KR20230013258A - T 세포 재유도 치료제 및 vla-4 부착 경로 억제제를 포함하는 조성물 - Google Patents

T 세포 재유도 치료제 및 vla-4 부착 경로 억제제를 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물, 및 암 세포를 사멸시키기 위한 그의 용도가 본 명세서에 개시된다.

Description

T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 조성물
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된, 2020년 5월 19일자로 출원된 미국 가출원 제63/026,885호의 이익을 주장한다.
기술분야
본 개시내용은 T 세포 재유도(redirection) 치료제를 이용하는 조성물 및 암 세포 사멸에 관한 것이다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2021년 4월 9일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 JBI6312WOPCT1_SL.txt이며, 크기가 29 KB이다.
여러 치료 옵션에도 불구하고 현재 급성 골수성 백혈병(AML) 및 다발성 골수종(MM)에 대한 치료법은 없다. 골수(BM)에 백혈병성 아세포(AML) 또는 형질 세포(MM)가 5% 이하로 존재하는 것으로 정의되는 완전한 혈액학적 관해(CR)의 높은 비율(50%-80%)을 달성한 후에도(1, 2) AML 또는 MM을 가지는 환자의 대다수는 재발한다(3-5). 재발은 소수의 암 줄기 세포(CSC) 또는 기타 악성 전구 세포가 제거되지 않고 요법 후에도 지속되는 최소 잔류 질병(MRD)과 관련이 있다(6). 재발을 예방하고 AML 및 MM에 대한 치료법을 찾으려면 MRD를 제거하기 위한 더 나은 전략을 찾아야 한다.
조혈 줄기 세포(HSC)와 마찬가지로, AML 및 MM의 CSC는 BM 틈새에 상주하고 우선적으로 유지된다(7, 8). BM 틈새는 CSC를 보호하는 용해성 성장 인자의 분비와 세포-세포 상호작용을 통해 특화된 미세환경을 제공한다(9). 더욱이, BM 틈새는 면역 억제적이며 정상적인 조혈 및 면역 세포 생성을 허용하는 정상 상태에서 면역 특권의 부위로 인식된다(10). BM 틈새의 이러한 양태는 화학 요법, 표적 소분자 억제제 및 항체 기반 요법을 포함한 여러 항암 약물의 효능을 최소화하고 내성을 제공하였다(11-14).
T 세포가 종양 세포를 특이적으로 용해하고 사이토카인을 분비하여 암에 대한 면역을 모집하고 지원하는 능력은 이들을 요법에 대한 매력적인 옵션으로 만든다. 이중특이성 T-세포 연관체(BiTE, 작은 이중특이성 생물제제), 키메라 항원 수용체(CAR) 및 이중특이성 항체와 같은 여러 접근 방식이 이 전략을 활용하였다(15). BiTE 및 항체 매개 재유도는 종양 세포의 특정 에피토프와 T 세포의 CD3을 결합하여 T 세포를 종양 세포에 교차 연결하여 T 세포 활성화 및 궁극적으로 종양 세포를 사멸하는 페르포린 및 그랜자임을 분비한다. 이러한 CD3 재유도 요법은 급성 림프모구성 림프종(ALL)에 대한 CD19 × CD3 BiTE(블리나투모맙)의 승인을 받아 임상에서 효과적인 항암 전략으로 검증되었다(16). 그러나, BM 틈새의 면역 억제 및 보호 특성은 잠재적으로 T 세포 재유도 요법에 상당한 장애물을 제기한다.
예를 들어, 본원에 나타난 바와 같이, 특정 종양 항원(CD123 및 BCMA) 및 CD3을 표적으로 하는 이중특이성 항체를 사용하여, AML 또는 MM 세포주의 BM 기질 세포와의 공동 배양이 시험관 내에서 이중특이성 T 세포 매개된 용해로부터 암 세포를 유의하게 보호하는 것으로 관찰되었다. 인간화 이종이식 AML 모델에서 인간 BM 기질 세포의 존재가 이중특이성 항체 치료로 관찰된 종양 성장 억제(TGI)를 약화시켰을 때 유사한 결과가 생체내에서 관찰되었다. 손상된 CD3 재유도 세포독성은 감소된 T 세포 효과기 반응과 상관관계가 있었고, 이에 따라 이중특이성 항체의 활성 상실을 설명하는 메커니즘을 제공하였다.
T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공되며, T 세포 재유도 치료제는 T 세포 표면 항원에 대해 특이성을 갖는 제1 결합 영역 및 종양 연관된 항원 (TAA)에 대해 특이성을 갖는 제2 결합 영역을 포함한다.
약제학적 조성물의 한 구현예에서, 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함한다.
약제학적 조성물의 추가 구현예에서, T 세포 재유도 치료제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, T 세포 표면 항원은 CD3, CD2, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28, CD40L, CD44, CD137, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 및 NKG2C로 이루어진 군으로부터 선택된다.
약제학적 조성물의 또 다른 구현예에서, T 세포 표면 항원은 CD3이다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, TAA는 BCMA, CD123, GPRC5D, CD33, CD19, PSMA, TMEFF2, CD20, CD22, CD25, CD52, ROR1, HM1.24, CD38, 및 SLAMF7로 이루어진 군으로부터 선택된다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, T 세포 표면 항원은 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 BCMA×CD3 이중특이성 항체이다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, BCMA×CD3 이중특이성 항체는 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성한다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, HC1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, HC1은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, T 세포 표면 항원은 CD123에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 CD123×CD3 이중특이성 항체이다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, CD123×CD3 이중특이성 항체는 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성한다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, HC1은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다.
약제학적 조성물의 또 다른 구현예에서, VLA-4 부착 경로 억제제는 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다.
약제학적 조성물의 또 다른 추가 구현예에서, 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 단일클론성 항체, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, 및 F(v) 단편, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 및 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 구성된 이량체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
약제학적 조성물의 또 다른 구현예에서, VLA-4 부착 경로 억제제는 VLA-4 길항제이다.
약제학적 조성물의 또 다른 구현예에서, VLA-4 부착 경로 억제제는 BIO1211, TCS2314, BIO5192, 및 TR14035로 이루어진 군으로부터 선택되는 VLA-4 길항제이다.
추가로 상기 제공된 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암 세포를 사멸시키는 방법이 본원에 제공된다.
방법의 추가 구현예에서, 암은 혈액 악성종양 또는 고형 종양이다.
방법의 또 다른 구현예에서, T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제는 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
방법의 또 다른 구현예에서, VLA-4 부착 경로 억제제는 T 세포 재유도 치료 전에 투여된다.
방법의 또 다른 구현예에서, VLA-4 부착 경로 억제제는 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여된다.
추가로 상기 제공된 약제학적 조성물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다.
본 출원의 상세한 설명 및 구현예뿐만 아니라 전술한 요약은 첨부된 청구범위 및 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 발명은 본 명세서에 개시된 정확한 인용으로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
도 1은 기질 세포의 존재가 AML 및 MM 세포주를 T 세포 재유도된 세포독성으로부터 보호한다는 것을 보여준다. 인간 T 세포(40,000개 세포/웰)를 기질 세포의 존재 또는 부재 하에 2:1 비율로 CFSE 표지된 AML KG1 (A, B) 또는 MM H929 세포주 (C, D)로 배양하였다 (HS-5, HS-27a, 일차 MSC 또는 CD105+ 내피 세포; 웰당 20,000개의 세포). 다양한 농도의 CD123 × CD3(A, B) 또는 BCMA × CD3(C, D)을 48시간 동안 배양물에 첨가하였다. 죽은 CFSE+ 세포의 백분율을 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. 왼쪽(A, C)의 용량 적정 그래프는 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시된다. 오른쪽(B, D)의 산점도는 이중특이성 항체의 최고 농도(범위가 있는 중앙값)에 대한 데이터를 보여준다. 데이터는 3개 이상의 실험을 나타낸다. ** p < 0.005, *** p < 0.0005; **** p < 0.0001; n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 2는 기질 세포가 T 세포 기능을 억제하고, 종양 세포의 신호 전달 경로를 상향 조절하며, T 세포 재유도 세포독성으로부터 종양 세포를 보호한다는 것을 보여준다. (A) 인간 T 세포(40,000개 세포/웰)는 기질 세포의 존재 또는 부재 하에 2:1 비율로 CFSE 표지된 KG-1 세포와 함께 배양되었다 (HS-5, 일차 MSC 또는 CD105+ 내피 세포; 웰당 20,000개의 세포). CD8+ T 세포에서 활성화, 효과기 및 체크포인트 억제 마커의 분석은 배양물에 33nM의 CD123 × CD3을 첨가한 후 수행되었다. 기하 평균 형광 강도는 48시간에 유동 세포측정에 의해 정량화되었다. (B) 48시간 동안 단독으로 또는 HS-5 기질 세포주의 존재 하에 배양된 KG-1 세포에서 PI3K 및 Akt의 활성화(인산화) 및 Bcl-2의 발현에 대한 면역블롯팅 분석. (C) A와 유사하지만 본 명세서에서 모든 배양물은 Bcl-2i의 유무에 관계없이 처리되었고 죽은 CFSE+ 세포의 백분율은 유동 세포측정에 의해 정량화되었다. (D) T 세포의 활성화 상태가 종양 및 T 세포 배양에서 기질의 부재 또는 존재 및 Bcl-2i 처리 유무에 따라 평가된 A 및 C와 유사하다. 표시된 모든 데이터는 3개 이상의 실험을 나타내며 SD(용량 적정 곡선)가 있는 평균 또는 범위(산점도)가 있는 중앙값으로 도시된다. * p < 0.05, ** p < 0.005, *** p < .0005. **** p < 0.0001; n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 3은 기질 세포가 생체 내에서 CD3 재유도의 효능에 영향을 미친다는 것을 보여준다. AML 세포주 MOLM-13 및 HS-5 골수 기질 세포를 갖는 MOLM-13(5:1)을 연구 0일에 huPBMC 주사된 암컷 NSG 마우스에 sc 이식하였다. 마우스는 총 5회의 처리를 위해 매주 2회 종양 세포 이식 후 5일째에 시작하여 CD123 × CD3(8 ㎍/㎏)으로 처리되었다. PBS 처리 그룹은 대조군으로 포함되었다. (A) 다른 시점에서 모든 그룹에 대한 평균 종양 부피 측정. (B) 연구 종료(24일째)에 마우스의 종양에서 CD8+ T 세포 침윤의 백분율. (C) 24일째에 마우스 종양에서 CD8+ T 세포의 활성화, 효과기 및 체크포인트 억제 마커의 분석. 표시된 모든 데이터는 두 개의 독립적인 실험을 나타내며 평균 ± 표준 오차의 평균(SEM)(A) 또는 범위가 있는 중앙값(B 및 C)으로 표시된다. * p < 0.05, ** p < 0.005, *** p < 0.0005; n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 4는 세포-세포 접촉이 기질 세포의 면역 억제 및 보호 표현형을 매개하는 데 지배적인 역할을 한다는 것을 보여준다. (A) 인간 T 세포(40,000개 세포/웰)를 Incucyte NucLight® Green 표지된 HS-5 세포(웰당 20,000개 세포)가 있거나 없는 Incucyte NucLight® Red 표지된 OCI-AML5 세포(20,000개)와 함께 배양하고 72시간 동안 다양한 농도의 이중특이성 항체로 처리하였다. 대표적인 이미지는 11nM의 CD123 × CD3 이중특이성 항체를 첨가한 후 72시간에 배양물의 스냅샷을 보여준다. (B) A와 동일하지만 본 명세서에서 T 세포는 기질 세포(HS-5 또는 일차 MSC)가 있거나 없는 CFSE 표지된 종양 세포와 함께 배양되었고 다양한 농도의 이중특이성 항체로 48시간 동안 처리되었다. 이러한 검정에서, 기질 세포는 함께 배양되거나 트랜스웰에서 종양 및 T 세포로부터 분리되었다. 죽은 CFSE+ 세포의 백분율을 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. 3개의 독립적인 생물학적 반복을 대표하는 본 명세서에 표시된 한 실험의 데이터이다. 여기서 표시된 데이터는 평균 ± SD이다. (C) 사멸 검정에서 CD8+ T 세포에 대한 활성화 및 효과기 마커의 흐름 분석. 데이터는 범위가 있는 중앙값으로 표시된다. * p < 0.05, ** p < 0.005, *** p < 0.0005; n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 5는 VLA-4 억제가 시험관 내에서 CD3 재유도된 세포독성으로부터 종양 세포의 기질 매개 면역 억제 및 보호를 역전시킨다는 것을 보여준다. 인간 T 세포를 기질 세포(HS-5 또는 일차 MSC)가 있거나 없는 CFSE 표지된 종양 세포와 함께 배양하고 VLA-4 또는 CXCR4에 대한 중화 항체의 존재 또는 부재 하에 48시간 동안 다양한 농도의 이중특이성 항체로 처리하였다. (A, B) 죽은 CFSE+ 세포의 백분율을 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. (C, D) 사멸 검정에서 CD8+ T 세포에 대한 그랜자임 B 및 CD25 발현의 흐름 분석. 데이터는 3개 이상의 실험을 대표하며 평균 ± SD(A, B) 및 범위가 있는 중앙값(C, D)으로 표시된다. * p < 0.05, ** p < 0.005, *** p < 0.0005. **** p < 0.0001); n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 6은 VLA-4 억제가 생체 내에서 CD3 재유도된 세포독성으로부터 종양 세포의 기질 매개 면역 억제 및 보호를 역전시킨다는 것을 보여준다. AML 세포주 MOLM-13 AML 및 HS-5 골수 기질 세포를 갖는 MOLM-13(5:1)을 연구 0일에 huPBMC 주사된 암컷 NSG 마우스에 sc 이식하였다. 마우스를 단독으로 또는 VLA-4에 대한 중화 항체(3 mg/㎏)와 조합하여 CD123×CD3(8 ㎍/㎏)으로 처리하였다. PBS 처리 그룹을 대조군으로 포함시켰다. (A) 다른 시점에서 모든 그룹에 대한 평균 종양 부피 측정. (B) 23일째에 마우스 종양에서 CD8+ T 세포의 활성화, 효과기 및 체크포인트 억제 마커의 분석. 표시된 모든 데이터는 2개의 독립적인 실험을 대표하며 평균 ± SEM(A) 및 범위가 있는 중앙값(B)으로 표시된다. * p < 0.05, ** p < 0.005, *** p < 0.0005. **** p < 0.0001); n.s.,통계학적으로 유의하지 않음.
도 7은 VLA-4 억제가 생체외 일차 AML 및 MM 배양물에서 CD3 재유도의 효능을 구제한다는 것을 보여준다. 3개의 일차 AML 샘플(A, B)의 PBMC 또는 3개의 MM 샘플(C, D)의 BMMC를 HS-5의 존재 및 VLA-4에 대한 중화 항체의 유무에 따라 1 ㎍/mL의 이중특이성 항체와 함께 72시간 동안 인큐베이션하였다. 범위가 있는 중앙값은 모든 3개의 일차 샘플에 대한 세포독성(A 및 C) 또는 CD8 T 세포 확장(B)/활성화(D)에 대해 도시된다. * p < 0.05.
도 8은 CD123 × CD3 및 BCMA × CD3이 종양 세포에 결합할 뿐만 아니라 사멸 및 T 세포 활성화를 매개함을 보여준다. (A) CD123+ 또는 BCMA+ 세포주는 표면 결합 프로파일을 특성화하기 위해 다양한 농도의 이중특이성 항체로 염색되었다. 이중특이성 항체의 결합은 마우스 항-인간 IgG4로 염색하여 검출하였다. (B) CD123 × CD3 및 BCMA × CD3이 T 세포 활성화(CD25 상향조절 및 그랜자임 b의 생산으로 측정됨) 및 CD123+ 또는 BCMA+ 종양 세포주의 세포독성을 매개하는 능력.
도 9는 기질 세포의 존재가 AML 및 MM 세포주를 T 세포 재유도된 세포독성으로부터 보호한다는 것을 보여준다. 인간 T 세포를 기질 세포(HS-5, HS-27a, 일차 MSC 또는 CD105+ 내피 세포)의 존재 또는 부재 하에 2:1 비율로 CFSE 표지된 AML 또는 MM 세포주와 함께 배양하였다. 다양한 농도의 CD123 × CD3 또는 BCMA × CD3을 48시간 동안 배양물에 첨가하였다. 죽은 CFSE+ 세포의 백분율을 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. (A) 각각 AML 세포주 KG-1 및 MM 세포주 H929의 세포독성을 매개하기 위한 CD123 × CD3 및 BCMA × CD3의 EC50 값의 요약을 보여주는 표. (B) A와 유사한 실험 설정이지만 HS-5 세포의 양을 증가시키는 것이 KG-1-T 세포 배양에 추가되었다. (C) 기질의 부재 또는 존재 하에 AML 세포주 OCI-AML5 및 MOLM-13의 세포독성을 매개하는 CD123 × CD3의 능력을 평가하였다. (D) 기질의 부재 또는 존재 하에 MM 세포주 RPMI-8226 및 MM.1S의 세포독성을 매개하는 BCMA × CD3의 능력을 평가하였다.
도 10은 기질 세포의 존재가 T 세포 활성화 및 증식을 약화시킨다는 것을 보여준다. (A) 인간 T 세포를 기질 세포(HS-5, HS-27a, 일차 MSC 또는 CD105+ 내피 세포)의 존재 또는 부재 하에 2:1 비율로 CFSE 표지된 MM 세포주 H929와 함께 배양하였다. 다양한 농도의 BCMA × CD3을 48시간 동안 배양물에 첨가하였다. T 세포 활성화 마커의 기하 평균 형광 강도를 이중특이성 항체로 처리한 후 48시간째에 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. (B) A와 유사하지만 여기에서 CFSE로 표지된 T 세포를 기질 세포(HS-5, 일차 MSC 또는 CD105+ 내피 세포)의 존재 또는 부재 하에 2:1 비율로 표지되지 않은 종양 세포주와 함께 배양하였다. FACS 분석은 T 세포 증식을 나타내는 CFSE 희석 프로파일의 오버레이를 보여준다(처리 그룹은 검은색 히스토그램으로 표시되는 반면 널 × CD3 대조군은 음영으로 표시됨).
도 11은 Bcl-2 억제제에 의한 처리가 Bcl2의 발현을 차단함을 보여준다. HS5 기질 세포주의 존재 하에 배양되고 48시간 동안 Bcl-2i가 있거나 없이 처리된 KG-1 세포에서 Bcl-2의 발현에 대한 면역블롯팅 분석.
도 12는 세포-세포 접촉 및 VLA-4 부착 경로가 MOLM-13 세포에서 세포독성의 기질 매개 억제에 역할을 한다는 것을 보여준다. (A) 인간 T 세포를 HS-5 또는 일차 MSC 세포가 있거나 없는 CFSE 표지된 MOLM-13 세포와 함께 배양하고 다양한 농도의 이중특이성 항체로 48시간 동안 처리하였다. 이러한 검정에서, 기질 세포는 함께 배양되거나 트랜스웰에서 종양 및 T 세포로부터 분리되었다. 죽은 CFSE+ 세포의 백분율을 유동 세포측정에 의해 정량화하였다. (B) A와 유사하지만 여기에서는 모든 세포가 VLA-4 또는 CXCR4에 대한 중화 항체의 존재 또는 부재 하에 함께 배양될 때 세포독성을 평가하였다.
도 13은 VLA-4 중화 항체를 사용한 처리가 AKT 및 PI3K 경로의 인산화를 감소시킨다는 것을 보여준다. HS5 기질 세포주의 존재 하에 배양되고 48시간 동안 항-VLA4 중화 항체로 처리되거나 처리되지 않은 KG-1 세포에서 pAkt 및 pPI3K의 발현에 대한 면역블롯팅 분석.
도 14는 AML 일차 환자 샘플에 대한 게이팅 전략을 보여준다. 생체 외 실험을 위한 게이팅 전략은 일차 AML 환자 샘플로 수행되었다. 해당 동종형 대조군은 측면에 표시된다. (A) CD123+ 아세포는 관심 세포를 단리하기 위해 전방 산란검출기(FSC) 및 측면 산란검출기(SSC)에서 먼저 게이팅하여 확인되었다. 그 다음 살아있는 CD45+ 세포에 게이팅을 하고, 그 후 CD38+ CD33+ 아세포를 게이팅하였다. 다음으로, 다양한 조건에서 CD123을 발현하는 아세포를 정량화하였다. (B) 샘플에서 T 세포 확장을 정량화하기 위해, SSC/FSC가 있는 관심 세포를 먼저 게이트한 다음, 살아있는 CD45+ 세포를 확인하였다. 그 다음, CD4 및 CD8 염색에 기초하여 CD4+CD8- 및 CD8+CD4- T 세포를 확인하였다.
도 15는 MM 일차 환자 샘플에 대한 게이팅 전략을 보여준다. 생체 외 실험을 위한 게이팅 전략은 일차 MM 환자 샘플로 수행되었다. 해당 동종형 대조군은 측면에 표시된다. (A) CD138+ MM 세포는 관심 세포를 단리하기 위해 FSC/SSC에서 먼저 게이팅하여 확인되었다. 그 다음 살아있는 CD138+ 세포를 다양한 조건에서 정량화하였다. (B) 샘플에서 T 세포 활성화를 정량화하기 위해, SSC/FSC가 있는 림프구를 먼저 게이트한 다음, 살아있는 CD138- 세포를 확인하였다. 그 다음, CD8+ T 세포에서 CD25의 발현을 측정하였다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.
달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞의 용어 "적어도"는 일련 내의 각각의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 구현예에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하는", "구비하다", "구비하는", "갖는다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는", 또는 이들의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 내포하지만 임의의 다른 정수 또는 정수들의 군의 배제를 내포하지 않는 것으로 이해될 것이며, 비배타적 또는 개방형(open-ended)인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소들의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치는 반드시 그러한 요소들만으로 제한되지는 않고, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치에 고유하거나 명시적으로 열거되어 있지 않은 다른 요소들을 포함할 수 있다. 또한, 명시적으로 반대로 기재되어 있지 않는 한, "또는"은 배타적 '또는'이 아니라 포괄적 '또는'을 지칭한다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 하기 중 어느 하나에 의해 만족된다: A가 참(또는 존재함)이고 B가 거짓(또는 존재하지 않음)임, A가 거짓(또는 존재하지 않음)이고 B가 참(또는 존재함)임, A 및 B 둘 모두가 참(또는 존재함)임.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 이루어지다" 또는 "~로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함을 나타내지만, 추가의 정수 또는 정수들의 군이 명시된 방법, 구조, 또는 조성물에 추가될 수 없다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 본질적으로 이루어진다", 또는 변형, 예컨대 "~로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~로 본질적으로 이루어진"은, 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 포함, 및 명시된 방법, 구조 또는 조성물의 기본적 또는 신규한 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수들의 군의 선택적인 포함을 나타낸다. M.P.E.P. § 2111.03을 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "대상체"는 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "포유동물"은 임의의 포유동물을 포괄한다. 포유동물의 예는 암소, 말, 양, 피그, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니아 피그, 원숭이, 인간, 등, 더 바람직하게는 인간을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
단어 "우측", "좌측", "하부", 및 "상부"는 참조하는 도면에서의 방향을 지정한다.
또한, 본 명세서에서 바람직한 발명의 구성요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 사용되는 용어 "약", "대략", "대체로", "실질적으로" 및 유사한 용어들은 기재된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니고, 그로부터 기능적으로 동일하거나 유사한 사소한 변동은 배제하지 않음을 나타낸다는 것이 이해되어야 하며, 이는 당업자에 의해 이해되는 바와 같을 것이다. 최소한으로, 수치 파라미터를 포함하는 그러한 언급은 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 오차 또는 다른 계통 오차, 제조 공차 등)를 사용하여, 최소 유효 숫자를 변화시키지 않게 될 변형을 포함할 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 생물학적 성분(예컨대, 핵산, 펩티드 또는 단백질)이, 그러한 성분이 천연 발생하는 유기체의 다른 생물학적 성분들, 즉 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 따로 생성되거나, 또는 따로 정제되었음을 의미한다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. "단리된" 핵산, 펩티드, 및 단백질은 조성물의 일부일 수 있으며, 조성물이 핵산, 펩티드, 또는 단백질의 천연 환경의 일부가 아닌 경우에 여전히 단리될 수 있다. 이 용어는 또한 숙주 세포에서의 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩티드 및 단백질뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 또한 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 레플리콘이며, 그 안에는 세그먼트의 복제 또는 발현을 일으키도록 다른 핵산 세그먼트가 작동가능하게 삽입될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 세포를 지칭한다. "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 중인 세포, 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 일 구현예에서, "숙주 세포"는 본 발명의 핵산 분자로 형질감염되거나 형질도입된 세포이다. 다른 구현예에서, "숙주 세포"는 그러한 형질감염되거나 형질도입된 세포의 자손 또는 잠재적 자손이다. 세포의 자손은, 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 통합으로 인해 모세포와 동일하거나 동일하지 않을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "발현"은 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이 용어는 또한, 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사후 및 번역후 변형을 추가로 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 광의로 의미되며, 단일클론성 항체 (쥣과, 인간, 인간화된 및 키메라 단일클론성 항체 포함), 항원 결합 단편, 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적, 삼중특이적, 테트라특이적 등, 이량체성, 사량체 또는 다량체 항체, 단쇄 항체, 도메인 항체를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 필요한 특이성의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 배열을 포함한다. "전장 항체"는 이황화 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC), 뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 이루어진다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, 힌지(hinge), CH2, 및 CH3으로 이루어짐)으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이 산재된(interspersed) 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변성 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노에서 카복시 말단까지 다음 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되고, 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라 5개의 주요 부류, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM로 할당될 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위분류된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 2개의 분명하게 별도인 유형, 즉 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 지정될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단일클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체 분자 집단으로부터 얻어진 항체를 말하는데, 즉, 집단을 구성하는 개별 항체는 항체 중쇄로부터 C 말단 라이신의 제거와 같은 가능성 있는 잘 알려진 변경, 또는 아미노산 이성질화 또는 탈아미드화, 메티오닌 산화 또는 아스파라긴 또는 글루타민 탈아미드화와 같은 번역 후 변형을 제외하고는 동일하다. 단일클론성 항체는 전형적으로 1개의 항원 에피토프에 결합한다. 이중특이성 단일클론 항체는 2개의 별개의 항원 에피토프에 결합한다. 단일클론 항체는 항체 집단 내에 불균질한 글리코실화를 가질 수 있다. 단일클론 항체는 단일특이적 또는 다중특이적, 예컨대, 이중특이성 1가, 2가 또는 다가일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "인간 항체"는 인간 대상체에 투여될 때 최소 면역 반응을 갖도록 최적화된 항체를 지칭한다. 인간 항체의 가변 영역은 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체가 불변 영역 또는 불변 영역의 일부를 함유한다면, 불변 영역은 또한 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체는, 인간 항체의 가변 영역이 인간 생식계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 수득된다면 인간 기원의 서열"로부터 유래되는" 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 이러한 예시적인 시스템은 파지(phage) 상에 표시되는 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리, 및 인간 면역글로불린 좌위를 보유하는 마우스 또는 래트와 같은 유전자이식 비인간 동물이다. "인간 항체"는 전형적으로, 인간 항체 및 인간 면역글로불린 좌위를 수득하는 데 사용되는 시스템 사이의 차이, 체세포 돌연변이의 도입 또는 프레임워크나 CDR 또는 둘 다 내로의 치환의 의도적인 도입으로 인해, 인간에서 발현되는 면역글로불린과 비교할 때 아미노산 차이를 함유한다. 전형적으로, "인간 항체"는 인간 생식계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 아미노산 서열과 아미노산 서열이 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 경우에, "인간 항체"는, 예를 들어 문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래되는 공통 프레임워크 서열을 함유하거나, 또는, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO2009/085462호에 기재된 바와 같이 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리 내로 도입된 합성 HCDR3을 함유할 수 있다. 적어도 하나의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되는 항체는 "인간 항체"의 정의에 포함되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "인간화 항체"는 적어도 하나의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되고 적어도 하나의 프레임워크가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 인간화 항체는, 프레임워크가 발현된 인간 면역글로불린 또는 인간 면역글로불린 생식계열 유전자 서열의 정확한 복사체(copy)가 아닐 수 있도록 프레임워크에 치환을 포함할 수 있다.
용어 "단리된 항체"는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없는 항체를 지칭하며, 더 높은 순도로, 예컨대 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 순도로 단리된 항체를 포괄한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "항원 결합 단편" 또는 "항원 결합 도메인"은 항원에 결합하는 면역글로불린 분자의 일부를 지칭한다. 항원 결합 단편은 합성 폴리펩티드이거나, 효소적으로 얻을 수 있는 폴리펩티드이거나, 유전자 조작된 폴리펩티드일 수 있으며, VH, VL, VH 및 VL, Fab, F(ab')2, Fd 및 Fv 단편, 1개의 VH 도메인 또는 1개의 VL 도메인으로 이루어진 도메인 항체(dAb), 상어 가변 IgNAR 도메인, 낙타화(camelized) VH 도메인, 항체의 CDR을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위, 예컨대, FR3-CDR3-FR4 부분, HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 및 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3을 포함한다. VH 및 VL 도메인은 합성 링커를 통해 결합되어 다양한 유형의 단일쇄 항체 설계를 형성할 수 있으며, 여기서 1가 항원 결합 부위, 예컨대, 단일쇄 Fv(scFv) 또는 이중항체(diabody)를 형성하기 위해, VH/VL 도메인은 분자내에, 또는 VH 및 VL 도메인이 별도의 단일쇄 항체 작제물에 의해 발현되는 경우에는 분자간에 쌍을 이룰 수 있으며; 이는 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO1998/44001호, WO1988/01649호, WO1994/13804호 및 WO1992/01047호에 기재되어 있다.
용어 "이중특이적"은 동일한 항원 내에서 2개의 별개의 항원 또는 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 사이노몰거스(Macaca cynomolgus)(사이노몰거스, 사이노), 또는 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "다중특이성"은 동일한 항원 내에서 2개 이상의 별개의 항원 또는 2개 이상의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 다중특이성 항체는, 예를 들어 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 별개의 에피토프와 결합할 수 있다.
항체 또는 항체 단편과 관련하여 사용될 때, "특이적 결합" 또는 "면역특이적 결합" 또는 이들의 파생어는, 혼합된 분자 집단을 함유하는 샘플 중의 다른 분자에 우선적으로 결합하지 않고서, 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 단편에 의해 인코딩된 도메인을 통한 관심 단백질의 하나 이상의 에피토프에 대한 결합을 나타낸다. 전형적으로, 항체는 표면 플라즈몬 공명 검정 또는 세포 결합 검정에 의해 측정될 때 약 1×10-8 M 미만의 Kd로 동종 항원에 결합한다.
용어 "암"은 신체에서 비정상 세포의 통제되지 않은 성장을 특징으로 하는 다양한 질병의 광범위한 그룹을 지칭한다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 이웃하는 조직을 침범하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있는 악성 종양의 형성을 야기한다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "조합"은 둘 이상의 치료제가 대상체에게 혼합물 상태로 함께 투여되거나, 단일 제제(single agent)로서 동시에 투여되거나, 또는 단일 제제로서 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있음을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "향상시킨다" 또는 "향상된"은 대조 분자와 비교할 때 테스트 분자 또는 하나 이상의 대조 분자와 비교할 때 테스트 분자의 조합의 하나 이상의 기능의 향상을 지칭한다. 측정될 수 있는 예시적인 기능은 종양 세포 사멸, T 세포 활성화, 상대 또는 절대 T 세포 수, Fc 매개 효과기 기능(예를 들어, ADCC, CDC 및/또는 ADCP) 또는 Fcγ 수용체(FcγR) 또는 FcRn에 대한 결합이다. "향상된"은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 그 이상의 향상, 또는 통계학적으로 유의한 향상일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "돌연변이"는 참조 서열과 비교할 때 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열에서 조작되거나 자연적으로 발생하는 변경을 지칭한다. 변경은 하나 이상의 아미노산 또는 폴리뉴클레오티드의 치환, 삽입 또는 결실일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "비-고정 조합"은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제의 별개의 약제학적 조성물이 별개의 독립체로서 동시에, 병행적으로 또는 특정한 개재 시간 제한 없이 순차적으로 투여되는 것을 지칭하며, 이러한 투여는 대상체의 신체에서 두 가지 화합물의 효과적인 수준을 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적 조성물"은 활성 성분 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "부형제"는 대상체에게 무독성인 활성 성분 이외의 약제학적 조성물의 성분을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "재조합체"은 상이한 공급원으로부터의 단편이 결합되어 재조합 DNA, 항체 또는 단백질을 생성할 때 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 DNA, 항체 및 기타 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "감소시키다" 또는 "감소된"은 대조 분자와 비교할 때 테스트 분자 또는 하나 이상의 대조 분자와 비교할 때 테스트 분자의 조합의 하나 이상의 기능의 감소를 지칭한다. 측정될 수 있는 예시적인 기능은 종양 세포 사멸, T 세포 활성화, 상대 또는 절대 T 세포 수, Fc 매개 효과기 기능(예를 들어, ADCC, CDC 및/또는 ADCP) 또는 Fcγ 수용체(FcγR) 또는 FcRn에 대한 결합이다. "감소된"은 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 그 이상의 감소, 또는 통계학적으로 유의한 향상일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "불응성"은 외과적 개입으로 수정될 수 없고 초기에 요법에 반응하지 않는 암을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "재발한"은 치료에 반응했지만 이후에 되돌아 간 암을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"은 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. "비인간 동물"은 척추동물, 예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 암소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다. 언급된 경우를 제외하고 "환자" 또는 "대상체"라는 용어는 상호교환적으로 사용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "치료적 유효량"은 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 용량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 이끌어내는 치료제 또는 치료제들 조합의 능력과 같은 인자들에 따라 달라질 수 있다. 효과적인 치료제 또는 치료제들 조합의 예시적인 지표는, 예를 들어 환자의 개선된 웰빙(well-being)을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 요법적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 지칭하며, 목적은 원치 않는 생리학적 변화 또는 장애를 예방 또는 둔화(감퇴)시키는 것이다. 유익하거나 원하는 임상 결과는, 검출가능하든 검출 불가능하든 어느 것이든 간에, 증상의 경감, 질병 정도의 저하, 안정화된(즉, 악화되지 않는) 질병 상태, 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선 또는 고식, 및 관해(부분 또는 전체 어느 것이든)를 포함한다. "치료"는 또한 대상체가 치료를 받지 않고 있을 경우에 예상되는 생존과 비교할 때 연장되는 생존을 의미할 수 있다. 치료가 필요한 자들은 이미 질환 또는 장애를 가진 자들뿐만 아니라 질환 또는 장애를 갖기 쉬운 자들 또는 질환 또는 장애가 예방되어야 하는 자들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "종양 세포" 또는 "암 세포"는 자발적 또는 유도된 표현형 변화를 갖는 생체내, 생체외 또는 조직 배양에서 암성, 전-암성 또는 형질전환된 세포를 지칭한다. 이러한 변화가 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하지는 않는다. 형질전환이 형질전환 바이러스에 의한 감염 및 새로운 게놈 핵산의 도입, 또는 외인성 핵산의 흡수로부터 일어날 수 있기는 하지만, 이는 또한 자발적으로 또는 발암물질에 대한 노출 후에 일어날 수 있으며, 그럼으로써 내인성 유전자를 돌연변이화할 수 있다. 형질전환/암은 시험관 내, 생체 내, 및 생체 외에서 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상적인 성장 조절, 병소 형성, 증식, 악성, 종양 특이적 마커 수준의 조절, 침습성, 누드 마우스와 같은 적합한 동물 숙주에서의 종양 성장 등에 의해 예시된다..
T 세포 재유도(redirection) 치료제
본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제(이는 또한 본원 전반에 걸쳐 "T 세포 재유도 이중특이성 항체" 또는 "이중특이성 항체"로도 지칭됨)는 2개 이상의 결합 영역을 함유하는 분자이며, 결합 영역 중 하나는 표적 세포 또는 조직 상의 세포 표면 항원(예컨대 종양 연관 항원(TAA))에 특이적으로 결합하고 분자의 제2 결합 영역은 T 세포 표면 항원(예컨대, CD3)에 특이적으로 결합한다. 이러한 이중/다중-표적 결합 능력은 T 세포를 표적 세포 또는 조직에 동원하여 표적 세포 또는 조직의 근절로 이어진다.
본 명세서에 사용되는 T 세포 재유도 치료제는 항체, 항체 유래 단백질, 또는 예를 들어 항원 결합 부위를 나타내는 재조합 단백질일 수 있다. 일 구현예에서, 본 명세서에 사용된 T 세포 재유도 치료제는 이중특이성 항체로서 "전체" 항체, 예컨대 전체의 IgG 또는 IgG 유사 분자, 및 작은 재조합 포맷, 예컨대 탠덤 단일 사슬 가변 단편 분자 (taFvs), 디아바디 (Dbs), 단일 사슬 디아바디 (scDbs) 및 이들의 다양한 다른 유도체를 포괄한다(참조: 다양한 이중특이성 항체 포맷을 보여주는 도 2와 함께 Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31 (11): 621-632에 의해 기재된 이중특이성 항체 포맷; Weidle U. H. et al. (2013) Cancer Genomics and Proteomics 10: 1-18, 특히 다양한 이중특이성 항체 포맷을 보여주는 도 1; 및 다양한 이중특이성 항체 포맷을 보여주는 도 3과 함께 Carter, P. J. (2010) Nat Rev Immu 10: 301-316). 이중특이성 항체 포맷의 예는 쿼드로마(quadroma), 화학적으로 커플링된 Fab (단편 항원 결합), 및 BiTE® (이중특이성 T 세포 연관체)를 포함하지만 이에 제한되지 않습니다.
한 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 군로부터 선택될 수 있다: 트리오맙; 하이브리드 하이브리도마(쿼드로마); 다중특이적 안티칼린 플랫폼(Pieris); 디아바디; 단일 사슬 디아바디; 탠덤 단일 사슬 Fv 단편; TandAbs, 삼중특이적 Ab(Affimed)(105-110 kDa); 다트(Dart)(이중 친화성 재표적화; Macrogenics); 이중특이성 Xmabs(Xencor); 이중특이성 T 세포 연관체 (Bites; Amgen; 55 kDa); 삼중체; 트리바디=Fab-scFv 융합 단백질(CreativeBiolabs) 다기능 재조합 항체 유도체(110kDa); 듀오바디 플랫폼(Genmab); 도킹 및 잠금 플랫폼; 놉 인투 홀(Knob into hole, KIH) 플랫폼; 인간화 이중특이성 IgG 항체(REGN1979)(Regeneron); Mab2 이중특이성 항체(F-Star); DVD-Ig=이중 가변 도메인 면역글로불린(Abbvie); 카파 람다 바디; 4가 이중특이성 탠덤 Ig; 및 CrossMab.
추가 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 이중특이성 IgG 유사 항체(BsIgG)로부터 선택될 수 있다: CrossMab; DAF(투인원); DAF(포인원); DutaMab; DT-IgG; 놉인홀(knobs-in-holes) 일반 LC; 놉인홀 어셈블리; 전하 쌍; Fab-아암 교환 SEEDbody; 트리오맙; LUZ-Y; Fcab; κλ-바디; 및 직교 Fab. 이러한 이중특이성 항체 포맷은 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 추가 항원 결합 모이어티를 갖는 IgG 첨부 항체로부터 선택될 수 있다: DVD-IgG; IgG(H)-scFv; scFv-(H)IgG; IgG(L)-scFv; scFV-(L)IgG; IgG(L,H)-Fv; IgG(H)-V; V(H)-IgG; IgG(L)-V; V(L)-IgG; KIH IgG-scFab; 2scFv-IgG; IgG-2scFv scFv4-Ig; scFv4-Ig; Zybody; 및 DVI-IgG (포인원) 이러한 이중특이성 항체 포맷은 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
또 다른 추가 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 이중특이성 항체 단편으로부터 선택될 수 있다: 나노바디; 나노바디-HAS; BiTE; 디아바디; DART; TandAb; sc디아바디; sc-디아바디-CH3; 디아바디-CH3; 트리플 바디; 미니항체; 미니바디; TriBi 미니바디; scFv-CH3 KIH; Fab-scFv; scFv-CH-CL-scFv; F(ab')2; F(ab')2-scFv2; scFv-KIH; Fab-scFv-Fc; 4가 HCAb; sc디아비디-Fc; 디아바디-Fc; 탠덤 scFv-Fc; 및 인트라바디. 이러한 이중특이성 항체 포맷은 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
또 다른 구현예에서, 본원에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 이중특이성 융합 단백질로부터 선택될 수 있다: Dock 및 Lock; ImmTAC; HSAbody; sc디아바디-HAS; 및 탠덤 scFv-독소. 이러한 이중특이성 항체 포맷은 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
또 다른 추가 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 하기를 포함하는 이중특이성 항체 접합체로부터 선택될 수 있다: IgG-IgG; Cov-X-바디; 및 scFv1-PEG-scFv2. 이러한 이중특이성 항체 포맷은 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
또 다른 추가 구현예에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 임의의 면역글로불린 부류(예를 들어, IgA, IgG, IgM 등) 및 하위부류(예를 들어, IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등)에 기초할 수 있다. 한 양태에서, 본 명세서에 사용된 이중특이성 항체는 일반적으로 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 IgG 유사 포맷(IgG에 기초하여 "IgG 유형"으로도 지칭됨)을 가질 수 있다. IgG 유사 포맷을 갖는 항체의 예는 쿼드로마 및 다양한 IgG-scFv 포맷을 포함한다(참조: Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31(11): 621-632; 도 2a 내지 도 2e), 이에 의해 쿼드로마가 바람직하며, 이는 바람직하게는 2개의 상이한 하이브리도마의 융합에 의해 생성된다. IgG 부류 내에서, 이중특이성 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위부류를 기반으로 할 수 있다.
또 다른 추가 구현예에서, 본원에 사용된 이중특이성 항체는 예를 들어 Chan, A. C. 및 Carter, P. J. (2010) Nat Rev Immu 10: 301-316의 도 3c에 도시되고 해당 기사에 기재되어 있는, 하이브리드 하이브리도마(쿼드로마), 공통 경쇄를 갖는 노브-인투-홀, 다양한 IgG-scFv 포맷, 다양한 scFv-IgG 포맷, 투인원 IgG, 이중 V 도메인 IgG, IgG-V, 및 V-IgG를 포함하는 IgG 유사 항체 포맷이다. 추가의 예시적인 이중특이성 IgG 유사 항체 포맷은 예를 들어 DAF, CrossMab, IgG-dsscFv, DVD, IgG-dsFV, IgG-scFab, scFab-dsscFv 및 Fv2-Fc를 포함하며, 이는 문헌[Weidle U. H. et al. (2013) Cancer Genomics and Proteomics 10: 1-18]의 도 1a에 보여지며 해당 기사에 기재되어 있다. 또 다른 예시적인 이중특이성 IgG 유사 항체 포맷은 하기를 포함한다: DAF(투인원); DAF(포인원); DutaMab; DT-IgG; 놉인홀 어셈블리; 전하 쌍; Fab-아암 교환 SEEDbody; 트리오맙; LUZ-Y; Fcab; κλ-바디; 직교 Fab; DVD-IgG; IgG(H)-scFv; scFv-(H)IgG; IgG(L)-scFv; scFV-(L)IgG; IgG(L,H)-Fv; IgG(H)-V; V(H)-IgG; IgG(L)-V; V(L)-IgG; KIH IgG-scFab; 2scFv-IgG; IgG-2scFv scFv4-Ig; scFv4-Ig; Zybody; 및 DVI-IgG (포인원), 이는 예를 들어 문헌[Spiess C., Zhai Q. 및 Carter P. J. (2015) Molecular Immunology 67: 95-106, 특히 도 1 및 상응하는 설명, 예를 들어 p. 95-101]에 보여지고 기재되어 있다.
예를 들어, 이중특이성 항체는 3가지 다른 방법에 의해 생산될 수 있다: (i) 화학적 가교를 포함하는 화학적 접합; (ii) 2개의 상이한 하이브리도마 세포주의 융합; 또는 (iii) 재조합 DNA 기술을 포함하는 유전적 접근. 2개의 상이한 하이브리도마의 융합은 이중특이성 분자를 포함하는 이종 항체 집단을 분비하는 하이브리드-하이브리도마(또는 "쿼드로마")를 생성한다. 대안적 접근법에는 2개의 상이한 mAb 및/또는 더 작은 항체 단편의 화학적 접합이 포함되었다. 2개의 상이한 항체 또는 항체 단편을 연결하기 위한 산화적 재회합 전략은 다중 천연 이황화 결합의 재산화 동안 부반응의 존재로 인해 비효율적인 것으로 밝혀졌다. 화학적 접합을 위한 현재 방법은 동종 또는 이종 이관능성 가교 시약의 사용에 중점을 둔다. 재조합 DNA 기술은 유전자의 인공적인 조작을 통해 이중특이성 항체의 가장 큰 범위를 산출했으며 이중특이성 항체 생성을 위한 가장 다양한 접근 방식을 나타낸다(지난 20년 동안 45개 포맷; 문헌[Byrne H. et al. (2013) Trends Biotech, 31 (11): 621-632] 참조).
특히, 이러한 재조합 DNA 기술을 이용하여 최근에는 더욱 다양한 다중특이적 항체가 등장하고 있다. 용어 "다중특이적 항체"는 하나 초과의 파라토프 및 둘 이상의 상이한 에피토프에 결합하는 능력을 갖는 단백질을 지칭한다. 따라서, 용어 "다중특이적 항체"는 상기 정의된 바와 같은 이중특이성 항체를 포함하지만, 일반적으로 단백질, 예를 들어, 항체, 특히 3개 이상의 상이한 에피토프에 결합하는 스캐폴드, 즉 3개 이상의 파라토프를 갖는 항체를 포함한다. 특히 3개 이상의 파라토프를 갖는 이러한 다중특이적 단백질은 일반적으로 재조합 DNA 기술에 의해 달성된다. 본 발명의 맥락에서, 항체는 특히 2개 초과의 특이성을 가질 수 있으며, 따라서 적어도 2개의 파라토프로서 2개 초과의 파라토프는 본 발명에 따라 필요하고, 예를 들어 하나는 표적 세포에 대한 것 및 다른 하나는 T 세포에 대한 것이다. 따라서, 본 발명에 따라 사용되는 항체는 2개의 파라토프 외에, 특히 추가 특이성과 관련된 추가 파라토프를 가질 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 다중특이적 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명은 최소 요건을 나타내는 이중특이성 항체에 대해 특히 본 명세서에서 언급되지만, 이중특이성 항체에 제한되지 않는 것으로 이해된다. 따라서 이중특이성 항체에 대해 본 명세서에서 말하는 것은 다중특이적 항체에도 적용될 수 있다.
상기 정의된 바와 같은 이중특이성 항체 및 다중특이적 항체는 질병 과정에서 핵심적인 역할을 하는 표적 세포에 대해 효과기 세포를 재유도할 수 있다. 특히, 본 명세서에 사용된 T 세포 재유도 이중특이성 항체는 예를 들어 T 세포 수용체(TCR) 복합체에 결합하고 T 세포를 표적 세포, 예를 들어 종양 세포로 "재유도"할 수 있다. 이를 위해, 본 명세서에 사용된 이러한 이중특이성 항체는 적어도 하나의 특이성, 예를 들어 T 세포, 바람직하게는 T 세포 표면 항원, 예를 들어 CD3에 특이적인 T 세포를 동원하기 위한 적어도 하나의 파라토프, 및 적어도 하나의 다른 특이성, 예를 들어, T 세포를, 종양 세포, 바람직하게는 종양 세포 상의 TAA에 특이적인 종양 세포로 유도하기 위한 적어도 하나의 파라토프를 갖는다. T 세포 재유도 이중특이성 항체에 의한 T 세포의 종양 세포로의 이러한 "재유도"는 전형적으로 종양 세포의 T-세포 매개 세포 사멸을 초래한다.
일 구현예에서, 본 명세서에 사용된 T 세포 재유도 치료제는 T 세포 표면 항원에 대해 특이성을 갖는 제1 결합 영역 및 종양 세포 상의 TAA에 대해 특이성을 갖는 제2 결합 영역을 포함한다.
추가 구현예에서, T 세포 표면 항원은 CD3, CD2, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28, CD40L, CD44, CD137, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 및 NKG2C로부터 선택될 수 있다. 또는 T 세포 표면 항원은 CD3이다.
또 다른 추가 구현예에서, TAA는 B-세포 성숙 항원 (BCMA), CD123, GPRC5D, CD33, CD19, PSMA, TMEFF2, CD20, CD10, CD21, CD22, CD25, CD30, CD34, CD37, CD44v6, CD45, CD52, CD133, ROR1, B7-H6, B7-H3, HM1.24, SLAMF7, Fms 유사 티로신 키나제 3 (FLT-3, CD135), 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4 (CSPG4, 흑색종 연관 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸), 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), Her2, Her3, IGFR, IL3R, 섬유아세포 활성화 단백질 (FAP), CDCP1, 데를린(Derlin)1, 테나스신, 프리즐레드 1-10, VEGFR2 (KDR/FLK1), VEGFR3 (FLT4, CD309), PDGFR-알파 (CD140a), PDGFR-베타 (CD140b), 엔도글린, CLEC14, Tem1-8, 또는 Tie2로부터 선택될 수 있다. 종양 세포 상의 추가의 예시적인 TAA는 A33, CAMPATH-1(CDw52), 암배아 항원(CEA), 카르보안하이드라제 IX(MN/CA IX), de2-7, EGFRvIII, EpCAM, Ep-CAM, 엽산 결합 단백질, G250, c-Kit(CD117), CSF1R(CD115), HLA-DR, IGFR, IL-2 수용체, IL3R, MCSP(흑색종-관련 세포 표면 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸), Muc-1, 전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 항원(PSA), hK2, TAG-72 또는 종양 세포 신생항원을 포함한다. 또는, TAA는 BCMA, CD123, GPRC5D, CD33, CD19, PSMA, TMEFF2, CD20, CD22, CD25, CD52, ROR1, HM1.24, CD38 및 SLAMF7로부터 선택될 수 있다. 또는, TAA는 BCMA 또는 CD123 중에서 선택될 수 있다.
일 구현예에서, T 세포 재유도 치료제는 BCMA+ MM 세포 및 CD3 T 세포에 면역특이적으로 결합하는 BCMA×CD3 이중특이성 항체이다. BCMA×CD3 이중특이성 항체는 전문이 본 명세서에 참조로 포함되어 있는 WO2007117600, WO2009132058, WO2012066058, WO2012143498, WO2013072406, WO2013072415, WO2014122144, 및 US10,072,088에 개시된 것들로부터 선택될 수 있다.
일 구현예에서, BCMA×CD3 이중특이성 항체는 US10,072,088에 개시된 것과 같은 이중특이성 DuoBody® 항체이며, 이는 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다. BCMA×CD3 이중특이성 항체는 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하며, HC1 및 LC1은 쌍을 이루어 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, 및 HC2 및 LC2는 쌍을 이루어 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성한다. 일 구현예에서, BCMA×CD3 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 HC1, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 LC1, 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 HC2, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 LC2을 포함하고, HC1 및 LC1은 쌍을 이루어 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, HC2 및 LC2는 쌍을 이루어 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성한다. 일 구현예에서, BCMA×CD3 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 HC1, 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 LC1, 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 HC2, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 LC2을 포함하고, HC1 및 LC1은 쌍을 이루어 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, HC2 및 LC2는 쌍을 이루어 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성한다.
일 구현예에서, T 세포 재유도 치료제는 CD123+ AML 세포 및 CD3 T 세포에 면역특이적으로 결합하는 CD123×CD3 이중특이성 항체이다. CD123×CD3 이중특이성 항체는 US9,850,310에 개시된 것과 같은 이중특이성 DuoBody® 항체일 수 있으며, 이는 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다. 일 구현예에서, CD123×CD3 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 HC1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 LC1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 HC2, 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 LC2을 포함하고, HC1 및 LC1은 쌍을 이루어 CD123에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, HC2 및 LC2는 쌍을 이루어 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성한다.
서열번호 1
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서열 번호 2
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서열 번호 3
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서열 번호 4
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서열 번호 5
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서열 번호 6
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서열 번호 7
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서열 번호 8
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서열 번호 9
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서열 번호 10
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
VLA-4 부착 경로 억제제
α4β1이라고도 하는 매우 늦은(Very late) 항원-4(VLA-4)는 세포 표면 수용체의 β1 인테그린 계열의 구성원이다. VLA-4는 α4 사슬과 β1 사슬을 함유하고 있으며 세포-세포 상호작용에 관여한다. 이의 발현은 주로 림프구 및 골수 세포로 제한된다. 그것은 세포 부착의 핵심 선수이다. 연구는 또한 VLA-4가 BM에서 AML/MM-기질 상호작용을 매개하는 데 중요한 역할을 한다는 것을 보여주었다. 혈관 세포 부착 분자-1(VCAM-1)(골아세포 및 내피 세포에 의해 발현됨) 및 피브로넥틴(세포외 기질의 성분)은 VLA-4에 대한 두 리간드이다.
본 명세서에 사용되는 VLA-4 부착 경로 억제제는 VLA-4 매개 부착 경로를 차단할 수 있는 임의의 분자일 수 있다.
예를 들어, 본 명세서에 사용된 VLA-4 부착 경로 억제제는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 F(v) 단편과 같은 항-VLA-4 항체로부터 제조된 항-VLA-4 항체 또는 VLA-4 결합 단편; 중쇄 단량체 또는 이량체; 경쇄 단량체 또는 이량체일 수 있고; 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 구성된 이량체가 또한 고려된다. 이러한 항체 단편은 화학적 방법, 예를 들어 온전한 항체를 프로테아제, 예컨대 펩신 또는 파파인으로 절단함으로써, 또는 재조합 DNA 기술을 통해, 예를 들어 말단절단된 중쇄 및/또는 경쇄 유전자로 형질전환된 숙주 세포를 사용함으로써 생성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 단량체는 온전한 항체를 환원제, 예를 들어 디티오트레이톨 또는 β-메르캅토에탄올로 처리하거나 원하는 중쇄 또는 경쇄 또는 둘 다, 예컨대, 단일클론성 항체 또는 그의 항체 단편을 인코딩하는 DNA로 형질전환된 숙주 세포를 사용함으로써 유사하게 생성될 수 있다.
VLA-4 매개 부착 경로를 차단할 수 있는 임의의 적합한 항-VLA-4 항체 또는 VLA-4-결합 단편은 본 명세서에서 사용될 수 있으며, 이는 제한 없이 나탈리주맙 및 미국 특허 제6,602,503호 및 미국 특허 출원 공개 제US20140161794 A1호에 개시된 것들을 포함하고, 상기 특허는 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 사용된 VLA-4 부착 경로 억제제는 VLA-4 매개 부착 경로를 차단할 수 있는 VLA-4 길항제일 수 있다. 본 명세서에 사용된 예시적인 VLA-4 길항제는 제한 없이 Tocris Bioscience의 VLA-4 길항제(예를 들어, BIO1211, TCS2314, BIO5192, 및 TR14035)를 포함한다.
VCAM-1 및 피브로넥틴이 VLA-4의 리간드인 한, VLA-4 부착 경로 억제제는 또한 VCAM-1 또는 피브로넥틴의 길항제(항체 포함)를 포함할 수 있다.
약제학적 조성물
상기 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 및 상기 개시된 바와 같은 VLA-4 부착 경로 억제제, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 추가로 개시된다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 숙주 세포, 및/또는 조작된 면역 세포 및 이들을 포함하는 조성물은 또한 본 명세서에 언급된 치료적 응용을 위한 의약의 제조에 유용하다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 상기 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 및 상기 개시된 바와 같은 VLA-4 부착 경로 억제제, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 별개의 조성물이다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 별개의 조성물이 아니고 약제학적 조성물은 상기 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 및 상기 개시된 바와 같은 VLA-4 부착 경로 억제제, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "담체"는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 베시클, 미소구체, 리포좀 캡슐화, 또는 약제학적 제형에 사용하기 위한 당업계에 잘 알려진 다른 물질을 지칭한다. 담체, 부형제, 또는 희석제의 특성은 특정 응용을 위한 투여 경로에 좌우될 것임이 이해될 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 본 발명에 따른 조성물의 유효성 또는 본 발명에 따른 조성물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 비독성 물질을 지칭한다. 특정 구현예에 따라, 본 개시내용을 고려하여, 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 숙주 세포, 및/또는 조작된 면역 세포 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체가 본 발명에 사용될 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 약제학적으로 활성인 성분의 제형은 당업계에, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (e.g. 21st edition (2005), and any later editions)]에 알려져 있다. 추가의 성분의 비제한적인 예에는 완충제, 희석제, 용매, 장성 조절제, 방부제, 안정제, 및 킬레이트제가 포함된다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형화에 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체가 사용될 수 있다.
본 개시내용의 한 구현예에서, 약제학적 조성물은 액체 제형이다. 액체 제형의 바람직한 예는 수성 제형, 즉 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어 주사 장치(예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프)를 통해 주사될 수 있는 주사제로서 제형화될 수 있다. 주사는, 예를 들어 피하, 근육내, 복막내, 유리체강내, 또는 정맥내 전달될 수 있다.
다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 고체 제형, 예를 들어 냉동-건조 또는 분무-건조된 조성물이며, 이것은 그대로 사용될 수 있거나, 또는 이것에 의사 또는 환자가 사용 전에 용매 및/또는 희석제를 첨가한다.
사용 방법
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는, 조성물에 암 세포를 적용하는 것을 포함하는 암 세포를 사멸시키는 방법에 관한 것이다.
대상체는 새로 진단된 암을 가질 수 있거나 이전의 항암 요법에 대해 재발하거나 불응성일 수 있다. 암은 혈액 악성 종양 또는 고형 종양일 수 있다.
본 발명의 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제의 치료적 유효량을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 용어 "치료적 유효량"은 대상에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 활성 성분 또는 성분의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 언급된 목적에 관하여 경험적으로 그리고 일상적인 방식으로 결정될 수 있다.
T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제와 관련하여 본 명세서에 사용된 바와 같이, 치료적 유효량은 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 조절하는 VLA-4 부착 경로 억제제와 조합된 T 세포 재유도 치료제의 양을 의미한다. 또한, T 세포 재유도 치료제와 관련하여 본 명세서에 사용된 바와 같이, 치료적 유효량은 질병, 장애 또는 질환의 치료를 초래하거나; 질병, 장애 또는 질환의 진행을 예방하거나 늦추거나; 또는 질병, 장애 또는 질환과 관련된 증상을 감소시키거나 완전히 완화시키는 VLA-4 부착 경로 억제제를 사용한 T 세포 재유도 치료제의 양을 의미한다.
치료적 유효량 또는 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태(예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함함), 대상체가 인간인지 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부에 따라 변동될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능(efficacy)을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
특정 구현예에 따르면, 본 명세서에 기재된 조성물은 대상체에 대한 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 모두 암과 관련된 하나 이상의 측정가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 역전을 지칭하고자 하는 것이며, 이는 반드시 대상체에서 식별가능하지는 않지만, 대상체에서 식별가능할 수 있다. 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 또한, 퇴행을 야기하거나, 진행을 예방하거나, 적어도 질병, 장애 또는 질환의 진행을 둔화시키는 것을 지칭할 수 있다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애, 또는 질환, 예컨대 종양 또는 더 바람직하게는 암과 관련된, 경감, 발생 또는 발병의 예방, 또는 하나 이상의 증상의 지속기간의 감소를 지칭한다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환의 재발의 예방을 지칭한다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환을 갖는 대상체의 생존율의 증가를 지칭한다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 대상체에서 질병, 장애 또는 질환의 제거를 지칭한다.
특정 구현예에 따르면, 암의 치료에 사용되는 약제학적 조성물이 제공된다. 암 요법의 경우, 제공된 약제학적 조성물은 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-LAG-3 mAb, 항-EGFR mAb, 항-HER-2 mAb, 항-CD19 mAb, 항-CD33 mAb, 항-CD47 mAb, 항-CD73 mAb, 항-DLL-3 mAb, 항-아펠린 mAb, 항-TIP-1 mAb, 항-FOLR1 mAb, 항-CTLA-4 mAb, 항-PD-L1 mAb, 항-PD-1 mAb, 다른 면역-종양학 약물, 혈관신생 억제제, 방사선 요법, 항체-약물 접합체(ADC), 표적화 요법, 또는 다른 항암 약물을 포함하지만 이로 제한되지 않는 다른 치료와 조합하여 사용될 수 있다.
특정 구현예에 따르면, 암의 치료가 필요한 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본 명세서에 개시된 VLA-4 부착 경로 억제제와 조합하여 대상체에게 T 세포 재유도 치료제를 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 대상체에 대한 2가지 이상의 요법의 투여와 관련하여 용어 "병용하여"는 하나 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 "병용하여"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 대상체에게 제2 요법(예를 들어, VLA-4 부착 경로 억제제)을 투여하기 전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 요법(예를 들어, 본 명세서에 기재된 T 세포 재유도 치료제)이 투여될 수 있다.
키트
또 다른 일반적인 양태에서, 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 본 명세서에 개시된 바와 같은 VLA-4 부착 경로 억제제, 및 선택적으로 약제학적 담체를 포함하는 키트, 단위 투여량, 및 제조 물품이 본원에 제공된다. 소정 구현예에서, 키트는 바람직하게는 그의 사용을 위한 설명서를 제공한다.
또 다른 특정 양태에서, (1) 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 및 (2) 본 명세서에 개시된 바와 같은 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또 다른 특정 양태에서, 약제학적으로 허용가능한 담체 및 (1) 본 명세서에 개시된 바와 같은 T 세포 재유도 치료제, 및 (2) 본 명세서에 개시된 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
구현예
본 발명의 구현예 1은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하고, T 세포 재유도 치료제는 T 세포 표면 항원에 면역특이적으로 결합하는 제1 결합 영역 및 종양 관련 항원(TAA)에 면역특이적으로 결합하는 제2 결합 영역을 포함한다.
본 발명의 구현예 2는 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는, 구현예 1의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예는 3은 T 세포 재유도 치료제가 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 구현예 1 또는 2의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 4는 T 세포 표면 항원이 CD3, CD2, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28, CD40L, CD44, CD137, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 및 NKG2C로 이루어진 군으로부터 선택되는, 구현예 1-3 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 5는 T 세포 표면 항원이 CD3인, 구현예 4의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 6은 TAA가 BCMA, CD123, GPRC5D, CD33, CD19, PSMA, TMEFF2, CD20, CD22, CD25, CD52, ROR1, HM1.24, CD38, 및 SLAMF7로 이루어진 군으로부터 선택되는, 구현예 1-5 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 포함한다.
구현예 7은 T 세포 재유도 치료제가 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 BCMA×CD3 이중특이성 항체인, 구현예 6의 약제학적 조성물을 포함한다.
구현예 8은 BCMA×CD3 이중특이성 항체가 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 구현예 7의 약제학적 조성물을 포함한다.
구현예 9는 HC1이 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는, 구현예 8의 약제학적 조성물을 포함한다.
구현예 10은 HC1이 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는, 구현예 8의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 11은 T 세포 재유도 치료제가 CD123에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 CD123×CD3 이중특이성 항체인, 구현예 6의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 12는 CD123×CD3 이중특이성 항체가 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 구현예 11의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 13은 HC1이 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는, 구현예 12의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 14는 VLA-4 부착 경로 억제제가 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편인, 구현예 1-13 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 15는 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 단일클론성 항체, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, 및 F(v) 단편, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 및 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 구성된 이량체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 구현예 14의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 16은 VLA-4 부착 경로 억제제가 VLA-4 길항제인, 구현예 1-13 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 17은 VLA-4 부착 경로 억제제가 BIO1211, TCS2314, BIO5192, 및 TR14035로 구성된 군으로부터 선택되는 VLA-4 길항제인, 구현예 16의 약제학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 구현예 18은 암 세포를 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 적용하는 것을 포함하는, 암 세포를 사멸시키는 방법을 포함하며, 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 19는 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 18의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 20은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 19의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 21은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 20의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 22는 암 세포에 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 적용하는 것을 포함하는, 암 세포와 기질 세포 사이의 세포-세포 접촉을 파괴하는 것을 포함하는 암 세포를 죽이는 방법을 포함하며, 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 23는 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 22의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 24은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 22의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 25는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 22의 방법을 포함한다.
구현예 26은 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 암 세포에 적용하는 것을 포함하는, T 세포 의존성 세포독성을 증가시키는 것을 포함하는 암 세포를 사멸시키는 방법을 포함하며, 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 27은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 26의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 28은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 26의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 29는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 26의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 30은 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 암 세포에 적용하는 것을 포함하는, 암 세포와 기질 세포 사이의 세포-세포 접촉을 파괴하고 T 세포 의존성 세포독성을 증가시키는 것을 포함하는 암 세포를 죽이는 방법을 포함하며, 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 31은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 30의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 32는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 30의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 33은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 30의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 34는 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 종양 미세환경을 적용하는 것은 포함하는, 종양 미세환경에서 면역억제를 변경하는 방법을 포함하고, 면역억제는 종양 미세환경에서 감소되고 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 35는 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 34의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 36은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 34의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 37은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 34의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 38은 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 종양 미세환경을 적용하는 것을 포함하는, 암 세포와 기질 세포 사이의 세포-세포 접촉을 파괴하는 것을 포함하는, 종양 미세환경에서 면역억제를 변경하는 방법을 포함하고 면역억제는 종양 미세환경에서 감소되고 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 39는 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 38의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 40은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 38의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 41은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 38의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 42는 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 종양 미세환경을 적용하는 것은 포함하는, T 세포 의존성 세포독성을 증가시키는 것을 포함하는, 종양 미세환경에서 면역억제를 변경하는 방법을 포함하고, 면역억제는 종양 미세환경에서 감소되고 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 43은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 42의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 44는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 42의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 45는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 42의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 46은 구현예 1-17 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량에 종양 미세환경을 적용하는 것을 포함하는, 암 세포와 기질 세포 사이의 세포-세포 접촉을 파괴하고 T 세포 의존성 세포독성을 증가시키는 것을 포함하는, 종양 미세환경에서 면역억제를 변경하는 방법을 포함하고 면역억제는 종양 미세환경에서 감소되고 암 세포는 일부 형태의 세포 사멸을 겪는다.
본 발명의 구현예 47은 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 46의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 48은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 46의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 49는 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 46의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 50은 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 치료가 필요한 대상체에서 암을 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 51은 대상체가 새로 진단된 암을 갖는, 구현예 50의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 52는 대상체가 이전의 항암 요법에 대해 재발하거나 불응성인, 구현예 51의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 53은 암이 혈액 악성종양 또는 고형 종양인, 구현예 50-52 중 어느 하나의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 54는 대상체가 AML 또는 MM을 갖는, 구현예 53의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 55는 T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 구현예 50-54의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 56은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 전에 투여되는, 구현예 55의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 57은 VLA-4 부착 경로 억제제가 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 구현예 55의 방법을 포함한다.
본 발명의 구현예 58은 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 포함한다.
본 발명의 구현예 59는 약제학적 조성물이 별도로 포장된, 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 포함한다.
본 발명의 구현예 60은 약제학적 조성물이 함께 포장된, 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 포함한다.
실시예
물질 및 방법
항체 설계
인간 CD123 및 CD3을 표적으로 하거나 인간 BCMA 및 CD3을 표적으로 하는 이중특이성 항체를 생산하였으며, 항-CD123 또는 항-BCMA 항체 및 항-CD3 항체는 Genmab 기술을 사용하여 제어 단편 항원 결합 아암 교환을 생성함으로써 정제 후 함께 결합되었다(17, 18). 그 결과 인간 CD123+ AML 또는 인간 BCMA+ MM 세포 및 CD3 T 세포에 특이적으로 결합하는 1가 결합 이중기능성 DuoBody® 항체가 생성되었다(도 8a 및 도 8b). 항체 매개 효과기 기능을 최소화하기 위해, Fc 도메인에 돌연변이를 도입하여 Fcγ 수용체와의 상호작용을 감소시켰다. 하기 실험에 사용된 이중특이성 항체(BCMA×CD3 이중특이성 및 CD123×CD3 이중특이성)는 제1 중쇄(HC1), 제2 중쇄(HC2), 제1 경쇄(LC1) 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1이 쌍을 이루어 CD123 또는 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위를 형성하고, HC2 및 LC2가 쌍을 이루어 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 형성한다. 하기 실시예에서 사용된 이중특이성 BCMA×CD3은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 HC1, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 LC1, 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 HC2, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 LC2를 포함한다. 하기 실시예에서 사용된 이중특이성 CD123×CD3은 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 HC1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 LC1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 HC2, 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 LC2를 포함한다.
시험관내 및 생체외 세포독성 검정
종양 세포주는 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르 (CFSE)로 표지되었고 기질 세포주(HS-5 및 HS-27a), 일차 중간엽 기질 세포(MSC) 및 CD105+ 내피 세포의 존재 또는 부재 하에 해동된 정제된 냉동된 T 세포와 공동 배양되었다. 24시간 후, 이중특이성 항체를 웰에 첨가하고 플레이트를 48시간 동안 5% CO2와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 다음 유동 세포측정기에서 분석하기 전에 세포를 다양한 마커에 대해 염색하였다. 트랜스-웰 관련 실험을 위해, 0.4 μm 트랜스웰 삽입물(HTS TRANSWL96, Corning)이 있거나 없는 96웰 U 바닥 플레이트에서 분석을 수행하였다. IncuCyte® 관련 실험을 위해, 적색 형광 OCI-AML5 세포(OCI-AML5-NucLight Red)와 녹색 HS-5(HS-5-NucLight Green)를 사용하였다.
생체외 검정을 위해, AML 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 MM 골수 단핵 세포(BMMC)를 첨가하기 전에 HS-5 세포를 플레이팅하였다. 항-VLA4 항체(5 ㎍/ml)가 있거나 없는 CD123 × CD3 또는 BCMA × CD3 또는 널 × CD3 이중특이성 항체 (1 ㎍/ml)를 첨가하였다. 72시간 후, CD123+ 아세포 또는 CD138+ MM 형질 세포의 고갈을 유동 세포측정을 통해 모니터링하였다. 추가로, CD8 T 세포의 확장 및 활성화 상태(CD25의 상향 조절)를 평가하였다.
생체 내 MOLM-13 이종이식 모델
인간 PBMC(1 × 107 세포/마우스)를 종양 세포 이식 6-7일 전에 정맥내(iv) 접종하였다. 연구 0일째에, 마우스에 1 × 106 MOLM-13 세포 및 2가지 농도의 HS-5 골수 기질 세포(2 × 105 및 5 × 105)를 피하(sc)로 이식하였다. CD123 × CD3(0.04 mg/㎏ 및 0.008 mg/㎏, n=8) 또는 비히클 PBS 대조군(n=5)을 사용한 처리는 5회 용량 동안 3일마다(q3d) 정맥내(iv) 제공되었다. 연구 기간 동안 매주 2회 개별 마우스를 체중 감소 및 종양 성장 억제에 대해 모니터링하였다. VLA-4 차단 항체를 사용한 생체 내 연구의 경우, CD123 × CD3 이중특이성 항체(0.008 mg/㎏, n=8 또는 9) 또는 PBS 비히클 대조군(n=5)을 사용한 처리가 iv 제공되었고 항-VLA-4 항체(5 mg/㎏)를 복강내(ip) 제공하였다. 분석에서 제외된 동물은 없다.
통계적 방법
데이터는 GraphPad 소프트웨어 Prism 버전 8(SAS Institutes, Cary, NC)에 의해 분석되었다. Browne-Forsythe 및 Welch ANOVA 테스트 분석은 도 1과 도 2에 적용되었으며 통상적인 2-웨이 ANOVA 분석은 도 3 내지 도 7에 적용되었다.
세포주
KG1, H929, RPMI-8226, MM.1S, HS-5 및 HS-27a 세포주는 American Tissue Culture Collection(Manassas, VA)에서 입수하였다. MOLM 13 및 OCI-AML5는 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(DSMZ, 독일)에서 입수하였다. 정상 인간 공여자로부터 동결보존된 일차 중간엽 줄기 세포는 Lonza(Basel, Switzerland)에서 구입했으며 CD105+ 골수 내피 세포는 All Cells(Alameda, California)에서 구입하였다. IncuCyte® NucLight Green 또는 NucLight Red Lentivirus Reagent(EF1a, Puro)는 Essen Bioscience(Ann Arbor, Michigan)에서 구입했으며 제조업체의 지침에 따라 사용하여 HS-5-NucLight Green 및 OCI-AML5-NucLight Red 세포를 생성하였다. 퓨로마이신 처리를 사용하여 형광 양성 세포주를 선택하였다. 세포주는 최근에 인증되지 않았지만 마이코플라스마 오염에 대해 음성으로 테스트되었다.
이중특이성 항체를 사용한 결합 검정
모든 종양 세포를 원심분리하고 Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)로 2회 세척하고 1×104 세포를 96웰 U 바닥 플레이트의 각 웰 중앙에 10분 동안 2 mg/mL로 첨가된 단편 결정화(Fc) 블록(인간 IgG1 단편)과 함께 첨가하였다. 연속 희석된 이중특이성 항체를 적절한 웰에 첨가하였다. 플레이트를 4시간 동안 5% CO2와 함께 37℃의 암실에서 인큐베이션하였다. 그 다음 세포를 DPBS로 세척하고 30분 동안 하기로 염색하여 이중특이성 항체의 결합을 검출하였다: 마우스 항-인간 IgG4(Southern Biotech, 클론 HP6025, 카탈로그 번호 9200-09) 및 LIVE/DEAD(L/D; Invitrogen, 카탈로그 번호 L34976). 마지막으로, 세포를 세척하고, 염색 완충액에 재현탁하고, FACSCanto II 유동 세포측정기(BD Biosciences)에서 분석하였다. 기하 평균 형광 강도(gMFI)는 Prism 버전 7(GraphPad)에 플롯팅되었다. X축은 로그 변환되었고 4개의 파라미터 비-선형 곡선 적합이 적용되었다.
세포주를 이용한 시험관내 세포독성 검정
종양 세포주(KG1, MOLM 13, OCI-AML5, H929, RPMI-8226 및 MM.1S)를 계수하고 RT에서 8분 동안 1×107 세포/mL의 CFSE에서 CFSE(150 μL 디메틸 설폭사이드에 재현탁되고 1:10,000 희석됨)와 함께 인큐베이션하기 전에 DPBS로 세척하였다. 염색은 HI FBS로 켄칭되었다. 세포를 1 mg/mL 인간 IgG1 단편을 함유하는 완전 배지에서 2 × 105개 세포/mL로 재현탁시키기 전에 완전 배지에서 세척한 다음, 15분 동안 인큐베이션하였다. 정제된 냉동된 T 세포(BioIVT(Westport, New York)로부터 입수)를 해동하고 1×106개의 세포/mL로 재현탁시켰다. 피콜(Ficoll) 구배(단핵 세포를 단리하기 위해)를 사용하고 항체 칵테일(CD16, CD19, CD36, CD56 및 CD66b)과 함께 실온에서 배양 후 음성 선택을 사용하여 전혈에서 T 세포를 단리하여 '원하지 않는' 세포를 제거하였다. 기질 세포주(HS-5 및 HS-27a)를 수확하고, 세척하고, 계수하고, 4 × 105개 세포/mL로 재현탁시켰다. 일차 중간엽 기질 세포(MSC) 및 CD105+ 내피 세포의 경우, 각각 Lonza 및 All Cells에서 공급된 냉동 분취액을 해동하고 4 × 105개 세포/mL로 재현탁하였다. 마지막으로 50 μL의 정제된 T 세포, 50 μL의 기질 세포 및 100 μL의 표지된 종양 세포를 0.5 mg/mL 인간 IgG1 단편이 있는 96웰 U 바닥 플레이트의 각 웰에 조합하였다. 24시간 후, 테스트 항체를 웰에 첨가하였다. 항체를 DPBS 또는 완전 배지에서 133 nM의 최종 출발 농도로 희석하였다. 항체를 추가로 3배 희석하고 적절한 웰에 첨가하였다. 모든 플레이트를 항체 첨가 후 48시간 동안 5% CO2와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 다음 세포를 DPBS로 세척하고 유동 세포측정기에서 분석하기 전에 다양한 마커에 대해 염색하였다.
증식 실험을 위해, T 세포가 공동-배양 전에 CFSE 염료로 표지되었고, 따라서 이중특이성 항체의 첨가 후 96시간에 CFSE를 모니터링함으로써 증식의 평가를 가능하게 하는 것을 제외하고 시험관내 검정을 위에서 설명된 바와 같이 수행하였다.
트랜스-웰 관련 실험을 위해, 0.4 μM 트랜스웰 삽입물(HTS TRANSWL96, Corning)이 있거나 없는 96웰 U 바닥 플레이트에서 검정을 수행하였다. 기질 세포를 T 및 종양 세포와 조합하거나 트랜스웰 삽입물에 시딩하여 T 및 종양 세포로부터 분리하였다.
IncuCyte® 관련 실험을 위해, 적색 형광 OCI-AML5 세포(OCI-AML5-NucLight Red)와 녹색 HS-5(HS-5-NucLight Green)를 사용하였다. 종양, 기질 및 T 세포를 세척하고 이들 검정을 위해 페놀-레드-무함유 RPMI/10% HI FBS에서 조합하였다. 웰당 적색 및 녹색 물체(적색 OCI-AML5 및 녹색 HS-5를 나타냄)의 이미지를 120시간 동안 6시간마다 IncuCyte® Zoom으로 기록하였다.
차단 실험을 위해, 다음 억제제 및 중화 항체를 사용하였다: Bcl-2 억제제 (HA14-1), 항-인간 CXCR4 (12G5) 및 항-인간 ITGA4/VLA4 (2B4) 항체는 R&D systems (Minneapolis, Minnesota)로부터 구매하였다.
일차 AML 및 MM 환자 샘플을 사용한 생체외 세포독성 검정
30,000 또는 600,000개의 HS-5 세포를 6웰 플레이트의 웰당 밤새 플레이팅하였다. 다음날 아침, 0.5 mg/mL 인간 IgG1 단편이 있는 αMEM+10% FBS에서 각각 3×106 일차 AML 또는 MM PBMC 및 BMMC로 교체하기 전에 배지를 조심스럽게 제거하였다. 다음으로, 항-VLA4 항체(5 ㎍/ml)가 있거나 없는 CD123 × CD3, BCMA × CD3 또는 널 × CD3 이중특이성 항체 (1 ㎍/ml)를 첨가하였다. 72시간 후, CD123+ 아세포 또는 CD138+ MM 형질 세포의 고갈을 유동 세포측정을 통해 모니터링하였다. 추가로, CD8 T 세포의 확장 및 활성화 상태(CD25의 상향 조절)를 평가하였다.
유동 세포측정 및 항체 시약
FACS에 대한 항체는 다음 항-인간 항체를 포함하였다: CD278/ICOS (DX-29), CD4 (SK3), 그란자임 B (GB11) (BD Biosciences에서 구입), CD8 (RPA-T8), 41BB/CD137 (4B4-1), CD25 (BC96), 페르포린 (dG9), Tbet (4b10), PD-1/CD279 (EH12.2H7), TIM3 (F38-2E2), CD33 (WM53), CD38 (HIT2), CD123 (6H6), CD138 (MI15) (BioLegend에서 구입), LAG3 (3DS223H) (eBiosciences에서 구입) 및 LIVE/DEAD Near-IR (Life Technologies).
FACS 분석을 위해, 플레이트를 1,500rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 그 다음, 세포를 DPBS로 세척하고 T 세포 활성화 마커 및 세포독성에 대해 30분 동안 염색하였다. 마지막으로 세포를 세척하고 염색 완충액에 재현탁하였다. 세포내 염색을 위해, 제조사의 지침에 따라 IC 염색 키트(eBiosciences)를 사용하여 세포를 고정하고 약간의 수정(세포내 사이토카인 항체와 함께 인큐베이션하기 전에 투과 완충액으로 4회 세척)과 함께 투과화하였다.
데이터는 FACSCanto II(BD Biosciences) 또는 LSRFortessa((BD Biosciences)에서 획득하였다. 종양 세포 사멸은 위해 전방 산란검출기(FSC) 및 측면 산란검출기(SSC)에 게이팅하여 평가하여 세포 집단, 그 다음 CFSE+ 종양 이벤트, 및 최종적으로 LIVE/DEAD Near-IR을 확인하여, 종양 세포 세포독성을 평가하였다. L/D+ 게이트는 PBS 처리 및 동종형 대조군과 비교한 후 그려졌다. 이러한 대조군은 또한 항체의 비특이적 결합 또는 파급 효과와 관련된 오류를 설명하는 데 도움이 된다. T 세포 활성화는 FSC 및 SSC에서 게이팅하여 세포 집단, CFSE-사건, 살아있는 세포를 확인한 다음, 여러 마커에 대한 양성 염색을 찾아 평가하였다. 죽은 종양 세포의 백분율은 Prism 8을 사용하여 그래프로 표시하고 4개 파라미터 비-선형 회귀 곡선 적합으로 분석하였다. T 세포 활성화 마커의 경우, 다양한 마커의 기하 평균 형광 강도를 FlowJo 소프트웨어를 통해 분석하고 Prism 8을 사용하여 그래프로 표시하였다.
면역블롯팅 및 항체 시약
제조업체의 지침에 따라 Wes 자동화 시스템(ProteinSimple, California, USA)을 사용하여 자동 웨스턴 블롯을 수행하였다. 샘플을 SDS, DTT 및 형광 분자량 표준을 함유하는 5x 샘플 완충액과 혼합하고 95℃에서 5분 동안 가열한 다음, 차단 및 세척 완충액, 항체 용액 및 검출 시약과 함께 스태킹 및 분리 매트릭스가 미리 채워진 플레이트에 로딩하였다. 분석에는 디폴트 설정이 사용되었다. Cell Signaling Technology(Danvers, MA)에서 구입한 다음 항-인간 항체를 사용하여 단백질을 검출하였다: Bcl-2 (#2872), 포스포-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® 토끼 mAb (#4511), 포스포-Akt (Ser473) (D9E) XP® 토끼 mAb (#4060) 및 β-액틴 (D6A8) 토끼 mAb (#8457).
동물
암컷 NSG(NOD 산 감마 또는 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) 마우스(The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)는 대략 6-8주령이고 체중이 20g일 때 사용되었다. 모든 동물은 실험 사용 전 최소 5일 동안 운송 관련 스트레스에 적응하고 회복하도록 하였다. 역삼투(RO) 염소 처리된 물과 방사선 조사 식품(Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010, Lab Diet)은 선택적으로 제공되었으며 동물은 12시간 명암 주기로 유지되었다. 케이지, 베딩(bedding) 및 물병은 사용 전에 고압증기멸균 처리하고 매주 교체하였다. 모든 실험은 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에 따라 수행되었으며 펜실베니아 스프링 하우스에 있는 Janssen R&D의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았다.
결과
BM 기질 세포는 CD3 이중특이성 항체 및 T 세포 매개 세포독성으로부터 AML 및 MM 세포주를 보호한다
BM 틈새는 보호 및 면역 억제 미세환경을 특징으로 한다. BM 기질 세포는 자가 재생, 생존, 분화 및 증식을 포함한 근본적인 조혈 줄기 세포(HSC) 세포 운명 결정을 지배하는 골내막 및 혈관 적소의 주요 세포 구성요소이기 때문에 BM 틈새를 모방하는 데 사용되었다(19, 20). BM 기질 세포는 또한 면역 억제(13, 21)를 매개하는 동시에, 종양 세포에서 다중 생존 및 항-세포자멸 경로를 활성화하여 상이한 유형의 요법에 내성을 갖도록 하는 것으로 기록되어 있다(22). AML 또는 MM 세포주는 BM 기질 세포의 부재 또는 존재 하에 T 세포 및 이중특이성 항체와 함께 공동 배양되었다. CD123 또는 BCMA 및 CD3(도구 항체)을 표적으로 하는 이중특이성 항체를 사용하였다. 이러한 항체의 효능을 입증하는 결합, 사멸 및 T 세포 활성화 데이터는 도 8에 나와 있다. CD123 × CD3 이중특이성 항체를 사용하여, CD123 발현 백혈병 세포주 KG-1의 용량 의존적 사멸이 관찰되었다(도 1a 및 도 1b). 이 사멸은 비-표적화(널) 아암과 함께 CD3 또는 CD123을 발현하는 이중특이성 항체에서는 관찰되지 않았다(도 1a 및 도 1b). MM 세포주 H929를 발현하는 BCMA 및 다른 이중특이성 항체 BCMA × CD3(도 1c 및 도 1d)을 사용할 때 유사한 결과가 관찰되었으며, 특이적 사멸은 널 대조군과 대조적으로 BCMA × CD3에 의해 매개되었다. 기질 세포가 공동 배양에 추가되었을 때, 이중특이성 항체의 고농도에서도 최대 관찰된 세포독성 반응에서 통계적으로 유의한 감소가 관찰되었다(도 1a 내지 도 1d). 또한, 이중특이성 항체의 EC50 값은 기질의 존재 하에 3-5배 더 높았다(도 9a). 이중특이성 항체 활성의 기질 억제는 섬유아세포 기질 세포주(HS-5 및 HS-27a)에만 국한되지 않고 건강한 공여자의 BM에서 유래된 일차 중간엽 기질 세포(MSC)에서도 관찰되었다(도 1a 내지 도 1d). 이중특이성 항체 활성의 억제는 공동 배양물에 존재하는 기질 세포의 수에 따라 결정되었고; 이에 의해 기질 세포가 공동 배양에서 암세포보다 10배 적었을 때 감소된 효능이 여전히 관찰되었다(도 9b). 흥미롭게도, 건강한 공여자의 BM 단핵 세포에서 분류된 CD105+ 내피 세포의 추가로 억제가 관찰되지 않았다(도 1a 내지 도 1d). 이 결과는 모든 기질 세포가 CD3 재유도 이중특이성 항체의 효능에 부정적인 영향을 미치는 것은 아니며 종양-T 세포 공동 배양에서 다른 세포 유형의 단순한 존재가 억제 효과에 기여하지 않는다는 사실을 입증하였다. 이중특이성 항체 활성의 기질 매개 억제는 한 공여자의 T 세포에만 고유한 것이 아니라 여러 공여자의 T 세포에서 관찰되었다(각각 도 1a, 도 1c 및 도 1b, 도 1d에 플롯팅된 다른 공여자의 평균 및 중앙값). 다른 CD123+ AML (MOLM-13 및 OCI-AML5) 및 BCMA+ MM 세포주 (RPMI-8226 및 MM.1S)에서 유사한 결과가 관찰되었기 때문에 이러한 데이터는 하나의 AML 또는 MM 세포주에 특이적이지 않았다(도 9c 및 도 9d). 이 데이터는 기질 세포가 CD3 재유도 이중특이성 항체의 효능과 잠재력에 영향을 미친다는 것을 처음으로 입증한다.
BM 기질 세포는 T 세포 활동을 억제하고 암 세포에서 생존 및 항-세포자멸 경로를 활성화한다
다음으로, 이중특이성 항체 활성의 기질 억제의 근본 메커니즘을 조사하였다. 이를 위해, T 세포의 표현형은 기질 세포의 부재 또는 존재 하에 T 세포-종양 공동 배양 세포독성 검정에서 평가되었다. 기질의 부재 하에 CD123 × CD3 이중특이성 항체로 처리하면 CD8+ T 세포에서 PD1, LAG3 및 TIM3을 포함한 체크포인트 마커의 동시 증가와 함께 CD25, CD137 및 ICOS를 포함한 활성화 마커의 상향 조절이 발생하였다(도 2a). 또한, CD8+ T 세포는 페르포린 및 그랜자임 B와 같은 효과기 단백질의 생산 증가 및 T-bet 발현의 상향 조절에 의해 세포독성 T 림프구(CTL)의 특성을 나타냈다(도 2a). 그러나, 기질 세포가 공동 배양에 존재할 때 T 세포는 활성화, 효과기 및 체크포인트 마커의 발현 감소로 덜 활성화되었다(도 2a). 이러한 결과는 MM 세포주 H929 및 BCMA×CD3 이중특이성 항체뿐만 아니라 다중 T 세포 공여자(도 2a에 플롯팅된 상이한 공여자의 중앙값)에서 관찰되었다 (도 10a). PD1, TIM3 및 LAG3가 T 세포 활성화 반응을 조절하는 억제 단백질로 인식된다는 점을 고려할 때 기질이 있는 경우 T 세포에서 체크포인트 마커의 발현이 감소한 결과는 처음에는 반직관적으로 보일 수 있다. 그러나 이러한 단백질은 T 세포 활성화 시에만 유도되며 나이브(naive) T 세포에는 존재하지 않는다(23-29). 따라서 이러한 데이터가 주어지면, PD1, TIM3 및 LAG3의 상향 조절이 기질 세포의 존재 하에 T 세포에서 감소되고 억제 기질 구획의 존재 하에 T 세포의 덜 활성화된 표현형을 지지한다는 것은 놀라운 일이 아니다. 더욱이, T 세포 증식은 두 이중특이성 항체로 처리한 후 기질의 존재 하에 감소되었다(도 10b).
면역 억제 외에도, 백혈병성 및 골수종 종양 세포에서 다중 생존 촉진 및 항-세포자멸 경로의 기질 매개 활성화가 요법에 대한 내성을 매개하는 추가 메커니즘이 될 수 있는지 여부가 조사되었다(30). 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 및 Akt의 인산화 증가 및 KG-1 또는 HS-5 세포 단독이 아닌 HS-5 기질 세포와 함께 배양된 KG-1 세포에서 Bcl-2의 단백질 발현 증가가 관찰되었다(도 2b). 이러한 데이터는 함께 AML 및 MM 종양 세포가 T 세포의 억제된 활성화에 추가하여 종양 세포에서 내성 경로의 활성화를 수반하는 기질 세포 의존성 메커니즘에 의해 T 세포 매개 사멸을 회피할 수 있음을 시사한다.
다음으로, CD3 재유도의 감소된 효능의 표현형에 대한 T 세포 면역 억제 및 생존촉진 경로의 상향조절의 상대적 기여도를 조사하였다. Bcl-2가 여러 요법(30, 31)으로부터 AML 및 MM 세포의 생존 및 내성에 직접적으로 연루되어 있다는 점을 감안할 때, Bcl-2 억제제 HA14-1을 추가하거나 추가하지 않고 기질의 존재 하에 세포독성 검정을 수행하였다. 억제제는 Bcl-2의 발현을 성공적으로 방지했지만(도 11), CD3 재유도의 기질 매개 억제를 구출하지 못했고(도 2c) T 세포는 덜 활성화된 상태로 유지되었다(도 2d). 이 데이터는 표적 세포에서 Bcl-2의 과발현이 AMG110(EpCAM×CD3 BiTE)의 활성에 최소한의 영향을 미친다는 이전에 발표된 발견을 뒷받침한다(32).
골수 기질 세포는 생체 내에서 CD3 재유도의 효능을 약화시킨다
다음으로, 기질 세포가 생체내 이중특이성 항체-T 세포 매개 세포독성으로부터 종양 세포를 보호할 수 있는지 여부를 조사하였다. 이를 위해, 인간 PBMC를 암컷 NSG 마우스에 정맥내 접종하고, 1주 후, HS-5 골수 기질 세포가 있거나 없는 MOLM-13을 마우스 옆구리에 피하(sc) 이식하였다. 그 다음 마우스는 총 5회의 처리를 위해 매주 2회 종양 세포 이식 후 5일째에 시작하여 CD123 × CD3(8 ㎍/㎏)으로 처리되었다. CD123 × CD3 처리는 PBS 또는 CD3 × 널 대조군과 비교하여 MOLM-13 단독 그룹에서 sc 종양 성장을 유의하게 억제하였다(종양 성장 억제(25일째 TGI)=78%, p<0.0001) (도 3a). 이 항종양 활성은 기질의 존재 하에 현저하게 감소되었고(25일째 TGI = 15%), 이중특이성 항체 처리 MOLM-13 단독 그룹(p<0.0001)과 비교하여 통계적으로 유의하였다(도 3a). 또한, 기질이 있거나 없는 종양에서 CD8+ T 세포의 동일한 침윤이 관찰되었지만(도 3b), 기질의 존재와 상관관계가 있는 T 세포의 활성화 프로파일에는 차이가 있었다(도 3c). 이중특이성 항체 처리된 MOLM-13+HS-5 그룹의 CD8+ T 세포는 MOLM-13 대조군과 비교하여 CD25, PD1 및 그랜자임 B의 손상된 상향조절을 나타내었다 (도 3c). 이러한 결과는 시험관 내 관찰을 뒷받침하며 BM 기질 세포가 T 세포 활성화를 억제함으로써 강력한 CD3 재유도 치료제의 효능을 감소시킨다는 것을 강력하게 시사한다.
기질에 대한 접착은 면역 억제와 암 세포 생존을 매개하는 데 중요하다
기질 세포는 그 중에서도 면역 억제성 매개체 예컨대 IL-10, TGF-β 및 PGE2 또는 성장 인자 예컨대 줄기 세포 인자 (SCF), IL-7, IL-15, CXCL-12를 비롯한 용해성 인자의 분비를 통해 면역 억제를 매개하고 종양 세포를 세포독성으로부터 보호할 수 있다(21, 33). 추가로, 기질 세포는 내성을 유도하는 부착 경로를 통해 종양 세포와 직접 상호작용할 수 있으며(34), 이에 의해 세포-세포 접촉 의존적 방식으로 T 세포 매개 세포독성으로부터 악성 세포를 보호할 수 있다. 세포독성 검정의 시각적 검사는 이중특이성 항체-T 세포 매개 세포독성에 의해 사멸되지 않은 잔류 백혈병성 세포가 기질 세포 주위에 밀접하게 클러스터링되어 있음을 보여주었고(도 4a), 이는 세포-세포 접촉 경로가 암 세포의 기질 매개 보호에 중요한 역할을 할 수 있음을 시사한다. 용해성 대 세포-세포 접촉 의존성 메커니즘을 구별하기 위해, 기질 세포가 종양 및 T 세포로부터 분리된 경우에도 이중특이성 항체-T 세포 매개 용해의 효능을 여전히 억제할 수 있는지 평가하기 위해 시험관내 트랜스웰 검정을 수행하였다. 세포-세포 접촉은 이중특이성 항체-T 세포 재유도된 세포독성으로부터 AML 및 MM 세포주의 기질 보호를 매개하는 데 지배적인 역할을 하는 것으로 관찰되었는데, 이는 기질 세포가 종양 세포로부터 분리될 때 어떠한 억제 효과도 나타내지 않았기 때문이다 (도 4b 및 도 12a). 상이한 공여자(도 4b에 사용된 2개의 다른 T 세포 공여자)로부터의 T 세포에서 유사한 경향이 관찰되었다. 또한, 기질 세포가 트랜스웰 삽입물에 배치되었을 때, T 세포 활성화 및 페르포린, 그란자임 B 및 T-bet의 발현을 억제할 수 없었다(도 4c). 이러한 데이터는 기질 매개 T 세포 억제 및 T 세포 의존성 세포독성으로부터의 보호를 위한 세포-세포 상호작용에 대한 강한 의존성을 입증한다.
시험관 내 및 생체 내 VLA4 차단은 CD3 재유도의 기질 매개 억제를 구제한다
부착 경로를 조사하여 이중특이성 항체 효능의 기질 억제에 중요한 경로를 결정하였다. CXCR4 및 VLA-4는 BM에서 AML/MM-기질 상호작용을 매개하는 문서화된 역할 때문에 중점을 두었다 (34). VLA-4 또는 CXCR4(R&D Systems에서 구입)에 대한 차단 항체를 사용하여, 기질의 존재 하에서 이중특이성 항체 매개 세포독성 반응을 구제하지 못한 CXCR4 억제와 달리 VLA-4 억제는 CD123 × CD3 이중특이성 항체-T 세포 세포독성으로부터 KG-1 및 MOLM-13의 기질 매개 보호를 역전시켰다(50-60%)(도 5a 및 도 12b). 이 효과는 H929 및 BCMA × CD3 이중특이성 항체에서 더욱 두드러졌으며, VLA-4 억제는 기질이 있는 경우에도 세포독성 반응(80-100%)을 회복하였다(도 5b). VLA-4 억제에 따른 증가된 세포독성 반응은 CXCR4 차단 하에서 여전히 억제된 T 세포 활성화 마커 예컨대 그란자임 B 및 CD25의 회복된 발현과 상관관계가 있었다(도 5c 및 도 5d). VLA-4 억제가 있는 T 세포 활성화 마커의 이러한 증가는 처리되지 않은 대응물(HS-5 또는 일차 MSC 기질 세포를 함유하는 공동 배양)과 비교하여 통계적으로도 유의하였다. VLA-4 억제는 또한 Akt 및 PI3K 경로의 인산화를 약화시켰다(도 13).
이전의 생체 내 결과는 HS-5 골수 기질 세포로 MOLM-13 종양을 처리할 때 CD123 × CD3의 효능이 약화된 것으로 나타났다. 항종양 효과가 회복될 수 있는지 결정하기 위해, 항-VLA-4 중화 항체를 MOLM-13-보유 마우스의 치료를 위해 CD123 × CD3과 조합하였다. 이전 관찰과 유사하게, CD123 × CD3(8 ㎍/㎏)은 PBS 처리 대조군과 비교하여 24일째 TGI를 52.3%(p≤0.0001) 촉진한 반면, 동일한 용량의 이중특이성 항체는 HS-5 세포가 공동 주사된 MOLM-13 종양에 대해 최소한의 효과를 나타내었다 (23일째 TGI =7.6%)(도 6a). 그러나, 항-VLA-4 항체와 CD123 × CD3의 동시 첨가는 48.4%(p=0.0001)의 HS-5 세포를 갖는 MOLM-13 종양의 23일째 TGI을 증가시켰다(도 6a). VLA-4 차단 및 이중특이성 항체 치료를 받은 기질이 있는 MOLM-13 종양의 증가된 TGI는 페르포린, CD25 및 PD1의 발현을 포함한 개선된 CD8+ T 세포 활성화 및 효과기 반응을 동반하였다(도 6b). 증가된 TGI 및 증강된 CD8+ T 세포 반응은 VLA-4 차단 및 이중특이성 항체 치료의 조합을 받은 종양+HS-5 보유 마우스로 제한되었으며 마우스가 단독으로 어느 하나의 제제를 투여받은 경우에는 없었다. 이러한 결과는 CD3 재유도 제제와 함께 VLA-4의 동시 차단이 기질 세포에 의해 매개되는 억제 효과를 극복할 수 있고 우수한 항종양 반응을 매개할 수 있음을 강력하게 시사한다.
생체 외 일차 환자 배양에서 VLA-4를 차단하면 기질의 존재에도 불구하고 CD3 재유도의 효능이 회복된다
그 다음 결과는 일차 냉동/해동 AML 및 MM 샘플로 검증되었다. 일차 종양 세포가 사이토카인 또는 기질 지지체의 외인성 보충 없이 배양물에서 유지하기 위한 도전이 될 수 있다는 점을 감안할 때, 다양한 수의 기질 세포를 사용하여 AML/MM 샘플의 생체외 배양을 수행하였다(도 14 및 도 15에 표시된 대표적인 게이팅 전략). 놀랍게도, 낮은 기질: 종양 비율 (0.01× HS-5)을 가지며 배양물이 널 대조군으로 처리된 경우가 아닌 CD123 × CD3 및 BCMA × CD3 이중특이성 항체 처리된 배양물에서 CD123+ CD33+ AML 아세포 뿐만 아니라 BCMA+ CD138+ MM 종양 세포의 주목할 만하고 선택적인 사멸이 관찰되었다(도 7a 및 도 7c). CD123 × CD3 사멸 효과는 기질:종양 비율이 높은 배양에서 최소였다(0.2x HS-5, 도 7a 및 도 7c). 추가로, 일차 종양 세포를 제거하는 효과적인 세포독성 반응은 기질 함량이 더 적은 이중특이성 항체 처리 배양으로 제한된 CD8+ T 세포의 확장 또는 활성화로 이어졌다(도 7b 및 도 7d). 마지막으로, CD123 × CD3 또는 BCMA × CD3과 조합한 중화된 VLA-4를 사용하는 경우, 배양물에서 더 높은 기질 함량에도 불구하고 종양 세포의 우수한 사멸 및 이중특이성 항체의 효능 회복이 관찰되었다(도 7a 내지 도 7d). 이중특이성 항체 처리와 함께 VLA-4를 차단하면 기질 함량이 더 높은 배양물에서 CD8+ T 세포의 확장/활성화도 회복되었다(도 7b 및 도 7c). 이러한 결과는 3명의 다른 환자(도 7a 및 도 7b의 AML 환자 및 도 7c 및 도 7d의 MM 환자)에서 관찰되었으며 이전의 시험관내 및 생체내 발견을 강화한다. VLA-4 억제 자체는 AML 환자 샘플 중 하나에서 기질:종양 비율이 높은 배양물에서 CD123+ 아세포의 고갈을 증가시켰지만, 이 효과는 광범위하게 관찰되지 않았다(데이터 미도시). 이러한 데이터는 실제로 VLA-4 차단과 CD3 재유도 이중특이성 항체 치료제와의 조합이 기질 세포의 억제 효과를 극복할 수 있고 임상에서 그러한 조합을 탐구하는 근거를 제공할 수 있음을 보여준다.
논의
BM 틈새의 복잡성은 조혈 줄기 세포의 유지 및 조절에 기여하는 분자 및 세포 인자를 이해하는 데 상당한 발전으로 최근 몇 년 동안 진정으로 인정되었다. 혈액 악성 종양의 맥락에서 암 줄기 세포는 여러 항암 요법에 대한 내성과 보호를 위해 동일한 요인을 이용할 수 있으므로 잔류 질병을 최소화할 수 있다.
본 명세서의 결과는 처음으로 효과적인 T 세포 치료제가 BM 미세환경의 구성요소에 의해 방해될 수 있음을 보여준다. 구체적으로, BM 기질 세포의 존재 하에, AML 및 MM 암 세포가 T 세포 및 이중특이성 항체에 의해 매개되는 세포독성으로부터 보호되는 것으로 관찰되었다. 암 세포의 사멸 감소는 둔감한 T 세포 활성화 및 효과기 반응과 관련이 있다. 구체적으로 VLA-4 경로에 의해 매개되는 세포-세포 상호작용을 차단하면 T 세포 면역 억제가 역전되어 AML 및 MM 암 세포의 사멸이 증가하였다. 따라서 결과는 BM 미세환경이 CD3 재유도와 같은 강력하고 효과적인 면역 요법의 맥락에서도 고려해야 하는 강력한 인자임을 재확인한다. 결과는 또한 MRD의 더 우수하고 완전한 제거를 위해 CD3 재유도 치료제와의 접착을 방해하는 제제를 조합하는 것에 대한 근거와 증거를 제공한다.
VLA-4를 차단하면 이중특이성 T 세포 매개 세포독성 및 면역억제의 효능에 대한 기질 억제가 역전된다는 것이 입증되었지만, 이 조절의 기초가 되는 메커니즘은 기술되지 않은 채로 남아 있다. VLA-4는 T 세포에서 발현되며 백혈구의 부착 및 경내피 이동을 매개하는 것 외에도 T 림프구의 활성화를 초래하는 공동자극 신호를 제공할 수 있다(35-38). MS 승인을 받은 인간화 단일클론 IgG4 VLA-4 차단 항체인 나탈리주맙을 사용한 다발성 경화증 환자의 임상 연구는 약물이 말초 혈액에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수를 증가시킬 뿐만 아니라(39), 더 많은 IL-2, TNF-α, IFN-γ 및 IL-17의 CD4+ 및 CD8+ T 세포 생성을 자극한다는 것을 보여주었다(40-43). 결과는 더 완만했지만, 나탈리주맙이 건강한 공여자로부터 생체외에서 전파된 활성화된 일차 인간 CD4+ T 세포에서 IL-2, IFN-γ 및 IL-17 발현의 가벼운 상향조절을 유도한 시험관 내에서 유사한 결과가 관찰되었으며, 이는 나탈리주맙이 직접적으로 T 세포에 작용함을 시시한다(42). 상기 연구는 CD4+ T 세포에 초점을 맞추었고; 따라서 시험관 내에서 CD8+ T 세포에 대해서도 동일하게 관찰되는지 여부는 조사해야 한다. VLA-4 차단의 효과를 설명하는 또 다른 메커니즘은 종양과 기질 세포 사이의 상호작용을 차단하면 기질 주변의 종양 세포 클러스터링을 방해하여 T 세포가 종양 세포에 접근할 수 있게 하여 CD3 재유도의 더 나은 효능을 유도할 수 있다는 것이다. 마지막으로, VLA-4 억제는 AML 및 MM 세포에 직접적으로 작용하여 종양 세포 자체에서 주요 생존 촉진 경로의 발현 및 상향 조절을 방지하거나(34) 항염증성 사이토카인의 종양 세포 생산을 변경함으로써 화학요법 및 표적 요법에 더 취약하게 만드는 것으로 나타났다.
본 연구는 BM 미세환경에 중점을 두었지만, 고형 종양에서도 유사한 현상이 발생할 가능성이 있다. 고형 종양은 세포외 기질 분자의 복잡하고 조밀한 네트워크뿐만 아니라 면역억제성일 수 있는 다양한 기질 세포 유형을 함유한다.
결과는 CD3 재유도 요법과 함께 BM 미세환경을 표적으로 하는 것이 중요함을 지적한다. 또한, 결과는 VLA-4가 잠재적으로 CD3 재유도에 대한 반응을 예측하는 바이오마커로 사용될 수 있고 아마도 이러한 면역 요법에 대한 환자 선택을 안내하는 데 사용될 수 있음을 입증한다.
참고문헌
본 명세서에 인용된 모든 간행물은 전체적으로 참고로 포함된다.
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SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN BIOTECH INC. <120> COMPOSITIONS COMPRISING A T CELL REDIRECTION THERAPEUTIC AND A VLA-4 ADHESION PATHWAY INHIBITOR <130> JBI6312WOPCT1 <150> 63/026885 <151> 2020-05-19 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 1 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Lys Asn 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Met Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg His Asp Gly Gly Ala Ser Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu 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Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 7 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Gly Ser Thr Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys 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Claims (23)

  1. T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제를 포함하는 약제학적 조성물로서, T 세포 재유도 치료제는 T 세포 표면 항원에 면역특이적으로 결합하는 제1 결합 영역 및 종양 관련 항원(TAA)에 면역특이적으로 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, T 세포 재유도 치료제는 항체 또는 그의 항원 결합 단편인, 약제학적 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 표면 항원은 CD3, CD2, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28, CD40L, CD44, CD137, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 및 NKG2C로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, T 세포 표면 항원은 CD3인, 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, TAA는 BCMA, CD123, GPRC5D, CD33, CD19, PSMA, TMEFF2, CD20, CD22, CD25, CD52, ROR1, HM1.24, CD38, 및 SLAMF7로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, T 세포 재유도 치료제는 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 BCMA×CD3 이중특이성 항체인, 약제학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서, BCMA×CD3 이중특이성 항체는 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 약제학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, HC1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  10. 제8항에 있어서, HC1은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  11. 제6항에 있어서, T 세포 재유도 치료제는 CD123에 면역특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부위 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 부위를 갖는 CD123×CD3 이중특이성 항체인, 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서, CD123×CD3 이중특이성 항체는 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하고, HC1 및 LC1 쌍은 제1 항원 결합 부위를 형성하고 HC2 및 LC2 쌍은 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, HC1은 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LC1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, LC2는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, VLA-4 부착 경로 억제제는 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편인, 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 항-VLA-4 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 단일클론성 항체, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, 및 F(v) 단편, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 및 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 구성된 이량체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, VLA-4 부착 경로 억제제는 VLA-4 길항제인, 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서, VLA-4 길항제는 BIO1211, TCS2314, BIO5192, 및 TR14035로 이루어진 군에서 선택되는, 약제학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 암 세포에 적용하는 것을 포함하는, 암 세포와 기질 세포 사이의 세포-세포 접촉을 파괴하는 것을 포함하는 암 세포의 사멸 방법.
  19. 제18항에 있어서, 암은 혈액 악성종양 또는 고형 종양인, 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, T 세포 재유도 치료제 및 VLA-4 부착 경로 억제제는 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, VLA-4 부착 경로 억제제는 T 세포 재유도 치료제 전에 투여되는, 방법.
  22. 제20항에 있어서, VLA-4 부착 경로 억제제는 T 세포 재유도 치료제의 투여 후에 투여되는, 방법.
  23. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 키트.
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