JP2023527164A - Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びｖｌａ－４接着経路阻害剤を含む組成物 - Google Patents

Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びｖｌａ－４接着経路阻害剤を含む組成物 Download PDF

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Abstract

Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む、医薬組成物、並びにがん細胞を死滅させるためのその使用が、本明細書に開示される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年５月１９日出願の米国仮出願第６３／０２６，８８５号の利益を主張するものであり、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（発明の分野）
本開示は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬を利用した組成物及びがん細胞の死滅に関する。
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年４月９日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、ＪＢＩ６３１２ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられており、サイズは２９ＫＢである。
いくつかの治療選択肢にもかかわらず、現在、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia、ＡＭＬ）及び多発性骨髄腫（multiple myeloma、ＭＭ）の治療法は存在しない。骨髄（bone marrow、ＢＭ）中の白血病芽球（ＡＭＬ）又は形質細胞（ＭＭ）の存在が５％以下であるとして定義される血液学的完全寛解（complete hematologic remission、ＣＲ）を高い率（５０％～８０％）で達成した後でさえ（１、２）、ＡＭＬ又はＭＭを有する患者の大部分が再発する（３～５）。再発は、少数のがん幹細胞（cancer stem cell、ＣＳＣ）、又は他の悪性前駆細胞が除去されず、療法後でさえ存続する、微小残存病変（minimal residual disease、ＭＲＤ）に関連付けられている（６）。再発を予防し、ＡＭＬ及びＭＭの治療法を見つけるためには、ＭＲＤを排除するためのより良好な戦略を見つける必要がある。
造血幹細胞（hematopoietic stem cell、ＨＳＣ）と同様に、ＡＭＬ及びＭＭにおけるＣＳＣがＢＭニッチに存在し、選択的に存続する（７、８）。ＢＭニッチは、可溶性成長因子の分泌及びＣＳＣを保護する細胞間相互作用を介して、特殊な微小環境を提供する（９）。更に、ＢＭニッチは、免疫抑制性であり、正常な造血及び免疫細胞生成を可能にするために、定常状態で免疫特権の部位であると理解される（１０）。ＢＭニッチのこれらの態様は、化学療法、標的小分子阻害剤、及び抗体ベースの療法を含むいくつかの抗がん薬に対する耐性をもたらし、その有効性を最小限に抑えた（１１～１４）。
Ｔ細胞が腫瘍細胞を特異的に溶解し、サイトカインを分泌してがんに対する免疫を動員及び支持する能力により、それらは治療法の魅力的な選択肢となる。とりわけ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（bispecific T-cell engager、ＢｉＴＥ；小さい二重特異性生物製剤）、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）、及び二重特異性抗体などのいくつかのアプローチが、この戦略を利用している（１５）。ＢｉＴＥ及び抗体媒介性リダイレクトは、腫瘍細胞上の特定のエピトープ及びＴ細胞上のＣＤ３を関与させることによって、Ｔ細胞を腫瘍細胞に交差結合し、Ｔ細胞の活性化、及び最終的に腫瘍細胞を死滅させるパーフォリン及びグランザイムの分泌をもたらす。これらのＣＤ３リダイレクト療法は、急性リンパ芽球性リンパ腫（acute lymphoblastic lymphoma、ＡＬＬ）に対するＣＤ１９×ＣＤ３ ＢｉＴＥ（ブリナツモマブ）の承認とともに、臨床における有効な抗がん戦略として確認されている（１６）。しかしながら、ＢＭニッチの免疫抑制及び保護の性質は、潜在的に、Ｔ細胞リダイレクト療法に大きなハードルをもたらす。
例えば、本明細書に示されるように、特異的腫瘍抗原（ＣＤ１２３及びＢＣＭＡ）並びにＣＤ３を標的とする二重特異性抗体を使用して、ＢＭ間質細胞とのＡＭＬ又はＭＭ細胞株の共培養が、インビトロで、二重特異性Ｔ細胞媒介性溶解からがん細胞を有意に保護したことが観察された。インビボで、ヒト化異種移植ＡＭＬモデルにおけるヒトＢＭ間質細胞の存在が、二重特異性抗体処理で観察された腫瘍成長阻害（tumor growth inhibition、ＴＧＩ）を弱めたとき、同様の結果が観察された。低下したＣＤ３リダイレクト細胞傷害性は、低減したＴ細胞エフェクター応答と相関し、それによって二重特異性抗体の活性の喪失を説明するためのメカニズムを提供した。
Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む、医薬組成物であって、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、Ｔ細胞表面抗原に対する特異性を有する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（tumor associated antigen、ＴＡＡ）に対する特異性を有する第２の結合領域とを含む、医薬組成物が本明細書に提供される。
医薬組成物の一実施形態では、組成物は、医薬的に許容される担体を更に含む。
医薬組成物の更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、抗体又はその抗原結合断片である。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ１３７、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、第２の抗原結合部位を形成する。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＨＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、第２の抗原結合部位を形成する。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＨＣ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４アンタゴニストである。
医薬組成物のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択されるＶＬＡ－４アンタゴニストである。
治療有効量の上記に提供される医薬組成物を投与することを含む、がん細胞を死滅させる方法が、本明細書に更に提供される。
本方法の更なる実施形態では、がんは、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である。
本方法のなお更なる実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、同時に又は連続的に投与される。
本方法のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の前に投与される。
本方法のなお更なる実施形態では、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される。
上記に提供される医薬組成物を含むキットが、本明細書に更に提供される。
前述の概要、並びに本出願の詳細な説明及び実施形態は、添付される特許請求の範囲及び図面と併せて読まれることで、よりよく理解されるであろう。ただし、本発明は、本明細書に開示される正確な記述に限定されるものでないことは理解されるべきである。
間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ ＫＧ１（Ａ、Ｂ）又はＭＭ Ｈ９２９細胞株（Ｃ、Ｄ）と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３（Ａ、Ｂ）又はＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｃ、Ｄ）を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。左側の用量漸増グラフ（Ａ、Ｃ）は、平均±標準偏差（ＳＤ）で示される。右側の散布図（Ｂ、Ｄ）は、二重特異性抗体の最高濃度のデータを示す（範囲を伴う中央値）。データは、３つ又は４つ以上の実験を表す。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ ＫＧ１（Ａ、Ｂ）又はＭＭ Ｈ９２９細胞株（Ｃ、Ｄ）と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３（Ａ、Ｂ）又はＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｃ、Ｄ）を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。左側の用量漸増グラフ（Ａ、Ｃ）は、平均±標準偏差（ＳＤ）で示される。右側の散布図（Ｂ、Ｄ）は、二重特異性抗体の最高濃度のデータを示す（範囲を伴う中央値）。データは、３つ又は４つ以上の実験を表す。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ ＫＧ１（Ａ、Ｂ）又はＭＭ Ｈ９２９細胞株（Ｃ、Ｄ）と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３（Ａ、Ｂ）又はＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｃ、Ｄ）を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。左側の用量漸増グラフ（Ａ、Ｃ）は、平均±標準偏差（ＳＤ）で示される。右側の散布図（Ｂ、Ｄ）は、二重特異性抗体の最高濃度のデータを示す（範囲を伴う中央値）。データは、３つ又は４つ以上の実験を表す。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ ＫＧ１（Ａ、Ｂ）又はＭＭ Ｈ９２９細胞株（Ｃ、Ｄ）と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３（Ａ、Ｂ）又はＢＣＭＡ×ＣＤ３（Ｃ、Ｄ）を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。左側の用量漸増グラフ（Ａ、Ｃ）は、平均±標準偏差（ＳＤ）で示される。右側の散布図（Ｂ、Ｄ）は、二重特異性抗体の最高濃度のデータを示す（範囲を伴う中央値）。データは、３つ又は４つ以上の実験を表す。＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がＴ細胞機能を抑制し、腫瘍細胞中のシグナル伝達経路を上方調節し、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥされた標識ＫＧ－１細胞と２：１の比で培養した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析を、培養物への３３ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３の添加後に実施した。幾何平均蛍光強度を、４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）単独又はＨＳ－５間質細胞株の存在下のいずれかで４８時間培養されたＫＧ－１細胞中のＰＩ３Ｋ及びＡｋｔの活性化（リン酸化）、並びにＫＧ－１細胞中のＢｃｌ－２の発現の免疫ブロッティング分析。（Ｃ）Ａと同様であるが、ここでは全ての培養物を、Ｂｃｌ－２ｉあり又はなしで処理し、死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｄ）Ａ及びＣと同様に、Ｔ細胞の活性化状態を、間質の非存在下又は存在下で、及びＢｃｌ－２ｉでの処理あり又はなしで、腫瘍及びＴ細胞培養物中で評価した。示される全てのデータは、３つ又は４つ以上の実験を表し、ＳＤを伴う平均（用量漸増曲線）又は範囲を伴う中央値（散布図）として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がＴ細胞機能を抑制し、腫瘍細胞中のシグナル伝達経路を上方調節し、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥされた標識ＫＧ－１細胞と２：１の比で培養した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析を、培養物への３３ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３の添加後に実施した。幾何平均蛍光強度を、４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）単独又はＨＳ－５間質細胞株の存在下のいずれかで４８時間培養されたＫＧ－１細胞中のＰＩ３Ｋ及びＡｋｔの活性化（リン酸化）、並びにＫＧ－１細胞中のＢｃｌ－２の発現の免疫ブロッティング分析。（Ｃ）Ａと同様であるが、ここでは全ての培養物を、Ｂｃｌ－２ｉあり又はなしで処理し、死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｄ）Ａ及びＣと同様に、Ｔ細胞の活性化状態を、間質の非存在下又は存在下で、及びＢｃｌ－２ｉでの処理あり又はなしで、腫瘍及びＴ細胞培養物中で評価した。示される全てのデータは、３つ又は４つ以上の実験を表し、ＳＤを伴う平均（用量漸増曲線）又は範囲を伴う中央値（散布図）として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がＴ細胞機能を抑制し、腫瘍細胞中のシグナル伝達経路を上方調節し、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥされた標識ＫＧ－１細胞と２：１の比で培養した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析を、培養物への３３ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３の添加後に実施した。幾何平均蛍光強度を、４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）単独又はＨＳ－５間質細胞株の存在下のいずれかで４８時間培養されたＫＧ－１細胞中のＰＩ３Ｋ及びＡｋｔの活性化（リン酸化）、並びにＫＧ－１細胞中のＢｃｌ－２の発現の免疫ブロッティング分析。（Ｃ）Ａと同様であるが、ここでは全ての培養物を、Ｂｃｌ－２ｉあり又はなしで処理し、死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｄ）Ａ及びＣと同様に、Ｔ細胞の活性化状態を、間質の非存在下又は存在下で、及びＢｃｌ－２ｉでの処理あり又はなしで、腫瘍及びＴ細胞培養物中で評価した。示される全てのデータは、３つ又は４つ以上の実験を表し、ＳＤを伴う平均（用量漸増曲線）又は範囲を伴う中央値（散布図）として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がＴ細胞機能を抑制し、腫瘍細胞中のシグナル伝達経路を上方調節し、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞；１ウェル当たり２０，０００個の細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥされた標識ＫＧ－１細胞と２：１の比で培養した。ＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析を、培養物への３３ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３の添加後に実施した。幾何平均蛍光強度を、４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）単独又はＨＳ－５間質細胞株の存在下のいずれかで４８時間培養されたＫＧ－１細胞中のＰＩ３Ｋ及びＡｋｔの活性化（リン酸化）、並びにＫＧ－１細胞中のＢｃｌ－２の発現の免疫ブロッティング分析。（Ｃ）Ａと同様であるが、ここでは全ての培養物を、Ｂｃｌ－２ｉあり又はなしで処理し、死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｄ）Ａ及びＣと同様に、Ｔ細胞の活性化状態を、間質の非存在下又は存在下で、及びＢｃｌ－２ｉでの処理あり又はなしで、腫瘍及びＴ細胞培養物中で評価した。示される全てのデータは、３つ又は４つ以上の実験を表し、ＳＤを伴う平均（用量漸増曲線）又は範囲を伴う中央値（散布図）として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がインビボでのＣＤ３リダイレクトの有効性に影響を与えることを示す。ＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ及びＨＳ－５骨髄間質細胞を有するＭＯＬＭ－１３（５：１）を、研究０日目に、ｈｕＰＢＭＣ注射された雌ＮＳＧマウスに皮下移植した。マウスを、腫瘍細胞移植後５日目から週２回、合計５回の処理にわたって、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＰＢＳ処理群を対照として含んだ。（Ａ）異なる時点での全ての群についての平均腫瘍体積測定値。（Ｂ）研究終了時（２４日目）のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤のパーセンテージ。（Ｃ）２４日目のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析。示される全てのデータは、２つの独立した実験を表し、平均値±標準誤差（ＳＥＭ）（Ａ）又は範囲を伴う中央値（Ｂ及びＣ）のいずれかとして表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がインビボでのＣＤ３リダイレクトの有効性に影響を与えることを示す。ＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ及びＨＳ－５骨髄間質細胞を有するＭＯＬＭ－１３（５：１）を、研究０日目に、ｈｕＰＢＭＣ注射された雌ＮＳＧマウスに皮下移植した。マウスを、腫瘍細胞移植後５日目から週２回、合計５回の処理にわたって、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＰＢＳ処理群を対照として含んだ。（Ａ）異なる時点での全ての群についての平均腫瘍体積測定値。（Ｂ）研究終了時（２４日目）のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤のパーセンテージ。（Ｃ）２４日目のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析。示される全てのデータは、２つの独立した実験を表し、平均値±標準誤差（ＳＥＭ）（Ａ）又は範囲を伴う中央値（Ｂ及びＣ）のいずれかとして表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 間質細胞がインビボでのＣＤ３リダイレクトの有効性に影響を与えることを示す。ＭＯＬＭ－１３ ＡＭＬ及びＨＳ－５骨髄間質細胞を有するＭＯＬＭ－１３（５：１）を、研究０日目に、ｈｕＰＢＭＣ注射された雌ＮＳＧマウスに皮下移植した。マウスを、腫瘍細胞移植後５日目から週２回、合計５回の処理にわたって、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＰＢＳ処理群を対照として含んだ。（Ａ）異なる時点での全ての群についての平均腫瘍体積測定値。（Ｂ）研究終了時（２４日目）のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞浸潤のパーセンテージ。（Ｃ）２４日目のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析。示される全てのデータは、２つの独立した実験を表し、平均値±標準誤差（ＳＥＭ）（Ａ）又は範囲を伴う中央値（Ｂ及びＣ）のいずれかとして表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 細胞間接触が、間質細胞の免疫抑制性及び保護的表現型を媒介する際に主要な役割を果たすことを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ標識したＨＳ－５細胞（１ウェル当たり２０，０００個の細胞）あり又はなしで、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｒｅｄ標識したＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（２０，０００個）と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で７２時間処理した。代表的な画像は、１１ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体の添加後７２時間での培養物のスナップショットを示す。（Ｂ）Ａと同じであるが、ここでは、Ｔ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。これらのアッセイでは、間質細胞を一緒に培養したか、又はトランスウェル中で腫瘍及びＴ細胞から分離した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。ここに示される１つの実験からのデータは、３つの独立した生物学的反復を表す。データは、ここでは、平均値±ＳＤとして示される。（Ｃ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞に対する活性化及びエフェクターマーカーのフロー分析。データは、範囲を伴う中央値として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 細胞間接触が、間質細胞の免疫抑制性及び保護的表現型を媒介する際に主要な役割を果たすことを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ標識したＨＳ－５細胞（１ウェル当たり２０，０００個の細胞）あり又はなしで、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｒｅｄ標識したＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（２０，０００個）と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で７２時間処理した。代表的な画像は、１１ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体の添加後７２時間での培養物のスナップショットを示す。（Ｂ）Ａと同じであるが、ここでは、Ｔ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。これらのアッセイでは、間質細胞を一緒に培養したか、又はトランスウェル中で腫瘍及びＴ細胞から分離した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。ここに示される１つの実験からのデータは、３つの独立した生物学的反復を表す。データは、ここでは、平均値±ＳＤとして示される。（Ｃ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞に対する活性化及びエフェクターマーカーのフロー分析。データは、範囲を伴う中央値として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 細胞間接触が、間質細胞の免疫抑制性及び保護的表現型を媒介する際に主要な役割を果たすことを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞（４０，０００個の細胞／ウェル）を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ標識したＨＳ－５細胞（１ウェル当たり２０，０００個の細胞）あり又はなしで、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＮｕｃＬｉｇｈｔ（登録商標）Ｒｅｄ標識したＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（２０，０００個）と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で７２時間処理した。代表的な画像は、１１ｎＭのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体の添加後７２時間での培養物のスナップショットを示す。（Ｂ）Ａと同じであるが、ここでは、Ｔ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。これらのアッセイでは、間質細胞を一緒に培養したか、又はトランスウェル中で腫瘍及びＴ細胞から分離した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。ここに示される１つの実験からのデータは、３つの独立した生物学的反復を表す。データは、ここでは、平均値±ＳＤとして示される。（Ｃ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞に対する活性化及びエフェクターマーカーのフロー分析。データは、範囲を伴う中央値として示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビトロでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、ＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。（Ａ、Ｂ）死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｃ、Ｄ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞上のグランザイムＢ及びＣＤ２５発現のフロー分析。データは、３つ又は４つ以上の実験を表し、平均±ＳＤ（Ａ、Ｂ）及び範囲を伴う中央値（Ｃ、Ｄ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビトロでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、ＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。（Ａ、Ｂ）死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｃ、Ｄ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞上のグランザイムＢ及びＣＤ２５発現のフロー分析。データは、３つ又は４つ以上の実験を表し、平均±ＳＤ（Ａ、Ｂ）及び範囲を伴う中央値（Ｃ、Ｄ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビトロでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、ＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。（Ａ、Ｂ）死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｃ、Ｄ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞上のグランザイムＢ及びＣＤ２５発現のフロー分析。データは、３つ又は４つ以上の実験を表し、平均±ＳＤ（Ａ、Ｂ）及び範囲を伴う中央値（Ｃ、Ｄ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビトロでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ）あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識した腫瘍細胞と培養し、ＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。（Ａ、Ｂ）死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｃ、Ｄ）死滅アッセイにおけるＣＤ８＋ Ｔ細胞上のグランザイムＢ及びＣＤ２５発現のフロー分析。データは、３つ又は４つ以上の実験を表し、平均±ＳＤ（Ａ、Ｂ）及び範囲を伴う中央値（Ｃ、Ｄ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビボでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３及びＨＳ－５骨髄間質細胞を有するＭＯＬＭ－１３（５：１）を、研究０日目に、ｈｕＰＢＭＣ注射された雌ＮＳＧマウスに皮下移植した。マウスを、単独又はＶＬＡ－４に対する中和抗体（３ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせのいずれかで、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＰＢＳ処理群を対照として含んだ。（Ａ）異なる時点での全ての群についての平均腫瘍体積測定値。（Ｂ）２３日目のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析。示される全てのデータは、２つの独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭ（Ａ）及び範囲を伴う中央値（Ｂ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、インビボでのＣＤ３リダイレクト細胞傷害性からの腫瘍細胞の間質媒介性免疫抑制及び保護を逆転させることを示す。ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１３及びＨＳ－５骨髄間質細胞を有するＭＯＬＭ－１３（５：１）を、研究０日目に、ｈｕＰＢＭＣ注射された雌ＮＳＧマウスに皮下移植した。マウスを、単独又はＶＬＡ－４に対する中和抗体（３ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせのいずれかで、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＰＢＳ処理群を対照として含んだ。（Ａ）異なる時点での全ての群についての平均腫瘍体積測定値。（Ｂ）２３日目のマウスの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞中の活性化、エフェクター、及びチェックポイント阻害マーカーの分析。示される全てのデータは、２つの独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭ（Ａ）及び範囲を伴う中央値（Ｂ）として表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＮＳ、統計的に有意ではない。 ＶＬＡ－４阻害が、エクスビボ一次ＡＭＬ及びＭＭ培養物中のＣＤ３リダイレクトの有効性を助けることを示す。３つの一次ＡＭＬ試料からのＰＢＭＣ（Ａ、Ｂ）又は３つのＭＭ試料からの３つのＢＭＭＣ（Ｃ、Ｄ）を、ＨＳ－５の存在下で、及びＶＬＡ－４に対する中和抗体あり／なしで、１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体と７２時間インキュベートした。範囲を伴う中央値は、細胞傷害性（Ａ及びＣ）又はＣＤ８ Ｔ細胞増殖（Ｂ）／活性化（Ｄ）に関して、３つ全ての一次試料について示される。＊ｐ＜０．０５。 ＶＬＡ－４阻害が、エクスビボ一次ＡＭＬ及びＭＭ培養物中のＣＤ３リダイレクトの有効性を助けることを示す。３つの一次ＡＭＬ試料からのＰＢＭＣ（Ａ、Ｂ）又は３つのＭＭ試料からの３つのＢＭＭＣ（Ｃ、Ｄ）を、ＨＳ－５の存在下で、及びＶＬＡ－４に対する中和抗体あり／なしで、１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体と７２時間インキュベートした。範囲を伴う中央値は、細胞傷害性（Ａ及びＣ）又はＣＤ８ Ｔ細胞増殖（Ｂ）／活性化（Ｄ）に関して、３つ全ての一次試料について示される。＊ｐ＜０．０５。 ＶＬＡ－４阻害が、エクスビボ一次ＡＭＬ及びＭＭ培養物中のＣＤ３リダイレクトの有効性を助けることを示す。３つの一次ＡＭＬ試料からのＰＢＭＣ（Ａ、Ｂ）又は３つのＭＭ試料からの３つのＢＭＭＣ（Ｃ、Ｄ）を、ＨＳ－５の存在下で、及びＶＬＡ－４に対する中和抗体あり／なしで、１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体と７２時間インキュベートした。範囲を伴う中央値は、細胞傷害性（Ａ及びＣ）又はＣＤ８ Ｔ細胞増殖（Ｂ）／活性化（Ｄ）に関して、３つ全ての一次試料について示される。＊ｐ＜０．０５。 ＶＬＡ－４阻害が、エクスビボ一次ＡＭＬ及びＭＭ培養物中のＣＤ３リダイレクトの有効性を助けることを示す。３つの一次ＡＭＬ試料からのＰＢＭＣ（Ａ、Ｂ）又は３つのＭＭ試料からの３つのＢＭＭＣ（Ｃ、Ｄ）を、ＨＳ－５の存在下で、及びＶＬＡ－４に対する中和抗体あり／なしで、１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体と７２時間インキュベートした。範囲を伴う中央値は、細胞傷害性（Ａ及びＣ）又はＣＤ８ Ｔ細胞増殖（Ｂ）／活性化（Ｄ）に関して、３つ全ての一次試料について示される。＊ｐ＜０．０５。 ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３が、腫瘍細胞に結合し、並びに死滅及びＴ細胞活性化を媒介することを示す。（Ａ）ＣＤ１２３＋又はＢＣＭＡ＋細胞株を様々な濃度の二重特異性抗体で染色して、表面結合プロファイルを特徴付けた。二重特異性抗体の結合を、マウス抗ヒトＩｇＧ４で染色することによって検出した。（Ｂ）Ｔ細胞活性化（ＣＤ２５上方調節及びグランザイムｂの産生によって測定）、並びにＣＤ１２３＋又はＢＣＭＡ＋腫瘍細胞株の細胞傷害性を媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力。 ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３が、腫瘍細胞に結合し、並びに死滅及びＴ細胞活性化を媒介することを示す。（Ａ）ＣＤ１２３＋又はＢＣＭＡ＋細胞株を様々な濃度の二重特異性抗体で染色して、表面結合プロファイルを特徴付けた。二重特異性抗体の結合を、マウス抗ヒトＩｇＧ４で染色することによって検出した。（Ｂ）Ｔ細胞活性化（ＣＤ２５上方調節及びグランザイムｂの産生によって測定）、並びにＣＤ１２３＋又はＢＣＭＡ＋腫瘍細胞株の細胞傷害性を媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ又はＭＭ細胞株と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ａ）ＡＭＬ細胞株ＫＧ－１及びＭＭ細胞株Ｈ９２９の細胞傷害性をそれぞれ媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３のＥＣ５０値の要約を示す表。（Ｂ）Ａと同様の実験設定であるが、ここでは、増加する量のＨＳ－５細胞をＫＧ－１－Ｔ細胞培養物に添加した。（Ｃ）間質の非存在下又は存在下で、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ５及びＭＯＬＭ－１３の細胞傷害性を媒介するＣＤ１２３×ＣＤ３の能力を評価した。（Ｄ）間質の非存在下又は存在下で、ＭＭ細胞株ＲＰＭＩ－８２２６及びＭＭ．１Ｓの細胞傷害性を媒介するＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力を評価した。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ又はＭＭ細胞株と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ａ）ＡＭＬ細胞株ＫＧ－１及びＭＭ細胞株Ｈ９２９の細胞傷害性をそれぞれ媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３のＥＣ５０値の要約を示す表。（Ｂ）Ａと同様の実験設定であるが、ここでは、増加する量のＨＳ－５細胞をＫＧ－１－Ｔ細胞培養物に添加した。（Ｃ）間質の非存在下又は存在下で、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ５及びＭＯＬＭ－１３の細胞傷害性を媒介するＣＤ１２３×ＣＤ３の能力を評価した。（Ｄ）間質の非存在下又は存在下で、ＭＭ細胞株ＲＰＭＩ－８２２６及びＭＭ．１Ｓの細胞傷害性を媒介するＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力を評価した。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ又はＭＭ細胞株と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ａ）ＡＭＬ細胞株ＫＧ－１及びＭＭ細胞株Ｈ９２９の細胞傷害性をそれぞれ媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３のＥＣ５０値の要約を示す表。（Ｂ）Ａと同様の実験設定であるが、ここでは、増加する量のＨＳ－５細胞をＫＧ－１－Ｔ細胞培養物に添加した。（Ｃ）間質の非存在下又は存在下で、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ５及びＭＯＬＭ－１３の細胞傷害性を媒介するＣＤ１２３×ＣＤ３の能力を評価した。（Ｄ）間質の非存在下又は存在下で、ＭＭ細胞株ＲＰＭＩ－８２２６及びＭＭ．１Ｓの細胞傷害性を媒介するＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力を評価した。 間質細胞の存在が、Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護することを示す。ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＡＭＬ又はＭＭ細胞株と２：１の比で培養した。様々な濃度のＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ａ）ＡＭＬ細胞株ＫＧ－１及びＭＭ細胞株Ｈ９２９の細胞傷害性をそれぞれ媒介する、ＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３のＥＣ５０値の要約を示す表。（Ｂ）Ａと同様の実験設定であるが、ここでは、増加する量のＨＳ－５細胞をＫＧ－１－Ｔ細胞培養物に添加した。（Ｃ）間質の非存在下又は存在下で、ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ５及びＭＯＬＭ－１３の細胞傷害性を媒介するＣＤ１２３×ＣＤ３の能力を評価した。（Ｄ）間質の非存在下又は存在下で、ＭＭ細胞株ＲＰＭＩ－８２２６及びＭＭ．１Ｓの細胞傷害性を媒介するＢＣＭＡ×ＣＤ３の能力を評価した。 間質細胞の存在がＴ細胞活性化及び増殖を弱めることを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＭＭ細胞株Ｈ９２９と２：１の比で培養した。様々な濃度のＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。Ｔ細胞活性化マーカーの幾何平均蛍光強度を、二重特異性抗体を用いた処理後４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）Ａと同様であるが、ここでは、ＣＦＳＥ標識したＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、非標識腫瘍細胞株と２：１の比で培養した。Ｔ細胞増殖を示す、ＣＦＳＥ希釈プロファイルのオーバーレイを示すＦＡＣＳ分析（ｎｕｌｌ×ＣＤ３対照が影付きで示される一方で、処理群は黒色ヒストグラムで示される）。 間質細胞の存在がＴ細胞活性化及び増殖を弱めることを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、ＨＳ－２７ａ、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、ＣＦＳＥ標識したＭＭ細胞株Ｈ９２９と２：１の比で培養した。様々な濃度のＢＣＭＡ×ＣＤ３を、培養物に４８時間添加した。Ｔ細胞活性化マーカーの幾何平均蛍光強度を、二重特異性抗体を用いた処理後４８時間でフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）Ａと同様であるが、ここでは、ＣＦＳＥ標識したＴ細胞を、間質細胞（ＨＳ－５、一次ＭＳＣ、又はＣＤ１０５＋内皮細胞）の存在下又は非存在下で、非標識腫瘍細胞株と２：１の比で培養した。Ｔ細胞増殖を示す、ＣＦＳＥ希釈プロファイルのオーバーレイを示すＦＡＣＳ分析（ｎｕｌｌ×ＣＤ３対照が影付きで示される一方で、処理群は黒色ヒストグラムで示される）。 Ｂｃｌ－２阻害剤を用いた処理がＢｃｌ２の発現を遮断することを示す。ＨＳ５間質細胞株の存在下で培養し、Ｂｃｌ－２ｉあり又はなしで４８時間処理した、ＫＧ－１細胞中のＢｃｌ－２の発現の免疫ブロッティング分析。 細胞間接触及びＶＬＡ－４接着経路が、ＭＯＬＭ－１３細胞中の細胞傷害性の間質媒介性抑制において役割を果たすことを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞を、ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ細胞あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識したＭＯＬＭ－１３細胞と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。これらのアッセイでは、間質細胞を一緒に培養したか、又はトランスウェル中で腫瘍及びＴ細胞から分離した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）Ａと同様であるが、ここでは、全ての細胞を一緒に、及びＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で培養したときの細胞傷害性を評価した。 細胞間接触及びＶＬＡ－４接着経路が、ＭＯＬＭ－１３細胞中の細胞傷害性の間質媒介性抑制において役割を果たすことを示す。（Ａ）ヒトＴ細胞を、ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ細胞あり又はなしで、ＣＦＳＥ標識したＭＯＬＭ－１３細胞と培養し、様々な濃度の二重特異性抗体で４８時間処理した。これらのアッセイでは、間質細胞を一緒に培養したか、又はトランスウェル中で腫瘍及びＴ細胞から分離した。死ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量化した。（Ｂ）Ａと同様であるが、ここでは、全ての細胞を一緒に、及びＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４に対する中和抗体の存在下又は非存在下で培養したときの細胞傷害性を評価した。 ＶＬＡ－４中和抗体を用いた処理がＡＫＴ及びＰＩ３Ｋ経路のリン酸化を低減することを示す。ＨＳ５間質細胞株の存在下で培養し、抗ＶＬＡ４中和抗体あり又はなしで４８時間処理した、ＫＧ－１細胞中のｐＡｋｔ及びｐＰＩ３Ｋの発現の免疫ブロッティング分析。 ＡＭＬ一次患者試料のゲーティング戦略を示す。エクスビボ実験のゲーティング戦略を、一次ＡＭＬ患者試料を用いて行った。対応するアイソタイプ対照を横に示す。（Ａ）目的の細胞を単離するために、最初に前方散乱（forward scatter、ＦＳＣ）及び側方散乱（side scatter、ＳＳＣ）をゲーティングすることによって、ＣＤ１２３＋芽球を特定した。次いで、生ＣＤ４５＋細胞をゲーティングし、その後、ＣＤ３８＋ ＣＤ３３＋芽球をゲーティングした。次に、ＣＤ１２３を発現する芽球を様々な条件で定量化した。（Ｂ）試料中のＴ細胞増殖を定量化するために、ＳＳＣ／ＦＳＣを有する目的の細胞を最初にゲーティングし、次いで、生ＣＤ４５＋を特定した。次いで、ＣＤ４＋ＣＤ８－及びＣＤ８＋ＣＤ４－ Ｔ細胞をＣＤ４及びＣＤ８染色に基づいて特定した。 ＡＭＬ一次患者試料のゲーティング戦略を示す。エクスビボ実験のゲーティング戦略を、一次ＡＭＬ患者試料を用いて行った。対応するアイソタイプ対照を横に示す。（Ａ）目的の細胞を単離するために、最初に前方散乱（forward scatter、ＦＳＣ）及び側方散乱（side scatter、ＳＳＣ）をゲーティングすることによって、ＣＤ１２３＋芽球を特定した。次いで、生ＣＤ４５＋細胞をゲーティングし、その後、ＣＤ３８＋ ＣＤ３３＋芽球をゲーティングした。次に、ＣＤ１２３を発現する芽球を様々な条件で定量化した。（Ｂ）試料中のＴ細胞増殖を定量化するために、ＳＳＣ／ＦＳＣを有する目的の細胞を最初にゲーティングし、次いで、生ＣＤ４５＋を特定した。次いで、ＣＤ４＋ＣＤ８－及びＣＤ８＋ＣＤ４－ Ｔ細胞をＣＤ４及びＣＤ８染色に基づいて特定した。 ＭＭ一次患者試料のゲーティング戦略を示す。エクスビボ実験のゲーティング戦略を、一次ＭＭ患者試料を用いて行った。対応するアイソタイプ対照を横に示す。（Ａ）目的の細胞を単離するために、最初にＦＳＣ／ＳＳＣをゲーティングすることによって、ＣＤ１３８＋ ＭＭ細胞を特定した。次いで、生ＣＤ１３８＋細胞を様々な条件で定量化した。（Ｂ）試料中のＴ細胞活性化を定量化するために、ＳＳＣ／ＦＳＣを有するリンパ球を最初にゲーティングし、次いで、生ＣＤ１３８－細胞を特定した。次いで、ＣＤ８＋ Ｔ細胞上のＣＤ２５の発現を測定した。 ＭＭ一次患者試料のゲーティング戦略を示す。エクスビボ実験のゲーティング戦略を、一次ＭＭ患者試料を用いて行った。対応するアイソタイプ対照を横に示す。（Ａ）目的の細胞を単離するために、最初にＦＳＣ／ＳＳＣをゲーティングすることによって、ＣＤ１３８＋ ＭＭ細胞を特定した。次いで、生ＣＤ１３８＋細胞を様々な条件で定量化した。（Ｂ）試料中のＴ細胞活性化を定量化するために、ＳＳＣ／ＦＳＣを有するリンパ球を最初にゲーティングし、次いで、生ＣＤ１３８－細胞を特定した。次いで、ＣＤ８＋ Ｔ細胞上のＣＤ２５の発現を測定した。
背景技術において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
別途記載のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識するか、又は確認することができよう。かかる均等物は、本発明によって包含されることが意図される。
本明細書で使用するとき、「備える（comprises）、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」という用語、又はこれらの任意の他の変形形態は、述べられている整数又は整数群を含むことが意図されるが、これら以外の他の整数又は整数群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置に本来存在しない他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって充足される。
本明細書で使用するとき、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用するとき、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。
本明細書で使用するとき、「からなる（consists of）」という用語、又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含するが、追加の整数又は整数群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されることはないことを示す。
本明細書で使用するとき、「から本質的になる（consists essentially of）」という用語、又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用するとき、任意の列挙された整数又は整数群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された整数又は整数群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照されたい。
本明細書で使用するとき、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書で使用するとき、「哺乳動物」という用語は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなど、より好ましくはヒトが挙げられる。
「右」、「左」、「下方」、及び「上方」という語は、参照される図面内での方向を指定する。
好ましい本発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定又は他の系統的誤差、製造公差など）を使用すると、最小有効数字は変化しない変形形態を含むであろう。
本明細書で使用するとき、「単離（された）」という用語は、生物学的構成成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの構成成分が天然に生じる生物の他の生物学的構成成分（すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質）から実質的に分離されたか、これらの他の成分とは別に生成されたか、又はこれらの他の成分から精製されたものであることを意味する。このため、「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、その組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離される。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。
本明細書で使用するとき、「ポリヌクレオチド」という用語は、同義的に、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、これらに限定されるものではないが、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられる。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ又は２つ以上の改変された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により改変された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「改変された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に改変された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。
本明細書で使用するとき、「ベクター」という用語は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのことである。
本明細書で使用するとき、「宿主細胞」という用語は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれのタイプの細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本発明の核酸分子をトランスフェクト又は形質導入した細胞である。別の一実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクト又は形質導入された細胞の子孫又は潜在的な子孫である。ある細胞の子孫は、例えば、後続の世代で生じ得る変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞との同一性を有していない場合がある。
本明細書で使用するとき、「発現」という用語は、遺伝子産物の生合成を指す。かかる用語には、遺伝子のＲＮＡへの転写が含まれる。また、かかる用語には、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳も含まれ、全ての天然に生じる、転写後及び翻訳後修飾も更に含まれる。
本明細書で使用するとき、「抗体」という用語は、広義の意味を有し、モノクローナル抗体（マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含む）、抗原結合断片、二重特異性、三重特異性、四重特異性などの多重特異性抗体、二量体、四量体、又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された形態を含む免疫グロブリン分子を含む。「完全長抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された、２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えばＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称される超可変領域に更に分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。どのような脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てることができる。
本明細書で使用するとき、「モノクローナル抗体」という用語は、抗体分子の実質的に均質な集団（すなわち、集団を含む個々の抗体が、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去、あるいはアミノ酸異性化若しくはアミド分解、メチオニン酸化、又はアスパラギン若しくはグルタミンアミド分解などの翻訳後修飾などの、可能な周知の変化を除いて同一である）から入手される抗体を指す。モノクローナル抗体は、典型的には、１つの抗原性エピトープに結合する。二重特異性モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内で不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性であってよく、又は、二重特異性などの多重特異性であってよく、一価、二価、又は多価であってよい。
本明細書で使用するとき、「ヒト抗体」という用語は、ヒト対象に投与されたときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を指す。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、当該定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ ＭｏｌＢｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
本明細書で使用するとき、「ヒト化抗体」という用語は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。
「単離抗体」という用語は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない抗体を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された抗体を包含する。
本明細書で使用するとき、「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子の一部分を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素により入手可能なポリペプチド、又は遺伝子組換えされたポリペプチドであってよく、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの、抗体のＣＤＲを再現するアミノ酸残基からなる最小認識単位、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３が挙げられる。ＶＨ及びＶＬドメインは互いに、合成リンカーを介して結合し、様々なタイプの一本鎖抗体設計を形成することができ、ＶＨ及びＶＬドメインが、別個の一本鎖抗体構築物により発現される場合では、ＶＨ／ＶＬドメインが分子内、又は分子間で対形成し、一価の抗原結合部位、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができ、これらは、例えば国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、及び同第１９９２／０１０４７号に記載されている。
「二重特異性」という用語は、２つの異なる抗原、又は同じ抗原内の２つの異なるエピトープに特異的に結合する抗体を指す。二重特異性抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えば、Ｍａｃａｃａ ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（例えば、カニクイザル（cynomolgus、ｃｙｎｏ））若しくはＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓなどの他の種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有し得るか、あるいは２つ又は３つ以上の異なる抗原間で共有されているエピトープに結合し得る。
本明細書で使用するとき、「多重特異性」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原、又は同じ抗原内の少なくとも２つの異なるエピトープに特異的に結合する抗体を指す。多重特異性抗体は、例えば、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの異なる抗原、又は同じ抗原内の異なるエピトープに結合し得る。
抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的結合」若しくは「免疫特異的結合」、又はそれらの派生語は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされるドメインを介して、分子の混合集団を含有するサンプル中の他の分子に優先的に結合することなく、目的のタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイによって測定された場合、約１×１０－８Ｍ未満のＫｄで、同種抗原に結合する。
「がん」という用語は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞分裂及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「がん」又は「がん組織」は、腫瘍を含み得る。
本明細書で使用するとき、「組み合わせ」という用語は、２つ又は３つ以上の治療薬が、混合物中で一緒に、単独の薬剤として同時に、又は単独の薬剤として任意の順番で連続的に対象に投与されることを意味する。
本明細書で使用するとき、「向上させる」又は「向上した」という用語は、対照分子と比較したときの試験分子、又は１つ若しくは２つ以上の対照分子と比較したときの試験分子の組み合わせの１つ又は２つ以上の機能の向上を指す。測定され得る例示的な機能は、腫瘍細胞死滅、Ｔ細胞活性化、相対的若しくは絶対的Ｔ細胞数、Ｆｃ媒介性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／若しくはＡＤＣＰ）、又はＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）若しくはＦｃＲｎへの結合である。「向上した」とは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、若しくはそれ以上の向上、又は統計的に有意な向上であることができる。
本明細書で使用するとき、「変異」という用語は、参照配列と比較したときのポリペプチド又はポリヌクレオチド配列における操作された変化又は自然発生的変化を指す。変更は、１つ又は２つ以上のアミノ酸又はポリヌクレオチドの置換、挿入、又は欠失であってもよい。
本明細書で使用するとき、「非固定組み合わせ」という用語は、異なる実体として、特定の中断時間の制限なしに同時、併行的、又は連続的のいずれかで投与されるＴ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤の別々の医薬組成物を指し、ここで、そのような投与は、対象の体内で２つの化合物の有効なレベルを提供する。
本明細書で使用するとき、「医薬組成物」という用語は、有効成分及び医薬的に許容される担体を含む組成物を指す。
「医薬的に許容される担体」又は「賦形剤」という用語は、対象に対して毒性のない、活性成分以外の医薬組成物中の成分を指す。
本明細書で使用するとき、「組換え」という用語は、異なる供給源由来のセグメントが結合されて組換えＤＮＡ、抗体、又はタンパク質を産生するときに、組換え手段によって調製、発現、作製、又は単離されるＤＮＡ、抗体、及び他のタンパク質を指す。
本明細書で使用するとき、「低減する」又は「低減された」という用語は、対照分子と比較したときの試験分子、又は１つ若しくは２つ以上の対照分子と比較したときの試験分子の組み合わせの１つ又は２つ以上の機能の低減を指す。測定され得る例示的な機能は、腫瘍細胞死滅、Ｔ細胞活性化、相対的若しくは絶対的Ｔ細胞数、Ｆｃ媒介性エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／若しくはＡＤＣＰ）、又はＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）若しくはＦｃＲｎへの結合である。「低減した」は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、若しくはそれ以上の低減、又は統計的に有意な向上であり得る。
本明細書で使用するとき、「難治性」という用語は、外科的介入に対して修正可能ではなく、初期には療法に対して応答しないがんを指す。
本明細書で使用するとき、「再発性」という用語は、治療に応答したが、その後再発するがんを指す。
本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物などの全ての脊椎動物を含む。記載されている場合を除き、「患者」及び「対象」という用語は、互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、所望の治療結果を得るための、必要な用量及び期間での有効量を指す。治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を誘発する治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって変動し得る。有効な治療薬、又は治療薬の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の改善された健康が挙げられる。
本明細書で使用するとき、「治療する」、又は「治療」という用語は、治療的処置、及び予防的（prophylactic）若しくは予防的（preventative）手段の両方を意味し、目的は、望ましくない生理学的変化又は障害を予防する、又は減速する（減少させる）ことである。有益な又は所望の臨床結果としては、検出可能であろうと又は検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であろうと又は全体的であろうと）が挙げられる。「治療」はまた、対象が治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長させることを意味し得る。処置を要する者には、既に状態若しくは疾患を有している者、及び、状態若しくは疾患を有しやすい者、又は状態若しくは疾患を予防しようとする者が含まれる。
本明細書で使用するとき、「腫瘍細胞」又は「がん細胞」という用語は、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する、インビボ、エクスビボ、又は組織培養のいずれかにおけるがん性、前がん性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発がん物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／がんは、ヌードマウスなどの好適な動物宿主、インビトロ、インビボ、及びエクスビボにおける形態学的変化、細胞の不死化、異常な成長制御、病巣の形成、増殖、悪性腫瘍、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、腫瘍成長によって例示される。
Ｔ細胞リダイレクト治療薬
本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬（本出願全体を通して、「Ｔ細胞リダイレクト二重特異性抗体」又は「二重特異性抗体」とも称される）は、２つ又は３つ以上の結合領域を含有する分子であり、結合領域のうちの１つは、標的細胞又は組織上の細胞表面抗原（腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）など）に特異的に結合し、分子の第２の結合領域は、Ｔ細胞表面抗原（ＣＤ３など）に特異的に結合する。この二重／多重標的結合能力は、Ｔ細胞を標的細胞又は組織に動員して、標的細胞又は組織の根絶をもたらす。
本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、抗体、抗体由来タンパク質、又は例えば、抗原結合部位を示す組換えタンパク質であってもよい。一実施形態では、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、二重特異性抗体であり、「全」抗体、例えば、全ＩｇＧ又はＩｇＧ様分子、及び小さい組換え形式、例えば、タンデム一本鎖可変断片分子（ｔａＦｖ）、ダイアボディ（Ｄｂ）、一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、並びにこれらの様々な他の誘導体を包含する（様々な二重特異性抗体形式を示す図２を含むＢｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２によって記載されるような二重特異性抗体形式、Ｗｅｉｄｌｅ Ｕ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０：１－１８、特に、様々な二重特異性抗体形式を示す図１、及び様々な二重特異性抗体形式を示す図３を含むＣｈａｎ，Ａ．Ｃ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．（２０１０）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕ １０：３０１－３１６を参照されたい）。二重特異性抗体形式の例としては、クアドローマ、化学的に結合されたＦａｂ（断片抗原結合）、及びＢｉＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、トリオマブ、ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマ）、多重特異性アンチカリンプラットフォーム（Ｐｉｅｒｉｓ）、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、タンデム一本鎖Ｆｖ断片、ＴａｎｄＡｂ、三重特異性Ａｂ（Ａｆｆｉｍｅｄ）（１０５～１１０ｋＤａ）、Ｄａｒｔ（ｄｕａｌ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ、二重親和性再標的化、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）、二重特異性Ｘｍａｂ（Ｘｅｎｃｏｒ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（Ｂｉｔｅ、Ａｍｇｅｎ、５５ｋＤａ）、トリプルボディ、トライボディ＝Ｆａｂ－ｓｃＦｖ融合タンパク質（ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏｌａｂｓ）多官能性組換え抗体誘導体（１１０ｋＤａ）、デュオボディプラットフォーム（Ｇｅｎｍａｂ）、ドックアンドロックプラットフォーム、ノブイントゥーホール（Knob into hole、ＫＩＨ）プラットフォーム、ヒト化二重特異性ＩｇＧ抗体（ＲＥＧＮ１９７９）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、Ｍａｂ２二重特異性抗体（Ｆ－Ｓｔａｒ）、ＤＶＤ－Ｉｇ＝二重可変ドメイン免疫グロブリン（Ａｂｂｖｉｅ）、カッパ－ラムダボディ、四価二重特異性タンデムＩｇ、及びＣｒｏｓｓＭａｂを含む群から選択され得る。
更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホール集合、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、トリオマブ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、及び直交Ｆａｂを含む、二重特異性ＩｇＧ様抗体（ＢｓＩｇＧ）から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦＶ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、及びＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）を含む追加の抗原結合部分を有する、ＩｇＧ付加抗体から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ナノボディ、ナノボディ－ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃ－ダイアボディ－ＣＨ３、ダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びイントラボディを含む、二重特異性抗体断片から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ドックアンドロック、ＩｍｍＴＡＣ、ＨＳＡｂｏｄｙ、ｓｃダイアボディ－ＨＡＳ、及びタンデムｓｃＦｖ－Ｔｏｘｉｎを含む、二重特異性融合タンパク質から選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＩｇＧ－ＩｇＧ、Ｃｏｖ－Ｘボディ、及びｓｃＦｖ１－ＰＥＧ－ｓｃＦｖ２を含む、二重特異性抗体コンジュゲートから選択され得る。これらの二重特異性抗体形式は、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び記載される。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、任意の免疫グロブリンクラス（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）及びサブクラス（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４など）に基づき得る。態様では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、通常、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含むＩｇＧ様形式（ＩｇＧに基づき、（「ＩｇＧタイプ」とも称される）を有し得る。ＩｇＧ様形式を有する抗体の例としては、クアドローマ及び様々なＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式を含み（Ｂｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２；図２Ａ～Ｅ）、２つの異なるハイブリドーマの融合によって生成されるクアドローマが好ましい。ＩｇＧクラス内で、二重特異性抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラスに基づき得る。
なお更なる実施形態では、本明細書で使用される二重特異性抗体は、ＩｇＧ様抗体形式であり、これは例えば、ハイブリッドハイブリドーマ（クアドローマ）、共通軽鎖を含むノブイントゥーホール、様々なＩｇＧ－ｓｃＦｖ形式、様々なｓｃＦｖ－ＩｇＧ形式、ツーインワンＩｇＧ、二重ＶドメインＩｇＧ、ＩｇＧ－Ｖ、及びＶ－ＩｇＧを含み、これらは、例えば、Ｃｈａｎ，Ａ．Ｃ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．（２０１０）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕ １０：３０１－３１６の図３ｃに示され、当該論文に記載される。更なる例示的な二重特異性ＩｇＧ様抗体形式としては、例えば、ＤＡＦ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＩｇＧ－ｄｓｓｃＦｖ、ＤＶＤ、ＩｇＧ－ｄｓＦＶ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、及びＦｖ２－Ｆｃが挙げられ、これらは、Ｗｅｉｄｌｅ Ｕ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ １０：１－１８の図１Ａに示され、当該論文に記載される。なお更なる例示的な二重特異性ＩｇＧ様抗体形式としては、ＤＡＦ（ツーインワン）、ＤＡＦ（フォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール集合、電荷対、Ｆａｂアーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、トリオマブ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、κλボディ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦＶ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、及びＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ Ｃ．，Ｚｈａｉ Ｑ．ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ Ｐ．Ｊ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７：９５－１０６、特に、図１及び対応する説明、例えば、ｐ．９５～１０１に図示及び説明されるような）が挙げられる。
例えば、二重特異性抗体は、３つの異なる方法：（ｉ）化学的架橋を伴う化学的コンジュゲーション、（ｉｉ）２つの異なるハイブリドーマ細胞株の融合、又は（ｉｉｉ）組換えＤＮＡ技術を伴う遺伝的アプローチによって産生され得る。２つの異なるハイブリドーマの融合は、二重特異性分子を含む不均一な抗体集団を分泌するハイブリッド－ハイブリドーマ（又は「クアドローマ」）を産生する。代替的なアプローチは、２つの異なるｍＡｂ及び／又はより小さい抗体断片の化学的コンジュゲーションを含んだ。２つの異なる抗体又は抗体断片を連結するための酸化再会合戦略は、複数の天然ジスルフィド結合の再酸化中の副反応の存在に起因して非効率的であることがわかった。化学的コンジュゲーションのための現在の方法は、ホモ又はヘテロ二官能性架橋試薬の使用に焦点を当てている。組換えＤＮＡ技術は、遺伝子の人工操作を通して二重特異性抗体の最大範囲をもたらし、二重特異性抗体生成のための最も多様なアプローチを表す（過去２０年で４５個の形式、Ｂｙｒｎｅ Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（１１）：６２１－６３２を参照されたい）。
特に、そのような組換えＤＮＡ技術を使用することによって、更なる多重特異性抗体も近年出現している。「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上のパラトープ、及び２つ又は３つ以上の異なるエピトープに結合する能力を有するタンパク質を指す。したがって、「多重特異性抗体」という用語は、上記で定義されたような二重特異性抗体を含むが、典型的には、特に３つ又は４つ以上の異なるエピトープに結合するタンパク質、例えば、抗体、足場、すなわち、３つ又は４つ以上のパラトープを有する抗体も含む。特に３つ又は４つ以上のパラトープを有する、そのような多重特異性タンパク質は、典型的には、組換えＤＮＡ技術によって達成される。本発明の文脈において、抗体はまた、特に３つ以上の特異性、したがって、３つ以上のパラトープも有し得、これは、少なくとも２つのパラトープ、例えば、標的細胞に対して１つ、及びＴ細胞に対してもう１つが、本発明に従って必要とされるためである。したがって、本発明に従って使用される抗体は、２つのパラトープに加えて、特に更なる特異性に関連して更なるパラトープを有し得る。したがって、本発明はまた、多重特異性抗体を含む。したがって、本発明は、二重特異性抗体に限定されないが、本明細書では特に、最小要件を表す二重特異性抗体に言及されることが理解される。したがって、二重特異性抗体について本明細書で述べられることは、多重特異性抗体にも適用され得る。
上記で定義された二重特異性抗体及び多重特異性抗体は、疾患プロセスにおいて重要な役割を果たす標的細胞に対してエフェクター細胞をリダイレクトすることができる。特に、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト特異性抗体は、例えば、Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）複合体に結合し、例えば腫瘍細胞などの標的細胞にＴ細胞を「リダイレクトする」ことができる。この目的で、本明細書で使用されるそのような二重特異性抗体は、典型的には、少なくとも１つの特異性、例えば、Ｔ細胞、好ましくはＴ細胞表面抗原、例えば、ＣＤ３に特異的である、Ｔ細胞を動員するための少なくとも１つのパラトープ、及び少なくとも１つの他の特異性、例えば、腫瘍細胞、好ましくは腫瘍細胞上のＴＡＡに特異的である、Ｔ細胞を腫瘍細胞に方向付けるための少なくとも１つのパラトープを有する。Ｔ細胞リダイレクト二重特異性抗体による腫瘍細胞へのＴ細胞のそのような「リダイレクト」は、典型的には、腫瘍細胞のＴ細胞媒介性細胞死滅をもたらす。
一実施形態では、本明細書で使用されるＴ細胞リダイレクト治療薬は、Ｔ細胞表面抗原に対する特異性を有する第１の結合領域と、腫瘍細胞上のＴＡＡに対する特異性を有する第２の結合領域と、を含む。
更なる実施形態では、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ１３７、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃから選択され得る。又は、Ｔ細胞表面抗原は、ＣＤ３である。
なお更なる実施形態では、ＴＡＡは、Ｂ細胞成熟抗原（B-cell maturation antigen、ＢＣＭＡ）、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ１０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＲＯＲ１、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ３、ＨＭ１．２４、ＳＬＡＭＦ７、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３、ＣＤ１３５）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（chondroitin sulfate proteoglycan 4、ＣＳＰＧ４、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、上皮成長因子受容体（epidermal growth factor receptor、ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、ＩＧＦＲ、ＩＬ３Ｒ、線維芽細胞活性化タンパク質（fibroblast activating protein、ＦＡＰ）、ＣＤＣＰ１、Ｄｅｒｌｉｎ１、テネイシン、ｆｒｉｚｚｌｅｄ １－１０、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ／ＦＬＫ１）、ＶＥＧＦＲ３（ＦＬＴ４、ＣＤ３０９）、ＰＤＧＦＲ－アルファ（ＣＤ１４０ａ）、ＰＤＧＦＲ－ベータ（ＣＤ１４０ｂ）、エンドグリン、ＣＬＥＣ１４、Ｔｅｍ１－８、又はＴｉｅ２から選択され得る。腫瘍細胞上の更なる例示的なＴＡＡとしては、Ａ３３、ＣＡＭＰＡＴＨ－１（ＣＤｗ５２）、がん胎児性抗原（Carcinoembryonic antigen、ＣＥＡ）、カルボアンヒドラーゼＩＸ（ＭＮ／ＣＡ ＩＸ）、ｄｅ２－７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ、Ｅｐ－ＣＡＭ、葉酸結合タンパク質、Ｇ２５０、ｃ－Ｋｉｔ（ＣＤ１１７）、ＣＳＦ１Ｒ（ＣＤ１１５）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＩＧＦＲ、ＩＬ－２受容体、ＩＬ３Ｒ、ＭＣＳＰ（melanoma-associated cell surface chondroitin sulphate proteoglycane、黒色腫関連細胞表面コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、Ｍｕｃ－１、前立腺幹細胞抗原（prostate stem cell antigen、ＰＳＣＡ）、前立腺特異的抗原（prostate specific antigen、ＰＳＡ）、ｈＫ２、ＴＡＧ－７２、又は腫瘍細胞新生抗原が挙げられる。又は、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７から選択され得る。又は、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ若しくはＣＤ１２３から選択され得る。
一実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＢＣＭＡ＋ ＭＭ細胞及びＣＤ３ Ｔ細胞に免疫特異的に結合する、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＷＯ２００７／１１７６００、ＷＯ２００９／１３２０５８、ＷＯ２０１２／０６６０５８、ＷＯ２０１２／１４３４９８、ＷＯ２０１３／０７２４０６、ＷＯ２０１３／０７２４１５、ＷＯ２０１４／１２２１４４、及びＵＳ１０，０７２，０８８（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものから選択され得る。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＵＳ１０，０７２，０８８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるもののような二重特異性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）抗体である。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。
一実施形態では、Ｔ細胞リダイレクト治療薬は、ＣＤ１２３＋ ＡＭＬ細胞及びＣＤ３ Ｔ細胞に免疫特異的に結合する、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である。ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＵＳ９，８５０，３１０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるもののような二重特異性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）抗体であってもよい。一実施形態では、ＣＤ１２３×ＣＤ３抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。
配列番号１
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＤＳＩＳＫＮＳＹＹＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＭＹＹＳＧＳＴＹＹＮＳＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＧＡＳＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号２
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＭＤＡＣＷＹＱＱＲＰＧＱＳＰＶＶＶＩＹＱＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＡＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＧＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号３
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号４
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号５
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号６
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＧＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号７
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＤＰＳＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＤＧＳＴＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号８
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＤＹＧＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＹＮＡＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号１０
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ＶＬＡ－４接着経路阻害剤
α４β１と呼ばれることも知られている）最晩期抗原－４（ＶＬＡ－４）は、細胞表面受容体のβ１インテグリンファミリーのメンバーである。ＶＬＡ－４は、α４鎖及びβ１鎖を含有し、細胞間相互作用に関与する。その発現は、主にリンパ球及び骨髄細胞に制限される。それは、細胞接着において重要な役割を果たす。研究はまた、ＶＬＡ－４がＢＭ中のＡＭＬ／ＭＭ－間質相互作用を媒介する際に重要な役割を果たすことを示している。血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１）（骨芽細胞及び内皮細胞によって発現）並びにフィブロネクチン（細胞外マトリックスの構成成分）は、ＶＬＡ－４の２つのリガンドである。
本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができる任意の分子であってもよい。
例えば、本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片などの抗ＶＬＡ－４抗体又は抗ＶＬＡ－４抗体から調製されたＶＬＡ－４結合断片；重鎖単量体又は二量体；軽鎖単量体又は二量体であってもよく、１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体も、本明細書で企図される。そのような抗体断片は、化学的方法によって、例えば、ペプシン若しくはパパインなどのプロテアーゼでインタクトな抗体を切断することによって、又は組換えＤＮＡ技術を介して、例えば、切断された重鎖及び／若しくは軽鎖遺伝子で形質転換された宿主細胞を使用することによって産生され得る。重鎖及び軽鎖単量体は、同様に、インタクトな抗体をジチオトレイトール若しくはβ－メルカプトエタノールなどの還元剤で処理することによって、あるいは所望の重鎖若しくは軽鎖のいずれか若しくは両方をコードするＤＮＡで形質転換された宿主細胞、又はモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を使用することによって産生され得る。
ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができる任意の好適な抗ＶＬＡ－４抗体又はＶＬＡ－４結合断片が、本明細書で使用され得、これには、ナタリズマブ、並びに米国特許第６，６０２，５０３号及び米国特許出願公開第２０１４／０１６１７９４（Ａ１）号（参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるものが含まれるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、本明細書で使用されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＬＡ－４媒介性接着経路を遮断することができるＶＬＡ－４アンタゴニストであってもよい。本明細書で使用される例示的なＶＬＡ－４アンタゴニストとしては、Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製のＶＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５）が挙げられるが、これらに限定されない。
ＶＣＡＭ－１及びフィブロネクチンが、ＶＬＡ－４のリガンドであるため、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤は、ＶＣＡＭ－１又はフィブロネクチンのアンタゴニスト（抗体を含む）も含み得る。
医薬組成物
上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物が、本明細書に更に開示される。本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、宿主細胞、及び／又は遺伝子操作された免疫細胞と、それらを含む組成物はまた、本明細書で言及される治療用途のための薬剤の製造において有用である。特定の実施形態では、医薬組成物は、上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、医薬的に許容される担体と、を含む別々の医薬組成物である。他の実施形態では、医薬組成物は、別々の組成物ではなく、医薬組成物は、上記に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、上記に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、医薬的に許容される担体と、を含む。
本明細書で使用するとき、「担体」という用語は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知の他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書で使用するとき、「医薬的に許容される担体」という用語は、本発明による組成物の効果にも本発明による組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮すると、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、宿主細胞、及び／又は遺伝子操作された免疫細胞の医薬組成物における使用に好適な、任意の医薬的に許容される担体を、本発明で使用できる。
医薬的に許容される担体を有する医薬的活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）及びそれ以降の任意の改訂版）にあるように、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ又は２つ以上の医薬的に許容される担体が、本発明の医薬組成物を配合する際に使用され得る。
本開示の一実施形態では、医薬組成物は、液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含んでいてよい。
一実施形態では、医薬組成物は、例えば注射デバイス（例えば、注射器又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射剤として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、又は静脈内に送達され得る。
別の一実施形態では、医薬組成物は、固体製剤、例えば、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／若しくは希釈剤を加える、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。
使用方法
別の一般的な態様では、本発明は、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法に関する。
別の一般的な態様では、本発明は、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む組成物に供することを含む、方法に関する。
対象は、新たに診断されたがんを有し得るか、又は以前の抗がん療法に対して再発性若しくは難治性である。がんは、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍であり得る。
本発明の実施形態によると、医薬組成物は、治療有効量の本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む。本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。
Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤に関して本明細書で使用するとき、治療有効量とは、免疫応答の調節を必要とする対象においてそれを行う、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤と組み合わせたＴ細胞リダイレクト治療薬の量を意味する。また、Ｔ細胞リダイレクト治療薬に関して本明細書で使用するとき、治療有効量とは、疾患、障害、若しくは状態の治療をもたらす、疾患、障害、若しくは状態の進行を予防する若しくは遅延させる、又は疾患、障害、若しくは状態に関連する症状を低減する若しくは完全に緩和する、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤を伴うＴ細胞リダイレクト治療薬の量を意味する。
治療有効量又は用量は、治療される疾患、障害又は状態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び、治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な因子によって異なり得る。治療用量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。
特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に好適であるように製剤化することができる。
本明細書で使用するとき、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」という用語は全て、がんに関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」という用語はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もある。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、腫瘍若しくはより好ましくはがんなどの疾患、障害、若しくは病態に関連する１つ又は２つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
特定の実施形態によると、がんの治療で使用される医薬組成物が提供される。がん療法のために、提供される医薬組成物は、化学療法、抗ＣＤ２０ｍＡｂ、抗ＴＩＭ－３ｍＡｂ、抗ＬＡＧ－３ｍＡｂ、抗ＥＧＦＲｍＡｂ、抗ＨＥＲ－２ｍＡｂ、抗ＣＤ１９ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ｍＡｂ、抗ＣＤ４７ｍＡｂ、抗ＣＤ７３ｍＡｂ、抗ＤＬＬ－３ｍＡｂ、抗アペリンｍＡｂ、抗ＴＩＰ－１ｍＡｂ、抗ＦＯＬＲ１ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ－４ｍＡｂ、抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂ、抗ＰＤ－１ ｍＡｂ、他の免疫腫瘍学薬、抗血管新生薬、放射線療法、抗体－薬物複合体（antibody-drug conjugate、ＡＤＣ）、標的療法、又は他の抗がん薬が挙げられるがこれらに限定されない、別の治療法と併用され得る。
特定の実施形態によると、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法は、本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と組み合わせてＴ細胞リダイレクト治療薬を、対象に投与することを含む。
本明細書で使用するとき、対象への２種類又は３種類以上の治療薬の投与との関連において用いられる「併用」という用語は、２種類以上の治療薬の使用を指す。「併用」という用語の使用は、治療薬を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の治療薬（例えば、本明細書に記載されるＴ細胞リダイレクト治療薬）は、対象への第２の治療薬（例えば、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤）の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、若しくは１２週間前）、それと同時、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、若しくは１２週間後）に投与され得る。
キット
別の一般的な態様では、本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、任意選択的に医薬担体と、を含むキット、単位投与量、及び製造物品が本明細書に提供される。特定の実施形態では、キットは、好ましくは、その使用のための取扱説明書を提供する。
別の特定の態様では、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、を含むキットが本明細書に提供される。
別の特定の態様では、医薬的に許容される担体と、（１）本明細書に開示されるＴ細胞リダイレクト治療薬と、（２）本明細書に開示されるＶＬＡ－４接着経路阻害剤と、を含む医薬組成物を含む、キットが本明細書に提供される。
実施形態
本発明の実施形態１は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む、医薬組成物であって、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、Ｔ細胞表面抗原に免疫特異的に結合する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に免疫特異的に結合する第２の結合領域とを含む、医薬組成物を含む。
本発明の実施形態２は、医薬的に許容される担体を更に含む、実施形態１に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態３は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１又は２に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態４は、Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ１３７、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態５は、Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３である、実施形態４に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態６は、ＴＡＡが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される、実施形態１～５のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。
実施形態７は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である、実施形態６に記載の医薬組成物を含む。
実施形態８は、ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が対になって、第２の抗原結合部位を形成する、実施形態７に記載の医薬組成物を含む。
実施形態９は、ＨＣ１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の医薬組成物を含む。
実施形態１０は、ＨＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１１は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である、実施形態６に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１２は、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が対になって、第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２が対になって、第２の抗原結合部位を形成する、実施形態１１に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１３は、ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＬＣ２が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１４は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１５は、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、実施形態１４に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１６は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、ＶＬＡ－４アンタゴニストである、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１７は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択されるＶＬＡ－４アンタゴニストである、実施形態１６に記載の医薬組成物を含む。
本発明の実施形態１８は、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態１９は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態１８に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２０は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態１９に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２１は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態２０に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２２は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態２３は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態２２に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２４は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態２２に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２５は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態２２に記載の方法を含む。
実施形態２６は、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態２７は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態２６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２８は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態２６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態２９は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態２６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３０は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊すること、及びＴ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態３１は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態３０に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３２は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３０に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３３は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３０に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３４は、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態３５は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態３４に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３６は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３４に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３７は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３４に記載の方法を含む。
本発明の実施形態３８は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
実施形態３９は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態３８に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４０は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態３８に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４１は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態３８に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４２は、Ｔ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態４３は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態４２に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４４は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態４２に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４５は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態４２に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４６は、がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊すること、及びＴ細胞依存性細胞傷害性を高めることを含む、腫瘍微小環境における免疫抑制を変化させる方法であって、腫瘍微小環境を、治療有効量の実施形態１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物に供することを含み、免疫抑制が、腫瘍微小環境において減少し、がん細胞が、何らかの形態の細胞死を受ける、方法を含む。
本発明の実施形態４７は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態４６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４８は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態４６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態４９は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態４６に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５０は、がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、治療有効量の請求項１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を含む。
本発明の実施形態５１は、対象が、新たに診断されたがんを有する、実施形態５０に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５２は、対象が、以前の抗がん療法に対して再発性又は難治性である、実施形態５１に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５３は、がんが、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である、実施形態５０～５２のいずれか１つに記載の方法を含む。
本発明の実施形態５４は、対象が、ＡＭＬ又はＭＭを有する、実施形態５３に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５５は、Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、実施形態５０～５４に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５６は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与前に投与される、実施形態５５に記載の方法を含んだ。
本発明の実施形態５７は、ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、実施形態５５に記載の方法を含む。
本発明の実施形態５８は、請求項１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む、キットを含む。
本発明の実施形態５９は、請求項１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含むキットを含み、医薬組成物は、別々にパッケージングされている。
本発明の実施形態６０は、請求項１～１７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含むキットを含み、医薬組成物は、一緒にパッケージングされている。
材料及び方法
抗体設計
ヒトＣＤ１２３及びＣＤ３を標的とするか、又はヒトＢＣＭＡ及びＣＤ３を標的とする二重特異性抗体を産生し、抗ＣＤ１２３又は抗ＢＣＭＡ抗体及び抗ＣＤ３抗体を、Ｇｅｎｍａｂ技術を使用して制御された断片抗原結合アーム交換を生成することによって、精製後に一緒に結合した（１７、１８）。これにより、ヒトＣＤ１２３＋ ＡＭＬ又はヒトＢＣＭＡ＋ ＭＭ細胞及びＣＤ ３Ｔ細胞に特異的に結合する一価の結合二官能性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）抗体が得られた（図８Ａ及び８Ｂ）。抗体媒介性エフェクター機能を最小限に抑えるために、Ｆｃドメインに変異を導入して、Ｆｃγ受容体との相互作用を低減した。以下の実験で使用される二重特異性抗体（ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性及びＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性）は、第１の重鎖（ＨＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１は対になって、ＣＤ１２３又はＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は対になって、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。以下の実施例で使用されるＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含む。以下の実施例で使用されるＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣ１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣ２を含む。
インビトロ及びエクスビボ細胞傷害性アッセイ
腫瘍細胞株を、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（Carboxyfluorescein succinimidyl ester、ＣＦＳＥ）で標識し、間質細胞株（ＨＳ－５及びＨＳ－２７ａ）、一次間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、並びにＣＤ１０５＋内皮細胞の存在下又は非存在下で、解凍精製した凍結Ｔ細胞と共培養した。２４時間後、二重特異性抗体をウェルに添加し、プレートを３７℃、５％ ＣＯ２で４８時間インキュベートした。次いで、フローサイトメーターで分析する前に、細胞を様々なマーカーについて染色した。トランスウェル関連の実験の場合、０．４μｍのトランスウェルインサート（ＨＴＳ ＴＲＡＮＳＷＬ９６、Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含む又は含まない９６ウェルＵ底プレートで、アッセイを実施した。ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）関連の実験の場合、赤色蛍光ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ）及び緑色ＨＳ－５（ＨＳ－５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｇｒｅｅｎ）を使用した。
エクスビボアッセイの場合、ＨＳ－５細胞を、ＡＭＬ末梢血単核細胞（peripheral blood mononuclear Cell、ＰＢＭＣ）又はＭＭ骨髄単核細胞（bone marrow mononuclear cell、ＢＭＭＣ）の添加前に播種した。抗ＶＬＡ４抗体（５μｇ／ｍｌ）を含む又は含まない、ＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３又はｎｕｌｌ×ＣＤ３二重特異性抗体（１μｇ／ｍｌ）を添加した。７２時間後、ＣＤ１２３＋芽球又はＣＤ１３８＋ ＭＭ形質細胞の枯渇をフローサイトメトリーによって監視した。更に、ＣＤ８ Ｔ細胞の増殖並びにそれらの活性化状態（ＣＤ２５の上方調節）を評価した。
インビボＭＯＬＭ－１３異種移植モデル
ヒトＰＢＭＣ（１×１０７個の細胞／マウス）を、腫瘍細胞移植の６～７日前に静脈内（intravenously、ｉｖ）接種した。研究０日目に、マウスに、１×１０６個のＭＯＬＭ－１３細胞、並びに２つの濃度のＨＳ－５骨髄間質細胞、２×１０５及び５×１０５を皮下（subcutaneously、ｓｃ）移植した。ＣＤ１２３×ＣＤ３（０．０４ｍｇ／ｋｇ及び０．００８ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）又はビヒクルＰＢＳ対照（ｎ＝５）による処理を、３日間毎（ｑ３ｄ）に５回の用量、静脈内（ｉｖ）に行った。個々のマウスを、研究期間にわたって週２回、体重減少及び腫瘍成長阻害について監視した。ＶＬＡ－４遮断抗体を用いたインビボ研究の場合、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体（０．００８ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８若しくは９）又はＰＢＳビヒクル対照（ｎ＝５）による処理を静脈内に行い、抗ＶＬＡ－４抗体（５ｍｇ／ｋｇ）による処理を腹腔内（intraperitoneally、ｉｐ）に行った。分析から除外された動物はなかった。
統計的方法
データを、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアＰｒｉｓｍバージョン８（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ、Ｃａｒｙ，ＮＣ）によって分析した。Ｂｒｏｗｎｅ－Ｆｏｒｓｙｔｈｅ及びＷｅｌｃｈ ＡＮＯＶＡ試験分析を、図１及び２に適用した一方で、通常の二元配置ＡＮＯＶＡ分析を図３～７に適用した。
細胞株
ＫＧ１、Ｈ９２９、ＲＰＭＩ－８２２６、ＭＭ．１Ｓ、ＨＳ－５、及びＨＳ－２７ａ細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。ＭＯＬＭ １３及びＯＣＩ－ＡＭＬ５を、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。正常なヒトドナー由来の凍結保存した一次間葉系幹細胞を、Ｌｏｎｚａ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入し、ＣＤ１０５＋骨髄内皮細胞をＡｌｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｍｅｄａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から購入した。ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｇｒｅｅｎ又はＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＥＦ１ａ，Ｐｕｒｏ）を、Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）から購入し、製造業者の指示に従って使用して、ＨＳ－５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｇｒｅｅｎ及びＯＣＩ－ＡＭＬ５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ細胞を生成した。ピューロマイシン処理を使用して、蛍光陽性細胞株を選択した。これらの細胞株は最近認証されなかったが、マイコプラズマ汚染の検査で陰性になった。
二重特異性抗体を用いた結合アッセイ
全ての腫瘍細胞を遠心分離し、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（Dulbecco's phosphate-buffered saline、ＤＰＢＳ）で２回洗浄し、２ｍｇ／ｍＬで１０分間添加した断片結晶化可能（fragment crystallizable、Ｆｃ）なブロック（ヒトＩｇＧ１断片）とともに、１×１０４個の細胞を９６ウェルＵ底プレートの各ウェルの中心に添加した。連続希釈二重特異性抗体を適切なウェルに添加した。プレートを３７℃、５％ ＣＯ２で、暗所において４時間インキュベートした。次いで、細胞をＤＰＢＳで洗浄し、二重特異性抗体の結合を、マウス抗ヒトＩｇＧ４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、クローンＨＰ６０２５、カタログ番号９２００－０９）及びＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（Ｌ／Ｄ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３４９７６）で３０分間染色することによって検出した。最後に、細胞を洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）をＰｒｉｓｍバージョン７（ＧｒａｐｈＰａｄ）でプロットした。Ｘ軸を対数変換し、４パラメータ非線形曲線フィットを適用した。
細胞株を用いたインビトロ細胞傷害性アッセイ
腫瘍細胞株（ＫＧ１、ＭＯＬＭ １３、ＯＣＩ－ＡＭＬ５、Ｈ９２９、ＲＰＭＩ－８２２６、及びＭＭ．１Ｓ）を計数し、ＤＰＢＳで洗浄した後に、ＣＦＳＥ（１５０μＬのジメチルスルホキシド中に再懸濁し、１：１０，０００に希釈）と、１×１０７個の細胞／ｍＬのＣＦＳＥで室温において８分間インキュベートした。染色をＨＩ ＦＢＳでクエンチした。細胞を完全培地で洗浄した後に、１ｍｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１断片を含有する完全培地において、２×１０５個の細胞／ｍＬで再懸濁し、次いで、１５分間インキュベートした。精製した凍結Ｔ細胞（ＢｉｏＩＶＴ（Ｗｅｓｔｐｏｒｔ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）から入手）を解凍し、１×１０６個の細胞／ｍＬで再懸濁した。Ｆｉｃｏｌｌ勾配（単核細胞を単離するため）、並びに抗体カクテル（ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３６、ＣＤ５６、及びＣＤ６６ｂ）を用いた室温でのインキュベーション後の陰性選択を使用して、「不要な」細胞を除去することによって、全血からＴ細胞を単離した。間質細胞株（ＨＳ－５及びＨＳ－２７ａ）を採取し、洗浄し、係数し、４×１０５個の細胞／ｍＬで再懸濁した。一次間葉系間質細胞（ＭＳＣ）及びＣＤ１０５＋内皮細胞の場合、Ｌｏｎｚａ及びＡｌｌ ｃｅｌｌｓからそれぞれ供給された凍結アリコートを解凍し、４×１０５個の細胞／ｍＬで再懸濁した。最後に、５０μＬの精製したＴ細胞、５０μＬの間質細胞、及び１００μＬの標識した腫瘍細胞を、０．５ｍｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１断片を含む９６ウェルＵ底プレートの各ウェルで組み合わせた。２４時間後、試験抗体をウェルに添加した。抗体を、ＤＰＢＳ又は完全培地で１３３ｎＭの最終開始濃度に希釈した。抗体を更に３倍に希釈し、適切なウェルに添加した。全てのプレートを、抗体の添加後４８時間、３７℃、５％ ＣＯ２でインキュベートした。次いで、細胞をＤＰＢＳで洗浄し、フローサイトメーターで分析する前に、細胞を様々なマーカーについて染色した。
増殖実験の場合、ここでは、Ｔ細胞を共培養前にＣＦＳＥ色素で標識し、したがって、二重特異性抗体の添加後９６時間、ＣＦＳＥを監視することによる増殖の評価を可能にしたことを除いて、インビトロアッセイを上記で詳述したように実施した。
トランスウェル関連の実験の場合、０．４μＭのトランスウェルインサート（ＨＴＳ ＴＲＡＮＳＷＬ９６、Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含む又は含まない９６ウェルＵ底プレートで、アッセイを実施した。間質細胞をＴ細胞及び腫瘍細胞と組み合わせるか、又はトランスウェルインサート上に播種することによってＴ細胞及び腫瘍細胞から分離した。
ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）関連の実験の場合、赤色蛍光ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ）及び緑色ＨＳ－５（ＨＳ－５－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｇｒｅｅｎ）を使用した。腫瘍細胞、間質細胞、及びＴ細胞を洗浄し、これらのアッセイのために、フェノールレッド不含ＲＰＭＩ／１０％ ＨＩ ＦＢＳ中で組み合わせた。１ウェル当たりの赤色及び緑色の物体の画像（赤色のＯＣＩ－ＡＭＬ５及び緑色のＨＳ－５を示す）を、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）Ｚｏｏｍによって、１２０時間の時間経過にわたって６時間毎に記録した。
遮断実験の場合、以下の阻害剤及び中和抗体を使用した：Ｂｃｌ－２阻害剤（ＨＡ１４－１）、抗ヒトＣＸＣＲ４（１２Ｇ５）、及び抗ヒトＩＴＧＡ４／ＶＬＡ４（２Ｂ４）抗体を、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）から購入した。
一次ＡＭＬ及びＭＭ患者試料を用いたエクスビボ細胞傷害性アッセイ
６ウェルプレートの１ウェル当たり、３０，０００個又は６００，０００個のＨＳ－５細胞を一晩播種した。翌朝、培地を注意深く除去した後、それぞれ０．５ｍｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１断片を含むαＭＥＭ＋１０％ ＦＢＳ中の３×１０６個の一次ＡＭＬ又はＭＭ ＰＢＭＣ及びＢＭＭＣで置き換えた。次に、抗ＶＬＡ４抗体（５μｇ／ｍｌ）を含む又は含まない、ＣＤ１２３×ＣＤ３、ＢＣＭＡ×ＣＤ３、又はｎｕｌｌ×ＣＤ３二重特異性抗体（１μｇ／ｍｌ）を添加した。７２時間後、ＣＤ１２３＋芽球又はＣＤ１３８＋ ＭＭ形質細胞の枯渇をフローサイトメトリーによって監視した。更に、ＣＤ８ Ｔ細胞の増殖並びにそれらの活性化状態（ＣＤ２５の上方調節）を評価した。
フローサイトメトリー及び抗体試薬
ＦＡＣＳの抗体は、以下の抗ヒト抗体を含んだ：ＣＤ２７８／ＩＣＯＳ（ＤＸ－２９）、ＣＤ４（ＳＫ３）、グランザイムＢ（ＧＢ１１）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）、ＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、４１ＢＢ／ＣＤ１３７（４Ｂ４－１）、ＣＤ２５（ＢＣ９６）、パーフォリン（ｄＧ９）、Ｔｂｅｔ（４ｂ１０）、ＰＤ－１／ＣＤ２７９（ＥＨ１２．２Ｈ７）、ＴＩＭ３（Ｆ３８－２Ｅ２）、ＣＤ３３（ＷＭ５３）、ＣＤ３８（ＨＩＴ２）、ＣＤ１２３（６Ｈ６）、ＣＤ１３８（ＭＩ１５）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから購入）、ＬＡＧ３（３ＤＳ２２３Ｈ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）、及びＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｎｅａｒ－ＩＲ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。
ＦＡＣＳ分析の場合、プレートを１，５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで、細胞をＤＰＢＳで洗浄し、Ｔ細胞活性化マーカー及び細胞傷害性について３０分間染色した。最後に、細胞を洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁した。細胞内染色の場合、若干の修正（細胞内サイトカイン抗体とのインキュベーション前に透過処理緩衝液で４回洗浄する）を伴い、製造業者の指示に従って、ＩＣ Ｓｔａｉｎｉｎｇキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞を固定及び透過処理した。
データを、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得した。細胞集団を特定するための前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）、次いで、ＣＦＳＥ＋腫瘍事象、並びに最後に、腫瘍細胞傷害性を評価するためのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｎｅａｒ－ＩＲをゲーティングすることによって、腫瘍細胞死を評価した。ＰＢＳ処理対照及びアイソタイプ対照と比較した後、Ｌ／Ｄ＋ゲートを引いた。これらの対照はまた、抗体の非特異的結合又は漏出効果に関連するエラーを説明するのに役立つ。細胞集団を特定するためのＦＳＣ及びＳＳＣ、ＣＦＳＥ－事象、生細胞をゲーティングし、次いでいくつかのマーカーについての陽性染色を探すことによって、Ｔ細胞活性化を評価した。いずれかの死腫瘍細胞のパーセンテージを、Ｐｒｉｓｍ ８を使用してグラフ化し、４パラメータ非線形回帰曲線フィットを用いて分析した。Ｔ細胞活性化マーカーの場合、様々なマーカーの幾何平均蛍光強度をＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって分析し、Ｐｒｉｓｍ ８を使用してグラフ化した。
免疫ブロッティング及び抗体試薬
自動ウエスタンブロットを、Ｗｅｓ自動化システム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して、製造業者の指示に従って実施した。試料を、ＳＤＳ、ＤＴＴ、及び蛍光分子量標準を含有する５×試料緩衝液と混合し、９５℃で５分間加熱し、次いで、ブロッキング及び洗浄緩衝液、抗体溶液、並びに検出試薬とともに、スタッキング及び分離マトリックスで予め充填したプレート上に装填した。デフォルト設定を分析に使用した。Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）から購入した以下の抗ヒト抗体を使用して、タンパク質を検出した：Ｂｃｌ－２（番号２８７２）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）（Ｄ３Ｆ９）ＸＰ（登録商標）Ｒａｂｂｉｔ ｍＡｂ（番号４５１１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）（Ｄ９Ｅ）ＸＰ（登録商標）Ｒａｂｂｉｔ ｍＡｂ（番号４０６０）、及びβ－アクチン（Ｄ６Ａ８）Ｒａｂｂｉｔ ｍＡｂ（番号８４５７）。
動物
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ又はＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、約６～８週齢であり、体重が２０ｇであるときに利用した。全ての動物は、実験使用前に最低５日間、順応させ、任意の輸送関連のストレスから回復させた。逆浸透（Reverse osmosis、ＲＯ）塩素水及び照射食品（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｕｔｏｃｌａｖａｂｌｅ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ５０１０、Ｌａｂ Ｄｉｅｔ）を不断給餌で与え、動物を１２時間の明暗サイクルで維持した。使用前にケージ、床敷き、及び給水瓶をオートクレーブ処理し、毎週交換した。全ての実験は、Ｔｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従って行われ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒ＆Ｄ、Ｓｐｒｉｎｇ Ｈｏｕｓｅ，ＰＡによって承認された。
結果
ＢＭ間質細胞は、ＣＤ３二重特異性抗体及びＴ細胞媒介性細胞傷害性からＡＭＬ及びＭＭ細胞株を保護する
ＢＭニッチは、その保護的及び免疫抑制性微小環境を特徴とする。ＢＭ間質細胞は、自己複製、生存、分化、及び増殖を含む、基本的な造血幹細胞（ＨＳＣ）の細胞運命決定を左右する内膜及び血管ニッチの主要な細胞構成成分であるため、それらを使用して、ＢＭニッチを再現した（１９、２０）。ＢＭ間質細胞はまた、免疫抑制を媒介する（１３、２１）一方で、腫瘍細胞中で複数の生存及び抗アポトーシス経路も活性化し、したがって、それらが異なる種類の療法に対して耐性になることを可能にする（２２）ことが実証されている。ＡＭＬ又はＭＭ細胞株を、ＢＭ間質細胞の非存在下又は存在下で、Ｔ細胞及び二重特異性抗体と共培養した。ＣＤ１２３又はＢＣＭＡのいずれか及びＣＤ３（ツール抗体）を標的とする二重特異性抗体を使用した。これらの抗体の有効性を実証する結合、死滅、及びＴ細胞活性化データを図８に示す。ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体を使用して、ＣＤ１２３発現白血病細胞株ＫＧ－１の用量依存的死滅が観察された（図１Ａ及び１Ｂ）。この死滅は、非標的（ｎｕｌｌ）アームとともに、ＣＤ３又はＣＤ１２３のいずれかを発現する二重特異性抗体では観察されなかった（図１Ａ及び１Ｂ）。特定の死滅が、ｎｕｌｌ対照とは対照的にＢＣＭＡ×ＣＤ３によって媒介された、ＢＣＭＡ発現ＭＭ細胞株Ｈ９２９及び別の二重特異性抗体ＢＣＭＡ×ＣＤ３を使用した場合、同様の結果が観察された（図１Ｃ～図１Ｄ）。間質細胞を共培養物に添加した場合、高濃度の二重特異性抗体でさえ、観察された最大の細胞傷害性応答において統計的に有意な減少が観察された（図１Ａ～１Ｄ）。更に、二重特異性抗体のＥＣ５０値は、間質の存在下で３～５倍高かった（図９Ａ）。二重特異性抗体活性の間質阻害は、線維芽間質細胞株（ＨＳ－５及びＨＳ－２７ａ）に限定されただけではなく、健康なドナーのＢＭに由来する一次間葉系間質細胞（ＭＳＣ）でも観察された（図１Ａ～１Ｄ）。二重特異性抗体活性の阻害は、共培養物中に存在する間質細胞の数に依存し、それにより、間質細胞が共培養物中でがん細胞より１０倍低い場合、有効性の低下が依然として観察された（図９Ｂ）。興味深いことに、健康なドナーのＢＭ単核細胞から選別されたＣＤ１０５＋内皮細胞の添加では、阻害は観察されなかった（図１Ａ～１Ｄ）。この結果は、全ての間質細胞が、ＣＤ３リダイレクト二重特異性抗体の有効性に悪影響を及ぼしたわけではないことを実証し、腫瘍－Ｔ細胞共培養物中の別の細胞型の単なる存在が、阻害効果に寄与しなかったという事実を説明した。二重特異性抗体活性の間質媒介性阻害は、１人のドナー由来のＴ細胞に固有ではなかったが、複数のドナーのＴ細胞で観察された（それぞれ図１Ａ、Ｃ、及び１Ｂにプロットされた異なるドナーを用いた平均及び中央値）。これらのデータは、他のＣＤ１２３＋ ＡＭＬ（ＭＯＬＭ－１３及びＯＣＩ－ＡＭＬ５）、並びにＢＣＭＡ＋ ＭＭ細胞株（ＲＰＭＩ－８２２６及びＭＭ．１Ｓ）で同様の結果が観察されたため、１つのＡＭＬ又はＭＭ細胞株に特異的ではなかった（図９Ｃ及び９Ｄ）。これらのデータは、間質細胞がＣＤ３リダイレクト二重特異性抗体の有効性及び効力に影響を及ぼすことを初めて実証する。
ＢＭ間質細胞は、Ｔ細胞活性を抑制し、がん細胞中の生存及び抗アポトーシス経路を活性化する
次に、二重特異性抗体活性の間質阻害の根底にあるメカニズムを調査した。この目的で、Ｔ細胞の表現型を、間質細胞の非存在下又は存在下でのＴ細胞腫瘍共培養細胞傷害性アッセイにおいて評価した。間質の非存在下でのＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体での処理により、ＣＤ８＋ Ｔ細胞中のＰＤ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３を含むチェックポイントマーカーの同時増加を伴う、ＣＤ２５、ＣＤ１３７、及びＩＣＯＳを含む活性化マーカーの上方調節がもたらされた（図２Ａ）。更に、ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、パーフォリン及びグランザイムＢなどのエフェクタータンパク質の産生の増加、並びにＴ－ｂｅｔ発現の上方調節によって、細胞傷害性Ｔリンパ球（cytotoxic T lymphocyte、ＣＴＬ）の特徴を示した（図２Ａ）。しかしながら、共培養物中に間質細胞が存在した場合、Ｔ細胞は、活性化、エフェクター、及びチェックポイントマーカーの発現の低減によってあまり活性化されなかった（図２Ａ）。これらの結果は、複数のＴ細胞ドナー（図２Ａにプロットされた異なるドナーを伴う中央値）、並びにＭＭ細胞株Ｈ９２９及びＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（図１０Ａ）で観察された。間質の存在下でＴ細胞上のチェックポイントマーカーの発現が減少した結果は、ＰＤ１、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３がＴ細胞活性化応答を調節する阻害性タンパク質として認識されることを考慮すると、最初は直観に反しているように思われ得る。しかしながら、これらのタンパク質は、Ｔ細胞活性化時にのみ誘導され、ナイーブＴ細胞中には存在しない（２３～２９）。したがって、これらのデータを考慮すると、間質細胞の存在下で、ＰＤ１、ＴＩＭ３、及びＬＡＧ３の上方調節がＴ細胞上で減少し、阻害性間質区画の存在下でＴ細胞のあまり活性化されていない表現型を支持することは驚くべきことではない。更に、Ｔ細胞増殖は、両方の二重特異性抗体を用いた処理後、間質の存在下で低減した（図１０Ｂ）。
免疫抑制に加えて、白血病及び骨髄腫腫瘍細胞中の複数の生存促進及び抗アポトーシス経路の間質媒介性活性化が、療法に対する耐性を媒介する追加のメカニズムであり得るかどうかを調査した（３０）。ＨＳ－５間質細胞と培養したＫＧ－１細胞中のホスホイノシチド３－キナーゼ（phosphoinositide 3-kinase、ＰＩ３Ｋ）及びＡｋｔのリン酸化の増加、並びにＢｃｌ－２のタンパク質発現の増加が観察されたが、ＫＧ－１又はＨＳ－５細胞単独では観察されなかった（図２Ｂ）。これらのデータは合わせて、ＡＭＬ及びＭＭ腫瘍細胞が、Ｔ細胞の活性化の抑制に加えて、腫瘍細胞中の耐性経路の活性化を伴う間質細胞依存性メカニズムによって、Ｔ細胞媒介死を回避することができることを示唆している。
次に、ＣＤ３リダイレクトの有効性が低減した表現型へのＴ細胞免疫抑制及び生存促進経路の上方調節の相対的寄与を調査した。Ｂｃｌ－２がいくつかの療法からのＡＭＬ及びＭＭ細胞の生存及び耐性に直接関与していることを考慮して（３０、３１）、細胞傷害性アッセイを、Ｂｃｌ－２阻害剤ＨＡ１４－１の添加あり又はなしで、間質の存在下において実施した。阻害剤は、Ｂｃｌ－２の発現をうまく防止したが（図１１）、ＣＤ３リダイレクトの間質媒介性阻害を助けず（図２Ｃ）、Ｔ細胞は、あまり活性化されないままであった（図２Ｄ）。これらのデータは、標的細胞中のＢｃｌ－２の過剰発現が、ＡＭＧ１１０（ＥｐＣＡＭｘＣＤ３ ＢｉＴＥ）の活性に最小限の影響を及ぼした、以前に公開された発見を裏付けている（３２）。
骨髄間質細胞は、インビボでのＣＤ３リダイレクトの有効性を弱める
次に、間質細胞が、インビボで二重特異性抗体－Ｔ細胞媒介性細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することができるかどうかを調査した。この目的で、ヒトＰＢＭＣを雌ＮＳＧマウスに静脈内接種し、１週間後、ＨＳ－５骨髄間質細胞あり又はなしのＭＯＬＭ－１３をマウスの脇腹に皮下（ｓｃ）移植した。次いで、マウスを、腫瘍細胞移植後５日目から週２回、合計５回の処理にわたって、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）で処理した。ＣＤ１２３×ＣＤ３を用いた処理は、ＰＢＳ又はＣＤ３×ｎｕｌｌ対照と比較して、ＭＯＬＭ－１３単独群で皮下腫瘍成長を有意に阻害した（腫瘍成長阻害（tumor growth inhibition、ＴＧＩ ２５日目）＝７８％、ｐ＜０．０００１）（図３Ａ）。この抗腫瘍活性は、間質の存在下で著しく低減し（ＴＧＩ２５日目＝１５％）、二重特異性抗体処理したＭＯＬＭ－１３単独群と比較して統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）（図３Ａ）。更に、間質あり又はなしの腫瘍中のＣＤ８＋ Ｔ細胞の等しい浸潤が観察されたが（図３Ｂ）、間質の存在と相関したＴ細胞の活性化プロファイルの差があった（図３Ｃ）。二重特異性抗体処理したＭＯＬＭ－１３＋ＨＳ－５群からのＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＭＯＬＭ－１３対照と比較して、ＣＤ２５、ＰＤ１、及びグランザイムＢの上方調節の低下を示した（図３Ｃ）。これらの結果は、インビトロ観察を裏付け、ＢＭ間質細胞が、Ｔ細胞活性化を抑制することによって、そうでなければ強力なＣＤ３リダイレクト治療薬の有効性を低減することを強く示唆している。
間質への接着は、免疫抑制及びがん細胞生存を媒介するために重要である
間質細胞は、特にＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、及びＰＧＥ２などの免疫抑制メディエーター、又は幹細胞因子（stem cell factor、ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＣＸＣＬ－１２などの成長因子を含む、可溶性因子の分泌を介して、免疫抑制を媒介し、細胞傷害性から腫瘍細胞を保護することができる（２１、３３）。更に、間質細胞は、耐性を誘導する接着経路を介して腫瘍細胞と直接相互作用し（３４）、それによって、細胞間接触依存的にＴ細胞媒介性細胞傷害性から悪性細胞を保護することができる。細胞傷害性アッセイの目視検査により、二重特異性抗体－Ｔ細胞媒介性細胞傷害性によって死滅していない残留白血病細胞が、間質細胞の周囲で密接にクラスター化していたことが明らかになり（図４Ａ）、細胞間接触経路が、がん細胞の間質媒介性保護において重要な役割を果たし得ることを示唆している。可溶性メカニズムと細胞間接触依存性メカニズムとを識別するために、インビトロトランスウェルアッセイを実施して、腫瘍及びＴ細胞から分離された場合でも、間質細胞が二重特異性抗体－Ｔ細胞媒介性溶解の有効性を依然として阻害することができるかどうかを評価した。間質細胞は、腫瘍細胞から分離された場合に阻害効果を示さなかったため、細胞間接触は、二重特異性抗体－Ｔ細胞リダイレクト細胞傷害性からのＡＭＬ及びＭＭ細胞株の間質保護を媒介する際に主要な役割を果たすことが観察された（図４Ｂ及び図１２Ａ）。異なるドナー（図４Ｂで使用される２人の異なるＴ細胞ドナー）由来のＴ細胞で、同様の傾向が観察された。更に、間質細胞をトランスウェルインサートに入れたとき、それらは、Ｔ細胞活性化、並びにパーフォリン、グランザイムＢ、及びＴ－ｂｅｔの発現を抑制することができなかった（図４Ｃ）。これらのデータは、間質媒介性Ｔ細胞抑制及びＴ細胞依存性細胞傷害性からの保護について、細胞間相互作用に対する強い依存性を実証する。
インビトロ及びインビボでのＶＬＡ４の遮断は、ＣＤ３リダイレクトの間質媒介性阻害を助ける
接着経路を調査して、二重特異性抗体有効性の間質阻害にとってどちらが重要であったかを判断した。ＢＭ中のＡＭＬ／ＭＭ－間質相互作用を媒介する際のＣＸＣＲ４及びＶＬＡ－４の役割が実証されているため、それらに重点を置いた（３４）。ＶＬＡ－４又はＣＸＣＲ４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入）のいずれかに対する遮断抗体を使用すると、間質の存在下で二重特異性抗体媒介性細胞傷害性応答を助けることができなかったＣＸＣＲ４阻害とは異なり、ＶＬＡ－４阻害が、ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体－Ｔ細胞細胞傷害性からのＫＧ－１及びＭＯＬＭ－１３の間質媒介性保護を逆転させた（５０～６０％）（図５Ａ及び図１２Ｂ）。この効果は、Ｈ９２９及びＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体でより顕著であり、ＶＬＡ－４阻害は、間質の存在下でも細胞傷害性応答を回復させた（８０～１００％）（図５Ｂ）。ＶＬＡ－４阻害による細胞傷害性応答の増加は、ＣＸＣＲ４遮断下で依然として抑制されたグランザイムＢ及びＣＤ２５などのＴ細胞活性化マーカーの発現の回復と相関した（図５Ｃ及び５Ｄ）。ＶＬＡ－４阻害を伴うＴ細胞活性化マーカーのこの増加もまた、未処理の対応物（ＨＳ－５又は一次ＭＳＣ間質細胞のいずれかを含有する共培養物）と比較して、統計的に有意であった。ＶＬＡ－４阻害はまた、Ａｋｔ及びＰＩ３Ｋ経路のリン酸化を弱めた（図１３）。
以前のインビボ結果は、ＨＳ－５骨髄間質細胞を用いたＭＯＬＭ－１３腫瘍の処理において、ＣＤ１２３×ＣＤ３の有効性が弱められたことを示している。抗腫瘍効果が回復し得るかを判断するために、抗ＶＬＡ－４中和抗体を、ＭＯＬＭ－１３担持マウスの処理のためにＣＤ１２３×ＣＤ３と組み合わせた。前の観察と同様に、ＣＤ１２３×ＣＤ３（８μｇ／ｋｇ）が、ＰＢＳ処理対照と比較してＴＧＩ ２４日目５２．３％（ｐ≦０．０００１）を促進した一方で、同じ用量の二重特異性抗体は、ＨＳ－５細胞を同時注射したＭＯＬＭ－１３腫瘍に対して最小限の効果を有した（ＴＧＩ ２３日目＝７．６％）（図６Ａ）。しかしながら、ＣＤ１２３×ＣＤ３との抗ＶＬＡ－４抗体の同時添加は、ＨＳ－５細胞を用いたＭＯＬＭ－１３腫瘍のＴＧＩ ２３日目の４８．４％（ｐ＝０．０００１）の増加をもたらした（図６Ａ）。ＶＬＡ－４遮断及び二重特異性抗体処理を受けた間質を有するＭＯＬＭ－１３腫瘍のＴＧＩの増加には、ＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化、並びにパーフォリン、ＣＤ２５、及びＰＤ１の発現を含むエフェクター応答の改善が伴った（図６Ｂ）。ＴＧＩの増加及びＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の増大は、ＶＬＡ－４遮断及び二重特異性抗体処理との組み合わせを受けた腫瘍＋ＨＳ－５担持マウスに限定され、マウスにいずれかの薬剤をそれ自体で投与したときは存在しなかった。これらの結果は、ＣＤ３リダイレクト薬剤とともにＶＬＡ－４の同時遮断が、間質細胞によって媒介された抑制効果を克服することができ、優れた抗腫瘍応答を媒介することができることを強く示唆している。
エクスビボ一次患者培養物中のＶＬＡ－４の遮断は、間質の存在にもかかわらずＣＤ３リダイレクトの有効性を回復させる
次いで、一次凍結／解凍ＡＭＬ及びＭＭ試料で結果を検証した。一次腫瘍細胞が、サイトカイン又は間質支持体の外因的補充なしに培養物中で維持することが困難であり得ることを考慮して、本発明者らは、異なる数の間質細胞を含むＡＭＬ／ＭＭ試料のエクスビボ培養を実施した（図１４及び１５に示す代表的なゲーティング戦略）。際立って、培養物がｎｕｌｌ対照で処理されたときではなく、低い間質：腫瘍比（０．０１×ＨＳ－５）を有するＣＤ１２３×ＣＤ３及びＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体処理された培養物中で、ＣＤ１２３＋ ＣＤ３３＋ ＡＭＬ芽球並びにＢＣＭＡ＋ ＣＤ１３８＋ ＭＭ腫瘍細胞の認識可能かつ選択的な死滅があったことが観察された（図７Ａ及び７Ｃ）。ＣＤ１２３×ＣＤ３死滅効果は、高い間質：腫瘍比（０．２×ＨＳ－５、図７Ａ及び７Ｃ）を有する培養物中で最小であった。更に、一次腫瘍細胞を除去する有効な細胞傷害性応答に続いて、間質含有量がより少ない二重特異性抗体処理された培養物に制限されたＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖又は活性化があった（図７Ｂ及び７Ｄ）。最後に、ＣＤ１２３×ＣＤ３又はＢＣＭＡ×ＣＤ３と組み合わせて中和されたＶＬＡ－４を使用した場合、培養物中の間質含有量がより高いにもかかわらず、腫瘍細胞の優れた死滅及び二重特異性抗体の有効性の回復が観察された（図７Ａ～Ｄ）。二重特異性抗体処理とともにＶＬＡ－４の遮断はまた、間質含有量がより高い培養物中のＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖／活性化を回復させた（図７Ｂ及び７Ｃ）。これらの結果は、３つの異なる患者（図７Ａ～ＢのＡＭＬ患者及び図７Ｃ～ＤのＭＭ患者）で観察され、以前のインビトロ及びインビボ結果を裏付けている。ＶＬＡ－４阻害それ自体により、ＡＭＬ患者試料のうちの１つにおける間質：腫瘍比が高い培養物中のＣＤ１２３＋芽球の枯渇が増加したが、この効果は広く観察されなかった（データは図示せず）。これらのデータは実際に、ＶＬＡ－４遮断をＣＤ３リダイレクト二重特異性抗体治療薬と組み合わせることが、間質細胞の抑制効果を克服し、診療所においてそのような組み合わせを調査するための理論的根拠を提供することができることを実証する。
考察
ＢＭニッチの複雑さは、造血幹細胞の維持及び調節に寄与する分子因子及び細胞因子の理解の大きな前進を伴い、近年、真に理解されている。血液悪性腫瘍の文脈において、いくつかの抗がん療法からの保護及びそれに対する耐性のために、同じ因子ががん幹細胞によって利用され、したがって、最小限の残存疾患に寄与することができる。
本明細書における結果は、そうでなければ有効なＴ細胞治療薬がＢＭ微小環境の構成成分によってどのように阻止され得るかを初めて示す。具体的には、ＢＭ間質細胞の存在下で、ＡＭＬ及びＭＭがん細胞が、Ｔ細胞及び二重特異性抗体によって媒介される細胞傷害性から保護されたことが観察された。がん細胞の死滅の低減は、鈍化したＴ細胞活性化及びエフェクター応答と相関した。細胞間相互作用、特にＶＬＡ－４経路によって媒介されるものの遮断は、Ｔ細胞免疫抑制を逆転させ、ＡＭＬ及びＭＭがん細胞の死滅の増加をもたらした。したがって、結果は、ＢＭ微小環境が、ＣＤ３リダイレクトなどの他の強力かつ有効な免疫療法の文脈でさえ考慮される必要がある、手強い要因であることを再確認する。結果はまた、ＭＲＤのより良好かつより完全な排除のために、接着を妨げる薬剤をＣＤ３リダイレクト治療薬と組み合わせるための理論的根拠及び証拠を提供する。
ＶＬＡ－４の遮断は、二重特異性Ｔ細胞媒介性細胞傷害性及び免疫抑制の有効性の間質阻害を逆転させることが実証されているが、この調節の根底にあるメカニズムは、まだ説明されていない。ＶＬＡ－４は、Ｔ細胞上に発現し、共刺激シグナルを提供し、白血球の接着及び経内皮遊走の媒介に加えて、Ｔリンパ球の活性化をもたらすことができる（３５～３８）。ＭＳに承認されたヒト化モノクローナルＩｇＧ４ ＶＬＡ－４遮断抗体であるナタリズマブを用いた多発性硬化症患者における臨床研究は、この薬物が末梢血中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の数を増加させるだけではなく（３９）、より多くのＩＬ－２、ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－１７のＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞産生も刺激することを示している（４０～４３）。結果はより軽度であったが、同様の結果がインビトロで観察され、ここでは、ナタリズマブが、健康なドナー由来のエクスビボで増殖した活性化一次ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞中のＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－１７発現の軽度な上方調節を誘導し、ナタリズマブがＴ細胞に直接作用することを示唆している（４２）。上記の研究は、ＣＤ４＋ Ｔに重点を置いた。したがって、同じことがインビトロのＣＤ８＋ Ｔ細胞について観察されるかどうかは、まだ調査されていない。ＶＬＡ－４遮断の効果を説明するための別のメカニズムは、腫瘍細胞と間質細胞との間の相互作用の遮断が、間質の周囲の腫瘍細胞のクラスター化を妨げ、したがってＴ細胞が腫瘍細胞にアクセスすることを可能にし、ＣＤ３リダイレクトのより良好な有効性をもたらすことであり得る。最後に、ＶＬＡ－４阻害は、腫瘍細胞自体における重要な生存促進経路の発現及び上方調節を防止すること（３４）、又は抗炎症性サイトカインの腫瘍細胞産生を変化させることによって、ＡＭＬ及びＭＭ細胞に直接作用し、化学療法及び標的療法をより受けやすいものにすることが示されている。
この研究は、ＢＭ微小環境に重点を置いたが、固形腫瘍において同様の現象が発生する可能性がある。固形腫瘍は、細胞外マトリックス分子の複雑で緊密なネットワーク、並びに免疫抑制性であり得る様々な間質細胞型を含有する。
結果は、ＣＤ３リダイレクト治療薬と併せて、ＢＭ微小環境を標的とすることの重要性を指している。更に、結果は、ＶＬＡ－４が、ＣＤ３リダイレクトに対する応答を予測するためのバイオマーカーとして潜在的に使用され得、これらの免疫療法の患者選択を誘導するためにおそらく使用され得ることを実証する。
参考文献
本明細書で引用された全ての刊行物は各々、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
１．Ｐａｉｅｔｔａ Ｅ．Ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｃｏｍｉｎｇ ｏｆ ａｇｅ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍ．２０１２；２０１２：３５－４２。
２．Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ ＪＬ，Ａｔｔａｌ Ｍ，Ａｖｅｔ－Ｌｏｉｓｅａｕ Ｈ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１４（１５）：３１３９－４６。
３．Ｅｌ Ｒａｓｓｉ Ｆ，Ａｒｅｌｌａｎｏ Ｍ．Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１３；７：１８１－９７。
４．Ｍａｒｔｉｎｅｚ－Ｌｏｐｅｚ Ｊ ｅｔ ａｌ．Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ａｆｔｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ．２０１１；１１８（３）：５２９－３４。
５．Ｍａｌａｒｄ Ｆ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ ＪＬ，Ｍｏｈｔｙ Ｍ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｔ ｒｅｌａｐｓｅ ａｆｔｅｒ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｖｉｅｗｓ．２０１７；５２：４１－７。
６．Ｂｌａｔｔｅｒ Ｓ，Ｒｏｔｔｅｎｂｅｒｇ Ｓ．Ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ－－Ｓｍａｌｌ ｔｈｉｎｇｓ ｍａｋｅ ａｌｌ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｕｐｄａｔｅｓ：ｒｅｖｉｅｗｓ ａｎｄ ｃｏｍｍｅｎｔａｒｉｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１５；２１－２２：１－１０。
７．Ｂａｓａｋ ＧＷ，Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ＡＳ，Ｍａｌｈｏｔｒａ Ｒ，Ｃａｒｒｉｅｒ Ｅ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２００９；１０（３）：３４５－６。
８．Ｓａｎｃｈｅｚ－Ａｇｕｉｌｅｒａ Ａ，Ｍｅｎｄｅｚ－Ｆｅｒｒｅｒ Ｓ．Ｔｈｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ：ＣＭＬＳ．２０１６。
９．Ｌａｎｅ ＳＷ，Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ，Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ ＤＧ．Ｔｈｅ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｉｃｈｅ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００９；１１４（６）：１１５０－７。
１０．Ｍｅｒｃｉｅｒ ＦＥ，Ｒａｇｕ Ｃ，Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ．Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ａｔ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓｒｏａｄｓ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１１；１２（１）：４９－６０。
１１．Ｎｏｂｏｒｉｏ－Ｈａｔａｎｏ Ｋ ｅｔ ａｌ．Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ ｃｅｌｌ－ａｄｈｅｓｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＬＡ－４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００９；２８（２）：２３１－４２。
１２．Ｇｒｅｅｎ ＡＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｉｍ ｋｉｎａｓｅｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＦＬＴ３ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ＦＬＴ３－ＩＴＤ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｄｖａｎｃｅｓ．２０１５；１（８）：ｅ１５００２２１。
１３．Ｋｒａｕｓｅ ＤＳ，Ｓｃａｄｄｅｎ ＤＴ．Ａ ｈｏｓｔｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｏｓｔｉｌｅ：ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．２０１５；１００（１１）：１３７６－８７。
１４．Ｐａｌｌａｓｃｈ ＣＰ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ ｔｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｅｌｌ．２０１４；１５６（３）：５９０－６０２。
１５．Ｚｈｕｋｏｖｓｋｙ ＥＡ，Ｍｏｒｓｅ ＲＪ，Ｍａｕｓ ＭＶ．Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ＣＡＲｓ：ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１６；４０：２４－３５。
１６．Ｔｏｐｐ ＭＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｓｅ ＩＩ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ＣＤ１９ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ－ｅｎｇａｇｅｒ ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ ｓｈｏｗｓ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｐｓｅｄ ｏｒ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｂ－ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１４；３２（３６）：４１３４－４０。
１７．Ｌａｂｒｉｊｎ ＡＦ ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＧ１ ｂｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｆａｂ－ａｒｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３；１１０（１３）：５１４５－５０。
１８．Ｌａｂｒｉｊｎ ＡＦ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｆａｂ－ａｒｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＧ１．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．２０１４；９（１０）：２４５０－６３。
１９．Ｒａｓｈｉｄｉ Ａ，Ｕｙ ＧＬ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１５；１０（２）：１２６－３１。
２０．Ｓｈｉｏｚａｗａ Ｙ，Ｈａｖｅｎｓ ＡＭ，Ｐｉｅｎｔａ ＫＪ，Ｔａｉｃｈｍａｎ ＲＳ．Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ：ｈａｂｉｔａｔ ｔｏ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｎｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｕｎｗｉｔｔｉｎｇ ｈｏｓｔ ｔｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｒａｓｉｔｅｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００８；２２（５）：９４１－５０。
２１．Ｔｒｉｐｏｄｏ Ｃ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ－－ａ ｇｕｉｌｔｙ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１１；８（８）：４５６－６６。
２２．Ｍｅａｄｓ ＭＢ，Ｈａｚｌｅｈｕｒｓｔ ＬＡ，Ｄａｌｔｏｎ ＷＳ．Ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｓ ａ ｔｕｍｏｒ ｓａｎｃｔｕａｒｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒ ｔｏ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ａｎ ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００８；１４（９）：２５１９－２６。
２３．Ｃｈｉｋｕｍａ Ｓ ｅｔ ａｌ．ＰＤ－１－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｅｒｇｙ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；１８２（１１）：６６８２－９。
２４．Ｉｎｏｚｕｍｅ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ８＋ＰＤ－１＋ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｆｒｅｓｈ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａｓ ｅｎｒｉｃｈｅｓ ｆｏｒ ｔｕｍｏｒ－ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０；３３（９）：９５６－６４。
２５．Ｇｒｏｓ Ａ ｅｔ ａｌ．ＰＤ－１ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８（＋）ｔｕｍｏｒ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１４；１２４（５）：２２４６－５９。
２６．Ｓｉｍｏｎ Ｓ ｅｔ ａｌ．ＰＤ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ Ｔ ｃｅｌｌ ａｖｉｄｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１６；５（１）：ｅ１１０４４４８。
２７．Ｇｒｏｓ Ａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１６；２２（４）：４３３－８。
２８．Ｈｕａｒｄ Ｂ，Ｇａｕｌａｒｄ Ｐ，Ｆａｕｒｅ Ｆ，Ｈｅｒｃｅｎｄ Ｔ，Ｔｒｉｅｂｅｌ Ｆ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＬＡＧ－３－ｅｎｃｏｄｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｌｉｇａｎｄ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．１９９４；３９（３）：２１３－７。
２９．Ｈａｓｔｉｎｇｓ ＷＤ ｅｔ ａｌ．ＴＩＭ－３ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｔｈ１ ａｎｄ Ｔｈ１７ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；３９（９）：２４９２－５０１。
３０．Ｍａｔｓｕｎａｇａ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ－ｃｅｌｌ ＶＬＡ－４ ａｎｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｉｓ ａ ｄｅｃｉｓｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００３；９（９）：１１５８－６５。
３１．Ｍａｊｉ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｃｌ－２ Ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃ Ｆａｍｉｌｙ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ．Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１８；１３７：３７－７５。
３２．Ｄｅｉｓｔｉｎｇ Ｗ，Ｒａｕｍ Ｔ，Ｋｕｆｅｒ Ｐ，Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＰＡ，Ｍｕｎｚ Ｍ．Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｄｉｖｅｒｓｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｅｖａｓｉｏｎ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｏｎ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｅｎｇａｇｅｄ ｂｙ ＥｐＣＡＭ／ＣＤ３－Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ＡＭＧ １１０．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１５；１０（１０）：ｅ０１４１６６９。
３３．Ｒａｆｆａｇｈｅｌｌｏ Ｌ，Ｖａｃｃａ Ａ，Ｐｉｓｔｏｉａ Ｖ，Ｒｉｂａｔｔｉ Ｄ．Ｃａｎｃｅｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１５；６（５）：２５８９－６０３。
３４．Ｒａｓｈｉｄｉ Ａ，ＤｉＰｅｒｓｉｏ ＪＦ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ－ｓｔｒｏｍａ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｒａｔｉｏｎａｌｅ ａｎｄ ｌａｔｅｓｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．２０１６；７（１）：４０－５１。
３５．Ｓａｔｏ Ｔ，Ｔａｃｈｉｂａｎａ Ｋ，Ｎｏｊｉｍａ Ｙ，Ｄ’Ａｖｉｒｒｏ Ｎ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＶＬＡ－４ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＬＡ－４．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９９５；１５５（６）：２９３８－４７。
３６．Ｄａｖｉｓ ＬＳ，Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ－Ｍａｒｋｓ Ｎ，Ｂｅｄｎａｒｃｚｙｋ ＪＬ，ＭｃＩｎｔｙｒｅ ＢＷ，Ｌｉｐｓｋｙ ＰＥ．Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｉｖｅ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｏｔｈ ｔｈｅ ＶＬＡ－４ ａｎｄ ＶＬＡ－５ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９９０；１４５（３）：７８５－９３。
３７．Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｙ，ｖａｎ Ｓｅｖｅｎｔｅｒ ＧＡ，Ｈｏｒｇａｎ ＫＪ，Ｓｈａｗ Ｓ．Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｒｅｓｔｉｎｇ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＶＬＡ－４ ａｎｄ ＶＬＡ－５ ｗｉｔｈ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｏｒ ＶＬＡ－６ ｗｉｔｈ ｌａｍｉｎｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９９０；１４５（１）：５９－６７。
３８．Ｍｉｔｔｅｌｂｒｕｎｎ Ｍ ｅｔ ａｌ．ＶＬＡ－４ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｎａｐｓｅ ａｎｄ ｄｒｉｖｅｓ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ １ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ．２００４；１０１（３０）：１１０５８－６３。
３９．Ｍａｒｏｕｓｉ Ｓ，Ｋａｒｋａｎｉｓ Ｉ，Ｋａｌａｍａｔａｓ Ｔ，Ｔｒａｖａｓａｒｏｕ Ｍ，Ｐａｔｅｒａｋｉｓ Ｇ，Ｋａｒａｇｅｏｒｇｉｏｕ ＣＥ．Ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ ｔｈｅｒａｐｙ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ．Ａｃｔａ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ．２０１３；１２８（１）：ｅ１－５。
４０．Ｂｏｒｎｓｅｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ ｏｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＣＤ４＋ Ｔ－ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１２；７（１１）：ｅ４７５７８。
４１．Ｋｉｖｉｓａｋｋ Ｐ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００９；７２（２２）：１９２２－３０。
４２．Ｂｅｎｋｅｒｔ ＴＦ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ ｅｘｅｒｔｓ ｄｉｒｅｃｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ａ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｓｏｍｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１２；７（１２）：ｅ５２２０８。
４３．Ｋｉｍｕｒａ Ｋ ｅｔ ａｌ．Ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ ｂａｌａｎｃｅ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（Ｒ）ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ＆ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２０１６；３（２）：ｅ２１０。
４４．Ｙｕ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ＆ ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１７；１０（１）：１５５。
４５．Ｉｓｈｉｇｕｒｏ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ａｎ ａｎｔｉ－ｇｌｙｐｉｃａｎ ３／ＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１７；９（４１０）。
４６．Ｆｅｉｇ Ｃ ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＣＸＣＬ１２ ｆｒｏｍ ＦＡＰ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ－ＰＤ－Ｌ１ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ．２０１３；１１０（５０）：２０２１２－７。

Claims (23)

  1. Ｔ細胞リダイレクト治療薬及びＶＬＡ－４接着経路阻害剤を含む、医薬組成物であって、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、Ｔ細胞表面抗原に免疫特異的に結合する第１の結合領域と、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に免疫特異的に結合する第２の結合領域とを含む、医薬組成物。
  2. 医薬的に許容される担体を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、抗体又はその抗原結合断片である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
  4. 前記Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ１３７、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、及びＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 前記Ｔ細胞表面抗原が、ＣＤ３である、請求項４に記載の医薬組成物。
  6. 前記ＴＡＡが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ５２、ＲＯＲ１、ＨＭ１．２４、ＣＤ３８、及びＳＬＡＭＦ７からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  7. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体である、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 前記ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１が対になって、前記第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２が対になって、前記第２の抗原結合部位を形成する、請求項７に記載の医薬組成物。
  9. 前記ＨＣ１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 前記ＨＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
  11. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬が、ＣＤ１２３に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位とを有するＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体である、請求項６に記載の医薬組成物。
  12. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性抗体が、第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）、及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１が対になって、前記第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２が対になって、前記第２の抗原結合部位を形成する、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 前記ＨＣ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣ２が、配列番号９のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  15. 前記抗ＶＬＡ－４抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）断片、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、並びに１つの重鎖及び１つの軽鎖からなる二量体からなる群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、ＶＬＡ－４アンタゴニストである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  17. 前記ＶＬＡ－４アンタゴニストが、ＢＩＯ１２１１、ＴＣＳ２３１４、ＢＩＯ５１９２、及びＴＲ１４０３５からなる群から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. がん細胞と間質細胞との間の細胞間接触を破壊することを含む、がん細胞を死滅させる方法であって、がん細胞を、治療有効量の請求項１～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物に供することを含む、方法。
  19. 前記がんが、血液悪性腫瘍又は固形腫瘍である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬及び前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、同時に又は連続的に投与される、請求項１８又は１９に記載の方法。
  21. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬の前に投与される、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記ＶＬＡ－４接着経路阻害剤が、前記Ｔ細胞リダイレクト治療薬の投与後に投与される、請求項２０に記載の方法。
  23. 請求項１～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、キット。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE87659T1 (de) 1986-09-02 1993-04-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2150262C (en) 1992-12-04 2008-07-08 Kaspar-Philipp Holliger Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
SG44845A1 (en) 1993-01-12 1997-12-19 Biogen Inc Recombitant anti-vla4 antibody molecules
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
WO2007117600A2 (en) 2006-04-07 2007-10-18 Macrogenics, Inc. Combination therapy for treating autoimmune diseases
WO2009085462A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor, Inc. Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
AU2009239437B2 (en) 2008-04-25 2014-11-13 University Of Washington Levels of BCMA protein expression on B cells and use in diagnostic methods
PT3202789T (pt) 2010-04-16 2020-06-16 Biogen Ma Inc Anticorpos anti-vla-4
EP3974453A3 (en) 2010-11-16 2022-08-03 Amgen Inc. Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
US20130101599A1 (en) 2011-04-21 2013-04-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bcma-based stratification and therapy for multiple myeloma patients
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
PL2953972T3 (pl) 2013-02-05 2021-03-08 Engmab Sàrl Metoda wyboru przeciwciał przeciwko bcma
RS60305B1 (sr) * 2014-09-05 2020-07-31 Janssen Pharmaceutica Nv Agensi koji vezuju cd123 i njihove upotrebe
AU2016308567B2 (en) 2015-08-17 2022-10-27 Janssen Biotech, Inc. Anti-BCMA antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind BCMA and CD3, and uses thereof
MX2019004621A (es) * 2016-11-02 2019-11-28 Engmab Sarl Anticuerpo biespecifico contra bcma y cd3 y un farmaco inmunologico para uso combinado en el tratamiento del mieloma multiple.
CA3100118A1 (en) * 2018-05-16 2019-11-21 Janssen Biotech, Inc. Bcma/cd3 and gprdc5d/cd3 bispecific antibodies for use in cancer therapy

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