ES2907557T3

ES2907557T3 - Métodos de intervención temprana para prevenir o mejorar la toxicidad

Info

Publication number: ES2907557T3
Application number: ES17719044T
Authority: ES
Inventors: Michael Jensen; Rebecca Gardner
Original assignee: Seattle Childrens Hospital
Current assignee: Seattle Childrens Hospital
Priority date: 2016-03-22
Filing date: 2017-03-22
Publication date: 2022-04-25
Anticipated expiration: 2037-03-22
Also published as: US20230091447A1; EP4015536A1; US20230212298A1; US11760804B2; JP7048571B2; MA44486A; US20230322937A1; CA3018588A1; JP2022088489A; MX2018011480A; JP2019509351A; WO2017165571A1; KR20190021200A; AU2017238218B2; AU2017238218A1; RU2018136877A; EP3433276A1; US20190112379A1; BR112018069251A2; CN109476743A

Abstract

Un agente para uso en el tratamiento, prevención, retraso o atenuación del desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado una terapia que comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19, en el que el agente comprende tocilizumab y se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0ºC.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos de intervención temprana para prevenir o mejorar la toxicidad

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

[0001] Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de EE. UU. N° 62/311.906, presentada el 22 de marzo de 2016, titulada "Early Intervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity", solicitud provisional de EE. UU. N° 62/417.287, presentada el 3 de noviembre de 2016, titulada "Early Intervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity", y la solicitud provisional de EE. UU. N° 62/429.722, presentada el 2 de diciembre de 2016, titulada "Early Intervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity".

Listado de secuencias

[0002] La presente solicitud se presenta junto con un Listado de Secuencias en formato electrónico. La lista de secuencias se proporciona como un archivo titulado 735042005140seqlist.txt, creado el 22 de marzo de 2017, que tiene un tamaño de 17,6 kilobytes.

Campo

[0003] La presente divulgación se refiere a métodos para prevenir o mejorar la toxicidad causada por o debido a una terapia, tal como una inmunoterapia o una terapia celular, mediante la administración preventiva o temprana de uno o más agentes dirigidos a la toxicidad. En algunos casos, la terapia es una terapia celular en la que las células generalmente expresan receptores recombinantes tales como receptores quiméricos, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR) u otros receptores transgénicos tales como receptores de células T (TCR). Las características de los métodos, incluido el momento de la administración de los agentes o los tratamientos para la toxicidad, proporcionan varias ventajas, como una menor toxicidad mientras se mantiene la persistencia y la eficacia de las células administradas.

Antecedentes

[0004] Varios métodos de inmunoterapia y/o terapia celular están disponibles para tratar enfermedades y afecciones. Se necesitan métodos mejorados, por ejemplo, para reducir el riesgo de toxicidad de tales métodos. Por ejemplo, se necesitan métodos mejorados para reducir el riesgo de toxicidad de las terapias celulares, mientras se mantiene la exposición del sujeto a las células administradas, por ejemplo, debido a la expansión y/o persistencia de las células administradas. Se proporcionan métodos y usos que satisfacen dichas necesidades.

[0005] El documento WO2001/10912 describe múltiples complejos de citoquina-anticuerpo. WO 2014/011984 divulga el uso de un inhibidor de IL-6; tocilizumab y esteroides como los corticosteroides para reducir los síntomas del síndrome de liberación de citocinas (SLC) causado por el tratamiento del receptor de antígeno quimérico T (CART19) redirigido a CD19.

Resumen

[0006] La invención proporciona un agente para usar en el tratamiento, la prevención, el retraso o la atenuación del desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado una terapia que comprende células T del receptor del antígeno quimérico (CAR) anti-CD19, en el que el agente comprende tocilizumab y se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C. La invención también proporciona un agente para usar con una terapia en un método para tratar un cáncer, en el que dicho método comprende: administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, en el que la terapia comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD 19; y administrar al sujeto dicho agente que comprende tocilizumab dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre tras el inicio de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C. La invención también proporciona una terapia para usar con un agente en un método para tratar un cáncer, en el que el método comprende: administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, en el que la terapia comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD 19; y administrar al sujeto dicho agente que comprende tocilizumab dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre tras el inicio de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C. La invención también proporciona un agente y una terapia para usar en un método para tratar un cáncer, en el que el método comprende: administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, en el que la terapia comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19; y administrar al sujeto dicho agente que comprende tocilizumab dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre tras el inicio de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C.

[0007] Los aspectos de la invención se describen en algunos de los casos siguientes. En algunos aspectos se describen métodos de tratamiento que incluyen la administración a un sujeto de un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos casos, en el momento de dicha administración, al sujeto se le ha administrado previamente una terapia, tal como una terapia que incluye una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunas instancias, la administración del agente u otro tratamiento es en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no presenta signos o síntomas de neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos aspectos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no ha presentado SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia celular y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior.

[0008] En algunos casos, se describen métodos de tratamiento que incluyen la administración a un sujeto administrado con una terapia, como una inmunoterapia y/o una terapia celular, un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento es en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra SLC de grado 2 o superior. En algunos aspectos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia celular y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no presenta signos o síntomas de neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos aspectos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia celular y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior.

[0009] En algunos aspectos, se describen métodos de tratamiento que incluyen administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección una inmunoterapia o una terapia celular. En algunos casos, el método implica administrar al sujeto un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento es en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior. En algunos aspectos, la administración del agente u otro tratamiento se realiza en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de neurotoxicidad grave y/o no muestra una neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, la terapia incluye una dosis de células que expresan un receptor recombinante.

[0010] En algunos de tales casos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto presenta SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presenta un primer signo o síntoma de SLC de grado 1. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto presenta un signo o síntoma de SLC y/o presenta SLC de grado 1. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestre un primer signo o síntoma de SLC de grado 1 después del inicio de la administración de la terapia.

[0011] En algunos casos, un signo o síntoma de SLC de grado 1 es fiebre. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia.

[0012] En algunos aspectos, se describen métodos de tratamiento que incluyen la administración a un sujeto previamente administrado con una terapia, tal como una inmunoterapia y/o una terapia celular, un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia.

[0013] En algunos casos, antes de administrar el agente u otro tratamiento, el método incluye administrar al sujeto la terapia para tratar una enfermedad o afección.

[0014] En algunos casos, se describen métodos de tratamiento que incluyen administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, el método incluye administrar al sujeto un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad a la inmunoterapia y/o terapia celular administrada en un momento dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de aproximadamente 16 horas, dentro de aproximadamente 12 horas, dentro de aproximadamente 8 horas, dentro de aproximadamente 2 horas o dentro de aproximadamente 1 hora después del primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia.

[0015] En algunos casos, la fiebre es una fiebre sostenida. En algunos casos, la fiebre no se reduce o no se reduce en más de 1°C después del tratamiento con un antipirético. En algunos aspectos, la fiebre es una fiebre que no se reduce o no se reduce en más de 1°C después del tratamiento con un antipirético. En algunos casos, la fiebre no se ha reducido en más de 1°C, siguiendo el tratamiento del sujeto con un antipirético.

[0016] En algunos casos, la fiebre incluye una temperatura de al menos o al menos alrededor de 38,0°C. En algunos aspectos, la fiebre incluye una temperatura que está entre aproximadamente 38,0°C y 42,0°C, 38,0°C y 39,0°C, 39,0°C y 40,0°C o 40,0°C y 42,0°C, cada una inclusive. En algunos casos, la fiebre incluye una temperatura que es superior o superior a aproximadamente 38,52C, 39,0 °C, 39,5 °C, 40,0 °C, 41,0 °C, 42,0 °C.

[0017] En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra menos de cinco días después del inicio de la administración de la terapia, menos de cuatro días después del inicio de la administración de la terapia o menos de tres días después del inicio de la administración de la terapia.

[0018] En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia celular. En algunos casos, la terapia celular es o comprende una terapia celular adoptiva. En algunos aspectos, la terapia es o comprende una terapia con linfocitos infiltrantes de tumores (LIT), una terapia con TCR transgénico o una terapia con células que expresan receptores recombinantes, que opcionalmente es una terapia con células T. En algunos casos, la terapia es una terapia de células T que expresan el receptor de antígeno quimérico (CAR).

[0019] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un esteroide, o un antagonista o inhibidor de un receptor de citocinas o de una citocina seleccionada entre IL-10, IL-10R, IL-6, receptor de IL-6, IFNy , IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1 p, CCR5, TNFalfa, TNFR1, IL-1 e IL-1 Ralfa/IL-1 beta.

[0020] En algunos aspectos, el antagonista o inhibidor es o comprende un agente seleccionado entre un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido y un ácido nucleico. En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un agente seleccionado entre tocilizumab, situximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 y FM101.

[0021] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende tocilizumab. En algunos de estos casos, el tocilizumab se administra en una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg /kg a 4 mg/kg o 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive, o el tocilizumab se administra en una dosis de al menos o al menos alrededor de 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg u 8 mg/kg.

[0022] En algunos aspectos, el método incluye además la administración de un esteroide al sujeto. En algunos de estos aspectos, el esteroide se administra en un momento que está dentro de los 7 días, 8 días o 9 días después de la administración de la terapia. En algunos casos, el esteroide se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de hipotensión después de la administración de la terapia. En algunos casos, el esteroide se administra en un momento en el que el sujeto muestra el síndrome de liberación de citocinas (SLC) de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestra un primer signo de SLC de grado 2 después de la administración de la terapia. En algunos casos, el esteroide se administra en un momento en el que el sujeto presenta neurotoxicidad de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestre un primer signo o síntoma de neurotoxicidad de grado 2 después de la administración de la terapia.

[0023] En algunos casos, se describen métodos de tratamiento que incluyen la administración de un esteroide a un sujeto administrado con una terapia, tal como una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, la administración del esteroide se inicia en un momento dentro de los 7 días, 8 días o 9 días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del esteroide se inicia dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de hipotensión que sigue al inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del esteroide se inicia en un momento en el que el sujeto presenta el síndrome de liberación de citoquinas (SLC) de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presenta el primer signo de SLC de grado 2 después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, la administración del esteroide se inicia en un momento en el que el sujeto presenta neurotoxicidad de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestre un primer signo o síntoma de neurotoxicidad de grado 2 tras el inicio de la administración de la terapia.

[0024] En algunos casos, antes de administrar el esteroide, el método incluye administrar al sujeto la terapia para tratar una enfermedad o afección.

[0025] En algunos aspectos, se describen métodos de tratamiento que incluyen la administración a un sujeto que tiene una enfermedad o afección de una terapia, tal como una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, el método implica además la administración de un esteroide al sujeto. En algunos aspectos, la administración del esteroide se inicia en un momento dentro de los 7 días, 8 días o 9 días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, la administración del esteroide se inicia dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de hipotensión que sigue al inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, la administración del esteroide se inicia en un momento en el que el sujeto presenta un síndrome de liberación de citoquinas (SLC) de grado 2 o superior o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presenta un primer signo de SLC de grado 2 o superior tras el inicio de la administración. de la terapia. En algunos aspectos, la administración del esteroide se inicia en un momento en el que el sujeto presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presenta un primer signo o síntoma de neurotoxicidad de grado 2 o superior tras el inicio de la administración de la terapia.

[0026] En algunos casos, en el momento de la administración del esteroide, el sujeto no presenta SLC grave, no presenta SLC de grado 3 o superior, o no presenta neurotoxicidad grave o no presenta neurotoxicidad de grado 3 o superior.

[0027] En algunos aspectos, el esteroide se administra dentro de las 24 horas posteriores o simultáneamente con el primer signo de hipotensión después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, el esteroide se administra simultáneamente con el inicio de una terapia presora. En algunos casos, la hipotensión incluye una presión arterial sistólica inferior o aproximadamente inferior a 90 mm Hg, 80 mm Hg o 70 mm Hg. En algunos casos, la hipotensión incluye presión arterial diastólica inferior a 60 mm Hg, 50 mm Hg o 40 mm Hg.

[0028] En algunos casos, el agente es o comprende un esteroide que es o comprende un corticosteroide. En algunos aspectos, el agente es un esteroide que es o comprende un glucocorticoide. En algunos casos, el corticosteroide es o comprende dexametasona o prednisona. En algunos casos, el esteroide se administra por vía intravenosa u oral.

[0029] En algunos casos, el esteroide se administra en una cantidad de dosificación equivalente de aproximadamente 1,0 mg a 20 mg de dexametasona por día, 1,0 mg a 10 mg de dexametasona por día, o 2,0 mg a 6,0 mg de dexametasona por día, cada uno inclusivo.

[0030] En algunos casos, antes de administrar el esteroide, el método incluye administrar un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra en un tiempo inferior o inferior a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citocinas (SLC) grave y/o no muestra SLC de grado 2 o superior. En algunos aspectos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior. En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto no presenta signos o síntomas de neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, el sujeto no ha presentado neurotoxicidad grave y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior.

[0031] En algunos casos, la terapia incluye una dosis de células que expresan un receptor recombinante.

[0032] En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto presenta SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presenta un primer signo o síntoma de SLC de grado 1. En algunos casos, un signo o síntoma de SLC de grado 1 es fiebre. En algunos casos, el primer signo o síntoma de SLC es fiebre. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre que sigue al inicio de la administración de la terapia.

[0033] En algunos aspectos, antes de administrar el esteroide, el método incluye administrar un agente u otro tratamiento capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre que sigue al inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento se administra dentro de aproximadamente 16 horas, dentro de aproximadamente 12 horas, dentro de aproximadamente 8 horas, dentro de aproximadamente 2 horas o dentro de aproximadamente 1 hora después del primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia.

[0034] En algunos casos, la fiebre es una fiebre sostenida. En algunos casos, la fiebre no se reduce o no se reduce en más de 1 °C después del tratamiento con un antipirético. En algunos casos, la fiebre es una fiebre que no se reduce o no se reduce en más de 1 °C después del tratamiento con un antipirético. En algunos casos, la fiebre no se ha reducido en más de 1°C, siguiendo el tratamiento del sujeto con un antipirético.

[0035] En algunos casos, la fiebre incluye una temperatura de al menos o al menos alrededor de 38,0°C. En algunos casos, la fiebre incluye una temperatura que está entre aproximadamente 38,0°C y 42,0°C, 38,0°C y 39,0°C, 39,0°C y 40,0°C o 40,0°C y 42,0°C, cada uno inclusive. En algunos aspectos, la fiebre incluye una temperatura que es superior o superior a aproximadamente 38,52C, 39,0°C, 39,5°C, 40,0°C, 41,0°C, 42,0°C.

[0036] En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra menos de cinco días después del inicio de la administración de la terapia, menos de cuatro días después del inicio de la administración de la terapia o menos de tres días después del inicio de la administración de la terapia.

[0037] En algunos casos de cualquiera de los casos anteriores, la terapia es o comprende una terapia celular. En algunos casos, la terapia celular es o comprende una terapia celular adoptiva. En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia con linfocitos infiltrantes de tumores (LIT), una terapia con TCR transgénico o una terapia con células que expresan un receptor recombinante, que opcionalmente es una terapia con células T. En algunos casos, la terapia es o incluye una terapia celular que expresa el receptor de antígeno quimérico (CAR).

[0038] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un antagonista o inhibidor de un receptor de citoquinas o una citoquina seleccionada entre IL-10, IL-10R, IL-6, receptor de IL-6, IFNy, IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1 p, CCR5, TNFalfa, TNFR1, IL-1 e IL-1 Ralfa/IL-1beta. En algunos casos, el antagonista o inhibidor es o comprende un agente seleccionado entre un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido y un ácido nucleico.

[0039] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un agente seleccionado entre tocilizumab, situximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX -109, FE301 y FM101.

[0040] En algunos aspectos, el agente u otro tratamiento es o comprende tocilizumab. En algunos casos, el tocilizumab se administra en una cantidad de dosificación de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg kg a 4 mg/kg o 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive, o el tocilizumab se administra en una dosis de al menos o al menos alrededor de 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg /kg o 8 mg/kg.

[0041] En algunos de cualquiera de los casos anteriores, la terapia es o comprende una terapia celular y el número de células administradas está entre aproximadamente 0,25 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, 0,5 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 3 x 106 células/kg, entre aproximadamente 0,75 x 106 células/kg y 2,5 x 106 células/kg o entre aproximadamente 1 x 106 células/kg y 2 x 106 células/kg, cada uno inclusivo.

[0042] En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia celular y las células se administran en una única composición farmacéutica que contiene las células. En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia celular y la dosis de células es una dosis dividida, donde las células de la dosis se administran en una pluralidad de composiciones, que contienen colectivamente las células de la dosis, durante un período de no más de tres días.

[0043] En algunos casos, la enfermedad o afección es o comprende un tumor o un cáncer. En algunos casos, la enfermedad o afección es o comprende una leucemia o un linfoma. En algunos casos, la enfermedad o afección es una neoplasia maligna de células B o es una enfermedad o afección hematológica. En algunos aspectos, la enfermedad o afección es o comprende un linfoma no Hodgkin (LNH) o una leucemia linfoblástica aguda (LLA).

[0044] En algunos casos, la terapia es una terapia celular que incluye una dosis de células que expresan un receptor recombinante. En algunos aspectos, el receptor recombinante se une, reconoce o se dirige a un antígeno asociado con la enfermedad o afección. En algunos casos, el receptor recombinante es un receptor de células T o un receptor de células no T funcional. En algunos casos, el receptor recombinante es un receptor de antígeno quimérico (CAR).

[0045] En algunos casos, CAR contiene un dominio de reconocimiento de antígeno extracelular que se une específicamente al antígeno y un dominio de señalización intracelular que contiene un ITAM. En algunos casos, el antígeno es CD19. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular contiene un dominio intracelular de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, el CAR contiene además una región de señalización coestimuladora. En algunos aspectos, el dominio de señalización coestimulador contiene un dominio de señalización de CD28 o 4-1BB.

[0046] En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia que contiene una dosis de células que contienen células T. En algunos casos, las células T son CD4+ o CD8+. En algunos casos, las células T son autólogas del sujeto.

[0047] En algunos casos, el método incluye además administrar un agente quimioterapéutico antes de administrar la terapia. En algunos casos, el sujeto ha sido tratado previamente con un agente quimioterapéutico antes del inicio de la administración de la terapia. En algunos aspectos, el agente quimioterapéutico incluye un agente seleccionado del grupo que consiste en ciclofosfamida, fludarabina y/o una combinación de los mismos. En algunos casos, el agente quimioterapéutico se administra entre 2 y 5 días antes del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, el agente quimioterapéutico se administra a una dosis de entre aproximadamente 1 g/m2 del sujeto y aproximadamente 3 g/m2 del sujeto.

[0048] En algunos casos, la toxicidad es una neurotoxicidad. En algunos casos, un resultado relacionado con el SNC en el sujeto hasta el día 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 después de la administración de la terapia no es detectable o se reduce en comparación con un método que incluye un régimen de tratamiento alternativo en el que al sujeto se le administra el agente u otro tratamiento después de desarrollarse SLC grave o neurotoxicidad o después de que se haya desarrollado SLC o neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, el resultado tóxico es un síntoma asociado con neurotoxicidad de grado 3 o superior o es un síntoma asociado con SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, el resultado tóxico se reduce en más del 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % o más. En algunos casos, el resultado tóxico es un síntoma asociado con neurotoxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, el resultado tóxico se selecciona entre neurotoxicidad de grado 3 o superior que incluye confusión, delirio, afasia expresiva, obnubilación, mioclono, letargo, estado mental alterado, convulsiones, actividad similar a convulsiones y convulsiones.

[0049] En algunos aspectos, la terapia es una terapia y las células exhiben una expansión y/o persistencia mayor o más prolongada en el sujeto que las células administradas en un método que incluye un régimen de tratamiento alternativo en el que al sujeto se le administra el agente u otro tratamiento después de desarrollarse SLC severo o neurotoxicidad o después de que se haya desarrollado SLC o neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, la expansión y/o la persistencia aumentan 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces.

[0050] En algunos casos, el resultado tóxico es SLC de grado 3 o superior que comprende uno o más síntomas seleccionados entre fiebre persistente superior a o aproximadamente 38 grados Celsius, durante al menos tres días consecutivos; hipotensión que requiere dosis altas de vasopresores o múltiples vasopresores; hipoxia, que comprende opcionalmente (p. ej., niveles de oxígeno en plasma (PO2) inferiores al 90 % o aproximadamente e insuficiencia respiratoria que requiere ventilación mecánica. En algunos casos, la terapia es una terapia celular que comprende una dosis de células y las células exhiben una expansión y/o persistencia aumentada o prolongada en el sujeto en comparación con la administración de la terapia celular (en el sujeto o en un sujeto correspondiente en una cohorte o grupo de tratamiento alternativo) usando un régimen de tratamiento alternativo, en el que dicho régimen de tratamiento alternativo comprende administrar la terapia celular y posteriormente administrar el agente u otro tratamiento después de que se haya desarrollado SLC grave o después de que se haya desarrollado SLC de grado 2 o superior, y opcionalmente en el que el sujeto en dicho régimen de tratamiento alternativo no se administra dicho agente, y opcionalmente no se administra ningún otro tratamiento diseñado para tratar SLC o neurotoxicidad, tras la administración de las células y antes de dicho desarrollo de SLC de grado 2 o superior o SLC grave. En algunos casos, el aumento o la prolongación de la expansión y/o persistencia es de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces.

[0051] En algunos casos, la terapia es una terapia celular que comprende una dosificación de células y las células exhiben una expansión y/o persistencia aumentada o prolongada en el sujeto en comparación con la administración de la terapia celular (en el sujeto o en un sujeto correspondiente en una cohorte o grupo de tratamiento alternativo) utilizando un régimen de tratamiento alternativo. En algunos casos, dicho régimen de tratamiento alternativo comprende administrar la terapia celular y posteriormente administrar el agente u otro tratamiento después de que se haya desarrollado SLC o neurotoxicidad grave o después de que se haya desarrollado SLC o neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, al sujeto en dicho régimen de tratamiento alternativo no se le administra dicho agente. En algunos casos, al sujeto en dicho régimen de tratamiento alternativo no se le administra ningún otro tratamiento diseñado para tratar el SLC o la neurotoxicidad, después de la administración de las células y antes de dicho desarrollo de SLC de grado 2 o superior o SLC grave o neurotoxicidad de grado 2 o superior o neurotoxicidad severa.

[0052] En algunos casos, el aumento o la prolongación de la expansión y/o la persistencia es de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces.

[0053] En algunos casos, las células exhiben la misma o similar expansión y/o persistencia en el sujeto que las células administradas en un método que incluye un régimen de tratamiento alternativo en el que al sujeto se le administra la terapia celular pero en ausencia del agente o del otro tratamiento. En algunos casos, la expansión y/o persistencia no es más de 2 veces inferior o reducida que en un método que incluye un régimen de tratamiento alternativo en el que al sujeto se le administra la terapia celular pero en ausencia del agente o del otro tratamiento.

[0054] En algunos casos, la terapia es una terapia celular, que comprende células manipuladas y/o que expresan CAR. En algunos casos, la concentración o el número de células manipuladas y/o que expresan CAR en la sangre del sujeto el día 30, el día 60 o el día 90 después del inicio de la administración de la terapia es al menos de 10 o aproximadamente 10. Células que expresan CAR por microlitro, al menos el 50 % del número total de células mononucleares de sangre periférica (PBMC), al menos o al menos aproximadamente 1 x 105 células modificadas genéticamente o que expresan CAR, y/o al menos 5.000 copias de células que codifican CAR o ADN codificante de receptor diseñado por microgramos de ADN. En algunos casos, en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, las células que expresan CAR y/o son manipuladas son detectables en la sangre o el suero del sujeto. En algunos casos, en los días 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, la sangre del sujeto contiene al menos un 20 % de células que expresan CAR, al menos 10 células que expresan CAR por microlitro o al menos 1 x 104 células que expresan CAR. En algunos casos, en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, la sangre del sujeto contiene al menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de una dosis biológicamente efectiva de las células. En algunos casos, en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, la sangre del sujeto contiene al menos un 20 % de células modificadas y/o que expresan CAR, al menos 10 células modificadas y/o que expresan CAR por microlitro y/o al menos 1 x 104 células manipuladas y/o células que expresan CAR. En algunos casos, en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, el sujeto presenta una reducción o una reducción sostenida de la carga de la enfermedad o afección. En algunos casos, la reducción o la reducción sostenida de la carga de la enfermedad o afección es igual o cercana al 50, 60, 70 u 80 % de reducción máxima después de la administración de la terapia o la reducción asociada con la dosis efectiva.

[0055] En algunos casos, en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, el sujeto no muestra, y/o no ha mostrado, después del tratamiento de terapia celular, neurotoxicidad grave, SLC grave, SLC de grado 2 o superior, neurotoxicidad de grado 2 o superior, y/o no ha presentado convulsiones u otro resultado del SNC; o en el día 30, 60 o 90 después del inicio de la administración de la terapia, menos o aproximadamente menos del 25 %, menos o aproximadamente menos del 20 %, menos o aproximadamente menos del 15 %, o menos o aproximadamente menos del 10 % de los sujetos así tratados no muestran, después del tratamiento de terapia celular, neurotoxicidad grave, SLC grave, SLC de grado 2 o superior, neurotoxicidad de grado 2 o superior y/o no han presentado convulsiones u otro resultado del SNC.

[0056] En algunos casos, la terapia es una terapia celular, que comprende células manipuladas y/o que expresan CAR; y el área bajo la curva (AUC) para la concentración en sangre de células manipuladas y/o que expresan CAR a lo largo del tiempo después de la administración de la terapia es mayor en comparación con la que se logra a través de un método que comprende un régimen de dosificación alternativo, como cuando al sujeto se le administra la terapia y se le administra el agente u otro tratamiento en un momento en el que el sujeto presenta un SLC o neurotoxicidad grave o de grado 2 o superior o de grado 3 o superior.

[0057] En algunos casos, también se describen agentes u otros tratamientos para usar en el tratamiento, prevención, retraso o atenuación del desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, (a) el agente u otro tratamiento se administra a un sujeto: (i) en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después de la iniciación del sujeto al que se le ha administrado la terapia; y/o (ii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra un SLC de grado 2 o superior; y/o (iii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de neurotoxicidad grave y/o no muestra neurotoxicidad de grado 2 o superior; y/o (b) entre el momento de inicio del sujeto al que se le administró la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, (i) el sujeto no ha exhibido SLC severo y/o no ha exhibido SLC de grado 2 o superior y/o (ii) el sujeto no ha exhibido neurotoxicidad severa y/o no exhibe neurotoxicidad de grado 2 o superior.

[0058] En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto muestra un signo o síntoma de SLC y/o muestra SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestra un primer signo o síntoma de SLC de grado 1 tras la administración de la terapia. En algunos casos, el signo o síntoma del SLC de grado 1 es fiebre; y/o el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0059] En algunos casos, también se describen agentes u otro uso de tratamiento en el tratamiento, prevención, retraso o atenuación del desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular, en la que el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0060] En algunos casos, también se describen agentes u otro tratamiento para usar como medicamento para tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, (a) el agente u otro tratamiento se administra a un sujeto: (i) en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después de la iniciación del sujeto al que se le ha administrado la terapia; y/o (ii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra un SLC de grado 2 o superior; y/o (iii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de neurotoxicidad grave y/o no muestra neurotoxicidad de grado 2 o superior; y/o (b) entre el momento de inicio del sujeto al que se le administró la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, (i) el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no ha presentado SLC de grado 2 o superior y/o (ii) el sujeto no ha exhibido neurotoxicidad severa y/o no exhibe neurotoxicidad de grado 2 o superior.

[0061] En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto muestra un signo o síntoma de SLC y/o muestra un SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestra un primer signo o síntoma de SLC de grado 1 tras la administración de la terapia. En algunos casos, el signo o síntoma del SLC de grado 1 es fiebre; y/o el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0062] En algunos casos, también se describen agentes u otro tratamiento para usar como medicamento para tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular, en la que el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0063] En algunos casos, también se describen usos de agentes u otro tratamiento para la fabricación de un medicamento para tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, (a) el agente u otro tratamiento se administra a un sujeto: (i) en un tiempo menor o mayor a diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después de la iniciación del sujeto al que se le ha administrado la terapia; y/o (ii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de síndrome de liberación de citoquinas (SLC) grave y/o no muestra un SLC de grado 2 o superior; y/o (iii) en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de neurotoxicidad grave y/o no muestra neurotoxicidad de grado 2 o superior; y/o (b) entre el momento de inicio del sujeto al que se le administró la terapia y el momento de la administración del agente u otro tratamiento, (i) el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no ha presentado SLC de grado 2 o superior y/o (ii) el sujeto no ha exhibido neurotoxicidad severa y/o no exhibe neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, el agente u otro tratamiento se administra en un momento en el que el sujeto muestra un signo o síntoma de SLC y/o muestra SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestra un primer signo o síntoma de SLC de grado 1 después de la administración de la terapia. En algunos casos, el signo o síntoma del SLC de grado 1 es fiebre; y/o el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0064] En algunos casos, también se describen usos de agentes u otro tratamiento para la fabricación de un medicamento para tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado previamente una terapia, terapia que comprende una inmunoterapia y/o una terapia celular, en la que el agente u otro tratamiento se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0065] En algunos de los casos de los agentes, otros tratamientos o usos de los mismos descritos en el presente documento, el agente u otro tratamiento se administra dentro de aproximadamente 16 horas, dentro de aproximadamente 12 horas, dentro de aproximadamente 8 horas, dentro de aproximadamente 2 horas o dentro de aproximadamente 1 hora después del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia.

[0066] En algunos casos, la fiebre es una fiebre sostenida. En algunos casos, la fiebre es una fiebre que no se reduce o no se reduce en más de 1 °C después del tratamiento con un antipirético y/o en la que la fiebre no se ha reducido en más de 1 °C, luego del tratamiento del sujeto con un antipirético. En algunos casos, la fiebre comprende una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C. En algunos casos, la fiebre comprende una temperatura que está entre o entre aproximadamente 38,0°C y 42,0°C, 38,0°C y 39,0°C, 39,0°C y 40,0°C o 40,0°C y 42,0°C, cada uno inclusive; o la fiebre comprende una temperatura que es superior o superior a aproximadamente 38,5°C, 39,0°C, 39,5°C, 40,0°C, 41,0°C, 42,0°C.

[0067] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un esteroide, o un antagonista o inhibidor de un receptor de citoquinas o una citoquina seleccionada entre IL-10, IL-10R, IL-6, receptor de IL-6, IFNy , IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1 p, CCR5, TNFalfa, Tn Fr 1, IL-1 e IL-1 Ralfa/IL-1 beta. En algunos casos, el antagonista o inhibidor es o comprende un agente seleccionado entre un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido y un ácido nucleico.

[0068] En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende un agente seleccionado entre tocilizumab, situximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX -109, FE301 y FM101. En algunos casos, el agente u otro tratamiento es o comprende tocilizumab. En algunos casos, el tocilizumab se administra en una cantidad de dosificación de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg /kg a 4 mg/kg o 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive, o el tocilizumab se administra en una dosis de al menos o al menos alrededor de 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg u 8 mg/kg.

[0069] En algunos casos, el agente es o comprende un esteroide que opcionalmente es o comprende un corticosteroide, que opcionalmente es un glucocorticoide. En algunos casos, el corticosteroide es o comprende dexametasona o prednisona. En algunos casos, el esteroide es para administración en una cantidad de dosificación equivalente de aproximadamente 1,0 mg a 20 mg de dexametasona por día, 1,0 mg a 10 mg de dexametasona por día, o 2,0 mg a 6,0 mg de dexametasona por día, cada uno inclusive. En algunos casos, el esteroide se formula para administración intravenosa u oral.

[0070] En algunos de los casos de los agentes, otros tratamientos o usos de los mismos descritos en el presente documento, la terapia es o comprende una terapia celular. En algunos casos, la terapia celular es o comprende una terapia celular adoptiva. En algunos casos, la terapia es o comprende una terapia de linfocitos infiltrantes de tumores (LIT), una terapia de TCR transgénico o una terapia de células que expresan un receptor recombinante, que opcionalmente es una terapia de células T, que opcionalmente es una terapia de células que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR). En algunos casos, la terapia es una terapia celular que comprende una dosis de células que expresan un receptor recombinante, en la que: el receptor recombinante se une, reconoce o se dirige a un antígeno asociado con una enfermedad o afección; y/o el receptor recombinante es un receptor de células T o un receptor de células no T funcional; y/o el receptor recombinante es un receptor de antígeno quimérico (CAR).

[0071] En algunos casos, CAR comprende un dominio de reconocimiento de antígeno extracelular que se une específicamente al antígeno y un dominio de señalización intracelular que comprende un ITAM. En algunos casos, el antígeno es CD19. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular comprende un dominio intracelular de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, CAR comprende además una región de señalización coestimuladora. En algunos casos, el dominio de señalización coestimulador comprende un dominio de señalización de CD28 o 4-1BB.

[0072] En algunos casos, la terapia es una terapia celular que comprende una dosis de células que comprenden células T. En algunos casos, las células T son CD4+ o CD8+. En algunos casos, las células T son autólogas del sujeto. En algunos casos, la enfermedad o afección es un tumor o un cáncer. En algunos casos, la enfermedad o afección es una leucemia o un linfoma. En algunos casos, la enfermedad o afección es un linfoma no Hodgkin (LNH) o una leucemia linfoblástica aguda (LLA).

[0073] En algunos casos, el sujeto ha sido tratado previamente con un agente quimioterapéutico antes de la administración de la terapia. En algunos casos, el agente quimioterapéutico comprende un agente seleccionado del grupo que consiste en ciclofosfamida, fludarabina y/o una combinación de los mismos.

Breve descripción de los dibujos

[0074]

La Figura 1A y la Figura 1B muestran un perfil de toxicidad de sujetos ejemplares tratados con células T que expresan CAR. La Figura 1A muestra un perfil de toxicidad de un sujeto que presenta efectos secundarios de toxicidad leve después del tratamiento con células T que expresan CAR, en el que no se empleó ninguna intervención de la toxicidad. La Figura 1B muestra un perfil de toxicidad de un sujeto que presenta efectos secundarios graves en el que los métodos de intervención emplean tocilizumab (toci) en un momento en que los síntomas del SLC eran graves, terapia presora en un momento en el que se desarrolló hipotensión y dexametasona en un momento posterior a la terapia presora. Se representa el período de tiempo en el que está presente la toxicidad del SNC.

Las Figuras 2A, 2B, 2C y 2D muestran la correlación de los niveles máximos de citoquinas para IL-6, IFN-y, Granzima B e IL-2, respectivamente, en sujetos con (sí) y sin (no) SLC grave en el día 28 después de la infusión de células T CAR+. Los valores de p indican diferencias estadísticamente significativas entre sujetos dentro de la misma cohorte con y sin SLC grave.

La Figura 3 representa el porcentaje de células T CAR+ entre todas las células T en la sangre de sujetos varios días después de la infusión de células T CAR+ después de recibir una intervención con dexametasona (Dex), tocilizumab (toci) o prednisona antagonista del receptor de IL-1 recombinante anakinra (pred+ anakinra) para el tratamiento de la toxicidad grave. Se representa el inicio de SLC grave (SLCg) y neurotoxicidad grave (sNTox). La expansión máxima de las células T CAR+ fue de 454 células/pL. La expansión no se vio afectada por la administración de terapias intermedias.

La Figura 4A y la Figura 4B muestran el número máximo de células T con CAR por microlitro de sangre periférica en sujetos con (sí) y sin (no) SLC grave o neurotoxicidad grave, respectivamente.

Descripción detallada

[0075] En el presente documento se describen métodos que implican un tratamiento temprano o preventivo para prevenir o mejorar las toxicidades potenciales que pueden estar asociadas con ciertas terapias cuando se administran a un sujeto.

[0076] Los encabezados de las secciones que se utilizan en este documento son solo para fines organizativos y no deben interpretarse como una limitación del tema descrito.

I. MÉTODOS DE INTERVENCIÓN PREVENTIVA CON AGENTES DIRIGIDOS A LA TOXICIDAD

[0077] Se describen métodos que implican la administración de una inmunoterapia, tal como una terapia celular (por ejemplo, terapia de células CAR-T) y la administración de un agente dirigido a la toxicidad para la intervención temprana de, o riesgo de desarrollar una toxicidad para la inmunoterapia, tal como una toxicidad que es o incluye el síndrome de liberación de citoquinas (SLC) o una neurotoxicidad. En algunos casos, los métodos implican la administración de uno o más agentes dirigidos a la toxicidad en un momento en que los signos o síntomas del síndrome de liberación de citocinas (SLC) resultantes de la inmunoterapia, como la terapia celular, son relativamente leves y/o no son graves. En algunos casos, los métodos permiten el tratamiento de un sujeto con una terapia para tratar una enfermedad o trastorno, tal como una inmunoterapia o una terapia celular, que de otro modo puede dar como resultado efectos secundarios de SLC o neurotoxicidad de moderados a graves en los sujetos. En los métodos divulgados, la intervención temprana o el tratamiento preventivo con uno o más agentes dirigidos a la toxicidad previene o mejora el riesgo de SLC o neurotoxicidad de moderados a severos mientras mantiene la eficacia de la terapia, tal como, para el caso de la terapia celular, la persistencia de la terapia.

[0078] En algunos casos, el sujeto ha recibido o está recibiendo una terapia, tal como una inmunoterapia o una terapia celular, por ejemplo, para tratar una enfermedad o afección en un sujeto. Por ejemplo, en algunos casos, la terapia celular es una terapia celular adoptiva, que incluye la administración de células que expresan receptores quiméricos específicos para una enfermedad o trastorno de interés, como los receptores de antígenos quiméricos (CAR) y/u otros receptores de antígenos recombinantes., así como otras células inmunes adoptivas y terapias de células T adoptivas. En algunos casos, la terapia celular adoptiva incluye la administración de una dosis de células que expresan un receptor recombinante, como CAR u otro receptor de antígeno recombinante. En algunos casos, los receptores quiméricos, como el receptor de antígeno quimérico, contienen uno o más dominios que combinan un dominio de unión a ligando (p. ej., anticuerpo o fragmento de anticuerpo) que proporciona especificidad para un antígeno deseado (p. ej., antígeno tumoral) con dominios de señalización intracelular. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular es una parte del dominio intracelular activador, tal como un dominio activador de células T, que proporciona una señal de activación primaria. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular contiene o contiene adicionalmente un dominio de señalización coestimulador para facilitar las funciones efectoras. En algunos casos, los receptores quiméricos, cuando se modifican genéticamente en células inmunitarias, pueden modular la actividad de las células T y, en algunos casos, pueden modular la diferenciación u homeostasis de las células T, lo que da como resultado células modificadas genéticamente con una mayor longevidad, supervivencia y/o persistencia in vivo, tales como para su uso en métodos de terapia celular adoptiva.

[0079] Terapias de células adoptivas (incluidas las que implican la administración de células que expresan receptores quiméricos específicos para una enfermedad o trastorno de interés, como receptores de antígenos quiméricos (CAR) y/u otros receptores de antígenos recombinantes, así como otros receptores de células inmunitarias adoptivas y terapias de células T adoptivas) pueden ser eficaces en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades y trastornos. En ciertos contextos, los enfoques disponibles para la terapia celular adoptiva pueden no ser siempre completamente satisfactorios. En algunos contextos, la eficacia óptima puede depender de la capacidad de las células administradas para reconocer y unirse a un objetivo, por ejemplo, un antígeno objetivo, para traficar, localizar y entrar con éxito en los sitios apropiados dentro del sujeto, los tumores y sus entornos, para activarse, expandirse, ejercer varias funciones efectoras, incluida la destrucción citotóxica y la secreción de varios factores como las citoquinas, persistir, incluso a largo plazo, diferenciarse, hacer la transición o participar en la reprogramación en ciertos estados fenotípicos (como estados efectores, de longevidad, de memoria, menos diferenciados y efectores), para proporcionar respuestas de recuerdo eficaces y sólidas después de la eliminación y la reexposición al ligando o antígeno objetivo, y evitar o reducir el agotamiento, la anergia, la diferenciación terminal y/o la diferenciación en un estado supresor.

[0080] En algunos aspectos, los casos descritos se basan en observaciones de que la eficacia de la terapia celular adoptiva puede estar limitada por el desarrollo de toxicidad en el sujeto al que se administran dichas células, cuya toxicidad en algunos casos puede ser grave. Por ejemplo, en algunos casos, la administración de una dosis de células que expresan un receptor recombinante, por ejemplo, un CAR, puede dar como resultado toxicidad o riesgo de la misma, como SLC o neurotoxicidad. En algunos casos, si bien una dosis más alta de dichas células puede aumentar la eficacia del tratamiento, por ejemplo, al aumentar la exposición a las células, como promover la expansión y/o la persistencia, también puede resultar en un riesgo aún mayor de desarrollar una toxicidad o una toxicidad más grave. Además, en algunos casos, los sujetos con una mayor carga de enfermedad también pueden tener un mayor riesgo de desarrollar una toxicidad o una toxicidad más grave.

[0081] Ciertos métodos disponibles para tratar o mejorar la toxicidad pueden no ser siempre completamente satisfactorios. Muchos de estos enfoques se centran, por ejemplo, en abordar los efectos posteriores de la toxicidad, como el bloqueo de citoquinas y/o agentes de administración tales como esteroides en dosis altas que también pueden eliminar o deteriorar la función de las células administradas. Además, dichos enfoques a menudo implican la administración de dichas intervenciones solo tras la detección de signos o síntomas físicos de toxicidad, que en general implican signos o síntomas de toxicidad moderada o grave (p. ej., SLC moderado o grave o neurotoxicidad moderada o grave). Por ejemplo, las Figura 1A y 1B proporcionan una comparación de los perfiles de toxicidad en los que un sujeto (mostrado en la Figura 1B) necesita una intervención y se le administra dicho agente en un momento en el que están presentes síntomas graves de SLC. Muchos de estos otros enfoques tampoco previenen otras formas de toxicidad como la neurotoxicidad, que puede estar asociada con la terapia celular adoptiva.

[0082] En algunos casos, esto es en un momento en el que dichos síntomas son graves y, por lo tanto, pueden requerir tratamientos incluso más duros o más extremos (por ejemplo, dosis más altas o una frecuencia de administración aumentada) para mejorar o tratar la toxicidad.

[0083] El uso de ciertos enfoques alternativos no proporciona soluciones satisfactorias a tales problemas. En algunos casos, tales agentes y terapias (p. ej., esteroides) están asociados con efectos secundarios tóxicos. Dichos efectos secundarios pueden ser incluso mayores a la dosis o frecuencia más alta en la que es necesario administrar o tratar con el agente o la terapia para tratar o mejorar la gravedad de la toxicidad que puede resultar de la terapia celular. Además, en algunos casos, se cree que un agente o terapia para tratar una toxicidad puede limitar la eficacia de la terapia celular, como la eficacia del receptor quimérico (por ejemplo, CAR) expresado en las células proporcionadas como parte de la terapia celular (Sentman (2013) Immunotherapy, 5:10).

[0084] Los métodos divulgados ofrecen ventajas sobre los enfoques disponibles. En algunos casos, los métodos descritos implican el tratamiento temprano o preventivo de sujetos antes de que los sujetos muestren signos físicos o síntomas de toxicidad que sean más que leves, como antes de mostrar signos físicos o síntomas de toxicidad grave. En algunos casos, el tratamiento ocurre en un momento en el que está presente un signo o síntoma físico de SLC leve, como SLC de grado 1, pero antes de que se haya desarrollado SLC moderado o grave o antes de que se haya desarrollado SLC de grado 2 o grado 3. En algunos casos, el tratamiento ocurre en un momento en el que está presente un signo o síntoma físico de neurotoxicidad leve, como la neurotoxicidad de grado 1, pero antes de que se haya desarrollado una neurotoxicidad moderada o grave o antes de que se haya desarrollado una neurotoxicidad de grado 2 o 3. En algunos casos, el tratamiento con los agentes dirigidos a la toxicidad ocurre en un momento en el que no se han desarrollado signos físicos o síntomas de neurotoxicidad. Por lo tanto, en algunos casos, los métodos descritos proporcionan la capacidad de intervenir antes de que puedan producirse resultados relacionados con el SNC no deseados. En algunos casos, la capacidad de intervenir temprano en el tratamiento de un resultado tóxico o el potencial de un resultado tóxico puede significar que se puede administrar una dosis reducida de un agente dirigido a la toxicidad para tratar o mejorar la toxicidad y/o una frecuencia reducida de administración de tal agente o terapia puede ser dada.

[0085] En algunos casos, los métodos descritos incluyen la administración de un agente dirigido a la toxicidad a un sujeto al que se le ha administrado una terapia, tal como una inmunoterapia (inmuno-terapia) o una terapia celular. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad es un agente que es capaz de tratar, prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo de una toxicidad en el sujeto. A continuación se describen ejemplos de dichos agentes dirigidos a la toxicidad.

[0086] En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra (i) en un tiempo inferior o no más de diez, siete, seis, cinco, cuatro o tres días después del inicio de la administración de la terapia. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra en un momento en el que el sujeto no presenta un signo o síntoma de síndrome de liberación de citocinas (SLC) grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular, y el momento de la administración del agente dirigido a la toxicidad, el sujeto no ha presentado SLC grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra en un momento en el que el sujeto no muestra un signo o síntoma de neurotoxicidad grave y/o no muestra una neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, entre el momento del inicio de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular, y el momento de la administración del agente dirigido a toxicidad, el sujeto no ha presentado neurotoxicidad grave y/o no presenta SLC de grado 2 o superior.

[0087] En algunos casos, los métodos divulgados están diseñados para incluir características que dan como resultado un menor grado de toxicidad, resultado o síntoma tóxico, perfil, factor o propiedad que promueve la toxicidad, como un síntoma o resultado asociado o indicativo del síndrome de liberación de citocinas (SLC) o neurotoxicidad, por ejemplo, en comparación con la administración de la terapia en un momento en el que al sujeto se le administra el agente u otro tratamiento después de que se haya desarrollado SLC grave o después de que se haya desarrollado SLC de grado 2 o superior.

[0088] En algunos aspectos, el resultado tóxico de una terapia, tal como una terapia celular, está asociado o es indicativo del síndrome de liberación de citocinas (SLC) o SLC grave (SLCg). SLC, por ejemplo, SLCg, puede ocurrir en algunos casos después de la terapia de células T adoptivas y la administración a sujetos de otros productos biológicos. Véase Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens y col., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp y col., N. Engl. J.Med. 368, 1509-1518 (2013); y Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78.

[0089] Típicamente, el SLC está causado por una respuesta inmunitaria sistémica exagerada mediada, por ejemplo, por células T, células B, células NK, monocitos y/o macrófagos. Tales células pueden liberar una gran cantidad de mediadores inflamatorios como citocinas y quimiocinas. Las citocinas pueden desencadenar una respuesta inflamatoria aguda y/o inducir daños en los órganos endoteliales, lo que puede provocar una fuga microvascular, insuficiencia cardíaca o la muerte. El SLC grave y potencialmente mortal puede conducir a infiltración pulmonar y lesión pulmonar, insuficiencia renal o coagulación intravascular diseminada. Otras toxicidades graves que amenazan la vida pueden incluir toxicidad cardíaca, dificultad respiratoria, toxicidad neurológica y/o insuficiencia hepática.

[0090] Los resultados, signos y síntomas de SLC son conocidos e incluyen los descritos en este documento. En algunos casos, cuando un régimen de dosificación o administración en particular afecta o no afecta un resultado, signo o síntoma determinado asociado con SLC, se pueden especificar resultados, signos y síntomas particulares y/o cantidades o grados de los mismos.

[0091] En el contexto de la administración de células que expresan CAR, la SLC, tal como la SLC severa, ocurre típicamente de 6 a 20 días después de la infusión de células que expresan CAR. Véase Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78. En algunos casos, la SLC ocurre menos de 6 días o más de 20 días después de la infusión de células T con CAR. La incidencia y el momento de la SLC pueden estar relacionados con los niveles de citocinas iniciales o la carga tumoral en el momento de la infusión. Comúnmente, el SLC implica niveles séricos elevados de interferón (IFN)-y , factor de necrosis tumoral (TNF)-a y/o interleucina (IL)-2. Otras citocinas que pueden inducirse rápidamente en SLC son IL-1 p, IL-6, IL-8 e IL-10.

[0092] Se han desarrollado criterios de SLC que parecen correlacionarse con el inicio de SLC para predecir qué pacientes tienen más probabilidades de estar en riesgo de desarrollar SLCg (ver Davilla et al. Science translational medicine.

2014;6(224):224ra25). Los factores incluyen fiebre, hipoxia, hipotensión, cambios neurológicos, niveles séricos elevados de citoquinas inflamatorias, como un conjunto de siete citoquinas (IFNy , IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalquina y GM-CSF) cuya elevación inducida por el tratamiento se puede correlacionar bien con la carga de la enfermedad previa al tratamiento, por ejemplo, la carga del tumor y los síntomas del SLCg. Se conocen otras pautas sobre el diagnóstico y manejo de SLC (ver, por ejemplo, Lee et al., Blood. 2014; 124 (2): 188-95). En algunos casos, los criterios que reflejan la calificación SLC son los que se detallan en la Tabla 1 a continuación.

[0093] En algunos casos, se considera que un sujeto desarrolla "SLC grave" ("SLCg") en respuesta o como consecuencia de la administración de una terapia celular o una dosis de células de la misma, si, después de la administración, el sujeto muestra: (1) fiebre de al menos 38 grados centígrados durante al menos tres días; (2) elevación de citoquinas que incluye (a) un cambio de pliegue máximo de al menos 75 para al menos dos del siguiente grupo de siete citoquinas en comparación con el nivel inmediatamente posterior a la administración: interferón gamma (IFNy), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalquina e IL-5 y/o (b) un cambio de pliegue máximo de al menos 250 para al menos uno del siguiente grupo de siete citocinas en comparación con el nivel inmediatamente posterior a la administración: interferón gamma (IFNy), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalquina e IL-5; y (c) al menos un signo clínico de toxicidad como hipotensión (que requiere al menos un presor vasoactivo intravenoso) o hipoxia (PO2 < 90%) o uno o más trastornos neurológicos (incluidos cambios en el estado mental, obnubilación y/o convulsiones). En algunos casos, el SLC grave incluye SLC con un grado de 3 o superior, como se establece en la Tabla 1.

[0094] En algunos casos, los resultados asociados con el SLC grave o el SLC de grado 3 o superior, como el grado 4 o superior, como se establece en la Tabla 1. En algunos casos, estos incluyen uno o más de: fiebre persistente, por ejemplo, fiebre de una temperatura específica, por ejemplo, superior a 38 grados centígrados o aproximadamente, durante dos o más, por ejemplo, tres o más, por ejemplo, cuatro o más días o durante al menos tres días consecutivos; fiebre superior a los 38 grados centígrados o aproximadamente; elevación de las citocinas, como un cambio máximo, p. ej., de al menos 75 o aproximadamente, en comparación con los niveles previos al tratamiento de al menos dos citocinas (p. ej., al menos dos del grupo que consta de interferón gamma (IFNy), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalquina e IL-5, y/o factor de necrosis tumoral alfa (TNFa)), o un cambio máximo, p. ej., de al menos 250 o aproximadamente de al menos una de tales citocinas; y/o al menos un signo clínico de toxicidad, tal como hipotensión (p. ej., medida por al menos un presor vasoactivo intravenoso); hipoxia (p. ej., niveles de oxígeno en plasma (PO2) inferiores al 90 % o aproximadamente); y/o uno o más trastornos neurológicos (incluidos cambios en el estado mental, obnubilación y convulsiones). En algunos casos, el SLC grave incluye el SLC que requiere manejo o atención en la unidad de cuidados intensivos (UCI).

[0095] En algunos casos, el SLC grave abarca una combinación de (1) fiebre persistente (fiebre de al menos 38 grados centígrados durante al menos tres días) y (2) un nivel sérico de CRP de al menos o alrededor de 20 mg/dL. En algunos casos, el SLC grave incluye hipotensión que requiere el uso de dos o más vasopresores o insuficiencia respiratoria que requiere ventilación mecánica. En algunos casos, la dosis de vasopresores se aumenta en una segunda o posterior administración.

[0096] En algunos casos, el SLC grave o el SLC de grado 3 abarca un aumento de la alanina aminotransferasa, un aumento de aspartato aminotransferasa, escalofríos, neutropenia febril, dolor de cabeza, disfunción ventricular izquierda, encefalopatía, hidrocefalia y/o temblor.

[0097] En algunos casos, los métodos descritos implican intervenciones tempranas antes del desarrollo de SLC grave en el sujeto o antes del desarrollo de SLC de grado 2 o grado 3. En algunos casos, se entiende que pueden existir signos o síntomas físicos de SLC, pero tales signos o síntomas generalmente son leves y/o no son graves. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra en un momento en el que el sujeto presenta SLC de grado 1 o se administra dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto presente un primer signo o síntoma de SLC de grado 1. En algunos casos, al sujeto se le administra un agente dirigido a la toxicidad en un momento en el que se ha desarrollado una primera fiebre sostenida o en un momento en el que se encuentra dentro de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 7 horas, 8 horas, 9 horas, 10 horas, 12 horas, 18 horas o 24 horas de fiebre, como una fiebre sostenida.

[0098] En algunos casos, el sujeto presenta fiebre y, en algunos aspectos, se trata en un momento en el que el sujeto presenta tal fiebre y/o presenta o ha presentado fiebre durante un período de tiempo particular.

[0099] En algunos casos, la fiebre en el sujeto se caracteriza como una temperatura corporal del sujeto que está (o se mide) en o por encima de un cierto umbral de temperatura o nivel. En algunos aspectos, la temperatura umbral es la asociada con al menos una fiebre baja, con al menos una fiebre moderada y/o con al menos una fiebre alta. En algunos casos, la temperatura umbral es una temperatura o rango particular. Por ejemplo, la temperatura umbral puede estar en o alrededor de o al menos en o alrededor de 38, 39, 40, 41 o 42 grados Celsius, y/o puede estar en un intervalo de alrededor de 38 grados Celsius a alrededor de 39 grados Celsius, un rango de alrededor de 39 grados Celsius a alrededor de 40 grados Celsius, un rango de alrededor de 40 grados Celsius a alrededor de 41 grados, o un rango de alrededor de 41 grados Celsius a alrededor de 42 grados Celsius.

[0100] En algunos casos, la fiebre es una fiebre sostenida; en algunos aspectos, el sujeto es tratado en un momento en el que se ha determinado que un sujeto tiene fiebre sostenida, como dentro de una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o menos horas de dicha determinación o de la primera determinación de este tipo después de la terapia inicial que tiene el potencial de inducir la toxicidad, como la terapia dirigida a la enfermedad.

[0101] En algunos casos, el sujeto tiene, y/o se determina que tiene o se considera que tiene fiebre sostenida si presenta fiebre en o por encima del umbral de temperatura relevante, y cuando la fiebre o la temperatura corporal del sujeto no fluctúa alrededor de 1 °C o más de alrededor de 1 °C, y generalmente no fluctúa alrededor de 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3 °C o 0,2 °C o más de alrededor de 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3 °C o 0,2 °C. Dicha ausencia de fluctuación por encima o en una cierta cantidad generalmente se mide durante un período de tiempo determinado (por ejemplo, durante un período de 24 horas, 12 horas, 8 horas, 6 horas, 3 horas o 1 hora, que puede medirse desde el primer signo de fiebre o la primera temperatura por encima del umbral indicado). Por ejemplo, en algunos casos, se considera o se determina que un sujeto presenta fiebre sostenida si presenta fiebre de al menos alrededor de 38 o 39 grados centígrados, que no fluctúa en temperatura en más de o alrededor de 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3 °C o 0,2 °C, durante un período de 6 horas, durante un período de 8 horas, o durante un período de 12 horas, o durante un período de 24 horas.

[0102] En algunos casos, el sujeto tiene, y/o se determina que tiene o se considera que tiene, fiebre sostenida si presenta fiebre en o por encima del umbral de temperatura relevante, y cuando la fiebre o la temperatura corporal del sujeto no se reduce, o no se reduce en o en más de una cantidad especificada (p. ej., en más de 1 °C, y generalmente no fluctúa en aproximadamente o en más de aproximadamente 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3°C, o 0,2 °C), después de un tratamiento específico, como un tratamiento diseñado para reducir la fiebre, como un tratamiento con un antipirético. Un antipirético puede incluir cualquier agente, por ejemplo, compuesto, composición o ingrediente, que reduzca la fiebre, como uno de varios agentes que se sabe que tienen efectos antipiréticos, como los AINE (como ibuprofeno, naproxeno, ketoprofeno y nimesulida), salicilatos, tales como aspirina, salicilato de colina, salicilato de magnesio y salicilato de sodio, paracetamol, acetaminofén, metamizol, nabumetona, fenaxona, antipirina, febrífugos. En algunos casos, el antipirético es paracetamol. En algunos casos, el paracetamol se puede administrar a una dosis de 12,5 mg/kg por vía oral o intravenosa hasta cada cuatro horas. En algunos casos, es o comprende ibuprofeno o aspirina. Por ejemplo, se considera que un sujeto tiene fiebre sostenida si presenta o se determina que presenta una fiebre de al menos 38 o 39 grados centígrados, que no se reduce o no se reduce en más de 0,5 °C, 0,4 °C, 0,3 °C o aproximadamente, o 0,2 °C, o en o alrededor del 1 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 %, durante un período de 6 horas, durante un período de 8 horas, o durante un período de 12 horas, o durante un período de 24 horas, incluso después del tratamiento con el antipirético como el paracetamol. En algunos casos, la dosificación del antipirético es una dosificación ordinariamente eficaz en un sujeto para reducir la fiebre o fiebre de un tipo particular tal como fiebre asociada con una infección bacteriana o viral, por ejemplo, una infección localizada o sistémica.

[0103] En algunos casos, una o más de las terapias dirigidas a la toxicidad se administran en un momento en el que o inmediatamente después del cual se determina o se confirma que el sujeto (tal como se determina o confirma por primera vez) presenta fiebre sostenida, por ejemplo, medida de acuerdo con cualquiera de los casos antes mencionados. En algunos casos, una o más terapias dirigidas a la toxicidad se administran dentro de un cierto período de tiempo de dicha confirmación o determinación, como dentro de los 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 6 horas u 8 horas del mismo.

[0104] En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra antes de un signo o síntoma físico de neurotoxicidad. En algunos casos, la neurotoxicidad, incluida la neurotoxicidad grave, es un resultado tóxico que se puede asociar con la administración de diversas terapias, como las terapias celulares.

[0105] En algunos casos, los síntomas asociados con un riesgo clínico de neurotoxicidad incluyen confusión, delirio, afasia expresiva, obnubilación, mioclono, letargo, estado mental alterado, convulsiones, actividad similar a convulsiones, convulsiones (opcionalmente según lo confirmado por electroencefalograma [EEG]), niveles elevados de beta amiloide (Ap), niveles elevados de glutamato y niveles elevados de radicales de oxígeno. En algunos casos, la neurotoxicidad se clasifica en función de la gravedad (p. ej., utilizando una escala de grado 1 a 5 (consulte, por ejemplo, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (diciembre de 2010); National Cancer Institute— Common Toxicity Criteria versión 4.03 (NCI-CTCAE v4.03).

[0106] En algunos casos, los síntomas neurológicos pueden ser los primeros síntomas de SLCg. En algunos casos, se observa que los síntomas neurológicos comienzan de 5 a 7 días después de la infusión de terapia celular. En algunos casos, la duración de los cambios neurológicos puede variar de 3 a 19 días. En algunos casos, la recuperación de los cambios neurológicos se produce después de que se hayan resuelto otros síntomas de SLCg. En algunos casos, el tiempo o el grado de resolución de los cambios neurológicos no se acelera con el tratamiento con anti-IL-6 y/o esteroide(s).

[0107] En algunos casos, se considera que un sujeto desarrolla "neurotoxicidad severa" en respuesta o como consecuencia de la administración de una terapia celular o dosis de células de la misma, si, después de la administración, el sujeto muestra síntomas que limitan cuidado personal (p. ej., bañarse, vestirse y desvestirse, alimentarse, ir al baño, tomar medicamentos) entre:1) síntomas de neuropatía motora periférica, incluida la inflamación o degeneración de los nervios motores periféricos; 2) síntomas de neuropatía sensorial periférica, incluida la inflamación o degeneración de los nervios sensoriales periféricos, disestesia, como distorsión de la percepción sensorial, que da como resultado una sensación anormal y desagradable, neuralgia, como una sensación de dolor intenso a lo largo de un nervio o un grupo de nervios y/o parestesia, tales como alteraciones funcionales de las neuronas sensoriales que resultan en sensaciones cutáneas anormales de hormigueo, entumecimiento, presión, frío y calor en ausencia de estímulo. En algunos casos, la neurotoxicidad severa incluye neurotoxicidad con un grado de 3 o mayor, tal como se establece en la Tabla 2.

[0108] En algunos casos, los métodos reducen los síntomas, resultados o factores asociados con SLC, incluidos síntomas, resultados o factores asociados con SLC severo o grado 3 o superior, en comparación con otros métodos. Por ejemplo, los sujetos tratados de acuerdo con los presentes métodos pueden carecer de síntomas, resultados o factores detectables y/o reducidos de SLC, por ejemplo, SLC grave o SLC de grado 3 o superior, como cualquiera descrito, por ejemplo, establecido en la Tabla 1.

[0109] En algunos casos, los métodos reducen los síntomas asociados con los resultados del SNC o la neurotoxicidad en comparación con otros métodos. Por ejemplo, los sujetos tratados de acuerdo con los presentes métodos pueden carecer de síntomas detectables y/o reducidos de neurotoxicidad, tales como debilidad o entumecimiento de las extremidades, pérdida de memoria, visión y/o intelecto, conductas obsesivas y/o compulsivas incontrolables, delirios, dolor de cabeza, problemas cognitivos y conductuales que incluyen pérdida del control motor, deterioro cognitivo y disfunción del sistema nervioso autónomo y disfunción sexual, en comparación con sujetos tratados por otros métodos en los que la administración del agente dirigido a la toxicidad de ataque se administra más tarde y después de que se hayan desarrollado SLC severos o neurotoxicidad severa u otros resultados tóxicos. En algunos casos, los sujetos tratados de acuerdo con los presentes métodos pueden tener síntomas reducidos asociados con neuropatía motora periférica, neuropatía sensorial periférica, disestesia, neuralgia o parestesia.

[0110] En algunos casos, los métodos reducen los resultados asociados con la neurotoxicidad, incluidos los daños al sistema nervioso y/o al cerebro, como la muerte de las neuronas. En algunos aspectos, los métodos reducen el nivel de factores asociados con la neurotoxicidad, como beta amiloide (Ap), glutamato y radicales de oxígeno.

[0111] En algunos casos, los sujetos a los que se administró la terapia junto con una intervención temprana con un agente dirigido a la toxicidad tienen síntomas, resultados o factores reducidos asociados con SLC o asociados con un resultado relacionado con el SNC o neurotoxicidad (por ejemplo, neurotoxicidad severa o grado 3 o mayor neurotoxicidad) en comparación con un método que comprende un régimen de tratamiento alternativo en el que al sujeto se le administra el agente u otro tratamiento después de que se haya desarrollado SLC grave o después de que se haya desarrollado SLC de grado 2 o superior o neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos casos, el resultado de SLC (p. ej., SLC grave o grado 3 o superior) o relacionado con el SNC o neurotoxicidad (p. ej., neurotoxicidad grave o neurotoxicidad de grado 3 o superior) se reduce en más del 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % o más.

[0112] En algunos casos, la administración de la terapia celular provoca un evento adverso más. En algunos casos, el evento adverso incluye, entre otros, un aumento de la alanina aminotransferasa, un aumento de aspartato aminotransferasa, escalofríos, neutropenia febril, dolor de cabeza, hipotensión, disfunción ventricular izquierda, encefalopatía, hidrocefalia, convulsiones y/o temblor. En algunos casos, los métodos de intervención descritos aquí mejoran o reducen tales eventos adversos.

[0113] En algunos casos, los métodos descritos incluyen la administración de un agente dirigido a la toxicidad para mejorar un resultado tóxico (p. ej., un agente para mejorar la neurotoxicidad o SLC, como neurotoxicidad grave o SLC grave) a una dosis que se reduce o es inferior a la dosis de dicho agente administrada a un sujeto en un momento en que se ha desarrollado un signo o síntoma físico de SLC grave o neurotoxicidad y/o en un momento en el que el sujeto muestra SLC de grado 2 o grado 3 o neurotoxicidad y/o en un momento que es superior a 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días después de la administración o inicio de una terapia celular o después de la administración o inicio de una primera dosis de terapia celular. En algunos casos, la reducción de la dosis es al menos 1,2 veces, 1,3 veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces o 10 veces.

[0114] En algunos casos, los métodos descritos incluyen la administración del agente dirigido a la toxicidad a una frecuencia en un ciclo o régimen de dosificación que se reduce en comparación con la frecuencia de administración de un agente en un ciclo o régimen de dosificación de tal agente que es iniciado en un momento en que se ha desarrollado un signo o síntoma físico de SLC severo o neurotoxicidad y/o en un momento en el que el sujeto exhibe SLC de grado 2 o grado 3 o neurotoxicidad y/o en un tiempo mayor a 3 días (p. más de 3 a 14 días, como más de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días) después de la administración o inicio de una terapia celular o después de la administración o inicio de una primera dosis de terapia celular. En algunos casos, cuando un régimen de referencia o ciclo de tratamiento de un agente (p. ej., esteroide) implica la administración durante 3 días, la disminución de la frecuencia de administración puede ser a la administración durante 1 día o durante 2 días.

[0115] En algunos casos, los métodos divulgados están asociados con la administración de una terapia celular, por ejemplo, la administración de células en terapia celular adoptiva, tal como para el tratamiento de enfermedades o afecciones que incluyen diversos tumores. Los métodos implican la administración de células manipuladas que expresan receptores recombinantes diseñados para reconocer y/o unirse específicamente a moléculas asociadas con la enfermedad o afección y dar como resultado una respuesta, como una respuesta inmunitaria contra dichas moléculas al unirse a dichas moléculas. Los receptores pueden incluir receptores quiméricos, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR) y otros receptores de antígenos transgénicos que incluyen receptores de células T transgénicas (TCR). En algunos casos, los métodos divulgados van seguidos de una terapia de intervención temprana para tratar una toxicidad en el sujeto después del inicio de la terapia celular como se describe, como cuando la intervención temprana se inicia antes de un signo o síntoma de SLC de grado 2 o superior o un SLC grave o antes de que se haya desarrollado un signo o síntoma de neurotoxicidad de grado 2 o superior o neurotoxicidad grave.

A. Terapia celular y células manipuladas

[0116] En algunos aspectos, los métodos terapéuticos descritos implican la administración de células que expresan un receptor recombinante, y sus composiciones, a sujetos, por ejemplo, pacientes. En algunos casos, las células contienen o están diseñadas para contener un receptor diseñado, por ejemplo, un receptor de antígeno diseñado, tal como un receptor de antígeno quimérico (CAR) o un receptor de células T (TCR). Las células incluyen poblaciones de tales células, composiciones que contienen tales células y/o enriquecidas para tales células, por ejemplo, en las que se enriquecen o seleccionan células de cierto tipo tales como células T o células CD8+ o CD4+. Entre las composiciones se encuentran composiciones farmacéuticas y formulaciones para administración, como para terapia celular adoptiva.

[0117] En algunos casos, las células incluyen uno o más ácidos nucleicos introducidos mediante ingeniería genética y, por lo tanto, expresan productos recombinantes o modificados genéticamente de dichos ácidos nucleicos. En algunos casos, la transferencia de genes se logra estimulando primero las células, y combinándolas con un estímulo que induce una respuesta como proliferación, supervivencia y/o activación, por ejemplo, medida por la expresión de una citocina o marcador de activación, seguido de la transducción de las células activadas y expansión en cultivo a números suficientes para aplicaciones clínicas.

[0118] Son bien conocidos varios métodos para la introducción de componentes modificados genéticamente, por ejemplo, receptores de antígenos, por ejemplo, CAR, y pueden usarse con los métodos y composiciones descritos. Los métodos ejemplares incluyen aquellos para la transferencia de ácidos nucleicos que codifican los receptores, incluso a través de transducción viral, por ejemplo, retroviral o lentiviral, transposones y electroporación.

1. Receptores recombinantes

[0119] Las células generalmente expresan receptores recombinantes, tales como receptores de antígenos que incluyen receptores de antígenos no TCR funcionales, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR) y otros receptores de unión a antígenos tales como receptores de células T transgénicas (TCR). También entre los receptores hay otros receptores quiméricos.

a. Receptores de antígenos quiméricos (CAR)

[0120] Los receptores de antígenos ejemplares, incluidos los CAR, y los métodos para diseñar e introducir dichos receptores en las células incluyen los descritos, por ejemplo, en las publicaciones de Solicitud de Patente Internacional números WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, Nos de Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. US2002131960, US2013287748, US20130149337, la Patente de EE. UU. N2: 6.451.995, 7.446.190, 8.252.592, 8.339.645, 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319, 7.070.995, 7.265.209, 7.354.762, 7.446.191, 8.324.353, y 8.479.118, y la Solicitud de Patente Europea N2 EP2537416, y/o las descritas por Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 abril; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle y col., Curr. Opinión Immunol., 2012 octubre; 24(5): 633-39; Wu et al., Cáncer, 18 de marzo de 2012 (2): 160-75. En algunos aspectos, los receptores de antígeno incluyen un CAR como se describe en la Patente de EE. u U. N°: 7.446.190, y los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N°: WO/2014055668 A1. Los ejemplos de CAR incluyen CAR como se describe en cualquiera de las publicaciones antes mencionadas, como WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Patente de EE. UU. N2: 7.446.190, Patente de EE. UU. N°: 8.389.282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; y Brentjens y col., Sci Transl Med. 2013 5(177). Consulte también los documentos WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Patente de EE. UU. N2: 7.446.190 y Patente de EE. UU. N°: 8.389.282. Los receptores quiméricos, como los CAR, generalmente incluyen un dominio de unión a antígeno extracelular, como una parte de una molécula de anticuerpo, generalmente una región de cadena pesada variable (VH) y/o una región de cadena ligera variable (VL) del anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo scFv.

[0121] En algunos casos, el antígeno al que se dirige el receptor es un polipéptido. En algunos casos, es un carbohidrato u otra molécula. En algunos casos, el antígeno se expresa selectivamente o se sobreexpresa en células de la enfermedad o afección, por ejemplo, células tumorales o patógenas, en comparación con células o tejidos normales o no objetivo. En otros casos, el antígeno se expresa en células normales y/o se expresa en células manipuladas.

[0122] Los antígenos dirigidos por los receptores en algunos casos incluyen receptor de tirosina quinasa huérfano ROR1, tEGFR, HER2, LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA y antígeno de superficie de hepatitis B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3 o 4, FBP, receptor fetal de aceticolina e, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1, MAGE-A1, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, ligandos NKG2D, NY-ESO-1, Ma RT-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno prostático específico, PSMA, HER2/neu, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, ephrinB2, CD123, c-Met, g D-2 y MAGE A3, CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), una ciclina, como la ciclina A1 (CCNA1), y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por VIH, VHC, VHB u otros patógenos.

[0123] En algunos casos, CAR se une a un antígeno específico de patógeno. En algunos casos, el CAR es específico para antígenos virales (como VIH, VHC, VHB, etc.), antígenos bacterianos y/o antígenos parasitarios.

[0124] En algunos casos, la parte de anticuerpo del receptor recombinante, por ejemplo, CAR, incluye además al menos una parte de una región constante de inmunoglobulina, como una región bisagra, por ejemplo, una región bisagra de IgG4 y/o una región CH1/CL y/o Fc. En algunos casos, la parte o región constante es una IgG humana, como IgG4 o IgG 1. En algunos aspectos, la parte de la región constante sirve como región espaciadora entre el componente de reconocimiento de antígeno, por ejemplo, scFv, y el dominio transmembrana. El espaciador puede tener una longitud que proporcione una mayor capacidad de respuesta de la célula después de la unión al antígeno, en comparación con la ausencia del espaciador. Los espaciadores ejemplares, por ejemplo, regiones de bisagra, incluyen los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° WO2014031687. En algunos ejemplos, el espaciador tiene o tiene aproximadamente 12 aminoácidos de longitud o no tiene más de 12 aminoácidos de longitud. Los espaciadores ejemplares incluyen aquellos que tienen al menos aproximadamente 10 a 229 aminoácidos, aproximadamente 10 a 200 aminoácidos, aproximadamente 10 a 175 aminoácidos, aproximadamente 10 a 150 aminoácidos, aproximadamente 10 a 125 aminoácidos, aproximadamente 10 a 100 aminoácidos, aproximadamente 10 a 75 aminoácidos, aproximadamente 10 a 50 aminoácidos, aproximadamente 10 a 40 aminoácidos, aproximadamente 10 a 30 aminoácidos, aproximadamente 10 a 20 aminoácidos, o aproximadamente 10 a 15 aminoácidos, e incluyendo cualquier número entero entre los puntos finales de cualquiera de los rangos listados. En algunos casos, una región espaciadora tiene aproximadamente 12 aminoácidos o menos, aproximadamente 119 aminoácidos o menos, o aproximadamente 229 aminoácidos o menos. Los espaciadores ejemplares incluyen la bisagra de IgG4 sola, la bisagra de IgG4 unida a los dominios CH2 y CH3, o la bisagra de IgG4 unida al dominio CH3. Los espaciadores ejemplares incluyen, pero no se limitan a los descritos en Hudecek et al. (2013) Clínica. Cancer Res., 19:3153, Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° WO2014031687, Patente de e E. UU. N28.822.647 o Solicitud Publicada N2 US2014/0271635.

[0125] En algunos casos, la región o parte constante es una IgG humana, tal como IgG4 o IgG1. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia ESKYGPPCPPCP (establecida en SEQ ID NO:1) y está codificado por la secuencia establecida en SEQ ID NO: 2. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia establecida en SEQ ID NO: 3. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia establecida en SEQ ID NO: 4. En algunos casos, la región o parte constante es de IgD. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia establecida en SEQ ID NO: 5. En algunos casos, el espaciador tiene una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con cualquiera de s Eq ID NOS: 1,3, 4 o 5.

[0126] Este dominio de reconocimiento de antígeno generalmente está vinculado a uno o más componentes de señalización intracelular, como componentes de señalización que imitan la activación a través de un complejo receptor de antígeno, como un complejo TCR, en el caso de un CAR, y/o señal a través de otro receptor de superficie celular. Por lo tanto, en algunos casos, el componente de unión al antígeno (p. ej., el anticuerpo) está unido a uno o más dominios de señalización transmembrana e intracelular. En algunos casos, el dominio transmembrana se fusiona con el dominio extracelular. En un caso, se usa un dominio transmembrana que está asociado naturalmente con uno de los dominios en el receptor, por ejemplo, CAR. En algunos casos, el dominio transmembrana se selecciona o modifica por sustitución de aminoácidos para evitar la unión de dichos dominios a los dominios transmembrana de las mismas o diferentes proteínas de membrana superficial para minimizar las interacciones con otros miembros del complejo receptor.

[0127] El dominio transmembrana en algunos casos se deriva de una fuente natural o sintética. Cuando la fuente es natural, el dominio en algunos aspectos se deriva de cualquier proteína transmembrana o unida a la membrana. Las regiones transmembrana incluyen las derivadas de (es decir, comprenden al menos la(s) región(es) transmembrana(s) de) la cadena alfa, beta o zeta del receptor de células T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, c D8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, c D134, CD137, CD154. Alternativamente, el dominio transmembrana en algunos casos es sintético. En algunos aspectos, el dominio transmembrana sintético comprende residuos predominantemente hidrofóbicos tales como leucina y valina. En algunos aspectos, se encontrará un triplete de fenilalanina, triptófano y valina en cada extremo de un dominio transmembrana sintético. En algunos casos, el enlace se realiza mediante enlazadores, espaciadores y/o dominio(s) transmembrana.

[0128] Entre los dominios de señalización intracelular están aquellos que imitan o se aproximan a una señal a través de un receptor de antígeno natural, una señal a través de dicho receptor en combinación con un receptor coestimulador y/o una señal a través de un receptor coestimulador solo. En algunos casos, está presente un enlazador oligopeptídico o polipeptídico corto, por ejemplo, un enlazador de entre 2 y 10 aminoácidos de longitud, como uno que contiene glicinas y serinas, por ejemplo, el doblete de glicina-serina, y forma un enlace entre el dominio transmembrana y el dominio de señalización citoplasmática del CAR.

[0129] El receptor, por ejemplo, el CAR, generalmente incluye al menos un componente o componentes de señalización intracelular. En algunos casos, el receptor incluye un componente intracelular de un complejo TCR, como una cadena TCR CD3 que media en la activación y citotoxicidad de las células T, por ejemplo, la cadena zeta CD3. Por tanto, en algunos aspectos, la parte de unión a antígeno está unida a uno o más módulos de señalización celular. En algunos casos, los módulos de señalización celular incluyen el dominio transmembrana de CD3, los dominios de señalización intracelular de CD3 y/u otros dominios transmembrana de CD. En algunos casos, el receptor, por ejemplo, CAR, incluye además una parte de una o más moléculas adicionales, como el receptor Fc y, CD8, CD4, CD25 o CD16. Por ejemplo, en algunos aspectos, el CAR u otro receptor quimérico incluye una molécula quimérica entre CD3-zeta (CD3-Z) o receptor Fc y y CD8, CD4, CD25 o CD16.

[0130] En algunos casos, tras la unión de CAR u otro receptor quimérico, el dominio citoplásmico o el dominio de señalización intracelular del receptor activa al menos una de las funciones o respuestas efectoras normales de la célula inmunitaria, p. ej., célula T diseñada para expresar CAR. Por ejemplo, en algunos contextos, CAR induce una función de una célula T, como la actividad citolítica o la actividad de linfocitos T cooperadores, como la secreción de citocinas u otros factores. En algunos casos, se usa una parte truncada de un dominio de señalización intracelular de un componente receptor de antígeno o molécula coestimuladora en lugar de una cadena inmunoestimuladora intacta, por ejemplo, si transduce la señal de función efectora. En algunos casos, el dominio o dominios de señalización intracelular incluyen las secuencias citoplásmicas del receptor de células T (TCR) y, en algunos aspectos, también las de los correceptores que, en el contexto natural, actúan en concierto con dichos receptores para iniciar la transducción de señales después de la unión del receptor de antígeno.

[0131] En el contexto de un TCR natural, la activación completa generalmente requiere no solo la señalización a través del TCR, sino también una señal coestimuladora. Por lo tanto, en algunos casos, para promover la activación completa, también se incluye en el CAR un componente para generar una señal secundaria o coestimuladora. En otros casos, el CAR no incluye un componente para generar una señal coestimuladora. En algunos aspectos, se expresa un CAR adicional en la misma célula y proporciona el componente para generar la señal secundaria o coestimuladora.

[0132] La activación de las células T se describe en algunos aspectos como mediada por dos clases de secuencias de señalización citoplasmáticas: las que inician la activación primaria dependiente de antígeno a través del TCR (secuencias de señalización citoplasmáticas primarias) y las que actúan de forma independiente a antígeno para proporcionar una señal secundaria o coestimuladora (secuencias de señalización citoplasmáticas secundarias). En algunos aspectos, el CAR incluye uno o ambos componentes de señalización.

[0133] En algunos aspectos, CAR incluye una secuencia de señalización citoplasmática primaria que regula la activación primaria del complejo TCR. Las secuencias de señalización citoplasmáticas primarias que actúan de forma estimulante pueden contener motivos de señalización que se conocen como motivos de activación basados en tirosina de inmunorreceptores o ITAM. Los ejemplos de secuencias de señalización citoplasmáticas primarias que contienen ITAM incluyen las derivadas de TCR zeta, FcR gamma, FcR beta, CD3 gamma, c D3 delta, Cd3 epsilon, CD8, CD22, CD79a, CD79b y CD66d. En algunos casos, la(s) molécula(s) de señalización citoplasmática en el CAR contiene(n) un dominio de señalización citoplasmática, una parte del mismo o una secuencia derivada de CD3 zeta.

[0134] En algunos casos, CAR incluye un dominio de señalización y/o una parte transmembrana de un receptor coestimulador, como CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 e ICOS. En algunos aspectos, el mismo CAR incluye tanto el componente activador como el coestimulador.

[0135] En algunos casos, el dominio de activación se incluye dentro de un CAR, mientras que el componente coestimulador lo proporciona otro CAR que reconoce otro antígeno. En algunos casos, CAR incluyen CAR activadores o estimulantes, CAR coestimuladores, ambos expresados en la misma célula (ver WO2014/055668). En algunos aspectos, las células incluyen uno o más CAR estimuladores o activadores y/o un CAR coestimulador. En algunos casos, las células incluyen además CAR inhibidores (iCAR, véase Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (diciembre de 2013), como un CAR que reconoce un antígeno distinto del asociado con y/o específico para la enfermedad o afección mediante el cual una señal de activación suministrada a través del CAR dirigido a la enfermedad se reduce o inhibe mediante la unión del CAR inhibidor a su ligando, por ejemplo, para reducir los efectos fuera del objetivo.

[0136] En algunos casos, el dominio de señalización intracelular comprende una transmembrana de CD28 y un dominio de señalización vinculado a un dominio intracelular de CD3 (p. ej., CD3-zeta). En algunos casos, el dominio de señalización intracelular comprende dominios coestimuladores quiméricos CD28 y CD137 (4-1BB, TNFRSF9), vinculados al dominio intracelular de CD3 zeta.

[0137] En algunos casos, el CAR abarca uno o más, por ejemplo, dos o más dominios coestimuladores y un dominio de activación, por ejemplo, dominio de activación primario, en la parte citoplásmica. Los CAR ejemplares incluyen componentes intracelulares de CD3-zeta, CD28 y 4-1 BB.

[0138] En algunos casos, el CAR u otro receptor de antígeno incluye además un marcador, como un marcador de superficie celular, que puede usarse para confirmar la transducción o ingeniería de la célula para expresar el receptor, como una versión truncada de un receptor de superficie celular, como EGFR truncado (tEGFR). En algunos aspectos, el marcador incluye todo o parte (p. ej., forma truncada) de CD34, un NGFR o receptor del factor de crecimiento epidérmico (p. ej., tEGFR). En algunos casos, el ácido nucleico que codifica el marcador se une operativamente a un polinucleótido que codifica una secuencia enlazadora, tal como una secuencia enlazadora escindible, por ejemplo, T2A. Por ejemplo, un marcador, y opcionalmente una secuencia enlazadora, puede ser cualquiera de los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° WO2014031687. Por ejemplo, el marcador puede ser un EGFR truncado (tEGFR) que está, opcionalmente, unido a una secuencia enlazadora, tal como una secuencia enlazadora escindible de T2A. Un polipéptido ejemplar para un EGFR truncado (p. ej., tEGFR) comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 7 o 16 o una secuencia de aminoácidos que muestra al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 7 o 16. Una secuencia conectora T2A de ejemplo comprende la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 6 o una secuencia de aminoácidos que presenta al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 6.

[0139] En algunos casos, el marcador es una molécula, por ejemplo, proteína de superficie celular, que no se encuentra naturalmente en las células T o que no se encuentran de forma natural en la superficie de las células T, o en una parte de las mismas. En algunos casos, la molécula es una molécula no propia, por ejemplo, una proteína no propia, es decir, una que no es reconocida como "propia" por el sistema inmunitario del huésped al que se transferirán adoptivamente las células.

[0140] En algunos casos, el marcador no cumple ninguna función terapéutica y/o no produce ningún efecto más que el de ser utilizado como marcador para la ingeniería genética, por ejemplo, para seleccionar células modificadas con éxito. En otros casos, el marcador puede ser una molécula terapéutica o una molécula de otro modo ejercer algún efecto deseado, como un ligando para que una célula se encuentre in vivo, como una molécula coestimuladora o de punto de control inmunitario para potenciar y/o atenuar las respuestas de las células tras la transferencia adoptiva y el encuentro con el ligando.

[0141] Los CAR se denominan CAR de primera, segunda y/o tercera generación. En algunos aspectos, un CAR de primera generación es aquel que únicamente proporciona una señal inducida por la cadena CD3 al unirse al antígeno; en algunos aspectos, un CAR de segunda generación es aquel que proporciona una señal y una señal coestimuladora, tal como una que incluye un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador tal como CD28 o CD137; en algunos aspectos, un CAR de tercera generación es uno que incluye múltiples dominios coestimuladores de diferentes receptores coestimuladores.

[0142] En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico incluye una parte extracelular que contiene un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En algunos aspectos, el receptor de antígeno quimérico incluye una parte extracelular que contiene el anticuerpo o fragmento y un dominio de señalización intracelular. En algunos casos, el anticuerpo o fragmento incluye un scFv y el dominio intracelular contiene un ITAM. En algunos aspectos, el dominio de señalización intracelular incluye un dominio de señalización de una cadena zeta de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico incluye un dominio transmembrana que une el dominio extracelular y el dominio de señalización intracelular. En algunos aspectos, el dominio transmembrana contiene una parte transmembrana de CD28. En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico contiene un dominio intracelular de una molécula coestimuladora de células T. El dominio extracelular y el dominio transmembrana se pueden vincular directa o indirectamente. En algunos casos, el dominio extracelular y la transmembrana están unidos por un espaciador, como cualquiera de los descritos en este documento. En algunos casos, el receptor contiene una parte extracelular de la molécula de la que se deriva el dominio transmembrana, como una parte extracelular de CD28. En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico contiene un dominio intracelular derivado de una molécula coestimuladora de células T o una variante funcional de la misma, tal como entre el dominio transmembrana y el dominio de señalización intracelular. En algunos aspectos, la molécula coestimuladora de células T es CD28 o 41BB.

[0143] Por ejemplo, en algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo, un dominio transmembrana que es o contiene una parte transmembrana de CD28 o una variante funcional del mismo, y un dominio de señalización intracelular que contiene una parte de señalización de CD28 o variante funcional del mismo y una parte de señalización de CD3 zeta o variante funcional del mismo. En algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo, un dominio transmembrana que es o contiene una parte transmembrana de CD28 o una variante funcional del mismo, y un dominio de señalización intracelular que contiene una parte de señalización de un 4-1BB o una variante funcional del mismo y una parte de señalización de CD3 zeta o variante funcional del mismo. En algunos de estos casos, el receptor incluye además un espaciador que contiene una parte de una molécula de Ig, como una molécula de Ig humana, como una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra de IgG4, como un espaciador de solo bisagra.

[0144] En algunos casos, el dominio transmembrana del receptor recombinante, por ejemplo, el CAR, es o incluye un dominio transmembrana de CD28 humano (por ejemplo, número de acceso P01747.1) o una variante del mismo, como un dominio transmembrana que comprende la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 8; en algunos casos, la parte que contiene el dominio transmembrana del receptor recombinante comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 9 o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente el 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de identidad de secuencia con los mismos.

[0145] En algunos casos, el (los) componente(s) de señalización intracelular del receptor recombinante, por ejemplo, el CAR, contiene un dominio de señalización intracelular coestimulador de CD28 humano o una variante funcional o una parte del mismo, como un dominio con una sustitución de LL a GG en las posiciones 186-187 de una proteína CD28 nativa. Por ejemplo, el dominio de señalización intracelular puede comprender la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 10 u 11 o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con SEQ ID NO: 10 u 11. En algunos casos, el dominio intracelular comprende un dominio de señalización coestimulador intracelular de 4-1 BB (p. ej., número de acceso Q07011.1) o variante funcional o parte del mismo, como la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 12 o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con SEQ ID NO: 12.

[0146] En algunos casos, el dominio de señalización intracelular del receptor recombinante, por ejemplo, el CAR, comprende un dominio de señalización estimulante de CD3 zeta humano o una variante funcional del mismo, como un dominio citoplásmico 112 AA de la isoforma 3 de CD3Z humano (N° de acceso: P20963.2) o un dominio de señalización CD3 zeta como se describe en la Patente de EE. UU. N°: 7,446,190 o la Patente de EE. UU. N° 8.911.993. Por ejemplo, en algunos casos, el dominio de señalización intracelular comprende la secuencia de aminoácidos que se establece en SEQ ID NO: 13, 14 o 15 o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con SEQ ID NO: 13, 14 o 15.

[0147] En algunos aspectos, el espaciador contiene solo una región bisagra de una IgG, tal como solo una bisagra de IgG4 o IgG1, tal como el espaciador de solo bisagra establecido en SEQ ID NO: 1. En otros casos, el espaciador es o contiene una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra derivada de IgG4, opcionalmente unida a dominios CH2 y/o CH3. En algunos casos, el espaciador es una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra de IgG4, unida a los dominios CH2 y CH3, tal como se establece en SEQ ID NO: 4. En algunos casos, el espaciador es una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra de IgG4, unida a un dominio CH3 solamente, tal como se establece en SEQ ID NO: 3. En algunos casos, el espaciador es o comprende una secuencia rica en glicina-serina u otro enlazador flexible como los enlazadores flexibles conocidos.

[0148] Por ejemplo, en algunos casos, el CAR incluye un anticuerpo como un fragmento de anticuerpo, incluidos scFv, un espaciador, como un espaciador que contiene una parte de una molécula de inmunoglobulina, como una región bisagra y/o una o más regiones constantes de una molécula de cadena pesada, como un espaciador que contiene bisagra de Ig, un dominio transmembrana que contiene todo o una parte de un dominio transmembrana derivado de CD28, un dominio de señalización intracelular derivado de CD28 y un dominio de señalización de CD3 zeta. En algunos casos, el CAR incluye un anticuerpo o fragmento, como scFv, un espaciador como cualquiera de los espaciadores que contienen bisagras de Ig, un dominio transmembrana derivado de CD28, un dominio de señalización intracelular derivado de 4-1 BB y un dominio de señalización derivado de CD3 zeta.

[0149] En algunos casos, las moléculas de ácido nucleico que codifican dichas construcciones de CAR incluyen además una secuencia que codifica un elemento de salto ribosómico T2A y/o una secuencia de tEGFR, por ejemplo, cadena abajo de la secuencia que codifica CAR. En algunas ocasiones, la secuencia codifica un elemento de salto ribosómico T2A establecido en SEQ ID NO: 6, o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con SEQ ID NO: 6. En algunos casos, las células T que expresan un receptor de antígeno (por ejemplo, CAR) pueden también generarse para expresar un EGFR truncado (EGFRt) como un epítopo de selección no inmunogénico (por ejemplo, mediante la introducción de una construcción que codifica CAR y EGFRt separadas por un interruptor de ribosoma T2A para expresar dos proteínas de la misma construcción), que luego pueden ser utilizadas como marcador para detectar dichas células (véase, por ejemplo, la Patente de EE. UU. N° 8.802.374). En algunos casos, la secuencia codifica una secuencia de tEGFR expuesta en SEQ ID NO: 7 o 16, o una secuencia de aminoácidos que exhibe al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con SEQ ID NO: 7 o 16.

[0150] Los receptores recombinantes, tales como CAR, expresados por las células administradas al sujeto generalmente reconocen o se unen específicamente a una molécula que se expresa, está asociada y/o es específica para la enfermedad o afección o las células de la misma que se están tratando. T ras la unión específica a la molécula, por ejemplo, antígeno, el receptor generalmente envía una señal inmunoestimuladora, tal como una señal transducida por iTAM, a la célula, promoviendo así una respuesta inmunitaria dirigida a la enfermedad o afección. Por ejemplo, en algunos casos, las células expresan un CAR que se une específicamente a un antígeno expresado por una célula o tejido de la enfermedad o afección o asociado con la enfermedad o afección.

b. TCR

[0151] En algunos casos, los receptores de antígeno modificados genéticamente incluyen receptores de células T recombinantes (TCR) y/o TCR clonados a partir de células T naturales. En algunos casos, se identifica un clon de células T de alta afinidad por un antígeno objetivo (p. ej., un antígeno canceroso), se aísla de un paciente y se introduce en las células. En algunos casos, el clon de TCR para un antígeno objetivo se ha generado en ratones transgénicos diseñados con genes del sistema inmunitario humano (p. ej., el sistema de antígenos leucocitarios humanos o ALH). Véase, por ejemplo, antígenos tumorales (véase, por ejemplo, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 y Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808. En algunos casos, la presentación de fagos se usa para aislar TCR frente a un antígeno objetivo (véase, por ejemplo, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 y Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354.

[0152] En algunos casos, después de obtener el clon de células T, las cadenas alfa y beta del TCR se aíslan y se clonan en un vector de expresión génica. En algunos casos, los genes alfa y beta del TCR se unen a través de un péptido de salto ribosómico 2A de picornavirus para que ambas cadenas sean coexpresión. En algunos casos, la transferencia genética del TCR se logra a través de vectores retrovirales o lentivirales, o a través de transposones (ver, por ejemplo, Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13: 1050-1063; Frecha et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757; Hackett et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683.

c. Múltiples objetivos

[0153] En algunos casos, las células y los métodos incluyen estrategias de múltiples objetivos, como la expresión de dos o más receptores modificados genéticamente en la célula, cada uno de los cuales reconoce lo mismo de un antígeno diferente y, por lo general, cada uno incluye un componente de señalización intracelular diferente. Dichas estrategias de objetivos múltiples se describen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N°: WO 2014055668 A1 (que describe combinaciones de CAR activantes y coestimuladoras, por ejemplo, dirigidas a dos antígenos diferentes presentes individualmente fuera del objetivo, por ejemplo, células normales, pero presentes juntos solo en células de la enfermedad o afección a tratar) y Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (diciembre de 2013) (que describe células que expresan un CAR activador y otro inhibidor, como aquellas en las que el CAR activador se une a un antígeno expresado tanto en células normales o no enfermas como en células de la enfermedad o afección a tratar, y el CAR inhibidor se une a otro antígeno expresado sólo en las células normales o en las células que no se desea tratar).

[0154] Por ejemplo, en algunos casos, las células incluyen un receptor que expresa un primer receptor de antígeno modificado genéticamente (p. ej., CAR o TCR) que es capaz de inducir una señal de activación a la célula, generalmente tras la unión específica al antígeno reconocido por el primer receptor, por ejemplo, el primer antígeno. En algunos casos, la célula incluye además un segundo receptor de antígeno modificado genéticamente (p. ej., CAR o TCR), p. ej., un receptor coestimulador quimérico, que es capaz de inducir una señal coestimuladora a la célula inmunitaria, generalmente tras la unión específica a un segundo antígeno reconocido por el segundo receptor. En algunos casos, el primer antígeno y el segundo antígeno son iguales. En algunos casos, el primer antígeno y el segundo antígeno son diferentes.

[0155] En algunos casos, el primer y/o segundo receptor de antígeno manipulado genéticamente (por ejemplo, CAR o TCR) es capaz de inducir una señal de activación a la célula. En algunos casos, el receptor incluye un componente de señalización intracelular que contiene motivos ITAM o similares a ITAM. En algunos casos, la activación inducida por el primer receptor implica una transducción de señales o un cambio en la expresión de proteínas en la célula que da como resultado el inicio de una respuesta inmunitaria, como la fosforilación de ITAM y/o el inicio de la cascada de transducción de señales mediada por ITAM, la formación de un sinapsis inmunológica y/o agrupamiento de moléculas cerca del receptor unido (por ejemplo, CD4 o CD8, etc.), activación de uno o más factores de transcripción, como NF-kB y/o AP-1, y/o inducción de la expresión génica de factores como citocinas, proliferación y/o supervivencia.

[0156] En algunos casos, el primer y/o segundo receptor incluye dominios de señalización intracelular de receptores coestimuladores tales como CD28, CD137 (4-1BB), OX40 y/o ICOS. En algunos casos, el primer y segundo receptor incluyen un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador que son diferentes. En un caso, el primer receptor contiene una región de señalización coestimuladora de CD28 y el segundo receptor contiene una región de señalización coestimuladora de 4-1BB o viceversa.

[0157] En algunos casos, el primer y/o el segundo receptor incluyen un dominio de señalización intracelular que contiene ITAM o motivos similares a ITAM y un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador.

[0158] En algunos casos, el primer receptor contiene un dominio de señalización intracelular que contiene ITAM o motivos similares a ITAM y el segundo receptor contiene un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador. La señal coestimuladora en combinación con la señal activadora inducida en la misma célula es la que da como resultado una respuesta inmunitaria, como una respuesta inmunitaria robusta y sostenida, como una mayor expresión génica, secreción de citoquinas y otros factores, y funciones efectoras mediadas por células T, como la destrucción de células.

[0159] En algunos casos, ni la unión del primer receptor solo ni la unión del segundo receptor solo inducen una respuesta inmunitaria robusta. En algunos aspectos, si solo se liga un receptor, la célula se toleriza o deja de responder al antígeno, o se inhibe y/o no se induce a proliferar o secretar factores o llevar a cabo funciones efectoras. Sin embargo, en algunos de estos casos, cuando se liga la pluralidad de receptores, como cuando se encuentra una célula que expresa el primer y el segundo antígeno, se logra una respuesta deseada, como una activación o estimulación inmunitaria completa, por ejemplo, como lo indica la secreción de una o más citocinas, proliferación, persistencia y/o realización de una función efectora inmunitaria tal como destrucción citotóxica de una célula objetivo.

[0160] En algunos casos, los dos receptores inducen, respectivamente, una señal de activación e inhibidora a la célula, de modo que la unión de uno de los receptores a su antígeno activa la célula o induce una respuesta, pero la unión del segundo receptor inhibidor a su antígeno induce una señal que suprime o amortigua esa respuesta. Los ejemplos son combinaciones de CAR activadores y CAR inhibidores o iCAR. Tal estrategia puede usarse, por ejemplo, en la que el CAR activador se une a un antígeno expresado en una enfermedad o afección pero que también se expresa en células normales, y el receptor inhibidor se une a un antígeno separado que se expresa en las células normales pero que también se expresa en las células normales, pero no en células de la enfermedad o afección.

[0161] En algunos casos, la estrategia multidirigida se emplea en un caso en el que un antígeno asociado con una enfermedad o afección en particular se expresa en una célula no enferma y/o se expresa en la propia célula manipulada, ya sea de forma transitoria (p. ej., tras la estimulación en asociación con la ingeniería genética) o de forma permanente. En tales casos, al requerir la ligadura de dos receptores de antígeno separados e individualmente específicos, se puede mejorar la especificidad, la selectividad y/o la eficacia.

[0162] En algunos casos, la pluralidad de antígenos, por ejemplo, el primer y el segundo antígeno, se expresan en la célula, tejido o enfermedad o afección a la que se dirige, como en la célula cancerosa. En algunos aspectos, la célula, tejido, enfermedad o afección es mieloma múltiple o una célula de mieloma múltiple. En algunos casos, uno o más de la pluralidad de antígenos generalmente también se expresan en una célula a la que no se desea dirigirse con la terapia celular, como una célula o tejido normal o no enfermo, y/o las propias células manipuladas. En tales casos, al requerir la unión de múltiples receptores para lograr una respuesta de la célula, se logra especificidad y/o eficacia.

2. Células y preparación de células para ingeniería genética

[0163] Entre las células que expresan los receptores y administradas en los métodos descritos se encuentran las células modificadas. La ingeniería genética generalmente implica la introducción de un ácido nucleico que codifica el componente recombinante o manipulado en una composición que contiene las células, como por transducción, transfección o transformación retrovirales.

[0164] En algunos casos, los ácidos nucleicos son heterólogos, es decir, normalmente no están presentes en una célula o muestra obtenida de la célula, como una obtenida de otro organismo o célula, que por ejemplo, no se encuentra normalmente en la célula que se está modificando y/o un organismo del que se deriva dicha célula. En algunos casos, los ácidos nucleicos no son naturales, como un ácido nucleico que no se encuentra en la naturaleza, incluido uno que comprende combinaciones quiméricas de ácidos nucleicos que codifican varios dominios de múltiples tipos de células diferentes.

[0165] Las células generalmente son células eucarióticas, tales como células de mamíferos, y normalmente son células humanas. En algunos casos, las células se derivan de la sangre, la médula ósea, la linfa o los órganos linfoides, son células del sistema inmunitario, como células de la inmunidad innata o adaptativa, por ejemplo, células mieloides o linfoides, incluidos los linfocitos, típicamente células T y/o células NK. Otros ejemplos de células incluyen células madre, tales como células madre multipotentes y pluripotentes, incluidas células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Las células suelen ser células primarias, como las que se aíslan directamente de un sujeto y/o se aíslan de un sujeto y se congelan. En algunos casos, las células incluyen uno o más subconjuntos de células T u otros tipos de células, como poblaciones de células T completas, células CD4+, células CD8+ y subpoblaciones de las mismas, como las definidas por función, estado de activación, madurez, potencial para capacidades de diferenciación, expansión, recirculación, localización y/o persistencia, especificidad de antígeno, tipo de receptor de antígeno, presencia en un órgano o compartimento en particular, marcador o perfil de secreción de citocinas y/o grado de diferenciación. Con referencia al sujeto a tratar, las células pueden ser alogénicas y/o autólogas. Entre los métodos se incluyen métodos listos para usar. En algunos aspectos, como en el caso de las tecnologías estándar, las células son pluripotentes y/o multipotentes, como las células madre, como las células madre pluripotentes inducidas (iPSC). En algunos casos, los métodos incluyen aislar células del sujeto, prepararlas, procesarlas, cultivarlas y/o diseñarlas y reintroducirlas en el mismo sujeto, antes o después de la crioconservación.

[0166] Entre los subtipos y subpoblaciones de células T y/o de células T CD4+ y/o de células T CD8+ se encuentran las células T naive (Tⁿ), células T efectoras (T^eff), células T de memoria y subtipos de las mismas, tales como células madre T de memoria (T^scm), células T de memoria central (T^cm), células T de memoria efectoras (T^em) o células T de memoria efectoras diferenciadas terminalmente, linfocitos infiltrantes de tumores (LIT), células T inmaduras, células T maduras, linfocitos T cooperadores, células T citotóxicas, células T invariantes asociadas a la mucosa (MAIT), células T reguladoras (Treg) naturales y adaptativas, linfocitos T cooperadores, como células TH1, células TH2, células TH3, células TH17, células TH9, células TH22, linfocitos T cooperadores foliculares, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T delta/gamma.

[0167] En algunos casos, las células son células asesinas naturales (NK). En algunos casos, las células son monocitos o granulocitos, por ejemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastocitos, eosinófilos y/o basófilos.

[0168] En algunos casos, las células incluyen uno o más ácidos nucleicos introducidos mediante ingeniería genética y, por lo tanto, expresan productos recombinantes o modificados genéticamente de dichos ácidos nucleicos. En algunos casos, los ácidos nucleicos son heterólogos, es decir, normalmente no están presentes en una célula o muestra obtenida de la célula, como la obtenida de otro organismo o célula, que por ejemplo, normalmente no se encuentra en la célula que se está manipulando y/o un organismo del que se deriva dicha célula. En algunos casos, los ácidos nucleicos no son naturales, como un ácido nucleico que no se encuentra en la naturaleza, incluido uno que comprende combinaciones quiméricas de ácidos nucleicos que codifican varios dominios de múltiples tipos de células diferentes.

[0169] En algunos casos, la preparación de las células manipuladas incluye uno o más pasos de cultivo y/o preparación. Las células para la introducción del ácido nucleico que codifica el receptor transgénico tal como el CAR, pueden aislarse de una muestra, tal como una muestra biológica, por ejemplo, una obtenida de o derivada de un sujeto. En algunos casos, el sujeto del que se aísla la célula es uno que padece la enfermedad o afección o que necesita una terapia celular o al que se le administrará la terapia celular. En algunos casos, el sujeto es un ser humano que necesita una intervención terapéutica particular, como la terapia celular adoptiva para la que se aíslan, procesan y/o manipulan células.

[0170] En consecuencia, las células en algunos casos son células primarias, por ejemplo, células humanas primarias. Las muestras incluyen tejidos, fluidos y otras muestras tomadas directamente del sujeto, así como muestras resultantes de uno o más pasos de procesamiento, como separación, centrifugación, ingeniería genética (por ejemplo, transducción con vector viral), lavado y/o incubación. La muestra biológica puede ser una muestra obtenida directamente de una fuente biológica o una muestra procesada. Las muestras biológicas incluyen, entre otros, fluidos corporales, como sangre, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, orina y sudor, muestras de tejidos y órganos, incluidas las muestras procesadas derivadas de los mismos.

[0171] En algunos aspectos, la muestra de la que se derivan o aíslan las células es sangre o una muestra derivada de sangre, o es o se deriva de un producto de aféresis o leucoféresis. Ejemplos de muestras incluyen sangre completa, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), leucocitos, médula ósea, timo, biopsia de tejido, tumor, leucemia, linfoma, ganglio linfático, tejido linfoide asociado al intestino, tejido linfoide asociado a la mucosa, bazo, otros tejidos linfoides, hígado, pulmón, estómago, intestino, colon, riñón, páncreas, mama, hueso, próstata, cuello uterino, testículos, ovarios, amígdala u otro órgano y/o células derivadas de los mismos. Las muestras incluyen, en el contexto de la terapia celular, por ejemplo, terapia celular adoptiva, muestras de fuentes autólogas y alogénicas.

[0172] En algunos casos, las células se derivan de líneas celulares, por ejemplo, líneas de células T. Las células en algunos casos se obtienen de una fuente xenogénica, por ejemplo, de ratón, rata, primate no humano y cerdo.

[0173] En algunos casos, el aislamiento de las células incluye una o más etapas de preparación y/o separación de células basadas en la no afinidad. En algunos ejemplos, las células se lavan, centrifugan y/o incuban en presencia de uno o más reactivos, por ejemplo, para eliminar componentes no deseados, enriquecer los componentes deseados, lisar o eliminar células sensibles a reactivos particulares. En algunos ejemplos, las células se separan en función de una o más propiedades, como densidad, propiedades adherentes, tamaño, sensibilidad y/o resistencia a componentes particulares.

[0174] En algunos ejemplos, las células de la sangre circulante de un sujeto se obtienen, por ejemplo, mediante aféresis o leucoféresis. Las muestras, en algunos aspectos, contienen linfocitos, incluyendo células T, monocitos, granulocitos, células B, otros glóbulos blancos nucleados, glóbulos rojos y/o plaquetas, y en algunos aspectos contienen células distintas de glóbulos rojos y plaquetas.

[0175] En algunos casos, las células sanguíneas recogidas del sujeto se lavan, por ejemplo, para eliminar la fracción de plasma y colocar las células en un tampón o medio apropiado para las etapas de procesamiento posteriores. En algunos casos, las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato (PBS). En algunos casos, la solución de lavado carece de calcio y/o magnesio y/o muchos o todos los cationes divalentes. En algunos aspectos, se realiza una etapa de lavado en una centrífuga de "flujo continuo" semiautomática (por ejemplo, el procesador celular Cobe 2991, Baxter) según las instrucciones del fabricante. En algunos aspectos, se logra un paso de lavado mediante filtración de flujo tangencial (TFF) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En algunos casos, las células se resuspenden en una variedad de tampones biocompatibles después del lavado, como, por ejemplo, PBS libre de Ca++/Mg++. En ciertos casos, los componentes de una muestra de glóbulos se eliminan y las células directamente se vuelven a suspender en medios de cultivo.

[0176] En algunos casos, los métodos incluyen métodos de separación celular basados en la densidad, como la preparación de glóbulos blancos a partir de sangre periférica lisando los glóbulos rojos y centrifugando a través de un gradiente de Percoll o Ficoll.

[0177] En algunos casos, los métodos de aislamiento incluyen la separación de diferentes tipos de células en función de la expresión o presencia en la célula de una o más moléculas específicas, como marcadores de superficie, por ejemplo, proteínas de superficie, marcadores intracelulares o ácido nucleico. En algunos casos, puede usarse cualquier método conocido para la separación basado en dichos marcadores. En algunos casos, la separación es una separación basada en afinidad o inmunoafinidad. Por ejemplo, el aislamiento en algunos aspectos incluye la separación de células y poblaciones celulares en función de la expresión de las células o el nivel de expresión de uno o más marcadores, normalmente marcadores de superficie celular, por ejemplo, mediante incubación con un anticuerpo o pareja de unión que se une específicamente a dichos marcadores, seguidos generalmente por etapas de lavado y separación de las células que se han unido al anticuerpo o compañero de unión, de aquellas células que no se han unido al anticuerpo o compañero de unión.

[0178] Dichos pasos de separación pueden basarse en la selección positiva, en la que las células que se han unido a los reactivos se conservan para su uso posterior, y/o la selección negativa, en la que se conservan las células que no se han unido al anticuerpo o pareja de unión. En algunos ejemplos, ambas fracciones se conservan para su uso posterior. En algunos aspectos, la selección negativa puede ser particularmente útil cuando no hay ningún anticuerpo disponible que identifique específicamente un tipo de célula en una población heterogénea, de modo que la separación se realice mejor en función de marcadores expresados por células distintas de la población deseada.

[0179] La separación no necesita dar como resultado un enriquecimiento o eliminación del 100 % de una población celular particular o células que expresan un marcador particular. Por ejemplo, la selección positiva o el enriquecimiento de células de un tipo particular, como las que expresan un marcador, se refiere al aumento del número o porcentaje de dichas células, pero no necesariamente da como resultado una ausencia total de células que no expresan el marcador. Asimismo, la selección negativa, la eliminación o el agotamiento de células de un tipo particular, como las que expresan un marcador, se refiere a la disminución del número o porcentaje de tales células, pero no tiene por qué dar como resultado una eliminación completa de todas esas células.

[0180] En algunos ejemplos, se llevan a cabo múltiples rondas de pasos de separación, donde la fracción seleccionada positiva o negativamente de un paso se somete a otro paso de separación, como una selección positiva o negativa posterior. En algunos ejemplos, un solo paso de separación puede agotar las células que expresan múltiples marcadores simultáneamente, como mediante la incubación de células con una pluralidad de anticuerpos o compañeros de unión, cada uno específico para un marcador objetivo de selección negativa. Asimismo, múltiples tipos de células pueden seleccionarse positivamente simultáneamente incubando células con una pluralidad de anticuerpos o compañeros de unión expresados en los diversos tipos de células.

[0181] Por ejemplo, en algunos aspectos, subpoblaciones específicas de células T, como células positivas o que expresan altos niveles de uno o más marcadores de superficie, por ejemplo, células T CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ y/o CD45RO+, se aíslan mediante técnicas de selección positiva o negativa.

[0182] Por ejemplo, las células T CD3+, CD28+ pueden seleccionarse positivamente utilizando perlas magnéticas conjugadas con anticuerpos anti-CD3/anti-CD28 (p. ej., DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander).

[0183] En algunos casos, el aislamiento se lleva a cabo mediante el enriquecimiento de una población celular particular mediante selección positiva, o el agotamiento de una población celular particular mediante selección negativa. En algunos casos, la selección positiva o negativa se logra mediante la incubación de células con uno o más anticuerpos u otro agente de unión que se une específicamente a uno o más marcadores de superficie expresados o expresados (marcador+) a un nivel relativamente más alto (marcador alto) en las células seleccionadas positiva o negativamente, respectivamente.

[0184] En algunos casos, las células T se separan de una muestra de PBMC mediante la selección negativa de marcadores expresados en células que no son T, como células B, monocitos u otros glóbulos blancos, como CD14. En algunos aspectos, se utiliza una etapa de selección de CD4+ o CD8+ para separar los linfocitos T cooperadores CD4+ y las células T citotóxicas CD8+. Dichas poblaciones de CD4+ y CD8+ pueden clasificarse adicionalmente en subpoblaciones mediante selección positiva o negativa para marcadores expresados o expresados en un grado relativamente mayor en una o más subpoblaciones de células T naive, de memoria y/o efectoras.

[0185] En algunos casos, las células CD8+ se enriquecen o se agotan adicionalmente en células madre de memoria central, memoria efectora y/o memoria central naive, como por selección positiva o negativa basada en antígenos de superficie asociados con la subpoblación respectiva. En algunos casos, el enriquecimiento de células T de memoria central (T^cm) se lleva a cabo para aumentar la eficacia, como mejorar la supervivencia a largo plazo, la expansión y/o el injerto después de la administración, que en algunos aspectos es particularmente sólido en tales subpoblaciones. Véase Terakura et al. (2012) Blood. 1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701. En algunos casos, la combinación de células T CD8+ enriquecidas con T^cmy células T CD4+ mejora aún más la eficacia.

[0186] En algunos casos, las células T de memoria están presentes en los subconjuntos CD62L+ y CD62L- de linfocitos de sangre periférica CD8+. Las PBMC se pueden enriquecer o empobrecer en fracciones de CD62L-CD8+ y/o CD62L+CD8+, como mediante el uso de anticuerpos anti-CD8 y anti-CD62L.

[0187] En algunos casos, el enriquecimiento para las células T de memoria central (T^cm) se basa en la expresión superficial alta o positiva de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 y/o CD127; en algunos aspectos, se basa en la selección negativa de células que expresan o expresan mucho CD45RA y/o granzima B. En algunos aspectos, el aislamiento de una población CD8+ enriquecida en células de la T^cmse lleva a cabo mediante el agotamiento de las células que expresan CD4, CD14, CD45RA, y selección positiva o enriquecimiento de células que expresan CD62L. En un aspecto, el enriquecimiento de las células T de memoria central (T^cm) se lleva a cabo a partir de una fracción negativa de células seleccionadas en función de la expresión de CD4, que se somete a una selección negativa basada en la expresión de CD14 y CD45RA, y una selección positiva basada en CD62L. Dichas selecciones en algunos aspectos se realizan simultáneamente y en otros aspectos se realizan secuencialmente, en cualquier orden. En algunos aspectos, el mismo paso de selección basado en la expresión de CD4 que se usa para preparar la población o subpoblación de células CD8+ también se usa para generar la población o subpoblación de células CD4+, de modo que tanto las fracciones positivas como las negativas de la separación basada en CD4 se retienen y utilizan en pasos posteriores de los métodos, opcionalmente después de uno o más pasos de selección positivos o negativos adicionales.

[0188] En un ejemplo particular, una muestra de PBMC u otra muestra de glóbulos blancos se somete a selección de células CD4+, donde se retienen tanto las fracciones negativas como las positivas. Luego, la fracción negativa se somete a selección negativa basada en la expresión de CD14 y CD45RA o CD19, y selección positiva basada en un marcador característico de las células T de memoria central, como CD62L o CCR7, donde las selecciones positivas y negativas se llevan a cabo en cualquiera de los órdenes.

[0189] Los linfocitos T cooperadores CD4+ se clasifican en células naive, de memoria central y efectoras mediante la identificación de poblaciones celulares que tienen antígenos de superficie celular. Los linfocitos CD4+ se pueden obtener mediante métodos estándar. En algunos casos, los linfocitos T CD4+ naive son células T CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+. En algunos casos, las células CD4+ de la memoria central son CD62L+ y CD45RO+. En algunos casos, las células efectoras CD4+ son CD62L- y CD45RO-.

[0190] En un ejemplo, para enriquecer células CD4+ mediante selección negativa, un cóctel de anticuerpos monoclonales normalmente incluye anticuerpos contra CD14, CD20, CD11b, CD16, ALH-DR y CD8. En algunos casos, el anticuerpo o el compañero de unión se une a un soporte sólido o matriz, como una perla magnética o una perla paramagnética, para permitir la separación de células para selección positiva y/o negativa. Por ejemplo, en algunos casos, las células y las poblaciones celulares se separan o aíslan mediante técnicas de separación inmunomagnéticas (o magnéticas por afinidad) (revisadas en Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Editado por: S. A. Brooks y U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).

[0191] En algunos aspectos, la muestra o composición de células a separar se incuba con material pequeño, magnetizable o magnéticamente sensible, como partículas o micropartículas magnéticamente sensibles, como perlas paramagnéticas (p. ej., como Dynalbeads o perlas MACS). El material magnéticamente sensible, p. ej., una partícula, generalmente se une directa o indirectamente a un compañero de unión, p. ej., un anticuerpo, que se une específicamente a una molécula, p. ej., un marcador de superficie, presente en la célula, las células o la población de células que se desea separar, por ejemplo, que se desea seleccionar negativa o positivamente.

[0192] En algunos casos, la partícula o perla magnética comprende un material magnéticamente sensible unido a un miembro de unión específico, tal como un anticuerpo u otra pareja de unión. Hay muchos materiales magnéticamente sensibles bien conocidos que se utilizan en los métodos de separación magnética. Partículas magnéticas adecuadas incluyen las descritas en Molday, Patente de EE. UU. N° 4.452.773, y en la Especificación de Patente Europea EP 452342 B. Partículas de tamaño coloidal, tales como las descritas en la Patente de EE. UU. N° 4.795.698, y Liberti et al., Patente de EE. UU. n° 5.200.084 son otros ejemplos.

[0193] La incubación generalmente se lleva a cabo en condiciones en las que los anticuerpos o compañeros de unión, o moléculas, tales como anticuerpos secundarios u otros reactivos, que se unen específicamente a dichos anticuerpos o compañeros de unión, que están unidos a la partícula o perla magnética, específicamente se unen a las moléculas de la superficie celular si están presentes en las células dentro de la muestra.

[0194] En algunos aspectos, la muestra se coloca en un campo magnético, y aquellas células que tienen partículas magnéticamente sensibles o magnetizables unidas a ellas serán atraídas por el imán y separadas de las células no marcadas. Para la selección positiva, se retienen las células que son atraídas por el imán; para la selección negativa, se retienen las células que no son atraídas (células sin marcar). En algunos aspectos, se realiza una combinación de selección positiva y negativa durante el mismo paso de selección, donde las fracciones positivas y negativas se retienen y se procesan más o se someten a más pasos de separación.

[0195] En ciertos casos, las partículas magnéticamente sensibles están recubiertas de anticuerpos primarios u otros compañeros de unión, anticuerpos secundarios, lectinas, enzimas o estreptavidina. En ciertos casos, las partículas magnéticas se unen a las células a través de un recubrimiento de anticuerpos primarios específicos para uno o más marcadores. En ciertos casos, las células, en lugar de las perlas, se marcan con un anticuerpo primario o un compañero de unión, y luego se añaden partículas magnéticas recubiertas con un anticuerpo secundario específico de tipo celular u otro compañero de unión (p. ej., estreptavidina). En ciertos casos, las partículas magnéticas recubiertas de estreptavidina se usan junto con anticuerpos primarios o secundarios biotinilados.

[0196] En algunos casos, las partículas magnéticamente sensibles se dejan unidas a las células que se van a incubar, cultivar y/o manipular posteriormente; en algunos aspectos, las partículas se dejan unidas a las células para su administración a un paciente. En algunos casos, las partículas magnetizables o magnéticamente sensibles se eliminan de las células. Los métodos para eliminar partículas magnetizables de las células son conocidos e incluyen, por ejemplo, el uso de anticuerpos competitivos no marcados y partículas magnetizables o anticuerpos conjugados con conectores escindibles. En algunos casos, las partículas magnetizables son biodegradables.

[0197] En algunos casos, la selección basada en la afinidad se realiza a través de la clasificación de células activadas magnéticamente (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Los sistemas de Clasificación de Células Activadas Magnéticamente (MACS) son capaces de una selección de alta pureza de células que tienen partículas magnetizadas adheridas a los mismos. En ciertos casos, MACS funciona en un modo en el que las especies objetivo y no objetivo se eluyen secuencialmente después de la aplicación del campo magnético externo. Es decir, las células unidas a las partículas magnetizadas se mantienen en su lugar mientras se eluyen las especies no unidas. A continuación, después de completarse este primer paso de elución, las especies que quedaron atrapadas en el campo magnético e impedidas de eluir se liberan de alguna manera para que puedan eluirse y recuperarse. En ciertos casos, las células no objetivo se marcan y eliminan de la población heterogénea de células.

[0198] En ciertos casos, el aislamiento o la separación se lleva a cabo usando un sistema, dispositivo o aparato que lleva a cabo una o más de las etapas de aislamiento, preparación celular, separación, procesamiento, incubación, cultivo y/o formulación del métodos. En algunos aspectos, el sistema se utiliza para llevar a cabo cada uno de estos pasos en un ambiente cerrado o estéril, por ejemplo, para minimizar el error, la manipulación por parte del usuario y/o la contaminación. En un ejemplo, el sistema es un sistema como se describe en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° W02009/072003, o la Publicación de Solicitud de Patente EE. UU. N° US 20110003380 A1.

[0199] En algunos casos, el sistema o aparato lleva a cabo uno o más, por ejemplo, todos los pasos de aislamiento, procesamiento, ingeniería y formulación en un sistema integrado o autónomo, y/o de forma automatizada o programable. En algunos aspectos, el sistema o aparato incluye una computadora y/o un programa de computadora en comunicación con el sistema o aparato, que permite al usuario programar, controlar, evaluar el resultado y/o ajustar varios aspectos de los pasos de procesamiento, aislamiento, ingeniería y formulación.

[0200] En algunos aspectos, la separación y/u otros pasos se llevan a cabo utilizando el sistema CliniMACS (Miltenyi Biotec), por ejemplo, para la separación automatizada de células a nivel de escala clínica en un sistema cerrado y estéril. Los componentes pueden incluir una microcomputadora integrada, una unidad de separación magnética, una bomba peristáltica y varias válvulas de manguito. La computadora integrada en algunos aspectos controla todos los componentes del instrumento y dirige el sistema para realizar procedimientos repetidos en una secuencia estandarizada. La unidad de separación magnética en algunos aspectos incluye un imán permanente móvil y un soporte para la columna de selección. La bomba peristáltica controla la tasa de flujo en todo el conjunto de tubos y, junto con las válvulas de manguito, asegura el flujo controlado de tampón a través del sistema y la suspensión continua de las células.

[0201] El sistema CliniMACS en algunos aspectos utiliza partículas magnetizables acopladas a anticuerpos que se suministran en una solución estéril no pirógena. En algunos casos, después de marcar las células con partículas magnéticas, las células se lavan para eliminar el exceso de partículas. A continuación, se conecta una bolsa de preparación de células al juego de tubos, que a su vez se conecta a una bolsa que contiene tampón y una bolsa de recogida de células. El conjunto de tubos consta de tubos estériles preensamblados, que incluyen una precolumna y una columna de separación, y son para un solo uso. Después de iniciar el programa de separación, el sistema aplica automáticamente la muestra de células en la columna de separación. Las células marcadas se retienen dentro de la columna, mientras que las células no marcadas se eliminan mediante una serie de pasos de lavado. En algunos casos, las poblaciones de células para usar con los métodos descritos en este documento no están marcadas y no se retienen en la columna. En algunos casos, las poblaciones de células para usar con los métodos descritos en este documento se etiquetan y se retienen en la columna. En algunos casos, las poblaciones de células para usar con los métodos descritos en este documento se eluyen de la columna después de eliminar el campo magnético y se recogen dentro de la bolsa de recogida de células.

[0202] En ciertos casos, la separación y/u otros pasos se llevan a cabo usando el sistema CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). El sistema CliniMACS Prodigy en algunos aspectos está equipado con una unidad de procesamiento celular que permite el lavado y fraccionamiento automático de células por centrifugación. El sistema CliniMACS Prodigy también puede incluir una cámara integrada y un software de reconocimiento de imágenes que determina el punto final de fraccionamiento celular óptimo al discernir las capas macroscópicas del producto celular de origen. Por ejemplo, la sangre periférica se separa automáticamente en eritrocitos, glóbulos blancos y capas de plasma. El sistema CliniMACS Prodigy también puede incluir una cámara de cultivo celular integrada que lleva a cabo protocolos de cultivo celular como, por ejemplo, diferenciación y expansión celular, carga de antígenos y cultivo celular a largo plazo. Los puertos de entrada pueden permitir la extracción estéril y la reposición de medios y las células se pueden monitorear usando un microscopio integrado. Véase, por ejemplo, Klebanoff et al. (2012) J Inmunotro. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood. 1:72-82, y Wang et al. (2012) J Inmunotro. 35(9):689-701.

[0203] En algunos casos, una población celular descrita en el presente documento se recoge y se enriquece (o se empobrece) mediante citometría de flujo, en la que las células teñidas para múltiples marcadores de superficie celular se transportan en una corriente fluídica. En algunos casos, una población celular descrita en el presente documento se recoge y enriquece (o empobrece) mediante clasificación a escala preparativa (FACS). En ciertos casos, una población de células descrita en este documento se recolecta y enriquece (o se agota) mediante el uso de chips de sistemas microelectromecánicos (MEMS) en combinación con un sistema de detección basado en FACS (ver, por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573 y Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376. En ambos casos, las células se pueden marcar con múltiples marcadores, lo que permite la aislamiento de subconjuntos de células T bien definidos con alta pureza.

[0204] En algunos casos, los anticuerpos o compañeros de unión se marcan con uno o más marcadores detectables, para facilitar la separación para selección positiva y/o negativa. Por ejemplo, la separación puede ser basada en la unión a anticuerpos marcados con fluorescencia En algunos ejemplos, la separación de células basada en la unión de anticuerpos u otros compañeros de unión específicos para uno o más marcadores de superficie celular se lleva a cabo en una corriente fluídica, como por clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS), incluidos chips de escala preparativa (FACS) y/o sistemas microelectromecánicos (MEMS), por ejemplo, en combinación con un sistema de detección de citometría de flujo. Dichos métodos permiten la selección positiva y negativa basada en múltiples marcadores simultáneamente.

[0205] En algunos casos, los métodos de preparación incluyen etapas para congelar, por ejemplo, crioconservar, las células, ya sea antes o después del aislamiento, la incubación y/o la ingeniería. En algunos casos, el paso de congelación y posterior descongelación elimina los granulocitos y, hasta cierto punto, los monocitos en la población celular. En algunos casos, las células se suspenden en una solución congelada, por ejemplo, después de un paso de lavado para eliminar el plasma y las plaquetas. Puede usarse cualquiera de una variedad de soluciones y parámetros de congelación conocidos en algunos aspectos. Un ejemplo implica el uso de PBS que contiene un 20 % de DMSO y un 8 % de albúmina de suero humano (HSA), u otro medio de congelación celular adecuado. A continuación, se diluye 1:1 con medio para que la concentración final de DMSO y HSA sea del 10 % y el 4 %, respectivamente. A continuación, las células se congelan generalmente a -80 °C a una velocidad de 1 °C por minuto y se almacenan en la fase de vapor de un tanque de almacenamiento de nitrógeno líquido.

[0206] En algunos casos, las células se incuban y/o cultivan antes o en conexión con la ingeniería genética. Los pasos de incubación pueden incluir cultivo, crecimiento, estimulación, activación y/o propagación. La incubación y/o la ingeniería pueden llevarse a cabo en un recipiente de cultivo, como una unidad, cámara, pocillo, columna, tubo, conjunto de tubos, válvula, vial, placa de cultivo, bolsa u otro recipiente para cultivo o crecimiento de células. En algunos casos, las composiciones o células se incuban en presencia de condiciones estimulantes o un agente estimulador. Dichas condiciones incluyen aquellas diseñadas para inducir la proliferación, expansión, activación y/o supervivencia de las células en la población, para imitar la exposición al antígeno y/o preparar las células para la ingeniería genética, como para la introducción de un receptor de antígeno recombinante.

[0207] Las condiciones pueden incluir uno o más medios particulares, temperatura, contenido de oxígeno, contenido de dióxido de carbono, tiempo, agentes, por ejemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, iones y/o factores estimulantes, tales como citoquinas, quimioquinas, antígenos, compañeros de unión, proteínas de fusión, receptores solubles recombinantes y cualquier otro agente diseñado para activar las células.

[0208] En algunos casos, las condiciones o agentes estimulantes incluyen uno o más agentes, por ejemplo, un ligando, que es capaz de activar un dominio de señalización intracelular de un complejo TCR. En algunos aspectos, el agente activa o inicia la cascada de señalización intracelular de TCR/CD3 en una célula T. Dichos agentes pueden incluir anticuerpos, como los específicos de un TCR, por ejemplo, anti-CD3. En algunos casos, las condiciones estimulantes incluyen uno o más agentes, por ejemplo, un ligando, que es capaz de estimular un receptor coestimulador, por ejemplo, anti-CD28. En algunos casos, tales agentes y/o ligandos pueden estar unidos a un soporte sólido tal como una perla y/o una o más citocinas. Opcionalmente, el método de expansión puede comprender además el paso de añadir anticuerpos anti-CD3 y/o anti-CD28 al medio de cultivo (p. ej., a una concentración de al menos aproximadamente 0,5 ng/ml). En algunos casos, los agentes estimulantes incluyen IL-2 y/o IL-15, por ejemplo, una concentración de IL-2 de al menos aproximadamente 10 unidades/ml. En algunos aspectos, la concentración de IL-2 es de al menos unas 10 unidades/ml. En algunos casos, los agentes estimulantes incluyen PMA e ionomicina.

[0209] En algunos aspectos, la incubación se lleva a cabo de acuerdo con técnicas como las descritas en la Patente de EE. UU. N° 6,040,177 de Riddell et al., Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.

1:72-82, y/o Wang et al. (2012) J Inmunotro. 35(9):689-701.

[0210] En algunos casos, las células T se expanden añadiendo células alimentadoras a una composición iniciadora de cultivo, como células mononucleares de sangre periférica (PBMC) que no se dividen (p. ej., de modo que la población resultante de células contenga al menos aproximadamente 5, 10, 20 o 40 o más células alimentadoras de PBMC para cada linfocito T en la población inicial a expandir); e incubar el cultivo (por ejemplo, durante un tiempo suficiente para expandir el número de células T). En algunos aspectos, las células alimentadoras que no se dividen pueden comprender células alimentadoras de PBMC irradiadas con rayos gamma. En algunos casos, las PBMC se irradian con rayos gamma en el rango de aproximadamente 3000 a 3600 rads para evitar la división celular. En algunos aspectos, las células alimentadoras se añaden al medio de cultivo antes de añadir las poblaciones de células T.

[0211] En algunos casos, las condiciones estimulantes incluyen una temperatura adecuada para el crecimiento de los linfocitos T humanos, por ejemplo, al menos alrededor de 25 grados Celsius, generalmente al menos alrededor de 30 grados y generalmente alrededor de 37 grados Celsius. Opcionalmente, la incubación puede comprender además la adición de células linfoblastoides (LCL) transformadas por EBV que no se dividen como células alimentadoras. LCL se puede irradiar con rayos gamma en el rango de aproximadamente 6000 a 10.000 rads. Las células alimentadoras LCL en algunos aspectos se proporcionan en cualquier cantidad adecuada, tal como una proporción de células alimentadoras LCL a linfocitos T iniciales de al menos aproximadamente 10:1.

[0212] En algunos casos, las células T específicas de antígeno, tales como las células T CD4+ y/o CD8+ específicas de antígeno, se obtienen estimulando linfocitos T naive o específicos de antígeno con antígeno. Por ejemplo, se pueden generar líneas o clones de células T específicas de antígeno para antígenos de citomegalovirus aislando células T de sujetos infectados y estimulando las células in vitro con el mismo antígeno.

3. Vectores y métodos para ingeniería genética

[0213] Varios métodos para la introducción de componentes modificados genéticamente, por ejemplo, receptores recombinantes, por ejemplo, CAR o TCR, son bien conocidos y pueden usarse con los métodos y composiciones descritos. Los métodos ejemplares incluyen aquellos para la transferencia de ácidos nucleicos que codifican los receptores, incluso a través de transducción viral, por ejemplo, retroviral o lentiviral, transposones y electroporación.

[0214] En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a células utilizando partículas de virus infecciosos recombinantes, tales como, por ejemplo, vectores derivados del virus de simio 40 (SV40), adenovirus, virus adenoasociados (VAA). En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T usando vectores lentivirales recombinantes o vectores retrovirales, como vectores gamma-retrovirales (ver, por ejemplo, Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt. 2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 noviembre 29(11)): 550 - 557.

[0215] En algunos casos, el vector retroviral tiene una secuencia repetida terminal larga (LTR), por ejemplo, un vector retroviral derivado del virus de la leucemia murina de Moloney (MoMLV), virus del sarcoma mieloproliferativo (MPSV), virus de células madre embrionarias murinas (MESV), virus de células madre murinas (MSCV), virus formador de focos de bazo (SFFV) o virus adenoasociados (VAA). La mayoría de los vectores retrovirales se derivan de retrovirus murinos. En algunos casos, los retrovirus incluyen aquellos derivados de cualquier fuente de células de aves o mamíferos. Los retrovirus suelen ser anfotrópicos, lo que significa que son capaces de infectar las células huésped de varias especies, incluidos los seres humanos. En un caso, el gen a expresar reemplaza las secuencias retrovirales gag, pol y/o env. Se han descrito varios sistemas retrovirales ilustrativos (p. ej., Patentes de EE. UU. Nos 5.219.740; 6.207.453; 5.219.740; Miller y Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A d (1990) Human Gene Therapy 1:5-14 Scarpa y otros (1991) Virology 180:849-852, Burns y otros (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. Ee . UU. 90:8033-8037 y Boris-Lawrie y Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109.

[0216] Se conocen métodos de transducción lentiviral. Se describen métodos ejemplares en, por ejemplo, Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. otros (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; y Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505.

[0217] En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T mediante electroporación (véase, por ejemplo, Chicaybam et al., (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 y Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437). En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T mediante transposición (ver, por ejemplo, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21 (4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74 y Huang y otros (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Otros métodos para introducir y expresar material genético en células inmunitarias incluyen transfección con fosfato de calcio (p. ej., como se describe en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Nueva York, NY), fusión de protoplastos, transfección mediada por liposomas catiónicos; bombardeo de micropartículas facilitado por partículas de tungsteno (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); y coprecipitación de ADN con fosfato de estroncio (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).

[0218] Otros enfoques y vectores para la transferencia de los ácidos nucleicos que codifican los productos recombinantes son los descritos, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N°: WO2014055668 y la patente de EE. UU. N27.446.190.

[0219] En algunos casos, las células, por ejemplo, las células T, pueden transfectarse durante o después de la expansión, por ejemplo, con un receptor de células T (TCR) o un receptor de antígeno quimérico (CAR). Esta transfección para la introducción del gen del receptor deseado se puede realizar con cualquier vector retroviral adecuado, por ejemplo. La población de células modificadas genéticamente puede entonces liberarse del estímulo inicial (el estímulo CD3/CD28, por ejemplo) y posteriormente estimularse con un segundo tipo de estímulo, por ejemplo, a través de un receptor introducido de novo). Este segundo tipo de estímulo puede incluir un estímulo antigénico en forma de una molécula de péptido/MHC, el ligando afín (entrecruzamiento) del receptor introducido genéticamente (p. ej., ligando natural de un CAR) o cualquier ligando (como un anticuerpo) que se une directamente dentro del marco del nuevo receptor (p. ej., reconociendo regiones constantes dentro del receptor). Véase, por ejemplo, Cheadle et al., "Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 o Barrett y col., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine vol. 65: 333-347 (2014).

[0220] En algunos casos, se puede usar un vector que no requiere que las células, por ejemplo, las células T, estén activadas. En algunos de estos casos, las células pueden seleccionarse y/o transducirse antes de la activación. Por lo tanto, las células pueden diseñarse antes o después del cultivo de las células y, en algunos casos, al mismo tiempo o durante al menos una parte del cultivo.

[0221] En algunos aspectos, las células se modifican además para promover la expresión de citoquinas u otros factores. Entre los ácidos nucleicos adicionales, por ejemplo, los genes para la introducción son los que mejoran la eficacia de la terapia, por ejemplo, promoviendo la viabilidad y/o la función de las células transferidas; genes para proporcionar un marcador genético para la selección y/o evaluación de las células, como para evaluar la supervivencia o localización in vivo; genes para mejorar la seguridad, por ejemplo, haciendo que la célula sea susceptible a la selección negativa in vivo como describen Lupton SD et al., Mol. y Cell Biol., 11:6 (1991); y Riddell y col., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); véanse también las publicaciones de PCT/US91/08442 y PCT/US94/05601 de Lupton et al. que describe el uso de genes de fusión seleccionables bifuncionales derivados de la fusión de un marcador seleccionable positivo dominante con un marcador seleccionable negativo. Véase, por ejemplo, Riddell et al., Patente de EE. UU. N° 6.040.177, en las columnas 14-17.

[0222] En algunos contextos, la sobreexpresión de un factor estimulante (por ejemplo, una linfoquina o una citoquina) puede ser tóxica para un sujeto. Por lo tanto, en algunos contextos, las células manipuladas incluyen segmentos de genes que hacen que las células sean susceptibles a la selección negativa in vivo, tal como tras la administración en inmunoterapia adoptiva. Por ejemplo, en algunos aspectos, las células están diseñadas para que puedan eliminarse como resultado de un cambio en la condición in vivo del sujeto al que se administran. El fenotipo seleccionable negativo puede resultar de la inserción de un gen que confiere sensibilidad a un agente administrado, por ejemplo, un compuesto. Los genes seleccionables negativos incluyen el gen de la timidina quinasa del virus del herpes simple tipo I (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2:223, 1977) que confiere sensibilidad al ganciclovir; el gen de hipoxantina fosforribosiltransferasa celular (HPRT), gen de adenina fosforribosiltransferasa celular (APRT), citosina desaminasa bacteriana (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU.. 89:33 (1992)).

B. Composiciones y formulaciones

[0223] En algunos casos, la inmunoterapia y/o una terapia celular se proporciona como una composición o formulación, tal como una composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones se pueden usar de acuerdo con los métodos descritos, como en la prevención o tratamiento de enfermedades, afecciones y trastornos, o en métodos de detección, diagnóstico y pronóstico.

[0224] El término "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está en tal forma que permite que la actividad biológica de un ingrediente activo contenido en ella sea eficaz, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto para el cual se administraría la formulación.

[0225] Un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un ingrediente en una formulación farmacéutica, distinto de un ingrediente activo, que no es tóxico para un sujeto. Un vehículo farmacéuticamente aceptable incluye, entre otros, un tampón, un excipiente, un estabilizador o un conservante.

[0226] En algunos casos, la terapia con células T, como las células T modificadas genéticamente (p. ej, células T CAR), se formulan con un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunos aspectos, la elección del vehículo está determinada en parte por la célula particular y/o por el método de administración. En consecuencia, hay una variedad de formulaciones adecuadas. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede contener conservantes. Los conservantes adecuados pueden incluir, por ejemplo, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sodio y cloruro de benzalconio. En algunos aspectos, se utiliza una mezcla de dos o más conservantes. El conservante o mezclas del mismo están típicamente presentes en una cantidad de aproximadamente 0,0001 % a aproximadamente 2 % en peso de la composición total. Los portadores se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a edición, Osol, A. Ed. (1980). Los vehículos farmacéuticamente aceptables generalmente no son tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas e incluyen, pero no se limitan a: tampones como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos como metil o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales como polietilenglicol (PEG).

[0227] Los agentes tamponadores en algunos aspectos están incluidos en las composiciones. Los agentes tamponadores adecuados incluyen, por ejemplo, ácido cítrico, citrato de sodio, ácido fosfórico, fosfato de potasio y varios otros ácidos y sales. En algunos aspectos, se usa una mezcla de dos o más agentes tamponadores. El agente tampón o mezclas de los mismos están típicamente presentes en una cantidad de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 4 % en peso de la composición total. Se conocen métodos para preparar composiciones farmacéuticas administrables. Los métodos ejemplares se describen con más detalle en, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21a edición. (1 de mayo de 2005).

[0228] Las formulaciones pueden incluir soluciones acuosas. La formulación o composición también puede contener más de un ingrediente activo útil para la indicación, enfermedad o afección particular que se previene o trata con las células, incluidos uno o más ingredientes activos donde las actividades son complementarias a las células y/o las actividades respectivas no se afecten negativamente unas a otras. Dichos ingredientes activos están adecuadamente presentes combinados en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido. Por lo tanto, en algunos casos, la composición farmacéutica incluye además otros agentes o fármacos farmacéuticamente activos, como agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, asparaginasa, busulfano, carboplatino, cisplatino, daunorrubicina, doxorrubicina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, metotrexato, paclitaxel, rituximab, vinblastina., vincristina, etc.

[0229] La composición farmacéutica en algunos casos contiene células en cantidades efectivas para tratar o prevenir la enfermedad o afección, tal como una cantidad terapéuticamente efectiva o profilácticamente efectiva. La eficacia terapéutica o profiláctica en algunos casos se controla mediante la evaluación periódica de los sujetos tratados. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la condición, el tratamiento se repite hasta que ocurre la supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, otros regímenes de dosificación pueden ser útiles y pueden determinarse. La dosificación deseada puede administrarse mediante la administración en bolo única de la composición, mediante administraciones en bolo múltiples de la composición o mediante la administración por infusión continua de la composición.

[0230] Las células pueden administrarse utilizando técnicas, formulaciones y/o dispositivos de administración estándar. Se describen formulaciones y dispositivos, tales como jeringas y viales, para el almacenamiento y la administración de las composiciones. Con respecto a las células, la administración puede ser autóloga o heteróloga. Por ejemplo, las células o progenitores inmunosensibles pueden obtenerse de un sujeto y administrarse al mismo sujeto o a un sujeto compatible diferente. Las células inmunosensibles derivadas de sangre periférica o su progenie (p. ej., derivadas in vivo, ex vivo o in vitro) pueden ser administradas mediante inyección localizada, incluida la administración por catéter, inyección sistémica, inyección localizada, inyección intravenosa o administración parenteral. Cuando se administra una composición terapéutica (p. ej., una composición farmacéutica que contiene una célula inmunosensible modificada genéticamente), generalmente se formulará en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, emulsión).

[0231] Las formulaciones incluyen aquellas para administración oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o en supositorios. En algunos casos, el agente o las poblaciones de células se administran por vía parenteral. El término "parenteral", como se usa en el presente documento, incluye la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, rectal, vaginal e intraperitoneal. En algunos casos, el agente o las poblaciones de células se administran a un sujeto mediante administración sistémica periférica mediante inyección intravenosa, intraperitoneal o subcutánea.

[0232] En algunos casos, las composiciones se proporcionan como preparaciones líquidas estériles, por ejemplo, soluciones acuosas isotónicas, suspensiones, emulsiones, dispersiones o composiciones viscosas, que en algunos aspectos pueden tamponarse a un pH seleccionado. Las preparaciones líquidas normalmente son más fáciles de preparar que los geles, otras composiciones viscosas y las composiciones sólidas. Además, las composiciones líquidas son algo más cómodas de administrar, especialmente mediante inyección. Las composiciones viscosas, por otro lado, se pueden formular dentro del rango de viscosidad apropiado para proporcionar períodos de contacto más prolongados con tejidos específicos. Las composiciones líquidas o viscosas pueden comprender vehículos, que pueden ser un disolvente o medio dispersante que contiene, por ejemplo, agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos.

[0233] Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando las células en un disolvente, mezcladas con un vehículo, diluyente o excipiente adecuado, como agua estéril, solución salina fisiológica, glucosa, dextrosa o similares. Las composiciones también se pueden liofilizar. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares tales como agentes humectantes, dispersantes o emulsionantes (p. ej., metilcelulosa), agentes amortiguadores del pH, gelificantes o aditivos que mejoran la viscosidad, conservantes, agentes aromatizantes, colorantes y similares, según la vía de administración y la preparación deseada. Los textos estándar pueden consultarse en algunos aspectos para preparar preparaciones adecuadas.

[0234] Se pueden añadir varios aditivos que mejoran la estabilidad y esterilidad de las composiciones, incluidos conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y tampones. La prevención de la acción de los microorganismos puede garantizarse mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

[0235] Las formulaciones a utilizar para la administración in vivo son generalmente estériles. La esterilidad puede lograrse fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas de filtración estériles.

[0236] Para la prevención o el tratamiento de enfermedades, la dosificación adecuada puede depender del tipo de enfermedad a tratar, el tipo de agente o agentes, el tipo de células o receptores recombinantes, la gravedad y el curso de la enfermedad, si el agente o las células se administran con fines preventivos o terapéuticos, la terapia previa, la historia clínica del sujeto y la respuesta al agente o las células, y la discreción del médico tratante. En algunos casos, las composiciones se administran adecuadamente al sujeto de una vez o durante una serie de tratamientos.

C. Tratamiento y métodos

[0237] En algunos casos, la inmunoterapia y/o una terapia celular, por ejemplo, una dosis de células que expresan un receptor recombinante, se administran a un sujeto para tratar o prevenir enfermedades, afecciones y trastornos, incluidos los cánceres. En algunos casos, la inmunoterapia y/o una terapia celular, por ejemplo, células, poblaciones y composiciones, se administran a un sujeto o paciente que tiene la enfermedad o afección particular que se va a tratar, por ejemplo, a través de terapia celular adoptiva, como terapia de células T adoptivas. En algunos casos, las células y las composiciones, como las composiciones diseñadas y las composiciones de final de producción después de la incubación y/u otros pasos de procesamiento, se administran a un sujeto, como un sujeto que tiene o está en riesgo de padecer la enfermedad o afección. En algunos aspectos, los métodos tratan, por ejemplo, mejoran uno o más síntomas de la enfermedad o afección, como por ejemplo, disminuyendo la carga tumoral en un cáncer que expresa un antígeno reconocido por un linfocito T manipulado. En algunos casos, los métodos divulgados incluyen una intervención o intervenciones tempranas o preventivas, incluida la administración de agentes o terapias u otros tratamientos que se administran además de la inmunoterapia y/o la terapia celular.

[0238] Los métodos para la administración de células para la terapia celular adoptiva son conocidos y pueden usarse en relación con los métodos y composiciones descritos. Por ejemplo, los métodos de terapia de células T adoptivas se describen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. N° 2003/0170238 de Gruenberg et al; Patente de EE. UU. N° 4.690.915 de Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). Véase, por ejemplo, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84 9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338.

[0239] La enfermedad o afección que se trata puede ser cualquiera en la que la expresión de un antígeno esté asociada con y/o involucrada en la etiología de una enfermedad o trastorno, por ejemplo, cause, exacerbe o esté involucrada de otro modo en tal enfermedad, afección, o trastorno. Ejemplos de enfermedades y condiciones pueden incluir enfermedades o condiciones asociadas con malignidad o transformación de células (por ejemplo, cáncer), enfermedad autoinmunitaria o inflamatoria, o una enfermedad infecciosa, por ejemplo causada por una bacteria, virus u otro patógeno. Los antígenos ejemplares, que incluyen antígenos asociados con diversas enfermedades y afecciones que pueden tratarse, se describen anteriormente. En casos particulares, el receptor de antígeno quimérico o TCR transgénico se une específicamente a un antígeno asociado con la enfermedad o afección.

[0240] Entre las enfermedades, afecciones y trastornos están los tumores, incluidos los tumores sólidos, las neoplasias malignas hematológicas y los melanomas, e incluidos los tumores metastásicos y localizados, las enfermedades infecciosas, como la infección por un virus u otro patógeno, por ejemplo, VIH, VHC, VHB, CMV y enfermedad parasitaria, y enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias. En algunos casos, la enfermedad o afección es un tumor, cáncer, malignidad, neoplasia u otra enfermedad o trastorno proliferativo. Dichas enfermedades incluyen, entre otras, leucemia, linfoma, por ejemplo, leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia linfoblástica aguda (LLA), linfoma no Hodgkin, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiple, linfoma folicular refractario, linfoma de células del manto, linfoma de células del manto indolente, linfoma de células B, neoplasias malignas de células B, cánceres de colon, pulmón, hígado, mama, próstata, ovario, piel, melanoma, cáncer de huesos y cerebro, cáncer de ovario, cánceres epiteliales, carcinoma de células renales, adenocarcinoma pancreático, linfoma de Hodgkin, carcinoma del cuello uterino, cáncer colorrectal, glioblastoma, neuroblastoma, sarcoma de Ewing, meduloblastoma, osteosarcoma, sarcoma sinovial y/o mesotelioma. En algunos casos, el sujeto tiene leucemia linfoblástica aguda (LLA). En algunos casos, el sujeto tiene linfoma no Hodgkin.

[0241] En algunos casos, la enfermedad o afección es una enfermedad o afección infecciosa, tal como, entre otras, infecciones virales, retrovirales, bacterianas y protozoarias, inmunodeficiencia, citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr (EBV), adenovirus, poliomavirus BK. En algunos casos, la enfermedad o afección es una enfermedad o afección autoinmune o inflamatoria, como artritis, por ejemplo, artritis reumatoide (AR), diabetes tipo I, lupus eritematoso sistémico (LES), enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis, esclerodermia, enfermedad de la tiroides autoinmunitaria, enfermedad de Grave, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, asma y/o una enfermedad o afección asociada con el trasplante.

[0242] En algunos casos, el antígeno asociado con la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en receptor huérfano de tirosina quinasa ROR1, tEGFR, HER2, LI-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA y antígeno de superficie de hepatitis B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3 o 4, FBP, receptor de acetilcolina fetal, GD2, GD3, Hm W -MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1, MAGE-A1, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, ligandos NKG2D, NY-ESO-1, MART- 1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno prostático específico, PSMA, HER2/neu, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, ephrinB2, CD123, CS-1, c-Met, GD-2 y MAGE A3, CE7, Wilms Tumor 1 (WT-1), una ciclina, como la ciclina A1 (CCNA1), y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por VIH, VHC, VHB u otros patógenos.

[0243] En algunos casos, la terapia celular, por ejemplo, la terapia de células T adoptivas, se lleva a cabo mediante transferencia autóloga, en la que las células se aíslan y/o se preparan de otro modo a partir del sujeto que va a recibir la terapia celular, o de una muestra derivada de tal sujeto. Así, en algunos aspectos, las células se derivan de un sujeto, por ejemplo, un paciente, que necesita un tratamiento y las células, tras el aislamiento y el procesamiento, se administran al mismo sujeto.

[0244] En algunos casos, la terapia celular, por ejemplo, la terapia de células T adoptivas, se lleva a cabo mediante transferencia alogénica, en la que las células se aíslan y/o se preparan de otro modo a partir de un sujeto que no es un sujeto que va a recibir o que finalmente recibe la terapia celular, por ejemplo, un primer sujeto. En tales casos, las células se administran a continuación a un sujeto diferente, por ejemplo, un segundo sujeto, de la misma especie. En algunos casos, los sujetos primero y segundo son genéticamente idénticos. En algunos casos, los sujetos primero y segundo son genéticamente similares. En algunos casos, el segundo sujeto expresa la misma clase o supertipo ALH que el primer sujeto.

[0245] Las células se pueden administrar por cualquier medio adecuado, por ejemplo, por infusión en bolo, por inyección, por ejemplo, inyecciones intravenosas o subcutáneas, inyección intraocular, inyección periocular, inyección subretiniana, inyección intravítrea, inyección transseptal, inyección subescleral, inyección intracoroidea, inyección intracameral, inyección subconjetval, inyección subconjuntival, inyección sub-Tenon, inyección retrobulbar, inyección peribulbar o administración yuxtaescleral posterior. En algunos casos, se administran por vía parenteral, intrapulmonar e intranasal y, si se desea para el tratamiento local, administración intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea. En algunos casos, una dosis determinada se administra mediante la administración de un solo bolo de las células. En algunos casos, se administra mediante múltiples bolos de las células, por ejemplo, durante un período de no más de 3 días, o mediante la administración de infusión continua de las células.

[0246] Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosificación adecuada puede depender del tipo de enfermedad a tratar, el tipo de células o receptores recombinantes, la gravedad y el curso de la enfermedad, si las células se administran con fines preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial clínico del sujeto y la respuesta a las células, y la discreción del médico tratante. En algunos casos, las composiciones y las células se administran adecuadamente al sujeto en un momento o durante una serie de tratamientos.

[0247] En algunos casos, las células se administran como parte de un tratamiento de combinación, como de forma simultánea o secuencial con, en cualquier orden, otra intervención terapéutica, como un anticuerpo o una célula modificada o un receptor o agente, como un agente citotóxico o terapéutico. En algunos casos, las células se administran conjuntamente con uno o más agentes terapéuticos adicionales o en relación con otra intervención terapéutica, ya sea de forma simultánea o secuencial en cualquier orden. En algunos contextos, las células se coadministran con otra terapia lo suficientemente próxima en el tiempo como para que las poblaciones de células potencien el efecto de uno o más agentes terapéuticos adicionales, o viceversa. En algunos casos, las células se administran antes que uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunos casos, las células se administran después de uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunos casos, uno o más agentes adicionales incluyen una citocina, como IL-2, por ejemplo, para mejorar la persistencia. En algunos casos, los métodos comprenden la administración de un agente quimioterapéutico.

[0248] En algunos casos, los métodos comprenden la administración de un agente quimioterapéutico, por ejemplo, un agente quimioterapéutico acondicionador, por ejemplo, para reducir la carga tumoral antes de la administración.

[0249] El preacondicionamiento de sujetos con terapias de inmunodepleción (p. ej., depleción de linfocitos) en algunos aspectos puede mejorar los efectos de la terapia celular adoptiva (TCA).

[0250] Por lo tanto, en algunos casos, los métodos incluyen la administración de un agente de preacondicionamiento, como un agente quimioterapéutico o de eliminación de linfocitos, como ciclofosfamida, fludarabina o combinaciones de los mismos, a un sujeto antes del inicio de la terapia celular. Por ejemplo, al sujeto se le puede administrar un agente acondicionador previo al menos 2 días antes, tal como al menos 3, 4, 5, 6 o 7 días antes del inicio de la terapia celular. En algunos casos, al sujeto se le administra un agente de preacondicionamiento no más de 7 días antes, tal como no más de 6, 5, 4, 3 o 2 días antes del inicio de la terapia celular.

[0251] En algunos casos, el sujeto se preacondiciona con ciclofosfamida a una dosis entre aproximadamente 20 mg/kg y 100 mg/kg, tal como entre aproximadamente 40 mg/kg y 80 mg/kg. En algunos aspectos, el sujeto se preacondiciona con o con aproximadamente 60 mg/kg de ciclofosfamida. En algunos casos, la ciclofosfamida se puede administrar en una sola dosis o se puede administrar en una pluralidad de dosis, como diariamente, cada dos días o cada tres días. En algunos casos, la ciclofosfamida se administra una vez al día durante uno o dos días.

[0252] En algunos casos, cuando el agente de depleción de linfocitos comprende fludarabina, al sujeto se le administra fludarabina en una dosis entre aproximadamente 1 mg/m2 y 100 mg/m2, tal como entre aproximadamente 10 mg/m2 y 75 mg/m2, 15 mg/m2 y 50 mg/m2, 20 mg/m2 y 30 mg/m2, o 24 mg/m2 y 26 mg/m2. En algunos casos, al sujeto se le administran 25 mg/m2 de fludarabina. En algunos casos, la fludarabina se puede administrar en una sola dosis o se puede administrar en una pluralidad de dosis, como diariamente, cada dos días o cada tres días. En algunos casos, la fludarabina se administra diariamente, por ejemplo durante 1 a 5 días, por ejemplo, durante 3 a 5 días.

[0253] En algunos casos, el agente de depleción de linfocitos comprende una combinación de agentes, como una combinación de ciclofosfamida y fludarabina. Por tanto, la combinación de agentes puede incluir ciclofosfamida en cualquier dosis o programa de administración, como los descritos anteriormente, y fludarabina en cualquier dosis o programa de administración, como los descritos anteriormente. Por ejemplo, en algunos aspectos, al sujeto se le administran 60 mg/kg (~2 g/m2) de ciclofosfamida y de 3 a 5 dosis de 25 mg/m2 de fludarabina antes de la primera o subsiguiente dosis.

[0254] Después de la administración de las células, la actividad biológica de las poblaciones de células manipuladas en algunos casos se mide, por ejemplo, mediante cualquiera de varios métodos conocidos. Los parámetros a evaluar incluyen la unión específica de una célula T modificada o natural u otra célula inmunitaria al antígeno, in vivo, p. ej., mediante formación de imágenes, o ex vivo, p. ej., mediante ELISA o citometría de flujo. En ciertos casos, la capacidad de las células modificadas para destruir las células objetivo se puede medir utilizando cualquier método adecuado conocido en la técnica, como los ensayos de citotoxicidad descritos, por ejemplo, en Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009) y Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). En determinados casos, la actividad biológica de las células se mide analizando la expresión y/o secreción de una o más citocinas, como CD107a, IFNy, IL-2 y TNF. En algunos aspectos, la actividad biológica se mide evaluando el resultado clínico, como la reducción de la carga o carga tumoral.

[0255] En ciertos casos, las células manipuladas se modifican adicionalmente de varias formas, de manera que se aumenta su eficacia terapéutica o profiláctica. Por ejemplo, el CAR o TCR manipulado expresado por la población se puede conjugar directa o indirectamente a través de un conector a un resto de direccionamiento. La práctica de conjugar compuestos, por ejemplo, el CAR o el TCR, para seleccionar restos es conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 111 (1995) y la patente de EE. UU. 5.087.616.

1. Dosificación

[0256] La composición farmacéutica en algunos casos de los métodos descritos en el presente documento contiene las células en cantidades eficaces para tratar o prevenir la enfermedad o afección, como una cantidad terapéuticamente eficaz o profilácticamente eficaz. En algunos casos, la composición incluye las células en una cantidad eficaz para reducir la carga de la enfermedad o afección.

[0257] En el contexto de la terapia celular adoptiva, la administración de una "dosis" dada abarca la administración de la cantidad o número dado de células como una sola composición y/o una sola administración ininterrumpida, por ejemplo, como una sola inyección o infusión continua, y también abarca la administración de la cantidad o número dado de células como una dosis dividida, proporcionada en múltiples composiciones o infusiones individuales, durante un período de tiempo específico, que no es más de 3 días. Así, en algunos contextos, la dosis es una administración única o continua del número especificado de células, dada o iniciada en un solo punto en el tiempo. En algunos contextos, sin embargo, la dosis se administra en inyecciones o infusiones múltiples durante un período de no más de tres días, como una vez al día durante tres días o durante dos días o mediante infusiones múltiples durante un período de un solo día.

[0258] Así, en algunos aspectos, las células de la dosis se administran en una sola composición farmacéutica. En algunos casos, las células de la dosis se administran en una pluralidad de composiciones, que contienen colectivamente las células de la primera dosis.

[0259] El término "dosis dividida" se refiere a una dosis que se divide para que se administre durante más de un día. Este tipo de dosificación está abarcado por los presentes métodos y se considera que es una dosis única.

[0260] Por lo tanto, la dosis en algunos aspectos se puede administrar como una dosis dividida. Por ejemplo, en algunos casos, la dosis se puede administrar al sujeto durante 2 días o durante 3 días. Los métodos ejemplares para la dosificación dividida incluyen la administración del 25 % de la dosis el primer día y la administración del 75 % restante de la dosis el segundo día. En otros casos, el 33 % de la primera dosis puede administrarse el primer día y el 67 % restante administrarse el segundo día. En algunos aspectos, el 10 % de la dosis se administra el primer día, el 30 % de la dosis se administra el segundo día y el 60 % de la dosis se administra el tercer día. En algunos casos, la dosis dividida no se distribuye en más de 3 días.

[0261] En algunos casos, se pueden administrar al sujeto una o más dosis consecutivas o posteriores de células. En algunos casos, la dosis consecutiva o posterior de células se administra más o más de aproximadamente 7 días, 14 días, 21 días, 28 días o 35 días después del inicio de la administración de la primera dosis de células. La dosis consecutiva o posterior de células puede ser mayor, aproximadamente igual o menor que la primera dosis. En algunos casos, puede repetirse la administración de la terapia con células T, como la administración de la primera y/o segunda dosis de células.

[0262] En algunos casos, se administra una dosis de células a los sujetos de acuerdo con los métodos descritos. En algunos casos, el tamaño o el momento de las dosis se determina en función de la enfermedad o afección particular del sujeto. Está dentro del nivel de un experto en la materia determinar empíricamente el tamaño o el momento de las dosis para una enfermedad particular. Las dosis pueden variar dependiendo de los atributos particulares de la enfermedad o trastorno y/o del paciente y/u otros tratamientos.

[0263] En ciertos casos, las células, o poblaciones individuales de subtipos de células, se administran al sujeto en un intervalo de aproximadamente 0,1 millones a aproximadamente 100 mil millones de células y/o esa cantidad de células por kilogramo de peso corporal del sujeto, como, por ejemplo, alrededor de 0,1 millones a alrededor de 50 mil millones de células (por ejemplo, alrededor de 5 millones de células, alrededor de 25 millones de células, alrededor de 500 millones de células, alrededor de 1 mil millones de células, alrededor de 5 mil millones de células, alrededor de 20 mil millones de células, alrededor de 30 mil millones de células, alrededor de 40 mil millones de células, o un intervalo definido por cualquiera de los dos valores anteriores), alrededor de 1 millón a alrededor de 50 mil millones de células (por ejemplo, alrededor de 5 millones de células, alrededor de 25 millones de células, alrededor de 500 millones de células, alrededor de 1 mil millones de células, alrededor de 5 mil millones de células, alrededor de 20 mil millones de células, alrededor de 30 mil millones de células, alrededor de 40 mil millones de células, o un intervalo definido por cualquiera de los dos valores anteriores), como alrededor de 10 millones a alrededor de 100 mil millones de células (por ejemplo, alrededor de 20 millones de células, unos 30 millones de células, unos 40 millones de células, unos 60 millones de células, aproximadamente 70 millones de células, aproximadamente 80 millones de células, aproximadamente 90 millones de células, aproximadamente 10 mil millones de células, aproximadamente 25 mil millones de células, aproximadamente 50 mil millones de células, aproximadamente 75 mil millones de células, aproximadamente 90 mil millones de células, o un intervalo definido por cualquiera de dos de los valores anteriores), y en algunos casos alrededor de 100 millones de células a alrededor de 50 mil millones de células (por ejemplo, alrededor de 120 millones de células, alrededor de 250 millones de células, alrededor de 350 millones de células, alrededor de 450 millones de células, alrededor de 650 millones de células, alrededor de 800 millones de células, aproximadamente 900 millones de células, aproximadamente 3 mil millones de células, aproximadamente 30 mil millones de células, aproximadamente 45 mil millones de células) o cualquier valor entre estos rangos y/o por kilogramo de peso corporal del sujeto. Las dosis pueden variar dependiendo de los atributos particulares de la enfermedad o trastorno y/o del paciente y/u otros tratamientos. En algunos casos, tales valores se refieren al número de células que expresan el receptor recombinante; en otros casos, se refieren al número de células T o PBMC o células totales administradas.

[0264] En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células que es al menos o al menos alrededor de o es o es alrededor de 0,1 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto, 0,2 x 106 células/ kg, 0,3 x 106 células/kg, 0,4 x 106 células/kg, 0,5 x 106 células/kg, 1 x 106 células/kg, 2,0 x 106 células/kg, 3 x 106 células/kg o 5 x 106 células/kg.

[0265] En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células entre aproximadamente 0,1 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 1,0 x 107 células/kg, entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 5 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 2 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 1 x 106 células/kg, entre aproximadamente 1,0 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, entre aproximadamente 1,0 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, entre aproximadamente 1,0 x 106 células/kg y 2 x 106 células/kg, entre aproximadamente 2,0 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 2,0 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, o entre aproximadamente 3,0 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, cada uno inclusive.

[0266] En algunos casos, la dosis de células comprende entre aproximadamente 2 x 105 de células/kg y aproximadamente 2 x 106 de células/kg, tal como entre aproximadamente 4 x 105 de células/kg y en o alrededor de 1 x 106 de células/kg o entre alrededor de 6 x 105 de células/kg y en o alrededor de 8 x 105 de células/kg. En algunos casos, la dosis de células comprende no más de 2 x 105 de las células (p. ej, que expresan antígenos, como las células que expresan CAR) por kilogramo de peso corporal del sujeto (células/kg), como no más de al menos o alrededor de 3 x 105 células/kg, no más de o alrededor de 4 x 105 células/kg, no más de o alrededor de 5 x 105 células/kg, no más de o alrededor de 6 x 105 células/kg, no más que en o alrededor de 7 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 8 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 9 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 1 x 106 células/kg, o no más de o aproximadamente alrededor de 2 x 106 células/kg. En algunos casos, la dosis de células comprende al menos o al menos alrededor de o alrededor de 2 x 105 de las células (por ejemplo, células que expresan antígenos, tales como células que expresan CAR) por kilogramo de peso corporal del sujeto (células/kg), como al menos o al menos alrededor de o alrededor de 3 x 105 células/kg, al menos o al menos alrededor de o alrededor de 4 x 105 células/kg, al menos o al menos alrededor de o alrededor de 5 x 105 células/kg, al menos o al menos alrededor de o alrededor de 6 x 105 células/kg, al menos o al menos alrededor de o alrededor de 7 x 105 células/kg, al menos o al menos alrededor de o alrededor de 8 x 105 células/kg, al menos o al menos aproximadamente o en o aproximadamente 9 x 105 células/kg, al menos o al menos aproximadamente o en o aproximadamente 1 x 106 células/kg, o al menos o al menos aproximadamente o en o aproximadamente 2 x 106 células/kg.

[0267] En algunos casos, las células se administran en una dosis deseada, que en algunos aspectos incluye una dosis deseada o número de células o tipo(s) de células y/o una proporción deseada de tipos de células. Por tanto, la dosificación de células en algunos casos se basa en un número total de células (o número por kg de peso corporal) y una proporción deseada de las poblaciones o subtipos individuales, como la proporción de CD4+ a CD8+. En algunos casos, la dosificación de células se basa en un número total deseado (o número por kg de peso corporal) de células en las poblaciones individuales o de tipos de células individuales. En algunos casos, la dosificación se basa en una combinación de dichas características, como el número deseado de células totales, la proporción deseada y el número total deseado de células en las poblaciones individuales.

[0268] En algunos casos, las poblaciones o subtipos de células, como las células T CD8+ y CD4+, se administran en o dentro de una diferencia tolerada de una dosis deseada de células totales, como una dosis deseada de células T. En algunos aspectos, la dosis deseada es un número deseado de células o un número deseado de células por unidad de peso corporal del sujeto al que se administran las células, por ejemplo, células/kg. En algunos aspectos, la dosis deseada es igual o superior a un número mínimo de células o un número mínimo de células por unidad de peso corporal. En algunos aspectos, entre las células totales, administradas a la dosis deseada, las poblaciones o subtipos individuales están presentes en o cerca de una proporción de producción deseada (como la proporción de CD4+ a CD8+), p. ej., dentro de una cierta diferencia tolerada o error de tal proporción.

[0269] En algunos casos, las células se administran en o dentro de una diferencia tolerada de una dosis deseada de una o más de las poblaciones individuales o subtipos de células, como una dosis deseada de células CD4+ y/o una dosis deseada de células CD8+. En algunos aspectos, la dosis deseada es un número deseado de células del subtipo o población, o un número deseado de dichas células por unidad de peso corporal del sujeto al que se administran las células, por ejemplo, células/kg. En algunos aspectos, la dosis deseada es igual o superior a un número mínimo de células de la población o subtipo, o un número mínimo de células de la población o subtipo por unidad de peso corporal.

[0270] Por lo tanto, en algunos casos, la dosificación se basa en una dosis fija deseada de células totales y una proporción deseada, y/o se basa en una dosis fija deseada de uno o más, por ejemplo, cada uno de los subtipos individuales o subpoblaciones. Por lo tanto, en algunos casos, la dosificación se basa en una dosis mínima o fija deseada de células T y una proporción deseada de células CD4+ a CD8+, y/o se basa en una dosis mínima o fija deseada de células CD4+ y/o CD8+.

[0271] En algunos casos, las células se administran en o dentro de un rango tolerado de una relación de producción deseada de múltiples poblaciones o subtipos de células, tales como células o subtipos CD4+ y CD8+. En algunos aspectos, la relación deseada puede ser una relación específica o puede ser un rango de relaciones. por ejemplo, en algunos casos, la proporción deseada (p. ej., proporción de células CD4+ a CD8+) está entre aproximadamente 5:1 y aproximadamente 5:1 (o mayor que aproximadamente 1:5 y menor que aproximadamente 5:1), o entre aproximadamente 1:3 y aproximadamente 3:1 (o mayor que aproximadamente 1:3 y menor que aproximadamente 3:1), tal como entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 1:5 (o mayor que aproximadamente 1:5 y menor que aproximadamente 2:1, tal como aproximadamente 5:1,4,5:1,4:1,3,5:1,3:1,2,5:1, 2:1, 1,9:1, 1,8:1, 1,7:1, 1,6:1, 1,5:1, 1,4:1, 1,3:1, 1,2:1, 1,1:1, 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,5, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,8, 1:1,9: 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5, o 1:5. En algunos aspectos, la diferencia tolerada es de alrededor del 1 %, alrededor del 2 %, alrededor del 3 %, alrededor del 4 %, alrededor del 5 %, alrededor del 10 %, alrededor del 15 %, alrededor del 20 %, alrededor del 25 %, alrededor del 30 %, alrededor del 35 %, alrededor del 40 %, alrededor del 45 %, alrededor del 50 % de la relación deseada, incluido cualquier valor entre estos rangos.

[0272] En casos particulares, los números y/o concentraciones de células se refieren al número de células que expresan el receptor recombinantes (por ejemplo, CAR). En otros casos, los números y/o concentraciones de células se refieren al número o concentración de todas las células, células T o células mononucleares de sangre periférica (PBMC) administradas.

[0273] En algunos aspectos, el tamaño de la dosis se determina en función de uno o más criterios, como la respuesta del sujeto al tratamiento previo, por ejemplo, quimioterapia, la carga de la enfermedad en el sujeto, como la carga tumoral, volumen, tamaño o grado, extensión o tipo de metástasis, etapa y/o probabilidad o incidencia de que el sujeto desarrolle resultados tóxicos, por ejemplo, SLC, síndrome de activación de macrófagos, síndrome de lisis tumoral, neurotoxicidad y/o una respuesta inmunitaria del huésped contra las células y/o receptores recombinantes que se administran.

II. AGENTES DIRIGIDOS A LA TOXICIDAD QUE TRATAN O MEJORAN LOS SÍNTOMAS DE TOXICIDAD

[0274] En algunos casos, los métodos incluyen una intervención o intervenciones tempranas o preventivas, incluida la administración de agentes o terapias u otros tratamientos que tratan una toxicidad de una inmunoterapia y/o una terapia celular, tal como SLC o neurotoxicidad, por ejemplo, SLC grave o neurotoxicidad grave, y/o que previenen, retrasan o atenúan el desarrollo o el riesgo de desarrollar SLC o neurotoxicidad, por ejemplo, SLC grave o neurotoxicidad grave. Por ejemplo, en algunos casos, el agente es un agente o tratamiento o intervención dirigido a la toxicidad.

[0275] En algunos casos, el agente, p. ej., un agente dirigido a la toxicidad, es un esteroide, es un antagonista o inhibidor de un receptor de citocinas, como el receptor de IL-6, el receptor CD122 (receptor de IL-2Rbeta) o CCR2, o es un inhibidor de una citocina, como IL-6, MCP-1, IL-10, IFN-y, IL-8 o IL-18. En algunos casos, el agente es un agonista de un receptor de citoquinas y/o citoquinas, como TGF-p. En algunos casos, el agente, por ejemplo, agonista, antagonista o inhibidor, es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

[0276] En algunos casos, se puede emplear un bolo de líquido como una intervención, tal como para tratar la hipotensión asociada con SLC. En algunos casos, los niveles de hematocrito deseados son >24 %. En algunos casos, la intervención incluye el uso de tecnología de resina absorbente con filtración de sangre o plasma. En algunos casos, la intervención incluye diálisis, plasmaféresis o tecnologías similares. En algunos casos, se pueden emplear vasopresores o paracetamol.

[0277] En algunos casos, el agente se puede administrar secuencialmente, intermitentemente, o al mismo tiempo o en la misma composición que la terapia, como células para terapia celular adoptiva. Por ejemplo, el agente puede administrarse antes, durante, simultáneamente con o después de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular.

[0278] En algunos casos, el agente se administra en el momento que se describe en el presente documento y de acuerdo con los métodos descritos. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra en un momento dentro de, por ejemplo, menos o no más de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 días después del inicio de la inmunoterapia y/o terapia celular. En algunos casos, el agente dirigido a la toxicidad se administra dentro de aproximadamente 1 día, 2 días o 3 días después del inicio de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular.

[0279] En algunos casos, el agente, p. ej., un agente dirigido a la toxicidad, se administra a un sujeto después del inicio de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular en un momento en el que el sujeto no presenta SLC de grado 2 o superior o neurotoxicidad de grado 2 o superior. En algunos aspectos, el agente dirigido a la toxicidad se administra después del inicio de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular en un momento en el que el sujeto no presenta SLC grave o neurotoxicidad grave. Por lo tanto, en los métodos descritos, entre el inicio de la administración de la inmunoterapia y/o la terapia celular y el agente dirigido a la toxicidad, el sujeto es uno que no presenta SLC de grado 2 o superior, como SLC grave, y/o no presenta neurotoxicidad de grado 2 o superior, como neurotoxicidad grave.

[0280] En la Tabla 3 se describen ejemplos no limitativos de intervenciones para tratar o mejorar una toxicidad, como SLC grave (SLCg). En algunos casos, la intervención incluye tocilizumab u otro agente dirigido contra la toxicidad como se describe, que puede ser en un momento en el que hay una fiebre sostenida o persistente de más de 38 °C o más o más de 39 °C en el sujeto. En algunos casos, la fiebre se mantiene en el sujeto durante más de 10 horas, más de 12 horas, más de 16 horas o más de 24 horas antes de la intervención.

TABLA 3

(Continuación)

[0281] En algunos casos, el agente o la terapia o la intervención, por ejemplo, el agente dirigido a la toxicidad, se administra solo o se administra como parte de una composición o formulación, tal como una composición o formulación farmacéutica, como se describe en el presente documento. Por lo tanto, el agente solo o como parte de una composición farmacéutica se puede administrar por vía intravenosa u oral, o por cualquier otra vía de administración conocida aceptable o como se describe en el presente documento.

[0282] En algunos casos, la dosificación del agente o la frecuencia de administración del agente en un régimen de dosificación se reduce en comparación con la dosificación del agente o su frecuencia en un método en el que se trata a un sujeto con el agente después del SLC de grado 2 o superior o neurotoxicidad, como después de SLC grave, p. ej., de grado 3 o superior, o después de que se haya desarrollado o diagnosticado neurotoxicidad grave, p. ej., de grado 3 o superior (p. ej., después de signos o síntomas físicos de SLC de grado 3 o superior o se ha manifestado neurotoxicidad). En algunos casos, la dosis del agente o la frecuencia de administración del agente en un régimen de dosificación se reduce en comparación con la dosis del agente o su frecuencia en un método en el que se trata a un sujeto por SLC o neurotoxicidad durante más de 3 días. 4 días, 5 días, 6 días, 1 semana, 2 semanas, tres semanas o más después de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular. En algunos casos, la dosificación se reduce en más o más de aproximadamente 1,2 veces, 1,5 veces, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces o más. En algunos casos, la dosificación se reduce en más o alrededor del 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % o más. En algunos casos, se reduce la frecuencia de dosificación, tal como se reduce el número de dosis diarias o se reduce el número de días de dosificación.

A. Agentes d irigidos a la toxicidad

1. Esferoide

[0283] En algunos casos, el agente, por ejemplo, agente dirigido a la toxicidad, que trata y/o previene, retrasa o atenúa el desarrollo o el riesgo de desarrollar una toxicidad para una inmunoterapia y/o una terapia celular, tal como SLC o neurotoxicidad de grado 2 o superior o grave, es un esteroide, por ejemplo, un corticosteroide. Los corticosteroides típicamente incluyen glucocorticoides y mineralocorticoides.

[0284] Se puede usar cualquier corticosteroide, por ejemplo, glucocorticoide, en los métodos descritos en el presente documento. En algunos casos, los glucocorticoides incluyen glucocorticoides sintéticos y no sintéticos. Los glucocorticoides ejemplares incluyen, pero no se limitan a: alclometasonas, algestonas, beclometasonas (p. ej., dipropionato de beclometasona), betametasonas (p. ej., betametasona 17-valerato, acetato de betametasona sódica, fosfato de betametasona sódica, valerato de betametasona), budesonidas, clobetasoles (p. ej., propionato de clobetasol), clobetasonas, clocortolonas (p. ej., pivalato de clocortolona), cloprednoles, corticosteronas, cortisonas e hidrocortisonas (p. ej., acetato de hidrocortisona), cortivazoles, deflazacort, desonidas, desoximetasonas, dexametasonas (p. ej., dexametasona 21-fosfato, acetato de dexametasona, fosfato sódico de dexametasona), diflorasonas (p. ej., diflorasona diacetato), diflucortolonas, difluprednatos, enoxolonas, fluazacort, flucloronidas, fludrocortisonas (p. ej., acetato de fludrocortisona), flumetasonas (p. ej., pivalato de flumetasona), flunisolidas, fluocinolonas (p. ej., acetónido de fluocinolona), fluocinonidas, fluocortinas, fluocortolonas, fluorometolonas (p. ej., acetato de fluorometolona), fluperolonas (p. ej., acetato de fluperolona), fluprednidenos, fluprednisolonas, flurandrenolidas, fluticasonas (p. ej., propionato de fluticasona), formocortales, halcinonidas, halobetasoles, halometasonas, halopredonas, hidrocortamatos, hidrocortisonas (p. ej., 21-butirato de hidrocortisona, aceponato de hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, buteprato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, hidrocortisona cipionato, hemisuccinato de hidrocortisona, probutato de hidrocortisona, fosfato de hidrocortisona sódica, succinato de hidrocortisona sódica, valerato de hidrocortisona), etabonato de loteprednol, mazipredonas, medrisonas, meprednisonas, metilprednisolonas (aceponato de metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, hemisuccinato de metilprednisolona, succinato de metilprednisolona sódica), mometasonas (mometasona furoato), parametasonas (p. ej., acetato de parametasona), prednicarbatos, prednisolonas (p. ej., 25-dietilaminoacetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, 21-hemisuccinato de prednisolona, acetato de prednisolona; farnesilato de prednisolona, hemisuccinato de prednisolona, prednisolona-21 (beta-D-glucurónido), metasulfobenzoato de prednisolona, esteagato de prednisolona, tebutato de prednisolona, tetrahidroftalato de prednisolona), prednisonas, prednivales, prednilidenos, rimexolonas, tixocortoles, triamcinolonas (p. ej., triamcinolona acetonida, triamcinolona benetonida, triamcinolona hexacetaonida, triamcinolina acetonida 21-palmitato, diacetato de triamcinolona). Estos glucocorticoides y las sales de los mismos se analizan en detalle, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pensilvania (16a edición, 1980).

[0285] En algunos ejemplos, el glucocorticoide se selecciona entre cortisonas, dexametasonas, hidrocortisonas, metilprednisolonas, prednisolonas y prednisonas. En un ejemplo particular, el glucocorticoide es dexametasona.

[0286] En algunos casos, el agente es un corticosteroide y se administra en una cantidad que es terapéuticamente eficaz para tratar, mejorar o reducir uno o más síntomas de toxicidad para una inmunoterapia y/o una terapia celular, como SLC o neurotoxicidad. En algunos casos, los indicadores de mejoría o tratamiento exitoso incluyen la determinación de la falta de manifestación de una puntuación relevante en la escala de clasificación de toxicidad (p. ej., SLC o escala de clasificación de neurotoxicidad), como una puntuación inferior a 3, o un cambio en la clasificación o gravedad en la escala de calificación como se analiza en este documento, como un cambio de una puntuación de 4 a una puntuación de 3, o un cambio de una puntuación de 4 a una puntuación de 2, 1 o 0.

[0287] En algunos aspectos, el corticosteroide se proporciona en una dosis terapéuticamente eficaz. La concentración terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente mediante pruebas en sistemas conocidos in vitro o in vivo (p. ej., modelo animal). Por ejemplo, la cantidad de un corticosteroide seleccionado a administrar para mejorar los síntomas o los efectos adversos de una toxicidad para una inmunoterapia y/o una terapia celular, tal como SLC o neurotoxicidad, puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Además, se pueden emplear modelos animales para ayudar a identificar rangos de dosificación óptimos. La dosificación precisa, que puede determinarse empíricamente, puede depender de la preparación terapéutica particular, el régimen y programa de dosificación, la vía de administración y la gravedad de la enfermedad.

[0288] El corticosteroide se puede administrar en cualquier cantidad que sea eficaz para mejorar uno o más síntomas asociados con la toxicidad, como con el SLC o la neurotoxicidad. El corticosteroide, por ejemplo, glucocorticoide, puede administrarse, por ejemplo, en una cantidad entre o aproximadamente 0,1 y 100 mg, por dosis, 0,1 a 80 mg, 0,1 a 60 mg, 0,1 a 40 mg, 0,1 a 30 mg, 0,1 a 20 mg, 0,1 a 15 mg, 0,1 a 10 mg, 0,1 a 5 mg, 0,2 a 40 mg, 0,2 a 30 mg, 0,2 a 20 mg, 0,2 a 15 mg, 0,2 a 10 mg, 0,2 a 5 mg, 0,4 a 40 mg, 0,4 a 30 mg, 0,4 a 20 mg, 0,4 a 15 mg, 0,4 a 10 mg, 0,4 a 5 mg, 0,4 a 4 mg, 1 a 20 mg, 1 a 15 mg o 1 a 10 mg, a un sujeto humano adulto de 70 kg. Típicamente, el corticosteroide, tal como un glucocorticoide, se administra en una cantidad entre o alrededor de 0,4 y 20 mg, por ejemplo, en o alrededor de 0,4 mg, 0,5 mg, 0,6 mg, 0,7 mg, 0,75 mg, 0,8 mg, 0,9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg o 20 mg por dosis, a un sujeto humano adulto medio.

[0289] En algunos casos, el corticosteroide se puede administrar, por ejemplo, a una dosis de o aproximadamente 0,001 mg/kg (del sujeto), 0,002 mg/kg, 0,003 mg/kg, 0,004 mg/kg, 0,005 mg /kg, 0,006 mg/kg, 0,007 mg/kg, 0,008 mg/kg, 0,009 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,015 mg/kg, 0,02 mg/kg, 0,025 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,035 mg /kg, 0,04 mg/kg, 0,045 mg/kg, 0,05 mg/kg, 0,055 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,065 mg/kg, 0,07 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,08 mg/kg, 0,085 mg /kg, 0,09 mg/kg, 0,095 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,15 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,25 mg/kg, 0,30 mg/kg, 0,35 mg/kg, 0,40 mg/kg, 0,45 mg /kg, 0,50 mg/kg, 0,55 mg/kg, 0,60 mg/kg, 0,65 mg/kg, 0,70 mg/kg, 0,75 mg/kg, 0,80 mg/kg, 0,85 mg/kg, 0,90 mg/kg, 0,95 mg /kg, 1 mg/kg, 1,05 mg/kg, 1,1 mg/kg, 1,15 mg/kg, 1,20 mg/kg, 1,25 mg/kg, 1,3 mg/kg, 1,35 mg/kg o 1,4 mg/kg, hasta un sujeto humano adulto promedio, que normalmente pesa alrededor de 70 kg a 75 kg.

[0290] El corticosteroide o glucocorticoide, por ejemplo dexametasona, se puede administrar por vía oral (comprimidos, líquido o concentrado líquido), PO, por vía intravenosa (IV), intramuscular o por cualquier otra vía conocida o vía descrita en el presente documento (por ejemplo, con respecto a formulaciones farmacéuticas). En algunos aspectos, el corticosteroide se administra como un bolo y en otros aspectos puede administrarse durante un período de tiempo.

[0291] En algunos aspectos, el glucocorticoide se puede administrar durante un período de más de un día, como durante dos días, durante 3 días o durante 4 o más días. En algunos casos, el corticosteroide puede administrarse uno al día, dos veces al día o tres o más veces al día. Por ejemplo, el corticosteroide, por ejemplo, dexametasona, puede administrarse en algunos ejemplos a 10 mg (o equivalente) IV dos veces al día durante tres días.

[0292] En algunos casos, la dosis de corticosteroide, por ejemplo, glucocorticoide, se administra en dosis cada vez más bajas por tratamiento. Por lo tanto, en algunos de estos regímenes de tratamiento, la dosis de corticosteroides se reduce gradualmente. Por ejemplo, el corticosteroide puede administrarse a una dosis inicial (o una dosis equivalente, como con referencia a la dexametasona) de 4 mg, y en cada administración sucesiva la dosis puede reducirse, de modo que la dosis sea de 3 mg para la próxima administración, 2 mg para la siguiente administración y 1 mg para la siguiente administración.

[0293] Generalmente, la dosis de corticosteroide administrada depende del corticosteroide específico, ya que existe una diferencia en la potencia entre diferentes corticosteroides. Normalmente se entiende que los fármacos varían en potencia y que, por lo tanto, las dosis pueden variar para obtener efectos equivalentes. La Tabla 4 muestra la equivalencia en términos de potencia para varios glucocorticoides y vías de administración. La potencia equivalente en dosificación clínica es bien conocida. La información relacionada con la dosificación equivalente de esferoides (de una manera no cronoterapéutica) se puede encontrar en el British National Formulary (BNF) 37, marzo de 1999.

[0294] Por lo tanto, en algunos casos, el esteroide se administra en una cantidad de dosificación equivalente de o de aproximadamente 1,0 mg a 20 mg de dexametasona por día, tal como 1,0 mg a 15 mg de dexametasona por día, 1,0 mg a 10 mg de dexametasona por día, 2,0 mg a 8 mg de dexametasona por día, o 2,0 mg a 6,0 mg de dexametasona por día, cada uno inclusive. En algunos casos, el esteroide se administra en una dosis equivalente de aproximadamente 4 mg 0 aproximadamente 8 mg de dexametasona por día.

[0295] En algunos casos, el esteroide se administra si la fiebre persiste después del tratamiento con tocilizumab. Por ejemplo, en algunos casos, la dexametasona se administra por vía oral o intravenosa en una dosis de 5 a 10 mg cada 6 a 12 horas con fiebre continua. En algunos casos, tocilizumab se administra junto con o después de la suplementación con oxígeno.

2. Otros agentes

[0296] En algunos casos, el agente, por ejemplo, un agente dirigido a la toxicidad, que trata o mejora los síntomas de una toxicidad de inmunoterapia y/o una terapia celular, como SLC o neurotoxicidad, es uno que se dirige a una citocina, por ejemplo, es un antagonista o inhibidor de una citocina, como el factor de crecimiento transformante beta (TGF-beta), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), IL-2, MIP1 p (CCL4), TNF alfa, IL-1, interferón gamma (IFN-gamma) o proteína quimioatrayente de monocitos-1 (MCP-1). En algunos casos, el agente que trata o mejora los síntomas de una toxicidad de una inmunoterapia y/o una terapia celular, como SLC o neurotoxicidad, es uno que se dirige (por ejemplo, inhibe o es un antagonista de) un receptor de citoquina, como IL receptor -6 (IL-6R), receptor de IL-2 (IL-2R/CD25), receptor de MCP-1 (CCL2) (CCR2 o CCR4), un receptor de TGF-beta (TGF-beta I, II o III), receptor de IFN-gamma (iFn GR), receptor de MIP1 p (p. ej., CCR5), receptor de TNF alfa (p. ej., TNFR1), receptor de lL-1 (IL1 -Ra/IL-1 Rp) o receptor de lL-10 (lL-10R).

[0297] La cantidad de un agente seleccionado que trata o mejora los síntomas de una toxicidad de una inmunoterapia y/o una terapia celular, tal como SLC o neurotoxicidad que se administrará para mejorar los síntomas o los efectos adversos de una toxicidad de una inmunoterapia y/o una terapia celular, como SLC o neurotoxicidad, puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Ejemplos de eventos adversos incluyen, pero no se limitan a un aumento de la alanina aminotransferasa, un aumento del aspartato aminotransferasa, escalofríos, neutropenia febril, dolor de cabeza, hipotensión, disfunción ventricular izquierda, encefalopatía, hidrocefalia, convulsiones y/o temblores.

[0298] En algunos casos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de aproximadamente 30 mg a 5000 mg, tal como 50 mg a 1000 mg, 50 mg a 500 mg, 50 mg a 200 mg, 50 mg a 100 mg, 100 mg a 1000 mg, 100 mg a 500 mg, 100 mg a 200 mg, 200 mg a 1000 mg, 200 mg a 500 mg o 500 mg a 1000 mg.

[0299] En algunos casos, el agente se administra desde o desde aproximadamente 0,5 mg/kg hasta 100 mg/kg, como desde o desde aproximadamente 1 mg/kg hasta 50 mg/kg, 1 mg/kg hasta 25 mg/kg, 1 mg/kg a 10 mg/kg, 1 mg/kg a 5 mg/kg, 5 mg/kg a 100 mg/kg, 5 mg/kg a 50 mg/kg, 5 mg/kg a 25 mg/kg, 5 mg/kg a 10 mg/kg, 10 mg/kg a 100 mg/kg, 10 mg/kg a 50 mg/kg, 10 mg/kg a 25 mg/kg, 25 mg/kg a 100 mg/kg, 25 mg/kg a 50 mg/kg a 50 mg/kg a 100 mg/kg. En algunos casos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg kg a 4 mg/kg o 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive. En algunos aspectos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de al menos o al menos alrededor de 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg o más. En algunos casos, el agente se administra a una dosis de 4 mg/kg u 8 mg/kg.

[0300] En algunos casos, el agente se administra mediante inyección, por ejemplo, inyecciones intravenosas o subcutáneas, inyección intraocular, inyección periocular, inyección subretiniana, inyección intravítrea, inyección transseptal, inyección subescleral, inyección intracoroidea, inyección intracameral, inyección subconjetval, inyección subconjuntival, inyección sub-Tenon, inyección retrobulbar, inyección peribulbar o parto yuxtaescleral posterior. En algunos casos, se administran por vía parenteral, intrapulmonar e intranasal y, si se desea para el tratamiento local, administración intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea.

[0301] En algunos casos, la cantidad del agente se administra alrededor o aproximadamente dos veces al día, diariamente, cada dos días, tres veces a la semana, semanalmente, cada dos semanas o una vez al mes.

[0302] En algunos casos, el agente se administra como parte de una composición o formulación, tal como una composición o formulación farmacéutica como se describe a continuación. Así, en algunos casos, la composición que comprende el agente se administra como se describe a continuación. En otros aspectos, el agente se administra solo y puede administrarse por cualquier vía de administración aceptable conocida o por una descrita en el presente documento, tal como con respecto a las composiciones y formulaciones farmacéuticas.

[0303] En algunos casos, el agente que trata o mejora los síntomas de una toxicidad de la inmunoterapia y/o la terapia celular, como SLC o neurotoxicidad, es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno. En algunos casos, el agente es tocilizumab, siltuximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 o FM101.

[0304] En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de IL-6 o del receptor de IL-6 (IL-6R). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IL-6, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a IL-6 o IL-6R. Por ejemplo, en algunos casos, el agente es o comprende tocilizumab (atlizumab) o sarilumab, anticuerpos anti-IL-6R. En algunos casos, el agente es un anticuerpo anti-IL-6R descrito en la Patente de EE. UU. N° 8.562.991. En algunos casos, el agente que se dirige a la IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6, como siltuximab, elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301, FM101, o olokizumab (CDP6038). En algunos aspectos, el agente puede neutralizar la actividad de IL-6 al inhibir las interacciones ligandoreceptor. La viabilidad de este tipo general de enfoque se ha demostrado con un antagonista del receptor natural para la interleucina-1. Véase Harmurn, C. H. y col., Nature (1990) 343:336-340. En algunos aspectos, el antagonista o inhibidor de IL-6/IL-6R es una muteína de IL-6, como la descrita en la patente de EE. IL-6R es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

[0305] En algunos casos, el agente es tocilizumab. En algunos casos, el tocilizumab se administra como una intervención temprana de acuerdo con los métodos descritos en una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a 12 mg/kg, tal como aproximadamente 4 mg/kg, 8 mg/kg o 10 mg/kg. En algunos casos, el tocilizumab se administra por infusión intravenosa. En algunos casos, el tocilizumab se administra para una fiebre persistente de más de 39 °C que dura 10 horas y que no responde al paracetamol. En algunos casos, se proporciona una segunda administración de tocilizumab si los síntomas reaparecen después de 48 horas de la dosis inicial.

[0306] En algunos casos, el agente es un agonista o estimulador de TGF-p o un receptor de TGF-p (p. ej., receptor I, II o III de TGF-p). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que aumenta la actividad de TGF-p, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a TGF-p o uno de sus receptores. En algunos casos, el agente que es un agonista o estimulador de TGF-p y/o su receptor es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

[0307] En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de MCP-1 (CCL2) o un receptor de MCP-1 (p. ej., receptor de MCP-1 CCR2 o CCR4). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de MCP-1, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a MCP-1 o uno de sus receptores (CCR2 o CCR4). En algunos casos, el antagonista o inhibidor de MCP-1 es cualquiera de los descritos en Gong et al. J Exp Med. 7 de julio de 1997; 186(1): 131-137 o Shahrara et al. J Immunol 2008; 180:3447-3456. En algunos casos, el agente que es antagonista o inhibidor de MCP-1 y/o su receptor (CCR2 o CCR4) es una molécula pequeña, una proteína o un péptido, o un ácido nucleico.

[0308] En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de IFN-y o un receptor de IFN-y (IFNGR). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IFN-y, como un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno que se une a IFN-y o su receptor (IFNGR). En algunos aspectos, el anticuerpo neutralizante de IFN-gamma es cualquiera descrito en Dobber et al. Cell Immunol. 1995 febrero; 160 (2): 185-92 u Ozmen et al. J Immunol. 1 de abril de 1993; 150(7):2698-705. En algunos casos, el agente que es antagonista o inhibidor de IFN-y/IFNGR es una molécula pequeña, una proteína o un péptido, o un ácido nucleico.

[0309] En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de IL-10 o del receptor de IL-10 (IL-10R). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IL-10, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a IL-10 o IL-10R. En algunos aspectos, el anticuerpo neutralizante de IL-10 es cualquiera de los descritos en Dobber et al. Cell Immunol. 1995 febrero; 160(2): 185-92 o Hunter et al. J Immunol. 1 de junio de 2005; 174 (11): 7368-75. En algunos casos, el agente que es antagonista o inhibidor de IL-10/IL-10R es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

B. Composiciones y formulaciones

[0310] En algunos casos, los agentes, por ejemplo, agentes dirigidos a la toxicidad, se proporcionan como una composición o formulación, tal como una composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones se pueden usar de acuerdo con los métodos descritos, como en una intervención temprana para la prevención, el tratamiento o la mejora de una toxicidad, como para retrasar, atenuar, reducir el SLC o la neurotoxicidad en el sujeto.

[0311] En algunos casos, los agentes dirigidos a la toxicidad se formulan con un vehículo farmacéutico. Dichos vehículos pueden incluir, por ejemplo, vehículos como un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra el agente. Los ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de EW Martin. Tales composiciones contendrán una cantidad terapéuticamente eficaz del agente, generalmente en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de vehículo para proporcionar la forma adecuada para la administración al paciente. Dichos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, como agua y aceites, incluidos los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral y aceite de sésamo. Las soluciones salinas y las soluciones acuosas de dextrosa y glicerol también se pueden emplear como vehículos líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Las composiciones farmacéuticas pueden contener uno o más diluyentes, adyuvantes, antiadherentes, aglutinantes, recubrimientos, rellenos, saborizantes, colorantes., lubricante(s), deslizante(s), conservante(s), detergente(s), sorbente(s), agente(s) emulsionante(s), excipiente(s) farmacéutico(s), agente(s) amortiguador(es) de pH o edulcorante(s) y una combinación de los mismos. En algunos casos, la composición farmacéutica puede ser líquida, sólida, un polvo liofilizado, en forma de gel y/o una combinación de los mismos. En algunos aspectos, la elección del vehículo está determinada en parte por el agente particular y/o por el método de administración.

[0312] En algunos casos, la composición farmacéutica puede contener conservantes. Los conservantes adecuados pueden incluir, por ejemplo, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sodio y cloruro de benzalconio. En algunos aspectos, se utiliza una mezcla de dos o más conservantes. El conservante o mezclas de los mismos están típicamente presentes en una cantidad de aproximadamente 0,0001 % a aproximadamente 2 % en peso de la composición total. Los portadores se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a edición, Osol, A. Ed. (1980). Los vehículos farmacéuticamente aceptables generalmente no son tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas e incluyen, pero no se limitan a: tampones como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos tales como metilparabeno o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales como polietilenglicol (PEG).

[0313] Los agentes tamponadores en algunos aspectos están incluidos en las composiciones. Los agentes tamponadores adecuados incluyen, por ejemplo, ácido cítrico, citrato de sodio, ácido fosfórico, fosfato de potasio y varios otros ácidos y sales. En algunos aspectos, se usa una mezcla de dos o más agentes tamponadores. El agente tampón o mezclas de los mismos están típicamente presentes en una cantidad de aproximadamente 0,001 % a aproximadamente 4 % en peso de la composición total. Se conocen métodos para preparar composiciones farmacéuticas administrables. Los métodos ejemplares se describen con más detalle en, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21a edición. (1 de mayo de 2005).

[0314] En algunos casos, los agentes se administran en forma de sal, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen las derivadas de ácidos minerales, como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico y sulfúrico, y ácidos orgánicos, como los ácidos tartárico, acético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucónico, succínico y arilsulfónico, por ejemplo, ácido p-toluenosulfónico.

[0315] Los ingredientes activos pueden quedar atrapados en microcápsulas, en sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. En ciertos casos, la composición farmacéutica se formula como un complejo de inclusión, tal como un complejo de inclusión de ciclodextrina, o como un liposoma. Los liposomas pueden servir para dirigir el agente a un tejido particular. Están disponibles muchos métodos para preparar liposomas, tales como los descritos, por ejemplo, en Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) y las patentes estadounidenses 4.235.871, 4.501.728, 4.837.028 y 5.019.369.

[0316] La composición farmacéutica en algunos aspectos puede emplear sistemas de administración de liberación prolongada, liberación retardada y liberación sostenida de manera que la administración de la composición se produzca antes y con tiempo suficiente para provocar la sensibilización del sitio a tratar. Muchos tipos de sistemas de entrega de liberación están disponibles y son conocidos. Dichos sistemas pueden evitar administraciones repetidas de la composición, aumentando así la comodidad para el sujeto y el médico.

[0317] La composición farmacéutica en algunos casos contiene agentes en cantidades eficaces para mejorar la toxicidad y/o para prevenir, retrasar o atenuar el desarrollo o el riesgo de desarrollar una toxicidad, tal como una cantidad terapéuticamente eficaz o profilácticamente eficaz. La eficacia terapéutica o profiláctica en algunos casos se controla mediante la evaluación periódica de los sujetos tratados. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la condición, el tratamiento se repite hasta que ocurre la supresión deseada de la toxicidad o los síntomas asociados con la toxicidad y/o el riesgo de desarrollar la toxicidad ha pasado. Sin embargo, otros regímenes de dosificación pueden ser útiles y pueden determinarse. La dosificación deseada puede administrarse mediante la administración en bolo único de la composición, mediante administraciones en bolo múltiples de la composición o mediante la administración por infusión continua de la composición.

[0318] Los agentes se pueden administrar por cualquier medio adecuado, por ejemplo, por infusión en bolo, por inyección, por ejemplo, inyecciones intravenosas o subcutáneas, inyección intraocular, inyección periocular, inyección subretiniana, inyección intravítrea, inyección transseptal, inyección subescleral, inyección intracoroidea, inyección intracameral, inyección subconjetval, inyección subconjuntival, inyección sub-Tenon, inyección retrobulbar, inyección peribulbar o administración yuxtaescleral posterior. En algunos casos, se administran por vía parenteral, intrapulmonar e intranasal y, si se desea para el tratamiento local, administración intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea. En algunos casos, una dosis determinada se administra mediante una única administración en bolo del agente. En algunos casos, se administra mediante múltiples administraciones en bolo del agente.

[0319] Para la mejora de una toxicidad y/o para retrasar, atenuar para prevenir el riesgo de una toxicidad, la dosificación apropiada puede depender del tipo de toxicidad a tratar, el tipo de agente o agentes, el tipo de células o receptores recombinantes administrados previamente al sujeto, la gravedad y el curso de la enfermedad, si el agente o las células se administran con fines preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial clínico del sujeto y la respuesta al agente o a las células, y la discreción del médico tratante. En algunos casos, las composiciones se administran adecuadamente al sujeto de una vez o durante una serie de tratamientos.

[0320] Las células o agentes pueden administrarse utilizando técnicas, formulaciones y/o dispositivos de administración estándar. Se describen formulaciones y dispositivos, tales como jeringas y viales, para el almacenamiento y la administración de las composiciones. Cuando se administra una composición terapéutica (p. ej., una composición farmacéutica que contiene un agente que trata o mejora los síntomas de una toxicidad, como SLC o neurotoxicidad), generalmente se formulará en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, emulsión).

[0321] Las formulaciones incluyen las de administración oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o en supositorios. En algunos casos, el agente se administra por vía parenteral. En algunos casos, el agente se administra a un sujeto utilizando la administración sistémica periférica por vía intravenosa, inyección intraperitoneal o subcutánea.

[0322] En algunos casos, las composiciones se proporcionan como preparaciones líquidas estériles, por ejemplo, soluciones acuosas isotónicas, suspensiones, emulsiones, dispersiones o composiciones viscosas, que en algunos aspectos pueden tamponarse a un pH seleccionado. Las preparaciones líquidas normalmente son más fáciles de preparar que los geles, otras composiciones viscosas y las composiciones sólidas. Además, las composiciones líquidas son algo más cómodas de administrar, especialmente mediante inyección. Las composiciones viscosas, por otro lado, se pueden formular dentro del rango de viscosidad apropiado para proporcionar períodos de contacto más prolongados con tejidos específicos. Las composiciones líquidas o viscosas pueden comprender vehículos, que pueden ser un disolvente o un medio dispersante que contiene, por ejemplo, agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, polioles (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos.

[0323] Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el agente en un disolvente, como mezclado con un vehículo, diluyente o excipiente adecuado, como agua estéril, solución salina fisiológica, glucosa, dextrosa o similares. Las composiciones también se pueden liofilizar. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares tales como agentes humectantes, dispersantes o emulsionantes (p. ej., metilcelulosa), agentes amortiguadores del pH, gelificantes o aditivos que mejoran la viscosidad, conservantes, agentes aromatizantes, colorantes y similares, según la vía de administración y la preparación deseada. Los textos estándar pueden consultarse en algunos aspectos para preparar preparaciones adecuadas.

[0324] Se pueden añadir varios aditivos que mejoran la estabilidad y esterilidad de las composiciones, incluidos conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y tampones. La prevención de la acción de los microorganismos puede garantizarse mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Se pueden preparar preparaciones de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en forma de artículos moldeados, por ejemplo, películas o microcápsulas.

[0325] Las formulaciones a utilizar para la administración in vivo son generalmente estériles. La esterilidad puede lograrse fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas de filtración estériles.

[0327] En algunos casos, los agentes dirigidos a la toxicidad se formulan y administran típicamente en formas de dosificación unitaria o formas de dosificación múltiple. Cada dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada de compuesto terapéuticamente activo suficiente para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con el portador, vehículo o diluyente farmacéutico requerido. En algunos casos, las formas de dosificación unitaria incluyen, entre otras, tabletas, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles y soluciones o suspensiones orales, y emulsiones de agua y aceite que contienen cantidades adecuadas de los compuestos o farmacéuticamente derivados aceptables de los mismos. Las formas de dosis unitarias pueden contener ampollas y jeringas o tabletas o cápsulas envasadas individualmente. Las formas de dosis unitaria se pueden administrar en fracciones o múltiplos de las mismas. En algunos casos, una forma de dosis múltiple es una pluralidad de formas de dosis unitarias idénticas envasadas en un solo recipiente para administrarse en forma de dosis unitaria segregada. Los ejemplos de formas de dosis múltiples incluyen viales, botellas de tabletas o cápsulas o botellas de pintas o galones.

III. DEFINICIONES

[0328] A menos que se defina lo contrario, todos los términos de la técnica, las notaciones y otros términos o terminología técnica y científica utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entienden los expertos en la técnica a la que se refiere el tema reivindicado. En algunos casos, los términos con significados comúnmente entendidos se definen aquí para mayor claridad y/o para facilitar la referencia, y la inclusión de tales definiciones aquí no debe interpretarse necesariamente como una diferencia sustancial sobre lo que generalmente se entiende en la técnica.

[0329] Los términos "polipéptido" y "proteína" se usan indistintamente para referirse a un polímero de residuos de aminoácidos y no se limitan a una longitud mínima. Los polipéptidos, incluidos los receptores descritos y otros polipéptidos, por ejemplo, enlazadores o péptidos, pueden incluir residuos de aminoácidos que incluyen residuos de aminoácidos naturales y/o no naturales. Los términos también incluyen modificaciones posteriores a la expresión del polipéptido, por ejemplo, glicosilación, sialilación, acetilación y fosforilación. En algunos aspectos, los polipéptidos pueden contener modificaciones con respecto a una secuencia nativa o natural, siempre que la proteína mantenga la actividad deseada. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, como a través de mutagénesis dirigida al sitio, o pueden ser accidentales, como a través de mutaciones de huéspedes que producen las proteínas o errores debido a la amplificación por PCR.

[0330] El término "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está en tal forma que permite que la actividad biológica de un ingrediente activo contenido en ella sea eficaz, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto para el cual se administraría la formulación.

[0331] Un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un ingrediente en una formulación farmacéutica, distinto de un ingrediente activo, que no es tóxico para un sujeto. Un vehículo farmacéuticamente aceptable incluye, entre otros, un tampón, un excipiente, un estabilizador o un conservante.

[0332] Como se usa en el presente documento, un "sujeto" es un mamífero, como un ser humano u otro animal, y normalmente es un ser humano. En algunos casos, el sujeto, por ejemplo, el paciente, al que se administra el agente o los agentes, las células, las poblaciones celulares o las composiciones, es un mamífero, normalmente un primate, como un ser humano. En algunos casos, el primate es un mono o un simio. El sujeto puede ser hombre o mujer y puede tener cualquier edad adecuada, incluidos sujetos lactantes, juveniles, adolescentes, adultos y geriátricos. En algunos casos, el sujeto es un mamífero no primate, como un roedor.

[0333] Como se usa en el presente documento, "tratamiento" (y variaciones gramaticales del mismo, como "tratar" o "tratado") se refiere a la mejora o reducción completa o parcial de una enfermedad, afección o trastorno, o un síntoma, efecto adverso o resultado, o fenotipo asociado con el mismo. Los efectos deseables del tratamiento incluyen, pero no se limitan a la prevención de la aparición o recurrencia de la enfermedad, el alivio de los síntomas, la disminución de cualquier consecuencia patológica directa o indirecta de la enfermedad, la prevención de la metástasis, la disminución de la tasa de progresión de la enfermedad, la mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión o mejor pronóstico. Los términos no implican la curación completa de una enfermedad o la eliminación completa de cualquier síntoma o efecto(s) en todos los síntomas o resultados.

[0334] Como se usa en el presente documento, "retrasar el desarrollo de una enfermedad" significa diferir, dificultar, retardar, retrasar, estabilizar, suprimir y/o posponer el desarrollo de la enfermedad (tal como el cáncer). Este retraso puede variar en la duración del tiempo, dependiendo de la historia de la enfermedad y/o del individuo que se está tratando. Como es evidente para un experto en la materia, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, en el sentido de que el individuo no desarrolle la enfermedad. Por ejemplo, un cáncer en etapa tardía, como el desarrollo de metástasis, puede retrasarse.

[0335] "Prevenir", como se usa en el presente documento, incluye proporcionar profilaxis con respecto a la aparición o recurrencia de una enfermedad en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad pero que aún no ha sido diagnosticado con la enfermedad. En algunos casos, los agentes, células y composiciones descritos se usan para retrasar el desarrollo de una enfermedad o para retrasar la progresión de una enfermedad.

[0336] Como se usa en el presente documento, "suprimir" una función o actividad es reducir la función o actividad en comparación con las mismas condiciones excepto por una condición o parámetro de interés, o alternativamente, en comparación con otra condición. Por ejemplo, las células que suprimen el crecimiento del tumor reducen la tasa de crecimiento del tumor en comparación con la tasa de crecimiento del tumor en ausencia de células.

[0337] Una "cantidad eficaz" de un agente, por ejemplo, una formulación farmacéutica, agente, células o composición, en el contexto de la administración, se refiere a una cantidad eficaz, en dosis/cantidades y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado deseado, tal como un resultado terapéutico o profiláctico.

[0338] Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de una composición, por ejemplo, una formulación farmacéutica que comprende agentes o células, se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado terapéutico deseado, como para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno, y/o un efecto farmacocinético o farmacodinámico del tratamiento. La cantidad terapéuticamente eficaz puede variar según factores tales como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del sujeto, y los agentes o poblaciones de células administradas. En algunos casos, los métodos descritos implican la administración de agentes, células y/o composiciones en cantidades eficaces, por ejemplo, cantidades terapéuticamente eficaces.

[0339] Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, en las dosis y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, pero no necesariamente, dado que se usa una dosis profiláctica en sujetos antes o en una etapa más temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente efectiva será menor que la cantidad terapéuticamente efectiva.

IV. EJEMPLOS

[0340] Los siguientes ejemplos se incluyen solo con fines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención.

Ejemplo 1 Método de intervención temprana para prevenir o reducir la toxicidad en pacientes con cáncer tratados con células T autólogas que expresan CAR

[0341] A una cohorte de sujetos (n=6) con leucemia linfoblástica aguda (LLA) pediátrica se les administraron células T autólogas que expresan un anti-CD 19 receptor de antígeno quimérico (CAR). La construcción que codifica CAR también incluía un ácido nucleico que codificaba EGFR truncado (EGFRt), para uso como marcador. Antes de la administración de las células, los pacientes se sometieron a leucaféresis y fueron tratados con un régimen de quimioterapia de acondicionamiento que incluía fludarabina y ciclofosfamida. Para generar los linfocitos T que expresan CAR autólogos, los linfocitos T se aislaron mediante enriquecimiento basado en inmunoafinidad a partir de muestras de leucaféresis de sujetos individuales, se activaron y transdujeron con un vector viral que codifica un CAR anti-CD 19, seguido de expansión.

[0342] Antes de la administración de las células T que expresan CAR, los sujetos fueron tratados con 30 mg/m2 de fludarabina al día durante 3 días y 300 mg/m2 de ciclofosfamida al día durante 3 días. En d=0, los sujetos se trataron luego con 0,5 - 10 x 106 células/kg de células T que expresan CAR.

[0343] Como tratamiento temprano o preventivo para prevenir o mejorar las toxicidades potenciales, a los sujetos se les administraron agentes capaces de tratar o prevenir tales toxicidades, en un punto de tiempo anterior a la aparición de toxicidad grave y/o antes de signos o síntomas de neurotoxicidad. Al primer signo de fiebre sostenida después de la administración de células T que expresan CAR (p. ej., una fiebre que no remitió con la administración de un antipirético), los sujetos fueron tratados con el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tocilizumab a 4 mg/kg o 8 mg/kg. En sujetos que presentan hipotensión, como hipotensión en un grado que indica que el sujeto debe ser tratado con terapia presora de dosis baja, a los sujetos se les administró el esteroide dexametasona, comenzando en el momento de dicha hipotensión, como en el momento de la administración de dicha terapia presora. Si correspondía, a dichos sujetos se les administró dexametasona a 5-10 mg/día durante dos días.

[0344] En varios puntos de tiempo en relación con el tratamiento, se evaluó la carga tumoral en los sujetos. En el día 63+, cada uno de los sujetos de esta cohorte exhibió una remisión completa (RC) negativa para la enfermedad residual mínima (ERM), con una persistencia de CAR-T de más del 80 % de la dosis biológicamente efectiva (BED), medida por el nivel de aplasia de células B (BCA).

[0345] Uno de los seis sujetos en esta cohorte desarrolló hipotensión que requirió terapia presora, y ninguno (0/6) de los sujetos desarrolló signos o síntomas de neurotoxicidad severa (resultado del SNC) o exhibió convulsiones. Los resultados demuestran que la intervención preventiva exitosa con agente(s) dirigido(s) a la toxicidad mostró que los sujetos tratados de forma preventiva con un régimen que involucra una intervención temprana usando agentes generalmente usados para apuntar los resultados de las toxicidades observadas después de la terapia CAR-T (antes del desarrollo de SLC grave o síntomas de neurotoxicidad) exhibieron una ausencia de cualquier resultado del SNC o neurotoxicidad y de SLC grave, mientras que también exhibieron persistencia y eficacia continua de las células CAR-T a lo largo del tiempo.

Ejemplo 2 Método de intervención temprana para prevenir o reducir la toxicidad en pacientes con cáncer tratados con células T autólogas que expresan CAR

[0346] Como una extensión del estudio, se evaluaron las células a cohortes de sujetos (n total = 43) con leucemia linfoblástica aguda (LLA) pediátrica se les administró células T autólogas que expresaban un receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD 19 como se describe en el Ejemplo 1.

[0347] En esta evaluación, a los sujetos de una primera cohorte (n=20) se les administró un tratamiento para la toxicidad después de la evidencia o señal, si corresponde, de una toxicidad limitante de la dosis después de la infusión de células CAR-T y (2) los sujetos en una segunda cohorte (n = 23) se administró una terapia de intervención temprana para mejorar o prevenir la toxicidad o el resultado tóxico, antes de desarrollar o exhibir toxicidad limitante de la dosis. En concreto, en la primera cohorte (n=20), los sujetos fueron tratados con el anticuerpo anti-receptor de IL-6 tocilizumab a 8 mg/kg con o sin esteroides, en caso de toxicidad limitante de la dosis. A los sujetos de la segunda cohorte (n=23) se les administró un tratamiento temprano o preventivo del anticuerpo anti-receptor de IL-6 tocilizumbab y, opcionalmente, dexametasona si, luego de la administración de las células T que expresan CAR, presentaban fiebre persistente de más de igual a 39°C, a pesar de antipiréticos durante 10 horas, hipotensión persistente o recurrente después del bolo inicial de líquidos y/o inicio del suplemento de oxígeno. En varios puntos de tiempo relativos al tratamiento, se determinó el injerto de células T CAR y aplasia de células B mediante citometría de flujo y se evaluó la carga tumoral en los sujetos. La tasa general de remisión completa (RC) negativa para la enfermedad residual mínima (ERM) fue del 93 % (40/43) y no se vio afectada por el uso de tocilizumab o dexametasona. Las tasas de R^cnegativa para ERM en pacientes que recibieron tocilizumab sin esteroides, tocilizumab con esteroides o esteroides solos fueron similares (89 % frente a 100 % frente a 100 %, respectivamente). Se observó una expansión continua de células T CAR en sangre periférica en sujetos que recibieron tocilizumab y/o esteroides. Los resultados demuestran que el tratamiento de intervención temprana con tocilizumab o dexametasona no afectó la eficacia de la terapia con células T CAR, el injerto de las células T CAR o la persistencia de las células T CAR. Las tasas generales de SLC observadas en las dos cohortes fueron del 91 % (21/23) y del 95 % (19/20), respectivamente. Las tasas de SLC grave fueron del 30 % (9/23) y del 15 % (3/20), respectivamente, p=0,3. Los resultados de la estrategia de intervención temprana se muestran en la Tabla 5, a continuación.

Tabla 5:

[0348] Se evaluó la proliferación celular en sujetos que recibieron intervención por toxicidad grave. Los resultados muestran que la expansión de las células T CAR no se vio afectada por la administración de tocilizumab, como se muestra en la Figura 3. El número máximo de células T con CAR por microlitro de sangre periférica fue significativamente mayor en pacientes con SLC grave (FIG. 4A) y neurotoxicidad grave (FIG. 4B) que en aquellos sin ella (p = 0,002 y p = 0,0015, respectivamente). Los resultados muestran que los pacientes con números máximos de células T con CAR pueden presentar un mayor riesgo de SLC grave y neurotoxicidad.

[0349] Se evaluaron varios biomarcadores el día 28 en sujetos con y sin SLC grave para cada cohorte. Las Figuras 2A, 2B, 2C y 2D muestran la correlación de los niveles máximos de citoquinas para IL-6, IFN-y, Granzima B e IL-2, respectivamente. Algunos biomarcadores exhibieron diferencias estadísticamente significativas entre sujetos dentro de la misma cohorte con (sí) y sin (no) SLC grave.

[0350] La Tabla 6 presenta datos de eventos adversos para todos los sujetos en ambas cohortes (N=43) que posiblemente, probablemente o definitivamente estaban relacionados con el estudio.

Tabla 6:

[0351] La Tabla 7 presenta datos de eventos de neurotoxicidad para todos los sujetos en ambas cohortes (N=43) que posiblemente, probablemente o definitivamente estaban relacionados con el estudio.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un agente para uso en el tratamiento, prevención, retraso o atenuación del desarrollo de una toxicidad en un sujeto al que se le ha administrado una terapia que comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19, en el que el agente comprende tocilizumab y se administra dentro de las 24 horas del primer signo de fiebre después de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C.

2. Un agente para usar con una terapia en un método para tratar un cáncer, donde dicho método comprende:

administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, donde la terapia comprende células T receptoras de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19; y

administrar al sujeto dicho agente que comprende tocilizumab dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de fiebre tras el inicio de la administración de la terapia, en donde la fiebre comprende que el sujeto tenga una temperatura de al menos o al menos aproximadamente 38,0°C.

3. Una terapia para usar con un agente en un método para tratar un cáncer, donde el método comprende:

administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, donde la terapia comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19; y

4. Un agente y una terapia para usar en un método para tratar un cáncer, en el que el método comprende:

administrar dicha terapia a un sujeto que tiene dicho cáncer, en el que la terapia comprende células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19; y

5. El agente para el uso de la reivindicación 1 o 2, la terapia para el uso de la reivindicación 3, o el agente y la terapia para el uso de la reivindicación 4, donde el agente se administra dentro de aproximadamente 16 horas, dentro de aproximadamente 12 horas, dentro de aproximadamente 8 horas, dentro de aproximadamente 2 horas o dentro de aproximadamente 1 hora después del primer signo de fiebre después del inicio de la administración de la terapia.

6. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5, la terapia para el uso de la reivindicación 3 o 5, o el agente y la terapia para el uso de la reivindicación 4 o 5, donde la fiebre:

es una fiebre sostenida;

es una fiebre que no se reduce o no se reduce en más de 1 °C después del tratamiento con un antipirético y/o en la que la fiebre no se ha reducido en más de 1°C, luego del tratamiento del sujeto con un antipirético; y/o comprende una temperatura que es (i) entre aproximadamente 38,0°C y 42,0°C, 38,0°C y 39,0°C, 39,0°C y 40,0°C o 40,0°C y 42,0°C, cada una inclusive; o (ii) mayor que o mayor que aproximadamente o es o es aproximadamente 38,52C, 39,0°C, 39,5°C, 40,0°C, 41,0°C, 42,0°C.

7. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5 y 6, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3, 5 y 6, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que el agente se administra menos de cinco días después del inicio de la administración de la terapia, menos de cuatro días después del inicio de la administración de la terapia o menos de tres días después del inicio de la administración de la terapia.

8. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-7, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 5-7, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4- 7, en el que el agente comprende además un esteroide, o un antagonista o inhibidor de un receptor de citoquinas o una citoquina seleccionada entre IL-10, IL-10R, IL-6, receptor de IL-6, IFNy, IFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1 p, CCR5, TNFalfa, TNFR1, IL-1 e IL-1 Ralfa/IL-1 beta, donde opcionalmente

el antagonista o inhibidor es o comprende un agente seleccionado entre un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido y un ácido nucleico, además opcionalmente donde el agente u otro tratamiento es o comprende un agente seleccionado del grupo que consiste en situximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 y FM101.

9. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-8, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 5-8, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4-8, en el que el tocilizumab se administra en una cantidad de dosificación de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, 2 mg/kg a 8 mg/kg, 2 mg/kg a 6 mg/kg, 2 mg/kg a 4 mg/kg o 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive, o el tocilizumab se administra en una dosis de al menos o al menos alrededor de 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg u 8 mg/kg; o el tocilizumab se administra en una cantidad de dosificación de o de aproximadamente 8 mg/kg a 12 mg/kg.

10. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-9, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 5-9, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en el que el método comprende además administrar un segundo agente, que opcionalmente es un esteroide, al sujeto, en el que el segundo agente se administra: (i) en un momento que es dentro de los 7 días, 8 días o 9 días después del inicio de la administración de la terapia; (ii) en un momento dentro de las 24 horas posteriores al primer signo de hipotensión tras el inicio de la administración de la terapia; (iii) en un momento en el que el sujeto presente el síndrome de liberación de citoquinas (SLC) de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestre un primer signo de SLC de grado 2 tras el inicio de la administración de la terapia; y/o (i.v.) en un momento en el que el sujeto muestre neurotoxicidad de grado 2 o dentro de las 24 horas posteriores a que el sujeto muestre un primer signo o síntoma de neurotoxicidad de grado 2 tras el inicio de la administración de la terapia.

11. El agente para el uso de la reivindicación 10, la terapia para el uso de la reivindicación 10, o el agente y la terapia para el uso de la reivindicación 10, donde el esteroide se administra dentro de las 24 horas posteriores o al mismo tiempo que el primer signo de hipotensión después del inicio de la administración de la terapia y/o en el que el esteroide se administra simultáneamente con el inicio de una terapia presora.

12. El agente para usar según la reivindicación 10 u 11, la terapia para usar según la reivindicación 10 u 11, o el agente y la terapia para usar según la reivindicación 10 u 11, donde el segundo agente es o comprende un corticosteroide, opcionalmente donde el corticosteroide:

(i) es un glucocorticoide; o

(ii) es o comprende dexametasona o prednisona.

13. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-12, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 5-12, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4-12, donde la toxicidad es o incluye el síndrome de liberación de citocinas (SLC) o una neurotoxicidad.

14. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-13, la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 5-13, o el agente y la terapia para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 4- 13, en el que el sujeto tiene una leucemia o un linfoma.