CN108697794A - C-met抑制剂和抗pd-1抗体分子的组合及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物组合，其包含(a)与程序性死亡分子1(PD‑1)结合的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，和(b)至少一种c‑Met受体酪氨酸激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，用于同时、分别或依序给药用于治疗增生性疾病，特别是c‑Met依赖性增生性疾病；包含所述组合的药物组合物；治疗患有增殖性疾病的受试者的方法，包括将所述组合给予有需要的受试者；所述组合治疗增生性疾病的用途；以及包含所述组合的商业包装。

Description

C-MET抑制剂和抗PD-1抗体分子的组合及其用途
技术领域
本发明涉及药物组合，其包含(a)与程序性死亡分子1(PD-1)结合的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，和(b)至少一种c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，用于同时、分别或依序给药用于治疗增生性疾病，特别是c-Met依赖性增生性疾病；包含所述组合的药物组合物；治疗患有增殖性疾病的受试者的方法，包括将所述组合给予有需要的受试者；所述组合治疗增生性疾病的用途；以及包含所述组合的商业包装。
背景技术
T细胞介导针对抗原的免疫应答的能力需要两种不同的信号传导相互作用(Viglietta，V等人(2007)Neurotherapeutics 4：666-675；Korman，AJ等人(2007)Adv.Immunol.90：297-339)。首先，将已经排列在抗原呈递细胞(APC)表面上的抗原呈递给抗原特异性未免疫CD4+T细胞。这种呈递通过T细胞受体(TCR)传递信号，该信号指导T细胞启动对所呈递抗原特异的免疫应答。其次，通过APC与不同T细胞表面分子之间的相互作用介导的各种共刺激和抑制信号触发T细胞的激活和增殖及最终它们的抑制。
免疫系统受共刺激和共抑制配体和受体网络的严密控制。这些分子为T细胞活化提供第二信号，并提供正负信号的平衡网络，以最大化针对感染的免疫应答，同时限制对自身的免疫(Wang，L等人(Epub Mar.，2011)J.Exp.Med.208(3)：577-92；Lepenies，B等人(2008)Endocrine，Metabolic&Immune Disorders-Drug Targets 8：279-288)。共刺激信号的示例包括APC的B7.1(CD80)和B7.2(CD86)配体与CD4+T淋巴细胞的CD28和CTLA-4受体之间的结合(Sharpe，AH等人(2002)Nature Rev.Immunol.2：116-126；Lindley，PS等人(2009)Immunol.Rev.229：307-321)。B7.1或B7.2与CD28的结合刺激T细胞活化，而B7.1或B7.2与CTLA-4的结合抑制这种活化(Dong，C等人(2003)Immunolog.Res.28(1)：39-48；Greenwald，RJ等人(2005)Ann.Rev.Immunol.23：515-548)。CD28在T细胞表面上组成型表达(Gross，J等人(1992)J.Immunol.149：380-388)，而CTLA-4表达在T细胞活化后迅速上调(Linsley，P等人(1996)Immunity 4：535-543)。
CD28受体的其他配体包括一组相关的B7分子，也称为“B7超家族”(Coyle，AJ等人(2001)Nature Immunol.2(3)：203-209；Sharpe，AH等人(2002)Nature Rev.Immunol.2：116-126；Collins，M等人(2005)Genome Biol.6：223.1-223.7；Korman，AJ等人(2007)Adv.Immunol.90：297-339)。已知B7超家族的一些成员，包括B7.1(CD80)，B7.2(CD86)，诱导型共刺激配体(ICOS-L)，程序性死亡分子-1配体(PD-L1；B7-H1)，程序性死亡分子-2配体(PD-L2；B7-DC)，B7-H3，B7-H4和B7-H6(Collins，M等人(2005)Genome Biol.6：223.1-223.7)。
程序性死亡分子1(PD-1)蛋白是扩展的T细胞调节因子CD28/CTLA-4家族的抑制成员(Okazaki等人(2002)Curr Opin Immunol 14：391779-82；Bennett等人(2003)J.Immunol.170：711-8)。CD28家族的其他成员包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。提示PD-1作为单体存在，缺乏其他CD28家族成员特有的未成对半胱氨酸残基。PD-1在活化的B细胞、T细胞和单核细胞上表达。
PD-1基因编码55kDa的I型跨膜蛋白(Agata等(1996)Int Immunol.8：765-72)。虽然结构上类似于CTLA-4，但PD-1缺乏对B7-1和B7-2结合重要的MYPPY基序(SEQ ID NO:236)。已经确认两种PD-1配体，PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，它们已显示在与PD-1结合后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J.Exp.Med.192：1027-34；Carter等(2002)Eur.J.Immunol.32：634-43)。PD-L1和PD-L2都是与PD-1结合的B7同源物，但不与其他CD28家族成员结合。PD-L1在多种人类癌症中大量存在(Dong等人(2002)Nat.Med.8：787-9)。
已知PD-1是负调节TCR信号的免疫抑制蛋白(Ishida，Y等人(1992)EMBO J.11：3887-3895；Blank，C等人(Epub 2006年12月29日)Immunol.Immunother.56(5)：739-745)。PD-1和PD-L1之间的相互作用可以充当免疫检查点，其可以导致例如减少肿瘤浸润淋巴细胞，减少T细胞受体介导的增殖和/或癌细胞的免疫逃避(Dong等人(2003)J.Mol.Med.81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10：5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用可以逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效应是叠加的(Iwai等人(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 99：12293-7；Brown等人(2003))J.Immunol.170：1257-66)。
鉴于免疫检查点途径在调节免疫应答中的重要性，需要开发调节免疫抑制蛋白(例如PD-1)活性的新型组合疗法，从而导致免疫系统的活化。这些药剂可用于例如癌症免疫疗法和其他病症的治疗，例如慢性感染。
c-Met是一种原癌基因，是包括Met，Ron和Sea的异二聚体受体酪氨酸激酶的独特亚家族的成员(Birchmeier，C等，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003,4(12)：915-925；Christensen，JG等，Cancer Lett.2005,225(1)：1-26)。c-Met的唯一高亲和力配体是肝细胞生长因子(HGF)，也称为分散因子(SF)。HGF与c-Met的结合通过自身磷酸化诱导受体活化，导致受体依赖性信号传导的增加。c-Met和HGF均在多种器官中广泛表达，但它们的表达通常分别局限于上皮和间充质来源的细胞。c-Met(或c-Met信号传导途径)在正常组织和人类恶性肿瘤如癌症中的生物学功能已被充分记载(Christensen，JG等，Cancer Lett.2005,225(1)：1-26；Corso，S等，Trends in Mol.Med.2005,11(6)：284-292)。
正常哺乳动物发育需要HGF和c-Met，在HGF和c-Met均缺失的小鼠中报告的异常与器官形态发生过程中胚胎表达和上皮-间质转化缺陷接近一致(Christensen，JG等，CancerLett.2005,225(1)：1-26)。与这些发现一致，HGF/c-Met途径的信号转导和随后的生物学效应已被证明对于上皮-间充质相互作用和调节发育期间的细胞迁移、侵袭、细胞增殖和存活、血管生成、形态发生的调节，和三维管状结构(例如肾小管细胞，腺体形成)的组织是重要的。c-Met途径激活在给定细胞/组织中的特定后果是高度依赖于所处环境的。
有证据表明，失调的c-Met途径在肿瘤形成、生长、维持和进展中发挥重要且有时是成因性(在遗传改变的情况中)的作用(Birchmeier，C等，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.2003,4(12)：915-925；Boccaccio，C等人，Nat.Rev.Cancer 2006,6(8)：637-645；Christensen，JG等人，Cancer Lett.2005,225(1)：1-26)。HGF和/或c-Met在人类大多数癌症中的相当部分有过表达，并且通常关联较差的临床结果，例如更具侵袭性的疾病，疾病进展，肿瘤转移和缩短的患者存活。此外，具有高水平HGF/c-Met蛋白的患者对化学疗法和放射疗法具有更高的抗性。除了异常的HGF/c-Met表达外，c-Met受体还可以通过基因突变(种系和体细胞)和基因扩增在癌症患者中被激活。尽管基因扩增和突变是患者中报道的最常见遗传改变，但该受体也可以通过缺失、截短、基因重排以及异常受体加工和缺陷的负调控机制来激活。
发明内容
本发明公开药物组合，其包含(a)与程序性死亡分子1(PD-1)结合的至少一种抗体分子(例如，人源化抗体分子)，和(b)至少一种c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，用于同时、分别或依序给药以治疗增生性疾病，特别是c-Met依赖性增生性疾病；包含所述组合的药物组合物；治疗患有增殖性疾病的受试者的方法，包括将所述组合给予有需要的受试者；所述组合治疗增生性疾病的用途；以及包含所述组合的商业包装。
在一个实施方案中，本发明的特征在于治疗(例如，抑制、减少、改善或预防)受试者中的病症，例如过度增殖性病症或病征(例如，癌症)的方法。该方法包括与c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂组合给予受试者抗-PD-1抗体分子，例如本文所述的抗PD-1抗体分子，以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约300mg的剂量施用。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子以每4周一次约400mg的剂量施用。在一些实施方案中，所述病症是癌症，例如本文所述的癌症。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)施用约200mg至500mg的剂量(例如，平坦剂量)，例如约250mg至450mg，约300mg至400mg，约250mg至350mg，约350mg至450mg，或约300mg或约400mg。给药方案(例如，平坦给药方案)可以从例如每周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约400mg的剂量施用。
另一方面，本发明的特征在于降低过度增殖(例如癌)细胞的活性(例如，生长、存活或活性，或全部)的方法。该方法包括使细胞与抗PD-1抗体分子接触，例如本文所述的抗PD-1抗体分子。该方法可以在受试者中进行，例如作为治疗方案的一部分与c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂组合，例如，以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的抗PD-1抗体分子的剂量，在某些实施方案中，剂量为每三周一次约300mg的抗PD-1抗体分子。
在其他实施方案中，剂量为每四周一次约400mg的抗PD-1抗体分子。癌细胞可以是，例如，来自本文所述癌的细胞，例如肺癌(鳞状)，肺癌(腺癌)，头颈癌，宫颈癌(鳞状)，胃癌，甲状腺癌，黑素瘤，鼻咽癌(例如，分化的或未分化的转移性或局部复发的鼻咽癌)或乳腺癌。
另一方面，本发明的特征在于一种组合物(例如，一种或多种组合物或剂型)，其包括抗PD-1抗体分子(例如，如本文所述的抗PD-1抗体分子)。本文还描述了包含抗PD-1抗体分子(例如，如本文所述的抗PD-1抗体分子)的制剂(例如剂量制剂)和试剂盒(例如治疗试剂盒)。在某些实施方案中，组合物或制剂包含300mg或400mg的抗PD-1抗体分子(例如，如本文所述的抗PD-1抗体分子)。在一些实施方案中，制剂组合物每三周或每四周施用或使用一次。这种组合物与至少一种c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂或其药学上可接受的盐组合使用，用于同时、分开或依序给药。
本文公开的组合可以在单一组合物中一起施用或者以两种或更多种不同组合物(例如本文所述的组合物或剂型)分开施用。治疗剂的施用可以是任何顺序。第一药剂和另外的药剂(例如，第二、第三药剂)可以通过相同的给药途径或通过不同的给药途径给药。
抗PD-1抗体分子
在一个实施方案中，PD-1抑制剂是抗-PD-1抗体分子，如题为“抗PD-1抗体分子及其用途(Antibody Molecules to PD-1and Uses Thereof)”的USSN14/604,415中所述，其通过引用整体纳入。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段，所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个、两个、三个或四个可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个或两个重链可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个或两个轻链可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区。在一个实施方案中，人IgG4包括在根据EU编号228位的取代(例如，Ser至Pro取代)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区。在一个实施方案中，人IgG1包括在根据EU编号297位的取代(例如，Asn至Ala取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第265位的取代，根据EU编号第329位的取代，或两者(例如，在第265位的Asp至Ala取代和/或在第329位的Pro至Ala的取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第234位的取代，根据EU编号第235位的取代，或两者(例如，在第234位的Leu至Ala取代和/或在第235位的Leu至Ala的取代)。在一个实施方案中，重链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如，重和轻链恒定区包含以下序列：表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。
在一个实施方案中，人IgG4包括在根据EU编号228位的取代(例如，Ser至Pro取代)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如，重和轻链恒定区包含以下序列：表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。在一个实施方案中，人IgG1包括在根据EU编号297位的取代(例如，Asn至Ala取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第265位的取代，根据EU编号第329位的取代，或两者(例如，在第265位的Asp至Ala取代和/或在第329位的Pro至Ala的取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第234位的取代，根据EU编号第235位的取代，或两者(例如，在第234位的Leu至Ala取代和/或在第235位的Leu至Ala的取代)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括重链可变结构域和恒定区，轻链可变结构域和恒定区，或两者，包含以下的氨基酸序列：BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。可任选地，抗PD-1抗体分子包含来自重链，轻链或两者的前导序列，如表4中所示；或与其基本相同的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR(或所有CDR)，所述重链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个，两个，三个，四个，五个，六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自轻链可变区的至少一个，两个或三个CDR(或所有CDR)，所述轻链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个，两个，三个，四个，五个，六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括轻链CDR中的取代，例如轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括在轻链CDR3上的轻链可变区102位的取代，例如，在表1所示的轻链可变区102位的半胱氨酸取代为酪氨酸，或半胱氨酸取代为丝氨酸残基(例如，未修饰的鼠或嵌合的SEQID NO:16或24；或已修饰序列SEQ ID No：34,42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自重和轻链可变区的至少一个，两个、三个、四个、五个或六个CDR(或所有CDR)，所述重和轻链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个，两个，三个，四个，五个，六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的所有六个CDR或密切相关的CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；密切相关的CDR例如相同的或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何CDR。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括轻链CDR中的取代，例如轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括在轻链CDR3上的轻链可变区102位的取代，例如，在表1所示的轻链可变区102位的半胱氨酸取代为酪氨酸，或半胱氨酸取代为丝氨酸残基(例如，未修饰的鼠或嵌合的SEQ ID NO:16或24；或已修饰序列SEQ ID No：34,42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或与前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的轻和重链可变区的所有六个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的所有个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的所有六个CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何CDR。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个Chothia高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个高变环)，或至少为来自那些与PD-1接触的高变环的氨基酸，或相对于根据Chothia等人定义如表1所示的至少一个、两个或三个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个Chothia高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个高变环)，或至少为来自那些与PD-1接触的高变环的氨基酸，或相对于根据Chothia等人定义如表1所示的至少一个、两个或三个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Chothia等人的如本文所述抗体的重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环)，或至少有来自那些高变环的接触PD-1的氨基酸，或相对于根据Chothia定义如表1所示的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Chothia等人的如本文所述抗体的所有六个高变环(例如，根据Chothia定义如表1的所有六个高变环)，或密切相关的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；密切相关的高变环例如：相同的高变环或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个，三个或四个改变(例如，取代，缺失或插入，例如保守取代)的序列的高变环，或相对于根据Chothia定义如表1的所有六个高变环，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个，三个或四个改变(例如，取代，缺失或插入，例如保守取代)的序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何高变环。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含至少一个、两个或三个高变环，其具有与如本文所述抗体的相应高变环相同的经典结构，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；例如，与本文所述抗体的重链和/或轻链可变结构域的至少环1和/或环2相同的经典结构。高变环经典结构描述参见，例如，Chothia等，(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等人(1992)J.Mol.Biol.227：776-798。这些结构可以通过检查这些参考文献中描述的表格来确定。
在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人和Chothia等人定义的CDR或高变环的组合。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环，或相对于根据Kabat或Chothia定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR或高变环，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，根据Kabat或Chothia定义(例如，根据Kabat或Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个CDR或高变环)；或由表1中的核苷酸序列编码；或与前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
例如，抗PD-1抗体分子可包括根据Kabat等的VH CDR1，或根据Chothia等人的VH高变环1，或其组合，例如，如表1所示。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和Chothia CDR的组合包含氨基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO:224)，或与其基本相同的氨基酸序列(例如，具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代))。抗PD-1抗体分子可以进一步包括例如根据Kabat等人的VH CDR 2-3，和根据Kabat等人的VLCDR 1-3，例如，如表1所示。因此，在一些实施方案中，框架区基于根据Kabat等定义的CDR和根据Chothia等人定义的高变环的组合来定义。例如，抗PD-1抗体分子可包括基于根据Chothia等的VH高变环1定义的VH FR1，和基于根据Kabat等的VH CDR 1-2定义的VH FR2和VH FR2，例如，如表1所示。抗PD-1抗体分子可以进一步包括例如基于根据Kabat等人的VH CDR 2-3所定义的VH FR 3-4，和基于根据Kabat等人的VL CDR 1-3所定义的VLFR 1-4。
抗PD-1抗体分子可包括根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，根据Kabat或Chothia定义(例如，根据Kabat或Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含选自SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在本文的组合中，在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含(i)重链可变区(VH)，其包含选自SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQID NO:2或SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；(ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列，和SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，例如，实施方案包含可变区，CDR(例如，Chothia CDR或KabatCDR)或本文提及(例如，在表1中)的其他序列，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子，或是包含抗体的抗原结合片段的抗体分子，例如半抗体或半抗体的抗原结合片段。在某些实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子，其具有对PD-1的第一结合特异性和对TIM-3，LAG-3，CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)，PD-L1或PD-L2的第二结合特异性。在一个实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和TIM-3。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和LAG-3。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和CEACAM-1。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和CEACAM-5。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和PD-L1。在另一实施方案中，双特异性抗体分子结合PD-1和PD-L2。前述分子的任何组合可以制备成多特异性抗体分子，例如，三特异性抗体，其包含对PD-1的第一结合特异性的，以及对以下一种或多种的第二和第三结合特异性：TIM-3，LAG-3，CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3或CEACAM-5)，PD-L1或PD-L2。
C-Met受体酪氨酸激酶抑制剂
本文公开的c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂，例如公开在美国专利7,767,675中，该专利全文以引用的方式并入本文。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是capmatinib。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是capmatinib二盐酸盐。在一个实施方案中，capmatinib以约400-600mg(例如，每天)的剂量施用，例如约400、500或600mg，或约400-500或500-600mg。
在一个实施方案中，capmatinib口服给药。
组合疗法的应用
本文公开的组合可以导致以下一种或多种：抗原呈递增加，效应细胞功能提高(例如，T细胞增殖、IFN-分泌或细胞裂解功能申的一种或多种)，调节性T细胞功能的抑制，对多种细胞类型(如调节性T细胞，效应T细胞和NK细胞)的活性的影响，肿瘤浸润淋巴细胞增加，T细胞受体介导增殖增加，癌细胞免疫逃避减少。在一个实施方案中，组合中PD-1抑制剂的使用抑制、降低或中和PD-1的一种或多种活性，导致免疫检查点的阻断或减少。因此，这种组合可用于治疗或预防需要增强受试者免疫应答的疾病。
因此，在另一方面，提供了一种调节受试者中免疫应答的方法。该方法包括向受试者施用本文公开的组合(例如，包含治疗有效量的抗PD-1抗体分子的组合)，单独或与一种或多种试剂或程序组合，使得受试者中的免疫应答被调制。在一个实施方案中，抗体分子增强、刺激或增加受试者的免疫应答。受试者可以是哺乳动物，例如灵长类动物，优选高等灵长类动物，例如人(例如，患有或有风险患有本文所述疾病的患者)。在一个实施方案中，受试者需要增强免疫应答。在一个实施方案中，受试者患有或有风险患有本文所述的病症，例如本文所述的癌症或感染性病症。在某些实施方案中，受试者是免疫受损的或处于免疫受损的风险中。例如，受试者正在经历或已经历化学治疗和/或放射疗法。另外地，或组合地，受试者由于感染而具有免疫受损的风险或处于免疫受损中。
在一个方面，提供了治疗(例如，减少、抑制或延迟进展中的一种或多种)受试者中的癌症或肿瘤的方法。该方法包括向受试者施用本文公开的组合(例如，包含治疗有效量的抗PD-1抗体分子的组合)。
在某些实施方案中，用所述组合治疗的癌症包括但不限于实体瘤，血液癌症(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤)和转移性病变。在一个实施方式中，所述癌症是实体瘤。实体瘤的实例包括恶性肿瘤，例如肉瘤和癌，例如各种器官系统的腺癌，例如影响肺、乳腺、卵巢、淋巴、胃肠(例如结肠)、肛门、生殖器和泌尿生殖道(例如，肾、尿路上皮、膀胱细胞、前列腺)、咽、中枢神经系统(如脑、神经或神经胶质细胞)、头颈部、皮肤(如黑色素瘤)和胰腺的那些，以及包括结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、非小细胞肺癌、小肠癌和食道癌等恶性肿瘤的腺癌。癌症可能处于早期、中期、晚期或转移性癌症。
在一个实施方案中，癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，具有鳞状和/或非鳞状组织学的NSCLC或NSCLC腺癌))、黑素瘤(例如，晚期黑素瘤)、肾癌(例如，肾细胞癌)、肝癌(例如，肝细胞癌)、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、前列腺癌、乳腺癌(例如，不表达雌激素受体、孕激素受体或Her2/neu中的一种、两种或全部的乳腺癌，例如三阴性乳腺癌)、结肠直肠癌、胰腺癌、头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、肛门癌、胃食管癌、甲状腺癌、宫颈癌、淋巴组织增生性疾病(如移植后淋巴组织增生性疾病)或血液癌、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或白血病(例如，髓样白血病或淋巴样白血病)。
在另一个实施方案中，癌症选自癌(例如晚期或转移癌)、黑素瘤或肺癌，例如非小细胞肺癌。
在一个实施方案中，癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌或小细胞肺癌。
在一个实施方案中，癌症是黑素瘤，例如晚期黑素瘤。在一个实施方案中，癌症是晚期或不可切除的黑素瘤，其不响应其他疗法。在其他实施方案中，癌症是具有BRAF突变的黑素瘤(例如，BRAF V600突变)。在其他实施方案中，本文所述的组合在用或不用BRAF抑制剂(例如，vemurafenib或dabrafenib)的抗CTLA4抗体分子(例如ipilimumab)治疗后施用。
在另一个实施方案中，癌症是肝癌，例如晚期肝癌，伴有或不伴有病毒感染，例如慢性病毒性肝炎。
在一个实施方案中，癌症是前列腺癌症，例如晚期前列腺癌。
在另一个实施方案中，癌症是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。
在另一个实施方案中，癌症是肾癌，例如肾细胞癌(RCC)(例如，转移性RCC或透明细胞肾细胞癌(CCRCC))。
在一个实施方案中，癌症微环境具有升高的PD-L1表达水平。另外地，或组合地，癌症微环境可具有增加的IFN和/或CD8表达。
在一些实施方案中，受试者患有或被鉴定为患有具有一种或多种高PD-L1水平或表达的肿瘤，或者具有肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)+(例如，具有增加数量的TIL))或两者。在某些实施方案中，受试者患有或被鉴定为患有具有高PD-L1水平或表达且为TIL+的肿瘤。在一些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有高PD-L1水平或表达中的一种或多种，或TIL+或两者的肿瘤来鉴定受试者。在某些实施方案中，本文所述的方法还包括基于具有高PD-L1水平或表达，且为TIL+的肿瘤来鉴定受试者。在一些实施方案中，TIL+的肿瘤CD8和IFNγ呈阳性。在一些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分比的PD-L1、CD8和/或IFNγ中的一种、两种或更多种呈阳性的细胞。在某些实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有高百分比的PD-L1、CD8和IFNγ均呈阳性的细胞。
在一些实施方案中，本文所述方法包括基于具有高百分比的PD-L1、CD8和/或IFNγ中的一种、两种或更多种呈阳性的细胞来鉴定受试者。在某些实施方案中，本文所述方法包括基于具有高百分比的PD-L1、CD8和IFNγ均呈阳性的细胞来鉴定受试者。在一些实施方案中，所述受试者患有或被鉴定为患有PD-L1、CD8和/或IFNγ中的一种、两种或更多种，以及一种或多种肺癌，例如鳞状细胞肺癌或肺腺癌；头颈癌；鳞状细胞宫颈癌；胃癌；食道癌；甲状腺癌；黑色素瘤和/或鼻咽癌(NPC)。在某些实施方案中，本文所述的方法进一步描述了基于以下来鉴定受试者：具有PD-L1、CD8和/或IFNγ中的一种、两种或更多种以及一种或多种肺癌(例如，鳞状细胞肺癌或肺癌)；腺癌；头颈癌；鳞状细胞宫颈癌；胃癌；甲状腺癌；黑色素瘤和/或鼻咽癌。
本文公开的方法和组合物可用于治疗与前述癌症相关的转移性病变。
在另一方面，本发明提供治疗受试者的感染性疾病的方法，其包括向受试者施用如本文所述的组合，例如包含治疗有效量的本文所述的抗PD-1抗体分子的组合。在一个实施方案中，感染性疾病选自肝炎(例如，丙型肝炎感染)或败血症。
更进一步地，本发明提供增强受试者对抗原的免疫应答的方法，包括给受试者施用：
(i)抗原；(ii)如本文所述的组合，例如包含治疗有效量的本文所述的抗PD-1抗体分子的组合，从而增强受试者中对抗原的免疫应答。抗原可以是，例如，肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原或来自病原体的抗原。
本文所述的组合可以如下给与受试者：全身(例如，口服、肠胃外、皮下、静脉内、直肠、肌肉内、腹膜内、鼻内、透皮、或通过吸入或腔内安装)，局部，或通过应用于粘膜，如鼻子、喉咙和支气管。
本文公开的治疗剂的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)以约1至30mg/kg的剂量施用，例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg或约3mg/kg。给药方案可以不同，从例如每周一次到每2、3或4周一次。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子以每隔一周约10至20mg/kg的剂量施用。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)施用约200mg至500mg的剂量(例如，平坦剂量)，例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg或约300mg或约400mg。给药方案(例如，平坦给药方案)可以从例如每周一次到每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约400mg的剂量施用。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子单独或组合(例如，与抗LAG-3抗体分子组合)每隔一周以如下剂量施用：小于或约5mg/kg；小于或约4毫克/千克；小于或约3毫克/千克；小于或约2毫克/千克；少于或约1毫克/千克。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子如下剂量施用：每隔一周1至5mg/kg；每隔一周1至4毫克/千克、每隔一周1至3毫克/千克或每隔一周1至2毫克/千克。在一个实施方案中，抗LAG-3抗体分子单独或联合(例如，联合抗PD-1抗体分子)如下剂量施用：每隔一周1至5mg/kg；每隔一周1至4毫克/千克、每隔一周1至3毫克/千克或每隔一周1至2毫克/千克。
本文所述的抗体分子对于本文所述方法中的应用为优选，但也可以使用其他抗PD-1抗体代替或与本发明的抗PD-1抗体分子组合使用。
进一步的组合治疗
本文描述的方法和组合可以与其他药剂或治疗方式组合使用。在一个实施方案中，本文所述的方法包括以有效治疗或预防病症的量向受试者施用包含如本文所述的抗PD-1抗体分子与药剂或治疗方法或方式的组合的组合。抗PD-1抗体分子和药剂或治疗方法或方式可以同时或以任何顺序依次施用。可以使用抗PD-1抗体分子和其他治疗剂、程序或方式(例如，如本文所述)的任何组合和顺序。抗体分子和/或其他治疗剂、程序或方式可以在活动性病症期间或在缓解期或活动性较低的疾病期间给予。抗体分子可以在其他治疗之前、与该治疗同时、治疗后或在疾病缓解期间施用。
在某些实施方案中，本文所述的方法和组合物与如下一种或多种联合施用：其他抗体分子，化疗，其他抗癌疗法(例如，靶向抗癌疗法、基因疗法、病毒疗法、RNA疗法骨髓移植、纳米疗法或溶瘤药物)，细胞毒性剂，基于免疫的疗法(例如，细胞因子或基于细胞的免疫疗法)，外科手术(例如，乳房肿瘤切除术或乳房切除术)或放射疗法，或任何前述的组合。另外的疗法可以是佐剂或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，另外的疗法是酶抑制剂(例如，小分子酶抑制剂)或转移抑制剂。可联合施用的示例性细胞毒试剂包括抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷化剂、蒽环霉素、长春花生物碱、嵌入剂、能够干扰信号转导途径的试剂、促进细胞凋亡的试剂、蛋白酶体抑制剂和辐射(例如，局部或全身照射(例如，γ辐射))。在其他实施方案中，另外的疗法是手术或放射或其组合。在其他实施方案中，另外的疗法是靶向PI3K/AKT/mTOR途径、HSP90抑制剂或微管蛋白抑制剂中的一种或多种的疗法。
另外地，或与前述组合组合，本文所述的方法和组合物可以与以下一种或多种组合施用：免疫调节剂(例如，共刺激分子的激活剂或抑制性分子的抑制剂，例如免疫检查点分子)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。
本文公开的组合的示例性非限制性组合和用途，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，包括以下。
在某些实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与共刺激分子或抑制分子(例如共抑制配体或受体)的调节剂组合施用。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与共刺激分子的调节剂(例如激动剂)组合施用。在一个实施方案中，共刺激分子的激动剂选自对于如下的激动剂(例如激动性抗体或其抗原结合片段或可溶性融合体)：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与选自如下抑制性(或免疫检查点)分子的抑制剂组合施用：PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ。在一个实施方案中，抑制剂是可溶性配体(例如，CTLA-4-Ig)或结合PD-L1、PD-L2或CTLA-4的抗体或抗体片段。例如，抗PD-1抗体分子可以与抗-CTLA-4抗体(例如，ipilimumab)组合施用，以治疗癌症(例如，选自以下的癌症：黑素瘤，例如，转移性黑素瘤；肺癌，例如非小细胞肺癌；或前列腺癌)。在一个实施方案中，在用或不用BRAF抑制剂(例如，vemurafenib或dabrafenib)的抗-CTLA-4抗体(例如ipilimumab)处理后施用抗PD-1抗体分子。
在另一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与抗LAG-3抗体分子或其抗原结合片段组合施用。
在另一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与抗TIM-3抗体分子或其抗原结合片段组合施用。
在另一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与抗LAG-3抗体分子和抗TIM-3抗体分子(或其抗原结合片段)组合施用。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与CEACAM抑制剂(例如CEACAM-1和/或CEACAM-5抑制剂)组合施用，例如抗CEACAM抗体分子。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子与CEACAM-1抑制剂组合施用，例如抗CEACAM-1抗体分子。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子与CEACAM-5抑制剂组合施用，例如抗CEACAM-5抗体分子。
本文所述的抗体组合可以分开给药，例如作为单独的抗体或其抗原结合片段，或被连接的，例如作为双特异性或三特异性抗体分子。在一个实施方案中，施用双特异性抗体，其包括抗PD-1抗体分子和抗TIM-3、抗CEACAM(例如，抗CEACAM-1、CEACAM-3和/或抗CEACAM-5)或抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，本文所述的抗体组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，实体瘤或恶性血液病)。
在另一些实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与细胞因子组合施用。细胞因子可以作为抗PD-1抗体分子的融合分子给药，或作为单独的组合物给药。在一个实施方案中，抗PD-1抗体与一种、两种、三种或更多种细胞因子(例如作为融合分子或作为单独的组合物)组合施用。在一个实施方案中，细胞因子是选自IL-1、IL-2、IL-12、IL-15或IL-21中的一种、两种、三种或更多种的白细胞介素(IL)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子对第一靶标(例如，对PD-1)具有第一结合特异性，对第二靶标(例如，LAG-3或TIM-3)具有第二结合特异性，并且可任选地连接白细胞介素(例如，IL-12)结构域，例如全长IL-12或其部分。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子和本文所述细胞因子的组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，实体瘤)。
在某些实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与特异性针对HLA C的抗体(例如，对杀伤细胞免疫球蛋白样受体特异的抗体，在本文中也称为“抗KIR抗体”)组合施用。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子和抗KIR抗体的组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，实体瘤，例如晚期实体瘤)。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与细胞免疫疗法(例如，(例如，Sipuleucel-T))组合施用，并可任选与环磷酰胺组合施用。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子、Provenge和/或环磷酰胺的组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，前列腺癌，例如晚期前列腺癌)。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与疫苗(例如癌症疫苗)(例如，树突状细胞肾癌(DC-RCC)疫苗)组合施用。在一个实施方案中，疫苗是基于肽的、基于DNA的、基于RNA的或基于抗原的，或其组合。在实施方案中，疫苗包含一种或多种肽，核酸(例如DNA或RNA)，抗原或其组合。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子和DC-RCC疫苗的组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，肾癌，例如转移性肾细胞癌(RCC))或透明细胞肾细胞癌(CCRCC))。
在另一实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与佐剂组合施用。
在另一些实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与化疗和/或免疫疗法组合施用。例如，抗PD-1抗体分子可单独或与以下一种或多种组合用于治疗骨髓瘤：化学疗法或其他抗癌剂(例如，沙利度胺类似物，例如来那度胺)，抗-TIM-3抗体，肿瘤抗原脉冲致敏的树突细胞，肿瘤细胞和树突细胞的融合(例如，电融合)，或由恶性浆细胞产生的免疫球蛋白独特型的疫苗接种。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子与抗TIM-3抗体组合使用以治疗骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。
在一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与化学疗法组合使用以治疗肺癌，例如非小细胞肺癌。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子与标准肺癌(例如NSCLC)化学疗法，例如铂双重疗法一起使用，以治疗肺癌。在其他实施方案中，在具有晚期或转移性癌症的受试者(例如，患有转移性和复发性NSCL癌症的患者)中组合施用抗PD-1抗体分子与吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂(例如，(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基))-亚硝基亚甲基-1,2,5-恶二唑-3-胺(也称为INCB24360)，吲哚莫德(1-甲基-D-色氨酸)，α-环己基-5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-乙醇(也称为NLG919)，等)。
在其他实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与以下一种或多种组合使用：基于免疫的策略(例如白细胞介素-2或干扰素-)，靶向剂(例如，VEGF抑制剂，例如VEGF的单克隆抗体)；VEGF酪氨酸激酶抑制剂，如舒尼替尼，索拉非尼，阿西替尼和帕唑帕尼；RNAi抑制剂；或VEGF信号传导下游介质的抑制剂，例如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂，例如依维莫司和替西罗莫司。任何这样的组合可用于治疗肾癌，例如肾细胞癌(RCC)(例如，透明细胞肾细胞癌(CCRCC))或转移性RCC。
在一些实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与MEK抑制剂(例如本文所述的MEK抑制剂)组合使用。在一些实施方案中，抗PD-1抗体和MEK抑制剂的组合用于治疗癌症(例如，本文所述的癌症)。在一些实施方案中，用所述组合治疗的癌症选自黑素瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤或肾细胞癌。在某些实施方案中，癌症包括BRAF突变(例如，BRAF V600E突变)，BRAF野生型，KRAS野生型或活化KRAS突变。癌症可能处于早期、中期或晚期。
在另一个实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与奥沙利铂、甲酰四氢叶酸或5-FU中的一种、两种或全部组合使用(例如，FOLFOX共治疗)。另外地或组合地，组合还包括VEGF抑制剂(例如，本文公开的VEGF抑制剂)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体，FOLFOX共治疗和VEGF抑制剂的组合用于治疗癌症(例如，本文所述的癌症)在一些实施方案中，用所述组合治疗的癌症选自黑素瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液恶性肿瘤或肾细胞癌。癌症可能处于早期、中期或晚期。
在其他实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与酪氨酸激酶抑制剂(例如阿西替尼)一起施用，以治疗肾细胞癌和其他实体瘤。
在其他实施方案中，本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，与4-1BB受体靶向剂(例如，刺激通过4-1BB(CD-137)的信号传导的抗体)例如，PF-2566)一起施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子与酪氨酸激酶抑制剂(例如阿西替尼)和4-1BB受体靶向剂组合施用。
抗PD-1抗体分子可以结合某实体，例如细胞毒性剂或部分(例如，治疗药物；发射辐射的化合物；植物、真菌或细菌来源的分子；或生物蛋白质(例如，蛋白质毒素)或颗粒(例如，重组病毒颗粒，例如，通过病毒外壳蛋白)。例如，抗体可以偶联放射性同位素，例如α-，β-或γ-发射体，或β-和γ-发射体。
可以使用抗PD-1抗体分子和其他治疗剂、程序或方式(例如，如本文所述)的任何组合和顺序。抗体分子和/或其他治疗剂、程序或方式可以在活动性病症期间或在缓解期或活动性较低的疾病期间给予。抗体分子可以在其他治疗之前、与该治疗同时、治疗后或在疾病缓解期间施用。
其他的组合治疗
在某些实施方案中，本文公开的任何组合还包括表7中描述的一种或多种药剂。
在一些实施方案中，另外的治疗剂选自以下一种或多种：1)蛋白激酶C(PKC)抑制剂；2)热休克蛋白90(HSP90)抑制剂；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂；4)细胞色素P450的抑制剂(例如，CYP17抑制剂或17α-羟化酶/C17-20裂解酶抑制剂)；5)铁螯合剂；6)芳香酶抑制剂；7)p53的抑制剂，例如p53/Mdm2相互作用的抑制剂；8)细胞凋亡诱导剂；9)血管生成抑制剂；10)醛固酮合成酶抑制剂；11)平滑(SMO)受体抑制剂；12)催乳素受体(PRLR)抑制剂；13)Wnt信号传导抑制剂；14)CDK4/6抑制剂；15)成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)/成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)抑制剂；16)巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂；17)c-KIT、组胺释放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中的一种或多种的抑制剂；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中的一种或多种的抑制剂；19)生长抑素激动剂和/或生长激素释放抑制剂；20)间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂；21)胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂；22)P-糖蛋白1抑制剂；23)血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂；24)BCR-ABL激酶抑制剂；25)FGFR抑制剂；26)CYP11B2的抑制剂；27)HDM2抑制剂，例如HDM2-p53相互作用的抑制剂；28)酪氨酸激酶抑制剂；29)c-MET的抑制剂；30)JAK的抑制剂；31)DAC的抑制剂；32)11β-羟化酶的抑制剂；33)IAP的抑制剂；34)PIM激酶抑制剂；35)Porcupine的抑制剂；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制剂；37)HER3的抑制剂；38)MEK的抑制剂；或39)脂质激酶的抑制剂，例如，如本文和表7中所述。
在一个实施方案中，癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，具有鳞状和/或非鳞状组织学的NSCLC，或NSCLC腺癌)，或公开在表7列出的出版物。
其他的实施方案
另外的实施方案提供治疗癌症的方法，其包括：在受试者或样品(例如，包含癌细胞和可任选的免疫细胞例如TIL的受试者样品)中鉴定PD-L1、CD8或IFN-γ中的一种、两种或全部的存在，从而提供PD-L1、CD8和IFN-γ中的一种、两种或全部的值。该方法可以进一步包括将PD-L1、CD8和/或IFN-γ值与参考值(例如对照值)进行比较。如果PD-L1、CD8和/或IFN-γ值大于参考值，例如对照值，则给予受试者治疗有效量的如本文所述的组合(例如，包含本文所述的抗PD-1抗体的组合)，可任选地与一种或多种其他药剂组合，从而治疗癌症。癌症可以是，例如，本文所述癌症，例如肺癌(鳞状)，肺癌(腺癌)，头颈癌，宫颈癌(鳞状)，胃癌，甲状腺癌，黑素瘤，鼻咽癌或乳腺癌，例如TN乳腺癌，例如IM-TN乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是ER+乳腺癌或胰腺癌。
还提供了治疗癌症的方法，包括：测试受试者或样品(例如，包含癌细胞的受试者样品)中PD-L1的存在，从而鉴定PD-L1值，与对照值比较PD-L1值，如果PD-L1值大于对照值，则向受试者施用治疗有效量的如本文所述的组合(例如，包含本文所述的抗PD-1抗体的组合)，可任选地与一种或多种其他药剂组合，从而治疗癌症。癌症可以是例如本文所述的癌症，例如癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)腺癌(ACA)，NSCLC鳞状细胞癌(SCC)或肝细胞癌(HCC)。
另一方面，本发明的特征在于诊断或治疗试剂盒，其包括本文所述的抗体分子和使用说明。
本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用整体并入。
根据说明书和附图以及权利要求，本发明的其他特征、目的和优点将显而易见。
附图的简要说明
图1描述了鼠抗PD-1mAb BAP049的轻链和重链可变区的氨基酸序列。上部和下部序列来自两个独立的分析。基于Kabat编号的轻链和重链CDR序列标有下划线。基于Chothia编号的轻重链CDR序列以粗体斜体显示。轻链序列102位的未配对的Cys残基加框。序列按出现的顺序分别公开为SEQ ID NO:8、228、16和229。
图2A描述了与种系序列比对的鼠抗PD-1mAb BAP049的轻链和重链可变区的氨基酸序列。上部和下部序列分别是种系(GL)和BAP049(Mu mAb)序列。基于Kabat编号的轻链和重链CDR序列标有下划线。基于Chothia编号的轻重链CDR序列以粗体斜体显示。“-”表示相同的氨基酸残基。序列按出现的顺序分别公开为SEQ ID NO:230、8、231和16。
图2B描述了鼠κJ2基因的序列和鼠抗-PD-1mAb BAP049中的相应突变。“-”表示相同的核苷酸残基。序列按出现的顺序分别公开为SEQ ID NO:233、232、234和235。
图3A-3B描述了荧光标记的鼠抗PD-1mAb BAP049(Mu mAb)和BAP049(Chi mAb)三种嵌合形式之间的竞争结合。实验进行两次，结果分别显示在图3A和3B中。三种嵌合BAP049抗体(Chi mAb(Cys)，Chi mAb(Tyr)和Chi mAb(Ser))分别在轻链可变区的102位具有Cys、Tyr和Ser残基。Chi mAb(Cys)，Chi mAb(Tyr)和Chi mAb(Ser)也分别称为BAP049-Chi，BAP049-Chi-Y和BAP049-Chi-S。
图4是显示16个人源化BAP049克隆(BAP049-hum01至BAP049-hum16)的FACS结合分析结果的柱状图。对于每种测试的mAb，从最左边的柱到最右边的柱的抗体浓度为200,100,50,25和12.5ng/ml。
图5描述了人源化BAP049克隆的结构分析(a，b，c，d和e代表不同类型的框架区序列)。还显示了样品中mAb的浓度。
图6A-6B描述了人源化BAP049mAb的结合亲和力和特异性，通过在竞争结合试验中使用恒定浓度的Alexa 488标记的鼠mAb BAP049、测试抗体的连续稀释物和表达PD-1的300.19细胞来测量。实验进行两次，结果分别显示在图6A和6B中。
图7描述了基于FACS数据、竞争结合和结构分析的人源化BAP049克隆的排序。还显示了样品中mAb的浓度。
图8A-8B描述了通过所选人源化BAP049克隆阻断配体与PD-1的结合。阻断PD-L1-Ig和PD-L2-Ig与PD-1的结合如图8A所示。阻断PD-L2-Ig与PD-1的结合如图8B所示。评估了BAP049-hum01、BAP049-hum05、BAP049-hum08、BAP049-hum09、BAP049-hum10和BAP049-hum11。在分析中还包括鼠mAb BAP049和在轻链可变区102位具有Tyr的嵌合mAb。
图9A-9B描绘了16种人源化BAP049克隆和BAP049嵌合体(BAP049-Chi)的重链可变结构域序列的比对。在图9A中，显示了所有序列(分别为SEQ ID NO:22,38,38,38,38,38,38,38,38,38,50,50,50,50,82,82和86，按出现顺序)。在图9B中，仅显示了与小鼠序列不同的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO:22,38,38,38,38,38,38,38,38,38,50,50,50,50,82,82和86，按出现顺序)。
图10A-10B描绘了16种人源化BAP049克隆和BAP049嵌合体(BAP049-Chi)的轻链可变结构域序列的比对。在图10A中，显示了所有序列(分别为SEQ ID NO:24,66,66,66,66,70,70,70,58,62,78,74,46,46,42,54和54,按出现顺序)。在图10A中，仅显示了与小鼠序列不同的氨基酸序列(分别为SEQ ID NO:24,66,66,66,66,70,70,70,58,62,78,74,46,46,42,54和54,按出现顺序)。
图11是概述本文公开的组合疗法靶向的抗原加工和呈递，效应细胞应答和免疫抑制途径的示意图。
图12描述了在接受相同剂量的示例性抗PD-1抗体分子时不同重量患者的预测的Ctrough(Cmin)浓度。
图13描述了观察的相对于模型预测的(基于种群或个体)Cmin浓度。
图14描述了用于分析药代动力学的模型的累积、时间过程和受试者差异性。
图15描述了抗体分子A的轻链的氨基酸序列。
图16描述了抗体分子A的重链的氨基酸序列。
表格的简要说明
表1总结了鼠、嵌合和人源化抗PD-1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAb BAP049，嵌合mAb BAP049-Chi和BAP049-Chi-Y，以及人源化mAb BAP049-hum01至BAP049-hum16和BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E。重链和轻链CDR的氨基酸和核苷酸序列，重链和轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列，以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列示于该表中。
表2描述了人源化mAb BAP049-hum01至BAP049-hum16和BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E的重链和轻链框架区的氨基酸和核苷酸序列。
表3描述了人IgG重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列。
表4显示了人源化mAb BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E的重链和轻链前导序列的氨基酸序列。
表5描绘了基于平坦给药方案的示例性PK参数。
表6描述了抗体分子A中预期的二硫键。
发明详述
本文至少部分地公开了以高亲和力和特异性结合程序性死亡分子1(PD-1)的抗体分子(例如，人源化抗体分子)。还针对制备所述抗体分子提供了编码抗体分子的核酸分子、表达载体、宿主细胞和方法。还提供了包含抗体分子的药物组合物和剂量制剂。本文公开的抗PD-1抗体分子可以(单独或与其他药剂或治疗方式组合)用于治疗、预防和/或诊断疾病，例如癌性疾病(例如，实体和软组织肿瘤)，以及传染病(例如，慢性传染病或败血症)。因此，本文公开了使用抗PD-1抗体分子检测PD-1的组合物和方法，以及治疗各种病症(包括癌症和/或感染性疾病)的方法。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子以平坦或固定剂量施用或使用。
本文还公开了包含两种，三种或更多种治疗剂的组合的方法和组合物，所述治疗剂选自以下(i)-(iii)中一种，两种或所有类别：(i)增强抗原呈递(例如，肿瘤抗原呈递)的试剂(例如，通过增强树突细胞活性或成熟、抗原摄取或抗原加工中的一种或多种)；(ii)增强效应细胞反应(例如，免疫效应细胞反应，例如B细胞和/或T细胞活化和/或动员，例如在淋巴结中)的试剂；或(iii)降低肿瘤免疫抑制(例如，增加T细胞浸润和肿瘤细胞杀伤)的试剂。在一些实施方案中，所述组合包括PD-1抑制剂(例如，如本文所述的抗PD-1抗体分子)。不希望受理论束缚，据信当通过免疫应答不同阶段的多个靶标优化免疫应答时，增强抗肿瘤免疫力的治疗方法更有效。在图21中以示意图形式描绘这些阶段中的每一个。例如，导致树突细胞活化的方法与增强细胞和体液免疫的方法相结合可以得到更有效和/或延长的治疗反应。
其他术语如下和在整个申请中定义。
如本文所用，冠词“一”和“一个”指一个或多于一个(例如，至少一个)该冠词的语法对象。
除非上下文另有明确说明，否则术语“或”在本文中用于表示术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。
“约”和“近似”通常表示在给定测量的性质或精度的情况下测量的量的可接受的误差度。示例性误差程度在给定值或值范围的20％内，通常在10％内，更典型地，在5％内。
“组合”或“与......组合”并不意味着治疗剂或治疗剂必须同时施用和/或配制成一起递送，尽管这些递送方法在本文所描述的范围内。组合中的治疗剂可以与一种或多种其他的补充疗法或治疗剂同时、之前或之后施用。治疗剂或治疗方案可以以任何顺序施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表施用。还应理解，该组合中使用的补充治疗剂可以在单一组合物中一起施用或在不同组合物中分开施用。通常，预期组合使用的补充治疗剂的使用水平不超过它们单独使用的水平。在一些实施方案中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。
在实施方案中，补充治疗剂以治疗剂量或低于治疗剂量施用。在某些实施方案中，实现抑制(例如生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度在第二治疗剂与第一治疗剂(例如抗PD-1抗体分子)组合施用时比第二种治疗剂单独给药时低。在某些实施方案中，实现抑制(例如生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度在第一治疗剂与第二治疗剂组合施用时比第一治疗剂单独施用时低。在某些实施方案中，在组合疗法中，实现抑制(例如生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度比作为单一疗法的第二治疗剂的治疗剂量低，例如低10-20％，20-30％，30-40％，40-50％，50-60％，60-70％，70-80％或80-90％。在某些实施方案中，在组合疗法中，实现抑制(例如生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度比作为单一疗法的第一治疗剂的治疗剂量低，例如低10-20％，20-30％，30-40％，40-50％，50-60％，60-70％，70-80％或80-90％。
术语“抑制”，“抑制剂”或“拮抗剂”包括给定分子(例如免疫检查点抑制剂)的某参数(例如活性)的降低。例如，该术语包括抑制至少5％，10％，20％，30％，40％或更多的活性，例如PD-1或PD-L1活性。因此，抑制不必是100％。
术语“活化”，“活化剂”或“激动剂”包括给定分子(例如共刺激分子)的某参数(例如活性)的增加。例如，该术语包括增加至少5％，10％，25％，50％，75％或更多的活性，例如共刺激活性。
术语“抗癌作用”是指可以通过各种手段表现的生物效应，包括但不限于例如肿瘤体积减少，癌细胞数量减少，转移数量减少，预期寿命的增加，癌细胞增殖的减少，癌细胞存活的减少，或与癌症相关的各种生理症状的改善。“抗癌作用”也可以首先通过肽、多核苷酸、细胞和抗体预防癌症发生的能力来展现。
术语“癌症”是指以异常细胞的快速和不受控制的生长为特征的疾病。癌细胞可以局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。在本文中描述了各种癌症的示例，包括但不限于，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌，子宫颈癌，皮肤癌，胰腺癌，结肠直肠癌，肾癌，肝癌，脑癌，淋巴瘤，白血病，肺癌等。术语“肿瘤”和“癌症”在本文中可互换使用，例如，这两个术语包括实体和流体(例如弥漫性或循环性)肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括癌前病变以及恶性癌症和肿瘤。
术语“抗原呈递细胞”或“APC”是指一种免疫系统细胞，例如辅助细胞(例如，B细胞，树突细胞等)，其在细胞表面上展示与主要组织相容性复合物(MHC)复合的外来抗原。T细胞可以使用它们的T细胞受体(TCR)识别这些复合物。APC处理抗原并将其呈递给T细胞。
术语“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合配偶体，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激反应，例如但不限于增殖。共刺激分子是抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，是有效免疫应答所需的。共刺激分子包括但不限于MHC I类分子，TNF受体蛋白，免疫球蛋白样蛋白，细胞因子受体，整联蛋白，信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)，激活NK细胞受体，BTLA，Toll配体受体，OX40，CD2，CD7，CD27，CD28，CD30，CD40，CDS，ICAM-1，LFA-1(CD11a/CD18)，4-1BB(CD137)，B7-H3，
本文使用的术语“免疫效应细胞”或“效应细胞”是指参与免疫应答(例如促进免疫效应物反应)的细胞。免疫效应细胞的示例包括T细胞，例如α/βT细胞和γ/δT细胞，B细胞，天然杀伤(NK)细胞，天然杀伤T(NKT)细胞，肥大细胞和骨髓衍生的吞噬细胞。
如本文所用的术语“免疫效应物”或“效应物”“功能”或“反应”是指增强或促进靶细胞免疫攻击的功能或响应，例如免疫效应细胞的这种功能或响应。例如，免疫效应物功能或响应是指T细胞或NK细胞的特性：促进靶细胞的杀伤或抑制其生长或增殖。在T细胞的情况下，初级刺激和共刺激是免疫效应物功能或响应的示例。
术语“效应物功能”是指细胞的特化功能。例如，T细胞的效应物功能可以是细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。
如本文所用，术语“治疗”和“处理”是指减少或改善疾病(例如增殖性疾病)的进展、严重性和/或持续时间，或改善疾病的一种或多种症状(优选地，一种或多种可辨别的症状)，其由施用一种或多种疗法引起。在具体的实施方案中，术语“治疗”和“处理”是指改善增殖性疾病的至少一种可测量的物理参数，例如肿瘤的生长，不一定是患者可辨别的。在其他实施方案中，术语“治疗”和“处理”-指抑制增殖性疾病的进展，该抑制可为物理性，通过例如稳定可辨识症状，或生理性，通过例如稳定物理参数，或两者。在其他实施方案中，术语“治疗”和“处理”是指肿瘤大小或癌细胞计数的减少或稳定。
本发明的组合物和方法包括具有指定序列的多肽和核酸，或与其基本相同或相似的序列，例如与指定序列至少85％，90％，95％相同或更高的序列。在氨基酸序列的上下文中，术语“基本上相同”在本文中用于指以下情况：第一氨基酸中含有足够或最小数量的氨基酸残基与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基i)相同或ii)是其保守取代，使得第一和第二氨基酸序列可具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，含有与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少85％,90％,91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性的共同结构域的氨基酸序列。
在核苷酸序列的上下文中，术语“基本上相同”在本文中用于指以下情况：第一核酸序列含有足够或最小数量的核苷酸与第二核酸序列中的比对核苷酸相同，使得第一核酸序列和第二核酸序列中的核苷酸编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构多肽域或共同功能多肽活性。例如，与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少85％,90％,91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性的核苷酸序列。
术语“功能变体”是指与天然存在的序列具有基本相同的氨基酸序列，或由基本相同的核苷酸序列编码，并且能够具有天然存在的序列的一种或多种活性的多肽。
序列之间的同源性或序列同一性(这些术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的百分比同一性，对齐序列以达到最佳比较目的(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一者或两者中引入缺口用于最佳比对，且出于比较目的可忽略非同源序列)。在一个优选的实施方案中，为比较目的比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％，60％，甚至更优选至少70％，80％，90％，100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，那么该分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置的数量的函数，考虑到为了两个序列的最佳比对，需要引入的缺口数量和每个缺口的长度。
可以使用数学算法完成序列的比较和两个序列之间的百分比同一性的确定。在一个优选的实施方案中，使用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)算法确定两个氨基酸序列之间的百分比同一性，该算法已被整合到GCG软件包中的GAP程序中(可在http://www.gcg.com获得)，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。在另一个优选的实施方案中，使用GCG软件包的GAP程序(可从http://www.gcg.com获得)确定两个核苷酸序列之间的百分比同一性，使用NWSgapdna.CMP矩阵，缺口权重为40、50、60、70或80，长度权重为1、2、3、4、5或6。一组特别优选的参数(除非另有说明，否则应使用的参数)是Blossum 62评分矩阵，其缺口罚分为12，缺口延伸罚分为4，移码缺口罚分为5。
可以使用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS，4：11-17)的算法确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比，该算法已经并入ALIGN程序(版本2.0)，使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
本文描述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，以例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)进行这样的搜索,Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-10。可以用NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，计分＝100，字长＝12，以获得与本发明的核酸(SEQ ID NO:1)分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，计分＝50，字长＝3，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的缺口比对，可以使用Gapped BLAST,如Altschul等，(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402中所述。当使用BLAST和GappedBLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文所用，术语“在低严格性，中等严格性，高严格性或非常高严格性条件下杂交”描述了杂交和清洗的条件。进行杂交反应的指导可参见Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6，其通过引用并入本文。在该参考文献中描述了水性和非水性方法，并且可以使用任一种。本文提到的特定杂交条件如下：1)低严格杂交条件：在约45℃下在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中杂交，然后在0.2XSSC、0.1％SDS中在至少50℃下洗涤两次(对于低严格性，洗涤温度可以增加至55℃)；2)中等严格杂交条件：在约45℃的6×SSC中杂交，然后在60℃下在0.2×SSC、0.1％SDS中洗涤一次或多次；3)高严格杂交条件：在约45℃下6X SSC中杂交，然后在65℃下在0.2X SSC、0.1％SDS中洗涤一次或多次；和优选地4)非常高严格性杂交条件：0.5M磷酸钠、7％SDS、65℃，然后在0.2X SSC、1％SDS、65℃下洗涤一次或多次。除非另有说明，否则非常高严格性条件(4)是优选的条件和应该使用的条件。
应理解，本发明的分子可具有对其功能没有实质性影响的额外的保守或非必需氨基酸取代。
术语“氨基酸”旨在包括无论是天然的还是合成的兼具氨基机能和酸机能并且能够被纳入天然存在的氨基酸聚合物中的所有分子。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物，衍生物和同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；和任何前述任何一种的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-或L-光学异构体和肽拟似物。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被取代以具有相似侧链的氨基酸残基的氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)，不带电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)，β-支链侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(若为单链)在本文中互换使用，指任意长度的氨基酸残基的聚合物。该聚合物可以是直链或支链聚合物，可包含修饰的氨基酸，可被非氨基酸介入。该术语还包括已经修饰过的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成，糖基化，脂化，乙酰化，磷酸化或任何其他操作，例如与标记组分的偶联。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主中产生，或者可以是合成方法的产物。
术语“核酸”，“核酸序列”，“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的聚合形式的核苷酸，无论脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链的，并且如果单链可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可被非核苷酸组分介入。多核苷酸可在聚合后进一步修饰，例如通过与标记组分偶联。核酸可以是重组多核苷酸，或基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，合成来源的多核苷酸是自然界中不存在的或是以非天然排列与另一多核苷酸连接。
如本文所用，术语“分离的”是指从其原始或天然环境(例如，自然环境，如果其是自然发生的)中移出的材料。例如，存在于活动物中的天然存在的多核苷酸或多肽不是分离的，但是通过人为干预从天然系统中的一些或所有共存材料分离的相同多核苷酸或多肽则是分离的。此类多核苷酸可以是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这种载体或组合物不是天然存在的环境的一部分。
在下文中更详细地解释本发明的各方面。在整个说明书中列出了其他定义。
抗体分子
在一个实施方案，该抗体分子结合哺乳动物如人PD-1。例如，抗体分子特异性结合PD-1上的表位，例如线性或构象表位(例如，如本文所述的表位)。
如本文所用，术语“抗体分子”所指蛋白质包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括，例如，单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)。在一个实施方案中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链。在一个实施方案中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能片段。在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性和第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。
在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子并结合单个表位。例如，具有多个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，每个免疫球蛋白可变结构域序列结合相同的表位。
在一个实施方案中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性和第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同的抗原上，例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同的抗原上，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)。在一个实施方案中，多特异性抗体分子包含第三，第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子，三特异性抗体分子或四特异性抗体分子，
在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方案中，第一和第二表位在相同的抗原上，例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)。在一个实施方案中，第一和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一和第二表位在不同的抗原上，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其结合片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其结合片段。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其结合片段和对第二表位具有结合特异性的scFv或其结合片段。在一个实施方案中，第一表位位于PD-1，第二表位位于TIM-3、LAG-3、CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)、PD-L1或PD-L2。
在一个实施方案中，抗体分子包含双价小抗体(diabody)和单链分子，以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab，F(ab')2和Fv)。例如，抗体分子可包括重(H)链可变结构域序列(本文中缩写为VH)和轻(L)链可变结构域序列(本文缩写为VL)。在一个实施方案中，抗体分子包含重链和轻链或由一条重链和一条轻链组成(在本文中称为半抗体)。在另一个实例中，抗体分子包括两个重(H)链可变结构域序列和两个轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，例如Fab，Fab'，F(ab')2，Fc，Fd，Fd'，Fv，单链抗体(例如scFv)，单可变结构域抗体，双价小抗体(Dab)(二价和双特异性)和嵌合(例如人源化)抗体，其可通过修饰整体抗体或使用重组DNA技术从头合成的抗体产生。这些功能性抗体片段保留了与其各自的抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何类别的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及抗体的任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子的制备可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人、人源化、CDR移植或体外产生的抗体。抗体可具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体还可以具有选自例如κ或λ的轻链。本文的术语“免疫球蛋白”(Ig)与术语“抗体”可互换使用。
抗体分子的抗原结合片段的示例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含两个Fab片段的二价片段，这两个Fab片段在铰链区通过二硫键连接；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)双价小抗体(dAb)片段，其由VH结构域组成；(vi)骆驼科动物或骆驼源化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体。这些抗体片段通过本领域熟练技术人员已知的常规方法获取，并且筛选这些片段以与完整抗体相同的方式应用。
术语“抗体”包括完整分子及其功能片段。可以改变抗体的恒定区，例如突变，以改变抗体的性质(例如，增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合，抗体糖基化，半胱氨酸残基数，效应细胞功能或补体功能)。
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可包括其互补决定区是单结构域多肽的一部分的抗体。示例包括但不限于重链抗体，天然缺乏轻链的抗体，衍生自常规4-链抗体的单结构域抗体，工程化抗体和除抗体衍生的那些之外的单结构域支架。单结构域抗体可以是任何现有技术，或任何未来的单结构域抗体。单结构域抗体可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠，人，骆驼，美洲驼(llama)，鱼，鲨鱼，山羊，兔和牛。根据本发明的另一方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称为缺乏轻链的重链抗体。例如，这种单结构域抗体公开在WO 9404678中。出于清楚的原因，自天然缺乏轻链的重链抗体衍生的这种可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体，以将其与四链免疫球蛋白的常规VH区分开。这种VHH分子可以衍生自骆驼科物种中产生的抗体，例如骆驼，美洲驼，单峰骆驼，羊驼(alpaca)和原驼(guanaco)。除骆驼科外的其他物种可能产生天然缺乏轻链的重链抗体；这些VHH属于本发明的范围。
VH和VL区可以细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，它们间插有更保守的区域，称为“框架区”(FR或FW)。
框架区和CDR的范围已经通过许多方法精确定义(参见，Kabat，EA，等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美国卫生和人类服务部，NIH出版物编号91-3242；Chothia，C等人(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；以及OxfordMolecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。通常参见例如抗体可变区的蛋白质序列和结构分析(Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody VariableDomains)，收于：抗体工程实验室手册(Antibody Engineering Lab Manual)(编辑：Duebel，S和Kontermann，R，Springer-Verlag，Heidelberg)。
本文所用术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗体特异性和结合亲和性的氨基酸序列。通常，在各重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)且在各轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。
给定CDR的精确氨基酸序列边界可以使用许多众所周知的方案中的任何一种来确定，包括Kabat等人描述的方案。(1991)，“免疫学兴趣蛋白质序列(Sequences of Proteinsof Immunological Interest)”，第5版。公共卫生服务，国立卫生研究院，Bethesda，MD(“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani等，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)。如本文所用，根据“Chothia”编号方案定义的CDR有时也称为“高变环”。
例如，在Kabat下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)，50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；轻链可变区(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)，50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)，52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；VL中的CDR氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)，50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过结合Kabat和Chothia的CDR定义，CDR由人VH中氨基酸残基26-35(HCDR1)，50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中氨基酸残基24-34(LCDR1)，50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。
通常，除非特别指出，否则抗PD-1抗体分子可包括一个或多个Kabat CDR和/或Chothia高变环(例如，如表1中所述)的任何组合。在一个实施方案中，以下定义用于表1中描述的抗PD-1抗体分子：HCDR1根据Kabat和Chothia两者的组合的CDR定义,以及HCCDR 2-3和LCCDR 1-3根据Kabat的CDR定义。在所有定义中，每个VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1,CDR1,FR2,CDR2,FR3,CDR3,FR4。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可以形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列。例如，序列可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，序列可以包括或不包括一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，或者可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
术语“抗原结合位点”是指抗体分子的一部分，其包含形成与PD-1多肽或其表位结合的界面的决定簇。关于蛋白质(或蛋白质模拟物)，抗原结合位点通常包括一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)，其形成结合PD-1多肽的界面。通常，抗体分子的抗原结合位点包括至少一个或两个CDR和/或高变环，或更通常至少三个，四个，五个或六个CDR和/或高变环。
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换使用，指抗体分子干扰抗PD-1抗体分子(例如本文提供的抗PD-1抗体分子)结合靶标(例如人PD-1)的能力。结合的干扰可以是直接的或间接的(例如，通过抗体分子或靶标的变构调节)。抗体分子能够干扰另一抗体分子结合靶标的程度，以及因此是否可以称为竞争，可以使用竞争结合试验来确定，例如，FACS试验、ELISA或BIACORE试验。在一些实施方案中，竞争结合试验是定量竞争试验。在一些实施方案中，当竞争结合试验(例如，本文所述的竞争试验)中第一抗体分子与靶标的结合降低10％或更多，例如，20％或更多，30％或更多，40％或更多，50％或更多，55％或更多，60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多，98％或更多，99％或更多时，称第一抗PD-1抗体分子与第二抗PD-1抗体分子竞争结合靶标。
如本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组合物的抗体分子制品。单克隆抗体组合物显示对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或不使用杂交瘤技术的方法(例如重组方法)制备。
“事实上人”的蛋白质是不会引起中和抗体反应(例如人抗鼠抗体(HAMA)反应)的蛋白。HAMA在许多情况下可能是成问题的，例如，如果反复施用抗体分子，例如，在治疗慢性或复发性疾病中。HAMA反应可能使重复的抗体施用可能无效,这是由于从血清中的抗体清除增加(参见，例如，Saleh等，Cancer Immunol.Immunother.，32：180-190(1990))以及由于潜在的过敏反应(参见，例如，LoBuglio等，Hybridoma，5：5117-5123(1986))。
抗体分子可以是多克隆抗体或单克隆抗体。在其他实施方案中，抗体可以重组产生，例如通过噬菌体展示或通过组合方法产生。
用于产生抗体的噬菌体展示以及组合的方法是本领域已知的(如以下中所描述，例如，Ladner等，美国专利号5,223,409；Kang等，国际公开号WO 92/18619；Dower等，国际公开号WO 91/17271；Winter等，国际公开WO 92/20791；Markland等，国际公开号WO92/15679；Breitling等，国际公开WO 93/01288；McCafferty等，国际公开号WO92/01047；Garrard等，国际公开号WO 92/09690；Ladner等，国际公开号WO 90/02809；Fuchs等，(1991)Bio/Technology 9：1370-1372；Hay等，(1992)Hum Antibod Hybridomas 3：81-85；Huse等，(1989)Science 246：1275-1281；Griffths等，(1993)EMBO J 12：725-734；Hawkins等，(1992).J Mol Biol 226：889-896；Clackson等，(1991)Nature 352：624-628；Gram等，(1992)PNAS 89：3576-3580；Garrad等，(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom等，(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等，(1991)PNAS 88：7978-7982，其全部内容通过引用并入本文)。
在一个实施方案中，抗体是完全人抗体(例如，在小鼠中制备的抗体，该小鼠已被基因工程化以产生来自人免疫球蛋白序列的抗体)，或非人抗体，例如啮齿动物(小鼠或大鼠)，山羊，灵长类动物(如猴子)，骆驼抗体。优选地，非人抗体是啮齿动物(小鼠或大鼠抗体)。产生啮齿动物抗体的方法是本领域已知的。
可以使用携带人免疫球蛋白基因而不是小鼠系统的转基因小鼠产生人单克隆抗体。来自用目标抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用于产生分泌人mAb的杂交瘤，所述人mAb对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力(参见，例如，Wood等，国际申请WO 91/00906，Kucherlapati等PCT公开WO 91/10741；Lonberg等，国际申请WO 92/03918；Kay等国际申请92/03917；Lonberg，N等，1994Nature 368：856-859；Green，LL等，1994Nature.Genet.7：13-21；Morrison，SL等，1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855；Bruggeman等，1993,YearImmunol 7：33-40；Tuaillon等，1993PNAS 90：3720-3724；Bruggeman等，1991Eur JImmunol 21：1323-1326)。
抗体可以是其中可变区或其部分(例如CDR)在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生的抗体。嵌合、CDR移植和人源化抗体属于本发明。在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生，且然后在例如可变框架或恒定区中修饰以降低人的抗原性的抗体在本发明范围内。
嵌合抗体可以通过本领域已知的重组DNA技术产生(参见Robinson等，国际专利公开PCT/US86/02269；Akira等，欧洲专利申请184,187；Taniguchi，M，欧洲专利申请171,496；Morrison等，欧洲专利申请173,494；Neuberger等，国际申请WO 86/01533；Cabilly等，美国专利4,816,567号；Cabilly等，欧洲专利申请125,023；Better等，1988Science 240:1041-1043)；Liu等，(1987)PNAS 84：3439-3443；Liu等，1987，J.Immunol.139：3521-3526；Sun等，(1987)PNAS 84：214-218；Nishimura等，1987，Canc.Res.47：999-1005；Wood等，(1985)Nature 314：446-449；和Shaw等，1988，J.Natl Cancer Inst.80：1553-1559)。
人源化或CDR-移植的抗体将具有(重和/或轻的免疫球蛋白链的)至少一个或两个但通常所有三个受体的CDR被供体CDR替换。抗体可以用至少一部分非人CDR替换，或者仅一些CDR可以用非人CDR替换。仅需要替换人源化抗体与PD-1结合所需的CDR数量。优选地，供体是啮齿动物抗体，例如大鼠或小鼠抗体，并且受体将是人框架或人共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”，提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方案中，供体免疫球蛋白是非人的(例如啮齿动物)。受体框架是天然存在的(例如人)框架或共有框架，或与其约85％或更高，优选90％，95％，99％或更高相同的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如，Winnaker，From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft，Weinheim，Germany 1987)。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置被在家族中该位置最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸同样频繁出现，则任一个都可以包括在共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
抗体可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如Morrison，SL，1985，Science229：1202-1207，Oi等，1986，BioTechniques 4：214，以及Queen等，US 5,585,089，US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容通过引用并入本文。
可以通过CDR-移植或CDR取代产生人源化或CDR-移植的抗体，其中可以替换免疫球蛋白链的一个、两个或所有CDR。参见例如美国专利5,225,539；Jones等,1986Nature321：552-525；Verhoeyan等,1988Science 239：1534；Beidler等,1988J.Immunol.141：4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容通过引用明确并入本文。Winter描述了可用于制备本发明的人源化抗体的CDR-移植方法(英国专利申请GB 2188638A，1987年3月26日提交；Winter US 5,225,539)，其内容明确地通过引用并入。
人源化抗体也在本发明的范围内，其中特定氨基酸已被取代、缺失或添加。从供体中选择氨基酸的标准描述于US 5,585,089，例如US 5,585,089的第12-16栏，例如US 5,585,089的第12-16栏，其内容在此引入作为参考。用于人源化抗体的其他技术描述与Padlan等，EP 519596 A1，1992年12月23日公开。
抗体分子可以是单链抗体。可以改造单链抗体(scFV)(参见，例如，Colcher，D等，(1999)Ann NY Acad Sci 880：263-80；和Reiter，Y(1996)Clin Cancer Res 2：245-52)。单链抗体可以二聚化或多聚化以产生对同一靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
在其他实施方案中，抗体分子具有重链恒定区，其选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；特别地，选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(例如人)重链恒定区。在另一个实施方案中，抗体分子具有的轻链恒定区选自例如κ或λ的(例如人)轻链恒定区。可以改变恒定区，例如突变，以修饰抗体的性质(例如，增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合，抗体糖基化，半胱氨酸残基数，效应细胞功能或补体功能)。在一个实施方案中，抗体具有：效应物功能；并且可以结合(fix)补体。在其他实施方案中，抗体不招募效应细胞或结合补体。在另一个实施方案中，抗体具有降低的结合Fc受体或没有结合Fc受体的能力。例如，它是同种型或亚型、片段或其他突变体，其不支持与Fc受体的结合，例如，它具有诱变或缺失的Fc受体结合区。
改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。通过用不同的残基取代抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基可以产生功能改变的抗体，例如，对效应配体(例如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力改变(参见例如EP 388,151A1，美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用并入本文)。可以描述类似类型的改变，如果应用于鼠或其他物种免疫球蛋白将减少或消除这些功能。
抗体分子可以衍生化或与另一种功能分子(例如另一种肽或蛋白质)连接。如本文所用，“衍生的”抗体分子是已经修饰的抗体分子。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体的衍生化和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以与一种或多种其他分子实体功能性连接(通过化学偶联，遗传融合，非共价结合或其他)，其他分子实体例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双价小抗体)，可检测试剂，细胞毒性剂，药剂和/或可介导抗体或抗体部分结合另一分子(例如链霉抗生物素蛋白核心区或多组氨酸标签)的蛋白质或肽。
一种类型的衍生化抗体分子的产生是通过交联两种或更多种抗体(相同类型或不同类型的抗体，例如产生双特异性抗体)。合适的交联剂包括异双功能和同双功能的(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)，异双功能的交联剂具有两个不同的反应基团，其由适当的间隔物分开(例如间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)。这种接头可从PierceChemical Company，Rockford，IL获得。
可衍生化(或标记)本发明抗体分子的有用的可检测试包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子，例如铕(Eu)和其他蒽化物和放射性物质(如下所述)。示例性荧光可检测试剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测的酶衍生化，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等。当抗体用可检测的酶衍生化时，通过添加被酶用于产生可检测反应产物的额外试剂来检测。例如，当存在可检测试剂辣根过氧化物酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯胺会产生可检测的有色反应产物。抗体分子也可以用辅基(prosthetic group)衍生化(例如，链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素)。例如，抗体可以用生物素衍生化，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合来检测。合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的示例包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白。
标记的抗体分子可用于许多情况，例如在诊断和/或实验中，包括(i)通过标准技术分离预定的抗原，例如通过亲和层析或免疫沉淀；(ii)检测预定的抗原(例如，在细胞裂解物或细胞上清液中)以评估蛋白质的丰度和表达状况；(iii)监测组织中的蛋白质水平，作为临床测试程序的一部分，例如，以确定给定治疗方案的功效。
抗体分子可以偶联另一种分子实体，通常是标记物或治疗(例如细胞毒性或细胞抑制)剂或部分。放射性同位素可用于诊断或治疗应用。
本发明提供了放射性标记的抗体分子及其标记方法。在一个实施方案中，公开了标记抗体分子的方法。该方法包括使抗体分子与螯合剂接触，从而产生偶联的抗体。
如上所述，抗体分子可以与治疗剂偶联。已经提到过治疗活性的放射性同位素。其他治疗剂的示例包括紫杉醇，细胞松弛素B，短杆菌肽D，溴化乙锭，依米嗪，丝裂霉素，依托泊苷，天莨菪碱，长春新碱，长春碱，秋水仙碱，多柔比星，柔红霉素，二羟基蒽二酮，米托蒽醌，光神霉素，放线菌素D，1-脱氢睾酮，糖皮质激素，普鲁卡因，丁卡因，利多卡因，普萘洛尔，嘌呤霉素，美登木素生物碱，例如美登醇(参见美国专利号5,208,020)，CC-1065(参见美国专利号5,475,092，5,585,499，5,846,545)及其类似物或同系物。治疗剂包括但不限于抗代谢物(例如，甲氨蝶呤，6-巯基嘌呤，6-硫鸟嘌呤，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)，烷化剂(例如，氮芥，硫喷妥苯丁酸氮芥，CC-1065，美法仑，卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)，环磷酰胺，白消安，二溴甘露醇，链脲佐菌素，丝裂霉素C和顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)，蒽环霉素(如柔红霉素(以前称为daunomycin)和多柔比星)，抗生素(如，放线菌素D(以前称为放线菌素)，博来霉素，光霉素和安定霉素(AMC))和抗有丝分裂剂(如长春新碱，长春碱，紫杉醇和美登木素生物碱)。
在一个方面，本发明的特征在于提供特异性结合本文公开的靶标(例如PD-1受体)的靶结合分子的方法。例如，靶结合分子是抗体分子。该方法包括：提供包含至少非人蛋白质中一部分的靶蛋白，该部分与人靶蛋白的相应部分同源(至少70,75,80,85,87,90,92,94,95,96,97，98％相同)，但相差至少有一个氨基酸(例如，至少一个，两个，三个，四个，五个，六个，七个，八个或九个氨基酸)；获得特异性结合抗原的抗体分子；并评估结合剂在调节靶蛋白活性中的功效。该方法可以进一步包括将结合剂(例如抗体分子)或衍生物(例如人源化抗体分子)给予人受试者。
多特异性抗体分子
在某些实施方案中，抗体分子是多特异性(例如，双特异性或三特异性)抗体分子。用于产生双特异性或异二聚体抗体分子的方案是本领域已知的；包括但不限于，例如，在US5731168中描述的“孔中旋钮”方法；静电导向Fc配对，如例如WO 09/089004，WO 06/106905和WO 2010/129304中所述；链交换工程化结构域(SEED)异二聚体形成，如例如WO 07/110205所述；Fab臂交换，如例如WO 08/119353，WO 2011/131746和WO2013/060867中所述；双抗体耦合物，例如通过抗体交联以使用具有胺反应性基团和巯基反应性基团的异双功能试剂产生双特异性结构，如US4433059所述；通过两条重链之间二硫键的还原和氧化循环来重组来自不同抗体的半抗体(重-轻链对或Fab)产生的双特异性抗体决定簇，如US4444878中所述；三官能抗体，例如通过巯基反应基团交联的三个Fab'片段，如US5273743中所述；生物合成结合蛋白，例如通过C-末端尾交联的scFv对，优选通过二硫键或胺反应性化学交联，如US5534254中所述；双功能抗体，例如具有不同结合特异性的Fab片段，其通过已经取代恒定结构域的亮氨酸拉链(例如，c-fos和c-jun)二聚化，如US5582996所述；双特异性和寡特异性单和寡价受体，例如，两个抗体(两个Fab片段)的VH-CH1区域通过一个抗体的CH1区域与另一个抗体的VH区域之间的多肽间隔相连接，通常具有相关的轻链，如例如，US5591828所述；双特异性DNA-抗体偶联物，例如，通过双链DNA交联抗体或Fab片段，如US5635602中所述；双特异性融合蛋白，例如，表达构建体含有两个scFv，它们之间具有亲水性螺旋肽接头，还有完整恒定区，如US5637481中所述；多价和多特异性结合蛋白，例如如下多肽二聚体：其具有带Ig重链可变区的结合区的第一结构域，和具有Ig轻链可变区的结合区的第二结构域，通常称为双价小抗体(也公开产生双特异性、三特异性或四特异性分子的更高阶结构，如US5837242中所述；minibody构建体，其具有连接的VL和VH链并进一步与肽间隔物连接至抗体铰链区和CH3区，其可二聚化以形成双特异性/多价分子，如例如，US5837821所述；VH和VL结构域在任一方向上接有短肽接头(例如，5或10个氨基酸)或完全没有接头，其可以形成二聚体以形成双特异性双抗体；三聚体和四聚体，如，例如，US5844094中描述；VH结构(或家族成员中VL结构域)串，其通过肽连接在C-末端连接可交联基团，并进一步与VL结构域结合，形成一系列FV(或scFv)，如US5864019中所述；以及兼有VH和VL结构域的单链结合多肽，通过肽接头连接的VH和VL结构域通过非共价或化学交联组合成多价结构，以采用scFV或双价小抗体类型两种形式形成例如同二价、异二价、三价和四价结构格，如US5869620中所述。另外的示例性多特异性和双特异性分子及其制备方法见于例如US5910573，US5932448，US5959083，US5989830，US6005079，US6239259，US6294353，US6333396，US6476198，US6511663，US6670453，US6743896，US6809185，US6833441，US7129330，US7183076。，US7521056，US7527787，US7534866，US7612181，US2002004587A1，US2002076406A1，US2002103345A1，US2003207346A1，US2003211078A1,US2004219643A1，US2004220388A1，US2004242847A1，US2005003403A1，US2005004352A1，US2005069552A1，US2005079170A1，US2005100543A1，US2005136049A1，US2005136051A1，US2005163782A1，US2005266425A1，US2006083747A1，US2006120960A1，US2006204493A1，US2006263367A1，US2007004909A1，US2007087381A1，US2007128150A1，US2007141049A1，US2007154901A1，US2007274985A1，US2008050370A1，US2008069820A1，US2008152645A1，US2008171855A1，US2008241884A1，US2008254512A1，US2008260738A1，US2009130106A1，US2009148905A1，US2009155275A1，US2009162359A1，US2009162360A1，US2009175851A1，US2009175867A1，US2009 232811A1，US2009234105A1，US2009263392A1，US2009274649A1，EP346087A2，WO0006605A2，WO02072635A2，WO04081051A1，WO06020258A2，WO2007044887A2，WO2007095338A2，WO2007137760A2，WO2008119353A1，WO2009021754A2，WO2009068630A1，WO9103493A1，WO9323537A1，WO9409131A1，WO9412625A2，WO9509917A1，WO9637621A2，WO9964460A1。上述申请的内容通过引用整体并入本文。
在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子(例如，单特异性，双特异性或多特异性抗体分子)共价连接(例如融合)另一个配偶体例如蛋白质，例如一种、两种或更多种细胞因子，例如，作为融合分子如融合蛋白。在其他实施方案中，融合分子包含一种或多种蛋白质，例如一种、两种或更多种细胞因子。在一个实施方案中，细胞因子是选自IL-1、IL-2、IL-12、IL-15或IL-21中的一种、两种、三种或更多种的白细胞介素(IL)。在一个实施方案中，双特异性抗体分子对第一靶标(例如，对PD-1)具有第一结合特异性，对第二靶标(例如，LAG-3或TIM-3)具有第二结合特异性，并且可任选地连接白细胞介素(例如，IL-12)结构域，例如全长IL-12或其部分。
“融合蛋白”和“融合多肽”是指具有共价连接在一起的至少两个部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。该性质可以是生物学性质，例如体外或体内活性。该性质也可以是简单的化学或物理性质，例如与靶分子的结合，反应的催化等。这两部分可以通过单个肽键直接连接或通过肽接头连接，但是彼此在阅读框中。
本发明提供了编码上述抗体分子的分离的核酸分子，其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
示例性PD-1抑制剂
PD-1是CD28/CTLA-4家族成员，例如在活化的CD4+和CD8+T细胞、Tregs和B细胞上表达。它负调节效应T细胞信号和功能。PD-1在肿瘤浸润性T细胞上被诱导，并且可导致功能性衰竭或功能障碍(Keir等人(2008)Annu.Rev.Immunol.26：677-704；Pardoll等人(2012)NatRev Cancer12(4)：252-64)。PD-1在与其两种配体的任何一者(程序性死亡分子配体1(PD-L1)或程序性死亡分子配体2(PD-L2))结合时传递共抑制信号。PD-L1在许多细胞类型上表达，包括T细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、B细胞、上皮细胞、血管内皮细胞以及许多类型的肿瘤。PD-L1在鼠和人肿瘤中的高表达与多种癌症中的不良临床结果相关(Keir等人(2008)Annu.Rev.Immunol.26：677-704；Pardoll等人(2012))Nat Rev Cancer12(4)：252-64)。PD-L2在树突细胞、巨噬细胞和一些肿瘤上表达。阻断PD-1通路已经就癌症免疫疗法得到临床前和临床上的验证。临床前和临床研究都表明，抗PD-1阻断可以恢复效应T细胞的活性，并产生强大的抗肿瘤反应。例如，阻断PD-1途径可以恢复耗尽/功能失调的效应T细胞功能(例如，增殖、IFN-γ分泌或细胞溶解功能)和/或抑制Treg细胞功能(Keir等人(2008)Annu.Rev。Immunol.26：677-704；Pardoll等人(2012)Nat Rev Cancer 12(4)：252-64)。PD-1通路的阻断可以用抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或PD-1、PD-L1和/或PD-L2的寡肽实现。
如本文所用，术语“程序性死亡分子1”或“PD-1”包括同种型，哺乳动物的，例如人PD-1，人PD-1的物种同源物，和包含至少一个与PD-1的共同表位的类似物。PD-1的氨基酸序列，例如人PD-1，是本领域已知的，例如Shinohara T等(1994)Genomics 23(3)：704-6；Finger LR等Gene(1997)197(1-2)：177-87。
本文所述的抗PD-1抗体分子可以根据本文描述的方法单独使用或与本文所述的一种或多种另外的药剂组合使用。在某些实施方案中，本文所述的组合包括PD-1抑制剂，例如本文所述的抗PD-1抗体分子(例如，人源化抗体分子)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子(例如，分离的或重组的抗体分子)具有以下一种或多种性质：
(i)以高亲和力结合PD-1，例如人PD-1，例如，亲和常数为至少约107M-1，通常约108M-1，更通常约109M-1至1010M-1或更强；
(ii)基本上不与CD28、CTLA-4、ICOS或BTLA结合；
(iii)抑制或降低PD-1与PD-1配体(例如PD-L1或PD-L2或两者)的结合；
(iv)特异性结合PD-1上的表位，例如与鼠BAP049单克隆抗体或BAP049嵌合抗体(例如BAP049-Chi或BAP049-Chi-Y)识别的表位相同或相似的表位；
(V)显示与如下任一者相同或相似的结合亲和力或特异性或两者：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D，或BAP049-克隆-E；
(vi)显示与表1中所述的抗体分子(例如，重链可变区和轻链可变区)相同或相似的结合亲和力或特异性或两者；
(vii)显示具有表1所示氨基酸序列的抗体分子(例如，重链可变区和轻链可变区)的相同或相似的结合亲和力或特异性或两者。
(viii)显示与表1中所示的核苷酸序列编码的抗体分子(例如，重链可变区和轻链可变区)相同或相似的结合亲和力或特异性或两者。
(ix)抑制(例如竞争性抑制)第二抗体分子与PD-1的结合，其中第二抗体分子是本文所述的抗体分子，例如选自如下的抗体分子：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆--A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；
(x)与PD-1的第二抗体分子结合相同或重叠的表位，其中第二抗体分子是本文所述的抗体分子，例如选自如下的抗体分子：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；
(xi)与PD-1的第二抗体分子竞争相同表位和/或结合相同表位，其中第二抗体分子是本文所述的抗体分子，例如选自如下的抗体分子：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；
(xii)具有本文所述抗体分子的一种或多种生物学特性，例如选自如下的抗体分子：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；
(xii)具有本文所述抗体分子的一种或多种药物动力学特性，例如选自如下的抗体分子：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；
(xiv)抑制PD-1的一种或多种活性，例如，导致肿瘤浸润淋巴细胞增加、T细胞受体介导的增殖增加或癌细胞免疫逃避减少中的一种或多种；
(xv)与人PD-1结合并与食蟹猴PD-1交叉反应；
(xvi)结合PD-1的C链、CC'环、C'链或FG环上一个或多个残基，或PD-1的C链、CC'环、C'链或FG环的两个、三个或全部的组合，例如，其中所述结合使用ELISA或Biacore试验；或者
(xvii)VL区对与PD-1的结合比VH区域起更重要作用。
在一些实施方案中，抗体分子以高亲和力结合PD-1，例如，与鼠或嵌合抗PD-1抗体分子(例如本文所述的鼠或嵌合抗PD-1抗体分子)的KD相比，具有大约相同的KD，或更高或更低至少大约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％。在一些实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的KD小于约0.4、0.3、0.2、0.1或0.05nM，例如通过Biacore方法测得。在一些实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的KD小于约0.2nM，例如约0.135nM。在其他实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的KD小于约10、5、3、2或1nM，例如通过结合表达PD-1的细胞(例如，300.19细胞)测得。在一些实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的KD小于约5nM，例如约4.60nM(或约0.69μg/mL)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子与PD-1结合，其Koff低于1×10-4,5×10-5,or1×10-5s-1,例如,约1.65×10-5s-1。在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子与PD-1结合的Kon比1×104,5×104,1×105,or 5×105M-1s-1,例如,约1.23×105M-1s-1更快。
在一些实施方案中，与鼠或嵌合抗体分子(例如本文所述的鼠或嵌合抗PD-1抗体分子)的表达水平相比，所述抗体分子的表达水平更高，例如至少约0.5,1,2,3,4,5,6,7,8,9或10倍更高。在一些实施方案中，抗体分子在CHO细胞中表达。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子降低一种或多种PD-1相关活性，其IC50(50％抑制时的浓度)与鼠或嵌合抗PD-1抗体分子(例如本文所述鼠或嵌合抗PD-1)的IC50相比，大约相同或更低，例如，至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％更低。在一些实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的IC50小于约6、5、4、3、2或1nM，例如通过结合表达PD-1的细胞(例如，300.19细胞)测得。在一些实施方案中，鼠或嵌合抗PD-1抗体分子的IC50小于约4nM，例如约3.40nM(或约0.51μg/mL)。在一些实施方案中，降低的PD-1相关活性是PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子结合由葡萄球菌肠毒素B(SEB)激活的外周血单核细胞(PBMC)。在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子增加由SEB激活的全血IL-2的表达。例如，相比于当使用同种型对照(例如，IgG4)时IL-2的表达，抗PD-1抗体使IL-2的表达增加至少约2、3、4或5倍。
在一些实施方案中，相比鼠或嵌合抗PD-1抗体分子(例如本文所述的鼠或嵌合抗PD-1抗体分子)，所述抗PD-1抗体分子具有改善的稳定性，例如，在体外或体内至少约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍更稳定。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是人源化抗体分子，并且基于T细胞表位分析的风险评分为300至700,400至650,450至600，或如本文所述的风险评分。
在另一实施方式中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个、两个、三个或四个可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个或两个重链可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的至少一个或两个轻链可变区，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG4的重链恒定区，例如人IgG4。在一个实施方案中，人IgG4包括在根据EU编号228位的取代(例如，Ser至Pro取代)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG1的重链恒定区，例如人IgG1。在一个实施方案中，人IgG1包括在根据EU编号297位的取代(例如，Asn至Ala取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第265位的取代，根据EU编号第329位的取代，或两者(例如，在第265位的Asp至Ala取代和/或在第329位的Pro至Ala的取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第234位的取代，根据EU编号第235位的取代，或两者(例如，在第234位的Leu至Ala取代和/或在第235位的Leu至Ala的取代)。在一个实施方案中，重链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如，重和轻链恒定区包含以下序列：表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。在一个实施方案中，人IgG4包括在根据EU编号228位的取代(例如，Ser至Pro取代)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如，重和轻链恒定区包含以下序列：表3中列出的氨基序列，或与其基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的相同)的序列。在一个实施方案中，人IgG1包括在根据EU编号297位的取代(例如，Asn至Ala取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第265位的取代，根据EU编号第329位的取代，或两者(例如，在第265位的Asp至Ala取代和/或在第329位的Pro至Ala的取代)。在一个实施方案中，人IgG1包括根据EU编号第234位的取代，根据EU编号第235位的取代，或两者(例如，在第234位的Leu至Ala取代和/或在第235位的Leu至Ala的取代)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括重链可变结构域和恒定区，轻链可变结构域和恒定区，或两者，包含以下的氨基酸序列：BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。可任选地，抗PD-1抗体分子包含来自重链、轻链或两者的前导序列，如表4中所示；或与其基本相同的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自重链可变区的至少一个，两个或三个CDR(或所有CDR)，所述重链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者与任何前述序列基本相同(例如，至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高的同一性)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或所有CDR)，所述轻链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括轻链CDR中的取代，例如轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括在轻链CDR3上的轻链可变区102位的取代，例如，在表1所示的轻链可变区102位的半胱氨酸取代为酪氨酸，或半胱氨酸取代为丝氨酸残基(例如，未修饰的鼠或嵌合的SEQID NO:16或24；或已修饰序列SEQ ID No：34,42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(或所有CDR)，所述重和轻链可变区包含表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的序列。在一个实施方案中，相对于表1所示的或由表1中所示核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个CDR(或所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的所有六个CDR或密切相关的CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；密切相关的CDR例如相同的或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何CDR。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括轻链CDR中的取代，例如轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括在轻链CDR3上的轻链可变区102位的取代，例如，在表1所示的轻链可变区102位的半胱氨酸取代为酪氨酸，或半胱氨酸取代为丝氨酸残基(例如，未修饰的鼠或嵌合的SEQ ID NO:16或24；或已修饰序列SEQ ID No：34,42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人的如本文所述抗体的轻和重链可变区的所有六个CDR(例如，根据Kabat定义如表1的所有个CDR)，或相对于根据Kabat定义如表1所示的所有六个CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码,或于前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何CDR。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个Chothia高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个高变环)，或至少为来自那些与PD-1接触的高变环的氨基酸，或相对于根据Chothia等人定义如表1所示的至少一个、两个或三个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个Chothia高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个高变环)，或至少为来自那些与PD-1接触的高变环的氨基酸，或相对于根据Chothia等人定义如表1所示的至少一个、两个或三个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Chothia等人的如本文所述抗体的重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环(例如，根据Chothia定义如表1的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环)，或至少有来自那些高变环的接触PD-1的氨基酸，或相对于根据Chothia定义如表1所示的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括根据Chothia等人的如本文所述抗体的所有六个高变环(例如，根据Chothia定义如表1的所有六个高变环)，或密切相关的高变环；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；密切相关的高变环例如：相同的高变环或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个，三个或四个改变(例如，取代，缺失或插入，例如保守取代)的序列的高变环，或相对于根据Chothia定义如表1的所有六个高变环，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个，三个或四个改变(例如，取代，缺失或插入，例如保守取代)的序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子可包括本文所述的任何高变环。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含至少一个、两个或三个高变环，其具有与如本文所述抗体的相应高变环相同的经典结构，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体，BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；例如，与本文所述抗体的重链和/或轻链可变结构域的至少环1和/或环2相同的经典结构。高变环经典结构描述参见，例如，Chothia等，(1992)J.Mol.Biol.227：799-817；Tomlinson等人(1992)J.Mol.Biol.227：776-798。这些结构可以通过检查这些参考文献中描述的表格来确定。
在某些实施方式中，抗PD-1抗体分子包括根据Kabat等人和Chothia等人定义的CDR或高变环的组合。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括如本文所述抗体的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环，或相对于根据Kabat或Chothia定义如表1所示的至少一个、两个或三个CDR或高变环，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)；本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，根据Kabat或Chothia定义(例如，根据Kabat或Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个CDR或高变环)；或由表1中的核苷酸序列编码；或与前述任意序列基本相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
例如，根据Kabat等，抗PD-1抗体分子可包括根据Chothia等人的VH CDR1，或根据Chothia等人VH高变环1或其组合，例如，如表1所示。在一个实施方案中，VH CDR1的Kabat和Chothia CDR的组合包含氨基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO:224)，或与其基本相同的氨基酸序列(例如，具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代))。抗PD-1抗体分子可以进一步包括例如根据Kabat等人的VH CDR2-3，和根据Kabat等人的VL和CDR 1-3，例如，如表1所示。因此，在一些实施方式中，框架区基于根据Kabat等定义的CDR和根据Chothia等人定义的高变环的组合来定义。例如，抗PD-1抗体分子可包括基于根据Chothia等的VH高变环1定义的VH FR1，和基于根据Kabat等的VHCDR 1-2定义的VH FR2，例如，如表1所示。抗PD-1抗体分子可以进一步包括例如基于根据Kabat等人的VH CDR 2-3所定义的VH FR 3-4，和基于根据Kabat等人的VL CDR 1-3所定义的VL FR 1-4。
抗PD-1抗体分子可包括根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自本文所述抗体的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，本文所述抗体例如选自以下的任何抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，根据Kabat或Chothia定义(例如，根据Kabat或Chothia定义如表1的至少一个、两个或三个CDR)。
在一个实施方案中，例如，实施方案包含可变区，CDR(例如，ChothiaCDR或KabatCDR)或本文提及(例如，在表1中)的其他序列，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子，或是包含抗体的抗原结合片段的抗体分子，例如半抗体或半抗体的抗原结合片段。在某些实施方式中，抗体分子是双特异性抗体分子，其具有对PD-1的第一结合特异性和对TIM-3，LAG-3，CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)，PD-L1或PD-L2的第二结合特异性。
在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子包括：
(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含选自SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗体分子是人源化抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子。在另一个实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(i)重链可变区(VH)，包括选自SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；和
(ii)轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在另一实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(i)重链可变区(VH)，包括选自SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；和
(ii)轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子的轻链或重链可变框架(例如，包含至少FR1、FR2、FR3和可任选地FR4的区域)可选自：(a)轻链或重链可变框架，包括至少80％，85％，87％，90％，92％，93％，95％，97％，98％或优选100％来自人轻链或重链可变框架(例如来自人成熟抗体，人种系序列或人共有序列)的氨基酸残基；(b)轻链或重链可变框架，包括来自人轻链或重链可变框架(例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列)的氨基酸残基的至少20％至80％,40％至60％,60％至90％,或70％至95％；(c)非人类框架(例如啮齿动物框架)；或(d)已被修饰的非人框架，例如去除抗原性或细胞毒性决定簇，例如去免疫化或部分人源化。在一个实施方案中，轻链或重链可变框架区(特别是FR1、FR2和/或FR3)包括与人种系基因的VL或VH区段的框架相同或至少70、75、80、85、87、88、90、92、94、95、96、97、98、99％相同的轻链或重链可变框架区序列。
在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链可变结构域，其相对来自BAP049-Chi-HC的氨基酸序列(例如，整个可变区中FR区的氨基酸序列，例如，如图9A-9B或SEQ IDNO:18、20、22或30所示)，具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含的重链可变结构域具有以下一种或多种：按BAP049-Chi-HC氨基酸序列(例如，在整个可变区中FR的酸序列，例如，如图9A-9B或SEQ ID NO:18、20、22或30所示)中的位置，E在位置1，V在位置5，A在位置9，V在位置11，K在位置12，K在位置13，E在位置16，L在位置18，R在位置19，I或V在位置20，G在24位置，I在位置37，A或S在位置40，T在位置41，S在位置42，R在位置43，M或L在位置48，V或F在位置68，T在位置69，I在位置70，S在位置71，A或R在位置72，K或N在位置74，T或K在位置76，S或N在位置77，L在位置79，L在位置81，E或Q在位置82，M在位置83，S或N在位置84，R在位置87，A在位置88，或T在位置91。
另外地或本文所述的BAP049-Chi-HC的重链取代组合地，相对BAP049-Chi-LC的氨基酸序列，例如图10A-10B或SEQ ID NO:24或26所示的氨基酸序列，抗PD-1抗体分子包含的轻链可变结构域具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个氨基酸变化，例如氨基酸取代或缺失。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含的重链可变结构域具有以下一种或多种：按BAP049-Chi-LC氨基酸序列(例如，如图10A-10B或SEQ ID NO:24或26所示的氨基酸序列)中的位置，E在位置1，V在位置2，Q在位置3，L在位置4，T在位置7，D或L或A在位置9，F或T在位置10，Q在位置11，S或P在位置12，L或A在位置13，S在位置14，P或L或V在位置15，K在位置16，Q或D在位置17，R在位置18，A在位置19，S在位置20，I或L在位置21，T在位置22，L在位置43，K在位置48，A或S在位置49，R或Q在位置51，Y在位置55，I在位置64，S或P在位置66，S在位置69，Y在位置74，E在位置76，F在位置79，N在位置82，N在位置83，L或I在位置84，E在位置85，S或P在位置86，D在位置87，A或F或I在位置89，T或Y在位置91，F在位置93，或Y在位置102
在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子包括一个、两个、三个或四个重链框架区(例如，表2中所示，或由表2中所示的核苷酸序列编码的VHFW氨基酸序列)，或与其基本相同的序列。
在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子包括一个、两个、三个或四个轻链框架区(例如，表2中所示，或由表2中所示的核苷酸序列编码的VLFW氨基酸序列)，或与其基本相同的序列。
在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子包括一个、两个、三个或四个重链框架区(例如，表2中所示，或由表2中所示的核苷酸序列编码的VHFW氨基酸序列)，或与其基本相同的序列；和一个、两个、三个或四个轻链框架区(例如，表2中所示，或由表2中所示的核苷酸序列编码的VLFW氨基酸序列)，或与其基本相同的序列。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的重链框架区1(VHFW1)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:147)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum14或BAP049-hum15的重链框架区1(VHFW1)(例如，SEQID NO:151)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的重链框架区2(VHFW2)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum09，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:153)。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的重链框架区2(VHFW2)：BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum08，BAP049-hum10，BAP049-hum14，BAP049-hum15或BAP049-克隆-D(例如，SEQ ID NO:157)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum16的重链框架区2(VHFW2)(例如，SEQ ID NO:160)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的重链框架区3(VHFW3)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum09，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:162)。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的重链框架区3(VHFW3)：BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum08，BAP049-hum10，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16或BAP049-克隆-D(例如，SEQ ID NO:166)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的重链框架区4(VHFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:169)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1(VLFW1)：BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum15，BAP049-hum16或BAP049-克隆-C(例如，SEQID NO:174)。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1(VLFW1)：BAP049-hum01，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum07，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum14，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:177)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum06的轻链框架区1(VLFW1)(例如，SEQ ID NO:181)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum13的轻链框架区1(VLFW1)(例如，SEQ ID NO:181)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum02，BAP049-hum03或BAP049-hum12的轻链框架区1(VLFW1)(例如，SEQ ID NO:185)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的轻链框架区2(VLFW2)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum06，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10,BAP049-hum11，BAP049-hum14，BAP049-hum15,BAP049-hum16,BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:187)。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区2(VLFW2)：BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum07，BAP049-hum13或BAP049-克隆-C(例如，SEQ ID NO:191)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum12的轻链框架区2(VLFW2)(例如，SEQ ID NO:194)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的轻链框架区3(VLFW3)：BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12,BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15,BAP049-hum16,BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:196)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum02或BAP049-hum03的轻链框架区3(VLFW3)(例如，SEQ ID NO:200)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum01或BAP049-克隆-A的轻链框架区3(VLFW3)(例如，SEQ ID NO:202)。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum04，BAP049-hum05或BAP049-克隆-B的轻链框架区3(VLFW3)(例如，SEQ ID NO:205)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的轻链框架区4(VLFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:208)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的重链框架区1-3：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP-hum07，BAP049-hum09，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2),和SEQ ID NO:162(VHFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的重链框架区1-3：BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum08，BAP049-hum10或BAP049-克隆-D(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2),和SEQ ID NO:166(VHFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的重链框架区1-3：BAP049-hum14或BAP049-克隆-15(例如，SEQ ID NO:151(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2),和SEQ ID NO:166(VHFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum16的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:160(VHFW2),和SEQ ID NO:166(VHFW3))。在一些实施方案中，抗体分子进一步包含如下抗体的重链框架区4(VHFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:169)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1-3：BAP049-hum01或BAP049-克隆-A(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:202(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1-3：BAP049-hum02或BAP049-hum03(例如，SEQ ID NO:185(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:200(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1-3：BAP049-hum04、BAP049-hum05或BAP049-克隆-B(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1)、SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ ID NO:205(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum06的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:181(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum07的轻链框架区1-3(例如，SEQ IDNO:177(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1-3：BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum15，BAP049-hum16或BAP049-克隆-C(例如，SEQ ID NO:174(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含如下抗体的轻链框架区1-3：BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum14，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum12的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:185(VLFW1),SEQ IDNO:194(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子包含BAP049-hum13的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:183(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。在一些实施方案中，抗体分子进一步包含如下抗体的轻链框架区4(VLFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:208)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum01或BAP049-克隆-A的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum01或BAP049-克隆-A的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:202(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum02的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum02的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:185(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:200(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum03的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum03的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:185(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:200(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum04的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum04的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ IDNO:205(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum05或BAP049-克隆-B的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum05或BAP049-克隆-B的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ ID NO:205(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum06的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum06的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:181(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum07的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum07的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum08的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum08的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:174(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum01或BAP049-克隆-C的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum09或BAP049-克隆-C的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:174(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum01或BAP049-克隆-D的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum10或BAP049-克隆-D的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum01或BAP049-克隆-E的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum11或BAP049-克隆-E的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ ID NO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum12的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum12的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:185(VLFW1),SEQ ID NO:194(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum13的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:153(VHFW2)和SEQ ID NO:162(VHFW3))和BAP049-hum13的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:183(VLFW1),SEQ ID NO:191(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum14的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:151(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum14的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:177(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum15的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:151(VHFW1),SEQ ID NO:157(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum15的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:174(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含BAP049-hum16的重链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:147(VHFW1),SEQ ID NO:160(VHFW2)和SEQ ID NO:166(VHFW3))和BAP049-hum16的轻链框架区1-3(例如，SEQ ID NO:174(VLFW1),SEQ ID NO:187(VLFW2)和SEQ IDNO:196(VLFW3))。
在一些实施方案中，抗体分子进一步包含如下抗体的重链框架区4(VHFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:169),以及如下抗体的轻链框架区4(VLFW4)：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E(例如，SEQ ID NO:208)。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含重链框架区，其具有如图5或7中所示框架区FW1、FW2和FW3的组合。在另一实施方案中，抗体分子包含轻链框架区，其具有如图5或7中所示框架区FW1、FW2和FW3的组合。在另一些实施方案中，抗体分子包含轻链框架区和重链框架区，该轻链框架区具有如图5或7中所示框架区FW1、FW2和FW3的组合，该重链框架区具有如图5或7中所示框架区FW1、FW2和FW3的组合。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子的重链或轻链可变结构域或两者包括氨基酸序列，其与本文公开的氨基酸基本相同，例如，与本文所述抗体的可变区至少80％，85％，90％，92％，95％，97％，98％，99％或更高相同，本文所述抗体例如选自如下任一的抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述，或由表1中的核苷酸序列编码；或者，其与本文所述抗体的可变区差异至少1或5个残基，但少于40,30,20或10个残基。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子的重链或轻链可变区或两者包含由如下编码的氨基酸序列：本文所述的核酸序列或与本文所述的核酸序列(例如，表1和2中所示的核酸序列)或其互补序列杂交(例如，在低严格性、中等严格性或高严格性，或本文所述的其他杂交条件下)的核酸。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含至少一个、两个、三个或四个抗原结合区，例如可变区，具有表1中列出的氨基酸序列或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或者与表1所示序列相差不超过1,2,5,10或15个氨基酸残基)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括由VH和/或VL结构域由具有如下序列的核酸编码：表1中列出的核苷酸序列或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或者与表1中所示的序列相差不超过3,6,15,30或45个核苷酸。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自如下重链可变区的至少一个、两个或三个CDR，该重链可变区具有表1所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自如下轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR，该轻链可变区具有表1所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列)。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自如下重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，该重和轻链可变区具有表1所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失(例如保守取代)的序列)。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自具有本文所述抗体氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个CDR和/或高变环，本文所述抗体例如选自如下任一抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，如表1总结，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或相同相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失(例如，保守取代)的序列)。在另一实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自具有本文所述抗体氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR和/或高变环，本文所述抗体例如选自如下任一抗体：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，如表1总结，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或相同相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失(例如，保守取代)的序列)。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含本文所述(例如，如表1中所述)的所有六个CDR和/或高变环。
在一个实施方案中，相比于本文所述的可变区(例如，本文公开的FR区)，抗PD-1抗体分子具有在序列上相同或相差1、2、3或4个氨基酸的可变区。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是完整抗体或其片段(例如，Fab，F(ab')2，Fv或单链Fv片段(scFv))。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子是单克隆抗体或具有单一特异性的抗体。抗PD-1抗体分子也可以是人源化、嵌合、骆驼科、鲨鱼或体外产生的抗体分子。在一个实施方案中，其抗PD-1抗体分子是人源化抗体分子。抗PD-1抗体分子的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条，优选两条，完整的重链，以及至少一条，优选两条，完整的轻链)或可包括抗原结合片段(例如，Fab，F(ab')2，Fv，单链Fv片段，单结构域抗体，双价小抗体(dAb)，二价抗体或双特异性抗体或其片段，其单结构域变体，或骆驼科抗体)。
在其他实施方案中，抗PD-1抗体分子具有重链恒定区(Fc)，其选自例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgM，IgA1，IgA2，IgD，IgD和IgE的重链恒定区，特别地，选自例如IgG1，IgG2，IgG3和IgG4的重链恒定区，更特别地，选自IgG1或IgG2的重链恒定区(例如，人IgG1，IgG2或IgG4)。在一个实施方案中，重链恒定区是人IgG1。在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子具有的轻链恒定区选自例如κ或λ的轻链恒定区，优选κ(例如人κ)。在一个实施方案中，恒定区经改变，例如突变，以改变抗PD-1抗体分子的性质(例如，增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基的数量、效应细胞功能或补体功能)。例如，恒定区在如下位置的突变：296(M至Y)，298(S至T)，300(T至E)，477(H至K)和478(N至F)，以改变Fc受体结合(例如，突变位置对应于SEQ ID NO：212或214的位置132(M至Y)，134(S至T)，136(T至E)，313(H至K)和314(N至F)；或SEQ ID NO：215,216,217或218的位置135(M至Y)，137(S至T)，139(T至E)，316(H至K)和317(N至F))。在另一个实施方案中，IgG4的重链恒定区，例如人IgG4，在根据EU编号的228位突变(例如，S至P)，例如，如表3中所示。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含在根据EU编号的228位有突变(例如，S至P)的人IgG4，例如，如表3中所示；以及κ轻链恒定区，例如，如表3所示。在又一个实施方案中，IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区有以下一或多处突变：在根据EU编号的位置297(例如，N至A)，根据EU编号的位置265(例如，D至A)，根据EU编号的位置329(例如，P至A)，根据EU编号的位置234(例如，L至A)，或根据EU编号的位置235(例如，L至A)，例如，如表3所示。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包含在一个或多个前述位置突变的人IgG1，例如，如表3中所示；以及κ轻链恒定区，例如，如表3所示。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是分离或重组的。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是人源化抗体分子。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子具有基于T细胞表位分析小于700,600,500,400或更低的风险评分。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子是人源化抗体分子，并且具有基于T细胞表位分析的300至700,400至650,450至600的风险评分，或如本文所述的风险评分。
在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含选自SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(i)重链可变区(VH)，包括选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；和
(ii)轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在另一些实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：
(i)重链可变区(VH)，包括选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；和
(ii)轻链可变区(VL)，其包括SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
在前述抗体分子的实施方案中，VHCDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在其他实施方案中，VHCDR1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在其他实施方案中，SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列。
在实施方案中，前述抗体分子具有重链可变区，其包含至少一个框架(FW)区，其包含SEQ ID NO:147,151,153,157,160,162,166或169中任一个氨基酸序列，或与其至少90％相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:147,151,153,157,160,162，166或169中任一个氨基酸序列相比，具有不超过两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子具有重链可变区，其包含至少一个框架区，所述框架区包含SEQ ID NO:147,151,153,157,160,162,166或169中任一个氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子具有重链可变区，其包含至少两个、三个或四个框架区，所述框架区包含SEQ ID NO:147,151,153,157,160,162,166或169中任一个氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含SEQ ID NO:147或151的VHFW1氨基酸序列，SEQ ID NO:153,157或160的VHFW2氨基酸序列，和SEQ ID NO:162或166的VHFW3氨基酸序列，且可任选地，还包含SEQ ID NO:169的VHFW4氨基酸序列。
在实施方案中，前述抗体分子具有轻链可变区，其包含至少一个框架(FW)区，其包含SEQ ID NO:174,177,181,183,185,187,191,194,196,200,202,205或208中任一个氨基酸序列，或与其至少90％相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:174,177,181,183,185,187,191,194,196,200,202,205或208中任一个氨基酸序列相比，具有不超过两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子具有轻链可变区，其包含至少一个框架区，所述框架区包含SEQ ID NO:174,177,181,183,185,187,191,194,196,200,202,205或208中任一个氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子具有轻链可变区，其包含至少两个、三个或四个框架区，所述框架区包含SEQ ID NO:174,177,181,183,185,187,191,194,196,200,202,205或208中任一个氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含SEQ ID NO:174,177,181,183或185的VHFW1氨基酸序列，SEQ ID NO:187,191或194的VHFW2氨基酸序列，和SEQ ID NO:196,200,202或205的VHFW3氨基酸序列，且可任选地，还包含SEQ ID NO:208的VHFW4氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体包含重链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:38,50,82或86中的任一个至少85％相同的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:38,50,82或86的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体包含轻链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个至少85％相同的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:42,46,54,58,62,66,70,74或78的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链，其包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链，其包含SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:102的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链，其包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链，其包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体包含轻链，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含轻链，其包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。
在其他实施方案中，前述抗体分子选自Fab，F(ab')2，Fv或单链Fv片段(scFv)。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含的轻链恒定区选自κ或λ的轻链恒定区。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含人IgG4重链恒定区和κ轻链恒定区，其重链恒定区在根据EU编号的位置228或SEQ ID NO:212或214的位置108具有突变。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含人IgG4重链恒定区和κ轻链恒定区，其重链恒定区在根据EU编号的位置228或SEQ ID NO:212或214的位置108具有丝氨酸至脯氨酸突变。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含人IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区，其重链恒定区在根据EU编号的位置297或SEQ ID NO:216的位置180具有天冬酰胺至丙氨酸突变。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含人IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区，其重链恒定区在根据EU编号的位置265或SEQ ID NO:217的位置148具有天冬酰胺至丙氨酸突变，且在根据EU编号的位置329或SEQ ID NO:217的位置212具有脯氨酸至丙氨酸突变。
在其他实施方案中，前述抗体分子包含人IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区，其重链恒定区在根据EU编号的位置234或SEQ ID NO:218的位置117具有亮氨酸至丙氨酸突变，且在根据EU编号的位置235或SEQ ID NO:218的位置118具有亮氨酸至丙氨酸突变。
在其他实施方案中，前述抗体分子能够以小于约0.2nM的解离常数(KD)结合人PD-1。
在一些实施方案中，前述抗体分子与人PD-1结合的KD小于约0.2nM，0.15nM，0.1nM，0.05nM或0.02nM，例如约0.13nM至0.03nM，例如约0.077nM至0.088nM，例如，约0.083nM，例如，通过Biacore方法测量。
在另一些实施方案中，前述抗体分子与食蟹猴PD-1结合的KD小于约0.2nM，0.15nM，0.1nM，0.05nM，或0.02nM，例如，约0.11nM至0.08nM，例如约0.093nM，例如，通过Biacore方法测量。
在某些实施方案中，前述抗体分子以相似KD(例如在nM范围内，例如，通过Biacore方法测量)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合。在一些实施方案中，前述抗体分子与人PD-1-Ig融合蛋白结合的KD小于约0.1nM，0.075nM，0.05nM，0.025nM或0.01nM，例如约0.04nM，例如，通过ELISA测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子与表达人PD-1的Jurkat细胞(例如，人PD-1转染的Jurkat细胞)结合的KD小于约0.1nM，0.075nM，0.05nM，0.025nM，或0.01nM，例如，约0.06nM，例如，通过FACS分析测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子与食蟹猴T细胞结合的KD小于约1nM，0.75nM，0.5nM，0.25nM或0.1nM，例如约0.4nM，例如通过FACS分析测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子与表达食蟹猴PD-1的细胞(例如，用食蟹猴PD-1转染的细胞)结合的以KD小于约1nM，0.75nM，0.5nM，0.25nM或0.01nM，例如约0.6nM，例如，通过FACS分析测量。
在某些实施方案中，前述抗体分子不与小鼠或大鼠PD-1交叉反应。在其他实施方案中，前述抗体与恒河猴PD-1交叉反应。例如，可以通过Biacore方法或使用表达PD-1的细胞(例如，表达人PD-1的300.19细胞)的结合试验来测量交叉反应性。在其他实施方案中，前述抗体分子结合PD-1的细胞外Ig样结构域。
在其他实施方案中，前述抗体分子能够降低PD-1结合PD-L1、PD-L2或两者，或表达PD-L1、PD-L2或两者的细胞。在一些实施方案中，前述抗体分子减少(例如，阻断)PD-L1与表达PD-1的细胞(例如，表达人PD-1的300.19细胞)结合的IC50小于约1.5nM，1nM,0.8nM，0.6nM，0.4nM，0.2nM或0.1nM，例如，约0.79nM至约1.09nM，例如约0.94nM，或约0.78nM或更低，例如约0.3nM。在一些实施方案中，前述抗体减少(例如，阻断)PD-L1与表达PD-1的细胞(例如，表达人PD-1的300.19细胞)结合的IC50小于约2nM，1.5nM,1nM,0.5nM或0.2nM，例如，约1.05nM至约1.55nM，例如约1.3nM或更少，例如约0.9nM。
在其他实施方案中，前述抗体分子能够增强抗原特异性T细胞应答。
在实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子或双特异性抗体分子。在实施方案中，抗体分子是具有对PD-1的第一结合特异性和对TIM-3，LAG-3，CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)，PD-L1或PD-L2的第二结合特异性。在实施方案中，抗体分子包含抗体的抗原结合片段，例如半抗体或半抗体的抗原结合片段。
在一些实施方案中，前述抗体分子使得葡萄球菌肠毒素B(SEB)活化的细胞(例如，25μg/mL)的IL-2表达增加至少约2,3,4,5倍，例如，约2至3倍，例如约2至2.6倍，例如约2.3倍，这是与使用同种型对照(例如，IgG4)时IL-2的表达相比，例如，如在SEB的T细胞活化试验或人全血离体试验中测定。
在一些实施方案中，前述抗体分子使得抗-CD3(例如，0.1μg/mL)刺激的T细胞的IFN-γ表达增加至少约2,3,4,5倍，例如约1.2至3.4倍，例如约2.3倍，这是与使用同种型对照(例如，IgG4)时的IFN-γ的表达相比，例如，如在IFN-γ活性试验中测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子使得SEB(例如，3pg/mL)激活的T细胞的IFN-γ表达增加至少约2,3,4,5倍，例如约0.5至4.5倍，例如约2.5倍，这是与使用同种型对照(例如，IgG4)时的IFN-γ的表达相比，例如，如在IFN-γ活性试验中测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子使得CMV肽刺激的T细胞的IFN-γ表达增加至少约2,3,4,5倍，例如约2至3.6倍，例如约2.8倍，这是与使用同种型对照(例如，IgG4)时的IFN-γ的表达相比，例如，如在IFN-γ活性试验中测量。
在一些实施方案中，前述抗体分子使得CMV肽活化的CD8+T细胞的增殖增加至少约1,2,3,4,5倍，例如约1.5倍，这是与使用同种型对照(例如，IgG4)时的CD8+T的增殖相比，例如，通过经过至少n次(例如，n＝2或4)细胞分裂的CD8+T细胞的百分比来测量。
在某些实施方案中，前述抗体分子的Cmax为约100μg/mL至约500μg/mL，约150μg/mL至约450μg/mL，约250μg/mL至约350μg/mL，或者在约200μg/mL和约400μg/mL之间，例如，约292.5μg/mL，例如，在猴中测量的。
在某些实施方案中，前述抗体分子的T1/2为约250小时至约650小时，约300小时至约600小时，约350小时至约550小时，或约400小时至约500小时，例如，大约465.5小时，例如，在猴子中测量的。
在一些实施方案中，前述抗体分子与PD-1结合的Kd慢于5×10-4,1×10-4,5×10- 5s-1或1×10-5s-1例如,约2.13×10-4s-1，例如，通过Biacore方法测量。在一些实施方案中，前述抗体分子与PD-1结合的Kd慢于1×104,5×104,1×105s1或5×105s-1例如,约2.78×105s-1，例如，通过Biacore方法测量。
在一些实施方案中，前述抗PD-1抗体分子结合PD-1的C链，CC'环，C'链和FG环内的一个或多个残基。PD-1的结构域结构描述于例如Cheng等人的“人类程序化细胞死亡1受体的结构和相互作用(Structure and Interactions of the Human Programmed CellDeath 1Receptor)”J.Biol.Chem.Vol.2013,288：11771-11785。如Cheng等所述,C链包含残基F43-M50，CC'环包含S51-N54，C'链包含残基Q55-F62，并且FG环包含残基L108-I114(根据Chang等人的氨基酸编号,同上)。因此，在一些实施方案中，如本文所述的抗PD-1抗体结合PD-1的F43-M50，S51-N54，Q55-F62和L108-I114的一个或多个范围中的至少一个残基。在一些实施方案中，如本文所述的抗PD-1抗体结合PD-1的F43-M50，S51-N54，Q55-F62和L108-I114的两个，三个或所有四个范围中的至少一个残基。在一些实施方案中，抗PD-1抗体结合的PD-1残基也是PD-L1和PD-L2之一或二者的结合位点的一部分。
在另一方面，本发明提供了编码上述抗体分子的分离的核酸分子，其载体和宿主细胞。
还提供了编码任何前述抗体分子的抗体重链可变区或轻链可变区或两者的分离的核酸。
在一个实施方案中，所述分离的核酸编码重链CDR 1-3，其中所述核酸包含SEQ IDNO:108-112,223,122-126,133-137或144-146的核苷酸序列。
在另一实施方案中，所述分离的核酸编码轻链CDR 1-3，其中所述核酸包含SEQ IDNO:113-120,127-132或138-143的核苷酸序列。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码重链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:39,51,83,87,90,95或101中的任一个至少85％相同。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码重链可变结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含SEQ ID NO:39,51,83,87,90,95或101中的任一个。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码重链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:41,53,85,89,92,96或103中的任一个至少85％相同。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码重链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含SEQ ID NO:41,53,85,89,92,96或103中的任一个。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码轻链可变区结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:45,49,57,61,65,69,73,77,81,94,98,100,105或107中的任一个至少85％相同。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码轻链可变区结构域的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含SEQ ID NO:45,49,57,61,65,69,73,77,81,94,98,100,105或107中的任一个。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码轻链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与SEQ ID NO:45,49,57,61,65,69,73,77,81,94,98,100,105或107中的任一个至少85％相同。
在其他实施方案中，前述核酸还包含编码轻链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含SEQ ID NO:45,49,57,61,65,69,73,77,81,94,98,100,105或107中的任一个。
在某些实施方案中，提供了一种或多种包含前述核酸的表达载体和宿主细胞。
还提供了产生抗体分子或其片段的方法，包括在适于基因表达的条件下培养如本文所述的宿主细胞。
在一个方面，本发明的特征在于提供本文所述的抗体分子的方法。该方法包括：提供PD-1抗原(例如，包含至少一部分PD-1表位的抗原)；获得特异性结合PD-1多肽的抗体分子；并评估抗体分子是否特异性结合PD-1多肽，或评估抗体分子调节(例如抑制)PD-1活性的功效。该方法可以进一步包括将抗体分子给予受试者，例如人或非人动物。
另一方面，本发明提供组合物，例如药物组合物，其包括药学上可接受的载体，赋形剂或稳定剂，和至少一种治疗剂，例如本文所述的抗PD-1抗体分子。在一个实施方案中，组合物，例如药物组合物，包括抗体分子和一种或多种试剂的组合，例如本文所述的治疗剂或其他抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子与标记物或治疗剂偶联。C-Met受体酪氨酸激酶抑制剂
本发明的c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂公开于例如美国专利7,767,675中，其通过引用整体并入本文。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐。
在优选的实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是capmatinib。
在优选的实施方式中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是capmatinib二盐酸盐。在一个实施方案中，capmatinib以约400-600mg(例如，每天)的剂量施用，例如约400、500或600mg，或约400-500或500-600mg。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药。
药物组合物和试剂盒
另一方面，本发明提供组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与药学上可接受的载体一起配制的本文所述的抗体分子。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂，分散介质，等渗和吸收延迟剂等。载体可适用于静脉内，肌肉内，皮下，肠胃外，直肠，脊柱或表皮给药(例如通过注射或输注)。
本发明的组合物可以有多种形式。这些包括例如液体，半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)，分散体型或悬浊液，脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的给药方式和治疗应用。典型的优选组合物是可注射或可输注溶液的形式。优选的给药方式是肠胃外给药(例如，静脉内，皮下，腹膜内，肌肉内)。在优选的实施方案中，抗体通过静脉内输注或注射给药。在另一个优选的实施方案中，抗体通过肌内或皮下注射给药。
本文所用的短语“肠胃外给药”和“胃肠外给药”是指除肠内和局部给药以外的给药方式，通常通过注射给药，包括但不限于静脉内，肌肉内，动脉内，鞘内，囊内，眶内，心内，皮内，腹膜内，经气管，皮下，角质层下(subcuticular)，关节内，包膜下，蛛网膜下，脊柱内，硬膜外和胸骨内注射和输注。
治疗组合物通常应在制造和储存条件下无菌且稳定。该组合物可以配制成溶液，微乳液，分散体，脂质体或适于高抗体浓度的其他有序结构。无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物(即抗体或抗体部分)掺入适当的溶剂中，根据需要联同上面列举的成分中的一种或组合，然后过滤灭菌来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其自其先前无菌过滤溶液产生活性成分的粉末以及任何其他所需成分。溶液的适当流动性可得以保持，例如，通过使用诸如卵磷脂的涂层，通过在分散体的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
抗体分子可以通过本领域已知的多种方法施用，但是对于许多治疗应用，优选的施用途径/方式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20-40mg/min，通常大于或等于40mg/min的速率给药，以达到约35mg至440mg/m2，通常约70至310mg/m2，更通常约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，抗体分子可以通过静脉内输注以小于10mg/min的速率给药；优选小于或等于5mg/min，达到约1至100mg/m2，优选约5至50mg/m2，约7至25mg/m2，更优选约10mg/m2的剂量。如本领域技术人员所理解的，给药途径和/或方式将根据所需结果而变化。在某些实施方案中，活性化合物可以用载体制备，所述载体将保护化合物免于快速释放，例如控释制剂，包括植入物，透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的，生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是专利的或本领域技术人员通常已知的。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson编著，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
在某些实施方案中，抗体分子可以口服给药，例如，用惰性稀释剂或可同化的可食用载体。化合物(和其他成分，如果需要)也可以包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂，或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗给药，化合物可与赋形剂混合并以可摄入的片剂，口含片，锭剂，胶囊，酏剂，悬浮液，糖浆，糯米纸囊剂等形式使用。为了通过肠胃外给药以外的方式给予本发明化合物，可能需要用物质包被化合物或与化合物共同给药以防止其失活。治疗组合物还可以与本领域已知的医疗装置一起施用。
调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可给予单一推注剂量，可随时间给予分成数次的剂量或可如治疗情况的紧急性所示成比例降低或增加剂量。尤其有利的是配制成单位剂型的胃肠道外组合物以便于给药和剂量均一性。本文所用的剂量单位形式指作为单一剂量用于待治疗受试者的物理离散单位，每个单位包含预定量的活性化合物，该预定量经计算能够产生与所需药物载体相关的所需治疗效果。本发明剂量单位形式的规格决定于并直接取决于(a)活性化合物的独特特性和可达到的具体治疗作用，和(b)就治疗个体敏感性而言复合该活性化合物技术中固有的局限性。
治疗或预防有效量的抗体分子的示例性非限制性范围是0.1-30mg/kg，更优选1-25mg/kg。抗PD-1抗体分子的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)以如下剂量给药，约1-40mg/kg，例如1-30mg/kg，例如约5-25mg/kg，约10至20mg/kg，约1至5mg/kg，1至10mg/kg，5至15mg/kg，10至20mg/kg，15至25mg/kg或约3mg/kg。给药方案可以从例如每周一次到每2,3或4周一次变化。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子以每隔一周约10至20mg/kg的剂量施用。
作为另一个实例，治疗或预防有效量的抗体分子的非限制性范围是200-500mg，更优选300-400mg/kg。抗PD-1抗体分子的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施方案中，抗PD-1抗体分子通过注射(例如，皮下或静脉内)施用以下剂量(例如，平坦剂量)约200mg至500mg，例如约250mg至450mg，约300mg至400mg，约250mg至350mg，约350mg至450mg，或约300mg或约400mg。给药方案(例如，平坦给药方案)可以从例如每周一次到每2,3,4,5或6周一次变化。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约400mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每四周一次约300mg的剂量施用。在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子以每三周一次约400mg的剂量施用。虽然不希望受理论束缚，但在一些实施方案中，平坦或固定剂量可以对患者有益，例如，以节省药物供应和减少药房错误。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子的清除率(CL)为约6至16mL/h，例如，约7至15mL/h，约8至14mL/h，约9至12mL/h或约10至11mL/h，例如，约8.9mL/h，10.9mL/h或13.2mL/h。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子的CL的重量指数(exponent of weight)为约0.4至0.7，约0.5至0.6，或0.7或更低，例如0.6或更低，或约0.54。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子在稳态(Vss)下的分布体积为约5至10V，例如约6至9V，约7至8V，或约6.5至7.5,例如，约7.2V。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子的半衰期为约10至30天，例如约15至25天，约17至22天，约19至24天或约18至22天,例如，大约20天。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体分子的Cmin(例如，对于80kg患者)为至少约0.4μg/mL，例如，至少约3.6μg/mL，例如，约20至50μg/mL,例如，约22至42μg/mL，约26至47μg/mL，约22至26μg/mL，约42至47μg/mL，约25至35μg/mL，约32至38μg/mL，例如，约31μg/mL或约35μg/mL。在一个实施方案中，在以每四周一次约400mg的剂量接受抗PD-1抗体分子的患者中测定Cmin。在另一个实施方案中，在以每三周一次约300mg的剂量接受抗PD-1抗体分子的患者中测定Cmin。在一些实施方案中，在某些实施方案中，Cmin比抗-PD-1抗体分子的EC50高至少约50倍，例如，至少约60倍，65倍，70倍，75倍，80倍，85倍，90倍，95倍或100倍，例如，至少约77倍，例如，基于SEB离体试验中IL-2变化确定。在另一些实施方案中，Cmin比抗-PD-1抗体分子的EC50高至少5倍，例如，至少6倍，7倍，8倍，9倍或10倍，例如，至少约8.6倍，例如，基于SEB离体试验中IL-2变化确定。
抗体分子可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20-40mg/min，通常大于或等于40mg/min的速率给药，以达到约35mg至440mg/m2，通常约70至310mg/m2，更通常约110至130mg/m2的剂量。在实施方案中，约110至130mg/m2的输注速率达到约3mg/kg的水平。在其他实施方案中，抗体分子可以通过静脉内输注以小于10mg/min，例如小于或等于5mg/min的速率施用，以达到约1至100mg/m2的剂量，例如，约5至50mg/m2，约7至25mg/m2，或约10mg/m2。在一些实施方案中，抗体在约30分钟的时间内输注。应注意，剂量值可随待缓解的病症的类型和严重程度而变化。需要进一步理解，对于任何具体的受试者，应当随着时间根据个体的需求以及给予或监督组合物给予的个人专业判断来调节具体给药方案，本文所列的剂量范围仅仅是示例性的，不意在对所要求权利的组合物的范围或实施方案构成限制。
本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或抗体部分。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所需治疗结果的量。治疗有效量的修饰抗体或抗体片段可根据诸如疾病状态，年龄，性别和个体体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引发所需反应的能力而变化。治疗有效量也是其中治疗有益效果超过修饰抗体或抗体片段的任何毒性或有害作用的量。“治疗有效剂量”优选将可测量的参数(例如，肿瘤生长速率)相对于未治疗的受试者抑制至少约20％，更优选至少约40％，甚至更优选至少约60％，还更优选至少约80％。可以在预测人肿瘤功效的动物模型系统中评估化合物抑制可测量参数(例如癌症)的能力。或者，组合物的这种性质可以通过检查化合物的抑制能力来评估，这种抑制在体外通过本领域技术人员已知的测定进行。
“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所需预防结果的量。通常，由于在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，预防有效量将小于治疗有效量。
包含本文所述抗体分子的试剂盒也在本发明的范围内。该试剂盒可包括一个或多个其他元件，包括：使用说明；其他试剂，例如标签，治疗剂，或用于螯合或另行偶联抗体至标记物或治疗剂或辐射防护组合物的试剂；用于制备供施用抗体的装置或其他材料；药学可接受的载体或用于对受试者施用的装置或其他材料。
组合疗法的应用
组合，例如本文公开的抗PD-1抗体分子，具有体外和体内诊断以及治疗和预防用途。例如，这些分子可以施用于培养的细胞(体外或离体)或施用于受试者，例如人受试者，以治疗、预防和/或诊断多种疾病，例如癌症和感染性疾病。
因此，在一个方面，本发明提供了改变受试者中免疫应答的方法，包括向受试者施用本文所述的组合，从而改变受试者中的免疫应答。在一个实施方案中，免疫应答被增强、刺激或上调。
如本文所用，术语“受试者”旨在包括人和非人动物。在一个实施方案中，受试者是人受试者，例如患有以PD-1功能异常为特征的病症或病症的人类患者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一个实施方案中，受试者是人。在一个实施方案中，受试者是需要增强免疫应答的人类患者。在一个实施方案中，受试者是免疫受损的，例如受试者正在经历或已经历化学治疗或放射疗法。另外地，或组合地，受试者由于感染而具有免疫受损或处于免疫受损的风险中。本文所述的方法和组合物适用于治疗患有可通过增强T细胞介导的免疫应答来治疗的病症的人类患者。例如，本文描述的方法和组合物可以增强多种免疫活性。在一个实施方案中，受试者具有增加的肿瘤浸润性T淋巴细胞(TIL)的数量或活性。在另一个实施方案中，受试者具有增加的干扰素-γ(IFN-γ)的表达或活性。在另一个实施方案中，受试者具有降低的PD-L1表达或活性。
治疗用途
阻断PD-1可以增强受试者中对癌细胞的免疫应答。PD-1的配体PD-L1不在正常人细胞中表达，但在多种人类癌症中是丰富的(Dong等(2002)Nat Med 8：787-9)。PD-1和PD-L1之间的相互作用可导致肿瘤浸润淋巴细胞减少，T细胞受体介导的增殖减少和/或癌细胞的免疫逃避(Dong et al。(2003)J Mol Med 81：281-7；Blank等人(2005)CancerImmunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10：5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用可以逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效应是叠加的(Iwai等人(2002)PNAS.USA 99：12293-7；Brown等人(2003)J.Immunol.170：1257-66)。因此，PD-1的抑制可导致增强免疫应答。
在一个方面，本发明涉及使用抗PD-1抗体分子在体内治疗受试者，从而抑制或减少癌性肿瘤的生长。可以单独使用抗PD-1抗体来抑制癌性肿瘤的生长。或者，抗PD-1抗体可以与以下一种或多种组合使用：标准治疗(例如，用于癌症或感染性疾病)，另一种抗体或其抗原结合片段，免疫调节剂(例如，共刺激分子的激活剂或抑制分子的抑制剂)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法，如下所述。
因此，在一个实施方案中，本发明提供抑制受试者中肿瘤细胞生长的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的抗PD-1抗体分子。
在一个实施方案中，所述方法适用于体内治疗癌症。为了实现免疫的抗原特异性增强，抗PD-1抗体分子可以与感兴趣的抗原一起施用。当PD-1的抗体与一种或多种药剂联合给药时，该组合可以按任何顺序或同时给药。
另一方面，提供一种在受试者中治疗受试者的方法，例如，减少或改善过度增殖性病症或病症(例如，癌症)，例如实体瘤，血液癌症，软组织肿瘤或转移性病变。该方法包括向受试者施用本文公开的一种或多种组合。
如本文所用，术语“癌症”意指包括所有类型的癌性生长或致癌过程，转移性组织或恶性转化的细胞，组织或器官，而与组织病理学类型或侵袭性阶段无关。癌症病症的示例包括但不限于实体瘤，血液癌症，软组织肿瘤和转移性病变。实体瘤的示例包括恶性肿瘤，例如各种器官系统的肉瘤和癌(包括腺癌和鳞状细胞癌)，例如影响肝，肺，乳腺，淋巴，胃肠(例如结肠)，泌尿生殖道(例如，肾，尿路上皮细胞)，前列腺和咽的那些。腺癌包括恶性肿瘤，例如大多数结肠癌，直肠癌，肾细胞癌，肝癌，非小细胞癌肺癌，小肠癌和食道癌。鳞状细胞癌包括恶性肿瘤，例如在肺，食道，皮肤，头颈部区域，口腔，肛门和子宫颈中。在一个实施方案中，癌症是黑素瘤，例如晚期黑素瘤。使用本发明的方法和组合物也可以治疗或预防前述癌症的转移性病变。
可以使用本文公开的抗体分子抑制其生长的示例性癌症包括通常对免疫疗法有反应的癌症。治疗的优选癌症的非限制性示例包括黑素瘤(例如，转移性恶性黑素瘤)，肾癌(例如，透明细胞癌)，前列腺癌(例如，激素难治性前列腺腺癌)，乳腺癌，结肠癌和肺癌(例如，非小细胞肺癌)。另外，可以使用本文所述的抗体分子治疗难治性或复发性恶性肿瘤。
可以治疗的其他癌症的示例包括骨癌，胰腺癌，皮肤癌，头颈癌，皮肤或眼内恶性黑素瘤，子宫癌，卵巢癌，直肠癌，肛门癌，胃食管癌，胃癌，睾丸癌，子宫癌，输卵管癌，子宫内膜癌，子宫颈癌，阴道癌，外阴癌，Merkel细胞癌，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，食道癌，小肠癌，内分泌系统癌症，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌，慢性或急性白血病，包括急性髓性白血病，慢性粒细胞白血病，急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，儿童实体瘤，淋巴细胞性淋巴瘤，膀胱癌，多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合征，肾脏或输尿管癌，肾盂癌，中枢神经系统肿瘤(CNS)，原发性中枢神经系统淋巴瘤，肿瘤血管生成，脊髓轴肿瘤，脑干胶质瘤，垂体腺瘤，卡波西氏肉瘤，表皮样癌，鳞状细胞癌细胞癌，T细胞淋巴瘤，环境诱发的癌症，包括由石棉诱导的癌症(例如，间皮瘤)，以及所述癌症的组合。
在一些实施方案中，此处的疗法可用于治疗患有(或被鉴定为患有)与感染相关的癌症(例如病毒或细菌感染)的患者。示例性癌症包括宫颈癌，肛门癌，HPV相关的头颈部鳞状细胞癌，HPV相关的食管乳头状瘤，HHV6相关的淋巴瘤，EBV相关的淋巴瘤(包括Burkitt淋巴瘤)，胃MALT淋巴瘤，其他感染相关的MALT淋巴瘤，HCC和Kaposi的肉瘤。
在其他实施方案中，癌症是血液恶性肿瘤或癌症，包括但不限于白血病或淋巴瘤。例如，抗PD-1抗体分子可用于治疗癌症和恶性肿瘤，包括但不限于例如急性白血病，包括但不限于例如B细胞急性淋巴性白血病(“BALL”)，T细胞急性淋巴细胞白血病(“TALL”)，急性淋巴细胞白血病(ALL)；一种或多种慢性白血病，包括但不限于，例如慢性粒细胞白血病(CML)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)；其他血液系统癌症或血液病症，包括但不限于，例如，B细胞幼淋巴细胞白血病，囊性浆细胞样树突状细胞肿瘤，伯基特淋巴瘤，弥漫性大B细胞淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，毛细胞白血病，小细胞或大细胞-滤泡性淋巴瘤，恶性淋巴组织增生症，MALT淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，边缘区淋巴瘤，多发性骨髓瘤，骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征，非霍奇金淋巴瘤，浆母细胞淋巴瘤，浆细胞样树突状细胞肿瘤，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，以及“白血病前期”(其是由骨髓血细胞的无效产生(或发育不良)等联系起来的血液病症的多样化集合)。
在一个实施方案中，癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，具有鳞状和/或非鳞状组织学的NSCLC，或NSCLC腺癌))，黑素瘤(例如，晚期黑素瘤)，肾癌(例如，肾细胞癌，例如，透明细胞肾细胞癌)，肝癌(例如，肝细胞癌)，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)，前列腺癌，乳腺癌(例如，不表达雌激素受体、孕激素受体或Her2/neu中的一种、两种或全部的乳腺癌，例如三阴性乳腺癌)，结肠直肠癌，胰腺癌，头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌HNSCC)，肛门癌，胃食管癌，甲状腺癌，宫颈癌，淋巴组织增生性疾病(如移植后淋巴组织增生性疾病)或血液癌，T细胞淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤或白血病(例如，髓样白血病)。
在另一个实施方案中，癌症选自癌(例如晚期或转移癌)，黑素瘤或肺癌，例如非小细胞肺癌。
在一个实施方案中，癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌。
在另一个实施方案中，癌症是肝癌，例如晚期肝癌，伴有或不伴有病毒感染，例如慢性病毒性肝炎。
在一个实施方案中，癌症是前列腺癌症，例如晚期前列腺癌。
在另一个实施方案中，癌症是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。
在另一个实施方案中，癌症是肾癌，例如肾细胞癌(RCC)(例如，转移性RCC或透明细胞肾细胞癌)。
本文公开的方法和组合物可用于治疗与前述癌症相关的转移性病变。
感染性疾病
本发明的其他方法用于治疗已经暴露于特定毒素或病原体的患者。因此，本发明的另一方面提供治疗受试者的感染性疾病的方法，包括向受试者施用本文公开的组合，例如包含抗PD-1抗体分子的组合，使得受试者就传染病接受治疗。
在感染(例如，急性和/或慢性)的治疗中，抗PD-1抗体分子的施用可以与常规治疗组合，以补充或代替刺激天然宿主对感染的免疫防御。天然宿主对感染的免疫防御包括但不限于炎症，发热，抗体介导的宿主防御，T淋巴细胞介导的宿主防御，包括淋巴因子分泌和细胞毒性T细胞(特别是在病毒感染期间)，补体介导的裂解和调理作用(促进的吞噬作用)和吞噬作用。抗PD-1抗体分子重新激活功能失调的T细胞的能力可用于治疗慢性感染，特别是那些细胞介导的免疫对完全恢复很重要的感染。
类似于如上所述其对肿瘤的应用，抗体介导的PD-1阻断可以单独使用，或作为佐剂与疫苗组合使用，以刺激对病原体，毒素和自身抗原的免疫应答。该治疗方法可能特别有用的病原体的示例包括目前没有有效疫苗的病原体，或常规疫苗不完全有效的病原体。这些包括但不限于HIV，肝炎(甲、乙和丙)，流感，疱疹，贾第虫，疟疾，利什曼原虫，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌。PD-1阻断对于在感染过程中呈现改变抗原的诸如HIV的病原体所形成的感染特别有用。这些新型表位在抗人PD-1给药时被识别为外源，因此引起强烈的T细胞应答，其不会被PD-1的负信号消弱。
联合治疗
本文提供了本文公开的组合，例如PD-1抗体分子的组合，以及一种或多种其他治疗剂。本节中的许多组合可用于治疗癌症，但也描述了其他适应症。本节重点介绍抗PD-1抗体分子的组合。在下文的组合中，在一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包括：(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ IDNO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含选自SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
在本文以下的组合中，在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含(i)重链可变区(VH)，其包含选自SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，或SEQ ID NO:224；SEQID NO:2或SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；(ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列，和SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述组合，例如包含如本文所述的抗PD-1抗体分子的组合，与c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂抑制剂2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(Capmatinib)，或其二盐酸盐，或公开于PCT公开号WO2007/070514中的化合物，联合用于治疗病症，例如本文所述的病症。在一个实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂抑制剂是2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(Capmatinib)，或其二盐酸盐，或PCT公开号WO 2007/070514中公开的化合物。在一个实施方案中，PD-1抗体分子与2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b]-[1,2,4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(Capmatinib)或其二盐酸盐，或PCT公开号WO 2007/070514中公开的化合物组合使用，用于治疗诸如结肠直肠癌，骨髓性白血病，肝癌，肺癌，血液癌症，自身免疫性疾病，非霍奇金淋巴瘤或血小板增多症。
在一个实施方案中，c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂抑制剂或2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(Capmatinib)或其二盐酸盐的给药剂量为约200-600mg，优选400-600mg(例如，每天)，例如约400,500或600mg，或约400-500或500-600毫克。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，每日两次(BID)。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，100mg,每日两次(BID)。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，150mg,每日两次(BID)。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，200mg,每日两次(BID)。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，300mg,每日两次(BID)。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，每日两次(BID)连续给药。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，100mg,每日两次(BID)连续给药。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，150mg,每日两次(BID)连续给药。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，200mg,每日两次(BID)连续给药。
在一个实施方式中，capmatinib口服给药，300mg,每日两次(BID)连续给药。
以下提供示例性huMLR测定和B或T细胞增殖测定。
人混合淋巴细胞反应
混合淋巴细胞反应(MLR)是一种功能试验，其测量来自一个个体(应答者)的淋巴细胞对来自另一个体(刺激者)的淋巴细胞的增殖反应。为了进行同种异体MLR，从未知HLA型的血沉棕黄层(来自Bern和Aarau，瑞士的Kantonspital Blutspendezentrum)分离来自三个供体的外周血单核细胞(PBMC)。细胞以2.105制备在0.2mL培养基中，培养基含有RPMI1640GlutaMAX TM和10％胎牛血清(FCS)，100U青霉素/100μg链霉素，50μM 2-巯基乙醇。通过以1:1的比例混合来自两个不同供体的PBMC来建立个体双向反应，在平底96孔组织培养板中在37℃、5％CO2下一式三份进行共培养6天，存在或不存在试验化合物的8点浓度范围。将细胞用3H-TdR(1μCi/0.2mL)脉冲培养最后16小时，并且掺入的放射性用作细胞增殖的量度。计算每种化合物抑制50％最大huMLR反应(IC50)的浓度。环孢菌素用作huMLR抑制的阳性对照。
人B细胞增殖试验
通过来自人血液的Ficoll-Paque密度梯度新鲜分离PBMC并进行阴性B细胞分离。将B细胞重悬于培养基(RPMI 1640，HEPES，10％FCS，50μg/mL庆大霉素，50μM2-巯基乙醇，1xITS(胰岛素，转铁蛋白和亚硒酸钠)，1x非必需氨基酸)中，以每孔9.104的浓度重悬在平底96孔培养板中。存在或不存测试化合物的7点浓度范围的情况下，由人抗IgM抗体分子(30ug/mL)和IL-4(75ng/mL)或由CD40配体(3ug/mL)和IL-4(75ng/mL)进行B细胞刺激。在37℃、10％CO2培养72小时后，用3H-TdR(1μCi/孔)脉冲细胞最后6小时的培养。然后收获B细胞并使用闪烁计数器测量胸苷的掺入。计算每次重复处理的平均值，并将这些数据绘制在XLfit 4中以确定各自的IC50值。
人T细胞增殖试验
通过来自人血液的Ficoll-Paque密度梯度新鲜分离PBMC并进行T细胞的阴性分离。T细胞在平底96孔培养板中以每孔8.104的浓度制备在培养基(RPMI 1640，HEPES，10％FCS，50μg/mL庆大霉素，50μM2-巯基乙醇，1xITS(胰岛素，转铁蛋白和亚硒酸钠)，1x非必需氨基酸)中，。在存在或不存在测试化合物的7点浓度范围的情况下，通过人抗CD3抗体分子(10ug/mL)或人抗CD3抗体分子(5μg/mL)和抗CD28抗体分子(1μg/mL)进行T细胞刺激。在37℃、10％CO2培养72小时后，用3H-TdR(1μCi/孔)脉冲细胞最后6小时的培养。通过掺入胸苷测量细胞增殖来容许每种测试化合物的IC50测定。
核酸
本发明还涉及核酸，其包含编码如本文所述抗PD-1抗体分子的重链和轻链可变区和CDR或高变环的核苷酸序列。例如，本发明的特征在于分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子的抗PD-1抗体分子的重链和轻链可变区的第一和第二核酸。核酸可包含本文表中列出的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或与来自本文表中所示序列的不超过3,6,15,30或45个核苷酸。
在某些实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在另一些实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。在另一实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重和轻链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个或多个取代，例如保守取代)。
在某些实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或能在本文所述严格条件下杂交)。在另一实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在另一实施方案中，核酸可包含编码来自具有如下重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重和轻链可变区具有本文表中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。
另一方面，本申请的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于单个载体中或存在于相同宿主细胞或分开的宿主细胞中分开的载体中，如下文更详细描述的。
在某些实施方案中，提供了一种或多种核酸分子，其包含编码抗PD-1抗体分子的重链和轻链可变区、CDR、高变环、框架区的一个或两个核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗PD-1抗体分子的核苷酸序列是密码子优化的。例如，本发明的特征在于分别编码选自如下的一种或多种的抗PD-1抗体分子的重链和轻链可变区的第一和第二核酸：BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E，如表1中总结，或与其基本相同的序列。例如，核酸可包含表1和2中列出的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或与来自表1和2中所示序列的不超过3,6,15,30或45个核苷酸)。
在其他实施方案中，核酸分子包含编码重链可变结构域和/或重链恒定区的核苷酸序列，其包含以下克隆的氨基酸序列：BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述；或表1中的核苷酸序列；或者与任何前述序列基本相同的序列(例如，至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列)。
在其他实施方案中，核酸分子包含编码轻链可变结构域和/或轻链恒定区的核苷酸序列，其包含以下克隆的氨基酸序列：BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E；或如表1所述；或表1中的核苷酸序列；或者与任何前述序列基本相同的序列(例如，至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列)。
编码抗PD-1重链和轻链可变结构域和恒定区的前述核苷酸序列可以存在于分开的核酸分子中，或存在于相同的核酸分子中。在某些实施方案中，核酸分子包含编码前导序列的核苷酸序列，例如表4中所示的前导序列，或与其基本相同的序列。
在某些实施方案中，核酸分子可包含编码来自具有如下重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有表1中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或删除，例如保守取代)。
在另一实施方案中，核酸分子可包含编码来自具有如下轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有表1中所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，序列与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或删除，例如保守取代)。
在另一个实施方案中，抗PD-1抗体分子包含来自如下重和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，该重和轻链可变区具有表1所示氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同，和/或具有一个、两个、三个或更多个取代、插入或缺失，例如保守取代的序列)。
在一个实施方案中，核酸分子包括编码抗PD-1抗体分子的核苷酸序列，其包括轻链可变区102位的轻链CDR3的取代，例如，在轻链可变区102位的半胱氨酸取代为酪氨酸，或半胱氨酸取代为丝氨酸残基，轻链可变区102位根据表1(例如，鼠或嵌合的未修饰的SEQ IDNO:16或24；或SEQ ID No：34,42,46,54,58,62,66,70,74或78中的任一个修饰的序列)。
在另一个实施方案中，核酸分子包括一个或多个重链框架区(例如，VHFW1(类型a)，VHFW1(类型b)，VHFW2(类型a)，VHFW2(类型b)，VHFW2(类型c)，VHFW3(a型)，VHFW3(b型)或VHFW4中的任一个，或其任何组合，例如，如本文所述的框架组合)，这些框架区是对于BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E中的任一个而言，如表1和2中所概述，或与其基本相同的序列。例如，核酸分子可包含表1和2中列出的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或与来自表1和2中所示序列差异不超过3,6,15,30或45个核苷酸)。
在另一个实施方案中，核酸分子包括一个或多个轻链框架区(例如，VLFW1(类型a)，VLFW1(类型b),VLFW1(类型c)，VLFW1(类型d),VLFW1(类型e),VLFW2(类型a)，VLFW2(类型b)，VLFW2(类型c)，VLFW3(a型)，VLFW3(b型)，VLFW3(c型)，VLFW3(d型)或VHFW4中的任一个，或其任何组合，例如，如本文所述的框架组合)，这些框架区是对于BAP049-hum01，BAP049-hum02，BAP049-hum03，BAP049-hum04，BAP049-hum05，BAP049-hum06，BAP049-hum07，BAP049-hum08，BAP049-hum09，BAP049-hum10，BAP049-hum11，BAP049-hum12，BAP049-hum13，BAP049-hum14，BAP049-hum15，BAP049-hum16，BAP049-克隆-A，BAP049-克隆-B，BAP049-克隆-C，BAP049-克隆-D或BAP049-克隆-E中的任一个而言，如表1和2中所概述，或与其基本相同的序列。例如，核酸分子可包含表1和2中列出的核苷酸序列，或与其基本相同的序列(例如，与其至少约85％，90％，95％，99％或更多相同的序列，或与来自表1和2中所示序列差异不超过3,6,15,30或45个核苷酸)。
在另一个实施方案中，核酸分子包括一个或多个重链框架区和如本文所述的一个或多个轻链框架区。重链和轻链框架区可以存在于相同的载体或分开的载体中。
载体和宿主细胞
另一方面，本申请的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于单个载体中或存在于相同宿主细胞或分开的宿主细胞中分开的载体中。
在一个实施方案中，载体包含编码本文所述抗体分子的核苷酸。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒，质粒，粘粒，λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
可以使用多种载体系统。例如，一类载体利用衍生自动物病毒的DNA元件，例如牛乳头瘤病毒，多瘤病毒，腺病毒，痘苗病毒，杆状病毒，逆转录病毒(劳氏肉瘤病毒，MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一类载体利用源自RNA病毒的RNA元件，例如Semliki Forest病毒，东部马脑炎病毒和黄病毒。
另外，可以通过引入一种或多种标记来选择已将DNA稳定整合到其染色体中的细胞，所述标记允许选择已转染的宿主细胞。标记物可以提供例如营养缺陷型宿主的原养型，杀菌剂抗性(例如抗生素)，或对重金属例如铜的抗性等。选择标记基因可以直接与待表达的DNA序列连接，或通过共转化引入同一细胞。还可能需要额外的元件来最佳地合成mRNA。这些元件可包括剪接信号以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦制备了含有构建体的表达载体或DNA序列用于表达，就可以将表达载体转染或引入合适的宿主细胞中。可以采用各种技术来实现这一点，例如，原生质体融合，磷酸钙沉淀，电穿孔，逆转录病毒转导，病毒转染，基因枪，基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，细胞在培养基中生长并筛选适当的活性。用于培养所得转染细胞和回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且可以根据本说明书中所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。
本发明还提供了宿主细胞，其包含编码如本文所述的抗体分子的核酸。
在一个实施方案中，宿主细胞经基因工程改造以包含编码抗体分子的核酸。
在一个实施方案中，通过使用表达盒对宿主细胞进行基因工程改造。短语“表达盒”是指核苷酸序列，其能够在与这些序列相容的宿主中引起基因的表达。这种盒可以包括启动子，具有或不具有内含子的开放阅读框和终止信号。还可以使用在实现表达中必需或有帮助的其他因子，例如诱导型启动子。
本发明还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
细胞可以是但不限于真核细胞，细菌细胞，昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞，HeLa细胞，COS细胞，CHO细胞，HEK293细胞，BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。
在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如哺乳动物细胞，昆虫细胞，酵母细胞或原核细胞，例如大肠杆菌。例如，哺乳动物细胞可以是培养细胞或细胞系。示例性哺乳动物细胞包括淋巴细胞系(例如，NSO)，中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，COS细胞，卵母细胞和来自转基因动物(例如乳腺上皮细胞)的细胞。
表1鼠、嵌合和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAbBAP049，嵌合mAb BAP049-Chi和BAP049-Chi-Y，以及人源化mAb BAP049-hum01至BAP049-hum16和BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E。重链和轻链CDR的、重链和轻链可变区的以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列示于该表中。
表2人源化mAb BAP049-hum01至BAP049-hum16和BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E的重链和轻链框架区的氨基酸和核苷酸序列
表3人IgG重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列
表4人源化mAb BAP049-克隆-A至BAP049-克隆-E的重链和轻链前导序列的氨基酸序列。
实施例
以下实施例用于帮助理解本发明，但并不意图也不应解释为以任何方式限制其范围。
实施例1：平坦给药方案的药代动力学分析
基于药代动力学(PK)建模，预期利用平坦剂量以适当的Cmin浓度提供暴露至患者。超过99.5％的患者将高于EC50，超过93％的患者将高于EC90。对于使用每三周一次300mg(Q3W)或每四周一次400mg(Q4W)预测的示例性抗PD-1抗体分子的稳态平均Cmin预计平均高于20ug/mL(最高体重，150kg)。
表5基于平坦给药方案的示例性PK参数
用任一剂量/方案(300mg q3w或400mg q4w)观察到的示例性抗PD-1抗体分子的预期平均稳态Cmin浓度会比EC50(0.42ug/mL)大约高出77倍,且比EC90大约高8.6倍。离体效力基于SEB离体试验中的IL-2变化。
对于300mg Q3W或400mg Q4W，预计不到10％患者达到的Cmin浓度低于3.6ug/mL。对于300mg Q3W或400mg Q4W，预计不到0.5％患者达到的Cmin浓度低于0.4ug/mL。
图12描述了在接受相同剂量的示例性抗PD-1抗体分子时不同重量患者的预测的Ctrough(Cmin)浓度。比较基于体重的给药与固定剂量(3.75mg/kg Q3W对比300mg Q3W和5mg/kg Q4W对比400mg Q4W)。图12支持示例性抗PD-1抗体分子的平坦剂量给药。
PK模型进一步验证。如图13所示，观察到的对比模型预测的浓度位于统一线上。图14显示该模型捕获累积、时间过程和受试者内差异。
实施例2：Ib/II期开放标签，多中心研究Capmatinib联合抗PD-1抗体分子(“抗体分子A”，详述如下)或抗体分子A单一药物治疗晚期肝细胞癌
抗体分子A
抗体分子A是高亲和力的完全人源化抗人PD-1单克隆抗体，其属于IgG4/κ同种型亚类。它在中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-C8TD)中表达，由两条重链和两条轻链组成。抗体分子A的两条重链都含有与蛋白质主链在Asn294处连接的寡糖链。
由DNA序列推导的轻链(220个氨基酸)和重链(443个氨基酸)的氨基酸序列示于图15和图16中。
表6列出了源自一级序列的预期二硫键。
表6预期的二硫键
基于从DNA序列推导的氨基酸组成，抗体分子A的理论平均分子量为145759Da。该质量考虑了预期的肽键和二硫键的形成。
其他翻译后修饰被忽略，例如，N-末端谷氨酰胺不被认为是焦谷氨酸，天冬酰胺糖基化位点被认为是不变的(Asn代替Asp)，并且在计算中没有考虑其他化学修饰。
用于静脉注射的小瓶中的冻干形式的抗体分子A。起始剂量为300mg，每3周施用一次(Q3W)。
抗体分子A将通过超过30分钟的静脉注射给药(如果有临床指示，最多2小时)，每3周一次。下一次计划的剂量可能会延迟最多7天，以便从之前的AE恢复。如果在上述7天延迟期间不能给予下一剂量，则应相应地改变评估。
Capmatinib
Capmatinib片剂将以连续每日两次(BID)给药方案口服给药，以mg/天的平坦规模进行，并且不根据体重或体表面积作单独调整。
除PK采样天数外，患者应每天两次(BID)服用Capmatinib片剂，从第1周期开始每天大约在同一时间。
每次剂量的Capmatinib用一杯水(至少8盎司-约250mL)服用，并在尽可能短的时间内服用(即，每2分钟不慢于1片)。
Capmatinib的剂量为200mg BID。
应指导患者吞服整个片剂而不是咀嚼它们。
●Capmatinib应在禁食状态下给药，至少在餐前1小时或餐后2小时。早晨和晚上的剂量应相隔12(±4)小时，但强烈建议间隔12小时。如果在计划的给药时间的4小时内未服用剂量，则不应补充错过的剂量。
在收集PK血样的日子，将指示患者推迟其剂量直至到达研究中心。Capmatinib将在早上在现场施用。药物给药的确切时间应记录在适当的eCRF中。PK血液抽取将由研究团队的成员监督。如果患者在接受Capmatinib给药后4小时内呕吐，则应在eCRF上记录呕吐时间。
应指示患者不要弥补错过的剂量或部分剂量(即，当未按照指示服用整个剂量时)。错过剂量的或部分服药将被定义为在预定的每日两次给药的4小时内未服用全剂量的情况。如果发生这种情况，则不应服用该剂量(或部分剩余剂量)，并且应在下一次预定剂量下重新开始给药。如果发生呕吐，则不应尝试在下一次预定剂量之补换呕吐剂量。
在使用Capmatinib治疗的整个过程中，建议患者采取预防措施防止紫外线照射(例如，使用防晒霜，防护服，避免日光浴或使用日光浴室)。
试验目标
主要目标:
1.Ib阶段部分：
表征Capmatinib与抗体分子A联合的安全性和耐受性，并确定MTD和/或RP2D
2.II阶段部分：
(a)对于cMET低HCC患者，比较Capmatinib与抗体分子A的组合相对抗体分子A单一药剂的功效。
(b)对于cMET高HCC患者，分别评估Capmatinib与抗体分子A的组合和抗体分子A单一药剂的功效。
次要目标:
1.Ib/II阶段部分：
表征cMET高和低的HCC中Capmatinib与抗体分子A的组合和抗体分子A单一药剂的功效。
2.II阶段：
表征Capmatinib与抗体分子A的组合和抗体分子A单一药剂的安全性和耐受性。
3.II阶段：
研究抗体分子A单一药物功效与HCC患者cMET状态之间的关系。
4.Ib/II阶段部分：
表征Capmatinib和抗体分子A的药代动力学特征。
5.Ib/II阶段部分：
评估Capmatinib联合抗体分子A和抗体分子A单一药剂在cMET高和低的HCC中肿瘤活检和外周血中的药效学效应。
6.II阶段部分：
通过使用来自一线亚洲HCC患者的Capmatinib单一药物研究的历史数据，比较Capmatinib与抗体分子A的组合与Capmatinib单一药剂在cMET高HCC患者中的功效。
主要纳入标准
1.组织学记录的局部晚期复发或转移性HCC。当前肝硬化状态Child Pugh A级(5-6分)，无脑病和/或腹水。Child Pugh状态必须根据筛查期间的临床和实验室结果计算。
2.必须在筛查时获得基线肿瘤组织(新获得的)。患者必须有适合活检的疾病部位，并根据治疗机构的指南和此类程序的要求为肿瘤活检的候选者。
3.II阶段：指定实验室进行的根据FISH的cMet扩增(基因拷贝数)和根据IHC的cMet表达的有记录证据。
根据IHC评估的cMET表达和FISH评估的基因扩增，cMET状态将被分类为高或低：
cMET高：如果满足以下任何一个标准
·在至少50％的肿瘤细胞和任何基因中(无论基因拷贝数(GCN))IHC＝3+，
·在至少50％的肿瘤细胞中IHC＝2+且GCN≥5
cMET低：如果满足以下任何一个标准
·在至少50％的肿瘤细胞中IHC＝2+且GCN<5
·在少于50％的肿瘤细胞中IHC＝2+和任何GCN
·IHC＝0或1+(无论和任何GCN)
4.患者必须愿意在研究期间(研究治疗开始后6-9周，如果医学上可行)进行新的肿瘤活检。
对于研究II阶段部分的患者，在与诺华公司进行有记录的讨论后可以给予例外。在收集足够数量的配对活组织检查后，可以决定停止收集活组织检查。
5.患者必须接受在先的全身索拉非尼治疗HCC，且在停止索拉非尼治疗期间或之后具有有记录的进展(仅限法国：患者必须接受至少8周的索拉非尼治疗)，对索拉非尼不耐受(定义为有记录的导致索拉非尼停药的等级3或4不良事件)或拒绝索拉非尼治疗。
6.在筛查期间必须对患者进行乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg)状态的检测。如果患者已经充分控制了乙型肝炎，则将患者纳入研究，定义如下：
·接受核苷类似物抗病毒药物3个月或更长时间，
和
·登记前通过聚合酶链反应定量分析，血清乙型肝炎病毒(HBV)脱氧核糖核酸(DNA)水平低于100IU/ml。
7.在研究筛查期间必须对患者的丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)状态进行测试，如果患者已经充分控制了丙型肝炎，则将患者纳入研究；该充分控制按入组前检测不到血清HCV RNA水平来定义。
主要排除标准
1.在第一剂研究治疗之前，患者已接受以下治疗：
·除索拉非尼或Capmatinib之外的在先全身性抗癌疗法(包括治疗性癌症疫苗和免疫疗法)(索拉非尼必须在第一剂研究治疗前>1周内完成)。
·如下情况下的在先局部区域治疗(例如肝动脉栓塞，射频消融，放射治疗)：
-在索拉非尼治疗后施用，有限区域的姑息性放疗(例如用于治疗骨痛)除外。针对局部疼痛性肝肿瘤肿块的局部区域治疗将与试验赞助商进行个案讨论。
-在给药前4周内完成，如果存在任何相关的急性毒性>1级。
·在开始研究治疗后4周内使用任何疫苗(灭活季节性流感疫苗除外)。
·在第一剂研究治疗后2周内进行大手术(纵隔镜检查，插入中心静脉通路装置，插入喂食管不被视为大手术)。
·在第一剂研究治疗后2周内参与介入性研究性研究，除非与试验赞助商另有约定。
·除非与试验赞助商另有约定，由于在前的癌症治疗而存在的CTCAE等级≥1的毒性(除了脱发，周围神经病和耳毒性，其在CTCAE等级≥3时排除)。
·在开始或研究药物之前≤2周使用造血集落刺激生长因子(例如G-CSF，GM-CSF，M-CSF)。只要在第一剂研究治疗前至少2周开始并且患者处于稳定剂量，就允许红细胞刺激剂。
2.对其他单克隆抗体的严重超敏反应的历史。
3.人体免疫缺陷病毒(HIV)检测呈阳性的已知病史或已知的获得性免疫缺陷综合症(不需要进行检测)。
4.临床上显著的胸腔积液，要么需要胸膜穿刺术，要么与呼吸短促有关。
5.接受如下药物治疗的患者，该药物为治疗指数窄的CYP3A，CYP3A或CYP1A2底物的强诱导剂或抑制剂，并且在开始用Capmatinib治疗前至少1周和在研究期间不能停药。
6.无法停止被认为能够显著引起PK或PD草药/食物-药物相互作用的草药/食品补充剂或治疗。
7.活动性自身免疫疾病或有记录的自身免疫疾病病史，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病或需要全身性类固醇或任何免疫抑制治疗的任何病症，例外是白癜风或已用支气管扩张剂(例如沙丁胺醇)治疗解决的哮喘/特应性疾病。
8.临床上显著的，不受控制的心脏病。
·筛查前6个月内不稳定型心绞痛
·筛查前6个月内心肌梗死
·有记录的充血性心力衰竭的历史(纽约心脏病协会功能分类III-IV)
·不受控制的高血压，由收缩压(SBP)≥160mm Hg和/或舒张压(DBP)≥100mm Hg定义，有或没有抗高血压药物。允许在筛选之前启动或调整抗高血压药物
·室性心律失常
·未受药物控制的室上性和节性心律失常
·其他未受药物控制的心律失常
·筛查心电图中QTcF≥450ms(男性患者)，≥460ms(女性患者)(以三次心电图的平均值)
终点:
主要终点
Ib阶段部分：
安全性：AE和SAE的发生率和严重程度，包括实验室值，生命体征和ECG的变化。在前2个治疗周期中发生DLT。
耐受性：剂量中断、减少和剂量强度
II阶段部分：
在实体肿瘤中(RECIST v1.1)每个响应评估标准的总体响应率(ORR)
次要终点：
1.最佳总体反应(BOR)，总反应持续时间(DOR)，反应时间(TTR)，无进展生存期(PFS)，进展时间(TTP)，总生存期(OS)，总反应率(ORR)
2.安全性：不良事件(AEs)和严重不良事件的发生率和严重程度，包括实验室参数，生命体征和心电图(ECG)的变化。耐受性：剂量中断、减少和剂量强度
3.最佳总体反应(BOR)，进展时间(TTP)，cMET IHC评分和GCN
4.血浆/血清PK参数(例如，AUC，Cmax，Tmax)血浆/血清浓度对时间曲线。
5.H&E TIL和TIL表征(CD8，CD3，CD4)，TReg(FoxP3)，PDL1，p-cMet对肿瘤活检(IHC)的影响
6.最佳整体响应(BOR)和TTP
初步临床发现
截至2016年12月中旬，已有4名患者参加本研究并接受治疗，并且已观察到符合确认部分反应标准的1例肿瘤缩小。临床试验仍在进行中。
以引用方式并入
包括附图和表格的其他实施方案和实施例在国际专利申请公开号WO 2015/112900和题为“抗体分子至PD-1及其用途(Antibody Molecules to PD-1and UsesThereof)”的美国专利申请公开号US 2015/0210769中公开，其通过引用整体并入本文。
本文提及的所有出版物，专利和登记号均通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指出通过引用并入。
等同方案
虽然已经讨论了本发明的特定实施方案，但是上述说明书是说明性的而非限制性的。通过阅读本说明书和下面的权利要求，本发明的许多变化对于本领域技术人员而言将变得显而易见。本发明的全部范围应该通过参考权利要求及其等同方案的全部范围和说明书以及这些变化来确定。
序列表
<110> 诺华股份有限公司（NOVARTIS AG）
<120> C-MET抑制剂和PD-1抗体分子的组合及其应用
<130> PAT057232-WO-PCT02
<140> PCT/US2016/067430
<141> 2016-12-19
<150> 62/291,651
<151> 2016-02-05
<150> 62/269,044
<151> 2015-12-17
<160> 239
<170> PatentIn version 3.5
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Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
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Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
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Lys Asn Arg Thr Ser Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ala Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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caggtccagc tgcagcaacc tgggtctgag ctggtgaggc ctggagcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cgtctggcta cacattcacc acttactgga tgcactgggt gaggcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggaaat atttatcctg gtactggtgg ttctaacttc 180
gatgagaagt tcaaaaacag gacctcactg actgtagaca catcctccac cacagcctac 240
atgcacctcg ccagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagatggact 300
actgggacgg gagcttattg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc a 351
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
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Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
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Lys Asn Arg Thr Ser Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
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Met His Leu Ala Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
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Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
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Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
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Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
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gatgagaagt tcaaaaacag gacctcactg actgtagaca catcctccac cacagcctac 240
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tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600
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cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
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Met His Leu Ala Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 25
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
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gacattgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgactgtga cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tcttctgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg taacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtgcacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
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<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 27
gacattgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgactgtga cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tcttctgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg taacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtgcacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
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ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
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<400> 28
000
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<400> 29
000
<210> 30
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 30
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Thr Ser Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ala Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
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Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
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Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
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<210> 31
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 31
caggtccagc tgcagcagtc tgggtctgag ctggtgaggc ctggagcttc agtgaagctg 60
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cctggacaag gccttgagtg gattggaaat atttatcctg gtactggtgg ttctaacttc 180
gatgagaagt tcaaaaacag gacctcactg actgtagaca catcctccac cacagcctac 240
atgcacctcg ccagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagatggact 300
actgggacgg gagcttattg gggccagggc accaccgtga ccgtgtcctc cgcttccacc 360
aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600
aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 660
cccccatgcc caccgtgccc agcacctgag ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc 720
cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780
gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 840
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 900
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 960
tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020
cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200
ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1260
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagag cctctccctg 1320
tctctgggta aa 1332
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 32
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 33
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 33
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr
1 5
<210> 34
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 34
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 35
gacattgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgactgtga cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
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ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 36
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
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<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 37
gacattgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgactgtga cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagcctcct aaactgttga tcttctgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg taacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 39
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 39
gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
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<210> 40
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
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Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
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210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
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385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 41
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 41
gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaagg gttctggcta cacattcacc acttactgga tgcactgggt gcgacaggcc 120
actggacaag ggcttgagtg gatgggtaat atttatcctg gtactggtgg ttctaacttc 180
gatgagaagt tcaagaacag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtac aagatggact 300
actgggacgg gagcttattg gggccagggc accaccgtga ccgtgtcctc cgcttccacc 360
aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600
aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 660
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cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780
gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 840
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 900
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 960
tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020
cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200
ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1260
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 43
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 43
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
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gaatctgggg tcccatcaag gttcagcggc agtggatctg ggacagaatt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcagcctga tgattttgca acttattact gtcagaatga ttatagttat 300
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<210> 44
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 45
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 45
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctattgggc atccactagg 180
gaatctgggg tcccatcaag gttcagcggc agtggatctg ggacagaatt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcagcctga tgattttgca acttattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
<210> 46
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 47
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 47
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctattgggc atccactagg 180
gaatctggga tcccacctcg attcagtggc agcgggtatg gaacagattt taccctcaca 240
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ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 48
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 49
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 49
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctattgggc atccactagg 180
gaatctggga tcccacctcg attcagtggc agcgggtatg gaacagattt taccctcaca 240
attaataaca tagaatctga ggatgctgca tattacttct gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
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caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
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<220>
<221> 源
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<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 51
gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
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<210> 52
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 53
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 53
gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaagg gttctggcta cacattcacc acttactgga tgcactggat caggcagtcc 120
ccatcgagag gccttgagtg gctgggtaat atttatcctg gtactggtgg ttctaacttc 180
gatgagaagt tcaagaacag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtac aagatggact 300
actgggacgg gagcttattg gggccagggc accaccgtga ccgtgtcctc cgcttccacc 360
aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcc 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacgaagac ctacacctgc 600
aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatggt 660
cccccatgcc caccgtgccc agcacctgag ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc 720
cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780
gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 840
gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca acagcacgta ccgtgtggtc 900
agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 960
tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1020
cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1200
ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg gaatgtcttc 1260
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagag cctctccctg 1320
tctctgggta aa 1332
<210> 54
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 55
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 55
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
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tggtatcagc agaaaccagg gaaagctcct aagctcctga tctattgggc atccactagg 180
gaatctgggg tcccatcaag gttcagtgga agtggatctg ggacagattt tactttcacc 240
atcagcagcc tgcagcctga agatattgca acatattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 56
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 57
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 57
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtatcagc agaaaccagg gaaagctcct aagctcctga tctattgggc atccactagg 180
gaatctgggg tcccatcaag gttcagtgga agtggatctg ggacagattt tactttcacc 240
atcagcagcc tgcagcctga agatattgca acatattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
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<220>
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<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 59
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 59
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
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atcagtagcc tggaagctga agatgctgca acatattact gtcagaatga ttatagttat 300
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<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 61
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 61
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca agtccagtca gagtctgtta gacagtggaa atcaaaagaa cttcttgacc 120
tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctattgggc atccactagg 180
gaatctgggg tcccctcgag gttcagtggc agtggatctg ggacagattt cacctttacc 240
atcagtagcc tggaagctga agatgctgca acatattact gtcagaatga ttatagttat 300
ccgtacacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 63
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
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<400> 63
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
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Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
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gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
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Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
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<213> 人工序列
<220>
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
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Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<220>
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<400> 73
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
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<220>
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<400> 84
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Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
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Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
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Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 85
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 85
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ccatcgagag gccttgagtg gctgggtaat atttatcctg gtactggtgg ttctaacttc 180
gatgagaagt tcaagaacag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
cttcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtac aagatggact 300
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<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
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<212> DNA
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<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 88
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<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 91
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<212> DNA
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<221> 源
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<211> 351
<212> DNA
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<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 95
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<213> 人工序列
<220>
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<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
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gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60
agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct 120
accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc 180
gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240
atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact 300
accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag cgctagcact 360
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<211> 339
<212> DNA
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<220>
<221> 源
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<400> 97
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ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
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<210> 98
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 98
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tgcagcccga ggatatcgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 99
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 99
gagatcgtgc tgacccagtc ccccgacttc cagtccgtga cccccaaaga aaaagtgacc 60
atcacatgca agtcctccca gtccctgctg gactccggca accagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctactgggc ctccacccgg 180
gaatctggcg tgccctctag attctccggc tccggctctg gcaccgactt taccttcacc 240
atctccagcc tggaagccga ggacgccgcc acctactact gccagaacga ctactcctac 300
ccctacacct tcggccaggg caccaaggtg gaaatcaag 339
<210> 100
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 100
gagatcgtgc tgacccagtc ccccgacttc cagtccgtga cccccaaaga aaaagtgacc 60
atcacatgca agtcctccca gtccctgctg gactccggca accagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctactgggc ctccacccgg 180
gaatctggcg tgccctctag attctccggc tccggctctg gcaccgactt taccttcacc 240
atctccagcc tggaagccga ggacgccgcc acctactact gccagaacga ctactcctac 300
ccctacacct tcggccaggg caccaaggtg gaaatcaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tccccccaag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420
ctgctgaaca acttctaccc cagggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 101
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 101
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60
tcctgcaagg gctctggcta caccttcacc acctactgga tgcactggat ccggcagtcc 120
ccctctaggg gcctggaatg gctgggcaac atctaccctg gcaccggcgg ctccaacttc 180
gacgagaagt tcaagaacag gttcaccatc tcccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtac cagatggacc 300
accggaaccg gcgcctattg gggccagggc acaacagtga ccgtgtcctc c 351
<210> 102
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 102
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 103
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 103
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60
tcctgcaagg gctctggcta caccttcacc acctactgga tgcactggat ccggcagtcc 120
ccctctaggg gcctggaatg gctgggcaac atctaccctg gcaccggcgg ctccaacttc 180
gacgagaagt tcaagaacag gttcaccatc tcccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgtac cagatggacc 300
accggaaccg gcgcctattg gggccagggc acaacagtga ccgtgtcctc cgcttctacc 360
aaggggccca gcgtgttccc cctggccccc tgctccagaa gcaccagcga gagcacagcc 420
gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga ccagcggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac 540
agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc agcagcctgg gcaccaagac ctacacctgt 600
aacgtggacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gggtggagag caagtacggc 660
ccaccctgcc ccccctgccc agcccccgag ttcctgggcg gacccagcgt gttcctgttc 720
ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgtgtggtg 780
gtggacgtgt cccaggagga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttta acagcaccta ccgggtggtg 900
tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgtaaggtc 960
tccaacaagg gcctgccaag cagcatcgaa aagaccatca gcaaggccaa gggccagcct 1020
agagagcccc aggtctacac cctgccaccc agccaagagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080
tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac ccaagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140
aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccag tgctggacag cgacggcagc 1200
ttcttcctgt acagcaggct gaccgtggac aagtccagat ggcaggaggg caacgtcttt 1260
agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgagcctg 1320
tccctgggc 1329
<210> 104
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 104
gagatcgtgc tgacccagtc ccctgccacc ctgtcactgt ctccaggcga gagagctacc 60
ctgtcctgca agtcctccca gtccctgctg gactccggca accagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctactgggc ctccacccgg 180
gaatctggcg tgccctctag attctccggc tccggctctg gcaccgactt taccttcacc 240
atctccagcc tggaagccga ggacgccgcc acctactact gccagaacga ctactcctac 300
ccctacacct tcggccaggg caccaaggtg gaaatcaag 339
<210> 105
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 105
gagatcgtgc tgacccagtc ccctgccacc ctgtcactgt ctccaggcga gagagctacc 60
ctgtcctgca agtcctccca gtccctgctg gactccggca accagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctactgggc ctccacccgg 180
gaatctggcg tgccctctag attctccggc tccggctctg gcaccgactt taccttcacc 240
atctccagcc tggaagccga ggacgccgcc acctactact gccagaacga ctactcctac 300
ccctacacct tcggccaggg caccaaggtg gaaatcaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tccccccaag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420
ctgctgaaca acttctaccc cagggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 106
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 106
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaag 339
<210> 107
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多核苷酸"
<400> 107
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 108
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 108
acttactgga tgcac 15
<210> 109
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 109
aatatttatc ctggtactgg tggttctaac ttcgatgaga agttcaagaa c 51
<210> 110
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 110
tggactactg ggacgggagc ttat 24
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 111
ggctacacat tcaccactta c 21
<210> 112
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成
寡核苷酸"
<400> 112
tatcctggta ctggtggt 18
<210> 113
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 113
aagtccagtc agagtctgtt agacagtgga aatcaaaaga acttcttgac c 51
<210> 114
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 114
tgggcatcca ctagggaatc t 21
<210> 115
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 115
cagaatgatt atagttatcc gtgcacg 27
<210> 116
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 116
agtcagagtc tgttagacag tggaaatcaa aagaacttc 39
<210> 117
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 117
tgggcatcc 9
<210> 118
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 118
gattatagtt atccgtgc 18
<210> 119
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 119
cagaatgatt atagttatcc gtacacg 27
<210> 120
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 120
gattatagtt atccgtac 18
<210> 121
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 121
aagtccagtc agagtctgtt agacagtgga aatcaaaaga acttcttaac c 51
<210> 122
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 122
acctactgga tgcac 15
<210> 123
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 123
aacatctatc ctggcaccgg cggctccaac ttcgacgaga agttcaagaa c 51
<210> 124
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 124
tggacaaccg gcacaggcgc ttat 24
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 125
ggctacacct tcaccaccta c 21
<210> 126
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 126
tatcctggca ccggcggc 18
<210> 127
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 127
aagtcctccc agtccctgct ggactccggc aaccagaaga acttcctgac c 51
<210> 128
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 128
tgggcctcca cccgggaatc t 21
<210> 129
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 129
cagaacgact actcctaccc ctacacc 27
<210> 130
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 130
tcccagtccc tgctggactc cggcaaccag aagaacttc 39
<210> 131
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 131
tgggcctcc 9
<210> 132
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 132
gactactcct acccctac 18
<210> 133
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 133
acctactgga tgcac 15
<210> 134
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 134
aatatctacc ccggcaccgg cggctctaac ttcgacgaga agtttaagaa t 51
<210> 135
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 135
tggactaccg gcacaggcgc ctac 24
<210> 136
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 136
ggctacacct tcactaccta c 21
<210> 137
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 137
taccccggca ccggcggc 18
<210> 138
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 138
aaatctagtc agtcactgct ggatagcggt aatcagaaga acttcctgac c 51
<210> 139
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 139
tgggcctcta ctagagaatc a 21
<210> 140
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 140
cagaacgact atagctaccc ctacacc 27
<210> 141
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 141
agtcagtcac tgctggatag cggtaatcag aagaacttc 39
<210> 142
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 142
tgggcctct 9
<210> 143
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 143
gactatagct acccctac 18
<210> 144
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成
寡核苷酸"
<400> 144
aacatctacc ctggcaccgg cggctccaac ttcgacgaga agttcaagaa c 51
<210> 145
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 145
tggaccaccg gaaccggcgc ctat 24
<210> 146
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 146
taccctggca ccggcggc 18
<210> 147
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 147
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser
20 25
<210> 148
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 148
gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaagg gttct 75
<210> 149
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 149
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60
tcctgcaagg gctct 75
<210> 150
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 150
gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60
agctgtaaag gttca 75
<210> 151
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 151
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 152
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 152
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttct 75
<210> 153
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 153
Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 154
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 154
tgggtgcgac aggccactgg acaagggctt gagtggatgg gt 42
<210> 155
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 155
tgggtgcgac aggctaccgg ccagggcctg gaatggatgg gc 42
<210> 156
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 156
tgggtccgcc aggctaccgg tcaaggcctc gagtggatgg gt 42
<210> 157
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 157
Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 158
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 158
tggatcaggc agtccccatc gagaggcctt gagtggctgg gt 42
<210> 159
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 159
tggatccggc agtccccctc taggggcctg gaatggctgg gc 42
<210> 160
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 161
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 161
tgggtgcgac aggcccctgg acaagggctt gagtggatgg gt 42
<210> 162
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 162
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 163
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 163
agagtcacga ttaccgcgga caaatccacg agcacagcct acatggagct gagcagcctg 60
agatctgagg acacggccgt gtattactgt acaaga 96
<210> 164
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 164
agagtgacca tcaccgccga caagtccacc tccaccgcct acatggaact gtcctccctg 60
agatccgagg acaccgccgt gtactactgc acccgg 96
<210> 165
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 165
agagtgacta tcaccgccga taagtctact agcaccgcct atatggaact gtctagcctg 60
agatcagagg acaccgccgt ctactactgc actagg 96
<210> 166
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 166
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 167
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 167
agattcacca tctccagaga caattccaag aacacgctgt atcttcaaat gaacagcctg 60
agagccgagg acacggccgt gtattactgt acaaga 96
<210> 168
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 168
aggttcacca tctcccggga caactccaag aacaccctgt acctgcagat gaactccctg 60
cgggccgagg acaccgccgt gtactactgt accaga 96
<210> 169
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 169
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 170
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 170
tggggccagg gcaccaccgt gaccgtgtcc tcc 33
<210> 171
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 171
tggggccagg gcaccacagt gaccgtgtcc tct 33
<210> 172
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 172
tggggtcaag gcactaccgt gaccgtgtct agc 33
<210> 173
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 173
tggggccagg gcacaacagt gaccgtgtcc tcc 33
<210> 174
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 174
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 175
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 175
gaaattgtgc tgactcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga gaaagtcacc 60
atcacctgc 69
<210> 176
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 176
gagatcgtgc tgacccagtc ccccgacttc cagtccgtga cccccaaaga aaaagtgacc 60
atcacatgc 69
<210> 177
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 177
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 178
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 178
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgc 69
<210> 179
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 179
gagatcgtgc tgacccagtc ccctgccacc ctgtcactgt ctccaggcga gagagctacc 60
ctgtcctgc 69
<210> 180
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 180
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgt 69
<210> 181
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 181
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 182
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 182
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgc 69
<210> 183
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 183
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 184
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 184
gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgc 69
<210> 185
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 185
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 186
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 186
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgc 69
<210> 187
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 187
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 188
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 188
tggtaccagc agaaacctgg ccaggctccc aggctcctca tctat 45
<210> 189
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 189
tggtatcagc agaagcccgg ccaggccccc agactgctga tctac 45
<210> 190
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 190
tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctac 45
<210> 191
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 191
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 192
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 192
tggtatcagc agaaaccagg gaaagctcct aagctcctga tctat 45
<210> 193
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 193
tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctac 45
<210> 194
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 194
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 195
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 195
tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctat 45
<210> 196
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 196
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 197
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 197
ggggtcccct cgaggttcag tggcagtgga tctgggacag atttcacctt taccatcagt 60
agcctggaag ctgaagatgc tgcaacatat tactgt 96
<210> 198
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 198
ggcgtgccct ctagattctc cggctccggc tctggcaccg actttacctt caccatctcc 60
agcctggaag ccgaggacgc cgccacctac tactgc 96
<210> 199
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 199
ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcacctt cactatctct 60
agcctggaag ccgaggacgc cgctacctac tactgt 96
<210> 200
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 200
Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 201
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 201
gggatcccac ctcgattcag tggcagcggg tatggaacag attttaccct cacaattaat 60
aacatagaat ctgaggatgc tgcatattac ttctgt 96
<210> 202
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 202
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 203
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 203
ggggtcccat caaggttcag cggcagtgga tctgggacag aattcactct caccatcagc 60
agcctgcagc ctgatgattt tgcaacttat tactgt 96
<210> 204
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 204
ggcgtgccct ctagattctc cggctccggc tctggcaccg agtttaccct gaccatctcc 60
agcctgcagc ccgacgactt cgccacctac tactgc 96
<210> 205
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 205
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 206
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 206
ggggtcccat caaggttcag tggaagtgga tctgggacag attttacttt caccatcagc 60
agcctgcagc ctgaagatat tgcaacatat tactgt 96
<210> 207
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成寡核苷酸
<400> 207
ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcacctt cactatctct 60
agcctgcagc ccgaggatat cgctacctac tactgt 96
<210> 208
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 208
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 209
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 209
ttcggccaag ggaccaaggt ggaaatcaaa 30
<210> 210
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 210
ttcggccagg gcaccaaggt ggaaatcaag 30
<210> 211
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 211
ttcggtcaag gcactaaggt cgagattaag 30
<210> 212
<211> 327
<212> PRT
<213> 人
<400> 212
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 213
<211> 107
<212> PRT
<213> 人
<400> 213
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 214
<211> 326
<212> PRT
<213> 人
<400> 214
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
325
<210> 215
<211> 330
<212> PRT
<213> 人
<400> 215
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 216
<211> 330
<212> PRT
<213> 人
<400> 216
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 217
<211> 330
<212> PRT
<213> 人
<400> 217
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Ala Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 218
<211> 330
<212> PRT
<213> 人
<400> 218
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 219
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 219
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 220
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 220
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys
20
<210> 221
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 221
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Val Gln Ala
<210> 222
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 222
Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Gly Thr Arg Cys
20
<210> 223
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<400> 223
tggactactg ggacgggagc ttac 24
<210> 224
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 224
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp Met His
1 5 10
<210> 225
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 225
Cys Asn Gly Arg Cys
1 5
<210> 226
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成引物"
<400> 226
gctgacagac taacagactg ttcc 24
<210> 227
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成引物"
<400> 227
caaatgtggt atggctga 18
<210> 228
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 228
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Thr Ser Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ala Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala
130
<210> 229
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 229
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Val Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Ala Asp
115
<210> 230
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 230
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg His Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Gly Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg
<210> 231
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 231
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro
100
<210> 232
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<220>
<221> CDS
<222> (2)..(37)
<400> 232
g tgc acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 37
Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 233
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 233
Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 234
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成寡核苷酸"
<220>
<221> CDS
<222> (2)..(37)
<400> 234
g tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa c 38
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 235
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 235
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 236
Met Tyr Pro Pro Tyr
1 5
<210> 237
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成肽"
<400> 237
Arg Gly Asp Ser
1
<210> 238
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 238
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 239
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 源
<223> /注释="人工序列描述：合成多肽"
<400> 239
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440

Claims (21)

1.一种在受试者中治疗癌症的方法，包括：
(A)向受试者施用c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂，其为2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐；和
向受试者以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量施用抗PD-1抗体分子。
其中所述抗PD-1抗体分子包含：
(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
2.权利要求1所述的方法，其中所述c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂和所述抗PD-1抗体分子分开、同时或依序给药。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述抗PD-1抗体分子以每三周一次约300mg的剂量施用。
4.权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体分子以每四周一次约400mg的剂量施用。
5.权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂以每天两次200mg的连续方案施用。
6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体分子静脉内施用。
7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂口服给予。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体分子包含：
(a)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；
(b)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(c)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(d)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(e)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；
(f)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；
(g)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(h)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(i)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；
(j)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；
(k)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(l)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；
(m)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列；
(n)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(o)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(p)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
9.权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺癌，鳞状细胞肺癌，黑素瘤，肾癌，肝癌，骨髓瘤，前列腺癌，乳腺癌，ER+乳腺癌，IM-TN乳腺癌，结肠直肠癌，具有高微卫星不稳定性的结肠直肠癌，EBV+胃癌，胰腺癌，甲状腺癌，血液癌症，非霍奇金淋巴瘤或白血病，或癌症的转移性病变。
10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述癌症选自非小细胞肺癌(NSCLC)，NSCLC腺癌，NSCLC鳞状细胞癌，肝细胞癌。
11.一种药物组合，包含
(A)c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂，其为2-氟-N-甲基-4-[7-喹啉-6-基-甲基)-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐；和
(B)抗PD-1抗体分子，其用于以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量使用，
其中所述抗PD-1抗体分子包含：
(a)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述轻链可变区其包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或者
(d)VH和VL,所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列，SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
12.权利要求11所述的药物组合，其中所述c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂是口服剂型。
13.权利要求11所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体分子是可注射的剂型。
14.权利要求11-13中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体分子用于以每三周一次或每四周一次约300mg至400mg的剂量使用。
15.权利要求11-14中任一项所述的药物组合，其中所述c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂用于口服剂型，用于以200mg BID连续给药。
16.权利要求11-15中任一项所述的药物组合，其中所述抗PD-1抗体分子的剂量为每三周一次约300mg。
17.权利要求11-15中任一项所述的药物组合，其中所述剂量为每四周一次约400mg。
18.如权利要求11-17中任一项所述的药物组合物或剂量制剂，其中所述抗PD-1抗体分子包含：
(a)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；
(b)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(c)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(d)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(e)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；
(f)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；
(g)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(h)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；
(i)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；
(j)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；
(k)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(l)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；
(m)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列；
(n)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
(o)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；
(p)重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。
19.权利要求11-18中任一项所述的药物组合，用于治疗癌症。
20.权利要求19所述的药物组合，其中所述癌症选自肺癌，鳞状细胞肺癌，黑素瘤，肾癌，肝癌，骨髓瘤，前列腺癌，乳腺癌，ER+乳腺癌，IM-TN乳腺癌，结肠直肠癌，具有高微卫星不稳定性的结肠直肠癌，EBV+胃癌，胰腺癌，甲状腺癌，血液癌症，非霍奇金淋巴瘤或白血病，或癌症的转移性病变。
21.权利要求19所述的药物组合，其中所述癌症选自非小细胞肺癌(NSCLC)，NSCLC腺癌，NSCLC鳞状细胞癌，肝细胞癌。
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