CN108752475B - 抗人cd38抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了结合人CD38的抗体或其抗原结合部分，编码所述抗体或其抗原结合部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合部分的应用。

Description

抗人CD38抗体及其用途
技术领域
本申请大体涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及抗人CD38抗体领域及其用途。本申请开发了新的抗人CD38抗体，并提供了该抗体在治疗CD38介导的疾病中的用途。
背景技术
CD38是一种分子量大小为46KD的II型跨膜蛋白，其包括一个长C端胞外区(258个氨基酸)、一个跨膜区(21个氨基酸)和一个短的N端(21个氨基酸)。CD38的C端胞外区在跨膜信号传导过程中起重要作用，同时还具有糖苷水解酶活性[1]。当CD38作为一种ADP核糖基环化酶存在时，可以将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)转化为烟酰胺、腺苷二磷酸核糖(ADPR)，还可以将NAD+环化为环腺苷二磷酸核糖(cADPR)。这一系列生化过程被认为和胞外钙离子迁移有关，钙离子从内质网迁移需要cADPR作为二级信使[2]。关于CD38敲除小鼠的研究表明，CD38在NAD糖水解酶发挥活性功能的过程中是必不可少的[3]。另外CD38还可以通过T细胞受体(TCR)传导信号并参与细胞应答，启动免疫蛋白的转换分泌[4]。
CD38主要表达于淋巴细胞和髓系来源的细胞上。在部分非造血细胞中有较低的表达。CD38在造血细胞中的表达与细胞的分化状态和活化状态有关系，如大部分的骨髓胸腺细胞表达CD38，血液中循环流通的T细胞不产生CD38，当T细胞被活化时CD38表达产生。CD38表达于B细胞发育的各个阶段，其中在浆细胞中的表达量较高[5,6]。虽然CD38广泛表达于造血细胞中，但是CD38敲除后小鼠的造血功能并没有发生改变，这一结果表明CD38对小鼠的造血系统和淋巴系统来说并不是必需的[3]。
CD38的表达和多种疾病有关，如HIV感染[7]、系统红斑狼疮[8]和肿瘤。CD38在多种血液肿瘤中的表达量上调，如多发性骨髓瘤(MM)[9]、急性淋巴性白血病(ALL)[10]、慢性淋巴性白血病(CLL)[11]等。CD38的表达及其与疾病发展进展中的关联使其成为抗体治疗中的一个靶点。
多发性骨髓瘤(Multiple myeloma(MM))是一种浆细胞异常增生导致的恶性血液肿瘤，骨髓中增长异常的浆细胞不断累积并挤压正常造血细胞，症状显示为骨破坏。多发性骨髓瘤在血液肿瘤中占比约为10％，在所有肿瘤中的比率约为1％[12]。统计显示在2012年全球共有114,252例新增病例和80,119例死亡病例[13]。多发性骨髓瘤的发病率有一定的人种差异性，东亚地区的发病率要低于欧美地区，其中美国发病率为3.6/10万，中国发病率为0.6/10万(GLOBOCAN 2012)。近年来由于老年化程度升高和环境变化，国内的多发性骨髓瘤发病呈上升趋势[14]。
多发性骨髓瘤目前的主要治疗方法有干细胞移植、免疫调节剂(如来那度胺、泊马度胺等)和蛋白酶体抑制剂(如硼替佐米、卡非佐米等)治疗。这些已有治疗方法的缺陷在于对耐受复发型骨髓瘤的治疗效果差，并且对基因突变的病例或者髓外疾病的治疗不尽如人意。因此，寻求一种新的不同机制的治疗方法是非常有必要的。
在文献中已经描述了许多抗CD38抗体可用于血液肿瘤如骨髓瘤的治疗的实例，并且它们效果显著。如靶向CD38的全人源抗体daratumumab已经被证实可以通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)、补体依赖的细胞毒性作用(CDC)、抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(ADCP)等机制在体外杀死CD38+骨髓瘤细胞[15]，此抗体是首个上市的抗CD38抗体。另一人源化抗CD38抗体SAR650984在骨髓瘤细胞和CD38+的其他血液瘤细胞中也表现出了明显的杀伤作用，其通过ADCC、CDC、ADCP和直接诱导细胞凋亡的机制不仅在体外杀伤了肿瘤细胞，而且在重症联合免疫缺陷(SCID)鼠体内也能明显的抑制移植肿瘤Molp-8的生长[16]。
新的抗CD38抗体的开发和应用是本领域所需要的。
发明概述
第一方面，本申请提供了一种结合人CD38的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区及含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为NSWMH，所述HCDR2氨基酸序列为EIHPQSGRTNYNEKFKG，所述HCDR3氨基酸序列为DLLQFGNQYYYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RSSQSLVHSNGNTYLH，所述LCDR2氨基酸序列为KVSNRFS，所述LCDR3氨基酸序列为SQSTHVPLT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为SYTIH，所述HCDR2氨基酸序列为YINPSNGYTNYNQKFKD，所述HCDR3氨基酸序列为KYGNFYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RASENIYSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为NAKTLAE，所述LCDR3氨基酸序列为QHHYGTPYT；
其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27、28、31、33或者35所示。
在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29、30、32、34或者36所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：33所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：34所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：36所示。
第二方面，本申请提供了一种结合人CD38的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：27、28、31、33或者35中任一项具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：29、30、32、34或者36中任一项具有至少90％的一致性。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体能结合人CD38，并能通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用、抗体依赖的细胞介导的吞噬作用中的至少一种机制杀死CD38阳性细胞。在一些实施方案中，所述抗体能抑制肿瘤细胞的体内生长。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面或第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面或第二方面所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗CD38介导的疾病。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
第五方面，本申请提供了第一方面或第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗CD38介导的疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
第六方面，本申请提供了预防或治疗CD38介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面或第二方面所述的抗体或第四方面所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
附图说明
图1显示ELISA分析各重组抗hCD38单抗与不同种属CD38的结合能力。
图2显示在PBMC体系中评价重组抗hCD38单抗的ADCC活性。
图3显示在PBMC体系中评价重组抗hCD38单抗的ADCC活性。
图4显示在jurkat-dual-CD16a报告基因体系中评价重组抗hCD38单抗的ADCC活性。
图5显示在NK92-MI-CD16a体系中评价重组抗hCD38单抗的ADCC活性。
图6显示重组抗hCD38单抗的CDC活性。
图7显示重组抗hCD38单抗的ADCP活性。
图8显示重组抗hCD38单抗对CD38酶是否具有阻断作用的测试。
图9显示在PBMC体系中评价S5B8人源化分子的ADCC活性。
图10显示S5B8人源化分子在jurkat-dual-CD16a报告基因体系中的ADCC活性。
图11显示S5B8人源化分子在NK92-MI-CD16a体系中具有的ADCC活性。
图12显示S5B8人源化分子具有的ADCP活性。
图13显示S5B8人源化分子对CD38酶是否具有阻断作用的测试。
图14显示在RPMI8226人多发性骨髓瘤模型中S5B8人源化分子治疗组和对照组小鼠肿瘤体积的生长变化情况。
图15显示在PBMC体系中评价S5A10人源化分子的ADCC活性。
图16显示S5A10人源化分子在jurkat-dual-CD16a报告基因体系中具有的ADCC活性。
图17显示S5A10人源化分子在NK92-MI-CD16a体系中具有的ADCC活性。
图18显示S5A10人源化分子具有的ADCP活性。
图19显示S5A10人源化分子对CD38酶是否具有阻断作用的测试。
图20显示RPMI8226人多发性骨髓瘤模型中S5A10人源化分子治疗组和对照组小鼠肿瘤体积的生长变化情况。
序列说明
SEQ ID NO：1显示人(homo sapiens)CD38胞外区(hCD38)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2显示小鼠(mus musculus)CD38胞外区(mCD38)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3显示食蟹猴(Macaca fascicularis)CD38胞外区(mfCD38)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4显示His标签(His)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5显示人抗体IgG1的Fc段(Fc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6显示鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7显示人IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8显示人IgG2亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9显示人IgG4亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10显示鼠IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：11显示鼠IgG2a亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：12显示人κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：13显示人λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：14显示鼠κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：15显示鼠λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：16显示小鼠单链抗体S5B8的全长氨基酸序列，SEQ ID NO：33和34分别显示其VH和VK序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO：17显示小鼠单链抗体S5A10的全长氨基酸序列，SEQ ID NO：35和36分别显示其VH和VK序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO：18显示小鼠单链抗体S5B7的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：19显示小鼠单链抗体S5B5的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：20显示小鼠单链抗体S5D3的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：21显示小鼠单链抗体S5B4的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：22显示小鼠单链抗体S5E3的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：23和24分别显示抗CD38单抗daratumumab的轻链氨基酸序列和重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：25和26分别显示抗CD38单抗isatuximab的轻链氨基酸序列和重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：27和28分别显示S5B8的重链人源化版本S5B8VH-h1和S5B8VH-h2氨基酸序列。
SEQ ID NO：29和30分别显示S5B8的轻链人源化版本S5B8VK-h1和S5B8VK-h2氨基酸序列。
SEQ ID NO：31和32分别显示S5A10的重链人源化版本S5A10VH-h1和轻链人源化版本S5A10VK-h1的氨基酸序列。
发明详细描述
本申请的发明人通过抗体工程技术得到了新的抗人CD38抗体。在本申请的多个方面，提供了新的抗人CD38抗体或其抗原结合片段，编码该抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合片段的医学和生物学应用。根据本申请提供的抗体的可变区的序列，可构建全长的抗体分子作为药物用于治疗临床上由CD38介导的疾病。
除非另外指明，本申请的实施采用本领域常规的分子生物学、微生物学、细胞生物学、生物化学以及免疫学技术。
除非另外指明，本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常所理解的含义。
定义
如本文所用术语“抗体”，是指能够经由至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点特异性结合到标靶的免疫球蛋白分子。标靶包括但不限于碳水化合物、多聚核苷酸、脂质、多肽等。本文所使用的“抗体”不仅包括完整的(即全长的)抗体，而且还包括其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、其变异体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及任何其他包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的修改配置，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体及共价修饰的抗体。
通常，完整或全长的抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链含有重链变异区(VH)和第一、第二及第三恒定区(CH1、CH2及CH3)。每个轻链含有轻链变异区(VL)和恒定区(CL)。全长的抗体可以是任何种类的抗体，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或上述的子类)，但抗体不需要属于任何特定的类别。根据重链的恒定域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白指定为不同的类别。通常，免疫球蛋白有五种主要的类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，而且这些类别中有几个可以再被进一步区分成子类(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ、以及μ。不同类别的免疫球蛋白的子单元结构和三维结构是公知的。
如本文所用术语“抗原结合片段或抗原结合部分”，是指负责结合抗原的完整抗体分子的一部分或区域。抗原结合域可以包含重链变异区(VH)、轻链变异区(VL)或上述两者。VH和VL中的每个通常含有三个互补决定区CDR1、CDR2及CDR3。
本领域技术人员公知，互补决定区(CDR，通常有CDR1、CDR2及CDR3)是可变区中对抗体的亲和力和特异性影响最大的区域。VH或VL的CDR序列有两种常见的定义方式，即kabat定义和Chothia定义。(参阅例如Kabat,“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest”，National Institutes of Health,Bethesda，Md.(1991)；A1-Lazikani etal.，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；以及Martin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9268-9272(1989))。对于给定抗体的可变区序列，可以根据Kabat定义或者Chothia定义来确定VH和VL序列中CDR区序列。在本申请的实施方案中，利用Kabat定义CDR序列。
对于给定抗体的可变区序列，可以通过多种方式分析可变区序列中CDR区序列，例如可以利用在线软件Abysis确定(http://www.abysis.org/)。
抗原结合片段的实例包括但不限于：(1)Fab片段，其可以是具有VL-CL链和VH-CH1链的单价片段；(2)F(ab')2片段，其可以是具有两个Fab'片段的二价片段，该两个Fab'片段由铰链区的二硫桥(即Fab'的二聚物)连接；(3)具有抗体的单臂的VL和VH域的Fv片段；(4)单链Fv(scFv)，其可以是由VH域和VL域经由胜肽连接符组成的单一多胜肽链；以及(5)(scFv)2，其可以包含两个由胜肽连接符连接的VH域和两个VL域，该两个VL域是经由二硫桥与该两个VH域组合。
如本文所用术语“特异性结合”，是指两个分子之间的非随机结合反应，例如抗体至抗原表位的结合。
本文所用术语“单克隆抗体”指由基本同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能在少量个体中存在自然发生的突变以外，组成群体的各个抗体是相同的。本文所述单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于具体物种或属于具体抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而重链和/或轻链的余下部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，并且还包括这样的抗体的片段，只要它们能表现出所期望的生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。
本文所用术语“肿瘤”指由异常细胞生长形成的赘生物或实体病变。肿瘤可以是良性的、恶变前的或恶性的。
本文所用术语“恶性肿瘤”是指或描述哺乳动物的生理条件，其典型的特征在于不受调控的细胞生长。示例性恶性肿瘤包括：癌、黑素瘤肉瘤、淋巴瘤、白血病、生殖细胞瘤和胚细胞瘤。恶性肿瘤的更多具体实例包括：鳞状细胞癌(例如，鳞状上皮细胞癌)，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌的肺癌，腹膜癌，肝细胞癌，包括胃肠癌的胃癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，子宫颈癌，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，膀胱癌，尿路癌，肝细胞瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌(hepatic carcinoma)，肛门癌，阴茎癌，黑素瘤，多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤，脑癌及头颈癌以及相关转移灶。
本文所用术语“血液肿瘤”是指由于异常细胞的生长增殖不受控制引起的，在多数情况下这些不正常的细胞的起源部位是骨髓，这也正是血液细胞产生的地方。示例性血液肿瘤包括各类白血病、多发性骨髓瘤以及恶性淋巴瘤。血液肿瘤的更多具体实例包括：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、毛细胞性白血病(HCL)、T细胞幼淋巴细胞性白血病、大颗粒淋巴细胞白血病、幼年型粒-单核细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、伯基特白血病和成人T细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、原发性巨球蛋白血症(
Figure BDA0001696719520000101
macroglobulinemia)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性淋巴瘤、经典霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤、结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、母细胞NK细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、赛谢综合征、原发性皮肤CD30阳性T细胞淋巴增生病、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、非特指型外周T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤。
本文所用术语“白血病”为血液或骨髓的恶性肿瘤，特征在于白细胞的异常增多。白血病是广义术语，其涵盖了一系列疾病。因此，白血病是更广泛的称为血液肿瘤的疾病种类的一部分。白血病细分为多个大类；第一种分类是白血病的急性和慢性形式。急性白血病的特征在于未成熟的血细胞数量的快速增长。由于这些细胞的积聚使得骨髓不能制造健康的血细胞。慢性白血病的特征在于相对成熟、但仍为异常的白细胞的过度产生。通常通过数月或数年的发展，所述细胞的产生速率大大高于正常细胞，导致血液中有很多的异常白细胞。白血病也可以通过受累的血细胞进行细分。这样的分界将白血病划分为成淋巴细胞或淋巴细胞白血病和骨髓性(myeloid)或骨髓性(myelogenous)白血病。在成淋巴细胞或淋巴细胞白血病中，癌变发生在通常继续形成淋巴细胞的骨髓细胞类型中。在骨髓性(myeloid)或骨髓性(myelogenous)白血病中，癌变发生在通常继续形成红细胞、一些其他类型的白细胞和血小板的骨髓细胞类型中。结合这两种分类提供了总共四种主要类别。在这四种主要分类的每一种中，通常有一些亚类别。还存在分类方案之外的罕见类型。示例性的白血病包括：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、毛细胞性白血病(HCL)、T细胞幼淋巴细胞性白血病、大颗粒淋巴细胞白血病、幼年型粒-单核细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、伯基特白血病和成人T细胞性白血病。
本文所用术语“抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC)”是一种细胞介导的免疫防御机制，在靶细胞膜表面抗原结合了特异性抗体的情况下，激活免疫系统的效应细胞裂解靶细胞的作用。因其对已存在的抗体的依赖性，ADCC作用是适应性免疫反应的一部分，也是体液免疫反应的一部分，用于限制和消除感染。经典的ADCC作用由自然杀伤(NK)细胞介导，巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞也能介导ADCC作用。ADCC的作用机制包括穿孔素、颗粒酶作用途径，Fas与FasL作用途径以及TNF-α与TNFR-I作用途径。
本文所用术语“补体依赖的细胞毒性作用(complement dependentcytotoxicity，CDC)”是指补体参与的细胞毒作用，即通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合，形成复合物而激活补体经典途径，所形成的攻膜复合物对靶细胞发挥裂解效应。
本文所用术语“抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(antibody-dependent celluarphagocytosis，ADCP)”是指抗体与靶细胞(例如肿瘤细胞)表面的抗原特异性结合，随后抗体Fc段与效应细胞(巨噬细胞)表面Fcγ受体结合，诱导巨噬细胞吞噬靶细胞。ADCP通常由单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞以及树突细胞通过其细胞表面表达的FcγRIIa、FcγRI、FcγRIIIa介导，其中FcγRIIIa被认为是ADCP过程中最主要的Fcγ受体。
在本文给出的核酸序列中涉及兼并碱基(除了A、T、C、G常规碱基之外)的使用，其含义与本领域技术人员通常理解的相同。例如，R代表A或G；Y代表C或T，M代表A或C；K代表G或T；S代表C或G；W代表A或T；H代表A或C或T；B代表C或G或T；V代表A或C或G；D代表A或G或T；N代表A或C或G或T。
第一方面，本申请提供了一种结合人CD38的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区及含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为NSWMH，所述HCDR2氨基酸序列为EIHPQSGRTNYNEKFKG，所述HCDR3氨基酸序列为DLLQFGNQYYYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RSSQSLVHSNGNTYLH，所述LCDR2氨基酸序列为KVSNRFS，所述LCDR3氨基酸序列为SQSTHVPLT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为SYTIH，所述HCDR2氨基酸序列为YINPSNGYTNYNQKFKD，所述HCDR3氨基酸序列为KYGNFYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RASENIYSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为NAKTLAE，所述LCDR3氨基酸序列为QHHYGTPYT；
其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27、28、31、33或者35所示。
在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29、30、32、34或者36所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：33所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：34所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：36所示。
第二方面，本申请提供了一种结合人CD38的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：27、28、31、33或者35中任一项具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：29、30、32、34或者36中任一项具有至少90％的一致性。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体能结合人CD38，并能通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用、抗体依赖的细胞介导的吞噬作用中的至少一种机制杀死CD38阳性细胞。在一些实施方案中，所述抗体能抑制肿瘤细胞的体内生长。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面或第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，所述核酸分子可操作地连接到调控序列，调控序列可以被用所述载体转化过的宿主细胞识别。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面或第二方面所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗CD38介导的疾病。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述药物组合物还可包含下述中的一种或多种：润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂；悬浮剂；防腐剂，如苯甲酸、山梨酸和丙酸钙；增甜剂和/或调味剂等。
在一些实施方案中，可将本申请中的药物组合物配制为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、酏剂、悬液、乳剂、溶液、糖浆、栓剂或胶囊等形式。
在一些实施方案中，可以利用任何生理上可接受的给药方式递送本申请的药物组合物，这些给药方式包括但不限于：口服给药、肠胃外给药、经鼻给药、直肠给药、腹膜内给药、血管内注射、皮下给药、经皮给药、吸入给药等。
在一些实施方案中，可以通过混合具有所需纯度的试剂与视情况的药学上可接受的载体、赋形剂等，以冻干制剂或水溶液的形式配制用于治疗用途的药物组合物用于存储。
第五方面，本申请提供了第一方面或第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗CD38介导的疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
第六方面，本申请提供了预防或治疗CD38介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面或第二方面所述的抗体或第四方面所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为多发性骨髓瘤。
在其他方面，本申请还提供包含编码本申请抗体或其抗原结合部分的分离的核酸分子的载体以及包含所述核酸分子或载体的宿主细胞。
在其他方面，本申请还提供产生本申请抗体的方法。在一些实施方案中，产生抗体的方法包括培养宿主细胞以便于表达核酸。在一些实施方案中，产生抗体的方法还包括从宿主细胞培养基中回收抗体。
应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和变化。
以下实施例仅用于说明而非限制本申请范围的目的。
实施例
实施例1：重组蛋白的制备
制备抗CD38单抗的过程中用到多种不同的重组蛋白，包括人CD38胞外区(hCD38，SEQ ID NO：1)、小鼠CD38胞外区(mCD38，SEQ ID NO：2)和食蟹猴CD38胞外区(mfCD38，SEQID NO：3)。这些蛋白具有翻译后修饰(如糖基化或者二硫键等)，因而利用哺乳动物细胞表达系统更有利于保持重组蛋白的结构和功能。此外，为了有利于重组蛋白的纯化和单克隆抗体功能的鉴定，在这些重组蛋白的C端添加了His标签(His，SEQ ID：4)或者人抗体IgG1的Fc段(Fc，SEQ ID：5)或者鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc，SEQ ID：6)。抗体重链恒定区可以是人IgG1亚型(SEQ ID NO:7)，人IgG2亚型(SEQ ID NO:8)、人IgG4亚型(SEQ ID NO:9)或者鼠IgG1亚型(SEQ ID NO：10)，鼠IgG2a亚型(SEQ ID NO:11)，轻链恒定区可以是人κ亚型(SEQID NO:12)、人λ亚型(SEQ ID NO:13)或者鼠κ亚型(SEQ ID NO:14)、鼠λ亚型(SEQ ID NO：15)
根据Uniprot数据库的各种目的重组蛋白的氨基酸序列，设计并合成上述各种重组蛋白的基因(包含His标签或者Fc、mFc编码基因)。利用常规的分子生物学技术将合成的各种重组蛋白基因克隆至合适的真核表达载体(如invitrogen公司的pcDNA3.1等)，然后利用脂质体(如invitrogen公司的293fectin等)或者其他阳离子转染试剂(如PEI等)将制备的重组蛋白表达质粒转染入HEK293细胞(如invitrogen公司的HEK293F)，在无血清悬浮培养条件下培养3-4天。然后通过离心等方式收获培养上清。
His标签融合表达的重组蛋白利用金属螯合亲和层析柱(如GE公司的HisTrap FF等)对培养上清中的重组蛋白进行一步纯化。Fc和mFc融合表达的重组蛋白用ProteinA/G亲和层析柱(如GE公司的Mabselect SURE等)进行一步纯化。然后利用脱盐柱(如GE公司的Hitrap desaulting等)将重组蛋白保存缓冲液置换为PBS(pH7.0)或者其他合适的缓冲液。必要时，可以对抗体样品进行过滤除菌，然后分装保存于-20℃。
实施例2：鼠抗人CD38单抗的制备
1.小鼠免疫及免疫抗体库的制备
取6-8周龄BALB/c小鼠，免疫之前对小鼠进行尾静脉采血留本底血清。首次免疫取hCD38-His融合蛋白以费氏完全佐剂乳化，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白。间隔两周加强免疫，取hCD38-His融合蛋白以费式不完全佐剂乳化，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白，注射前断尾采血，共进行两次加强免疫。第四次免疫改用冲击免疫，以不加佐剂的hCD38-His重组抗原作为免疫原，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白，冲击免疫后3天处死小鼠，收集脾细胞。
使用小鼠淋巴细胞分离液(达科为，CAT#DKW33-R0100)对小鼠脾脏淋巴细胞进行分离，利用细胞总RNA提取试剂盒(天根，CAT#DP430)，将分离的淋巴细胞进行总RNA的提取。以提取的总RNA为模板，利用第一链cDNA合成试剂盒(Thermo scientific，CAT#K1621)分别合成重链可变区和轻链可变区，反转录引物采取基因特异性引物，引物配对区分别位于抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区，具体序列分别为PmCGR:TGCATTTGAACTCCTTGCC和PmCKR:CCATCAATCTTCCACTTGAC。将合成完成的cDNA立即存放于-70℃保存备用。然后，以反转录得到的cDNA为模板，参考文献(Journal of Immunological Methods，201(1997)，35–55)合成引物，并利用PCR分别扩增鼠抗体VH和VK，然后利用重叠延伸PCR技术，构建单链抗体(scFv)。最后将制备的小鼠单链抗体基因克隆至载体pADSCFV-S(实验技术流程可参见中国专利申请第201510097117.0号)，构建scFv库。此抗体库的库容达到3×10E8，正确率为60％。
2.小鼠免疫库的筛选和鉴定
按照与中国专利申请第201510097117.0号相似的实验流程，以重组hCD38-his为抗原，利用固相筛选策略筛选展示小鼠单链抗体库的噬菌体，通过结合、洗脱、中和、感染和扩增的方式共进行三轮筛选，最终获得多株序列不同但结合hCD38的鼠抗体。
实施例3：鼠单抗的鉴定
在实施例2中获得的多种抗体中，选取小鼠单链抗体S5B8(SEQ ID NO：16，VH和VK序列分别为SEQ ID NO：33和34)、S5A10(SEQ ID NO：17，VH和VK序列分别为SEQ ID NO：35和36)、S5B7(SEQ ID NO：18)、S5B5(SEQ ID NO：19)、S5D3(SEQ ID NO：20)、S5B4(SEQ ID NO：21)和S5E3(SEQ ID NO：22)，利用常规分子生物学方法制备重组人IgG1-κ/λ形式鼠-人嵌合抗体，同时参照美国专利申请US 7829673B2和US 8153765B2的公开内容，制备抗hCD38单抗daratumumab(轻链氨基酸序列为SEQ ID NO：23；重链氨基酸序列为SEQ ID NO：24)和isatuximab(轻链氨基酸序列为SEQ ID NO：25；重链氨基酸序列为SEQ ID NO：26)。
1.重组抗hCD38单抗的亲和力分析
利用Biacore X100测定IgG1嵌合抗体的亲和力。氨基偶联试剂盒、人抗体捕获试剂盒、CM5芯片和pH7.4的10×HBS-EP等相关试剂和耗材均购自GE healthcare。根据试剂盒中的说明书，使用氨基偶联的方法将抗人Fc段的抗体偶联至CM5芯片表面，然后稀释抗体蛋白至合适浓度，保证50-100RU左右的抗体被抗人Fc的抗体捕获。将hCD38-his设置一系列的浓度梯度(100nM、33nM、11nM、3.7nM、1.23nM)流经固定相表面，用3M的MgCl2对芯片表面进行再生，在25℃下测定各单克隆抗体的亲和力。使用Biacore X100评估软件2.0.1版本对Biacore数据进行分析，拟合结果如表1所示。
表1.不同重组抗hCD38单抗结合hCD38的亲和力常数
Figure BDA0001696719520000171
Figure BDA0001696719520000181
2.重组抗hCD38单抗与不同种属CD38的结合
将制备的hCD38-his、mCD38-his和mfCD38-his分别包被96孔ELISA板(1.5μg/ml，100μl/孔)，在4℃下包被过夜。利用封闭液(2％的牛奶-PBST)将包被的96孔ELISA板在37℃下封闭1小时，然后分别加入各重组抗CD38单抗，在37℃下结合1小时。之后用PBST洗涤ELISA板，加入HRP小鼠抗人IgG，在37℃下再结合1小时。之后用PBST洗涤ELISA板，并加入OPD底物显色液，5-10分钟后用1M的H2SO4溶液终止显色，使用酶标仪在492nm/630nm双波长下测定光密度值。结果如图1所示，各重组抗hCD38单抗都能识别人CD38胞外区，而不结合鼠CD38胞外区，其中S5B8可以交叉识别食蟹猴CD38胞外区。
实施例4：重组抗hCD38单抗的ADCC活性鉴定
1.重组抗hCD38单抗在PBMC体系中的ADCC活性评价
利用Ficoll密度梯度离心法从健康志愿者的全血中分离PBMC(外周血单核细胞)，在培养箱中放置待用。
采集健康志愿者的血液(各50mL)，其中所采集的血液由发明人及其同事作为志愿者提供，所有志愿者均已签署知情同意书。志愿者的纳入标准为：
1.年龄大于18周岁；
2.无HIV、HBV感染；
3.血常规检测正常；
4.非孕妇或哺乳期妇女。
将PBMC(效应细胞)和高表达CD38的靶细胞(daudi细胞)以效靶比50:1的比例混合并与梯度稀释(起始浓度20μg/ml起始，5倍梯度稀释，8个浓度点)的各种抗CD38单抗(S5B7、S5A10、S5B8、daratumumab或isatuximab)在培养箱中共同孵育6h，同时设置靶细胞自发释放(只有靶细胞，无效应细胞和CD38单抗)、靶细胞+效应细胞自发释放(只有靶细胞和效应细胞，无CD38单抗)、靶细胞最大释放(只有靶细胞，无效应细胞和CD38单抗)、培养基背景(只有培养基，无靶细胞、效应细胞和CD38单抗)和体积校正(只有培养基，无靶细胞、效应细胞和CD38单抗)等一系列对照孔，用培养基将对照组和各实验组体积保持一致。
检测前50min在靶细胞最大释放孔和体积校正孔中均加入同等体积的10X裂解液，待镜下观察靶细胞完全裂解后离心，取50μl上清，并加入50μl LDH检测液(CytoTox
Figure BDA0001696719520000191
非放射性细胞毒性检测试剂盒，promega，货号G1780)，避光孵育30min，孵育结束后加入50μl中止液(CytoTox
Figure BDA0001696719520000192
非放射性细胞毒性检测试剂盒，promega，货号G1780)，利用酶标仪在490/492nm波长下测定吸光值，并计算杀伤率。杀伤率(％)的计算公式为：
{实验组吸光值-(靶细胞+效应细胞自发释放)吸光值)}/{(靶细胞最大释放吸光值-体积校正吸光值)-(靶细胞自发释放吸光值-培养基背景吸光值)}*100。
基于PBMC体系的ADCC评价结果显示(图2和图3)，重组抗hCD38单抗S5A10和S5B8以及对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性，并且S5A10和S5B8的最大杀伤率均高于对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab。
2.重组抗hCD38单抗在报告基因体系中的ADCC活性评价
本申请发明人通过将CD16a质粒转入Invivogen公司的jurkat-dual细胞中，构建了jurkat-dual-CD16a报告基因细胞株。当ADCC效应发生时，活化信号通过CD16a分子转至下游的NFκB通路，最后通过荧光素酶检测ADCC活性。
将jurkat-dual-CD16a细胞和高表达CD38的靶细胞(daudi细胞)以效靶比10:1的比例混合并与梯度稀释(起始浓度1μg/ml起始，3倍梯度稀释，10个浓度点)的各种抗CD38单抗(S5A10、S5B8、daratumumab或isatuximab)在培养箱中共同孵育20h。离心取20μl上清，酶标仪中设置好自动上样程序，在每孔中加入50μl荧光素酶检测液quanti-luc(invivogen,货号rep-qlc2)并进行全波长检测测定荧光强度。
基于jurkat-dual-CD16a报告基因体系的ADCC结果显示(图4)，重组抗hCD38单抗S5A10和S5B8以及对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性，并且S5A10和S5B8的最大荧光强度均高于对照抗hCD38单抗daratumumab。
3.重组抗hCD38单抗在NK92体系中的ADCC活性评价
本申请的发明人通过将CD16a质粒转入NK92-MI细胞中，构建了NK92-MI-CD16a报告基因细胞株，用于评价ADCC效应。将NK92-MI-CD16a细胞和高表达CD38的靶细胞(例如daudi细胞)以效靶比3:2的比例混合并与梯度稀释(起始浓度10μg/ml起始，3倍梯度稀释，10个浓度点请说明具体的浓度梯度)的抗hCD38单抗(S5A10、S5B8、daratumumab或isatuximab)在培养箱中共同孵育6h，同时设置好靶细胞自发释放(只有靶细胞，无效应细胞和CD38单抗)、靶细胞+效应细胞自发释放(只有靶细胞和效应细胞，无CD38单抗)、靶细胞最大释放(只有靶细胞，无效应细胞和CD38单抗)、培养基背景(只有培养基，无靶细胞、效应细胞和CD38单抗)和体积校正(只有培养基，无靶细胞、效应细胞和CD38单抗)等一系列对照孔。检测前50min在靶细胞最大释放孔和体积校正孔中加入同等体积的裂解液，镜下观察靶细胞完全裂解后离心，取50μl上清，并加入50μl LDH检测液(CytoTox
Figure BDA0001696719520000201
非放射性细胞毒性检测试剂盒，promega，货号G1780)，避光孵育30min后加入50μl中止液(CytoTox
Figure BDA0001696719520000202
非放射性细胞毒性检测试剂盒，promega，货号G1780)，利用酶标仪在490/492nm波长下测定吸光值，并计算杀伤率。杀伤率(％)的计算公式为：
{实验组吸光值-(靶细胞+效应细胞自发释放)吸光值)}/{(靶细胞最大释放吸光值-体积校正吸光值)-(靶细胞自发释放吸光值-培养基背景吸光值)}*100。
基于NK92-MI-CD16a体系的ADCC评价结果显示(图5)，重组抗hCD38单抗S5A10和S5B8以及对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性。
实施例5：重组抗hCD38单抗的CDC活性测试
将抗hCD38单抗(S5A10、S5B8、S5B7或daratumumab)稀释至起始浓度10μg/ml，然后以3倍浓度梯度进行稀释，共获得8个浓度的稀释液。将高表达CD38的靶细胞(daudi细胞)计数后重悬至2.5*105个细胞/ml。将100μl重组抗hCD38单抗的各种浓度稀释液和80μl高表达CD38的靶细胞预先孵育15min，然后加入20μl的新鲜人血清(志愿者捐赠，参见实施例4)混匀。阳性对照孔为单独靶细胞、阴性对照孔为无细胞的培养基。培养箱中孵育18h，加入10μlCCK-8，4h后使用酶标仪在450nm处测定吸光值，根据450nm处的读数计算杀伤率。杀伤率计算公式为：
杀伤率(％)＝(阳性对照吸光值-实验组吸光值)/(阳性对照吸光值-阴性对照吸光值)*100。
结果显示(图6)，重组抗hCD38单抗S5A10和对照抗hCD38单抗daratumumab都有明显的CDC活性，S5B8在本项测试中的活性较弱。
实施例6：重组抗hCD38单抗的ADCP活性鉴定
利用Ficoll密度梯度离心法从健康志愿者的全血中分离PBMC(参见实施例4)，然后通过CD14磁珠(抗人CD14磁性粒子–DM(Anti-Human CD14Magnetic Particles–DM)，BD，货号557769)从PBMC中分选得到CD14+单核细胞。将CD14+单核细胞以8*105个细胞/孔的密度接种于12孔板中，并用10ng/ml MCSF诱导7天至分化成成熟的巨噬细胞。将高表达CD38的肿瘤细胞(daudi细胞)预先用CFSE染色后计数重悬，以8*105的细胞量和终浓度10μg/ml的抗hCD38单抗(S5A10、S5B8、daratumumab或isatuximab)或对照抗体(HIgG)共孵育15min，随后转移至巨噬细胞孔中。共同孵育3h后收集巨噬细胞，利用抗人CD14-APC对巨噬进行染色30min，PBS洗两次，利用流式细胞术(BD AccuriTMC6)检测APC(FL-4)和CFSE(FL-1)双通路，在巨噬细胞(APC阳性)细胞群中圈出CFSE阳性细胞群(吞噬了肿瘤细胞的巨噬细胞)，并以巨噬细胞本底的吞噬率作为起始，计算出各个样品的吞噬率。
结果显示(图7)，重组抗hCD38单抗S5A10和S5B8以及对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都具有ADCP活性。
实施例7：重组抗hCD38单抗的阻断CD38酶活性测试
CD38既是一种膜蛋白也是一种生物酶，参与体内多种生化反应。当环境中存在NGD时，CD38可以以NGD为底物，将NGD催化为CGDPR，这一生化反应可以通过分光光度法在Ex300，Em410的条件下检测CGDPR来确认。基于此原理对重组抗CD38单抗的阻断酶活性能力进行了评价。
将hCD38-His(参见实施例1)稀释至3μg/ml，NGD(sigma，货号N5131)用水稀释至400μM。将50μl hCD38-His与50μl的10μg/ml抗hCD38单抗(S5A10、S5B8、daratumumab或isatuximab)提前共孵育15min，然后加入50μl NGD。反应90min后在Ex300nm，Em410nm的条件下进行检测。结果显示(图8)，只有isatuximab表现出明显的阻断CD38酶活性的能力，而重组抗hCD38单抗S5B8和S5A10以及对照抗hCD38单抗daratumumab均无明显的阻断CD38酶活性的能力。
实施例8：鼠单抗S5B8的人源化
1.鼠单抗S5B8的人源化改造
对鼠抗体S5B8进行人源化改造以降低其免疫原性。将S5B8的重链可变区(VH，SEQID NO：33)和轻链可变区(VL，SEQ ID NO：34)分别与IMGT数据库中的人抗体胚系基因序列相比较，选择合适的胚系基因序列以提供抗体的框架区1至3(FR1+FR2+FR3)，选择合适的J区基因序列以提供框架区4(FR4)。模板可以根据多种因素选出，例如：抗体的相对总长度、CDR的大小、位于抗体框架区(FR)和超变区(CDR)之间连接处的氨基酸残基、序列整体的同源性等。所选的模板可以是多个序列的混合物或者可以是共有模板，目的是尽可能维持亲本互补决定区(CDR)的合适构象。对S5B8的重链进行CDR移植得到两个人源化版本S5B8VH-h1(SEQ ID NO：27)和S5B8VH-h2(SEQ ID NO：28)，对S5B8的轻链进行CDR移植得到两个人源化版本S5B8VK-h1(SEQ ID NO：29)和S5B8VK-h2(SEQ ID NO：30)。根据人源化抗体的氨基酸序列设计并合成抗体可变区基因，克隆至真核表达载体并组合表达人IgG1版本全抗体。
2.S5B8人源化分子的亲和力分析
参照实施例3，利用BIAcore测定人源化S5B8单抗结合hCD38和mfCD38的能力，分析数据分别如表2和表3所示。
表2.抗CD38人源化单抗结合hCD38的亲和力常数
Kon Koff KD
S5B8 1.957*10E5 3.486*10E-5 1.782*10E-10
S5B8VH-h1+S5B8VK-h1 1.173*10E5 4.352*10E-5 3.711*10E-10
S5B8VH-h1+S5B8VK-h2 3.091*10E5 2.764*10E-5 8.944*10E-11
S5B8VH-h2+S5B8VK-h1 6.616*10E4 2.686*10E-5 4.060*10E-10
S5B8VH-h2+S5B8VK-h2 3.133*10E5 1.521*10E-5 4.856*10E-11
表3.抗CD38人源化单抗结合mfCD38的亲和力常数
Kon Koff KD
S5B8 5.827*10E4 1.83*10E-4 3.14*10E-9
S5B8VH-h1+S5B8VK-h1 7.24*10E4 9.841*10E-4 1.359*10E-8
S5B8VH-h1+S5B8VK-h2 7.923*10E4 4.083*10E-4 5.153*10E-9
S5B8VH-h2+S5B8VK-h1 6.855*10E4 6.622*10E-4 9.66*10E-9
S5B8VH-h2+S5B8VK-h2 8.288*10E4 2.888*10E-4 3.485*10E-9
isatuximab 1.407*10E6 6.45*10E-4 4.584*10E-10
实施例9：S5B8人源化分子的ADCC活性鉴定
1.S5B8人源化分子在PBMC体系中的ADCC活性评价
参照实施例4，基于PBMC体系对S5B8人源化分子进行ADCC活性评价。
结果显示(图9)，S5B8人源化分子改造后ADCC杀伤率有一定程度的下降，其中S5B8VH-h1+S5B8VK-h2和S5B8VH-h2+S5B8VK-h2仍能保持较高的活性。
2.S5B8人源化分子在报告基因体系中的ADCC活性评价
参照实施例4，基于jurkat-dual-CD16a体系对S5B8人源化分子进行ADCC活性评价。结果显示(图10)，S5B8人源化分子S5B8VH-h2+S5B8VK-h2和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性。
3.S5B8人源化分子在NK92体系中的ADCC活性评价
参照实施例4，基于NK92-MI-CD16a体系对S5B8人源化分子进行ADCC活性评价。基于NK92-MI-CD16a体系的ADCC评价结果显示(图11)，S5B8人源化分子S5B8VH-h2+S5B8VK-h2和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性。
实施例10：S5B8人源化分子的ADCP活性鉴定
参照实施例6，基于巨噬细胞对S5B8人源化分子进行ADCP活性评价。结果显示(图12)，S5B8人源化分子S5B8VH-h2+S5B8VK-h2和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都具有ADCP活性。
实施例11：S5B8人源化分子的阻断CD38酶活性鉴定
参照实施例7，对S5B8人源化分子S5B8VH-h2+S5B8VK-h2的阻断CD38酶活性的能力进行了评价，不同于实施例7的是，各抗体(S5B8、S5B8VH-h2+S5B8VK-h2、daratumumab或isatuximab)的浓度为15μg/ml。结果显示(图13)，只有对照抗hCD38单抗isatuximab表现出明显的阻断CD38酶活性的能力，S5B8人源化分子S5B8VH-h2+S5B8VK-h2以及对照抗hCD38单抗daratumumab均无明显的阻断CD38酶活性的能力。
实施例12：S5B8人源化分子的体内活性评价
收集指数生长期的骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞，用PBS重悬至适合浓度并与基质胶以1:1的比例混合，然后用于6-8周雌性NOD/SCID小鼠的皮下肿瘤接种。细胞接种前一天，将小鼠进行60Co照射处理(150rad)。待肿瘤平均体积为80-100mm3时，根据动物体重和肿瘤体积对入选动物进行随机分组，保证不同组别间的肿瘤体积相似。分组当天开始给药，肿瘤细胞接种当天定义为第0天。给药方案见表4。
每周测量三次小鼠的体重和肿瘤的大小。肿瘤大小计算公式：
肿瘤体积(mm3)＝0.5×(肿瘤长径×肿瘤短径2)。
当对照组小鼠瘤体积的平均值超过2000mm3时终止实验，对所有实验动物实施安乐死并称体重，剥离肿瘤组织并称量肿瘤重量。所有实验结果以平均瘤体积±SEM(平均标准误差)表示。在最后一次给药后对各实验组进行统计分析。用独立样本T检验方法比较治疗组(组2、3和4)的相对肿瘤体积和瘤重与对照组(组1)的相对肿瘤体积和瘤重相比有无显著性异。
表4.RPMI8226动物模型中的给药方案
Figure BDA0001696719520000251
相对肿瘤体积结果显示(图14)，S5B8人源化单抗S5B8VH-h2+S5B8Vk-h2具有良好的抑制肿瘤生长的作用，并且和来那度胺联合用药后提高了来那度胺的抗肿瘤效果。
其中S5B8人源化单抗S5B8VH-h2+S5B8Vk-h2治疗组与对照组相比具有显著的统计学差异(p＝0.043)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为56％；测试药来那度胺(50mg/kg)治疗组与对照组相比不具有显著的统计学差异(p＝0.344)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为25％；S5B8VH-h2+S5B8Vk-h2(10mg/kg)+来那度胺(50mg/kg)治疗组与对照组相比具有显著的统计学差异(p＝0.028)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为59％。瘤重分析结果(未示出)与相对瘤体积分析结果基本吻合。
实施例13：鼠单抗S5A10的人源化
1.鼠单抗S5A10的人源化改造
参照实施例8，对S5A10的重链(VH，SEQ ID NO:35)进行CDR移植得到人源化版本S5A10VH-h1(SEQ ID NO:31)，对S5A10的轻链(VL，SEQ ID NO:36)进行CDR移植得到人源化版本S5A10VK-h1(SEQ ID NO:32)。根据人源化抗体的氨基酸序列设计并合成抗体可变区基因，克隆至真核表达载体并组合表达人IgG1版本全抗体，S5A10-h1。
2.S5A10人源化分子的亲和力分析
参照实施例3，利用BIAcore测定人源化S5A10单抗结合hCD38的能力，分析数据如表5所示。
表5.抗CD38人源化单抗结合hCD38的亲和力常数
Kon Koff KD
daratumumab 4.834*10E5 3.006*10E-3 6.217*10E-9
S5A10 5.335*10E5 1.605*10E-3 3.01*10E-9
S5A10-h1 6.563*10E5 1.789*10E-3 2.726*10E-9
实施例14：S5A10人源化分子的ADCC活性鉴定
1.S5A10人源化分子在PBMC体系中的ADCC活性评价
参照实施例4，基于PBMC体系对S5A10人源化分子进行ADCC活性评价。
结果显示(图15)，S5A10人源化分子S5A10-h1改造后ADCC活性和鼠单抗S5A10保持一致，具有明显的ADCC活性。
2.S5A10人源化分子在报告基因体系中的ADCC活性评价
参照实施例4，基于jurkat-dual-CD16a体系对S5A10人源化分子进行ADCC活性评价。结果显示(图16)，S5A10人源化分子S5A10-h1和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性。
3.S5A10人源化分子在NK92体系的ADCC活性评价
参照实施例4，基于NK92-MI-CD16a体系对S5A10人源化分子进行ADCC活性评价。基于NK92-MI-CD16a体系的ADCC评价结果显示(图17)，S5A10人源化分子S5A10-h1和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都有优异的ADCC活性。
实施例15：S5A10人源化分子的ADCP活性鉴定
参照实施例6，基于巨噬细胞对S5A10人源化分子进行ADCP活性评价。结果显示(图18)，S5A10人源化分子S5A10-h1和对照抗hCD38单抗daratumumab和isatuximab都具有ADCP活性。
实施例16：S5A10人源化分子的阻断CD38酶活性鉴定
参照实施例7，对S5A10人源化分子S5A10-h1的阻断CD38酶活性的能力进行了评价，不同于实施例7的是各抗体(S5A10、S5A10-h1、daratumumab或isatuximab)的浓度为15μg/ml。结果显示(图19)，只有对照抗hCD38单抗isatuximab表现出明显的阻断CD38酶活性的能力，S5A10人源化分子S5A10-h1以及对照抗hCD38单抗daratumumab均无明显的阻断CD38酶活性的能力。
实施例17：S5A10人源化分子的体内活性评价
参照实施例12，对S5A10人源化分子进行体内抑瘤活性评价。给药方案见表6。
表6.RPMI8226动物模型中的给药方案
Figure BDA0001696719520000271
相对肿瘤体积结果显示(图20)，S5A10人源化单抗S5A10-h1具有很好的抑制肿瘤生长的作用，并且和来那度胺联合用药后提高了来那度胺的抗肿瘤效果。
其中S5A10人源化单抗S5A10-h1(10mg/kg)治疗组与对照组相比具有显著的统计学差异(p＝0.027)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为60％；测试药来那度胺(50mg/kg)治疗组与对照组相比不具有显著的统计学差异(p＝0.344)(p＝0.344)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为25％；S5A10-h1(10mg/kg)+来那度胺(50mg/kg)治疗组相较对照组统计学上有显著性差异(p＝0.014)，相对肿瘤抑制率TGI(％)为69％；瘤重分析结果(未示出)与相对瘤体积分析结果基本吻合。
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Figure BDA0001696719520000291
Hematologic Malignancies.J Clin Cancer Res；20(17)；4574–83.
序列表
<110> 北京智仁美博生物科技有限公司
<120> 抗人CD38抗体及其用途
<130> 18C11143CN
<160> 36
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 258
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Val Pro Arg Trp Arg Gln Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg
1 5 10 15
Phe Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His
20 25 30
Pro Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys
35 40 45
Gly Ala Phe Ile Ser Lys His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr
50 55 60
Gln Pro Leu Met Lys Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile
65 70 75 80
Leu Leu Trp Ser Arg Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val
85 90 95
Gln Arg Asp Met Phe Thr Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala
100 105 110
Asp Asp Leu Thr Trp Cys Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr
115 120 125
Gln Ser Cys Pro Asp Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser
130 135 140
Val Phe Trp Lys Thr Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp
145 150 155 160
Val Val His Val Met Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Phe Gly Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys
180 185 190
Val Gln Thr Leu Glu Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser
195 200 205
Arg Asp Leu Cys Gln Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile
210 215 220
Ser Lys Arg Asn Ile Gln Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp
225 230 235 240
Lys Phe Leu Gln Cys Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser
245 250 255
Glu Ile
<210> 2
<211> 260
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 2
Leu Arg Pro Arg Ser Leu Leu Val Trp Thr Gly Glu Pro Thr Thr Lys
1 5 10 15
His Phe Ser Asp Ile Phe Leu Gly Arg Cys Leu Ile Tyr Thr Gln Ile
20 25 30
Leu Arg Pro Glu Met Arg Asp Gln Asn Cys Gln Glu Ile Leu Ser Thr
35 40 45
Phe Lys Gly Ala Phe Val Ser Lys Asn Pro Cys Asn Ile Thr Arg Glu
50 55 60
Asp Tyr Ala Pro Leu Val Lys Leu Val Thr Gln Thr Ile Pro Cys Asn
65 70 75 80
Lys Thr Leu Phe Trp Ser Lys Ser Lys His Leu Ala His Gln Tyr Thr
85 90 95
Trp Ile Gln Gly Lys Met Phe Thr Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr
100 105 110
Ile Ala Asp Asp Leu Arg Trp Cys Gly Asp Pro Ser Thr Ser Asp Met
115 120 125
Asn Tyr Val Ser Cys Pro His Trp Ser Glu Asn Cys Pro Asn Asn Pro
130 135 140
Ile Thr Val Phe Trp Lys Val Ile Ser Gln Lys Phe Ala Glu Asp Ala
145 150 155 160
Cys Gly Val Val Gln Val Met Leu Asn Gly Ser Leu Arg Glu Pro Phe
165 170 175
Tyr Lys Asn Ser Thr Phe Gly Ser Val Glu Val Phe Ser Leu Asp Pro
180 185 190
Asn Lys Val His Lys Leu Gln Ala Trp Val Met His Asp Ile Glu Gly
195 200 205
Ala Ser Ser Asn Ala Cys Ser Ser Ser Ser Leu Asn Glu Leu Lys Met
210 215 220
Ile Val Gln Lys Arg Asn Met Ile Phe Ala Cys Val Asp Asn Tyr Arg
225 230 235 240
Pro Ala Arg Phe Leu Gln Cys Val Lys Asn Pro Glu His Pro Ser Cys
245 250 255
Arg Leu Asn Thr
260
<210> 3
<211> 258
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 3
Leu Pro Arg Trp Arg Gln Gln Trp Ser Gly Ser Gly Thr Thr Ser Arg
1 5 10 15
Phe Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Val His
20 25 30
Pro Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys
35 40 45
Gly Ala Phe Ile Ser Lys Tyr Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr
50 55 60
Gln Pro Leu Val Lys Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Thr
65 70 75 80
Leu Leu Trp Ser Arg Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val
85 90 95
Gln Arg Asp Met Phe Thr Leu Glu Asp Met Leu Leu Gly Tyr Leu Ala
100 105 110
Asp Asp Leu Thr Trp Cys Gly Glu Phe Asn Thr Phe Glu Ile Asn Tyr
115 120 125
Gln Ser Cys Pro Asp Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser
130 135 140
Val Phe Trp Lys Thr Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Thr Ala Cys Gly
145 150 155 160
Val Val His Val Met Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Phe Gly Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys
180 185 190
Val Gln Ala Leu Glu Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser
195 200 205
Arg Asp Leu Cys Gln Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile
210 215 220
Ser Lys Arg Asn Ile Arg Phe Phe Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp
225 230 235 240
Lys Phe Leu Gln Cys Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Leu Ser
245 250 255
Gly Ile
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
His His His His His His
1 5
<210> 5
<211> 232
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 6
<211> 232
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 6
Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile
20 25 30
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
50 55 60
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln
85 90 95
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val
115 120 125
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu
145 150 155 160
Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr
165 170 175
Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr
195 200 205
Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
210 215 220
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
225 230
<210> 7
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 8
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 9
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 10
<211> 324
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 10
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 11
<211> 330
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 11
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
145 150 155 160
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
165 170 175
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
180 185 190
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
195 200 205
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
210 215 220
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
245 250 255
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
260 265 270
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
275 280 285
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
290 295 300
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
305 310 315 320
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
325 330
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 13
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 14
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 15
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 15
Gly Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro
35 40 45
Val Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu
65 70 75 80
Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val
85 90 95
Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
100 105
<210> 16
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Ala Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile His Pro Gln Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Asp Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Leu Gln Phe Gly Asn Gln Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr
130 135 140
Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile
145 150 155 160
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
165 170 175
Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
210 215 220
Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu
225 230 235 240
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
245 250
<210> 17
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Pro Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu
145 150 155 160
Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser
165 170 175
Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile
195 200 205
Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His
210 215 220
Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
225 230 235 240
<210> 18
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Leu Pro Gly Thr Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Trp Gly Gln Gly Thr Ser Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser
130 135 140
Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
145 150 155 160
Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile
180 185 190
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn
195 200 205
Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
210 215 220
Gly Asn Gly Ala Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys
<210> 19
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Gln Val Lys Leu Gln Gln Phe Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Thr Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Pro Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Gly Asn Tyr Gly Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys
210 215 220
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 20
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Tyr Asp Asn Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met
130 135 140
Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln
145 150 155 160
Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
165 170 175
Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr
210 215 220
Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
225 230 235 240
<210> 21
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Leu Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Gly Asn Tyr Gly Asp Tyr Thr Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys
210 215 220
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Met Lys
<210> 22
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Ser Arg Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Gly Asn Tyr Gly Asp Phe Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Phe
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys
210 215 220
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Met Lys
<210> 23
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Lys Ile Leu Trp Phe Gly Glu Pro Val Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 24
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 25
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 26
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 27
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile His Pro Gln Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Leu Gln Phe Gly Asn Gln Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile His Pro Gln Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Leu Gln Phe Gly Asn Gln Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Pro Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Ala Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile His Pro Gln Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Val Asp Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Leu Gln Phe Gly Asn Gln Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105 110
<210> 35
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Pro Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105

Claims (11)

1.一种结合人CD38的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区及含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为NSWMH，所述HCDR2氨基酸序列为EIHPQSGRTNYNEKFKG，所述HCDR3氨基酸序列为DLLQFGNQYYYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RSSQSLVHSNGNTYLH，所述LCDR2氨基酸序列为KVSNRFS，所述LCDR3氨基酸序列为SQSTHVPLT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为SYTIH，所述HCDR2氨基酸序列为YINPSNGYTNYNQKFKD，所述HCDR3氨基酸序列为KYGNFYAMDY，所述LCDR1氨基酸序列为RASENIYSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为NAKTLAE，所述LCDR3氨基酸序列为QHHYGTPYT；
其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
2.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27、28、31、33或者35所示。
3.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29、30、32、34或者36所示。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：33所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：34所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：35所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：36所示。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中
所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)；和/或
所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
6.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体为全人源抗体。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体。
8.核酸分子，其编码权利要求1-7中任一项所述的抗体。
9.药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
10.权利要求1-7中任一项所述的抗体在制备用于治疗CD38介导的肿瘤的药物中的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述肿瘤为恶性肿瘤。
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