ES2375843T3 - Procedimientos y compuestos para la preparación de an�?logos de cc-1065. - Google Patents

Abstract

Un procedimiento de fabricación de un compuesto (I) o una sal del mismo, en la que R 1 y R 2 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, -C(O)OR', - C(O)NR'R", o un grupo protector, en el que R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido y heterocicloalquilo no sustituido, R 6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano o alcoxi; y X es halógeno, comprendiendo el procedimiento: la adición de grupos protectores R 1' y R 2' a un compuesto (II) para formar un compuesto (III) en la que R 3 es alquilo sustituido o alquilo no sustituido; y **Fórmula** generar un anillo de cinco miembros que comprende el nitrógeno de amino del compuesto (III) mediante alquilación del anillo de arilo adyacente al nitrógeno seguido del cierre del anillo.

Description

Procedimientos y compuestos para la preparación de análogos de CC-1065

Antecedentes

Se sabe que CC-1065 es una potente citotoxina. CC-1065 se aisló por vez primera a partir de Streptomyces zelensis

5 en 1981 por la Upjohn Company (Hanka y col., J. Antibiot. 31: 121 1 (1978); Martin y col, J. Antibiot. 33: 902 (1980); Martin y col, J. Antibiot. 34: 1119 (1981)) y se encontró que presentaba actividad antitumor y antimicrobiana potente tanto in vitro como en animales experimentales (Li y col., Cancer Res.42: 999 (1982)). El CC-1065 se une a ADN-B de doble hebra dentro del surco menor (Swenson y col, Cancer Res. 42: 2821 (1982)) con la preferencia de secuencia de 5'-d(A/GNTTA)-3' y 5'-(AAAAA)-3' y alquila la posición N3 de la 3'-adenina mediante su unidad de parte

10 izquierda CPI presente en las moléculas (Hurley y col, Science 226: 843 (1984)). A pesar de su potente y amplia actividad antitumor, el CC-1065 no se puede usar en seres humanos debido a que provoca muerte retardada en animales experimentales.

Se conocen en la técnica muchos análogos y derivados de CC-1065. Se ha revisado la investigación en estructura, síntesis y propiedades de muchos de los compuestos. Véase, por ejemplo Boger y col, Angew. Chem. Int. Ed.

15 Engl.35: 1438 (1996); y Boger y col, Chem. Rev. 97: 787 (1997).

Un grupo de Kyowa Hakko Kogya Co., Ltd. ha preparado un número de derivados de CC-1065. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos números 5.101.038; 5.641.780; 5.187.186; 5.070.092; 5.703.080; 5.070.092; 5.641.780; 5.101.038; y 5.084.468; y la solicitud PCT publicada, WO 96/10405 y la solicitud europea publicada 0 537 575 A1.

20 La Upjohn Company (Pharmacia Upjohn) ha sido también activa en la preparación de derivados de CC-1065. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos números 5.739.350; 4.978.757. 5.332. 837 y 4.912.227.

Breve sumario

Una realización es un procedimiento de preparación de un compuesto (1) o una sal del mismo,

25 en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, -C(O)OR', -C(O)NR’R", o un grupo protector, donde R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido y heterocicloalquilo no sustituido, R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano o alcoxi; y X es halógeno, comprendiendo el procedimiento:

30 la adición de grupos protectores R1' y R2’ a un compuesto (II)

(II)

formando un compuesto (III) en la que R3 es alquilo sustituido o alquilo no sustituido; y

se genera un anillo de cinco miembros que comprende el nitrógeno de amino del compuesto (III) mediante alquilación del anillo de arilo adyacente al nitrógeno seguido del cierre del anillo.

Otra realización es un procedimiento de preparación del análogo de CBI CC-1065, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que presenta la siguiente fórmula:

10 en la que X es halo;

X1 y Z se seleccionan cada uno independientemente de O, S y NR8, en la que R8 es un miembro seleccionado de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, y acilo;

R4, R4', R5 y R5' son miembros seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido,

15 alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, halógeno, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(O)R9, SR9, OR9 y CR9=NR10,

en las que R9 y R10 se seleccionan independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, arilo sustituido o arilo no sustituido, heteroarilo

20 sustituido o heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo no sustituido, y peptidilo sustituido o peptidilo no sustituido o las que R9 y R10 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos están combinados opcionalmente formando un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos, y

R11 y R11' son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido;

25 R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano, o alcoxi, y

R7 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido, heteroalquilo no sustituido, difosfatos, trifosfatos, acilo, C(O)R12R13, C(O)OR12, C(O)NR12R13, P(O)(OR12)2, C(O)CHR12R13, SR12 y SiR12R13R14,

donde R12, R13, y R14 son miembros seleccionados independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no

30 sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido y arilo sustituido o arilo no sustituido, o donde R12 y R13 junto con el átomo de nitrógeno o de carbono al que están unidos están combinados opcionalmente formando un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos; comprendiendo el procedimiento:

la adición de grupos protectores R1' y R2’ a un compuesto (II)

formando un compuesto (III)

en la que R3 es alquilo sustituido o alquilo no sustituido;

generando un anillo de cinco miembros que comprende el nitrógeno de amino del compuesto (III) mediante alquilación del anillo de arilo adyacente al nitrógeno seguido de cierre del anillo; y adición de una unidad de unión al compuesto (III) eliminando el grupo protector R1’ y uniendo el resto:

al sustituyente amino del compuesto (III), en el que indica el punto en el que el resto está unido al sustituyente amino.

También se desvela un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo, -C(O)OR', -C(O)NR'R'’ o un grupo protector, donde R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo 15 sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido y heterocicloalquilo no sustituido.

Breve descripción de los dibujos

Se describen realizaciones no limitantes y no exhaustivas de la presente invención con referencia a los siguientes dibujos. En los dibujos, las referencias numéricas iguales se refieren a partes de las diversas figuras a menos que se especifique de otra forma.

Para una mejor comprensión de la presente invención, la referencia se hará a la siguiente descripción detallada que se debe contemplar junto con los dibujos acompañantes, en los que

La FIG. 1 es un esquema de síntesis de una realización de un procedimiento de formación de un análogo de CBI CC-1065;

La FIG. 2 es un esquema de síntesis de otra realización de un procedimiento de formación de un análogo de CBI CC-1065; y

La FIG. 3 es un esquema de síntesis de una tercera realización de un procedimiento de formación de un análogo de CBI CC-1065.

Descripción detallada

Tal como se usa en esta invención, "Boc" se refiere a t-butiloxicarbonilo.

"CPI" se refiere a ciclopropapirrolindol.

"CBI" se refiere a ciclopropabencindol.

"Cbz" es carbobenzoxi.

"DCM," se refiere a diclorometano.

"DMF" es N,N-dimetilformamida.

"FMOC" se refiere a 9-fluorenilmetiloxicarbonilo.

"TEA" se refiere a trietilamina.

"THF" se refiere a tetrahidrofurano.

"EDC" se refiere a clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida.

A menos que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y científicos usados en esta invención presentan por lo general el mismo significado que se entiende habitualmente por un especialista en la técnica a la que pertenece esta invención. Por lo general la nomenclatura usada en esta invención y los procedimientos de laboratorio en cultivo celular, genética molecular, química orgánica y química de ácidos nucleicos e hibridación descritos a continuación es bien conocida y es usada habitualmente en la técnica. Las técnicas y procedimientos se llevan a cabo en general de acuerdo con procedimientos convencionales en la técnica y diversas referencias generales. La nomenclatura usada en esta invención y los procedimientos de laboratorio en química analítica y síntesis orgánica descrita a continuación son bien conocidos y los usados habitualmente en la técnica. Se usan para síntesis química y análisis químico técnicas estándar o modificaciones de las mismas.

El término “agente terapéutico” se pretende que signifique un compuesto que cuando esté presente en una cantidad terapéuticamente efectiva, produzca un efecto terapéutico deseado en un mamífero. Para el tratamiento de carcinomas es deseable que el agente terapéutico sea también capaz de entrar en la célula diana.

El término “citotoxina” se pretende que signifique un agente terapéutico que presente el efecto deseado de ser citotóxico para las células cancerígenas. Citotóxico significa que el agente contrarresta el crecimiento de, o mata, las células.

Los términos “profármaco” y “conjugado de fármaco” se usan en esta invención de forma intercambiable. Ambos se refieren a un compuesto que es relativamente inocuo para las células aún en la forma conjugada pero que se degrada de forma selectiva en una forma farmacológicamente activa mediante condiciones, por ejemplo, enzimas, localizadas dentro o en la proximidad de células diana.

El símbolo

cuando se usa como un enlace o se muestra perpendicular a un enlace indica el punto en el que se une el resto mostrado al resto de la molécula, soporte sólido, sustituyente, etc.

El término “alquilo” por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, a menos que se establezca de otra forma, una cadena lineal o ramificada, o radical hidrocarburo cíclico, o combinación de los mismos, que pueden estar completamente saturados, mono- o poliinsaturados y puede incluir radicales di- y multivalentes, presentando el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-C10 significa de uno a diez carbono). Ejemplos de radicales

hidrocarburos saturados, incluyen, pero sin limitarse a estos, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, nbutilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciclohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y similares. Un grupo alquilo insaturado es uno que presenta uno o más enlaces dobles o enlaces triples. Ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, pero sin limitarse a estos, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3propinilo, 3-butinilo, y homólogos e isómeros superiores. El término “alquilo”, a menos que se indique de otra forma, se entiende también que incluye aquellos derivados de alquilo definidos con más detalle a continuación, tal como “heteroalquilo”. Grupos alquilo, que se limitan a grupos hidrocarburo se denominan “homoalquilo”.

El término “alquileno” por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado de un alcano, como se ejemplifican, pero sin limitar, con -CH2CH2CH2CH2-, e incluye además aquellos grupos descritos a continuación como “heteroalquileno”. De forma típica un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, prefiriéndose en la presente invención aquellos grupos que presenten 10 o menos átomos de carbono. Un “alquilo inferior” o “alquileno inferior” es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que presenta en general ocho o menos átomos de carbono.

El término “heteroalquilo” por sí mismo o en combinación con otro término, significa, a menos que se establezca de otro modo, una cadena lineal o ramificada estable, o radical hidrocarburo cíclico, o combinaciones del mismo, que consiste en un número de átomos de carbono y al menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en O, N, Si y S, y en el que los átomos de nitrógeno, carbono y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El (los) heteroátomo(s) O, N, S y Si pueden estar dispuestos en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo o en la posición en la que el grupo alquilo está unido al resto de la molécula. Ejemplos incluyen, pero sin limitarse a estos, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2,-S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, y -CH=CH-N (CH3)-CH3. Hasta dos heteroátomos pueden ser consecutivos, tal como, por ejemplo, -CH2-NH-OCH3 y -CH2-O-Si(CH3)3. De forma similar el término “heteroalquileno” por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado de heteroalquilo, como se ejemplifica, pero sin limitarse a estos, con -CH2-CH2-S-CH2-CH2- y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Para grupos heteroalquileno los heteroátomos pueden ocupar también uno o ambos de los terminales de la cadena (por ejemplo, alquilenoxi, alquilendioxi, alquilenamino, alquilendiamino, y similares). Los términos “heteroalquilo” y “heteroalquileno” comprenden poli(etilenglicol) y sus derivados (véase, por ejemplo, Shearwater Polymers Catalog, 2001). Además para sustituyentes alquileno y heteroalquileno no se ve implicada orientación alguna del sustituyente con la dirección en la que está escrita la fórmula del sustituyente. Por ejemplo, la fórmula -C(O)2R'- representa tanto -C(O)2R'- como – R’C(O)2-.

El término “inferior” en combinación con los términos “alquilo” o “heteroalquilo” se refiere a un resto que presenta de 1 a 6 átomos de carbono.

Los términos “alcoxi”, “alquilamino”, “alquilsulfonilo” y “alquiltio” (o tioalcoxi) se usan en su sentido convencional, y se refieren a aquellos grupos alquilo unidos al resto de la molécula mediante un átomo de oxígeno, un grupo amino, un grupo SO2 o un átomo de azufre, respectivamente. El término "arilsulfonilo" se refiere a un grupo arilo unido al resto de la molécula mediante un grupo SO2, y el término “sulfhidrilo” se refiere a un grupo SH.

En general un sustituyente “acilo” se selecciona también del grupo descrito a continuación. Como se usa en esta invención el término sustituyente “acilo” se refiere a grupos unidos a, y cumple la valencia de un carbono de carbonilo que está directa o indirectamente unido al núcleo policíclico de los compuestos de la presente invención.

Los términos “cicloalquilo” y “heterocicloalquilo”, por sí mismos o en combinación con otros términos, representan, a menos que se indique de otra forma, versiones cíclicas de “alquilo” sustituido o no sustituido y “heteroalquilo” sustituido o no sustituido, respectivamente. Adicionalmente, para heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la que está unido el heterociclo al resto de la molécula. Ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero sin limitarse a estos, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, y similares. Ejemplos de heterocicloalquilo incluyen, pero sin limitarse a estos, 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridilo), 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3piperidinilo, 4-morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3ilo, 1-piperazinilo, 2-piperazinilo, y similares. Los heteroátomos y átomos de carbono de las estructuras cíclicas están oxidados opcionalmente.

Los términos “halo” o “halógeno”, por sí mismos o como parte de otros sustituyente, significa, a menos que se indique de otra forma, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. De forma adicional, términos tales como “haloalquilo” se entiende que incluyen monoalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo (C1-C4)" se entiende que incluye, pero sin limitarse a estos, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo, y similares.

El término “arilo” significa, a menos que se indique de otra forma, un sustituyente hidrocarburo, sustituido o no sustituido, poliinsaturado, aromático, que puede ser un anillo simple o anillos múltiples (preferiblemente de 1 a 3 anillos) que están condensados conjuntamente o unidos de forma covalente. El término “heteroarilo” se refiere a grupos arilo (o anillos) que contienen de uno a cuatro “heteroátomos seleccionados de N, O, y S, en los que los átomos de nitrógeno, carbono y azufre están opcionalmente oxidados, y el(los) átomo(s) de nitrógeno están

opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo puede estar unido al resto de la molécula a través de un heteroátomo. Ejemplos no limitantes de arilo y grupos heteroarilo incluyen fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, piracinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenilo-4oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5indolilo, 1 -isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo, y 6-quinolilo. Sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillo arilo y heteroarilo indicados anteriormente se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables descritos a continuación. “Arilo” y “heteroarilo” comprende también sistemas de anillo en los que uno o más sistemas de anillo no aromáticos están condensados, o unidos de otro modo, a un sistema de arilo o heteroarilo.

A modo de resumen el término “arilo” cuando se usa en combinación con otros términos (por ejemplo, ariloxi, ariltioxi, arilalquilo) incluye tanto anillos de arilo como de heteroarilo como se definieron anteriormente. Por tanto, el término “arilalquilo” se entiende que incluye aquellos radicales en los que un grupo arilo está unido a un grupo alquilo (por ejemplo, bencilo, fenetilo, piridilmetilo y similares) incluyendo aquellos grupos alquilo en los que se ha reemplazado un átomo de carbono (por ejemplo, un grupo metileno), por ejemplo, con un átomo de oxígeno (por ejemplo, fenoximetilo, 2-piridiloximetilo, 3-(1-naftiloxi)propilo, y similares).

Cada uno de los términos anteriores (por ejemplo, “alquilo”, “heteroalquilo”, “arilo” y “heteroarilo”) incluye tanto formas sustituidas como formas no sustituidas del radical indicado. Se proporcionan a continuación sustituyentes preferidos para cada tipo de radical.

Sustituyentes para los radicales alquilo y heteroalquilo (incluyendo aquellos grupos denominados frecuentemente como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo y heterocicloalquenilo) se denominan en general como “sustituyentes de alquilo” y “sustituyentes de heteroalquilo”, respectivamente, y pueden ser uno o más de una variedad de grupos seleccionados de, pero sin limitarse a estos: -OR', =O, =NR’, =N-OR', -NR'R", -SR', -halógeno, -SiR'R"R'", -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR’R", NR’’C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"’, -NR"C(O)2R’, NR-C(NR'R"R'")=NR"", -NR-C(NR'R")=NR"’, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR’R", -NRSO2R’, -CN y -NO2 en un número que varía de cero a (2m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en tal radical. R', R", R"’ y R"" se refieren cada uno preferiblemente independientemente a hidrógeno, heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, por ejemplo, arilo sustituido con 1 a 3 halógenos, alquilo sustituido o no sustituido, grupos alcoxi o tioalcoxi, o grupos arilalquilo. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente ya que son cada uno grupos R', R", R'" y R"" cuando más de uno de estos grupos está presente. Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno formando estos pueden combinarse con el átomo de nitrógeno formando un anillo de 5, 6 ó 7 miembros. Por ejemplo, se entiende que -NR'R" incluye, pero no se limita a estos, 1-pirrolidinilo y 4-morfolinilo. De la descripción anterior de sustituyentes, un especialista en la técnica entenderá que el término “alquilo” se entiende que incluye grupos que incluyen átomos de carbono unidos a grupos distintos de grupos hidrógeno, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo (por ejemplo, C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3, y similares).

De forma similar a los sustituyentes descritos para el radical alquilo, los sustituyentes arilo y sustituyentes heteroarilo se denominan en general como “sustituyentes arilo” y “sustituyentes heteroarilo” respectivamente y varían y se seleccionan, por ejemplo, de: halógeno, -OR', =O, =NR’ =N-OR', -NR'R", -SR', -halógeno, -SiR'R"R"’, -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR’R", -NR"C(O)R’, -NR'-C(O)NR"R'", -NR"C(O)2R', -NR-C(NR'R")=NR"’, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR’R", -NRSO2R', -CN y -NO2, -R', -N3, -CH(Ph)2, fluoroalcoxi (C1-C4) y fluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía de cero al número total de valencias abiertas en el sistema de anillo aromático; y donde R', R", R'" y R"" se seleccionan preferiblemente independientemente de hidrógeno, alquilo (C1-C8) y heteroalquilo, arilo y heteroarilo no sustituidos, (arilo no sustituido)-alquilo (C1-C4), y (arilo no sustituido)oxi-alquilo (C1-C4). Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada uno de los grupos R se selecciona independientemente ya que son cada uno grupos R', R", R'" y R"", cuando más de uno de estos grupos está presente.

Dos de los sustituyentes arilo en átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyente de fórmula -T-C(O)-(CRR')q-U-, en la que T y U son independientemente -NR-, -O-, -CRR'- o un enlace simple, y q es un número entero de 0 a 3. De forma alternativa, dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyente de fórmula -A-(CH2)r-B-, en la que A y B son independientemente -CRR'-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'

o un enlace simple, y r es un número entero de 1 a 4. Uno de los enlaces simples del nuevo anillo así formado puede estar reemplazado opcionalmente con un enlace doble. De forma alternativa dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyente de fórmula -(CRR')s-X-(CR"R'")d-, donde s y d son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-o -S(O)2NR'-. Los sustituyentes R, R', R" y R'" se seleccionan preferiblemente independientemente de hidrógeno o alquilo (C1-C6) sustituido o no sustituido.

Tal como se usa en esta invención, el término “difosfato” incluye, pero sin limitarse a estos, un éster de ácido fosfórico que contiene dos grupos fosfato. El término “trifosfato” incluye, pero sin limitarse a estos, un éster de ácido

fosfórico que contiene tres grupos fosfato. Por ejemplo, fármacos particulares que presentan un difosfato o un trifosfato incluyen:

Tal como se usa en esta invención, el término “heteroátomo” incluye oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S) y silicio (Si).

El símbolo "R" es una abreviatura general que representa un grupo sustituyente que se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido

o no sustituido, y grupos heterociclilo sustituidos o no sustituidos.

En lo que respecta al término “grupo protector”, los especialistas en la técnica entenderán cómo proteger un grupo funcional determinado de la interferencia con un conjunto seleccionado de condiciones de reacción. Por ejemplo, de grupos protectores útiles, véase Greene y col., PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991. Ejemplos de grupos protectores adecuados incluyen, pero sin limitarse a estos, BOC, FMOC, 2-trimetilsililetoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, 4-metil-1-piperazincarbonilo, 1-metil-1-(4-bifenilil)etoxicarbonilo, difeniloxicarbonilo, bencilo, t-butilo, tetrahidropirano, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, triisopropilsililo, t-butildifenilsililo, 2,2,2-triclorooetiloxicarbonilo, diisopropilmetiloxicarbonilo, viniloxicarbonilo, metoxibenciloxicarbonilo, nitrobenciloxicarbonilo, ciclohexiloxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo, formilo, acetilo, trihaloacetilo, benzoilo, nitrofenilacetilo, 2-nitrobencenosulfonilo, ftalimido, y ditiasuccinoilo.

La expresión “vehículo farmacéuticamente aceptable”, tal como se usa en esta invención, significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga líquida o sólida, diluyente, excipiente, disolvente o material de encapsulamiento, implicados en llevar a cabo o transportar un agente químico. Vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen sales farmacéuticamente aceptables, donde el término “sales farmacéuticamente aceptables” incluye sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicas, en función de los sustituyentes particulares que se encuentran en los compuestos descritos en este documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas se pueden obtener sales de adición de base poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, bien en masa o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico o de magnesio, o una sal similar. Cuando compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas se pueden obtener sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, bien en masa o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos como clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico, o fosforoso y similares, así como también sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónicos o galacturónicos y similares (véase, por ejemplo, Berge y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen tanto funcionalidades básicas como ácidas que permiten que los compuestos se transformen en sales de adición de base o de ácido.

Las formas neutras de los compuestos se regeneran preferiblemente poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto padre de forma convencional. La forma padre del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero de otra forma son equivalentes a la forma padre del compuesto para los fines de la presente invención.

Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que se encuentran en una forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en esta invención son aquellos compuestos que sufren fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas proporcionando los compuestos de la presente invención. Adicionalmente los profármacos se pueden transformar en los compuestos de la presente invención mediante procedimientos químicos o bioquímicos en un ambiente ex vivo. Por ejemplo, los profármacos se pueden transformar lentamente en compuestos de la presente invención cuando se disponen en un depósito de parche transdérmico con un enzima o reactivo químico adecuado.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como también en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y están comprendidas dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se pretende que se encuentren dentro del alcance de la presente invención.

Ciertos compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o enlaces dobles, los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos e isómeros individuales están comprendidos dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención pueden contener también proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar marcados radiológicamente con isótopos radioactivos tales como, por ejemplo, tritio (3H), yodo-125 (125I) o carbono14 (14C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, bien radioactivos o no, se pretende que estén comprendidos dentro del alcance de la presente invención.

Los términos “polipéptido”, “péptido” y “proteína” se usan de forma intercambiable en esta invención para referirse a un polímero de residuos de aminoácido. Los términos aplican a polímeros de aminoácidos en los que uno o más residuos de aminoácido es un mimético químico artificial de un aminoácido de origen natural, así como también polímeros de aminoácidos de origen no natural. Estos términos también comprenden el término “antibiótico”.

El término “aminoácido” se refiere a aminoácidos de origen natural o sintéticos, así como también a análogos de aminoácido y miméticos de aminoácido que funcionan de forma similar a los aminoácidos de origen natural. Aminoácidos de origen natural son aquellos codificados con el código genético, así como también aquellos aminoácidos que son modificados posteriormente, por ejemplo, hidroxiprolina, y-carboxiglutamato, y O-fosfoserina. Análogos de aminoácido se refiere a compuestos que presentan la misma estructura química básica que un aminoácido de origen natural, es decir un carbono a que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R, por ejemplo, homoserina, norleucina, metioninasulfóxido, metioninametilsulfonio. Tales análogos presentan grupos R modificados (por ejemplo, norleucina) o esqueletos de péptido modificados, pero conservan la misma estructura química básica que un aminoácido de origen natural. Un aminoácido que se puede usar en particular es citrulina, que es un precursor de arginina y está implicado en la formación de urea en el hígado. Miméticos de aminoácidos se refiere a compuestos químicos que presentan una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido, pero funciona de una forma similar a un aminoácido de origen natural. El término “aminoácido no natural” se pretende que represente la forma estereoquímica “D” de los veinte aminoácidos de origen natural descritos anteriormente. Se entiende adicionalmente que el término aminoácido no natural incluye homólogos de aminoácidos naturales y formas sintéticamente modificadas de aminoácidos naturales. Las formas modificadas sintéticamente incluyen, pero sin limitarse a estas, aminoácidos que presentan cadenas de alquileno recortadas o alargadas hasta dos átomos de carbono, aminoácidos que comprenden grupos arilo opcionalmente sustituidos, y aminoácidos que comprenden grupos halogenados, preferiblemente grupos alquilo y arilo halogenados. Cuando se unen a un conector o conjugado de la invención el aminoácido está en la forma de una “cadena lateral de aminoácido”, donde el grupo ácido carboxílico del aminoácido se ha reemplazado con un grupo ceto (C(O)). Por tanto, por ejemplo, una cadena lateral de alanina es -C(O)-CH(NH2)-CH3, y así sucesivamente.

Aminoácidos y péptidos pueden ser protegidos por grupos de bloqueo. Un grupo de bloqueo es un átomo o un resto químico que protege el término N de un aminoácido o de un péptido de reacciones no deseadas y se puede usar durante la síntesis de un conjugado de sustrato escindible del fármaco. Debería permanecer unido al término N en toda la síntesis, y se puede eliminar tras completar la síntesis del conjugado de fármaco mediante condiciones químicas u otras condiciones que consigan selectivamente su eliminación. Los grupos de bloqueo adecuados para la protección del término N son bien conocidos en la técnica de la química de péptidos. Grupos de bloqueo ejemplos incluyen, pero sin limitarse a estos, hidrógeno, D-aminoácido, y cloruro de carbobenzoxi (Cbz).

El término “anticuerpo” como se define en esta invención incluye anticuerpos completos y cualquier fragmento de unión al antígeno (es decir, “porción de unión al antígeno”) o cadenas simples de los mismos. Un “anticuerpo” se refiere a una glicoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, o una porción de unión al antígeno de la misma. Cada cadena pesada está comprendida por una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada está comprendida por tres dominios CH1, CH2 y CH3, y puede ser del isotipo mu, delta, gamma, alfa o epsilon. Cada cadena ligera está comprendida por una región variable de cadena ligera (VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está comprendida por un dominio, CL, que puede ser del isotipo kappa o lambda. Las regiones VH y VL se pueden subdividir adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, las denominadas regiones determinantes de la complementaridad (CDR), interespaciadas con regiones que son regiones más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada VH y VL está compuesta por tres CDRs y cuatro FRs, dispuestas desde el término amino al término carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar en la unión de la inmunoglobulina con tejidos o factores del huésped, incluyendo diversas células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (CIq) del sistema de complemento clásico.

Los términos “fragmento de anticuerpo” o “porción de unión al antígeno” de un anticuerpo (o simplemente “porción de anticuerpo”), tal como se usa en esta invención, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retienen la capacidad de unirse específicamente a un antígeno. Se ha demostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo puede ser desarrollada por fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Ejemplos de fragmentos de unión comprendidos dentro del término “fragmento de anticuerpo” o “porción de unión al antígeno” de un anticuerpo incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que comprende los dominios VL, VH, CL y CH1;

(ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región de anclaje; (iii) un fragmento Fd que comprende los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un brazo simple de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward y col., (1989) Nature 341 :544-546), que comprende un dominio VH; y (vi) una región determinante de la complementaridad (CDR) aislada. Adicionalmente si bien los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados para genes separados, estos pueden estar unidos, usando procedimientos recombinantes, por un conector sintético que les permite ser preparados como una cadena de proteína simple en la que el par de regiones VL y VH forman moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena simple (scFv); véase por ejemplo, Bird y col. (1988) Science 242:423426; y Huston y col. (1988) Proc. Natl. Acad. Set. USA 85:5879-5883). Tales anticuerpos de cadena simple se pretende también que estén comprendidos dentro del término “porción de unión al antígeno” de un anticuerpo. Estos fragmentos de anticuerpo se obtienen usando técnicas convencionales conocidas por los especialistas en la técnica, y los fragmentos se seleccionan por su utilidad de la misma forma que los anticuerpos intactos.

Los términos “anticuerpo monoclonal” tal como se usa en esta invención se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular simple. Una composición de anticuerpo monoclonal muestra una especificidad y afinidad de unión única para un epítopo determinado.

“Soporte sólido”, tal como se usa en esta invención, se refiere a un material que es sustancialmente insoluble en un sistema disolvente seleccionado, o que se puede separar fácilmente (por ejemplo, por precipitación) de un sistema disolvente seleccionado en el que es soluble. Soportes sólidos útiles en la práctica de la presente invención pueden incluir grupos que están activados o son capaces de activarse para permitir que especies seleccionadas se unan al soporte sólido. Un soporte sólido puede ser también un sustrato, por ejemplo, un chip, oblea o pocillo, sobre el que se usa un compuesto individual o más de un compuesto de la invención.

Los compuestos de la invención se preparan como un isómero simple (por ejemplo, enantiómero, cis-trans, posicional, diastereómero) o como una mezcla de isómeros. En una realización preferida los compuestos se preparan sustancialmente como un isómero simple. Se conocen en la técnica procedimientos para la preparación de compuestos sustancialmente isoméricamente puros. Por ejemplo, se pueden preparar mezclas enantioméricamente enriquecidas y compuestos enantioméricamente puros usando intermedios sintéticos que son enantioméricamente puros en combinación con reacciones que dejan la estereoquímica en un centro quiral sin carga o dan lugar a su inversión completa. De forma alternativa el producto final o intermedios a lo largo de la ruta sintética se pueden resolver en un estereoisómero único. Las técnicas para invertir o dejar sin cargar un estereocentro determinado, y aquellas para resolver mezclas de estereoisómeros son bien conocidas en la técnica y es bien conocida la capacidad de un especialista en la técnica de seleccionar un procedimiento apropiado para una situación determinada. Véase en general Furniss y col. (eds.), VOGEL's ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5ª ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, páginas 809-816; y Heller, Ace. Chem. Res. 23: 128 (1990).

Se pueden formar análogos citotóxicos de CC-1065 usando un resto ciclopropabencindol (CBI) como una unidad alquilante en lugar del resto ciclopropapiroloindol (CPI) de CC-1065. Como un ejemplo, análogos de CBI CC1065 incluyen, pero sin limitarse a estos, compuestos que presentan la fórmula (o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo):

en la que X es halo. Preferiblemente, X es Cl o Br y, más preferiblemente, X es Br.

X1 y Z se seleccionan cada uno independientemente de O, S y NR8 donde R8 es un miembro seleccionado de H, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, y acilo.

R4, R4', R5 y R5' son miembros seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, halógeno, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(O)R9, SR9, OR9 y CR9=NR10,

Donde R9 y R10 se seleccionan independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, arilo sustituido o arilo no sustituido, heteroarilo sustituido o heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo no sustituido, y peptidilo sustituido o no sustituido, o cuando R9 y R10 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos están combinados opcionalmente para formar un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos, y

R11 y R11’ son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido.

R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano, o alcoxi. Preferiblemente R6 es metilo, ciano o H. Más preferiblemente, R6 es H.

R7 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido, heteroalquilo no sustituido, difosfatos, trifosfatos, acilo, C(O)R12R13, C(O)OR12, C(O)NR12R13, P(O)(OR12)2, C(O)CHR12R13, SR12 y SiR12R13R14, en las que R12, R13 y R14 son miembros seleccionados independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido y arilo sustituido o arilo no sustituido, o donde R12 y R13 junto con el átomo de nitrógeno o de carbono al que están unidos están combinados opcionalmente para formar un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos.

Se describen ejemplos de análogos de CBI CC-1065 en las solicitudes de patente de Estados Unidos cedidas legalmente números de serie 10/160.972; 10/161.233; 10/161.234, 11/134.685, y 11/134.826. Estas referencias también describen ejemplos de síntesis y usos para estos compuestos. Estos compuestos se pueden usar como agentes terapéuticos (por ejemplo, fármacos) y como profármacos. En al menos algunas realizaciones los análogos de CBI CC-1065 pueden conjugarse con agentes de direccionamiento, tales como un anticuerpo, receptor, péptido, lectinas, sacárido, ácido nucleico o una combinación de los mismos, para uso en composiciones farmacéuticas que liberan de forma selectiva los análogos de CBI CC-1065 citotóxicos en las células diana deseadas, tales como células del carcinoma.

Ejemplos representativos de condiciones precancerosas que pueden ser tratados por estos compuestos, incluyen, pero sin limitarse a estas: metaplasia, hiperplasia, displasia, pólipos colorectales, cetatosis actínica, queilitis actínica, virus del papiloma humano, leucoplaquia, lichen planus y enfermedad de Bowen.

Ejemplos representativos de cánceres o tumores que pueden ser tratados con estos compuestos incluyen, pero sin limitarse a estos: cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, linfoma, melanoma, cáncer de mama, cáncer de ovarios, cáncer de testículos, cáncer del sistema nervioso central, cáncer renal, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de estómago, cáncer de boca, cáncer de nariz, cáncer de cuello uterino y leucemias. Será fácilmente aparente para el especialista en la técnica que se pueda selecciona el agente indicado particular tal que este dirija el fármaco al tejido de tumor que se va a tratar con el fármaco (es decir, se elige un agente de direccionamiento específico para un antígeno específico del tumor). Ejemplos de tales agentes de direccionamiento

son bien conocidos en la técnica, ejemplos no limitantes de estos incluyen anti-Her2 para el tratamiento de cáncer de mama, anti-CD20 para tratamiento de linfoma, anti-PSMA para tratamiento de cáncer de próstata y anti-CD30 para tratamiento de linfomas, anti-PSMA para tratamiento de cáncer de próstata y anti-CD30 para tratamiento de linfomas, incluyendo linfoma no de Hodgkin.

Estos compuestos proporcionan un procedimiento para asesinar una célula. El procedimiento incluye la administración a la célula de una cantidad de un compuesto de la invención suficiente para matar dicha célula. En una realización ejemplo, el compuesto se administra a un sujeto que porta la célula. En una realización ejemplo adicional la administración sirve para retardar o detener el crecimiento de un tumor que incluye la célula (por ejemplo, la célula puede ser una célula tumoral). Para la administración para retardar el crecimiento, la tasa de crecimiento de la célula debería ser al menos 10% menor que la tasa de crecimiento antes de la administración. Preferiblemente la tasa de crecimiento será retardada al menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, o se detendrá por completo.

Composiciones farmacéuticas incluyen composiciones en las que el principio activo está contenido en una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, en una cantidad efectiva para conseguir su fin pretendido. La cantidad actual efectiva para una aplicación particular dependerá, entre otros, de la afección que se trate. La determinación de una cantidad efectiva se encuentra dentro de las capacidades de los especialistas en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada de esta invención.

Para cualquier compuesto descrito en esta invención la cantidad terapéuticamente efectiva se puede determinar inicialmente a partir de los ensayos de cultivo celular. Las concentraciones en plasma objetivo serán aquellas concentraciones de compuesto(s) activo(s) que son capaces de inhibir el crecimiento o división celular. En realizaciones preferidas la actividad celular es inhibida al menos en el 25%. Se encuentran presentes preferiblemente concentraciones en plasma objetivo de compuesto(s) activo(s) que son capaces de inducir al menos aproximadamente 50%, 75% o incluso el 90% o más de inhibición de actividad celular. El porcentaje de inhibición de actividad celular en el paciente puede ser controlado para valorar la adecuación de la concentración de fármaco en plasma alcanzada, y la dosificación se puede ajustar hacia arriba o hacia abajo para conseguir el porcentaje deseado de inhibición.

Como es bien conocido en la técnica se pueden determinar también cantidades terapéuticamente efectivas para uso en humanos a partir de modelos animales. Por ejemplo se puede formular una dosis para humanos para conseguir una concentración en circulación que se ha encontrado que es efectiva en animales. La dosificación en humanos se puede ajustar controlando la inhibición celular y ajustando la dosificación hacia arriba o hacia abajo según se describió anteriormente.

Se puede determinar también una dosis terapéuticamente efectiva a partir de datos de humanos para compuestos que son conocidos por mostrar actividades farmacológicas similares. La dosis aplicada se puede ajustar en base a la biodisponibilidad relativa y potencia del compuesto administrado en comparación con el compuesto conocido.

El ajuste de la dosis para conseguir la eficacia máxima en humanos basada en los procedimientos descritos anteriormente y otros procedimientos como son bien conocidos en la técnica se encuentra dentro de las capacidades del especialista en la técnica.

En el caso de administración local la concentración en circulación sistémica de compuesto administrado no será de importancia particular. En tales casos el compuesto se administra de modo que alcance una concentración en la zona local efectiva para conseguir el resultado pretendido.

Para uso en la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades relacionadas con proliferación celular anormal se prefiere una concentración en circulación de compuesto administrado de aproximadamente 0,001 !M a 20 !M, siendo preferido de aproximadamente 0,01 !M a 5 !M.

Las dosis para paciente para administración por vía oral de los compuestos descritos en esta invención, varían de forma típica de aproximadamente 1 mg/día a aproximadamente 10.000 mg/día, más típicamente de aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 1.000 mg/día, y lo más típicamente de aproximadamente 50 mg/día a aproximadamente 500 mg/día. En términos de peso corporal del paciente las dosificaciones típicas varían de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 150 mg/kg/día, más típicamente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 15 mg/kg/día, y lo más típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg/día, por ejemplo 5 mg/kg/día o 3 mg/kg/día.

En al menos algunas realizaciones dosis para paciente que retardan o inhiben el crecimiento del tumor pueden ser de 1 µmol/kg/día o inferior. Por ejemplo, las dosis de paciente pueden ser 0,9, 0,6, 0,5, 0,45, 0,3, 0,2, 0,15, o 0,1 µmol/kg/día o inferior (referido a moles del fármaco) del fármaco o de un conjugado de fármaco, tal como un conjugado de anticuerpo-fármaco. Preferiblemente, el fármaco o conjugado de fármaco el crecimiento del tumor cuando se administran en la cantidad de dosificación diaria durante un periodo de al menos cinco días. En al menos algunas realizaciones el tumor es un tumor de tipo humano en un ratón SCID. Como ejemplo, el ratón SCID puede ser un ratón CB17.SCID (disponible en Taconic, Germantown, NY).

Para otros modos de administración, la cantidad e intervalo de dosificación se pueden ajustar individualmente proporcionando niveles en plasma del compuesto administrado efectivas para la indicación clínica particular que se va a tratar. Por ejemplo, en una realización un compuesto de acuerdo con la invención se puede administrar en múltiples veces al día a concentraciones relativamente altas. De forma alternativa puede ser más deseable

5 administrar un compuesto de la invención en concentraciones efectivas mínimas y usar un régimen de administración menos frecuente. Esto proporcionará un régimen terapéutico que es comensurable con la gravedad de la enfermedad individual.

Llevando a cabo las indicaciones proporcionadas en esta invención se puede planificar un régimen de tratamiento terapéutico efectivo que no provoque toxicidad sustancial y aún sea completamente efectivo para tratar los síntomas

10 clínicos demostrados por el paciente particular. Esta planificación debería implicar la elección cuidadosa del compuesto activo mediante la consideración de factores tales como potencia del compuesto, biodisponibilidad relativa, peso corporal del paciente, presencia y gravedad de efectos secundarios adversos, modo preferido de administración y el perfil de toxicidad del agente seleccionado. En general el resto CBI presenta la fórmula:

15 donde los sustituyentes pueden estar unidos a los átomos de oxígeno y nitrógeno, X es halo y R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano o alcoxi. Preferiblemente R6 es H, metilo o ciano. Más preferiblemente R6 es H. Además X es preferiblemente Cl o Br y más preferiblemente X es Br-. En general puede estar unida una unidad de unión al sustituyente amino del resto CBI. Ejemplos de unidades de unión adecuadas incluyen, pero sin limitarse a estas,

en la que X1, Z, R4, R4', R5, y R5' son como se definieron anteriormente.

Ejemplos de unidades de unión adecuadas se ilustran y describen en las solicitudes de patente de Estados Unidos números de serie 10/160.972; 10/161.233; 10/161.234, 11/134.685, y 11/134.826; así como también en la patente de Estados Unidos número 6.534.660. Unidades de unión adecuadas dentro de esta fórmula también incluyen unidades

25 de unión con anillos de condensación múltiples tales como:

donde Z' se selecciona independientemente de O, S y NR8 donde R8 es un miembro seleccionado de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, y acilo.

R4", R4'", R5", y R5'" son miembros seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, halógeno, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(Q)R9, SR9, OR9, CR9=NR10, y O(CH2)nNR11R11.

en las que R9 y R10 se seleccionan independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, arilo sustituido o arilo no sustituido, heteroarilo sustituido o heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo no sustituido, y peptidilo sustituido o peptidilo no sustituido, o en las que R9 y R10 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos están combinados opcionalmente para formar un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos, y

R11 y R11 son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido.

R15 puede ser H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, o R15 y R4' o R5' pueden estar combinados para formar un anillo (por ejemplo, un anillo de cinco o seis miembros).

Un compuesto intermedio útil en la formación de análogos de CBI CC-1065 presenta la fórmula (I):

en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo, -C(O)OR', -C(O)NR’R", o un grupo protector, en las que R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido y heterocicloalquilo no sustituido, y X es halógeno.

En un procedimiento de síntesis convencional para el compuesto (I), el material de partida es 1,3-dihidroxinaftaleno que se hace reaccionar con amoniaco en una cámara presurizada (por ejemplo, una bomba) para reemplazar el grupo hidroxi en la posición 3 del naftaleno con una amina. Se pueden encontrar ejemplos de este procedimiento de síntesis en la patente de Estados Unidos número 6.534.600 y D.L. Boger y col., J. Org. Chem. 57, 2873-2876 (1992).

La reacción de aminación es seguida de la adición de grupos protectores tanto a los restos hidroxi como a los restos amina.

Si bien la reacción de aminación puede presentar rendimiento aceptable a pequeña escala, puede ser difícil de aumentar la escala de la reacción debido al uso de una bomba para contener esta reacción presurizada, que de forma típica tiene lugar a una presión sustancialmente mayor de 1 atmósfera (aproximadamente 1,01 x 105 Pa) y en general a una presión de al menos 1,5 atmósferas (1,52 x 105 Pa). Este procedimiento de síntesis se ha encontrado que da lugar a un rendimiento sustancialmente menor cuando se aumenta la escala.

En contraste con los procedimientos convencionales, el material de partida puede ser el compuesto (II), como se ilustra en los esquemas de síntesis de las figuras 1 y 2:

en la que R3 es H o alquilo. Preferiblemente, R3 es alquilo C1-5 y, más preferiblemente, metilo. Por ejemplo, se encuentra comercialmente disponible 4-metoxi-2-naftilamina en Aldrich Chemical Company, Inc., Milwaukee, WI. Es relativamente fácil de hidrolizar el compuesto si R3 es alquilo, y añadir grupos protectores, R1’, tanto a los restos hidroxi como amina formando el compuesto (III)

En algunas realizaciones, como se ilustra en las figuras 1 y 2, es deseable proporcionar diferentes grupos protectores en las funcionalidades amina e hidroxi. De acuerdo con lo anterior el grupo protector inicial, R1, puede ser liberado de uno de estos restos (por ejemplo, del resto hidroxi) y reemplazarse con un segundo grupo protector diferente, R2’, dando el compuesto (IV)

Un ejemplo específico de compuesto (IV) presenta la fórmula:

Presentando diferentes grupos protectores en los sustituyentes hidroxilo y amina puede facilitarse las etapas de reacción posteriores donde se puedan eliminar de forma selectiva uno de los grupos protectores mientras se deja el

15 otro grupo protector. De forma alternativa se pueden añadir inicialmente diferentes grupos protectores a los sustituyentes hidroxilo y amina.

Los esquemas 1 y 2 (figuras 1 y 2) ilustran una realización de las restantes etapas en la formación del compuesto (I) a partir del compuesto (IV). Estas etapas pueden incluir, por ejemplo, la formación de un anillo usando el nitrógeno del grupo amino. Esto se puede conseguir, por ejemplo, mediante alquilación del anillo de arilo adyacente al

20 nitrógeno seguido de una etapa de cierre de anillo. En una realización la yodinación del compuesto (IV) con Nyodosuccinimida da lugar a un compuesto que se puede alquilar usando 1,3-dibromopropeno o 1,3-dicloropropeno. El cierre del anillo se puede llevar a cabo usando hidruro de tributilestaño en presencia de 2,2’-azobisisobutironitrilo (AIBN) dando el derivado CBI racémico, compuesto (V):

Si se desea se pueden eliminar los grupos protectores formando CBI. Se entenderá que se pueden usar diferentes reactantes y catalizadores en estas etapas de reacción. Se pueden encontrar ejemplos en Boger, Chemical Reviews, 97, 787-828 (1997).

El derivado de CBI racémico se puede separar usando técnicas conocidas de separación de enantiómeros incluyendo el uso de procedimientos de cromatografía. Una técnica particularmente útil es cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) usando una columna quiral. Por ejemplo, se ha llevado a cabo la separación de tales enantiómeros usando una columna Chiralcel de HPLC y eluyente de hexano/isopropanol (99:1) dando el compuesto (I).

Ejemplos específicos del compuesto (I) incluyen, pero sin limitarse a estos,

El compuesto (I) se puede usar para formar análogos de CBI CC-1065 como se describe, por ejemplo, en las solicitudes de patente de Estados Unidos números de serie 10/160,972; 10/161,233; 10/161,234, 11/134,685, and 1 1/134,826 del solicitante. Por ejemplo, se puede añadir una unidad de unión al compuesto (I) mediante desprotección del sustituyente amino y hacer reaccionar un compuesto que comprende la unidad de unión con la amina desprotegida. Se pueden añadir sustituyentes adicionales al átomo de oxígeno del compuesto de CBI mediante desprotección del oxígeno y hacerlo reaccionar con reactante(s) apropiado(s).

Ejemplos

Sin más elaboración se cree que un especialista en la técnica puede, usando la descripción precedente, usar la presente invención en toda su extensión. Las siguientes realizaciones preferidas se construyen, por tanto, como meramente ilustrativas.

En lo precedente y en los ejemplos siguientes, todas las temperaturas se indican sin corregir en grados Celsius y todas las partes y porcentajes son en peso, a menos que se indique otra cosa.

Ejemplo 1 – Esquema 1 (figura 1)

Síntesis de N-(terc-butiIoxicarboniI)-4-O-(terc-butiIoxicarboniI)-2-naftilamina (2)

Se sometió a reflujo una solución de 4-metoxi-2-naftilamina (230 mg, 1,33 mmol) en ácido acético glacial (9,6 ml) y ácido bromhídrico en agua (16 ml, 48%) en N2 durante 4 h. Se diluyó una pequeña cantidad de muestra (0,1 ml) con acetato de etilo (0,5 ml), y luego se añadieron agua (0,5 ml) y TEA (0,1 ml). TLC (DCM/metanol 20:1) de la capa orgánica no mostró material de partida y una mancha nueva muy inferior (Rf=0,1). Se eliminó el disolvente a presión reducida y se secó el producto a vacío dando el intermedio 4-hidroxi-2-naftilamina que se usó para la siguiente etapa sin purificación alguna. Se añadió a una solución de 4-hidroxi-2-naftilamina en dioxano (10 ml) TEA (1 ml) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,149 g, 5,27 mmol). Se sometió a reflujo la mezcla de reacción en N2 durante 4 h. TLC (hexano/acetato de etilo 4:1) no mostró material de partida y una mancha nueva superior (Rf=0,55). Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con agua. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 50 ml) y se reunieron los extractos orgánicos y se lavaron con salmuera. Se secaron los extractos orgánicos sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida dando N-(terc-butiloxicarbonil)-4-O-(tercbutiloxicarbonil)-2-naftilamina (2, 80% de rendimiento) como aceite.

Síntesis del compuesto 3

Se añadió a una solución de compuesto 2 en acetona (10 ml) solución de NaOH en agua (10 ml, 1 M). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. TLC (hexano/acetato de etilo 4:1) no mostró material de partida y una nueva mancha inferior. Se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con agua. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x 50 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron. Se purificó el residuo en columna de gel de sílice de 10 g con acetato de etilo al 0-20% en hexano dando el compuesto 3 (181 mg, 53%) como un aceite.

Síntesis del compuesto 4:

Se trató una solución del compuesto 3 (5 g, 19,3 mmol) en DMF anhidro (50 ml) en atmósfera de nitrógeno con bromuro de bencilo (4 g, 23,1 moles), carbonato de potasio (3,7 g, 27 moles) y yoduro de tetrabutilamonio (70 mg, 0,01 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 8 h. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida. La separación cromatográfica (4 x 10 cm de SiO2, elución con gradiente de EtOAchexano al 10-20%) dio el compuesto 4 puro (5,48 g, 83%) como un polvo crema. RMN 1H (CDCl3, 400 MHz, ppm) 8,22 (d, 1H J=8,1 Hz, C5-H), 7,68 (d, 1H, J=8,2 Hz5 C8-H), 7,3-7,5 (m, 8H, Cl-H, C6-H, C7-H, CH2C6H5), 7,06 (d, 1H, J=U Hz, C3-H), 6,62 (s a, 1H, NH), 5,23 (S, 2H, OCH2(C6H5), 1,55 (s, 9H, OC(CH3)3).

Síntesis del compuesto 5:

Se combinó en un matraz de fondo redondo de 1000 ml equipado con una barra agitadora y un septo de caucho el compuesto 4 (13 g, 0,0372 moles) y THF (300 ml). Se enfrió la solución amarilla clara hasta -20º C con un baño de hielo seco en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido p-toluenosulfónico (0,10 g, 0,0005 moles) a la reacción y se agitó la solución durante 10 minutos. Se disolvió N-yodosuccinimida (10 g, 0,0446 moles) en THF (50 ml) y se añadió a la reacción mediante cánula (aproximadamente 1 hora). Se agitó la solución en un baño de hielo durante 2 horas y se volvió parduzca. Se retiró luego la solución del baño de hielo y se dejó calentar hasta temperatura ambiente en nitrógeno durante 1,5 horas. TLC (hexano/DCM 2:1) no mostró material de partida y una nueva mancha superior. Se interrumpió la reacción con NaHCO3 saturado (200 ml) y se formó un sólido blanco. Tras agitar la solución durante 10 minutos, se añadió EtOAc (200 ml) y agua (100 ml) a la reacción. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (2 x 100 ml) y se reunieron los extractos orgánicos y se extrajo con salmuera (100 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre MgSO4, se filtraron, y se concentraron a vacío hasta un sólido rojo-parduzco oscuro. Se purificó el sólido por cromatografía en columna usando hexano/DCM 2:1 como eluyente dando el compuesto 5 (14 g, 79%) como un sólido pardo.

Síntesis de compuesto 6:

Se combinó en un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con una barra agitadora y entrada de nitrógeno el compuesto 5 (22,5 g, 0,0473 moles) y DMF anhidro (250 ml). Se enfrió la solución naranja amarillenta hasta 0º C con un baño de hielo/sal en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió NaH (60%, 5,6 g, 0,146 moles) a la reacción de una vez. La solución se volvió turbia y se formó un gas. Se agitó la reacción en un baño de hielo durante 15 minutos y luego se retiró el baño de hielo y se agitó la solución durante otros 15 minutos, se añadió cis/trans-1,3dibromopropeno (14 ml, 0,14 moles) a la reacción en porciones mediante jeringuilla. Se agitó la reacción en nitrógeno a temperatura ambiente durante 1 hora y se volvió pardo turbia. La temperatura aumentó hasta 40º C. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente. La TLC (hexano/EtOAc 4:1) no mostró material de partida y una nueva mancha inferior. Se interrumpió la reacción con agua (500 ml). Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (4 x 100 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera (2 x 75 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre MgSO4, se filtró y se concentraron a vacío hasta un aceite pardo. Se purificó el producto mediante cromatografía en columna usando DCM/hexano 1:1 como eluyente dando el compuesto 6 (25 g, 89%) como un aceite pardo.

Síntesis del compuesto 7:

Se combinó en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 1000 ml equipado con barra agitadora, sonda de temperatura, condensador de reflujo y entrada de nitrógeno compuesto 6 (25 g, 0,0421 moles), tolueno (500 ml), 2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo) (0,15 g, 0,0009 moles) e hidruro de tributilestaño (3,4 ml, 0,0126 moles) [mediante jeringuilla]. Se burbujeó nitrógeno a través de la solución durante 15 minutos y luego se calentó la reacción hasta 80º C en nitrógeno. Después de calentar a 80º C durante 15 minutos, se añadió hidruro de tributilestaño (3,4 ml, 0,0126 moles) a la reacción mediante jeringuilla. Después de calentar durante otros 15 minutos se añadió hidruro de tributilestaño (3,4 ml, 0,0126 moles) a la reacción mediante jeringuilla. Después de otros 15 minutos, se añadió hidruro de tributilestaño (3,4 ml, 0,0126 moles) a la reacción mediante jeringuilla. La cantidad total de hidruro de tributilestaño añadida fue de 13,6 ml, 0,0505 moles. Se calentó la reacción a 80º C durante 30 minutos y luego se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. La TLC (EtOAc/hexano al 10%) mostró material de partida y una nueva mancha superior. Se concentró la solución a vacío hasta un sólido amarillo. Se purificó el sólido por cromatografía en columna usando como eluyente diclorometano/hexano 1:1 dando un sólido amarillo. Se recristalizó el sólido en hexano (200 ml, 45º C durante 30 minutos, se enfrió en refrigerador durante 2 horas, se recogió mediante filtración, se secó a vacío) dando el compuesto 7 (11,70 g, rendimiento del 59%) como un sólido amarillo pálido. RMN (1H, CDCl3, 400 MHz): � 1,61 (9H, s, C(CH3)3); 3,30 (1H, t, J = 26 Hz, CH-CH2-N); 3,82 (1H, d, J = 26 Hz, Br-CH2-CH); 4,04 (1H, d, J = 19 Hz, Br-CH2-CH) 4,14 (1H, t, J = 26 Hz, CH-CH2-N); 4,21 (1H, m, CH2-CH-CH2); 5,26 (2H, s, OCH2-C6H5); 7,3-7,55 (8H, m, O-CH2-C6H5, C10H5); 7,63 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5); 8,3 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5).

Resolución del compuesto 7:

Se disolvió el compuesto racémico 7 en DCM (50 mg, 1 ml). Se diluyó luego la solución con hexano (9 ml). Se cargó luego la solución en una columna preparativa Chiralcel OD (10 micrómetros, 20 x 250 mm) y se separó usando hexano/isopropanol (99:1, 15 ml/min). El primer enantiómero (7a) eluye de 10 a 15 minutos y el segundo enantiómero (7b) eluye de 17,5 a 25 minutos. La columna analítica (Chiralcel OD, 0,46 x 25 cm, 20 micrómetros) da un tiempo de retención de 7,71 minutos para el compuesto 7a y 12,9 minutos para el compuesto 7b (hexano/IPA 99:1, 1 ml/min, ensayo de 15 minutos). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): D 1,61 (9H, s, C-(CH3)3); 3,30 (1H, t, J = 26 Hz, CH-CH2-N); 3,82 (1H, d, J = 26 Hz, Br-CH2-CH); 4,04 (1H, d, J = 19 Hz, Br-CH2-CH) 4,14 (1H, t, J = 26 Hz, CH-CH2-N); 4,21 (1H, m, CH2-CH-CH2); 5,26 (2H, s, O-CH2-C6H5); 7,3-7,55 (8H, m, O-CH2-C6H5, C10H5); 7,63 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5); 8,3 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5).

Ejemplo 2 - Esquema 2 (Fig. 2)

El procedimiento de síntesis es como se describe anteriormente en el ejemplo 1 mediante la síntesis del compuesto

5.

Síntesis del compuesto 8:

Se combinó en un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con barra agitadora y entrada de nitrógeno compuesto 5 (8,4 g, 0,0177 moles) y DMF anhidro (125 ml). Se enfrió la solución naranja amarillenta hasta 0º C con un baño de hielo/sal en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió NaH (60%, 2,22 g, 0,0554 moles) a la reacción de una vez. La solución se volvió turbia y se formó un gas. Se agitó la reacción en un baño de hielo durante 15 minutos y luego se retiró el baño de hielo y se agitó la solución durante otros 15 minutos, se añadió cis/trans-1,3dicloropropeno (5,3 ml, 0,0571 moles) a la reacción en porciones mediante jeringuilla. Se agitó la reacción en nitrógeno a temperatura ambiente durante 3 horas y se volvió parda turbia. TLC (hexano/EtOAc 4:1) no mostró material de partida y una nueva mancha inferior. Se interrumpió la reacción con agua (250 ml). Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 100 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera (2 x 50 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a vacío hasta un sólido pardo. Se purificó el producto mediante cromatografía en columna usando DCM/hexano 1:1 como eluyente dando 4-(benciloxi)-1yodonaftalen-2-il(3-cloroalil)carbamato de (E/Z)-terc-butilo (8) (9 g, 93%) como un aceite amarillo.

Síntesis del compuesto 9:

Se combinó en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 ml equipado con barra agitadora, sonda de temperatura, condensador de reflujo y entrada de nitrógeno el compuesto 8 (9 g, 0,0164 moles), tolueno (200 ml), 2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo) (0,15 g, 0,0009 moles) e hidruro de tributilestaño (1,5 ml, 0,0056 moles) [mediante jeringuilla]. Se burbujeó nitrógeno por la solución durante 15 minutos y luego se calentó la reacción hasta 80º C en nitrógeno. Después de calentar a 80º C durante 15 minutos se añadió hidruro de tributilestaño (1,5 ml, 0,0056 moles) a la reacción mediante jeringuilla. Después de calentar durante otros 15 minutos se añadió hidruro de tributilestaño (1,5 ml, 0,0056 moles) a la reacción mediante jeringuilla. Después de otros 15 minutos, se añadió hidruro de tributilestaño (1,0 ml, 0,0037 moles) a la reacción mediante jeringuilla. La cantidad total de hidruro de tributilestaño añadida fue 5,5 ml, 0,0204 moles. Se calentó la reacción a 80º C durante 30 minutos y luego se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. La TLC (EtOAc/hexano al 10%) no mostró material de partida y una nueva mancha superior. Se concentró la solución a vacío dando un aceite amarillo. Se purificó el aceite mediante cromatografía en columna usando como eluyente hexano al 100% hasta EtOAc/hexano al 5% hasta EtOAc/hexano al 10% dando un sólido amarillo pálido. Se recristalizó el sólido en hexano (100 ml, 45º C durante 30 minutos, se enfrió en refrigerador durante 2 horas, se recogió mediante filtración, se secó a vacío) dando el compuesto 9 (4,16 g, rendimiento del 60%) como un sólido blanco.

Resolución del compuesto 9:

Se disolvió el compuesto racémico 9 en DCM (50 mg, 1 ml). Se diluyó luego la solución con hexano (9 ml). Se cargó luego la solución en una columna preparativa Chiralcel OD (10 micrómetros, 20 x 250 mm) y se separó usando hexano/isopropanol (99:1, 15 ml/min). El primer enantiómero (9a) eluye a partir de 11,5 a 15 minutos y los segundos enantiómeros (9b) eluyen a partir de 17,5 a 25 minutos. La columna analítica (Chiralcel OD, 0,46 x 25 cm, 20 micrómetros) da un tiempo de retención de 6,5 minutos para el compuesto 9a y 10,6 minutos para el compuesto 9b

(99:1 hexano/IPA, 1 ml/min, 15 minutos de ensayo). RMN 1H (CDCl3, 400 MHz): d 1,61 (9H, s, C-(CH3)3); 3,44 (1H, t, J = 25 Hz, CH-CH2-N); 3,9-4,0 (2H, m, Cl-CH2-CH); 4,12 (1H, t, J = 26 Hz, CH-CH2-N); 4,25 (1H, m, CH2-CH-CH2); 5,26 (2H, s, 0-CH2-C6H5); 7,2-7,5 (8H, m, O-CH2-C6H5, C10H5); 7,63 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5); 8,3 (1H, d, J = 21 Hz, C10H5).

Ejemplo 3 - Esquema 3 (figura 3)

El procedimiento de síntesis es como se describió anteriormente en el ejemplo 1 con la síntesis del compuesto 3.

Síntesis del compuesto 10:

Se agitó una solución de 4-hidroxinaftalen-2-ilcarbamato de terc-butilo (3) (500 mg, 2,89 mmol), clorhidrato de cloruro de 4-metil-1-piperazincarbonilo (858 mg, 4,34 mmol), piridina anhidra (4,98 ml, 57,8 mmol), y alcohol alílico (4,98 ml, 73,2 mmol) en DCM anhidro (20 ml) a temperatura ambiente durante la noche. La TLC (DCM/MeOH 9:1) no mostró material de partida y una mancha muy inferior. Se interrumpió la mezcla de reacción con agua. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 50 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera (2x 50 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a vacío hasta aceite pardo. Se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna con metanol al 1-5% en DCM dando el compuesto 10 (602 mg, 82%) como sólido amarillo. RMN 1H (DMSO-d6) 5 9,68 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,47 (t, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,39 (t, IH), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H), 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Síntesis del compuesto 11:

Se agitó compuesto 10 (82 mg, 0,21 mmol), ácido p-toluenosulfónico (10 mg, 0,05 mmol), y N-yodosuccinimida (96 mg, 0,43 mmol) en THF anhidro (5 ml) a temperatura ambiente durante la noche. El TLC (DCM/MeOH 9:1) mostró una pequeña cantidad de material de partida y una mancha superior. La mezcla de reacción se interrumpió con NaHCO3 saturado (10 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 minutos, se extrajo la mezcla de reacción con EtOAc (3 x 20 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera (2 x 20 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a vacío hasta aceite pardo. Se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna con metanol al 1-5% en DCM dando el compuesto 11 (52 mg, 48%) como aceite amarillo. RMN 1H (DMSO-d6) 5 8,81 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,65 (t, 1 H), 7,58 (t, 1H), 7,45 (t, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H), 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Síntesis del compuesto 12:

Se enfrió una solución de compuesto 11 (102 mg, 0,2 mmol) en DMF anhidro (5 ml) en un baño de hielo. Se añadió hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 32 mg, 0,8 mmol) a la reacción. Se agitó la mezcla de reacción a 0º C durante 15 minutos y a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadió cis/trans-1,3-dicloroprepeno (83,36 !l, 0., mmol) a la reacción. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. La TLC (DCM/MeOH 9:1) no mostró material de partida. Se interrumpió la mezcla de reacción con agua. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 10 ml) y se lavaron los extractos orgánicos con salmuera (2 x 10 ml). Se secaron los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a vacío hasta aceite pardo. Se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna con metanol al 1-5% en DCM dando el compuesto 12 (82 mg, 70%) como sólido amarillo.

RMN 1H (DMSO-d6) 5 8,20 (d, 1H), 7,82 (d, 1 H), 7,62 (m, 2H), 7,38 (d, 1H), 6,38 (m, 1H)5 6,18 (m, 1H), 3,98-4,46 (dd, 2H), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H), 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Síntesis del compuesto 13:

Se burbujeó en una solución de compuesto 12 (82 mg, 0,14 mmol) en tolueno anhidro (3 ml), nitrógeno seco durante

5 15 minutos. Se añadieron hidruro de tributilestaño (47,1 !l, 0,18 mmol) y 2,2'-azobisisobutironitrilo (10 mg, 0,06 mmol) a la reacción. Se calentó la mezcla de reacción a 80º C durante 15 minutos en nitrógeno. La TLC (DCM/MeOH 9:1) mostró nueva mancha azul y ningún material de partida. Se concentró la mezcla de reacción a vacío dando aceite amarillo. Se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna con metanol al 1-5% en DCM dando el compuesto 13 (52 mg, 82%) como sólido blanco. RMN 1H (DMSO-d6) 5 7,92 (d, 1H), 7,83 (m, 1H),

10 7,78 (d, 1 H), 7,58 (t, 1H), 7,42 (t, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,04 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H), 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Resolución del compuesto 13:

Se disuelve el compuesto racémico 13 en metanol. La solución se carga luego en una columna preparativa CHIRALPAK AD (20 micrómetros 20 x 250 mm) y se separó usando metanol (15 ml/min). El primer enantiómero

15 (13a) eluye a partir de 5,1 minutos y el segundo enantiómero (13b) eluye a partir de 7,1 min. RMN 1H (DMSO-d6) 5 7,92 (d, 1H), 7,83 (m, 1H), 7,78 (d, 1 H), 7,58 (t, 1H), 7,42 (t, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,04 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H), 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Ejemplo 4 – Síntesis de análogo de CBI CC-1065

20 Síntesis del compuesto (14). Se desgasificó una solución del compuesto 9b (100 mg, 0,24 mmol) y Pd-C al 10% (35 mg) en MeOH/CH2Cl2 (1/2, 10 ml) a vacío durante 40 s. Se dispuso la mezcla resultante en una atmósfera de hidrógeno y se agitó a 25º C durante 7 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite (lavado con CH2CI2). Se eliminó el disolvente a vacío. La cromatografía en gel de sílice eluyó con EtOAc/Hex (2/8) dio el compuesto 14 (77

25 mg, 98%). RMN 1H DMSOd6) 5 10,36 (s, 1H), 8,04 (d, 1H, J=8,2 Hz), 7,72 (d, 1H, J=8,2 Hz), 7,61 (s a, 1H), 7,45 (t, 1H, J=8,4 Hz), 7,261 (t, 1H, J=8,4 Hz), 4,06 (m, 4H), 3,73 (m, 1H), 1,52 (s, 9H).

Síntesis del compuesto (16). Se agitó una solución de compuesto 14 (35 mg, 0.1 mmol) en HCl-EtOAc 4 M (5 ml) a 25º C en Ar durante 30 minutos. Se eliminó el disolvente a vacío. Se añadió al residuo ácido 5-acetilindon-2carboxílico (24,4 mg, 0,12 mmol). Se añadió una solución de EDC (22,9 mg, 0,12 mmol) en DMF (3 ml) y se agitó la 30 mezcla de reacción a 25º C durante 5 h. Se eliminó el disolvente. Se sometió el producto bruto a cromatografía en

gel de sílice eluyendo con MeOH al 10% en CH2Cl2 dando el compuesto 16 (40,7 mg, 93%). RMN 1H DMSOd6) 512,13 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,10 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,96 (s a, 1H), 7,85 (d, 2H, J=8,4 Hz), 7,54 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,51 (t, 1H, J=8,2 Hz), 7,36 (t, 1H, J=7,6), 7,35 (s, 1H), 4,81 (t, 1H, 11,2 Hz), 4,54 (dd, 1H, 8,8 Hz), 4,23 (m, 1H), 4,01 (dd, 1H, J=10,2 Hz), 3,86 (dd, 1H, J=10,7 Hz), 2,61 (s, 3H).

Síntesis del compuesto (17). Se añadió clorhidrato de cloruro de 4-metil-1-piperazincarbonilo (19,9 mg, 0,1 mmol) a una solución del compuesto 16 (20 mg, 0,05 mmol) y piridina anhidra (25 !m, 0,3 mmol) en alcohol alílico al 3% en cloruro de metileno seco (4 ml) y se agitó la mezcla durante 16 h. La purificación del producto bruto en gel de sílice dio el compuesto 17 (23,6 mg, 91%). RMN 1H DMSOd6) 5 12,03 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,01 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,88 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,82 (dd, 1H, J=8,4 Hz), 7,58 (t, 1H, J=8,1 Hz), 7,51 (d, 1H, J=8,4 Hz)5 7,46 (t, 1H, J=7,6 Hz), 7,37 (s, 1H), 4,86 (t, 1H, J=10,8 Hz), 4,57 (dd, 1H, J=10,8 Hz), 4,38 (in, 1H), 4,06 (dd, 1H, J=I 0,8 Hz), 3,86 (dd, 1H, J=I 1 Hz), 3,41 (br, 4H), 3,29 (br, 4H), 2,82 (s, 3H), 2,57 (s, 3H).

Síntesis del compuesto (19). Se agitó una solución del compuesto 17 (13 mg, 24 umol) y conector 18 (16,9 mg, 31 umol) en ácido acético al 5% en cloruro de metileno seco (1 ml) durante 30 min a 25º C. Se eliminó el disolvente por completo a vacío y se purificó mediante HPLC (columna SymmetryPrep C18, 7!m, 19 x 150 mm) dando el compuesto 19 (18,5 mg, 81%). EM: calculado para C48H57ClN8On (M+H) m/z 958.38, encontrado 958.10.

Ejemplo 5: ensayos de proliferación

La actividad biológica de los compuestos citotóxicos de la invención se pueden ensayar usando el ensayo de proliferación de 3H-timidina bien definido. Esto es un procedimiento conveniente para la cuantificación de la proliferación celular, ya que evalúa la síntesis de ADN mediante la medida de la incorporación de 3H-timidina marcada radiológicamente exógena. Este ensayo es altamente reproducible y puede acomodarse a gran número de compuestos.

Para llevar a cabo el ensayo se cultivan células de leucemia promielocíticas, HL-60, en medio RPMI que contiene suero bovino fetal (FCS) inactivado con calor al 10%. El día del estudio se recogen las células, se lavan y se resuspenden a una concentración de 0,5 x 106 células/ml en RPMI que contiene FCS al 10%. Se añade 100 !l de suspensión de células a placas de 96 pocillos. Se añaden diluciones en serie (incrementos de 3 veces) de dexorubicina (como un control positivo) o se preparan compuestos de ensayo y se añaden 100 !l de compuestos por pocillo. Finalmente se añade 10 !l de una 3H-timidina 100 !Ci/ml por pocillo y se incuban las placas durante 24 horas. Se cultivan las placas usando un cosechador de 96 pocillos (Packard Instruments) y se recuentan en un contador Packard Top Count. Se ajustan curvas logísticas de parámetros con la incorporación de 3H-timidina como una función de la molaridad de fármaco usando el software Prism para determinar los valores de CI50.

Los análogos de CBI CC-1065 (por ejemplo, el compuesto 19 del ejemplo 4) presentan por lo general un valor de CI50 en el ensayo anterior de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 nM, preferiblemente de aproximadamente 10 pM a aproximadamente 10 nM.

Ejemplo 6: conjugación de moléculas de fármaco con anticuerpos

Este ejemplo describe las condiciones de reacción y metodologías para la conjugación de una molécula de fármaco de la invención (que incluye opcionalmente otros grupos, tales como espaciadores, grupos funcionales reactivos y similares) con un anticuerpo como un agente de direccionamiento. Las condiciones y metodologías se pretende que sean ejemplares únicamente y no limitativas. Se conocen en la técnica otros enfoques para la conjugación de moléculas de fármaco con anticuerpos.

El procedimiento de conjugación descrito en esta invención se basa en la introducción de grupos tiol libres con el anticuerpo mediante reacción de lisinas del anticuerpo con 2-iminotiolanos, seguido de reacción de la molécula de unión al fármaco con un grupo maleimida activo. Inicialmente el anticuerpo que se va a conjugar se tampona de forma intercambiable en tampón fosfato 0,1 M pH 8,0 que contiene NaCl 50 mM, DTPA 2 mM, pH 8,0 y se concentra a 5-10 mg/ml. La tiolación se consigue mediante adición de 2-iminotiolano al anticuerpo. La cantidad de 2iminotiolano que se va a añadir se determina en experimentos preliminares y varía de un anticuerpo a otro anticuerpo. En los experimentos preliminares se añade una valoración de cantidades crecientes de 2-iminotilano al anticuerpo, y tras la incubación con el anticuerpo durante una hora a temperatura ambiente se desala el anticuerpo en tampón HEPES 50 mM pH 6,0 usando una columna Sephadex G-25 y el número de grupos tiol introducidos se determina rápidamente mediante reacción con ditiodipiridina (DTDP). La reacción de grupos tiol con DTDP da lugar a la liberación de tiopiridina que se controla a 324 nm. Se pueden usar muestras a una concentración de proteína de 0,5-1,0 mg/ml. Se usa la absorbancia a 280 nm para determinar exactamente la concentración de proteína en las muestras, y luego se incuba una alícuota de cada muestra (0,9 ml) con 0,1 ml de DTDP (solución madre 5 mM en etanol) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se incuban también junto a estas muestras blanco de tampón solas más DTDP. Después de 10 minutos se mide la absorbancia a 324 nm y el número de tioles presentes se cuantifica usando un coeficiente de extinción para tiopiridina de 19800 M-1.

De forma típica se desea un nivel de tiolación de tres grupos tiol por anticuerpo. Por ejemplo, con un anticuerpo determinado esto se puede conseguir mediante la adición de un exceso molar de 15 veces de 2-iminotiolano seguido de incubación a temperatura ambiente durante 1 hora. El anticuerpo que se va a conjugar se incuba por tanto con 2-iminotiolano a la relación molar deseada y luego se desala en tampón de conjugación (tampón HEPES 50 mM pH 6,0 que contiene glicina 5 mM, glicerol al 3% y DTPA 2 mM). El material tiolado se mantiene en hielo mientras que el número de tioles introducido se cuantifica como se describió anteriormente.

Tras verificación del número de tioles introducido la molécula de fármaco que contiene un grupo maleimida activo

5 (por ejemplo, el compuesto 15 del ejemplo 3) se añade en un exceso molar de 3 veces por tiol. La reacción de conjugación se lleva a cabo en tampón de conjugación que contiene también una concentración final de etilenglicoldimetiléter al 5% (o un disolvente alternativo adecuado). Habitualmente, la solución madre de fármaco se disuelve el etilenglicoldimetiléter al 90%, dimetilsulfóxido al 10%. Para la adición al anticuerpo se añade la solución madre directamente al anticuerpo tiolado, el cual tiene suficiente etilenglicoldimetiléter añadido para llevar la

10 concentración final hasta el 5%, o se prediluye en tampón de conjugación que contiene una concentración final de etilenglicoldimetiléter al 10%, seguido de la adición de un volumen igual de anticuerpo tiolado.

La reacción de conjugación se incuba a temperatura ambiente durante 2 horas con mezcla. Tras la incubación se centrifuga la mezcla de reacción a 14000 rpm durante 15 minutos y se puede ajustar el pH hasta 7,2 si la purificación no fuese inmediata. La purificación del conjugado se puede alcanzar mediante cromatografía usando un número de 15 procedimientos. El conjugado se puede purificar usando cromatografía por exclusión de tamaños en una columna Sephacryl S200 pre-equilibrada con tampón HEPES 50 mM pH 7,2 que contiene glicina 5 mM, NaCl 50 mM y glicerol al 3%. La cromatografía se puede llevar a cabo con un caudal de flujo lineal de 28 cm/h. Se pueden recoger fracciones que contienen conjugado, reunirse y concentrarse. Se puede conseguir la purificación alternativa mediante cromatografía de intercambio iónico. Las condiciones varían de un anticuerpo a otro y necesitan ser

20 optimizadas en cada caso. Por ejemplo, se puede aplicar la mezcla de reacción de conjugado anticuerpo-fármaco a una columna de SP-Sepharose pre-equilibrada en HEPES 50 mM, glicina 5 mM, glicerol al 3%, pH 6,0. El conjugado de anticuerpo se puede eluir usando un gradiente de NaCl 0-1 M en tampón de equilibrado. Se pueden reunir las fracciones que contienen el conjugado, se puede ajustar el pH a 7,2 y la muestra concentrada como se requiera.

Los ejemplos precedentes se pueden repetir con éxito similar mediante la sustitución de los reactantes y/o

25 condiciones de operación descritos genética o específicamente de esta invención por aquellos usados en los ejemplos precedentes.

De la descripción anterior un especialista en la técnica puede cerciorarse fácilmente de las características esenciales de esta invención y, sin apartarse del espíritu y alcance de la misma, pueden hacer diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarlos a diversos usos y condiciones.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES

   1.- Un procedimiento de fabricación de un compuesto (I) o una sal del mismo,

   5 en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, -C(O)OR', -C(O)NR’R", o un grupo protector, en el que R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido y heterocicloalquilo no sustituido, R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano o alcoxi; y X es halógeno, comprendiendo el procedimiento:

   10 la adición de grupos protectores R1' y R2’ a un compuesto (II)

   (II)

   para formar un compuesto (III)

   (III) en la que R3 es alquilo sustituido o alquilo no sustituido; y generar un anillo de cinco miembros que comprende el nitrógeno de amino del compuesto (III) mediante alquilación

   del anillo de arilo adyacente al nitrógeno seguido del cierre del anillo. 20
2. 2.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que R3 es metilo.
3. 3.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que X es Cl o Br.
4. 4.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que X es Br.
5. 5.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que R1’ y R2’ son grupos protectores diferentes.

   25 6.- El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la adición de R1’ y R2’ comprende la adición de R1’ al compuesto

   (II) para formar el compuesto (III’)

   y reemplazar el grupo protector R1’ en el sustituyente hidroxilo con el grupo protector R2’. 7.- El procedimiento de la reivindicación 5, en el que R1’ es terc-butiloxicarbonilo. 8.- El procedimiento de la reivindicación 7, en el que R2’ es –CH2Ph.

   5 9.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que R1’ y R2’ son iguales.
6. 10.- El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende reemplazar R1’ y R2’ con hidrógeno tras la generación del anillo de cinco miembros. 11.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que R1’ y R1 son los mismos y R2’ y R2 son los mismos. 12.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la generación del anillo de cinco miembros comprende la

   10 yodinación de un carbono adyacente al sustituyente amino del compuesto (III) seguido de alquilación usando 1,3

   dihalopropeno. 13.- Un procedimiento de fabricación de un análogo de CBI CC-1065, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que presenta la fórmula siguiente:

   en la que X es halo;

   X1 y Z se seleccionan cada uno independientemente de O, S y NR8, en la que R8 es un miembro seleccionado de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, y acilo;

   R4, R4', R5 y R5 son miembros seleccionados independientemente del grupo que consiste en H, alquilo sustituido,

   20 alquilo no sustituido, arilo sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, halógeno, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(O)R9, SR9, OR9 y CR9=NR10,

   en las que R9 y R10 se seleccionan independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido, arilo sustituido o arilo no sustituido, heteroarilo

   25 sustituido o heteroarilo no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo no sustituido, y peptidilo sustituido o peptidilo no sustituido, o las que R9 y R10 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos están combinados opcionalmente formando un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos, y

   R11 y R11' son cada uno independientemente H o alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido; R6 es H, alquilo C1-6 sustituido o alquilo C1-6 no sustituido, ciano, o alcoxi, y R7 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo sustituido, alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido, heteroalquilo no sustituido, difosfatos, trifosfatos, acilo, C(O)R12R13, C(Q)OR12, C(O)NR12R13, P(O)(OR12)2, C(O)CHR12R13, SR12 y SiR12R13R14,

   en las que R12, R13, y R14 son miembros seleccionados independientemente de H, alquilo sustituido o alquilo no sustituido, heteroalquilo sustituido o heteroalquilo no sustituido y arilo sustituido o arilo no sustituido, o en las que R12 y R13 junto con el átomo de nitrógeno o de carbono al que están unidos están combinados opcionalmente formando un sistema de anillo heterocicloalquilo sustituido o no sustituido que presenta de 4 a 6 miembros, que contiene opcionalmente dos o más heteroátomos; comprendiendo el procedimiento:

   la adición de grupos protectores R1' y R2’ a un compuesto (II)

   para formar un compuesto (III)

   en la que R3 es alquilo sustituido o alquilo no sustituido;

   generar un anillo de cinco miembros que comprende el nitrógeno de amino del compuesto (III) mediante alquilación del anillo de arilo adyacente al nitrógeno seguido de cierre del anillo; y adición de una unidad de unión al compuesto (III) eliminando el grupo protector R1’ y uniendo el resto:

   al sustituyente amino del compuesto (III), en el que indica el punto en el que el resto está unido al sustituyente amino.

   20 14.- El procedimiento de la reivindicación 13, en el que la generación del anillo de cinco miembros comprende la yodinación de un carbono adyacente al sustituyente amino del compuesto (III) seguido de alquilación usando 1,3dihalopropeno antes de la generación del anillo de cinco miembros.
7. 15.- El procedimiento de la reivindicación 13, en el que R6 es H.
8. 16.- El procedimiento de la reivindicación 13 en el que se seleccionan grupos protectores R1’ y R2’ de: BOC, FMOC,

   25 2-trimetilsililetoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, 4-metil-1-piperazincarbonilo, 1-metil-1-(4-bifenilil)etoxicarbonilo, difeniloxicarbonilo, bencilo, t-butilo, tetrahidropirano, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, triisopropilsililo, t-butildifenilsililo, 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo, diisopropilmetilxicarbonilo, viniloxicarbonilo, metoxibenciloxicarbonilo, nitrobenciloxicarbonilo, ciclohexiloxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo, formilo, acetilo, trihaloacetilo, benzoilo, nitrofenilacetilo, 2-nitrobencenosulfonilo, ftalimido, y ditiasuccinoilo.

   Figura 1 Figura 2 Figura 3