CN109180816B - 抗人tim-3抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了结合人TIM‑3的抗体或其抗原结合部分，编码所述抗体或其抗原结合部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合部分的应用。

Description

抗人TIM-3抗体及其用途
技术领域
本申请大体涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及抗人TIM-3抗体领域及其用途。本申请开发了新的抗人TIM-3抗体，并提供了该抗体在预防或治疗TIM-3介导的疾病中的用途。
背景技术
T淋巴细胞免疫球蛋白粘蛋白-3(TIM-3)是T淋巴细胞免疫球蛋白粘蛋白(TIM)家族成员之一，人的TIM基因家族还包括TIM-1和TIM-4。T淋巴细胞免疫球蛋白粘蛋白最早是在2002年由Monney等人研究哮喘易感基因过程中在小鼠体内发现并鉴定的一个新的基因家族[1]，后续对人的T淋巴细胞免疫球蛋白粘蛋白也进行了广泛和深入的研究。
研究发现TIM-3有多个配体，已知的包括S型凝集素半乳糖凝素-9(Gal-9)、高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、癌胚抗原相关细胞粘附分子(癌胚抗原相关细胞粘附分子)以及模式识别受体凋亡细胞上的磷脂酰丝氨酸(PtdSer)，因此其作用机理相对比较复杂。
最初，TIM-3被认为特异地表达在T细胞上，直接调节T细胞反应，近来发现TIM-3表达在多种免疫细胞表面，参与多种T细胞调节、免疫自稳和凋亡细胞清除过程。TIM-3高表达于辅助性T细胞1(Th1)、细胞毒性T细胞1(Tc1)和辅助性T细胞17(Th17)上，并提供给T细胞一种负性共刺激信号，引起T细胞的程序性死亡或是免疫耐受，因此TIM-3属于一类下调免疫应答的共抑制分子[2]。此外，表达于树突状细胞(DC细胞)表面的TIM-3会阻碍DC细胞的活化和分化[3]。TIM-3还表达于自然杀伤细胞(NK细胞)，过表达TIM-3的NK细胞功能下降，不能有效分泌IFN-γ等因子，TIM-3的过表达标志着NK细胞的耗竭[4]。
TIM-3在肿瘤免疫调节和自身免疫疾病调节等中得到广泛研究。尤其是在肿瘤免疫调节方面，临床前研究发现无论是在血液肿瘤还是实体瘤中，TIM-3均过表达于耗竭的同时高表达PD-1的CD8+T细胞表面，该类T细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF的能力明显下降。在非小细胞肺癌患者中，三分之一的浸润性CD8+T细胞表达TIM-3，且共表达PD-1[5]。在滤泡性B细胞非霍奇金淋巴瘤患者中，三分之一的淋巴结中的CD4+T细胞和CD8+T细胞都表达TIM-3,且共表达PD-1[6]。近年来在免疫治疗研究中证明，阻断TIM-3的信号以及联合处理可有效抑制肿瘤生长。临床前研究发现，在结肠癌的癌症小鼠模型中，单独阻断TIM-3和单独阻断PD-1都能达到一定的抑瘤效果，但是同时阻断TIM-3和PD-1信号能达到更有效的阻断效果[7]。在B16F10恶性黑色素瘤的临床前研究中发现，在小鼠模型中，TIM-3和PD-1双靶点的联合治疗有效地提高了抑瘤率[7]。在急性髓细胞性白血病(AML)小鼠模型中，与单独阻断PD-1实验组相比，联合用药，同时抑制TIM-3和PD-1的信号，有效的延长了小鼠的生存期[8]。在CT26肿瘤模型小鼠中，与单独用药实验组比较，TIM-3与PD-L1双靶点的联合用药也表现出良好的抑瘤效果，且在体外证明了可以有效提高浸润性T细胞分泌IFN-γ的功能[9]。因此推测在临床上，可以用阻断TIM-3的药物并联合其他药物拓展新的免疫治疗方法，这可能会给癌症病人带来更多的生机。
基于临床需求，探索和研发可以抑制TIM-3信号的药物具有重要的生物学和医学意义。
发明概述
第一方面，本申请提供了一种结合人TIM-3的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMH，所述HCDR2氨基酸序列为RIDPENGNTIYDPKFQG，所述HCDR3氨基酸序列为DFGYIAWFAY，所述LCDR1氨基酸序列为KASQNVVTAVA，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRYT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSSYPYT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQDVNNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为AASTLQS，所述LCDR3氨基酸序列为QQMKDAPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为EYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DAYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FVSNTGAIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为EYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNSWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24、25、26、27、28或者32所示。
在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29、30、31或者33所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：26所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示。
第二方面，本申请提供了一种结合人TIM-3的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：24、25、26、27、28或者32中任何一项具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：29、30、31或者33中任何一项具有至少90％的一致性。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区。在第一方面和第二方面的一些具体实施方案中，所述IgG1亚型重链恒定区为Fc功能削弱的突变体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面或第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面或第二方面所述的抗体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于预防或治疗TIM-3介导的疾病。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌或胰腺癌。
第五方面，本申请提供了第一方面或第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗TIM-3介导的疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌或胰腺癌。
第六方面，本申请提供了预防或治疗TIM-3介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面或第二方面所述的抗体或第四方面所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
在一些实施方案中，所述恶性肿瘤为黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌或胰腺癌。
附图说明
图1显示ELISA分析不同抗人TIM-3单克隆抗体竞争C1结合TIM-3的能力。
图2显示ELISA分析不同抗人TIM-3单克隆抗体与不同种属TIM-3-His蛋白的结合能力。
图3显示不同抗人TIM-3(hTIM-3)单克隆抗体在人血清中的稳定性。
图4显示不同抗TIM-3单克隆抗体对T细胞分泌IFN-γ的促进作用。
图5显示不同抗TIM-3单克隆抗体对肿瘤生长抑制的效果。
图6显示不同抗TIM-3单克隆抗体与派姆单抗(Keytruda)联用对肿瘤生长抑制的效果。
图7显示抗TIM-3单克隆抗体与阿特珠单抗(Atezolizumab)联用对T细胞激活的促进作用。
图8显示抗TIM-3单克隆抗体与阿特珠单抗联用对肿瘤生长抑制的效果。
序列说明
SEQ ID NO：1显示人(homo sapiens)TIM-3胞外区(hTIM-3)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2显示人(homo sapiens)TIM-3胞外区免疫球蛋白样结构域(hTIM-3-D1)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3显示小鼠(mus musculus)TIM-3胞外区(mTIM-3)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4显示猕猴(Macaca mulatta)TIM-3胞外区(mmTIM-3)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5显示His标签(His)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6显示人抗体IgG1的Fc段(Fc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7显示鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8显示人IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9显示人IgG2亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10显示人IgG4亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：11显示鼠IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：12显示鼠IgG2a亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：13显示人κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：14显示人λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：15显示鼠κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：16显示鼠λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：17显示人IgG1亚型为Fc功能削弱的突变体IgG1m3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：18显示小鼠单链抗体S6A1的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：19显示小鼠单链抗体S7A3的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：20显示小鼠单链抗体S7G3的全长氨基酸序列。
SEQ ID NO：21显示全人源单链抗体S3C2的全长氨基酸序列，其中SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33分别显示全人源单链抗体S3C2的VH和VK的氨基酸序列。
SEQ ID NO：22和23分别显示抗人TIM-3全抗体C1的VH氨基酸序列和VK氨基酸序列。
SEQ ID NO：24重链可变区突变体H3B5VH的氨基酸序列。
SEQ ID NO：25重链可变区突变体H4G4VH的氨基酸序列。
SEQ ID NO：26重链可变区突变体H8G4VH的氨基酸序列。
SEQ ID NO：27重链可变区突变体H8G8VH的氨基酸序列。
SEQ ID NO：28重链可变区突变体H9H4VH的氨基酸序列。
SEQ ID NO：29轻链可变区突变体L1F10的氨基酸序列。
SEQ ID NO：30轻链可变区突变体L2B3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：31轻链可变区突变体L4C10的氨基酸序列。
发明详细描述
本申请的发明人通过抗体工程技术得到了新的抗人TIM-3抗体。在本申请的多个方面，提供了新的抗人TIM-3抗体或其抗原结合片段，编码该抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合片段的医学和生物学应用。根据本申请提供的抗体的可变区的序列，可构建全长的抗体分子作为药物用于治疗临床上由TIM-3介导的疾病。
除非另外指明，本申请的实施采用本领域常规的分子生物学、微生物学、细胞生物学、生物化学以及免疫学技术。
除非另外指明，本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常所理解的含义。
定义
如本文所用术语“抗体”，是指能够经由至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点特异性结合到标靶的免疫球蛋白分子。标靶包括但不限于碳水化合物、多聚核苷酸、脂质、多肽等。本文所使用的“抗体”不仅包括完整的(即全长的)抗体，而且还包括其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、其变异体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及任何其他包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的修改配置，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体及共价修饰的抗体。
通常，完整或全长的抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链含有重链变异区(VH)和第一、第二及第三恒定区(CH1、CH2及CH3)。每个轻链含有轻链变异区(VL)和恒定区(CL)。全长的抗体可以是任何种类的抗体，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或上述的子类)，但抗体不需要属于任何特定的类别。根据重链的恒定域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白指定为不同的类别。通常，免疫球蛋白有五种主要的类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，而且这些类别中有几个可以再被进一步区分成子类(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ、以及μ。不同类别的免疫球蛋白的子单元结构和三维结构是公知的。
如本文所用术语“抗原结合片段或抗原结合部分”，是指负责结合抗原的完整抗体分子的一部分或区域。抗原结合域可以包含重链变异区(VH)、轻链变异区(VL)或上述两者。VH和VL中的每个通常含有三个互补决定区CDR1、CDR2及CDR3。
本领域技术人员公知，互补决定区(CDR，通常有CDR1、CDR2及CDR3)是可变区中对抗体的亲和力和特异性影响最大的区域。VH或VL的CDR序列有两种常见的定义方式，即kabat定义和Chothia定义。(参阅例如Kabat,“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest”，National Institutes of Health,Bethesda，Md.(1991)；A1-Lazikani etal.，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；以及Martin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9268-9272(1989))。对于给定抗体的可变区序列，可以根据Kabat定义或者Chothia定义来确定VH和VL序列中CDR区序列。在本申请的实施方案中，利用Kabat定义CDR序列。
对于给定抗体的可变区序列，可以通过多种方式分析可变区序列中CDR区序列，例如可以利用在线软件Abysis确定(http://www.abysis.org/)。
抗原结合片段的实例包括但不限于：(1)Fab片段，其可以是具有VL-CL链和VH-CH1链的单价片段；(2)F(ab')2片段，其可以是具有两个Fab'片段的二价片段，该两个Fab'片段由铰链区的二硫桥(即Fab'的二聚物)连接；(3)具有抗体的单臂的VL和VH域的Fv片段；(4)单链Fv(scFv)，其可以是由VH域和VL域经由胜肽连接符组成的单一多胜肽链；以及(5)(scFv)2，其可以包含两个由胜肽连接符连接的VH域和两个VL域，该两个VL域是经由二硫桥与该两个VH域组合。
如本文所用术语“特异性结合”，是指两个分子之间的非随机结合反应，例如抗体至抗原表位的结合。
本文所用术语“单克隆抗体”指由基本同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能在少量个体中存在自然发生的突变以外，组成群体的各个抗体是相同的。本文所述单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于具体物种或属于具体抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而重链和/或轻链的余下部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，并且还包括这样的抗体的片段，只要它们能表现出所期望的生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。
本文所用术语“肿瘤”指由异常细胞生长形成的赘生物或实体病变。肿瘤可以是良性的、恶变前的或恶性的。
本文所用术语“恶性肿瘤”是指或描述哺乳动物的生理条件，其典型的特征在于不受调控的细胞生长。示例性恶性肿瘤包括：癌、黑素瘤肉瘤、淋巴瘤、白血病、生殖细胞瘤和胚细胞瘤。恶性肿瘤的更多具体实例包括：肾癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌的肺癌，膀胱癌，乳腺癌，宫颈癌，结肠癌，肝癌(hepatic carcinoma)，包括胃肠癌的胃癌，前列腺癌，胰腺癌，腹膜癌，肝细胞癌，成胶质细胞瘤，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，尿路癌，肝细胞瘤，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，鳞状细胞癌(例如，鳞状上皮细胞癌)，外阴癌，甲状腺癌，肛门癌，阴茎癌，黑素瘤，多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤，脑癌及头颈癌以及相关转移灶。
本文所用术语“血液肿瘤”是指由于异常细胞的生长增殖不受控制引起的，在多数情况下这些不正常的细胞的起源部位是骨髓，这也正是血液细胞产生的地方。示例性血液肿瘤包括各类白血病、多发性骨髓瘤以及恶性淋巴瘤。血液肿瘤的更多具体实例包括：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、毛细胞性白血病(HCL)、T细胞幼淋巴细胞性白血病、大颗粒淋巴细胞白血病、幼年型粒-单核细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、伯基特白血病和成人T细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、原发性巨球蛋白血症(
Figure BDA0001801616050000121
macroglobulinemia)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性淋巴瘤、经典霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤、结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、母细胞NK细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、赛谢综合征、原发性皮肤CD30阳性T细胞淋巴增生病、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、非特指型外周T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤。
本文所用术语“白血病”为血液或骨髓的恶性肿瘤，特征在于白细胞的异常增多。白血病是广义术语，其涵盖了一系列疾病。因此，白血病是更广泛的称为血液肿瘤的疾病种类的一部分。白血病细分为多个大类；第一种分类是白血病的急性和慢性形式。急性白血病的特征在于未成熟的血细胞数量的快速增长。由于这些细胞的积聚使得骨髓不能制造健康的血细胞。慢性白血病的特征在于相对成熟、但仍为异常的白细胞的过度产生。通常通过数月或数年的发展，所述细胞的产生速率大大高于正常细胞，导致血液中有很多的异常白细胞。白血病也可以通过受累的血细胞进行细分。这样的分界将白血病划分为成淋巴细胞或淋巴细胞白血病和骨髓性(myeloid)或骨髓性(myelogenous)白血病。在成淋巴细胞或淋巴细胞白血病中，癌变发生在通常继续形成淋巴细胞的骨髓细胞类型中。在骨髓性(myeloid)或骨髓性(myelogenous)白血病中，癌变发生在通常继续形成红细胞、一些其他类型的白细胞和血小板的骨髓细胞类型中。结合这两种分类提供了总共四种主要类别。在这四种主要分类的每一种中，通常有一些亚类别。还存在分类方案之外的罕见类型。示例性的白血病包括：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性髓细胞性白血病(CML)、毛细胞性白血病(HCL)、T细胞幼淋巴细胞性白血病、大颗粒淋巴细胞白血病、幼年型粒-单核细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、伯基特白血病和成人T细胞性白血病。
本文所用术语“实体瘤”是指可通过临床检查如x线摄片、CT扫描，B超、或触诊扪及到的有形肿块。临床上诊治过的实体瘤分恶性和良性两种。恶性实体瘤包括：儿童霍奇金淋巴瘤：淋巴细胞为主型、结节硬化型、混合细胞型、淋巴细胞消减型；儿童非霍奇金淋巴瘤：前淋巴母细胞淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤(伯基特/非伯基特淋巴瘤)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤等；儿童肾脏肿瘤：肾母细胞瘤(Wilms瘤)、肾透明细胞癌、肾横纹肌样瘤、肾透明细胞肉瘤、肾原始神经外胚叶瘤等；儿童神经母细胞瘤：神经母细胞瘤、节细胞神经母细胞瘤、节细胞神经瘤；儿童颅外生殖细胞瘤：成熟畸胎瘤、未成熟畸胎瘤、内胚窦瘤(卵黄囊瘤)、精原细胞瘤、无性细胞瘤、绒毛膜上皮癌、胚胎癌等；骨肉瘤及软骨肉瘤；儿童横纹肌肉瘤：胚胎型、腺泡型、多形型等；儿童软组织肉瘤：纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、恶性神经鞘瘤、腺泡状软组织肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤、恶性黑色素瘤、滑膜肉瘤、促纤维增生性小圆细胞瘤等；尤文氏家族肉瘤：尤文氏肉瘤、原始神经外胚叶瘤；儿童肝脏肿瘤：肝母细胞瘤(胚胎型、胎儿型、未分化型)、肝细胞癌；视网膜母细胞瘤；其他肿瘤：后颅窝髓母细胞瘤、鼻咽癌、甲状腺乳头状癌、胸腺瘤、肺母细胞瘤、胰母细胞瘤、胰岛细胞瘤、回盲部类癌、间皮瘤等。良性实体瘤包括：淋巴管瘤、血管瘤、甲状舌管囊肿等。
在本文给出的核酸序列中涉及兼并碱基(除了A、T、C、G常规碱基之外)的使用，其含义与本领域技术人员通常理解的相同。例如，R代表A或G；Y代表C或T，M代表A或C；K代表G或T；S代表C或G；W代表A或T；H代表A或C或T；B代表C或G或T；V代表A或C或G；D代表A或G或T；N代表A或C或G或T。
第一方面，本申请提供了一种结合人TIM-3的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMH，所述HCDR2氨基酸序列为RIDPENGNTIYDPKFQG，所述HCDR3氨基酸序列为DFGYIAWFAY，所述LCDR1氨基酸序列为KASQNVVTAVA，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRYT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSSYPYT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQDVNNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为AASTLQS，所述LCDR3氨基酸序列为QQMKDAPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为EYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DAYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FVSNTGAIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为EYYMY，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNSWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTNNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYTYNWYYYGMDI，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24、25、26、27、28或者32所示。
在一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29、30、31或者33所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：26所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：27所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示。
第二方面，本申请提供了一种结合人TIM-3的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：24、25、26、27、28或者32中任何一项具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO：29、30、31或者33中任何一项具有至少90％的一致性。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区。在第一方面和第二方面的一些具体实施方案中，所述IgG1亚型重链恒定区为Fc功能削弱的突变体。
在第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面或第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，所述核酸分子可操作地连接到调控序列，调控序列可以被用所述载体转化过的宿主细胞识别。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面或第二方面所述的抗体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于预防或治疗TIM-3介导的疾病。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
恶性肿瘤包括但不限于黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌和胰腺癌。
在具体的实施方案中，所述恶性肿瘤为结肠癌。
在一些实施方案中，第一方面或第二方面所述的抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体联用。
在一些实施方案中，所述药物组合物还可包含下述中的一种或多种：润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂；悬浮剂；防腐剂，如苯甲酸、山梨酸和丙酸钙；增甜剂和/或调味剂等。
在一些实施方案中，可将本申请中的药物组合物配制为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、酏剂、悬液、乳剂、溶液、糖浆、栓剂或胶囊等形式。
在一些实施方案中，可以利用任何生理上可接受的给药方式递送本申请的药物组合物，这些给药方式包括但不限于：口服给药、肠胃外给药、经鼻给药、直肠给药、腹膜内给药、血管内注射、皮下给药、经皮给药、吸入给药等。
在一些实施方案中，可以通过混合具有所需纯度的试剂与视情况的药学上可接受的载体、赋形剂等，以冻干制剂或水溶液的形式配制用于治疗用途的药物组合物用于存储。
第五方面，本申请提供了第一方面或第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗TIM-3介导的疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
恶性肿瘤包括但不限于黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌和胰腺癌。
在具体的实施方案中，所述恶性肿瘤为结肠癌。
在一些实施方案中，第一方面或第二方面所述的抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体联用。
第六方面，本申请提供了预防或治疗TIM-3介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面或第二方面所述的抗体或第四方面所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述疾病为肿瘤，例如恶性肿瘤。
恶性肿瘤包括但不限于黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌和胰腺癌。
在具体的实施方案中，所述恶性肿瘤为结肠癌。
在一些实施方案中，所述方法包括将第一方面或第二方面所述的抗体与抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体联合给药。
在其他方面，本申请还提供包含编码本申请抗体或其抗原结合部分的分离的核酸分子的载体以及包含所述核酸分子或载体的宿主细胞。
在其他方面，本申请还提供产生本申请抗体的方法。在一些实施方案中，产生抗体的方法包括培养宿主细胞以便于表达核酸。在一些实施方案中，产生抗体的方法还包括从宿主细胞培养基中回收抗体。
应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和变化。
以下实施例仅用于说明而非限制本申请范围的目的。
实施例
实施例1：重组蛋白的制备
制备抗TIM-3单克隆抗体的过程中需要用到多种不同的重组蛋白，包括人TIM-3胞外区(hTIM-3，SEQ ID NO：1)、人TIM-3胞外区免疫球蛋白样结构域(hTIM-3-D1,SEQ ID NO：2)、小鼠TIM-3胞外区(mTIM-3，SEQ ID NO：3)、猕猴TIM-3胞外区(mmTIM-3，SEQ ID NO：4)。这些蛋白具有翻译后修饰(如糖基化或者二硫键等)，因而利用哺乳动物细胞表达系统将更有利于保持重组蛋白的结构和功能。此外，在这些重组蛋白的C端添加了His标签(His，SEQID NO：5)或者人抗体IgG1的Fc段(Fc，SEQ ID NO：6)或者鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc，SEQ IDNO：7)，将更有利于重组蛋白的纯化和单克隆抗体功能的鉴定。抗体重链恒定区可以是人IgG1亚型(SEQ ID NO:8)，人IgG2亚型(SEQ ID NO:9)、人IgG4亚型(SEQ ID NO:10)或者鼠IgG1亚型(SEQ ID NO：11)，鼠IgG2a亚型(SEQ ID NO:12)，抗体轻链恒定区可以是人κ亚型(SEQ ID NO:13)、人λ亚型(SEQ ID NO:14)或者鼠κ亚型(SEQ ID NO:15)、鼠λ亚型(SEQ IDNO：16)。可用的人IgG1亚型包括Fc功能削弱的突变体IgG1m3(SEQ ID NO：17)。
根据Uniprot数据库的各种目的重组蛋白的氨基酸序列，设计并合成上述各种重组蛋白的基因(包含His标签或者Fc、mFc编码基因)。利用分子生物学技术将合成的各种重组蛋白基因克隆至合适的真核表达载体(如invitrogen公司的pcDNA3.1等)，然后利用脂质体(如invitrogen公司的293fectin等)或者其他阳离子转染试剂(如PEI等)将制备的重组蛋白表达质粒转染入HEK293细胞(如invitrogen公司的HEK293F)，在无血清悬浮培养条件下培养3-4天。然后通过离心等方式收获培养上清。
His标签融合表达的重组蛋白利用金属螯合亲和层析柱(如GE公司的HisTrap FF等)对培养上清中的重组蛋白进行一步纯化。Fc和mFc融合表达的重组蛋白用ProteinA/G亲和层析柱(如GE公司的Mabselect SURE等)进行一步纯化。然后利用脱盐柱(如GE公司的Hitrap desaulting等)将重组蛋白保存缓冲液置换为PBS缓冲液(pH7.0)或者其他合适的缓冲液。必要时，可以对抗体样品进行过滤除菌，然后分装保存于-20℃。
实施例2：鼠抗人TIM-3单克隆抗体的制备
1.小鼠免疫及免疫抗体库的制备
取6-8周龄BALB/c小鼠，免疫之前小鼠尾静脉采血留本底血清。首次免疫取hTIM-3-His融合蛋白以费氏完全佐剂乳化，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白。间隔两周加强免疫，取hTIM-3-His融合蛋白以费氏不完全佐剂乳化，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白，注射前断尾采血，共进行两次加强免疫。第四次免疫改用冲击免疫，以不加佐剂的hTIM-3-His重组抗原作为免疫原，每只小鼠腹腔注射50μg融合蛋白，冲击免疫后3天处死小鼠，收集脾细胞。
使用小鼠淋巴细胞分离液(达科为，CAT#DKW33-R0100)对小鼠脾脏淋巴细胞进行分离，利用细胞总RNA提取试剂盒(天根，CAT#DP430)，将分离的淋巴细胞进行总RNA的提取。以提取的总RNA为模板，利用第一链cDNA合成试剂盒(Thermo scientific，CAT#K1621)分别合成重链可变区和轻链可变区，反转录引物采用基因特异性引物，引物配对区分别位于抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区，具体序列分别为PmCGR:TGCATTTGAACTCCTTGCC和PmCKR:CCATCAATCTTCCACTTGAC。将合成完成的cDNA立即存放于-70℃保存备用。然后以反转录得到的cDNA为模板，参考文献(Journal of Immunological Methods，201(1997)，35–55)合成引物，并利用PCR分别扩增鼠抗体VH和VK，然后利用重叠延伸PCR技术，构建单链抗体(scFv)。最后将制备的小鼠单链抗体基因克隆至载体pADSCFV-S(实验技术流程可参见中国专利申请第201510097117.0号)，构建scFv库。此抗体库的库容达到1.9×10E7，正确率为85％。
2.抗人TIM-3小鼠单链抗体库的筛选
以实施例1制备的重组hTIM-3-his为抗原，利用固相筛选策略(实验方案参考噬菌体展示：通用实验指南/(美)克拉克森(Clackson,T.),(美)洛曼(Lowman,H.B.)编；马岚等译。化学工业出版社，2008.5)筛选上述构建的展示小鼠单链抗体噬菌体库，共进行三轮筛选，最终获得3株序列不同，但均能结合人TIM-3的单链抗体，包括克隆S6A1(SEQ ID NO：18)、S7A3(SEQ ID NO：19)和S7G3(SEQ ID NO：20)。
实施例3：全人源抗hTIM-3单克隆抗体的制备
以实施例1制备的重组hTIM-3-his为抗原，利用固相筛选策略(实验方案参考噬菌体展示：通用实验指南/(美)克拉克森(Clackson,T.),(美)洛曼(Lowman,H.B.)编；马岚等译。化学工业出版社，2008.5)筛选天然人噬菌体抗体库(实验技术流程可参见中国专利申请第201510097117.0号中的实施例1)，最终获得1株结合人TIM-3的全人源单链抗体S3C2(SEQ ID NO：21)。
实施例4：抗人TIM-3单克隆抗体的鉴定
选取实施例2中获得的小鼠单链抗体S6A1(SEQ ID NO：18)、S7A3(SEQ ID NO：19)、S7G3(SEQ ID NO：20)和实施例3中获得的全人源单链抗体S3C2(SEQ ID NO：21)，利用分子生物学方法制备重组嵌合抗体或全人源抗体。同时参照美国专利申请US20150218274A1的公开内容制备全抗体，命名为C1(VH氨基酸序列和VK氨基酸序列分别为SEQ ID NO：22和23，恒定区为鼠IgG2a亚型)。
1.重组抗人TIM-3单克隆抗体与C1竞争结合TIM-3
使用制备的包被抗原hTIM-3-his包被96孔ELISA板(1μg/ml，100μL/孔)，4℃包被过夜。利用封闭液(2％牛奶-PBST缓冲液)在37℃封闭1小时。用固定浓度(0.05μg/ml)的嵌合抗体C1对重组抗人TIM-3单克隆抗体S6A1/S7A3/S7G3/S3C2(IgG4亚型)进行梯度稀释(起始浓度为100μg/ml，3倍梯度稀释，11个稀释度)，以100μL/孔加入封闭后的免疫孔中。使用HRP山羊抗小鼠IgG(中杉金桥，ZB-5305)检测重组抗人TIM-3单克隆抗体对C1与hTIM-3-his结合的竞争作用。使用PBST缓冲液洗涤ELISA板，加入OPD底物显色液，5-10分钟后用1M的H2SO4溶液终止显色，使用酶标仪在492nm/630nm双波长测定光密度值。ELISA分析结果(图1)显示，单克隆抗体S3C2阻断C1结合TIM-3的能力最强，S7A3阻断C1结合TIM-3的能力次之，S6A1阻断C1结合TIM-3的能力最弱，S7G3基本不能阻断C1和TIM-3的结合。
2.重组抗人TIM-3单克隆抗体的亲和力分析
利用Biacore X100测定IgG4嵌合抗体的亲和力。氨基偶联试剂盒(BR-1000-50)、人抗体捕获试剂盒(BR-1008-39)，CM5芯片(BR100012)和pH7.4的10×HBS-EP(BR100669)等相关试剂和耗材均购自GE healthcare。根据试剂盒中的说明书，用NHS/EDC方法对CM5芯片表面进行活化，将抗人Fc段的抗体偶联至CM5芯片表面，最后用乙醇胺进行封闭。利用捕获法检测重组抗人TIM-3单克隆抗体的亲和力，稀释重组抗人TIM-3单克隆抗体至合适浓度(1-5μg/ml)，保证250RU左右的抗体被抗人Fc的抗体捕获。将hTIM-3-his设置一系列的浓度梯度(500nM、167nM、56nM、18.5nM、6.2nM)流经固定相表面，在25℃测定各重组抗体的亲和力。结果如表1所示。
表1.抗TIM-3单克隆抗体的亲和力常数
Kon Koff KD
S7A3 3.377E+5 1.691E-2 5.007E-8
S7G3 6.333E+4 6.927.E-4 1.094E-8
S6A1 2.383E+4 1.066E-4 4.474E-9
S3C2 1.834E+4 1.249E-4 6.794E-9
C1 8.635E+4 3.572E-4 4.137E-9
实施例5：全人源抗hTIM-3单克隆抗体S3C2的亲和力成熟
为进一步提高全人源单克隆抗体S3C2的亲和力，对S3C2进行了体外亲和力成熟。体外亲和力成熟的主要策略是分别对S3C2进行重链CDR突变和轻链置换，然后基于双载体的噬菌体展示系统分别筛选重链和轻链的高亲和力突变体。
1.S3C2重链突变库的构建及筛选
利用常规分子生物学方法构建S3C2重链可变区的突变库S3C2-HCDR123，构建库容为1×10E8，突变库的正确率约为90％，其中在HCDR中引入突变所需引物见表2。以重组hTIM-3-His为抗原，利用固相筛选策略对S3C2-HCDR123突变库进行了3轮筛选(实验技术流程可参见中国专利申请第201510097117.0号中的实施例5)，最终得到亲和力进一步提高的5个重链突变体：H3B5VH(SEQ ID NO：24)、H4G4VH(SEQ ID NO：25)、H8G4VH(SEQ ID NO：26)、H8G8VH(SEQ ID NO：27)、H9H4VH(SEQ ID NO：28)。
表2：S3C2重链可变区突变库扩增所需引物
Figure BDA0001801616050000231
Figure BDA0001801616050000241
2.S3C2轻链置换
基于S3C2重链可变区突变体，对S3C2进行轻链置换研究(实验技术流程可参见中国专利申请第201510097117.0号中的实施例4)，最终筛选得到3株活性明显提高的轻链可变区突变体：L1F10(SEQ ID NO：29)、L2B3(SEQ ID NO：30)、L4C10(SEQ ID NO：31)。
3.S3C2突变体亲和力分析
利用筛选得到的5种重链可变区突变体和3种轻链可变区突变体进行组合表达，得到多株抗hTIM-3单克隆抗体。利用Biacore X100对这些组合突变体亲和力进行了分析，结果见表3。
表3.S3C2突变体结合hTIM-3的亲和力常数
Kon Koff KD
H8G4+L4C10 1.565E+5 1.366E-4 8.732E-10
H8G8+L4C10 1.4E+5 1.159E-4 8.277E-10
H9H4-L4C10 1.576E+5 1.344E-4 8.526E-10
H3B5+L4C10 5.427E+5 1.998E-4 3.681E-9
H4G4+L4C10 5.861E+5 1.814E-4 3.096E-9
H3B5+L2B3 5.417E+4 1.708E-4 3.153E-9
H4G4+L2B3 1.098E+5 2.164E-4 1.971E-9
H3B5+L1F10 8.851E+5 3.656E-4 4.13E-10
H4G4+L1F10 9.096E+5 3.462E-4 3.806E-10
S3C2 5.899E+4 6.741E-4 1.143E-8
4.S3C2突变体种属交叉分析
将制备的人TIM-3-His(hTIM-3-His)、鼠TIM-3-His(mTIM-3-His)和猕猴TIM-3-His(mm TIM-3-His)分别包被于96孔ELISA板(1μg/ml，100μl/孔)，在4℃下包被过夜。利用封闭液(2％的牛奶-PBST)在37℃封闭1小时后，分别加入各种重组抗TIM-3单克隆抗体(C1、S3C2、H8G4+L4C10、H3B5+L2B3或H4G4+L1F10)，37℃结合1小时。用PBST缓冲液洗涤ELISA板，加入HRP抗人IgG(二抗)，37℃结合1小时。PBST缓冲液洗涤ELISA板，并加入OPD底物显色液，5-10分钟后用1M的H2SO4溶液终止显色，使用酶标仪在492nm/630nm双波长测定光密度值。结果如图2所示，5种抗TIM-3单克隆抗体均结合人TIM-3和猕猴TIM-3，而不结合鼠TIM-3。
5.S3C2突变体血清稳定性分析
为了初步分析不同抗TIM-3单克隆抗体分子的特异性及血清稳定性，进行了抗TIM-3单克隆抗体在人血清中的稳定性分析。此研究包括多种抗TIM-3单克隆抗体(C1、S3C2、H8G4+L4C10、H3B5+L2B3或H4G4+L1F10)。取过滤除菌的单克隆抗体样品，分别稀释于200μl无菌的正常人混合血清或PBS缓冲液至终浓度为30μg/ml，混匀后置于37℃水浴中放置2h。利用ELISA分析血清样品(HS:正常人血清处理，37℃，2h)和PBS样品(PBS:PBS处理，37℃，2h)与hTIM-3的结合(图3)，并分别比较各单克隆抗体样品结合TIM-3能力的变化(HS/PBS)。结果(表4)表明5种抗hTIM-3单克隆抗体都具有较好的血清稳定性。
表4：不同处理条件下单克隆抗体样品结合hTIM-3能力的变化
C1 S3C2 H8G4+L4C10 H4G4+L1F10 H3B5+L2B3
HS/PBS 0.88 0.84 0.86 0.84 0.81
实施例6：基于混合淋巴细胞反应评价不同抗TIM-3单克隆抗体的生物学活性
1.混合淋巴细胞反应原理
混合淋巴细胞反应是指两种无关个体、功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLA II类抗原中D和DP抗原不同，可相互刺激对方的T细胞发生增殖。常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。近年来混合淋巴细胞反应是体外研究T细胞的有效实验方法。TIM-3的存在有可能抑制了T细胞的活化，阻断TIM-3信号，通过检测IFN-γ的分泌评价不同抗TIM-3单克隆抗体促进T细胞活化的生物学活性。
2.外周血单个核细胞(PBMC)的获得
采集正常志愿者的血液(各50mL)，使用淋巴细胞分离液(天津灏洋，LDS1075)获得PBMC。其中所采集的血液由发明人及其同事作为志愿者提供，所有志愿者均已签署知情同意书。志愿者的纳入标准为：
1)年龄大于18周岁；
2)无HIV、HBV感染；
3)血常规检测正常；
4)非孕妇或哺乳期妇女。
3.树突细胞的体外诱导
通过磁珠(BD,Cat#557769)从PBMC中获得CD14+单核细胞，使用含有10％灭活胎牛血清、IL-4(100ng/ml)和GM-CSF(1000U/ml)的R1640完全培养基重悬细胞并接种于6孔细胞培养板中，每2-3天半量换液，培养5-7天，收获前12-24小时加入1μg/ml的脂多糖，诱导为成熟的树突细胞，使用之前用新鲜培养基多次清洗细胞，最终用含有10％灭活胎牛血清的R1640培养基重悬细胞。
4.CD4+T的获取
通过阴选磁珠(BD,Cat#557767)从不同来源的PBMC中获得CD4+T细胞，使用含有10％灭活胎牛血清的R1640培养基重悬细胞。
5.混合淋巴细胞活性评价实验
将100,000个分离的CD4+T细胞与5,000-20,000个同种异体的成熟的树突细胞混合，实验起始加入0.019μg/ml-20μg/ml浓度(4倍连续稀释)的不同抗TIM-3单克隆抗体(C1、H8G4+L4C10、H3B5+L2B3或H4G4+L1F10)，总体积为200μl在96孔组织培养板中，在37℃下，混合2-3天。1μg/ml抗PD-1抗体(BMS)是实验系统的阳性对照，CD4+T细胞和成熟的树突细胞(DC)混合实验组为系统的阴性对照。取上清进行IFN-γ的检测，根据试剂盒的检测范围进行必要的样品稀释，根据试剂盒的说明书进行规范的实验操作，使用酶标仪进行OD值检测。最后利用GraphPad Prism 6进行数据分析和作图。其中单克隆抗体H4G4+L1F10和H3B5+L2B3重链恒定区为IgG1m3亚型，H8G4+L4C10重链恒定区为IgG4亚型，轻链恒定区均为κ亚型。图4展示了不同抗TIM-3单克隆抗体对T细胞分泌IFN-γ的促进作用。
实施例7：基于B-hTIM-3人源化小鼠建立MC38结肠癌动物模型评价不同抗TIM-3单克隆抗体药效
将MC38细胞以5×105个/0.1mL浓度，0.1mL/只体积接种于B-hTIM-3人源化小鼠(此小鼠的TIM-3基因的胞外区替换为人TIM-3基因)的右侧胁肋部皮下，待平均肿瘤体积生长到约150±50mm3时挑选个体肿瘤体积适中的小鼠入组，将动物按肿瘤体积随机分配到5个实验组中。5个实验组分别为：阴性对照(hIgG)、抗TIM-3对照抗体(C1)、抗TIM-3抗体1(H4G4+L1F10)、抗TIM-3抗体2(H3B5+L2B3)、抗TIM-3抗体3(H8G4+L4C10)。其中单克隆抗体H4G4+L1F10和H3B5+L2B3重链恒定区为IgG1m3亚型，H8G4+L4C10重链恒定区为IgG4亚型，轻链恒定区均为κ亚型。所有实验组给药途径均为腹腔注射(i.p.)，按照20mg/kg的给药剂量每3天给药1次，共给药6次，并在首次给药27天后对小鼠进行安乐死。实验期间每周进行两次肿瘤体积及体重的测量，记录小鼠体重和肿瘤体积，计算相对肿瘤抑制率(TGI％)。
所有实验动物的体重均有一定程度的上升，所有实验动物活动和进食状态良好。对分组给药后第27天动物的体重数据进行统计学分析，不同抗TIM-3单克隆抗体实验组给药后与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05)。
图5展现了不同抗TIM-3单克隆抗体对肿瘤生长抑制的效果。分组给药后第27天，不同抗TIM-3单克隆抗体对肿瘤生长的抑制率，且不同抗TIM-3单克隆抗体实验组肿瘤体积与阴性对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。
实施例8：基于B-hPD-1/TIM-3双人源化小鼠的MC38结肠癌动物模型评价不同抗TIM-3抗体与抗PD-1抗体联用的药效
将MC38细胞以5×105个/0.1mL浓度，0.1mL/只体积接种于B-hPD-1/TIM-3双人源化小鼠(此小鼠的TIM-3基因的胞外区替换为人TIM-3基因，而且小鼠的PD-1基因的胞外区替换为人PD-1基因的胞外区)的右侧胁肋部皮下，待平均肿瘤体积生长到约150±50mm3时挑选个体肿瘤体积适中的小鼠入组，将动物按肿瘤体积随机分配到4个实验组中。4个实验组分别为：阴性对照(hIgG)、抗PD-1抗体(派姆单抗)、抗TIM-3抗体1与抗PD-1抗体联用(H4G4+L1F10/派姆单抗)、抗TIM-3抗体2与抗PD-1抗体联用(H3B5+L2B3/派姆单抗)。其中单克隆抗体H4G4+L1F10和H3B5+L2B3重链恒定区为IgG1m3亚型，轻链恒定区均为κ亚型。所有实验组给药途径均为腹腔注射，3天给药1次，共给药6次。实验期间每周进行两次肿瘤体积及体重的测量，记录小鼠体重和肿瘤体积，计算相对肿瘤抑制率(TGI％)。完成观察后，剥取小鼠肿瘤称重，计算瘤重抑制率(IRTW)，并对安乐死动物及肿瘤拍照记录。
图6展现了不同抗TIM-3单克隆抗体与派姆单抗联用对肿瘤生长抑制的效果。分组给药后第23天，不同抗TIM-3单克隆抗体与派姆单抗联用的肿瘤生长抑制率以及实验组肿瘤体积，与阴性对照组相比，除派姆单抗实验组外，均有显著性差异(P<0.05)。证明H4G4+L1F10和H3B5+L2B3在分别与派姆单抗联合用药时增强了抗肿瘤药效。
实施例9：基于B-hPD-1/TIM-3双人源化小鼠的MC38结肠癌动物模型评价抗TIM-3单克隆抗体与抗PD-L1抗体联用的药效
将MC38细胞以5×105个/0.1mL浓度，0.1mL/只体积接种于B-hPD-1/TIM-3双人源化小鼠的右侧胁肋部皮下，待平均肿瘤体积生长到约150±50mm3时挑选个体肿瘤体积适中的小鼠入组，将动物按肿瘤体积随机分配到4个实验组中。4个实验组分别为：阴性对照(hIgG)、抗TIM-3单克隆抗体(H3B5+L2B3)、抗PD-L1抗体(阿特珠单抗)、抗TIM-3抗体与抗PD-L1抗体联用(H3B5+L2B3/阿特珠单抗)。其中单克隆抗体H3B5+L2B3重链恒定区为IgG1m3亚型，轻链恒定区均为κ亚型。H3B5+L2B3给药途径均为腹腔注射，3天给药1次，共给药6次；阿特珠单抗给药途径均为腹腔注射，2天给药1次，共给药8次。实验期间每周进行两次肿瘤体积及体重的测量，记录小鼠体重和肿瘤体积，计算相对肿瘤抑制率(TGI％)。第五次给药后每只小鼠眼眶内眦静脉丛采血，通过流式细胞术检测血液中CD4+、CD8+、CD45+、CD69+、CD25+及Treg细胞比例；实验终点，剥取小鼠肿瘤称重，计算瘤重抑制率(IRTW)，并对安乐死动物及肿瘤拍照记录。
所有实验动物的体重均有一定程度的上升，所有实验动物活动和进食状态良好。对分组给药后第28天动物体重数据进行统计学分析，实验组给药后与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05)。
图7展示了抗TIM-3单克隆抗体与阿特珠单抗联用对T细胞激活的促进。分组给药后第15天，H3B5+L2B3与阿特珠单抗联用促进T细胞激活，与阴性对照组相比，有极显著性差异(P<0.01)；单独的H3B5+L2B3也可促进T细胞激活(P<0.05)。
图8展现了抗TIM-3单克隆抗体与阿特珠单抗联用对肿瘤生长抑制的效果。分组给药后第28天，H3B5+L2B3与阿特珠单抗联用的肿瘤生长抑制率，与阴性对照组相比，有显著性差异(P<0.05)。
参考文献
[1].Monney L,Sabatos C.A,Gaglia J.L,Ryu A,Waldner H,Chernova T,Manning S,Greenfield E.A,Coyle A.J,Sobel R.A,Freeman G.J,Kuchroo V.K.Th1-specific cell surface protein Tim-3 regulates macrophage activation andseverity of an autoimmune disease.Nature 415:536-541(2002)
[2]Roselynn R.M.,Rosemarie D.,Vijay K.Kuchroo1,and Dale T.U.Thecostimulatory role of TIM molecules.Immunol Rev.2009May；229(1):259–270.
[3 Shigeki C,Muhammad B,Hisaya A,Hironori Y,Ichiro K,Hirotoshi D.A,Yoichiro F,Yusuke O,Jacob V G,John D C,Mitsuomi H,Toshimitsu U,Akinori T,Hideo Y,and Masahisa J.Tumor-infiltrating DCs suppress nucleic acid-mediatedinnate immune responses through interactions between the receptor TIM-3 andthe alarmin HMGB1.Nature immunology.20121309:832-42
[4]Xu L,Huang Y,Tan L,et al.Increased Tim-3 expression in peripheralNK cells predicts a poorer prognosis and Tim-3 blockade improves NK cell-mediated cytotoxicity in human lung adenocarcinoma[J].Int Immunopharmacol,2015,29(2):635-641.
[5].Gao X,Zhu Y,Li G,Huang H,Zhang G,Wang F,et al.TIM-3 expressioncharacterizes regulatory T cells in tumor tissues and is associated with lungcancer progression.PLoS ONE 2012；7:e30676.
[6]Yang ZZ,Grote DM,Ziesmer SC,Niki T,Hirashima M,Novak AJ,et al.IL-12 upregulates TIM-3 expression and induces T cell exhaustion in patientswith follicular B cell non-Hodgkin lymphoma.J Clin Invest 2012；122:1271–82.
[7].Ngiow SF,von Scheidt B,Akiba H,Yagita H,Teng MW,Smyth MJ.Anti-TIM3 antibody promotes T cell IFN-{gamma}-mediated antitumor immunity andsuppresses established tumors.Cancer Res.2011；71:3540–51.
[8].Zhou Q,Munger ME,Veenstra RG,Weigel BJ,Hirashima M,Munn DH,etal.Coexpression of Tim-3 and PD-1 identifies a CD8t T-cell exhaustionphenotype in mice with disseminated acute myelogenous leukemia.Blood 2011；117:4501–10.
[9].Sakuishi K,Apetoh L,Sullivan JM,Blazar BR,Kuchroo VK,AndersonAC.Targeting Tim-3 and PD-1 pathways to reverse T cell exhaustion and restoreanti-tumor immunity.J Exp Med 2010；207:2187–94.
序列表
<110> 北京智仁美博生物科技有限公司
<120> 抗人TIM-3抗体及其用途
<160> 33
<170> CNIPASequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 181
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln Asn Ala Tyr Leu Pro
1 5 10 15
Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu Val Pro Val Cys Trp
20 25 30
Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly Asn Val Val Leu Arg
35 40 45
Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser Arg Tyr Trp Leu Asn
50 55 60
Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu Asn Val Thr
65 70 75 80
Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Ile Pro Gly Ile
85 90 95
Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val Ile Lys Pro Ala Lys
100 105 110
Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe Thr Ala Ala Phe Pro
115 120 125
Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala Glu Thr Gln Thr Leu
130 135 140
Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile Ser Thr Leu Ala Asn
145 150 155 160
Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu Arg Asp Ser Gly Ala
165 170 175
Thr Ile Arg Ile Gly
180
<210> 2
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln Asn Ala Tyr Leu Pro
1 5 10 15
Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu Val Pro Val Cys Trp
20 25 30
Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly Asn Val Val Leu Arg
35 40 45
Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser Arg Tyr Trp Leu Asn
50 55 60
Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu Asn Val Thr
65 70 75 80
Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Ile Pro Gly Ile
85 90 95
Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 174
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 3
Arg Ser Leu Glu Asn Ala Tyr Val Phe Glu Val Gly Lys Asn Ala Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Leu Ser Thr Pro Gly Ala Leu Val Pro Met
20 25 30
Cys Trp Gly Lys Gly Phe Cys Pro Trp Ser Gln Cys Thr Asn Glu Leu
35 40 45
Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asn Val Thr Tyr Gln Lys Ser Ser Arg Tyr
50 55 60
Gln Leu Lys Gly Asp Leu Asn Lys Gly Asp Val Ser Leu Ile Ile Lys
65 70 75 80
Asn Val Thr Leu Asp Asp His Gly Thr Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Phe
85 90 95
Pro Gly Leu Met Asn Asp Lys Lys Leu Glu Leu Lys Leu Asp Ile Lys
100 105 110
Ala Ala Lys Val Thr Pro Ala Gln Thr Ala His Gly Asp Ser Thr Thr
115 120 125
Ala Ser Pro Arg Thr Leu Thr Thr Glu Arg Asn Gly Ser Glu Thr Gln
130 135 140
Thr Leu Val Thr Leu His Asn Asn Asn Gly Thr Lys Ile Ser Thr Trp
145 150 155 160
Ala Asp Glu Ile Lys Asp Ser Gly Glu Thr Ile Arg Thr Ala
165 170
<210> 4
<211> 174
<212> PRT
<213> 猕猴(Macaca mulatta)
<400> 4
Ser Glu Val Glu Tyr Ile Ala Glu Val Gly Gln Asn Ala Tyr Leu Pro
1 5 10 15
Cys Ser Tyr Thr Pro Ala Pro Pro Gly Asn Leu Val Pro Val Cys Trp
20 25 30
Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Asp Cys Ser Asn Val Val Leu Arg
35 40 45
Thr Asp Asn Arg Asp Val Asn Asp Arg Thr Ser Gly Arg Tyr Trp Leu
50 55 60
Lys Gly Asp Phe His Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu Asn Val
65 70 75 80
Thr Leu Ala Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Ile Gln Ile Pro Gly
85 90 95
Ile Met Asn Asp Glu Lys His Asn Leu Lys Leu Val Val Ile Lys Pro
100 105 110
Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Leu Gln Arg Asp Leu Thr Ser Ala
115 120 125
Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Gly Glu His Gly Pro Ala Glu Thr Gln
130 135 140
Thr Pro Gly Ser Leu Pro Asp Val Asn Leu Thr Gln Ile Phe Thr Leu
145 150 155 160
Thr Asn Glu Leu Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Thr Ala
165 170
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His His His His His His
1 5
<210> 6
<211> 232
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 7
<211> 232
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 7
Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile
20 25 30
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
50 55 60
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln
85 90 95
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val
115 120 125
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu
145 150 155 160
Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr
165 170 175
Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr
195 200 205
Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
210 215 220
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
225 230
<210> 8
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 9
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 10
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 11
<211> 324
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 11
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 12
<211> 330
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 12
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
145 150 155 160
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
165 170 175
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
180 185 190
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
195 200 205
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
210 215 220
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
245 250 255
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
260 265 270
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
275 280 285
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
290 295 300
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
305 310 315 320
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
325 330
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 15
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 16
Gly Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro
35 40 45
Val Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu
65 70 75 80
Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val
85 90 95
Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
100 105
<210> 17
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 18
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Asn Asp Gly Val Ser Thr Phe Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Leu Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
130 135 140
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
145 150 155 160
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
165 170 175
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
195 200 205
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
210 215 220
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
225 230 235 240
<210> 19
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Gln Val Gln Leu Lys Gln Phe Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Gly Tyr Ile Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe
130 135 140
Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Gly Ile Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asn Val Val Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Asn Met Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys
<210> 20
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met Gln Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Gly Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Pro Gly Ser Ser Tyr Ala Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val
130 135 140
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
145 150 155 160
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
180 185 190
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys
210 215 220
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Met Lys
<210> 21
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Gly Tyr Thr Asn Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu
180 185 190
Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Gln Met Lys Asp Ala Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 22
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Gly Ala Phe Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 24
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Thr Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Thr Tyr Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Thr Asn Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Val Ser Asn Thr Gly Ala Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Gly Tyr Thr Asn Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Thr Asn Ser Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Asp Ile Gly Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Arg Phe Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile His Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Met Met Asp His Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Gly Tyr Thr Asn Asn Trp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Met Lys Asp Ala Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

Claims (14)

1.一种结合人TIM-3的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSVSSSYLA，所述LCDR2氨基酸序列为GASSRAT，所述LCDR3氨基酸序列为QQYDTSPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQNIHNYLN，所述LCDR2氨基酸序列为SASNRQT，所述LCDR3氨基酸序列为QQMMDHPIT；或者
所述HCDR1氨基酸序列为DYYMS，所述HCDR2氨基酸序列为FISSSGSIIYYADSVKG，所述HCDR3氨基酸序列为DGYSTNWYYYGMDV，所述LCDR1氨基酸序列为RASQSDIGTYLA，所述LCDR2氨基酸序列为SDSKLAS，所述LCDR3氨基酸序列为QQYSRFPIT；
其中HCDR和LCDR氨基酸序列根据Kabat定义。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO：24所示。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO：29、30或者31所示。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中
所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
6.根据权利要求5所述的抗体，其中所述抗体为全人源抗体。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中
所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区；和/或
所述抗体还包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述IgG1亚型为Fc功能削弱的突变体。
10.核酸分子，其编码权利要求1-9中任一项所述的抗体。
11.药物组合物，其包含权利要求1-9中任一项所述的抗体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
12.权利要求1-9中任一项所述的抗体在制备用于治疗TIM-3介导的肿瘤的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述肿瘤为恶性肿瘤。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述恶性肿瘤为黑色素瘤、肾癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌或胰腺癌。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020227640A1 (en) * 2019-05-08 2020-11-12 Agilvax, Inc. Compositions and methods related to xct antibodies
CN110456042B (zh) * 2019-08-09 2022-07-05 臻悦生物科技江苏有限公司 血清学生物标志物在制备试剂盒和/或芯片中的应用、试剂盒或芯片及其制备方法
CN113164601B (zh) * 2019-09-19 2023-09-29 上药生物治疗（香港）有限公司 一种分离的抗原结合蛋白及其用途
CN114014928B (zh) * 2021-10-27 2023-05-12 南京安吉生物科技有限公司 抗hmmw抗体、包含该抗体的组合物、编码该抗体的核酸分子及其用途
TW202345900A (zh) * 2022-03-14 2023-12-01 大陸商正大天晴藥業集團南京順欣製藥有限公司 抗tim-3抗體與去甲基化藥物的藥物組合

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005033144A3 (en) * 2003-10-03 2005-06-16 Brigham & Womens Hospital Tim-3 polypeptides
CN102492038A (zh) * 2011-12-09 2012-06-13 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 抗人Tim-3的中和性单克隆抗体L3D及其用途
CN106632675A (zh) * 2016-12-15 2017-05-10 常州格露康生物医药科技有限公司 一种抗人Tim‑3单克隆抗体8E11及其制备方法
WO2018013818A2 (en) * 2016-07-14 2018-01-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005033144A3 (en) * 2003-10-03 2005-06-16 Brigham & Womens Hospital Tim-3 polypeptides
CN102492038A (zh) * 2011-12-09 2012-06-13 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 抗人Tim-3的中和性单克隆抗体L3D及其用途
WO2018013818A2 (en) * 2016-07-14 2018-01-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
CN106632675A (zh) * 2016-12-15 2017-05-10 常州格露康生物医药科技有限公司 一种抗人Tim‑3单克隆抗体8E11及其制备方法

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