EA015324B1 - Способы и соединения для получения аналогов сс-1065 - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к способу соединений формулы Iгде R, R, Rи X имеют значения, указанные в формуле изобретения, используемых в качестве промежуточных соединений в синтезе CBI аналога CC-1065Способ получения соединения формулы (I) включает присоединение различных защитных групп Rи Rк соединению (II)где Rпредставляет собой Cалкил; путем гидролиза группы Rи защиты аминогруппы и полученной гидроксильной группы с получением соединения (III)образование пятичленного кольца, содержащего аминный азот соединения (III), путем алкилирования арильного кольца в положение, смежное с указанным азотом, с последующим закрытием кольца с образованием рацемического соединения (V)и последующее разделение энантиомеров соединения формулы (V). Способ получения CBI аналога CC-1065 заключается в присоединении к соединению (I) связующего звена

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет согласно предварительной заявке США на выдачу патента № 60/730804, поданной 26 октября 2005 г., которая включена здесь посредством ссылки в полном объеме.

Предпосылки к созданию изобретения

Известно, что СС-1065 является сильным цитотоксином. Впервые СС-1065 был выделен из 8!гер!отусек хе1еп818 в 1981 г. компанией ир)обп Сотрапу (Напка е! а1., 1. АпбЬю!. 31: 1211 (1978); Мабт е! а1., 1. АпбЬю!. 33: 902 (1980); МагИп е! а1., 1. АпбЬю!. 34: 1119 (1981)) и было обнаружено, что он обладает сильной противоопухолевой и антимикробной активностью как т уйго. так и у экспериментальных животных (Ь1 е! а1., Сапсег Кек. 42: 999 (1982)). СС-1065 связывается с двухспиральной В-ДНК в пределах малой бороздки (8теепкоп е! а1., Сапсег Кек. 42: 2821 (1982)) с предпочтением последовательностей 5'6(Λ/ΟΝΤΤΛ)-3' и 5'-б(ААААА)-3' и алкилирует N3 положение 3'-аденина посредством своей СР1 единицы левого вращения, присутствующей в этой молекуле (Ниг1еу е! а1., 8с1епсе 226: 843 (1984)). Несмотря на его эффективность и широкий спектр противоопухолевой активности, СС-1065 не может быть использован для людей, поскольку вызывает отсроченную гибель у экспериментальных животных.

В уровне техники известно много аналогов и производных СС-1065. Был сделан обзор исследований структуры, синтеза и свойств многих из этих соединений. См., например, Водег е! а1., Апдете. Сбет. 1п!. Еб. Епд1. 35: 1438 (1996); и Водег е! а1., Сбет. Кеу. 91: 787 (1997).

Группа при Куотеа Накко Кодуа Со., Ь!б. получила ряд производных СС-1065. См., например, патенты США № 5101038; 5641780; 5187186; 5070092; 5703080; 5070092; 5641780; 5101038 и 5084468, опубликованную заявку РСТ νθ 96/10405 и опубликованную европейскую заявку 0537575 А1.

Ир)оЬп Сотрапу (Рбагташа ир)обп) также проявила активность в получении производных СС1065. См., например, патенты США № 5739350; 4978757, 5332837 и 4912227.

Краткое изложение сущности изобретения

Одним вариантом осуществления изобретения является способ получения соединения (I) или его соли

где К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, алкил, -С(О)ОК', -Γ(Ο)ΝΒ'Κ или защитную группу, где К' и К'' независимо выбраны из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила и незамещенного гетероциклоалкила;

К⁶ представляет собой Н, замещенный или незамещенный низший алкил, циано или алкокси;

X представляет собой галоген.

В этом способе защитные группы К¹ и К² присоединяют к соединению (II) с получением соединения (III)

где К³ представляет собой алкил. Получается пятичленное ния (III).

Другим вариантом осуществления является способ получения СВI аналога СС-1065 или его фармацевтически приемлемой соли следующей формулы:

кольцо, содержащее аминный азот, соедине- 1 015324

из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила и ацила;

В⁴, В⁴, В⁵ и В⁵ представляют собой радикалы, независимо выбранные из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила, незамещенного гетероциклоалкила, галогена, Νϋ;. ΝΒ⁹Β¹⁰, ЫС(О)В⁹, ОС(О)ИВ⁹В¹⁰, ОС(О)ОВ⁹, С(О)В⁹, 8В⁹, ОВ⁹, СВ⁹=ИВ¹⁰ и О(СН2)_ПЫВ¹¹В¹¹', где В⁹ и В¹⁰ независимо выбраны из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероарила, замещенного или незамещенного гетероциклоалкила и замещенного или незамещенного пептидила, или где В⁹ и В¹⁰ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием замещенной или незамещенной гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов, и

В¹¹ и В¹¹, каждый независимо, представляет собой Н или низший алкил;

В⁶ представляет собой Н, замещенный или незамещенный низший алкил, циано или алкокси и

В⁷ представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного гетероалкила, незамещенного гетероалкила, дифосфатов, трифосфатов, ацила, С(О)В¹²В¹³, С(О)ОВ¹², С(О)1МВ¹²В¹³, Р(О)(ОВ¹²)₂, С(О)СНВ¹²В¹³, 8В¹² и 81В¹²В¹³В¹⁴, где В¹², В¹³ и В¹⁴ представляют собой радикалы, независимо выбранные из Н, замещенного или не замещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила и замещенного или незамещенного арила, или где В¹² и В¹³ вместе с атомом азота или углерода, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием замещенной или незамещенной гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов.

Этот способ включает присоединение защитных групп В¹ и В² к соединению (II)

СП) с получением соединения (III)

где В³ представляет собой алкил. Получается пятичленное кольцо, содержащее аминный азот, соединения (III). Связующее звено присоединяют к соединению (III), причем это связующее звено включает

К⁵

Еще один вариант осуществления представляет собой соединение формулы (I) или его фармацевти- 2 015324 чески приемлемую соль

где К¹ и К², каждый независимо, представляет собой Н, алкил, -С(О)ОК', -Ο(Θ)ΝΚ'Κ или защитную группу, где К' и К'' независимо выбраны из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила и незамещенного гетероциклоалкила.

Краткое описание чертежей

Неограничивающие и неисчерпывающие варианты осуществления настоящего изобретения описаны со ссылкой на следующие чертежи. На них одинаковые номера позиций относятся к аналогичным частям всюду на различных чертежах, если не указано иное.

Для лучшего понимания настоящего изобретения будут сделаны ссылки на следующее подробное описание, которое необходимо рассматривать совместно с прилагаемыми чертежами, на которых фиг. 1 представляет собой схему синтеза для одного варианта осуществления способа получения СВ1 аналога СС 1065;

фиг. 2 - схему синтеза для другого варианта осуществления способа получения СВ1 аналога СС 1065;

фиг. 3 - схему синтеза для третьего варианта осуществления способа получения СВ1 аналога СС 1065.

Подробное описание

В контексте настоящего изобретения, Вос относится к трет-бутилоксикарбонилу.

СР1 относится к циклопропапирролоиндолу.

СВ1 относится к циклопропабензиндолу.

СЬх представляет собой карбобензокси.

Όί,'Μ относится к дихлорметану.

ΌΜΡ представляет собой Ν,Ν-диметилформамид.

РМОС относится к 9-флуоренилметилоксикарбонилу.

ТЕА относится к триэтиламину.

ТНР относится к тетрагидрофурану.

ЕОС относится к 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлориду.

Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые здесь, в основном, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в той области, которой принадлежит это изобретение. В основном, используемая здесь номенклатура и лабораторные методики по клеточной культуре, молекулярной генетике, органической химии и химии нуклеиновых кислот и гибридизации, описанные ниже, представляют собой методики, которые хорошо известны и обычно используются в этой области. Методики и способы обычно проводятся в соответствии с общепринятыми способами в этой области и различными общими ссылками. Используемая здесь номенклатура и лабораторные методики по аналитической химии и органическому синтезу, описанные ниже, представляют собой те, которые хорошо известны и обычно используются в этой области. Стандартные способы или их модификации используются для химического синтеза и химического анализа.

Термин терапевтическое средство означает соединение, которое при наличии в терапевтически эффективном количестве оказывает желаемое терапевтическое действие на млекопитающее. Для лечения карцином, желательно, чтобы терапевтическое средство также обладало способностью проникать в клетку-мишень.

Термин цитотоксин означает терапевтическое средство, оказывающее желаемое цитотоксическое действие на злокачественные клетки. Цитотоксическое действие означает, что это средство задерживает рост клеток или приводит к их гибели.

Термины пролекарство и лекарственный конъюгат используются здесь взаимозаменяемо. Оба этих термина относятся к соединению, которое является сравнительно нетоксичным для клеток, пока оно находится в конъюгированной форме, но которое селективно распадается до фармацевтически активной формы под действием определенных условий, например ферментов, находящихся в клетках-мишенях или в непосредственной близости от них.

Символ используемый или как связь, или изображенный перпендикулярно связи, указывает точку, в которой изображаемая часть молекулы присоединена к остатку молекулы, твердой подложке,

- 3 015324 заместителю и т.д.

Термин алкил как таковой или как часть другого заместителя означает, если не указано иное, прямую или разветвленную цепь, или циклический углеводородный радикал, или их комбинацию, который может быть полностью насыщенным, моно- или полиненасыщенным и может включать ди- и мультивалентные радикалы, имеющие обозначенное число атомов углерода (т.е. С1-С_!0- означает от одного до десяти атомов углерода). Примеры насыщенных углеводородных радикалов включают, но не только, такие группы, как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, т-бутил, изобутил, втор-бутил, циклогексил, (циклогексил)метил, циклопропилметил, гомологи и изомеры, например, н-пентила, н-гексила, нгептила, н-октила и подобных. Ненасыщенная алкильная группа представляет собой группу, имеющую одну или несколько двойных связей или тройных связей. Примеры ненасыщенных алкильных групп включают, но не только, винил, 2-пропенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3(1,4-пентадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и высшие гомологи и изомеры. Подразумевается, что термин алкил, если не указано иное, также включает производные алкила, более подробно описанные ниже, такие как гетероалкил. Алкильные группы, которые ограничены углеводородными группами, называются гомоалкил.

Термин алкилен как таковой или как часть другого заместителя означает двухвалентный радикал, полученный из алкана, примером которого является, но не только, -СН₂СН₂СН₂СН₂-, и дополнительно включает группы, описанные ниже как гетероалкилен. Обычно алкильная (или алкиленовая) группа будет иметь от 1 до 24 атомов углерода с группами, имеющими 10 или меньше атомов углерода, являющихся предпочтительными в настоящем изобретении. Низший алкил или низший алкилен представляет собой алкильную или алкиленовую группу с более короткой цепью, в основном имеющую восемь или менее атомов углерода.

Термин гетероалкил как таковой или в сочетании с другим термином, если не указано иное, означает стабильную прямую, или разветвленную цепь, или циклический углеводородный радикал, или их комбинации, состоящую из нескольких атомов углерода и по меньшей мере одного гетероатома, выбранного из группы, состоящей из О, Ν, 81 и 8, и где атомы азота, углерода и серы необязательно могут быть окислены, а азотный гетероатом необязательно может быть четвертичным. Гетероатом(ы) О, Ν, 8 и 81 могут располагаться в любом внутреннем положении гетероалкильной группы или в положении, в котором алкильная группа присоединена к оставшейся части молекулы. Примеры включают, но не только, -СН2-СН2-О-СН3, -СЩ-СЩ-БТН-СНз, -СН2-СН2-ЖСНз)-СНз, -СН2-8-СН2-СН3, СН_;-СН_;.-8(О)-СН_;. -СН2-СН2-8(О)2-СНз, -СН=СН-О-СНз, -81(СНз)з, -СЩ-СН=^ОСНз и -СН=СН-^СНз)-СНз. Подряд может идти вплоть до двух гетероатомов, например, такие как -СН₂-ИН-ОСН₃ и -СН₂-О-81 (СН₃)₃. Подобным образом термин гетероалкилен как таковой или как часть другого заместителя означает двухвалентный радикал, полученный из гетероалкила, как проиллюстрировано на примере, но не только, -СН2СН₂-8-СН₂-СН₂- и -СН₂-8-СН₂-СН₂-NН-СН₂-. В отношении гетероалкиленовых групп гетероатомы также могут занимать любой или оба конца цепи (например, алкиленокси, алкилендиокси, алкиленамино, алкилендиамино и подобное). Термины гетероалкил и гетероалкилен охватывают поли(этиленгликоль) и его производные (см., например, 811саг\\Шсг Ро1ушег§ Са1а1од, 2001). Более того, для алкиленовых и гетероалкиленовых заместителей ориентация заместителя не подразумевается направлением, в котором написана формула заместителя. Например, формула С(О)₂К'- представляет как -С(О)₂К'-, так и -К'С(О)₂-.

Термин низший в сочетании с терминами алкил или гетероалкил относится к функциональной группе, имеющей от 1 до 6 атомов углерода.

Термины алкокси, алкиламино, алкилсульфонил и алкилтио (и тиоалкокси) используются в их обычном смысле и относятся к тем алкильным группам, которые присоединены к оставшейся части молекулы через атом кислорода, аминогруппу, группу 8О₂ или атом серы соответственно.

Термин арилсульфонил относится к арильной группе, присоединенной к остальной части молекулы через 8О₂ группу, а термин сульфгидрильная относится к 8Н группе.

В целом, ацильный заместитель также выбран из группы, указанной выше. В контексте настоящего изобретения термин ацильный заместитель относится к группам, присоединенным к и удовлетворяющим валентности карбонильного углерода, который либо напрямую, либо опосредовано присоединен к полициклическому ядру соединений по настоящему изобретению.

Термины циклоалкил и гетероциклоалкил как таковые или в сочетании с другими терминами представляют, если не указано иное, циклические варианты замещенного или незамещенного алкила и замещенного или незамещенного гетероалкила соответственно. Кроме того, в отношении гетероциклоалкила гетероатом может занимать положение, в котором гетероцикл присоединен к остальной молекуле.

Примеры циклоалкила включают, но не только, циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, зциклогексенил, циклогептил и подобное.

Примеры гетероциклоалкила включают, но не только, 1-(1,2,5,6-тетрагидропиридил), 1пиперидинил, 2-пиперидинил, з-пиперидинил, 4-морфолинил, з-морфолинил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-з-ил, тетрагидротиен-2-ил, тетрагидротиен-з-ил, 1-пиперазинил, 2-пиперазинил и по

- 4 015324 добное. Гетероатомы и атомы углерода циклических структур необязательно окислены.

Термины гало или галоген как таковые или как часть другого заместителя означают, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или иода. Кроме того, подразумевается, что такие термины, как галогеналкил включают моногалогеналкил и полигалогеналкил. Например, подразумевается, что термин галогенЦ-Сдалкил включает, но не только, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3бромпропил и подобное.

Термин арил означает, если не указано иное, замещенный или незамещенный полиненасыщенный ароматический углеводородный заместитель, который может представлять собой одно кольцо или несколько колец (предпочтительно от 1 до 3 колец), которые конденсированы друг с другом или ковалентно связаны. Термин гетероарил относится к арильным группам (или кольцам), которые содержат от одного до четырех гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8, где атомы азота, углерода и серы необязательно окислены, а атом(ы) азота необязательно является четвертичным.

Гетероарильная группа может быть присоединена к остальной молекуле через гетероатом. Неограничивающие примеры арильных и гетероарильных групп включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4бифенил, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2оксазолил, 4-оксазолил, 2-фенил-4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил, 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, 5-индолил, 1изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил и 6-хинолил.

Заместители для каждой указанной выше арильной и гетероарильной кольцевых систем выбраны из группы подходящих заместителей, описанных ниже. Арил и гетероарил также охватывают кольцевые системы, в которых одна или несколько неароматических кольцевых систем являются конденсированными или связанными иным образом с арильной или гетероарильной системой.

Для краткости, термин арил при использовании в сочетании с другими терминами (например, арилокси, арилтиокси, арилалкил) включает как арильные, так и гетероарильные кольца, определенные выше. Следовательно, подразумевается, что термин арилалкил включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к алкильной группе (например, бензил, фенэтил, пиридилметил и подобное), включая те алкильные группы, в которых атом углерода (например, метиленовая группа) был заменен, например, на атом кислорода (например, феноксиметил, 2-пиридилоксиметил, 3-(1нафтилокси)пропил и подобные).

Каждый из указанных выше терминов (например, алкил, гетероалкил, арил и гетероарил) включает как замещенные, так и незамещенные формы указанного радикала. Предпочтительные заместители для каждого типа радикалов приведены ниже.

Заместители для алкильных и гетероалкильных радикалов (включая те группы, которые часто называют алкиленом, алкенилом, гетероалкиленом, гетероалкенилом, алкинилом, циклоалкилом, гетероциклоалкилом, циклоалкенилом и гетероциклоалкенилом) в основном называются алкильными заместителями и гетероалкильными заместителями соответственно, и они могут представлять собой одну или несколько из различных групп, выбранных из, но не ограниченных ими, -ОК', =О, =ΝΚ', =Ν-ΟΚ.' , -ΝΚΈ, -8К', -галоген, 81К'КК', -ОС(О)К', -С(О)К', -СО₂К', -ΟΟΝΚ'Κ, -ОС(О)К1К'К, -№''С(О)К', -ΝΚ'0(Ο)ΝΚΚ', -ЫК''С(О)₂К', -МК-С(НК.'КК')=МК.'''', -ΝΚ-ΟΝΚ’Κ'^ΝΚ', -8(О)К', -8(О)₂К', -8(О)₂№'К'', -ЫК8О₂К', -СИ и -ЫО₂ в количестве от 0 до (2т'+1), где т' представляет собой общее число атомов углерода в этих радикалах. .', .'', .''' и .'''', каждый предпочтительно независимо, относится к водороду, замещенному или незамещенному гетероалкилу, замещенному или незамещенному арилу, например арилу, замещенному 1-3 галогенами, замещенному или незамещенному алкилу, алкокси или тиоалкоксигруппам или арилалкильным группам. В тех случаях, когда соединение по изобретению включает более одной . группы, например, каждая из . групп независимо выбрана как любая .', .'', .''' и .'''' группа в тех случаях, когда присутствует более одной из этих групп. В тех случаях, когда .' и .'' присоединены к одному и тому же атому азота, они могут быть объединены с атомом азота с образованием 5-, 6- или 7членного кольца. Например, подразумевается, что -Ν.'.'' включает, но не только, 1-пирролидинил и 4морфолинил. Из приведенного выше рассмотрения заместителей специалисту в данной области будет понятно, что термин алкил включает группы, содержащие атомы углерода, связанные с группами, отличными от водородных групп, такими как галогеналкил (например, -СГ₃ и -СН₂СГ₃) и ацил (например, -С(О)СН₃, -С(О)СГ₃, -С(О)СН2ОСН₃ и подобными).

Подобно заместителям, описанным для алкильного радикала, арильные заместители и гетероарильные заместители называются арильные заместители и гетероарильные заместители соответственно и являются различными и выбраны, например, из галогена, -ОК', =О, =ΝΚ', =№ОК', -ΝΚ'.'', -8К', -галоген, -81К'КК''', -ОС(О)К', -С(О)К', -СО₂К', -СОХК'К. ОС(О)\К'К. -ЫК''С(О)К', -МК.'-С(О)К1КК',

-ЫКС(О)₂К', -ΝΚ-ϋ(ΝΚ^,Κ)=ΝΚ''', -8(О)К', -8(О)₂К', -8(О)₂МК'К, -К1К.8О₂К', -ΌΝ и -ЫО₂, -К', -Ν₃, -СН(Рй)₂, фтор(С₁-С₄)алкокси и фтор(С₁-С₄)алкил, в количестве от нуля до общего числа открытых валентностей в ароматической кольцевой системе; и где К', К, К''' и К'''' предпочтительно независимо выбраны из водорода, (С₁-С₈)алкила и гетероалкила, незамещенного арила и гетероарила, (незамещенного

- 5 015324 арила)-(С₁-С₄)алкила и (незамещенного арила)окси-(С1-С₄)алкила. В тех случаях, когда соединение по изобретению включает более одной К группы, например, каждая из В групп независимо выбрана как каждая К', К'', К''' и К'''' группа, в тех случаях, когда присутствует больше чем одна из этих групп.

Два из арильных заместителей на соседних атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть заменены заместителем формулы -Т-С(О)-(СКК')_Ч-И-, где Т и и независимо представляют собой -ΝΕ-, -О-, -СКК'- или одинарную связь, а с.| представляет собой целое число от 0 до 3. Альтернативно, два из заместителей на соседних атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть заменены заместителем формулы -А-(СН₂)_ГВ-, где А и В независимо представляют собой -СКК'-, -О-, -ΝΒ-, -8-, -8(О)-, -8(О)₂-, -8(О)₂ЫК'- или одинарную связь, а г представляет собой целое число от 1 до 4. Одна из одинарных связей нового кольца, образованная таким образом, необязательно может быть заменена двойной связью. Альтернативно, два из заместителей на соседних атомах арильного или гетероарильного кольца необязательно могут быть заменены заместителем формулы -(СКК')₈-Х-(СК''К''')₆-, где 8 и 6 независимо представляют собой целые числа от 0 до 3, а X представляет собой -О-, -ΝΒ.'-, -8-, -8(О)-, -8(О)₂- или -8(О)₂ХК'-. Заместители К, К', К и К''' предпочтительно независимо выбраны из водорода или замещенного или незамещенного (С₁-С₆)алкила.

В контексте настоящего изобретения термин дифосфат включает, но не только, сложный эфир фосфорной кислоты, содержащий две фосфатные группы. Термин трифосфат включает, но не только, сложный эфир фосфорной кислоты, содержащий три фосфатные группы. Например, конкретные лекарственные средства, содержащие дифосфат или трифосфат включают

В контексте настоящего изобретения термин гетероатом включает кислород (О), азот (Ν), серу (8) и кремний (81).

Символ К представляет собой общую аббревиатуру, которая представляет группу заместителей, которая выбрана из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероарила и замещенных или незамещенных гетероциклильных групп.

В отношении термина защитная группа специалистам в данной области будет понятно, как защитить конкретную функциональную группу от воздействия выбранной серией условий реакции. Примеры используемых защитных групп см. у Огеепе с1 а1., РгЩссОус Огоир8 ίη Огдашс 8уШ11С515. ίοΐιη \УПеу & 8οη8, №\ν Уогк, 1991. Примеры подходящих защитных групп включают, но не только, ВОС, РМОС, 2триметилсилилэтоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 4-метил-1-пиперазинкарбонил, 1-метил-1-(4бифенилил)этоксикарбонил, дифенилоксикарбонил, бензил, т-бутил, тетрагидропиран, триметилсилил, тбутилдиметилсилил, триизопропилсилил, т-бутилдифенилсилил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, диизопропилметилоксикарбонил, винилоксикарбонил, метоксибензилоксикарбонил, нитробензилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, бензилоксикарбонил, формил, ацетил, тригалогенацетил, бензоил, нитрофенилацетил, 2-нитробензолсульфонил, фталимидо и дитиасукциноил.

Термин фармацевтически приемлемый носитель в контексте настоящего изобретения означает фармацевтически приемлемое вещество, композицию или наполнитель, например жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующее вещество, принимающее участие в переносе или доставке химического агента. Фармацевтически приемлемые носители включают фармацевтически приемлемые соли, где термин фармацевтически приемлемые соли включает соли активных соединений, которые получены с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей, встречающихся у описанных здесь соединений. В тех случаях, когда соединения по настоящему изобретению содержат относительно кислые функциональные группы,

- 6 015324 могут быть получены основно-аддитивные соли посредством контактирования нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемого основания, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых основно-аддитивных солей включают натриевую, калиевую, кальциевую, аммонийную, органическую аминную или магниевую соль и подобные соли. В тех случаях, когда соединения по настоящему изобретению содержат сравнительно основные функциональные группы, могут быть получены кислотно-аддитивные соли, посредством взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, либо в чистом виде, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей включают соли, полученные из неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромисто-водородная, азотная, угольная, монозамещенная угольная, фосфорная, дизамещенная фосфорная, монозамещенная фосфорная, серная, монозамещенная серная, йодисто-водородная или фосфористая кислота и т.п., а также соли, полученные из относительно нетоксичных органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, изомасляная, малеиновая, малоновая, бензойная, янтарная, пробковая, фумаровая, молочная, миндальная, фталевая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, лимонная, винная, метансульфоновая и подобные. Также включены соли аминокислот, такие как аргинаты и подобные, и соли органических кислот, такие как глюкуроновая или галактуроновая кислота и подобные (см., например, Вегде с1 а1., Рйаттасеибса1 8а1к, 1оитпа1 о£ РйагтасеиИса1 8с1еисе, 1977, 66, 1-19). Некоторые особые соединения по настоящему изобретению содержат как основные, так и кислые функциональные группы, что позволяет превращать эти соединения либо в основно-, либо в кислотноаддитивные соли.

Нейтральные формы соединений предпочтительно регенерируют путем взаимодействия соли с основанием или кислотой и выделения исходного соединения общепринятым способом. Исходная форма соединения отличается от различных солевых форм определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, но в остальном эти соли эквивалентны исходной форме соединения в отношении целей настоящего изобретения.

Помимо солевых форм, настоящее изобретение относится к соединениям, которые находятся в форме пролекарства. Пролекарства описанных здесь соединений представляют собой соединения, которые легко подвергаются химическим изменениям в физиологических условиях с предоставлением соединений по настоящему изобретению. Кроме того, пролекарства могут быть преобразованы в соединения по настоящему изобретению химическими или биохимическими способами в среде ех νίνο. Например, пролекарства могут медленно превращаться в соединения по настоящему изобретению, когда они располагаются в резервуаре трансдермального пластыря с подходящим ферментом или химическим реактивом.

Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированных формах, также как и в сольватированных формах, в том числе гидратированных формах. В основном, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам и входят в объем настоящего изобретения. Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать во множественных кристаллических или аморфных формах. В основном, все физические формы эквивалентны для применений, предусмотренных настоящим изобретением, и включены в объем настоящего изобретения.

Некоторые соединения по настоящему изобретению имеют асимметричные атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; рацематы, диастереомеры, геометрические изомеры и индивидуальные изомеры входят в объем настоящего изобретения.

Соединения по настоящему изобретению также могут содержать неприродные соотношения атомных изотопов при одном или нескольких атомах, которые составляют эти соединения. Например, соединения могут быть радиоактивно мечены радиоактивными изотопами, например, такими как тритий (³Н), йод-125 (¹²⁵1) или углерод-14 (¹⁴С). Все изотопные варианты соединений по настоящему изобретению, радиоактивные, или нет, входят в объем настоящего изобретения.

Термины полипептид, пептид и белок здесь используются взаимозаменяемо и относятся к полимеру аминокислотных остатков. Эти термины применяются к аминокислотным полимерам, в которых один или несколько аминокислотных остатков являются искусственным химическим миметиком соответствующих природных аминокислотных полимеров и неприродных аминокислотных полимеров. Эти термины также охватывают термин антитело.

Термин аминокислота относится к природным и синтетическим аминокислотам, а также аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые действуют подобно природным аминокислотам. Природными аминокислотами являются те аминокислоты, которые кодируются генетическим кодом, а также те, которые в последствии являются модифицированными, например гидроксипролин, γкарбоксиглутамат и О-фосфосерин. Аналоги аминокислот относятся к соединениям, которые имеют такую же основную химическую структуру, как природная аминокислота, т.е. α-углерод, который связан с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой, и В группу, например гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид, метионинметилсульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные В группы (например, норлейцин) или модифицированные пептидные скелеты, но сохраняют ту же основную химическую структуру, что и природная аминокислота. Одной аминокислотой, которая может быть конкретно ис

- 7 015324 пользована, является цитруллин, который является предшественником аргинина и принимает участие в образовании мочевины в печени. Миметики аминокислот относятся к химическим соединениям, которые имеют структуру, отличную от общей химической структуры аминокислоты, но действуют подобно природной аминокислоте. Термин неприродная аминокислота представляет Ό-стереохимическую форму двадцати природных аминокислот, описанных выше. Далее будет понятно, что термин неприродная аминокислота включает гомологи природных аминокислот и синтетически модифицированные формы природных аминокислот. Синтетически модифицированные формы включают, но не только, аминокислоты, имеющие алкиленовые цепи, укороченные или удлиненные на два атома углерода, аминокислоты, содержащие необязательно замещенные арильные группы, и аминокислоты, содержащие галогенированные группы, предпочтительно галогенированные алкильные и арильные группы.

При присоединении к линкеру или конъюгату по изобретению аминокислота находится в форме аминокислотной боковой цепи, где карбоксильная группа аминокислоты была заменена кето(С(О))группой. Таким образом, например, боковая аланиновая цепь представляет собой -С(О)-СН(ХН₂)-СНз и так далее.

Аминокислоты и пептиды могут быть защищены блокирующими группами. Блокирующая группа представляет собой атом или химическую группу, которая защищает Ν-конец аминокислоты или пептида от нежелательных реакций и может быть использована во время синтеза конъюгата лекарственное средство-расщепляемый субстрат. Она должна оставаться присоединенной к Ν-концу на протяжении синтеза и может быть удалена после завершения синтеза лекарственного конъюгата с помощью химических или иных условий, при которых достигается ее селективное удаление. Блокирующие группы, подходящие для защиты Ν-конца, известны в области пептидной химии. Примеры блокирующих групп включают, но не только, водород, Ό-аминокислоту и карбобензокси (С'Ьх) хлорид.

Термин антитело, упоминаемый в контексте настоящего изобретения, включает целые антитела и любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. антигенсвязывающую часть) или их одиночные цепи. Антитело относится к гликопротеину, содержащему по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (Ь) цепи, взаимосвязанные дисульфидными связями, или их антигенсвязывающим частям. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (У_Н) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, С_Н1 С_Н2 и С_Н3, и может быть μ, δ, γ, α или ε изотипа. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (У_ь) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена С_ъ, который может быть к или λ изотипа. У_Н и У|, области дополнительно можно подразделить на участки гипервариабельности, называемые областями, определяющими комплементарность (СЭЯ), разбросанные между участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (БЯ). Каждая У_Н и У_ъ состоит из трех СЭЯ и четырех БЯ, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: БЯ1, СЭР1. БЯ2, СЭР2. БЯ3, СЭЯ3. БЯ4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (С 1с|) классической системы комплемента.

Термины фрагмент антитела или антигенсвязывающая часть антитела (или просто часть антитела), в контексте настоящего изобретения относятся к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном. Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может выполняться фрагментами антитела полной длины. Примеры связывающих фрагментов, которые охватываются термином фрагмент антитела или антигенсвязывающая часть антитела, включают (1) БаЬ фрагмент, моновалентный фрагмент, состоящий из У_ь, У_Н, Сь и С_Н1 доменов; (и) Б(аЬ')₂ фрагмент, двухвалентный фрагмент, содержащий два БаЬ фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (ш) Бб фрагмент, состоящий из У_Н и С_Н1 доменов; (ίν) Бу фрагмент, состоящий из У_ь и У_Н доменов одного плеча антитела, (ν) бАЬ фрагмент (Аатб с1 а1., (1989) №Шгс 341:544-546), который состоит из У_Н домена; и (νί) выделенной области, определяющей комплементарность (СЭЯ). Кроме того, хотя два домена Бу фрагмента Уь и У_Н кодируются отдельными генами, их можно объединить, используя рекомбинантные методы, посредством синтетического линкера, что позволяет выполнить их в виде одной белковой цепи, в которой У|, и У_Н области образуют пару для формирования моновалентных молекул (известных как одноцепочечные Бу (зсБу); см., например, Впб с1 а1. (1988) §с1еисе 242:423-426 и Нийои е1 а1. (1988) Ргос. №11. Асаб. 8с1 И8А 85-5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также охватываются термином антигенсвязывающая часть антитела. Эти фрагменты антител получают, используя обычные методики, известные специалистам в данной области, и эти фрагменты подвергают скринингу на их пригодность тем же способом, что и интактные антитела.

Термин моноклональное антитело в контексте настоящего изобретения относится к препарату молекул антител одного молекулярного состава. Состав моноклонального антитела демонстрирует одну связывающую специфичность и аффинность для конкретного эпитопа.

Твердая подложка в контексте настоящего изобретения относится к веществу, которое, по суще

- 8 015324 ству, не растворимо в выбранной системе растворителей или которое можно легко отделить (например, посредством осаждения) от выбранной системы растворителей, в которой он растворяется. Твердые подложки, используемые при практическом осуществлении настоящего изобретения, могут включать группы, которые являются активированными или способны к активации, что позволяет выбранным группам связываться с твердой подложкой. Твердая подложка также может представлять собой субстрат, например чип, пластинку или лунку, на котором связано индивидуальное или более одного соединения по настоящему изобретению.

Соединения по изобретению получают в виде отдельного изомера (например, энантиомера, цистранс, позиционного, диастереомера) или в виде смеси изомеров. В предпочтительном варианте осуществления соединения получают, по существу, в виде отдельного изомера. Способы получения, по существу, изомерно чистых соединений известны в уровне техники. Например, энантиомерно обогащенные смеси и чистые энантиомерные соединения могут быть получены с использованием синтетических промежуточных соединений, которые являются энантиомерно чистыми в сочетании с реакциями, которые либо сохраняют стереохимию при хиральном центре без изменений, либо приводят к ее полной инверсии. Альтернативно, конечный продукт или промежуточные соединения на всем протяжении пути синтеза может быть выделен в виде индивидуального стереоизомера. Методики превращения или сохранения без изменений конкретного стереоцентра и методики для разделения смесей стереоизомеров хорошо известны в области техники, и выбор и предназначение способа в конкретной ситуации находится в компетенции специалиста в данной области. В основном см., Ритшзз с1 а1. (ебз.), УОСЕЬ'8 ΕΝΕΥΕΕΟΡΕΟΙΑ ОР РКАСТ1САЕ ΟΕΟΑΝΙΕ (ΊΙΕΛ1Ι8ΤΡΥ 5^ТН ΕΌ., Еопщпап 8с1еибйс апб Тес1ииса1 Ь1б., Еззех, 1991, рр. 809-816 и Не11ег, Асс. Сйеш. Кез. 23: 128 (1990).

Цитотоксичные аналоги СС-1065 могут быть получены с использованием циклопропабензиндольной (СВ1) группы в качестве алкилирующей единицы вместо циклопропапироллоиндольной (СР1) группы СС-1065. В качестве одного примера СВ1 аналоги СС-1065 включают, но не только, соединения, имеющие формулу (или их фармацевтически приемлемые соли)

где X представляет собой галоген. Предпочтительно X представляет собой С1 или Вг и более предпочтительно X представляет собой Вг.

X¹ и Ζ, каждый независимо, выбран из О, 8 и ΝΚ⁸, где К⁸ представляет собой радикал, выбранный из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила и ацила.

К⁴, К⁴, К⁵ и К⁵ представляют собой радикалы, независимо выбранные из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила, незамещенного гетероциклоалкила, галогена, ΝΟ2, ΝΒ⁹Β¹⁰, ЫС(О)В⁹, ООДЦКК¹⁰, ОС(О)ОК⁹, С(О)К⁹, 8К⁹, ОК⁹, СК' ΝΡ и О(СН2)₁Ж^ПК.¹¹', где К⁹ и К¹⁰ независимо выбраны из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероарила, замещенного или незамещенного гетероциклоалкила и замещенного или незамещенного пептидила, или где К⁹ и К¹⁰ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием замещенной или незамещенной гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов, и

К¹¹ и К^11', каждый независимо, представляет собой Н или низший алкил.

К⁶ представляет собой Н, замещенный или незамещенный низший алкил, циано или алкокси. Предпочтительно К⁶ представляет собой метил, циано или Н. Более предпочтительно К⁶ представляет собой Н.

К⁷ представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного гетероалкила, незамещенного гетероалкила, дифосфатов, трифосфатов, ацила, С(О)К.¹²К¹³, С(О)ОК¹², С(О)ХК¹²К¹³, Р(О)(ОК¹²)₂, С(О)СНК¹²К¹³, 8К¹² и 81КК^;К ⁴, в которых К¹², К¹³ и К¹⁴ представляют собой радикалы, независимо выбранные из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила и замещенного или незамещенного арила, или где К¹² и К¹³ вместе с атомом азота или углерода, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием замещенной или незамещенной гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов.

Примеры СВ1 аналогов СС-1065 описаны в патентных заявках США №№ 10/160972, 10/161233,

- 9 015324

10/161234, 11/134685 и 11/134826 того же заявителя; все они включены здесь посредством ссылок. В этих ссылках также описаны примеры синтеза и применения этих соединений. Эти соединения могут быть использованы в качестве терапевтических агентов (например, лекарственных средств) и в качестве пролекарств. По меньшей мере, в некоторых вариантах осуществления СВ1 аналоги СС-1065 могут быть конъюгированы с агентами для направленной доставки, такими как антитело, рецептор, пептид, лектин, сахарид, нуклеиновая кислота или их комбинации, для применения в фармацевтических композициях, которые селективно доставляют цитотоксические СВ1 аналоги СС-1065 к желаемым клеткам-мишеням, таким как клетки карциномы.

Характерные примеры предраковых состояний, на которые могут быть нацелены эти соединения, включают, но не только: метаплазию, гиперплазию, дисплазию, колоректальные полипы, старческий кератоз, световой хейлит, папилломавирусы человека, лейкоплакию, красный плоский лишай и чечевицеобразный дискоидный дискератоз.

Характерные примеры злокачественных заболеваний или опухолей, на которые могут быть нацелены эти соединения, включают, но не только: рак легких, рак кишечника, рак предстательной железы, лимфому, меланому, рак груди, рак яичников, рак яичек, злокачественное заболевание ЦНС, рак почек, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак ротовой полости, рак носовой полости, рак шейки матки и лейкозы. Для специалиста в данной области будет очевидно, что конкретный агент для направленной доставки может быть выбран таким образом, чтобы он нацеливал лекарственное средство на опухолевую ткань, на которую оказывает воздействие это лекарственное средство (т.е. выбирают агент для направленной доставки, специфичный к опухоль-специфичному антигену). Примеры таких агентов для направленной доставки хорошо известны в уровне техники, неограничивающие примеры которых включают анти-Нег2 для лечения рака груди, анти-СЭ20 для лечения лимфомы, анти-Р8МЛ для лечения рака предстательной железы и анти-СЭ30 для лечения лимфом, в том числе неходжкинской лимфомы.

Эти соединения обеспечивают способ уничтожения клетки. Этот способ включает введение в клетку количества соединения по изобретению, достаточное для уничтожения указанной клетки. В одном варианте осуществления, приводимом в качестве примера, это соединение вводят пациенту, у которого имеются такие клетки. Еще в одном варианте осуществления, приводимом в качестве примера, это введение служит для задержки или остановки роста опухоли, которая содержит эти клетки (например, клетка может быть опухолевой клеткой). Для введения с целью задержки роста, скорость роста клетки должна быть по меньшей мере на 10% ниже скорости роста до введения. Предпочтительно скорость роста будет задерживаться по меньшей мере на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или полностью остановлена.

Фармацевтические композиции включают композиции, в которых активный ингредиент содержится в терапевтически эффективном количестве, т. е. в количестве, эффективном для достижения поставленной цели. Данное количество, эффективное для конкретного применения, будет зависеть, среди прочего, от состояния, подвергаемого лечению. Определение эффективного количества находится в компетенции специалистов в данной области, особенно в свете представленного здесь подробного описания.

Для любого описанного здесь соединения терапевтически эффективное количество исходно можно определить исследованиями в клеточной культуре. Целевыми концентрациями в плазме будут те концентрации активного соединения (соединений), которые могут ингибировать рост и деление клеток. В предпочтительных вариантах осуществления, ингибируется по меньшей мере 25% клеточной активности. В настоящий момент предпочтительными являются целевые концентрации в плазме активного соединения (соединений), которые могут индуцировать ингибирование по меньшей мере около 50, 75 или даже 90% или более клеточной активности. Процент ингибирования клеточной активности у пациента можно контролировать для оценки соответствия достигаемой в плазме концентрации лекарственного средства, а дозу можно регулировать повышением или понижением для достижения желаемого процента ингибирования.

Как хорошо известно из уровня техники, терапевтически эффективные количества для использования у людей также можно определить в моделях на животных. Например, дозы для людей можно составить для достижения той концентрации в кровообращении, которая была обнаружена эффективной у животных. Дозы у людей можно регулировать путем наблюдения за ингибированием клеток и регулируя дозы повышением или понижением, как описано выше.

Терапевтически эффективную дозу также можно определить по данным, полученным у людей для соединений, которые, как известно, демонстрируют подобные фармакологические активности. Применяемую дозу можно регулировать, исходя из относительной биодоступности и эффективности вводимого соединения по сравнению с известным соединением.

Регулирование дозы для достижения максимальной эффективности у людей основано на описанных выше способах и других способах, как хорошо известных в уровне техники в пределах компетентности обычного специалиста.

В случае местного применения системная циркулирующая концентрация введенного соединения не будет иметь особой значимости. В таких случаях соединение вводят таким образом, чтобы достигалась концентрация в локальной области, эффективная для достижения намеченного результата.

Для использования в профилактике и/или лечении заболеваний, связанных с аномальной клеточной

- 10 015324 пролиферацией, предпочтительной является циркулирующая концентрация введенного соединения примерно от 0,001 до 20 мкМ, с предпочтением примерно от 0,01 до 5 мкМ.

Дозы для пациентов, предназначенные для перорального введения описанных здесь соединений, обычно находятся в интервале примерно от 1 примерно до 10000 мг/день, более характерно примерно от 10 примерно до 1000 мг/день и наиболее характерно примерно от 50 примерно до 500 мг/день. Установленные из расчета массы тела пациента, характерные дозы находятся в интервале от примерно 0,01 до примерно 150 мг/кг/день, более характерно от примерно 0,1 до примерно 15 мг/кг/день и наиболее характерно от примерно 1 до примерно 10 мг/кг/день, например 5 или 3 мг/кг/день.

По меньшей мере, в некоторых вариантах осуществления дозы для пациентов, которые задерживают или ингибируют рост опухоли, могут составлять 1 мкмоль/кг/день или менее. Например, дозами для пациентов могут быть дозы 0,9, 0,6, 0,5, 0,45, 0,3, 0,2, 0,15 или 0,1 мкмоль/кг/день или менее (в отношении молей лекарственного средства) лекарственного средства или лекарственного конъюгата, например конъюгата антитело-лекарственное средство. Предпочтительно лекарственное средство или лекарственный конъюгат задерживают рост опухоли при ежедневном введении количества дозы за период по меньшей мере пять дней. По меньшей мере, в некоторых вариантах осуществления опухоль представляет собой опухоль, относящуюся к типу опухолей человека у мышей с 8СШ. В качестве примера мышь с 8СШ может представлять собой СВ17.8СШ мышь (которую можно получить от фирмы Тасошс, СсппапΙο\νπ. ΝΥ).

Для других способов введения величину дозы и интервал можно регулировать индивидуально для обеспечения уровней в плазме введенного соединения, эффективных для конкретного клинического показания, при котором проводят лечение. Например, в одном варианте осуществления соединение по изобретению можно вводить в относительно высоких концентрациях многократно в течение суток. Альтернативно, может быть более желательным вводить соединение по изобретению в минимально эффективных концентрациях и использовать режим введения с меньшей частотой. Это обеспечит терапевтическую схему лечения, которая соответствует тяжести заболевания индивидуума.

Используя представленные здесь сведения, можно планировать эффективный терапевтический режим, который не вызывает значительной токсичности и вполне эффективен для лечения клинических симптомов, проявляемых у конкретного пациента. Это планирование должно включать тщательный выбор активного соединения, принимая во внимание такие факторы, как эффективность соединения, относительная биодоступность, масса тела пациента, наличие и тяжесть неблагоприятных побочных явлений, предпочтительный способ введения и профиль токсичности выбранного агента.

В общем виде СВ1 группа имеет формулу

где заместители могут быть присоединены к атомам кислорода и азота, X представляет собой галоген, а В⁶ представляет собой Н, замещенный или незамещенный низший алкил, циано или алкокси. Предпочтительно В⁶ представляет собой Н, метил или циано. Более предпочтительно В⁶ представляет собой Н. Кроме того, X предпочтительно представляет собой С1 или Вг и более предпочтительно X представляет собой Вг. В основном связующее звено может быть присоединено к аминному заместителю СВ1 группы. Примеры подходящих связующих звеньев включают, но не только

где X¹, Ζ, В⁴, В⁴', В⁵ и В⁵' определены выше.

Примеры подходящих связующих звеньев показаны и описаны в патентных заявках США №№ 10/160972; 10/161233; 10/161234, 11/134685 и 11/134826; а также в патенте США № 6534660, включенных здесь посредством ссылки. Подходящие связующие звенья в пределах этой формулы также включают связующие звенья с несколькими конденсированными кольцами, такие как

- 11 015324

где Ζ' независимо выбран из О, 8 и ΝΚ⁸, где В⁸ является радикалом, выбранным из Н, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила и ацила.

В⁴, В⁴ , В⁵ и В⁵ представляют собой радикалы, независимо выбранные из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила, незамещенного гетероциклоалкила, галогена, N0·. NВ⁹В¹⁰, N('(0)11 . ОБОАПВ , ОС(О)ОВ⁹, С(О)В⁹, 8В⁹, ОВ⁹, СВ⁹=NВ¹⁰ и О(СН2)_ГХВ¹¹В¹¹, где В⁹ и В¹⁰ независимо выбраны из группы, включающей Н, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный гетероалкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный гетероарил, замещенный или незамещенный гетероциклоалкил и замещенный или незамещенный пептидил, или где В⁹ и В¹⁰ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием замещенной или незамещенной гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов, и

В¹¹ и В¹¹, каждый независимо, представляет собой Н или низший алкил.

В¹⁵ может представлять собой Н, замещенный или незамещенный алкил, или В¹⁵ и В^4' или В^5' могут объединяться с образованием кольца (например, пяти- или шестичленного кольца).

Одно промежуточное соединение, используемое при образовании СВ1 аналогов СС-1065, имеет формулу (I)

О) где В¹ и В², каждый независимо, представляет собой Н, алкил, -С(О)ОВ', -С(О)NВ'В'' или защитную группу, где В' и В'' независимо выбраны из группы, состоящей из Н, замещенного алкила, незамещенного алкила, замещенного арила, незамещенного арила, замещенного гетероарила, незамещенного гетероарила, замещенного гетероциклоалкила и незамещенного гетероциклоалкила, а X представляет собой га логен.

В одном общепринятом способе синтеза соединения (I), исходное вещество представляет собой 1,3дигидроксинафталин, который затем вступает в реакцию с аммиаком в герметичной камере (например, бомбе) для замещения гидроксигруппы в 3 положении нафталина амином. Примеры этого способа синтеза можно найти в патенте США № 6534660 и у ΌΕ. Водег е! а1., 1. Огд. Сйет. 57, 2873-2876 (1992), оба включены посредством ссылки. После реакции аминирования следует присоединение защитных групп к обеим гидрокси и аминным частям.

Хотя реакция аминирования может иметь приемлемый выход в малом масштабе, это может быть трудным для проведения реакции в крупном масштабе, поскольку применение бомбы для содержания этой реакции под давлением, которая обычно протекает под давлением, по существу, более 1 атм (около 1,01х 10⁵ Па) и в основном при давлении по меньшей мере 1,5 атм (1,52х10⁵ Па). Было обнаружено, что этот способ синтеза в результате приводит, по существу, к низкому выходу при синтезе в более крупном масштабе.

В отличие от общепринятых способов, исходным веществом может быть соединение (II), показанное на схемах синтеза фиг. 1 и 2

(П) где В³ представляет собой алкил. Предпочтительно В³ представляет собой С1-5 алкил и более предпочтительно метил. Например, 4-метокси-2-нафтиламин является коммерчески доступным от фирмы Л1бпс11 С’11е1шса1 Сотрапу, Шс., Мй^аикее, ^к Это соединение сравнительно легко гидролизовать, если В³

- 12 015324 представляет собой алкил, и присоединить защитные группы, В¹ как к гидрокси, так и аминогруппам с получением соединения (III)

В некоторых вариантах осуществления, как показано на фиг. 1 и 2, желательно обеспечить различные защитные группы на аминной и гидроксифункциональных группах. Соответственно, исходная защитная группа В¹ может быть удалена с одной из этих групп (например, с гидроксигруппы) и заменена второй, отличной от этой защитной группой В² с получением соединения (IV)

Имея различные защитные группы на гидроксильном и аминном заместителях, можно облегчить последующие стадии реакции, на которых одна из защитных групп может быть селективно удалена, сохраняя другую защитную группу. Альтернативно, различные защитные группы могут быть изначально присоединены к гидроксильным и аминным заместителям.

Схемы 1 и 2 (фиг. 1 и 2) иллюстрируют один вариант осуществления оставшихся стадий при образовании соединения (I) из соединения (IV). Эти стадии могут включать, например, образование кольца с использованием азота аминной группы. Это можно осуществить, например, путем алкилирования азота, смежного с арильным кольцом, с последующей стадией закрытия кольца. В одном варианте осуществления иодирование соединения (IV) Ν-йодсукцинимидом дает соединение, которое затем может быть алкилировано с использованием 1,3-дибромпропена или 1,3-дихлорпропена.

Закрытие кольца затем можно осуществить, используя гидрид трибутилолова в присутствии 2,2'азобисизобутиронитрила (ΑΓΒΝ) с получением рацемического СВБпроизводного соединения (V)

(V)

При необходимости защитные группы можно удалить для образования СВЕ Будет понятно, что различные реактивы и катализаторы могут быть использованы на этих стадиях реакции. Примеры можно найти у Водег, Сйетка1 Веу1ете, 97, 787-828 (1997), включенные здесь посредством ссылки.

Рацемическое СВБпроизводное можно отделить, используя известные методики разделения энантиомеров, включая использование хроматографических методов. Одной особенно используемой методикой является жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ), используя хиральную колонку. Например, разделение таких энантиомеров проводили, используя ВЭЖХ колонку СЫга1се1 и элюент/изопропанол (99:1) с получением соединения (I).

Особые примеры соединения (I) включают, но не только

- 13 015324

Соединение (I) может быть использовано для получения СВ1 аналогов СС-1065, как описано, например, в патентных заявках США №№ 10/160972; 10/161233; 10/161234; 11/134685 и 11/134826 того же заявителя, все включены здесь посредством ссылки. Например, связующее звено может быть присоединено к соединению (I) путем снятия защиты с аминного заместителя и взаимодействия соединения, содержащего связующее звено, с амином, с которого снята защита. Могут быть присоединены дополнительные заместители к атому кислорода СВ1 соединения путем снятия защиты с кислорода и взаимодействия его с соответствующим реактивом (реактивами).

Примеры

Без дополнительного разъяснения считается, что специалист в данной области может, используя предшествующее описание, использовать настоящее изобретение в его самом полном объеме. Следующие предпочтительные конкретные примеры, следовательно, интерпретируются лишь как иллюстрирующие, а не ограничивающие остальное описание в любом случае.

В указанном выше и в последующих примерах все температуры приведены нескорректированными в градусах Цельсия, и все части и проценты даны по массе, если не указано иное.

Пример 1. Схема 1 (фиг. 1).

Синтез Ы-(трет-бутилоксикарбонил)-4-О-(трет-бутилоксикарбонил)-2-нафтиламин (2).

Раствор 4-метокси-2-нафтиламина (230 мг, 1,33 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (9,6 мл) и бромисто-водородной кислоты в воде (16 мл, 48%) нагревали при кипении с обратным холодильником в атмосфере N в течение 4 ч. Небольшое количество образца (0,1 мл) разводили этилацетатом (0,5 мл), а затем добавляли воду (0,5 мл) и ТЕА (0,1 мл). ТСХ (20:1 ЭСМ/метанол) органического слоя не показала исходного вещества и нового значительно более низкого пятна (Я{=0,1). Растворитель удаляли при пониженном давлении и продукт сушили под вакуумом с выходом промежуточного вещества 4-гидрокси2-нафтиламина, которое использовали на следующей стадии без какой-либо очистки. К раствору 4гидрокси-2-нафтиламина в диоксане (10 мл) добавляли ТЕА (1 мл) и ди-трет-бутилдикарбонат (1,149 г, 5,27 ммоль). Реакционную смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в атмосфере Ν₂ в течение 4 ч. ТСХ (4:1 гексан/этилацетат) не показал исходного вещества и нового более высокого пятна (К.(=0.55). Реакционную смесь разводили этилацетатом (50 мл) и промывали водой. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x50 мл), а органические слои объединяли и промывали солевым раствором. Органические слои сушили над безводным №₂8О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном

- 14 015324 давлении с получением М-(трет-бутилоксикарбонил)-4-О-(трет-бутилоксикарбонил)-2-нафтиламина (2, выход 80%) в виде масла.

Синтез соединения 3.

К раствору соединения 2 в ацетоне (10 мл) добавляли раствор ΝαΟΗ в воде (10 мл, 1М). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ (4:1 гексан/этилацетат) не показала исходного вещества и нового более низкого пятна. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл) и промывали водой. Водный слой экстрагировали этилацетатом (2x50 мл) и органические слои промывали солевым раствором, сушили над безводным Να₂8Ο₄ и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем 10 г с 10-20% этилацетатом в гексане с получением соединения 3 (181 мг, 53%) в виде масла.

Синтез соединения 4.

Раствор соединения 3 (5 г, 19,3 ммоль) в безводном ΌΜΕ (50 мл) в атмосфере азота обрабатывали бензилбромидом (4 г, 23,1 моль), карбонатом калия (3,7 г, 27 моль) и йодидом тетрабутиламмония (70 мг, 0,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Хроматографическое (4x10 см 8ίΟ₂, 10-20% Е1ОАсгексан градиентное элюирование) разделение дало чистое соединение 4 (5,48 г, 83%) в виде порошка кремового цвета.

Ή ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц, ррт) 8,22 (д, 1Н, 1=8,1 Гц, С5-Н), 7,68 (д, 1Н, 1=8,2 Гц, С8-Н), 7,3-7,5 (м, 8Н, С1-Н, С6-Н, С7-Н, СН₂С₆Н₅), 7,06 (д, 1Н, 1=1,1 Гц, С3-Н), 6,62 (ушир. с, 1Н, ΝΉ), 5,23 (с, 2Н, ОСН2(СбН₃), 1,55 (с, 9Н, ОС(СН₃)₃).

Синтез соединения 5.

В 1000 мл круглодонной колбе, снабженной мешалкой и резиновой перегородкой, объединяли соединение 4 (13 г, 0,0372 моль) и ТНГ (300 мл). Прозрачный желтый раствор охлаждали до -20°С на бане с сухим льдом в атмосфере азота. п-Толуолсульфоновую кислоту (0,10 г, 0,0005 моль) добавляли к реакционной смеси и раствор перемешивали в течение 10 мин. Ν-Йодсукцинимид (10 г, 0,0446 моль) растворяли в ТНГ (50 мл) и добавляли к реакционной смеси с помощью канюли (приблизительно 1 ч). Раствор перемешивали на ледяной бане в течение 2 ч, и он становился коричневатым. Затем раствор убирали с ледяной бани и оставляли нагреваться до комнатной температуры в атмосфере азота в течение 1,5 ч. ТСХ (2:1 гексан/ЭСМ) не показала исходного вещества и нового более высокого пятна. Реакцию гасили насыщенным NаНСΟ₃ (200 мл) и образовывалось белое твердое вещество. После перемешивания раствора в течение 10 мин, в реакцию добавляли ЕЮАс (200 мл) и воду (100 мл). Водный слой экстрагировали ЕЮАс (2x100 мл) и органические слои объединяли и экстрагировали солевым раствором (100 мл). Органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до темного краснокоричневого твердого вещества. Это твердое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, используя 2:1 гексан/ЭСМ в качестве элюента с получением соединения 5 (14 г, 79%) в виде твердого вещества коричневого цвета.

Синтез соединения 6.

В 500 мл круглодонной колбе, снабженной мешалкой и входным клапаном для азота, объединяли соединение 5 (22,5 г, 0,0473 моль) и безводный ΌΜΓ (250 мл). Оранжево-желтый раствор охлаждали до 0°С с помощью ледяной/солевой бани в атмосфере азота. №1Н (60%, 5,6 г, 0,146 моль), добавляли в реакционную смесь за один раз. Раствор становился мутным и образовывался газ. Реакционную смесь перемешивали на ледяной бане в течение 15 мин, а затем ледяную баню убирали и раствор перемешивали в течение еще 15 мин. В реакционную смесь частями с помощью шприца добавляли цис/транс-1,3дибромпропен (14 мл, 0,14 моль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 1 ч, и она становилась мутно-коричневой. Температура повышалась до 40°С. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры. ТСХ (4:1 гексан/ЕЮАс) не показала исходного вещества и нового более низкого пятна. Реакцию гасили водой (500 мл). Водный слой экстрагировали ЕЮАс (4x100 мл) и органические слои промывали солевым раствором (2x75 мл). Органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого масла. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии, используя 1:1 ЭСМ/гексан в качестве элюента с получением соединения 6 (25 г, 89%) в виде коричневого масла.

Синтез соединения 7.

В 1000-мл трехгорлой круглодонным холодной колбе, снабженной мешалкой, датчиком температуры, обратильником и входным клапаном для азота, объединяли соединение 6 (25 г, 0,0421 моль), толуол (500 мл), 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил) (0,15 г, 0,0009 моль) и гидрид трибутилолова (3,4 мл, 0,0126 моль) [с помощью шприца]. Через раствор барботировали азот в течение 15 мин, а затем реакционную смесь нагревали до 80°С в атмосфере азота. После нагревания при 80°С в течение 15 мин с помощью шприца в реакцию добавляли гидрид трибутилолова (3,4 мл, 0,0126 моль). После нагревания в течение еще 15 мин с помощью шприца в реакцию добавляли гидрид трибутилолова (3,4 мл, 0,0126 моль). После дополнительных 15 мин с помощью шприца в реакцию добавляли гидрид трибутилолова (3,4 мл, 0,0126 моль). Общее количество добавленного гидрида трибутилолова составило 13,6 мл, 0,0505 моль. Реакци

- 15 015324 онную смесь нагревали при 80°С в течение 30 мин, а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. ТСХ (10% ЕЮ Ас/гексан) показала исходное вещество и новое более высокое пятно. Раствор концентрировали под вакуумом до твердого вещества желтого цвета. Это твердое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, используя в качестве элюента 1:1 дихлорметан/гексан, с получением твердого вещества желтого цвета. Это твердое вещество перекристаллизовывали из гексана (200 мл, 45°С в течение 30 мин, охлаждали в холодильнике в течение 2 ч, собирали фильтрацией, сушили под вакуумом) с получением соединения 7 (11,70 г, 59% выход) в виде бледно-желтого твердого вещества.

ЯМР (1Н, СЭС1₃, 400 МГц): δ 1,61 (9Н, с, С-(СН₃)₃); 3,30 (1Н, т, 1=26 Гц, СН-СН₂-Ы); 3,82 (1Н, д, 1=26 Гц, Вг-СН₂-СН); 4,04 (1Н, д, 1=19 Гц, Вг-СН₂-СН); 4,14 (1Н, т, 1=26 Гц, СН-СЩ-Ν); 4,21 (1Н, м, СН₂-СН-СН₂); 5,26 (2Н, с, О-СН₂-СбН₅); 7,3-7,55 (8Н, м, О-СН₂-С₆Н₅, С₁₀Н₅); 7,63 (1Н, д, 1=21 Гц, С₁₀Н₅); 8,3 (1Н, д, 1=21 Гц, С10Н5).

Разделение соединения 7.

Рацемическое соединение 7 растворяли в ЭСМ (50 мг, 1 мл). Этот раствор затем разводили гексаном (9 мл). Этот раствор затем загружали на препаративную колонку СЫга1се1 ОЭ (10 мкм, 20x250 мм) и разделяли, используя гексан/изопропанол (99:1, 15 мл/мин). Первый энантиомер (7а) элюируется в интервале от 10 до 15 мин, а другой энантиомер (7Ь) элюируется в интервале от 17,5 до 25 мин. Аналитическая колонка (СЫга1се1 ОЭ. 0,46x25 см, 20 мкм) дает время удерживания 7,71 мин для 7а и 12,9 мин для 7Ь (99:1 гексан/1РА, 1 мл/мин, пробег 15 мин).

ЯМР (1Н, СЭС1₃, 400 МГц): δ 1,61 (9Н, с, С-(СН₃)₃); 3,30 (1Н, т, 1=26 Гц, СН-СН₂-Ы); 3,82 (1Н, д, 1=26 Гц, Вг-СН₂-СН); 4,04 (1Н, д, 1=19 Гц, Вг-СН₂-СН); 4,14 (1Н, т, 1=26 Гц, СН-СН₂-Ы); 4,21 (1Н, м, СН₂-СН-СН₂); 5,26 (2Н, с, О-СН₂-С₆Н₅); 7,3-7,55 (8Н, м, О-СН₂-С₅Н₅,С1₀Н₅); 7,63 (1Н, д, 1=21 Гц, С₁₀Н₅); 8,3 (1Н, д, 1=21 Гц, С10Н5).

Пример 2. Схема 2 (фиг. 2).

Способ синтеза является таким, как описано выше в примере 1 в отношении синтеза соединения 5. Синтез соединения 8.

В 250-мл круглодонной колбе, снабженной мешалкой и входным клапаном для азота, объединяли соединение 5 (8,4 г, 0,0177 моль) и безводный ΌΜΡ (125 мл). Желто-оранжевый раствор охлаждали до 0°С с использованием ледяной/солевой бани в атмосфере азота. NаН (60%, 2,22 г, 0,0554 моль) добавляли в реакционную смесь за один раз. Раствор становился мутным и образовывался газ. Реакционную смесь перемешивали на ледяной бане в течение 15 мин, а затем ледяную баню убирали и раствор перемешивали в течение еще 15 мин. В реакционную смесь с помощью шприца добавляли частями цис/транс-1,3-дихлорпропен (5,3 мл, 0,0571 моль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 3 ч, и она становилась мутно-коричневой. ТСХ (4:1 гексан/ЕЮАс) не показала исходного вещества и нового более низкого пятна. Реакцию гасили водой (250 мл). Водный слой экстрагировали ЕЮАс (3x100 мл) и органические слои промывали солевым раствором (2 х50 мл). Органические слои сушили над Мд§О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого масла. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии, используя 1:1 ЭСМ/гексан в качестве элюента с получением (Е/2)-трет-бутил 4-(бензилокси)-1-йоднафтален-2-ил(3-хлораллил)карбамата (8) (9 г, 93%) в виде желтого масла.

Синтез соединения 9.

В 500-мл трехгорлой круглодонной колбе, снабженной мешалкой, датчиком температуры, обратным холодильником и входным клапаном для азота, объединяли соединение 8 (9 г, 0,0164 моль), толуол (200 мл), 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил) (0,15 г, 0,0009 моль) и гидрид трибутилолова (1,5 мл, 0,0056 моль) [с помощью шприца]. Через раствор барботировали азот в течение 15 мин, а затем реакционную смесь нагревали до 80°С в атмосфере азота. После нагревания до 80°С в течение 15 мин, гидрид трибутилолова (1,5 мл, 0,0056 моль) добавляли в реакционную смесь с помощью шприца. После нагревания в течение еще 15 мин гидрид трибутилолова (1,5 мл, 0,0056 моль) добавляли в реакционную смесь с помощью шприца. Еще через 15 мин с помощью шприца в реакционную смесь добавляли гидрид трибутилолова (1,0 мл, 0,0037 моль). Общее количество добавленного гидрида трибутилолова составило 5,5 мл, 0,0204 моль. Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 30 мин, а затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. ТСХ (10% ЕЮАс/гексан) не показала исходного вещества и нового более высокого пятна. Раствор концентрировали под вакуумом до желтого масла. Это масло очищали с помощью колоночной хроматографии, используя в качестве элюента 100% гексан - 5% ЕЮАс/гексан - 10% ЕЮАс/гексан с получением твердого вещества бледно-желтого цвета. Это твердое вещество перекристаллизовывали из гексана (100 мл, 45°С в течение 30 мин, охлаждали в холодильнике в течение 2 ч, собирали фильтрацией, сушили под вакуумом) с получением соединения 9 (4,16 г, 60% выход) в виде твердого вещества белого цвета.

Выделение соединения 9.

Рацемическое соединение 9 растворяли в ЭСМ (50 мг, 1 мл). Затем раствор разбавляли гексаном (9 мл). Затем раствор загружали на препаративную колонку СЫга1се1 ОЭ (10 мкм, 20 х250 мм) и разделяли, используя гексан/изопропанол (99:1, 15 мл/мин). Первый энантиомер (9а) элюируется в интервале от 11,5

- 16 015324 до 15 мин, а второй энантиомер (9Ь) элюируется в интервале от 17,5 до 25 мин. Аналитическая колонка (СЫга1се1 ΟΌ, 0,46x25 см, 20 мкм) дает время удерживания 6,5 мин для 9а и 10,6 мин для 9Ь (99:1 гексан/ГРА, 1 мл/мин, пробег 15 мин).

ЯМР (1Н, СЭС1₃, 400 МГц): δ 1,61 (9Н, с, С-(СН₃)₃); 3,44 (1Н, т, 1=25 Гц, СН-СН₂-Н); 3,9-4,0 (2Н, м, С1-СН₂-СН); 4,12 (1Н, т, 1=26 Гц, СН-СН₂-Н); 4,25 (1Н, м, СН₂-СН-СН₂); 5,26 (2Н, с, О-СН₂-С₆Н₅); 7,2-7,5 (8Н, м, О-СН₂-С₆Н₅, С₁₀Н₅); 7,63 (1Н, д, 1=21 Гц, С₁₀Н₅); 8,3 (1Н, д, 1=21 Гц, С₁₀Н₅).

Пример 3. Схема 3 (фиг. 3).

Способ синтеза является таким, как описано выше в примере 1 в отношении синтеза соединения 3.

Синтез соединения 10.

Раствор трет-бутил-4-гидроксинафтален-2-илкарбамата (3) (500 мг, 2,89 ммоль), 4-метил-1пиперазинкарбонилхлоридгидрохлорида (858 мг, 4,34 ммоль), безводного пиридина (4,98 мл, 57,8 ммоль) и аллилового спирта (4,98 мл, 73,2 ммоль) в безводном ЭСМ (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ (9:1 ЭСМ/МеОН) не показала исходного вещества и гораздо более низкого пятна. Реакционную смесь гасили водой. Водный слой экстрагировали Е!ОАс (3x50 мл) и органические слои промывали солевым раствором (2x50 мл). Органические слои сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого масла. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией с использованием 1-5% метанола в ЭСМ с получением соединения 10 (602 мг, 82%) в виде твердого вещества желтого цвета.

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 9,68 (с, 1Н), 7,91 (с, 1Н), 7,80 (д, 1Н), 7,69 (с, 1Н), 7,47 (т, 1Н), 7,42 (с, 1Н), 7,39 (т, 1Н), 3,78 (с, 2Н), 3,42 (с, 2Н), 2,44 (с, 2Н), 2,39 (с, 2Н), 2,21 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н).

Синтез соединения 11.

Соединение 10 (82 мг, 0,21 ммоль), п-толуолсульфоновую кислоту (10 мг, 0,05 ммоль) и Νйодсукцинимид (96 мг, 0,43 ммоль) в безводном ТНЕ (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ТСХ (9:1 ЭСМ/МеОН) показала небольшое количество исходного вещества и более высокое пятно. Реакционную смесь гасили насыщенным NаНСΟ₃ (10 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 10 мин реакционную смесь экстрагировали Е!ОАс (3x20 мл) и органические слои промывали солевым раствором (2x20 мл). Органические слои сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого масла. Сырой продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием 1-5% метанола ЭСМ с получением соединения 11 (52 мг, 48%) в виде желтого масла.

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 8,81 (с, 1Н), 8,14 (д, 1Н), 7,79 (д, 1Н), 7,65 (т, 1Н), 7,58 (т, 1Н), 7,45 (т, 1Н), 3,78 (с, 2Н), 3,42 (с, 2Н), 2,44 (с, 2Н), 2,39 (с, 2Н), 2,21 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н).

Синтез соединения 12.

Раствор соединения 11 (102 мг, 0,2 ммоль) в безводном ОМЕ (5 мл) охлаждали на ледяной бане. В реакционную смесь добавляли гидрид натрия (60% в минеральном масле, 32 мг, 0,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и при комнатной температуре в течение 15 мин. В реакционную смесь добавляли цис/транс-1,3-дихлорпропен (83,36 мкл, 0,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. ТСХ (9:1 ЭСМ/МеОН) не показала исходного вещества. Реакционную смесь гасили водой. Водный слой экстрагировали Е!ОАс (3x10 мл) и органические слои промывали солевым раствором (2x10 мл). Органические слои сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом до коричневого масла. Сырой продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием 1-5% метанола в ЭСМ с получением соединения 12 (82 мг, 70%) в виде твердого вещества желтого цвета.

'Н ЯМР (ДМСО-б₆) δ 8,20 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,62 (м, 2Н), 7,38 (д, 1Н), 6,38 (м, 1Н), 6,18 (м, 1Н), 3,98-4,46 (дд, 2Н), 3,78 (с, 2Н), 3,42 (с, 2Н), 2,44 (с, 2Н), 2,39 (с, 2Н), 2,21 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н).

Синтез соединения 13.

В раствор соединения 12 (82 мг, 0,14 ммоль) в безводном толуоле (3 мл) барботировали сухой азот в течение 15 мин. В реакционную смесь добавляли гидрид трибутилолова (47,1 мкл, 0,18 ммоль) и 2,2'азобисизобутиронитрил (10 мг, 0,0 6 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 15 мин в атмосфере азота. ТСХ (9:1 ЭСМ/МеОН) показала новое голубое пятно и отсутствие исходного вещества. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом до желтого масла. Сырой продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием 1-5% метанола в ЭСМ с получением соединения 13 (52 мг, 82%) в виде твердого вещества белого цвета.

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 7,92 (д, 1Н), 7,83 (м, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,58 (т, 1Н), 7,42 (т, 1Н), 4,20 (м, 2Н), 4,04 (м, 2Н), 3,92 (м, 1Н), 3,78 (с, 2Н), 3,42 (с, 2Н), 2,44 (с, 2Н), 2,39 (с, 2Н), 2,21 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н).

Разделение соединения 13.

Рацемическое соединение 13 растворяют в метаноле. Этот раствор затем нагружают на препаративную колонку СШКАЬРАК АО (20 мкм, 20x250 мм) и разделяют с использованием метанола (15 мл/мин). Первый энантиомер (13а) элюируется от 5,1 мин, а второй энантиомер (13Ь) элюируется от 7,1 мин.

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 7,92 (д, 1Н), 7,83 (м, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,58 (т, 1Н) , 7,42 (т, 1Н), 4,20 (м, 2Н), 4,04 (м, 2Н), 3,92 (м, 1Н), 3,78 (с, 2Н), 3,42 (с, 2Н), 2,44 (с, 2Н), 2,39 (с, 2Н), 2,21 (с, 3Н), 1,50 (с, 9Н).

- 17 015324

Пример 4. Синтез СΒI аналога СС-1065.

Синтез соединения (14).

Раствор 9Ь (100 мг, 0,24 ммоль) и 10% Рб-С (35 мг) в МеОН/СН₂С1₂ (1/2, 10 мл) дегазировали под вакуумом в течение 40 с. Полученную в результате смесь помещали в атмосферу водорода и перемешивали в течение 25°С в течение 7 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит (СН₂С1₂ промывка). Растворитель удаляли под вакуумом. Хроматография на силикагеле с ЕЮАс/Нех элюцией (2/8) давала соединение 14 (77 мг, 98%).

¹Н ЯМР (ДМСО-б₆) δ 10,36 (с, 1Н), 8,04 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,72 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,61 (ушир. с, 1Н), 7,45 (т, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,261 (т, 1Н, 1=8,4 Гц), 4,06 (м, 4Н), 3,73 (м, 1Н), 1,52 (с, 9Н).

Синтез соединения (16). Раствор 14 (35 мг, 0,1 ммоль) в 4 М НС1-Е1ОАс (5 мл) перемешивали при 25°С в атмосфере Аг в течение 30 мин. Растворитель удаляли под вакуумом. К остатку добавляли 5ацетилиндон-2-карбоновую кислоту (24,4 мг, 0,12 ммоль). Добавляли раствор ЕБС (22,9 мг, 0,12 ммоль) в БМЕ (3 мл) и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 5 ч. Растворитель удаляли. Сырой продукт хроматографировали на силикагеле, элюировали с использованием 10% МеОН в СН2С12 с получением соединения 16 (40,7 мг, 93%).

¹Н ЯМР (ДМСО-б₆) δ 12,13 (с, 1Н), 10,47 (с, 1Н), 8,45 (с, 1Н), 8,10 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,96 (ушир. с, 1Н), 7,85 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 7,54 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,51 (т, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,36 (т, 1Н, 1=7,6), 7,35 (с, 1Н), 4,81 (т, 1Н, 11,2 Гц), 4,54 (дд, 1Н, 8,8 Гц), 4,23 (м, 1Н), 4,01 (дд, 1Н, 1=10,2 Гц), 3,86 (дд, 1Н, 1=10,7 Гц), 2,61 (с, 3Н).

Синтез соединения (17).

4-Метил-1-пиперазинкарбонилхлорид гидрохлорид (19,9 мг, 0,1 ммоль) добавляли к раствору соединения 16 (20 мг, 0,05 ммоль) и безводного пиридина (25 мкмл, 0,3 ммоль) в 3% аллиловом спирте в сухом метиленхлориде (4 мл) и смесь перемешивали в течение 16 ч. Очистка сырого продукта на силикагеле давала соединение 17 (23,6 мг, 91%).

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 12,03 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,21 (с, 1Н), 8,01 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,88 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,82 (дд, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,58 (т, 1Н, 1=8,1 Гц), 7,51 (д, 1Н, 1=8,4 Гц), 7,46 (т, 1Н, 1=7,6 Гц), 7,37 (с, 1Н), 4,86 (т, 1Н, 1=10,8 Гц), 4,57 (дд, 1Н, 1=10,8 Гц), 4,38 (м, 1Н), 4,06 (дд, 1Н, 1=10,8 Гц), 3,86 (дд, 1Н, 1=11 Гц), 3,41 (ушир., 4Н), 3,29 (ушир., 4Н), 2,82 (с, 3Н), 2,57 (с, 3Н).

Синтез соединения (19).

Раствор соединения 17 (13 мг, 24 мкмоль) и линкера 18 (16,9 мг, 31 мкмоль) в 5% уксусной кислоте в сухом метиленхлориде (1 мл) перемешивали в течение 30 мин при 25°С. Растворитель полностью удаляли под вакуумом и очищали с помощью ВЭЖХ (8утте1гу Ргер С1₈, 7 мкм, 19x150 мм колонка) с получением соединения 19 (18,5 мг, 81%). М8: рассчитано для С₄₈Н₅7СШ₈Оц (М+Н) т/ζ 958,38, найдено 958,10.

Пример 5. Исследования пролиферации.

Биологическую активность цитотоксичных соединений по изобретению можно исследовать, используя традиционное исследование пролиферации с ³Н-тимидином. Это удобный способ для количественной оценки клеточной пролиферации, поскольку в нем оценивают синтез ДНК, измеряя включение

- 18 015324 экзогенного радиоактивно меченного ³Н-тимидина. Это исследование является высоковоспроизводимым и может быть приспособлено для большого числа соединений.

Для проведения этого исследования клетки промиелоцитарного лейкоза НЬ-60 культивируют в среде ВРМ1, содержащей 10% инактивированную нагреванием фетальную сыворотку теленка (ЕС8). В день исследования клетки собирают, промывают и ресуспендируют при концентрации 0,5х10⁶ клеток/мл в ВРМ1, содержащей 10% ЕС8. 100 мкл клеточной суспензии добавляют в 96-луночные планшеты. Готовят серийные разведения (3-кратные увеличения) доксорубицина (в качестве положительного контроля) или тестируемых соединений и 100 мкл соединений добавляют на лунку. Наконец, 10 мкл 100 мкКи/мл ³Нтимидина добавляют на лунку и инкубируют в течение 24 ч. Планшеты собирают, используя 96луночный харвестер (Раскагб 1пйгитеп15), и подсчитывают на счетчике Раскагб Тор Соип1.

Четырехпараметрические логистические кривые аппроксимируют к включению ³Н-тимидина как функцию молярности лекарственного средства, используя программное обеспечение Ргщт для определения значений 1С₅₀.

СВ1 аналоги СС-1065 (например, соединение 19 примера 4) обычно имеет значение 1С₅₀ в приведенном выше исследовании примерно от 1 пМ примерно до 100 нМ, предпочтительно примерно от 10 пМ примерно до 10 нМ.

Пример 6. Конъюгирование молекул лекарственного средства с антителами.

В этом примере описываются условия реакции и методики конъюгирования молекулы лекарственного средства по изобретению (необязательно включающей другие группы, такие как спейсеры, реакционноспособные функциональные группы и подобное) с антителом в качестве агента для направленной доставки. Условия и методики приводятся только в качестве примера и не являются ограничивающими. Другие подходы для конъюгации молекул лекарственного средства с антителами известны в уровне техники.

Описанный здесь способ конъюгации основан на введении свободных тиольных групп в антитело посредством взаимодействия лизинов антитела с 2-иминотиоланом, с последующим взаимодействием лекарственного средства-линкерной молекулы с активной малеимидной группой. Изначально конъюгируемое антитело замещают буфером в 0,1М фосфатном буфере рН 8,0 содержащем 50 мМ №С1, 2 мМ бТРЛ, рН 8,0 и концентрируют до 5-10 мг/мл. Тиолирование достигается посредством добавления 2иминотиолана к антителу. Количество добавляемого 2-иминотиолана определят в предварительных экспериментах и это количество варьирует от антитела к антителу. В предварительных экспериментах титрование возрастающих количеств 2-иминотиолана добавляют к антителу и последующее инкубирование с антителом в течение 1 ч при комнатной температуре, антитело обессоливают в 50 мМ НЕРЕ8 буфере рН 6,0 используя 8ер11абех С-25 колонку и число введенных тиольных групп легко определяется путем взаимодействия с дитиодипиридином (бТбР). Взаимодействие тиольных групп с бТбР приводит в результате к высвобождению тиопиридина, который подвергают мониторингу при 324 нм. Могут быть использованы образцы с концентрацией белка 0,5-1,0 мг/мл. Для точного определения концентрации белка в образцах используют поглощение при 280 нм, а затем аликвоту каждого образца (0,9 мл) инкубируют с 0,1 мл ЭТЭР (5 мМ маточного раствора в этаноле) в течение 10 мин при комнатной температуре. Пустые образцы одного буфера плюс ЭТЭР также инкубируют рядом.

Через 10 мин измеряют поглощение при 324 нм и количественно определяют число присутствующих тиолов, используя коэффициент экстинкции для тиопиридина 19800 М^-1.

Обычно желательным является уровень тиолирования трех тиольных групп на антитело. Например, с одним конкретным антителом это может достигаться посредством добавления 15-кратного молярного избытка 2-иминотиолана с последующим инкубированием при комнатной температуре в течение 1 ч. Следовательно, конъюгируемое антитело инкубируется с 2-иминотиоланом в желаемом молярном соотношении, а затем его обессоливают в буфере для конъюгации (50 мМ НЕРЕ8 буфер рН 6,0 содержащий 5 мМ глицина, 3% глицерин и 2 мМ бТРЛ). Тиолированное вещество держат на льду, пока проводят количественную оценку числа введенных тиолов, как описано выше.

После установления числа введенных тиолов, молекулу лекарственного вещества, содержащего активную малеимидную группу (например, соединение 15 примера 3), добавляют в 3-кратном молярном избытке на тиол. Реакцию конъюгирования проводят в буфере для конъюгации, также содержащем конечную концентрацию 5% диметилового эфира этиленгликоля (или подходящий альтернативный растворитель). Обычно маточный раствор лекарственного средства растворяют в 90% диметиловом эфире этиленгликоля, 10% диметилсульфоксиде. Для добавления к антителу маточный раствор добавляют непосредственно к тиолированному антителу, который имеет достаточно диметилового эфира этиленгликоля, добавленного для приведения конечной концентрации к 5%, или предварительно разведенный в буфере для конъюгации, содержащем конечную концентрацию 10% диметилового эфира этиленгликоля, с последующим добавлением к равному объему тиолированного антитела.

Реакцию конъюгации инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч с перемешиванием. После инкубирования реакционную смесь центрифугируют при 14 000 об/мин в течение 15 мин и рН можно установить на значении 7,2, если очистку не проводили сразу же. Очистку конъюгата можно осуществить посредством хроматографии, используя ряд способов. Конъюгат можно очистить, используя

- 19 015324 эксклюзионную гель-хроматографию на колонке 8ерЬасгу1 8200, предварительно уравновешенной 50 мМ НЕРЕ8 буфером рН 7,2, содержащим 5 мМ глицина, 50 мМ Νηί,Ί и 3% глицерина. Хроматографию можно проводить с линейной скоростью потока 28 см/ч. Фракции, содержащие конъюгат, можно собрать, объединить и концентрировать. Альтернативно, очистку можно осуществить посредством ионобменной хроматографии. Условия варьируют от антитела к антителу и их необходимо оптимизировать в каждом случае. Например, реакционную смесь конъюгата антитело-лекарственное средство можно нанести на колонку 8Р-Сефароза, предварительно уравновешенную в 50 мМ НЕРЕ8, 5 мМ глицина, 3% глицерина, рН 6,0. Конъюгат с антителом можно элюировать, используя градиент 0-1М Νηί,Ί в равновесном буфере. Фракции, содержащие конъюгат, можно объединить, рН можно установить на значении 7,2, а образцы концентрировать по мере необходимости.

Полное изложение всех заявок, патентов и публикаций, процитированных здесь, включено здесь посредством ссылки.

Предыдущие примеры можно повторить с аналогичным успехом, заменяя реактивы и/или технологические условия настоящего изобретения, описанные в общем виде или конкретно, на те, которые используются в предыдущих примерах.

Из приведенного выше описания специалист в данной области может легко определить существенные характеристики изобретения и, не отклоняясь от его сущности и объема, может внести в изобретение различные изменения и модификации, чтобы приспособить его к различным применениям и условиям.

Claims (13)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения соединения (I) или его соли где К¹ и К², каждый независимо, представляют собой Н, С1_-6алкил, -С(О)ОК', -С(О^К'К'', третбутилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил, 2-триметилсилилэтоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 4-метил-1-пиперазинкарбонил, 1-метил-1-(4-бифенилил)этоксикарбонил, дифенилоксикарбонил, бензил, трет-бутил, тетрагидропиранил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил, триизопропилсилил, трет-бутилдифенилсилил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, диизопропилметилоксикарбонил, винилоксикарбонил, метоксибензилоксикарбонил, нитробензилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, бензилоксикарбонил, формил, ацетил, тригалогенацетил, бензоил, нитрофенилацетил, 2-нитробензолсульфонил, фталимидо и дитиасукциноил, где К' и К'' независимо выбраны из группы, состоящей из Н и С_1-6алкила;

   К⁶ представляет собой Н, С_1-6алкил, циано или С_1-6алкокси; а X представляет собой галоген, включающий присоединение защитных групп К¹ и К² к соединению (II), где защитные группы К¹ и К² являются различными защитными группами где К³ представляет собой С1_-6алкил;

   путем гидролиза группы К³ и защиты аминогруппы и полученной гидроксильной группы с получением соединения (III)

   - 20 015324 где Я¹ и Я², каждый независимо, представляют собой трет-бутилоксикарбонил, 9флуоренилметилоксикарбонил, 2-триметилсилилэтоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 4-метил-1пиперазинкарбонил, 1-метил-1-(4-бифенилил)этоксикарбонил, дифенилоксикарбонил, бензил, третбутил, тетрагидропиранил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил, триизопропилсилил, третбутилдифенилсилил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, диизопропилметилоксикарбонил, винилоксикарбонил, метоксибензилоксикарбонил, нитробензилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, бензилоксикарбонил, формил, ацетил, тригалогенацетил, бензоил, нитрофенилацетил, 2нитробензолсульфонил, фталимидо и дитиасукциноил;

   образование пятичленного кольца, содержащего аминный азот соединения (III), путем алкилирования арильного кольца в положение, смежное с указанным азотом, с последующим закрытием кольца с образованием рацемического соединения (V) (V) и разделение энантиомеров соединения формулы (V) с использованием хиральной хроматографии с получением соединения (I).
2. 2. Способ по п.1, где Я³ представляет собой метил.
3. 3. Способ по п.1, где X представляет собой С1 или Вг.
4. 4. Способ по п.3, где X представляет собой Вг.
5. 5. Способ по п.1, в котором присоединение Я¹ и Я² включает присоединение Я¹ к соединению (II) с образованием соединения (III') (ПГ) и замену защитной группы Я^1' на гидроксильном заместителе защитной группой Я^2'.
6. 6. Способ по п.1, где Я^1' представляет собой трет-бутилоксикарбонил.
7. 7. Способ по п.6, где Я²' представляет собой -СН₂Р11.
8. 8. Способ по п.1, дополнительно включающий замену Я¹ и Я² водородом после образования пяти членного кольца.
9. 9. Способ по п.1, где Я¹ и Я¹ являются одинаковыми и Я² и Я² являются одинаковыми.
10. 10. Способ по п.1, где образование пятичленного кольца включает иодирование атома углерода, смежного с аминным заместителем соединения (III), с последующим алкилированием с использованием 1,3-дигалогенпропена.
11. 11. Способ получения СВI аналога СС-1065 или его фармацевтически приемлемой соли, имеющего следующую формулу:

    X¹ и Ζ, каждый независимо, выбраны из О, 8 и ΝΗ;

    Я⁴, Я^4', Я⁵ и Я^5' представляют собой радикалы, независимо выбранные из группы, состоящей из Н, С1-6алкила, галогена, ΝΟ2, NЯ⁹Я¹⁰, Ν('(Ο)Η. ОС(О)№Я' . ОС(О)ОЯ⁹, С(О)Я⁹, 8Я⁹, ОЯ⁹, СЯ⁹=NЯ¹⁰, где С1_-6алкил необязательно замещен группой =О;

    где Я⁹ и Я¹⁰ независимо выбраны из Н и С1_-6алкила и Я¹¹ и Я¹¹, каждый независимо, представляют собой Н или С1-6алкил;

    Я⁶ представляет собой Н, С1_-6алкил, циано или С1_-6алкокси; и

    - 21 015324

    В⁷ представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из Н, С1_-6алкила, С(О)В¹²В¹³, С(О)ОВ¹², С(О)ИВ¹²В¹³ и С(О)СНВ¹²В¹³, где В¹², В¹³ и В¹⁴ представляют собой радикалы, независимо выбранные из Н, С_1-6алкила, или где В¹² и В¹³ вместе с атомом азота или углерода, к которому они присоединены, необязательно соединяются с образованием гетероциклоалкильной кольцевой системы, имеющей от 4 до 6 атомов, необязательно содержащей два или более гетероатомов, необязательно замещенной С1-6алкилом; включающий присоединение защитных групп В¹ и В² к соединению (II), где защитные группы В¹ и В² являются различными защитными группами где В³ представляет собой С_1-6алкил;

    путем гидролиза группы В³ и защиты аминогруппы и полученной гидроксильной группы с получением соединения (III) где В¹ и В², каждый независимо, представляют собой трет-бутилоксикарбонил, 9флуоренилметилоксикарбонил, 2-триметилсилилэтоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 4-метил-1пиперазинкарбонил, 1-метил-1-(4-бифенилил)этоксикарбонил, дифенилоксикарбонил, бензил, третбутил, тетрагидропиранил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил, триизопропилсилил, третбутилдифенилсилил, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонил, диизопропилметилоксикарбонил, винилоксикарбонил, метоксибензилоксикарбонил, нитробензилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, бензилоксикарбонил, формил, ацетил, тригалогенацетил, бензоил, нитрофенилацетил, 2нитробензолсульфонил, фталимидо и дитиасукциноил; и В³ представляет собой С1-6алкил;

    образование пятичленного кольца, содержащего аминный азот соединения (III), путем алкилирова ния арильного кольца в положение, смежное с указанным азотом, с последующим закрытием кольца с образованием рацемического соединения (V)

    X (V) разделение энантиомеров соединения формулы (V) с использованием хиральной хроматографии с получением соединения (I)

    X /

    (I) и присоединение связующего звена к соединению (I), причем связующее звено включает

    - 22 015324
12. 12. Способ по п.11, где образование пятичленного кольца включает иодирование атома углерода, смежного с аминным заместителем соединения (III), с последующим алкилированием с использованием 1,3-дигалогенпропена с образованием пятичленного кольца.
13. 13. Способ по п.11, где Я⁶ представляет собой Н.

    ИаОН/ацетон

    ВЭЖХ колонка СЫгасеК гексан/2-пропанол (99 1)