JP5117765B2 - 抗robo1抗体を含むpet用腫瘍診断剤 - Google Patents
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Description
(1) ROBO1の全長cDNAを含む組み換えバキュロウイルスを感染させた宿主細胞の培養上清から回収されるROBO1提示発芽バキュロウイルスを抗原として用いて免疫動物を免疫することにより得られる、細胞表面上のROBO1を特異的に認識できるモノクローナル抗体。
(2) 免疫動物が、gp64を過剰発現するトランスジェニックマウスである、(1)に記載のモノクローナル抗体。
(3) 細胞表面上にROBO1を発現している細胞を用いたスクリーニングによって選択される、(1)又は(2)に記載のモノクローナル抗体。
(5) (1)から(4)の何れかに記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
(6) 受託番号FERM P−21238を有するハイブリドーマ。
(8) 放射性金属で標識した(1)から(4)の何れかに記載のモノクローナル抗体を含む、PET用腫瘍診断剤。
(9) 放射性金属が64Cuである、(8)に記載のPET用腫瘍診断剤。
(1)抗原として使用するROBO1
ROBO1のタンパク質レベルの発現解析を実施するためには、特異性の高い抗ROBO1抗体が必要となることから、本発明では、抗ROBO1モノクローナル抗体の作製を実施した。ROBO1はマウスとアミノ酸配列レベルでの相同性が95%以上であることから、本発明においては、定法である一般的な免疫方法を使用せず、発芽型バキュロウイルス抗原(BV抗原)をgp64発現トランスジェニックマウスに免疫する方法と、可溶型ROBO1精製抗原(sROBO1-His)をMRL/lprマウスに免疫する方法の二種類の方法を採用した。ROBO1は細胞外領域に特徴的なドメインである、5つのイムノグロブリンドメインと3つのファイブロネクチンIIIドメインを有する。そのため、各ドメインを保持する形で、Gp64結合型抗原のデザインを行った。
などを用いることができるが、これらに限定されるものではない。上記の中でも好ましくは、64Cuである。
(A)方法
(1)ROBO1 cDNAの単離
ROBO1のcDNAを以下の方法で単離した。Alexander細胞より一本鎖cDNAを調製し、それを鋳型としてプライマーRBV2F-TA:5'-ACCATGATTGCGGAGCCCGCTCAC-3'(配列番号1)とRBR-TA:5'-GCTTTCAGTTTCCTCTAATTC-3'(配列番号2)を用いてPCR法による増幅を行った。プライマーRBV2F-TAはROBO1遺伝子(GenBank:NM_133631)の5’-端にハイブリダイズするように、そしてRBR-TAは3’-端にパイブリダイズするようにデザインした。PCR法はLA-PCRキット(TAKARA社製)のプロトコールに準じて反応液を調製し、初めに95℃で2分間一次変性を行い、94℃で15秒、63℃で15秒、72℃で5分からなるサイクルを30回行なった後、最後の伸長反応を72℃で10分間からなる条件で実施した。そして、アガロースゲル電気泳動にてROBO1予測配列と一致する約5kbp付近のバンドの検出した後、その特異的増幅断片をTAクローニング法によりpcDNA3.1/V5-His TOPO(Invitrogen社製)に挿入した。塩基配列を定法により確認したところ、単離したcDNAがROBO1であることが明らかとなった(ROBO1/pcDNA3.1)。
図1に示すように、ROBO1のN末から最初のイムノグロブリン領域(Ig1)を含む領域をはじめとして5種類の抗原をデザインし、バキュロウイルスの膜タンパク質gp64との融合タンパク質として発現させた。すなわち、以下に示すプライマーセットを用いて、上記のROBO1 cDNAを鋳型とし、PCR法にてROBO1の各領域をコードする遺伝子を増幅し、続いてpGEM-Teベクター(プロメガ社製)への挿入を行った。塩基配列を定法にて確認した後、制限酵素KpnIを用いて切断した遺伝子断片をpBacSurfベクター(Novagen社製)に挿入し、トランスファーベクターROBO1N/pBS、gp1/pBS、gp2/pBS、gp3/pBS、そしてgp4/pBSを構築した。続いて、4μgの各ベクターを制限酵素BpII (Fermentas社製)により切断し直鎖化した後、Invitrogen社の指示書に準じてBac-N-Blue DNAと共にSf9細胞に導入し、ROBO1-各ドメイン(Ig1、Ig2、Ig3、Fn1、Fn3)とgp64との融合タンパク質発現組み換えバキュロウイルスを調製した。
ROBO1N-F:5'-GGTACCCCTTCGTCAGGAAGATTTTCCAC-3'(配列番号3)
ROBO1N-R:5'-GGTACCGAGTAATTCCTTGCTACACA-3'(配列番号4)
Gp1-F:5'-GGTACCCGATGAAGGAGTCTATGTCTGTGT-3'(配列番号5)
Gp1-R:5'-GGTACCGCACCAACACAAACATATTTGCCA-3’ (配列番号6)
Gp2-F:5'-GGTACCCACCAATATGGTTGGGGAACGTGA-3'(配列番号7)
Gp-2-R:5'-GGTACCGCAGATGCTTCAGCTTTGCCCACC-3'(配列番号8)
Gp3-F:5'-GGTACCCGCTAATGCATATGGAATTAGTGA-3'(配列番号9)
Gp3-R:5'-GGTACCGCATTCTTGGATACAGTTACACCT-3'(配列番号10)
Gp4-F:5'-GGTACCCGCACCCAGTGCCCCACCCCAAGG-3'(配列番号11)
Gp4-R:5'-GGTACCGCATCTGAAATCTGCTGAGCGAGG-3'(配列番号12)
上記(1)で記載した全長ORF領域を含むROBO1 cDNAをpBlueBac4.5-TOPOベクターに直接挿入し、配列解析を行った後、正しい塩基配列を有するトランスファーベクターROBO1/pBBを作製した。4μgのROBO1/pBBを用い、上記と同様に組み換えバキュロウイルスを作製した。上記(2)と同様にBV画分を調製し、抗原として免疫した。
各種調製BV抗原の発現確認のため、ウエスタンブロット解析による検出を試みた。前述の各調製BV抗原をSDS-ポリアクリルアミドゲルに供し、タンパク質を分離した後、Hybond-P(アマシャムバイオサイエンス社製)に転写した。そして一次抗体としてanti-gp64抗体(Tanaka T他、J Atheroscler Thrombo, 9: 233-242, 2002)を50000倍希釈で使用し、二次抗体にHRP標識抗マウスIgG抗体(ジャクソンラボラトリー社製)を用い、ECLプラス(アマシャムバイオサイエンス社製)による検出を行った。
免疫用抗原として、抗体スクリーニングの際のELISA用抗原として、ROBO1の細胞外領域のC末にHisタグを付加した可溶型ROBO1(sROBO1-His)を以下のように作製した。
上記(1)で記載したROBO1 cDNAを鋳型としプライマーRBV2F-TA:5'-ACCATGATTGCGGAGCCCGCTCAC-3'(配列番号13)とプライマーRB_SH_TA:5'-GGCCGGCTGCTTCACCACAT-3'(配列番号14)を用いてPCR法により細胞外領域をコードする遺伝子を増幅した。PCR産物をpBlueBac4.5-TOPOベクターに直接挿入し、配列解析を行った後、正しい塩基配列を有するトランスファーベクターsROBO1/pBBを作製した。4μgのsROBO1/pBBを用い、上記と同様に組み換えバキュロウイルスを作製した。
上記(1)で作製した1μgのROBO1/pcDNA3.1を2 x 105個HEK293細胞(6well plateを使用)にFuGene6試薬3μL(ロシュダイアグノスティック社製)を用いて導入した。発現ベクター導入3日後に培地交換を実施し、DMEM+10% FCSにネオマイシン(Geneticin、GIBCO社)を500μg/mlで添加し、ネオマイシンによる薬剤選抜を実施した。一ヶ月間におよぶ薬剤選抜を実施し、ROBO1発現HEK293細胞のモノクローン化を行った。
上記(2)にて調製したBV抗原であるROBO1-N(Ig1)、gp1(Ig2)、gp2(Ig3)、gp4(Fn3)、そして全長発現型BV(ROBO1-Full)を抗原として用い抗ROBO1モノクローナル抗体を作製した。すなわち、PBSに懸濁した1mgのタンパク量に相当する各BV抗原を200ngの百日咳毒素と混合したものをgp64トランスジェニックマウス(WO03/104453)に皮下注射により初回免疫を行った。gp64過剰発現トランスジェニックマウスはgp64をpCAGGSベクターにより全身性に発現させたマウスである。
抗ROBO1モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞の選択はsROBO1-Hisを固層したELISAにて実施した。ELISA法は、50μL(5μg/ml)のsROBO1-Hisを96ウェル平底プレート(ファルコン社製)に4℃で一昼夜おき、その後、40%ブロックエース試薬(大日本製薬社製)を含むTBS緩衝液を用いてブロッキングした後、ハイブリドーマ培養上清を加え、室温で1時間反応させた。次いで、室温にて1時間HRP標識抗マウスIgG抗体(ジャクソン社製)を反応させ、4回洗浄した後、室温にて1時間、3, 3', 5, 5'-テトラメチルベンジジン(TMB)試薬(Sigma製)を反応させた。0.5N硫酸で反応を停止させ、マイクロプレート・リーダーMultickanJX(Labsystems社製)で492nmにおける吸光度を測定した。
立体構造を認識する抗体をスクリーニングするため、FACS解析によるハイブリドーマ上清のスクリーニングを実施した。すなわち、ROBO1強制発現HEK293細胞あるいは陰性対照であるHEK293細胞をFACS溶液(1%アルブミン、0.1% NaN3入りPBS)に懸濁した。細胞懸濁液にハイブリドーマ上清10μLを加えて、4℃で60分間反応させ、FACS溶液で2回洗浄した後、FITC標識抗マウスIgG抗体(ジャクソン社製)を加えて、4℃で30分間反応させた。そしてFACS溶液で2回洗浄した後、使用説明書に準じてFACSCalibur(ベクトンディッキンソン社製)によるFACS解析を実施した。
Cell ELISAをべースとしたFMAT 8200 CDSを用いて、ハイブリドーマ上清のスクリーニングを実施した。すなわち、ROBO1発現HEK293細胞を1 x 104個の細胞をFMATアッセイ用96 well Black plateで一昼夜培養し、翌日、アッセイバッファー(1% BSA+0.01% アザイド /PBS)100μLに交換した。そして10μLのハイブリドーマ上清と50μLのFMAT Blueラベル化抗マウスIgG抗体(final 1μg/mL、アプライドバイオシステム社)を各Wellに添加し、室温、暗室で二時間静置した。その後、8200CDSにて検出し、蛍光強度比をネガティブコントロール(上清マイナス)と比較し、陽性判定を行った。
上記(5)にて調製したsROBO1-Hisを抗原として用い抗ROBO1モノクローナル抗体を作製した。すなわち、PBSに懸濁した100μgのタンパク量に相当するsROBO1-His抗原を200ngの百日咳毒素と混合したものを自己免疫疾患マウスであるMRL/lprマウスに皮下注射により初回免疫を行った。以後の免疫では50μgタンパク量相当のsROBO1-His抗原を4回から6回、皮下注射した。最終免疫として50μgのsROBO1-His抗原を静脈内に投与し、その3日後にマウスから脾臓細胞を単離し、常法によりマウスP3U1細胞との細胞融合を行い、ハイブリドーマ細胞を樹立した。
以降のスクリーニングは上記と同法にて実施した。
(1)ROBO1のクローニング及び発現ベクターの作製
ROBO1 cDNAをPCRにより増幅し、動物細胞発現ベクターとしてROBO1/pcDNA3.1及び、昆虫細胞発現用トランスファーベクターROBO1/pBBを作製した。それぞれのC末端にV5とHis6タグが付加されている。また、膜貫通領域のN末側で切断した可溶型ROBO1(1-862アミノ酸、sROBO1-His)発現用のトランスファーベクターsROBO1/pBBを作製した。
免疫用抗原として各組み換えウイルスを構築し、各発現をウエスタンブロット解析により確認を行った。その結果、ROBO1N_BV、gp1_BV、gp2_BV、及びgp4_BVはすべて図3のA及びBに示すように発現に成功した。しかしながら、イムノグロブリンドメインの3番目をコードするgp3の発現が認められなかった(図3のA)。そのため、免疫源としてgp3は以降除外した。
ROBO1/pcDNA3.1を用いてROBO1恒常的発現細胞の樹立を行った。1μgのROBO1/pcDNA3.1を2 x 105個HEK293細胞に3μLのFuGene6試薬(ロシュダイダイアグノスティック社製)を用いて導入し、二目後にネオマイシン(500μg/mL, Geneticin、GIBCO社)を培地に添加し、さらに一週間後に1 cell/wellのリミティングダイリューションによるセレクションを実施した。そして、モノクローン化されネオマイシン耐性能を獲得した細胞を回収して、各RIPAライゼート液を調整し、等量2μgのタンパク相当量を各レーンに供与し、ウエスタンブロット解析を実施した(図5)。その結果、抗ROBO1モノクローナル抗体であるA7241A及び抗V5抗体などで検出されたROBO1と考えられる分子量の位置のバンドを指標に比較を行ったところ、R#6、R#10及びR#12におけるROBO1の発現が他のクローンと比較し高いことが明らかとなった。
表1に示すように各種抗原とマウスの組み合わせにより、数々の抗ROBO1モノクローナル抗体の作製を実施した。
抗体作製に関してはヒトROBO1のアミノ酸配列の相同性がマウスと95%以上と非常に高く、さらに目的のエピトープ部位が細胞外領域であったため、抗体取得方法に工夫を行った。すなわち、BV抗原とgp64発現トランスジェニックマウスに免疫する方法と、可溶型ROBO1精製抗原(sROBO1-His)をMRL/lprマウスに免疫する方法の二種類の方法を本研究にて実施した。
(A)方法
(1)抗ROBO1モノクローナル抗体のFACS解析
実施例1における「ハイブリドーマ上清のFACSスクリーニング」に記載した方法に準じて解析を実施した。Fluorescense intensityを数値化(X mean)して用いた。
カルセイン(Wako)で標識したROBO1発現HEK293細胞を用いて解析を行った。具体的には以下の通りである。
(i)ヒトアルブミン・ベロナール・バッファ(HAVB)の作製
NaCl(特級、和光純薬工業株式会社)12.75g、Na-バルビタール(特級、和光純薬工業株式会社)0.5625g、バルビタール(特級、和光純薬工業株式会社)0.8625gをミリQ水に溶解し200mLとした後、オートクレーブ処理(121℃、20分間)を行った。オートクレーブ処理した100mLの温ミリQ水を加え、pH7.43を確認した(推奨pH7.5)。これを5×ベロナールバッファとした。CaCl2・ 2H2O(特級、純正化学株式会社)0.2205gを50mLミリQ水に溶解し0.03mol/Lとし、CaCl2溶液とした。MgCl2・6H2O(特級、純正化学株式会社)1.0165gを50mLミリQ水に溶解し0.1mol/Lとし、MgCl2溶液とした。5×ベロナールバッファ100mL、ヒト血清アルブミン(ブミネート(登録商標)25%、ヒト血清アルブミン濃度250mg/mL、バクスター株式会社)4mL、CaCl2溶液2.5mL、MgCl2溶液2.5mL、KCl(特級、純正化学株式会社)0.1g、グルコース(D(+)-グルコース、ブドウ糖無水、特級、和光純薬工業株式会社)0.5gをミリQ水に溶解し500mLとした。これをHAVBとした。ろ過滅菌後、設定温度5℃にて保存した。
ROBO1強制発現HEK293細胞及びALXは、DMEM培地/10%FBS(SIGMA)で培養した(ROBO1発現HEK293細胞には0.5 mg/mLネオマイシン(Geneticin, GIBCO社)を添加)。そして、細胞剥離緩衝液(GIBCO)を用いてディッシュから剥離して、96ウェルU底プレート(BECTON DICKINSON)の各ウェルに1×104細胞/ウェルで分注し、一晩培養した。培養後、5.55MBqのクロム-51、あるいは終濃度20μg/mLのカルセイン試薬(WaKo)を加え、5%炭酸ガスインキュベータ中37℃ 1時間培養し、この細胞をHAVBで2回洗浄し、50μLのHAVBを加え標的細胞とした。
幼令ウサギ補体(BABY RABBIT COMPLEMENT、CEDARLANE)を、1バイアルあたり1mLの注射用蒸留水(扶桑薬品工業株式会社)に溶解し、補体溶液とした(試験時に用事調製)。
抗ROBO1モノクローナル抗体をHAVBで希釈し抗体溶液とし、標的細胞に抗体溶液を50μLずつ添加し氷上で15分静置した(終濃度0.16μg/mL〜100μg/mL)。続いて各ウェルに補体溶液を100μg/mLずつ添加し(終濃度5〜25%)、5%炭酸ガスインキュベーター中に37℃で90分間静置した。プレートを遠心分離後、各ウェルより上清を100μLずつ回収し、ガンマカウンターにて放射活性を測定した(カルセイン標識の際には494nmで測定)。下式により特異的クロム遊離率を求めた。
特異的クロム遊離率(%)=(A-C)/(B-C)×100
Aは各ウェルにおける放射活性(cpm)、Bは標的細胞に2% NP-40水溶液(Nonidet P-40、ナカライテスク株式会社)を100μL、HAVBを50μL添加したウェルにおける放射活性(cpm)の平均値、Cは標的細胞にHAVBを150μL添加したウェルにおける放射活性(cpm)の平均値を示す。試験は三重に行い、CDC活性(%)について平均値および標準偏差を算出した。
ROBO1発現細胞外領域に存在する5つのイムノグロブリンドメイン、3つのファイブロネクチンIIIドメインを保有することから、各エピトープ解析用抗原が、それぞれ重複する形でデザインし、GST結合型組み換え体として発現させた(図6)。8つの抗原にプラスし、膜貫通領域上流の30アミノ酸(UT1_GST、831-860アミノ酸)と、第2、第3イムノグロブリンドメインをあわせたIg2-3と第4、第5イムノグロブリンをあわせたIg4-5の計11種類である。すなわち、以下に示すプライマーセットを用いてPCR法により目的遺伝子断片をクローニングし、pET41bベクターにBamHI-HindIIIサイトにて挿入を行った(Ig1/pET41b〜UT1/pET41bの計11ベクター)。それぞれの発現ベクターをBL21(DE3)(Novagen)に形質転換し、0.5M IPTG、3時間、37℃で発現誘導した菌体を1% Triton X-100/PBSにて超音波破砕し、その不溶性画分、可溶性画分をエピトープ解析用抗原とした。また、免疫源として使用したsROBO1-Hisは細胞外領域全長のコントロールとして使用した。
Ig1R:5'-AAGCTTGACATCCGAAGGGTTTTGTCTGAAGTCAT-3'(配列番号16)
Ig2F:5'-GGATCCGAATGCATCGCTGGAAGTAGCCATACTTC-3'(配列番号17)
Ig2R:5'-AAGCTTACTGGGTCTCTTCACAAATGATGGTCTC-3'(配列番号18)
Ig3F:5'-GGATCCGGAGAGTGAAGTAGCCGAGCTGACTGTC-3'(配列番号19)
Ig3R:5'-AAGCTTCCGTCCCAAAGCAACAACCTGGTCACGG-3'(配列番号20)
Ig4F:5'-GGATCCGCCCCGTGACCAGGTTGTTGCTTTG-3'(配列番号21)
Ig4R:5'-AAGCTTTACAGTCTGATTCACAGGACCTTGTCG-3'(配列番号22)
Ig5F:5'-GGATCCGATCATCACAAAGGCATATTTGGAAG-3'(配列番号23)
Ig5R:5'-AAGCTTTGTATTTCTGCTGACATCTGTCACTTC-3'(配列番号24)
Fn1F:5'-GGATCCGCCAAATTTAATCCCTAGTGCCCCATC-3'(配列番号25)
Fn1R:5'-AAGCTTAAGGACGGTGGGGTTGTGGAGGTGCAG-3'(配列番号26)
Fn2F:5'-GGATCCGAAGCAGGTCCAGAGAGAGCTGGGAAATG-3'(配列番号27)
Fn2R:5'-AAGCTTCTTGGATACAGTTACACCTTGGGGTGG-3'(配列番号28)
Fn3F:5'-GGATCCGTTTGCCAAAACCCTGGAAGAAGCACC-3'(配列番号29)
Fn3R:5'-AGCTTCTGCTTCACCACATCTGAAATCTGCTG-3'(配列番号30)
UT1F:5'-GGATCCGCAGTTCATCCAGCTGGATGCC-3'(配列番号31)
UT1R:5'-AAGCTTCTGCTTCACCACATCTGAAATCTGCTG-3'(配列番号32)
*Ig2-3はIg2FとIg3R、Ig4-5はIg4FとIg5Rの各プライマーの組み合わせ
(1)ROBO1発現HEK293細胞に対する各抗ROBO1モノクローナル抗体のFACS解析比較
B2318C抗体(IgG2a)を指標に、B1511A(IgM)とB2610A(IgG1)の容量依存的なFACSアフィニティー解析を実施した(図7のA)。B2318Cは抗体低濃度でのROBO1に対するアフィニティーが他の抗体と比較し、低くなる傾向が示された。引き続き、抗体濃度2μg/mLの値に統一し、ROBO1-Full_BV/gp64TGM免疫シリーズであるB47、B52、そしてB53シリーズの作製抗体(表1)のFACS解析を実施した(図7のB)。そして、主な抗体の濃度依存性カーブを図7のCに示した。以上の解析により、細胞表面上のROBO1に対するアフィニティーの高い抗体がB47, B52, B53シリーズに多数含まれることが明らかとなった。
B2318CとB1511A、及びB2610Aの抗体容量依存的なCDC活性評価を実施した(図8のA)。図7のAのFACS解析と相関する傾向がCDC活性測定でも示された。B2318Cと比較し、B1511A及びB2610Aは低容量での細胞障害活性が認めらることが明らかとなった。
図6に示した各種GST結合タンパク質の発現解析を実施した。Ig2_GSTとIg5_GSTは可溶化・不溶化画分のいずれにも目的タンパクは検出されず、それ以外のGST結合タンパク質をエピトープ解析に使用した(lg2-3_GSTとIg4-5_GST)。各ドメインの発現を抗GST抗体で検出した結果を図10に示す。Ig3_GSTを除き、イムノグロブリンドメインであるIg1、2-3、4、及び4-5_GSTは可溶化画分で微量しか検出できなかったため、すべて不溶化画分をエピトープ解析に使用し、ファイブロネクチンIIIドメインであるFn1、2、3_GST及びUT1_GSTはすべて可溶化画分を使用した。
本研究にて取得した抗ROBO1モノクローナル抗体のキャラクタライゼーションにより、各抗体のCDC活性能、細胞表面上のROBO1結合能(FACS解析)、そしてROBO1結合ドメイン(エピトープ)が明らかとなった。そして、本研究で試みた3種類の免疫方法の中で、もっとも細胞障害活性能を持つ抗体の単離に成功したのはROBO1-Full_BVをgp64TGMに免疫する方法であった。この際に血清をFCS(ウシ胎児血清)からCS(ウシ血清)に変更している点も重要である。
(A)方法
(1)18FDG Study
使用動物:HepG2細胞107個を6週齢のBALB/cAjcl-nu/nu雄マウスに移植し、xenograft modelを作成、実験時に9週齢、腫瘤サイズ10x8mm、体重25gとした。
使用動物:前術のHepG2細胞xenograft model2匹を17週齢で使用した。実験初日前夜から初日の実験終了までは絶食とした。Mouse#1とMouse#2の腫瘍サイズはそれぞれ15mm x13mmと18mm x12mm、実験中の5日間(2007年1月16日〜20日)で体重はそれぞれ22-26g、19-21gであった。なお、最終日(20日)の実験終了後、腫瘍部を切り出し、ホルマリン固定し、腫瘍部以外は凍結保存とした。
(1)18FDG Study
HepG2腫瘍ヌードマウス、18FDG投与後55-60分の画像を図13に示す。HepG2腫瘍部の18FDG集積は、hexokinase活性の高い心臓や脳よりも低く、18FDG metaboliteが脱リン酸化によって分解される肝臓よりも高いことを確認した。
肺扁平上皮癌QG-56担癌ヌードマウス、60分後18FDG画像を図16に示す。PET画像上、肺扁平上皮癌xenograftの内部は低〜無集積となっており、腫瘍組織割面では、腫瘍内部に固形の腫瘍成分は見られなかった。
Mouse#1へ64Cu-DOTA-anti-Robo1 whole IgG mAb投与後、6時間、1日、2日、3日後のPET画像を図17に示す。6時間像では心内腔の血液プール像と比較してHepG2腫瘍への集積は少なかったが、3日後まで腫瘍への集積は緩徐に増加した。64Cu-DOTA mAbの肝臓へ非特異的集積は、胆道系を介してゆっくりと腸管へ排泄されていた。なお、腎と膀胱の集積は確認できなかった。
Claims (4)
- ROBO1の全長cDNAを含む組み換えバキュロウイルスを感染させた宿主細胞の培養上清から回収されるROBO1提示発芽バキュロウイルスを抗原として用いて免疫動物を免疫することにより得られる、細胞表面上のROBO1を特異的に認識できるモノクローナル抗体であって、受託番号FERM BP−10921を有するハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体。
- 受託番号FERM BP−10921を有するハイブリドーマ。
- 放射性金属で標識した請求項1に記載のモノクローナル抗体を含む、PET用腫瘍診断剤。
- 放射性金属が64Cuである、請求項3に記載のPET用腫瘍診断剤。
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