CN105960414A

CN105960414A - 治疗散发性包涵体肌炎的方法

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Publication number: CN105960414A
Application number: CN201480056363.5A
Authority: CN
Inventors: D·帕帕尼古劳; R·罗本奥夫; B·曾; C·古布泽; D·格拉斯
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2013-08-14
Filing date: 2014-08-13
Publication date: 2016-09-21
Also published as: EP3033358A2; WO2015022658A3; TW201536318A; TN2016000057A1; HK1219280A1; CL2016000341A1; RU2016108652A; SG11201600212VA; SG10201801063TA; IL243883A0; JP2016528247A; US20180066061A1; RU2016108652A3; US20160200818A1; PH12016500141A1; WO2015022658A2; AU2014307589A1; KR20160042987A; CA2918300A1; AU2017228600A1

Abstract

本发明是关于用于治疗散发性包涵体肌炎及其他肌肉萎缩病症的新颖方案，这些方案采用治疗有效量的肌肉生长抑制素(myostatin)拮抗剂，例如肌肉生长抑制素结合分子，例如肌肉生长抑制素抗体或ActRII受体结合分子、ActRII受体抗体，例如比麦单抗(bimagrumab)抗体。

Description

治疗散发性包涵体肌炎的方法

本申请请求2013年8月14日提交的第61/865861号美国临时专利申请和2014年4月24日提交的第61/983567号美国临时专利申请的优先权，其公开通过引用全文纳入本文。

技术领域

本发明处在肌肉生长抑制素(myostatin)拮抗剂的领域，例如肌肉生长抑制素结合分子或活化素受体II(ActRII)结合分子，例如针对肌肉生长抑制素或ActRII的拮抗剂抗体，例如BYM338。具体而言，其是关于散发性包涵体肌炎(sIBM)的疗法和该病治疗的新颖用药方案，其采用治疗有效量的ActRII拮抗剂，例如活化素受体II(ActRII)结合分子，例如抗活化素受体II(ActRII)抗体，例如BYM338抗体(其亦称为“比麦单抗(bimagrumab)”)。

背景技术

散发性包涵体肌炎(sIBM)是极罕见的疾病。尽管关于该疾病基于现代诊断准则的发病率的流行病学文献有限，但该病是散发性的，所有年龄估计每百万人中有15-71人发病，50岁以上每百万人中有51人发病。男性比女性更易患病，约为2:1。发病率存在显著的区域差异，这可能涉及遗传及环境两种要素。尽管存在可能的继发性退化及发炎特征的证据(Hohlfeld 2011)，但sIBM的主要潜在病因未知，且不幸的是对任何已知治疗具有难治性。

尽管罕见，但sIBM代表影响>50岁人群的特发性发炎性肌病的最常见形式(Dimachkie及Barohn 2013；Griggs 2006；Peng等人，2000)，且占所有发炎性肌病的总共30％。该疾病的临床特征在于通常在50岁以后罹患并随时间进展的近端及远端虚弱的隐性及不对称发作(Needham等人，2008)。通常直至症状发作后5-8年才有诊断，此主要归因于该疾病的缓慢演化且难以识别细微早期症状，以及复杂的诊断准则，包含需要活检肌肉病理专业技术。下肢疾病通常以难于自椅子起身及上下楼困难的形式呈现。随着疾病进展，下肢虚弱导致频繁跌倒以及潜在损伤。sIBM患者的跌倒可能因近端肌肉虚弱所致，但远端下肢虚弱(足下垂)也有发生且可对这些这类跌倒起作用。此外，手及手指虚弱存在早期发作，其最终损害保持日常生活活动(例如书写、进食、沐浴、穿衣、刷牙)独立性的能力。在其他重要症状中，至少40％的患者由于涉及食道及咽肌肉发生吞咽困难。这可导致体重损失或后续吸入性肺炎(Amato及Barohn2009；Oh等人，2008)。疾病进展相对缓慢但持续，几乎所有sIBM患者都需要辅助装置，例如在几年内需要手杖或助行器，且至发作约十年则需要轮椅(Griggs等人，1995；Dalakas 2006)。sIBM的不可逆发病率为临床及患者群体所公认(Hohlfeld 2011)。

对相对较大数量的sIBM患者的长期随访研究已确认sIBM严重使人虚弱的性质(Benveniste等人，2011；Cox等人，2011)。在荷兰对64名患者进行了历时10-13年的国家流行病学研究确认sIBM严重使人虚弱的性质，该研究关注sIBM对肌肉强度、功能状况及预期寿命的进行性下降(Cox等人，2011)。尽管并非正规前瞻性登记研究，作者报导预期寿命正常为81岁，但日常生活的活动明显受限。随访时发现，同意进一步随访的所有15名存活患者使用轮椅，其中七名(47％)完全依靠轮椅。20年的平均疾病持续时间后，三名患者生活在养老院且12名住家而有改装(活动扶梯、无门槛、站立椅)。几乎所有患者的日常活动皆需要其伴侣或其他护理者的大量帮助；40％的患者为完全或严重依赖性(巴氏指数(Barthel index)<10)，且20％的患者为中等依赖性(巴氏指数为10-15)。在三名患者(6.5％)中，由于“过度虚弱所致无法忍受的痛苦及生活品质严重降低”而要求安乐死，且在另外三名患者(6.5％)中，因严重失能性吞咽困难、恶病质及脱水要求的连续深度镇静的要求被允许。这些这些荷兰患者中的六个(13％)报导的生命终期护理干预的事实反映在此疾病末期的严重失能及生活品质损失。

尚无经批准用于治疗sIBM的药物，因为尚未发现减缓或逆转sIBM肌肉虚弱进展的治疗(Greenberg 2009；Aggarwal及Oddis 2012)。此外，sIBM患者对传统上用于治疗发炎性肌病的药剂(包含皮质类固醇、甲氨喋呤、硫唑嘌呤或环磷酰胺)尚未显示临床上有意义的反应(Griggs 2006；Mann及2011；Needham及Mastaglia 2007；Solorzano及Phillips 2011)。静脉内免疫球蛋白在一些中心中被标签外(off-label)使用，但没有证据支持其在此病症中的长期效果。对不同免疫疗法(例如抗T淋巴细胞抑制剂、抗TNF药(依那西普(etanercept))及β-干扰素1A)的功效可得出类似总体结论。氧雄龙(Oxandrolone)仍处于探索期，且在对其可能益处达成结论前需要其他数据。因此，当前对sIBM患者的疗法存在明显、未得到满足的医学需求。

基于不同方法及评分，肌肉强度的平均下降速率为每年3.5％-5.4％，且个别患者的可能进展速率显著较快(Hohlfeld 2011；Cox等人，2011)。由于sIBM导致显著的骨骼肌萎缩，故靶向肌肉萎缩途径的治疗(如比麦单抗)可能对此疾病有效。

来自Brigham&Women医院Steven Greenberg博士的实验室的初步数据表明，在sIBM中ActRIIB及其他受体下游的信号传导途径可能被不当活化，这进一步支持ActRIIB抑制可帮助sIBM患者的假说。基于来自17名sIBM患者与12名多发性肌炎或皮肌炎患者及5名正常对照相比的数据，sIBM患者具有显著的磷酸化SMAD(pSMAD)信号传导(其处在ActRIIB受体的下游且起TGFβ信号传导第二信使的作用)，且与正常对照相比增加平均27倍(Greenberg等人，2013)。

基于此，猜测通过TGFβ途径的不适当信号传导促成sIBM的发病机制。尽管未知此TGFβ上调是否藉助ActRIIB受体或另一TGFβ受体，但测试比麦单抗对ActRIIB的抑制是否可干预肌肉萎缩信号传导途径且靶向sIBM患者所经历的虚弱症状似乎是合理的。

此外，Wojcik等人的研究包含分析来自12名sIBM患者的活检，且表明单独或结合至β-淀粉样蛋白的肌肉生长抑制素/肌肉生长抑制素前体可能在sIBM的发病机制中起作用(Wojcik等人，2005)。

比麦单抗(BYM338)是经研发竞争性结合II型活化素受体(ActRII)的亲和力大于肌肉生长抑制素或活化素(其天然配体)的单克隆抗体。比麦单抗是全人源抗体(经修饰IgG1，234-235-Ala-Ala，λ₂)，其结合至ActRII的配体结合结构域，由此阻止其配体的结合及后续信号传导，这些配体之一有肌肉生长抑制素及活化素。肌肉生长抑制素(转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员)是一种负调控动物及人类的骨骼肌质量的分泌蛋白。肌肉生长抑制素信号传导发生在ActRII，且其所提出的作用机制是通过Smad 2/3途径来抑制蛋白质合成以及肌细胞分化及增殖。肌肉生长抑制素抑制或遗传消融增加肌肉质量及强度(Lee等人，2005；Lee及McPherron 2001；Whittemore等人，2003)。

BYM338与人类及小鼠ActRIIB交叉反应，且对人类、食蟹猴、小鼠及大鼠骨骼肌细胞有效。BYM338经调配用于静脉内(静脉内)及皮下(皮下)给药。

来自对14名sIBM患者(11名活性，3名安慰剂)的研究CBYM338X2205的数据显示，在给药单一剂量的BYM338 30mg/kg静脉内后，BYM338相对于安慰剂在统计学上显著增加肌肉体积及瘦体质量。用药后8周，优势大腿肌肉体积(TMV)自基线的平均变化支持BYM338(+6.5％；P＝0.024)。非优势TMV及全身瘦体质量(藉由DXA量测)亦支持BYM338(分别为+7.6％及+5.7％；P＝0.009及P＝0.014)。在单一剂量后跟踪患者24周，且展示按定量肌肉测试(QMT)及人工肌肉测试二者所量测，若干肌群的肌肉强度数值增加。数据亦表明单一BYM338给药后16周的身体功能及活动性益处，如按6分钟步行距离测试(6MWD)中与安慰剂相比14.6％的统计学显著性增加(p＝0.008)所显示。

如藉由来自散发性包涵体肌炎、进行性肌肉退化疾病患者的数据所说明，由单次注射比麦单抗(30mg/kg)引起的瘦体质量的快速增加(自基线>5％)能够触发身体性能的显著增加(图1)。重要的是，肌肉质量增加后功能的改良需要一段滞后时间，此可能反映骨骼肌在完全成熟且就绪以增加收缩活动前的结构/功能重塑。

本研究正进一步研究这些有利的初步单一剂量发现，且研究使用不同剂量的比麦单抗进行长期治疗如何影响非卧床sIBM行动患者的肌肉质量、肌肉强度、身体功能及活动性。

肌肉生长抑制素、ActRIIB受体及ActRIIB受体抗体

比麦单抗(亦称为BYM338)是一种经研发竞争性结合II B型活化素受体(ActRIIB)的亲和力大于肌肉生长抑制素(其主要天然配体)的人单克隆抗体。比麦单抗揭示于WO2010/125003中，该专利的全文以引用方式纳入本文。肌肉生长抑制素(转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员)是一种在整个生命周期中负调控动物及人类骨骼肌质量的分泌蛋白。肌肉生长抑制素信号传导发生在ActRIIB处，且其所提出的作用机制是通过Smad 2/3途径来抑制蛋白质合成以及肌细胞分化及增殖。发育态动物及人类中不存在肌肉生长抑制素会产生肌肉纤维数量及大小增加的超肌肉表型。产后肌肉生长抑制素的含量降低因现有肌纤维的大小增加而导致骨骼肌肥大。在成人中，肌肉生长抑制素是在骨骼肌中产生且部分在血液中循环，作为潜在的非活跃复合物。

与肌肉生长抑制素作为骨骼肌质量的内源抑制剂的作用一致，在不用及类固醇诱导型萎缩的临床前鼠类模型以及使用健康食蟹猴的毒物学研究中，BYM338显著增加骨骼肌质量。此外，小鼠及大鼠的质量增加使得肌肉强度相应增加(力量生成)。向小鼠及食蟹猴静脉内及皮下给药后，比麦单抗显示一致的IgG1药物代谢动力学(PK)曲线与靶介导的药物配置(TMDD)且耐受良好。

首次在人类中分析六个剂量水平的单一升序剂量研究表明，比麦单抗的0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg及30mg/kg的静脉内单剂量是安全、耐受良好的，且产生可根据模型化临床前数据预测的PK曲线。在四周时，3-30mg/kg的剂量产生与安慰剂相比自基线2.7％-5.2％的大腿肌肉体积可量测的增加。

比麦单抗的潜在临床应用是具有肌肉萎缩的病况。尤其应注意需要从由于弃用、恶病质、皮质类固醇使用及肌肉减少症引起的萎缩来恢复肌肉质量的临床情形。散发性包涵体肌炎(sIBM)这一临床情况中所有这些这些要素都可能起一定作用。

发明内容

干预散发性包涵体肌炎(sIBM)患者群体将具有高度创新性且将满足高度迫切的医学需要。实际上，当前尚无治疗sIBM的治疗选择。藉由本发明内提供的方法及用药方案来达成这一目的。

因此，本发明的第一个主题是关于包括肌肉生长抑制素拮抗剂的组合物治疗sIBM的方法或用途，该肌肉生长抑制素拮抗剂可是肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子。肌肉生长抑制素结合分子可以是例如针对肌肉生长抑制素的拮抗剂抗体。ActRII结合分子可以是例如针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比麦单抗(亦称为BYM338)。

如本文所使用的“肌肉生长抑制素拮抗剂”是指能够拮抗(例如，降低、抑制、减小、延迟)肌肉生长抑制素功能、表达及/或信号传导(例如，藉由阻断肌肉生长抑制素与肌肉生长抑制素受体(即ActRIIB)的结合)的分子。拮抗剂的非限制性示例包含肌肉生长抑制素结合分子及ActRIIB受体结合分子。在所揭示方法、方案、试剂盒、过程、用途及组合物的一些实施方式中，采用肌肉生长抑制素拮抗剂。

“肌肉生长抑制素结合分子”意指能够单独或与其他分子缔合来结合人肌肉生长抑制素抗原的任何分子。结合反应可藉由标准方法(定性分析)显示，这些方法包含(例如)结合分析、竞争分析或用于测定肌肉生长抑制素与其受体结合的抑制的生物分析或任一种类的结合分析，参照其中使用具有不相关特异性但理想地具有相同同种型的抗体(例如抗CD25抗体)的阴性对照测试。肌肉生长抑制素结合分子的非限制性示例包含小分子、肌肉生长抑制素受体诱饵及如由B细胞或杂交瘤所产生结合至肌肉生长抑制素的抗体以及嵌合抗体、CDR移植抗体或人类抗体或其任意片段(例如F(ab’)₂及Fab片段)以及单链或单一结构域抗体。优选地，肌肉生长抑制素结合分子拮抗(例如降低、抑制、减小、延迟)肌肉生长抑制素功能、表达及/或信号传导。在所揭示方法、方案、试剂盒、过程、用途及组合物的一些实施方式中，采用肌肉生长抑制素结合分子。

“ActRII结合分子”意指能够单独或与其他分子缔合来结合人类ActRII受体(ActRIIA及/或ActRIIB)的任意分子。结合反应可藉由标准方法(定性分析)显示，这些方法包含(例如)结合分析、竞争分析或用于测定ActRII受体与肌肉生长抑制素结合的抑制的生物分析或任一种类的结合分析，参照其中使用具有不相关特异性但理想地具有相同同种型的抗体(例如抗CD25抗体)的阴性对照测试。ActRII受体结合分子的非限制性实例包含小分子、肌肉生长抑制素诱饵及如由B细胞或杂交瘤所产生针对ActRII受体的抗体以及嵌合抗体、CDR移植抗体或人类抗体或其任意片段(例如F(ab’)₂及Fab片段)以及单链或单一结构域抗体。优选地，ActRII受体结合分子拮抗(例如降低、抑制、减小、延迟)肌肉生长抑制素功能、表达及/或信号传导。在所揭示方法、方案、试剂盒、过程、用途及组合物的一些实施方式中，采用ActRIIB受体结合分子。

在另一实施方式中，组合物包括抗ActRII抗体，其结合至由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的结合结构域或结合至包括以下序列或由以下序列组成的表位：(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ IDNO:186)；(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ ID NO:187)；(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)。

在另一替代性实施方式中，上文所提及的组合物包括抗ActRII抗体，其结合ActRIIB的亲和力10倍或更高于其结合ActRIIA。

此外，本发明是关于组合物，其中抗ActRIIB抗体包括重链可变区CDR1，其包括选自由SEQ ID NO:1-14组成的群的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自由SEQ ID NO:15-28组成的群的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自由SEQ ID NO:29-42组成的群的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自由SEQ ID NO:43-56组成的群的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自由SEQ ID NO:57-70组成的群的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自由SEQ ID NO:71-84组成的群的氨基酸序列。

在某些实施方式中，本发明提供组合物，其中抗ActRII抗体包括：(a)SEQID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3，(b)SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3，(c)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3，(d)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3，(e)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3，(f)SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3，(g)SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3，(h)SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3，(i)SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3，(j)SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3，(k)SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3，(l)SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3，(m)SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3，或(n)SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。

在另一实施方式中，上文所提及的抗ActRII抗体包括(i)全长重链氨基酸序列，其与至少一个选自由SEQ ID NO:146-150及156-160组成的群的序列具有至少95％序列一致性，(ii)全长轻链氨基酸序列，其与至少一个选自由SEQID NO:141-145及151-155组成的群的序列具有至少95％序列一致性，或(iii)(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列及SEQ ID NO:85的可变轻链序列；(b)SEQ IDNO:100的可变重链序列及SEQ ID NO:86的可变轻链序列；(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列及SEQ ID NO:87的可变轻链序列；(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列及SEQ ID NO:88的可变轻链序列；(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列及SEQ ID NO:89的可变轻链序列；(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列及SEQ ID NO:90的可变轻链序列；(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列及SEQ ID NO:91的可变轻链序列；(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列及SEQ ID NO:92的可变轻链序列；(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列及SEQ IDNO:93的可变轻链序列；(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列及SEQ ID NO:94的可变轻链序列；(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列及SEQ ID NO:95的可变轻链序列；(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列及SEQ ID NO:96的可变轻链序列；(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列及SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列及SEQ ID NO:98的可变轻链序列。

在某些方面中，本发明是关于上述组合物，其中所包括的抗ActRII抗体包括(a)SEQ ID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；(b)SEQ IDNO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQID NO:144的轻链序列；(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；(g)SEQ ID NO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQ ID NO:154的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ IDNO:155的轻链序列。

本发明的另一主题是关于组合物，其中(i)抗ActRII抗体交叉阻断上述抗体中之一者或被上述抗体中之一者交叉阻断，(ii)经由Fc区突变具有改变的效应子功能，及/或(iii)结合至由上述抗体中之一者识别的表位。

在另一实施方式中，所揭示组合物包括由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码的抗ActRII抗体。

附图简要说明

图1：在散发性包涵体肌炎患者中，比麦单抗引起的瘦体质量(LBM)、四头肌强度(QMT)及6分钟步行距离(6MWD)自基线的变化。应注意LBM增加(在第8周至第16周)与在第16周开始的肌肉强度及身体性能显著增加之间的时间滞后。

图2：研究设计。

定义

为使本发明更易理解，首先定义某些术语。其他定义在整个详细描述中进行阐释。

术语“包括”意指“包含”，例如“包括”X的组合物可排他地由X组成或可包含额外某物，例如X+Y。

术语“约”关于数值x意指(例如)x±10％。

下文例示评估使用肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRII结合分子，更优选针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比麦单抗)治疗的可能效应的可能临床前治疗方案。

该治疗是藉由使用食蟹猴来例示，但所阐述实验并不限于猴，且技术人员已知如何针对其他物种、尤其针对人类设定适宜实验或给药方案：可藉由静脉内注射向雄性及雌性食蟹猴每周一次持续3个月给药抗ActRII抗体(例如比麦单抗)。32只食蟹猴(16只/性别)可分至四个治疗组中其一(3至5只动物/性别/组)，且可以10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg每周一次持续13周静脉内注射载剂或ActRIIB抗体(例如BYM338)(总共14次剂量；剂量应基于猴的肌肉肥大活性来选择)来给药。

术语“ActRII”、“ActRIIA”及“ActRIIB”是指活化素受体。活化素通过受体丝氨酸激酶的异源二聚体复合物来信号传导，该复合物包含至少两种I型(I及IB)及两种II型(IIA及IIB、也称ACVR2A及ACVR2B)受体。这些受体皆为跨膜蛋白，其是由具有富半胱氨酸区域的配体结合胞外结构域、跨膜结构域及具有所预测丝氨酸/苏氨酸特异性的细胞质结构域构成。I型受体为信号传导所必需，而II型受体为结合配体及表达/募集I型受体所必需。I型及II型受体在配体结合后形成稳定复合物，导致II型受体对I型受体的磷酸化。活化素受体II B(ActRIIB)是肌肉生长抑制素的受体。活化素受体II A(Act RIIA)亦是肌肉生长抑制素的受体。术语ActRIIB或Act IIB受体是指如SEQ ID NO:181(AAC64515.1,GI:3769443)中所定义的人类ActRIIB。业内已知研究级多克隆及单克隆抗ActRIIB抗体，例如由美国明尼苏达州R&D制备的那些。当然，抗体可针对其他物种的ActRIIB，且用于治疗那些物种的病理学病况。

术语“免疫反应”是指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞的以及上述细胞或肝所生成可溶性大分子(例如抗体、细胞因子及补体)的如下作用：其导致选择性损害、破坏或自人体消除侵袭性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌性细胞或(在自体免疫或病理学性发炎的情形下)正常人类细胞或组织。

“信号传导活性”是指通常由蛋白-蛋白相互作用(例如生长因子与受体的结合)引发、使信号自细胞的一部分传递至细胞的另一部分的生物化学因果关系。通常，传递涉及一或多种蛋白质上一或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基在引起信号转导的反应系列中的特异性磷酸化。倒数第二的过程通常包含核事件，从而使基因表达发生变化。

术语“抗体”在本文中提及时包含全抗体及其任意抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。天然产生的“抗体”是包括由二硫键互连的至少两条重(H)链及两条轻(L)链的糖蛋白。每一重链包括重链可变区(在本文中缩写为V_H)及重链恒定区。重链恒定区包括三个结构域：CH1、CH2及CH3。每一轻链包括轻链可变区(在本文中缩写为V_L)及轻链恒定区。轻链恒定区包括一个结构域(C_L)。可将V_H及V_L区进一步细分成超变区(称为互补决定区(CDR))及更保守的区(称为框架区(FR))，二者间杂排列。每一V_H及V_L是由三个CDR及四个FR构成，其自氨基末端至羧基末端按下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链及轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包含免疫系统的各种细胞(例如效应子细胞)及经典补体系统的第一组份(C1q))的结合。

如本文所使用，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗原部分”)是指保留特异性结合至抗原(例如ActRIIB的部分)的能力的抗体的全长或一或多个片段。已显示，抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段来实施。术语抗体的“抗原结合部分”涵盖的结合片段的示例包含Fab片段，即由V_L、V_H、C_L及CH1结构域组成的单价片段；F(ab)₂片段，即包括各自结合至相同抗原、在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；由V_H及CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的V_L及V_H结构域组成的Fv片段；由V_H结构域组成的dAb片段(Ward等人，1989Nature 341:544-546)；及经分离互补决定区(CDR)。

此外，尽管Fv片段的两个结构域(V_L及V_H)是由分别的基因编码，但可使用重组方法藉由合成接头使该两个结构域连接在一起，该合成接头使该两个结构域能够制备为其中V_L与V_H区配对形成单价分子的单一蛋白链(称为单链Fv(scFv)；例如，参见Bird等人，1988Science 242:423-426；及Huston等人，1988Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。这些单链抗体亦欲涵盖于术语抗体的“抗原结合区域”内。这些抗体片段是使用那些本领域技术人员已知的常规技术来获得，且这些片段经筛选以与完整抗体相同的方式使用。

如本文所使用，“经分离抗体”所指的抗体是基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的(例如，特异性结合ActRIIB的经分离抗体基本上不含特异性结合ActRIIB以外抗原的抗体)。然而，特异性结合ActRIIB的经分离抗体可对其他抗原(例如来自其他物种的ActRIIB分子)具有交叉反应性。此外，经分离抗体可以基本上不含其他细胞材料及/或化学品。

术语“交叉阻断(cross-block、cross-blocked及cross-blocking)”在本文中可互换使用，且意指在标准竞争性结合分析中抗体或其他结合剂干扰其他抗体或结合剂结合ActRIIB特别是配体结合结构域的能力。

如本文所使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子制品。单克隆抗体组合物展示针对具体表位的单一结合特异性及亲和力。

如本文所使用，术语“人(类)抗体”意欲包含具有可变区的抗体，其中框架区及CDR区二者皆源自人类来源的序列。此外，若抗体含有恒定区，则该恒定区亦源自此类人类序列，例如人种系序列或人种系序列的突变形式或含有源自人类框架序列分析的共有框架序列的抗体，例如如Knappik等人(2000.JMol Biol 296,57-86)所阐述。本发明的人类抗体可包含并非由人类序列编码的氨基酸残基(例如，藉由活体外随机诱变或位点特异性诱变或藉由活体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所使用，术语“人类抗体”并不欲包含源自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已移植至人类框架序列上的抗体。

术语“人(类)单克隆抗体”是指展示单一结合特异性的抗体，其具有的可变区中框架区及CDR区二者皆源自人类序列。在一实施方式中，人类单克隆抗体是由杂交瘤产生，上述杂交瘤包含与永生细胞融合的获自转基因非人动物(例如转基因小鼠)的B细胞，该转基因非人动物具有包括人类重链转基因及轻链转基因的基因组。

如本文所使用，术语“重组人(类)抗体”包含藉由重组方式制备、表达、产生或分离的所有人类抗体，例如自对人类免疫球蛋白基因而言转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或自其制备的杂交瘤分离的抗体，自经转化以表达该人类抗体的宿主细胞、例如自转染瘤分离的抗体，自重组、组合人类抗体文库分离的抗体，及藉由涉及将人类免疫球蛋白基因、序列的全部或部分剪接至其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。这些重组人类抗体具有的可变区中框架区及CDR区源自人类种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方式中，可使这些重组人类抗体经历体外诱变(或，当使用人类Ig序列的转基因动物时，经历体内的体细胞诱变)，且因此所述重组抗体的V_H及V_L区的氨基酸序列尽管源自人类种系V_H及V_L序列并与其相关，但可以不是天然存在于体内人类抗体种系谱内的序列。

如本文所使用，“同种型”是指由重链恒定区基因提供的抗体类别(例如IgM、IgE、IgG(例如IgG1或IgG2))。

片语“识别抗原的抗体”及“特异性针对抗原的抗体”在本文中可与术语“特异性结合抗原的抗体”互换使用。

如本文所使用，抗体“特异性结合ActRIIB多肽”欲指抗体结合人类ActRIIB多肽的K_D为约100nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小。“与ActRIIB外的抗原交叉反应”的抗体欲指抗体与那种抗原结合的K_D为约10×10^-9M或更小、约5×10^-9M或更小或约2×10^-9M或更小。“不与具体抗原交叉反应”的抗体欲指抗体结合那种抗原的K_D为约1.5×10^-8M或更大，或K_D约5-10×10^-8M或约1×10^-7M或更大。在某些实施方式中，在标准结合分析中，不与抗原交叉反应的这类抗体展现针对这些蛋白质基本上不可检测的结合。K_D可使用生物感测器系统(例如系统)或溶液平衡滴定来测定。

如本文所使用，术语“拮抗剂抗体”欲指在肌肉生长抑制素或其他ActRIIB配体(例如活化素或GDF-11)存在下抑制ActRIIB诱导的信号传导活性的抗体及/或在肌肉生长抑制素或其他ActRIIA配体(例如活化素或GDF-11)存在下抑制ActRIIA诱导的信号传导活性的抗体。用于检测此的分析的示例包含抑制肌肉生长抑制素诱导的信号传导(例如藉由Smad依赖性报导基因分析)、抑制肌肉生长抑制素诱导的Smad磷酸化(P-Smad ELISA)及抑制肌肉生长抑制素诱导的骨骼肌细胞分化抑制(例如藉由肌酸激酶分析)。

在一些实施方式中，这些抗体如Smad依赖性报导基因分析中所量测以约10nM或更小、约1nM或更小或约100pM或更小的IC₅₀抑制肌肉生长抑制素诱导的信号传导。

如本文所使用，“无激动活性”的抗体欲指在基于细胞的分析中在肌肉生长抑制素不存在下不显著增加ActRIIB介导的信号传导活性的抗体，例如抑制肌肉生长抑制素诱导的信号传导(例如藉由Smad依赖性报导基因分析)、抑制肌肉生长抑制素诱导的Smad磷酸化(P-Smad ELISA)及抑制肌肉生长抑制素诱导的骨骼肌细胞分化抑制(例如藉由肌酸激酶分析)。这些分析更详细阐述于下文实例中。

如本文所使用，术语“K_缔合”或“K_a”欲指具体抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所使用，术语“K_解离”或“K_d”欲指具体抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所使用，术语“K_D”欲指解离常数，其是自K_d对K_a的比率(即K_d/K_a)获得且以摩尔浓度(M)表示。抗体的K_D值可使用业内已充分建立的方法来测定。用于测定抗体K_D的方法是藉由使用表面等离子共振(例如生物感测器系统)或溶液平衡滴定(SET)来实施(参见Friguet B等人.(1985)J.Immunol Methods；77(2):305-319,及Hanel C等人.(2005)AnalBiochem；339(1):182-184)。

如本文所使用，术语“亲和力”是指单一抗原位点处抗体与抗原之间相互作用的强度。在每一抗原位点内，抗体“臂”的可变区经由弱的非共价力在多个位点处与抗原相互作用；相互作用愈大，亲和力愈强。

如本文所使用，术语“亲合力”是指抗体-抗原复合物的总体稳定性或强度的资讯性量度。其受控于三个主要要素：抗体表位亲和力；抗原及抗体二者的效价；及相互作用部分的结构排列。最终，这些要素定义抗体的特异性，即具体抗体结合至精确抗原表位的可能性。

如本文所使用，术语“ADCC”或“抗体依赖性细胞毒性”活性是指人类B细胞耗减活性。ADCC活性可藉由业内已知的人类B细胞耗减分析来量测。

为获得较高亲合力探针，可构建二聚体偶联物(偶合至FACS标记物的两个抗体蛋白分子)，因此使得更容易地藉由FACS检测到低亲和力相互作用(例如与种系抗体)。此外，增加抗原结合亲合力的另一方式涉及产生抗ActRIIB抗体的本文所阐述任一构建体的二聚体、三聚体或多聚体。这些多聚体可经由个别模块之间的共价结合、例如藉由模仿天然C至N末端结合或藉由模仿经由其恒定区保持在一起的抗体二聚体来产生。改造成Fc/Fc界面的键可为共价或非共价的。此外，除Fc外的二聚或多聚伴侣可用于ActRIIB杂合体中以产生这些高阶结构。例如，可使用多聚结构域，例如WO2004/039841中所阐述的三聚结构域或WO98/18943中所阐述的五聚结构域。

如本文所使用，对抗体的术语“选择性”是指结合至某靶多肽但不结合密切相关多肽的抗体。

如本文所使用，对抗体的术语“高亲和力”是指抗体对靶抗原的K_D为1nM或更小。如本文所使用，术语“对象”包含任何人类或非人类动物。

术语“非人类动物”包含所有脊椎动物，例如哺乳动物及非哺乳动物，例如非人类灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。

如本文所使用，术语“经优化”意指核苷酸序列经改变以使用在生产细胞或有机体、通常真核细胞(例如毕赤酵母属(Pichia)细胞、木霉属(Trichoderma)细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或人类细胞)中优选的密码子来编码氨基酸序列。经优化的核苷酸序列经改造以完全或尽可能多地保留最初由起始核苷酸序列编码的氨基酸序列，亦称为“亲代”序列。本文的经优化序列已经改造具有在CHO哺乳动物细胞中优选的密码子，然而本文亦设想这些序列在其他真核细胞中的优化表达。由经优化核苷酸序列编码的氨基酸序列亦称为经优化的。

发明详述

业已发现，针对ActRII受体的抗体如比麦单抗可阻止肌肉生长抑制素结合至受体，由此治疗sIBM患者。

因此，在一方面，本发明提供组合物供应用，该组合物包括肌肉生长抑制素拮抗剂，例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRII结合分子，更优选抗ActRII抗体，例如比麦单抗或包括该抗体的抗原结合部分的功能蛋白。在一种实施方式中，ActRIIB是人类ActRIIB。人类ActRIIB的多肽序列陈述于SEQ ID NO:181(AAC64515.1,GI:3769443)中。在一种实施方式中，抗体或功能蛋白是来自哺乳动物，具有例如人类或骆驼科(camelid)的起源。因此，所揭示组合物中所包括的抗体可为嵌合、人类或人源化抗体。在具体实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗ActRIIB抗体的特征在于具有特异性针对靶蛋白ActRIIB且结合至ActRIIB或ActRIIB片段的抗原结合区域。

所揭示组合物及方案亦适用于治疗年龄相关的活动失能、癌症恶病质、慢性阻塞性肺病(COPD)及关节置换(例如膝关节成形术或髋关节成形术或髋骨折)。

在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体是激动活性低或无的ActRII拮抗剂。在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体或功能片段结合靶蛋白ActRII，且将肌肉生长抑制素与ActRII的结合减少至基底水准。在此实施方式的另一方面中，所揭示组合物中所包括的抗体或功能片段完全阻止肌肉生长抑制素结合至ActRII。在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体或功能片段抑制Smad活化。在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体或功能片段经由Smad依赖性途径抑制IIB型活化素受体介导的肌肉生长抑制素诱导的骨骼分化抑制。

结合可藉由一或多种可用于量测抗体的拮抗作用或激动作用的活性的分析来测定。优选地，这些分析量测抗体对ActRIIB的至少一种效应，这些效应包含：由ELISA所测肌肉生长抑制素结合ActRIIB的抑制、抑制肌肉生长抑制素诱导的信号传导(例如藉由Smad依赖性报导基因分析)、抑制肌肉生长抑制素诱导的Smad磷酸化(P-Smad ELISA)及抑制肌肉生长抑制素诱导的骨骼肌细胞分化抑制(例如藉由肌酸激酶分析)。

在一种实施方式中，本发明提供包括特异性结合至ActRIIB的肌肉生长抑制素结合区域(即配体结合结构域)的抗体的组合物。此配体结合结构域是由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134组成，且在本文中已指配为SEQ ID NO:182。所述配体结合结构域包括若干下文所阐述的表位。

在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体结合ActRIIB的K_D为约100nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小。优选地，所揭示组合物中所包括的抗体结合ActRIIB的的亲和力为100pM或更小(即约100pM、约50pM、约10pM、约2pM、约1pM或更小)。在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体结合ActRIIB的的亲和力介于约1pM与约10pM之间。

在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体不与ActRIIB相关蛋白交叉反应，尤其不与人类ActRIIA(NP_001607.1,GI:4501897)交叉反应。在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体与ActRIIA交叉反应，且结合ActRIIB的亲和力是结合ActRIIA的亲和力等效或为其约1、2、3、4或5倍、更优选约10倍、仍更优选约20倍、30倍、40倍或50倍、仍更优选约100倍。

在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体结合至ActRIIA的亲和力为100pM或更大(即约250pM、约500pM、约1nM、约5nM或更大)。

在一种实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体为IgG₂同种型。

在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体为IgG₁同种型。在另一实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体为IgG1同种型，且具有经由Fc区突变而改变的效应子功能。该经改变的效应子功能可是降低的ADCC及CDC活性。在一实施例中，该经改变的效应子功能是沉默ADCC及CDC活性。

在另一相关实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体是不具抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性或CDC活性的全人或人源化IgG1抗体，且结合至由SEQID NO:181的氨基酸19-134组成的ActRIIB区域。

在另一相关实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体是抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性或CDC活性降低的全人或人源化IgG1抗体，且结合至由SEQID NO:181的氨基酸19-134组成的ActRIIB区域。

本发明是关于包括人类或人源化抗ActRIIB抗体的组合物，其用于缩短无法脱离机械通气的重症监护患者在脱离机械通气前的时间。

在某些实施方式中，所揭示组合物中所包括的抗体源自特定的重链及轻链序列及/或包括含特定氨基酸序列的特定结构特征，例如CDR区。本发明提供经分离ActRIIB抗体、制备这些抗体的方法、包括这些抗体的免疫偶联物及多价或多特异性分子以及含有这些抗体、免疫偶联物或双特异性分子的医药组合物。

在替代性实施方式中，本发明是关于供应用的包括肌肉生长抑制素拮抗剂的组合物，根据以下方面所述：

1.一种供使用于治疗散发性包涵体肌炎的肌肉生长抑制素拮抗剂

2.根据方面1供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以约1-10mg/kg的剂量向有需要的患者给药。

3.根据方面1-2供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以约1、约3或约10mg/kg体重的剂量来给药。

4.根据方面1-3供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是经静脉内给药。

5.根据方面1-4中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以每四周给药。

6.根据方面1-5中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该患者可走动。

7.根据方面1-6中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减缓疾病的进展或改善身体功能及活动性。

8.根据方面1-6中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善吞咽障碍和咽下困难。

9.根据方面1-6中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善上肢强度。

10.根据方面1-6中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减少摔倒发生或防止摔倒。

11.根据方面1-10中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是肌肉生长抑制素受体结合分子。

12.根据方面1-11中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是ActRII受体拮抗剂。

13.根据方面1-12中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII受体抗体。

14.根据方面1-13中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRII受体抗体是比麦单抗。

15.根据方面13-14中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII抗体，该抗体结合至ActRIIB的由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的表位。

16.根据方面13-15中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRII抗体结合的ActRIIB表位包括或由以下序列组成：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)。

17.根据方面13-16中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRIIB抗体是选自下组：

a)抗ActRIIB抗体，其结合的ActRIIB表位包括以下序列：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)；

及b)针对ActRIIB的拮抗剂抗体，其结合的ActRIIB表位包括以下序列：SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)，其中该抗体具有约2pM的KD。

18.根据方面13-17中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体结合ActRIIB的亲和力10倍或更大于其结合ActRIIA。

19.根据方面13-18中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:29-42的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:43-56的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:71-84的氨基酸序列。

20.根据方面13-19中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3，

(b)SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3，

(c)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3，

(d)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3，

(e)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3，

(f)SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3，

(g)SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3，

(h)SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3，

(i)SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3，

(j)SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3，

(k)SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3，

(l)SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3，

(m)SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3，或

(n)SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。

21.根据方面13-20中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括的全长重链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

22.根据方面13-21中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括的全长轻链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:141-145及151-155的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

23.根据方面13-22中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列及SEQ ID NO:85的可变轻链序列；

(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列及SEQ ID NO:86的可变轻链序列；

(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列及SEQ ID NO:87的可变轻链序列；

(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列及SEQ ID NO:88的可变轻链序列；

(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列及SEQ ID NO:89的可变轻链序列；

(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列及SEQ ID NO:90的可变轻链序列；

(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列及SEQ ID NO:91的可变轻链序列；

(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列及SEQ ID NO:92的可变轻链序列；

(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列及SEQ ID NO:93的可变轻链序列；

(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列及SEQ ID NO:94的可变轻链序列；

(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列及SEQ ID NO:95的可变轻链序列；

(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列及SEQ ID NO:96的可变轻链序列；

(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列及SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或

(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列及SEQ ID NO:98的可变轻链序列。

24.根据方面13-23中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；

(b)SEQ ID NO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；

(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；

(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQ ID NO:144的轻链序列；

(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；

(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；

(g)SEQ ID NO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；

(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；

(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQ ID NO:154的轻链序列；或

(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ ID NO:155的轻链序列。

25.根据方面13-24中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的抗体交叉阻断方面10的至少一种抗体与ActRIIB的结合或被方面10的至少一种抗体交叉阻断与ActRIIB的结合。

26.根据方面13-25中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的抗体具有经由Fc区突变而改变的效应子功能。

27.根据方面13-26中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的抗体结合方面15-17中所列抗体识别的表位。

28.根据方面13-27中任一项供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。

29.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗，其中比麦单抗是以约1-10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

30.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗，其中比麦单抗是以约1mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

31.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗，其中比麦单抗是以约3mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

32.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗，其中比麦单抗是以约10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

33.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括将治疗有效剂量的肌肉生长抑制素拮抗剂给药至有需要的患者。

34.权利要求33所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其包括以约1-10mg/kg的剂量来给药肌肉生长抑制素拮抗剂。

35.根据方面33-34中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括以约1mg/kg体重、约3mg/kg体重或约10mg/kg体重的剂量给药。

36.根据方面33-35中任一者的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括静脉内给药该肌肉生长抑制素拮抗剂。

37.根据方面33-36中任一者的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括每四周给药该肌肉生长抑制素拮抗剂。

38.根据方面33-37中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该患者可走动。

39.根据方面33-38中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减缓疾病的进展或改善身体功能及活动性。

40.根据方面33-38中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善吞咽障碍和咽下困难。

41.根据方面33-38中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善上肢强度。

42.根据方面33-38中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减少摔倒发生或防止摔倒。

43.根据方面33-42中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是肌肉生长抑制素受体结合分子。

44.根据方面33-43中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是ActRII受体拮抗剂。

45.根据方面33-44中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII受体抗体。

46.根据方面33-45中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRII受体抗体是比麦单抗。

47.根据方面45或46的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII抗体，该抗体结合的ActRIIB表位由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成。

48.根据方面45-47中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRII抗体结合的ActRIIB表位包括或由以下序列组成：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

49.根据方面45-48中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRIIB抗体是选自下组：

a)抗ActRIIB抗体，其结合的ActRIIB表位包括以下序列：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

50.根据方面45-49中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体结合ActRIIB的亲和力10倍或更大于其结合ActRIIA。

51.根据方面45-50中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:29-42的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:43-56的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:71-84的氨基酸序列。

52.根据方面45-51中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

53.根据方面45-52中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括的全长重链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

54.根据方面45-53中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括的全长轻链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:141-145及151-155的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

55.根据方面45-54中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列及SEQ ID NO:85的可变轻链序列；

(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列及SEQ ID NO:86的可变轻链序列；

(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列及SEQ ID NO:87的可变轻链序列；

(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列及SEQ ID NO:88的可变轻链序列；

(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列及SEQ ID NO:89的可变轻链序列；

(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列及SEQ ID NO:90的可变轻链序列；

(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列及SEQ ID NO:91的可变轻链序列；

(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列及SEQ ID NO:92的可变轻链序列；

(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列及SEQ ID NO:93的可变轻链序列；

(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列及SEQ ID NO:94的可变轻链序列；

(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列及SEQ ID NO:95的可变轻链序列；

(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列及SEQ ID NO:96的可变轻链序列；

(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列及SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或

(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列及SEQ ID NO:98的可变轻链序列。

56.根据方面45-55中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；

(b)SEQ ID NO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；

(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；

(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQ ID NO:144的轻链序列；

(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；

(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；

(g)SEQ ID NO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；

(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；

(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQ ID NO:154的轻链序列；或

(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ ID NO:155的轻链序列。

57.根据方面45-56中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该组合物中所包括的抗体交叉阻断方面10的至少一种抗体与ActRIIB的结合或被方面10的至少一种抗体交叉阻断与ActRIIB的结合。

58.根据方面45-57中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该组合物中所包括的抗体具有经由Fc区突变而改变的效应子功能。

59.根据方面45-58中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该组合物中所包括的抗体结合方面46-48中所列抗体识别的表位。

60.根据方面45-59中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。

61.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括给药比麦单抗。

62.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括给药比麦单抗，其中比麦单抗是以约1-10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

63.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括给药比麦单抗，其中比麦单抗是以约1mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

64.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括给药比麦单抗，其中比麦单抗是以约3mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

65.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括给药比麦单抗，其中比麦单抗是以约10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

66.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗。

67.一种包括150mg/ml比麦单抗的组合物，供使用于治疗散发性包涵体肌炎的方法中。

68.一种单一剂型，其包括150mg/ml的比麦单抗。

在其他实施方式中，所述单一剂型(即小瓶)包括100-200mg/ml的比麦单抗，优选100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200mg/ml的比麦单抗。

69.一种输注包，其包括来自一或多个小瓶用溶液稀释的的适量比麦单抗。

该溶液优选是右旋糖溶液。

在一些其他实施方式中，肌肉生长抑制素拮抗剂、优选AcRII拮抗剂或抗ActRII抗体(例如比麦单抗)是以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/kg体重的剂量来给药。

本发明的多个方面进一步详细阐述于下文子部分中。业内已知用于评估抗体对不同物种ActRII的结合能力的标准分析，包含例如ELISA、蛋白质印迹(western blot)及RIA。适宜分析详述于实施例中。抗体的结合亲和力亦可藉由业内已知的标准分析、例如藉由Biacore分析或溶液平衡滴定来评价。基于表面等离子共振的技术(例如Biacore)可测定结合动力学，这允许计算结合亲和力。用于评估抗体对ActRIIB功能特性的效应(例如受体结合、阻止或诱导人类B细胞增殖或IgG产生)的分析进一步详细阐述于实施例中。

因此，应理解，按业内已知和本文所述的方法确定为“抑制”这些ActRII功能性质中的一或多者(例如，生物化学、免疫化学、细胞、生理学或其他生物活性或诸如此类)的抗体与特定活性相对于该抗体不存在下(例如，或在存在不相关特异性的对照抗体时)所见活性的统计学上显著降低有关。抑制ActRII活性的抗体造成统计学显著降低所测参数的至少10％、至少50％、80％或90％，且在某些实施方式中，本发明的抗体可将ActRII功能活性抑制大于95％、98％或99％。

抗体或其他结合剂能够干扰另一抗体或结合分子与ActRII的结合—并因此是否可称其为本发明所述的交叉阻断—的能力或程度可使用标准竞争性结合分析来测定。一种适宜分析涉及使用Biacore技术(例如藉由使用BIAcore仪器(瑞典Uppsala的Biacore公司))，其可使用表面等离子共振技术来量测相互作用程度。用于量测交叉阻断的另一分析使用基于ELISA的方式。另一分析使用FACS分析，其中测试不同抗体结合ActRIIB表达细胞的竞争性(例如实施例中所述)。

根据本发明，在所阐述的BIAcore交叉阻断分析中本发明的交叉阻断抗体或其他结合剂结合至ActRII，以使得抗体或结合剂的组合(混合物)所记录的结合介于呈组合形式的两种抗体或结合剂的最大理论结合的80％与0.1％(例如80％至4％)之间，特定而言介于最大理论结合的75％与0.1％(例如75％至4％)之间，且更特定而言介于最大理论结合的70％与0.1％(例如70％至4％)之间，且更特定而言介于65％与0.1％(例如65％至4％)之间(如上文所定义)。

若与阳性对照孔(即相同抗ActRIIB抗体及ActRIIB，但无“测试”交叉阻断抗体)相比，测试抗体能够引起抗ActRII抗体与ActRIIB的结合降低介于60％与100％之间、特定而言介于70％与100％之间、且更特定而言介于80％与100％之间，则将该抗体定义为在ELISA分析中交叉阻断本发明的抗ActRIIB抗体。如本文所引用的交叉阻断抗体的示例是MOR08159及MOR08213(揭示于WO2010/125003中)。因此，本发明提供组合物，其包含交叉阻断MOR08159或MOR08213与ActRIIB的结合的抗体。

重组抗体

用于本发明内的组合物中所包括的抗体(例如针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比麦单抗)包含人类重组抗体，其如实例中所阐述进行分离及结构表征。本发明组合物中所包括的抗体的V_H氨基酸序列显示于SEQ ID NO:99-112中。本发明组合物中所包括的抗体的V_L氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO:85-98中。本发明组合物中所包括的抗体的优选全长重链氨基酸序列的实例显示于SEQ ID NO:146-150及156-160中。本发明组合物中所包括的抗体的优选全长轻链氨基酸序列的实例分别显示于SEQ ID NO:141-145及151-155中。本发明组合物中所包括的其他抗体包含已藉由氨基酸缺失、插入或取代而突变，但在CDR区中与上述序列中所示的CDR区具有至少60％、70％、80％、90％、95％、97％或99％一致性的氨基酸。在一些实施方式中，其包含突变体氨基酸序列，当与上述序列中所示的CDR区相比时，其CDR区中已藉由氨基酸缺失、插入或取代而突变不大于1个、2个、3个、4个或5个氨基酸。

此外，可变重链亲代核苷酸序列显示于SEQ ID NO:127-140中。可变轻链亲代核苷酸序列显示于SEQ ID NO:113-126中。经优化以在哺乳动物中表达的全长轻链核苷酸序列显示于SEQ ID NO:161-165及171-175中。经优化以在哺乳动物细胞中表达的全长重链核苷酸序列显示于SEQ ID NO:166-170及176-180中。本发明组合物中所包括的其他抗体包含的氨基酸或其编码核酸已经突变、但与上述序列具有至少60％或更大(即80％、90％、95％、97％、99％或更大)一致性。在一些实施方式中，其包含突变体氨基酸序列，其中在可变区与上述序列中所示的可变区相比时，已藉由氨基酸缺失、插入或取代而突变不大于1个、2个、3个、4个或5个氨基酸。

由于这些抗体中的每一者皆结合相同表位且是来自相同亲代抗体的子代，可“混合并匹配”V_H、V_L、全长轻链及全长重链序列(核苷酸序列及氨基酸序列)以产生本发明的其他抗ActRIIB结合分子。可使用上文及实施例中所阐述的结合分析(例如ELISA)来测试这些“混合并匹配”抗体的ActRIIB结合。当混合并匹配这些链时，来自特定V_H/V_L配对的V_H序列应更换为结构相似的V_H序列。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应更换为结构相似的全长重链序列。同样，来自特定V_H/V_L配对的V_L序列应更换为结构相似的V_L序列。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应更换为结构相似的全长轻链序列。因此，在一方面，本发明提供组合物，该组合物包括重组抗ActRII抗体或其抗原结合区，其具有：包括选自SEQ ID NO:99-112的氨基酸序列的重链可变区；及包括选自SEQ ID NO:85-98的氨基酸序列的轻链可变区。

在另一方面，本发明提供组合物，其包括：

(i)经分离重组抗ActRII抗体，其具有：包括选自SEQ ID NO:99-112的氨基酸序列的全长重链；及包括选自SEQ ID NO:85-98的氨基酸序列的全长轻链，或

(ii)含其抗原结合部分的功能蛋白。

在另一方面，本发明提供组合物，其包括：

(i)经分离重组抗ActRII抗体，其具有由已经优化以在哺乳动物细胞中表达的选自SEQ ID NO:127-140的核苷酸序列编码所编码的全长重链，及由已经优化以在哺乳动物细胞中表达选自由SEQ ID NO:113-126的核苷酸序列所编码的全长轻链，或

(ii)含其抗原结合部分的功能蛋白。

本发明组合物中所包括抗体的V_H CDR1的氨基酸序列的示例显示于SEQID NO:1-14中。这些抗体的V_H CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:15-28中。这些抗体的V_H CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:29-42中。这些抗体的V_L CDR1的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:43-56中。这些抗体的V_L CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:57-70中。这些抗体的V_L CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:71-84。CDR区是使用Kabat系统来描绘(Kabat,E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，美国卫生和人类服务部，国立卫生研究院公告第91-3242号)。测定CDR区的替代性方法使用由Chothia所设计的方法(Chothia等人.1989,Nature,342:877-883)。Chothia定义是基于结构环区域的位置。然而，由于Chothia所使用的编号系统中的变化(参见例如http://www.biochem.ucl.ac.uk/～martin/abs/GeneralInfo.html及http://www.bioinf.org.uk/abs/)，此系统现较不常用。业内存在用于定义CDR的其他系统且在该两个网站上也有提及。

鉴于这些抗体中的每一者皆可结合ActRII且抗原结合特异性主要是由CDR1、2及3区提供，可“混合并匹配”V_H CDR1、2及3序列以及V_L CDR1、2及3序列(即可混合并匹配来自不同抗体的多个CDR，各抗体含有V_H CDR1、2及3以及V_L CDR1、2及3，来产生本发明的其他抗ActRII结合分子。可使用上文及实施例中所阐述的结合分析(例如ELISA)来测试这些“混合并匹配”抗体的ActRIIB结合。当V_H CDR序列被混合并匹配时，来自特定V_H序列的CDR1、CDR2及/或CDR3序列应更换为结构相似的CDR序列。同样，当V_L CDR序列被混合并匹配时，来自特定V_L序列的CDR1、CDR2及/或CDR3序列应更换为结构相似的CDR序列。本领域技术人员可显见，可藉由使用来自本文针对单克隆抗体显示的CDR序列的结构相似序列取代一或多个V_H及/或V_LCDR区序列来产生新的V_H及V_L序列。

所揭示组合物中所包括的抗ActRII抗体或其抗原结合区域具有：重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:29-42的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:43-56的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:71-84的氨基酸序列。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体包括：SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；及SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。

在一种实施方式中，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体包括：(a)SEQID NO:85的可变重链序列及SEQ ID NO:99的可变轻链序列；(b)SEQ ID NO:86的可变重链序列及SEQ ID NO:100的可变轻链序列；(c)SEQ ID NO:87的可变重链序列及SEQ ID NO:101的可变轻链序列；(d)SEQ ID NO:88的可变重链序列及SEQ ID NO:102的可变轻链序列；(e)SEQ ID NO:89的可变重链序列及SEQ ID NO:103的可变轻链序列；(f)SEQ ID NO:90的可变重链序列及SEQ ID NO:104的可变轻链序列；(g)SEQ ID NO:91的可变重链序列及SEQID NO:105的可变轻链序列；(h)SEQ ID NO:92的可变重链序列及SEQ ID NO:106的可变轻链序列；(i)SEQ ID NO:93的可变重链序列及SEQ ID NO:107的可变轻链序列；(j)SEQ ID NO:94的可变重链序列及SEQ ID NO:108的可变轻链序列；(k)SEQ ID NO:95的可变重链序列及SEQ ID NO:109的可变轻链序列；(l)SEQ ID NO:96的可变重链序列及SEQ ID NO:110的可变轻链序列；(m)SEQ ID NO:97的可变重链序列及SEQ ID NO:111的可变轻链序列；或(n)SEQID NO:98的可变重链序列及SEQ ID NO:112的可变轻链序列。

在一种实施方式中，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体包括：(a)SEQID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；(b)SEQ ID NO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQ ID NO:144的轻链序列；(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；(g)SEQ IDNO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQID NO:154的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ ID NO:155的轻链序列。

如本文所使用，若抗体的可变区或全长链是自使用人类种系免疫球蛋白基因的系统获得，则人类抗体包括的重链或轻链可变区或全长重链或轻链为特定种系序列的“产物”或“源自”这种序列。这些系统包含使用所关注抗原对携载人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠实施免疫或使用所关注抗原筛选展示于噬菌体上的人类免疫球蛋白基因文库。为人类种系免疫球蛋白序列的“产物”或“源自”这种序列的人类抗体可藉由以下方式来鉴定：比较人类抗体的氨基酸序列与人类种系免疫球蛋白的氨基酸序列，并选择序列最接近人类抗体序列(即最大一致性％)的人类种系免疫球蛋白序列。为特定人类种系免疫球蛋白序列的“产物”或“源自”这种序列的人类抗体与种系序列相比可含有氨基酸差异，其原因例如天然产生的体细胞突变或有意引入定点突变。然而，所选人类抗体的氨基酸序列通常与由人类种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少90％一致，且含有当与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如鼠类种系序列)相比时将人类抗体鉴定为人类的氨基酸残基。在某些情形下，人类抗体的氨基酸序列可与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少80％、90％或至少95％或甚至至少96％、97％、98％或99％一致。通常，源自特定人类种系序列的人类抗体将展示与由人类种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不大于10个氨基酸的差异。在某些情形下，人类抗体可展示与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不大于5个或甚至不大于4个、3个、2个或1个氨基酸的差异。

在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体是由pBW522或pBW524(于2009年8月18日分别以保藏编号DSM22873及DSM22874保藏于德国微生物菌种保藏中心DSMZ,Inhoffenstr.7B,D-38124Braunschweig,Germany)所编码。

同源抗体

在另一实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体具有与本文所述抗体的氨基酸及核苷酸序列同源的全长重链及轻链氨基酸序列；全长重链及轻链核苷酸序列、可变区重链及轻链核苷酸序列或可变区重链及轻链氨基酸序列，且其中这些抗体保留本发明抗ActRIIB抗体的期望功能特性。

例如，本发明提供组合物，其包括包含重链可变区及轻链可变区的经分离重组抗ActRIIB抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：重链可变区包括与选自SEQ ID NO:99-112的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致的氨基酸序列；轻链可变区，其包括与选自SEQ ID NO:85-98的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致的氨基酸序列；或者所述组合物包括包含重链可变区及轻链可变区的重组抗ActRIIB抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：重链可变区包括与选自SEQ ID NO:99-112的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化；轻链可变区包括与选自SEQ ID NO:85-98的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化，且该抗体展现以下至少一种功能特性：(i)其抑制体外或体内肌肉生长抑制素结合，(ii)降低经由Smad依赖性途径的肌肉分化抑制及/或(iii)不引起血液学变化，尤其不引起RBC变化。在此背景下，术语“变化”是指插入、缺失及/或取代。

在另一示例中，本发明提供组合物，其包括包含全长重链及全长轻链的经分离重组抗ActRII抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：全长重链包括与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致的氨基酸序列；全长轻链包括与选自SEQ IDNO:141-145及151-155的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致的氨基酸序列；或者，所述组合物包括包含重链可变区及轻链可变区的重组抗ActRII抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：重链可变区包括与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化；轻链可变区包括与选自SEQ ID NO:141-145及151-155的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化，且该抗体展现以下至少一种功能特性：(i)其抑制体外或体内肌肉生长抑制素结合，(ii)降低经由Smad依赖性途径的肌肉分化抑制及/或(iii)不引起血液学变化，尤其不引起RBC变化。优选地，这样的抗体结合至ActRIIB及/或ActRIIA的配体结合结构域。在此背景下，术语“变化”是指插入、缺失及/或取代。

在另一示例中，本发明提供组合物，其包括包含全长重链及全长轻链的经分离重组抗ActRII抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：所述全长重链的编码核苷酸序列与选自SEQ ID NO:166-170及176-180的核苷酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致；所述全长轻链的编码核苷酸序列与选自SEQ ID NO:161-165及171-175的核苷酸序列至少80％或至少90％(优选至少95％、97％或99％)一致；或者，所述组合物包括包含重链可变区及轻链可变区的重组抗ActRIIB抗体(或含其抗原结合部分的功能蛋白)，其中：重链可变区包括与选自SEQ ID NO:166-170及176-180的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化；轻链可变区包括与选自SEQ ID NO:161-165及171-175的氨基酸序列相比不大于5个氨基酸、或不大于4个氨基酸、或不大于3个氨基酸、或不大于2个或不大于1个氨基酸的变化，且该抗体展现以下至少一种功能特性：(i)其抑制体外或体内肌肉生长抑制素结合，(ii)降低经由Smad依赖性途径的肌肉分化抑制及/或(iii)不引起血液学变化，尤其不引起RBC变化。优选地，这样的抗体结合至ActRIIB的配体结合结构域。在此背景下，术语“变化”是指插入、缺失及/或取代。

在不同实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体可展现上文所述功能特性中的一或多种、两种或更多种或三种。该抗体可以是例如人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。优选地，该抗体是全人源IgG1抗体。

在其他实施方式中，V_H及/或V_L氨基酸序列可与上文所阐释的序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致。在其他实施方式中，除不大于1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸取代外，V_H及/或V_L氨基酸序列可一致。所含V_H及V_L区分别与SEQ ID NO 99-112及SEQ ID NO:85-98的V_H及V_L区具有高(即80％或更大)一致性的抗体可藉由以下方式来获得：分别诱变(例如定点或PCR介导的诱变)核酸分子SEQ ID NO:127-140及113-126，然后使用本文所阐述的功能分析测试所编码经改变抗体的保留功能(即上文所阐释的功能)。

在其他实施方式中，全长重链及/或全长轻链氨基酸序列可与上文所阐释的序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致，或除不大于1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸变化外可一致。所含全长重链和全长轻链分别与SEQ ID NO:146-150及156-160中任一全长重链以及SEQ ID NO:141-145及151-155中任一全长轻链具有高(即至少80％或更大)一致性的抗体可藉由以下方式来获得：分别诱变(例如定点或PCR介导的诱变)核酸分子SEQ IDNO:166-170及176-180和SEQ ID NO:161-165及171-175，然后使用本文所阐述的功能分析测试所编码经改变抗体的保留功能(即上文所阐释的功能)。

在其他实施方式中，全长重链及/或全长轻链核苷酸序列可与上文所阐释的序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致。

在其他实施方式中，重链及/或轻链核苷酸序列的可变区可与上文所阐释的序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致，或除不大于1个、2个、3个、4个或5个氨基酸位置的氨基酸变化外可一致。

如本文所使用，两条序列之间的一致性％随这些序列共有的一致位置数变化(即，一致性％＝一致位置数/总位置数×100)，其中考虑到为达成两条序列最佳比对而需要引入的缺口数及各缺口的长度。两条序列之间的序列比较及一致性％测定可使用数学算法来完成，如下文所阐述。

两条氨基酸序列之间的一致性％可使用已纳入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers及W.Miller的算法(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17,1988)、使用PAM120权重残基表、缺口长度罚分12及缺口罚分4来测定。此外，两条氨基酸序列之间的一致性％可使用已纳入GCG软件包(在http://www.gcg.com上获得)内GAP程序式中的Needleman及Wunsch(J.Mol,Biol.48:444-453,1970)算法、使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵及缺口权重16、14、12、10、8、6或4以及长度权重1、2、3、4、5或6来测定。

具有保守修饰的抗体

在某些实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体具有包括CDR1、CDR2及CDR3序列的重链可变区以及包括CDR1、CDR2及CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一或多者具有基于本文所阐述抗体的指定氨基酸序列或其包括1个、2个、3个、4个或5个氨基酸变化或保守修饰的变体序列，且其中这些抗体保留了本发明抗ActRIIB抗体的期望功能特性。因此，本发明提供包括经分离重组抗ActRIIB抗体或含其抗原结合部分的功能蛋白的组合物，这些抗体或功能蛋白包括含CDR1、CDR2及CDR3序列的重链可变区以及含CDR1、CDR2及CDR3序列的轻链可变区，其中：重链可变区CDR1氨基酸序列是选自SEQ ID NO:1-14或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列；重链可变区CDR2氨基酸序列是选自SEQ ID NO:15-28或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列；CDR3氨基酸序列的重链可变区是选自SEQ ID NO:29-42或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列；轻链可变区CDR1氨基酸序列是选自SEQID NO:43-56或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列；轻链可变区CDR2氨基酸序列是选自SEQ ID NO:57-70或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列；CDR3氨基酸序列的轻链可变区是选自SEQ ID NO:71-84或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列。优选地，该抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其抑制体外或体内肌肉生长抑制素结合，(ii)降低经由Smad依赖性途径的肌肉分化抑制及/或(iii)不引起血液学变化，尤其不引起RBC变化。

在多个实施方式中，该抗体可展现一或两种上文所列功能特性。这些抗体可是例如人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

在其他实施方式中，本发明组合物中所包括的经优化以在哺乳动物细胞中表达的抗体具有全长重链序列及全长轻链序列，其中这些序列中的一或多者具有基于本文所阐述的抗体或其保守修饰的指定氨基酸序列，且其中这些抗体保留了本发明抗ActRIIB抗体的期望功能特性。因此，本发明提供组合物，其包括经优化以在哺乳动物细胞中表达、由全长重链及全长轻链组成的经分离单克隆抗ActRII抗体，其中：全长重链具有选自SEQ ID NO:146-150及156-160或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列的氨基酸序列；且全长轻链具有选自SEQ ID NO:141-145及151-155或其包括1、2、3、4或5个氨基酸变化及其保守修饰的变体序列的氨基酸序列；且该抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其抑制体外或体内肌肉生长抑制素结合，(ii)降低经由Smad依赖性途径的肌肉分化抑制及/或(iii)不引起血液学变化，尤其不引起RBC变化。

如本文所使用，术语“保守序列修饰”欲指不显著影响或改变含有所述氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。这些保守修饰包含氨基酸取代、添加及缺失。可藉由业内已知的标准技术如定点诱变及PCR介导的诱变将修饰引入本发明抗体中。

保守氨基酸取代是氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替代的那类。业内已定义具有类似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包含具有碱性侧链的氨基酸(例如，离氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β分枝侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本发明抗体的CDR区内的一或多个氨基酸残基可被来自同一侧链家族的其他氨基酸残基替代，且可使用本文所阐述的功能分析来测试经改变抗体的保留功能。

与所揭示组合物中所包括的抗ActRII抗体结合相同表位的抗体

在另一实施方式中，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体与本文所阐述的多个特异性抗ActRII抗体结合相同表位。实例中所阐述能够阻断肌肉生长抑制素与ActRIIA及ActRIIB的结合的所有抗体以高亲和力结合ActRIIA及ActRIIB中表位之一，该表位包括在SEQ ID NO:181的氨基酸19-134之间。

因此，可在标准ActRIIB结合分析中基于抗体与本发明的其他抗体交叉竞争(例如以统计学上显著的方式竞争性抑制结合)的能力鉴定其他抗体。测试抗体抑制本发明组合物中所包含抗体与人类ActRIIB结合的能力表明测试抗体可与该抗体竞争结合人类ActRIIB；根据非限制性理论，这样的抗体可能与其所竞争的抗体结合至人类ActRIIB上的相同或相关(例如结构相似或空间近端)表位。在某一实施方式中，与本发明组合物中所包括的抗体结合至人类ActRIIA及ActRIIA上相同表位的抗体是人类重组抗体。这些人类重组抗体可如实例中所阐述来制备及分离。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:85所述可变重链序列及SEQ ID NO:99所述可变轻链序列的抗体所识别的表位及/或与其竞争结合。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:86所述可变重链序列及SEQ ID NO:100所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:87所述可变重链序列及SEQ ID NO:101所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:88所述可变重链序列及SEQ ID NO:102所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:89所述可变重链序列及SEQ ID NO:103所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:90所述可变重链序列及SEQ ID NO:104所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:91所述可变重链序列及SEQ ID NO:105所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:92所述可变重链序列及SEQ ID NO:106所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:93所述可变重链序列及SEQ ID NO:107所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:94所述可变重链序列及SEQ ID NO:108所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:95所述可变重链序列及SEQ ID NO:109所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:96所述可变重链序列及SEQ ID NO:110所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:97所述可变重链序列及SEQ ID NO:111所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合至具有SEQ ID NO:98所述可变重链序列及SEQ ID NO:112所述可变轻链序列的抗体所识别的表位。

遵循更详细的表位定位实验，已更明确地界定本发明组合物的优选抗体的结合区域。

因此，本发明提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ ID NO:187)。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)或由其组成。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)或由其组成。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)或由其组成。

本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合至由这些序列组成的表位或包括这些表位区域的组合的表位。

因此，本发明亦提供包括抗体的组合物，该抗体结合的表位包括SEQ IDNO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)或由其组成。

经改造及经修饰抗体

本发明组合物中所包括的抗体还可使用具有本文所显示V_H及/或V_L序列中的一或多者的抗体作为起始材料改造出经修饰抗体而制备，该经修饰抗体可具有自起始抗体改变的特性。抗体可藉由修饰一或两个可变区(即V_H及/或V_L)内、例如一或多个CDR区内及/或一或多个框架区内的一或多个残基来改造。补充或替代地，抗体可藉由修饰恒定区内的残基来改造，例如改变抗体的效应子功能。

可实施的一种可变区改造类型是CDR移植。抗体与靶抗原主要经由位于六个重链及轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基相互作用。出于此原因，在个体抗体之间CDR内氨基酸序列比CDR外的序列更多样。由于CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，故可藉由构建表达载体来表达模拟特异性天然抗体的特性的重组抗体，这些表达载体包含来自特异性天然抗体、移植至具有不同特性的不同抗体的框架序列上的CDR序列(例如，参见Riechmann,L.等人，1998Nature 332:323-327；Jones,P.等人，1986Nature 321:522-525；Queen,C.等人，1989Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029-10033；Winter的美国专利第5,225,539号以及Queen等人的美国专利第5,530,101号；第5,585,089号；第5,693,762号及第6,180,370号)。

因此，本发明的另一实施方式是关于组合物，其包括单克隆抗ActRII抗体或含其抗原结合部分的功能蛋白，该抗体或功能蛋白包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括分别具有选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列的CDR2序列；具有选自SEQID NO:29-42的氨基酸序列的CDR3序列；轻链可变区分别具有选自SEQ IDNO:43-56的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列的CDR2序列；及由选自SEQ ID NO:71-84的氨基酸序列组成的CDR3序列。因此，这些抗体含有单克隆抗体的V_H及V_L CDR序列，但可含有不同于这些抗体的框架序列。

这些框架序列可获自包含种系抗体基因序列的公开DNA数据库或公开参考文献。例如，人类重链及轻链可变区基因的种系DNA序列可参见“VBase”人类种系序列数据库(在互联网www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase上获得)以及Kabat,E.A.等人，[参见上文]；Tomlinson,I.M.等人，1992J.fol.Biol.227:776-798；及Cox,J.P.L.等人，1994Eur.J Immunol.24:827-836。

用于本发明抗体中的框架序列的实例是与由本发明的所选抗体使用的框架序列(例如共有序列)及/或由本发明的单克隆抗体使用的框架序列结构相似的那些。可将V_H CDR1、2及3序列及V_L CDR1、2及3序列移植至具有与发现于衍生出框架序列的种系免疫球蛋白基因中的序列相一致的序列的框架区上，或可将CDR序列移植至与种系序列相比含有一或多个突变的框架区上。例如已发现，在某些情况下，突变框架区内的残基有益于维持或增强抗体的抗原结合能力(例如，参见Queen等人的美国专利5,530,101；5,585,089；5,693,762及6,180,370)。

另一类型的可变区修饰是突变V_H及/或V_L CDR1、CDR2及/或CDR3区内的氨基酸残基，由此改良所关注抗体的一或多种结合特性(例如亲和力)，称为“亲和力成熟”。可实施定点诱变或PCR介导的诱变以引入突变，且可在如本文所阐述且于实例中提供的体外或体内分析中评估对抗体结合的效应或所关注的其他功能特性。可引入保守修饰(如上文所论述)。突变可为氨基酸取代、添加或缺失。此外，通常改变CDR区内不大于1、2、3、4或5个残基。

因此，在另一实施方式中，本发明提供经分离抗ActRII单克隆抗体或含其抗原结合部分的功能蛋白，该抗体或功能蛋白有以下组成，重链可变区具有：V_H CDR1区，其氨基酸序列组成选自SEQ ID NO:1-14或与SEQ ID NO:1-14相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；V_H CDR2区，其具有选自SEQ ID NO:15-28或与SEQ ID NO:15-28相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的氨基酸序列；V_H CDR3区，其具有选自SEQ ID NO:29-42或与SEQ ID NO:29-42相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的氨基酸序列；V_L CDR1区，其具有选自SEQ ID NO:43-56或与SEQ ID NO:43-56相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的氨基酸序列；V_L CDR2区，其具有选自SEQ ID NO:52-70或与SEQ ID NO:52-70相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列氨基酸序列；及V_L CDR3区，其具有选自SEQ ID NO:71-84或与SEQ ID NO:71-84相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的氨基酸序列。

骆驼科抗体

已对获自骆驼及单峰骆驼(dromedary)家族成员(双峰骆驼(Camelusbactrianus)及单峰骆驼(Camelus dromaderius)，包含新世界成员，例如美洲驼(llama)种(羊驼(Lama paccos)、大羊驼(Lama glama)及小羊驼(Lama vicugna)))的抗体就蛋白大小、结构复杂度及对人类个体的抗原性进行了表征。来自此哺乳动物家族的某些IgG抗体自然所见缺少轻链，且因此在结构上不同于来自其他动物的抗体的具有两条重链及两条轻链的典型四链四级结构(参见WO94/04678)。

骆驼科抗体的鉴定为V_HH的小单一可变结构域的区域可藉由遗传改造来获得以产生对靶具有高亲和力的小蛋白质，从而产生低分子量的抗体衍生蛋白质，称为“骆驼科纳米抗体”(参见US5,759,808；Stijlemans,B.等人，2004J BiolChem 279:1256-1261；Dumoulin,M.等人，2003Nature 424:783-788；Pleschberger,M.等人，2003Bioconjugate Chem 14:440-448；Cortez-Retamozo,V.等人，2002Int J Cancer 89:456-62；及Lauwereys,M.等人，1998EMBO J 17:3512-3520)。骆驼科抗体及抗体片段的经改造文库市售可得，例如，购自比利时根特的Ablynx公司。如同非人类来源的其他抗体，可以重组改变骆驼科抗体的氨基酸序列，以获得更密切类似于人类序列的序列，即可“人源化”纳米抗体。因此，骆驼科抗体对人类的天然低抗原性可被进一步降低。

骆驼科纳米抗体的分子量约为人类IgG分子的十分之一，且该蛋白质的物理直径仅几纳米。该小尺寸的一个结果是骆驼科纳米抗体结合至在功能上为较大抗体蛋白不可见的抗原位点的能力，即骆驼科纳米抗体可用作试剂来检测原本对使用经典免疫学技术隐蔽的抗原的，并用作可能的治疗剂。因此，小尺寸的另一结果在于，骆驼科纳米抗体可因与靶蛋白的沟或窄缝中的特异性位点的结合而抑制，且因此可提供比经典抗体更接近地类似于经典低分子量药物的功能的能力。

低分子量及紧凑尺寸还使得骆驼科纳米抗体极其热稳定、对极端pH及蛋白水解消化稳定以及低抗原性。另一结果在于，骆驼科纳米抗体容易自循环系统移动至组织中，且甚至穿过血脑屏障，且可治疗侵袭神经组织的病症。纳米抗体可进一步促进药物运输穿过血脑屏障(参见US2004/0161738)。这些特征佐以对人类的低抗原性指示较大治疗潜能。此外，这些分子可在原核细胞(例如大肠杆菌(E.coli))中完整表达，且与细菌噬菌体表达为融合蛋白并具有功能。

因此，在一种实施方式中，本发明是关于组合物，其包括对ActRIIB具有高亲和力的骆驼科抗体或纳米抗体。在本文的某些实施方式中，骆驼科抗体或纳米抗体在骆驼科动物中天然产生，即在使用本文针对其他抗体阐述的技术使用ActRIIB或其肽片段实施免疫后由骆驼科产生。或者，抗ActRIIB骆驼科纳米抗体经改造，即，使用以ActRIIB作为靶的淘选程序，藉由例如自展示经适当诱变的骆驼科纳米抗体蛋白的噬菌体文库选择来产生，如本文实例中所阐述。经改造纳米抗体可进一步藉由遗传改造来定制成在接受个体中具有45分钟至两周的半衰期。在特定实施方式中，骆驼科抗体或纳米抗体是藉由将本发明人类抗体的重链或轻链CDR序列移植至纳米抗体或单一结构域抗体框架序列中来获得，如例如WO94/04678中所阐述。

非抗体支架

已知非免疫球蛋白框架或支架包含(但不限于)阿德奈汀(Adnectins)(纤连蛋白)(马萨诸塞州沃尔瑟姆的Compound Therapeutics公司)、锚蛋白(瑞士苏黎世的Molecular Partners AG)、结构域抗体(马萨诸塞州剑桥的Domantis有限公司及比利时兹维纳尔德的Ablynx nv)、脂质运载蛋白(抗运载蛋白(Anticalin))(德国弗赖辛的Pieris Proteolab AG)、小分子免疫医药(华盛顿州西雅图的Trubion Pharmaceuticals公司)、马克西抗体(maxybody)(加州山景城的Avidia公司)、蛋白质A(瑞典的Affibody AG)及亲和素(γ-晶体蛋白或泛素)(德国哈勒的Scil Proteins GmbH)、蛋白质表位模拟物(瑞士阿勒斯海姆的Polyphor有限公司)。

(i)纤连蛋白支架

纤连蛋白支架优选是基于III型纤连蛋白结构域(例如III型纤连蛋白的第十模组(10Fn3结构域))。III型纤连蛋白结构域具有7或8条β链分布于两个β片之间，它们本身彼此堆砌形成该蛋白质的核心，且进一步含有将β链彼此连接且暴露于溶剂中的环(类似于CDR)。在β片夹心的每一边缘处存在至少三个这些环，其中该边缘是蛋白质的垂直于β链方向的边界(US 6,818,418)。

这些基于纤连蛋白的支架并非免疫球蛋白，但总体折迭与最小功能性抗体片段、重链可变区的折迭密切相关，该片段包括骆驼及美洲驼IgG中的整个抗原识别单元。由于此结构，非免疫球蛋白抗体模拟那些抗体的亲和力与天然所见类似的抗原结合特性。这些支架可用于与体内抗体亲和力成熟过程类似的体外环随机化及改组策略。这些基于纤连蛋白的分子可用作支架，其分子中的环区域可使用标准克隆技术用本发明的CDR替代。

(ii)锚蛋白-分子伴侣

该技术是基于使用含锚蛋白衍生重复模块的蛋白质作为支架来承载可用于与不同靶结合的多个可变区。锚蛋白重复模块是由两个反向平行的α-螺旋与β转角组成的33个氨基酸的多肽。可变区的结合大多是藉由使用核糖体展示来优化。

(iii)马克西抗体(Maxybody)/亲合聚体(Avimer)-Avidia

亲合聚体源自含有A-结构域的天然蛋白质如LRP-1。这些结构域天然用于蛋白质-蛋白质相互作用，且在人类中超过250种蛋白质的结构是基于A-结构域。亲合聚体由经氨基酸接头连接的多个不同“A-结构域”单体(2-10)组成。可结合至靶抗原的亲合聚体可使用例如US2004/0175756、US2005/0053973、US2005/0048512及US2006/0008844中所阐述的方法来产生。

(vi)蛋白质A-亲和体(Affibody)

亲和力配体是简单的小蛋白质，由基于蛋白质A的一个IgG结合结构域的支架的三螺旋束构成。蛋白质A是来自细菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的表面蛋白。此支架结构域由58个氨基酸组成，其中的13个被随机化以产生具有大量配体变体的文库(例如，参见US5,831,012)。分子模拟抗体，其具有6kDa的分子量，相比之下抗体的分子量是150kDa。尽管其尺寸小，分子的结合位点与抗体的结合位点相似。

(v)抗运载蛋白(Anticalin)-白粉蝶属(Pieris)

是由Pieris ProteoLab AG公司研发的产品。它们源自脂质运载蛋白，这些脂质运载蛋白是一类广泛的小且稳健的蛋白质，其通常参与化学敏感或不可溶化合物的生理运输或储存。若干天然脂质运载蛋白出现在人类组织或体液中。

蛋白质架构暗示免疫球蛋白，在刚性框架顶部上有超变环。然而，与抗体或其重组片段不同，脂质运载蛋白是由具有160至180个氨基酸残基的单一多肽链构成，仅稍大于单一免疫球蛋白结构域。

构成结合囊袋的四环集合显示显著的结构可塑性且耐受多种侧链。因此，可在专有过程中对结合位点进行改型来以高亲和性和特异性识别不同形状的指定靶分子。

业内已使用脂质运载蛋白家族的一种蛋白质，欧洲粉蝶(Pieris brassicae)的胆结合蛋白(BBP))，来藉由诱变四环集合来研发抗运载蛋白。阐述“抗运载蛋白”的专利申请案的一个实例是WO1999/16873。

(vi)亲和素(Affilin)-Scil蛋白

AFFILIN^TM分子是经设计对蛋白质及小分子有特异性亲和力的小的非免疫球蛋白。新颖AFFILIN^TM分子可极快速地选自两个文库，这两个文库各是基于源自人类的不同支架蛋白。

AFFILIN^TM分子并不显示任何与免疫球蛋白的结构同源性。Scil蛋白采用两种AFFILIN^TM支架，其中之一是γ晶体蛋白(人类结构晶状体蛋白)，且另一者是“泛素”超家族蛋白质。两种人类支架皆极小，显示高温稳定性且几乎抵抗pH变化及变性剂。这种高稳定性主要归因于这些蛋白质的扩展β片结构。源自γ晶体蛋白的蛋白质的实例阐述于WO2001/004144中，且“泛素样”蛋白的实例阐述于WO2004/106368中。

(vii)蛋白质表位模拟物(PEM)

PEM是模拟蛋白质的β-发夹二级结构(参与蛋白质-蛋白质相互作用的主要二级结构)的中等大小的环状肽样分子(MW 1-2kDa)。

将抗原结合结构域移植入替代框架或支架

可采用众多种抗体/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含至少一个特异性结合ActRIIB的结合区域。这些框架或支架包含人类免疫球蛋白的5个主要的独特型，或其片段(例如本文别处所揭示的那些)，且包含其他动物物种的免疫球蛋白，优选具有人类化方面。单一重链抗体(例如于骆驼科中所鉴定的那些)在此方面尤其受关注。藉由那些本领域技术人员持续发现及研发新颖的框架、支架及片段。

在一方面，本发明组合物可包括基于非免疫球蛋白的抗体，使用非免疫球蛋白支架，其上可移植所揭示抗体的CDR。可采用已知或将来非免疫球蛋白框架及支架，只要其包括特异性针对SEQ ID NO:181的靶蛋白的结合区域(优选其配体结合结构域，如SEQ ID NO:182中所显示)。这些化合物在本文中称为“包括靶特异性结合区域的多肽”。非免疫球蛋白框架的实例进一步阐述于以下部分中(骆驼科抗体及非抗体支架)。

框架或Fc改造

本发明组合物中所包括的经改造抗体包含其中已对V_H及/或V_L内的框架残基进行修饰例如以改良抗体特性的那些。通常，这些框架修饰经制备以降低抗体的免疫原性。例如，一种方式是将一或多个框架残基“回复突变”成相应的种系序列。更特定而言，已经受体细胞突变的抗体可含有与衍生出该抗体的种系序列不同的框架残基。这些残基可藉由比较抗体框架序列与衍生出该抗体的种系序列来鉴定。为使框架区序列返回至其种系组态，可藉由例如定点诱变或PCR介导的诱变将体细胞突变“回复突变”成种系序列。这些“回复突变”抗体亦可包括在本发明组合物中。

另一类型的框架修饰涉及突变框架区或甚至一或多个CDR区内的一或多个残基，以移除T细胞表位，由此降低抗体的潜在免疫原性。此方式亦称为“去免疫化”且进一步详细阐述于US2003/0153043中。

作为在框架或CDR区内进行修饰的补充或替代，本发明抗体可经改造以包含Fc区内的修饰，通常改变抗体的一或多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合及/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本发明组合物中所包括的抗体可经化学修饰(例如可将一或多个化学部分附接至该抗体)或经修饰以改变其糖基化，也用来改变抗体的一或多种功能特性。这些实施方式中的各自进一步详细阐述于下文中。Fc区中残基的编号是Kabat的EU指数。

在一种实施方式中，CH1的铰链区经修饰以改变(例如增加或减少)铰链区中的半胱氨酸残基数。此方式进一步阐述于US5,677,425中。改变CH1铰链区中的半胱氨酸残基数以例如帮助轻链及重链组装或增加或降低抗体的稳定性。

在另一实施方式中，抗体的Fc铰链区经突变以缩短抗体的生物半衰期。更特定而言，将一或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区，以使得该抗体具有相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合而言削弱的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。此方式进一步详细阐述于US 6,165,745中。

在另一实施方式中，抗体经修饰以延长其生物半衰期。多种方式是可行的。例如，可引入以下突变中的一或多者：T252L、T254S、T256F，如US6,277,375中所阐述。或者，为延长生物半衰期，可改变抗体的CH1或CL区以含有取自IgG的Fc区的CH2结构域的两环的补救受体结合表位，如US5,869,046及US6,121,022中所阐述。

在其他实施方式中，藉由将至少一个氨基酸残基替代为不同的氨基酸参加来改变Fc区以改变抗体的效应子功能。例如，一或多个氨基酸可替代为不同的氨基酸残基，以使得抗体对效应子配体具有经改变的亲和力但保留亲代抗体的抗原结合能力。对其亲和力改变的效应子配体可是例如Fc受体或补体的C1组份。此方式进一步详细阐述于Winter等人的US5,624,821及US5,648,260中。具体而言，可突变残基234及235。具体而言，这些突变可以是丙氨酸。因此，在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体具有Fc区的氨基酸234及235中一或两者处的突变。在另一实施方式中，可用丙氨酸取代氨基酸234及235中的一或两者。用丙氨酸取代氨基酸234及235二者导致降低的ADCC活性。

在另一实施方式中，选自所阐述抗体的氨基酸残基的一或多个氨基酸可替代为不同的氨基酸残基，以使得抗体具有经改变的C1q结合及/或降低或消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。此方式进一步详细阐述于US6,194,551中。

在另一实施方式中，改变所阐述抗体的一或多个氨基酸残基，由此改变抗体固定补体的能力。此方式进一步阐述于WO94/29351中。

在另一实施方式中，藉由修饰一或多个氨基酸对所阐述抗体的Fc区进行修饰，以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力及/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力。此方式进一步阐述于WO00/42072中。此外，已定位人类IgG1上针对FcγRl、FcγRII、FcγRIII及FcRn的结合位点，且已阐述具有经改良结合的变体(参见Shields,R.L.等人，2001J.Biol.Chen.276:6591-6604)。

在另一实施方式中，改变本发明组合物中所包括的抗体的糖基化。例如，可制备无糖基化的抗体(即抗体缺少糖基化)。可改变糖基化以例如增加抗体对抗原的亲和力。这些碳水化合物修饰可藉由例如改变抗体序列内的一或多个糖基化位点来完成。例如，可进行一或多个氨基酸取代以消除一或多个可变区框架糖基化位点，由此消除该位点处的糖基化。这种无糖基化可增加抗体对抗原的亲和力。此一方式进一步详细阐述于Co等人的美国专利第5,714,350号及第6,350,861号中。

补充或替代地，可使用具有经改变糖基化类型的抗体，例如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二分型GlcNac结构的抗体。已展示，这些经改变的糖基化模式增加抗体的ADCC能力。这些碳水化合物修饰可藉由例如在具有经改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来完成。具有经改变糖基化机制的细胞已于业内有所阐述且可用作在其中表达所揭示重组抗体的宿主细胞，由此产生具有经改变糖基化的抗体。例如，Hang等人的EP1,176,195阐述具有编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因的功能被破坏的细胞系，使得在这种细胞系中表达的抗体呈现低岩藻糖基化。因此，在一种实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体是藉由在展现低岩藻糖基化模式的细胞系(例如缺陷性表达编码岩藻糖基转移酶的FUT8基因的哺乳动物细胞系)中重组表达来产生。WO03/035835阐述变体CHO细胞系、Lecl3细胞，其中将岩藻糖附接至Asn(297)连接的碳水化合物的能力降低，亦导致在该宿主细胞中所表达抗体的低岩藻糖基化(亦参见Shields,R.L.等人，2002J.Biol.Chem.277:26733-26740)。WO99/54342阐述经改造以表达糖蛋白修饰的糖基转移酶(例如β(1,4)-N乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的细胞系，以使得在经改造细胞系中表达的抗体展现增加的二分型GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性增加(亦参见Umana等人，1999Nat.Biotech.17:176-180)。另一选择为，本发明组合物中所包括的抗体可在酵母菌或丝状真菌中产生，该酵母菌或丝状真菌经改造用于哺乳动物样糖基化模式，且能够产生糖基化模式缺少岩藻糖的抗体(例如，参见EP1297172B1)。

本发明所涵盖的本文抗体的另一修饰是聚乙二醇化。抗体可经聚乙二醇化以例如延长抗体的生物(例如血清)半衰期。为对抗体实施聚乙二醇化，通常在一或多个PEG基团附接至抗体或抗体片段的条件下使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)(例如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应。聚乙二醇化可藉由与反应性PEG分子(或类似的反应性水溶聚合物)的酰化反应或烷基化反应来实施。如本文所使用，术语“聚乙二醇”意欲涵盖PEG的已用于衍生其他蛋白质的任一形式，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方式中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化抗体。用于聚乙二醇化蛋白质的方法为业内已知且可应用于所揭示抗体(例如，参见EP0154316及EP0401384)。

本发明所涵盖的抗体的另一修饰是本发明组合物中所包括的抗体的至少抗原结合区域与血清蛋白(例如人类血清白蛋白或其片段)的偶联或蛋白融合，以延长所得分子的半衰期(例如，参见EP0322094)。

另一可能性是融合本发明组合物中所包括的抗体的至少抗原结合区域与能够结合至血清蛋白(例如人类血清白蛋白)的蛋白质，以延长所得分子的半衰期(例如，参见EP0486525)。

改造经改变抗体的方法

如上文所论述，可藉由修饰CDR序列全长重链及/或轻链序列、V_H及/或V_L序列或其附接的恒定区，使用具有本文所显示的CDR序列、V_H及V_L序列或全长重链及轻链序列的抗ActRIIB抗体来产生新颖的抗ActRIIB抗体。因此，在本发明的另一方面中，使用本发明组合物中所包括的抗ActRIIB抗体的结构特征来产生结构相关的抗ActRIIB抗体，这些结构相关的抗ActRIIB抗体保留本发明组合物中所包括抗体的至少一种功能特性(例如结合至人类ActRIIB)，但还抑制ActRIIB的一或多种功能特性(例如，抑制Smad活化)。

例如，本发明组合物中所包括抗体的一或多个CDR区或其突变可以重组方式与已知框架区及/或其他CDR组合，以产生本发明组合物中所包括的额外经重组改造的抗ActRIIB抗体，如上文所论述。其他类型的修饰包含先前部分中所阐述的那些。用于改造方法的起始材料是本文所提供V_H及/或V_L序列中的一或多者或其一或多个CDR区。为产生经改造抗体，无需实际制备(即表达为蛋白质)具有本文所提供V_H及/或V_L序列中的一或多者或其一或多个CDR区的抗体。而是，使用序列中所含有的信息作为起始材料以产生源自初始序列的“第二代”序列，且然后制备“第二代”序列并表达为蛋白质。

经改变抗体序列亦可藉由筛选抗体文库来制备，这些抗体文库具有选自SEQ ID NO:29-42及SEQ ID NO:71-84的固定CDR3序列或如US2005/0255552中所阐述的最小必需结合决定簇及CDR1及CDR2序列多样性。筛选可根据适用于自抗体文库筛选抗体的任何筛选技术(例如噬菌体展示技术)来实施。

可使用标准分子生物学技术来制备并表达经改变抗体序列。由经改变抗体序列编码的抗体是保留本文所阐述抗ActRIIB抗体的一种、一些或所有功能特性的抗体，这些功能特性包含但不限于特异性结合人类ActRIIB及抑制Smad活化。

经改变抗体可展现上文所论述功能特性中的一或多者、两者或更多者或三者或更多者。

经改变抗体的功能特性可使用业内可得及/或本文所阐述的标准分析(例如实施例中所阐释的那些(例如ELISA))来评价。

突变可沿抗ActRIIB抗体编码序列的全部或部分随机或选择性引入，且可针对本文所阐述的结合活性及/或如其他功能特性来筛选所得经修饰抗ActRIIB抗体。突变方法已于业内有所阐述。例如，WO02/092780阐述使用饱和诱变、合成性接合组装或其组合产生及筛选抗体突变的方法。或者，WO03/074679阐述使用计算筛选方法优化抗体的物理化学特性的方法。

编码本发明组合物中所包括抗体的核酸分子

针对哺乳动物细胞中表达经过优化的全长轻链核苷酸序列的实例显示于SEQ ID NO:161-165及171-175中。针对哺乳动物细胞中表达经过优化的全长重链核苷酸序列的实例显示于SEQ ID NO:166-170及176-180中。

所述核酸可存在于完整细胞、细胞裂解物中，或可是呈部分纯化或实质上纯的形式的核酸。当藉由标准技术实施纯化以清除其他细胞组份或其他污染物(例如其他细胞核酸或蛋白质)时，核酸是“经分离”或“实质上纯的”，这些标准技术包含碱/SDS处理、CsCl显带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳及业内熟知的其他方法。参见F.Ausubel等人编辑，1987Current Protocols in MolecularBiology,Greene Publishing和Wiley Interscience,New York。核酸可使用标准分子生物学技术来获得。对于由杂交瘤(例如自携载人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤，如下文进一步阐述)表达的抗体，所述杂交瘤所制备抗体的轻链及重链的编码cDNA可藉由标准PCR扩增或cDNA克隆技术来获得。对于自免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可自多个文库成员的噬菌体克隆回收编码所述抗体的核酸。

一旦获得编码V_H及V_L区段的DNA片段，即可藉由标准重组DNA技术进一步操纵这些DNA片段，以例如将可变区基因转化成全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操纵中，编码V_L或V_H的DNA片段可操作地连接至另一DNA分子或编码另一蛋白质(例如抗体恒定区或挠性接头)的片段。按此背景下所使用的术语“可操作地连接”欲指两个DNA片段以功能方式连结，例如以使得由该两个DNA片段编码的氨基酸序列保留在框内，或使蛋白质在期望启动子的控制下表达。

可藉由将编码V_H的DNA可操作地连接至编码重链恒定区(CH1、CH2及CH3)的另一DNA分子，将编码V_H区的经分离DNA转化成全长重链基因。人类重链恒定区基因的序列为业内已知(例如，参见Kabat,E.A.等人，同上)，且涵盖这些区域的DNA片段可藉由标准PCR扩增来获得。重链恒定区可是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。重链恒定区可选自IgG1同种型。对于Fab片段重链基因，编码V_H的DNA可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。

可藉由将编码V_L的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子，将编码V_L区的经分离DNA转化成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人类轻链恒定区基因的序列为业内已知(例如，参见Kabat,E.A.等人，同上)，且涵盖这些区域的DNA片段可藉由标准PCR扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。

为产生scFv基因，编码V_H及V_L的DNA片段可操作地连接至编码挠性接头、例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)₃的另一片段，以使得V_H及V_L序列可表达为连续的单链蛋白，且V_L及V_H区藉由挠性接头连结(例如，参见Bird等人，1988Science 242:423-426；Huston等人，1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；McCafferty等人，1990Nature 348:552-554)。

单克隆抗体的产生

单克隆抗体(mAb)可藉由多种技术(包含常规单克隆抗体方法，例如Kohler及Milstein的标准体细胞杂交技术)(1975Nature 256:495)来产生。可采用许多产生单克隆抗体的技术，例如B淋巴细胞的病毒或致癌转化。

用于制备杂交瘤的一种动物系统是鼠类系统。小鼠中的杂交瘤产生是已充分建立的程序。分离融合用经免疫脾细胞的免疫方案及技术为业内已知。融合伴侣(例如，鼠类骨髓瘤细胞)及融合程序也是已知的。

本发明组合物中所包括的嵌合或人源化抗体可基于如上文所述制备的鼠类单克隆抗体的序列来制备。编码重链及轻链免疫球蛋白的DNA可自所关注鼠类杂交瘤获得并使用标准分子生物学技术加以改造以含有非鼠类(例如，人类)免疫球蛋白序列。例如，为产生嵌合抗体，可使用业内已知的方法将鼠类可变区连接至人类恒定区(例如，参见US4,816,567)。为产生人源化抗体，可使用业内已知的方法将鼠类CDR区插入人类框架中(例如，参见美国专利第5225539号；第5530101号；第5585089号；第5693762号及第6180370号)。

在某一实施方式中，本发明组合物中所包括的抗体是人类单克隆抗体。可使用携载人类免疫系统而非小鼠系统的部分的转基因或转染色体小鼠来产生针对ActRIIB的这些人类单克隆抗体。这些转基因及转染色体小鼠包含在本文中分别称为HuMAb小鼠及KM小鼠的小鼠，且在本文中统称为“人类Ig小鼠”。

HuMAb(Medarex公司)含有编码非重排人类重链(μ及γ)及κ轻链免疫球蛋白序列的人类免疫球蛋白基因微小基因座(miniloci)以及使内源性μ及κ链基因座失活的靶向突变(例如，参见Lonberg等人，1994Nature 368(6474):856-859)。因此，小鼠展现降低的小鼠IgM或κ表达，且在对免疫的反应中，所引入的人类重链及轻链转基因经受类别转换及体细胞突变，以产生高亲和力人类IgGκ单克隆抗体(Lonberg,N.等人，1994同上；综述于Lonberg,N.,1994Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101；Lonberg,N.及Huszar,D.,1995Intern.Rev.Immunol.13:65-93，以及Harding,F.及Lonberg,N.,1995Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546)。HuMAb小鼠及这些小鼠所携载的基因组修饰的制备及用途进一步阐述于Taylor,L.等人，1992Nucleic Acids Research20:6287-6295；Chen,J.等人，1993International Immunology 5:647-656；Tuaillon等人，1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:3720-3724；Choi等人，1993NatureGenetics 4:117-123；Chen,J.等人，1993EMBO J.12:821-830；Tuaillon等人，1994J.Immunol.152:2912-2920；Taylor,L.等人，1994International Immunology579-591；及Fishwild,D.等人，1996Nature Biotechnology 14:845-851，所有这些文献中的全文皆以引用方式纳入本文。此外，参见美国专利第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,789,650号；第5,877,397号；第5,661,016号；第5,814,318号；第5,874,299号；第5,770,429号；及第5,545,807号；以及WO92/103918、WO93/12227、WO94/25585、WO97/113852、WO98/24884；WO99/45962；及WO01/14424。

在另一实施方式中，本发明组合物中所包括的人类抗体可使用转基因及转染色体上携载人类免疫球蛋白序列的小鼠(例如携载人类重链转基因及人类轻链转染色体的小鼠)来产生。这些小鼠(在本文中称为“KM小鼠”)详细阐述于WO02/43478中。

此外，表达人类免疫球蛋白基因的替代性转基因动物系统在业内可得且可用来产生本发明的抗ActRIIB抗体。例如，可使用称为Xenomouse(Abgenix公司)的替代性转基因系统。这些小鼠阐述于例如美国专利第5,939,598号；第6,075,181号；第6,114,598号；第6,150,584号及第6,162,963号中。

此外，表达人类免疫球蛋白基因的替代性转染色体动物系统在业内可得且可用来产生本发明的抗ActRIIB抗体。例如，可使用携载人类重链转染色体及人类轻链转染色体二者的小鼠(称为“TC小鼠”)；这些小鼠阐述于Tomizuka等人，2000Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:722-727中。此外，携载人类重链及轻链转染色体的牛业内已有阐述(Kuroiwa等人，2002Nature Biotechnology20:889-894)，且可用来产生抗ActRIIB抗体。

本发明组合物中所包括的人类重组抗体亦可使用用于筛选人类免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备。用于分离人类抗体的这些噬菌体展示方法在业内已建立或阐述于以下实例中。例如，参见：美国专利第5,223,409号；第5,403,484号；第5,571,698号；第5,427,908号；第5,580,717号；第5,969,108号；第6,172,197号；第5,885,793号；第6,521,404号；第6,544,731号；第6,555,313号；第6,582,915号及第6,593,081号。

本发明组合物中所包括的人类单克隆抗体亦可使用SCID小鼠来制备，该小鼠中重构有人类免疫细胞以使得可在实施免疫后产生人类抗体反应。这些小鼠阐述于例如美国专利第5,476,996号及第5,698,767号中。

产人类单克隆抗体的杂交瘤的产生

为产生产本发明组合物中所包括人类单克隆抗体的杂交瘤，可自免疫小鼠分离脾细胞及/或淋巴结细胞并融合至适宜永生细胞系，例如小鼠骨髓瘤细胞系。所得杂交瘤可就产生抗原特异性抗体作筛选。例如，可使用50％PEG将来自免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬浮液融合至六分之一数量的P3X63-Ag8.653非分泌小鼠骨髓瘤细胞(ATCC,CRL 1580)。将细胞以约2×145平铺于平底微量滴定板中，然后在含有20％胎牛纯系血清、18％“653”条件化培养基、5％奥瑞金(origen,IGEN公司)、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0:055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素及1×HAT(Sigma；融合后24小时添加HAT)的选择培养基中培育两周。约两周后，可在HAT被更换为HT的培养基中培养细胞。然后可藉由ELISA就人类单克隆IgM及IgG抗体筛选个体孔。一旦出现杂交瘤广泛生长，通常可在10-14天后观察培养基。可将抗体分泌性的杂交瘤再铺板，再筛选，且若仍为人类IgG阳性，则可藉由限制性稀释将单克隆抗体亚克隆至少两次。然后可体外培养稳定的亚克隆以在组织培养基中产生少量抗体用于表征。

为纯化人类单克隆抗体，可使所选杂交瘤在两公升旋转瓶中生长用于纯化单克隆抗体。可将上清液过滤并浓缩，然后使用蛋白质A-琼脂糖(Pharmacia)进行亲和层析。洗脱的IgG可藉由凝胶电泳及高效液相层析检查以确保纯度。缓冲溶液可置换为PBS，且可使用1.43消光系数藉由OD₂₈₀来测定浓度。可将单克隆抗体等分并储存在-80℃下。

产单克隆抗体的转染瘤的产生

本发明组合物中所包括的抗体亦可在宿主细胞转染瘤中产生，使用例如业内所熟知的重组DNA技术及基因转染方法的组合(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)。

例如，为表达抗体或其抗体片段，可藉由标准分子生物学技术(例如使用表达所关注抗体的杂交瘤的cDNA克隆或PCR扩增)获得编码部分或全长轻链及重链的DNA，且可将所述DNA插入表达载体中，以使得这些基因可操作地连接至转录及翻译控制序列。在此背景下，术语“可操作地连接”欲指使抗体基因接合至载体中，以使得该载体内的转录及翻译控制序列发挥其调控抗体基因的转录及翻译的期望功能。表达载体及表达控制序列经选择与所用表达宿主细胞相容。可将抗体轻链基因及抗体重链基因插入单独载体中，或更通常地，将两种基因插入同一表达载体中。藉由标准方法将抗体基因插入表达载体中(例如，将抗体基因片段与载体上的互补限制位点接合，或若不存在限制位点，则利用钝端接合)。可使用本文所阐述抗体的轻链及重链可变区藉由将其插入已编码期望同种型的重链恒定区及轻链恒定区的表达载体中来产生任何抗体同种型的全长抗体基因，使V_H区段在载体内可操作地连接至CH区段，且使V_L区段在载体内可操作地连接至CL区段。补充或替代地，重组表达载体可编码促进宿主细胞分泌抗体链的信号肽。可将抗体链基因克隆至载体中，以使得信号肽框内连接至抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。

除抗体链基因外，本发明的重组表达载体可携载控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调控序列。术语“调控序列”意欲包含控制抗体链基因的转录或翻译的启动子、增强子及其他表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。这些调控序列阐述于例如Goeddel(Gene Expression Technology.Methods inEnzymology 185,Academic Press,San Diego,CA 1990)中。本领域技术人员应了解，表达载体的设计(包含调控序列的选择)可取决于多种因素，例如欲转化宿主细胞的选择、期望蛋白质的表达量等。用于哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包含在哺乳动物细胞中引导较高蛋白质表达量的病毒元件，例如源自以下各项的启动子及/或增强子：巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))及多瘤病毒。或者，可使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或P-球蛋白启动子。此外，调控元件是由来自不同来源(例如SRa启动子系统)的序列构成，该SRa启动子系统含有来自SV40早期启动子的序列及人类T细胞1型白血病病毒的长末端重复(Takebe,Y.等人，1988Mol.Cell.Biol.8:466-472)。

除抗体链基因及调控序列外，重组表达载体可携载额外序列，例如调控载体在宿主细胞中复制的序列(例如复制起点)及可选标记物基因。可选标记物基因帮助选择其中已引入载体的宿主细胞(例如，参见美国专利第4,399,216号、第4,634,665号及第5,179,017号)。例如，通常可选标记物基因赋予已引入载体的宿主细胞对药物(例如G418、潮霉素或胺甲喋呤)的抗性。可选标记物基因包含二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于经胺甲喋呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞)及neo基因(用于G418选择)。

为表达轻链及重链，藉由标准技术将编码重链及轻链的表达载体转染至宿主细胞中。术语“转染”的各种形式意欲涵盖众多种常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。理论上可在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体。讨论了抗体在真核细胞、尤其哺乳动物宿主细胞中的表达，这是因为这些真核细胞、且尤其哺乳动物细胞比原核细胞更可能组装并分泌经适当折叠且具免疫学活性的抗体。已报导抗体基因的原核表达无法有效地产生高产量的活性抗体(Boss,M.A.及Wood,C.R.,1985Immunology Today 6:12-13)。

用于表达本发明组合物中所包括的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包含中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包含dhfr-CHO细胞，其阐述于Urlaub及Chasin,1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中，其与DH FR可选标记物一起使用，例如，如R.J.Kaufman and P.A.Sharp,1982Mol.Biol.159:601-621中所阐述)，NSO骨髓瘤细胞，COS细胞及SP2细胞。在一种实施方式中，宿主细胞是CHOK1PD细胞。具体而言，为与NSO骨髓瘤细胞一起使用，另一表达系统是WO87/04462、WO89/01036及EP 338,841中所显示的GS基因表达系统。用于表达本发明组合物中所包括的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包含FUT8基因表达缺陷的哺乳动物细胞系，例如如US6,946,292B2中所阐述。当将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，藉由将宿主细胞培养一段时间来产生抗体，该段时间足以使在宿主细胞中表达抗体或使抗体分泌至生长宿主细胞的培养基中。可使用标准蛋白纯化方法自培养基回收抗体。

免疫偶联物

在另一方面，本发明涉及包括偶联至治疗部分(例如细胞毒素、药物(例如免疫抑制剂)或放射性毒素)的抗ActRIIB抗体或其片段的组合物。这些偶联物在本文中称为“免疫偶联物”。包含一或多种细胞毒素的免疫偶联物称为“免疫毒素”。细胞毒素或细胞毒性剂包含有害于(例如杀死)细胞的任何药剂。

可使用业内可得的接头技术将细胞毒素偶联至本发明的抗体。已用于将细胞毒素偶联至抗体的接头类型的实例包含(但不限于)腙、硫醚、酯、二硫化物及含肽接头。可选择例如易受溶酶体隔室内的低pH影响而裂解或易被蛋白酶(例如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶，例如组织蛋白酶(例如组织蛋白酶B、C、D))裂解的接头。

关于细胞毒素类型、接头及将治疗剂偶联至抗体的方法的其他论述亦参见Saito,G.等人，2003Adv.Drugs Deliv.Rev.55:199-215；Trail,P.A.等人，2003Cancer Immunol.Immunother.52:328-337；Payne,G.2003Cancer Cell 3:207-212；Allen,T.M.,2002Nat.Rev.Cancer 2:750-763；Pastan,I.及Kreitman,R.J.,2002Curr.Opin.Investig.Drugs 3:1089-1091；Senter,P.D.及Springer,C.J.,2001Adv.Drug Deliv.Rev.53:247-264。

亦可将本发明组合物中所包括的抗体偶联至放射性同位素以产生细胞毒性放射性医药，亦称为放射性免疫偶联物。可偶联至抗体用于诊断或治疗的放射性同位素的实例包含(但不限于)碘¹³¹、铟¹¹¹、钇⁹⁰及镥¹⁷⁷。用于制备放射性免疫偶联物的方法在业内已建立。放射性免疫偶联物的实例在市面上有售，包含Zevalin^TM(DEC Pharmaceuticals)及Bexxar^TM(Corixa Pharmaceuticals)，且可使用类似方法使用本发明抗体来制备放射性免疫偶联物。

可使用本发明组合物中所包括的抗体偶联物来调整给定生物应答，且药物部分不应理解为限于经典化学治疗剂。例如，药物部分可是具有期望生物活性的蛋白质或多肽。这些蛋白质可包含例如酶促活性毒素或其活性片段，例如相思豆毒素(abrin)、蓖麻毒素A、假单胞菌(pseudomonas)外毒素或白喉毒素；蛋白质，例如肿瘤坏死因子或干扰素-γ；或生物应答调整剂，例如淋巴因子、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或其他生长因子。

用于偶联此类治疗部分与抗体的技术已为业内所熟知，例如参见Amon等人，“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy(用于癌症治疗药物免疫靶向的单克隆抗体)”，Monoclonal Antibodies AndCancer Therapy(《单克隆抗体和癌症治疗》),Reisfeld等人(编辑)，第243-56页(Alan R.Liss公司，1985)；Hellstrom等人，“Antibodies For Drug Delivery(用于药物递送的抗体)”，Controlled Drug Delivery(《受控药物递送》)(第2版),Robinson等人(编辑)，第623-53页(Marcel Dekker公司，1987)；Thorpe，“AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review(综述：癌症治疗中细胞毒性药剂的抗体载体)”，Monoclonal Antibodies'84:Biological And ClinicalApplications(《单克隆抗体'84：生物学及临床应用》),Pinchera等人(编辑)，第475-506页(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of The TherapeuticUse Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy(带放射性标记抗体治疗性应用于癌症治疗中的分析、结果和前景)”，Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy(《单克隆抗体用于癌症检测和治疗》),Baldwin等人，(编辑)，第303-16页(Academic Press 1985)；及Thorpe等人，“The Preparation AndCytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates(抗体-毒素偶联物的制备和细胞毒性)”，Inmunol.Rev.,62:119-58(1982)。

双特异性分子

在另一方面，本发明涉及包括双特异性或多特异性分子的组合物，该分子包含本发明的抗ActRIIB抗体或其片段。本发明组合物中所包括的抗体或其抗原结合区域可衍生化或连接至另一功能分子，例如另一肽或蛋白质(例如某受体的另一抗体或配体)，以产生结合至少两个不同结合位点或靶分子的双特异性分子。本发明抗体事实上可衍生化或连接至超过一个的其他功能分子，以产生结合超过两个不同结合位点及/或靶分子的多特异性分子；这些多特异性分子亦欲涵盖于如本文所使用的术语“双特异性分子”中。为产生本发明的双特异性分子，本发明抗体可功能性连接(例如藉由化学偶合、遗传融合、非共价缔合或其他方式)至一或多个其他结合分子，例如另一抗体、抗体片段、肽或结合模拟物，以产生双特异性分子。

因此，本发明包含包括双特异性分子的组合物，这些双特异性分子至少包括对ActRIIB的一种第一结合特异性及对第二靶表位的第二结合特异性。例如，第二靶表位可是ActRIIB的不同于第一靶表位的另一表位。

此外，对于其中双特异性分子具有多特异性的组合物，该分子可进一步包含第一及第二靶表位以外的第三结合特异性。

在一种实施方式中，所揭示组合物的双特异性分子包括至少一种抗体或其抗体片段(包含例如Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv或单链Fv)作为结合特异性。抗体亦可是轻链或重链二聚体或其任何最小片段，例如Fv或单链构建体，如Ladner等人，US4,946,778中所阐述，其内容以引用方式纳入本文中。

可用于双特异性分子中的其他抗体是鼠类、嵌合及人源化单克隆抗体。

本发明组合物中所包括的双特异性分子可使用业内已知的方法藉由偶联成份结合特异性来制备。例如，可单独产生双特异性分子的各结合特异性再彼此偶联。当结合特异性是蛋白质或肽时，可使用多种偶合或交联试剂进行共价偶联。交联试剂的实例包含蛋白质A、碳化二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫基双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻亚苯基二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)及4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-l-甲酸磺基琥珀酰亚胺基酯(磺基-SMCC)(例如，参见Karpovsky等人，1984J.Exp.Med.160:1686；Liu,MA等人，1985Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其他方法包含以下文献中所阐述的那些：Paulus,1985Behring Ins.Mitt.第78期，118-132；Brennan等人，1985Science 229:81-83)及Glennie等人，1987J.Immunol.139:2367-2375)。偶联剂是SATA及磺基-SMCC，其皆可自Pierce Chemical公司(伊利诺伊州罗克福德)购得。

当结合特异性是抗体时，其可藉由两条重链的C末端铰链区的巯基键结来偶联。在具体实施方式中，铰链区经修饰在偶联前含有奇数个巯基残基，例如1个。

或者，两种结合特异性可在同一载体中编码且在同一宿主细胞中表达并组装。此方法在双特异性分子是mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab')₂或配体×Fab融合蛋白时尤其有用。本发明组合物中所包括的双特异性分子可是包括一种单链抗体及结合决定簇的单链分子或包括两种结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性分子可包括至少两种单链分子。用于制备双特异性分子的方法阐述于例如美国专利第5,260,203号；第5,455,030号；第4,881,175号；第5,132,405号；第5,091,513号；第5,476,786号；第5,013,653号；第5,258,498；及第5,482,858号中。

双特异性分子与其特异性靶的结合可藉由例如酶联免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)、FACS分析、生物分析(例如生长抑制)或蛋白质印迹分析来确认。这些分析中的每一者通常藉由采用特异性针对所关注复合物的经标记试剂(例如抗体)来检测具体受关注的蛋白质-抗体复合物的存在。

多价抗体

在另一方面，本发明是关于包括多价抗体的组合物，这些抗体包括至少两个相同或不同的所述抗体结合ActRIIB的抗原结合部分。在一种实施方式中，多价抗体提供抗体的至少两个、三个或四个抗原结合部分。抗原结合部分可经由蛋白融合或共价或非共价连接连接在一起。或者，已阐述用于双特异性分子的连接方法。在多个实施方式中，组合物可具有单价、二价或多价(例如能够结合至一个、两个或若干抗原)及/或单特异性、双特异性或多特异性(例如具有能够结合至一种、两种或若干种不同抗原的结合区域)。组合物可为这些中的任一组合，例如单价及单特异性(具有一个结合至一种抗原或表位的结合区域)；或二价及双特异性(具有两个结合区域，其各自结合至不同表位或抗原)；或二价及单特异性(具有两个结合区域，其各自结合至相同表位或抗原)；或多价及单特异性(具有若干结合区域，其皆结合至相同抗原或表位)；或多价及多特异性(具有若干结合区域结合至若干种不同的抗原或表位)。

医药组合物

在另一方面，本发明提供组合物，例如医药组合物，其含有上文所阐述抗体/单克隆抗体或其抗原结合部分中的一个或组合，与医药上可接受的载剂配制在一起。这些组合物可包含所阐述抗体或免疫偶联物或双特异性分子中的一个或组合(例如两种或更多不同种的组合)。例如，本发明的医药组合物可包括结合至靶抗原上的不同表位或具有互补活性的多个抗体的组合。

本发明的医药组合物也可在组合疗法中给药，即联合其他药剂给药。例如，组合疗法可包含本发明抗ActRII抗体联合至少一种其他肌肉质量/强度增加剂，该增加剂是例如IGF-1、IGF-2或者IGF-1或IGF-2的变体、抗肌肉生长抑制素抗体、肌肉生长抑制素前肽、结合ActRIIB但不使其活化的肌肉生长抑制素陷阱蛋白、β2激动剂、饥饿素(Ghrelin)激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或滤泡抑素。可用于组合疗法中的治疗剂的实例更详细阐述于下文关于本发明抗体的用途部分中。

如本文所使用，“医药上可接受的载剂”包含任何及所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌及抗真菌剂、等张渗剂及吸收延迟剂等。载剂应适于静脉内、肌内、皮下、非经肠、脊髓或表皮给药(例如藉由注射或输注)，优选适于静脉内注射或输注。根据给药途径，活性化合物(即抗体、免疫偶联物或双特异性分子)可被包衣在材料中以保护化合物免受可使化合物失活的酸及其他天然条件的作用。

本发明的医药组合物可包含一或多种医药上可接受的盐。“医药上可接受的盐”是指保留母体化合物的期望生物活性且不造成任何不期望毒理学效应的盐(例如，参见Berge,S.M.等人，1977J.Pharm.Sci.66:1-19)。这些盐的实例包含酸加成盐及碱加成盐。酸加成盐包含源自无毒无机酸(例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等)以及源自无毒有机酸(例如脂肪族单及二羧酸、经苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族及芳香族磺酸等)的那些。碱加成盐包含源自碱土金属(例如钠、钾、镁、钙等)以及源自无毒有机胺(例如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等)的那些。

本发明的医药组合物亦可包含医药上可接受的抗氧化剂。医药上可接受的抗氧化剂的实例包含：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；及金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。

可用于本发明医药组合物中的适宜水性及非水性载剂的实例包含水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适宜混合物，植物油(例如橄榄油)及可注射有机酯(例如油酸乙酯)。可藉由(例如)使用诸如卵磷脂等包衣材料、维持所需粒径(在分散剂的情形下)及使用表面活性剂来维持适当流动性。

这些组合物亦可含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂及分散剂。藉由上述灭菌程序和纳入各种抗细菌剂及抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)都可确保阻止微生物的存在。这些组合物中可能亦期望包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，可藉由纳入吸收延迟剂(例如单硬脂酸铝及明胶)来实现可注射医药形式的长效吸收。

医药上可接受的载剂包含无菌水溶液或分散液及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂。业内已知用于医药活性物质的这些介质及药剂的使用。除与活性化合物不相容的以外，本发明涵盖任何常规介质或药剂于医药组合物中的用途。所述组合物中亦可纳入附加活性化合物。

通常，治疗组合物必须无菌且在制造及储存条件下稳定。可将组合物调配成溶液、微乳液、脂质体或其他适于高药物浓度的有序结构。载剂可为溶剂或分散介质，其含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液体聚乙二醇等)及其适宜混合物。可藉由(例如)使用包衣(例如卵磷脂)、维持所需粒径(在分散液情形下)和使用表面活性剂来维持适当流动性。在许多情形下，可向组合物中纳入等渗剂，例如糖、多元醇(例如，甘露醇、山梨醇)或氯化钠)。可藉由向组合物中纳入延迟吸收剂(例如，单硬脂酸盐及明胶)实现可注射组合物的长效吸收。

无菌可注射溶液可如下制备：将所需量的活性化合物按需要纳入含有上文所列举药剂中之一或组合的适宜溶剂中，然后进行无菌微滤。通常，可藉由将活性化合物纳入无菌载剂中来制备分散液，该载剂含有基础分散介质及上文所列举中需要的其他药剂。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情形下，制备方法是真空干燥及冷冻干燥(冻干)，其可自其预先经无菌过滤的溶液产生由活性剂加上任意所期望额外药剂构成的粉末。

可与载剂材料组合产生单一剂型的活性剂的量将取决于所治疗个体及具体给药模式而变化。可与载剂材料组合产生单一剂型的活性剂的量通常可为产生治疗效应的组合物的量。通常，在100％中，此量会是约0.01％至约99％范围内的活性剂，约0.1％至约70％或约1％至约30％范围内的活性剂联合医药上可接受的载剂。

可对剂量方案进行调整以提供最佳期望反应(例如治疗应答)。例如，可给予单次快速剂量(bolus)，可随时间给药若干个分次剂量或可根据治疗状况紧急程度所指示按比例减少或增加剂量。以剂量单元形式来调配非经肠组合物尤其有利于方便给药及剂量一致性。如本文所使用的剂量单元形式是指适于作为单位剂量供欲治疗个体使用的物理离散单元；各单元含有预定量的活性化合物，此预定量经计算与所需医药载剂一起产生期望治疗效应。本发明剂量单元形式的规格取决于且直接依赖于活性化合物的独特特征及欲达成的具体治疗效应，及形成这样的活性化合物以治疗个体敏感性的技术中固有的限制条件。

对于根据本发明使用的包括抗体的组合物的给药，抗体剂量按宿主体重介于约0.0001至约100mg/kg、且更通常介于约0.01至约30mg/kg范围内。例如，剂量为约1mg/kg体重、约3mg/kg体重、约5mg/kg体重或约10mg/kg体重，介于约1-10mg/kg范围内，例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/kg体重，优选每4周一次。优选在静脉内实施该给药。或者，在皮下实施给药。

本发明抗ActRII抗体(例如比麦单抗)的剂量方案包含约1mg/kg体重或约3mg/kg体重或约10mg/kg体重，藉由静脉内每四周一次给药。

本发明组合物优选用于治疗散发性包涵体肌炎。

在一种特定实施方式中，患有散发性包涵体肌炎的患者的身体功能及活动性有改善。

在一种特定实施方式中，患有散发性包涵体肌炎的患者的吞咽障碍和咽下困难有改善。

在一种特定实施方式中，患有散发性包涵体肌炎的患者的上肢强度有改善。

在一种特定实施方式中，患有散发性包涵体肌炎的患者的摔倒发生或摔倒风险有减少。

在一些方法中，本发明组合物包括两种或更多种具有不同结合特异性的单克隆抗体，且因此同时给药，在该情形下每一抗体所给药的剂量在所指示范围内。抗体通常是在多个情况下给药。单一剂量之间的间隔可是例如每周、每月、每三个月、每六个月或每年。间隔亦可如藉由量测患者的针对靶抗原的抗体血液含量所指示而不规则。在一些方法中，对剂量进行调整以达成约1-约1000μg/ml、且在一些方法中为约25-约300μg/ml的血浆抗体浓度。例如，本发明的ActRII抗体可与抗肌肉生长抑制素抗体共同给药。

剂量及频率根据抗体在患者中的半衰期而变化。通常，人类抗体显示最长半衰期，其次为人源化抗体、嵌合抗体及非人类抗体。给药剂量及频率可根据治疗为预防性或或治疗性而变化。在预防性应用中，以相对较不频繁的间隔在较长时间段给药相对较低的剂量。一些患者在其余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要相对较短间隔的相对较高的剂量直至减轻或终止疾病进展或直至患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可向患者施用预防性方案。

“治疗有效剂量”的本发明组合物所包括抗ActRII抗体的给药可降低疾病症状的严重程度，增加无疾病症状期的频率及持续时间，或预防因感病性造成的损害或失能，即增加肌肉质量及/或强度。

活性化合物可利用保护化合物免于快速释放的载剂制备，例如控释配制物，包含植入物、经皮贴剂及微囊封递送系统。可使用生物可降解、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯及聚乳酸。制备这些配制物的许多方法已申请专利或通常为本领域技术人员已知。例如，参见Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems(迟效和控释药物递送洗脱),J.R.Robinson编辑，Marcel Dekker公司，纽约,1978。

治疗性组合物可与业内已知的医学装置一起施用。

本发明的用途及方法

本发明组合物及所揭示抗体具有治疗效用，因为他们对散发性包涵体肌炎的治疗或受散发性包涵体肌炎侵袭的患者病况的改善或散发性包涵体肌炎关联症状的减轻有影响。

如本文所使用，术语“个体”或“个别”意欲包含人类及非人类动物。非人类动物包含所有脊椎动物，例如哺乳动物及非哺乳动物，例如非人类灵长类、绵羊、狗、猫、牛、马、鸡、两栖动物及爬行动物。

因此，本发明亦是关于治疗以下疾病的方法：其中本发明组合物或所揭示的肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRII结合分子，更优选针对ActRII的抗体，例如比麦单抗或BYM338)抑制(即拮抗)ActRII的功能，且由此减轻散发性包涵体肌炎。本发明提供治疗散发性包涵体肌炎患者的方法，其包括向患者施用治疗有效量的肌肉生长抑制素拮抗剂，例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRIIB结合分子，优选ActRIIB结合分子，更优选针对ActRIIB的拮抗剂抗体(例如BYM338)或所揭示组合物。

可用于所揭示治疗方法中的肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRIIB结合分子，更优选针对ActRIIB的拮抗剂抗体，例如比麦单抗或BYM338)的实例是上文所揭示或详细阐述的那些。在某些实施方式中，本文所揭示的本发明组合物中包括ActRII抗体(例如比麦单抗或BYM338)。

本发明亦是关于肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRIIB结合分子，优选ActRIIB结合分子，更优选针对ActRII的拮抗剂抗体，例如BYM338)的用途，其用于制造用来治疗散发性包涵体肌炎的药品。

在另一实施方式中，患者可是对先前治疗未见应答。例如，患者可能对使用：IGF-1、IGF-2或者IGF-1或IGF-2的变体、抗肌肉生长抑制素抗体、肌肉生长抑制素前肽、结合ActRIIB但不使其活化的肌肉生长抑制素陷阱蛋白、β2激动剂、饥饿素激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或滤泡抑素的治疗未见应答。量测患者对治疗的应答的简单方式可以是对患者爬上已知高度的楼梯花费的时间进行定时并比较治疗前及治疗后二者的结果。

肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRII结合分子，更优选针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比麦单抗或BYM338)可给药为单独活性剂，或可结合(例如作为佐剂)或与其组合)其他药物：IGF-1、IGF-2或者IGF-1或IGF-2的变体、抗肌肉生长抑制素抗体、肌肉生长抑制素前肽、结合ActRIIB但不使其活化的肌肉生长抑制素陷阱蛋白、β2激动剂、饥饿素激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或滤泡抑素。例如，本发明拮抗剂可与IGF-1模拟物组合使用，如WO2007/146689中所揭示。

根据上文，本发明在另一方面提供：

一种如上文所定义的方法或用途，其包括共同施用(例如同时或依序)治疗有效量的肌肉生长抑制素拮抗剂(例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRII结合分子，优选ActRII或结合分子，更优选针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比麦单抗或BYM338)与至少一种第二药物物质，该第二药物物质是IGF-1、IGF-2或者IGF-1或IGF-2的变体、抗肌肉生长抑制素抗体、肌肉生长抑制素前肽、结合ActRII但不使其活化的肌肉生长抑制素陷阱蛋白、β2激动剂、饥饿素激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或滤泡抑素。

试剂盒

本发明亦涵盖试剂盒，其可包括肌肉生长抑制素拮抗剂，例如肌肉生长抑制素结合分子(例如肌肉生长抑制素抗体或其抗原结合片段，例如比麦单抗或BYM338)或肌肉生长抑制素受体(即ActRIIB受体)结合分子(例如抗ActRIIB抗体或其抗原结合片段)(例如呈液体或冻干形式)或包括该肌肉生长抑制素拮抗剂(同上文所述)的医药组合物。此外，这些试剂盒可包括用于施用所述肌肉生长抑制素拮抗剂的装置(例如，注射器及小瓶、预填充注射器、预填充笔)及使用说明。这些试剂盒可含有其他治疗剂(如上文所述)，例如其与所装肌肉生长抑制素拮抗剂(例如BYM338)联合递送。

短语“用于给药的装置”用于指示用于向患者全身性给药药物的任一可用器具，包含但不限于预填充注射器、小瓶及注射器、注射笔、自动注射器、静脉内滴注器及袋、泵等。使用这些物项，患者可自行施用所述药物(即，将所述药物自行施用)或医师可施用所述药物。

试剂盒的各组件通常装个别容器内，且各个容器全部与使用说明一起位于单一包装内。

序列

表1：序列表

所揭示方法、治疗、方案、用途及试剂盒的一些实施方式采用肌肉生长抑制素拮抗剂，例如肌肉生长抑制素结合分子或ActRIIB结合分子。在其他实施方式中，ActRIIB结合分子是针对ActRIIB的拮抗剂抗体。

在所揭示方法、治疗、方案、用途及试剂盒的一些实施方式中，该抗ActRIIB抗体是选自下组：a)抗ActRIIB抗体，其结合的ActRIIB表位包括以下：SEQID NO:

SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

；及b)针对ActRIIB的拮抗剂抗体，其结合的ActRIIB表位的包括：

SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)及SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)，其中该抗体具有约2pM的K_D。

在所揭示方法、治疗、方案、用途及试剂盒的一些实施方式中，针对ActRIIB的拮抗剂抗体是人类抗体。

在所揭示方法、治疗、方案、用途及试剂盒的一些实施方式中，抗体是比麦单抗或BYM338。

本发明的一或多个实施方式的细节阐释于以上随附描述中。尽管类似或等效于那些本文所述方法及材料的任一方法及材料皆可用于本发明的实践或测试中，但在此描述优选方法及材料。根据说明书和权利要求可明了本发明的其他特征、目标及优点。在说明书及随附权利要求中，除非上下文另作明确指明，否则单数形式包含复数个指示物。除非另外定义，本文所使用的所有技术及科学术语具有的含义都与本发明所属技术领域普通通常所理解的相同。本说明书中所引用的所有专利及公开文献都以引用方式纳入。呈现下列实施例以更全面地说明本发明的优选实施方式。这些实例决不应理解为限制所揭示专利内容的范畴，该范围藉由随附权利要求界定。

实施例

一般方法

ActRIIB抗体，其表征及其相关方法，如(i)功能分析，(ii)报导基因分析(RGA)，(iii)HEK293T/17细胞系的培养，(iv)肌肉生长抑制素诱导的萤光素酶报导基因分析，(v)特异性ELISA，(vi)ActRIIB/Fc-肌肉生长抑制素结合相互作用ELISA，(vii)hActRIIB及hActRIIA表达型细胞的FACS滴定，(viii)结合至原代人类骨骼肌细胞，(ix)使用表面等离子共振(Biacore)所选抗人类ActRIIBFab的亲和力测定，(x)CK分析，(xi)动物模型，(xii)治疗方案，(xiii)统计分析，(xiiii)淘选，(xv)抗体鉴定及表征，(xvi)源自第一次亲和力成熟的抗体的优化，(xvii)亲和力成熟Fab(第1次成熟)的IgG2转化，(xviiii)第二次亲和力成熟，(xx)IgG2转化及IgG2的表征(第2次成熟)，(xxi)体内鼠类研究中抗ActRIIB抗体的表征，(xxii)藉由SET的亲和力确认，(xxiii)交叉阻断研究及(xxiv)表位定位细节及技术已揭示于WO 2010/125003中。

研究设计

此是多中心、随机化、双盲、安慰剂对照、关键、4组剂量发现期IIb/III试验。将总共约240个散发性包涵体肌炎(sIBM)对象以1:1:1:1比率随机化至4个试验组(A、B、C或D)其中之一内(图2)。

随机化的患者最多有20％的基线6分钟步行距离≥400米。

对于每一对象，该研究的组成如下：最多28天的筛选期，其中包含最多5天的基线访问，52周治疗期，可变的0-52周维持治疗期，以及28天无治疗随访期。

该研究包含4个研究时期：

1.筛选时期：持续时间最长达28天(第-28天至第-1天)，在此期间确认研究适格性，且若适用，使对象逐渐减少不允许服用的药品。筛选时期是由筛选访问及基线访问组成。在此时期期间不使对象接受任何研究药品。

筛选访问：访问可在随机化前28天至6天(第-28天至第-6天)进行。在实施任何研究特定程序前必须获得知情同意。使满足纳入/排除准则的对象经受安全性评价，其包含身体检查、ECG、生命体征、标准临床实验评估(血液学、血液化学、尿样分析)。

基线访问：在此5天时程(第-5天至第-1天)期间实施开始研究药物给药前的所有所需评价。请求在筛选访问时满足安全性要求及纳入/排除准则的对象返回至用于基线评价的现场。一旦检查基线评估(包含6MWD)且再次确认患者为该研究的适格者后，在欲随机化的第1天请求患者返回至现场。

2.治疗时期：治疗期定义为第1天至第52周(剂量给药前)。在第1天访问时，将对象随机化至四个平行治疗组其中之一内：

组A：BYM338 10mg/kg静脉内输注，每4周

组B：BYM338 3mg/kg静脉内输注，每4周

组C：BYM338 1mg/kg静脉内输注，每4周

组D：安慰剂，以静脉内输注给药，每4周

根据研究组，使对象每4周一次以静脉内输注接受13个BYM338剂量或给药匹配的安慰剂。在第1天时进行第一次研究药物给药，且必须在投药前获得所有基线安全性评估结果。对于所有后续访问(包含第52周)，必须在药物给药前实施所有评估。在第48周访问时进行此治疗时期的最终剂量给药。使对象每四周一次返回至现场进行安全性、药物效应动力学、药物代谢动力学、生物标记物及功效评估。

所有对象在第52周时实施其治疗结束评价，然后移至维持治疗时期，直至仍处在此治疗时期中的最后对象完成其第48周剂量。

一旦仍处在此治疗时期中的最后对象完成其第48周剂量，不再有其他对象接受研究药物，且：

˙尚未完成此治疗时期的对象应在其最后研究药物给药后约28天时完成治疗结束(EOT)访问。

˙完成EOT访问后，使这些对象直接进入无治疗随访期(他们不适格于进入维持治疗时期)。

˙对于已进入维持时期的对象，见下文。

3.维持治疗时期：此时期将由患者招募的持续时间来界定，但上限为最长持续52周(在招募期超过52周的情形下)。因此，鉴于0周直至52周的可变持续时间，维持治疗期定义为第52周剂量给药后直至最长第104周。

在此维持治疗时期期间，对象将继续处在随机化指配的治疗组中。在第52周时给予的剂量是维持治疗期的第一剂量，且随后是每四周一次的BYM338或安慰剂剂量直至第100周。使对象每四周返回至现场作安全性及功效评估。

第104周访问是维持治疗结束(EOMT)的访问。当完成所有访问评价时认为完成EOMT访问，且将该访问登记入交互应答技术(Interactive ResponseTechnology,IRT)中。

所有对象在第52周后的治疗持续时间是由仍处在治疗时期中的最后对象接受其第48周剂量的日期来确定，但将限于52周(即研究中的最长总治疗持续时间为2年)。

一旦最后对象接受其第48周剂量，不再有其他对象接受研究药物，且：

˙维持治疗时期中的所有对象应在其最后研究药物给药后约28天时完成维持治疗结束(EOMT)访问。

˙完成EOMT访问后，所有对象进入无治疗随访期。

4.治疗后随访时期：持续时间为28天，对象在此时期期间不接受任何研究药剂。在各对象分别完成治疗时期(治疗时期或维持时期)后4周及最后研究药物给药后8周进行随访结束(EOF)访问。应完成所有对象的EOF访问，无论其是否按计划完成整个研究抑或提前中断)。完成此研究的对象可适格进入开放标记研究中以收集sIBM患者中BYM338的额外长期功效及安全性数据。

研究设计的概述呈现于图3-1中，而维持治疗时期可变治疗持续时间表示于图3-2中。详细的访问及评价日程表可见表6-1及表6-2。

研究设计的理由

已有sIBM患者中单一剂量给药30mg/kg BYM338的初步临床数据。在sIBM患者中尚无BYM338的多剂量数据及其他剂量的数据。提出剂量范围研究以基于目标患者群体的功效、药物效应动力学、药物代谢动力学及关键安全性数据来研究不同的BYM338剂量。此研究的设计解决了这些需求，具体关注对象安全性及BYM338对瘦体质量、肌肉强度、肌肉功能及活动性的效应。此试验的主要终点将经由第52周时的6分钟步行距离测试来量测身体功能及活动性的变化。

此双盲、安慰剂对照研究经设计以允许评价每4周给药1mg/kg、3mg/kg与10mg/kg BYM338剂量之间的剂量范围。当前，业内对sIBM尚无已批准的治疗。此外，业内尚无药理学疗法可帮助sIBM患者逆转疾病进展的稳定过程(Greenberg 2009；Aggarwal及Oddis 2012)。经由pSMAD的TGFβ信号传导活化的升高表达的发现表明，肌肉生长抑制素过表达可能是sIBM的病理生理学的重要部分，且因此BYM338可在此疾病中有益。

鉴于业内对治疗sIBM尚无已批准的药物且无现行护理标准，提出安慰剂对照。安慰剂对照试验提供最大能力来区分药物引起的不良反应与潜在疾病或“背景噪音”所造成的那些。安慰剂对照试验亦提供最佳设置以展示研究疗法的功效，且展示剂量-应答关系，并可藉由降低由对象或研究者预期值导致的改良量来提高本研究检测真实药物效应的能力。能够区分sIBM患者中BYM338的不利效应情况尤其重要，因为sIBM是BYM338的第一个适应症，且迄今为止对BYM338仅获得有限的人类数据。

随机化至三个非安慰剂组中任一组的对象每4周一次接受至少13个BYM338剂量。超过52周的研究药物治疗持续时间将根据对象而变化，此研究中的最短总治疗持续时间为52周而最长为104周，在所有情形下此后都进行4周无治疗随访期，以允许评估此群体中的长期功效及安全性。此研究经设计以集合关于如藉由6分钟步行测试所量测的治疗效应开始的数据。该试验亦包含量测sIBM对生活品质的效应，包含可源自此疾病的吞咽困难。

维持盲化直至数据库被锁以确保可靠的功效及安全性量测。理想地，所有对象实施标准锻炼计划，以避免不同BYM338剂量的功效评价中的变化。由于sIBM群体内的身体功能广泛变化(即不对称神经性肌肉病理)，由每次访问时评价个体能力及虚弱严重程度的有资格的理疗师向对象提供定制的对象特异性锻炼建议。鼓励对象参与经现场理疗师确定对其安全的身体活动。向理疗师提供阐述所建议室内锻炼计划的视频以辅助研发对对象的锻炼建议。若理疗师判断该视频适于对象使用，则其可选择向对象提供视频拷贝。单纯锻炼计划的效应仍需在安慰剂组中界定且可与接受活性药物的组有协同作用。

研究群体是由在筛选时满足sIBM诊断准则(改编自所提出的医学研究理事会(Medical Research Council)准则-参见附录1)的行动sIBM患者组成。依照sIBM诊断准则(Hohlfeld 2011，改编自Hilton-Jones等人，2010)，要求适格对象具有经病理学上定义或经临床上定义的sIBM诊断。

在基线处6MWD≥400的患者在研究样本量中占比不大于20％，因为许多公开文献认为在健康志愿者及处于不同疾病病况下的患者中，400m的阈值作为次正常身体功能及活动性的标记物(Chetta等人，2006；Troosters等人，1999；Simonsick等人，2008；Chang等人，2004；Enright等人，2003；Enright等人，1998；Kruis等人，2010；Morley等人，2011；Kommuri等人，2010；Villalba等人，2007)。

3.3给药剂量/方案、途径及治疗持续时间的理由

基于自可用临床数据(包含考虑来自进行中的研究CBYM338X2205的最新获得的治疗结果)所作推理选择所提出的剂量。

来自对14名患者(11名活性，3名安慰剂)的研究CBYM338X2205的数据展示，单一剂量的BYM338 30mg/kg静脉内给药由MRI显示大腿肌肉体积(TMV)比基线显著增加，以及由DXA显示总LBM及四肢LBM与安慰剂相比显著增加。此外，依照药物给药后16周的定量肌肉测试及6分钟步行距离测试，此剂量亦引起持续的强度及功能性能以及活动性改良。由于单次30mg/kg剂量显示至少8周持续时间的效应，使用10mg/kg重复治疗可能达成类似功效。因此，10mg/kg已选为本研究的最高剂量。然而，仍需鉴定最低有效剂量。

在本研究中，研究长期重复用药的功效，目的是理解BYM338的剂量-应答关系。本研究选择的所有BYM338剂量(10、3及1mg/kg静脉内)已在健康志愿者中进行测试且发现耐受良好。

多个剂量的目的是评估10、3或1mg/kg静脉内的重复剂量是否能向患者提供额外的肌肉结构及功能益处，以及较低剂量是否可提供这些益处并具有较少副作用(例如痤疮或非自主肌肉收缩)。

在健康志愿者(CBYM338X2101及CBYM338X2102)中，对于10mg/kg及30mg/kg的单次剂量，大腿肌肉MRI体积增加相当，但30mg/kg的效应持续时间更长。即使认为3mg/kg引起的完全受体占据的持续时间约为10mg/kg的一半，利用BYM338的3个重复月度剂量，3mg/kg及10mg/kg使健康成人TMV的增加相当。推测由于较低Cmax，即使10mg/kg给予频率大于30mg/kg剂量，10mg/kg的不良反应可能少于30mg/kg，但这尚未明确。

总之，健康志愿者中3mg/kg及10mg/kg q4可有效地增加TMV，因此预期在sIBM患者中亦有效。

1mg/kg的较低剂量并未在向健康志愿者给药单一剂量后显示超过2周的TMV持久增加。然而，对该剂量加以测试，其前提是sIBM患者可具有增加的BYM338敏感性且此剂量在多次给药时可证明有效。

由2010年的国际神经性肌肉疾病专家会议产生的共识论文建议，sIBM治疗试验的长度必须超过6个月以充分地评价治疗对该疾病的效应(Hilton-Jones等人，2010)。EMA及FDA二者皆同意12个月的sIBM试验持续时间较为充分，因此使所有对象接受至少52周的治疗。产生从随机化高达起最长达3年的额外数据以评估此群体中的长期安全性及功效。

尽管将对象维持在安慰剂上的持续时间优选尽可能短，但当前尚无经批准用于sIBM的治疗，且无护理标准。此外，鉴于sIBM是计划使用BYM338登记的第一个适应症，且由于预期sIBM需要慢性治疗，故研发出具有足够长期安全性数据稳健数据库至关重要。因此，实施具有额外维持期的1年安慰剂对照研(总共最长2年的治疗持续时间)较为合理。疾病活动性的规律评价确保任一治疗组中正经历疾病恶化的对象可在任何时间根据其自身意愿或基于研究者的建议退出研究。应注意，一旦基于研究结果确定了功效及安全性，即邀请所有对象参与另外的使用活性药物的开放标记扩展研究。因此，在确定52周安全性及功效后，对象不再处于安慰剂上。尽管现有数据不足以展示BYM338在sIBM群体中令人信服的功效，但此研究经设计以收集此数据且在研究结束时告知BYM338在sIBM群体中的功效及安全性。

选择比较剂的理由

鉴于尚无经批准用于治疗sIBM的药物，提出安慰剂对照。安慰剂对照试验亦提供最大能力来区分药物引起的不良反应和由潜在疾病或“背景噪音”造成的那些。安慰剂对照试验亦提供最佳设置以展示研究疗法的功效，且展示剂量-应答关系，并可藉由降低由对象或研究者预期值导致的改良量来增加本研究检测真实药物效应的能力。

风险及益处

来自已完成的I期研究的安全性数据并未凸显任何特定安全风险或问题或主要事件聚类的任何具体模式。从总体风险益处评价的角度来看，使用BYM338的当前研究设计及其试验相关的风险(输注、抽血、成像期间的辐射暴露)是合理的。

迄今为止，在使用比麦单抗的研究中已招募213名患者及健康志愿者，其中150名已接受剂量介于静脉内0.1至30mg/kg范围内的活性药物的单次及多个剂量。早期临床数据支持BYM338在健康志愿者及患者中有利的益处-风险情况。

来自健康志愿者及老年患者中的第一研究的初步数据指示观察到一些接受30mg/kg单一剂量的成人中可能出现面部及较少见于背部及胸部的弥漫性痤疮。BYM338与皮肤反应性之间的可能作用机制关联仍不明确。

在约20％-48％的经单次30mg/kg静脉内BYM338剂量处理的正常健康志愿者及sIBM患者中，有报导非自主肌肉收缩，称为“肌肉抽搐”。所报导肌肉抽搐的强度较为温和、短暂、持续时间较短、自限性且无需医学治疗。尽管抽搐理论上可在老化及萎缩肌肉中更显著，但在年龄最高达78岁的sIBM患者中未观察到此现象。BYM338项目组正使用内部及外部资源来探求抽搐的生物学解释。

大鼠中的临床前研究展示显著心脏肥大，这被认为是补偿骨骼肌质量的大量增加。尽管在猴研究中观察到不一致，在雌性猴中观察到的心室肌肉质量增加而对左心室大小、且重要的是对整体左心室收缩功能无任何效应，这还是支持补偿效应而非BYM338的直接效应。尚未明确使用BYM338治疗在骨骼肌质量较小增加的患者中是否会出现心脏肥大。心动图仪及EKG霍尔特监视器(Holter monitor)数据显示，在最高且包含30mg/kg的单次及多个剂量后，无证据表明与安慰剂相比在后壁厚度、室间隔厚度、左心室舒张直径、左心室质量或心脏传导上有显著变化。在研究CBYM338B2203中进行ECG及心电图以监测此潜在风险。

在4周及13周毒性研究中BYM338的1、10及100mg/kg的每周剂量产生大鼠子宫、阴道及卵巢的可逆变化及食蟹猴卵巢更小程度的变化。每周给予100mg/kg时显示BYM338在大鼠中有发育毒性，且存在致畸性的迹象。基于BYM338的药理学及活化素在器官形成中的作用，这些发现并不出人意料(Xia及Schneyer 2009)。已鉴定出对停经后及无分娩潜能的停经前女性的FSH含量的抑制随BYM338的剂量而增加，且有计划在进行中及将来的研究中密切监控数据。未知停经后女性中FSH降低的临床意义；在停经前女性中，预期这一降低会干扰月经周期、生殖力且可能引起身体中雌激素较低的症状(例如潮热、阴道干燥、骨流失加速)，这可能需要额外治疗。在所有健康志愿者研究中仅募集无分娩潜能的女性。对于停经前对象，此研究计划招募同意自给出书面同意之日起直至最后研究药物给药后6个月使用两种高度有效的避孕形式的分娩潜能女性(WOCBP)。在筛选时、在整个研究期间及最后访问后30天进行妊娠测试。

体重可能随BYM338治疗而增加，但预期该增加主要为LBM增加，而身体脂肪质量保持稳定或减小。

可能发生针对BYM338的抗药物抗体，这会中和药物并减弱其功效。然而，截止IB 4.0版公开之日，在单一剂量研究所评估的样品中尚未观察到中和抗体。计划将对多剂量研究及其他单一剂量研究作分析。

使用单克隆抗体可能出现输注相关反应。超敏反应可表现为发热、发寒、荨麻疹、呼吸困难、头痛、肌痛及/或低血压。导致过敏的严重输注反应在单克隆抗体疗法中是罕见事件。若出现严重超敏反应，则应中断BYM338的给药并启动适宜疗法。

与任何其他研究药物相同，BYM338存在可能严重和无法预料的未知风险。

群体

由依照欧洲神经肌肉中心(European Neuromuscular Center)的2010年定义具有病理学定义或临床定义的sIBM诊断的行动(即在筛选及基线处非依靠轮椅或卧病在床)男性及女性患者组成研究群体。目标是在世界范围内约30个中心随机化总共240名患者。

纳入准则

纳入此研究中的适格患者在筛选及基线访问时必须满足所有以下准则：

年龄为35至85岁(包含35岁及85岁)的男性及女性患者。

依照sIBM诊断准则(改编自所提出的2010MRC准则)诊断为病理学定义或临床定义的散发性包涵体肌炎，包含评估病理报告。

在筛选及基线访问二者时不可依赖轮椅(允许间歇使用轮椅)，如6MWD评分>1米所定义。

能够与研究者良好地沟通。

愿意参与研究全过程且承诺遵循研究要求及程序。

排除准则

在筛选及基线访问时满足以下任一准则的患者因不适格而不纳入本研究。

1.在招募时或在招募30天或5个半衰期(以较长者为准)内，或若基于当地法规为参与研究试验的任何其他限制所需的更长时间内，使用其他研究药物。当前或在此研究期间计划参与另一临床试验。允许参与不涉及药物疗法的观察或登记研究；

2.对研究药品有变应反应或过敏性反应史或对研究药品的任何组份有超敏史。对生物剂超敏史；

3.妨碍充分吸收蛋白质(定义为至少0.8g蛋白质/kg/天)的原因及/或已知导致来自胃肠道的蛋白质或能量吸收不良的疾病，例如炎性肠病、乳糜泻、短肠综合征、胰脏功能不全；

4.导致显著限制活动性的显著的较低腿部肌肉或关节疼痛或肌肉虚弱的任何非sIBM病况或其他神经(先天性或获得性)或神经性肌肉疾病，包含多发性肌炎或皮肌炎、风湿性多发性肌痛、纤维肌痛、显著痴呆/阿尔茨海默病、帕金森氏病、肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、中风、脑瘫、癫痫、多发性硬化症、脊髓损伤、肌肉萎缩症、重症肌无力及与脊柱退化性关节疾病相关的虚弱。注意：这些疾病的先前误诊并非排斥性的。患有诸如骨关节炎等病况的患者可参与，除非其疼痛限制其实施研究程序；

5.与恶病质或肌肉萎缩相关或因呼吸功能而限制活动性的任何活跃的慢性非sIBM病况，包含：严重慢性阻塞性肺病(所预测FEV1<50％或功能性呼吸困难≥医学研究理事会呼吸困难量表上的3级)、晚期器官衰竭、慢性肾疾病(使用MDRD方程估计的GFR<30mL/min)、甲状腺功能亢进症、类风湿性关节炎；

6.不受控的甲状腺机能低下.在筛选之前6周内改变其激素替代疗法剂量的甲状腺机能低下患者对于该研究不适格；

7.不受控的糖尿病(即HbA1C≥9.0mmol/l)及/或任何其他不受控的内分泌疾病；

8.最近在过去60天中已捐献血液或在过去2周中捐献血浆的潜在对象；

9.在过去6个月中有髋骨折史或在过去6个月中进行髋或膝假体手术；

10.在筛选(筛选访问)之前30天内经历研究者认为影响下肢功能或患者参与研究的能力的急性疾病；

11.在哥伦比亚自杀严重程度等级量表(CSSRS)的自杀意念部分的第4项或第5项记为“是”，若该意念发生在过去6个月内，或在自杀行为部分中除“非自杀性自伤行为”(该项也在自杀行为部分中)外有任一项记为“是”，若该行为发生在过去2年内；

12.怀孕或哺乳(泌乳)女性，其中怀孕定义为女性自受孕后及直至终止妊娠的状态，此是由阳性hCG实验测试来确认；

13.分娩潜能女性，其定义为生理上能够怀孕的所有女性，除非其在用药期间并在最后BYM338剂量后持续6个月正使用高度有效的避孕方法。

高度有效的避孕方法包含：

1.全面禁欲(当此与对象的优选及日常生活方式一致时)。定期禁欲(例如日历、排卵、症状体温、排卵后方法)及戒断不是可接受的避孕方法。

2.在采取研究治疗前至少六周进行女性绝育(已进行手术性双侧卵巢切除术，含或不含子宫切除术)或输卵管结扎。在只切除卵巢的情形下，仅在已由随访激素含量评价确认女性生殖状况时。

男性绝育(筛选前至少6个月)。对于该研究中的女性对象，切除输精管的男性伴侣应是该对象的唯一伴侣。

4.以下方法中任两者的组合(a+b或a+c或b+c)：

a.使用口服、注射或植入激素避孕方法或具有相当功效(失败率<1％)的其他形式的激素避孕，例如激素阴道环或经皮激素避孕。

b.放置子宫内装置(IUD)或子宫内系统(IUS)。

c.屏障避孕方法：含有杀精子泡沫/凝胶/膜/霜/阴道栓剂的闭塞帽(隔膜或子宫颈/穹窿帽)或保险套。

在使用口服避孕药的情形下，在进行研究治疗前女性应稳定服用相同药丸达最短3个月。

若女性已具有12个月的天然(自发)闭经且具有适宜临床概况(例如年龄适宜、血管舒张症状史)或在至少六周前已进行手术性双侧卵巢切除术(含或不含子宫切除术)或输卵管结扎，则认为其为停经后且无分娩潜能。在只切除卵巢的情形下，仅在藉由随访激素含量评价确认女性生殖状况时认为其无分娩潜能；

14.预期在随机化后12个月内进行任何预定的住院手术；

15.筛选时的严重维生素D缺乏，定义为25-OH-维生素D含量<9.2ng/mL或<23nmol/mL；

16.显著精神病学病症、临床表现的外周血管疾病或病症或可影响任一功效评价的全身性病症(例如糖尿病性神经病变、慢性疲劳综合征、精神分裂症、双向情感病症、严重抑郁症、间歇性跛行)；

17.缺少外周静脉接入；

18.已知归类为纽约心脏协会(New York Heart Association)III类及IV类的心脏衰竭或慢性低血压史(收缩血压<100mm Hg)；

19.在筛选时收缩血压>180mm Hg或<90mm Hg或舒张血压>100mm Hg或<50mm Hg，或恶性高血压；

20.离筛选180天内有不稳定心绞痛、心肌梗塞、冠状动脉搭桥移植手术或经皮冠状动脉干预(例如血管成形术或支架放置)史；

21.持续的QT综合征，或在筛选或基线时重复评价下的QTcF男性>450msec(Fridericia校正)及女性>470msec；

22.尽管使用医学或装置疗法，但在休息时ECG仍显示临床上显著的异常，包含当前任何室上心律失常与失控心室反应(平均心率>100次/分钟[bpm])，或尽管使用医学或装置疗法但仍存在任何自发或诱导型持续的室性心动过速史(有30秒心率>100bpm)，或任何复苏的心跳骤停史或存在自动的内置复律除颤器；

23.显著凝血障碍，血小板计数小于75,000/mm3，血红素小于11.0g/dL；

24.肝脏疾病或肝脏损伤，由异常肝脏功能测试如SGOT(AST)、SGPT(ALT)、碱性磷酸酶或血清胆红素所指示(吉伯氏病(Gilbert’s Disease)除外)。

研究者应由以下准则来引导：

·任何单一转胺酶不可超过正常上限(ULN)的3×倍。升高至3×ULN且包含3×ULN的单一参数应尽快复查，且在所有情形下至少在随机化前进行复查，以排除任何实验误差。

·若总胆红素浓度增至1.5×ULN以上，则应将总胆红素分化成直接及间接反应胆红素。在任何情形下，血清胆红素应不超过1.6mg/dL(27μmol/L)的值；

14.以下疾病的已知病史或存在：严重急性或慢性肝脏疾病(代偿性或失代偿性)、已知胆囊或胆管疾病、急性或慢性胰脏炎、肾衰竭或长期使用具有肝毒性潜能的药剂治疗；

15.在过去5年内经治疗或未经治疗的任何器官系统的恶性病变(已经确定性治疗的皮肤的局部基底细胞癌或鳞状细胞癌除外)，无论是否存在局部复发或转移的迹象。在筛选前1年以上得到确定性治疗的患有原位子宫颈癌的参与者可进入该研究；

16.在随机化之前的6个月内使用不准许的全身性治疗，包含VEGF抑制剂(贝伐单抗(bevacizumab))，或在随机化之前3个月内使用过已知影响肌肉质量的任何疗法，包含雄激素补充剂(包含OTC DHEA)、GnRH类似物、抗雄激素、抗雌激素(他莫昔芬)、含有已知雄激素组份的黄体素(例如NETA)、重组人类生长激素、口服β激动剂、胰岛素、乙酸甲地孕酮或屈大麻酚；

17.进行中的长期皮质类固醇使用，或在随机化前以大于或等于10mg泼尼松(prednisone)等效物的日剂量持续至少90天的全身性皮质类固醇使用史；

18.正在进行免疫抑制疗法，或在随机化之前6个月内使用抗体免疫抑制疗法(利妥昔单抗(rituximab)或静脉内免疫球蛋白、TNF-α抑制剂)，或在随机化之前3个月(90天)内使用针对自体免疫疾病的非抗体疗法(例如环孢素、甲胺喋呤、他克莫司、环磷酰胺、硫唑嘌呤)；

19.当前活跃的酒精或药物滥用或在随机化之前24周内有酒精或药物滥用史；

20.在随机化前8周内，已知任何种类的活动性感染(排除甲床的真菌感染)或需要住院或使用静脉内抗感染剂治疗的任何重度感染发作；

21.任何慢性活动性感染(例如HIV、乙肝或丙肝、结核病等)。接受针对潜伏性结核病感染的化学预防的患者对该研究而言适格；

22.在筛选期间患者具有研究者认为可能干扰参与、混淆结果或在给药BYM338时对患者具有任何额外风险的任何医学病况或实验发现；

23.随机化最多20％的基线6分钟步行距离≥400米的患者。

研究者不可施加其他排除，以确保研究群体代表所有适格患者。

治疗

方案要求的治疗

1.研究治疗

诺华公司将供应以下研究药物：

˙BYM338：150mg小瓶装液体，提供于具有橡胶塞及铝钳口(flip-off)盖的无色玻璃瓶中；

˙安慰剂：提供于具有橡胶塞及铝钳口盖的无色玻璃瓶中。

注意：为维持盲性，由非盲性药剂师/被指定人制备开放标记的研究治疗且仅由盲性研究工作人员给药。

2.额外的研究治疗

此试验无需除研究治疗外的额外治疗。

然而，可依照当地指导方针且在治疗医师的引导下使对象接受足够的元素钙及维生素D治疗。

治疗组

此为四组研究。在第1天时将240名sIBM对象以1:1:1:1的比率随机化至以下4组其中之一内：

˙组A：BYM338，10mg/kg静脉内输注，每4周(n＝60)

˙组B：BYM338，3mg/kg静脉内输注，每4周(n＝60)

˙组C：BYM338，1mg/kg静脉内输注，每4周(n＝60)

˙组D：安慰剂，以静脉内输注给药，每4周(n＝60)

根据研究组，使对象每4周一次以静脉内输注给药接受最少13次BYM338剂量或匹配的安慰剂。在第1天时进行第一次给药，且在第48周访问时进行治疗时期期间的最终剂量给药，此定义52周的最短治疗期。使进入维持治疗时期的对象根据其第1天治疗组随机化指配每4周一次持续接受BYM338或匹配安慰剂静脉内输注。由于所有对象将持继续接受研究药剂直至最后对象达到第48周治疗剂量，故最终研究药物给药是可变的。然而，此研究中个别对象的最长总治疗期将限于2年(104周)；在此最长治疗期的情形下，在第100周访问时进行最终研究药物给药。

Claims

1.一种供使用于治疗散发性包涵体肌炎的肌肉生长抑制素(myostatin)拮抗剂。

2.如权利要求1所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以约1mg/kg至10mg/kg的剂量向有需要的患者给药。

3.如权利要求1或2所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以约1、约3或约10mg/kg体重的剂量来给药。

4.如权利要求1-3所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是经静脉内给药。

5.如权利要求1至4中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是以每四周给药。

6.如权利要求1至5中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该患者可走动。

7.如权利要求1至6中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减缓该疾病的进展或改善身体功能及活动性。

8.如权利要求1至6中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善吞咽障碍和咽下困难。

9.如权利要求1至6中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善上肢强度。

10.如权利要求1至6中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减少摔倒发生或防止摔倒。

11.如权利要求1至10中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是肌肉生长抑制素受体结合分子。

12.如权利要求1至11中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是ActRII受体拮抗剂。

13.如权利要求1至12中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII受体抗体。

14.如权利要求1至13中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRII受体抗体是比麦单抗(bimagrumab)。

15.如权利要求13至14中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII抗体，该抗体结合至ActRIIB的由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的表位。

16.如权利要求13至15中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRII抗体结合的ActRIIB表位包括以下序列或由以下序列组成：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

17.如权利要求13至16中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗ActRIIB抗体是选自下组：

a)抗ActRIIB抗体，其结合至ActRIIB的包括以下序列的表位：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

及b)针对ActRIIB的拮抗剂抗体，其结合d ActRIIB表位包括以下序列：SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

18.如权利要求13至17中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中结合ActRIIB的亲和力10倍或更大于其结合ActRIIA。

19.如权利要求13至18中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:29-42的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:43-56群的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ IDNO:71-84的氨基酸序列。

20.如权利要求13至19中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

21.如权利要求13至20中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括的全长重链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

22.如权利要求13至21中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括的全长轻链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:141-145及151-155的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

23.如权利要求13至22中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列及SEQ ID NO:85的可变轻链序列；

(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列及SEQ ID NO:86的可变轻链序列；

(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列及SEQ ID NO:87的可变轻链序列；

(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列及SEQ ID NO:88的可变轻链序列；

(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列及SEQ ID NO:89的可变轻链序列；

(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列及SEQ ID NO:90的可变轻链序列；

(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列及SEQ ID NO:91的可变轻链序列；

(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列及SEQ ID NO:92的可变轻链序列；

(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列及SEQ ID NO:93的可变轻链序列；

(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列及SEQ ID NO:94的可变轻链序列；

(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列及SEQ ID NO:95的可变轻链序列；

(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列及SEQ ID NO:96的可变轻链序列；

(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列及SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或

(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列及SEQ ID NO:98的可变轻链序列。

24.如权利要求13至23中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；

(b)SEQ ID NO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；

(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；

(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQ ID NO:144的轻链序列；

(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；

(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；

(g)SEQ ID NO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；

(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；

(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQ ID NO:154的轻链序列；或

(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ ID NO:155的轻链序列。

25.如权利要求13至24中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的该抗体交叉阻断权利要求10中的至少一种抗体与ActRIIB的结合或被权利要求10中的至少一种抗体交叉阻断与ActRIIB的结合。

26.如权利要求13至25中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的该抗体具有经由Fc区突变而改变的效应子功能。

27.如权利要求13至26中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该组合物中所包括的该抗体结合如权利要求15-17中所列抗体识别的表位。

28.如权利要求13至27中任一项所述供使用的肌肉生长抑制素拮抗剂，其中该抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。

29.一种用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗，其中比麦单抗是以约1-10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

34.权利要求33所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其包括以约1-10mg/kg的剂量向有需要的患者给药肌肉生长抑制素拮抗剂。

35.如权利要求33-34中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括以约1、约3或约10mg/kg体重的剂量给药该肌肉生长抑制素拮抗剂。

36.如权利要求33-35中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括经静脉内给药该肌肉生长抑制素拮抗剂。

37.如权利要求33-36中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该方法包括每四周给药该肌肉生长抑制素拮抗剂。

38.如权利要求33-37中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该患者可走动。

39.如权利要求33-38中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减缓疾病的进展或改善身体功能及活动性。

40.如权利要求33-38中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善吞咽障碍和咽下困难。

41.如权利要求33-38中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括改善上肢强度。

42.如权利要求33-38中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中治疗散发性包涵体肌炎包括减少摔倒发生或防止摔倒。

43.如权利要求33-42中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是肌肉生长抑制素受体结合分子。

44.如权利要求33-43中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是ActRII受体拮抗剂。

45.如权利要求33-44中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII受体抗体。

46.如权利要求33-45中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRII受体抗体是比麦单抗。

47.如权利要求45或46所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该肌肉生长抑制素拮抗剂是抗ActRII抗体，该抗体结合的ActRIIB表位由SEQ IDNO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成。

48.如权利要求45-47中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRII抗体结合的ActRIIB表位包括以下序列或由以下序列组成：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ ID NO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ ID NO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ ID NO:192)；或

49.如权利要求45-48中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗ActRIIB抗体是选自下组：

a)抗ActRIIB抗体，其结合的ActRIIB表位包括以下序列：

(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN-SEQ ID NO:188)；

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC-SEQ ID NO:186)；

(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY-SEQ IDNO:190)；

(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR-SEQ ID NO:189)；

(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW-SEQ IDNO:187)；

(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT-SEQ IDNO:191)；

(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN-SEQ IDNO:192)；或

50.如权利要求45-49中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体结合ActRIIB的亲和力10倍或更大于其结合ActRIIA。

51.如权利要求45-50中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：重链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:1-14的氨基酸序列；重链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:15-28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:29-42的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，其包括选自SEQ ID NO:43-56的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，其包括选自SEQ ID NO:57-70的氨基酸序列；及轻链可变区CDR3，其包括选自SEQ ID NO:71-84的氨基酸序列。

52.如权利要求45-51中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

53.如权利要求45-52中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括的全长重链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:146-150及156-160的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

54.如权利要求45-53中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括的全长轻链氨基酸序列与选自SEQ ID NO:141-145及151-155的至少一个序列具有至少95％序列一致性。

55.如权利要求45-54中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列及SEQ ID NO:85的可变轻链序列；

(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列及SEQ ID NO:86的可变轻链序列；

(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列及SEQ ID NO:87的可变轻链序列；

(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列及SEQ ID NO:88的可变轻链序列；

(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列及SEQ ID NO:89的可变轻链序列；

(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列及SEQ ID NO:90的可变轻链序列；

(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列及SEQ ID NO:91的可变轻链序列；

(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列及SEQ ID NO:92的可变轻链序列；

(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列及SEQ ID NO:93的可变轻链序列；

(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列及SEQ ID NO:94的可变轻链序列；

(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列及SEQ ID NO:95的可变轻链序列；

(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列及SEQ ID NO:96的可变轻链序列；

(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列及SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或

(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列及SEQ ID NO:98的可变轻链序列。

56.如权利要求45-55中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体包括：

(a)SEQ ID NO:146的重链序列及SEQ ID NO:141的轻链序列；

(b)SEQ ID NO:147的重链序列及SEQ ID NO:142的轻链序列；

(c)SEQ ID NO:148的重链序列及SEQ ID NO:143的轻链序列；

(d)SEQ ID NO:149的重链序列及SEQ ID NO:144的轻链序列；

(e)SEQ ID NO:150的重链序列及SEQ ID NO:145的轻链序列；

(f)SEQ ID NO:156的重链序列及SEQ ID NO:151的轻链序列；

(g)SEQ ID NO:157的重链序列及SEQ ID NO:152的轻链序列；

(h)SEQ ID NO:158的重链序列及SEQ ID NO:153的轻链序列；

(i)SEQ ID NO:159的重链序列及SEQ ID NO:154的轻链序列；或

(j)SEQ ID NO:160的重链序列及SEQ ID NO:155的轻链序列。

57.如权利要求45-56中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该组合物中所包括的抗体交叉阻断权利要求10中的至少一种抗体与ActRIIB的结合或被权利要求10中的至少一种抗体交叉阻断与ActRIIB的结合。

58.如权利要求45-57中任一项所述的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中组合物中所包括的抗体具有经由Fc区突变而改变的效应子功能。

59.如权利要求45-58中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中组合物中所包括的抗体结合权利要求46-48中所列抗体识别的表位。

60.如权利要求45-59中任一项的治疗散发性包涵体肌炎的方法，其中该抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。

61.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括比麦单抗给药。

62.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括比麦单抗给药，其中比麦单抗是以约1-10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

63.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括比麦单抗给药，其中比麦单抗是以约1mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

64.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括比麦单抗给药，其中比麦单抗是以约3mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

65.一种治疗散发性包涵体肌炎的方法，包括比麦单抗给药，其中比麦单抗是以约10mg/kg体重的剂量每四周经静脉内给药。

66.供使用于治疗散发性包涵体肌炎的比麦单抗。

68.一种单一剂型，其包括150mg/ml的比麦单抗。