JP7219376B2 - キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防 - Google Patents

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Description

本願は、２０１６年７月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／３６２６５９号明細書、２０１６年７月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／３６６９９７号明細書、及び２０１６年８月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／３８１２３０号明細書に対する優先権を主張し、これらの全ての内容は、全体として参照により本明細書に援用される。
本発明は、概して、疾患を治療し且つ／又はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を予防するための、キナーゼ阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）と併用した、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の使用に関する。
血液系悪性腫瘍（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）を有する多くの患者は、標準療法では不治である。加えて、従来の治療選択肢は、多くの場合に重篤な副作用を有する。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変自己Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）療法を用いた最近の展開は、Ｔ細胞をＢ細胞悪性腫瘍などの癌細胞上の好適な細胞表面分子に仕向け直すことに依存するものであり、免疫系の力を利用したＢ細胞悪性腫瘍及び他の癌の治療において有望な結果を示している（例えば、非特許文献１を参照されたい）。マウス由来ＣＡＲＴ１９（即ち「ＣＴＬ０１９」）の臨床結果は、ＣＬＬ並びに小児ＡＬＬに罹患している患者において完全寛解が得られる見込みを示している（例えば、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４を参照されたい）。遺伝子改変Ｔ細胞上のキメラ抗原受容体が標的細胞を認識し破壊する能力に加えて、治療的Ｔ細胞療法の成功には、増殖して長期間持続する能力を有すること、更に白血病細胞エスケープを監視することが必要である。アネルギー、抑制又は枯渇のいずれの結果であれ、Ｔ細胞品質のばらつきがＣＡＲ形質転換Ｔ細胞の性能に影響を及ぼし得るが、これに関して現時点で当業者の制御は限られている。有効であるには、ＣＡＲ形質転換患者Ｔ細胞が、標的抗原に応答して増殖する能力を持続及び維持する必要がある。ＡＬＬ患者Ｔ細胞は、マウスｓｃＦｖを含むＣＡＲＴ１９でこれを行い得ることが示されている（例えば、非特許文献４を参照されたい）。
Ｓａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ３：３８８－３９８（２０１３） Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３：９５ｒａ７３（２０１１） Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＮＥＪＭ ３６５：７２５－７３３（２０１１） Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，ＮＥＪＭ ３６８：１５０９－１５１８（２０１３）
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、免疫細胞に基づく療法、例えばＣＡＲ Ｔ細胞療法によく見られる重篤な有害副作用である。重症ＣＲＳは、生命を脅かす恐れのある毒性である。ＣＲＳの重症例による死亡が報告されている。免疫細胞に基づく療法に応答したＣＲＳの診断及び管理は、常法では臨床パラメータ及び症状に基づく。例えば、Ｌｅｅ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｂｌｏｏｄ １２４（２）：１８８－１９５によって記載されるとおりのＣＲＳ評価尺度を参照されたい。インターロイキン－６受容体遮断薬トシリズマブ及びステロイド類は、ＣＲＳを好転させ得るが、これらの手法は、抗腫瘍効果を害し得るという懸念が残る。また、ヒトＣＡＲＴ後のＣＲＳの前臨床モデルも欠如している。ヒトＣＡＲＴ投与後のＣＲＳの前臨床モデルが必要とされている。また、ＣＲＳ予防モダリティも必要とされている－かかるモダリティがあれば、ＣＡＲＴ療法の臨床での実現可能性が高まるであろう。
本開示は、少なくとも一部には、ルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害薬が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの血液癌に対するＣＡＲＴ細胞療法後、ＣＡＲＴ療法の抗腫瘍効果を著しく害することなくサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の重症度を和らげるか又はＣＲＳを予防し得るという発見に基づく。本開示は、少なくとも一部には、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬が、Ｂ細胞新生物に対するＣＤ１９ ＣＡＲ療法後のＣＲＳを改善又は予防し得るという発見にも基づく。加えて、本開示は、少なくとも一部には、ＩＬ－６阻害薬（例えば、これは、ＣＲＳ予防／治療に使用され得る）を、ＣＡＲ療法の抗癌有効性を低下させることなくＣＡＲ療法と併用して（例えば、その前に、それと並行して、又はその後に）投与し得るという発見に基づく。
理論によって拘束されることを望むものではないが、本明細書に記載される疾患、例えば本明細書に記載される癌を有する対象を、ＣＡＲ発現細胞とＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬とを含む併用療法で治療すると、例えば疾患を有する対象をＣＡＲ発現細胞又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ若しくはＢＴＫ阻害薬単独で治療するのと比較して、対象における腫瘍進行の阻害又は低減の向上及び／又は有害作用の低減（例えば、ＣＲＳの低減）がもたらされると考えられる。
従って、本開示は、少なくとも一部には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子（例えば、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又は分化クラスター１９タンパク質（ＣＤ１９）（例えば、ＯＭＩＭ受託番号１０７２６５、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１）に結合するＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を使用して癌（例えば、血液癌又は他のＢ細胞悪性腫瘍）などの障害を治療する組成物及び方法を特徴とする。本組成物は、キナーゼ阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬及び／又はＢＴＫ阻害薬の１つ以上）との併用で、ＣＡＲ（例えば、Ｂ細胞を標的とするＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を含み、及び本方法は、それを投与することを含む。一部の実施形態において、この併用は、いずれかの療法単独と比較したときに（例えば、ＣＲＳの予防に起因して）より良好な臨床効果を維持し、それを有し、及び／又はより低い毒性を有する。一部の実施形態において、対象は、ＣＲＳのリスクがあるか若しくはＣＲＳを有し、又は対象は、ＣＲＳを有するか若しくはＣＲＳを発症するリスクがあると同定されている。
本開示は、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９の発現に関連する障害（例えば、癌、例えば血液癌）を治療するための、キナーゼ阻害薬（例えば、少なくとも１つのＪＡＫ－ＴＡＴ阻害薬）と併用した、抗原（例えば、本明細書に記載される腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９に結合するＣＡＲ分子を発現するように操作された細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の使用に更に関する。
また、本明細書では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬とＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｂ細胞を標的とするＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）との併用を用いることにより、対象のＣＲＳを予防するための組成物及び方法も提供される。
また、ＢＴＫ阻害薬とＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｂ細胞を標的とするＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）との併用を用いることにより、対象のＣＲＳを予防するための組成物及び方法も提供され、例えば、対象は、ＣＲＳのリスクがあるか若しくはＣＲＳを有し、又は対象は、ＣＲＳを有するか若しくはＣＲＳを発症するリスクがあると同定されている。
ある態様において、本明細書では、抗原、例えば腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象、例えば哺乳類を治療する方法が提供される。この方法は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えば本明細書に記載されるＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブと併用して、抗原（例えば、本明細書に記載される抗原、例えば腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原）に結合するＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の有効量を対象に投与することを含む。
別の態様において、本明細書では、抗原、例えば腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原の発現に関連する疾患を有する対象、例えば哺乳類に抗腫瘍免疫を付与する方法が提供される。この方法は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えば本明細書に記載されるＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブと併用して、抗原（例えば、本明細書に記載される抗原、例えば腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原）に結合するＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の有効量を対象に投与することを含む。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１２３に結合し、例えば本明細書に記載されるＣＤ１２３に結合するＣＡＲ分子である。
別の態様において、本明細書では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、例えばＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）に関連するＣＲＳの治療及び／又は予防を、それを必要としている対象において行う方法が提供され、この方法は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬（例えば、ルキソリチニブ）を単独で又はＣＡＲ療法と併用して対象に投与し、それにより対象のＣＲＳを治療及び／又は予防することを含む。
実施形態において、対象は、ＣＲＳを発症するリスクがあるか、ＣＲＳを有するか、又はＣＲＳと診断される。実施形態において、対象は、ＣＡＲ療法、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる。
実施形態において、本方法は、ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を対象に投与することを更に含む。実施形態において、本方法は、（ｉ）ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬（例えば、ルキソリチニブ）、（ｉｉ）ＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を対象に投与することを含む。
別の態様において、本明細書では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）（例えば、ＣＡＲ療法、例えばＢ細胞抗原ＣＡＲ療法、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ療法に関連するＣＲＳ）の予防を、それを必要としている対象において行う方法が提供され、この方法は、ＢＴＫ阻害薬（例えば、イブルチニブ）を単独で又はＣＡＲ療法と併用して対象に投与し、それにより対象のＣＲＳを予防することを含む。
実施形態において、対象は、ＣＲＳを発症するリスクがあるか、ＣＲＳを有するか、又はＣＲＳと診断される。実施形態において、対象は、ＣＡＲ療法、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ療法を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる。実施形態において、対象は、ＣＲＳのリスクがあると同定されるか、又は以前に同定されたことがある。
実施形態において、本方法は、対象をＢＴＫ阻害薬の投与のために選択することを含む。実施形態において、対象は、（ｉ）対象のＣＲＳを発症するリスク、（ｉｉ）対象のＣＲＳの診断、及び／又は（ｉｉｉ）対象がＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ療法、例えばＣＡＲ１９療法、例えばＣＴＬ０１９）を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになるかどうかに基づいて選択される。実施形態において、対象がＣＲＳ、例えば重症又は非重症ＣＲＳと診断される場合、その対象は、ＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。実施形態において、対象がＣＲＳを発症するリスクがある（例えば、リスクがあると同定される）場合、その対象は、ＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。実施形態において、対象がＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ療法、例えばＣＡＲ１９療法、例えばＣＴＬ０１９）を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる場合、その対象は、ＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。
実施形態において、本方法は、ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を対象に投与することを更に含む。実施形態において、本方法は、（ｉ）ＢＴＫ阻害薬（例えば、イブルチニブ）、（ｉｉ）ＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を対象に投与することを含む。
更に別の態様において、本明細書では、対象におけるＣＡＲを発現する細胞、例えば細胞集団の投与に関連するＣＲＳを治療又は予防する方法が提供される。
更に別の態様において、本明細書では、Ｔ細胞阻害薬療法、例えばＣＤ１９阻害又は枯渇療法、例えばＣＤ１９阻害薬を含む療法の投与に関連するＣＲＳを治療又は予防する方法が提供される。実施形態において、ＣＤ１９阻害又は枯渇療法は、ＣＲＳに関連する。
ＣＡＲを発現する前記細胞、例えば前記細胞集団、又は前記療法のある用量（例えば、第１の用量）の投与前、投与と同時、又は投与から１日以内に（例えば、２４時間、１２時間、６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、１時間以内に又はそれ未満で）ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を対象に投与することを含む、ＣＲＳを治療又は予防する方法である。
実施形態において、ＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）は、対象においてＣＲＳの症状の最初の徴候（例えば、２４時間で２回の（例えば、少なくとも４、５、６、７、８時間、又はそれを超えて離れた）連続計測について、例えば少なくとも３８℃（例えば、少なくとも３８．５℃）の温度によって特徴付けられる例えば発熱）の時点で（例えば、１時間、３０分、２０分、１５分以内に又はそれ未満で）投与される。
以下の実施形態は、本明細書に記載される任意の方法及び組成物に関する。
ＣＡＲ分子
実施形態において、ＣＡＲ分子は、抗原結合ドメイン（例えば、Ｂ細胞抗原結合ドメイン、ＣＤ１２３結合ドメイン、又はＣＤ１９結合ドメイン）と、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）とを含む。
実施形態において、ＣＡＲは、以下：ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１又はＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２又はＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスチシン又はＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体α；受容体チロシン－プロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びエーベルソンマウス白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質（ｂｃｒ－ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体β；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；グロボＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレノセプターβ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；メラノーマ関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；ＥＴＳ転座変異体遺伝子６、染色体１２ｐに位置する（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンギオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）；メラノーマ癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマ癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；サーバイビング；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１又はガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識されるメラノーマ抗原１（メランＡ又はＭＡＲＴ１）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；サルコーマ転座切断点；メラノーマアポトーシス阻害因子（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス性癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ又は刷り込み部位の調節因子のブラザー（Ｂｒｏｔｈｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ Ｓｉｔｅｓ））、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；後期糖化最終産物受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎臓遍在性１（ＲＵ１）；腎臓遍在性２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ Ｅ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０－２突然変異型（ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；又は免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）の１つ以上を結合する抗原結合ドメインを含む。

他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載される抗原、例えば以下の「抗原」の節に記載される抗原への結合能を有する。
一実施形態において、抗原は、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、及び／又はＣＤ７９ａを含む。
実施形態において、抗原は、ＣＤ１２３である。実施形態において、抗原は、ＣＤ１９である。
他の実施形態において、抗原は、ＢＣＭＡである。実施形態において、抗原は、ＣＬＬである。
例示的ＣＡＲ分子
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１２３ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ１２３ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書に記載されるＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＬＬ１ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＬＬ１ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＬＬ１ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ３３ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ３３ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ３３ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ＣＤ１２３ ＣＡＲ抗原結合ドメイン
実施形態において、ＣＡＲ分子はＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）への結合能を有する。実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載される（例えば、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載される）抗ＣＤ１２３結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）、並びに／又は本明細書に記載される（例えば、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載される）抗ＣＤ１２３結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む抗ＣＤ１２３結合ドメイン、例えば１つ以上、例えば３つ全てのＬＣ ＣＤＲと、１つ以上、例えば３つ全てのＨＣ ＣＤＲとを含む抗ＣＤ１２３結合ドメインを含む。
一実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載されるＣＤ１２３結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）、並びに／又は本明細書に記載されるＣＤ１２３結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含み、例えば１つ以上、例えば３つ全てのＬＣ ＣＤＲと、１つ以上、例えば３つ全てのＨＣ ＣＤＲとを含むＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ヒト又はヒト化ＣＤ１２３結合ドメイン）は、本明細書に（例えば、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂに）記載される軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂに）記載される重鎖可変領域を含む。一実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂのアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１１Ａ、１２Ａ若しくは１２Ｂに提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は表１１Ａ、１２Ａ若しくは１２Ｂのアミノ酸配列と少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１１Ａ、１２Ａ若しくは１２Ｂに提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は表１１Ａ、１２Ａ若しくは１２Ｂのアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性の配列を含む重鎖可変領域を含む。
他の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂに挙げられる任意のＣＤ１２３重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を含む。実施形態において、ＣＤ３３結合ドメインは、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を更に含む。実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂに挙げられる任意のＣＤ１２３軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一部の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、表１１Ａ又は１２Ｂに挙げられる任意のＣＤ１２３軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３の１つ、２つ又は全てと、表１１Ａ、１２Ａ、又は１２Ｂに挙げられる任意のＣＤ１２３重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３の１つ、２つ又は全てとを含む。
一実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、及び４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、及び４８５のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０、又は１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、及び４８５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一の（例えば、それと９５～９９％の同一性を有する）配列を含む。
別の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号２１６～２１９若しくは２４３～２７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は配列番号２１６～２１９若しくは２４３～２７４の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号２１６～２１９若しくは２４３～２７４と少なくとも９５％同一の（例えば、それと９５～９９％の同一性を有する）配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の重鎖可変領域に対応するアミノ酸配列、又は配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の対応する部分の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の対応する部分と少なくとも９５％同一の（例えば、それと９５～９９％の同一性を有する）配列を含む重鎖可変領域を含む。
別の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号２７５～２７８若しくは３０２～３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は配列番号２７５～２７８若しくは３０２～３３３の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号２７５～２７８若しくは３０２～３３３と少なくとも９５％同一の（例えば、それと９５～９９％の同一性を有する）配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の軽鎖可変領域に対応するアミノ酸配列、又は配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の対応する部分の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号４７８、４８０、４８３若しくは４８５の対応する部分と少なくとも９５％同一の（例えば、それと９５～９９％の同一性を有する）配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、ｓｃＦｖをコードする核酸分子は、配列番号４７９、４８１、４８２、４８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、核酸分子は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４７９、４８１、４８２、及び４８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域に対応する一部分を含む。一実施形態において、核酸分子は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、コードされるアミノ酸配列は、配列番号１５７～１６０、又はその少なくとも９５％同一の（例えば、９５～９９％の同一性を有する）配列からなる群から選択される。一実施形態において、核酸分子は、配列番号１８４～２１５からなる群から選択されるアミノ酸配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含むｓｃＦｖをコードする。一実施形態において、核酸分子は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードする配列を含み、コードされるアミノ酸配列は、配列番号１８４～２１５、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列からなる群から選択される。
一実施形態において、コードされるＣＤ１２３結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（式中、ｎは、１、２、３、４、５、又は６、好ましくは３又は４である）（配列番号２６）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向き：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれでもあり得る。
ＣＤ１９ ＣＡＲ抗原結合ドメイン
実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１９（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１９）への結合能を有する。実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載される抗ＣＤ１２３結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）、並びに／又は本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含む抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、例えば１つ以上、例えば３つ全てのＬＣ ＣＤＲと、１つ以上、例えば３つ全てのＨＣ ＣＤＲとを含む抗ＣＤ１９結合ドメインを含む。
一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含み、例えば、抗ＣＤ１９結合ドメインは、２つの可変重鎖領域を有し、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１４Ａに）記載されるマウス軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表１４Ａに）記載されるマウス重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、表１４Ａのアミノ酸配列のマウス軽鎖及びマウス重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１４Ａに提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１４Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１４Ａに提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１４Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７７４の配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、及び本明細書の例えば表１４Ａに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書の例えば表１４Ａに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載されるリンカーを介して付加される。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（式中、ｎは、１、２、３、４、５、又は６、好ましくは３又は４である）（配列番号２６）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向き：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれでもあり得る。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）と、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）とを含むヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、例えば１つ以上、例えば３つ全てのＬＣ ＣＤＲと、１つ以上、例えば３つ全てのＨＣ ＣＤＲとを含むヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインを含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、少なくともＨＣ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上の（例えば、３つ全ての）重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）を含み、例えば、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、２つの可変重鎖領域を有し、本明細書に記載されるＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２及びＨＣ ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、少なくともＨＣ ＣＤＲ２を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、ＶＫ３＿Ｌ２５生殖系列配列の１つ、２つ、３つ又は４つ全てのフレームワーク領域を含む。一実施形態において、軽鎖可変領域は、改変（例えば、置換、例えば配列番号７７３のマウス軽鎖可変領域の対応する位置に見られる１つ以上のアミノ酸の置換、例えば位置７１及び８７の１つ以上における置換）を有する。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＶＨ４＿４－５９生殖系列配列の１つ、２つ、３つ又は４つ全てのフレームワーク領域を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、改変（例えば、置換、例えば配列番号７７３のマウス重鎖可変領域の対応する位置に見られる１つ以上のアミノ酸の置換、例えば位置７１、７３及び７８の１つ以上における置換）を有する。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１３Ａに）記載される軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表１３Ａに）記載される重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、表１３Ａのアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１３Ａに提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１３Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１３Ａに提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１３Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７１０～７２１からなる群から選択される配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、及び本明細書の例えば表１３Ａに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書の例えば表１３Ａに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載されるリンカーを介して付加される。
実施形態において、抗原認識ドメインは、ＣＤ１９に結合する。実施形態において、ＣＡＲは、本明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲのアミノ酸配列を含む。実施形態において、ＣＡＲは、配列番号７７３のアミノ酸配列を含む。
一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（式中、ｎは、１、２、３、４、５、又は６、好ましくは３又は４である）（配列番号２６）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向き：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれでもあり得る。
他のＣＡＲドメイン
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列を含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、２０、１０若しくは５つ以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態において、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９結合ドメイン）は、ヒンジ領域、例えば本明細書に記載されるヒンジ領域によって膜貫通ドメインに結合されている。一実施形態において、コードされるヒンジ領域は、配列番号２、配列番号４若しくは配列番号３、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、共刺激ドメイン、例えば本明細書に記載される共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ、及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）からなる群から選択されるタンパク質の機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号７の配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号８の配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号４３の配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号４５の配列を含む。一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号７、８、４３、又は４５のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、２０、１０若しくは５つ以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号７、８、４３若しくは４５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列及び／又は配列番号９若しくは１０の配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７の機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号８の配列及び／又は配列番号９若しくは１０の配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７若しくは配列番号８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、２０、１０若しくは５つ以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は配列番号７若しくは配列番号８のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７又は配列番号８の配列及び配列番号９又は配列番号１０の配列を含み、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームにおいて且つで単一のポリペプチド鎖として発現される。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、リーダー配列、例えば本明細書に記載されるリーダー配列を更に含む。一実施形態において、リーダー配列は、配列番号１のアミノ酸配列、又は配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
ＣＤ１２３ ＣＡＲコンストラクト
実施形態において、ＣＡＲ分子は、リーダー配列、例えば本明細書に記載されるリーダー配列、例えば配列番号１のリーダー配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するもの、本明細書に記載されるＣＤ１２３結合ドメイン、例えば本明細書に記載されるＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、ＬＣ ＣＤＲ３、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２及びＨＣ ＣＤＲ３を含むＣＤ１２３結合ドメイン、例えば表１１Ａ又は１２Ａに記載されるＣＤ１２３結合ドメイン、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列、ヒンジ領域、例えば本明細書に記載されるヒンジ領域、例えば配列番号２のヒンジ領域、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するもの、膜貫通ドメイン、例えば本明細書に記載される膜貫通ドメイン、例えば配列番号６の配列又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を有する膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン、例えば本明細書に記載される共刺激ドメイン、例えば配列番号７の配列を有するか、若しくはその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン、例えば配列番号９若しくは配列番号１０の配列を有するか、若しくはその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するＣＤ３ζ刺激ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン、例えば本明細書に記載される共刺激ドメイン、例えば配列番号７の配列を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン、例えば配列番号９若しくは配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激ドメインを含む。
ＣＤ１９ ＣＡＲコンストラクト
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、リーダー配列、例えば本明細書に記載されるリーダー配列、例えば配列番号１のリーダー配列、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するもの；本明細書に記載される抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば本明細書に記載されるＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、ＬＣ ＣＤＲ３、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２及びＨＣ ＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば表１４Ａに記載されるマウス抗ＣＤ１９結合ドメイン、表１３Ａに記載されるヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン、又はその９５～９９％の同一性を有する配列；ヒンジ領域、例えば本明細書に記載されるヒンジ領域、例えば配列番号２、３、又は４のヒンジ領域、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するもの；膜貫通ドメイン、例えば本明細書に記載される膜貫通ドメイン、例えば配列番号６の配列又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を有する膜貫通ドメイン；細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン、例えば本明細書に記載される共刺激ドメイン、例えば配列番号７の配列を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号４３の配列を有するＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号８の配列を有するＣＤ２７共刺激ドメイン、又は配列番号４５の配列を有するＩＣＯＳ共刺激ドメイン、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するもの、及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン、例えば配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激ドメイン、又はその少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有するものを含む。
他の例示的ＣＡＲコンストラクト
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載されるアミノ酸配列；又は米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載されるアミノ酸配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、１０、１５、２０又は３０以上の改変（例えば、置換）であるが、６０、５０又は４０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列；又は米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載されるアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、それからなる）。
ベクター
一実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞は、ＣＡＲ分子をコードする核酸配列を含むベクターを含む。一実施形態において、ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、又はレトロウイルスベクターからなる群から選択される。一実施形態において、ベクターは、レンチウイルスベクターである。一実施形態において、ベクターは、プロモーターを更に含む。一実施形態において、プロモーターは、ＥＦ－１プロモーターである。一実施形態において、ＥＦ－１プロモーターは、配列番号１１の配列を含む。一実施形態において、ベクターは、インビトロ転写ベクター、例えば本明細書に記載される核酸分子のＲＮＡを転写するベクターである。一実施形態において、インビトロベクターの核酸配列は、ポリ（Ａ）テール、例えば本明細書に記載される、例えば約１５０のアデノシン塩基を含むポリＡテール（配列番号３０）を更に含む。一実施形態において、インビトロベクターの核酸配列は、３’ＵＴＲ、例えば本明細書に記載される、例えばヒトβ－グロブリンに由来する３’ＵＴＲの少なくとも１つのリピートを含む３’ＵＴＲを更に含む。一実施形態において、インビトロベクターの核酸配列は、プロモーター、例えばＴ２Ａプロモーターを更に含む。
ＣＡＲ発現細胞
本明細書に開示される組成物及び方法の特定の実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞（本明細書では「ＣＡＲ発現細胞」とも称される）は、本明細書に記載されるとおりの細胞又は細胞集団、例えばヒト免疫エフェクター細胞又は細胞集団（例えば、ヒトＴ細胞又はヒトＮＫ細胞、例えば本明細書に記載されるヒトＴ細胞又は本明細書に記載されるヒトＮＫ細胞）である。一実施形態において、ヒトＴ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。一実施形態において、細胞は、自己Ｔ細胞である。一実施形態において、細胞は、同種異系Ｔ細胞である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、イカロス欠損である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、ＤＧＫ及びイカロスの両方が欠損している。用語「細胞」を記載する本明細書に開示される組成物及び方法は、１つ以上の細胞、例えば細胞集団を含む組成物及び方法を包含することが理解されるべきである。
一部の実施形態において、投与されるＣＡＲ発現細胞は、調節可能なＣＡＲ（ＲＣＡＲ）、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲを含む。ＲＣＡＲは、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインと第１のスイッチドメインとを含む細胞内シグナル伝達メンバー、抗原（例えば、本明細書に記載される抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９）に結合する抗原結合ドメインと第２のスイッチドメインとを含む抗原結合メンバー、及び膜貫通ドメインを含み得る。本方法は、例えば、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの二量化を生じさせるのに十分な量の二量化分子を投与することを更に含み得る。
阻害薬
実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを含む／である。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬は、小分子、例えばルキソリチニブ、ＡＧ４９０、ＡＺＤ１４８０、トファシチニブ（タソシチニブ又はＣＰ－６９０５５０）、ＣＹＴ３８７、フェドラチニブ、バリシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ７０１）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）、ＸＬ０１９、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、ＢＭＳ９１１５４３、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３）、デセルノチニブ（Ｖ－５０９）、ＩＮＣＢ３９１１０、ＧＥＮ１、ＧＥＮ２、ＧＬＰＧ０６３４、ＮＳ０１８、及びＮ－（シアノメチル）－４－［２－（４－モルホリノアニリノ）ピリミジン－４－イル］ベンズアミド、又はその薬学的に許容可能な塩である。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬は、ルキソリチニブ又はその薬学的に許容可能な塩である。
実施形態において、ＢＴＫ阻害薬は、抗体分子、小分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを含む／である。実施形態において、ＢＴＫ阻害薬は、小分子、例えばイブルチニブ、ＧＤＣ－０８３４、ＲＮ－４８６、ＣＧＩ－５６０、ＣＧＩ－１７６４、ＨＭ－７１２２４、ＣＣ－２９２、ＯＮＯ－４０５９、ＣＮＸ－７７４若しくはＬＦＭ－Ａ１３、又はその薬学的に許容可能な塩、或いはこれらの組み合わせである。実施形態において、ＢＴＫ阻害薬は、イブルチニブ又はその薬学的に許容可能な塩である。
実施形態において、ＩＬ－６阻害薬、例えば本明細書に記載される任意の組成物又は方法において使用されるＩＬ－６阻害薬は、例えば、ＩＬ－６阻害薬又はＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害薬を含むＩＬ－６シグナル伝達の阻害薬を含む。例示的ＩＬ－６阻害薬は、トシリズマブ、シルツキシマブ、バゼドキシフェン、及び可溶性糖タンパク質１３０（ｓｇｐ１３０）遮断薬を含む。例示的ＩＬ－６阻害薬は、国際公開第２０１４０１１９８４号パンフレット（本明細書によって参照により援用される）に記載される。トシリズマブについては、本明細書において、例えば本明細書の「ＣＲＳ療法」の節に更に詳細に記載される。一実施形態において、ＩＬ－６阻害薬は、抗ＩＬ－６抗体、例えばシルツキシマブなどの抗ＩＬ－６キメラモノクローナル抗体である。他の実施形態において、阻害薬は、ＩＬ－６シグナル伝達を遮断する能力を有する可溶性ｇｐ１３０又はその断片を含む。一部の実施形態において、ｓｇｐ１３０又はその断片は、異種ドメイン、例えばＦｃドメインに融合され、例えばＦＥ３０１などのｇｐ１３０－Ｆｃ融合タンパク質である。実施形態において、ＩＬ－６阻害薬は、抗体、例えばサリルマブ、オロキズマブ（ＣＤＰ６０３８）、エルシリモマブ、シルクマブ（ＣＮＴＯ １３６）、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ－９４５４２９、ＡＲＧＸ－１０９、又はＦＭ１０１など、ＩＬ－６受容体に対する抗体を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－６阻害薬は、ＣＰＳＩ－２３６４などの小分子を含む。
疾患
実施形態において、抗原の発現に関連する疾患は、過剰増殖性障害、例えば癌である。実施形態において、癌は、固形癌である。他の実施形態において、癌は、血液癌である。
実施形態において、血液癌は、白血病である。実施形態において、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。実施形態において、血液癌は、リンパ腫、例えばマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。
実施形態において、血液癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えばＢ細胞白血病又はＢ細胞リンパ腫である。
実施形態において、血液癌は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ系組織の節外性辺縁帯リンパ腫）、辺縁帯リンパ腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫／白血病、脾びまん性赤脾髄小細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病バリアント、リンパ形質細胞性リンパ腫、重鎖病、形質細胞性骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、節性辺縁帯リンパ腫、小児節性辺縁帯リンパ腫、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、縦隔原発（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ＋大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、又は分類不能なリンパ腫から選択される。
実施形態において、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（Ｂ細胞急性リンパ性白血病、ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキンリンパ腫、組織球性障害、肥満細胞障害、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、形質細胞性骨髄腫、形質細胞様樹状細胞新生物、又はこれらの組み合わせから選択される。
実施形態において、疾患は、Ｂ細胞抗原の発現（例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、及び／又はＣＤ７９ａの１つ以上の発現）に関連する疾患である。実施形態において、Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患は、増殖性疾患、例えば癌、悪性腫瘍、又は前癌病態、例えば骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病から選択されるか、又はＢ細胞抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、及び／又はＣＤ７９ａの１つ以上の発現に関連する非癌関連徴候である。特定の実施形態において、Ｂ細胞抗原発現に関連する疾患は、「前白血病」であり、これは、骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である。一部の実施形態において、Ｂ細胞抗原発現に関連する疾患には、限定されないが、Ｂ細胞抗原（例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、及び／又はＣＤ７９ａの１つ以上）を発現する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。実施形態において、Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患は、血液癌、白血病、リンパ腫、ＭＣＬ、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫である。本明細書に記載されるＢ細胞抗原発現に関連する疾患の任意の組み合わせは、本明細書に記載される方法及び組成物によって治療され得る。
ＣＲＳ
実施形態において、ＣＲＳは、重症ＣＲＳ、例えばグレード４又は５ ＣＲＳである。実施形態において、ＣＲＳは、重症未満のＣＲＳ、例えばグレード１、２、又は３ ＣＲＳである。ＣＲＳについての更なる説明は、「サイトカイン放出症候群」と題される節に提供される。
本明細書に記載される任意の方法の実施形態において、ＣＲＳは、例えば、本明細書に記載される方法により、例えば本明細書に記載されるとおりの対象のＣＲＳと敗血症とを区別する方法により、敗血症と区別されるＣＲＳである。実施形態において、ＣＲＳと敗血症とを区別する方法は、以下の１つ以上の測定を取ることを含む：
（ｉ）ＧＭ－ＣＳＦ、ＨＧＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＴＮＦＲＩ、及びｓＴＮＦＲＩＩの１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は全て）のレベル又は活性、ここで、基準よりも高いレベル又は活性がＣＲＳの指標となる、又は
（ｉｉ）ＣＤ１６３、ＩＬ－１β、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＶＥＧＦＲ－１、及びｓＶＥＧＦＲ－２の１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は全て）のレベル又は活性、ここで、基準よりも高いレベル又は活性が敗血症の指標となる。対象のＣＲＳと敗血症とを区別する方法の更なる実施形態は、本明細書に記載される。
投与レジメン
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞と阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）とは、逐次的に、並行して、又は例えば本明細書に記載されるとおりの治療インターバルの範囲内で投与される。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞と阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）とは、逐次的に投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）は、ＣＡＲ発現細胞の投与前に投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）は、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与される。
一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）とＣＡＲ発現細胞とは、同時に又は並行して投与される。
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞及び阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）は、治療インターバルにおいて投与される。一実施形態において、治療インターバルは、単回用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を（例えば、任意の順序で）含む。別の実施形態において、治療インターバルは、複数回用量（例えば、第１及び第２の用量）の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及びある用量のＣＡＲ発現細胞を（例えば、任意の順序で）含む。
治療インターバルが単回用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を含む場合、特定の実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、同時に又は並行して投与される。例えば、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、互いから２日以内に（例えば、２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間、１時間以内に、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、治療インターバルは、初回投与用量の投与で始まり、最終回投与用量の投与で終わる。
治療インターバルが単回用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及び単回用量のＣＡＲ発現細胞を含む場合、特定の実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量とＣＡＲ発現細胞の用量とは、逐次的に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量よりも前に投与され、治療インターバルは、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与で始まり、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量の投与で終わる。他の実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量よりも前に投与され、治療インターバルは、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量の投与で始まり、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与で終わる。一実施形態において、治療インターバルは、１用量以上、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０用量、又はそれを超える後続用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）を更に含む。かかる実施形態において、治療インターバルは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０用量、又はそれを超える阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及び１用量のＣＡＲ発現細胞を含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量が投与される少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間前又は後に投与される。２用量以上の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）が投与される実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量が投与される少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間前若しくは後又は治療インターバルの開始後に投与される。実施形態において、２用量以上の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）が投与される場合、第２の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量が投与された約１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、又は４日後に投与される。
治療インターバルが複数回用量（例えば、第１及び第２並びに任意選択により後続の用量）の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及びある用量のＣＡＲ発現細胞を含む場合、特定の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量と阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量とは、同時に又は並行して、例えば互いから２日以内に（例えば、２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間以内に、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、（ｉ）ＣＡＲ発現細胞の用量又は（ｉｉ）阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量のいずれか遅い方の後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、（ｉ）又は（ｉｉ）の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の後続用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、初回投与用量の投与で始まり、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量（又は後続用量）の投与で終わる。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量は、少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、又はそれを超える治療インターバルにわたって１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）投与される。本明細書に記載される治療インターバルのいずれも１用量以上のＣＡＲ発現細胞を含み得る。
治療インターバルが複数回用量（例えば、第１及び第２並びに任意選択により後続の用量）の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）及びある用量のＣＡＲ発現細胞を含む他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量と阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量とは、逐次的に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与後であるが、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の投与前に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の後に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与で始まり、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２、第３、第４、第５、又は第６の用量（又は後続用量）の投与で終わる。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与の少なくとも１日（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、又はそれを超える）後に投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与から１日以内に（例えば、２４時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間以内に、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量と並行して投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量の投与の少なくとも１日（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。実施形態において、治療インターバルは、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の持続投与、例えば１日１回、１日２回、１日３回、２日毎、３日毎、又は４日毎を含む。阻害薬が持続投与される実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量（例えば、第１の用量）は、阻害薬の第１の用量の後、例えば少なくとも１日後、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７日、１、２、３、４、５、６週間、１、２、３、４、５、６ヵ月又はそれを超えて後に投与される。阻害薬が持続投与される他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量（例えば、第１の用量）は、阻害薬の第１の用量の投与と並行して（例えば、１日以内に（例えば、２４時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間以内に、又はそれ未満で）投与される。阻害薬が持続投与される実施形態において、阻害薬は、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量の投与の少なくとも１日後、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７日、１、２、３、４、５、６週間、１、２、３、４、５、６ヵ月又はそれを超えて後に投与される。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与前に投与される。かかる実施形態において、治療インターバルは、ＣＡＲ発現細胞の投与で始まり、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量（又は後続用量）の投与で終わる。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量の投与の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の後続用量（例えば、第３、第４、又は第５の用量など）は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第２の用量の少なくとも８時間（例えば、少なくとも８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の第１の用量は、ＣＡＲ発現細胞の投与の少なくとも１日（例えば、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超える）後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量は、少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、又はそれを超える治療インターバルにわたって１日１回（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）投与される。
一実施形態において、本明細書に記載される治療インターバルのいずれも１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の更なる回数だけ繰り返され得る。一実施形態において、治療インターバルは、１回繰り返され、２回の治療インターバルを含む治療レジメンとなる。ある実施形態において、治療インターバルの繰り返しは、第１の又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日若しくは２週間、又はそれを超えて後に投与される。ある実施形態において、治療インターバルの繰り返しは、第１の又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも３日後に投与される。
一実施形態において、本明細書に記載される治療インターバルのいずれも、その後に１回以上、例えば１、２、３、４、又は５回の後続の治療インターバルが続く。１回以上の後続の治療インターバルは、第１の又は前回の治療インターバルと異なる。例として、単回用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）と単回用量のＣＡＲ発現細胞とからなる第１の治療インターバルの後に、複数回用量（例えば、２、３、４用量、又はそれを超える）の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）と単回用量のＣＡＲ発現細胞とからなる第２の治療インターバルが続く。一実施形態において、１回以上の後続の治療インターバルは、第１の又は前回の治療インターバルの完了から少なくとも１日、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、又は２週間後に投与される。
本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、１回以上の治療インターバルの完了後に１用量以上の後続用量、例えば更なる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）が投与される。治療インターバルが繰り返されるか又は２回以上の治療インターバルが投与される実施形態において、１用量以上の後続用量、例えば更なる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）は、１回の治療インターバルの完了後且つ別の治療インターバルの開始前に投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）の用量は、１回以上又は各々の治療インターバルの完了後８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、２０時間、２４時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、７日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される。一実施形態において、１回以上又は各々の治療インターバルの完了後、１、２、又は３用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬）が毎日投与される。
本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、１回以上の治療インターバルの完了後に１用量以上、例えば１、２、３、４、５用量、又はそれを超える後続用量のＣＡＲ発現細胞が投与される。治療インターバルが繰り返されるか又は２回以上の治療インターバルが投与される実施形態において、１用量以上の後続用量、例えば１、２、３、４若しくは５用量、又はそれを超えるＣＡＲ発現細胞は、１回の治療インターバルの完了後且つ別の治療インターバルの開始前に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、１回以上又は各々の治療インターバルの完了後２日、３日、４日、５日、７日、２週間、３週間、又は４週間毎に投与される。
一実施形態において、治療インターバルは、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の第１の用量と並行して（例えば、２日以内に（例えば、２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間以内に、又はそれ未満で）投与される単回用量のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）を含む。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬（例えば、ルキソリチニブ）又はＢＴＫ阻害薬（例えば、イブルチニブ）は、治療インターバルの継続期間中、１日２回（ＢＩＤ）投与される。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬（例えば、ルキソリチニブ）又はＢＴＫ阻害薬（例えば、イブルチニブ）は、治療インターバルの継続期間中、１日１回（ＱＤ）投与される。
他の実施形態において、治療インターバルは、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の第１の用量の投与後に（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、又はそれを超えて後に）投与される単回用量のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）を含む。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の第２の用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の第１の用量の投与後に投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の後続用量が投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の用量は、１日２回（ＢＩＤ）投与される。実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の用量は、１日１回（ＱＤ）投与される。実施形態において、治療インターバルは、少なくとも５用量（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０用量、又はそれを超える）の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）を含む。実施形態において、治療インターバルは、阻害薬の持続投与（例えば、ＱＤ又はＢＩＤ）を含む。実施形態において、治療インターバルは、１～７日、１～５週間、又は１～１２ヵ月の継続期間にわたる。
本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、対象は、単回用量のＣＡＲ発現細胞及び単回用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）を投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の単回用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の単回用量の投与の少なくとも１日、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、２０、２５、３０、３５、４０日、又は２週間、３週間、４週間、又はそれを超えて後に投与される。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の初回用量後に１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量の後続用量のＣＡＲ発現細胞が対象に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも２日、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、２０、２５、３０、３５、４０日若しくは２週間、３週間、４週間、又はそれを超えて後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の前回用量の少なくとも５日後に投与される。一実施形態において、対象は、週に３用量又は２日毎に１用量のＣＡＲ発現細胞を投与される。
一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の単回用量の投与後、１用量以上、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０用量、又はそれを超える後続用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）が投与される。一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の１用量以上の後続用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の前回用量の少なくとも５日、７日、１０日、１４日、２０日、２５日、３０日、２週間、３週間、４週間、又は５週間後に投与される。他の実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の１用量以上の後続用量は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の前回用量の後に隔日、１日１回、又は１日２回投与される。
一実施形態において、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の１用量以上の後続用量は、ＣＡＲ発現細胞の用量、例えばＣＡＲ発現細胞の初回用量の少なくとも１、２、３、４、５、６、又は７日後に投与される。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の第１の用量の前に、１用量以上、例えば１、２、３、４、又は５用量の阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）が投与される。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の１用量以上及び阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ、又はＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ）の１用量以上の投与は、例えば、１、２、３、４、又は５回の更なる回数だけ繰り返される。
本明細書に開示される治療剤の投薬量及び治療レジメンは、当業者が決定することができる。
本明細書に記載される投与レジメン又は治療インターバルのいずれかにおいて、一部の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の用量は、少なくとも約１×１０５、５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９個の細胞を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の用量は、少なくとも約１～５×１０７～１～５×１０８個を含む。一部の実施形態において、対象は、約１～５×１０７個のＣＡＲ発現細胞を投与される。他の実施形態において、対象は、約１～５×１０８個のＣＡＲ発現細胞を投与される。
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、１ｋｇ当たり１．５×１０７～５×１０９細胞（例えば、１ｋｇ当たり０．３×１０６～１×１０８細胞）の用量（例えば、総用量）で投与される。実施形態において、総用量は、１．５×１０１０細胞／ｋｇを超えず、例えば複数回用量で時間をかけて投与され、例えば１．５×１０９細胞／ｋｇを超えず、例えば１．５×１０８細胞／ｋｇを超えない。
一実施形態において、最大１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２用量の細胞が投与される。他の実施形態において、１、２、３、４、５又は６用量の細胞は、例えば、１、２、３、４週間、又はそれを超える治療インターバルで哺乳類に投与される。一実施形態において、最大６用量が２週間で投与される。用量は同じであるか又は異なり得る。一実施形態において、最初により低い用量が投与され、続いて１用量以上のより高い用量が投与される。一例示的実施形態において、より低い用量は、約１×１０５～１×１０９細胞／ｋｇ、又は１×１０６～１×１０８細胞／ｋｇであり、及びより高い用量は、約２×１０５～２×１０９細胞／ｋｇ又は２×１０６～２×１０８細胞／ｋｇであり、その後に約４×１０５～４×１０９細胞／ｋｇ、又は４×１０６～４×１０８細胞／ｋｇの３～６用量が続く。
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、分割用量、例えば１、２、３回、又はそれを超えて分けた部分用量の投与によって対象に投与される細胞の総用量を含む投与レジメンに従い対象に投与される。実施形態において、治療１日目に総用量の第１の割合が投与され、後続の（例えば、２、３、４、５、６、又は７日目又はそれ以降の）治療日に総用量の第２の割合が投与され、及び任意選択により更に後続の（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０日目、又はそれ以降の）治療日に総用量の第３の割合（例えば、残りの割合）が投与される。例えば、治療１日目に総用量の１０％の細胞が送達され、２日目に総用量の３０％の細胞が送達され、及び３日目に総用量の残り６０％の細胞が送達される。例えば、総細胞用量は、１～５×１０７又は１～５×１０８個のＣＡＲ発現細胞を含む。
実施形態において、総用量は、複数回用量（例えば、第１の用量、第２の用量、及び任意選択により第３の用量など）で投与される。
実施形態において、第１の用量は、例えば、初日に投与される、総用量の約１０％（例えば、約１×１０７細胞／ｋｇ）を含む。実施形態において、第２の用量は、例えば、後続の日（例えば、第１の用量の１、２、３、４、５、６、又は７日後）に投与される、総用量の約３０％（例えば、約３×１０７細胞／ｋｇ）を含む。実施形態において、第２の用量は、対象が第１の用量後に臨床的に安定している場合に投与される。実施形態において、後続用量（例えば、第３、任意選択により第４等の用量）が対象に投与され、例えば、第１の用量、第２の用量、及び後続用量の合計は、総用量になる。実施形態において、総用量が複数回用量で投与される場合、各用量間の時間は、少なくとも１日（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７日、１、２若しくは３週間、又はそれを超える）である。実施形態において、第２の用量と第３の用量との間、及び／又は第３の用量と第４の用量との間、及び／又は第４の用量と第５の用量との間の時間は、少なくとも１週間（例えば、少なくとも１、２、３、４週間、又はそれを超える）である。
実施形態では、本明細書に記載される投与レジメンのいずれかにおいて、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬又はＢＴＫ阻害薬）の用量は、１、２、３、４、５、６、又は７日毎、又は１日２回、又は１日３回投与される。
実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブは、２．５ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、２．５～５ｍｇ、５～１０ｍｇ、１０～１５ｍｇ、１５～２０ｍｇ、２０～２５ｍｇ、２５～３０ｍｇ、３０～３５ｍｇ、３５～４０ｍｇ、４０～４５ｍｇ、又は４５～５０ｍｇ）の用量で１日２回（例えば、１日当たり合計５ｍｇ～１００ｍｇ）（例えば、経口的に）投与される。
実施形態において、ＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）は、約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量である期間にわたって毎日、例えば２１日サイクルにわたって毎日、又は２８サイクルにわたって毎日（例えば、経口的に）投与される。一実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２サイクル又はそれを超えるＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブが投与される。
本明細書に開示される方法のいずれかの一部の実施形態において、本方法は、阻害薬（例えば、ＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ、又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ）を対象に投与すること、阻害薬を減量すること（例えば、その投与を中止すること）、及び続いてＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ１９－又はＣＡＲ１２３発現細胞）を対象に投与することを含む。
一部の実施形態において、本方法は、阻害薬（例えば、ＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ、又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ）を対象に投与すること、及び続いて阻害薬とＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ１９－又はＣＡＲ１２３発現細胞）との組み合わせを対象に投与することを含む。
一部の実施形態において、本方法は、阻害薬（例えば、ＢＴＫ阻害薬、例えばイブルチニブ、又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ）を対象に投与すること、阻害薬を減量すること（例えば、その投与を中止又は中断すること）、及び続いてＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ１９－又はＣＡＲ１２３発現細胞）と第２の阻害薬（例えば、第１の阻害薬以外の第２の阻害薬）との組み合わせを対象に投与することを含む。一部の実施形態において、第１の阻害薬は、ＢＴＫ阻害薬であり、第２の阻害薬は、第１のＢＴＫ阻害薬以外、例えばイブルチニブ以外のＢＴＫ阻害薬である。一部の実施形態において、第１の阻害薬は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬であり、第２の阻害薬は、第１のＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬以外、例えばルキソリチニブ以外のＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬である。一部の実施形態において、第１の阻害薬は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬であり、第２の阻害薬は、ＢＴＫ阻害薬である。一部の実施形態において、第１の阻害薬は、ＢＴＫ阻害薬であり、第２の阻害薬は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬である。一部の実施形態において、第２のＢＴＫ阻害薬は、ＧＤＣ－０８３４、ＲＮ－４８６、ＣＧＩ－５６０、ＣＧＩ－１７６４、ＨＭ－７１２２４、ＣＣ－２９２、ＯＮＯ－４０５９、ＣＮＸ－７７４若しくはＬＦＭ－Ａ１３の１つ以上、又はこれらの組み合わせから選択される。実施形態において、第２のＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬は、ＡＧ４９０、ＡＺＤ１４８０、トファシチニブ（タソシチニブ又はＣＰ－６９０５５０）、又はＣＹＴ３８７の１つ以上から選択される。
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞は、本明細書に記載される用量及び／又は投与スケジュールで投与される。
ある実施形態において、本明細書に記載される任意の方法は、療法を投与してＣＲＳを予防又は治療することを更に含む。実施形態において、療法は、ＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えば抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）を含む。他の実施形態において、療法は、ＩＬ－６阻害薬を血管作動性薬剤、免疫抑制剤、コルチコステロイド、又は機械的換気法の１つ以上（又は全て）との併用で含む。実施形態において、本方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）の用量（例えば、第１の用量）の投与前に（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０日又は１、２、３、又は４週間前に）ＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）を投与することを含む。実施形態において、本方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）の用量（例えば、第１の用量）の投与と並行してＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）を投与することを含む。実施形態において、本方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）の用量（例えば、第１の用量）の例えば投与後であるが、対象における最初の発熱の徴候の前に又はそれから１週間以内に（例えば、１週間、７、６、５、４、３、２、１日以内に又はそれ未満で）ＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）を投与することを含む。実施形態において、本方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞）の用量（例えば、第１の用量）の投与後、及び例えば２４時間で（例えば、少なくとも４時間離れた）２回の連続測定についての対象における少なくとも３８℃（例えば、少なくとも３８．５℃）の温度の発生から１週間以内に（例えば、１週間、７、６、５、４、３、２、１日以内に、又はそれ未満で）ＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）を投与することを含む。実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞による治療前に高腫瘍負荷を有する（例えば、それと診断されるか又はそれを有すると同定される）。実施形態において、高腫瘍負荷は、ＣＡＲ発現細胞の投与前（例えば、ＣＡＲ発現細胞の投与の約１～５日前）の対象の骨髄における少なくとも４０％の芽球（例えば、少なくとも４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超える芽球）を含む。
実施形態において、本方法は、約５～１５ｍｇ／ｋｇ、例えば８～１２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、又は約１２ｍｇ／ｋｇ）の用量のトシリズマブを投与することを含む。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、Ｔ細胞に例えばインビトロ転写を用いて導入され、及び対象（例えば、ヒト）は、ＣＡＲ分子を含む細胞の最初の投与、及びＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の後続の投与を受け、１回以上の後続の投与は、前回の投与から１５日未満、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２日後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与が１週間当たりで対象（例えば、ヒト）に投与され、例えばＣＡＲ分子を含む細胞の２、３、又は４回の投与が１週間当たりで投与される。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与（例えば、１週間当たりに２、３又は４回の投与）を受け（本明細書ではサイクルとも称される）、続く１週間ではＣＡＲ分子を含む細胞の投与がなく、次にＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与）が対象に投与される。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、２サイクル以上のＣＡＲ分子を含む細胞を受け、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４、又は３日未満である。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、１週間当たり３回の投与のために隔日投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８週間、又はそれを超えて投与される。
一実施形態において、キナーゼ阻害薬とＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞との組み合わせは、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載される癌に対する第一選択治療として投与される。別の実施形態において、キナーゼ阻害薬とＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞との組み合わせは、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載される癌に対する第２、第三、第四選択治療として投与される。
実施形態において、本明細書に記載される方法の任意のものは、例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ分子、例えばＣＤ１９又はＣＤ１２３に結合するＣＡＲ分子を発現する１つ以上の細胞を投与する前に対象に対してリンパ球枯渇を実施することを更に含む。リンパ球枯渇は、例えば、メルファラン、シトキサン、シクロホスファミド、及びフルダラビンの１つ以上を投与することを含み得る。
対象
実施形態において、対象は、ＣＲＳを発症するリスクがある（例えば、リスクがあると同定される）か、ＣＲＳを有するか、又はＣＲＳと診断される。
実施形態において、対象は、ＣＡＲ療法、例えば本明細書に記載されるＣＡＲ療法を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる。実施形態において、対象は、ＣＡＲ１２３発現細胞又はＣＡＲ１９発現細胞を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる。
実施形態において、本方法は、ｉ）ＣＲＳを発症するリスクがあるか、又はｉｉ）ＣＲＳを有する対象を同定すること（及び任意選択により選択すること）を含む。
実施形態において、本方法は、阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬又はＢＴＫ阻害薬）の投与に対象を選択することを含む。実施形態において、対象は、（ｉ）対象のＣＲＳを発症するリスク、（ｉｉ）対象のＣＲＳの診断、及び／又は（ｉｉｉ）対象がＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ療法、例えばＣＡＲ１９療法、例えばＣＴＬ０１９、又はＣＤ１２３ ＣＡＲ療法）を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになるかどうかに基づいて選択される。実施形態において、対象がＣＲＳ、例えば重症又は非重症ＣＲＳと診断される場合、その対象は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。実施形態において、対象がＣＲＳを発症するリスクがある（例えば、リスクがあると同定される）場合、その対象は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。実施形態において、対象がＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ療法、例えばＣＡＲ１９療法、例えばＣＴＬ０１９、又はＣＡＲ１２３療法）を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる場合、その対象は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫ阻害薬の投与のために選択される。
ＣＲＳのリスクがある対象
実施形態において、対象が例えばＣＡＲ療法（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ療法）の投与前に高腫瘍負荷を有する場合、その対象は、ＣＲＳのリスクがあると同定される。
実施形態において、対象は、対象のＣＲＳリスク状態を取得することによりＣＲＳのリスクがあると同定され、前記ＣＲＳリスク状態は、以下の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、又はそれを超える（全て）測定を含む：
（ｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０又はＩＦＮ－γのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ、例えば、ここで、対象は、成人又は小児対象である、
（ｉｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、又はＩＬ１Ｒａのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ１Ｒａのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、成人又は小児対象である、
（ｉｉｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０又はＩＦＮ－γのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ、及び対象における骨髄疾患のレベル、例えば、ここで、対象は、小児対象である、
（ｉｖ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、又はＭＩＰ１－αのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、及びＭＩＰ１－αのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、小児対象である、
（ｖ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０、ＭＣＰ１、又はエオタキシンのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ｓｇｐ１３０、ＭＣＰ１、又はエオタキシンのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、成人又は小児対象である、
（ｖｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のＩＬ－２、エオタキシン、又はｓｇｐ１３０のレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ＩＬ－２、エオタキシン、又はｓｇｐ１３０のいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、成人又は小児対象である、
（ｖｉｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、又はエオタキシンのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、又はエオタキシンのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、小児対象である、
（ｖｉｉｉ）対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のＩＬ－１０のレベル又は活性及び対象における疾患負荷のレベル又はこれらの組み合わせ、例えば、ここで、対象は、小児対象である、
（ｉｘ）対象におけるＩＦＮ－γ又はＩＬ－１３のレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ、例えば、ここで、対象は、小児対象である、又は
（ｘ）試料（例えば、血液試料）中のＩＦＮ－γ、ＩＬ－１３、又はＭＩＰ１－αのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１３、及びＭＩＰ１－αのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、例えば、ここで、対象は、小児対象である、又は
（ｘｉ）試料（例えば、血液試料）中のＩＦＮ－γ又はＭＩＰ１－αのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ、例えば、ここで、対象は、小児対象であり、
ここで、ＣＲＳリスク状態は、対象がＣＲＳ、例えば重症ＣＲＳを発症するリスクの指標となる。
前述の方法の任意のものは、ＣＲＳリスク状態の決定に応じて、
対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高い又は重症ＣＲＳを発症するリスクが低いと同定すること、
ＢＴＫ阻害薬（例えば、イブルチニブ）又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬（例えば、ルキソリチニブ）を投与すること、
変更した用量設定のＣＡＲ発現細胞療法を投与すること、
ＣＡＲ発現細胞療法のスケジュール又は時間コースを変更すること、
療法、例えばＩＬ－６阻害薬（例えば、抗ＩＬ６受容体阻害薬、例えばトシリズマブ）、血管作動性薬剤、免疫抑制剤、コルチコステロイド、又は機械的換気法の１つ以上から選択される療法を投与してＣＲＳを治療すること、及び／又は
例えば重症ＣＲＳを発症するリスクが高い対象について、代替療法、例えば特定の癌型に対する標準治療を投与すること
の１つ、２つ、又はそれを超えるもの（全て）を実施することを更に含み得る。
本方法の一部の実施形態において、ＣＲＳリスク状態は、対象における、例えば試料（例えば、血液試料）中のｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、又はＩＬ－１３のレベル若しくは活性の測定又はこれらの組み合わせ（例えば、ｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－１３のいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）を含み、例えば、ここで、対象は、成人又は小児対象である。
本方法の一部の実施形態において、ＣＲＳリスク状態は、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いか又はリスクが低いかの指標である。例えば、ＣＲＳは、臨床グレード１～３であることもあり、又は臨床グレード４～５の重症ＣＲＳであることもある。
一部の実施形態において、本方法は、ＣＲＳの症状（例えば、臨床症状）、例えば低血圧又は発熱の１つ以上、又は重症ＣＲＳ、例えばグレード４臓器毒性又は機械的換気法の必要性の１つ以上を有しない対象に対して実施される。
本方法の一部の実施形態において、ＩＦＮ－γ、ｓｇｐ１３０、ＭＣＰ１、ＩＬ－１０、又は疾患負荷の高いレベル若しくは活性又はこれらの任意の組み合わせは、重症ＣＲＳのリスクが高いことの指標である。一部の実施形態において、ＩＬ１３、ＩＬ１Ｒａ、ＭＩＰ１ａ、又はエオタキシンの低いレベル若しくは活性又はこれらの任意の組み合わせは、重症ＣＲＳのリスクが高いことの指標である。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準と比べて（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０若しくはＩＦＮ－γ又はこれらの組み合わせを有するか又は有すると同定される。
本方法の他の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準と比べて（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、又はより低いレベル若しくは活性のＩＬ１Ｒａ、或いはこれらの組み合わせを有するか又は有すると同定される。一実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準と比較してより高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０及びより高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０及びより低いレベル若しくは活性のＩＬ１Ｒａ、より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ及びより低いレベル若しくは活性のＩＬ１Ｒａ、又はより高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、及びより低いレベル若しくは活性のＩＬ１Ｒａを有すると同定される。一部の実施形態において、基準は、重症ＣＲＳのリスクが低い対象又は対照レベル若しくは活性である。対象はヒト、例えば成人又は小児対象であり得る。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準と比べて、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して対象において（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０若しくはＩＦＮ－γ又はこれらの組み合わせ、及びより高いレベルの骨髄疾患を有するか又は有すると同定される。一実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベルのｓｇｐ１３０及びＩＦＮ－γ、ｓｇｐ１３０及び骨髄疾患、ＩＦＮ－γ及び骨髄疾患、又はｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ及び骨髄疾患を有すると同定される。対象は、ヒト、例えば小児対象であり得る。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象（例えば、小児対象）は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、又はより低いレベル若しくは活性のＭＩＰ１－α、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、例えば、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０及びより高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ、より高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０及びより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－α、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ及びより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－α、より高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ、及びより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－αを有すると同定される。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル若しくは活性のＭＣＰ１、又はより低いレベル若しくは活性のエオタキシン、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０及びより高いレベル又は活性のＭＣＰ１、より高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０及びより低いレベル又は活性のエオタキシン、より高いレベル又は活性のＭＣＰ１及びより低いレベル又は活性のエオタキシン、より高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０、より高いレベル又は活性のＭＣＰ１、及びより低いレベル又は活性のエオタキシンを有すると同定される。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）変化した（例えば、より高い）レベル若しくは活性のＩＬ－２、より低いレベル若しくは活性のエオタキシン、又はより高いレベル若しくは活性のｓｇｐ１３０、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２及びより低いレベル又は活性のエオタキシン、変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２及びより高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０、より低いレベル又は活性のエオタキシン及びより高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０、変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２、より低いレベル又は活性のエオタキシン、及びより高いレベル又は活性のｓｇｐ１３０を有すると同定される。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、変化した（例えば、より高い）レベル若しくは活性のＩＬ－２、又はより低いレベル若しくは活性のエオタキシン、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、小児対象である。一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ及び変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ及びより低いレベル又は活性のエオタキシン、変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２及びより低いレベル又は活性のエオタキシン、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ、変化した（例えば、より高い）レベル又は活性のＩＬ－２、及びより低いレベル又は活性のエオタキシンを有すると同定される。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のＩＬ－１０又はより高いレベルの疾患負荷、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、小児対象である。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ又はより低いレベルのＩＬ－１３、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、小児対象である。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ、より低いレベル若しくは活性のＩＬ－１３、より低いレベル若しくは活性のＭＩＰ１－α、又はこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、小児対象である。一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ又はより低いレベル又は活性のＩＬ－１３、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ又はより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－α、より低いレベル又は活性のＩＬ－１３又はより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－α、より高いレベル又は活性のＩＦＮ－γ、より低いレベル又は活性のＩＬ－１３、及びより低いレベル又は活性のＭＩＰ１－αを有すると同定される。
本方法の一部の実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して（例えば、試料中、例えば血液試料中に）より高いレベル若しくは活性のＩＦＮ－γ又はより低いレベル若しくは活性のＭＩＰ１－α、或いはこれらの組み合わせを有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、小児対象である。
一部の実施形態では、例えば、（例えば、小児患者の）ＩＬ２、エオタキシン、及びｓｇｐ１３０を例えば含む３バイオマーカーパネルにおいて、又はＩＦＮ－γ、ＩＬ２、及びエオタキシンを含む３バイオマーカーパネルにおいて、ＩＬ２のより高いレベル又は活性は、対象の重症ＣＲＳのリスクが高いことを示す。他の実施形態において、例えば、例として小児患者についての２バイオマーカーパネルにおいて、ＩＬ２のより高いレベル又は活性は、対象の重症ＣＲＳのリスクが低いことを示す。
本方法の一部の実施形態において、本明細書に記載されるマーカーのより高いレベルとは、１、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、１０，０００、２０，０００、５０，０００、１００，０００、２００，０００、又は５００，０００ｐｇ／ｍｌ以上のレベルである。一部の実施形態において、ｓｇｐ１３０のより高いレベルとは、１５０，０００、２００，０００、２１０，０００、２１５，０００、２１８，０００、２１８，１７９、２２０，０００、２２５，０００、２３０，０００、又は２５０，０００ｐｇ／ｍｌ以上である。一部の実施形態において、ＩＦＮ－γのより高いレベルとは、６、７、８、９、１０、１０．４２７２、１０．５、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２７．６７３２、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９４．８８７３、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０５、１１０、１１５、又は１２０ｐｇ／ｍｌ以上である。一部の実施形態において、ＩＬ－１０のより高いレベルとは、５、６、７、８、９、１０、１１、１１．７４５７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０ｐｇ／ｍｌ以上である。一部の実施形態において、より高い腫瘍負荷とは、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５１．９、５５、６０、６５、７０、又は７５％以上である。一部の実施形態において、ｓｇｐ１３０、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、又は腫瘍負荷のより低いレベルとは、この段落中にある任意の値以下のレベルである。
本方法の一部の実施形態において、本明細書に記載されるマーカーのより低いレベルとは、１、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、１０，０００、２０，０００、５０，０００、１００，０００、２００，０００、又は５００，０００ｐｇ／ｍｌ以上のレベルである。一部の実施形態において、ＩＬ１Ｒａのより低いレベルとは、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６５７．９８７、６７５、７００、７２０、又は７５０ｐｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態において、ＭＣＰ１のより低いレベルとは、３５００、４０００、４１００、４２００、４３００、４４００、４５００、４６００、４６３６．５２、４７００、４８００、４９００、５０００、又は５５００ｐｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態において、エオタキシンのより低いレベルとは、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、２９．０９０２、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ｐｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態において、ＭＩＰ１ａのより低いレベルとは、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３０．１５９１、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ｐｇ／ｍｌ以下である。一部の実施形態において、ＩＬ１Ｒａ、ＭＣＰ１、エオタキシン、又はＭＩＰ１ａのより高いレベルとは、この段落中にある任意の値以上のレベルである。
本方法の一部の実施形態において、感度は少なくとも０．７５、０．７９、０．８０、０．８２、０．８５、０．８６、０．９０、０．９１、０．９３、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、又は１．０である。一部の実施形態において、特異度は少なくとも０．７５、０．７７、０．８０、０．８５、０．８６、０．８９、０．９０、０．９２、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、又は１．０である。一部の実施形態において、ＰＰＶは少なくとも０．６２、０．６５、０．７０、０．７１、０．７５、０．８０、０．８２、０．８３、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、又は１．０である。一部の実施形態において、ＮＰＶは少なくとも０．８０、０．８５、０．９０、０．９２、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９、又は１．０である。
本方法の一部の実施形態において、エオタキシンの測定は、エオタキシン－１、エオタキシン－２、及びエオタキシン－３の１つ以上（例えば、そのうちの２つ又は全て）の測定を含む。一部の実施形態において、エオタキシンの測定は、エオタキシン－１及びエオタキシン－２、エオタキシン－１及びエオタキシン－３、又はエオタキシン－２及びエオタキシン－３の測定を含む。
本明細書に開示される任意の方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、血液試料）中のｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、又はＧＭ－ＣＳＦから選択されるサイトカインの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、１０、２０若しくはそれを超えるレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせの測定を取得するステップを更に含み得る。一部の実施形態において、重症ＣＲＳを有するか又は有するリスクが高い対象は、ｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β若しくはＧＭ－ＣＳＦから選択されるサイトカインの１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、１０、１５、２０、又は全て）又はこれらの組み合わせについて、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性を有するか又は有すると同定される。
本明細書に開示される任意の方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、血液試料）中のＩＦＮ－γ、ＩＬ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＰ１０、ＭＣＰ１、Ｍ１Ｇ、ｓＩＬ２Ｒα、ＧＭ－ＣＳＦ若しくはＴＮＦαから選択されるサイトカインの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ若しくは全てのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせの測定値を取得するステップを更に含み得る。一部の実施形態において、重症ＣＲＳを有するか又は有するリスクが高い対象は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＰ１０、ＭＣＰ１、Ｍ１Ｇ、ｓＩＬ２Ｒα、ＧＭ－ＣＳＦ若しくはＴＮＦαから選択されるサイトカインの１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又は全て）又はこれらの組み合わせについて、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性を有するか又は有すると同定される。
本明細書に開示される任意の方法は、対象における、例えば対象からの試料（例えば、血液試料）中のＩＦＮ－γ、ＩＬ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＰ１０、ＭＣＰ１、Ｍ１Ｇ若しくはｓＩＬ２Ｒαから選択されるサイトカインの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ若しくは全てのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせの測定を取得するステップを更に含み得る。一部の実施形態において、重症ＣＲＳを有するか又は有するリスクが高い対象は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＰ１０、ＭＣＰ１、Ｍ１Ｇ若しくはｓＩＬ２Ｒαから選択されるサイトカインの１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は全て）又はこれらの組み合わせについて、基準、例えば重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較してより高いレベル又は活性を有するか又は有すると同定される。
一部の実施形態において、本明細書に開示される任意の方法は、対象からの試料（例えば、血液試料）中のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを決定するステップを更に含み得る。一実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが低い対象は、７ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、７、６．８、６、５、４、３、２、１ｍｇ／ｄＬ又はそれ未満）のＣＲＰレベルを有するか又は有すると同定される。一実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して試料（例えば、血液試料）中により高いレベルのＣＲＰを有するか又は有すると同定される。一実施形態において、より高いレベル又は活性は、重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して少なくとも２倍高い（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超えて高い）。
他の実施形態において、本明細書に開示される方法は、取得されたＣＲＳリスク状態に基づいて対象に対する療法、例えばＣＡＲ発現細胞療法を選択又は変更するステップを更に含む。取得されたＣＲＳリスク状態が、対象が重症ＣＲＳのリスクが高いというものである実施形態では、療法が中断されるか、又は療法（例えば、ＣＡＲ発現細胞）の後続の（例えば、第２、第３、又は第４の）用量が前回の用量よりも低い用量となるように療法が変更される。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の後続の（例えば、第２、第３、又は第４の）用量は、前回対象に投与されたＣＡＲ発現細胞療法と異なるＣＡＲ又は異なる細胞型を含む。
本方法の他の実施形態において、バイオマーカー（例えば、（ｉ）～（ｘｉ）の１つ以上のバイオマーカー）の１つ以上の測定は、対象から取得された試料（例えば、血液試料）から得られる。一部の実施形態において、対象、例えば対象からの試料は、ＣＡＲ発現細胞療法を受けている間に評価される。他の実施形態において、対象、例えば対象からの試料は、ＣＡＲ発現細胞療法を受けた後に評価される。例えば、対象、例えば対象からの試料は、ＣＡＲ発現細胞療法の輸注から１０日以下（例えば、１～１０日、１～９日、１～８日、１～７日、１～６日、１～５日、１～４日、１～３日、又は１～２日、５日以下、４日以下、３日以下、２日以下、１日以下、例えば１、３、５、１０、１２、１５、２０時間）後に評価される。一部の実施形態において、対象は、５日以下、４日以下、３日以下、２日以下、１日以下で（例えば、但しＣＡＲ発現療法の輸注から１、３、５、１０、１２、１５、２０時間以上後に）評価される。他の実施形態において、バイオマーカーの１つ以上の測定は、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）レベル又はタンパク質レベルの１つ以上の検出を含む。
実施形態において、本方法は、対象が重症ＣＲＳを有するかどうかを決定することを含む。本方法は、例えば、対象に対する免疫細胞に基づく療法、例えばＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＣＡＲ１９発現細胞療法又はＣＡＲ１２３発現細胞療法）に応答したＣＲＳリスク状態を取得することを含み、前記ＣＲＳリスク状態は、以下：
（ｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β若しくはＧＭ－ＣＳＦから選択される１つ以上（例えば、３つ、４つ、５つ、１０、１５、２０、又はそれを超える）のサイトカイン、又はＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、フェリチン、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）若しくは血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、クレアチニン（Ｃｒ）若しくはフィブリノゲンから選択される分析物のレベル又は活性或いはこれらの組み合わせ、
（ｉｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ若しくはｓｇｐ１３０のレベル又は活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、及びｓｇｐ１３０のいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）、又は
（ｉｉｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ＩＬ６、ＩＦＮ－γ若しくはＩＬ２Ｒのレベル若しくは活性又はこれらの組み合わせ（例えば、ＩＬ６、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ２Ｒのいずれか２つ又は３つ全ての組み合わせ）
の１つ、２つ、又はそれを超える（全て）測定を含み、この値が対象の重症ＣＲＳ状態の指標となる。
実施形態において、サイトカイン（ｉ）～（ｉｉｉ）、又はフィブリノゲンを除く全ての分析物の評価レベルが重症ＣＲＳの指標となる。実施形態において、低フィブリノゲンが重症ＣＲＳの指標となる。
組成物及び使用のための組成物
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ）を発現する細胞と、本明細書に記載される阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬、例えばルキソリチニブ）とを含む組成物（例えば、１つ以上の投薬量製剤、併用、又は１つ以上の医薬組成物）を特徴とする。ＣＡＲ発現細胞及び阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）は、同じ又は異なる製剤又は医薬組成物中にあり得る。ＣＡＲ発現細胞及び１つ以上のキナーゼ阻害薬は、単回用量形態で又は２用量以上の形態として存在し得る。
実施形態において、本明細書に開示される組成物は、薬剤としての使用のためのものである。
実施形態において、本明細書に開示される組成物は、本明細書に記載される抗原、例えばＢ細胞抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）の発現に関連する疾患の治療に使用される。
別の態様において、本開示は、抗原（例えば、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９）の発現に関連する疾患、例えば本明細書に記載される癌の治療方法（又はその治療用薬剤の調製）における使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ）を発現する細胞と、本明細書に記載される阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）とを含む組成物（例えば、１つ以上の投薬量製剤、併用、又は１つ以上の医薬組成物）を特徴とする。
別の態様において、本開示は、対象のＣＲＳの予防方法における使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）を発現する細胞と、本明細書に記載される阻害薬（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬又はＢＴＫ阻害薬）とを含む組成物（例えば、１つ以上の投薬量製剤、併用、又は１つ以上の医薬組成物）を特徴とする。
別の態様において、本発明は、例えば対象のＣＲＳを予防するための、キナーゼ阻害薬、例えば本明細書に記載されるキナーゼ阻害薬（例えば、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬、又はルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）と併用した薬剤としての使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、例えば、対象のＣＲＳを予防するための、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞と併用した薬剤としての使用のための、本明細書に記載されるキナーゼ阻害薬（例えば、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬、又はルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）に関する。
別の態様において、本発明は、Ｂ細胞抗原（例えば、ＣＤ１９又はＣＤ１２３）を発現する疾患の治療における、キナーゼ阻害薬、例えば本明細書に記載されるキナーゼ阻害薬（例えば、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬、又はルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）と併用した使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。
別の態様において、本発明は、Ｂ細胞抗原（例えば、ＣＤ１９又はＣＤ１２３）を発現する疾患の治療における、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞と併用した使用のための、本明細書に記載されるキナーゼ阻害薬（例えば、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬、又はルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるＣＡＲ療法の１つ以上の副作用の低減における、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞と併用した使用のための、本明細書に記載されるキナーゼ阻害薬（例えば、イブルチニブなどのＢＴＫ阻害薬、又はルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬）に関する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるとおりのサイトカイン、例えばＩＬ－７、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－２１と併用した（例えば、薬剤としての）使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞と併用した（例えば、薬剤としての）使用のための、本明細書に記載されるサイトカインに関する。
別の態様において、本発明は、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９を発現する疾患の治療における、本明細書に記載されるとおりのサイトカイン、例えばＩＬ－７、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－２１と併用した（例えば、薬剤としての）使用のための、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９を発現する疾患の治療における、本明細書に記載されるＣＡＲ分子を発現する細胞と併用した（例えば、薬剤としての）使用のための、本明細書に記載されるサイトカインに関する。
一部の態様において、本開示は、対象のＣＲＳと敗血症とを区別する方法を提供し、この方法は、以下の１つ以上の測定を取得することを含む：
（ｉ）ＧＭ－ＣＳＦ、ＨＧＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＴＮＦＲＩ、及びｓＴＮＦＲＩＩの１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は全て）のレベル又は活性、ここで、基準よりも高いレベル又は活性がＣＲＳの指標となる、又は
（ｉｉ）ＣＤ１６３、ＩＬ－１β、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＶＥＧＦＲ－１、及びｓＶＥＧＦＲ－２の１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は全て）のレベル又は活性、ここで、基準よりも高いレベル又は活性が敗血症の指標となる。
実施形態において、本方法は、測定がＣＲＳを示す場合、療法（例えば、本明細書に記載される療法）を投与してＣＲＳを治療することを含む。実施形態において、本方法は、測定が敗血症を示す場合、療法を投与して敗血症を治療することを含む。
本開示は、一部の態様において、患者のＣＲＳと敗血症とを区別するためのキットも提供し、このキットは、以下から選択される１つ以上の遺伝子又はタンパク質（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２、２２、又は全て）のレベル又は活性を特異的に検出する試薬の組：
ＧＭ－ＣＳＦ、ＨＧＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＣＤ１６３、ＩＬ－１β、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＶＥＧＦＲ－１、及びｓＶＥＧＦＲ－２、及び
前記キットの使用説明書
を含み、
前記使用説明書は、ＧＭ－ＣＳＦ、ＨＧＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＴＮＦＲＩ、又はｓＴＮＦＲＩＩの検出されたレベル又は活性の１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は全て）が基準値よりも高い場合、その対象は、ＣＲＳを有する可能性が高い、及び／又は
ＣＤ１６３、ＩＬ－１β、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＶＥＧＦＲ－１、又はｓＶＥＧＦＲ－２の検出されたレベル又は活性の１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は全て）が基準値よりも高い場合、その対象は、敗血症を有する可能性が高いことを提供する。
本開示は、一部の態様において、
ＧＭ－ＣＳＦ、ＨＧＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＰ－１０、ＭＣＰ１、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ＣＤ１６３、ＩＬ－１β、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＶＥＧＦＲ－１、及びｓＶＥＧＦＲ－２から選択される１つ以上の遺伝子又はタンパク質（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２、２２、２３、又は全て）のレベル又は活性を特異的に検出する試薬の組、及び
生体試料、例えば血液試料
を含む反応混合物も提供する。
実施形態において、生体試料は、ＣＡＲ発現細胞療法で治療される対象、並びに／又はＣＲＳ及び／若しくは敗血症の症状を有する対象からのものである。
本開示は、特定の態様において、対象の敗血症を同定する方法も提供し、この方法は、以下の１つ以上の測定を取得することを含む：
（ｉ）ＡＮＧ２、ＧＣＳＦ、ＩＦＮα、ＩＬ１ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ６、ＭＩＧ、ＭＩＰ１α、ＰＴＸ３、ＴＮＦα、ｓＣＤ１６３、ｓＣＤ３０、ｓＩＬ－１ＲＩ、ｓＩＬ－１ＲＩＩ、ｓＩＬ－２Ｒα、ｓＩＬ－４Ｒ、ｓＲＡＧＥ、ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩ、ｓＶＥＧＦＲ１、ｓＶＥＧＦＲ２、ｓＶＥＧＦＲ３、及びＶＥＧＦの１つ以上（例えば、そのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、又は全て）のレベル又は活性、ここで、基準と比べて高いレベル又は活性が敗血症の指標となる、
（ｉｉ）ＩＬ１３及びＲＡＮＴＥＳの１つ以上（例えば、その両方）のレベル又は活性、ここで、基準と比べて低いレベル又は活性が敗血症の指標となる。
一部の態様において、本開示は、神経毒性、ＣＲＳ、又は後部可逆性脳症症候群（ＰＲＥＳ）の１つ以上を治療する方法を提供し、この方法は、治療有効量のシクロホスファミドを、それを必要としている対象に投与することを含む。関連する態様において、本開示は、神経毒性、ＣＲＳ、又は後部可逆性脳症症候群（ＰＲＥＳ）の治療における使用のためのシクロホスファミドを提供する。実施形態において、シクロホスファミドの投与は、細胞に基づく療法、例えば癌のための細胞に基づく療法、ＣＤ１９阻害療法、又はＣＤ１９枯渇療法の後に続き、又は対象は、細胞に基づく療法、例えば癌のための細胞に基づく療法、ＣＤ１９阻害療法、又はＣＤ１９枯渇療法で以前に治療されたことがある。実施形態において、シクロホスファミドの投与は、細胞に基づく療法の前、それと同じ時点、又はその後である。
実施形態において、患者は、ＣＲＳ、ＰＲＥＳ、又は両方を有するか又は有すると同定される。一部の実施形態において、対象は、ＣＤ１９阻害又は枯渇療法で治療されたことがある。一部の実施形態において、ＣＤ１９阻害薬は、ＣＤ１９抗体、例えばＣＤ１９二重特異性抗体（例えば、ＣＤ１９を標的とする二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ｅｎｇａｇｅｒ）、例えばブリナツモマブ）である。一部の実施形態において、療法は、ＣＡＲ発現細胞、例えば抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又は抗ＣＤ１９ ＣＡＲを含む。実施形態において、対象は、神経毒性、例えば限局的欠損（例えば、脳神経麻痺若しくは不全片麻痺）若しくは大域的異常（例えば、全般発作、錯乱）、又はてんかん重積症に罹患している。実施形態において、対象は、ＣＲＳのいかなる臨床症状も有しない。実施形態において、対象は、ＣＲＳの１つ以上の臨床症状を有する。実施形態において、対象は、基準、例えばＣＡＲ発現細胞による療法前の対象のＩＬ－６レベルと比べて上昇したＩＬ－６を有するか又は有すると同定される。実施形態において、対象は、基準と比べて上昇した血清レベルのＣＲＳ関連サイトカイン（例えば、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－８）を有するか又は有すると同定される。実施形態において、対象は、基準と比べて上昇したレベルのＣＲＳ関連サイトカイン（例えば、ＣＳＦ ＩＬ－６及び／又はＩＬ－８）を有するか又は有すると同定される。実施形態において、対象は、トシリズマブ又はコルチコステロイド（例えば、（メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、又は両方）など、ＣＲＳに対する療法で治療されるか又は治療されたことがある。実施形態において、対象は、循環中の活性化ＣＲ発現細胞の増加を有するか又は有すると同定される。実施形態において、対象は、ＣＳＦ中にＣＡＲ発現細胞を有するか又は有すると同定される。
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明の実施又は試験では、本明細書に記載されるものと同様の又は均等な方法及び材料を使用し得るが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献の全ては、全体として参照により援用される。加えて、材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。見出し、副見出し、又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、ステップ若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はなく、又はステップ若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
本発明の好ましい実施形態についての以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとより良く理解されるであろう。本発明を例示する目的から、現在好ましい実施形態が図面に示される。しかしながら、本発明は、図面に示される実施形態の正確な構成及び手段に限定されないことが理解されなければならない。
例えば、ＣＡＲＴ後のＣＲＳのマウスモデルを作成するための、実施例１に記載のとおり実施される実験を説明する概略図である。 ＡＭＬ注射後のＣＡＲＴ細胞の拡大増殖を示すグラフである。 高用量のＣＡＲＴ１２３後のマウスの生存率を示す生存曲線である。 高用量ＣＡＲＴ１２３で治療したマウスにおける様々なサイトカインのレベルを示すグラフのパネルである。 例えば、ＣＡＲＴ療法後のＣＲＳに対するルキソリチニブの効果を決定するための、実施例１に記載のとおり実施される実験を説明する概略図である。 ｘ軸上の時間に対してｙ軸上にプロットされる、ベースラインからの％変化率によって測定したときのマウスの体重の変化を示すグラフである。 ｘ軸上の時間に対してｙ軸上にプロットされる、連続後眼窩採血からの白血病細胞／ｕｌ（ｈｕＣＤ４５ ｄｉｍ細胞）によって測定したときの疾患負荷を示すグラフである。 ルキソリチニブで治療したときのマウスの体重の変化を示すグラフである。ベースラインからの％変化率によって測定したときの体重をｘ軸上の時間に対してｙ軸上にプロットする。 マウスからの連続後眼窩採血からの絶対ＣＤ３＋細胞数を示すグラフである。ｘ軸上に指示される時点で連続後眼窩採血を実施した。絶対ＣＤ３＋細胞数をｙ軸上にプロットする。 ＣＡＲ１２３注射１週間後にマウスの後眼窩採血によって得たマウス血清からの炎症性サイトカインのレベルを示すグラフの組である。 ＣＡＲＴ１２３と併用して６０ｍｇ／ｋｇルキソリチニブで治療したマウスの生存率を示す生存プロットである。 ＡＭＬ注射後７０日におけるルキソリチニブで治療した生存マウスからの末梢血の分析を示すフローサイトメトリープロットである（ヒトＣＤ４５陽性生細胞にゲートをかけた）。 実施例２に記載される実験、詳細にはＢ細胞新生物におけるＣＡＲＴ１９治療後のＣＲＳモデルの作成の概略図である。 高腫瘍負荷を示す、Ｔ細胞療法前に犠牲死させた代表的なマウスからの脾臓の画像である。 無作為化時点で末梢血（ＰＢ）中に存在する高レベルの循環新生物Ｂ細胞を示すフローサイトメトリープロットである（ゲーティング戦略：時間ゲート、リンパ球、単細胞、ライブゲート、ｈｕＣＤ４５＋ ｍｕＣＤ４５－）。 ＣＡＲＴ１９で治療したマウスに全生存率の有意な低下が起こることを示す生存曲線である。 血清ヒトサイトカインのルミネックス分析を示すグラフのパネルであり、この分析により、未治療と比較してＣＡＲＴ１９を受けたマウスのＰＢ中サイトカインの有意な増加が明らかになった。図３Ｃ～図３Ｅについて、グラフの全ては、２つの独立した実験（１群当たり５匹のマウス）の代表であった。スチューデントｔ検定を使用して２群を比較した。生存曲線は、ログ・ランク検定を用いて比較した。アスタリスクは、ｐ値を表し（＊＝＜０．０５、＊＊＝＜０．０１、＊＊＊＝＜０．００１、＊＊＊＊＝＜０．０００１）、及び「ｎｓ」は、「有意差なし」（ｐ＞０．０５）を意味する。 実施例２の実験、例えば実施例２で作成したマウスモデルにおけるイブルチニブ又は媒体と併用したＣＡＲＴ１９の投与を示す概略図である。 ＣＡＲＴ１９＋イブルチニブで治療したマウスで全生存率の有意な増加が起こることを示す生存曲線である。 媒体又はイブルチニブ治療後の末梢血中のＣＤ１９＋細胞数を示すグラフである。 Ｔ細胞拡大増殖がイブルチニブ治療によって悪影響を受けなかった（むしろ、Ｔ細胞拡大増殖は、イブルチニブ治療によって増大した）ことを示すグラフである。 ルミネックスにより分析したＣＡＲＴ１９又はＣＡＲＴ１９＋イブルチニブで治療したマウスからの血清サイトカインを示すグラフのパネルである。ＣＲＳに関わる全てのサイトカインの有意な低下が観察された。 イブルチニブと共に２４時間インキュベートした初代ＭＣＬ細胞における用量依存的な有意なサイトカイン産生を示すグラフのパネルである。図４Ｂ～図４Ｆのグラフの全ては、２つの独立した実験（１群当たり５匹のマウス）の代表である。スチューデントｔ検定を使用して２群を比較した。複数の群を比較した分析では、多重比較のホルム－シダック補正を伴う一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施した。生存曲線は、ログ・ランク検定を用いて比較した。アスタリスクは、ｐ値を表し（＊＝＜０．０５、＊＊＝＜０．０１、＊＊＊＝＜０．００１、＊＊＊＊＝＜０．０００１）、及び「ｎｓ」は、「有意差なし」（ｐ＞０．０５）を意味する。 ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療した初代小児ＡＬＬを担持する異種移植マウスの血清サイトカイン濃度を示すグラフである。ＮＳＧマウスに１０６個の初代ＡＬＬを投与し、７日後に５×１０６個の自己ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。Ｔ細胞送達の３日後に血清を採取し、Ｔ細胞後１日目及び３日目に動物サブグループにトシリズマブを投与した。サイトカイン濃度は、ｐｇ／ｍＬ単位で測定した。 ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療したＡＬＬ細胞株を担持する異種移植マウスの血清サイトカイン濃度を示すグラフである。ＮＳＧマウスに１０６個のＮａｌｍ－６ ＡＬＬ細胞を移植し、７日後に正常ドナーに由来する５×１０６個のＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を投与した。Ｔ細胞送達の３日後に血清を採取し、Ｔ細胞後１日目及び３日目に動物サブグループにトシリズマブを投与した。サイトカイン濃度は、ｐｇ／ｍＬ単位で測定する。 細胞共培養後のサイトカイン発現を示すグラフである。Ｔ細胞、標的及びＡＰＣをそれぞれ１０：５０：１の比で組み合わせた。共培養の１８時間後に上清を回収した。サイトカインレベルは、ｐｇ／ｍＬ単位で測定する。有意差は、＊又は＊＊のいずれかで示し、＜０．０５のｐ値を表す。 単球系列細胞をＴ細胞及び標的と組み合わせる共培養実験からのサイトカイン分泌を示すグラフである。単球系列細胞をインビトロで分化させて、Ｔ細胞、標的及びＡＰＣをそれぞれ１０：５０：１の比で組み合わせた。１８及び４８時間で上清を回収し、ｐｇ／ｍＬ単位で測定したサイトカイン濃度に関して分析した。 単離細胞集団の転写解析を示すグラフである。トランスウェルインサートを使用してＴ細胞及び標的をＡＰＣから分離し、１８時間共培養した。各細胞集団から６９７個のＲＮＡ転写物を定量化したと共に、各々の対数カウントを表示する。（Ａ）ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を標的と組み合わせたとき並びに標的及びプール単球と組み合わせたとき、（Ｂ）ＡＰＣを標的と組み合わせたとき並びに標的及び非標的Ｔ細胞と組み合わせたとき、及び（Ｃ）ＡＰＣを標的及び非標的Ｔ細胞と組み合わせたとき、並びに標的及び標的Ｔ細胞と組み合わせたときの転写プロファイルである。 活性化ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞及び単球系列ＡＰＣの転写物プロファイルを示すグラフである。ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、Ｎａｌｍ－６白血病及びプール単球のトランスウェル共培養物から１８時間後に細胞を回収した。Ｔ細胞からの転写物カウントを青色で、及びＡＰＣからのカウントを赤色で表示する。 ＡＰＣの存在下におけるＴ細胞脱顆粒を示すグラフである。（Ａ）ＣＡＲ分子発現なし、（Ｂ）ＧＤ２標的ＣＡＲ、又は（Ｃ）ＣＤ１９標的ＣＡＲのいずれかを発現するＴ細胞をＣＤ１９＋標的ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ－６と組み合わせた。脱顆粒は、ＣＤ１０７ａ表面発現の定量化によって測定した。 ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で治療したＡＬＬ患者から採取したＰＢＭＣのＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ解析を示す図である。末梢血は、操作Ｔ細胞輸注後の発熱初日に採取した。最初の７人の患者は、末梢血中に検出可能なＴ細胞を有したが、検出可能なＡＬＬはなく、一方、最後の３人の患者は、ＡＬＬ細胞のみを有し、検出可能なＴ細胞を有しなかった。 急性リンパ芽球性白血病患者においてＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞輸注後最初の発熱時点で採取した末梢血Ｔ細胞の顕微鏡分析を示す画像の組である。画像は、１０００倍の倍率で撮った。
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
用語「キメラ抗原受容体」又は代わりに「ＣＡＲ」は、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義するとおりの刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む組換えポリペプチドコンストラクトを指す。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、同じポリペプチド鎖にあり、例えばキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、互いに連続しておらず、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲに提供されるように、例えば異なるポリペプチド鎖にある。
一態様において、ＣＡＲの刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連したζ鎖である。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３－ζの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義するとおりの少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能性シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激分子は、４－１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ－ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択により、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
特異的腫瘍マーカーＸ（ここで、Ｘは、本明細書に記載されるとおりの腫瘍マーカーであり得る）に特異的に結合する抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体、又はＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα結合ドメイン又はＴＣＲβ結合ドメイン））を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲとも称される。例えば、ＣＤ１２３に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＡＲ１２３と称される。例えば、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲ又はＣＡＲ１９と称される。一部の実施形態において、ＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりのＣＴＬ０１９ ＣＡＲを含む。ＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりの任意の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に発現することができる。
ＣＡＲ発現細胞を含む療法は、本明細書ではＣＡＲ療法と称される。例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞、又はＣＤ１９ ＣＡＲを含む療法は、本明細書では、それぞれＣＤ１２３ ＣＡＲ療法又はＣＤ１９ ＣＡＲ療法と称される。
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「ＩＬ－３受容体のαサブユニット」、「ＩＬ３Ｒα」、「ＣＤ１２３」、「ＩＬ３Ｒα鎖」及び「ＩＬ３Ｒαサブユニット」は、同義的に、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＩＬ３Ｒαのアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ ００２１７４で見付けることができ、ヒトＩＬ３Ｒαをコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ ００５１９１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ１２３タンパク質の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一態様において、ＣＤ１２３タンパク質は、癌細胞上に発現する。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１２３」には、完全長野生型ＣＤ１２３の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質が含まれる。
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ１９」は、白血病前駆細胞上に検出可能な抗原決定基である分化クラスター１９タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として見付けることができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８で見付けることができる。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ１９」には、完全長野生型ＣＤ１９の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質が含まれる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病及び非ホジキンリンパ腫を含むほとんどのＢ細胞系列癌に発現する。ＣＤ１９を発現する他の細胞は、以下の「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」の定義に提供する。これは、Ｂ細胞前駆細胞の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）を参照されたい。一態様において、ＣＡＲＴの抗原結合部分は、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ１９タンパク質は、癌細胞上に発現する。
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ２０」は、Ｂ細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒトＣＤ２０は、膜貫通４－ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１（ＭＳ４Ａ１）とも称される。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ＿６９０６０５．１及びＮＰ＿０６８７６９．２で見付けることができ、ヒトＣＤ２０の転写変異体１及び３をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ受託番号ＮＭ＿１５２８６６．２及びＮＭ＿０２１９５０．３で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ２０タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ２０タンパク質は、癌細胞上に発現する。
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ２２」は、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、アイソフォーム１～５ヒトＣＤ２２のアミノ酸配列は、それぞれ受託番号ＮＰ ００１７６２．２、ＮＰ ００１１７２０２８．１、ＮＰ ００１１７２０２９．１、ＮＰ ００１１７２０３０．１、及びＮＰ ００１２６５３４６．１で見付けることができ、ヒトＣＤ２２の変異体１～５をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ受託番号ＮＭ ００１７７１．３、ＮＭ ００１１８５０９９．１、ＮＭ ００１１８５１００．１、ＮＭ ００１１８５１０１．１、及びＮＭ ００１２７８４１７．１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部 分は、ＣＤ２２タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＣＤ２２タンパク質は、癌細胞上に発現する。
本明細書で使用されるとき、用語「ＲＯＲ１」は、白血病前駆細胞上に検出可能であることが公知の抗原決定基を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＲＯＲ１のアイソフォーム１及び２前駆体のアミノ酸配列は、それぞれ受託番号ＮＰ＿００５００３．２及びＮＰ＿００１０７７０６１．１で見付けることができ、それらをコードするｍＲＮＡ配列は、それぞれ受託番号ＮＭ＿００５０１２．３及びＮＭ＿００１０８３５９２．１で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＲＯＲ１タンパク質の細胞外ドメイン内の抗原を認識し、結合する。一態様において、ＲＯＲ１タンパク質は、癌細胞上に発現する。
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ３３」は、白血病細胞上並びに骨髄細胞系列の正常前駆細胞上に検出可能な抗原決定基である分化クラスター３３タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＤ３３のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０１３８として見付けることができ、ヒトＣＤ３３をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１７７２．３で見付けることができる。一態様において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＤ３３タンパク質又はその断片の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一態様において、ＣＤ３３タンパク質は、癌細胞上に発現する。本明細書で使用されるとき、「ＣＤ３３」は、完全長野生型ＣＤ３３の突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質を含む。
本明細書で使用されるとき、用語「ＢＣＭＡ」は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９としても知られる）は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、主に最終分化したＢ細胞、例えば記憶Ｂ細胞、及び形質細胞上に発現する。そのリガンドは、ＴＮＦファミリーのＢ細胞アクティベータ（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる。ＢＣＭＡは、長期体液性免疫を維持するため形質細胞の生存を媒介することに関与する。ＢＣＭＡの遺伝子は、１６番染色体にコードされ、１８４アミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１１８３．２）をコードする９９４ヌクレオチド長の一次ｍＲＮＡ転写物（ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１９２．２）を産生する。ＢＣＭＡ遺伝子座に由来する第２のアンチセンス転写物について記載されており、これは、ＢＣＭＡ発現の調節において役割を果たし得るものである。（Ｌａａｂｉ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９４，２２：１１４７－１１５４）。更なる転写変異体が記載されているが、有意性は不明である（Ｓｍｉｒｎｏｖａ ＡＳ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，４５（４）：１１７９－１１８３。ＴＶ４としても知られる第２のアイソフォームが同定されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別名Ｑ０２２２３－２）。本明細書で使用されるとき、「ＢＣＭＡ」は、完全長野生型ＢＣＭＡの突然変異、例えば点突然変異、断片、挿入、欠失及びスプライス変異を含むタンパク質を含む。
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＬＬ－１」は、白血病前駆細胞上及び正常免疫細胞上に検出可能な抗原決定基であるＣ型レクチン様分子－１を指す。Ｃ型レクチン様１（ＣＬＬ－１）は、ＭＩＣＬ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＥＣ－１、樹状細胞関連レクチン１、及びＤＣＡＬ－２としても知られている。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベースに見付けることができる。例えば、ヒトＣＬＬ－１のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ５ＱＧＺ９として見付けることができ、ヒトＣＬＬ－１をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ ００１２０７０１０．１、ＮＭ １３８３３７．５、ＮＭ ２０１６２３．３、及びＮＭ ２０１６２５．１で見付けることができる。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合部分は、ＣＬＬ－１タンパク質又はその断片の細胞外ドメイン内のエピトープを認識し、結合する。一実施形態において、ＣＬＬ－１タンパク質は、癌細胞上に発現する。
用語「ＥＧＦＲ」は、ヒト及び非ヒト形態を含め、任意の哺乳類成熟完全長上皮成長因子受容体を指す。１１８６アミノ酸のヒトＥＧＦＲは、Ｕｌｌｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０９：４１８－４２５（１９８４））並びにＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ１２５２５３及びＳｗｉｓｓＰｒｏｔ受託番号Ｐ００５３３－２に記載されている。
用語「ＥＧＦＲｖＩＩＩ」は、上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩを指す。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ヒト腫瘍に観察されるが、正常組織にほとんど観察されないＥＧＦＲの最も一般的な変異体である。このタンパク質は、ＥＧＦＲの細胞外ドメイン内のエクソン２～７のインフレーム欠失及びエクソン１及び８のジャンクションにおける新規グリシン残基の生成に起因して、それにより腫瘍特異的エピトープが作り出されることによって生じる。ＥＧＦＲｖＩＩＩはＧＢＭの２４％～６７％に発現するが、正常組織に発現しない。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ＩＩＩ型突然変異体、Δ－ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｄｅ２－７、及びＥＧＦＲとしても知られ、米国特許第６，４５５，４９８号明細書、同第６，１２７，１２６号明細書、同第５，９８１，７２５号明細書、同第５，８１４，３１７号明細書、同第５，７１０，０１０号明細書、同第５，４０１，８２８号明細書、及び同第５，２１２，２９０号明細書に記載される。ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現は、染色体欠失によって生じることもあり、また異常な選択的スプライシングによって生じることもある。Ｓｕｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：８６０２－８６０６を参照されたい。
本明細書で使用されるとき、用語「メソテリン」は、巨核球増強因子（ＭＰＦ）と称される、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合及びアミノ末端３１ｋＤａシェディング断片によって細胞膜にアンカリングされる４０ｋＤａタンパク質、メソテリンを指す。両方の断片ともＮ－グリコシル化部位を含む。この用語は、「可溶性メソテリン／ＭＰＦ関連」とも称される４０ｋＤａカルボキシル末端断片の可溶性スプライス変異体も指す。好ましくは、この用語は、例えば、細胞膜上、例えば癌細胞膜上に発現するとおりのＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０３５１２．１のヒトメソテリン及びその天然で切断された一部分を指す。
用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質、又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであり得、及び天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体又はその組換え変異体の少なくとも一部分を指し、及び抗原などの標的に対する抗体断片の認識及び特異的結合をもたらすのに十分である、インタクトな抗体の抗原結合ドメイン、例えば抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、線状抗体、ｓｄＡｂなどのシングルドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン、及びヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片で形成された多重特異性抗体、及び抗体の単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片は、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。
用語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、本明細書で使用されるとき、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内にあるアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）及び各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）がある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）、又はこれらの組み合わせを含め、幾つもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。Ｋａｂａｔ付番スキームに基づき、一部の実施形態において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキームに基づき、一部の実施形態において、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、及びＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は、２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの組み合わせでは、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、又は両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば哺乳類ＶＨ、例えばヒトＶＨのアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、及びＶＬ、例えば哺乳類ＶＬ、例えばヒトＶＬのアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）に対応する。
抗体又はその抗体断片を含む本発明のＣＡＲ組成物の一部分は、種々の形態で存在し得、抗原結合ドメインは、例えば、シングルドメイン抗体断片（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）及びヒト化抗体又はヒト抗体を含め、連続したポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」（本明細書では「抗標的（例えば、ＣＤ１２３）結合ドメイン」とも称される）は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体断片を包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数個のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数個のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生、又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること、及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得、又は生体試料から得られ得、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。
用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、腫瘍細胞増殖の減少、腫瘍細胞生存の減少、又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、そもそも腫瘍の発生を防ぐことにおける本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。
用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少、又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。
用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、又は腫瘍細胞生存の減少を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。
用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
用語「アフェレーシス」は、本明細書で使用されるとき、ドナー又は患者の血液をドナー又は患者から取り出し、装置に通過させて１つ又は複数の選択された特定の構成成分を選り除き、残りを例えば返血法によってドナー又は患者の循環に戻すという当技術分野で認められている体外プロセスを指す。従って、「アフェレーシス試料」に関連して、アフェレーシスを用いて得られる試料を指す。
用語「併用」は、１つの投薬量単位形態での固定的併用、又は本発明の化合物及び併用パートナー（例えば、以下に説明するとおりの別の薬物、「治療剤」又は「共薬剤」とも称される）が独立して同じ時点で又は時間間隔内に別々に投与され得る併用投与、特にこれらの時間間隔によって併用パートナーが協同効果、例えば相乗効果を示すことが可能になる併用投与のいずれかを指す。単一の成分がキットに又は別々に包装され得る。成分（例えば、粉末又は液体）の一方又は両方が投与前に所望の用量に再構成又は希釈され得る。用語「共投与」又は「併用投与」などは、本明細書で利用されるとき、それを必要としている単一の対象（例えば、患者）への選択の併用パートナーの投与を包含することが意味され、薬剤が必ずしも同じ投与経路によって又は同じ時点で投与されない治療レジメンを含むことが意図される。用語「医薬併用」は、本明細書で使用されるとき、２つ以上の活性成分を混合し又は組み合わせることにより得られる生成物を意味し、活性成分の固定的組み合わせ及び非固定的組み合わせの両方を含む。用語「固定的組み合わせ」は、活性成分、例えば本発明の化合物と併用パートナーとが両方とも単一の実体又は投薬量の形態で同時に患者に投与されることを意味する。用語「非固定的組み合わせ」は、活性成分、例えば本発明の化合物と併用パートナーとが両方とも別個の実体として特定の時間制限なしに同時に、並行して、又は代わりに逐次的に患者に投与されることを意味し、かかる投与は、患者の体内において２つの化合物の治療上有効なレベルを提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用される。
用語「癌」は、異常細胞の急激な無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性、並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
「由来する」は、この用語が本明細書で使用されるとき、第１の分子と第２の分子との間の関係を指す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性に言及するものであり、第２の分子に由来する第１の分子に関する方法又は供給源を限定することを含意又は包含しない。例えば、ＣＤ３ζ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、求められる機能、即ち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するような十分なＣＤ３ζ構造を保持している。これは、細胞内シグナル伝達ドメインの特定の作製方法に限定することを含意又は包含せず、例えば細胞内シグナル伝達ドメインを提供するためにＣＤ３ζ配列で開始して不要な配列を欠失させ、又は突然変異を付与して細胞内シグナル伝達ドメインに至らせなければならないことを意味しない。
語句「Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含め、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＲＯＲ１の１つ以上の発現に関連する疾患、又はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＲＯＲ１の１つ以上を発現する、若しくはいずれかの時点で発現した細胞に関連する病態、又はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＲＯＲ１の１つ以上を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患には、例えばＢ細胞抗原を標的とする分子、例えばＢ細胞を標的とするＣＡＲによる治療によって例えば抗原発現が下方制御されているため、現在ではＢ細胞抗原を発現しないが、かつては抗原を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。語句「Ｂ細胞抗原の発現に関連する疾患」には、本明細書に記載されるとおりの、ＣＤ１９の発現に関連する疾患が含まれる。
語句「ＣＤ１９の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＤ１９の発現に関連する疾患又はＣＤ１９を発現する、若しくはいずれかの時点で発現した細胞に関連する病態、又はＣＤ１９を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＤ１９の発現に関連する疾患には、例えばＣＤ１９を標的とする分子、例えばＣＤ１９ ＣＡＲによる治療によって例えばＣＤ１９発現が下方制御されているため、現在ではＣＤ１９を発現しないが、かつてはＣＤ１９を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＤ１９の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＣＤ１９の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。更に、ＣＤ１９発現の発現に関連する疾患には、限定されないが、例えばＣＤ１９の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ１９の発現に関連する非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
本明細書で使用されるとおりの語句「ＣＤ１２３の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患、骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＤ１２３の発現に関連する疾患又はＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）を発現する細胞に関連する病態、又はＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。一態様において、ＣＤ１２３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ１２３）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、疾患には、ＡＭＬ、ＡＬＬ、ヘアリー細胞白血病、前リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（Ｂ細胞急性リンパ性白血病、ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、組織球性障害（例えば、肥満細胞障害又は芽球性形質細胞様樹状細胞新生物）、肥満細胞障害、例えば全身性肥満細胞症又は肥満細胞性白血病などが含まれる。ＣＤ１２３発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＤ１２３の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ１２３の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。
本明細書で使用されるとおりの語句「ＣＤ３３の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群又は前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する疾患又はＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する病態、又はＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＤ３３の発現に関連する疾患には、例えばＣＤ３３を標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＣＤ３３阻害薬による治療によって例えばＣＤ３３発現が下方制御されているため、現在ではＣＤ３３を発現しないが、かつてはＣＤ３３を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌には、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、骨髄線維症及び骨髄増殖性新生物、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、前リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物などが含まれる。ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＤ３３（例えば、野生型又は突然変異体ＣＤ３３）の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。実施形態において、ＣＤ３３の発現に伴う非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
語句「ＢＣＭＡの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する疾患又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する病態、又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、例えばＢＣＭＡを標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡ阻害薬による治療によってＢＣＭＡ発現が下方制御されているため、現在ではＢＣＭＡを発現しないが、かつてはＢＣＭＡを発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、分化型形質細胞Ｂ細胞の悪性腫瘍である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＢＭＣＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。一部の実施形態において、癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、又は膠芽腫である。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）が含まれる。ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患、例えば本明細書に記載される癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは療法抵抗性前立腺癌、又は転移性前立腺癌）、膵癌、又は肺癌が含まれる。
ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）に関連する非癌関連病態には、ウイルス感染症、例えばＨＩＶ、真菌感染症、例えばＣ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ又はループス）、尋常性天疱瘡、及びシェーグレン症候群、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、粘膜免疫に関連する移植関連アロ特異的免疫障害、及び体液性免疫が重要な場合の生物製剤（例えば、第ＶＩＩＩ因子）に対する望ましくない免疫応答が含まれる。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に伴う非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
語句「ＣＬＬ－１の発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＣＬＬ－１を発現する細胞に関連する疾患又はＣＬＬ－１を発現する細胞に関連する病態、又はＣＬＬ－１（例えば、野生型又は突然変異体ＣＬＬ－１）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＣＬＬ－１の発現に関連する疾患には、例えばＣＬＬ－１を標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＣＬＬ－１阻害薬による治療によって例えばＣＬＬ－１発現が下方制御されているため、現在ではＣＬＬ－１を発現しないが、かつてはＣＬＬ－１を発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＣＬＬ－１の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌には、限定されないが、白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病及び骨髄異形成症候群など）及びリンパ腫（多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び小細胞型及び大細胞型濾胞性リンパ腫など）を含めた悪性リンパ球増殖性病態が含まれる。ＣＬＬ－１発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＣＬＬ－１の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。ＣＬＬ－１の発現に関連する非癌関連徴候も含まれ得る。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
本明細書で使用されるとおりの用語「ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば膠芽腫（膠芽腫幹細胞を含む）、乳癌、卵巣癌、及び非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、髄芽腫、結腸直腸癌、前立腺癌、及び膀胱癌などの様々な癌の腫瘍細胞を含めた、ＥＧＦＲｖＩＩＩの発現に関連する疾患又はＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する細胞に関連する病態が含まれる。特定の理論又は機構に拘束されるものではないが、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに対する抗原特異的応答を誘発することにより、以下：ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現腫瘍細胞の標的化及び破壊、腫瘍の減少又は消失、腫瘍部位への免疫細胞の浸潤促進、及び抗腫瘍応答の亢進／延長の１つ以上を提供すると考えられる。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、正常な（即ち非癌性の）組織において検出可能なレベルで発現しないため、本発明のＣＡＲは、有利には、正常組織及び細胞の標的化／破壊を実質的に回避することが企図される。
本明細書で使用されるとおりの語句「メソテリンの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は中皮過形成などの前癌状態を含めた、メソテリンの発現に関連する疾患又はメソテリンを発現する細胞に関連する病態、又はメソテリンを発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。メソテリンを発現する様々な癌の例には、限定されないが、中皮腫、卵巣癌、膵癌などが含まれる。
一部の実施形態において、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
用語「刺激」は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）がそのコグネイトリガンドと結合して、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達など、シグナル伝達イベントを媒介することによって生じる一次応答を指す。刺激は、ＴＧＦ－βの下方制御など、ある種の分子の発現の変化、及び／又は細胞骨格構造の認識などを媒介することができる。
用語「刺激分子」は、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面について刺激的方法でＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する１つ又は複数の一次細胞質シグナル伝達配列を提供するＴ細胞によって発現される分子を指す。一態様において、一次シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドが負荷されたＭＨＣ分子との結合によって惹起され、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含めたＴ細胞応答の媒介につながる。刺激的方法で機能する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号９として提供される配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号１０に提供されるとおりの配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成することができる。例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。実施形態において、細胞内シグナルドメインはエフェクター機能シグナルを伝達し、細胞が特化した機能を果たすように仕向ける。細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される範囲で、かかるトランケートされた一部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、それがインタクトな鎖の代わりに使用され得る。従って、用語の細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことが意図される。
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激、又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル、又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
用語「ζ」若しくは代わりに「ζ鎖」、「ＣＤ３－ζ」又は「ＴＣＲ－ζ」は、ＧｅｎＢａｎ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義され、「ζ刺激ドメイン」若しくは代わりに「ＣＤ３－ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ－ζ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なζ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。一態様において、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４又はその機能性オルソログである非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を含む。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ζ刺激ドメイン」は、配列番号９として提供される配列である。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ζ刺激ドメイン」は、配列番号１０として提供される配列である。
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定されないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はその機能性断片を含み得る。
用語「４－１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、及び「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４～２５５、又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義される。一態様において、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号７として提供される配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β Ｔ細胞及びγ／δ Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞、及び骨髄由来食細胞が挙げられる。
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
用語「エフェクター機能」は、細胞の特化した機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖、及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載されるとおりの化合物、製剤、材料、又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の、又はその内部で産生される任意の材料を指す。
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
用語「発現」は、プロモーターによってドライブされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
用語「ベクター」は、本明細書で使用されるとき、核酸分子の送達及び／又は発現に使用することのできる任意の媒体を指す。これは、本明細書に記載されるとおりのトランスファーベクター又は発現ベクターであり得る。
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）に提供されるとおりの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体断片の性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、及びＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６，１９９２を参照されたい。
「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体断片などの免疫グロブリンを指す。
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができ、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」、又は「核酸分子」は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）、又はそのＤＮＡ若しくはＲＮＡの組み合わせ、及びそのポリマーを指す。用語「核酸」には、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡが含まれる。一実施形態において、核酸分子は、合成（例えば、化学的に合成されている）又は組換えである。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの類似体又は誘導体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、ある詳細な核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択の（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作成することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、又はこれらの組み合わせが含まれる。
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
用語「癌関連抗原」又は「腫瘍抗原」は、同義的に、癌細胞の表面上に、完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物又は脂質）であって、癌細胞への薬理学的薬剤の優先的なターゲティングに有用な分子を指す。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９又はＣＤ１２３である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞と比較して癌細胞で過剰発現する（例えば、正常細胞と比較して１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍の過剰発現又はそれを超える）細胞表面分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比較して欠失、付加又は突然変異を含む分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は癌細胞の細胞表面にのみ、完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現することになり、正常細胞の表面に合成されず、又は発現しない。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体断片）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋ Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞によって構成的に発現される。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法用のユニークなクラスの細胞表面標的となる。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－Ａ１又はＨＬＡ－Ａ２のコンテクストでウイルス又は腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１１ ８５（５）：１９３５－１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１ １１７（１６）：４２６２－４２７２；Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０ １８４（４）：２１５６－２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００１ ８（２１）：１６０１－１６０８；Ｄａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１３ ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０１２ １９（２）：８４－１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなど、ライブラリのスクリーニングによって同定することができる。
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（配列番号３８）（式中、ｎは、１以上の正の整数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である）を含む。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ）３（配列番号２８）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号２９）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７－メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現用のコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０～５０００（配列番号３０）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分、又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行、及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／又は持続期間の低減又は改善、又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメータの改善を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメータの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。
投薬量レジメン、例えば治療投薬量レジメンは、１回以上の治療インターバルを含み得る。投薬量レジメンは、検出可能であるか又は検出不能であるかに関わらず、限定されないが、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患の状態の安定化（即ち悪化させないこと）、疾患の進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は緩和を含めた少なくとも１つの有益な又は所望の臨床結果をもたらすことができる。
本明細書で使用されるとき、「治療インターバル」は、例えば、定期的スケジュールで繰り返され得る治療サイクル、例えば治療剤の投与コースを指す。実施形態において、投薬量レジメンは、治療インターバルにわたって治療剤を投与しない期間を１つ以上有し得る。例えば、治療インターバルは、第２の治療剤、例えば阻害薬（例えば、本明細書に記載されるとおりのキナーゼ阻害薬）の投与と併用して（その前に、それと並行して、又はその後に）投与される１用量のＣＡＲ分子を含み得る。
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解、又は根絶によって達成される。
実施形態において、治療される疾患状態にはＣＲＳが含まれる。一部の実施形態において、ＣＲＳの治療には、発症後、例えば１つ以上のＣＲＳ症状の検出後の本明細書に記載される組成物又は併用の投与が含まれる。一部の実施形態において、ＣＲＳの治療により、例えば本明細書に記載される組成物又は併用を投与されない対象と比べてＣＲＳの重症度の低減がもたらされる。例えば、対象は、ＣＲＳが検出不能なレベルまで低下し得る。他の実施形態において、治療により、より軽度の重症型のＣＲＳ、例えばグレード１、２、又は３ ＣＲＳになり得る。
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の予防又はそれに対する予防的治療を意味する。疾患又は疾患状態の予防には、例えば基準レベル（例えば、治療を投与されない同様の対象におけるその１つ又は複数の症状）と比べた疾患又は疾患状態の１つ以上の症状の低減（例えば、軽減）が含まれ得る。予防には、例えば基準レベル（例えば、治療を投与されない同様の対象におけるその１つ又は複数の症状の発生）と比べた疾患又は疾患状態の１つ以上の症状の発生の遅延も含まれ得る。実施形態において、疾患は、本明細書に記載される疾患である。
実施形態において、予防される疾患状態にはＣＲＳが含まれる。一部の実施形態において、ＣＲＳの予防には、１つ以上のＣＲＳ症状の前、例えばその検出又は発生前における本明細書に記載される組成物又は併用の投与が含まれる。一部の実施形態において、ＣＡＲ療法の前にＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害薬又はＢＴＫ阻害薬の投与が行われる。一部の実施形態において、ＣＲＳの予防により、例えば本明細書に記載される組成物又は併用を投与されない対象と比べてＣＲＳの可能性又は重症度の低減がもたらされる。例えば、対象は、ＣＲＳを発症しないこともある。他の実施形態において、対象は、例えば、本明細書に記載される組成物又は併用を投与されない対象と比べてより軽度の重症型のＣＲＳ、例えばグレード１、２、又は３ ＣＲＳを発症する。
本発明との関連において、「腫瘍抗原」、又は「過剰増殖性障害抗原」、又は「過剰増殖性障害に関連する抗原」は、特異的な過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害抗原は、限定されないが、原発性又は転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝癌、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌及び腺癌、例えば乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵癌などを含めた癌に由来する。
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在するコグネイト結合パートナー（例えば、Ｔ細胞上に存在する刺激及び／又は共刺激分子）タンパク質を認識し、結合する抗体、又はリガンドであって、しかし、試料中の他の分子は、実質的に認識又は結合しない、抗体又はリガンドを指す。
本明細書で使用されるとおりの「調節可能なキメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、免疫エフェクター細胞内にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性、及び調節可能な細胞内シグナル生成を細胞に付与するポリペプチドの組、最も単純な実施形態では典型的には２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、ＣＡＲ分子に関連して本明細書に定義されるとおりの刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む。一部の実施形態において、ＲＣＡＲのポリペプチドの組は、互いに連続しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖にある。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、二量化スイッチを含み、このスイッチは、二量化分子の存在を受けてポリペプチドを互いにカップリングすることができ、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることができる。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりの細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）、例えばＲＣＡＲ発現細胞（本明細書では「ＲＣＡＲＸ細胞」とも称される）に発現する。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称される。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称される。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性、及び調節可能な細胞内シグナル生成又は増殖を付与することができ、これがＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。実施形態において、ＲＣＡＲ細胞は、抗原結合ドメインによって結合される抗原を含む標的細胞に対する特異性を付与するために、少なくとも一部には抗原結合ドメインに依存する。
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、その断片、又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
用語「生物学的に均等」は、参照用量又は参照量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）によって生じる効果と均等な効果を生じさせるのに必要な量の参照化合物（例えば、ＲＡＤ００１）以外の薬剤を指す。ある実施形態において、効果は、例えば、Ｐ７０ Ｓ６キナーゼ阻害によって測定したときの、例えばインビボ又はインビトロアッセイで評価したときの、例えば本明細書に記載されるアッセイ、例えばブーレイ（Ｂｏｕｌａｙ）アッセイ、又はウェスタンブロットによるリン酸化Ｓ６レベルの測定によって測定したときのｍＴＯＲ阻害レベルである。ある実施形態において、効果は、細胞選別によって測定したときのＰＤ－１陽性／ＰＤ－１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の比の変化である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰ７０ Ｓ６キナーゼ阻害を達成する量又は用量である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の生物学的に均等な量又は用量は、参照用量又は参照量の参照化合物と同じレベルのＰＤ－１陽性／ＰＤ－１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の比の変化を達成する量又は用量である。
用語「低免疫増強用量」は、ｍＴＯＲ阻害薬、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害薬、例えばＲＡＤ００１又はラパマイシン、又は触媒ｍＴＯＲ阻害薬と併せて使用されるとき、例えばＰ７０ Ｓ６キナーゼ活性の阻害によって測定したときのｍＴＯＲ活性を、完全ではないが、部分的に阻害するｍＴＯＲ阻害薬の用量を指す。ｍＴＯＲ活性の、例えばＰ７０ Ｓ６キナーゼの阻害による評価方法は、本明細書で考察される。用量は、完全な免疫抑制をもたらすには不十分であるが、免疫応答を増強するには十分である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ＰＤ－１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の数の減少、及び／又はＰＤ－１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の数の増加、又はＰＤ－１陰性Ｔ細胞／ＰＤ－１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の比の増加をもたらす。
ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ナイーブ免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の数の増加をもたらす。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、以下の１つ以上をもたらす：
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、以下のマーカー：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈ、ＣＤ１２７ｈｉｇｈ、ＣＤ２７＋、及びＢＣＬ２の１つ以上の発現の増加、
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、ＫＬＲＧ１の発現の減少、及び
メモリーＴ細胞前駆体、例えば以下の特性：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈの増加、ＣＤ１２７ｈｉｇｈの増加、ＣＤ２７＋の増加、ＫＬＲＧ１の減少、及びＢＣＬ２の増加のいずれか１つ又は組み合わせを有する細胞の数の増加。
ここで、上記に記載される変化のいずれも、例えば未治療対象と比較したとき、例えば少なくとも一過性に起こる。
「不応性」は、本明細書で使用されるとき、治療に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、不応性癌は、治療の開始前又は開始時点で治療に抵抗性であり得る。他の実施形態において、不応性癌は、治療中に抵抗性になり得る。不応性癌は、抵抗性癌とも称される。
「再発した」又は「再発する」は、本明細書で使用されるとき、改善又は応答期間後、例えば療法、例えば癌療法の前治療後における疾患（例えば、癌）又は癌などの疾患の徴候及び症状の再来又は再出現を指す。初期応答期間は、特定の閾値を下回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％、又は１％を下回るレベルの癌細胞を伴い得る。再出現は、特定の閾値を上回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％、又は１％を上回るレベルの癌細胞を含み得る。例えば、例としてＢ－ＡＬＬのコンテクストにおいて、再出現は、例えば、完全奏効後の血液、骨髄（＞５％）、又は任意の髄外部位における芽球の再出現を含み得る。これに関連して、完全奏効は、＜５％ＢＭ芽球を含み得る。より一般的には、ある実施形態において、応答（例えば、完全奏効又は部分奏効）は、検出可能なＭＲＤ（微小残存病変）が存在しないことを含み得る。ある実施形態において、初期応答期間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６日、少なくとも１、２、３、又は４週間、少なくとも１、２、３、４、６、８、１０、又は１２ヵ月、又は少なくとも１、２、３、４、又は５年続く。
一部の実施形態において、ＣＤ１９阻害薬を含む療法、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ療法は、再発し得るか、又は治療不応性であり得る。再発又は抵抗性は、ＣＤ１９欠損（例えば、抗原欠損突然変異）又は他の（例えば、ＣＤ１９陰性クローンのクローン選択によって引き起こされる）ＣＤ１９レベルを低下させるＣＤ１９の変化によって引き起こされ得る。かかるＣＤ１９欠損又は変化を有する癌は、本明細書では「ＣＤ１９陰性癌」又は「ＣＤ１９陰性再発性癌」と称される）。ＣＤ１９陰性癌は、１００％のＣＤ１９欠損を有する必要はなく、癌が再発し又は不応性になるようなＣＤ１９療法の有効性を低下させるのに十分な低下であることが理解されるべきである。一部の実施形態において、ＣＤ１９陰性癌は、ＣＤ１９ ＣＡＲ療法によって生じる。
本明細書で使用されるとき、「ＪＡＫ－ＳＴＡＴ」は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路及び／又はＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路における１つ以上のキナーゼを指す。ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路及びその成分については、本明細書に更に詳細に記載される。
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５～９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、及び９６～９９％、９６～９８％、９６～９７％、９７～９９％、９７～９８％及び９８～９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
説明
本明細書では、対象のＣＲＳを予防する方法が提供される。この方法は、本明細書に記載されるＣＡＲをキナーゼ阻害薬、例えばＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫの阻害薬との併用で投与することを含み得る。
また、本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をキナーゼ阻害薬、例えばＪＡＫ－ＳＴＡＴ又はＢＴＫの阻害薬との併用で使用した癌などの疾患の治療又は予防のための物質組成物及び使用方法も提供される。
本明細書の実施例３は、ＣＡＲ Ｔ細胞関連ＣＲＳにおいてＩＬ－６が抗原提示細胞（骨髄性細胞）によって産生されること、及びＩＬ－６の存在又は非存在（例えば、ＡＰＣの存在下又は非存在下における脱顆粒によって測定したときの）がＣＡＲＴ機能に影響を及ぼさなかったことを記載している。従って、一部の実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲは、ＩＬ－６阻害薬、例えばトシリズマブと併用して投与される。実施形態において、本明細書に記載される方法は、ＣＡＲ療法に関連するＣＲＳを予防するためのＩＬ－６阻害薬、例えばトシリズマブの早期投与を提供する。実施形態において、早期投与は、ＣＡＲ療法前の投与、ＣＡＲ療法投与と同じ時点での投与、又は発熱の最初の徴候が出るまでの（例えば、ＣＡＲ療法投与後の）投与を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲと本明細書に記載されるＩＬ－６阻害薬との併用は、キナーゼ阻害薬、例えば本明細書に記載されるとおりのキナーゼ阻害薬を更に含み得る。
抗原（例えば、ＣＤ１２３タンパク質又はＣＤ１９タンパク質又はその断片）に特異的に結合するように操作された抗体又は抗体断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、本明細書に記載される任意の方法又は組成物において使用することができる。一態様において、本発明は、ＣＡＲを発現するように操作された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、ＣＡＲ発現細胞（例えば、「ＣＡＲＴ」又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、抗腫瘍特性を呈する。一態様において、細胞がＣＡＲで形質転換され、ＣＡＲの少なくとも一部が細胞表面上に発現する。一部の実施形態において、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクターで形質導入される。一部の実施形態において、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。一部の実施形態において、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部のかかる実施形態において、細胞は、ＣＡＲを安定に発現し得る。別の実施形態において、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードする核酸、例えばｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡをトランスフェクトされる。一部のかかる実施形態において、細胞は、ＣＡＲを一過性に発現し得る。
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）、例えばヒト又はヒト化ＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片である。一態様において、かかる抗体断片は、それが同じ重鎖及び軽鎖可変領域を有するＩｇＧ抗体と均等な結合親和性を保持しており、例えばそれが均等な有効性で同じ抗原に結合する点で機能性である。一態様において、かかる抗体断片は、それが、当業者によって理解されるであろうとおり、限定されないが、免疫応答の活性化、その標的抗原から生じるシグナル伝達の阻害、キナーゼ活性の阻害などを含み得る生物学的反応をもたらす点で機能性である。
一部の態様において、本発明の抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に取り込まれる。一態様において、ＣＡＲは、ＣＤ１２３ ＣＡＲであり、本明細書に配列番号９８～１０１、及び１２５～１５６として提供されるポリペプチド配列を含む。
一態様において、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメイン（ＣＤ１２３又はＣＤ１９結合ドメイン、例えばヒト化又はヒトＣＤ１２３又はＣＤ１９結合ドメイン）部分は、配列が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されているトランス遺伝子によってコードされる。一態様において、本発明のＣＡＲコンストラクト全体は、配列全体が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されているトランス遺伝子によってコードされる。コドン最適化とは、コードＤＮＡにおける同義コドン（即ち同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種で偏っているという発見を指す。かかるコドン縮重により、同一のポリペプチドが種々のヌクレオチド配列によってコードされることが可能になる。種々のコドン最適化方法が当技術分野において公知であり、例えば少なくとも米国特許第５，７８６，４６４号明細書及び同第６，１１４，１４８号明細書に開示される方法が挙げられる。
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１２３抗体若しくは抗体断片又はヒトＣＤ１９抗体若しくは抗体断片を含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒト化ＣＤ１２３又はＣＤ１９抗体又は抗体断片を含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含むヒトＣＤ１２３又はＣＤ１９抗体断片を含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１２３ ｓｃＦｖ又はヒトＣＤ１９ ｓｃＦｖである。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含むヒト化ＣＤ１２３又はＣＤ１９抗体断片を含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒト化ＣＤ１２３ ｓｃＦｖ又はＣＤ１９ ｓｃＦｖである。
一態様において、ＣＡＲ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０及び１８４～２１５に提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様において、ｓｃＦｖ部分は、ヒトである。一態様において、ヒトＣＡＲ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０に提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号４７８、４８０、４８３、又は４８５に提供されるｓｃＦｖ部分を含む。
一態様において、ｓｃＦｖ部分は、ヒト化である。一態様において、ヒト化ＣＡＲ１２３結合ドメインは、配列番号１８４～２１５に提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号５５６～５８７に提供されるｓｃＦｖ部分を含む。
更に、本発明は、疾患の中でも特に、ＣＤ１２３を発現する細胞又は組織が関わる癌又は任意の悪性腫瘍又は自己免疫疾患を治療するためのＣＤ１２３ ＣＡＲ組成物、及び薬剤又は方法におけるその使用を提供する。
一態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ１２３発現正常細胞の根絶に使用することができ、従って細胞移植前の細胞コンディショニング療法としての使用に適用可能である。一態様において、ＣＤ１２３発現正常細胞は、ＣＤ１２３発現骨髄系前駆細胞であり、細胞移植は、幹細胞移植である。
一態様において、本発明は、本発明のキメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を発現するように操作された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、細胞（例えば、「ＣＡＲＴ」）は、抗腫瘍特性を呈する。従って、本発明は、ＣＤ１２３結合ドメインを含み、且つ免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に操作されたＣＤ１２３－ＣＡＲ、及び養子療法へのその使用方法を提供する。
一態様において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、例えば、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナルドメイン、及びこれらの任意の組み合わせの群から選択される、例えば本明細書に記載される少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。一態様において、ＣＤ１２３－ＣＡＲは、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）又はＣＤ２８以外の１つ以上の共刺激分子からのものである。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書に記載される任意の方法又は組成物において、実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１２３ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ１２３ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書に記載されるＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＬＬ１ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＬＬ１ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＬＬ１ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＣＤ３３ ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＣＤ３３ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ３３ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲを含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載されるメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に示されるアミノ酸を含むか又はヌクレオチド配列を有する。
ＣＡＲ１２３
本発明は、ＣＡＲをコードする配列を含む組換えＤＮＡコンストラクトを包含し、ＣＡＲは、ＣＤ１２３又はその断片、例えばヒトＣＤ１２３に特異的に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体、抗体断片）を含み、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体断片）の配列は、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある。細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインとは、共刺激分子の細胞内ドメインの少なくとも一部分を含むＣＡＲの一部分を指す。
具体的な態様において、本発明のＣＡＲコンストラクトは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５、及び５５６～５８７からなる群から選択されるｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖの前には、配列番号１に提供されるような任意選択のリーダー配列があり得、後ろには、配列番号２又は配列番号３又は配列番号４又は配列番号５に提供されるような任意選択のヒンジ配列、配列番号６に提供されるような膜貫通領域、配列番号７又は配列番号８を含む細胞内シグナル伝達ドメイン及び配列番号９又は配列番号１０を含むＣＤ３ζ配列があり得、例えば、これらのドメインは、連続しており、同じリーディングフレーム内にあり、単一の融合タンパク質を形成する。一部の実施形態において、ｓｃＦｖドメインは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３、及び４８５からなる群から選択されるヒトｓｃＦｖドメインである。一部の実施形態において、ｓｃＦｖドメインは、配列番号１８４～２１５及び５５６～５８７からなる群から選択されるヒト化ｓｃＦｖドメインである。また、本発明には、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５、及び５５６～５８７からなる群から選択されるｓｃＦｖ断片の各々のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明には、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５、及び５５６～５８７からなる群から選択されるｓｃＦｖ断片の各々、及び配列番号１、２、及び６～９のドメインの各々のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、それに加えて、コードされる本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲも含まれる。
一態様において、例示的ＣＤ１２３ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン、及び細胞内刺激ドメインを含む。一態様において、例示的ＣＤ１２３ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン及び細胞内刺激ドメインを含む。
一部の実施形態において、完全長ＣＤ１２３ ＣＡＲ配列も、表１１Ａ又は表１２Ａに示されるとおり、本明細書に配列番号９８～１０１及び１２５～１５６として提供される。
例示的リーダー配列は、配列番号１として提供される。例示的ヒンジ／スペーサー配列は、配列番号２、又は配列番号３、又は配列番号４、又は配列番号５として提供される。例示的膜貫通ドメイン配列は、配列番号６として提供される。４－１ＢＢタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの例示的配列は、配列番号７として提供される。ＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインの例示的配列は、配列番号８として提供される。例示的ＣＤ３ζドメイン配列は、配列番号９又は配列番号１０として提供される。ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインの例示的配列は、配列番号４３として提供される。ＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメインの例示的配列は、配列番号４５として提供される。
一態様において、本発明は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む組換え核酸コンストラクトを包含し、核酸分子は、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある、例えば本明細書に記載されるＣＤ１２３結合ドメインをコードする核酸配列を含む。一態様において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５、及び５５６～５８７の１つ以上から選択される。一部の実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３、及び４８５からなる群から選択されるヒトＣＤ１２３結合ドメインである。一部の実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１８４～２１５及び５５６～５８７からなる群から選択されるヒト化ＣＤ１２３結合ドメインである。
一態様において、本発明は、ＣＡＲをコードする核酸分子を含む組換え核酸コンストラクトを包含し、核酸分子は、ＣＤ１２３結合ドメインをコードする核酸配列を含み、例えば、この配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある。ＣＡＲに使用し得る例示的細胞内シグナル伝達ドメインには、限定されないが、例えばＣＤ３－ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳなどの１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。一部の例では、ＣＡＲは、ＣＤ３－ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳなどの任意の組み合わせを含み得る。
一態様において、本発明のＣＡＲコンストラクトの核酸配列は、配列番号３９～４２及び６６～９７の１つ以上から選択される。所望の分子をコードする核酸配列は、標準的な技法を用いて、例えばその遺伝子を発現する細胞からのライブラリをスクリーニングすることによるか、それを含むことが知られるベクターから遺伝子を誘導することによるか、又はそれを含む細胞及び組織から直接単離することによるなど、当技術分野において公知の組換え方法を用いて得ることができる。代わりに、目的の核酸はクローニングでなく、むしろ合成的に作製することができる。
ＣＡＲ１９（又はＣＤ１９ ＣＡＲ）
本開示は、ＣＤ１９を標的とする、例えばそれに特異的に結合するＣＡＲ分子（ＣＤ１９ ＣＡＲ）を含む免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を包含する。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するように操作される。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードする核酸配列を含む組換え核酸コンストラクトを含む。
実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、抗原結合ドメインの配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列に連続しており、それと同じリーディングフレーム内にある。細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインとは、共刺激分子の細胞内ドメインの少なくとも一部分を含むＣＡＲの一部分を指す。
一態様において、例示的ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、及び細胞内刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される細胞内刺激ドメイン）を含む。一態様において、例示的ＣＡＲコンストラクトは、任意選択のリーダー配列（例えば、本明細書に記載されるリーダー配列）、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、本明細書に記載される抗原結合ドメイン）、ヒンジ（例えば、本明細書に記載されるヒンジ領域）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載される膜貫通ドメイン）、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメイン）及び／又は細胞内一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載される一次シグナル伝達ドメイン）を含む。
一態様において、本発明のＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナルドメイン、及びこれらの任意の組み合わせの群から選択される少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様において、本発明のＣＡＲは、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２８、ＣＤ２７、又はＩＣＯＳから選択される１つ以上の共刺激分子からのものである。
ベクター及びＲＮＡコンストラクト
本発明は、細胞に直接形質導入することのできるＣＡＲを発現するレトロウイルス及びレンチウイルスベクターコンストラクトを含む。
本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることのできるＲＮＡコンストラクトも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法には、特別に設計したプライマーによる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリＡ付加が含まれ、それにより、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させようとする核酸、及びポリＡテールを含むコンストラクト、典型的には５０～２０００塩基長（配列番号３５）が提供される。このように作製されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一実施形態において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。ある実施形態において、ＲＮＡ ＣＡＲベクターは、電気穿孔によってＴ細胞に形質導入される。
抗原結合ドメイン
一態様において、本発明のＣＡＲは、他の場合には抗原結合ドメインと称される標的特異的結合エレメントを含む。部分の選択は、標的細胞の表面を定義するリガンドの種類及び数に依存する。例えば、抗原結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとしての役割を果たすリガンドを認識するように選択され得る。従って、本発明のＣＡＲにおける抗原結合ドメインのリガンドとしての役割を果たし得る細胞表面マーカーの例には、ウイルス、細菌及び寄生虫感染症、自己免疫疾患及び癌細胞に関連するものが含まれる。
一態様において、所望の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインをＣＡＲに操作することにより、ＣＡＲ媒介性Ｔ細胞応答を目的の抗原に仕向けることができる。
一態様において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。
一態様において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、ＣＤ１２３又はその断片を標的とする抗原結合ドメインを含む。実施形態において、抗原結合ドメインはヒトＣＤ１２３又はその断片を標的とする。他の実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｂ細胞抗原（例えば、Ｂ細胞表面抗原）、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａを標的とする。
抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びその機能性断片、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体、及び組換えフィブロネクチンドメインなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のドメインであり得る。一部の例では、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用されることになる同じ種に由来することが有益である。例えば、ヒトでの使用には、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体又は抗体断片の抗原結合ドメインにヒト又はヒト化残基を含むことが有益であり得る。
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載される抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗体）からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２及びＨＣ ＣＤＲ３、及び／又は本明細書に記載される抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗体）からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
実施形態において、抗原結合ドメインは、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書、又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載される抗原結合ドメインである。
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを標的とし、米国特許出願公開第２０１６－００４６７２４－Ａ１号明細書に記載される。
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９を標的とし、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載される。
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３を標的とし、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載される。
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＬＬを標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に記載される。
実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ３３を標的とし、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に記載される。
ＣＡＲ発現細胞を使用して標的化することのできる例示的標的抗原には、例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット、及び国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレット（これらの各々は、全体として参照により本明細書に援用される）に記載されるとおり、限定されないが、特にＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ、及びＧＦＲ ＡＬＰＨＡ－４が含まれる。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ヒト化ＣＤ１９に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含み得る。ＣＤ１９ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表１～表２に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１～ＣＡＲ８のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２、表６、及び表９に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ１２３－１～ＣＡＲ１２３－４及びｈｚＣＡＲ１２３－１～ｈｚＣＡＲ１２３－３２のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２又は配列番号１１に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ３３に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２又は表９に係るＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ３３－１～ＣＡＲ－３３－９のいずれか）、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＤ３３ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、メソテリンに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２～表３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。メソテリンＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡに特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表１又は表１６、配列番号２７１又は配列番号２７３に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＬＬ－１に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＣＬＬ－１ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットに指定される。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＧＦＲ ＡＬＰＨＡ－４に特異的に結合することができ、例えば国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレット（参照により本明細書に援用される）の表２に係るＣＡＲ分子、又は抗原結合ドメインを含み得る。ＧＦＲ ＡＬＰＨＡ－４ ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ ＣＤＲ、及び１つ、２つ、３つのＶＬ ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに指定される。
一実施形態において、本明細書に記載されるＣＡＲ分子のいずれか（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ、及びＧＦＲ ＡＬＰＨＡ－４のいずれか）の抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２及びＨＣ ＣＤＲ３、及び／又は上記に挙げた抗原結合ドメインからの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた又は記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
別の態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片を含む。一部の態様において、非ヒト抗体は、ヒト化であり、抗体の特定の配列又は領域は、ヒトで天然に産生される抗体又はその断片との類似性が増すように改変される。一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化である。
一部の例では、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用されることになる同じ種に由来することが有益である。例えば、ヒトにおける使用について、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体又は抗体断片の抗原結合ドメインにヒト又はヒト化残基を含むことが有益であり得る。従って、一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト抗体又は抗体断片を含む。
ＣＤ１２３結合ドメイン
一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、並びに／又は本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、例えばＬＣ ＣＤＲの１つ以上、例えば３つ全て及びＨＣ ＣＤＲの１つ以上、例えば３つ全てを含むヒトＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒトＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含み、例えば、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、２個の可変重鎖領域を含み、本明細書に記載のＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１１Ａ又は１２Ｂに）記載するヒト軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表１１Ａ又は１２Ｂに）記載するヒト重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１１Ａ又は１２Ｂ９に）記載するヒト重鎖可変領域、例えば本明細書に（例えば、表１１Ａ又は１２Ｂに）記載する少なくとも２つのヒト重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表１１Ａ又は１２Ｂのアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１１Ａ若しくは１２Ｂに提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１１Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１１Ａ若しくは１２Ｂに提供する重鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１１Ａ又は１２Ｂのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３及び４８５からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書において、例えば表１１Ａ又は１２Ｂに記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書において、例えば表１１Ａに記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって結合されている。一実施形態において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは３又は４である）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向きのいずれでもあり得る：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域。
いくつかの態様において、非ヒト抗体は、ヒト化され、抗体の特定の配列又は領域は、ヒトにおいて天然に産生される抗体又はそのフラグメントに対する類似性を高めるために改変される。そのため、一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体フラグメントを含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、並びに／又は本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、例えば３つ全て及びＬＣ ＣＤＲの１つ以上、並びに例えば３つ全て及びＨＣ ＣＤＲの１つ以上を含むヒト化ＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書に記載のヒト化ＣＤ１２３結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含み、例えば、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、２つの可変重鎖領域を有し、本明細書に記載のＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３をそれぞれ含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書（例えば、表１２Ａ）に記載するヒト化軽鎖可変領域、及び／又は本明細書（例えば、表１２Ａ）に記載するヒト化重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、本明細書（例えば、表１２Ａ）に記載するヒト化重鎖可変領域、例えば本明細書（例えば、表１２Ａ）に記載する少なくとも２つのヒト化重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、表１２Ａのアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表４に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１２Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１２Ａに提供する重鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１２Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１８４～２１５及び３０２～３３３からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書において、例えば表１２Ａに記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書において、例えば表１２Ａに記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって結合されている。一実施形態において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは３又は４である）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向きのいずれでもあり得る：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域。
ヒト化抗体
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に援用される欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書及び同第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）、ベニアリング又はリサーフェシング（例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に援用される欧州特許第５９２，１０６号明細書及び同第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９－９７３を参照されたい）、鎖シャッフリング（例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）、並びに例えばそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９－２５（２００２），Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３－６０（２０００），Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７－７９（２０００），Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８－８４（１９９７），Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５－９０４（１９９６），Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ（１９９５），Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７－２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ Ｊ Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９－１０（１９９４）及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９－７３（１９９４）に記載の技術を含むが、これらに限定されない、当技術分野で知られる多様な方法を使用して産生できる。多くの場合、フレームワーク領域におけるフレームワーク残基を、抗原結合を変える、例えば改善するためにＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換する。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、及び特定の位置の異常フレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される（例えば、参照により本明細書に援用されるＱｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号明細書；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたい）。
ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、非ヒトである源から残留している１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、典型的には「インポート」可変ドメインからとられる「インポート」残基と呼ばれる。本明細書に提供されるように、ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、フレームワークが完全に又は主にヒト生殖細胞系に由来する、非ヒト免疫グロブリン分子及びフレームワーク領域からの１つ以上のＣＤＲを含む。抗体又は抗体フラグメントのヒト化のための多数の技術が当技術分野で知られ、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒ ａｎｄ ｃｏ－ｗｏｒｋｅｒｓ（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８））の方法に従い、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより、即ちＣＤＲ移植（内容全体が参照により本明細書に援用される欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第４，８１６，５６７号明細書；同第６，３３１，４１５号明細書；同第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第６，５４８，６４０号明細書）により実施できる。このようなヒト化抗体及び抗体フラグメントにおいて、非ヒト種からの対応する配列により置換されるのは、実質的に完全より少ないヒト可変ドメインである。ヒト化抗体は、多くの場合、あるＣＤＲ残基及び場合によりあるフレームワーク（ＦＲ）残基が齧歯類抗体における類似部位からの残基により置換されるヒト抗体である。抗体及び抗体フラグメントのヒト化は、ベニアリング又はリサーフェシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５－８１４（１９９４）；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，９１：９６９－９７３（１９９４）））又は鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）によっても達成でき、その内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
ヒト化抗体を製造するために使用する軽及び重の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少するためである。いわゆる「ベストフィット」法により、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を既知ヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングする。齧歯類に最も近いヒト配列を、その後、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れる（その内容全体が参照により本明細書に援用されるＳｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）を参照されたい）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖又は重鎖の全抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、数種の異なるヒト化抗体のために使用され得る（例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用されるＮｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）。一実施形態において、重鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＨ４＿４－５９生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。一実施形態において、軽鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＫ３＿１．２５生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列のアミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。
いくつかの態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗体フラグメントを含む部分は、標的抗原に対する高親和性及び他の有利な生物学的特性を維持しながらヒト化される。本発明の一態様によると、ヒト化抗体及び抗体フラグメントは、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物の分析の過程により製造される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者に熟知されている。選択した候補免疫グロブリン配列の可能性のある三次元立体構造的構造を説明及び提示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、例えば候補免疫グロブリンの標的抗原への結合能に影響する残基の分析を可能にする。この方法で、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性増加など、所望の抗体又は抗体フラグメント時調が達成されるように、レシピエント及びインポート配列から選択及び組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合の直接的且つ最も実質的な影響に関与する。
ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、例えば、本発明における元の抗体と類似の抗原性特異性、本明細書に記載の抗原、例えば腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばヒトＣＤ１２３、ＣＤ１９又はそのフラグメントに結合する能力を維持し得る。一実施形態において、ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、抗原、例えば腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばヒトＣＤ１２３、ＣＤ１９又はそのフラグメントに対する結合親和性及び／又は特異性が改善され得る。
一態様において、抗原結合ドメイン部分は、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７から選択される１つ以上の配列を含む。一態様において、ヒトＣＤ１２３結合ドメインを含むＣＤ１２３ ＣＡＲは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３及び４８５からなる群から選択される１つ以上の配列から選択される。一態様において、ヒト化ＣＤ１２３結合ドメインを含むＣＤ１２３ ＣＡＲは、配列番号１８４～２１５及び５５６～５８７から選択される１つ以上の配列から選択される。
一態様において、抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）は、抗体又は抗体フラグメントの特定の機能的特性又は性質により特徴付けられる。例えば、一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインを含む部分は、抗原（例えば、腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばヒトＣＤ１２３、ＣＤ１９又はそのフラグメント）と特異的に結合する。一態様において、本発明は、抗体又は抗体フラグメントを構成する抗原結合ドメインに関し、ここで、抗体結合ドメインは、ＣＤ１２３タンパク質又はそのフラグメントに特異的に結合し、ここで、抗体又は抗体フラグメントは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖及び／又は可変重鎖を含む。一態様において、抗原結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７から選択されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む。特定の態様において、ｓｃＦｖは、リーダー配列と連続しており、且つ同じリーディングフレーム内にある。一態様において、リーダー配列は、配列番号１として提供されるポリペプチド配列である。
抗原結合ドメイン－更なる実施形態
一態様において、抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）は、フラグメント、例えば単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一態様において、抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）は、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、又は二機能性（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））である。一態様において、本発明の抗体及びそのフラグメントは、野生型の又は増強した親和性で抗原（例えば、腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９タンパク質）又はそのフラグメントに結合する。
ある例において、ヒトｓｃＦｖは、ディスプレイライブラリー由来であり得る。ディスプレイライブラリーは、エンティティの集合である。各エンティティは、ポリペプチド成分をコード又は特定するアクセス可能ポリペプチド成分及び回復可能成分を含む。ポリペプチド成分は、異なるアミノ酸配列が表されるように変わる。ポリペプチド成分は、任意の長さ、例えば３アミノ酸～３００アミノ酸超であり得る。ディスプレイライブラリーエンティティは、Ｆａｂの２つ以上のポリペプチド成分、例えば２つのポリペプチド鎖を含み得る。１つの例示的実施形態において、ディスプレイライブラリーを使用してヒトＣＤ１２３結合ドメインを同定できる。選択において、ライブラリの各メンバーのポリペプチド成分をＣＤ１２３又はそのフラグメントでプローブし、ポリペプチド成分がＣＤ１２３に結合する場合、ディスプレイライブラリーメンバーを典型的には支持体上への保持により同定する。
保持されたディスプレイライブラリーメンバーを支持体から回収し、分析する。分析は、増幅及び続く類似又は非類似条件下での選択を含み得る。例えば、陽性及び陰性選択が交互であり得る。分析は、ポリペプチド成分、即ち抗ＣＤ１２３結合ドメインのアミノ酸配列の決定及び詳細な特徴付けのためのポリペプチド成分の精製も含み得る。
ディスプレイライブラリーについて多様な形式が使用され得る。例は、ファージディスプレイを含む。ファージディスプレイにおいて、タンパク質成分を典型的には共有的にバクテリオファージコートタンパク質に結合させる。結合は、コートタンパク質に融合したタンパク質成分をコードする核酸の翻訳に由来する。結合は、可動性ペプチドリンカー、プロテアーゼ部位又は停止コドンの抑制の結果として取り込まれたアミノ酸を含む。ファージディスプレイは、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号明細書；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１３１５－１３１７；国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；国際公開第９２／２０７９１号パンフレット；国際公開第９２／１５６７９号パンフレット；国際公開第９３／０１２８８号パンフレット；国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；国際公開第９２／０９６９０号パンフレット；国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７４：１８２１８－３０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１－２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１－８及びＨｏｅｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（３）３４４－８に記載されている。タンパク質成分をディスプレイするバクテリオファージを、標準ファージ分取法、例えば増殖培地からのＰＥＧ沈降を使用して増殖及び採取できる。個々のディスプレイファージ選択後、選択タンパク質成分をコードする核酸を、増幅後、選択したファージで感染させた細胞又はファージ自体から単離できる。個々のコロニー又はプラークを採り、核酸を単離及び配列決定できる。
他のディスプレイ形式は、細胞ベースのディスプレイ（例えば、国際公開第０３／０２９４５６号パンフレットを参照されたい）、タンパク質－核酸融合（例えば、米国特許第６，２０７，４４６号を参照されたい）、リボソームディスプレイ（例えば、Ｍａｔｔｈｅａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９０２２及びＨａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２８７－９２；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２８：４０４－３０；並びにＳｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２３１（１－２）：１１９－３５を参照されたい）及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ペリプラズムディスプレイ（２００５ Ｎｏｖ ２２；ＰＭＩＤ：１６３３７９５８）を含む。
ある例において、ｓｃＦｖは、当技術分野で知られる方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域とを一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ－Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合、（例えば、５～１０のアミノ酸）、鎖内折りたたみが阻止される。鎖内折りたたみは、２つの可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例については、例えば、参照により本明細書に援用されるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９３ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４－６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号明細書、同第２００５／０１７５６０６号明細書、同第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。一実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。別の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数である）などの一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２５）。一実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２８）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。
例示的なＣＤ１２３ ＣＡＲ構築物及び抗原結合ドメイン
本明細書に開示する例示的なＣＤ１２３ ＣＡＲ構築物は、ｓｃＦｖ（例えば、本明細書の表１１Ａ、１２Ａ及び１２Ｂに開示するようなヒトｓｃＦｖ、任意選択により、任意選択のリーダー配列（例えば、それぞれ例示的なリーダーアミノ酸及びヌクレオチド配列として配列番号１及び配列番号１２）が前に存在する）を含む。ヒトｓｃＦｖフラグメントの配列（配列番号１５７～１６０のアミノ酸配列）を本明細書で表１１Ａに提供する。リーダー配列を伴わないヒトｓｃＦｖフラグメントの配列を本明細書で表１２Ｂに提供する（ヌクレオチド配列について配列番号４７９、４８１、４８２及び４８４、並びにアミノ酸配列について配列番号４７８、４８０、４８３及び４８５）。ＣＤ１２３ ＣＡＲ構築物は、任意選択によるヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン（例えば、配列番号２又は配列番号１３の核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号６又は配列番号１７のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；細胞内ドメイン、例えば４－１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号７又は配列番号１８のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含み、及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメイン（例えば、配列番号９若しくは１０又は配列番号２０若しくは２１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）を更に含む。一実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するか又はその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のようなＲＣＡＲ分子におけるような別々のポリペプチドにある。
一実施形態において、全長ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子は、表１１Ａ、１２Ａ若しくは１２Ｂに提供されるか、又はそれと実質的に同一である（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有する）配列である、ＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１又はｈｚＣＤ１２３－３２のアミノ酸配列を含むか、又はヌクレオチド配列によりコード化される。
一実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表１１Ａ、１２Ａ又は１２Ｂに提供するＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１又はｈｚＣＤ１２３－３２のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１若しくはｈｚＣＤ１２３－３２又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有し、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸変化を有する）である配列のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はヌクレオチド配列によりコード化される。
一実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表１１Ａ又は１２Ａに提供されるＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１若しくはｈｚＣＤ１２３－３２の重鎖可変領域、及び／又は軽鎖可変領域若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％の同一性、例えば９５～９９％の同一性を有し、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸変化を有する）である配列を含む。
一実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表１Ａ若しくは３Ａに提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表２Ａ若しくは４Ａに提供するＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１若しくはｈｚＣＤ１２３－３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ、若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
一実施形態において、ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表５Ａに提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表６Ａに提供するＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１又はｈｚＣＤ１２３－３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
一実施形態において、ＣＤ１２３分子又はＣＤ１２３抗原結合ドメインは、表７Ａに提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３）、及び／又は表８Ａに提供するＣＤ１２３－１、ＣＤ１２３－２、ＣＤ１２３－３、ＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－１、ｈｚＣＤ１２３－２、ｈｚＣＤ１２３－３、ｈｚＣＤ１２３－４、ｈｚＣＤ１２３－５、ｈｚＣＤ１２３－６、ｈｚＣＤ１２３－７、ｈｚＣＤ１２３－８、ｈｚＣＤ１２３－９、ｈｚＣＤ１２３－１０、ｈｚＣＤ１２３－１１、ｈｚＣＤ１２３－１２、ｈｚＣＤ１２３－１３、ｈｚＣＤ１２３－１４、ｈｚＣＤ１２３－１５、ｈｚＣＤ１２３－１６、ｈｚＣＤ１２３－１７、ｈｚＣＤ１２３－１８、ｈｚＣＤ１２３－１９、ｈｚＣＤ１２３－２０、ｈｚＣＤ１２３－２１、ｈｚＣＤ１２３－２２、ｈｚＣＤ１２３－２３、ｈｚＣＤ１２３－２４、ｈｚＣＤ１２３－２５、ｈｚＣＤ１２３－２６、ｈｚＣＤ１２３－２７、ｈｚＣＤ１２３－２８、ｈｚＣＤ１２３－２９、ｈｚＣＤ１２３－３０、ｈｚＣＤ１２３－３１又はｈｚＣＤ１２３－３２の軽鎖可変領域の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％同一、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表３Ａ、５Ａ及び７Ａ、並びに軽鎖可変ドメインについて表２Ａ、４Ａ、６Ａ及び８Ａに示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
表１Ａ、２Ａ、３Ａ及び４Ａに提供するＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームの組み合わせに従う。
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実施形態において、ＣＤ１２３単鎖可変フラグメントを産生し、細胞内ＣＤ３ζドメイン及び４－１ＢＢの細胞内共刺激性ドメインを有するレンチウイルスＣＡＲ発現ベクターにクローン化する。例示的な完全ヒトＣＤ１２３ ｓｃＦｖの名称を表９Ａに示す。例示的なヒト化ＣＤ１２３ ｓｃＦｖの名称を表１０Ａに示す。
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実施形態において、ＶＬ及びＶＨドメインがｓｃＦｖにおいて現れる順番は、変わり（即ちＶＬ－ＶＨ又はＶＨ－ＶＬ方向）、各サブユニットが配列ＧＧＧＧＳ（配列番号２５）（例えば、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２８）又は（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７））を含む３つ又は４つのコピーの「Ｇ４Ｓ」（配列番号２５）サブユニットは、表１１Ａ、表１２Ａ及び表１２Ｂに示すように、可変ドメインに結合してｓｃＦｖドメイン全体を作る。
ＣＤ１２３ ｓｃＦｖドメイン及びＣＤ１２３ ＣＡＲ分子のアミノ酸及び核酸配列を表１１Ａ、表１２Ａ、及び表１２Ｂに提供する。各ｓｃＦｖの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列も表１１Ａ及び表１２Ａに提供する。リーダー配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列又は配列番号１２のヌクレオチド配列）を伴うｓｃＦｖフラグメント（配列番号１５７～１６０及び１８４～２１５）及びリーダー配列を伴わないｓｃＦｖフラグメント（配列番号４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７）も本発明に包含されることに留意されたい。
実施形態において、表１１Ａ及び１２Ａにおけるこれらのクローンは、全てＣＤ３ζ鎖由来の共刺激性ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含む。
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実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ＣＤ１２３に特異的に結合し、リーダー配列、例えばアミノ酸配列番号１を含まないｓｃＦｖを含む。下記表１２Ｂは、リーダー配列番号１を含まないＣＤ１２３ ｓｃＦｖ配列のアミノ酸及びヌクレオチド配列を提供する。
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ＣＤ１９抗原結合ドメイン
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７、又は７８０から選択されるＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）、並びに配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７、又は７８０から選択されるＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に（例えば、表１３Ａ又は１４Ａに）記載する軽鎖可変領域、及び／又は本明細書に（例えば、表１３Ａ又は１４Ａに）記載する重鎖可変領域を含む。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、表１３Ａ又は１４Ａのアミノ酸配列の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含むｓｃＦｖである。一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦＶ）は、表１３Ａ若しくは１４Ａに提供する軽鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１３Ａ若しくは１４Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域、及び／又は表１３Ａ若しくは１４Ａに提供する重鎖可変領域のアミノ酸の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変（例えば、置換）であが、３０、２０若しくは１０以下の改変（例えば、置換）を有するアミノ酸配列、又は表１３Ａ若しくは１４Ａのアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％））の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
一実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書において、例えば表１３Ａ又は１４Ａに記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域にリンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって結合されている、本明細書において、例えば表１３Ａ又は１４Ａに記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、又は６、好ましくは３又は４である）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の向きのいずれでもあり得る：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域。
別の実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９に結合する当技術分野において公知の任意の抗体又はその抗体フラグメントを含む。
一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列の（例えば、配列番号７７４の）アミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。一実施形態において、軽鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば全部で４つのフレームワーク領域は、ＶＫ３＿１．２５生殖細胞系配列由来である。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列の（例えば、配列番号７７４の）アミノ酸からの１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの改変、例えば置換を含み得る。
例示的なＣＤ１９抗原結合ドメイン及びＣＡＲ構築物
本明細書に開示する例示的なＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、本明細書の表１３Ａ又は１４Ａに開示するｓｃＦｖ（例えば、ヒトｓｃＦｖ）、任意選択により、任意選択によるリーダー配列（例えば、それぞれ例示的なリーダーアミノ酸及びヌクレオチド配列として配列番号１及び配列番号１２）が前にあるものを含む。ｓｃＦｖフラグメントの配列（配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７又は７８０のアミノ酸配列）をここで表１３Ａ又は１４Ａに提供する。ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、任意選択によるヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン（例えば、配列番号２又は配列番号１３の核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号６又は配列番号１７のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；細胞内ドメイン、例えば４－１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号７又は配列番号１８のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含み、及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメイン（例えば、配列番号９若しくは１０又は配列番号２０若しくは２１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）を更に含む。一実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するか又はその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のようなＲＣＡＲ分子におけるような別々のポリペプチドにある。
一実施形態において、全長ＣＤ１９ ＣＡＲ分子は、表１３Ａ若しくは１４Ａに提供するＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１～ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５－Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列のアミノ酸配列を含むか、又はこれらのヌクレオチド配列によりコードされる。
一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表１３Ａ若しくは１４Ａに提供するＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１～ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５－Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列のｓｃＦｖアミノ酸配列を含むか、又はこれらのヌクレオチド配列によりコードされる。
一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表１３Ａ若しくは１４Ａに提供するＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１～ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５－Ｃ１、又はこれらの配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大２０、１５、１０、８つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子又はＣＤ１９抗原結合ドメインは、表１３Ａ若しくは１４Ａに提供するＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１－ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５－Ｃ１の重鎖可変領域からの１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／若しくはＨＣＤＲ３）、及び／又は表１３Ａ若しくは１４Ａに提供するＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＴＬ０１９、ｍＣＡＲ１－ｍＣＡＲ３若しくはＳＳＪ２５－Ｃ１の軽鎖可変領域の１つ、２つ若しくは３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／若しくはＬＣＤＲ３）、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも９５％、例えば９５～９９％同一であるか、又は最大５つ、４つ、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸変化）である配列を含む。
ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１５Ａ及び軽鎖可変ドメインについて表１６Ａに示す。
ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメイン及びＣＤ１９ ＣＡＲ分子のアミノ酸及び核酸配列を表１３Ａ及び１４Ａに提供する。一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子は、例えば、表１３Ａ及び１４Ａに提供される配列において下線を引いた本明細書に記載のリーダー配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子は、リーダー配列を含まない。
実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＣＤ１９ ＣＡＲ）を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９を標的とする。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）に記載のＦＭＣ６３ ｓｃＦｖフラグメントと同一又は類似の結合特異性を有する。一実施形態において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）に記載のｓｃＦｖフラグメントを含む。ＣＤ１９抗体分子は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載の抗体分子（例えば、ヒト化抗ＣＤ１９抗体分子）であり得る。国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットは、様々なＣＡＲ構築物の結合及び有効性をアッセイする方法も記載している。
一態様において、親マウスｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に提供され、本明細書に配列番号７７３として提供されるＣＡＲ１９構築物である。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載され、本明細書に配列番号７７４で提供されるｓｃＦｖである。
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに配列番号１２として提供され、本明細書に配列番号７７３として提供されるポリペプチド配列を含み、ここで、ｓｃＦｖドメインは、配列番号７５８～７６９から選択される１つ以上の配列によって置換される。一実施形態において、配列番号７５８～７６９のｓｃＦｖドメインは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するマウス由来のｓｃＦｖフラグメントである配列番号７７４のｓｃＦｖドメインのヒト化変異体である。このマウスｓｃＦｖのヒト化は、ＣＡＲＴ１９処置、例えばＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞での処置を受けている患者において、マウス特異的な残基がヒト抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導することが可能な臨床条件にとって望ましい場合がある。
一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットで配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態において、アミノ酸配列は、
Figure 0007219376000075
 又はそれと実質的に相同な配列である。
実施形態において、アミノ酸配列は、
Figure 0007219376000076
 又はそれと実質的に相同な配列である。
一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＵＳＡＮ名ＴＩＳＡＧＥＮＬＥＣＬＥＵＣＥＬ－Ｔを有する。実施形態では、ＣＴＬ０１９は、Ｔ細胞の遺伝子改変によって作製され、この改変は、ＥＦ－１αプロモーターの制御下のＣＴＬ０１９導入遺伝子を含有する自己不活性化、複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターでの形質導入による安定的挿入によって媒介される。ＣＴＬ０１９は、パーセント導入遺伝子陽性Ｔ細胞に基づいて対象に送達される導入遺伝子陽性Ｔ細胞と導入遺伝子陰性Ｔ細胞の混合物であり得る。
他の実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のヒト化ＣＡＲ分子、例えば表１３Ａのヒト化ＣＤ１９ＣＡＲ分子であるか、又は表１５Ａ及び１６Ａに記載のＣＤＲを有する。
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のマウスＣＡＲ分子、例えば表１４ＡのマウスＣＤ１９ＣＡＲ分子であるか、又は表１５Ａ及び１６Ａに記載のＣＤＲを有する。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ分子は、表１５Ａ及び１６Ａのマウス又はヒト化ＣＤ１９ ＣＡＲの重鎖可変領域からの１つ、２つ、及び／若しくは３つのＣＤＲ、並びに／又は軽鎖可変領域からの１つ、２つ、及び／若しくは３つのＣＤＲを含む。
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３、並びに／又は本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に列挙した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
マウス抗ＣＤ１９抗体のヒト化
マウスＣＤ１９抗体のヒト化は、ＣＡＲＴ１９処置、即ちＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞での処置を受けている患者において、マウス特異的な残基がヒト抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導することが可能な臨床条件にとって望ましい。ヒト化ＣＤ１９ ＣＡＲ配列の産生、特徴付け及び効能は、実施例１～５（１１５～１５９ページ）、例えば表３、４及び５（１２５～１４７ページ）を含めて、その全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットにおいて説明されている。
ＣＡＲ構築物、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ構築物
国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載のＣＤ１９ ＣＡＲ構築物の特定の配列を本明細書において再現する。
ヒト化ｓｃＦｖフラグメント（配列番号７１０～７２１）の配列を下の表１３Ａに提供する。配列番号７５８～７６９を有する完全ＣＡＲ構築物を生成するため、例えば本明細書の「ＣＡＲ構築物構成要素」の節からの、更なる配列を有する配列番号７１０～７２１を使用して完全ＣＡＲ構築物を生成した。
これらのクローンは、全て４－１ＢＢ由来の共刺激性ドメインのシグナルドメインにＱ／Ｋ残基変化を含んだ。
Figure 0007219376000077
Figure 0007219376000078
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Figure 0007219376000102
Figure 0007219376000103
Figure 0007219376000104
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、表１３Ａ又は１４Ａに列挙する重鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３を含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を更に含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、表１３Ａ又は１４Ａに列挙する軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態において、抗原結合ドメインは、表１３Ａ又は１４Ａに記載する軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３の１つ、２つ、又は全て、並びに表１３Ａ又は１４Ａに記載する重鎖結合ドメインアミノ酸配列のいずれかのＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３の１つ、２つ、又は全てを含む。
いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、又はそれらの組み合わせに従って定義される。
ｓｃＦｖドメインのヒト化ＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１５Ａ及び軽鎖可変ドメインについて表１６Ａに示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
Figure 0007219376000105
Figure 0007219376000106
ＣＡＲ構築物成分
実施形態において、ＣＡＲ ｓｃＦｖフラグメントをレンチウイルスベクターにクローン化して、単一コーディングフレームに全長ＣＡＲ構築物を作り、発現のためにＥＦ１αプロモーター（配列番号１１）を使用する。
ＥＦ１αプロモーター
Figure 0007219376000107
 Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号２５）
ＧＧＧＧＳ
Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号２６）：この配列は、１～６「Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ」反復単位を含み得る
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号２７）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号２８）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳ
Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号２９）
ＧＧＧＳ
ポリＡ：（Ａ）５０００（配列番号３０）
この配列は、５０～５０００アデニンを含み得る。
ポリＡ：（Ｔ）１００（配列番号３１）
ポリＡ：（Ｔ）５０００（配列番号３２）
この配列は、５０～５０００チミンを含み得る。
ポリＡ：（Ａ）５０００（配列番号３３）
この配列は、１００～５０００アデニンを含み得る。
ポリＡ：（Ａ）４００（配列番号３４）
この配列は、１００～４００アデニンを含み得る。
ポリＡ：（Ａ）２０００（配列番号３５）
この配列は、５０～２０００アデニンを含み得る。
Ｇｌｙ／Ｓｅｒ（配列番号７０９）：この配列は、１～１０「Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ」反復単位を含み得る
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
リンカー（配列番号７９４）
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
ＣＡＲ構築物は、次の配列の１つ以上を有するＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーを含み得る：ＧＧＧＧＳ（配列番号２５）；１～６「Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ」反復単位を含む、例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳ（配列番号２８）；ＧＧＧＳ（配列番号２９）；又は１～１０「Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ」反復単位を含む、例えばＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号７０９）。
実施形態において、ＣＡＲ構築物は、ポリＡ配列、例えば５０～５０００若しくは１００～５０００のアデニンを含む配列（例えば、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４若しくは配列番号３５）又は５０～５０００のチミンを含む配列（例えば、配列番号３１、配列番号３２）を含む。代わりに、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧを含むリンカーを含み得る（配列番号７０４）。
ＣＡＲ構築物の更なる配列／構成要素は、次の１つ以上を含み得る。
リーダー（アミノ酸配列）（配列番号１）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ
リーダー（核酸配列）（配列番号１２）
Figure 0007219376000108
 リーダー（コドン最適化核酸配列）（配列番号７９６）
Figure 0007219376000109
 ＣＤ８ヒンジ（アミノ酸配列）（配列番号２）
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
ＣＤ８ヒンジ（核酸配列）（配列番号１３）
Figure 0007219376000110
 ＣＤ８膜貫通（アミノ酸配列）（配列番号６）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ
ＣＤ８膜貫通（核酸配列）（配列番号１７）
Figure 0007219376000111
 ＣＤ８膜貫通（コドン最適化核酸配列）（配列番号７９７）
Figure 0007219376000112
 ４－１ＢＢ細胞内ドメイン（アミノ酸配列）（配列番号７）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
４－１ＢＢ細胞内ドメイン（核酸配列）（配列番号１８）
Figure 0007219376000113
 ４－１ＢＢ細胞内ドメイン（コドン最適化核酸配列）（配列番号７９８）
Figure 0007219376000114
 ＣＤ２８細胞内ドメイン（アミノ酸配列）（配列番号４３）
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号４３）
ＣＤ２８細胞内ドメイン（ヌクレオチド配列）（配列番号４４）
Figure 0007219376000115
 ＩＣＯＳ細胞内ドメイン（アミノ酸配列）（配列番号４５）
Ｔ Ｋ Ｋ Ｋ Ｙ Ｓ Ｓ Ｓ Ｖ Ｈ Ｄ Ｐ Ｎ Ｇ Ｅ Ｙ Ｍ Ｆ Ｍ Ｒ Ａ Ｖ Ｎ Ｔ Ａ Ｋ Ｋ Ｓ Ｒ Ｌ Ｔ Ｄ Ｖ Ｔ Ｌ（配列番号４５）
ＩＣＯＳ細胞内ドメイン（ヌクレオチド配列）（配列番号４６）
Figure 0007219376000116
 ＣＤ３ζドメイン（Ｑ／Ｋ変異体）（アミノ酸配列）（配列番号９）
Figure 0007219376000117
 ＣＤ３ζ（Ｑ／Ｋ変異体）（核酸配列）（配列番号２０）
Figure 0007219376000118
 ＣＤ３ζ（Ｑ／Ｋ変異体）（コドン最適化核酸配列）（配列番号７９９）
Figure 0007219376000119
 ＣＤ３ζドメイン（アミノ酸配列；ＮＣＢＩ対照配列ＮＭ＿０００７３４．３）（配列番号１０）
Figure 0007219376000120
 ＣＤ３ζ（核酸配列；ＮＣＢＩ対照配列ＮＭ＿０００７３４．３）；（配列番号２１）
Figure 0007219376000121
 ＩｇＧ４ヒンジ（アミノ酸配列）（配列番号３）
Figure 0007219376000122
 ＩｇＧ４ヒンジ（ヌクレオチド配列）（配列番号１４）
Figure 0007219376000123
 ＩｇＤヒンジ（ａａ）（配列番号４）
Figure 0007219376000124
 ＩｇＤヒンジ（ｎａ）（配列番号１５）
Figure 0007219376000125
 ＣＤ２７（ａａ）（配列番号８）
ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＲＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ
ＣＤ２７（ｎａ）（配列番号１９）
Figure 0007219376000126
 ＹからＦへの変異体ＩＣＯＳドメイン（ａａ）（配列番号７９５）
ＴＫＫＫＹＳＳＳＶＨＤＰＮＧＥＦＭＦＭＲＡＶＮＴＡＫＫＳＲＬＴＤＶＴＬ
二特異性ＣＡＲ
一実施形態において、多特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２以下の抗原に特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する第１免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）である。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複する。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複しない。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）にある。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列並びに第２エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントを含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントを含む。
一実施形態において、抗体分子は、多特異性（例えば、二特異性又は三特異性）抗体分子である。二特異性又はヘテロ二量体抗体分子を産生するためのプロトコルは、当技術分野で知られており、例えば米国特許第５７３１１６８号明細書に記載の「ノブインアホール」アプローチ；例えば、国際公開第０９／０８９００４号パンフレット、国際公開第０６／１０６９０５号パンフレット及び国際公開第２０１０／１２９３０４号パンフレットに記載のような静電的ステアリングＦｃ対形成；例えば、国際公開第０７／１１０２０５号パンフレットに記載のような鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、国際公開第０８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットに記載のようなＦａｂアーム交換；例えば、米国特許第４４３３０５９号明細書に記載のような、例えばアミン反応性基及びスルフヒドリル反応性基を有するヘテロ二官能性試薬を使用して二特異性構造を製造するための、抗体架橋結合による二重抗体コンジュゲート；例えば、米国特許第４４４４８７８号明細書に記載のような、２つの鎖間のジスルフィド結合の還元及び酸化のサイクルを経る異なる抗体からの半抗体（重－軽鎖対又はＦａｂ）の組み換えにより産生する二特異性抗体決定基；例えば、米国特許第５２７３７４３号明細書に記載のような、三機能性抗体、スルフヒドリル反応性基により架橋された３Ｆａｂ’フラグメント；例えば、米国特許第５５３４２５４号明細書に記載のような、生合成結合タンパク質、例えばＣ末端テール、好ましくはジスルフィド又はアミン反応性化学架橋結合により架橋されたｓｃＦｖの対；例えば、米国特許第５５８２９９６号明細書に記載のような、二機能性抗体、例えば置換された定常ドメインを有する、ロイシンジッパー（例えば、ｃ－ｆｏｓ及びｃ－ｊｕｎ）により二量体化された異なる結合特性を有するＦａｂフラグメント；例えば、米国特許第５５９１８２８号明細書に記載のような、二特異性及びオリゴ特異性一価及びオリゴ価受容体、例えば一方の抗体のＣＨ１領域と他方の典型的には軽鎖を伴う抗体のＶＨ領域との間のポリペプチドスペーサーを経て連結した２つの抗体（２つのＦａｂフラグメント）のＶＨ－ＣＨ１領域；例えば、米国特許第５６３５６０２号明細書に記載のような、二特異性ＤＮＡ－抗体コンジュゲート、例えば二本鎖切片のＤＮＡを経た抗体又はＦａｂフラグメントの架橋；例えば、米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のような、二特異性融合タンパク質、例えば親水性らせん状ペプチドリンカーを間に含み、完全定常領域を含む、２つのｓｃＦｖを含む発現構築物；例えば、米国特許第５８３７２４２号明細書に記載のような、多価及び多特異性結合タンパク質、例えばＩｇ重鎖可変領域の結合領域を有する第１ドメイン及びＩｇ軽鎖可変領域の結合領域を有する第２ドメインを有し、一般に二特異性抗体（二特異性、三特異性、四特異性の分子を作るための高次構造も包含される）と呼ばれるポリペプチドの二量体；例えば、米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のような、二特異性／多価分子を形成するように二量体化できる、ペプチドスペーサーで抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域に更に結合された、連結ＶＬ鎖及びＶＨ鎖を有するミニボディ構築物；二特異性抗体を形成するように二量体を形成できる、いずれかの方向で短ペプチドリンカー（例えば、５つ又は１０のアミノ酸）により、又はリンカーなしで連結されたＶＨ及びＶＬドメイン；例えば、米国特許第５８４４０９４号明細書に記載のような三量体及び四量体；例えば、米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のような、一連のＦＶ（又はｓｃＦｖ）を形成するように更にＶＬドメインと結合した、Ｃ末端で架橋可能基とのペプチド結合により連結した一連のＶＨドメイン（又はファミリーメンバーにおけるＶＬドメイン）；及び例えば、米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のような、ｓｃＦＶ又は二特異性抗体形態の両方を使用して、例えばホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成するように非共有又は化学架橋により多価構造に合わさっている、ペプチドリンカーにより連結したＶＨドメイン及びＶＬドメインの両方を有する一本鎖結合ポリペプチドを例えば含むが、これらに限定されない。多特異性及び二特異性分子並びにそれを製造するための更なる例は、例えば、米国特許第５９１０５７３号明細書、米国特許第５９３２４４８号明細書、米国特許第５９５９０８３号明細書、米国特許第５９８９８３０号明細書、米国特許第６００５０７９号明細書、米国特許第６２３９２５９号明細書、米国特許第６２９４３５３号明細書、米国特許第６３３３３９６号明細書、米国特許第６４７６１９８号明細書、米国特許第６５１１６６３号明細書、米国特許第６６７０４５３号明細書、米国特許第６７４３８９６号明細書、米国特許第６８０９１８５号明細書、米国特許第６８３３４４１号明細書、米国特許第７１２９３３０号明細書、米国特許第７１８３０７６号明細書、米国特許第７５２１０５６号明細書、米国特許第７５２７７８７号明細書、米国特許第７５３４８６６号明細書、米国特許第７６１２１８１号明細書、米国特許出願公開第２００２００４５８７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２０７６４０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２１０３３４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２０７３４６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２１１０７８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２１９６４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２２０３８８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２４２８４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００３４０３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００４３５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０６９５５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０７９１７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１００５４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１６３７８２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５２６６４２５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６０８３７４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６１２０９６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２６３３６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７００４９０９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７０８７３８１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１２８１５０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１４１０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１５４９０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７２７４９８５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０５０３７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０６９８２０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１５２６４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１７１８５５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２４１８８４Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２５４５１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２６０７３８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１３０１０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１４８９０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１５５２７５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３５９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３２８１１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３４１０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２６３３９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２７４６４９Ａ１号明細書、欧州特許第３４６０８７Ａ２号明細書、国際公開第０００６６０５Ａ２号パンフレット、国際公開第０２０７２６３５Ａ２号パンフレット、国際公開第０４０８１０５１Ａ１号パンフレット、国際公開第０６０２０２５８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０４４８８７Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０９５３３８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７１３７７６０Ａ２号パンフレット、国際公開第２００８１１９３５３Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０２１７５４Ａ２号パンフレット、国際公開第２００９０６８６３０Ａ１号パンフレット、国際公開第９１０３４９３Ａ１号パンフレット、国際公開第９３２３５３７Ａ１号パンフレット、国際公開第９４０９１３１Ａ１号パンフレット、国際公開第９４１２６２５Ａ２号パンフレット、国際公開第９５０９９１７Ａ１号パンフレット、国際公開第９６３７６２１Ａ２号パンフレット、国際公開第９９６４４６０Ａ１号パンフレットに見ることができる。上に引用した出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
二特異性抗体分子の各抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流にあり得る。一実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）の上流のそのＶＨ（ＶＨ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）の上流のそのＶＨ（ＶＨ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＨ１－ＶＬ１－ＶＬ２－ＶＨ２を有する。他の実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）の上流のそのＶＬ（ＶＬ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）の上流のそのＶＬ（ＶＬ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＬ１－ＶＨ１－ＶＨ２－ＶＬ２を有する。任意選択により、リンカーは、２つの抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１－ＶＬ１－ＶＬ２－ＶＨ２として配列される場合にＶＬ１とＶＬ２との間に、又は構築物がＶＬ１－ＶＨ１－ＶＨ２－ＶＬ２として配置される場合にＶＨ１とＶＨ２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）であり得る。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。任意選択により、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。任意選択により、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数リンカーを有する構築物において、リンカーの任意の２つ以上は、同じであるか又は異なり得る。従って、一実施形態において、二特異性ＣＡＲは、本明細書に記載のような配置でＶＬ、ＶＨ及び任意選択により１つ以上のリンカーを含む。
一態様において、二特異性抗体分子は、第１免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えばｓｃＦｖにより特徴付けられ、これは、抗原（例えば、腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９）に結合特異性を有し、例えば本明細書に記載のような、例えば表１１Ａ、表１２Ａ、表１２Ｂ、表１３Ａ、又は表１４Ａに記載するようなｓｃＦｖを含むか又は本明細書に記載のｓｃＦｖ（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９ ｓｃＦｖ）からの軽鎖ＣＤＲ及び／又は重鎖ＣＤＲ及び第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列を異なる抗原に含む。いくつかの態様において、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＡＭＬ細胞上に発現された抗原、例えばＣＤ１２３以外の抗原に結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＬＬ－１に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ３３に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ３４に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＦＬＴ３に対する結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、葉酸受容体βに対する結合特異性を有する。いくつかの態様において、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、Ｂ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＲＯＲ１に対する結合特異性を有する。
キメラＴＣＲ
一態様において、本発明の抗原及び抗原フラグメント（例えば、抗ＣＤ１２３抗体又は抗体フラグメント）（例えば、表１１Ａ、１２Ａ、１２Ｂ、１３Ａ、又は１４Ａに開示されるもの）を、抗原（例えば、腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９）に特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）鎖の１つ以上の定常ドメイン、例えばＴＣＲα又はＴＣＲβ鎖に移植できる。理論に拘束されないが、キメラＴＣＲは、抗原結合によりＴＣＲ複合体を経てシグナル伝達すると考えられる。例えば、本明細書に記載するようなｓｃＦｖ（例えば、ＣＤ１２３ ｓｃＦｖ又はＣＤ１９ ｓｃＦｖ）を、ＴＣＲ鎖、例えばＴＣＲα鎖及び／又はＴＣＲβ鎖の定常ドメイン、例えば少なくとも細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの部分に移植できる。別の例として、抗体フラグメント（例えば、抗ＣＤ１２３抗体フラグメント又は抗ＣＤ１９抗体フラグメント）、例えば本明細書に記載のようなＶＬドメインを、ＴＣＲα鎖の定常ドメインに移植でき、抗体フラグメント（例えば、抗ＣＤ１２３抗体フラグメント又は抗ＣＤ１９抗体フラグメント）、例えば本明細書に記載のようなＶＨドメインを、ＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植できる（又は代替的にＶＬドメインをＴＣＲβ鎖の定常ドメインに移植し得、ＶＨドメインをＴＣＲα鎖に移植し得る）。別の例として、抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲ（例えば、ＣＤ１２３抗体又は抗体フラグメント、例えば表１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａ、５Ａ、６Ａ、７Ａ、８Ａ、１０Ａ、又は１２Ａに記載のＣＤ１２３抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲ；又はＣＤ１９抗体又は抗体フラグメント、例えば表１３Ａ、１４Ａ、１５Ａ、又は１６Ａに記載のもののＣＤＲ）をＴＣＲα及び／又はβ鎖に移植して、抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）に特異的に結合するキメラＴＣＲを生成し得る。例えば、本明細書に記載のＬＣＤＲをＴＣＲα鎖の可変ドメインに移植し得、本明細書に記載のＨＣＤＲをＴＣＲβ鎖の可変ドメインに移植し得、又はその逆も可能である。このようなキメラＴＣＲは、当技術分野で知られる方法により産生し得る（例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ ＲＡ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０００；７：１３６９－１３７７；Ｚｈａｎｇ Ｔ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００４；１１：４８７－４９６；Ａｇｇｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１２ Ａｐｒ；１９（４）：３６５－７４）。
安定性及び変異
抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）、例えばｓｃＦｖ分子（例えば、可溶性ｓｃＦｖ）の安定性は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に援用される、２０１５年８月１９日に出願された国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットの１４７～１５１ページに記載されている、従来の対照ｓｃＦｖ分子又は全長抗体の生物物理学的特性（例えば、熱安定性、凝集率、及び結合親和性）を参照して評価することができる。
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメインアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、抗原結合ドメインは、本明細書に記載のＣＤ１２３抗体フラグメントの所望の機能的特性を保持する。特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
種々の態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、一方又は両方の可変領域（例えば、ＶＨ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域の、１つ以上のアミノ酸の改変により操作される。特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
本発明の抗体又は抗体フラグメントが、アミノ酸配列が（例えば、野生型から）異なるように更に改変され得るが、所望の活性は改変されないことが当業者に理解される。例えば、「非必須」アミノ酸残基でのアミノ酸置換を生じる更なるヌクレオチド置換をタンパク質に行い得る。例えば、分子における非必須アミノ酸残基を同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換え得る。別の実施形態において、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーメンバーの順番及び／又は組成が異なる構造的に類似する一連のもので置き換えることができ、例えばアミノ酸残基が類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられた保存的置換をなし得る。
塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関連して、同一性パーセントは、同じである、２つ以上の配列を指す。２配列は、次の配列比較アルゴリズムの１つを使用して又は手動アラインメント及び目視により、比較窓又は指定領域にわたり、最大対応を比較及びアラインしたとき、同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドを特定パーセント有する場合、「実質的に同一」である（特定領域又は、特定されていないとき、配列全体にわたり、例えば６０％の同一性、任意選択により７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）。任意選択により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長の領域又はより好ましくは１００～５００又は１０００又はそれを超えるヌクレオチド（又は２０、５０、２００又はそれを超えるアミノ酸）長の領域にわたり、同一性が存在する。
配列比較のために、典型的には１配列が対照配列としての役割を果たし、それに対して試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験及び対照配列をコンピューターに入力し、必要であれば、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用でき又は代替パラメータを指定できる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、対照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。比較のために配列をアラインメントする方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４のサーチのための類似法、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）又は手動アラインメント及び目視（例えば、Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）により実施できる。
配列同一性及び配列類似性パーセントの決定に適するアルゴリズムの２つの例はＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから公的に入手可能である。
２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれている、Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７）アルゴリズムを使用しても決定できる。加えて、２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｏｍ ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス及びギャップ荷重１６、１４、１２、１０、８、６又は４及び長さ荷重１、２、３、４、５又は６を使用する、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムに取り込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３）アルゴリズムを使用して決定できる。
一態様において、本発明は、機能的に均等な分子を産生する、出発抗体又はフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列の改変を企図する。例えば、例としてＣＡＲを構成する抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）、例えばｓｃＦｖのＶＨ又はＶＬを、抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）、例えばｓｃＦｖの出発ＶＨ又はＶＬフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変できる。本発明は、機能的に均等な分子を産生するための、ＣＡＲ構築物全体の改変、例えばＣＡＲ構築物における種々のドメインの１つ以上のアミノ酸配列における改変を企図する。ＣＡＲ構築物は、出発ＣＡＲ構築物の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように改変され得る。
抗原
本明細書に記載の任意の方法又は組成物によると、例示的な腫瘍抗原には以下の１つ以上が含まれるが、これらに限定されるものではない。甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）；Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ）；Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン－１３受容体サブユニットα２（ＩＬ－１３Ｒａ２）；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；ステージ特異的胎児抗原４（ＳＳＥＡ－４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）；上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体β；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化型リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座変異型遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）；黒色腫癌精巣抗原１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；黒色腫癌精巣抗原２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；ｐ５３変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座切断点；黒色腫由来アポトーシス阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄球症ウイルス癌遺伝子神経芽腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞により認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘ染色体切断点２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球関連免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；並びに免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）。
実施形態では、腫瘍抗原は、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５及びＩＧＬＬ１からなる群から選択される。
実施形態において、腫瘍抗原は、Ｂ細胞抗原（例えば、Ｂ細胞表面抗原）、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａである。
実施形態では、腫瘍抗原はＣＤ１２３である。実施形態では、腫瘍抗原はＣＤ１９である。他の実施形態において、腫瘍抗原はＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、又はＥＧＦＲｖＩＩＩである。
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関係する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０～最大１５アミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関係する１つ以上の更なるアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０～最大１５アミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインと結合するものである。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択され又はアミノ酸置換による改変ができる。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞、表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。
膜貫通ドメインは、天然由来又は組み換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ１９の少なくとも膜貫通領域を含み得る。
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、一実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号２のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号６の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列
Figure 0007219376000127
 のヒンジを含む。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、
Figure 0007219376000128
 のヌクレオチド配列によりコードされたヒンジを含む。
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列
Figure 0007219376000129
 のヒンジを含む。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、
Figure 0007219376000130
 のヌクレオチド配列によりコードされたヒンジを含む。
一態様において、膜貫通ドメインは組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
任意選択により、２～１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域の間に結合を形成し得る。グリシン－セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む（配列番号５）。一実施形態において、リンカーは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣのヌクレオチド配列によりコードされる（配列番号１６）。
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
細胞質ドメイン
本ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化ができる。
本発明のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又はバリアント及び同じ機能的能力を有するあらゆる組み換え配列を含む。
ＴＣＲ単独により産生されたシグナルはＴ細胞の完全活性化には不十分であり、二次及び／又は共刺激性シグナルも必要であることが知られている。そのため、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激性シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものを含む。一実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
本発明で特に有用である初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む分子の更なる例は、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ３２のものを含む。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζシグナル伝達ドメインをそれ自体で含むことができ又は本発明のＣＡＲに関連して、有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζ鎖部分及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激性分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、インビボでヒトＴ細胞残留性及び抗腫瘍活性を増強することが示されている（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６－７０６）。
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択により、例えば、２～１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列間に結合を形成し得る。一実施形態において、グリシン－セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。一実施形態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、リンカー分子はグリシン残基である。一実施形態において、リンカー分子はアラニン残基である。
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号７のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号９（変異体ＣＤ３ζ）又は配列番号１０（野生型ヒトＣＤ３ζ）のシグナル伝達ドメインである。
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＲＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ（配列番号８）のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、
Figure 0007219376000131
 の核酸配列によりコードされる。
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４４の核酸配列によりコードされる。
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４６の核酸配列によりコードされる。
一態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的（例えば、ＣＤ１２３若しくはＣＤ１９、又は本明細書に記載の任意の他の抗原）又は異なる標的（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３、若しくは葉酸受容体β、又は本明細書に記載の任意の他の抗原）に対する、例えば第２のＣＡＲの異なる抗原結合ドメインを更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体βなど、急性骨髄性白血病細胞に発現される標的に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ、及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。理論に拘束されることを望まないが、第１のＣＡＲへの共刺激性シグナル伝達ドメイン、例えば４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ又はＯＸ－４０及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性ドメインを含む第１のＣＤ１２３ ＣＡＲ及びＣＤ１２３以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＤ１２３ ＣＡＲ及びＣＤ１２３以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）及び阻害性ＣＡＲを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）の細胞内ドメインであり得る。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が２つ以上の異なるＣＡＲを含むとき、種々のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものである。例えば、第１及び第２のＣＡＲを発現する細胞は、第２のＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えばＶＨＨである第２のＣＡＲの抗原結合ドメインと結合を形成しない、例えばフラグメント、例えばｓｃＦｖとしての第１のＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。
一実施形態において、抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子を含み、相補的決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４鎖抗体由来の単一ドメイン、操作されたドメイン及び抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドを含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の又は将来的な単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
一態様において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であるような、魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域由来の単一ドメイン分子を製造する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１４：２９０１－２９０９に記載されている。
別の態様によると、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８に記載されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインは、ここでは、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するためにＶＨＨ又はナノボディとして知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコ由来であり得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
ＳＤＡＢ分子は、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロ産生され得る（例えば、ファージディスプレイにより選択）。
受容体の抗原結合ドメイン間を相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１つ以上がその同族抗原に結合することを阻止するため、望ましくない可能性があることも判明した。従って、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する、抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。また、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸並びにこのような細胞及び核酸を製造及び使用する方法である。一実施形態において、前記第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の抗原結合ドメインの一方は、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。
一実施形態において、本発明は、第１及び第２のＣＡＲを含み、ここで、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、前記第２のＣＡＲの存在により実質的に低減されない。一実施形態において、前記第２のＣＡＲの存在下の前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、前記第２のＣＡＲの非存在下の前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なく互いに結合する。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく互いに結合する。
別の態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を更に発現できる。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ１は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）を含む。一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド並びに本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／０１９６１５号パンフレットに記載のようなスイッチ共刺激性受容体を含む。ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．１９９６ Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：７６５－７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．２０００ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．２００１ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ－Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。
一実施形態において、阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む薬剤を膜貫通ドメイン及び４１ＢＢ及びＣＤ３ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合できる（本明細書ではＰＤ１ ＣＡＲと称する）。一実施形態において、ＰＤ１ ＣＡＲは、本明細書に記載のＣＤ１２３と組み合わせで使用したとき、ＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の残留性を改善する。一実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２４において下線で示すＰＤ１の細胞外ドメインを含むＰＤ１ ＣＡＲである。一実施形態において、ＰＤ１ ＣＡＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
Figure 0007219376000132
一実施形態において、ＰＤ１ ＣＡＲは、下記アミノ酸配列を含む（配列番号２２）。
Figure 0007219376000133
一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１ ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＰＤ１ ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一実施形態において、ＰＤ１ ＣＡＲの核酸配列を下に示し、ＰＤ１ ＥＣＤを下記配列番号２３で下線を引く。
Figure 0007219376000134
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞集団を提供する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、本明細書に記載の抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）を有するＣＡＲを発現する第１の細胞及び異なる抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）、例えば第１の細胞により発現されるＣＡＲにおける抗原結合ドメインと異なる本明細書に記載の抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞集団は、例えば、本明細書に記載のような、ＣＤ１２３結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及びＣＤ１２３以外の標的（例えば、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、ＦＬＴ３、ＣＤ１９、ＣＤ２０，ＣＤ２２又は葉酸受容体β）に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞、例えば共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。
別の態様において、本発明は、細胞集団を提供し、ここで、集団内の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の抗原結合ドメイン（例えば、腫瘍抗原結合ドメイン、例えばＢ細胞抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３結合ドメイン又はＣＤ１９結合ドメイン）を有するＣＡＲを発現し、第２の細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）を含む。一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子であり、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦ（例えば、ＴＧＦβ）又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインの第２のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を含む。
一態様において、本発明は、別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて、ＣＡＲ発現細胞集団、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞、例えば種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を投与することを含む方法を提供する。別の態様において、本発明は、集団内の少なくとも１つの細胞が本明細書に記載のような抗癌関連抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞が別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する細胞集団を別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の１つ以上の成分を含み、それによりＮＫＲ－ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、次のナチュラルキラー細胞受容体のいずれかに由来する膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン又は細胞質ドメインであり得る：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、例えばＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１及びＫＩＲ３ＤＰ１；天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）、例えばＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー、例えばＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ及びＣＤ２Ｆ－１０；Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＣＤ１６及びＣＤ６４；及びＬｙ４９受容体、例えばＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃ。本明細書に記載のＮＫＲ－ＣＡＲ分子は、アダプター分子又は細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ要素を含むＣＡＲ分子の例示的な配置及び配列は、国際公開第２０１４／１４５２５２号パンフレットに記載され、その内容が参照により本明細書に援用される。
スプリットＣＡＲ
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び国際公開第２０１４／０５５６５７号パンフレットにより詳細に記載されている。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は、第１の抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢ）を有する第１のＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞は、第２の抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を有する第２のＣＡＲも発現する。細胞が第１の抗原に遭遇したとき、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２の抗原に遭遇したとき、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、殺細胞活性が開始される。そのため、ＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下でのみ完全活性化される。実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原（例えば、Ｂ細胞抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９）を認識し、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインは、急性骨髄白血病細胞で発現される抗原、例えばＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体βを認識する。実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３を認識し、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインは、Ｂ細胞で発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２又はＲＯＲ１を認識する。
キメラ抗原受容体を制御するための戦略
ＣＡＲ活性が制御され得る多くの方法がある。一実施形態において、ＣＡＲ活性が制御できる制御可能ＣＡＲ（ＲＣＡＲ）は、ＣＡＲ治療の安全性及び有効性を最適化するために望ましい。例えば、例として二量体化ドメインに融合した、カスパーゼを使用するアポトーシスの誘導（例えば、Ｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１ Ｎｏｖ．３；３６５（１８）：１６７３－１６８３を参照されたい）を本発明のＣＡＲ治療における安全スイッチとして使用できる。別の例において、ＣＡＲ発現細胞は、誘導性カスパーゼ－９（ｉＣａｓｐａｓｅ－９）分子も発現でき、これは、二量体化因子薬物（例えば、ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ（ＡＰ１９０３（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＰ２０１８７（Ａｒｉａｄ）とも呼ばれる）の投与により、細胞のカスパーゼ－９活性化及びアポトーシスに至る。ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、二量体化（ＣＩＤ）結合ドメインの化学誘導因子を含み、これは、ＣＩＤの存在下で二量体化に介在する。これは、ＣＡＲ発現細胞の誘導的及び選択的枯渇に至る。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターと別の核酸分子によりコードされる。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ－９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によりコードされる。ｉＣａｓｐａｓｅ－９は、ＣＡＲ発現細胞の何らかの毒性を避けるための安全スイッチを提供できる。例えば、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８；１５（１０）：６６７－７５；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄ．Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０７９６３；及びＤｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１；３６５：１６７３－８３を参照されたい。
本発明のＣＡＲ治療を制御するための代替的戦略は、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘発により、例えばＣＡＲ発現細胞を消失させることにより、ＣＡＲ活性の脱活性化又は遮断する小分子又は抗体の利用を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えばＡＤＣＣ又は補体誘導性細胞死を誘発できる分子により認識される抗原も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体又は抗体フラグメントにより標的化され得る受容体も発現し得る。このような受容体の例は、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ－７２、ＩＬ－６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ－１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７、及びＥＧＦＲ、並びにその切断バージョン（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠くバージョン）を含む。
例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘発できる分子、例えばセツキシマブ（アービタックス（登録商標））により認識されるエピトープを保持する切断型上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）も発現し、その結果、セツキシマブの投与がＡＤＣＣ及び続くＣＡＲ発現細胞の枯渇を誘発する（例えば、国際公開第２０１１／０５６８９４号パンフレット及びＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１３；２０（８）８５３－８６０を参照されたい）。別の戦略は、例えば、ＡＤＣＣによりＣＡＲ発現細胞の選択的枯渇をもたらす、リツキシマブに結合する、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞におけるＣＤ３２及びＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープをあわせる、高度に小型のマーカー／自殺遺伝子の発現を含む（例えば、Ｐｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４（８）１２７７－１２８７を参照されたい）。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を枯渇させる他の方法は、例えば、ＡＤＣＣ誘発により、破壊するために成熟リンパ球、例えばＣＡＲ発現細胞に選択的に結合し、標的とするモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）の投与を含む。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体を使用して選択的に標的化され得る。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を引き起こし、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。他の実施形態において、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体は、細胞致死を誘発する薬剤、例えばトキシンに結合させ、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。代わりに、ＣＡＲ分子自体、下記のように、活性が制御され得る、例えば活性化又は遮断され得るように配置できる。
他の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、Ｔ細胞除去剤により認識される標的タンパク質も発現し得る。一実施形態において、標的タンパク質は、ＣＤ２０であり、Ｔ細胞除去剤は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブである。このような実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を減少又は除去する、例えばＣＡＲ誘発毒性を軽減することが望まれるときにＴ細胞除去剤を投与する。他の実施形態において、Ｔ細胞除去剤は、抗ＣＤ５２抗体、例えば本明細書での実施例に記載するようにアレムツズマブである。
他の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の標準的ＣＡＲの要素、例えば抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが別々のポリペプチド又はメンバーに配置された、一連の典型的には最も単純な実施形態において２つのポリペプチドを含む。一部の実施形態において、一連のポリペプチドは、二量体化分子の存在下で互いにポリペプチドを結合できる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。このような制御可能ＣＡＲの更なる記載及び例示的な配置は、本明細書、及び参照により本明細書にその全体が援用される国際公開第２０１５／０９０２２９号パンフレットに提供される。
一態様において、ＲＣＡＲは、２つポリペプチド又はメンバーを含む：１）例えば、本明細書に記載の初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン；２）例えば、本明細書に記載のような腫瘍抗原と特異的に結合する抗原結合ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む抗原結合メンバー。任意選択により、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達メンバー上、抗原結合メンバー上又は両方の上に配置できる。（特に断らない限り、ＲＣＡＲのメンバー又は要素が本明細書に記載されるものであるとき、順番は記載したとおりであり得るが、他の順番も同様に含まれる。換言すると、一実施形態において、順番は、本書に記載のとおりであるが、他の実施形態において、順番は、異なり得る。例えば、膜貫通領域の一端の要素の順番は、例と異なり得、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインに対するスイッチドメインの配置は、異なり、例えば逆であり得る）。
一実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、細胞内又は細胞外二量体化スイッチを形成できる。一実施形態において、二量体化スイッチは、例えば、第１及び第２のスイッチドメインが同一であるホモ二量体化スイッチ、又は例えば第１及び第２のスイッチドメインが互いに異なるヘテロ二量体化スイッチであり得る。
実施形態において、ＲＣＡＲは、「多スイッチ」を含み得る。多スイッチは、ヘテロ二量体化スイッチドメイン又はホモ二量体化スイッチドメインを含み得る。多スイッチは、複数の、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０のスイッチドメインを独立して第１のメンバー、例えば抗原結合メンバー及び第２のメンバー、例えば細胞内シグナル伝達メンバー上に含む。一実施形態において、第１のメンバーは、複数の第１のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメインを含み得、第２のメンバーは、複数の第２のスイッチドメイン、例えばＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得る。一実施形態において、第１のメンバーは、第１及び第２のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及びＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得、第２のメンバーは、第１及び第２のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及びＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得る。
一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態において、抗原結合メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態において、抗原結合メンバーは、複数の、例えば２つ又は３つの例えば４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ４０から選択される、本明細書に記載の共刺激性シグナル伝達ドメインを含み、一実施形態において、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、抗原結合メンバーは、細胞外から細胞内方向で次の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む：４－１ＢＢ－ＣＤ２７；４１－ＢＢ－ＣＤ２７；ＣＤ２７－４－１ＢＢ；４－１ＢＢ－ＣＤ２８；ＣＤ２８－４－１ＢＢ；ＯＸ４０－ＣＤ２８；ＣＤ２８－ＯＸ４０；ＣＤ２８－４－１ＢＢ；又は４－１ＢＢ－ＣＤ２８。このような実施形態において、細胞内結合メンバーは、ＣＤ３ζドメインを含む。このような実施形態において、ＲＣＡＲは、（１）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び２つの共刺激ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む抗原結合メンバー；及び（２）膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメイン及び少なくとも１つの初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
ある態様は、抗原結合メンバーがＣＡＲ細胞表面に繋留されていないＲＣＡＲを提供する。これは、細胞内シグナル伝達メンバーを有する細胞が、細胞を、抗原結合メンバーをコードする配列で形質転換する必要なく１つ以上の抗原結合ドメインと好都合に対合することを可能とする。このような実施形態において、ＲＣＡＲは、１）第１のスイッチドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；及び２）抗原結合ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む抗原結合メンバーを含み、ここで、抗原結合メンバーは、膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメインを含まず、任意選択により細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、ＲＣＡＲは、３）第２の抗原結合ドメイン、例えば抗原結合ドメインにより結合されるのと異なる抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン；及び第２のスイッチドメインを含む第２の抗原結合メンバーを更に含み得る。
抗原結合メンバーが二特異性活性化及びターゲティング能を含むＲＣＡＲも本明細書で提供される。この実施形態において、抗原結合メンバーは、複数の、例えば２つ、３つ、４つ、又は５つの抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖを含み得、ここで、各原結合ドメインは、標的抗原、例えば異なる抗原又は同じ抗原、例えば同じ抗原の同一又は異なるエピトープに結合する。一実施形態において、複数の抗原結合ドメインは、タンデムであり、任意選択により、リンカー又はヒンジ領域が抗原結合ドメインの各々の間に配置される。適当なリンカー及びヒンジ領域は、本明細書に記載される。
ある態様は、増殖のスイッチングが可能な配置を有するＲＣＡＲを提供する。この実施形態において、ＲＣＡＲは、１）任意選択により、膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメイン；例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ４０及びスイッチドメインから選択される１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；及び２）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメインを含む抗原結合メンバーを含み、ここで、抗原結合メンバーは、スイッチドメインを含まないか、又は細胞内シグナル伝達メンバー上のスイッチドメインと二量体化するスイッチドメインを含まない。一実施形態において、抗原結合メンバーは、共刺激性シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、ホモ二量体化スイッチからのスイッチドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、ヘテロ二量体化スイッチの第１のスイッチドメインを含み、ＲＣＡＲは、ヘテロ二量体化スイッチの第２のスイッチドメインを含む第２の細胞内シグナル伝達メンバーを含む。このような実施形態において、第２の細胞内シグナル伝達メンバーは、細胞内シグナル伝達メンバーと同じ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、二量体化スイッチは、細胞内である。一実施形態において、二量体化スイッチは、細胞外である。
本明細書に記載のＲＣＡＲ配置のいずれかにおいて、第１及び第２のスイッチドメインは、本明細書に記載のようなＦＫＢＰ－ＦＲＢベースのスイッチを含む。
また本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＲＣＡＲを含む細胞である。ＲＣＡＲを発現するように操作したあらゆる細胞をＲＣＡＲＸ細胞として使用できる。一実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称する。一実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称する。
ＲＣＡＲコード化配列を含む核酸及びベクターも本明細書で提供される。ＲＣＡＲの種々の要素をコードする配列は、同じ核酸分子、例えば同じプラスミド又はベクター、例えばウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターに配置できる。一実施形態において、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列及び（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列は、同じ核酸、例えばベクターに存在できる。対応するタンパク質の産生は、例えば、別々のプロモーターの使用により又はバイシストロニック転写産物（これは、単一翻訳産物の開裂又は２つの別々のタンパク質産物の翻訳により２つのタンパク質の産生を生じ得る）の使用により達成できる。一実施形態において、開裂可能ペプチドをコードする配列、例えばＰ２Ａ又はＦ２Ａ配列を（ｉ）と（ｉｉ）との間に配置する。一実施形態において、ＩＲＥＳ、例えばＥＭＣＶ又はＥＶ７１ ＩＲＥＳをコードする配列を（ｉ）と（ｉｉ）との間に配置する。これらの実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）は、単一ＲＮＡとして転写される。一実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）が別々のｍＲＮＡとして転写されるように、第１プロモーターは、（ｉ）に操作可能に連結し、第２プロモーターは、（ｉｉ）に操作可能に連結する。
代わりに、ＲＣＡＲの種々の要素をコードする配列を種々の核酸分子、例えば異なるプラスミド又はベクター、例えばウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターに配置できる。例えば、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列を第１核酸、例えば第１ベクターに配置でき、（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列は、第２核酸、例えば第２ベクターに存在できる。
二量体化スイッチ
二量体化スイッチは、非共有又は共有であり得る。非共有二量体化スイッチにおいて、二量体化分子は、スイッチドメイン間の非共有相互作用を促進する。共有二量体化スイッチにおいて、二量体化分子は、スイッチドメイン間の共有相互作用を促進する。
一実施形態において、ＲＣＡＲは、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ又はＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチを含む。ＦＫＢＰ１２（ＦＫＢＰ又はＦＫ５０６結合タンパク質）は、天然産物免疫抑制剤、ラパマイシンのための最初の細胞内標的としての役割を果たす豊富な細胞質タンパク質である。ラパマイシンは、ＦＫＢＰ及び大ＰＩ３ＫホモログＦＲＡＰ（ＲＡＦＴ、ｍＴＯＲ）に結合する。ＦＲＢは、ＦＫＢＰ－ラパマイシン複合体の結合のために十分であるＦＲＡＰの９３アミノ酸部分である（Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｘ．Ｆ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．＆Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（１９９５）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ １１－ｋＤａ ＦＫＢＰ１２－ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ２８９－ｋＤａ ＦＫＢＰ１２－ｒａｐａｍｙｃｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｓｅｒｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９２：４９４７－５１．）。
実施形態において、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えばＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチは、二量体化分子、例えばラパマイシン又はラパマイシン類似体を使用できる。
ＦＫＢＰのアミノ酸配列は、次のとおりである。
Figure 0007219376000135
実施形態において、ＦＫＢＰスイッチドメインは、ラパマイシン又はラパログ、例えば配列番号５８８の下線部分の存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント若しくは類似体と結合する能力を有するＦＫＢＰのフラグメントを含み、これは、次のとおりである。
Figure 0007219376000136
ＦＲＢのアミノ酸配列は、次のとおりである。
Figure 0007219376000137
本明細書で使用する用語「ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えばＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチ」は、ラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１の存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント若しくは類似体と結合する能力を有するＦＫＢＰフラグメント又はその類似体を含み、配列番号５８８又は５８９のＦＫＢＰ配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するか、又は３０、２５、２０、１５、１０、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸残基を超えて異ならない第１のスイッチドメイン；及びラパマイシン又はラパログの存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント若しくは類似体と結合する能力を有するＦＲＢフラグメント又はその類似体を含み、配列番号５９０のＦＲＢ配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するか、又は３０、２５、２０、１５、１０、５つ、４つ、３つ、２つ、又は１つのアミノ酸残基を超えて異ならない第２のスイッチドメインを含む二量体化スイッチを指す。一実施形態において、本明細書に記載のＲＣＡＲは、配列番号５８８（又は配列番号５８９）に開示するアミノ酸残基を含む１スイッチドメイン及び配列番号５９０に開示するアミノ酸残基を含む１スイッチドメインを含む。
実施形態において、ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化スイッチは、ＦＲＢベースのスイッチドメイン、例えば修飾ＦＲＢスイッチドメイン、ＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及び二量体化分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１間の複合体形成が変えられた、例えば増強された修飾ＦＲＢスイッチドメインを含む。一実施形態において、修飾ＦＲＢスイッチドメインは、アミノ酸位置Ｌ２０３１、Ｅ２０３２、Ｓ２０３５、Ｒ２０３６、Ｆ２０３９、Ｇ２０４０、Ｔ２０９８、Ｗ２１０１、Ｄ２１０２、Ｙ２１０５及びＦ２１０８から選択される１つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれを超える変異を含み、ここで、野生型アミノ酸は、任意の他の天然に存在するアミノ酸へ変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２に変異を含み、ここで、Ｅ２０３２は、フェニルアラニン（Ｅ２０３２Ｆ）、メチオニン（Ｅ２０３２Ｍ）、アルギニン（Ｅ２０３２Ｒ）、バリン（Ｅ２０３２Ｖ）、チロシン（Ｅ２０３２Ｙ）、イソロイシン（Ｅ２０３２Ｉ）、例えば配列番号５９１又はロイシン（Ｅ２０３２Ｌ）、例えば配列番号５９２に変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｔ２０９８に変異を含み、ここで、Ｔ２０９８は、フェニルアラニン（Ｔ２０９８Ｆ）又はロイシン（Ｔ２０９８Ｌ）、例えば配列番号５９３に変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２及びＴ２０９８に変異を含み、ここで、Ｅ２０３２は、任意のアミノ酸に変異され、Ｔ２０９８は、任意のアミノ酸に変異され、例えば配列番号５９４である。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｉ及びＴ２０９８Ｌ変異を含み、例えば配列番号５９５である。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｌ及びＴ２０９８Ｌ変異を含み、例えば配列番号５９６である。
Figure 0007219376000138
他の適当な二量体化スイッチは、ＧｙｒＢ－ＧｙｒＢベースの二量体化スイッチ、ジベレリンベースの二量体化スイッチ、タグ／バインダー二量体化スイッチ及びハロタグ／ｓｎａｐタグ二量体化スイッチを含む。本明細書に提供する手引きに従い、このようなスイッチ及び関連する二量体化分子は、当業者に明らかである。
二量体化分子
スイッチドメイン間の結合は、二量体化分子により促進される。二量体化分子存在下でのスイッチドメイン間の相互作用又は結合は、第１のスイッチドメインに結合、例えば融合したポリペプチドと、第２のスイッチドメインに結合、例えば融合したポリペプチドとの間のシグナル伝達を可能にする。非律速レベルの二量体化分子存在下で本明細書に記載のシステムにおいて測定して、シグナル伝達は、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍増加する。
ラパマイシン及びラパマイシン類似体（ラパログと称される場合もある）、例えばＲＡＤ００１は、本明細書に記載のＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチにおける二量体化分子として使用できる。一実施形態において、二量体化分子は、ラパマイシン（シロリムス）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）、ゾタロリムス、テムシロリムス、ＡＰ－２３５７３（リダフォロリムス）、バイオリムス及びＡＰ２１９６７から選択できる。ＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチで使用するのに適する更なるラパマイシン類似体は、「併用療法」と題される節又は「低用量ｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせ」と題される節に更に記載する。
ＣＡＲ及びケモカイン受容体の共発現
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ケモカイン受容体分子を更に含む。Ｔ細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂ又はＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、黒色腫及び神経芽腫を含むＣＣＬ２－又はＣＸＣＬ１分泌固形腫瘍への輸送を促進する（Ｃｒａｄｄｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０ Ｏｃｔ；３３（８）：７８０－８及びＫｅｒｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００２ Ｎｏｖ １；１３（１６）：１９７１－８０）。そのため、理論に拘束されることを望まないが、腫瘍、例えば固形腫瘍により分泌されるケモカインを認識するＣＡＲ発現細胞で発現されるケモカイン受容体は、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への帰巣を改善し、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への浸潤を促進し、ＣＡＲ発現細胞の抗腫瘍効果を増強すると考えられる。ケモカイン受容体分子は、天然に存在する又は組み換えケモカイン受容体又はそのケモカイン結合フラグメントを含む。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞における発現に適するケモカイン受容体分子は、ＣＸＣケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６又はＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０又はＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例えば、ＣＸ３ＣＲ１）、ＸＣケモカイン受容体（例えば、ＸＣＲ１）又はそのケモカイン結合フラグメントを含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲと共に発現するケモカイン受容体分子は、腫瘍により発現されるケモカインに基づいて選択する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＣＲ２ｂ受容体又はＣＸＣＲ２受容体を更に含み、例えば発現する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、同じベクターにあるか又は２つの異なるベクターにある。本明細書に記載のＣＡＲ及びケモカイン受容体分子が同じベクターにある実施形態において、ＣＡＲ及びケモカイン受容体分子は、それぞれ２つの異なるプロモーターの制御下にあるか又は同じプロモーターの制御下にある。
ＲＮＡトランスフェクション
インビトロで転写されたＲＮＡ ＣＡＲを産生する方法が本明細書に開示される。本発明は、細胞に直接遺伝子導入できるＲＮＡ構築物をコードするＣＡＲも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを産生する方法は、特異的に設計したプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続くポリＡ付加を含み、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現させる核酸及びポリＡテールを含む構築物、典型的には５０～２０００塩基長（配列番号３５）を産生し得る。このように産生されたＲＮＡは、異なる種の細胞において効率的に翻訳され得る。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
一態様において、本明細書に記載のＣＡＲ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。一態様において、ＣＡＲ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲをコードするｍＲＮＡをＣＡＲＴ細胞産生のためにＴ細胞に導入する。
ＲＮＡトランスフェクションの更なる方法は、その全体が参照により本明細書に援用される、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレットの１９２～１９６ページに記載されている。
非ウイルス送達方法
いくつかの態様において、非ウイルス方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を細胞、又は組織、又は対象に送達できる。
一実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転位因子とも呼ばれる）の使用を含む。一実施形態において、トランスポゾンは、ゲノムの位置にそれ自体挿入できるＤＮＡの断片、例えば自己複製性であり、そのコピーをゲノムに挿入することができるＤＮＡの断片又は長い核酸の外にスプライシングされ、ゲノムの別の場所に挿入され得るＤＮＡの断片である。
付加的且つ例示的なトランスポゾン及び非ウイルス送達方法は、その全体が参照により本明細書に援用される、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレットの１９６～１９８ページに記載されている。
ＣＡＲをコードする核酸構築物
本明細書に記載の任意の方法又は組成物に従って、ＣＡＲは、核酸構築物によってコードされ得る。１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする例示的な核酸分子は、本明細書に記載されている。実施形態において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。実施形態において、核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
実施形態において、核酸分子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子を含み、ここで、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ヒト化又はヒトＣＤ１２３又はＣＤ１９結合ドメイン）、膜貫通ドメイン並びに刺激性ドメイン、例えば共刺激性シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばζ鎖を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態において、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３結合ドメイン）は、本明細書に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３結合ドメイン）、例えば配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含むＣＤ１２３結合ドメインである。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３及び４８５からなる群から選択される配列を含むヒトＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１８４～２１５及び５５６～５８７からなる群から選択される配列を含むヒト化ＣＤ１２３結合ドメインを含む。
一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７、又は７８０からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む抗ＣＤ１９結合ドメインである。
一実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４からなる群から選択される、例えば本明細書に記載のタンパク質の膜貫通ドメインである。一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域、例えば本明細書に記載のヒンジによって接続されている。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号２、若しくは配列番号３、若しくは配列番号４、若しくは配列番号５、又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態において、単離核酸分子は、共刺激性ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激性ドメインは、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、例えば本明細書に記載のタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインである。
一実施形態において、共刺激ドメインは、配列番号７の配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列若しくは配列番号８又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列及び配列番号９若しくは配列番号１０の配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される。
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）からなる群から選択される配列を有するｓｃＦｖドメイン、配列番号２、又は配列番号３、又は配列番号４、又は配列番号５（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）のヒンジ領域、配列番号６の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列を有する４－１ＢＢ共刺激性ドメイン又は配列番号８の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、又は配列番号４３の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ２８共刺激性ドメイン、又は配列番号４５の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有するＩＣＯＳ共刺激性ドメイン）及び配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激性ドメイン（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を含む、ＣＡＲ構築物をコードする単離核酸分子に関する。
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７及び７８０（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）からなる群から選択される配列を有するｓｃＦｖドメイン、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１６又は配列番号３９のヒンジ領域（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）、配列番号６の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有する４－１ＢＢ共刺激性ドメイン又は配列番号８の配列（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、及び配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激性ドメイン（又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列）を含む、ＣＡＲ構築物をコードする単離核酸分子に関する。
別の態様において、本発明は、核酸分子によりコードされる単離ポリペプチド分子に関する。一実施形態において、単離ポリペプチド分子は、配列番号９８～１０１及び１２５～１５６からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
別の態様において、本発明は、核酸分子によりコードされる単離ポリペプチド分子に関する。一実施形態において、単離ポリペプチド分子は、配列番号７５８～７６９、７７３、７７６、７７８、７７９及び７８１からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
別の態様において、本発明は、ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激性ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子をコードする核酸分子に関し、ここで、前記ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５及び５５６～５８７からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１５７～１６０、４７８、４８０、４８３及び４８５からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含むヒトＣＤ１２３結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、配列番号１８４～２１５及び５５６～５８７からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含むヒト化ＣＤ１２３結合ドメインを含む。別の態様において、本発明は、抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激性ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子をコードする単離核酸分子に関し、ここで、抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸は、配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７及び７８０からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態において、コード化ＣＡＲ分子は、共刺激性ドメインをコードする配列を更に含む。一実施形態において、共刺激性ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、タンパク質の機能的シグナル伝達ドメインである。一実施形態において、共刺激性ドメインは、配列番号７の配列を含む。
一実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインである。
一実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６の配列を含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及びζの機能的シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７の配列及び配列番号９の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される。一実施形態において、ＣＤ１２３結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域によって結合されている。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号２を含む。一実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号３、又は配列番号４、又は配列番号５を含む。
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号１５７～１６０、１８４～２１５、４７８、４８０、４８３、４８５、５５６～５８７からなる群から選択される配列を有するｓｃＦｖドメイン、又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％、同一性を有する配列、配列番号２、又は配列番号３、又は配列番号４、又は配列番号５のヒンジ領域、配列番号６の配列を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列を有する４－１ＢＢ共刺激性ドメイン、又は配列番号８の配列を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、又は配列番号４３の配列を有するＣＤ２８共刺激性ドメイン、又は配列番号４５の配列を有するＩＣＯＳ共刺激性ドメイン及び配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激性ドメインを含むコード化ＣＡＲ分子に関する。一実施形態において、コード化ＣＡＲ分子は、配列番号９８～１０１及び１２５～１５６からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列、配列番号７１０～７２１、７３４～７４５、７７１、７７４、７７５、７７７、及び７８０からなる群から選択される配列を有するｓｃＦｖドメイン、又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号１６、又は配列番号３９のヒンジ領域、配列番号６の配列を有する膜貫通ドメイン、配列番号７の配列を有する４－１ＢＢ共刺激性ドメイン、又は配列番号８の配列を有するＣＤ２７共刺激性ドメイン、及び配列番号９又は配列番号１０の配列を有するＣＤ３ζ刺激性ドメインを含む単離ＣＡＲ分子に関する。一実施形態において、コード化ＣＡＲ分子は、配列番号７１０～７２１、７５８～７６９、７７１及び７７３～７９２からなる群から選択される配列又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技術を使用して、例えば遺伝子を発現する細胞からのライブラリのスクリーニングにより、それを含むことが知られるベクターからの遺伝子を誘導化することにより又はそれを含むことが知られる細胞及び組織から直接単離することによるような、組み換え当技術分野で知られる方法を使用して得ることができる。代わりに、目的の遺伝子をクローン化ではなく合成により産生できる。
ベクター
本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ－レトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。更に低免疫原性であるという付加的利点も有する。レトロウイルスベクターは、例えば、γレトロウイルスベクターでもあり得る。γレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２）末端反復配列（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えばＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。γレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖなどのウイルス構造的遺伝子を欠き得る。例示的なγレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）及びそれら由来のベクターを含む。他のγレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ Ｍａｅｔｚｉｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１ Ｊｕｎ；３（６）：６７７－７１３に記載される。
別の実施形態において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙ、ｃｒｉｓｐｅｒ、ＣＡＳ９及び亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。参照により本明細書に包含される下記のＪｕｎｅ ｅｔ ａｌ．２００９ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９．１０：７０４－７１６を参照されたい。
概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
本発明の構築物の発現は、標準遺伝子送達プロトコルを使用する核酸免疫化及び遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子送達のための方法が当技術分野で知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第５，３９９，３４６号明細書、同第５，５８０，８５９号明細書、同第５，５８９，４６６号明細書を参照されたい。別の実施形態において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシークエンシングベクターを含む。
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ １ －４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
多数のウイルスベースの系が哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組み換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当技術分野で知られている。一実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。一実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。
更なるプロモーター要素、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０～１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間は、多くの場合、可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。
哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲ導入遺伝子の発現ができるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子－１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された導入遺伝子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。一態様において、ＥＦ１ａプロモーターは、配列番号１１として提供される配列を含む。
プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子－１□プロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに活性化し、発現が望まれないときに遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
プロモーターの別の例は、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、切断ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき、１つ以上、例えば１つ、２つ、５つ、１０、１００、２００、３００又は４００のヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいことがある。ＰＧＫプロモーター例のヌクレオチド配列を下に提供する。
ＷＴ ＰＧＫプロモーター
Figure 0007219376000139
 例示的な切断型ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：
Figure 0007219376000140
 ＰＧＫ２００：
Figure 0007219376000141
 ＰＧＫ３００：
Figure 0007219376000142
 ＰＧＫ４００：
Figure 0007219376000143
ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野で知られる他のもの）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。
ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両方を含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用される。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．，２０００ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２）。適当な発現系は、周知であり、既知技術により製造できるか又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用され得る。
一実施形態において、ベクターは、第２のＣＡＲをコードする核酸を更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、ＦＬＴ３又は葉酸受容体βなど、急性骨髄白血病細胞に発現される標的に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ベクターは、第１の抗原を標的とし、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第１のＣＡＲをコードする核酸配列を含み、第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸配列を含む。一実施形態において、ベクターは、ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性ドメインを含む第１のＣＤ１２３ ＣＡＲをコードする核酸及びＣＤ１２３以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＬＬ－１、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。別の実施形態において、ベクターは、ＣＤ１２３結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＤ１２３ ＣＡＲをコードする核酸及びＣＤ１２３以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ３３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）を標的とし、その抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。
一実施形態において、ベクターは、本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲをコードする核酸及び阻害性ＣＡＲをコードする核酸を含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばまたＣＤ１２３を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβの細胞内ドメインであり得る。
実施形態において、ベクターは、２つ以上の核酸ＣＡＲをコードする配列、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えば阻害性ＣＡＲ又はＣＤ１２３以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体β）に特異的に結合するＣＡＲを含み得る。このような実施形態において、２つ以上のＣＡＲをコードする核酸配列は、同じフレームにおいて単一核分子により且つ単一のポリペプチド鎖としてコード化される。この態様において、２つ以上のＣＡＲは、例えば、１つ以上のペプチド開裂部位により分けられ得る（例えば、自己開裂部位又は細胞内プロテアーゼのための基質）。ペプチド開裂部位の例は、次のものを含み、ここで、ＧＳＧ残基は、任意選択である。
Ｔ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｅ Ｇ Ｒ Ｇ Ｓ Ｌ Ｌ Ｔ Ｃ Ｇ Ｄ Ｖ Ｅ Ｅ Ｎ Ｐ Ｇ Ｐ（配列番号６０２）
Ｐ２Ａ：（ＧＳＧ）Ａ Ｔ Ｎ Ｆ Ｓ Ｌ Ｌ Ｋ Ｑ Ａ Ｇ Ｄ Ｖ Ｅ Ｅ Ｎ Ｐ Ｇ Ｐ（配列番号６０３）
Ｅ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｑ Ｃ Ｔ Ｎ Ｙ Ａ Ｌ Ｌ Ｋ Ｌ Ａ Ｇ Ｄ Ｖ Ｅ Ｓ Ｎ Ｐ Ｇ Ｐ（配列番号６０４）
Ｆ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｖ Ｋ Ｑ Ｔ Ｌ Ｎ Ｆ Ｄ Ｌ Ｌ Ｋ Ｌ Ａ Ｇ Ｄ Ｖ Ｅ Ｓ Ｎ Ｐ Ｇ Ｐ（配列番号６０５）
細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野の任意の方法により、宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段により、宿主細胞に移入され得る。
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照されたい）。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入に好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞への遺伝子挿入に最も広く使用される方法となってきている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書及び同第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段は、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散体系を含む。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための代表的コロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。標的化ナノ粒子又は他の適当なサブミクロンサイズの送達系を用いるポリヌクレオチドの送達など、最新式の核酸の標的化送達の他の方法が利用可能である。
非ウイルス送達系を利用する場合、代表的送達媒体は、リポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入のために意図される（インビトロ、エクスビボ又はインビボ）。別の態様において、核酸は、脂質と結合され得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの水性内部への被包、リポソームの脂質二重層内への分散、リポソームとオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介するリポソームへの結合、リポソームへの封入、リポソームとの複合体化、脂質含有溶液への分散、脂質との混合、脂質との組み合わせ、脂質中の懸濁液としての包含、ミセル内への包含又は複合体化又は他の方法で脂質と結合する。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造において、ミセルとして又は「崩壊」構造を有して存在し得る。それらはまた、単に溶液に分散され、恐らくサイズ又は形状が均一ではない凝集体を形成し得る。脂質は、天然に存在する又は合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素を含む化合物群及びその誘導体を含む。
使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から得ることができる。クロロホルム又はクロロホルム／メタノール中の脂質の原液を約－２０℃で保存できる。クロロホルムを、メタノールよりも容易に揮発するために唯一の溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層又は凝集体の産生により形成される多様な単及び多層状脂質媒体を包含する一般的用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜及び内部水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられ得る。多層状リポソームは、水性媒体により分離された、複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自然に形成される。脂質要素は、閉構造形成前に自己凝集し、水及び溶解した溶質を脂質二重層の間に封入する（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５：５０５－１０）。しかしながら、通常の小胞構造と異なる構造を溶液で有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であるか又は単に脂質分子の不均一凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン－核酸複合体も考慮される。
外来性核酸を宿主細胞に導入するか又はそうでなければ細胞を本発明の阻害剤に曝す方法に関係なく、宿主細胞における組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために多様なアッセイを行い得る。このようなアッセイは、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、薬剤の同定に使用するための、例えば免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）により、特定のペプチドの存在又は不在を検出するような「生化学的」アッセイ又は本発明の範囲内に入る本明細書に記載のアッセイを含む。
本発明は、ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを更に提供する。一態様において、ＣＡＲベクターを細胞、例えば免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入し得る。一態様において、ベクターは、クローニング又は発現ベクター、例えば１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳動物免疫エフェクター細胞、例えば哺乳動物Ｔ細胞又は哺乳動物ＮＫ細胞においてＣＡＲ構築物の発現ができる。一態様において、哺乳動物Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。
細胞の供給源
増殖及び遺伝的改変又は他の改変前に細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）の供給源を対象から得ることができる。用語「対象」は、免疫応答が惹起できる生存生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種を含む。
実施形態において、免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞集団）、例えばＴ細胞は、幹細胞、例えば胚性幹細胞又は多能性幹細胞、例えば人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来（例えば、分化）する。実施形態において、細胞は、自己又は同種である。細胞が同種である実施形態において、例えば幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）由来細胞を改変して、そのアロ反応性を低減する。例えば、細胞を、例えばＴ細胞受容体の改変（例えば、破壊）により、アロ反応性を低減するように改変できる。実施形態において、部位特異的ヌクレアーゼを使用して、例えばＴ細胞分化後にＴ細胞受容体を破壊できる。他の例において、細胞、例えばｉＰＳＣ由来Ｔ細胞をウイルス特異的Ｔ細胞から産生でき、これは、病原体由来抗原の認識により、移植片対宿主病を引き起こす可能性が低い。更に他の例において、アロ反応性を、適合、無関係レシピエント対象と組織適合性であるように、共通ＨＬＡハプロタイプからのｉＰＳＣの産生により、減少、例えば最小化できる。更に他の例において、アロ反応性を、遺伝子改変によりＨＬＡ発現を抑制することより、減少、例えば最小化できる。例えば、ｉＰＳＣ由来Ｔ細胞を、例えば参照により本明細書に援用されるＴｈｅｍｅｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１．１０（２０１３）：９２８－３５に記載のとおり処理できる。ある例において、幹細胞由来免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１６５７０７号パンフレットに記載音方法を使用して処理／産生できる。同種細胞が関係する更なる実施形態は、本明細書において、例えば本明細書の「同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞」の節に記載される。
Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。
本発明の一態様において、当技術分野で利用可能な任意の数の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）系を使用し得る。本発明の一態様において、Ｔ細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に知られるあらゆる技術を使用して、対象から採取した血液の単位から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れる。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ Ｘｅｎｏ－ｆｒｅｅ ＣＴＳ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。
一態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離又は向流遠心溶出法により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的下位集団を陽性又は陰性選択技術により更に単離し得る。例えば、一態様において、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズとインキュベーションすることにより単離する。一態様において、時間は、約３０分である。更なる態様において、時間は、３０分～３６時間又はそれより長い範囲及びその間の任意の整数値である。更なる態様において、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。別の好ましい態様において、時間は、１０～２４時間である。一態様において、インキュベーション時間は、２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。更に、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短くするか若しくは長くし、及び／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加若しくは減少させる（更に本明細書に記載のとおり）ことにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。複数回の選択も本発明で使用できることを当業者は認識する。一態様において、選択過程を実施し、「未選択」細胞を活性化及び増殖過程で使用することが望ましいことがある。「未選択」細胞も更なる選択に付され得る。
陰性選択によるＴ細胞集団富化は、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。一態様において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞について富化又は陽性選択することが望ましいことがある。代わりに、一態様において、Ｔ制御性細胞を抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似選択法により枯渇させる。
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ－２を使用して集団から除去する。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
一実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９～１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２－０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
一実施形態において、製造法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。
一実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＰＤ１、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ及びＬＡＩＲ１を含む。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序の順番でも生じ得る。
一実施形態において、Ｔ細胞ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０ｅ６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ～１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２～１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後凍結させ得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で－８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接－２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
一態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本発明の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどの細胞療法、例えばＴ細胞治療からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、Ｔ細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本発明に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ－ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
一実施形態において、免疫エフェクターＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤を受けた対象から得る。一実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作される免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
他の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作する免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のｍＴＯＲ阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処理できる。
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現せず、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ－９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞
本明細書に記載の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲデルタ、ＴＣＲイプシロン及び／又はＴＣＲζの発現がない（又は発現の減少を示す）ように操作される）、又はその表面に微少の機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異した又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」は、このＴＣＲが宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。
本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。いくつかの態様において、ＨＬＡの下方制御は、β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の発現の減少又は排除を伴い得る。
一実施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。
機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用したＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。
一実施形態において、同種細胞は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにより、阻害性分子を発現しないか又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下できる、阻害分子を発現しないか又は阻害分子を低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載の阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用できる。
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、細胞におけるＴＣＲ、及び／又はＨＬＡ、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。
Ｔ細胞におけるｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの発現は、例えば、レンチウイルス発現系などの任意の慣用の発現系を使用して達成できる。
ＴＣＲの１つ以上の要素の発現を下方制御する代表的ｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２０１２／０３２１６６７号明細書に記載されている。ＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩ遺伝子の発現を下方制御する代表的ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２００７／００３６７７３号明細書に開示されている。
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
本明細書で使用する「ＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、一連の群生性等間隔短回文反復配列又はこのような一連の反復を含む系を指す。本明細書で使用する「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の発現抑制又は変異に使用できる、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ由来の系を指す。
天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％及び配列決定された古細菌の９０％に見られる。Ｇｒｉｓｓａ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ８：１７２。この系は、プラスミド及びファージなどの外来遺伝的要素に対する抵抗性を付与する１種の原核生物免疫系であり、後天性免疫の形態を提供する。Ｂａｒｒａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１５：１７０９－１７１２；Ｍａｒｒａｇｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２２：１８４３－１８４５。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、マウス又は霊長類などの真核生物における遺伝子エディティング（特定の遺伝子のサイレンシング、増強又は変更）に使用するために改変されている。Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ ４８２：３３１－８。これは、真核細胞に、特別に設計したＣＲＩＳＰＲ及び１つ以上の適切なＣａｓを含むプラスミドを導入することにより達成される。
ＣＲＩＳＰＲ座位と呼ばれることもあるＣＲＩＳＰＲ配列は、交互の反復及びスペーサーを含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲにおいて、スペーサーは、通常細菌に対して外来であるプラスミド又はファージ配列などの配列を含み、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系において、スペーサーは、ＴＣＲ又はＨＬＡ遺伝子配列に由来する。
ＣＲＩＳＰＲ座位からのＲＮＡは、構成的に発現され、Ｃａｓタンパク質により小ＲＮＡに加工される。これらは、反復配列が隣接したスペーサーを含む。ＲＮＡは、他のＣａｓタンパク質をＲＮＡ又はＤＮＡレベルで外来性遺伝的要素に対して発現抑制するように導く。Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２７：１６７－１７０；Ｍａｋａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｄｉｒｅｃｔ １：７。スペーサーは、そのため、ｓｉＲＮＡに類似して、ＲＮＡ分子の鋳型としての役割を果たす。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８３３－８３６。
多くの異なるタイプの細菌で自然に生じるように、ＣＲＩＳＰＲの正確な配置及び構造、Ｃａｓ遺伝子の機能及び数及びそれらの産物は、種毎にいくぶん異なる。Ｈａｆｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．１：ｅ６０；Ｋｕｎｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．８：Ｒ６１；Ｍｏｊｉｃａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．６０：１７４－１８２；Ｂｏｌｏｔｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：２５５１－２５６１；Ｐｏｕｒｃｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：６５３－６６３；及びＳｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ．Ｇｅｎｅｔ．２８：３３５－３４０。例えば、Ｃｓｅ（Ｃａｓサブタイプ、大腸菌）タンパク質（例えば、ＣａｓＡ）は、機能的複合体、Ｃａｓｃａｄｅを形成し、これは、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ転写物を、Ｃａｓｃａｄｅが保持するスペーサー－反復単位に加工する。Ｂｒｏｕｎｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：９６０－９６４。他の原核生物において、Ｃａｓ６は、ＣＲＩＳＰＲ転写物を加工する。大腸菌におけるＣＲＩＳＰＲベースのファージ不活性化は、Ｃａｓｃａｄｅ及びＣａｓ３を必要とするが、Ｃａｓ１又はＣａｓ２を必要としない。パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）及び他の原核生物におけるＣｍｒ（Ｃａｓ ＲＡＭＰモジュール）タンパク質は、小ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡと機能的複合体を形成し、これは相補的標的ＲＮＡを認識し、開裂する。より単純なＣＲＩＳＰＲ系は、二重らせんの各鎖のための２活性切断部位を有するヌクレアーゼであるタンパク質Ｃａｓ９に依存する。Ｃａｓ９と修飾ＣＲＩＳＰＲ座位ＲＮＡの組み合わせを遺伝子エディティングのための系に使用できる。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８３３－８３６。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子を編集でき、（塩基対の付加又は欠失）又は未成熟終止を導入でき、これは、そうしてＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を減少させる。代わりに、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系をＲＮＡ干渉のように使用し、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子を可逆性形式でオフにできる。哺乳動物細胞において、例えば、ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質をＴＣＲ及び／又はＨＬＡプロモーターに導くことができ、ＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断する。
当技術分野で知られる技術、例えば米国特許出願公開第２０１４００６８７９７号明細書及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３に記載のものを使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を産生できる。例えば、Ｔｓａｉ（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：６ ５６９－５７６、米国特許第８，８７１，４４５号明細書；同第８，８６５，４０６号明細書；同第８，７９５，９６５号明細書；同第８，７７１，９４５号明細書；及び同第８，６９７，３５９号明細書に記載されるもののような、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する当技術分野で知られる他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系も産生できる。
ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ
「ＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、ＨＬＡ、及び／又はＴＣＲ遺伝子、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼを指す。
ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ開裂ドメインを融合することにより人工的に産生される。転写アクティベータ様効果（ＴＡＬＥ）は、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子の部分を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に結合するように操作できる。操作されたＴＡＬＥとＤＮＡ開裂ドメインを合わせることにより、ＨＬＡ又はＴＣＲ配列を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を産生できる。次いで、これらを細胞に導入でき、そこで、それらは、ゲノムエディティングのために使用され得る。Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５－６；及びＢｏｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０９－１２；Ｍｏｓｃｏｕ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：３５０１。
ＴＡＬＥは、ザントモナス細菌により分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目及び１３番目のアミノ酸以外、反復した高度に保存的な３３～３４アミノ酸配列を含む。これらの２箇所は、高度に可変であり、特定のヌクレオチド認識と強い相関を示す。それらは、従って、所望のＤＮＡ配列と結合するように操作され得る。
ＴＡＬＥＮを産生するために、ＴＡＬＥタンパク質を、野生型又は変異ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）と融合する。ＴＡＬＥＮにおいて使用するために、ＦｏｋＩについていくつかの変異が行われており、これらは、例えば、開裂特異性又は活性の改善を含む。Ｃｅｒｍａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１－７３４；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７４－７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６－７９３；及びＧｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６。
ＦｏｋＩドメインは、二量体として機能し、適切な配向及び間隔を有する標的ゲノムにおける部位のための独特なＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩ開裂ドメインとの間のアミノ酸残基数及び２の個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基数の両方が高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであると考えられる。Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８。
ＨＬＡ又はＴＣＲ ＴＡＬＥＮを細胞内で使用して二重鎖切断（ＤＳＢ）を産生できる。変異は、修復機構が切断を非相同末端結合により不適切に修復する場合、切断部位に導入できる。例えば、不適切な修復は、フレームシフト変異を導入し得る。代わりに、外来ＤＮＡをＴＡＬＥＮと共に細胞に導入でき、外来ＤＮＡの配列及び染色体配列により、この方法は、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子における欠損の補正、又はｗｔ ＨＬＡ、又はＴＣＲ遺伝子におけるこのような欠損の導入に使用でき、そうしてＨＬＡ又はＴＣＲの発現を減少させる。
ＨＬＡ又はＴＣＲにおける配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー要素を使用する多様なスキームを含む、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９－５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６：ｅ１９５０９。
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するための亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
「ＺＦＮ」、又は「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＺＦＮ」は、ＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである亜鉛フィンガーヌクレアーゼを指す。
ＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋＩヌクレアーゼドメイン（又はその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上の亜鉛フィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １８８：７７３－７８２；及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１１５６－１１６０。
亜鉛フィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンにより安定化される小タンパク質構造モチーフである。亜鉛フィンガーは、例えば、Ｃｙｓ２Ｈｉｓ２を含むことができ、約３ｂｐ配列を認識できる。既知特異性の多様な亜鉛フィンガーを合わせて、約６ｂｐ、９ｂｐ、１２ｂｐ、１５ｂｐ又は１８ｂｐ配列を認識する多フィンガーポリペプチドを産生できる。ファージディスプレイ、酵母ワンハイブリッド系、細菌ワンハイブリッド及びツーハイブリッド系及び哺乳動物細胞を含む、特異的配列を認識する亜鉛フィンガー（及びそれらの組み合わせ）を産生するための多様な選択及びモジュラーアセンブリー技術が利用可能である。
ＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡを開裂するために二量体化しなければならない。そのため、ＺＦＮの対が非パリンドロームＤＮＡ部位を標的とすることが必要である。２の各々のＺＦＮは、そのヌクレアーゼが適切に離れて、ＤＮＡの逆の鎖に結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：１０５７０－５。
またＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡに二重鎖切断を創製でき、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を創製でき、細胞におけるＨＬＡ及び／又はＴＣＲの発現及び量の減少に至る。ＺＦＮは、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子における変異のために相同組換えとも使用できる。
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲにおける配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。Ｃａｔｈｏｍｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００－７；Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書を参照されたい。
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、治療的Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアのために患者における残留性が短く、従って、テロメラーゼ遺伝子を用いるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ Ｊｕｎｅ，“Ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６－１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、異所性にテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。いくつかの態様において、本開示は、細胞をテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前に、同時に又は後に核酸と接触させ得る。
一態様において、本開示は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を製造する方法に関する。一実施形態において、本方法は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、免疫エフェクター細胞集団を、ＣＡＲをコードする核酸と接触させ、免疫エフェクター細胞集団をテロメラーゼサブユニット、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と、ＣＡＲ及びテロメラーゼ発現を可能とする条件下で接触させることを含む。
一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡである。一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、テロメラーゼサブユニットの発現を駆動できるプロモーターを含む。
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、以下のようにＧｅｎＢａｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＩＤ ＡＡＣ５１７２４．１のアミノ酸配列を有する（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ Ｃａｔａｌｙｔｉｃ Ｓｕｂｕｎｉｔ Ｇｅｎｅ，Ｉｓ Ｕｐ－Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｄｕｒｉｎｇ Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ Ｖｏｌｕｍｅ ９０，Ｉｓｓｕｅ ４，２２ Ａｕｇｕｓｔ １９９７，Ｐａｇｅｓ ７８５－７９５）。
Figure 0007219376000144
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号６０６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６＾、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号６０６の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方に欠失（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方にトランスジェニックアミノ酸配列（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＦ０１８１６７の核酸配列によりコードされる（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ Ｃａｔａｌｙｔｉｃ Ｓｕｂｕｎｉｔ Ｇｅｎｅ，Ｉｓ Ｕｐ－Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｄｕｒｉｎｇ Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ Ｖｏｌｕｍｅ ９０，Ｉｓｓｕｅ ４，２２ Ａｕｇｕｓｔ １９９７，Ｐａｇｅｓ ７８５－７９５）。
Figure 0007219376000145
Figure 0007219376000146
Figure 0007219376000147
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号６０７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６、９７％、９８％又は９９％同一である配列を有する核酸によりコードされる。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号６０７の核酸によりコードされる。
細胞の活性化及び増殖
細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載する方法を使用して、一般的に活性化及び増殖できる。
一般に、本発明のＴ細胞を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面とＴ細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドを使用する。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３，１９９９）。
一態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本発明におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本発明の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１～約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１～１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。本発明の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。本発明の一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１ ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
１：５００～５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００～１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９～９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１～１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１～１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４～１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本発明に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約１００億細胞／ｍｌ、９０億／ｍｌ、８０億／ｍｌ、７０億／ｍｌ、６０億／ｍｌ、５０億／ｍｌ又は２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、及び特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）～約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一実施形態において、細胞は、４～９日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又は本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又は本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ又は本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ細胞を発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ－γ及び／又はＧＭ－ＣＳＦレベルを示す。一実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又は本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ－γ及び／又はＧＭ－ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
本発明の一態様において、混合物を数時間（約３時間）～約１４日又はその間の任意の時間的整数値だけ培養し得る。一態様において、混合物を２１日培養し得る。本発明の一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に約８日培養する。一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に２～３日培養する。Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ－α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ－ｖｉｖｏ １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ－アセチル－システイン、及び２－メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ １６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ１５及びＸ－Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
一実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一実施形態において、細胞は、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７（例えば、ＩＬ－１５及びＩＬ－７）の存在下で増殖させる。
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ－２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７の存在下で増殖させる。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドとＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ－１５ポリペプチド及びＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物と接触させる。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ－１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ－１５ポリペプチド及びＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８～９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８～９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）が構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）の効果を評価するためのアッセイは、以下に更に詳細に記載する。
初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現のウェスタンブロット分析を、単量体及び二量体の存在を検出するために使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＣＡＲを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合物）をインビトロで１０日超増殖させ、続いて溶解及び還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥを行う。全長ＴＣＲ－ζ細胞質ドメイン及び内因性ＴＣＲ－ζ鎖を含むＣＡＲを、ＴＣＲ－ζ鎖に対する抗体を使用するウェスタンブロッティングにより検出する。同じＴ細胞サブセットを、共有結合性二量体形成の評価を可能とするために非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析に使用する。
抗原刺激後のＣＡＲ＋Ｔ細胞のインビトロ増殖をフローサイトメトリーにより測定できる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物をαＣＤ３／αＣＤ２８ ａＡＰＣで刺激し、続いて分析すべきプロモーターの制御下において、ＧＦＰを発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。代表的プロモーターは、ＣＭＶ ＩＥ遺伝子、ＥＦ－１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。ＧＦＰ蛍光を、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの培養６日目にフローサイトメトリーにより評価する。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。代わりに、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を０日目にαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズで刺激し、２Ａリボソームスキッピング配列を使用するＣＡＲとｅＧＦＰを発現するバイシストロニックレンチウイルスベクターを使用して、１日目にＣＡＲを形質導入する。培養物を、洗浄後、ＣＤ１９＋Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２－ＣＤ１９）、野生型Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２野生型）又は抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体存在下ｈＣＤ３２及び４－１ＢＢＬを発現するＫ５６２細胞（Ｋ５６２－ＢＢＬ－３／２８）で再刺激する。外来性ＩＬ－２を１００ＩＵ／ｍｌにおいて隔日で培養物に添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ビーズベースの計数を使用するフローサイトメトリーにより数える。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。他の抗原を認識するＴ細胞（例えば、抗ＣＤ１２３ Ｔ細胞）（例えば、Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ Ｂｌｏｏｄ ２０１４；１２３：２３４３を参照されたい）を用いて、又は他の抗原に対するＣＡＲＴ細胞（例えば、抗ＣＤ１２３ ＣＡＲ Ｔ細胞）と共に類似のアッセイを実施することができる。
再刺激非存在下の持続するＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖も測定できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）を、０日目のαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズでの刺激及び１日目の記載するＣＡＲの形質導入後、培養８日目にＣｏｕｌｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ ＩＩＩ粒子カウンター、Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｖｉｓｉｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｃｅｐｔｅｒを使用して測定する。
動物モデルもＣＡＲＴ活性の測定に使用できる。例えば、免疫欠損マウスにおける初代ヒトプレＢ ＡＬＬを処置するための、ヒトＣＤ１９特異的ＣＡＲ＋Ｔ細胞を使用する異種移植モデルを使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＡＬＬ確立後、マウスを処置群に無作為化する。異なる数のαＣＤ１９－ζ及びαＣＤ１９－ＢＢ－ζ操作Ｔ細胞を、Ｂ－ＡＬＬを担持するＮＯＤ－ＳＣＩＤ－γ－／－マウスに１：１の比で共注射する。マウスからの脾臓ＤＮＡにおけるαＣＤ１９－ζ及びαＣＤ１９－ＢＢ－ζベクターのコピー数をＴ細胞注射後種々の時点で評価する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。末梢血ＣＤ１９＋Ｂ－ＡＬＬ芽細胞数を、αＣＤ１９－ζ ＣＡＲ＋Ｔ細胞又は偽形質導入Ｔ細胞を注射したマウスで測定する。ログ・ランク検定を使用して、群の生存曲線を比較する。更に、ＮＯＤ－ＳＣＩＤ－γ－／－マウスへのＴ細胞注射４週間後の絶対的末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数も分析し得る。マウスに白血病性細胞を注射し、３週間後、ｅＧＦＰに連結したＣＡＲをコードするバイシストロニックレンチウイルスベクターによりＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を注射する。Ｔ細胞を、注入ＧＦＰ＋Ｔ細胞の４５～５０％に、注射前に偽形質導入細胞と混合することにより標準化し、フローサイトメトリーにより確認する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＣＡＲ＋Ｔ細胞群の生存曲線を、ログ・ランク検定を使用して比較する。類似の実験を他のＣＡＲＴ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲＴで実施できる。
用量依存的ＣＡＲ処置応答を評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。例えば、２１日目にＣＡＲ Ｔ細胞、等しい数の偽形質導入Ｔ細胞で処置した又はＴ細胞処置なしの、マウスにおいて白血病が確立した後３５～７０日後に末梢血を得る。各群からのマウスを末梢血ＣＤ１９＋ＡＬＬ芽細胞数の決定のために無作為に採血し、３５日目及び４９日目に屠殺する。残りの動物を５７日目及び７０日目に評価する。類似の実験を他のＣＡＲＴ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲＴで実施できる。
細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）に以前に記載されている。簡潔には、ＣＡＲ介在増殖の評価を、洗浄したＴ細胞と、ＣＤ１９（Ｋ１９）又はＣＤ３２及びＣＤ１３７（ＫＴ３２－ＢＢＬ）を発現するＫ５６２細胞とを最終Ｔ細胞：Ｋ５６２比２：１で混合することによりマイクロタイタープレートにおいて実施する。Ｋ５６２細胞を使用前にガンマ線で照射する。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン９．３）モノクローナル抗体を、これらのシグナルがエクスビボでの長期ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を支持するため、刺激Ｔ細胞増殖について陽性対照として役立つＫＴ３２－ＢＢＬ細胞の培養物に添加する。Ｔ細胞を、製造者により記載のとおりＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びフローサイトメトリーを使用して培養において数える。ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、ｅＧＦＰ－２Ａ連結ＣＡＲ発現レンチウイルスベクターで操作されたＴ細胞を使用するＧＦＰ発現により同定する。ＧＦＰを発現しないＣＡＲ＋Ｔ細胞について、ＣＡＲ＋Ｔ細胞をビオチニル化組み換え抗原（例えば、ＣＤ１２３タンパク質又はＣＤ１９タンパク質）及び二次アビジン－ＰＥコンジュゲートにより検出する。Ｔ細胞のＣＤ４＋及びＣＤ８＋発現も、特異的モノクローナル抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同時に検出する。サイトカイン測定を、製造業者の指示に従ってヒトＴＨ１／ＴＨ２サイトカイン細胞数測定ビーズアレイキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して再刺激２４時間後に回収した上清で又はＬｕｍｉｎｅｘ ３０－ｐｌｅｘキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して実施する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターを使用して蛍光を評価し、データを製造業者の指示に従って分析する。類似の実験を他のＣＡＲＴ、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲＴで実施できる。
細胞毒性を標準的５１Ｃｒ放出アッセイにより評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、標的細胞（Ｋ５６２株及び初代プロＢ－ＡＬＬ細胞）に５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ４として、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を３７℃で２時間、頻繁に撹拌しながら充填し、完全ＲＰＭＩで２回洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞をウェル中で完全ＲＰＭＩ中に標的細胞と種々のエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で混合する。更なる培地のみ（自発的放出、ＳＲ）又はｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １００洗剤１％溶液（全放出、ＴＲ）を含むウェルも調製する。３７℃で４時間のインキュベーション後、各ウェルから上清を回収する。放出された５１Ｃｒを、次いでガンマ粒子カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して測定する。各条件を少なくとも３回行い、溶解のパーセントを式：溶解％＝（ＥＲ－ＳＲ）／（ＴＲ－ＳＲ）（式中、ＥＲは、各実験条件で放出された平均５１Ｃｒを示す）を使用して計算する。
造影技術を使用して、腫瘍担持動物モデルにおけるＣＡＲの特異的輸送及び増殖を評価できる。このようなアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２２：１５７５－１５８６（２０１１）に記載されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ－／－（ＮＳＧ）マウスにＮａｌｍ－６細胞をＩＶ注射し、７日後、ＣＡＲ構築物でエレクトロポレーションから４時間後にＴ細胞を注射する。Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現するようにレンチウイルス構築物で安定にトランスフェクトされ、マウスをバイオルミネセンスについて造影する。代わりに、Ｎａｌｍ－６異種移植モデルにおけるＣＡＲ＋Ｔ細胞の単回注射の治療有効性及び特異性を次のように測定できる。ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するように形質導入したＮａｌｍ－６を注射し、続いて７日後にＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）で電気穿孔したＴ細胞を１回尾静脈注射する。動物を注射後の種々の時点で造影する。例えば、５日目（処置２日前）及び８日目（ＣＡＲ＋ＰＢＬ後２４時間）に代表的マウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性白血病の光子密度ヒートマップを作成できる。
米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（参照により本明細書に援用される）の実施例の節に記載のもの、並びに当技術分野で公知のものを含む他のアッセイも本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）構築物の評価に使用できる。
ここに開示する方法の代わりに又はこれと組み合わせて、ＣＡＲリガンドの使用を含む、ＣＡＲ発現細胞（例えば、インビトロ又はインビボ（例えば、臨床モニタリング））、免疫細胞増殖及び／又は活性化及び／又はＣＡＲ特異的選択の１つ以上の検出及び／又は定量のための方法及び組成物が開示される。１つの例示的実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ分子に結合する、例えばＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに結合する抗体である（例えば、抗原結合ドメインに結合する抗体、例えば抗イディオタイプ抗体；又は細胞外結合ドメインの定常領域に結合する抗体）。他の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ抗原分子である（例えば、本明細書に記載のようなＣＡＲ抗原分子）。
一態様において、ＣＡＲ発現細胞を検出及び／又は定量する方法が開示される。例えば、ＣＡＲリガンドは、インビトロ又はインビボでＣＡＲ発現細胞の検出及び／又は定量に使用できる（例えば、患者におけるＣＡＲ発現細胞の臨床モニタリング又は患者への投薬）。方法は、ＣＡＲリガンド（任意選択により、標識ＣＡＲリガンド、例えばタグ、ビーズ、放射活性又は蛍光標識を含むＣＡＲリガンド）を提供すること；ＣＡＲ発現細胞を取得すること（例えば、製造試料又は臨床試料などのＣＡＲ発現細胞含有試料の取得）；ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドとを、結合が生じる条件下で接触させ、それにより存在するＣＡＲ発現細胞のレベル（例えば、量）を検出することを含む。ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドとの結合は、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡなどのような標準技術を使用して検出できる。
別の態様において、増殖及び／又は活性化細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を増殖する方法が開示される。方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、第１のＣＡＲ発現細胞又は一過性に発現されるＣＡＲ細胞）を提供すること；前記ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンド、例えば本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドとを、免疫細胞増殖及び／又は増殖が生じる条件下で接触させ、それにより活性化及び／又は増殖集団を産生することを含む。
一実施形態において、ＣＡＲリガンドが存在する（例えば、基質、例えば天然に存在しない基質に固定化又は結合される）。一実施形態において、基質は、非細胞基質である。非細胞基質は、例えば、プレート（例えば、マイクロタイタープレート）、膜（例えば、ニトロセルロース膜）、マトリックス、チップ又はビーズから選択される固体支持体であり得る。実施形態において、ＣＡＲリガンドは、基質に存在する（例えば、基質表面上）。ＣＡＲリガンドを基質に共有非共有（例えば、架橋）により固定、結合又は会合させ得る。一実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ビーズに結合（例えば、共有結合）する。前記実施形態において、免疫細胞集団をインビトロ又はエクスビボで増殖できる。方法は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ分子のリガンド存在下で免疫細胞集団を培養することを更に含み得る。
他の実施形態において、細胞を増殖及び／又は活性化する方法は、更に第２の刺激性分子、例えばＣＤ２８の添加を含む。例えば、ＣＡＲリガンド及び第２の刺激性分子を基質、例えば１つ以上のビーズに固定し、それにより細胞増殖及び／又は活性化を増加させ得る。
更に別の態様において、ＣＡＲ発現細胞を選択又は富化する方法を提供する。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドを接触させ、ＣＡＲリガンドの結合に基づいて細胞を選択することを含む。
更に他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を枯渇、減少及び／又は死滅する方法が提供される。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドとを接触させ、及び細胞をＣＡＲリガンドの結合に基づいてターゲティングし、それによりＣＡＲ発現細胞の数を減らす及び／又は殺傷することを含む。一実施形態において、ＣＡＲリガンドは、毒性剤と結合する（例えば、トキシン又は細胞除去剤）。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を生じ得る。
本明細書に開示する方法において使用できる例示的な抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレット及びＪｅｎａ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｄｅｔｅｃｔ ＣＤ１９－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ”，ＰＬＯＳ Ｍａｒｃｈ ２０１３ ８：３ ｅ５７８３８に記載され、その内容が参照により本明細書に援用される。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、抗ＣＤ１９抗体分子、例えば抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖを認識する。例えば、抗イディオタイプ抗体分子は、Ｊｅｎａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｍａｒｃｈ ２０１３ ８：３ ｅ５７８３８に記載のＣＤ１９特異的ＣＡＲ ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と結合について競合でき；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と同じＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義又はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ定義の組み合わせを使用して１つ以上、例えば全てのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＣＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３）を有し得；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１のような１つ以上の（例えば、２）可変領域を有し得るか又はＣＤ１９特異的ＣＡＲ ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１を含み得る。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、Ｊｅｎａ ｅｔ ａｌ．に記載の方法により製造した。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗イディオタイプ抗体分子である。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、１３６．２０．１などの国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗体分子と同じＣＤＲ（例えば、１つ以上、例えば全てのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＣＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３）を有し；国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットの抗体分子の１つ以上の（例えば、２）可変領域を有し得るか又は１３６．２０．１などの国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗体分子を含み得る。他の実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載のようなＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域に結合する。一実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、ＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域、例えば重鎖定常領域（例えば、ＣＨ２－ＣＨ３ヒンジ領域）又は軽鎖定常領域に結合する。例えば、一実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の２Ｄ３モノクローナル抗体と結合について競合し、２Ｄ３と同じＣＤＲ（例えば、１つ以上、例えば全てのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＣＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３）を有するか、又は２Ｄ３の１つ以上の（例えば、２）可変領域を有するか、又は国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載のような２Ｄ３を含む。
いくつかの態様及び実施形態において、本明細書における組成物及び方法は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、２０１４年７月３１日出願の米国特許出願第６２／０３１，６９９号明細書に記載のようなＴ細胞の特定のサブセットのために最適化される。一実施形態において、Ｔ細胞の最適化サブセットは、対照Ｔ細胞、例えば同じ構築物を発現する異なるタイプ（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）のＴ細胞と比較して残留性の増強を示す。
一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＩＣＯＳドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ８＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば４－１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又はＩＣＯＳドメイン以外の共刺激ドメインを含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、例えば本明細書に記載の抗原、例えばＣＤ１２３に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、例えば表１１Ａ又は表１２ＡのＣＡＲである。
一態様において、本明細書に記載されるのは、対象、例えば癌を有する対象を処置する方法である。方法は、前記対象に、有効量の、
１）ＣＡＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３、例えば表１１Ａ、表１２Ａ、又は表１２Ｂの抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第１の共刺激ドメイン、例えばＩＣＯＳドメイン
を含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）、及び
２）ＣＡＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３、例えば表１１Ａ、表１２Ａ、又は表１２Ｂの抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第２の共刺激ドメイン、例えば４－１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン、又はＩＣＯＳドメイン以外の別の共刺激ドメイン
を含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）
を投与することを含み、ここで、ＣＡＲＣＤ４＋とＣＡＲＣＤ８＋とは、互いに異なる。
任意選択により、方法は、
３）ＣＡＲを含む第２のＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメイン、例えばＣＤ１２３、例えば表１１Ａ、表１２Ａ、又は表１２Ｂ ９の抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
第２のＣＡＲＣＤ８＋が、ＣＡＲＣＤ８＋上に存在しない細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、ＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）を投与することを含む。
ＣＡＲ発現細胞を産生するための方法及び組成物
本開示は、特定の態様において、ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ）を発現するように操作し得る免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を作製する方法も提供し、この方法は、免疫エフェクター細胞集団を提供すること、及びキナーゼ阻害剤（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、又はＴＹＫ２）の標的を阻害するのに十分な条件下で免疫エフェクター細胞をキナーゼ阻害剤（例えば、ルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤）と接触させることを含む。方法は、免疫エフェクター細胞を、ＣＡＲ分子をコードする核酸と接触させる、例えば形質導入することを更に含み得る。
いくつかの態様において、本開示は、細胞又は細胞集団をキナーゼ阻害剤、例えばルキソリチニブなどのＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤と接触させること、及びＣＡＲ分子が発現されるような条件下において、ＣＡＲ分子をコードする核酸を細胞又は細胞集団に導入（例えば、形質導入）することを含む、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞又は細胞集団）を作製する方法を提供する。
ＣＡＲ発現細胞を産生する方法の特定の実施形態において、核酸によってコードされるＣＡＲ分子は、本明細書に記載の抗原、例えば本明細書に記載の腫瘍抗原、例えばＢ細胞抗原、例えばＣＤ１２３に結合するＣＡＲ分子である。実施形態において、方法は、細胞又は少なくとも細胞の亜集団がＣＡＲ分子を発現することを可能にする条件下で単数又は複数の細胞を培養することを更に含む。実施形態において、細胞は、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞であり、又は細胞集団は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞若しくはその両方を含む。実施形態において、この方法は、単数又は複数の細胞をＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤と（例えば、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～６０、又は６０～１２０分間）接触させること、及びその後、単数又は複数の細胞からキナーゼ阻害剤の大部分又は全部を除去することを含む。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、単数又は複数の細胞が採取された後、又は単数又は複数の細胞が刺激される前に添加される。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路中の少なくとも１つのキナーゼを阻害するマルチキナーゼ阻害剤である。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、ＪＡＫ１阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＪＡＫ３阻害剤、又はＴＹＫ２阻害剤である。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、又はＴＹＫ２に特異的である。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、ルキソリチニブ、ＡＧ４９０、ＡＺＤ１４８０、トファシチニブ（タソシチニブ又はＣＰ－６９０５５０）、ＣＹＴ３８７、フェドラチニブ、バリシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ７０１）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）、ＸＬ０１９、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、ＢＭＳ９１１５４３、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３）、デセモチニブ（Ｖ－５０９）、ＩＮＣＢ３９１１０、ＧＥＮ１、ＧＥＮ２、ＧＬＰＧ０６３４、ＮＳ０１８、及びＮ－（シアノメチル）－４－［２－（４－モルホリノアニリノ）ピリミジン－４－イル］ベンズアミド、又はその薬学的に許容される塩である。実施形態では、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、ルキソリチニブである。
いくつかの態様において、本開示は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤（例えば、ルキソリチニブ）及びＣＡＲ分子又はＣＡＲ分子をコードする核酸を含む反応混合物も提供する。いくつかの実施形態において、反応混合物は、免疫エフェクター細胞集団を更に含む。
いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫エフェクター細胞がＣＡＲ分子を発現するか、又はＣＡＲ分子をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴキナーゼ阻害剤は、ルキソリチニブ、ＡＧ４９０、ＡＺＤ１４８０、トファシチニブ（タソシチニブ又はＣＰ－６９０５５０）、ＣＹＴ３８７、フェドラチニブ、バリシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ７０１）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）、ＸＬ０１９、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、ＢＭＳ９１１５４３、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３）、デセモチニブ（Ｖ－５０９）、ＩＮＣＢ３９１１０、ＧＥＮ１、ＧＥＮ２、ＧＬＰＧ０６３４、ＮＳ０１８、及びＮ－（シアノメチル）－４－［２－（４－モルホリノアニリノ）ピリミジン－４－イル］ベンズアミド、又はその薬学的に許容される塩から選択される。実施形態において、反応混合物は、癌細胞、例えば血液癌細胞を含む。癌細胞は、例えば、免疫エフェクター細胞が対象から採取されたときに対象から採取された細胞であり得る。
実施形態において、本明細書に記載の反応混合物は、緩衝液又は他の試薬、例えばＰＢＳ含有溶液を更に含む。実施形態では、反応混合物は、細胞集団を活性化及び／又は増殖する薬剤、例えばＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及び／又は細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを更に含む。実施形態において、薬剤は、抗ＣＤ３抗体、又はそのフラグメント、及び／又は抗ＣＤ２８抗体、又はそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズである。実施形態では、反応混合物は、増殖及び／又は生存率についての１つ以上の因子を更に含み、これは、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ－α、又は細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む。実施形態では、反応混合物は、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７を更に含む。実施形態において、反応混合物中の複数の細胞集団は、ＣＡＲコード配列、例えばＣＤ１２３ ＣＡＲコード配列、例えば本明細書に記載のものを含む、核酸分子、例えば本明細書に記載の核酸分子を含む。実施形態において、反応混合物中の複数の細胞集団は、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＤ１２３ ＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを含む。実施形態において、ベクターは、本明細書に記載のベクター、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターからなる群から選択される。実施形態において、反応混合物は、例えば、糖、オリゴ糖、多糖及びポリオール（例えば、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、グルコース及びデキストラン）、塩及びクラウンエーテルなどの抗凍結剤又は安定剤を更に含む。一実施形態では、抗凍結剤はデキストランである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の作製方法は、免疫エフェクター細胞集団を、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸、例えばｈＴＥＲＴと接触させることを更に含む。テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡであり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される作製方法は、２％ｈＡＢ血清を含む血清中で免疫エフェクター細胞集団を培養することを更に含む。
治療適用
本明細書に記載の任意の方法に従って、実施形態において、対象は、癌、例えば血液癌又は固形癌を有する。実施形態において、本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載の癌を処置するために使用され得る。実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤、例えばルキソリチニブは、癌を処置するためにＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）と組み合わせて使用される。
本発明は、中でも例えば癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態、又は抗原（例えば、ＣＤ１２３）を発現する細胞が関係する非癌関連徴候を含む、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する疾患又は抗原（例えば、ＣＤ１２３）を発現する細胞と関係する状態を処置するための組成物及び方法を提供する。一態様において、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、ＡＭＬ、骨髄異形成症候群、ＡＬＬ、慢性骨髄白血病、芽細胞性形質細胞様樹状細胞新生物、骨髄増殖性新生物、ホジキンリンパ腫などを含むが、これらに限定されない。実施形態において、ＣＤ１２３の発現と関係する疾患は、例えば、非定型及び／又は非古典的癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性ＣＤ１２３の発現と関係する疾患を含むが、これらに限定されない。抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する非癌関連徴候も包含され得る。
一態様において、本発明は、抗原の発言（例えば、ＣＤ１２３発現）と関係する疾患を処置する方法を提供する。一態様において、本発明は、疾患を処置する方法を提供し、ここで、腫瘍の一部が抗原（例えば、ＣＤ１２３）陰性であり、腫瘍の一部が抗原（例えば、ＣＤ１２３）陽性である。例えば、本明細書に記載のＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現増加と関係する疾患の処置を受けている対象の処置に有用であり、ここで、抗原（例えば、ＣＤ１２３）のレベル上昇について処置を受けている対象は、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の上昇したレベルと関係する疾患を有する。実施形態において、ＣＡＲは、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する疾患の処置を受けている対象の処置に有用であり、ここで、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現に関する処置を受けている対象は、抗原（例えば、ＣＤ１２３）の発現と関係する疾患を示す。
一態様において、ＣＡＲ発現細胞が、抗原に応答して活性化し、癌細胞を標的とし、ここで、腫瘍の増殖が阻害されるように、腫瘍細胞をＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞））と接触させることを含む、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現）腫瘍細胞の増殖を阻害する方法が本明細書で提供される。方法は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤の投与を含み得る。
一態様において、本発明は、対象における癌を処置する方法に関する。方法は、癌が対象において処置されるように、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞））を対象に投与することを含む。細胞治療は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて提供される。ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）により処置可能な癌の例は、ＣＤ１２３の発現と関係する癌である。ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）により処置可能な癌の例は、ＡＭＬ、ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、慢性骨髄白血病及び他の骨髄増殖性新生物又は芽細胞性形質細胞様樹状細胞新生物などを含むが、これらに限定されない。
本開示は、ある種の細胞治療を含み、ここで、免疫エフェクター細胞、例えば免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に改変され、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞））は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。細胞治療は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて提供される。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ修飾Ｔ細胞又はＣＡＲ修飾ＮＫ細胞は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞又はその子孫は、患者において、患者に免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
本発明は、ある種の細胞治療も含み、ここで、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように例えばインビトロ転写ＲＮＡにより改変され、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ ＮＫ細胞）は、それを必要とするレシピエントに注入される。細胞治療は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて提供される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与した免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、患者に免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満持続する。
何らかの特定の理論に拘束されないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞により惹起される抗腫瘍免疫応答は、能動的又は受動的免疫応答であり得るか又は代わりに直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＤ１２３を発現するヒト癌細胞に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解性活性を示し、可溶性ＣＤ１２３阻害に抵抗し、バイスタンダー細胞死に介在し、確立されたヒト腫瘍の退縮に介在する。例えば、ＣＤ１２３発現腫瘍の不均一な場における抗原低腫瘍細胞は、近辺の抗原陽性癌細胞に対して先に反応している癌関連抗原のＣＤ１２３再指向免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）による間接的破壊を受け得る。
一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化及び／又はインビボ治療のための１種のワクチンである。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
エクスビボ免疫化に関して、次の少なくとも１つは、哺乳動物に細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を投与する前にインビトロで起こる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）細胞へのＣＡＲをコードする核酸の導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。
エクスビボ過程は、当技術分野で周知であり、下により詳細に記載する。簡潔には、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に記載するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的に改変（即ちインビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を提供できる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに対して同種、同系又は異種であり得る。
参照により本明細書に援用される米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載する造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖のための方法を本発明の細胞に適用できる。他の適当な方法は、当技術分野で知られ、従って、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、（１）哺乳動物からの採取した末梢血又は髄外植体からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞回収、及び（２）エクスビボでのこのような細胞の増殖を含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載される細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ－１、ＩＬ－３及びｃ－ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用できる。
エクスビボ免疫化の点で細胞ベースのワクチンを使用するのに加えて、本発明は、患者における抗原に対する免疫応答を惹起するための、インビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。
一般に、本明細書に記載のような細胞活性化及び増殖は、免疫不全状態である個体で惹起する疾患の処置及び予防に利用し得る。特に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、本明細書に記載の疾患、障害及び症状、例えば本明細書に記載の抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９の発現に関連する障害又は症状の処置に使用される。特定の態様において、本発明の細胞は、本明細書に記載の疾患、障害及び症状、例えば本明細書に記載の抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９の発現に関連する障害又は症状を発症するリスクがある患者の処置に使用される。そのため、本発明は、処置を必要とする対象に、本明細書に記載のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の治療有効量をＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、本明細書に記載の疾患、障害及び状態、例えば本明細書に記載の抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９の発現と関係する疾患、障害及び状態の処置又は予防のための方法を提供する。
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態の処置に使用し得る。一態様において、癌は、血液癌、前白血病状態、過増殖性障害、過形成又は細胞の異常増殖により特徴付けられる異形成である。
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を癌の処置に使用し、ここで、癌は、血液癌である。血液癌状態は、白血病及び血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌である。
一態様において、組成物及び本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、骨髄白血病、ＡＭＬ及びそのサブタイプ、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）、組織球性障害及び肥満細胞障害の処置に特に有用である。
抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）細胞集団の増殖を阻害する又は低減する方法も本明細書において提供され、方法は、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）細胞を含む細胞集団を、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）細胞に結合するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）と接触させることを含む。特定の一態様において、本発明は、抗原（例えば、ＣＤ１２３又はＣＤ１９）を発現する癌細胞集団の増殖を阻止するか又は減らす方法を提供し、方法は、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）癌細胞集団を、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）に結合するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）と接触させることを含む。一態様において、本発明は、抗原（例えば、ＣＤ１２３）を発現する癌細胞集団の増殖を阻止するか又は減らす方法を提供し、方法は、抗原発現（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現）癌細胞集団を、抗原発現細胞に結合するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）と接触させることを含む。一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現細胞）は、細胞及び／又は癌細胞の含量、数、量又はパーセンテージを、陰性対照と比較して、骨髄性白血病又は抗原発現細胞（例えば、ＣＤ１２３発現細胞又はＣＤ１９発現細胞）と関係する別の癌を有する対象又は動物モデルで少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％減少させる。一態様において、対象は、ヒトである。
本発明は、抗原発現細胞（例えば、ＣＤ１２３発現細胞又はＣＤ１９発現細胞）と関係する疾患（例えば、抗原、例えばＣＤ１２３又はＣＤ１９を発現する血液癌又は非定型癌）を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）を投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。様々な抗原、例えばＣＤ１２３発現細胞と関係する障害の非限定的例は、自己免疫性障害（狼瘡など）、炎症性障害（アレルギー及び喘息など）及び癌（抗原、例えばＣＤ１２３を発現する血液癌又は非定型癌など）を含む。
本発明は、抗原発現細胞（例えば、ＣＤ１２３発現細胞又はＣＤ１９発現細胞）と関係する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）を投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
本発明は、抗原発現細胞（例えば、ＣＤ１２３発現又はＣＤ１９発現細胞）と関係する癌の再発を予防する方法を提供し、方法は、それを必要とする対象に、抗原発現細胞と結合する本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）をＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて投与することを含む。一態様において、方法は、処置を必要とする対象に、抗原発現細胞と結合する有効量の本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）を有効量の別の治療（例えば、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤）と組み合わせて投与することを含む。
骨髄除去
一態様において、本発明は、骨髄除去のための組成物及び方法を提供する。例えば、一態様において、本発明は、対象において存在する骨髄の少なくとも一部を除去するための組成物及び方法を提供する。ある状況において、本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲを含むＣＡＲＴ１２３細胞は、ＣＤ１２３陽性骨髄前駆細胞を根絶することが本明細書に記載される。
一態様において、本発明は、骨髄除去を必要とする対象に例えばＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤と組み合わせて本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を投与することを含む、骨髄除去の方法を提供する。例えば、本方法は、骨髄移植又は骨髄再コンディショニングが有益な処置戦略である、疾患又は障害を有する対象の存在する骨髄の一部又は全ての根絶に使用し得る。一態様において、本明細書の他の箇所に記載するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の投与を含む本発明の骨髄除去方法を骨髄移植前に対象に実施する。そのため、一態様において、本発明の方法は、骨髄又は幹細胞移植前の細胞コンディショニングレジメンを提供する。一態様において、骨髄移植は、幹細胞の移植を含む。骨髄移植は、自己又は同種細胞の移植を含み得る。
本発明は、存在する骨髄の少なくとも一部を除去するための、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）又はＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＤ１９ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞を投与することを含む、疾患又は障害を処置する方法を提供する。方法は、骨髄移植が有益である何らかの疾患又は障害の処置レジメンの少なくとも一部として使用され得る。即ち、本方法を、骨髄移植を必要とするあらゆる対象に使用し得る。一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の投与を含む骨髄除去は、ＡＭＬの処置において有用である。一態様において、本方法による骨髄除去は、血液癌、固形腫瘍、血液学的疾患、代謝障害、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、リソソーム蓄積障害及び免疫不全の処置に有用である。
本明細書に開示する組成物及び方法を使用して、存在する骨髄の少なくとも一部を除去し、白血病、リンパ腫、骨髄腫、ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＣＬＬ、ＣＭＬ、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫及び多発性骨髄腫を含むが、これらに限定されない血液癌を処置する。
本明細書に開示する組成物及び方法を、とりわけ、骨髄異形成、貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、再生不良性貧血、後天性赤芽球貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニー貧血、血球減少、無巨核球性血小板減少症、骨髄増殖性障害、真性多血症、本態性血小板増加症、骨髄線維症、異常ヘモグロビン症、鎌状赤血球疾患、重症型βサラセミアを含むが、これらに限定されない血液学的疾患の処置に使用し得る。
本明細書に開示する組成物及び方法を、リピドーシス、スフィンゴリピドーシス、白質ジストロフィー、ムコ多糖症、糖タンパク代謝異常症、小児神経セロイドリポフスチン沈着症、ヤンスキー・ビールショースキー病、ニーマン・ピック病、ゴーシェ病、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、クラッベ病、ハーラー症候群、シャイエ症候群、ハーラー・シャイエ症候群、ハンター症候群、サンフィリポ症候群、モルキオ症候群、マロトー・ラミー症候群、スライ症候群、ムコリピドーシス、フコリピドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、α－マンノース症及びウォルマン病を含むが、これらに限定されないリソソーム蓄積障害の処置に使用し得る。
本明細書に開示する組成物及び方法を、Ｔ細胞欠損、複合型Ｔ細胞及びＢ細胞欠損、ファゴサイト障害、免疫調節不全疾患、生得的免疫欠損、毛細血管拡張性運動失調症、ディジョージ症候群、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、コストマン症候群、シュワックマン・ダイアモンド症候群、グリシェリ症候群及びＮＦ－カッパ－Ｂ必須モジュレーター（ＮＥＭＯ）欠損を含むが、これらに限定されない免疫不全の処置に使用し得る。
一態様において、本発明は、骨髄コンディショニングを含む癌を処置する方法を提供し、ここで、対象の骨髄の少なくとも一部は、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞、又はＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＤ１９ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）により除去される。例えば、ある例において、対象の骨髄は、ＣＡＲ発現細胞の活性により標的化され、除去され得る悪性前駆体細胞を含む。一態様において、骨髄コンディショニング治療は、天然骨髄の除去後、対象に骨髄又は幹細胞移植を投与することを含む。一態様において、骨髄再コンディショニング治療を、抗腫瘍ＣＡＲ療法、化学療法、放射線などを含むが、これらに限定されない１つ以上の他の抗癌療法と組み合わせる。
一態様において、投与したＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＤ１２３ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞、又はＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞若しくはＣＤ１９ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の根絶は、骨髄又は幹細胞移植の注入前に必要であり得る。ＣＡＲ発現細胞の根絶を、自殺遺伝子、ＣＡＲをコードするＲＮＡを使用するＣＡＲ残留性の制限又は抗体若しくは化学療法を含む抗Ｔ細胞モダリティを含むが、これらに限定されない、あらゆる適当な戦略又は処置を使用して達成し得る。
血液癌
血液癌状態は、白血病、リンパ腫、並びに血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌の種類である。
一実施形態において、血液癌は、白血病である。一実施形態において、癌は、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＢＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（ＴＡＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を包含する、１種又は複数の急性白血病；これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を包含する、１種又は複数の慢性白血病；これらに限定されないが、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せもつ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」を包含する追加の血液癌又は血液学的状態からなる群から選択される。
白血病は、急性白血病及び慢性白血病に分類できる。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として更に分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連する状態は、骨髄球性血液細胞の産生不良（又は異形成）によりまとめられる血液学的状態の多様な集合であり、ＡＭＬに癌化するリスクがある骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病状態」として知られる）である。
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。代表的リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む。
一態様において、本発明は、血液癌を有する哺乳動物を処置する方法であって、ＣＡＲ分子（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ分子又はＣＤ１９ ＣＡＲ分子）を発現する細胞、例えばＣＡＲ分子（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ又はＣＤ１９ ＣＡＲ）及びＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤を発現する細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
ある態様において、本発明の組成物及びＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、非ホジキンリンパ腫、例えばＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、又はＣＬＬなどのＢ細胞悪性腫瘍を処置するのに特に有用である。いくつかの場合において、本発明の組成物及びＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、ＡＭＬを処置するのに特に有用である。
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、Ｂ細胞又はＴ細胞のいずれかから形成される、リンパ球の癌の群である。ＮＨＬは、あらゆる年齢で起こり、多くの場合、正常なものより大きいリンパ節、体重減少及び発熱を特徴とする。異なるＮＨＬ型は、中悪性度（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）（急速進行）及び低悪性度（緩徐進行）型として大別される。Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、及びマントル細胞リンパ腫を包含する。Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫の例としては、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、及び前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。骨髄又は幹細胞移植後に起こるリンパ腫は、典型的にはＢ細胞非ホジキンリンパ腫である。例えば、Ｍａｌｏｎｅｙ．ＮＥＪＭ．３６６．２１（２０１２）：２００８－１６を参照されたい。
びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）は、Ｂ細胞から発生するＮＨＬの一形態である。ＤＬＢＣＬは、リンパ節内又はリンパ系の外部、例えば胃腸管、精巣、甲状腺、皮膚、乳房、骨又は脳において生じ得る中悪性度リンパ腫である。ＤＬＢＣＬでは、細胞の形状の３つの変異体、中心芽球型、免疫芽球型及び未分化型が一般に観察される。中心芽球型の形状が最もよく見られ、最小の細胞質を伴う中～大型リンパ球の外観を有する。ＤＬＢＣＬにはいくつかの亜型がある。例えば、原発性中枢神経系リンパ腫は、もっぱら脳を冒すＤＬＢＣＬの１つの型を指し、脳外の領域を冒すＤＬＢＣＬとは別ものとして処置される。ＤＬＢＣＬのもう１つの型は、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫であり、これは、多くの場合、若年患者において起こり、胸部で急速に進行する。ＤＬＢＣＬの症状としては、肥大したリンパ節に起因する頸部、腋窩部又は鼠径部における無痛の急速な腫脹が挙げられる。一部の対象については、腫脹が有痛であることもある。ＤＬＢＣＬの他の症状としては、寝汗、原因不明の発熱、及び体重減少が挙げられる。ＤＬＢＣＬを有するほとんどの患者は、成人であるが、この疾患が小児において起こることもある。ＤＬＢＣＬの処置としては、化学療法（例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、エトポシド）、抗生物質（例えば、リツキサン）、放射線、又は幹細胞移植が挙げられる。
非ホジキンリンパ腫の１つの型である濾胞性リンパ腫は、少なくとも部分的に濾胞性のパターンを有する濾胞中心Ｂ細胞（セントロサイト及び中心芽球）のリンパ腫である。濾胞性リンパ腫細胞は、Ｂ細胞マーカーＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２を発現する。濾胞性リンパ腫細胞は、一般に、ＣＤ５に関して陰性である。形態学的には、濾胞性リンパ腫腫瘍は、セントロサイト（くびれのある濾胞中心細胞又は小細胞とも呼ばれる）と中心芽球（くびれのない大型濾胞中心細胞又は大細胞とも呼ばれる）の混合物を含有する濾胞で構成されている。濾胞は、非悪性細胞、主にＴ細胞によって包囲されている。濾胞は、主としてセントロサイトを含有し、少数の中心芽細胞を有する。世界保健機関（ＷＨＯ）は、形態学的にこの疾患を次のように分類している：グレード１［高倍率視野（ｈｐｆ）当たり＜５個の中心芽球］、グレード２（６～１５個の中心芽球／ｈｐｆ）、グレード３（＞１５個の中心芽球／ｈｐｆ）。グレード３は、以下のグレードに更に細分される：グレード３Ａ（セントロサイトが依然として存在する）、グレード３Ｂ（濾胞がほぼ全て中心芽球からなる）。濾胞性リンパ腫の処置としては、化学療法、例えばアルキル化剤、ヌクレオシド類似体、アントラサイクリン含有レジメン、例えばＣＨＯＰと呼ばれる併用療法－シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン／プレドニゾロン、抗体（例えば、リツキシマブ）、放射免疫療法、及び造血幹細胞移植が挙げられる。
ＣＬＬは、骨髄、血液、リンパ節及び脾臓における新生物細胞増殖及び蓄積を特徴とするＢ細胞悪性腫瘍である。ＣＬＬの診断時の年齢中央値は、約６５歳である。現行の処置としては、化学療法、放射線療法、生物学的療法、又は骨髄移植が挙げられる。症状は、外科的に（例えば、肥大した脾臓の脾摘出術での除去）、又は放射線療法（例えば、腫脹したリンパ節を減量すること）によって処置されることもある。ＣＬＬを処置するための化学療法剤としては、例えば、フルダラビン、２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、シクロホスファミド、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ）、ドキソルビシン及びプレドニゾンが挙げられる。ＣＬＬのための生物学的療法としては、抗体、例えばアレムツズマブ、リツキシマブ及びオファツムマブ；並びにチロシンキナーゼ阻害剤療法が挙げられる。多数の基準、例えばＲａｉ又はＢｉｎｅｔシステムを使用して、ＣＬＬの病期を分類することができる。Ｒａｉシステムは、５つの病期を有するものとして（ｈａｓ ｈａｖｉｎｇ）ＣＬＬを説明する：リンパ球増加のみが存在する病期０；リンパ節腫大が存在する病期Ｉ；巨脾症、リンパ節腫大、又は両方が存在する病期ＩＩ；貧血、臓器肥大、又は両方が存在する病期ＩＩＩ（進行は体重減少、疲労、発熱、広範囲の臓器肥大、及びリンパ球数急増によって定義される）；及び貧血、血小板減少症、臓器肥大、又はこれらの組み合わせが存在する病期ＩＶ。Ｂｉｎｅｔ病期分類システムのもとには３つのカテゴリーがある：リンパ球増加が存在し、３つ未満のリンパ節が肥大している病期Ａ（この病期は、Ｒａｉ病期０の患者全て、Ｒａｉ病期Ｉの患者の半分、及びＲａｉ病期ＩＩの患者の３分の１を含む）；３つ以上のリンパ節が罹患している病期Ｂ；及び貧血若しくは血小板減少症、又は両方が存在する病期Ｃ。これらの分類システムを免疫グロブリン遺伝子の変異の測定値と併用して、その疾患の状況のより正確な特徴付けを行うことができる。変異した免疫グロブリン遺伝子の存在は、予後改善と相関する。
別の実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、例えば、白血病幹細胞を用いて、癌又は白血病を処置するために使用される。例えば、白血病幹細胞は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－白血病細胞である。
一態様において、組成物及び本発明のＣＡＲ発現細胞（ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、骨髄白血病、ＡＭＬ及びそのサブタイプ、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）、組織球性障害及び肥満細胞障害の処置に特に有用である。
白血病は、急性白血病及び慢性白血病に分類できる。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として更に分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連する状態は、骨髄球性血液細胞の産生不良（又は異形成）によりまとめられる血液学的状態の多様な集合であり、ＡＭＬに癌化するリスクがある骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病状態」として知られる）である。
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。代表的リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む。
ＡＭＬにおいて、悪性形質転換及び異常に分化した長命骨髄前駆細胞の未制御な増殖は、未熟血液形態の高循環数及び正常骨髄の悪性細胞による置き換えに至る。症状は、疲労、蒼白、易皮下出血及び出血、発熱及び感染を含み、白血病性浸潤の症状は、患者の約５％にのみ存在する（多くの場合に皮膚所見として）。末梢血スメア及び骨髄の試験は、診断的である。既存の処置は、寛解を達成するための導入化学療法及び再発を避けるための寛解後化学療法（幹細胞移植を伴う又は伴わない）である。
ＡＭＬは、形態学、免疫表現型及び細胞化学により互いに区別される多数のサブタイプがある。骨髄、骨髄－単球、単球、赤血球及び巨核球を含む優勢細胞型に基づき、５つのタイプが記載される。
寛解導入率は、５０～８５％の範囲である。長期無病生存は、患者の２０～４０％で生じ、幹細胞移植で処置した若い患者では４０～５０％に増加すると報告されている。
予後因子は、処置プロトコル及び強度の決定を促進する。極めて予後不良な性質を有する患者は、通常、利益の可能性が処置毒性増加を正当化すると考えられるために、より強い形態の治療を与える。最も重要な予後因子は、白血病細胞核型である。有利な核型は、ｔ（１５；１７）、ｔ（８；２１）及びｉｎｖ１６（ｐ１３；ｑ２２）を含む。陰性因子は、高齢、先行骨髄異形成相、二次性白血病、高ＷＢＣ数及びアウエル小体不在である。
最初の治療は、寛解の導入を試み、ＡＭＬに応答する薬剤が少ない点でＡＬＬと大きく異なる。基本的導入レジメンは、５～７日連続的ＩＶ注入又は高用量によるシタラビン；ダウノルビシン又はイダルビシンは、この間、３日間ＩＶで与えられる。いくつかのレジメンは６－チオグアニン、エトポシド、ビンクリスチン及びプレドニゾンを含むが、それらの貢献は不明確である。処置は、通常、感染又は出血を伴う有意な骨髄抑制をもたらし、骨髄回復前に相当な潜時がある。この間、慎重な予防的及び支持的処置が重要である。
慢性骨髄性（又は骨髄）白血病（ＣＭＬ）は、慢性顆粒球性白血病としても知られ、白血球の癌として特徴付けられる。ＣＭＬの一般的処置レジメンは、Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、イマチニブ（グリーベック（登録商標））、ダサチニブ及びニロチニブを含む。Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤は、フィラデルフィア染色体転座を有するＣＭＬ患者に特に有用である。
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、障害され且つ無効な造血又は血液産生により特徴付けられる血液学的医学的状態である。そのため、血液形成細胞の数及び質が非可逆的に低下する。ＭＤＳを有する患者の一部は、重度の貧血を発症するが、他は、非症候性である。ＭＤＳの分類スキームは、当技術分野で知られ、基準は、特定の血液細胞型、例えば骨髄芽細胞、単球及び赤血球前駆体の比又は頻度を特定する。ＭＤＳは、難治性貧血、環状鉄芽細胞を伴う難治性貧血、過剰の芽細胞を伴う難治性貧血、形質転換における過剰な芽細胞を伴う難治性貧血、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）を含む。
ＭＤＳの処置は、症状の重症度で異なる。重篤な症状を経験している患者のための処置の積極的形態は、骨髄移植及び血液産物支持（例えば、輸血）及び造血増殖因子（例えば、エリスロポエチン）での支持的ケアを含む。他の薬剤は、ＭＤＳの処置に頻繁に使用される：５－アザシチジン、デシタビン及びレナリドマイド。ある場合、鉄キレート剤デフェロキサミン（デスフェラール（登録商標））及びデフェラシロクス（エクジェイド（登録商標））も投与し得る。
固形癌
例示的な固形癌としては、子宮癌、大腸癌、卵巣癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、肺癌、肺の非小細胞癌、乳癌、小腸癌、精巣癌、肛門部癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、食道癌、黒色腫、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、脳腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、副腎癌、骨癌、膵癌、頭頸部癌、類表皮癌、子宮内膜癌、膣癌、子宮頸癌、肉腫、子宮癌、胃癌、食道癌、大腸癌、肝癌、前立腺癌、子宮頸部扁平上皮癌、卵管癌、軟部肉腫、尿道癌、外陰癌、腎臓又は尿管癌、腎盂癌、脊髄軸腫瘍、陰茎癌、膀胱癌、中枢神経系新生物（ＣＮＳ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、前記癌の転移性病変、及び／又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
Ｂ細胞癌
Ｂ細胞悪性腫瘍を有する多くの患者は、標準治療で治癒できない。更に、従来の処置の選択肢には、多くの場合、重篤な副作用がある。癌免疫治療において複数の試みがなされてきたが、いくつかの障害により、これは、臨床的有効性を達成する非常に困難な目標となっている。何百ものいわゆる腫瘍抗原が同定されているが、これらは、一般的に自己由来であり、従って免疫原性が低い。更に、腫瘍は免疫攻撃の開始及び伝播に対して自らを好ましくないものとするためにいくつかのメカニズムを使用する。
Ｔ細胞をＢ細胞悪性腫瘍などの癌細胞上の適切な細胞表面分子に再指向させることに依存する、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾自己Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）治療を用いた最近の開発は、Ｂ細胞悪性腫瘍及び他の癌を処置する免疫系の力の活用に有望な結果を示している（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ３：３８８～３９８（２０１３）を参照されたい）。マウス由来のＣＡＲＴ１９（即ち「ＣＴＬ０１９」）の臨床結果は、ＣＬＬを患っている患者並びに小児ＡＬＬを患っている患者において完全寛解を確立することにおいて有望であることを示している（例えば、Ｋａｌｏｓら、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３：９５ｒａ７３を参照されたい（２０１１）、Ｐｏｒｔｅｒら、ＮＥＪＭ ３６５：７２５－７３３（２０１１）、Ｇｒｕｐｐら、ＮＥＪＭ ３６８：１５０９－１５１８（２０１３））。遺伝的に改変されたＴ細胞上のキメラ抗原受容体が標的細胞を認識し、破壊する能力以外に、治療的Ｔ細胞治療の成功は、白血病の再発について調査するため、経時的に増殖し、持続する能力を必要とする。アネルギー、抑制、又は消耗に起因するＴ細胞の質の変動は、ＣＡＲ変換Ｔ細胞のパフォーマンスに影響を与え、現時点では、これは、熟練した医師による制御が制限されている。有効であるために、ＣＡＲ形質転換患者Ｔ細胞は、存続し、同種抗原に応答して増殖する能力を維持することが必要である。ＡＬＬ患者Ｔ細胞は、マウスｓｃＦｖを含むＣＡＲＴ１９においてこれを実施できることが示されている（例えば、Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，ＮＥＪＭ ３６８：１５０９－１５１８（２０１３）を参照されたい）。
実施形態において、Ｂ細胞阻害剤は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ－３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ、又はＣＤ７９ａの１つ以上の阻害剤を含む。
ＣＲＳを処置又は予防する方法
更に別の態様において、対象においてＣＡＲを発現する細胞、例えば細胞集団の投与に関連するＣＲＳを処置又は予防する方法が本明細書に提供される。
更に別の局態様において、Ｔ細胞阻害剤治療、例えばＣＤ１９阻害又は枯渇治療、例えばＣＤ１９阻害剤を含む治療の投与に関連するＣＲＳを処置又は予防する方法が本明細書に提供される。実施形態において、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療は、ＣＲＳと関連する。
いくつかの実施形態において、ＣＲＳを処置又は予防する方法は、本明細書に記載のように組み合わせてＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤を対象に投与することを含む。
他の実施形態において、ＣＲＳを処置又は予防する方法は、本明細書に記載のように組み合わせてＢＴＫ阻害剤を対象に投与することを含む。
更に他の実施形態において、ＣＲＳを処置又は予防する方法は、ＣＡＲを発現する前記細胞、例えば前記細胞の集団の用量（例えば、第１の用量）の投与、又は前記治療前に、それと同時、又はそれから１日以内に（例えば、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、又はそれ未満で）対象にＩＬ－６阻害剤（例えば、抗ＩＬ－６受容体阻害剤、例えばトシリズマブ）を投与することを含む。実施形態において、Ｉ－６阻害剤（例えば、トシリズマブ）は、対象におけるＣＲＳの症状の最初の徴候（例えば、２４時間で２回の（例えば、少なくとも４、５、６、７、８時間、又はそれを超えて離れた）連続計測について、例えば少なくとも３８℃（例えば、少なくとも３８．５℃）の温度によって特徴付けられる例えば発熱）の時点で（例えば、１時間、３０分、２０分、１５分、又はそれ未満で）投与される。
他の実施形態において、治療は、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療、例えばＣＤ１９阻害剤を含む治療である。実施形態において、ＣＤ１９阻害又は枯渇治療は、ＣＲＳと関連する。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９阻害剤は、ＣＤ１９抗体、例えばＣＤ１９二特異性抗体（例えば、ＣＤ１９を標的とする二特異性Ｔ細胞エンゲイジャー、例えばブリナツモマブ）である。いくつかの実施形態において、二特異性Ｔ細胞エンゲイジャー抗体分子は、Ｂａｒｇｏｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｂｙ ｖｅｒｙ ｌｏｗ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ａ Ｔ ｃｅｌｌ－ｅｎｇａｇｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ．”Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８ Ａｕｇ １５；３２１（５８９１）：９７４－７．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１５８５４５に記載される抗体分子である。
いくつかの実施形態において、治療は、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞若しくは抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単又は二特異性抗体）又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートを含む。一実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３）に記載のヒト化抗原結合ドメイン又はそのコンジュゲートである。他の例示的な抗ＣＤ１９抗体又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートは、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＥＤＩ－５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ ＬＬＣ）、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（Ｍａｓｏｎｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＭＯＲ－２０８（別名ＸｍＡｂ－５５７４；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＸｍＡｂ－５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ－１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｈａｍｍｅｒ．ＭＡｂｓ．４．５（２０１２）：５７１－７７を参照されたい。ブリナツモマブは、２つのｓｃＦｖを含む二特異性抗体、ＣＤ１９に結合するもの及びＣＤ３に結合するものである。ブリナツモマブは、Ｔ細胞を指向し、癌細胞を攻撃する。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００２７４７４２及びＮＣＴ０１２０９２８６を参照されたい。ＭＥＤＩ－５５１は、増強した抗体依存性細胞介在細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有するように操作されたＦｃを有するヒト化抗ＣＤ１９抗体ｗである。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０１９５７５７９を参照されたい。Ｃｏｍｂｏｔｏｘは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する免疫毒素の混合物である。免疫毒素は、脱グリコシル化リシンＡ鎖に融合したｓｃＦｖ抗体フラグメントからなる。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＨｅｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３１．１２（２００９）：９３６－４１；Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５４．４（２０１１）：４７１－６を参照されたい。ＤＴ２２１９ＡＲＬは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的化し、２つのｓｃＦｖ及び切断型ジフテリア毒素を含む二特異性免疫毒素である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００８８９４０８を参照されたい。ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａは、合成細胞毒性細胞致死剤、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と連結した抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体からなる抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１７８６０９６及びＮＣＴ０１７８６１３５を参照されたい。ＳＡＲ３４１９は、開裂可能リンカーによりメイタンシン誘導体にコンジュゲートした抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体を含む抗ＣＤ１９抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０．２（２０１２）：２７７６－８２；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００５４９１８５；及びＢｌａｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１；１７：６４４８－５８を参照されたい。ＸｍＡｂ－５８７１は、Ｆｃ操作、ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。ＭＤＸ－１３４２は、ＡＤＣＣが増強されたヒトＦｃ操作抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。実施形態において、抗体分子は、二特異性抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ３分子である。例えば、ＡＦＭ１１は、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的とする二特異性抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０６０９１を参照されたい。一実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体を治療剤、例えば化学療法剤、ペプチドワクチン（例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９６３－９７１に記載のもの）、免疫抑制剤又は免疫除去剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、ＦＫ５０６、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、ｃｙｔｏｘｉｎ、フルダラビン、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８又はサイトカインとコンジュゲート又は他の方法で結合させる。
併用療法
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤と組み合わせて使用され得る。ＣＡＲ発現細胞とＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤との組み合わせは、他の公知の薬剤及び治療（更なる治療薬）と更に組み合わせて使用することができる。本明細書で使用する「組み合わせて」投与するとは、２つ（又はそれを超える）の異なる処置を、対象が障害を患っている過程中に対象に送達することを意味し、例えば、２つ以上の処置を、対象が障害と診断された後に且つ障害が治癒又は撲滅される前に、又は処置が他の理由で中止される前に送達される。一実施形態において、投与期間の重複があるように、一方の処置の送達は、第２の処置の送達開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」又は「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）送達」ということがある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの場合の一実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。例えば、第２の処置剤は、より有効である、例えば等しい効果が少ない第２の処置剤で見られるか、又は第２の処置剤は、第２の処置剤を第１の処置剤の非存在下で投与したときに見られるよりも大きい程度で症状を軽減するか又は第１の処置剤で同様の状況が見られる。一実施形態において、送達、障害と関係する症状又は他のパラメータの減少は、他方の処置剤の非存在下において一方の処置剤の送達で観察されるより大きい。２つの処置の効果は、一部相加的、完全相加的又は相加的より大きいものであり得る。送達は、送達した第１の処置の効果が第２剤の送達時になお検出可能であるようなものであり得る。
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び少なくとも１つの更なる治療剤を同時に、同じ又は別の組成物で又は逐次的に投与できる。逐次投与について、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をまず投与し得、更なる薬剤を次に投与し得、又は投与の順番が逆であり得る。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤は、ＣＡＲ発現細胞又は更なる薬剤の前に、それと同時に、又はその後に投与され得る。
ＣＡＲ治療及び／又は他の治療剤、方法又はモダリティを活動性障害の期間又は寛解又は低活動性疾患の期間に投与できる。ＣＡＲ治療を他の処置の処置前、処置と同時に、処置後に、又は障害の寛解中に投与できる。
組み合わせて投与するとき、ＣＡＲ治療及び更なる薬剤（例えば、第２又は第三の薬剤）又は全てを、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は投与より高い、低い又は同じ量又は用量で投与できる。一実施形態において、ＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第三薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％）。他の実施形態において、所望の効果（例えば、癌の処置）を生じるＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第三薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、同じ治療効果を達成するのに必要である、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％低い）。
ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路及び阻害剤
ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）並びに２つの転写シグナルトランスデューサー及び転写活性化因子（ＳＴＡＴ）タンパク質を含む。例えば、Ａａｒｏｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６．５５７３（２００２）：１６５３－５５を参照されたい。ＪＡＫファミリーには、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴＹＫ２を含む多くの異なる酵素が含まれる。
骨髄増殖性新生物を処置するためにＪＡＫ阻害剤が開発されており、これは、原発性骨髄線維症を処置するためのルキソリチニブ（ＩＮＣＢ０１８４２４）、骨髄線維症を処置するためのフェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３、ＴＧ１０１３４８）、及びＰＶ／ＥＴ後骨髄線維症を処置するためのＸＬ０１９、ＳＢ１５１８及びＡＺＤ１４８０を含む。例えば、Ｓｏｎｂｏｌ，Ｔｈｅｒ．Ａｄｖ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４：１５－３５，２０１３を参照されたい。ＪＡＫ阻害剤で処置した患者は、脾腫の減少及び／又は全身症状の改善を示した。ＣＹＴ３８７（モメロチニブ）又はＮ－（シアノメチル）－４－（２－（４－モルホリノフェニルアミノ）ピリミジン－４－イル）ベンズアミドは、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板増加症（ＥＴ）、及びＰＶ／ＥＴ後の処置のために現在臨床試験中のＪＡＫ阻害剤である。
ＪＡＫ－ＳＴＡＴの阻害剤には、小分子、抗体分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡが含まれる。
ＪＡＫ－ＳＴＡＴの例示的な阻害剤としては、ルキソリチニブ、ＡＧ４９０、ＡＺＤ１４８０、トファシチニブ（タソシチニブ又はＣＰ－６９０５５０）、ＣＹＴ３８７、フェドラチニブ、バリシチニブ（ＩＮＣＢ０３９１１０）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ７０１）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８）、ＸＬ０１９、ガンドチニブ（ＬＹ２７８４５４４）、ＢＭＳ９１１５４３、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３）、デセモチニブ（Ｖ－５０９）、ＩＮＣＢ３９１１０、ＧＥＮ１、ＧＥＮ２、ＧＬＰＧ０６３４、ＮＳ０１８、及びＮ－（シアノメチル）－４－［２－（４－モルホリノアニリノ）ピリミジン－４－イル］ベンズアミド；又はその薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ルキソリチニブは、ＪＡＫ１及びＪＡＫ２の両方を阻害して炎症性サイトカインレベル、例えばＩＬ－６及びＴＮＦ－αを低下させるＡＴＰ模倣物である。例えば、Ｑｕｉｎｔａｓ－Ｃａｒｄａｍａ Ａ．Ｂｌｏｏｄ １１５．１５（２０１０）：３１０９－１７を参照されたい。ルキソリチニブは、骨髄線維症の処置に臨床的に使用される。例えば、Ｍａｓｃａｒｅｎｈａｓ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１８（２０１２）：３００８－１４）を参照されたい。
実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤は、ルキソリチニブ、又はその薬学的に許容される塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物を含む。一実施形態において、ルキソリチニブは、化学名：（３Ｒ）－３－シクロペンチル－３－［４－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）ピラゾール－１－イル］プロパンニトリル）を有する。
実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴの阻害剤は、国際公開第２０１５／１０９２８６号パンフレット（参照により本明細書に援用される）からの化合物Ａ、又はその薬学的に許容される塩、プロドラッグ若しくは溶媒和物を含む。
実施形態において、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ阻害剤は、本明細書に列挙した１つ以上のＪＡＫ阻害剤のプロドラッグ又は溶媒和物である。
ＢＴＫ及び阻害剤
Ｂｒｕｔｏｎのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ細胞の発生に関与するチロシンプロテインキナーゼである。ＢＴＫの阻害剤には、小分子、抗体分子、ポリペプチド、例えば融合タンパク質、又は阻害性核酸、例えばｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡが含まれる。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）；ＧＤＣ－０８３４；ＲＮ－４８６；ＣＧＩ－５６０；ＣＧＩ－１７６４；ＨＭ－７１２２４；ＣＣ－２９２；ＯＮＯ－４０５９；ＣＮＸ－７７４；及びＬＦＭ－Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン－２－誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害せず、ＧＤＣ－０８３４；ＲＮ－４８６；ＣＧＩ－５６０；ＣＧＩ－１７６４；ＨＭ－７１２２４；ＣＣ－２９２；ＯＮＯ－４０５９；ＣＮＸ－７７４；及びＬＦＭ－Ａ１３から選択される。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５とも称す）と組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、イブルチニブは、化学名（１－［（３Ｒ）－３－［４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル］ピペリジン－１－イル］プロプ－２－エン－１－オン）を有する。
実施形態において、対象は、ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬ又はＳＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に１つ、２つ、３つ、又は４つの癌治療を投与されている）。実施形態において、対象は、難治性ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。他の実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫、例えば再発性又は難治性濾胞性リンパ腫を有する。一部の実施形態において、イブルチニブを約３００～６００ｍｇ／日（例えば、約３００～３５０、３５０～４００、４００～４５０、４５０～５００、５００～５５０又は５５０～６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日又は約５６０ｍｇ／日）で例えば経口により投与する。実施形態において、イブルチニブを約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量で連日一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるイブルチニブを投与する。
一実施形態において、イブルチニブをリツキシマブと組み合わせて投与する。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ Ｉｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ｉＲ）Ｉｓ Ｗｅｌｌ Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ａｎｄ Ｉｎｄｕｃｅｓ ａ Ｈｉｇｈ Ｒａｔｅ Ｏｆ Ｄｕｒａｂｌｅ Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ Ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ－Ｒｉｓｋ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）：Ｎｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｄ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｏｆ ａ Ｐｈａｓｅ ＩＩ Ｔｒｉａｌ Ｉｎ ４０ Ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ａｂｓｔｒａｃｔ ６７５ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｔ ５５ｔｈ ＡＳＨ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ ７－１０ Ｄｅｃを参照されたい。理論に拘束されないが、イブルチニブの添加はＴ細胞増殖性応答を増強し、Ｔ細胞をＴ－ヘルパー－２（Ｔｈ２）からＴ－ヘルパー－１（Ｔｈ１）表現型にシフトさせ得ると考えられる。Ｔｈ１及びＴｈ２は、ヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１とＴｈ２とで異なる免疫応答経路を指向する。Ｔｈ１表現型は、例えば、細胞内病原体／ウイルス又は癌性細胞などの細胞を死傷するための炎症誘発性応答又は自己免疫性応答永続化と関係する。Ｔｈ２表現型は、好酸球蓄積及び抗炎症性応答と関係する。
本明細書における方法、使用及び組成物の一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第／２０１５／０７９４１７号パンフレットに記載のＢＴＫ阻害剤である。例えば、一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である。
Figure 0007219376000148
 式中、
Ｒ１は、水素、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり；
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり；
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素又はハロゲンであり；又は
Ｒ４とＲ５とは、互いに結合し、結合、－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－；－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－；又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－を意味し；
Ｒ６及びＲ７は、互いに独立してＨ、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１－Ｃ６アルキル、任意選択によりハロゲン又はヒドロキシ又はハロゲンで置換され得るＣ３－Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１は、互いに独立してＨ又は任意選択によりＣ１－Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１－Ｃ６アルキルであり；又はＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１の任意の２個は、それらが結合している炭素原子と一体となって３～６員飽和炭素環式環を形成し得、
Ｒ１２は、水素又は任意選択によりハロゲン若しくはＣ１－Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１－Ｃ６アルキルであり、又は
Ｒ１２及びＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０又はＲ１１のいずれか１つは、それらが結合している原子と一体となって、４員、５員、６員又は７員アザシクロ環を形成し得、その環は、任意選択によりハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１－Ｃ６アルキル又はＣ１－Ｃ６アルコキシで置換され得、
ｎは、０又は１であり；
Ｒ１３は、任意選択によりＣ１－Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ又は任意選択によりＣ１－Ｃ６アルキル若しくはＣ１－Ｃ６アルコキシで置換され得るＮ，Ｎ－ジ－Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノＣ２－Ｃ６アルキニル；又は任意選択によりＣ１－Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２－Ｃ６アルキレニルオキシドである。
いくつかの実施形態において、式ＩのＢＴＫ阻害剤は、Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルアゼチジン－３－イル）オキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｅ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（１－（ブタ－２－エノイル）アゼチジン－３－イル）オキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（１－プロピオロイルアゼチジン－３－イル）オキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（１－（ブタ－２－イノイル）アゼチジン－３－イル）オキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルピペリジン－４－イル）オキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｅ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルブタ－２－エンアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルプロピオルアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｅ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（４－メトキシ－Ｎ－メチルブタ－２－エンアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルブタ－２－インアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（２－（（４－アミノ－６－（３－（４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）ピリミジン－５－イル）オキシ）エチル）－Ｎ－メチルオキシラン－２－カルボキサミド；Ｎ－（２－（（４－アミノ－６－（３－（６－シクロプロピル－８－フルオロ－１－オキソイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）フェニル）ピリミジン－５－イル）オキシ）エチル）－Ｎ－メチルアクリルアミド；Ｎ－（３－（５－（２－アクリルアミドエトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－エチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－（２－フルオロエチル）アクリルアミド）エトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（５－（（１－アクリルアミドシクロプロピル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（５－（２－アクリルアミドプロポキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（ブタ－２－インアミド）プロポキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（２－（Ｎ－メチルブタ－２－インアミド）プロポキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（３－（Ｎ－メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（１－（ブタ－２－イノイル）ピロリジン－２－イル）メトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－２－（３－（５－（（１－アクリロイルピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル）－６－シクロプロピル－３，４－ジヒドロイソキノリン－１（２Ｈ）－オン；Ｎ－（２－（（４－アミノ－６－（３－（６－シクロプロピル－１－オキソ－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－５－フルオロ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル）ピリミジン－５－イル）オキシ）エチル）－Ｎ－メチルアクリルアミド；Ｎ－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－アクリロイル－４－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－（ブタ－２－イノイル）－４－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；２－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－アクリロイル－４－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル）－６－シクロプロピル－３，４－ジヒドロイソキノリン－１（２Ｈ）－オン；Ｎ－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－アクリロイル－４－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－４－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－アクリロイル－４－フルオロピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－（ブタ－２－イノイル）－４－フルオロピロリジン－２－イル）メトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルアゼチジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－５－（（１－プロピオロイルアゼチジン－２－イル）メトキシ）ピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｓ）－２－（３－（５－（（１－アクリロイルアゼチジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－（ヒドロキシメチル）フェニル）－６－シクロプロピル－３，４－ジヒドロイソキノリン－１（２Ｈ）－オン；（Ｒ）－Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルアゼチジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；（Ｒ）－Ｎ－（３－（５－（（１－アクリロイルピペリジン－３－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（５－（（（２Ｒ，３Ｓ）－１－アクリロイル－３－メトキシピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；Ｎ－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｒ）－１－アクリロイル－４－シアノピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミド；又はＮ－（３－（５－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－アクリロイル－４－シアノピロリジン－２－イル）メトキシ）－６－アミノピリミジン－４－イル）－５－フルオロ－２－メチルフェニル）－４－シクロプロピル－２－フルオロベンズアミドから選択される。
特に断らない限り、上記式ＩのＢＴＫ阻害剤で使用した化学的用語は、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第／２０１５／０７９４１７号パンフレットに示す意味に従って使用される。
ＢＴＫ阻害剤の更なる例は、本明細書において、例えば本明細書の更なる併用療法の節に記載されている。
更なる併用療法
更なる態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、手術、サイトカイン、放射線若しくはシトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、デメチル化剤、又はＩｚｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９６３－９７１に記載ものなどのペプチドワクチンなどの化学療法剤と組み合わせて治療レジメンにおいて使用し得る。
ある例において、本発明の化合物を他の抗癌剤、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤及びこれらの組み合わせなどの他の治療剤と組み合わせる。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び／又はＳＴＡＴ／ＪＡＫ阻害剤を化学療法剤と更に組み合わせて使用できる。例示的な化学療法剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、サリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤を含む。
併用療法における使用が企図される一般的化学療法剤は、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標））、ブスルファン注（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメサゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５－フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６－メルカプトプリン（ピュリネソール（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（イットリウム９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０とカルムスチンインプラント（グリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
本明細書に記載の組み合わせのための特に興味深い抗癌剤は、アントラサイクリン；アルキル化剤；代謝拮抗剤；カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン又はｐ７０Ｓ６キナーゼＦＫ５０６）を阻害する又はｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬剤；ｍＴＯＲ阻害剤；免疫調節剤；アントラサイクリン；ビンカアルカロイド；プロテオソーム阻害剤；ＧＩＴＲアゴニストタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；ＣＤＫ４キナーゼ阻害剤；ＢＴＫ阻害剤；ＭＫＮキナーゼ阻害剤；ＤＧＫキナーゼ阻害剤；又は腫瘍溶解性ウイルスを含む。
例示的な代謝拮抗剤は、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤）：メトトレキサート（リウマトレックス（登録商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、エフデックス（登録商標）、フルオロプレクス（登録商標））、フロクスウリジン（ＦＵＤＦ（登録商標））、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標）、Ｔａｒａｂｉｎｅ ＰＦＳ）、６－メルカプトプリン（プリントール（登録商標）））、６－チオグアニン（チオグアニンＴａｂｌｏｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））、ペメトレキセド（アリムタ（登録商標））、ラルチトレキセド（トムデックス（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、クロファラビン（Ｃｌｏｆａｒｅｘ（登録商標）、クロラール（登録商標））、アザシチジン（ビダーザ（登録商標））、デシタビン及びゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））を含むが、これらに限定されない。好ましい代謝拮抗剤は、シタラビン、クロファラビン及びフルダラビンを含む。
例示的なアルキル化剤は、窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類及びトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、ウラムスチン（登録商標）、ウラムスチン（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（ヘメル（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホロアミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、マイレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））及びダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。アルキル化剤の更なる例は、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（登録商標）及びテモダール（登録商標））；ダクチノマイシン（別名アクチノマイシン－Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（別名Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェクス（登録商標）及びマイレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（別名ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（別名ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）－ＡＱ）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（別名ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（別名窒素マスタード、ムスチン及び塩酸メクロロエタミン、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（別名チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。
実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、フルダラビン、シクロホスファミド、及び／又はリツキシマブを含む。実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、フルダラビン、シクロホスファミド、及びリツキシマブ（ＦＣＲ）を含む。実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、フルダラビンを約１０～５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約１０～１５ｍｇ／ｍ２、１５～２０ｍｇ／ｍ２、２０～２５ｍｇ／ｍ２、２５～３０ｍｇ／ｍ２、３０～３５ｍｇ／ｍ２、３５～４０ｍｇ／ｍ２、４０～４５ｍｇ／ｍ２又は４５～５０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、シクロホスファミドを約２００～３００ｍｇ／ｍ２（例えば、約２００～２２５ｍｇ／ｍ２、２２５～２５０ｍｇ／ｍ２、２５０～２７５ｍｇ／ｍ２又は２７５～３００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、リツキシマブを約４００～６００ｍｇ／ｍ２（例えば、４００～４５０、４５０～５００、５００～５５０又は５５０～６００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。
実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、ベンダムスチン及びリツキシマブを含む。実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、ベンダムスチンを約７０～１１０ｍｇ／ｍ２（例えば、７０～８０、８０～９０、９０～１００又は１００～１１０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、リツキシマブを約４００～６００ｍｇ／ｍ２（例えば、４００～４５０、４５０～５００、５００～５５０又は５５０～６００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。
実施形態において、本明細書に開示されている組み合わせは、リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及び／又はコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）を含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（Ｒ－ＣＨＯＰ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。実施形態において、対象は、巨大腫瘤がない限局したステージのＤＬＢＣＬ（例えば、７ｃｍ未満のサイズ／直径の腫瘍を含む）を有する。実施形態において、対象は、Ｒ－ＣＨＯＰと組み合わせて放射線で処置される。例えば、対象にＲ－ＣＨＯＰ（例えば、１～６サイクル、例えば１、２、３、４、５又は６サイクルのＲ－ＣＨＯＰ）、続いて放射線を投与する。ある場合、対象に放射線後Ｒ－ＣＨＯＰ（例えば、１～６サイクル、例えば１、２、３、４、５又は６サイクルのＲ－ＣＨＯＰ）を投与する。
実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、エトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、及び／又はリツキシマブを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン及びリツキシマブ（ＥＰＯＣＨ－Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を用量調節ＥＰＯＣＨ－Ｒ（ＤＡ－ＥＰＯＣＨ－Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、Ｂ細胞リンパ腫、例えばＭｙｃ再配列侵襲性Ｂ細胞リンパ腫を有する。
実施形態において、本明細書に開示されている組み合わせは、リツキシマブ及び／又はレナリドマイドを含む。レナリドマイド（（ＲＳ）－３－（４－アミノ－１－オキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン）は、免疫調節剤である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ及びレナリドマイドと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する。実施形態において、対象は、ＦＬを有し、癌治療剤で先に処置されていない。実施形態において、レナリドマイドを約１０～２０ｍｇ（例えば、１０～１５ｍｇ又は１５～２０ｍｇ）で例えば連日投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０～５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０～３７５ｍｇ／ｍ２、３７５～４００ｍｇ／ｍ２、４００～４２５ｍｇ／ｍ２、４２５～４５０ｍｇ／ｍ２、４５０～４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５～５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内投与する。
例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス（以前はデフェロリムスとして既知、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２－［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られ、国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）又はＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（ＣＡＳ １６４３０１－５１－３）；エムシロリムス、（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ １０１３１０１－３６－４）；及びＮ２－［１，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチルＬ－セリン－（配列番号７０６）、分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ ９３６４８７－６７－１）及びＸＬ７６５を含む。
例示的な免疫調節剤は、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；レナリドマイド（ＣＣ－５０１３、レブリミド（登録商標））；サリドマイド（サロミド（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）；及びＩＲＸ－２（インターロイキン１、インターロイキン２及びインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ ９５１２０９－７１－５、ＩＲＸ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）を含む。
例示的なアントラサイクリンは、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；及びデスアセチルラビドマイシンを含む。
例示的なビンカアルカロイドは、例えば、酒石酸ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（別名硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、Ａｌｋａｂａｎ－ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標））；及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
例示的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））；カーフィルゾミブ（ＰＸ－１７１－００７、（Ｓ）－４－メチル－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－メチル－１－（（Ｒ）－２－メチルオキシラン－２－イル）－１－オキソペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル）－２－（（Ｓ）－２－（２－モルホリノアセトアミド）－４－フェニルブタンアミド）－ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ－００５２）；イキサゾミブクエン酸エステル（ＭＬＮ－９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）；及びＯ－メチル－Ｎ－［（２－メチル－５－チアゾリル）カルボニル］－Ｌ－セリル－Ｏ－メチル－Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｒ）－２－メチル－２－オキシラニル］－２－オキソ－１－（フェニルメチル）エチル］－Ｌ－セリンアミド（ＯＮＸ－０９１２）を含む。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体及びモノメチルオーリスタチンＥの抗体－薬物コンジュゲートである。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば再発性又は難治性ＨＬを有する。実施形態において、対象は、ＣＤ３０＋ ＨＬを含む。実施形態において、対象は、自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けている。実施形態において、対象は、ＡＳＣＴを受けていない。実施形態において、ブレンツキシマブを約１～３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５～２ｍｇ／ｋｇ、２～２．５ｍｇ／ｋｇ又は２．５～３ｍｇ／ｋｇ）で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブ及びダカルバジン又はブレンツキシマブとベンダムスチンとの組み合わせと組み合わせて対象に投与する。ダカルバジンは、化学名５－（３，３－ジメチル－１－トリアゼニル）イミダゾール－４－カルボキサミドを有するアルキル化剤である。ベンダムスチンは、化学名４－［５－［ビス（２－クロロエチル）アミノ］－１－メチルベンズイミダゾール－２－イル］ブタン酸を有するアルキル化剤である。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する。実施形態において、対象は、癌治療剤で先に処置されていない。実施形態において、対象は、少なくとも６０歳、例えば６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳又はそれを超える。実施形態において、ダカルバジンを約３００～４５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約３００～３２５ｍｇ／ｍ２、３２５～３５０ｍｇ／ｍ２、３５０～３７５ｍｇ／ｍ２、３７５～４００ｍｇ／ｍ２、４００～４２５ｍｇ／ｍ２又は４２５～４５０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ベンダムスチンを約７５～１２５ｍｇ／ｍ２（例えば、７５～１００ｍｇ／ｍ２又は１００～１２５ｍｇ／ｍ２、例えば約９０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ブレンツキシマブを約１～３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１～１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５～２ｍｇ／ｋｇ、２～２．５ｍｇ／ｋｇ又は２．５～３ｍｇ／ｋｇ）で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を対象にＣＤ２０阻害剤、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、抗ＣＤ２０単又は二特異的抗体）又はそのフラグメントと組み合わせて投与する。例示的な抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ－０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、オカラツズマブ及びＰｒｏ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．９５．１（２０１０）：１３５－４３を参照されたい。
一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブを含む。リツキシマブは、例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１０／１０３７０５ｓ５３１１ｌｂｌ．ｐｄｆに記載のように、ＣＤ２０に結合し、ＣＤ２０発現細胞の細胞溶解を起こすキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ１カッパである。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
一実施形態において、リツキシマブを静脈内に例えば静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約５００～２０００ｍｇ（例えば、約５００～５５０ｍｇ、５５０～６００ｍｇ、６００～６５０ｍｇ、６５０～７００ｍｇ、７００～７５０ｍｇ、７５０～８００ｍｇ、８００～８５０ｍｇ、８５０～９００ｍｇ、９００～９５０ｍｇ、９５０～１０００ｍｇ、１０００～１１００ｍｇ、１１００～１２００ｍｇ、１２００～１３００ｍｇ、１３００～１４００ｍｇ、１４００～１５００ｍｇ、１５００～１６００ｍｇ、１６００～１７００ｍｇ、１７００～１８００ｍｇ、１８００～１９００ｍｇ又は１９００～２０００ｍｇ）のリツキシマブを提供する。一実施形態において、リツキシマブを１５０ｍｇ／ｍ２～７５０ｍｇ／ｍ２、例えば約１５０～１７５ｍｇ／ｍ２、１７５～２００ｍｇ／ｍ２、２００～２２５ｍｇ／ｍ２、２２５～２５０ｍｇ／ｍ２、２５０～３００ｍｇ／ｍ２、３００～３２５ｍｇ／ｍ２、３２５～３５０ｍｇ／ｍ２、３５０～３７５ｍｇ／ｍ２、３７５～４００ｍｇ／ｍ２、４００～４２５ｍｇ／ｍ２、４２５～４５０ｍｇ／ｍ２、４５０～４７５ｍｇ／ｍ２、４７５～５００ｍｇ／ｍ２、５００～５２５ｍｇ／ｍ２、５２５～５５０ｍｇ／ｍ２、５５０～５７５ｍｇ／ｍ２、５７５～６００ｍｇ／ｍ２、６００～６２５ｍｇ／ｍ２、６２５～６５０ｍｇ／ｍ２、６５０～６７５ｍｇ／ｍ２又は６７５～７００ｍｇ／ｍ２の用量で投与し、ここで、ｍ２は、対象の体表面積を示す。一実施形態において、リツキシマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日又はそれを超える投薬間隔で投与する。例えば、リツキシマブを少なくとも０．５週間、例えば０．５週間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超える投薬間隔で投与する。一実施形態において、リツキシマブを一定期間、例えば少なくとも２週間、例えば少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間又はそれより長く、本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する。例えば、リツキシマブを本明細書に記載の用量及び投薬間隔で１処置サイクル当たり計少なくとも４回の投与で投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６回又はそれを超える投与）。
一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブを含む。オファツムマブは、分子量約１４９ｋＤａを有する抗ＣＤ２０ ＩｇＧ１κヒトモノクローナル抗体である。例えば、オファツムマブは、トランスジェニックマウス及びハイブリドーマ技術を使用して産生し、組み換えマウス細胞株（ＮＳ０）から発現及び精製する。例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２００９／１２５３２６ｌｂｌ．ｐｄｆ；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ ｎｕｍｂｅｒ ＮＣＴ０１３６３１２８、ＮＣＴ０１５１５１７６、ＮＣＴ０１６２６３５２及びＮＣＴ０１３９７５９１を参照されたい。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をオファツムマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
一実施形態において、オファツムマブを静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約１５０～３０００ｍｇ（例えば、約１５０～２００ｍｇ、２００～２５０ｍｇ、２５０～３００ｍｇ、３００～３５０ｍｇ、３５０～４００ｍｇ、４００～４５０ｍｇ、４５０～５００ｍｇ、５００～５５０ｍｇ、５５０～６００ｍｇ、６００～６５０ｍｇ、６５０～７００ｍｇ、７００～７５０ｍｇ、７５０～８００ｍｇ、８００～８５０ｍｇ、８５０～９００ｍｇ、９００～９５０ｍｇ、９５０～１０００ｍｇ、１０００～１２００ｍｇ、１２００～１４００ｍｇ、１４００～１６００ｍｇ、１６００～１８００ｍｇ、１８００～２０００ｍｇ、２０００～２２００ｍｇ、２２００～２４００ｍｇ、２４００～２６００ｍｇ、２６００～２８００ｍｇ又は２８００～３０００ｍｇ）のオファツムマブを投与する。実施形態において、オファツムマブを約３００ｍｇの出発用量、続いて２０００ｍｇ、例えば約１１用量で例えば２４週間投与する。一実施形態において、オファツムマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日又はそれを超える投薬間隔で投与する。例えば、オファツムマブを少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、２４週間、２６週間、２８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間又はそれを超える投薬間隔で投与する。一実施形態において、オファツムマブを一定期間、例えば少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、４０週間、５０週間、６０週間若しくはそれを超えるか、又は１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月若しくはそれを超えるか、又は１年、２年、３年、４年、５年若しくはそれを超えて、本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する。例えば、オファツムマブを１処置サイクル当たり計少なくとも２用量において本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０又はそれを超える用量）。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブを含む。オクレリズマブは、例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０００７７８７０、ＮＣＴ０１４１２３３３、ＮＣＴ００７７９２２０、ＮＣＴ００６７３９２０、ＮＣＴ０１１９４５７０及びＫａｐｐｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．１９．３７８（２０１１）：１７７９－８７に記載のようなヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブを含む。ベルツズマブは、ＣＤ２０に対するヒト化モノクローナル抗体である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００５４７０６６、ＮＣＴ００５４６７９３、ＮＣＴ０１１０１５８１及びＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．５１（５）（２０１０）：７４７－５５を参照されたい。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１を含む。ＧＡ１０１（オビヌツズマブ又はＲＯ５０７２７５９とも称する）は、ヒト化及び糖鎖改変抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．１０．６（２００９）：５８８－９６；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｕｍｂｅｒｓ：ＮＣＴ０１９９５６６９、ＮＣＴ０１８８９７９７、ＮＣＴ０２２２９４２２及びＮＣＴ０１４１４２０５；並びにｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１３／１２５４８６ｓ０００ｌｂｌ．ｐｄｆを参照されたい。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＡＭＥ－１３３ｖを含む。ＡＭＥ－１３３ｖ（ＬＹ２４６９２９８又はオカラツズマブとも称する）は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａ受容体に対する親和性が増加し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が増強された、ＣＤ２０に対するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２５．１（２０１１）：１３－２５；及びＦｏｒｅｒｏ－Ｔｏｒｒｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１８．５（２０１２）：１３９５－４０３を参照されたい。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＰＲＯ１３１９２１を含む。ＰＲＯ１３１９２１は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａへの結合が良好であり、ＡＤＣＣが増強されるように操作されたヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２５．１（２０１１）：１３－２５；及びＣａｓｕｌｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４．１（２０１４）：３７－４６；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００４５２１２７を参照されたい。
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ－０１５を含む。ＴＲＵ－０１５は、ＣＤ２０に対する抗体のドメイン由来の抗ＣＤ２０融合タンパク質である。ＴＲＵ－０１５は、モノクローナル抗体より小さいが、Ｆｃ介在エフェクター機能を保持する。例えば、Ｒｏｂａｋ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２５．１（２０１１）：１３－２５を参照されたい。ＴＲＵ－０１５は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに連結した抗ＣＤ２０一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むが、ＣＨ１及びＣＬドメインを欠く。
一実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ２０抗体を治療剤、例えば本明細書に記載の化学療法剤（例えば、シトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、デメチル化剤、ペプチドワクチン、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗微小管又は有糸分裂阻害剤）、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤又は細胞保護的薬剤にコンジュゲート又は他の方法で結合する。
実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、Ｂ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）阻害剤（例えば、ベネトクラックス、ＡＢＴ－１９９又はＧＤＣ－０１９９とも呼ばれる）及び／又はリツキシマブを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をベネトクラクス及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ベネトクラクスは、抗アポトーシスタンパク質、ＢＣＬ－２を阻害する小分子である。一実施形態において、ベネトクラックスは、化学名：（４－（４－｛［２－（４－クロロフェニル）－４，４－ジメチルシクロヘキサ－１－エン－１－イル）メチル｝ピペラジン－１－イル）－Ｎ－（｛３－ニトロ－４－［（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）－２－（１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－イルオキシ）ベンズアミド）を有する。
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている。実施形態において、ベネトクラクスを約１５～６００ｍｇ（例えば、１５～２０ｍｇ、２０～５０ｍｇ、５０～７５ｍｇ、７５～１００ｍｇ、１００～２００ｍｇ、２００～３００ｍｇ、３００～４００ｍｇ、４００～５００ｍｇ又は５００～６００ｍｇ）で例えば連日投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０～５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０～３７５ｍｇ／ｍ２、３７５～４００ｍｇ／ｍ２、４００～４２５ｍｇ／ｍ２、４２５～４５０ｍｇ／ｍ２、４５０～４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５～５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内に例えば毎月投与する。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、腫瘍溶解性ウイルスを含む。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞内で選択的に複製し、その死を誘発するか又は増殖を遅延することができる。ある場合、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞に効果を有しないか又は効果が最小である。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス又は腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス又は腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））を含むが、これらに限定されない。
一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のウイルス、例えば組み換え腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のような、免疫又は炎症性応答の阻害剤をコードする核酸配列（例えば、異種核酸配列）を含む。実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ＮＤＶは、アポトーシス促進性タンパク質（例えば、アポプチン）、サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、インターフェロン－γ、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、腫瘍壊死因子－α）、免疫グロブリン（例えば、ＥＤ－Ｂフィブロネクチンに対する抗体）、腫瘍関連抗原、二特異性アダプタータンパク質（例えば、ＮＤＶ ＨＮタンパク質及びＣＤ３又はＣＤ２８などのＴ細胞共刺激性受容体に対する二特異性抗体又は抗体フラグメント；又はヒトＩＬ－２及びＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する一本鎖抗体の融合タンパク質）を含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用されるＺａｍａｒｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７．３（２０１２）：３４７－６７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、参照によりそれぞれその全体が本明細書に援用される米国特許第８５９１８８１Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１２２１８５Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６７７Ａ１号明細書に記載のキメラ腫瘍溶解性ＮＤＶである。
一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、排他的に癌細胞において複製するよう設計された条件的複製アデノウイルス（ＣＲＡｄ）である。例えば、Ａｌｅｍａｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（２０００）：７２３－２７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性アデノウイルスは、その全体が参照により本明細書に援用されるＡｌｅｍａｎｙ ｅｔ ａｌ．の７２５ページの表１に記載のものを含む。
例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、次のものを含むが、これらに限定されない。
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス（ＣｏｌｏＡｄ１）（ＰｓｉＯｘｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２０５３２２０を参照されたい）；
顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ－１０２（以前はＣＧＴＧ－１０２と呼ばれた）（Ｏｎｃｏｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１５９８１２９を参照されたい）；
ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的に改変された腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ－０１（ＶＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓ．Ｌ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０２０４５６０２及びＮＣＴ０２０４５５８９を参照されたい）；
網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路の脱制御を伴い癌細胞で選択的に複製するように改変されている野生型ヒトアデノウイルス血清型５（Ｈａｄ５）由来のウイルスである条件的複製アデノウイルスＩＣＯＶＩＲ－５（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｃａｔａｌａ ｄ’Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８６４７５９を参照されたい）；
ＩＣＯＶＩＲ５、腫瘍溶解性アデノウイルスで感染させた骨髄由来自己間葉性幹細胞（ＭＳＣ）を含むＣｅｌｙｖｉｒ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｉｎｆａｎｔｉｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉｏ Ｎｉｎｏ Ｊｅｓｕｓ，Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ／Ｒａｍｏｎ Ａｌｅｍａｎｙ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８４４６６１を参照されたい）；
ヒトＥ２Ｆ－１プロモーターが必須Ｅ１ａウイルス遺伝子の発現を駆動し、それによりＲｂ経路欠損腫瘍細胞に対するウイルス複製及び細胞毒性を制限する、条件複製腫瘍溶解性血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）であるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２１４３８０４を参照されたい）；又は
網膜芽細胞腫（Ｒｂ）経路欠損細胞で選択的に複製し、ある種のＲＧＤ結合インテグリンをより効率的に発現する細胞に感染するように操作されているアデノウイルスであるＤＮＸ－２４０１（以前はデルタ－２４－ＲＧＤと称された）（Ｃｌｉｎｉｃａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｎａｖａｒｒａ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｎａｖａｒｒａ／ＤＮＡｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１９５６７３４を参照されたい）。
一実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを注射、例えば皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、髄腔内又は腹腔内注射により投与する。実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを腫瘍内、経皮、経粘膜、経口、鼻腔内又は肺投与により投与する。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を、Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる分子と組み合わせて対象に投与する。Ｔｒｅｇ細胞数を減らす（例えば、枯渇させる）方法は、当技術分野で知られ、例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、ＧＩＴＲ機能改変を含む。理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又は本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞投与前に対象におけるＴｒｅｇ細胞数を減らすことは、腫瘍微小環境における望まない免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の数を減らし、対象の再発のリスクを減らすと考えられる。
一実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させるＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＧＩＴＲ抗体など、ＧＩＴＲを標的とする分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子を含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞をシクロホスファミドと組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、ＧＩＴＲ結合分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＴｒｅｇ枯渇ＧＩＴＲ抗体）をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。実施形態において、シクロホスファミドをＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に対象に投与する。実施形態において、シクロホスファミド及び抗ＧＩＴＲ抗体をＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に対象に投与する。一実施形態において、対象は、癌（例えば、固形癌又はＡＬＬ又はＣＬＬなどの血液癌）を有する。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、ＡＬＬを有する。実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌を有する。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号明細書、欧州特許第０９０５０５Ｂ１号明細書、米国特許第８，５８６，０２３号明細書、国際公開第２０１０／００３１１８号パンフレット及び同２０１１／０９０７５４号パンフレットに記載のＧＩＴＲ融合タンパク質又は例えば米国特許第７，０２５，９６２号明細書、欧州特許第１９４７１８３Ｂ１号明細書、米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第８，５９１，８８６号明細書、欧州特許第１８６６３３９号明細書、国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、国際公開第２０１３／０３９９５４号パンフレット、国際公開第２００５／００７１９０号パンフレット、国際公開第２００７／１３３８２２号パンフレット、国際公開第２００５／０５５８０８号パンフレット、国際公開第９９／４０１９６号パンフレット、国際公開第２００１／０３７２０号パンフレット、国際公開第９９／２０７５８号パンフレット、国際公開第２００６／０８３２８９号パンフレット、国際公開第２００５／１１５４５１号パンフレット、米国特許第７，６１８，６３２号明細書及び国際公開第２０１１／０５１７２６号パンフレットに記載のような抗ＧＩＴＲ抗体など、例えばＧＩＴＲ融合タンパク質及び抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）を含む。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＧＩＴＲアゴニスト、例えば本明細書に記載のＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストをＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。
一実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスのなどのラパログを含む。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤を細胞のアフェレーシスの前に投与できる。
一実施形態において、本明細書に開示されている組み合わせは、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば本明細書に記載のタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤を含む。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ－１阻害剤、例えばスチボグルコン酸ナトリウムなど、例えば本明細書に記載のＳＨＰ－１阻害剤である。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ－２阻害剤である。
一実施形態において、本明細書に開示される組み合わせは、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤又はＢＴＫ阻害剤以外のキナーゼ阻害剤を含む。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤、例えば６－アセチル－８－シクロペンチル－５－メチル－２－（５－ピペラジン－１－イル－ピリジン－２－イルアミノ）－８Ｈ－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、ヒドロクロライド（パルボシクリブ又はＰＤ０３３２９９１とも呼ばれる）など、例えばＣＤ４／６阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ－０２７など、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば４－アミノ－５－（４－フルオロアニリノ）－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジンなど、例えば本明細書に記載のＭＮＫ阻害剤である。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａ及び／又はＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＤＧＫ阻害剤、例えばＤＧＫｉｎｈ１（Ｄ５９１９）又はＤＧＫｉｎｈ２（Ｄ５７９４）など、例えば本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、アロイシンＡ；フラボピリドール又はＨＭＲ－１２７５、２－（２－クロロフェニル）－５，７－ジヒドロキシ－８－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－ヒドロキシ－１－メチル－４－ピペリジニル］－４－クロメノン；クリゾチニブ（ＰＦ－０２３４１０６６；２－（２－クロロフェニル）－５，７－ジヒドロキシ－８－［（２Ｒ，３Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）－１－メチル－３－ピロリジニル］－４Ｈ－１－ベンゾピラン－４－オン、ヒドロクロライド（Ｐ２７６－００）；１－メチル－５－［［２－［５－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－イミダゾール－２－イル］－４－ピリジニル］オキシ］－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－アミン（ＲＡＦ２６５）；インジスラム（Ｅ７０７０）；ロスコビチン（ＣＹＣ２０２）；パルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）；ジナシクリブ（ＳＣＨ７２７９６５）；Ｎ－［５－［［（５－ｔｅｒｔ－ブチルオキサゾール－２－イル）メチル］チオ］チアゾール－２－イル］ピペリジン－４－カルボキサミド（ＢＭＳ ３８７０３２）；４－［［９－クロロ－７－（２，６－ジフルオロフェニル）－５Ｈ－ピリミド［５，４－ｄ］［２］ベンズアゼピン－２－イル］アミノ］－安息香酸（ＭＬＮ８０５４）；５－［３－（４，６－ジフルオロ－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－５－イル］－Ｎ－エチル－４－メチル－３－ピリジンメタンアミン（ＡＧ－０２４３２２）；４－（２，６－ジクロロベンゾイルアミノ）－１Ｈ－ピラゾール－３－カルボン酸Ｎ－（ピペリジン－４－イル）アミド（ＡＴ７５１９）；４－［２－メチル－１－（１－メチルエチル）－１Ｈ－イミダゾール－５－イル］－Ｎ－［４－（メチルスルホニル）フェニル］－２－ピリミジンアミン（ＡＺＤ５４３８）；及びＸＬ２８１（ＢＭＳ９０８６６２）から選択されるＣＤＫ４阻害剤である。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えばパルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）であり、パルボシクリブを一定期間にわたり１日約５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１００ｍｇ又は１２５ｍｇ）の用量で例えば２８日サイクルの１４～２１日間連日又は２１日サイクルの７～１２日間連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるパルボシクリブを投与する。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４又は６阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤又はＣＤＫ６阻害剤と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６の両方を標的とする阻害剤）、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４／６阻害剤と組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、対象は、ＭＣＬを有する。ＭＣＬは、現在利用可能な治療にはほとんど応答せず、即ち本質的に不治の侵襲性癌である。ＭＣＬの多くの症例において、サイクリンＤ１（ＣＤＫ４／６のレギュレーター）がＭＣＬ細胞で発現される（例えば、免疫グロブリン及びサイクリンＤ１遺伝子が関与する染色体転座のため）。そのため、理論に拘束されないが、ＭＣＬ細胞は、高特異性（即ち正常免疫細胞に対する最小限の影響）でＣＤＫ４／６阻害に高度に感受性であると考えられる。ＣＤＫ４／６阻害剤単独でＭＣＬの処置にいくぶん有効性を有しているが、部分的寛解のみが達成され、高再発率である。例示的なＣＤＫ４／６阻害剤は、ＬＥＥ０１１（リボシクリブ）であり、その構造を下に示す。
Figure 0007219376000149
理論に拘束されないが、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及びＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＬＥＥ０１１又は他の本明細書に記載のＣＤＫ４／６阻害剤）の投与は、例えば、ＣＤＫ４／６阻害剤単独と比較して高い応答性、例えば高い寛解率及び／又は低い再発率を達成すると考えられる。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス；リダフォロリムス（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２－［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ、２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３、２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる；エベロリムス（ＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９）；セマピモド；（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２）；及びＮ２－［１，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチルＬ－セリン－（配列番号７０６）、分子内塩（ＳＦ１１２６）；及びＸＬ７６５から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンであり、ラパマイシンを約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ（例えば、６ｍｇ）の用量で連日、一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるラパマイシンを投与する。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスであり、エベロリムスを一定期間にわたり１日約２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ（例えば、１０ｍｇ）の用量において例えば２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるエベロリムスを投与する。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４－アミノ－３－（ｐ－フルオロフェニルアミノ）－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン（ＣＧＰ５７３８０）；セルコスポラミド；ＥＴＣ－１７８０４４５～２；及び４－アミノ－５－（４－フルオロアニリノ）－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤、例えばイデラリシブ又はドゥベリシブ）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイデラリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をドゥベリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。イデラリシブ（ＧＳ－１１０１又はＣＡＬ－１０１とも呼ばれる；Ｇｉｌｅａｄ）は、ＰＩ３Ｋのデルタアイソフォームを遮断する小分子である。一実施形態において、イデラリシブは、化学名：（５－フルオロ－３－フェニル－２－［（１Ｓ）－１－（７Ｈ－プリン－６－イルアミノ）プロピル］ －４（３Ｈ）－キナゾリノン）を有する。
デュベリシブ（ＩＰＩ－１４５とも呼ばれる；Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、ＰＩ３Ｋ－δ、γを遮断する小分子である。一実施形態において、デュベリシブは、化学名：（８－クロロ－２－フェニル－３－［（１Ｓ）－１－（９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル）－１（２Ｈ）－イソキノリノン）を有する。
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に抗ＣＤ２０抗体を投与されているか又は先にイブルチニブを投与されている）。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、対象は、染色体１１の長腕に欠失を有する（ｄｅｌ（１１ｑ））。他の実施形態において、対象は、ｄｅｌ（１１ｑ）を有しない。実施形態において、イデラリシブを約１００～４００ｍｇ（例えば、１００～１２５ｍｇ、１２５～１５０ｍｇ、１５０～１７５ｍｇ、１７５～２００ｍｇ、２００～２２５ｍｇ、２２５～２５０ｍｇ、２５０～２７５ｍｇ、２７５～３００ｍｇ、３２５～３５０ｍｇ、３５０～３７５ｍｇ又は３７５～４００ｍｇ）で例えばＢＩＤ投与する。実施形態において、ドゥベリシブを約１５～１００ｍｇ（例えば、約１５～２５、２５～５０、５０～７５又は７５～１００ｍｇ）で例えば１日２回投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０～５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０～３７５ｍｇ／ｍ２、３７５～４００ｍｇ／ｍ２、４００～４２５ｍｇ／ｍ２、４２５～４５０ｍｇ／ｍ２、４５０～４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５～５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内投与する。
一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ－０４６９１５０２）；Ｎ－［４－［［４－（ジメチルアミノ）－１－ピペリジニル］カルボニル］フェニル］－Ｎ’－［４－（４，６－ジ－４－モルホリニル－１，３，５－トリアジン－２－イル）フェニル］尿素（ＰＦ－０５２１２３８４、ＰＫＩ－５８７）；２－メチル－２－｛４－［３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－１－イル］フェニル｝プロパンニトリル（ＢＥＺ－２３５）；アピトリシブ（ＧＤＣ－０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４－ジフルオロ－Ｎ－｛２－（メチルオキシ）－５－［４－（４－ピリダジニル）－６－キノリニル］－３－ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８－（６－メトキシピリジン－３－イル）－３－メチル－１－（４－（ピペラジン－１－イル）－３－（トリフルオロメチル）フェニル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２（３Ｈ）－オンマレイン酸（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）；３－［４－（４－モルホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル］フェノール（ＰＩ－１０３）；５－（９－イソプロピル－８－メチル－２－モルホリノ－９Ｈ－プリン－６－イル）ピリミジン－２－アミン（ＶＳ－５５８４、ＳＢ２３４３）；及びＮ－［２－［（３，５－ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン－３－イル］－４－［（４－メチル－３－メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。例示的なＡＬＫキナーゼは、クリゾチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、セリチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、アレクチニブ（中外）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３とも呼ばれる；Ａｒｉａｄ）、エントレクチニブ（Ｉｇｎｙｔａ）、ＰＦ－０６４６３９２２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＴＳＲ－０１１（Ｔｅｓａｒｏ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０２０４８４８８を参照されたい）、ＣＥＰ－３７４４０（Ｔｅｖａ）及びＸ－３９６（Ｘｃｏｖｅｒｙ）を含む。一実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌、例えば肺癌を有する。
クリゾチニブの化学名は、３－［（１Ｒ）－１－（２，６－ジクロロ－３－フルオロフェニル）エトキシ］－５－（１－ピペリジン－４－イルピラゾール－４－イル）ピリジン－２－アミンである。セリチニブの化学名は、５－クロロ－Ｎ２－［２－イソプロポキシ－５－メチル－４－（４－ピペリジニル）フェニル］－Ｎ４－［２－（イソプロピルスルホニル）フェニル］－２，４－ピリミジンジアミンである。アレクチニブの化学名は、９－エチル－６，６－ジメチル－８－（４－モルホリノピペリジン－１－イル）－１１－オキソ－６，１１－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［ｂ］カルバゾール－３－カルボニトリルである。ブリガチニブの化学名は、５－クロロ－Ｎ２－｛４－［４－（ジメチルアミノ）－１－ピペリジニル］－２－メトキシフェニル｝－Ｎ４－［２－（ジメチルホスホリル）フェニル］－２，４－ピリミジンジアミンである。エントレクチニブの化学名は、Ｎ－（５－（３，５－ジフルオロベンジル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）アミノ）ベンズアミドである。ＰＦ－０６４６３９２２の化学名は、（１０Ｒ）－７－アミノ－１２－フルオロ－２，１０，１６－トリメチル－１５－オキソ－１０，１５，１６，１７－テトラヒドロ－２Ｈ－８，４－（メテノ）ピラゾロ［４，３－ｈ］［２，５，１１］－ベンズオキサジアザシクロテトラデシン－３－カルボニトリルである。ＣＥＰ－３７４４０の化学名は、（Ｓ）－２－（（５－クロロ－２－（（６－（４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル）－１－メトキシ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）アミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）－Ｎ－メチルベンズアミドである。Ｘ－３９６の化学名は、（Ｒ）－６－アミノ－５－（１－（２，６－ジクロロ－３－フルオロフェニル）エトキシ）－Ｎ－（４－（４－メチルピペラジン－１－カルボニル）フェニル）ピリダジン－３－カルボキサミドである。
カルシウム依存的ホスファターゼカルシニューリンを阻害する（シクロスポリン及びＦＫ５０６）又は増殖因子誘発シグナル伝達に重要であるｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物（ラパマイシン）（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６６：８０７－８１５，１９９１；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ．７３：３１６－３２１，１９９１；Ｂｉｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３－７７３，１９９３）も使用できる。更なる態様において、本発明の細胞組成物を、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド及び／又はＯＫＴ３又はＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体を使用するＴ細胞除去療法と組み合わせて（例えば、その前に、それと同時に、又はその後に）患者に投与し得る。一態様において、本発明の細胞組成物を、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えばリツキサンなどのＢ細胞除去療法後に投与する。例えば、一実施形態において、対象を高用量化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付す。一実施形態において、移植後、対象は、本発明の増殖した免疫細胞の注入を受ける。更なる実施形態において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。ＩＤＯは、アミノ酸、Ｌ－トリプトファンのキヌレニンへの分解を触媒する酵素である。多くの癌、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌及び肺癌がＩＤＯを過発現する。ｐＤＣ、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）がＩＤＯを発現できる。理論に拘束されないが、Ｌ－トリプトファンの減少（例えば、ＩＤＯによる触媒）は、Ｔ細胞アネルギー及びアポトーシスの誘発による免疫抑制性環境をもたらすと考えられる。そのため、理論に拘束されないが、ＩＤＯ阻害剤は、例えば、ＣＡＲ発現免疫細胞の抑制又は死を減少させることにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強できると考えられる。実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌又は肺癌を有する。例示的なＩＤＯ阻害剤は、１－メチル－トリプトファン、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１１９１２１６；ＮＣＴ０１７９２０５０を参照されたい）及びＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１６０４８８９；ＮＣＴ０１６８５２５５を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）のモジュレーターと組み合わせて対象に投与する。ＭＤＳＣは、末梢及び多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞は、Ｔ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の効果を障害する。理論に拘束されないが、ＭＤＳＣモジュレーター投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強すると考えられる。一実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば神経膠芽腫を有する。例示的なＭＤＳＣのモジュレーターは、ＭＣＳ１１０及びＢＬＺ９４５を含むが、これらに限定されない。ＭＣＳ１１０は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００７５７７５７を参照されたい。ＢＬＺ９４５は、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）の小分子阻害剤である。例えば、Ｐｙｏｎｔｅｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９（２０１３）：１２６４－７２を参照されたい。ＢＬＺ９４５の構造を下に示す。
Figure 0007219376000150
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を組み合わせて対象に投与する薬剤は、免疫抑制性形質細胞の活性を阻害又は低減する。免疫抑制性形質細胞は、オキサリプラチンなどのＴ細胞依存性免疫原性化学療法を妨害することが示されている（Ｓｈａｌａｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１５，５２１：９４－ １０１）。一実施形態において、免疫抑制性形質細胞は、ＩｇＡ、インターロイキン（ＩＬ）－１０及びＰＤ－Ｌ１の１つ以上を発現できる。一実施形態において、薬剤は、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞又はＢＣＭＡ ＣＡＲ発現細胞である。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体α（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド、又はＩＬ－１５ポリペプチド及びＩＬ－１５Ｒａポリペプチド両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ－１５（Ａｄｍｕｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）と組み合わせて対象に投与する。ｈｅｔＩＬ－１５は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１５Ｒａのヘテロ二量体非共有複合体である。ｈｅｔＩＬ－１５は、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第８，１２４，０８４号明細書、米国特許第２０１２／０１７７５９８号明細書、米国特許第２００９／００８２２９９号明細書、米国特許第２０１２／０１４１４１３号明細書及び米国特許第２０１１／００８１３１１号明細書に記載されている。実施形態において、ｈｅｔ－ＩＬ－１５を皮下投与する。実施形態において、対象は、癌、例えば固形癌、例えば黒色腫又は結腸癌を有する。実施形態において、対象は、転移癌を有する。
実施形態において、本明細書に記載の疾患、例えば血液学的障害、例えばＡＭＬ又はＭＤＳを有する対象に本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を薬剤、例えば細胞毒性又は化学療法剤、生物学的治療（例えば、抗体、例えばモノクローナル抗体又は細胞治療）又は阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）と組み合わせて投与する。実施形態において、対象は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を細胞毒性剤、例えばＣＰＸ－３５１（Ｃｅｌａｔｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シタラビン、ダウノルビシン、ボサロキシン（Ｓｕｎｅｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、サパシタビン（Ｃｙｃｌａｃｅｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、イダルビシン又はミトキサントロンと組み合わせて投与される。ＣＰＸ－３５１は、シタラビン及びダウノルビシンを５：１モル比で含むリポソーム製剤である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を低メチル化剤、例えばＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばアザシチジン又はデシタビンと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を生物学的治療、例えば抗体又は細胞治療、例えば２２５Ａｃリンツズマブ（Ａｃｔｉｍａｂ－Ａ；Ａｃｔｉｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＰＨ２１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）又はゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ；Ｐｆｉｚｅｒ）と組み合わせて対象に投与する。ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａは、抗ＣＤ３３抗体に結合するピロロベンゾジアゼピン二量体を含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。Ａｃｔｉｍａｂ－Ａは、アクチニウムで標識された抗ＣＤ３３抗体（リンツズマブ）である。ＩＰＨ２１０２は、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を標的とするモノクローナル抗体である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＦＬＴ３阻害剤、例えばソラフェニブ（Ｂａｙｅｒ）、ミドスタウリン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、キザルチニブ（第１三共）、クレノラニブ（Ａｒｏｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＬＸ３３９７（第１三共）、ＡＫＮ－０２８（Ａｋｉｎｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＳＰ２２１５（アステラス）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイソシトレートデヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）阻害剤、例えばＡＧ－２２１（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｇｉｏｓ）又はＡＧ－１２０（Ａｇｉｏｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を細胞サイクルレギュレーター、例えばポロ様キナーゼ１（Ｐｌｋ１）阻害剤、例えばボラセルチブ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；又はサイクリン依存性キナーゼ９（Ｃｄｋ９）阻害剤、例えばアルボシジブ（Ｔｏｌｅｒｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢ細胞受容体シグナル伝達ネットワーク阻害剤、例えばＢ細胞リンパ腫２（Ｂｃｌ－２）阻害剤、例えばベネトクラクス（Ａｂｂｖｉｅ／Ｒｏｃｈｅ）；又はブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害剤、例えばイブルチニブ（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＭ１アミノペプチダーゼ阻害剤、例えばトセドスタット（ＣＴＩ ＢｉｏＰｈａｒｍａ／Ｖｅｒｎａｌｉｓ）；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えばｐｒａｃｉｎｏｓｔａｔ（ＭＥＩ Ｐｈａｒｍａ）；多キナーゼ阻害剤、例えばリゴサチブ（Ｏｎｃｏｎｏｖａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／Ｂａｘｔｅｒ／ＳｙｍＢｉｏ）；又はペプチド性ＣＸＣＲ４逆アゴニスト、例えばＢＬ－８０４０（ＢｉｏＬｉｎｅＲｘ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、ＣＤ１２３標的ＣＡＲ発現細胞をＣＤ１２３以外の抗原、例えばＣＬＬ－１、ＢＣＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＦＬＴ－３又は葉酸受容体β標的とするＣＡＲ発現細胞と組み合わせて対象に投与する。
別の実施形態において、対象は、細胞の移植、例えば同種幹細胞移植前に本発明のＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞組成物の注入を受ける。好ましい実施形態において、ＣＤ１２３－ＣＡＲ発現細胞は、例えば、ｍＲＮＡ ＣＤ１２３ ＣＡＲのエレクトロポレーションにより一過性にＣＤ１２３ ＣＡＲを発現し、それにより、ＣＤ１２３の発現を、移植失敗を避けるためにドナー幹細胞の注入前に停止させる。
投与中又は後に本発明の化合物及び／又は他の抗癌剤に対するアレルギー反応を経験する患者がいる場合があり、そのため、多くの場合、アレルギー反応のリスクを最小化するために抗アレルギー剤を投与する。適当な抗アレルギー剤は、デキサメサゾン（例えば、デカドロン（登録商標））、ベクロメタゾン（例えば、Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標））、ヒドロコルチゾン（コルチゾン、ヒドロコルチゾンナトリウムスクシネート、ヒドロコルチゾンナトリウムホスフェートとしても知られ、商品名Ａｌａ－Ｃｏｒｔ（登録商標）、ヒドロコルチゾンホスフェート、Ｓｏｌｕ－Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）及びＬａｎａｃｏｒｔ（登録商標）として販売）、プレドニゾロン（商品名Ｄｅｌｔａ－Ｃｏｒｔｅｌ（登録商標）、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）及びＰｒｅｌｏｎｅ（登録商標）として販売）、プレドニゾン（商品名Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕｉｄ Ｒｅｄ（登録商標）、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）及びＯｒａｓｏｎｅ（登録商標）として販売）、メチルプレドニゾロン（６－メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセテート、メチルプレドニゾロンナトリウムスクシネートとしても知られ、商品名Ｄｕｒ単独（登録商標）、Ｍｅｄｒ単独（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍ－Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）及びＳｏｌｕ－Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売）などのコルチコステロイド；ジフェンヒドラミン（例えば、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標））、ヒドロキシジン及びシプロヘプタジンなどの抗ヒスタミン剤；及びβ－アドレナリン受容体アゴニスト、アルブテロール（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標））及びテルブタリン（Ｂｒｅｔｈｉｎｅ（登録商標））などの気管支拡張剤を含む。
本発明の化合物及び／又は他の抗癌剤の投与中及び後に悪心を経験する患者がいる場合があり、そのため、悪心（胃上部）及び嘔吐の予防に制吐剤を使用する。適当な制吐剤は、アプレピタント（Ｅｍｅｎｄ（登録商標））、オンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ（登録商標））、グラニセトロンＨＣｌ（Ｋｙｔｒｉｌ（登録商標））、ロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標）、デキサメサゾン（デカドロン（登録商標））、プロクロルペラジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標））、カソピタント（Ｒｅｚｏｎｉｃ（登録商標）及びＺｕｎｒｉｓａ（登録商標））及びこれらの組み合わせを含む。
処置中に経験する疼痛を軽減する投薬も、多くの場合、患者がより快適になるように処方される。タイレノール（登録商標）のような一般的非処方鎮痛剤が多くの場合に使用される。しかしながら、ヒドロコドン／パラセタモール又はヒドロコドン／アセトアミノフェン（例えば、Ｖｉｃｏｄｉｎ（登録商標））、モルヒネ（例えば、Ａｓｔｒａｍｏｒｐｈ（登録商標）又はＡｖｉｎｚａ（登録商標））、オキシコドン（例えば、ＯｘｙＣｏｎｔｉｎ（登録商標）又はＰｅｒｃｏｃｅｔ（登録商標））、塩酸オキシモルホン（Ｏｐａｎａ（登録商標））及びフェンタニル（例えば、Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ（登録商標））などのオピオイド鎮痛剤剤も軽度又は重度疼痛に有用である。
正常細胞を処置毒性から保護する及び臓器毒性を制限する試みにおいて、細胞保護剤（例えば、神経保護剤、フリーラジカルスカベンジャー、心保護剤、アントラサイクリン溢血中和剤、栄養素など）を補助剤治療として使用し得る。適当な細胞保護剤は、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、グルタミン、ジメスナ（Ｔａｖｏｃｅｐｔ（登録商標））、メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））、デクスラゾキサン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）又はＴｏｔｅｃｔ（登録商標））、キサリプロデン（Ｘａｐｒｉｌａ（登録商標））及びロイコボリン（カルシウムロイコボリン、シトロボラム因子及びフォリン酸としても既知）を含む。
コード番号、一般名又は商品名により同定した活性化合物の構造は、標準参考書「Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ」の現行版又はデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ Ｗｏｒｌｄ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から取られ得る。
本発明の化合物と組み合わせて使用できる上記化合物を、上に引用した文献に記載のものなど、当技術分野で記載されるように製造し、投与できる。
一実施形態において、本発明は、少なくとも１つの本発明の化合物（例えば、本発明の化合物）又はその薬学的に許容される塩を、ヒト又は動物対象の投与に適する薬学的に許容される担体と共に、単独で又は他の抗癌剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。
一実施形態において、本発明は、癌などの細胞増殖性疾患を有するヒト又は動物対象を処置する方法を提供する。本発明は、治療有効量の本発明の化合物（例えば、本発明の化合物）又はその薬学的に許容される塩を、単独で又は他の抗癌剤と組み合わせて対象に投与することを含む、処置を必要とするヒト又は動物対象を処置する方法を提供する。
特に、組成物は、併用療法として製剤するか又は別々に投与することができる。
併用療法において、本発明の化合物及び他の抗癌剤を同時に、一緒に、又は逐次的に特定の時間制限なく投与し得、ここで、このような投与は、患者体内で２化合物の治療的有効なレベルを提供する。
好ましい実施形態において、本発明の化合物及び他の抗癌剤を一般に任意の順番で注入又は経口により逐次的に投与する。投薬レジメンは、疾患ステージ、患者の体力、個々の薬物の安全性プロファイル及び個々の薬物の耐容性、並びに組み合わせを投与する処置医及び医療従事者に周知の他の基準により変わり得る。本発明の化合物及び他の抗癌剤を、処置に使用する特定のサイクルにより、互いに数分、数時間、数日又は数週間離れて投与する。加えて、サイクルは、処置サイクル中、一方の薬剤の他方より多い投与及び薬物投与当たりの異なる用量を含む。
本発明の別の態様において、本明細書に開示されるような１つ以上の本発明の化合物及び組み合わせパートナーを含むキットが提供される。代表的キットは、（ａ）本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、（ｂ）例えば、上記のような少なくとも１つの組み合わせパートナーを含み、それにより、このようなキットは、投与指示を含む添付文書又は他のラベリングを含み得る。
本発明の化合物は、既知治療法、例えばホルモン投与又は特に放射線と組み合わせても有利に使用され得る。本発明の化合物は、特に放射線療法に低感受性を示す腫瘍の処置のために特に放射線増感剤として使用され得る。
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用を低減又は緩和する薬剤を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞の投与に付随する副作用は、ＣＲＳ及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる血液貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）を含むが、これらに限定されない。ＣＲＳの症状は、高熱、悪心、一過性低血圧、低酸素症などを含む。ＣＲＳは、発熱、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛（ａｒｔｈａｌｇｉａｓ）、悪心、嘔吐、頭痛などの臨床的体質的徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、発疹などの臨床皮膚徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、悪心、嘔吐及び下痢などの臨床的消化器徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻呼吸及び低酸素血症などの臨床的呼吸器徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻脈、脈圧の増大、低血圧、心拍出量の増加（早期）及び心拍出量の低下（後期）などの臨床的心血管徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、凝固兆候及びｄ－二量体増加、出血の有無にかかわらず低フィブリノゲン血などの症状を含み得る。ＣＲＳは、高窒素血症などの臨床腎徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、高トランスアミナーゼ血症及び高ビリルビン血症などの臨床肝徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頭痛、精神状態の変化、混乱、せん妄、単語発見困難又はフランク失語、幻覚、振戦、ジメトリア、異常歩行、発作などの臨床的神経徴候及び症状を含み得る。
従って、本明細書に記載の方法は、対象に本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を投与し、更にＣＡＲ発現細胞処置に由来する可溶性因子のレベル増加を管理する１つ以上の薬剤の投与を含み得る。一実施形態において、対象で増加し得る可溶性因子は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－２及びＩＬ－６の１つ以上である。一実施形態において、対象において増加する因子は、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、ＩＬ－５及びフラクタルカインの１つ以上である。そのため、これらの副作用を処置するために投与する薬剤は、これらの可溶性因子の１つ以上を中和する薬剤であり得る。一実施形態において、これらの可溶性形態の１つ以上を中和する薬剤は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。このような薬剤の例は、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、ＴＮＦα阻害剤及びＩＬ－６阻害剤を含むが、これらに限定されない。ＴＮＦα阻害剤の例は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール及びゴリムマブなどの抗ＴＮＦα抗体分子である。ＴＮＦα阻害剤の別の例は、エタネルセプトなどの融合タンパク質である。小分子ＴＮＦα阻害剤は、キサンチン誘導体（例えば、ペントキシフィリン）及びブプロピオンを含むが、これらに限定されない。ＩＬ－６阻害剤の例は、トシリズマブ（ｔｏｃ）、サリルマブ、エルシリモマブ、ＣＮＴＯ ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ－９４５４２９、ＣＮＴＯ １３６、ＣＰＳＩ－２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ－１０９、ＦＥ３０１及びＦＭ１０１などの抗ＩＬ－６抗体分子である。一実施形態において、抗ＩＬ－６抗体分子は、トシリズマブである。ＩＬ－１Ｒベースの阻害剤の例は、アナキンラである。
一実施形態において、対象にとりわけ例えばメチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなどのコルチコステロイドを投与する。
一実施形態において、対象に例えばノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、バソプレシン又はこれらの組み合わせなどの昇圧剤を投与する。
一実施形態において、対象に解熱剤を投与できる。一実施形態において、対象に鎮痛剤を投与できる。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を対象に投与できる。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る、例えば、薬剤は、チェックポイント阻害剤である。阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載のような阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写－アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＣＡＲ発現細胞の阻害分子の発現を阻害できる。一実施形態において、阻害剤は、ｓｈＲＮＡである。一実施形態において、阻害分子は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態において、阻害分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子を、ＣＡＲの要素、例えば要素全部をコードする核酸と連結する。
一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子を、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が例えばＣＡＲ発現細胞内で発現されるようにプロモーター、例えばＨ１又はＵ６駆動プロモーターに操作可能に連結する。例えば、Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ Ｇ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｓｉＲＮＡ，”Ｃｈａｐｔｅｒ ３，ｉｎ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ：Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ（ｅｄｓ．Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ ａｎｄ Ｒｏｓｓｉ）を参照されたい。Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ，２００７；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ ＴＲ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６：５５０－５５３；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４９７－５００。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸分子を含む同じベクター、例えばレンチウイルスベクター上に存在する。このような実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸に対して５’又は３’に位置するベクター、例えばレンチウイルスベクターに位置する。Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸と同一又は異なる方向で転写され得る。
一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸分子を含むベクター以外のベクターに存在する。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞内で一過性に発現される。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞のゲノムに安定に統合される。
Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現の阻害に有用なｄｓＲＮＡ分子の例であって、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子がＰＤ－１である例を下に提供する。
下記表１８Ａに、ＤＮＡ配列を表す配列番号２１６～２６３と共に、ＰＤＣＤ１（ＰＤ１）ＲＮＡｉ剤の名称（マウスＰＤＣＤ１遺伝子ＮＭ＿００８７９８．２におけるそれらの位置由来）を提供する。センス（Ｓ）及びアンチセンス（ＡＳ）配列の両方を本表では１９ｍｅｒ及び２１ｍｅｒ配列として提供する。位置（ＰｏＳ、例えば１７６）は、マウスＰＤＣＤ１遺伝子ＮＭ＿００８７９８．２における位置番号由来であることに留意されたい。配列番号を「センス１９」配列番号６０８～６１９；「センス２１」配列番号６２０～６３１；「アセンス２１」配列番号６３２～６４３；「アセンス１９」配列番号６４４～６５５に対応する１２群で示す。
Figure 0007219376000151
Figure 0007219376000152
下記表１９Ａに、ＤＮＡ配列を表す配列番号２６４～３１１と共に、ＰＤＣＤ１（ＰＤ１）ＲＮＡｉ剤（ヒトＰＤＣＤ１遺伝子におけるそれらの位置由来）を提供する。センス（Ｓ）及びアンチセンス（ＡＳ）配列の両方を本表では１９ｍｅｒ及び２１ｍｅｒ配列として提供する。配列番号を「センス１９」配列番号「センス１９」配列番号６５６～６６７；「センス２１」配列番号６６８～６７９；「アセンス２１」配列番号６８０～６９１；「アセンス１９」配列番号６９２～７０３に対応する１２群で示す。
Figure 0007219376000153
一実施形態において、阻害シグナルの阻害剤は、例えば、阻害分子と結合する抗体又は抗体フラグメントであり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２又はＣＴＬＡ４に結合する抗体又は抗体フラグメントであり得る（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０及びＭＤＸ－１０１とも称し、ヤーボイ（登録商標）として市販；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前はチシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６として既知。））。一実施形態において、薬剤は、ＴＩＭ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。一実施形態において、薬剤は、ＬＡＧ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤、例えば阻害分子の阻害剤を同種異系ＣＡＲ、例えば同種異系本明細書に記載のＣＡＲと組み合わせて投与する（例えば、本明細書における同種異系ＣＡＲに記載）。
ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ－１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．１９９６ Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：７６５－７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．２０００ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９２：１０２７－３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．２００１ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２：２６１－８；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：６３４－４３）。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８１：２８１－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５４：３０７－３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ－Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。
ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で入手可能であり、本発明のＣＡＲと組み合わせて使用され得る。例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ１１０６とも称す；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＰＤ１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。ピディリズマブ（ＣＴ－０１１；Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに開示されている。ペンブロリズマブ（以前はランブロリズマブとして知られ、ＭＫ０３４７５とも称される；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペンブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ１抗体は、米国特許第８，３５４，５０９号明細書及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示される。ＭＥＤＩ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）は、ＰＤＬ１と結合し、リガンドとＰＤ１との相互作用を阻害するヒトモノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は、ＰＤ－Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＰＤ－Ｌ１に対するＭＤＰＬ３２８０Ａ及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号明細書及び米国特許出願公開２０１２００３９９０６号明細書に記載されている。他の抗ＰＤ－Ｌ１結合剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（重鎖及び軽鎖可変領域は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットの配列番号２０及び２１に示される）及びＭＤＸ－１ １０５（別名ＢＭＳ－９３６５５９及び例えば国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに開示される抗ＰＤ－Ｌ１結合剤）である。ＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示）は、ＰＤ１とＢ７－Ｈ１の相互作用を遮断するＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合可溶性受容体である。他の抗ＰＤ１抗体は、とりわけ、ＡＭＰ ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書に開示の抗ＰＤ１抗体を含む。
一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体又はそのフラグメントは、参照によりその全体が本明細書に援用される「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ－１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書に記載のような抗ＰＤ－１抗体分子である。一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ａ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｂ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｃ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｄ又はＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｅのいずれかから選択される抗体からの重鎖及び軽鎖可変領域の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲ（又は集合的にＣＤＲ全部）；又は米国特許出願公開２０１５／０２１０７６９号明細書の表１に記載される又は表１におけるヌクレオチド配列によりコード化される又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列；又は密接に関係するＣＤＲ、例えば少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、又は４つ以下の改変（例えば、置換、欠失又は挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
更に別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ａ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｂ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｃ、ＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｄ又はＢＡＰ０４９－Ｃｌｏｎｅ－Ｅのいずれかから選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの可変領域；又は米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書の表１に記載されるか若しくは表１におけるヌクレオチド配列によりコード化されるような、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列を含む。
ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリン－３）も、特にＩＦＮ－ｇ分泌ＣＤ４＋Ｔヘルパー１及びＣＤ８＋Ｔ細胞毒性１細胞においてＴ細胞機能を負に制御し、Ｔ細胞疲弊に重要な役割を有する。ＴＩＭ３とそのリガンド、例えばガレクチン－９（Ｇａｌ９）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＨＭＧＢ１の相互作用の阻害は、免疫応答を高め得る。ＴＩＭ３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲと組み合わせて使用され得る。例えば、ＴＩＭ３を標的とする抗体、抗体フラグメント、小分子又はペプチド阻害剤は、そのリガンドとの相互作用を阻害するためにＴＩＭ３のＩｇＶドメインに結合する。ＴＩＭ３を阻害する抗体及びペプチドは、国際公開第２０１３／００６４９０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１００２４７５２１号明細書に開示されている。他の抗ＴＩＭ３抗体は、ＲＭＴ３－２３のヒト化バージョン（Ｎｇｉｏｗ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，７１：３５４０－３５５１に開示）及びクローン８Ｂ．２Ｃ１２（Ｍｏｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｎａｔｕｒｅ，４１５：５３６－５４１に開示）を含む。ＴＩＭ３及びＰＤ－１を阻害する二特異性抗体は、米国特許出願公開第２０１３０１５６７７４号明細書に開示されている。
一実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体又はそのフラグメントは、参照によりその全体が本明細書に援用される「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＴＩＭ３ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書に記載のような抗ＴＩＭ３抗体である。一実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体分子は、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２３のいずれかから選択される抗体からの重鎖及び軽鎖可変領域の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲ（又は集合的にＣＤＲ全部）；又は米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書の表１～４に記載されるような若しくは表１～４のヌクレオチド配列によりコード化されるか、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列又は密接に関係するＣＤＲ、例えば少なくとも１つのアミノ酸改変を有するが、改変（例えば、置換、欠失又は挿入、例えば保存的置換）が２つ、３つ、又は４つ以下ＣＤＲを含む。
更に別の実施形態において、抗ＴＩＭ３抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２３のいずれかから選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの可変領域；又は米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号明細書の表１～４に記載のような若しくは表１～４のヌクレオチド配列によりコード化されるか、又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列を含む。
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３及び／又はＣＥＡＣＡＭ－５阻害剤）である。一実施形態において、ＣＥＡＣＡＭの阻害剤は、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体分子である。例示的な抗ＣＥＡＣＡＭ－１抗体は、国際公開第２０１０／１２５５７１号パンフレット、国際公開第２０１３／０８２３６６号パンフレット、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレット及び国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレットに開示され、例えばモノクローナル抗体３４Ｂ１、２６Ｈ７及び５Ｆ４；又は例えば米国特許出願公開第２００４／００４７８５８号明細書、米国特許第７，１３２，２５５号明細書及び国際公開第９９／０５２５５２号パンフレットに開示のようなその組み換え形態である。他の実施形態において、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体は、例えば、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１０ Ｓｅｐ ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９（ＤＯＩ：１０：１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２１１４６）に記載のようにＣＥＡＣＡＭ－５と結合するか、又は例えば国際公開第２０１３／０５４３３１号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１８号明細書に記載のようにＣＥＡＣＡＭ－１及びＣＥＡＣＡＭ－５と交差反応する。
理論に拘束されることを望まないが、ＣＥＡＣＡＭ－１及びＣＥＡＣＡＭ－５などの癌胎児性抗原細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）は、少なくとも部分的に抗腫瘍免疫応答の阻害を仲介すると考えられる（例えば、Ｍａｒｋｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２ Ｍａｒ １５；１６８（６）：２８０３－１０；Ｍａｒｋｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ Ｎｏｖ １；１７７（９）：６０６２－７１；Ｍａｒｋｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９ Ｆｅｂ；１２６（２）：１８６－２００；Ｍａｒｋｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０ Ｆｅｂ；５９（２）：２１５－３０；Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１２ Ｊｕｎ；１１（６）：１３００－１０；Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５ Ｊｕｎ １；１７４（１１）：６６９２－７０１；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１０ Ｓｅｐ ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９を参照されたい）。例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１は、ＴＩＭ－３のヘテロ親和性リガンドとして、及びＴＩＭ－３介在Ｔ細胞耐容性及び疲弊に役割を有するとして記載されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１３８４８）。実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ－１及びＴＩＭ－３の共遮断は、異種移植結腸直腸癌モデルにおいて抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）、前掲を参照されたい）。他の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ－１及びＰＤ－１の共遮断は、例えば、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレットに記載されるようにＴ細胞耐容性を減少させる。そのため、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤を、本明細書に記載の他の免疫調節剤（例えば、抗ＰＤ－１及び／又は抗ＴＩＭ－３阻害剤）と使用して、癌、例えば黒色腫、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌及び本明細書に記載の他の癌に対する免疫応答を増強させ得る。
ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子－３又はＣＤ２２３）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊に役割を有することが示されている、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞に発現される細胞表面分子である。ＬＡＧ－３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で入手可能であり、本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲと組み合わせて使用され得る。例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂ）は、ＬＡＧ３を標的とするモノクローナル抗体である。ＩＭＰ７０１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）は、アンタゴニストＬＡＧ－３抗体であり、ＩＭＰ７３１（Ｉｍｍｕｔｅｐ及びＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、枯渇性ＬＡＧ－３抗体である。他のＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ３の可溶性部分とＭＨＣクラスＩＩ分子のＩｇの組み換え融合タンパク質であり、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）である。他の抗体は、例えば、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレットに開示されている。
一実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体又はそのフラグメントは、参照によりその全体が本明細書に援用される「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＬＡＧ３ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書に記載のような抗ＬＡＧ３抗体である。
一実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９－Ｓｅｒ又はＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０－Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｆ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｇ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｈ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｉ又はＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｊのいずれかから選択される抗体からの重鎖及び軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＣＤＲ（又は集合的に全てのＣＤＲ）；又は米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書の表１に記載されるもの；又は表１のヌクレオチド配列によってコードされるもの；又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列、又は密接に関連するＣＤＲ、例えば同一であるか若しくは少なくとも１つのアミノ酸改変であるが、２つ、３つ、又は４つ以下の改変（例えば、置換、欠失、又は挿入、例えば保存的置換）を有するＣＤＲを含む。
更に別の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えばＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９－Ｓｅｒ又はＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０－Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｆ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｇ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｈ、ＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｉ又はＢＡＰ０５０－Ｃｌｏｎｅ－Ｊのいずれかから選択される抗体からの少なくとも１つ、２つ、３つ又は４つの可変領域；又は米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号明細書の表１に記載されるもの；又は表１のヌクレオチド配列によってコードされるもの；又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％又はそれを超えて同一）である配列を含む。
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、例えば、第１ドメイン及び第２ドメインを含む融合タンパク質であり得、ここで、第１ドメインは、阻害分子又はそのフラグメントであり、第２ドメインは、陽性シグナルと関係するポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである。一実施形態において、陽性シグナルと結合するポリペプチドは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８、ＣＤ２７及び／又はＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は例えば本明細書に記載の例えばＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態において、融合タンパク質は、ＣＡＲを発現するのと同じ細胞により発現される。別の実施形態において、融合タンパク質は、ＣＤ１２３ ＣＡＲを発現しない細胞、例えばＴ細胞により発現される。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ｍｉＲ－１７－９２である。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの活性を増強する薬剤は、サイトカインである。サイトカインは、Ｔ細胞増殖、分化、生存及び恒常性に関連する重要な機能を有する。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を受ける対象に投与できるサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８及びＩＬ－２１又はこれらの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、投与するサイトカインは、ＩＬ－７、ＩＬ－１５又はＩＬ－２１又はこれらの組み合わせである。サイトカインを１日１回又は１日２回以上、例えば１日２回、１日３回又は１日４回投与できる。サイトカインを２日以上投与でき、例えばサイトカインを２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間又は４週間投与する。例えば、サイトカインを１日１回、７日間投与する。
実施形態において、サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与する。サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と同時に又は一緒に投与でき、例えば同じ日に投与する。サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と同じ医薬組成物に製剤するか又は別の医薬組成物に製剤することができる。代わりに、サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与後間もなく、例えばＣＡＲ発現Ｔ細胞投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後に投与し得る。１日を超える投薬レジメンでサイトカインを投与する実施形態において、サイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与と同じ日であり得、又はサイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後であり得る。一実施形態において、１日目にＣＡＲ発現Ｔ細胞を対象に投与し、２日目にサイトカインを１日１回、翌７日間投与する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与するサイトカインは、ＩＬ－７、ＩＬ－１５又はＩＬ－２１である。
他の実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞の投与から一定期間後、例えばＣＡＲ発現細胞の投与から少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に投与する。一実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞に対する対象の応答の評価後に投与する。例えば、対象に本明細書に記載の用量及びレジメンに従い、ＣＡＲ発現細胞を投与する。ＣＡＲ発現細胞治療に対する対象の応答を、腫瘍増殖阻止、循環腫瘍細胞減少又は腫瘍退縮を含む本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ発現細胞の投与２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に評価する。ＣＡＲ発現細胞治療に対して十分な応答を示さない対象にサイトカインを投与し得る。ＣＡＲ発現細胞治療に対して応答が最適以下である対象へのサイトカインの投与は、ＣＡＲ発現細胞有効性又は抗癌活性を改善する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与するサイトカインは、ＩＬ－７である。
ＣＤ１９阻害剤との組み合わせ
本明細書に開示する方法及び組成物をＣＤ１９阻害剤と組み合わせて使用できる。一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞及びＣＤ１９阻害剤（例えば、ＣＤ１９と結合するＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＤ１９と結合するＣＡＲ分子を発現する１つ以上の細胞）を同時に、又は一緒に、又は逐次的に投与する。
一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞及びＣＤ１９阻害剤を対象に同時に又は一緒に注入し、例えば同じ注入液に混合する。例えば、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞及びＣＤ１９ＣＡＲ含有細胞集団を一緒に混合する。代わりに、ＣＤ１２３ＣＡＲ及びＣＤ１９ＣＡＲを共発現する細胞集団を投与する。他の実施形態において、同時の投与は、例えば、予定した間隔内（例えば、互いに１５分、３０分又は４５分以内）のＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞及びＣＤ１９阻害剤の別々の投与を含む。
一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞の開始及びＣＤ１９阻害剤の開始は、互いに１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、１８時間又は２４時間以内又は互いに１日、２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、６０日、８０日又は１００日以内である。一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞の送達終了及びＣＤ１９阻害剤の送達終了は、互いに１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、１８時間又は２４時間以内又は互いに１日、２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、６０日、８０日又は１００日以内である。一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞の送達（例えば、注入）終了とＣＤ１９阻害剤の送達（例えば、注入）終了との間の重複は、少なくとも１分、２分、３分、４分、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分である。一実施形態において、ＣＤ１９阻害剤をＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞の前に投与する。他の実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞をＣＤ１９阻害剤の前に投与する。
一実施形態において、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞を、ＣＤ１９阻害剤（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ分子を発現する１つ以上の細胞）が対象に存在している間（例えば、増殖中の細胞）に投与する。他の実施形態において、ＣＤ１９阻害剤（例えば、ＣＤ１９ＣＡＲ分子を発現する１つ以上の細胞）を、ＣＤ１２３ＣＡＲ含有細胞が対象に存在している間（例えば、増殖中の細胞）に投与する。
ＣＤ１９阻害剤は、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞若しくは抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単若しくは二特異性抗体）又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートを含むが、これらに限定されない。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤ１９ ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞）（例えば、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のような例えばＣＴＬ０１９）と組み合わせて対象に投与する。
他の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３）に記載のようなヒト化抗原結合ドメインを含むＣＤ１９ ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞）と組み合わせて対象に投与する。
ＣＤ１９阻害剤（例えば、第１のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞）及び第２のＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞は、同じ細胞型又は異なる細胞型により発現され得る。例えば、一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、ＣＤ１２３ ＣＡＲを発現する細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞であるか又はＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞であり、ＣＤ１２３ ＣＡＲを発現する細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞は、Ｔ細胞であり、ＣＤ１２３ ＣＡＲを発現する細胞はＮＫ細胞であるか又はＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞は、ＮＫ細胞であり、ＣＤ１２３ ＣＡＲを発現する細胞は、Ｔ細胞である。他の実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する細胞及びＣＤ１２３ ＣＡＲを発現する細胞は、両方ともＮＫ細胞であるか又は両方ともＴ細胞、例えば両方ともＣＤ４＋Ｔ細胞又は両方ともＣＤ８＋Ｔ細胞である。更に他の実施形態において、単一細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ及びＣＤ１２３ ＣＡＲを発現し、この細胞は、例えば、ＮＫ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞である。
第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは、同一又は異なる細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例えば、一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、共刺激性ドメイン、例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８共刺激性ドメインを含むか、一実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲは、共刺激性ドメイン、例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。他の実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ及びＣＤ１２３ ＣＡＲの各々は、同じタイプの一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むが、ＣＤ１９ ＣＡＲ及びＣＤ１２３ ＣＡＲは、異なる共刺激性ドメインを含み、例えば、（１）ＣＤ１９ ＣＡＲは、４１ＢＢ共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、異なる共刺激性ドメイン、例えばＣＤ２７共刺激性ドメインを含むか、（２）ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ２７共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、異なる共刺激性ドメイン、例えば４１ＢＢ共刺激性ドメインを含むか、（３）ＣＤ１９ ＣＡＲは、４１ＢＢ共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激性ドメインを含むか、（４）ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激性ドメインを含み、及びＣＤ１２３ ＣＡＲは、異なる共刺激性ドメイン、例えば４１ＢＢ共刺激性ドメインを含むか、（５）ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ２７共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激性ドメインを含むか、又は（６）ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激性ドメインを含み、ＣＤ１２３ ＣＡＲは、ＣＤ２７共刺激性ドメインを含む。別の実施形態において、細胞は、ＣＤ１９抗原結合ドメイン及びＣＤ１２３抗原結合ドメインの両方を含むＣＡＲ、例えば二特異性抗体を含む。
実施形態において、対象は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、例えばＣＤ１９陽性ＡＭＬ又はＣＤ１９陰性ＡＭＬを有する。実施形態において、対象は、ＣＤ１９＋リンパ腫、例えばＣＤ１９＋非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ＣＤ１９＋ＦＬ又はＣＤ１９＋ＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、再発性又は難治性ＣＤ１９＋リンパ腫を有する。実施形態において、リンパ球枯渇性化学療法剤をＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞の投与前に、それと同時に、又はその後に投与（例えば、注入）する。一例において、リンパ球枯渇性化学療法剤をＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞の投与前に対象に投与する。例えば、リンパ球枯渇性化学療法剤は、ＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞注入の１～４日（例えば、１日、２日、３日又は４日）前に終わる。実施形態において、複数用量のＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞を例えば本明細書に記載のように投与する。例えば、単一用量は、約５×１０８個のＣＤ１９ ＣＡＲＴ細胞を含む。実施形態において、リンパ球枯渇性化学療法剤を、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えば非ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に、又はその後に対象に投与する。実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲＴを、非ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載の非ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に、又はその後に対象に投与する。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、ＣＤ１２３の発現と関係する疾患、例えば本明細書に記載の癌の処置のために、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞、例えば参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のような例えばＣＴＬ０１９と組み合わせて対象に投与する。理論に拘束されないが、ＣＡＲ発現細胞と組み合わせたＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞の投与は、初期細胞系統癌細胞、例えば癌幹細胞を標的とすることにより、免疫応答を調節することにより、制御性Ｂ細胞を枯渇することにより及び／又は腫瘍微小環境を改善することにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を改善すると考えられる。例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞は、初期細胞系統マーカー、例えば癌幹細胞及びＣＤ１９発現細胞を発現する癌細胞を標的とするのに対し、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、後期細胞系統マーカー、例えばＣＤ１２３を発現する癌細胞を標的とする。この前処理アプローチは、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を改善できる。このような実施形態において、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞を、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に、又はその後に投与する。
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ、例えばＣＤ１９ ＣＡＲも発現する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞及びＣＤ１９ ＣＡＲを、本明細書に記載の癌、例えばＡＭＬの処置ために対象に投与する。一実施形態において、一方又は両方のＣＡＲ分子の配置は、初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態において、一方又は両方のＣＡＲ分子の配置は、初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、若しくは５つ、又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。このような実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子及びＣＤ１９ ＣＡＲは、同一若しくは異なる初代細胞内シグナル伝達ドメイン、同一若しくは異なる共刺激性シグナル伝達ドメイン、又は同数若しくは異なる数の共刺激性シグナル伝達ドメインを有し得る。代わりに、本明細書に記載のＣＡＲ及びＣＤ１９ ＣＡＲは、スプリットＣＡＲとして配置され、そこで、ＣＡＲ分子の一方は、抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４－１ＢＢ）を含み、他のＣＡＲ分子は、抗原結合ドメイン及び初代細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を含む。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えばＣＤ１９ ＣＡＲは、同じベクターにあるか又は２つの異なるベクターにある。本明細書に記載のＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えばＣＤ１９ ＣＡＲが同じベクターに実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えばＣＤ１９ ＣＡＲをコードする核酸配列は、同じフレーム内にあり、１つ以上のペプチド開裂部位、例えばＰ２Ａにより分離される。
他の実施形態において、本明細書に開示するＣＡＲ発現細胞を抗ＣＤ１９抗体阻害剤と組み合わせて投与する。一実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３）に記載のヒト化抗原結合ドメイン又はそのコンジュゲートである。他の例示的抗ＣＤ１９抗体又はそのフラグメント若しくはそのコンジュゲートは、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＥＤＩ－５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ ＬＬＣ）、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（Ｍａｓｏｎｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＭＯＲ－２０８（別名ＸｍＡｂ－５５７４；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＸｍＡｂ－５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ－１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｈａｍｍｅｒ．ＭＡｂｓ．４．５（２０１２）：５７１－７７を参照されたい。ブリナツモマブは、２つのｓｃＦｖを含む二特異性抗体、ＣＤ１９に結合するもの及びＣＤ３に結合するものである。ブリナツモマブは、Ｔ細胞を指向し、癌細胞を攻撃する。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００２７４７４２及びＮＣＴ０１２０９２８６を参照されたい。ＭＥＤＩ－５５１は、増強した抗体依存性細胞介在細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有するように操作されたＦｃを有するヒト化抗ＣＤ１９抗体ｗである。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０１９５７５７９を参照されたい。Ｃｏｍｂｏｔｏｘは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する免疫毒素の混合物である。免疫毒素は、脱グリコシル化リシンＡ鎖に融合したｓｃＦｖ抗体フラグメントからなる。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＨｅｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３１．１２（２００９）：９３６－４１；Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５４．４（２０１１）：４７１－６を参照されたい。ＤＴ２２１９ＡＲＬは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的化し、２つのｓｃＦｖ及び切断型ジフテリア毒素を含む二特異性免疫毒素である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００８８９４０８を参照されたい。ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａは、合成細胞毒性細胞致死剤、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）と連結した抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体からなる抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１７８６０９６及びＮＣＴ０１７８６１３５を参照されたい。ＳＡＲ３４１９は、開裂可能リンカーによりメイタンシン誘導体にコンジュゲートした抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体を含む抗ＣＤ１９抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０．２（２０１２）：２７７６－８２；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００５４９１８５；及びＢｌａｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１；１７：６４４８－５８を参照されたい。ＸｍＡｂ－５８７１は、Ｆｃ操作、ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。ＭＤＸ－１３４２は、ＡＤＣＣが増強されたヒトＦｃ操作抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。実施形態において、抗体分子は、二特異性抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ３分子である。例えば、ＡＦＭ１１は、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的とする二特異性抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０６０９１を参照されたい。一実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ１９抗体を治療剤、例えば化学療法剤、ペプチドワクチン（例えば、Ｉｚｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ １０８：９６３－９７１に記載のもの）、免疫抑制剤又は免疫除去剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、ＦＫ５０６、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、ｃｙｔｏｘｉｎ、フルダラビン、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８又はサイトカインとコンジュゲート又は他の方法で結合させる。
低用量のｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせ
本明細書に記載の方法は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１などのラパログを含むアロステリックｍＴＯＲ阻害剤を使用する。低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与（例えば、それ自体、免疫系を完全に抑制するには不十分であるが、免疫機能の改善に十分である用量）は、対象における免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＣＡＲ発現細胞の性能を最適化できる。ｍＴＯＲ阻害を測定する方法、用量、処置レジメン及び適当な医薬組成物は、参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１５／０１２４００３６号明細書に記載される。
例示的なｍＴＯＲ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害を測定する方法、投与量、処置レジメン、及び適当な医薬組成物は、参照によりその全体が本明細書に援用される、２０１６年４月８日に出願された国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレットの３１３～３２０ページにも記載されている。
本発明によって有用なｍＴＯＲ阻害剤は、前記のいずれかのプロドラッグ、誘導体、薬学的に許容される塩又はその類似体も含む。ＲＡＤ００１などのｍＴＯＲ阻害剤は、本明細書に記載の特定の用量に基づき、当技術分野で十分に確立された方法に基づいて送達用に製剤され得る。特に、米国特許第６，００４，９７３号明細書（参照により本明細書に援用される）は、本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤で使用できる製剤例を提供する。
ＣＡＲ有効性又は試料適性を評価するための方法及びバイオマーカー
別の態様において、本発明は、対象（例えば、癌を有する対象、例えば血液癌）におけるＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ治療）の有効性又はＣＡＲ治療（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ治療）のための試料（例えば、アフェレーシス試料）の適性を評価又はモニタリングする方法に関する。方法は、ＣＡＲ治療又は試料適性に対する有効性の値を得ることを含み、ここで、前記値は、ＣＡＲ発現細胞療法の有効性又は適性の指標である。実施形態において、方法は、参照により本明細書に援用される国際公開第２０１６／０５７７０５号パンフレットに記載のように実施される。
バイオポリマー送達方法
一実施形態において、本明細書に開示する１つ以上のＣＡＲ発現細胞をバイオポリマー足場、例えばバイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマーをバイオポリマー足場、例えばバイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマー足場は、生体適合性（例えば、炎症性若しくは免疫応答を実質的に誘発しない）及び／又は天然に存在し得るか若しくは合成である生分解性ポリマーを含む。
適当なバイオポリマーの例は、寒天、アガロース、アルギン酸、アルギン酸／リン酸カルシウムセメント（ＣＰＣ）、β－ガラクトシダーゼ（β－ＧＡＬ）、（１，２，３，４，６－ペンタアセチルａ－Ｄ－ガラクトース）、セルロース、キチン、キトサン、コラーゲン、エラスチン、ゼラチン、ヒアルロン酸コラーゲン、ヒドロキシアパタイト、ポリ（３－ヒドロキシブチレート－コ－３－ヒドロキシ－ヘキサノエート）（ＰＨＢＨＨｘ）、ポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリビニルアルコール）（ＰＶＡ）、絹、大豆タンパク質及び大豆タンパク質単離体の、単独で又は任意の他のポリマー組成物とのあらゆる濃度及びあらゆる比での混合物を含むが、これらに限定されない。バイオポリマーは、接着又は遊走促進分子、例えばリンパ球のコラーゲン受容体に結合するコラーゲン模倣ペプチド及び／又は送達する細胞の送達、増殖又は機能、例えば抗癌活性を増強する刺激分子で増強又は改変され得る。バイオポリマー足場は、注射可能な例えばゲル又は半固体又は固体組成物であり得る。
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、対象への送達前にバイオポリマー足場上に播種する。実施形態において、バイオポリマー足場は、例えば、足場のバイオポリマーに取り込まれた又はコンジュゲートされた、更に本明細書に記載の１つ以上の更なる治療剤（例えば、別のＣＡＲ発現細胞、抗体又は小分子）又はＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を含む。実施形態において、バイオポリマー足場を例えば腫瘍内に注射するか、又は腫瘍若しくは抗腫瘍効果を仲介するのに十分に腫瘍に近位に外科的にインプラントする。バイオポリマー組成物及びその送達のための方法の更なる例は、Ｓｔｅｐｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３３：９７－１０１；及び国際公開第２０１４／１１０５９１号パンフレットに記載される。
医薬組成物及び処置
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与用に製剤される。
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
一実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ－Ｇ核酸、ＨＩＶ ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
「免疫学的に有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物を、１０４～１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの例において１０５～１０６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。
一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、少なくとも約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、最大約１×１０６、１．１×１０６、２×１０６、３．６×１０６、５×１０６、１×１０７、１．８×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８又は５×１０８細胞／ｋｇを含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、約１．１×１０６～１．８×１０７細胞／ｋｇを含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９細胞を含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、少なくとも約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９細胞を含む。一実施形態において、ＣＡＲ細胞（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ細胞又はＣＤ１９ ＣＡＲ細胞）の用量は、最大約１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９又は５×１０９細胞を含む。
細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
一態様において、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、続いて血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからのＴ細胞を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させたＴ細胞を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一態様において、Ｔ細胞を、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、Ｔ細胞を、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に投与し得る。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
特定の例示的態様において、対象は、白血球を採取し、エクスビボで富化又は枯渇させて、目的の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を選択及び／又は単離する白血球除去を受け得る。これらの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）単離体を当技術分野で知られる方法により増殖させ、１つ以上の本発明のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が創製されるように処理し得る。処置を必要とする対象を、その後、高用量の化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付し得る。一態様において、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖させた本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の注入を受ける。更なる態様において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
患者に投与すべき上記処置の用量は、処置する状態の正確な性質及び処置のレシピエントにより変わる。ヒト投与のためのスケーリングは、当技術分野で認識されている習慣に従って実施できる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者に１～約１００ｍｇの範囲であり、通常、連日で１～３０日の期間にわたって投与する。好ましい１日用量は、１～１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例において最大４０ｍｇ／日までの高用量を使用し得る（米国特許６，１２０，７６６号明細書に記載）。
一実施形態において、ＣＡＲを、例えばインビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入し、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の初期投与及びその後の本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回以上の投与を受け、ここで、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日未満で行う。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間当たりに行い、例えば本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の２、３又は４投与を１週間当たりに投与する。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１週間当たり１回を超える投与を受け（例えば、１週間当たり２回、３回又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、続いて１週間、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を投与されず、その後、更にＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりでＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超える投与）を対象に投与する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の１回を超えるサイクルの投与を受け、各サイクル間の期間は、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日又は３日より短い。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を隔日で１週間３回投与する。一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超えて投与する。
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）（例えば、ＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）を、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して産生する。この方法で産生したＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、安定なＣＡＲ発現を有する。
一態様において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞を、γレトロウイルスベクター、例えば本明細書に記載のγレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用して産生する。これらのベクターを使用して産生されたＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ Ｔ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞は、安定なＣＡＲ発現を有し得る。
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、形質導入４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日後、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ ＣＡＲベクター送達により行われ得る。一態様において、ＣＡＲ ＲＮＡを電気穿孔法により細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に形質導入する。
一過性に発現されるＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖ担持ＣＡＲを伴う）を使用して処置される患者で生じ得る可能性のある問題は、複数処置後のアナフィラキシーである。
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０～１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）注入中断は、１０～１４日を超えて継続してはならない。
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、癌免疫療法、例えば癌抗体療法又はＴ細胞免疫療法（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）の結果として生じ得る潜在的に生命を脅かすサイトカインと関連する毒性である。ＣＲＳは、多数のリンパ球及び／又は骨髄性細胞が活性化時に炎症性サイトカインを放出する場合の高レベルの免疫活性化の結果である。ＣＲＳの重症度及び症状の開始のタイミングは、対象における免疫細胞活性化の規模、投与される療法の種類、及び／又は全身腫瘍組織量の程度に応じて変化し得る。癌のためのＴ細胞療法の場合、症状の開始は、例えば、インビボでのＴ細胞増殖のピークがある場合、典型的には、Ｔ細胞療法の投与後の数日～数週間である。例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２４．２（２０１４）：１８８－９５を参照されたい。
ＣＲＳの症状は、神経毒性、播種性血管内凝固、心機能障害、成人呼吸窮迫症候群、腎不全、及び／又は肝不全を含み得る。例えば、ＣＲＳの症状は、悪寒を伴う若しくは伴わない発熱、疲労、不快感、筋肉痛、嘔吐、頭痛、悪心、食欲不振、関節痛、下痢、発疹、低酸素症、多呼吸、低血圧、脈圧拡大、心拍出量の潜在的な低下（後期）、心拍出量の増加（前期）、高窒素血症、出血を伴う若しくは伴わない低フィブリノゲン血症、Ｄ－ダイマーの上昇、高ビリルビン血症、高トランスアミナーゼ血症、混乱、せん妄、精神状態の変化、幻覚、振戦、発作、歩行の変化、喚語困難、明らかな失語症、又は認知症を含み得る。
ＩＬ－６は、ＣＲＳ毒性のメディエータであると考えられる。例えば、同上を参照されたい。高いＩＬ－６レベルは、前炎症性ＩＬ－６シグナル伝達カスケードを開始させ、１つ以上のＣＲＳ症状を誘導し得る。一部の例では、Ｃ－反応性タンパク質（ＣＲＰ）（例えば、ＩＬ－６に応答して肝臓によって産生される生体分子）のレベルは、ＩＬ－６活性の測定値であり得る。一部の例では、ＣＲＰレベルは、ＣＲＳ中に数倍（例えば、数ログ）増加し得る。ＣＲＰレベルを、本明細書に記載の方法、及び／又は当業界で利用可能な標準的な方法を使用して測定することができる。
ＣＲＳグレード付け
一部の実施形態において、ＣＲＳを以下のような１～５の重症度にグレード付けることができる。グレード１～３は、重症ＣＲＳ未満である。グレード４～５は、重症ＣＲＳである。グレード１のＣＲＳについては、対症処置のみが必要であり（例えば、悪心、発熱、疲労、筋肉痛、不快感、頭痛）、症状は、生命を脅かすものではない。グレード２のＣＲＳについては、症状は適度の介入を必要とし、一般的に適度の介入に応答する。グレード２のＣＲＳを有する対象は、液体若しくは１種の低用量昇圧剤に応答する低血圧を発症するか、又は対象は、グレード２の臓器毒性若しくは低流量の酸素（４０％未満の酸素）に応答する軽度の呼吸器症状を発症する。グレード３のＣＲＳ対象では、低血圧は、一般的には、液体療法又は１種の低用量昇圧剤によって逆転させることができない。これらの対象は、一般的には、より低流量の酸素を必要とし、グレード３の臓器毒性（例えば、腎若しくは心機能障害又は血液凝固障害）及び／又はグレード４の高トランスアミナーゼ血症を有する。グレード３のＣＲＳ対象は、より積極的な介入、例えば４０％以上の酸素、高用量昇圧剤、及び／又は複数の昇圧剤を必要とする。グレード４のＣＲＳ対象は、グレード４の臓器毒性又は機械的人工換気の必要性を含む、直ちに生命を脅かす症状に罹患する。グレード４のＣＲＳ対象は、一般的には、高トランスアミナーゼ血症を有さない。グレード５のＣＲＳ対象では、毒性は、死亡の原因となる。例えば、ＣＲＳをグレード付けするための基準は、表２０Ａとして本明細書に提供される。特に指定がない限り、本明細書で使用されるＣＲＳは、表２０Ａの基準によるＣＲＳを指す。
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ＣＲＳ療法
ＣＲＳのための療法としては、ＩＬ－６阻害剤又はＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ又はシルツキシマブ）、ｓｇｐ１３０遮断剤、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、及び機械的人工換気が挙げられる。ＣＲＳのための例示的療法は、国際公開第２０１４０１１９８４号パンフレットに記載され、参照により本明細書に援用される。
トシリズマブは、ヒト化された免疫グロブリンＧ１カッパ抗ヒトＩＬ－６Ｒモノクローナル抗体である。例えば、同上を参照されたい。トシリズマブは、ＩＬ－６の可溶型及び膜結合型ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）への結合を遮断し、従って古典的及びトランス－ＩＬ－６シグナル伝達を阻害する。実施形態において、トシリズマブは、約４～１２ｍｇ／ｋｇ、例えば成人の対象について約４～８ｍｇ／ｋｇ、小児の対象について約８～１２ｍｇ／ｋｇの用量で例えば１時間の経過にわたって投与される。
一部の実施形態において、ＣＲＳ治療剤は、ＩＬ－６シグナル伝達の阻害剤、例えばＩＬ－６又はＩＬ－６受容体の阻害剤である。一実施形態において、阻害剤は、抗ＩＬ－６抗体、例えばシルツキシマブなどの抗ＩＬ－６キメラモノクローナル抗体である。他の実施形態では、阻害剤は、ＩＬ－６シグナル伝達を遮断することができる可溶性ｇｐ１３０又はそのフラグメントを含む。一部の実施形態において、ｓｇｐ１３０又はそのフラグメントは、異種ドメイン、例えばＦｃドメインに融合され、例えばＦＥ３０１などのｇｐ１３０－Ｆｃ融合タンパク質である。実施形態において、ＩＬ－６シグナル伝達の阻害剤は、抗体、例えばサリルマブ、オロキズマブ（ＣＤＰ６０３８）、エルシリモマブ、シルクマブ（ＣＮＴＯ１３６）、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ－９４５４２９、ＡＲＧＸ－１０９、又はＦＭ１０１など、ＩＬ－６受容体に対する抗体を含む。一部の実施形態において、ＩＬ－６シグナル伝達の阻害剤は、ＣＰＳＩ－２３６４などの低分子を含む。
例示的な血管作動性薬剤としては、これらに限定されないが、アンギオテンシン－１１、エンドセリン－１、αアドレナリンアゴニスト、ロスタノイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、循環作動薬（例えば、アドレナリン、ドブタミン、イソプレナリン、エフェドリン）、昇圧剤（例えば、ノルアドレナリン、バソプレッシン、メタラミノール、バソプレッシン、メチレンブルー）、強心性血管拡張薬（例えば、ミルリノン、レボシメンダン）、及びドーパミンが挙げられる。
例示的な昇圧剤としては、これらに限定されないが、ノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、及びバソプレッシンが挙げられる。一部の実施形態において、高用量昇圧剤は、下記：２０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン単剤療法、１０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ以上のドーパミン単剤療法、２００μｇ／ｍｉｎ以上のフェニレフリン単剤療法、及び／又は１０μｇ／ｍｉｎ以上のエピネフリン単剤療法の１つ以上を含む。一部の実施形態において、対象がバソプレッシンを投与中の場合、高用量昇圧剤は、バソプレッシン＋１０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン均等物（ここで、ノルエピネフリン均等物用量＝［ノルエピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［ドーパミン（μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）／２］＋［エピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［フェニレフリン（μｇ／ｍｉｎ）／１０］である）を含む。一部の実施形態において、対象が組み合わせ昇圧剤（バソプレッシンではない）を投与中の場合、高用量昇圧剤は、２０μｇ／ｍｉｎ以上のノルエピネフリン均等物（ここで、ノルエピネフリン均等物用量＝［ノルエピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［ドーパミン（μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）／２］＋［エピネフリン（μｇ／ｍｉｎ）］＋［フェニレフリン（μｇ／ｍｉｎ）／１０］である）を含む。例えば、同上を参照されたい。
一部の実施形態において、低用量昇圧剤は、高用量昇圧剤について上記に列挙された１つ以上の用量未満の用量で投与される昇圧剤である。
例示的なコルチコステロイドとしては、これらに限定されないが、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、及びメチルプレドニゾロンが挙げられる。実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇの用量のデキサメタゾンが使用される。実施形態では、１０ｍｇ／用量の最大用量のデキサメタゾンが使用される。実施形態では、２ｍｇ／ｋｇ／日の用量のメチルプレドニゾロンが使用される。
例示的な免疫抑制剤としては、これらに限定されないが、ＴＮＦαの阻害剤又はＩＬ－１の阻害剤が挙げられる。実施形態において、ＴＮＦαの阻害剤は、抗ＴＮＦα抗体、例えばモノクローナル抗体、例えばインフリキシマブを含む。実施形態において、ＴＮＦαの阻害剤は、可溶性ＴＮＦα受容体（例えば、エタネルセプト）を含む。実施形態において、ＩＬ－１又はＩＬ－１Ｒ阻害剤は、アナキンラを含む。
一部の実施形態において、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象に抗ＩＦＮ－γ又は抗ｓＩＬ２Ｒａ療法、例えばＩＦＮ－γ又はｓＩＬ２Ｒａに対する抗体分子を投与する。
実施形態において、ブリナツモマブなどの治療抗体分子を受け、ＣＲＳを有するか、又はＣＲＳを発症するリスクがある対象については、治療抗体分子を低用量及び／若しくは低頻度で投与するか、又は治療抗体分子の投与を停止する。
実施形態において、ＣＲＳを有するか又はＣＲＳを発症するリスクがある対象を、アセトアミノフェンなどの解熱剤を用いて処置する。
実施形態において、本明細書の対象に、任意の組み合わせの、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞と組み合わせた本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与又は提供する。
実施形態において、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクがある（例えば、重症ＣＲＳを発症する高リスク状態にあると同定された）対象に、任意の組み合わせの、例えば本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞と組み合わせた本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与する。
実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）は、集中治療室に移送される。一部の実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）は、発熱、心拍数の上昇、血液凝固障害、ＭＯＤＳ（多臓器不全症候群）、心血管機能障害、血液分布異常性ショック、心筋症、肝機能障害、腎機能障害、脳症、臨床的発作、呼吸器不全、又は頻脈など、ＣＲＳと関連する１つ以上の症状又は状態についてモニタリングされる。一部の実施形態において、本明細書の方法は、ＣＲＳと関連する症状又は状態の１つのための療法を投与することを含む。例えば、実施形態において、例えば対象が血液凝固障害を発症する場合、方法は、寒冷沈降物を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が心血管機能障害を発症する場合、方法は、血管作動性注入支持を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が血液分布異常性ショックを発症する場合、方法は、αアゴニスト療法を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が心筋症を発症する場合、方法は、ミルリノン療法を投与することを含む。一部の実施形態において、例えば対象が呼吸器不全を発症する場合、方法は、機械的人工換気（例えば、侵襲的機械的人工換気又は非侵襲的機械的人工換気）を実行することを含む。一部の実施形態において、例えば対象がショックを発症する場合、方法は、晶質液及び／又はコロイド液を投与することを含む。
実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与前に、それと同時に、又はその後に投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与の２週間以内に（例えば、２若しくは１週間以内、又は１４日以内、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１日以内、又はそれ未満で）投与される。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＣＲＳのための１つ以上の療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上の投与前又は後、少なくとも１日（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、３ヶ月、又はそれを超える）で投与される。
実施形態において、本明細書の対象（例えば、重症ＣＲＳを発症するリスクがある対象又は重症ＣＲＳを発症するリスクがあると同定された対象）に単回用量のＩＬ－６阻害剤又はＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）を投与する。実施形態において、対象に複数用量（例えば、２、３、４、５、６、又はそれを超える用量）のＩＬ－６阻害剤又はＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）を投与する。
実施形態において、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクが低いか又はリスクがない対象（例えば、重症ＣＲＳを発症する低リスク状態を有すると同定された対象）には、本明細書に記載のＣＲＳのための療法、例えばＩＬ－６阻害剤若しくはＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤（例えば、トシリズマブ）、血管作動性薬剤、コルチコステロイド、免疫抑制剤、又は機械的人工換気の１つ以上を投与しない。
実施形態において、対象は、本明細書に記載の評価又は予測方法を使用することによって重症ＣＲＳを発症するリスクが高いと決定される。実施形態において、対象は、本明細書に記載の評価又は予測方法を使用することによって重症ＣＲＳを発症するリスクが低いと決定される。
ＣＲＳのリスクがある対象の特定
ＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）ためのバイオマーカーの使用
実施形態では、１つ以上のバイオマーカーを使用してＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。ＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）ために使用される例示的なバイオマーカーとしては、ｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦなどのサイトカインが挙げられる。実施形態では、サイトカイン、ｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ以上）を使用してＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ以上）を使用してＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ及びｓｇｐ１３０の１つ以上（例えば、両方）を使用して、例えば成人又は小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ｓｇｐ１３０、及びＩＬ１Ｒａの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば成人又は小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ１３、及びＭＩＰ１αの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ｓｇｐ１３０、ＭＣＰ１、及びエオタキシンの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば小児又は成人の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＬ２、エオタキシン、及びｓｇｐ１３０の１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば小児又は成人の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ２、及びエオタキシンの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、ＩＬ１０及び疾患負荷の１つ以上（例えば、両方）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１３エオタキシンの１つ以上（例えば、両方）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１３、及びＭＩＰ１αの１つ以上（例えば、２つ以上又は３つ全部）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態では、サイトカイン、ＩＦＮ－γ及びＭＩＰ１αの１つ以上（例えば、両方）を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。
ＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）ために使用される例示的なバイオマーカーは、対象における疾患負荷評価、例えば疾患（例えば、癌）の程度を含み得る。例えば、疾患負荷評価を、対象由来生物学的試料（例えば、対象の骨髄）中の疾患（例えば、癌）のレベルを決定することによって行うことができる。例えば、高疾患負荷は、少なくとも２５％（例えば、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれを超える）の骨髄芽球の存在（例えば、吸引物若しくは生検上での形態、吸引物若しくは生検上での流動アッセイ、及び／又はＭＲＤによって決定される）によって示される。一部の実施形態において、高疾患負荷は、少なくとも５０％の骨髄芽球の存在によって示される。例えば、低疾患負荷は、２５％未満（例えば、２４％以下、例えば２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１５％、１０％、５％以下）の骨髄芽球の存在（例えば、吸引物若しくは生検上での形態、吸引物若しくは生検上での流動アッセイ、及び／又はＭＲＤによって決定される）によって示される。一部の実施形態において、低疾患負荷は、０．１％、１％、５％、２５％、又は５０％未満の骨髄芽球の存在によって示される。一部の実施形態において、癌は、ＡＬＬである。一部の実施形態において、癌は、ＡＭＬである。
実施形態において、疾患負荷評価と組み合わせた１つ以上のサイトカインを使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態において、骨髄疾患（例えば、癌）と組み合わせたサイトカイン、ｓｇｐ１３０及びＩＦＮ－γの１つ以上を使用して、例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）。実施形態において、例えば癌に関する例えば骨髄由来の疾患負荷評価を、本明細書に記載の方法を使用して、例えばＢｏｒｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２００８；１１１（１２）：５４７７－８５；又はＷｅｉｒ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１９９９；１３（４）：５５８－６７に記載のように決定することができる。
ＣＲＳ重症度を評価する（例えば、予測する）ために使用される別の例示的なバイオマーカーとしては、Ｃ－反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベル又は活性が挙げられる。実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが低い対象は、７ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、７、６．８、６、５、４、３、２、１ｍｇ／ｄＬ以下）のＣＲＰレベルを有すると同定される。実施形態において、重症ＣＲＳのリスクが高い対象は、重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して、又は対照レベル若しくは活性と比較して試料（例えば、血液試料）中のＣＲＰのレベルが高いと同定される。実施形態において、より高いレベル又は活性は、重症ＣＲＳのリスクが低い対象と比較して又は対照レベル若しくは活性と比較して少なくとも２倍高い（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超えて高い）。
実施形態において、本明細書に記載のバイオマーカーを使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、早期に対象中でＣＲＳ重症度を予測する。実施形態において、本明細書に記載のバイオマーカーを使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与後、２週間以内、例えば１週間以下以内に対象においてＣＲＳ重症度を予測する。実施形態において、本明細書に記載のバイオマーカーを使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与後、１０日（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１日以下）以内に対象においてＣＲＳ重症度を予測する。実施形態において、本明細書に記載のバイオマーカーを使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与後、１～１０日以内（例えば、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内）に対象においてＣＲＳ重症度を予測する。実施形態において、本明細書に記載のバイオマーカーを使用して、対象がグレード２、３、４若しくは５のＣＲＳの１つ以上の症状を経験する前に（例えば、対象がグレード３、４、若しくは５のＣＲＳ、又はグレード４若しくは５のＣＲＳの１つ以上の症状を経験する前に）対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、サイトカイン、ＩＦＮ－γ及びｓｇｐ１３０の１つ以上（例えば、両方）を使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に例えば成人又は小児の対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ｓｇｐ１３０、及びＩＬ１Ｒａの１つ以上（例えば、２つ以上、又は３つ全部）を使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に例えば成人又は小児の対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、サイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ１３、及びＭＩＰ１αの１つ以上（例えば、２つ以上、又は３つ全部）を使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、骨髄疾患（例えば、癌）と組み合わせたサイトカイン、ｓｇｐ１３０、及びＩＦＮ－γの１つ以上を使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に例えば小児の対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、ＣＲＰレベル又は活性を使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に例えば成人又は小児の対象においてＣＲＳ重症度を予測する。
実施形態において、対照レベルと比較した、本明細書に記載のサイトカイン、例えばｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦの１つ以上のレベルの上昇又は低下は、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。
実施形態において、参照レベルと比較して上昇した又は低下した本明細書に記載のサイトカイン、例えばｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦの１つ以上のレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、対照レベル（例えば、ベースラインレベル）と比較して少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超える）上昇した本明細書に記載のサイトカインの１つ以上のレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、参照レベルと比較して少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は９９％）低下した本明細書に記載のサイトカインの１つ以上のレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。一部の実施形態において、参照レベルは、対象におけるサイトカインのベースラインレベルに依存しない値である。いくつかの実施形態において、参照レベルは、ベースラインのサイトカイン値、又は疾患負荷によるベースラインのサイトカイン値である。
実施形態において、参照レベルと比較して上昇した又は低下した本明細書に記載のサイトカイン、例えばｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、及びＧＭ－ＣＳＦの１つ以上のレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、例えば対照レベルと比較して少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超える）上昇したサイトカイン、ＩＦＮ－γ及びｓｇｐ１３０の１つ以上（例えば、両方）のレベルは、例えば、対象が成人又は小児の対象である場合、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、対照レベルは、正常で健康な成人若しくは小児の対象（例えば、ＣＲＳを有さない）；又はＣＡＲ発現細胞の投与前の対象のＩＦＮ－γ及び／又はｓｇｐ１３０のレベルである。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、例えば対照レベルと比較して少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超える）変化したサイトカイン、ＩＦＮ－γ、ｓｇｐ１３０、及びＩＬ１Ｒａの１つ以上（例えば、２つ以上、又は３つ全部）のレベルは、例えば、対象が成人又は小児の対象である場合、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、変化したレベルは、ｓｇｐ１３０のより高いレベル、ＩＦＮ－γのより高いレベル、若しくはＩＬ１Ｒａのより低いレベル、又はその任意の組み合わせである。実施形態において、対照レベルは、正常で健康な成人若しくは小児の対象（例えば、ＣＲＳを有さない）；又はＣＡＲ発現細胞の投与前の対象のＩＦＮ－γ及び／又はｓｇｐ１３０のレベルである。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、例えば対照レベルと比較して少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、５０、１００、５００、１０００倍又はそれを超える）変化したサイトカイン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ１３、及びＭＩＰ１αの１つ以上（例えば、２つ以上、又は３つ全部）のレベルは、例えば、対象が小児の対象である場合、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、変化したレベルは、ＩＦＮ－γのより高いレベル、ＩＬ－１３のより低いレベル、ＭＩＰ１－αのより低いレベル、又はその任意の組み合わせである。実施形態において、対照レベルは、正常で健康な小児の対象（例えば、ＣＲＳを有さない）；又はＣＡＲ発現細胞の投与前の対象のＩＦＮ－γ及び／又はｓｇｐ１３０のレベルである。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、対照レベルと比較したサイトカイン、ｓｇｐ１３０及びＩＦＮ－γの１つ以上の変化したレベルと、高い疾患負荷（例えば、骨髄疾患）との組み合わせは、例えば、対象が小児の対象である場合、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。実施形態において、変化したレベルは、ｓｇｐ１３０のより高いレベル、ＩＦＮ－γのより高いレベル、及び疾患負荷のより高いレベルである。実施形態において、対照レベルは、正常で健康な小児の対象（例えば、ＣＲＳを有さない）；又はＣＡＲ発現細胞の投与前の対象のＩＦＮ－γ及び／又はｓｇｐ１３０のレベルである。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、７ｍｇ／ｄＬ未満（例えば、７、６．８、６、５、４、３、２、１ｍｇ／ｄＬ又はそれ未満）のＣＲＰレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが低いことを示す。
実施形態において、例えばＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＴＬ０１９など、例えば本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞）の投与後、１～１０日以内、例えば１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、又は１日以内に測定した場合、６ｍｇ／ｄＬ又はそれを超える（例えば、６、６．８、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０ｍｇ／ｄＬ又はそれを超える）ＣＲＰレベルは、対象が重症ＣＲＳを発症するリスクが高いことを示す。
特定の態様において、本開示は、本明細書に記載の１つ以上のＣＲＳバイオマーカーを評価することを含む、ＣＲＳをモニタリングする（例えば、ＣＲＳ０、ＣＲＳ１、ＣＲＳ２、若しくはＣＲＳ３を有する患者をモニタリングする）か又は重症ＣＲＳの発症についてモニタリングする方法を提供する。この方法は、複数の時点、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、又はそれを超える時点で１つ以上のバイオマーカーを測定することを含み得る。特定の態様において、本開示は、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクが高い対象を評価すること、及び任意選択により、ＣＲＳのための処置、例えば本明細書に記載の処置を投与することを含む、ＣＲＳを管理する方法を提供する。
特定のサイトカインを１つ以上の同義語で称することができる。例えば、本明細書で使用されるＩＬ１Ｒ１とＩＬ１ＲＡとは、両方ともＩＬ１受容体の同義語である。ｓＩＬ＿１ＲＩは、ｓＩＬＲ１の同義語である。ｓＩＬ＿１ＲＩＩは、ｓＩＬ１Ｒ２の同義語である。
実施形態において、例えばＭａｕｄｅ＆Ｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ，ＮＥＪＭ ２０１４に記載されているように、例えばＣＡＲ治療（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ治療）の投与前に対象が高い腫瘍負荷を有する場合、対象は、ＣＲＳのリスクがあると同定される。
ＣＲＳを有する対象の特定
対象が重症ＣＲＳを有するかどうかを決定するための臨床検査の使用
一部の態様において、本発明は、対象が重症ＣＲＳを有するかどうかを決定する方法を特徴とする。この方法は、例えば、対象のための免疫細胞に基づく療法、例えばＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＣＡＲ１９発現細胞療法又はＣＡＲ１２３発現細胞療法）への応答としてのＣＲＳリスク状態を獲得することを含み、前記ＣＲＳリスク状態は、下記：
（ｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ｓＴＮＦＲ２、ＩＰ１０、ｓＩＬ１Ｒ２、ｓＴＮＦＲ１、Ｍ１Ｇ、ＶＥＧＦ、ｓＩＬＲ１、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＧＣＳＦ、ｓＲＡＧＥ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｒ１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ６、ＩＬ８、ｓＩＬ２Ｒα、ｓｇｐ１３０、ｓＩＬ６Ｒ、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、若しくはＧＭ－ＣＳＦから選択される１つ以上（例えば、３、４、５、１０、１５、２０、若しくはそれを超える）のサイトカイン、又はＣ－反応性タンパク質（ＣＲＰ）、フェリチン、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、若しくは血液尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、クレアチニン（Ｃｒ）、若しくはフィブリノゲン、プロトロンビン時間（ＰＴ）、部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）、若しくはその組み合わせから選択される臨床検査（分析物）のレベル若しくは活性；
（ｉｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、若しくはｓｇｐ１３０、若しくはその組み合わせ（例えば、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、及びｓｇｐ１３０のいずれか２つ又は３つ全部の組み合わせ）のレベル若しくは活性；又は
（ｉｉｉ）試料（例えば、血液試料）中の、ＩＬ６、ＩＦＮ－γ、若しくはＩＬ２Ｒ、若しくはその組み合わせ（例えば、ＩＬ６、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ２Ｒのいずれか２つ若しくは３つ全部の組み合わせ）のレベル若しくは活性
の１つ、２つ、又はそれを超える（全部の）測定値を含み、その値は、対象の重症ＣＲＳ状態を示す。
一部の実施形態において、少なくとも約２３，５００、２５，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００、１００，０００、１５０，０００、２００，０００、又は２５０，０００ｎｇ／ｍｌ、及び任意選択により、最大で約２９９，０００又は４１２，０００ｎｇ／ｍｌのフェリチンレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約２３，５００、２０，０００、１８，０００、１６，０００、１４，０００、１２，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、又は１，０００ｎｇ／ｍｌ未満、及び任意選択により、約２８０ｎｇ／ｍｌより高いフェリチンレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約１，７００、２，０００、３，０００、４，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，０００、１５，０００、又は２０，０００Ｕ／Ｌ未満、及び任意選択により、最大で約２４，０００Ｕ／ＬのＬＤＨレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約１，７００、１，５００、１，４００、１，３００、１，２００、１，１００、１，０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、又は２００Ｕ／Ｌ未満、及び任意選択により、約１５９Ｕ／Ｌより高いＬＤＨレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、又は３５ｍｇ／ｄｌ、及び任意選択により、最大で約３８ｍｇ／ｄｌのＣＲＰレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１ｍｇ／ｄｌ未満、及び任意選択により、約０．７ｍｇ／ｄｌより高いＣＲＰレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、９８０、９００、９５０、又は１０００Ｕ／Ｌ、及び任意選択により、最大で１３００Ｕ／ＬのＡＬＴレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、又は３０Ｕ／Ｌ未満、及び任意選択により、約２５Ｕ／Ｌより高いＡＬＴレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、９８０、９００、９５０、１０００Ｕ／Ｌ、及び任意選択により、最大で約１５００Ｕ／ＬのＡＳＴレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約１５０、１４０、１３０、１２０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、又は３０Ｕ／Ｌ未満、及び任意選択により、約１５Ｕ／Ｌより高いＡＳＴレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、又は１９０ｍｇ／ｄｌ、及び任意選択により、最大で約２１０ｍｇ／ｄｌのＢＵＮレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、又は１０ｍｇ／ｄｌ未満、及び任意選択により、約５ｍｇ／ｄｌより高いＢＵＮレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、約１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、又は３０ｍｇ／ｄｌ未満、及び任意選択により、約２０ｍｇ／ｄｌより高いフィブリノゲンレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、少なくとも約１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、又は２１０ｍｇ／ｄｌ、及び任意選択により、最大で約２３０ｍｇ／ｄｌのフィブリノゲンレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約１７、１８、１９、２０、２１、又は２２ｓｅｃ、及び任意選択により、最大で約２４ｓｅｃのＰＴレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約１７、１６、１５、又は１４ｓｅｃ未満、及び任意選択により、約１２ｓｅｃより長いＰＴレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、少なくとも約４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、６０、６５、７０、７５、８０、又は８５ｓｅｃ、及び任意選択により、最大で約９５ｓｅｃのＰＴＴレベルは、重症ＣＲＳを示す。一部の実施形態において、約４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、又は２７ｓｅｃ未満、及び任意選択により、約２５ｓｅｃより長いＰＴＴレベルは、対象が重症ＣＲＳを有さないことを示す。
一部の実施形態において、重症ＣＲＳを有する患者は、７５ｐｇ／ｍｌより高いＩＦＮ－□及び６０ｐｇ／ｍｌより高いＩＬ－１０を有する。一部の実施形態において、重症ＣＲＳを有する患者は、４０、５０、６０、７０、又は７５ｐｇ／ｍｌより高い、又はそれと等しいＩＦＮ－□、及び３０、４０、５０、又は６０ｐｇ／ｍｌより高い、又はそれと等しいＩＬ－１０レベル、若しくはその組み合わせを有する。
バイオマーカーの判定
例えば、ＣＲＳを発症するリスクのある対象を同定すること、又はＣＲＳを有する対象を同定することを含む、本明細書に記載の任意の方法に従い、１つ以上のバイオマーカーは、例えば本明細書に記載の方法を用いて評価され得る。
一部の実施形態において、対象からの試料中から決定されたバイオマーカーの量は、絶対測定値（例えば、ｎｇ／ｍＬ）として定量される。絶対測定値は、参照値又はカットオフ値と容易に比較することができる。例えば、疾患進行状態を表すカットオフ値を決定することができ、カットオフ値を上回る（即ち癌、例えばＡＬＬ及びＣＬＬなどの血液癌の進行と共に発現を増加させるバイオマーカーについて）か又は下回る（即ち癌、例えばＡＬＬ及びＣＬＬなどの血液癌の進行と共に発現が減少するバイオマーカーについて）かのいずれかの任意の絶対値は、疾患進行の可能性がある。
代わりに、バイオマーカーの相対量が決定される。一実施形態において、相対量は、癌を有する対象における１つ以上のバイオマーカーの発現及び／又は活性を、参照パラメータにおけるバイオマーカーの発現と比較することによって決定される。一部の実施形態において、参照パラメータは、対象についてのベースライン又は以前の値、異なる時間間隔での対象、癌の対象（例えば、患者）集団、健康な対照、又は健康な対象集団についての平均又は中央値の１つ以上から得られる。
本開示はまた、診断アッセイ、薬理ゲノミクス、及び臨床試験のモニタリングが予測目的で使用され、それにより個体を予防的に処置する予測医学の分野に関する。そのため、本開示の一態様は、癌（例えば、ＣＬＬ及びＡＬＬなどの血液癌）を有するか又は癌（例えば、ＣＬＬ及びＡＬＬなどの血液癌）を発生するリスクがある個体が、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、本明細書記載のＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞療法、例えばＣＴＬ０１９など；又はＣＡＲ１２３発現細胞療法）に応答する可能性がより高いかどうかを決定するために、本明細書記載の１つ以上のマーカーに対応するポリペプチド又は核酸の量、構造、及び／又は活性を決定するためのアッセイに関する。
遺伝子発現の検出方法
バイオマーカーの発現レベルもアッセイすることができる。本明細書に記載されているマーカーの発現は、転写された分子又はタンパク質の発現を検出するための様々な公知の方法のいずれかによって評価することができる。かかる方法の非限定例は、分泌された細胞－表面、細胞質、若しくは核のタンパク質の検出のための免疫学的な方法、タンパク質の精製方法、タンパク質の機能若しくは活性アッセイ、核酸ハイブリダイゼーション方法、核酸逆転写方法、及び核酸増幅方法を含む。
特定の実施形態において、特定の遺伝子の活性は、遺伝子転写物（例えば、ｍＲＮＡ）の測定により、翻訳されたタンパク質の量の測定により、又は遺伝子産物の活性の測定により特徴付けられる。マーカーの発現は、いずれも標準的な技術を使用して測定することができるｍＲＮＡのレベル、タンパク質のレベル、又はタンパク質の活性を検出することを含む様々な方法でモニターすることができる。検出は、遺伝子発現（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、タンパク質、又は酵素活性）のレベルの定量化を含むことをできるか、或いは遺伝子発現のレベル、特に対照のレベルと比較した定性的な評価であり得る。検出されるレベルの種類は、背景状況から明らかである。
核酸ハイブリダイゼーション技術を使用して遺伝子転写物（それから作製されたｍＲＮＡ又はｃＤＮＡ）を検出及び／又は定量する方法は、当業者に公知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、前掲を参照されたい）。例えば、ｃＤＮＡの存在、不在、又は量を評価するための１つの方法は、上記のようなサザン法を含む。簡潔に言うと、ｍＲＮＡを単離し（例えば、酸グアニジニウム－フェノール－クロロホルム抽出方法を使用する、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、前掲を参照されたい）、逆転写してｃＤＮＡを作製する。その後、任意選択によりｃＤＮＡを消化し、バッファーでゲル上に流し、膜に移す。次に、標的ｃＤＮＡに特異的な核酸プローブを使用してハイブリダイゼーションを実施する。
本明細書に記載されているバイオマーカーを測定する方法は、限定されないが、ウェスタンブロット、免疫ブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、化学発光、蛍光偏光、燐光、免疫組織学的分析、液体クロマトグラフィー質量分光分析（ＬＣ－ＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分光分析、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、フローサイトメトリー、レーザー走査型サイトメトリー、血液分析器及び限定されないが、ＤＮＡ結合、リガンド結合、又は他のタンパク質パートナーとの相互作用を含むタンパク質の性質に基づくアッセイを含む。
本発明のキットは、マーカーのタンパク質レベル又はタンパク質活性を決定するのに有用な試薬を含むことができる。
対象
本明細書開示の方法及びキットのいずれかについて、処置される対象又は評価される対象は、任意の処置段階で癌を有する対象又はこれを有するリスクがある対象である。癌については、上記でより詳細に記載されている。例えば、癌としては、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前骨髄球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンのリンパ腫、ホジキンのリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症が挙げられる。一実施形態において、癌は、血液癌である。好ましい一実施形態において、癌は、ＡＭＬである。好ましい一実施形態において、癌は、ＡＬＬである。別の好ましい一実施形態において、癌は、ＣＬＬである。一実施形態において、癌は、ＣＤ１９の発現に関連する。実施形態において、癌は、ＣＤ１２３の発現に関連する。
他の実施形態において、本明細書に開示される方法及びキットのいずれかについて、処置される対象又は評価される対象は、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＣＤ１９ ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＴＬ－０１９；又はＣＤ１２３ ＣＡＲ発現細胞を用いて処置されるか又は処置された対象である。
実施形態において、対象は、例えば、１８歳を超える年齢（例えば、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０歳又はそれを超える年齢、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、８５～９０、９０～９５、又は９５～１００歳の年齢）を有する成人の対象である。
実施形態において、対象は、例えば、１８歳未満の年齢（例えば、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１歳又はそれ未満の年齢）を有する小児の対象である。
実施形態において、対象は、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスク（例えば、高いリスク）がある。実施形態において、対象は、ＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクが低い（例えば、リスクがない）。
実施形態において、対象は、ＣＲＳ０、ＣＲＳ１、ＣＲＳ２、又はＣＲＳ３を有する。
実施形態において、対象がＣＲＳ（例えば、重症ＣＲＳ）を発症するリスクは、本明細書に記載の評価又は予測方法を使用して決定される。
本発明を、次の実験的実施例を参照して更に詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。
更に記載しなくとも、当業者は、前の記載及び次の説明的実施例を使用して、本発明の化合物を製造及び利用し、本願発明方法を実施できると考える。次の作業実施例は、本発明の多様な態様を特に示すものであり、本開示を限定するものと解釈されるべきでない。
実施例１：ルキソリチニブ処置はキメラ抗原受容体Ｔ細胞治療後のサイトカイン放出症候群を予防した
キメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲＴ）細胞治療は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）において顕著に高い寛解率をもたらすが、いくつかの場合にサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の発症をもたらし得る。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１５；７：３０３ｒａ１３９；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；３７１：１５０７－１５１７；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２０１５；３８５：５１７－５２８；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１４；６：２２４ｒａ２２５；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１４；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１１；３：９５ｒａ７３；Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１１；３６５：７２５－７３３；及びＧｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１３；３６８：１５０９－１５１８を参照されたい。ＣＲＳは、高熱、低血圧、体液過負荷、及び呼吸障害の発症を特徴とし、Ｔ細胞増殖と合致し、インターロイキン－６、インターフェロン－γ及び他の炎症性サイトカインの顕著な上昇と関連する。重症ＣＲＳがＣＤ１９指向ＣＡＲＴ細胞処置（ＣＡＲＴ１９）で処置された患者の２５～８０％に見られ、死亡率が報告されている。従って、ＣＲＳの処置及び予防に対する必要性がある。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１５；７：３０３ｒａ１３９；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；３７１：１５０７－１５１７；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２０１５；３８５：５１７－５２８；及びＤａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１４；６：２２４ｒａ２２５を参照されたい。
ステロイドを伴って又は伴わずに抗ＩＬ－６受容体抗体トシリズマブを使用することでＣＲＳを回復できる場合があるが、免疫抑制薬の早期導入が抗腫瘍活性を損なう可能性があるという懸念が存在する。例えば、Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１３；３６８：１５０９－１５１８を参照されたい。従って、研究者の大半は、現在、重症（グレード３～４）ＣＲＳの治療薬としてトシリズマブを留保している。例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４：１８８－１９５を参照されたい。高い腫瘍負荷の存在は、重症ＣＲＳの予測因子となり得、細胞減少化学療法は、潜在的に重症ＣＲＳの発生率を低下させる可能性がある。例えば、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；３７１：１５０７－１５１７を参照されたい。しかしながら、ＣＡＲＴ１９治療を受けている患者の大部分は、化学療法抵抗性であり、そのため、細胞減少が不可能であり得る。早期の処置後サイトカイン上昇に基づく予測モデルが開発されているが、これらの結果の適時の利用可能性に依存している。例えば、Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１５；１２６：１３３４－１３３４を参照されたい。従って、抗腫瘍効果を無効にしない、忍容性が高く臨床的に利用可能な薬理学的介入は、当技術分野における垂直的進歩を意味するであろう。
ヒトＣＡＲＴ治療後のＣＲＳについて、モデル、例えば前臨床モデルが欠如している。例えば、ＡＬＬ異種移植のＣＡＲＴ１９治療は、ＣＲＳを誘発しない。モデルの欠如により、ＣＲＳ予防法の開発が制限されている。ＣＲＳを予防する方法は、ＣＡＲＴ治療の実現可能性を大いに高めるであろう（例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｓｔｅｇｅｎ ＳＪ，Ｄａｖｉｅｓ ＤＭ，Ｗｉｌｋｉｅ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＥｒｂＢ－ｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ：ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ａ ｗｉｎｄｏｗ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｙ？Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；１９１：４５８９－４５９８を参照されたい）。
この実施例は、ＣＡＲＴ細胞治療後にＣＲＳを研究するために使用することができる異種移植急性骨髄性白血病モデル（ＣＲＳの前臨床ＡＭＬ異種移植モデル）の生成／特徴付けを説明する。本明細書の結果は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤ルキソリチニブがＣＲＳを予防し得たことを示す。ルキソリチニブは、ＣＡＲＴ細胞の抗腫瘍効果を損なうことなく、重症ＣＲＳに関連するインビボでのＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を鈍化させた。これらの結果は、重症ＣＲＳ発症のリスクが高い患者において、ＣＡＲＴ細胞治療と組み合わせてルキソリチニブなどのＪＡＫ阻害剤を将来の臨床試験に組み入れることを支持し得る。
材料及び方法
細胞株及び初代試料。細胞株は、元はＡＴＣＣから入手した。いくつかの実験について、ＭＯＬＭ１４細胞株をホタルルシフェラーゼ／ｅＧＦＰで形質導入し、次いでソートして＞９９％陽性集団を得た。細胞株を、１０％ウシ胎児血清及び５０ＩＵ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ培地を用いて培養物中に維持した。非特定化初代ヒトＡＭＬ標本は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａの幹細胞及び異種移植片コアから入手した。全ての機能的試験について、初代細胞を解凍し、３７℃で少なくとも１２時間静置した。
ＣＡＲ構築物及びＣＡＲ Ｔ細胞の産生。ＣＤ１２３指向ＣＡＲ構築物及びＣＡＲＴ細胞を先に記載のように生成した。例えば、Ｇｉｌｌ Ｓ，Ｔａｓｉａｎ ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３－２３５４；及びＫｅｎｄｅｒｉａｎ ＳＳ，Ｒｕｅｌｌａ Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ３３ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｅｘｈｉｂｉｔ Ｐｏｔｅｎｔ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５を参照されたい。
インビトロＴ細胞エフェクター機能アッセイ。Ｔ細胞脱顆粒、サイトカイン、増殖、細胞毒性測定を先に記載のように実施した。例えば、Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ ＳＳ，Ｒｕｅｌｌａ Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ３３ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｅｘｈｉｂｉｔ Ｐｏｔｅｎｔ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５を参照されたい。
動物実験。ＣＲＳ前臨床モデルの開発のために、ヒトインターロイキン－３、幹細胞因子及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＮＳＧ－Ｓ）についてトランスジェニックなＮＯＤ－ＳＣＩＤ－γ鎖－／－（ＮＳＧ）を使用した。これらは、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｃｏｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（元はＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た）から購入した。利用した異種移植モデルのスキームは、関連する図面及び本明細書における結果の節に詳細に論じられる。細胞を、２００μｌのリン酸緩衝生理食塩水中、示された濃度で尾静脈に注射した。
ルキソリチニブ。ルキソリチニブはＳｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍから購入し、ＤＭＳＯに溶解して示された濃度に希釈した。動物実験のために、ルキソリチニブを１０％ＨＰ－β－シクロデキストリン溶液（１．６ｍｇ／ｍｌ）で更に希釈し、示された濃度で経口胃管栄養法によりマウスに投与した。１２，１５，１６例えば、Ｑｕｉｎｔａｓ－Ｃａｒｄａｍａ Ａ，Ｖａｄｄｉ Ｋ，Ｌｉｕ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＪＡＫ１／２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＮＣＢ０１８４２４：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１５：３１０９－３１１７；Ｄａｓ Ｒ，Ｇｕａｎ Ｐ，Ｓｐｒａｇｕｅ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｌｅｓｓｅｎｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１６；１２７：１６６６－１６７５；及びＭａｓｃｈａｌｉｄｉ Ｓ，Ｓｅｐｕｌｖｅｄａ ＦＥ，Ｇａｒｒｉｇｕｅ Ａ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ａ，ｄｅ Ｓａｉｎｔ Ｂａｓｉｌｅ Ｇ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＪＡＫ１／２ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ．２０１６を参照されたい。
多変数フローサイトメトリー。フローサイトメトリーは、先に記載のように実施した。例えば、Ｋｅｎｄｅｒｉａｎ ＳＳ，Ｒｕｅｌｌａ Ｍ，Ｓｈｅｓｔｏｖａ Ｏ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ３３ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｅｘｈｉｂｉｔ Ｐｏｔｅｎｔ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｈｕｍａｎ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５を参照されたい。
統計分析。全統計学を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ、ｖｅｒｓｉｏｎ ６．０４（Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して、示すとおりに実施した。個々の実験で使用した統計の詳細は、図の説明文に列挙される。
結果
新規ＣＲＳ異種移植モデルの確立
ＮＳＧ－Ｓマウス及び初代白血病芽球を用いて、ＣＲＳの発症を研究するために新規のＡＭＬ異種移植モデルを確立した。ＮＳＧ－ＳマウスにＡＭＬ患者由来の芽球を生着し、以前の報告よりも１０倍高い用量のＣＤ１２３指向ＣＡＲＴ細胞（ＣＡＲＴ１２３）で処置した（図１Ａ）。例えば、Ｇｉｌｌ Ｓ，Ｔａｓｉａｎ ＳＫ，Ｒｕｅｌｌａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３：２３４３－２３５４を参照されたい。特に、ＮＳＧ－Ｓマウスに初代ＡＭＬ芽球（５×１０６）を生着し、２～４週間後に採血して生着を確認した。次いで、マウスを静脈内尾静脈単回注射によって高用量のＣＡＲＴ１２３ １×１０６で処置し、白血病負荷量評価及びサイトカイン分析のため、連続臨床試験、体重記録、及び眼窩後部出血を監視した。これらの動物は、進行性の体重減少、全身脱力感、衰弱、身体の湾曲、離脱症状及び運動応答不良を特徴とする疾病を発症した。この疾病は、Ｔ細胞増殖と相関するＣＡＲＴ細胞注射の１週間以内に始まった（末梢血中のＣＡＲＴ１２３増殖は注射の１０～１４日後に発生した；図１Ｂ）。疾病は、急速に進展し、５～７日で動物の死亡を生じた（図１Ｃ）。高用量のＣＡＲＴ１２３は、確立されたＡＭＬ異種移植片の早期死を生じた（注射後２週間以内）。（実験において、ＡＭＬ注射後４１日目にＣＡＲＴ１２３を注射した。）
ＣＡＲＴ１２３処置の１週間後に血清サイトカインのためマウスから採血した。パネルに概説されるように、ＣＡＲＴ１２３で処置されたマウスは、複数の炎症性サイトカインの有意な上昇を示した。特に、ＣＡＲＴ１２３の５日後のこれらのマウスからの血清は、ＣＡＲＴ細胞治療後のヒトＣＲＳに類似してＩＬ－６、インターフェロン－γ、腫瘍壊死α、及び他の炎症性サイトカインの極端な上昇を示した（図１Ｄ）。例えば、Ｌｅｅ ＤＷ，Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ＪＮ，Ｓｔｅｔｌｅｒ－Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＣＤ１９ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｆｏｒ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋａｅｍｉａ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ａｎｄ ｙｏｕｎｇ ａｄｕｌｔｓ：ａ ｐｈａｓｅ １ ｄｏｓｅ－ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２０１５；３８５：５１７－５２８；Ｋａｌｏｓ Ｍ，Ｌｅｖｉｎｅ ＢＬ，Ｐｏｒｔｅｒ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｈａｖｅ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｃａｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１１；３：９５ｒａ７３；Ｐｏｒｔｅｒ ＤＬ，Ｌｅｖｉｎｅ ＢＬ，Ｋａｌｏｓ Ｍ，Ｂａｇｇ Ａ，Ｊｕｎｅ ＣＨ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１１；３６５：７２５－７３３；及びＧｒｕｐｐ ＳＡ，Ｋａｌｏｓ Ｍ，Ｂａｒｒｅｔｔ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１３；３６８：１５０９－１５１８を参照されたい。
ルキソリチニブによる処置はＣＡＲＴ１２３後の抗腫瘍活性を損なうことなくＣＲＳ重症度を改善した
ルキソリチニブは、骨髄線維症及び真性赤血球増加症についてＦＤＡ承認されているＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路阻害剤である。例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ Ｃ，Ｋｉｌａｄｊｉａｎ ＪＪ，Ａｌ－Ａｌｉ ＨＫ，ｅｔ ａｌ．ＪＡＫ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ ｖｅｒｓｕｓ ｂｅｓｔ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｍｙｅｌｏｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１２；３６６：７８７－７９８；及びＶａｎｎｕｃｃｈｉ ＡＭ，Ｋｉｌａｄｊｉａｎ ＪＪ，Ｇｒｉｅｓｓｈａｍｍｅｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ ｖｅｒｓｕｓ ｓｔａｎｄａｒｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５；３７２：４２６－４３５を参照されたい。前臨床及び臨床試験において、ルキソリチニブは、炎症性サイトカインの有意な減少を生じた。例えば、Ｑｕｉｎｔａｓ－Ｃａｒｄａｍａ Ａ，Ｖａｄｄｉ Ｋ，Ｌｉｕ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ＪＡＫ１／２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＩＮＣＢ０１８４２４：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１５：３１０９－３１１７；Ｄａｓ Ｒ，Ｇｕａｎ Ｐ，Ｓｐｒａｇｕｅ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｌｅｓｓｅｎｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１６；１２７：１６６６－１６７５；Ｍａｓｃｈａｌｉｄｉ Ｓ，Ｓｅｐｕｌｖｅｄａ ＦＥ，Ｇａｒｒｉｇｕｅ Ａ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ａ，ｄｅ Ｓａｉｎｔ Ｂａｓｉｌｅ Ｇ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＪＡＫ１／２ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ．２０１６を参照されたい。
この実施例における実験は、本明細書に記載のＡＭＬ異種移植モデルにおいて、ＣＡＲＴ１２３の後にＣＲＳの重症度を予防又は軽減するためのモダリティとしてルキソリチニブを調査した。ＮＳＧＳマウスに初代ＡＭＬ芽球（５×１０６）を生着し、２～４週間後に採血して末梢血生着を確認した。原発性ＡＭＬを有するＮＳＧＳマウスをルキソリチニブ又はビヒクル対照と共に静脈内尾静脈単回注射によってＣＡＲＴ１２３（１×１０６）で処置した。１日２回、経口胃管栄養法により、異なる用量のルキソリチニブ（３０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ又は９０ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクルを投与するマウスを無作為に分けた。処置は、ＣＡＲＴ１２３注射の日に開始し、１週間継続した（図２Ａ）。次いで、マウスを、白血病負荷量評価及びサイトカイン分析のため、連続臨床試験、体重記録、眼窩後部出血を用いて監視し、生存について経過観察した。
６０ｍｇ／ｋｇ又は９０ｍｇ／ｋｇのルキソリチニブで処置したマウスは、ＣＡＲＴ１２３単独又はＣＡＲＴ１２３と３０ｍｇ／ｋｇのルキソリチニブとの組み合わせで処置したマウスと比較した場合、体重減の緩和に現れるより軽症の臨床疾病（ＣＲＳ）を示した（図２Ｂ）。
全ての群が均等な抗白血病効果を示した（図２Ｃ）。これは、ルキソリチニブが直接的な抗腫瘍活性を有さず、ＣＡＲＴ１２３の抗腫瘍活性を損なわないことを示唆する。従って、ルキソリチニブ６０ｍｇ／ｋｇを更なる実験に使用した。ルキソリチニブは、これらのマウスにおける疾病の改善、一過性体重減少（６０ｍｇ／ｋｇ）（図２ｄ）、白血病根絶（図２Ｈ）、及び末梢血における鈍化したＴ細胞増殖（図２Ｅ）を生じた。更に、ルキソリチニブ処置は、炎症性サイトカインのレベルを低下させ（図２Ｆ）、長期の無病生存率をもたらした（図２Ｇ）。特に、高用量のＣＡＲＴ１２３で処置したマウスは、早期死亡（ＣＲＳに関連する疾病による死亡）を示したが、ルキソリチニブ６０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせで処置したマウスは、長期生存をもたらした。ＡＭＬ注射後７０日目にルキソリチニブで処置した生存マウス（生存ヒトＣＤ４５陽性細胞にゲートをかけた）からの末梢血の分析において、全ての生存マウスは、白血病の根絶を示した。データは、２つの独立した実験の代表例である。
これらの結果は、臨床的に関連するヒトＣＲＳの動物モデルの生成を説明する。結果は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤ルキソリチニブが、ＣＡＲＴ細胞の抗腫瘍効果を損なうことなく重症ＣＲＳの発症を予防できることも実証している。ルキソリチニブがこの効果を達成する機構は、標準的ＣＲＳ誘導性サイトカインを含む複数のサイトカインの産生の減弱による可能性がある。ＣＡＲＴ１９／ＡＬＬシステムの前臨床モデルが存在しない場合、これらの結果は、ＣＲＳ予防及び処置の研究に有用な基盤を提供する。ルキソリチニブは、骨髄増殖性腫瘍、移植片対宿主病、及び「フィラデルフィア様」ＡＬＬについて臨床的に研究されている。例えば、Ｚｅｉｓｅｒ Ｒ，Ｂｕｒｃｈｅｒｔ Ａ，Ｌｅｎｇｅｒｋｅ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ ｉｎ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ－ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｓｕｒｖｅｙ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５；２９：２０６２－２０６８；及びＲｏｂｅｒｔｓ ＫＧ，Ｌｉ Ｙ，Ｐａｙｎｅ－Ｔｕｒｎｅｒ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔａｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ Ｐｈ－ｌｉｋｅ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；３７１：１００５－１０１５を参照されたい。本明細書におけるこれらの結果は、ルキソリチニブをＣＲＳの予防のためのＣＡＲＴ細胞治療と組み合わせることができるという証拠を提供する。
実施例２：イブルチニブは、Ｂ細胞新生物に対する抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体Ｔ細胞後のサイトカイン放出症候群を改善した
キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）は、Ｂ細胞新生物の処置に非常に有望である。抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ１９）は、Ｂ細胞白血病及びリンパ腫における完全な応答を含む顕著な応答をもたらす可能性がある。例えば、Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１１；３６５（８）：７２５－３３；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１（１６）：１５０７－１７；Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１５；１２６（２３）：１８３－１８３；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１４；６（２２４）：２２４ｒａ２５；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１６；１０．１１７２／ＪＣＩ８５３０９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ ２０１５；３８５（９９６７）：５１７－２８；Ｋｏｃｈｅｎｚｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１５；３３（６）：５４０－９；Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ２０１６；１０８（７）を参照されたい。しかしながら、この免疫治療の広範な適用性は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）によって制限され得る。
ＣＲＳは、活性化Ｔ細胞及び免疫細胞によるサイトカインの大量放出を伴う重度の全身性炎症であり、死亡を含む重篤な毒性をもたらし得る。ＣＲＳは、全身性炎症状態を表す末梢血中のサイトカイン（ＩＦＮｇ、ＴＮＦα、ＩＬ－６等）の上昇を特徴とする。例えば、Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１１；３（９５）：９５ｒａ７３を参照されたい。臨床的には、ＣＲＳは、高熱と、低血圧、低酸素、精神状態の変化、多臓器機能不全及び死亡に進展し得る全身性炎症応答とを特徴とする。ＣＲＳは、応答のある患者の大部分で観察され、典型的には高い腫瘍負荷と相関している。例えば、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１（１６）：１５０７－１７を参照されたい。試みられている緩和戦略には、ＣＡＲＴ１９注入前のＣＡＲＴ１９用量の減少又は分画、及び腫瘍細胞減少が含まれる。例えば、Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１４；６（２２４）：２２４ｒａ２５；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１６；１０．１１７２／ＪＣＩ８５３０９；Ｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｎｎｕａｌ（ＡＳＨ）Ｍｅｅｔｉｎｇ ２０１４ ２０１４；Ａｂｓ ＃２２９６；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１５；３３（１５）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１４；１２４（２）：１８８－９５；及びＭａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｊ ２０１４；２０（２）：１１９－２２を参照されたい。ＣＲＳを予防するアプローチが欠如している。
最近、ＣＲＳを予測し、場合により先制処置を開始することを目的として、新規のアルゴリズムが開発された。例えば、Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ２０１６；１０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１６－００４０を参照されたい。しかしながら、現在の慣行は、予防的ＣＲＳ処置が、注入されたＣＡＲＴ細胞の抗腫瘍効果を損なう可能性があるという懸念から、重症（グレード３～４）ＣＲＳを経験している患者のためにトシリズマブ及びステロイドを留保することである。ＣＲＳの管理は、依然として、ＣＡＲＴ１９を高齢且つ虚弱の患者に拡張し、丈夫な成人及び小児のコホートにおいてその安全性を高めるための重要な因子である。（Ｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３４，２０１６（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ ７００２））。
Ｂｒｕｔｏｎのチロシンキナーゼ阻害剤であるイブルチニブは、再発性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及びマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）についてＦＤＡの承認を受けており、Ｂ細胞新生物に広く使用されている。例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１５；１２６（６）：７３９－４５；及びＢｙｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３；３６９（１）：３２－４２を参照されたい。
イブルチニブはＣＡＲＴ１９と組み合わせることができ、ＭＣＬとＡＬＬの両方で相乗的応答をもたらす。例えば、Ｒｕｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６；１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１５－１５２７；Ｆｒａｉｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１６；１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１５－１１－６７９１３４を参照されたい。イブルチニブは、Ｔ細胞機能を調節することも示されている。イブルチニブは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞において発現されるＩＬ－２誘導チロシンキナーゼ（ＩＴＫ）を阻害する。例えば、Ｄｕｂｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１３；１２２（１５）：２５３９－４９を参照されたい。この効果は、マウスＴ細胞モデルにおいて示されるようにＴ細胞サイトカイン産生の調節をもたらし得、ＮＫモデルにおいて示されるように、サイトカイン産生の減少と共にチェックポイント遮断の効果を増大させ得る。例えば、Ｓａｇｉｖ－Ｂａｒｆｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ２０１５；１１２（９）：Ｅ９６６－７２；及びＫｏｈｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１４；１２３（１２）：１９５７－６０を参照されたい。Ｒｕｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．は、イブルチニブがインビトロでＣＡＲＴ１９細胞によるサイトカイン産生を鈍化させ得ることを示した。Ｒｕｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６；１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１５－１５２７を参照されたい。
本明細書に記載の実験は、イブルチニブをＣＡＲＴ１９に添加することが抗腫瘍効果を損なうことなくＣＲＳを減少させ、従って関連する前臨床モデルにおける全生存を高めるかどうかを決定するために行われた。
今日まで、ＣＡＲＴ－１９処置後に観察されるサイトカイン放出の大幅な増加を再現するモデルは知られていない。この実施例は、再発ＭＣＬを有する患者から採取した初代ＭＣＬ細胞をＮＯＤ－ＳＣＩＤγ鎖欠損マウス（ＮＳＧ）に静脈内注射することによって生成されたそのようなモデルの開発を説明する（図３Ａ）。ＮＯＤ ＳＣＩＤγ鎖欠損マウスに２×１０６個の初代ＭＣＬ細胞を静脈内注射した。生着を連続的な後眼窩末梢血出血で監視し、腫瘍性Ｂ細胞が検出された場合（高い腫瘍負荷、典型的には約５０～６０日目）、マウスを、処置を受けないもの又はＣＡＲＴ１９を投与されるものに無作為で分けた。次いで、マウスの臨床徴候、Ｔ細胞移植、腫瘍負荷及び生存についてフォローアップした。
ＣＲＳは、明らかに高い腫瘍負荷と関連しているため、脾臓のサイズが有意に増大し、臨床的に触知可能となったとき、腫瘍を５０～６０日まで増殖させた。高腫瘍負荷は、Ｔ細胞処置の前に屠殺された代表的なマウスの脾臓のサイズによって実証された（図３Ｂ）。その時点で末梢血中にも点状の新生物性Ｂ細胞が見られた（図３Ｃ）。その時点で１×１０６個のＣＡＲＴ１９細胞を静脈内注射した。対照として、細胞の代わりにＰＢＳを注射した。注入後２日目までに、ＣＡＲＴ１９を投与されたマウスは、対照と比較して（ｐ＜０．０５）苦痛の臨床徴候を示し（運動性低下、過換気）、早期死亡を経験した（図３Ｄ）が、ＰＢＳを投与されたマウスはそうではなかった。臨床的には、この早期毒性は、ＣＲＳに類似していた。ＣＡＲＴ１９注入後４日目にマウスからの血清を収集し、Ｌｕｍｉｎｅｘによってサイトカイン濃度を分析した。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイは、マウスサイトカインと反応しないため、ヒトサイトカインに特異的である。ＣＡＲＴ１９処置マウスは、ＩＬ－６、ＩＦＮｇ、ＴＮＦα、ＩＬ－２及びＧＭ－ＣＳＦを含むいくつかのヒトサイトカインの血清濃度の有意な上昇を示し、対照マウスは示さなかった（図３Ｅ）。
ＣＡＲＴ１９で処置したＢ細胞新生物に関して臨床的に関連するＣＲＳのモデルを確立し、ＣＡＲＴ１９へのイブルチニブの添加がこの初期毒性を低減するかどうかを決定するために実験を行った。ＮＯＤ ＳＣＩＤγ鎖欠損マウスに２×１０６個の初代ＭＣＬ細胞を静脈内注射した。生着を連続的な後眼窩末梢血出血で監視し、腫瘍性Ｂ細胞が検出された場合（高い腫瘍負荷、典型的には約５０～６０日目）、マウスを、飲料水中でＣＡＲＴ１９＋ビヒクル又はＣＡＲＴ１９＋イブルチニブを投与（１２５ｍｇ／Ｋｇ／日）するものに無作為で分けた。イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）は、粉末又はＤＭＳＯ溶液としてＭｅｄＫｏｏ（＃２０２１７１）又はＳｅｌｌｅｃｋ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（＃Ｓ２６８０）から購入した。両社から入手した製品を比較し、均等な活性を有することを実証した（データ示さず）。インビトロ実験のために、イブルチニブをＤＭＳＯに溶解し、培地中で２、１０、１００又は１０００ｎＭに希釈した。インビボ実験のために、イブルチニブ粉末を１０％ＨＰ－β－シクロデキストリン溶液（１．６ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、飲料水中でマウスに投与した。次いで、マウスの臨床徴候、Ｔ細胞移植、腫瘍負荷及び生存についてフォローアップした。図４Ａの概略図に示されるように、高腫瘍負荷マウスをＣＡＲＴ１９（プラスビヒクル）、又はイブルチニブと組み合わせたＣＡＲＴ１９のいずれかで処置した。同様の腫瘍負荷にもかかわらず、ＣＡＲＴ１９とイブルチニブとの組み合わせを投与されたマウスは、ＣＡＲＴ１９を単独で投与されたマウス（図４Ｂ）と比較して延長した全生存期間（ＯＳ）を有していた（図４Ｃ）。また、イブルチニブは、ＰＢにおけるＣＡＲＴ１９の増殖を損なうのではなく増大させた（図４Ｄ） － これは以前の観察を確認するものであった。例えば、Ｒｕｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６；１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１５－１５２７を参照されたい。４日目の末梢血中のサイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮｇ、ＴＮＦα、ＩＬ－２及びＧＭ－ＣＳＦを含み、イブルチニブ処置マウスにおいて有意に減少した（図４Ｅ）。
イブルチニブがＴ細胞サイトカイン産生の穏やかな減少をもたらしたことが以前に示されており（同上を参照されたい）、イブルチニブが最初に細胞増殖抑制性抗腫瘍剤として開発されたことを考慮して、イブルチニブ処置が培養ＭＣＬ細胞によるサイトカイン産生にも影響を及ぼすかどうかを決定するために実験を行った。図４Ｆに示されるように、インビトロでのイブルチニブの濃度増加は腫瘍によって産生されるサイトカインを減少させ、これは、インビボで観察されるＣＲＳの減少に寄与する可能性がある。
ＣＲＳは、癌に対するＣＡＲ Ｔ細胞治療の広範な実現可能性を制限する主な要因である。本明細書における結果は、ＣＡＲＴ１９処置後のＢ細胞新生物におけるＣＲＳ（例えば、致死的ＣＲＳ）についての関連する前臨床モデルの開発を実証する。対照と比較して、上昇したレベルのヒト炎症性サイトカインがＣＡＲＴ１９処置マウスの血清中に見出された。イブルチニブとＣＡＲＴ－１９との共投与は、このサイトカインストームを鈍化させ、全生存を有意に増大させた（ｐ＜０．０５）。本明細書におけるデータは、ＣＡＲＴ１９と組み合わせたＢＴＫ／ＩＴＫ阻害剤イブルチニブが、ＣＡＲＴ及び腫瘍細胞の両方からの炎症性サイトカインの産生を鈍化させることによってＣＲＳの減少及び生存の強化をもたらしたことを示す。結果は、イブルチニブがインビボでＴ細胞増殖を損なわなかったこと、即ち抗腫瘍効果のための重要な要素であることが示されてきた因子を示す。イブルチニブは、Ｂ細胞悪性腫瘍におけるＣＡＲＴ１９の抗腫瘍効果と相乗効果を示す。本明細書に提示された結果は、イブルチニブとＣＡＲＴ１９との組み合わせがＣＡＲ Ｔ細胞治療の毒性を低下させ得ることを示唆する。ＣＡＲＴ１９－イブルチニブの組み合わせは、急性白血病におけるＣＲＳを予防するための新たな戦略であると同時に、現在イブルチニブで処置されているＢ細胞新生物に対する魅力的な二面的アプローチであり得る。
実施例３：単球系細胞によるキメラ抗原受容体Ｔ細胞活性化誘導インターロイキン６分泌
ＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体Ｔ細胞治療は、Ｂ細胞悪性腫瘍に対して成功を収めているが、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の形態での深刻な全身毒性により時に悪化する。この症候群の症状は、インターロイキン６（ＩＬ－６）の上昇によって主に仲介されているようであり、管理は、ＩＬ－６シグナル伝達の阻害に焦点を当てている。ＣＲＳにおけるＩＬ－６の細胞源及び機能は、この研究前には未知のままであった。これにより、ＣＲＳの情報に基づく管理が制限されてきた。本明細書における結果は、ＩＬ－６の分泌がＣＡＲ Ｔ細胞活性化によって促進されるが、単球系ＡＰＣに由来することを実証している。ＡＰＣのＴ細胞誘導活性化は、接触非依存的機序で起こり、ＩＬ－６分泌ＡＰＣは、Ｔ細胞転写プロファイル又は細胞毒性に影響を及ぼさなかった。本明細書における結果は、急性リンパ芽球性白血病を有する患者に送達されたＣＡＲ Ｔ細胞が臨床ＣＲＳの間にインビボでＩＬ－６を分泌しなかったことも示す。これらの結果は、抗ＩＬ－６治療がＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍効果に影響を及ぼさない可能性があることを示唆している。
序説
ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＤ１９ ＣＡＲ）Ｔ細胞を用いた高活性細胞治療に関連する主な毒性は、「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）として知られる過炎症状態である（Ｇｒｕｐｐ ＮＥＪＭ ２０１３）。この毒性は、軽度のインフルエンザ様症候群から深部体温の極端な上昇及び生命を脅かす多臓器不全に至るまでの臨床症状を特徴とする。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）のためのＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞の報告において、Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．は、ＣＲＳを有する患者における、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及びγインターフェロン（ＩＮＦ－γ）を含む、いくつかの血清サイトカインの有意な上昇を示す生化学的プロファイルを説明した（Ｇｒｕｐｐ ＮＥＪＭ ２０１３）。第Ｉ相試験で処置を受けた１人の患者は、血管支持のために複数の昇圧剤を必要とする血液分布異常性ショック及び長期の機械的人工換気を必要とする呼吸不全の形態で劇的な毒性を経験した。抗ＩＬ－６受容体剤トシリズマブを数日間ＣＲＳに投与すると、急速な血行動態の安定化が生じ、これは、これらの症状を引き起こすことにおけるＩＬ－６の中心的役割を示していた。Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．は、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞と同様のＩＬ－６駆動症候群を報告している（Ｄａｖｉｌａ ＳＴＭ ２０１４、Ｌｅｅ Ｌａｎｃｅｔ ２０１５）。ＣＲＳ中のＩＬ－６の細胞供給源、急速に分裂する細胞集団における恒常性支持の手段としてのＣＡＲ Ｔ細胞自体によってＩＬ－６が分泌されるかどうか、又はＩＬ－６がＴ細胞活性に必要であるかどうかについての理解は制限されている。マクロファージ、樹状細胞並びにＢ及びＴリンパ球を含む、ＩＬ－６のいくつかの細胞源が同定されている（Ｓｃｈｕｌｅｒｔ ａｎｄ Ｇｒｏｍ，Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｍｅｄ ２０１５；Ｌｅｅｃｈ ＭＤ ＪＩ ２０１３；Ｂａｒｒ ＴＡ ＪＥＭ ２０１２；Ｔｒｉｎｓｃｈｅｋ Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ ２０１３）。Ｔ細胞は、多発性硬化症のモデルにおいて病理学的ＩＬ－６の主な供給源として同定され（Ｔｒｉｎｓｃｈｅｋ Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ ２０１３）、Ｔ細胞由来のＩＬ－６は、ＴＨ１７細胞の分化を促進する正のフィードバックループの媒介における関与が示されており（Ｏｇｕｒａ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８）、これは、Ｔ細胞自体が観察された高レベルのＩＬ－６の供給源である可能性をもたらす。感染及び自己抗原に応答した従来のＴ細胞活性化が研究されてきたが、Ｔ細胞活性化の機構の効果は、ＣＡＲとの関連ではほとんど理解されておらず、ＣＡＲ駆動活性化は、異なるサイトカイン支持の必要性をもたらし、Ｔ細胞媒介性ＩＬ－６産生に対して異なる効果を有し得る。ＣＡＲ Ｔ細胞機能及びＣＲＳにおけるＩＬ－６の役割についてより良い理解がない状態において、重度の毒性の管理と抗腫瘍活性の最適化とのバランスをとることは、経験的な試行錯誤によって推進されてきた。
ＡＬＬのためにＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療を受けている小児及び成人患者における血清サイトカインのパネルの検査において、Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、可溶性ＩＬ－２受容体α（ｓＩＬ－２Ｒα）、可溶性ＩＬ－６受容体（ｓＩＬ－６Ｒ）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）、マクロファージ炎症タンパク質１α（ＭＩＰ－１α）、マクロファージ炎症タンパク質１β（ＭＩＰ－１β）及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）の上昇が重症ＣＲＳの発症と関連していることを観察した（Ｔｅａｃｈｅｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ２０１６）。ＩＦＮ－γ、血清糖タンパク質１３０（ｓｇｐ１３０）、ｓＩＬ－６Ｒの成分、及びｓＩＬ－１ＲＡの早期上昇は、重症ＣＲＳの発症の予測マーカーであった。同上参照。Ｔ細胞増殖とベースラインの疾患負荷との両方がＣＲＳの重症度の主要な決定因子であると考えられてきた。しかしながら、Ｔ細胞増殖自体は、ＣＲＳの発症と関連していなかった。同様に、疾患負担のみでは、血清サイトカインレベルを超える更なる予測モデルは提供されなかった。トシリズマブ治療を受けた全ての患者の試験は、投与後に一貫した急速な毒性の解決を示し、これは、２４～３６時間以内の昇圧剤の中止を伴い、毒性の媒介におけるＩＬ－６の臨床的意義が確認された。同上参照。
天然のＴＣＲ媒介活性化とは対照的に、ＣＡＲ媒介Ｔ細胞活性化から生じる免疫学的カスケード、及び結果として生じる、ＣＲＳの生化学的障害をもたらす細胞事象は、臨床的関連性を有し、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａで処置された２人の成人患者は、ＣＲＳを経験している間に死亡し、多くの患者が有意な罹患率を経験した。上述のＴｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．の研究は、ＣＲＳを経験した患者の詳細なサイトカインプロファイルを提供し、ＣＲＳにおけるサイトカイン動態は、血液貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）におけるものとほとんど同一であることが観察された。この炎症性症候群は、マクロファージ活性化によって引き起こされており、ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＲＳの唯一のアクターである可能性が低いことを示唆しており、他の免疫細胞が重要な役割を果たし得る。これまでの臨床的理解は、ＩＬ－６の上昇にかかっている。ＩＬ－６は臨床症状を引き起こし、ＩＬ－６は、インビボでのＣＡＲ Ｔ細胞活性化中に上方制御されるいくつかのサイトカインの１つであり、サイトカインシグナル伝達のネットワークがＣＲＳに寄与していることを示唆している。
この実施例では、ＣＲＳの細胞ドライバーを調べるために、単球系由来の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を単離した。この臨床的症候群に関連してどの細胞型がサイトカイン上昇をもたらしたかを同定するために、インビボ及びインビトロ共培養実験を行った。本明細書における結果は、Ｔ細胞単独ではいくつかのＣＲＳ関連サイトカインの産生に十分であるが、活性化Ｔ細胞及びＡＰＣの両方がＩＬ－６の産生に必要であること、及びこの依存性は細胞間接触によらないことを示す。本明細書における結果は、単球由来細胞がＣＡＲ媒介性Ｔ細胞活性化に応答してＩＬ－６分泌を担うこと、及びＣＡＲ活性化Ｔ細胞がＡＰＣの存在によって影響されないことも同定する。ＣＲＳカスケードのこれらの詳細は、この症候群のより深い免疫学的理解だけでなく、ＣＲＳの管理のための更なる機会も提供し得る。
材料及び方法
異種移植片研究及び患者試料
６～１０週齢のＮＯＤ－ＳＣＩＤ－γｃ－／－（ＮＳＧ）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から入手するか、又は認可されたＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）プロトコルに従って自家繁殖させ、無菌状態で維持した。患者の白血病細胞及びＴ細胞は、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄが承認したプロトコル（それぞれＣＨＰ９５９及びＣＨＰ７８４）の下で入手した。この研究のためのＴ細胞操作は、以前に記載されている（Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ ＮＥＪＭ ２０１３）。動物に尾静脈を介して１０６個の初代ヒトＡＬＬ細胞を投与し、続いて７日後に５×１０６個のＣＡＲ Ｔ細胞（１１％ＣＡＲ＋）を投与した。末梢血を、後眼窩洞を介して収集し、サイトカイン定量のためにＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｅに提出した。
正常ドナー単球及びＴ細胞の単離並びにＴ細胞操作
正常なドナーからの初代ヒトＴ細胞及び単球は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｅを通じて入手した。全ての共培養実験について、Ｔ細胞及び単球は、同一のドナーから得た。以前に報告されたように、Ｔ細胞を１：１のＣＤ４：ＣＤ８細胞比で１０６細胞／ｍＬ Ｔ細胞培地の濃度において、３ビーズ／細胞の濃度の、ＣＤ３及びＣＤ２８に対して指向された抗体でコーティングした刺激性マイクロビーズ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、Ｃａｔａｌｏｇ ＃１１１．３２Ｄ）と共に混合した（Ｌａｐｏｒｔ ＧＧ、Ｂｌｏｏｄ ２００３）。初回刺激の２４時間後、Ｔ細胞をＣＤ１９ ＣＡＲ構築物をコードするレンチウイルスベクターに５～１０粒子／細胞の感染多重度（ＭＯＩ）で曝露した。７日目に刺激性ビーズを除去し、増殖及びサイズの傾向が、細胞が静止していることを示すまで細胞を数え、体積を連続的に測定し、その時点でそれらを凍結した。次いで、細胞をインビボ注射又はインビトロ共培養の１２～１８時間前に解凍した。非標的化Ｔ細胞を同じ方法で培養したが、レンチウイルスベクターで処理しなかった。
レンチウイルスベクターの調製
２９３Ｔヒト胎児腎臓細胞を用いて、高力価の複製欠損レンチウイルスベクターを産生した。トランスフェクションの２４時間前にＨＥＫ２９３Ｔ細胞を１つのＴ１５０組織培養フラスコ当たり１０７細胞で播種した。トランスフェクションの日に、Ｅｘｐｒｅｓｓ－Ｉｎトランスフェクション試薬（Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、ＣＯ）又はＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００トランスフェクション試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、カタログ＃１１６６８０１９）のいずれかの存在下で、細胞を７μｇのｐＭＤＧ．１、１８μｇのｐＲＳＶ．ｒｅｖ、１８μｇのｐＭＤＬｇ／ｐ．ＲＲＥパッケージングプラスミド及び１５μｇのトランスファープラスミドで処置した。ＣＡＲ構築物を含有するトランスファープラスミドは、ＣＡＲの発現が前述のようにＥＦ－１αプロモーターの制御下にあるように改変した。トランスフェクションの２４時間後及び４８時間後にウイルス上清を回収し、超遠心分離により１０，５００×ｇで一晩濃縮した。初回刺激の２４時間後、Ｔ細胞を１個のＴ細胞当たり５～１０個の感染性粒子の濃度でレンチウイルスベクターに曝露し、次いで上記のように培養した。
単球系細胞の産生
単球を上記のように採取し、以前に記載された方法（Ｈａｎ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００９）を使用して分化を実施した。簡潔には、２×１０６個の単球を、０．１ｍＭのＭＥＭ非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び１０％ウシ胎児血清を添加した１ｍＬのＲＰＭＩ １６４０にプレーティングし、４日間培養した。次いで、細胞を２ｍＭのＥＤＴＡを用いて回収し、ＣＤ１４、ＣＤ４５、ＣＤ６８及びＣＤ１６３で染色してマクロファージ分化を確認した。樹状細胞系統を産生するために、単球を１ｍＬのｃＲ１０中に６×１０６でプレーティングし、０．２μｇ／ｍＬのヒトＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ、＃２０４－ＩＬ－０５０）及び０．２μｇ／ｍＬのＧＭＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ、＃２１５－ＧＭ－０５０）で処置した。４日目に２ｍＭのＥＤＴＡを用いて細胞を採取し（未成熟樹状細胞）、又は培養物を１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ；＃Ｌ２６３０）及び０．０５μｇ／ｍＬのＩＦＮ－γ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ、＃２８５－ＩＦ－１００）（成熟樹状細胞）で処置した。２４時間後、細胞を２ｍＭのＥＤＴＡで回収し、ＣＤ４５、ＣＤ８０及びＣＤ８６で染色して未成熟ＤＣ及び成熟ＤＣの分化を確認した。
共培養アッセイ
Ｔ細胞を上記のように操作し、単球系を上記のように分化させた。Ｎａｌｍ－６ ＡＬＬ細胞株を標的として使用した。細胞を１５０μＬのｃＲ１０中に５０のＴ細胞、１０の標的及び１のＡＰＣの比率で組み合わせた。１８時間後、２０Ｌの上清を吸引し、２０ＬのｃＲ１０と置換した。次いで、２０Ｌを４８時間後に再び吸引した。トランスウェル共培養アッセイのために、Ｔ細胞及び標的を、本発明者らの標準的な共培養アッセイについて記載されているように培養した。プールした単球を、２４ウェルプレートの各ウェルに配置されたＴｈｉｎＣｅｒｔ細胞培養インサート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ）に播種した。共培養物を３７℃でインキュベートし、下記のようにＲＮＡ単離のためにインサート及びウェルの両方からの細胞を１８時間及び４８時間で収集した。
サイトカインレベルの測定
動物血清及び培養上清からのサイトカイン濃度測定は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌｕｍｉｎｅｘ ２００システム及びＭｉｌｌｉｐｌｅｘ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ２１ Ｐｌｅｘアッセイ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ；製品＃４０－０１２及び＃ＨＣＹ４ＭＧ－６４Ｋ－ＰＸ２１）を使用して、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｅによって行われた。測定は、標準的な製品プロトコルを用いて行われた。
ＲＮＡ抽出
Ｑｉａｇｅｎ Ｂｕｆｆｅｒ ＲＬＴ（Ｑｉａｇｅｎ Ｉｎｃ．）中で溶解した細胞ペレットから全ＲＮＡを調製した。溶解物を処理し、ＲＮＡ Ｃｌｅａｎ＆Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ－５カラム（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ．）を製造業者のプロトコルに従って使用してＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡの質及び収率は、Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡピコチップを備えたＡｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）又はＨｅｌｌｍａ ＴｒａｙＣｅｌｌ微量ウルトラマイクロセル（Ｈｅｌｌｍａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ）を備えたＢｉｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を使用して評価した。
ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ ｎＣｏｕｎｔｅｒアッセイ
ｎＣｏｕｎｔｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｖ２遺伝子発現コードセット（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ｎａｎｏＳｔｒｉｎｇ ｎＣｏｕｎｔｅｒ ＳＰＲＩＮＴ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で遺伝子発現を測定した。製造業者の推奨に従って試料を調製し処理した。簡潔には、５０ｎｇの全ＲＮＡを６５℃で１８時間、ｎＣｏｕｎｔｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｖ２遺伝子発現コードセットに溶液中でハイブリダイズさせた。次いで、ハイブリダイズした試料をｎＣｏｕｎｔｅｒ ＳＰＲＩＮＴカートリッジ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に充填し、次いでそれを密封して処理及び分析のために機器に入れた。
ＣＤ１０７ａ脱顆粒アッセイ
共培養実験を上記のように設定した。１８時間後、この培養物を、抗ＣＤ１０７ａ－ｅ６６０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、カタログ＃５０－１０７９）、及びＣＤ２８（クローン９．３）及びＣＤ４９ｄに対し指向した刺激性抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、カタログ＃５５５０５１）からなる抗体カクテルと１時間組み合わせた。細胞内タンパク質輸送をＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、Ｃａｔａｌｏｇ＃５５４７２４）の添加により停止させ、細胞を更に３時間インキュベートした。次いで、細胞を採取し、ＣＤ８及びＣＤ１０７ａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）について染色し、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーターで分析した。
結果
ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞及び標的の併用は、異種移植マウスにおいて臨床的に観察されたＣＲＳを模倣しなかった
ＣＲＳにおけるＣＡＲ活性化Ｔ細胞の役割を評価するために、患者由来の異種移植片モデルを攻撃的且つ多剤耐性の小児急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）から作成した。この異種移植を確立するために使用された悪性細胞は、Ｇｒｕｐｐ ＮＥＪＭ ２０１３に記載されているように処置されたＡＬＬを有する患者（患者ＣＨＰ－１００）に由来した。Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．に報告されているように、この患者は、長期の昇圧剤支持及び機械的人工換気の必要性を含むグレード４の毒性を経験した。臨床ＣＲＳは、血清ＩＬ－６の有意な上昇（ベースラインと比較してＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞注入後６日目で約１０００倍の増加）、及びαＩＬ６Ｒ抗体治療の投与後の症状の急速な解決を伴った。インビボでＣＲＳ関連サイトカインを産生する際のこの患者のＣＡＲ Ｔ細胞の役割を評価するために、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ｃγ－／－（ＮＳＧ）マウスに患者ＣＨＰ－１００からの１０６個の初代急性リンパ芽球性白血病細胞を生着し、続いて７日後に同じ患者からの５×１０６個のＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞（Ｔ細胞は１１％ＣＡＲ＋であった）を注射した。ＣＡＲ Ｔ細胞注入後、隔日で動物のサブグループにトシリズマブ（腹腔内注射により１００μｇ）も投与した。ＣＡＲＴ細胞注入後３日目の血清サイトカインレベルの測定は、トシリズマブの存在にかかわらず、測定可能なレベルのＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＧＭＣＳＦを示したが、検出可能なＩＬ－６を示さなかった（図５）。動物にＮａｌｍ－６ ＡＬＬ細胞株を生着し、正常ドナー由来のＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置した場合に類似のパターンが観察され（図６）、これは、このＩＬ－６産生の欠如が患者特異的現象ではなかったことを支持し、臨床的に観察された有意なＩＬ－６産生の原因である細胞成分は、これらの免疫不全異種移植片に存在しなかったことを示唆している。
抗原媒介Ｔ細胞死滅中のＡＰＣの存在は、ＣＲＳ関連サイトカインレベルの上昇を生じた
ＣＲＳとＨＬＨとの間の血清サイトカインプロファイルの類似性に基づき、単球系の抗原提示細胞がサイトカイン産生において果たし得る役割を評価した。ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞又は非標的化Ｔ細胞のいずれかを、ＡＰＣの存在下においてインビトロでＣＤ１９＋ＡＬＬ細胞株（Ｎａｌｍ－６）とＴ細胞１０：標的５０：ＡＰＣ１の細胞比で組み合わせた。１８時間の共培養後に培養上清を回収した。Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１６に記載の前向き臨床試験で実証されているように、ＩＦＮ－γの血清レベルにおいて早期上昇が観察された。Ｔ細胞が標的によって活性化される場合には常にＩＦＮ－γが検出され、ＡＰＣの存在に基づく有意差はなかった（図７Ａ）。Ｔ細胞を標的と組み合わせた場合、中程度のレベルのＧＭＣＳＦが分泌されたが、ＡＰＣが共培養物に含まれた場合、有意な上昇が見られ（図７Ｂ）、これは、ＡＰＣによるＴ細胞ベースの分泌の強化又はＧＭＣＳＦの２つの細胞源のいずれかを示唆する。従来、ＣＤ４ Ｔ細胞因子と考えられていたＩＬ－２は、Ｔ細胞と標的を組み合わせた場合のいくらかの分泌を伴う類似のパターンを示したが、共培養にＡＰＣを含めると有意に増強された（図７Ｃ）。このパターンは、ＩＬ－８及びＩＬ－６で実験したときに異なっていた。ＡＰＣ単独、ＡＰＣと標的との組み合わせ、並びにＡＰＣと標的及び非標的化Ｔ細胞との組み合わせの培養物において同様のレベルのＩＬ－８が観察された（図７Ｄ）。ＡＰＣを標的及び標的化Ｔ細胞と組み合わせた場合、レベルは、有意に増加した（図７Ｄ）。まとめると、これらのデータは、ＡＰＣがＴ細胞又は標的とは無関係に低レベルのＩＬ－８を分泌したが、標的、標的化Ｔ細胞及びＡＰＣの組み合わせが高レベルのＩＬ－８を生じたことを示唆している。ＩＬ－６レベルも同様のパターンを経過した（図７Ｅ）。ＡＰＣが単独で、標的と組み合わされ、非標的化Ｔ細胞及び標的と組み合わされた場合、低レベルが観察された。ＡＰＣを活性化Ｔ細胞及び標的と組み合わせると、レベルは、有意に上昇した。
ＡＰＣ：Ｔ細胞相互作用が細胞間接触又は可溶性因子によって媒介されるかどうかを明らかにするために、トランスウェルインサートを使用してＴ細胞及び標的をＡＰＣから分離する共培養と並行して同じ共培養を設定した。同数のＴ細胞及び標的をプレートウェルに入れ、同数のＡＰＣをトランスウェルインサートに入れた。図７Ｆ～７Ｊに示されるように、サイトカインの絶対濃度は変動したが、サイトカイン分泌の相対量は、ＩＦＮ－γ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ－２及びＩＬ－８について変化しなかった。トランスウェル分離は、非標的化Ｔ細胞の存在下又は非存在下でＡＰＣを標的と組み合わせた場合、ＩＬ－６の相対的増加を生じた。しかしながら、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞を標的及びＡＰＣと組み合わせた場合、最も高いＩＬ－６レベルが依然として観察され、他の全ての共培養実験と比較して統計的に有意な上昇を示した（ｐ＝０．００１）。これらの研究は、ＡＰＣの存在下でＣＡＲ媒介Ｔ細胞活性化時に誘導されるサイトカインネットワークがＴ細胞とＡＰＣとの間の細胞間接触に依存していなかったこと、並びに標的、ＣＡＲ Ｔ細胞及びＡＰＣの組み合わせが高レベルのＩＬ－６産生に必要であったことを実証している。
単球系細胞は、ＣＲＳ関連サイトカインを差次的に分泌する
どのＡＰＣ系統がＩＬ－６分泌に必要であるかを同定するために実験を行った。単球を単離し、インビトロで培養して、単球系の分化した子孫、即ち未成熟樹状細胞、成熟樹状細胞及びマクロファージを産生した（Ｈａｎ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ２００９）（破骨細胞は含まれなかった）。これらの未分化単球及び分化系統を、記載のように共培養においてＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞及び標的と組み合わせた。培養上清を１８及び４８時間で回収した。図７Ａ～７Ｊからの知見と一致して、ＩＦＮ－γレベルは、各ＡＰＣ系統の存在下及びＡＰＣの非存在下で上昇し、これは、ＩＦＮ－γがＡＰＣとは無関係に活性化ＣＡＲ Ｔ細胞によって産生されたことを示唆する（図８Ａ）。４８時間の培養後、レベルは、わずかに上昇した。ＧＭＣＳＦレベルは、１８～４８時間の時点で有意な増加を示し、これは、最もＧＭＣＳＦを産生する未成熟樹状細胞を含む培養物を伴い、その後、成熟ＤＣ、次いでマクロファージが続いた（図８Ｂ）。活性化Ｔ細胞単独では、活性化Ｔ細胞と単球との培養物と同様に、非常に少ないＧＭＣＳＦのみを産生し、これは、ＧＭＣＳＦ分泌が分化した単球系細胞集団によって促進されたことを示唆する。活性化Ｔ細胞を成熟樹状細胞と組み合わせた場合、ＩＬ－２レベルは、４８時間の時点で大きいピークを示し、Ｔ細胞をマクロファージと組み合わせた場合、小さいが有意なピークを示した（図８Ｃ）。Ｔ細胞を単独で又は未成熟樹状細胞の存在下で標的と組み合わせた４８時間後に低レベルのＩＬ－２が検出されたが、単球の存在は、有意なＩＬ－２産生を生じないようであった。ＡＰＣを含有するほぼ全ての培養物においていくらかの低レベルのＩＬ－８が検出されたが、１８時間の時点において、活性化Ｔ細胞をマクロファージと組み合わせた場合、Ｔ細胞及び標的単独と比較して１０００倍の増加が検出された（図８Ｄ）。未成熟樹状細胞の存在はまた、単球培養物においてより緩やかな上昇を伴って１８時間で高いＩＬ－８レベルをもたらした。成熟樹状細胞の存在は、ＩＬ－８濃度を有意に変化させなかった。最後に、ＩＬ－６レベルは、４８時間の培養後に活性化Ｔ細胞を未成熟樹状細胞と組み合わせた場合に最も高くなることが観察され、サイトカイン濃度は、１００倍を超えて増加した（図８Ｅ）。活性化Ｔ細胞並びに成熟ＤＣ及びマクロファージを含有する培養物において中程度の上昇が検出された。ＡＰＣの非存在下では、ＩＬ－６は、ほとんど検出されなかったが、標的の非存在下では低レベルが生成され（Ｔ細胞及び未成熟ＤＣのみ）、これらのレベルは、ＣＡＲ Ｔ細胞を標的及びＡＰＣと組み合わせたときに観察されたものより数ｌｏｇ低いものであった。
ＡＰＣ産生ＩＬ－６は、ＣＡＲ Ｔ細胞転写又は細胞毒性に影響を及ぼさなかった
いずれの細胞型（ＡＰＣ又はＣＡＲ Ｔ細胞）がこれらの共培養物中のサイトカイン分泌に関与しているかを決定するために実験を行った。トランスウェル共培養実験を行い、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ転写分析を別々の細胞集団に対して行った。ＡＰＣの存在下又は非存在下における活性化Ｔ細胞の転写プロファイルを調べた。免疫活性化に関連する６９７個の遺伝子の回帰分析によって示されるように、転写プロファイルに検出可能な差異はなかった（図９Ａ、Ｒ２＝０．９５１、ｐ＞０．５）。非標的化Ｔ細胞及びＮａｌｍ－６白血病と組み合わせたＡＰＣに対するＡＰＣ単独のプロファイルも調べた。ＡＰＣ転写プロファイルに変化はなかった（図９Ｂ、Ｒ２＝０．９３４、ｐ＞０．５）。更に、非標的化Ｔ細胞とＮａｌｍ－６、又はＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞とＮａｌｍ－６を組み合わせた場合のＡＰＣ転写プロファイルを比較した。ＡＰＣ転写プロファイルに有意な変動性があった（図９Ｃ、Ｒ２＝０．８３０、ｐ＝０．００１７）。これらのデータは、ＡＰＣがＴ細胞転写に影響を及ぼさなかったが、ＣＡＲ活性化Ｔ細胞がＡＰＣ転写表現型を有意に変化させ、非活性化Ｔ細胞がＡＰＣ転写表現型を有意に変化させなかったことを実証する。同じトランスウェル研究から、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ分析を用いてＲＮＡ構築物をそれらの起源の細胞にマッピングした。ＩＦＮ－γは専らＴ細胞によって作製され、ＩＬ－２及びＧＭＣＳＦは、主にＴ細胞によって作製され、ＩＬ－８は、主にＡＰＣによって作製され、ＩＬ－６は、専らＡＰＣによって作製され（図１０）、これは、これらのＣＲＳ関連サイトカインの細胞源を確認した。
ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞活性が転写非依存的方法でＩＬ－６によって変化したかどうかを評価するために、共培養実験を行い、Ｔ細胞の細胞毒性活性を評価した。標的、ＡＰＣ、及びＴ細胞を上記のように混合し、Ｔ細胞を１８時間の共培養後に回収した。非特異的ＣＡＲシグナル伝達が細胞毒性評価に及ぼし得る影響を制御するために、Ｔ細胞を、ＣＡＲを全く発現しない（図１１Ａ）、無関係の抗原ＧＤ２を指向するＣＡＲ（図１１Ｂ）、又はＣＤ１９ ＣＡＲ（図１１Ｃ）を発現するように操作した。細胞毒性は、Ｔ細胞脱顆粒の尺度であるＣＤ１０７ａの上方制御によって測定された。非標的化Ｔ細胞又はＧＤ２ ＣＡＲ Ｔ細胞を標的と組み合わせた場合、脱顆粒が検出されなかったが、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ１９＋白血病に遭遇した場合、脱顆粒が検出された。ＡＰＣの存在又は不存在に基づいて脱顆粒度に検出可能な差はなかった。
臨床ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞試料の転写分析は、グレード４に対するグレード２～３のＣＲＳの明確なクラスター化を明らかにした
白血病に対してＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療を受けた患者のサイトカイン分析は、多くのサイトカインがＣＲＳの間に上昇するが、Ｔ細胞注入後にグレード４のＣＲＳを発症し続ける患者の予測モデルに貢献するのはごくわずかであることを実証した（Ｔｅａｃｈｅｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１６）。Ｔ細胞注入後の発熱の初日に第Ｉ相臨床試験の一部としてＡＬＬの処置のためにＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療を受けた患者から末梢血及び単離単核細胞（ＰＢＭＣ）を採取した。１０個の患者試料のうちの７個が検出可能な末梢ＣＡＲ Ｔ細胞を有し、これらの患者のうちの３人はグレード２のＣＲＳ、１人はグレード３、及び３人はグレード４を経験した。残りの３つの試料は、検出可能な末梢Ｔ細胞を有さず、循環ＡＬＬ細胞のみを有した。これらの患者のうち、２人はグレード４のＣＲＳ、１人はグレード３と分類された。教師なしクラスタリング分析をこれらの試料に対して実施した。グレード２～３及びグレード４のＣＲＳについて異なる転写プロファイルが決定された（図１２）。グレード４のＣＲＳを発症した患者由来のＴ細胞は、グレード２～３のＣＲＳと比較してグランザイムＢ、パーフォリン、ＩＦＮ－γ、Ｚａｐ７０、ＥＯＭＥＳ及びＬａｇ－３転写物の上昇を示し、腫瘍壊死因子α、ＩＬ－１β及びＣＣＲ７のレベルを抑制した。ＣＤ７９、Ｐａｘ５及びＣＤ１９などのＢ細胞転写物は、循環白血病を伴う３つの試料において上昇したのみであった。
ＣＲＳを経験している患者において、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩＬ－６を産生しなかった
ＣＡＲ Ｔ細胞がインビトロでＩＬ－６を産生しなかったことが実証されたため、関連する臨床的状況においてこの知見を確認するために実験を行った。ＣＲＳを発症し続けた、発熱を経験している患者の転写分析は、ＣＡＲ Ｔ細胞を含有する試料のいずれも検出可能なレベルのＩＬ－６転写物を示さず、全てのＩＬ－６転写物レベルは、検出下限未満（１細胞当たりのＲＮＡ転写物１コピー未満、図１２）を示すことを明らかにした。同様に、白血病細胞のみを含む試料は、検出可能なレベルのＩＬ－６を有さず、これらの患者においてＴ細胞も白血病もＩＬ－６産生の原因ではないことを確認した。光学顕微鏡を用いたこの収集物からのＴ細胞の検査により、大きく不規則な核、開いたクロマチン及び不規則な形質膜を有する高度に活性化された表現型が示された（図１３）。
考察
ＣＲＳ、例えばＣＡＲ Ｔ細胞治療に関連するＣＲＳの機構的理解が欠如している。本明細書における結果は、ＩＬ－６の供給源及びそれがＣＡＲ Ｔ細胞活性において果たす役割についての生物学的洞察を提供する。特に、本明細書における結果は、単球系ＡＰＣが標的白血病のＣＡＲ媒介Ｔ細胞認識に応答してＩＬ－６を産生すること、並びにＴ細胞転写活性及び細胞毒性活性がＩＬ－６の存在によって影響されないことを示した。
これらの知見は、単球由来の未熟樹状細胞がＣＡＲ媒介Ｔ細胞活性化に応答して最大のＩＬ－６シグナルを生じることを実証した。患者からのＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞がＩＬ－６を産生しなかったという確認と共に、ＩＬ－６の細胞源の同定は、この症候群の中心的な生理学を強調する。本明細書における結果は、Ｔ細胞及びＡＰＣがトランスウェル設定において分離された場合、活性化されていないＴ細胞の存在下又は非存在下でＡＰＣが標的と組み合わされた場合のより高レベルのＩＬ－６の観察を含む。１つの説明は、標的とＡＰＣとの間の直接的な細胞間接触が細胞表面共受容体に基づく阻害性シグナル伝達を介してＩＬ－６の分泌を阻害し得るということであり得る。代わりに、トランスウェルインサートのミクロ細孔材料は、従来のプレートウェルの不活性プラスチックによって送達されないＡＰＣに非特異的刺激を提供し得、この刺激は、ＩＬ－６分泌の増強を生じ得る。しかしながら、唯一統計的に関連性を有する、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞、標的及びＡＰＣの組み合わせから生じるＩＬ－６分泌の増加を伴って、全体的なパターンは同じままであり、ＡＰＣによるＩＬ－６分泌は細胞間接触によってではなく、代わりにＣＡＲ Ｔ細胞が標的を殺傷するときに存在する可溶性因子によって刺激されることを示唆する。
トランスウェルシステムを用いた転写マッピングは、評価された全てのサイトカインの細胞源の同定を可能にした。ＩＦＮ－γは、Ｔ細胞のみによって産生され、これは、図８に提示されたサイトカイン定量からの知見と一致していた。ＩＬ－２、ＧＭＣＳＦ、及びＩＬ－８は、各分子について明らかに優勢なＡＰＣ又はＴ細胞を伴うが、両方の細胞集団によって産生された。低レベルのＩＬ－２は、ＡＰＣに由来し、優勢は、Ｔ細胞に由来した。図８からの分泌パターンの試験は、ＣＡＲ Ｔ細胞を標的と組み合わせた場合、４８時間でＩＬ－２レベルは、約４００００ｐｇ／ｍＬであり、ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて見られたものと同様であり、標的は単球及び未成熟樹状細胞と組み合わせた。しかしながら、成熟樹状細胞及びマクロファージの存在は、１６００００ｐｇ／ｍＬ、４倍の増加に近い有意により高いＩＬ－２レベルを生じた。これらの濃度の違いは、転写における差異と完全には相関していなかったが、ＩＬ－２産生の原因である単球系は、成熟樹状細胞及びマクロファージであった可能性がある。いくつかの可能性は、転写の違いによって説明されないサイトカイン量の有意な違いを説明し得る。ＡＰＣ側での受容体発現の変化又は再利用は、採取時に存在する可溶性ＩＬ－２の変動を引き起こす可能性がある。代わりに、ＡＰＣは、ＩＬ－２の安定性を強化し、その消費を低下させる、他の可溶性因子を分泌し得る。ＧＭＣＳＦは、活性化Ｔ細胞をＡＰＣと組み合わせた場合に分泌が増加したこと、及び２つの細胞源の転写の証拠を伴う、ほぼ同一のパターンを示した。この場合、未成熟樹状細胞がＡＰＣ由来のＧＭＣＳＦの供給源であると考えられ、成熟ＤＣ及びマクロファージも寄与している。タンパク質レベルでのＩＬ－８の検出は、活性化Ｔ細胞がＡＰＣと組み合わされた場合にのみ起こり、Ｔ細胞が単独又は標的と一緒になった場合に非常に低いレベルが検出された一方、転写分析は、２つの細胞源を示した。ＡＰＣ ＩＬ－８転写物レベルは、Ｔ細胞転写物レベルよりも約４ｌｏｇ高く、これは、これらの動態を説明し得る。ＩＬ－２及びＧＭＣＳＦ転写物は、両方とも約２ｌｏｇの相違を示した。最後に、ＩＬ－８は、１８時間の時点で有意により高いレベルを示した唯一のサイトカインであり、他の全ては、４８時間でピークに達したことから、ＩＬ－８がＣＲＳカスケードの初期の構成要素であり得ることが示唆される。
Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．は、ＡＬＬを有する患者の大多数がサイトカイン放出症候群を発症したと報告し、２７％がトシリズマブを必要とする重症ＣＲＳを経験していると説明した（Ｍａｕｄｅ ＮＥＪＭ ２０１５）。抗ＩＬ－６Ｒ治療は、この毒性を管理するのに有効であり、大半の場合において急速な臨床的改善をもたらした。この実施例の研究に細胞を使用した患者は、進行中の呼吸器及び血行動態機能不全の急速な改善を経験した。ＣＡＲ Ｔ細胞活性に対するＩＬ－６シグナル伝達の妨害の影響は未知のままであるため、抗ＩＬ－６治療を始めるという決定は、臨床試験チームの裁量によるものである。本明細書におけるこれらの知見は、単球系由来のＩＬ－６がＣＡＲ Ｔ細胞転写シグネチャを変化させないこと、及びこの転写安定性が細胞毒性機能の安定性に対応することを実証する。本明細書における結果は、ＡＰＣ及びＡＰＣ産生ＩＬ－６がインビボでのＣＡＲ Ｔ細胞活性に必要ではなく、インビボでの標的殺傷において役割を果たさないバイスタンダーである可能性が高いことを示唆する。これらの知見は、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後のＩＬ－６シグナル伝達の無効化が抗腫瘍応答に影響を及ぼさないはずであることを示唆している。
結論
ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療後のＣＲＳの管理は、この症候群の生物学的理解が限られていることを考慮すると、大半が経験的なものであった。本明細書における結果は、ＣＡＲ Ｔ細胞がＩＬ－６を産生しない（むしろ、それらは、ＡＰＣによって産生される）こと、及びＩＬ－６の存在がＴ細胞転写活性又は細胞毒性を変化させないことを実証する。これらの結果は、ＣＡＲ Ｔ細胞治療の有効性を維持しながら、ＣＲＳからの毒性に関連する有意な罹患率を制御するための抗ＩＬ－６治療の、より十分な情報に基づく使用を可能にする。本明細書のデータは、ＣＡＲＴ１９の有効性の変化を伴わない、ＣＲＳの症状が現れる前のＩＬ－６の遮断を支持し得る。本明細書中のデータに基づいて、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞治療後のトシリズマブの早期投与を可能にするように臨床試験が設計されている。臨床試験は、以下の実施例４に更に詳細に記載される。トシリズマブの早期投与（例えば、ＣＲＳの症状が発生する前又は直後）は、強力な抗腫瘍効果を維持しながらＣＲＳ毒性の発生率を有意に減少させ得る。
実施例４：再発／難治性Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を発現するＣＤ１９を有する小児患者におけるＣＡＲＴ１９（ＣＴＬ０１９）関連サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）管理のためのトシリズマブ最適化タイミングの第２相２コホート研究
トシリズマブの臨床経験
ＣＲＳ及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）などの毒性がＣＡＲＴ１９患者（２０１５年５月の時点で成人及び小児及びリンパ腫を含む７件の研究においてこの製品を投与された１６２人の患者）に観察されている。ＣＲＳは、ＣＴＬ０１９で処置された成人及び小児患者に見られる最も有意なＳＡＥである。ＣＲＳは、典型的にはＣＡＲＴ１９の注入から２週間以内に始まり、数日間の発熱で始まる。全ての場合において、感染症の評価が行われている。発熱は、急上昇する傾向があり、悪寒、食欲不振、悪心、下痢、電気泳動、毛細血管漏出、低酸素及び低血圧と関連し得る。ＩＣＵレベルの治療症例の２５～３０％において、換気装置支持及び昇圧薬が必要であった。観察により、ＣＲＳ中、ＩＬ－６濃度の非常に高い上昇が認められた。更に、反応は、典型的にはＭＡＳと関連しているようである。これは、フェリチンの上昇の証拠として現れ得るが、低フィブリノゲン血症、血球減少症、精神状態の変化、及び他の合併症にも関連し得る。
トシリズマブは、抗ＩＬ６受容体抗体であり、ＣＨＰ９５９に対して８～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与されている。多くの場合、ＣＲＳは、重症であるが可逆的である。しかしながら、成人患者において死に至る難治性ＣＲＳのいくつかの症例があり、これは、一般に同時の耐性感染症を併発した。ＣＲＳの危険性は腫瘍負荷と非常に有意に関連しているため、より少ない腫瘍負荷を有する患者を処置することは、より軽症のサイトカイン放出症候群を生じ得る。しかしながら、更なる寄与患者及びＣＡＲＴ１９関連の要因を除外することはできない。
作用機序的に、ＣＲＳは、インビボでのＣＡＲＴ１９細胞増殖及び腫瘍死滅の抗腫瘍機構の必要な部分であるため、トシリズマブは、静脈内輸液及び中等度の昇圧薬支持にもかかわらない血行動態的不安定性、急速な臨床的悪化、肺浸潤、高流量酸素及び／又は機械的人工換気の必要性を含む酸素要求量の増加を含む、呼吸困難が悪化を伴うＣＲＳに対して投与されてきた。
ＣＲＳ／ＭＡＳは、この毒性が軽度又は中等度の場合、支持療法を用いる患者、及びトシリズマブのような抗サイトカイン治療と支持療法を用いる患者の大部分において管理が成功した。重症ＣＲＳ／ＭＡＳは、今日までに処置された全てのＣＬＬ、ＮＨＬ及び小児ＡＬＬ患者において必要とされるように、トシリズマブの投与に急速に（多くの場合、数時間で）応答した。
ＣＨＰ９５９及びＮｏｖａｒｔｉｓ－ＵＰｅｎｎマルチサイト試験Ｂ２２０５Ｊで処置されたＡＬＬの小児患者では、グレード１～４のＣＲＳが６２人（８９．８％）の患者について報告された。６２人中２１人の患者（３３．８％）が抗サイトカイン治療を必要とした。ＣＲＳは、１～３用量のトシリズマブの投与を受けた１人の患者を除く全ての患者において可逆的であった。Ｐｅｎｎの研究において処置されたＡＬＬを有する成人患者において、Ｂ２１０２Ｊ ＣＲＳが全ての患者で報告された。これらの患者の５０％が抗サイトカイン治療（１回又は２回のトシリズマブ投与）を必要とし、これは、ＣＲＳの完全解決をもたらした。
ＣＡＲＴ１９増殖に対するトシリズマブの影響
小児ＡＬＬ患者２５人（ＣＨＰ９５９、Ｂ２２０５Ｊ、及びＢ２２０２）におけるＣＡＲＴ１９細胞動態のグラフィカル診査は、ＣＡＲＴ１９拡大に対するトシリズマブの影響を示唆しなかった。臨床試験からの小児ＡＬＬ患者の２つの例において、ＣＨＰ９５９（ＣＡＲＴ１９を投与された小児ＡＬＬ患者の第Ｉ相臨床試験）、試料ｑＰＣＲ評価は、本明細書に記載のＣＲＳ処置アルゴリズムの基準に従って投与した場合、ＣＡＲＴ１９細胞の増殖率は、第１の用量のトシリズマブの投与前後で同様であるように見えることを示した。
今日までの予備分析（ｎ＝２５の小児ＡＬＬ患者）では、非線形混合効果モデルに基づく増殖率に対するトシリズマブの識別可能な影響は検出されていない。
抗腫瘍活性に対するトシリズマブの影響
ＣＨＰ９５９で処置された患者では、グレード４のＣＲＳに対してトシリズマブで処置された患者の１００％がその後寛解した。トシリズマブで処置されなかった患者（データは示さず）と比較して、ＣＲ／ＣＲｉを達成したトシリズマブで処置された患者は、２倍高いＴ細胞曝露（ＡＵＣ２８ｄ）を有する傾向があったが、これは、臨床応答に影響しなかった。更にＣＲＳのより高い重症度を含む更なる因子がトシリズマブを投与された患者を特徴付け、これは、ＣＡＲＴ１９細胞注入直前のより高い腫瘍負荷と相関した。ＣＨＰ９５９のＣＲ／ＣＲｉ応答サブグループ（ｎ＝４６）内では、トシリズマブを投与された患者（ｎ＝１５）は、投与されなかった患者（ｎ＝３１）よりも少なかった。応答のある患者においてのみ見られた別の標的上の効果は、正常なＣＤ１９＋Ｂ細胞の枯渇であった。例えば、Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．ｍｅｄ．２０１３；及びＰｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ２０１１；３６５（８）：７２５－３３を参照されたい。トシリズマブを投与された患者とトシリズマブを投与されなかった患者との寛解期間（ＤＯＲ）の予備的比較は、標準的なＣＲＳ処置アルゴリズム、例えば本明細書に記載の処置アルゴリズムを介して投与した場合のＣＡＲＴ１９腫瘍有効性に影響を及ぼさないことを示唆する。
第２相試験の概要
本実施例は、抗ＣＤ１９レンチウイルスベクター（ＣＡＲＴ１９／ＣＴＬ０１９）で形質導入された再指向自己Ｔ細胞後の、注入前の高腫瘍負荷対低腫瘍負荷を伴う、ＣＤ１９を発現する再発性及び難治性Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病の小児患者におけるＣＡＲＴ１９（ＣＴＬ０１９）関連ＣＲＳ安全性事象に対するトシリズマブの投与タイミングの有効性を説明する第２相、２コホート、非盲検試験について説明する。
本研究の一次的目的は、グレード４のＣＲＳの頻度を説明することである。二次的目的は、
１．ＭＲＤ陰性骨髄を伴うＣＲの２８日目の割合及び寛解期間によって評価される腫瘍応答を説明すること
２．ＣＡＲＴ１９（ＣＴＬ０１９）細胞動態を説明すること；及び
３．更なる安全性評価項目を説明すること
である。探索的目的は、
１．第１のトシリズマブ投与前後のＣＡＲＴ１９（ＣＴＬ０１９）増殖を比較すること；及び
２．サイトカイン放出症候群の鍵となり得る可溶性免疫因子のプロファイルを説明すること
である。
包含基準は、再発／難治性Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を発現するＣＤ１９を有する１～２４歳の小児患者を含むように設計される。
試験産物は、抗ＣＤ１９ζ ｓｃＦｖ ＴＣＲζ：４１ＢＢのいずれかを発現するようにレンチウイルスベクターで形質導入されたＣＡＲＴ－１９細胞であり、患者内用量漸増アプローチ：０日目に１０％、１日目に３０％、総用量目標は、約１．５×１０７～５×１０９（約０．３×１０６～１．０×１０８／ｋｇ）Ｔ細胞を使用して静脈内投与される。
２つのコホートは、注入前の高腫瘍負荷対低腫瘍負荷に基づいて定義され、ＣＲＳ管理のためのプロトコル定義された早期抗サイトカイン介入（即ちトシリズマブ）を受ける高腫瘍負荷コホート、及びＣＲＳのための標準的な抗サイトカイン介入（即ちトシリズマブ）を受ける低腫瘍負荷コホートを伴う。
ＣＡＲＴ－１９投与の期間は、注入される総量及び毎分１０～２０ｍＬの推奨注入速度に基づく。形質導入Ｔ細胞は、緩徐なＩＶ注入によって投与される。Ｔ細胞は、多くの患者において数ヶ月又はそれを超える循環において検出可能なレベルで持続すると予想される。
投与及び処置レジメン
１．５×１０７～５×１０９細胞又は０．３×１０６～１．０×１０８／ｋｇのＣＡＲＴ１９細胞の用量を使用する。健康な成人には約１×１０１２Ｔ細胞（２×１０１０Ｔ細胞／ｋｇに相当）が存在するため、提案された総（１００％）用量は、Ｔ細胞の総体質量の約０．５％に相当する。従って、存在すべき細胞の初期頻度は、注入後のベースラインで約０．５％であるべきである。更なる安全性の特徴として、細胞は、下記の「ＣＡＲＴ１９形質導入Ｔ細胞投与」の節に記載されるように分割投与アプローチを用いて投与される。
ＣＡＲＴ１９形質導入Ｔ細胞投与
ＣＡＲＴ１９ Ｔ細胞を１．５×１０７～５×１０９（０．３×１０６～１．０×１０８／ｋｇ）全細胞の総用量まで投与する。投与された形質導入ＣＡＲＴ１９細胞の実際の数は、形質導入効率に依存する。以下のスケジュールが使用される：
・０日目：「１０％」－１．０×１０７／ｋｇ
・１日目：前日の注入により患者が臨床的に安定している場合、「３０％」－３．０×１０７／ｋｇ
製造時に標的用量が達成されない場合、全ての放出基準を満たす産物が注入され得る。次回のＴ細胞投与を妨げるであろう毒性は、発熱又は臨床的不安定性である。血球減少症など、先の化学療法に起因する毒性は、安定した患者への注入に影響を与えない。
その後のＣＡＲＴ－１９注入のタイミング及び用量
ｉ）その後のＢ細胞回復を伴う短期間のＢ細胞形成不全の証拠（急速なＣＡＲクリアランスを示唆する）、又はｉｉ）ＣＡＲの増殖／ＬＧＬ若しくは応答の証拠を有しない発熱若しくは他の可逆的毒性、又はｉｉｉ）初回注入に対して無応答、若しくは部分的若しくは一時的な応答を有した患者については、細胞の初期用量が完全な治療的効果をもたらすのに十分ではなかったか、又は細胞が長期の疾患制御をもたらすのに十分長く持続していなかった可能性がある。このような場合、更にＣＡＲＴ－１９細胞を投与すること（その後の注入）が適切であり得る。その後の注入は、１４日目以降に行われる。
対象の累積用量は、上記で特定される用量の１００％を超え得る可能性がある。細胞がよく増殖し、十分な数が利用可能である場合、初期応答を維持するため、又は（例えば、Ｂ細胞回収によって証明される）急速なＣＡＲクリアランスに対処するために、１００％を超える細胞用量をアリコートで投与し得る。このシナリオでは、（利用可能な場合）３０％の追加用量が２週間以上の間隔で与えられよう。この投与レジメンの理論的根拠は、初期用量と有意な用量応答関係がないように思われることである。注入後の細胞増殖の程度は様々で有意な程度であることが観察されており、注入された細胞の量は、それほど重要ではない。従って、経時的に与えられる複数回投与は、応答を持続させる上でより有効であり得る。安全性の観点から、最悪の毒性が最初の注入で観察されている。それらを受けた少数の患者において、その後の注入で最小の毒性があった。従って、本発明者らは、潜在的なリスクを上回る、経時的により多くの細胞用量を投与することの潜在的な利益を考慮する。しかしながら、累積用量は、数回の投与で経時的に投与される１．５×１０８／ｋｇを超えない。
研究設計
研究は３つの逐次的な相を有する：１）スクリーニング段階、２）アフェレーシス（該当する場合）及び化学療法（該当する場合）を含む製造及び処置前段階、並びに３）ＣＡＲＴ１９輸血細胞注入及び経過観察評価を含む処置段階。
患者の適格性が確認されると、製造に適したアフェレーシス産物を有しない患者は、この目的のために末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得るために白血球除去によって細胞を収集される。細胞を抗ＣＤ１９ＴＣＲζ／４－１ＢＢレンチウイルスベクターで形質導入し、インビトロで増殖させ、次いで将来の投与のために凍結する。適切に認証されたアフェレーシスセンターで収集され、産物が適切な単核細胞収量を満たす場合、研究参加前に患者から収集した凍結保存された既存のアフェレーシス産物は、ＣＡＲＴ１９製造に使用することができる。過去のアフェレーシス産物が入手できない場合、試験登録後に細胞調達のためのアフェレーシス手順が予定される。
禁忌であり、以前の化学療法に基づいて医学的に望ましくない場合を除き、患者はリンパ球減少を目的としたＣＡＲＴ１９細胞注入前にコンディショニング化学療法を受ける。更に、患者の白血球（ＷＢＣ）数が１，０００／μＬ以下の場合、コンディショニング／リンパ球除去化学療法は必要でない。化学療法は、ＣＡＲＴ１９細胞の計画された注入の１～４日前に最後の投与が完了するように計画される。化学療法の開始日は、選択した化学療法レジメンの期間によって異なる。化学療法からＣＡＲＴ１９注入までの期間が４週間以上遅れる場合、患者は、ＣＡＲＴ１９注入前にリンパ除去化学療法で再処置される必要がある。
ＣＡＲＴ１９注入直前の時点での腫瘍負荷（ＴＢ）（骨髄穿刺吸引物の分化度又は生検又はマルチパラメータフローサイトメトリーによって測定される最高芽球率によって定義される）によって定義される、２つの研究コホートが計画される：
１．コホートＡ：注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄内に４０％以上の芽球を有する患者は、早期トシリズマブコホートに登録され、早期ＣＲＳ処置アルゴリズムに従う。
２．コホートＢ：注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄内に４０％未満の芽球を有する患者は、標準的なＣＲＳ Ｒｘアルゴリズムに従う。
患者選択基準
患者選択基準には以下が含まれる。
１．再発性又は難治性Ｂ細胞ＡＬＬ：
ａ．２回目又はそれを超える再発（骨髄又はＣＮＳ）、又は
ｂ．同種ＨＳＣＴ後の再発、及び注入時にＳＣＴから６か月以上、又は
ｃ．ＣＡＲ修飾Ｔ細胞治療後の再発、又は
ｄ．２回を超える化学療法レジメン／サイクル（再発患者に対して１サイクル）後にＭＲＤ陰性ＣＲを達成しなかったと定義される難治性疾患、又は
ｅ．Ｐｈ＋ＡＬＬ患者は、チロシンキナーゼ阻害剤治療に不耐性であるか、これが失敗した場合に適格である、又は
ｆ．以下の理由により同種ＳＣＴには不適格である：ｉ．併存疾患
ｉｉ．同種ＳＣＴコンディショニングレジメンに対する他の禁忌
ｉｉｉ．適当なドナーの欠如
ｉｖ．従前のＳＣＴ
ｖ．研究チームの一員でないＢＭＴ医師とのＳＣＴの役割についての書面による議論の後の、予想される結果による、治療選択肢としての同種ＳＣＴの拒否
ｇ．ＣＮＳ疾患の患者は、ＣＮＳ３疾患が治療に応答性である場合、適格となる（注入時に項５．２の基準を満たす必要がある）。
２．再発時のフローサイトメトリーによる骨髄又は末梢血（又は難治性疾患の場合には最近の骨髄）におけるＣＤ１９腫瘍発現の記録。患者がＣＤ１９指向性治療（即ちブリナツモマブ）を受けた場合、ＣＤ１９発現を示すためにこの治療の後に骨髄を得るべきである。
３．次のように定義される適切な臓器機能：
ａ．以下の年齢／性別に基づく血清クレアチニン：
Figure 0007219376000155
ｂ．ＡＬＴ＜５００Ｕ／Ｌ
ｃ．ビリルビン＜２．０ｍｇ／ｄｌ
ｄ．グレード１以下の呼吸困難として定義される最小レベルの肺予備能、室内空気での９２％を超えるパルスオキシメトリー；処置をしている研究者の判断により、ＰＦＴが臨床的に適切であればＤＬＣＯ＞４０％（貧血に対して補正）を有しなければならない
ｅ．ＥＣＨＯにより確認される、左心室短縮率（ＬＶＳＦ）≧２８％又は駆出率（ＬＶＥＦ）≧４０％、又はスキャン若しくは心臓専門医によって記録された十分な心室機能。
５．標準的な形態学的基準又はＭＲＤ基準による疾患の証拠。疾患を示す臨床骨髄は、登録時、又は登録から１２週間以内に実施され得る。
６．年齢１～２４歳。
７．適切なパフォーマンスステータス（Ｌａｎｓｋｙ又はＫａｒｎｏｆｓｋｙスコア≧５０）。
８．生殖能力のある対象は、許容される避妊方法を使用することに同意しなければならない。
ＣＡＲＴ１９産物注入
形質導入Ｔ細胞は、緩徐なＩＶ注入によって投与される。１０ｍＬ／ｋｇ以下の総容量が患者に送達される。ＣＡＲＴ－１９投与の期間は、注入される総量及び毎分１０～２０ｍＬの推奨注入速度に基づく。
バイタルサイン（体温、呼吸数、脈拍、血圧、及び臨床的に適応がある場合には酸素飽和度）は、注入前１０分以内、注入後１０分以内、及びその後少なくとも１時間、１５分ごとに測定される。対象のバイタルサインがＣＡＲＴ１９注入後１時間で満足のいくものではなく、安定していない場合、バイタルサインは、１時間ごとに又は臨床的に示されるように継続して監視する。対象は、各注入の日に対象の治療を管理している医師が、対象が満足な状態にあると判断した後、退院となる。
発熱反応
発熱反応の場合、感染症の評価を開始すべきであり、患者は、処置する医師によって医学的に指示及び決定されるように、抗生物質、輸液及び他の支持療法で適切に管理されるべきである。ＣＡＲ Ｔ細胞注入後に患者が敗血症又は全身性菌血症を発症する事象では、適切な培養及び医学的管理を実施する必要がある。汚染されたＣＡＲＴ１９ Ｔ細胞産物が疑われる場合、ＣＶＰＦに保存された保管試料を使用して産物の無菌性を再試験できる。最も可能性の高い病因としてＣＲＳが考慮されるべきである。
ＣＲＳのための検査パラメータの評価
血液検査、凝固及び化学安全性評価は研究来診時に行われる。ＣＡＲＴ１９細胞注入後の副作用は、高熱を誘発する可能性があり、予想されるべきである。ＣＡＲＴ１９注入後に高熱（≧１０１．５°Ｆ／３８．６℃）が発生した場合、発熱が解決する（１０１．５°Ｆ／３８．６℃未満）までフェリチン、ＬＤＨ及びＣＲＰレベルをＱＤで監視することが推奨される。ＣＲＳが疑われる場合、他の化学パラメータを監視するか又は臨床的に示されるようにすべきである。
細胞減少／リンパ球除去化学療法
ＣＡＲＴ１９細胞注入前に更なる化学療法サイクルが計画されている。化学療法の選択は、患者の根底にある疾患及び以前の治療に応じて、研究者の裁量に委ねられるが、進行中の小児マウスＣＡＲＴ１９研究ＣＨＰ９５９において、養子免疫療法を促進するにおいてこれらの薬剤を使用することに最も多くの経験があるため、フルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２／日×４日間）及びシクロホスファミド（５００ｍｇ／ｍ２／日×２日間）が好ましい薬剤である。
患者のＷＢＣが１，０００／μＬ以下の場合、ＣＡＲＴ１９細胞注入前のリンパ球除去化学療法は必要でない。更に、化学療法とＣＡＲＴ１９注入との間の期間が４週間以上遅れる場合、患者は、ＣＡＲＴ１９注入前にリンパ球除去化学療法で再処置される必要があり得る。
化学療法は、ＡＬＬに対するＣＡＲＴ１９細胞の計画された注入の１～４日前に最後の投与が完了するように計画される。各レジメンは、異なる期間を有するため、化学療法の開始日は、異なる。化学療法の目的は、ＣＡＲＴ１９細胞の生着及び恒常性増殖を促進するためにリンパ球減少症を誘発することである。更に、化学治療は、ＡＬＬを制御することを意図している。化学療法は試験的なものではなく、特定の期間内に患者の地域の腫瘍医によって行われ得る。
ＣＡＲＴ１９（ＣＴＬ０１９）注入
対象の注入は、本明細書中の「細胞減少／リンパ除去化学療法」の節に示されるように化学療法の完了後１～４日で開始されるべきである。
対象は、来診評価スケジュールに従って試験及び手順を受ける。これには、各注入前の差次的なＣＢＣ、並びにリンパ球減少症を誘発するために化学療法が部分的に施されてから１回目の注入前のＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８数の評価が含まれる。ＣＡＲＴ１９細胞は、上記の用量／処置レジメンの節に記載されているように注入される。
腫瘍負荷に基づくＣＲＳ管理
ＣＡＲＴ１９注入直前の時点での腫瘍負荷によって定義される２つの研究コホートが計画される：
ａ）コホートＡ：注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄内に４０％以上の芽球を有する患者は、早期抗サイトカインコホートに登録され、早期ＣＲＳ管理アルゴリズムに従う。
ｂ）コホートＢ：注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄内に４０％未満の芽球を有する患者は、標準的なＣＲＳ管理アルゴリズムに従う。
有効性評価
腫瘍応答評価は、ベースライン時（ＣＡＲＴ１９注入前）、次いでＣＡＲＴ１９細胞注入後２８日目及び３、６、９及び１２ヶ月目に、又は患者がその疾患に対する代替治療を必要とするまで行われる。健康診断、胸部Ｘ線検査（臨床的に適応がある場合）、ＣＳＦ評価、血液学的血液パネル、骨髄生検及び吸引により、臨床的に示されるように評価を行う。
疾患評価収集計画は表２１Ｂに詳述される。
Figure 0007219376000156
身体検査
該当する場合、肝臓、脾臓、リンパ節、皮膚、歯茎の浸潤、精巣の関与、及び他の部位における髄外疾患の証拠を評価するために身体検査が用いられる。髄外の関与はスクリーニング時に評価されるべきであり、臨床的に適切なように経過観察される。
骨髄穿刺／生検及び末梢血
骨髄生検及び吸引物を腫瘍評価及び有効性分析のために測定する。
脳脊髄液（ＣＳＦ）評価
スクリーニング／登録時にＣＮＳ症状がある場合、ＣＮＳ白血病の関与を評価するために腰椎穿刺が行われる。ＣＳＦは、ベースライン（－１日目）及び２８日目に評価される。ＣＳＦは、細胞数及び分化度、細胞診について、及びＣＡＲＴ１９細胞の存在について分析される。更に、ＣＳＦは、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の高さの間に臨床的に示されるように評価され得る。
髄外疾患
処置前に髄外疾患が存在する場合、臨床的に適切なように経過観察される。
微小残存病変（ＭＲＤ）
全ての患者は、骨髄穿刺が行われる各時点でＭＲＤ状態について骨髄穿刺により骨髄穿刺についてマルチパラメータフローサイトメトリーを行う。
定量的ＢＣＲ－ＡＢＬ：Ｐｈ＋ＡＬＬ患者
腫瘍評価の時点で採取した骨髄穿刺試料を、Ｐｈ陽性ＡＬＬ患者のみについて、定量的ＢＣＲ－ＡＢＬレベルについて更に分析する。
ＡＬＬ応答基準
応答基準は、表２１Ｃに従って評価される。定義、は主にＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）ガイドライン（ＮＣＣＮ、２０１３ ｖ．１）で定義される標準化された応答基準に基づいており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＳＨ）のワークショップ報告書及びＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＩＷＧ）の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のためのガイドラインで更にサポートされる。Ｃｈｅｓｏｎ ＩＷＧガイドライン及びＡｐｐｅｌｂａｕｍ ＡＳＨレポートは、ＮＣＣＮガイドラインが利用可能になる前に、ＡＬＬにおける最近の医薬品承認（例えば、Ｍａｒｑｉｂｏ）で使用されていた。ＮＣＣＮガイダンスは、より最近に発行されたＡＬＬのための最新の米国ベースのガイドラインである。
有効性評価は、骨髄及び血液形態学的基準、身体検査所見、並びにＣＳＦの臨床評価及び骨ＭＲＤ評価に基づいて行われる。全体的な疾患応答は、表２１Ｃに記載の基準を用いて所与の評価で決定される。
Figure 0007219376000157
有害事象の記録
有害事象が記録される。
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）のグレード付けシステム
ＣＡＲＴ１９細胞のレシピエントは、ＣＲＳを発症し得る。少数の患者からのデータは、ＩＬ６、ＩＦＮ－ｇにおいて著しい上昇を示し、ＴＮＦにおいてより鈍い上昇を示す。フェリチン及びＣＲＰを含む臨床的に利用可能な炎症マーカーの上昇も臨床ＣＲＳ症候群と相関することが観察されている。
症状は、通常、細胞注入の１～１４日後に発生するが、症候群は、反応のタイミングによって定義されない。研究者がサイトカイン放出に関連したものとして起因性であると考え得る症状を発症している患者は、ＣＲＳを有すると報告されるべきである。症状には、例えば、高熱、悪寒、悪心、嘔吐、食欲不振、疲労、頭痛、筋肉痛／関節痛、低血圧、呼吸困難、頻呼吸、低酸素、精神状態の変化、終末期臓器機能不全、及びフェリチン上昇を含むＭＡＳの徴候が含まれる。
ＣＡＲＴ１９細胞を用いた臨床試験に関する報告及び評価のために、ＣＲＳ毒性について、本発明者らは、以下のグレード付けを使用する。ＣＲＳの開始日は、ＣＲＳと一致し、他の事象（即ち敗血症）によって説明されない持続性発熱及び／又は筋肉痛の発症日の遡及的評価である。ＣＲＳの中止日は、患者が２４時間無熱性であり、２４時間昇圧剤を用いない日として定義される。無熱性は、３８．０℃（１００．４°Ｆ）未満の温度として定義される。
Figure 0007219376000158
Figure 0007219376000159
毒性管理
発熱反応
発熱反応の場合、感染症の評価を開始すべきであり、患者は、処置する医師によって医学的に指示及び決定されるように、抗生物質、輸液及び他の支持療法で適切に管理されるべきである。ＣＡＲ Ｔ細胞注入後に患者が敗血症又は全身性菌血症を発症する事象では、適切な培養及び医学的管理を実施する必要がある。汚染されたＣＡＲＴ１９ Ｔ細胞産物が疑われる場合、ＣＶＰＦに保存された保管試料を使用して産物の無菌性を再試験できる。ＣＲＳ（下記を参照されたい）が考慮されるべきである。
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）／マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）
高腫瘍負荷コホート（早期トシリズマブ）－注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄内に４０％以上の芽球を有する患者：トシリズマブ（８～１２ｍｇ／ｋｇ）による介入は、２４時間以内に３８．５℃を超える２つの温度が少なくとも４時間離間して測定される場合に発生する。患者が臨床的ＣＲＳを経験している場合、標準的なＣＲＳ処置アプローチが使用される。
低腫瘍負荷コホート－注入前（約－５日目～－１日目）に骨髄に４０％未満の芽球を有する患者で、臨床ＣＲＳを伴う患者は、表２１Ｆに概説されているＣＲＳ処置アルゴリズムに従う。
トシリズマブは、血行動態が不安定な場合、体重ベースで８～１２ｍｇ／ｋｇの単回用量として使用されるべきである。この管理アプローチは、生命を脅かす毒性を回避するように設計されているため、トシリズマブのタイミングは、研究チームと密に協議して個別化されるべきである。ステロイドは、この設定で常に有効であるとは限らず、トシリズマブへの急速な応答を考慮すると、必要ではない可能性がある。ステロイドは、ＣＡＲＴ１９の機能及び有効性を妨げるため、使用する場合には速やかに漸減するべきである。
ＣＡＲＴ１９注入後に持続性の高い発熱の前駆症状を発症すると、患者は、その後密に経過観察されるべきである。感染症及び腫瘍溶解症候群の処置は、直ちに行われるべきである。薬局は、トシリズマブの潜在的な必要性を通知されるべきである。集中治療室での患者管理が必要とされる場合があり、そのタイミングは、地域施設の実務に依存する。支持療法に加えて、特に患者が以下のいずれかを示す場合、トシリズマブは、中等度から重度のＣＲＳの場合に投与され得る：
・静脈内抗原輸液及び中等度の安定な昇圧薬支持にもかかわらず、血行動態的不安定、又は
・高流量Ｏ２及び／又は機械的人工換気の必要を含む、肺への浸潤による酸素の必要の増加を含む、呼吸困難の悪化。
・医療管理にもかかわらず、急速な悪化の他の徴候又は症状
ＣＡＲＴ１９に続くグレード４のＣＲＳ反応の全てが直ちにトシリズマブで処置されたわけではなく、決定は、部分的には、症候群の発症の速さ及び根底にある患者予備力に基づいている。
ＣＲＳは、ＭＡＳと一致する生化学的及び生理学的異常と関連している。血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及びフェリチンにおいて、中等度から極度の上昇が見られた。ＣＡＲＴ１９は、ＣＲＳと関連していたが、その規模及び動態は個々の患者によって大きく異なる。ＣＲＳ管理の決定は、これらの検査値自体ではなく、臨床兆候及び症状、並びに介入に対する応答に基づいて行われるべきである。
ＣＲＳのＣＴＣＡＥグレード付けは、急性注入毒性を伴うその発生に関連しているのに対して、ＣＡＲＴ１９治療に関連するＣＲＳは、急性ではなくむしろ遅延型である。
Figure 0007219376000160
Figure 0007219376000161
結論
トシリズマブのより早期の投与は、急性ＣＡＲＴ１９関連ＣＲＳ重症度（グレード、ＣＲＳ期間又は医療介入強度）を低下させることができ、同時に、それは、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞による治療の抗腫瘍効果を損なわないであろう。
均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的態様を参照して開示しているが、本発明の他の態様及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような態様及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。

Claims (37)

  1. ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団との併用で、それを必要とする対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の治療又は予防、において使用するためのルキソリチニブを含む組成物であって、前記ＣＡＲはＣＤ１２３結合ドメインを含む、組成物。
  2. ルキソリチニブとの併用で、それを必要とする対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の治療又は予防、において使用するためのＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団を含む組成物であって、前記ＣＡＲはＣＤ１２３結合ドメインを含む、組成物。
  3. それを必要とする対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の治療又は予防のための医薬の製造における、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団と併用するルキソリチニブの使用であって、前記ＣＡＲはＣＤ１２３結合ドメインを含む、使用。
  4. ＣＤ１２３の発現に関連する疾患を有する対象の治療における、対象における使用のための、
    （ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞集団であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、免疫エフェクター細胞集団、及び
    （ｉｉ）ルキソリチニブ、
    を含む組成物であって、前記ＣＤ１２３の発現に関連する疾患が増殖性疾患である、
    組成物。
  5. ＣＤ１２３の発現に関連する疾患を有する対象を治療するための医薬の製造における、
    （ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞集団であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、免疫エフェクター細胞集団、及び
    （ｉｉ）ルキソリチニブ、
    の使用であって、前記ＣＤ１２３の発現に関連する疾患が増殖性疾患である、
    使用。
  6. 前記増殖性疾患が、癌、悪性腫瘍、又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態から選択される、請求項４に記載の使用のための組成物。
  7. 前記対象は、（ｉ）ＣＲＳを発症するリスクがあるか、ＣＲＳを有するか、若しくはＣＲＳと診断され、（ｉｉ）ＣＲＳのリスクがあると同定されるか若しくは以前に同定されたことがあり、及び／又は（ｉｉｉ）前記免疫エフェクター細胞集団を投与されたことがあるか、投与されているか、若しくは投与されることになる、請求項１、２又は４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  8. 前記対象をルキソリチニブの投与のために選択することを更に含む、
    任意選択により前記対象が、
    （ｉ）前記対象のＣＲＳを発症するリスク、
    （ｉｉ）前記対象のＣＲＳの診断、及び／又は
    （ｉｉｉ）前記対象が、前記免疫エフェクター細胞集団を投与されたことがあるか、投与されているか、若しくは投与されることになるかどうか
    に基づいて選択される、
    請求項１、２、４又は７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  9. （ｉ）前記対象がＣＲＳと診断される場合、前記対象は、ルキソリチニブの投与のために選択される；
    （ｉｉ）前記対象がＣＲＳを発症するリスクがある場合、前記対象は、ルキソリチニブの投与のために選択される；及び／又は
    （ｉｉｉ）前記対象が前記免疫エフェクター細胞集団を投与されたことがあるか、投与されているか、又は投与されることになる場合、前記対象は、ルキソリチニブの投与のために選択される、
    請求項１、２、４、７又は８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  10. （ｉ）前記免疫エフェクター細胞集団とルキソリチニブとは、逐次的に投与される；
    （ｉｉ）ルキソリチニブは、前記免疫エフェクター細胞集団の前に投与される；
    （ｉｉｉ）ルキソリチニブと前記免疫エフェクター細胞集団とは、同時に又は並行して投与される；又は
    （ｉｖ）前記免疫エフェクター細胞集団とルキソリチニブとは、治療インターバルにわたって投与され、前記治療インターバルは、単回用量の前記免疫エフェクター細胞集団及び複数回用量のルキソリチニブの投与を含む、
    請求項１、２、４、又は７－９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  11. （ｉ）前記免疫エフェクター細胞集団の用量は、ルキソリチニブの第１の用量の投与後に投与される；
    （ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞集団の用量は、ルキソリチニブの前記第１の用量の投与と並行して投与される；
    （ｉｉｉ）１用量以上の後続用量のルキソリチニブは、ルキソリチニブの第２の用量後に投与され、
    任意選択により、ルキソリチニブの前記用量は、１日２回（ＢＩＤ）投与される；
    （ｉｖ）前記治療インターバルは、少なくとも７日、８日、９日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、又はそれを超える継続期間を含む；
    （ｖ）前記治療インターバルは繰り返される；
    及び／又は、
    （ｖｉ）前記治療インターバルは第１の用量及び第２の用量、及び任意選択で後続用量のルキソリチニブの投与を含む、
    請求項１０に記載の使用のための組成物。
  12. （ｉ）前記免疫エフェクター細胞集団の前記用量は、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又はそれを超えて、
    ルキソリチニブの前記第１の用量の投与後であるが、ルキソリチニブの前記第２の用量の投与前、に投与される；
    （ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞集団の前記用量は、ルキソリチニブの前記第１の用量の投与と並行して投与され、ルキソリチニブの投与の２日、１日、２４時間、１２時間、６時間、４時間、２時間以内、又はそれ未満での投与を含む；又は
    （ｉｉｉ）繰り返し治療インターバルは１回以上、１、２、３、４、又は５回以上を含み、又は前記治療インターバルの後に１回以上、１、２、３、４、又は５回の後続の治療インターバルが続く、
    請求項１１に記載の使用のための組成物。
  13. （ａ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに挙げられる任意のＣＤ１２３重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ ＣＤＲ２）、及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ ＣＤＲ３）と、
    （ｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに挙げられる任意のＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ ＣＤＲ２）、及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ ＣＤＲ３）とを含む；
    （ｂ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、表５Ａ、７Ａ、１Ａ、又は３ＡのＨＣ ＣＤＲアミノ酸配列に係るＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、及びＨＣ ＣＤＲ３と、表６Ａ、８Ａ、２Ａ、又は４ＡのＬＣ ＣＤＲアミノ酸配列に係るＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３とを含む；
    （ｃ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）表１２Ｂ又は１１Ａに挙げられるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）表１２Ｂ又は１１Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）表１２Ｂ又は１１Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む；
    （ｄ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖に対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の重鎖に対するアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む；
    （ｅ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む；
    （ｆ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖に対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）表１２Ｂ、表１１Ａ、又は表１２Ａに提供されるＣＤ１２３結合ドメインの任意の軽鎖に対するアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む；
    （ｇ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、表１２Ｂ又は１１Ａに挙げられる任意の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び表１２Ｂ又は１１Ａに挙げられる任意の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む；及び／又は
    （ｈ）前記ＣＤ１２３結合ドメインは、
    （ｉ）配列番号４８０、４８３、４８５、４７８、１５８、１５９、１６０、１５７、２１７、２１８、２１９、２１６、２７６、２７７、２７８、又は２７５からなる群から選択されるアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号４８０、４８３、４８５、４７８、１５８、１５９、１６０、１５７、２１７、２１８、２１９、２１６、２７６、２７７、２７８、又は２７５のいずれかに対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）配列番号４８０、４８３、４８５、４７８、１５８、１５９、１６０、１５７、２１７、２１８、２１９、２１６、２７６、２７７、２７８、又は２７５のいずれかと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む、
    請求項１、２、４、又は７－１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  14. 前記ＣＡＲは膜貫通ドメインを含み、
    （ａ）前記膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質からの膜貫通ドメインを含む；及び／又は
    （ｂ）前記膜貫通ドメインは、
    （ｉ）配列番号６のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を含むアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列
    を含む、
    請求項１、２、４、又は７－１３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  15. 前記ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒンジ領域によって前記膜貫通ドメインに結合される、任意選択により前記ヒンジ領域は、配列番号２又はそれと少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、請求項１４に記載の使用のための組成物。
  16. 前記ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン及び共刺激ドメインを含み、
    （ａ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質から得られる機能性シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含む；
    （ｂ）前記共刺激ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの改変であるが、２０、１０若しくは５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、又は配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；
    （ｃ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの機能性シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ζの機能性シグナル伝達ドメインを含む；
    （ｄ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列、或いは配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、２０、１０、又は５つ以下の改変を有するアミノ酸配列、或いは配列番号７のアミノ酸配列及び／又は配列番号９若しくは配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；
    （ｅ）前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び配列番号９又は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインを含むアミノ酸配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される；及び／又は
    （ｆ）前記ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列を更に含む；
    請求項１、２、４、又は７－１５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  17. 前記ＣＡＲは、
    （ｉ）配列番号９９、１００、１０１、又は９８のいずれかのアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号９９、１００、１０１、又は９８のいずれかに対して少なくとも１つ、２つ、又は３つの改変であるが、３０、２０、又は１０以下の改変を有するアミノ酸配列、又は
    （ｉｉｉ）配列番号９９、１００、１０１、又は９８のいずれかと少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
    を含む、請求項１、２、４、又は７－１６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  18. ＣＡＲを含む前記免疫エフェクター細胞集団は、前記ＣＡＲをコードする核酸を含む、任意選択により
    （ａ）前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルスベクターである；
    （ｂ）前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、レンチウイルス形質導入によって前記細胞に導入される；
    （ｃ）前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡである；及び／又は
    （ｄ）前記ＣＡＲをコードする前記核酸は、電気穿孔によって前記細胞に導入される、
    請求項１、２、４、又は７－１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  19. 前記免疫エフェクター細胞集団は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞の集団である、任意選択により前記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞である、請求項１、２、４、又は７－１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  20. 前記ＣＲＳは、重症ＣＲＳ、グレード４又は５ ＣＲＳである、又は前記ＣＲＳは、重症未満のＣＲＳ、グレード１、２、又は３ ＣＲＳである、請求項１－３又は７－９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  21. 前記対象は、哺乳類である、任意選択により前記対象は、ＣＤ１２３の発現に関連する疾患を有するか又はそれと診断される、請求項１、２、４、又は７－２０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  22. 前記ＣＤ１２３の発現に関連する疾患が、血液癌、例えばリンパ腫又は白血病、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）から選択される、請求項２１に記載の使用のための組成物。
  23. （ａ）前記免疫エフェクター細胞集団は、少なくとも１×１０５、５×１０６、１×１０７、１．５×１０７、２×１０７、２．５×１０７、３×１０７、３．５×１０７、４×１０７、５×１０７、１×１０８、１．５×１０８、２×１０８、２．５×１０８、３×１０８、３．５×１０８、４×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、又は５×１０９個の細胞を含む；及び／又は
    （ｂ）ルキソリチニブの各使用は、独立して、２．５ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、２．５～５ｍｇ、５～１０ｍｇ、１０～１５ｍｇ、１５～２０ｍｇ、２０～２５ｍｇ、２５～３０ｍｇ、３０～３５ｍｇ、３５～４０ｍｇ、４０～４５ｍｇ、又は４５～５０ｍｇ）のルキソリチニブを含む、請求項１、２、４、又は７－２２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  24. ＩＬ－６阻害薬を前記対象に投与することを更に含む、任意選択により前記ＩＬ－６阻害薬は、前記免疫エフェクター細胞集団の用量、の前に、それと並行して、又はその後に投与される、請求項１、２、４、又は７－２３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  25. 前記ＩＬ－６阻害薬が、抗ＩＬ－６受容体阻害薬またはトシリズマブを含む、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記ＩＬ－６阻害薬は、前記対象におけるＣＲＳの症状の最初の徴候の前に又はそれから２週間、１．５週間、１週、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日、１日、２４時間、２０時間、１５時間、１０時間、５時間、２時間、１時間又はそれ未満、以内に投与される、任意選択により前記ＩＬ－６阻害薬は、前記免疫エフェクター細胞集団の用量の投与後に投与される、任意選択により前記ＩＬ－６阻害薬は、前記免疫エフェクター細胞集団の前記用量の投与後１時間～１０日で投与される、請求項２４または２５に記載の使用のための組成物。
  27. （ｉ）前記ＣＲＳ症状の最初の徴候が、２４時間で2回の連続計測について、少なくとも３８℃の発熱または温度を含む、任意選択で前記計測は４、５、６、７、８時間、又はそれを超えて離れている；又は
    （ｉｉ）前記ＩＬ－６阻害薬が、前記免疫エフェクター細胞集団の前記用量の投与後１～２４時間、１～２時間、２～４時間、４～８時間、８～１２時間、１２～２４時間、１～２日、２～３日、３～４日、４～５日、５～７日、又は７～１０日で投与される、
    請求項２６に記載の組成物。
  28. ５～１５ｍｇ／ｋｇ、８～１２ｍｇ／ｋｇ、又は８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、又は１２ｍｇ／ｋｇの用量のトシリズマブを投与することを含む、請求項２６又は２７に記載の使用のための組成物。
  29. 前記対象が、前記免疫エフェクター細胞集団による治療前に高腫瘍負荷と診断されるか又はそれを有すると同定される、請求項２６－２８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  30. 前記高腫瘍負荷が、前記免疫エフェクター細胞集団の投与前、任意選択で前記免疫エフェクター細胞集団の投与の１～５日前に、少なくとも４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超える、前記対象の骨髄における芽球によって特徴付けられる、請求項２９に記載の使用のための組成物
  31. 前記免疫エフェクター細胞集団が、１ｋｇ当たり１．５×１０７～５×１０９細胞の総用量で投与される、請求項１、２、４、又は７－３０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
  32. （ｉ）前記総用量が１ｋｇ当たり０．３×１０６～１×１０８細胞である；
    （ｉｉ）前記総用量が複数回用量で投与される；
    （ｉｉｉ）前記総用量が、前記総用量の１０％を含む第１の用量、及び前記総用量の３０％を含む第２の用量として投与される、
    請求項３１に記載の使用のための組成物。
  33. （ｉ）前記第１の用量が１×１０７細胞／ｋｇである；
    （ｉｉ）前記第２の用量が３×１０７細胞／ｋｇである；又は
    （ｉｉｉ）前記第１の用量が初日に投与され、かつ前記第２の用量が前記第１の用量の１、２、３、４、５、６、又は７日後に投与される、
    請求項３２に記載の使用のための組成物。
  34. 前記ＩＬ－６阻害薬（例えば、トシリズマブ）は、５～１５ｍｇ／ｋｇ、８～１２ｍｇ／ｋｇ、又は８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、又は１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２４－２７のいずれか一項に記載の使用のための組成物
  35. 癌の治療における使用のための又はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の予防における使用のための（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫エフェクター細胞集団であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、免疫エフェクター細胞集団、及び（ｉｉ）ルキソリチニブを含む医薬組成物であって；任意選択によりＩＬ－６阻害薬を更に含む、医薬組成物。
  36. 癌の治療における使用のための又はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の予防における使用のための、（ｉ）ＣＤ１２３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法（例えば、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ１２３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含む、免疫エフェクター細胞集団）、及び（ｉｉ）ルキソリチニブを含む医薬組成物であって、任意選択によりＩＬ－６阻害薬を更に含む、医薬組成物。
  37. 前記ＩＬ－６阻害薬が抗ＩＬ－６受容体阻害薬またはトシリズマブである、請求項３５または３６に記載の医薬組成物。
JP2019522625A 2016-07-15 2017-07-14 キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防 Active JP7219376B2 (ja)

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