７３３８６号明細書、国際公開第２０１７／０２５６１０号パンフレット及びＲｏｓｓ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６；７６（１４ Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ ｎｒ ５６１に開示される。一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＭＥＤＩ １８７３のＩｇＧ Ｆｃドメイン、機能性多量体化ドメイン及びグルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）の受容体結合ドメインの１つ以上を含む。
更なる既知のＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）としては、例えば、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０５４６３８号パンフレットに記載されるものが挙げられる。
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、本明細書に記載される抗ＧＩＴＲ抗体の１つと同じＧＩＴＲ上のエピトープと結合に関して競合し、且つ／又はそれに結合する抗体である。
一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、ＧＩＴＲシグナル伝達経路を活性化するペプチドである。一実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストは、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたイムノアドヘシン結合フラグメント（例えば、ＧＩＴＲＬの細胞外部分又はＧＩＴＲ結合部分を含むイムノアドヘシン結合フラグメント）である。
Figure 2022548881000105
例示的な抗ＣＤ３多重特異性抗体分子
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、抗ＣＤ３多重特異性抗体分子（例えば、抗ＣＤ３二重特異性抗体分子）と組み合わせて投与される。一実施形態では、抗ＣＤ３多重特異性抗体分子は、ＣＤ３及び標的腫瘍抗原（ＴＴＡ）に結合する。一実施形態では、ＴＴＡは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８又はＣＤ１２３から選択される。一実施形態では、抗ＣＤ３多重特異性抗体分子は、全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットの図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ及び１２５に開示される形式である。
一実施形態では、抗ＣＤ３多重特異性抗体分子は、抗ＣＤ３×抗ＣＤ１２３二重特異性抗体分子、例えばＸＥＮＰ１４０４５（例えば、表１５において記載される通り）又は全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０８６１８９号パンフレット又は国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットに開示される抗ＣＤ３×抗ＣＤ１２３二重特異性抗体分子である。一実施形態では、抗ＣＤ３×抗ＣＤ１２３二重特異性抗体分子は、ＸＥＮＰ１４０４５のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列又はそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する配列）を含む。
一実施形態では、抗ＣＤ３多重特異性抗体は、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２０二重特異性抗体分子、例えばＸＥＮＰ１３６７６（例えば、表１３において記載される通り）又は全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０８６１８９号パンフレット又は国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットに開示される抗ＣＤ３×抗ＣＤ２０二重特異性抗体分子である。一実施形態では、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２０二重特異性抗体分子は、ＸＥＮＰ１３６７６のＣＤＲ配列の１つ以上（又は一括して全てのＣＤＲ配列）、重鎖若しくは軽鎖可変領域配列又は重鎖若しくは軽鎖配列又はそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する配列）を含む。
Figure 2022548881000106
ＩＬ１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体
特定の実施形態では、本明細書に記載されるヒトＥＮＴＰＤ２抗体は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ＮＩＺ９８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＴＬ－８０３（Ａｌｔｏｒ）又はＣＹＰ０１５０（Ｃｙｔｕｎｅ）から選択される。
例示的なＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ヒトＩＬ－１５Ｒａの可溶性形態と複合体を形成したヒトＩＬ－１５を含む。複合体は、ＩＬ－１５Ｒａの可溶性形態に共有結合的又は非共有結合的に結合されたＩＬ－１５を含み得る。特定の実施形態では、ヒトＩＬ－１５は、ＩＬ－１５Ｒａの可溶性形態に非共有結合的に結合される。特定の実施形態では、組成物のヒトＩＬ－１５は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１４／０６６５２７号パンフレットに記載される通り、表１４における配列番号１００１のアミノ酸配列を含み、且つヒトＩＬ－１５Ｒａの可溶性形態は、表１４における配列番号１００２のアミノ酸配列を含む。本明細書に記載される分子は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレットに記載されるベクター、宿主細胞及び方法によって作製され得る。
Figure 2022548881000107
他の例示的なＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ＡＬＴ－８０３、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ－１５Ｎ７２Ｄ：ＩＬ－１５ＲａＳｕ／Ｆｃ可溶性複合体）である。ＡＬＴ－８０３は、全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１４３７９４号パンフレットに開示される。一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ Ｆｃ融合タンパク質は、表１５に開示される通りの配列を含む。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ＩＬ－１５Ｒａ（ＣＹＰ０１５０、Ｃｙｔｕｎｅ）のｓｕｓｈｉドメインに融合されたＩＬ－１５を含む。ＩＬ－１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインは、ＩＬ－１５Ｒａのシグナルペプチド後の１番目のシステイン残基で始まり、前記シグナルペプチド後の４番目のシステイン残基で終わるドメインを指す。ＩＬ－１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインに融合されたＩＬ－１５の複合体は、全体が参照により組み込まれる国際公開第２００７／０４６０６号パンフレット及び国際公開第２０１２／１７５２２２号パンフレットに開示される。一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ ｓｕｓｈｉドメイン融合物は、表１５に開示される通りの配列を含む。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒａの融合タンパク質を含み、これは、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１４／１８６４６９号パンフレット（Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｒｅｇｅｎｔｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｓｙｓｔｅｍ）に開示されるように、ＩＬ－１５とＩＬ－１５Ｒａを接続するリンカー、特にグリシン－セリンリンカーを更に含み得る。一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ融合タンパク質は、表１５に開示される配列を含む。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１５／１０９１２４号パンフレット（Ｋａｄｍｏｎ Ｃｏｒｐ．）に開示されているように、グリシン－セリンリンカーにより結合したＩＬ－１５Ｒａ及びＩＬ－１５のスシドメインの融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ融合タンパク質は、表１５に開示されている配列を含む。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１７／０００９１３号パンフレット（Ｎｕｍａｂ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に開示されているように、好ましくはＲＧＤポリペプチド－Ｆｃドメイン－ＩＬ－１５ポリペプチド－ＩＬ－１５Ｒａポリペプチドとして構成された、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒａ、Ｆｃドメイン及びＲＧＤペプチドの融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＲＧＤ－Ｆｃ－ＩＬ－１５－ＩＬ－１５Ｒａ融合タンパク質は、表１５に開示されている配列を含む。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、第１のＦｃドメインに結合したＩＬ－１５及び第２のＦｃドメインに結合したＩＬ－１５Ｒａを含むヘテロ二量体タンパク質を含む。ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５の成熟形態であり、ＩＬ－１５Ｒａは、ヒトＩＬ－１５Ｒａの細胞外ドメイン又はその切断変異体、例えばＩＬ－１５Ｒａ－スシである。２つのＦｃドメインは、変異を含んで、「Ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ」相互作用を介したヘテロ二量体形成を可能にし得、例示的な構築物は、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１５／１０３９２８号パンフレット（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｄｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ）に開示されている。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、ポリペプチド間の分子内ジスルフィド結合の形成を促進するように、ｃｙｓアミノ酸変異を含むＩＬ－１５と、ｃｙｓ変異を含むＩＬ－１５Ｒａ（その細胞外又はスシドメイン）との組合せを含む。変異の組合せを有するＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒａの配列は、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１６／０９５６４２号パンフレット（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｄｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ）に開示されている。
一実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒａ複合体は、第１のＦｃドメインに結合したＩＬ－１５及び第２のＦｃドメインに結合したＩＬ－１５Ｒａを含むヘテロ二量体タンパク質を含む。第１及び第２のＦｃドメインは、ＥＵナンバリングに従うＳ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６ＨＤ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６ＨＤ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６ＨＥ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ及びＫ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑに列挙されるアミノ酸置換のセットを有し得、加えて、その全体が参照により組み込まれる国際公開第２０１８／０７１９１９号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ、Ｉｎｃ．）に開示されているように、アミノ酸置換及びＦｃγ受容体結合を弱めるための置換を更に含み得る。
Figure 2022548881000108
例示的なＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）の阻害剤である。Ｍ－ＣＳＦは、ＣＳＦ－１として知られる場合もある。
別の実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、ＣＳＦ－１Ｒチロシンキナーゼ阻害剤、４－（（２－（（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－Ｎ－メチルピコリンアミド（化合物Ａ１５）又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０７３２２４号パンフレットに開示される化合物である。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、Ｍ－ＣＳＦ阻害剤、化合物Ａ３３又はＲＸ１若しくは５Ｈ４（例えば、Ｍ－ＣＳＦに対する抗体分子又はＦａｂフラグメント）を含むＰＣＴ公開国際公開第２００４／０４５５３２号パンフレット又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０６８５０３号パンフレットに開示されるＣＳＦ－１に対する結合剤である。
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤又は４－（２－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシルアミノ）ベンゾチアゾール－６－イルオキシ）－Ｎ－メチルピコリンアミドである。４－（２－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシルアミノ）ベンゾチアゾール－６－イルオキシ）－Ｎ－メチルピコリンアミドは、ＰＣＴ公開国際公開第２００７／１２１４８４号パンフレットの１１７頁の実施例１５７として開示される。
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、ペキシダルチニブ（ＣＡＳ登録番号１０２９０４４－１６－３）である。ペキシダルチニブは、ＰＬＸ３３９７又は５－（（５－クロロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）メチル）－Ｎ－（（６－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル）メチル）ピリジン－２－アミンとしても知られる。ペキシダルチニブは、ＫＩＴ、ＣＳＦ１Ｒ及びＦＬＴ３の小分子受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤である。
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、エマクツヅマブである。エマクツヅマブは、ＲＧ７１５５又はＲＯ５５０９５５４としても知られる。エマクツヅマブは、ＣＳＦ１Ｒを標的化するヒト化ＩｇＧ１ ｍＡｂである。
いくつかの実施形態では、ＣＳＦ－１／１Ｒ結合剤は、ＦＰＡ００８である。ＦＰＡ００８は、ＣＳＦ１Ｒを阻害するヒト化ｍＡｂである。
例示的なＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）及び／又はトリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、（４Ｅ）－４－［（３－クロロ－４－フルオロアニリノ）－ニトロソメチリデン］－１，２，５－オキサジアゾール－３－アミン（ＩＮＣＢ２４３６０又はエパカドスタットとしても知られる；ＣＡＳ登録番号：１２０４６６９－５８－８（Ｉｎｃｙｔｅ））、インドキシモド（１－メチル－Ｄ－トリプトファン）、α－シクロヘキシル－５Ｈ－イミダゾ［５，１－ａ］イソインドール－５－エタノール（ＮＬＧ９１９としても知られる）又はＢＭＳ－９８６２０５（Ｆ００１２８７又はＯＮＯ－７７０１としても知られる）から選択される。
いくつかの実施形態では、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、エパカドスタットである。これは、１０ｎＭのＩＣ５０を有する強力且つ選択的なインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）阻害剤である。エパカドスタットは他の関連酵素、例えばＩＤＯ２又はトリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）と比較して高く選択的である。
いくつかの実施形態では、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、インドキシモド（Ｎｅｗ Ｌｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）である。インドキシモド、１－メチル－トリプトファンのＤ異性体は、腫瘍が免疫媒介性の破壊を回避する機構を妨害する、経口投与される小分子インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）経路阻害剤である。ＮＬＧ９１９は、無細胞アッセイにおいて、それぞれ７ｎＭ／７５ｎＭのＫｉ／ＥＣ５０を有する強力なＩＤＯ経路阻害剤である。
いくつかの実施形態では、ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤は、ＢＭＳ－９８６２０５（Ｆ００１２８７又はＯＮＯ－７７０１としても知られる）（Ｆｌｅｘｕｓ／ＢＭＳ）である。ＢＭＳ－９８６２０５は、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）の小分子阻害剤である。
例示的なＴＧＦ－β阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）阻害剤と組み合わせて投与される。ＴＧＦ－β阻害剤は、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、フレソリムマブ及びＸＯＭＡ ０８９（Ｘｏｍａ）から選択される。
ＴＧＦ－βは、例えば、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、増殖及び分化因子、アクチビン及びインヒビンを含む構造的に関連するサイトカインの大きいファミリーに属する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＴＧＦ－β阻害剤は、ＴＧＦ－βの１つ以上のアイソフォーム（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２又はＴＧＦ－β３の１つ、２つ又は全て）に結合することができ、且つ／又は阻害することができる。
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、フレソリムマブ（ＣＡＳ登録番号：９４８５６４－７３－６）である。フレソリムマブは、ＧＣ１００８としても知られる。フレソリムマブは、ＴＧＦ－ベータアイソフォーム１、２及び３に結合し且つ阻害するヒトモノクローナル抗体である。フレソリムマブは、例えば、国際公開第２００６／０８６４６９号パンフレット、米国特許第８，３８３，７８０号明細書及び同第８，５９１，９０１号明細書に記載されている。
フレソリムマブの重鎖は、
Figure 2022548881000109
のアミノ酸配列を有する。
フレソリムマブの軽鎖は、
Figure 2022548881000110
のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、ＴＧＦ－β阻害剤は、ＸＯＭＡ ０８９である。ＸＯＭＡ ０８９は、ＸＰＡ．４２．０８９としても知られる。ＸＯＭＡ ０８９は、ＴＧＦ－β ３を温存しながら、ＴＧＦ－β １及び２リガンドに結合及び中和する完全ヒトモノクローナル抗体である。
ＸＯＭＡ ０８９の重鎖可変領域は、
Figure 2022548881000111
のアミノ酸配列を有する（国際公開第２０１２／１６７１４３号パンフレットに配列番号６として開示されている）。
ＸＯＭＡ ０８９の軽鎖可変領域は、ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＡＮＤＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＶＳＥＤＩＩＲＰＳＧＩＰＥＲＩＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＲＤＳＤＱＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を有する（国際公開第２０１２／１６７１４３号パンフレットに配列番号８として開示されている）。
例示的なＶＥＧＦＲ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲの１つ以上（例えば、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２又はＶＥＧＦＲ－３）又はＶＥＧＦの阻害剤）と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ阻害剤は、バタラニブコハク酸塩（化合物Ａ４７）又は欧州特許第２９６１２２号明細書に開示される化合物である。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ阻害剤は、ＶＥＧＦＲ－２、ＰＤＧＦＲベータ、ＫＩＴ又はＲａｆキナーゼＣの１つ以上の阻害剤、１－メチル－５－（（２－（５－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）ピリジン－４－イル）オキシ）－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－アミン（化合物Ａ３７）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０３０３７７号パンフレットに開示される化合物である。
本明細書で開示される組合せにおいて使用され得る他の例示的なＶＥＧＦＲ経路阻害剤としては、例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ（登録商標））；ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ－５８２６６４、（Ｓ）－（（Ｒ）－１－（４－（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノアート）；ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））；パゾパニブ（ＶＯＴＲＩＥＮＴ（登録商標））；スニチニブリンゴ酸塩（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））；セジラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ ２８８３８３－２０－１）；バルガテフ（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ ９２８３２６－８３－４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ ３３２０１２－４０－５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ ８１１８０３－０５－１）；イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ ９４３３１９－７０－８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ ４７５１０８－１８－０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ ７５５０３７－０３－７）；バタラニブ二塩酸化合物（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ ２１２１４１－５１－０）；ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ ６４９７３５－４６－６）；バンデタニブ（ＣＡＰＲＥＬＳＡ（登録商標）又はＡＺＤ６４７４）；モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ ８５７８７６－３０－３、ＰＣＴ公開国際公開第０２／０６６４７０号パンフレットにおいて記載されるＮ－（２，３－ジヒドロ－３，３－ジメチル－１Ｈ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド；リニファニブ（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ ７９６９６７－１６－３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ ８４９２１７－６８－１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ １１１３５８－８８－４）；Ｎ－［５－［［［５－（１，１－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ ３４５６２７－８０－７）；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロロ－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ ７８１６１３－２３－８）；４－メチル－３－［［１－メチル－６－（３－ピリジニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３－（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ ９４０３１０－８５－０）；アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））及びエンドスタチン（ＥＮＤＯＳＴＡＲ（登録商標））が挙げられる。
本明細書で開示される組合せにおいて使用され得る例示的な抗ＶＥＧＦ抗体としては、例えば、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９によって産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９に従って作製される組換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が挙げられる。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ又はＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）としても知られるベバシズマブ（ＢＶ）である。それは、ヒトＶＥＧＦのその受容体への結合を遮断するマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１に由来する変異されたヒトＩｇＧ１フレームワーク領域及び抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、２００５年２月２６日に交付された米国特許第６，８８４，８７９号明細書において更に記載される。更なる抗体としては、ＰＣＴ公開国際公開第２００５／０１２３５９号パンフレット、ＰＣＴ公開国際公開第２００５／０４４８５３号パンフレットに記載される通りのＧ６又はＢ２０シリーズ抗体（例えば、Ｇ６－３１、Ｂ２０－４．１）が挙げられる。更なる抗体については、米国特許第７，０６０，２６９号明細書、同第６，５８２，９５９号明細書、同第６，７０３，０２０号明細書、同第６，０５４，２９７号明細書、国際公開第９８／４５３３２号パンフレット、国際公開第９６／３００４６号パンフレット、国際公開第９４／１０２０２号パンフレット、欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号明細書、米国特許出願公開第２００６／００９３６０号明細書、同第２００５／０１８６２０８号明細書、同第２００３／０２０６８９９号明細書、同第２００３／０１９０３１７号明細書、同第２００３／０２０３４０９号明細書及び同第２００５／０１１２１２６号明細書；並びにＰｏｐｋｏｖ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８８：１４９－１６４（２００４）を参照されたい。他の抗体としては、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、１９１、Ｋ１０１、Ｅ１０３及びＣ１０４を含むか、又は代わりに残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、１８３及びＱ８９を含むヒトＶＥＧＦ上の機能的エピトープに結合するものが挙げられる。
例示的なＥＧＦＲ阻害剤
いくつかの実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子、例えば本明細書に記載される抗ＥＮＴＰＤ２抗体分子は、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と組み合わせて使用される。例示的なチロシンキナーゼ阻害剤としては、上皮成長因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ＶＥＧＦＲ－３阻害剤））、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ－β阻害剤））、ＲＡＦ－１阻害剤、キット阻害剤及びＲＥＴ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）－Ｎ－（７－クロロ－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）アゼパン－３－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－２－メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示されている化合物である。
いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、ネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（登録商標））、ダコミチニブ、ニモツズマブ、イムガツズマブ、アファチニブ又はオシメルチニブ（Ｔａｇｒｉｓｓｏ）の１つ以上から選択される。
他の抗癌剤、例えば本明細書に開示した組合せにおいて使用され得るチロシンキナーゼ阻害剤経路阻害剤としては、挙げられるが、これらに限定されず、選択されたチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））又はソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））から選択される。
いくつかの実施形態では、ヘッジホッグ阻害剤と組み合わせて使用される抗癌剤は、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ－６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ－３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ－５７１）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ－７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマキサニブ（セマキサニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ－２０７６、ＰＣＩ－３２７６５、ＡＣ２２０、ＢＩＢＷ ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ－０４２１７９０３、ＰＦ－０２３４１０６６、ＰＦ－２９９８０４、ＢＭＳ－７７７６０７、ＡＢＴ－８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ－２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ－２０３６、ＢＭＳ－６９０１５４、ＣＥＰ－１１９８１、ｔｉｖｏｚａｎｉｂ（ＡＶ－９５１）、ＯＳＩ－９３０、ＭＭ－１２１、ＸＬ－１８４、ＸＬ－６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ－４９０、ＡＳＴ－６、ＢＭＳ－５９９６２６、ＣＵＤＣ－１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ－５６９）、バンデタニブ（ｚａｃｔｉｍａ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ－８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ－９５１（チボサニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ ７３－４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ－５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＰ ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ－２６５、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ－７０６）、ＭＰ－４７０、ＯＳＩ－９３０、パゾパニブ塩酸塩、ＰＤ１７３０７４、ソラフェニブトシル酸（Ｂａｙ ４３－９００６）、ＳＵ ５４０２ＳＵ ５４０２、ＴＳＵ－６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ－２８８０）からなる群から選択される。
例示的なｃ－ＭＥＴ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ｃ－ＭＥＴの阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、化合物Ａ１７又は米国特許第７，７６７，６７５号明細書及び同第８，４２０，６４５号明細書に記載されている化合物である）。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、ＪＮＪ－３８８７７６０５である。ＪＮＪ－３８８７７６０５は、経口で利用可能なｃ－Ｍｅｔの小分子阻害剤である。ＪＮＪ－３８８７７６０５は、ｃ－ＭＥＴに選択的に結合し、それによってｃ－ＭＥＴリン酸化を阻害し、ｃ－Ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊する。
いくつかの実施形態では、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤は、ＡＭＧ ２０８である。ＡＭＧ ２０８は、ｃ－ＭＥＴの選択的な小分子阻害剤である。ＡＭＧ ２０８は、ｃ－ＭＥＴのリガンド依存性及びリガンド非依存性活性化を阻害し、チロシンキナーゼ活性を阻害し、ｃ－Ｍｅｔを過剰発現する腫瘍における細胞成長阻害をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤は、ＡＭＧ ３３７である。ＡＭＧ ３３７は、経口により生体利用可能なｃ－Ｍｅｔの阻害剤である。ＡＭＧ ３３７は、ｃ－ＭＥＴに選択的に結合し、それによってｃ－ＭＥＴシグナル伝達経路を破壊する。
いくつかの実施形態では、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤は、ＬＹ２８０１６５３である。ＬＹ２８０１６５３は、経口により利用可能なｃ－Ｍｅｔの小分子阻害剤である。ＬＹ２８０１６５３は、ｃ－ＭＥＴに選択的に結合し、それによってｃ－ＭＥＴリン酸化を阻害し、ｃ－Ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊する。
いくつかの実施形態では、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤は、ＭＳＣ２１５６１１９Ｊである。ＭＳＣ２１５６１１９Ｊは、経口により生体利用可能なｃ－Ｍｅｔの阻害剤である。ＭＳＣ２１５６１１９Ｊは、ｃ－ＭＥＴに選択的に結合し、それによってｃ－ＭＥＴリン酸化を阻害し、ｃ－Ｍｅｔ－媒介シグナル伝達経路を破壊する。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、カプマチニブである。カプマチニブは、ＩＮＣＢ０２８０６０としても知られる。カプマチニブは、経口により生体利用可能なｃ－ＭＥＴの阻害剤である。カプマチニブは、ｃ－Ｍｅｔに選択的に結合し、それによってｃ－Ｍｅｔリン酸化を阻害し、ｃ－Ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊する。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブである。クリゾチニブは、ＰＦ－０２３４１０６６としても知られる。クリゾチニブは、経口的に利用可能な、受容体チロシンキナーゼ未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）及びｃ－Ｍｅｔ／肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）のアミノピリジンベースの阻害剤である。クリゾチニブは、ＡＴＰと競合的な様式において、ＡＬＫキナーゼ及びＡＬＫ融合タンパク質に結合及び阻害する。加えて、クリゾチニブは、ｃ－Ｍｅｔキナーゼを阻害し、ｃ－Ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊する。まとめると、この薬剤は、腫瘍細胞成長を阻害する。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、ゴルバチニブである。ゴルバチニブは、潜在的な抗悪性腫瘍活性を有する、経口により生体利用可能な、ｃ－ＭＥＴ及びＶＥＧＦＲ－２の二重キナーゼ阻害剤である。ゴルバチニブは、ｃ－ＭＥＴ及びＶＥＧＦＲ－２の両方の活性を阻害し、これらの受容体チロシンキナーゼを過剰発現する腫瘍細胞の腫瘍細胞成長及び生存を阻害することができる。
いくつかの実施形態では、ｃ－ＭＥＴ阻害剤は、チバンチニブである。チバンチニブは、ＡＲＱ １９７としても知られる。チバンチニブは、経口により生体利用可能なｃ－ＭＥＴの小分子阻害剤である。チバンチニブは、ｃ－ＭＥＴタンパク質に結合し、ｃ－Ｍｅｔシグナル伝達経路を破壊し、これはｃ－ＭＥＴタンパク質を過剰発現するか、又は構成的に活性化されたｃ－Ｍｅｔタンパク質を発現する腫瘍細胞における細胞死を誘導し得る。
例示的なＩＡＰ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、アポトーシスタンパク質阻害剤（ＩＡＰ）の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＩＡＰ阻害剤は、（Ｓ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－シクロヘキシル－２－（（Ｓ）－２－（４－（４－フルオロベンゾイル）チアゾール－２－イル）ピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル）－２－（メチルアミノ）プロパンアミド（化合物Ａ２１）又は米国特許第８，５５２，００３号明細書に開示されている化合物である。
例示的なｍＴＯＲ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）の哺乳動物標的の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、８－（６－メトキシ－ピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－ピペラジン－１－イル－３－トリフルオロメチル－フェニル）－１，３－ジヒドロ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２－オン（化合物Ａ４１）である。
いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス（ＲＡＤ００１又はＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標）としても知られる；化合物Ａ３６）又はＰＣＴ公開国際公開第９４／０９０１０号パンフレットで最初に開示された化合物である。
いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＰＦ－４６９１５０２、ＧＤＣ０９８０、ＯＳＩ－０２７、ＧＳＫ１０５９６１５、ＫＵ－００６３７９４、ＷＹＥ－３５４、Ｐａｌｏｍｉｄ ５２９（Ｐ５２９）、ＰＦ－０４６９１５０２、ゲダトリシブ（ＰＦ－０５２１２３８４、ＰＫＩ－５８７）、リダフォロリムス（正式にはデフェロリムス、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる及びＰＣＴ公開国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載されている（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ、２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３、２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（ｓｉｍａｐｉｍｏｄ）（ＣＡＳ登録番号：１６４３０１－５１－３）；（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［ｔｒａｎｓ－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ登録番号：１０１３１０１－３６－４）；Ｎ２－［１，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチルＬ－セリン分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ登録番号：９３６４８７－６７－１）（配列番号１０１１）又はＸＬ７６５（ＳＡＲ２４５４０９）の１つ以上から選択される。
例示的なＰＩ３Ｋ－γ、－δ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスフェート３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、例えばホスファチジルイノシトール－４，５－ビスホスフェート３－キナーゼγ及び／又はδ（ＰＩ３Ｋ－γ、δ）の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋのδ及びγアイソフォームの阻害剤である。組み合わせて使用され得る例示的なＰＩ３Ｋ阻害剤は、例えば、国際公開第２０１０／０３６３８０号パンフレット、国際公開第２０１０／００６０８６号パンフレット、国際公開第０９／１１４８７０号パンフレット、国際公開第０５／１１３５５６号パンフレットに記載されている。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＧＳＫ ２１２６４５８、ＧＤＣ－０９８０、ＧＤＣ－０９４１、Ｓａｎｏｆｉ ＸＬ１４７、ＸＬ７５６、ＸＬ１４７、ＰＦ－４６９１５０３２、ＣＡＬ－１０１、ＣＡＬ ２６３、ＳＦ１１２６、ＰＸ－８８６及び二重ＰＩ３Ｋ阻害剤の１つ以上から選択される。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ－γ、δ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＳ登録番号：８７０２８１－８２－６）である。イデラリシブは、ＺＹＤＥＬＩＧ（登録商標）、ＧＳ－１１０１、ＣＡＬ－１０１又は５－フルオロ－３－フェニル－２－［（１Ｓ）－１－（７Ｈ－プリン－６－イルアミノ）プロピル］－４（３Ｈ）－キナゾリノンとしても知られる。イデラリシブは、Ｐ１１０δ、Ｉ３Ｋのδアイソフォームを遮断する。イデラリシブは、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１３）６：３６に開示されている。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ－γ、δ阻害剤は、８－（６－メトキシ－ピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－ピペラジン－１－イル－３－トリフルオロメチル－フェニル）－１，３－ジヒドロ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２－オン（化合物Ａ４１）である。
組み合わせて使用され得る他の例示的なＰＩ３Ｋ－γ、δ阻害剤には、例えば、ピクチリシブ（ＧＤＣ－０９４１）、ＬＹ２９４００２、ピララリシブ（ＸＬ１４７）、ＰＩ－３０６５、ＰＩ－１０３、ＶＳ－５５８４（ＳＢ２３４３）、ＣＺＣ２４８３２、デュベリシブ（ＩＰＩ－１４５、ＩＮＫ１１９７）、ＴＧ１００－１１５、ＣＡＹ１０５０５、ＧＳＫ１０５９６１５、ＰＦ－０４６９１５０２、ＡＳ－６０５２４０、ボクスタリシブ（ＳＡＲ２４５４０９、ＸＬ７６５）、ＩＣ－８７１１４、オミパリシブ（ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ４５８）、ＴＧ１００７１３、ゲダトリシブ（ＰＦ－０５２１２３８４、ＰＫＩ－５８７）、ＰＫＩ－４０２、ＸＬ１４７類似体、ＰＩＫ－９０、ＰＩＫ－２９３、ＰＩＫ－２９４、３－メチルアデニン（３－ＭＡ）、ＡＳ－２５２４２４、ＡＳ－６０４８５０又はアピトリシブ（ＧＤＣ－０９８０、ＲＧ７４２２）が含まれる。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、化合物Ａ８又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／０２９０８２号パンフレットに開示されている化合物である。
いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、パン－ＰＩ３Ｋ阻害剤、（４Ｓ，５Ｒ）－３－（２’－アミノ－２－モルホリノ－４’－（トリフルオロメチル）－［４，５’－ビピリミジン］－６－イル）－４－（ヒドロキシメチル）－５－メチルオキサゾリジン－２－オン（化合物Ａ１３）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１２４８２６号パンフレットに開示されている化合物である。
例示的なＰＩ３Ｋ－γ、－δ阻害剤には、デュベリシブ及びイデラリシブが含まれるがこれらに限定されない。イデラリシブ（ＧＳ－１１０１又はＣＡＬ－１０１とも呼ばれる；Ｇｉｌｅａｄ）は、ＰＩ３Ｋのδアイソフォームを遮断する小分子である。イデラリシブ（５－フルオロ－３－フェニル－２－［（１Ｓ）－１－（７Ｈ－プリン－６－イルアミノ）プロピル］－４（３Ｈ）－キナゾリノン）の構造を下記に示す。
Figure 2022548881000112
デュベリシブ（ＩＰＩ－１４５とも呼ばれる；Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ及びＡｂｂｖｉｅ）は、ＰＩ３Ｋ－δ、γを遮断する小分子である。デュベリシブ（８－クロロ－２－フェニル－３－［（１Ｓ）－１－（９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル］－１（２Ｈ）－イソキノリノン）の構造を下記に示す。
Figure 2022548881000113
一実施形態では、阻害剤は、２－アミノ－８－［ｔｒａｎｓ－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ－０４６９１５０２）；Ｎ－［４－［［４－（ジメチルアミノ）－１－ピペリジニル］カルボニル］フェニル］－Ｎ’－［４－（４，６－ジ－４－モルホリニル－１，３，５－トリアジン－２－イル）フェニル］尿素（ＰＦ－０５２１２３８４、ＰＫＩ－５８７）；アピトリシブ（ＧＤＣ－０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４－ジフルオロ－Ｎ－｛２－（メチルオキシ）－５－［４－（４－ピリダジニル）－６－キノリニル］－３－ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８－（６－メトキシピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－（ピペラジン－１－イル）－３－（トリフルオロメチル）フェニル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２（３Ｈ）－オンマレイン酸（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）；３－［４－（４－モリホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル］フェノール（ＰＩ－１０３）；５－（９－イソプロピル－８－メチル－２－モルホリノ－９Ｈ－プリン－６－イル）ピリミジン－２－アミン（ＶＳ－５５８４、ＳＢ２３４３）；又はＮ－［２－［（３，５－ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン－３－イル］－４－［（４－メチル－３－メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択される二重ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
例示的なＪＡＫ阻害剤
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の阻害剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、２－フルオロ－Ｎ－メチル－４－（７－（キノリン－６－イルメチル）イミダゾ［１，２－ｂ］［１，２，４］トリアジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ａ１７）若しくはそのニ塩酸塩又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物である。
いくつかの実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブリン酸塩（ＪＡＫＡＦＩとしても知られる；化合物Ａ１８）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物である。
特定の実施形態では、本明細書に開示される組合せのいずれも、代替的に又は組み合わせて、表１６に記載される薬剤の１つ以上を更に含む。
Figure 2022548881000114
Figure 2022548881000115
Figure 2022548881000116
Figure 2022548881000117
Figure 2022548881000118
Figure 2022548881000119
Figure 2022548881000120
Figure 2022548881000121
Figure 2022548881000122
Figure 2022548881000123
Figure 2022548881000124
Figure 2022548881000125
Figure 2022548881000126
Figure 2022548881000127
Figure 2022548881000128
Figure 2022548881000129
Figure 2022548881000130
本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、追加の治療薬と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、１）タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤；２）熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）阻害剤；３）ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及び／又はラパマイシン（ｍＴＯＲ）の標的の阻害剤；４）チトクロムＰ４５０の阻害剤（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤又は１７α－ヒドロキシラーゼ／Ｃ１７－２０リアーゼ阻害剤）；５）鉄キレート化剤；６）アロマターゼ阻害剤；７）ｐ５３の阻害剤、例えばｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用の阻害剤；８）アポトーシス誘発剤；９）血管新生阻害剤；１０）アルドステロンシンターゼ阻害剤；１１）スムーズンド（ＳＭＯ）受容体阻害剤；１２）プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）阻害剤；１３）Ｗｎｔシグナル伝達阻害剤；１４）ＣＤＫ４／６阻害剤；１５）線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）／線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）阻害剤；１６）マクロファージコロニー－刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）の阻害剤；１７）ヒスタミン放出、Ｆｌｔ３（例えば、ＦＬＫ２／ＳＴＫ１）又はＰＫＣの１つ以上の阻害剤；１８）ＶＥＧＦＲ－２（例えば、ＦＬＫ－１／ＫＤＲ）、ＰＤＧＦＲβ、ｃ－ＫＩＴ又はＲａｆキナーゼＣの１つ以上の阻害剤；１９）ソマトスタチン作動薬及び／又は成長ホルモン放出阻害剤；２０）未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤；２１）インスリン様の増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）阻害剤；２２）Ｐ－糖タンパク質１阻害剤；２３）血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤；２４）ＢＣＲ－ＡＢＬキナーゼ阻害剤；２５）ＦＧＦＲ阻害剤；２６）ＣＹＰ１１Ｂ２の阻害剤；２７）ＨＤＭ２阻害剤、例えばＨＤＭ２－ｐ５３相互作用の阻害剤；２８）チロシンキナーゼの阻害剤；２９）ｃ－ＭＥＴの阻害剤；３０）ＪＡＫの阻害剤；３１）ＤＡＣの阻害剤；３２）１１β－ヒドロキシラーゼの阻害剤；３３）ＩＡＰの阻害剤；３４）ＰＩＭキナーゼの阻害剤；３５）ポーキュパインの阻害剤；３６）ＢＲＡＦ、例えばＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ又は野生型ＢＲＡＦの阻害剤；３７）ＨＥＲ３の阻害剤；３８）ＭＥＫの阻害剤；又は３９）例えば、本明細書及び表１に記載される脂質キナーゼの阻害剤の１つ以上から選択される。
一実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＫＣ阻害剤、ソトラスタウリン（化合物Ａ１）又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０３９５４９号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＫＣ阻害剤は、ソトラスタウリン（化合物Ａ１）又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０３９５４９号パンフレットに開示されている化合物である。
一実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ニロチニブ（化合物Ａ２、Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））又はＰＣＴ公開国際公開第２００４／００５２８１号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤は、ニロチニブ又はＰＣＴ公開国際公開第２００４／００５２８１号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害、例えば癌を処置するために、ＨＳＰ９０阻害剤を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＩ３Ｋ及び／又はｍＴＯＲの阻害剤、８－（６－メトキシ－ピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－ピペラジン－１－イル－３－トリフルオロメチル－フェニル）－１，３－ジヒドロ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２－オン（化合物Ａ４１）と組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ及び／又はｍＴＯＲ阻害剤は、８－（６－メトキシ－ピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－ピペラジン－１－イル－３－トリフルオロメチル－フェニル）－１，３－ジヒドロ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２－オン（化合物Ａ４１）である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＦＧＦＲ阻害剤、３－（２，６－ジクロロ－３，５－ジメトキシフェニル）－１－（６－（（４－（４－エチルピペラジン－１－イル）フェニル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－１－メチル尿素（化合物Ａ５）又は米国特許第８，５５２，００２号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、３－（２，６－ジクロロ－３，５－ジメトキシフェニル）－１－（６－（（４－（４－エチルピペラジン－１－イル）フェニル）アミノ）ピリミジン－４－イル）－１－メチル尿素（化合物Ａ５）又は米国特許第８，５５２，００２号明細書に開示されている化合物である。化合物Ａ５は、以下の構造を有する。
Figure 2022548881000131
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ブパリシブ（化合物Ａ６）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０８４７８６号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ブパリシブ（化合物Ａ６）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０８４７８６号パンフレットに開示されている化合物である。化合物Ａ６は、以下の構造を有する。
ａ．
Figure 2022548881000132
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＦＧＦＲ阻害剤、８－（２，６－ジフルオロ－３，５－ジメトキシフェニル）－Ｎ－（４－（（ジメチルアミノ）メチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）キノキサリン－５－カルボキサミド（化合物Ａ７）又はＰＣＴ公開国際公開第２００９／１４１３８６号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、８－（２，６－ジフルオロ－３，５－ジメトキシフェニル）－Ｎ－（４－（（ジメチルアミノ）メチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）キノキサリン－５－カルボキサミド（化合物Ａ７）又はＰＣＴ公開国際公開第２００９／１４１３８６号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＩ３Ｋ阻害剤、（Ｓ）－Ｎ１－（４－メチル－５－（２－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリジン－４－イル）チアゾール－２－イル）ピロリジン－１，２－ジカルボキサミド（化合物Ａ８）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／０２９０８２号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、（Ｓ）－Ｎ１－（４－メチル－５－（２－（１，１，１－トリフルオロ－２－メチルプロパン－２－イル）ピリジン－４－イル）チアゾール－２－イル）ピロリジン－１，２－ジカルボキサミド（化合物Ａ８）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／０２９０８２号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、チトクロムＰ４５０（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤）の阻害剤又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／１４９７５５号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、チトクロムＰ４５０阻害剤（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤）は、ＰＣＴ公開国際公開第２０１０／１４９７５５号パンフレット；米国特許第８，２６３，６３５Ｂ２号明細書；又は欧州特許第２４４５９０３ Ｂ１号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＨＤＭ２阻害剤、（Ｓ）－１－（４－クロロフェニル）－７－イソプロポキシ－６－メトキシ－２－（４－（メチル（（（１ｒ，４Ｓ）－４－（４－メチル－３－ｏｘｏピペラジン－１－イル）シクロヘキシル）メチル）アミノ）フェニル）－１，２－ジヒドロイソキノリン－３（４Ｈ）－オン（化合物Ａ１０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１１／０７６７８６号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＨＤＭ２阻害剤は、（Ｓ）－１－（４－クロロフェニル）－７－イソプロポキシ－６－メトキシ－２－（４－（メチル（（（１ｒ，４Ｓ）－４－（４－メチル－３－ｏｘｏピペラジン－１－イル）シクロヘキシル）メチル）アミノ）フェニル）－１，２－ジヒドロイソキノリン－３（４Ｈ）－オン（化合物Ａ１０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１１／０７６７８６号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、鉄キレート化剤、デフェラシロクス（ＥＸＪＡＤＥとしても知られる；化合物Ａ１１）又はＰＣＴ公開国際公開第１９９７／０４９３９５号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、鉄キレート化剤は、デフェラシロクス又はＰＣＴ公開国際公開第１９９７／０４９３９５号パンフレットに開示されている化合物である。一実施形態では、鉄キレート化剤は、デフェラシロクス（化合物Ａ１１）である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、アロマターゼ阻害剤、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡとしても知られる；化合物Ａ１２）又は米国特許第４，９７８，６７２号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、アロマターゼ阻害剤は、レトロゾール（化合物Ａ１２）又は米国特許第４，９７８，６７２号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えばパン－ＰＩ３Ｋ阻害剤、（４Ｓ，５Ｒ）－３－（２’－アミノ－２－モルホリノ－４’－（トリフルオロメチル）－［４，５’－ビピリミジン］－６－イル）－４－（ヒドロキシメチル）－５－メチルオキサゾリジン－２－オン（化合物Ａ１３）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１２４８２６号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、（４Ｓ，５Ｒ）－３－（２’－アミノ－２－モルホリノ－４’－（トリフルオロメチル）－［４，５’－ビピリミジン］－６－イル）－４－（ヒドロキシメチル）－５－メチルオキサゾリジン－２－オン（化合物Ａ１３）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１２４８２６号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ｐ５３及び／又はｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用の阻害剤、（Ｓ）－５－（５－クロロ－１－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－イル）－６－（４－クロロフェニル）－２－（２，４－ジメトキシピリミジン－５－イル）－１－イソプロピル－５，６－ジヒドロピロロ［３，４－ｄ］イミダゾール－４（１Ｈ）－オン（化合物Ａ１４）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１１１１０５号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ｐ５３及び／又はｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用阻害剤は、（Ｓ）－５－（５－クロロ－１－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－イル）－６－（４－クロロフェニル）－２－（２，４－ジメトキシピリミジン－５－イル）－１－イソプロピル－５，６－ジヒドロピロロ［３，４－ｄ］イミダゾール－４（１Ｈ）－オン（化合物Ａ１４）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１１１１０５号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＣＳＦ－１Ｒ チロシンキナーゼ阻害剤、４－（（２－（（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－Ｎ－メチルピコリンアミド（化合物Ａ１５）又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０７３２２４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＣＳＦ－１Ｒ チロシンキナーゼ阻害剤は、４－（（２－（（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－Ｎ－メチルピコリンアミド（化合物Ａ１５）又はＰＣＴ公開国際公開第２００５／０７３２２４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、アポトーシス誘発剤及び／又は血管新生阻害剤、例えばイマチニブ メシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）としても知られる；化合物Ａ１６）又はＰＣＴ公開国際公開第１９９９／００３８５４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、アポトーシス誘発剤及び／又は血管新生阻害剤は、イマチニブ メシル酸塩（化合物Ａ１６）又はＰＣＴ公開国際公開第１９９９／００３８５４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＪＡＫ阻害剤、２－フルオロ－Ｎ－メチル－４－（７－（キノリン－６－イルメチル）イミダゾ［１，２－ｂ］［１，２，４］トリアジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ａ１７）若しくはその二塩酸塩又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、２－フルオロ－Ｎ－メチル－４－（７－（キノリン－６－イルメチル）イミダゾ［１，２－ｂ］［１，２，４］トリアジン－２－イル）ベンズアミド（化合物Ａ１７）若しくはその二塩酸塩又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＪＡＫ阻害剤、ルキソリチニブリン酸塩（ＪＡＫＡＦＩとしても知られる；化合物Ａ１８）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブリン酸塩（化合物Ａ１８）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０７０５１４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ（ＤＡＣ）阻害剤、パノビノスタット（化合物Ａ１９）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１４／０７２４９３号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＤＡＣ阻害剤は、パノビノスタット（化合物Ａ１９）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１４／０７２４９３号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、チトクロムＰ４５０（例えば、１１Ｂ２）、アルドステロン又は血管新生の１つ以上の阻害剤、オシロドロスタット（化合物Ａ２０）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０２４９４５号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＩＡＰ阻害剤、（Ｓ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－シクロヘキシル－２－（（Ｓ）－２－（４－（４－フルオロベンゾイル）チアゾール－２－イル）ピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル）－２－（メチルアミノ）プロパンアミド（化合物Ａ２１）又は米国特許第８，５５２，００３号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＩＡＰ阻害剤は、（Ｓ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－シクロヘキシル－２－（（Ｓ）－２－（４－（４－フルオロベンゾイル）チアゾール－２－イル）ピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル）－２－（メチルアミノ）プロパンアミド（化合物Ａ２１）又は米国特許第８，５５２，００３号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、スムーズンド（ＳＭＯ）阻害剤、（Ｒ）－２－（５－（４－（６－ベンジル－４，５－ジメチルピリダジン－３－イル）－２－メチルピペラジン－１－イル）ピラジン－２－イル）プロパン－２－オール（化合物Ａ２５）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／００７１２０号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＳＭＯ阻害剤は、（Ｒ）－２－（５－（４－（６－ベンジル－４，５－ジメチルピリダジン－３－イル）－２－メチルピペラジン－１－イル）ピラジン－２－イル）プロパン－２－オール（化合物Ａ２５）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／００７１２０号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、セリチニブ（ＺＹＫＡＤＩＡとしても知られるＡｌｋ阻害剤；化合物Ａ２３）を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＪＡＫ及び／又はＣＤＫ４／６阻害剤、７－シクロペンチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－カルボキサミド（化合物Ａ２４）又は米国特許第８，４１５，３５５号明細書又は米国特許第８，６８５，９８０号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＪＡＫ及び／又はＣＤＫ４／６阻害剤は、７－シクロペンチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（（５－（ピペラジン－１－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－カルボキサミド（化合物Ａ２４）又は米国特許第８，４１５，３５５号明細書又は米国特許第８，６８５，９８０号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）阻害剤、米国特許第７，８６７，４９３号明細書に開示されているヒトモノクローナル抗体分子（化合物Ａ２６）を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＰＩＭキナーゼ阻害剤、Ｎ－（４－（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－５－メチルシクロヘキシル）ピリジン－３－イル）－６－（２，６－ジフルオロフェニル）－５－フルオロピコリンアミド（化合物Ａ２７）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／０２６１２４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＰＩＭキナーゼ阻害剤は、Ｎ－（４－（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－３－アミノ－５－メチルシクロヘキシル）ピリジン－３－イル）－６－（２，６－ジフルオロフェニル）－５－フルオロピコリンアミド（化合物Ａ２７）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／０２６１２４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、Ｗｎｔシグナル伝達阻害剤、２－（２’，３－ジメチル－［２，４’－ビピリジン］－５－イル）－Ｎ－（５－（ピラジン－２－イル）ピリジン－２－イル）アセトアミド（化合物Ａ２８）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／１０１８４９号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、Ｗｎｔシグナル伝達阻害剤は、２－（２’，３－ジメチル－［２，４’－ビピリジン］－５－イル）－Ｎ－（５－（ピラジン－２－イル）ピリジン－２－イル）アセトアミド（化合物Ａ２８）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／１０１８４９号パンフレットに開示されている化合物である。一実施形態では、Ｗｎｔシグナル伝達阻害剤は、２－（２’，３－ジメチル－［２，４’－ビピリジン］－５－イル）－Ｎ－（５－（ピラジン－２－イル）ピリジン－２－イル）アセトアミド（化合物Ａ２８）である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害、例えば癌を処置するために、ＢＲＡＦ阻害剤を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＣＤＫ４／６阻害剤、７－シクロペンチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（（５－（（１Ｒ，６Ｓ）－９－メチル－４－オキソ－３，９－ジアザビシクロ［４．２．１］ノナン－３－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－カルボキサミド（化合物Ａ３０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１１／１０１４０９号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＣＤＫ４／６阻害剤は、７－シクロペンチル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－（（５－（（１Ｒ，６Ｓ）－９－メチル－４－オキソ－３，９－ジアザビシクロ［４．２．１］ノナン－３－イル）ピリジン－２－イル）アミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－カルボキサミド（化合物Ａ３０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１１／１０１４０９号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＨＥＲ３阻害剤、化合物Ａ３１又はＰＣＴ公開国際公開第２０１２／０２２８１４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＨＥＲ３阻害剤は、化合物Ａ３１又はＰＣＴ公開国際公開第２０１２／０２２８１４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＦＧＦＲ２及び／又はＦＧＦＲ４阻害剤、化合物Ａ３２又は公開ＰＣＴ公開国際公開第２０１４／１６０１６０号パンフレットに開示されている化合物（例えば、ＦＧＦＲ２及び／又はＦＧＦＲ４に対する抗体分子薬物コンジュゲート、例えばｍＡｂ １２４２５）を含むか又はそれと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、化合物Ａ３２は、ＦＧＦＲ２及び／又はＦＧＦＲ４に対する抗体分子薬物コンジュゲート、例えばｍＡｂ １２４２５である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、Ｍ－ＣＳＦ阻害剤、化合物Ａ３３又はＰＣＴ公開国際公開第２００４／０４５５３２号パンフレットに開示されている化合物（例えば、Ｍ－ＣＳＦに対する抗体分子又はＦａｂ断片）を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、本明細書に記載される障害、例えば癌を処置するために、ＭＥＫ阻害剤を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ｃ－ＫＩＴ、ヒスタミン放出、Ｆｌｔ３（例えば、ＦＬＫ２／ＳＴＫ１）又はＰＫＣの１つ以上の阻害剤、ミドスタウリン（化合物Ａ３５）又はＰＣＴ公開国際公開第２００３／０３７３４７号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、阻害剤は、ミドスタウリン（化合物Ａ３５）又はＰＣＴ公開国際公開第２００３／０３７３４７号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＶＥＧＦＲ－２、ＰＤＧＦＲβ、キット又はＲａｆキナーゼＣの阻害剤の１つ以上、１－メチル－５－（（２－（５－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）ピリジン－４－イル）オキシ）－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－アミン（化合物Ａ３７）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０３０３７７号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＶＥＧＦＲ－２、ＰＤＧＦＲβ、キット又はＲａｆキナーゼＣの１つ以上の阻害剤は、１－メチル－５－（（２－（５－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）ピリジン－４－イル）オキシ）－Ｎ－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－アミン（化合物Ａ３７）又はＰＣＴ公開国際公開第２００７／０３０３７７号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ソマトスタチン作動薬及び／又は成長ホルモン放出阻害剤、パシレオチド二アスパラギン酸塩（ＳＩＧＮＩＦＯＲとしても知られる；化合物Ａ３８）又はＰＣＴ公開国際公開第２００２／０１０１９２号パンフレット又は米国特許第７，４７３，７６１号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ソマトスタチン作動薬及び／又は成長ホルモン放出阻害剤は、パシレオチド二アスパラギン酸塩（化合物Ａ３８）又はＰＣＴ公開国際公開第２００２／０１０１９２号パンフレット又は米国特許第７，４７３，７６１号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、例えば、本明細書に記載される障害、例えば癌を処置するために、シグナル伝達モジュレーター及び／又は血管新生阻害剤を含むか又はそれと組み合わせて使用される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）－Ｎ－（７－クロロ－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）アゼパン－３－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－２－メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、（Ｒ，Ｅ）－Ｎ－（７－クロロ－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）アゼパン－３－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－２－メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示されている化合物である。一実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、障害、例えば癌を処置するために、（Ｒ，Ｅ）－Ｎ－（７－クロロ－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）アゼパン－３－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－２－メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示されている化合物と組み合わせて使用される。
いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）－Ｎ－（７－クロロ－１－（１－（４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エノイル）アゼパン－３－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル）－２－メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ４０）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットに開示されている化合物は、癌を処置するために、ＥＮＴＰＤ２（例えば、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子）の阻害剤と組み合わせて投与される。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＡＬＫ阻害剤、Ｎ６－（２－イソプロポキシ－５－メチル－４－（１－メチルピペリジン－４－イル）フェニル）－Ｎ４－（２－（イソプロピルスルホニル）フェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４，６－ジアミン（化合物Ａ４２）又はＰＣＴ公開国際公開第２００８／０７３６８７号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＡＬＫ阻害剤は、Ｎ６－（２－イソプロポキシ－５－メチル－４－（１－メチルピペリジン－４－イル）フェニル）－Ｎ４－（２－（イソプロピルスルホニル）フェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４，６－ジアミン（化合物Ａ４２）又はＰＣＴ公開国際公開第２００８／０７３６８７号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＩＧＦ－１Ｒ阻害剤、３－（４－（４－（（５－クロロ－４－（（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）ピペリジン－１－イル）チエタン１，１－ジオキシド（化合物Ａ４３）、５－クロロ－Ｎ２－（２－フルオロ－５－メチル－４－（１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピペリジン－４－イル）フェニル）－Ｎ４－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物Ａ４４）又は５－クロロ－Ｎ２－（４－（１－エチルピペリジン－４－イル）－２－フルオロ－５－メチルフェニル）－Ｎ４－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物Ａ４５）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／００２６５５号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＩＧＦ－１Ｒ阻害剤は、３－（４－（４－（（５－クロロ－４－（（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）アミノ）ピリミジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）ピペリジン－１－イル）チエタン１，１－ジオキシド（化合物Ａ４３）、５－クロロ－Ｎ２－（２－フルオロ－５－メチル－４－（１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）ピペリジン－４－イル）フェニル）－Ｎ４－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物Ａ４４）、５－クロロ－Ｎ２－（４－（１－エチルピペリジン－４－イル）－２－フルオロ－５－メチルフェニル）－Ｎ４－（５－メチル－１Ｈ－ピラゾール－３－イル）ピリミジン－２，４－ジアミン（化合物Ａ４５）又はＰＣＴ公開国際公開第２０１０／００２６５５号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、Ｐ－糖タンパク質１阻害剤、バルスポダール（ＡＭＤＲＡＹとしても知られる；化合物Ａ４６）又は欧州特許第２９６１２２号明細書に開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、Ｐ－糖タンパク質１阻害剤は、バルスポダール（化合物Ａ４６）又は欧州特許第２９６１２２号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＶＥＧＦＲ阻害剤、バタラニブコハク酸塩（化合物Ａ４７）又は欧州特許第２９６１２２号明細書に開示されている化合物を含むか又はその１つ以上と組み合わせて使用される。一実施形態では、ＶＥＧＦＲ阻害剤は、バタラニブコハク酸塩（化合物Ａ４７）又は欧州特許第２９６１２２号明細書に開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＩＤＨ阻害剤又は国際公開第２０１４／１４１１０４号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＩＤＨ阻害剤は、ＰＣＴ公開国際公開第２０１４／１４１１０４号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ＢＣＬ－ＡＢＬ阻害剤又はＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１７１６３９号パンフレット、国際公開第２０１３／１７１６４０号パンフレット、国際公開第２０１３／１７１６４１号パンフレット又は国際公開第２０１３／１７１６４２号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ＢＣＬ－ＡＢＬ阻害剤は、ＰＣＴ公開国際公開第２０１３／１７１６３９号パンフレット、国際公開第２０１３／１７１６４０号パンフレット、国際公開第２０１３／１７１６４１号パンフレット又は国際公開第２０１３／１７１６４２号パンフレットに開示されている化合物である。
別の実施形態では、組合せ、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子を含む組合せは、障害、例えば本明細書に記載される障害を処置するために、ｃ－ＲＡＦ阻害剤又はＰＣＴ公開国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに開示されている化合物を含むか又はそれと組み合わせて使用される。一実施形態では、ｃ－ＲＡＦ阻害剤は、化合物Ａ５０又はＰＣＴ公開国際公開第２０１４／１５１６１６号パンフレットに開示されている化合物である。いくつかの実施形態では、ｃ－ＲＡＦ阻害剤又は化合物Ａ５０は、式（Ｉ）の化合物：
ｂ．
Figure 2022548881000133
ｃ．又はその薬学的に許容される塩であり、式中、
ｄ．Ｚ１は、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）又はＳＯ２であり；
ｅ．Ｚ２は、Ｎ、Ｓ又はＣＲａであり、Ｒａは、Ｈ、ハロ、Ｃ１～４アルキル又はＣ１～４ハロアルキルであり；
ｆ．Ｒ１は、ＣＮ、ハロ、ＯＨ、Ｃ１～４アルコキシ又はハロ、Ｃ１～４アルコキシ、ＣＮ及びヒドロキシルから選択される１～３つの基で任意選択的に置換されたＣ１～４アルキルであり；
ｇ．環Ｂは、フェニル、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ピリドン、ピリミドン、ピラジノン、ピリダジノン及びチアゾールから選択され、これらのそれぞれは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ２～４アルケニル、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、ＮＨ２、ＮＨ－（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、－ＳＯ２Ｒ２、ＮＨＳＯ２Ｒ２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ２、ＮＨＣＯ２Ｒ２、Ｃ３～６シクロアルキル、５～６員のヘテロアリール、－Ｏ－Ｃ３～６シクロアルキル、－Ｏ－（５～６員のヘテロアリール）、Ｃ４～８ヘテロシクロアルキル及び－Ｏ－（４～８員のヘテロシクロアルキル）から選択される２つまでの基で任意選択的に置換され、ヘテロシクロアルキル及びヘテロアリールのそれぞれは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される３つまでのヘテロ原子を環員として含み、
ｉ．ここで、Ｃ１～４アルキル、Ｃ２～４アルケニル、Ｃ３～６シクロアルキル、５～６員のヘテロアリール及び４～８員のヘテロシクロアルキルのそれぞれは、それぞれオキソ、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、Ｃ１～４アルコキシ及び－（ＣＨ２）１～２Ｑから選択される３つまでの基で任意選択的に置換され、ここでＱは、ＯＨ、Ｃ１～４アルコキシ、－ＣＮ、ＮＨ２、－ＮＨＲ３、－Ｎ（Ｒ３）２、－ＳＯ２Ｒ３、ＮＨＳＯ２Ｒ３、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ３又はＮＨＣ（Ｏ）Ｒ３であり；Ｒ２及びＲ３のそれぞれは、独立してＣ１～４アルキルであり；
ｉｉ．環Ｂは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される２つまでのヘテロ原子を含む５～６員の芳香族又は非芳香族環に任意選択的に縮合され、５～６員の環は、ハロ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル又はＣ１～４アルコキシで置換され得、縮合環が非芳香族の場合、置換基の選択肢は、オキソを更に含み得；
ｈ．各Ｙは、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４アルコキシ、ＣＮ、ハロ、オキソ、－（ＣＨ２）ＰＯＲ４、－（ＣＨ２）ｐＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｐＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、－（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＯ（Ｃ１～４アルキル）及びイミダゾールから独立して選択されるか、又は
ｉ．環上の２つのＹ基は、任意選択的に一緒になって、環Ａに縮合又は架橋する環を形成し、前記縮合又は架橋環は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択されるヘテロ原子を環員として任意選択的に含み、且つＣ１～４アルキル、Ｃ１～４アルコキシ、ＣＮ、ハロ、オキソ、－（ＣＨ２）ｐＯＲ４、－（ＣＨ２）ＰＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｐＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４及び－（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＯ（Ｃ１～４アルキル）から選択される２つまでの基で任意選択的に置換され；
ｊ．各Ｒ４は、独立してＨ又はＣ１～４アルキルであり；
ｋ．各ｐは、独立して０、１又は２であり；
ｌ．ｑは、０、１又は２であり；
ｍ．Ｚ３、Ｚ４及びＺ５は、ＣＨ及びＮ及び任意選択的にＮＯから独立して選択され；
ｎ．Ｌは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ４－［ＣＹ］又は－ＮＲ４－Ｃ（＝Ｏ）－［ＣＹ］であり、［ＣＹ］は、ＬがＣＹのどの原子に結合しているかを示し；
ｏ．ＣＹは、フェニル、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ピリドン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピラゾール及びイソオキサゾールから選択される芳香族環であり、環は、チオフェン、イミダゾール、オキサゾロン又はピロール環に任意選択的に縮合され；
ｐ．ＣＹは、ハロ、ＣＮ、Ｒ５、ＯＲ５、ＳＯ２Ｒ５、－Ｓ（＝ＮＨ）（＝Ｏ）Ｒ５、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲ５及び－Ｎ（Ｒ５）２から選択される２つまでの基で置換され、
ｉ．各Ｒ５は、独立してＣ１～４アルキル、Ｃ２～４アルケニル、Ｃ２～６ヘテロシクリル、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される３つまでのヘテロ原子を環員として含む５員のヘテロアリール又はＣ３～８シクロアルキルであり、及びＲ５は、オキソ、ハロ、ＣＮ、Ｒ６、ＯＨ、ＯＲ６、ＳＯ２Ｒ６、ＮＨ２、ＮＨＲ６、Ｎ（Ｒ６）２、ＮＨＳＯ２Ｒ６、ＮＨＣＯＯＲ６、ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ６、－ＣＨ２ＯＲ７、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ７）２から選択される４つまでの基で任意選択的に置換され、それぞれ
ｑ．Ｒ６は、独立してＣ１～４アルキルであり、各Ｒ７は、独立してＨ又はＣ１～４アルキルであり；
ｒ．同じ窒素原子上の２つのＲ４、Ｒ５、Ｒ６又はＲ７は、一緒になって、５～６員の複素環式環を形成し得、これは追加のＮ、Ｏ又はＳを環員として任意選択的に含み、且つＣ１～４アルキル、オキソ、ハロ、ＯＨ及びＣ１～４アルコキシから選択される２つまでの基で任意選択的に置換されている。
例示的な細胞療法
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、細胞療法、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法、Ｔ細胞療法、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞療法又は樹状細胞療法とも組み合わされ得る。
ＣＡＲ療法との組合せ
本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、第２の治療、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞と組み合わせて投与され得る。ＣＡＲは、ｉ）細胞外抗原結合ドメイン、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメイン（一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激ドメインの１つ又は両方を含み得る）を含み得る。ＣＡＲは、リーダー配列及び／又はヒンジ配列を更に含み得る。特定の実施形態では、ＣＡＲコンストラクトは、ｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖの前に任意のリーダー配列が先行する場合があり、ｓｃＦｖ後に任意のヒンジ配列、膜貫通領域及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、これらのドメインは、単一の融合タンパク質を形成する同じ読み枠と連続し、且つその中にある）が続く。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５／０２８３１７８号明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２８３１７８号明細に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する配列）を有する。
一実施形態では、ＣＤ１９に結合するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＵＳＡＮ名称チサゲンレクロイセル－Ｔを有する。ＣＴＬ０１９は、ＥＦ－１アルファプロモーターの制御下でＣＴＬ０１９導入遺伝子を含有する自己不活性化、複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターによる形質導入を介した安定的な挿入により媒介されるＴ細胞の遺伝子改変によって作製される。ＣＴＬ０１９は、導入遺伝子陽性Ｔ細胞のパーセントに基づいて対象に送達される導入遺伝子陽性及び陰性Ｔ細胞の混合物であり得る。
一実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＰＣＴ公開国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットにおける配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態において、アミノ酸配列は、
Figure 2022548881000134
又は大文字で示されるシグナルペプチド配列を有するか又は有しない、それと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する配列）である。
一実施形態では、アミノ酸配列は、
Figure 2022548881000135
又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する配列）である。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の抗原結合ドメイン
抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及びその機能性フラグメントを含むが、これらに限定されない抗原に結合する任意のドメインであり得、単一ドメイン抗体、例えば重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）並びに当技術分野で抗原結合ドメインとして機能することが知られる代替の骨格、例えば組換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はそのフラグメント、例えば単鎖ＴＣＲなどを含むが、これらに限定されない。いくつかの例において、抗原結合ドメインは、最終的にＣＡＲが使用されることになる同じ種に由来することが有利である。例えば、ヒトにおける使用に関して、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体又は抗体フラグメントの抗原結合ドメインに関してヒト又はヒト化残基を含むことが有利であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、それが由来するｓｃＦｖのマウス配列と比較してヒト化されているｓｃＦｖ抗体フラグメントである。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、本明細書に記載される腫瘍抗原に結合する。実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１とも称される、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９及び１９Ａ２４）；Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１又はＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（Ｔｎ Ａｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；プロテアーゼ特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒａ２又はＣＤ２１３Ａ２）；メソセリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ－１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスティシン又はＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）；ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ；受容体チロシン－タンパク質キナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；変異した伸張因子２（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びエーベルソンマウス白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ－ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体ベータ；腫瘍内皮細胞マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮細胞マーカー７－関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーティングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）のヘキササッカリド部分；哺乳動物腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）；黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３変異体；プロステイン；生存；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１又はガレクチン８）、Ｔ細胞１によって認識される黒色腫抗原（ＭｅｌａｎＡ又はＭＡＲＴ１）；ラット肉腫（Ｒａｓ）変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転移ブレークポイント；アポトーシスの黒色腫抑制分子（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニル－トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；チトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ又はインプリントされた部位の制御因子の同類）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物のための受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎臓遍在性１（ＲＵ１）；腎臓遍在性２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ Ｅ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ Ｅ７）；腸管カルボキシルエステラーゼ；変異熱ショックタンパク質７０－２（ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）；白血病免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；及び免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）から選択される。
一実施形態では、ＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子、例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００４６７２４号明細書又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットにおいて記載されるＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００４６７２４号明細書又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットの表１若しくは１６、配列番号２７１若しくは配列番号２７３に従うアミノ酸配列を含むか、又はＣＡＲ分子のヌクレオチド配列若しくは抗原結合ドメイン又は前述の配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、前述のＢＣＭＡ ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも約８５％、９０％又は９５％の配列同一性を有する）配列を有する。アミノ酸配列並びにＢＣＭＡ ＣＡＲ及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａに従う１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ；及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットにおいて特定される。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、様々な実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合される膜貫通ドメインを含むように設計され得る。
膜貫通ドメインは、天然又は組換えの供給源のいずれかに由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合型又は膜貫通型タンパク質に由来し得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合している場合には常に細胞内ドメインにシグナルを伝達することができる。膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ又はＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
いくつかの例では、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質由来のヒンジを介してＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合され得る。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載されるＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲの細胞質内ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、ＣＡＲが導入された免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。
ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後に協調してシグナル伝達を開始するために作用する共受容体の細胞質内配列並びにこれらの配列の任意の誘導体又はバリアント並びに同じ機能上の能力を有する任意の組換え配列を含む。
一次シグナル伝達ドメインは、刺激性の様式又は抑制性の様式いずれかにおいてＴＣＲ複合体の一次の活性化を調節する。刺激性の様式において作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有し得る。
一次細胞内シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ゼータ、通常のＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２のものが挙げられる。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３－ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含む。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それ自体にＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含み得るか又は本発明のＣＡＲとの関係において有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わされ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、抗原受容体以外の細胞表面分子又は抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要なそのリガンドである。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３に結合するリガンドなどが挙げられる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでのヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、且つインビボでのヒトＴ細胞の持続及び抗腫瘍活性を増大させることが実証されている（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６－７０６）。このような共刺激分子の更なる例としては、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ及びＣＤ１９ａが挙げられる。
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び増殖
Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、通常、例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６／０１２１００５号明細書において記載される方法を用いて活性化及び増殖され得る。
免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばアルファ／ベータＴ細胞及びガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞及び骨髄由来貪食細胞が挙げられる。
ＣＡＲ発現細胞を作製する方法は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／０１８５８６１号明細書において記載される。
例示的な癌ワクチン
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、癌性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド及び炭水化物分子を含む）、細胞及び免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞などの免疫原性薬剤と組み合わされ得る（Ｈｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：４９１９－２８）。使用され得る腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１及び／又はチロシナーゼ、サイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞、ＤＮＡに基づくワクチン、ＲＮＡに基づくワクチン及びウイルスによる形質導入に基づくワクチンなどの黒色腫抗原のペプチドが挙げられる。癌ワクチンは、予防的又は治療的であり得る。
ＥＮＴＰＤ２遮断薬は、組換えタンパク質及び／又は腫瘍において発現されるペプチドの収集物と、これらのタンパク質に対する免疫応答を起こすために組み合わせて使用され得る。
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶ及びＨＣＶ）、カポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）及びエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）のようなヒト癌に関係づけられるウイルスに由来するタンパク質を含み得る。ＥＮＴＰＤ２遮断薬と組み合わせて使用され得る腫瘍特異抗原の別の形態は、腫瘍組織自体から単離された精製された熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞に由来するタンパク質のフラグメントを含有し、且つこれらのＨＳＰは、腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞への送達において非常に効率的である（Ｓｕｏｔ，Ｒ＆Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ，Ｐ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：１５８５－１５８８；Ｔａｍｕｒａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８：１１７－１２０）。
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答を刺激するために使用され得る強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、エクスビボで作製され、且つ様々なタンパク質及びペプチド抗原並びに腫瘍細胞抽出物を追加され得る（Ｎｅｓｔｌｅ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４：３２８－３３２）。ＤＣは、遺伝的な手段によって形質導入されて、これらの腫瘍抗原も発現し得る。ＤＣは、免疫化のためにも腫瘍細胞に直接的に融合されてきた（Ｋｕｇｌｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６：３３２－３３６）。ワクチン投与の方法として、ＤＣの免疫化は、ＣＤ７３遮断薬と効果的に組み合わされて、より強力な抗腫瘍応答を活性化し得る。
例示的な腫瘍溶解性ウイルス
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて使用され得る。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞において選択的に複製することができ、且つ選択的に癌細胞の死を誘発するか、又は選択的に癌細胞の増殖を遅くすることができる。いくつかの場合、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞に対して影響を及ぼさないか又は最小限の影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、この組合せは、癌、例えば本明細書に記載される癌を治療するために使用される。腫瘍溶解性ウイルスとしては、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス又は腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））が挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な腫瘍溶解性ウイルスとしては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス（ＣｏｌｏＡｄ１）（ＰｓｉＯｘｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ．）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０２０５３２２０を参照されたい）；
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ－１０２（以前はＣＧＴＧ－１０２と呼ばれた）（Ｏｎｃｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０１５９８１２９を参照されたい）；
ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的に改変された腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ－０１（ＶＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓ．Ｌ．）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０２０４５６０２及びＮＣＴ０２０４５５８９を参照されたい）；
調節解除された網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路を有する癌細胞において選択的に複製するように改変された野生型ヒトアデノウイルスセロタイプ５（Ｈａｄ５）に由来するウイルスである条件的に複製されるアデノウイルスＩＣＯＶＩＲ－５（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｃａｔａｌａ ｄ’Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０１８６４７５９を参照されたい）；
腫瘍溶解性アデノウイルスであるＩＣＯＶＩＲ５により感染された骨髄由来自己間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含むＣｅｌｙｖｉｒ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆａｎｔｉｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉｏ Ｎｉｎｏ Ｊｅｓｕｓ，Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ／Ｒａｍｏｎ Ａｌｅｍａｎｙ）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０１８４４６６１を参照されたい）；
ヒトＥ２Ｆ－１プロモーターが必須のＥｌａウイルス遺伝子の発現を促進して、それによりウイルス複製及びＲｂ経路欠損腫瘍細胞に対する細胞傷害性を制限する条件的に複製する腫瘍溶解性セロタイプ５アデノウイルス（Ａｄ５）であるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０２１４３８０４）；又は
網膜芽細胞腫（Ｒｂ）経路欠損細胞において選択的に複製し、且つ特定のＲＧＤ結合インテグリンをより効率的に発現する細胞を感染させるように操作されたアデノウイルスであるＤＮＸ－２４０１（以前はＤｅｌｔａ－２４－ＲＧＤと命名された）（Ｃｌｉｎｉｃａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｎａｖａｒｒａ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｎａｖａｒｒａ／ＤＮＡｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、臨床試験識別番号：ＮＣＴ０１９５６７３４を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、注射、例えば皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、髄腔内又は腹腔内注射によって投与される。実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍内、経皮的、経粘膜的、経口的、鼻腔内又は経肺投与を介して投与される。
追加の例示的な癌療法
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子（単独又は他の刺激薬剤と組み合わせた）及び癌のための標準治療の例示的な組合せとしては、少なくとも以下のものが挙げられる。特定の実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノルビシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩ポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６－メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキセート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを有するポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、タモキシフェンクエン酸塩（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））及びビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ及びブレンツキシマブベドチンを含むが、これらに限定されない、標準的な癌療法の化学療法剤と組み合わせて使用される。
特定の実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、アルキル化剤と組み合わせて使用され、例示的なアルキル化剤としては、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア及びトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホロアミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））及びダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。更なる例示的なアルキル化剤としては、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）及びＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン－Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）としても知られる）；メルファラン（Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）としても知られる）；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）としても知られる）；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）及びＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標）としても知られる）；シスプラチン（ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）－ＡＱとしても知られる）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）としても知られる）；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）としても知られる）；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドヌムスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチン及び塩酸メクロロエタミン、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）としても知られる）；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）としても知られる）；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子、例えば本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、アントラサイクリンと組み合わせて使用され、例示的なアントラサイクリンとしては、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；及びデスアセチルラビドマイシンが挙げられる。抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子と組み合わせて使用され得る例示的なビンカアルカロイドとしては、酒石酸ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、Ａｌｋａｂａｎ－ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標）としても知られる）；並びにビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体と組み合わせて使用され得る例示的なプロテアソーム阻害剤としては、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カルフィルゾミブ（ＰＸ－１７１－００７、（Ｓ）－４－メチル－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－メチル－１－（（Ｒ）－２－メチルオキシラン－２－イル）－１－オキソペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル）－２－（（Ｓ）－２－（２－モルホリノアセトアミド）－４－フェニルブタンアミド）－ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ－００５２）；クエン酸イキサゾミブ（ＭＬＮ－９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）；及びＯ－メチル－Ｎ－［（２－メチル－５－チアゾリル）カルボニル］－Ｌ－セリル－Ｏ－メチル－Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｒ）－２－メチル－２－オキシラニル］－２－オキソ－１－（フェニルメチル）エチル］－Ｌ－セリンアミド（ＯＮＸ－０９１２）が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子は、放射線療法と組み合わせて投与される。放射線療法は、外照射療法、内部放射線療法、インプラント照射、定位放射線手術、全身放射線療法、放射線療法及び永続性又は一過性組織内近接照射療法を含むが、これらに限定されないいくつかの方法の１つ又は方法の組合せにより施され得る。用語「組織内照射療法」は、腫瘍又は他の増殖性組織疾患部位に又はその近くに体内に入れられた空間的に閉じ込められた放射性物質により送達される放射線療法を指す。本用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ－２１１、Ｉ－１３１、Ｉ－１２５、Ｙ－９０、Ｒｅ－１８６、Ｒｅ－１８８、Ｓｍ－１５３、Ｂｉ－２１２、Ｐ－３２及びＬｕの放射性同位体）への暴露を含むが、これらに限定されないものとする。本発明の細胞コンディショナーとして使用するための好適な放射線源は、固体及び液体の両方を含む。非限定的例として、放射線源は、Ｉ－１２５、Ｉ－１３１、Ｙｂ－１６９、固体源としてのＩｒ－１９２、固体源としてのＩ－１２５又は光子、ベータ粒子、ガンマ線若しくは他の治療的放射線を放射する他の放射性核種などの放射性核種であり得る。放射性物質は、放射性核種の任意の溶液、例えばＩ－１２５又はＩ－１３１の溶液から作製された液体でもあり得、放射性液体は、Ａｕ－１９８、Ｙ－９０などの固体放射性核種の小粒子を含有する好適な液体のスラリーを使用して作製され得る。
ＥＮＴＰＤ２遮断薬は、化学療法の方式とも効果的に組み合わされ得る。これらの例において、投与される化学療法剤の用量を減少させることが可能である場合がある。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体分子と組み合わせて投与され得る例示的な細胞傷害性薬剤としては、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路を妨害できる薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテアソーム阻害剤及び放射線照射（例えば、局所又は全身照射）が挙げられる。
サンプルの調製
本明細書に記載される方法において使用されるサンプルは、当技術分野において既知の方法の任意の１つを使用して、例えば生検又は手術によって対象から得られ得る。サンプルは、瞬間凍結され、後の使用のために－８０℃で保存され得る。サンプルは、ホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド又は酢酸／エタノールなどの固定剤でも固定され得る。ＲＮＡ又はタンパク質は、分析のために、新鮮な、凍結された又は固定されたサンプルから抽出され得る。
医薬組成物、投与量及び投与方法
ＥＮＴＰＤ２関連疾患、例えば本明細書に記載される癌の処置において使用するための組成物、例えば医薬組成物も本明細書で提供される。このような組成物は、本明細書に記載される１つ以上の抗体又は抗原結合断片、このような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸又はこのような抗体又は抗原結合断片をコードする核酸を含むベクターを含む。このような組成物は、別の薬剤、例えば処置される疾患の現在の標準的な治療を更に含むことができる。
医薬組成物は、典型的には、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合する、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。医薬組成物は、典型的には、その意図される投与経路と適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内）、頭蓋内、髄腔内又は鼻腔内（例えば、吸入）、皮内、皮下又は腫瘍内投与が挙げられる。
語句「薬学的に許容される」は、本明細書では、健全な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適切であり、妥当な利益／リスク比に見合った化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指すために使用される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなどの緩衝物質、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂肪を含む、１つ以上の薬学的に許容される担体を含む。
適切な医薬組成物を処方する方法は、当技術分野で既知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２１ｓｔ ｅｄ．，２００５；及びシリーズＤｒｕｇｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ：ａ Ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｔｅｘｔｂｏｏｋｓ ａｎｄ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ（Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ）の書籍を参照されたい。例えば、非経口又は皮下適用のために使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分を含み得る：注射のための水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒のような無菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩のような緩衝剤；及び塩化ナトリウム又はデキストロースのような張性の調節のための薬剤。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は複数用量バイアルに封入することができる。
注射用使用に適した医薬組成物は、無菌の注射用溶液又は分散液の即時調製のための、無菌の水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び無菌の粉末を含むことができる。静脈内投与のために、適切な担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合において、組成物は、無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度に流動性でなければならない。それは、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌のような微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）及びこれらの適当な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒径の維持及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用を防止することは、種々の抗菌及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロプタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の延長された吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
無菌注射溶液は、必要量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて上記に列挙した成分の１つ又は組合せとともに組み込み、続いて濾過無菌することによって調製することができる。
一般に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒及び上に列挙したものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これは、活性成分の粉末と、その以前に無菌濾過された溶液からの任意の更なる所望の成分とを生じる。
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入又は負荷ボーラス用量、続いて維持用量であり得る。これらの組成物は、特定の固定又は可変間隔で、例えば１日１回又は「必要に応じて」投与することができる。
注射のための適切な医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸塩、リン酸塩又はクエン酸塩緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択的に安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含むことができる。末梢投与のための調製物には、無菌水性又は非水性溶液、懸濁液及びエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油及びオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体としては、例えば、水、アルコール／水溶液、エマルジョン又は懸濁液（生理食塩水及び緩衝媒体を含む）が挙げられる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は０．０１～０．１Ｍリン酸緩衝液又は０．８％生理食塩水を含む。他の一般的な非経口ビヒクルには、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル又は固定油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体及び栄養補充剤、リンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充剤などが含まれる。例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤及び不活性ガスなどのような保存剤及び他の添加剤も存在し得る。
一実施形態では、治療化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、身体からの迅速な排除から治療化合物を保護する担体を用いて調製される。
医薬組成物は、投与のための説明書とともに、容器、パック又はディスペンサーに含めることができる。
治療化合物の投与量、毒性及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養物又は実験動物における標準的な医薬手順によって決定され得る。毒性及び治療効果の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物が使用され得るが、非感染細胞に対する潜在的な損傷を最小限にし、それによって副作用を減少させるために、そのような化合物を罹患組織の部位に標的化する送達システムを設計するように注意が払われるべきである。
細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための用量の範囲を処方する際に使用され得る。このような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんど又は全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される剤形及び利用される投与経路に依存して、この範囲内で変化し得る。本発明の方法において使用される任意の化合物について、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、細胞培養において決定されるようなＩＣ５０（すなわち症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて処方され得る。このような情報を、ヒトにおける有用な用量を更に正確に決定するのに用いることができる。血漿中のレベルは、例えば高性能液体クロマトグラフィーによって測定できる。
キット
本明細書で提供される組成物の１つ以上及び使用説明書を含むキットも本明細書で提供される。使用説明書は、本明細書に記載されるように、ＥＮＴＰＤ２関連疾患、例えば癌の診断又は処置のための説明書を含むことができる。本明細書で提供されるキットは、本明細書に記載される方法の任意の１つに従って使用され得る。当業者は、本明細書で提供されるキットについての他の適切な使用を知っており、このような使用のためのキットを使用することができる。本明細書で提供されるキットは、分析のためにサンプルを例えば実験室に戻すために使用され得る郵送業者（例えば、郵便料金支払い封筒又は郵送パック）も含み得る。キットは、サンプルのための１つ以上の容器を含み得るか、又はサンプルは、標準的な血液収集バイアル中にあり得る。キットは、インフォームドコンセント形態、試験依頼形態及び本明細書に記載の方法におけるキットの使用方法に関する説明書の１つ以上も含むことができる。このようなキットを使用するための方法も本明細書に含まれる。形態（例えば、試験要求形態）の１つ以上及びサンプルを保持する容器は、例えば、サンプルを提供した対象を識別するためのバーコードでコード化され得る。
当業者は、本発明の実践に使用することができる、本明細書に記載されたものと類似の又は均等な多くの方法及び材料を認識するであろう。実際には、本発明は、記載された方法及び材料に決して限定されない。
本発明の特定の実施形態を論じてきたが、上記の本明細書は、例示的なものであり、限定的なものではない。本発明の多くの変形は、本明細書及び以下の特許請求の範囲を検討することにより、当業者に明らかになるであろう。本発明の全範囲は、特許請求の範囲、それらの均等物の全範囲及び本明細書並びにそのような変形を参照することによって決定されるべきである。本発明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない以下の実施例において更に記載される。
実施例１：癌におけるＥＮＴＰＤ２の発現
エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２、ＮＴＰＤａｓｅ ２、ＮＴＰＤａｓｅ－２、Ｅｃｔｏ－ＡＴＰａｓｅ ２、エクト－ＡＴＰＤａｓｅ ２、ＣＤ３９抗原様１、ＣＤ３９Ｌ１、エクト－ＡＴＰ－ジホスホヒドロラーゼ２とも呼ばれる）は、プリン作動性シグナル伝達、特にＡＴＰ、ＵＴＰ並びに細胞外空間のＡＤＰ及びＵＤＰを調節する細胞外ＡＴＰヒドロラーゼのファミリーに属する（レビューは、Ｒｏｂｓｏｎ ｅｔ ａｌ Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ２：４０９－４３０（２００６）を参照されたい）。ＡＴＰ／ＡＤＰ加水分解の最終産物５’ＡＭＰは、続いてエクト－５’－ヌクレオチダーゼ（エクト５’Ｎｔａｓｅ又はＣＤ７３としても知られる）によってアデノシンに脱リン酸化される。
癌におけるＥＮＴＰＤ２の機能的役割は、十分に記述されていない。初期の報告は、ラット神経膠腫モデルにおけるＥＮＴＰＤ２過剰発現に焦点を当てており、これは、血小板及び腫瘍微小環境のＡＤＰ媒介調節を介してインビボ腫瘍増殖の増強をもたらし、且つ炎症状態増強腫瘍広がりを促進した（Ｂｒａｇａｎｈｏｌ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１４３４－４２（２００９）；Ｂｒａｇａｎｈｏｌ ｅｔ ａｌ Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ Ｓｉｇｎａｌ ８（２）：２３５－４３（２０１２））。より最近では、ＥＮＴＰＤ２の発現の上昇が肝細胞癌において報告され、そこでは、その発現が増強された骨髄由来サプレッサー細胞蓄積／維持による悪い予後と関連していた（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ８（１）：５１７（２０１７））。
癌におけるＥＮＴＰＤ２の機能的特徴付けは、パブリックドメインに限られているが、細胞外空間に放出されるＡＴＰ及びアデノシンなどのプリン作動性メディエーターは、免疫及び炎症において重要な役割を果たしていることが示されている。ストレスを受けた、損傷を受けた又はアポトーシスを起こした細胞から放出されたＡＴＰは、免疫細胞の動員を増強するＰ２ＲＸ受容体及びＰ２ＲＹ受容体の活性化を介して急速な炎症を引き起こし、Ｔ細胞におけるＴＣＲシグナル伝達を増強し、樹状細胞及びマクロファージ細胞の活性化を促進する。一方、アデノシンシグナル伝達は、エフェクターＴ細胞の阻害及び単核食細胞細胞の調節解除による免疫抑制ニッチをもたらす（総説については、Ｃｅｋｉｃ ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６：１７７－１９２（２０１６），Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １３：８４２－８５７（２０１３）を参照されたい）。前臨床において、アデノシンシグナル伝達を遮断したり、腫瘍部位の細胞外ＡＴＰを回復させたりすることにより、リンパ球の動員及び抗腫瘍反応を誘導することが示されている（Ｍｉｃｈａｕｄ ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３４（６０６２）：１５７３－７（２０１１）；Ａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９（２０）：５６２６－３５（２０１３））。
癌細胞におけるＥＮＴＰＤ２の発現上昇は、腫瘍微小環境におけるプリン作動性シグナル伝達のバランスを劇的に変化させ、より免疫抑制状態にシフトさせる可能性がある。従って、ＥＮＴＰＤ２触媒機能の標的化阻害はＡＴＰ駆動炎症促進性Ｔｈ－１様状態にバランスをシフトさせ、抗腫瘍免疫応答を増強する機会を提供することができる。
ＥＮＴＰＤ２の発現は、様々な腫瘍サブタイプにわたって慎重に検討されていない。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１を用いて、異なる適応症からの癌細胞株にわたるＥＮＴＰＤ２発現を評価した。細胞を氷上で４５分間、５μｇ／ｍｌの抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１で染色し、続いてヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ特異的、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７又はＡＰＣ結合二次Ａｂ（１：４００希釈；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）とインキュベートした。全てのインキュベーション及び洗浄は、１ｘ ＨｙＣｌｏｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、１％ ＨｙＣｌｏｎｅ Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、２ｍＭ ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）からなるＦＡＣＳ緩衝液中で行った。
ＥＮＴＰＤ２の発現上昇は、図１Ａに示すように、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、乳癌及び肺癌適応症由来の代表的な癌細胞株において観察された。ＥＮＴＰＤ２受容体密度を、製造業者の指示に従い、Ｂａｎｇｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｉｓｈｅｒｓ、ＩＮ）からのＱｕａｎｔｕｍ Ｓｉｍｐｌｙ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧを使用して定量した（表２０、図１Ｂ）。
原発性腫瘍組織におけるＥＮＴＰＤ２タンパク質発現を評価するために、対応する隣接正常組織を有するホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織マイクロアレイをＣｕｒｅｌｉｎｅ（Ｂｒｉｓｂａｎｅ、ＣＡ）から得た。ＩＨＣ染色は、抗ＣＤ３９Ｌ１／ＥＮＴＰＤ２ ＩＨＣ Ａｂ（ＮＢＰ１－８５７５２、Ｎｏｖｕｓ、Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＣＯ）を用いて、９５℃での標準的な高ｐＨ ＣＣ１抗原回収を伴う自動化Ｖｅｎｔａｎａプロトコールを用いて行い、続いてＶｅｎｔａｎａ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ（登録商標）ＯｍｎｉＭａｐ抗Ｒｂ ＨＲＰ二次Ａｂ及びＶｅｎｔａｎａ ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ（登録商標）ＣｈｒｏｍｏＭａｐ ＤＡＢキット（Ｖｅｎｔａｎａ、Ｔｕｓｃｏｎ ＡＺ）とインキュベートした。
細胞膜に局在するＥＮＴＰＤ２発現の上昇が、結腸直腸、食道及び卵巣腫瘍サンプルのサブセットで観察された。ＥＮＴＰＤ２発現のバックグラウンドレベルは、一致した正常組織切片において検出されなかったか又は非常に低かった（図２）。
実施例２：ヒトＥＮＴＰＤ２に結合するヒト化モノクローナル抗体の生成
ヒト、ラット、マウス及びカニクイザルＥＮＴＰＤ２の発現構築物の生成
ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、ラット及びマウスからの全長ＥＮＴＰＤ２並びにヒト及びマウスからのＥＮＴＰＤ１（ＣＤ３９）をコードするヌクレオチド配列をＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）又はＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースからのアミノ酸配列に基づいて合成した（表２４を参照されたい）。合成した全てのＤＮＡ断片を適切な発現ベクターにクローニングした。
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ＨＥＫ培養物からの組換えマウスＥＮＴＰＤ１並びにマウス及びラットＥＮＴＰＤ２の発現及び精製
組換え単量体マウス又はラットＥＮＴＰＤ２及びマウスＥＮＴＰＤ１を以下のように生成した：ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をＧｉｂｃｏ（商標）ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地中で培養し、ＣＭＶプロモーター、マウスＩｇＫシグナルペプチド、マウス又はラットＥＮＴＰＤ２の残基２９～４６２（細胞外ドメイン）又はマウスＥＮＴＰＤ１の残基３８～４７８及びポリヒスチジン（Ｈｉｓ６）タグ（配列番号１０１０）を含むプラスミドで一過性にトランスフェクトした。トランスフェクションの４日後、１Ｌ培養物からの細胞を２６００×ｇで１０分間ペレット化し、上清を、０．２２μｍフィルターを通した濾過によって清澄化した。上清に２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ ８．０及び２０ｍＭイミダゾールを添加し、６ｍＬ Ｎｉ－ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）を予め充填したカラムにロードした。カラムを１０カラム容量のＷａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ８．０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール］で洗浄し、５カラム容量のＥｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ８．０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール］で溶出した。ＰＤ－１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてタンパク質をＴＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換し、保存のために凍結した。
昆虫細胞からのヒトＥＮＴＰＤ１とヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２の発現と精製
Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ（登録商標）バキュロウイルス発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、組換えヒトＥＮＴＰＤ１並びにヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２タンパク質を発現させた。ヒトＥＮＴＰＤ１の残基３８～４７８又はヒト若しくはカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２の残基２９～４６２を、ＧＰ６７シグナルペプチド及びＣ末端Ａｖｉ－Ｈｉｓ６標識（配列番号１０１０）を用いて発現ベクターｐＦａｓｔＢａｃ（商標）１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングした。クローニングしたベクターをＤＨ１０Ｂａｃ（商標）大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）コンピテント細胞に形質転換して、組換えバクミドを作製した。次いで、組換えバクミドを、ＰｕｒｅＬｉｎｋ（登録商標）ＨｉＰｕｒｅプラスミドミニプレップキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して抽出し、ＦｕＧｅｎｅ（登録商標）ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＳｆ９（ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ））細胞にトランスフェクトして、組換えバキュロウイルス（ＢＶ）を生成した。１回の増幅の後、得られたＢＶを用いて、２×１０６細胞／ｍｌの密度及び１０の多重感染（ＭＯＩ）で１Ｌ懸濁培養中の高Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）（イラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ））細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に感染させた。感染後７２時間で細胞を２６００×ｇで１０分間の遠心分離によってペレット化し、分泌された、グリコシル化された組換えタンパク質を含む培地を収集した。次いで、上清に５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ８．０）、１ｍＭ ＮｉＣｌ２、５ｍＭ ＣａＣｌ２を補充し、次いで２６００×ｇで３０分間遠心分離した。上清を、０．２２μｍフィルターを通して濾過し、６ｍＬのＮｉ－ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）を充填したカラムにロードした。カラムを上記の１０カラム容量の洗浄緩衝液で洗浄し、溶出緩衝液（上にも記載）で溶出した。タンパク質を、ＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＴＢＳ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）に緩衝液交換し、保存のために凍結した。
ＥＮＴＰＤ１又はＥＮＴＰＤ２を安定に発現する細胞株の生成
レトロウイルス形質導入を用いて、安定なＥＮＴＰＤ１又はＥＮＴＰ２発現細胞株を生成した。レトロウイルスを作製するために、２９３Ｔ細胞を、製造業者の推奨に従い、ＦｕＧｅｎｅ（登録商標）６トランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ＃ Ｅ２６９２）を使用して、ＥＮＴＰＤ１又はＥＮＴＰＤ２を発現するレトロウイルス発現ベクター及びｐＣＬ－Ｅｃｏ又はｐＣＬ－１０Ａ１パッケージングベクター（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、ｃａｔ＃ＮＢＰ２－２９５４０又はＮＢＰ２－２９５２）で同時トランスフェクトした。細胞を３７℃及び５％ ＣＯ２の加湿インキュベーター中で維持し、ウイルス含有細胞上清をトランスフェクションの４８時間後に回収した。ＮＩＨ／３Ｔ３及び３００．１９細胞（ＡＴＣＣ（登録商標））を６ウェルプレート中でほぼコンフルエンスまで増殖させた。増殖培地を細胞から除去し、ウイルス上清を８ｕｇポリブレン／ｍｌ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ｃａｔ＃ＴＲ－１００３－Ｇ）の存在下で添加した。３７℃で３～６時間インキュベートした後、新鮮な培地を添加した。次いで、細胞を適切な選択条件下で培養して、安定なＥＮＴＰＤ１又はＥＮＴＰＤ２発現細胞株を産生した。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）の生成、発現及び精製
３００．１９細胞を、１０％ ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中で維持した。ＶＬＰを作製するために、細胞を４％ ＦＢＳを含むＤＭＥＭに交換し、次いでヒトＥＮＴＰＤ２発現プラスミド及びレトロウイルスＧａｇ発現プラスミドを３：２のμｇ比で同時トランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、細胞上清を回収し、ベンチトップ遠心分離機で２５００×ｇで５分間遠心分離することによって清澄化し、氷上に保持した。ＶＬＰを、Ｓｏｒｖａｌｌ（商標）ＲＣ ６ Ｐｌｕｓ超遠心機中のＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ（登録商標）ＳＷ ３２ Ｔｉローター中のＵｌｔｒａ－Ｃｌｅａｒ（商標）３８．５ｍｌ遠心管（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ（登録商標）、ｃａｔ＃３４４０５８）中の２０％スクロースクッションを通して１００，０００×ｇの超遠心分離により精製した。得られたペレットを３００μｌの冷無菌ＰＢＳに再懸濁し、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃２３２２５）を用いて定量した。
ハイブリドーマ生成
Ｂｃｌ－２トランスジェニックマウス［Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｇｎ（ｂｃｌ－２）２２ ＷＥＨＩ株］を、多重部位での反復免疫化（ＲＩＭＭＳ）を必要とする手順を用いて抗原で免疫化した（Ｋ．Ｅ．Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １９９７）。簡潔には、マウスに、末梢リンパ節（ＰＬＮ）に近接する８つの特異的部位に、２２．５μｇのＨｉｓ６標識ヒトＥＮＴＰＤ２ ２９－４６２ ＥＣＤタンパク質（「Ｈｉｓ６」、配列番号１０１０として開示）を注射した。この手順を２０日間にわたって８回繰り返した。１８日目に、試験出血を収集し、血清抗体力価をＦＡＣＳ及びＥＬＩＳＡによって分析した。いくつかの例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｓｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）又はＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ中のＨｉｓ６標識ヒトＥＮＴＰＤ２ ２９－４６２ ＥＣＤ（「Ｈｉｓ６」、配列番号１０１０として開示）タンパク質５０μｇ、ＰＢＳ中のヒトＥＮＴＰＤ２発現ＶＬＰ５０μｇ又はＰＢＳ中のヒトＥＮＴＰＤ２（配列番号２９１）を安定に過剰発現する５ｘ１０ｅ６ ３００．１９細胞で免疫化した。動物に２週間隔で皮下又は腹腔内に２回注射し、次いで約２週間後に、ＰＢＳ中のヒトＥＮＴＰＤ２発現ＶＬＰ又はＨｉｓ６標識ヒトＥＮＴＰＤ２ ２９－４６２ ＥＣＤタンパク質（「Ｈｉｓ６」配列番号１０１０として開示）５０μｇを静脈内追加免疫した。２回目の免疫化の１０日後、試験出血を収集し、血清抗体力価をＦＡＣＳ及びＥＬＩＳＡによって分析した。脾臓とプールした末梢リンパ節（ＰＬＮ）を高力価マウスから摘出した。リンパ球を採取するために、脾臓及びＰＬＮをＰＢＳ中で１回洗浄し、次いで７０ミクロンスクリーン（Ｆａｌｃｏｎ ＃３５２３５０）に通すことによって解離させた。得られたリンパ球を、Ｃｙｔｏｆｕｓｉｏｎ（登録商標）培地（ＢＴＸｐｒｅｓｓ Ｃｙｔｏｆｕｓｉｏｎ（登録商標）Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｃａｔ＃ ４７００１）中で融合する前に更に２回洗浄した。
融合のために、Ｆ０骨髄腫細胞をリンパ球と１：４の比で混合した。細胞混合物を遠心分離し、Ｃｙｔｏｆｕｓｉｏｎ（登録商標）培地中に懸濁し、続いて電気融合チャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｃｏａｘｉａｌチャンバー９ＭＬ Ｐａｒｔ ＃４７００２０）に添加した。電気融合は、ＣＥＥＦ－５０Ｂ Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ／Ｈｙｂｒｉｄｏｍａシステム（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用して、製造業者の説明書に従って実施した。融合細胞をチャンバー内で５分間回復させ、ヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ）を含まない培地［ＤＭＥＭ＋２０％ ＦＢＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミン（ＰＳＧ）、１×非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、０．５×ハイブリドーマ融合及びクローニングサプリメント（Ｒｏｃｈｅ；ＨＦＣＳ）］中で１：１０に希釈し、３７℃及び５％ ＣＯ２に１時間置いた。次に、４×ＨＡＴ培地（ＤＭＥＭ＋２０％ ＦＢＳ、１％ ＰＳＧ、１×ＮＥＡＡ、４×ＨＡＴ、０．５×ＨＦＣＳ）を添加して、ＨＡＴの濃度を１×にし、密度を６６，０００細胞／ｍｌに調整した。細胞を３８４ウェルプレートに６０ｕｌ／ウェルでプレーティングした。
ＦＡＣＳスクリーニング
融合の１０日後、ハイブリドーマプレートを、フローサイトメトリーを用いてＥＮＴＰＤ２特異的抗体の存在についてスクリーニングして、親ＮＩＨ／３Ｔ３細胞、ヒトＥＮＴＰＤ２を安定に過剰発現するＮＩＨ／３Ｔ３細胞及び内因性ヒトＥＮＴＰＤ２を発現するＲＫＯ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標））の３つの細胞株を用いて、細胞表面発現ヒトＥＮＴＰＤ２に対する候補抗体の特異的結合を確認した。細胞をＰＢＳで十分にリンスし、Ａｃｃｕｔａｓｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃ＳＣＲ００５）で処理して増殖プレートから取り出し、冷ＰＢＳに再懸濁した。細胞をビオチン化し、製造業者の説明書（ＦｌｕｏＲｅｐｏｒｔｅｒ（商標）Ｃｅｌｌ－Ｓｕｒｆａｃｅ Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ＃ Ｆ－２０６５０；ＰＥ－Ｃｙ７ Ｓｔｅｐｔａｖｉｄｉｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ＃ ＳＡ１０１２）に従って蛍光色素で標識した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ ＦＢＳ＋０．１％ ＮａＮ３を含むＰＢＳ）中において約１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。３８４ウェルプレートに、２０μＬのハイブリドーマ上清を予め播種し、２０μＬの細胞懸濁液を添加した。細胞を４℃で１時間インキュベートし、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、１：４００希釈で２次抗体を含むＦＡＣＳ緩衝液２０μＬに再懸濁した（アロフィコシアニン結合Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃγ特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃ １１５－１３６－０７１）。４℃で４５分間追加インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、２μｇ／ｍｌヨウ化プロピジウム（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｔ＃ Ｐ４８６４）を含むＦＡＣＳ緩衝液２０μＬ中に再懸濁した。幾何平均蛍光強度を、ＦｌｏｗＪｏ（商標）ソフトウェアを用いて生きた単一細胞について計算した。
この一次細胞ベースのフローサイトメトリースクリーンからのヒットを二次フローサイトメトリースクリーンで確認した。ＮＩＨ／３Ｔ３－ｈＥＮＴＰＤ２及びＲＫＯ細胞の両方に結合した抗体を発現するハイブリドーマを、ＣｅｌｌＳｔａｒ（登録商標）Ａｕｔｏｆｌａｓｋｓ（商標）（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）中のＨＴ培地補充物（５０×）Ｈｙｂｒｉ－Ｍａｘ（商標）（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ＃ Ｈ０１３７）を含むハイブリドーマ無血清培地中の４５ｍｌのタンパク質産生培養物中に増殖させた。培養物を３７℃及び５％ ＣＯ２の振盪インキュベーター中で約８日間維持し、次いで細胞をペレット化し、タンパク質Ｇ樹脂上での精製を通して上清を採取した。その後、タンパク質をＮＡＰ－１０（商標）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＰＢＳに緩衝液交換した。
組換え抗体産生
ハイブリドーマ由来ｍＡｂをＥＮＴＰＤ２によるＡＴＰ加水分解の阻害について細胞ベースのアッセイにおいてスクリーニングした。このアッセイで２つのリード阻害ｍＡｂを同定した：ｍＡｂ１７及びｍＡｂ１６。
マウス可変領域及びヒト定常領域からなるキメラ抗体を調製した。クローニング及び抗体最適化（ヒト化、潜在的な翻訳後修飾の除去など）のために、ハイブリドーマの可変領域（ＶＨ及びＶＬ）ＤＮＡ配列を得た。マウスモノクローナル抗体由来の可変領域ＤＮＡを、標準的な方法を使用して、選択された各ハイブリドーマ細胞株から得られたＲＮＡから５’ ＲＡＣＥによって増幅した。マウス可変重／軽鎖のそれぞれについてのポリペプチド配列をそれぞれｍＡｂ１７及びｍＡｂ１６について表１に示す。ハイブリドーマのそれぞれについての対応する可変重／軽ヌクレオチド配列は、配列番号２３４／配列番号２３８及び配列番号２２６／配列番号２３０に示される。キメラ抗体の調製のために、５’ ＲＡＣＥ－ＰＣＲによって増幅されたハイブリドーマＶＬ及びＶＨをコードするＤＮＡ配列を、それぞれのヒト野生型重鎖及びヒト軽鎖定常領域配列（ＩｇＧ１、κ）を含有する発現ベクターにクローニングした。これらのベクターを、ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、ｃａｔ＃ ２７１０６）を使用してミニプレップし、Ａｍａｘａ（商標）４Ｄ－Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）（Ｌｏｎｚａ）を使用して、独自のＣＨＯ細胞株にヌクレオフェクトした。トランスフェクトした細胞を安定なプール生成のために選択培地に入れ、得られたプールを１４日間の流加タンパク質産生プロセスに供した。タンパク質含有細胞上清を３０００×ｇで１５分間の遠心分離及び０．２２μｍフィルターでの濾過によって清澄化した。タンパク質を、ＡｅＫＴＡ（商標）Ｐｕｒｅ又はＡｅＫＴＡ（商標）Ｐｕｒｉｆｉｅｒ上のＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ ２１００４）を使用して溶出し、次いで透析により又はＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＰＢＳに緩衝液交換した。得られたタンパク質が、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅを使用する分析サイズ排除クロマトグラフィー（ＡｎＳＥＣ）によって＜９５％二量体であった場合、タンパク質を、移動相としてＰＢＳを使用するＨｉＬｏａｄ（登録商標）Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する分取ＳＥＣに供した。
ヒト化
可変領域構築物は、内部ソフトウェアプログラムを使用して、配列のヒト化及び最適化（例えば、潜在的な翻訳後修飾部位の除去）のためにも設計された。親和性及び所望の機能的活性を維持するために、Ｖｅｒｎｉｅｒ Ｚｏｎｅｓ（Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ １９９２，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ；２２４（２）：４８７－４９９）において復帰変異を有する１つ以上のヒトフレームワークを各マウスＶＨ及びＶＬについて選択した。また、ｍＡｂ１７及びｍＡｂ１６の両方を、三次元結晶構造ベースの設計を用いてヒト化した。簡潔には、結晶構造を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ（商標））（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ ＵＬＣ）にロードし、Ａｍｂｅｒ１０ＥＨＴ力場を用いた標準構造調製方法論を使用して調製した。次いで、Ｆａｂを、「ｃｄｒ＿ｇｒａｆｔｅｒ ＳＶＬ」と呼ばれるカスタムスクリプトを使用して、ヒト化Ｆａｂの社内ライブラリーと構造的に比較した。スクリプトは、入力されたマウスＦａｂ構造を内部データベース中のヒトＦａｂ構造と構造的に比較し、マウス（ドナー）Ｆａｂとヒト（アクセプター）Ｆａｂとの間の構造的類似性に関する詳細なパラメーターを列挙する。これらのパラメーターには、フレームワーク及びステム領域ＲＭＳＤ並びにＣＤＲ長比較が含まれる。これらのパラメーターに基づいて、ｍＡｂ１７からドナーＣＤＲを移植するために４つの候補アクセプターＦａｂを選択し、ｍＡｂ１６からドナーＣＤＲを移植するために４つの候補アクセプターＦａｂを選択した。ｍＡｂ１７のヒト化は、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、ｍＡｂ３及びｍＡｂ７の生成をもたらした。ｍＡｂ１６のヒト化及び最適化は、ｍＡｂ４、ｍＡｂ５及びｍＡｂ６の生成をもたらした。
両方のヒト化戦略からの設計されたヒト化ＶＬ及びＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列を、チャイニーズハムスター（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）のためのコドン最適化とともにＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から注文した。これらの可変領域を、標準的な方法を用いて、それぞれのヒト野生型重鎖及びヒト軽鎖定常領域配列（ＩｇＧ１、κ）を含む発現ベクターにサブクローニングした。
組換え抗体を、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）への重鎖及び軽鎖をコードするベクターの同時トランスフェクションによって産生した。トランスフェクトした細胞を、３７℃及び５％ ＣＯ２の振盪インキュベーター中に収容したＣｅｌｌＳｔａｒ（登録商標）Ａｕｔｏｆｌａｓｋｓ（商標）（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）中のＧｉｂｃｏ（登録商標）ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃１２３３８０１８）中で約５日間維持し、次いで細胞をペレット化し、タンパク質含有上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での精製を通して採取した。その後、タンパク質をＮＡＰ－１０（商標）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＰＢＳに緩衝液交換した。
実施例３．ファージディスプレイを用いたヒト抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体及びそのＦａｂ断片の生成
ヒトＥＮＴＰＤ２（配列番号２９１）に特異的に結合するＦａｂを、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ファージディスプレイ技術を用いて生成した。ファージミドライブラリーは、ＨｕＣＡＬ（登録商標）概念（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６，５７－８６）に基づき、ファージ表面上にＦａｂをディスプレイするためにＣｙｓＤｉｓｐｌａｙ（商標）技術を使用する（Ｌｏｈｎｉｎｇ、国際公開第２００１／０５９５０号パンフレット）。
４つのタイプのパニングを行った：直接被覆組換えヒトＥＮＴＰＤ２（ｈＥＮＴＰＤ２）に対する固相パニング、ＥＮＴＰＤ２に対する溶液パニング、全細胞パニング及び親和性成熟パニング。
ビーズベースのパニング
ビーズベースのパニングの前に、抗原を磁性カルボン酸被覆ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｍ－２７０カルボン酸、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ＃ １４３０６Ｄ）上に固定化した。１ファージプールあたり１×１０７の抗原で被覆されたビーズを１×ＣｈｅｍｉＢｌｏｃｋｅｒ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でブロックした。並行して、５０％ヒト血清／０．３３ｘ ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で適切な量のファージ抗体をブロックした。ビーズ結合ファージの選択を防止するために、ブロックされたファージ粒子を、固定化された無関係なタンパク質を有するビーズを用いてプレインキュベートした。ブロックされた抗原で被覆されたビーズを、予め吸着され、ブロックされたファージ粒子に添加し、ファージ抗体を抗原で被覆されたビーズに結合させた。抗原被覆ビーズに結合したファージ粒子を磁気分離によって収集した。いくつかの洗浄ステップにより、非特異的に結合したファージを除去した。最後に、特異的に結合したファージを抗原被覆ビーズから溶出した。溶出液を１４ｍｌの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１培養物に移し、ファージ感染のためにインキュベートした。
遠心分離に際して、感染した細菌をペレット化し、２×ＹＴ媒体に再懸濁し、ＬＢ／クロラムフェニコール寒天プレート上にプレートし、一晩インキュベートした。コロニーをプレートから掻き取り、ファージレスキュー、選択されたクローンのポリクローナル増幅及びファージ産生に使用した。精製ファージを用いて、次のパニングラウンドを開始した。第２及び第３ラウンドの固相パニングを、より少ない抗原及びよりストリンジェントな洗浄条件を使用したことを除いて、第１ラウンドと同じプロトコールを使用して行った。
溶液パニング
適切な量のストレプトアビジンビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）Ｍ－２８０ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ＃ １１２０６Ｄ）をブロックした。並行して、適切な量のファージ抗体をブロックした。ストレプトアビジン又はビーズ結合ファージの除去のために、ビオチン化無関係タンパク質で被覆されたブロックトストレプトアビジンビーズを用いて、ブロックされたファージ粒子の前吸着を行った。次いで、ビオチン化ＥＮＴＰＤ２を、前吸着され、ブロックされたファージ粒子に添加し、ファージ抗体を溶液中の抗原に結合させた。ブロックされたストレプトアビジンビーズを用いてファージ－抗原複合体を捕捉し、ストレプトアビジンビーズに結合したファージ粒子を磁気分離器で収集した。非特異的に結合したファージをいくつかの洗浄ステップによって洗い流した。特異的に結合したファージをストレプトアビジンビーズから溶出した。溶出液を１４ｍｌの大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１培養物に移し、ファージ感染のためにインキュベートした。その後、ビーズベースのパニングプロトコルに従ってファージ感染及びファージ産生を行い、次のパニングラウンドを開始した。ビーズベースの溶液パニングの第２ラウンド及び第３ラウンドは、ストリンジェンシーを増加させた洗浄条件を適用したことを除いて、第１のパニングラウンドと同じプロトコールを用いて行った。
全細胞パニング
各パニングについて、適切な量のファージ抗体をブロックした。並行して、ＥＮＴＰＤ２を発現している適切な量の標的細胞及び抗原ＥＮＴＰＤ２を発現していない適切な量の吸着細胞を各ファージプールについてブロックした。ブロックされた標的細胞をスピンダウンし、予めブロックされたファージ粒子に再懸濁し、ファージ抗体を細胞上に提示された抗原に結合させた。ファージ－細胞複合体を数回洗浄した。特異的に結合したファージを標的細胞から溶出した。遠心分離後、上清（溶出液）を抗原陰性吸着細胞に適用して、標的抗原以外の細胞表面分子に結合するファージを除去した（吸着後）。最終上清をファージ感染のために大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１培養物に移した。全細胞パニングの第２及び第３ラウンドは、第１のパニングラウンドと同じプロトコールを用いて行った。
親和性成熟パニング
ＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）成熟ライブラリーの生成
親和性成熟のために４つのＦａｂ候補を選択した。選択された抗体の親和性及び生物学的活性を増加させるために、ＣＤＲ－Ｌ３及びＣＤＲ－Ｈ２領域を、トリヌクレオチド特異的変異誘発を使用するカセット変異誘発によって最適化する一方、フレームワーク領域を一定に保った（Ｖｉｒｎｅｋａｅｓ ｅｔ ａｌ．１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２（２５），ｐｐ．５６００－５６０７）。ＣＤＲ－Ｌ３最適化のために、ＣＤＲ－Ｌ３、フレームワーク４及び軽鎖の定常領域をコードする約４００ｂｐのＤＮＡ断片を、制限消化によって親抗体をコードする配列から除去し、フレームワーク４及び定常ドメインとともに、多様化されたＣＤＲ－Ｌ３領域をコードするＤＮＡ断片のレパートリーで置き換えた。第２のライブラリーセットにおいて、ＣＤＲ－Ｈ２をコードする配列を多様化させる一方、連結フレームワーク領域を一定に保った。親非多様化配列のバックグラウンドを減少させるために、親ＣＤＲ－Ｈ２及びフレームワーク３配列を含有する約１５０ｂｐのＤＮＡ断片を、制限消化及びライゲーションを介して約５９０ｂｐのダミー配列で置き換え、その後、多様化ＣＤＲ－Ｈ２カセット（フレームワーク３を含む）を、同じく制限消化及びライゲーションを介して挿入した。ＭＣ１０６１Ｆ’細胞におけるライゲーション混合物の電気穿孔は、＞５ｘ１０６の独立コロニーにおいて、約１０８～１０９を生じた。ライブラリーの増幅は、以前に記載されたように行った（Ｒａｕｃｈｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ ｂｉｏｌ ｃｈｅｍ ２７８（４０），ｐｐ．３８１９４－３８２０５）。品質管理のために、１ライブラリーあたり約１０～２０の単一クローンを無作為に採取し、配列決定した。
親和性が改善された候補の選択のために、成熟ライブラリー由来のファージを２～３ラウンドの成熟パニングに供した。パニングストリンジェンシーは、各パニングラウンドにおいて抗原濃度を低下させることによって増加させた（Ｌｏｗ ｅｔ ａｌ．１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６０，ｐｐ．３５９－３６８）。抗原減少に加えて、オフレート選択を行った（Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６（３），ｐｐ．８８９－８９６）。これらの戦略を長期の洗浄ステップと組み合わせた。
発現
ディスプレイベクターから大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＦａｂ発現ベクターへのサブクローニング
可溶性Ｆａｂの迅速な発現を促進するために、選択されたＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ファージのＦａｂコードインサートをｐＭＯＲＰＨ（登録商標）３０ディスプレイベクターからｐＭＯＲＰＨ（登録商標）ｘ１１発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）ｘ１１＿ＦＨにサブクローニングした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の形質転換後、ＴＧ１ Ｆ単一クローン発現及びＨｕＣＡＬ（登録商標）－Ｆａｂ断片を含むペリプラズム抽出物の調製を以前に記載されたように行った（Ｒａｕｃｈｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３８１９４－３８２０５）。
Ｈｉｓ標識Ｆａｂ断片のミクロスケール産生
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１ Ｆ細胞における細菌発現ベクターによってコードされるＦａｂ断片の発現を、０．１％グルコース、３４μｇ／ｍＬクロラムフェニコール及び１ｍＭ ＩＰＴＧ（イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド）を補充した２５ｍＬの２×ＹＴ培地を使用して、５０ｍＬファルコンチューブ中で行った。培養物を３０℃で１８時間振盪した。細胞を回収し、リゾチーム及びＢｕｇ Ｂｕｓｔｅｒ（登録商標）タンパク質抽出試薬（Ｍｅｒｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の組合せを用いて破壊した。Ｈｉｓ６標識Ｆａｂ断片（「Ｈｉｓ６」、配列番号１０１０として開示）を、ＩＭＡＣ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を介して単離し、イミダゾールを用いて溶出した。１Ｘ ＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（ｐＨ ７．２）への緩衝液交換を、「ＰＤ ＭｕｌｔｉＴｒａｐ（商標）Ｇ－２５」プレート（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して行った。タンパク質濃度は、ＵＶ分光光度法によって測定した。代表的に選択されたサンプルの純度を変性、非還元１５％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。
ＩｇＧ及びＦａｂＣｙｓ発現ベクターへのサブクローニング並びにＨＫＢ１１細胞における発現
ＨＫＢ１１細胞における全長ＩｇＧ発現のために、選択された候補又は候補プールをｐＭＯＲＰＨ（登録商標）４＿ＩｇＧ１ｆベクターにクローニングした。サブクローニングは、多数の配列特異的ＦａｂクローンのＩｇＧフォーマットへの簡便且つ効率的な変換のための２段階法として実施した。
真核生物ＨＫＢ１１細胞に、ＩｇＧの重鎖及び軽鎖の両方をコードする哺乳動物発現ベクターＤＮＡをトランスフェクトした。細胞培養上清をトランスフェクション後３又は６日目に回収し、標準的なタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に供した。特に明記しない限り、緩衝液交換を１×ＤｕｌｂｃｅｃｃｏのＰＢＳ（ｐＨ ７．２、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に対して行い、サンプルを無菌濾過した（０．２μｍ孔径）。
タンパク質濃度をＵＶ分光光度法によって測定し、ＩｇＧの純度を、ＣＥ－ＳＤＳ（ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を使用して、変性、還元及び非還元条件下で分析した。ＨＰ－ＳＥＣを行って、天然状態のＩｇＧ調製を分析した。
抗体のまとめ
表１は、マウスハイブリドーマ及びファージディスプレイに由来する抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体の配列情報を示す。
実施例４．抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体の生化学的特徴付け
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体を以下のアッセイで評価した。
ＦＡＣＳスクリーニング：内因的に発現されたＥＮＴＰＤ２への候補抗体の特異的結合をフローサイトメトリーによって評価した。細胞を１×ＰＢＳで十分にリンスし、Ａｃｃｕｔａｓｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＃ＳＣＲ００５）で処理して増殖プレートから持ち上げ、１×ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の２％ ＦＢＳ＋０．１％ ＮａＮ３）中に約１×１０５細胞／９０μＬで再懸濁した。９６ウェルＵ底プレートに、ＦＡＣＳ緩衝液中１０μＬの１０ｘ抗体溶液を予め播種し、９０μＬの細胞懸濁液を添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、冷ＰＢＳで１回洗浄し、１００μＬの１：５００二次抗体１ｘ ＦＡＣＳ緩衝液（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ結合Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１０９－１３６－０９８）に再懸濁した。４℃で１５分間にわたって更にインキュベートした後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、４μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウム（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃ Ｐ３５６６）を含む１００μＬの１×ＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。幾何平均蛍光強度を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて生きた単一細胞について計算した。
直接被覆した抗原上でのＥＬＩＳＡスクリーニング：Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｎｕｎｃ）を、ＰＢＳ中に希釈した２μｇ／ｍｌの組換えＥＮＴＰＤ２で被覆した。ＰＢＳ中の２％ ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）で室温において１時間ブロックした後、プレートをＴＢＳＴ（ＴＢＳ中０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ＃ Ｔ９０３９）で３回洗浄し、ＴＢＳＴ中の一次抗体及び２％ ＢＳＡを連続希釈で添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを再び洗浄し、結合した抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃ １１５－０３５－０９８、１×ＴＢＳＴ＋２％ ＢＳＡ中で１：５０００に希釈）にコンジュゲートした抗ｈＦｃγと室温で１時間インキュベートし、続いてＴＢＳＴで洗浄し、その後ＳｕｒｅＢｌｕｅペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ、＃５２－００－０３）基質を添加することによって検出した。１５分後、６５０ｎＭでの吸光度を記録し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６で分析した。
Ｂｉａｃｏｒｅスクリーニング：親和性は、Ｔ２００感度アップグレード機器（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００又はＴ１００上で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて速度定数を決定することによって測定した。抗体を、表面に結合したマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ＃ ０５－４２００）アミンを用いて調製したＣＭ５センサチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉した。２５℃でのヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２ ＥＣＤの結合は、抗体の親和性に依存して０．７８ｎＭ～５００ｎＭの範囲の濃度で検出された。ＥＮＴＰＤ２分析物を３０μＬ／分の流速において、抗体のオフレートに依存して１８０秒間会合させ、１８００秒まで解離させた。泳動緩衝液は、ＰＢＳ ｐＨ ７．２（Ｃｏｒｎｉｎｇ １０Ｘストック、ｃａｔ＃ ４６－０１３－ＣＭから調製）＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０であった。再生は、３又は４Ｍ ＭｇＣｌ２の３０回の注射で達成され、表面から全ての捕捉された抗体及び残りの複合体を除去し、その後、新鮮な抗体を捕捉した。生データを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン１．０を使用して分析し、１：１結合モデルに適合させ、ＲＩを除いて全てのパラメーターを全体的に適合させるように設定し、これを局所的に適合させるように設定した。
ｍＡｂ１－ｍＡｂ１０に関する抗体特異性が確認された。全てのクローンは、ヒトＥＮＴＰＤ２への有意なｎＭ～サブｎＭ結合を示した。抗体ｍＡｂ８、ｍＡｂ９及びｍＡｂ１０は、マウスＥＮＴＰＤ２に対して弱い親和性を示す。選択された抗体のいずれもラットＥＮＴＰＤ２に結合しない。表２１及び表２２を参照されたい。
Figure 2022548881000142
Figure 2022548881000143
交差反応性 ＮＩＨ／３Ｔ３細胞を発現するヒトＥＮＴＰＤ１（ＮＰ＿００１７６７）を、レトロウイルス形質導入アプローチを用いて生成した。形質導入の７２時間後、操作した細胞を抗ヒトＣＤ３９／ＥＮＴＰＤ１ ＡＰＣ結合抗体（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）で染色し、ヒトＥＮＴＰＤ１を発現する生細胞を蛍光活性化細胞選別によって集団の残りから分離した。ＥＮＴＰＤ１の安定な発現を、上記の抗ヒトＣＤ３９／ＥＮＴＰＤ１ ＡＰＣ結合抗体（１：１００）を用いたＦＡＣＳによって定期的に再確認した。
Ｈ５２０細胞を、ＴａｑｍａｎによるＥＮＴＰＤ３（Ｃｔ ２５）及びＥＮＴＰＤ８（Ｃｔ ２６）発現を有する癌細胞株として同定し、選択性スクリーニングに使用した。
試験した抗ヒトＥＮＴＰＤ２ Ａｂのいずれについても、対照細胞株のいずれにも有意な結合は観察されなかった（表２５）。
Figure 2022548881000144
Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６システムを使用したエピトープビニング
抗ヒトＥＮＴＰＤ２抗体のエピトープビニングを、生物層干渉法（ＢＬＩ）を測定するＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を用いて行った。ヒトＥＮＴＰＤ２－Ａｖｉ－Ｈｉｓ６タンパク質（「Ｈｉｓ６」、配列番号１０１０として開示）を、製造業者の推奨に従い（Ａｖｉｄｉｔｙ、ＬＬＣ、ＵＳＡ ｃａｔ＃ ＢｉｒＡ５００）、ＢｉｒＡビオチンリガーゼを用いてＡｖｉＴａｇ（商標）を介してビオチン化した。ビオチン化免疫原足場を、予め平衡化したストレプトアビジンセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）上に０．５μｇ／ｍＬでロードした。次いで、センサーを、１×動力学緩衝液（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）中の１００ｎＭ抗体Ａを含む溶液に移した。センサーを１×動力学緩衝液中で短時間洗浄し、１００ｎＭの競合抗体を含む第２の溶液に移した。Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６システム分析ソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０、ＦｏｒｔｅＢｉｏ、ＵＳＡ）を使用して、生データから結合動態を決定した。ｈＥＮＴＰＤ２に結合した第１の（ブロッキング）抗体及び第２の（競合物）抗体の両方として、抗体を全ての対の組合せで試験した。全ての抗体は、このアッセイにおいて有意なクロスブロッキングを示し、ｍＡｂ１－１０が類似のエピトープを有し得ることを示した。
実施例５．抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２の結晶学及びエピトープマッピング
この実施例では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２をヒトＥＮＴＰＤ２（Ｙ３５０Ａ変異体）外部ドメインとの複合体中で結晶化させ、対応する構造を決定した。Ｘ線データに基づくヒトＥＮＴＰＤ２への抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２結合の分析は、明らかにされた抗原結合の分子的詳細とＦａｂパラトープ及び抗原エピトープに対する洞察とを提供した。
材料及び方法
Ｆａｂ断片の発現及び精製
同定されたＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を、それぞれヒト野生型ＣＨ１及びヒトκ軽鎖定常領域配列を含む哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。組換えヒトＦａｂは、トランスフェクション試薬を用いてベクターを細胞に一過性同時トランスフェクションすることによって産生した。トランスフェクション後、細胞を５～６日間培養し、抗体の精製を行った。細胞を遠心分離（２６００×ｇ、１０分間）によってペレット化し、抗体含有細胞上清を０．２２□ｍフィルターを通した濾過によって清澄化した。Ｆａｂをタンパク質Ｇ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムで精製し、酸性溶出緩衝液条件を用いて溶出した。
ヒトＥＮＴＰＤ２及び抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２複合体の調製
ＥＮＴＰＤ２－ＦＡｂ２２複合体を調製するために、１．３倍モル過剰のＦＡｂ２２を、１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．５中のｈＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａと組み合わせて、５．６５ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得た。複合体サンプルを氷上で２時間インキュベートし、結晶化スクリーンセットアップに供した。
結晶化及びＸ線データ収集
滴下蒸気拡散を静置することにより、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ Ｃｒｙｓｔａｌｑｕｉｃｋ Ｐｌｕｓプレート）中で結晶を成長させた。詳細には、０．２μｌのタンパク質ストックを０．２μｌのリザーバ溶液と混合し、液滴を２０℃で５０μｌの同じリザーバ溶液に対して平衡化した。実験は、Ｐｈｏｅｎｉｘロボットシステム（Ａｒｔ Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて設定し、社内のカスタムエンジニアリングクリスタルイメージャー及びガントリー（Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＧＮＦ内部システム）に保存した。
Ｘ線データ収集のために、単結晶をクライオループに直接取り付け、液体窒素中にフラッシュ冷却した。Ｘ線データは、０．９７６５ÅのＸ線放射を用いて、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ、ＢＬ５．０３、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｑ３１５ ＣＣＤ検出器で収集した。それぞれ１．０°振動の１８０画像を結晶－検出器間距離３５０ｍｍで記録し、ＨＫＬ２０００で処理した（Ｚ．Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｎｏｒ，“Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｘ－ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｄａｔａ Ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２７６：Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，ｐａｒｔ Ａ，ｐ．３０７－３２６，１９９７，Ｃ．Ｗ．Ｃａｒｔｅｒ，Ｊｒ．＆Ｒ．Ｍ．Ｓｗｅｅｔ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
構造決定及び分析
ＦＡｂ２２－ＥＮＴＰＤ２複合体の構造は、独立した検索モデルとして、以前に社内で決定されたヒトＥＮＴＰＤ２の洗練された構造及び抗ＲＳＶ Ｆａｂ Ｂ２１ｍ（ＰＤＢコード３ＱＲＧ）のコーディネートを使用して、プログラムＰｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４０：６５８－６７４）による分子置換によって決定した。モデル構築の反復サイクルを用いて構造を洗練させ、続いてプログラムＣｏｏｔ ０．８．０（Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ Ｏｂｊｅｃｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｔｏｏｌｋｉｔ；Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＡｕｔｏｂｕｓｔｅｒ ２．１１．５（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＢＵＳＴＥＲ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１１．２．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）を用いる自動結晶学的洗練を行った。
結晶構造の目視検査は、プログラムＣｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＰｙＭＯＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ；ＤｅＬａｎｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ：Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）を用いて行った。最終洗練モデルの品質は、プログラムＣｏｏｔ及びＰＲＯＣＨＥＣＫ ｖ３．３（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；２６：２８３－２９１）を用いて評価した。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２の結合時に溶媒に接近しにくくなるヒトＥＮＴＰＤ２の残基は、ＣＣＰ４プログラムスイートのプログラムＡＲＥＡＩＭＯＬ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ、Ｎｕｍｂｅｒ ４、１９９４）によって同定された。４．０Åのカットオフ距離を用いて分子間接触を定義し、ＣＣＰ４プログラムＮＣＯＮＴで同定した。
結果
ヒトＥＮＴＰＤ２との複合体における抗ｈＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２の結晶構造
ヒトＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ変異体と複合体化した抗ｈＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２を２０℃において静置滴下での蒸気拡散法により９６ウェルプレート中で結晶化させた。結晶は、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７．５、２０％ポリエチレングリコール３３５０、０．２Ｍ塩化マグネシウム中で成長した。結晶は、約６週間後に現れ、数日以内にフルサイズに成長した。
ＦＡｂ２２－ＥＮＴＰＤ２複合体の結晶は、単斜晶系空間群Ｃ２にあり、非対称単位あたり１複合体であった。完全な回折データセットを２．７５オングストロームの分解能まで複合体について収集した。
分子置換による構造決定は、以前に決定されたヒトＥＮＴＰＤ２コーディネート及びＰＤＢコード３ＱＲＧからのＦａｂコーディネートを用いて行った。ＡｕｔｏＢｕｓｔｅｒによる洗練は、良好な洗練された統計及び全体的な幾何学的形状をもたらした。２つのＦＡｂ２２残基、Ａｌａ５５Ｌ及びＴｙｒ３３Ｈ並びに４つのＥＮＴＰＤ２残基、Ｇｌｙ１２０、Ｔｈｒ１２２、Ｔｙｒ２２９及びＡｌａ４３０は、ＦＡｂ２２－ＥＮＴＰＤ２複合体の構造におけるＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ外れ値であった。ＥＮＴＰＤ２残基Ｇｌｙ１２０及びＴｈｒ１２２は、Ｆａｂ残基Ａｌａ５５Ｌ及びＴｙｒ３３Ｈに加えて、電子密度において明確に定義され、真の幾何学的外れ値である可能性が高い。注目すべきことに、Ｔｙｒ３３Ｈは、以下に記載されるように、ＥＮＴＰＤ２結合に関与するＣＤＲ残基である。ＥＮＴＰＤ２残基Ｔｙｒ２２９及びＡｌａ４３０は、電子密度において緩くモデル化された。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を図３Ａに提供し、ＣＤＲに下線を引き（Ｋａｂａｔ，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２によって定義される）、Ｆａｂ－抗原界面に位置する残基を＊で標識した。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２２／ＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ複合体の三次元構造の全体図を図６に示す。
この実施例で使用した組換えヒトＥＮＴＰＤ２のアミノ酸配列（配列番号２９１）を図４Ａに示す。ヒトＥＮＴＰＤ２の可溶性細胞外ドメインは、残基２９～４６２に及ぶ。Ｙ３５０Ａの操作された変異が構築物中に存在し、灰色イタリック体で強調された。ここで使用した構築物は、Ｎ末端ＧＰ６７分泌シグナルペプチド（最初の３８残基）及びＣ末端６ｘヒスチジンタグ（配列番号１０１０）を利用した。Ａｓｎ６４、Ａｓｎ１２９、Ａｓｎ２９４、Ａｓｎ３７８及びＡｓｎ４４３は、灰色イタリック体で強調された結晶構造においてグリコシル化が観察された部位のみについて予測されたＮ結合グリコシル化部位である。二次構造要素をアミノ酸配列の下に示し、バーはαヘリックスを表し、矢印は、□鎖を表す。二次構造要素が標識されていない残基は、非構造化ループ及びターンセグメントを表す。
ヒトＥＮＴＰＤ２アミノ酸配列は、齧歯類種及び他の哺乳動物と高い配列相同性を有し、その構造は、ラットＥＮＴＰＤ２について記載されたものとほぼ同一の全体的な折り畳みを有する（すなわちＰＤＢコード３ＣＪＡ、Ｚｅｂｉｓｃｈ，Ｍ．，Ｓｔｒａｔｅｒ，Ｎ．（２００８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕｓａ １０５：６８８２－６８８７）。Ｃｙｓ７５／Ｃｙｓ９９、Ｃｙｓ２４２／Ｃｙｓ２８４、Ｃｙｓ２６５／Ｃｙｓ３１０、Ｃｙｓ３２３／Ｃｙｓ３２８及びＣｙｓ３７７／Ｃｙｓ３９９について、不変及び保存されたジスルフィド対が観察される。ヒトＥＮＴＰＤ２構造とラットＥＮＴＰＤ２構造との間の３８８個のＣ－α炭素にわたるＲＭＳＤ（二乗平均平方根偏差）は、約０．３６５Åである。
ＦＡｂ２２／ＥＮＴＰＤ２複合体の最終モデルは、ＥＮＴＰＤ２の残基３７～４４８を含んでいた。ＡＴＰ加水分解の活性部位は、２つのサブドメイン間に存在する（サブドメイン１：Ｐｒｏ３６－Ｓｅｒ１６１とＬｙｓ４２７－Ｐｈｅ４６１；サブドメイン２：Ｇｌｙ１６２－Ｇｌｎ４２６）。最終モデルから省略されたＥＮＴＰＤ２残基は、Ｎ末端の残基２９～３６及び鎖β２及びβ３を連結するループ残基に対応する６０～６５、膜相互作用ループ（ＭＩＬ）に対応する残基１７９～１９３並びにＩｌｅ４４８を超えるＣ末端残基を含む。末端システイン（Ｃｙｓ２２８重鎖／Ｃｙｓ２１８軽鎖）を除いて、全ての重鎖及び軽鎖Ｆａｂ残基を最終洗練モデルに含めた。
ＦＡｂ２２は、ＥＮＴＰＤ２抗原に、主に、重鎖及び軽鎖可変ドメインの６つ全てのＣＤＲを含む相互作用を介して、予測される膜遠位葉の結合を介して結合する。ＦＡｂ２２ ＣＤＲ残基は、ＡＴＰ基質結合に影響を及ぼすためにＥＮＴＰＤ２活性部位の裂け目に感知できるほど浸透するようには見えない。重鎖ＣＤＲ３及びＣＤＲ２残基は、鎖β１０／β１１からなる逆平行２鎖βシートを含み及び隣接する残基を隔離する。末端重鎖ＣＤＲ３残基は、ヘリックスα１４のＮ末端の残基並びにα８及びα１３ヘリックスとの更なる結合接触を形成する。ＥＮＴＰＤ２との軽鎖可変ドメイン結合相互作用には、主にヘリックスα１４のＮ末端に結合するＣＤＲ１及びＣＤＲ３残基が大きく関与する。ＦＡｂ２２／ＥＮＴＰＤ２複合体の形成は、重鎖及び軽鎖Ｆａｂ鎖からのほぼ等しい寄与を伴って、合計の組合せた溶媒接近可能な表面の約１６７００Å２を埋め込む。４．０Åの距離カットオフ内で計算した直接分子間接触に関与するエピトープ及びパラトープ残基を表１７に列挙し、図３Ａ及び４Ａに標識する。合計２５個のＦａｂ残基及び２６個のＥＮＴＰＤ２残基が直接分子間接触に関与し、重鎖ＣＤＲは、軽鎖ＣＤＲよりも多くの結合残基に寄与する。これらのＦａｂパラトープ残基のうち、ＣＤＲチロシンは、関与する１４個のＣＤＲ Ｔｙｒ残基の１０個との多数のＥＮＴＰＤ２接触に寄与する。分子間接触における重鎖ＣＤＲ残基には、ＣＤＲ１残基Ｓｅｒ３１、Ｇｌｙ３２、Ｔｙｒ３３及びＴｙｒ３４；ＣＤＲ２残基Ｔｙｒ５４、Ａｓｐ５５、Ａｓｐ５７；及びＣＤＲ３残基Ｔｙｒ１００、Ｔｙｒ１０１、Ａｒｇ１０２、Ｔｙｒ１０３、Ｓｅｒ１０６、Ｔｙｒ１０７、Ａｓｐ１１２、Ｔｙｒ１１３が含まれる。重鎖ＦＲ１のＴｙｒ２７もＥＮＴＰＤ２抗原と接触する。ＥＮＴＰＤ２結合に関与する軽鎖ＣＤＲ１残基には、Ｔｙｒ３１、Ａｓｐ３２、Ｇｌｙ３３及びＴｙｒ３６並びにＣＤＲ２軽鎖残基Ｇｌｕ５９、Ｓｅｒ６０及びＣＤＲ３残基Ｓｅｒ９５、Ａｓｎ９６及びＡｓｐ９８が含まれる。側鎖が無秩序であり、ＦＲ３のＧｌｙ６１に加えて複合体構造でモデル化されていないＧｌｕ１は、ＥＮＴＰＤ２抗原のＡｓｎ２９４について観察され、図３Ａにおいて強調されているＮ結合グリコシル化の接触距離内にある。
Figure 2022548881000145
Figure 2022548881000146
実施例６．抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３の結晶学及びエピトープマッピング
この実施例では、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３をヒトＥＮＴＰＤ２（Ｙ３５０Ａ変異体）外部ドメインとの複合体中で結晶化させ、対応する構造を決定した。Ｘ線データに基づくヒトＥＮＴＰＤ２への抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３結合の分析は、明らかにされた抗原結合の分子的詳細とＦａｂパラトープ及び抗原エピトープに対する洞察とを提供した。
材料及び方法
ヒトＥＮＴＰＤ２及び抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３複合体の調製
ＥＮＴＰＤ２－ＦＡｂ２３複合体を調製するために、１．６倍モル過剰のＥＮＴＰＤ２を、１００ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）中のＦＡｂ２３と合わせ、限外濾過によって９．０８ｍｇ／ｍＬに濃縮し、氷上で１０分間インキュベートし、結晶化試験の設定に供した。
結晶化及びＸ線データ収集
ヒトＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ変異体と複合体化した抗ｈＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３を２０℃において静置滴下での蒸気拡散法により９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）中で結晶化させた。詳細には、０．２μｌのタンパク質ストックを０．２μｌのリザーバ溶液と混合し、液滴を２０℃で５０μｌの同じリザーバ溶液に対して平衡化した。実験は、Ｐｈｏｅｎｉｘロボットシステム（Ａｒｔ Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて設定し、社内のカスタムエンジニアリングクリスタルイメージャー及びガントリー（Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＧＮＦ内部システム）に保存した。
Ｘ線データ収集のために、１つの結晶をクライオループに直接取り付け、液体窒素中にフラッシュ冷却した。Ｘ線データセットは、０．９７６５ÅのＸ線放射を用いて、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ、ＢＬ５．０３において、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｑ３１５ｒ ＣＣＤ検出器で収集した。それぞれ１．０°振動の１４０画像を結晶－検出器間距離３００ｍｍで記録し、ＨＫＬ２０００で処理した（Ｚ．Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｎｏｒ，“Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｘ－ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｄａｔａ Ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅ ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２７６：Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，ｐａｒｔ Ａ，ｐ．３０７－３２６，１９９７，Ｃ．Ｗ．Ｃａｒｔｅｒ，Ｊｒ．＆Ｒ．Ｍ．Ｓｗｅｅｔ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
構造決定及び分析
ＦＡｂ２３－ＥＮＴＰＤ２複合体の構造は、独立した検索モデルとして、以前に社内で決定されたヒトＥＮＴＰＤ２の洗練されたコーディネートと、ＩＣＳＭ １８－抗ＰＲＰ（ＰＤＢコード４Ｗ９Ｄ）のＦａｂ断片と高い配列類似性を示したＭＯＥソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ），２０１３．０８；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ ＵＬＣ，１０１０ Ｓｈｅｒｂｏｏｋｅ Ｓｔ．Ｗｅｓｔ，Ｓｕｉｔｅ ＃９１０，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ，Ｈ３Ａ ２Ｒ７，２０１８）における抗体モデラーツールで生成されたＦＡｂ２３の相同モデルを使用した、プログラムＰｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４０：６５８－６７４）による分子置換により決定した。モデル構築の反復サイクルを用いて構造を洗練させ、続いてプログラムＣｏｏｔ ０．８．０（Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ Ｏｂｊｅｃｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｔｏｏｌｋｉｔ；Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＡｕｔｏｂｕｓｔｅｒ ２．１１．５（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＢＵＳＴＥＲ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１１．２，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）を用いる自動結晶学的洗練を行った。
結晶構造の目視検査は、プログラムＣｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＰｙＭＯＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ；ＤｅＬａｎｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ：Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）を用いて行った。最終洗練モデルの品質を、プログラムＣｏｏｔ及びＰＲＯＣＨＥＣＫ ｖ３．３（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；２６：２８３－２９１）を用いて評価した。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＭＡＢ１７ Ｆａｂの結合時に溶媒に接近しにくくなるヒトＥＮＴＰＤ２の残基をＣＣＰ４プログラムスイートのプログラムＡＲＥＡＩＭＯＬ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ、Ｎｕｍｂｅｒ ４、１９９４）によって同定した。４．０Åのカットオフ距離を用いて分子間接触を定義し、ＣＣＰ４プログラムＮＣＯＮＴで同定した。
結果
抗ｈＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３／ＥＮＴＰＤ２複合体の結晶構造
ヒトＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ変異体と複合体化した抗ｈＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３を２０℃において静置滴下での蒸気拡散法により９６ウェルプレート中で結晶化させた。結晶は、０．０８Ｍビス－Ｔｒｉｓプロパン（ｐＨ ８．８）、０．０２Ｍクエン酸、１６％ ＰＥＧ３３５０中で成長した。結晶は、約６週間後に現れ、数日以内にフルサイズに成長した。
ＦＡｂ２３－ＥＮＴＰＤ２複合体の結晶は、単斜晶系空間群Ｐ２１にあり、非対称単位あたり１複合体であった。完全な回折データセットを複合体について２．０オングストロームの分解能まで収集した。ＥＮＴＰＤ２と複合体化したＦＡｂ２３の最終モデルをＡｕｔｏＢｕｓｔｅｒで洗練させ、良好な洗練された統計及び全体的な幾何学的形状を得た。ＦＡｂ２３軽鎖由来の２つの残基（Ｓｅｒ３９及びＴｈｒ５０）及びＥＮＴＰＤ２由来の２つ（Ｔｈｒ１２２及びＡｌａ４３０）を有する合計４つのＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ外れ値が最終モデルに存在した。電子密度は、Ｆａｂ軽鎖のＳｅｒ３９について低く、仮にモデル化した。全ての他の残基は、電子密度において十分に定義され、真のＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ外れ値である可能性が高い。最終モデルから省略されたＥＮＴＰＤ２残基は、Ｎ末端の残基２９～３４及びＣ末端の４４８を超える残基を含む。ＦＡｂ２３鎖定常領域の残基１３９～１４４及び末端システイン（Ｃｙｓ２２７）も最終モデルから省略した。ＦＡｂ２３軽鎖の最後の２つの残基（Ｇｌｕ２１２及びＣｙｓ２１３）も、無秩序のために最終モデルに存在しなかった。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２３重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を図３Ｂに提供し、ＣＤＲに下線を引き（Ｋａｂａｔ，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２によって定義される）、Ｆａｂ－抗原界面に位置する残基を＊で標識した。ＦＡｂ２３／ＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ複合体の三次元構造の全体図を図７に示す。
ＦＡｂ２２とは対照的に、ＦＡｂ２３のＥＮＴＰＤ２への結合は、重鎖及び軽鎖可変ドメインの両方による膜近位葉及び遠位葉の両方の有意な結合を含む。重鎖可変領域ループＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、ＣＤＲ１からの寄与なしに、ＥＮＴＰＤ２結合に関与する。軽鎖可変領域からの３つ全てのＣＤＲからの残基は、ＥＮＴＰＤ２結合に関与する。ＥＮＴＰＤ２膜遠位葉との接触は、主に、α１３とα１４との間のＥＮＴＰＤ２ループ領域残基に結合する重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＦＲ３残基からの残基並びに逆平行鎖β１０／β１１及びヘリックスα９とのＦＲ３相互作用によって付与される。ＣＤＲ３軽鎖及びＣＤＲ２重鎖残基は、ＥＮＴＰＤ２の膜近位葉のβ３及びα１を連結するα２ヘリックス及びループ残基への広範な結合を付与する。重鎖ＣＤＲ３は、末端残基Ｔｙｒ１０４、Ｔｙｒ１０５及びＧｌｙ１０６を膜遠位葉のヘリックスα８、α１１及びα１４のＮ末端間のＥＮＴＰＤ２活性部位裂け目に投影する。結合したラットＥＮＴＰＤ２結晶構造ＰＤＢ ３ＣＪＡからのＡＴＰ類似体ＡＭＰ－ＰＮＰの重ね合わせは、Ｔｙｒ１０５がＡＴＰのアデニン環が結合すると予測され、潜在的に基質結合を立体障害する位置にあることを示唆する。重鎖ＣＤＲ３末端のＴｙｒ１０５及びＴｙｒ１０４は、基質ＡＴＰのアデニン環とのπ－π及びカチオン－πスタッキング相互作用に必要なＴｙｒ３５０及びＡｒｇ３９４を含むＥＮＴＰＤ２活性部位残基も混乱させ得る。ＦＡｂ２３のＥＮＴＰＤ２への結合は、約１７５００Å２の組み合わされた溶媒接近可能な表面を埋める。４．０Åの距離カットオフ内で計算された直接分子間接触に関与するエピトープ及びパラトープ残基を表１８に列挙し、図３Ｂ及び４Ａに標識する。２５個のＦａｂ残基及び２９個のＥＮＴＰＤ２残基が、直接分子間接触に関与していた。ＣＤＲ２の重鎖残基Ｔｙｒ５５、Ｉｌｅ５７、Ｔｈｒ５９、Ｇｌｎ６２及びＣＤＲ３のＰｈｅ１０２、Ｔｙｒ１０５、Ｉｌｅ１０７、Ｔｙｒ１１０は、ＣＤＲ１残基からの寄与なしにＥＮＴＰＤ２結合に寄与する。ＥＮＴＰＤ２結合に寄与する軽鎖残基には、ＣＤＲ１からのＳｅｒ２７及びＴｙｒ３１、ＣＤＲ２からのＳｅｒ４９及びＡｓｎ５２並びにＣＤＲ３のＴｒｐ９０、Ｓｅｒ９１、Ｓｅｒ９２、Ｔｙｒ９３及びＴｒｐ９５が含まれる。ＥＮＴＰＤ２結合に寄与する非ＣＤＲ軽鎖残基には、結晶構造においてピログルタメートとして観察されモデル化されるＧｌｕ１、ＦＲ１のＴｈｒ２２及びＦＲ３のＳｅｒ６４、Ｇｌｙ６５、Ｓｅｒ６６、Ｇｌｙ６７、Ｔｈｒ６８及びＰｈｅ６９が含まれる。
Figure 2022548881000147
Figure 2022548881000148
実施例７．抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４の結晶学とエピトープマッピング
この実施例では、抗マウスＥＮＴＰＤ２ Ｆａｂ ＭＡＢ１３をマウスＥＮＴＰＤ２外部ドメインとの複合体中で結晶化させ、対応する構造を決定した。Ｘ線データに基づくマウスＥＮＴＰＤ２への抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４結合の分析は、明らかにされた抗原結合の分子的詳細及びＦａｂパラトープ及び抗原エピトープに対する洞察を提供した。
材料及び方法
マウスＥＮＴＰＤ２及び抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４複合体の調製
マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４複合体を調製するために、１００ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ ７．５中の精製マウスＥＮＴＰＤ２及びＦＡｂ２４を１：１のモル比で合わせ、氷上で４℃において一晩インキュベートした。翌朝、サンプルを限外濾過により９．８８ｍｇ／ｍＬに濃縮し、結晶化試験の設定に供した。
結晶化及びＸ線データ収集
ＥＮＴＰＤ２ Ｙ３５０Ａ変異体と複合体化した抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４を２０℃において静置滴下での蒸気拡散法により９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）中で結晶化した。詳細には、０．２μｌのタンパク質ストックを０．２μｌのリザーバ溶液と混合し、液滴を２０℃で５０μｌの同じリザーバ溶液に対して平衡化した。実験は、Ｐｈｏｅｎｉｘロボットシステム（Ａｒｔ Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて設定し、社内のカスタムエンジニアリングクリスタルイメージャー及びガントリー（Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＧＮＦ内部システム）に保存した。
Ｘ線データ収集のために、１つの結晶をクライオループに直接取り付け、液体窒素中にフラッシュ冷却した。ＡＤＳＣ Ｑｕａｎｔｕｍ ３１５ｒ ＣＣＤ検出器を備えた１．１８０８ÅのＸ線放射を用いて、ＳＳＲＬ、ビームライン７－１でＸ線データセットを収集した。それぞれ０．５°振動の３４０画像を結晶－検出器間距離４００ｍｍで記録し、ＨＫＬ２０００で処理した（Ｚ．Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｎｏｒ，“Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｘ－ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｄａｔａ Ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ２７６：Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，ｐａｒｔ Ａ，ｐ．３０７－３２６，１９９７，Ｃ．Ｗ．Ｃａｒｔｅｒ，Ｊｒ．＆Ｒ．Ｍ．Ｓｗｅｅｔ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
構造決定及び分析
ＦＡｂ２４－マウスＥＮＴＰＤ２複合体構造は、独立した検索モデルとして以前に社内で決定されたマウスＥＮＴＰＤ２及びＦＡｂ２４の精緻化された構造を使用して、プログラムＰｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４０：６５８－６７４）による分子置換によって決定された。モデル構築の反復サイクルを用いて構造を洗練させ、続いてプログラムＣｏｏｔ ０．８．０（Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ Ｏｂｊｅｃｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｔｏｏｌｋｉｔ；Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＡｕｔｏｂｕｓｔｅｒ ２．１１．５（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＢＵＳＴＥＲ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１１．２．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）を用いる自動結晶学的洗練を行った。
結晶構造の目視検査は、Ｃｏｏｔ（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＰｙＭＯＬ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ；ＤｅＬａｎｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ：Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）のプログラムを用いて行った。最終洗練モデルの品質は、プログラムＣｏｏｔ及びＰＲＯＣＨＥＣＫ ｖ３．３（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；２６：２８３－２９１）を用いて評価した。抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４の結合時に溶媒に接近しにくくなるマウスＥＮＴＰＤ２の残基は、ＣＣＰ４プログラムスイートのプログラムＡＲＥＡＩＭＯＬ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ ４，１９９４）によって同定された。４．０Åのカットオフ距離を用いて分子間接触を定義し、ＣＣＰ４プログラムＮＣＯＮＴで同定した。
ＦＡｂ２４－マウスＥＮＴＰＤ２複合体構造は、独立した検索モデルとして以前に社内で決定されたマウスＥＮＴＰＤ２及びＦＡｂ２４の精緻化された構造を使用して、プログラムＰｈａｓｅｒ（ＭｃＣｏｙ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ａｐｐｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４０：６５８－６７４）による分子置換によって決定された。モデル構築の反復サイクルを用いて構造を洗練させ、続いてプログラムＣｏｏｔ ０．８．０（Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ Ｏｂｊｅｃｔ－Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｔｏｏｌｋｉｔ；Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｓｅｃｔ Ｄ：Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ；６６：４８６－５０１）及びＡｕｔｏｂｕｓｔｅｒ ２．１１．５（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＢＵＳＴＥＲ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１１．２．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）を用いる自動結晶学的洗練を行った。
結果
抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４／マウスＥＮＴＰＤ２複合体の結晶構造
マウスＥＮＴＰＤ２と複合体化した抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４を２０℃において静置滴下での蒸気拡散法により９６ウェルプレート中で結晶化した。結晶は、０．２Ｍクエン酸三アンモニウムｐＨ ７．０、２０％ ＰＥＧ３３５０中で成長した。結晶は、約１ヶ月後に現れ、数日以内にフルサイズに成長した。
ＦＡｂ２４－マウスＥＮＴＰＤ２複合体結晶は、単斜晶系空間群Ｐ２１に存在し、非対称単位あたり１個の複合体を有していた。完全な回折データセットを３．０オングストロームの分解能まで複合体について収集した。マウスＥＮＴＰＤ２と複合体化したＦＡｂ２４の最終モデルをＡｕｔｏＢｕｓｔｅｒで精緻化し、良好な精緻化統計及び全体的な幾何学的形状を得た。マウスＥＮＴＰＤ２の２つのＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎ外れ値Ｔｈｒ１２２及びＦＡｂ２４のＡｌａ５７が最終モデルに存在し、これらはいずれも電子密度において明確に定義されていた。Ａｓｎ１２９及びＡｓｎ３７８は、Ｎ結合グリコシル化が観察された残基のみであった。ＦＡｂ２４重鎖のＧｌｕ１が観察され、ピログルタメートとしてモデル化された。最終モデルから省略されたマウスＥＮＴＰＤ２残基は、Ｎ末端の残基２９～３５、鎖β２及びβ３を連結するループ残基に対応する６１～６６、膜相互作用ループ（ＭＩＬ）に対応する残基１８２～１９４、α９とβ１１との間のループ残基２９０～２９３及びＡｌａ４５０を超えるＣ末端残基を含む。ＦＡｂ２４の全ての重鎖及び軽鎖残基は、重鎖Ｃｙｓ２２５の末端システインを除いて、最終洗練モデルに含まれた。
抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を図３Ｃに提供し、ＣＤＲに下線を引き（Ｋａｂａｔ，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２により定義される）、Ｆａｂ－抗原界面に位置する残基を＊で標識した。ＦＡｂ２４／ｍＥＮＴＰＤ２複合体の三次元構造の全体図を図８に示す。
抗マウスＥＮＴＰＤ２ ＦＡｂ２４は、ＥＮＴＰＤ２抗原の推定膜遠位葉（残基Ｇ１６２～Ｅ４２６）に主に結合する。ＥＮＴＰＤ２結合への等しい寄与が、重鎖及び軽鎖可変ドメインのＣＤＲ残基について観察される。
ヒトＥＮＴＰＤ２に結合するＦＡｂ２２及びＦＡｂ２３と比較して、ＦＡｂ２４は、ｈＥＮＴＰＤ２とのＦＡｂ２２及びＦＡｂ２３複合体において観察される方向に直交する全く異なる方向からマウスＥＮＴＰＤ２と結合する。ＦＡｂ２４は、広範な重鎖ＣＤＲ相互作用及び比較的少ない軽鎖ＣＤＲ相互作用を介して、マウスＥＮＴＰＤ２膜遠位葉に主に結合する。重鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ３残基は、軽鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ２残基とともに、ｍＥＮＴＰＤ２のヘリックスα１１及びα１３に結合する。重鎖ＣＤＲ２の残基は、α１３とα１４との間の相互連結ループ残基と相互作用する。ＣＤＲ３重鎖ＣＤＲ３は、それがほぼ９０度曲げられ、その末端で短いβターンモチーフをとるコンホメーションで観察される。ＦＲ３重鎖の２残基は、５鎖逆平行シートのβ３との相互作用を介して、マウスＥＮＴＰＤ２近位葉にのみ接触する。ＭＡＢ１３ ＣＤＲは、基質結合部位の直接的な閉塞を介してＡＴＰ加水分解活性に影響を及ぼすのに十分なほどマウスＥＮＴＰＤ２部位に広がることは観察されていない。マウスＥＮＴＰＤ２へのＦＡｂ２４の結合は、約１６３００Å２の合計の溶媒接近可能な表面を埋める。４．０Åの距離カットオフ内で計算された直接分子間接触に関与するエピトープ及びパラトープ残基を表１９に列挙し、図３Ｃ及び４Ｂに標識する。２２ Ｆａｂ残基及び１８マウスＥＮＴＰＤ２残基は、直接分子間接触に関与し、Ｆａｂ／ＥＮＴＰＤ２結合において観察されたパラトープ及びエピトープを含む。重鎖ＣＤＲ残基は、ＣＤＲ１ Ｔｈｒ２８、Ｔｈｒ３０、Ｈｉｓ３１、Ｔｙｒ３２及びＧｌｙ３３；ＣＤＲ２ Ｔｒｐ５０、Ａｓｎ５２、Ｔｈｒ５３及びＡｓｐ５４、Ｔｈｒ５５；ＣＤＲ３ Ｔｙｒ９９、Ｇｌｙ１００、Ｔｈｒ１０１、Ｌｅｕ１０２、Ｔｙｒ１０３及びＰｈｅ１１０を含む。重鎖からの２つのＦＲ３残基Ｔｈｒ７４及びＳｅｒ７５も結合に寄与する。結合に寄与する軽鎖ＣＤＲ残基には、ＣＤＲ１からのＴｈｒ３４及びＬｙｓ３６、ＣＤＲ２からのＴｙｒ５６及びＣＤＲ３からのＴｒｐ９７が含まれる。
Figure 2022548881000149
Figure 2022548881000150
実施例８．同系Ｂ１６ＬＭ３腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－１ Ａｂと組み合わせた抗ＥＮＴＰＤ２ ＭＡＢ１３による腫瘍増殖の阻害
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに０．５×１０６細胞をそれぞれのマウスの右側腹部に皮下注射することにより、Ｂ１６ＬＭ３モデルを確立した。インプラントの翌日、マウスを処置群（各群ｎ＝１０）に無作為化した。マウスは、抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３又は非特異的ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（クローンＭＯＰＣ－１７３、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）のいずれかの処置を１、５、８、１２、１５日目に最終用量１５ｍｇ／ｋｇで受けた。
抗ＰＤ－１ Ａｂ（クローンＲＭＰ１－１４ Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）又は非特異的ｒＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（クローンＲＴＫ２７５８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を１、５、８、１２、１５日目に１０ｍｇ／ｋｇの最終用量で腹腔内送達した。全ての用量を個々のマウス体重に調整した。
全試験薬は試験についての忍容性が認められ、処置群のいずれにおいても明らかな毒性の臨床症状や体重減少は認められなかった。抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３と抗ＰＤ－１ Ａｂ処理の組合せは、処置なし（ｐ＜０．００５）、アイソタイプ対照（ｐ＜０．０５）又は抗ＰＤ－１ Ａｂ（ｐ＜０．０１）（生存曲線が有意に異なるかどうかを決定するためにＬｏｇ－ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定を用いた）と比較してマウスの生存を有意に延長した（図９）。
実施例９．同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３と抗ＰＤ－１ Ａｂとの組合せ処置は、活性化Ｔ細胞の腫瘍流入を誘導する
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに０．５×１０６細胞をそれぞれのマウスの右側腹部に皮下注射することにより、Ｂ１６Ｆ１０モデルを確立した。７日目に、腫瘍が約３０ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に従って処置群に無作為化した（１群あたりｎ＝１０）。マウスは、最終用量１５ｍｇ／ｋｇの抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３、最終用量１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１ Ａｂ（クローンＲＭＰ１－１４ Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）ｉ．ｐ又は両方の処置の組合せのいずれかの処置を１、５及び８日目に受けた。全ての用量を個々のマウス体重に調整した。
抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３又は抗ＰＤ－１ Ａｂ単独での処理後に有意な抗腫瘍効果は観察されなかったが、抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３と抗ＰＤ－１ Ａｂとの組合せアームにおいて、処置なし対照と比較して腫瘍増殖の有意な減少が観察された（ｐ＜０．０５ 一元配置分散分析／Ｔｕｋｅｙの多重比較検定）（図１０Ａ～１０Ｂ）。
腫瘍微小環境に対する処置の影響を理解するために、８日目にマウスを安楽死させ、ＨｙＣｌｏｎｅ ＲＰＭＩ１６４０培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）中でｇｅｎｔｌｅＭａｃｓ Ｏｃｔｏ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）上のｇｅｎｔｌｅＭａｃｓ Ｃ－チューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を使用して腫瘍を解離させた。約２×１０６の解離した腫瘍細胞をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２ Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）でブロックして、非特異的ＦｃｙＲＩＩＩ／ＩＩ結合を減少させ、続いて製造業者の推奨希釈の以下のＡｂのカクテルで染色した：ラット抗マウスＣＤ４５－ＢＵＶ３９５（クローン３０－Ｆ１１）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）、ラット抗マウスＣＤ８ａ－ＢＵＶ７３７（クローン５３－６．７）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）、ラット抗マウスＣＤ４－ＢＶ５１０（クローンＲＭ４－５）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ＣＡ）、抗マウスＣＤ６９－ＰｅｒｃＰＣｙ５．５（クローンＨ１－２Ｆ３）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）及びラット抗マウスＣＤ２５－ｅＦｌｕｏｒ４５０（クローンｅＢｉｏ３Ｃ７）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。全てのインキュベーション及び洗浄は、１ｘ ＨｙＣｌｏｎｅリン酸緩衝生理食塩水（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、１％ ＨｙＣｌｏｎｅウシ胎仔血清（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、２ｍＭ ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）からなるＦＡＣＳ緩衝液中で行った。細胞表面抗原抗体カクテルで染色した後、解離した腫瘍細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、固定し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）を用いて透過処理して、マウス抗マウスＦＯＸＰ３－ｅＦｌｕｏｒ６６０（クローン１５０Ｄ／Ｅ４）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）での細胞内染色を可能にした。
活性化ＣＤ４ Ｔ－ヘルパー細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ８－ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３－ＣＤ６９＋ＣＤ２５＋として定義）（処置なしに対して７．０倍の増加、ｐ＜０．０００１ 一元配置分散分析／Ｔｕｋｅｙの多重比較検定）及びＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ６９＋ＣＤ２５＋として定義）（処置なしに対して５．８倍の変化、ｐ＜０．０５ 一元配置分散分析／Ｔｕｋｅｙの多重比較検定）の有意な流入が、抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３及び抗ＰＤ－１ Ａｂ組合せ処置群で他の全ての処置群と比較して観察された（図１０Ｃ）。
実施例１０．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３異種移植モデルにおける抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びｍＡｂ６と抗ＰＤ－１ Ａｂとの組合せの用量依存的なインビボ有効性
インビボでの抗ヒトＥＮＴＰＤ２ Ａｂの標的抗腫瘍活性を実証するために、ヒトＥＮＴＰＤ２操作モデル、Ｂ１６ＬＭ３クローン５を開発した。このモデルは、マウスＥＮＴＰＤ２に対するＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ配列を有するＣＡＳ９タンパク質の一時的エレクトロポレーションを介して内在性マウスＥＮＴＰＤ２発現をノックアウトしたＢ１６ＬＭ３黒色腫モデルに由来し、ヒトＥＮＴＰＤ２を、レトロウイルス形質導入アプローチを用いて過剰発現させた。モデルにおけるヒトＥＮＴＰＤ２発現を、ヒトＥＮＴＰＤ２選択的抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１７を用いたＦＡＣＳによってインビトロで確認した。マウスＥＮＴＰＤ２選択的抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３を用いて、内因性マウスＥＮＴＰＤ２の完全なノックアウトを実証した（図１１Ａ）。Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５は、親株と同等の増殖動態を示し、同系宿主でヒトＥＮＴＰＤ２発現を維持した（図１１Ｂ）。
ヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５モデルを、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、それぞれのマウスの右側腹部に０．５×１０６細胞を皮下注射することにより確立した。腫瘍が約３５～５０ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に従って処置群に無作為化した（１群あたりｎ＝８）。マウスは、試験１日目に、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又はｍＡｂ６のいずれかの静脈内処置を０．１、１又は１０ｍｇ／ｋｇの最終用量において又は非特異的ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を１０ｍｇ／ｋｇで受けた。抗ＰＤ－１ Ａｂ（クローンＲＭＰ１－１４ Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）をＤ１及びＤ５に１０ｍｇ／ｋｇの最終用量で腹腔内投与した。全ての用量を個々のマウス体重に調整した。いずれの処置群においても、全試験薬は忍容性が確認され、明らかな毒性の臨床症状及び体重減少は認められなかった（表２３）。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又はｍＡｂ６を単剤で又は非特異的アイソタイプ対照及び抗ＰＤ－１抗体の組合せで処置した後に有意な抗腫瘍効果は認められなかった。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１と抗ＰＤ－１抗体（１０ｍｇ／ｋｇの固定用量）との組合せレジメンは、用量依存的な抗腫瘍効果を示し、ΔＴ／ΔＣ値は、１８．４％（１０ｍｇ／ｋｇ）、３５．７％（１ｍｇ／ｋｇ）及び３３．４％（０．１ｍｇ／ｋｇ）であった。同様に、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ６ と抗ＰＤ－１ Ａｂ（１０ｍｇ／ｋｇの固定用量）との組合せレジメンにおいても、用量依存的な抗腫瘍効果が認められ、ΔＴ／ΔＣ値は、２９．２％（１０ｍｇ／ｋｇ）、２７．３％（１ｍｇ／ｋｇ）及び４１．０％（０．１ｍｇ／ｋｇ）であった（表２３及び図１２Ａ～１２Ｂ）。
Figure 2022548881000151
Figure 2022548881000152
実施例１１．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５異種移植モデルにおける抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ活性
免疫経路関与の観点からＥＮＴＰＤ２遮断の即時の影響を理解するために、血漿及びＢ１６ＬＭ３クローンＢ５腫瘍（平均腫瘍体積約１７０ｍｍ３）を抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又は１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照での処置の２４時間後にＣ５７ＢＬ／６マウスから収集した。抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１は、マウスＥＮＴＰＤ２交差反応性ではないため、末梢におけるサイトカイン調節は、腫瘍微小環境の変化を反映していると考えられる。
簡潔には、１０００～２０００×ｇで１０分間スピンダウンしたＭｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ＭＶ－Ｈ－３００ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｐｌａｓｍａ Ｌｉｔｈｉｕｍ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎチューブ（Ｓａｉ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌａｋｅ Ｖｉｌｌａ、ＩＬ）に血液を採取して血漿を単離した。血漿サンプルは、使用するまで－８０℃で保存した。腫瘍サンプルを外科的に切除し、直ちに液体窒素中で凍結した。次いで、腫瘍組織を、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）機器を使用して、Ｔ－ＰＥＲ Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）中でホモジナイズした。腫瘍溶解物サンプルを１１，０００ｒｐｍで１５分間スピンダウンし、Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を用いたタンパク質濃度分析のために上清を回収した。２００μｇのタンパク質又は２５μｌの未希釈血漿を、Ｖ－ＰＬＥＸ Ｍｏｕｓｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２９－Ｐｌｅｘ Ｋｉｔ（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を製造業者の推奨に従って使用して、サイトカイン分析に使用した。
抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１処置（図１３Ｂ及び１３Ｄ）により、腫瘍部位におけるＭＣＰ１の約２倍の増加を伴う、血漿ＭＣＰ１の有意な減少（ｐ＜０．０５ 対応のないＴ検定）が観察され、骨髄細胞の腫瘍部位への結合及び動員を潜在的に反映していた。加えて、抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１処置動物の血漿中では、ＩＬ－１βの約２倍の減少が認められ（ｐ＝０．０５ 対応のないＴ検定）、腫瘍部位での並行した減少を示唆する傾向が認められた（図１３Ａ及び１３Ｃ）。
実施例１２．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５異種移植モデルにおけるＡ２ＡＲアンタゴニストと組み合わせた抗ヒトＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ活性
ヒトＥＮＴＰＤ２操作Ｂ１６ＬＭ３クローンＢ５を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、それぞれのマウスの右側腹部に０．５×１０６細胞を皮下注射することによって確立した。腫瘍が約５０ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に従って処置群に無作為化した（１群あたりｎ＝８）。マウスは、研究の１日目に１０／ｍｇ／ｋｇの最終用量での抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又は非特異的ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照１０ｍｇ／ｋｇのいずれかの静脈内（ｉ．ｖ．）処置を受けた。ＮＩＲ１７８を５０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇのいずれかで研究の開始時に開始して、オンの４日間及びオフの３日間、経口（ｐ．ｏ．）で投与した。全ての用量を個々のマウス体重に調整した。試験は、処置開始後１３日間実施し、有効性を評価するために腫瘍体積を隔日で評価した。いずれの処置群においても、全試験薬は試験についての忍容性が確認され、明らかな毒性の臨床症状及び体重減少は認められなかった（表２７）。
Figure 2022548881000153
非特異的アイソタイプ対照及びＡ２ＡＲアンタゴニスト、ＮＩＲ１７８の組合せで５０又は２００ｍｇ／ｋｇのいずれかでの処置後に、有意な抗腫瘍効力は観察されなかった。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１（１０ｍｇ／ｋｇ）とＮＩＲ１７８（５０ｍｇ／ｋｇ）との組合せレジメンは、６１．６％のＴ／ΔＣ値で抗腫瘍作用を示した（表２７及び図１４）。これらのデータは、アデノシン経路の複数のノードを遮断する場合、抗腫瘍効果の増強があることを示唆している。
実施例１３．生化学的及び細胞ベースの機能アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの評価
ＥＮＴＰＤ２の精製細胞外ドメイン（残基２９～４６２）に対する抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの機能的影響及び天然の細胞ベースのコンホメーションの文脈における完全に無傷のタンパク質に対する抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの機能的影響を理解するために、生化学的及び細胞ベースの機能的アッセイが自社で開発された。ＥＮＴＰＤ２は、ＡＴＰをＡＤＰに加水分解し、その後、ＨＴＲＦ Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ ＡＤＰ２ ＴＲ－ＦＲＥＴ Ｒｅｄ Ａｓｓａｙ（ＢｅｌｌＢｒｏｏｋ Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて検出することができ、ここでＥＮＴＰＤ２産生ＡＤＰは、ＡＤＰトレーサーと競合して抗ＡＤＰ－Ｔｂ抗体に結合する。得られるシグナルは、サンプル中のＡＤＰの濃度に反比例する。
ＥＮＴＰＤ２生化学アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの活性を評価するために、抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂ及び組換えＥＮＴＰＤ２（残基２９～４６２）を反応緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．１、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％ ＢＳＡ）中で所望の濃度に希釈した。１ウェルあたり４μＬのＥＮＴＰＤ２溶液及び１ウェルあたり２μＬの抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂ溶液をＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に移し、室温で３０分間インキュベートした。次いで、２μｌのＡＴＰ（最終アッセイ濃度１μＭ）の添加によって反応を開始させ、サンプルを室温で２５分間インキュベートした。反応を２００ｍＭ ＥＤＴＡ／２００ｍＭ ＥＧＴＡ（１ウェルあたり５μＬ）でクエンチし、検出試薬をウェルに添加し（１ウェルあたり５μＬ）、最終濃度はウェル中４ｎＭ ＡＤＰ２抗体及び４ｎＭ ＡＤＰトレーサー（ＢｅｌｌＢｒｏｏｋｓ Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）であった。次いで、プレートを室温で６０分間インキュベートした後、ＨＴＲＦシグナルを測定した。
細胞ベースの機能アッセイを確立するために、内因性ＥＮＴＰＤ２発現を有するヒト／カニクイザル（ｃｙｎｏ）／マウスＥＮＴＰ２操作ＮＩＨ／３Ｔ３細胞又はＲＫＯ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａ ＶＡ）結腸直腸癌細胞を、１ウェルあたり３０μｌ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）において、ＮＩＨ／３Ｔ３マウス、カニクイザル（ｃｙｎｏ）及びヒトＥＮＴＰＤ２株について、それぞれ１ウェルあたり１５０、２００及び２５０細胞又はＲＫＯについて３８４ウェル組織培養プレート中の１ウェルあたり１０００細胞で一晩プレーティングした。翌日、細胞を３７℃、５％ ＣＯ２（１ウェルあたり１０μｌの５×抗体用量）で６０分間、用量反応において抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂとプレインキュベートし、続いて室温で２０分間、１０μＭ ＡＴＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）の最終濃度で刺激した（１ウェルあたり１０μｌの５×（５０μＭ）ＡＴＰ）。反応を４０ｍＭ ＥＤＴＡ／４０ｍＭ ＥＧＴＡ、１ウェルあたり２５μｌでクエンチし、１５μｌのクエンチした培地をＡＤＰ検出のために低容量Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に移した。ＡＤＰ産生を、Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ ＡＤＰ２ ＴＲ－ＦＲＥＴ Ｒｅｄ Ａｓｓａｙ（ＢｅｌｌＢｒｏｏｋ Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて、ウェル中の最終濃度４ｎＭのＡＤＰ２抗体及び１３．４ｎＭのＡＤＰ Ｔｒａｃｅｒを用いて検出した（４×溶液を調製し、５μＬの「検出試薬混合物」を、クエンチした条件培地に添加した）。プレートを、ＨＴＲＦモードでプレートを読み取る前に、室温で１時間、検出試薬とともにインキュベートした。
ＨＴＲＦシグナル（６２０ｎｍ及び６６５ｎｍでの発光）を、ＨＴＲＦモード（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）でＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用する両方のアッセイにおいて評価した。ＨＴＲＦ比は、次の式を用いて求めた：ＨＴＲＦ比＝Ｒ＝６６５ｎｍでの発光／６２０ｎｍでの発光×１０，０００。続いて、％残留活性及び％阻害を以下のように決定した。
Figure 2022548881000154
ここで、Ｒ０％は、陰性対照のＨＴＲＦ比（０％酵素活性）であり、Ｒ１００％は、陽性対照のＨＴＲＦ比（１００％酵素活性）である。データをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌで分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ’ｓ Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェアを用いてグラフ化し、非線形回帰、対数（アゴニスト）対応答変数勾配（４つのパラメーター）分析を用いてＩＣ５０値を得た。
生化学的ヒトＥＮＴＰＤ２機能アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの代表的な活性
ハイブリドーマ及びファージディスプレイキャンペーンからの抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂを生化学的ヒトＥＮＴＰＤ２アッセイにおける機能的活性についてトリアージした。抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの代表的な活性及びそれらのＩＣ５０を図１５及び表２８に示す。多数のＡｂについて一連の活性が観察され、いくつかはナノモル以下のＩＣ５０及び完全な標的阻害を伴う非常に強力な活性を示し、その他は、はるかに弱い活性及び部分的な阻害のみを示した（データは示さず）。
Figure 2022548881000155
細胞ベースのヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２機能アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂの活性
生化学的ＥＮＰＴＤ２アッセイにおけるＡｂの初期プロファイリングでは、ＥＮＴＰＤ２の組換え細胞外ドメインに対して強い阻害活性を有する多数の強力なヒットが同定されたが、生化学的及び細胞ベースの機能的アッセイ間でＡｂのサブセットについて異なる挙動プロファイルが観察されたことから、精製組換えタンパク質と天然細胞ベースのコンホメーションとの間にコンホメーションの違いが存在する可能性が示唆された（データは示していない）。天然ＥＮＴＰＤ２に対するＡｂの強力な活性を確認するために、抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂを、ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２で操作したＮＩＨ／３Ｔ３細胞又は内因性ＥＮＴＰＤ２発現を有するＲＫＯ細胞株を用いて阻害活性についてプロファイリングした。ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２ ＮＩＨ／３Ｔ３又はＲＫＯ細胞ベースのアッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂ活性プロファイルの要約を表２９に示す。抗ＥＮＴＰＤ２ Ａｂのサブセットについての３つの機能アッセイ全てにわたる強力な活性を示す代表的なグラフを図１６に示す。
Figure 2022548881000156
実施例１４．構造誘導操作により、より強力な代理抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体が同定された
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３は、ヒト又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＥＮＴＰＤ２に結合しないマウスＥＮＴＰＤ２選択的Ａｂ（ＦＡＣＳ ＥＣ５０ ３～４ｎＭ）として同定された。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３の活性を、ＮＩＨ３Ｔ３－マウスＥＮＴＰＤ２操作細胞株を用いて評価し、ここで、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３は、２．８ｎＭのＩＣ５０及び最高４４％の標的阻害を有する部分酵素阻害剤としての活性を示した。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３ Ｆａｂ／ｍＥＮＴＰＤ２複合結晶構造とｍＥＮＴＰＤ２活性部位内のＰＤＢコード３ＣＪＡ ｒＥＮＴＰＤ２からのＡＴＰ－基質類似体の重ね合わせを調べたところ、より大きなアミノ酸の置換がＡＴＰ結合を立体的に遮断すると予測される最適部位として抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３ ＨＣのＣＤＲ１にＴ３０があることが明らかになった。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３ ＣＤＲ１のＴ３０位に置換を有する構築物のサブセット（抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１４及びｍＡｂ１５を含む）を操作した。マウスＥＮＴＰＤ２ ＮＩＨ／３Ｔ３細胞ベースの機能アッセイにおける抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１４及びｍＡｂ１５の操作バリアントの評価は、親の抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１３と比較して有意に改善された標的阻害を示し、５～６ｎＭのＩＣ５０で約７６～７９％のマウスＥＮＴＰＤ２阻害に達した（表３０、図１７）。
Figure 2022548881000157
実施例１５．ＦｃγＲ ＩＩＩａシグナル伝達アッセイにおける抗ＥＮＴＰ２ ｍＡｂ１の機能活性
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１は、ヒトＩｇＧ１抗体であり、従ってＦｃγＲ ＩＩＩａを介してシグナル伝達し、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを誘導し、ＥＮＴＰＤ２を発現する細胞の枯渇をもたらす可能性を有する。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１がＡＤＣＣを誘導する能力を評価するために、本発明者らは、細胞表面に４６～６８，０００分子のＥＮＴＰＤ２を発現するＲＫＯ結腸直腸癌細胞を用いた代理ＡＤＣＣアッセイを開発した。これらのＲＫＯ細胞を、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、Ｖ１５８（高親和性変異体）及びＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターを１５ Ｊｕｒｋａｔ：１ ＲＫＯの比で発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞と混合した。抗ＥＮＴＰ２ ｍＡｂ１を細胞に添加した後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ２で５時間インキュベートし、次いでＲＴに１５分間移した。ルシフェラーゼ活性のレベルをＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏで測定した。ＥＣ５０は、非線形回帰分析を用いて得た。図１８において、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１は、１７．３ｎＭ（２．５５μｇ／ｍＬ）のＥＣ５０でＦｃγＲＩＩＩａシグナル伝達を媒介することが示された。
実施例１６．カニクイザルの薬物動態
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１を用いて、カニクイザル単回投与及び複数回投与薬物動態非ＧＬＰ試験、４週間カニクイザル非ＧＬＰ毒性試験及び４週間カニクイザルＧＬＰ毒性試験を実施した。
３、１０、３０及び１００ｍｇ／ｋｇを１又は２回静脈内投与した後、雄カニクイザルにおける抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１、ＥＮＴＰＤ２抗体の血漿曝露量を決定した。２回連続投与の間隔は、１４日であった。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１を受ける全ての動物は、試験物品に曝露された。単回静脈内投与後の抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の血漿曝露量は、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまで用量を上回って比例的に増加した。用量が３．３倍になると、ＡＵＣ（０－３３６ｈ）は、５．３倍に、ＡＵＣ（０－ｉｎｆ）は、５．９倍に増加した。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の血漿クリアランスは、用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇに増量すると、約１２ｍＬ／日／ｋｇから７ｍＬ／日／ｋｇに減少し、標的媒介薬物動態（ＴＭＤＤ）に起因し得る非線形排出を示した。１０～１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲では、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の血漿曝露は、用量に比例して増加した。用量を１０倍に増加させると、ＡＵＣ（０－３３６ｈ）及びＡＵＣ（０－ｉｎｆ）の両方が約９．５倍に増加し、１０ｍｇ／ｋｇ以上の線形薬学的製剤であることを示した。血漿クリアランスは、１０～１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で約７ｍｌ／日／ｋｇであり、非線形排出が１０ｍｇ／ｋｇ以上の用量で飽和したことを示唆した。
本試験では、抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成についても検討した。ＡＤＡは、試験に使用された９匹の動物の１匹（１０ｍｇ／ｋｇ）においてのみ検出された。ＡＤＡの存在は、ＡＤＡ陽性動物における抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の血漿曝露を減少させた。
各用量群についての血漿抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１濃度を図１９にプロットする。各用量群の平均ＰＫパラメーターを表３１に示す。
Figure 2022548881000158
実施例１７．進行性固形癌を有する対象における単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１と、スパルタリズマブ、抗ＣＤ７３ Ａｂ及びＮＩＲ１７８との組合せの第Ｉ／Ｉｂ相、非盲検、多施設共同試験
試験設計
この試験（図２０）は、ＦＩＨ非盲検第Ｉ／Ｉｂ相多施設共同試験であり、単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の用量漸増部分と、スパルタリズマブ、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＮＩＲ１７８との組合せと、それに続く拡大部分とからなる。更に、二重組合せについての全ての安全性及び有効性データの評価並びにＭＴＤ／ＲＤが決定された後、任意選択的な三重組合せを考慮することができる。登録は、ＭＳＳ ＣＲＣ、胆管癌、膵臓癌、食道癌、ＥＧＪ又は胃癌の対象に限定する。
漸増部分中、単剤（図２１）として又はスパルタリズマブ（図２２）、ＮＩＲ１７８（図２３）若しくは抗ＣＤ７３ Ａｂ（図２４）と組み合わせて、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の非試験用量レベルで処置される最初の２人の対象についての最初の用量は、２４時間ずらされる。組合せの用量漸増は、少なくとも２用量レベルの抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１単剤が安全且つ忍容性であると決定された後に開始することができる。単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びスパルタリズマブ、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＮＩＲ１７８と組み合わせた抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１のＲＤ又はＭＴＤを決定したら、対応する拡大部分を開始することができる。
試験設計の理論的根拠
この第Ｉ／Ｉｂ相非盲検試験の設計は、安全性、忍容性を特徴付け、推奨用量を決定し、選択された進行性悪性腫瘍の対象における単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びスパルタリズマブ、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＮＩＲ１７８のいずれかとの組合せの抗腫瘍活性を推定するために選択された。必要に応じて、用量漸増により、単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びスパルタリズマブ、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＮＩＲ１７８との組合せのＭＴＤ／ＲＤの確立が可能となり、ベイズ階層ロジスティック回帰モデル（ＢＨＬＲＭ）により誘導される。
ＢＨＬＲＭは、癌対象においてＭＴＤを同定するための十分に確立された方法である。適応ＢＨＬＲＭは、今後の試験対象においてＤＬＴのリスクを制御するために、過量投与制御（ＥＷＯＣ）原則による漸増によって導かれる。小規模データセットのためのベイズ反応適応モデルの使用は、ＥＭＥＡによって受け入れられており（「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ」、２００７年２月１５日）、多数の文献によって推奨されており（Ｂａｂｂ ｅｔ ａｌ １９９８，Ｎｅｕｅｎｓｃｈｗａｎｄｅｒ Ｂ，ｅｔ ａｌ（２００８）Ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｙｅｓｉａｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｐｈａｓｅ Ｉ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｉａｌｓ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２７（１３）：２４２０－３９，Ｂａｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ ２００９）、その開発及び適切な使用は、ＦＤＡのＣｒｉｔｉｃａｌ Ｐａｔｈ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅの一側面である。
本試験は、用量漸増及び用量拡大という２つの部分から構成されている。試験の用量漸増部分では、最初に抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１の隔週（Ｑ２Ｗ）投与を評価し、表３２（例えば、Ｑ４Ｗ）に記載されているような抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１についての様々な投与スケジュール並びにＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１とスパルタリズマブとの組合せ、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１とＮＩＲ１７８との組合せ及び抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１と抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せの二重組合せについての評価を含み得る。異なる投与スケジュールは、より高い抗体用量の必要性に対処するための選択肢を提供して、より長い間隔での投与を支持する標的飽和及び／又は新たなＰＫ／ＰＤデータに到達する。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１とスパルタリズマブ及びＮＩＲ１７８との組合せ、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１とスパルタリズマブ及び抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せ並びに抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１とＮＩＲ１７８及び抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せの任意選択的な三重組合せを新たな安全性、ＰＫ及び有効性データに基づいて評価することができる。
三重組合せコホートは、これらの化合物の単剤試験で宣言された単剤ＭＴＤ（例えば、４８０ｍｇ ＮＩＲ１７８ ＢＩＤ及び４００ｍｇスパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）Ｑ４Ｗ）まで用量を漸増させることができる。化合物は、１００％を超えて漸増されず、一度に１つの試験処置のみが漸増される。試験の用量漸増中、ＭＴＤに達するか又はより低い推奨用量（ＲＤ）が確立されるまで、評価可能な患者３～６人のコホートを組合せパートナーとともに抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１で処置する。ＲＤがＭＴＤを超えないことを保証するために、各用量漸増は、ＥＷＯＣ原則に従う適応ＢＨＬＲＭによって導かれる。群の全ての用量レベルが、毒性が強すぎると考えられる場合、処置及びスケジュールのＭＴＤ又はＲＤを定義せず、その処置群への登録を中止する。
漸増部分で決定された用量及びスケジュールは、対象が単剤（任意選択的）及び組合せのＲＤで処置される用量拡大部分に使用される。ＭＳＳ ＣＲＣにおける組合せ拡大は、ＲＤが確立されると開始する。他の選択された腫瘍における組合せ拡大は、任意であり、単剤又は組合せの効力が見られた場合に開始し得る。
組合せ薬物の選択の理論的根拠
高レベルのＥＮＴＰＤ２は、ＣＤ７３及びＡ２ＡＲとともに、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、胆管癌及び膵臓癌において見出されており（図２５を参照されたい）、ＴＣＧＡデータセットの分析は、Ａ２ＡＲ及びＣＤ３９ ＲＮＡ発現が免疫シグネチャーと相関するが、ＥＮＴＰＤ２は、免疫シグネチャーと抗相関することを示している（図２６を参照されたい）。ＣＤ７３は、免疫細胞及び腫瘍細胞の両方で発現している。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１と抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＡ２ａＲ阻害剤（ＮＩＲ１７８）との組合せは、抗腫瘍効果を増強する可能性があると仮定される。更に、腫瘍内の免疫細胞浸潤の予想される増加を考慮すると、抗ＰＤ－１抗体（スパルタリズマブ）との組合せは、腫瘍殺傷能を更に高める可能性がある。
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１によるインビボ処置は、抗ＰＤ－１アンタゴニストｍＡｂ又はＡ２ａＲアンタゴニスト、ＮＩＲ１７８と組み合わせた場合、ヒトＥＮＴＰＤ２を発現するＢ１６同系細胞株の腫瘍増殖を遅延させた。同系腫瘍の抗ＥＮＴＰ２ ｍＡｂ１処置は、腫瘍内Ｍ１マクロファージの増加をもたらした。
ＣＤ７３とＰＤ－１遮断との組合せは、ＭＣ３８－ＯＶＡ（結腸癌）皮下腫瘍において顕著な相乗効果を示し、全てのマウスにおいて完全な腫瘍拒絶を有した（Ｂｅａｖｉｓ ＰＡ，Ｄｉｖｉｓｅｋｅｒａ Ｕ，Ｐａｇｅｔ Ｃ，ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ Ａ２ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｐｏｔｅｎｔｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｈｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ＣＤ７３＋ ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ；１１０（３６）１４７１１－１６）。
本試験の組入れ対象として適格な対象の選択基準の一部：
・１８歳以上の成人の男女。
・組織学的に確認及び実証された進行性悪性腫瘍（局所進行性悪性腫瘍、手術又は放射線療法で治癒不能及び転移性腫瘍）であって、標準治療後の進行が実証されるか、又は試験責任医師の判断で適切な標準治療が存在しないもの。疾患は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１によって測定可能でなければならない。
・生検可能な疾患部位を有し、処置施設の指針による腫瘍生検の候補である必要がある。対象は、スクリーニング時及び処置中に新たな腫瘍生検を受ける意思を有する必要がある。
・２未満のＥＣＯＧパフォーマンスステータス
・対象は、従来の技術で２０ｍｍを超える又はスパイラルコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）若しくは臨床検査によるキャリパーで１０ｍｍを超える少なくとも１次元（非リンパ節病変では最長径、リンパ節病変では短軸）で正確に測定できる少なくとも１つの病変として定義される、測定可能な疾患を有する必要がある。
・注：毒性のために前の処置が中止された場合、対象は、測定可能又は評価可能な疾患のエビデンスを継続している必要がある。
本試験の対象の除外基準の一部：
・手術、放射線療法及び／又はコルチコステロイドを含むが、これらに限定される同時処置を必要とする症候性又は制御不能の脳転移。症候性脳転移の処置を受けている対象は、試験エントリー前の処置後４週間にわたって神経学的に安定しており、いずれかの試験処置の投与前に少なくとも２週間、プレドニゾン１０ｍｇ／日以下又は均等な用量にある必要がある。
・過去３年以内に進行中又は積極的な処置が必要な既知の追加の悪性腫瘍を有する。例外として、潜在的に治癒可能な治療法を受けた皮膚の基底細胞癌若しくは皮膚の扁平上皮癌又は余命に影響を及ぼさないであろうインサイチュー子宮頸癌若しくは他の腫瘍が挙げられる。
・以下を除く、過去２年以内の以前に実証された又は疑われた活性自己免疫疾患：
白斑、Ｉ型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする残存甲状腺機能低下症、全身処置を必要としない乾癬又は再発が予想されない状態の対象は、除外すべきではない。既往又は現在の間質性肺疾患又は非感染性間質性肺炎がグレード２以上である。
日本のみ － 薬物及び／又は非薬物誘導間質性肺疾患（ＩＬＤ）又は間質性肺炎の既往又は存在がグレード２以上の対象。
・活性又は以前に実証された炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）
・試験薬の任意の成分並びに他のｍＡｂ及び／又はその賦形剤に対する重度の過敏症反応の病歴
・スクリーニング中及び試験処置の初回投与前に、検査値の範囲外であった対象。検査値の範囲外は、以下として定義される。
・絶対好中球数（ＡＮＣ）＜１．０×１０９／Ｌ
・血小板＜７５×１０９／Ｌ
・ヘモグロビン（Ｈｇｂ）＜９ｇ／ｄＬ
・血清クレアチニン＞１．５×ＵＬＮ又はＣｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を用いたクレアチニンクリアランス＜４０ｍＬ／分
・ジルベール症候群＞３．０×ＵＬＮ又は直接ビリルビン＞１．５×ＵＬＮの対象を除き、総ビリルビン＞１．５×ＵＬＮ
・アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）＞３×ＵＬＮ
・アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ
・十分な補給にも関わらず、血清電解質グレード２以上。
・以下のいずれかを含む、心機能障害又は臨床的に重大な心臓病：
・臨床的に重大な及び／又は制御されていない心疾患、例えば処置を必要とするうっ血性心不全（ＮＹＨＡグレード２以上）、制御されていない高血圧又は臨床的に重大な不整脈
・スクリーニングＥＣＧのＦｒｉｄｅｒｉｃｉａ補正法（ＱＴｃＦ）を用いた補正ＱＴが女性で４７０ｍｓｅｃ超若しくは男性で４５０ｍｓｅｃ超又は先天性ＱＴ延長症候群の対象
・試験エントリー前３ヵ月未満の急性心筋梗塞又は不安定狭心症
・医学療法を必要とする脳卒中又は一過性脳虚血事象の病歴
・症候性跛行
・試験処置の初回投与の２週間以内の全身抗癌療法。重大な遅発性毒性を有する細胞毒性剤、例えばマイトマイシンＣ及びニトロソウレアでは、６週間の休薬期間が義務付けられる
・試験処置の初回投与前２週間以内の非緩和的放射線療法。骨痛の処置のため又は局所的に痛みを伴う腫瘍塊の処置のような、限定された照射野への緩和的放射線療法は、許容される。処置に対する応答の評価を可能にするために、対象は、照射されていない測定可能な疾患が残っていなければならない。
・試験薬の初回投与の２週間以内の大手術（縦隔鏡検査、中心静脈アクセスデバイスの挿入及び栄養チューブの挿入は、大手術とみなさない）。
・感染症：
・ＨＩＶ感染症
・活性ＨＢＶ又はＨＣＶ感染症（施設の指針による）。抗ウイルス療法（インターフェロンを除く）下で制御されている慢性ＨＢＶ又はＨＣＶ疾患を有する対象は、拡大部分では認められるが、漸増部分では認められない。
・結核の既知の病歴
・全身抗生物質療法を必要とする対象。感染症のために全身抗生物質を必要とする対象は、スクリーニングを開始する前に処置を完了している必要がある。
・試験処置の開始の４週間以内の感染症に対する生ワクチンの使用。
・Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）による、以前の癌治療からのグレード２以上の毒性の存在。神経障害（グレード２以下の神経障害を有する対象の組み入れは可）、聴器毒性及び脱毛症を除く。
・試験処置の初回投与の７日間以内の全身性慢性ステロイド療法（１０ｍｇ／日を超えるプレドニゾン又は均等物）又は任意の免疫抑制療法（副腎機能不全の状況下での補充用量ステロイド以外）。局所、吸入及び点眼ステロイドは可とする。
・試験処置の開始前２週間以内の造血コロニー刺激増殖因子（例えば、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ）、トロンボポエチン模倣薬又は赤血球刺激薬の使用。試験処置の初回投与の２週間以上前にトロンボポエチン模倣薬又は赤血球刺激薬を開始し、対象が安定した用量を受けていれば、その用量を維持することができる。
試験処置
本試験では、用語「治験薬」又は「試験薬」は、抗ＥＮＴＰ２ ｍＡｂ１、抗ＣＤ７３ Ａｂ、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）及びＮＩＲ１７８を指す。試験処置は、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１単独又はスパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はＮＩＲ１７８との組合せと定義する。
対象に処方及び調剤された全ての投与量並びに試験中の全ての用量変更は、適切な投与量投与記録ｅＣＲＦに記録しなければならない。
治験薬及び対照薬
Figure 2022548881000159
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１、抗ＣＤ７３ Ａｂ及びスパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１は、処置群に規定された頻度で１時間かけて（臨床的に適応がある場合、２時間まで）ＩＶ注入により投与する。
抗ＣＤ７３抗体は、処置群に規定された頻度で１時間かけて（臨床的に適応がある場合、２時間まで）ＩＶ注入により投与する。
スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）は、処置群に規定された頻度で３０分かけて（臨床的に適応がある場合、２時間まで）ＩＶ注入により投与する。
組合せで投与される場合、抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１、抗ＣＤ７３ Ａｂ又はスパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）は、各注入について別々の注入材料（バッグ、ライン、フィルター）を使用して同日に投与される。同じアクセス部位を両方の注入に使用することができる。抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１を最初に注入し、続いて抗ＣＤ７３ Ａｂ又はスパルタリズマブのいずれかを注入する前に中断する。全ての対象について、同じ投与順序に従う必要がある。単剤としての抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１又は抗ＣＤ７３ Ａｂ若しくはスパルタリズマブと組み合わせる場合、サイクル１の１日目及びサイクル１の１５日目の注入では、対象を少なくとも４時間観察する必要がある。その後、サイクル２の１日目から開始して、試験処置による最終注入後の約２時間又はＩＶ注入に関する各地域のガイドラインに従って対象を観察するべきである。
治験薬の投与後に注入反応が発現した場合、試験責任医師の臨床的判断に基づき、試験処置に対して対象が安全となるまでその後の試験処置注入を遅らせる必要がある。
１サイクルの試験処置の次の用量は、何らかの理由により最大７日遅らせることができる。持続するＡＥのため、上記の７日間以内に次の用量を投与できない場合、その用量を省略する必要がある。次のサイクルの１日目にＡＥが解決／改善したら投与を再開することができ、それに応じて評価スケジュールを変更する。
ＮＩＲ１７８
ＮＩＲ１７８カプセルを１日２回（ＢＩＤ）、連続して経口的に服用する。単剤又は組合せで抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１を投与する来院時、ＮＩＲ１７８の用量を最初に服用すべきである。ＮＩＲ１７８の投与とその後の治験薬の注入との間に中断は必要としない。注入は、できるだけ早く、ＮＩＲ１７８を投与してから６０分以内に開始する必要がある。
対象は、ＮＩＲ１７８を１日２回（ＢＩＤ）、朝及び夕方に毎日ほぼ同じ時間に服用すべきである。ＰＫサンプルを採取する日には、試験スタッフの指示に従い、対象は、来院中、投与前ＰＫサンプルの後及び投与後ＰＫサンプルの前にＮＩＲ１７８を服用する必要がある。
対象は、食事の少なくとも１時間前又は２時間後の空腹時にＮＩＲ１７８を服用する必要がある。各用量は、１グラスの水（約８オンス又は約２３５ｍＬ）とともに服用され得る。
対象は、カプセル剤全体を嚥下し、それらを噛んだり開けたりしないように指導される必要がある。
処置過程中に嘔吐が発現した場合、対象は、次の予定用量前に再度ＮＩＲ１７８を服用してはならない。
対象は、飲み忘れた用量を補給しないよう指導される必要がある。飲み忘れた用量は、通常の１日のおよその投与時間後の４時間以内に全用量を服用しなかった場合と定義される。その日の用量は、省略し、対象は、次の予定用量で処置を継続すべきである。
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１及びＮＩＲ１７８の場合、対象は、最初の２回の注入後２時間観察される必要がある。医学的に指示される場合、同じことがその後の投与に適用され得る。
ＰＤ－Ｌ１発現と抗腫瘍活性との関係
副次目的は、ＲＥＣＩＳＴ １．１及びｉＲＥＣＩＳＴに準じて、奏効率（ＯＲＲ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）と、腫瘍におけるＰＤ－Ｌ１発現レベルとの関係を評価することを含む。
ＰＤ－Ｌ１発現と奏効率（ＯＲＲ）との関係
ＰＤ－Ｌ１発現は、ＯＲＲに基づくレスポンダー及び非レスポンダーの記述統計量の平均で要約する。
ＰＤ－Ｌ１発現と無増悪生存期間（ＰＦＳ）との関係
ＰＤ－Ｌ１発現とＰＦＳとの関係を評価するには、ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いる。更に、ベースライン時に高／低ＰＤ－Ｌ１発現を有した対象について、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ（ＫＭ）方法を用いてＰＦＳを要約する。ＰＦＳ中央値を、対応する９０ ＣＩ並びに２５パーセンタイル値及び７５パーセンタイル値（Ｂｒｏｏｋｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｃｒｏｗｌｅｙ，Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ，ｐｐ．２９－４１（１９８２）；Ｋｌｅｉｎ ａｎｄ Ｍｏｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ（１９９７）Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ：ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｃｅｎｓｏｒｅｄ ａｎｄ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｄａｔａ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）とともに提示する。特定の時点におけるＰＦＳ比率のＫＭ推定値及び９０％ＣＩ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ’ｓ ｆｏｒｍｕｌａ，Ｋａｌｂｆｌｅｉｓｃｈ ａｎｄ Ｐｒｅｎｔｉｃｅ（２００２）Ｔｈｅ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆａｉｌｕｒｅ Ｔｉｍｅ Ｄａｔａ．Ｗｉｌｅｙ Ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）も提供される。
実施例１８．ＢＡＬＢ／ｃマウスの４Ｔ１同系モデルにおける抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５と抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せのインビボ有効性
抗マウスＥＮＴＰＤ２抗体の標的抗腫瘍活性を実証するために、インビボでマウスＥＮＴＰＤ２操作モデルを開発した：４Ｔ１クローン４５。このモデルは、４Ｔ１マウス乳癌モデルに由来し、そこでは、マウスＥＮＴＰＤ２がレトロウイルス形質導入アプローチを用いて過剰発現された。マウスＥＮＴＰＤ２の発現を示した生細胞を蛍光活性化細胞選別によって集団の残りから分離し、限界希釈によるクローン選択に供した。モデルにおける安定なマウスＥＮＴＰＤ２発現（約４７９，０００受容体）を、マウスＥＮＴＰＤ２選択的抗マウスＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５を用いたフローサイトメトリーによりインビトロで確認した（図２７）。４Ｔ１クローン４５は、インビトロで親株と同等の増殖動態を示し、同系宿主でのマウスＥＮＴＰＤ２発現を維持した。
マウスＥＮＴＰＤ２操作４Ｔ１クローン４５モデルは、雌ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、各マウスの右側腹部に０．５ｘ１０６細胞を皮下注射することによって確立される。腫瘍が約５０～８０ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に従って処置群に無作為に割り付ける（１群あたりｎ＝１０）。マウスは、抗ｍＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ １５又は非特異的マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照のいずれかの腹腔内処置を０、２、５及び９日目に１０ｍｇ／ｋｇの最終用量で受ける。抗ＣＤ７３ Ａｂ又は非特異的ヒトＩｇＧ４を０日目及び５日目に２０ｍｇ／ｋｇの最終用量で腹腔内投与する。
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５と抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せによる処置は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるマウスＥＮＴＰＤ２操作４Ｔ１クローン４５同系モデルの免疫浸潤の変化を誘導する。
腫瘍微小環境に対する抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５単独又は抗ＣＤ７３ Ａｂ処置との組合せの影響を理解するために、マウスを１２日目に安楽死させ、ＨｙＣｌｏｎｅ ＲＰＭＩ１６４０培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）中でｇｅｎｔｌｅＭａｃｓ Ｏｃｔｏ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）上のｇｅｎｔｌｅＭａｃｓ Ｃ－チューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を使用して腫瘍を解離させる。約２×１０６の解離した腫瘍細胞をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２ Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）でブロックして、非特異的ＦｃｙＲＩＩＩ／ＩＩ結合を減少させ、続いて骨髄又はＴ細胞パネルのいずれかからの抗体のカクテルで染色する。
Figure 2022548881000160
Figure 2022548881000161
細胞を、ＥＮＴＰ２への結合が抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５によってブロックされない抗ＥＮＴＰＤ２抗体でも染色する。全てのインキュベーション及び洗浄を、１×Ｈｙｃｌｏｎｅリン酸緩衝食塩水（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、１％ ＨｙＣｌｏｎｅ Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ）、２ｍＭ ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ）から構成されるＦＡＣＳ緩衝液中で行う。
抗ＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５と抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せによる処置は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるマウスＥＮＴＰＤ２操作４Ｔ１クローン４５同系モデルにおいて血清サイトカインレベルの変化を誘導する。
免疫経路関与／バイオマーカーの観点からＥＮＴＰＤ２遮断の即時的影響を検討するために、抗ｍＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ１５単独又は抗ＣＤ７３ Ａｂとの組合せによる処置の２４時間後にＢＡＬＢ／ｃマウスから血漿を採取する。
マウスＥＮＴＰＤ２操作４Ｔ１クローン４５モデルは、雌ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、各マウスの右側腹部に０．５ｘ１０６細胞を皮下注射することによって確立される。腫瘍が約１００～１５０ｍｍ３に達したら、マウスを腫瘍体積に従って処置群に無作為に割り付ける（１群あたりｎ＝８）。マウスは、抗ｍＥＮＴＰＤ２ ｍＡｂ １５又は非特異的マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照のいずれかの腹腔内処置を０、２、５及び９日目に１０ｍｇ／ｋｇの最終用量で受ける。抗ＣＤ７３ Ａｂ又は非特異的ヒトＩｇＧ４を０日目及び５日目に２０ｍｇ／ｋｇの最終用量で腹腔内投与した。
マウスの炎症マーカーであるサイトカイン及び血清アミロイドＰの測定のために、０日目にマウスに前投与し、１日目の最初の処置の２４時間後に血漿を採取する。
簡単に述べると、Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ＭＶ－Ｈ－３００毛管血漿リチウムヘパリン血液収集チューブ（Ｓａｉ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌａｋｅ Ｖｉｌｌａ、ＩＬ）への血液の収集を介して血漿を単離し、これを１０００～２０００Ｘｇで１０分間スピンダウンする。血漿サンプルは、使用するまで－８０℃で保存する。１：５に希釈した血清１０μＬを、製造業者の推奨に従い、ＭＳＤマウスプロ炎症性パネル１（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用するサイトカイン分析に使用し、１：１０に希釈した血清５μＬを、ＭＳＤマウスサイトカインパネル１（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用するサイトカイン分析に使用する。ＳＡＰのレベルを決定するために、１０μＬの未希釈血清を、製造業者の推奨に従い、ＳＡＰ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡ（ＲｎＤシステム）における分析のために使用する。
他に定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野に精通する専門家によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
他に指示がない限り、詳細に具体的に説明されていない全ての方法、ステップ、技法及び操作は、当業者に明らかであるように、それ自体既知の方法で実行することができ、実行されている。例えば、本明細書で言及される標準的なハンドブック及び一般的な背景技術並びにそこで引用される更なる参考文献が再び参照される。特に指示がない限り、本明細書で引用される参考文献のそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる。
本発明の請求項は、非限定的であり、以下に提供される。
特定の態様及び特許請求の範囲が本明細書で詳細に開示されてきたが、これは、例示のみを目的として例として行われたものであり、添付の特許請求の範囲又は任意の対応する将来の出願の特許請求の範囲の主題の範囲に関して限定することを意図するものではない。特に、本発明者らは、特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本開示に対する様々な置換形態、変更形態及び修正形態がなされ得ることを意図する。核酸出発物質、目的のクローン又はライブラリー型の選択は、本明細書に記載される態様の知識を有する当業者にとって日常的な問題であると考えられる。他の態様、利点及び修正形態は、以下の特許請求の範囲内にあると考えられる。当業者は、日常的な実験のみを用いて、本明細書に記載される本発明の特定の態様の多くの均等物を認識又は確認することができる。このような均等物は、添付の特許請求の範囲に包含されるものとする。後に提出される対応する出願における請求項の範囲の再作成は、様々な国の特許法による制限に起因する場合があり、請求項の主題を放棄するものと解釈されるべきではない。

Claims (40)

  1. 癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含み、前記癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である、方法。
  2. 癌の処置であって、それを必要とする対象における処置に使用するための、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物であって、前記癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である、組成物。
  3. 癌の処置であって、それを必要とする対象における処置のための医薬の製造における、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物の使用であって、前記癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である、使用。
  4. 癌の処置であって、それを必要とする対象における処置のための、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む組成物の使用であって、前記癌は、ＭＳＳ結腸直腸癌（ＣＲＣ）、胆管癌（肝内若しくは肝外）、膵臓癌、食道癌、食道胃接合部（ＥＧＪ）癌又は胃癌である、使用。
  5. 前記抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  6. 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、表１に提供されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  7. 前記抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供される重鎖可変領域を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  8. 前記抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供される軽鎖可変領域を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  9. 前記抗体又はその抗原結合断片は、以下：
    １）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号５を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号４５を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５６を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号４５を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    １０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号３８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    １１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    １２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号４４を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号５６を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    １３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号８２を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号８３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号８４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号９５を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号９７を含むＬＣＤＲ３配列；
    １４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号８５を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号８６を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号８４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号９８を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１００を含むＬＣＤＲ３配列；
    １５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号８８を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号８９を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号９０を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１０１を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号９７を含むＬＣＤＲ３配列；
    １６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１０６を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１０７を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１１９を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１２０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
    １７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１０９を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１１０を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１２２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２３を含むＬＣＤＲ３配列；
    １８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１１２を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１１３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
    １９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１０６を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１２９を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１１９を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１２０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１０９を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１３０を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１０８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１２２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２３を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１１２を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１３１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１１４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１２４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号９９を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１２１を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１３６を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１３７を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１３８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１４９を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１５１を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１３９を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１４０を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１３８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１５２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１５４を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１４２を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１４３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１４４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１５５を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１５１を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１６０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１６１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１６２を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５０を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１７４を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１６３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１６４を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１６２を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７５を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１７６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１６６を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号１６７を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号１６８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５３を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１７４を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２０を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２２１を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ２９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２２を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２２１を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２２４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号３７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２０を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６１を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５１を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４０を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２２を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６８を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６２を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３３）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４３を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２２３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号６９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号６３を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号５４を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号５２を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３４）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２４５を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２４６を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号２５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３５）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２４７を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２４６を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号２５６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３６）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２４８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２４９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号２５５を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３７）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２６１を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２６２を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３８）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２４７を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２６２を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
    ３９）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２４８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２６３を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ４０）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号２７２を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２７３を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２７４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２５４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号２８５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列；
    ４１）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号２７５を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２７６を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２７４を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号２８６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列；
    ４２）以下を含む抗体又はその抗原結合断片：
    配列番号２７８を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２７９を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号２８０を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号２８６を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
    の任意の１つから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  10. 前記抗体又はその抗原結合断片は、以下：
    １）配列番号１０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体又はその抗原結合断片；
    ２）配列番号２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ３）配列番号３３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ４）配列番号４６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号５７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ５）配列番号４６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号６４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ６）配列番号７０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号７４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ７）配列番号２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号７８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ８）配列番号９１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１０２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    ９）配列番号１１５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １０）配列番号１３２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １１）配列番号１４５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１５６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １２）配列番号１６９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号１７８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １３）配列番号２２５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １４）配列番号２３３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２３７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １５）配列番号２４１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２２９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １６）配列番号２５０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２５７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；
    １７）配列番号２６４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２６８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片；又は
    １８）配列番号２８１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＨ及び配列番号２８７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含むＶＬを含む抗体又はその抗原結合断片
    の任意の１つから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  11. 前記抗体又はその抗原結合断片は、以下：
    １）配列番号１２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ２）配列番号２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ３）配列番号３５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ４）配列番号４８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号５９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ５）配列番号４８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号６６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ６）配列番号７２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号７６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ７）配列番号２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号８０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ８）配列番号９３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１０４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    ９）配列番号１１７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １０）配列番号１３４又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １１）配列番号１４７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１５８又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １２）配列番号１７１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号１８０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １３）配列番号２２７又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １４）配列番号２３５又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １５）配列番号２４３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２３１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １６）配列番号２５２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２５９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；
    １７）配列番号２６６又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２７０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体；又は
    １８）配列番号２８３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖及び配列番号２８９又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む抗体
    の任意の１つから選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  12. 前記抗体又はその抗原結合断片は、
    配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号２を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１４を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１５を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
    を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  13. 前記抗体又はその抗原結合断片は、
    配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号５を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号３を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１９を含むＬＣＤＲ３配列
    を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  14. 前記抗体又はその抗原結合断片は、
    配列番号７を含むＨＣＤＲ１配列、
    配列番号８を含むＨＣＤＲ２配列、
    配列番号９を含むＨＣＤＲ３配列、
    配列番号２０を含むＬＣＤＲ１配列、
    配列番号１８を含むＬＣＤＲ２配列、及び
    配列番号１６を含むＬＣＤＲ３配列
    を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  15. 前記抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号２１又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  16. 前記抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１２又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列及び配列番号２３又はそれと少なくとも約９５％以上同一の配列を含む軽鎖を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  17. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに結合し、前記エピトープは、以下の残基：Ｈｉｓ５０、Ａｓｐ７６、Ｐｒｏ７８、Ｇｌｙ７９、Ｇｌｙ８０、Ｔｙｒ８５、Ａｓｐ８７、Ａｓｎ８８、Ｇｌｙ９１、Ｇｌｎ９４、Ｓｅｒ９５、Ｇｌｙ９８、Ｇｌｕ１０１、Ｇｌｎ１０２、Ｇｌｎ１０５、Ａｓｐ１０６、Ａｒｇ２４５、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ａｌａ３４７、Ａｌａ３５０、Ｔｈｒ３５１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＴｙｒ３９８の少なくとも１つを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  18. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２におけるエピトープに結合し、前記エピトープは、以下の残基：Ｇｌｙ７９、Ｇｌｎ２５０、Ｌｅｕ２５３、Ｔｒｐ２６６、Ａｒｇ２６８、Ｇｌｙ２６９、Ｐｈｅ２７０、Ｓｅｒ２７１、Ｔｈｒ２７２、Ｇｌｎ２７３、Ｖａｌ２７４、Ｌｅｕ２７５、Ａｓｐ２７８、Ａｒｇ２９８、Ｓｅｒ３００、Ｓｅｒ３０２、Ｇｌｙ３０３、Ｔｈｒ３８０、Ｔｒｐ３８１、Ａｌａ３８２、Ｇｌｙ３９０、Ｇｌｎ３９１、Ａｒｇ３９２、Ａｌａ３９３、Ａｒｇ３９４又はＡｓｐ３９７の少なくとも１つを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  19. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質への結合について、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片と競合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  20. 前記抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供される任意の抗体又は抗原結合断片のエピトープと同じエピトープ、実質的に同じエピトープ、重複するエピトープ又は実質的に重複するエピトープに結合する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  21. 前記抗体又はその抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、１０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  22. 前記抗体又はその抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  23. 前記抗体又はその抗原結合断片は、例えばＢｉａｃｏｒｅにより測定して、３ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＥＮＴＰＤ２タンパク質に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  24. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＥＮＴＰＤ２酵素活性を少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％阻害する、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  25. 前記抗体又はその抗原結合断片は、アデノシン三リン酸塩（ＡＴＰ）の加水分解のＥＮＴＰＤ２の能力を阻害する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  26. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ＥＮＴＰＤ２へのＡＴＰの結合を妨害するか、又はＥＮＴＰＤ２の触媒ドメイン内にＡＴＰを捕捉する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  27. 前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  28. 前記抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域又はＩｇＧ２／ＩｇＧ４ハイブリッドＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  29. 前記抗体又はその抗原結合断片は、前記親抗体と比較して低下した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性を有する改変されたＦｃ領域を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  30. 前記抗体は、ヒト若しくはヒト化抗体又はその断片である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  31. 前記癌は、ＥＮＴＰＤ２＋癌である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  32. 前記抗体又はその抗原結合断片は、１時間注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として前記対象に静脈内投与される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  33. 前記抗体又はその抗原結合断片は、抗ＣＤ７３ Ａｂ、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）及びＮＩＲ１７８からなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  34. 前記抗ＣＤ７３ Ａｂは、１時間注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として前記対象に静脈内投与される、請求項３３に記載の方法、組成物又は使用。
  35. スパルタリズマブは、３０分注入（臨床的に指示される場合、２時間まで）として前記対象に静脈内投与される、請求項３３又は３４に記載の方法、組成物又は使用。
  36. ＮＩＲ１７８は、前記対象によって経口的に服用される、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  37. 前記抗体又はその抗原結合断片は、１０ｍｇ、３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、６００ｍｇ、１２００ｍｇ又は２４００ｍｇで２週間又は４週間毎に１回、前記対象に投与される、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  38. 前記抗ＣＤ７３ Ａｂは、２００ｍｇ又は４００ｍｇで２週間毎に１回、前記対象に投与される、請求項３３～３７のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  39. スパルタリズマブは、４００ｍｇで４週間毎に１回、前記対象に投与される、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
  40. ＮＩＲ１７８は、８０ｍｇ又は１６０ｍｇで１日２回（ＢＩＤ）、連続して前記対象に投与される、請求項３３～３９のいずれか一項に記載の方法、組成物又は使用。
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