SE506771C2 - Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna - Google Patents
Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellernaInfo
- Publication number
- SE506771C2 SE506771C2 SE9600434A SE9600434A SE506771C2 SE 506771 C2 SE506771 C2 SE 506771C2 SE 9600434 A SE9600434 A SE 9600434A SE 9600434 A SE9600434 A SE 9600434A SE 506771 C2 SE506771 C2 SE 506771C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- bacteriophage
- ecacc
- phage
- bacterial
- infections
- Prior art date
Links
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 title claims abstract description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 20
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 12
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 19
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 33
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 claims description 9
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000702224 Enterobacteria phage M13 Species 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 17
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 abstract description 5
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 abstract description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 6
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 6
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710192393 Attachment protein G3P Proteins 0.000 description 2
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 101710179596 Gene 3 protein Proteins 0.000 description 2
- 241001590124 Helicobacter pylori 17874 Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKJKONMZMPUGHJ-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-hydroxy-3-[(4-nitrophenyl)diazenyl]-6-phenyldiazenylnaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=C(N=NC=3C=CC=CC=3)C(O)=C2C(N)=C1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 HKJKONMZMPUGHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710169873 Capsid protein G8P Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102100037114 Elongin-C Human genes 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101001011859 Homo sapiens Elongin-A Proteins 0.000 description 1
- 101001011846 Homo sapiens Elongin-B Proteins 0.000 description 1
- 101000881731 Homo sapiens Elongin-C Proteins 0.000 description 1
- 101000836005 Homo sapiens S-phase kinase-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010065764 Mucosal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000148 Polycarbophil calcium Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 230000003232 mucoadhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 1
- 229940127249 oral antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229950005134 polycarbophil Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000005919 time-dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydrogen carbonate;carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC([O-])=O.[O-]C([O-])=O WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/40—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum bacterial
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/205—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Campylobacter (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/121—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Helicobacter (Campylobacter) (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/14011—Details ssDNA Bacteriophages
- C12N2795/14111—Inoviridae
- C12N2795/14132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
20 25 506 771 F ilamentfager E. coli celler som uppbär hårliknande F-pili är värdar for filamentfager såsom Ml3, fd och fl. Dessa Ff (F pili, filamentous) fager är nästan identiska i sekvens och uppträdande (Rashed & Oberer (1986) Microbiological reviews 50, 401-427; Komberg & Baker, in: DNA Replication, p. 557-570, W.H. Freeman and Co., New York 1992). F f fager ensamma bland bakterievirus åstadkommer ingen lytisk infektion, men inducerar snarare ett tillstånd i vilket de infekterade värdcellema producerar och avsöndrar fagpartiklar utan att undergå lys.
Det enkelsträngade genomet av fagen M13 kodar for 10 olika proteiner. DNA är inneslutet i ett proteinhölje innefattande approximativt 2700 kopior av gen 8 proteinet (g8p). En viabel Ml3 fag uttrycker också fem kopior av 43 kDa gen 3 proteinet (g3p) på sin spets, vilket protein är ansvarigt fór adsorption till pili. Gen 3 proteinet är förankrat till virushöljet via den C-terrninala delen av en polypeptidkedja, medan det N-terrninala globulära området är exponerat och medierar fåstandet av fagen till spetsen av ett värd F pilus. Genom elektronmikroskopi, framstår adsorptionskomplexet som en "knopp-på-skaft" struktur vid ena änden av fagen. Under infektion, riktar ledarsekvensema av g3p och g8p transporten av dessa proteiner in till det inre membranet av bakteriecellen.
Ff fagema har rönt popularitet som kloningsvektorer eftersom de inte har någon fysisk restriktion som begränsar längden på DNA-kedjan som kan packas och eftersom de medger enkel rening av DNA. En fagemid är en vektor som uppbär replikeringsursprunget för både Ml3 (enkelsträngad) och plasmiden (dubbel- strängad). Fagemider kan odlas som plasmider eller packas som rekombinenta Ml3 fager medelst en hjälpfag såsom 3K07 (Veira & Messing (1987) Methods in Enzymol. 153, 3-11). 10 15 20 25 506 771 Rekombinan! antkroppsproduktion Antikroppsmolekyler innehåller diskreta fragment vilka kan isoleras genom proteasspjälkning eller framställas genom rekombinanta tekniker. Ett sådant fragment är Fv (“fragment variable“) vilket är sammansatt av endast VL och VH regionema av antikroppen. I US 4,946,778 beskrivs en rekombinant version av Fv fragmentet, benämnd enkelkedjig Fv (ScFv), där de två variabla regionema är artificiellt förenade med en neutral länk och uttrycks som en enkel polypeptidkedja.
En teknologi för rekombinant antikroppsproduktion har utvecklats av McCafferty och medarbetare (McCafferty (1990) Nature 348, 552-554; Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293). Dessa försök baseras ett fag-display system i vilket VH (“variable heavy“) och VL (“variable light“) genema klonas in i en fagvektor varefter fragmenten av antikroppar uttrycks som fusionsproteiner som visar sig på fagytan.
På detta sätt kan antikroppar av definierad speciñcitet och affinitet selekteras från en population. Det har föreslagits att antikroppar isolerade och framtällda i prokaryotiska system skulle benämnas "coliklonala" antikroppar (Chiswell & McCafferty (1992) Trends in Biotechnology 10, 80-84).
De kommersiellt tillgängliga fagemiden pCANTABS är så utformad att antikroppsvariabla regiongener kan klonas mellan ledarsekvensen och huvukroppen av M13 gen 3. Ledarsekvensen av g3p styr transport av det resulterande fusionsproteinet till det inre membranet och/eller periplasman av E. coli där huvud- g3p domänen fäster fusionsproteinet till spetsen av den samlade fagen. Uttryckandet av antikropps-gfsp genen kontrolleras av en inducerbar lac promoter på fagemiden. 10 15 20 25 30 506 771 Helicobacter pylori' infektion Det har allmänt accepterats att bakterien Helicobacter pylori är huvudorsaken till mag- och duodenal sår, och svarar för 84% respektive 95% av rapporterade fall (Kuipers, E.L. et al. (1995) Aliment. Pharinacol. Ther. 9 (suppl.2), 59-69). H. pylori' koloniserar på väggama av magsäcken skyddade från den sura omgivningen av ett slemhinneskikt vilket täcker magsäckens väggar, och av en metabolisk process som möjliggör för organismen att avsöndra ammoniak fór att neutralisera syra.
Konventionell antibiotikabehandling verkar ha liten effekt på H. pylori. Orsaken är förmodligen dålig tillgång till det antimikrobiella medlet för organismen vilken inte exponeras direkt för blodcirkulationen; och (ii) att många orala antibiotika antingen passerar genom magen alltför snabbt eller bryts ned snabbt av den sura omgivningen.
UPPFINNINGENS ÅNDAMÅL Ändamålet med uppfinningen är att åstadkomma nya produkter och metoder för avdödning av bakterier. Det har överraskande visat sig att en bakteriofag, vilken är specifik för en bakterievärd, kan modifieras genetiskt så att den erhåller bindningsspecificitet gentemot en annan bakterievärd. Följdaktigen erbjuder uppfinningen nya rekombinanta fager med specifika egenskaper för att binda till och avdöda bakterier.
Dessa rekombinanta fager kan således användas för behandling av bakterieinfektioner islemhinnor. Behandlingsmetoder baserade på rekombinanta fager tros vara överlägsen konventionell antibiotikabehandling av flera orsaker. tex. följande: - det är möjligt att avdöda bakterier resistenta mot konventionell antibiotika: - den höga specificiteten hos de rekombinanta fagema mot specifika bakteriearter; - törökningen av fagen är självbegränsande; 10 15 20 25 30 506 77'l“ - i fallet Helicobacter pylori infektioner, kan motiliteten av Helicobacrer pylori hjälpa till at sprida fagen till alla delar av magslemhinnan.
BESKRIVNING AV UPPFINNINGEN l följande beskrivning och exempel, skall termema "standardprotokoll" och "standardförfaranden " förstås som protokoll och förfaranden som hittas i en vanlig laboratoriemanual såsom: Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A laboratory manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY.
I en första aspekt avser föreliggande uppfinning en rekombinant polypeptid innefattande (i) en första polypeptiddel härrörande från ett bakteriofagt ytprotein; och (ii) en andra polypeptiddel härrörande från en variabel region av en antikropp som specifikt binder till en bakteriecell av Helicobacter pylori. l en annan aspekt avser uppfinningen en rekombinant polypeptid avsedd att användas i terapi innefattande (i) en första polypeptiddel härrörande från ett bacteriofagt ytprotein och (ii) en andra polypeptiddel härrörande från en variabel region av en antikropp som specifikt binder till en bakteriecell, vilken är av en annan art än den art som sagda bekteriofag normalt förmår infektera. Sagda bakteriecell kan t.ex. vara en He/icobacter pylori cell.
För båda dessa aspekter kan den första polypeptiddelen t.ex. härröra från en filamentbakteriofag såsom Ml3, ytproteinet kan t.ex. vara ett g3p protein från fag lvll3.
Sagda variabla region av en antikropp kan t.ex. vara ett "fragment Variable" (Fv) av en antikwpp, eller den rekombinanta enkel-kedjan Fv (ScFv) vilken är känd inom området. 10 15 20 25 30 506 771 l det fall att sagda andra polypeptiddel härrör från en antikroppsbindande Helicobacter pylori, kan sagda antikropp t.ex. härröra från någon av hybridom- cellinjema benämnda 2H6 (ECACC No. 95121526), 5D8 (ECACC No. 95121527), 5F8 (ECACC No. 95121524), eller 5C4 (ECACC No. 95121525). Sagda hybridom- cellinjer, liksom monoklonala antikroppar härrörande från dessa cellinjer innefattas av uppfinningen. Hybridomtekniken ivilken antikroppsproducerande B-celler från immunicerade djur sammansmältes med myelomceller, och resulterande hybridom- cellinjer som producerar önskade antikroppar utväljs, är välkänd inom området.
Uppfinningen avser vidare en isolerad bakteriofag, vilken på sin yta uttrycker en komponent, t.ex. en rekombinant polypeptid, med förmåga att binda till en bakteriecell, varvid bakteriofagen kan lysera eller på annat sätt oskadliggöra bakteriecellen, medan bakteriofagen i sin naturliga fonn saknar förmåga att binda till eller lysera sagda bakteriecell.
Fager med de önskade egenskapema kan erhållas t.ex. med någon av följande metoder: (a) Screening av naturligt förekommande fager, eller fagbibliotek innehållande fager som uttrycker en mängd variabla antikroppsfragment. Fagbibliotek kan erhållas t.ex. från immunceller från ett stort antal individer. Beroende på den omfattande genetiska variationen kommer sådana stora fagbibiliotek sannolikt att innefatta de önskade specifika fagema riktade mot bakterier, för vilka individerna tidigare exponerats. (b) Utvecklande av mutationer i existerande fager. Mutationer uppstår i alla levande organismer inklusive fager. Frekvensen av mutationer kan ökas, t.ex. på kemisk väg eller med hjälp av elektromagenstisk strålning med kort våglängd. (c) Riktad genetisk modifiering av en eller flera aminosyror, eller andra modifieringar av t.ex. kolhydrat- eller lipidkomponenter, i fagens bindningsregioner. 10 15 20 25 30 506 771 fór att förstärka de önskade egenskapema hos den naturliga eller rekombinanta fagen.
Ett exempel på detta beskrivs närmare i den experimentella delen. En bakteriofag enligt uppfinningen kan således framställas med en metod innefattande (a) isolering av en antikropp mot en bakteriecell; (b) isolering av DNA sekvensen som kodar för en variabel region av den tunga eller lätta kedjan av sagda antikropp; och (c) införande av sagda DNA i fagens DNA så att sagda antikroppregioner kommer att uttryckas på ytan av fagen.
En föredragen utfóringsfonn av bakteriofagen enligt uppfinningen utgörs av en isolerad bakteriofag vilken på sin yta uttrycker en rekombinant polypeptid enligt uppfinningen.
En bakteriofag enligt uppfinningen kan tillhöra gruppen filamentfager, och kan således vara en Ml3 bakteriofag, t.ex. fagen benämnd B8 (NCIMB 40779).
Föreliggande uppfinning är inte begränsad till fager som förmår lysera eller oskadliggöra Helicobacter pylori celler, utan innefattar snarare fager med förändrade egenskaper vilka kan användas för ett lysera eller oskadliggöra bakterier i allmänhet.
Det är underförstått att en fag enligt uppfinningen vilken är specifik för en viss bakterieart kan framställas av en fackman på området på basis av föreliggande beskrivning. Fager enligt uppfinningen är lämpliga för behandling av vilken som helst bakteriell slemhinneinfektion. Exempel på sådana mucosaepitel är nasal-, lung-. gastrointestinalområdet, urinblåsa och vagina.
Exempel på andra bakterieinfektioner som skulle kunna behandlas med fager enligt uppfinningen är: - infektioner i urinvägama av E. coli, Staphylococcus saprophyticus, Klebsiella spp.
Proteus spp eller Pseudomonas aeruginosa; - vaginala infektioner av Clamydia: - näs-/tonsill-/lunginfektioner av Streptoccus, Staphylococcus, Haemophilus influence. Pneumococcus eller Mycoplasma pneumoníc; - infektioner i det gastrointestinala området av Salmonella, Shigella. Yersinia, 10 15 20 25 30 506 771 Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Helicobacter, Vibrio cholera eller E. coli.
I en ytterligare aspekt avser uppfinningen en rekombinant polypeptid eller en bakteriofag enligt uppfinningen for användning i terapi, såsom behandling eller profylax av bakterieinfektioner, t.ex. Helicobacter pylori infektioner.
I en annan aspekt avser uppfinningen användning av en rekombinant polypeptid eller en bakteriofag enligt uppfinningen for framställning av ett medikament fór behandling av bakterieinfektioner såsom Helicobacter pylori infektioner.
En ytterligare aspekt av uppfinningen utgörs av en metod fór behandling av bakterieinfektioner, t.ex. Helicobacter pylori infektioner, hos ett däggdjur, innefattande administrering till däggdjuret ifråga som är i behov av sådan behandling, av en effektiv dos av en rekombinant polypeptid eller en bakteriofag enligt uppfinningen.
Uppfinningen avser även ett farmaceutiskt preparat innefattande en rekombinant polypeptid eller en bakteriofag enligt uppfinningen. Ett farmaceutiskt preparat enligt uppfinningen kan användas fór behandling av bakterieinfektioner , t.ex. Helicobacter pylori infektioner.
Exempel på lämpliga administreringsformer av fagema enligt uppfinningen innefattar: - spray for nasal- och lungapplikationer; - fórbehandling med omeprazole följt av fager suspenderade i bikarbonatbuffert för behandling av den gastrointestinala slemhinnan; - blandningar av muco-adhesiva geler (t.ex. cellulosa-baserade geler, polykarbofil, poloxamer etc.) för magslemhinna och vaginalslemhinna; - bikarbonatbuffert fór användning i urinblåsan.
Antalet fager som skall adminstreras kan avgöras av fackmannen på området. 10 15 20 25 30 'soe 771 Beroende på typ av infektion kan antalet fager som skall administreras variera mellan io* to 1o'°.
EXEMPEL EXEMPEL 1: Framställning av monoklonala antikroppar mot H. pylori 1. 1. Antigenfiramställning H. pylori stammar 17874, 25, 66, 253, och 1139 (erhållna från Astra Hässle, Sverige) odlades på Columbia agar kompletterad med 85% hästblod, 10% hästserum, 1% isovitalex under mikroaeroflla Förhållanden med Anaerocult C at +37°C.
Förfaranden beskrivna av Ma J-Y et al. (1994) Scand. J. Gastroenterol. 29, 961-965, följdes för att fiamställa ytprotein av H pylori. l korthet inkuberades totalt 4 g av de fem stammama av H. pylori i 15 min vid rumstemperatur i 100 ml 0.2 M glycin-HCl (pH 2.2). pH neutraliserades med 1 M NaOH. Antigenpreparatet centrifugerades 10,000 x g under 10 min vid +4°C. Pellets kastades bort och supematanten dialyserades över natten mot destillerat vatten vid +4°C och användes vidare som "H. pylorí antigenpreparat" eller "I-I. pylori ytproteiner". 1.2. F ramstäílníng av monoklonal antilo-opp lmmuniseringsproceduren utfördes huvudsakligen såsom beskrivs av Cabero, J.L. et al. (1992) Acta Physiol. Scand. 144, 369-378. I korthet, 2 mg/ml ytprotein av H. pylori emulgerades med lika volym av F reunds kompletta adjuvans vid +4°C. Två DBA/1 möss av honkön injicerades i de bakre trampdynoma med en enkel dos 50 ul antigenemulsion. ll dagar efier immuniseringen. sammansmältes lymfocyter från knäveckslymtkörtlama med myelomceller från mus (sp2 line) med användande av 50% (w/w) PEG 4000. Cellfusionssuspensionen fördelades sedan i fem 10 15 20 25 30 506 771 __]0_ mikrotiterplattor. Alla celler odlades i DMEM kulturmedium innehållande 10% serum från kalv-foster plus 50 pg/ml gentamycin. 1.3. Enzymkopplad immunosorbent assay (ELISA) lmmunoplattor belades med 50 pl of 0.05 M NaZCOJ/Nal-ICO] buffert, pH 9.8 innehållande indikerade antigen (10 ug/ml) och inkuberades över natten vid +4°C.
Fria bindningssäten blockerades med PBS innehållande 0.05% Tween-20 (PBS-T) vid +37°C under 1 timme. Primär antikroppssupematant tillsattes och inkuberades vid +37°C under l timme. Get anti-mus IgG peroxidaskonjugat användes som en sekondär antikropp. Bundet peroxidas detekterades med 0.04% (w/v) OPD och 14 mM väteperoxid i 0.1 M citron- syra/0.2 M NaHPOu pH 5. Plattoma lästes vid 492 nm efter det att reaktionen stoppats genom tillsats av 2 M HZSO, Tvätt med PBS-T genomfördes tre gånger mellan varje inkubation. 1.4. Initial screening Från fusionen av lymfkärlsceller och myelomceller, var 45 hybridomkloner positiva mot H. pylori ytprotein med ELlSA. 8 av dem var distinkt färgade H. pylori tagna från agarplattans kultur med hjälp av immunohistokemi. Hybridomkloner designerade 21-16 (ECACC No. 95121526), 5D8 (ECACC No. 95121527), 5F8 (ECACC No. 95121524), och 5C4 (ECACC No. 95121525) gav en starkare reaktion mot H. pylorí än andra och valdes for vidare studier.
EXAMPEL 2: Framställning av rekombinanta Ml3 fager mot H. pylori 2. 1. Åfíaterial QuickPrep mRNA puriflcation kitTM, Mouse ScFv Module kitTM, Expression Module kitTM, Detection Module KitTM, Sjil, Notl, T4 DNA ligas och Anti-MB antikroppar 10 15 20 25 30 506 771 _11_ från får erhölls från Pharrnacia Biotech (Uppsala, Sweden). dNTPs mix, l0 x PCR buffert och AmpliTaq DNA polymeras köptes från Perkin Elmer. Bacto-yeast extrakt, Bacto-trypton, Bacto agar köptes från Difco Laboratories (Detroit, Michigan USA). Columbia agarplattor och brucella-buljong erhölls från lnstitutionen för Mikrobiologi (Linköpings Universitet, Sverige). Anaerocult® C erhölls från Merck (Tyskland). SlowFadeTM “antifade kit“ erhölls från Molecular Probes lnc. (U.S.A.). 2.2. Uppbyggnad avfagantikropps-bibliotek The Recombinant Phage Antibody SystemTM (Pharmacia) användes för att uttrycka fragment av antikroppar som fusionsproteíner som ñnns på fag-ytan.
Total mRNA isolerades från hybridomcellinjer (2H6, 5D8, 5F8 och 5C4) och renades med affmitetskromatografi på oligo(dT)-cellulosa, med användande av QuickPrep mRNA Purification KitTM (Pharmacia).
Följande steg genomfördes med användande av Mouse ScFv Module KitTM: ~ Första strängen av cDNA syntetiserades från hybridom mRNA med användande av omvänd transkriptas och primerblandningar försedda med Mouse ScFv Module KitTM. ° cDNA motsvarande de variabla regionema av de tunga och lätta kedjoma av mAbs förstärktes med olika primers (VH och VL kedje- primers, tillhandahållna med kitet) genom polymeraskedjereaktion (PCR). VH och VL kedjor analyserades genom elektrofores på en l.5% agarosgel. Enkla band vid den korrekta storleken för VH (340 bp) och VL (325 bp) kedjan erhölls.
° De förstärkta VH och VL kedjoma renades och isolerades genom elektrofores på en 1% agarosgel och sammanfórdes sedan till en enkel-kedjig Fv (ScFv) gen med användande av DNA kopplingsfragment som tillhandhölls med kitet. 10 15 20 25 30 506 771 _12_ Kopplingsfragmentet var så uppbyggt att en ände sammansmälte med 3'- änden av den tunga kedjan medan den andra änden hybridiserade med 5'- änden av den lätta kedjan. Ett enkelt band med korrekt storlek för en ScFv gen (750 bp) observerades eñer elektrofores.
Det förenade antikropps ScFv DNA fragmentet förstärktes med ett set av oligonukleotidprimer (tillhandahållet med kitet) som introducera-de Notl och Sfil restriktionssäten. Fragmenten renades på en spunnen kolonn (tillhandahållen med kitet) för att avlägsna kopplarsubstanser, dNTPs och Taq DNA polymeras. ScFv fragmentet spjälkades med Notl och Sjïl för att bilda kohesionsändar fór ligation med pCANTAB5 vetom.
Följande steg utfördes med användande av Expression Module KitTM: ScFv fragmentet ligerades till fagemidvektom pCANTABS (tillhandahölls med kitet), tidigare spjälkad med Notl och Sfil för att generera kohesiva ändar.
T4 DNA ligas användes för att förena ändama av fragmentet med motsvarande ändar fór fagemiden. cFv fragmentet orienterade sedan i korrekt riktning, intill och inom ramen för Ml3 genen 3, fór uttryckande av ScFv-g3p fiisionsproteinet.
E. coli TGI celler (tillhandahölls med kitet) gjordes kompetenta och transformerads med den rekombinanta fagemiden, innanhållande en lac promoter och en ampicillin resistensmarkör. De transformerade cellerna odlades vid +30°C i ett medium innehållande glukos och ampicillin. 3.2 x 104 ScFv kloner erhölls. Ampicillin resistenta kolonier skrapades ned i ett medium fór att generera en biblioteksstam.
Ampicillinresistenta celler infekterades med hjälparfagen Nll3K07 (tillhandahölls med kitet), innehållande en kanamycinresistent markör, och odlades iett glukos-fattigt medium innehållande ampicillin och kanamycin. I 10 15 20 25 30 506 771 _13- frånvaro av glukos undertrycktes inte längre Iac promotom på fagemiden.
Fagpartíklar uppvisande rekombinanta antikroppsfragment på sina spetsar framställdes och frigjordes från cellema - Faguppvisande antikroppar med förmåga att binda H. pylori antigen selekterades genom vaskning mot antigenen. En kulturflaska belades med 5 ml H. pylori ytprotein (15 pg/ml i 50 mM natriumkarbonat- buffert, pH 9.6) över natten. Efter tre tvättar med PBS, inkuberades flaskan innehållande 10 ml 1% BSA (w/v) i PBS vid +37°C under 1 timme. Efter tre tvättar med PBS, inkuberades flaskan vid +37°C under 2 timmar i fagsupematant (medium innehållande fag). Flaskan tvättades sedan 20 gånger med PBS innehållande 0.l% (w/v) Tween-ZO och 20 gånger med PBS. Bundna fagpartiklar eluerades sedan genom att tillsätta 1 ml 100 mM trietylamin under varsam skakning under 10 min och omedelbar neutralisering med 0.5 ml 1 M Tris-HCl, pH 7.4.
Den eluerade fagen användes fór att infektera log-fas E. coli TG] celler på SOBAG agar innehållande 2% Bacto-trypton, 0.5% Bacto-jäst extrakt, 0,05% NaCl, 0.01 M MgClz. 0,01% glukos and 0.01% ampicillin. Kolonier plockades ut. överfördes, odlades och återvanns igen med M13K07.
Efter den första selekteringsomgången räknades 100 kloner varav 6% av klonema från microtiter plattoma var positiva mot antigen preparationen av H. pylori i en ELlSA. l en tredje selekteringsomgång från mikrotiterplattoma reagerade 95% av fagantikroppama från individuella kloner med H. pylori antigen. 1 en fag ELISA med användning av H. pylori antigenpreparation som antigen, har den rekombinanta fagen B8 en titer som är 10 gånger högre än hjälparfagen (vid fag).
Fag B8 (NClMB No. 40779) valdes fór vidare analys. 10 '15 20 25 30 506 771 _14_ EXEMPEL 3: ELISA De fagindikerade rekombinanta antikroppama detekterades och identifierades i en “enzyme-linked immunosorbent assay“ (ELISA), med användning av Detection Module KitTM.
En 96-brunns mikrotiterplatta belades med 200 ul H. pylori antigen (10 tig/ml i 50 mM NazCOjNaHCOs, pH 9.6) och inkuberades över natten vid +4°C. Brunnama tvättades med PBS innehållande 0.05% Tween 20 (PBS-T) tre gånger och blockerades sedan med 300 ul PBS innehållande 1% BSA under l timme vid +37°C.
Rekombinanta fagantikroppar späddes med en lika volym av 1% BSA/PBS och inkuberades under 20 min. vid rumstemperatur. Eñer tvättning tillsattes 5xl0l° fag- transduktionsenheter (200 ul/well) och inkuberades under 2 timmar vid +37°C.
Brunnama tvättades med PBS-T tre gånger och sedan tillsattes HRP/Anti Ml3 konjugat levererat i Detection Module kit, utspätt |:5000 i 1% BSA/PBS och inkuberades under l timme vid +37°C. Brunnama tvättades tre gånger med PBS-T och sedan tillsattes 2'2'-Azino-Bis(3-Etylbenztiazolin-ó-Sulfonsyra) Diammonium (ABTS) och HzOz som peroxidassubstrat och inkuberades vid rumstemperatur under 30 min. Absorbansen avlästes vid 405 nm med användning av en datoriserad ELlSA läsare. Ovalbumin (10 tig/ml i PBS) användes som kontrollantigen. Hjälparfag användes som en negativ kontroll. Resultaten verifierade att den rekombinanta fagen B8 specifikt binder till H. pylori ytantigenen.
EXEMPEL 4: lmmunoblotting Proteiner av H. pylori antigenpreparat separerades medelst polyakrylamidgel- elektrofores i SDS-PAGE (10 pg protein/brunn) och överfördes sedan till nitrocellulosapapper ien mini trans-blot elektroforetisk transfercell (BioRad.
Richmond, CA, USA). Nitrocellulosapapperet blockerades med 10% BSA i PBS 10 15 20 25 30 506 771 ._|5_ innehållande 0.l% Tween 20 i 1 timme vid rumstemperatur under varsam skakning.
Fage B8 (10" transducerande enheter/ml) tillsattes sedan och inkuberades tillsammans nitrocellulosa-papper över natten under varsam skakning vid +4°C.
Utelämnande av primära antikroppar användes som en negativ kontroll. Efter tvättning med PBS-0.l% Tween 20, inkuberades nitrocellulosapapperet med HRP/anti-MIB konjugat (l:5000 spädning i en blockierande buffert) under l timme med omskakning. Detektering av bindning utfördes med användning ECL Detection Kit (Amersham, UK).
Efier färgning av nitrocellulosapapperet med amidosvart, svarade huvudbanden mot proteiner av 64 kDa, 36 kDa, 3l kDa och 27 kDa. “Pooled“ MAbs (2H6, SDS. Fl S och SC4 svarande mot de hybridomas som användes för fagkonstruktion) reagerade med banden för 32 kDa och 64 kDa. En liknande färgning erhölls genom immunoblotting med fagantikropp BS. Detta resultat indikerade att genema tíir Jt- variabla tunga och lätta kedjoma svarande mot de H. pylori specifika monoklvndld anti-kroppama uttrycktes korrekt på fagen.
EXEMPEL 5: Effekter av rekombinanta fager på bakterier l Följande experiment odlades bakterier +37°C i Brucella-buljong innehållande 5% kalvfosterserum i en atmosfär innehållande l0% C02 och 5% Oz.
Experimentet startades ("Tid 0") när 20 ul av bakteriesamlingen blandades med l0 ml buljong. CFU (“colony forming units“) per ml kultur bestämdes vid de indikerade tidpunktema genom att späda alikvoter av kulturema i PBS och sprida ut spädningama på agarplattor. Plattoma inkuberades i två dagar vid +37°C och antalet kolonier på varje platta räknades. 10 20 25 30 506 771 _16__ 5 . 1. Tidsberoende eflekï i Den tidsberoende effekten av den rekombinanta fagen B8 på tillväxten H. pylori stammen 17874 undersöktes genom att CFU under tre dagar med eller utan fag (Tabell 1). 106 fager tillsattes ("+Fag") till 10 ml medium vid Tiden 0. 1 kontrollen ("- Fag") tillsattes inga fager.
Efter 3 dagar, hade CFU ökat cirka 5 storleksordningar i frånvaro av den rekombinanta fagen. Eñer en dag i närvaro av fagen var det en reducering av CFU med cirka en storleksordning och buljongkulturen förändrades från en turbid till en mindre turbid lösning.
TABELL 1 -Fag + Fag B8 fiè CFU/ml Tido sx1o^ 4x1o“ 2411. 13x10' sx1o° 48 h. 1.75 x 10” 9.5 x1o° 72 h. 4x1o° 3x1o° 5.2. Eflekr på olika bakteriestammar H. pylori laboratoriestammar 17874, 1139 och 244, tillsammans med Staphylococcus aureus, ATCC 29213, och E. coli TG1 odlades med eller utan fag (106 fager till 10 ml medium) under 24 h. CFU analyserades vid Tiden 0 och vid 24 h (Tabell 2). Den rekombinanta fagen minskade CFU hos de tre testade H. pylori stammama men påverkade Staphylococcus eller E. coli. H. pylorí 17874 påverkades inte av Ml3K07 som användes som kontroll. 10 15 20 506 771 _17_ TABELL 2 H. pylori Staph. E. coli 17874 1139 244 CFU/ml Ingen fag 0 h. 2.1 x 4.7 x 10' 10" 7.8 x 107 2.6 x 106 10' 2411. sax 15x10” 3.1 x1of* 1o'° 44x10” 1o° Fag B8 0 h. 2.8 x 4.3 x 10' 10' 2.1 x 10” 2.6 x106 10' 2411. 4x1o2 102 1o° ex1o9 42x10” Fag 0 h. 3.9 x (ej bestämd) M13K07 10' 24 h. 4 x 106 (ej bestämd) 5.3. Eflekï på H. pylori stammar I ett andra experiment (Tabell 3), testades H. pylori stammama 17874, l l39. 253, 25 och 66 tillsammans med Streptococcus (Raf M87). Utan fag ökade CFU under den 24 h långa inkubationen för alla testade bakterier. Emellenid i kulturer med den rekombinanta fagen närvarande (106 fager till 10 ml medium vid Tiden O). reducerades CFU värdena på H. pylori stammama 17874, l [39 och 25 i antal och tillväxthastigheten stammama 253 och 66 reducerades krafiigt ijämfórelse med.
Således påverkades alla H. pylori stammar av fagema. 10 15 20 25 30 506 771 _1g_ TABELL 3 'I -Fag +Fa BB Jjkoh. a: 24 h. oh. 24 h. 17074 15x10' sx10° 13x10* 2x1o2 1130 10* 7x10“ 9x10“ 1.1x10“ 253 1.1 x10' 17x10? 13x10* 4x105 zs 14x10* 9x10' 7x10“ 3x102 66 14x10' 21x10' 14x10* 4x10“ srrepr. 23x10? 5.6 x107~ 19x10” 5.8 x 10' EXEMPEL 6: lmmunofluorescent infärgning av H. pylori Fagantikroppar B8 koncentrarades genom PEG utfállning och immuno-fluorescent intärgning genomfördes på H. pylori (17874 stam) tagen från kulturen.
Följande förrådsreagens framställdes för att immunofluorescent infárgning: Reagens A: 10” transduktionsenheter/ml fagantikroppar späddes 1:1 med 1% BSA/PBS; Reagens B: anti-MIB lgG från får späddes med 1% BSA/PBS; Reagens C: anti-får lgFlTC konjugat spätt 12100 i 1% BSA/PBS; Reagens D: 1 mg (w/v) pronas i PBS.
Tre dagar efter odling suspenderades H. pylori (5 olika stammar), Staphylococcus aureus (ATCC 29213), och Streplococcus (Raf M 87) separat i PBS innehållande 1% BSA. 20 ul av varje bakteriesuspension tillsattes på objektglas. Bakteriema luft- torkades och fixerades i neutral fonnalin i 2 min, tvättades sedan genom att objekt- glasen doppades sex gånger i vatten och lufttorkades vid rumstemperatur. Kort behandling i reagens D ökade signal-till-brustörhållandes när provglasen jämfördes med kontrollema. Provglasen inkuberades sedan efter varandra med 30 pl av 10 '15 20 506 771 _19... reagensen A, B och C, under 30 min vardera, och tvättades i PBS mellan inkuberingama. Objektglasen lufitorkades och l droppe S1owFade tillsattes fóre övertäckning. Alla inkuberingar utfördes vid rumstemperatur. Negativ kontroll genomfördes genom att utesluta de primära antikroppama.
Resultaten visade att H. pylori infárgades positivt med fagantikroppen. Resultaten indikerar en god överensstämmelse med de CFU värden som erhölls från odlingsexperimenten. Således verkar uttryckandept av en specifik antigen på ytan av bakterien vara en förutsättning för fullgörandet av den biologiskaeffekten av fag B8.
DEPOSITION AV MIKROORGANISMER Följande hybridoma kloner har deponerats under Budapesttördraget vid European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, U.K., den 15 December 1995: 21-16 (ECACC No. 95121526) 5D8 (ECACC No. 95121527) 5F8 (ECACC No. 95121524) 5C4 (ECACC No. 95121525) Den rekombinanta fagen B8 har deponerats under Budapesttördraget vid National Collection of Industrial and Marine Bacteria (NCllVlB), Aberdeen, Scotland, den 20 December 1995 med depositionsnummer NCIMB 40779.
Claims (1)
1. 0 15 20 25 30 506 771 20 PATENTKRAV Rekombinant polypeptid innefattande (i) en första polypeptiddel härrörande från ett bakteriofagt ytprotein och (ii) en andra poly-peptiddel härrörande från en variabel region av en antikropp som specifikt binder till en Helicobacter pylori cell. Rekombinant polypeptid, för användning iterapi, innefattande (i) en första polypeptiddel härrörande från ett bakteriofagt ytprotein och (ii) en andra polypeptiddel härrörande från en variabel region av en antikropp som specifikt binder till en bakteriecell, varvid sagda bakteriecell är av en annan art än den an som sagda bakteriofag normalt förmår infektera. Rekombinant polypeptid enligt patentkrav 2, for användning iterapi, varvid sagda antikropp binder Helicobacter pylori. Rekombinant polypeptid enligt något av kraven l till 3 varvid antikroppen härrör från hybridoma cell-linjer benämnda 2H6 (ECACC No. 95121526), 5D8 (ECACC No. 95121527), 5F8 (ECACC No. 95121524), eller 5C4 (ECACC No. 95121525). Rekombinant polypeptid enligt något av kraven 1 till 3 varvid sagda forsta polypeptiddel härrör från en filament-bakteriofag. Rekombinant polypeptid enligt krav 5 varvid sagda första polypeptiddel härrör från ett g3p protein från bakteriofag M13. Rekombinant polypeptid enligt något av kraven 1 till 6 för användning vid behandling eller profylax av bakterieinfektioner i slemhinnor. Rekombinant polypeptid enligt någort av kraven 1 till 6 for användning vid behandling eller profylax av Helicobacter pylori infektioner. 10 15 20 25 30 l0. l7. l8. 506 771 21 ' En isolerad bakteriofag, för användning i terapi, vilken bakteriofag på sin yta uttrycker en rekombinant polypeptid som förmår binda till en bakteriecell, varvid sagda bakteriofag därigenom blir kapabel att lysera eller på annat sätt oskadliggöra sagda bakteriecell, medan sagda bakteriofag i sin naturliga form saknar fönnåga att binda till eller lysera sagda bakteriecell. isolerad bakteriofag vilken på sin yta uttrycker en rekombinant polypeptid enligt något av kraven l till 6. Bakteriofag enligt krav 9 eller 10 vilken härrör från gruppen fllament-fager. Bakteriofag enligt krav l l vilken härrör från en M13 bakteriofag. Bakteriofag enligt krav 12 vilken är en fag benämnd B8 (NCIMB 40779). Bakteriofag enligt något av kraven 9 till 13 för användning vid behandling eller profylax av bakterieinfektioner i slemhinnor. Bakteriofag enligt något av kraven 9 till 13 för användning vid behandling eller profylax av Helicobacler pylori infektioner. Användning av en rekombinant polypeptid enligt något av kraven l till 6 for framställning av ett medikament för behandling av bakterieinfektioner, t.ex. Helicobacter pylori infektioner. Användning av en bakteriofag enligt något av kraven 9 till 13 för tillverkning av ett medikament for behandling av bakterieinfektioner, t.ex. Helicobacter pylori infektioner. Farmaceutiskt preparat innefattande ett rekombinant protein enligt något av kraven I till 6. 10 506 771 20. 21. 22. 23. 22 Fannaceutiskt preparat innefattande en bakteriofag enligt något av kraven 9 till 'W 15. Farrnaceutiskt preparat enligt krav 20 eller 21 fór användning vid behandling av bakterieinfektioner i slemhinnor. Farmaceutiskt preparat enligt krav 22 för behandling av Helicobacter pylori infektioner. Hybridoma cell identisk med någon av de cell-linjer identifierade som 21-16 (ECACC No. 95121526), 5D8 (ECACC No. 95121527), 5F8 (ECACC No. 95121524), eller 5C4 (ECACC No. 95121525). Monoklonala antikroppar producerade av en hybridoma cell enligt krav 22.
Priority Applications (18)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9600434A SE506771C2 (sv) | 1996-02-06 | 1996-02-06 | Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna |
| ES97902815T ES2221033T3 (es) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Fagos recombinantes. |
| CN97192116A CN1125174C (zh) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | 重组噬菌体 |
| JP52844697A JP4015195B2 (ja) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | 組換えファージ |
| PCT/SE1997/000172 WO1997029185A1 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| EP97902815A EP0889955B1 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| DE69728975T DE69728975T2 (de) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Rekombinante phagen |
| HU9901242A HUP9901242A3 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| AT97902815T ATE266091T1 (de) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Rekombinante phagen |
| NZ331580A NZ331580A (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| AU16817/97A AU712767B2 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| CA002244792A CA2244792A1 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| KR10-1998-0705761A KR100459638B1 (ko) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | 재조합파아지 |
| IL12564597A IL125645A0 (en) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Recombinant phages |
| RU98116471/13A RU2215032C2 (ru) | 1996-02-06 | 1997-02-05 | Конструкция модифицированного нитевидного бактериофага для лечения или профилактики бактериальной инфекции, модифицированный бактериофаг м13, фармкомпозиция и способ лечения бактериальной инфекции, моноклональное антитело, гибридома (вариант) |
| NO19983456A NO323359B1 (no) | 1996-02-06 | 1998-07-27 | Anvendelse av en modifisert bakteriofag til fremstilling av et legemiddel. |
| IL125645A IL125645A (en) | 1996-02-06 | 1998-08-03 | Use of a modified bacteriophage in the manufacture of a medicament |
| US09/927,420 US20020044922A1 (en) | 1996-02-06 | 2001-08-10 | Recombinant phages |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9600434A SE506771C2 (sv) | 1996-02-06 | 1996-02-06 | Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9600434D0 SE9600434D0 (sv) | 1996-02-06 |
| SE9600434L SE9600434L (sv) | 1997-08-07 |
| SE506771C2 true SE506771C2 (sv) | 1998-02-09 |
Family
ID=20401289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9600434A SE506771C2 (sv) | 1996-02-06 | 1996-02-06 | Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0889955B1 (sv) |
| JP (1) | JP4015195B2 (sv) |
| KR (1) | KR100459638B1 (sv) |
| CN (1) | CN1125174C (sv) |
| AT (1) | ATE266091T1 (sv) |
| AU (1) | AU712767B2 (sv) |
| CA (1) | CA2244792A1 (sv) |
| DE (1) | DE69728975T2 (sv) |
| ES (1) | ES2221033T3 (sv) |
| HU (1) | HUP9901242A3 (sv) |
| IL (2) | IL125645A0 (sv) |
| NO (1) | NO323359B1 (sv) |
| NZ (1) | NZ331580A (sv) |
| RU (1) | RU2215032C2 (sv) |
| SE (1) | SE506771C2 (sv) |
| WO (1) | WO1997029185A1 (sv) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000006717A2 (en) | 1998-07-27 | 2000-02-10 | Genentech, Inc. | Improved transformation efficiency in phage display through modification of a coat protein |
| GB9908195D0 (en) | 1999-04-09 | 1999-06-02 | Microbiological Res Authority | Treatment of intracellular infection |
| EP1187914B1 (en) | 1999-06-14 | 2005-05-25 | Genentech, Inc. | A structured peptide scaffold for displaying turn libraries on phage |
| DE60113851T2 (de) * | 2000-07-25 | 2006-07-20 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Bakteriophage mit breitem wirtsspektrum |
| US6914123B2 (en) | 2001-04-17 | 2005-07-05 | Genentech, Inc. | Hairpin peptides with a novel structural motif and methods relating thereto |
| KR20040036176A (ko) * | 2002-10-23 | 2004-04-30 | (주)엘피스바이오텍 | 단백질의 특이적 결합을 매개로 한 박테리오파아지의선택적 숙주감염을 이용한 단백질간의 상호작용을분석하는 방법 |
| CN102296051B (zh) * | 2011-03-07 | 2014-09-17 | 江苏省农业科学院 | 一种宽宿主谱鸡白痢沙门氏菌噬菌体及其应用 |
| RU2503716C1 (ru) * | 2012-09-27 | 2014-01-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ВИРУЛЕНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИОФАГА, ОБЛАДАЮЩИЙ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ Staphylococcus aureus, ВКЛЮЧАЯ МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНЫЕ ШТАММЫ |
| GB201308745D0 (en) * | 2013-05-15 | 2013-06-26 | Imp Innovations | Bacteriophage |
| CN106198523A (zh) * | 2016-07-06 | 2016-12-07 | 哈尔滨贝贝凯尔科技发展有限公司 | 微量元素检测试纸及其制备方法 |
| US20200271657A1 (en) | 2017-10-04 | 2020-08-27 | Opko Pharmaceuticals, Llc | Articles and methods directed to personalized therapy of cancer |
| CN112739416B (zh) * | 2018-12-27 | 2024-09-06 | 国立大学法人东海国立大学机构 | 宿主细菌特异性纳米粒子 |
| CN109679981A (zh) * | 2019-02-21 | 2019-04-26 | 武汉大学 | 一种甲酰基肽定向进化噬菌体及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9015198D0 (en) * | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| SE9304060D0 (sv) * | 1993-12-06 | 1993-12-06 | Bioinvent Int Ab | Sätt att selektera specifika bakteriofager |
-
1996
- 1996-02-06 SE SE9600434A patent/SE506771C2/sv not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-02-05 WO PCT/SE1997/000172 patent/WO1997029185A1/en active IP Right Grant
- 1997-02-05 HU HU9901242A patent/HUP9901242A3/hu unknown
- 1997-02-05 CA CA002244792A patent/CA2244792A1/en not_active Abandoned
- 1997-02-05 AU AU16817/97A patent/AU712767B2/en not_active Ceased
- 1997-02-05 AT AT97902815T patent/ATE266091T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-02-05 JP JP52844697A patent/JP4015195B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-05 ES ES97902815T patent/ES2221033T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-05 KR KR10-1998-0705761A patent/KR100459638B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-02-05 IL IL12564597A patent/IL125645A0/xx active IP Right Grant
- 1997-02-05 CN CN97192116A patent/CN1125174C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-05 EP EP97902815A patent/EP0889955B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-05 DE DE69728975T patent/DE69728975T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-05 NZ NZ331580A patent/NZ331580A/en unknown
- 1997-02-05 RU RU98116471/13A patent/RU2215032C2/ru not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-07-27 NO NO19983456A patent/NO323359B1/no unknown
- 1998-08-03 IL IL125645A patent/IL125645A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU712767B2 (en) | 1999-11-18 |
| WO1997029185A1 (en) | 1997-08-14 |
| NO983456L (no) | 1998-10-06 |
| KR19990082041A (ko) | 1999-11-15 |
| EP0889955B1 (en) | 2004-05-06 |
| CA2244792A1 (en) | 1997-08-14 |
| JP4015195B2 (ja) | 2007-11-28 |
| NO323359B1 (no) | 2007-04-10 |
| CN1125174C (zh) | 2003-10-22 |
| IL125645A0 (en) | 1999-04-11 |
| EP0889955A1 (en) | 1999-01-13 |
| AU1681797A (en) | 1997-08-28 |
| DE69728975D1 (de) | 2004-06-09 |
| DE69728975T2 (de) | 2005-05-04 |
| NO983456D0 (no) | 1998-07-27 |
| NZ331580A (en) | 1999-09-29 |
| ATE266091T1 (de) | 2004-05-15 |
| KR100459638B1 (ko) | 2005-02-24 |
| HUP9901242A2 (hu) | 1999-07-28 |
| RU2215032C2 (ru) | 2003-10-27 |
| JP2000505648A (ja) | 2000-05-16 |
| SE9600434L (sv) | 1997-08-07 |
| SE9600434D0 (sv) | 1996-02-06 |
| ES2221033T3 (es) | 2004-12-16 |
| HUP9901242A3 (en) | 2000-03-28 |
| CN1210558A (zh) | 1999-03-10 |
| IL125645A (en) | 2006-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Goodridge | Designing phage therapeutics | |
| SE506771C2 (sv) | Fusionsprotein, bakteriofag uttryckande proteinet, dessas användning samt hybridoma celler och monoklonaler producerade av cellerna | |
| Kim et al. | Characterization of a T5-like coliphage, SPC35, and differential development of resistance to SPC35 in Salmonella enterica serovar Typhimurium and Escherichia coli | |
| Jones et al. | FimH adhesin of type 1 pili is assembled into a fibrillar tip structure in the Enterobacteriaceae. | |
| Cao et al. | Helicobacter pylori-antigen-binding fragments expressed on the filamentous M13 phage prevent bacterial growth | |
| CN111848789B (zh) | 抗sars-cov-2病毒s蛋白的单链抗体及其用途 | |
| US20020044922A1 (en) | Recombinant phages | |
| CN106008710B (zh) | 一种猪源性抗产肠毒素大肠杆菌K88 FaeG蛋白的单链抗体及其制备方法 | |
| CN110621690A (zh) | 具有针对屎肠球菌的溶菌能力的新型抗细菌蛋白efal-2 | |
| JP2001500730A (ja) | ヒスチジン―タグ付き志賀毒素およびトキソイド、該毒素およびトキソイドとの融合タンパク質ならびにそれらの精製及び調製方法 | |
| CN110621775A (zh) | 新型铜绿假单胞菌噬菌体Pse-AEP-4及其用于抑制铜绿假单胞菌的增殖的用途 | |
| CA2098296C (en) | Pseudomonas peptide composition and method for producing the same | |
| US6497874B1 (en) | Recombinant phages | |
| AU5328599A (en) | Gastrointestinal bacterial antibody factories | |
| Ojobor | The Noncontractile Phage Tail-Like Bacterial Killing Nanomachines–Characterizing the Specificity Determinants of the F-Pyocins of Pseudomonas aeruginosa | |
| Uddin et al. | Associations between Bacteriophage Resistance and Antibiotic Resistance Phenotypes in Laboratory and Clinical strains of Salmonella Typhimurium | |
| CN118344443A (zh) | 一种增强噬菌体对肠黏膜黏附能力的蛋白a | |
| Emara et al. | Expression of an anti-Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide core recombinant antibody in Escherichia coli | |
| CN118480121A (zh) | 一种特异性结合金黄色葡萄球菌蛋白a的抗体及其应用 | |
| Jamalludeen | Phages against porcine post-weaning diarrhea due to O149 Escherichia coli | |
| Ranger | The localizaton of a putative target cell binding domain of the pasteurella haemolytica A1 leukotoxin using a neutralizing single chain fragment variable | |
| Kaluzny | Investigation of the Wzy alpha and beta O-antigen polymerases in Pseudomonas aeruginosa | |
| Lam | The Role of Campylobacter jejuni in Guillain-Barré Syndrome | |
| Çakan | Evidence for a Novel Bacteriophage from Moraxella Catarrhalis | |
| Narasanna et al. | Experimental protection of ESBL producing Salmonella typhi bacteremic induced mice model by φGRCST; a therapeutic approach |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |