CN109790223A

CN109790223A - 用于治疗癌症的抗siglec-7抗体

Info

Publication number: CN109790223A
Application number: CN201780060307.2A
Authority: CN
Inventors: 克里斯托弗·贝炳东; 沃特·科沃尔; 内纳德·托马斯维克; 苏济·埃尔巴德; 肯尼思·鲁尔森
Original assignee: Arakos Co Ltd
Current assignee: Arakos Co Ltd; Allakos Inc
Priority date: 2016-08-05
Filing date: 2017-08-04
Publication date: 2019-05-21
Also published as: JP2019526622A; IL264674A; AU2017307616A1; US20190194323A1; WO2018027203A1; EP3494142A4; BR112019002331A2; SG11201901020RA; CA3032437A1; IL264674B2; IL264674B1; MX2019001471A; US11773162B2; EA201990296A1; JP7137563B2; KR20190035863A; EP3494142A1

Abstract

本发明提供了使用抗Siglec‑7抗体治疗癌症的方法和组合物。

Description

用于治疗癌症的抗SIGLEC-7抗体

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年8月5日提交的美国临时申请第62/371,680号的优先权权益，其通过引用并入本文。

发明背景

Siglec-7，也称为p75或AIRM，是免疫球蛋白(Ig)超家族的唾液酸结合凝集素(Siglec)的成员。Siglec受体结合含有唾液酸的聚糖，但是它们对唾液残基(sialicresidues)的键合区域化学(the linkage regiochemistry)和空间分布的识别不同。家族成员也具有不同的表达模式。已经在自然杀伤(NK)细胞上观察到Siglec-7的高水平表达。还在亚群CD8+T细胞上观察到表达。还观察到Siglec-7对NK细胞介导的肿瘤清除具有抑制作用(Jandus等人,J.Clin.Invest.124:1810-20,2014)；Hudak等人,Nat.Chem.Biol.10:69-77,2014)。

大范围的人类恶性肿瘤过度表达Siglec-7配体唾液酸聚糖(sialic residues)，其包括作为Siglec-7配体的唾液酸聚糖。还观察到Siglec-7对NK细胞介导的肿瘤清除具有抑制作用(Jandus等人,J.Clin.Invest.124:1810-20,2014)。

公开的方面的简要概述

本公开部分基于以下发现：升高水平的肿瘤浸润性CD8+T细胞表达Siglec-7；并且，阻断Siglec-7-配体结合相互作用和/或降低在CD8+细胞上表达的Siglec-7水平的抗体增加了肿瘤细胞的杀伤。因此，本公开提供了抗体和此类抗体用于抑制肿瘤生长的用途。

在一方面，本公开提供了抑制肿瘤细胞增殖的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用治疗有效量的抗Siglec-7抗体，其中所述患者具有包含升高水平的表达Siglec-7的CD8+浸润性T细胞的原发性肿瘤或转移性病灶，并且，其中所述肿瘤或转移性病灶包含表达唾液酸化的Siglec-7配体的癌细胞。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有50pM或更小的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体以小于约4000pM的IC₅₀阻断配体结合，或以小于约3500pM的IC₅₀阻断配体结合，并且任选地可具有50pM或更小的K_D。在可以与前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约70pM或小于约25pM的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约70pM或大于约25pM的内化活性；并且不阻断配体结合。

在一些实施方案中，用于所述方法中的所述抗Siglec-7抗体阻断配体与Siglec-7的结合，并且与由以登录号ICLC PD99003保藏的杂交瘤产生的抗体QA79竞争结合Siglec-7，但不与抗体Z176或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含如在图1和图2中被命名为2G12的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:2的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:16的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:16的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗体具有如图1和图2中被命名为抗体2G12的六个CDR。

在一些实施方案中，用于所述方法中的所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体S7.7竞争结合Siglec-7，但不与抗体QA79或抗体Z176竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含如图1和图2中被命名为8A2的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:4的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:4的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:4的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:18的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有在图1和图2中被命名为8A2的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，用于所述方法的所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体Z176竞争结合Siglec-7，但不与QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体与包含被命名为5D1的抗体的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:17的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗体具有在图1和图2中被命名为5D1的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，用于所述方法中的所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且不与抗体Z176、QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含在图1和图2中被命名为4B12的抗体的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的CDR3的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有在图1和图2中被命名为4B12的抗体的六个CDR。

在任何前述实施方案中，所述抗体可呈单价形式或可呈Fv、Fab、Fab'、scFv、双抗体或F(ab')₂片段。在一些实施方案中，此类抗体是PEG化的。

在一些实施方案中，施用所述抗体的患者具有实体瘤，诸如黑色素瘤、肺癌或结肠直肠癌。

在另一方面，本公开提供了抗Siglec-7抗体，其阻断配体与Siglec-7的结合，并且与由以登录号ICLC PD99003保藏的杂交瘤产生的抗体QA79竞争结合Siglec-7，但不与抗体Z176或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含如在图1和图2中被命名为2G12的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗体具有如在图1和图2中被命名为抗体2G12的六个CDR。

在另一方面，本公开提供了抗Siglec-7抗体，其具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体S7.7竞争结合Siglec-7，但不与抗体QA79或抗体Z176竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含如图1和图2中被命名为8A2的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:4、SEQID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQID NO:107的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有在图1和图2中被命名为8A2的抗体的六个CDR。

在又一方面，本公开提供了抗Siglec-7抗体，其具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体Z176竞争结合Siglec-7，但不与QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体与包含被命名为5D1的抗体的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗体具有在图1和图2中被命名为5D1的抗体的六个CDR。

在另一方面，本公开提供了抗Siglec-7抗体，其具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且不与抗体Z176、QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体与包含在图1和图2中被命名为4B12的抗体的V_H和V_L的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:11的重链可变区序列的CDR3的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VH区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的VL区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有在图1和图2中被命名为4B12的抗体的六个CDR。

本公开另外提供了抗Siglec-7抗体，其具有包含图1中所示的V_H区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区；或抗Siglec-7抗体，其具有包含图1中所示的重链可变区序列之一的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

本公开还提供了抗Siglec-7抗体，其具有包含图2中所示的V_L区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区；或抗Siglec-7抗体，其具有包含图2中所示的轻链可变区序列之一的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

在一些方面，本发明提供了抗Siglec-7抗体，其包含V_H区和V_L区，所述V_H区包含图1中所示的V_H区序列的至少一个CDR或至少两个CDR，所述V_L区包含图2中所示的V_L区序列的至少一个CDR或至少两个CDR，其中图2中的V_L序列具有与图1中的V_H序列相同的抗体名称。

在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-7抗体包含V_H区和V_L区，所述V_H区包含图1中所示的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3，所述V_L区包含图2中所示的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3，其中图2中的V_L序列具有与图1中的VH序列相同的抗体名称。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其与具有SEQ ID NO:1的可变重链序列和SEQ ID NO:15的可变轻链序列的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代；或包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的CDR3。在一些实施方案中，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。在一些实施方案中，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1，和具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2。在可与该段落中前述实施方案中任一个组合的一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代；或包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的CDR3。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1和具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57、58、59、60或61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ ID NO:69、70、71、72、73、74、75、76、77或78的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:43、45、46、47、48、49、50、51、54、55、57和58的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:69的CDR1、CDR2和CDR3序列。另外，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:53、54、51、55、58和59的重链可变区序列中任一项所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:78的CDR1、CDR2和CDR3序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含：

a)含如SEQ ID NO:43所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(b)含如SEQ ID NO:45所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(c)含如SEQ ID NO:46所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(d)含如SEQ ID NO:47所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(e)含如SEQ ID NO:48所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(f)含如SEQ ID NO:49所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(g)含如SEQ ID NO:50所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(h)含如SEQ ID NO:51所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(i)如重链可变区序列SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(j)含如SEQ ID NO:55所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(k)含如SEQ ID NO:57所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；或

(l)含如SEQ ID NO:58所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含：

a)含如SEQ ID NO:53所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(b)含如SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(c)含如SEQ ID NO:51所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(d)含如SEQ ID NO:55所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(e)含如SEQ ID NO:58所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；或

(f)含如SEQ ID NO:59所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含：

a)含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(c)含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(d)含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(e)含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(f)含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(g)含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(h)含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(i)含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(j)含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(k)含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；或

(l)含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在另一方面，本文提供了抗Siglec-7抗体，其包含：

a)含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(c)含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(d)含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(e)含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；或

(f)含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区，和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有配体阻断活性；和/或当作为单价Fab测量时，具有小于约100pM的K_D；和/或具有小于约100pM的内化活性。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有小于约75pM的K_D。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有约70pM或更小的内化活性。在一些实施方案中，所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

在一些实施方案中，如在前述段落中所描述的本公开的抗Siglec-7抗体呈单价形式或抗体片段形式，诸如Fv、Fab、Fab'、scFv、双抗体或F(ab')₂片段。

在一些实施方案中，如在前述段落中所描述的本公开的抗Siglec-7抗体是多价形式或二价形式。在一些实施方案中，所述抗体是IgG，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

在另一方面，本发明提供了包含前述实施方案中任一个的抗体的双特异性或多特异性抗体。

在另一方面，本发明提供了抑制肿瘤细胞增殖的方法，所述方法包括向具有表达唾液酸化的Siglec-7配体的肿瘤的患者施用治疗有效量的在前述段落中所描述的抗体中的任一抗体，或包含此类抗体的双特异性或多特异性抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤以高于在相应细胞类型的正常细胞中检测到的量的量表达唾液酸化的Siglec-7配体。在一些实施方案中，所述肿瘤包含升高水平的表达Siglec-7的CD8+浸润性T细胞。

在另一方面，本发明提供了鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的患者的方法，所述方法包括确定已经浸润肿瘤或转移性病灶的在细胞表面上表达可检测的Siglec-7的CD8+T细胞的比例。在一些实施方案中，作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的肿瘤患者，在肿瘤或转移性病灶中具有至少10％或至少20％或更多的在细胞表面上表达可检测的Siglec-7的肿瘤浸润性CD8+T细胞。在一些实施方案中，使用抗Siglec-7抗体确定Siglec-7的表达水平。在一些实施方案中，通过流式细胞术或免疫组织化学确定表达水平。

本公开另外提供了鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的肿瘤患者的方法，所述方法包括确定肿瘤或转移性病灶中表达可检测的Siglec-7的CD8+浸润性T细胞的比例，其中所述肿瘤或转移性病灶中至少10％或至少20％的浸润性CD8+T表达Siglec-7的患者作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者。在一些实施方案中，使用抗Siglec-7抗体确定Siglec-7的表达水平。在一些实施方案中，通过流式细胞术或免疫组织化学确定表达水平。

在另一方面，本公开提供了抑制肿瘤细胞增殖的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用治疗有效量的抗Siglec-7抗体，其中所述患者具有包含升高水平的表达Siglec-7的CD8+浸润性-T细胞的原发性肿瘤或转移性病灶；并且，其中所述肿瘤或转移性病灶包含表达唾液酸化的Siglec-7配体(例如以比正常组织高的水平表达唾液酸化的Siglec-7配体)癌细胞。在一些实施方案中，当作为单价Fab测量时，所述抗Siglec-7抗体具有70pM或更小的K_D。

在另一方面，本公开还提供了如本文所述的抗Siglec-7抗体在治疗如本文所述的癌症的方法中的用途。

附图简述

图1提供了本发明的抗Siglec-7抗体的说明性重链可变区序列。如通过Kabat所定义的CDR加下划线。

图2提供了本发明的抗Siglec-7抗体的说明性重链可变区序列。如通过Chothia所定义的CDR加下划线。

图3提供了本发明的抗Siglec-7抗体的说明性轻链可变区序列。如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线。

图4提供了说明性数据，其显示在新鲜原发性肿瘤中高百分比的肿瘤浸润性CD8+细胞上检测到Siglec-7。

图5提供了说明从肿瘤亚群中分离的CD8+T细胞具有高水平的Siglec-7的数据。

图6提供了说明Siglec-7配体在肿瘤亚群上表达的数据。

图7提供了显示与抗体Z176、S7.7或QA79相比，具有改善的K_D值的本公开的抗Siglec-7抗体的数据。

图8提供了显示与抗体Z176、S7.7或QA79相比，具有改善的配体阻断活性的本公开的抗Siglec-7抗体的数据。

图9提供了显示与抗体Z176、S7.7或QA79相比，具有改善的内化活性的本公开的抗Siglec-7抗体的数据。

图10提供了说明使用本公开的抗体在人NK细胞上快速浓度依赖性、抗体诱导的Siglec-7内化的数据。

图11提供了说明本公开的抗体的非配体阻断、内化活性的数据。

公开的方面的详细描述

术语

如本文所用的，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非内容另有明确规定。因此，例如，提及“抗体”任选地包括两种或更多种此类分子的组合等。

如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围，例如±20％、±10％或±5％，在所引用值的预期含义内。

Siglec-7，也称为p75或AIRM，是免疫球蛋白(Ig)超家族的唾液酸结合凝集素(Siglec)的成员。Siglec受体结合含有唾液酸的聚糖，但是它们对特定碳水化合物结构的识别不同。以登录号NP_055200.1可获得的人Siglec-7蛋白序列是

术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(诸如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中产生的可能的变体抗体(此类变体通常以少量存在)，包含群体的个体抗体是相同的和/或结合相同的表位。。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法。

“抗体片段”是指完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分并且结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(诸如scFv分子)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

“结合与参考抗体结合的表位相同的表位的抗体”是指在竞争测定中阻断参考抗体与其抗原结合50％或更多的抗体，并且相反地，在竞争测定中参考抗体阻断所述抗体与其抗原结合50％或更多。本文提供了示例性竞争测定。

如本文所用的，“V区”是指包含框架1、CDR1、框架2、CDR2和框架3、包括CDR3和框架4的区段的抗体可变区结构域，所述区段被添加到V区段是B细胞分化过程中重链和轻链V区基因重排的结果。

如本文所用的，“互补决定区(CDR)”是指每条链中三个高变区(HVR)，其中断由轻链可变区和重链可变区建立的四个“框架”区。CDR是结合抗原表位的主要贡献者。每条链的CDR被称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始依序编号，并且还通过其中特定CDR所在的链鉴定。因此，VH CDR3位于其中发现它的抗体的重链的可变结构域中，而VL CDR1是来自其中发现它的抗体的轻链的可变结构域的CDR1。术语“CDR”可与“HVR”互换使用。

CDR和框架区的氨基酸序列可以使用本领域中各种公知的定义来确定，例如Kabat、Chothia、国际免疫遗传学数据库(international ImMunoGeneTics database，IMGT)和AbM(参见，如，Johnson等人，同上；Chothia&Lesk,1987,Canonical structuresfor the hypervariable regions of immunoglobulins.J.Mol.Biol.196,901-917；Chothia C.等人,1989,Conformations of immunoglobulin hypervariableregions.Nature342,877-883；Chothia C.等人,1992,structural repertoire of thehuman VH segments J.Mol.Biol.227,799-817；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol1997,273(4))。抗原结合位点的定义也在以下中被描述：Ruiz等人,IMGT,国际免疫遗传学数据库。Nucleic Acids Res.,28,219–221(2000)；和Lefranc,M.-P.IMGT,国际免疫遗传学数据库。Nucleic Acids Res.1月1日；29(1):207-9(2001)；MacCallum等人,Antibody-antigeninteractions:Contact analysis and binding site topography,J.Mol.Biol.,262(5),732-745(1996)；和Martin等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA,86,9268–9272(1989)；Martin等人,Methods Enzymol.,203,121–153,(1991)；Pedersen等人,Immunomethods,1,126,(1992)；和Rees等人,In Sternberg M.J.E.(编辑),Protein StructurePrediction.Oxford University Press,Oxford,141–1721996)。提及如通过Kabat编号确定的CDR例如是基于Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版，Public Health Service,National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。Chothia CDR如通过Chothia(参见，如Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))所定义的来确定。

“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上抗体所结合的位点。表位可以由连续氨基酸或通过蛋白的三级折叠而并置的不连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时被保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丧失。表位通常包括呈独特空间构象的至少3个，并且更通常至少5个或8-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如x射线晶体学和二维核磁共振。参见，例如Epitope Mapping Protocolsin Methods in Molecular Biology,第66卷，Glenn E.Morris,编辑(1996)。

如本文所用的，“嵌合抗体”是指免疫球蛋白分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，以便抗原结合位点(可变区)连接至不同或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区，或赋予嵌合抗体新的性质的完全不同的分子(例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等)；或(b)可变区或其部分被用具有不同或改变的抗原特异性的可变区或其部分改变、替换或交换；或被用来自另一物种或来自另一抗体类别或亚类的相应序列改变、替换或交换。

“Fc区”是指不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域的抗体的恒定区。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域的N末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可包括J链。对于IgG，Fc包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及Cγ1和Cγ之间的铰链。在本领域中应理解，Fc区的边界可以变化，然而，人IgG重链Fc区通常被定义为包含其羧基末端的残基C226或P230(使用根据如Kabat等人(1991,NIH Publication 91-3242,National TechnicalInformation Service,Springfield,Va.)中的EU索引的编号)。术语“Fc区”可以是指分离的该区域或在抗体或抗体片段的情况下的该区域。“Fc区”包括Fc区的天然存在的等位基因变体以及调节效应子功能的修饰。Fc区还包括不会导致生物功能改变的变体。例如，可以从免疫球蛋白的Fc区的N-末端或C-末端缺失一个或多个氨基酸，而基本上不丧失生物学功能。可以根据本领域已知的一般规则选择此类变体，以便对活性具有最小的影响(参见，例如，Bowie等人,Science247:306-1310,1990)。例如，对于IgG4抗体，可以引入单个氨基酸取代(根据Kabat编号的S228P；被命名为IgG4Pro)以消除在重组IgG4抗体中观察到的异质性(参见，例如，Angal等人,Mol Immunol30:105-108,1993)。

缩写为(K_D)的术语“平衡解离常数”是指解离速率常数(k_d，时间^-1)除以缔合速率常数(k_a，时间^-1M^-1)。可以使用任何方法测量平衡解离常数。因此，在一些实施方案中，如在37℃下通过使用生物传感器系统(诸如系统)进行的表面等离子体共振分析所确定的，本公开的抗体具有小于约50nM，通常小于约25nM或小于10nM，例如小于约5nM或小于约1nM并且通常小于约10nM的K_D。在一些实施方案中，当作为二价抗体测量时，本公开的抗体具有小于5×10^-5M、小于10^-5M、小于5×10^-6M、小于10^-6M、小于5×10^-7M、小于10^-7M、小于5×10^-8M、小于10^-8M、小于5×10^-9M、小于10^-9M、小于5×10^-10M、小于10^-10M、小于5×10^-11M、小于10^-11M、小于5×10^-12M、小于10^-12M、小于5×10^-13M、小于10^-13M、小于5×10^-14M、小于10^-14M、小于5×10^-15M或小于10^-15M或更低的K_D。在本发明的上下文中，“改善的”K_D是指更低的K_D。在一些实施方案中，当作为单价抗体，通常为单价Fab测量时，本公开的抗体具有小于5×10^- ⁵M、小于10^-5M、小于5×10^-6M、小于10^-6M、小于5×10^-7M、小于10^-7M、小于5×10^-8M、小于10^-8M、小于5×10^-9M、小于10^-9M、小于5×10^-10M、小于10^-10M、小于5×10^-11M、小于10^-11M、小于5×10^-12M、小于10^-12M、小于5×10^-13M、小于10^-13M、小于5×10^-14M、小于10^-14M、小于5×10^-15M或小于10^-15M或更低的K_D。在一些实施方案中，当作为单价Fab，在37℃下通过使用生物传感器系统(诸如系统)进行的表面等离子共振分析测量时，本公开的抗Siglec-7抗体具有小于100pM，例如或小于75pM，例如在1至100pM的范围内的K_D。在一些实施方案中，当作为单价Fab，在37℃下通过使用生物传感器系统(诸如系统)进行的表面等离子共振分析测量时，本公开的抗Siglec-7抗体具有小于500pM，例如在1至500pM、或1至200、或1至250pM的范围内的K_D。在本发明的上下文中，“改善的”K_D是指更低的K_D。

如本文所用的术语"单价分子"是指具有一个抗原结合位点的分子，例如Fab。

如本文所用的术语“二价分子”是指具有两个抗原结合位点的分子。在一些实施方案中，本发明的二价分子是二价抗体或其二价片段。在一些实施方案中，本发明的二价分子是二价抗体。在一些实施方案中，本发明的二价分子是IgG。一般而言，单克隆抗体具有二价基本结构。IgG和IgE只具有一个二价单元，而IgA和IgM由多个二价单元(分别为2个和5个)组成，并因此具有更高的效价。这种二价增加了抗体对抗原的亲合力。

如本文所用的术语“单价结合”或“单价结合至”是指一个抗原结合位点与其抗原的结合。

如本文所用的术语“二价结合”或“二价结合至”是指二价分子的两个抗原结合位点与其抗原的结合。优选地，二价分子的两个抗原结合位点具有相同的抗原特异性。

如本文所用的术语“效价”是指抗体对抗原的不同结合位点的数目。单价抗体包含针对抗原的一个结合位点。二价抗体包含针对相同抗原的两个结合位点。

如在本文中所用的术语“亲合力”，在抗体与抗原结合的背景中，是指抗体的多个结合位点的组合结合强度。因此，“二价亲合力”是指两个结合位点的组合强度。

短语“特异性地(或选择性地)结合”至抗原或靶标或“与其特异性(或选择性地)免疫反应”，当涉及蛋白质或肽时，是指抗体与目标抗原或靶标结合的结合反应。在本发明的上下文中，抗体与SIGLEC-7结合的K_D比其对其他抗原的亲和力高至少100倍。

术语“同一的”或“同一性”百分比，在两条或更多条多肽序列的背景中，是指当在比较窗口或指定区上进行最大对应的比较和比对时，在指定区域上相同或具有指定百分比的相同氨基酸残基(例如，至少70％、至少75％、至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性)的两条或更多条序列或子序列。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以各种方法来进行，包括使用公众可获得的计算机软件(诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件)的那些方法。适用于测定序列同一性和序列相似性百分比的算法的的实例为BLAST 2.0算法，其被描述于Altschul等人,Nuc.Acids Res.25:3389-3402(1977)和Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)。因此，可以将BLAST 2.0与所述的默认参数一起使用以确定序列百分比。

如本文所用的“保守性”取代是指氨基酸的取代，使得侧基链的电荷、疏水性和/或大小得以保持。可以彼此取代的氨基酸的说明性组包括(i)带正电荷的氨基酸Lys、Arg和His；(ii)带负电荷的氨基酸Glu和Asp；(iii)芳香族氨基酸Phe、Tyr和Trp；(iv)氮环氨基酸His和Trp；(v)大脂肪族非极性氨基酸Val；Leu和Ile；(vi)微极性氨基酸Met和Cys；(vii)小侧链氨基酸Ser、Thr、Asp、Asn、Gly、Ala、Glu、Gln和Pro；(viii)脂肪族氨基酸Val、Leu、Ile、Met和Cys；和(ix)小羟基氨基酸Ser和Thr。在本段中提及氨基酸的电荷是指在生理pH下的电荷。

抗Siglec-7抗体

与已知的抗Siglec7抗体相比，本发明的抗Siglec-7抗体具有改善的结合特性，诸如改善的内化活性和/或改善的配体阻断活性。在一些实施方案中，本发明的抗体具有内化活性，但不阻断配体结合。

当与已知的抗Siglec 7单克隆抗体(诸如Z176、QA79和S7.7)相比时，本发明的抗体通常具有更低的K_D。在一些实施方案中，本发明的抗体具有小于约100pM、或小于约75pM、或小于约50pM、或小于约40pM或小于约35pM的K_D。在一些实施方案中，本发明的抗体具有约1pM或更小的K_D。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为16H11、3F1、SL9、8A2、5D1或5G10的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，具有改善的K_D的本发明的抗体具有在图3中被命名为16H11、3F1、SL9、8A2、5D1或5G10的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为16H11、3F1、SL9、8A2、5D1或5G10的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，与先前表征的抗Siglec 7单克隆抗体相比，具有增强的阻断配体结合的能力。在本发明的上下文中，阻断配体结合的能力是指50％的Siglec-7不结合配体的单克隆抗体浓度。在一些实施方案中，本发明的抗体在配体阻断活性方面更有效力，即用于配体阻断的抗体的IC₅₀低于已知抗体(诸如Z176、QA79和S7)的IC₅₀。可以使用已知的测定评估配体阻断活性。例如，可以使用在细胞表面上表达高水平的Siglec-7配体的细胞系(诸如人黑色素瘤细胞系A375)来测定配体阻断活性。可以例如，如实施例章节中所解释的来测定阻断的IC₅₀值。在一些实施方案中，当在实施例章节中所描述的测定条件下测定时，具有改善的配体阻断活性的本发明的抗体具有小于4000pM、或小于约3500pM、或小于约3000pM、或小于约2000pM、或小于约1500pM、或小于约1000pM、或约500pM、或更小的IC50。在一些实施方案中，展现出改善的配体阻断活性的本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为9D4、SL13或5G10的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为9D4、SL13或5G10的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为9D4、SL13或5G10的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，与先前表征的抗Siglec-7单克隆抗体相比，本发明的抗Siglec-7抗体展现出改善的内化。在本公开中，内化活性是指24小时内在健康供体自然杀伤(NK)细胞上50％的Siglec-7被内化的抗体浓度。在本发明的上下文中，“增强的”或“改善的”内化活性意指内化的IC₅₀低于已知抗体(诸如Z176、QA79和S7)的IC₅₀。可以使用已知的测定评估内化。例如，可以将从健康供体获得的PBMC用于测定抗Siglec-7抗体的内化活性。可以例如如实施例章节中所描述的测定内化的IC₅₀值。在一些实施方案中，本发明的抗体具有小于约70pM的内化IC50。在一些实施方案中，当在实施例章节中所描述的测定条件下测定时，抗体具有小于约60pM、或小于约50pM、或小于约40pM、或小于约30pM、或小于约25pM、或小于约20、或小于约10pM的内化IC50。在一些实施方案中，具有改善的内化活性的本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为3F1、SL9、16H11、8A2、SL2、5D1或10E11的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为3F1、SL9、16H11、8A2、SL2、5D1或10E11的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为3F1、SL9、16H11、8A2、SL2、5D1或10E11的抗体的六个CDR。在一些实施方案中，具有改善的内化活性的本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为3F1或16H11的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中倍命名为3F1或16H11的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为9D4、SL13或5G10的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗-Siglec 7抗体内化Siglec-7，但不阻断Siglec-7配体与Siglec-7的结合。在本发明的上下文中，当在如实施例章节中所解释的条件下测定时，不阻断配体与Siglec-7结合的抗体是指不会导致配体结合减少超过25％的抗体。在一些实施方案中，内化Siglec-7配体、但不阻断配体与Siglec-7结合的本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为4B12或8A2的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为4B12或8A2的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个、三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为4B12或8A2的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，相对于所述的抗Siglec-7抗体(诸如Z176、QA79和S7)，本发明的抗-Siglec 7抗体与不同的表位结合。Z176和S7.7是可商购获得的抗Siglec-7抗体。QA79可从eBiosciences商购获得。产生QA79的杂交瘤也可以ICLC登录号PD99003获得。Z176可从Beckman Coulter获得并且S7.7可从BioLegend获得。

在一些实施方案中，本发明的抗体不与Z176、QA79和S7中的任一种竞争结合Siglec-7配体。在一些实施方案中，本发明的抗体与在图1-3中被命名为4B12的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为4B12的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为4B12的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为4B12的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7结合包含W132的表位，使得W132A突变损害了结合活性。在一些实施方案中，此类抗体与在图1-3中被命名为2G12的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，此类抗体与在图1-3中被命名为2G12的抗体竞争结合Siglec-7配体。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为2G121的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为2G12的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为2G12的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体与在图1-3中被命名为5D1的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，此类抗体与在图1-3中被命名为2G12的抗体竞争结合Siglec-7配体。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为5D1的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为5D1的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为5D1的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体与图1-3中被命名为8A2的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为8A2的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为8A2的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为8A2的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含选自图1或图2中所示的重链可变氨基酸序列的至少一个、两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含选自图3中所示的轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含选自图1中所示的HCDR3序列的HCDR3和选自图3中所示的LCDR3序列的LCDR3。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体与在图1-3中被命名为16H11的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图1或图2中被命名为8A2的抗体的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有在图3中被命名为8A2的抗体的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在实施方案中，具有在图1-3中被命名为8A2的抗体的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区与图1的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与图1或图2的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的V_H序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与Siglec-7结合的能力。在某些实施方案中，在图1的重链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在框架区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区与图3的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与图3的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的V_L序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与Siglec-7结合的能力。在某些实施方案中，在图3的轻链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在框架区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和图3的相应抗体的轻链可变区，所述重链可变区与图1或图2的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，其中所述轻链可变区与图3的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体具有对如前述两段中所述的重链可变区和/或轻链可变区的修饰。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含如图1中所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含图1中所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2或3个氨基酸取代，和/或CDR2具有至少1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代。在一些实施方案中，重链可变区包含图2中所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2、3或4个氨基酸取代，和/或CDR2具有至少1、2或3个氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含如图2中所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，此类重链可变区包含图2中所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2或3个氨基酸取代，和/或CDR2具有至少1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代；或包含图2中所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2、3或4个氨基酸取代，和/或CDR2具有至少1、2或3个氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如图3中所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含图3中所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1和/或CDR2具有至少1、2、3或4个氨基酸取代。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体内化Siglec-7，并且与在图1-3中被命名为16H11的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体内化Siglec-7，并且与在图1-3中被命名为16H11的抗体竞争结合Siglec-7配体。在一些实施方案中，本发明的抗体具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗体具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含选自如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的HCDR3序列的HCDR3，和选自如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的LCDR3序列的LCDR3。在实施方案中，具有如表1中所示的VH-VL区对中任一项所示的六个CDR。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的V_H序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与Siglec-7结合的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项的重链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，所有的取代、插入或缺失发生在框架区中。在某些实施方案中，1、2或3个取代发生在CDR区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区与SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的V_L序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与Siglec-7结合的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，所有的取代、插入或缺失发生在框架区中。在某些实施方案中，1、2或3个取代发生在CDR区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57、58、59、60或61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ IDNO:69、70、71、72、73、74、75、76、77或78的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体具有对如前述两段中所述的重链可变区和/或轻链可变区的修饰。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)；或1或2个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的CDR3，其中一个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)，和/或CDR2具有1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1或2个氨基酸取代(例如保守性取代)，和/或CDR2具有1或2个氨基酸取代(例如保守性取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1和/或CDR2具有1个氨基酸取代(例如保守性取代)。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链CDR1序列G(G/Y)(K/T)FS(W/S/Y)(F/Y)、重链CDR2序列YP(G/I)(D/F)GE和重链CDR3序列DYLRAMD(Y/I/V)。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含：重链CDR3(HCDR3)序列DDYLRAMDY(SEQ ID NO:81)、DDYLRAMDV(SEQ ID NO:91)或DDYLRAMDI(SEQ IDNO:92)；重链CDR1(HCDR1)序列GYDFSNF(SEQ ID NO:79)、GYTFSNF(SEQ ID NO:82)、GGDFSNF(SEQ ID NO:83)、GYDFSSY(SEQ ID NO:87)、GYDFSSF(SEQ ID NO:88)或GYDFSNY(SEQ IDNO:89)；和重链CDR2(HCDR2)序列YPGDGE(SEQ ID NO:80)、YPIDGE(SEQ ID NO:85)或YPGFGE(SEQ ID NO:90)。具有消除结合的突变的说明性CDR2序列是IPGDGE(SEQ ID NO:84)和YPGDGT(SEQ ID NO:86)。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQID NO:62和64-78中任一项所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)；或1或2个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的CDR3，其中一个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2、3或4个氨基酸取代，或1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)；和/或CDR2具有1、2、3或4个氨基酸取代，或1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1和/或CDR2具有1或2个氨基酸取代(例如保守性取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1和/或CDR2具有1个氨基酸取代(例如保守性取代)。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含轻链CDR1序列RAS(G/Q)(N/G)I(H/S)NYLA、重链CDR2序列(S/A)A(K/S)RL(E/A)(S/D)和重链CDR3序列QHFWSSPYT。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：轻链CDR3(LCDR3)序列QHFWSSPYT(SEQ ID NO:95)；轻链CDR1(LCDR1)序列RASGNIHNYLA(SEQ ID NO:93)、RASGGIHNYLA(SEQ ID NO:99)、RASQNIHNYLA(SEQ ID NO:100)或RASGNISNYLA(SEQ IDNO:101)；和轻链CDR2(LCDR2)序列SAKRLES(SEQ ID NO:94)、AASRLES(SEQ ID NO:97)、SASRLES(SEQ ID NO:98)、SAKRLAS(SEQ ID NO:102)或SAKRLED(SEQ ID NO:103)。消除结合的说明性CDR1突变是RASGNIHNSLA(SEQ ID NO:96)。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：重链CDR3(HCDR3)序列DDYLRAMDY(SEQ ID NO:81)、DDYLRAMDV(SEQID NO:91)或DDYLRAMDI(SEQ ID NO:92)；重链CDR1(HCDR1)序列GYDFSNF(SEQ ID NO:79)、GYTFSNF(SEQ ID NO:82)、GGDFSNF(SEQ ID NO:83)、GYDFSSY(SEQ ID NO:87)、GYDFSSF(SEQID NO:88)或GYDFSNY(SEQ ID NO:89)；和重链CDR2(HCDR2)序列YPGDGE(SEQ ID NO:80)、YPIDGE(SEQ ID NO:85)或YPGFGE(SEQ ID NO:90)；其中所述轻链可变区包含：轻链CDR3(LCDR3)序列QHFWSSPYT(SEQ ID NO:95)；轻链CDR1(LCDR1)序列RASGNIHNYLA(SEQ ID NO:93)、RASGGIHNYLA(SEQ ID NO:99)、RASQNIHNYLA(SEQ ID NO:100)或RASGNISNYLA(SEQ IDNO:101)；和轻链CDR2(LCDR2)序列SAKRLES(SEQ ID NO:94)、AASRLES(SEQ ID NO:97)、SASRLES(SEQ ID NO:98)、SAKRLAS(SEQ ID NO:102)或SAKRLED(SEQ ID NO:103)。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:43、45、46、47、48、49、50、51、54、55、57和58的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:69的CDR1、CDR2和CDR3序列。在一些实施方案中，重链可变区包含如选自SEQ ID NO:53、54、51、55、58和59的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列；和轻链可变区包含SEQ ID NO:78的CDR1、CDR2和CDR3序列。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7包含：a)含如SEQ ID NO:43所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(i)如重链可变区序列SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(l)含如SEQ ID NO:58所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7包含：

(f)含如SEQ ID NO:59所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ IDNO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体内化Siglec-7，并且与在图1-3中被命名为8A2的抗体竞争结合Siglec-7。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体具有如SEQ ID NO:104或106中任一项所示的V_H序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体具有如SEQ ID NO:105或107所示的V_L序列的至少一个、至少两个或三个CDR。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含如SEQ ID NO:104或106所示的HCDR3序列和如SEQ ID NO:105或107所示的LCDR3序列。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:104或106的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与SEQ ID NO:104或106的重链可变的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的V_H序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与Siglec-7结合的能力并且具有内化活性。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:104或106的重链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，所有的取代、插入或缺失发生在框架区中。在某些实施方案中，1、2或3个取代发生在CDR区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区与SEQ ID NO:105或107的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在某些实施方案中，相对于参考序列，与SEQ ID NO:105或107的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的V_L序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但是包含此序列的抗Siglec-7抗体保留了与至Siglec-7结合的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:105或107的轻链可变区的氨基酸序列中总共1至20个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，所有的取代、插入或缺失发生在框架区中。在某些实施方案中，1、2或3个取代发生在CDR区中。

在一些实施方案中，本发明的抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:104或106的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ ID NO:105或107的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体具有对如前述两段中所述的重链可变区和/或轻链可变区的修饰。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQID NO:104或106所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)；或1或2个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQ ID NO:104或106所示的CDR3，其中一个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，重链可变区包含如SEQ ID NO:104或106所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)，和/或CDR2具有1或2，或仅有1个氨基酸取代(例如保守性取代)。

在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQID NO:105或107所示的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代(例如保守取代)；或1或2个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:105或107所示的CDR3，其中一个氨基酸被取代(例如保守取代)。在一些实施方案中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:105或107所示的可变区序列的三个CDR，其中CDR1具有1、2或3个氨基酸取代(例如保守性取代)，和/或CDR2具有1或2，或仅有1个氨基酸取代(例如保守性取代)。

在本发明的另一方面，根据任何上述实施方案的抗Siglec-7抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗Siglec-7抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、双抗体或F(ab')₂片段。在另一个实施方案中，抗体是基本上全长的抗体，例如IgG抗体或如本文所定义的其他抗体类别或同种型。对于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)。如本文所述，抗体片段可以通过多种技术来制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)产生。

在一些实施方案中，根据本公开的抗Siglec-7抗体是呈单价形式的配体阻断抗体。在一些实施方案中，抗Siglec-7抗体呈片段形式，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、双抗体或F(ab')₂片段。在一些实施方案中，例如通过PEG化修饰呈单价或片段形式的抗体以延长半衰期。

在一些实施方案中，以双特异性或多特异性形式利用本发明的抗Siglec-7抗体。如下面进一步讨论的，例如，在一些实施方案中，可以将抗体掺入包含治疗性抗体的双特异性或多特异性抗体中。

Fc工程化

在一些实施方案中，本公开的抗体包含Fc区。Fc区可以是Fc区经工程化以改变抗体的一种或多种功能性质(诸如血清半衰期、补体固定(complement fixation)、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞细胞毒性)。此外，本公开的抗体可以是化学修饰的(例如，可以将一个或多个化学部分与抗体连接)或被修饰以改变其糖基化，再次改变抗体的一种或多种功能性质。

在一个实施方案中，修饰CH1的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数量被改变(例如增加或减少)。该方法被进一步描述于Bodmer等人的美国专利第5,677,425号中。CH1铰链区中的半胱氨酸残基数量被改变，以便例如促进轻链和重链的组装，或者增加或降低抗体的稳定性。

在一个实施方案中，本发明的抗体可以具有经修饰以包含S228P取代的人IgG4 Fc区，其中将氨基酸残基根据如Kabat中的EU索引编号。

在其他实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替换一个或多个氨基酸，使得抗体对效应子配体具有改变的结合，但是保留了母体抗体的抗原结合能力。改变结合的效应子配体可以是，例如，Fc受体或补体的C1组分。该方法被进一步详细描述于Winter等人的美国专利第5,624,821号和第5,648,260号两者中。

在另一个实施方案中，选自氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基替换，使得抗体具有改变的C1 q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。该方法被进一步详细描述于美国专利第6,194,551号中。

在另一个实施方案中，改变一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。该方法被进一步描述于Bodmer等人的PCT公开W01994/29351中。

在另一个实施方案中，通过修饰一个或多个氨基酸来修饰Fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)的能力和/或来增加抗体对Fc受体的亲和力。该方法被进一步描述于Presta的PCT公开WO2000/42072中。此外，已经绘制了人IgG1上的针对FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcR的结合位点，并且具有改善的结合的变体已经被描述(参见Shields等人,(2001)J.Biol.Chem.276:6591-6604)。

在另一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化的(aglycoslated)抗体或具有改变的糖基化模式的抗体。可以改变糖基化，例如以增加抗体对抗原的亲和力，或者如果在Fc区中制备，则影响效应子功能。此类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致一个或多个可变区框架糖基化位点的消除，从而消除在那个位点处的糖基化。此类无糖基化(aglycosylation)可以增加抗体对抗原的亲和力。此类方法被进一步详细描述于Co等人的美国专利第5,714,350号和第6,350,861号中。

另外地或可替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，诸如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体制剂，或具有增加的平分型GlcNac结构的抗体。已证明此类改变的糖基化模式增加了抗体的ADCC能力。此类碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已经在本领域中被描述，并且可被用作宿主细胞，在其中表达本公开的重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破坏的FUT8基因(其编码岩藻糖基转移酶)的细胞系，使得在此类细胞系中表达的抗体展现出低岩藻糖基化。Presta的PCT公开WO2003/035835描述了变体CHO细胞系Lecl3细胞，其具有降低的使岩藻糖与Asn(297)连接的碳水化合物连接的能力，还导致在此宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(还参见Shields等人,(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等人的PCT公开W01999/54342描述了经工程化以表达糖蛋白修饰性糖基转移酶(例如，β(1,4)-N乙酰基葡糖胺基-转移酶III(GnTIII))的细胞系，使得在工程化细胞系中表达的抗体展现出增加的平分型GlcNac结构，其导致抗体的ADCC活性增加(还参见Umana等人,(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。

在另一个实施方案中，修饰抗体以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，如Ward的美国专利第6,277,375号中所描述的，可以引入以下突变中的一个或多个：T252L、T254S和T256F。可替代地，如Presta等人的美国专利第5,869,046号和第6,121,022号中所描述的，为了增加生物半衰期，可以在CH1或CL区内改变抗体，以含有取自IgG的Fc区的CH2区的两个环的补救受体结合表位。

治疗癌症

可以将本发明的抗Siglec-7抗体用于治疗任何数量的癌症。在本公开的一些方面，抗体被用于治疗展现出具有高Siglec-7表达水平的免疫细胞(诸如CD8+T细胞)浸润的癌症。在一些实施方案中，可以将本发明的抗Siglec-7抗体用于治疗展现出表达Siglec-7的NK细胞或单核细胞浸润的癌症。

在一些方面，本公开因此提供了鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的对象的方法。因此，在一个实施方案中，本发明提供了鉴定从患者获得的肿瘤样品中表达Siglec-7的CD8+T细胞的浸润水平的方法。在一些实施方案中，肿瘤样品来自原发性肿瘤。在可替代的实施方案中，肿瘤样品是转移性病灶。可以使用任何测定(诸如免疫组织化学或流式细胞术)测量Siglec-7在细胞(例如T细胞)表面上的表达水平。在测定Siglec-7在肿瘤浸润性T细胞上的表达水平的背景中，Siglec-7的“过表达”被认为是其中至少10％、至少20％、或至少25％、或至少30％、或更多被分析的细胞(例如CD8+T细胞)在细胞表面上表达可检测的Siglec-7。因此，在该背景中的“过表达”是指表达可检测的Siglec-7的T细胞的百分比。就表达可检测的Siglec-7的T细胞的百分比而言，在该背景中的“过表达”与表达可检测的Siglec-7的T细胞的术语“升高的数量”或“升高的水平”同义。

还通常评估由肿瘤表达的Siglec-7配体的水平。当在肿瘤细胞表面上观察到Siglec-7的可检测结合时，认为肿瘤表达Siglec-7配体。在一些实施方案中，所评估的样品中的至少10％、至少20％、至少30％、至少50％或更多的肿瘤细胞上Siglec-7配体的表达可被用作选择标准以用于确定要用抗Siglec-7抗体治疗的患者。

可以用如本文所述的抗Siglec-7抗体治疗任何癌症。在一些实施方案中，癌症是癌或肉瘤。在一些实施方案中，癌症是血液癌症。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、前列腺癌、睾丸癌、肾细胞癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌、结肠直肠癌、肛门癌、胰腺癌、胃癌(gastric cancer)、食管癌、肝细胞癌、头颈癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、黑色素瘤，或骨或软组织肉瘤。在一些实施方案中，癌症是急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨瘤、脑干胶质瘤、脑癌、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓增生性病症、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、促结缔组织增生性小圆细胞瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、上皮样血管内皮瘤(EHE)、食管癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃癌(gastric cancer)、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞瘤、妊娠性滋养层细胞肿瘤、胃类癌、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)、下咽癌、下丘脑和视觉通路胶质瘤、儿童期、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、肾癌、喉癌、白血病、唇和口腔癌(lip and oral cavity cancer)、脂肪肉瘤、肝癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、男性乳腺癌、恶性骨纤维组织细胞瘤、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、默克尔细胞癌(Merkel cell cancer)、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、口腔癌(mouth cancer)、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓性白血病、髓性白血病、成人急性、骨髓增生性病症、慢性、粘液瘤、鼻腔和副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、少突神经胶质瘤、口腔癌(oral cancer)、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体星形细胞瘤、松果体生殖细胞瘤、松果体母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体腺瘤、浆细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤文氏肉瘤、卡波西肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤、塞扎里综合征(Sézary syndrome)、非黑色素瘤皮肤癌、黑色素瘤默克尔细胞皮肤癌、小肠癌、鳞状细胞癌、鳞状颈癌、胃癌(stomach cancer)、皮肤T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、滋养层细胞肿瘤、妊娠期、尿道癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(macroglobulinemia)或威尔姆斯瘤(Wilms tumor)。

在一方面，本公开内容的方法包括使用适于治疗癌症的给药方案，以治疗有效量将抗Siglec-7抗体作为药物组合物施用给癌症患者。可以配制用于各种药物递送系统的组合物。在组合物中也可以包括一种或多种生理学上可接受的赋形剂或载体以用于适当的剂型。用于本发明的合适剂型见于例如Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第21版,Philadelphia,PA.Lippincott Williams&Wilkins,2005。

抗Siglec-7抗体以适用于向患者施用的溶液提供，诸如用于注射的无菌等渗水溶液。将抗体以合适的浓度溶解或混悬在可接受的载体中。在一些实施方案中，载体是水性的(例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水等)。组合物可以含有接近生理条件所需的辅助药物物质，诸如pH调节和缓冲剂、张力调节剂等。

以足以治愈或至少部分阻止疾病或疾病症状及其并发症的量向患者施用药物组合物。足以实现该目的的量被定义为“治疗有效剂量”。通过监测患者对疗法的应答来确定治疗有效剂量。指示治疗有效剂量的典型基准包括改善患者的疾病症状。该用途的有效量将取决于疾病的严重程度和患者健康的一般状态，包括其他因素诸如年龄、体重、性别、施用途径等。可以根据所需的和患者耐受的剂量和频率施用抗体的单次或多次给药。在任何情况下，该方法提供足够量的抗Siglec-7抗体以有效地治疗患者。

抗Siglec-7抗体可以通过任何合适的方法施用，包括例如肠胃外、肺内和鼻内施用，以及局部施用(诸如瘤内施用)。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，可以通过吹入施用抗体。在说明性实施方案中，可以在4℃将抗体以10mg/ml储存在注射用无菌等渗水性盐溶液中，并在施用给患者之前在100ml或200ml注射用0.9％氯化钠中稀释。在一些实施方案中，经1小时的过程以0.01至25mg/kg的剂量通过静脉内输注施用抗体。在其他实施方案中，经15分钟至2小时的时间段通过静脉内输注施用抗体。在其他实施方案中，施用程序是经由皮下弹丸式注射的。

抗体剂量被选择以便为患者提供有效的疗法，并且其在小于0.01mg/kg体重至约25mg/kg体重的范围内或在每名患者1mg–2g的范围内。优选地，剂量在0.1–10mg/kg或大约50mg–1000mg/患者的范围内。剂量可以以适当的频率重复，该频率可以在每天一次至每三个月一次或每六个月一次的范围内，这取决于抗体的药代动力学(例如，抗体在循环中的半衰期)和药效学应答(例如，抗体治疗效果的持续时间)。在一些实施方案中，体内半衰期为约7天至约25天，并且每周一次至每3个月一次或每6个月一次重复抗体给药。在其他实施方案中，大约每月一次施用抗体。

可以将抗Siglec-7抗体与一种或多种另外的治疗剂(例如化学治疗剂)和/或另外的免疫疗法一起施用。

在一些实施方案中，可以将抗Siglec-7抗体与另一种检查点抑制剂结合施用。在一方面，检查点抑制剂是生物治疗剂或小分子。在另一方面，检查点抑制剂是单克隆抗体、人源化抗体、完全人抗体、融合蛋白或它们的组合。在某些实施方案中，检查点抑制剂抑制检查点蛋白，所述检查点蛋白可以是CTLA-4、PDLl、ICOS、PDL2、IDO1、IDO2、PDl、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、GITR、HAVCR2、LAG3、KIR、LAIR1、LIGHT、MARCO、OX-40、SLAM、2B4、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD160、CD39、VISTA、TIGIT、CGEN-15049、2B4、CHK1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或它们的组合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM3的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是ICOS。

在一些实施方案中，可以将抗Siglec-7抗体与治疗性抗体(诸如靶向肿瘤细胞抗原的抗体)结合施用。治疗性抗体的实例包括利妥昔单抗、曲妥珠单抗、托西莫单抗、替伊莫单抗、阿仑珠单抗、依帕珠单抗、贝伐珠单抗、埃罗妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、西妥昔单抗、达雷木单抗、地诺单抗，地努图希单抗，吉妥珠单抗替伊莫单抗伊匹单抗、纳武单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、阿多曲妥珠单抗、帕尼单抗、帕博利珠单抗、帕妥珠单抗、雷莫芦单抗和兰尼单抗。

在一些实施方案中，将抗Siglec-7抗体与化学治疗剂一起施用。癌症化学治疗剂的实例包括烷基化剂，诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXAN)；烷基磺酸酯类，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮杂环丙烷类，诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替派和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三乙烯蜜胺(triethylenemelamine)、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸氧化二氯甲基二乙胺、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素类，诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡里奇霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素D、道诺霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺加霉素、橄榄霉素类、培洛霉素、博地霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素类，诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺剂，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；倍曲布西(bestrabucil)；比生群；依达曲沙(edatraxate)；德福法明(defofamine)；地美可辛；地吖醌；依福密辛(elformithine)；醋酸羟吡咔唑；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝基可润；喷司他丁；苯来美特；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；甲基苄肼；雷佐生；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；格塞图辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如紫杉醇和紫杉萜(doxetaxel)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春花碱；多西他赛，铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺消灵；替尼泊苷；道诺霉素；氨基喋呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸衍生物，诸如贝沙罗汀、阿利维A酸；地尼白介素(denileukin diftitox)；埃斯佩拉霉素(esperamicins)；卡培他滨；及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。该定义还包括用于调节或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、米非司酮、芳香酶抑制4(5)-咪唑类、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、可莫昔芬(keoxifene)、LY 1 17018、奥那司酮和托瑞米芬(法乐通)；和抗雄激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；和任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。其他癌症治疗试剂包括索拉非尼和其他蛋白激酶抑制剂，诸如阿法替尼、阿西替尼、克唑替尼、达沙替尼、厄洛替尼、福斯马替尼(fostamatinib)、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、乐伐替尼、木利替尼、尼罗替尼、帕唑帕尼、哌加他尼、鲁索替尼、凡德他尼、维莫非尼和舒尼替尼；西罗莫司(雷帕霉素)、依维莫司和其他mTOR抑制剂。另外的化学治疗剂的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(例如伊立替康、拓扑替康、喜树碱及其类似物或代谢物，和阿霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(例如，依托泊苷、替尼泊苷和道诺霉素)；烷基化剂(例如，美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、噻替派、异环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、链脲菌素、达卡巴嗪、甲氨蝶呤、丝裂霉素C和环磷酰胺)；DNA嵌入剂(例如顺铂、奥沙利铂和卡铂)；DNA嵌入剂和自由基生成剂，诸如博来霉素；和核苷类似物(例如5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、氟达拉滨、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和羟基脲)。说明性化学治疗剂还包括紫杉醇、多西他赛和相关类似物；长春新碱、长春碱(vinblastin)和相关类似物；沙利度胺、来那度胺和相关类似物(例如，CC-5013和CC-4047)；蛋白酪氨酸激酶抑制剂(例如，甲磺酸伊马替尼和吉非替尼)；蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)；NF-κΒ抑制剂，包括ΙκΒ激酶的抑制剂和已知在癌症中被上调、过表达或激活的蛋白质或酶的其他抑制剂，对其的抑制下调了细胞复制。另外的试剂包括天冬酰胺酶和卡介苗(Bacillus Calmete-Guérin)制剂。

还可以将抗Siglec-7抗体与基于细胞的疗法(诸如NK细胞疗法)或癌症疫苗结合施用给癌症患者。在一些情况下，癌症疫苗是基于肽的疫苗、基于核酸的疫苗、基于细胞的疫苗、基于病毒或基于病毒片段的疫苗，或基于抗原呈递细胞(APC)的疫苗(例如基于树突细胞的疫苗)。癌症疫苗包括西普鲁塞-TNeuVax^TM、基于HER-2ICD肽的疫苗、HER-2/neu肽疫苗、AdHER2/neu树突细胞疫苗、HER-2脉冲的DC1疫苗、Ad-sig-hMUC-l/ecdCD40L融合蛋白疫苗、MVX-ONCO-1、hTERT/生存素/CMV多肽疫苗、E39、J65、PlOs-PADRE、rV-CEA-Tricom、 HER2VRP、AVX901、ONT-10、ISAlOl、ADXSl 1-001、VGX-3100、INO-9012、GSK1437173A、BPX-501、AGS-003、IDC-G305、-Renal(HAR)免疫疗法、Prevenarl3、MAGER-3.A1、NA17.A2、DCVax-Direct、负载潜伏膜蛋白-2(LMP2)的树突细胞疫苗(NCT02115126)、HS410-101(NCT02010203,Heat Biologies)、EAU RF 2010-01(NCT01435356,GSK)、140036(NCT02015104,新泽西州罗格斯癌症研究所(Rutgers Cancer Institute of NewJersey))、130016(NCTO 1730118,美国国家癌症研究所(National Cancer Institute))、MVX-201101(NCT02193503,Maxivax SA)、ITL-007-ATCR-MBC(NCT01741038,ImmunovativeTherapies,Limited)、CDR0000644921(NCT00923143,宾夕法尼亚大学艾布拉姆森癌症中心(Abramson cancer center of theUniversity of Pennsylvania))、SuMo-Sec-01(NCT00108875,朱利叶斯·马克西米利安大学医院(Julius Maximilians UniversitaetHospital))或MCC-15651(NCT01176474,Medarex,Inc,BMS)。

在本发明的上下文中，可以在施用抗Siglec-7抗体之前或在施用抗Siglec-7抗体之后施用与本发明的抗Siglec-7抗体结合施用的治疗剂。在一些实施方案中，可以将抗Siglec-7抗体与另外的治疗剂同时施用。

以下实施例被提供用于说明性目的，并不旨在限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或修改各种非关键参数以产生基本相同结果。

实施例

实施例1.在肿瘤浸润性T细胞上的Siglec-7检测

根据制造商的说明书，使用Mylteni GentleMACS仪器制备包含来自原发性人肿瘤试样的细胞的样品。通过荧光激活细胞分选来分析细胞以确定作为存活力标志物的包括CD3、CD8、CD16、CD45和7-AAD的免疫细胞表面标志物。将CD8+T细胞鉴定并门控为7-AAD-CD45+CD3+CD8+。将抗Siglec-7-PE(克隆S7.7Biolegend)用于检测Siglec-7水平。结果表明，Siglec-7表达的百分比(图4)和水平(图5)两者在肿瘤亚群中的CD8+肿瘤浸润性T细胞上增强。

实施例2.肿瘤细胞上的Siglec-7配体检测

还评估了肿瘤细胞上的配体水平。使用重组Siglec-7-Fc融合蛋白的特异性结合来评定从新鲜原发性肿瘤分离的细胞上的Siglec-7配体水平。作为特异性对照，用0.1U/mL的唾液酸酶/神经氨酸苷酶(Roche)处理细胞以从细胞表面除去唾液酸。结果表明在来自不同肿瘤亚群的肿瘤细胞上检测到Siglec-7配体(图6)。细胞的唾液酸酶处理(即从细胞膜“剥离”唾液酸聚糖)消除了结合。

实施例3.具有改善的K_D的抗体

评估一组抗体与Siglec-7的结合。结果鉴定出与可商购获得的抗Siglec-7抗体相比，抗Siglec-7抗体具有改善的K_D值(图7)。

实施例4.具有Siglec-7配体阻断活性的抗体

在递增浓度的抗Siglec-7抗体存在下，将重组Siglec-7-Fc加入到A375细胞中，并且在细胞表面上检测到复合物的结合。结果表明，抗Siglec-7抗体以不同的效力阻断了Siglec-7与存在于A375黑色素瘤人细胞表面上的配体的相互作用(图8)，并且证明了相对于可商购获得的抗Siglec-7抗体，抗体具有改善的配体阻断活性。

实施例5.具有Siglec-7内化活性的抗体

将原代人外周血单个核细胞(PBMC)与递增浓度的抗Siglec-7抗体一起孵育24小时，并且使用非竞争性抗Siglec-7抗体检测NK细胞的细胞表面中剩余的Siglec-7。结果显示抗Siglec-7抗体以不同效力导致原代人NK细胞上Siglec-7的内化(图9)并且证明与可商购获得或先前描述的抗Siglec-7抗体相比，抗体具有改善的内化活性。使用单克隆抗体3F1进一步评估了人NK细胞上的Siglec-7快速、浓度依赖性抗体诱导的内化。与可商购获得的S7.7抗体相比，3F1显示出更有效的内化活性(图10)

单克隆抗体8A2的评估(图11)证明抗体不阻断Siglec-7/配体相互作用(左图)，但导致原代人免疫细胞上的Siglec-7的内化(右图)。

实施例6.人源化序列

使用单克隆抗体16H11和8A2产生人源化抗体以产生人源化内化抗Siglec 7抗体。

评估源自16H11的人源化抗体与Siglec 7的结合。表1中显示了抗体结合结果(以单价Fab的形式测量)。具有以下重链和轻链可变区的抗体显示出约75nM或更低的K_D值(单价Fab)：VH438-4和VL418-2；VH440-2和VL418-2；VH441-2和VL418-2；VH443-1和VL418-2；VH444-2和VL418-2，VH445-3和VL418-2；VH449-4和VL448-3；VH449-6和VL418-2；VH387-11和VL418-2；VH446-7和VL418-2；VH 446-7和VL448-3；VH463-2和VL418-2；Vh463-2和VL448-3；FH465-17和VL418-2；VH484-6和VL418-2；VH484-6和VL448-3；和VH484-7和VL448-3。如所选抗体的分析显示(由表1中的VH/VL对表示)：AK410-1/AK418-2、AK446-7/AK418-2和AK446-7/AK448-3，16H11抗Siglec-7抗体的配体阻断活性被保留。

表1.作为单价Fab测量的源自16H11的人源化抗体的K_D值：

方法

K_D测量

通过生物层干涉法(ForteBio)进行抗体结合分析。该测定于25℃下在超纯水中的1×ForteBio动力学缓冲液(ForteBio18-132)中进行。以0.5ug/mL在抗小鼠动力学传感器上捕获抗体；将Siglec-7-ECD用作分析物，并用2×稀释液在测定缓冲液中从50nM稀释至1.56nM。进行了两分钟缔合，然后进行了10分钟解离。相对于对照空参考AHC传感器确定结果，并使用具有1:1全局拟合参数的ForteBio分析软件进行分析。

使用Fortebio进行的抗体竞争

在饱和条件下(在1ug/ml下15min)，以0.5ug/ml在抗人IgG动力学传感器上捕获Siglec-7-ECD-huFc，之后测试竞争抗体的结合。每种抗Siglec-7抗体都以相对于所有其他抗体的两种方式(即作为饱和抗体和作为竞争抗体)进行测试。当传感器上的抗体与溶液中的抗体竞争时，未观察到与抗原的额外结合。当观察到结合信号时，两种抗体以非竞争性方式与抗原结合。

配体阻断测定

在基于细胞的测定中，将表达高水平的Siglec-7配体的人黑色素瘤细胞系A375用于确定抗Siglec-7抗体的阻断活性。将两倍连续稀释的抗Siglec-7抗体(40nM至40pM)与在FACS缓冲液(PBS/2％BSA)中的10nM Siglec-7-ECD-Fc合并，并在冰上孵育30分钟。将每孔2.5×10e4个A375细胞加入到FACS缓冲液中的圆底96孔组织培养板中，将板以400g离心2min，除去上清液，并将细胞重悬于100ul的抗体Siglec-7复合物中。在冰上孵育1小时后，将细胞洗涤两次，并与在FACS缓冲液中的1ug/ml与AF647(Jackson IR实验室)缀合的山羊抗人F(ab’)₂片段一起孵育30分钟。再洗涤两次后，将细胞固定在PBS/2％PFA中，并在Novocyte流式细胞仪(ACEA biosciences)上捕获。基于在APC通道中对平均荧光作图并使用Prism Graphpad软件分析来确定阻断的IC₅₀值。

内化测定

将健康供体外周血单核单个核细胞(PBMC)用于测定抗Siglec-7抗体的内化活性。将先前冷冻保存的PBMC解冻并在完全培养基(补充有10％胎牛血清的RPMI培养基)中于37℃孵育90分钟。在完全培养基中制备抗Siglec-7抗体的五倍连续稀释液(100nM-0.01pM)。将细胞(每孔5×10e4个)和抗体稀释液在96孔组织培养板中合并，并在37℃下孵育24小时。将细胞重悬于FACS缓冲液中的huFc块(BectonDickinson)中，并用含有CD3-FITC、CD16-PE和抗Siglec-7抗体4B12-AF647的抗体混合物在冰上染色1小时。洗涤两次后，将细胞在PBS/2％PFA中固定，并在Novocyte流式细胞仪上捕获。基于在APC通道中对NK细胞(门控为CD3-CD16+)的平均荧光进行作图并使用Prism Graphpad软件分析来确定内化的IC₅₀值。

原发性肿瘤分析

根据制造商的说明书，使用Mylteni GentleMACS仪器制备来自原发性人肿瘤试样的单细胞。将细胞重悬于FACS缓冲液中的huFc块(Becton Dickinson)中，并使用含有针对作为存活力标志物的免疫细胞表面标志物(包括CD3、CD8、CD16、CD45和7-AAD)的缀合抗体的混合物进行染色。鉴定CD8+T细胞并将其门控为7-AAD-CD45+CD3+CD8+。将抗Siglec-7-PE(克隆S7.7Biolegend)用于检测Siglec-7水平。将细胞在PBS/2％PFA中固定，并在Novocyte细胞计数器上捕获。使用Flowjo软件(Tristar)进行门控和分析。

如上文在配体阻断测定中所述，使用Siglec-7-ECD-Fc检测肿瘤细胞上的配体水平。作为特异性对照，用0.1U/mL的唾液酸酶/神经氨酸苷酶(Roche)处理细胞以从细胞表面除去唾液酸。

应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明性目的，并且根据它们进行的各种修改或改变将被建议给本领域技术人员，以及将它们包括在本申请的精神和权限以及所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利、登录号和专利申请均在此通过引用并入，用于引用它们的上下文中的目的。

说明性序列表

SEQ ID NO:1重链可变区序列(16H11)；如通过Kabat所定义的CDR：加下划线；如通过Chothia所定义的CDR：粗体，斜体

SEQ ID NO:2重链可变区序列(2G12)；如通过Kabat所定义的CDR：加下划线；如通过Chothia所定义的CDR：粗体，斜体

SEQ ID NO:3重链可变区序列(5D1)；如通过Kabat所定义的CDR：加下划线；如通过Chothia所定义的CDR：粗体，斜体

SEQ ID NO:4重链可变区序列(8A2)；如通过Kabat所定义的CDR：加下划线；如通过Chothia所定义的CDR：粗体，斜体

SEQ ID NO:11重链可变区序列(4B12)；如通过Kabat所定义的CDR：加下划线；如通过Chothia所定义的CDR：粗体，斜体

SEQ ID NO:15轻链可变区序列(16H11)；如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWFQQKQGKSPHFLVYSAKALADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGTYYCQHFWSSPYTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:16轻链可变区序列(2G12)；如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线。

DIVLTQSHKFMSTSVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWTSTRHTGVPDRFTGSGSGTDHTLT

SEQ ID NO:18轻链可变区序列(8A2)；如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线。

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSRVIFMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVRFSGGGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPPTFGAGTKLELK

SEQ ID NO:17轻链可变区序列(5D1)；如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线。

DIQMTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDISNFLNWYQQKPDGTVKLLMYDTSILQSGVPSRFSGRGSGADYSLTINNLEQEDLATYFCQQGKTLPYTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:25轻链可变区序列(4B12)；如通过Kabat和Chothia两者所定义的CDR加下划线。

DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKAVIYSASYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLTEYFCQQYNNYPYTFGGGTKLEIK

SEQ ID NO:29-78—源自16A11的人源化可变区序列：

SEQ ID NO:29人源化V_H区386-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:30人源化V_H区392-3的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:31人源化V_H区392-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:32人源化VH区393-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:33人源化V_H区393-8的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPIDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:34人源化V_H区394-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:35人源化V_H区394-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:36人源化V_H区400-5的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:37人源化V_H区400-7的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:38人源化V_H区400-9的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSYWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:39人源化V_H区400-14的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:40人源化V_H区401-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGFGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:41人源化V_H区417-8的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDVWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:42人源化V_H区417-17的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:43人源化V_H区387-11的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:44人源化V_H区410-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:45人源化V_H区438-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:46人源化V_H区440-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:47人源化V_H区441-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:48人源化V_H区443-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:49人源化V_H区444-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:50人源化V_H区445-3的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:51人源化V_H区446-7的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:52人源化V_H区447-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEINYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:53人源化V_H区449-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:54人源化V_H区449-6的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:55人源化V_H区463-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:56人源化V_H区465-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:57人源化V_H区465-17的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:58人源化V_H区484-6的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:59人源化V_H区484-7的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:60人源化V_H区485-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFAMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO:61人源化V_H区485-5的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFAMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:62人源化V_L区381-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:63人源化V_L区390-8的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNSLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:64人源化V_L区391-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:65人源化V_L区391-8的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSASRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:66人源化V_L区395-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGGIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:67人源化V_L区395-4的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:68人源化V_L区396-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNISNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:69人源化V_L区418-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:70人源化V_L区419-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:71人源化V_L区421-3的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO:72人源化V_L区424-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:73人源化V_L区425-3的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:74人源化V_L区426-2的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:75人源化V_L区427-1的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:76人源化V_L区435-7的氨基酸序列；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:77人源化V_L区439-5的氨基酸序列

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO:78人源化V_L区448-3的氨基酸序列

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO:104-107源自8A2的人源化可变区序列：

SEQ ID NO:104人源化重链可变区序列RHA；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTTYGWSWIRQPPGKGLEWIGYIWGGGNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKHKGTSHAMEYWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:105:人源化轻链可变区序列RKA；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRVIFLAWYQQKPGQAPRLLIYDTSNKATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO:106人源化重链可变区序列RHB；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTTYGVDWVRQPPGKGLEWIGVIWGGGNTNYNSSLKSRVTISKDTSKNQVFLKLSSVTAADTAVYYCAKHKGTSHAMEYWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:107人源化轻链可变区序列RKB；如通过Chothia所定义的CDR加下划线

QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRVIFMYWYQQKPGQSPRLLIYDTSNLATGVPARFSGGGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGGGTKVEIK

Claims

1.抑制肿瘤细胞增殖的方法，所述方法包括向患有癌症的患者施用治疗有效量的抗Siglec-7抗体，其中所述患者具有包含升高水平的表达Siglec-7的CD8+浸润性T细胞的原发性肿瘤或转移性病灶，并且，其中所述肿瘤或转移性病灶包含表达唾液酸化的Siglec-7配体的癌细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有50pM或更小的二价亲合力。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体以小于约4000pM的IC₅₀阻断配体结合。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体以小于约3500pM的IC₅₀阻断配体结合。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有小于约70pM的内化活性。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有小于约25pM的内化活性。

7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体不阻断配体结合。

8.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体与具有SEQ ID NO:1的可变重链序列和SEQ ID NO:15的可变轻链序列的抗体竞争结合Siglec-7。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:1的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:1的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:1的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

12.如权利要求8至11中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:15的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

13.如权利要求8至11中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:15的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

14.如权利要求8至11中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:15的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

15.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代。

16.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含含如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的CDR3的重链可变区。

17.如权利要求15或16所述的方法，其中所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。

18.如权利要求15或16所述的方法，其中所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1和具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2。

19.如权利要求8和15-18中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代。

20.如权利要求8和15-18中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含含如SEQID NO:62和64-78中任一项所示的CDR3的轻链可变区。

21.如权利要求19或20所述的方法，其中所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。

22.如权利要求19或20所述的方法，其中所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1和具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2。

23.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:29-31、33和35-61中的任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

24.如权利要求8或23所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区与SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列的具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

25.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57、58、59、60或61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ IDNO:69、70、71、72、73、74、75、76、77或78的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

26.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:43、45、46、47、48、49、50、51、54、55、57和58的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:69的CDR1、CDR2和CDR3序列。

27.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:53、54、51、55、58和59的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:78的CDR1、CDR2和CDR3序列。

28.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

a)含如SEQ ID NO:43所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(b)含如SEQ ID NO:45所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(c)含如SEQ ID NO:46所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(d)含如SEQ ID NO:47所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(e)含如SEQ ID NO:48所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(f)含如SEQ ID NO:49所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(g)含如SEQ ID NO:50所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(h)含如SEQ ID NO:51所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(i)如重链可变区序列SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(j)含如SEQ ID NO:55所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(k)含如SEQ ID NO:57所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；或

(l)含如SEQ ID NO:58所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。

29.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

a)含如SEQ ID NO:53所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(b)含如SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(c)含如SEQ ID NO:51所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(d)含如SEQ ID NO:55所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

(e)含如SEQ ID NO:58所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；或

(f)含如SEQ ID NO:59所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:78所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区。

30.如权利要求1所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体阻断配体与Siglec-7的结合，并且与由以登录号ICLC PD99003保藏的杂交瘤产生的抗体QA79竞争结合Siglec-7，但不与抗体Z176或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为2G12的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争结合Siglec-7。

32.如权利要求30所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

33.如权利要求30所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

34.如权利要求30所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:2的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

35.如权利要求30至34中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:16的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

36.如权利要求30至34中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:16的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

37.如权利要求30至34中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:16的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

38.如权利要求1所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体S7.7竞争结合Siglec-7，但不与抗体QA79或抗体Z176竞争结合Siglec-7。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为8A2的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

40.如权利要求38所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQ ID NO:4、SEQID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列中所示的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

41.如权利要求38所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQ ID NO:4、SEQID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列中所示的CDR3的V_H区。

42.如权利要求38所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQ ID NO:4、SEQID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

43.如权利要求38至42中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列中所示的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

44.如权利要求38至42中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列中所示的CDR3的V_L区。

45.如权利要求38至42中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含如SEQID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

46.如权利要求1所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体Z176竞争结合Siglec-7，但不与QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。

47.如权利要求46所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为5D1的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

48.如权利要求46所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

49.如权利要求46所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

50.如权利要求46所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:3的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

51.如权利要求46至50中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:17的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

52.如权利要求46至50中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:17的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

53.如权利要求46至50中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:17的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

54.如权利要求1所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且不与抗体Z176、QA79或S7.7竞争结合Siglec-7。

55.如权利要求54所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为4B12的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

56.如权利要求54所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

57.如权利要求54所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

58.如权利要求54所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

59.如权利要求54至58中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:25的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

60.如权利要求54至58中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:25的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

61.如权利要求54至58中任一项所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:25的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

62.如权利要求1至61中任一项所述的方法，其中所述抗体呈单价形式或片段形式。

63.如权利要求62所述的方法，其中所述抗体是PEG化的。

64.如权利要求1至63中任一项所述的方法，其中所述患者患有黑色素瘤、肺癌或结肠直肠癌。

65.抗Siglec-7抗体，其与具有SEQ ID NO:1的可变重链序列和SEQ ID NO:15的可变轻链序列的抗体竞争结合Siglec-7。

66.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代。

67.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含含如SEQ IDNO:29-31、33和35-61中任一项所示的CDR3的重链可变区。

68.如权利要求66或67所述的抗Siglec-7抗体，其中所述重链可变区包含具有如SEQID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。

69.如权利要求66或67所述的抗Siglec-7抗体，其中所述重链可变区包含具有如SEQID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR1和具有如SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项所示的序列的CDR2。

70.如权利要求65至69中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR3，其中1、2或3个氨基酸被取代。

71.如权利要求65至69中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含含如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的CDR3的轻链可变区。

72.如权利要求70或71所述的抗Siglec-7抗体，其中所述轻链可变区包含具有如SEQID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1，其中1、2或3个氨基酸被取代；和/或具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2，其中1、2或3个氨基酸被取代。

73.如权利要求70或71所述的抗Siglec-7抗体，其中所述轻链可变区包含具有如SEQID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR1和具有如SEQ ID NO:62和64-78中任一项所示的序列的CDR2。

74.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:29-31、33和35-61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

75.如权利要求65或74所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区与SEQ ID NO:62和64-78中任一项的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％，或至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

76.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、57、58、59、60或61中任一项的重链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，所述轻链可变区与SEQ ID NO:69、70、71、72、73、74、75、76、77或78的轻链可变区的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

77.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:43、45、46、47、48、49、50、51、54、55、57和58的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:69的CDR1、CDR2和CDR3序列。

78.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含如选自SEQ ID NO:53、54、51、55、58和59的重链可变区序列中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:78的CDR1、CDR2和CDR3序列。

79.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

(i)含如重链可变区序列SEQ ID NO:54所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含如SEQ ID NO:69所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区；

80.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

81.如权利要求8所述的方法，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

a)含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(c)含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(d)含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(e)含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(f)含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(g)含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(h)含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(i)含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(j)含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；

(k)含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区；或

(l)含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区。

82.如权利要求65所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体包含：

a)含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(b)含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(c)含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(d)含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区；

(e)含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区和含氨基酸序列的轻链可变区；或

(f)含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链可变区。

83.抗Siglec-7抗体，其阻断配体与Siglec-7的结合，并且与由以登录号ICLC PD99003保藏的杂交瘤产生的抗体QA79竞争结合Siglec-7，但不与抗体Z176或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。

84.如权利要求83所述的抗Siglect抗体，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为2G12的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

85.如权利要求83所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:2的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

86.如权利要求83所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:2的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

87.如权利要求83所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:2的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

88.如权利要求83至87中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

89.如权利要求83至87中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

90.如权利要求83至87中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:16的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

91.抗Siglec-7抗体，其具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体S7.7竞争结合Siglec-7，但不与抗体QA79或抗体Z176竞争结合Siglec-7。

92.如权利要求91所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为8A2的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

93.如权利要求91所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

94.如权利要求91所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

95.如权利要求91所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:106的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

96.如权利要求91至95中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

97.如权利要求91至95中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

98.如权利要求91至95中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:105或SEQ ID NO:107的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

99.抗Siglec-7抗体，其具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且与抗体Z176竞争结合Siglec-7，但不与抗体QA79或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。

100.如权利要求99所述的抗Siglec抗体，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为5D1的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

101.如权利要求99所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:3的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

102.如权利要求99所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:3的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

103.如权利要求99所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ IDNO:3的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

104.如权利要求99至103中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

105.如权利要求99至103中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

106.如权利要求99至103中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:17的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

107.如权利要求1所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有内化活性，不阻断配体与Siglec-7的结合，并且不与抗体Z176、抗体QA79或抗体S7.7竞争结合Siglec-7。

108.如权利要求107所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体与在图1和图2中被命名为4B12的包含V_H序列和V_L序列的抗体竞争。

109.如权利要求107所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:11的重链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

110.如权利要求107所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:11的重链可变区序列的CDR3的V_H区。

111.如权利要求107所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQID NO:11的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

112.如权利要求107至111中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

113.如权利要求107至111中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR3的V_L区。

114.如权利要求107至111中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗Siglec-7抗体具有包含SEQ ID NO:25的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的V_L区。

115.抗Siglec-7抗体，其具有包含图1中所示的V_H区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_H区。

116.抗Siglec-7抗体，其具有包含图1中所示的重链可变区序列之一的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

117.如权利要求116所述的抗Siglec-7抗体，其具有包含图1中所示的重链可变区序列的V_H区。

118.抗Siglec-7抗体，其具有包含图2中所示的V_L区序列的至少一个CDR或至少两个CDR的V_L区。

119.抗Siglec-7抗体，其具有包含图2中所示的轻链可变区序列之一的CDR1、CDR2和CDR3的V_H区。

120.如权利要求119所述的抗Siglec-7抗体，其具有包含图2中所示的轻链可变区序列的V_L区。

121.如权利要求83至120中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗体呈单价形式。

122.如权利要求83至120中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗体是多价Fab形式。

123.如权利要求83至120中任一项所述的抗Siglec-7抗体，其中所述抗体是IgG。

124.双特异性或多特异性抗体，其包含权利要求83至120中任一项所述的抗体。

125.抑制肿瘤细胞增殖的方法，所述方法包括向具有表达唾液酸化的Siglec-7配体的肿瘤的患者施用治疗有效量的权利要求83至123中任一项所述的抗体、或权利要求124所述的双特异性或多特异性抗体。

126.如权利要求125所述的方法，其中所述肿瘤具有升高数量的表达Siglec-7的CD8+浸润性T细胞。

127.鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的患者的方法，所述方法包括确定已经浸润肿瘤或转移性病灶的表达Siglec-7的CD8+ T细胞的比例。

128.鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的肿瘤患者的方法，所述方法包括确定所述肿瘤或转移性病灶中的至少10％的肿瘤浸润性CD8+ T细胞表达Siglec-7。

129.鉴定作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者的肿瘤患者的方法，所述方法包括确定肿瘤或转移性病灶中表达Siglec-7的CD8+浸润性T细胞的比例，其中所述肿瘤或转移性病灶中至少10％的浸润性CD8+ T表达Siglec-7的患者作为用抗Siglec-7抗体进行治疗的候选者。

130.如权利要求127、128或129所述的方法，其中使用抗Siglec-7抗体确定Siglec-7的表达水平。

131.如权利要求130所述的方法，其中通过流式细胞术或免疫组织化学确定所述表达水平。