CN108136003A

CN108136003A - 抗pd-1和抗m-csf抗体在癌症治疗中的联合应用

Info

Publication number: CN108136003A
Application number: CN201680044470.5A
Authority: CN
Inventors: M-L·夫杰尔斯考格; J·卡梅伦; Z·曹; D·希伯勒塔; K·马西萨克
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2015-07-29
Filing date: 2016-07-27
Publication date: 2018-06-08
Also published as: WO2017017623A1; AU2016300208A1; US11001628B2; RU2018106876A3; TWI735456B; HK1247848A1; US20180222973A1; AU2016300208B2; RU2018106876A; SA518390834B1; JP2018525367A; JO3784B1; EP3328425B1; IL256691A; RU2742494C2; PH12018500174A1; TN2017000554A1; EP3328425A1; CL2018000222A1; JP6840127B2

Abstract

本发明是关于包含PD‑1抗体和M‑CSF抗体的药物组合物。该组合可以治疗癌症治疗有效量独立地或单独地施用。

Description

抗PD-1和抗M-CSF抗体在癌症治疗中的联合应用

技术领域

本发明部分是关于包含PD-1拮抗剂和M-CSF拮抗剂的药物组合物。本发明组合是以治疗癌症的治疗有效量独立地或单独地施用。本发明进一步是关于这一组合用于制造药品的用途；该组合作为药物的用途；包含这一组合的成套药盒；和涉及该组合的治疗方法。

背景技术

实体肿瘤癌症需要更有效治疗。目前出现靶向免疫检查点的免疫疗法作为癌症治疗中的关键药剂。抑制细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)和程序性死亡-1(PD-1)的抗体(也称为检查点抑制剂)已在一些癌症患者中显示出有效性。患者和肿瘤类型具有显著不同的反应，且在晚期黑色素瘤中观察到最高反应率。已观察到对检查点抑制无反应性以及初始反应和之后的进展，这指示存在固有耐药性和疗法诱导的获得性耐药性。疾病在CTLA-4、PD-1或PD-L1检查点抑制剂后进展的黑色素瘤患者需要能稳定或逆转疾病进展的其他治疗选择。

一种可受益于用检查点抑制抗体治疗的癌症是乳腺癌，全世界女性中最常见的癌症，2008年估计有138万新病例，其也是女性最常见的癌症死因，有458,000例死亡。三阴性乳腺癌(TNBC)占新确诊乳腺癌的约15％，但由于其侵袭性，在转移背景中报导的TNBC比例过高(25％)。TNBC的特征为缺乏雌激素(ER)和孕酮(PR)受体的表达和缺乏人类表皮生长因子受体2(HER2)的过表达。

TNBC的临床病程与(尤其转移至肺和脑的)远程转移的高几率相关。目前尚无用于此乳腺癌亚型的靶向疗法，且唯一治疗选择是化疗。即使若干研究表明TNBC是高度化学敏感性的疾病，初始疗法后的较短无病间歇期且在转移背景中更具侵袭性临床病程的预后仍较差。在辅助情境中大多数患者接受蒽环和紫杉烷，且对于患有转移TNBC的患者不存在其他标准疗法。然而，新数据表明，铂盐(即顺铂和卡铂)在早期和晚期TNBC中具有高活性，且因此广泛用于临床情境中。转移TNBC的中值存活期约为1年，使得TNBC成为具有高度未满足医学需求的疾病。其他具有高度未满足患者需求的癌症也包括患有胰腺癌(尤其患有胰脏腺癌的患者)或子宫内膜癌的患者。业内需要研发可用于治疗癌症的新颖组合疗法。

发明概述

本发明部分关于巨噬细胞菌落刺激因子(M-CSF)拮抗剂与程序性死亡1(PD-1)拮抗剂的组合，其可提供用于治疗癌症的有利效果。M-CSF拮抗剂和PD-1拮抗剂组合用于治疗癌症，包括三阴性乳腺癌(TNBC)、皮肤、卵巢、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(GBM)、肺癌、肾细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤、子宫内膜癌和鼻咽癌(NPC)，或已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症，例如TNBC或黑色素瘤。

在另一方面中，本发明包括上述药物组合，其用于治疗癌症，包括三阴性乳腺癌(TNBC)、皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(GBM)、肺癌、肾细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤和鼻咽癌(NPC)，或对其他疗法、尤其对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性、复发或难治的癌症，例如TNBC或黑色素瘤。本发明组合可用于治疗肺癌，包括非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌。本文所述药物组合包括治疗有效的量。乳腺癌包括内分泌受体(雌激素或孕酮受体)阳性、HER2阳性、三阴性(对于雌激素、孕酮或HER2的受体并非阳性)或三阳性(对于雌激素受体、孕酮受体和HER2为阳性)，且本发明组合针对三阴性乳腺癌尤其有用。胰腺癌主要为外分泌癌症的腺癌或癌瘤型。胰脏外分泌癌症包括胰脏腺癌、胰脏腺泡细胞癌、囊腺癌、胰母细胞瘤腺鳞状癌、印戒细胞癌、肝样癌、胶体癌、未分化癌、具有破骨细胞样巨细胞的未分化癌、实性假乳头状瘤和胰脏黏液性囊性肿瘤。

在一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗乳腺癌的治疗有效量，所述乳腺癌例如内分泌受体(雌激素或孕酮受体)阳性、HER2阳性、三阴性(对于雌激素、孕酮或HER2的受体并非阳性)或三阳性(对于雌激素受体、孕酮受体和HER2为阳性)。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗卵巢癌的治疗有效量。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗黑色素瘤(包括黑色素瘤)的治疗有效量。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗胰腺癌的治疗有效量。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗肺癌(包括非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)的治疗有效量。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症(例如TNBC或黑色素瘤)的治疗有效量。在另一个实施方式中，本文所述药物组合包括用于治疗的治疗有效量

在另一方面中，本发明包括本文所述药物组合，其用于治疗癌症，例如乳腺癌(三阴性乳腺癌(TNBC))、皮肤、卵巢、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(GBM)、肺癌、肾细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤和鼻咽癌(NPC)，或已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症，例如TNBC或黑色素瘤。

在另一方面，本发明包括本文所述药物组合在制造用于治疗癌症的药剂中的用途，所述癌症例如乳腺癌(包括三阴性乳腺癌(TNBC))、皮肤、卵巢、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(GBM)、肺癌、肾细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤和鼻咽癌(NPC)，或已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症，例如TNBC或黑色素瘤。

附图说明

图1显示来自TCGA和内部数据库的Rnaseq数据，其显示M2巨噬细胞的替代标记物CD163在由最高PD1表达水平(框)定义的特定患者群体内的高表达水平。

发明详述

需要可用于治疗癌症的新颖组合。本发明是关于可用于治疗癌症的M-CSF拮抗剂(例如抗M-CSF抗体分子)与PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体分子)的组合。尽管不期望受限于理论，但由于影响挽救T细胞抗肿瘤反应并扩展T细胞的内源抗肿瘤反应的免疫反应，使用本文所公开的新颖组合治疗特定癌症被认为是有利的。如图1中所示，在活化后，T细胞增加其表面上的PD-1的表达，容许其接受负信号，从而抑制T细胞反应。肿瘤细胞通过表达过早关闭针对肿瘤的T细胞反应的PD-1的结合伴侣(例如PD-L1)来利用此系统。在本发明组合中，抗PD1抗体分子识别并结合T细胞上的PD-1，从而防止肿瘤细胞结合PD-1并降低T细胞活性。抗PD-1抗体分子结合T细胞但不干扰T细胞功能，由此确保T细胞保留其肿瘤杀伤影响。抗M-CSF抗体进而通过影响不同细胞轴来增加T细胞活性。在肿瘤位点处，肿瘤相关巨噬细胞(TAMS)以旁分泌方式分泌细胞因子抑制IL-2产生和T细胞增殖。使用抗M-CSF抗体通过消耗M2巨噬细胞从T细胞区室释放碎片(break)，这些M2巨噬细胞可通过产生免疫调节细胞因子来抑制T细胞功能和增殖。因此，抗MSCF抗体分子与抗PD1抗体分子的组合被认为可挽救已经因肿瘤细胞和M2巨噬细胞而受损的衰竭T细胞的功能，从而在肿瘤患者中导致有利治疗影响。本发明新颖组合可用于指示表达或过表达PD-1标记物和CD163(巨噬细胞标记物)的位置。该组合具有有利影响的癌症示例包括卵巢癌、乳腺癌(例如TNBC)、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌)、鼻咽癌(NPC)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤、肾细胞癌或神经胶母细胞瘤。此外，本发明组合可用于治疗对PD1/PDL-1治疗产生耐药性或难治的癌症，包括黑色素瘤和三阴性乳腺癌(TNBC)。

因此，本发明提供组合物，例如药物组合物，其包括药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂和本文所述的抗PD-1抗体分子和如本文所述的抗M-CSF抗体，以及其治疗癌症的用途。在一个实施方式中，组合物(例如药物组合物)包括抗PD-1与抗M-CSF抗体分子的组合和如本文所述的一或多种药剂(例如治疗剂或其他抗体分子)。

定义

术语“程序性死亡1”或“PD-1”包括哺乳动物同种型，例如人类PD-1、人类PD-1的物种同系物和包含至少一个与PD-1共有表位的类似物。业内已知PD-1(例如人类PD-1)的氨基酸序列，例如Shinohara T等人(1994)Genomics 23(3):704-6；Finger LR等人，Gene(1997)197(1-2):177-87。

术语“联合治疗有效”意指，PD-1拮抗剂(例如抗PD-1抗体分子)和M-CSF拮抗剂(例如抗M-CSF抗体分子)可同时(在一个剂型或多个剂型中)给予或(以按时间顺序交错的方式、尤其是顺序特异性方式)以其在待治疗对象(例如人类)中优选且仍显示(优选改良或协同)相互作用的时间间隔分开给予。在一个实施方式中，组合在施用时显示与作为单一疗法施用于癌症对象时的治疗反应相比改良的治疗反应。

如本文所用冠词“一(a)”和“一(an)”是指一个或一个以上(例如是指至少一个)该冠词的语法对象。

除非上下文另有明确指示，否则术语“或”在本文中用于意指术语“和/或”，且可与“和/或”互换使用。

“约”和“大约”一般应意指根据测量的性质或精密度，对于所测量的量的误差可接受程度。示例性的误差程度在给定值或值范围的百分之20(％)内，通常在10％内，且更通常在5％内。

本发明的组合物和方法涵盖具有指定序列或与其实质上一致或类似的序列(例如与指定序列至少85％、90％、95％一致或更高一致性的序列)的多肽和核酸。在氨基酸序列的语境下，术语“实质上一致”在本文中用于指含有足够或最小数目的氨基酸残基的第一氨基酸，所述氨基酸残基i)与第二氨基酸序列中的对齐氨基酸残基一致，或ii)是第二氨基酸序列中的对齐氨基酸残基的保守取代，使得第一和第二氨基酸序列可具有共有结构域和/或共有功能活性。例如，含有共有结构域的氨基酸序列与参照序列(例如本文所提供序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。

在核苷酸序列的语境下，术语“实质上一致”在本文中用于指含有足够或最小数目的核苷酸的第一核酸序列，其与第二核酸序列中的对齐核苷酸一致，使得第一和第二核苷酸序列编码具有共有功能活性的多肽，或编码共有结构多肽域或共有功能多肽活性。例如，核苷酸序列与参照序列(例如本文所提供序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。

术语“功能变体”是指具有与天然序列实质上一致的氨基酸序列或由实质上一致的核苷酸序列编码，且能具有天然序列的一或多种活性的多肽。

术语“抗原结合位点”是指抗体分子中包含决定子的部分，所述决定子形成结合至PD-1或M-CSF多肽或其表位的界面。关于蛋白(或蛋白模拟物)，抗原结合位点通常包括一或多个(至少4个氨基酸或氨基酸模拟物的)环，其形成结合至或M-CSF PD-1多肽的界面。通常，抗体分子的抗原结合位点包括至少1个或2个CDR和/或超变环，或更通常至少是3、4、5或6个CDR和/或超变环。

如本文所用术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子组成的抗体分子制剂。单克隆抗体组合物显示对特定表位的单一结合特异性和亲和性。单克隆抗体可通过杂交瘤技术或通过不使用杂交瘤技术的方法(例如重组法)来制备。

“有效人类”蛋白是不引起中和抗体反应(例如人类抗鼠抗体(HAMA)反应)的蛋白。

“组合”是指具有或不具有组合使用说明的单独伴侣的制剂，或是指组合产品。因此，组合伴侣可为完全分开的药物剂型或药物组合物，其也彼此独立出售且仅在包装设备(例如宣传页等)中或例如提供给医师和医务人员的其他信息(例如口头沟通、书面沟通等)中提供其组合使用的说明，用于同时或依序使用以获得联合活性。

“组合产品”包括组合施用的成套药盒，其中抗PD-1抗体和抗M-CSF抗体可同时独立施用或在相同时间间隔内分开施用，尤其这些时间间隔容许组合伴侣显示合作(＝联合)、例如改良、增强或协同的效果。如本文所用的术语“共施用”或“组合施用”等意欲涵盖将所选组合伴侣施用于有需要的单一对象(例如患者)，且意欲包括其中无需通过相同施用路径和/或同时施用药剂的治疗方案。

术语“非固定组合”意指，将两种活性成份作为单独实体同时、并行或(无具体时间限制地)依序施用于患者，其中所述施用在患者体内提供治疗有效水平的两种抗体。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成份。因此，术语“非固定组合”特别如下定义“成套药盒”：如本文所定义的组合伴侣(i)抗PD-1抗体和(ii)抗M-CSF抗体可彼此独立地给药，或即同时或在不同时间点通过使用具有不同量的组合伴侣的不同固定组合给药，其中组合伴侣也可作为完全分开的药物剂型或药物制剂使用，其也彼此独立地出售且仅在包装设备(例如宣传页等)中或其他信息(例如提供给医师和医务人员)中提供其组合使用的可能性的说明。然后，独立制剂或成套药盒的部分可(例如)同时或(就成套药盒的任一部分而言在不同时间点且以相同或不同的时间间隔)按时间顺序交错施用。非常优选地，时间间隔如下选择：部分在组合使用中对所治疗疾病的效果大于通过仅使用任一组合伴侣(i)和(ii)可获得的效果，由此获得联合活性。以组合制剂施用的组合伴侣(i)与组合伴侣(ii)的总量的比例可变，以(例如)符合待治疗患者亚群的需要或单一患者的需要，这些不同需要可能是由于患者的年龄、性别、体重等所致。

如本文所用词组“非经肠施用”和“以非经肠方式施用”意指除经肠和局部施用以外的施用模式，通常是注射且包括(不限于)静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、角质层下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内、硬膜外和胸骨内注射和输注。

如本文所用术语“经分离”是指自其原始和天然环境(例如，若其为天然存在的则为天然环境)移出的材料。例如，存在于活的动物中的天然多核苷酸或多肽未经分离，但通过人类介入而与天然系统中的一些或全部共存材料分离的相同多核苷酸或多肽是经分离的。这些多核苷酸可为载体的部分和/或这些多核苷酸或多肽可为组合物的部分，且由于该载体或组合物仍是经分离的，这是由于其不是天然发现所处环境的部分所致。

如本文所用术语“抗体分子”是指蛋白，例如免疫球蛋白链或其片段，包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列。术语“抗体分子”包括例如单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)。在一个实施方式中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链。在一个实施方式中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能片段。在另一个实施例中，抗体分子包括两个重(H)链可变结构域序列和两个轻(L)链可变结构域序列，由此形成两个抗原结合位点，例如Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单可变结构域抗体、双价抗体(Dab)(二价且双特异性)和嵌合(例如人源化)抗体，其可通过修饰完整抗体或用重组体DNA技术重新合成的那些来产生。这些功能性抗体片段保留与其相应抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可来自任何抗体种类，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自任何抗体亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子的制剂可为单克隆或多克隆。抗体分子也可为人类、人源化、CDR移植或活体外生成的抗体。抗体可具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体也可具有选自例如κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与术语“抗体”互换使用。

抗体分子的抗原结合片段的示例包括：(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其是包含两个通过铰链区处的二硫桥连接的Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其是由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，其是由抗体单臂的VL和VH结构域组成，(v)双价抗体(dAb)片段，其是由VH结构域组成；(vi)骆驼科或骆驼化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)；(viii)单一结构域抗体。这些抗体片段是用本领域普通技术人员已知的常用技术获得，且以与完整抗体相同的方式针对实用性筛选这些片段。术语“抗体”包括完整分子以及其功能性片段。抗体恒定区可经改变(例如突变)以修改抗体性质(例如，增强或降低以下一或多个：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效果细胞功能或补体功能)。

VH和VL区可细分为称为“互补决定区”(CDR)的超变区，散布有称为“框架区”(FR或FW)的更保守区域。

框架区和CDR的范围已通过多种方法准确界定(参见Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版，U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH公开号91-3242；Chothia,C.等人(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；和Oxford Molecular's AbM抗体建模软件所用的AbM定义。一般参见例如Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody VariableDomains.，Antibody Engineering Lab Manual(编辑：Duebel,S.和Kontermann,R.,Springer-Verlag,Heidelberg)。

如本文所用术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和性的氨基酸序列。一般而言，在每一重链可变区内有3个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)且在每一轻链可变区内有3个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。

给定CDR的准确氨基酸序列边界可使用多种熟知方案中的任意一种来测定，包括以下所述：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service,国立卫生研究院,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)。如本文所用，根据“Chothia”编号方案定义的CDR有时也称为“超变环”。

例如，在Kabat下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia的CDR定义，CDR由人类VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)以及人类VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。

通常，除非明确指示，否则抗PD-1抗体分子可包括一或多个Kabat CDR和/或Chothia超变环的任一组合，例如表2中所述。在一个实施方式中，以下定义用于表2中所述的抗PD-1抗体分子：根据Kabat和Chothia的组合CDR定义的HCDR1，以及根据Kabat的CDR定义的HCCDR 2-3和LCCDR 1-3。在所有定义下，各VH和VL通常包括3个CDR和4个FR，其自氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

在一个实施方式中，抗体分子是单特异性抗体分子且结合单一表位。例如，具有数个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，其中的每一个都结合相同表位。

在一个实施方式中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有对第一表位的结合特异性，且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有对第二表位的结合特异性。在一个实施方式中，第一和第二表位位于相同抗原上，例如相同蛋白(或多聚蛋白的亚单位)上。在一个实施方式中，第一和第二表位重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位位于不同抗原上，例如不同蛋白(或多聚蛋白的不同亚单位)上。在一个实施方式中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方式中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。

在一个实施方式中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对于不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于第一免疫球蛋白可变结构域序列具有对第一表位的结合特异性且第二免疫球蛋白可变结构域序列具有对第二表位的结合特异性。在一个实施方式中，第一和第二表位位于相同抗原上，例如相同蛋白(或多聚蛋白的亚单位)上。在一个实施方式中，第一和第二表位重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位不重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位位于不同抗原上，例如不同蛋白(或多聚蛋白的不同亚单位)上。在一个实施方式中，双特异性抗体分子包含具有对第一表位的结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及具有对第二表位的结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方式中，双特异性抗体分子包含具有对第一表位的结合特异性的半抗体和具有对第二表位的结合特异性的半抗体。在一个实施方式中，双特异性抗体分子包含具有对第一表位的结合特异性的半抗体或其片段和具有对第二表位的结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方式中，双特异性抗体分子包含具有对第一表位的结合特异性的scFv或其片段和具有对第二表位的结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方式中，第一表位位于PD-1上且第二表位位于TIM-3、LAG-3、CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)、PD-L1或PD-L2上。

人源化或CDR移植抗体将具有至少1个或2个但通常为全部3个被供体CDR替代的(重链和/或轻链免疫球蛋白链的)受体CDR。抗体可被至少一部分非人类CDR替代或仅一些CDR可被非人类CDR替代。仅需要替代人源化抗体结合至PD-1所需数目的CDR。优选地，供体将是啮齿类动物抗体，例如大鼠或小鼠抗体，且受体将是人类框架或人类共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”且提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方式中，供体免疫球蛋白是非人类(例如啮齿类动物)。受体框架是天然存在的(例如人类)框架或共有框架，或与其约85％或更高、优选90％、95％、99％或更高一致的序列。

如本文所用术语“共有序列”是指形成自相关序列家族中出现最频繁的氨基酸(或核苷酸)的序列。在蛋白家族中，共有序列中的每一位置被家族中该位置处最常出现的氨基酸占据。若两个氨基酸出现同样频繁，则任何一个都可被包括在共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。

本发明药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明抗体或抗体部分。“治疗有效量”或“联合治疗有效量”是指在所需剂量和时间段下有效达成期望治疗结果的量。经修饰抗体或抗体片段的治疗有效量可根据例如以下等因素而变化：对象的疾病状态、年龄、性别和体重，以及抗体或抗体部分引发对象所期望反应的能力。治疗有效量也为经修饰抗体或抗体片段的治疗有益效果胜过任何毒性或有害效果的量。所公开组合的治疗有效剂量优选将可测量参数(例如肿瘤生长速率)相对于未治疗对象抑制至少约20％，更优选至少约40％，甚至更优选至少约60％，且更优选至少约80％。本文所公开组合抑制可测量参数(例如癌症)的能力可在临床试验中评估并由熟练从业人员评估。

“预防有效量”是指在所需剂量和时间段下有效达成期望预防结果的量。通常，由于预防剂量是在患病之前或患病早期用于对象中，故预防有效量将小于治疗有效量。

本发明范围内也包括药盒，其包含如本文所述的抗PD-1抗体分子和抗M-CSF抗体分子。药盒可包括一或多个其他部件，包括：使用说明书；其他试剂，例如，标记、治疗剂或用于螯合或以其他方式偶合的试剂、针对标记或治疗剂的抗体或放射保护性组合物；用于制备施用用途抗体的装置或其他材料；药学上可接受的载剂；和用于施用于对象的装置或其他材料。

序列表

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巨噬细胞菌落刺激因子(M-CSF)抗体拮抗剂的示例

如下文所述各种形式的M-CSF通过结合至其靶细胞上的受体(M-CSFR)发挥功能。M-CSFR是跨膜分子，其具有5个胞外免疫球蛋白样结构域、跨膜结构域和细胞内中断的Src相关酪氨酸激酶结构域。M-CSFR由c-fms原癌基因编码。M-CSF结合至M-CSFR的胞外结构域导致受体二聚化，从而活化细胞质激酶结构域，引起其他细胞蛋白的自磷酸化和磷酸化(Hamilton J.A.,J Leukoc Biol.,62(2):145-55(1997)；Hamilton J,A.,Immuno Today.,18(7):313-7(1997))。

全长人类M-CSF(也称为菌落刺激因子(CSF-1))mRNA编码554个氨基酸的前体蛋白。通过可变mRNA剪接和差异性转译后蛋白水解处理，M-CSF可作为糖蛋白或含有蛋白多糖的硫酸软骨素被分泌至循环中，或作为跨膜糖蛋白在产生M-CSF的细胞表面上表达。人类M-CSF的细菌表达的氨基末端150个氨基酸(完整活体外生物活性所需的最小序列)的三维结构指示，该蛋白是二硫键连接的二聚体且每一单体由4个α螺旋束和反向平行的β折叠组成(Pandit等人，Science 258:1358-62(1992))。通过可变mRNA剪接产生3种独特的M-CSF物质。3种多肽前体是256个氨基酸的M-CFSα、554个氨基酸的M-CSFβ和438个氨基酸的M-CSFγ。M-CSFβ是不以膜结合形式存在的分泌蛋白。M-CSFα表达为通过蛋白水解裂解缓慢释放的整合膜蛋白。M-CSFα在氨基酸191-197处裂解。M-CSF的膜结合形式可与附近细胞上的受体相互作用并从而介导特异性细胞间接触。术语“M-CSF”也可包括氨基酸36-438。

已阐述M-CSF拮抗剂。组合中的M-CSF拮抗剂可为小分子、抗体或其他抗原结合蛋白、小分子、核酸(例如siRNA)，或任何其他干扰M-CSF活化或功能的这类分子。

在一个实施例中，M-CSF拮抗剂是抗M-CSF抗体分子。可用于本发明中的抗M-CSF抗体包括公开于国际公开WO 2005/068503中的那些抗M-CSF抗体，其中关于M-CSF抗体的教导通过引用全文并入本文中。WO 2005/068503公开了例如与抗体RX1、5H4、MC1和/或MC3结合相同表位的抗体，包括上述抗体的抗M-CSF特异性抗体Human Engineered^TM形式的药物制剂，以及制备这些药物制剂的方法。术语“抗体”以最广泛意义使用且包括完全组装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、可结合抗原的抗体片段(例如Fab'、F'(ab)2、Fv、单链抗体、双价抗体)和包含前述各项的重组肽，只要其展现期望的生物学活性即可。

可用于本发明中的其他抗M-CSF抗体包括公开于国际公开WO2003/028752、US2009117103和US2005059113中的那些M-CSF抗体，每一个中关于抗M-CSF抗体分子的教导都通过引用全文并入本文中。

在一个实施方式中，可用于本发明方法中的抗体分子包括结合至由RFRDNTPN(SEQID NO:42)或RFRDNTAN(SEQ ID NO:43)表示的线性表位的抗体分子。这一抗体是公开于WO2005/068503中的人类经改造RX1(H-RX1)抗体。在另一个实施方式中，抗体可为结合至由ITFEFVDQE(SEQID NO:44)表示的线性表位的抗体分子。这一抗体是公开于WO 2005/068503中的5H4。

在一个实施方式中，H-RX1用于本发明组合中。H-RX1抗体或其抗原结合片段的重链和轻链恒定区、可变区和互补决定区(CDR)显示于表1中。

表1抗M-CSF抗体H-RX1

在一个实施方式中，M-CSF拮抗剂抗体是人源化抗体分子，其具有SEQ IDNO:1中所述的重链可变区序列和SEQ ID NO:2中所述的轻链可变区序列。在另一个实施方式中，抗体分子包含重链可变区，其包含CDR1、CDR2和CDR3结构域；和轻链可变区，其包含CDR1、CDR2和CDR3结构域，其中重链可变区CDR3包含具有SEQ ID NO:5中所述序列的氨基酸；且轻链可变区CDR3包含具有SEQ ID NO:8中所述序列的氨基酸；且其中抗体或其抗原结合部分以约10^- ⁷M的结合亲和性结合至人类M-CSF。抗体或其片段可进一步包括重链可变区CDR2，其包含具有SEQ ID NO:4中所述序列的氨基酸；和轻链可变区CDR2，其包含具有SEQ ID NO:7中所述序列的氨基酸。抗体或其片段可进一步包括重链可变区CDR1，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的氨基酸；和轻链可变区CDR1，其包含具有SEQ ID NO:6中所述序列的氨基酸。

在另一个实施例中，可用于本发明方法中的人源化抗体或人类经改造抗体或其片段结合至人类M-CSF，其中该抗体结合M-CSF的表位，所述表位包含RFRDNTPN(SEQ ID NO:42)或RFRDNTAN(SEQ ID NO:43)中至少4个邻接残基，其中该抗体具有对人类M-CSF至少10^- ⁷M的亲和性Kd(解离平衡常数)，其中该抗体包含如上文所指定的全部3个重链CDR。

本文所公开抗体可为单链抗体、双价抗体、结构域抗体、纳米抗体和单抗体的衍生物。例如，本发明提供包含重链可变区和轻链可变区的经分离单克隆抗体(或其功能片段)，其中重链可变区包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％一致的氨基酸序列；轻链可变区包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％一致的氨基酸序列；与阐述于上文所述序列中的可变区相比，该抗体结合至M-CSF(例如人类和/或食蟹猴M-CSF)并中和M-CSF的信号传导活性。

在其他实施方式中，可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)氨基酸序列可与上文表1中所述的序列50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致。

在某些实施方式中，本发明抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一或多个具有基于本文所述抗体的指定氨基酸序列或其保守修饰，且其中抗体保留表1中所述M-CSF结合抗体的所期望功能性质。

因此，本发明提供经分离M-CSF单克隆抗体或其片段，其由包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区组成，其中：重链可变区CDR1氨基酸序列包括SEQ ID NO:3和其保守修饰；重链可变区CDR2氨基酸序列包括SEQ ID NO:4和其保守修饰；重链可变区CDR3氨基酸序列包括SEQ ID NO:5和其保守修饰；轻链可变区CDR1氨基酸序列包括SEQ ID NO:6和其保守修饰；轻链可变区CDR2氨基酸序列包括SEQ IDNO:7和其保守修饰；轻链可变区CDR3氨基酸序列包括SEQID NO:8和其保守修饰；抗体分子特异性结合至M-CSF，并中和M-CSF活性。

用于本发明的抗体可为选自由下组的结合至M-CSF的抗体片段：Fab、F(ab₂)'、F(ab)₂'、scFv、VHH、VH、VL、dAb。生产M-CSF抗体的方法阐述于WO 2005/068503中。

抗体PD-1拮抗剂的示例

可用于本发明中的PD-1分子可为任何PD-1拮抗剂。在一个实施例中，PD-1拮抗剂分子(诸如抗PD-1抗体分子)可抑制、降低或中和PD-1的一或多种活性，从而阻断或减少免疫检查点。在一个实施方式中，PD-1拮抗剂分子(诸如抗PD-1抗体)导致以下一或多种：肿瘤浸润淋巴细胞增加、T细胞受体介导的增殖增加、癌细胞免疫逃避减少、效果细胞功能(例如，T细胞增殖、IFN-α分泌或细胞功能中的一或多个)恢复、对调节T细胞功能的抑制或对多种细胞类型(例如调节T细胞、效应T细胞和NK细胞)活性的效果。

可用于本发明中的PD-1分子显示于表1中且如PCT申请PCT/US2015/012754中所述，其以全文引用并入本文中。

在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是人源化抗PD-1抗体且包括重链可变结构域和恒定区、轻链可变结构域和恒定区或这二者，包含如表2中所述或由表2中的核苷酸序列编码的BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的氨基酸序列。抗PD-1抗体分子可任选包含来自重链、轻链或这二者的前导序列，如表3中所述；或与其实质上一致的序列。

在另一个实施方式中，抗PD-1抗体分子包括至少1个、2个或3个互补决定区(CDR)，来自本文所述抗体的重链可变区，例如选自如表2中所述BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任意一个或由表2中的核苷酸序列编码的抗体。

在一个实施方式(例如包含可变区、CDR(例如，Chothia CDR或Kabat CDR)或本文(例如表2)中提及的其他序列的实施方式)中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子，或是包含抗体的抗原结合片段(例如半抗体或半抗体的抗原结合片段)的抗体分子。

表2：PD-1抗体重链和轻链、CDR以及重链和轻链可变结构域

表3人源化mAb BAP049-克隆-B和BAP049-克隆-E的重链和轻链前导序列的氨基酸序列

表4人类IgG重链和人类κ轻链的恒定区氨基酸序列

人源化BAP049-克隆-B和BAP049-克隆E的生成及其表征

将鼠类抗PD-1单克隆抗体BAP049人源化。获得16个具有独特可变区序列的人源化BAP049克隆的序列和测试样品。针对其生物功能(例如，抗原结合和配体阻断)、结构特征和在CHO细胞中的瞬时表达进一步分析这些克隆。

结合亲和性和特异性

使用Biacore方法测量示例性人源化抗PD-1抗体与人类PD-1蛋白的结合。结果为：Ka＝2.78×10⁵M^-1s^-1；Kd＝2.13×10^-4s^-1；K_D＝0.0827±0.005505nM。

人源化技术和过程

BAP049的人源化是使用人类种系可变区框架(FW)的组合库来实施。该技术使得框架中的鼠类CDR转移至已通过随机组合人类种系FW1、FW2和FW3序列构建的人类可变区(VR)的库中。仅使用一个FW4序列，其对于重链(HC)(Kabat人类HC亚组I)是WGQGTTVTVSS(SEQ IDNO:45)且对于轻链(LC)(Kabat人类κ亚组I)是FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:46)。将VR序列库融合至人类恒定区(CR)序列、HC的人类IgG4(S228P)和LC的人类κCR，且所得完整IgG库在CHO细胞中表达以供筛选。用组织培养上清液进行筛选，从而以全细胞ELISA模式或在FACS上测量对抗原表达细胞的结合亲合力。

人源化过程是以逐步方式来实施，始于构建和表达适当嵌合mAb(鼠类VR、IgG4(S228P)、人类κ)，其可用作筛选人源化克隆的比较器。LC和HC的VR人源化是以两个独立步骤来实施。将人源化LC(huLC)的库与嵌合HC(鼠类VR、IgG4(S228P))配对并通过ELISA针对结合活性筛选所得的“半人源化”mAb。选择具有足够结合活性(≥嵌合mAb的结合)的克隆huLC。类似地，将人源化HC(huHC)的库与嵌合LC(鼠类VR、人类κ)配对并通过ELISA针对结合活性进行筛选。选择具有足够结合活性(≥嵌合mAb的结合)的克隆huHC。

然后对所选huLC和huHC的可变区进行测序以鉴别具有独特序列的huLC和huHC(一些来自初始选择过程的克隆可共有相同的LC或HC)。然后将独特huLC和huHC随机组合以形成人源化mAb(humAb)的小库，将其在CHO细胞中表达并以ELISA和FACS模式在抗原表达细胞上筛选。结合活性等于或优于嵌合比较器mAb结合的克隆是人源化过程的最终产物。

嵌合抗体的构建

制备嵌合抗体的3种变体，其在LC序列的位置102处具有Cys、Tyr或Ser残基。在CHO细胞中表达这3种嵌合抗体(即BAP049-chi(Cys)、BAP049-chi(Tyr)和BAP049-chi(Ser)，也分别称为BAP049-chi、BAP049-chi-Y和BAP049-chi-S)，并测试其与标记的鼠类抗体竞争结合至PD-1表达Jurkat细胞的能力。这3种变体在竞争实验中无差别。结果显示，这3种嵌合mAb(Cys、Tyr、Ser)同样地竞争结合标记的鼠类mAb BAP049。嵌合mAb曲线与鼠类mAb曲线之间的微小差异可能是由于用于测定mAb浓度的方法不同所致。鼠类mAb的浓度通过OD280测量来测定，而上清液中的嵌合mAb浓度是通过ELISA使用IgG4标准品来测定。针对人源化抗体选择种系残基Tyr。

人源化抗体克隆

人源化过程产生16个结合亲和性与嵌合抗体相当的克隆。除了结合数据外，对于每一克隆，提供VR序列以及mAb样品。这些样品是通过瞬时转染CHO细胞来制备，且是浓缩的组织培养上清液。溶液中的抗体浓度是通过IgG4特异性ELISA来测定。

16个独特克隆是4个独特HC序列和9个独特LC序列的组合。对于HC FW区，HC序列是2种不同VHFW1中的一个、3种不同VHFW2中的一个和2种不同VHFW3序列中的一个的组合。对于LC FW区，LC序列是5种不同VLFW1中的一个、3种不同VLFW2中的一个和4种不同VLFW3序列中的一个的组合。人源化BAP049克隆B和E的重链和轻链可变结构域的氨基酸和核苷酸序列显示于表2中。人源化BAP049克隆的重链和轻链CDR的氨基酸和核苷酸序列也显示于表2中。

人源化克隆的选择

针对其阻断PD-L1和PD-L2结合至PD-1的能力以及在使用人类PBMC的活体外分析中增强T细胞活性，进一步测试包括克隆B和E在内的所选克隆。

人源化抗PD-1抗体BAP049的表达

选择5种人源化克隆用于评估在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达。

使用Lonza’s GS Xceed载体(用于重链的IgG4proΔk和用于轻链的κ)构建单一基因载体(SGV)。扩增SGV并瞬时共转染至2.8L体积的表达用CHOK1SV GS-KO细胞中。

在转染后第6天收获表达培养物并通过离心和无菌过滤使其澄清。使用一步式蛋白A层析纯化澄清细胞培养上清液。以1mg/ml浓度(包括作为对照样品的抗体)使用纯化材料进行SE-HPLC、SDS-PAGE、IEF和LAL形式的产物质量分析。

载体构建

通过GeneArt AG合成轻链和重链可变结构域编码区的序列。分别使用N-末端限制位点Hind III和C-末端限制位点BsiWI(轻链)和ApaI(重链)，将轻链可变结构域编码区亚克隆至pXC-κ中并将重链可变结构域编码区亚克隆至pXC-IgG4proΔK载体中。通过PCR扩增(引物1053：GCTGACAGACTAACAGACTGTTCC(SEQ ID NO:47)和1072：CAAATGTGGTATGGCTGA(SEQID NO:48))筛选阳性克隆，并通过感兴趣基因的限制消化(使用EcoRI-HF和HindIII-HF的双酶消化)和核苷酸测序来检验。

DNA扩增

将单细菌菌落捡样至15ml含有50μg/ml氨苄青霉素的Luria Bertani(LB)培养基(LB培养液，Sigma-Aldrich,L7275)中，并在37℃下以220rpm振荡培育过夜。使用所得起子培养物接种1L含有50μg/ml氨苄青霉素的Luria Bertani(LB)培养基，并在37℃下以220rpm振荡培育过夜。使用QIAGEN Plasmid Plus Gigaprep系统(QIAGEN，12991)分离载体DNA。在所有情况下，DNA浓度是使用Nanodrop 1000分光亮度计(Thermo-Scientific)测量，并用EB缓冲液(10mM Tris-Cl，pH 8.5)调节至1mg/ml。通过测量吸光度比值A260/A280来评价单个基因载体的DNA质量。发现该比值介于1.88与1.90之间。

CHOK1SV GS-KO细胞的培养

在补充有6mM谷氨酰胺(Invitrogen，25030-123)的CD-CHO培养基(Invitrogen，10743-029)中培养CHOK1SV GS-KO细胞。在36.5℃、5％CO₂、85％湿度、140rpm下在振荡培育器中培育细胞。每3-4天以常规方式将细胞继代培养，以2×10⁵个细胞/ml接种并繁殖以获得足够细胞用于转染。截至第20次传代弃去细胞。

CHOK1SV GS-KO细胞的瞬时转染

瞬时转染是使用已培养至少2周的CHOK1SV GS-KO细胞来实施。在转染前24h将细胞继代培养且在转染时细胞活力>99％。

所有转染都是通过电穿孔使用Gene Pulse MXCell(Bio-Rad，一种基于板的电穿孔系统)来实施。对于每一转染，将活细胞再悬浮于预热培养基中至2.86×10⁷个细胞/ml。将80μg DNA(重链和轻链SGV的比率为1:1)和700μl细胞悬浮液等分至各比色皿/孔中。在300V、1300μF下对细胞进行电穿孔。将转染细胞转移至Erlenmeyer烧瓶中的预热培养基中，并将比色皿/孔用预热培养基冲洗两次，将其也转移至烧瓶中。将转染细胞培养物在振荡培育器中在36.5℃、5％CO₂、85％湿度、140rpm下培育6天。在收获时使用Cedex HiRes自动化细胞计数器(Roche)来测量细胞活力和活细胞浓度。

人源化抗PD-1抗体的表征

结合亲和性和特异性

使用Biacore方法测量包括如表2中所示的克隆B和克隆E在内的示例性人源化抗PD-1抗体与人类PD-1蛋白的结合。结果为：Ka＝2.78×10⁵M^-1s^-1；Kd＝2.13×10^-4s^-1；K_D＝0.0827±0.005505nM。

使用FACS分析测量相同的人源化抗PD-1抗体在表达人类PD-1的300.19细胞上的结合。结果显示，与人类IgG4同型对照相比，抗PD-1抗体(人类IgG4)以高亲和性结合至人类PD-1。

发现示例性人源化抗PD-1抗体展现与食蟹猴PD-1蛋白和表达食蟹猴PD-1的300.19细胞的高亲和性。如通过Biacore方法所测量，抗PD-1抗体以0.093±0.015nM的K_D结合至食蟹猴PD-1。与食蟹猴PD-1的结合亲和性与其与人类PD-1的结合亲和性相当。

其他结合分析显示，示例性人源化抗PD-1抗体不具有与小鼠PD-1的交叉反应或与亲代细胞系的交叉反应。

PD-1与其配体之间的相互作用的阻断

检查示例性人源化抗PD-1抗体阻断PD-1与其两种已知配体PD-L1和PD-L2之间的相互作用的能力。结果显示，与人类IgG4同型对照和无抗体对照相比，抗PD-1抗体阻断PD-L1和PD-L2在表达人类PD-1的300.19细胞上的结合。抗PD-1抗体以0.94±0.15nM的IC50阻断在300.19细胞上的PD-L1结合。相同抗体以1.3±0.25nM的IC50阻断300.19细胞上的PD-L2结合。

抗PD-1抗体的生物活性和功能

在其他实施方式中，前述抗体分子能以小于约0.2nM的解离常数(K_D)结合至人类PD-1。

在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约0.2nM、0.15nM、0.1nM、0.05nM或0.02nM、例如约0.13nM至0.03nM、例如约0.077nM至0.088nM、例如约0.083nM的K_D结合至人类PD-1，例如如通过Biacore方法所测量。

在其他实施方式中，前述抗体分子以小于约0.2nM、0.15nM、0.1nM、0.05nM或0.02nM、例如约0.11nM至0.08nM、例如约0.093nM的K_D结合至食蟹猴PD-1，例如如通过Biacore方法所测量。

在某些实施方式中，前述抗体分子以类似K_D(例如在nM范围内)结合至人类PD-1和食蟹猴PD-1，例如如通过Biacore方法所测量。在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约0.1nM、0.075nM、0.05nM、0.025nM或0.01nM、例如约0.04nM的K_D结合至人类PD-1-Ig融合蛋白，例如如通过ELISA所测量。

在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约0.1nM、0.075nM、0.05nM、0.025nM或0.01nM、例如约0.06nM的K_D结合至表达人类PD-1的Jurkat细胞(例如，人类PD-1转染的Jurkat细胞)，例如如通过FACS分析所测量。

在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.1nM、例如约0.4nM的K_D结合至食蟹猴T细胞，例如如通过FACS分析所测量。

在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约1nM、0.75nM、0.5nM、0.25nM或0.01nM、例如约0.6nM的K_D结合至表达食蟹猴PD-1的细胞(例如，食蟹猴PD-1转染的细胞)，例如如通过FACS分析所测量。

在其他实施方式中，前述抗体分子能降低PD-1与PD-L1、PD-L2或与这二者的结合，或PD-1与表达PD-L1、PD-L2或这二者的细胞的结合。在一些实施方式中，前述抗体分子以小于约1.5nM、1nM、0.8nM、0.6nM、0.4nM、0.2nM或0.1nM、例如介于约0.79nM与约1.09nM之间、例如约0.94nM或约0.78nM或更小、例如约0.3nM的IC50降低(例如，阻断)PD-L1与表达PD-1的细胞(例如，表达人类PD-1的300.19细胞)的结合。在一些实施方式中，前述抗体以小于约2nM、1.5nM、1nM、0.5nM或0.2nM、例如介于约1.05nM与约1.55nM之间或约1.3nM或更小、例如约0.9nM的IC50降低(例如，阻断)PD-L2与表达PD-1的细胞(例如，表达人类PD-1的300.19细胞)的结合。

在其他实施方式中，前述抗体分子能增强抗原特异性T细胞反应。

在一些实施方式中，与使用同型对照(例如，IgG4)时IL-2的表达相比，前述抗体分子将来自通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)(例如，25μg/mL)活化的细胞的IL-2表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约2至3倍，例如约2至2.6倍，例如约2.3倍，例如如在SEB T细胞活化分析或人类全血离体分析中所测量。

在一些实施方式中，与使用同型对照(例如，IgG4)时IFN-γ的表达相比，前述抗体分子将来自通过(例如，0.1μg/mL)抗CD3刺激的T细胞的IFN-γ表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约1.2至3.4倍，例如约2.3倍，例如如在IFN-γ活性分析中所测量。

在一些实施方式中，与使用同型对照(例如，IgG4)时IFN-γ的表达相比，前述抗体分子将来自通过(例如，3pg/mL)SEB活化的T细胞的IFN-γ的表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约0.5至4.5倍，例如约2.5倍，例如如在IFN-γ活性分析中所测量。

在一些实施方式中，与使用同型对照(例如，IgG4)时IFN-γ的表达相比，前述抗体分子将来自用CMV肽活化的T细胞的IFN-γ的表达增加至少约2、3、4、5倍，例如约2至3.6倍，例如约2.8倍，例如如在IFN-γ活性分析中所测量。

在一些实施方式中，与使用同型对照(例如，IgG4)时CD8⁺T细胞的增殖相比，前述抗体分子将用CMV肽活化的CD8⁺T细胞的增殖增加至少约1、2、3、4、5倍，例如约1.5倍，例如如通过传代至少n(例如，n＝2或4)次细胞分裂的CD8+T细胞的百分比所测量。

在某些实施方式中，前述抗体分子的Cmax介于约100μg/mL与约500μg/mL之间、介于约150μg/mL与约450μg/mL之间、介于约250μg/mL与约350μg/mL之间或介于约200μg/mL与约400μg/mL之间、例如约292.5μg/mL，例如如在猴中所测量。

在某些实施方式中，前述抗体分子的T_1/2介于约250小时与约650小时之间、介于约300小时与约600小时之间、介于约350小时与约550小时之间或介于约400小时与约500小时之间、例如约465.5小时，例如如在猴中所测量。

在一些实施方式中，前述抗体分子以慢于5×10^-4、1×10^-4、5×10^-5或1×10^-5s^-1、例如约2.13×10^-4s^-1的Kd结合至PD-1，例如如通过Biacore方法所测量。在一些实施方式中，前述抗体分子以快于1×10⁴、5×10⁴、1×10⁵或5×10⁵M^-1s^-1、例如约2.78×10⁵M^-1s^-1的Ka结合至PD-1，例如如通过Biacore方法所测量。

其他组合伴侣

在任一实施方式中，抗PD-1抗体和抗M-CSF抗体的组合伴侣优选经配制或使用以具有联合治疗活性。这尤其意指，存在至少一种有益效果，例如相互增强组合伴侣的效果，具体而言例如协同作用、大于加和的效果、其他有利效果(例如对于任意单一抗体而言尚未发现的另一治疗效果)、较少副作用和/或在组合伴侣的一个或两者的非有效剂量中的组合治疗效果。例如，术语“联合(治疗)活性”可意指，化合物可以使得其优选在所治疗温血动物、尤其人类中仍展示(优选增强、大于加和或协同)相互作用(联合治疗效果)的时间间隔分开或依序(以长期交错的方式、尤其是顺序特异性方式)给予。联合治疗活性尤其可通过肿瘤体积的减小或症状的减少并如下文所述来测定。

在一方面中，本发明是关于在活体内使用抗PD-1抗体分子和抗M-CSF抗体分子的组合治疗对象，从而抑制或降低如本文所述癌性肿瘤的生长。抗PD-1抗体与抗M-CSF抗体分子的组合可单独用于抑制癌性肿瘤的生长，或可与以下一或多项组合使用：标准治疗(例如，用于癌症的)、另一抗体或其抗原结合片段、免疫调节剂(例如，共刺激分子的活化剂或抑制性分子的抑制剂)；或疫苗，例如细胞免疫疗法的其他形式的治疗性癌症疫苗。

在一个实施例中，本文所述组合可用于治疗乳腺癌，例如内分泌受体(雌激素或孕酮受体)阳性、HER2阳性、三阴性(对于雌激素、孕酮或HER2的受体并非阳性)或三阳性(对于雌激素受体、孕酮受体和HER2为阳性)。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准(将取决于乳腺癌的阶段)治疗或正在用标准治疗的患者，或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已经在治疗或正在接受标准治疗但显示疾病进展的患有晚期三阴性乳腺癌的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗黑色素瘤。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准(例如，卡铂和紫杉醇或卡铂/吉西他滨或紫杉醇)治疗或正在用标准治疗或对其他免疫调节检查点抑制剂(例如PD-1或PD-L1)产生耐药性或难治的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用PD-1或PD-L1治疗并对该治疗产生耐药性或难治或正在接受标准治疗但显示疾病进展的患有黑色素瘤的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗卵巢癌。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准(例如，卡铂和紫杉醇或卡铂/吉西他滨或紫杉醇)治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗或正在接受标准治疗但显示疾病进展的患有晚期卵巢癌的患者。

在一个实施例中，本文所述组合可用于治疗胰腺癌。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准(例如，吉西他滨)治疗或正在用标准治疗的患有胰腺癌的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗或正在接受标准治疗但显示疾病进展的患有晚期胰腺癌的患者。本文所述组合可施用于正在接受标准治疗或已接受标准治疗的那些患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗神经胶母细胞瘤。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有神经胶母细胞瘤的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗肺癌，例如非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌或鳞状细胞肺癌。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准(例如，卡铂/吉西他滨或紫杉醇)治疗或正在用标准治疗的患有肺癌的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有肺癌的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗肾细胞癌。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有肾细胞癌的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有弥漫性大B细胞淋巴瘤的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗间皮瘤。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有间皮瘤的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗鼻咽癌。接受该组合的癌症对象可为先前已用标准治疗或正在用标准治疗的患者或尚未接受任何治疗的患者。在一个实施例中，本文所述组合用于治疗已用标准治疗但显示疾病进展的患有鼻咽癌的患者。

在另一个实施例中，本文所述组合可用于治疗对免疫调节剂(例如免疫检查点分子抑制剂)产生耐药性或难治的癌症。在一个实施方式中，免疫调节剂是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ的抑制剂。在另一个实施例中，免疫调节剂是抗PD-1或抗PD-L1。在此实施例中，本文所述组合用于治疗先前已用抗PD-1或抗PDL1治疗但显示疾病进展的患有晚期三阴性乳腺癌的患者。在另一个实施例中，本文所述组合用于治疗先前已用抗PD-1或抗PDL1治疗但显示疾病进展的患有黑色素瘤的患者。

因此，本发明组合提供抑制对象的肿瘤细胞生长的方法，包含向该对象施用治疗有效量的本文所述组合。在另一个实施方式中，本发明组合可单独或与一或多种其他药剂组合施用，且该组合可以任一顺序或同时施用。在一个实施例中，本文所公开的组合疗法可包括与一或多种其他治疗剂(例如一或多种抗癌剂、细胞毒性剂或细胞生长抑制剂、激素治疗、疫苗和/或其他免疫疗法)共配制和/或共施用的本发明组合物。在其他实施方式中，本文所述组合可与其他治疗性治疗方式(包括手术、放射疗法、冷冻手术和/或温热疗法)组合施用。这些组合疗法可有利地利用较低剂量的所施用治疗剂，由此避免与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。

“与……组合”不欲暗示疗法或治疗剂必须同时施用和/或经配制以共同递送，尽管这些递送方法在本文所述的范围内。抗PD-1抗体和抗M-CSF分子可与一或多种其他额外疗法或治疗剂并行施用、先于或后于一或多种其他额外疗法或治疗剂施用。抗PD-1抗体和抗M-CSF分子和其他药剂或治疗方案可以任何顺序施用。一般而言，各药剂将按针对该药剂确定的剂量和/或时间表来施用。也将理解所用额外治疗剂可以单个组合物共同施用或以不同组合物分开施用。一般而言，预期组合使用的额外治疗剂的用量不超过其个别使用时的量。在一些实施方式中，组合用量将低于个别用量。

在某些实施方式中，本发明组合是与一或多种本领域已知的PD-1、PD-L1和/或PD-L2的其他抑制剂组合施用。拮抗剂可为抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。在一些实施方式中，其他抗PD-1抗体选自MDX-1106、Merck 3475或CT-011。在一些实施方式中，PD-1抑制剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施方式中，PD-1抑制剂是AMP-224。在一些实施方式中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方式中，抗PD-L1结合拮抗剂选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。MDX-1105也称为BMS-936559，是阐述于WO2007/005874中的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70(分别示于SEQ ID No.20和21中的重链和轻链可变区序列)是阐述于WO2010/077634中的抗PD-L1。

MDX-1106也称为MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558，是阐述于WO2006/121168中的抗PD-1抗体。Merck 3745也称为MK-3475或SCH-900475，是阐述于WO2009/114335中的抗PD-1抗体。匹地利珠单抗(CT-011；Cure Tech)是结合至PD-1的人源化IgG1k单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体公开于WO2009/101611中。在其他实施方式中，抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗(商标名Keytruda，曾用名兰利珠单抗，也称为MK-3475)公开于例如Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134-44中。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，公开于WO2010/027827和WO2011/066342中)是PD-L2Fc融合可溶受体，其阻断PD-1与B7-H1之间的相互作用。其他抗PD-1抗体包括AMP 514(Amplimmune)，例如公开于US 8,609,089、US 2010028330和/或US 20120114649中的抗PD-1抗体。

其他可与本发明组合组合的示例性药剂可包括标准化疗剂，包括但不限于阿那曲唑比卡鲁胺硫酸博来霉素白消安白消安注射剂卡培他滨N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂卡莫司汀氮芥苯丁酸顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷阿糖胞苷脂质体注射剂达卡巴嗪放线菌素(放线菌素D、Cosmegan)、盐酸道诺霉素柠檬酸道诺霉素脂质体注射剂地塞米松、多西他赛盐酸多柔比星依托泊苷磷酸氟达拉滨5-氟尿嘧啶氟他胺替扎他滨、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康L-天冬酰胺酶甲酰四氢叶酸钙、美法仑6-巯嘌呤甲胺喋呤米托蒽醌麦罗塔、紫杉醇菲尼克斯(phoenix，钇90/MX-DTPA)、喷司他汀、聚苯丙生20和卡莫司汀植入物柠檬酸他莫西芬替尼泊苷6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明注射用盐酸托泊替康长春碱长春新碱长春瑞滨依鲁替尼、艾代拉里斯和维汀布伦妥单抗(brentuximab vedotin)。

示例性烷化剂包括(但不限于)氮芥、乙撑亚胺衍生物、磺酸烷基酯、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶氮芥(Aminouracil Uracilnitrogen )、甲川氯环磷酰胺( Revimmune^TM)、异环磷酰胺美法仑氮芥苯丁酸哌泊溴烷三乙烯三聚氰胺三乙烯硫代磷胺、替莫唑胺噻替派白消安卡莫司汀洛莫司汀链脲霉素和达卡巴嗪其他示例性烷化剂包括(但不限于)奥沙利铂替莫唑胺(和)；放线菌素(也称为放线菌素-D，)；美法仑(也称为L-PAM、L-溶肉瘤素和苯丙氨酸氮芥、)；六甲蜜胺(也称为六甲基三聚氰胺(HMM)、)；卡莫司汀苯达莫司汀白消安(和)；卡铂洛莫司汀(也称为CCNU、)；顺铂(也称为CDDP、和)；氮芥苯丁酸环磷酰胺(和)；达卡巴嗪(也称为DTIC、DIC和咪唑甲酰胺、)；六甲蜜胺(也称为六甲基三聚氰胺(HMM)、)；异环磷酰胺普雷德氮芥(Prednumustine)；丙卡巴肼二氯甲二乙胺(也称为氮芥、氮介(mustine)和盐酸甲基二氯乙胺、)；链脲霉素噻替派(也称为硫代磷酰胺、TESPA和TSPA、)；环磷酰胺和苯达莫司汀HCl

示例性蒽环包括例如多柔比星(和)；博来霉素道诺霉素(盐酸道诺霉素、道诺霉素和盐酸红比霉素、)；道诺霉素脂质体(柠檬酸道诺霉素脂质体、)；米托蒽醌(DHAD、)；表阿霉素(Ellence^TM)；伊达比星(Idamycin)；丝裂霉素C格尔德霉素；除莠霉素；近灰霉素；和去乙酰基拉维霉素。

可与单独或与另一免疫调节剂(例如，抗LAG-3、抗PD-L1或抗TIM-3抗体分子)组合的抗PD-1抗体分子组合使用的示例性长春花生物碱包括(但不限于)酒石酸长春瑞滨长春新碱和长春地辛长春碱(也称为硫酸长春碱、长春花碱和VLB、和)；和长春瑞滨

组合物和使用

本发明是关于药物产物或商业包装，其包含本文所述的本发明组合产品，尤其与其在癌症治疗中的同时、分开或依序使用(尤其用于呈联合活性)的说明书一起。在一方面中，本发明提供组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括如本文所述的PD-1抗体分子和如本文所述的M-CSF抗体分子，其与药学上可接受的载剂一起配制。如本文所用“药学上可接受的载剂”包括生理上兼容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗和吸收延迟剂等。载剂可适于静脉内、肌内、皮下、非经肠、经直肠、经脊柱或经表皮施用(例如，通过注射或输注)。

本发明组合物可呈多种形式。这些形式包括(例如)液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散液或悬浮液、脂质体和栓剂。优选形式取决于既定的施用模式和治疗应用。典型的优选组合物呈注射或输注溶液形式。优选施用模式是非经肠(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个优选实施方式中，本文所公开组合是通过静脉内输注或注射施用。在另一个优选实施方式中，本文所公开组合是通过肌内或皮下注射施用。

治疗组合物通常应无菌且在制造和储存条件下稳定。可将组合物配制为溶液、微乳液、分散液、脂质体或其他适于高抗体浓度的有序结构。无菌注射溶液可通过以下方式制备：将活性化合物(即抗体或抗体部分)以所需量纳入具有上文所列举成份的一种或组合(根据需要)的适当溶剂中，随后过滤灭菌。通常，分散液是通过将活性化合物纳入含有基础分散介质和来自上文所列举的其他所需成份的无菌载剂中来制备。在使用无菌粉末制备无菌注射溶液的情形中，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其可自其先前经无菌过滤的溶液产生活性成份加上任何其他期望成份的粉末。可通过(例如)使用诸如卵磷脂等包衣、通过在分散剂情形中维持所需粒径以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。可注射组合物的吸收延长可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现。

用于所公开方法中的药物组合物可以常规方式制造。现在普遍使用抗体作为药物活性成份，包括产品(曲妥珠单抗)、(利妥昔单抗)、(帕利珠单抗)等。业内已熟知用于冻干、制备水性制剂和将抗体纯化到药物级的技术。

通常将抗体配制为准备用于非经肠施用的水性形式或配制为用于在施用之前用适宜稀释剂重构的冻干物。在所公开方法和用途的一些实施方式中，将本发明抗体配制为冻干物。适宜冻干物制剂可在小体积(例如，2 ml或更小)液体中重构以实现皮下施用，并可提供抗体聚集程度低的溶液。对于即刻施用，将其溶解于适宜水性载剂中，例如注射用无菌水或无菌缓冲生理盐水中。若认为需要制备较大体积溶液用于通过输注而非推注注射施用，则在配制时将人类血清白蛋白或患者自身的肝素化血液纳入盐水中可以是有利的。过量的该生理惰性蛋白的存在可防止抗体因吸附至用于输注溶液的容器和管路的壁上而损失。若使用白蛋白，则适宜浓度是盐水溶液的0.5重量％至4.5重量％。

施用方法和速率

本文所公开组合的抗体分子可通过业内已知的多种方法来施用，尽管对于多种治疗性应用，优选的施用途径/模式是静脉内注射或输注。例如，参见Sachs等人，OptimalDosing for Targeted Therapies in Oncology:Drug Development Cases Leading byExample,Clin.Cancer Res；22(6)2016；Bai等人，A Guide to Rational Dosing ofMonoclonal Antibodies,Clin.Pharmacokinet.2012:51(2)119-135；Le Tourneau,J.,Dose Escalation Methods in Phase I Cancer Clinical Trials,J Natl Cancer Inst2009；101:708-720；Wang,D.等人，Fixed Dosing Versus Body Size-Based Dosing ofMonoclonal Antibodies in Adult Clinical Trials,J Clin Pharmacol 2009；29:1012-1024；Hempel,G.et ano,Flat-Fixed Dosing Versus Body Surface Aread-Based Dosingof Anticancer Drugs:There Is a Difference,The Oncologist 2007:12:924-926,Mathijssen,R.,Flat-Fixed Dosing Versus Body Surface Area-Based Dosing ofAnticancer Drugs in Adults:Does It Make a Difference？,The Oncologist,2007；12:913-923；Leveque,Evaluation of Fixed Dosing of New Anticancer Agents in PhaseI Studies,Anticancer Research 28:300275-2078(2008),Gurney,How to calculatethe dose of chemotherapy,British Journal of Cancer(2002)86,1297-1302。例如，抗体分子可通过静脉内输注以大于20mg/min、例如20-40mg/min、以及通常大于或等于40mg/min的速率施用，以达到约35至440mg/m²、通常约70至310mg/m²、以及更通常约110至130mg/m²的剂量。在实施方式中，抗体分子可通过静脉内输注以小于10mg/min、优选小于或等于5mg/min的速率施用，以达到约1至100mg/m²、优选约5至50mg/m²、约7至25mg/m²以及更优选约10mg/m²的剂量。施用途径和/或模式将根据所期望结果而变化。

剂量方案

调节剂量方案以提供最优的期望反应(例如治疗反应)。例如，可施用单次推注剂，可随时间施用若干分开的剂量，或剂量可根据治疗状况紧急程度的指示按比例减少或增加。尤其有利地是，以剂量单位形式配制非经肠组合物便于施用和剂量均匀。如本文所使用的剂量单位形式是指适于作为用于待治疗对象的单位剂量的物理离散单元；各单元含有预定量的活性化合物，该预定量经计算与所需药物载剂一起产生期望治疗效果。本发明剂量单位形式的规格取决并直接依赖于(a)活性化合物的独特性质和欲实现的特定治疗效果，和(b)复合此活性化合物用于治疗对象敏感性的技术中固有的限制。

体重剂量

抗体可根据患者的体重来给药。抗体分子治疗性或预防性有效量的示例性非限制性范围是0.1-30mg/kg，更优选1-25mg/kg。本文所公开组合的剂量和治疗方案可由本领域技术人员确定。其可分开或同时递送。在某些实施方式中，抗PD-1抗体是通过(例如，皮下或静脉内)注射以约1至40mg/kg、例如1至30mg/kg、例如约3至25mg/kg、约3至20mg/kg、约1至5mg/kg、1至10mg/kg、3至10mg/kg、5至15mg/kg、10至20mg/kg、15至25mg/kg或约3mg/kg的剂量施用，且抗M-CSF抗体是通过(例如，皮下或静脉内)注射以约1至40mg/kg、例如1至30mg/kg、例如约3至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg、3至10mg/kg、1至10mg/kg、5至15mg/kg、10至20mg/kg、15至25mg/kg或约3mg/kg的剂量施用。

固定剂量(Flat Dosage)

抗体也可以平稳剂量形式施用于患者，也即给予各患者固定或预定量的剂量。术语平稳剂量与固定剂量可互换使用。平稳或固定给药可有益于患者，例如节省药物供应并减少药房误差。

在一些实施方式中，抗PD-1抗体分子是通过(例如，皮下或静脉内)注射以约200mg至500mg、例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg或约300mg或约400mg的剂量(例如固定剂量)施用。给药时间表(例如，固定剂量给药时间表)可自例如一周一次至每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是以约300mg至400mg的剂量每3周一次或每4周一次施用。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是以约300mg的剂量每3周一次施用。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是以约400mg的剂量每4周一次施用。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是以约300mg的剂量每4周一次施用。在一个实施方式中，抗PD-1抗体分子是以约400mg的剂量每3周一次施用。

抗M-CSF抗体也可以同样固定剂量施用。在一些实施方式中，抗M-CSF抗体分子是通过(例如，皮下或静脉内)注射以约200mg至500mg、例如约250mg至450mg、约300mg至400mg、约250mg至350mg、约350mg至450mg或约300mg或约400mg的剂量(例如，固定剂量)施用。另外，抗M-CSF抗体分子也可通过注射以约300mg至800mg、包括约800mg的固定剂量施用。给药时间表(例如，固定剂量给药时间表)可自例如一周一次至每2、3、4、5或6周一次变化。在一个实施方式中，抗M-CSF抗体分子是以约300mg至400mg的剂量每3周一次或每4周一次施用。在一个实施方式中，抗M-CSF抗体分子是以约300mg的剂量每3周一次施用。在一个实施方式中，抗M-CSF抗体分子是以约400mg的剂量每4周一次施用。在一个实施方式中，抗M-CSF抗体分子是以约300mg的剂量每4周一次施用。在一个实施方式中，抗M-CSF抗体分子是以约400mg的剂量每3周一次施用。

给药时间表

给药时间表可自例如一周一次至每2、3或4周一次变化。在一个实施方式中，抗PD-1抗体和抗M-CSF抗体或两种分子是以约3至10mg/kg的剂量每隔一周施用。应注意的是，剂量水平可随待缓解病况的类型和严重性而变。还应理解，对于任一特定对象，应根据对象需要和执行或监督组合物施用人员的专业判断随时间调节具体的剂量方案，且本文所述剂量范围仅为示例性且不欲限制所要求保护的组合物的范围或实践。

3种(或更多种)药剂方案的示例性剂量如下。抗PD-1抗体和抗M-CSF抗体或两种分子可例如以约1至40mg/kg、例如1至30mg/kg、例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg或约3mg/kg的剂量施用。M-CSF抗体分子可例如以约1至40mg/kg、例如1至30mg/kg、例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg或约3mg/kg的剂量施用。

生物标记物

本发明进一步包括选择可能从使用抗PD-1抗体分子和抗M-CSF抗体分子的组合治疗受益最多的患者。可通过确定PD-1的存在或肿瘤相关巨噬细胞(TAMS)的存在来实现患者选择。尽管不期望受限于理论，但在一些实施方式中，若患者患有高度表达PD-L1的癌症，和/或该癌症经抗肿瘤免疫细胞(例如TIL)浸润和/或具有高TAMS水平，例如如下文所述通过寻找CD163或CD163/CD8所确定，则该患者更有可能对使用本发明组合的治疗反应。

另外，组合潜在效能的其他潜在预测因子包括在(TAM和TIL表型的调节)基线和(例如在所有反应速率下)抗肿瘤活性终点处的FoxP3、PD-L1和CD68表达水平。在本发明的一个实施方式中，可分析患者血液中的CD163或CD163/CD8作为组合效能的单一预测因子。

组合的药效学效果可潜在地通过在(TAM和TIL表型的调节)基线处和基线后的CD8、CD163、FoxP3、PD-L1、CD68表达水平、CD4、LAG3或TIM3(以及(若可获得)CD80、LKB2、CCL2)来评价。另外，可测量在基线处和基线后的全身性细胞因子水平以评价药效学(例如，GM-CSF、IFN-γ、IL-10、IL-18、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、MCP-1、MIP-1αMIP-1β、TNF-α或TNF-β)。

BRCA1/BRCA2突变体和非突变体TNBC患者中依照RECIST v1.1的ORR可分别用于评估BRCA1和BRCA2状态是否影响TNBC患者对治疗的反应。符合MSI状态和突变负荷的依照RECIST v1.1的ORR评估微卫星不稳定状态和突变负荷是否影响总反应率。MCS110与PDR001的组合在对PD-1/PDL-1靶向疗法具有固有或获得性耐药性的黑色素瘤患者中的抗肿瘤活性，可分别通过对PD-1具有固有或获得性耐药性(根据临床病史)的黑色素瘤患者中的依照RECIST v1.1的ORR来评估。

具有PD-1的患者的选择

在一个实施例中，测定PD-1的存在可为通过分析对CD8、PD-L1和/或IFN-γ呈阳性的细胞来测定抗肿瘤免疫细胞；因此CD8、PD-L1和/或IFN-γ的水平可用作微环境中TIL水平的读数。在某些实施方式中，癌症微环境指对PD-L1/CD8/IFN-γ呈三阳性。

因此，在某些方面中，本申请提供如下方法：测定肿瘤样品是否对PD-L1、CD8和IFN-γ中的一或多个呈阳性以及肿瘤样品是否对这些标记物中的一或多个(例如两个或全部三个)呈阳性，然后向患者施用治疗有效量的抗PD-1抗体分子，其可任选与一或多种其他免疫调节剂或抗癌剂组合。

在以下适应症中，大部分患者对PD-L1/CD8/IFN-γ呈三阳性：TN乳腺癌。不管是大部分还是小部分患者对这些标记物呈三阳性，针对这些标记物筛选患者能够鉴别有极高可能性对疗法有利反应的患者部分，所述疗法使用PD-1抗体(例如，阻断性PD-1抗体)与M-CSF-1和可任选的一或多种其他免疫调节剂(例如，抗TIM-3抗体分子、抗LAG-3抗体分子或抗PD-L1抗体分子)和/或抗癌剂组合。

在一些实施方式中，将癌症样品按照对PD-L1/CD8/IFN-γ呈三阳性分类。该测量可大致分解为两个门槛：个体细胞是否归类为阳性，以及样品作为整体是否归类为阳性。第一，可在个体细胞内测量PD-L1、CD8和/或IFN-γ的水平。在一些实施方式中，对这些标记中的一或多个呈阳性的细胞是与对照细胞或参照值相比具有较高标记物水平的细胞。例如，在一些实施方式中，给定细胞中的高PD-L1水平是高于患者相应非癌性组织中的PD-L1水平的水平。作为另一个实施例，在一些实施方式中，给定细胞中的高CD8或IFN-γ水平是在TIL中通常所见的该蛋白的水平。第二，也可测量对PD-L1、CD8和/或IFN-γ呈阳性的细胞在样品中的百分比。在一些实施方式中(单个细胞不一定表达所有三种标记物)，三阳性样品是高百分比(例如高于参照值或高于对照样品)的对这些标记物呈阳性的细胞的样品。

在其他实施方式中，可测量样品中PD-L1、CD8和/或IFN-γ的总体水平。在此情形中，样品中CD8或IFN-γ的高水平可为在经TIL浸润的肿瘤中通常所见的该蛋白的水平。类似地，PD-L1的高水平可为肿瘤样品、例如肿瘤微环境中通常所见的该蛋白的水平。

对PD-L1/CD8/IFN-γ呈三阳性的患者亚组的鉴别显示可能对PD-1抗体疗法反应的患者的某些亚群。例如，许多IM-TN(免疫调节性，三阴性)乳腺癌患者对PD-L1/CD8/IFN-γ呈三阳性。IM-TN乳腺癌阐述于例如Brian D.Lehmann等人，“Identification of humantriple-negative breast cancer subtypes and preclinical models for selectionof targeted therapies”,J Clin Invest.2011年7月1日；121(7):2750-2767中。三阴性乳腺癌不表达雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)和Her2/neu。这些癌症因为通常对靶向ER、PR和Her2/neu的药剂无反应而难以治疗。三阴性乳腺癌可进一步细分为不同种类，其中一类是免疫调节性。如Lehmann等人所述，IM-TN乳腺癌富含免疫细胞过程中所涉及的因子，例如免疫细胞信号传导(例如，TH1/TH2路径、NK细胞路径、B细胞受体信号传导路径、DC路径和T细胞受体信号传导)、细胞因子信号传导(例如，细胞因子路径、IL-12路径和IL-7路径)、抗原处理和呈递、经由核心免疫信号转导路径的信号传导(例如，NFKB、TNF和JAK/STAT信号传导)、T细胞功能中所涉及的基因、免疫转录、干扰素(IFN)反应和抗原处理中的一或多个。因此，在一些实施方式中，所治疗癌症是对IM-TN乳腺癌的一或多种标记物呈阳性或经测定呈阳性的癌症，这些标记物例如促进以下一或多个因子：免疫细胞信号传导(例如，TH1/TH2路径、NK细胞路径、B细胞受体信号传导路径、DC路径和T细胞受体信号传导)、细胞因子信号传导(例如，细胞因子路径、IL-12路径和IL-7路径)、抗原处理和呈递、经由核心免疫信号转导路径的信号传导(例如，NFKB、TNF和JAK/STAT信号传导)、T细胞功能中所涉及的基因、免疫转录、干扰素(IFN)反应和抗原处理。

使用TAM的患者的选择

本发明是关于表1中所述的抗M-CSF抗体与表2中所述的PD-1抗体的组合用于治疗癌症、诸如三阴性乳腺癌的用途。目前，尚针对此乳腺癌亚型的靶向疗法且唯一治疗选择是化疗。本发明提供通过鉴别在用M-CSF治疗之前可能顺利反应的那些患者使得在癌症群体中使用抗M-CSF抗体分子的益处最大化并使其风险最小化的个性化疗法。在一个实施例中，本发明包括鉴别患有癌症的患者，例如三阴性乳腺癌患者，其肿瘤相关巨噬细胞(TAM)水平指示该患者可能对M-CSF拮抗剂治疗反应。具体而言，患者的TAM水平是通过测量患者样品中的CD163(例如，mRNA或蛋白)水平来测定，且患者的CD163水平进而用于指示患者是否更可能有利地对M-CSF治疗反应。在一个实施例中，若患者的CD163水平相较对照增加，则将该患者鉴别为更可能对M-CSF拮抗剂反应的患者。在另一个实施例中，若患者的CD163水平等于或大于预定CD163水平(“截止值”)，则将该患者鉴别为更可能对M-CSF拮抗剂反应的患者。在获自癌症患者的样品中分析的CD163表达水平可以是例如mRNA表达和/或蛋白。

样品制备

可使用取自患有癌症的对象细胞的任何适宜样品或测试样品。通常，细胞测试样品或组织样品将通过活检或手术切除从患有癌症的对象获得。细胞、组织或体液的样品可通过针抽吸活检来移除。为此，将附接至注射器的细针穿过皮肤插入目标组织中。通常使用超声或计算机断层摄影(CT)成像将针引导至目标区域。在将针插入组织中后，用注射器产生真空，使得可经由针抽吸细胞或体液并收集于注射器中。细胞或组织样品也可通过切口式或核心活检来移除。为此，自目标区域移除组织的锥体、圆柱或极少量组织。通常使用CT成像、超声或内视镜来引导这类活检。更具体而言，可通过切除式活检或手术切除移除整个癌性病灶。在本发明中，测试样品通常是手术切除术部分移除的细胞样品。

例如，组织的测试样品也可储存于诸如RNAlater(Ambion；Austin Tex.)或急冻并储存于-80℃下供以后使用。也可用固定剂、例如甲醛、多聚甲醛或乙酸/乙醇来固定活检组织样品。可将固定的组织样品包埋于蜡(石蜡)或塑料树脂中。可将包埋的组织样品(或冷冻的组织样品)切成薄片。也可从固定的或蜡包埋的组织样品或冷冻的组织样品提取RNA或蛋白。在自患有癌症的对象移除细胞样品或组织样品后，其可使用业内熟知且如下文所述的技术处理以分离RNA或蛋白。

从取自患有癌症的患者的活检提取RNA的示例可包括(例如)硫氰酸胍裂解液后用CsCl离心。来自单细胞的RNA可根据从单细胞制备cDNA库的方法所述来获得。在一个实施方式中，RNA群可富集CD163。富集可通过例如随机六聚体和引物特异性cDNA合成来完成，或通过基于cDNA合成和模板引导的活体外转录的多轮线性扩增来完成。

患有肿瘤或癌症的对象通常将为哺乳动物对象，例如灵长类动物。在一个示例性实施方式中，对象是人类。

TAM的存在可通过检测CD163+的存在来评价

本文所公开的方法尤其采用对CD163水平的测定。CD163水平可预测对象是否更可能对M-CSF拮抗剂反应。在一个实施例中，预测性CD163水平是指高于癌症中CD163表达的中值水平(对照)或大于预定截止值的表达水平。

在一个实施方式中，将CD163蛋白的表达水平与对照或截止值相比较，以选择用M-CSF拮抗剂治疗的患者，例如相较对照CD163表达水平可预测患者可能或不可能对M-CSF拮抗剂(例如H-RX1)反应。在一个实施方式中，选择CD163蛋白表达的表达水平(也称为“TAM密度”)高于10％、15％、20％、30％、40％或更高阈值的患者用于使用M-CSF拮抗剂治疗。CD163的对照水平可与测量CD163表达基本上同时测定或可预先测定。

检测CD163核酸表达

可通过任何可用的方法分析患者生物样品中CD163表达(例如mRNA)的存在。增加的CD163表达水平可用于预测改良的患有癌症(例如TBNC)的患者对M-CSF拮抗的反应。

检测CD163蛋白

在一些情形中，CD163的存在可通过分析CD163多肽产物来测定。多肽产物的检测可使用业内任意已知的方法来实施，包括但不限于免疫细胞化学染色、ELISA、流式细胞术、西方墨点(Western blot)、分光光度法、HPLC和质谱。

对照

如本文所用，用于比较的对照可由本领域技术人员来确定。在一个实施例中，对照是通过选择具有界定截止值的TAM密度值的对照样品来确定。例如，该值可为在例如其中个体的CD163(或TAM密度)小于15％的测试样品或其中个体的CD163(或TAM密度)等于或大于15％CD163(或TAM密度)的测试样品之间区别的值；或在其中个体可能受益于M-CSF拮抗剂疗法的那些测试样品与可能不受益的那些测试样品之间区别的值。

在另一个实施例中，对照可为来自健康志愿者的样品或来自已知具有低CD163表达(mRNA或蛋白)的癌症患者的样品，并在所测定CD163值大于那些对照时选择患者进行治疗。

在另一个实施例中，对照值可为根据作为数学模型基础的历史对照而预定的值。也称为分类器的模型可通过使用来自癌症患者集合(例如，TBNC)的表达水平(例如，mRNA或蛋白)来构建。数学模型可为例如任何种类预测方法或其变化形式，且可使用衍生对照值作为阈值。若表达水平等于或高于阈值，则患者更可能对使用M-CSF拮抗剂的治疗反应。在一个实施方式中，选择CD163表达水平等于或大于阈值(例如可为15％、20％、30％、40％或更高)的个体。

患有癌症的患者的选择和治疗

CD163核酸表达或CD163蛋白的水平容许临床医师为癌症患者(例如TBNC、胰腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、鼻咽癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、间皮瘤、肾细胞癌或神经胶母细胞瘤)提供个人化疗法，即其容许确定是否用M-CSF拮抗剂选择性治疗患者。这样的话，在整个罹患癌症的患者群体中，临床医师可使M-CSF拮抗的益处最大化并使其风险最小化。下文更详细地阐述本发明的多个方面。其他定义展示于整篇说明书中。

实施例1

一项Ib期临床试验用每3周一次经由i.v.输注分别经30分钟和1小时施用的MCS110和PDR001实施。药物将以两种抗体之间至少30min的间隔分开施用。临床上有指征时每一抗体的输注可延长至长达2小时。以下给药方案用于下表10中。

表5示例给药方案

两种研究药物可使用相同的i.v.进入位点来输注。所有患者遵循相同的施用顺序，即应首先输注PDR001。若在施用PDR001后发生输注反应，则后续MCS110输注延迟，直至基于研究者的临床决定患者可安全接受MCS110为止。若临床上有指征，则PDR001与MCS110输注之间的延迟可长达4小时。

研究中药物的计划剂量可延迟长达7天，以从之前的AE或漏诊恢复。若由于AE未解决，研究中药物的计划剂量延迟超过7天，则应略过该次施用并在下一次计划剂量以较低的剂量水平(若符合DLT的准则)恢复治疗。评价时间表将相应改变。剂量延迟涉及所有研究中药物：MCS110和PDR001二者的组合治疗以及MCS110或PDR001的单一药剂治疗。MCS110研究药物的剂量是从个别对象的体重来计算，体重如在筛选就诊和后续施用前就诊时所测量。

起始剂量

MCS110的起始剂量和方案将为每3周3mg/kg iv，对应于在PVNS患者中施用单一药剂剂量(在研究NCT01643850、CMCS110X2201中每4周10mg/kg)的约40％和在TNBC中与卡铂/吉西他滨组合施用剂量(在研究NCT02435680、CMCSZ2201中每3周10mg/kg)的30％。

10mg/kg的MCS110剂量在PVNS患者中耐受良好，且在PVNS患者中显示显著肿瘤减小。在健康志愿者中3mg/kg MCS110的单一剂量后，观察到CSF-1已经MCS110饱和约21天(CMCSX2101)。在HV研究中实施的药效学分析指示，循环生物标记物反应应接近等于或高于5mg/kg剂量的最大值且低于3mg/kg剂量的最小值。考虑到潜在重叠毒性的风险，选择3mg/kgMCS110的剂量作为研究的剂量递增部分的起始剂量。

PDR001的起始剂量和方案是每3周100mg iv。已在正在进行的NCT02404441、CPRD001X2101研究中测试高达每2周10mg/kg剂量的PDR001。尚未测定MTD且计划推荐II期剂量(RP2D)为每3周给予300mg(3.75mg/kg)或每4周给予400mg(5mg/kg)。所建议的两个RP2D可达成高于c评估为0.42μg/mL的PDR001活体外/离体功效EC50约77倍的稳定平均C_谷(Cthrough)浓度。在100mg Q3W起始剂量下的PDR001暴露在无DLT的CPDR001X2101研究中观察到的那些范围内。预期PDR001在每3周100mg或更高的剂量下可显示抗肿瘤活性。

表6

潜在毒性

这是首个评估MCS110和PDR001的组合的研究。潜在重叠毒性包括免疫诱导(PDR001)或肝酶消除减少(MCS110)引起的肝酶升高、免疫介导的不良事件频率增加或加重以及皮肤毒性。

剂量限制性毒性(DLT)定义为被评价为与疾病、疾病进展、间发病或合并用药无关的CTCAE等级≥3的不良事件或异常实验室值，其在使用组合治疗的最初两个治疗周期内发生且符合表XX中包括的任何准则。

来自免疫-免疫组合研究新领域的新数据表明，一些免疫相关的不良事件具有延长的潜伏期。因此，此试验中组合队列的DLT窗延长至两个周期或42天的长度。

国家癌症研究院常见不良事件评价准则(NCI CTCAE)4.03版将用于所有评级。出于剂量递增决定的目的，将在Bayesian逻辑式回归模型(BLRM)中考虑并包括DLT。

对于不耐受方案指定的给药时间表的患者，允许调整剂量以使患者可继续进行研究治疗，但若患者经历DLT，则仅容许在最初两个周期期间修改剂量。需要应用以下准则：

若患者经历达到如6.2.4章节中概述的DLT标准的AE，则应退出治疗。针对与研究用药相关的毒性的剂量修改归纳于表6-44中。在毒性消退至1级或患者的基线值后，若根据irRC无疾病进展的证据，则患者可以低于在该时刻(按相同给药时间表)所测试的剂量水平恢复研究治疗。在发生DLT后恢复治疗的决定是取决于研究者的决定。在符合DLT准则的AE后，若患者恢复研究治疗，则其应使用下一较低剂量水平。不允许剂量降低至低于MCS1100.3mg/kg/PDR001 100mg Q3W的剂量。若由于研究治疗相关的毒性而不得不略过超过2次连续剂量，则患者必须中断研究除非在研究者看来患者经历临床益处。在此情形中，可以诺华(Novartis)和研究者同意的剂量继续治疗。

若中断研究药物中的一个，则若研究者认为对患者最有利，患者可继续使用其余研究药物。其余研究药物的剂量必须经诺华和研究者同意。

对于腹泻/结肠炎、肾、肺、内分泌病、肝和皮肤AE，首先排除非炎性病因。若认为是炎性病因，则根据附录14.3：用于可疑毒性的推荐管理算法(Appendix 14.3:Recommendedmanagement algorithms for suspected toxicities)，其纳入皮质类固醇疗法。

剂量限制性毒性的标准

表7

表8针对药物相关毒性的剂量修改

实施例2

在Ib期部分后，若新PK、PD和安全性数据指示MCS110的固定剂量给药策略适当，则可在研究的II期部分中实践固定剂量给药策略。在此研究的Ib期部分期间获得的PK数据将与来自其他MCS110临床研究的PK数据结合以评价固定剂量给药和基于体重给药，且可确定用于此研究的II期部分的固定剂量。

实施例3

来自TCGA数据库的Rnaseq数据显示M2巨噬细胞的替代标记物CD163在由最高PD1表达水平定义的患者群体内的高表达水平。对各种肿瘤类型进行分析以测定CD163和PD1在各种肿瘤类型中的表达。使用来自TCGA数据库和内部数据库在各种癌症(包括三阴性乳腺癌(TNBC)、皮肤、卵巢、胰腺癌、神经胶母细胞瘤(GBM)、肺癌、肾细胞癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、间皮瘤和鼻咽癌(NPC))中的RNAseq，观察与CD163相关的PD-1的表达水平。图a通过将PD-1表达从高至低分类来显示PD-1表达水平与CD163相关的联系。结果显示，高PD-1表达通常与高CD163水平密切相关。

实施例4

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:1中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:2中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1BAP049-克隆-E抗体分子(具有包括SEQID NO:11中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:12中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于已经历标准疗法的患有晚期三阴性乳腺癌(TNBC)的患者。肿瘤反应是根据实体肿瘤中的反应评估准则(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)New Guidelines to Evaluate theResponse to Treatment in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate the Response in Solid Tumors,Journalof National Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

实施例5

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:1中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:2中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1BAP049-克隆-E抗体分子(具有包括SEQID NO:11中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:12中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于患有胰腺癌的患者。肿瘤反应将根据实体肿瘤中的反应评估准则(RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)New Guidelines to Evaluate theResponse to Treatment in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate the Response in Solid Tumors,Journalof National Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

实施例6

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:1中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:2中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1BAP049-克隆-E抗体分子(具有包括SEQID NO:11中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:12中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于患有子宫内膜癌的患者。肿瘤反应将根据实体肿瘤中的反应评估准则(RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)New Guidelines to Evaluate theResponse to Treatment in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate the Response in Solid Tumors,Journalof National Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

实施例7

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:1中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:2中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1克隆E抗体分子(具有包括SEQ ID NO:11中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:12中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于已经历标准且对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性的患有黑色素瘤的患者。肿瘤反应将根据实体肿瘤中的反应评估准则(RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)NewGuidelines to Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors,Journal ofNational Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate theResponse in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

实施例8

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:1中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:2中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1BAP049-克隆-E抗体分子(具有包括SEQID NO:11中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:12中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于已经历标准疗法且对于PD-1或PD-L1疗法难治或产生耐药性的患有晚期三阴性乳腺癌(TNBC)的患者。肿瘤反应是根据实体肿瘤中的反应评估准则(RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)New Guidelines to Evaluate the Response toTreatment in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate the Response in Solid Tumors,Journal ofNational Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

实施例9

M-CSF抗体H-RX1(具有包括SEQ ID NO:2中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQID NO:4中所述氨基酸的轻链可变区的抗体)与PD-1BAP049-克隆-E抗体分子(具有包括SEQID NO:37中所述氨基酸的重链可变区和包括SEQ ID NO:47中所述氨基酸的轻链可变区的抗体分子)组合施用于患有非小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌中的任一个或两者的患者。肿瘤反应将根据实体肿瘤中的反应评估准则(RECIST)v1.1局部测定(Therasse等人，(2000)NewGuidelines to Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors,Journal ofNational Cancer Institute，第92卷；205-16)；New Guidelines to Evaluate theResponse in Solid Tumors,Journal of National Cancer Institute，第92卷；205-16和经修订RECIST准则(1.1版)(Eisenhauer等人2009)European Journal of Cancer；45:228-247。

本文所提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献的全部内容都以引用方式并入本文。根据说明书和附图以及权利要求书，本发明的其他特征、目的和优势是明显的。

序列表

<110> M-L·夫杰尔斯考格(FJAELLSKOG, MARIE-LOUISE)

J·卡梅伦(CAMERON, JOHN SCOTT)

Z·曹(CAO, ZHU ALEXANDER)

D·希伯勒塔(CIPOLLETTA, DANIELA)

K·马西萨克(MACISAAC, KENZIE DANIEL)

<120> 用于治疗癌症的新颖组合

<130> PAT057000

<140>

<141>

<150> 62/352,637

<151> 2016-06-21

<150> 62/198,384

<151> 2015-07-29

<160> 48

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Phe Asp Tyr Ala His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 2

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 2

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Asp Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn Ser Trp Pro Thr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 3

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn

1 5

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 4

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<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 5

Phe Asp Tyr Ala His Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 6

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 7

Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser

1 5

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<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 8

Gln Gln Ile Asn Ser Trp Pro Thr Thr

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 9

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

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Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn

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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

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Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

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Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

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Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 10

Met Val Ser Thr Pro Gln Phe Leu Val Phe Leu Leu Phe Trp Ile Pro

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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<210> 11

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 12

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

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100 105 110

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 13

Thr Tyr Trp Met His

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 14

Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 15

Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 16

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 17

<211> 7

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<213> 人工序列

<220>

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<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 17

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

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<212> PRT

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<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 18

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

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<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

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Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

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<210> 20

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 20

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

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Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

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Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

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Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

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<211> 5

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<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 21

Thr Tyr Trp Met His

1 5

<210> 22

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 22

Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 23

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 23

Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr

1 5

<210> 24

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

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<210> 25

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

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Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

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Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe

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Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

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<210> 26

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 26

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 27

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 28

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 29

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 29

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Lys

<210> 30

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成多肽"

<400> 30

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

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Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

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<210> 31

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 31

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Val Gln Ala

<210> 32

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 32

Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Thr Arg Cys

20

<210> 33

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 33

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Val Gln Ala

<210> 34

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 34

Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Thr Arg Cys

20

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<212> PRT

<213> 智人

<400> 35

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100 105 110

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115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 36

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 36

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 37

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人

<400> 37

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

325

<210> 38

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 38

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

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100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 39

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 39

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

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65 70 75 80

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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

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180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

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Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 40

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 40

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

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Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

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245 250 255

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275 280 285

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305 310 315 320

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325 330

<210> 41

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 41

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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

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165 170 175

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180 185 190

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210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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<210> 42

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 42

Arg Phe Arg Asp Asn Thr Pro Asn

1 5

<210> 43

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 43

Arg Phe Arg Asp Asn Thr Ala Asn

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 44

Ile Thr Phe Glu Phe Val Asp Gln Glu

1 5

<210> 45

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 45

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 46

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成肽"

<400> 46

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 47

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成引物"

<400> 47

gctgacagac taacagactg ttcc 24

<210> 48

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注="人工序列说明：合成引物"

<400> 48

caaatgtggt atggctga 18

Claims

1.一种药物组合，其包含：

i)能结合至人类程序性死亡-1(PD-1)的经分离抗体分子，其包含包括如表2中所述的BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)，和包括如表2中所述的BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)；和

ii)能结合至巨噬细胞菌落刺激因子1(M-CSF)的经分离抗体分子，其包含(a)包括SEQID NO:3的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:4的VHCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:5的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包括SEQ ID NO:6的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:7的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:8的VLCDR3氨基酸序列的VL。

2.如权利要求1的药物组合，其中权利要求1所述的PD-1抗体包含：

(a)包含SEQ ID NO:13的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:14的VHCDR2氨基酸序列和SEQID NO:15的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:16的VLCDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:17的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:18的VLCDR3氨基酸序列的VL；

(b)包含选自SEQ ID NO:21的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:22的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:23的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:26的VLCDR1氨基酸序列、SEQID NO:27的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:28的VLCDR3氨基酸序列的VL；

(c)包含SEQ ID NO:31的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:32的VHCDR2氨基酸序列和SEQID NO:33的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:41的VLCDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:42的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:43的VLCDR3氨基酸序列的VL；或

(d)包含SEQ ID NO:34的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:35的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:36的VHCDR3氨基酸序列的VH；和包含SEQ ID NO:44的VLCDR1氨基酸序列、SEQID NO:45的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:46的VLCDR3氨基酸序列的VL。

3.如权利要求1的药物组合，其包含分开或一起的所述PD-1抗体分子或所述M-CSF抗体分子。

4.如权利要求1或2的药物组合，用作药物，其中所述PD-1抗体分子和所述M-CSF抗体分子同时独立施用或在时间间隔内分开施用。

5.如权利要求5的药物组合，其中时间间隔使组合伴侣具有活性。

6.如权利要求1至5中任一项的药物组合，其包含用于治疗三阴性乳腺癌的治疗有效量。

7.如权利要求1至5中任一项的药物组合，其包含用于治疗卵巢癌的治疗有效量。

8.如权利要求1至5中任一项的药物组合，其包含用于治疗黑色素瘤的治疗有效量。

9.如权利要求1至5中任一项的药物组合，其包含用于治疗胰腺癌的治疗有效量。

10.如权利要求1至5中任一项的药物组合，其包含用于治疗已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症的治疗有效量。

11.如权利要求10的方法，其中所述癌症是TNBC或黑色素瘤。

12.PD-1与M-CSF抑制剂组合的用途，其用于制造用于治疗三阴性乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、胰腺癌或已对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治的癌症的药剂。

13.一种治疗乳腺癌的方法，所述方法包含向需要的对象施用有效量的如权利要求1至5中任一项的组合。

14.一种治疗卵巢癌的方法，所述方法包含向需要的对象施用有效量的如权利要求1至5中任一项的组合。

15.一种治疗胰腺癌的方法，所述方法包含向需要的对象施用有效量的如权利要求1至5中任一项的组合。

16.一种治疗癌症的方法，所述方法包含向需要的对象施用有效量的如权利要求1至5中任一项的组合，其中所述癌症对PD-1或PD-L1疗法产生耐药性或难治。

17.如权利要求16的方法，其中所述癌症是TNBC。

18.如权利要求16的方法，其中所述癌症是黑色素瘤。

19.如权利要求16至18的方法，其中所述PD-1抗体分子和所述M-CSF抗体同时或依序施用。

20.如权利要求16至18的方法，所述方法进一步包含施用化疗剂。