JP2011504740A - ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列、並びにこれを含むポリペプチド - Google Patents

ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列、並びにこれを含むポリペプチド Download PDF

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Abstract

本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に（本明細書で規定されるように）指向性を有するアミノ酸配列、並びに１つ又は複数のこのようなアミノ酸配列を含むか、又は本質的にこれから成る化合物又は構築物、特にタンパク質及びポリペプチド（本明細書中でそれぞれ「本発明のアミノ酸配列」、「本発明の化合物」、及び「本発明のポリペプチド」とも称される）に関する。本発明は、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドをコードする核酸（本明細書中で「本発明の核酸」又は「本発明のヌクレオチド配列」とも称される）、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドを調製する方法、このようなアミノ酸配列又はポリペプチドを発現するか、又は発現することが可能な宿主細胞、このようなアミノ酸配列、ポリペプチド、核酸及び／又は宿主細胞を含む組成物、特に薬学的組成物、並びに特に本明細書で言及する予防目的、治療目的又は診断目的のような予防目的、治療目的又は診断目的のためのこのようなアミノ酸配列又はポリペプチド、核酸、宿主細胞及び／又は組成物の使用にも関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、（本明細書で規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列、並びに１つ又は複数のこのようなアミノ酸配列を含むか、又は本質的にこれらから成る化合物又は構築物、特にタンパク質及びポリペプチドに関する（それぞれ本明細書中で、「本発明のアミノ酸配列」、「本発明の化合物」、及び「本発明のポリペプチド」とも称される）。
本発明は、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドをコードする核酸（本明細書中で「本発明の核酸」又は「本発明のヌクレオチド配列」とも称される）、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドを調製する方法、このようなアミノ酸配列又はポリペプチドを発現するか、又は発現することが可能な宿主細胞、このようなアミノ酸配列、ポリペプチド、核酸及び／又は宿主細胞を含む組成物、特に薬学的組成物、並びに特に本発明で言及する予防目的、治療目的又は診断目的のような予防目的、治療目的又は診断目的のためのこのようなアミノ酸配列若しくはポリペプチド、核酸、宿主細胞及び／又は組成物の使用にも関する。
本発明の他の態様、実施の形態、利点及び用途は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
ヘテロ二量体サイトカイン、これらの受容体、並びにヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体が関与する経路、シグナル伝達、生物学的機構及び生理効果は、従来技術より既知である。
最もよく知られているヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体の幾つかの例は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−２７、並びにこれらのそれぞれの受容体ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−２３Ｒ、及びＩＬ−２７Ｒである。これらのサイトカインは、その名称が示すように、２つの異なるサブユニット、即ちＩＬ−１２の場合はＩＬ１２ｐ４０及びＩＬ１２ｐ３５、ＩＬ−２３の場合はＩＬ１２ｐ４０及びＩＬ２３ｐ１９（ＩＬ−３０Ｂとも呼ばれる）、並びにＩＬ−２７の場合はＥＢＩ３及びＩＬ２７ｐ２８から成るヘテロ二量体である。また、これらのヘテロ二量体サイトカインの受容体は、複数のサブユニット、即ちＩＬ−１２Ｒの場合はＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ１２Ｒβ２、ＩＬ−２３Ｒの場合はＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ２３Ｒ、並びにＩＬ−２７Ｒの場合はＷＳＸ１及びｇｐ１３０から成る。
依然としてＩＬ１２が原型的なヘテロ二量体サイトカイン（ＩＬ１２ｐ４０及びＩＬ１２ｐ３５から構成される）であり、比較的最近まで他の関連ヘテロ二量体は見つかっていなかった。
２０００年には、ＩＬ−６ファミリーの成員に対する相同性検索に基づき、ＩＬ−２３及びそのサブユニットｐ１９（ＩＬ２３ｐ１９）が同定された。この研究により、ｐ１９がＩＬ１２ｐ４０と二量体化すること、及びＩＬ２３として知られるこのサイトカインが、その高親和性受容体の構成要素としてＩＬ１２Ｒβ２ではなく、ＩＬ１２Ｒβ１を用いることが明らかとなった。機能的クローニングにより、ＩＬ２３の受容体の他のサブユニット、即ちＩＬ２３Ｒとして知られるサブユニットが同定された（出展：非特許文献１）。ＩＬ−２３がＴｈ１７細胞の増殖において重要な役割を果たすことも見出されている。
ＩＬ２７は、ＥＢＩ３及びＩＬ２７ｐ２８から構成される、ＩＬ１２に関連する別のヘテロ二量体サイトカインである。エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）誘導分子３（ＥＢＩ３）がＩＬ−１２ｐ４０ホモログとして同定された。２００２年には、ＩＬ−２７のｐ２８サブユニット（ＩＬ−２７ｐ２８）が、ＩＬ−１２ｐ３５及びＩＬ−６との相同性を有するタンパク質として発見された。
近年、ＩＬ−３５と呼ばれる、ＩＬ−１２ファミリーに属するさらなるヘテロ二量体サイトカインの存在が記載されている（非特許文献２）。このヘテロ二量体サイトカインは、制御性Ｔ細胞の機能に寄与すると記載されており、ＩＬ１２ｐ３５サブユニット及びＥＢＩ−３サブユニットから構成される。
３４種の既知のＩ型サイトカイン受容体が記載されており、そのリガンドを同定するのはより困難であるが、少なくとも２７種は５つの異なるファミリーに分けることができる（非特許文献３を参照されたい）。これらの集団の１つは、ｇｐ１３０（糖タンパク質１３０）、又は幾つかのｇｐ１３０関連タンパク質の１つを使用する一連のサイトカイン受容体のリガンドから構成される。この受容体にはＩＬ６の受容体、並びにヘテロ二量体サイトカインＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−２７の受容体が含まれる（非特許文献１、上記）。
ＩＬ１２受容体は、ＩＬ１２Ｒβ１とＩＬ１２Ｒβ２とのヘテロ二量体である。
ＩＬ２３受容体は、ＩＬ１２Ｒβ１とＩＬ２３Ｒとのヘテロ二量体である。ＩＬ１２Ｒβ１は、シグナル伝達に関してＩＬ１２及びＩＬ−２３の両方で使用される。この受容体の標的化により、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３の両方のシグナル伝達が遮断される。
ＩＬ２７受容体は、ＷＳＸ１（ｇｐ１３０様タンパク質に対する相同性検索に基づき同定される）、及びｇｐ１３０から構成されるヘテロ二量体であり、ｇｐ１３０はＩＬ−６の受容体（ＩＬ−６Ｒα及びｇｐ１３０を含む）とＩＬ２７の受容体（ＷＳＸ１及びｇｐ１３０を含む）との共通要素であるが、これはこれらのサイトカインの近縁関係と一致する。
ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体、並びにこれらが関与する経路、シグナル伝達、生物学的機構、及び生物学的効果、並びに同様にこれらが関連する疾患についてのさらなる情報に関しては、以下の従来技術：非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３、非特許文献１４、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７及び特許文献１８、並びにこれらの参照文献及び本明細書中に引用されるさらなる従来技術を参照されたい。上記参照文献の一部はまた、ヘテロ二量体サイトカインのアンタゴニスト（従来のモノクローナル抗体等）を記載しており、このようなアンタゴニストを用いて予防及び／又は治療することができる疾患及び障害について言及している。
ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体の様々なサブユニットの配列に関しては、これらが関与する経路、シグナル伝達、生物学的機構及び生物学的効果、並びに同様にこれらが関連する疾患についての（on as）さらなる情報に関して言及するものでもある以下のＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号を参照されたい：
ｐ１９：ＮＭ＿０１６５８４
ｐ４０：ＮＭ＿００２１８７
ＩＬ１２Ｒβ１：ＮＭ＿００５５３５
ＩＬ２３Ｒ：ＮＭ＿１４４７０１
ＩＬ１２Ｒβ２：ＮＭ＿００１５５９
ＷＳＸ１：ＩＬ２７ＲＡ：ＮＭ＿００４８４３
Ｇｐ１３０：ＮＭ＿００２１８４及びＮＭ＿１７５７６７
ｐ３５（ＩＬ１２Ａ）：ＮＭ＿０００８８２
ｐ２８：ＮＭ＿１４５６５９
ＥＢＩ３：ＮＭ＿００５７５５
上記より、上述のヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体が、幾つかのサブユニットを共通して有する（例えばＩＬ１２ｐ４０がＩＬ−１２及びＩＬ−２３の両方に存在し、また例えばＩＬ−１２Ｒβ１がＩＬ−１２の（同族）受容体及びＩＬ−２３の（同族）受容体の両方に存在する）ことも明らかである。また、ヘテロ二量体サイトカイン又は受容体中に存在する他のサブユニットの一部は同一ではないが、構造的及び／又は機能的に類似しており、その類似性に基づき以下のように分類することができる：
ｐ１９サブユニット、ｐ３５サブユニット及びｐ２８サブユニット（及びこれらの現在及び将来のホモログ）（これらは本明細書中で集合的に「ｐ１９様サブユニット」とも称され、ＩＬ−１２のｐ１９様サブユニットがｐ３５であり、ＩＬ−２３のｐ１９様サブユニットがｐ１９であり、ＩＬ−２７のｐ１９様サブユニットがｐ２８であり、ＩＬ−３５のｐ１９様サブユニットがｐ３５であることが理解される。ｐ１９様サブユニット（ｐ３５等）はまた、ＩＬ６及びオンコスタチンＭ等のＩ型サイトカインと相同であり、例えばＩ型サイトカインと共通の「４ヘリックスバンドル」を有する）；
ｐ４０サブユニット及びＥＢＩ３サブユニット（及びこれらの現在及び将来のホモログ）（これらは本明細書中で集合的に「ｐ４０様サブユニット」とも称され、ＩＬ−１２のｐ４０様サブユニットがｐ４０であり、ＩＬ−２３のｐ４０様サブユニットがｐ４０であり、ＩＬ−２７のｐ４０様サブユニットがＥＢＩ３であり、ＩＬ−３５のｐ４０様サブユニットがＥＢＩ３であることが理解される。ｐ４０様サブユニット（ＩＬ１２ｐ４０等）は、可溶性ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒα）と構造的に関連する）；
ｇｐ１３０サブユニット及びＩＬ−１２β−１サブユニット（及びこれらの現在及び将来のホモログ）（これらは本明細書中で集合的に「ｇｐ１３０様サブユニット」とも称され、ＩＬ−１２受容体のｇｐ１３０様サブユニットがＩＬ−１２Ｒβ−１であり、ＩＬ−２３受容体のｇｐ１３０様サブユニットがＩＬ−１２Ｒβ−１であり、ＩＬ−２７受容体のｇｐ１３０様サブユニットがｇｐ１３０であることが理解される）；
ＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニット、ＩＬ−２３Ｒサブユニット及びＷＳＸ−１サブユニット（及びこれらの現在及び将来のホモログ）（これらは本明細書中で集合的に「ＩＬ−２３様サブユニット」とも称され、ＩＬ−１２受容体のＩＬ−２３様サブユニットがＩＬ−１２Ｒβ−２であり、ＩＬ−２３受容体のＩＬ−２３様サブユニットがＩＬ−２３Ｒであり、ＩＬ−２７受容体のＩＬ−２３様サブユニットがＷＳＸ−１であることが理解される）。
サイトカイン及びこれらの受容体が、全ての側面の免疫応答の制御（経路）において重要な役割を果たすことが一般に知られている。このことは、インターロイキン−１２（ＩＬ１２）関連ファミリーに属するヘテロ二量体サイトカイン、及びこれらの受容体にも当てはまる。例えば、ＩＬ−１２ファミリーの原型的なヘテロ二量体成員であるＩＬ１２は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、及びマクロファージによるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）産生を誘導する。ＩＬ−１２はまた、ＩＦＮ−γを産生するＴヘルパー１（ＴＨ１）細胞へのナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を促進し、細胞性免疫を助ける。したがって、ＴＨ１細胞の発生（細胞性免疫応答）におけるＩＬ１２の中心的役割は長年評価されてきた。例えば、マウスモデルにより、ＩＬ１２が細胞内病原体に対する先天性及び適応的な防御免疫応答の進行に必要とされることが立証された。
ＩＬ−１２ファミリーの他のヘテロ二量体サイトカインのうちの２つであるＩＬ２３及びＩＬ２７も、機能は異なるがＴＨ１細胞応答を制御する。ＩＬ−２３のＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激してＩＬ−１７を産生させる能力は、自己免疫性炎症の発症及び維持において主要な役割を有する。一方、ＩＬ−２７のｉｎ ｖｉｖｏでの主要機能は、先天性及び適応的な免疫応答の強さ及び持続時間を制限することである。
また、ＩＬ１２ｐ４０は、アンタゴニスト活性を有する単量体又はホモ二量体として見ることができる。
近年、ＩＬ２３が炎症性腸疾患において認められる慢性炎症に関与することが示されている。このことは、ＩＬ２３Ｒ遺伝子が炎症性腸疾患に関与するものとして同定されるという事実から確認された。ｐ１９ノックアウトマウスはコラーゲン誘導関節炎及び大腸炎に対して耐性であることも見出されているが、一方で比較用ｐ３５ノックアウトマウスはコラーゲン誘導関節炎に対してより感受性が高いことが認められている。また、ｐ１９ノックアウトマウスをＩＬ−１０ノックアウトマウスと交雑させた場合、得られた子孫は大腸炎に対して耐性であったが、一方でｐ１９ノックアウトマウスとＩＬ−１０ノックアウトマウスとの同様の交雑により大腸炎に対して感受性が高い子孫が生じた。ｐ１９に対するモノクローナル抗体は、多発性硬化症に対する前臨床動物モデルであるＥＡＥの発症を阻害し、ＩＬ−１７の血清濃度（ＩＬ−１２によって制御されない）を低減することがさらに見出されている。また、ＩＬ−１２よりもＩＬ−２３がＣＮＳ自己免疫性炎症において重要なサイトカインであると考えられる。この全ての結果により、（ｐ４０に指向性を有する化合物はＩＬ−１２及びＩＬ−２３の両方を調節する可能性があるため）ＩＬ−１２／ｐ３５又はｐ４０よりもＩＬ−２３／ｐ１９が大腸炎、クローン病、ＩＢＤ、多発性硬化症、関節リウマチ、及び本明細書で言及する他の疾患及び障害の一部の治療にとって魅力的な標的であり得ることが示唆される。現在臨床開発中であるモノクローナル抗体ＣＮＴＯ １２７５及びＡＢＴ−８７４（下記を参照されたい）は共にｐ４０に指向性を有することにも留意されたい。
欧州特許第４３３８２７号明細書 欧州特許第１２１０４３４号明細書 欧州特許第７９０３０８号明細書 欧州特許第７９０３０９号明細書 欧州特許第１１７５４４６号明細書 欧州特許第０９６９８６７号明細書 欧州特許第１３０９６９２号明細書 欧州特許第１００２０８４号明細書 欧州特許第１５８７１７８号明細書 欧州特許第１５８９９９８号明細書 国際公開第０４／０７１５１７号パンフレット 欧州特許第１６０１６９５号明細書 国際公開第０５／０７９８３７号パンフレット 国際公開第０６／０６８９８７号パンフレット 国際公開第０７／０２７７６１号パンフレット 国際公開第２００７／０２４８４６号パンフレット 国際公開第０２／０９７４８号パンフレット 国際公開第０６／０６９０３６号パンフレット
CA Hunter 2003 Collison et al., Nature, 22 November 2007, 566 Boulay et al 2003 Oppmann, 2000, Immunity, 13: 751-725 Gubler et al., 1991, PNAS, 88: 4143-4147 Hunter, Nature Rev., Vol.5, July2003, 521 Watford et al., Cytokine andGrowth Factor Reviews 14 (2003), 361-368 Boulay, Immunity, Vol.19, 159-163 (2003) Goriely and Goldmann, American Journal of Transplantation2007; 7: 208-284 Langrish et al., Immunological Reviews 2004, 202, 96-105 Kaufmann et al., J. Invest. Dermatol., 123: 1037-1044, 2004 Neurath, Nature Medecine, Vol.13, January 2007,26 Collison et al., Nature, 22 November 2007, 566 Parham et al., The Journal ofImmunology, 2002, 5699
したがって、本発明の具体的な一目的は、ｐ１９に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチド、特にｐ３５及びｐ４０の両方と比較してｐ１９に対して（本明細書で規定されるように）特異的な、及び／又はＩＬ−１２と比較してＩＬ−２３に対して（本明細書で規定されるように）特異的なアミノ酸配列及びポリペプチドを提供することである。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドの例は、本明細書中の記載から明らかとなる。
本明細書でさらに記載されるように、本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物は一般に、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体によって媒介されるシグナル伝達を（本明細書で規定されるように）調節するため、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体が関与する生物学的経路を（本明細書で規定されるように）調節するため、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン、これらの受容体、このようなシグナル伝達及び／又はこれらの経路に関連する生物学的機構、応答及び効果を（本明細書で規定されるように）調節するために使用することができる（上記は全て、本明細書中で集合的に「ヘテロ二量体サイトカイン媒介性シグナル伝達」とも称される）。
このように、本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物は一般に、本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物の１つ又は複数が（即ち治療に適した量で）投与される被験体において、免疫系及び／又は１つ又は複数の具体的な免疫応答を調節するために使用することができる。
本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体サイトカイン」は、その最も広い意味で、一般に任意のヘテロ二量体サイトカイン、即ち少なくとも２つ、より好ましくは２つのみのサブユニットを含むサイトカインを含む。
特に、本明細書で使用される用語「ヘテロ二量体サイトカイン」は、細胞性（ＴＨ１）免疫と関連するヘテロ二量体サイトカインを包含するが、本発明はその最も広い意味でこれに限定されず、体液性（ＴＨ２）免疫に関連するヘテロ二量体サイトカインも包含する。
具体的であるが、非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３に存在する）ｐ４０サブユニット、又はエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）誘導分子３（ＥＢＩ３、例えばＩＬ−２７及びＩＬ−３５に存在する）のようなｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインから選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
別の具体的であるが、非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ１９サブユニット（例えばＩＬ−２３に存在する）、ｐ３５サブユニット（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−３５に存在する）、又はｐ２８サブユニット（例えばＩＬ−２７に存在する）又はこれらのホモログのようなｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインから選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
例えば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、少なくとも１つのｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニット、及び少なくとも１つのｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し得る。
さらにより具体的であるが、非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５から選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
具体的な態様ではあるが、非限定的な一態様において、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２３（即ちｐ４０、ｐ１９又はその両方）に指向性を有する。このような本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド（並びにこれを含む組成物）は、ＩＬ−２３に関連する障害を予防及び治療するために使用することができる。
別の具体的な態様ではあるが、非限定的な態様において、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２（即ちｐ４０、ｐ３５又はその両方）に指向性を有する。このような本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド（並びにこれを含む組成物）は、本明細書中にさらに記載されるようなものであってもよく、ＩＬ−１２に関連する障害を予防及び治療するために使用することができる。
アミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物は、ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体、及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果を（本明細書で規定されるように、例えばアゴニスト又はアンタゴニストとして）調節するために使用することができる。
ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体（及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果）のアンタゴニストであるアミノ酸配列及びポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカインのアゴニスト効果を低減又は阻害するためにも使用することができる。
より一般的には、本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書中に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）、ポリペプチド（例えば本明細書中に記載される、少なくとも１つのｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及び／又はＩＬ−２３配列を含む、例えば多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック（biparatopic）の構築物）及び組成物は、ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体（及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果）に関連する疾患及び障害の予防及び治療（本明細書で規定される）に使用することができる。一般に、「ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患及び障害」とは、本発明のポリペプチド又は組成物のいずれか（特にこれらの薬学的に活性のある量）、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体、又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体が関与する生物学的経路若しくは機構に対して活性のある既知の活性成分（特にこれらの薬学的に活性のある量）を、これを必要とする（即ち疾患若しくは障害、又はこれらの少なくとも１つの症状を有するか、及び／又は疾患若しくは障害を誘発又は発症する危険性がある）被験体に好適に投与することによって、それぞれ予防及び／又は治療することができる疾患及び障害として定義することができる。ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連するこのような疾患及び障害の例は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかであり、例えば以下の疾患及び障害が挙げられる：腸疾患（大腸炎、クローン病、ＩＢＤ）等の炎症及び炎症性障害、感染症、乾癬、癌、自己免疫性疾患（ＭＳ等）、サルコイドーシス、移植拒絶反応、嚢胞性線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、関節リウマチ、ウイルス感染、分類不能型免疫不全症、並びに本明細書中で引用される従来技術において言及される様々な疾患及び障害。これに基づき、特定の疾患及び障害が関与するヘテロ二量体サイトカイン（及び／又はこれらの受容体）も当業者に明らかである。
特に、本発明のポリペプチド及び組成物は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体、又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体が関与する経路（複数可）によって媒介される過剰及び／又は不要のシグナル伝達を特徴とする、ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患及び障害の予防及び治療に使用することができる。ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連するこのような疾患及び障害の例は、同様に本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかである。この目的のために、通常はヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体（及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果）のアンタゴニストが使用される。
ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体（及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果）のアゴニストは、ヒト又は動物において１つ又は複数の免疫応答を刺激又は増強するため、例えば弱まった免疫系を特徴とするか、又は弱まった免疫系を有することの結果として起こり得る疾患の予防及び／又は治療に使用することができる。例えば、Hunter（上記）、様々なヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体（特にこれらのサブユニット）がノックアウトされた幾つかのノックアウトマウス、及びこれに関連する炎症性表現型を挙げた表１を参照されたい。
ＩＬ１２ｐ４０は、ＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）又はＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）のような疾患モデル系において示されるように、自己免疫性炎症において重要な役割を有することも示されている。
したがって、これに限定するものではないが、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは例えば、上記で引用される従来技術において言及されるような、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体により媒介されるシグナル伝達を調節することができる活性成分（例えば、特許文献１７及び特許文献１８に記載されているモノクローナル抗体ＣＮＴＯ １２７５、Abbottによって開発されているｐ４０に対するモノクローナル抗体であるＡＢＴ−８７４、並びにSyntha Pharmaceuticalsの小分子Ａｐｉｌｉｍｏｄ（登録商標））を用いて、現在予防又は治療されている全ての疾患及び障害を予防及び／又は治療するために使用することができる。本発明のポリペプチドを、このような活性成分による治療が現在開発中であるか、提案されているか、又は将来提案若しくは開発され得る全ての疾患及び障害を予防及び／又は治療するために使用することができることも想定される。また、本発明のポリペプチドが、本明細書中にさらに記載されるようなこれらの有利な特性から、これらの既知の活性成分が使用されているか、又は提案若しくは開発され得るもの以外の疾患及び障害の予防及び治療に使用され得ること、及び／又は本発明のポリペプチドが本明細書中に記載される疾患及び障害を治療する新たな方法及びレジメンをもたらし得ることが想定される。
本明細書中のさらなる記載から明らかであるように、本発明のアミノ酸配列は、いわゆる「一価の」フォーマット（即ち単一の抗原結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る）、又は「多価の」フォーマット（即ち任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して互いに連結した、２つ以上の結合ドメイン又は結合単位（同じであり得る又は異なり得る）を含むか、又は本質的にこれから成る）であってもよい。また、さらに本明細書中に記載されるように、本発明のこのような多価のアミノ酸配列及びポリペプチドは例えば、限定するものではないが、多重特異性（例えば二重特異性又は三重特異性）又は多重パラトピック（例えば二重パラトピック）の構築物（又は多重パラトピック及び多重特異性の両方、例えば本明細書中で例示されるような、血清タンパク質と結合するさらなる結合ドメインを含有する、ｐ１９サブユニットに対する二重パラトピック構築物）であってもよく、例えば各々がヘテロ二量体サイトカインの同じサブユニット上の異なるエピトープに指向性を有する、少なくとも２つの結合ドメイン又は結合単位を含む構築物、各々が異なる生物学的機能を有する、少なくとも２つの結合ドメイン又は結合単位（例えば、受容体−リガンド相互作用を遮断又は阻害することができる１つの結合ドメイン、及び受容体−リガンド相互作用を遮断又は阻害しない１つの結合ドメイン）を含む構築物、又は少なくとも２つの結合ドメイン又は結合単位（各々がヘテロ二量体サイトカインの異なるサブユニットに指向性を有する）を含む構築物であり得る。
このような構築物の例は、本明細書中のさらなる開示から明らかとなる。
またこのような構築物は一般に、２つ以上の本発明の「一価の」アミノ酸配列を（任意で好適なリンカーを介して）好適に連結するか、又は結合させる（又はこのような一価のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を好適に連結するか、若しくは結合させて、所望の多価の構築物をコードする核酸を提供した後、上記多価の構築物を好適に発現させる）ことにより提供され得る（特に特定の生物学的作用のために意図的に設計され得る）ことが本明細書中のさらなる記載から明らかとなる。したがって、本発明は本明細書中に記載される一価及び多価のアミノ酸配列及びポリペプチドを利用可能にするだけでなく、本明細書中に記載される一価のアミノ酸配列及びポリペプチドを利用可能にすることにより、当業者に「構成単位」として使用することができる種々の結合ドメイン及び結合単位を提供し、本明細書中に記載されるような好適な「構成単位」の使用により、（本明細書中にさらに記載されるような）本発明の異なる態様における使用のために意図的に設計することができる種々の多価、多重特異性及び／又は多重パラトピック（特に二重パラトピック）の構築物（異なる結合親和性、結合活性（avidities：親和力）、特異性、効力及び／又は有効性を有し得る）を提供することが明らかであり得る。
結果として、本発明のタンパク質及びポリペプチド（又はこれをコードするヌクレオチド配列／核酸（これを次に発現させて、このようなタンパク質及びポリペプチドを提供することができる））を提供するために、本発明の様々な一価のアミノ酸配列を「構成単位」として使用することは、本発明の重要な態様を形成する。
この目的及び本明細書中に記載される他の目的のために、本発明は、特定の態様において、各々が単一の結合ドメイン又は結合単位として、それ自体で（即ち本明細書中にさらに記載されるような一価のアミノ酸配列として）又は本明細書中にさらに記載されるように多価、多重特異性及び／又は多重特異性の構築物の一部として（及び／又は「構成単位」として）使用することができる多数の異なるアミノ酸配列を提供する。
これらのアミノ酸配列は、その一価の形態では、例えば以下のように分類することができる：
「ｐ１９配列」、即ち（例えばＩＬ−２３に存在するような）ｐ１９サブユニットに（本明細書で規定されるように）指向性を有する本発明のアミノ酸配列。本明細書中に記載されるｐ１９配列は、「ｐ１９＋配列」（即ちｐ１９サブユニットに指向性を有し、且つｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、特に、例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて、ＩＬ−２３とその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なｐ１９配列）、及び「ｐ１９−配列」（即ちｐ１９サブユニットに指向性を有するが、（それ自体で（per se/as such））ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインのその（同族）受容体）への結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが（本質的に）不可能なｐ１９配列）にさらに細分することができる；
「ｐ４０配列」、即ち（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３に存在するような）ｐ４０サブユニットに（本明細書で規定されるように）指向性を有する本発明のアミノ酸配列。本明細書中に記載されるｐ４０配列は、「ｐ４０＋配列」（即ちｐ４０サブユニットに指向性を有し、且つｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、特に、例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて、ＩＬ−２３とその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な）、及び／又はＩＬ−１２とその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なｐ４０配列）、及び「ｐ４０−配列」（即ちｐ４０サブユニットに指向性を有するが、（それ自体で）ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが（本質的に）不可能なｐ４０配列）にさらに細分することができる；
「ｐ３５配列」、即ち（例えばＩＬ−１２に存在するような）ｐ３５サブユニットに（本明細書で規定されるように）指向性を有する本発明のアミノ酸配列；
「ＩＬ−２７配列」、即ちＩＬ−２７に（本明細書で規定されるように）指向性を有する本発明のアミノ酸配列。本明細書中に記載されるＩＬ−２７配列は、ＥＢＩ−３サブユニット又はＩＬ−２７ｐ２８サブユニットに指向性を有し得る；
「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」、即ちＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−２３ＲのＲβ１サブユニットに指向性を有する本発明のアミノ酸配列；
「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」、即ちＩＬ−１２ＲのＲβ２サブユニットに指向性を有する本発明のアミノ酸配列）；
「ＩＬ−２３Ｒ配列」、即ちＩＬ−２３受容体のＩＬ−２３Ｒサブユニットに指向性を有する本発明のアミノ酸配列。
ｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３Ｒ配列は各々、本明細書中にさらに記載されるようなものであり、各々のクラスの本発明のアミノ酸配列は本発明のさらなる態様を形成する。
本発明はまた、このようなｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３Ｒ配列（及び／又はこれをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を、本明細書中にさらに記載されるように多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物における又はこれに関する「構成単位」として（即ち単一の抗原結合ドメイン又は単位として）使用することに関する。
これに関して、例えば、ヘテロ二量体サイトカインとその同族受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが不可能な本発明のアミノ酸配列（例えばｐ１９−配列又はｐ４０−配列）を、例えば特異性を提供／改善するか、及び／又は親和性及び／又は結合活性を提供／改善するために、多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの本発明のポリペプチドにおける結合ドメイン及び／又は結合単位としてさらに使用することができることに留意されたい。この例は本明細書中の開示から当業者に明らかとなる。
したがって、本発明のさらなる態様は以下のものに関する：
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体（又は他のヘテロ二量体「標的」）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列がヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つがヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットとは異なる第２のサブユニットに指向性を有する、使用；
ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体（又は他のヘテロ二量体「標的」）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列がヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つがヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットとは異なる第２のサブユニットに指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、ヘテロ二量体サイトカイン又はヘテロ二量体サイトカインの（同族）受容体に指向性を有し、且つ上記本発明のアミノ酸配列及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ヘテロ二量体サイトカイン又はヘテロ二量体サイトカインの（同族）受容体に指向性を有し、且つ上記本発明のアミノ酸配列及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、ヘテロ二量体サイトカイン（のサブユニット）又はヘテロ二量体サイトカインの（同族）受容体（のサブユニット）に指向性を有し、且つ上記本発明のアミノ酸配列及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ヘテロ二量体サイトカイン（のサブユニット）又はヘテロ二量体サイトカインの（同族）受容体（のサブユニット）に指向性を有し、且つ上記本発明のアミノ酸配列及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列がヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが同じヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニット（即ち第１のサブユニットとは異なる）に指向性を有する、使用；
ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成る本発明のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが上記本発明のアミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列がヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが同じヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニット（即ち第１のサブユニットとは異なる）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列の使用であって、上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列の使用であって、ｐ１９及び／又はｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有し、且つ上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ１９に指向性を有する（が、ｐ１９の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ｐ１９及び／又はｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有し、且つ上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ１９に指向性を有する（が、ｐ１９の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ１９とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０）に指向性を有する、使用；
ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ１９とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列の使用であって、上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列の使用であって、ｐ１９及び／又はｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有し、且つ上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ１９に指向性を有する（が、ｐ１９の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ｐ１９及び／又はｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有し、且つ上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ１９に指向性を有する（が、ｐ１９の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ１９とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０）に指向性を有する、使用；
ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ１９とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列の使用であって、上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列の使用であって、ｐ４０及び／又はｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有し、且つ上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ４０に指向性を有する（が、ｐ４０の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ｐ４０及び／又はｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有し、且つ上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ４０に指向性を有する（が、ｐ４０の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ４０とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ１９又はＩＬ−１２のｐ３５）に指向性を有する、使用；
ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ４０とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０又はＩＬ−１２のｐ３５）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列の使用であって、上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列の使用であって、ｐ４０及び／又はｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有し、且つ上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ４０に指向性を有する（が、ｐ４０の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ｐ４０及び／又はｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有し、且つ上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ４０に指向性を有する（が、ｐ４０の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ４０とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ１９又はＩＬ−１２のｐ３５）に指向性を有する、使用；
ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−２３又はＩＬ−１２）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ４０とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−２３のｐ４０又はＩＬ−１２のｐ３５）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列の使用であって、上記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列の使用であって、ｐ３５及び／又はｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２）に指向性を有し、且つ上記ｐ３５配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ３５に指向性を有する（が、ｐ３５の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ｐ３５及び／又はｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２）に指向性を有し、且つ上記ｐ３５配列（１つ又は複数）、及び同様にｐ３５に指向性を有する（が、ｐ３５の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ３５とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−１２のｐ４０）に指向性を有する、使用；
ｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体サイトカインのｐ３５とは異なる第２のサブユニット（例えばＩＬ−１２のｐ４０）に指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列の使用であって、上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列の使用であって、ＩＬ−２７に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−２７に指向性を有する（が、ＩＬ−２７の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ＩＬ−２７に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−２７に指向性を有する（が、ＩＬ−２７の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ＩＬ−２７に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ＩＬ−２７配列が指向性を有するサブユニットとは異なるＩＬ−２７の別のサブユニットに指向性を有する、使用；
ＩＬ−２７に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２７配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−２７配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ＩＬ−２７配列が指向性を有するサブユニットとは異なるＩＬ−２７の別のサブユニットに指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列の使用であって、上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列の使用であって、ＩＬ−１２ＲＢ１及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−１２ＲＢ１に指向性を有する（が、ＩＬ−１２ＲＢ１の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ＩＬ−１２ＲＢ１及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−１２ＲＢ１に指向性を有する（が、ＩＬ−１２ＲＢ１の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ＩＬ−１２ＲＢ１サブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−１２ＲＢ１とは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用；
ＩＬ−１２ＲＢ１サブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ１配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−１２ＲＢ１配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−１２ＲＢ１とは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列の使用であって、上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列の使用であって、ＩＬ−１２ＲＢ２及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−１２の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−１２ＲＢ２に指向性を有する（が、ＩＬ−１２ＲＢ２の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ＩＬ−１２ＲＢ２及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−１２の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−１２ＲＢ２に指向性を有する（が、ＩＬ−１２ＲＢ２の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ＩＬ−１２ＲＢ２サブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−１２の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−１２ＲＢ２とは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用；
ＩＬ−１２ＲＢ２サブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−１２の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２ＲＢ２配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−１２ＲＢ２配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−１２ＲＢ２とは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列の使用であって、上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列の使用であって、ＩＬ−２３Ｒ及び／又はＩＬ−２３Ｒサブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−２３Ｒに指向性を有する（が、ＩＬ−２３Ｒの異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、ＩＬ−２３Ｒ及び／又はＩＬ−２３Ｒサブユニットを含む受容体（例えばＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有し、且つ上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）、及び同様にＩＬ−２３Ｒに指向性を有する（が、ＩＬ−２３Ｒの異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する）少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位、及び任意で１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む、二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用；
ＩＬ−２３Ｒサブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドを提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−２３Ｒとは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用；
ＩＬ−２３Ｒサブユニットを含むヘテロ二量体受容体（例えばＩＬ−２３の同族受容体）に指向性を有する多重特異性（特に二重特異性）の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ＩＬ−２３Ｒ配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、上記ヘテロ二量体受容体のＩＬ−２３Ｒとは異なる別のサブユニットに指向性を有する、使用。
上記態様／使用のいずれかが、多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物（例えば二重パラトピック構築物）をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸を提供する、構築する際の、及び／又はその一部としての一価のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用を含む場合、上記態様／使用は任意で、上記ヌクレオチド配列及び／又は核酸によりコードされる多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物を（例えば、本明細書中にさらに記載されるような好適な発現により）調製する際の、このようにして得られたヌクレオチド配列及び／又は核酸の使用をさらに含む。
より一般的には、本発明の一態様では、ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体（又は他の「標的」）に（本明細書で規定されるように）指向性を有する（本明細書で規定されるような「多重特異性」）ポリペプチド構築物であって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び上記第２のサブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、ポリペプチド構築物が提供される。
特に、本発明のこの態様では、第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に（本明細書で規定されるように）指向性を有する（本明細書で規定されるような「多重特異性」）ポリペプチド構築物であって、
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、少なくとも１つの第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有される少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、上記第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有されない少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第１の（即ち共有）サブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び上記第２の（即ち非共有）サブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、ポリペプチド構築物が提供される。
本発明の別の態様では、ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体（又は他の「標的」）に（本明細書で規定されるように）指向性を有するポリペプチド構築物であって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に上記第１のサブユニットに指向性を有するが、上記第１のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、上記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む（本明細書で規定されるような二重パラトピック）構築物である、ポリペプチド構築物が提供される。
本発明の別の態様では、受容体のリガンドであるヘテロ二量体タンパク質に（本明細書で規定されるように）指向性を有するポリペプチド構築物であって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に上記第１のサブユニットに指向性を有するが、上記第１のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、上記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む（本明細書で規定されるような二重パラトピック）構築物である、ポリペプチド構築物が提供される。特に、限定するものではないが、このような（二重パラトピック）構築物では、第１の結合ドメイン又は結合単位は、上記ヘテロ二量体タンパク質とその（同族）受容体との結合を調節（本明細書で規定される）、遮断、阻害及び／又は中和するようなものであってもよく、第２の結合ドメイン又は結合単位は、上記ヘテロ二量体タンパク質とその（同族）受容体との結合を本質的に調節（本明細書で規定される）、遮断、阻害及び／又は中和しないようなものであってもよい（又は逆もまた同様である）。
本発明の別の態様では、受容体のリガンドであるヘテロ二量体タンパク質に（本明細書で規定されるように）指向性を有するポリペプチド構築物であって、
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、少なくとも１つの第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有される少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、上記第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有されない少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第２の（即ち非共有）サブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に上記第２の（即ち非共有）サブユニットに指向性を有するが、上記第２のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、上記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む（本明細書で規定されるような二重パラトピック）構築物である、ポリペプチド構築物が提供される。特に、限定するものではないが、このような（二重パラトピック）構築物では、第１の結合ドメイン又は結合単位は、上記ヘテロ二量体タンパク質とその（同族）受容体との結合を調節（本明細書で規定される）、遮断、阻害及び／又は中和するようなものであってもよく、第２の結合ドメイン又は結合単位は、上記ヘテロ二量体タンパク質とその（同族）受容体との結合を本質的に調節（本明細書で規定される）、遮断、阻害及び／又は中和しないようなものであってもよい（又は逆もまた同様である）。
本発明の別の態様では、ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に（本明細書で規定されるように）指向性を有するポリペプチド構築物であって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記ポリペプチド構築物が、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に上記第１のサブユニットに指向性を有するが、上記第１のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、上記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む（本明細書で規定されるような二重パラトピック）構築物である、ポリペプチド構築物が提供される。
上記の多重特異性（特に二重特異性）及び多重パラトピック（特に二重パラトピック）の構築物では、第１及び第２の結合ドメインは一般に、（例えばこれらが指向性を有するサブユニットに対する親和性、特異性等に関して）本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中に一般的に記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中に記載されるように、上記構築物に存在する第１の結合ドメイン又は結合単位、第２の結合ドメイン又は結合単位及び任意のさらなる結合ドメイン又は結合単位は、好ましくは単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を形成するか、又は（任意で好適なフォールディングの後に）形成することが可能であるようなものであり、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域及び３つのＣＤＲから構成されるアミノ酸配列、特にドメイン抗体、単一のドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」又はナノボディ（全て本明細書中にさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であり得る。
上記多重特異性（特に二重特異性）及び多重パラトピック（特に二重パラトピック）の構築物の好適なヘテロ二量体「標的」は、このような標的に対する上記構築物の使用の利点と同様に、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかである。
例えば、限定するものではないが、ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体は、ヘテロ二量体受容体のリガンドであるヘテロ二量体タンパク質、特にヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５）であり得る。また、例えば、ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体は、ヘテロ二量体リガンドの受容体であるヘテロ二量体リガンド、特にヘテロ二量体サイトカインの受容体（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５の受容体）であり得る。
特に、本発明によると、上記ヘテロ二量体タンパク質、リガンド又はポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン、又はサイトカイン（特にヘテロ二量体サイトカイン）の（ヘテロ二量体）受容体であり得る。
上記構築物の他の用途及び利点は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかとなる。
幾つかの好ましいが、非限定的な本発明の構築物は、
ａ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列を含む構築物；
ｂ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列を含む構築物；
ｃ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ１９＋配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列を含む構築物；
ｄ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列を含む構築物；
ｅ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列を含む構築物；
ｆ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ３５配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列を含む構築物；
ｇ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０＋配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ｐ４０−配列を含む構築物；
ｈ）少なくとも２つの（同じ又は異なる）（本明細書で規定されるような）ｐ１９−配列を含む構築物：（例えば、限定するものではないが、構築物中に存在するリンカー（複数可）との立体相互作用によって、及び／又はリンカーによって（courtesy of））ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、特に（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−２３のＩＬ−２３Ｒへの結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であるようなものである；
ｉ）少なくとも２つの（同じ又は異なる）ｐ４０−配列を含む構築物：（例えば、限定するものではないが、これに存在するリンカー（複数可）との立体相互作用によって、及び／又はリンカーによって）ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、特に（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−２３のＩＬ−２３Ｒへの結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、及び／又は（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−１２とその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であるようなものである；
ｊ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２Ｒｂ２配列を含む構築物；
ｋ）少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、及び少なくとも１つの（本明細書で規定されるような）ＩＬ−２３Ｒ配列を含む構築物であり、このような構築物、これをコードするヌクレオチド配列、これを含む製剤及び調製物、及びこれらの調製及び様々な使用（全て本明細書中にさらに記載される）は、本発明のさらなる態様を形成する。
このような構築物（及び／又はこのような構築物を提供するために結合ドメイン及び／又は結合単位として使用することができる本発明のアミノ酸配列）の例、並びに上記構築物の潜在的用途及び利点は、本明細書中の開示に基づいて当業者に明らかとなる。例えば、限定するものではないが、
上記のａ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害すること、特に（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−２３のＩＬ−２３Ｒへの結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、及び／又は（ｉｉ）一般に、ｐ１９サブユニットを含まないヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−２３に（本明細書で規定されるように）特異的であり、及び／又は（ｉｉｉ）対応するｐ１９＋配列（又は別のｐ１９＋配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってｐ１９に結合する；及び／又は
上記のｂ）、ｃ）及びｄ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−２３とＩＬ−２３の（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、及び／又は（ｉｉ）一般に、ＩＬ−１２と比較してＩＬ−２３に（本明細書で規定されるように）特異的であり（ｐ１９サブユニット又はｐ４０サブユニットを含み得る他のヘテロ二量体サイトカインと比較して、ＩＬ−２３に特異的であることも期待される）、及び／又は（ｉｉｉ）対応するｐ１９＋配列（又は別のｐ１９＋配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってＩＬ−２３に結合し、及び／又は（ｉｖ）一般に、ｐ１９−配列及びｐ４０−配列のみを含む類似の構築物より好ましい；
上記のｅ）及びｆ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−１２とＩＬ−１２の（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、及び／又は（ｉｉ）一般に、ＩＬ−２３と比較してＩＬ−１２に（本明細書で規定されるように）特異的であり（ｐ３５サブユニット又はｐ４０サブユニットを含み得る他のヘテロ二量体サイトカインと比較して、ＩＬ−１２に特異的であることも期待される）、及び／又は（ｉｉｉ）対応するｐ３５配列（又は別のｐ３５配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってＩＬ−１２に結合する；
上記のｇ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とＩＬ−２３の（同族）受容体との結合、並びに（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−１２とＩＬ−１２の（同族）受容体との結合の両方を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、（ｉｉ）対応するｐ４０＋配列（又は別のｐ４０＋配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってｐ４０に結合する；
上記のｈ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおいて）ＩＬ−２３とＩＬ−２３の（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、及び／又は（ｉｉ）一般に、ｐ１９サブユニットを含まないヘテロ二量体サイトカイン（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５）と比較してＩＬ−２３に（本明細書で規定されるように）特異的であり、及び／又は（ｉｉｉ）各々の対応するｐ１９−配列（又は別の単量体ｐ１９−配列又はｐ１９＋配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってＩＬ−２３に結合する；
上記のｉ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とＩＬ−２３の（同族）受容体との結合、並びに（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−１２とＩＬ−１２の（同族）受容体との結合の両方を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり、（ｉｉ）各々の対応するｐ４０−配列（又は別の単量体ｐ４０−配列又はｐ４０＋配列）自体よりも強い結合活性及び特異性をもってｐ４０に結合する；
上記のｊ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）ＩＬ−２３の同族受容体と比較して、ＩＬ−１２の同族受容体に特異的であり、（ｉｉ）単量体ＩＬ−１２Ｒｂ２配列と比較して、より強い結合活性及び特異性をもってＩＬ−１２の同族受容体に結合する；
上記のｋ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）ＩＬ−１２の同族受容体と比較して、ＩＬ−２３の同族受容体に特異的であり、（ｉｉ）単量体ＩＬ−２３Ｒ配列と比較して、より強い結合活性及び特異性をもってＩＬ−２３の同族受容体に結合する。
また、本明細書中にさらに記載されるように、上記のｊ）で取り上げられるような構築物は、（ｉ）ＩＬ−１２の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアゴニストとして作用する場合があり（この場合、構築物は、ＩＬ−２３の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達と比較して、ＩＬ−１２の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達に特異的であることが期待されるか、又はＩＬ−２３の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアゴニストとして作用することさえ本質的に不可能である場合もある）、及び／又は（ｉｉ）ＩＬ−１２とその同族受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であるか、及び／又はそうでなければ上記構築物の非存在下で、ＩＬ−１２とその同族受容体との結合によって誘発され得る受容体媒介性シグナル伝達を予防、調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり（即ちＩＬ−１２及び／又はＩＬ−１２の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストとして作用する）、それ自体が、ＩＬ−２３の同族受容体と比較してＩＬ−１２の同族受容体に特異的である（及び／又はＩＬ−２３の同族受容体と比較して、より高い結合活性及び／又は特異性をもってＩＬ−１２の同族受容体に結合する）場合がある。
同様に、本明細書中にさらに記載されるように、上記のｋ）で取り上げられた構築物は、（ｉ）ＩＬ−２３の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアゴニストとして作用する場合がある（この場合、構築物は、ＩＬ−１２の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達と比較して、ＩＬ−２３の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達に特異的であることが期待されるか、又はＩＬ−１２の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアゴニストとして作用することさえ本質的に不可能である場合もある）、及び／又は（ｉｉ）ＩＬ−２３とその同族受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であるか、及び／又はそうでなければ上記構築物の非存在下で、ＩＬ−２３とその同族受容体との結合によって誘発され得る受容体媒介性シグナル伝達を予防、調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能であり（即ちＩＬ−２３及び／又はＩＬ−２３の同族受容体によって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニストとして作用する）、それ自体が、ＩＬ−１２の同族受容体と比較してＩＬ−２３の同族受容体に特異的である（及び／又はＩＬ−１２の同族受容体と比較して、より高い結合活性及び／又は特異性をもってＩＬ−２３の同族受容体に結合する）場合がある。
本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドの他の用途及び使用は、本明細書のさらなる開示から当業者にとって明らかになる。
概して、本発明の目的は、ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患及び障害、及び本明細書で言及されるさらなる疾患及び障害の診断、予防及び／又は治療に使用することができる、薬理学的に活性な作用物質、及びこれを含む組成物を提供すること、並びにこのような作用物質及び組成物の投与及び／又は使用を伴う、このような疾患及び障害を診断、予防及び／又は治療する方法を提供することである。
具体的には本発明の目的は、現在当該技術分野で使用されている、及び／又は既知の作用物質、組成物及び／又は方法に比べて或る特定の利点を有するような薬理学的に活性な作用物質、組成物及び／又は方法を提供することである。これらの利点は、以下のさらなる記載から明らかになる。
より具体的には本発明の目的は、ヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患及び障害及び本明細書で言及されるさらなる疾患及び障害の診断、予防及び／又は治療に、薬理学的に活性な作用物質、及びこれを含む組成物として使用することができる治療タンパク質を提供すること、並びにこのような治療タンパク質及び組成物の投与及び／又は使用を伴うような疾患及び障害を診断、予防及び／又は治療する方法を提供することである。
したがって本発明の特定の目的は、（本明細書に規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体、具体的には温血動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はその受容体、より具体的には哺乳動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、特にヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性があるアミノ酸配列を提供すること、並びに少なくとも１つのこのようなアミノ酸配列を含むか、又は本質的にこれから成るタンパク質及びポリペプチドを提供することである。
具体的には本発明の特定の目的は、温血動物、具体的に哺乳動物、より具体的にヒトにおいて予防的用途、治療的用途及び／又は診断的用途に好適であるようなアミノ酸配列及びタンパク質及び／又はポリペプチドを提供することである。
より具体的には本発明の特定の目的は、温血動物、具体的に哺乳動物、より具体的にヒトにおいてヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体で媒介される１つ又は複数の疾患、障害又は症状（本明細書中で言及される疾患、障害及び症状等）の予防、治療、緩和及び／又は診断に使用することができるようなアミノ酸配列及びタンパク質及び／又はポリペプチドを提供することである。
本発明の特定の目的は、温血動物、具体的に哺乳動物、より具体的にヒトにおいてヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体で媒介される１つ又は複数の疾患、障害又は症状（本明細書中で言及される疾患、障害及び症状等）の予防及び／又は治療のための薬学的組成物又は獣医学的組成物の調製に使用することができるようなアミノ酸配列及びタンパク質及び／又はポリペプチドを提供することでもある。
本発明において概して、これらの目的は、本明細書に記載のアミノ酸配列、タンパク質、ポリペプチド及び組成物の使用によって達成される。
概して本発明は、（本明細書に規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する、及び／又は（本明細書に規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と特異的に結合することができるアミノ酸配列、並びに少なくとも１つのこのようなアミノ酸配列を含む化合物及び構築物、特にタンパク質及びポリペプチドを提供する。上記アミノ酸配列は、好ましくは単一の（抗原）結合ドメイン又は結合単位を形成するか、及び／又は本質的にこれから成り、及び／又は（任意で好適なフォールディングの後に）単一の（抗原）結合ドメイン又は結合単位を形成するか、及び／又はそれ自体で、及び／又は本明細書中にさらに記載されるように本発明のタンパク質又はポリペプチドの一部として、そのように機能することが可能である。
より具体的には本発明は、本明細書に規定の（さらに本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができるアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）、並びに少なくとも１つのこのようなアミノ酸配列を含む化合物及び構築物、特にタンパク質及びポリペプチドを提供する。
特に、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドが、１０−５モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及び好ましくは１０−７モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及びより好ましくは１０−８モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で（即ち１０５Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及び好ましくは１０７Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及びより好ましくは１０８Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モルの結合定数（ＫＡ）で）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなもの、及び／又は
１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、好ましくは１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１、より好ましくは１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１、（１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１等）のｋｏｎ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなもの、及び／又は
１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−６ｓ−１（ｔ１／２が数日である略不可逆的な複合体の場合）、好ましくは１０−２ｓ−１〜１０−６ｓ−１、より好ましくは１０−３ｓ−１〜１０−６ｓ−１（１０−４ｓ−１〜１０−６ｓ−１等）のｋｏｆｆ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものであるのが好ましい。
好ましくは、本発明の一価のアミノ酸配列（又は本発明のアミノ酸配列を本質的に１つだけ含有するポリペプチド）が、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満（５００ｐＭ未満等）の親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドとヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に関する幾つかの好ましい及びＩＣ５０値は、本明細書のさらなる記載及び実施例から明らかになる。
ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合のために、本発明のアミノ酸配列は通常、そのアミノ酸配列内に１つ又は複数のアミノ酸残基若しくは１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ（即ちそれぞれの「ストレッチ」が、（即ちアミノ酸配列の一次構造又は三次構造で）互いに隣接しているか、又は互いに密接している２つ以上のアミノ酸残基を含む）を含有し、これを介して本発明のアミノ酸配列はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができ、このようにしてアミノ酸残基又はアミノ酸残基のストレッチは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合する「部位」（本明細書で「抗原結合部位」とも称される）を形成する。
本発明で与えられるアミノ酸配列は、（本明細書で規定のように）本質的に単離形態であるか、又は（本明細書で規定のように）本発明のタンパク質若しくはポリペプチド（１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列を含むか、又は本質的にこれから成り、任意でさらに１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列（全て任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して連結される）を含んでもよい）の一部を形成するのが好ましい。例えば、これに限定されないが、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列は、全て本明細書に記載される本発明の一価、多価、又は多重特異性のポリペプチドをそれぞれ提供するように、このようなタンパク質又はポリペプチドにおける結合単位として使用してもよい（任意で（即ちヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体以外の１つ又は複数の他の標的に対する）結合単位としての役割を果たし得る１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列を含有してもよい）。このようなタンパク質又はポリペプチドは、（本明細書に規定のように）本質的に単離形態でもあり得る。
本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）及びポリペプチド（例えば、ｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及び／又はＩＬ−２３配列を少なくとも１つ含む、本明細書中に記載の多価、多重特異性、及び／又は二重パラトピック（biparatopic）の構築物）自体が、ジスルフィド架橋を介して任意の他のアミノ酸配列又はアミノ酸鎖と連結しない（が、１つ又は複数の分子内ジスルフィド架橋を含有しても又は含有しなくてもよい。例えば本明細書中に記載のナノボディは、ＣＤＲ３とＣＤＲ１又はＦＲ２との間にジスルフィド架橋を含有し得ることもあることが知られている）単一のアミノ酸鎖から本質的に成るのが好ましい。しかしながら、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列は、互いに及び／又は他のアミノ酸配列と（例えばジスルフィド架橋を介して）連結し、本発明に有用でもあり得るペプチド構築物（例えばＦａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＳｃＦｖ構築物、「ダイアボディ」及び他の多重特異性の構築物、例えばHolliger andHudson, Nat Biotechnol. 2005 Sep; 23（9）: 1126-36による総説を参照されたい）を提供し得ることに留意されたい。
概して、本発明のアミノ酸配列（又はこれを含む化合物、構築物若しくはポリペプチド）は、（例えば本明細書に記載の治療目的及び／又は診断目的のための）被験体への投与を目的とする場合、上記被験体において自然発生しないアミノ酸配列であるか、又は上記被験体において自然発生する場合は、（本明細書に規定のように）本質的に単離形態であるのが好ましい。
薬学的用途の場合、本発明のアミノ酸配列（並びにこれを含む化合物、構築物及びポリペプチド）はヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するのが好ましく、一方で獣医学目的の場合は、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは治療する種由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するか、又は治療する種由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と少なくとも交差反応性を有するのが好ましいことも、当業者にとって明らかである。
さらに、本発明のアミノ酸配列は、任意で且つヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合のための少なくとも１つの結合部位の他に、他の抗原、タンパク質又は標的との結合のための１つ又は複数のさらなる結合部位を含有し得る。
発症する特定の疾患又は障害に応じて、任意の好適なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞ベースのアッセイ、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ及び／又はそれ自体が既知の動物モデル、又はこれらの任意の組合せを使用して、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド、並びにこれを含む組成物の有効性を試験することができる。好適なアッセイ及び動物モデルは当業者に明らかであり、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、例えばビアコア（例えば実施例１２、実施例２０又は実施例２３を参照されたい）、アルファスクリーン（例えば実施例１４、実施例２０又は実施例２２を参照されたい）、ＦＬＩＰＲ、ＥＬＩＳＡ（例えば実施例１０を参照されたい）及び競合ＥＬＩＳＡ（例えば実施例１１を参照されたい）、活性化ＰＢＭＣの増殖（ＩＬ−１２媒介性シグナル伝達の変調を測定する）、活性化脾臓細胞のＩＬ１７産生（ＩＬ−２３媒介性シグナル伝達の変調を測定する、例えばAggarwal, Journal of Biological Chemistry, 278, 3, 2003, 1910-1914を参照されたい）等の細胞ベースのアッセイ、並びにＴＨ１細胞の分化及び／又はＴＨ１７細胞の阻害を測定するアッセイ（ＩＬ−２３媒介性シグナル伝達の変調を測定する）、並びに炎症性疾患及び障害の様々な動物モデル、例えばＥＡＥ（実験的アレルギー性脳脊髄炎）、ＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）、ＩＬ１２誘導ネオプテリン放出、及びマウス脾臓ＩＬ１７産生等の自己免疫性炎症のモデル、デキストラン硫酸塩誘導性潰瘍性大腸炎、及びジニトロフルオロベンゼン誘導性クローン病等のマウス及びラットにおけるＩＢＤモデル、並びに下記実験部及び本明細書中で引用される従来技術において使用されるアッセイ及び動物モデルが挙げられる。本明細書中の開示に基づき、関与するヘテロ二量体サイトカイン（複数可）及び／又は受容体（複数可）に応じて、当業者は一般に、ヘテロ二量体サイトカイン又はその受容体に対する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドを、ヘテロ二量体サイトカイン及びその受容体を調節するこれらの能力、及び／又はこれらが関与するシグナル伝達、経路、生物学的機構及び効果、並びにヘテロ二量体サイトカイン及び／又はその受容体に関連する１つ又は複数の疾患及び障害に関するこれらの治療効果及び／又は予防効果について試験するために、好適なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞アッセイ又は動物モデルを選択することが可能である。
また本発明によれば、第１の種の温血動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドは、１つ又は複数の他の種の温血動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と交差反応性を示しても又は示さなくてもよい。例えば、ヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドは、１つ又は複数の他の種の霊長類（例えば、これらに限定されないが、マカク属のサル（例えば特にカニクイザル（マカク・ファシクラリス（Macaca fascicularis））及び／又はアカゲザル（マカク・ムラット（Macaca mulatta）））及びヒヒ（パピオ・ウルジヌス（Papio ursinus））由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、及び／又は疾患のための動物モデル（例えばマウス、ラット、ウサギ、ブタ又はイヌ）、特にヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連がある疾患及び障害のための動物モデルで使用されることが多い、１種又は複数種の動物（例えば本明細書で言及される種及び動物モデル）由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と交差反応性を示しても又は示さなくてもよい。この観点では、このような疾患モデルでヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するアミノ酸配列及びポリペプチドを試験することが可能であるので、存在する場合、このような交差反応性は薬剤開発の観点から都合がいいことがあることが当業者にとって明らかである。
より一般的には、複数種の哺乳動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と交差反応性を有する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは複数種にわたって使用することが可能であるので、このアミノ酸配列及びポリペプチドは通常、獣医学用途に使用するのに有利である。したがって、或る種の動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチド（例えばヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するアミノ酸配列及びポリペプチド）は、アミノ酸配列及び／又はポリペプチドの使用によって治療する種において所望の効果が提供されれば、別の種の動物の治療に使用することができることも本発明の範囲内に包含される。
本発明は最も広範な意味でも、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドが指向性を有するヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体の特定の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置（適用可能な場合）に特に限定されないか、又はこれらによって規定されない。本発明の特定の一態様では、アミノ酸配列及びポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン又は受容体上の（本明細書で規定される）相互作用部位に（少なくとも）指向性を有する。
本明細書でさらに記載されるように、本発明のポリペプチドは、これらの目的とする（同族）同族標的（例えばヘテロ二量体サイトカイン、その受容体、又はそのいずれかのサブユニット）に指向性を有する２つ以上の本発明のアミノ酸配列を含有し得る。概して、このようなポリペプチドは、本発明の単一のアミノ酸配列に比べて、増大した結合活性（avidity：親和力）で上記標的と結合する。このようなポリペプチドは例えば、上記標的の同じ抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置（適用可能な場合）に指向性を有する本発明のアミノ酸配列（相互作用部位であっても、又はなくてもよい）を２つ含み得るか、又は上記標的の第１の同じ抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置（適用可能な場合）に指向性を有する本発明の少なくとも１つの「第１の」アミノ酸配列（相互作用部位であっても、又はなくてもよい）と、第１のアミノ酸配列とは異なる第２の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置（適用可能な場合）に指向性を有する本発明の少なくとも１つの「第２の」アミノ酸配列（これも相互作用部位であっても、又はなくてもよい）とを含み得る。好ましくは、本発明のこのような「二重パラトピック」ポリペプチドでは、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列が、相互作用部位（本明細書中に規定）に指向性を有するが、本発明はその最も広範な意味ではこれに限定されない。
また、標的が結合対部分（例えば、受容体−リガンド結合対）である場合、アミノ酸配列及びポリペプチドは、標的と結合する同族結合パートナー（例えば適用可能な場合、リガンド、受容体又は他の結合パートナー）と競合するようなもの、及び／又は結合パートナーと標的との結合を（完全に又は部分的に）中和するようなものであり得る。
また適用可能な場合、本発明のアミノ酸配列が、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の２つ以上の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置と結合することができることは、本発明の範囲内である。このような場合、本発明のアミノ酸配列及び／又はポリペプチドが結合する、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、又はサブユニットは、本質的に同じであり得るか（例えば、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体が反復構造モチーフを含有するか、又は多量体形態で生じる場合）、又は異なり得る（後者の場合、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドが、同じであり得るか、若しくは異なり得る親和性及び／又は特異性で、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体のこのような異なる抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニットと結合し得る）。また、例えば、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体が活性な立体配置及び不活性な立体配置で存在する場合、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、これらの立体配置のいずれか一方に結合しても、又はこれらの立体配置の両方に結合してもよい（即ち、親和性及び／又は特異性が同じであっても、又は異なっていてもよい）。また、例えば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、付属リガンドと結合するヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の立体配置と結合しても、付属リガンドと結合していないヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の立体配置と結合しても、又はこのような立体配置の両方と（また同じであり得る又は異なり得る親和性及び／又は特異性で）結合してもよい。
また本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは概して、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の天然又は合成の類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分及び断片全て、又は本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドがヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体（例えば野生型ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体）で結合する抗原決定基（複数可）又はエピトープ（複数可）と本質的に同じである１つ又は複数の抗原決定基又はエピトープを含有する、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の少なくともこれらの類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分及び断片と結合することが期待される。また、このような場合、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列が（野生型）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合する親和性及び特異性と同じか、又は異なる（即ちこれより高いか、又は低い）親和性及び／又は特異性で、このような類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分及び断片と結合し得る。本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分及び断片によっては結合するものもあれば、結合しないものもあることも本発明の範囲内に含まれる。
本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物は概して、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はその受容体により媒介されるシグナル伝達を（本明細書中に規定のように）調節するのに、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はその受容体が関与する生物学的経路を（本明細書中に規定のように）調節するのに、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン、その受容体に関連する生物学的機構、応答及び効果、例えばシグナル伝達及び／又はこれらの経路（上述のもの全てが集合的に本明細書中で「ヘテロ二量体のサイトカイン媒介性シグナル伝達」とも称される）を（本明細書中に規定のように）調節するのに使用することができる。
また、本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物は概して、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、ポリペプチド及び組成物を（即ち治療に関連する量で）投与する被験者において免疫系及び／又は１つ又は複数の特定の免疫応答を調節するのに使用することができる。
本明細書中で使用されるような「ヘテロ二量体サイトカイン」という用語は、その最も広範な意味で、包括的に任意のヘテロ二量体サイトカイン、即ち少なくとも２つ、より好ましくは２つだけのサブユニットを含むサイトカインを包含する。
具体的に、本明細書中に使用されるような「ヘテロ二量体サイトカイン」という用語は、細胞性（ＴＨ１）免疫に関連するヘテロ二量体サイトカインを包含するが、本発明はその最も広範な意味でこれに限定されず、体液性（ＴＨ２）免疫に関連するヘテロ二量体サイトカインも包含する。
具体的であるが非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニット、例えばｐ４０サブユニット（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３に存在する）又はエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）誘導性分子３（ＥＢＩ３、例えばＩＬ−２７及びＩＬ−３５に存在する）を含むヘテロ二量体サイトカインから選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
具体的であるが非限定的な別の態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニット、例えばｐ１９サブユニット（例えばＩＬ−２３に存在する）、ｐ３５サブユニット（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−３５に存在する）若しくはｐ２８サブユニット（例えばＩＬ−２７に存在する）、又はそのホモログを含むヘテロ二量体サイトカインから選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
例えば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニットの少なくとも１つとｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニットの少なくとも１つとを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し得る。
さらにより具体的であるが非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５から選択されるヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する。
具体的であるが非限定的な一態様において、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドはＩＬ−２３（即ちｐ４０、ｐ１９又はその両方）に指向性を有する。このような本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド（及びこれを含む組成物）は、本明細書中でさらに記載されるようなものであってもよく、ＩＬ−２３、ＩＬ−２３受容体及び／又はＩＬ−２３媒介性のシグナル伝達に関連する障害を予防及び治療するのに使用することができる。ここでも上記で言及される従来技術に対して言及が為される。また、本明細書中で言及されるように、ＩＬ−２３に指向性を有する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド、特にＩＬ−１２と比較して（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３に特異的なものは、ＩＬ−１２に指向性を有する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドを超えて、治療的使用に対する利点を有し得る。また、本明細書中で言及されるように、ｐ１９に指向性を有する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチド、特にｐ３５及びｐ４０と比較して（本明細書に規定のように）ｐ１９に特異的なものは、ｐ３５又はｐ４０に指向性を有する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドを超えて、治療的使用に対する利点を有し得る。
具体的であるが非限定的な別の態様によれば、本発明は、（本明細書に規定のように）ヘテロ二量体サイトカインの少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの両方のサブユニットに指向性を有する（本明細書中で規定のような）「二重特異性」ポリペプチドを提供する。これらのポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの１つのサブユニットに指向性を有する（本明細書中で規定のような）「二重パラトピック」ポリペプチドを提供する。これらのポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
限定されないが特に、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記ヘテロ二量体サイトカインが細胞性（ＴＨ１）免疫に関連する、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
例えば、具体的であるが非限定的な一態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記ヘテロ二量体サイトカインがｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニット、例えばｐ４０サブユニット（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−２３に存在する）又はエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）誘導性分子３（ＥＢＩ３、例えばＩＬ−２７及びＩＬ−３５に存在する）を含むヘテロ二量体サイトカインから選択される、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ４０サブユニット又はｐ４０様サブユニット、例えば以下のサブユニット：ｐ４０及び／又はＥＢＩ３、又は上述のそれぞれの突然変異体、変異体、対立遺伝子若しくはホモログの１つに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記ヘテロ二量体サイトカインがｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニット、例えばｐ１９サブユニット（例えばＩＬ−２３に存在する）、ｐ３５サブユニット（例えばＩＬ−１２及びＩＬ−３５に存在する）、ｐ２８サブユニット（例えばＩＬ−２７に存在する）、又は上述のそれぞれの突然変異体、変異体、対立遺伝子若しくはホモログを含むヘテロ二量体サイトカインから選択される、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ１９サブユニット又はｐ１９様サブユニット、例えば以下のサブユニット：ｐ１９、ｐ３５及び／又はｐ２８、又は上述のそれぞれの突然変異体、変異体、対立遺伝子若しくはホモログの１つに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、以下のヘテロ二量体サイトカイン：ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５の１つの少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２又はＩＬ−１２の少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２３又はＩＬ−２３の少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２７又はＩＬ−２７の少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−３５又はＩＬ−３５の少なくとも１つのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。これらのアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中にさらに記載され得る。
例えば、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５に対するこのようなポリペプチドはそれぞれ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５、特にＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で（本明細書中で規定のような）相互作用部位に指向性を有する、単一の本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）を含み得るか、又は本質的にこれから成り得る。このようなポリペプチドがそれぞれ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５に指向性を有する（任意で本明細書中で記載のように、１つ又は複数の好適なリンカーを介して互いに連結した）本発明のアミノ酸配列を２つ以上含む場合、これらのアミノ酸配列はそれぞれ、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７若しくはＩＬ−３５上でアミノ酸残基の同じエピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン若しくはストレッチ、又はＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７若しくはＩＬ−３５上のアミノ酸残基の異なるエピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン若しくはストレッチに指向性を有し得る。例えば、このようなポリペプチドは、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に受容体結合部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で相互作用部位ではないアミノ酸残基の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチに指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列とを含み得る。このようなポリペプチドは、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に受容体結合部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で（本明細書に規定のように）異なる相互作用部位に指向性を有する１つ又は複数のアミノ酸配列とを含み得る。このようなポリペプチドは、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５上で同じ相互作用部位（本明細書に規定のように、特に受容体結合部位）に指向性を有する本発明のアミノ酸配列を２つ以上含むことも可能である。
例えば、このようなポリペプチドは、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５とその受容体との結合を調節することができる１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列（例えば１つ又は複数のナノボディ）、及び／又はそれぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５とその受容体との結合を調節（特に阻害）しない１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列（例えば１つ又は複数のナノボディ）を含み得る。例えば、このようなポリペプチドは、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５とその受容体との結合を調節することができる、１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）と、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５とその受容体との結合を調節しない、１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）とを含み得る。
このような本発明のポリペプチドの例は本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ１９に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチド（本明細書中で「ｐ１９配列」とも称される）を提供する。このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載され得る（例えば、このようなアミノ酸配列は「ｐ１９＋配列」又は「ｐ１９−配列」であり得る）。例えば、このようなポリペプチドは、ｐ１９に対する１つ又は複数のアミノ酸配列、例えばｐ１９に対する１つ又は複数のナノボディを含有するポリペプチドであり得る。このような本発明のポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、ＩＬ−２３及びｐ１９を含有する他のヘテロ二量体サイトカインで選択的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ３５に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載され得る。例えば、このようなポリペプチドは、ｐ３５に対する１つ又は複数のアミノ酸配列、例えばｐ３５に対する１つ又は複数のナノボディを含有するポリペプチドであり得る。このような本発明のポリペプチドは、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２７と比較して、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−３５及びｐ４０を含有する他のヘテロ二量体サイトカインで選択的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ２８に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載され得る。例えば、このようなポリペプチドは、ｐ２８に対する１つ又は複数のアミノ酸配列、例えばｐ２８に対する１つ又は複数のナノボディを含有するポリペプチドであり得る。このような本発明のポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−３５と比較して、ＩＬ−２７及びｐ２８を含有する他のヘテロ二量体サイトカインで選択的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載され得る（例えば、このようなアミノ酸配列は「ｐ４０＋配列」又は「ｐ４０−配列」であり得る）。例えば、このようなポリペプチドは、ｐ４０に対する１つ又は複数のアミノ酸配列、例えばｐ４０に対する１つ又は複数のナノボディを含有するポリペプチドであり得る。このような本発明のポリペプチドは、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３、及びｐ４０を含有する他のヘテロ二量体サイトカインで選択的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＥＢＩ３に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載され得る。例えば、このようなポリペプチドは、ＥＢＩ３に対する１つ又は複数のアミノ酸配列、例えばＥＢＩ３に対する１つ又は複数のナノボディを含有するポリペプチドであり得る。このような本発明のポリペプチドは、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３と比較して、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−２３、及びＥＢＩ３を含有する他のヘテロ二量体サイトカインで選択的であることが期待される。
例えば、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３に対するこのようなポリペプチドは、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３、特にｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で（本明細書中で規定のような）相互作用部位に指向性を有する単一の本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）を含み得るか、又は本質的にこれから成り得る。このようなポリペプチドがそれぞれ、ｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３に指向性を有する（任意で本明細書中で記載のように、１つ又は複数の好適なリンカーを介して互いに連結した）本発明のアミノ酸配列を２つ以上含む場合、これらのアミノ酸配列はそれぞれ、ｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０若しくはＥＢＩ３上でアミノ酸残基の同じエピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン若しくはストレッチ、又はｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０若しくはＥＢＩ３上のアミノ酸残基の異なるエピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン若しくはストレッチに指向性を有し得る。例えば、このようなポリペプチドは、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に関与する部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で相互作用部位ではないアミノ酸残基の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチに指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列とを含み得る。またこのようなポリペプチドは、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に受容体結合部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で（本明細書に規定のように）異なる相互作用部位に指向性を有する１つ又は複数のアミノ酸配列とを含み得る。このようなポリペプチドは、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３上で同じ相互作用部位（本明細書に規定のように、特に上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に関与する部位）に指向性を有する本発明のアミノ酸配列を２つ以上含むことも可能である。
例えば、このようなポリペプチドは、それぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３に指向性を有し、且つ上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節（特に阻害）することができる、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列（例えば１つ又は複数のナノボディ）、及び／又はそれぞれｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０又はＥＢＩ３に指向性を有するが、上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節することができない、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列（例えば１つ又は複数のナノボディ）を含み得る。
さらに、このような本発明のポリペプチドの例は本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインで生じる２つの異なるサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチドを提供する。特に、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインで（特にＩＬ−１２ファミリー由来のヘテロ二量体サイトカイン、例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５で）生じる２つの異なるサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチドを提供する。例えば、このようなアミノ酸配列又はポリペプチドは、（ａ）ｐ１９若しくはｐ１９様サブユニット、例えばｐ１９、ｐ３５若しくはｐ２８に、及びヘテロ二量体サイトカインで（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５で）生じる、少なくとも１つの他のサブユニットに、又は（ｂ）ｐ４０若しくはｐ４０様サブユニット、例えばｐ４０若しくはＥＢＩ−３に、及びヘテロ二量体サイトカインで（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５で）生じる、少なくとも１つの他のサブユニットに指向性を有し得る。
より具体的に、本発明は、（ｉ）少なくとも１つのｐ１９又はｐ１９様サブユニット、例えばｐ１９、ｐ３５又はｐ２８に、及び（ｉｉ）少なくとも１つのｐ４０又はｐ４０様サブユニット、例えばｐ４０又はＥＢＩ−３に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチドを提供する。
このような本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは例えば、ヘテロ二量体サイトカインで生じる２つのサブユニットの界面、例えばＩＬ−２３におけるｐ１９／ｐ４０界面、ＩＬ−１２におけるｐ３５／ｐ４０界面、ＩＬ−２７におけるｐ２８／ＥＢＩ３界面、又はＩＬ−３５におけるｐ３５／ＥＢＩ３界面に指向性を有する本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドでもあり得る。
特に好ましい態様において、このような本発明のポリペプチドは、少なくとも１つのｐ１９又はｐ１９様サブユニット（例えばｐ１９、ｐ３５又はｐ２８）に指向性を有する、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）と、少なくとも１つのｐ４０又はｐ４０様サブユニット（例えばｐ４０又はＥＢＩ−３）に指向性を有する、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）とを含む、（本明細書中でさらに記載されるような）本発明の「二重特異性」、特に「二重パラトピック」ポリペプチドであり得る。
例えば、本発明は以下のものを提供する：
ＩＬ−１２、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較してＩＬ−２３に選択的であることが期待される、ｐ１９及びｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ｐ１９に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ｐ４０に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）；
ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較してＩＬ−１２に選択的であることが期待される、ｐ３５及びｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ｐ３５に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ｐ４０に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）；
ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−２７と比較してＩＬ−３５に選択的であることが期待される、ｐ３５及びＥＢＩ３に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ｐ３５に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ＥＢＩ３に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）；
ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−３５と比較してＩＬ−２７に選択的であることが期待される、ｐ２８及びＥＢＩ３に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ｐ２８に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ＥＢＩ３に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）。
さらに、このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは全て、本明細書中でさらに記載されるようなものであってもよく、このような本発明のポリペプチドの幾つかの例は本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
例えば、そのようなポリペプチドは以下のものを含み得る：
ｐ１９又はｐ１９様サブユニット上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に関与する部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及びｐ４０又はｐ４０様サブユニット上で相互作用部位ではないアミノ酸残基の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチに指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列；
ｐ４０又はｐ４０様サブユニット上で相互作用部位（本明細書に規定のように、特に上記サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に関与する部位）に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及びｐ１９又はｐ１９様サブユニット上で相互作用部位ではないアミノ酸残基の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチに指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列；或いは
ｐ４０又はｐ４０様サブユニット上で（本明細書に規定のように）相互作用部位に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及びｐ１９又はｐ１９様サブユニット上で相互作用部位に指向性を有する１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列；
ｐ１９又はｐ１９様サブユニットに指向性を有し、且つ上記ｐ１９又はｐ１９様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節（特に阻害）することができる、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及び／又はｐ４０又はｐ４０様サブユニットに指向性を有するが、上記ｐ４０又はｐ４０様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節することができない、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列；
ｐ４０又はｐ４０様サブユニットに指向性を有し、且つ上記ｐ４０又はｐ４０様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節（特に阻害）することができる、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及び／又はｐ１９又はｐ１９様サブユニットに指向性を有するが、上記ｐ１９又はｐ１９様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節することができない、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列；
ｐ１９又はｐ１９様サブユニットに指向性を有し、且つ上記ｐ１９又はｐ１９様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節（特に阻害）することができる、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及びｐ４０又はｐ４０様サブユニットに指向性を有し、且つ上記ｐ４０又はｐ４０様サブユニットが存在するヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節（特に阻害）することができる、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列。
さらに、このようなアミノ酸配列及び／又はポリペプチドは全て、本明細書中でさらに記載されるようなものであってもよく、このような本発明のポリペプチドの幾つかの例は本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
したがって、具体的であるが非限定的な態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの２つ以上のサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。例えば、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位と、上記第１のサブユニットとは異なるヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位とを含む（本明細書中で記載のような）多重特異性タンパク質及びポリペプチドを含む。例えば、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位と、上記第１のサブユニットとは異なる、ヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位とを含む、そのような多重特異性タンパク質及びポリペプチドを含み、ここで上記第１及び第２のサブユニットは同じヘテロ二量体サイトカインの一部を成す（即ち、このような多重特異性タンパク質又はポリペプチドは、上記ヘテロ二量体サイトカイン上で２つの異なるエピトープと結合することができるという点から上記ヘテロ二量体サイトカインに対して「二重パラトピック」である。代替的に、これに限定されないが、本明細書中に記載のようなタンパク質又はポリペプチドは例えば、本明細書中で言及されるサブユニットの１つに対して二重パラトピックであり得る、即ち上記サブユニット上で第１のエピトープに対する少なくとも１つの結合単位と上記サブユニット上で第２のエピトープに対する少なくとも１つの結合単位とを含み得る）。このような多重特異性タンパク質及びポリペプチドの幾つかの非限定的な例は、ｐ３５及びｐ４０（これらの両方がＩＬ−１２に存在し、このためこのような多価タンパク質又はポリペプチドがＩＬ−１２に特異的であることが期待される）、ｐ１９及びｐ４０（両方ともＩＬ−２３に存在する）、又はｐ２８及びＥＢＩ３（両方ともＩＬ−２７に存在する）に指向性を有する多重特異性タンパク質及びポリペプチドである。
より包括的に、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位と、上記第１のサブユニットとは異なるヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニットに対する少なくとも１つの結合単位とを含むこのような多重特異性タンパク質及びポリペプチドを含み、ここで上記第１及び第２のサブユニットがｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０及び／又はＥＢＩ３、及び／又は上述のそれぞれの突然変異体、変異体、対立遺伝子若しくはホモログから選択される。例えば、このような多重特異性タンパク質及びポリペプチドは、ｐ１９、ｐ３５又はｐ２８等のｐ１９様サブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合単位と、ｐ４０又はＥＢＩ３等のｐ４０様サブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合単位とを含み得る（さらにより包括的には本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン又はそのサブユニット（例えばｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０及び／又はＥＢＩ３）に指向性を有する少なくとも１つの結合単位と、任意の他の（例えば非ヘテロ二量体サイトカイン）所望の標的、抗原決定基又はエピトープに指向性を有する少なくとも１つのさらなる結合単位とを含む、任意の多重特異性タンパク質及びポリペプチドに関することにも留意すべきである）。
また本明細書中で記載されるようなアミノ酸配列又はポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインを形成する２つのサブユニット間の界面（通常ｐ１９様サブユニットとｐ４０様サブユニットとの間の界面）に指向性を有し得ることは、当業者にとって明らかである。このため、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、上記２つのサブユニット間の界面に広がるように、ヘテロ二量体サイトカインを形成する両方のサブユニットと（同時に）結合することができることが多くなる。例えば、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２のｐ３５／ｐ４０界面、ＩＬ−２３のｐ１９／ｐ４０界面、又はＩＬ−２８のｐ２８／ＥＢＩ−３界面に指向性を有し得る。
このため、上記から、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドが、単一ヘテロ二量体サイトカイン（又はヘテロ二量体サイトカインの単一サブユニット）に指向性を有し得るが、複数のヘテロ二量体サイトカイン（又は同じヘテロ二量体サイトカイン若しくはさらには異なるヘテロ二量体サイトカインの一部を成す、これらの複数のサブユニット）にも指向性を有し得ることは、当業者にとって明らかである。
具体的であるが非限定的な一態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較して（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較して（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−３５と比較して（本明細書に規定のように）ＩＬ−２７に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−２７と比較して（本明細書に規定のように）ＩＬ−３５に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ３５又はｐ２８サブユニットと比較して（本明細書に規定のように）ｐ１９サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２３に（即ちＩＬ−１２、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較して）特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ３５又はｐ１９サブユニットと比較して（本明細書に規定のように）ｐ２８サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２７に（即ちＩＬ−１２、ＩＬ−２３及びＩＬ−３５と比較して）特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ２８又はｐ１９サブユニットと比較して（本明細書に規定のように）ｐ３５サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２及びＩＬ−３５に（即ちＩＬ−２３及びＩＬ−２７と比較して）特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＥＢＩ−３と比較して（本明細書に規定のように）ｐ４０サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３に（即ちＩＬ−２７及びＩＬ−３５と比較して）特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、ｐ４０サブユニットと比較して（本明細書に規定のように）ＥＢＩ−３サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２７及びＩＬ−３５に（即ちＩＬ−１２及びＩＬ−２３と比較して）特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、（他のサブユニットと比較して）ｐ１９及びｐ４０サブユニットの両方に特異的であり、特にｐ１９及びｐ４０サブユニットに指向性を有する（本明細書に規定のように、即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができる）が、サブユニットｐ３５、ｐ２８及び／又はＥＢＩ３のいずれかに指向性を有しない（即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができない）（又はさらにより具体的な態様によれば、ｐ１９以外のいずれのｐ１９様サブユニットにも指向性を有せず、且つｐ４０以外のいずれのｐ４０様サブユニットにも指向性を有しない）。このようなアミノ酸配列（これは例えば、本明細書中で記載のようにＩＬ−２３においてｐ１９／ｐ４０界面に広がり得る）又はポリペプチド（これは例えば、ｐ１９に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とｐ４０に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とを有する二重特異性ポリペプチドであり得る）は、ＩＬ−２７と比較してＩＬ−２３に特異的であることが期待され、且つＩＬ−１２と比較してＩＬ−２３とより高い結合活性（avidity：親和力）（好ましくはまた選択性）で結合することが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、（他のサブユニットと比較して）ｐ３５及びｐ４０サブユニットの両方に特異的であり、特にｐ３５及びｐ４０サブユニットに指向性を有する（本明細書に規定のように、即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができる）が、サブユニットｐ１９、ｐ２８及び／又はＥＢＩ３のいずれかに指向性を有しない（即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができない）（又はさらにより具体的な態様によれば、ｐ３５以外のいずれのｐ１９様サブユニットにも指向性を有せず、且つｐ４０以外のいずれのｐ４０様サブユニットにも指向性を有しない）。このようなアミノ酸配列（これは例えば、本明細書中で記載のようにＩＬ−１２においてｐ３５／ｐ４０界面に広がり得る）又はポリペプチド（これは例えば、ｐ３５に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とｐ４０に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とを有する二重特異性ポリペプチドであり得る）は、ＩＬ−２７と比較してＩＬ−１２に特異的であることが期待され、且つＩＬ−２３と比較してＩＬ−１２とより高い結合活性（好ましくはまた選択性）で結合することが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本明細書中に記載のアミノ酸配列及びポリペプチドは、（他のサブユニットと比較して）ｐ２８及びＥＢＩ−３サブユニットの両方に特異的であり、特にｐ２８サブユニット及びＥＢＩ−３に指向性を有する（本明細書に規定のように、即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができる）が、サブユニットｐ１９、ｐ３５及び／又はｐ４０のいずれかに指向性を有しない（即ちこれらのサブユニットと特異的に結合することができない）（又はさらにより具体的な態様によれば、ｐ２８以外のいずれのｐ１９様サブユニットにも指向性を有せず、且つＥＢＩ−３以外のいずれのｐ４０様サブユニットにも指向性を有しない）。このようなアミノ酸配列（これは例えば、本明細書中で記載のようにＩＬ−２７においてｐ２８／ＥＢＩ−３界面に広がり得る）又はポリペプチド（これは例えば、ｐ２８に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とＥＢＩ３に指向性を有する少なくとも１つの結合単位とを有する二重特異性ポリペプチドであり得る）は、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３と比較してＩＬ−２７に特異的であることが期待される。
本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体、特に本明細書中に記載のヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドも提供する。
より具体的には、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が細胞性（ＴＨ１）免疫に関連するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な一態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が１つ又は複数のｐ１９様サブユニットを含有する、及び／又は１つ又は複数のｐ４０様サブユニットを含有する、特に以下のサブユニット：ｐ１９、ｐ３５、ｐ２８、ｐ４０及び／又はＥＢＩ３、又は上述のそれぞれの突然変異体、変異体、対立遺伝子若しくはホモログを１つ又は複数含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が少なくともｐ１９サブユニットを含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が少なくともｐ３５サブユニットを含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が少なくともｐ２８サブユニットを含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が少なくともｐ４０サブユニットを含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドであって、上記受容体が少なくともＥＢＩ３を含有するヘテロ二量体サイトカインの受容体である、アミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、それぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５の受容体、好ましくはそれぞれＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５の高親和性受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２の受容体、好ましくはＩＬ−１２の高親和性受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３Ｒの（同族）受容体及び／又はＩＬ−２７の（同族）受容体と比較してＩＬ−１２の（同族）受容体に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２３の受容体、好ましくはＩＬ−２３の高親和性受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２７の（同族）受容体と比較してＩＬ−２３の（同族）受容体に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２７受容体、好ましくはＩＬ−２７の高親和性受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２の（同族）受容体及びＩＬ−２３の（同族）受容体と比較してＩＬ−２７の（同族）受容体に特異的である。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−３５の受容体、好ましくはＩＬ−３５の高親和性受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。
上記のアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５の受容体の少なくとも１つのサブユニット、好ましくはＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５の高親和性受容体のサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。このような本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは例えば、このような受容体のＩＬ−２３様サブユニット、このような受容体のｇｐ１３０様サブユニット、又はその両方（例えば本発明の二重特異性／二重パラトピックポリペプチドの場合）に指向性を有し得る。
好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２Ｒβ−２、ＩＬ−２３Ｒ及びＷＳＸ−１等のような受容体のＩＬ−２３様サブユニットに指向性を有する（ＩＬ−１２Ｒβ−１サブユニット等のｇｐ−１３０様サブユニット又はｇｐ１３０に対するアミノ酸配列及びポリペプチドは、本発明の範囲から排除されないが、余り好ましくはない）。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２の受容体の少なくとも１つのサブユニット、好ましくはＩＬ−１２の高親和性受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。好ましくは、上記アミノ酸配列及びポリペプチドはＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニットに指向性を有する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３Ｒサブユニット及びＷＳＸ−１サブユニットと比較してＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−２３の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２７の（同族）受容体と比較してＩＬ−１２の（同族）受容体に特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２３の受容体の少なくとも１つのサブユニット、好ましくはＩＬ−２３の高親和性受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。好ましくは、上記アミノ酸配列及びポリペプチドはＩＬ−２３Ｒサブユニットに指向性を有する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニット及びＷＳＸ−１サブユニットと比較してＩＬ−２３Ｒサブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２７の（同族）受容体と比較してＩＬ−２３の（同族）受容体に特異的であることが期待される。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ＩＬ−２７の受容体の少なくとも１つのサブユニット、好ましくはＩＬ−２７の高親和性受容体に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドを提供する。好ましくは、上記アミノ酸配列及びポリペプチドはＷＳＸ−１サブユニットに指向性を有する。より好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニット及びＩＬ−２３Ｒサブユニットと比較してＷＳＸ−１サブユニット及びＩＬ−２３Ｒサブユニットに特異的である。このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、ＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２３の（同族）受容体と比較してＩＬ−２７の（同族）受容体に特異的であることが期待される。
上記のアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
本発明は、ＩＬ−１２Ｒβ−１に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドも提供する。好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ｇｐ１３０と比較してＩＬ−１２Ｒβ−１に特異的である。
本発明は、ｇｐ１３０に指向性を有するアミノ酸配列及びポリペプチドも提供する。好ましくは、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒβ−１と比較してｇｐ１３０に特異的である。
これらのアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
具体的であるが非限定的な別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカインの受容体の第１のサブユニット、及び上記第１のサブユニットとは異なる、ヘテロ二量体サイトカインの受容体の第２のサブユニットに指向性を有する二重特異性ポリペプチドを提供する。
例えば、このような本発明の二重特異性ポリペプチドは、ｇｐ１３０様サブユニット（例えばｇｐ１３０若しくはＩＬ−１２β−１サブユニット、又はその変異体、突然変異体、対立遺伝子若しくはホモログ）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）と、ＩＬ−２３様サブユニット（例えばＩＬ−１２Ｒβ−２、ＩＬ−２３、又はＷＳＸ−１）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（例えばナノボディ）とを含み得る。好ましくは、このような二重特異性ポリペプチドは、その受容体の一部を成すｇｐ１３０様サブユニット及びＩＬ−２３様サブユニットに指向性を有するようなものである。このような二重特異性ポリペプチドは、例えばリガンド結合の効果を模倣することにより受容体の活性化及び／又は会合（又はより包括的に受容体媒介性シグナル伝達）を誘発、促進及び／又は向上させ、これにより受容体、そのリガンド及び／又は関連のヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達のアゴニストとして作用し得る（これに関して、別の態様で本発明は、受容体の二量体化又はオリゴマー化を誘導し、活性化をもたらすように、単一サイトカイン受容体鎖に指向性を有する、１つ又は複数、例えば２つ、３つ又は４つの本発明のアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドを包含することにも留意すべきである）。
代替的に、このような二重特異性ポリペプチドは例えば、リガンドと受容体との結合を遮断、阻害若しくは低減し得るか、又はリガンドの結合後の受容体の活性化及び／又は会合を遮断、阻害若しくは低減し得るか、及び／又はより包括的には受容体、そのリガンド及び／又は関連のヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達のアゴニストとして作用し得る。
例えば、本発明は以下のものを提供する：
ＩＬ−２３受容体及びＩＬ−２７受容体と比較してＩＬ−１２受容体に（好ましくは）選択的であることが期待される、ＩＬ１２β１及びＩＬ１２Ｒβ２に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ＩＬ１２Ｒβ１に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ＩＬ１２Ｒβ２に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）；
ＩＬ−１２受容体及びＩＬ−２７受容体と比較してＩＬ−２３受容体に(好ましくは）選択的であることが期待される、ＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ２３Ｒに指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ＩＬ１２Ｒβ１に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ＩＬ２３Ｒに指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）；
ＩＬ−１２受容体及びＩＬ−２３受容体と比較してＩＬ−２７受容体に（好ましくは）選択的であることが期待される、ＷＳＸ−１及びｇｐ１３０に指向性を有するアミノ酸配列、（特に）ポリペプチド（例えば、このような二重パラトピックポリペプチドは、ＷＳＸ−１に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ｇｐ１３０に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る）。
さらに、このようなアミノ酸配列及びポリペプチドは全て、本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
非限定的な本発明の別の態様において、本発明のポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ヘテロ二量体サイトカインの受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含む二重特異性ポリペプチドであり得る。特に、本発明のこの態様では、本発明のポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に指向性を有する少なくとも本発明のアミノ酸配列と、上記ヘテロ二量体サイトカインの受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に、即ち上記ヘテロ二量体サイトカインの同族受容体に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含み得る。
このような二重特異性ポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン、これらの受容体及びヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達のアゴニストとして、即ちヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を推進又は促進することにより、及び／又はヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合の際にリガンド／受容体複合体を安定化することにより作用し得ることが期待される。このためには、このような二重特異性ポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインと受容体との結合を中和しないアミノ酸配列を含むのが好ましい。
また構築物を形成するために選択されるアミノ酸配列に応じて、このような二重特異性ポリペプチドは、アンタゴニストとして作用する、即ち受容体を活性化することなく、サイトカインと受容体とを連結させる（その後受容体が占有されると共に不活性化するので、ドミナントネガティブ調節因子として作用する）ように設計され得ることが期待される。
本明細書中で記載のような二重特異性ポリペプチドは、出願日が本願と同じ２００７年１２月４日である「Immunoglobulin constructs」と題された出願人の同時係属出願に記載のように、Ｆｃ部分と連結することもできる。
また、ヘテロ二量体サイトカイン、及び上記ヘテロ二量体サイトカインの同族受容体ではない受容体に指向性を有する二重特異性ポリペプチドは、二重特異性ポリペプチドが指向性を有するサイトカインにより、（特に）二重特異性ポリペプチドが指向性を有する受容体により媒介されるシグナル伝達を調節するのにも使用され得る。例えば、本発明の二重特異性抗ＩＬ１２ｐ３５及び抗ＩＬ２３Ｒポリペプチドは、ＩＬ１２とＩＬ２３受容体とを連結させると共にＩＬ２３シグナルを誘発することができる。
例えば、上記の二重特異性ポリペプチドは以下のものを含み得る：
ＩＬ−１２（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはｐ３５サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、及びＩＬ−１２の受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはＩＬ−１２Ｒβ−２サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、
ＩＬ−２３（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはｐ１９サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、及びＩＬ−２３の受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはＩＬ−２３サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、又は
ＩＬ−２７（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはｐ２８サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、及びＩＬ−２７の受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット、好ましくはＷＳＸ−１サブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列。
さらにこのようなアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドがヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する場合、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、幾つかの異なる方法で（本明細書中で規定のような）ヘテロ二量体サイトカイン媒介性シグナル伝達を（本明細書に規定のように）調節することができる。例えば、本発明はその最も広範な意味において任意の特定の説明、仮説又は機構に限定されないが、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン（又は少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する際には、このようなアミノ酸配列又はポリペプチドが、
上記ヘテロ二量体サイトカインとその受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）との結合を（一部又は完全に）抑制、低減又は阻害する；
ヘテロ二量体サイトカイン（例えばそのサブユニット）の会合（即ちヘテロ二量体化）を抑制、低減又は阻害する；
ヘテロ二量体サイトカインを不安定化する、又はそうでなければ特にその受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する能力若しくはその受容体と結合する際に受容体媒介性シグナル伝達を誘発する能力を完全に若しくは一部低減するように、ヘテロ二量体サイトカインの立体配置に影響を与えるか、又はヘテロ二量体サイトカインがその立体配置を変える能力を抑制若しくは低減する；
さらにヘテロ二量体サイトカインをその受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）と結合させるが、このような結合の際、受容体の活性化及び／又は二量体化を（一部又は完全に）抑制、低減又は阻害する（即ちここでは例えばＩＬ−２３受容体の場合と同様に、受容体はリガンド結合に関連する、Parham et al.（同上）を参照されたい）；又は
そうでなければ、ヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に起因するシグナル伝達を抑制、低減又は阻害するようなものであり得る。
このため、非限定的な一態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカインと結合する際、上記ヘテロ二量体サイトカインとその受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットとの結合を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
非限定的な別の態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカインと結合する際、ヘテロ二量体サイトカインとその受容体（又は少なくとも１つの受容体のサブユニット）との結合の後、その受容体の活性化及び／又は会合を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でヘテロ二量体サイトカインにより媒介される受容体の会合と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
非限定的な別の態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカインと結合する際、受容体のヘテロ二量体サイトカイン媒介性の会合により誘発される受容体のシグナル伝達を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下で受容体のヘテロ二量体サイトカイン媒介性の会合後のシグナル伝達と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
概して、好ましい態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカインと結合する際、上記ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はその受容体に関連する（本明細書中に規定のような）ヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でヘテロ二量体サイトカインにより媒介されるヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
さらにこのようなアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書中に記載のｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）又はポリペプチド（例えばｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及び／又はＩＬ−２３配列を少なくとも１つ含む、本明細書中に記載の多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの構築物）がヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する場合、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、幾つかの異なる方法で（本明細書中で規定のような）ヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を（本明細書に規定のように）調節することができる。例えば、本発明はその最も広範な意味において任意の特定の説明、仮説又は機構に限定されないが、本発明は、受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する際には、このようなアミノ酸配列又はポリペプチドが、
リガンド（即ち受容体のリガンドであるヘテロ二量体サイトカイン）とその受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）との結合を（一部又は完全に）抑制、低減又は阻害する；
さらにリガンドを受容体と結合させるが、通常リガンドと受容体との結合（例えば、これに限定されないが、受容体の立体配置に影響を与えるか、又は受容体がその立体配置を変える能力を低減すること）により誘発されるであろうシグナル伝達を抑制、低減又は阻害する；
（例えばそのサブユニットの）受容体の活性化及び／又は会合（例えば二量体化）、特にリガンド（即ち受容体のリガンドであるヘテロ二量体サイトカインのリガンド）とその受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）との結合により誘発される受容体の会合を抑制、低減又は阻害する（例えばＩＬ−２３受容体の場合と同様に、Parham et al.（同上）を参照されたい）；
さらに受容体を、リガンドを媒介して会合（例えば二量体化）させるが、通常このような会合（例えば、これに限定されないが、関連する受容体の立体配置に影響を与えるか、又は関連する受容体がその立体配置を変える能力を低減すること）により誘発されるであろうシグナル伝達を抑制、低減又は阻害する；又は
そうでなければ、ヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合、又は受容体のリガンド媒介性の会合に起因するシグナル伝達を抑制、低減又は阻害するようなものであり得る。
このため、非限定的な一態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、受容体（例えば少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する際、そのリガンドと上記受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットとの結合を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でそのリガンドと上記受容体との結合と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
非限定的な一態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、受容体（例えば少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する際、リガンドを受容体と結合させるが、リガンドと受容体又は少なくとも１つのそのサブユニットとの結合により誘発される（又は通常誘発されるであろう）シグナル伝達を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でリガンドを上記受容体と結合する際のシグナル伝達と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
非限定的な別の態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）と結合する際、受容体の活性化及び／又は会合、特に受容体のリガンド媒介性の会合を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下で受容体のリガンド媒介性の会合と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
非限定的な別の態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、受容体と結合する際、受容体のリガンド媒介性の会合により誘発されるシグナル伝達を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でリガンドと受容体との結合後のシグナル伝達と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
概して、好ましい態様によれば、ヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する（本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る）本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドは、受容体と結合する際、上記受容体及び／又はそのリガンドに関連する（本明細書中に規定のような）ヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を（即ちアミノ酸配列又はポリペプチドの非存在下でヘテロ二量体サイトカインにより媒介されるシグナル伝達と比較して、本明細書中で言及される、及び／又は実験部で用いられる一アッセイのような好適なアッセイにより求められるように、少なくとも１％、例えば少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、及び最大で９０％以上）抑制、低減又は阻害するようなものである。
さらにこのようなアミノ酸配列及びポリペプチドは全て本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。
上記の本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドが概して、ヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達（これは概して本明細書中では、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はヘテロ二量体サイトカインの受容体に関連するシグナル伝達、特にヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合に起因するシグナル伝達、並びにこのようなシグナル伝達により誘発される生物学的機構及び効果を意味する）のアンタゴニストとして作用することは、当業者にとって明らかである。
しかしながら、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達のアゴニストとして作用する本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドにも関する。例えば、このようなアゴニストは、受容体媒介性のシグナル伝達を誘発するように、ヘテロ二量体サイトカインの受容体（例えばＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７又はＩＬ−３５の受容体）又は少なくとも１つのそのサブユニットと結合することができる、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドであり得る。ヘテロ二量体サイトカイン（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、上記ヘテロ二量体サイトカインの受容体（又は少なくとも１つのそのサブユニット）に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列とを含む、上記の二重特異性ポリペプチドの幾つかが、本明細書中でさらに記載されるようにヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達のアゴニストとして作用し得ることも期待される。このためには、このような二重特異性ポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインと受容体との結合を中和しないアミノ酸配列を含むのが好ましい。
本明細書で想定される使用に好適である限り、本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドの部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子及び／又は誘導体を使用すること、及び／又はこのような部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子及び／又は誘導体を１つ又は複数含むか、又は本質的にこれから成るタンパク質又はポリペプチドを使用することも本発明の範囲内である。このような部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子及び／又は誘導体は通常、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に機能的な抗原結合部位（の少なくとも一部）を含有し、より好ましくはヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と特異的に結合することができ、さらにより好ましくは本明細書に規定のように（さらに本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる。このような部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子、誘導体、タンパク質及び／又はポリペプチドの幾つかの非限定的な例は、本明細書のさらなる記載から明らかになる。また本発明のさらなる断片又はポリペプチドは、本明細書に記載の１つ又は複数の（より小さい）部分又は断片を好適に組み合わせることによって（即ち連結又は遺伝子融合によって）提供され得る。
本明細書でさらに記載される、本発明の具体的であるが非限定的な一態様において、このような類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子、誘導体は、これら由来のアミノ酸配列に比べて（本明細書にさらに記載されるように）増大した血清半減期を有する。例えば、本発明のアミノ酸配列は、本発明のアミノ酸配列の誘導体の半減期が増大するように、半減期を延長する１つ又は複数の基又は部分（例えばＰＥＧ）と（化学的に又は別の方法で）連結し得る。具体的ではあるが非限定的な一態様では、本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）は、免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列であり得るか、又は好適な条件（例えば生理的条件）下で（即ちフォールディングによって）免疫グロブリンフォールドを形成することができるアミノ酸配列であり得る。特にHalaby et al., J. （1999） Protein Eng. 12, 563-71による概説を参照する。好ましくは、免疫グロブリンフォールドを形成するように適切にフォールディングする場合、このようなアミノ酸配列は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と（本明細書に規定のように）特異的に結合することができ、より好ましくは本明細書に規定のように（さらに本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる。また、このようなアミノ酸配列の部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子及び／又は誘導体は、免疫グロブリンフォールドを含むか、又は好適な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成することができるようなものであるのが好ましい。
具体的であるが、非限定的に、本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片（したがって通常、本明細書でさらに記載されるように、ＣＤＲの少なくとも１つを形成するアミノ酸残基の少なくとも幾つかを含有する）であり得る。
本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）は、具体的に免疫グロブリン配列又はその好適な断片、より具体的には免疫グロブリン可変ドメイン配列又はその好適な断片（例えば軽鎖可変ドメイン配列（例えばＶＬ配列）若しくはその好適な断片、又は重鎖可変ドメイン配列（例えばＶＨ配列）若しくはその好適な断片）であり得る。本発明のアミノ酸配列が重鎖可変ドメイン配列である場合、従来の４鎖抗体由来の重鎖可変ドメイン配列（例えば、これに限定されないが、ヒト抗体由来のＶＨ配列）又はいわゆる（本明細書に規定の）「重鎖抗体」由来のいわゆる（本明細書に規定の）ＶＨＨ配列であり得る。
しかし本発明が、本発明のアミノ酸配列（又はこれを発現するのに使用される本発明のヌクレオチド配列）の起源に関しても、また本発明のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を生成又は入手する（又は生成若しくは入手している）方法に関しても限定されないことに留意すべきである。したがって本発明のアミノ酸配列は、（任意の好適な種由来の）天然アミノ酸配列、又は合成若しくは半合成のアミノ酸配列であり得る。本発明の具体的ではあるが非限定的な態様では、アミノ酸配列は（任意の好適な種由来の）天然免疫グロブリン配列、又は合成若しくは半合成の免疫グロブリン配列であり、これにはこれらに限定されないが、（本明細書に規定の）「ヒト化」免疫グロブリン配列（例えば部分又は完全ヒト化マウス又はウサギ免疫グロブリン配列、特に部分又は完全ヒト化ＶＨＨ配列又はナノボディ）、（本明細書に規定の）「ラクダ化（camelized）」免疫グロブリン配列、並びに親和性成熟（例えば、合成、ランダム又は天然免疫グロブリン配列から開始する）、ＣＤＲグラフト化、ベニヤリング（veneering）、異なる免疫グロブリン配列由来の断片の結合（combining）、重複プライマーを使用したＰＣＲアセンブリ、及び当業者に既知の免疫グロブリン配列を遺伝子操作する（engineering）同様の技法、又は上記のいずれかの任意の好適な組合せ等の技法によって得られる免疫グロブリン配列が含まれる。例えば標準的なハンドブック、並びに本明細書に言及されるさらなる記載及び従来技術を参照する。
同様に、本発明のヌクレオチド配列は、天然ヌクレオチド配列、又は合成若しくは半合成の配列であってもよく、例えばＰＣＲによって好適な天然鋳型から単離される配列（例えば細胞から単離されるＤＮＡ又はＲＮＡ）、ライブラリ（特に発現ライブラリ）から単離されたヌクレオチド配列、（それ自体が既知の任意の好適な技法（例えばミスマッチＰＣＲ）を使用して）天然ヌクレオチド配列に突然変異を導入することによって調製されたヌクレオチド配列、重複プライマーを使用してＰＣＲによって調製されたヌクレオチド配列、又はそれ自体が既知のＤＮＡ合成のための技法を使用して調製されたヌクレオチド配列であり得る。
本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）は特に、ドメイン抗体（又はドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一ドメイン抗体（又は単一ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（又はｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（本明細書に規定のように、ＶＨＨ配列を含むが、これに限定されない）、他の単一可変ドメイン、又はこれらのいずれか１つの任意の好適な断片であり得る。（単一）ドメイン抗体の概説に関しては、上記で言及された従来技術、及び欧州特許第０３６８６８４号明細書も参照する。用語「ｄＡｂ」に関しては、例えばWard et al.（Nature 1989 Oct 12;341 （6242）: 544-6）、Holt et al.（Trends Biotechnol., 2003, 21（11）:484-490）、例えば国際公開第０６／０３０２２０号パンフレット、国際公開第０６／００３３８８号パンフレット、及びDomantis Ltd.の他の公開特許出願を参照する。哺乳動物起源ではないため、本発明に関してあまり好ましくはないが、単一ドメイン抗体又は単一可変ドメインは、或る特定種のサメ由来である可能性があることにも留意すべきである（例えばいわゆる「ＩｇＮＡＲドメイン」、例えば国際公開第０５／１８６２９号パンフレットを参照されたい）。
特に本発明のアミノ酸配列は、（本明細書で規定の）ナノボディ（商標）又はその好適な断片（備考：ナノボディ（商標）、ナノボディ（商標）及びナノクローン（商標）は、Ablynx N. V.の登録商標である）。ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するこのようなナノボディは、「本発明のナノボディ」とも称される。
ナノボディの概説に関しては、以下のさらなる記載、及び本明細書で言及される従来技術を参照する。しかしこれに関して、本明細書及び従来技術は主に、いわゆる「ＶＨ３群」のナノボディ（即ちＤＰ−４７、ＤＰ−５１又はＤＰ−２９等のＶＨ３群のヒト生殖細胞系列の配列との高度な配列相同性を有するナノボディ）を説明し、このナノボディは本発明の好ましい態様を形成することに留意すべきである。しかし概して、本発明は最も広い意味で、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する任意種のナノボディを包含し、例えば２００６年４月１４日付けてAblynx N. V. により出願された「ＤＰ−７８様ナノボディ（DP-78-likeNanobodies）」と題する米国仮特許出願６０／７９２,２７９号明細書（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００３２５９号明細書及び国際公開第０７／１１８６７０号パンフレットも参照されたい）に記載されるように、例えばいわゆる「ＶＨ４群」に属するナノボディ（即ちＤＰ−７８等のＶＨ４群のヒト生殖細胞系列の配列との高度な配列相同性を有するナノボディ）も包含することに留意すべきである。
概して、ナノボディ（特にＶＨＨ配列及び部分ヒト化ナノボディ）は特に、（また本明細書にさらに記載される）１つ又は複数のフレームワーク配列において（本明細書に記載される）１つ又は複数の「特徴的な（Hallmark：ホールマーク）残基」の存在を特徴とし得る。
したがって概して、ナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を表し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を表し、１つ又は複数の特徴的な残基は本明細書にさらに規定されるようなものである）を有するアミノ酸配列として定義することができる。
特にナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を表し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を表し、フレームワーク配列は本明細書にさらに規定されるようなものである）を有するアミノ酸配列であり得る。
より具体的に、ナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有するアミノ酸配列であり得る；ここで
ｉ）好ましくは、カバットナンバリング（Kabat numbering）による１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位のアミノ酸残基の１つ又は複数は、以下の表Ａ−４で言及した特徴的な残基から選択され、
ｉｉ）上記アミノ酸配列は、配列番号１〜配列番号２２のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有し、ここでアミノ酸同一性の程度を決定するためにＣＤＲ配列を形成するアミノ酸残基（配列番号１〜配列番号２２の配列においてＸで示す）は無視する。
これらのナノボディにおいて、ＣＤＲ配列は概して、本明細書中にさらに規定されるようなものである。
したがって、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と（本明細書に規定のように）結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するこのようなナノボディ、この好適な断片、及びこのようなナノボディ及び／又は好適な断片を１つ又は複数含むか、又は本質的にこれらから成るポリペプチドにも関する。
好適なフレームワーク配列の幾つかの（他の）例は以下の通りである：
フレームワーク１に関しては、ＦＲ１配列群１；ＦＲ１配列群８；ＦＲ１配列群１５；ＦＲ１配列群２２；ＦＲ１配列群２９；ＦＲ１配列群３６；ＦＲ１配列群４３；ＦＲ１配列群５０及び／又はＦＲ１配列群５７のフレームワーク１配列（以下の表Ａ−１を参照されたい）、又は（本明細書に規定のように）上記フレームワークＩ配列の１つ又は複数との多くとも５つ、例えば４つ、３つ、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列（この場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＶを（本明細書に規定のように）適用してもよい）；
フレームワーク２に関しては、ＦＲ２配列群３；ＦＲ２配列群１０；ＦＲ２配列群１７；ＦＲ２配列群２４；ＦＲ２配列群３１；ＦＲ２配列群３８；ＦＲ２配列群４５；ＦＲ２配列群５２及び／又はＦＲ２配列群５９のフレームワーク２配列（以下の表Ａ−１を参照されたい）、又は（本明細書に規定のように）上記フレームワークＩ配列の１つ又は複数との多くとも５つ、例えば４つ、３つ、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列（この場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＶを（本明細書に規定のように）適用してもよい）；
フレームワーク３に関しては、ＦＲ３配列群５；ＦＲ３配列群１２；ＦＲ３配列群１９；ＦＲ３配列群２６；ＦＲ３配列群３３；ＦＲ３配列群４０；ＦＲ３配列群４７；ＦＲ３配列群５４及び／又はＦＲ３配列群６１のフレームワーク３配列（以下の表Ａ−１を参照されたい）、又は（本明細書に規定のように）上記フレームワークＩ配列の１つ又は複数との多くとも５つ、例えば４つ、３つ、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列（この場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＶを（本明細書に規定のように）適用してもよい）；
フレームワーク４に関しては、ＦＲ４配列群７；ＦＲ４配列群１４；ＦＲ４配列群２１；ＦＲ４配列群２８；ＦＲ４配列群３５；ＦＲ４配列群４２；ＦＲ４配列群４９；ＦＲ４配列群５６及び／又はＦＲ４配列群６３のフレームワーク４配列（以下の表Ａ−１を参照されたい）、又は（本明細書に規定のように）上記フレームワークＩ配列の１つ又は複数との多くとも５つ、例えば４つ、３つ、２つ若しくは１つだけのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列（この場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＶを（本明細書に規定のように）適用してもよい）。
本明細書中のさらなる説明において、或る特定の群のアミノ酸配列（即ちフレームワーク配列及びＣＤＲ配列）に対する言及が為される。これらの群のアミノ酸配列（合計６３個）が以下の表Ａ−１で規定される：
また、本明細書中の説明において、完全な単一抗原結合ドメインを形成する、或る特定の群のアミノ酸配列（特にここではナノボディ配列）に対する言及が為される。これらの群の配列は以下の表Ａ−２で規定される：
特に、幾つかの特定の態様において本発明は以下のものを提供する：
（本明細書に規定のように）ｐ１９に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（これらのアミノ酸配列は、ＩＬ−２３とその受容体との結合を中和するようなものが好ましい）；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列の少なくとも１つとｐ１９との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はｐ１９との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ｐ１９に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９−配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（これらのアミノ酸配列は、ＩＬ−２３とその受容体との結合を本質的に遮断又は中和しないようなものが好ましい）；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９−配列の少なくとも１つとｐ１９との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はｐ１９との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９−配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ｐ４０に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０＋配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（これらのアミノ酸配列は、ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−１２とその受容体との結合を中和するようなものが好ましい）；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０＋配列の少なくとも１つとｐ４０との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はｐ４０との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０＋配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ｐ４０に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０−配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列（これらのアミノ酸配列は、ＩＬ−２３又はＩＬ−１２とその受容体との結合を本質的に遮断又は中和しないようなものが好ましい）；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０−配列の少なくとも１つとｐ４０との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はｐ４０との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ４０−配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ｐ３５に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列の少なくとも１つとｐ３５との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はｐ３５との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つとＩＬ−１２との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−１２との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ３５配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つとＩＬ−２３との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−２３との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列及び／又はｐ４０−配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−２７に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２７配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２７配列の少なくとも１つとＩＬ−２７との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−２７との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２７配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒｂ１に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つとＩＬ−１２Ｒｂ１との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ１との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２３の（同族）受容体に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つとＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２３の（同族）受容体との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２３の（同族）受容体との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ１配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒｂ２に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つとＩＬ−１２Ｒｂ２との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ２との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２の（同族）受容体に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つとＩＬ−１２の（同族）受容体との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−１２の（同族）受容体との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−１２Ｒｂ２配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３Ｒに指向性を有し、且つ表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つとＩＬ−２３Ｒとの結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−２３Ｒとの結合に関して、表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列；
（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３の（同族）受容体に指向性を有し、且つ上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つと、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば９０％、又は９５％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列；
上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つとＩＬ−２３の（同族）受容体との結合を（本明細書に規定のように）交差遮断し、及び／又はＩＬ−２３の（同族）受容体との結合に関して、上記の表Ａ−２で挙げられたＩＬ−２３Ｒ配列の少なくとも１つと競合するアミノ酸配列
（これらのアミノ酸配列は本明細書中でさらに記載されているようなものであり得る（例えばナノボディであり得る））；並びにこのようなアミノ酸配列を１つ又は複数含む本発明のポリペプチド（これは本明細書中でさらに記載されているようなものであり、例えば本明細書中に記載されるような二重特異性及び／又は二重パラトピックのポリペプチドであり得る）、並びにこのようなアミノ酸配列及びポリペプチドをコードする核酸配列。
したがって、幾つかの特に好ましい本発明のナノボディは、（本明細書にさらに規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するナノボディであり、
ｉ）配列番号１８９０〜配列番号２１４１、配列番号２４８５〜２５２９、及び／又は配列番号２５５９〜２６１４のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有し、ここでアミノ酸同一性の程度を決定するためにＣＤＲ配列を形成するアミノ酸残基は無視する（またこれに関して、表Ａ−１を参照し、フレームワーク１配列、フレームワーク２配列、フレームワーク３配列及びフレームワーク４配列の様々な群を列挙する）（フレームワーク１配列の１位〜４位及び２７位〜３０位のアミノ酸残基に関しては、以下で為されるコメントも参照する。したがって、アミノ酸同一性の程度を決定するためにこれらのアミノ酸残基は無視するのが好ましい）、
ｉｉ）好ましくはカバットナンバリングによる１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位のアミノ酸残基の１つ又は複数が、以下の表Ａ−４で言及される特徴的な残基から選択される。
これらのナノボディにおいて、概してＣＤＲ配列は、本明細書にさらに規定されるようなものである。
またこのようなナノボディは、任意で好適な方法で任意の好適な供給源から誘導されてもよく、例えば（即ち好適な種のラクダ科動物由来の）天然ＶＨＨ配列、又は合成若しくは半合成のアミノ酸配列であってもよく、これにはこれらに限定されないが、（本明細書に規定の）「ヒト化」ナノボディ、（本明細書に規定の）「ラクダ化」免疫グロブリン配列（特にラクダ化重鎖可変ドメイン配列）、並びに本明細書にさらに記載されるように、親和性成熟（例えば、合成、ランダム又は天然免疫グロブリン配列から開始する）、ＣＤＲグラフト化、ベニヤリング、異なる免疫グロブリン配列由来の断片の結合、重複プライマーを使用したＰＣＲアセンブリ、及び当業者に既知の免疫グロブリン配列を遺伝子操作する同様の技法、又は上記のいずれかの任意の好適な組合せ等の技法によって得られるナノボディが含まれる。また、ナノボディがＶＨＨ配列を含む場合、上ナノボディは、１つ又は複数の本発明のさらなる（部分又は完全）ヒト化ナノボディを提供するように、本明細書でさらに記載されるように好適にヒト化され得る。同様に、ナノボディが合成又は半合成の配列（例えば部分ヒト化配列）を含む場合、上ナノボディは、ここでもまた１つ又は複数の本発明のさらなる（部分又は完全）ヒト化ナノボディを提供するように、ここでもまた本明細書で記載されるように任意でさらに好適にヒト化され得る。
特にヒト化ナノボディは、概してこれまでの段落でナノボディに関して規定されたようなアミノ酸配列であり得るが、この中に（本明細書に規定の）ヒト化置換である、及び／又はヒト化置換に対応する少なくとも１つのアミノ酸残基が（特にフレームワーク残基の少なくとも１つに）存在する。本明細書中の開示に基づいて、当業者にとって、幾つかの好ましいが非限定的なヒト化置換（及びその好適な組合せ）は明らかになる。付加的に又は代替的に、天然ＶＨＨ配列のフレームワーク領域の配列を、１つ又は複数の密接に関連したヒトＶＨ配列の対応するフレームワーク配列と比較することによって、他の潜在的に有用なヒト化置換を確認することができ、その後このようにして決定した潜在的に有用なヒト化置換（又はその組合せ）の１つ又は複数を上記ＶＨＨ配列に（それ自体が既知の任意の方法で、本明細書にさらに記載のように）導入することができ、得られたヒト化ＶＨＨ配列を、標的に対する親和性、安定性、発現の容易さ及びレベル、及び／又は他の所望の特性に関して試験することができる。このように、限定された度合の試行錯誤によって、本明細書中の開示に基づき、当業者によって、他の好適なヒト化置換（又はその好適な組合せ）を決定することができる。また上記に基づいて、ナノボディ（のフレームワーク領域）を部分ヒト化又は完全ヒト化してもよい。
幾つかの特に好ましい本発明のヒト化ナノボディは、配列番号１８９０〜配列番号２１４１、配列番号２４８５〜配列番号２４９０及び／又は配列番号２５０２〜配列番号２５２９のナノボディのヒト化変異体であり、これは例えばｐ１９に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば、ｐ１９＋配列又はｐ１９−配列であるナノボディのヒト化変異体、例えば図２０及び図２１にそれぞれ示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、ｐ４０に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えばｐ４０−配列又はｐ４０＋配列であるナノボディのヒト化変異体、例えば図２２及び図２３にそれぞれ示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、ｐ３５に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば図２４に示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、ＩＬ−２７に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば図２６に示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、ＩＬ−１２Ｒｂ１に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば図２７に示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、ＩＬ−１２Ｒｂ２に指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば図２８に示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）、又はＩＬ−２３Ｒに指向性を有するナノボディのヒト化変異体（例えば図２９に示されるナノボディのうちの１つのヒト化変異体）であり得る。このようなヒト化ナノボディの例は、配列番号２５５９〜配列番号２６１４で与えられ（図３１も参照されたい）、当業者は、任意で幾らか限定された試行錯誤の後に、本明細書中の開示に基づき他の好適なヒト化変異体を見出すことができる。
したがって、幾つかの他の好ましい本発明のナノボディは、（本明細書にさらに規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができるナノボディであり、
ｉ）配列番号１８９０〜配列番号２１４１、配列番号２４８５〜２４９０、及び／又は配列番号２５０２〜２５２９のアミノ酸配列の１つのヒト化変異体であり、及び／又は
ｉｉ）配列番号１８９０〜配列番号２１４１、配列番号２４８５〜２４９０、及び／又は配列番号２５０２〜２５２９のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有し、ここでアミノ酸同一性の程度を決定するためにＣＤＲ配列を形成するアミノ酸残基は無視する、且つ
ｉ）好ましくはカバットナンバリングによる１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位のアミノ酸残基の１つ又は複数が、以下の表Ａ−４で言及される特徴的な残基から選択される。
本発明の別の態様は、マウス由来のｐ１９に指向性を有するナノボディに関する。このようなナノボディの幾つかの非限定的な例は、配列番号２４９１〜２５０１に示されている。
本発明の別の特定の態様によれば、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体（即ち、さらに本明細書に記載されるｐ１９、ｐ４０、ｐ３５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＩＬ−１２Ｒｂ１、ＩＬ−１２Ｒｂ２、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−１２の同族受容体又はＩＬ−２３の同族受容体の各々）との結合に特に適する多くのアミノ酸残基のストレッチ（即ち低分子ペプチド）を提供する。これらのアミノ酸残基のストレッチは、特に本発明のアミノ酸配列の抗原結合部位の（一部）を形成するように、本発明のアミノ酸配列に存在し得る、及び／又は組み込まれ得る。初めに、これらのアミノ酸残基のストレッチを重鎖抗体のＣＤＲ配列、又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するＶＨＨ配列として生成した（又は本明細書でさらに記載されるように、このようなＣＤＲ配列に基づき得る、及び／又はこれに由来し得る）ので、これらのアミノ酸残基のストレッチは概して、本明細書で「ＣＤＲ配列」（即ちそれぞれＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列）とも称される。しかし、本発明が最も広い意味で、これらのアミノ酸残基のストレッチによる本発明のアミノ酸配列とヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合が可能である限り、これらのアミノ酸残基のストレッチが本発明のアミノ酸配列中に有し得る特定の構造的役割又は機能に限定されないことに留意すべきである。したがって概して、本発明は最も広い意味で、全アミノ酸配列が、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる結合ドメイン及び／又は結合単位を形成するように、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができ、本明細書に記載の１つ又は複数のＣＤＲ配列、特に２つ以上のこのようなＣＤＲ配列の好適な組合せを含み、１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列を介して互いに好適に連結する、任意のアミノ酸配列を含む。しかし、本発明のアミノ酸配列における１つだけのこのようなＣＤＲ配列の存在は、それ自体で既にヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる本発明のアミノ酸配列を提供するのに十分であり得ることにも留意すべきである。例えばここでもまた、国際公開第０３／０５０５３１号パンフレットに記載される、いわゆる「促進断片（Expedite fragments）」を参照する。
したがって別の具体的ではあるが非限定的な態様において、本発明のアミノ酸配列は、本明細書に記載のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列又はこれらの任意の好適な組合せから成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列であり得る。特に好適な組み合わせは本明細書中の開示に基づいて、当業者に明らかになる。特に、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも１つの抗原結合部位（上記抗原結合部位は、本明細書に記載のＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列又はこれらの任意の好適な組合せから成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む）を含むアミノ酸配列であり得る。
概して本発明のこの態様において、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸残基のストレッチ（該アミノ酸残基のストレッチは、本明細書に記載のＣＤＲ配列の少なくとも１つの配列に対応するアミノ酸配列を有する）を含む任意のアミノ酸配列であり得る。このようなアミノ酸配列は、免疫グロブリンフォールドを含んでも、又は含んでいなくてもよい。例えば、これに限定されないが、このようなアミノ酸配列は、少なくとも１つのこのようなＣＤＲ配列を含むが、（完全）免疫グロブリンフォールドを形成するのに十分な大きさではない好適な免疫グロブリン配列の断片であり得る（例えばここでもまた、国際公開第０３／０５０５３１号パンフレットに記載される、「促進断片」を参照する）。代替的に、このようなアミノ酸配列は、このようなＣＤＲ配列に対応する（即ちその抗原結合部位の一部として）少なくとも１つのアミノ酸残基のストレッチを含む、好適な「タンパク質足場」であり得る。アミノ酸配列を提示するのに好適な足場が当業者にとって明らかであり、例えばこれらに限定されないが、（即ち本明細書に既に記載の免疫グロブリン配列以外の）免疫グロブリンに基づく若しくはこれに由来する結合足場、プロテインＡドメイン由来のタンパク質足場（例えばアフィボディ（Affibodies）（商標））、テンダミスタット、フィブロネクチン、リポカリン、ＣＴＬＡ−４、Ｔ細胞受容体、設計アンキリン反復、アビマー（avimers）及びＰＤＺドメイン（Binz et al., Nat.Biotech 2005, Vol 23:1257）、並びにＤＮＡ又はＲＮＡに基づく結合部分（ＤＮＡアプタマー又はＲＮＡアプタマーを含むが、これに限定されない）（Ulrich et al., Comb Chem High ThroughputScreen 2006 9（8）: 619-32）が含まれる。
また、これらのＣＤＲ配列を１つ又は複数含む、任意の本発明のアミノ酸配列は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と（本明細書に規定のように）特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（さらに本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができるようなものであるのが好ましい。
特に、本発明のアミノ酸配列は、ｐ１９に指向性を有するアミノ酸配列（これは「ｐ１９＋配列」又は「ｐ１９−配列」であってもよく、両方とも本明細書中で規定される）；ｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列（これは「ｐ４０＋配列」又は「ｐ４０−配列」であってもよく、両方とも本明細書中で規定される）；ｐ３５に指向性を有するアミノ酸配列；ＩＬ−２３に指向性を有するアミノ酸配列（これはｐ１９又はｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列であり得る）；ＩＬ−１２に指向性を有するアミノ酸配列（これはｐ３５又はｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列であり得る）；ＩＬ−２３に指向性を有するアミノ酸配列（これはｐ１９又はｐ４０に指向性を有するアミノ酸配列であり得る）；ＩＬ−２７に指向性を有するアミノ酸配列；ＩＬ−１２Ｒｂ１に指向性を有するアミノ酸配列；ＩＬ−１２Ｒｂ２に指向性を有するアミノ酸配列；ＩＬ−２３Ｒに指向性を有するアミノ酸配列；ＩＬ−１２の同族受容体に指向性を有するアミノ酸配列（これはＩＬ−１２Ｒｂ１又はＩＬ−１２Ｒｂ２に指向性を有するアミノ酸配列であり得る）；及び／又はＩＬ−２３の同族受容体に指向性を有するアミノ酸配列（これはＩＬ−１２Ｒｂ１又はＩＬ−２３Ｒに指向性を有するアミノ酸配列であり得る）であり得る。これらのアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載されるようなものであり、本発明のさらなる態様を形成してもよい（またこれをコードするヌクレオチド配列／核酸、これを含むポリペプチド、及びこのような構築物におけるこれらのアミノ酸配列の使用、これを調製する方法、及びこの使用（全て本明細書中でさらに記載されるようなものである）も同様である）。
Ａ）「ｐ１９＋配列」
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（例えばＩＬ−２３に存在するような）ｐ１９サブユニットに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、特に（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とＩＬ−２３Ｒとの結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができる、「ｐ１９＋配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ｐ１９＋配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばｐ１９に対する親和性、特異性に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ｐ１９＋配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ｐ１９＋配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１１も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１１も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１１も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ｐ１９との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ｐ１９＋配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群４」若しくは「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群２」若しくは「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群２」又は「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ｐ１９との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのが同様に好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ｐ１９＋配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ｐ１９と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２０に挙げられる少なくとも１つのｐ１９＋配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号１８９０、１８９１、１８９２、１８９３、１８９４、１８９５、１８９６、１８９７、１８９８、１８９９、１９００、２４８５、２４８６、２４８７、２４８８、２４８９及び／又は配列番号２４９０（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ１９サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ１９サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ１９サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ１９サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号１８９０、１８９１、１８９２、１８９３、１８９４、１８９５、１８９６、１８９７、１８９８、１８９９、１９００、２４８５、２４８６、２４８７、２４８８、２４８９及び／又は配列番号２４９０（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号１８９０、１８９１、１８９２、１８９３、１８９４、１８９５、１８９６、１８９７、１８９８、１８９９、１９００、２４８５、２４８６、２４８７、２４８８、２４８９及び／又は配列番号２４９０（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ｐ１９＋配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ｐ１９＋配列は、（例えばＩＬ−２３に存在するような）ｐ１９サブユニットに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、特に（例えば実施例１９又は実施例２２のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とＩＬ−２３Ｒとの結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、且つ
ａ）配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ｐ１９サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ１９サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ｐ１９＋配列は、配列番号１８９０、配列番号１８９１、配列番号１８９２、配列番号１８９３、配列番号１８９４、配列番号１８９５、配列番号１８９６、配列番号１８９７、配列番号１８９８、配列番号１８９９、配列番号１９００、配列番号２４８５、配列番号２４８６、配列番号２４８７、配列番号２４８８、配列番号２４８９及び／又は配列番号２４９０のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の１つから選択される。
Ｂ）「ｐ１９−配列」
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（例えばＩＬ−２３に存在するような）ｐ１９サブユニットに指向性を有するが（本明細書に規定のように）、（例えばＩＬ−２３及びその同族受容体並びにＩＬ−１２及びその同族受容体に関しては実施例１９及び実施例２２で例示される好適なアルファスクリーンアッセイにおける）ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を中和又は阻害することが（実質的に）できない、「ｐ１９−配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ｐ１９−配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばｐ１９に対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ｐ１９−配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ｐ１９−配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１２も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１２も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１２も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ｐ１９との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ｐ１９−配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群１１」若しくは「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群９」若しくは「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群９」又は「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ｐ１９との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ｐ１９−配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ｐ１９と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２１に挙げられる少なくとも１つのｐ１９−配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号１９０１、１９０２、１９０３、１９０４、１９０５、１９０６、１９０７、１９０８、１９０９、１９１０、１９１１、１９１２、１９１３、１９１４、１９１５、１９１６、１９１７、１９１８、１９１９、１９２０、１９２１、１９２２、１９２３、１９２４、１９２５、１９２６、１９２７、１９２８、１９２９、１９３０、１９３１、１９３２、１９３３、１９３４、１９３５、１９３６、１９３７、１９３８、１９３９、２５０２及び／又は配列番号２５０３（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ１９サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ１９サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ１９サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ１９サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号１９０１、１９０２、１９０３、１９０４、１９０５、１９０６、１９０７、１９０８、１９０９、１９１０、１９１１、１９１２、１９１３、１９１４、１９１５、１９１６、１９１７、１９１８、１９１９、１９２０、１９２１、１９２２、１９２３、１９２４、１９２５、１９２６、１９２７、１９２８、１９２９、１９３０、１９３１、１９３２、１９３３、１９３４、１９３５、１９３６、１９３７、１９３８、１９３９、２５０２及び／又は配列番号２５０３（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号１９０１、１９０２、１９０３、１９０４、１９０５、１９０６、１９０７、１９０８、１９０９、１９１０、１９１１、１９１２、１９１３、１９１４、１９１５、１９１６、１９１７、１９１８、１９１９、１９２０、１９２１、１９２２、１９２３、１９２４、１９２５、１９２６、１９２７、１９２８、１９２９、１９３０、１９３１、１９３２、１９３３、１９３４、１９３５、１９３６、１９３７、１９３８、１９３９、２５０２及び／又は配列番号２５０３（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ｐ１９−配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）。このため、好ましいが非限定的な本発明の別の態様によれば、ｐ１９−配列は、（例えばＩＬ−２３に存在するような）ｐ１９サブユニットに指向性を有するが（本明細書に規定のように）、（例えばＩＬ−２３及びその同族受容体並びにＩＬ−１２及びその同族受容体に関しては実施例１９及び実施例２２で例示される好適なアルファスクリーンアッセイにおける）ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を中和又は阻害することが（実質的に）できず、且つ
ａ）配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ１９サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ１９サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ｐ１９配列は、配列番号１９０１、配列番号１９０２、配列番号１９０３、配列番号１９０４、配列番号１９０５、配列番号１９０６、配列番号１９０７、配列番号１９０８、配列番号１９０９、配列番号１９１０、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、配列番号１９２０、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、配列番号１９３０、配列番号１９３１、配列番号１９３２、配列番号１９３３、配列番号１９３４、配列番号１９３５、配列番号１９３６、配列番号１９３７、配列番号１９３８、配列番号１９３９、配列番号２５０２及び／又は配列番号２５０３のアミノ酸配列の１つから選択される（表Ａ−２及び図２１を参照されたい）。
Ｃ）「ｐ４０−配列」
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（例えばＩＬ−２３及びＩＬ−１２に存在するような）ｐ４０サブユニットに指向性を有するが（本明細書に規定のように）、（例えばＩＬ−２３及びその同族受容体並びにＩＬ−１２及びその同族受容体に関しては実施例１９及び実施例２２で例示される好適なアルファスクリーンアッセイにおける）ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を中和又は阻害することが（実質的に）できない、「ｐ４０−配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ｐ４０−配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばｐ４０に対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ｐ４０−配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ｐ４０−配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１３も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１３も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１３も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ｐ４０との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ｐ４０−配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群１８」若しくは「ＣＤＲ３配列群２０由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群１６」若しくは「ＣＤＲ３配列群２０」のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群１６」又は「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ｐ４０との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ｐ４０−配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０由来」のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ｐ４０と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２２に挙げられる少なくとも１つのｐ４０−配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号１９４０、１９４１、１９４２、１９４３、１９４４、１９４５、１９５５、１９５８、１９６８、１９７１、１９７２、１９７４、１９７５、１９７６、１９７７、１９７８、１９７９、１９８０、１９８３、１９８６、１９８９、１９９１、１９９２、１９９６、２００２、２００４、２００６、２００７、２０２３、２０２４、２０２８、２０３３、２５０４、２５０５、２５０６、２５０７、２５０８及び／又は配列番号２５０９（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）のアミノ酸配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ４０サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ４０サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ４０サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ４０サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号１９４０、１９４１、１９４２、１９４３、１９４４、１９４５、１９５５、１９５８、１９６８、１９７１、１９７２、１９７４、１９７５、１９７６、１９７７、１９７８、１９７９、１９８０、１９８３、１９８６、１９８９、１９９１、１９９２、１９９６、２００２、２００４、２００６、２００７、２０２３、２０２４、２０２８、２０３３、２５０４、２５０５、２５０６、２５０７、２５０８及び／又は配列番号２５０９（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号１９４０、１９４１、１９４２、１９４３、１９４４、１９４５、１９５５、１９５８、１９６８、１９７１、１９７２、１９７４、１９７５、１９７６、１９７７、１９７８、１９７９、１９８０、１９８３、１９８６、１９８９、１９９１、１９９２、１９９６、２００２、２００４、２００６、２００７、２０２３、２０２４、２０２８、２０３３、２５０４、２５０５、２５０６、２５０７、２５０８及び／又は配列番号２５０９（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ｐ４０−配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）。このため、好ましいが非限定的な本発明の別の態様によれば、ｐ４０−配列は、（例えばＩＬ−２３及びＩＬ−１２に存在するような）ｐ４０サブユニットに指向性を有するが（本明細書に規定のように）、（例えばＩＬ−２３及びその同族受容体並びにＩＬ−１２及びその同族受容体に関しては実施例１９及び実施例２２で例示される好適なアルファスクリーンアッセイにおける）ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を中和又は阻害することが（実質的に）できず、且つ
ａ）配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２０を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ４０サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ４０サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ｐ４０配列は、配列番号１９４０、配列番号１９４１、配列番号１９４２、配列番号１９４３、配列番号１９４４、配列番号１９４５、配列番号１９５５、配列番号１９５８、配列番号１９６８、配列番号１９７１、配列番号１９７２、配列番号１９７４、配列番号１９７５、配列番号１９７６、配列番号１９７７、配列番号１９７８、配列番号１９７９、配列番号１９８０、配列番号１９８３、配列番号１９８６、配列番号１９８９、配列番号１９９１、配列番号１９９２、配列番号１９９６、配列番号２００２、配列番号２００４、配列番号２００６、配列番号２００７、配列番号２０２３、配列番号２０２４、配列番号２０２８、配列番号２０３３、配列番号２５０４、配列番号２５０５、配列番号２５０６、配列番号２５０７、配列番号２５０８及び／又は配列番号２５０９のアミノ酸配列の少なくとも１つから選択される（表Ａ−２及び図２２を参照されたい）。
Ｄ）ｐ４０＋配列
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（例えばＩＬ−２３及びＩＬ−１２に存在するような）ｐ４０サブユニットに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、（特に実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とその（同族）受容体との結合、及び／又は（特に実施例１９に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−１２とその（同族）受容体との結合を特に調節、中和、遮断及び／又は阻害することができる、「ｐ４０＋配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ｐ４０＋配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばｐ４０に対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ｐ４０＋配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ｐ４０＋配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１４も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１４も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１４も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ｐ４０との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ｐ４０＋配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群２５」若しくは「ＣＤＲ３配列群２７由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群２３」若しくは「ＣＤＲ３配列群２７」のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群２３」又は「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ｐ４０との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ｐ４０＋配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ｐ４０と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２３に挙げられる少なくとも１つのｐ４０＋配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号１９４２、１９４６、１９４８、１９５０、１９５２、１９５３、１９５４、１９５６、１９５７、１９５９、１９６２、１９６３、１９６４、１９６５、１９６７、１９６９、１９７０、１９７３、１９８１、１９８２、１９８４、１９８５、１９８７、１９８８、１９９０、１９９３、１９９４、１９９５、１９９７、１９９８、１９９９、２０００、２００１、２００３、２００５、２０３０、２５１０、２５１１、２５１２、２５１３、２５１４、２５１５、２５１６、２５１７、２５１８、２５１９、２５２０、２５２１、２５２２、２５２３、２５２４、２５２５、２５２６、２５２７及び／又は配列番号２５２８（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ４０サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ４０サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ４０サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ４０サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号１９４２、１９４６、１９４８、１９５０、１９５２、１９５３、１９５４、１９５６、１９５７、１９５９、１９６２、１９６３、１９６４、１９６５、１９６７、１９６９、１９７０、１９７３、１９８１、１９８２、１９８４、１９８５、１９８７、１９８８、１９９０、１９９３、１９９４、１９９５、１９９７、１９９８、１９９９、２０００、２００１、２００３、２００５、２０３０、２５１０、２５１１、２５１２、２５１３、２５１４、２５１５、２５１６、２５１７、２５１８、２５１９、２５２０、２５２１、２５２２、２５２３、２５２４、２５２５、２５２６、２５２７及び／又は配列番号２５２８（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号１９４２、１９４６、１９４８、１９５０、１９５２、１９５３、１９５４、１９５６、１９５７、１９５９、１９６２、１９６３、１９６４、１９６５、１９６７、１９６９、１９７０、１９７３、１９８１、１９８２、１９８４、１９８５、１９８７、１９８８、１９９０、１９９３、１９９４、１９９５、１９９７、１９９８、１９９９、２０００、２００１、２００３、２００５、２０３０、２５１０、２５１１、２５１２、２５１３、２５１４、２５１５、２５１６、２５１７、２５１８、２５１９、２５２０、２５２１、２５２２、２５２３、２５２４、２５２５、２５２６、２５２７及び／又は配列番号２５２８（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ｐ４０＋配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ｐ４０＋配列は、（例えばＩＬ−２３及びＩｌ−１２に存在するような）ｐ４０サブユニットに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、（特に実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とその（同族）受容体との結合、及び／又は（特に実施例１９に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−１２とその（同族）受容体との結合を特に調節、中和、遮断及び／又は阻害することができ、且つ
ａ）配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ｐ４０サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ４０サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ｐ４０＋配列は、配列番号１９４２、配列番号１９４６、配列番号１９４８、配列番号１９５０、配列番号１９５２、配列番号１９５３、配列番号１９５４、配列番号１９５６、配列番号１９５７、配列番号１９５９、配列番号１９６２、配列番号１９６３、配列番号１９６４、配列番号１９６５、配列番号１９６７、配列番号１９６９、配列番号１９７０、配列番号１９７３、配列番号１９８１、配列番号１９８２、配列番号１９８４、配列番号１９８５、配列番号１９８７、配列番号１９８８、配列番号１９９０、配列番号１９９３、配列番号１９９４、配列番号１９９５、配列番号１９９７、配列番号１９９８、配列番号１９９９、配列番号２０００、配列番号２００１、配列番号２００３、配列番号２００５、配列番号２０３０、配列番号２５１０、配列番号２５１１、配列番号２５１２、配列番号２５１３、配列番号２５１４、配列番号２５１５、配列番号２５１６、配列番号２５１７、配列番号２５１８、配列番号２５１９、配列番号２５２０、配列番号２５２１、配列番号２５２２、配列番号２５２３、配列番号２５２４、配列番号２５２５、配列番号２５２６、配列番号２５２７及び／又は配列番号２５２８のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２３を参照されたい）の少なくとも１つから選択される。
Ｅ）「ｐ３５配列」
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（例えばＩＬ−１２に存在するような）ｐ３５９サブユニットに指向性を有する（本明細書に規定のように）、「ｐ３５配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ｐ３５配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して、即ちｐ３５に対する親和性、特異性等に関して本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ｐ３５配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ｐ３５配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１５も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１５も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１５も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ｐ３５との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ｐ３５配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群３２」若しくは「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群３０」若しくは「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群３０」又は「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ｐ３５との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ｐ３５配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ｐ３５と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２４に挙げられる少なくとも１つのｐ３５配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号１９４７、１９４９、１９５１、１９６０、１９６１、１９６６、２００８、２００９、２０１０、２０１１、２０１２、２０１３、２０１４、２０１５、２０１６、２０１７、２０１８、２０１９、２０２０、２０２１、２０２２、２０２５、２０２６、２０２７、２０２９、２０３１、２０３２、２０３４、２０３５、２０３６、２０３７及び／又は配列番号２５２９（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ３５サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ３５サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ｐ３５サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でｐ３５サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号１９４７、１９４９、１９５１、１９６０、１９６１、１９６６、２００８、２００９、２０１０、２０１１、２０１２、２０１３、２０１４、２０１５、２０１６、２０１７、２０１８、２０１９、２０２０、２０２１、２０２２、２０２５、２０２６、２０２７、２０２９、２０３１、２０３２、２０３４、２０３５、２０３６、２０３７及び／又は配列番号２５２９（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号１９４７、１９４９、１９５１、１９６０、１９６１、１９６６、２００８、２００９、２０１０、２０１１、２０１２、２０１３、２０１４、２０１５、２０１６、２０１７、２０１８、２０１９、２０２０、２０２１、２０２２、２０２５、２０２６、２０２７、２０２９、２０３１、２０３２、２０３４、２０３５、２０３６、２０３７及び／又は配列番号２５２９（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ｐ３５配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ｐ３５配列は、（例えばＩＬ−１２に存在するような）ｐ３５サブユニットに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つ
ａ）配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ｐ３５サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の少なくとも１つと、ｐ３５サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ｐ３５配列は、配列番号１９４７、配列番号１９４９、配列番号１９５１、配列番号１９６０、配列番号１９６１、配列番号１９６６、配列番号２００８、配列番号２００９、配列番号２０１０、配列番号２０１１、配列番号２０１２、配列番号２０１３、配列番号２０１４、配列番号２０１５、配列番号２０１６、配列番号２０１７、配列番号２０１８、配列番号２０１９、配列番号２０２０、配列番号２０２１、配列番号２０２２、配列番号２０２５、配列番号２０２６、配列番号２０２７、配列番号２０２９、配列番号２０３１、配列番号２０３２、配列番号２０３４、配列番号２０３５、配列番号２０３６、配列番号２０３７及び／又は配列番号２５２９のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２４を参照されたい）の少なくとも１つから選択される。
Ｆ）ＩＬ−２７配列
具体的ではあるが非限定的な一態様は、（ＥＢＩ３サブユニット又はｐ２８サブユニットのいずれかに対する）ＩＬ−２７に指向性を有する（本明細書に規定のように）「ＩＬ−２７配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ＩＬ−２７配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばＩＬ−２７又はそのサブユニットの１つに対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中で記載されるように、ＩＬ−２７配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ＩＬ−２７配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１６も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１６も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１６も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ＩＬ−２７との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ＩＬ−２７配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群３９」若しくは「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群３７」若しくは「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群３７」又は「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ＩＬ−２７との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ＩＬ−２７配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ＩＬ−２７と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２６に挙げられる少なくとも１つのＩＬ−２７配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号２０３８、２０３９、２０４０、２０４１、２０４２、２０４３、２０４４、２０４５、２０４６、２０４７、２０４８、２０４９、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、２０５９、２０６０、２０６１、２０６２、２０６３、２０６４、２０６５、２０６６、２０６７、２０６８、２０６９、２０７０、２０７１、２０７２、２０７３、２０７４、２０７５及び／又は配列番号２０７６（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２７（即ちＥＢＩ３サブユニット又はｐ２８サブユニット）と特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−２７と結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２７と特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−２７と結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号２０３８、２０３９、２０４０、２０４１、２０４２、２０４３、２０４４、２０４５、２０４６、２０４７、２０４８、２０４９、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、２０５９、２０６０、２０６１、２０６２、２０６３、２０６４、２０６５、２０６６、２０６７、２０６８、２０６９、２０７０、２０７１、２０７２、２０７３、２０７４、２０７５及び／又は配列番号２０７６（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号２０３８、２０３９、２０４０、２０４１、２０４２、２０４３、２０４４、２０４５、２０４６、２０４７、２０４８、２０４９、２０５０、２０５１、２０５２、２０５３、２０５４、２０５５、２０５６、２０５７、２０５８、２０５９、２０６０、２０６１、２０６２、２０６３、２０６４、２０６５、２０６６、２０６７、２０６８、２０６９、２０７０、２０７１、２０７２、２０７３、２０７４、２０７５及び／又は配列番号２０７６（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）５６０〜配列番号６２１の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ＩＬ−２７配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ＩＬ−２７配列は、ＩＬ−２７に指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つ
ａ）配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ＩＬ−２７との相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）の少なくとも１つと、ＩＬ−２７との結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ＩＬ−２７配列は、配列番号２０３８、配列番号２０３９、配列番号２０４０、配列番号２０４１、配列番号２０４２、配列番号２０４３、配列番号２０４４、配列番号２０４５、配列番号２０４６、配列番号２０４７、配列番号２０４８、配列番号２０４９、配列番号２０５０、配列番号２０５１、配列番号２０５２、配列番号２０５３、配列番号２０５４、配列番号２０５５、配列番号２０５６、配列番号２０５７、配列番号２０５８、配列番号２０５９、配列番号２０６０、配列番号２０６１、配列番号２０６２、配列番号２０６３、配列番号２０６４、配列番号２０６５、配列番号２０６６、配列番号２０６７、配列番号２０６８、配列番号２０６９、配列番号２０７０、配列番号２０７１、配列番号２０７２、配列番号２０７３、配列番号２０７４、配列番号２０７５及び／又は配列番号２０７６のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２６を参照されたい）の１つから選択される。
Ｇ）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列
具体的ではあるが非限定的な一態様は、ＩＬ−１２の受容体及びＩＬ−２３の受容体の両方に存在するようなＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニット（したがってＩＬ−１２及びＩＬ−２３の両方の受容体）に指向性を有する（本明細書に規定のように）、「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばＩＬ−１２Ｒｂ１に対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中で記載されるように、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１７も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１７も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１７も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ＩＬ−１２Ｒｂ１との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群４６」若しくは「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群４４」若しくは「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群４４」又は「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ＩＬ−１２Ｒｂ１との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ＩＬ−１２Ｒｂ１と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２７に挙げられる少なくとも１つのＩＬ−１２Ｒｂ１配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号２０７７、２０７８、２０７９、２０８０、２０８１、２０８２、２０８３、２０８４、２０８５、２０８６、２０８７、２０８８、２０８９、２０９０、２０９１、２０９２、２０９３、２０９４、２０９５、２０９６、２０９７、２０９８、２０９９、２１００、２１０１、２１０２及び／又は配列番号２１０３（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）（即ちＩＬ−１２の受容体及び／又はＩＬ−２３の受容体に存在するように）ＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒｂ１と特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−１２Ｒｂ１と結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、上記アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号２０７７、２０７８、２０７９、２０８０、２０８１、２０８２、２０８３、２０８４、２０８５、２０８６、２０８７、２０８８、２０８９、２０９０、２０９１、２０９２、２０９３、２０９４、２０９５、２０９６、２０９７、２０９８、２０９９、２１００、２１０１、２１０２及び／又は配列番号２１０３（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号２０７７、２０７８、２０７９、２０８０、２０８１、２０８２、２０８３、２０８４、２０８５、２０８６、２０８７、２０８８、２０８９、２０９０、２０９１、２０９２、２０９３、２０９４、２０９５、２０９６、２０９７、２０９８、２０９９、２１００、２１０１、２１０２及び／又は配列番号２１０３（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ＩＬ−１２Ｒｂ１配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は、ＩＬ−１２Ｒｂ１に指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つ
ａ）配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の少なくとも１つと、ＩＬ−１２Ｒｂ１との結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列は、配列番号２０７７、配列番号２０７８、配列番号２０７９、配列番号２０８０、配列番号２０８１、配列番号２０８２、配列番号２０８３、配列番号２０８４、配列番号２０８５、配列番号２０８６、配列番号２０８７、配列番号２０８８、配列番号２０８９、配列番号２０９０、配列番号２０９１、配列番号２０９２、配列番号２０９３、配列番号２０９４、配列番号２０９５、配列番号２０９６、配列番号２０９７、配列番号２０９８、配列番号２０９９、配列番号２１００、配列番号２１０１、配列番号２１０２及び／又は配列番号２１０３のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２７を参照されたい）の１つから選択される。
Ｈ）ＩＬ−１２Ｒｂ２配列
具体的ではあるが非限定的な一態様は、例えばＩＬ−１２の受容体に存在するようなＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニット（したがってＩＬ−１２の受容体）に指向性を有する（本明細書に規定のように）、「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばＩＬ−１２Ｒｂ２に対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中で記載されるように、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１８も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１８も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１８も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ＩＬ−１２Ｒｂ２との結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群５３」若しくは「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群５１」若しくは「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群５１」又は「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ＩＬ−１２Ｒｂ２との結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ＩＬ−１２Ｒｂ２と結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２８に挙げられる少なくとも１つのＩＬ−１２Ｒｂ２配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号２１０４、２１０５、２１０６、２１０７、２１０８、２１０９、２１１０、２１１１、２１１２、２１１３、２１１４、２１１５、２１１６、２１１７、２１１８、２１１９、２１２０、２１２１、２１２２、２１２３及び／又は配列番号２１２４（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）（即ちＩＬ−１２の受容体に存在するように）ＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（(全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２Ｒｂ２と特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−１２Ｒｂ２と結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号２１０４、２１０５、２１０６、２１０７、２１０８、２１０９、２１１０、２１１１、２１１２、２１１３、２１１４、２１１５、２１１６、２１１７、２１１８、２１１９、２１２０、２１２１、２１２２、２１２３及び／又は配列番号２１２４（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号２１０４、２１０５、２１０６、２１０７、２１０８、２１０９、２１１０、２１１１、２１１２、２１１３、２１１４、２１１５、２１１６、２１１７、２１１８、２１１９、２１２０、２１２１、２１２２、２１２３及び／又は配列番号２１２４（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ＩＬ−１２Ｒｂ２配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は、ＩＬ−１２Ｒｂ２に指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つ
ａ）配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の少なくとも１つと、ＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列は、配列番号２１０４、配列番号２１０５、配列番号２１０６、配列番号２１０７、配列番号２１０８、配列番号２１０９、配列番号２１１０、配列番号２１１１、配列番号２１１２、配列番号２１１３、配列番号２１１４、配列番号２１１５、配列番号２１１６、配列番号２１１７、配列番号２１１８、配列番号２１１９、配列番号２１２０、配列番号２１２１、配列番号２１２２、配列番号２１２３及び／又は配列番号２１２４のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２８を参照されたい）の１つから選択される。
Ｉ）ＩＬ−２３Ｒ配列
具体的ではあるが非限定的な一態様は、例えばＩＬ−２３の（同族）受容体に存在するようなＩＬ−２３Ｒサブユニット（したがってＩＬ−２３の受容体）に指向性を有する（本明細書に規定のように）、「ＩＬ−２３Ｒ配列」（これは概して本発明のアミノ酸配列として本明細書中に規定される）に関する。
ＩＬ−２３Ｒ配列は概して、本発明のアミノ酸配列に関して（例えばＩＬ−２３Ｒに対する親和性、特異性等に関して）本明細書中にさらに記載されるようなものであり得る。また、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中でさらに記載されるように、ＩＬ−２３Ｒ配列は、単一の抗原結合ドメイン又は抗原結合単位を（任意で好適なフォールディングの後に）形成するようなもの又は形成することができるようなものであるのが好ましく、例えば免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列、４つのフレームワーク領域と３つのＣＤＲ領域とから成るアミノ酸配列であってもよく、特にドメイン抗体、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、「ｄＡｂ」若しくはナノボディ（全て本明細書中でさらに記載される）、又はこれらの好適な断片であってもよい。
特定の一態様において、ＩＬ−２３Ｒ配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１９も参照されたい）；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１９も参照されたい）；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１で規定及び列挙される、図１９も参照されたい）；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含み得る。
任意で、本発明のアミノ酸配列がｂ）及び／又はｃ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちａ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｅ）及び／又はｆ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｄ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。また任意で、本発明のアミノ酸配列がｈ）及び／又はｉ）によるアミノ酸配列を１つ又は複数含有する場合、任意条件Ｉ、任意条件ＩＩ及び／又は任意条件ＩＩＩ（全て本明細書中で規定される）は上記アミノ酸配列に（即ちｇ）による元のアミノ酸配列と比較して）適用され得る。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される１つ又は複数のアミノ酸残基のストレッチ、又はこれらの任意の好適な組合せを含むのが好ましい。
また好ましくは、このようなアミノ酸配列では、上記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも１つが、ＩＬ−２３Ｒとの結合に関する抗原結合部位の一部を成す。
さらに具体的ではあるが、これも非限定的な態様において、ＩＬ−２３Ｒ配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでもよく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがａ）、ｂ）若しくはｃ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ｄ）、ｅ）、ｆ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応し、又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチがｇ）、ｈ）若しくはｉ）によるアミノ酸配列の１つに対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）若しくはｆ）によるアミノ酸配列の１つに対応する。
この特定の態様において、アミノ酸配列は、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列；及び
ｃ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列；
から成る群から選択される２つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含むのが好ましく、
このため、（ｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ２配列群６０」若しくは「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；（ｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群５８」若しくは「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の１つと対応し；又は（ｉｉｉ）アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の１つと対応する場合、アミノ酸残基の第２のストレッチは、「ＣＤＲ１配列群５８」又は「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の１つと対応する。
また、このようなアミノ酸配列では、アミノ酸残基のストレッチの少なくとも２つが、ＩＬ−２３Ｒとの結合に関する抗原結合部位の一部を形成するのがさらに好ましい。
さらにより具体的ではあるが非限定的な一態様において、ＩＬ−２３Ｒ配列は３つ以上のアミノ酸残基のストレッチを含んでいてもよく、ここでアミノ酸残基の第１のストレッチが、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列；
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
アミノ酸残基の第２のストレッチが、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列；
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択され、
またアミノ酸残基の第３のストレッチが、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列；
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列；
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列；
から成る群から選択される。
好ましくは、この特定の態様において、アミノ酸残基の第１のストレッチが「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、アミノ酸残基の第２のストレッチが「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、またアミノ酸残基の第３のストレッチが「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択される。
また好ましくはこのようなアミノ酸配列において、少なくとも３つのアミノ酸残基のストレッチが、ＩＬ−２３Ｒと結合するための抗原結合部位の一部を形成する。
このようなアミノ酸配列のストレッチの好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
好ましくはこのようなアミノ酸配列において、ＣＤＲ配列が、表Ａ−２及び図２９に挙げられる少なくとも１つのＩＬ−２３Ｒ配列のＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する。例えば、（本明細書中に記載の方法で）上記アミノ酸配列と、配列番号２１２５、２１２６、２１２７、２１２８、２１２９、２１３０、２１３１、２１３２、２１３３、２１３４、２１３５、２１３６、２１３７、２１３８、２１３９、２１４０及び／又は配列番号２１４１（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の配列の１つ又は複数とのアミノ酸同一性の程度を求めることによって、このアミノ酸同一性の程度を決定することができ、ここではフレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する。また、このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書中でさらに記載するようなものであり得る。
またこのアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）（即ちＩＬ−２３の受容体に存在するように）ＩＬ−２３Ｒサブユニットと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−２３Ｒサブユニットと結合することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又はＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
特に本発明のアミノ酸配列が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る場合、本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるようなもの、又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片であるのが好ましい。
特にこのような本発明のアミノ酸配列は、ＣＤＲ１が「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ２が「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列から成る群から選択され、且つＣＤＲ３が「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列から成る群から選択されるようなものであり得る。
また、ＣＤＲ配列の好ましい組合せは、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
またこのようなアミノ酸配列は、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３Ｒと特異的に結合することができるようなもの、及びより具体的には本明細書に規定のように（（全てさらに）本明細書に記載されるような（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度、又は代替的にＩＣ５０値として好適に測定される、及び／又は表される）親和性でＩＬ−２３Ｒと結合することができるようなものであるのが好ましい。
好ましいが非限定的な一態様において本発明は、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成るアミノ酸配列であって、アミノ酸配列のＣＤＲ配列が、配列番号２１２５、２１２６、２１２７、２１２８、２１２９、２１３０、２１３１、２１３２、２１３３、２１３４、２１３５、２１３６、２１３７、２１３８、２１３９、２１４０及び／又は配列番号２１４１（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つのＣＤＲ配列との少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性（９５％以上のアミノ酸同一性等）、又はさらに本質的に１００％のアミノ酸同一性を有する、アミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は例えば、上記アミノ酸配列と、配列番号２１２５、２１２６、２１２７、２１２８、２１２９、２１３０、２１３１、２１３２、２１３３、２１３４、２１３５、２１３６、２１３７、２１３８、２１３９、２１４０及び／又は配列番号２１４１（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の配列の１つ又は複数との間のアミノ酸同一性の程度を（本明細書に記載の方法で）求めることによって決定することができる（フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視する）。このような本発明のアミノ酸配列は、本明細書にさらに記載されるようなものであり得る。
ＩＬ−２３Ｒ配列の幾つかの好ましいが非限定的な例は、配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列である（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）。このため、本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、ＩＬ−２３Ｒ配列は、ＩＬ−２３Ｒに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つ
ａ）配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の少なくとも１つとの少なくとも７０％のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも８０％のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸同一性、例えば９５％以上のアミノ酸同一性、又はさらに実質的に１００％のアミノ酸同一性を有し、及び／又は
ｂ）配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の少なくとも１つとの多くとも２０個、好ましくは多くとも１０個、例えば９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異を有し（好ましくは、このようなアミノ酸配列は、ＣＤＲにおいて多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異、及び／又はフレームワーク配列において多くとも合計５個（例えば４個、３個、２個又はただ１個）のこのようなアミノ酸差異しか有さない）、及び／又は
ｃ）（ｉ）配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列の少なくとも１つと、ＩＬ−２３Ｒサブユニットとの相互作用を（本明細書に規定のように）交差遮断することができる、及び／又は（ｉｉ）配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の少なくとも１つと、ＩＬ−２３Ｒとの結合と競合することができる（即ちこの結合に対する競合因子である）、アミノ酸配列である。
好ましいが非限定的な別の態様において、ＩＬ−２３Ｒ配列は、配列番号２１２５、配列番号２１２６、配列番号２１２７、配列番号２１２８、配列番号２１２９、配列番号２１３０、配列番号２１３１、配列番号２１３２、配列番号２１３３、配列番号２１３４、配列番号２１３５、配列番号２１３６、配列番号２１３７、配列番号２１３８、配列番号２１３９、配列番号２１４０及び／又は配列番号２１４１のアミノ酸配列（表Ａ−２及び図２９を参照されたい）の１つから選択される。
幾つかの他の非限定的な態様において、本発明は、
少なくとも１つのｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ１９＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ１９−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ３５配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ１９＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ１９−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ３５配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２及びＩＬ−２３に指向性を有し、且つＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０−配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２及びＩＬ−２３に指向性を有し、且つＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ｐ４０＋配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２７に指向性を有し、且つＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３と比較して、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２７に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−２７配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのＩＬ−１２Ｒｂ１サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのＩＬ−１２Ｒｂ２サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ２配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
少なくとも１つのＩＬ−２３Ｒサブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインの受容体に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−２３Ｒ配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３の（同族）受容体に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−２３の（同族）受容体に指向性を有し、且つＩＬ−１２の（同族）受容体と比較して、（本明細書に規定のように）ＩＬ−２３の（同族）受容体に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−２３Ｒ配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２の（同族）受容体に指向性を有する、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２の（同族）受容体に指向性を有し、且つＩＬ−２３の（同族）受容体と比較して、（本明細書に規定のように）ＩＬ−１２の（同族）受容体に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ２配列を含むか、又は本質的にこれから成る）；
ＩＬ−１２の（同族）受容体及びＩＬ−２３の同族受容体に指向性を有し、且つＩＬ−１２の（同族）受容体及び／又はＩＬ−２７の同族受容体及び／又は（本明細書に規定のように）ＩＬ−３５の（同族）受容体に特異的であるのが好ましい、アミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチド（このアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは少なくとも１つの（本明細書に規定のような）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列を含むか、又は本質的にこれから成る）、
に関する。
同様に、このようなアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドは本明細書中でさらに記載されるようなものであり得る。本発明は、全て本明細書中でさらに記載されるようなヌクレオチド配列／これをコードする核酸、これを含む調製物及び製剤、これを作製する方法、及びこの使用にも関する。
本発明のアミノ酸配列（例えば本明細書中で記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）において、フレームワーク配列は任意の好適なフレームワーク配列であり得るが、好適なフレームワーク配列の例は、例えば標準的なハンドブック、並びに本明細書において言及されるさらなる開示及び従来技術に基づき、当業者に明らかとなる。
フレームワーク配列は、免疫グロブリンフレームワーク配列、又は（例えばヒト化又はラクダ化によって）免疫グロブリンフレームワーク配列から誘導されているフレームワーク配列（の好適な組合せ）であるのが好ましい。例えば、フレームワーク配列は、軽鎖可変ドメイン（例えばＶＬ配列）及び／又は重鎖可変ドメイン（例えばＶＨ配列）から誘導されているフレームワーク配列であり得る。特に好ましい一態様では、フレームワーク配列は、ＶＨＨ配列（該フレームワーク配列は任意で、部分又は完全ヒト化し得る）から誘導されているか、又は（本明細書に規定のように）ラクダ化した従来のＶＨ配列であるいずれかのフレームワーク配列である。
フレームワーク配列は、本発明のアミノ酸配列が、ドメイン抗体（又はドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一ドメイン抗体（又は単一ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（又はｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（ＶＨＨ配列を含むが、これに限定されない）であるようなものであるのが好ましい。また、好適なフレームワーク配列は、例えば標準的なハンドブック、並びに本明細書に言及されるさらなる開示及び従来技術に基づいて当業者にとって明らかである。
特に、本発明のアミノ酸配列に存在するフレームワーク配列は、本発明のアミノ酸配列がナノボディ（商標）であるように、（本明細書に規定の）特徴的な残基を１つ又は複数含有し得る。このようなフレームワーク配列（の好適な組合せ）の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる開示から明らかになる。
また概して、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書に記載のように、上記のいずれかの好適な断片（又は断片の組合せ）（例えば１つ又は複数のフレームワーク配列に好適に隣接した、及び／又はこれを介して連結した、１つ又は複数のＣＤＲ配列を含有する断片）を使用することも可能である（例えば、これらのＣＤＲ配列及びフレームワーク配列が、断片が誘導された完全長の（full-sized：フルサイズの）免疫グロブリン配列で発生し得るのと同じ配列（order）で）。またこのような断片は、免疫グロブリンフォールドを含むか、若しくは形成することができるようなもの、又は代替的に免疫グロブリンフォールドを含まないか、若しくは形成することができないようなものであってもよい。
１つの特定の態様において、このような断片は、本明細書に記載の単一ＣＤＲ配列（特にＣＤＲ３配列）を含み、フレームワーク配列（の一部）（特に断片が誘導される免疫グロブリン配列において該ＣＤＲ配列に隣接するフレームワーク配列（複数可）の一部）が両側に位置する。例えば、ＣＤＲ３配列は、ＦＲ３配列（の一部）の後にあり、ＦＲ４配列（の一部）の前にあり得る。このような断片はまた、ジスルフィド架橋、特にそれぞれＣＤＲ配列の前後にある２つのフレームワーク領域と連結するジスルフィド架橋を含有してもよい（このようなジスルフィド架橋を形成するために、上記フレームワーク領域で自然発生するシステイン残基を使用するか、又は代替的にシステイン残基を上記フレームワーク領域に合成的に付加若しくは導入してもよい）。これらの「促進断片」のさらなる説明に関しては、ここでもまた国際公開第０３／０５０５３１号パンフレット、及び２００６年１２月５日に出願されたAblynx N. V.の"Peptidescapable of binding to serum proteins"と題する米国仮特許出願（発明者：Revets, Hilde AdiPierrette; Kolkman, Joost Alexander;及びHoogenboom, Hendricus RenerusJacobus Mattheus）（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６３３４８号明細書も参照されたい）を参照する。
別の態様において本発明は、化合物又は構築物、特にタンパク質又はポリペプチド（それぞれ本明細書で「本発明の化合物」又は「本発明のポリペプチド」とも称される）であって、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列（又はその好適な断片）を含むか、又は本質的にこれから成り、任意で１つ又は複数の他の基、残基、部分又は結合単位をさらに含む、化合物又は構築物、特にタンパク質又はポリペプチドに関する。本明細書中のさらなる開示から当業者にとって明らかになるように、このようなさらなる基、残基、部分、結合単位又はアミノ酸配列は、本発明のアミノ酸配列（及び／又はこれが存在する化合物又は構築物）に対しさらなる機能性を与えても、又は与えなくてもよく、本発明のアミノ酸配列の特性を変えても、又は変えなくてもよい。
例えば、このようなさらなる基、残基、部分又は結合単位は、化合物又は構築物が（融合）タンパク質又は（融合）ポリペプチドになるように、１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列であり得る。好ましいが非限定的な態様において、上記１つ又は複数の他の基、残基、部分又は結合単位は免疫グロブリン配列である。さらにより好ましくは、上記１つ又は複数の他の基、残基、部分又は結合単位は、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列、「ｄＡｂ」、ｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列、又はナノボディから成る群から選択される。
代替的に、このような基、残基、部分又は結合単位は例えば、化学的な基、残基、部分（それ自体が生物学的に及び／又は薬理学的に活性であっても、又は活性でなくてもよい）であり得る。例えば、これに限定されないが、このような基は、本明細書にさらに記載されるように、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドの「誘導体」を提供するように、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と連結し得る。
本明細書に記載の１つ又は複数の誘導体を含むか、又は本質的にこれから成り、任意で１つ又は複数のリンカーを介して連結した、１つ又は複数の他の基、残基、部分又は結合単位を任意でさらに含む、化合物又は構築物も本発明の範囲内である。好ましくは、上記１つ又は複数の他の基、残基、部分又は結合単位はアミノ酸配列である。
上記の化合物又は構築物において、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、及び１つ又は複数の基、残基、部分又は結合単位は、互いに直接、及び／又は１つ又は複数の好適なリンカー又はスペーサを介して連結してもよい。例えば、１つ又は複数の基、残基、部分又は結合単位がアミノ酸配列である場合、リンカーは、得られる化合物又は構築物が融合（タンパク質）又は融合（ポリペプチド）になるようにアミノ酸配列であってもよい。
概して本発明の化合物又はポリペプチドは、本発明の化合物又はポリペプチドを提供するように、任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列と、１つ又は複数のさらなる基、残基、部分又は結合単位とを好適に連結する工程を少なくとも１つ含む方法で調製することができる。本発明のポリペプチドは、概して少なくとも本発明のポリペプチドをコードする核酸を準備する工程と、好適な方法で上記核酸を発現する工程と、発現した本発明のポリペプチドを回収する工程とを含む方法で調製することもできる。このような方法は、例えば本明細書にさらに記載の方法及び技法に基づいて、当業者にとって明らかな、それ自体が既知の方法で行うことができる。
本発明のアミノ酸配列から開始して本発明の化合物又はポリペプチドを設計／選択、及び／又は調製する方法は、本明細書では上記本発明のアミノ酸配列を「フォーマットする（formatting）」とも称され、本発明の化合物又はポリペプチドの一部を構成する本発明のアミノ酸は、「フォーマットされた（formatted）」、又は上記本発明の化合物又はポリペプチド「のフォーマット形態（in theformat of）」であるといわれる。本発明のアミノ酸配列をフォーマットすることができる方法の例及びこのようなフォーマットの例が、本明細書中の開示に基づいて当業者にとって明らかであり、このようなフォーマットされたアミノ酸配列は、本発明のさらなる態様を形成する。
本発明の特定の一態様において、本発明の化合物、又は本発明のポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列に比べて増大した半減期を有し得る。このような化合物及びポリペプチドの幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかとなり、例えば半減期が増大するように（例えばペグ化によって）化学修飾された本発明のアミノ酸配列又はポリペプチド、血清タンパク質（例えば血清アルブミン（例については欧州特許第０３６８６８４号明細書４頁を参照されたい））と結合するための少なくとも１つのさらなる結合部位を含む本発明のアミノ酸配列、又は本発明のアミノ酸配列の半減期を増大させる少なくとも１つの部分（特に少なくとも１つのアミノ酸配列）と連結する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドが含まれる。このような半減期が延長した部分又はアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドの例は、本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかとなり、例えばこれらに限定されないが、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列が、１つ又は複数の血清タンパク質若しくはその断片（例えば（ヒト）血清アルブミン又はその好適な断片）、又は血清タンパク質と結合することができる１つ又は複数の結合単位と好適に連結するポリペプチド（例えばドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列、「ｄＡｂ」、ｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列、又は血清アルブミン（例えばヒト血清アルブミン）、血清免疫グロブリン（例えばＩｇＧ）等の血清タンパク質又はトランスフェリンと結合することができるナノボディ、さらなる記載及び本明細書で言及される参考文献を参照する）；本発明のアミノ酸配列がＦｃ部分（例えばヒトＦｃ）又はその好適な部分若しくは断片と連結するポリペプチド；又は１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列が、血清タンパク質と結合することができる１つ又は複数の低分子タンパク質又はペプチドと好適に連結するポリペプチドが含まれる（例えば、これに限定されないが、国際公開第９１／０１７４３号パンフレット、国際公開第０１／４５７４６号パンフレット、国際公開第０２／０７６４８９号パンフレット、及び２００６年１２月５日に出願されたAblynx N. V.の"Peptidescapable of binding to serum proteins"と題する米国仮特許出願（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６３３４８号明細書及び国際公開０８／０６８２８０号パンフレットも参照されたい）並びにAblynx. N. V. の"Improvedpeptides capable of binding to serum proteins"と共に題する２つの米国仮特許出願第６１／０５０３８５号明細書及び第６１／０４５６９０号明細書に記載のタンパク質及びペプチド）。
概して、半減期が増大した、本発明の化合物又はポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列自体の半減期よりも少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍（少なくとも５倍等）、例えば少なくとも１０倍、又は２０倍を超えて大きい半減期を有するのが好ましい。例えば、半減期が増大した、本発明の化合物又はポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列自体に比べて、１時間を超えて、好ましくは２時間を超えて、より好ましくは６時間を超えて（１２時間等を超えて）、又はさらに２４時間、４８時間若しくは７２時間を超えて増大した半減期を有し得る。
好ましいが、本発明の非限定的な態様において、このような本発明の化合物又はポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列自体に比べて、１時間を超えて、好ましくは２時間を超えて、より好ましくは６時間を超えて（１２時間等を超えて）、又はさらに２４時間、４８時間若しくは７２時間を超えて増大した血清半減期を有する。
本発明の好ましいが非限定的な別の態様において、このような本発明の化合物又はポリペプチドは、少なくとも約１２時間、好ましくは少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間、さらにより好ましくは少なくとも７２時間以上のヒトにおける血清半減期を示す。例えば本発明の化合物又はポリペプチドは、少なくとも５日（約５日〜１０日等）、好ましくは少なくとも９日（約９日〜１４日等）、より好ましくは少なくとも約１０日（約１０日〜１５日等）、若しくは少なくとも約１１日（約１１日〜１６日等）、より好ましくは少なくとも約１２日（約１２日〜１８日以上等）、又は１４日超（約１４日〜１９日等）の半減期を有し得る。
幾つかの好ましいが非限定的な本発明のポリペプチドの例は以下の通りである：
配列番号２１４２、配列番号２１４３、配列番号２１４４、配列番号２１４５、配列番号２１４６、配列番号２１４７、配列番号２１４８、配列番号２１４９、配列番号２１５０、配列番号２１５１、配列番号２１５２、配列番号２１５３、配列番号２１５４、配列番号２１５５、配列番号２１５６、配列番号２１５７、配列番号２１５８、配列番号２１５９、配列番号２１６０、配列番号２１６１、配列番号２１６２、配列番号２１６３、配列番号２１６４、配列番号２１６５、配列番号２１６６、配列番号２１６７、配列番号２１６８、配列番号２１６９、配列番号２５３０、配列番号２５３１、配列番号２５３２、配列番号２５３３、配列番号２５３４、配列番号２５３５、配列番号２５３６、配列番号２５３７、配列番号２５３８、配列番号２５３９、配列番号２５４０、配列番号２５４１、配列番号２５４２、配列番号２５４３、配列番号２５４４、配列番号２５４５、配列番号２５４６、配列番号２５４７、配列番号２５４８、配列番号２５４９、配列番号２５５０、配列番号２５５１、配列番号２５５２、配列番号２５５３、配列番号２５５４、配列番号２５５５、配列番号２５５６、配列番号２５５７及び／又は配列番号２５５８のポリペプチド（図３０も参照されたい）（これは、ｐ１９に指向性を有する（即ち少なくとも１つのｐ１９＋配列及び／又は少なくとも１つのｐ１９−配列を含む）多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの本発明のポリペプチドの幾つかの非限定的な例である。これらのポリペプチドは、（ｐ１９サブユニットを含まない他のヘテロ二量体サイトカインと比較して）ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つこれに特異的である（ことが期待される）（本明細書に規定のように）。例えばこれらのポリペプチドは、ＩＬ−１２（及びまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−２３に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））；
配列番号２６１５、配列番号２６１６、配列番号２６１７、配列番号２６１８、配列番号２６１９、配列番号２６２０、配列番号２６２１及び／又は配列番号２６２２のポリペプチド（図３２も参照されたい）（これは、少なくとも１つのヒト化ｐ１９＋配列及び／又は少なくとも１つのヒト化ｐ１９−配列を含む、ｐ１９に指向性を有する、多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの本発明のポリペプチドの幾つかの非限定的な例である）。これらのポリペプチドは、（ｐ１９サブユニットを含まない他のヘテロ二量体サイトカインと比較して）ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つこれに特異的である（ことが期待される）（本明細書に規定のように）。例えばこれらのポリペプチドは、ＩＬ−１２（及びまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−２３に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））；
配列番号２６２３、配列番号２６２４、配列番号２６２５、配列番号２６２６、配列番号２６２７、配列番号２６２８、配列番号２６２９、配列番号２６４３及び／又は配列番号２６４４のポリペプチド（図３３も参照されたい）（これは、ｐ１９に指向性を有する、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（即ち少なくとも１つのｐ１９＋配列及び／又は少なくとも１つのｐ１９−配列）と、ｐ４０に指向性を有する、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（即ち少なくとも１つのｐ４０＋配列及び／又は少なくとも１つのｐ４０−配列）とを含む、本発明の多重特異性「ｐ１９−ｐ４０」ポリペプチドの幾つかの非限定的な例である。これらのポリペプチドは、ＩＬ−１２（及びまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−２３に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））；
配列番号２６３０、配列番号２６３１、配列番号２６３２、配列番号２６３３、配列番号２６３４、配列番号２６３５、配列番号２６３６、配列番号２６３７、配列番号２６３８、配列番号２６３９、配列番号２６４０及び／又は配列番号２６４１のポリペプチド（図３４も参照されたい）（これは、ｐ４０に指向性を有する（即ち少なくとも１つのｐ４０＋配列及び／又は少なくとも１つのｐ４０−配列を含む）、多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの本発明のポリペプチドの幾つかの非限定的な例である。これらのポリペプチドは、（ｐ４０サブユニットを含まない他のヘテロ二量体サイトカインと比較して）、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つこれに特異的である（ことが期待される）（本明細書に規定のように）。例えば、これらのポリペプチドは、ＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、ＩＬ−２３及び／又はＩＬ−１２に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））；
配列番号２６４５及び／又は配列番号２６４６のポリペプチド（図３５も参照されたい）（これはｐ３５に指向性を有する、多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの本発明のポリペプチドの幾つかの非限定的な例である。これらのポリペプチドは、（ｐ３５サブユニットを含まない他のヘテロ二量体サイトカインと比較して）、ｐ３５サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインに指向性を有し（本明細書に規定のように）、且つこれに特異的である（ことが期待される）（本明細書に規定のように）。例えばこれらのポリペプチドは、ＩＬ−２３（及びまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−１２に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））；
配列番号２６４７及び／又は配列番号２６４８のポリペプチド（図３６も参照されたい）（これは、ｐ３５に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、ｐ４０に指向性を有する少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（即ち少なくとも１つのｐ４０＋配列及び／又は少なくとも１つのｐ４０−配列）とを含む、本発明の多重特異性「ｐ３５−ｐ４０」ポリペプチドの幾つかの非限定的な例である。これらのポリペプチドは、ＩＬ−２３（及びまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５）と比較して、ＩＬ−１２に特異的であることが期待される（本明細書に規定のように））。
本発明での使用に適したポリペプチド、このようなポリペプチド（例えば本明細書中に記載されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０＋配列、ｐ４０−配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列及びＩＬ−２３配列）に使用することができる本発明のアミノ酸配列（又はヌクレオチド配列／これを含む核酸）の他の例、及びこのような本発明のアミノ酸配列を使用して本発明のポリペプチドをどのように構築及び生成することができるかは、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかであろう。
したがって本発明の幾つかのさらなる態様は、
配列番号２１４２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１４９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１４９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１５９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１５９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２１６９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２１６９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５３９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５３９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５４９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５４９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２５５８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２５５８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６１５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６１５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６１６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６１６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６１７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６１７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６１８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６１８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６１９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６１９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
並びにヌクレオチド配列又はこれをコードするヌクレオチド配列に関する。これらのポリペプチド構築物はさらに、ｐ１９及び／又はＩＬ−２３に指向性を有し（より好ましくはまたｐ１９及び／又はＩＬ−２３に特異的であり）、さらにより好ましくは（例えば実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のまたさらなる態様は、
配列番号２６２３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６２９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６２９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
並びにヌクレオチド配列又はこれをコードするヌクレオチド配列に関する。これらのポリペプチド構築物はさらに、ｐ１９及び／又はＩＬ−２３に指向性を有し（より好ましくはまたｐ１９及び／又はＩＬ−２３に特異的であり）、さらにより好ましくは（例えば実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のまたさらなる態様は、
配列番号２６３０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３２のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３２のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３３のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３３のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３４のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３４のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６３９のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６３９のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４０のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４０のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４１のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４１のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
並びにヌクレオチド配列又はこれをコードするヌクレオチド配列に関する。これらのポリペプチド構築物はさらに、ｐ４０、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３に指向性を有し（より好ましくはまたＩＬ−２７及び／又はＩＬ−３５と比較して、ｐ４０、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３に特異的であり）、さらにより好ましくは（例えば実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−２３とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害すること、及び／又はＩＬ−１２とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のまたさらなる態様は、
配列番号２６４５のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４５のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４６のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４６のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
並びにヌクレオチド配列又はこれをコードするヌクレオチド配列に関する。これらのポリペプチド構築物はさらに、ｐ３５及び／又はＩＬ−１２に指向性を有し（より好ましくはまたｐ３５及び／又はＩＬ−１２に特異的であり）、さらにより好ましくはＩＬ−１２とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害することができるようなものであるのが好ましい。
本発明のさらなる他の態様は、
配列番号２６４７のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４７のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
配列番号２６４８のポリペプチド（構築物）；又は配列番号２６４８のポリペプチドとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば９５％を超えるアミノ酸同一性を有するポリペプチド（構築物）（本明細書に規定のように）；
並びにヌクレオチド配列又はこれをコードするヌクレオチド配列に関する。これらのポリペプチド構築物はさらに、ｐ３５及び／又はＩＬ−１２に指向性を有し（より好ましくはまたｐ３５及び／又はＩＬ−１２に特異的であり）、さらにより好ましくは（例えば実施例１９又は実施例２２に記載のアルファスクリーンアッセイにおける）ＩＬ−１２とその同族受容体との結合を調節、遮断、中和又は阻害することができるようなものであるのが好ましい。
別の態様において、本発明は、本発明のアミノ酸配列（例えば本発明の（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）又は本発明のポリペプチド（又はその好適な断片）をコードする核酸に関する。このような核酸は、本明細書中で「本発明の核酸」とも称され、例えば本明細書中でさらに記載されるように遺伝子構築物の形態であり得る。
別の態様において、本発明は、本発明のアミノ酸配列（例えば本発明の（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）及び／又は本発明のポリペプチドを発現する（又は好適な状況下で発現することができる）；及び／又は本発明の核酸を含有する、宿主又は宿主細胞に関する。このような宿主又は宿主細胞の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
本発明は、産物又は組成物であって、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列と、少なくとも１つの本発明のポリペプチド（又はその好適な断片）及び／又は少なくとも１つの本発明の核酸と、任意で（即ち組成物の使用目的に応じて）それ自体が既知のこのような組成物の１つ又は複数のさらなる成分とを含有するか又は含む産物又は組成物に関する。このような産物又は組成物は例えば、（本明細書に記載の）薬学的組成物、獣医学的組成物又は（同様に本明細書に記載の）診断用途のための産物若しくは組成物であり得る。このような産物又は組成物の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかでのヘテロ二量体サイトカイン、ヘテロ二量体サイトカインの受容体及び／又はヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達の調節（のための方法又は組成物）（本明細書に規定のように）における本発明のアミノ酸配列、ナノボディ若しくはポリペプチド、又はこれを含む組成物の使用にも関する。
本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかでヘテロ二量体サイトカイン、ヘテロ二量体サイトカインの受容体及び／又はヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を（本明細書に規定のように）調節する方法（本明細書に規定のように）であって、ヘテロ二量体サイトカイン、ヘテロ二量体サイトカインの受容体及び／又はヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を調節するのに適した方法及び量で、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はヘテロ二量体サイトカインの受容体を、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、ナノボディ若しくはポリペプチド、又はこれを含む組成物に接触させる工程を少なくとも含む、方法にも関する。
本発明は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ又は細胞アッセイ）又はｉｎ ｖｉｖｏ（例えば単一細胞又は多細胞生物、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒト、例えばヘテロ二量体サイトカイン及びこれらの受容体に関連する疾患又は障害の危険性があるか、又はこれを患うヒト）のいずれかで（本明細書に規定のように）ヘテロ二量体サイトカイン、ヘテロ二量体サイトカインの受容体及び／又はヘテロ二量体サイトカイン媒介性のシグナル伝達を（本明細書に規定のように）調節するための組成物（例えば、これらに限定されないが、本明細書中でさらに記載されるような医薬組成物又は医薬調製物）の調製における本発明の１つのアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドの使用にも関する。
本発明はさらに、本明細書に記載のアミノ酸配列、化合物、構築物、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、産物及び組成物を製造又は生成する方法に関する。このような方法の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
概してこれらの方法は、
ａ）アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリを準備する工程と、
ｂ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するアミノ酸配列に関して、上記のアミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程と、
ｃ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するアミノ酸配列（複数可）を単離する工程とを含み得る。
このような方法では、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、任意の好適なアミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリであり得る。例えば、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、（本明細書に記載の）免疫グロブリン配列のセット、コレクション又はライブラリ（例えば免疫グロブリン配列のナイーブセット、ナイーブコレクション又はナイーブライブラリ、免疫グロブリン配列の合成又は半合成のセット、コレクション又はライブラリ、及び／又は親和性成熟を受けている免疫グロブリン配列のセット、コレクション又はライブラリ）であり得る。
またこのような方法では、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、重鎖可変ドメイン（例えばＶＨドメイン又はＶＨＨドメイン）又は軽鎖可変ドメインのセット、コレクション又はライブラリであり得る。例えば、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、ドメイン抗体若しくは単一ドメイン抗体のセット、コレクション若しくはライブラリであり得るか、又はドメイン抗体若しくは単一ドメイン抗体として機能することができるアミノ酸配列のセット、コレクション若しくはライブラリであり得る。
この方法の好ましい態様では、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、例えばヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与した哺乳動物由来の免疫グロブリン配列の免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリであり得る。１つの特定の態様では、上抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
上記の方法において、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、スクリーニングを容易にするように、ファージ、ファージミド、リボソーム又は好適な微生物（例えば酵母）上に提示してもよい。アミノ酸配列（のセット、コレクション又はライブラリ）を提示及びスクリーニングするのに好適な方法、技法及び宿主生物は、例えば本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかである。Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116（2005）におけるHoogenboomによる総説も参照する。
別の態様において、アミノ酸配列を生成する方法は、少なくとも
ａ）アミノ酸配列を発現する細胞のコレクション又は試料を準備する工程と、
ｂ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するアミノ酸配列を発現する細胞に関して上記細胞のコレクション又は試料をスクリーニングする工程と、
ｃ）（ｉ）上記アミノ酸配列を単離する工程、又は（ｉｉ）上アミノ酸配列をコードする核酸配列を上記細胞から単離し、その後上アミノ酸配列を発現する、単離する工程のいずれかとを含む。
例えば、所望のアミノ酸配列が免疫グロブリン配列である場合、細胞のコレクション又は試料は例えば、Ｂ細胞のコレクション又は試料であり得る。また、この方法では、細胞の試料は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与した哺乳動物に由来し得る。１つの特定の態様では、上記抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
上記の方法は、当業者にとって明らかなように、任意の好適な方法で行われ得る。例えば欧州特許第０５４２８１０号明細書、国際公開第０５／１９８２４号パンフレット、国際公開第０４／０５１２６８号パンフレット及び国際公開第０４／１０６３７７号パンフレットを参照する。工程ｂ）のスクリーニングは、ＦＡＣＳ等のフローサイトメトリ技法を使用して行うのが好ましい。これに関しては、例えばLieby et al., Blood, Vol. 97, No. 12, 3820 （2001）を参照する。
別の態様において、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列を生成する方法は、少なくとも
ａ）アミノ酸配列をコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリを準備する工程と、
ｂ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列に関して、上記の核酸配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程と、
ｃ）上記核酸配列を単離した後、上記アミノ酸配列を発現する工程とを含み得る。
このような方法では、アミノ酸配列をコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリは例えば、免疫グロブリン配列のナイーブセット、ナイーブコレクション又はナイーブライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリ、免疫グロブリン配列の合成又は半合成のセット、コレクション又はライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリ、及び／又は親和性成熟を受けている免疫グロブリン配列のセット、コレクション又はライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリであり得る。
またこのような方法では、核酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、重鎖可変ドメイン（例えばＶＨドメイン又はＶＨＨドメイン）又は軽鎖可変ドメインのセット、コレクション又はライブラリをコードし得る。例えば、核酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、ドメイン抗体若しくは単一ドメイン抗体のセット、コレクション若しくはライブラリ、又はドメイン抗体若しくは単一ドメイン抗体として機能することができるアミノ酸配列のセット、コレクション若しくはライブラリをコードし得る。
この方法の好ましい態様では、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、例えばヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与した哺乳動物由来の核酸配列の免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリであり得る。１つの特定の態様では、上記抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
核酸配列のセット、コレクション又はライブラリは例えば、重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインの免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリをコードし得る。１つの特定の態様では、ヌクレオチド配列のセット、コレクション又はライブラリは、ＶＨＨ配列のセット、コレクション又はライブラリをコードし得る。
上記の方法において、ヌクレオチド配列のセット、コレクション又はライブラリは、スクリーニングを容易にするように、ファージ、ファージミド、リボソーム又は好適な微生物（例えば酵母）上に提示してもよい。アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（のセット、コレクション又はライブラリ）を提示及びスクリーニングするのに好適な方法、技法及び宿主生物は、例えば本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかである。Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116（2005）におけるHoogenboomによる総説も参照する。
本発明は、上記の方法、又は代替的に上記の方法のうちの１つと、さらに少なくとも上記免疫グロブリン配列のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を決定する工程と、それ自体が既知の方法で、例えば好適な宿主細胞若しくは宿主生物における発現又は化学合成により上記アミノ酸配列を発現又は合成する工程とを含む方法により得られるアミノ酸配列にも関する。
また上記の工程の後に、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列を好適にヒト化（又は代替的にラクダ化）してもよく、及び／又はこのようにして得られたアミノ酸配列（複数可）を、本発明のポリペプチドを提供するように（任意で１つ又は複数の好適なリンカーを介して）互いに又は１つ若しくは複数の他の好適なアミノ酸配列と連結してもよい。また、本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列を、好適にヒト化（又は代替的にはラクダ化）し、且つ好適に発現してもよく、及び／又は１つ又は複数の、本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列を（任意で１つ又は複数の好適なリンカーをコードするヌクレオチド配列を介して）互いに又は１つ若しくは複数の、他の好適なアミノ酸配列をコードする核酸配列と連結してもよく、その後でこのようにして得られたヌクレオチド配列を本発明のポリペプチドを提供するように好適に発現してもよい。
本発明はさらに、本明細書中に記載のアミノ酸配列、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、生成物及び組成物の用途及び使用、並びにヘテロ二量体サイトカイン及び／又はこれらの受容体に関連する疾患及び障害を予防及び／又は治療する方法に関する。幾つかの好ましいが非限定的な用途及び使用は、本明細書中のさらなる記載より明らかになる。
本発明の具体的で好ましいが、非限定的な態様は以下に関する：
１． タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ１９サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
２． 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）である、態様１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
３． 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０−配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、態様１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
４． 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）である、態様１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
５． タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ３５サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
６． タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ１９サブユニット上の第１のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ１９サブユニット上の該第１のエピトープ又は抗原決定基とは異なる第２のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
７． 第１のアミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ第２のアミノ酸配列が、ｐ１９−配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、態様６に記載のタンパク質又はポリペプチド。
８． タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ４０サブユニット上の第１のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニット上の該第１のエピトープ又は抗原決定基とは異なる第２のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
９． タンパク質又はポリペプチドであって、第１のアミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ第２のアミノ酸配列が、ｐ４０−配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、タンパク質又はポリペプチド。
１０． 上記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、単一の（抗原）結合ドメイン若しくは結合単位を形成するか、及び／又は本質的にこれから成る、及び／又は（任意で好適なフォールディングの後に）単一の（抗原）結合ドメイン又は結合単位を形成するか、及び／又はそのように機能することが可能である、態様１〜９のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
１１． 上記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、免疫グロブリンフォールドを含むか、又は好適な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成することが可能である、態様１〜１０のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
１２． 上記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）及び３つの相補性決定領域から成る、態様１〜１１のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
１３． 上記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、ドメイン抗体（若しくはドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一のドメイン抗体（若しくは単一のドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（若しくはｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（ＶＨＨ配列が挙げられるが、これに限定されない）、又は別の単一の可変ドメイン、又はこれらのいずれか１つの任意の好適な断片である、態様１〜１２のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
１４． ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記タンパク質又はポリペプチドが、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び上記第２のサブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
１５． 第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、少なくとも１つの第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有される少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
上記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、上記第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有されない少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記タンパク質又はポリペプチドが、上記第１の（即ち共有）サブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び上記第２の（即ち非共有）サブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
１６． 第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
上記タンパク質又はポリペプチドが、上記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に上記第１のサブユニットに指向性を有するが、上記第１のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、上記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
１７． 受容体のリガンドに指向性を有し、且つ該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、態様１５又は１６に記載のタンパク質又はポリペプチド。
１８． 受容体のリガンドに指向性を有し、該第１の結合ドメイン又は結合単位と該第２の結合ドメイン又は結合単位との両方が、該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能である、態様１５に記載のタンパク質又はポリペプチド。
１９． 各々の結合ドメイン又は結合単位が、免疫グロブリンフォールドを含むか、又は好適な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成することが可能である、態様１４〜１８のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
２０． 各々の結合ドメイン又は結合単位が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）及び３つの相補性決定領域から成る、態様１４〜１９のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
２１． 各々の結合ドメイン又は結合単位が、ドメイン抗体（若しくはドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一のドメイン抗体（若しくは単一のドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（若しくはｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（ＶＨＨ配列が挙げられるが、これに限定されない）、又は別の単一の可変ドメイン、又はこれらのいずれか１つの任意の好適な断片である、態様１４〜２０のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド。
２２． 態様１〜２１のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又は核酸。
２３． 少なくとも１つの態様１〜２１のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド、又は態様２２に記載のヌクレオチド配列又は核酸を含む組成物。
２４． 少なくとも１つの態様１〜２１のいずれか１つに記載のタンパク質又はポリペプチド、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤及び／又はアジュバントを含む医薬組成物。
２５． ｐ１９＋配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
２６． ｐ１９−配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
２７． ｐ４０−配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
２８． ｐ４０＋配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
２９． ｐ３５配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
３０． 該多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、態様２５〜２９のいずれか１つに記載の使用。
３１． 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、該ヘテロ二量体サイトカインの１つのサブユニットに指向性を有する二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドである、態様２５〜３０のいずれか１つに記載の使用。
３２． 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、上記ヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び上記ヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む多重特異性の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドである、態様３０及び３１のいずれか１つに記載の使用。
３３． 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、該ヘテロ二量体サイトカインとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、態様３０〜３２のいずれか１つに記載の使用。
３４． ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有する多重特異性構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成るアミノ酸配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが上記アミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数のアミノ酸配列が該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の該第１のサブユニットとは異なる第２のサブユニットに指向性を有する、使用。
３５． 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有するか、又はヘテロ二量体サイトカインのヘテロ二量体受容体に指向性を有する、態様３４に記載の使用。
３６． ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有する二重パラトピック構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成るアミノ酸配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、上記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが上記アミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、上記１つ又は複数のアミノ酸配列が該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ上記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが同様に上記第１のサブユニットに指向性を有するが、上記サブユニット上の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する、使用。
３７． 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが受容体のリガンドに指向性を有し、且つ該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、態様３６に記載の使用。
また、（全ての様々な及び／又は好ましい態様において）本明細書中に記載の本発明のアミノ酸配列（例えば（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）、構築物、ポリペプチド及びタンパク質は全て、以下のようなＩＣ５０値を有するのが好ましい：
本発明のアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドが、ｐ１９に指向性を有し、且つｐ１９＋配列である（本明細書中で記載されるような）一価のアミノ酸配列である場合、（１９ｐＭのヒトＩＬ−２３を使用する）実施例２５に記載のアッセイにおいて１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満、さらにより好ましくは１０ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満（例えばピコモル範囲）のＩＣ５０値；
本発明のアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドが、ｐ４０に指向性を有し、且つｐ４０＋配列である（本明細書中で記載されるような）一価のアミノ酸配列である場合、（１９ｐＭのヒトＩＬ−２３を使用する）実施例２５に記載のアッセイにおいて及び／又は（１ｐＭのヒトＩＬ−１２を使用する）実施例２７に記載のアッセイにおいて１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満、さらにより好ましくは１０ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満（例えばピコモル範囲）のＩＣ５０値；
本発明のアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドが、ＩＬ−２３に指向性を有する多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの構築物である場合、（１９ｐＭのヒトＩＬ−２３を使用する）実施例２５に記載のアッセイにおいて１０ｎＭ未満、より好ましくは１ｎＭ未満、さらにより好ましくは５００ｐＭ未満、例えば１００ｐＭ未満（例えば１ピコモル〜５０ピコモルの範囲）のＩＣ５０値；
本発明のアミノ酸配列、タンパク質又はポリペプチドが、ＩＬ−１２に指向性を有する多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックの構築物である場合、（１ｐＭのヒトＩＬ−１２を使用する）実施例２７に記載のアッセイにおいて１０ｎＭ未満、より好ましくは１ｎＭ未満、さらにより好ましくは５００ｐＭ未満、例えば１００ｐＭ未満（例えば１ピコモル〜５０ピコモルの範囲）のＩＣ５０値。
また本発明の他の態様、実施の形態、利点及び用途は、本明細書中のさらなる記載から明らかになり、その中で本発明は、これを含む本発明のナノボディ及びこれを含む本発明のポリペプチド（これらは本発明の好ましい態様の幾つかを形成する）に関してより詳細に説明及び考察する。
本明細書中のさらなる記載から明らかになるように、一般的にナノボディは、「ｄＡｂ」又は同様の（単一）ドメイン抗体又は免疫グロブリン配列に比べて（本明細書で概説される）或る特定の利点があり、この利点は本発明のナノボディでも与えられる。しかし、以下の教示のより一般的な態様を、（直接又は同じように）他の本発明のアミノ酸配列に適用することもできることは、当業者にとって明らかである。
本明細書、実施例及び特許請求の範囲において：
ａ）特に他に指示又は規定がなければ、使用される全ての用語は、当業者にとって明らかな、当該技術分野における通常の意味を有する。例えば標準的なハンドブック（例えばSambrook et al,"Molecular Cloning: A Laboratory Manual"（2nd.Ed.）, Vols. 1-3, Cold Spring HarborLaboratory Press（1989）、F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecularbiology", Green Publishing and Wiley Interscience,New York（1987）、Lewin, "Genes II", John Wiley & Sons, New York, N.Y.,（1985）、Old et al., "Principles of GeneManipulation: An Introduction to Genetic Engineering", 2nd edition,University of California Press, Berkeley, CA（1981）、Roitt et al., "Immunology"（6th. Ed.）, Mosby/Elsevier, Edinburgh（2001）、Roitt et al., Roitt's Essential Immunology, 10th Ed. BlackwellPublishing, UK（2001）、及びJaneway et al., "Immunobiology"（6th Ed.）, Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York（2005））、並びに本明細書で言及される一般的な背景技術を参照する。
ｂ）特に他に指示がなければ、用語「免疫グロブリン配列」は、本明細書で重鎖抗体に言及するのに使用されるのか又は従来の４鎖抗体に言及するのに使用されるかに関係なく、全長抗体、その個々の鎖、及びその全ての部分、ドメイン又は断片（これらに限定されないが、それぞれＶＨＨドメイン又はＶＨ／ＶＬドメイン等の抗原結合ドメイン又は断片を含む）の両方を含む一般的な用語として使用される。さらに（例えば「免疫グロブリン配列」、「抗体配列」、「可変ドメイン配列」、「ＶＨＨ配列」又は「タンパク質配列」等の用語で）本明細書で使用される用語「配列」は一般的に、文脈上さらなる限定的な解釈が要求される場合を除き、関連のアミノ酸配列と、これをコードする核酸配列又はヌクレオチド配列との両方を含むと理解されるべきである。
ｃ）特に他に指示がなければ、具体的に詳しく説明されていない全ての方法、工程、技法及び操作を実施することができ、当業者にとって明らかなそれ自体が既知の方法で実施する。また例えば、例えば標準的なハンドブック及び本明細書で言及される一般的な背景技術、並びに本明細書で言及されるさらなる参考文献並びに例えば以下の総説、Presta, Adv. Drug Deliv. Rev. 2006, 58 （5-6）: 640-56、Levin and Weiss, Mol. Biosyst.2006, 2（1）: 49-57、Irving et al., J.Immunol. Methods, 2001,248（1-2）, 31-45、Schmitz et al., Placenta, 2000, 21 Suppl. A, S106-12、Gonzales et al., Tumour Biol., 2005, 26（1）, 31-43（これらは、親和性成熟等のタンパク質工学技法及び免疫グロブリン等のタンパク質の特異性及び他の所望の特性を改善する他の技法を記載している）を参照する。
ｄ）アミノ酸残基は、表Ａ−３に言及されるように標準的な３文字アミノ酸コード又は１文字アミノ酸コードに従って示す。
ｅ）２つ以上のヌクレオチド配列を比較するために、［第２のヌクレオチド配列における対応する位置のヌクレオチドと同一な第１のヌクレオチド配列におけるヌクレオチドの数］を［第１のヌクレオチド配列におけるヌクレオチド総数］で除算し、［１００％］で乗算することによって、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間の「配列同一性」のパーセントを算出することができ、第１のヌクレオチド配列に比べて、第２のヌクレオチド配列におけるヌクレオチドの欠失、挿入、置換又は付加のそれぞれは、単一ヌクレオチド（位置）での差異と考えられる。
代替的に、標準的な設定を用いて、ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ ｖ２．０等の配列アラインメント用の既知のコンピュータアルゴリズムを使用して、２つ以上のヌクレオチド配列間の配列同一性の程度を算出することができる。
配列同一性の程度を決定するための幾つかの他の技法、コンピュータアルゴリズム及び設定は例えば、国際公開第０４／０３７９９９号パンフレット、欧州特許第０９６７２８４号明細書、欧州特許第１０８５０８９号明細書、国際公開第００／５５３１８号パンフレット、国際公開第００／７８９７２号パンフレット、国際公開第９８／４９１８５号パンフレット及び英国特許出願公開第２３５７７６８号明細書に記載されている。
通常、上述で概説された算出方法に従って、２つのヌクレオチド配列間の「配列同一性」のパーセントを決定するために、最も多くのヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を「第１の」ヌクレオチド配列とし、他のヌクレオチド配列を「第２の」ヌクレオチド配列とする。
ｆ）２つ以上のアミノ酸配列を比較するために、［第２のアミノ酸配列における対応する位置のアミノ酸残基と同一な第１のアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の数］を［第１のアミノ酸配列におけるアミノ酸残基総数］で除算し、［１００％］で乗算することによって、第１のアミノ酸配列と第２のアミノ酸配列との間の「配列同一性」（本明細書で「アミノ酸同一性」と称される）のパーセントを算出することができ、第１のアミノ酸配列に比べて、第２のアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の欠失、挿入、置換又は付加のそれぞれは、単一アミノ酸残基（位置）での差異、即ち本明細書に規定の「アミノ酸差異」と考えられる。
代替的に、ここでもまた標準的な設定を用いて、既知のコンピュータアルゴリズム（例えばヌクレオチド配列に関する配列同一性の程度を決定するのに上記で言及されるもの）を使用して、２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度を算出することができる。
通常、上述で概説された算出方法に従って、２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」のパーセントを決定するために、最も多くのアミノ酸残基を有するアミノ酸配列を「第１の」アミノ酸配列とし、他のアミノ酸配列を「第２の」アミノ酸配列とする。
また、２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度を決定する際、当業者は、いわゆる「保存的な」アミノ酸置換を考慮してもよく、これは一般的に、アミノ酸残基が同様の化学構造を有する別のアミノ酸残基に置き換わり、且つポリペプチドの機能、活性又は他の生物学的特性への影響がほとんど、又は本質的に全くないアミノ酸置換と説明することができる。このような保存的なアミノ酸置換は、例えば国際公開第０４／０３７９９９号パンフレット、英国特許出願公開第４３５７７６８号明細書、国際公開第９８／４９１８５号パンフレット、国際公開第００／４６３８３号パンフレット及び国際公開第０１／０９３００号パンフレットから当該技術分野において既知であり、このような置換の（好ましい）種類及び／又は組合せは、関連の教示に基づいて国際公開第０４／０３７９９９号パンフレット及び国際公開第９８／４９１８５号パンフレット、並びに本明細書で言及されるさらなる参考文献から選択することができる。
このような保存的な置換は、好ましくは以下の（ａ）群〜（ｅ）群内の或るアミノ酸が、同じ群内の別のアミノ酸残基に置換される置換である：（ａ）低分子脂肪族で非極性又はわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ及びＧｌｙ、（ｂ）極性で負に荷電した残基及びこの（非荷電）アミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ及びＧｌｎ、（ｃ）極性で正に荷電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ及びＬｙｓ、（ｄ）巨大な脂肪族で非極性の残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ及びＣｙｓ、並びに（ｅ）芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐ。
特に好ましい保存的置換は以下のようなものである：ＡｌａをＧｌｙに又はＳｅｒに、ＡｒｇをＬｙｓに、ＡｓｎをＧｌｎに又はＨｉｓに、ＡｓｐをＧｌｕに、ＣｙｓをＳｅｒに、ＧｌｎをＡｓｎに、ＧｌｕをＡｓｐに、ＧｌｙをＡｌａに又はＰｒｏに、ＨｉｓをＡｓｎ又はＧｌｎに、ＩｌｅをＬｅｕに又はＶａｌに、ＬｅｕをＩｌｅに又はＶａｌに、ＬｙｓをＡｒｇに、Ｇｌｎに又はＧｌｕに、ＭｅｔをＬｅｕに、Ｔｙｒに又はＩｌｅに、ＰｈｅをＭｅｔに、Ｌｅｕに又はＴｙｒに、ＳｅｒをＴｈｒに、ＴｈｒをＳｅｒに、ＴｒｐをＴｙｒに、ＴｙｒをＴｒｐに、及び／又はＰｈｅをＶａｌに、Ｉｌｅに又はＬｅｕに。
本明細書に記載のポリペプチドに適用される任意のアミノ酸置換はまた、Schulz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978によって開発された異なる種の相同タンパク質間のアミノ酸変異頻度の解析、Chou and Fasman, Biochemistry 13: 211, 1974及びAdv. Enzymol., 47: 45-149, 1978によって開発された構造形成能（structure forming potentials）の解析、並びにEisenberg et al., Proc. Nad. Acad Sci. USA 81: 140-144, 1984、Kyte & Doolittle; J Molec. Biol. 157: 105-132, 1981、及びGoldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem. 15: 321-353, 1986によって開発されたタンパク質における疎水性パターンの解析に基づき得る（全て全体が参照により本明細書に援用される）。ナノボディの一次構造、二次構造、及び三次構造に関する情報は、本明細書中の記載及び上記で言及された一般的な背景技術で与えられる。またこのため、ラマ由来のＶＨＨドメインの結晶構造は例えば、Desmyter et al., Nature Structural Biology, Vol. 3, 9, 803（1996）、Spinelli et al., Natural Structural Biology（1996）; 3, 752-757、及びDecanniere et al., Structure, Vol. 7, 4, 361（1999）によって与えられる。従来のＶＨドメインにおいてこれらの位置でＶＨ／ＶＬ界面及び潜在的なラクダ化置換を形成する幾つかのアミノ酸残基に関するさらなる情報は、上記で言及された従来技術で見出すことができる。
ｇ）アミノ酸配列及び核酸配列は、その全長にわたって（本明細書に規定のように）１００％の配列同一性を有する場合、「全く同じ」であると言える。
ｈ）２つのアミノ酸配列を比較するとき、用語「アミノ酸差異」は、第２の配列に比べて第１の配列の位置での単一アミノ酸残基の挿入、欠失又は置換を表し、２つのアミノ酸配列は、１つ又は２つ以上のこのようなアミノ酸差異を含有し得ることが理解される。
ｉ）ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列が、それぞれ別のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を「含む」、又は別のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列「から本質的に成る」というとき、これは、後者のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列がそれぞれ、初めに言及されたヌクレオチド配列又はアミノ酸配列に組み込まれていることを意味し得るが、より一般的に概してこれは、初めに言及されたヌクレオチド配列又はアミノ酸配列がそれぞれ、（例えば本明細書に記載の任意の好適な方法によるものであり得る）実際にどのように初めに言及された配列を生成又は入手するかに関係なく、その配列内にそれぞれ後者の配列と同じヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を有するヌクレオチド又はアミノ酸残基のストレッチを含むことを意味する。非限定的な例によって、本発明のナノボディがＣＤＲ配列を含むというとき、これは、上記ＣＤＲ配列が、本発明のナノボディに組み込まれていることを意味し得るが、より一般的に概してこれは、本発明のナノボディが、どのように該本発明のナノボディを生成又は入手するかに関係なく、その配列内に上記ＣＤＲ配列と同じアミノ酸配列を有するアミノ酸残基のストレッチを含むことを意味する。後者のアミノ酸配列は、特異的な生物学的又は構造的な機能を有する場合、初めに言及されたアミノ酸配列において本質的に同じ、類似の又は同等の生物学的又は構造的な機能を有するのが好ましい（言い換えれば、初めに言及されたアミノ酸配列は、後者の配列が本質的に同じ、類似の又は同等の生物学的又は構造的な機能を果たすことができるようなものであるのが好ましい）ということにも留意すべきである。例えば、本発明のナノボディがそれぞれ、ＣＤＲ配列又はフレームワーク配列を含むというとき、ＣＤＲ配列及びフレームワークはそれぞれ、上記ナノボディでＣＤＲ配列又はフレームワーク配列として機能することができるのが好ましい。また、ヌクレオチド配列が別のヌクレオチド配列を含むというとき、初めに言及されたヌクレオチド配列は、発現産物（例えばポリペプチド）で発現する場合、後者のヌクレオチド配列でコードされるアミノ酸配列が上記発現産物の一部を形成するようなもの（言い換えれば後者のヌクレオチド配列が、初めに言及されたより大きなヌクレオチド配列と同じリーディングフレーム内にあるようなもの）であるのが好ましい。
ｊ）核酸配列又はアミノ酸配列は、通常上記供給源又は媒体に関連がある少なくとも１つの他の成分（例えば別の核酸、別のタンパク質／ポリペプチド、別の生物学的成分、又は巨大分子）、又は少なくとも１つの汚染物質、不純物若しくは微量成分から分離されている場合、（例えばその天然の生物学的供給源及び／又はこれが得られる反応媒体又は培養媒体に比べて）「本質的な単離（形態）」であると見なされる。特に、核酸配列又はアミノ酸配列は、少なくとも２倍、具体的に少なくとも１０倍、より具体的に少なくとも１００倍、及び最大１０００倍以上精製されている場合に、「本質的に単離された」と考えられる。「本質的に単離形態である」核酸配列又はアミノ酸配列は、好適な技法、例えば好適なクロマトグラフィ技法（例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動法）を使用して決定されたものと、本質的に相同であるのが好ましい。
ｋ）本明細書で使用される用語「ドメイン」は概して、アミノ酸配列の球状領域（例えば抗体鎖、特に重鎖抗体の球状領域）又は本質的にこのような球状領域から成るポリペプチドを表す。通常、このようなドメインは、例えばシートとして、又はジスルフィド結合によって安定化したペプチドループ（例えば３つ又は４つのペプチドループ）を含む。用語「結合ドメイン」は（本明細書で規定されるように）抗原決定基に指向性を有するようなドメインを表す。
ｌ）用語「抗原決定基」は、抗原結合分子（例えば本発明のナノボディ又はポリペプチド）によって、及びより具体的には上記分子の抗原結合部位によって認識される抗原上のエピトープを表す。用語「抗原決定基」及び「エピトープ」は、本明細書で区別なく使用することもできる。
ｍ）特定の抗原決定基、エピトープ、抗原又はタンパク質（又はその少なくとも１つの部分、断片若しくはエピトープに関して）と（特異的に）結合することができる、特定の抗原決定基、エピトープ、抗原又はタンパク質に対する親和性を有する、及び／又は特定の抗原決定基、エピトープ、抗原又はタンパク質に対する特異性を有するアミノ酸配列（例えば本発明のナノボディ、抗体、ポリペプチド、又は概して抗原結合タンパク質若しくはポリペプチド、又はその断片）は、上記抗原決定基、エピトープ、抗原又は該タンパク質「に対する」、又は「に指向性を有する」（"directed against" or "directed to"）と言われる。
ｎ）用語「特異性」は、特定の抗原結合分子又は抗原結合タンパク質（例えば本発明のナノボディ又はポリペプチド）分子が結合することができる、様々な種類の抗原又は抗原決定基の数を表す。抗原結合タンパク質の特異性は、親和性及び／又は結合活性に基づき決定することができる。親和性（抗原と抗原結合タンパク質との解離に関する平衡定数（ＫＤ）によって表される）は、抗原結合タンパク質上の抗原決定基と抗原結合部位との間の結合力の評価基準であり、ＫＤ値が小さくなれば、抗原決定基と抗原結合分子との間の結合力が大きくなる（代替的に、親和性は、１／ＫＤである親和定数（ＫＡ）としても表すことができる）。（例えば本明細書中のさらなる開示に基づき）当業者にとって明らかなように、対象となる特異的な抗原に応じて、それ自体が既知の方法で親和性を決定することができる。結合活性は、抗原結合分子（例えば本発明のナノボディ又はポリペプチド）と関連抗原との間の結合力の評価基準である。結合活性は、抗原結合分子上での抗原決定基とその抗原結合部位との間の親和性、及び抗原結合分子上に存在する関連結合部位の数の両方に関係する。典型的には、抗原結合タンパク質（例えば本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチド）は、１０−５モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及び好ましくは１０−７モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及びより好ましくは１０−８モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で（即ち１０５Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及び好ましくは１０７Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及びより好ましくは１０８Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モルの結合定数（ＫＡ）で）これらの抗原と結合する。１０−４モル／Ｌより大きい任意のＫＤ値（即ち１０４Ｍ−１（Ｌ／モル）よりも小さい任意のＫＡ値）は一般的に非特異的な結合を示すと考えられる。好ましくは、本発明の一価の免疫グロブリン配列は、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満（５００ｐＭ未満等）の親和性で所望の抗原と結合する。抗原結合タンパク質と抗原又は抗原決定基との特異的な結合は、それ自体が既知の任意の好適な方法（例えばスキャッチャード解析及び／又は競合的結合アッセイ（例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）及びサンドイッチ競合アッセイ）を含む）及び当該技術分野でそれ自体が既知の様々なその変更方法、並びに本明細書で言及される他の技法で求めることができる。
当業者にとって明らかなように、解離定数は実際又は見掛けの解離定数であってもよい。解離定数を決定する方法は、当業者にとって明らかであり、例えば本明細書で言及される技法が含まれる。これに関して、１０−４モル／Ｌ又は１０−３モル／Ｌより大きい（例えば１０−２モル／Ｌの）解離定数を測定することが不可能であり得ることも明らかである。任意で、また当業者にとって明らかなように、（実際又は見掛けの）解離定数は、その関係性（ＫＤ＝１／ＫＡ）から（実際又は見掛けの）結合定数（ＫＡ）に基づき算出することができる。
親和性は、分子相互作用の強さ又は安定性を示す。一般的に親和性はＫＤ即ち解離定数として与えられ、その単位はモル／Ｌ（又はＭ）である。親和性は、１／ＫＤに等しい結合定数ＫＡとも表すことができ、その単位は（モル／Ｌ）−１（又はＭ−１）である。本明細書では、２つの分子（例えば本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドと、その目的標的との）間の相互作用の安定性は主に、これらの相互作用のＫＤ値で表され、ＫＡ＝１／ＫＤの関係性を考慮して、ＫＤ値で分子相互作用の強さを特定することを、対応するＫＡ値を算出するのに利用することもできることは、当業者にとって明らかである。ＫＤ値は、ＤＧ＝ＲＴ．ｌｎ（ＫＤ）（等しくはＤＧ＝−ＲＴ．ｌｎ（ＫＡ））（式中、Ｒは気体定数に等しく、Ｔは絶対温度に等しく、ｌｎは自然対数を示す）の既知の関係性から、結合の自由エネルギー（ＤＧ）と関連するので、熱力学的意味でも分子相互作用の強さを特徴付ける。
有意（例えば特異的）と見なされる、生物学的相互作用に関するＫＤは典型的に、１０−１０Ｍ（０．１ｎＭ）〜１０−５Ｍ（１００００ｎＭ）の範囲内である。相互作用が強くなれば、ＫＤは低くなる。
ＫＤは、（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ及びＫＡ＝ｋｏｎ／ｋｏｆｆのように）複合体の解離速度定数（ｋｏｆｆと称される）と、その結合速度（ｋｏｎと称される）との比としても表すことができる。解離速度（off-rate）ｋｏｆｆの単位は、ｓ−１（ｓは秒のＳＩ単位表記である）である。結合速度ｋｏｎの単位は、Ｍ−１ｓ−１である。結合速度は、二分子相互作用に関する拡散律速結合速度定数に近づきながら１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１の間で変化し得る。解離速度は、ｔ１／２＝ｌｎ（２）／ｋｏｆｆの関係性から所定の分子相互作用の半減期に関連する。解離速度は、１０−６ｓ−１（ｔ１／２が数日である略不可逆的な複合体）〜１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）の間で変化し得る。
２つの分子間の分子相互作用の親和性は、それ自体が既知の様々な技法（例えば既知の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサ技法（例えばOber et al.,Intern. Immunology, 13, 1551-1559, 2001を参照されたい）（ここで、１つの分子がバイオセンサーチップ上に固定され、もう１つの分子が、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ測定値、及びしたがってＫＤ（又はＫＡ）値が得られるフロー条件下で固定分子上を通る）で測定することができる。例えば、既知のビアコアの機器を使用してこれを実施することができる（例えば実施例１２及び実施例２０を参照されたい）。
測定プロセスが、例えば１つの分子のバイオセンサ上でのコーティングに関するアーチファクト（artefact：人工産物）によって、示唆した分子の固有の結合親和性に幾らか影響を与える場合、測定されたＫＤは見掛けのＫＤに対応し得ることも、当業者にとって明らかである。また、１つの分子が、もう１つの分子に対して２つ以上の認識部位を含有する場合、見掛けのＫＤを測定することができる。このような状況下で、測定された親和性は、２つの分子による相互作用の結合活性により影響され得る。
親和性を評価するのに使用することができる別のアプローチは、Friguet et al.（J. Immunol. Methods, 77, 305-19, 1985）の２段階ＥＬＩＳＡ（酵素免疫吸着アッセイ）法である。この方法によって、溶液相の結合平衡測定が確立され、プラスチック等の支持体上での分子の１つの吸着に関連すると考えられ得るアーチファクトが避けられる。
しかし、ＫＤの正確な測定はかなりの労働集約型である可能性があり、結果として２つの分子の結合力を評価するのに、見掛けのＫＤ値を求めることが多い。全ての測定が一貫して（例えばアッセイ条件を一定にして）行われていれば、見掛けのＫＤ測定値は真のＫＤの近似値として使用することができ、したがって本明細書で、ＫＤ及び見掛けのＫＤは、等しい重要性又は関連性があるとして処理されるべきであることに留意すべきである。
最後に、多くの状況下で経験豊かな科学者は、幾つかの参照分子に関して結合親和性を決定するのに都合がいいと判断することができることに留意すべきである。例えば、分子Ａと分子Ｂとの間の結合力を評価するために、例えば分子Ｂと結合することが知られており、且つＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別）での検出を容易にするためのフルオロフォア若しくはクロモフォア群、又は他の化学部分（例えばビオチン）、又は他のフォーマット（蛍光検出用フルオロフォア、吸光検出用クロモフォア、ストレプトアビジン媒介性ＥＬＩＳＡ検出用ビオチン）で好適に標識される参照分子Ｃを使用することができる。典型的に、参照分子Ｃは固定濃度に維持し、分子Ａの濃度は、分子Ｂの所定の濃度又は量に対して変化する。結果として、分子Ａの非存在下で分子Ｃについて測定されたシグナルが半分になる分子Ａの濃度に対応して、ＩＣ５０値が得られる。参照分子のＫＤであるＫＤｒｅｆ及び参照分子の総濃度ｃｒｅｆが既知であれば、以下の式：ＫＤ＝ＩＣ５０／（１＋ｃｒｅｆ／ＫＤｒｅｆ）からＡ−Ｂ相互作用に対する見掛けのＫＤを得ることができる。ｃｒｅｆ＜＜ＫＤｒｅｆの場合、ＫＤ≒ＩＣ５０であることに留意されたい。ＩＣ５０の測定が、比較用の結合因子に関して一貫して（例えばｃｒｅｆを一定にして）実施されれば、ＩＣ５０によって分子相互作用の強さ又は安定性を評価することができ、この測定値は、本明細書を通してＫＤ又は見掛けのＫＤと同等であると判断される。
ｏ）本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドの半減期は概して、例えば自然機構による配列若しくは化合物の分解及び／又は配列若しくは化合物のクリアランス（clearance）若しくは捕捉（sequestration）のために、ｉｎ ｖｉｖｏでアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドの血清濃度が５０％低減するのにかかる時間と定義することができる。本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、それ自体が既知の任意の方法（例えば薬物動態解析）で求めることができる。好適な技法は当業者にとって明らかであり、例えば概して、好適な用量の本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドを温血動物（即ち、ヒト又は別の好適な哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、ラット、ブタ、イヌ又は霊長類（例えばマカク属のサル（例えば特にカニクイザル（マカク・ファシクラリス）及び／又はアカゲザル（マカク・ムラット））及びヒヒ（パピオ・ウルジヌス））に好適に投与する工程と、血液試料又は他の試料を上記動物から採取する工程と、上記血液試料中の本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドのレベル又は濃度を求める工程と、このようにして得られたデータ（のプロット）から本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドのレベル又は濃度が投与時の最初のレベルに比べて５０％低減するまでの時間を算出する工程とを伴い得る。例えば、以下の実験部部分、並びにDennis et al., J. Biol. Chem 277: 35035-42（2002）、及び標準的なハンドブック（例えばKenneth, A et al:Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists及びPeters et al, Pharmacokinete analysis: APractical Approach（1996））を参照する。"Pharmacokinetics",M Gibaldi & D Perron,published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition（1982）も参照する。
また当業者にとって明らかなように（例えば国際公開第０４／００３０１９号パンフレットの６頁及び７頁とそこに言及されたさらなる参考文献とを参照されたい）、半減期は、ｔ１／２−α、ｔ１／２−β及び曲線下面積（ＡＵＣ）等のパラメータを利用して表すことができる。本明細書において、「半減期の増大」は、これらのパラメータのいずれか１つ、例えばこれらのパラメータのいずれか２つ、又は本質的に３つ全てのこれらのパラメータの増大を表す。本明細書で使用される「半減期の増大」又は「増大した半減期」は特にｔ１／２−βの増大を表し、ｔ１／２−α及び／又はＡＵＣのいずれか又は両方は増大しても又は増大しなくてもよい。
例えば、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドの半減期は、以下の通り、齧歯類又は非ヒト霊長類モデルで実施する薬物動態試験により求めることができる。動物群（ｎ＝２〜１０）に、１ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの２Ｄ３−１７Ｄ１２融合タンパク質を静脈内ボーラス注射した。血漿試料は、投与後様々な時点（例えば投与の１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、４８時間、１４４時間、１９２時間、２４０時間、２８８時間及び３３６時間）で静脈を通して得て、ＥＬＩＳＡにより２Ｄ３−１７Ｄ１２融合タンパク質の存在に関して分析した。血漿濃度対時間を２コンパートメント消失モデルに適合させる。クリアランス、Ｖ１、定常状態体積（Ｖｓｓ）、Ｔ１／２、ＡＵＣ、及び投与した実用量に対して補正したＡＵＣ（ＡＵＣ／用量）の薬物動態パラメータを各処理群で平均化する。群間の差異を分散分析により求める。
ｐ）本発明に関して、「調節（"modulating" or"to modulate"）」は一般的に、好適なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞アッセイ又はｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して測定するような標的又は抗原の活性の低減若しくは阻害のいずれか、又は代替的に活性の増大を意味する。特に「調節すること」は、好適なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞アッセイ、又はｉｎ ｖｉｖｏアッセイ（通常関与する標的又は抗原によって変わる）を用いて測定するような、本発明の構築物が存在しない以外は同じ条件下での同じアッセイにおける標的又は抗原の活性に比べて、少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、例えば少なくとも１０％若しくは少なくとも２５％、例えば少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は９０％以上標的又は抗原の活性を低減又は阻害すること、又は代替的に（関連又は対象の）生物学的活性を増大させることを意味し得る。
当業者にとって明らかなように、「調節」は、本発明の構築物が存在しない以外は同じ条件下に比べて、そのリガンド、結合パートナー、ホモ多量体形態若しくはヘテロ多量体形態で結び付くパートナー又は基質の１つ又は複数に対する標的又は抗原の親和性、結合活性、特異性及び／又は選択性を変化させること（増大又は減少のいずれであってもよい）、及び／又は標的又は抗原が存在する媒体又は環境における１つ又は複数の条件（ｐＨ、イオン強度、補因子の存在等）に対する標的又は抗原の感受性を変化させること（増大又は減少のいずれであってもよい）も伴い得る。当業者にとって明らかなように、関与する標的又は抗原に応じて、任意の好適な方法で、及び／又はそれ自体が既知の任意の好適なアッセイを用いてさらにこれを求めてもよい。
「調節」は、標的又は抗原が関与する（又はその基質（複数可）、リガンド（複数可）若しくは経路（複数可）が関与する、シグナル伝達経路若しくは代謝経路及び関連の生物学的作用若しくは生理学的作用のような）１つ又は複数の生物学的な若しくは生理学的な機構、作用、反応、機能、経路又は活性に関して変化させる（即ち標的又は抗原及び所望の生物学的作用若しくは生理学的作用に応じて、それぞれ、アゴニスト、アンタゴニスト、又は逆アゴニストとしての活性を与える）ことも意味し得る。ここでも同様に、当業者にとって明らかなように、関与する標的又は抗原に応じて、任意の好適な方法で、及び／又はそれ自体が既知の任意の好適な（ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び通常は細胞又はアッセイ内）アッセイを使用して、アゴニスト又はアンタゴニストとしての作用を求めてもよい。特に、アゴニスト又はアンタゴニストとしての作用は、対象の生物学的活性又は生理学的活性をそれぞれ、本発明の構築物が存在しない以外は同じ条件下での同じアッセイにおける生物学的活性又は生理学的活性に比べて少なくとも１％、好ましくは少なくとも５％、例えば少なくとも１０％若しくは少なくとも２５％、例えば少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は９０％以上増大又は低減させるようなものであり得る。
調節は例えば、標的又は抗原のアロステリック調節、及び／又は標的又は抗原とその基質又はリガンドの１つとの結合の低減又は阻害及び／又は標的又は抗原との結合に対する基質である天然リガンドとの競合も伴い得る。調節は、標的若しくは抗原、又はこれが関与する機構若しくは経路を活性化することも伴い得る。調節は、標的若しくは抗原のフォールディング若しくは立体配置に関して、又は標的若しくは抗原がフォールディングする能力、（例えばリガンドの結合の際に）その立体配置を変更する能力、他の（サブ）ユニットと結び付く能力、又は解離する能力に関して変化させることも伴い得る。調節は例えば、標的若しくは抗原が、他の化合物を移動させる能力、又は他の化合物（イオン等）に対するチャネルとして働く能力を変化させることも伴い得る。
調節は、可逆であっても又は不可逆であってもよいが、薬学的及び薬理学的目的では通常、可逆的である。
ｑ）標的又は抗原に関して、標的又は抗原上の「相互作用部位」という用語は、リガンド、受容体若しくは他の結合パートナーとの結合に関する部位、触媒部位、開裂部位、アロステリック相互作用に関する部位、標的又は抗原の多量体化（ホモマー化又はヘテロ二量体化等）に関与する部位である、標的又は抗原上のアミノ酸残基の部位、エピトープ、抗原決定部位、部分、ドメイン若しくはストレッチ、又は標的若しくは抗原の生物学的作用又は機構に関与する標的又は抗原上のアミノ酸残基の任意の他の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチを意味する。より一般的には、「相互作用部位」は、本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドが、（本明細書中に規定のように）標的又は抗原（及び／又は標的又は抗原が関与する任意の経路、相互作用、シグナル伝達、生物学的機構又は生物学的作用）を調節するように結合することができる、標的又は抗原上のアミノ酸残基の任意の部位、エピトープ、抗原決定基、部分、ドメイン又はストレッチであり得る。
ｒ）アミノ酸配列又はポリペプチドは、上記アミノ酸配列又はポリペプチドが第２の標的又はポリペプチドと結合する親和性よりも少なくとも１０倍、例えば少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、及び最大１００００倍以上良好な親和性（上記のように、好適にＫＤ値、ＫＡ値、Ｋｏｆｆ速度及び／又はＫｏｎ速度と表す）で第１の抗原と結合する場合、第２の標的又は抗原と比べて、第１の標的又は抗原「に特異的」であると言える。例えば、第１の抗原は、上記アミノ酸配列又はポリペプチドが第２の標的又はポリペプチドと結合するＫＤよりも少なくとも１０分の１、例えば少なくとも１００分の１、及び好ましくは少なくとも１０００分の１、例えば１００００分の１以下のＫＤ値で標的又は抗原と結合し得る。好ましくは、アミノ酸配列又はポリペプチドが、第２の標的又は抗原に比べて第１の標的又は抗原「に特異的」である場合、そのアミノ酸配列又はポリペプチドは、（本明細書中に規定のように）上記第１の標的又は抗原に指向性を有するが、該第２の標的又は抗原に対しては指向性を有しない。
ｓ）用語「交差遮断（"cross-block","cross-blocked" and "cross-blocking"）」は、本明細書中で区別なく使用し、アミノ酸配列又は他の結合剤（本発明のポリペプチド等）が、他の本発明のアミノ酸配列又は結合剤と所定の標的との結合を妨げる能力を意味する。本発明のアミノ酸配列又は他の結合剤が別のアミノ酸配列又は他の結合剤と［標的］との結合を妨げることができる範囲、ひいては本発明に従って交差遮断するということができるか否かを、競合結合アッセイを使用して求めることができる。１つの特に好ましい定量的なアッセイは、表面プラズモン共鳴技術を用いて相互作用の程度を測定することができるビアコア機器を使用する。別の好適な定量的なアッセイは、標的とのこれらの結合に関して、アミノ酸配列又は他の結合剤間の競合を測定するＥＬＩＳＡに基づくアプローチを使用する。
概して以下に、アミノ酸配列又は他の結合剤が、本発明に従って交差遮断するか、又は交差遮断することができるか否かを求めるのに適したビアコアアッセイを説明している。このアッセイは、本明細書中に記載のアミノ酸配列又は他の結合剤のいずれかと共に使用することができることが理解されよう。ビアコア機器（例えばビアコア３０００）は、製造元の推奨に沿って操作する。このように、１つの交差遮断アッセイでは、標的でコーティングする表面を作製するのに、標準的なアミンカップリングケミストリを用いて、標的タンパク質をＣＭ５ビアコアチップと結合させる。典型的に２００個〜８００個の標的の共鳴単位をチップに結合させる（容易に測定可能なレベルの結合を与えるが、使用する試験試薬の濃度によって容易に飽和することができる量）。互いに交差遮断する能力を評価する、２つの試験アミノ酸配列（Ａ＊及びＢ＊と呼ばれる）を、好適なバッファー中で、１：１の結合部位のモル比で混合し、試験混合物を作製する。結合部位ベースの濃度を算出する場合、アミノ酸配列の分子量は、アミノ酸配列の全分子量を、このアミノ酸配列上の標的結合部位の数で除算したものであると見なす。試験混合物中の各アミノ酸配列の濃度は、ビアコアチップ上に捕捉された標的分子上のこのアミノ酸配列に対する結合部位を容易に飽和するのに十分高いものとする。混合物中のアミノ酸配列は、典型的に（結合部位ベースで）１．００マイクロモル〜１．５マイクロモルである（結合部位ベースの）モル濃度と同じである。Ａ＊及びＢ＊を単独で含有する分離溶液も調製する。これらの溶液中のＡ＊及びＢ＊は、試験混合物と同じバッファー中で、且つ試験混合物と同じ濃度であるとする。試験混合物を標的コーティングビアコアチップ上に通し、結合総量を記録する。それから、チップ結合標的を損なうことなく、結合したアミノ酸配列を取り除くようにチップを処理する。典型的に、チップを３０ｍＭのＨＣｌで６０秒処理することによってこれを行う。その後、Ａ＊単独の溶液を標的コーティング表面上に通し、結合量を記録する。さらに、チップを処理し、チップ結合標的を損なうことなく、結合したアミノ酸配列を全て取り除く。それから、Ｂ＊単独の溶液を標的コーティング表面上に通し、結合量を記録する。次に、Ａ＊とＢ＊との混合物の理論最大結合を算出し、これは単独で標的表面上を通した際の各アミノ酸配列の結合の合計である。実際に記録された混合物の結合がこの理論最大よりも小さい場合、２つのアミノ酸配列は互いに交差遮断している。このように概して、交差遮断する本発明のアミノ酸配列又は他の結合剤は、アッセイ中、及び本発明の第２のアミノ酸配列又は他の結合剤の存在下で、記録された結合が、組合せた２つのアミノ酸配列又は結合剤の最大理論結合（直前に規定）の８０％〜０．１％（例えば８０％〜４％）、具体的に最大理論結合の７５％〜０．１％（例えば７５％〜４％）、及びより具体的に最大理論結合の７０％〜０．１％（例えば７０％〜４％）であるように、上記のビアコア交差遮断アッセイで標的と結合するものである。上記のビアコアアッセイは、アミノ酸配列又は他の結合剤が本発明に従って互いに交差遮断するかどうかを求めるのに使用する主なアッセイである。稀に、特定のアミノ酸配列又は他の結合剤が、ＣＭ５ビアコアチップとアミンケミストリを介して結合した標的と結合しないことがある（通常、標的上の関連の結合部位がチップとの連結によって塞がれるか、又は破壊される場合にこれが起こる）。このような場合、標識型、例えばＮ末端Ｈｉｓ標識型の標的を用いて交差遮断を求めることができる。この特定のフォーマットで、抗Ｈｉｓアミノ酸配列をビアコアチップに結合させた後、Ｈｉｓ標識した標的をチップの表面上に通し、抗Ｈｉｓアミノ酸配列で捕捉する。各チップ再生サイクル後に、抗Ｈｉｓアミノ酸配列コーティング表面上に、新たなＨｉｓ標識した標的を充填し戻すことを除いて、本質的に上記のように、交差遮断解析を行う。Ｎ末端Ｈｉｓ標識した［標的］を使用するとして与えられた例の他に、代替的にＣ末端Ｈｉｓ標識した標的を使用することができる。さらに、当該技術分野で既知の様々な他の標識及び標識結合タンパク質の組合せをこのような交差遮断解析に使用することができる（例えば、抗ＨＡ抗体によるＨＡ標識；抗ＦＬＡＧ抗体によるＦＬＡＧ標識；ストレプトアビジンによるビオチン標識）。
概して以下に、標的に指向性を有するアミノ酸配列又は他の結合剤が、本明細書中に規定のように、交差遮断するか、又は交差遮断することができるか否か求めるＥＬＩＳＡアッセイを説明している。このアッセイは、本明細書中に記載のアミノ酸配列（又は本発明のポリペプチド等の他の結合剤）のいずれかと共に使用することができることが理解されよう。このアッセイの一般原理は、ＥＬＩＳＡプレートのウェル上にコーティングした標的に指向性を有するアミノ酸配列又は結合剤を有することである。過剰量の第２の、潜在的に交差遮断する抗標的アミノ酸配列を溶液中に添加する（即ちＥＬＩＳＡプレートと結合しない）。それから、限定量の標的をウェルに添加する。コーティングしたアミノ酸配列と溶液中のアミノ酸配列とは、限定数の標的分子の結合に対して競合する。プレートを洗浄し、コーティングしたアミノ酸配列と結合していない過剰な標的を取り除き、また第２の溶液相のアミノ酸配列及び第２の溶液相のアミノ酸配列と標的との間に形成される任意の複合体を取り除く。その後、標的を検出するのに適切な試薬を使用して、結合標的の量を測定する。コーティングしたアミノ酸配列を交差遮断することができる溶液中のアミノ酸配列によって、第２の溶液相のアミノ酸配列の非存在下でコーティングしたアミノ酸配列と結合することができる標的分子の数に比べて、コーティングしたアミノ酸配列と結合することができる標的分子の数を低減させることができる。アミノ酸配列を固定化させるように、第１のアミノ酸配列、例えばＡｂ−Ｘを選択する場合、第１のアミノ酸配列をＥＬＩＳＡプレートのウェル上にコーティングし、その後、プレートを好適な遮断溶液で遮断し、その後添加する試薬の非特異的な結合を最小にする。Ａｂ−Ｙ［標的］結合部位の１つのウェル当たりのモルが、ＥＬＩＳＡプレートのコーティング中に使用したＡｂ−Ｘ［標的］結合部位の１つのウェル当たりのモルの少なくとも１０倍になるように、過剰量の第２のアミノ酸配列、即ちＡｂ−ＹをＥＬＩＳＡプレートに添加する。それから、添加した［標的］の１つのウェル当たりのモルが、各ウェルをコーティングするのに使用したＡｂ−Ｘ［標的］結合部位のモルの少なくとも２５分の１になるように、［標的］を添加する。好適なインキュベート期間の後、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄し、標的を検出する試薬を添加し、コーティングした抗［標的］アミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｘ）と特異的に結合した標的の量を測定する。アッセイに関するバックグラウンドシグナルは、コーティングしたアミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相のアミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｙ）、［標的］バッファーのみ（即ち標的が存在しない）及び標的検出試薬を用いてウェル中で得られたシグナルと定義する。アッセイに関する陽性対照シグナルは、コーティングしたアミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相のアミノ酸配列バッファーのみ（即ち第２の溶液相のアミノ酸配列が存在しない）、標的及び標的検出試薬を用いてウェル中で得られたシグナルと定義する。陽性対照シグナルがバックグラウンドシグナルの少なくとも６倍になるように、ＥＬＩＳＡアッセイを行い得る。どのアミノ酸配列をコーティングアミノ酸配列として使用し、どのアミノ酸配列を第２の（競合）アミノ酸配列として使用するかという選択に起因する任意のアーチファクト（例えば有意に異なる、［標的］に対するＡｂ−ＸとＡｂ−Ｙとの親和性）を避けるために、交差遮断アッセイを２つのフォーマットで行い得る：１）フォーマット１は、Ａｂ−Ｘが、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングするアミノ酸配列であり、且つＡｂ−Ｙが、溶液中にある競合アミノ酸配列である場合であり、また２）フォーマット２は、Ａｂ−Ｙが、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングするアミノ酸配列であり、且つＡｂ−Ｘが、溶液中にある競合アミノ酸配列である場合である。Ａｂ−Ｘ及びＡｂ−Ｙは、フォーマット１又はフォーマット２のいずれかで、溶液相の抗標的アミノ酸配列が、溶液相の抗標的アミノ酸配列の非存在下で得られた標的検出シグナル（即ち陽性対照ウェル）に比べて、標的検出シグナル（即ちコーティングしたアミノ酸配列で結合した標的の量）の６０％〜１００％、具体的に７０％〜１００％、及びより具体的に８０％〜１００％の低減を引き起こすことができる場合、交差遮断すると定義する。
ｔ）アミノ酸配列が、２つの異なる抗原又は抗原決定基の両方に（本明細書中で規定されるように）特異的である場合、（ヒト血清アルブミン及びｃｙｎｏ血清アルブミンなどの２つの異なる哺乳動物種からの血清アルブミンのような）これらの異なる抗原又は抗原決定基の両方に「交差反応性」であると言える。
ｕ）「本質的にｐＨに非依存的な」結合とは概して本明細書中では、動物又はヒトの身体の細胞で現れるｐＨ値（複数可）（本明細書中でさらに記載される）での血清タンパク質（例えば血清アルブミン）に対するアミノ酸配列の結合定数（ＫＡ）が、上記細胞外で現れるｐＨ値（複数可）での同じ血清タンパク質に対するアミノ酸配列の結合定数（ＫＡ）の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、例えばさらにより好ましくは少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％又は９０％以上（又はさらに１００％超、例えば１１０％超、１２０％超、又はさらに１３０％以上、又はさらに１５０％超、又はさらに２００％超）であることを意味する。代替的には、「本質的にｐＨに非依存的な」結合とは概して本明細書中では、動物又はヒトの身体の細胞で現れるｐＨ値（複数可）（本明細書中でさらに記載される、例えばｐＨ約５．５、例えば５．３〜５．７）での血清タンパク質（例えば血清アルブミン）に対するアミノ酸配列のｋｏｆｆ速度（ビアコアによって測定される）が、上記細胞外で現れるｐＨ値（複数可）、例えばｐＨ７．２〜７．４での同じ血清タンパク質に対するアミノ酸配列のｋｏｆｆ速度の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、例えばさらにより好ましくは少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％又は９０％以上（又はさらに１００％超、例えば１１０％超、１２０％超、又はさらに１３０％以上、又はさらに１５０％超、又はさらに２００％超）であることを意味する。「動物又はヒトの身体の細胞で現れるｐＨ値（複数可）」とは、細胞内、特に血清タンパク質の再生に関与する細胞内で現れ得るｐＨ値（複数可）を意味する。特に、「動物又はヒトの身体の細胞で現れるｐＨ値（複数可）」とは、エンドソーム、リソソーム又はピノソーム等の（例えばピノサイトーシス、エンドサイトーシス、トランスサイトーシス、エキソサイトーシス及びファゴサイトーシス、又は同様の上記細胞への取り込み若しくは内在化の機構の結果として）血清タンパク質の再生に関与する、細胞（内）コンパートメント又は小胞内で現れ得るｐＨ値（複数可）を意味する。
ｖ）本明細書でさらに記載されるように、ナノボディにおけるアミノ酸残基の総数は、１１０〜１２０、好ましくは１１２〜１１５の範囲内、及び最も好ましくは１１３であり得る。しかし、ナノボディの部分、断片、類似体又は誘導体（本明細書中にさらに記載されたように）は、本明細書に概説されるさらなる要求を満たし、また好ましくは本明細書に記載の目的に好適であれば、その長さ及び／又はサイズに特に限定されないことに留意すべきである。
ｗ）ナノボディのアミノ酸残基は、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol.Methods 2000 Jun 23; 240 （1-2）:185-195の論文（例えばこの論文の図２を参照されたい）においてラクダ由来のＶＨＨドメインに適用されるように、又は本明細書に参照されるようにKabat et al. （"Sequence of proteins of immunological interest", USPublic Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）によって与えられたＶＨドメインに関する一般的なナンバリングに従って数字が付けられる。このナンバリングに従うと、ナノボディのＦＲ１は１位〜３０位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ１は３１位〜３５位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ２は３６位〜４９位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ２は５０位〜６５位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ３は６６位〜９４位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ３は９５位〜１０２位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ４は１０３位〜１１３位のアミノ酸残基を含む。［これに関して、ＶＨドメイン及びＶＨＨドメインに関して当該技術分野で既知のように、ＣＤＲそれぞれにおけるアミノ酸残基の総数は変わる可能性があり、カバットナンバリングで示されるアミノ酸残基の総数に対応していなくてもよい（即ちカバットナンバリングによる１つ又は複数の位置が実際の配列で占められていなくてもよく、又は実際の配列が、カバットナンバリングで可能な数より多くのアミノ酸残基を含んでいてもよい）ことに留意すべきである。このことは、概してカバットによるナンバリングは、実際の配列におけるアミノ酸残基の実際のナンバリングに対応していても、又は対応していなくてもよいことを意味する。しかし一般的に、ＣＤＲにおけるアミノ酸残基の数に関係なく、カバットナンバリングに従うと、カバットナンバリングによる１位は、ＦＲ１の出発点に対応し（逆もまた同様）、カバットナンバリングによる３６位は、ＦＲ２の出発点に対応し（逆もまた同様）、カバットナンバリングによる６６位は、ＦＲ３の出発点に対応し（逆もまた同様）、カバットナンバリングによる１０３位は、ＦＲ４の出発点に対応する（逆もまた同様）］。
ＶＨドメインのアミノ酸残基の数字を付ける代替方法（この方法は、類似の方法でラクダ科動物由来のＶＨＨドメイン及びナノボディに適用することができる）は、Chothia et al.（Nature 342, 877-883（1989））によって説明される方法、いわゆる「ＡｂＭ定義」及びいわゆる「接触定義」である。しかし本明細書、特許請求の範囲及び図面では、特に他に指示がなければ、Riechmann及びMuyldermansによってＶＨＨドメインに適用されるようなカバットによるナンバリングに従う。
ｘ）ＣＤＲ配列である、本明細書中に記載の任意のアミノ酸配列（例えばＣＤＲ１配列群２、ＣＤＲ１配列群９、ＣＤＲ１配列群１６、ＣＤＲ１配列群２３、ＣＤＲ１配列群３０、ＣＤＲ１配列群３７、ＣＤＲ１配列群４４、ＣＤＲ１配列群５１及び／又はＣＤＲ１配列群５８（表Ａ−１を参照されたい）；ＣＤＲ２配列群４、ＣＤＲ２配列群１１、ＣＤＲ２配列群１８、ＣＤＲ２配列群２５、ＣＤＲ２配列群３２、ＣＤＲ２配列群３９、ＣＤＲ２配列群４６、ＣＤＲ２配列群５３及び／又はＣＤＲ２配列群６０（表Ａ−１を参照されたい）；及び／又はＣＤＲ３配列群６、ＣＤＲ３配列群１３、ＣＤＲ３配列群２０、ＣＤＲ３配列群２７、ＣＤＲ３配列群３４、ＣＤＲ３配列群４１、ＣＤＲ３配列群４８、ＣＤＲ３配列群５４及び／又はＣＤＲ３配列群６２（表Ａ−１を参照されたい）の任意のＣＤＲ配列）に関して、「任意条件Ｉ」は、上記アミノ酸配列がアミノ酸置換を含有する場合、このようなアミノ酸置換が好ましくは、上記置換のない元のアミノ酸配列と比較して（本明細書中で規定のような）保存的なアミノ酸置換であることを意味し、「任意条件ＩＩ」は、上記アミノ酸配列が好ましくは、上記置換のない元のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換のみを含有し、アミノ酸の欠失又は挿入を含有しないことを意味し、「任意条件ＩＩＩ」は、上記アミノ酸配列が、それ自体が既知の１つ又は複数の親和性成熟技法を用いる親和性成熟によって対応するアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であり得ることを意味する。
ｙ）フレームワーク配列である、本明細書中に記載の任意のアミノ酸配列に関して、「任意条件Ｉ」は、上記アミノ酸配列がアミノ酸置換を含有する場合、このようなアミノ酸置換が好ましくは、上記置換のない元のアミノ酸配列と比較して（本明細書中で規定のような）保存的なアミノ酸置換であることを意味し、「任意条件ＩＩ」は、上記アミノ酸配列が好ましくは、上記置換のない元のアミノ酸配列と比較してアミノ酸置換のみを含有し、アミノ酸の欠失又は挿入を含有しないことを意味し、「任意条件ＩＶ」は、このようなアミノ酸配列が任意のアミノ酸差異を含有する場合、好ましくはこれらのアミノ酸差異が特徴的な残基のうちの１つには存在しないことを意味する（が、本明細書中で記載のようなＶＨＨ又はナノボディの有利な特性が、実質的に維持されるか、又は得られるアミノ酸配列が単一の抗原結合ドメイン若しくは単位（例えばナノボディ）としての使用に適さないものになる程度まで影響を与えられなければ、特徴的な残基の位置でのアミノ酸差異の存在は除外されない）；
ｚ）図面、配列表及び実験部部分／実施例は、本発明をさらに説明するためだけに与えられ、特に他にはっきりと本明細書中に指示がなければ、本発明の範囲及び／又は添付の特許請求の範囲を限定するものとしては決して解釈すべきではない。また概して、実験部で明確に言及される本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドは本発明のアミノ酸配列及びポリペプチドの好例である。これらのアミノ酸配列及びポリペプチド内でのさらなる選好は、実験部で与えられるデータから明らかになる。
重鎖抗体及びその可変ドメインの概要に関しては、特に本明細書で言及される従来技術、Reviewsin Molecular Biotechnology 74（2001）, 277-302におけるMuyldermansによる総説、及び一般的な背景技術として言及される以下の特許出願：Vrije Universiteit Brusselの国際公開第９４／０４６７８号パンフレット、国際公開第９５／０４０７９号パンフレット、及び国際公開第９６／３４１０３号パンフレット；Unileverの国際公開第９４／２５５９１号パンフレット、国際公開第９９／３７６８１号パンフレット、国際公開第００／４０９６８号パンフレット、国際公開第００／４３５０７号パンフレット、国際公開第００／６５０５７号パンフレット、国際公開第０１／４０３１０号パンフレット、国際公開第０１／４４３０１号パンフレット、欧州特許第１１３４２３１号明細書及び国際公開第０２／４８１９３号パンフレット；Vlaams Instituut voor Biotechnologie（VIB）の国際公開第９７／４９８０５号パンフレット、国際公開第０１／２１８１７号パンフレット、国際公開第０３／０３５６９４号パンフレット、国際公開第０３／０５４０１６号パンフレット及び国際公開第０３／０５５５２７号パンフレット；Algonomics N.V.及びAblynx N. V.の国際公開第０３／０５０５３１号パンフレット；カナダのNational Research Councilによる国際公開第０１／９０１９０号パンフレット；Institute of Antibodiesによる国際公開第０３／０２５０２０号パンフレット（＝欧州特許第１４３３７９３号明細書）；並びにAblynx N.V.による国際公開第０４／０４１８６７号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６２号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６５号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６３号パンフレット、国際公開第０４／０６２５５１号パンフレット、国際公開第０５／０４４８５８号パンフレット、国際公開第０６／４０１５３号パンフレット、国際公開第０６／０７９３７２号パンフレット、国際公開第０６／１２２７８６号パンフレット、国際公開第０６／１２２７８７号パンフレット及び国際公開第０６／１２２８２５号パンフレット、並びにAblynx N.V.によってさらに公開された特許出願を参照する。これらの出願で言及されるさらなる従来技術、特に国際出願の国際公開第０６／０４０１５３号パンフレットの４１頁〜４３頁で言及される参考リストも参照する（このリスト及び参考文献は参照により本明細書に援用される）。
当該技術分野で使用される専門用語（上記の参考文献を参照されたい）に従って、天然重鎖抗体に存在する可変ドメインは、この可変ドメインを従来の４鎖抗体に存在する重鎖可変ドメイン（以下「ＶＨドメイン」と表す）と、及び従来の４鎖抗体に存在する軽鎖可変ドメイン（以下、「ＶＬドメイン」と表す）と区別するために、「ＶＨＨドメイン」とも表される。
上記で表された従来技術で言及されるように、ＶＨＨドメインは、単離ＶＨＨドメイン（並びにこれに基づくナノボディ、これは天然ＶＨＨドメインと、これらの構造的特徴及び機能的性質を共有する）及び機能的な抗原結合ドメイン又はタンパク質としての使用に非常に有利である、これを含有するタンパク質を作製する、多くの特有の構造的特徴及び機能的性質を有する。特に、以下に限定されないが、（軽鎖可変ドメインの非存在下で、及びこれとの相互作用が全くなく、自然に抗原と機能的に結合するように「設計」された）ＶＨＨドメイン及びナノボディは、単一で比較的低分子の機能的な抗原結合構造単位、ドメイン又はタンパク質としても機能することができる。このことは、ＶＨＨドメインを従来の４鎖抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインと区別し、概してこれら自体は単一抗原結合タンパク質又はドメインとしての実際の適用に適しておらず、幾つかの形態又は機能的な抗原結合単位を与えるような別の形態で（例えばＦａｂ断片等の従来の抗体断片、ＶＬドメインと共有結合するＶＨドメインから成るＳｃＦｖ断片等で）組合せる必要がある。
これらの特有の性質のために、単一抗原結合タンパク質又は抗原結合ドメインとして（即ちより大きなタンパク質又はポリペプチド部分として）のＶＨＨドメイン及びナノボディの使用によって、従来のＶＨドメイン及びＶＬドメイン、ｓｃＦｖ又はその従来の抗体断片（例えばＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片）の使用に対する多くの有意な利点が与えられる：
単一ドメインだけが、高い親和性及び高い選択性で抗原と結合することが要求されるので、２つの分離ドメインを存在させる必要もなく、これらの２つのドメインが正しい空間配座及び構造で存在することを（即ち特別に設計されたリンカー（ｓｃＦｖ等）の使用によって）確認する必要もない。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは単一遺伝子から発現することができ、翻訳後フォールディング又は修飾の必要はない。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、（本明細書でさらに考察されるように）容易に多価及び多重特異性のフォーマットに容易に遺伝子操作することができる。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、高溶解性であり、凝集しにくい（Ward et al., Nature, Vol. 341, 1989, p. 544で記載されるマウス由来の「ｄＡｂ’ｓ」等）。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、熱、ｐＨ、プロテアーゼ及び他の変性剤又は条件に対する安定性が高い（例えば上記のEwert et alを参照されたい）。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、製造で要求される規模であっても調製するのが容易であり、且つ比較的安価である。例えば、ＶＨＨドメイン、ナノボディ、及びこれを含有するタンパク質／ポリペプチドは、微生物発酵を使用して（例えば以下でさらに記載されるように）製造することができ、哺乳動物の発現系（例えば従来の抗体断片）を使用する必要がない。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、従来の４鎖抗体及びその抗原結合断片に比べて比較的低分子（約１５ｋＤａ、即ち従来のＩｇＧの１０分の１）であるため、このような従来の４鎖抗体及びその抗原結合断片よりも高い組織（充実性腫瘍及び他の高密度組織を含むが、これらに限定されない）への浸透性を示す。
ＶＨＨドメイン及びナノボディは、（特に従来のＶＨドメインに比べてＣＤＲ３ループが伸長するため）いわゆるキャビティ結合性を示すことができ、したがって従来の４鎖抗体及びその抗原結合断片には接近することができない標的及びエピトープに接近することもできる。例えば、ＶＨＨドメイン及びナノボディは酵素を阻害することができることが分かっている（例えば国際公開第９７／４９８０５号パンフレット、Transue et al., Proteins1998 Sep 1; 32（4）: 515-22; Lauwereys et al., EMBO J. 1998 Jul 1; 17（13）: 3512-20を参照されたい）。
特定の好ましい態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディ、及び詳細には温血動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディ、及びより詳細には哺乳動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディ、及び具体的にヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディ、並びに少なくとも１つのこのようなナノボディを含むタンパク質及び／又はポリペプチドを提供する。
特に、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する従来の抗体又はその断片に比べて、このような従来の抗体又は抗体断片（Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＳｃＦｖ構築物、「ダイアボディ」及び他の多重特異性構築物（例えばHolliger andHudson, Nat Biotechnol. 2005 Sep; 23（9）: 1126-36による総説を参照されたい）等）に基づき得る構築物に比べて、及びまた従来の抗体の可変ドメインに由来し得るいわゆる「ｄＡｂ」又は同様の（単一）ドメイン抗体に比べて、改善した治療特性及び／又は薬理学的特性、及び／又は他の有益な特性（例えば調製の簡便性の向上、及び／又は製品のコスト低減等）を有するヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディ、及びこれを含むタンパク質及び／又はポリペプチドを提供する。これらの改善した有益な特性は、本明細書中のさらなる記載から明らかになり、例えばこれらに限定されないが、
一価フォーマット、多価フォーマット（例えば二価フォーマット）のいずれか及び／又は多重特異性のフォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）でのヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性及び／又は結合活性の増大、
多価フォーマット（例えば二価フォーマット）に合わせるのにより良好な適合性、
多重特異性フォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）に合わせるのにより良好な適合性、
「ヒト化」置換（本明細書中で規定）に対する適合性又は感受性の改善、
一価フォーマット、多価フォーマット（例えば二価フォーマット）のいずれか及び／又は多重特異性のフォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）での免疫原性の低下、
一価フォーマット、多価フォーマット（例えば二価フォーマット）のいずれか及び／又は多重特異性のフォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）での安定性の増大、
一価フォーマット、多価フォーマット（例えば二価フォーマット）のいずれか及び／又は多重特異性のフォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）でのヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する特異性の増大、
異なる種由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との交差反応性の低減又は所望の増大、及び／又は
一価フォーマット、多価フォーマット（例えば二価フォーマット）のいずれか及び／又は多重特異性のフォーマット（例えば本明細書中の以下で記載の多重特異性のフォーマットの１つ）での薬学的用途（予防的用途及び／又は治療的用途を含む）及び／又は診断的用途（画像化目的への使用を含むが、これに限定されない）に望ましい、１つ又は複数の特性の改善の１つ又は複数が含まれる。
概して本発明のアミノ酸配列に対して本明細書中に記載するように、本発明のナノボディは、（本明細書中に規定のように）本質的に単離形態であるか、又は（本明細書中に規定のように）本発明のタンパク質若しくはポリペプチドの一部を形成するのが好ましく、１つ又は複数の本発明のナノボディを含むか、又は本質的にこれから成っていてもよく、任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列（任意で全て１つ又は複数の好適なリンカーを介して）をさらに含んでいてもよい。例えば、限定はしないが、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列は、このようなタンパク質又はポリペプチドにおける結合単位として使用してもよく、全て本明細書中に記載の本発明の一価、多価又は多重特異性のポリペプチドをそれぞれ提供するように、任意で結合単位として（即ちヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体以外の１つ又は複数の標的に対して）有用であり得る１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列を含有し得る。特に、このようなタンパク質又はポリペプチドは、本明細書中にさらに記載の一価、多価又は多重特異性のナノボディ構築物をそれぞれ提供するように、任意で全て１つ又は複数の好適なリンカーを介して連結した、１つ又は複数の本発明のナノボディと、任意で１つ又は複数の（他の）（即ちヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体以外の標的に指向性を有する）ナノボディとを含み得るか、又は本質的にこれから成り得る。このようなタンパク質又はポリペプチドは、（本明細書中に規定のように）本質的に単離形態であってもよい。
本発明のナノボディにおいて、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に関する結合部位は、ＣＤＲ配列によって形成されるのが好ましい。任意で、本発明のナノボディは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に関する少なくとも１つの結合部位の他に、他の抗原、タンパク質又は標的との結合に関する１つ又は複数のさらなる結合部位を含有してもよい。このような第２の結合部位を導入する方法及び位置に関しては、例えばKeck and Huston, Biophysical Journal, 71, October 1996, 2002-2011、欧州特許第０６４０１３０号明細書、国際公開第０６／０７２６０号パンフレットを参照する。
本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中に概して記載するように、本発明のナノボディ（又はこれを含む本発明のポリペプチド）が、被験体への投与を目的とする場合（例えば本明細書中に記載の治療目的及び／又は診断目的）、本発明のナノボディは、ヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するのが好ましいが、獣医学的目的では、治療する種由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するのが好ましい。また、本発明のアミノ酸配列と同様に、本発明のナノボディは交差反応性（即ち、ヒトヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体及び本明細書中で言及した種の少なくとも１種の哺乳動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体のような２種以上の哺乳動物由来のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する指向性）を有していても又は有しなくてもよい。
またここでも同様に、本発明のアミノ酸配列に関して本明細書中に概して記載するように、本発明のナノボディは概して、（本明細書中に規定のような）相互作用部位又は相互作用部位ではない部位、抗原決定基、エピトープ、部分、ドメインなどのヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニット又は立体配置（適用可能な場合）のいずれかに指向性を有し得る。
本明細書中で既に記載のように、ナノボディのアミノ酸配列及び構造は、これらに限定されないが、４つのフレームワーク領域即ち「ＦＲ」（又は「ＦＷ」と呼ばれることもある）から構成されていると考えることができ、当該技術分野及び本明細書中でそれぞれ、「フレームワーク領域１」即ち「ＦＲ１」、「フレームワーク領域２」即ち「ＦＲ２」、「フレームワーク領域３」即ち「ＦＲ３」及び「フレームワーク領域４」即ち「ＦＲ４」と称され、このフレーム領域の間には、３つの相補性決定領域即ち「ＣＤＲ」が挿入され、これは当該技術分野でそれぞれ、「相補性決定領域１」即ち「ＣＤＲ１」、「相補性決定領域２」即ち「ＣＤＲ２」及び「相補性決定領域３」即ち「ＣＤＲ３」と称される。本発明のナノボディに存在する、幾つかの好ましいフレームワーク配列及びＣＤＲ（及びこれらの組合せ）を本明細書中に記載している。他の好適なＣＤＲ配列は、本明細書中に記載の方法によって得ることができる。
本発明の非限定的であるが、好ましい態様によれば、本発明のナノボディ（に存在するＣＤＲ配列）は、
ナノボディが、１０−５モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及び好ましくは１０−７モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及びより好ましくは１０−８モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で（即ち１０５Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及び好ましくは１０７Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及びより好ましくは１０８Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モルの結合定数（ＫＡ）で）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合し得るようなもの、及び／又は
ナノボディが、１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、好ましくは１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１、より好ましくは１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１（１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１等）のｋｏｎ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合し得るようなもの、及び／又は
ナノボディが、１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−６ｓ−１（ｔ１／２が数日である略不可逆的な複合体の場合）、好ましくは１０−２ｓ−１〜１０−６ｓ−１、より好ましくは１０−３ｓ−１〜１０−６ｓ−１（１０−４ｓ−１〜１０−６ｓ−１等）のｋｏｆｆ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合し得るようなものである。
好ましくは、本発明のナノボディ（に存在するＣＤＲ配列）は、本発明の一価ナノボディ（又は本発明のナノボディを１つだけ含有するポリペプチド）が、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満（５００ｐＭ未満等）の親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものである。
例えば本明細書中で言及した、ＫＤ、ＫＡ、ｋｏｆｆ又はｋｏｎを測定する一般的技法、及び本明細書中に記載の特定のアッセイの幾つかを使用するそれ自体が既知の方法で、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する本発明のナノボディの親和性を求めることができる。
本発明のナノボディ（及びこれを含むポリペプチド）とヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に関する幾つかの好ましいＩＣ５０値は、本明細書中のさらなる記載及び実施例から明らかになる。
好ましいが非限定的な態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ｐ１９＋配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１１を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はｐ１９＋配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ｐ１９−配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１２を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はｐ１９−配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群１３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ｐ４０−配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１３を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はｐ４０−配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群１６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群１８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ｐ４０＋配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１４を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はｐ４０＋配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群２３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群２５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群２７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ｐ３５配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１５を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はｐ３５配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群３４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ＩＬ−２７配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１６を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はＩＬ−２７配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群３７」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群３９」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ＩＬ−１２Ｒｂ１配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１７を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ１配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群４４」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群４６」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群４８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ＩＬ−１２Ｒｂ２配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１８を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はＩＬ−１２Ｒｂ２配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５１」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群５３」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群５５」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又は（本明細書中に規定の）ＩＬ−２３Ｒ配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列（表Ａ−１及び図１８を参照されたい）、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、及び／又は
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
特に、好ましいが非限定的なこの態様において、本発明は、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成る、（単一）ドメイン抗体及び／又はＩＬ−２３Ｒ配列である（本明細書中に規定の）ナノボディであって、
ＣＤＲ１が、
ａ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列、
ｂ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｃ）「ＣＤＲ１配列群５８」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、
ＣＤＲ２が、
ｄ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列、
ｅ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｆ）「ＣＤＲ２配列群６０」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択され、且つ
ＣＤＲ３が、
ｇ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列、
ｈ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列、
ｉ）「ＣＤＲ３配列群６２」由来のアミノ酸配列の少なくとも１つとの、３つ、２つ若しくは１つのアミノ酸差異を有するアミノ酸配列から成る群から選択される（又はこのようなアミノ酸配列の任意の好適な断片）、ナノボディに関する。
概して、上記ＣＤＲ配列を有するナノボディは、本明細書中でさらに記載するようなものとすることができ、また好ましくは、同様に本明細書中にさらに記載のフレームワーク配列を有し得る。したがって例えば、本明細書中で言及されるように、このようなナノボディは、（任意の好適な種由来の）天然ナノボディ、天然ＶＨＨ配列（即ち好適なラクダ科動物種由来）、又は部分ヒト化ナノボディ若しくはＶＨＨ配列、完全ヒト化ナノボディ若しくはＶＨＨ配列、ラクダ化重鎖可変ドメイン配列、並びに本明細書中で言及される技法で得られたナノボディを含むが、これらに限定されない、合成若しくは半合成のアミノ酸配列若しくはナノボディであり得る。
また上記のｐ１９＋、ｐ１９−、ｐ４０＋、ｐ４０−、抗ｐ３５、抗ＩＬ−２７、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２及び抗ＩＬ−２３Ｒナノボディはそれぞれ好ましくは、それぞれ表Ａ−２で言及されるｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０−配列、ｐ４０＋配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列又はＩＬ−２３Ｒ配列との配列同一性、アミノ酸差異の数、及び／又は交差遮断及び／又は競合する能力に関して本明細書に記載される。好ましくは、ｐ１９＋、ｐ１９−、ｐ４０＋、ｐ４０−、抗ｐ３５、抗ＩＬ−２７、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２及び抗ＩＬ−２３Ｒナノボディは、表Ａ−２で言及される対応する配列から選択される。
したがって、具体的であるが、非限定的な一態様において、本発明は、ヒト化ナノボディであって、４つのフレームワーク領域（それぞれ、ＦＲ１〜ＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（それぞれ、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３）とから成り、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３が本明細書中に規定され、上記ヒト化ナノボディが、少なくとも１つのヒト化置換（本明細書中に規定）、特にそのフレームワーク配列の少なくとも１つにおいて少なくとも１つのヒト化置換（本明細書中に規定）を含む、ヒト化ナノボディに関する。
好ましいが非限定的な本発明の別の態様は、対応する（即ち表Ａ−２で言及されるような）天然ＶＨＨ配列と比較して、（本明細書中に規定されるように）少なくとも１つのヒト化置換、特に（本明細書中に規定されるように）少なくとも１つのそのフレームワーク配列に少なくとも１つのヒト化置換を含有する、上記のｐ１９＋、ｐ１９−、ｐ４０＋、ｐ４０−、抗ｐ３５、抗ＩＬ−２７、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２及び抗ＩＬ−２３Ｒナノボディのヒト化変異体に関する。このようなヒト化ナノボディの例は配列番号２５５９〜配列番号２６１４に与えられ（図３１も参照されたい）、当業者は、任意で幾らか限定された試行錯誤の後に、本明細書中の開示に基づき他の好適なヒト化変異体を見出すことができる。
本発明のポリペプチドは、本発明のナノボディを少なくとも１つ含む、又は本質的にこれから成る。好ましいが非限定的な本発明のポリペプチドの幾つかの例は、配列番号２１４２〜配列番号２１６９及び配列番号２５３０〜配列番号２５５８（図３０も参照されたい）、並びに配列番号２６１５〜配列番号２６２２（図３２を参照されたい）、配列番号２６２３〜配列番号２６２９、配列番号２６４３及び配列番号２６４４（図３３を参照されたい）、配列番号２６３０〜配列番号２６４１（図３４を参照されたい）、配列番号２６４５及び配列番号２６４６（図３５を参照されたい）、並びに配列番号２６４７及び配列番号２６４８（図３６を参照されたい）で与えられる。本発明は、これらのポリペプチドの少なくとも１つとの少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドにも関する。
例えば、実験部でさらに記載されるように、Aggarwalが記載した脾細胞アッセイにおいて（実施例１５を参照されたい）、一価のＮｂ １２１Ａ２のＩＣ５０が約１．５ｎＭであったのに対し、以下の二重パラトピック構築物のＩＣ５０値は以下の通りであった：
１２１Ａ２−３５ＧＳ−８１Ａ２：ＩＣ５０＝約６０ｐＭ、１２１Ａ２−３５ＧＳ−８１Ｇ２：ＩＣ５０＝約９０ｐＭ、１２１Ａ２−３５ＧＳ−１１９Ｇ７）：ＩＣ５０＝３０ｐＭ〜６０ｐＭ、１２１Ａ２−３５ＧＳ−１２４Ｈ２：ＩＣ５０＝約９０ｐＭ及び１２１Ａ２−３５ＧＳ−１２４Ｈ：ＩＣ５０＝約１８０ｐＭ。
「好ましい」（又は「より好ましい」、「さらにより好ましい」等）と本明細書中で言及されるナノボディが、本明細書中に記載のポリペプチドで使用するのにも好ましい（又はより好ましい、又はさらにより好ましい等）ことは、当業者にとって明らかである。このように概して、１つ又は複数の「好ましい」本発明のナノボディを含むか、又は本質的にこれから成るポリペプチドが好ましく、概して１つ又は複数の「より好ましい」本発明のナノボディを含むか、又は本質的にこれから成るポリペプチドがより好ましい。
概して、単一のナノボディ（本発明の単一のナノボディ等）を含むか、又は本質的にこれから成るタンパク質又はポリペプチドは、本明細書で「一価」タンパク質若しくはポリペプチド、又は「一価構築物」と呼ばれる。２つ以上のナノボディ（少なくとも２つの本発明のナノボディ、又は少なくとも１つの本発明のナノボディ及び少なくとも１つの他のナノボディ等）を含むか、又は本質的にこれから成るタンパク質及びポリペプチドは、本明細書で「多価」タンパク質若しくはポリペプチド、又は「多価構築物」と呼ばれ、これらは、対応する本発明の一価のナノボディに比べて或る特定の利点を与え得る。このような多価構築物の幾つかの非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
具体的であるが、非限定的な一態様によれば、本発明のポリペプチドは、少なくとも２つの本発明のナノボディ、例えば２つ又は３つの本発明のナノボディを含むか、又は本質的にこれから成る。本明細書中にさらに記載のように、このような多価構築物は、本発明の単一ナノボディを含むか、又はこれから成るタンパク質又はポリペプチドに比べて、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する結合活性が大きく改善するというような、或る特定の利点を与えることができる。このような多価構築物は、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかである。
具体的であるが、非限定的な別の態様によれば、本発明のポリペプチドは、少なくとも１つの本発明のナノボディと、少なくとも１つの他の結合単位（即ち別のエピトープ、抗原、標的、タンパク質又はポリペプチドに指向性を有する）とを含むか、又は本質的にこれから成り、これは好ましくはナノボディでもある。このようなタンパク質又はポリペプチドは、本明細書中で「多重特異性」タンパク質若しくはポリペプチド、又は「多重特異性構築物」とも称され、これらは、（好ましいが非限定的な幾つかの多重特異性構築物の本明細書中のさらなる考察から明らかになるように）対応する本発明の一価ナノボディに比べて或る特定の利点を与え得る。このような多重特異性構築物は、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかであり、（本明細書中に記載のように）特に二重パラトピック構築物であり得る。このような多重特異性ナノボディ構築物の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかである。
具体的であるが、非限定的なさらに別の態様によれば、本発明のポリペプチドは、少なくとも１つの本発明のナノボディと、任意で１つ又は複数のさらなるナノボディと、本発明のナノボディに及び／又は得られた融合タンパク質に少なくとも１つの所望の特性を与える少なくとも１つの他のアミノ酸配列（タンパク質又はポリペプチド等）とを含むか、又は本質的にこれから成る。ここでも同様に、このような融合タンパク質は、対応する本発明の一価ナノボディに比べて或る特定の利点を与え得る。このようなアミノ酸配列及びこのような融合構築物の幾つかの非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
例えば２つ以上の上記の態様を組合せて、２つの本発明のナノボディと、１つの他のナノボディと、任意で１つ又は複数の他のアミノ酸配列とを含む三価の二重特異性構築物を提供することも可能である。このような構築物、及び本発明の背景内で特に好ましい幾つかの構築物のさらなる非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
上記の構築物において、１つ又は複数のナノボディ及び／又は他のアミノ酸配列は、互いに直接連結しても、及び／又は１つ又は複数のリンカー配列を介して互いに好適に連結してもよい。このようなリンカーの幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
具体的な本発明の一態様において、本発明のナノボディ、又は少なくとも１つの本発明のナノボディを含む、本発明の化合物、構築物若しくはポリペプチドの半減期は、対応する本発明のアミノ酸配列に比べて増大し得る。このようなナノボディ、化合物及びポリペプチドの幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる開示に基づき、当業者にとって明らかになり、例えば（例えばペグ化によって）半減期が増大するように化学修飾した本発明のナノボディ配列又はポリペプチド；血清タンパク質（血清アルブミン等）との結合に関する、少なくとも１つのさらなる結合部位を含む本発明のアミノ酸配列；又は本発明のナノボディの半減期を増大させる、少なくとも１つの部位（特に少なくとも１つのアミノ酸配列）と連結する、少なくとも１つの本発明のナノボディを含む本発明のポリペプチドを含む。このような半減期が延びた部位又はアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドの例は、本明細書中のさらなる開示に基づき、当業者にとって明らかになり、例えば１つ又は複数の本発明のナノボディが、１つ又は複数の血清タンパク質若しくはその断片（血清アルブミン又はその好適な断片等）、又は血清タンパク質と結合することができる、１つ又は複数の結合単位（例えば血清アルブミン等の血清タンパク質、ＩｇＧ等の血清免疫グロブリン、又はトランスフェリンと結合することができるナノボディ又は（単一）ドメイン抗体等）と好適に連結するポリペプチド；本発明のナノボディがＦｃ部分（ヒトＦｃ等）又はその好適な部分若しくは断片と連結するポリペプチド；又は１つ又は複数の本発明のナノボディが、血清タンパク質と結合することができる、１つ又は複数の小さいタンパク質又はペプチドと好適に連結するポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない（例えば国際公開第９１／０１７４３号パンフレット、国際公開第０１／４５７４６号パンフレット、国際公開第０２／０７６４８９号パンフレット、及び２００６年１２月５日付で出願したAblynx N.V.の"Peptidescapable of binding to serum proteins"と題したAblynx N.V.の米国仮特許出願並びにAblynx. N. V. の"Improvedpeptides capable of binding to serum proteins"と共に題する２つの米国仮特許出願第６１／０５０３８５号明細書及び第６１／０４５６９０号明細書（国際公開第０６８２８０号パンフレットも参照されたい）に記載のタンパク質及びペプチドであるが、これに限定されない）。
さらに、当業者にとって明らかなように、このようなナノボディ、化合物、構築物又はポリペプチドは、三重特異性又は多重特異性ナノボディ構築物を提供するように、１つ又は複数のさらなる基、残基、部位、又は結合単位（例えば１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、特に１つ又は複数のさらなるナノボディ（即ちヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有しない））を含有し得る。
概して、半減期が増大した本発明のナノボディ（又はこれを含む化合物、構築物若しくはポリペプチド）は、対応する本発明のアミノ酸配列自体の半減期の少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍（少なくとも５倍等）、例えば少なくとも１０倍又は２０倍を超える半減期を有する。例えば、半減期が増大した本発明のナノボディ、化合物、構築物又はポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列自体に比べて、半減期が１時間を超えて、好ましくは２時間を超えて、より好ましくは６時間を超えて（１２時間等を超えて）、又はさらに２４時間、４８時間若しくは７２時間を超えて増大し得る。
好ましいが非限定的な本発明の態様において、このような本発明のナノボディ、化合物、構築物又はポリペプチドは、少なくとも約１２時間、好ましくは少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間、さらにより好ましくは少なくとも７２時間以上のヒトにおける血清半減期を示す。例えば本発明の化合物又はポリペプチドは、少なくとも５日（約５日〜１０日等）、好ましくは少なくとも９日（約９日〜１４日等）、より好ましくは少なくとも約１０日（約１０日〜１５日等）、若しくは少なくとも約１１日（約１１日〜１６日等）、より好ましくは少なくとも約１２日（約１２日〜１８日以上等）、又は１４日超（約１４日〜１９日等）の半減期を有し得る。
本発明の別の一態様では、本発明のポリペプチドは、得られた本発明のポリペプチドが血液脳関門を横断するのを可能にする（任意で１つ又は複数の好適なリンカー配列を介して）１つ又は複数（例えば２つ及び好ましくは１つ）のアミノ酸配列に連結する、１つ又は複数（例えば２つ又は好ましくは１つ）の本発明のナノボディを含む。特に、得られた本発明のポリペプチドが血液脳関門を横断するのを可能にする上記１つ又は複数のアミノ酸配列は、１つ又は複数の（例えば２つ及び好ましくは１つ）ナノボディ、例えば、国際公開第０２／０５７４４５号パンフレットに記載のナノボディ（好ましい例は、ＦＣ４４（国際公開第０６／０４０１５３号パンフレットの配列番号１８９）及びＦＣ５（国際公開第０６／０４０１５４号パンフレットの配列番号１９０）である）であり得る。
特に、１つ又は複数の本発明のナノボディを含むポリペプチドは、
１０−５モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及び好ましくは１０−７モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、及びより好ましくは１０−８モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で（即ち１０５Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及び好ましくは１０７Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、及びより好ましくは１０８Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モルの結合定数（ＫＡ）で）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなもの、及び／又は
１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、好ましくは１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１、より好ましくは１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１（１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１等）のｋｏｎ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなもの、及び／又は
１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−６ｓ−１（ｔ１／２が数日である略不可逆的な複合体の場合）、好ましくは１０−２ｓ−１〜１０−６ｓ−１、より好ましくは１０−３ｓ−１〜１０−６ｓ−１（１０−４ｓ−１〜１０−６ｓ−１等）のｋｏｆｆ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものであるのが好ましい。
好ましくは、本発明のアミノ酸配列を１つだけ含有するポリペプチドが、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満（５００ｐＭ未満等）の親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものである。これに対して、本発明のナノボディを２つ以上含有するポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列を１つだけ含有するポリペプチドに比べて、増大した結合活性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができることが当業者には明らかである。
本発明のアミノ酸配列又はポリペプチドとヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体との結合に関する幾つかの好ましいＩＣ５０値は、本明細書のさらなる記載及び実施例から明らかになる。
本発明の別の態様は、本発明のナノボディをコードする核酸、又はこれを含む本発明のポリペプチドに関する。さらに、本発明の核酸に関して本明細書中に概して記載するように、このような核酸は、本明細書中に規定のように遺伝子構築物の形態であり得る。
別の態様において、本発明は、本発明のアミノ酸配列（（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ等）及び／又はこれを含む本発明のポリペプチドを発現するか、又は発現することができる、及び／又は本発明の核酸を含有する宿主又は宿主細胞に関する。このような宿主又は宿主細胞の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
本発明の別の態様は、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列（（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ等）と、少なくとも１つの本発明のポリペプチド及び／又は少なくとも１つの本発明の核酸と、任意で（即ち組成物の使用目的に応じて）それ自体が既知のこのような組成物の１つ又は複数のさらなる構成要素とを含有するか又は含む産物又は組成物に関する。このような産物又は組成物は例えば、（本明細書に記載の）薬学的組成物、獣医学的組成物又は（同様に本明細書に記載の）診断用途のための産物若しくは組成物であり得る。このような産物又は組成物の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
本発明はさらに、本明細書中に記載のアミノ酸配列、化合物、構築物、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、産物及び組成物を調製又は生成する方法に関する。このような方法の幾つかの好ましいが非限定的な例は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
本発明はさらに、本明細書中に記載のアミノ酸配列、化合物、構築物、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、産物及び組成物の適用及び使用、並びにヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する疾患及び障害を予防及び／又は治療する方法に関する。幾つかの好ましいが非限定的な適用及び使用は、本明細書中のさらなる記載から明らかになる。
また本発明の他の態様、実施形態、利点及び用途は、本明細書中の以下のさらなる記載から明らかになる。
概して、最も広い意味で本明細書で使用される用語ナノボディは、特定の生物学的供給源又は特定の調製方法に限定されないことに留意すべきである。例えば、以下でより詳細に考察されるように、本発明のナノボディは概して、（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離すること、（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現、（３）天然ＶＨＨドメインの（本明細書に記載の）「ヒト化」、又はこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現、（４）任意の動物種、特に哺乳動物種（例えばヒト）由来の天然ＶＨドメインの（本明細書に記載の）「ラクダ化」、又はこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現、（５）Ward et al（上記）によって記載されるような「ドメイン抗体」若しくは「Ｄａｂ」の「ラクダ化」、又はこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現、（６）それ自体が既知である、タンパク質、ポリペプチド又は他のアミノ酸配列を調製するのに合成技法又は半合成技法を使用すること、（７）それ自体が既知である核酸合成技法を使用して、ナノボディをコードする核酸を調製した後、このようにして得られた核酸を発現すること、及び／又は（８）上記の任意の組合せの１つ又は複数によって得ることができることに留意すべきである。上記を実施するのに好適な方法及び技法は、本明細書中の開示に基づいて当業者にとって明らかであり、例えば本明細書でより詳細に記載される方法及び技法を含む。
１つの好ましい群のナノボディは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する天然重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応する。本明細書にさらに記載されるように、このようなＶＨＨ配列は概して、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体をラクダ科動物に好適に（即ち免疫応答及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する重鎖抗体を生じるように）免疫付与すること、上記ラクダ科動物由来の好適な生体試料（例えば血液試料、血清試料又はＢ細胞の試料）を得ること、及びそれ自体が既知の任意の好適な技法を使用して、上記試料からヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するＶＨＨ配列を生成することによって、生成又は入手することができる。このような技法は、当業者にとって明らかであり、及び／又は本明細書でさらに記載される。
代替的に、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するこのような天然ＶＨＨドメインは、例えばそれ自体が既知の１つ又は複数のスクリーニング技法を用いて、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又は少なくとも１つのその部分、断片、抗原決定基若しくはエピトープを使用して、このようなライブラリをスクリーニングすることによってラクダ科動物のＶＨＨ配列のナイーブライブラリから得ることができる。このようなライブラリ及び技法は例えば、国際公開第９９／３７６８１号パンフレット、国際公開第０１／９０１９０号パンフレット、国際公開第０３／０２５０２０号パンフレット及び国際公開第０３／０３５６９４号パンフレットに記載されている。代替的に、ナイーブＶＨＨライブラリ由来の改良型の合成ライブラリ又は半合成ライブラリ（例えばランダム突然変異法及び／又はＣＤＲシャッフリング（例えば国際公開第００／４３５０７号パンフレットに記載されているようなもの）等の技法によって、ナイーブＶＨＨライブラリから得られるＶＨＨライブラリ）を使用してもよい。
このように、別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するナノボディを生成する方法に関する。一態様では、上記方法は少なくとも、
ａ）ナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリを準備する工程と、
ｂ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するナノボディ配列に関して、上記のナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程と、
ｃ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有するアミノ酸配列（複数可）を単離する工程とを含む。
このような方法では、ナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリは、ナノボディ配列のナイーブセット、ナイーブコレクション又はナイーブライブラリ、ナノボディ配列の合成又は半合成のセット、コレクション又はライブラリ、及び／又は親和性成熟を受けているナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリであり得る。
この方法の好ましい態様では、ナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与したラクダ科動物種に由来している、ナノボディ配列の免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリ、特にＶＨＨ配列の免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリであり得る。特定の一態様では、上記抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
上記の方法において、ナノボディ配列又はＶＨＨ配列のセット、コレクション又はライブラリは、スクリーニングを容易にするように、ファージ、ファージミド、リボソーム又は好適な微生物（酵母等）上に提示してもよい。ナノボディ配列（のセット、コレクション又はライブラリ）を提示及びスクリーニングするのに好適な方法、技法及び宿主生物は、例えば本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかである。国際公開第０３／０５４０１６号パンフレット及びNature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116（2005）におけるHoogenboomによる総説も参照されたい。
別の態様において、ナノボディ配列を生成する方法は、少なくとも
ａ）免疫グロブリン配列を発現するラクダ種由来の細胞のコレクション又は試料を準備する工程と、
ｂ）（ｉ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有する免疫グロブリン配列を発現する細胞、（ｉｉ）重鎖抗体を発現する細胞に関して上記細胞のコレクション又は試料をスクリーニングする工程であって、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対して親和性を有する重鎖抗体を発現する細胞を少なくとも１つ提供するように、本質的に単一のスクリーニング工程として、又は２つの別々のスクリーニング工程として任意の好適な順番で下位工程（ｉ）及び（ｉｉ）を実施することができる、スクリーニングする工程と、
ｃ）（ｉ）上記重鎖抗体に存在するＶＨＨ配列を上記細胞から単離する工程、又は（ｉｉ）上記重鎖抗体に存在するＶＨＨ配列をコードする核酸配列を上記細胞から単離し、その後上記ＶＨＨドメインを発現する、単離する工程のいずれかとを含む。
この態様による方法において、細胞のコレクション又は試料は例えば、Ｂ細胞のコレクション又は試料であり得る。また、この方法では、細胞の試料は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与したラクダ科動物に由来し得る。特定の一態様では、上記抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
上記の方法は、当業者にとって明らかなように、任意の好適な方法で行われ得る。例えば欧州特許第０５４２８１０号明細書、国際公開第０５／１９８２４号パンフレット、国際公開第０４／０５１２６８号パンフレット及び国際公開第０４／１０６３７７号パンフレットを参照されたい。工程ｂ）のスクリーニングは、ＦＡＣＳ等のフローサイトメトリ法を使用して行うのが好ましい。これに関しては、例えばLieby et al.,Blood, Vol. 97, No. 12, 3820を参照されたい。特に、AblynxN.V.による国際出願である国際公開第０６／０７９３７２号で記載のいわゆる「ナノクローン（商標）」法を参照されたい。
別の態様において、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するアミノ酸配列を生成する方法は、少なくとも
ａ）重鎖抗体又はナノボディ配列をコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリを準備する工程と、
ｂ）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合することができる、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する親和性を有する重鎖抗体又はナノボディ配列をコードする核酸配列に関して、上記核酸配列のセット、コレクション又はライブラリをスクリーニングする工程と、
ｃ）上記核酸配列を単離し、その後それぞれ上記重鎖抗体に存在するＶＨＨ配列を発現するか、又は上記ナノボディ配列を発現する、単離する工程とを含み得る。
このような方法では、重鎖抗体又はナノボディ配列をコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリは例えば、重鎖抗体又はＶＨＨ配列のナイーブセット、ナイーブコレクション又はナイーブライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリ；ナノボディ配列の合成又は半合成のセット、コレクション又はライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリ；及び／又は親和性成熟を受けているナノボディ配列のセット、コレクション又はライブラリをコードする核酸配列のセット、コレクション又はライブラリであり得る。
この方法の好ましい態様では、アミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、又はこれに基づく若しくはこれに由来する好適な抗原決定基（例えばその抗原の部分、断片、領域、ドメイン、ループ又は他のエピトープ）を好適に免疫付与したラクダ科動物由来の重鎖抗体又はＶＨＨ配列をコードする核酸配列の免疫セット、免疫コレクション又は免疫ライブラリであり得る。特定の一態様では、上記抗原決定基は、細胞外の部分、領域、ドメイン、ループ又は他の細胞外エピトープ（複数可）であり得る。
上記の方法において、ヌクレオチド配列のセット、コレクション又はライブラリは、スクリーニングを容易にするように、ファージ、ファージミド、リボソーム又は好適な微生物（例えば酵母）上に提示してもよい。アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（のセット、コレクション又はライブラリ）を提示及びスクリーニングするのに好適な方法、技法及び宿主生物は、例えば本明細書中のさらなる開示に基づいて当業者にとって明らかである。国際公開第０３／０５４０１６号パンフレット及びNature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116（2005）におけるHoogenboomによる総説も参照されたい。
当業者にとって明らかなように、本明細書中に記載の方法のスクリーニング工程を選択工程として実施することもできる。したがって、本記載で使用する用語「スクリーニング」は、選択、スクリーニング、又は選択法及び／又はスクリーニング法の任意の好適な組合せを含むことができる。また、配列のセット、コレクション又はライブラリを使用する場合、これは、１個、２個、３個又は約５個、１０個、５０個、１００個、５００個、１０００個、５０００個、１０４個、１０５個、１０６個、１０７個、１０８個以上の配列等の任意の好適な数の配列を含有し得る。
また、上記のアミノ酸配列のセット、コレクション又はライブラリにおける配列の１つ又は複数又は全ては、コンピュータモデリング法又は生物静力学法又はデータマイニング法等の合理的又は半経験的なアプローチで入手又は規定され得る。
さらに、このようなセット、コレクション又はライブラリは、自然に多様化した配列（例えば免疫ライブラリ）の多様なセットに由来する複数の配列を含む（compromise）、（例えば、指定の点突然変異又はランダム化した位置で）互いの変異体である１つ、２つ以上の配列、又は任意の他の多様な配列源（例えばHoogenboom et al,Nat Biotechnol 23: 1105, 2005及びBinz et al, Nat Biotechnol 2005, 23: 1247に記載）を含み得る。配列のこのようなセット、コレクション又はライブラリは、ファージ粒子、リボソーム、細菌、酵母細胞、哺乳動物細胞の表面上に提示し、これらの担体内でアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に連結することができる。このことが、このようなセット、コレクション又はライブラリを、所望の本発明のアミノ酸配列を単離する選択法に従わせる。より一般的には、配列が好適な宿主又は宿主細胞上に提示される場合、初めに上記宿主又は宿主細胞から所望の配列をコードするヌクレオチド配列を単離した後、好適な宿主生物で上記ヌクレオチド配列を好適に発現することによって所望の配列を得ることも可能である（慣習になっている）。さらに、当業者にとって明らかなように、それ自体が既知の任意の好適な方法でこれを実施することができる。
ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するＶＨＨ配列又はナノボディ配列を得るためのさらに別の技法は、（即ち免疫応答及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する重鎖抗体を生じるように）重鎖抗体を発現することができるトランスジェニック哺乳動物に好適に免疫付与すること、上記ＶＨＨ配列又はナノボディ配列（をコードする核酸配列）を含有する上記トランスジェニック哺乳動物由来の好適な生体試料（例えば血液試料、血清試料又はＢ細胞の試料）を得ること、及びこれからそれ自体が既知の任意の好適な技法（本明細書で記載の方法又はハイブリドーマ法等）を使用して、上記試料からヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するＶＨＨ配列を生成することを伴う。例えばこのために、国際公開第０２／０８５９４５号パンフレット、国際公開第０４／０４９７９４号パンフレット、国際公開第０６／００８５４８号パンフレット及びJanssens et al.,Proc. Natl. Acad. Sci .USA. 2006 Oct 10;103（41）:15130-5に記載されている重鎖抗体発現マウス、並びにさらなる方法及び技法を使用することができる。例えば、このような重鎖抗体発現マウスは、天然源由来の（単一）可変ドメイン（例えばヒト（単一）可変ドメイン、ラクダ科動物（単一）可変ドメイン又はサメ（単一）可変ドメイン）及び例えば合成又は半合成の（単一）可変ドメイン等の任意の好適な（単一）可変ドメインを有する重鎖抗体を発現することができる。
本発明は、上記方法、又は代替的に上記の方法の１つと、さらに少なくとも上記ＶＨＨ配列又はナノボディ配列のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を決定する工程と、好適な宿主細胞若しくは宿主生物における発現又は化学合成のようなそれ自体が既知の方法で上記ＶＨＨ配列又はナノボディ配列を発現又は合成する工程とを含む方法によって得られるＶＨＨ配列又はナノボディ配列にも関する。
本明細書で言及されるように、特に好ましい群の本発明のナノボディは、天然ＶＨＨドメインのアミノ酸配列に対応するが、即ち上記天然ＶＨＨ配列（特にフレームワーク配列）のアミノ酸配列における１つ又は複数のアミノ酸残基を、（例えば上記の）ヒトの従来の４鎖抗体由来のＶＨドメインの対応する位置（複数可）で発生する１つ又は複数のアミノ酸残基に置き換えることによって「ヒト化」したアミノ酸配列を有するナノボディを含む。例えば本明細書中のさらなる記載及び本明細書で言及されたヒト化に関する従来技術に基づいて、当業者にとって明らかなそれ自体が既知の方法で、これを実施することができる。また、このような本発明のヒト化ナノボディは、それ自体が既知の任意の好適な方法で（即ち上記の（１）〜（８）で示されたように）得ることができ、このため出発材料として天然ＶＨＨドメインを含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密に限定されないことに留意すべきである。
別の特に好ましい群の本発明のナノボディは、天然ＶＨドメインのアミノ酸配列に対応するが、即ち従来の４鎖抗体由来の天然ＶＨドメインのアミノ酸配列における１つ又は複数のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメインの対応する位置（複数可）で発生する１つ又は複数のアミノ酸残基に置き換えることによって「ラクダ化」したアミノ酸配列を有するナノボディを含む。例えば本明細書中のさらなる記載に基づいて、当業者にとって明らかなそれ自体が既知の方法で、これを実施することができる。このような「ラクダ化」置換は、本明細書に規定のように、ＶＨ−ＶＬ界面及び／又はいわゆるラクダ科の特徴的な残基を形成し、及び／又はＶＨ−ＶＬ界面及び／又はいわゆるラクダ科動物の特徴的な残基に存在するアミノ酸位置に挿入するのが好ましい（例えば国際公開第９４／０４６７８号パンフレット及びDavies and Riechmann（1994 and 1996）（上記）を参照されたい）。好ましくは、出発材料又はラクダ化ナノボディを生成若しくは設計するための出発点として使用されるＶＨ配列は、好ましくは哺乳動物由来のＶＨ配列、より好ましくはヒトのＶＨ配列（例えばＶＨ３）である。しかし、このような本発明のラクダ化ナノボディは、それ自体が既知の任意の好適な方法で（即ち上記の（１）〜（８）で示されたように）得ることができ、このため出発材料として天然ＶＨドメインを含むポリペプチドを使用して得られたポリペプチドに厳密に限定されないことに留意すべきである。
例えばまた、本明細書にさらに記載されるように、それぞれ天然のＶＨＨドメイン又はＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列を準備した後、それ自体が既知の方法で、新規のヌクレオチド配列がそれぞれ、本発明の「ヒト化」又は「ラクダ化」ナノボディをコードするように、上記ヌクレオチド配列における１つ又は複数のコドンを変えることによって、「ヒト化」及び「ラクダ化」の両方を行うことができる。次にこの核酸は、所望の本発明のナノボディを提供するようにそれ自体が既知の方法で発現することができる。代替的に、それぞれ天然のＶＨＨドメイン又はＶＨドメインのアミノ酸配列に基づき、それぞれ所望の本発明のヒト化又はラクダ化ナノボディのアミノ酸配列を設計した後、それ自体が既知のペプチド合成技法を使用してｄｅ ｎｏｖｏで合成することができる。また、それぞれ天然のＶＨＨドメイン又はＶＨドメインのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列に基づき、それぞれ所望の本発明のヒト化又はラクダ化ナノボディをコードするヌクレオチド配列を設計した後、それ自体が既知の核酸合成技法を使用してｄｅ ｎｏｖｏで合成することができ、その後所望の本発明のナノボディを提供するように、それ自体が既知の方法で、このようにして得られた核酸を発現することができる。
天然ＶＨ配列又は好ましくはＶＨＨ配列から、本発明のナノボディ及び／又はこれをコードする核酸を得るのに好適な他の方法及び技法は、当業者にとって明らかであり、例えば本発明のナノボディ、又はこれをコードするヌクレオチド配列若しくは核酸を提供するように好適な方法で、１つ又は複数の天然ＶＨ配列（例えば１つ又は複数のＦＲ配列及び／又はＣＤＲ配列）の一部分又は複数部分、１つ又は複数の天然ＶＨＨ配列（例えば１つ又は複数のＦＲ配列及び／又はＣＤＲ配列）の一部分又は複数部分、及び／又は１つ又は複数の合成又は半合成の配列を組み合わせることを含み得る（したがって適切に発現することができる）。ＶＨＨ配列又はナノボディのフレームワーク配列をコードするヌクレオチド配列は、本明細書中の開示及び／又は本明細書中で言及したさらなる従来技術に基づき、当業者にとって明らかであり（及び／又は代替的に本明細書中に記載の方法を使用して得られたヌクレオチド配列から始めるＰＣＲによって入手され得る）、本発明のナノボディをコードする核酸を提供するように、（例えば重複プライマーを使用したＰＣＲアセンブリによって）所望のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列と好適に組合せ得る。
本明細書中に言及されるように、ナノボディは特に、１つ又は複数のフレームワーク配列における１つ又は複数の「特徴的な残基」（本明細書中に記載）の存在を特徴とし得る。
したがって、好ましいが、本発明の非限定的な一態様によれば、ナノボディは概して、最も広い意味で
ａ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱである）、及び／又は
ｂ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、（本明細書に規定の）荷電アミノ酸又はシステイン残基であり、４４位のアミノ酸残基はＥであるのが好ましい）、及び／又は
ｃ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＰ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択される）を含む、ポリペプチドと定義することができる。
したがって好ましいが非限定的な第１の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ａ）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱであり、及び／又は
ｂ）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、荷電アミノ酸又はシステイン残基であり、カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基はＥであるのが好ましく、及び／又は
ｃ）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＰ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択され、
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
特に、ナノボディは概して、最も広い意味で
ａ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱである）、及び／又は
ｂ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基はＥであり、カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基はＲである）、及び／又は
ｃ）３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列（カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＰ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択される）を含む、ポリペプチドと定義することができる。
したがって好ましいが非限定的な態様によれば、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ａ）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱであり、及び／又は
ｂ）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基はＥであり、カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基はＲであり、及び／又は
ｃ）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＰ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択され、
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
特に本発明によるヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対するナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ａ）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱであり、及び／又は
ｂ）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基はＥであり、カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基はＲであり、及び／又は
ｃ）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＰ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択され、
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
特に、好ましいが、本発明の非限定的な一態様によれば、ナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から成るアミノ酸配列を含むポリペプチドと定義することができ、
ａ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｌから成る群から選択され、好ましくはＧ、Ｅ若しくはＱから成る群から選択され、
ａ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ若しくはＣから成る群から選択され、好ましくはＬ若しくはＲから成る群から選択され、
ａ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ若しくはＳから成る群から選択され、好ましくはＷ若しくはＲであり、最も好ましくはＷであり、
ａ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱであるか、又は
ｂ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ｅ及びＱから成る群から選択され、
ｂ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基はＲであり、
ｂ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、好ましくはＷであり、
ｂ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＱであるか、又は
ｃ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｑ、Ｒ、Ｓ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＧ、Ｅ及びＱから成る群から選択され、
ｃ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ及びＣから成る群から選択され、好ましくはＬ及びＲから成る群から選択され、
ｃ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｐ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択され、
ｃ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＱであり、且つ
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
したがって、本発明の好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ａ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｌから成る群から選択され、好ましくはＧ、Ｅ若しくはＱから成る群から選択され、
ａ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ若しくはＣから成る群から選択され、好ましくはＬ若しくはＲから成る群から選択され、
ａ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ若しくはＳから成る群から選択され、好ましくはＷ若しくはＲであり、最も好ましくはＷであり、
ａ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱであり、且つ
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ｂ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ｅ及びＱから成る群から選択され、
ｂ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基はＲであり、
ｂ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、好ましくはＷであり、
ｂ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＱであり、且つ
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ｃ−１）カバットナンバリングによる４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｑ、Ｒ、Ｓ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＧ、Ｅ及びＱから成る群から選択され、
ｃ−２）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ及びＣから成る群から選択され、好ましくはＬ及びＲから成る群から選択され、
ｃ−３）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｐ、Ｒ及びＳから成る群から選択され、特にＲ及びＳから成る群から選択され、
ｃ−４）カバットナンバリングによる１０８位のアミノ酸残基はＱ及びＬから成る群から選択され、好ましくはＱであり、且つ
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
２つの特に好ましいが、本発明の非限定的なナノボディ群は、上記のａ）、上記の（ａ−１）〜（Ａ−５）、上記のｂ）、上記の（ｂ−１）〜（ｂ−４）、上記の（ｃ）、及び／又は上記の（ｃ−１）〜（ｃ−４）によるものであり、
ｉ）カバットナンバリングによる４４位〜４７位のアミノ酸残基は、配列ＧＬＥＷ（又は本明細書に記載のＧＬＥＷ様配列）を形成し、１０８位のアミノ酸残基はＱであるか、又は
ｉｉ）カバットナンバリングによる４３位〜４６位のアミノ酸残基は、配列ＫＥＲＥ又は配列ＫＱＲＥ（又は記載されるようなＫＥＲＥ様配列）を形成し、１０８位のアミノ酸残基はＱ又はＬであり、好ましくはＱである。
したがって、好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ｉ）カバットナンバリングによる４４位〜４７位のアミノ酸残基は、配列ＧＬＥＷ（又は本明細書に記載のＧＬＥＷ様配列）を形成し、１０８位のアミノ酸残基はＱであり、且つ
ｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有し得る；ここで
ｉ）カバットナンバリングによる４３位〜４６位のアミノ酸残基は、配列ＫＥＲＥ又は配列ＫＱＲＥ（又はＫＥＲＥ様配列）を形成し、１０８位のアミノ酸残基はＱ又はＬであり、好ましくはＱであり、且つ
ｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
カバットナンバリングによる４３位〜４６位のアミノ酸残基が、配列ＫＥＲＥ又は配列ＫＱＲＥを形成する、本発明のナノボディにおいて、３７位のアミノ酸残基がＦであるのが最も好ましい。カバットナンバリングによる４４位〜４７位のアミノ酸残基が、配列ＧＬＥＷを形成する、本発明のナノボディにおいて、３７位のアミノ酸残基は、Ｙ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＦから成る群から選択され、Ｖであるのが最も好ましい。
したがって、決してこれらには限定されないが、上記で言及された位置に存在するアミノ酸残基に基づき、概して本発明のナノボディを以下の３つの群に分類することができる：
ｉ）「ＧＬＥＷ群」：カバットナンバリングによる４４位〜４７位にアミノ酸配列ＧＬＥＷ、及びカバットナンバリングによる１０８位にＱを有するナノボディ。本明細書でさらに記載されるように、この群内のナノボディは通常、３７位にＶを有し、１０３位にＷ、Ｐ、Ｒ又はＳを有することができ、好ましくは１０３位にＷを有する。ＧＬＥＷ群は、以下の表Ａ−４で言及されるもののような幾つかのＧＬＥＷ様配列も含む。より一般的には、これに限定されないが、ＧＬＥＷ群に属するナノボディは、４４位にＧ、及び／又は４７位にＷを有し、４６位は通常Ｅであり、好ましくは４５位が荷電アミノ酸残基でもシステインでもないナノボディと定義することができる。
ｉｉ）「ＫＥＲＥ群」：カバットナンバリングによる４３位〜４６位にアミノ酸配列ＫＥＲＥ又はＫＱＲＥ（又は別のＫＥＲＥ様配列）、及びカバットナンバリングによる１０８位にＱ又はＬを有するナノボディ。本明細書でさらに記載されるように、この群内のナノボディは通常、３７位にＦ、及び４７位にＬ又はＦを有し、１０３位にＷ、Ｐ、Ｒ又はＳを有することができ、好ましくは１０３位にＷを有する。より一般的には、これに限定されないが、ＫＥＲＥ群に属するナノボディは、４４位にＫ、Ｑ又はＲ（通常Ｋ）を有し、４５位が荷電アミノ酸残基又はシステインであり、４７位が本明細書でさらに規定されるようなものであるナノボディと定義することができる。
ｉｉｉ）「１０３Ｐ、Ｒ、Ｓ群」：１０３位にＰ、Ｒ又はＳを有するナノボディ。これらのナノボディは、カバットナンバリングによる４４位〜４７位にアミノ酸配列ＧＬＥＷ、又はカバットナンバリングによる４３位〜４６位にアミノ酸配列ＫＥＲＥ又はアミノ酸配列ＫＱＲＥのいずれかを有することができ（後者は、（ＫＥＲＥ群に関して規定のように）３７位のＦと、４７位のＬ又はＦと組合せるのが最も好ましい）、カバットナンバリングによる１０８位にＱ又はＬを有することができ、Ｑを有するのが好ましい。
また必要に応じて、ナノボディは、２つ以上のこれらの群に属し得る（即ちこれらの特徴を有し得る）。例えば、１つの特に好ましいナノボディ群は、４４位〜４７位にＧＬＥＷ又はＧＬＥＷ様配列、１０３位にＰ、Ｒ又はＳ（特にＲ）、及び１０８位にＱを有する（Ｌへとヒト化してもよい）。
より一般的には、上記に言及される定義が、天然（即ち非ヒト化）ＶＨＨ配列の形態のナノボディを説明し、またこれに適用すること、及びこれらのナノボディのヒト化変異体は、上記のもの以外のアミノ酸残基（即ち本明細書中に規定の１つ又は複数のヒト化置換）を含み得ることに留意されたい。例えばこれに限定されないが、ＧＬＥＷ群又は１０３Ｐ、Ｒ、Ｓ群の幾つかのヒト化ナノボディにおいて、１０８位のＱは、１０８Ｌにヒト化し得る。本明細書中に既に言及されたように、他のヒト化置換（及びその好適な組合せ）は、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかになる。付加的に又は代替的に、天然のＶＨＨ配列のフレームワーク領域の配列を、１つ又は複数の密接に関連するヒトＶＨ配列の対応するフレームワーク配列と比較することによって、他の潜在的に有用なヒト化置換を確認することができ、その後（本明細書中にさらに記載のように、それ自体が既知の任意の方法で）このようにして求めた、潜在的に有用なヒト化置換（又はその組合せ）の１つ又は複数を上記ＶＨＨ配列に導入することができ、標的に対する親和性、安定性、発現の容易さ及びレベル、及び／又は他の所望の特性に関して、得られたヒト化ＶＨＨ配列を試験することができる。このようにして、試行錯誤の程度を限定することによって、本明細書中の開示に基づき当業者によって、他の好適なヒト化置換（又はその好適な組合せ）を求めることができる。また、上記に基づき、ナノボディ（のフレームワーク領域）を部分ヒト化又は完全ヒト化してもよい。
したがって、好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、（本明細書に規定のように）ＧＬＥＷ群に属するナノボディであってもよく、その中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、（本明細書に規定のように）ＫＥＲＥ群に属するナノボディであってもよく、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
したがって、好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、（本明細書に規定のように）１０３Ｐ、Ｒ、Ｓ群に属するナノボディであってもよく、その中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は本明細書で規定されるようなものであり、好ましくは本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであり、より好ましくは本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものである。
また、より一般的には、上記で言及された１０８Ｑ、４３Ｅ／４４Ｒ及び１０３Ｐ、Ｒ、Ｓ残基の他に、本発明のナノボディは、従来のＶＨドメインでＶＨ／ＶＬ界面（の一部）が形成される１つ又は複数の位置で、対応する天然ＶＨ配列における同じ位置（複数可）で自然発生するアミノ酸残基よりも強く荷電する、１つ又は複数のアミノ酸残基、特に（表Ａ−３で言及される）１つ又は複数の荷電アミノ酸残基を含有することができる。このような置換としては、これらに限定されないが、以下の表Ａ−４で言及されるＧＬＥＷ様配列、及び４４位〜４７位のＫＬＥＷと共に１０８位にＱを有するナノボディを得るために、いわゆる「ミクロボディ」に関して国際出願の国際公開第００／２９００４号パンフレットで説明される置換が挙げられる。これらの位置での他の可能性のある置換は、本明細書中の開示に基づいて当業者にとって明らかである。
本発明のナノボディの一態様において、８３位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｍ、Ｓ、Ｖ及びＷから成る群から選択され、Ｌであるのが好ましい。
また、本発明のナノボディの一態様において、８３位のアミノ酸残基は、Ｒ、Ｋ、Ｎ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｔ及びＱから成る群から選択され、（天然ＶＨＨドメインに対応するナノボディに関しては）Ｋ若しくはＥ、又は（本明細書に記載の「ヒト化」ナノボディに関しては）Ｒのいずれかであるのが最も好ましい。一態様では、８４位のアミノ酸残基は、Ｐ、Ａ、Ｒ、Ｓ、Ｄ、Ｔ及びＶから成る群から選択され、（天然ＶＨＨドメインに対応するナノボディに関しては）Ｐ、又は（本明細書に記載の「ヒト化」ナノボディに関しては）Ｒのいずれかであるのが最も好ましい。
さらに本発明のナノボディの一態様において、１０４位のアミノ酸残基は、Ｇ及びＤから成る群から選択され、Ｇであるのが最も好ましい。
まとめると、ナノボディにおいて上記で言及される、１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位のアミノ酸残基は、本明細書で「特徴的な残基」とも称される。特徴的な残基及び最も密接に関連したヒトＶＨドメイン（ＶＨ３）の対応する位置のアミノ酸残基を表Ａ−４に要約する。
幾つかの特に好ましいが非限定的な天然ＶＨＨドメインで生じるこれらの特徴的な残基の組合せを表Ａ−５で言及する。比較のために、ＤＰ−４７と呼ばれるヒトＶＨ３の対応するアミノ酸残基をイタリック体で示している。
ナノボディにおいて、特徴的な残基以外の任意の位置の各アミノ酸残基は、天然ＶＨＨドメインの（カバットナンバリングによる）対応する位置で自然発生する任意のアミノ酸残基であり得る。
このようなアミノ酸残基は当業者にとって明らかである。表Ａ−６〜表Ａ−９は、天然ＶＨＨドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４の（カバットナンバリングによる）それぞれの位置に存在し得る幾つかの非限定的な残基を表す。それぞれの位置に関しては、天然ＶＨＨドメインのそれぞれの位置で最も頻繁に発生する（ナノボディにおける上記位置に最も好ましいアミノ酸残基である）アミノ酸残基を太字で示し、それぞれの位置に好ましい他のアミノ酸残基を下線処理する（備考：天然ＶＨＨドメインの２６位〜３０位で見られるアミノ酸残基の数字は、これらの位置の残基が既にＣＤＲ１部分を形成するというChothia（上記）によるナンバリングに基づく仮説を支持する）。
表Ａ−６〜表Ａ−９では、ヒトＶＨ３ドメインのそれぞれの位置に存在し得る非限定的な残基の幾つかも表している。また、それぞれの位置に関しては、天然ヒトＶＨ３ドメインのそれぞれの位置で最も頻繁に発生するアミノ酸残基を太字で示し、他の好ましいアミノ酸残基を下線処理する。
参考のみのために、表Ａ−６〜表Ａ−９は、１１１８ＶＨＨ配列の代表的な試料におけるそれぞれのアミノ酸位置でＶＨＨエントロピー（「ＶＨＨ Ｅｎｔ．」）及びＶＨＨ変動性（「ＶＨＨ Ｖａｒ．」）に関するデータ（David Lutje Hulsingand Prof. Theo Verrips of Utrecht Universityによって無償（kindly）提供されたデータ）も含有する。ＶＨＨエントロピー及びＶＨＨ変動性の値は、解析する１１１８ＶＨＨ配列間のアミノ酸残基の変動性及び保存度に対する評価基準を与え、低い値（即ち１未満、例えば０．５未満）は、アミノ酸残基が、ＶＨＨ配列間で強く保存される（即ちほとんど変動性がない）ことを示す。例えば、８位のＧ及び９位のＧはそれぞれ、０．１及び０のＶＨＨエントロピー値を有し、これは（解析する全ての１１１８配列において９位がＧである場合）これらの残基が強く保存され、ほとんど変動しないことを示す一方で、ＣＤＲ部分を形成する残基に関しては概して、１．５以上の値が見られる（データ図示せず）。（１）表Ａ−６〜表Ａ−９の２列目に列挙されるアミノ酸残基は、後の２列で言及されるＶＨＨエントロピー及びＶＨＨ変動性を決定するのに解析された１１１８ＶＨＨ配列よりも大きい試料に基づいており、（２）以下で表すデータは、２７位〜３０位のアミノ酸残基、並びにおそらく９３位及び９４位のアミノ酸残基でさえも既にＣＤＲ部分を形成しているという仮説を支持することに留意されたい（しかしながら、本発明は任意の特定の仮説又は説明に限定されず、上記のように、本明細書ではカバットによるナンバリングを使用する）。配列エントロピー、配列変動性及びこれを決定する方法の一般的説明に関しては、Oliveira et al., PROTEINS: Structure, Function and Genetics, 52:544-552（2003）を参照されたい。
このように、好ましいが非限定的な別の態様において、本発明のナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有するアミノ酸配列として規定することができ、ここで
ｉ）カバットナンバリングによる１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位のアミノ酸残基の１つ又は複数が、表Ａ−４で言及される特徴的な残基から選択され、
ｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。
特に、本発明のナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域１〜フレームワーク領域４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域１〜相補性決定領域３を指す）を有するアミノ酸配列である可能性があり、ここで
ｉ）カバットナンバリングによる１１位、３７位、４４位、４５位、４７位、８３位、８４位、１０３位、１０４位及び１０８位の（好ましくは）アミノ酸残基の１つ又は複数が、表Ａ−４で言及される特徴的な残基から選択され（ＶＨＨ配列が１つ又は複数の特徴的な残基を含有すること、並びに部分ヒト化ナノボディが通常及び好ましくは［依然として］１つ又は複数の特徴的な残基を含有すること［しかしながら、本発明に応じて好適であれば、１つ又は複数の他のアミノ酸残基ではなく、全ての特徴的な残基がヒト化した部分ヒト化ナノボディを提供することも本発明の範囲内である］、並びに本発明に応じて好適であれば、完全ヒト化ナノボディにおいて特徴的な残基の位置の全てのアミノ酸残基がヒトＶＨ３配列で発生するアミノ酸残基であることが理解される。本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかなように、このようなＶＨＨ配列、少なくとも１つの特徴的な残基を有するこのような部分ヒト化ナノボディ、特徴的な残基を有しないこのような部分ヒト化ナノボディ及びこのような完全ヒト化ナノボディは全て、本発明の態様を形成する）、
ｉｉ）上記アミノ酸配列が、配列番号１〜配列番号２２のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有し（アミノ酸同一性の程度を求めるために、ＣＤＲ配列を形成するアミノ酸残基（配列番号１〜配列番号２２の配列においてＸで示す）は無視する）、
ｉｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。
特に、ＫＥＲＥ群の本発明のナノボディは、（一般）構造：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
を有するアミノ酸配列である可能性があり、ここで
ｉ）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、荷電アミノ酸（本明細書中に規定）又はシステイン残基であり、４４位のアミノ酸残基は好ましくはＥであり、
ｉｉ）ＦＲ１は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｉｉ）ＦＲ２は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｖ）ＦＲ３は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖ）ＦＲ４は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディにおいて、１つ又は複数のさらなる特徴的な残基は、（例えばこれらがＶＨＨ配列又は部分ヒト化ナノボディである場合）本明細書中に記載のようなものが好ましい。
また、上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。
フレームワーク１に関して、上記で概説のアミノ酸配列がヌクレオチド配列の発現によって生成する場合、上記核酸を生成するのに使用されているプライマー（複数可）によって、始めの４つのアミノ酸配列（即ちカバットナンバリングによる１位〜４位のアミノ酸残基）を求め得ることが多いことは、当業者にとって明らかである。このように、アミノ酸同一性の程度を求めるために、始めの４つのアミノ酸残基を無視するのが好ましい。
また、フレームワーク１に関して、カバットナンバリングによる２７位〜３０位のアミノ酸が（ＣＤＲではなく）フレームワーク領域の一部であると考えられる場合、１０００個を超えるＶＨＨ配列のデータベースの解析によって、２７位〜３０位のアミノ酸が、１位〜２６位のアミノ酸に対する変動性よりも非常に大きい変動性（ＶＨＨエントロピー及びＶＨＨ変動性に関して表される、表Ａ−６〜表Ａ−９を参照されたい）を有することが見出されている。このため、アミノ酸同一性の程度を求めるために、２７位〜３０位のアミノ酸残基も無視するのが好ましい。
これを考慮して、ＫＥＲＥ群のナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から構成されるアミノ酸配列であり得る；
ｉ）カバットナンバリングによる４５位のアミノ酸残基は、荷電アミノ酸（本明細書中に規定）又はシステイン残基であり、４４位のアミノ酸残基は好ましくはＥであり、
ｉｉ）ＦＲ１は、カバットナンバリングによる５位〜２６位で、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｉｉ）ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４は、ＫＥＲＥ群のナノボディのＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４に関して本明細書中に言及されるようなものであり、
ｉｖ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。
ＧＬＥＷ群のナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から構成されるアミノ酸配列であり得る；
ｉ）好ましくは、ＧＬＥＷ群のナノボディが非ヒト化ナノボディである場合、１０８位のアミノ酸残基はＱであり、
ｉｉ）ＦＲ１は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｉｉ）ＦＲ２は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｖ）ＦＲ３は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖ）ＦＲ４は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディにおいて、１つ又は複数のさらなる特徴的な残基は、（例えばこれらがＶＨＨ配列又は部分ヒト化ナノボディである場合）本明細書中に記載のようなものが好ましい。
さらにフレームワーク１に関して、アミノ酸同一性の程度を求めるために、１位〜４位及び２７位〜３０位のアミノ酸残基を無視するのが好ましいことは当業者にとって明らかである。
これを考慮して、ＧＬＥＷ群のナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から構成されるアミノ酸配列であり得る；
ｉ）好ましくは、ＧＬＥＷ群のナノボディが非ヒト化ナノボディである場合、１０８位のアミノ酸残基はＱであり、
ｉｉ）ＦＲ１は、カバットナンバリングによる５位〜２６位で、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｉｉ）ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４は、ＧＬＥＷ群のナノボディのＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４に関して本明細書中に言及されるようなものであり、
ｉｖ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。上記ナノボディにおいて、１つ又は複数のさらなる特徴的な残基は、（例えばこれらがＶＨＨ配列又は部分ヒト化ナノボディである場合）本明細書中に記載のようなものが好ましい。
Ｐ、Ｒ、Ｓ １０３群のナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から構成されるアミノ酸配列であり得る；
ｉ）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＷではなく、
ｉｉ）好ましくは、カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｐ、Ｒ又はＳであり、より好ましくはＲであり、
ｉｉｉ）ＦＲ１は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｖ）ＦＲ２は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖ）ＦＲ３は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖｉ）ＦＲ４は、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｖｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディにおいて、１つ又は複数のさらなる特徴的な残基は、（例えばこれらがＶＨＨ配列又は部分ヒト化ナノボディである場合）本明細書中に記載のようなものが好ましい。
フレームワーク１に関して、アミノ酸同一性の程度を求めるために、１位〜４位及び２７位〜３０位のアミノ酸残基を無視するのが好ましいことはここでもまた当業者にとって明らかである。
これを考慮して、Ｐ、Ｒ、Ｓ １０３群のナノボディは、３つの相補性決定領域／配列が間に挿入された４つのフレームワーク領域／配列から構成されるアミノ酸配列であり得る；
ｉ）カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基はＷではなく、
ｉｉ）好ましくは、カバットナンバリングによる１０３位のアミノ酸残基は、Ｐ、Ｒ又はＳであり、より好ましくはＲであり、
ｉｉｉ）ＦＲ１は、カバットナンバリングによる５位〜２６位で、以下のアミノ酸配列の少なくとも１つとの少なくとも８０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列であり、
ｉｖ）ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４は、Ｐ、Ｒ、Ｓ １０３群のナノボディのＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４に関して本明細書中に言及されるようなものであり、
ｖ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３が、本明細書中で規定されるようなものであり、本明細書中の好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのものが好ましく、本明細書中のより好ましい態様の１つに従って規定されるようなものであるのがより好ましい。
上記ナノボディは例えば、ＶＨＨ配列であっても、又はヒト化ナノボディであってもよい。上記ナノボディ配列がＶＨＨ配列である場合、これらは、本明細書中にさらに記載のように、好適にヒト化されていてもよい。ナノボディが部分ヒト化ナノボディである場合、これらは任意で、さらに本明細書中に記載のようにさらに好適にヒト化してもよい。
上記ナノボディにおいて、１つ又は複数のさらなる特徴的な残基は、（例えばこれらがＶＨＨ配列又は部分ヒト化ナノボディである場合）本明細書中に記載のようなものが好ましい。
好ましくは、本発明の（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディにおけるＣＤＲ配列及びＦＲ配列は、本発明のナノボディ（及びこれを含む本発明のポリペプチド）が、
１０−５モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、好ましくは１０−７モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌ以下、より好ましくは１０−８モル／Ｌ〜１０−１２モル／Ｌの解離定数（ＫＤ）で（即ち、１０５Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、好ましくは１０７Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モル以上、より好ましくは１０８Ｌ／モル〜１０１２Ｌ／モルの結合定数（ＫＡ）で）ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に結合する、及び／又は
１０２Ｍ−１ｓ−１〜約１０７Ｍ−１ｓ−１、好ましくは１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１、より好ましくは１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１（１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０７Ｍ−１ｓ−１等）のｋｏｎ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に結合する、及び／又は
１ｓ−１（ｔ１／２＝０．６９ｓ）〜１０−６ｓ−１（ｔ１／２が数日のほぼ非可逆的な複合体の場合）、好ましくは１０−２ｓ−１〜１０−６ｓ−１、より好ましくは１０−３ｓ−１〜１０−６ｓ−１（１０−４ｓ−１〜１０−６ｓ−１等）のｋｏｆｆ速度でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に結合するものである。
好ましくは、本発明のナノボディに存在するＣＤＲ配列及びＦＲ配列は、本発明のナノボディが、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満（５００ｐＭ未満等）の親和性でヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するようなものである。
本発明の非限定的な一態様によれば、ナノボディは本明細書で規定されるようなものであり得るが、天然のヒトＶＨドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にＤＰ−４７の対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも１つに少なくとも「１つのアミノ酸差異」（本明細書で規定される）を有することが条件である。より具体的には、本発明の非限定的な一態様によれば、ナノボディは本明細書で規定されるようなものであり得るが、天然のヒトＶＨドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にＤＰ−４７の対応するフレームワーク領域と比較して、特徴的な残基（例えば１０８位、１０３位及び／又は４５位のもの）の少なくとも１つに少なくとも「１つのアミノ酸差異」（本明細書で規定）を有することが条件である。通常、ナノボディは、ＦＲ２及び／又はＦＲ４の少なくとも１つにおいて、特にＦＲ２及び／又はＦＲ４の特徴的な残基の少なくとも１つ（同様に、例えば１０８位、１０３位及び／又は４５位のもの）において、天然のＶＨドメインとの少なくとも１つのこのようなアミノ酸差異を有する。
また、本発明のヒト化ナノボディは本明細書で規定されるようなものであり得るが、天然のＶＨＨドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも１つに少なくとも「１つのアミノ酸差異」（本明細書で規定）を有することが条件である。より具体的には、本発明の非限定的な一態様によれば、ヒト化ナノボディは本明細書で規定されるようなものであり得るが、天然のＶＨＨドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特徴的な残基（例えば１０８位、１０３位及び／又は４５位のもの）の少なくとも１つに少なくとも「１つのアミノ酸差異」（本明細書で規定）を有することが条件である。通常、ヒト化ナノボディは、ＦＲ２及び／又はＦＲ４の少なくとも１つにおいて、特にＦＲ２及び／又はＦＲ４の特徴的な残基の少なくとも１つ（同様に、例えば１０８位、１０３位及び／又は４５位のもの）において、天然のＶＨＨドメインとの少なくとも１つのこのようなアミノ酸差異を有する。
本明細書における開示より明らかなように、本明細書で規定されるような本発明のナノボディの天然又は合成の類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子、ホモログ及びオーソログ（本明細書中で集合的に「類似体」と称される）の使用も本発明の範囲内である。したがって、本発明の一実施形態によれば、用語「本発明のナノボディ」は最も広い意味ではこのような類似体も包含する。
概して、このような類似体では、本明細書で規定されるような本発明のナノボディと比較して、１つ又は複数のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されていてもよい。このような置換、挿入又は欠失はフレームワーク領域の１つ又は複数、及び／又はＣＤＲの１つ又は複数において起こってもよい。このような置換、挿入又は欠失がフレームワーク領域の１つ又は複数において起こる場合、特徴的な残基の１つ又は複数、及び／又はフレームワーク残基中の他の位置の１つ又は複数において起こってもよいが、特徴的な残基での置換、挿入又は欠失は（これらが本明細書中で説明されるような適切なヒト化置換でない限り）一般にあまり好適ではない。
非限定的な例によると、置換は例えば保存的置換（本明細書中で説明される）であってもよく、及び／又はアミノ酸残基は、別のＶＨＨドメインの同じ位置に自然発生する別のアミノ酸残基により置換されてもよいが（このような置換の幾つかの非限定的な例については表Ａ−５〜表Ａ−８を参照）、本発明は概してこれに限定されない。したがって、本発明のナノボディの特性を改善するか、又は少なくとも本発明のナノボディの所望の特性又は所望の特性のバランス若しくは組合せを過度に損なわない（即ち、ナノボディがもはやその使用目的に適さなくなる程度までの）任意の１つ又は複数の置換、欠失又は挿入、又はその任意の組合せは本発明の範囲内に含まれる。当業者は一般に、本明細書における開示に基づいて、また任意に、例えば限られた数の可能な置換を導入すること、及びそのようにして得られるナノボディの特性に対するその影響を求めることを含み得る限られた日常実験の後、適切な置換、欠失又は挿入、又はその適切な組合せを決定及び選択することが可能である。
例えば、本発明のナノボディ又はポリペプチドを発現するために使用される宿主生物に応じて、このような欠失及び／又は置換を、翻訳後修飾される１つ又は複数の部位（例えば１つ又は複数のグリコシル化部位）を除去し、当業者の能力の範囲内となるように設計してもよい。代替的には、置換又は挿入を官能基（本明細書中で説明される）が結合する１つ又は複数の部位を導入する、例えば部位特異的ペグ化（同様に本明細書中で説明される）を可能にするように設計してもよい。
上記の表Ａ−５〜表Ａ−８に示すＶＨＨエントロピー及びＶＨＨ変動性に関するデータから明らかなように、フレームワーク領域内の幾つかのアミノ酸残基は他よりも保存されている。一般に、任意の置換、欠失又は挿入は好ましくは保存されにくい位置で起こるが、本発明は最も広い意味ではこれに限定されない。また、一般に、アミノ酸置換はアミノ酸欠失又はアミノ酸挿入よりも好適である。
類似体は好ましくは、本発明のナノボディに関して本明細書で規定されるような親和性（本明細書中でさらに説明されるように、（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度として、又は代替的にはＩＣ５０値として適切に測定されるか、及び／又は表される）をもってヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に結合することができるものである。
類似体は好ましくは、本明細書中で説明されるようなナノボディの有利な特性を保持するものでもある。
また、好適な一態様によれば、類似体は、表Ａ−２に記載されるようなｐ１９＋配列、ｐ１９−配列、ｐ４０−配列、ｐ４０＋配列、ｐ３５配列、ＩＬ−２７配列、ＩＬ−１２Ｒｂ１配列、ＩＬ−１２Ｒｂ２配列又はＩＬ−２３Ｒ配列それぞれの１つとの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％（少なくとも９５％等）又は９９％以上の程度の配列同一性を有し、及び／又は好ましくは多くても２０個、好ましくは多くても１０個、さらにより好ましくは多くても５個、例えば４個、３個、２個又はただ１個のアミノ酸差異（本明細書で規定される）を有する。
また、類似体のフレームワーク配列及びＣＤＲは好ましくは、本明細書で規定される好適な態様に従うものである。より一般には、本明細書中で説明されるように、類似体は（ａ）１０８位にＱ、及び／又は（ｂ）４５位に荷電アミノ酸又はシステイン残基、好ましくは４４位にＥ、より好ましくは４４位にＥ及び４５位にＲ、及び／又は（ｃ）１０３位にＰ、Ｒ又はＳを有する。
本発明のナノボディの１つの好適な種類の類似体は、ヒト化された（即ち、本発明の天然のナノボディの配列と比較して）ナノボディを含む。本明細書中で引用される背景技術で述べられたように、このようなヒト化は一般に、ヒトＶＨドメインでの同じ位置、例えばヒトＶＨ３ドメインに起こる、天然のＶＨＨの配列における１つ又は複数のアミノ酸残基のアミノ酸残基での置換を含む。可能なヒト化置換又はヒト化置換の組合せの例は、例えば本明細書中の表から、本明細書中で引用される背景技術で述べられた可能なヒト化置換から、及び／又はナノボディの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との比較から当業者に明らかである。
ヒト化置換は、得られるヒト化ナノボディが、本明細書で規定されるようなナノボディの有利な特性を依然として保持するように、より好ましくは類似体に関して前述の段落に説明されるようなものであるように選択されるべきである。当業者は一般に、本明細書における開示に基づいて、また任意に、例えば限られた数の可能なヒト化置換を導入すること、及びそのようにして得られるナノボディの特性に対するその影響を求めることを含み得る限られた日常実験の後、適切なヒト化置換又は適切なヒト化置換の組合せを決定及び選択することが可能である。
概して、ヒト化の結果として、本発明のナノボディは、本明細書中で説明されるような本発明のナノボディの有利な特性を依然として保持すると同時に、より「ヒト様」と成り得る。結果として、このようなヒト化ナノボディは幾つかの利点、例えば対応する天然のＶＨＨドメインと比較して低減された免疫原性を有し得る。また、当業者は、本明細書における開示に基づいて、また任意に限られた日常実験の後、一方ではヒト化置換によりもたらされる有利な特性、他方では天然のＶＨＨドメインの有利な特性の間の所望の又は適切なバランスを最適化又は達成するヒト化置換又は適切なヒト化置換の組合せを選択することが可能である。
本発明のナノボディは任意のフレームワーク残基（複数可）、例えば１つ又は複数の特徴的な残基（本明細書で規定される）又は１つ又は複数の他のフレームワーク残基（即ち、非特徴的な残基）又はこれらの任意の適切な組合せで適切にヒト化され得る。「Ｐ、Ｒ、Ｓ−１０３群」又は「ＫＥＲＥ群」のナノボディに関する１つの好適なヒト化置換は、Ｑ１０８からＬ１０８への置換である。「ＧＬＥＷ群」のナノボディもまた、他の特徴的な残基の少なくとも１つがラクダ化（camelid（camelizing））置換（本明細書で規定される）を含有するという条件で、Ｑ１０８からＬ１０８への置換によりヒト化され得る。例えば、上述したように、１つの特に好適な種類のヒト化ナノボディは、ＧＬＥＷ又はＧＬＥＷ様配列を４４位〜４７位に、Ｐ、Ｒ又はＳ（特にＲ）を１０３位に、Ｌを１０８位に有する。
ヒト化及び他の類似体、並びにこれをコードする核酸配列は、それ自体が既知の任意の方法で準備することができる。例えば、類似体は、天然のＶＨＨドメインをコードする核酸を準備すること、（例えば部位特異的突然変異誘発法、又は適切なミスマッチプライマーを使用するＰＣＲによって）置換を受ける１つ又は複数のアミノ酸残基に対するコドンを、対応する所望のアミノ酸残基に対するコドンに変えること、このようにして得られる核酸／ヌクレオチド配列を適切な宿主又は発現システムにおいて発現させること、及び任意に、このようにして得られる類似体を（例えば本明細書中でさらに説明されるように）単離及び／又は精製して、本質的に単離された形の該類似体を提供する、単離及び／又は精製することにより得ることができる。これは概して、例えば本明細書中で引用されるハンドブック及び参考文献、本明細書中で引用される背景技術及び／又は本明細書中のさらなる記載から当業者に明らかな、それ自体が既知の方法及び技法を用いて実行することができる。代替的には、所望の類似体をコードする核酸は、それ自体が既知の方法で（例えば所定のアミノ酸配列を有する核酸配列を合成する自動装置を用いて）合成することができ、次に本明細書中で説明されるように発現させることができる。さらに別の技法は、各々が所望の類似体の一部をコードする１つ又は複数の天然及び／又は合成の核酸配列を組み合わせること、及び次に組み合わせた核酸配列を本明細書中で説明されるように発現させることを含み得る。また、類似体は、例えば本明細書中で述べたような、それ自体が既知のペプチド合成技法を用いた関連アミノ酸配列の化学合成を利用して準備することができる。
これに関して、本発明のナノボディの配列を提供するため及び／又は得られる配列にナノボディの有利な特性を付与するために、本発明のナノボディ（例えばその類似体）を、例えばヒトＶＨ３配列、例えばＤＰ−４７、ＤＰ−５１又はＤＰ−２９等のヒトＶＨ配列（即ち、アミノ酸配列又は対応するヌクレオチド配列）から設計及び／又は準備すること、即ち、１つ又は複数のラクダ化置換を導入する（即ち、上記ヒトＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ又は複数のアミノ酸残基を、ＶＨＨドメインの対応する位置で生じるアミノ酸残基に変化させる）ことが可能であることも、当業者には明らかである。また、これは一般に、開始点としてヒトＶＨドメインに対するアミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列を使用し、前の段落で言及される多様な方法及び技法を用いて実行することができる。
幾つかの好ましいが非限定的なラクダ化置換は、表Ａ−５〜表Ａ−８から導くことができる。特徴的な残基の１つ又は複数でのラクダ化置換は一般に、所望の特性に他のアミノ酸位置の１つ又は複数での置換よりも大きな影響を与えるが、その両方及び任意の適切な組合せが本発明の範囲内に含まれることも明らかである。例えば、既に少なくとも幾つかの所望の特性を付与している１つ又は複数のラクダ化置換を導入すること、及び次に上記特性をさらに改善するか、及び／又はさらなる有利な特性を付与するさらなるラクダ化置換を導入することが可能である。また、当業者は一般に、本明細書における開示に基づいて、また任意に、例えば限られた数の可能なラクダ化置換を導入すること、及びナノボディの有利な特性が得られたか又は（即ち、本来のＶＨドメインと比較して）改善されたか否かを求めることを含み得る限られた日常実験の後、適切なラクダ化置換又は適切なラクダ化置換の組合せを決定及び選択することが可能である。
しかしながら、一般にこのようなラクダ化置換は好ましくは、得られるアミノ酸配列が少なくとも（ａ）１０８位にＱ、及び／又は（ｂ）４５位に荷電アミノ酸又はシステイン残基、好ましくは４４位にＥ、より好ましくは４４位にＥ及び４５位にＲ、及び／又は（ｃ）１０３位にＰ、Ｒ又はＳ、並びに任意に１つ又は複数のさらなるラクダ化置換を含有するものである。より好ましくは、ラクダ化置換は、本発明のナノボディ及び／又はその類似体（本明細書で規定される）、例えばヒト化類似体及び／又は好ましくは前述の段落に規定されるような類似体をもたらすものである。
本明細書における開示から同様に明らかなように、本明細書で規定されるような本発明のナノボディの部分又は断片、又は２つ以上の部分又は断片の組合せ、特にさらに本明細書中で説明されるような及び／又は表Ａ−２に記載されるようなｐ１９＋、ｐ１９−、ｐ４０＋、ｐ４０−、坑ｐ３５、坑ＩＬ−２７、坑ＩＬ−１２Ｒｂ１、坑ＩＬ−１２Ｒｂ２及び坑ＩＬ−２３Ｒのそれぞれのナノボディの部分若しくは断片、又はそのヒト化変異体の使用もまた本発明の範囲内である。したがって、本発明の一態様によれば、用語「本発明のナノボディ」は最も広い意味ではこのような部分又は断片も包含する。
概して、本発明のナノボディ（例えばその類似体）のこのような部分又は断片は、対応する本発明の全長ナノボディ（又はその類似体）のアミノ酸配列と比較して、Ｎ末端の１つ又は複数のアミノ酸残基、Ｃ末端の１つ又は複数のアミノ酸残基、１つ又は複数の連続内部アミノ酸残基、又はその任意の組合せが欠失しているか、及び／又は除去されたアミノ酸配列を有する。
部分又は断片は好ましくは、本明細書で規定されるような親和性（本発明のナノボディに関して本明細書中でさらに規定されるように、（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度として、又は代替的にはＩＣ５０値として適切に測定されるか、及び／又は表される）をもってヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に結合することができるものである。
任意の部分又は断片は好ましくは、対応する本発明の全長ナノボディのアミノ酸配列の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基、好ましくは少なくとも２０個の連続アミノ酸残基、より好ましくは少なくとも３０個の連続アミノ酸残基、例えば少なくとも４０個の連続アミノ酸残基を含むものである。
また、任意の部分又は断片は好ましくは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３の少なくとも１つ又は少なくともその一部（特に少なくともＣＤＲ３又は少なくともその一部）を含むものである。より好ましくは、任意の部分又は断片は、好ましくは適切なフレームワーク配列（複数可）又は少なくともその一部により連結した、ＣＤＲの少なくとも１つ（好ましくは少なくともＣＤＲ３又はその一部）及び少なくとも１つの他のＣＤＲ（即ち、ＣＤＲ１又はＣＤＲ２）又は少なくともその一部を含むようなものである。より好ましくは、任意の部分又は断片は、好ましくは同様に適切なフレームワーク配列（複数可）又は少なくともその一部により連結した、ＣＤＲの少なくとも１つ（好ましくは少なくともＣＤＲ３又はその一部）及び残り２つのＣＤＲの少なくとも一部を含むようなものである。
別の特に好ましいが非限定的な実施の形態によれば、このような部分又は断片は、対応する本発明の全長ナノボディの少なくともＣＤＲ３、例えばＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む（即ち、例えば国際出願の国際公開第０３／０５０５３１号パンフレット（Lasters et al.）に説明される）。
上記で既に述べたように、２つ以上のこのような部分又は断片（即ち、同一又は別個の本発明のナノボディに由来する）を組み合わせる、即ち、本発明のナノボディの類似体（本明細書で規定される）及び／又はさらなる部分又は断片（本明細書で規定される）を提供することも可能である。例えば、本発明のナノボディの１つ又は複数の部分又は断片を、ヒトＶＨドメインの１つ又は複数の部分又は断片と組み合わせることもまた可能である。
好適な一態様によれば、部分又は断片は、さらに本明細書中で説明されるような及び／又は表Ａ−２に記載されるようなｐ１９＋、ｐ１９−、ｐ４０＋、ｐ４０−、坑ｐ３５、坑ＩＬ−２７、坑ＩＬ−１２Ｒｂ１、坑ＩＬ−１２Ｒｂ２及び坑ＩＬ−２３Ｒのそれぞれのナノボディの１つ、又はそのヒト化変異体との少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％（少なくとも９０％等）、９５％又は９９％以上の程度の配列同一性を有する。
部分及び断片、並びにこれをコードする核酸配列は、任意のそれ自体が既知の方法で準備して任意に組み合わせることができる。例えば、このような部分又は断片は、完全長の本発明のナノボディをコードする核酸中に終止コドンを挿入すること、及び次にこのようにして得られる核酸をそれ自体が既知の方法（例えば本明細書中で説明される）で発現させることで得ることができる。代替的には、このような部分又は断片をコードする核酸は、完全長の本発明のナノボディをコードする核酸を適切に制限すること、又はこのような核酸をそれ自体が既知の方法で合成することにより得ることができる。部分又は断片はまた、それ自体が既知のペプチド合成技法を用いて準備してもよい。
本発明は最も広い意味では本発明のナノボディの誘導体も含む。このような誘導体は概して、本発明のナノボディ及び／又は本発明のナノボディを形成するアミノ酸残基の１つ又は複数の修飾、特に化学的及び／又は生物学的（例えば酵素的）修飾により得ることができる。
このような修飾の例、並びにこのような形（即ち、タンパク質骨格、又は好ましくは側鎖のいずれか）で修飾することができるナノボディ配列中のアミノ酸残基の例、このような修飾の導入のために使用することができる方法及び技法、並びにこのような修飾の潜在的使用及び利点は当業者に明らかである。
例えば、このような修飾は、１つ又は複数の官能基、残基又は部分、特に１つ又は複数の所望の特性又は官能性を本発明のナノボディに付与する１つ又は複数の官能基、残基又は部分を本発明のナノボディ中又はナノボディ上に（例えば共有結合によるか、又は他の適切な形で）導入することを含み得る。このような官能基の例は当業者に明らかである。
例えば、このような修飾は、本発明のナノボディの半減期、溶解性及び／又は吸収性を増大する、本発明のナノボディの免疫原性及び／又は毒性を低減する、本発明のナノボディの任意の望ましくない副作用を排除又は減衰する、及び／又は本発明のナノボディ及び／又はポリペプチドに他の有益な特性を付与するか、及び／又は本発明のナノボディ及び／又はポリペプチドの不要な特性を減らす、又は上記の２つ以上の任意の組合せである１つ又は複数の官能基を（例えば共有結合によるか、又は他の適切な形で）導入することを含み得る。このような官能基及びこれらを導入する技法の例は当業者に明らかであり、一般に、以上で引用される一般的背景技術で述べた全ての官能基及び技法、並びに医薬用タンパク質の修飾、特に抗体又は抗体断片（例えばＳｃＦｖ及び単一ドメイン抗体）の修飾に関するそれ自体が既知の官能基及び技法を含み得る；これに関しては例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Mack Publishing Co., Easton,PA （1980）を参照する。同様に当業者に明らかなように、このような官能基は、例えば本発明のナノボディに直接（例えば共有結合的に）結合するか、又は任意に適切なリンカー又はスペーサーを介して結合する。
半減期を増大するか、及び／又は医薬用タンパク質の免疫原性を低減するために最も広く使用される技法の１つは、適切な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）又はその誘導体（例えばメトキシポリ（エチレングリコール）又はｍＰＥＧ）の結合を含む。概して、任意の適切な形のペグ化、例えば当該技術分野で抗体及び抗体断片（例えば、限定されるものではないが、（単一）ドメイン抗体及びＳｃＦｖ）に対して使用されるペグ化を使用することができる；例えばChapman, Nat. Biotechnol., 54, 531-545 （2002）、Veronese and Harris, Adv. Drug Deliv. Rev.54, 453-456 （2003）、Harris and Chess,Nat. Rev. Drug. Discov., 2, （2003）及び国際公開第０４／０６０９６５号パンフレットを参照する。タンパク質のペグ化に関する多様な試薬も、例えばNektar Therapeutics, USAより市販されている。
好ましくは、特にシステイン残基を介した部位特異的ペグ化を使用する（例えばYanget al., Protein Engineering, 16, 10, 761-770 （2003）を参照）。例えば、そのために、本発明のナノボディにおいて自然発生するシステイン残基にＰＥＧを結合してもよく、本発明のナノボディを、ＰＥＧに結合する１つ又は複数のシステイン残基を適切に導入するように修飾してもよく、又はＰＥＧに結合する１つ又は複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列を、本発明のナノボディのＮ末端及び／又はＣ末端と融合してもよい（全て、それ自体が当業者に既知であるタンパク質工学の技法を使用する）。
好ましくは、ＰＥＧは、本発明のナノボディ及びタンパク質に対して５０００を超える（例えば１００００を超える）且つ２０００００未満（例えば１０００００未満）の分子量、例えば２００００〜８００００の範囲の分子量で使用する。
さらに、通常あまり好ましくない修飾は、一般的に翻訳時及び／又は翻訳後の修飾の一部として、本発明のナノボディ又はポリペプチドを発現するのに用いられる宿主細胞に応
じてＮ結合型又はＯ結合型のグリコシル化を含む。
さらに別の修飾は、標識したナノボディの用途に応じて、１つ又は複数の検出可能な標識、又は他のシグナル生成基若しくはシグナル生成部分の導入を含んでいてもよい。これらを結合、使用及び検出するのに好適な標識及び技法は当業者にとって明らかであり、例としては、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタアルデヒド、及びフルオレサミン、並びに１５２Ｅｕ等の蛍光金属、又はランタニド種からの他の金属）、リン光標識、化学発光標識又は生物発光標識（例えば、ルミナール、イソルミナール、セロマティックアクリジニウムエステル（theromatic acridinium ester）、イミダゾール、アクリジニウム塩、シュウ酸エステル、及びジオキセタン又はＧＦＰ、並びにその類似体）、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、５１Ｃｒ、３６Ｃｌ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、及び７５Ｓｅ）、金属、金属キレート又は金属カチオン（例えば、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ、１１１Ｉｎ、１３１Ｉ、９７Ｒｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、及び６８Ｇａ等の金属カチオン、又はｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｓｉｔｕ診断及びイメージングに特に適す他の金属若しくは金属カチオン、例えば（１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｃｒ、及び５６Ｆｅ）、並びに、発色団及び酵素（例えば、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（horseradish peroxidase）、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−ＶＩ−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の好適な標識は当業者にとって明らかであり、例としては、ＮＭＲ分光法又はＥＳＲ分光法を用いて検出することができる部分が挙げられる。
本発明のこのような標識したナノボディ及びポリペプチドは、例えば、特異的標識の選択に応じて、（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＩＡ及び他の「サンドイッチアッセイ」等の既知のイムノアッセイを含む）ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｓｉｔｕアッセイに、並びにｉｎ ｖｉｖｏ診断及びイメージングの目的で使用され得る。
当業者にとって明らかであるように、別の修飾は、例えば、上記の金属又は金属カチオンの１つをキレート化するキレート官能基（chelating group）の導入を含んでいてもよい。例えば好適なキレート官能基としては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン五酢酸（ＥＤＴＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
さらに別の修飾は、ビオチン−（ストレプト）アビジン結合対等の特異的結合対の一部である官能基の導入を含んでいてもよい。このような官能基は、本発明のナノボディを別のタンパク質、ポリペプチド、又は結合対の残り半分と結合する化合物に連結させるのに（即ち、結合対の形成を介して）使用され得る。例えば、本発明のナノボディは、ビオチンと結合し、別のタンパク質、ポリペプチド、アビジン又はストレプトアビジンと結合する化合物又は担体に連結し得る。例えば、このような結合ナノボディは、例えば、検出可能なシグナル生成剤がアビジン又はストレプトアビジンに結合する診断系のレポーターとして使用され得る。このような結合対は、例えば、本発明のナノボディを、医薬目的に好適な担体を含む担体に結合させるのにも使用することができる。非限定的な一例は、Cao and Suresh, Journal of Drug Targetting, 8, 4, 257 （2000）によって記載のリポソーム製剤である。このような結合対はまた、本発明のナノボディに治療に有効な作用物質を連結させるのに使用することができる。
用途によっては、特に、（例えば、癌の治療において）本発明のナノボディが指向性を有する標的を発現する細胞を死滅させること、又はこのような細胞の成長及び／又は増殖を低減するか若しくは遅延させることを意図する用途では、本発明のナノボディは、毒素又は毒素残基又は毒素部分にも連結し得る。本発明のナノボディに連結して、例えば細胞毒性化合物をもたらし得る毒素部分、化合物又は残基の例は当業者にとって明らかであり、例えば、上記の従来技術に及び／又は本明細書中のさらなる説明に見ることができる。一例はいわゆるＡＤＥＰＴ（商標）技術である（国際公開第０３／０５５５２７号パンフレット）。
他の可能な化学修飾及び酵素修飾は当業者にとって明らかであろう。このような修飾を、（例えば、機能−活性関係を研究するために）調査目的で導入してもよい。例えば、Lundblad and Bradshaw, Biotechnol. Appl. Biochem., 26, 143-151 （1997）を参照する。
好ましくは、この誘導体は、（（実際又は見掛けの）ＫＤ値、（実際又は見掛けの）ＫＡ値、ｋｏｎ速度及び／又はｋｏｆｆ速度として、又は代替的に本明細書中にさらに記載のＩＣ５０値として好適に測定及び／又は表される）、本発明のナノボディに関して本明細書中に規定される親和性を有して、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と結合するような誘導体である。
上述のように、本発明はまた、少なくとも１つの本発明のナノボディから本質的に成るか又はこれを含む、タンパク質又はポリペプチドに関する。「から本質的に成る」とは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列が、本発明のナノボディのアミノ酸配列と厳密に同じであるか、又は、１個〜２０個のアミノ酸残基、例えば、１個〜１０個のアミノ酸残基、及び好ましくは１個〜６個のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個又は６個のアミノ酸残基）である限定数のアミノ酸残基をナノボディのアミノ酸配列のアミノ末端、カルボキシ末端、又はアミノ末端及びカルボキシ末端の両方に付加させた本発明のナノボディのアミノ酸配列に対応するかどちらかであることを意味する。
上記のアミノ酸残基は、ナノボディの（生物学的）特性を変更するか、改質するか、さもなければこれに影響を与えることもあり又は与えない場合もあり、ナノボディにさらなる官能基を付加することもあり又は付加しない場合もある。例えば、このようなアミノ酸残基は、
例えば、異種宿主細胞又は異種宿主生物において発現した結果得られるＮ末端Ｍｅｔ残基を含み得る。
合成の際に宿主細胞からのナノボディの分泌を導く、シグナル配列又はリーダー配列を形成してもよい。好適な分泌リーダーペプチドは当業者にとって明らかであり、本明細書中にさらに記載される通りであり得る。通常、発明は最も広い意味では、限定されるものではないが、このようなリーダー配列は、ナノボディのＮ末端に連結されるであろう。
ナノボディを、特定の器官、組織、細胞、又は細胞の一部若しくはコンパートメントに指向性を有し、及び／又はこれらに侵入させるか若しくは入り込ませ、及び／又はナノボディを、細胞膜、上皮細胞の層等の細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、又は血液脳関門のような生物学的障壁に侵入させるか若しくはこれらに対して横断させる、配列又はシグナルを形成し得る。このようなアミノ酸配列の例は当業者にとって明らかであろう。幾つかの非限定的な例は、国際公開第０３／０２６７００号パンフレット、並びにTemsamani et al., Expert Opin. Biol. Ther., 1, 773 （2001）、Temsamani and Vidal, Drug Discov. Today,9, 1012 （004）及びRousselle, J.Pharmacol. Exp. Ther., 296, 124-131 （2001）に記載されている小さいペプチドベクター（「Ｐｅｐ−トランスベクター」）、並びにZhao et al., Apoptosis, 8, 631-637 （2003）によって記載されている膜輸送体配列である。抗体断片の細胞内標的のためのＣ末端アミノ酸配列及びＮ末端アミノ酸配列は、例えば、Cardinale et al., Methods, 34, 171 （2004）によって記載されている。細胞内標的の他の好適な技法は、以下に記述されるような、本発明のナノボディを含むいわゆる「細胞内抗体」の発現及び／又は使用を伴う。
「標識」、例えば、例えば上記の配列又は残基を対象とする親和性技法を用いてナノボディの精製を可能にするか又は容易にする、アミノ酸配列又は残基を形成し得る。その後、（例えば、化学的又は酵素学的な開裂によって）上記の配列又は残基を除去して、ナノボディ配列をもたらし得る（この目的のために、標識は任意で、開裂可能なリンカー配列を介してナノボディ配列に連結されてもよく、又は開裂可能なモチーフを含有していてもよい）。このような残基の好ましいが非限定的な幾つかの例は、複数のヒスチジン残基、グルタチオン残基、及びｍｙｃ標識（例えば国際公開第０６／１２２８２号パンフレットの配列番号３１を参照）であり、
官能基の結合のために官能化し及び／又は部位として機能することができる１つ又は複数のアミノ酸残基であり得る。好適なアミノ酸残基及び官能基は当業者にとって明らかであり、本発明のナノボディの誘導体について本明細書中に記述されたアミノ酸残基及び官能基が挙げられるが、これらに限定されない。
別の態様によれば、本発明のポリペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシ末端、又はそのアミノ末端及びカルボキシ末端の両方で、少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列に融合する、即ち上記本発明のナノボディと１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列とを含む融合タンパク質がもたらされるように本発明のナノボディを含む。このような融合は本明細書中で「ナノボディ融合」とも呼ばれる。
１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列は、任意の好適及び／又は所望のアミノ酸配列であり得る。さらなるアミノ酸配列は、ナノボディの（生物学的）特性を変更するか、改質するか、さもなければこれに影響を与えることもあり又は与えない場合もあり、本発明のナノボディ又はポリペプチドにさらなる官能基を付加することもあり又は付加しない場合もある。好ましくは、さらなるアミノ酸配列は、本発明のナノボディ又はポリペプチドに、１つ又は複数の所望の特性又は官能性を付与するものである。
例えば、さらなるアミノ酸配列はまた、任意の所望のタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原決定基又はエピトープ（本発明のナノボディが指向性を有する同様のタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原決定基若しくはエピトープ、又は異なるタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原決定基若しくはエピトープが挙げられるが、これらに限定されない）のいずれかを対象とし得る第２の結合部位をもたらし得る。
このようなアミノ酸配列の例は当業者にとって明らかであり、概して、従来の抗体及びその断片に基づきペプチド融合に用いられる全てのアミノ酸配列を含み得る（ＳｃＦｖ抗体及び単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない）。例えば、Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136 （2005）による総説を参照する。
例えば、このようなアミノ酸配列は、本発明のナノボディ自体に比べて、半減期、溶解性又は吸着を増大させる、免疫原性又は毒性を低減させる、望ましくない副作用を排除又は減衰させる、及び／又は他の有益な特性を本発明のポリペプチドに付与するか、及び／又は本発明のポリペプチドの望ましくない特性を減らすアミノ酸配列であり得る。このようなアミノ酸配列の幾つかの非限定的な例は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（例えば国際公開第００／２７４３５号パンフレットを参照）又はハプテン分子（例えば、循環抗体として認識されるハプテン（例えば国際公開第９８／２２１４１号パンフレットを参照））である。
特に、血清アルブミン又はその断片に対する免疫グロブリンの連結断片（例えば、ＶＨドメイン）を使用して半減期を増大させることができることは、当該技術分野において記載されている。例えば、国際公開第００／２７４３５号パンフレット及び国際公開第０１／０７７１３７号パンフレットを参照する）。本発明によれば、本発明のナノボディは好ましくは、血清アルブミン（又はその好適な断片）に直接連結するか、又は好適なリンカーを介して、特に好適なペプチドを介して連結することにより、本発明のポリペプチドを遺伝子融合（タンパク質）として発現することができる。具体的な一態様によれば、本発明のナノボディは、少なくとも血清アルブミンのドメインＩＩＩ又はその一部を含む、血清アルブミンの断片に連結し得る。例えば、２００６年３月１３日に出願された、“Albumin derived amino acidsequence, use thereof for increasing the half-life of therapeutic proteins andof other therapeutic proteins and entities, and constructs comprising the same”と題された、Ablynx N.V.の米国仮特許出願第６０／７８８２５６号明細書を参照されたい（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００２８１７号明細書も参照されたい）。
代替的に、さらなるアミノ酸配列は、血清中の半減期を増大させるように、血清タンパク質（例えば、ＩｇＧ等のヒト血清アルブミン又は別の血清タンパク質等）に指向性を有する、第２の結合部位又は結合単位を付与し得る。このようなアミノ酸配列は例えば、下記のナノボディ、並びに、国際公開第９１／０１７４３号パンフレット、国際公開第０１／４５７４６号パンフレット及び国際公開第０２／０７６４８９号パンフレットに記載の小さいペプチド及び結合タンパク質、及び国際公開第０３／００２６０９号パンフレット及び国際公開第０４／００３０１９号パンフレットに記載のｄＡｂを含む。Harmsen et al., Vaccine, 23 （41）; 4926-42, 2005、並びに欧州特許第０３６８６８４号明細書、並びに、本明細書中に記載のAblynx N.V.による以下の米国仮特許出願第６０／８４３３４９号明細書（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９４７５号明細書も参照されたい）、同第６０／８５０７７４号明細書（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６０８４９号明細書も参照されたい）、同第６０／８５０７７５号明細書（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６０８５０号明細書も参照されたい）、及び"Peptides capable of binding to serum proteins"と題されたAblynx N.V.による米国仮特許出願（２００６年１２月５日出願）並びにどちらも“Improved peptides capable ofbinding to serum proteins”と題されたAblynx N.V.による米国仮特許出願第６１／０５０３８５号明細書及び米国仮特許出願第６１／０４５６９０号明細書（国際公開第０６８２８０号パンフレットも参照されたい）にも言及されている。このようなアミノ酸配列は特に、血清アルブミン（及びより詳細にはヒト血清アルブミン）及び／又はＩｇＧ（及びより詳細にはヒトＩｇＧ）に指向性を有し得る。例えば、このようなアミノ酸配列は、（ヒト）血清アルブミンに指向性を有するアミノ酸配列、及びＦｃＲｎへの血清アルブミンの結合に関与しない（ヒト）血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合し得るアミノ酸配列（例えば、国際公開第０６／０１２２７８７号パンフレットを参照）、及び／又は血清アルブミンのドメインＩＩＩの一部を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合し得るアミノ酸配列（例えば、同様に国際公開第０６／０１２２７８７号パンフレットを参照）；増大した半減期を有するか又は半減期を増大させ得るアミノ酸配列（例えば、“Serum albumin binding proteins withlong half-lives”と題されたAblynx N.V.の米国仮特許出願第６０／８４３３４９号明細書（２００６年９月８日出願）、並びに国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９４７５号明細書も参照されたい）；哺乳動物の少なくとも１種、特に霊長類の少なくとも１種（例えば、限定されるものではないが、マカク属のサル（例えば、特に、カニクイザル及び／又はアカゲサル）、並びにヒヒ）に由来の血清アルブミンと交差反応性であるヒト血清アルブミンに対するアミノ酸配列（同様に米国仮特許出願第６０／８４３３４９号明細書及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９４７５号明細書も参照）；ｐＨ非依存的に血清アルブミンに結合し得るアミノ酸配列（例えば、"Amino acid sequences that bind to serum proteins in a mannerthat is essentially independent of the pH, compounds comprising the same, anduses thereof"と題されたAblynx N.V.による米国仮特許出願第６０／８５０７７４号明細書（２００６年１０月１１日出願）（国際公開第０８／０４３８２１号パンフレットも参照されたい）を参照）、及び／又は条件付き結合剤であるアミノ酸配列（例えば、"Amino acid sequences that bind to a desired molecule in aconditional manner"と題されたAblynx N.V.による米国仮特許出願第６０／８５０７７５号明細書（２００６年１０月１１日出願（国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６０８５０号明細書も参照されたい））を参照）であり得る。
別の態様によれば、１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列は、従来の４本鎖抗体（及び、特にヒト抗体）及び／又は重鎖抗体の１つ又は複数の部分、断片、又はドメインを含み得る。例えば、本発明の通常好ましくないナノボディは、従来の（好ましくはヒト）ＶＨドメイン若しくはＶＬドメイン、又はＶＨドメイン若しくはＶＬドメインの天然型類似体若しくは合成類似体に、ここでもまた任意でリンカー配列（Ward et al.によって記載されているｄＡｂ抗体等の他の（単一）ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない）を介して連結され得る。
また、少なくとも１つのナノボディは、任意でリンカー配列を介して、１つ又は複数の（好ましくはヒト）ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインと連結してもよい。例えば、好適なＣＨ１ドメインと連結するナノボディは、例えば従来のＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片に類似する抗体断片／構築物を生成するように（好適な軽鎖と共に）使用することができるが、従来のＶＨドメインの１つ、又は（Ｆ（ａｂ’）２断片の場合）１つ若しくは両方を本発明のナノボディで置換した。また、２つのナノボディは、（任意でリンカーを介して）ＣＨ３ドメインと連結してｉｎ ｖｉｖｏで半減期が増大した構築物をもたらすことができる。
本発明のポリペプチドの具体的な一態様によれば、１つ又は複数の本発明のナノボディは、１つ又は複数の定常ドメイン（例えば、Ｆｃ部分の一部として使用する／Ｆｃ部分を形成することができる２つ又は３つの定常ドメイン）、Ｆｃ部分、及び／又は１つ又は複数のエフェクター機能を本発明のポリペプチドに付与し及び／又は１つ又は複数のＦｃ受容体に結合する能力を付与し得る１つ又は複数の抗体部、断片又はドメインと（任意で好適なリンカー又はヒンジ領域を介して）連結する。例えば、この目的で、及びこれらに限定されるものではないが、１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列は、重鎖抗体（本明細書中に記載）及びより好ましくは従来のヒト４本鎖抗体等に由来する抗体の１つ又は複数のＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインを含んでいてもよく、及び／又は例えばＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）、ＩｇＥ、又はＩｇＡ、ＩｇＤ若しくはＩｇＭ等の別のヒトＩｇに由来するＦｃ領域（の一部）を形成してもよい。例えば、国際公開第９４／０４６７８号パンフレットは、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン又はそのヒト化誘導体（即ち、ナノボディ）を含む重鎖抗体を記載しており、ここでは、ラクダＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインが、ヒトＣＨ２及びＣＨ３ドメインで置換されている。それによりナノボディと（ＣＨ１ドメインは含まないが）ヒトＣＨ２及びＣＨ３ドメインとをそれぞれ含む２つの重鎖から成る免疫グロブリンがもたらされるが、その免疫グロブリンは、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインによって付与されるエフェクター機能を有し、如何なる軽鎖も存在することなく機能することができる。本発明のナノボディと好適に連結してエフェクター機能を付与し得る他のアミノ酸配列は当業者にとって明らかであり、所望のエフェクター機能（複数可）に基づき選択され得る。例えば、国際公開第０４／０５８８２０号パンフレット、国際公開第９９／４２０７７号パンフレット、国際公開第０２／０５６９１０号パンフレット、及び国際公開第０５／０１７１４８号パンフレット、上記のHolliger and Hudsonの概説、並びに"Constructscomprising single variable domains and an Fc portion derived from IgE"と題されたAblynx N. V.による非公開の米国仮出願（２００７年１２月４日出願）、並びに本出願と出願日を同じくする（本出願の優先権出願として言及される）本明細書に基づく対応するＰＣＴ出願を参照する。本発明のナノボディとＦｃ部分とのカップリングによっても、対応する本発明のナノボディに比べて半減期の増大が生じ得る。用途によっては、如何なる生物学的に重要なエフェクター機能も含まない半減期の増大を与えるＦｃ部分及び／又は定常ドメイン（即ち、ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン）の使用も好適であるか、又は一層好ましい。１つ又は複数のナノボディと、ｉｎ ｖｉｖｏで半減期が増大した１つ又は複数の定常ドメインとを含む他の好適な構築物は当業者にとって明らかであり、例えば、任意でリンカー配列を介してＣＨ３ドメインに連結する２つのナノボディを含み得る。一般に、半減期が増大した任意の融合タンパク質又は誘導体は好ましくは、５０ｋＤを超える分子量、即ち腎臓吸収のカットオフ値を有する。
別の具体的であるが、非限定的な一態様において、本発明のポリペプチドを形成するために、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列は、（即ち従来の４鎖抗体で自然発生する定常ドメインに比べて）二量体に自己会合する傾向が低減した（又は本質的にその傾向がない）天然、合成又は半合成の定常ドメイン（又はその類似体、変異体、突然変異体、部分又は断片）と（任意で好適なリンカー又はヒンジ領域を介して）連結し得る。このような単量体の（即ち自己会合していない）Ｆｃ鎖変異体又は断片は、当業者にとって明らかである。例えば、Helm et al.（J Biol Chem 1996 2717494）は、本発明のポリペプチド鎖で使用することができる単量体Ｆｃε鎖変異体を説明している。
また、このような単量体Ｆｃ鎖変異体は、依然として（これらが由来するＦｃ部位に応じて）補体又は関連のＦｃ受容体（複数可）に結合することができるようなもの、及び／又は依然としてこれらが由来するＦｃ部位のエフェクター機能を幾らか又は全て（又は依然として使用目的に適した低減レベルで）有するようなものであるのが好ましい。代替的に、このような本発明のポリペプチド鎖では、単量体Ｆｃ鎖を使用して、ポリペプチド鎖の半減期を増大させることができ、この場合、単量体Ｆｃ鎖はエフェクター機能を有しなくても、又は本質的に有しなくてもよい。
二価／多価、二重特異性／多重特異性又は二重パラトピック／多重パラトピックの本発明のポリペプチドは、２００７年１２月４日に出願された表題"immunoglobulin constructs"の非公開米国仮特許出願、並びに本出願と出願日を同じくする（本出願の優先権出願として言及される）本明細書に基づく対応するＰＣＴ出願に記載される種類のポリペプチド構築物を提供するためにＦｃ部位と連結してもよい。
また、さらなるアミノ酸配列は、（例えば、本発明のポリペプチドを発現するのに用いられる宿主細胞に応じて、本発明のポリペプチドのプレフォーム、プロフォーム又はプレプロフォームをもたらすように）合成の際に宿主細胞から本発明のナノボディ又はポリペプチドの分泌を導くシグナル配列又はリーダー配列を形成し得る。
また、さらなるアミノ酸配列は、本発明のナノボディ又はポリペプチドを、特定の器官、組織、細胞、又は細胞の一部若しくはコンパートメントに誘導し、及び／又はこれらに侵入させるか若しくは入り込ませ、及び／又は本発明のナノボディ又はポリペプチドを、細胞膜、上皮細胞の層等の細胞層、固形腫瘍等の腫瘍、又は血液脳関門のような生物学的障壁に侵入させるか若しくはこれらに対して横断させる配列又はシグナルを形成し得る。このようなアミノ酸配列の好適な例は当業者にとって明らかであり、例えば、例えば国際公開第９４／０２６１０号パンフレット、国際公開第９５／２２６１８号パンフレット、米国特許第７００４９４０号明細書、国際公開第０３／０１４９６０号パンフレット、国際公開第９９／０７４１４号パンフレット；国際公開第０５／０１６９０号パンフレット；欧州特許第１５１２６９６号明細書；及びCattaneo, A. & Biocca, S. （1997） Intracellular Antibodies：Development andApplications. Landes and Springer-Verlag；及びKontermann,Methods 34, （2004）, 163-170、並びに本明細書中に記載のさらなる参照文献に記載されるような、上記の「Ｐｅｐｔｒａｎｓ」のベクター、即ち、Cardinale et al.によって記載される配列、並びにいわゆる「細胞内抗体」である本発明のナノボディ及びポリペプチドを発現又は産生するのに使用することができる、それ自体が既知のアミノ酸配列及び抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。
用途によっては、特に（例えば癌の治療において）本発明のナノボディが指向性を有する標的を発現する細胞を死滅させること、又はこのような細胞の成長及び／又は増殖を抑えるか若しくは遅延させることを意図する用途では、本発明のナノボディはまた、（細胞）毒性タンパク質又はポリペプチドと連結し得る。本発明のナノボディと連結して、例えば、本発明の細胞毒性をもたらし得るこのような毒性タンパク質及びポリペプチドの例は当業者にとって明らかであり、例えば、上記従来技術及び／又は本明細書中のさらなる開示に見出すことができる。一例は、国際公開第０３／０５５５２７号パンフレットに記載のいわゆるＡＤＥＰＴ（商標）技術である。
好ましいが非限定的な一態様によれば、上記１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列は、少なくとも１つのさらなるナノボディを含み、これにより、少なくとも２つ、例えば３つ、４つ、５つ以上のナノボディを含む本発明のポリペプチドをもたらし、上記ナノボディは任意で、１つ又は複数のリンカー配列（本明細書中に規定）を介して連結され得る。少なくとも１つが本発明のナノボディである２つ以上のナノボディを含む本発明のポリペプチドは、本明細書中で本発明の「多価」ポリペプチドとも呼ばれ、このようなポリペプチド中に存在するナノボディは、本明細書中で「多価フォーマット」であるとも称される。例えば、本発明の「二価」ポリペプチドは、任意でリンカー配列を介して連結される２つのナノボディを含み、本発明の「三価」ポリペプチドは、任意で２つのリンカー配列等を介して連結される３つのナノボディを含む。ポリペプチド中に存在するナノボディの少なくとも１つ、及びポリペプチド中に存在するナノボディの最大で全てが、本発明のナノボディである。
本発明の多価ポリペプチドでは、２つ以上のナノボディは、同じであっても異なっていてもよく、同じ抗原又は抗原決定基（例えば、同じ部分（複数可）若しくはエピトープ（複数可）、又は異なる部分若しくはエピトープ）に指向性を有するものであってもよく、代替的に異なる抗原若しくは抗原決定基、又はこれらの任意の好適な組合せに指向性を有するものであってもよい。例えば、本発明の二価ポリペプチドは、（ａ）２つの同一のナノボディ、（ｂ）タンパク質若しくは抗原の第１の抗原決定基に指向性を有する第１のナノボディ、及び第１のナノボディと異なる上記タンパク質若しくは抗原の同一抗原決定基に指向性を有する第２のナノボディ、（ｃ）タンパク質若しくは抗原の第１の抗原決定基に指向性を有する第１のナノボディ、及び上記タンパク質若しくは抗原の別の抗原決定基に指向性を有する第２のナノボディ、又は（ｄ）第１のタンパク質若しくは抗原に指向性を有する第１のナノボディ、及び第２のタンパク質若しくは抗原（即ち、上記第１の抗原と異なる）に指向性を有する第２のナノボディを含み得る。同様に、本発明の三価ポリペプチドは例えば、これらに限定されるものではないが、（ａ）３つの同一のナノボディ、（ｂ）抗原の第１の抗原決定基に対する２つの同一のナノボディ、及び同一抗原の異なる抗原決定基に指向性を有する第３のナノボディ、（ｃ）抗原の第１の抗原決定基に対する２つの同一のナノボディ、及び上記第１の抗原と異なる第２の抗原に指向性を有する第３のナノボディ、（ｄ）第１の抗原の第１の抗原決定基に指向性を有する第１のナノボディ、上記第１の抗原の第２の抗原決定基に指向性を有する第２のナノボディ、及び上記第１の抗原と異なる第２の抗原に指向性を有する第３のナノボディ、又は（ｅ）第１の抗原に指向性を有する第１のナノボディ、上記第１の抗原と異なる第２の抗原に指向性を有する第２のナノボディ、及び上記第１の抗原及び上記第２の抗原と異なる第３の抗原に指向性を有する第３のナノボディを含み得る。
少なくとも１つのナノボディが第１の抗原に指向性を有する（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する）ものであり、少なくとも１つのナノボディが第２の（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と異なる）抗原に指向性を有するものである、少なくとも２つのナノボディを含有する本発明のポリペプチドは、本発明の「多重特異性」ポリペプチドとも呼ばれており、このようなポリペプチド中に存在するナノボディは、本明細書中で「多重特異性フォーマット」であるとも称される。このため例えば、本発明の「二重特異性」ポリペプチドは、第１の抗原（即ちヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体）に指向性を有する少なくとも１つのナノボディ及び第２の（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と異なる）抗原に指向性を有する少なくとも１つのさらなるナノボディを含むポリペプチドであり、本発明の「三重特異性」ポリペプチドは、第１の抗原（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体）に指向性を有する少なくとも１つのナノボディ、第２の（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と異なる）抗原に指向性を有する少なくとも１つのさらなるナノボディ、及び第３の（即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体及び第２の抗原の両方と異なる）抗原に指向性を有する少なくとも１つのさらなるナノボディを含むポリペプチド等である。
したがって、その最も単純な別の形態において、本発明の二重特異性ポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する第１のナノボディと、第２の抗原に指向性を有する第２のナノボディとを含み、上記第１のナノボディ及び上記第２のナノボディが任意でリンカー配列（本明細書中に規定）を介して連結され得る本発明の二価ポリペプチド（本明細書中に規定）であるのに対し、その最も単純な形態の本発明の三重特異性ポリペプチドは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する第１のナノボディと、第２の抗原に指向性を有する第２のナノボディと、第３の抗原に指向性を有する第３のナノボディとを含み、上記第１のナノボディ、第２のナノボディ及び第３のナノボディが、任意で１つ又は複数、特に１つ及び複数、特に２つのリンカー配列を介して連結され得る本発明の三価ポリペプチド（本明細書中に規定）である。
しかしながら、上述から明らかであるように、本発明は、本発明の多重特異性ポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する少なくとも１つのナノボディと、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体と異なる１つ又は複数の抗原に指向性を有する任意の数のナノボディとを含み得るという意味において、これらに限定されない。
さらに、本発明のポリペプチド中における種々のナノボディの特定の順序又は配置が、最終的に得られる本発明のポリペプチドの性質（ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関する、又は１つ若しくは複数の他の抗原に対する、親和性、特異性、又は結合活性が挙げられるが、これらに限定されない）に何らかの影響を及ぼし得る点は、本発明の範囲内に包含されるが、通常、上記順序又は配置は重要なものでなく、場合によっては任意で本明細書中の開示に基づく限定された日常実験を幾つか実施した後に、当業者であれば好適に選択することができるであろう。したがって、特定の本発明の多価又は多重特異性のポリペプチドについて述べられる場合、明示的に指示がない限り、これは関連するナノボディの任意の順序又は配置を包含するものであることに留意されたい。
最終的に、本発明のポリペプチドが、２つ以上のナノボディと、１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列（本明細書中に記述）とを含有することも、本発明の範囲内である。
１つ又は複数のＶＨＨドメインを含有する多価の多重特異性のポリペプチド、及びこれらの調製に関して、Conrath et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, 10. 7346-7350, 2001;Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74 （2001）, 277-302、並びに、例えば国際公開第９６／３４１０３号パンフレット及び国際公開第９９／２３２２１号パンフレットにも述べられている。本発明の幾つかの特定の多重特異性及び／又は多価のポリペプチドの幾つかの他の例は、本明細書中で参照されるAblynx N.V.による出願に見ることができる。
本発明の多重特異性ポリペプチドの好ましいが非限定的な一例は、少なくとも１つの本発明のナノボディと、少なくとも１つの半減期の増大をもたらすナノボディとを含む。このようなナノボディは例えば、血清タンパク質、特にヒト血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、チロキシン結合タンパク質、（ヒト）トランスフェリン、フィブリノゲン、ＩｇＧ、ＩｇＥ若しくはＩｇＭ等の免疫グロブリン、又は国際公開第０４／００３０１９号パンフレットに列挙された血清タンパク質の１つに指向性を有するナノボディであり得る。これらの内で、血清アルブミン（特にヒト血清アルブミン）又はＩｇＧ（特にヒトＩｇＧ、例えば上記のMuyldermansによる総説に記載されているナノボディＶＨ−１を参照されたい）と結合することができるナノボディが特に好ましい（が、例えばマウス又は霊長類での実験に関しては、それぞれマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）又は上記霊長類由来の血清アルブミンに対する、又はこれと交差反応性のナノボディを使用することができる。しかしながら、薬学的使用に関しては、通常ヒト血清アルブミン又はヒトＩｇＧに対するナノボディが好ましい）。半減期を増大させ、本発明のポリペプチドで使用することができるナノボディには、上記で言及されたようなもの等の国際公開第０４／０４１８６５号パンフレット、国際公開第０６／１２２７８７号パンフレット及びAblynx N. V.によるさらなる特許出願で記載されている血清アルブミンに指向性を有するナノボディが含まれる。
例えば、本発明で使用する半減期を増大させる、幾つかの好ましいナノボディには、血清アルブミンとＦｃＲｎとの結合に関与しない（ヒト）血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができるナノボディ（例えば国際公開第０６／０１２２７８７号パンフレットを参照されたい）；血清アルブミンのドメインＩＩＩ部分を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基と結合することができるナノボディ（例えば国際公開第０６／０１２２７８７号パンフレットを参照されたい）；半減期を増大させたか又は増大させることができるナノボディ（例えば本明細書中に言及されるAblynx N.Vによる米国仮特許出願第６０／８４３３４９号明細書を参照されたい、また国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９４７５号明細書を参照されたい）；少なくとも１種の哺乳動物、特に少なくとも１種の霊長類（例えば、限定されるものではないが、マカク属のサル（例えば、特に、カニクイザル（マカク・ファシクラリス）及び／又はアカゲザル（マカク・ムラット））及びヒヒ（パピオ・ウルジヌス）由来の血清アルブミンと交差反応性であるヒト血清アルブミンに対するナノボディ（例えばAblynx N.Vによる米国仮特許出願第６０／８４３３４９号明細書を参照されたい、また国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９４７５号明細書を参照されたい）；ｐＨ非依存的に血清アルブミンと結合することができるナノボディ（例えば本明細書に言及されるAblynx N.V.による米国仮特許出願第６０／８５０７７４号を参照されたい、また国際公開第０８／０４３８２１号パンフレットを参照されたい）及び／又は条件付き結合剤（conditional binders）であるナノボディ（例えばAblynxN.V.による米国仮特許出願第６０／８５０７７５号を参照されたい、また国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０６０８５０号明細書を参照されたい）が含まれる。
半減期を増大させ、本発明のポリペプチドで使用することができる、幾つかの特に好ましいナノボディには、国際公開第０６／１２２７８７号パンフレット（表ＩＩ及び表ＩＩＩを参照されたい）に開示のナノボディＡＬＢ−１〜ＡＬＢ−１０が含まれ、その中でもＡＬＢ−８（国際公開第０６／１２２７８７号パンフレットにおける配列番号６２）が特に好ましい。
具体的であるが非限定的な本発明の態様によれば、本発明のポリペプチドは、１つ又は複数の本発明のナノボディ以外に、少なくとも１つのヒト血清アルブミンに対するナノボディを含有する。
概して、１つ又は複数の本発明のナノボディを含有する、半減期が増大した任意の本発明のポリペプチド、及び本発明のナノボディ又は半減期が増大したこのようなポリペプチドの任意の誘導体は好ましくは、対応する本発明のナノボディ自体の少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍（少なくとも５倍等）、例えば少なくとも１０倍又は２０倍を超える半減期を有する。例えば、このような誘導体又は半減期を増大させたポリペプチドは、対応する本発明のナノボディ自体に比べて、半減期が１時間を超えて、好ましくは２時間を超えて、より好ましくは６時間を超えて（１２時間等を超えて）、又はさらに２４時間、４８時間若しくは７２時間を超えて増大し得る。
好ましいが非限定的な本発明の態様において、このような誘導体又はポリペプチドは、少なくとも約１２時間、好ましくは少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間、さらにより好ましくは少なくとも７２時間以上のヒトにおける血清半減期を示し得る。例えばこのような誘導体又はポリペプチドは、少なくとも５日（約５日〜１０日等）、好ましくは少なくとも９日（約９日〜１４日等）、より好ましくは少なくとも約１０日（約１０日〜１５日等）、若しくは少なくとも約１１日（約１１日〜１６日等）、より好ましくは少なくとも約１２日（約１２日〜１８日以上等）、又は１４日超（約１４日〜１９日等）の半減期を有し得る。
本発明の一態様によれば、ポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてポリペプチドの半減期を増大させることができる１又は複数の分子と結合することができる。
本発明のポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて安定化され、これらの半減期は、分解耐性及び／又はクリアランス耐性若しくは捕捉耐性のある分子への結合により増大する。通常、このような分子は、それ自体がｉｎ ｖｉｖｏにおいて長い半減期を有する天然タンパク質である。
本発明の多重特異性ポリペプチドの好ましいが非限定的な別の例は、少なくとも１つの本発明のナノボディ、及び本発明のポリペプチドを特定の器官、組織、細胞、又は細胞の一部若しくはコンパートメントに誘導し、及び／又は本発明のポリペプチドを特定の器官、組織、細胞、又は細胞の一部若しくはコンパートメントに侵入させるか若しくは入り込ませ、及び／又はナノボディを細胞膜、上皮細胞層等の細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、又は血液脳関門のような生物学的障壁に侵入させるか若しくはこれらに対して横断させる、少なくとも１つのナノボディを含む。このようなナノボディの例としては、所望の器官、組織又は細胞（例えば、腫瘍細胞に関連する細胞表面マーカー）に特有の細胞表面タンパク質、マーカー又はエピトープ、並びに国際公開第０２／０５７４４５号パンフレット及び国際公開第０６／０４０１５３号パンフレットに記載の単一ドメイン脳標的化抗体断片に指向性を有するナノボディが挙げられ、このうち、ＦＣ４４（国際公開第０６／０４０１５３号パンフレットの配列番号１８９）及びＦＣ５（国際公開第０６／０４０１５４号パンフレットの配列番号１９０）が好ましい例である。
本発明のポリペプチドにおいて、１つ又は複数のナノボディ、及び１つ又は複数のポリペプチドは、（例えば、国際公開第９９／２３２２１号パンフレットに記載のように）互いに直接連結していてもよく、及び／又は１つ又は複数の好適なスペーサー若しくはリンカー、又はこれらの任意の組合せを介して互いに連結していてもよい。
多価及び多重特異性のポリペプチドに使用するのに好適なスペーサー又はリンカーは当業者にとって明らかであり、一般に、アミノ酸配列を連結させる当該技術分野で使用する任意のリンカー又はスペーサーであってよい。好ましくは、上記リンカー又はスペーサーは、医薬用途で意図されるタンパク質又はポリペプチドを構築する上での使用に好適である。
幾つかの特に好ましいスペーサーとしては、抗体断片又は抗体ドメインを連結させるのに当該技術分野で使用されるスペーサー及びリンカーが挙げられる。これらは、上記で引用した包括的な背景技術に記載したリンカーと共に、例えば、ダイアボディ又はＳｃＦｖ断片を構築するのに当該技術分野で使用するリンカーを含む（しかし、この点で、ダイアボディ及びＳｃＦｖ断片では、使用するリンカー配列が、関連するＶＨドメイン及びＶＬドメインが一体となって、完全な抗原結合部位を形成することができるような長さ、柔軟性の程度、及び他の性質を有している必要があるが、それぞれのナノボディは単独で完全な抗原結合部位を形成するため、本発明のポリペプチドに使用するリンカーの長さ又は柔軟性に関しては特に制限が存在しないことに留意されたい）。
例えば、リンカーは、好適なアミノ酸配列、具体的には１個〜５０個、好ましくは１個〜３０個、例えば１個〜１０個のアミノ酸残基のアミノ酸配列であってもよい。このようなアミノ酸配列の幾つかの好ましい例としては、（国際公開第９９／４２０７７号パンフレットに記載の例えば（ｇｌｙ４ｓｅｒ）３又は（ｇｌｙ３ｓｅｒ２）３）等の例えば、（ｇｌｙｘｓｅｒｙ）ｚ型のｇｌｙ−ｓｅｒリンカー、本明細書で上述したAblynxによる出願に記載のＧＳ３０リンカー、ＧＳ１５リンカー、ＧＳ９リンカー及びＧＳ７リンカー（例えば国際公開第０６／０４０１５３号パンフレット及び国際公開第０６／１２２８２５号パンフレットを参照）、並びに天然型重鎖抗体のヒンジ領域等のヒンジ類似領域、又は（国際公開第９４／０４６７８号パンフレットに記載のもの等の）同様の配列が挙げられる。
幾つかの他の特に好ましいリンカーは、ポリアラニン（ＡＡＡ等）、並びにＧＳ３０リンカー（国際公開第０６／１２２８２５号パンフレットの配列番号８５）及びＧＳ９リンカー（国際公開第０６／１２２８２５号パンフレットの配列番号８４）である。
他の好適なリンカーは一般に、有機化合物又はポリマー、特に医薬用途のタンパク質に使用するのに好適な有機化合物又はポリマーを含む。例えば、ポリ（エチレングリコール）部分が、抗体ドメインを連結させるのに使用されており、例えば、国際公開第０４／０８１０２６号パンフレットを参照されたい。
使用するリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度及び／又は他の性質（重要ではないが、ＳｃＦｖ断片に使用されるリンカーにおいて一般的なもの）は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体又は１つ又は複数の他の抗原に対する親和性、特異性又は結合活性を含むがこれらに限定されない、最終的に得られる本発明のポリペプチドの性質に何らかの影響を及ぼし得る点が、本発明の範囲内に包含される。本明細書中での開示に基づき、任意で、限定された日常実験を幾つか実施した後に、当業者であれば本発明の特定のポリペプチドに使用するために最適なリンカー（複数可）を決定することができるであろう。
例えば、（多量体受容体又は他のタンパク質等の）多量体抗原に指向性を有するナノボディを含む本発明の多価のポリペプチドにおいて、リンカーは、好ましくは、ポリペプチド中に存在する本発明のそれぞれのナノボディを、多量体のそれぞれのサブユニット上の抗原決定基に結合させるような長さ及び柔軟性を有している。同様に、同一の抗原上の２つ以上の異なる抗原決定基（例えば、抗原の異なるエピトープ、及び／又は多量体受容体、チャネル若しくはタンパク質の異なるサブユニット）に指向性を有するナノボディを含む本発明の多重特異性ポリペプチドにおいて、リンカーは、好ましくは、それぞれのナノボディを、目的の抗原決定基に結合させるような長さ及び柔軟性を有している。この場合にも、本明細書中での開示に基づき、任意で、限定された日常実験を幾つか実施した後に、当業者であれば本発明の特定のポリペプチドに使用するために最適なリンカー（複数可）を決定することができるであろう。
使用するリンカー（複数可）が、本発明のポリペプチドに、１つ又は複数の他の望ましい性質又は機能を付与し、及び／又は（例えば本発明のナノボディの誘導体について本明細書中に記載の）誘導体の形成及び／又は官能基の結合のための１つ又は複数の部位をもたらすことも本発明の範囲内に包含される。例えば、１つ又は複数の荷電アミノ酸残基（上記の表Ａ−３を参照）を含有するリンカーは、高められた親水性をもたらすことができるのに対し、低分子量のエピトープ又は標識を形成するか又はこれらを含有するリンカーは、検出、同定及び／又は精製の目的で使用することができる。この場合でも、本明細書中での開示に基づき、任意で、限定された通常実験を幾つか実施した後に、当業者であれば本発明の特定のポリペプチドに使用するために最適なリンカーを決定することができるであろう。
最終的に、本発明のポリペプチドに２つ以上のリンカーを使用する場合、これらのリンカーは同一であっても異なっていてもよい。この場合でも、本明細書中での開示に基づき、任意で、限定された日常実験を幾つか実施した後に、当業者であれば本発明の特定のポリペプチドに使用するのに最適なリンカーを決定することができるであろう。
通常、発現及び産生を容易にするため、本発明のポリペプチドは直鎖ポリペプチドである。しかしながら、本発明は、最も広い意味ではこれらに限定されない。例えば、本発明のポリペプチドが３つ以上のナノボディを含む場合、「星型」の構築物を得るために、各「アーム」がナノボディに結合する３つ以上の「アーム」を有するリンカーを使用することによってこれらを結合させることも可能である。通常あまり好ましくないが、環状の構築物を使用することも可能である。
また、本発明には、本発明のポリペプチドの誘導体が含まれ、これは本発明の、即ち本明細書中に記載のナノボディの誘導体に本質的に類似するものであり得る。
また、本発明には、本発明のポリペプチドから「本質的に成る」タンパク質又はポリペプチドが含まれる（「から本質的に成る」という語句は、上記で示したものと本質的に同じ意味を有する）。
本発明の一態様によれば、本発明のポリペプチドは、本明細書中に規定したように、本質的に単離形態である。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ、ポリペプチド及び核酸は、それ自体が既知であり、本明細書中のさらなる説明により当業者にとって明らかである方法で調製することができる。例えば、本発明のナノボディ及びポリペプチドは、抗体の調製、特に抗体断片（（単一）ドメイン抗体及びＳｃＦｖ断片が挙げられるが、これらに限定されない）の調製のためのそれ自体が既知の任意の方法で調製することができる。アミノ酸配列、ナノボディ、ポリペプチド及び核酸を調製するための、好ましいが非限定的な幾つかの方法としては、本明細書中に記載の方法及び技法が挙げられる。
当業者にとって明らかであるように、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチドの調製に特に有用な一方法は通常、
ｉ）好適な宿主細胞又は宿主生物（本明細書中では「本発明の宿主」とも呼ぶ）において、又は本発明の上記アミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドをコードする核酸（本明細書中では「本発明の核酸」とも呼ぶ）に適切な別の発現系において、発現する工程と、場合によってはその後、
ｉｉ）このようにして得られる本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを単離及び／又は精製する工程とを含む。
特に、このような方法は、
ｉ）本発明の上記宿主が少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチドを発現及び／又は産生するような条件下で、本発明の宿主を培養及び／又は維持する工程と、場合によってはその後、
ｉｉ）このようにして得られる本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを単離及び／又は精製する工程とを含み得る。
本発明の核酸は、一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡの形態を取ることができ、好ましくは二本鎖ＤＮＡの形態をとる。例えば、本発明のヌクレオチド配列はゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ又は合成ＤＮＡ（目的とする宿主細胞又は宿主生物内の発現に特異的に適合しているコドンの使用によるＤＮＡ等）であってもよい。
本発明の一態様によれば、本発明の核酸は、本明細書中に記載したように、本質的に単離形態である。
本発明の核酸は、例えば、プラスミド、コスミド又はＹＡＣ等のベクターの形態をとり、ベクター中に存在し、及び／又はその一部であってもよく、また本質的に単離形態であってもよい。
本発明の核酸は、本明細書中に記載の本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に関する情報に基づき、それ自体が既知の方法で調製されるか又は得ることができ、及び／又は好適な天然資源から単離することができる。類似体を得るためには、天然型ＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列に、例えば、部位特異的な突然変異誘発を起こして、上記類似体をコードする本発明の核酸を得ることができる。また、当業者にとって明らかであるように、本発明の核酸を調製するために、例えば、ナノボディをコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列、及び例えば、１つ又は複数のリンカーをコードする核酸等の幾つかのヌクレオチド配列を好適な方法で連結することができる。
本発明の核酸を生成するための技法は当業者にとって明らかであり、例えば、自動ＤＮＡ合成、部位特異的突然変異誘発、２つ以上の天然型配列及び／又は合成型配列（又はこれらの２つ以上の部分）の結合（combining）、切断された発現産物を発現させる変異の導入、（例えば、好適な制限酵素を用いて容易に消化及び／又はライゲーションすることができるカセット及び／又は領域を生成するための）１つ又は複数の制限部位の導入、及び／又は例えば、天然形態のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体配列を鋳型として使用する１つ又は複数の「ミスマッチ」プライマーを使用するＰＣＲ反応による変異の導入が挙げられ得るが、これらに限定されない。これらの技法及び他の技法は当業者にとって明らかであり、同様に上記のSambrook et al.及びAusubel et al.の文献等の標準的なハンドブック、及び以下の実施例を参照する。
本発明の核酸はまた、当業者にとって明らかであるように、遺伝子構築物の形態をとり、遺伝子構築物中に存在し、及び／又はその一部であってもよい。このような遺伝子構築物は一般に、例えば、１つ又は複数の好適な調節要素（好適なプロモーター（複数可）、エンハンサー（複数可）、ターミネーター（複数可）等）、及び本明細書中に述べられている遺伝子構築物のさらなる要素等）といった、１つ又は複数のそれ自体が既知の遺伝子構築物の要素に、場合によっては連結する少なくとも１つの本発明の核酸を含む。少なくとも１つの本発明の核酸を含むこのような遺伝子構築物は、本明細書中において「本発明の遺伝子構築物」とも呼ばれる。
本発明の遺伝子構築物は、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよく、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。また、本発明の遺伝子構築物は、目的とする宿主細胞又は宿主生物の形質転換に好適な形態、目的とする宿主細胞のゲノムＤＮＡへの組込みに好適な形態、又は目的とする宿主生物における単独での複製、保持及び／又は継代に好適な形態をとり得る。例えば、本発明の遺伝子構築物は、例えば、プラスミド、コスミド、ＹＡＣ、ウイルスベクター又はトランスポゾン等のベクターの形態をとることができる。特に、ベクターは、発現ベクター、即ち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ（例えば、好適な宿主細胞、宿主生物及び／又は発現系）での発現を提供し得るベクターであってもよい。
好ましいが非限定的な一態様では、本発明の遺伝子構築物は、
ｉ）ｉｉ）と作用可能に結合している少なくとも１つの本発明の核酸と、
ｉｉ）プロモーター、及び場合によっては好適なターミネーター等の、１つ又は複数の調節要素と、場合によってはさらに
ｉｉｉ）それ自体が既知の遺伝子構築物の１つ又は複数のさらなる要素とを含み、ここで、用語「調節要素」、「プロモーター」、「ターミネーター」、及び「作用可能に結合した」は、当該技術分野における（本明細書中に詳述するような）通常の意味を有しており、遺伝子構築物中に存在する上記「さらなる要素」とは、例えば、３’−又は５’−ＵＴＲ配列、リーダー配列、選択マーカー、発現マーカー／レポーター遺伝子、及び／又は形質転換若しくは組込み（の効率）を促進又は増大させ得る要素であってもよい。このような遺伝子構築物に好適なこれら及び他の要素は当業者にとって明らかであり、例えば、使用する構築物の種類、目的とする宿主細胞又は宿主生物、対象となる本発明のヌクレオチド配列を発現させる方法（例えば、構成的発現、一時的発現、又は誘導性発現等を介するもの）、及び／又は使用する形質転換法に応じて決定することができる。例えば、抗体及び抗体断片（（単一）ドメイン抗体及びＳｃＦｖ断片が挙げられるが、これらに限定されない）の発現及び産生のための、それ自体が既知の制御配列、プロモーター、及びターミネーターを、ほぼ同様の方法で使用してもよい。
好ましくは、本発明の遺伝子構築物において、上記少なくとも１つの本発明の核酸、及び上記調節要素、及び場合によっては上記１つ又は複数のさらなる要素は、互いに「作用可能に連結」しており、これにより、これらは通常互いに機能的な関係にあることが意図されている。例えば、プロモーターが、コーティング配列の転写及び／又は発現を、開始又は他の方法により制御／調節することができる場合（上記コーティング配列は、上記プロモーター「に制御されている」ものとして理解されたい）、コーティング配列に「作用可能に連結」していると考えられる。一般に、２つのヌクレオチド配列が作用可能に連結している場合、これらは同一の配向を有し、通常、同一リーディングフレーム内にある。必ずしも必要ではないが、通常、これらは本質的に隣接している。
好ましくは、本発明の遺伝子構築物の調節要素及びさらなる要素は、目的とする宿主細胞又は宿主生物において意図される生物学的機能を付与することができるほどのものである。
例えば、プロモーター、エンハンサー又はターミネーターは、目的とする宿主細胞又は宿主生物において「作用可能」でなければならず、このため（例えば）、上記プロモーターは、（本明細書で規定したように）作用可能に連結したヌクレオチド配列（例えばコーティング配列）の転写及び／又は発現を、開始、又は他の方法により制御／調節することができるものであると意図される。
特に好ましい幾つかのプロモーターとしては、本明細書中に述べた宿主細胞における発現のためのそれ自体が既知のプロモーター、特に、本明細書中に述べたもの及び／又は実施例において使用されるもの等の、細菌細胞における発現のためのプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
選択マーカーは、（即ち、適切な選択条件下で）本発明のヌクレオチド配列による形質転換が（首尾良く）起こった宿主細胞及び／又は宿主生物を、形質転換が（首尾良く）起こらなかった宿主細胞及び／又は宿主生物と区別できるようなものでなければならない。このようなマーカーの好ましいが非限定的な幾つかの例は、抗生物質（カナマイシン又はアンピシリン等）に対する耐性を付与する遺伝子、温度耐性を付与する遺伝子、形質転換されていない細胞又は生物が生存する上で不可欠な、培地中の或る種の因子、化合物及び／又は（食品）成分がない状態で宿主細胞又は宿主生物を維持させる遺伝子である。
リーダー配列は、（目的とする宿主細胞又は宿主生物において）所望の翻訳後修飾を可能にし、及び／又は転写されたｍＲＮＡを細胞の所望の部分又はオルガネラに配向させるようなものでなければならない。また、リーダー配列は、上記細胞から発現生成物を分泌させてもよい。そのようなものとして、リーダー配列は、宿主細胞又は宿主生物中で作用可能な任意のプロ配列、プレ配列、又はプレプロ配列であってもよい。リーダー配列は、細菌細胞中で発現しなくてもよい。例えば、抗体及び抗体断片（単一ドメイン抗体及びＳｃＦｖ断片が挙げられるが、これらに限定されない）の発現及び産生のための、それ自体が既知であるリーダー配列を、ほぼ同様の方法で使用することができる。
発現マーカー又はレポーター遺伝子は、（宿主細胞又は宿主生物中で）遺伝子構築物（に存在する遺伝子又はヌクレオチド配列）の発現を検出できるようなものでなければならない。発現マーカーは、場合によっては、発現産物を、例えば、細胞の特定の部分又はオルガネラ、及び／又は多細胞生物の特定の細胞（複数可）、組織（複数可）、器官（複数可）、又は部分（複数可）に局在化させてもよい。このようなレポーター遺伝子は、本発明のアミノ酸配列とのタンパク質融合として発現されてもよい。好ましいが非限定的な幾つかの例としては、ＧＦＰ等の蛍光性タンパク質が挙げられる。
好適なプロモーター、ターミネーター、及びさらなる要素の好ましいが非限定的な幾つかの例としては、本明細書中に記載した宿主細胞における発現に使用することができるもの、及び具体的には本明細書中に論じ、及び／又は下記の実施例で用いられているもの等の細菌細胞における発現に好適であるものが挙げられる。ターミネーター、転写及び／又は翻訳エンハンサー、及び／又は組込み因子等の、本発明の遺伝子構築物中に存在／使用し得るプロモーター、選択マーカー、リーダー配列、発現マーカー、及びさらなる要素についての（さらなる）非限定的な幾つかの例については、上記Sambrook et al.、及びAusubel et al.文献等の概説ハンドブック、並びに国際公開第９５／０７４６３号パンフレット、国際公開第９６／２３８１０号パンフレット、国際公開第９５／０７４６３号パンフレット、国際公開第９５／２１１９１号パンフレット、国際公開第９７／１１０９４号パンフレット、国際公開第９７／４２３２０号パンフレット、国際公開第９８／０６７３７号パンフレット、国際公開第９８／２１３５５号パンフレット、米国特許第７２０７４１０号明細書、米国特許第５６９３４９２号明細書、及び欧州特許第１０８５０８９号明細書に示された例を参照する。他の例は当業者にとって明らかであろう。上記の包括的な背景技術に関する参考文献及び本明細書中にさらに引用した参考文献も参照する。
本発明の遺伝子構築物は、通常、例えば、上記Sambrook et al.及びAusubel et al. 文献等の概説ハンドブックに記載の技法を用いて、本発明のヌクレオチド配列（複数可）を、１つ又は複数の上記さらなる要素と適切に連結させることにより得ることができる。
多くの場合、本発明の遺伝子構築物は、本発明のヌクレオチド配列を、それ自体が既知の好適な（発現）ベクターに挿入することによって得られる。好適な発現ベクターの好ましいが非限定的な幾つかの例は、以下の実施例において使用されるもの、及び本明細書中に記載したものである。
本発明の核酸及び／又は本発明の遺伝子構築物は、即ち本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを発現及び／又は産生させるための、宿主細胞又は宿主生物の形質転換に使用することができる。好適な宿主又は宿主細胞は当業者にとって明らかであり、例えば、任意の好適な真菌、原核、又は真核細胞若しくは細胞株、又は任意の好適な真菌、原核、又は真核生物、例えば：
大腸菌の菌株、ミラビリス変形菌等のプロテウス属の菌株、蛍光菌等のシュードモナス属の菌株等のグラム陰性菌株、及び、枯草菌又はブレビス菌等のバチルス属の菌株、ストレプトミセス・リビダンス（Streptomyces lividans）等のストレプトミセス属の菌株、スタフィロコッカス・カルノサス（Staphylococcus carnosus）等のブドウ球菌の菌株、及び乳酸連鎖球菌等のラクトコッカス属の菌株等のグラム陽性菌株が挙げられるがこれらに限定されない細菌株、
トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）等のトリコデルマ属、アカパンカビ等のニューロスポラ属、ソルダリア・マクロスポラ（Sordaria macrospora）等のソルダリア属、アスペルギルス・ニゲル（Aspergillus niger）又はショウユコウジカビ等のアスペルギルス属、又は別の糸状菌由来の細胞が挙げられるがこれらに限定されない真菌細胞、
出芽酵母等のサッカロミセス属、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomycespombe）等のシゾサッカロミセス属、ピキア・パストリス又はピキア・メタノリカ等のピキア属、ハンセヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）等のハンセヌラ属、クルイベロミセス・ラクティス等のクルイベロミセス属、アークスラ・アデニニボランス（Arxula adeninivorans）等のアークスラ属、ヤロウィア・リポリチカ（Yarrowia lipolytica）等のヤロウィア属由来の細胞が挙げられるがこれらに限定されない酵母細胞、
アフリカツメガエル卵母細胞等の両生類細胞又は細胞株、
シロイチモンジヨトウＳＦ９及びＳｆ２１細胞を含むがこれらに限定されない鱗翅目に由来する細胞／細胞株、又はシュナイダー細胞及びＫｃ細胞等のショウジョウバエに由来する細胞／細胞株等の昆虫に由来する細胞又は細胞株、
タバコ植物等の植物又は植物細胞、及び／又は
ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞（ＢＨＫ−２１細胞等）、及びＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ−７細胞等）、及びＰＥＲ．Ｃ６細胞等のヒト細胞又は細胞株が挙げられるがこれらに限定されない、ヒトに由来する細胞又は細胞株、哺乳動物に由来する細胞又は細胞株等の哺乳動物細胞又は細胞株、及び、
抗体及び抗体断片（（単一）ドメイン抗体及びＳｃＦｖ断片が挙げられるがこれらに限定されない）を発現及び産生することでそれ自体が既知の他の全ての宿主又は宿主細胞であってもよく、これらは当業者に明らかであろう。上記で引用した包括的な背景技術に関する文献及び、例えば、国際公開第９４／２９４５７号パンフレット、国際公開第９６／３４１０３号パンフレット、国際公開第９９／４２０７７号パンフレット、Frenken et al.（1998）（上記）、Riechmann及びMuyldermans （1999）（上記）、van der Linden （2000）（上記）、Thomassen et al.（2002）（上記）、Joosten et al.（2003）（上記）、Joosten et al.（2005）（上記）及び本明細書中にさらに引用した文献を参照する。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドはまた、例えば予防目的及び／又は治療目的（遺伝子治療等）のために、多細胞生物の１つ又は複数の細胞、組織、又は器官に導入し、発現させることができる。このために、本発明のヌクレオチド配列を、例えば、このように（例えば、リポソームを用いて）、又は好適な（例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス等のパルボウイルス等のレトロウイルスに由来する）遺伝子治療用ベクターに挿入後、任意の好適な方法で細胞又は組織に導入することができる。当業者にとって明らかであるように、このような遺伝子治療は、本発明の核酸又は本発明の核酸をコードする好適な遺伝子治療用ベクターを、患者又は患者の特定の細胞又は特定の組織若しくは器官に投与することにより患者の体内において、ｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｓｉｔｕで行うことができ、又は好適な（多くの場合、外植リンパ球、骨髄吸引物又は組織生検試料等の、治療対象となる患者の体内から採取された）細胞は、本発明のヌクレオチド配列を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで治療した後、患者の体内に好適に（再）導入することができる。これらは全て、Culver, K. W., "Gene Therapy", 1994, p. xii, Mary AnnLiebert, Inc., Publishers, New York, N.Y）、Giordano, Nature FMedicine 2 （1996）, 534-539、Schaper, Circ. Res. 79 （1996）, 911-919、Anderson, Science 256 （1992）, 808-813、Verma, Nature 389 （1994）, 239、Isner, Lancet 348 （1996）, 370-374、Muhlhauser, Circ. Res. 77 （1995）, 1077-1086、Onodera, Blood 91; （1998）, 30-36、Verma, Gene Ther. 5 （1998）, 692-699、Nabel, Ann. N.Y. Acad. Sci.: 811 （1997）, 289-292、Verzeletti, Hum. Gene Ther. 9 （1998）, 2243-51、Wang, Nature Medicine 2 （1996）, 714-716、国際公開第９４／２９４６９号パンフレット、国際公開第９７／００９５７号パンフレット、米国特許第５５８０８５９号明細書、米国特許第５５８９５４６６号明細書、又はSchaper, Current Opinion in Biotechnology 7 （1996）, 635-640に記載の当業者に既知の遺伝子治療用ベクター、技法、及びデリバリーシステムを用いて行うことができる。例えば、ＳｃＦｖ断片（Afanasieva et al., Gene Ther., 10, 1850-1859 （2003））及びダイアボディ（Blanco et al., J. Immunol, 171,1070-1077 （2003））のｉｎ ｓｉｔｕ発現は当該技術分野に記述されている。
細胞中でのナノボディの発現のために、これらは、例えば、国際公開第９４／０２６１０号パンフレット、国際公開第９５／２２６１８号パンフレット、及び米国特許第７００４９４０号明細書、国際公開第０３／０１４９６０号パンフレット、Cattaneo, A.及びBiocca, S. （1997） Intracellular Antibodies: Developmentand Applications. Landes and Springer-Verlag、並びにKontermann, Methods 34, （2004）, 163-170に記載の、いわゆる「細胞内抗体」として発現させることができる。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを、例えば、ウサギ、ウシ、ヤギ又はヒツジの母乳のトランスジェニック哺乳動物の母乳中（トランス遺伝子を哺乳動物に導入する一般的な技法については、例えば、米国特許第６７４１９５７号明細書、米国特許第６３０４４８９号明細書、及び米国特許第６８４９９９２号明細書を参照）、植物、又は葉、花、果実、種、根、塊茎を含むがこれらに限定されない植物の一部中（例えば、タバコ、トウモロコシ、大豆、又はアルファルファ）、又は、例えば、カイコガの蛹中で産生することもできる。
さらに、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドを、細胞を含まない発現系で発現及び／又は産生してもよく、このような系の好適な例は当業者にとって明らかであろう。好ましいが非限定的な幾つかの例としては、小麦麦芽系、ウサギ網状赤血球溶解物、又はZubayの方法による大腸菌を用いた系での発現が挙げられる。
上記のように、ナノボディを使用する利点の１つは、これに基づくポリペプチドを、好適な細菌系における発現によって調製することができる点であり、及び好適な細菌発現系、ベクター、宿主細胞、調節要素等は、例えば上記で引用した参考文献によって当業者にとって明らかであろう。しかしながら、本発明は、最も広い意味では細菌系における発現に限定されないことに留意されたい。
好ましくは、本発明では、本発明のポリペプチドを医薬用途に適した形態で提供する細菌発現系等の（ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ）発現系を使用し、このような発現系も当業者にとって明らかであろう。さらに当業者にとって明らかであるように、医薬用途に適した本発明のポリペプチドは、ペプチド合成法を用いて調製することができる。
工業的スケールでの製造において、ナノボディ又はナノボディを含有するタンパク質治療剤の（工業的）製造のために好ましい異種宿主としては、大規模スケールでの発現／産生／発酵、特に大規模スケール（即ち、ＧＭＰグレード）での医薬用途発現／産生／発酵に適した大腸菌、ピキア・パストリス、出芽酵母の菌株が挙げられる。このような菌株の好適な例は、当業者にとって明らかであろう。このような菌株及び産生／発現系も、Biovitrum社（Uppsala, Sweden）等の企業から入手可能である。
代替的には、哺乳動物細胞株、特にチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、大規模スケールでの発現／産生／発酵、特に大規模スケールでの医薬用途発現／産生／発酵のために用いることができる。このような発現／産生系も、上記の幾つかの企業から入手可能である。
特定の発現系の選択は、或る特定の翻訳後修飾、より具体的にはグリコシル化の必要条件に一部依存している。グリコシル化が望ましいか又は必要とされるナノボディを含有する組換えタンパク質の産生には、発現したタンパク質をグリコシル化する能力を有する哺乳動物発現用宿主の使用が必要である。これに関連して、得られるグリコシル化パターン（即ち、種類、数、及び残基が結合する位置）が、発現に用いられる細胞又は細胞株に依存することは、当業者にとって明らかであろう。好ましくは、ヒト細胞若しくは細胞株（即ち、本質的にヒトのグリコシル化パターンを有するタンパク質を与える）、又は、本質的に及び／又は機能的にヒトのグリコシル化と同一であるか、又は少なくともヒトのグリコシル化を模倣したグリコシル化パターンを与えることができる別の哺乳動物の細胞株が用いられる。一般に、大腸菌等の原核宿主はタンパク質をグリコシル化する能力を有しておらず、酵母等の下等原核細胞を使用すると、通常、ヒトのグリコシル化と異なるグリコシル化パターンがもたらされる。それにもかかわらず、上記宿主細胞及び発現系の全てを、得ようとする所望のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドに応じて、本発明に用いることができることを理解されたい。
したがって、本発明の非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドはグリコシル化される。本発明の別の非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドはグリコシル化されない。
本発明の好ましいが非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、細菌細胞中、具体的には大規模スケールでの医薬品製造に適した上記の株の細胞等の細菌細胞中で産生する。
本発明の好ましいが非限定的な別の態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、酵母細胞中、具体的には大規模スケールでの医薬品製造に適した上記の種の細胞等の酵母細胞中で産生する。
本発明のさらに好ましいが非限定的な別の態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、哺乳動物細胞中、具体的にはヒト細胞又はヒト細胞株の細胞中で、さらに具体的には大規模スケールでの医薬品製造に適した上記の細胞株等のヒト細胞又はヒト細胞株の細胞中で産生する。
宿主細胞中での発現が、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの製造に用いられる場合、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、細胞内（例えば、細胞質中、ペリプラズム中、又は封入体中）で産生し、次いで宿主細胞から単離し、場合によってはさらに精製してもよく、又は細胞外（例えば、宿主細胞を培養する培地中）で産生し、次いで培地から単離し、場合によってはさらに精製してもよい。真核宿主細胞を使用する場合、得られるナノボディ及びタンパク質のさらなる単離及び下流工程での処理が大幅に容易になるため、通常、細胞外で産生されることが好ましい。通常、大腸菌の菌株等の上記細菌細胞は、毒素及び血液毒等の数種のタンパク質を除き、タンパク質を細胞外に分泌せず、大腸菌において分泌物を産生することは、内膜を通してペリプラズム空間へタンパク質を転移させることを意味する。ペリプラズムでの産生は、細胞質での産生に対して、幾つかの利点がある。例えば、分泌産物のＮ末端のアミノ酸配列は、特異的シグナルペプチダーゼによる分泌シグナル配列の切断後の天然遺伝子産物と同一であってもよい。また、ペリプラズム中では、細胞質中よりもプロテアーゼ活性がはるかに低いと思われる。さらに、ペリプラズム中では、混入するタンパク質が少ないため、タンパク質の精製がより容易である。別の利点は、ペリプラズムが細胞質よりも酸化的な環境をもたらすため、正しい位置にジスルフィド結合が形成される可能性があるという点である。大腸菌中で過剰発現されたタンパク質は、封入体と呼ばれる不溶性の凝集物中に見られることが多い。これらの封入体は、細胞質中にもペリプラズム中にも存在させることができ、これらの封入体からの生理活性タンパク質の回収は、変性／リフォールディングプロセスを必要とする。治療効果を有するタンパク質を含む多くの組換えタンパク質は、封入体から回収される。代替的には、当業者に明らかであるように、所望のタンパク質、特に本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを分泌するように遺伝的に修飾された細菌の組換え菌株を用いることができる。
したがって、本発明の非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、細胞内で産生され、宿主細胞から、特に細菌細胞又は細菌細胞中の封入体から単離したアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドである。本発明の別の非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、細胞外で産生され、宿主細胞を培養する培地から単離されたアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドである。
好ましいが非限定的な幾つかの、これらの宿主細胞で用いるためのプロモーターとしては、
大腸菌における発現のための：ｌａｃプロモーター（及び、ｌａｃＵＶ５プロモーター等のこれらの誘導体）；アラビノースプロモーター；λファージの左側（ＰＬ）及び右側（ＰＲ）プロモーター；ｔｒｐオペロンのプロモーター；ハイブリッドｌａｃ／ｔｒｐプロモーター（ｔａｃ及びｔｒｃ）；Ｔ７−プロモーター（より具体的にはＴ７−ファージ遺伝子１０のプロモーター）；及び他のＴ−ファージプロモーター；Ｔｎ１０テトラサイクリン耐性遺伝子のプロモーター、外来制御オペレーター配列の１つ又は複数の複製を含む上記プロモーターの組換え変異体；
出芽酵母における発現のための：ＡＤＨ１（アルコール脱水素酵素１）、ＥＮＯ（エノラーゼ）、ＣＹＣ１（チトクロームｃ異性化酵素１）、ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素）、ＰＧＫ１（ホスホグリセリン酸キナーゼ）、ＰＹＫ１（ピルビン酸キナーゼ）の構成的プロモーター；ＧＡＬ１，１０，７（ガラクトース代謝酵素）、ＡＤＨ２（アルコール脱水素酵素２）、ＰＨＯ５（酸ホスファターゼ）、ＣＵＰ１（銅メタロチオネイン）の制御的プロモーター；ＣａＭＶ（カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓプロモーター）の外来プロモーター；
ピキア・パストリスにおける発現のための：ＡＯＸ１プロモーター（アルコール酸化酵素Ｉ）；
哺乳動物細胞における発現のための：ヒトサイトメガロウイルス（ヘテロ二量体サイトカインＭＶ）前初期エンハンサー／プロモーター；プロモーターがＴｅｔリプレッサーによって制御可能なように２個のテトラサイクリンオペレーター配列を含有するヒトサイトメガロウイルス（ヘテロ二量体サイトカインＭＶ）前初期プロモーター変異体；単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター；ラウス肉腫ウイルスの長末端反復配列（ＲＳＶ ＬＴＲ）エンハンサー／プロモーター；ヒト、チンパンジー、マウス、又はラット由来の伸長因子１α（ｈＥＦ−１α）プロモーター；ＳＶ４０初期プロモーター；ＨＩＶ−１の長末端反復配列プロモーター；βアクチンプロモーターが挙げられる。
好ましいが非限定的な幾つかの、これらの宿主細胞で用いるためのベクターとしては、
哺乳動物細胞における発現のためのベクター：ｐＭＡＭｎｅｏ（Clontech）、ｐｃＤＮＡ３（Invitrogen）、ｐＭＣ１ｎｅｏ（Stratagene）、ｐＳＧ５（Stratagene）、ＥＢＯ−ｐＳＶ２−ｎｅｏ（ＡＴＣＣ ３７５９３）、ｐＢＰＶ−１（８−２）（ＡＴＣＣ ３７１１０）、ｐｄＢＰＶ−ＭＭＴｎｅｏ（３４２−１２）（ＡＴＣＣ ３７２２４）、ｐＲＳＶｇｐｔ（ＡＴＣＣ ３７１９９）、ｐＲＳＶｎｅｏ（ＡＴＣＣ ３７１９８）、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、ｐＵＣＴａｇ（ＡＴＣＣ ３７４６０）及びｌＺＤ３５（ＡＴＣＣ ３７５６５）、並びにアデノウイルスに基づくもの等のウイルスに基づく発現系；
細菌細胞における発現のためのベクター：ｐＥＴベクター（Novagen）及びｐＱＥベクター（Qiagen）；
酵母又は他の真菌細胞における発現のためのベクター：ｐＹＥＳ２（Invitrogen）及びピキア発現ベクター（Invitrogen）；
昆虫細胞における発現のためのベクター：ｐＢｌｕｅＢａｃＩＩ（Invitrogen）及び他のバキュロウイルスベクター；
植物又は植物細胞における発現のためのベクター：例えば、カリフラワーモザイクウイルス又はタバコモザイクウイルス、アグロバクテリウムの好適な菌株又はＴｉ-プラスミドベースのベクターが挙げられる。
好ましいが非限定的な幾つかの、これらの宿主細胞で使用するための分泌配列としては、
大腸菌等の細菌細胞における使用のための：ＰｅｌＢ、Ｂｌａ、ＯｍｐＡ、ＯｍｐＣ、ＯｍｐＦ、ＯｍｐＴ、ＳｔＩＩ、ＰｈｏＡ、ＰｈｏＥ、ＭａｌＥ、Ｌｐｐ、ＬａｍＢ等；ＴＡＴシグナルペプチド、ヘモリシンＣ−末端分泌シグナル；
酵母における使用のための：α−接合因子プレプロ配列、ホスファターゼ（ｐｈｏ１）、インベルターゼ（Ｓｕｃ）等；
哺乳動物細胞における使用のための：標的タンパク質が真核細胞由来である場合には、固有シグナル、マウスＩｇκ鎖Ｖ−Ｊ２−Ｃシグナルペプチド等が挙げられる。
本発明の宿主又は宿主細胞を形質転換するのに好適な技法は、当業者にとって明らかであり、目的とする宿主細胞／宿主生物及び使用する遺伝子構築物に依存することもある。同様に、上記ハンドブック及び特許出願を参照する。
形質転換後、本発明のヌクレオチド配列／遺伝子構築物によってうまく形質転換された宿主細胞又は宿主生物を検出及び選択する工程を実行することができる。この工程は、例えば、本発明の遺伝子構築物中にある選択可能なマーカーに基づいて選択する工程、又は、例えば、特異的抗体を使用する本発明のアミノ酸配列の検出を含む工程であってもよい。
形質転換された宿主細胞（安定な細胞株の形態を取ることができる）又は宿主生物（安定な変異体系列又は株の形態を取ることができる）は、本発明のさらなる態様をなす。
好ましくは、これらの宿主細胞又は宿主生物は、（宿主生物の場合には、その少なくとも１つの細胞、部分、組織又は器官において）本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを発現し、又は（少なくとも）（例えば、好適な条件下で）発現することができるようなものである。本発明はまた、本発明の宿主細胞又は宿主生物のさらなる世代、後代及び／又は子孫を含んでおり、これらは、例えば、細胞分裂又は有性若しくは無性生殖により得られるものであってよい。
本発明のアミノ酸配列を生成し／その発現を得るために、形質転換された宿主細胞又は形質転換された宿主生物は一般に、（所望の）本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドが発現／産生されるような条件下で飼育、維持及び／又は培養され得る。好適な条件は当業者にとって明らかであり、通常、使用する宿主細胞／宿主生物、及び（関連する）本発明のヌクレオチド配列の発現を制御する調節因子に依存する。この場合にも、本発明の遺伝子構築物に関する上記の段落に記載したハンドブック及び特許出願を参照する。
一般に、好適な条件には、好適な培地の使用、好適な食餌及び／又は好適な栄養源の存在、好適な温度の使用、及び場合によっては好適な誘導因子又は化合物の存在（例えば、本発明のヌクレオチド配列が誘導性プロモーターにより制御される場合）が含まれることができ、これらは全て当業者が選択することができる。この場合にも、このような条件下で、本発明のアミノ酸配列は、連続的、一時的、又は適切に誘導された場合にのみ発現することができる。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、（まず）未成熟型（上記）で産生され、次いで、使用する宿主細胞／宿主生物に応じて翻訳後修飾されてもよいことも、当業者にとって明らかであろう。また、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、この場合にも、使用する宿主細胞／宿主生物に応じてグリコシル化されてもよい。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドは、次いで、宿主細胞／宿主生物から、及び／又は該宿主細胞若しくは宿主生物を培養した培地から、（分取）クロマトグラフィ法、及び／又は電気泳動法、分別沈殿法、アフィニティ法（例えば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドに融合した特定の切断可能なアミノ酸配列を用いる）、及び／又は分取免疫法（即ち、単離対象のアミノ酸配列に対する抗体を用いる）等の、それ自体が既知のタンパク質の単離技法及び／又は精製技法を用いて単離することができる。
一般に、医薬用途のために、本発明のポリペプチドは、少なくとも１つの本発明のポリペプチドと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤、及び／又はアジュバントとを含み、場合によっては１つ又は複数のさらなる薬理活性ポリペプチド及び／又は化合物を含む薬学的調製剤又は薬学的組成物として製剤化することができる。非限定的な例により、このような製剤は、経口投与のため、非経口投与（静脈内、筋内若しくは皮下注射、又は静脈内点滴等による）のため、（例えば乾癬等の表在性炎症を予防及び／又は治療するためのクリームとしての）局所投与のため、吸入、経皮パッチ、インプラント、座剤等による投与のために適した形態を取ることができる。このような好適な投与形態は、投与の方法、及びその調製剤で用いるための方法及び担体に応じて、固体、半固体又は液体であってよく、当業者にとって明らかであり、本明細書にさらに記載する。
したがって、さらなる態様において、本発明は、少なくとも１つの本発明のアミノ酸配列、少なくとも１つの本発明のナノボディ又は少なくとも１つの本発明のポリペプチド、及び少なくとも１つの好適な（医薬用途に好適な）担体、希釈剤又は賦形剤を含み、場合によっては１つ又は複数のさらなる活性物質を含有する薬学的組成物に関する。
概して、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、それ自体が既知の任意の好適な方法により製剤化及び投与することができ、これらについては、例えば、上記で引用した包括的な背景技術（特に、国際公開第０４／０４１８６２号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６３号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６５号パンフレット、国際公開第０４／０４１８６７号パンフレット）、及びRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., MackPublishing Company, USA （1990）若しくはRemington, the Science and Practice of Pharmacy, 21th Edition,Lippincott Williams and Wilkins （2005）等の標準的なハンドブックを参照する。
例えば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、従来の抗体及び抗体断片（例えばＳｃＦｖ及びダイアボディ）及び他の薬理活性タンパク質のための、それ自体が既知の任意の方法で製剤化及び投与することができる。このような製剤及びこれを調製する方法は当業者にとって明らかであり、例えば、非経口（例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋内、管腔内、動脈内若しくは髄腔内投与）又は局所（経皮若しくは皮内）投与に好適な調製剤が挙げられる。
非経口投与のための調製剤は、例えば、点滴又は注射に好適な滅菌液剤、懸濁剤、分散剤又は乳化剤であってもよい。このような調製剤に好適な担体又は希釈剤としては、例えば、限定するものではないが、滅菌水及び緩衝水溶液、並びにリン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液等の溶液、水性油、グリセロール、エタノール、プロピレングリコール等のグリコール、又は鉱物油、動物油、及び植物油、例えば、落花生油、大豆油、並びに好適なこれらの混合物が挙げられる。通常、水溶液剤又は懸濁剤が好ましい。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、遺伝子治療の送達方法を使用して投与することもできる。例えば、その全文が参照により本明細書中に援用される米国特許第５３９９３４６号明細書を参照されたい。遺伝子治療の送達方法を使用して、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドをコードする遺伝子によりトランスフェクトされた初代細胞を、特定の器官、組織、移植片、腫瘍又は細胞を標的とするための組織特異的プロモーターによりさらにトランスフェクトすることができ、且つ細胞内に局在化した発現のためのシグナル及び安定化配列によりさらにトランスフェクトすることもできる。
このように、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、不活性希釈剤又は吸収可能な食用の担体等の薬学的に許容される溶媒と組み合わせて、例えば、経口的に全身投与することができる。これらを、ハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入してもよく、錠剤として打錠してもよく、又は患者の食事中の食品に直接加えてもよい。経口治療用の投与のために、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドを１つ又は複数の賦形剤と組み合わせ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェハー剤等の形態で使用することができる。このような組成物及び調製剤は、少なくとも０．１％の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを含有していなければならない。組成物及び調製剤中のこれらの割合は、当然ながら変えることができ、便宜的には所定の単位投薬形態の重量の約２％〜約６０％であろう。このような治療上有用な組成物中の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドの量は、有効な用量レベルが得られるような量である。
また、錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤等は、トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ又はゼラチン等の結着剤；リン酸二カルシウム等の賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；及びスクロース、フルクトース、ラクトース又はアスパルテーム等の甘味料を含有していてもよく、又はペパーミント、冬緑油、チェリー香料等の香料を加えてもよい。単位投薬形態がカプセル剤である場合、上記のような種類の物質以外に、植物油又はポリエチレングリコール等の液体担体を含有していてもよい。種々の他の物質が、コーティングとして、又は固体状の単位投薬形態の物理的形態を他の方法により変化させるために存在していてもよい。例えば、錠剤、丸剤又はカプセル剤は、ゼラチン、ロウ、シェラック又は砂糖等でコーティングされていてもよい。シロップ剤又はエリキシル剤は、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチド、甘味料としてのスクロース又はフルクトース、保存料としてのメチルパラベン又はプロピルパラベン、色素、及びチェリー又はオレンジ香料等の香料を含有していてもよい。当然ながら、単位投薬形態の調製に使用される全ての物質は、薬学的に許容され、使用する量において実質的に無毒でなければならない。さらに、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、徐放剤及び装置中に封入されていてもよい。
経口投与のための調製剤及び製剤にはまた、本発明の構築物が胃内環境に耐性を有し且つ腸内を通過することを可能にする腸溶コーティングが付与される。より包括的には、経口投与のための調製剤及び製剤は、消化管のいずれかの所望部分に送達するのに好適に製剤化され得る。また、消化管に送達するのに好適な坐薬を使用してもよい。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドはまた、点滴又は注射によって静脈内投与又は腹腔内投与してもよい。本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの溶液、又はこれらの塩は、水中で調製することがき、任意で無毒性界面活性剤と混合することができる。分散剤液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、及びこれらの混合物中、並びに油中で調製することができる。通常の保存及び使用条件下において、これらの調製剤は、微生物の増殖を防ぐための保存料を含有している。
注射又は点滴に好適な薬剤投薬形態としては、滅菌注射又は滅菌点滴可能な溶液剤又は分散液剤の即時調製に適合し、場合によってはリポソームに封入された活性成分を含む、滅菌水溶液剤又は分散液剤又は滅菌粉末が挙げられ得る。全ての場合において、最終的な投薬形態は、滅菌されており、流体であり、製造及び保存条件下で安定でなければならない。液体の担体又は溶媒は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、植物油、非毒性グリセリルエステル、及びこれらの好適な混合物を含む溶媒又は液体の分散媒であってもよい。例えば、リポソームの形成により、分散液剤の場合には必要な粒子サイズを維持することにより、又は界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の種々の抗菌剤及び抗真菌剤により微生物の作用を妨害することができる。多くの場合において、等張剤、例えば、砂糖、緩衝剤、又は塩化ナトリウムを含んでいることが好ましい。組成物において、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを使用することにより、注射可能な組成物の長時間にわたる吸収をもたらすことができる。
滅菌注射可能な溶液剤は、所要の量の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドを、必要に応じて、上記に列挙した種々の他の成分を含む適切な溶媒中に混合させた後、滅菌濾過することにより調製される。滅菌注射可能な溶液剤を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、減圧乾燥法及び凍結乾燥法であり、活性成分の粉末、及び先に滅菌濾過された溶液剤中に存在する任意のさらなる望ましい成分が得られる。
局所投与のためには、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドが液体の場合には、純粋な形態で適用することができる。しかし、概して、これらは、固体であっても液体であってもよい皮膚科学的に許容される担体と共に、組成物又は製剤として皮膚に投与されることが望ましい。
有用な固体担体としては、タルク、粘土、微結晶セルロース、シリカ、アルミナ等の微粉砕された固体が挙げられる。有用な液体担体としては、水、ヒドロキシアルキル又はグリコール又は水−アルコール／グリコール配合物が挙げられ、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、場合によっては非毒性の界面活性剤の作用により、有効なレベルで溶解又は分散することができる。所定用途のための性質を最適化するために、芳香剤及び他の抗菌剤等のアジュバントを加えてもよい。得られる液体組成物は、ばんそうこう及び他の包帯に薬剤を含浸させるのに用いられる吸収パッドによって塗布することができ、又はポンプ型又はエアロゾルスプレーを使用して患部の上に噴霧することができる。
使用者の皮膚に直接塗布するための塗布用ペースト、ゲル、軟膏及び石鹸等を形成するために、合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩及びエステル、脂肪アルコール、修飾セルロース又は修飾無機物質等の増粘剤を液体担体と共に使用することができる。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドを皮膚に送達するために使用することができる有用な皮膚科用組成物の例は当該技術分野に既知であり、例えば、Jacquet et al.（米国特許第４６０８３９２号明細書）、Geria（米国特許第４９９２４７８号明細書）、Smith et al.（米国特許第４５５９１５７号明細書）及びWortzman（米国特許第４８２０５０８号明細書）を参照されたい。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの有用な用量は、これらのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性、及び動物モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ活性を比較することにより決定することができる。マウス及び他の動物における有効用量をヒトに外挿するための方法は当該技術分野に既知であり、例えば、米国特許第４９３８９４９号明細書を参照されたい。
概して、ローション等の液体組成物中の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの濃度は、約０．１重量％〜２５重量％、好ましくは、約０．５重量％〜１０重量％である。ゲル又は粉末等の半固形又は固形組成物中の濃度は、約０．１重量％〜５重量％、好ましくは約０．５重量％〜２．５重量％である。
治療における使用に必要な本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの量は、選択される特定のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドだけでなく、投与経路、治療する症状の性質、並びに患者の年齢及び状態によっても変動し、最終的には担当する医師又は臨床医の判断に委ねられる。また、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの用量は、標的となる細胞、腫瘍、組織、移植片又は器官によっても変動する。
望ましい用量は便宜上、単回用量で、又は例えば、１日２回、３回、４回以上の部分用量として、適切な間隔での分割投与で示され得る。部分用量自体を、例えば、吸入器からの複数回の吸入又は複数滴の点眼投与等の、個別で、大まかな間隔の数多くの投与にさらに分割してもよい。
投与計画には、長期間の毎日の処置が含まれ得る。「長期間」とは、少なくとも２週間、好ましくは数週間、数ヶ月、又は数年の期間を意味する。この用量範囲における必要な改変は、本明細書中で教示される通常の実験のみを使用して当業者によって決定され得る。Remington's Pharmaceutical Sciences （Martin, E. W., ed. 4）, Mack PublishingCo., Easton, PAを参照されたい。用量は、何らかの合併症が発症した場合には、個々の医師が調節することもできる。
別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する少なくとも１つの疾患及び障害を予防及び／又は治療する方法であって、これを必要とする患者に、薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれを含む薬学的組成物を投与することを含む、予防及び／又は治療する方法に関する。
本発明の文脈において、用語「予防及び／又は治療」とは、疾患を予防及び／又は治療することを含むだけでなく、概して、疾患の発症を予防すること、疾患の進行を遅延又は退行させること、疾患に関連する１つ又は複数の症状の発症を予防又は遅延させること、疾患に関連する１つ又は複数の症状を低減及び／又は軽減すること、疾患及び／又はこれに関連するあらゆる症状の重傷度及び／又は期間を低減すること、及び／又は疾患及び／又はこれに関連するあらゆる症状の重症度のさらなる増大を予防すること、疾患によって生じるあらゆる生理学的損傷を予防、低減又は退行させること、及び概して治療すべき患者に有益なあらゆる薬理作用も含む。
治療すべき被験体とは、任意の温血動物であり得るが、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒトである。当業者にとって明らかであるように、治療すべき被験体は、特に本明細書中に記載の疾患及び障害を患っているか又はこれらの危険性のあるヒトであり得る。
本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に、その生物活性若しくは薬理活性に、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体が関与する生物学的経路若しくはシグナル伝達に関連がある少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療する方法であって、これを必要とする被験体に薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれらを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。特に、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、その生物活性若しくは薬理活性、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体が関与する生物学的経路若しくはシグナル伝達を調節することによって治療することができる少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療する方法であって、これを必要とする被験体に薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれらを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。特に、上記の薬学的に有効な量とは、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、その生物活性若しくは薬理活性、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体が関与する生物学的経路又はシグナル伝達を調節するのに十分な量とすることができ、且つ／又は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体、その生物学的活性又は薬学的活性、及び／又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体が関与する生物学的経路又はシグナル伝達を調節するのに十分な、循環血液中で本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチドのレベルを与える量とすることができる。
本発明はさらに、本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、又は本発明のポリペプチドを患者に投与することによって予防及び／又は治療することができる少なくとも１つの疾患及び障害を予防及び／又は治療する方法であって、これを必要とする被験体に薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれらを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。
より具体的には、本発明は、本明細書中に列挙される疾患及び障害から成る群から選択される少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療する方法であって、これを必要とする被験体に薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれらを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。
別の態様では、本発明は、免疫療法、特に受動免疫療法に関する方法であって、本明細書中に記載の疾患及び障害を患っているか又はこれらの危険性のある被験体に、薬学的に有効な量の本発明のアミノ酸配列、本発明のナノボディ、本発明のポリペプチド、及び／又はこれらを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法に関する。
上記の方法において、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチド、及び／又はこれらを含む組成物は、使用される特定の薬学的製剤又は薬学的組成物に応じて任意の好適な方法で投与することができる。したがって、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチド、及び／又はこれらを含む組成物は、例えば、この場合にも使用される特定の薬学的製剤又は薬学的組成物に応じて経口的、腹腔内（例えば、静脈内、皮下、筋内、又は消化管を回避した投与の任意の他の経路を介して）、鼻腔内、経皮、局所的に、座薬を用いて、吸入によって投与することができる。臨床医は、予防又は治療すべき疾患又は障害、及び臨床医に既知の他の因子に応じて、好適な投与経路、及びこのような投与に使用される好適な薬学的製剤又は薬学的組成物を選択することができるであろう。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチド、及び／又はこれらを含む組成物は、予防又は治療すべき疾患又は障害の予防及び／又は治療に好適な治療計画に従って投与される。臨床医は一般的に、予防又は治療すべき疾患又は障害、治療すべき疾患の重症度及び／又はその症状の重症度、使用される本発明の特定のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチド、特定の投与経路、及び使用される薬学的製剤又は薬学的組成物、患者の年齢、性別、体重、食事、全身状態、並びに臨床医に既知の同様の因子に応じて、好適な治療計画を決定することができるであろう。
通常、治療計画には、１つ又は複数の薬学的に有効な量又は用量における１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチド、又はこれらを含む１つ又は複数の組成物の投与が含まれるであろう。投与される具体的な量（複数可）又は用量はこの場合でも上記の因子に基づき臨床医によって決定することができる。
通常、本明細書中に記載した疾患及び障害の予防及び／又は治療に関して、また治療すべき特定の疾患又は障害、使用される本発明の特定のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドの効力、特定の投与経路、及び使用される特定の薬学的製剤又は薬学的組成物に応じて、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは概して、１ｇ／ｋｇ（体重）／日〜０．０１μｇ／ｋｇ（体重）／日、好ましくは、０．１ｇ／ｋｇ（体重）／日〜０．１μｇ／ｋｇ（体重）／日、例えば、約１μｇ／ｋｇ（体重）／日、１０μｇ／ｋｇ（体重）／日、１００μｇ／ｋｇ（体重）／日又は１０００μｇ／ｋｇ（体重）／日の量で、連続して（例えば、点滴によって）、日々の単回用量として、又は１日の中の複数回の分割用量として投与されるであろう。臨床医は一般的に、本明細書中に記載の因子に応じて好適な日用量を決定することができるであろう。特定の場合には、例えば、上記の因子及び臨床医の専門的判断に基づきこれらの量から外れるように臨床医が選択することもあることが明らかであろう。一般的に、親和性／結合活性、有効性、体内分布、半減期及び当業者に既知の同様の因子の差異は考慮するものの、本質的に同様の経路を介して投与される、同様の標的に対する比較可能な従来の抗体又は抗体断片に関して通常投与される量から、投与量に関する指針を幾らか得ることができる。
通常上記の方法では、本発明の単一のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを使用するであろう。しかしながら、２つ以上の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及び／又はポリペプチドを組み合わせて使用することも本発明の範囲内である。
本発明のナノボディ、アミノ酸配列及びポリペプチドは、１つ又は複数のさらなる薬学的に有効な化合物又は成分と組み合わせて、即ち、相乗効果をもたらすことも又はもたらさないこともある複合治療計画として使用することもできる。この場合でも、臨床医は、上記の因子及び臨床医の専門的判断に基づき、このようなさらなる化合物又は成分、並びに好適な複合治療計画を選択することができるであろう。
特に、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ及びポリペプチドは、本明細書中に記載の疾患及び障害の予防及び／又は治療に用いられるか又は用いることができる他の薬学的に有効な化合物又は成分と組み合わせて使用してもよく、その結果、相乗効果が得られることも又は得られないこともある。このような化合物及び成分、並びにこれらを投与するための経路、方法及び薬学的製剤又は薬学的組成物の例は臨床医にとって明らかであろう。
２つ以上の物質又は成分を複合治療計画の一環として使用する場合、これらは、同様の投与経路を介して又は種々の投与経路を介して、本質的に同じ時間で又は種々の時間で（例えば、本質的に同時に、連続して、又は交互に）投与することができる。物質又は成分を、同様の投与経路を介して同時に投与しようとする場合、当業者にとって明らかであるような、種々の薬学的製剤又は薬学的組成物、又は併せた薬学的製剤又は薬学的組成物の一部として投与してもよい。
また、２つ以上の有効な物質又は成分を複合治療計画の一環として使用しようとする場合、化合物又は成分を単独で使用する場合に用いられるものと同様の量で、また同様の計画に従って、物質又は成分の各々を投与してもよく、このような併用によって、相乗効果がもたらされることも又はもたらされないこともある。しかしながら、２つ以上の有効な物質又は成分の併用によって相乗効果がもたらされる場合には、所望の治療作用を達成しつつも、投与される物質又は成分の１つ、複数又は全ての量を低減することができる可能性がある。これは、例えば、所望の薬学的効果又は治療効果を依然として得ると共に、一般的な量で使用される場合の物質又は成分の１つ又は複数の使用に関連するあらゆる望ましくない副作用を回避、制限又は低減するのに有用であり得る。
本発明に従って使用される治療計画の有効性は、臨床医にとって明らかであるように、関与する疾患又は障害についてそれ自体が既知の任意の方法で決定及び／又は追及され得る。臨床医はまた、必要に応じて及びケースバイケースに基づき、特定の治療計画を変更又は改変し、それにより、所望の治療効果を達成し、望ましくない副作用を回避、制限又は低減し、及び／又は一方で所望の治療効果を達成することと、他方で望ましくない副作用を回避、制限又は低減することとの適切な均衡を達成することができる。
通常、所望の治療効果が達成されるまで、及び／又は所望の治療効果を維持する必要がある以上、治療計画は続けられる。また、これは臨床医が決定することができるものである。
別の態様において、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療するため；及び／又は本明細書中に言及される１つ又は複数の治療方法に使用するための薬学的組成物の調製における本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドの使用に関する。
治療すべき被験体とは、任意の温血動物であり得るが、具体的には哺乳動物、より具体的にはヒトである。当業者にとって明らかであるように、治療すべき被験体は、特に本明細書中に記載の疾患及び障害を患っているか又はこれらの危険性のあるヒトである。
本発明はまた、本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを患者に投与することによって予防及び／又は治療することができる少なくとも１つの疾患又は障害を予防及び／又は治療するための薬学的組成物の調製における本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドの使用に関する。
より具体的には、本発明は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に関連する疾患又は障害を予防及び／又は治療するための、並びに特に本明細書中に列挙した疾患及び障害の１つ又は複数を予防及び治療するための薬学的組成物の調製における本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドの使用に関する。
また、このような薬学的組成物では、１つ又は複数の本発明のアミノ酸配列、ナノボディ又はポリペプチドを、本明細書中に記載したもの等の１つ又は複数の他の有効な成分と好適に組み合わせてもよい。
最終的に、本発明のナノボディ（本明細書中に規定）及び本発明のポリペプチドの使用がはるかに好ましいが、本明細書中の記載に基づき、当業者であれば、同様の方法で、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する他のアミノ酸配列、特に（単一）ドメイン抗体、並びにこのような（単一）ドメイン抗体を含むポリペプチドを設計及び／又は生成することもできることは明らかであろう。
例えば、本発明のナノボディに関して上記で記載されるＣＤＲの１つ又は複数をヒトの足場又は非免疫グロブリンの足場を含むがこれらに限定されないこのような（単一）ドメイン抗体又は他のタンパク質足場上に「グラフト化」することが可能であり得ることは、当業者にとって明らかであろう。このようなＣＤＲグラフト化の好適な足場及び技法は当業者にとって明らかであり、当該技術分野において既知である。例えば、米国特許第７１８０３７０号明細書、国際公開第０１／２７１６０号パンフレット、欧州特許第０６０５５２２号明細書、欧州特許第０４６０１６７号明細書、米国特許第７０５４２９７号明細書、Nicaise et al., Protein Science （2004）, 13: 1882-1891、Ewert et al., Methods, 2004 Oct; 34 （2）: 184-199、Kettleborough et al., Protein Eng. 1991 Oct; 4（7）: 773-783、O'Brien and Jones, Methods Mol. Biol. 2003: 207: 81-100、Skerra, J. Mol. Recognit. 2000: 13: 167-187、及びSaerens et al., J. Mol. Biol. 2005 Sep 23; 352（3）: 597-607、及び本明細書中に引用したさらなる参考文献を参照されたい。例えば、マウス又はラットのＣＤＲをヒトのフレームワーク及び足場上にグラフト化するそれ自体が既知の技法は、本発明のナノボディのＣＤＲの１つ又は複数と、１つ又は複数のヒトフレームワーク領域又は配列とを含むキメラタンパク質をもたらすのと同様に使用することができる。
本発明のナノボディが、上記の好ましいＣＤＲ配列以外の１つ又は複数の他のＣＤＲ配列を含有する場合、これらのＣＤＲ配列は、それ自体が既知の任意の方法で、例えば、（好ましい）ナノボディ、従来の抗体に由来の（特にヒト抗体に由来の）ＶＨドメイン、重鎖抗体、従来の４本鎖抗体（例えば、従来のヒト４本鎖抗体）、又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有する他の免疫グロブリン配列から得ることができることにも留意されたい。ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に指向性を有するこのような免疫グロブリン配列は、それ自体が既知の任意の方法で、当業者にとって明らかであるように、即ち、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体による免疫化によって、又はヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体を有する免疫グロブリン配列の好適なライブラリをスクリーニングすることによって、又は任意の好適なこれらの組合せによって生成することができる。任意で、この後、ランダム又は部位特異的突然変異のような技法、及び／又はそれ自体が既知の親和性成熟のような他の技法を続けてもよい。このような免疫グロブリン配列を生成する好適な技法は当業者にとって明らかであり、例えば、Hoogenboom, Nature Biotechnology, 23, 9, 1105-1116 （2005）に概説されるスクリーニング法が挙げられる。特定の標的に対する免疫グロブリンを生成する他の技法としては、例えば、ナノクローン技術（例えば、公開米国特許出願第２００６−０２１１０８８号明細書に記載）、いわゆるＳＬＡＭ技術（例えば、欧州特許出願第０５４２８１０号明細書に記載）、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックマウスの使用、又は既知のハイブリドーマ技法（例えば、Larrick et al., Biotechnology, Vol.7, 1989, p.934を参照）が挙げられる。全てのこれらの技法は、ヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体に対する免疫グロブリンを生成するのに使用することができ、且つこのような免疫グロブリンのＣＤＲは、即ち上記で概説されるように、本発明のナノボディにおいて使用することができる。例えば、このようなＣＤＲの配列は、本明細書中に記載されるもの等のそれ自体が既知の技法を全て用いて、測定、合成及び／又は単離して、本発明のナノボディの配列（例えば、対応する従来のＣＤＲに取って代わるように）に挿入することができ、又は、ここでも同様に、本明細書中に記載の技法を用いて、このようなＣＤＲ（又はこのようなＣＤＲをコードする核酸）を含有する本発明のナノボディをデノボ合成することができる。
本発明のアミノ酸配列、ナノボディ、ポリペプチド、核酸、遺伝子構築物、並びに宿主及び宿主細胞のさらなる使用は、本明細書中の開示に基づき当業者にとって明らかであろう。例えば、限定するものではないが、本発明のアミノ酸配列は、好適な担体又は固体支持体と連結することができ、組成物及び組成物を含む調製剤からヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体を精製するそれ自体が既知の方法で使用することができる培地をもたらす。好適な検出可能な標識を含む本発明のアミノ酸配列の誘導体はまた、組成物又は調製剤中のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の存在を（定性的に又は定量的に）測定するマーカーとして、又は（例えば、好適な細胞選別技法と組み合わせて）細胞又は組織の表面上のヘテロ二量体サイトカイン及び／又はそれらの受容体の存在を選択的に検出するマーカーとして使用することができる。
これより本発明は、以下の非限定的な実施例及び図面によりさらに説明される。
実施例５に記載のようにＩＬ１２Ｒβ１鎖又はＩＬ２３Ｒ鎖の結合に関する（ペリプラズム画分における）ナノボディのＩＬ２３中和活性を示す競合的結合ＥＬＩＳＡの代表的結果を示す図である。平均結合受容体を１とする。ナノボディを実施例３ｂのように選択した。 実施例６に記載の細胞ベースの増殖アッセイの結果を示す図である。 ｐ１９＋Ｎｂ １２１Ａ２、ｐ１９＋Ｎｂ １１９Ａ３、ｐ４０−Ｎｂ ８０Ｄ１０、ｐ４０−Ｎｂ ８０Ｃ１０、ｐ４０＋Ｎｂ ８１Ｅ１０及びｐ４０＋Ｎｂ １２１Ｃ１に関する全ビアコア解析を示す図である。 選択された一価のＮｂに関するビアコア解離と、交差反応性と、及びエピトープ「グループ分け」データとを示す図である。R&D systems又はeBiosciences由来のｈＩＬ−２３に関するビアコア解離速度を、ｐ１９＋ナノボディ及びｐ１９−ナノボディ並びに１つのｐ４０−Ｎｂのパネルで求め、データを表２に示す。 一価のｐ１９＋ナノボディと比較して二重パラトピックナノボディの効力を求めるためのｈＩＬ−２３とｈＩＬ２３Ｒ−Ｆｃとの結合を測定するアルファスクリーン（図５Ｂに示すように構成される）の結果を示す図である。図５Ａは、結果のグラフ図である。図６及び図７も参照されたい。 ｈＩＬ−２３−ｈＩＬ−２３Ｒアルファスクリーンにおける一価ナノボディ及び二重パラトピックナノボディの効力を示す図である。 ｈＩＬ−２３−ｈＩＬ−２３Ｒアルファスクリーンにおける一価ナノボディ及び二重パラトピックナノボディの効力を示す図である。 一価ナノボディ及び二重パラトピックナノボディ（ｐ１９＋−３５ＧＳ−ｐ１９−及びｐ１９＋−３５ＧＳ−ｐ４０−）の選択に関する（ｍＩＬ−１７レベルを測定する）脾細胞バイオアッセイ結果を示す図である。 選択されたｐ１９−（非中和）ナノボディ及びｐ１９＋（中和）ナノボディを用いたビアコアデータを示す図である。 選択されたｐ４０−（非中和）ナノボディ及びｐ４０＋（中和）ナノボディを用いたビアコアデータを示す図である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２ナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２３Ｒ配列」（この場合、抗ＩＬ−２３Ｒナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２３Ｒ配列」（この場合、抗ＩＬ−２３Ｒナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２３Ｒ配列」（この場合、抗ＩＬ−２３Ｒナノボディ）のフレームワーク領域及びＣＤＲを示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ１９−配列」（この場合、ｐ１９−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０−配列」（この場合、ｐ４０−ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ４０＋配列」（この場合、ｐ４０＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。（＊） 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ｐ３５配列」（この場合、抗ｐ３５ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 マウスｐ１９に対する幾つかの「ｐ１９＋配列」（この場合、ｐ１９＋ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２７配列」（この場合、抗ＩＬ−２７ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ１配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ１ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−１２Ｒｂ２配列」（この場合、抗ＩＬ−１２Ｒｂ２ナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２３Ｒ配列」（この場合、抗ＩＬ−２３Ｒナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な「ＩＬ−２３Ｒ配列」（この場合、抗ＩＬ−２３Ｒナノボディ）のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つの抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び／又は二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的なヒト化及び／又は突然変異抗ｐ１９配列の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つのヒト化抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な、少なくとも１つのヒト化抗ｐ１９配列（即ちｐ１９＋配列若しくはｐ１９−配列、又はその両方）を含む多価、多重特異性及び二重パラトピック構築物の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多重特異性「ｐ１９−ｐ４０」構築物（即ち少なくとも１つの抗ｐ１９配列及び少なくとも１つの抗ｐ４０配列を含む）の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多重特異性「ｐ１９−ｐ４０」構築物（即ち少なくとも１つの抗ｐ１９配列及び少なくとも１つの抗ｐ４０配列を含む）の例のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックｐ４０構築物のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックｐ４０構築物のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックｐ４０構築物のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多価、多重特異性及び／又は二重パラトピックｐ３５構築物のアミノ酸配列を示す表である。 幾つかの好ましいが非限定的な多重特異性「ｐ３５−ｐ４０」構築物（即ち少なくとも１つの抗ｐ３５配列及び少なくとも１つの抗ｐ４０配列を含む）のアミノ酸配列を示す表である。 ｈＩＬ−２３を使用するアルファスクリーンにおける幾つかの抗ｐ１９配列及び抗ｐ４０配列の効力の測定に関して実施例２２で得られた結果を示すグラフである。 ｃｙｎｏＩＬ−２３を使用するアルファスクリーンにおける幾つかの抗ｐ１９配列及び抗ｐ４０配列の効力の測定に関して実施例２２で得られた結果を示すグラフである。 実施例２４で得られるようなエピトープマッピングの結果を示すグラフである。 実施例２４で得られるようなエピトープマッピングの結果を示すグラフである。 ｈＩＬ−２３による刺激後のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の測定に関して実施例２５で得られた結果を示すグラフであり、その合成は、一価の抗ｐ４０ナノボディで遮断することができる。 カニクイザルＩＬ−２３による刺激後のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の測定に関して実施例２５で得られた結果を示すグラフであり、その合成は、一価の抗ｐ１９ナノボディで遮断することができる。 実施例２６で得られるように、ｈ−ＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３サブクローン４Ｄ９のフローサイトメトリ解析の結果を示す図である。マウス抗ｈＩＬ−１２Ｒβ１抗体、その後のＰＥ標識ポリクローナル抗マウスＩｇ抗体により検出を行った。細胞でのｈ−ＩＬ１２Ｒβ１の存在を、ＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ＋１０％ ＦＢＳ）、その後のＰＥ標識ポリクローナル抗マウスＩｇ抗体とインキュベートした細胞と比較して、蛍光強度の増大により測定した。蛍光強度をＸ軸にプロットし、事象数をＹ軸にプロットする。非染色細胞のＦＡＣＳプロファイルも示す。 ［メチル−３Ｈ］−チミジン取り込み［ＯＮパルス］を用いた読み出しとして幾つかの濃度のｈＩＬ−２３との７２時間のインキュベーション後に細胞増殖アッセイにおいて幾つかのＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒ単細胞クローンのｈＩＬ−２３反応性に関して実施例２６で得られた結果を示すグラフである。 一価（ｐ１９＋：１１９Ａ３、３７Ｄ５−ＡＬＢ１、ｐ１９−：８１Ａ１２、８１Ｇ２）ナノボディによりｈＩＬ−２３ＲとのｈＩＬ−２３相互作用の阻害に関して実施例３４で得られた結果を示すグラフである。 二重パラトピック（２３ＩＬ００４９、２３ＩＬ００４１、２３ＩＬ００３８）ナノボディによりＩＬ−２３ＲとのＩＬ−２３相互作用の阻害に関して実施例３４で得られた結果を示すグラフである。 ｈＩＬ−２３の最適な注入頻度の決定に関して最適なｍＩＬ−２２合成を得るための実施例３５で得られた結果を示すグラフである。１×３μｇ、２×３μｇ又は３×３μｇのｈＩＬ−２３（グラフの第１の部分）の投与の際にマウス脾細胞アッセイでｍＩＬ２２を測定した。グラフの第２の部分で、最初のｈＩＬ−２３注入の２時間前、又は２９時間後にＰ２３ＩＬ００３６を注入した場合のｍＩＬ２２産生阻害をモニタリングする。平均ｍＩＬ−２２合成を、群４と比較した％変化で表す。 異なる投与経路を介した２３ＩＬ００３６又はＩＲＲ００７の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成阻害に関して実施例３５で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。 ナノボディ（図４９Ａ：２３ＩＬ００４９、図４９Ｂ：２３ＩＬ００４１、図４９Ｃ：２３ＩＬ００３８）又は陽性の対照抗体（図４９Ｄ：ＢＭ０１）の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例３６で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。 ２３ＩＬ００５４及び２３ＩＬ００５０の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例３７で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。 本発明のヒト化アミノ酸配列及び対応する野生型配列及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列の配列アラインメントを示す図である。野生型ナノボディとヒト生殖系列配列との間のフレームワーク領域におけるアミノ酸差異を黒色の囲み枠で示し、ＣＤＲ領域を灰色で強調した。ヒト化配列における黒色の囲み枠は、野生型配列と比較して変化した残基を示す。図５１Ａ：Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列を有する最終ヒト化変異体のアラインメントを示す図である。図５１Ｂ：Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列を有する最終ヒト化変異体のアラインメントを示す図である。図５１Ｃ：Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列を有する最終ヒト化変異体のアラインメントを示す図である。 本発明のヒト化アミノ酸配列及び対応する野生型配列及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列の配列アラインメントを示す図である。野生型ナノボディとヒト生殖系列配列との間のフレームワーク領域におけるアミノ酸差異を黒色の囲み枠で示し、ＣＤＲ領域を灰色で強調した。ヒト化配列における黒色の囲み枠は、野生型配列と比較して変化した残基を示す。図５１Ｄ：Ｐ２３ＩＬ３７Ｄ５及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列を有するヒト化変異体のアラインメントを示す図である。図５１Ｅ：Ｐ２３ＩＬ１２４Ｃ４及びＶＨ３−２３／ＪＨ５生殖系列配列を有するヒト化変異体のアラインメントを示す図である。 フォーマットされたヒト化ナノボディによるＩＬ−２３ＲとのＩＬ−２３相互作用の阻害に関して実施例４０で得られた結果を示すグラフである。 ２３ＩＬ００６４とヒト血清アルブミンとの結合に関して実施例４０で得られた結果を示すグラフである。 ナノボディ又は陽性対照抗体の投与の際のｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例４１で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。 ナノボディ又は陽性対照抗体の投与の際のｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例４１で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。 ２つの異なる用量レベルでのＢＭ０１、２３ＩＬ４００及び２３ＩＬ４０３の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例４７で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。（＊）備考：Ｐ２３ＩＬｐ４０−ＰＭＰ８４Ｇ１２はｐ４０の部分遮断因子であり、したがって図１３及び図１４と、図２２及び図２３との両方で言及される。
実験部：
実施例１：免疫付与
２頭のラマに、標準的なプロトコルに従って、サイトカインカクテル（２×４０ｕｇ＋４×２０ｕｇ、等量のヒトＩＬ１２、ＩＬ２３及びＩＬ２７を含有する）の６回の追加免疫（boosts）で免疫付与した。６回目の追加免疫の７日後及び１０日後に、これらの動物から血液及びリンパ節を回収した。３つのサイトカインは全て、R&D systemsから購入した組み換えタンパク質であった：ｈＩＬ−１２（カタログ番号２１９−ＩＬ／ＣＦ）、ｈＩＬ−２３（カタログ番号１２９０−ＩＬ／ＣＦ）及びｈＩＬ−２７（カタログ番号２５２６−ＩＬ／ＣＦ）。
実施例２：ライブラリ構築
製造元の取扱説明書に従って、フィコール−ハイパークを使用して、血液試料から末梢血単球細胞を調製した。次に、これらの細胞とリンパ節弓（bow）細胞とから全ＲＮＡを抽出して、ナノボディコード化遺伝子断片を増幅するＲＴ−ＰＣＲの出発物質として使用した。これらの断片を、ファージミドベクターｐＡＸ５０にクローン化した。標準的な方法に従って、ファージを調製し（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）、さらなる使用のために４℃で保存し、２つのファージライブラリを得た（「Ａ」及び「Ｂ」）。
実施例３ａ：選択（Selections：抽出）
サイトカインを認識するナノボディを同定するために、実施例２のファージライブラリを、免疫付与サイトカイン及びビオチン化サイトカインでの選択に使用した。ビオチン化タンパク質を選択に使用する際に予めニュートラアビジン（５ｕｇ／ｍｌ）をコーティングしたＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上で（ビオチン化）タンパク質を５μｇ／ｍｌ、０．５ｕｇ／ｍｌ又は０ｕｇ／ｍｌ（対照）で独立して固定した。結合ファージを、標準的なプロトコルのようにトリプシン（１ｍｇ／ｍｌ）を使用してＩＬ１２、ＩＬ２３又はＩＬ２７（及びビオチン化形態）から溶出した。
両方のＲ１選択の出力（Outputs）を、濃縮因子（対照に対して溶出液に存在するファージの数）に関して解析した。これらのパラメータに基づき、さらなる解析のために最良の選択を選んだ。それから、出力ポリクローナル抗体をＰＡＸ５１で再びクローン化して、個々のＴＧ１コロニーを摘み取り、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で成長させ、ナノボディ発現のためにＩＰＴＧを添加することによって誘導した。標準的な方法に従って、ペリプラズム抽出物（容量：約１００ｕｌ）を調製した（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）。
実施例３ｂ：ｈＩＬ１２又はｈＩＬ２３特異的ナノボディの選択
ｈＩＬ１２又はｈＩＬ２３を特異的に認識し、それによりそれぞれＩＬ１２ｐ３５又はＩＬ２３ｐ１９を認識するするナノボディを同定するために、関連の対抗選択により２回の選択を行った。
ＩＬ２３特異的ナノボディでは、２．５ｕｇ／ｍｌのＩＬ２３をＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。ライブラリ１４６及びライブラリ１４７由来のファージを、１０ｕｇのＩＬ１２（１００ｕｇ／ｍｌ）の存在下でコーティングウェルに添加した。ＩＬ１２の存在により、（ＩＬ１２ｐ４０上の）非特異的ＩＬ２３エピトープを認識するファージがＩＬ２３と結合するのが妨げられる。ＩＬ１２特異的ナノボディを同定するために、２．５ｕｇ／ｍｌのＩＬ１２をコーティングし、１０ｕｇのＩＬ２３（１００ｕｇ／ｍｌ）をファージと共に添加して同様のことを行った。全ての場合で、結合ファージを、標準的なプロトコルを用いて、トリプシン（１ｍｇ／ｍｌ）を使用して溶出した（Ｒ１）。
１回目で溶出したファージを、１回目と同じ条件を用いて２回目を行うのに使用し、Ｒ２を得た。
Ｒ２選択の出力を回収し、標準的なポリクローナル再クローニングを使用してＰＡＸ５１でクローン化した。ＰＡＸ５１発現ナノボディを含有する個々のコロニーを摘み取り、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で成長させ、ナノボディ発現のためにＩＰＴＧを添加することによって誘導した。標準的な方法に従って、ペリプラズム抽出物（容量：約１００ｕｌ）を調製した（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）。
実施例３ｃ：マウスＩＬ１２又はマウスＩＬ２３特異的ナノボディの選択
動物試験を完了するためには、マウスサイトカインアイソフォームを認識するナノボディを有するのが望ましい。マウスＩＬ１２又はマウスＩＬ２３と交差反応するナノボディを同定するために、１つのアプローチは、マウスＩＬ１２又はＩＬ２３との交差反応性に関してヒトＩＬ１２／ＩＬ２３に対してこれまでに同定されたナノボディを試験することである。幾つかのナノボディの交差反応はこのようにして同定された。
第２のアプローチは、ヒトＩＬ１２及びＩｌ２３に指向性を有する実施例２のライブラリからファージを直接選択することである。したがって、マウスＩＬ１２（１００ｕｌ中の５ｕｇ／ｍｌ、カタログ番号４１９−ＭＬ／ＣＦ、R&Dsystem）又はマウスＩＬ２３（１００ｕｌ中の５ｕｇ／ｍｌ、カタログ番号１８８７−ＭＦ／ＣＦ、R&Dsystem）をコーティングした以外は実施例３ａと同様に選択を行った。さらに、対抗選択としてマウスＩＬ１２（ＩＬ２３をコーティングした場合）及びヒトＩＬ２３（ＩＬ１２をコーティングした場合）の存在下で同じ選択を行った。
第３のアプローチは、実施例３ｂと同様にＲ１中に溶出したファージからファージを直接選択することである（この場合、このアプローチは対抗選択と共にヒトＩＬでは１回であり、マウスＩＬでは２回である）。したがって、マウスＩＬ１２（１００ｕｌ中の５ｕｇ／ｍｌ、カタログ番号４１９−ＭＬ／ＣＦ、R&Dsystem）又はマウスＩＬ２３（１００ｕｌ中の５ｕｇ／ｍｌ、カタログ番号１８８７−ＭＦ／ＣＦ、R&Dsystem）をコーティングした以外は実施例３ｂと同様に２回目の選択を行った。並行して、特異的なマウスＩＬ１２及びマウスＩＬ２３を同定するために、対抗選択タンパク質として作用する、マウスＩＬ１２（ＩＬ２３をコーティングした場合）及びヒトＩＬ２３（ＩＬ１２をコーティングした場合）の存在下で同様のことを行った。
全ての選択において、結合ファージを、トリプシンを使用して溶出し、ＴＧ１中で回収した。個々のＴＧ１コロニーを摘み取り、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で成長させ、ナノボディ発現のためにＩＰＴＧを添加することによって誘導した。標準的な方法に従って、ペリプラズム抽出物（容量：約１００ｕｌ）を調製した（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）。
実施例４：結合に関するスクリーニング
サイトカインとの結合特異性を求めるために、クローンをＥＬＩＳＡ結合アッセイ構成で試験した。
要するに、１ｕｇ／ｍｌのサイトカイン（ＩＬ１２、ＩＬ２３又はＩＬ２７）をｐｏｌｙｓｏｒｐマイクロタイタープレート（Nunc）上に直接固定した。自由結合部位を４％ ＭａｒｖｅｌのＰＢＳ溶液を使用して遮断した。次に、２％ ＭａｒｖｅｌのＰＢＳＴ溶液１００ｕｌ中に異なるクローンのナノボディを含有するペリプラズム抽出物５ｕｌを固定抗原に結合させた。インキュベーション及び洗浄の後、ナノボディ結合をマウス抗ｍｙｃ二次抗体を使用して明らかにし、この二次抗体を洗浄工程後にＨＲＰ結合ヤギ抗マウス抗体で検出した。結合特異性を、（表Ｂ−１に例示されるように）ナノボディを摂取していない対照と比較したＯＤ値に基づき求めた。ｐ４０とのナノボディ結合は、ＩＬ１２及びＩＬ２３を認識するナノボディとして同定した。
実施例５：中和活性に関するスクリーニング
ナノボディの中和効率を求めるために、クローンを受容体結合アッセイ（競合ＥＬＩＳＡ）で試験した。サイトカインを９６ウェル（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Nunc）でコーティングした。通常通り洗浄及び遮断した後、コーティングサイトカインを、上記のものから調製されたペリプラズム画分１５ｕｌと共にインキュベートした。最後に、ヒトＦｃ（R&D systemから購入した組み換えタンパク質）に融合された特異的受容体鎖を添加した。
洗浄後、結合受容体の存在を、抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ抗体を使用して検出した。ペリプラズムに存在するナノボディがサイトカインを中和する（即ち結合する受容体と競合する）場合、結合受容体は検出されなかった。全ての場合で、試験されたタンパク質の濃度は、準最適応答を得るのに使用した（表Ｂ−２は例を示し、図１は代表的な結果を示す）。ＩＬ１２では、ＩＬ１２Ｒβ１又はＩｌ１２Ｒβ２を使用した。ＩＬ２３では、ＩＬ１２Ｒβ１又はＩＬ２３Ｒを使用した。
ＩＬ２７では、ＩＬ２７Ｒを使用した。
実施例６：細胞ベースのアッセイにおける中和活性
実施例４の結果に基づき、及び／又はこれらの配列（ＩＬ１２選択でのみ存在し、ＩＬ２３選択では見いだされない、例えばＩＬ１２に特異的であることが示唆されたナノボディのファミリー）に基づき、細胞上の中和活性を試験するために幾つかのナノボディを選択した。
これらの（ＰＡＸ５１プラスミドでコードされた）選択ナノボディを、標準的なＩＰＴＧ誘導を用いて細菌培養液（５０ｍｌ）中に産生し、製造元により推奨されるようにＴＡＬＯＮビーズを使用して精製した（イミダゾールを使用してビーズから溶出し、滅菌ＰＢＳに対して透析した）。
ＩＬ１２に対するナノボディを試験するために、ＰＨＡで３日間＋ＩＬ−２で１日間活性化したＰＢＭＣを使用した。それから本発明者らは、（広範な抗ＩＬ−１２ナノボディの存在下で）ＩＬ−１２を添加した。２日後、増殖を３Ｈ−チミジン取り込みで測定した。
この構成を用いて、６０ｐｇ／ウェル（＝３００ｐｇ／ｍｌ）のｒｈＩＬ−１２で最大増殖を得た。そのため、精製ナノボディ（１μｇ／ウェル〜１０−６μｇ／ウェルまで変わる濃度）を６０ｐｇ／ウェルのＩＬ−１２に対して試験した。ＬＧ１２０Ｃ７抗体及び１２０Ｆ８抗体を市販の抗体（抗ｐ３５及び抗ｐ４０、ＭＡＢ２１９及びＭＡＢ１５１０はそれぞれ、R&D system製のものであり、Ｂ−Ｔ２１はDiaclone製のものであった）に対して試験した。結果を図２に示す。
実施例７：免疫付与：
２頭のラマに、ヒトＩＬ１２Ｒβ１−ｈＦｃ（カタログ番号８３９−Ｂ１／ＣＦ）、ヒトＩＬ１２Ｒβ２−ｈＦｃ（カタログ番号１９５９−Ｂ２−ｂ１／ＣＦ）及びヒトＩＬ２３Ｒ（カタログ番号１４００−ＩＲ／ＣＦ）のカクテル（各２×４０ｕｇ＋各４×２０ｕｇ）を免疫付与した。実質的に実施例１に記載されるように免疫付与を行った。
実施例８：ライブラリ構築
実質的に実施例２に記載されるようにライブラリ（「Ｃ」及び「Ｄ」）の構築を行った。
実施例９ａ：ＩＬ１２−ファミリー受容体に対するナノボディの選択
ＩＬ１２−ファミリーサイトカインの受容体を認識するナノボディを同定するために、２つのライブラリ（「Ｃ」及び「Ｄ」）由来のファージを、免疫付与組み換えタンパク質での選択に使用した。タンパク質をＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上で５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ又は０μｇ／ｍｌ（対照）で独立して固定した。
組み換えタンパク質と融合したＦｃ融合ドメインに結合するファージを取り除くため、全ヒトＩｇＧ（２５０μｇ／ｍｌ（sigma））及び非関連性ｈＦｃ融合タンパク質（ｈＲＡＧＥ−Ｆｃ、２５μｇ／ｍｌ（R&DSystem））を、選択期間中にファージに添加した。
標準的なプロトコルと同様にトリプシン（１ｍｇ／ｍｌ）を使用してコーティングタンパク質から結合ファージを溶出した。
実施例９ｂ：ＩＬ１２−ファミリー受容体を中和するナノボディの選択
たった０．５ｕｇ／ｍｌの受容体をコーティングし、トリプシン溶出の代わりに競合溶出を行った以外は、実施例９ａに記載されるようにこれを行った。このため、ファージの結合及び広範な洗浄後、各受容体鎖のリガンドを、ファージを溶出するのに使用した。要するに、５ｕｇのＩＬ１２（ＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ１２Ｒβ２では）又は５ｕｇのＩＬ２３（ＩＬ１２Ｒβ１又はＩＬ２３Ｒでは）を依然としてコーティング受容体に結合しているファージに添加した。２時間の共存の後、溶出ファージを回収し、ＴＧ１中で回収した。
両方のＲ１選択の出力を、濃縮因子（対照に対して溶出液に存在するファージの数）に関して解析した。これらのパラメータに基づき、さらなる解析のために最良の選択を選んだ。それから、（トリプシン溶出のみのために）出力ポリクローナル抗体をＰＡＸ５１で再びクローン化して、個々のＴＧ１コロニーを摘み取り、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で成長させ、ナノボディ発現のためにＩＰＴＧを添加することによって誘導した。標準的な方法に従って、ペリプラズム抽出物（容量：約１００ｕｌ）を調製した（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）。
実施例１０：結合に関するスクリーニング
受容体鎖との結合特異性を求めるために、クローンをＥＬＩＳＡ結合アッセイ構成で試験した。
２ｕｇ／ｍｌのタンパク質（ＩＬ１２Ｒｂ１、ＩＬ１２Ｒｂ２又はＩＬ２３Ｒ）又は全ｈＩｇＧ（１５ｕｇ／ｍｌ）をｍａｘｉｓｏｒｐマイクロタイタープレート（Nunc）上に直接固定した。自由結合部位を４％ ＭａｒｖｅｌのＰＢＳ溶液を使用して遮断した。次に、２％ ＭａｒｖｅｌのＰＢＳＴ溶液１００ｕｌ中に異なるクローンのナノボディを含有するペリプラズム抽出物７．５ｕｌを固定抗原に結合させた。インキュベーション及び洗浄の後、ナノボディ結合をマウス抗ｍｙｃ二次抗体を使用して明らかにし、この二次抗体を洗浄工程後にＡＰ結合ヤギ抗マウス抗体で検出した。結合特異性を、（図１に例示されるように）ナノボディを摂取していない対照及びｈＩｇＧコーティングウェル（ｈＩｇＧと結合するナノボディはＦｃとは結合するが、受容体鎖とは結合しない）と比較したＯＤ値に基づき求めた。結果を表Ｂ−３に示す。
実施例１１：中和活性に関するスクリーニング
ナノボディの中和効率を求めるために、ＩＬ１２／ＩＬ２３及びＩＬ２７に関してこれまでに行ってきたように、クローンを受容体結合アッセイ（競合ＥＬＩＳＡ）で試験した。要するに、サイトカインを９６ウェル（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Nunc）でコーティングした。通常通り洗浄及び遮断した後、コーティングサイトカインを、上記のものから調製されたペリプラズム画分１５ｕｌと共にインキュベートした。最後に、ヒトＦｃ（R&D systemから購入した組み換えタンパク質）に融合された特異的受容体鎖を添加した。洗浄後、結合受容体の存在を、抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ抗体を使用して検出した。ペリプラズムに存在するナノボディがサイトカインを中和する（即ち結合する受容体と競合する）場合、結合受容体は検出されなかった。全ての場合で、試験されたタンパク質の濃度は、準最適応答を得るのに使用した（例として与えられるデータに関しては表Ｂ−４を参照されたい）。ＩＬ１２では、ＩＬ１２Ｒβ１又はＩｌ１２Ｒβ２を使用した。ＩＬ２３では、ＩＬ１２Ｒβ１又はＩＬ２３Ｒを使用した。ＩＬ２７では、ＩＬ２７Ｒを使用した。
実施例１２：ＩＬ−２３の一価のｐ１９＋ナノボディ、ｐ１９−ナノボディ、並びにＩＬ−２３／ＩＬ−１２のｐ４０＋ナノボディ、及びｐ４０−ナノボディのビアコア解析
ｈＩＬ−２３（R&D systemsから入手した）又はｈＩＬ−１２（これもR&D systemsから入手した）をビアコアチップと結合させ、ｐ１９＋ナノボディ、ｐ４０＋ナノボディ及びｐ４０−ナノボディの選択の結合特性を求めた。ｐ１９＋ナノボディ１２１Ａ２、ｐ１９＋ナノボディ１１９Ａ３に関する、ｐ４０−ナノボディ８０Ｄ１０、ｐ４０−ナノボディ８０Ｃ１０に関する、並びにｐ４０＋ナノボディ８１Ｅ１０及びｐ４０＋ナノボディ１２１Ｃ１に関するビアコア解析結果を図３に示す。
ビアコア
一価ナノボディの交差反応性プロファイル（図４を参照されたい）を、ビアコア実験（ｍＩＬ−２３）及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−２３（トランスフェクト細胞由来の上清）を使用するＥＬＩＳＡで試験した。ここで、試験するナノボディをプレートと結合させ、ｃｙｎｏＩＬ−２３を添加し、抗ｐ４０ｍＡｂ（ｍＡＢ１５１０、R&D）を使用して結合を明らかにした。
ビアコアを使用してエピトープマッピング実験を行い、一価のナノボディをチップに結合させ、ｈＩＬ−２３を捕捉するのに使用した。続いて、結合能に関して他の一価のナノボディを試験した。ナノボディは、ビアコアチップに固定されたナノボディと既に結合しているｈＩＬ−２３とさらに結合することができる場合に別々のエピトープ群と結合すると見なした。結合できないナノボディは、固定ナノボディと同じエピトープ群に属すると見なした（結果を図４にも示す）。
図４は、選択された一価のナノボディに関するビアコア解離速度と、交差反応性と、エピトープ「グループ分け」データとを示す。R&D systems（又はeBiosciences）由来のｈＩＬ−２３を使用して、ｐ１９＋ナノボディ及びｐ１９−ナノボディ並びに１つのｐ４０−ナノボディのパネルでビアコア解離速度を求めた。
実施例１３：二重特異性／二重パラトピックＩＬ２３ナノボディ構築物の構築、産生及び精製
二重パラトピック構築物を、Ｎ末端位置にｐ１９＋ナノボディ（１２１Ａ２又は１１９Ａ３）、及び３５ＧＳリンカー配列で融合されたＣ末端位置にｐ１９−ナノボディ（８１Ｇ２、８１Ａ１２、１２３Ｆ１、１１９Ｇ７、１２４Ｃ４又は１２４Ｈ５）又はｐ４０−ナノボディ（１１９Ｂ２）を用いてｐＡＸ５５ベクターにおいて作製した。さらに構築物を、Ｎ末端位置にｐ１９−ナノボディ（８１Ｇ２、８１Ａ１２、１２３Ｆ１、１１９Ｇ７、１２４Ｃ４又は１２４Ｈ５）、及び３５ＧＳリンカーで融合されたＣ末端位置にｐ１９＋ナノボディ１２１Ａ２を用いて作製した。また同様に、一価のナノボディを対照として使用するためにｐＡＸ５５にクローン化した。
構築物を、１ｍＭのＩＰＴＧを用いて誘導されたＴＧ１細胞で形質転換した。ヒスチジントラップ親和性クロマトグラフィ、その後脱塩処理を用いて、ナノボディをペリプラズム抽出物から精製した。中性ｐＨでのアニオン交換クロマトグラフィ、又はさらに精製が必要であった場合、５０ｍＭのオクチル−グリコシルピラノシドの存在下でのゲル濾過により、ＬＰＳの除去を行った。
実施例１４：ＩＬ−２３−ＩＬ２３Ｒ結合のアルファスクリーン遮断
アルファスクリーンアッセイを行い、一価のｐ１９＋ナノボディと比較して二重パラトピックナノボディの効力を求めるために、ｈＩＬ２３Ｒ−ＦｃとのｈＩＬ−２３結合の遮断（図５ｂを参照されたい）をモニタリングした。結果を図５Ａ、図６及び図７に示す。
図５は、一価のｐ１９＋ナノボディと比較して二重パラトピックナノボディの効力を求めるために、ｈＩＬ２３Ｒ−ＦｃとのｈＩＬ−２３結合を測定するアルファスクリーンアッセイの結果を示す（図５Ｂを参照されたい）。図５Ａは結果を表すグラフである。図６及び図７は、ｈＩＬ−２３−ｈＩＬ−２３Ｒアルファスクリーンにおける一価及び二重パラトピックのナノボディの効力を示す。
実施例１５：ＩＬ−２３ナノボディによるＩＬ−２３の生物学的機能の中和
新たに単離したマウス脾細胞を、滴定ｈＩＬ−２３ナノボディ又は対照ナノボディ又は抗体と共にプレインキュベートしたｈＩＬ−２３（eBiosciences）で処理した。培養下で３日〜７日後、細胞上清を取り除き、ＩＬ−１７ ＥＬＩＳＡデュオセット（R&D systems）を使用するＥＬＩＳＡにより化学分析した。図８は、一価及び二重パラトピックのＮｂ（ｐ１９＋−３５ＧＳ−ｐ１９−及びｐ１９＋−３５ＧＳ−ｐ４０−）の選択のための（ｍＩＬ−１７レベルを測定する）脾細胞バイオアッセイの結果を示す。Aggarwal, Journal of Biological Chemistry, 278, 3, 2003, 1910-1914に対する言及が為される。
図８に示されるように、一価ｐ１９＋ＮｂはｈＩＬ−２３媒介性のＩＬ−１７産生を阻害し、ほとんどの二重パラトピックＮｂがかなりの効力の向上を示す。
実施例１６：免疫付与
２頭のラマに、標準的なプロトコルに従って、組換えヒトＩＬ−２３（R&DSystems, Minneapolis, MN, US）を１週間間隔で６回筋肉内注射で免疫付与した（初めの２回の注射 ４０μｇ／投与、続く４回の注射 ２０μｇ／投与）。最後の注射の２週間後、２０μｇの追加免疫を与えた。抗原をＳｔｉｍｕｎｅ（Cedi-Diagnostics B.V., Lelystad, The Netherlands）中で配合した。３週目で、血清を回収し、ＥＬＩＳＡによりヒトＩＬ−２３に対する抗体力価を規定した。９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレート（Nunc, Wiesbaden, Germany）にヒトＩＬ−２３をコーティングした。希釈血清試料を遮断及び添加した後、抗ＩＬ−２３抗体の存在を、ＨＲＰ（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）結合ヤギ抗ラマ免疫グロブリン（Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, Texas USA）、及びその後のＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）基質（Pierce, Rockford, IL, USA）の存在下での酵素反応を使用することにより実証した。ＯＤ４５０ｎｍは、両方の動物で１を超えた。血液及びリンパ節を、これらの動物の最後の注射の４日後及び８日後の血液、並びに追加免疫の１３日後のリンパ節から回収した。
実施例１７：ライブラリ構築
製造元の取扱説明書に従って、フィコール−ハイパークを使用して、血液試料から末梢血単球細胞を調製した。次に、これらの細胞とリンパ節弓細胞とから全ＲＮＡを抽出して、ナノボディコード化遺伝子断片を増幅するＲＴ−ＰＣＲの出発物質として使用した。これらの断片を、ファージミドベクターｐＡＸ５０にクローン化した。標準的な方法に従って、ファージを調製し（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）、さらなる使用のために４℃で保存し、２つのファージライブラリを得た（「Ｅ」及び「Ｆ」）。
実施例１８：抗ＩＬ−２３のｐ１９及びｐ４０ナノボディの新規の選択
ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットを具体的に認識するナノボディを同定するために、５ｎＭ又は０．５ｎＭのヒトＩＬ−２３（R&D Systems, Minneapolis, MN, US）をＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。ライブラリＥ及びライブラリＦ由来のファージを、（ｐ４０結合ファージを除去するため）５μｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１２でコーティングされたウェルへの結合により３分の１に予め枯渇させ、さらにＩＬ−２３コーティングウェルに添加する前に、溶液中で１μＭのｈＩＬ−１２と共にプレインキュベートした。具体的には、ファージを、５００ｎＭの二重パラトピック抗ｐ１９ナノボディ若しくは５００ｎＭの組み換えＩＬ−２３Ｒ（R&D Systems, Minneapolis, MN, US）のいずれかで溶出するか、又は標準的なプロトコルに記載のようにトリプシンで溶出した。これらの１回の選択の出力を、濃縮因子（対照に対して溶出液に存在するファージの数）に関して解析した。このパラメータに基づき、１回目と同じ条件を用いる２回目の選択のために最良の出力を選んだ。これらの２回の選択の濃縮出力を、ｈＩＬ−２３対ｈＩＬ−１２との結合に関してＥＬＩＳＡでスクリーニングした。ｈＩＬ−２３との特異的な結合のほとんどが観察された。個々のＴＧ１コロニーを摘み取り、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で成長させ、ナノボディ発現のためにＩＰＴＧを添加することによって誘導した。標準的な方法に従って、ペリプラズム抽出物（容量：約１００ｕｌ）を調製した（例えば、従来技術及び本明細書中で言及される出願人によって出願された出願を参照されたい）。
ｐ４０結合ナノボディを上記のように得て、トリプシン（１ｍｇ／ｍｌ）を使用して結合ファージを溶出した。１回目の出力由来の個々のＴＧ１コロニーを摘み取り、成長させ、上記のように誘導した。クローンを、ｈＩＬ−２３対ｈＩＬ−１２との結合に関してＥＬＩＳＡでスクリーニングした。ｈＩＬ−２３及びｈＩＬ−１２の両方と結合するクローンを、ｐ４０結合因子としてのさらなる特徴付けのために選択した。
実施例１９：ｐ１９及びｐ４０結合ナノボディに関するスクリーニング、並びに受容体相互作用を遮断するｐ１９及びｐ４０ナノボディの同定
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニット又はｐ４０サブユニットとの結合特異性を求めるために、ペリプラズム抽出物をＥＬＩＳＡ結合アッセイ構成で試験した。このスクリーンには、ラマ１４６及びラマ１４７に由来するライブラリでの選択から得られたペリプラズム抽出物も含まれていた。
１μｇ／ｍｌのｈＩＬ−１２又はｈＩＬ−２３を、ｐｏｌｙｓｏｒｐマイクロタイタープレート（Nunc）上に直接固定した。自由結合部位を１％カゼインのＰＢＳ溶液を使用して遮断した。次に、異なるクローンのナノボディを含有するペリプラズム抽出物を１００μｌのＰＢＳ＋０．１％カゼイン＝０．０５％ ｔｗｅｅｎ中で５０倍に希釈し、固定抗体に結合させた。インキュベーション及び洗浄の後、ナノボディ結合を、ビオチン化抗Ｈｉｓ抗体を使用して明らかにし、この二次抗体を洗浄工程後にＨＲＰ結合エキストラビジン及びＴＭＢ基質で検出した。結合特異性を、ナノボディを摂取していない対照と比較したＯＤ値に基づき求めた。ｐ４０とのナノボディ結合はｈＩＬ−１２及びｈＩＬ−２３を認識するナノボディとして同定し、ｐ１９とのナノボディ結合はｈＩＬ−２３だけを認識するナノボディとして同定した。
カニクイザルＩＬ−２３に対する交差反応性をＥＬＩＳＡで試験し、カニクイザルＩＬ−２３を、固定抗ＩＬ−２３抗体（ＡＦ１７１６、R&D systems）を介してプレート上に結合させた。抽出物中に存在するナノボディの結合を、ＨＲＰ結合抗ｍｙｃ抗体及びＴＭＢ基質を使用して明らかにした。
発現ナノボディの中和効率を求めるために、ペリプラズム抽出物をｈＩＬ−２３又はｈＩＬ−１２アルファスクリーンアッセイでスクリーニングした。このアッセイは、生体分子と結合することができるドナービーズ及びアクセプタビーズの使用に依存する。分子間の生物学的相互作用によってビーズ同士が近づくと、ドナービーズにおける光増感剤による６８０ｎｍでのレーザー励起の際に発生する励起一重項酸素分子が拡散してアクセプタビーズにおける化学発光剤と反応し、これがフルオロフォアをさらに活性化し、その後５２０ｎｍ〜６２０ｎｍで発光させる。ナノボディがｈＩＬ−２３とｈＩＬ−２３Ｒとの結合又はｈＩＬ−１２とｈＩＬ−１２Ｒβ１との結合を阻害する場合、蛍光出力が低減し、ナノボディの存在量は、蛍光量と逆相関関係になる。
ｈＩＬ−１２（R&D Systems）及びｈＩＬ−２３（eBioscience）をスルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Pierce）を使用してビオチン化した。製造業者の取扱説明書（Perkin Elmer, Waltham, MA, US）に従って、ヒトＩＬ２３Ｒ−Ｆｃキメラ及びｈＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃキメラ（R&D Systems）を、アクセプタビーズと結合した。抗ｐ１９ナノボディの中和能を評価するために、希釈系列のペリプラズム抽出物をビオチン化ｈＩＬ−２３と共にプレインキュベートした。この混合物に、ＩＬ−２３Ｒ−Ｆｃ結合アクセプタビーズとストレプトアビジンドナービーズとを加え、室温でさらに１時間インキュベートした。６８０ｎｍの励起波長及び５２０ｎｍの発光波長を用いて、ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Perkin Elmer）でプレートを読み取ることによって蛍光を測定した。蛍光シグナルの低減は、ビオチン化ｈＩＬ−２３とＩＬ−２３受容体との結合が、ペリプラズム抽出物で発現したナノボディによって遮断されることを示しており、ナノボディは、中和される場合ｐ１９＋、中和されない場合ｐ１９−と称される。ｐ４０＋中和ナノボディ及びｐ４０−非中和ナノボディと共にビオチン化ｈＩＬ−１２及びｈＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃ結合アクセプタビーズを使用する以外は、抗ｐ４０ナノボディの中和能を同じように評価した。
実施例２０：抗ｐ１９の一価ナノボディ及び抗ｐ４０の一価ナノボディを含有するペリプラズム抽出物のビアコア解離速度スクリーニング
ヒトＩＬ−２３（eBioscience）は、活性化ではＥＤＣ／ＮＨＳ及び不活性化ではＨＣｌを使用して、アミンカップリングを介してＣＭ５センサーチップ表面と共有結合した。ｐ１９＋ナノボディ、ｐ１９−ナノボディ、ｐ４０＋ナノボディ又はｐ４０−ナノボディを含有するペリプラズム抽出物を、４５μｌ／分の流速で４分間、注入して、チップ結合抗原に結合させた。次に、ペリプラズム抽出物を有しない結合バッファーを同じ流速でチップに送り、結合ナノボディを自然解離させた。異なるペリプラズム抽出物で得られたセンサーグラムから、ｋｏｆｆ値（ｋｄ）を算出した（図９及び図１０）。対照としてｈＩＬ−１２（R&D systems）をビアコアチップ上に固定し、ｐ１９ナノボディはこのチップに結合しなかったのに対し、ｐ４０ナノボディは結合し、ｈＩＬ−２３と同様の解離速度を示した。
このビアコア解析に基づき、最適な解離速度を有するｐ１９及びｐ４０ナノボディを選択すると共に、シークエンシングした。シークエンシング解析後、これにより、４つのファミリーに属する６つの特有のｐ１９＋ナノボディ、２つのファミリーに属する２つの特有のｐ１９−ナノボディ、５つのファミリーに属する６つの特有のｐ４０＋配列及び６つのファミリーに属する６つの特有のｐ４０−配列が与えられた。実施例１〜実施例６で得られた配列と共に、これにより、合計７ファミリーのｐ１９＋ナノボディ、１５ファミリーのｐ１９−ナノボディ、１４ファミリーのｐ４０＋ナノボディ及び１１ファミリーのｐ４０−ナノボディが作製される。これらのナノボディのアミノ酸配列はそれぞれ、図２０〜図２３に挙げられる。
またペリプラズム抽出物を、固定ｍＩＬ−２３での解離速度を求めることによりマウスＩＬ−２３に対する交差反応性に関してスクリーニングした。２つのｐ１９−ファミリーをｍＩＬ−２３に対して交差反応させたが、ｐ１９＋、ｐ４０＋、ｐ４０−マウス交差反応性ナノボディはいずれも回復しなかった。
実施例２１：抗ＩＬ−２３ナノボディの発現及び精製
実施例２０の６つのｐ１９＋ナノボディ、実施例２０の１つのｐ１９−ナノボディ、実施例２０の１２個のｐ４０＋ナノボディ、及び実施例２０の８つのｐ４０−ナノボディを発現し、精製して、さらに特徴付けた。大腸菌ＴＧ１細胞においてｃ−ｍｙｃ、Ｈｉｓ６標識タンパク質として２５０ｍＬの培養容量で発現が起こった。発現を１ｍＭのＩＰＴＧの添加により誘導し、３７℃で３時間さらにインキュベートした。細胞培養液の回転（spinning down）後、ペリプラズム抽出物を、ペレットを凍結融解することにより調製し、ｄＰＢＳ中で再懸濁した。Ｈｉｓｔｒａｐ ＦＦ粗カラム（GE Healthcare）を用いる固定金属親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）の出発物質にこれらの抽出物を使用した。ナノボディを２５０ｍＭのイミダゾールでカラムから溶出させ、続いてｄＰＢＳに対して脱塩処理した。以下に記載される脾細胞アッセイのために、エンドトキシンをナノボディから取り除く必要があり、エンドトキシンが取り除かれたナノボディは、５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＧＰ、Sigma）の存在下でのゲル濾過、又はｄＰＢＳ中でのアニオン交換クロマトグラフィ（Ｍｏｎｏ Ｑ ＨＲ５／５０、GE healthcare）のいずれかにより得られ、ここでナノボディは流れの中で回収される一方で、ＬＰＳはカラム上に残る。ＬＰＳレベルを、ＬＡＬ−アッセイを使用して求める。
実施例２２：アルファスクリーンで求められた抗ｐ１９ナノボディ及び抗ｐ４０ナノボディを中和する効力
ｈＩＬ−１２（R&D Systems）、ｈＩＬ−２３（eBioscience）及びカニクイザルＩＬ−２３をスルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Pierce）を使用してビオチン化した。製造業者の取扱説明書（Perkin Elmer,Waltham, MA, US）に従って、ヒトＩＬ−２３Ｒ−Ｆｃキメラ及びｈＩＬ１２Ｒβ１−Ｆｃキメラ（R&DSystems, Minneapolis, MN, US）を、アクセプタビーズと結合した。
ｐ１９＋ナノボディの効力を求めるために、２５０ｎＭから始まり１ｐＭまでの希釈系列の抗ｐ１９ナノボディを、室温（ＲＴ）で１５分間５００ｐＭのビオチン化ｈＩＬ−２３又はｃｙｎｏＩＬ−２３と共にプレインキュベートした。この混合物に、ＩＬ−２３Ｒアクセプタビーズとストレプトアビジンドナービーズとを加え、室温でさらに１時間インキュベートした。ビオチン化ＩＬ−２３との全てのナノボディのプレインキュベーションにより、５２０ｎｍでの蛍光強度が低減し、これはナノボディが用量依存的にＩＬ−２３ＲとのｈＩＬ−２３結合を効率的に阻害することができることを実証していた。結果を図３７（ｈＩＬ−２３を使用するアルファスクリーンにおける幾つかの抗ｐ１９ナノボディ及び抗ｐ４０ナノボディの効力の測定に関して本実施例２２で得られた結果を示すグラフである）及び図３８（ｃｙｎｏＩＬ−２３を使用するアルファスクリーンにおける幾つかの抗ｐ１９ナノボディ及び抗ｐ４０ナノボディの効力の測定に関して本実施例２２で得られた結果を示すグラフである）に示す。算出されたＩＣ５０値を表Ｂ−５に示し、Ｐ２３ＩＬ３６Ａ１での７．３ｎＭからＰ２３ＩＬ３７Ｄ５での１１０ｐＭまで様々である。しかしながら、ｃｙｎｏＩＬ−２３結合はＰ２３ＩＬ３６Ａ４でしか効果的に阻害されない。
ｐ４０＋ナノボディの効力を求めるために、２５０ｎＭから始まり１ｐＭまでの希釈系列の抗ｐ４０ナノボディを、室温（ＲＴ）で１５分間３ｎＭのビオチン化ｈＩＬ−１２と共にプレインキュベートした。この混合物に、ＩＬ１２Ｒβ１アクセプタビーズとストレプトアビジンドナービーズとを加え、室温でさらに１時間インキュベートした。ビオチン化ＩＬ−１２とのほとんどの試験ナノボディのプレインキュベーションにより、５２０ｎｍでの蛍光強度が低減し、これはナノボディが用量依存的にＩＬ１２Ｒβ１とのｈＩＬ−１２結合を効率的に阻害することができることを実証していた。算出されたＩＣ５０値を表Ｂ−６に示し、Ｐ２３ＩＬ８１Ｅ１０での２３ｎＭからＰ２３ＩＬ３Ｂ８での３５０ｐＭまで様々である。
実施例２３：ＩＬ−２３の一価のｐ１９＋ナノボディ、ｐ１９−ナノボディ、並びにＩＬ−２３/ＩＬ−１２のｐ４０＋ナノボディ及びｐ４０−ナノボディの結合反応速度
選択されたｐ１９＋ナノボディ、ｐ１９−ナノボディ、ｐ４０＋ナノボディ及びｐ４０−ナノボディの結合反応速度を、表面プラズモン共鳴（ビアコアＴ１００）により分析した。ヒトＩＬ−２３を、活性化ではＥＤＣ／ＮＨＳ及び不活性化ではＨＣｌを使用して、アミンカップリングを介してＣＭ５センサーチップ表面と共有結合した。ナノボディ結合を１つの濃度（１００ｎＭ）で評価した。それぞれのナノボディを、４５μｌ／分の流速で４分間、注入して、チップ結合抗原に結合させた。次に、ナノボディを有しない結合バッファーを同じ流速でチップに送り、結合ナノボディを自然解離させた。異なるナノボディで得られたセンサーグラムから、ｋｏｆｆ値（ｋｄ）を算出したが、これを表Ｂ−７〜表Ｂ−１１に示す。Ｐ２３ＩＬ３７Ｄ５では、結合を様々な濃度で評価し、結合速度定数（ｋｏｎ）及び解離速度定数（ｋｏｆｆ）、並びにしたがって結合解離定数（ＫＤ）を求めたが、これを表Ｂ−９に示す。
一価ナノボディの交差反応性プロファイルを、固定カニクイザルＩＬ−２３を使用するビアコア実験で試験した。結果を表Ｂ−７〜表Ｂ−１１に示す。
実施例２４：抗ｐ１９ナノボディ及び抗ｐ４０ナノボディのエピトープグループ分け
二重パラトピック又は二重特異性の構築物を構築するためのナノボディの適合性を求めるために、幾つかの相対的エピトープのマッピング実験を実施した。
ｐ１９ナノボディの相対的エピトープを求めるために、所定の抗ｐ１９ナノボディを、スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Pierce）を使用してビオチン化し、製造業者の取扱説明書（Perkin Elmer,Waltham, MA, US）に従って、抗ヒトＩＬ−２３抗体（R&D Ｍａｂ６０９１）を、アクセプタビーズと結合した。２００ｎＭから始まり１ｐＭまでの希釈系列の第２の抗ｐ１９ナノボディを、室温で１５分間５００ｐＭのｈＩＬ−２３と共にプレインキュベートした。この混合物に、抗ＩＬ−２３抗体結合アクセプタビーズとビオチン化ｐ１９ナノボディとを加え、室温でさらに１時間インキュベートし、最後に混合物を室温で１時間ストレプトアビジンドナービーズと共にインキュベートする。ｈＩＬ−２３との所定のナノボディのプレインキュベーションにより、５２０ｎｍでの蛍光強度が低減した場合、このナノボディがｈＩＬ−２３上でビオチン化ナノボディと同じ又は重複するエピトープを認識する。このようにして求められる相対的エピトープを表Ｂ−１２に示す。
したがって本発明のさらなる態様は以下の通りである：
ｐ１９上でＰ２３ＩＬ−１２１Ａ２（配列番号１８９０）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３（配列番号１８９８）及び／又はＰ２３ＩＬ３６Ａ４（配列番号２４８６）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ１９との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ１９との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ１９＋配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）；
ｐ１９上でＰ２３ＩＬ８１Ａ１２（配列番号１９３６）及び／又はＰ２３ＩＬ８１Ｇ２（配列番号１９３０）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ１９との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ１９との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ１９−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）；
ｐ１９上でＰ２３ＩＬ−１２４Ｃ４（配列番号）及び／又はＰ２３ＩＬ２０Ｂ１１（配列番号２５０２）と同じエピトープと結合する、又は同じエピトープとｐ１９との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ１９との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ１９−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）；
ｐ１９上でＰ２３ＩＬ１１９Ｇ７（配列番号１９０２）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ１９との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ１９との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ１９−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）。
同様の実験を、ｐ４０ナノボディの相対的エピトープを求めるのに実施した。アクセプタビーズをｐ１９＋ナノボディＰ２３ＩＬ−１２１Ａ２に結合させた。第１の実験では、ｐ４０＋ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｂ８、３Ｃ１、８１Ｅ１０、２３Ｅ３、２３Ｈ３及び３Ｇ１０、並びにｐ４０−ナノボディＰ２３ＩＬ８０Ｄ１０をビオチン化した。非ビオチン化ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｂ８、３Ｃ１、２３Ｅ３、２３Ｈ３、３Ｇ１０、８１Ｅ１０、８０Ｄ１０、２０Ｆ２、２２Ｄ１０、２３Ａ１１、８０Ａ３、８４Ｇ１、８１Ａ１、２１Ｃ４、２２Ｄ７、２２Ｅ１１、８４Ａ１２、８４Ｇ１２及び３Ｆ１を、室温で１５分間４００ｐＭのｈＩＬ−２３と共に１００ｎＭの濃度でプレインキュベートした。ナノボディ−ｈＩＬ−２３混合物に、Ｐ２３ＩＬ−１２１Ａ２結合アクセプタビーズと所定のビオチン化ナノボディとを加え、室温でさらに１時間インキュベートし、最後に混合物を室温で１時間ストレプトアビジンドナービーズと共にインキュベートする。ｈＩＬ−２３との所定のナノボディのプレインキュベーションにより、５２０ｎｍでの蛍光強度が低減した場合、このナノボディがｈＩＬ−２３上でビオチン化ナノボディ／ｍＡＢと同じ又は重複するエピトープを認識する。
予想通り、全てのｐ４０＋ナノボディがｐ４０−ナノボディと異なるエピトープと結合する。ｐ４０＋ナノボディでは、相対的マッピングはより複雑であるが、結果は以下のことを示す：
図２３に示されるナノボディの中で、ナノボディＰ２３ＩＬ２３Ｅ３（配列番号２５１４）、２３Ｈ３（配列番号２５１５）、３Ｇ１０（配列番号２５１６）、２１Ｃ４（配列番号２５１０）、２２Ｄ７（配列番号２５１１）、２２Ｅ１１（配列番号２５１２）、８４Ａ１２（配列番号１９７０）及び３Ｆ１１（配列番号２５２５）がＰ２３ＩＬ３Ｂ８（配列番号２５２７）と同じエピトープの少なくとも一部を認識する。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ３Ｂ８（配列番号２５２７）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する；
ナノボディＰ２３ＩＬ２３Ｅ３（配列番号２５１４）、２３Ｈ３（配列番号２５１５）、８１Ｅ１０（配列番号１９４６）、８０Ｄ１０（配列番号１９４０）、２０Ｆ２（配列番号２５０４）、２２Ｄ１０（配列番号２５０５）、８０Ａ３（配列番号１９５２）、８４Ｇ１（配列番号１９９２）、８１Ａ１（配列番号１９６２）、２２Ｄ７（配列番号２５１１）及び８４Ｇ１２（配列番号１９４２）は、Ｐ２３ＩＬ３Ｃ１（配列番号２０３３）と同じエピトープの少なくとも一部を認識する。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ３Ｃ１（配列番号２０３３）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する；
ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｂ８（配列番号２５２７）、３Ｃ１（配列番号２０３３）、２３Ｈ３（配列番号２５１５）、３Ｇ１０（配列番号２５１６）、８１Ｅ１０（配列番号１９４６）、８０Ｄ１０（配列番号１９４０）、８０Ａ３（配列番号１９５２）、２１Ｃ４（配列番号２５１０）、２２Ｄ７（配列番号２５１１）、２２Ｅ１１（配列番号２５１２）、８４Ａ１２（配列番号１９７０）、３Ｆ１１（配列番号２５２５）は、Ｐ２３ＩＬ−２３Ｅ３（配列番号２５１４）と同じエピトープの少なくとも一部を認識する。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ−２３Ｅ３（配列番号２５１４）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する；
ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｂ８（配列番号２５２７）、３Ｃ１（配列番号２０３３）、２３Ｅ３（配列番号２５１４）、３Ｇ１０（配列番号２５１６）、８１Ｅ１０（配列番号１９４６）、８０Ａ３（配列番号１９５２）、８４Ｇ１（配列番号１９９２）、８１Ａ１（配列番号１９６２）、２１Ｃ４（配列番号２５１０）、２２Ｄ７（配列番号２５１１）、２２Ｅ１１（配列番号２５１２）、８４Ａ１２（配列番号１９７０）、８４Ｇ１２（配列番号１９４２）、３Ｆ１１（配列番号２５２５）は、Ｐ２３ＩＬ−２３Ｈ３（配列番号２５１５）と同じエピトープの少なくとも一部を認識する。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ−２３Ｈ３（配列番号２５１５）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する；
ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｂ８（配列番号２５２７）、２３Ｅ３（配列番号２５１４）、２３Ｈ３（配列番号２５１５）、８１Ａ１（配列番号１９６２）、２１Ｃ４（配列番号２５１０）、２２Ｄ７（配列番号２５１１）、２２Ｅ１１（配列番号２５１２）、８４Ａ１２（配列番号１９７０）及び３Ｆ１１（配列番号２５２５）は、２３ＩＬ３Ｇ１０（配列番号２５１６）と同じエピトープを認識する；
ナノボディＰ２３ＩＬ３Ｃ１（配列番号２０３３）、２３Ｅ３（配列番号２５１４）、２３Ｈ３（配列番号２５１５）、８０Ｄ１０（配列番号１９４０）、２２Ｄ１０（配列番号２５０５）、８０Ａ３（配列番号１９５２）、８４Ｇ１（配列番号１９９２）、８１Ａ１（配列番号１９６２）及び８４Ｇ１２（配列番号１９４２）は、Ｐ２３ＩＬ８１Ｅ１０（配列番号１９４６）と同じエピトープを認識する。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ８１Ｅ１０（配列番号１９４６）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する。
第２の実験において、ｐ４０＋ナノボディＰ２３ＩＬ−２２Ｄ７（配列番号２５１１）及び２２Ｅ１１（配列番号２５１２）をビオチン化した。非ビオチン化ナノボディＰ２３ＩＬ８４Ｇ１２、８０Ｄ１０、２０Ｆ２、２２Ｄ１０、２３Ａ１１、８０Ａ３、８４Ｇ１、８１Ａ１、２２Ｄ７及び２２Ｅ１１を室温で１５分間、４００ｐＭのｈＩＬ−２３と共に２５０ｎＭ又は７１ｎＭの濃度でプレインキュベーションした。ナノボディ−ｈＩＬ−２３混合物に、Ｐ２３ＩＬ−１２１Ａ２結合アクセプタビーズとビオチン化Ｐ２３ＩＬ−２２Ｄ７又は２２Ｅ１１とを加え、室温でさらに１時間インキュベートし、最後に混合物を室温で１時間ストレプトアビジンドナービーズと共にインキュベートする。ｈＩＬ−２３との所定のナノボディのプレインキュベーションにより、５２０ｎｍでの蛍光強度が低減した場合、このナノボディがｈＩＬ−２３上でビオチン化ナノボディと同じ又は重複するエピトープを認識する。結果を図３９（２２Ｄ７に対するエピトープマッピング）及び図４０（２２Ｅ１１に対するエピトープマッピング）に示す。したがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ−２２Ｄ７（配列番号２５１１）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する。同様にしたがって、ｐ４０上でＰ２３ＩＬ−２２Ｅ１１（配列番号２５１２）と同じエピトープと結合する、及び／又は同じエピトープとｐ４０との結合を交差遮断し得る、及び／又はｐ４０との結合に対して同じエピトープと競合し得る、ｐ４０＋配列又はｐ４０−配列（本明細書中に規定のようなものであり、特に（単一）ドメイン抗体及び／又はナノボディ）が本発明のさらなる態様を形成する。
ｐ１９＋ナノボディＰ２３ＩＬ１１９Ａ３対３つのｐ４０＋ナノボディ、Ｐ２３ＩＬ３Ｂ８、Ｐ２３ＩＬ３Ｃ１及びＰ２３ＩＬ−２３Ｅ３の相対的エピトープマッピングを、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３をチップと連結させ、ｈＩＬ−２３を補足するのに使用したビアコアを用いて行った。その後、ｐ４０＋の一価のナノボディを、その結合能に関して試験した。予想通り、ｐ４０＋ナノボディは、ビアコアチップに固定されたＰ２３ＩＬ１１９Ａ３と既に連結しているｈＩＬ−２３と依然として結合することができるため別々のエピトープ群と結合する。
実施例２５：細胞ベースのアッセイにおけるｐ１９＋ナノボディ及びｐ４０＋ナノボディの中和活性
（実施例１５から修正した）マウス脾細胞アッセイを、ＩＬ−２３がマウス脾細胞からのＩＬ−２２分泌を刺激する能力に基づき、ＩＬ−２３活性の阻害を求めるのに使用した。基本となるプロトコルは以下の通りである：５匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの脾臓を取り出し、脾細胞を採取して、単細胞懸濁液を調製した。脾細胞を、１０％ ＦＢＳ（Invitrogen、カタログ番号１０２７０−１０６）、１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Invitrogen、カタログ番号１５１４０−１２２）、８０μＭのβ−メルカプトエタノール（Invitrogen、カタログ番号３１３５０−０１０）及び１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Gibco、カタログ番号１１３６）を添加したＲＰＭＩ（Invitrogen、カタログ番号７２４００−０２１）で３回洗浄した。この培地は完全ＲＰＭＩとも称される。脾細胞懸濁液を１×赤血球溶解バッファー（１０×ストック：１ＬのＭｉｌｌｉＱ中、８２．９ｇのＮＨ４Ｃｌ、１０．９ｇのＫＨＣＯ３及び３７０ｍｇのＥＤＴＡ）で処理し、残留赤血球を全て取り除いた。完全ＲＰＭＩでの３回の洗浄工程の後、細胞を、１００μＭ細胞濾過器（BD、カタログ番号３５２６０）で濾過し、２０ｎｇ／ｍｌの組換えｍＩＬ−２（R&Dsystems、カタログ番号４０２−ＭＬ）を含有する完全ＲＰＭＩ中で再懸濁した。細胞を、９６ウェル平底プレート（Falcon、カタログ番号３５３０７２）に４０００００細胞数／ウェルで播種した。
ナノボディ（５０μｌ）を、完全ＲＰＭＩ中で、室温で３０分間、組換えｈＩＬ−２３と共にプレインキュンベートした後、所定の最終濃度のｈＩＬ−２３又はｃｙｎｏＩＬ−２３（３．７ｐＭ〜１９ｐＭの範囲）で脾細胞と共にさらに５日間インキュベートした。上清を回収し、ｍＩＬ−２２のレベルを、ＥＬＩＳＡ（マウスＩＬ−２２ ＥＬＩＳＡ組立キット、Antigenix America、カタログ番号ＲＭＦ２２２ＣＫ）を使用して測定した。
図４１及び図４２に示されるように、一価のｐ４０＋ナノボディ（図４１）及びｐ１９＋ナノボディ（図４２）がｈＩＬ−２３媒介性のＩＬ−２２産生を阻害する。対照として、抗ｐ４０ｍＡＢを使用し（本明細書中で「ＢＭ０１」とも称される）、これは（国際公開第００／５６７７２号パンフレットの配列番号３１及び配列番号３２の可変鎖配列を有する）国際公開第００／５６７７２号パンフレットに記載のヒトｍＡＢであり、標準的な技法に従って調製された。
表Ｂ−１３は、１９ｐＭのｈＩＬ−２３及び３．７ｐＭのカニクイザルＩＬ−２３（ｃＩＬ−２３）を遮断するためのｐ１９＋ナノボディの効力を示す。表Ｂ−１４は、１９ｐＭのｈＩＬ−２３及び３．７ｐＭのｃｙｎｏＩＬ−２３を遮断するためのｐ４０＋ナノボディの効力を示す（ｎｃ＝完全には遮断されない）。
実施例２６：ｈＩＬ２３Ｒ及びｈＩＬ１２Ｒβ１を安定して発現するＢａ／Ｆ３細胞株の生成
マウスＩＬ−３依存性ｐｒｏ−Ｂ細胞株であるＢａ／Ｆ３細胞株を、１０％ ＦＢＳ（Invitrogen、カタログ番号１０２７０−１０６）、１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Invitrogen、カタログ番号１５１４０−１２２）及び構造的にＩＬ−３を産生するマウス骨髄単核細胞株であるＷＥＨＩ−３Ｂの１０％馴化培地を添加したＲＰＭＩ（Invitrogen、カタログ番号７２４００−０２１）で培養した。初めに、ＢＡ／Ｆ３細胞株を、ｈＩＬ−１２Ｒβ１をコードする発現ベクターで安定してトランスフェクトした。Amaxaのｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ ＩＩ（カタログ番号ＡＡＤ−１００１）及びAmaxaのｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎキットＶ（カタログ番号ＶＣＡ−１００３）を使用してトランスフェクションを行った。トランスフェクションの直後、５００μｌの予め温められた培養培地をキュベットに加え、内容物全体を上記のように４ｍｌの培養培地を含有するＴ２５に移す。トランスフェクト細胞を選択するために、１．１ｍｇ／ｍｌのＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ（Invitrogen、カタログ番号１０６８７−０１０）をトランスフェクションの４８時間後に添加した。
ｈＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３細胞のプールを、ＦＡＣＳａｒｉａを使用して単細胞選別した。これに、細胞を２０×１０６／ｍｌで希釈マウス抗ｈＩＬ−１２Ｒβ１（０．５ｍｇ／ｍｌ、R&D systems、カタログ番号ＭＡＢ８３９）の入った、１５ｍｌ容のファルコンチューブで再懸濁した。Ｔｒｙｐａｎ Ｂｌｕｅと血球細胞計測器（haematocytometer）とを使用して細胞を計測した。全ての希釈及び洗浄工程を、１０％ ＦＢＳを添加したＰＢＳ（１×）（Invitrogen、カタログ番号１４１１９０−０９４）で行った。４℃での３０分のインキュベーション後、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。２回目の染色を、フィコエリトリン標識抗マウスＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch Laboratories、カタログ番号１１５−１１５−１６４）で行った。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、３回洗浄した。死滅細胞を排除するために、ＴＯＰＲＯ３（Molecular Probes、Ｔ３６０５）による最後の染色が含まれている。Ｈ−ＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３細胞を、９６ウェル培養プレートに単細胞選別し、さらに培養した。
ＦＡＣＳａｒｒａｙ上での数回のスクリーニングの後、ｈ−ＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３サブクローン４Ｄ９を、ｈＩＬ−２３をコードするプラスミドによるトランスフェクションのために選択した。本実施例２６で得られるようなｈ−ＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３サブクローン４Ｄ９のフローサイトメトリ解析の結果を図４３に示す。マウス抗ｈＩＬ−１２Ｒβ１抗体、その後のＰＥ標識ポリクローナル抗マウスＩｇ抗体により検出を行った。細胞でのｈ−ＩＬ１２Ｒβ１の存在を、ＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ＋１０％ ＦＢＳ）、その後のＰＥ標識ポリクローナル抗マウスＩｇ抗体と共にインキュベートした細胞と比較した蛍光強度の増大により測定した。蛍光強度をＸ軸にプロットし、事象数をＹ軸にプロットする。非染色細胞のＦＡＣＳプロファイルも示す。
ｈＩＬ−２３ＲによるｈＩＬ１２Ｒβ１を発現するＢａ／Ｆ３サブクローン４Ｄ９の安定したトランスフェクションのために、２μｇのｐｃＤＮＡ３．１Ｈｙｇｒｏ−ｈ−ＩＬ１２Ｒβ１の代わりに２μｇのｐｃＤＮＡ３．１Ｎｅｏ−ｈＩＬ２３Ｒを使用することだけが異なる上記と同じようなプロトコルを使用する。安定してトランスフェクトした細胞に関して選択するために、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Invitrogen、カタログ番号１０１３１−０７）をトランスフェクションの４８時間後に添加した。Ｇ４１８選択での数世代の培養の後、Ｂａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒ細胞のプールは、（ｍＩＬ−３成長因子を含有する）ＷＥＨＩ−３Ｂ培養上清を欠き、１００ｎｇ／ｍｌの組換えｈＩＬ−２３（e-Bioscience、カタログ番号３４−８２３９−８５）を添加された。生存細胞を増殖させ、１０％ ＦＢＳ、１％ Ｐ／Ｓ及び１００ｎｇ／ｍｌの組換えｈＩＬ−２３を添加したＲＰＭＩ中で３細胞数／ウェル、１細胞数／ウェル又は０．３細胞数／ウェルで播種した。
得られた単細胞クローンを増殖し、細胞増殖アッセイにおけるそのｈＩＬ−２３応答性に関してスクリーニングした。ここで、選択された細胞クローンを、１０％ ＦＢＳ及び１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを添加したＲＰＭＩで３回洗浄し、続いて３×１０６〜５×１０６細胞数／ｍｌの細胞密度でｈＩＬ−２３無含有培地中で３時間インキュベートした。飢餓後、細胞を１００μｌ容量のｈＩＬ−２３無含有培地の入った９６ウェル平底プレート（Greiner bio-one、カタログ番号６５５１８０）において７５００細胞数／ウェルで播種する。次に、５００ｎｇ／ｍｌから出発する２倍段階希釈が得られるように希釈曲線に基づき、ｈＩＬ−２３ １００μｌを細胞に添加した。７２時間のインキュベーション後、細胞を１μＣｉ［３Ｈ］−チミジンでパルス標識し、−８０℃で凍結する前にさらに２４時間インキュベートした。その後、細胞を解凍し、細胞回収器（cell harvester）（Perkin Elmer LifeSciences, Wellesley, MA, USA）を使用してガラス繊維膜上に包埋した。水による数回の洗浄後、濾紙を空気乾燥させ、γカウンタ（Perkin Elmer Life Sciences）を使用して計測した。結果を図４４に示し、この図は［メチル−３Ｈ］−チミジン取り込み［ＯＮパルス］を用いた読み出しとして、幾つかの濃度のｈＩＬ−２３との７２時間のインキュベーション後の細胞増殖アッセイにおける幾つかのＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒ単細胞クローンのｈＩＬ−２３応答性に関して本実施例２６で得られた結果を示すグラフである。クローン５Ｈ１０を、ＩＬ−２３中和ナノボディフォーマットのさらなる特徴付けのために選択した。
実施例２７：ＩＬ−１２依存性のＰＨＡブラスト増殖アッセイ
ＰＨＡブラストを、３日間、ＰＨＡ（５０μｇ／ｍｌ）で、及び１日間、ＩＬ−２（５０Ｕ／ｍｌ）でＰＢＭＣを培養することにより誘導した。これらのＰＨＡブラストを、２０００ｎＭから始まり１ｐＭまでの希釈系列のｐ４０＋ナノボディ、又は対照ナノボディ、又は抗体と共にプレインキュベートした１ｐＭのｈＩＬ−１２で刺激した。細胞を２日間刺激し、続いて６時間、１μＣｉ／ウェルの３Ｈ−チミジンでパルス標識して、したがって、シンチレーション計測により３Ｈ−チミジン組込みを測定することによって増殖を求めた。
表Ｂ−１５に示されるように、ほとんどの試験された一価のｐ４０＋ナノボディはｈＩＬ−１２媒介性の増殖を阻害した。
実施例２８：効力に対するリンカー長の影響を研究するための、さらなる二重特異性／二重パラトピックＩＬ−２３のｐ１９ナノボディの構築、産生及び精製
実施例１３に記載の二重パラトピック構築物に加えて、幾つかの二重パラトピック構築物を、より短いリンカーを用いて作製し、最適なリンカー長を求めた。個々の構成要素を、９Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ、配列番号２６４９）又は２０Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号２６５０）で融合し、ｐＡＸ１００ベクターにクローン化した。これらの二重パラトピック抗ｐ１９ナノボディの配列を図３０に示す。構築物を、１ｍＭのＩＰＴＧを用いて誘導されたＴＧ１細胞で形質転換した。ヒスチジントラップ親和性クロマトグラフィ、その後脱塩処理を用いて、ナノボディをペリプラズム抽出物から精製した。５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Sigma）の存在下でのゲル濾過により、さらなる精製及びＬＰＳの除去を行った。効力を脾細胞アッセイで評価し（実施例２７を参照されたい）、ＩＣ５０を表Ｂ−１６及び表Ｂ−１７に挙げる。結果は、リンカー長を短くするとＩＣ５０が下がり（worsens）、このため全体で２０個を超えるアミノ酸残基（例えば２０個のアミノ酸残基〜４５個のアミノ酸残基）を有するリンカー、例えば３５Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号２６５１）の使用が好まれ得ることをはっきりと示している。
実施例２９：半減期が延びたＨＬＥのｐ１９二重パラトピック構築物の構築、産生及び特徴付け
Ａ）ＨＬＥ１：抗ヒト血清アルブミンナノボディ、ＡＬＢ−１：
三価の二重パラトピック抗ｐ１９ナノボディを構築し（例えばＰ２３ＩＬ−１２１Ａ２−９ＧＳ−ＡＬＢ１−９ＧＳ−１２４Ｃ４）、これは中央に抗ヒト血清アルブミンナノボディ構成要素（ＡＬＢ−１、配列番号７９０）に対応する第３の構成要素を有する抗ｐ１９ナノボディに対応する２つの構成要素から成る。個々の構成要素を９Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ、配列番号７９２）で融合する。ＡＬＢ１ナノボディの配置が効力に影響するかを調べるために、本発明者らは、Ｃ末端にＡＬＢ−１を有する構築物（例えばＰ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２−９ＧＳ−ＡＬＢ１）も作製した（ここではｐ１９ナノボディが３５Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーで融合し、且つＡＬＢ１が９Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーで構築物と融合する）。またこれらの三価の二重特異性抗ｐ１９ナノボディの配列も図３０に示す。
これらの構築物は、ｐＡＸ１００にクローン化し、ＴＧ１細胞に形質転換し、ｃ−ｍｙｃ、Ｈｉｓ６標識タンパク質として発現され、その後にエンドトキシンを取り除くため、ＯＧＰの存在下で固定化金属親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）及びサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）によってペリプラズム抽出物から精製した。２つのこのようにフォーマットしたナノボディを、急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞アッセイで試験するためにより大きい規模で産生した（実施例３６を参照されたい）。
Ｐ２３ＩＬ００３６（即ちＰ２３ＩＬ１１９Ａ３−９ＧＳ−ＡＬＢ１−９ＧＳ−８１Ｇ２）を大腸菌で産生し、ＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａ（Poros）上で捕捉して、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）を使用して溶出し、すぐに１５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．８）で中和した。ナノボディをＰｏｒｏｓ ５０ＨＳ（Poros）でさらに精製し（polished）、ＬＰＳを取り除くため、４℃で一晩５０ｍＭのＯＧＰ（オクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド、Sigma）と共にインキュベートし、その後ＳＥＣを行った（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GEHealthcare）。Ｐ２３ＩＬ００４４（即ちＰ２３ＩＬ１１９Ａ３（Ｈ３７Ｙ−Ｍ４３Ｋ）−９ＧＳ−ＡＬＢ１−９ＧＳ−８１Ａ１２）を初めにｐＡＸ９８に再クローン化し（これによりＰ２３ＩＬ００４９が得られる）、メタノール資化酵母（Pichia pastoris：ピキア・パストリス）に形質転換した。それからナノボディ（登録商標）を発現する、組換えメタノール資化酵母の清澄発酵ブロスからこれを精製した。発酵ブロスを単体粒子（particle free）にさせ、それぞれ０．２２μｍのＨｙｄｒｏＳａｒｔカセット及び１０ＫＭＷＣＯ ＨｙｄｒｏＳａｒｔカセット（Sartorius）を使用してＤ−ＰＢＳ中で接線流濾過により濃縮した。１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）を使用する溶出の後、ＴＦＦ保持液をＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａ（Poros）上でさらに処理し、画分を１５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）で中和し、１／１０のＰＢＳに対して透析した（ＳｎａｋｅＳｋｉｎ Ｐｌｅａｔｅｄ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｕｂｉｎｇ １０，０００ ＭＷＣＯ（Pierce、製品コード６８１００））。ナノボディを陽イオン交換クロマトグラフィ（Ｐｏｒｏｓ ５０ＨＳ、Poros）、その後のサイズ排除クロマトグラフィ（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GE Healthcare）により精製した。
Ｂ）ＨＬＥ２：ＨＳＡ
二重パラピック抗ｐ１９ナノボディ、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２のＨＳＡ融合体を、この構築物のＣ末端に直接ＨＳＡを融合することにより作製した。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２に関するコード配列をｐＡＸ９９ベクター（これは全長ヒト血清アルブミンに関するコード配列を含有するｐＰＩＣＺαＡベクターである）にライゲーションすることによりこれが起こり、これによりＰ２３ＩＬ００４１（即ちＰ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２−ＨＳＡ）が得られた。プラスミドをメタノール資化酵母株Ｘ３３に形質転換した。それからナノボディを発現する、組換えメタノール資化酵母の清澄発酵ブロスからこれを精製した。清澄発酵ブロスをＴＦＦ（０．２２μｍのＨｙｄｒｏｓａｒｔカセット、Sartorius）により単体粒子にさせ、その後ＴＦＦ（ＰＥＳＵ−ＡＬカセット、Sartorius）を使用してＰＢＳに対する濃縮及び透析濾過工程を行った。対象のタンパク質をＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡ（Poros）上での捕捉工程、及びＰｏｒｏｓ ５０ＨＱ及びＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ ＸＫ２６／６０を使用するさらなる精製工程により精製した。
Ｃ）ＨＬＥ３：ＰＥＧ
二重パラトピックナノボディをペグ化するために、Ｃ末端標識をＧＧＧＣ配列に置き換えて構築物を生成した。したがってＰ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２及びＰ２３ＩＬ−１２１Ａ２−３５ＧＳ−１２４Ｃ４のコード配列をｐＡＸ９３ベクターにクローン化した。構築物をＴＧ１で発現した。精製及びペグ化を以下の通りに行った：ナノボディＰ２３ＩＬ００３８（即ちＰ２３ＩＬ１１９Ａ３−３５ＧＳ−８１Ｇ２−ＧＧＧＣ）をＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｘｔｒａ（商標）（GE Healthcare）上で捕捉し、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）を使用して溶出した。回収試料をすぐに１５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）を使用して中和して、１／１０ ＰＢＳ（ＳｎａｋｅＳｋｉｎ Ｐｌｅａｔｅｄ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｕｂｉｎｇ １０，０００ ＭＷＣＯ（Pierce、製品コード６８１００））に対して透析し、５ｍＭのＤＴＴの存在下でのＣＥＸ（Ｐｏｒｏｓ ５０ＨＳ、Poros）によりさらに精製した。ナノボディを含有する画分をＶｉｖａｓｐｉｎ（５ｋＤａ）で濃縮し、ＤＴＴを最終濃度が１０ｍＭになるまで添加し、一晩インキュベートした。ＳＥＣ（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ｐｇ ＸＫ１６／６０、GE healthcare）により余分な遊離ＤＴＴを取り除いた後、還元ナノボディを、５モル過剰の分岐ｍＰＥＧ４０（NOF、ＳｕｎＢｒｉｇｈｔ ＧＬ２−４００ＭＡ）と共に一晩インキュベートした。ペグ化ナノボディをＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ（GE Healthcare）上でさらに精製し、余分な反応していないＰＥＧ４０を取り除いた。最後に、ＬＰＳを取り除くため、ペグ化ナノボディを５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Sigma）で一晩処理し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ（GE Healthcare）を使用してサイズ排除クロマトグラフィを行った（sized）。
ペグ化Ｐ２３ＩＬ００３８の第２のバッチの生成のために、ナノボディをＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａ（POROS）上で捕捉し、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）を使用して溶出して、すぐに１５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）を使用して中和した。４℃での一晩、５Ｌの１／１０ ＰＢＳに対する透析後（ＳｎａｋｅＳｋｉｎ Ｐｌｅａｔｅｄ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｕｂｉｎｇ １０，０００ ＭＷＣＯ（Pierce、製品コード６８１００））、試料をＰｏｒｏｓ ５０ＨＳ（PoroS）上でさらに精製し、その後１０ｍＭのＤＴＴで還元させた。余分なＤＴＴをＳＥＣ（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GE healthcare）により取り除き、還元ナノボディを直鎖ｍＰＥＧ４０（４０ｋＤａのメトキシポリ（エチレングリコール）マレイミド−プロピオンアミド、Dow Pharma）と結合させた。ペグ化ナノボディを、ＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ（GE healthcare）上で過剰なｍＰＥＧ４０及び反応していないナノボディから分離した。最後に、ＬＰＳを取り除くため、ペグ化ナノボディを５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Sigma）で処理し、その後最終的にＳＥＣを行った（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GEHealthcare）。
ナノボディＰ２３ＩＬ００３９（即ちＰ２３ＩＬ−１２１Ａ２−３５ＧＳ−１２４Ｃ４−ＧＧＧＣ）をＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｘｔｒａ（商標）（GE Healthcare）上で捕捉し、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）を使用して溶出した。回収試料をすぐに１５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）を使用して中和して、陰イオン交換クロマトグラフィ（Ｐｏｒｏｓ ５０ＨＱ、Poros）でさらに精製した。ナノボディを含有する画分を１０ｍＭのＤＴＴの存在下で還元した。一晩のインキュベーション後、サイズ排除クロマトグラフィ（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ ＸＫ２６／６０、GE healthcare）により余分な遊離ＤＴＴを取り除いた。還元ナノボディを、５モル過剰の分岐ｍＰＥＧ４０（NOF、ＳｕｎＢｒｉｇｈｔ ＧＬ２−４００ＭＡ）と共に一晩インキュベートした。ペグ化ナノボディをＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ（GE Healthcare）上でさらに精製し、余分な反応していないＰＥＧ４０を取り除いた。最後に、ペグ化ナノボディをＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ ＸＫ２６／６０（GE Healthcare）を使用してサイズ排除クロマトグラフィを行った（sized）。
実施例３０：ＨＬＥナノボディの脾細胞アッセイ及びカニクイザルＩＬ−２３での交差反応性
実施例２９のＨＬＥナノボディを試験し、実施例２５に記載のような脾細胞アッセイで比較した。結果を表Ｂ−１８に示す。ＨＬＥタイプでは効力は失われず、それどころかわずかに効力が改善するので３つのタイプのＨＬＥ全てが適している。またＡＬＢ１ナノボディの位置も効力には影響しない。９ＧＳ−ＡＬＢ１−９ＧＳ部位は３５Ｇｌｙ／Ｓｅｒ−リンカーを効率的に置き換えることができるので、Ｐ２３ＩＬ３７Ｄ５構成要素を含有する抗ｐ１９二重パラトピックナノボディは、すぐに構築し、発現され、中央にＡＬＢ１を有するＨＬＥナノボディとして試験した。
さらに、カニクイザルＩＬ−２３に対する交差反応性を確認した。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３構成要素及びＰ２３ＩＬ３７Ｄ５構成要素を含有する抗ｐ１９二重パラトピックナノボディは全て交差反応性であり、Ｐ２３ＩＬ−１２１Ａ２構成要素を含有する抗ｐ１９二重パラトピックナノボディは交差反応性ではない。
実施例３１：ｈＩＬ−２３誘導性のＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒ細胞増殖に対する二重パラトピック／二重特異性の抗ｈＩＬ−２３ナノボディの効果
実施例２６に記載のように生成されたＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒサブクローン５Ｈ１０を、１０％ ＦＢＳ、１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、ＷＥＨＩ−３Ｂ細胞株の１０％馴化培地、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８及び１．１ｍｇ／ｍｌのＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂを添加したＲＰＭＩ中で培養する。細胞を、１０％ ＦＢＳ及び１％ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを添加したＲＰＭＩで３回洗浄した。細胞をこのｍＩＬ−３無含有培地中、３×１０６〜５×１０６細胞数／ｍｌの細胞密度で１時間インキュベートして、全ての残りの成長因子を取り除いた。
様々なナノボディの中和能を評価するために、５０μｌのナノボディ希釈液を９６ウェル平底プレート（Greiner bio-one、カタログ番号６５５１８０）における５０μｌのｈＩＬ−２３（最終濃度４ｎｇ／ｍｌ）と共に３０分間プレインキュベートした。次に、５０μｌのＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ１２Ｒβ１−ｈＩＬ２３Ｒ細胞を、５００００細胞数／ウェルの最終細胞密度に達するまでこれらのプレインキュベート試料に添加する。
５％ ＣＯ２の存在下、３７℃で２４時間後、製造元の取扱説明書に従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Promega、Ｇ７５７１）を使用して、細胞生存率を測定した。試験した実施例２９のＨＬＥナノボディは、実施例３２に示されるように、これらの細胞の増殖を効率的に遮断することができる。
実施例３２：ＨＬＥナノボディのＩＬ−２３依存性のＢＡＦ３増殖アッセイ
また実施例２９のＨＬＥナノボディを試験し、７６ｐＭのｈＩＬ−２３を使用して実施例２７に記載のように、ｈＩＬ−２３依存性のＢＡＦ３増殖アッセイで比較した。試験したナノボディは全て、表Ｂ−１９に示すようにこれらの細胞の増殖を効率的に遮断することができる。
実施例３３：天然ヒトＩＬ−２３の誘導及びこの天然ヒトＩＬ−２３に対するＨＬＥナノボディの効力の測定
ヒト単球細胞株ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ ＴＩＢ−２０２）を天然ヒトＩＬ−２３の産生に使用した。ＴＨＰ−１細胞を１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（全てInvitrogen,Carlsbad, USA製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。細胞を２、３日ごとに継代培養することにより維持し、１０４細胞数／ｍＬ〜１０６細胞数／ｍＬの細胞密度を保った。ＩＬ−２３の分泌を、固定黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）細胞（ＳＡＣ、Ｐａｎｓｏｒｂｉｎ、Calbiochem, Merck）でＴＨＰ−１細胞を刺激することにより誘導した。ＴＨＰ−１細胞（２．５〜５×１０６細胞数／ｍＬ）を０．０５％ ＳＡＣ（３７℃、５％ ＣＯ２）で２０時間〜２４時間刺激した。続いて、上清を遠心分離で回収し（２００×ｇ、５分、室温）、濾過して（０．２２μｍ ＰＶＤＦ、Millipore, Ireland）、残存細胞及び残屑を取り除き、−７０℃で保存した。ヒトＩＬ−２３の濃度をヒトＩＬ−２３（ｐ１９／ｐ４０）Ｅｌｉｓａ Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ！キット（eBioscience, SanDiego, USA）を使用して求めた。典型的に、２０ｎｇ／ｍＬ〜４０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−２３を誘導した。それからＩＬ−２３を含有する上清を、マウス脾細胞アッセイでＩＬ−２３供給源として使用し、ナノボディが天然ヒトＩＬ−２３を中和することが可能であるか否かを求めた。限られたパネルの二重パラトピックナノボディを試験し、これらは全て表Ｂ−２０に示すように天然ｈＩＬ−２３を中和することが可能であった。
実施例３４：ＥＬＩＳＡ効力アッセイ−一価及び二重パラトピックナノボディによるＩＬ−２３ＲとのＩＬ−２３相互作用の阻害
９６ウェルプレートを抗Ｆｃナノボディ（６μｇ／ｍｌ）で４℃で一晩コーティングし、その後３０分間、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーで遮断した。異なる濃度の一価及び二重パラトピックナノボディを３０分間、４ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−２３と共にプレインキュベートした後、３００ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−２３Ｒ−Ｆｃと共に３０分間インキュベートし、その後混合物をコーティングウェルに移した。結合ｈＩＬ−２３を、１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーを含有するＰＢＳ中で１／７５０希釈のビオチン化抗ヒトインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ｐ４０／７０モノクローナル抗体（eBiosciences, SanDiego, USA）により室温で３０分間検出し、その後１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーを含有するＰＢＳ中で１／５０００のホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンと共に室温で３０分インキュベートした。増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ）発色試薬を用いて可視化を行い、その後発色反応を１ＮのＨＣｌで停止させた。吸光度を４５０ｎｍで測定した。図４５に示されるように、ｐ１９＋（１１９Ａ３、３７Ｄ５−ＡＬＢ１）一価ナノボディは、ＩＬ−２３Ｒとの相互作用を阻害するが、ｐ１９−（８１Ａ１２、８１Ｇ２）一価ナノボディは阻害しない。二重パラトピック（２３００４９、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００３８）ナノボディは、ｈＩＬ−２３−ｈＩＬ−２３Ｒ相互作用を阻害するのに一価ナノボディよりも有意に高い効力を有する（図４６）。表Ｂ−２１は、様々なナノボディに対応する効力を示す（ＩＣ５０）。
実施例３５：急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルの最適化
急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルを最適化し、ＩＬ−２３ｐ１９−中和ナノボディのｉｎ ｖｉｖｏ効力を解析するのに標準化した。
このモデルでは、ｈＩＬ−２３の中和は、ｍＩＬ−２２合成のｅｘ ｖｉｖｏ読み出しと共にｉｎ ｖｉｖｏで起こる。全ての実験で、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ｈＩＬ−２３を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射している。唯一の１回目（only/first）のｈＩＬ−２３注射のちょうど３１時間後、マウスを採血し、その後屠殺した。脾臓を取り出し、脾細胞を、すりスライドガラスの間に脾臓をホモジナイズすることにより単離した。脾細胞を洗浄し、１０６細胞数／ｍｌの濃度で培地中で再懸濁した。使用する培地は、１０％ ＦＣＳ、１０Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、１％非必須アミノ酸、１％ピルビン酸ナトリウム、２．５ｍＭのＨＥＰＥＳ及び０．０００３５％ ２−メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ１６４０であった。ハムスター抗マウスＣＤ３ｅ抗体（４℃で一晩ＰＢＳ中で５μｇ／ｍｌ）を予めコーティングした９６ウェル培養プレートに細胞を２０００００細胞数／２００μｌ／ウェルで播種した。各脾臓に対して、６つのウェルを播種した。それから９６ウェルプレートを加湿ＣＯ２インキュベータで２４時間インキュベートした。マウスＩＬ−２２（ＲＭＦ２２２ＣＫ、Antigenix）に関して、サンドイッチＥＬＩＳＡキットを、各上清中のｍＩＬ−２２の量を測定するのに使用した。
結果を図４７（この図は３μｇのｈＩＬ−２３を単独で又は２３ＩＬ００３６と組み合わせて投与する際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して本実施例３５で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成は、群４と比較して％変化で表す）及び図４８（この図は異なる投与経路を介して２３ＩＬ００３６又はＩＲＲ００７を投与する際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して本実施例３５で得られる結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成は、ｈＩＬ−２３だけを摂取した群と比較して％変化で表す）に示す。
第１の実験において、異なる群のマウス（ｎ＝４）に、ｔ＝０時間、７時間及び３１時間でＰＢＳ（群１）、ｔ＝０時間で１×３μｇのｈＩＬ−２３（群２）、ｔ＝０時間及び７時間で２×３μｇのｈＩＬ−２３（群３）又はｔ＝０時間、７時間及び２３時間で３×３μｇのｈＩＬ−２３（群４、群５及び群６）を腹腔内注射した。群５及び群６ではさらに、０．２ｍｇの抗ＩＬ−２３のｐ１９ナノボディ２３ＩＬ００３６をそれぞれ、最初のｈＩＬ−２３注射の２時間前、及び２９時間後に腹腔内投与した。この結果は、ｈＩＬ−２３の２回又は３回の注射が、ｍＩＬ−２２合成を大きく誘導させるのに必要であることをはっきりと示した（図４７）。結果を３×３μｇのｈＩＬ−２３を注射した群４の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化した。これらの結果に基づき、本発明者らは、ｔ＝０時間、７時間及び２３時間で３回の３μｇのｈＩＬ−２３注射によりその後の実験においてｍＩＬ−２２合成を誘導することを決めた。さらに本発明者らは、本実験では、２３ＩＬ００３６が、最初のｈＩＬ−２３注射の２時間前に投与した場合にｍＩＬ−２２合成を阻害することができ、脾細胞の単離の２時間前に投与した場合には阻害することができなかったことから、ｅｘ ｖｉｖｏではなくｉｎ ｖｉｖｏ期にｈＩＬ−２３の中和が要求されることを実証している（図４７）。
第２の実験において、異なる群のマウス（ｎ＝４）に、ＰＢＳ（群１）又は３×３μｇのｈＩＬ−２３（群２〜群６）を注射した。さらに、群３〜群５に、０．２ｍｇの２３ＩＬ００３６を注射し、群６に無関連のナノボディＩＲＲ００７を注射した。ナノボディの投与経路は、異なる群間で変えた。２３ＩＬ００３６及びＩＲＲ００７をそれぞれ群３及び群６に腹腔内投与し、２３ＩＬ００３６を群４では静脈内（ｉ．ｖ．）注射し、群５では皮下（ｓ．ｃ．）注射した。結果を、ｈＩＬ−２３のみを注射した群２の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化した。異なる投与経路間でｍＩＬ−２２合成阻害に差異は観察されなかった（図４８）。ｈＩＬ−２３は腹腔内投与したが、本発明者らは腹腔内ではなく、全身的なｈＩＬ−２３の阻害を望んでいることから、以下の実験でナノボディを皮下注射することを決めた。無関連のナノボディＩＲＲ００７はｍＩＬ−２２合成には影響を与えなかった。図４８では、グラフは、異なる投与経路を介した２３ＩＬ００３６又はＩＲＲ００７の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成阻害に関して本実施例３５で得られた結果を示す。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。
実施例３６：急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルにおける野生型ナノボディ２３ＩＬ００３８、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００４９の用量範囲解析
野生型ＩＬ−２３ｐ１９−中和ナノボディ２３ＩＬ００３８、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００４９の有効性を、実施例３５に記載の最適化急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルで実証した。
４つの別個の実験において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、各群４匹の個体から成る７つの群に割り当てた。群２〜群７のマウス全てに、３つの異なる時点（ｔ＝０時間、７時間及び２３時間）で３μｇのｈＩＬ−２３を３回腹腔内注射した。群１の動物には、同じ時点でｈＩＬ−２３の代わりにＰＢＳを摂取させた。４つの実験それぞれで、５つの異なる用量の特定のナノボディ又は陽性対照抗体を初めのｈＩＬ−２３注射の２時間前に皮下注射した。全ての実験で、３μｇのｈＩＬ−２３注射のそれぞれに対するモル過剰が３つのナノボディ及び陽性対照抗体ＢＭ０１それぞれのものと同じになるように用量を選択した（８２倍過剰、１６倍過剰、３．２倍過剰、０．６４倍過剰及び０．１２８倍過剰）。
それぞれの実験で、結果を、ｈＩＬ−２３のみを注射した群２の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化し、その正規化の結果を図４９Ａ〜図４９Ｄに表し、これらの図はナノボディ（図４９Ａ：２３ＩＬ００４９、図４９Ｂ：２３ＩＬ００４１、図４９Ｃ：２３ＩＬ００３８）又は陽性の対照抗体（図４９Ｄ：ＢＭ０１）の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して本実施例３６で得られた結果を示すグラフである。平均ｍＩＬ−２２合成を、ｈＩＬ−２３のみを摂取した群と比較した％変化で表す。
３つのナノボディ全てがｉｎ ｖｉｖｏでｈＩＬ−２３を中和することが可能であった。ナノボディ２３ＩＬ００４９及び２３ＩＬ００３８が４つの最大用量でｍＩＬ−２２の合成を有意に遮断した。最小用量のこれらのナノボディ（０．１２８倍過剰）にも依然として効果はあったが、完全にはｍＩＬ−２２産生を遮断することはできなかった。２３ＩＬ００４１で、３つの最大用量群がｍＩＬ−２２の合成を有意に遮断し、２つの最小用量群における阻害は完全ではなかった。ナノボディの有効性はＢＭ０１の有効性と同程度であった。
ｈＩＬ−２３濃度をｈＩＬ−２３のみを注射した群の最終採血試料で測定した。３μｇのｈＩＬ−２３の最後の注射の８時間後、ｈＩＬ−２３の平均血清濃度は２２．５ｎｇ／ｍｌである。
実施例３７：急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルにおけるナノボディ２３ＩＬ００５０及び２３ＩＬ００５４の活性
一価のナノボディ２３ＩＬ００５０及び二重パラトピックナノボディ２３ＩＬ００５４を、実施例３５に記載の急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルで試験した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（それぞれが４匹のマウスを有する７つの群）に０時間、７時間及び２３時間で３μｇのｈＩＬ−２３を用いて刺激した。群１のマウスには、同じ時点でｈＩＬ−２３の代わりにＰＢＳを摂取させた。両方のナノボディを初めのｈＩＬ−２３注射の２４時間前に皮下注射した。３つの用量を解析し、それぞれの用量レベルで、３μｇのｈＩＬ−２３の注射それぞれに対して同じモル過剰を用いた（１６倍過剰、３．２倍過剰又は０．６４倍過剰）。
結果を図５０に示し、この図は２３ＩＬ００５４及び２３ＩＬ００５０の投与の際のマウス脾細胞アッセイにおけるｍＩＬ−２２合成の阻害に関して本実施例３７で得られた結果を示すグラフである。結果を、ｈＩＬ−２３のみを注射した群２の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化した。
両方のナノボディが最大の２つの用量レベルで完全にｍＩＬ−２２の合成を遮断した。最小用量では、一価のナノボディと二重パラトピックナノボディとの間ではっきりとした差異があった。二重パラトピック２３ＩＬ００５４は０．６４倍モル過剰でも依然としてｍＩＬ−２２合成を阻害したが、同じモル用量の２３ＩＬ００５０ではｍＩＬ−２２濃度は基礎レベルに戻った。
実施例３８：Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３、８１Ａ１２、８１Ｇ２、３７Ｄ５、２０Ｂ１１及び１２４Ｃ４のヒト化
Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３のアミノ酸配列を、インハウス（in-house）配列クエリ／アラインメントツールを使用して、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列データベースに対してＢＬＡＳＴにかけた（blasted）（図５１Ａを参照されたい）。ヒト生殖細胞系列ＶＨ３−２３（ＤＰ−４７とも呼ばれる）及びＪＨ５は、最も密接に関連する配列を示した。１０個のアミノ酸残基（図５１Ａの１１９Ａ３ｖ１６において黒色の囲み枠で示す）を、ヒト化目的のために置換し、１つのアミノ酸残基を安定性目的で置換して（Ｈ３７Ｙ）、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６（配列番号２５７８）を作製した。
Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３のヒト化プロセスにおいて、１８個のＰ２３ＩＬ１１９Ａ３バージョン（Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３−ＢＡＳＩＣ及びＰ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１〜ｖ１７）を構築した。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３−ＢＡＳＩＣは５つの置換基を含有する：Ａ１４Ｐ、Ｈ３７Ｙ、Ｖ７８Ｌ、Ｋ８４Ｒ及びＱ１０８Ｌ。これらの変化に加えて、ｖ１〜ｖ１７バージョンではさらなる置換基が導入されている：Ｖ５Ｌ、Ｍ４３Ｋ、Ｑ４４Ｇ、Ａ４９Ｓ、Ｎ５８Ｙ、Ａ７４Ｓ、Ｑ７５Ｋ、Ｋ７６Ｎ、Ｎ８２ｂＳ及びＱ９３Ａ。これらを、ＰＣＲオーバーラップ伸長法を使用して、オリゴヌクレオチドからアセンブリした。構築物を大腸菌で発現させ、ＩＭＡＣ及び脱塩処理で精製した。
全ての変異型を、ｈＩＬ−２３結合能に関しては表面プラズモン共鳴で、並びに中和活性に関しては実施例２７及び実施例３５に記載のようにアルファスクリーン及び脾細胞アッセイで評価した。また、変異体の熱安定性を、Ｌｉｇｈｔｃｙｌｃｅｒ（Roche）を使用して熱移動アッセイで試験した。このアッセイでは、ナノボディ変異体を、ｓｙｐｒｏオレンジの存在下で異なるｐＨ値でインキュベートし、温度勾配を適用する。ナノボディの変性が始まると、或る特定のｐＨでこのような融解温度を求めることができるので、ｓｙｐｒｏオレンジが結合し、測定される蛍光が突発的に増大する。解析を２回行い、１回目では、基本変異体での単一突然変異を評価し、これらの結果に基づき、突然変異を組み合わせて新たな変異体を作製した。結果を表Ｂ−２２に要約する。
２回目の変異体の結合反応速度も、表面プラズモン共鳴によって徹底的に解析した（ビアコア３０００）。ヒト可溶性ＩＬ−２３は、活性化ではＥＤＣ／ＮＨＳ及び不活性化ではＨＣｌを使用して、アミンカップリングを介してＣＭ５センサーチップ表面と共有結合した。ナノボディ結合は、１つの濃度（１００ｎＭ）で評価した。それぞれのナノボディは、４５μｌ／分の流速で４分間、注入して、チップ結合抗原に結合させた。次に、ナノボディを有しない結合バッファーを同じ流速でチップに送り、結合ナノボディを自然解離させた。異なるナノボディで得られたセンサーグラムから、ｋｏｆｆ値（ｋｄ）を算出し、表Ｂ−２３に示す。結合モデルに適合させるのに１つの濃度のナノボディしか使用しなかったので、結合速度定数（ｋｏｎ又はｋａ）、またしたがってＫＤ値も指標でしかなかった。結果を表Ｂ−２３に要約する。
Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２のアミノ酸配列を、インハウス配列クエリ／アラインメントツールを使用して、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列データベースに対してＢＬＡＳＴにかけた（図５１Ｂを参照されたい）。ヒト生殖細胞系列ＶＨ３−２３（ＤＰ−４７とも呼ばれる）及びＪＨ５は、最も密接に関連する配列を示した。８個のアミノ酸残基（図５１Ｂの８１Ａ１２ｖ４において黒色の囲み枠で示す）を、ヒト化目的のために置換し、Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２ｖ４（配列番号２５８４）を作製した。
Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２のヒト化プロセスにおいて、５個のＰ２３ＩＬ８１Ａ１２バージョン（Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２−ＢＡＳＩＣ及びＰ２３ＩＬ８１Ａ１２ｖ１〜ｖ４）を構築した。Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２−ＢＡＳＩＣは４つの置換基を含有する：Ａ１４Ｐ、Ｖ７８Ｌ、Ｋ８４Ｒ及びＱ１０８Ｌ。これらの変化に加えて、ｖ１〜ｖ４バージョンではさらなる置換基が導入されている：Ｖ５Ｌ、Ｅ４４Ｇ、Ａ４９Ｓ及びＡ７４Ｓ。これらを、ＰＣＲオーバーラップ伸長法を使用して、オリゴヌクレオチドからアセンブリした。構築物を大腸菌で発現させ、ＩＭＡＣ及び脱塩処理で精製した。
全ての変異型を、ｈＩＬ−２３結合能に関して表面プラズモン共鳴で評価し、また変異体の熱安定性を試験した。解析を２回行い、１回目では、基本変異体での単一突然変異を評価した。この結果を表Ｂ−２４に要約する。
全ての突然変異を有する最終変異体：Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２ｖ４を調製及び試験した。この最終変異体の解析結果を表Ｂ−２５に示す。この分子は、（カバットナンバリングによる）フレームワーク領域においてヒトのものに対して９１．９５％相同性である。
Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２のアミノ酸配列を、インハウス配列クエリ／アラインメントツールを使用して、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列データベースに対してＢＬＡＳＴにかけた（図５１Ｃを参照されたい）。ヒト生殖細胞系列ＶＨ３−２３（ＤＰ−４７とも呼ばれる）及びＪＨ５は、最も密接に関連する配列を示した。１１個のアミノ酸残基（図５１Ｃの８１Ｇ２ｖ１１において黒色の囲み枠で示す）を、ヒト化目的のために置換し、Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１１（配列番号２５９７）を作製した。
Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２のヒト化プロセスにおいて、１２個のＰ２３ＩＬ８１Ｇ２バージョン（Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２ｂａｓｉｃ及びＰ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１〜ｖ１１）を構築した。Ｐ２３ＩＬ８１Ａ１２ｂａｓｉｃは２つの置換基を含有する：Ｅ４４Ｇ及びＱ１０８Ｌ。これらの変化に加えて、ｖ１〜ｖ１１バージョンではさらなる置換基が導入されている：Ｖ５Ｌ、Ｉ２２Ａ、Ａ４９Ｓ、Ｇ６０Ａ、Ｆ６２Ｓ、Ａ６８Ｔ、Ａ７４Ｓ、Ｔ７８Ｌ、Ｗ７９Ｙ、Ｋ８３Ｒ及びＴ１０５Ｑ。これらを、ＰＣＲオーバーラップ伸長法を使用して、オリゴヌクレオチドからアセンブリした。構築物を大腸菌で発現させ、ＩＭＡＣ及び脱塩処理で精製した。全ての変異型を、ｈＩＬ−２３結合能に関して表面プラズモン共鳴で評価し、また変異体の熱安定性を試験した。解析を２回行い、１回目では、基本変異体での単一突然変異を評価した。この結果を表Ｂ−２６に要約する。
Ｖ３及びＶ４由来のものを除く全ての突然変異を有する最終変異体：Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１１を調製及び試験した。この最終変異体の解析結果を表Ｂ−２７に示す。この分子は、（カバットナンバリングによる）フレームワーク領域においてヒトのものに対して９２．１０％相同性である。
Ｐ２３ＩＬ３７Ｄ５のアミノ酸配列を、インハウス配列クエリ／アラインメントツールを使用して、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列データベースに対してＢＬＡＳＴにかけた（図５１Ｄ）。ヒト生殖細胞系列ＶＨ３−２３（ＤＰ−４７とも呼ばれる）及びＪＨ５は、最も密接に関連する配列を示した。８個のアミノ酸残基（図５１Ｄの３７Ｄ５ｖ１６において黄色及び青色で示す）を、ヒト化目的のために置換し、Ｐ２３ＩＬ３７Ｄ５ｖ１６（配列番号２６０１）を作製することができる。この場合、Ｖ５Ｌ、Ｅ４４Ｇ、Ｋ８４Ｒ及びＱ１０８Ｌの突然変異を含有する基本変異体を作製した。それから、７４位、７５位、７６位及び７８位に１６（２４）個の置換を有する基本変異体のミニライブラリを構築した。ライブラリをＴＧ１に形質転換し、個々のコロニーを摘み取り、９６ウェルプレートで成長させた。ペリプラズム抽出物を調製し、解離速度に関して遮断アルファスクリーンでスクリーニングした。またこれらのクローンの配列を決定した。
効力及び親和性が全く又はほとんど失われていない変異体を産生し、ＩＭＡＣ及び脱塩処理で精製して、徹底的に解析する。結果を表Ｂ−２８に示す。ヒト化目的で変化させるアミノ酸残基を図５１Ｄの変異体における黒色の囲み枠で示す）。
Ｐ２３ＩＬ−１２４Ｃ４のアミノ酸配列を、インハウス配列クエリ／アラインメントツールを使用して、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列データベースに対してＢＬＡＳＴにかけた（図５１Ｅ）。ヒト生殖細胞系列ＶＨ３−２３（ＤＰ−４７とも呼ばれる）及びＪＨ５は、最も密接に関連する配列を示した。６個のアミノ酸残基をヒト化目的のために置換することができる。基本変異体Ｐ２３ＩＬ−１２４Ｃ４−ＢＡＳＩＣを作製したが、これはＥ４４Ｇ及びＶ７８Ｌの突然変異を含有する。これらの変化に加えて、ｖ１〜ｖ３バージョンではさらなる置換基が導入されている：Ｓ７１Ｒ、Ａ７４Ｓ及びＫ１０５Ｑ。これらを、ＰＣＲオーバーラップ伸長法を使用して、オリゴヌクレオチドからアセンブリした。構築物を大腸菌で発現させ、ＩＭＡＣ及び脱塩処理で精製した。
実施例３９：異なるフォーマットのヒト化ナノボディの構築及び産生
二重パラトピック抗ｐ１９ナノボディを、構成要素Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６又はＰ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１０、Ｐ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１１又はＰ２３ＩＬ８１Ａ１２ｖ４を使用して、３つの異なるタイプのＨＬＥにより構築した。対応するナノボディ番号を有する様々なフォーマットされたヒト化ナノボディの幾つかの好ましいが非限定的な例を図３２に表す。
Ａ）ＨＬＥ１：抗ヒト血清アルブミンナノボディ
三価のヒト化二重パラトピック分子（Ｐ２３ＩＬ００５７及びＰ２３ＩＬ００５８／００６４）は、中央に、抗ヒト血清アルブミンナノボディ構成要素に対応する第３のヒト化ナノボディ構成要素を有する、ヒト化抗ｐ１９ナノボディに対応する２つの構成要素を有する。個々の構成要素を９Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ、配列番号７９２）で融合した。Ｐ２３ＩＬ００５７はＰ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１０とＰ２３ＩＬ８４Ａ１２とから成り、Ｐ２３ＩＬ００５８はＰ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６とＰ２３ＩＬ８４Ａ１２とから成る。構築物をＴＧ１に形質転換した。発現後、これらのナノボディを、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｅｘｔｒａを捕捉し、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．５）で溶出して、その後すぐに１ＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．５）で中和することによりペリプラズム抽出物から精製した。試料を、Ｍｏｎｏ Ｓ ＨＲ５／５０カラム（GE healthcare）を使用する陽イオン交換、及びＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ １０／３００ ＧＬ（GE healthcare）上のサイズ排除により精製した。
これらのナノボディを大量に産生するために、構築物をｐＡＸ８９（変性ｐＰＩＣＺαＡベクター、Invitrogen,Carlsbad, CA）にクローン化し、メタノール資化酵母株Ｘ３３に形質転換した。ナノボディを発現する、組換えメタノール資化酵母の清澄発酵ブロスからナノボディＰ２３ＩＬ００６４を精製した。清澄発酵ブロスをＴＦＦ（０．２２μｍのＨｙｄｒｏｓａｒｔカセット、Sartorius）により単体粒子にさせ、その後ＴＦＦ（１０ｋＤａ ＭＷＣＯ Ｈｙｄｒｏｓａｒｔカセット、Sartorius）を使用してＰＢＳに対する濃縮及び透析濾過工程を行った。ナノボディをＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡ（Poros）上で捕捉して、その後ＳＥＣ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ ｆｉｎｅ、GE healthcare）によりバッファーを１／１０ ＰＢＳに切り替え、Ｐｏｒｏｓ ５０ＨＳ（Poros）上で精製工程を行った。ＬＰＳ除去のための５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシドによる処理の後、ナノボディをＳｕｐｅｒｄｅｘ ７５ ｐｇ（GE Healthcare）上でサイズ排除クロマトグラフィを行った（sized）。
Ｂ）ＨＬＥ２：ＨＳＡ：
ＨＳＡ融合したヒト化二重パラピックナノボディ（Ｐ２３ＩＬ００６５）は、３５Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーで融合した、ヒト化抗ｐ１９ナノボディ、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６及びＰ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１１に対応する２つの構成要素から成る。この構築物のＣ末端に直接ＨＳＡを融合した。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６−３５ＧＳ−８１Ｇ２ｖ１１に関するコード配列をｐＡＸ９９ベクター（これは全長ヒト血清アルブミンに関するコード配列を含有するｐＰＩＣＺαＡベクターである）にライゲーションすることによりこれが起こった。プラスミドをメタノール資化酵母株Ｘ３３に形質転換した。ナノボディを発現する、組換えメタノール資化酵母の清澄発酵ブロスからナノボディを精製した。清澄発酵ブロスをＴＦＦ（０．２２μｍのＨｙｄｒｏｓａｒｔカセット、Sartorius）により単体粒子にさせ、その後ＴＦＦ（ＰＥＳＵ−ＡＬカセット、Sartorius）を使用してＰＢＳに対する濃縮及び透析濾過工程を行った。対象のタンパク質をＢｌｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ＦＦ（GE Healthcare, Uppsala, Sweden）上で捕捉し、Ｐｏｒｏｓ５０ＨＱ及びＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ ＸＫ２６／６０を使用する精製工程によりさらに精製した。
Ｃ）ＨＬＥ３：ＰＥＧ：
ペグ化されたヒト化二重パラトピックナノボディ（Ｐ２３ＩＬ００６２／００６３）は、３５Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーで融合した、ヒト化抗ｐ１９ナノボディ、Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６及びＰ２３ＩＬ８１Ｇ２ｖ１１に対応する２つの構成要素から成る。ＧＧＧＣ配列を構築物のＣ末端に添加した。Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３ｖ１６−３５ＧＳ−８１Ｇ２ｖ１１のコード配列を、Ｐ２３ＩＬ００６３が得られるｐＡＸ９７ベクター（このＧＧＧＣ配列を含有するｐＰＩＣＺαＡベクターである）、又はＰ２３ＩＬ００６２が得られるｐＡＸ１０１ベクターにライゲーションすることによりこれが起こった。ｐＡＸ９７構築物をメタノール資化酵母株Ｘ３３に形質転換し、ｐＡＸ１０１構築物をＴＧ１に形質転換した。精製及びペグ化を以下の通りに行った：ナノボディＰ２３ＩＬ００６３をメタノール資化酵母で産生した。ＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡ（商標）（Poros）上での捕捉工程により清澄発酵ブロスからナノボディを精製し、１００ｍＭのグリシン（ｐＨ２．７）を使用して溶出した。バッファーを１／１０ ＰＢＳに切り替えた後、対象のタンパク質をＰｏｒｏｓ５０ＨＳ（Poros）上でさらに精製し、その後１０ｍＭのＤＴＴで還元した。ＳＥＣ（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GE Healthcare）により余分なＤＴＴを取り除き、還元ナノボディを直鎖ｍＰＥＧ４０（４０ｋＤａのメトキシポリ（エチレングリコール）マレイミド−プロピオンアミド、Dow Pharma）と結合させた。ペグ化ナノボディを、ＭａｃｒｏＣａｐ ＳＰ（GE healthcare）上でさらに精製し、反応していない過剰なＰＥＧ４０を取り除いた。最後に、ＬＰＳを取り除くため、ペグ化ナノボディを５０ｍＭのオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド（Sigma）で処理し、その後サイズ排除クロマトグラフィを行った（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ｐｇ、GEHealthcare）。
実施例４０：フォーマットされたヒト化抗ｐ１９ナノボディの特徴付け
Ａ）マウス脾細胞アッセイにおける効力
ヒト化ＨＬＥナノボディを試験し、実施例２７に記載のようなｈＩＬ−２３及びカニクイザルＩＬ−２３を使用する脾細胞アッセイでＷＴ ＨＬＥナノボディと比較した。結果を表Ｂ−２９及び表Ｂ−３０に示す。
Ｂ）ＢＡＦ３増殖アッセイにおける効力
ヒト化ＨＬＥナノボディを試験し、実施例２７に記載のような７６ｐＭのｈＩＬ−２３を使用するＢＡＦ３増殖アッセイでＷＴ ＨＬＥナノボディと比較した。結果を表Ｂ−３１に示す。
Ｃ）ＥＬＩＳＡ効力アッセイ：フォーマットされたヒト化ナノボディによるＩＬ−２３ＲとのＩＬ−２３相互作用の阻害
９６ウェルプレートを抗Ｆｃナノボディ（６μｇ／ｍｌ）で４℃で一晩コーティングし、その後３０分間、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーで遮断した。異なる濃度のフォーマットされたヒト化ナノボディを、３０分間４ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−２３と共にプレインキュベーションした後、３００ｎｇ／ｍｌのｈＩＬ−２３Ｒ−Ｆｃと共に３０分インキュベーションし、その後混合物をコーティングウェルに移した。結合ｈＩＬ−２３を、１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーを含有するＰＢＳ中の１／７５０希釈のビオチン化抗ヒトインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ｐ４０／７０モノクローナル抗体（eBiosciences, SanDiego, USA）と共に室温で３０分間検出し、その後１０％ Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーを含有するＰＢＳ中の１／５０００のホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンと共に室温で３０分間インキュベーションした。増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ）発色試薬を用いて可視化を行い、その後発色反応を１ＮのＨＣｌで停止させた。吸光度を４５０ｎｍで測定した。図５２は、フォーマットされたヒト化ナノボディ（２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６３）によるＩＬ−２３ＲとのＩＬ−２３相互作用の阻害を示し、表Ｂ−３２は対応するＩＣ５０値を表す。
またこのアッセイにおいて、フォーマットされたヒト化ナノボディとマーモセットＩＬ−２３との交差反応性を示した。
Ｄ）２３ＩＬ００６４とヒト血清アルブミンとの結合
９６ウェルマイクロタイタープレートを組換えヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、ＰＢＳ中１２５μｇ／ｍｌ）で４℃で一晩コーティングした。ウェルのアスピレーション、及びＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ Ｔ２０（ＰＢＳ）遮断バッファーによる３０分間の遮断の後、ウェルを希釈系列の２３ＩＬ００６４と共に１時間インキュベートした。結合２３ＩＬ００６４を二価のホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ナノボディで検出した。３倍希釈した増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ）発色試薬による可視化の後、発色反応を１ＮのＨＣｌで停止させ、吸光を４５０ｎｍで測定した（図５３）。
実施例４１：急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルにおけるヒト化ナノボディ２３ＩＬ００６３、２３ＩＬ００６４及び２３ＩＬ００６５の活性
ヒト化ＩＬ−２３ｐ１９中和ナノボディ２３ＩＬ００６３、２３ＩＬ００６４及び２３ＩＬ００６５の有効性を、実施例３５に記載の急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルで実証した。
２つの別個の実験において、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれが４匹の個体から成る８つの群に割り当てた。群２〜群８のマウス全てに、３つの異なる時点（ｔ＝０時間、７時間及び２３時間）で３μｇのｈＩＬ−２３を３回腹腔内注射した。群１の動物には、同じ時点でｈＩＬ−２３の代わりにＰＢＳを摂取させた。１回目のｈＩＬ−２３注射の２４時間前に、ナノボディ又は陽性対照抗体を皮下注射した。２つの実験にわたって、ナノボディ２３ＩＬ００６３、２３ＩＬ００６４及び２３ＩＬ００６５を３つの異なる用量で投与した。この用量は、３μｇのｈＩＬ−２３注射のそれぞれに対するモル過剰が３つのナノボディそれぞれのものと同じになるように選択した（１６倍過剰、３．２倍過剰、又は０．６４倍過剰）。陽性対照として、ＢＭ０１を使用した。
結果を、ｈＩＬ−２３のみを注射した群２の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化し、これを図５４及び図５５に表す。３つのナノボディ全てがｈＩＬ−２３を中和することが可能であり、２つの最大用量でｍＩＬ−２２の合成を有意に遮断した。最小用量のこれらのナノボディ（０．６４倍過剰）にも依然として効果はあったが、完全にはｍＩＬ−２２産生を遮断することはできなかった。ナノボディの有効性はＢＭ０１の有効性と同程度であった。
実施例４２：マウスにおける二重パラトピックの野生型ナノボディの薬物動態
幾つかの代表的な二重パラトピックの野生型ナノボディの薬物動態特性を求めるために、７２匹の雄Ｂａｌｂ／ｃマウスを、それぞれが１２匹のマウスから成る６つの群に割り当てた。マウスは、およそ１２週齢であり、最初の体重が１９．８ｇ〜２４．９ｇであった。
ナノボディ２３ＩＬ００４９、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００３８を試験した。表Ｂ−３３に記載のように、試験日１日目に単一投与で動物に静脈内又は皮下投与した。血清試料をナノボディレベルの測定及び抗体解析のために表Ｂ−３４に記載の時点で採取した。
ナノボディ２３ＩＬ００４９（１１９Ａ３−Ａｌｂ１−８１Ａ１２、Ｐ１ａＷＴ）、２３ＩＬ００４１（１１９Ａ３−８１Ｇ２−ＨＳＡ、Ｐ１ｂＷＴ）及び２３ＩＬ００３８（１１９Ａ３−８１Ｇ２−ＰＥＧ４０、Ｐ１ｃＷＴ）の濃度を、３つの異なる免疫アッセイにより血清で求めた。
ナノボディ２３ＩＬ００４９の濃度を以下の通りマウス血清で求めた：９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Nunc, Wiesbaden,Germany）を１００μＬ／ウェルのニュートラアビジン（ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬ、Pierce,Rockford, IL）で一晩４℃でコーティングした。ウェルをアスピレーションし、室温で３０分間ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（登録商標）Ｔ２０ ＰＢＳ（Pierce, Rockford, IL）（３００μＬ／ウェル）で遮断した。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、１００μＬ／ウェルのビオチン化ｈＩＬ２３（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、０．２μｇ／ｍＬ、担体無含有組換えヒトＩＬ−２３（ｐ１９／ｐ４０）、eBioScience, SanDiego, USA）を、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間インキュベートすることにより捕捉した。ビオチン化ｈＩＬ２３を、ＥＺ−Ｌｉｎｋ（登録商標）スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Pierce, Rockford, IL, USA）を用いて調製し、遊離ビオチンを、Ｚｅｂａ脱塩スピンカラム（Pierce, Rockford, IL, USA）を使用して取り除いた。このインキュベーション工程後、ウェルをＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。標準、ＱＣ試料及び試験試料全てを非コーティング（ポリプロピレン）プレートで調製した。標準及びＱＣ試料の前希釈液を１００％マウス血清中で調製した。標準及びＱＣ試料を調製するために、１／１０希釈の前希釈液をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中で作製した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。試験試料をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で１／１０に希釈し、必要であれば１０％マウス血清を用いてＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中でさらに希釈した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。標準、ＱＣ試料及び試験試料をコーティングプレートに移し、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、プレートを、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間、１００μＬ／ウェルのウサギ抗ナノボディポリクローナル抗体（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、１／５０００に希釈）と共にインキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、プレートを、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間、１００μＬ／ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ポリクローナルヤギ抗ウサギ抗体（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、１／５０００に希釈、DakoCytomation, Glostrup, Denmark）と共にインキュベートした。１００μＬ／ウェルの増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ、SDT, Brussels, Belgium）とのインキュベーションにより可視化を行った。１０分後発色反応を１００μＬ／ウェルの１ＮのＨＣｌで停止させた。TecanのＥＬＩＳＡリーダーにおいて１０秒の振盪後に４５０ｎｍで吸光を求め、６２０ｎｍでバックグラウンド吸光を補正した。それぞれの試料における濃度をＳ字検量線に基づき求めた。
ナノボディ２３ＩＬ００４１の濃度を以下の通りマウス血清で求めた：９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Nunc, Wiesbaden,Germany）を１００μＬ／ウェルのニュートラアビジン（ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬ、Pierce,Rockford, IL）で一晩４℃でコーティングした。ウェルをアスピレーションし、室温で３０分間ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（登録商標）Ｔ２０ ＰＢＳ（Pierce, Rockford, IL）（３００μＬ／ウェル）で遮断した。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、１００μＬ／ウェルのビオチン化ｈＩＬ２３（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、０．２μｇ／ｍＬ、担体無含有組換えヒトＩＬ−２３（ｐ１９／ｐ４０）、eBioScience, SanDiego, USA）を、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間インキュベートすることにより捕捉した。このインキュベーション工程後、ウェルをＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。標準、ＱＣ試料及び試験試料全てを非コーティング（ポリプロピレン）プレートで調製した。標準及びＱＣ試料の前希釈液を１００％マウス血清中で調製した。標準及びＱＣ試料を調製するために、１／１０希釈の前希釈液をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中で作製した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。試験試料をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で１／１０に希釈し、必要であれば１０％マウス血清を用いてＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中でさらに希釈した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。標準、ＱＣ試料及び試験試料をコーティングプレートに移し、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、プレートを、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間、１００μＬ／ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ポリクローナルヤギ抗ヒトアルブミン（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、１／５０００に希釈、Nordic Immunology, Tilburg, The Netherlands）と共にインキュベートした。１００μＬ／ウェルの増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ、SDT, Brussels, Belgium）とのインキュベーションにより可視化を行った。１０分後発色反応を１００μＬ／ウェルの１ＮのＨＣｌで停止させた。TecanのＥＬＩＳＡリーダーにおいて１０秒の振盪後に４５０ｎｍで吸光を求め、６２０ｎｍでバックグラウンド吸光を補正した。それぞれの試料における濃度をＳ字検量線に基づき求めた。
ナノボディ２３ＩＬ００３８の濃度を以下の通りマウス血清で求めた：９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ、Nunc, Wiesbaden,Germany）を１００μＬ／ウェルのヒトＩＬ−１２／ＩＬ−２３ ｐ４０ＭＡｂ（クローン１６９５１６）（ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬ、R&D Systems, Minneapolis, USA）で一晩４℃でコーティングした。ウェルをアスピレーションし、室温で３０分間ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（登録商標）Ｔ２０ ＰＢＳ（Pierce, Rockford, IL）（３００μＬ／ウェル）で遮断した。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、１００μＬ／ウェルの担体無含有組換えヒトＩＬ−２３（ｐ１９／ｐ４０）（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、０．２５μｇ／ｍＬ、eBioScience, SanDiego, USA）を、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間インキュベートすることにより捕捉した。このインキュベーション工程後、ウェルをＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。標準、ＱＣ試料及び試験試料全てを非コーティング（ポリプロピレン）プレートで調製した。標準及びＱＣ試料の前希釈液を１００％マウス血清中で調製した。標準及びＱＣ試料を調製するために、１／１０希釈の前希釈液をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中で作製した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。試験試料をＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で１／１０に希釈し、必要であれば１０％マウス血清を用いてＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中でさらに希釈した（マウス血清の最終濃度は１０％である）。標準、ＱＣ試料及び試験試料をコーティングプレートに移し、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、プレートを、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間、１００μＬ／ウェルのウサギ抗ナノボディポリクローナル抗体（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、１／２０００に希釈）と共にインキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０による３回の洗浄工程の後、プレートを、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で１時間、１００μＬ／ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ポリクローナルヤギ抗ウサギ抗体（ＰＢＳ−０．１％カゼイン−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０中、１／５０００に希釈、DakoCytomation, Glostrup, Denmark）と共にインキュベートした。１００μＬ／ウェルの増強可溶性３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ｅｓＴＭＢ、SDT, Brussels, Belgium）とのインキュベーションにより可視化を行った。１０分後発色反応を１００μＬ／ウェルの１ＮのＨＣｌで停止させた。TecanのＥＬＩＳＡリーダーにおいて１０秒の振盪後に４５０ｎｍで吸光を求め、６２０ｎｍでバックグラウンド吸光を補正した。それぞれの試料における濃度をＳ字検量線に基づき求めた。
２３ＩＬ００４９、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００３８を注射する、平均血漿濃度−時間プロファイルを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌソフトウェアバージョン５．１（PharsightCorporation, Mountain View California, USA）を使用して、それぞれ静脈内及び皮下の投与経路に対して予めプログラミングされたモデル１〜７及びモデル３〜４を使用するコンパートメント薬物動態解析にかけた。モデル及び重み付けの識別を、適合の目視検査、並びに最小ＡＩＣ（赤池情報量規準）、ＳＢＣ（シュワルツベイジアン情報量基準）、ＷＲＳＳ（重み付き最小二乗基準（Weighted Residual Sum of Squares））及びＣＶ％（パラメータの変動係数）の評価により行った。算出された薬物動態パラメータの概要を表Ｂ−３５及び表Ｂ−３６に表す。
２３ＩＬ００３８又は２３ＩＬ００４１−２３ＩＬ００４９の静脈内投与後のプロファイルはそれぞれ一相又は二相で減衰しているように見えた。２３ＩＬ００４９、２３ＩＬ００４１及び２３ＩＬ００３８の皮下投与後のプロファイルは、最大濃度に達した後に一相で減衰した。静脈内及び皮下の両方の投与後に２３ＩＬ００４９及び２３ＩＬ００３８で予測ＰＫパラメータが得られ、２３ＩＬ００４９の静脈内及び皮下の両方の投与後に消失半減期（terminal half-lives）がわずかに高くなり、バイオアベイラビリティが高くなった。２３ＩＬ００４１の静脈内及び皮下の両方の投与後に消失半減期、並びにバイオアベイラビリティが有意に低くなった。
これらの動物では、２３ＩＬ００４９及び２３ＩＬ００３８ナノボディに対する有意な抗体力価は全く検出されない。静脈内投与の６日後及び皮下投与の１０日後、２３ＩＬ００４１に対する抗体はごく少量しか見られなかった。
実施例４３：マウスにおいてフォーマットされたヒト化ナノボディ（２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６３）のＰＫ
ヒト化ＩＬ２３ナノボディ２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６３を雄Ｂａｌｂ／ｃマウスに静脈内及び皮下投与する。ナノボディの濃度を血清試料で測定する。ナノボディに対する抗体を測定する。
実施例４４：カニクイザルにおいてフォーマットされたヒト化ナノボディ（２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６３）のＰＫ
ヒト化ＩＬ２３ナノボディ２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６３を雄カニクイザルに静脈内及び皮下投与する。ナノボディの濃度を血清試料で測定する。ナノボディに対する抗体を測定する。
実施例４５：ヒト化マウス乾癬モデルにおける２３ＩＬ００６４、２３ＩＬ００６５及び２３ＩＬ００６４の有効性
抗ＩＬ２３ｐ１９ナノボディがヒト化マウスモデルにおける乾癬の外観を抑制する能力を評価する。このモデルは、Wrone-Smith and Nickoloff（1996）によって記載されている試験に基づいている。これは、ヒト乾癬病巣の発達に対する薬物の効果をｉｎ ｖｉｖｏでモニタリングすることができる唯一利用可能なモデルである。要するに、乾癬患者の非病変皮膚を免疫不全マウスに移植し、移植片の適応後、自己前活性化ＰＢＭＣを皮内注射し、乾癬プロセスを誘発する。マウスを１週間に２回腹腔内で処理する。処理の３週間後、マウスを屠殺して、ヒト皮膚移植物を表皮過形成（ＨＥ染色）並びにケラチノサイトの増殖及び分化（例えばＫｉ−６７染色）に関して組織学的に評価する。
実施例４６：抗ｐ４０二重パラトピックナノボディ及び抗ｐ１９−抗ｐ４０二重特異性ナノボディ
Ａ）抗ｐ４０二重パラトピックナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ナノボディの構築
ｐ４０ナノボディによるエピトープグループ分け実験のデータに基づき（実施例２６）、以下のナノボディを抗ｐ４０二重パラトピックフォーマットに組み合わせた：Ｐ２３ＩＬ３Ｃ１をＰ２３ＩＬ３Ｂ８若しくはＰ２３ＩＬ３Ｇ１０で、Ｐ２３ＩＬ３Ｂ８をＰ２３ＩＬ８０Ｄ１０若しくはＰ２３ＩＬ８４Ｇ１２で、Ｐ２３ＩＬ−２３Ｅ３をＰ２３ＩＬ８１Ａ１若しくはＰ２３ＩＬ８４Ｇ１で、Ｐ２３ＩＬ−２２Ｄ７をＰ２３ＩＬ８０Ｄ１０若しくはＰ２３ＩＬ−２２Ｄ１０及びＰ２３ＩＬ−２２Ｅ１１をＰ２３ＩＬ８０Ｄ１０若しくはＰ２３ＩＬ８４Ｇ１２で、又は抗ｐ１９及び抗ｐ４０二重特異性フォーマットに組み合わせた：Ｐ２３ＩＬ１１９Ａ３をＰ２３ＩＬ３Ｃ１、Ｐ２３ＩＬ３Ｂ８又はＰ２３ＩＬ−２３Ｅ３及びＰ２３ＩＬ３７Ｄ５をＰ２３ＩＬ−２２Ｄ７で。効力に対するフォーマット、ナノボディの位置付け及びリンカー長の影響を調べた。使用される構築物を全て図３３及び図３４に挙げる。
コード配列をｐＡＸ１００にクローニングし、ＴＧ１に形質転換して、ｍｙｃ−Ｈｉｓ標識分子として発現した。これらを５０ｍＭのＯＧＰの存在下でＩＭＡＣ、脱塩処理、濃縮及びゲル濾過により精製し、ＬＰＳを取り除いた。
Ｂ）マウス脾細胞アッセイにおける抗ｐ４０二重パラトピックナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ナノボディの効力
抗ｐ４０二重パラトピックＨＬＥナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ＨＬＥナノボディを試験し、実施例２７に記載のようにｈＩＬ−２３及びカニクイザルＩＬ−２３を使用して脾細胞アッセイにおいてｍＡＢ ＢＭ０１と比較した。結果を表Ｂ−３７に示す。二重特異性ナノボディに関して、ｈＩＬ−２３では全てが良好に行われたが、カニクイザルＩＬ−２３ではＰ２３ＩＬ０２０２及びＰ２３ＩＬ０２０４が余り良好には行われなかった。二重パラトピックナノボディに関して、Ｐ２３ＩＬ０４０６及びＰ２３ＩＬ０４０７はカニクイザルＩＬ−２３を使用すると効力が低くなったが、これはその交差反応性が最適でないためであった。
Ｃ）ＢＡＦ３増殖アッセイにおける抗ｐ４０二重パラトピックナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ナノボディの効力
マウス脾細胞アッセイの結果に基づき、最良の効力を有する抗ｐ４０二重パラトピックＨＬＥナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ＨＬＥナノボディの選択組を試験し、実施例２７に記載のように７６ｐＭのｈＩＬ−２３を使用してＢＡ／Ｆ３増殖アッセイにおいてｍＡＢ ＢＭ０１と比較した。結果を表Ｂ−３８に示す。
Ｄ）脾細胞アッセイにおける天然ｈＩＬ−２３の活性：
組換えｈＩＬ−２３によるマウス脾細胞アッセイの結果に基づき、最良の効力を有する抗ｐ４０二重パラトピックＨＬＥナノボディ及び抗ｐ１９抗ｐ４０二重特異性ＨＬＥナノボディの選択組を試験し、実施例３１に記載のように調製した１９ｐＭの天然ｈＩＬ−２３を使用してマウス脾細胞アッセイにおいてｍＡＢ ＢＭ０１と比較した。結果を表Ｂ−３９に示す。
Ｅ）ＩＬ−１２依存性ＰＨＡブラスト増殖アッセイにおける効力
ｈＩＬ−１２の中和の効力をＩＬ−１２依存性ＰＨＡブラスト増殖アッセイで求める。要するにＰＨＡブラストを、３日間、ＰＨＡ（５０μｇ／ｍｌ）で、及び１日間、ＩＬ−２（５０Ｕ／ｍｌ）でＰＢＭＣを培養することにより誘導した。これらのＰＨＡブラストを、希釈系列のナノボディ試験項目（items）（例えば６０ｎＭから始まり０．１５ｐＭまで）、又は２０００ｎＭから始まり１ｐＭまでのｐ１９−ｐ４０二重特異性ナノボディ及びｐ４０一価ナノボディ、又は対照ナノボディ若しくは抗体と共にプレインキュベートしたｈＩＬ−１２で刺激する。細胞を２日間刺激し、続いて６時間、１μＣｉ／ウェルの３Ｈ−チミジンでパルス標識して、増殖を、シンチレーション計測により３Ｈ−チミジン組込みを測定することによって求めた。
実施例４７：急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルにおけるナノボディ２３ＩＬ４００及び２３ＩＬ４０３の活性
二価のｐ４０＋／ｐ４０＋ナノボディ２３ＩＬ４００（３Ｂ８−ＡＬＢ１−３Ｃ１、配列番号２６３０）及び２３ＩＬ４０３（３Ｇ１０−ＡＬＢ１−３Ｃ１、配列番号２６３３）を実施例３５に記載の急性ｉｎ ｖｉｖｏマウス脾細胞モデルで解析した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（それぞれが４匹のマウスを有する７つの群）に０時間、７時間及び２３時間で３μｇのｈＩＬ−２３を用いて刺激した。群１のマウスには、同じ時点でｈＩＬ−２３の代わりにＰＢＳを摂取させた。陽性対照抗体（ＢＭ０１、群３及び群４）、２３ＩＬ４００（群５及び群６）及び２３ＩＬ４０３（群７及び群８）を初めのｈＩＬ−２３注射の２４時間前に皮下注射した。２つの用量を解析し、両方の用量は３μｇのｈＩＬ−２３の注射それぞれに対するモル過剰であり、３つの試験項目全てで同じであった（３．２倍過剰及び０．６４倍過剰）。
結果を図５１に示し、この図は、マウス脾細胞アッセイにおける、２つの異なる用量レベルでのＢＭ０１、Ｐ２３ＩＬ０４００及びＰ２３ＩＬ０４０３の投与の際のｍＩＬ−２２合成の阻害に関して実施例３８で得られた結果を示すグラフである。
結果を、ｈＩＬ−２３のみを注射した群２の平均ｍＩＬ−２２濃度に正規化した。両方のナノボディが最大用量でｍＩＬ−２２の合成を完全に遮断した。最小用量では、２３ＩＬ４００と２３ＩＬ４０３との間ではっきりとした差異があった。２３ＩＬ４００は０．６４倍モル過剰でも依然として有意にｍＩＬ−２２合成を阻害したが、同じモル用量の２３ＩＬ４０３ではｍＩＬ−２２濃度はほとんど基礎レベルに戻った。２３ＩＬ４００の有効性はＢＭ０１の有効性と同程度である。

Claims (37)

  1. タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ１９サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
  2. 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）である、請求項１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  3. 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０−配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、請求項１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  4. 該ｐ１９サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ該ｐ４０サブユニットに指向性を有する該アミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能なアミノ酸配列）である、請求項１に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  5. タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ３５サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニットに指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
  6. タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ１９サブユニット上の第１のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ１９サブユニット上の該第１のエピトープ又は抗原決定基とは異なる第２のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
  7. 第１のアミノ酸配列が、ｐ１９＋配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ第２のアミノ酸配列が、ｐ１９−配列（即ち、ｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、請求項６に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  8. タンパク質又はポリペプチドであって、任意で好適なリンカーを介して連結した、ｐ４０サブユニット上の第１のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列、及びｐ４０サブユニット上の該第１のエピトープ又は抗原決定基とは異なる第２のエピトープ又は抗原決定基に指向性を有する少なくとも１つのさらなるアミノ酸配列を含み、且つ任意で１つ又は複数のさらなるアミノ酸配列、結合ドメイン及び／又は結合単位を含む、タンパク質又はポリペプチド。
  9. タンパク質又はポリペプチドであって、該第１のアミノ酸配列が、ｐ４０＋配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）であり、且つ第２のアミノ酸配列が、ｐ４０−配列（即ち、ｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインとその受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能なアミノ酸配列）である、タンパク質又はポリペプチド。
  10. 前記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、単一の（抗原）結合ドメイン若しくは結合単位を形成するか、及び／又は本質的にこれから成る、及び／又は（任意で好適なフォールディングの後に）単一の（抗原）結合ドメイン又は結合単位を形成するか、及び／又はそのように機能することが可能である、請求項１〜９のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  11. 前記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、免疫グロブリンフォールドを含むか、又は好適な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成することが可能である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  12. 前記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）及び３つの相補性決定領域から成る、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  13. 前記タンパク質又はポリペプチドに含まれ、且つサブユニットに指向性を有するアミノ酸配列が各々、ドメイン抗体（若しくはドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一のドメイン抗体（若しくは単一のドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（若しくはｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（ＶＨＨ配列が挙げられるが、これに限定されない）、又は別の単一の可変ドメイン、又はこれらのいずれか１つの任意の好適な断片である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  14. ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
    少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
    少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
    前記タンパク質又はポリペプチドが、前記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び前記第２のサブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
  15. 第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
    前記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、少なくとも１つの第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有される少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
    前記第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体と、前記第２の異なるヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体との間で共有されない少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
    前記タンパク質又はポリペプチドが、前記第１の（即ち共有）サブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び前記第２の（即ち非共有）サブユニットに指向性を有する第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
  16. 第１のヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有するタンパク質又はポリペプチドであって、
    少なくとも１つの第１のサブユニット、及び
    少なくとも１つの第２のサブユニットを含み、
    前記タンパク質又はポリペプチドが、前記第１のサブユニットに指向性を有する第１の結合ドメイン又は結合単位、及び同様に前記第１のサブユニットに指向性を有するが、前記第１のサブユニット上の異なるエピトープ、抗原決定基又は結合部位にも指向性を有する、前記第１の結合ドメイン又は結合単位とは異なる第２の結合ドメイン又は結合単位を少なくとも含む、タンパク質又はポリペプチド。
  17. 受容体のリガンドに指向性を有し、且つ該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、請求項１５又は１６に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  18. 受容体のリガンドに指向性を有し、該第１の結合ドメイン又は結合単位と該第２の結合ドメイン又は結合単位との両方が、該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能である、請求項１５に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  19. 各々の結合ドメイン又は結合単位が、免疫グロブリンフォールドを含むか、又は好適な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成することが可能である、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  20. 各々の結合ドメイン又は結合単位が、本質的に４つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１〜ＦＲ４）及び３つの相補性決定領域から成る、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  21. 各々の結合ドメイン又は結合単位が、ドメイン抗体（若しくはドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、単一のドメイン抗体（若しくは単一のドメイン抗体としての使用に好適なアミノ酸配列）、「ｄＡｂ」（若しくはｄＡｂとしての使用に好適なアミノ酸配列）、又はナノボディ（商標）（ＶＨＨ配列が挙げられるが、これに限定されない）、又は別の単一の可変ドメイン、又はこれらのいずれか１つの任意の好適な断片である、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド。
  22. 請求項１〜２１のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチドをコードするヌクレオチド配列又は核酸。
  23. 少なくとも１つの請求項１〜２１のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド、又は請求項２２に記載のヌクレオチド配列又は核酸を含む組成物。
  24. 少なくとも１つの請求項１〜２１のいずれか１項に記載のタンパク質又はポリペプチド、及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤及び／又はアジュバントを含む医薬組成物。
  25. ｐ１９＋配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記ｐ１９＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
  26. ｐ１９−配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記ｐ１９−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
  27. ｐ４０−配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記ｐ４０−配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
  28. ｐ４０＋配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記ｐ４０＋配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
  29. ｐ３５配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記ｐ３５配列（１つ又は複数）及び１つ又は複数のさらなる結合ドメイン又は結合単位を含む多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の、使用。
  30. 該多価、多重特異性及び／又は多重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有する、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の使用。
  31. 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、該ヘテロ二量体サイトカインの１つのサブユニットに指向性を有する二重パラトピックの構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドである、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載の使用。
  32. 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、前記ヘテロ二量体サイトカインの第１のサブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び前記ヘテロ二量体サイトカインの第２のサブユニットに指向性を有する少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む多重特異性の構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドである、請求項３０及び３１のいずれか１項に記載の使用。
  33. 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、該ヘテロ二量体サイトカインとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の使用。
  34. ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有する多重特異性構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成るアミノ酸配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが前記アミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、前記１つ又は複数のアミノ酸配列が該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ前記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の該第１のサブユニットとは異なる第２のサブユニットに指向性を有する、使用。
  35. 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが、ヘテロ二量体サイトカインに指向性を有するか、又はヘテロ二量体サイトカインのヘテロ二量体受容体に指向性を有する、請求項３４に記載の使用。
  36. ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体に指向性を有する二重パラトピック構築物、タンパク質及び／又はポリペプチド（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）を提供する、構築する、及び／又はその一部とする際の単一の結合ドメイン又は結合単位を含むか、又は本質的にこれから成るアミノ酸配列（をコードするヌクレオチド配列及び／又は核酸）の使用であって、前記構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが前記アミノ酸配列（１つ又は複数）及び少なくとも１つのさらなる結合ドメイン又は結合単位を含み、前記１つ又は複数のアミノ酸配列が該ヘテロ二量体タンパク質、ポリペプチド、リガンド又は受容体の第１のサブユニットに指向性を有し、且つ前記さらなる結合ドメイン又は結合単位の少なくとも１つが、同様に前記第１のサブユニットに指向性を有するが、前記サブユニット上の異なるエピトープ又は抗原決定基にも指向性を有する、使用。
  37. 該構築物、タンパク質及び／又はポリペプチドが受容体のリガンドに指向性を有し、且つ該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位、及び該リガンドとその（同族）受容体との結合を調節、中和、遮断及び／又は阻害することが本質的に不可能な少なくとも１つの結合ドメイン又は結合単位を含む、請求項３６に記載の使用。
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