PL220113B1 - Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc - Google Patents

Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc

Info

Publication number
PL220113B1
PL220113B1 PL394232A PL39423200A PL220113B1 PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1 PL 394232 A PL394232 A PL 394232A PL 39423200 A PL39423200 A PL 39423200A PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
region
polypeptide
binding
variant
amino acid
Prior art date
Application number
PL394232A
Other languages
English (en)
Other versions
PL394232A1 (pl
Inventor
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL394232A1 publication Critical patent/PL394232A1/pl
Publication of PL220113B1 publication Critical patent/PL220113B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc.
Dziedzina wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających wariant regionu Fc. W szczególności niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających region Fc o zmienionej funkcji efektorowej, wynikającej z modyfikacji jednej lub więcej reszt aminokwasowych w obrębie regionu Fc tych polipeptydów.
Opis stanu techniki
Przeciwciała są białkami wykazującymi swoiste powinowactwo do wiązania ze specyficznym antygenem. Natywne przeciwciała są zazwyczaj heterotetramerycznymi glikoproteinami o masie około 150000 daltonów, składającymi się z dwóch identycznych łańcuchów lekkich (L) i dwóch identycznych łańcuchów ciężkich (H). Każdy z łańcuchów lekkich połączony jest z łańcuchem ciężkim za pomocą jednego kowalencyjnego wiązania disiarczkowego, natomiast liczba wiązań disiarczkowych pomiędzy łańcuchami ciężkimi jest zmienna dla różnych odmian izotypowych immunoglobulin. Każdy łańcuch ciężki i lekki posiada również regularnie rozmieszczone wewnątrzłańcuchowe wiązania disiarczkowe. Każdy łańcuch ciężki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VH), poprzedzoną licznymi domenami stałymi. Każdy łańcuch lekki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VL) oraz na drugim swym końcu pewną liczbę domen stałych, domena stała łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do pierwszej domeny stałej łańcucha ciężkiego, natomiast domena zmienna łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do domeny zmiennej łańcucha ciężkiego. Uważa się, że za powstanie powierzchni styku pomiędzy domenami zmiennymi łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiedzialne są szczególne reszty aminokwasowe.
Termin „zmienny” odnosi się do faktu, że w różnych przeciwciałach pewne fragmenty domen zmiennych różnią się znacznie sekwencją i warunkują swoistość wiązania specyficznego antygenu przez specyficzne przeciwciało. Jednakże, zmienność nie jest rozmieszczona równomiernie w obrębie domen zmiennych przeciwciał. Skupia się ona w trzech segmentach, zwanych regionami determinującymi dopasowanie (CDR), zarówno w domenach zmiennych łańcuchów lekkich, jak i ciężkich. Najbardziej konserwatywne części domen zmiennych, zwane są regionami zrębowymi (FR). Każda z domen zmiennych natywnych łańcuchów lekkich i ciężkich obejmuje cztery FR, przyjmujące głównie strukturę harmonijki β, połączone poprzez trzy CDR, tworzące pętle łączące, a w pewnych przypadkach stanowiące fragment, o konformacji harmonijki β. W obrębie każdego z łańcuchów CDR znajdują się w bliskim sąsiedztwie FR i, wraz z CDR innego łańcucha, uczestniczą w formowaniu miejsca wiązania antygenu przeciwciała (patrz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).
Domeny stale nie uczestniczą bezpośrednio w wiązaniu przeciwciała z antygenem, jednakże wykazują różne funkcje efektorowe. W zależności od sekwencji aminokwasowej regionu stałego łańcuchów ciężkich przeciwciała lub immunoglobuliny podlegają podziałowi na różne klasy. Istnieje pięć głównych klas immunoglobulin: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM oraz kilka podklas (odmiany izotypowe), wynikających z podziału klas głównych, np. IgG1, IgG2, IgG3 oraz IgG4; IgA1 oraz IgA2. Regiony stałe łańcucha ciężkiego odpowiadające różnym klasom immunoglobulin nazywane są odpowiednio, α, β, ε, γ oraz μ. Spośród różnych klas ludzkich immunoglobulin, jedynie ludzkie IgG 1, IgG2, IgG3 oraz IgM są zdolne do aktywacji dopełniacza, przy czym ludzkie IgG 1 i IgG3 pośredniczą w ADCC skuteczniej niż IgG2 i IgG4.
Na Figurze 1 schematycznie przedstawiono strukturę natywnej IgG1 i wskazano różne fragmenty natywnego przeciwciała. Trawienie przeciwciała papainą skutkuje powstaniem dwóch identycznych fragmentów wiążących antygen, zwanych fragmentami Fab, przy czym każdy zawiera pojedyncze miejsce wiązania antygenu oraz pozostały fragment „Fc”, którego nazwa wywodzi się z jego łatwej krystalizacji. Określono strukturę krystaliczną regionu Fc ludzkiej IgG (Delsenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). W cząsteczkach ludzkich IgG region Fc otrzymywany jest w wyniku cięcia papainą od N-końca do reszty Cys 226. Fragment Fc jest kluczowy dla funkcji efektorowych przeciwciał.
PL 220 113 B1
Zależne od regionu Fc funkcje efektorowe przeciwciał można podzielić na dwie kategorie:
(1) funkcje efektorowe występujące po związaniu antygenu przez przeciwciało (funkcje te obejmują udział w kaskadzie dopełniacza lub wiązanie się z receptorami Fc przeciwciał (komórki z FcR); oraz (2) funkcje efektorowe występujące niezależnie od wiązania antygenu (funkcje te zapewniają ciągłość działania i zdolność przenoszenia przez bariery komórkowe w wyniku transcytozy). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77-94 (1995).
Podczas gdy wiązanie przeciwciała z wymaganym antygenem wywiera efekt neutralizujący, który może chronić przed wiązaniem obcego antygenu z endogenną cząsteczką docelową (np. receptorem lub ligandem), samo wiązanie nie usuwa obcego antygenu. W celu skutecznego usunięcia i/lub zniszczenia obcych antygenów, przeciwciało powinno wykazywać zarówno wysokie powinowactwo do swoistego antygenu, jak i skuteczne funkcje efektorowe.
Wiązanie receptora Fc (FcR)
Oddziaływania przeciwciał i kompleksów przeciwciało-antygen z komórkami układu immunologicznego wywołuje różnego typu odpowiedzi, włączając cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC) oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC) (praca przeglądowa, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997); Ward i Ghetie, Therapeutic Immunol. 2: 77-94 (1995); jak również Ravetch i Knet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)).
W kilku funkcjach efektorowych przeciwciał uczestniczą receptory Fc (FcR), wiążące region Fc przeciwciała. FcR definiowane są na podstawie ich specyficzności względem poszczególnych odmian izotypowych immunoglobulin; receptory Fc dla przeciwciał IgG to FcyR, dla IgE - FceR, dla IgA - FcaR, itd. Zidentyfikowano trzy podklasy FcyR: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) oraz FcyRIII (CD16). Ze względu na to, że każda podklasa FcyR kodowana jest przez dwa lub trzy geny, a alternatywne składanie RNA prowadzi do powstania różnorodnych transkryptów, występuje duże zróżnicowanie pomiędzy odmianami izotypowymi FcyR. Trzy geny kodujące podklasę FcyRI (FcyRIA, FcyRIB i FcyRIC) skupione są w regionie 1q21.1 długiego ramienia chromosomu 1; geny kodujące odmiany izotypowe FcyRII (FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIC) oraz geny kodujące FcyRIII (FcyRIIIA i FcyRIIIB) skupiają się w regionie 1q22. Te różne podtypy FcR ulegają ekspresji na różnych typach komórek (praca przeglądowa, Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)). Przykładowo FcyRIIIB występuje u ludzi tylko na neutrofiłach, natomiast FcyRIIIA występuje na makrofagach, monocytach, komórkach naturalnych zabójców (NK) i w subpopulacji komórek T. W szczególności, FcyRIIIA jest jedynym FcR obecnym na komórkach NK, jednym z typów komórek uczestniczących w ADCC.
FcyRI, FcyRII oraz FcyRIII należą do nadrodziny receptorów immunoglobulinowych (IgSF); FcyRI posiada trzy domeny IgSF w obszarze domeny zewnątrzkomórkowej, podczas gdy FcyRII i FcyRIII posiadają jedynie dwa fragmenty IgSF w swych domenach zewnątrzkomórkowych.
Innym typem receptora Fc jest noworodkowy receptor Fc (FcRn). FcRn wykazuje podobieństwo strukturalne do głównego układu zgodności tkankowej i składa się z łańcucha α niekowalencyjnie związanego z mikroglobuliną β2.
Miejsce wiązania FcyR na ludzkich i mysich przeciwciałach zostało uprzednio zmapowane do tzw. „dolnego regionu zawiasowego” składającego się z reszt 233-239 (indeks EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986); Duncan i wsp., Nature 332: 563 (1988); Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-1491 (1991); Chappel i wsp., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 9036-9040 (1991). Region obejmujący reszty 233-239, P238 i S239 był brany pod uwagę jako mogący uczestniczyć w wiązaniu, ale rola tych dwóch reszt nie była nigdy oceniana drogą substytucji lub delecji.
Inne opisane wcześniej obszary prawdopodobnie zaangażowane w wiązanie z FcyR to: G316 -K338 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRI (jedynie na podstawie porównania sekwencji, nie analizowano żadnych mutantów substytucyjnych) (Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986)); K274 -R301 (ludzka IgG1) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Sarmay i wsp., Molec. Immunol. 21: 43-51 (1984)); Y407-R416 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Gergely i wsp., Biochem. Soc. Trans. 12: 739-743 (1984)); jak również N297 i E318 (mysie IgG2b) dla mysiego FcyRII (Lund i wsp., Molec. Immunol,. 29: 53-59 (1992)).
Pro331 w IgG3 zastąpiono Ser i analizowano powinowactwo tego wariantu względem komórek docelowych. Powinowactwo to było sześciokrotnie niższe od powinowactwa obserwowanego dla niezmutowanej IgG3, co wskazało na udział Pro331 w wiązaniu FcyRI. Morrison i wsp., Immunologist, 2: 119-124 (1994); oraz Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-91 (1991).
PL 220 113 B1
Wiązanie C1q
C1q oraz dwie proteazy serynowe, C1r i C1s, tworzą kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). C1q jest sześciowartościową cząsteczką o masie cząsteczkowej w przybliżeniu 460000 i strukturze przypominającej bukiet tulipanów, w którym sześć kolagenowych „łodyg” jest połączonych z sześcioma regionami globularnych główek. Burton i Woof, Advances in Immunol. 51: 1-84 (1992). Do aktywacji kaskady dopełniacza niezbędne jest związanie z C1q przy najmniej dwóch cząsteczek IgG1, IgG2 lub IgG3 (istnieje zgoda co do tego, że IgG4 nie aktywuje dopełniacza), natomiast tylko jednej cząsteczki IgM, przyłączonej do docelowego antygenu. Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology, 2: 77-94 (1995), str. 80.
W oparciu o wyniki uzyskane na podstawie modyfikacji chemicznych i analizy krystalograficznej Burton i wsp., (Nature, 288: 338-344, (1980)) zaproponowali, że miejsce wiązania dla jednego ze składników dopełniacza C1q na IgG, obejmuje przynajmniej dwie (C-końcowe) nici β domeny CH2. Burton następnie zasugerował (Molec.Immunol., 22(3): 161-206 (1985)), że region zawierający reszty aminokwasowe 318 do 337 może uczestniczyć w wiązaniu dopełniacza.
Duncan i Winter (Nature 332: 738-40 (1988)), stosując mutagenezę ukierunkowaną, odkryli, że Glu318, Lys320 i Lys322 tworzą miejsce wiązania C1q. Dane dostarczone przez Duncan'a i Winter'a pochodzą z testów wiązania mysiej odmiany izotypowej IgG2b z pochodzącym ze świnki morskiej C1q. Znaczenie reszt Glu318, Lys320 i Lys322 w wiązaniu C1q zostało potwierdzone na podstawie zdolności jaką wykazywał krótki, syntetyczny peptyd zawierający te reszty do hamowania zależnej od dopełniacza lizy. Podobne rezultaty ujawniono w Patencie USA Nr 5, 648, 260, wydanym 15 lipca, 1997r. oraz Patencie USA Nr 5, 624, 821, wydanym 29 kwietnia, 1997 r.
Na podstawie analizy zdolności podklasy ludzkiej IgG do uczestniczenia w zależnej od dopełniacza lizie komórkowej, wykazano, że reszta Pro331 jest zaangażowana w wiązanie C1q. Mutacja reszty Ser331 do reszty Pro331 w IgG nadaje zdolność aktywacji dopełniacza. (Tao i wsp., J.Exp.Med., 178: 661-667 (1993); Brekke i wsp., Eur.J.Immunol., 24: 2542-47 (1994)).
Ward i Ghetie zaprezentowali w swoim artykule przeglądowym, na podstawie porównania wyn ików otrzymanych przez zespół Winter'a i Tao i wsp. oraz Brekke i wsp., twierdzenie, że istnieją przynajmniej dwa różne regiony zaangażowane w wiązanie C1q: jeden w obrębie nici β domeny CH2, zawierającej reszty Glu318, Lys320 i Lys322 oraz drugi, w obszarze skrętu, w bliskim sąsiedztwie tej samej nici β, zawierający kluczową resztę aminokwasową w pozycji 331.
Inne doniesienia literaturowe sugerowały, że reszty Leu235 i Gly237 ludzkiego białka IgG1, zlokalizowane w dolnym regionie zawiasowym, odgrywają krytyczną rolę w wiązaniu i aktywacji dopełni acza. Xu i wsp., Immunol. 150:15A (Streszczenie) (1993). WO94/29351, wydany 2 grudnia, 1994 r. donosi, że reszty aminokwasowe niezbędne do wiązania C1q i FcR ludzkiej IgG1 zlokalizowane są w N-końcowym regionie domeny CH2, tj. reszty 231-238.
Ponadto zaproponowano, że zdolność IgG do wiązania C1q i aktywacji kaskady dopełniacza zależy również od obecności, braku lub modyfikacji, ugrupowania węglowodanowego znajdującego się pomiędzy dwiema domenami CH2 (zazwyczaj zakotwiczonego przy reszcie Asn297). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-04 (1995), str. 81.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiąże receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten obejmuje przeciwciało.
Korzystnie region Fc macierzystego polipeptydu zawiera region Fc ludzkiej IgG.
Korzystniej region Fc ludzkiej IgG zawiera region ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4.
Korzystnie wariant ten uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
Korzystniej wariant ten wiąże FcyRII z niższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedno podstawienie reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w dom enie CH2 regionu Fc.
PL 220 113 B1
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc, innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
Korzystnie wariant ten zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej wariant ten zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Korzystniej wariant ten zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wariant regionu Fc zawiera wariant Fc ludzkiej IgG.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyRI.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wykazuje zredukowane wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie z FcyRIII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435, lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyR i zawiera modyfikacje reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRIII.
Jeszcze korzystniej ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRII.
Najkorzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcyRIII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej
PL 220 113 B1 pozycjach 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcRn.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja, charakteryzująca się tym, że zawiera wariant polipeptydu określony powyżej i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
Korzystnie kompozycja ta jest sterylna.
Przedmiotm wynalazku jest ponadto wyizolowany kwas nukleinowy, charakteryzujący się tym, że koduje wariant polipeptydu określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest także wektor, charakteryzujący się tym, że zawiera kwas nukleinowy określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest też komórka gospodarza, charakteryzująca się tym, że zawiera wektor określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, polegający na tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną powyżej, który pozwala na ekspresję tego kwasu nukleinowego.
Korzystnie sposób ten obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie wariantu polipeptydu określonego powyżej do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc (FcR) lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórk owej zależnej od przeciwciał (ADCC), polegający na tym, że obejmuje etapy, w których:
(a) wprowadza się jedną lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierz ystego polipeptydu, w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
(b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcR lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
Korzystnie etap (b) obejmuje określenie in vitro wiązania wariantu regionu Fc z FcR.
Korzystnie etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC.
Korzystnie FcR jest ludzkim receptorem Fc gamma III (FcyRIII).
Korzystnie etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
Korzystniej obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
Zgodnie z wynalazkiem opisano wariant macierzystego polipeptydu zawierający region Fc, uczestniczący w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiążący receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd i zawierający przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regionie Fc. Taki wariant polipeptydu może, na przykład, zawierać przeciwciało lub immunoadhezynę. Taki region Fc macierzystego polipeptydu dogodnie zawiera ludzki region Fc, np. region Fc ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Taki wariant polipeptydu zawiera dogodnie modyfikację aminokwasową
PL 220 113 B1 (np. substytucję) w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycji 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, którego reszty aminokwasowe oznaczone są zgodnie z indeksem EU według Kabat.
Ponadto, zgodnie z wynalazkiem opisano polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wariant regionu Fc dogodnie zawiera wariant regionu Fc ludzkiej IgG, np. wariant regionu ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Zauważono, że w powyżej cytowanych pracach z tej dziedziny, dotyczących macierzystego polipeptydu posiadającego niepochodzący od ludzi mysi region Fc, wymienionym powyżej resztom przypisywano udział w wiązaniu Fc. Na przykład, w układzie mysia IgG2b/mysi FcyRII, wykazano, że IgGE318 jest istotna w procesie wiązania (Lund i wsp., Molec.Immunol. 27(1): 53-59 (1992)), podczas gdy E318A nie wywierała żadnego wpływu w układzie ludzka IgG/ludzki FcyRII (Tabela 6, poniżej).
W jednym z rozwiązań wariant polipeptydu o zmienionej aktywności wiązania FcyR charakteryzuje się zredukowanym wiązaniem z Fc-,'R i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 28 9, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRI oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Będący przedmiotem zainteresowania wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRIII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
W innym rozwiązaniu, wariant polipeptydu o zmienionym powinowactwie wiązania Fc-/R wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zwiększone wiązanie FcyRIII oraz, ewentualnie, może dodatkowo wykazywać zredukowane wiązanie FcyRII. Przykładowo, taki wariant zawiera modyfikację lub modyfikacje reszty aminokwasowej lub reszt aminokwasowych w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283,
285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Takie warianty pol ipeptydu o zwiększonym wiązaniu FcyRII mogą, ewentualnie, dodatkowo charakteryzować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII i mogą, na przykład, zawierać modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272,
286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z in8
PL 220 113 B1 deksem EU według Kabat. Takie warianty polipeptydu o zredukowanym wiązaniu FcRn mogą zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wyżej wymienione warianty polipeptydu mogą, alternatywnie, wyk azywać silniejsze wiązanie FcRn i zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311,312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też kompozycję zawierającą wariant polipeptydu i fizjologicznie lub farmaceutycznie akceptowany nośnik lub rozpuszczalnik. Kompozycja ta, służąca do potencjalnego zastosowania terapeutycznego, jest sterylna i może być liofilizowana.
Rozważano diagnostyczne i terapeutyczne zastosowanie zawartych w niniejszym opisie waria ntów polipeptydu. W jednym z zastosowań diagnostycznych zgodnie w wynalazkiem opisano sposób określenia obecności antygenu będącego przedmiotem zainteresowania, obejmujący kontaktowanie próbki przypuszczalnie zawierającej antygen z wariantem polipeptydu i określanie wiązania wariantu polipeptydu z tą próbką. W jednym z zastosowań terapuetycznych zgodnie z wynalazkiem opisano sposób leczenia ssaków dotkniętych chorobą lub zaburzeniem, lub predysponowanych do wystąpienia takiej choroby lub zaburzenia, obejmujący podawanie ssakom terapeutycznie skutecznej ilości wariantu opisywanego polipeptydu, lub kompozycji zawierającej wariant polipeptydu i farmaceutycznie a kceptowany nośnik.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również: wyizolowany kwas nukleinowy kodujący wariant polipeptydu; wektor zawierający kwas nukleinowy, ewentualnie operacyjnie połączony z sekwencją rozpoznawaną przez transformowane wektorem komórki kontrolną gospodarza; komórki gospodarza zawierające wektor; sposób otrzymywania wariantu polipeptydu obejmujący hodowlę tych komórek gospodarza w celu osiągnięcia w nich ekspresji kwasu nukleinowego, i ewentualnie odzyskanie wariantu polipeptydu z hodowli komórek gospodarza (np. z pożywki hodowlanej komórek gospodarza).
Zgodnie z wynalazkiem opisano również sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmieni onym powinowactwie wiązania receptora (FcR) lub o zmienionej cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC), który to sposób obejmuje:
(a) wprowadzanie jednej lub więcej modyfikacji aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu uzyskania wariantu regionu Fc;
(b) określanie wiązania wariantu regionu Fc z FcR lub określanie aktywności ADCC regionu Fc wariantu polipeptydu.
Etap (b) sposobu może obejmować określanie wiązania in vitro regionu Fc wariantu polipeptydu z jednym lub więcej FcR. Ponadto, sposób może pozwalać na identyfikację regionu Fc wariantu polipeptydu o zwiększonym powinowactwie wiązania z FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC w et apie (b). Etap (b) obejmuje określanie wiązania regionu Fc z FcR, który na przykład, może być ludzkim receptorem III Fc gamma (FcγRIII). Gdy etap (b) dotyczy określania wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR, to testowane FcR dogodnie zawierają ludzki receptor II Fc ga mma (FcγRII) oraz ludzki receptor III Fc gamma (FcγRIII).
Krótki opis Rysunków
Na Figurze 1 przedstawiono schematycznie natywną IgG. Wiązania disiarczkowe zaznaczono grubą linią pomiędzy domenami CH1 a CL oraz dwiema domenami CG2. V jest domeną zmienną; C jest domeną stałą; literą L oznaczono łańcuch lekki, zaś literą H łańcuch ciężki.
Na Figurze 2 przedstawiono wiązanie C1q przeciwciała dzikiego typu (wt) C2B8; przeciwciała C2B8 zawierającego region stały ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz warianty K322A, K320A i K318A.
Na Figurze 3 zaprezentowano wiązanie C1q wariantów P331A, P329A i K322A.
Na Figurze 4A oraz 4B przedstawiono sekwencje aminokwasowe łańcucha lekkiego (Fig. 4A; SEQ ID NO:1) oraz łańcucha ciężkiego (Fig. 4B; SEQ ID NO:2) przeciwciała E27 skierowanego przeciwko IgE.
Na Figurze 5 zaprezentowano schematyczny diagram „kompleksu immunologicznego” przygotowanego do zastosowania w analizie FcR opisanej w Przykładzie 1. Przedstawiono heksamer zawi erający trzy cząsteczki przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (polipeptyd zawierający region Fc) oraz trzy cząsteczki IgE („pierwsza cząsteczka docelowa”). IgE posiada dwa „miejsca wiązania” przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (E27) w regionie Fc tego białka. Każda cząsteczka IgE w tym kompleksie jest ponadto zdolna do wiązania dwóch cząsteczek VEGF („drugi polipeptyd docelowy”). VEGF posiada dwa „miejsca wiązania” IgE.
PL 220 113 B1
Na Figurze 6 zademonstrowano wyniki wiązania C1q otrzymanego dla wariantów D270K oraz D270V, w porównaniu z wynikami uzyskanymi dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 7 przedstawiono wyniki dotyczące cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) wariantów D270K i D270V w porównaniu do wyników uzyskanych dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 8 zawarto wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez komórki 293 (293-Wt-C2B8), dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez CHO (CHO-Wt-C2B8) oraz różnych typów przeciwciał.
Na Figurze 9 przedstawiono wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu (wt) C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 10 zamieszczono strukturę trójwymiarową regionu Fc ludzkiego białka IgG, zaznaczono reszty aminokwasowe: Asp270, Lys326, Pro329, Pro331, Lys322 oraz Glu333.
Na Figurze 11 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 12 przedstawiono wyniki testu ELISA wiązania C1q uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 13 przedstawiono CDC dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 14 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla C2B8 z ludzką IgG4 (IgG4), dzikiego typu C2B8 (Wt-C2B8), C2B8 z regionem stałym ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz dla wariantów przeciwciał, zgodnie z opisem w Przykładzie 3.
Na Figurze 15A i 15B pokazano wzorce wiązania uzyskane dla macierzystego przeciwciała (E27) z FcyRIIB oraz FcyRIIIA. Na Figurze 15A przedstawiono wzorce wiązania dla humanizowanego przeciwciała IgG1, E27, skierowanego przeciwko IgE, w postaci monomeru (okręgi), heksameru (pełne kwadraty) oraz kompleksu immunologicznego składającego się z wielu heksamerów (pełne trójkąty), z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIB (CD32). Heksameryczny kompleks (pełne kwadraty) utworzono poprzez zmieszanie równych stężeń molarnych E27 (wiążącego się z regionem Fc ludzkiej IgE) oraz IgE ludzkiego szpiczaka. Heksamer jest stabilnym, 1.1 kDa kompleksem, składającym się z 3 cząsteczek IgG (każda o masie 150 kDa) oraz 3 cząsteczek IgE (każda o masie 200 kDa). Kompleks immunologiczny (pełne trójkąty) utworzono kolejno łącząc równe stężenia molarne E27 oraz rekombinowanej IgE, skierowanej przeciwko VEGF (ludzka IgE z domenami zmiennymi wiążącymi ludzki VEGF) z utworzeniem heksameru. Następnie, w celu utworzenia kompleksu immunologicznego, heksamery łączono z 2x stężeniem molarnym ludzkiego VEGF, homodimeru 44 kDa, posiadającego dwa miejsca wiązania dla IgE skierowanej przeciwko VEGF na mol VEGF. Na Figurze 15B pokazano przebieg wiązania z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIIA (CD16).
Na Figurze 16A przedstawiono wiązanie kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem różnych par typu antygen-przeciwciało w reakcji z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α receptora FcyRIIA. Na Figurze 16B pokazano wiązanie tych samych par antygen-przeciwciało z fuzyjnym białkiem GST podjednostki α receptora FcyRIIIA. Wiązanie ludzkiego IgE:anty-IgE E27 IgG1 zaznaczono za pomocą pełnych kółek; wiązanie ludzkiego VEGF: humanizowane anty-VEGF IgG1 zaznaczono za pomocą pustych kółek.
Na Figurze 17 podsumowano różnice w selektywności wiązania pomiędzy pewnymi wariantami alaninowymi różnych FcyR. Wiązanie wariantów alaninowych w miejscu reszt domeny CH2 IgG1 anty-IgE, E27, przedstawiono dla FcyRIIA, FcyRIIB oraz dla FcyRIIIA. Typ 1 nie wykazuje wiązania z żadnym z trzech receptorów: D278A (265 według indeksu EU). Typ 2 cechuje się zwiększonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, podczas gdy wiązanie z FcyRIIIA nie ulega zmianie: S280A (267 według indeksu EU). Typ 3 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB, natomiast zredukowane wiązanie z FcyRIIIA: H281A (268 według indeksu EU). Typ 4 cechuje się zmniejszonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, ale zwiększonym wiązaniem z FcyRIIIA: S317A (298 według indeksu EU). Typ 5 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIIA, natomiast wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB nie ulega zmianie: E352A, K353A (333 i 334 według indeksu EU).
Na Figurze 18A i 18B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIIA/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIIA. Na Figurze 18A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIIA-GST. S317A (298 według indeksu EU) oraz S317A/K353A (298 i 334 według indeksu EU) wykazywały się lepszym wiązaniem niż dzikiego typu E27, podczas gdy D278A (265 według indeksu EU) utracił niemal
PL 220 113 B1 całkowicie zdolność wiązania. Na Figurze 18B wykazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO, wykazujących ekspresję rekombinowanej postaci FcyRIIIA związanej z GPI.
Na Figurze 19A i 19B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIB/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIB. Na Figurze 19A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIB-GST. H281A (268 według indeksu EU) wykazał się lepszym wiązaniem niż dziki typ E27, podczas gdy dla S317A (298 według indeksu EU) odnotowano zredukowane wiązanie. Na Figurze 19B pokazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO wykazujących ekspresję rekombinowanego FcyRIIB związanego z błoną.
Na Figurze 20 zademonstrowano pojedyncze substytucje alaniny w domenie CH2 przeciwciała IgG1 skierowanego przeciwko HER2 (HERCEPTIN®), które wpływają na wiązanie FcyRIIIA w obu analizach, typu białko-białko i analizie opartei na wykorzystaniu komórek, zmieniając zdolność wiązania z FcyRIIIA na efektorowych jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC). Rekombinowane humanizowane przeciwciała anty-HER2 (HERCEPTIN®), które wiążą się z ekspresjonującymi
HER-2 komórkami raka sutka SK-BR-3, inkubowano wstępnie ze znakowanymi Cr komórkami SK-BR-3 przez 30 min (opsonizacja), stosując stężenie 100 ng/ml (pełne kółka) i 1,25 ng/ml (pełne kw adraty). Stosując stałe stężenie docelowych komórek nowotworowych, zwiększano stosunek komórek efektorowych od 0 do 100. Poziom spontanicznej cytotoksyczności przy braku przeciwciała (przekreślone kwadraty) wynosił 20%, przy stosunku komórka efektorowa:komórka docelowa wynoszącym 100:1. Pojedyncza mutacja alaninowa, niewywierająca wpływu na wiązanie z FcyRIIIA, wariant G31=R309A (292 według indeksu EU), nie wpływała na ADCC (pełne trójkąty). Pojedyncza mutacja alaninowa, zwiększająca jedynie nieznacznie wiązanie z FcyRIIIA, wariant G30=K307A (290 według indeksu EU), również powodowała niewielki wzrost ADCC (tj. 1,1-krotne zwiększenie aktywności ADCC, obliczonej na podstawie obszaru pod krzywą) w stężeniu 1,25 ng/ml dla stosunków komórka efektorowa:komórka docelowa (pełne romby) porównywanych do przeciwciała dzikiego typu w stężeniu 1,25 ng/ml (pełne kwadraty). Pojedyncza mutacja alaninowa obniżająca wiązanie z FcyRIIIA, wariant G34=Q312A (295 według indeksu EU), również powodowała obniżenie aktywności ADCC (pełne, odwrócone trójkąty).
Na Figurze 21 pokazano, że pojedyncza mutacja alaninowa, powodująca wzmocnienie wiąz ania z FcyRIIIA, wariant G36=S317A (298 według indeksu EU), w analizie typu białko-białko i analizie opartej na zastosowaniu komórek również powoduje wzrost ADCC (pełne trójkąty), obserwowany wśród wariantów porównywanych z dzikim typem (pełne kwadraty), w stężeniu 1,25 ng/ml. Zastosowanie G36 powodowało 1,7-krotny wzrost aktywności ADCC, wyrażony jako obszar pod krzywą. Oba warianty, G17=E282A (269 według indeksu EU) oraz G18=D283A (270 według indeksu EU), wykazywały zredukowane wiązanie z FcyRIIIA, jak również obniżoną skuteczność ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC.
Na Figurze 22A przedstawiono przyrównania natywnych sekwencji regionów Fc IgG. Przedst awiono natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypy nie-A i A) (odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7). Sekwencja ludzkiej IgG1 jest allotypem nie-A, a różnice pomiędzy tą sekwencją a allotypem A (w pozycjach 356 i 358; zgodnie z indeksem EU) pokazano poniżej sekwencji ludzkiej IgG1. Przedstawiono również natywne sekwencje regionu Fc mysiej IgG, murIgG1 (SEQ ID NO: 8), murIgG2A (SEQ ID NO: 9), murIgG2B (SEQ ID NO: 10) oraz murIgG3 (SEQ ID NO: 11). Na Figurze 22B pokazano procent identyczności pomiędzy sekwencjami regionu Fc przedstawionymi na Figurze 22A.
Na Figurze 23 pokazano przyrównania natywnych sekwencji regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypu nie-A i A; odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7), przy czym różnice pomiędzy sekwencjami zaznaczono za pomocą gwiazdek.
Na Figurze 24 przedstawiono obszar pod krzywą (AUC) dla wybranych wariantów w porówn aniu z IgG1 anty-HER2 (HERCEPTIN®) w 4-godzinnej analizie ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC (N=5). Wariant G36 (S317A; 298 według indeksu EU) o zwiększonym wiązaniu FcyRIIIA wykazywał zwiększoną aktywność ADCC; wariant G31 (R309A; 292 według indeksu EU), niewykazujący zmiany wiązania FcyRIIIA, również nie posiadał zmienionej aktywności ADCC, a G14 (D265A; 278 według indeksu EU) cechujący się zredukowanym wiązaniem FcyRIIIA, także posiadał obniżoną aktywność ADCC.
PL 220 113 B1
Szczegółowy opis zalecanych wykonań
I. Definicje
W niniejszym opisie i zastrzeżeniach numeracja reszt w łańcuchu ciężkim immunoglobuliny jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), wyraźnie włączonym tu przez odesłanie. „Indeks EU według Kabat” dotyczy numeracji reszt ludzkiego przeciwciała IgG1 EU.
„Macierzysty polipeptyd” jest polipeptydem o sekwencji aminokwasowej bezujawnionych tu, jednej lub więcej, modyfikacji w regionie Fc, różniącym się od ujawnionego tu wariantu polipeptydu funkcją efektorową. Polipeptyd macierzysty może zawierać natywną sekwencję regionu Fc lub reg ionu Fc obejmującego istniejące pierwotnie modyfikacje sekwencji aminokwasowej (takie jak addycje, delecje i/lub substytucje).
Termin „region Fc” stosowany jest w celu zdefiniowania C-końcowego regionu łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, np. jak przedstawiono na Figurze 1. „Region Fc” może być natywną sekwencją regionu Fc lub wariantem regionu Fc. Mimo, że granice regionu Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny mogą różnić się, region Fc łańcucha ciężkiego ludzkiej immunoglobuliny IgG rozciąga się od reszty aminokwasowej w pozycji Cys226, lub od Pro230, do jego karboksylowego końca. Region Fc immunoglobuliny, ogólnie, obejmuje dwie domeny stałe, CH2 i CH3, jak przedstawiono na Figurze 1.
„Domena CH2” regionu Fc ludzkiej IgG (również nazywana domeną „Cy2”) obejmuje zazwyczaj obszar od reszty aminokwasowej 231 do około aminokwasu 340. Domena CH2 jest jedynym fragmentem, który nie jest połączony ściśłe z inną domeną. Dwa rozgałęzione, połączone wiązaniem przez atom N, łańcuchy węglowodanowe umieszczone są pomiędzy dwiema domenami CH2 we wnętrzu nienaruszonej natywnej cząsteczki IgG. Przypuszcza się, że te węglowodany zastępują łączenia pomiędzy domenami i pomagają stabilizować domenę CH2. Burton, Molec.Immunol.22 : 161-206 (1985).
„Domena CH3” obejmuje obszar reszt od C-końcowych do domeny CH2 regionu Fc (tj. od około reszty aminokwasowej 341 do około reszty aminokwasowej 447 IgG).
„Funkcjonalny region Fc” posiada „funkcję efektorową” natywnej sekwencji regionu Fc. Przykładowe, „funkcje efektorowe” obejmują wiązanie C1q; cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc, cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC); fagocytozę; inhibicję receptorów powierzchniowych komórki (np. receptora komórki B, BCR), itp. Takie funkcje efektorowe wymagają połączenia regionu Fc z domeną wiążącą (np. domeną zmienną przeciwciała) oraz mogą być oceniane za pomocą różnych analiz, np. opisanych w niniejszym wynalazku.
„Natywna sekwencja regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową identyczną z sekwencją aminokwasową regionu Fc występującą w naturze. Natywne sekwencje ludzkich regionów Fc przedstawiono na Figurze 23 i obejmują one natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypu nie-A i allotypu A); natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG2; natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG3 oraz natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG4, jak również ich warianty występujące w naturze. Na Figurze 22A przedstawiono natywną sekwencję mysiego regionu Fc.
„Wariant regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową różniącą się od natywnej sekwencji regionu Fc tym, że zawiera przynajmniej jedną, zgodnie z niniejszym opisem, „modyfikację aminokwasową”. Dogodnie wariant regionu Fc posiada przynajmniej jedną substytucję aminokwasu innym am inokwasem, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu, np. od około jednej do około dziesięciu substytucji aminokwasowych, i dogodnie, od około jednej do około pięciu substytucji aminokwasowych w obrębie natywnej sekwencji regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu. Wariant regionu Fc dogodnie wykazuje przynajmniej około 80% homologii z natywną sekwencją regionu Fc i/lub z regionem Fc macierzystego polipeptydu, a dogodniej około 90% homologii z tymi regionami, a zwłaszcza przynajmniej około 95% homologii z tymi regionami.
„Homologia” definiowana jest jako procent reszt sekwencji aminokwasowej wariantu, które są identyczne po przyrównaniu sekwencji i, w razie konieczności, wstawieniu odpowiednich przerw celem uzyskania maksymalnego procentu homologii. Metody i programy komputerowe do przyrównywania sekwencji są dobrze znane w dziedzinie. Jednym z takich programów jest program komputerowy „Align 2”, Genetech, Inc., złożony wraz z dokumentacją dla użytkownika w the United States Copyright Office, Washington, DC 20559, 10 grudnia, 1991.
Termin „polipeptyd zawierający region Fc” odnosi się do polipeptydu, takiego jak przeciwciało lub immunoadhezyna (patrz definicje poniżej), który zawiera region Fc.
PL 220 113 B1
Terminy „receptor Fc” lub „FcR” stosowane są w celu określenia receptora wiążącego region Fc przeciwciała. Zalecany FcR jest natywną sekwencją ludzkiego FcR. Ponadto, zalecany FcR posiada zdolność wiązania przeciwciała IgG (receptor gamma) i obejmuje receptory podklasy FcyRI, FcyRII i FcyRIII, włączając warianty alleliczne i warianty alternatywnego składania tych receptorów. Receptory FcyRII obejmują receptory FcyRIIA (receptor aktywujący) oraz FcyRIIB (receptor hamujący), które posiadają podobne sekwencje aminokwasowe, różniące się głównie w obs zarze ich domen cytoplazmatycznych. Receptor aktywujący FcyRIIA zawiera w swojej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw aktywujący (ITAM) obejmujący resztę tyrozyny. Receptor hamujący FcyRIIB zawiera w swej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw hamujący (ITIM) obejmujący resztę tyrozyny. (Patrz praca przeglądowa M. Daeron, Annu.Rev.Immunol. 15: 203-234 (1997)). FcR opisane są w Raveth i Kinet, Annu.Rev.Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4: 25 -34 (1994) oraz de Haas i wsp., J.Lab.Clin.Med. 126: 330-41 (1995). Inne FcR, w tym również te które zostaną zidentyfikowane w przyszłości, nazywane są w niniejszym opisie „FcR”. Termin ten obejmuje również receptor noworodkowy, FcRn, odpowiedzialny za przeniesienie matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117: 587 (1976) oraz Kim i wsp., J.Immunol. 24: 249 (1994)).
„Cytotoksyczność komórkowa zależna od przeciwciał” i „ADCC” odnosi się do zależnej od komórek reakcji, w której niespecyficzne, cytotoksyczne komórki ekspresjonujące FcR (np. komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), neutrofile i makrofagi) rozpoznają przeciwciało związane z komórką docelową, a następnie powodują lizę tej komórki. Główne komórki uczestniczące w ADCC, komórki NK, ekspresjonują jedynie FcyRIII, podczas gdy monocyty ekspresjonują FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresję FcR na komórkach uczestniczących w hematopoezie podsumowano w Tabeli 3, na stronie 464, Ravetch i Kinet, Annu.Rev.Immunol 9: 457-92, (1991).
„Ludzkie komórki efektorowe” są leukocytami ekspresjonującymi jeden lub więcej FcR i wykazującymi funkcję efektorową. Zalecane komórki ekspresjonują przynajmniej FcyRIII i wykazują funkcję efektorową ADCC. Przykładami ludzkich leukocytów uczestniczących w ADCC są jednojądrzaste k omórki krwi obwodowej (PBMC), komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), monocyty, cytotoksyczne komórki T i neutrofile; przy czym zalecane są komórki PBMC i NK. Komórki efektorowe mogą być izolowane ze źródła natywnego np. z krwi lub komórek PBMC, zgodnie z niniejszym opisem.
Wariant polipeptydu o „zmienionym” powinowactwie wiązania FcR lub aktywności ADCC jest polipeptydem o zwiększonej lub zmniejszonej aktywności wiązania FcR i/lub aktywności ADCC, w porównaniu z polipeptydem macierzystym lub z polipeptydem zawierającym natywną sekwencję regionu Fc. Wariant polipeptydu, który „wykazuje zwiększone wiązanie” z FcR wiąże przynajmniej jeden FcR z większym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Wariant polipeptydu, który „ wykazuje zmniejszone wiązanie” z FcR, wiąże przynajmniej jeden FcR z mniejszym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty, wykazujące osłabione wiązanie FcR, mogą posiadać małą lub nie posiadać żadnej znaczącej zdolności wiązania FcR, np. 0-20% wiązania z FcR, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc IgG, np. jak określono w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który wiąże FcR z „lepszym powinowactwem” niż macierzysty polipeptyd, wykazuje zdolność wiązania jakiegokolwiek, jednego lub więcej, z powyżej wymienionych FcR z istotnie lepszym powinowactwem wiązania niż macierzyste przeciwciało, w przypadku gdy zastosowane w analizie wiązania ilości wariantu polipeptydu i polipeptydu macierzystego są zasadniczo takie sa me. Na przykład, wariant polipeptydu o lepszym powinowactwie wiązania FcR może wykazywać od około 1,15-krotną do około 100-krotnej, np. od około 1,2-krotną do około 50-krotną poprawę powinowactwa wiązania FcR niż polipeptyd macierzysty, przy czym powinowactwo wiązania jest określane, na przykład, zgodnie z opisem w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który „uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej” niż przeciwciało macierzyste jest polipeptydem, który jest in vitro lub in vivo zasadniczo skuteczniejszy w procesie ADCC, przy czym zastosowane w analizie ilości wariantu polipeptydu i przeciwciała macierzystego są zasadniczo takie same. Ogólnie, takie warianty są identyfikowane za pomocą analizy ADCC in vitro, zgodnie z niniejszym opisem. Jednakże, rozważa się zastosowanie również innych analiz i metod służących wykrywaniu aktywności ADCC, np. w doświadczeniu na zwierzętach itp. Zalecany wariant jest około 1,5-krotnie do około 100-krotnie, np. od około dwukrotnie do około pięciokrotnie, bardziej skuteczny w procesie ADCC niż macierzysty polipeptyd, np. w opisanej tu analizie in vitro.
PL 220 113 B1 „Modyfikacja aminokwasowa” odnosi się do zmiany sekwencji aminokwasowej w stosunku do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Przykładowe modyfikacje obejmują substytucję am inokwasową, insercję i/lub delecję. Zalecaną modyfikacją aminokwasową jest substytucja.
„Modyfikacja aminokwasowa w” specyficznej pozycji, np. regionu Fc, odnosi się do substytucji lub delecji specyficznej reszty, lub wstawienia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej w sąsied ztwie specyficznej reszty. Przez wstawienie „w sąsiedztwie” specyficznej reszty rozumie się wstawienie w tym miejscu jednej lub dwóch reszt aminokwasowych. Wstawienie może dotyczyć wstawienia reszty od N-końca lub C-końca względem specyficznej reszty.
„Substytucja aminokwasowa” odnosi się do zastąpienia przynajmniej jednej istniejącej reszty aminokwasowej w pierwotnie określonej sekwencji aminokwasowej, inną, odmienną „zastępczą” resztą aminokwasową. Zastępcza reszta lub reszty mogą być „naturalnie występującymi resztami aminokwasowymi” (tj. kodowanymi przez kod genetyczny) i wybranymi z grupy istniejących reszt, takich jak: alanina (Ala); arginina (Arg); aspargina (Asn); kwas asparaginowy (Asp); cysteina (Cys); glutamina (Gln); kwas glutaminowy (Glu); glicyna (Gly); histydyna (His); izoleucyna (Ile); leucyna (Leu); lizyna (Lys); metionina (Met); fenyloalanina (Phe); prolina (Pro); seryna (Ser); treonina (thr); tryptofan (Trp); tyrozyna (Tyr) i walina (Val). Zaleca się jednak, żeby reszta zastępcza nie była cysteiną. Definicja obejmuje również substytucję jedną lub więcej niewystępującymi naturalnie resztami aminokwasowymi. „Niewystępująca naturalnie reszta aminokwasowa” odnosi się do reszty innej niż wymienione powyżej naturalnie występujące reszty aminokwasowe, zdolnej do kowalencyjnego wiązania z sąsiednią resztą aminokwasową sąsiednimi resztami aminokwasowymi w łańcuchu polipeptydowym. Przykłady niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych obejmują norleucynę, ornitynę, homoserynę oraz inne analogi reszt aminokwasowych, takie jak opisane przez Ellman i wsp., Meth. Enzym. 202: 301 -336 (1991). W celu uzyskania takich niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych można zastosować procedury według Noren i wsp., Science 244: 182 (1989) i Ellman i wsp., jak wyżej. W skrócie, procedury te obejmują chemiczną aktywację supresorowego tRNA z niewystępującą naturalnie resztą aminokwasową, a następnie transkrypcją in vitro i translacją RNA.
„Wstawienie aminokwasu” (insercja) odnosi się do wbudowania przynajmniej jednego aminokwasu do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Podczas gdy insercja dotyczy zazwyczaj wstawienia jednej lub dwóch reszt aminokwasowych, w niniejszym zgłoszeniu brane są pod uwagę większe „insercje peptydowe”, np. wstawienie około trzech do około pięciu lub nawet do około dziesięciu reszt aminokwasowych. Wstawiona reszta lub reszty mogą być resztami występującymi naturalnie lub niewystępującymi naturalnie, jak opisano powyżej.
„Delecja aminokwasu” odnosi się do usunięcia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej z określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej.
„Region zawiasowy” jest ogólnie zdefiniowany jako obszar od Glu216 do Pro230 ludzkiej IgG1 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985)). Regiony zawiasowe innych postaci izotypowych IgG mogą być porównane z sekwencją IgG1 poprzez umieszczenie w tych samych pozycjach pierwszej i ostatniej reszty cysteiny, tworzących wiązania disiarczkowe S-S pomiędzy łańcuchami ciężkimi.
„Niższy region zawiasowy” regionu Fc jest zazwyczaj zdefiniowany jako obszar rozciągający się od reszt następujących bezpośrednio od C-końca do regionu zawiasowego, tj. od reszty 233 do reszty 239 regionu Fc. W badaniach wykonanych wcześniej niż niniejszy wynalazek stwierdzono, że wiązanie Fc-,'R było ogólnie związane z resztami aminokwasowymi niższego regionu zawiasowego w regionie Fc białka IgG.
„C1q” jest polipeptydem zawierającym miejsce wiązania regionu Fc immunoglobuliny. C 1q wraz z dwiema proteazami serynowymi, C1r i C1s, tworzy kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności (CDC) zależnej od dopełniacza. Ludzki polipeptyd C1q można zakupić np. w Quidel, San Diego, CA.
Termin „domena wiążąca” odnosi się do regionu polipeptydu, który wiąże inną cząsteczkę. W przypadku FcR, domena wiążąca może obejmować fragment jego łańcucha polipeptydowego np. jego łańcuch a, który jest odpowiedzialny za wiązanie regionu Fc. Jedną z użytecznych domen wiążących jest zewnątrzkomórkowa domena łańcucha a FcR.
Termin „przeciwciało” stosowane jest w najszerszym możliwym znaczeniu, a specyficznie dotyczy przeciwciał monoklonalnych (włączając pełnej długości przeciwciała monoklonalne), przeciwciała poliklonalne, przeciwciała wielospecyficzne (np. bispecyficzne) oraz fragmenty przeciwciał pod warunkiem, że wykazują aktywność biologiczną.
PL 220 113 B1 „Fragmenty przeciwciała” zdefiniowane są dla potrzeb niniejszego wynalazku jako zawierające część nienaruszonego przeciwciała, ogólnie włączając region wiązania antygenu lub region zmienny nienaruszonego przeciwciała, lub też zachowujący zdolność wiązania FcR region Fc przeciwciała. Przykłady fragmentów przeciwciała obejmują przeciwciała liniowe; jednołańcuchowe cząsteczki przeciwciał oraz, utworzone z fragmentów przeciwciał, przeciwciała wielospecyficzne. Zalecane fragmenty przeciwciał posiadają przynajmniej część regionu zawiasowego i, ewentualnie, region CH1 łańcucha ciężkiego IgG. Bardziej zalecane fragmenty przeciwciał obejmują cały region stały łańcucha ciężkiego IgG i zawierają łańcuch lekki IgG.
Stosowany tu termin „przeciwciało monoklonalne” odnosi się do przeciwciała otrzymanego z populacji zasadniczo homogennych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała wchodzące w skład populacji są identyczne, za wyjątkiem różnic wynikających z możliwych, naturalnie występujących mutacji, które mogą pojawiać się w nieznacznych ilościach. Przeciwciała monoklonalne są wysoce swoiste i skierowane są przeciwko pojedynczemu miejscu antygenowemu. Ponadto, w przeciwieństwie do konwencjonalnych preparatów przeciwciał (poliklonalnych), zawierających zazwyczaj różne przeciwciała skierowane przeciwko różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciwko pojedynczej determinancie na antygenie. Modyfikacje „monoklonalne” wskazują na charakter przeciwciała wynikający z otrzymania go z zasadniczo homogennej populacji przeciwciał i nie wymagają wytwarzania jakąkolwiek szczególną metodą. Na przykład, według niniejszego wynalazku, przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane metodą z użyciem hybrydom, opisaną po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature 256: 495 (1975), lub metodami rekombinacji DNA (patrz, np. Patent USA Nr 4, 816, 567). „Przeciwciała monoklonalne” mogą być również wyizolowane z fagowej biblioteki przeciwciał, za pomocą technik opisanych, na przykład, przez Clackson i wsp., Nature 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol. 222: 581-594 (1991).
Opisane tu przeciwciała monoklonalne specyficznie obejmują przeciwciała (immunoglobuliny) „chimerowe”, których fragment łańcucha ciężkiego i/lub lekkiego jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z poszczególnych gatunków, lub należącymi do poszczególnej klasy lub podklasy, przy czym pozostały łańcuch (lub łańcuchy) jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z innego gatunku lub należącymi do innej klasy lub podklasy, jak również obejmują fragmenty takich przeciwciał pod warunkiem, że wykazują one aktywność biologiczną (Patent USA Nr 4, 816, 567; oraz Morrison i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)).
Postaci „humanizowane” przeciwciał niepochodzących od ludzi (np. mysich) to chimerowe przeciwciała, które zawierają minimalnej długości sekwencję niepochodzącą od immunogłobuliny człowieka. W większości, humanizowane przeciwciała są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało biorcy), w których reszty regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione resztami z regionu hiperzmiennego innego gatunku (przeciwciało dawcy), takiego jak mysz, szczur, królik lub Naczelny inny niż człowiek, posiadające pożądaną swoistość, powinowactwo i zdolność wiązania. W pewnych przypadkach, res zty regionu zrębowego (FR) Fv ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione odpowiadającymi im resztami innych gatunków. Ponadto, przeciwciała humanizowane mogą zawierać reszty niewystępujące w przeciwciele biorcy lub w przeciwciele dawcy. Modyfikacje te służą dalszemu udoskonaleniu przeciwciała. Ogólnie, przeciwciało humanizowane obejmuje zasadniczo każdą z przynajmniej jednej, a zazwyczaj dwóch domen zmiennych, w których wszystkie lub zasadnicza większość pętli hiperzmiennych odpowiada pętlom immunoglobulin z gatunku innego niż człowiek, a wszystkie lub zasadn icza większość regionów FR pochodzi z sekwencji immunoglobuliny ludzkiej. Humanizowane przeci wciało może, ewentualnie, zawierać również przynajmniej fragment regionu stałego immunoglobuliny (Fc), zazwyczaj ludzkiej immunoglobuliny. Bardziej szczegółowo omówiono to zagadnienie w Jones i wsp., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann i wsp., Nature 332: 323-329 (1988) oraz Presta, Curr.Op.Struct.Biol. 2: 593-596 (1992).
Termin „region hiperzmienny” dotyczy reszt aminokwasowych przeciwciała odpowiedzialnych za wiązanie antygenu. Region hiperzmienny zawiera reszty aminokwasowe z „regionu determinującego dopasowanie” lub „CDR” (tj. reszty 24-34 (L1), 50-56 (L2) oraz 89-97 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego; Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)) i/lub reszty „pętli hiperzmiennej” (tj. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego oraz reszty 26-32 (H1), 53 -55 (H2) i 96-101 (H3) domeny zmiennej łańcucha ciężkiego; Chothia i Lesk, J.Mol.Biol. 196: 901-917
PL 220 113 B1 (1987)). Reszty „regionu zrębowego” lub „FR” są resztami domeny zmiennej, innymi niż zdefiniowane w niniejszym opisie reszty regionu hiperzmiennego.
Stosowany tu termin „immunoadhezyna” określa cząsteczkę podobną do przeciwciała, której struktura stanowi połączenie „domeny wiążącej” heterologicznego białka o właściwościach „adhezyjnych” (np. receptora, ligandu lub enzymu) z domeną stałą immnoglobuliny. Strukturalnie immunoadhezyna obejmuje fuzję sekwencji aminokwasowej adhezyny z sekwencją o pożądanej swoistości wiązania, inną niż miejsce rozpoznawania i wiązania antygenu (miejsce łączenia antygenu) przeci wciała (tj. jest „hetrologiczna”) oraz z sekwencją domeny stałej immunogłobuliny.
Stosowany tu termin „domena wiążąca ligand” odnosi się do jakiegokolwiek natywnego receptora powierzchniowego komórki lub jakiegokolwiek regionu, lub jego pochodnej, zachowującego przynajmniej jakościowo w stosunku do odpowiadającego mu natywnego receptora zdolność wiązania ligandu. W specyficznym wykonaniu receptor pochodzi z polipeptydu powierzchni komórki, posiadającego domenę zewnątrzkomórkową homologiczną z domeną kodowaną przez nadrodzinę genów immunoglobulin. Inne receptory, nienależące do nadrodziny genów immunoglobulin, lecz objęte niniejszą definicją, należą do nadrodzin receptorów cytokin i, w szczególności, receptorów cechujących się aktywnością kinazy tyrozynowej (receptory kinaz tyrozynowych), nadrodzin receptorów hematopoet yny oraz nadrodzin czynnika wzrostu nerwów, i cząsteczek adhezji komórkowej, np. selektyn (E-, L-, i P-selektyny).
Termin „domena wiążąca receptor” stosowany jest w celu określenia jakiegokolwiek natywnego ligandu receptora, włączając cząsteczki adhezji komórkowej, lub jakikolwiek region lub pochodną t akiego natywnego ligandu o zachowanej, przynajmniej jakościowo, względem natywnego ligandu, zdolności wiązania receptora. Definicja ta, między innymi, dotyczy specyficznie sekwencji wiążących ligandów dla wyżej wymienionych receptorów.
„Chimera przeciwciało-immunoadhezyna” obejmuje cząsteczkę stanowiącą połączenie przynajmniej jednej domeny wiążącej przeciwciała (zgodnie z niniejszą definicją) z przynajmniej jedną immunoadhezyną (zgodnie z niniejszą definicją). Przykładowymi chimerami przeciwciało-immunoadhezyna są bispecyficzne chimery CD4-IgG, opisane przez Berg i wsp., PNAS (USA), 88: 4723 -4727 (1991) oraz Chamow i wsp., J.Immunol. 153: 4268 (1994).
„Wyizolowany” polipeptyd jest zidentyfikowanym i wydzielonym i/lub odzyskanym polipeptydem ze składnika jego naturalnego środowiska. Składnikami stanowiącymi zanieczyszczenie naturalnego środowiska polipeptydu są materiały, mogące kolidować z diagnostycznym lub terapeutycznym zastosowaniem polipeptydu, i mogą one obejmować enzymy, hormony i inne białkowe lub niebiałkowe substancje rozpuszczone. W zalecanych wykonaniach polipeptyd podlega oczyszczeniu (1) na poziomie ponad 95% wagowo, określonym metodą Lowry'ego i w szczególności, ponad 99% wagowo, (2) w stopniu wystarczającym do uzyskania, za pomocą sekwentatora (spinning cup seguentator), co najmniej 15 reszt z N-końca lub wewnętrznej sekwencji aminokwasowej, lub (3) do homogenności, w warunkach redukującej i nieredukującej elektroforezy SDS-PAGE z wykorzystaniem Coomassie blue lub, dogodnie, barwiena srebrem. Wyizolowany polipeptyd obejmuje polipeptyd in situ w komórkach rekombinowanych, ponieważ nie będzie obecny przynajmniej jeden składnik naturalnego środowiska polipeptydu. Jednakże, zazwyczaj, wyizolowany polipeptyd otrzymywany jest w wyniku co najmniej jednego etapu oczyszczania.
„Leczenie” odnosi się zarówno do leczenia terapeutycznego, jak i środków profilaktycznych lub zapobiegawczych. Osobniki potrzebujące leczenia obejmują zarówno osobniki chore, jak i osobniki, u których należy zapobiegać zaburzeniu.
„Zaburzenie” jest dowolnym stanem, w którym leczenie za pomocą wariantu polipeptydu może spowodować poprawę. Obejmuje to przewlekłe i ostre zaburzenia lub choroby, włączając stany pat ologiczne predysponujące do pojawienia się rozważanego zaburzenia u ssaka. W jednymi z wykonań zaburzenie jest nowotworem.
Termin „nowotwór” i „nowotworowy” odnosi się do, lub opisuje, stan fizjologiczny organizmu ssaka zazwyczaj cechujący się niekontrolowanym wzrostem komórek. Przykłady nowotworów obejm ują, lecz bez ograniczenia, raka, chłoniaka, blastomę, mięsaka i białaczkę. Bardziej szczegółowe przykłady takich nowotworów obejmują raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, gruczolakoraka płuc, raka płaskonabłonkowego płuc, raka otrzewnej, raka komórek wątroby, raka żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki macicy, raka jajników, raka wątroby, raka pęcherza, wątrobiaka, raka piersi, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka
PL 220 113 B1 śluzówki macicy lub macicy, raka ślinianek, raka nerek, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątrobowego oraz różnych typów nowotworów głowy i szyi.
„Rak z ekspresją HER2” jest nowotworem zawierającym komórki posiadające białko receptora HER2 (Semba i wsp., PNAS (USA) 82: 6497-6501 (1985) oraz Yamamoto i wsp., Nature 319: 230 -234 (1986) (Genebank, numer dostępu Χ03363)) obecne na powierzchni tych komórek, co powoduje, że możliwe jest wiązanie z tymi komórkami przeciwciała skierowanego przeciwko HER2.
Słowo „znacznik” odnosi się do wykrywalnego związku lub kompozycji, połączonych bezpośrednio lub pośrednio z polipeptydem. Znacznik może być sam w sobie wykrywalny (np. znaczniki radioizotopowe lub znaczniki fluoroscencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować chemiczne zmiany w obrębie wykrywanego związku substratu lub kompozycji.
„Wyizolowana” cząsteczka kwasu nukleinowego jest cząsteczką kwasu nukleinowego zidentyfikowaną i oddzieloną od przynajmniej jednej będącej zanieczyszczeniem cząsteczki kwasu nukleinowego, z którą jest zazwyczaj związana w naturalnym źródle kwasu nukleinowego polipeptydu. Wyizoiowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest inną cząsteczką niż w postaci lub zestawie występującym w naturze. Wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego są zatem inne niż cząsteczki kwasu nukleinowego występujące w naturalnych warunkach. Jednakże, wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego znajdującą się w komórkach, które zazwyczaj ekspresjonują polipeptyd, na przykład, cząsteczka kwasu nukleinowego znajduje się w lokalizacji chromosomowej innej niż w naturalnych komórkach.
Termin „sekwencje kontrolne” odnosi się do sekwencji DNA niezbędnych do ekspresji operacyjnie połączonej sekwencji kodującej w organizmie szczególnego gospodarza. Odpowiednie dla organ izmów prokariotycznych sekwencje kontrolne, na przykład, zawierają promotor, ewentualnie, sekwencję operatorową i miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne wykorzystują pr omotory, sygnały poliadenylacji i sekwencje wzmacniaczy.
Kwas nukleinowy jest „operacyjnie połączony” gdy umieszczony jest w funkcjonalnej zależności z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA presekwencji lub liderowej sekwencji wydzielniczej jest operacyjnie połączony z DNA polipeptydu jeśli ten DNA ekspresjonowany jest jako białko uczestniczące w wydzielaniu tego polipeptydu; promotor lub wzmacniacz jest operacyjnie połączony z sekwencją kodującą jeżeli oddziałuje na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiązania rybosomu jest operacyjnie połączone z sekwencją kodującą jeśli jego lokalizacja ułatwia translację. Ogólnie, „operacyjnie połączony” oznacza, że związane sekwencje DNA są ciągłe, a w przypadku liderowej sekwencji wydzielniczej ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże, wzmacniacze nie muszą być ciągłe. Łączenie przeprowadza się poprzez ligaćję w odpowiednich miejscach restrykcyjnych. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, stosuje się, zgodnie z przyjętymi metodami, syntetyczne oligonukleotydowe sekwencje adapterowe lub łączniki.
Wyrażenie „komórka”, „linia komórkowa” i „hodowla komórkowa” stosowane są w niniejszym opisie zamiennie i wszystkie te określenia obejmują potomstwo. Zatem, termin „transformanty” i „komórki transformowane” obejmuje pierwotne komórki i pochodzące z nich hodowle, bez względu na liczbę pasaży. Przyjmuje się też, że, na skutek zaplanowanych i przypadkowych mutacji, nie całe potomstwo musi posiadać dokładnie identyczną zawartość DNA. Objęte tą definicją jest potomstwo, które posiada taką samą funkcję lub aktywność biologiczną jak pierwotnie transformowane komórki. W przypadku stosowania odmiennych znaczeń, ich znaczenie jest zrozumiałe z kontekstu opisu.
Stosowany tu termin „kompleks molekularny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku wiązania dwóch lub więcej heterologicznych cząsteczek (np. polipeptydów) (dogodnie połączonych wiązaniem niekowalencyjnym). Zalecanym tu kompleksem molekularnym jest kompleks immunologiczny.
„Kompleks immunologiczny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku połączenia przynajmniej jednej docelowej cząsteczki i przynajmniej jednego polipeptydu zawierając ego region Fc. Takie połączenie powoduje powstanie kompleksu o wyższej masie cząsteczk owej. Przykładami kompleksów immunologicznych są agregaty antygen-przeciwciało i agregaty cząsteczka docelowa-immunoadhezyna. Stosowany tu termin „kompleks immunologiczny” w wypadku jeśli nie został określony inaczej, odnosi się do kompleksu ex vivo (tj. różnego od postaci lub ułożenia występującego w naturze). Jednakże, kompleks immunologiczny może być podawany ssakom, np. w celu oszacowania klirensu kompleksu immunologicznego u ssaka.
Termin „cząsteczka docelowa” odnosi się do cząsteczki, zazwyczaj polipeptydu, zdolnej do wiązania przez cząsteczkę heterologiczną, i posiadającej jedno lub więcej miejsc wiążących dla cząPL 220 113 B1 steczki heterologicznej. Termin „miejsce wiążące” odnosi się do regionu cząsteczki, z którym możliwe jest związanie innej cząsteczki. „Pierwsza cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa różne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla analizowanej cząsteczki (np. polipeptyd zawierający region Fc), takie, że przynajmniej dwie analizowane cząsteczki mogą ulec związaniu z pierwszą cząsteczką docelową. W zalecanym wykonaniu, dwa lub więcej miejsc wiążących jest identycznych (np. posiadający taką samą sekwencję aminokwasową, gdy cząsteczka docelowa jest polipeptydem). W poniżej zamieszczonym Przykładzie 1 pierwszą cząsteczką docelową jest IgE, posiadająca dwa oddzielne miejsca wiążące w jej regionie Fc, z którymi może ulec związaniu polipeptyd posiadający region Fc (przeciwciało skierowane przeciwko IgE, E27). Inne pierwsze cząsteczki docelowe obejmują dimery składające się z zasadniczo identycznych monomerów (np. neurotrofiny, IL8 i VEGF) lub są polipeptydami zawierającymi dwa lub więcej zasadniczo identycznych łańcuchów polipeptydowych (np. przeciwciała lub immunoadhezyny). „Druga cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa oddzielne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla pierwszej cząsteczki docelowej, takie, że przynajmniej dwie pierwsze cząsteczki docelowe mogą ulec związaniu z drugą cząsteczką docelową. Dogodnie dwa lub więcej miejsca wiążące są identyczne (np. posiadają taką samą sekwencję aminokwasową, gdy docelowa cząsteczka jest polipeptydem). W Przykładzie 2, drugą cząsteczką docelową jest VEGF, posiadająca parę oddzielnych miejsc wiążących, do których może ulec przyłączeniu domena zmienna przeciwciała IgE. Innymi drugimi cząsteczkami docelowymi są np. inne dimery składające się z zasadniczo ide ntycznych monomerów (np. neurotrofiny lub IL8) lub polipeptydy zawierające dwa lub więcej zasadniczo identycznych domen (np. przeciwciała lub immunoadhezyny).
„Analit” jest substancją poddawaną analizie. Zalecanym analitem jest polipeptyd zawierający region Fc, który ma być analizowany pod kątem jego zdolności do wiązania receptora Fc.
„Receptor” jest polipeptydem zdolnym do wiązania przynajmniej jednego ligandu. Zalecanym receptorem jest receptor powierzchni komórkowej, posiadający zewnątrzkomórkową domenę wiążącą ligand i, ewentualnie, inne domeny (np. domenę przezbłonową, domenę wewnątrzkomórkową i/lub domenę zakotwiczoną w błonie komórkowej). Oceniany w tym teście receptor może być stosowany w całości lub jako jego fragment, lub też pochodna (np. białko fuzyjne zawierające domenę wiążącą receptora połączone z jednym lub więcej heterologicznym polipeptydem). Ponadto, receptor oceniany pod kątem właściwości wiązania może być obecny w komórce lub w postaci wyizolowanej i, ewentua lnie, analizowany na płytkach lub innych stałych fazach.
Wyrażenie „receptor o niskim powinowactwie” dotyczy receptora o słabym powinowactwie wiązania badanego ligandu, np. posiadającego stałą wiązania wynoszącą około 50 nM lub słabsze powinowactwo. Przykłady receptorów o niskim powinowactwie obejmują FcyRII i FcyRIII.
II. Sposoby wykonania wynalazku
Zgodnie z wynalazkiem opisano sposób otrzymywania wariantu polipeptydu. „Macierzysty”, „wyjściowy” lub „niezmieniony” polipeptyd wytwarza się za pomocą znanych w dziedzinie technik wytwarzania polipeptydów zawierających region Fc. W zalecanym wykonaniu wynalazku polipeptyd m acierzysty jest przeciwciałem, a przykładowe sposoby otrzymywania przeciwciał opisano bardziej szczegółowo w kolejnych podrozdziałach. Polipeptyd macierzysty może, jednakże, być jakimkolwiek polipeptydem zawierającym region Fc, np. cząsteczką immunoadhezyny. Sposoby otrzymywania immunoadhezyny omówiono szczegółowo poniżej.
W alternatywnym wykonaniu wariant regionu Fc może być otrzymany zgodnie ze sposobami zawartymi w niniejszym opisie i taki „wariant regionu Fc” może być poddany fuzji z wybranym heterologicznym polipeptydem, takim jak domena zmienna przeciwciała lub domena wiążąca receptora lub ligandu.
Polipeptyd macierzysty zawiera region Fc. Ogólnie, region Fc macierzystego polipepcydu zawiera natywną sekwencję regionu Fc i dogodnie, ludzką natywną sekwencję regionu Fc. Jednakże, region Fc macierzystego polipeptydu może posiadać jedną lub więcej istniejących wcześniej zmian w sekwencji aminokwasowej lub modyfikacji w stosunku do natywnego regionu Fc. Na przykład, aktywność wiążąca C1q regionu Fc może być uprzednio zmieniona (inne rodzaje modyfikacji regionu Fc opisano bardziej szczegółowo poniżej). W kolejnym rozwiązaniu region Fc macierzystego polipeptydu istnieje na poziomie „koncepcyjnym”, podczas gdy region ten fizycznie nie istnieje, projektant przeciwciała może zdecydować co do wyboru pożądanej sekwencji aminokwasowej regionu Fc i otrzymać polipeptyd zawierający sekwencję lub DNA kodujący pożądaną sekwencję aminokwasową wariantu regionu Fc.
PL 220 113 B1
Jednakże w zalecanym rozwiązaniu kwas nukleinowy kodujący region Fc macierzystego polipeptydu jest dostępny i, w celu uzyskania wariantu sekwencji kwasu nukleinowego kodującego wariant regionu Fc, sekwencja tego kwasu jest poddawana zmianie.
DNA kodujący wariant sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu otrzymywany jest w wyniku zastosowania różnych, znanych w dziedzinie, sposobów. Sposoby te obejmują, lecz bez ograniczenia, ukierunkowaną (lub zależną od oligonukleotydu) mutagenezę, mutagenezę PGR i mutagenezę kasetową uprzednio otrzymanego DNA kodującego polipeptyd.
Mutageneza ukierunkowana jest zalecanym sposobem otrzymywania wariantów substytucyjnych. Technika ta jest dobrze znana w dziedzinie (patrz np. Carter i wsp., Nucleic Acids Res. 13: 4431-4443 (1985) oraz Kunkel i wsp., Proc.Natl.Acad.Sei.USA 82: 488 (1987)). W skrócie, podczas mutagenezy ukierunkowanej DNA zmianie ulega najpierw wyjściowy DNA, na drodze hybrydyzacji oligonukleotydu kodującego pożądaną mutację z pojedynczą nicią tego wyjściowego DNA. Po hybrydyzacji, stosowana jest polimeraza DNA, służąca syntezie całości drugiej nici, przy pomocy przyłączonego na etapie hybrydyzacji oligonukleotydu jako startera i pojedynczej nici wyjściowego DNA jako matrycy. Zatem, w rezultacie, oligonukleotyd kodujący pożądaną mutację zostaje wbudowany w uzyskany w ten sposób dwuniciowy DNA.
Mutageneza PGR jest również odpowiednia w celu uzyskania wariantów sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu. Patrz, Higuchi, PGR Protocols, str. 177-183 (Academic Press, 1990) oraz Vallette i wsp., Nuci.Acids Res. 17: 723-733 (1989). W skrócie, w przypadku zastosowania m ałych ilości matrycowego DNA jako materiału wyjściowego w PGR, w celu uzyskania względnie dużych ilości specyficznego fragmentu DNA, różniącego się od sekwencji matrycy jedynie w pozycjach, w których startery różnią się od matrycy, stosuje się startery o jedynie nieznacznie zmienionej s ekwencji, w stosunku do odpowiadającego im regionu na matrycy DNA.
Innym sposobem otrzymywania wariantów jest mutageneza kasetowa, oparta na technice opisanej przez Wells i wsp., Gene 34: 315-323 (1985). Wyjściowy materiał jest plazmidem (lub innym wektorem) zawierającym poddawany mutagenezie wyjściowy polipeptyd DNA. W poddawanym mutagenezie wyjściowym DNA identyfikowany jest kodon lub kodony. Po obu stronach wskazanego miejsca lub miejsc mutacji powinno znajdować się unikalne miejsce dla endonukleazy restrykcyjnej. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, można je utworzyć za pomocą opisanych powyżej metod mutagenezy zależnej od oligonukleotydu, pozwalających na wprowadzenie takich miejsc w odpowiednim położeniu w wyjściowym polipeptydzie DNA. Następnie, w celu linearyzacji, plazmidowy DNA jest w tych miejscach poddawany trawieniu. Dwuniciowy oligonukleotyd kodujący sekwencję DNA znajdującą się pomiędzy miejscami restrykcyjnymi, lecz również zawierający pożądaną mutację lub mutacje syntetyzowany jest za pomocą standardowych procedur, w których dwie nici oligonukleotydu syntetyzowane są oddzielnie, a następnie poddawane wzajemnej hybrydyzacji za pomocą standardowych technik. Dwuniciowy oligonukleotyd określany jest jako kaseta. Kaseta ta zaprojektowana jest w taki sposób, żeby zawierała końce 5' i 3' kompatybilne z końcami zlinearyzowanego plazmidu, co pozwala na bezpośrednie włączenie jej do plazmidu. W rezultacie plazmid zawiera zmutowaną sekwencję DNA.
Alternatywnie, lub dodatkowo, możliwe jest określenie pożądanej sekwencji aminokwasowej, kodującej wariant polipeptydu i otrzymanie na drodze syntezy sekwencji kwasu nukleinowego kodującej wariant takiej sekwencji aminokwasowej.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc lub aktywności in vitro i/lub in vivo i/lub zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) in vitro i/lub in vivo, sekwencję aminokwasową macierzystego polipeptydu poddaje się modyfikacji.
Ogólnie, modyfikacja obejmuje jedną lub więcej substytucji aminokwasowych. W jednym z ro związań zastąpiona reszta nie odpowiada żadnej reszcie w tej samej pozycji w jakimkolwiek z regionów Fc o natywnej sekwencji przedstawionych na Figurze 22A. Na przykład, zgodnie z tym rozwiązaniem, Pro331 z regionu ludzkiej IgG3 lub IgG1, zastąpiona jest inną niż seryna resztą (odpowiadająca jej przyrównana reszta w natywnej sekwencji ludzkiej IgG4). W jednym z rozwiązań reszta z polipeptydu macierzystego, która zastąpiona jest inną resztą jest inna niż alanina i/lub nie jest resztą Ala339 z regionu Fc. W przypadku substytucji aminokwasowej zalecane jest by reszta macierzystego polipeptydu zastąpiona była resztą alaniny. Jednakże, zgodnie z niniejszym wynalazkiem brana jest pod uwagę substytucja reszty macierzystego polipeptydu jakąkolwiek inną resztą aminokwasową. Substytucja może, na przykład, mieć charakter „substytucji konserwatywnej”. Takie konserwatywne substytucje
PL 220 113 B1 zaprezentowano w Tabeli 1, pod nagłówkiem „zalecane substytucje”. Bardziej istotne zmiany mogą być uzyskane w wyniku jednego lub więcej „przykładowych substytucji”, które nie należą do zalecanych podstawień zawartych w Tabeli 1.
T a b e l a 1
Pierwotna reszta Przykładowe substytucje Zalecane substytucje
Ala (A) val; leu; ile val
Arg (R) lys; gln; asn lys
Asn(N) gln; his;lys;arg gln
Asp(D) glu glu
Cys (C) ser ser
Gln (Q) asn asn
Glu (E) asp asp
Gly (G) pro; ala ala
His (H) asn; gln; lys; arg arg
Ile (I) leu, val, met; ala; phe; norleucyna leu
Leu (L) norleucyna; ile; val; met, ala, phe ile
Lys (K) arg; gln; asn arg
Met (M) leu; phe; ile leu
Phe (F) leu; val; ile, ala; tyr leu
Pro (P) ala ala
Ser (S) thr thr
Thr (T) ser ser
Trp (W) tyr; phe tyr
Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucyna leu
Istotne modyfikacje właściwości biologicznych regionu Fc można uzyskać w wyniku selekcji substytucji wywołujących silnie zróżnicowany efekt na utrzymanie (a) struktury szkieletu polipeptydu w obszarze substytucji, na przykład, konformacji harmonijki lub struktury helisy, (b) ładunku lub hydrofobowości cząsteczki w miejscu docelowym, lub (c) objętości łańcuchów bocznych. Naturalnie występujące reszty aminokwasowe podzielono na grupy w oparciu o wspólne właściwości łańcucha bocznego.
(1) hydrofobowe: norleucyna, met, ala, val, leu, ile;
(2) obojętne hydrofilowe: cys, ser, thr;
(3) kwaśne: asp, glu;
(4) zasadowe: asn, gln, his, lys, arg;
(5) reszty wpływające na ułożenie łańcucha: gly, pro, i (6) aromatyczne: trp, tyr, phe.
Substytucje o charakterze niekonserwatywnym dotyczą wymiany reszty należącej do jednej z tych klas na resztę należącą do innej klasy. Przykłady konserwatywnych i niekonserwatywnych substytucji aminokwasowych przedstawiono poniżej w Tabeli 8.
Jak pokazano w Przykładzie 4, możliwe jest utworzenie wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania jednego lub więcej FcR. Jak zademonstrowano w tym Przykładzie, możliwe j est uzyskanie różnych klas wariantów regionu Fc, np. przedstawionych w poniższej tabeli. W przypadku
PL 220 113 B1 gdy wariant regionu Fc posiada więcej niż jedną substytucję aminokwasową, ogólnie, lecz niekoniecznie, łączy się substytucje aminokwasowe w tych samych klasach w celu uzyskania pożądanego efektu.
Ta b ela 2
Klasy wariantów regionu Fc
Klasa Właściwości wiązania FcR Pozycja substytucji w regionie Fc
1A zredukowane wiązanie wszystkich FcyR 238, 265, 269, 270, 297*, 327, 329
1B zredukowane wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 239, 294, 295, 303, 338, 373, 376, 416, 435
2 wzmocnione wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 256, 290, 312, 326, 330, 339#, 378, 430
3 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz brak efektu na wiązanie FcyRIII 255, 258, 267,276, 280, 283, 285, 286, 305, 307, 309, 315, 320, 331, 337, 398
4 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie dla FcyRIII 268, 272, 301, 322, 340
5 zredukowane wiązanie FcyRII ora brak efektu na wiązanie FcyRIII 292, 324, 335, 414, 419
6 zredukowane wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 298, 333
7 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie FcyRIII 248, 249, 252, 254, 278, 289, 293, 296, 338, 382, 388, 389, 434, 437
8 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 334, 360
* Wersja deglikozylowa #
Zalecane połączenie z inną lub innymi modyfikacjami regionu Fc (np. ujawnionymi w niniejszym opisie)
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem oprócz substancji aminokwasowych opisano inne modyfik acje sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc, które służą do otrzymania wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej.
W celu zredukowania wiązania z FcR możliwe jest, na przykład, usunięcie jednej lub więcej reszt aminokwasowych regionu Fc. Ogólnie, w celu stworzenia wariantu regionu Fc możliwe jest wycięcie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako reszty wpływające na wiązanie FcR (patrz poniżej. Przykład 4). Ogólnie, w takim wykonaniu można wyciąć nie więcej niż jedną do dziesięciu reszt regionu Fc. Opisywany tu region Fc, z delecją jednej lub więcej reszt aminokwas owych, zachowuje dogodnie przynajmniej 80%, i w szczególności przynajmniej 90%, a zwłaszcza prz ynajmniej 95% sekwencji macierzystego regionu Fc lub natywnej sekwencji ludzkiego regionu Fc.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej poprzez insercje aminokwasowe. Na przykład, możliwe jest wprowadzenie przynajmniej jednej reszty aminokwasowej (np. jednej do dwóch reszt aminokwasowych, ogólnie nie więcej niż dziesięciu reszt), w sąsiedztwie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako wpływające na wiązanie FcR. Terminem „w sąsiedztwie” określa się położenie w odległości jednej do dwóch reszt aminokwasowych od zidentyfikowanych tu reszt regionu Fc. Takie warianty regionu Fc mogą wykazywać wzmocnione lub osłabione wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC. W celu otrzymania takich wariantów insercyjnych i racjonalnego zaprojektowania wariantu regionu Fc, np. o wzm ocnionym wiązaniu FcR, można dokonać oceny struktury krystalicznej polipeptydu zawierającego region wiążący FcR (np. zewnątrzkomórkowej domeny FcR) będącego przedmiotem zainteresowań i regionu Fc, do którego ma być wstawiona reszta lub reszty aminokwasowe (patrz, na przykład, Deisenhofer, Biochemistry 20(9): 2361-2370 (1981) oraz Burmeister i wsp., Nature 342: 379-383, (1994)). Taką insercję lub insercje, ogólnie, wprowadza się w obszarze pętli regionu Fc, a nie w obrębie struktur drugorzędowych (tj. w strukturze nici β) regionu Fc.
W wyniku wprowadzenia odpowiednich modyfikacji sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc, który (a) skuteczniej uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych
PL 220 113 B1 i/lub (b) wiąże receptor gamma Fc (FcγR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty regionu Fc, ogólnie, zawierają przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regi onie Fc. Uważa się, że szczególnie zalecane jest połączenie modyfikacji aminokwasowych. Na przykład, wariant regionu Fc może obejmować dwie, trzy, cztery, pięć, itd. substytucji, np. w specyficznych, zidentyfikowanych tu pozycjach regionu Fc.
Zalecany region Fc macierzystego polipeptydu jest ludzkim regionem Fc, np. natywną sekwencją ludzkiego regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypy A i nie-A), regionu Fc IgG2, IgG3 lub IgG4. Sekwencje te przedstawiono na Figurze 23.
W celu uzyskania regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, polipeptyd macierzysty powinien, dogodnie, wykazywać już wcześniej aktywność ADCC, np. posiadać region Fc ludzkiej IgG1 lub ludzkiej IgG3. W jednym rozwiązaniu wariant o wzmocnionej ADCC uczestniczy w ADCC istotnie sk uteczniej niż przeciwciało o natywnej sekwencji regionu Fc IG1 lub IgG3 i regionu wiążącego antygen wariantu. Dogodnie, wariant zawiera substytucje dwóch lub trzech reszt w pozycjach 298, 333 i 334 regionu Fc, dogodniej mogą to być jedyne substytucje. Dogodnie substytucji poddaje się reszty w pozycjach 298, 333 i 334 (np. resztami alaniny). Ponadto, w celu otrzymania wariantu regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, możliwe jest ogólnie, otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII, który uważany jest za istotny FcR w procesie ADCC. Na przykład, w celu otrzymania takiego wariantu, możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej (np. substytucji) w obrębie macierzystego regionu Fc w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycjach aminokwasowych 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430. Wariant o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII może ponadto wykazywać zredukowane powinowactwo wiązania FcγRII, w szczególności zredukowane powinowactwo dla hamującego receptora FcγRIIB.
Modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe dogodnie wprowadza się w domenie CH2 regionu Fc, ponieważ ujawnione tu doświadczenia wskazują, że domena CH2 jest istotna dla aktywności wiązania FcR. Ponadto, odmiennie niż w cytowanej powyżej literaturze, w niniejszym zgłoszeniu ro zważane jest wprowadzanie modyfikacji w części regionu Fc innej niż niższy region zawiasowy.
Użyteczne do modyfikacji celem otrzymania wariantu regionu Fc IgG o zmienionym powinowa ctwie wiązania receptora gamma (FcγR) lub aktywności pozycje aminokwasowe obejmują jedną lub więcej spośród następujących pozycji aminokwasowych: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258,
265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298,
301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338,
340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc. W celu otrzymania takich wariantów, stosowany jako matryca region macierzysty Fc dogodnie zawiera region Fc ludzkiej IgG. W przypadku substytucji reszty 331, region macierzysty Fc, dogodnie, nie jest natywną sekwencją ludzkiej IgG3, lub gdy wariant regionu Fc zawiera substytucję w pozycji 331, dogodnie wykazuje on wzrost wiązania FcR, np. FcγRII.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zredukowanym wiązaniu FcγR możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji aminokwasowej spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Warianty cechujące się zredukowanym wiązaniem FcγRI, obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 327 lub 329.
Warianty wykazujące zredukowane wiązanie FcγRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439.
Warianty regionu Fc wykazujące zredukowane wiązanie FcγRIII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301,303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów o wzmocnionym wiązaniu jednego lub więcej Fc γΚ. Takie warianty regionu Fc mogą zawierać, modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290,
PL 220 113 B1
298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc.
Na przykład, wariant o wzmocnionej aktywności wiązania Fc-,'R może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRIII i, ewentualnie, może również cechować się zredukowanym wiązaniem z FcyRII; np. wariant może zawierać modyfikację aminokwasową w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc.
Warianty wykazujące wzmocnione wiązanie FcyRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc. Takie warianty mogą również cechować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII. Na przykład, mogą one zawierać modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 268, 272, 298, 301,322 lub 340.
Chociaż zmiana wiązania FcyR jest zalecana, to rozważa się tu również warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora (FcRn). Uważa się, że warianty regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcRn posiadają dłuższy okres półtrwania w surowicy i takie cząsteczki są użyteczne w sposobach leczenia ssaków, gdzie pożądany jest długi okres półtrwania podawanego polipeptydu, np. w leczeniu przewlekłych chorób lub zaburzeń. Przeciwnie, oczekuje się, że warianty regionów Fc o zredukowanym powinowactwie wiązania FcRn posiadają krótszy okres półtrwania, i tego typu cząsteczki mogą, na przykład, być podawane ssakom w sytuacjach gdy zalecany jest skrócony okres półtrwania w krążeniu, np. w celu obrazowania diagnostyc znego in vivo lub w przypadku polipeptydów wywołujących toksyczne skutki uboczne podczas krążenia przez dłuższy czas w krwioobiegu, itp. W wypadku wariantów regionu Fc o obniżonym powinowactwie wiązania FcRn jest mniej prawdopodobne, że przekroczą one łożysko i mogą być zatem użyteczne w leczeniu chorób i zaburzeń u kobiet w ciąży.
Warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania FcRn obejmują te warianty, które posiadają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447. Te, które wykazują zredukowane wiązanie FcRn obejmują ogólnie modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447, natomiast te, które cechują się wzmocnionym wiązaniem FcRn obejmują zazwyczaj modyfikacją aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 282, 413, 424 lub 434.
Wariant lub warianty polipeptydu otrzymane zgodnie z powyższym opisem mogą być poddane dalszym modyfikacjom, często zależnym od przewidywanego zastosowania polipeptydu. Modyfikacje te mogą obejmować dalsze zmiany sekwencji aminokwasowej (substytucję, insercję i/lub delecję reszt aminokwasowych), fuzję z heterologicznym polipeptydem lub polipeptydami heterologicznymi i/lub modyfikacje kowalencyjne. Takie „dalsze modyfikacje” mogą być wprowadzane wcześniej, równolegle lub po opisanej powyżej modyfikacji lub modyfikacjach aminokwasowych, w których efekcie następuje zmiana wiązania receptora Fc i/lub aktywności ADCC. W jednym rozwiązaniu możliwe jest połączenie opisywanej tu modyfikacji regionu Fc z substytucjami w regionie Fc, ujawnionymi w cytowanych publikacjach w opisie stanu techniki niniejszego zgłoszenia.
Alternatywnie, lub dodatkowo, użyteczne może być połączenie powyższych modyfikacji aminokwasowych z jedną lub więcej dalszych modyfikacji aminokwasowych, zmieniających wiązanie C1q i/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza regionu Fc.
Wyjściowym polipeptydem będącym tu przedmiotem zainteresowania jest zazwyczaj polipeptyd, który wiąże się z C1q i wykazuje cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC). Dalsze, ujawnione powyżej, substytucje aminokwasowe służą ogólnie zmianie zdolności wyjściowego polipeptydu wiązania C1q i/lub modyfikacji jego funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza, np. w celu zreduk owania, a w szczególności zniesienia, tych funkcji efektorowych. Jednakże, rozważane są tu również polipeptydy zawierające substytucje w jednej lub więcej spośród opisanych pozycji i wykazujące wzmocnione wiązanie C1q l/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Na przykład, wyjściowy polipeptyd może być niezdolny do wiązania C1q i/lub uczestniczenia w CDC a w wyniku zastosowania opisywanych tu modyfikacji możliwe jest nadanie mu tych funkcji efektorowych. Ponadto, polipeptydy posiadające wcześniej aktywność wiązania C1q, i, ewentualnie, zdolność uczestniczenia
PL 220 113 B1 w CDC, mogą zostać poddane modyfikacjom, w wyniku których jedna, lub obie, z tych funkcji ulegną wzmocnieniu.
W celu otrzymania regionu Fc o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) do modyfikacji wybiera się ogólnie reszty aminokwasowe spośród pozycji łańcucha ciężkiego 270, 322, 326, 327, 329, 331,333 i 334, przy czym numeracja w łańcuchu ciężkim IgG jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). W jednym rozwiązaniu w celu otrzymania wariantu polipeptydu o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) zmianie poddawana jest jedynie jedna z ośmiu wymienionych powyżej pozycji. W tym przypadku, zmianie podlega dogodnie jedynie reszta 270, 329 lub 322. Alternatywnie, modyfikowane mogą być dwie lub więcej spośród wymienionych reszt. W przypadku gdy substytucje mają być połączone, ogólnie łączy się substytucje zwiększające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 326, 327, 333 i 334) lub osłabiające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 270, 322, 329 i 331). W kolejnym rozwiązaniu możliwa jest substytucja wszystkich czt erech pozycji (tj. 270, 322, 329 i 331). W celu otrzymania polipeptydu o zwiększonej zdolności wiązania ludzkiego C1q, a zwłaszcza wyższej aktywności CDC in vitro lub in vivo, dogodnie łączy się dalsze substytucje w dwóch, trzech lub wszystkich pozycji spośród 326, 327, 333 lub 334, ewentualnie z innymi substytucjami w regionie Fc.
Prolina w pozycji 329 jest konserwowana w ludzkich IgG. Reszta ta jest dogodnie zastępowana alaniną, jednakże brana jest również pod uwagę substytucja jakimkolwiek innym aminokwasem, np. seryną, treoniną, asparaginą, glicyną lub waliną.
Prolina w pozycji 331 jest konserwowana w ludzkiej IgG1, IgG2 i IgG3, lecz nie w IgG4 (w której w pozycji 331 występuje seryna). Reszta 331 jest dogodnie zastępowana alaniną lub innym aminokwasem, np. seryną (dla regionów IgG innych niż IgG4), glicyną lub waliną.
Lizyna 322 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta jest dogodnie zastępowana resztą alaniny, brana jest również pod uwagę substytucja jakąkolwiek inną resztą aminokwasową, np. seryną, treoniną, glicyną lub waliną.
D270 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta może być zastąpiona inną resztą aminokwasową, np. alaniną, seryną, treoniną, glicyną, waliną lub lizyną.
K326 jest również resztą konserwowaną w ludzkich IgG. Reszta ta może być podstawiona przez inną resztę, w tym, lecz bez ograniczenia, walinę, kwas glutaminowy, alaninę, glicynę, kwas asparaginowy, metioninę lub tryptofan, przy czym zalecany jest tryptofan.
Podobnie, E333 jest również konserwowana w ludzkich IgG. E333 jest dogodnie zastępowana resztą aminokwasową o mniejszym łańcuchu bocznym, taką jak walina, glicyna, alanina lub seryna, przy czym zalecana jest seryna.
K334 jest resztą konserwowaną w ludzkich IgG, i która może być podstawiona inną resztą, taką jak alanina lub inną resztą.
W ludzkich IgG1 i IgG3 resztą 327 jest alanina. W celu otrzymania wariantu o zwiększonym wiązaniu C1q ta reszta alaniny może być podstawiona inną resztą, taką jak glicyna. W IgG2 i IgG4 resztą 327 jest glicyna, która, w celu osłabienia wiązania C1q, może być zastąpiona alaniną (lub inną resztą).
Jak ujawniono powyżej, możliwe jest zaprojektowanie regionu Fc o zmienionej funkcji efektor owej, np. poprzez modyfikację wiązania C1q i/lub wiązania FcR, a przez to zmianę aktywności CDC i/lub aktywności ADCC. Na przykład, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym wiązaniu C1q i wzmocnionym wiązaniu FcyRIII; np. wykazującego zarówno podwyższoną aktywność ADCC, jak i podwyższoną aktywność CDC. Alternatywnie, w celu zredukowania lub zniesienia funkcji efektorowych, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o zredukowanej aktywności CDC i/lub zredukowanej aktywności ADCC. W innych rozwiązaniach, możliwe jest nasilenie jedynie jednej z tych aktywności i, ewentualnie, również obniżenie innej aktywności, np. w celu otrzymania wariantu regionu Fc o podwyższonej aktywności ADCC, lecz obniżonej aktywności CDC, i odwrotnie.
W odniesieniu do dalszych zmian sekwencji aminokwasowej, możliwe jest podstawienie jakiejkolwiek reszty cysteiny, która nie jest zaangażowana w utrzymanie odpowiedniej konformacji polipeptydu, ogólnie seryną, w celu zwiększenia stabilności wobec utleniania cząsteczki i zapobiegnięcia powstawania nieprawidłowego sieciowania.
Inny typ substytucji aminokwasowej służy do zmiany wzorca glikozylacji polipeptydu. Można ją uzyskać poprzez delecję jednej lub więcej jednostek węglowodanowych polipeptydu i/lub dodania
PL 220 113 B1 jednego lub więcej miejsc glikozylacji, nieobecnych uprzednio w polipeptydzie. Glikozylacja polipept ydów związana jest zazwyczaj z powstaniem wiązań poprzez atom N lub atom O. Wiązanie poprzez atom N dotyczy przyłączenia jednostki węglowodanowej do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Sekwencje trójpeptydowe, obejmujące reszty takie jak asparagina-X-seryna oraz asparagina-X-treonina, gdzie X jest jakimkolwiek aminokwasem za wyjątkiem proliny, są sekwencjami rozpoznawanymi do enzymatycznego przyłączenia jednostki węgłowodanowej do łańcucha bocznego asparaginy. Zatem, obecność dowolnej z tych sekwencji trójpeptydowych w polipeptydzie stwarza potencjalne miejsce glikozylacji. Glikozylacja poprzez wiązanie przez atom O odnosi się do przyłączenia jednego z cukrów N-acetylogalaktozoaminy, galaktozy lub ksylozy do hydroksyaminokwasu, najczęściej seryny lub treoniny, jednakże do tego celu mogą być także wykorzystane 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna. Wprowadzenie miejsc glikozylacji do polipeptydu przeprowadza się dogodnie poprzez zmianę sekwencji aminokwasowej, w wyniku której zawiera ona jedną lub więcej powyżej w ymienionych sekwencji trójpeptydowych (dla miejsc N-glikozylacji). Zmiana ta może być dokonana również poprzez dodanie lub substytucję, jednej lub więcej reszt seryny lub treoniny, w pierwotnej s ekwencji polipeptydu (dla miejsc O-glikozylacji). Przykładowy wariant glikozylacji posiada substytucję aminokwasową reszty Asn297 łańcucha ciężkiego.
Ponadto, w wyniku jednej lub więcej dalszych substytucji aminokwasowych możliwa jest zmiana klasy, podklasy lub allotypu regionu Fc, co prowadzi, w razie potrzeby, do otrzymania regionu Fc o sekwencji aminokwasowej o wyższej homologii względem innej klasy, podklasy lub allotypu. Na przykład, możliwa jest zmiana mysiego regionu Fc, dająca w rezultacie sekwencję aminokwasową bardziej homologiczną względem ludzkiego regionu Fc; możliwe jest zmodyfikowanie ludzkiego regionu Fc, allotypu nie-A, prowadzące do otrzymania ludzkiego regionu Fc IgG1 allotypu A, itp. W jednym rozwiązaniu w regionie Fc przeprowadza się modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe w domenie CH2, które zmieniają wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC oraz poddaje się delecji domenę CH3, lub zastępuje się ją inną domeną dimeryzacji. Dogodnie jednak domena CH3 pozostaje (oprócz ujawnionych tu modyfikacji aminokwasowych, wywołujących zmianę funkcji efektorowej).
Wariant polipeptydu może być poddany jednej lub więcej analizom pozwalającym na oszacowanie jakiejkolwiek zmiany aktywności biologicznej w porównaniu do aktywności wyjściowego polipeptydu.
Wariant polipeptydu dogodnie zachowuje zasadniczo zdolność wiązania antygenu w porówn aniu do polipeptydu niezmienionego, tj. zdolność wiązania nie ulega więcej niż 20-krotnemu obniżeniu, np. nie ulega obniżeniu większemu niż około 5-krotnemu w porównaniu do polipeptydu niezmienionego. Zdolność wiązania wariantu polipeptydu może być określona za pomocą takich technik jak np. sortowanie fluorescencyjnie aktywowanych komórek (FACS) lub radioimmunoprecypitacja (RIA).
Możliwe jest określenie zdolności wariantu polipeptydu do wiązania FcR. W przypadku gdy receptor FcR jest receptorem Fc o wysokim powinowactwie FR, takim jak FcyRI, FcRn lub FcyRIIIA-V158, wiązanie to może być mierzone poprzez miareczkowanie monomeru wariantu polipeptydu i pomiar związanego wariantu polipeptydu za pomocą specyficznie łączącego się z wariantem polipeptydu w standardowym teście ELISA przeciwciała (patrz, poniżej. Przykład 2). Inną analizę wiązania FcR w przypadku FcR o niskim powinowactwie opisano w Przykładach 1 i 4.
W celu określenia aktywności ADCC wariantu polipeptydu analizę ADCC in vitro, taką jak w Przykładzie 4, można przeprowadzić z użyciem różnych stosunków komórka efektorowa: komórka docelowa. Użytecznymi do takich analiz komórkami efektorowymi: komórkami docelowymi są jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) oraz komórki NK. Alternatywnie, lub dodatkowo, aktywność ADCC wariantu polipeptydu można oceniać in vivo, np. w analizie modelu zwierzęcego opisanego przez Clynes i wsp., PNAS (USA) 95: 652-656 (1998).
Możliwa jest również ocena zdolności wiązania wariantu z C1q oraz jego udziału w cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC).
W celu określenia wiązania C1q możliwe jest wykonanie analizy wiązania C1q w teście ELISA. W skrócie, płytki do analizy można pokrywać wariantem polipeptydu lub wyjściowym polipeptydem (kontrola) w buforze do pokrywania w temperaturze 4°C przez noc. Następnie płytki można płukać i blokować. Po płukaniu do każdej studzienki można dodać porcję C1q i inkubować w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po kolejnym płukaniu do każdej studzienki można dodać 100 pl owczego przeciwciała skoniugowanego z peroksydazą, skierowanego przeciwko dopełniaczowi C1q, a następnie płytki można inkubować w temperaturze pokojowej przez godzinę. Płytki można pono wnie płukać buforem do płukania i do każdej studzienki można dodawać 100 pl buforu substratowego,
PL 220 113 B1 zawierającego OPD (dichlorowodorek O-fenylenodiaminy (Sigma)). Reakcja utleniania, obserwowana na podstawie pojawienia się żółtego koloru, może być prowadzona przez 30 minut, a następnie zatrzymana przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Absorbancję można następnie odczytywać przy długości fali (492-405) nm.
Przykładowy wariant polipeptydu w takiej analizie cechuje się „znaczną redukcję wiązania C1q”. Oznacza to, że około 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 50-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do kontrolnego przeciwciała posiadającego niezmutowany region Fc IgG1. W najbardziej zalecanym rozwiązaniu wariant polipeptydu „nie wiąże C1q”, tj. 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 100-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do 100 nl/ml kontrolnego przeciwciała.
Innym przykładem wariantu jest wariant „posiadający wyższe powinowactwo wiązania ludzkiego C1q niż macierzysty polipeptyd”. Cząsteczka taka może cechować się, na przykład, około dwukrotnym lub wyższym, a zwłaszcza około pięciokrotnym, lub wyższym, wiązaniem ludzkiego C1q, w porównaniu do macierzystego polipeptydu (np. określonym dla IC50 tych cząsteczek). Na przykład, wiązanie ludzkiego C1q może być około dwukrotnie do około 500-krotnie, a zwłaszcza od około dwukrotnie lub od około pięciokrotnie do około 1000-krotnie wyższe w porównaniu do macierzystego polipeptydu.
W celu określenia aktywacji dopełniacza można zmierzyć cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC), np. zgodnie z Gazzano-Santoro i wsp., J.Immunol.Methods 202: 1633 (1996). W skrócie, poprzez wykonanie odpowiednich rozcieńczeń w buforze otrzymać można różne stężenia wariantu polipeptydu i ludzkiego dopełniacza. Komórki ekspresjonujące antygen, z którym wiąże się wariant polipeptydu, można rozcieńczyć do gęstości ~1x106 kom./ml. Mieszaninę wariantu polipeptydu, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza i komórek ekspresjonujących antygen można przenosić do płaskodennej, 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubować przez 2 godziny w 37°C i w atmosferze 5% CO2, celem ułatwienia zależnej od dopełniacza lizy komórek. Następnie, do każdej studzienki można dodać 50 μl alamar blue (Accumed International) i inkubować przez noc w temperaturze 37°C. Absorbancję mierzy się za pomocą 96-studzienkowego fluoromertru ze wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Wyniki można wyrazić we względnych jednostkach fluorescencji (RFU). Stężenia próbek można obliczyć na podstawie krzywej standardowej, a następnie dla wariantu pol ipeptydu podaje się procent aktywności w porównaniu do polipeptydu niezmienionego.
Jeszcze innym przykładem jest wariant „nieaktywujący dopełniacza”. Na przykład, w analizie tej 0,6 μg/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 0-10% aktywności CDC w porównaniu do aktywności 0,6 μg/ml przeciwciała kontrolnego z niezmutowanym regionionem Fc IgG1. W powyższej analizie CDC wariant nie przejawia żadnej aktywności CDC.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również wariant polipeptydu o podwyższonej CDC w porównaniu do polipeptydu macierzystego, np. wykazującego, in vitro lub in vivo, około dwukrotnie do około 100-krotnie wyższą aktywność CDC (np. dla wartości IC50 każdej porównywanej cząsteczki).
A. Analiza wiązania receptora i kompleksu immunologicznego
Opracowana zgodnie z niniejszym wynalazkiem analiza wiązania receptora jest szczególnie użyteczna do określania wiązania badanej cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania (analitu) z receptorem w przypadku gdy powinowactwo wiązania receptora, dla badanej cząsteczki jest relatywnie słabe, np. rzędu mikromoli, jak w przypadku FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA i FcyRIIIB. W sposobie tym dochodzi do tworzenia kompleksu molekularnego o zwiększonej zachłanności wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania w porównaniu do badanej cząsteczki w postaci nieskompleksowanej. Zalecany kompleks molekularny jest kompleksem immunologicznym zawierającym: (a) polipeptyd zawierający region Fc (taki jak przeciwciało lub immunoadhezyna); (b) pierwszą cząsteczkę docelową, która posiada przynajmniej dwa miejsca wiążące polipeptyd zawierający region Fc i (c) drugą cząsteczkę docelową, posiadającą przynajmniej dwa miejsca wiążące pierwszą cząsteczkę docelową.
W poniżej przedstawionym Przykładzie 1, polipeptydem zawierającym region Fc jest przeciwciało skierowane przeciwko IgE, takie jak przeciwciało E27 (Figury 4A-4B). E27, po zmieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzy stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek E27 i trzech cząsteczek IgE. W poniższym Przykładzie 1, „pierwszą cząsteczką docelową” jest chimerowa postać IgE, w której fragment Fab skierowanego przeciwko VEGF przeciwciała jest połączony z fragmentem Fc ludzkiej IgE, a „drugą cząsteczką docelową” jest antygen, z którym wiąże się Fab (tj. VEGF). Każda cząsteczka IgE wiąże dwie cząsteczki VEGF. VEGF również wiąże dwie cząsteczki IgE na cząsteczkę VEGF. Po dodaniu rekombinowanego ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do
PL 220 113 B1 heksamerów IgE:E27, heksamery ulegały połączeniu z utworzeniem postaci kompleksów o wyższej masie cząsteczkowej poprzez interakcję IgE:VEGF (Fig. 5). Region Fc przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (anty-IgE) otrzymanego w ten sposób kompleksu immunologicznego wiąże FcR z wyższą zachłannością wiązania niż zarówno nieskompleksowane anty-IgE, jak i heksamery anty-IgE:IgE.
Również inne formy kompleksów molekularnych mogą być zastosowane w analizie wiązania receptora. Przykłady, obejmujące jedynie połączenie polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka docelowa, obejmują połączenie immunoadhezyna:ligand, takie jak receptor VEGF (KDR)-immunoadhezyna:VEGF oraz pełnej długości przeciwciało bispecyficzne (bsAb): pierwsza cząsteczka docelowa. Kolejny przykład połączenia polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka doc elowa: druga cząsteczka docelowa, obejmuje połączenie przeciwciało nieblokujące:rozpuszczalny receptor:ligand, takie jak przeciwciało any-Trk:rozpuszczalny receptor Trk:neutrofina (Urfer i wsp., J.Biol.Chem. 273 (10): 5829-5840 (1998)).
Oprócz zastosowania w analizie wiązania receptora, opisane powyżej kompleksy immunologiczne posiadają inne zastosowania, włączając ocenę funkcji polipeptydu zawierającego region Fc oraz klirensu kompleksu immunologicznego in vivo. Zatem, kompleksy immunologiczne mogą być podawane ssakom (np. w przedklinicznej fazie badań na zwierzętach) i oceniane pod kątem ich okresu półtrwania, itp.
W celu określenia wiązania receptora, polipeptyd zawierający przynajmniej domenę wiążącą receptor będący przedmiotem zainteresowania (np. zewnątrzkomórkowa domena podjednostki α FcR) może być umieszczony na fazie stałej, takiej jak płytka do analizy. Sama domena wiążąca receptor, albo białko fuzyjne receptora mogą być rozmieszczane na płytce za pomocą standardowych procedur. Przykłady białek fuzyjnych receptora obejmują białko fuzyjne receptor-transferaza S glutationu (GST), białko fuzyjne receptor-domena wiążąca chitynę, białko fuzyjne receptor-znacznik heksahistydynowy, (umieszczone na płytkach pokrytych, odpowiednio, glutationem, chityną i niklem). Alternatywnie, możliwe jest pokrywanie płytek do analaizy cząsteczką wychwytującą i wiązanie białka fuzyjnego receptora poprzez fragment niereceptorowy białka fuzyjnego. Przykłady obejmują pokrycie płytki do analizy F(ab')2 anty-heksaHis, w celu wychwycenia fuzji receptora z końcem heksaHis lub pokrycie płytki do analizy przeciwciałem skierowanym przeciwko GST (anty-GST), w celu wychwycenia białka fuzyjnego receptor-GST. W innych rozwiązaniach, oceniane może być wiązanie komórek ekspresjonujących przynajmniej domenę wiążącą receptora. Komórki mogą być naturalnie występującymi komórkami hematopoetycznymi ekspresjonującymi FcR będący przedmiotem zainteresowania lub komórkami transformowanymi kwasem nukleinowym kodującym FcR lub jego domenę wiążącą, przy czym taka domena wiążąca ulega ekspresji na powierzchni komórek do analizy.
Następnie, opisany powyżej kompleks immunologiczny dodawany jest do płytek pokrytych receptorem i całość inkubowana jest przez czas wystarczający do związania receptora przez badaną cząsteczkę. Płytki można następnie płukać w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów, po czym wiązanie badanej cząsteczki można wykrywać za pomocą znanych metod. Na przykład, wiązanie można wykrywać za pomocą reagenta (np. przeciwciała lub jego fragmentu) specyficznie wiążącego się z badaną cząsteczką, i, ewentualnie, sprężonego z wykrywalnym znacznikiem (wykrywalne znac zniki i metody sprzęgania polipeptydami opisano poniżej, w rozdziale zatytułowanym „Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu”).
Dogodnie, reagenty mogą znajdować się w zestawie do analizy, tj. opakowana kombinacja reagentów do połączenia z badaną cząsteczką przy analizie zdolności badanej cząsteczki do wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania. Zestawy takie powinny zawierać składniki w określonych wcześniej stosunkach. Zestaw może zawierać pierwszą cząsteczkę docelową i/lub drugą cząsteczkę docelową, ewentualnie obie w kompleksie ze sobą. Zestaw może również zawierać płytki do analizy, pokryte receptorem lub jego domeną wiążącą (np. zewnątrzkomórkową domeną podje dnostki α FcR). Zazwyczaj, w skład zestawu wchodzą również inne reagenty, takie jak przeciwciało wiążące się swoiście z badaną cząsteczką do analizy, bezpośrednio lub pośrednio znakowane za pomocą znacznika enzymatycznego. W przypadku gdy znacznikiem wykrywalnym jest enzym, zestaw zawiera także wymagane przez enzym substraty i kofaktory (np. prekursor substratu dostarczający wykrywalny chromofor lub fluorofor). Ponadto, mogą być zawarte inne dodatki, takie jak stabilizatory, bufory (np. bufor do analizy i/lub bufor do płukania i lizaty) itp. Względne ilości różnych reagentów mogą podlegać szerokim zmianom, po to by zapewnić stężenia reagentów w roztworze, które pozwalają na zasadnicze zoptymalizowanie czułości analizy. Szczególnie, reagenty mogą być udostępniane w postaci suchych proszków, zazwyczaj liofilizowanych, zawierających zaróbki, które po rozpuszczeniu
PL 220 113 B1 zapewniają odpowiednie stężenie reagentu w roztworze. Zestaw zawiera również odpowiednie instrukcje do przeprowadzenia analizy.
B. Otrzymywanie przeciwciała
W zalecanym rozwiązaniu polipeptyd zawierający region Fc, modyfikowany zgodnie z niniejszym opisem, jest przeciwciałem. Techniki otrzymywania przeciwciał obejmują:
(i) Selekcję i otrzymywanie antygenu
W przypadku gdy polipeptyd jest przeciwciałem, skierowany jest on przeciwko antygenowi będącemu przedmiotem zainteresowania. Zalecany antygen jest polipeptydem istotnym biologicznie, a podawanie przeciwciała dotkniętym chorobą i zaburzeniem ssakom może przynieść im korzyść t erapeutyczną. Jednakże brane są również pod uwagę przeciwciała skierowane przeciwko antygenom niepolipeptydowym (takim jak antygeny glikolipidowe związane z guzem nowotworowym; patrz Patent USA nr 5, 091, 178).
W przypadku, gdy antygen jest polipeptydem może on być cząsteczką przezbłonową (np. receptorem) lub ligandem, takim jak czynnik wzrostu. Przykładowe antygeny obejmują cząsteczki, takie jak renina; hormon wzrostu, włączając ludzki hormon wzrostu i wołowy hormon wzrostu; czynnik uwalniający hormon wzrostu; hormon przytarczyczny; hormon stymulujący tarczycę; lipoproteiny; alfa-1-antytrypsynę; łańcuch A insuliny; łańcuch B insuliny; proinsulinę, hormon folikulotropowy; kalcytoninę; hormon lutenizujący; glukagon; czynniki krzepnięcia, takie jak czynnik VIIIC, czynnik IX, czynnik tkankowy (TF) oraz czynnik von Wilebrand'a; czynniki przeciwkrzepliwe, takie jak Białko C; przedsionkowy czynnik natriuretyczny; surfaktant płucny; aktywator plazminogenu, taki jak urokinaza lub ludzki aktywator plazminogenu moczu, lub też tkankowy aktywator plazminogenu (t-PA); bombezynę; trombinę; hemopoetyczny czynnik wzrostu; czynnik martwicy nowotworu alfa i beta; enkefalinazę; RANTES (czynnik regulowany przez aktywację, zazwyczaj ekspresjonowany i wydzielany przez komórki T); ludzkie makrofagowe białko zapalne (MIP-1-alfa); albuminę surowicy krwi, taką jak ludzka albumina surowicy; substancję hamującą Muellerian; łańcuch A relaksyny; łańcuch B relaksyny; prorelaksynę; mysi peptyd związany z gonadotropiną; białko drobnoustrojowe, takie jak beta-laktamaza; Dnaza; IgE; antygen związany z cytotoksycznym limfocytem T (CTLA), takie jak CTLA-4; inhibinę; aktywinę; czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF); receptory hormonów lub czynników wzrostu; białko A lub D; czynniki reumatoidalne; czynnik neurotroficzny, taki jak kościopochodny czynnik neurotroficzny (BDNF), neutrofina 3, 4, 5 lub 6 (NT-3, NT-4, NT-5 lub NT-6) ; lub czynnik wzrostu nerwów, taki jak NGF-β; płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF); czynnik wzrostu fibroblastów, taki jak aFGF i bFGF; czynnik wzrostu naskórka (EGF); transformujący czynnik wzrostu (TGF), taki jak TGF-alfa i TGF-beta, włączając TGF-β! TGF^2, TGF^3, TGF^4 lub TGF^5; insulinopodobny czynnik wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF (mózgowy IGF-1), białka wiążące insulinopodobny czynnik wzrostu; białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19 i CD20; erytropoetynę; czynniki osteoindukcyjne; immunotoksyny; białko morfogenetyczne kości (BMP); interferon, taki jak interferon alfa, beta i gamma; czynniki stymulujące powstawanie kolonii (CSF), np. M-CSF, GM-CSF i G-CSF; interleukiny (IL), np. IL-1 do IL-10; dysmutaze nadtlenkową; receptory komórek T; białka powierzchniowo-błonowe; czynnik przyspieszający rozkład, antygen wirusowy, taki jak np. fragment otoczki AIDS; białka transportowe; receptory zasiedlania; adresyny; białka regulatorowe; integryny, takie jak CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 i VCAM; antygen związany z guzem nowotworowym, taki jak receptor HER-2, HER3 lub HER4; oraz fragmenty jakiegokolwiek z wyżej wymienionych polipeptydów.
Zalecanymi cząsteczkami docelowymi dla przeciwciał tu opisanych są białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 i CD34; białka wchodzące w skład rodziny receptora ErbB, takie jak receptor EGF, receptor HER2, HER3 lub HER4; cząsteczki adhezji komórkowej, takie jak LFA-1, Mac1, p150.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, integryna α4/β7 oraz integryna αν/β3, zawierająca albo jej podjednostkę α albo β (np. przeciwciała antyCD11a, anty-CD18 lub anty-CD11b); czynniki wzrostu, takie jak VEGF); czynnik tkankowy (TF); interferon alfa (α-IFN); interleukinę, taką jak IL-8; IgE; antygeny grupowe krwi; receptor flk2/flt3; receptor otyłości OB; receptor mp1; CTLA-4; białko C, itp.
Rozpuszczalne antygeny lub ich fragmenty, ewentualnie sprężone z innymi cząsteczkami, m ogą być stosowane jako immunogeny do produkcji przeciwciał. W przypadku cząsteczek przezbłonowych, takich jak receptory, możliwe jest zastosowanie jako immunogenów ich fragmentów (np. zewnątrzkomórkowej domeny receptora). Alternatywnie, rolę immunogenów mogą odgrywać cząsteczki ekspresjonujące cząsteczki przezbłonowe. Komórki te mogą pochodzić z naturalnego źródła (np. linie komórek nowotworowych) lub mogą być otrzymane drogą transformacji z zastosowaniem technik
PL 220 113 B1 rekombinacji, mających na celu uzyskanie ekspresji cząsteczki przezbłonowej. Inne antygeny i ich postacie, użyteczne do otrzymywania przeciwciał są oczywiste dla specjalistów w dziedzinie.
(ii) Przeciwciała poliklonalne
Przeciwciała poliklonalne są wzbudzane dogodnie w organizmach zwierzęcych poprzez podskórne (sc) lub wewnątrzotrzewne (ip) wstrzyknięcia odpowiedniego antygenu i adiuwantu. Użyteczne może być sprzęganie odpowiednio wybranego antygenu z białkiem o właściwościach immunogennych w immunizowanym gatunku, np. hemocyjaniną ze skałoczepa, albuminą surowicy, tyroglobuliną wołową lub inhibitorem trypsyny z soi z użyciem czynnika dwufunkcyjnego lub derywatyzującego, na przykład, estru maleimidobenzoilowego sukcynoimidu (sprzęganie przez reszty cysteiny), N-hydroksysukcynoimidu (przez reszty lizyny), glutaraldehydu, bezwodnika bursztynowego, SOCI2 lub
R N=C=NR, gdzie R i R są różnymi grupami alkilowymi.
Zwierzęta immunizuje się przeciwko antygenowi, koniugatom immunogennym lub pochodnym poprzez łączenie, np. 100 μg lub 5 μg, białka lub koniugatu (odpowiednio dla królików lub myszy) z trzema objętościami kompletnego adiuwanta Freunda i wstrzykuje się śródskórnie w wielu miejscach. Miesiąc później zwierzęta szczepione są dawką przypominającą, poprzez podskórne wstrzyknięcie w wielu miejscach 1/5 do 1/10 pierwotnej ilości peptydu lub koniugatu w kompletnym adiuwancie Freunda. 7 do 14 dni później, zwierzęta skrwawia się i oznacza się miano przeciwciała w surowicy. Zwierzętom podaje się dawki przypominające aż do uzyskania maksymalnego miana. Dogodne dawki przypominające zawierają koniugat tego samego antygenu, lecz połączony z innym białkiem i/lub za pomocą innego reagenta sieciującego. Koniugaty można także otrzymać w hodowli komórek rekombinowanych jako białka fuzyjne. Również czynniki agregujące, takie jak ałun, mogą być odpowiednie do zastosowannia w celu wzmacniania odpowiedzi immunologicznej.
(iii) Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane przy użyciu metody z zastosowaniem hybrydom, opisanej po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature, 256: 495 (1975) lub metody rekombinacji DNA (Patent U.S.A. Nr 4, 816, 567).
W metodzie z zastosowaniem hybrydom, myszy lub inne organizmy zwierzęce gospodarza, takie jak chomiki lub małpy makaki, szczepi się (jak opisano powyżej), w celu otrzymania limfocytów produkujących lub zdolnych do produkcji przeciwciał swoiście wiążących białko zastosowane do i mmunizacji. Alternatywnie, możliwa jest immunizacja in vitro limfocytów. Następnie limfocyty poddaje się fuzji z komórkami szpiczaka, za pomocą odpowiedniego czynnika fuzyjnego, takiego jak glikol poliet ylenowy, co pozwala na uzyskanie komórek hybrydoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Tak otrzymane komórki hybrydoma wysiewa się i hoduje w odpowiedniej pożywce hodowlanej, zawierającej dogodnie jedną lub więcej substancji hamujących wzrost lub przeżycie macierzystych komórek szpiczaka, jakie nie uległy fuzji. Na przykład, jeżeli macierzyste komórki szpiczaka nie posi adają enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantyno-guaninowej (HGPRT lub HPRT), pożywka hodowlana dla hybrydom zazwyczaj będzie zawierała hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek nieposiadających HGPRT.
Zalecanymi komórkami szpiczaka są komórki wydajnie ulegające fuzji, wspomagające stabilną produkcję na wysokim poziomie przeciwciała przez wyselekcjonowane komórki produkujące przeciwciało oraz wrażliwe na pożywkę typu HAT. Wśród tych komórek, zalecanymi liniami komórkowymi szpiczaka są linie komórkowe pochodzące z mysich guzów MOPC-21 i MPC-11, dostępne w Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA oraz komórki SP-2 lub X63-Ag8-653, dostępne w American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Ludzkie linie komórkowe szpiczaka i mysio-ludzkie linie komórkowe hetero-szpiczkowe zostały również opisane jako odpowiednie do produkcji ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J.Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur i wsp., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywkę hodowlaną, w której rosną komórki hybrydoma analizuje się pod kątem produkcji przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko antygenowi. Dogodnie, określa się swoistość wiązania wyprodukowanego przez komórki hybrydoma przeciwciała monoklonalnego, na drodze immunoprecypitacji lub analizy wiązania in vitro, takiej jak test radioimmunologiczny (RIA) lub test immunoenzymatyczny (ELISA).
Po dokonaniu identyfikacji komórek hybrydoma produkujących przeciwciało o pożądanej swoistości, powinowactwie i/lub aktywności klony te można subklonować metodą ograniczających
PL 220 113 B1 rozcieńczeń i hodować według standardowych metod (Coding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practoce, str. 59-103 (Academic Press, 1986)). Odpowiednie do tego celu pożywki hodowlane obejmują, na przykład, D-MEM lub RPMI-1640. Ponadto, komórki hybrydoma można hodować in vivo w postaci wysięku nowotworowego u zwierząt.
Wydzielane przez subklony przeciwciała monoklonalne odpowiednio oddziela się od pożywki hodowlanej, płynu wysiękowego lub surowicy konwencjonalnymi metodami oczyszczania immunoglobulin, takimi jak chromatografia na sefarozie z białkiem A, chromatografia na hydroksylacie, elektroforeza żelowa, dializa lub chromatografia powinowactwa.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np.poprzez zastosowanie sond oligonukleotydowych, zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciał monoklonalnych). Komórki hybryd oma stanowią zalecane źródło takiego DNA. W celu uzyskania syntezy przeciwciał monoklonalnych w rekombinowanych komórkach gospodarza wyizolowany DNA można umieszczać w wektorach ek spresyjnych, którymi transfekuje się następnie komórki gospodarza, takie jak komórki E.coli, małpie komórki COS, komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) lub komórki szpiczaka, które w inny sposób nie produkują białka immunoglobuliny. Rekombinowaną produkcję przeciwciał opisano bardziej szczegółowo poniżej.
W kolejnym rozwiązaniu, przeciwciała lub ich fragmenty, mogą zostać wyi zolowane z biblioteki fagowej przeciwciał, utworzonej za pomocą technik opisanych w McCafferty i wsp., Nature, 348: 552 -554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581 -597 (1991) opisali izolację, odpowiednio, mysich i ludzkich przeciwciał przy użyciu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują produkcję ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (rzędu nM) za pomocą tasowania łańcuchów (Marks i wsp., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)) oraz kombinatorycznego zakażenia, jak również rekombinacji in vivo, jako strategii pozwalającej na otrzymanie bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc.Acids.Res., 21: 2265-2266 (1993)). Techniki te są zatem alternatywnymi, względem tradycyjnej metody z zastosowaniem hybrydom, sposobami izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA może również podlegać modyfikacjom, na przykład przez substytucję sekwencji kodującej ludzkie domeny stałe łańcucha ciężkiego i lekkiego w miejscu homologicznych mysich sekwencji (Patent USA nr 4, 816, 567; Morrison i wsp., Proc.Natl. Acad.Sci. USA, 81: 6851 (1984)) lub przez kowalencyjne łączenie sekwencji kodującej immunoglobulinę z całą lub częścią sekwencji kodującej polipeptyd nie-immunoglobulinowy.
Zazwyczaj, takie polipeptydy nie-immunoglobulinowe podstawiane są za domeny stałe przeciwciała lub za domeny zmienne jednego miejsca przyłączającego antygen przeciwciała, w celu otr zymania chimerowych, biwalentnych przeciwciał, zawierających jedno miejsce przełączania antygenu o swoistości wobec jednego antygenu i drugie miejsce przyłączania antygenu, wykazujące swoistość dla innego antygenu.
(iv) Przeciwciała humanizowane i ludzkie
Humanizowane przeciwciało posiada jedną lub więcej reszt aminokwasowych wprowadzonych z organizmu innego niż ludzki. Takie niepochodzące z organizmu człowieka reszty aminokwasowe określane są często jako reszty „importowane”, zazwyczaj pobierane z „importowanej” domeny zmiennej. Humanizacja może być przeprowadzona zasadniczo zgodnie z metodą Winter i wsp., (J ones i wsp., Nature, 321: 522-525 (1986), Riechmann i wsp., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen i wsp., Sciene, 239: 1534-1536 (1988)), przez substytucję sekwencji CDR gryzoni lub sekwencji CDR dla odpowiednich sekwencji ludzkiego przeciwciała. Zatem, takie „humanizowane” przeciwciała są przeciwciałami chimerowymi (Patent USA nr 4, 816, 567), w których zasadniczo mniej niż całość ludzkiej domeny zmiennej została podstawiona odpowiadającą temu obszarowi sekwencją pochodzącą z innego niż człowiek gatunku. W praktyce, przeciwciała humanizowane są zazwyczaj ludzkimi przeciwciałami, w obrębie których pewne reszty CDR i, ewentualnie, pewne reszty FR, podstawiono resztami pochodzącymi z analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno łańcucha lekkiego, jak i ciężkiego, do zastosowania w metodzie otrzymywania przeciwciał humanizowanych jest bardzo istotny ze względu na obniżenie ich antygenności. Zgodnie z tzw. metodą „best-fit”, sekwencja domeny zmiennej przeciwciała gryzonia podlega przeszukiwaniu wobec całej biblioteki znanych ludzkich sekwencji domeny zmiennej. Ludzka sekwencja, najbliższa sekwencji gryzonia, przyjmowana jest jako ludzki region zrębowy przeciwciała humanizowanego (Sims i wsp., J.Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia i wsp., J.Mol.Biol.,
PL 220 113 B1
196: 901 (1987)). W innej metodzie wykorzystywany jest szczególny region zrębowy, pochodzący z sekwencji najwyższej zgodności wszystkich ludzkich przeciwciał należących do danej podgrupy łańcuchów lekkich lub ciężkich. Ten sam region zrębowy może być zastosowany do otrzymania kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 89: 4285 (1992); Presta i wsp., J.Immunol., 151: 2623 (1993)).
Istotne jest również, żeby przeciwciała były humanizowane z zachowaniem wysokiego powinowactwa do antygenu i innych zalecanych właściwości biologicznych. W celu osiągnięcia takiego rezu ltatu, zgodnie z zalecanym sposobem, przeciwciała humanizowane otrzymuje się w wyniku analizy sekwencji i różnych zaprojektowanych produktów humanizowanych, za pomocą trójwymiarowych m odeli wyjściowych i sekwencji humanizowanych. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępne i znane specjalistom w dziedzinie. Dostępne są również programy komputerowe preze ntujące i wykazujące prawdopodobną konformację trójwymiarowej struktury wybranych sekwencji i mmunoglobulin. Analiza ich pozwala na określenie prawdopodobnej roli reszt w funkcjonowaniu badanej sekwencji immunoglobuliny, tj. określenie wpływu tych reszt na zdolność badanej immunoglobuliny do wiązania antygenu. W ten sposób, możliwe jest dokonanie wyboru reszt FR i połączenie z sekwe ncjami biorcy i importowanymi w sposób pozwalający na uzyskanie pożądanych właściwości przeciwciała, takich jak zwiększone powinowactwo względem docelowego antygenu lub antygenów. Ogólnie, reszty CDR bezpośrednio i istotnie uczestniczą w wiązaniu antygenu.
Alternatywnie, możliwe jest obecnie otrzymanie zwierząt transgenicznych (np. myszy) zdolnych, po immunizacji, do produkcji pełnego zestawu ludzkich przeciwciał, przy braku produkcji immunogl obulin endogennych. Na przykład, opisano, że homozygotyczna delecja regionu genu łączącego łańcuch ciężki przeciwciała (JH) w chimerowych i zarodkowych mysich mutantach skutkuje całkowitym zahamowaniem produkcji endogennych przeciwciał. Przeniesienie macierzy genów immunoglobulin ludzkiej linii zarodkowej do takiej zmutowanej linii zarodkowej myszy wywołuje po prowokacji antygenem produkcję przeciwciał ludzkich. Patrz np., Jakobovits i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann i wsp., Year in Immuno., 7: 33 (1993) oraz Duchosal i wsp., Nature, 355: 258 (1992). Ludzkie przeciwciała mogą również być otrzymane z bibliotek prezentacji na fagach (Hoogenboom i wsp., J.Mol.Biol., 227: 381 (1991); Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581-597 (1991); Vaughan i wsp., Nature Biotech, 14: 309 (1996)).
(v) Przeciwciała wieloswoiste
Przeciwciała wieloswoiste wykazują specyficzność wiązania względem przynajmniej dwóch różnych antygenów. Cząsteczki takie zazwyczaj wiążą jedynie dwa antygeny (tj. są przeciwciałami biswoistymi, BsAb), jednak pojęcie to obejmuje przeciwciała o dodatkowych swoistościach, takie jak przeciwciała o potrójnej swoistości. Przykłady BsAb obejmują przeciwciała posiadające jedno ramię skierowane przeciwko antygenowi komórki nowotworowej, a drugie skierowane przeciwko cytoto kHER2 sycznej cząsteczce wzbudzającej, takiej jak anty-FcyRI/anty-CD15, anty-p185 /FcyRIII (CD16), anty-CD3/anty-uzłośliwione komórki B (1D10), anty-CD3/anty-p185HER2, anty-CD3/anty-p97, anty-CD3/przeciwko komórce raka nerki, anty-CD3/anty-OVCAR-3, antyCD3/L-D1 (przeciwko rakowi jelita grubego), anty-CD3/anty-analog czynnika stymulującego melanocyty, anty-receptor EGF/anty-CD3, anty-CD3/anty-CAMA1, anty-CD3/anty-CD19, anty-CD3/moV18, anty-cząsteczka adhezji komórek nerwowych (NCAM)/anty-CD3, białko wiążące folian(FBP)/anty-CD3, związany z rakiem anty-antygen AMOC-31 (ang. anti-pan carcinoma associated antigen)(AMOC-31)/anty-CD3; BsAb o jednym ramieniu wiążącym swoiście antygen rakowy i drugim, wiążącym toksynę, takie jak anty-saporyna/anty-Id-1, anty-CD22/anty-saporyna, anty-CD7/anty-saporyna, anty-CD38/anty-saporyna, anty-CEA/przeciwko łańcuchowi A rycyny, anty-interferon-a(IFN-a)/przeciwko idiotypowi hybrydomu, anty-CEA/anty-alkaloid winka; BsAb do konwersji enzymatycznie aktywowanych proleków, takich jak anty-CD30/anty-alkaliczna fosfataza (która katalizuje zamianę proleku fosforanu mitomycyny do alkoholu mitomycynowego); BsAb, które mogą być stosowane jako czynniki fibrynolityczne, takie jak anty-fibryna/anty-tkankowy aktywator plazminogenu (tPA), anty-fibryna/anty-aktywator plazminogenu typu urokinazy (uPA); BsAb do kierowania kompleksów immunologicznych do receptorów powierzchniowo-komórkowych, takie jak anty-lipoproteina o niskiej gęstości (LDL)/anty-receptor Fc (np. FcyRI, FcyRII lub FcyRIII); BsAb do zastosowania w terapii chorób zakaźnych, takie jak anty-CD3/anty-wirus opryszczki (HSV), anty-receptor komórek T: kompleks CD3/anty-wirus grypy, anty-FcyR/anty-HIV; BsAb do wykrywania nowotworów in vitro lub in vivo, takie jak anty-CEA/anty-EOTUBE, antyHER”
-CEA/anty-DPTA, anty-p185 /anty-hapten; BsAb jako adiuwanty szczepionkowe; oraz BsAb jako narzędzia diagnostyczne, takie jak anty-królicza IgG/anty-ferrytyna, anty-peroksydaza chrzanowa
PL 220 113 B1 (HRP)/anty-hormon, anty-somatostatyna/anty-substancja P, anty-HRP/anty-FITC, anty-CEA/anty-β-galaktozydaza. Przykłady przeciwciał o potrójnej swoistości obejmują anty-CD3/anty-CD4/anty-CD37, anty-CD3/anty-CD5/anty-CD37 oraz anty-CD3/anty-CD8/anty-CD37. Przeciwciała o podwójnej swoistości można otrzymywać w postaci pełnej długości przeciwciał lub fragmentów przeciwciał (np. przeciwciała o podwójnej swoistości F(ab')2).
Metody otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości są znane w dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie pełnej długości przeciwciał o podwójnej swoistości opiera się na koekspresji dwóch par łańcucha ciężkiego-łańcucha lekkiego immunoglobulin, w których dwa łańcuchy posiadają różną swoistość (Millstein i wsp., Nature, 305: 537-539 (1983)). Z powodu losowego doboru łańcuchów ciężkich i lekkich hybrydomy te (kwadromy) wytwarzają potencjalnie mieszaninę 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których jedynie jedna posiada właściwą strukturę o podwójnej swoistości. Oczyszczenie tej właściwej cząsteczki, zazwyczaj drogą chromatografii powinowactwa, jest niewygodne, a wydajność procesu jest niska. Podobne procedury opisano w WO 93/08829 i w Traunecker i wsp., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).
Zgodnie z innym podejściem, domeny zmienne przeciwciała o pożądanej swoistości wiązania (miejsca połączenia przeciwciało-antygen) poddaje się fuzji z sekwencjami domeny stałej immunoglobuliny. Fuzja ta dogodnie zachodzi z domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, zawierającą przynajmniej część regionu zawiasowego, regionów CH2 i CH3. Dogodnie przynajmniej jeden z pr oduktów fuzji obejmuje pierwszy region stały z łańcucha ciężkiego (CH1), zawierający miejsce niezbędne do wiązania łańcucha lekkiego. DNA kodujące fuzje łańcuchów ciężkich immunoglobuliny oraz, w razie potrzeby, łańcuchów lekkich immunoglobuliny, wstawia się do oddzielnych wektorów ekspresyjnych, którymi następnie kotransfekuje się odpowiednie komórki gospodarza. Pozwala to na dużą elastyczność dostosowywania wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydów w przypadku rozwiązań, w których stosuje się nierówne proporcje trzech łańcuchów polipeptydowych, celem zapewnienia optymalnej wydajności. Możliwe jest, jednakże, wstawienie sekwencji kodujących dwa lub trzy łańcuchy polipeptydowe w jednym wektorze ekspresyjnym, gdy ekspresja przynajmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach zapewnia wysoką wydajność, lub gdy proporcje te nie mają żadnego szczególnego znaczenia.
W zalecanym tego rodzaju rozwiązaniu, przeciwciała o podwójnej swoistości składają się z h ybrydowego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny o pierwszej swoistości wiązania w obszarze jednego ramienia, i pary hybrydowych łańcuchów, ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny (dostarczającej drugą swoistość wiązania) na drugim ramieniu. Zaobserwowano, że taka asymetryczna struktura ułatwia rozdzielanie pożądanego składnika o podwójnej swoistości od niepożądanych połączeń łańcuchów immunoglobulin, ponieważ oddzielanie cząsteczek jest łatwiejsze, gdy łańcuch lekki immunoglobuliny obecny jest jedynie w połowie struktury cząsteczki o podwójnej swoistości. Obserwację tę ujawniono w WO 94/04690. Więcej szczegółów na temat otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości można znaleźć, na przykład, w Suresh i wsp., Methods in Enzymology, 121: 210 (1936). Zgodnie z innym podejściem zaprezentowanym w WO 96/27011, powierzchnia pomiędzy parą cząsteczek przeciwciał może zostać zaprojektowana tak, by procent heterodimerów odzyskiwanych z hodowli komórek rekombinowanych był maksymalny. Zalecana powierzchnia obejmuje przynajmniej część domeny CH3 domeny stałej przeciwciała. W prezentowanym sposobie, jeden, lub więcej małych, aminokwasowych łańcuchów bocznych z powierzchni pierwszej cząsteczki przeciwciała zastępuje się większymi łańc uchami bocznymi (np. tyrozyną lub tryptofanem). Kompensujące „jamy”, o rozmiarach identycznych lub zbliżonych do rozmiarów większego łańcucha lub łańcuchów bocznych tworzy się na powierzchni drugiej cząsteczki przeciwciała poprzez zastąpienie dużych aminokwasowych łańcuchów bocznych mniejszymi (np. alaniny lub treoniny). Sposób ten zapewnia wzrost wydajności otrzymywania heterodimerów w stosunku do niepożądanych produktów końcowych, takich jak homodimery.
Przeciwciała o podwójnej swoistości obejmują przeciwciała sieciowane lub „heterokoniugatowe”. Na przykład, jedno z przeciwciał heterokoniugatu może być sprzęgnięte z awidyną, drugie z biotyną. Zastosowanie takich przeciwciał zaproponowano do nakierowywania, na przykład, komórek układu immunologicznego na komórki niepożądane (Patent USA nr 4, 676, 980) oraz do leczenia infekcji HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 oraz EP 03089). Przeciwciała heterokoniugatowe można otrzymać za pomocą jakiejkolwiek metody sieciowania. Odpowiednie czynniki umożliwiające takie sieciowanie są znane w dziedzinie i ujawnione w Patencie USA nr 4, 676, 980, wraz z licznymi technikami sieciowania.
PL 220 113 B1
Bierze się również pod uwagę przeciwciała o więcej niż dwóch swoistościach. Na przykład, można otrzymywać przeciwciała o potrójnej swoistości. Tutt i wsp., J.Immunol.147 : 60 (1991).
Chociaż polipeptyd będący przedmiotem zainteresowania stanowi dogodnie przeciwciało, to bierze się tu również pod uwagę inne polipeptydy zawierające region Fc, które można modyfikować, zgodnie z opisanymi tu sposobami. Przykładem takiej cząsteczki jest immunoadhezyna.
C. Otrzymywanie immunoadhezyny
Najprostsza immunoadhezyna zawiera domenę lub domeny wiążące adhezyny (np. zewnątrzkomórkową domenę receptora (EDC)) wraz z regionem Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Zw ykle, w celu otrzymania opisanej tu immunoadhezyny, kwas nukleinowy, kodujący domenę wiążącą tej adhezyny jest poddawany fuzji od strony C-końca z kwasem nukleinowym kodującym N-koniec sekwencji domeny stałej immunoglobuliny, możliwe są, jednakże, również fuzje od strony N-końca.
Zazwyczaj w takich fuzjach kodowany chimerowy polipeptyd zachowuje przynajmniej funkcjonalnie aktywny zawias, domeny CH2 i CH3 regionu stałego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Fuzje przeprowadza się także od strony C-końca fragmentu Fc domeny stałej, lub bezpośrednio, od N-końca CH1 łańcucha ciężkiego lub odpowiadającego temu obszarowi regionu łańcucha lekkiego. Dokładne miejsce przeprowadzenia fuzji nie jest krytyczne; poszczególne miejsca są dobrze znane i można je tak wybrać, żeby zoptymalizować aktywność biologiczną, wydzielanie lub właściwości wiązania immunoadhezyny.
W zalecanym rozwiązaniu sekwencja adhezyny poddawana jest fuzji z N-końcem regionu Fc immunoglobuliny G1 (IgG1). Możliwa jest przy tym fuzja całego regionu stałego łańcucha ciężkiego z sekwencją adhezyny. Jednakże, dogodniej fuzji poddaje się sekwencję rozpoczynającą się w regionie zawiasowym, tuż powyżej miejsca cięcia papainą, które określa chemicznie Fc IgG (np. reszta 216, przyjmując resztę 114 za pierwszą resztę regionu stałego łańcucha ciężkiego), lub w analogic znych miejscach innych immunoglobulin. W szczególnie zalecanym rozwiązaniu sekwencję aminokwasową adhezyny poddaje się fuzji z (a) regionem zawiasowym oraz CH2 i CH3 lub (b) CH1, regionem zawiasowym, domeną CH2 oraz CH3 łańcucha ciężkiego IgG.
W przypadku immunoadhezyn o podwójnej swoistości, immunoadhezyny tworzą multimery, a w szczególności heterodimery lub heterotetramery. Ogólnie, takie multimetryczne immunoglobuliny będą w postaci znanych jednostek strukturalnych. Podstawowa, czterołańcuchowa, jednostka strukturalna jest postacią, w jakiej występuje IgG, IgD oraz IgE. Jednostka czterołańcuchowa powtarzana jest w immunoglobulinach o wyższej masie cząsteczkowej; IgM ogólnie występuje w postaci pentameru, składającego się z czterech podstawowych jednostek połączonych ze sobą wiązaniami disiarczkowymi. W postaci multimeru w surowicy może występować również globulina IgA i czasem, globulina IgG. W przypadku postaci multimetru, każda z czterech jednostek może być taka sama lub inna.
Poniżej, przedstawiono schematycznie różne przykłady opisanych tu immunoadhezyn złożonych:
(a) ACl-ACl;
(b) ACh-(ACh, ACl-ACh, ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(c) ACl-ACh-(ACl-ACh, ACl-VhCh, VlCl-ACh lub VlCl-VhCh);
(d) ACl-VhCh-(ACh lub ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(e) VlCl-ACh-(ACl-VhCh lub VlCl-ACh); oraz (f) (A-YMVlCl-VhCh)2, gdzie każda litera A oznacza identyczne lub różne sekwencje aminokwasowe adhezyn;
VL oznacza domeną zmienną łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
VH oznacza domeną zmienną łańcucha ciężkiego immunoglobuliny;
CL oznacza domeną stałą łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
CH oznacza domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny; n oznacza liczbę całkowitą większą niż 1;
Y oznacza resztę czynnika sieciującego.
Dla zwięzłości w powyższych strukturach zaznaczono jedynie kluczowe cechy; nie wskazano w nich ani domeny łączącej (J) lub innych domen immunoglobulin, ani też wiązań disiarczkowych. Jednakże, gdy domeny te wymagane są do przejawienia aktywności biologicznej, należy przyjąć, że występują one w typowych lokalizacjach występowania w cząsteczkach immunoglobulin.
Alternatywnie, sekwencje adhezyn można wstawić pomiędzy sekwencje łańcucha ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny, w taki sposób, że immunoglobulina zawiera chimerowy łańcuch ciężki. W takim rozwiązaniu sekwencje adhezyny poddaje się fuzji z 3' końcem łańcucha ciężkiego immunoglobuliny w każdym ramieniu, albo pomiędzy regionem zawiasowym a domeną CH2, albo pomiędzy
PL 220 113 B1 domenami CH2 a CH3. Podobne struktury opisane zostały przez Hoogenboom i wsp., Mol.Immunol. 28: 1027-1037 (1991).
Chociaż w opisanych tu immunoadhezynach nie jest wymagana obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny, to łańcuch ten może być obecny w strukturze, albo w postaci kowalencyjnie związanej z polipeptydem fuzyjnym adhezyjna-łańcuch ciężki immunoglobuliny, albo w postaci fuzji bezpośrednio z adhezyną. W ostatnim przypadku, DNA kodujący łańcuch lekki immunoglobuliny ulega zazwyczaj koekspresji z DNA kodującym białko fuzyjne adhezyna-łańcuch ciężki immunoglobuliny. Po wydzieleniu hybrydowy łańcuch ciężki i łańcuch lekki będą miały postać kowalencyjnie związaną c elem uzyskania struktury immunoglobulino-podobnej, zawierającej dwie połączone za pomocą wiązań disiarczkowych pary łańcuchów: ciężkich i lekkich. Odpowiednie sposoby, pozwalające na otrzymanie takich struktur ujawniono, na przykład, w Patencie USA nr 4, 816, 567, wydanym 28 marca 1989r.
Immunoadhezyny zazwyczaj otrzymuje się poprzez fuzję sekwencji cDNA kodującej fragment adhezyny w ramce odczytu z sekwencją cDNA immunoglobuliny. Jednakże, zastosować można również fuzję z genomowymi fragmentami immunoglobuliny (patrz, np. Aruffo i wsp., Cell 61: 1303-1313 (1990) oraz Stamenkovic i wsp., Cell 66: 1133-1144 (1991)). W przypadku ostatniego typu fuzji do ekspresji wymagana jest obecność sekwencji regulatorowych Ig. cDNA kodujące regiony stałe łańcucha ciężkiego IgG można wyizolować w oparciu o opublikowane sekwencje pochodzące z bibliotek cDNA pochodzących z limfocytów ze śledziony lub krwi obwodowej, z zastosowaniem technik hybrydyzacji lub łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR). cDNA kodujący części „adhezyny” i immunoglobuliny cząsteczki immunoadhezyny wstawia się razem do wektora plazmidowego, wywołującego wydajną ekspresję w wybranych komórkach gospodarza.
D. Wektory, komórki gospodarza i sposoby rekombinacji
Zgodnie z wynalazkiem opisano wyizolowany kwas nukleinowy kodujący ujawniony tu wariant polipeptydu, wektory i komórki gospodarza oraz techniki rekombinacji, pozwalające na otrzymanie wariantu polipeptydu.
W celu otrzymania wariantu polipeptydu za pomocą techniki rekombinacji kodujący go kwas nukleinowy izoluje się, a następnie wstawia do odpowiedniego wektora do replikacji w celu dalszego klonowania (amplifikacji DNA) lub ekspresji. DNA kodujący wariant polipeptydu łatwo izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np. z zastosowaniem sond oligonukleinowych zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących wariant polipeptydu). Dostępnych jest wiele wektorów. Wektor składa się, ogólnie, lecz bez ograniczenia, z jednego lub więcej spośród następujących elementów: sekwencji sygnałowej, miejsca początku replikacji, jednego lub więcej genów markerowych, elementu wzmacniającego (enhancer), promotora i sekwencji terminacji transkrypcji.
(i) Element sekwencji sygnałowej
Opisany tu wariant polipeptydu może być otrzymany drogą rekombinacji, nie tylko bezpośrednio, ale również jako polipeptyd fuzyjny z polipeptydem heterologicznym, który dogodnie jest sekwe ncją sygnałową lub innym polipeptydem posiadającym specyficzne miejsce cięcia na N-końcu dojrzałego białka lub polipeptydu. Dogodnie wybraną sekwencją sygnałową jest sekwencja rozpoznawana i przekształcana przez komórki gospodarza (tj. cięta przez peptydazę sygnałową). W przypadku prokariotycznych komórek gospodarza, nie rozpoznających i nie przekształcających natywnej sekwencji sygnałowej wariantu polipeptydu, sekwencją tą zastąpuje się odpowiednią prokariotyczną sekwencją sygnałową wybraną, na przykład, z grupy sekwencji liderowych alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, Ipp lub termostabilnej enterotoksyny II. W przypadku wydzielania przez komórki drożdży natywną sekwencję sygnałową można podstawić, np. drożdżową sekwencją liderową inwertazy, czynnika α (włączając sekwencje liderowe czynników α Saccharomyces i Kluyveromyces) lub kwaśnej fosfatazy, glukoamylazy z C.albicans lub sekwencji sygnałowych opisanych w WO 90/13646. W przypadku ekspresji w komórkach ssaczych dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe wydzie lnicze sekwencje liderowe, na przykład, sekwencja sygnałowa gD wirusa opryszczki.
DNA takiego regionu prekursorowego poddaje się ligacji w ramce odczytu z DNA kodującym wariant polipeptydu.
(II) Element miejsca początku replikacji
Zarówno wektory ekspresyjne, jak i wektory do klonowania, zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, pozwalającą na replikację wektora w jednej lub więcej wybranych komórkach gospodarza. Ogólnie, w wektorach do klonowania sekwencją tą jest sekwencja, która umożliwia niezależną od chromosowego DNA gospodarza replikację wektora oraz zawiera miejsce początku replikacji lub autonomicznie replikujące sekwencje. Sekwencje te są dobrze znane dla wielu bakterii, drożdży i wirusów.
PL 220 113 B1
Miejsce początku replikacji plazmidu pBR322 jest odpowiednie dla większości bakterii Gram-ujemnych, miejsce początku replikacji plazmidu 2μ jest odpowiednie dla drożdży, natomiast dla wektorów do klonowania w komórkach ssaczych odpowiednie są miejsca początku replikacji różnych wirusów (SV40, polioma, adenowirus, VSV lub BPV). Ogólnie, element miejsca początku replikacji nie jest niezbędny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (miejsce początku replikacji z SV40 stosowane jest zazwyczaj jedynie z tego powodu, że zawiera wczesny promotor).
(iii) Element genu selekcyjnego
Wektory do klonowania i wektory ekspresyjne mogą zawierać gen selekcji, zwany również markerem selekcyjnym. Zazwyczaj geny selekcyjne kodują białka, które (a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np. ampicylinę, metotreksat lub tetracyklinę, (b) uzupełniają auksotroficzne niedobory, lub (c) dostarczają istotnych składników odżywczych, niedostępnych w pożywkach złożonych, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
W jednym z przykładów schematu selekcji w celu zahamowania wzrostu komórek gospodarza wykorzystuje się lek. Te komórki, które zostały skutecznie transformowane heterologicznym genem, wytwarzają białko nadające oporność na lek, i przeżywają zatem w warunkach schematu selekcji. Przykładem takiej selekcji dominującej jest zastosowanie leków, takich jak neomycyna, kwas mykofenolowy i higromycyna.
Innym przykładem odpowiednich markerów selekcyjnych dla komórek ssaczych są markery, które pozwalają na identyfikację komórek, które są kompetentne do pobrania kwasu nukleinowego kodującego wariant polipeptydu, takie jak DHFR, kinaza tymidynowa, metalotioneina I i II, zwłaszcza geny metalotioneiny naczelnych, deaminazy adenozynowej, dekarboksylazy ornitynowej, itp.
Na przykład, komórki transformowane genem selekcyjnym DHFR najpierw identyfikuje się poprzez hodowlę wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej zawierającej metotreksat (Mtx), antagonistę kompetycyjnego DHFR. W przypadku dzikiego typu DHFR odpowiednią komórką gospodarza jest linia komórkowa komórek jajnika chomika chińskiego (CHO), bez aktywności DHFR.
Alternatywnie, komórki gospodarza (szczególnie dzikiego typu zawierające endogenną DHFR), transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi wariant polipeptydu, białka DHFR dzikiego typu i inny marker selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferaza aminoglikozydowa (APH), mogą być poddawane selekcji poprzez wzrost komórek w pożywce zawierającej czynnik selekcyjny dla markera selekcyjnego, taki jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycyna, neomycyna lub G418. Patrz Patent USA nr 4, 965, 199.
Odpowiednim genem selekcyjnym do zastosowania w przypadku drożdży jest gen trp1 obecny w plazmidzie drożdżowym Yrp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282: 39 (1979)). Gen trp1 dostarcza markera selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży, pozbawionego zdolności do wzrostu na tryptofanie, na przykład, ATCC Nr 44076 lub PEP4-1. Jones, Genetics, 85: 12 (1977). Obecność uszkodzonego trp1 w genomie drożdżowych komórek gospodarza zapewnia skuteczne warunki do wykrywania transformacji poprzez hodowlę bez tryptofanu. Podobnie, zdolność do wzrostu szczepów drożdży nie posiadających Leu2 (ATCC 20,622 lub 38,626) jest uzupełniana za pomocą plazmidów dostarczających gen Leu2.
Ponadto, wektory pochodzące z 1,6 μm, kolistego plazmidu pKD1 mogą być wykorzystane do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, dla K.lactis opisano system ekspresji do wytwarzania na dużą skalę rekombinowanej chymozyny cielęcej. Van den Berg, Bio/Technology, 8; 135 (1990). Ujawniono również stabilne, wielokopijne wektory ekspresyjne służące do wydzielania dojrzałej, rekombinowanej, ludzkiej albuminy przez szczepy drożdży przemysłowych Kluyveromyces. Fleer i wsp., Bio/Technology, 9: 968-975 (1991).
(iv) Element promotora
Wektory ekspresyjne i wektory do klonowania zazwyczaj posiadają rozpoznawany przez organizm gospodarza promotor, operacyjnie przyłączony do kwasu nukleinowego wariantu polipeptydu. Odpowiednie do zastosowania w prokariotycznych komórkach gospodarza promotory obejmują układy promotora phoA, β-laktamazy i laktozy, układ promotora alkalicznej fosfatazy, tryptofanu (trp) oraz promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże, odpowiednie są również inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w układach bakteryjnych zawierają także sekwencję Shine-Dalgarno, połączoną operacyjnie z DNA kodującym wariant polipeptydu.
Znane są sekwencje promotorowe dla Eukariotów. Prawie wszystkie geny eukariotyczne posi adają region bogaty w reszty AT, zlokalizowany w przybliżeniu 25 do 30 reszt powyżej miejsca, gdzie rozpoczyna się transkrypcja. Inną sekwencją występującą w wielu genach 70 do 80 reszt powyżej
PL 220 113 B1 miejsca rozpoczęcia transkrypcji jest region CNCAAT, gdzie N jest dowolnym nukleotydem. Przy 3'-końcu większości genów eukariotycznych znajduje się sekwencja AATAAA, która może stanowić sygnał do dodania ogona poli-A do 3'-końca sekwencji kodującej. Wszystkie te sekwencje odpowiednio wstawia się do eukariotycznych wektorów ekspresyjnych.
Przykładami odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania w drożdżowych komórkach gospodarza są kinaza 3-fosfoglicerynianowa lub inne enzymy glikolityczne, takie jak enolaza, dehydrogenaza gliceroaldehyd-3-fosforanowa, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza glukozo-6-fosforanowa, mutaza 3-fosfoglicerynianowa, kinaza pirogronianowa, izomeraza triozofosforanowa, izomeraza fosfoglukozowa i glukokinaza.
Innymi promotorami drożdżowymi są promotory indukowalne, pozwalające na dogodną kontrolę transkrypcji poprzez warunki wzrostu, takie jak regiony promotorowe dla dehydrogenazy alkoholowej 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów degradacyjnych związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy gliceroaldehyd-3-fosforanowej oraz enzymów odpowiedzialnych za wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania w przypadku ekspresji u drożdży opisano ponadto w EP 73,657. Wraz z promotorami drożdżowymi dogodnie stosuje się drożdżowe sekwencje wzmacniające.
Transkrypcja wariantu polipeptydu z wektorów w ssaczych komórkach gospodarza jest kontrolowana, na przykład, przez promotory otrzymane z genomu wirusów, takich jak wirus polioma, wirus ospy ptasiej, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), wirus brodawczaka wołowego, wirus mięsaka ptaków, cytomegalowirus, retrowirus, wirus zapalenia wątroby typu B i w szczególności, Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np. promotor aktyny lub promotor immunoglobuliny, z promotorów genów szoku cieplnego, pod warunkiem że, promotory te są kompatybilne z układem komórek gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 otrzymuje się zazwyczaj z fragmentu restrykcyjnego SV40, zawierającego również miejsce początku replikacji wirusa SV40. Bardzo wczesny promotor ludzkiego cytomegalowirusa dogodnie otrzymuje się w postaci fragmentu restrykcyjnego HindIIIE. Układ do ekspresji DNA w ssaczych komórkach gospodarza wykorzystujący jako wektor wirus brodawczaka wołowego ujawniono w Patencie USA nr 4,601,978. Patrz również Reyes i wsp., Nature 297: 598-601 (1982), gdzie omówiono ekspresję cDNA ludzkiego interferonu β w mysich komórkach pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki. Alternatywnie, w funkcji promotora może być zastosowane długie końcowe powtórzenie z wirusa mięsaka Rous'a.
(v) Element wzmacniający
Transkrypcję DNA kodującego opisany tu wariant polipeptydu u wyższych Eukariotów często zwiększa się poprzez wstawienie sekwencji wzmacniających do wektora. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniających, pochodzących z genów ssaczych (globina, elastaza, albumina, α-fetoproteina oraz insulina). Jednakże zazwyczaj możliwe jest zastosowanie sekwencji wzmacniającej pochodzącej z wirusa komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują sekwencje wzmacniające SV40, po stronie późnej miejsca początku replikacji (100-270 pz), sekwencje wzmacniające wczesnego promotora cytomegalowirusa, sekwencje wzmacniające wirusa polioma po stronie późnej miejsca początku repl ikacji i sekwencje wzmacniające adenowirusa. Patrz również, Yaniv, Nature 297; 17-18 (1982), gdzie opisano elementy wzmacniające aktywację promotorów eukariotycznych. Sekwencja wzmacniająca może być wstawiona do wektora w pozycji 5' lub 3' względem sekwencji kodującej wariant polipept ydu, lecz zalecaną lokalizacją jest położenie 5' od promotora.
(vi) Element terminacji transkrypcji
Wektory ekspresyjne stosowane w eukariotycznych komórkach gospodarza (drożdże, grzyby, owady, rośliny, zwierzęta, ludzie lub komórki jądrowe innych organizmów wielokomórkowych) obejm ują również sekwencje niezbędne do terminacji transkrypcji i stabilizacji mRNA. Sekwencje te powszechnie występują od 5' końca, czasami końca 3', niepodlegających translacji regionów DNA lub cDNA eukariotycznego lub wirusowego. Regiony te zawierają segmenty nukleotydowe transkrybowane w postaci poliadenylowanych fragmentów w niepodlegającym translacji regionie mRNA kodującego wariant polipeptydu. Jednym z użytecznych elementów terminacji transkrypcji jest region poliadenyl acji wołowego hormonu wzrostu. Patrz WO 94/11026 i zawarty tam opis wektora ekspresyjnego.
(vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednimi komórkami gospodarza do klonowania lub ekspresji DNA w wektorach są opisane powyżej komórki prokariotyczne, drożdżowe lub komórki wyższych Eukariotów. Odpowiednie do tego celu komórki prokariotyczne obejmują eubacteria, takie jak mikroorganizmy Gram-ujemne lub
PL 220 113 B1
Gram-dodatnie, na przykład, Enterobacteriaceae, takie jak Escherichia, np. E.coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np. Salmonella typhimurium, Serratia, np. Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacillus, np. B.subtilis i B.licheniformis (np. B.licheniformis 41P, zawarty w DD 266,710, opublikowany 12 kwietnia 1989), Pseudomonas, np. P. aeruginosa i Streptomyces. Jednymi z zalecanych komórek gospodarza E.coli do klonowania są komórki E.coli294 (ATCC 31,446), jednak odpowiednie są również inne szczepy, takie jak E.coliB, E.coliX1776 (ATCC 31,537) i E.coliW3110 (ATCC 27,325). Wymienione tu szczepy nie służą ograniczeniu, ale podane zostały jedynie przykładowo.
Oprócz mikroorganizmów prokariotycznych, również mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak grzyby strzępkowate lub drożdże, są odpowiednie do klonowania i ekspresji gospodarzami dla wektorów kodujących wariant polipeptydu. Spośród niższych Eukariotów najpowszechniej stosowanymi mikroorganizmami gospodarza są drożdże Saccharomyces cerevisiae, lub powszechnie znane drożdże piekarskie. Jednakże, powszechnie dostępne są i użyteczne w niniejszym wynalazku liczne inne rodzaje, gatunki i szczepy, takie jak Schizosaccharomyces pombe : Kluyveromyces, tak jak np., K.lactis, K.fragilis (ATCC 12,424), K.bulgaricus (ATCC 16,045), K.wickeramii (ATCC 24,178), K.waltii (ATCC 56,500), K.drosophilarum (ATCC 36,906), K. thermotolerans i K.marxianus; Yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, tak jak Schwanniomyces occidentalis i grzyby strzępkowe, takie jak, np., Neurospora, Penicillium, Tolypocladium oraz Aspergillus, takie jak A.nidulans i A.niger.
Odpowiednie komórki gospodarza do ekspresji glikozylowanego wariantu polipeptydu pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i owadzie. Zidentyfikowano liczne szczepy i warianty bakulowirusowe oraz odpowiednie permisywne owadzie komórki gospodarza, z gospodarzy takich jak Spodoptera frugiperda (gąsienica), Aedes aegypti (komar), Aedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) oraz Bombyx mori. Dostępnych jest wiele szczepów wirusowych do transfekcji, np. wariant L-1 Autographa californica NPV oraz szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i wirusy te mogą być stosowane zgodnie z niniejszym wynalazkiem, w szczególności do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Jako organizmy gospodarza mogą być również wykorzystane hodowle komórek roślinnych bawełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu.
Jednakże, bardziej interesujące były komórki kręgowców, i dlatego namnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowle tkankowe) stało się powszechnie stosowaną procedurą. Przykładami użytecznych ssaczych linii komórek gospodarza są linia komórek nerki małpy transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linia komórek embrionalnych nerki człowieka (komórki 293 lub 293 subklonowane do wzrostu w zawiesinie, Graham i wsp., J.Gen Virol. 36:59 (1977); komórki nerki młodego chomika (BHK, ATCC CCL10); komórki jajnika chomika chińskiego/-DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77: 4216 (1980)); komórki Sertoliego myszy (TM4, Mather, Biol.Reprod. 23: 243-251 (1980)); komórki nerki małpy (CV1 ATCC CCL 70); komórki nerki afrykańskiej małpy zielonej (VERO-76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL2).; komórki nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątroby szczura (Buffalo)(BRL 3A, ATCC CRL 1442); komórki płuca człowieka (W138, ATCC CCL 75); komórki wątroby człowieka (Hep G2, HB 8065); komórki raka sutka myszy (MMT 060562, ATCC CCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N.Y.Acad.Sci. 383: 44-68 (1982)); komórki MRC5; komórki FS4 oraz linia komórek ludzkiego wątrobiaka (Hep G2).
W celu otrzymania wariantu polipeptydu komórki gospodarza poddaje się transformacji za pomocą wyżej wymienionych wektorów ekspresyjnych lub do klonowania, i hodowli w konwencjonalnych pożywkach odżywczych, zmodyfikowanych odpowiednio do indukcji promotorów, selekcji transformantów lub amplifikacji genów kodujących pożądane sekwencje.
(viii) Hodowla komórek gospodarza
Komórki gospodarza stosowane do produkcji opisanego tu wariantu polipeptydu mogą być hodowane w rozmaitych pożywkach. Do hodowli takich komórek gospodarza odpowiednie są dostępne handlowo pożywki, takie jak pożywka Ham'a F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) oraz Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma). Ponadto, jako pożywki hodowlane dla komórek gospodarza może być zastosowana jakakolwiek pożywka opisana w Ham i wsp., Meth.Enz. 58: 44 (1979), Bames i wsp., A102: 255 (1980), U.S. Patent No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655 lub 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195 lub US. Patent Re. 30,985. Jakakolwiek z tych pożywek może być, w razie potrzeby, uzupełniona hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostu (takimi jak insulina, transferyna lub naskórkowy czynnik wzrostu), solami (takimi
PL 220 113 B1 jak chlorek sodu, wapnia, magnezu i fosforan), buforami (takimi jak HEPES), nukleotydami (takimi jak adenozyna i tymidyna), antybiotykami (takimi jak GENTAMYCYNA™), pierwiastkami śladowymi (zdefiniowanymi jako związki nieorganiczne obecne zazwyczaj w końcowych stężeniach rzędu mikromola) oraz glukozą lub równoważnym źródłem energii. Do pożywki można dodać jakiekolwiek inne dodatki w odpowiednich stężeniach, znanych specjalistom w dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH itp., są takie jak stosowano już uprzednio do selekcji komórek gospodarza do ekspresji, i są znane specjalistom w dziedzinie.
(ix) Oczyszczanie wariantu polipeptydu
W przypadku stosowania technik rekombinacyjnych wariant polipeptydu można otrzymywać wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni peryplazmatycznej, lub w postaci bezpośrednio wydzielanej do pożywki. Jeżeli wariant polipeptydu wytwarza się wewnątrzkomórkowo, to w pierwszym etapie usuwa się szczątki, albo komórek gospodarza albo fragmentów poddanych lizie, na przykład drogą wirowania lub ultrafiltracji. Carter i wsp., Bio/Technology 10: 163-167 (1992) opisali procedurę izolacji przeciwciał wydzielanych do przestrzeni peryplazmatycznej E.coli. W skrócie, pastę komórkową rozmraża się w obecności octanu sodu (pH 3,5), EDTA i fluorku fenylometylosulfonylu (PMSF) przez około 30 min. Szczątki można usunąć drogą wirowania. W przypadku gdy wariant polipeptydu wydzielany jest do podłoża, supernatanty z takich układów ekspresyjnych zazwyczaj zatęża się za pomocą dostępnych handlowo filtrów odpowiednich do zatężania białek, na przykład, Amicon lub Millipore Pellicon ultrafiltracion unit. W celu zahamowania proteolizy na jakimkolwiek etapie można dodać inhibitor proteazy, taki jak PMSF, jak również antybiotyki, zapobiegające wzrostowi przypadkowej mikroflory zanieczyszczającej.
Kompozycja wariantu polipeptydu otrzymana z komórek może być poddana oczyszczaniu za pomocą, na przykład, chromatografii na hydroksyapatycie, elektroforezy żelowej, dializy i chromatografii powinowactwa, przy czym ta ostatnia technika jest zalecaną techniką oczyszczania. Skuteczność białka A jako liganda powinowactwa zależy od gatunku i odmiany izotypowej jakiegokolwiek regionu Fc immunoglobuliny, obecnego w wariancie polipeptydu. Białko A może być stosowane do oczyszczania wariantów polipeptydów opartych na ludzkich łańcuchach ciężkich y1, y2 lub y4 (Lidmark i wsp., J.Immunol.Meth. 62: 1-13 (1983)). Białko G jest polecane w przypadku wszystkich mysich odmian izotypowych oraz w przypadku ludzkiego y3 (Guss i wsp., EMBO J. 5: 1567-1575 (1986)). W większości przypadków macierzą, do której przyłączony jest ligand jest agaroza, lecz dostępne również są inne macierze. Macierze mechanicznie stabilne, takie jak szkło o kontrolowanej porowatości lub poli(styrenodiwynylo)benzen, pozwalają osiągnąć szybszy przepływ i krótszy czas oczyszczania niż w przypadku zastosowania agarozy. W przypadku oczyszczania wariantu polipeptydu zawierającego domenę CH3 użyteczna jest żywica Bakerbond ABX™ (J.T.Baker, Phillipsburg, NJ). W zależności od oczyszczanego wariantu polipeptydu mogą być zastosowane także inne techniki oczyszczania białka, takie jak frakcjonowanie na kolumnie do chromatografii jonowymiennej, wytrącanie etan olem, HPLC z odwróconą fazą, chromatografia na krzemionce, chromatografia na SEPHAROSE™ z heparyną, chromatografia kationowymienna lub anionowymienna na żywicy (taka jak na kolumnie z kwasem poliasparaginowym), ogniskowanie chromatograficzne, SDS-PAGE oraz wytrącanie siarczanem amonu.
Po jakimkolwiek z etapów oczyszczania mieszaninę wariantu polipeptydu będącego przedmiotem zainteresowania i zanieczyszczeń można poddać chromatografii oddziaływań hydrofobowych w niskim pH, z wykorzystaniem buforu elucyjnego w pH 2,5-4,5, dogodnie przy niskich stężeniach soli (np. od około 0-0,25 M soli).
E. Preparaty farmaceutyczne
Preparaty terapeutyczne wariantu polipeptydu przygotowuje się do przechowywania poprzez wymieszanie wariantu polipeptydu o pożądanym stopniu czystości z dowolnymi, farmaceutycznie akceptowanymi, nośnikami, zaróbkami lub substancjami stabilizującymi (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Ed., Osol, A.Ed. (1960)), w postaci preparatów liofilizowanych lub roztworów wodnych. Akceptowalne nośniki, zaróbki lub substancje stabilizujące są nietoksyczne dla przyjmujących lek w stosowanych dawkach i stężeniach, i obejmują bufory, takie jak fosforanowy, cytrynianowy i bufory innych kwasów organicznych; antyutleniacze, włączając kwas askorbinowy i metioninę; konserwanty (takie jak chlorek oktadecylodimetylobenzyloamonu; chlorek heksametonium; chlorek benzalkonium; chlorek benzetonium; fenol, alkohol butylowy lub benzylowy; parabeny alkilowe, takie jak paraben metylu lub propylu; katechol; rezorcynol; cykloheksanol; 3-pentanol oraz m-krezol); polipeptyd o niskiej masie cząsteczkowej (krótszy niż około 10 reszt); białka, takie jak albumina surowicy, żelatyna
PL 220 113 B1 lub immunoglobuliny; hydrofilowe polimery, takie jak poliwinylopirolidon; aminokwasy, takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histydyna, arginina lub lizyna; monosacharydy, dwusacharydy i inne węglowodany, włączając glukozę, mannozę lub dekstryny; czynniki chelatujące, takie jak EDTA; cukry, takie jak sacharoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol, tworzące sole przeciwjony, takie jak sód,; kompleksy z jonami metali (np. kompleksy Zn-białko) i/lub surfaktanty niejonowe, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Opisywany tu preparat może również zawierać więcej niż jeden związek czynny, jeżeli jest to niezbędne w przypadku danego wskazania terapeutycznego, dogodnie takie, które mają komplementarne aktywności, i które nie wpływają niekorzystnie na siebie. Cząsteczki te występują dogodnie w połączeniach, w ilościach odpowiednich dla zamierzonego celu.
Składniki czynne mogą również być zawarte w mikrokapsułkach otrzymanych, na przykład, techniką koacerwacji lub polimeryzacji międzyfazowej, na przykład, odpowiednio mikrokapsułkach hydroksymetylocelulozowych lub żelatynowych oraz z polimetakrylanu metylu, w koloidalnych ukł adach dostarczania leku (na przykład liposomy, mikrosfery albumiowe, mikroemulsje, nanocząsteczki i nanokapsułki) lub makroemulsje. Techniki te opisano w Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Osol, A.Ed. (1980).
Preparaty do podawania in vivo muszą być sterylne. Można to łatwo uzyskać poprzez filtrację przez sterylne błony do filtracji.
Możliwe jest przygotowanie preparatów o przedłużonym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o przedłużonym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne matryce ze stałych polimerów hydrofobowych zawierających wariant polipeptydu, przy czym matryce te mają różną postać, np. warstwy lub mikrokapsułki. Przykładami matryc o przedłużonym uwalnianiu są poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) lub alkohol poliwinylowy, polilaktydy (Patent USA nr 3,773,919), kopolimery kwasu L-glutaminowego i γ-etylo L-glutaninianu, niedegradowalny octan etyleno-winylu, degradowalne kopolimery kwasu mlekowego i kwasu glikolowego, takie jak LUPRON DEPOT™ (wstrzykiwalne mikrosfery składające się z kopolimeru kwasu mlekowego i kwasu glikolowego oraz octanu leuprolidu), oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksymasłowy. Podczas gdy polimery, takie jak octan etyleno-winylu i kwas mlekowy-kwas glikolowy, pozwalają na uwalnianie cząsteczek przez ponad 100 dni, to pewne hydrożele uwalniają białka przez krótsze okresy czasu. W przypadku gdy znajdujące się w kapsułkach przeciwciała pozostają w organizmie przez dłuższy czas, mogą one ul egać denaturacji lub agregacji na skutek panujących warunków wilgotności w temperaturze 37°C, powodujących brak aktywności biologicznej i możliwe zmiany immunogenności. W zależności od m echanizmu działania opracować można racjonalne strategie. Na przykład, w przypadku wystąpienia procesu agregacji, przebiegającego w wyniku powstawania międzycząsteczkowych wiązań disiarczkowych S-S poprzez wymianę grup tio-disiarczkowych, stabilizację można uzyskać poprzez modyfikację reszt sulfhydrylowych, liofilizację z kwaśnych roztworów, kontrolę wilgotności, zastosowanie odpowiednich dodatków i opracowanie specyficznych kompozycji matrycy polimerowej.
F. Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu
Opisany tu wariant polipeptydu może być zastosowany jako czynnik do oczyszczania przez p owinowactwo. W procesie tym, wariant polipeptydu immobilizuje się jest na fazie stałej, takiej jak żywica Sephadex lub papier filtracyjny, za pomocą dobrze znanych w dziedzinie metod. Immobilizowany w ariant polipeptydu kontaktuje się z próbką zawierającą oczyszczany antygen, a następnie nośnik płucze się odpowiednim rozpuszczalnikiem, usuwającym zasadniczo wszystkie składniki z próbki, za wyją tkiem oczyszczanego antygenu związanego z immobilizowanym wariantem polipeptydu. Ostatecznie, nośnik płucze się odpowiednim innym rozpuszczalnikiem, takim jak bufor glicynowy, pH 5,0, który uwalnia oczyszczany antygen od wariantu polipeptydu.
Wariant polipeptydu może być również użyteczny w testach diagnostycznych, np. do wykryw ania ekspresji antygenu będącego przedmiotem zainteresowania w specyficznych komórkach, tkankach lub surowicy.
Do celów diagnostycznych wariant polipeptydu zazwyczaj bedzie znakowany za pomocą wykrywalnych ugrupowań. Dostępne są liczne znaczniki, które ogólnie można podzielić na następujące grupy:
(a) radioizotopy, takie jak 35S, 14C, 125I, 3H i 131I.
Wariant polipeptydu może być znakowany izotopowo przykładowo za pomocą technik opisanych w Current Protocols in Immunology, tom 1 i 2, Coligen i wsp., Ed. Wiley-Interscience, New York, New York Pubs. (1991), a radioaktywność można mierzyć za pomocą licznika scyntylacyjnego.
PL 220 113 B1 (b) znaczniki fluorescencyjne, które można zastosować to chelaty metali ziem rzadkich (chelaty europu) lub fluoresceina i jej pochodne, rodamina i jej pochodne, dansyl, lissamina, fikoerytryna i barwnik Texas Red. Znaczniki fluorescencyjne można sprzęgać z wariantem polipeptydu za pomocą technik ujawnionych, na przykład, w Current Protocols in Immunology, jak powyżej. Fluorescencję można oceniać częściowo za pomocą fluorymetru.
(c) różne znaczniki typu enzym-substrat, z których część opisano w Patencie USA nr 4,257,149. Enzym, ogólnie, katalizuje chemiczną zmianę substratu chromogennego, którą można mierzyć za pomocą różnych technik. Na przykład, enzym może katalizować zmianę koloru substratu, którą można mierzyć spektrofotometrycznie. Alternatywnie, enzym może zmieniać fluorescencję lub chemiluminescencję substratu. Techniki oceny ilościowej zmian fluorescencji opisano powyżej. Substrat chemiluminescencyjny zostaje elektronowo wzbudzony w wyniku reakcji chemicznej, i może emitować następnie światło, które można mierzyć (na przykład za pomocą chemiluminometru) lub przekazuje energię na akceptor fluorescencyjny. Przykłady znaczników enzymatycznych obejmują lucyferazy (np. lucyferazę ze świetlika i lucyferazę bakteryjną; Patent USA nr 4,737,456), lucyferynę, 2,3-dihydroftalazynodiony, dehydrogenazę jabłczanową, ureazę, peroksydazę, taką jak peroksydaza chrzanowa (HRPO), alkaliczną fosfatazę, β-galaktozydazę, glukoamylazę, lizozym, oksydazy sacharydów (np. oksydazę glukozy, oksydazę galaktozy i dehydrogenazę glukozo-6-fosforanową) oraz heterocykliczne oksydazy (takie jak urykaza i oksydaza ksantynowa), laktoperoksydaza, mikroperoksydaza, itp. Techniki sprzęgania enzymów z przeciwciałami opisano w O'Sullivan i wsp., Methods for the Preparation of Enzyme-Antybody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, Methods in Enzym, (ed J.Langone&H.Van Vunakis), Academic Press, New York, 73: 147-166 (1981).
Przykłady połączeń enzym-substrat obejmują, na przykład:
(i) Peroksydazę chrzanową (HRPO) i peroksydazę wodorową jako substrat, przy czym peroks ydaza wodorowa utlenia prekursor barwnika (np. diaminę ortofenylenu (OPD) lub chlorowodorek 3,3',5,5'-tetrametylobenzydyny (TMB));
(ii) Alkaliczną fosfatazę (AP)i fosforan paranitrofenylu jako substrat chromogenny; i (iii) β-D-galaktozydazę (β-D-Gal) i substrat chromogenny (np. p-nitrofenylo^-D-galaktozydaza) lub substrat fluorogenny (4-metylolumbelliferylo^-D-galaktozydaza).
Istnieją również liczne inne połączenia enzym-substrat, znane specjalistom w dziedzinie. Ogólny ich przegląd można znaleźć w Patencie USA nr 4,257,149 i 4,318,980.
Znacznik może być czasami sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Specjal istom w dziedzinie znane są liczne techniki odpowiednie do tego celu. Na przykład, wariant polipeptydu może być sprzęgany z biotyną, a jakikolwiek z trzech wymienionych powyżej grup znaczników może być sprzęgany z awidyną i odwrotnie. Biotyna ulega selektywnemu wiązaniu z awidyną, co powoduje, że znacznik może być sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Alternatywnie, w celu sprzęgania pośredniego znacznika z wariantem polipeptydu, wariant polipeptydu sprzęga się z małym haptenem (np. digoksyną), a jeden z wymienionych powyżej znaczników sprzęga się ze skierowanym przeciwko cząsteczce haptenu wariantem polipeptydu (np. przeciwciałem przeciwko digoksynie). Zatem, można przez to uzyskać pośrednie sprzęganie znacznika z wariantem polipeptydu.
W innym rozwiązaniu nie jest konieczne znakowanie wariantu polipeptydu, a jego obecność wykrywa się z użyciem znakowanego przeciwciała wiążącego się z wariantem polipeptydu.
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w jakiejkolwiek znanej metodzie analizy, takiej jak analiza wiązania kompetycyjnego, bezpośrednie i pośrednie analizy kanapkowe i immunoprecypitacyjne. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
Wariant polipeptydu może być także wykorzystany w testach diagnostycznych in vivo. Ogólnie, wariant polipeptydu jest znakowany radioizotopowo (tak jak 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H, 32P lub
S), co pozwala na zlokalizowanie antygenu lub ekspresjonującej go komórki za pomocą immunoscyntygrafii.
G. Zastosowania wariantu polipeptydu in vivo
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w leczeniu ssaków, np. pacjentów cierpiących na choroby lub zaburzenia lub predysponowanych do takich chorób lub zaburzeń, gdzie p odawanie wariantu polipeptydu mogłoby przynieść korzyść. Wiele stanów można leczyć z zastosowaniem wariantu polipeptydu i obejmują one raka (np. gdzie wariant polipeptydu wiąże się z receptorem HER2, CD20 lub czynnik wzrostu śródłonka naczyniowego (VEGF)); alergie, takie jak astma (przeci w40
PL 220 113 B1 ciało anty-IgE) oraz zaburzenia zależne od LFA1 (np. gdzie wariantem polipeptydu jest przeciwciało anty-LFA-1 lub anty-ICAM-1), itp.
W przypadku gdy przeciwciało wiąże się z receptorem HER2, zalecanym zaburzeniem jest rak z ekspresją HER2, np. łagodny lub złośliwy guz wykazujący nadekspresję receptora HER2. Raki te obejmują, lecz bez ograniczenia, raka sutka, raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, raka przewodu żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki, raka jajników, raka pęcherza, wątrobiaka, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka śluzówki macicy, raka ślinianek, raka nerki, raka wątroby, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątroby i różnych typów nowotworów głowy i szyi.
Zgodnie z niniejszym opisem możliwe jest otrzymanie polipeptydu zawierającego wariant regionu Fc o udoskonalonej lub zredukowanej aktywności ADCC. Cząsteczki takie znajdą zastosowanie w leczeniu różnorodnych zaburzeń.
Na przykład, wariant polipeptydu o wzmocnionej aktywności ADCC może być zastosowany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zniszczenie lub wyeliminowanie tkanki lub obcego mikroorganizmu. Na przykład, taki polipeptyd może znaleźć zastosowanie w leczeniu raka, zaburzeń zapalnych, zakażeń (np. bakteryjnych, wirusowych, grzybowych lub drożdżowych) lub innych stanów (takich jak wole), gdzie pożądane jest usunięcie tkanki, itp.
W przypadku gdy wariant polipeptydu wykazuje zredukowaną aktywność ADCC, może on być wykorzystany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zastosowanie polipeptydu zawierającego region Fc o dłuższym okresie półtrwania, przy czym dogodnie polipeptyd nie wykazuje ni epożądanych funkcji efektorowych. Na przykład, polipeptyd zawierający region Fc może być przeci wciałem skierowanym przeciwko czynnikowi tkankowemu (TF); przeciwciałem skierowanym przeciwko IgE i przeciwciałem skierowanym przeciwko integrynie (np. przeciwciałem anty-a437). Pożądanym mechanizmem działania takich polipeptydów zawierających region Fc może być blokowanie par wiążących ligand-receptor. Ponadto, polipeptyd zawierający region Fc o zredukowanej aktywności ADCC może być agonistą przeciwciała.
Wariant polipeptydu podaje się za pomocą dowolnych w jakikolwiek możliwch środków, włączając podawanie pozajelitowe, podskórne, dootrzewnowe, dopłucne i donosowe, a w razie potrzeby miejscowego leczenia immunosupresyjnego podawanie w obrębie zmiany. Wlewy pozajelitowe obejmują podawanie domięśniowe, dożylne, dotętnicze, dootrzewnowe lub podskórne.
Ponadto, wariant polipeptydu podaje się odpowiednio drogą wlewu pulsowego, szczególnie w malejących dawkach wariantu polipeptydu. Dawkę podaje się dogodnie przez wstrzyknięcia, a w szczególności wstrzyknięcia dożylne lub podskórne, co częściowo zależy od tego czy czas pod awania jest krótki czy przewlekły.
W przypadku profilaktyki lub leczenia choroby odpowiednie dawki wariantu polipeptydu będą zależały od typu leczonej choroby, stopnia jej ciężkości i przebiegu, od tego czy podawanie wariantu polipeptydu ma charakter profilaktyczny czy terapeutyczny, poprzednio stosowanej terapii, historii choroby pacjenta i odpowiedzi na wariant polipeptydu oraz decyzji lekarza prowadzącego. Wariant polipeptydu podaje się pacjentowi jednorazowo lub w seriach.
W zależności od typu i ciężkości choroby wstępną dawkę do podania pacjentowi stanowi około 1 pg/kg do 15 mg/kg (np. 0,1-20 mg/kg) wariantu polipeptydu w zależności przykładowo od tego czy podawanie jest jednokrotne czy w kilku oddzielnych dawkach lub przez wlew ciągły. Typowa dzienna dawka wynosi w zakresie od około 1 pg/kg do 100 mg/kg lub więcej, zależnie od wymienionych powyżej czynników. W przypadku podawania wielokrotnego przez okres kilku dni lub dłuższy, w zależności od stanu, leczenie kontynuuje się aż do momentu zahamowania występowania objawów chorobowych. Jednakże użyteczne są również inne schematy dawkowania. Postęp terapii łatwo monitoruje się za pomocą konwencjonalnych technik i analiz.
Kompozycję wariantu polipeptydu otrzymuje się, dawkuje i podaje w zgodzie z dobrą praktyką lekarską. Czynniki, które należy rozważyć w tym kontekście to szczególnie choroba do leczenia, szczególny ssak do leczenia, stan kliniczny poszczególnego pacjenta, przyczyna zaburzenia, miejsce dostarczenia czynnika, sposób podawania, schemat podawania i inne czynniki znane lekarzom.
„Terapeutycznie skuteczna ilość” wariantu polipeptydu, którą należy podać będzie ustalana ogólnie na podstawie wymienionych czynników, i stanowi minimalną ilość niezbędną do zapobiegnięcia, złagodzenia lub wyleczenia choroby lub zaburzenia. Wariant polipeptydu nie musi być, ale może być otrzymany wraz z jednym lub więcej czynnikami stosowanymi obecnie do zapobiegania lub lecz enia danego zaburzenia. Skuteczna ilość takich dodatkowych czynników uzależniona będzie od ilości
PL 220 113 B1 wariantu polipeptydu obecnego w preparacie, typu zaburzenia lub leczenia i innych dyskutowanych powyżej czynników. Stosuje się je, ogólnie, w takich samych dawkach i w taki sam sposób, jak wcześniej to opisano, lub stosuje się około od 1 do 99% opisanych powyżej dawek.
Wynalazek będzie bardziej zrozumiały w kontekście zamieszczonych poniżej przykładów. Przykładów tych nie należy jednak interpretować jako ograniczających zakres wynalazku. Wszystkie odnośniki literaturowe i odwołania do patentów włączone są tu przez odesłanie.
P r z y k ł a d 1
Analiza wiązania receptora o niskim powinowactwie
Analiza ta określa wiązanie regionu Fc IgG z rekombinowanymi podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIA, ekspres jonowanymi jako białko fuzyjne ze znakowaną His6 S transferazą glutationu (GST). Ze względu na to, że powinowactwo regionu Fc IgG1 względem FcyRI jest rzędu nanomoli, wiązanie wariantów Fc IgG1 można mierzyć za pomocą miareczkowania monomeru IgG i pomiaru wiązania IgG z przeciwciałem poliklonalnym anty-IgG w standardowym teście ELISA (Przykład 2, poniżej). Jednakże powinowactwo pozostałych członków rodziny FcyR, tj. FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA względem IgG jest rzędu mikromolarnego i wiązania tych receptorów z monomerem IgG1 nie można mierzyć za pomocą testu ELISA.
W poniższej analizie wykorzystuje się warianty Fc rekombinowanego przeciwciała anty-IgE E27 (Figury 4A i 4B), które po wymieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzą stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek anty-IgE i trzech cząsteczek IgE. Otrzymano rekombinowaną chimerową postać IgE (chimerową IgE), składającą się z regionu Fc ludzkiej IgE i Fab przeciwciała anty-VEGF, (Presta i wsp. Cancer Research 57: 4593-4599(1997)), która wiąże się z dwiema cząsteczkami VEGF na mol przeciwciała anty-VEGF. Po dodaniu ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do chimerowych heksamerów IgE:E27, heksamery łączą się w kompleksy o większej masie cząsteczkowej poprzez oddziaływanie chimerowe IgE:VEGF. Składnik E27 tego kompleksu wiąże się z podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA z silniejszą zachłannością wiązania, co umożliwia ich wykrycie w teście ELISA.
Materiały i metody
Pokrywanie receptorem: Podjednostki α receptora Fcy ekspresjonowane były jako białka fuzyjne GST domen zewnątrzkomórkowych (ECD) znakowanych His6 w komórkach 293, dzięki czemu otrzymano białko fuzyjne ECD-6His-GST (Graham i wsp., J.Gen.Virol. 36: 59-74 (1977) i Gorman i wsp., DNA Prot.Eng.Tech. 2:3-10 (1990)), które oczyszczono na kolumnie chromatograficznej Ni-NTA (Qiagen, Australia) i przez wymianę buforu na buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej (PBS). Stężenia określano na podstawie absorpcji przy 280 nm, z użyciem współczynników ekstynkcji ustalonych w analizie składu aminokwasowego. Płytki Nunc F96 maxisorb pokrywano receptorami (Nr kat. 439454) w ilości 100 ng na studzienkę poprzez dodanie 100 μl białka fuzyjnego receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w 4°C. Przed analizą płytki płukano 250 μl 3x buforu do płukania (PBS, pH 7,4 zawierającego 0,5% TWEEN 20™) i blokowano za pomocą 250 μl buforu do analizy (50 mM buforowanego Tris roztworu soli fizjologicznej, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) oraz 2 mM EDTA, pH 7,4).
Tworzenie kompleksów immunologicznych: równe molowe ilości (1:1) E27 i rekombinowanej chimerowej IgE, które wiążą dwa mole rekombinowanego ludzkiego VEGF na mol chimerowej IgE dodano do próbki polipropylenowej 12 x 75 mm w PBS i zmieszano przez obracanie przez 30 minut w temperaturze 25°C. Heksamery E27 (anty-IgE)/chimerowa IgE (IGE) powstają w czasie inkubacji. Rekombinowany ludzki VEGF (postać 165, MW 44000) dodano w ilości molowej 2:1 względem stężenia IgE i zmieszano przez obracanie przez dodatkowe 30 minut w 25°C. Wiązanie VEGF-chimerowa IgE łączy heksamery E27:chimerowa IgE w kompleksy o większej masie cząsteczkowej, które wiążą podjednostki FcyR α ECD na powleczonych płytkach poprzez regiony Fc przeciwciała E27.
Kompleksy E27:chimerowa IgE:VEGF: (stosunek molowy 1:1:2) dodano do powleczonych podjednostek α FcyR płytek w stężeniu E27 wynoszącym 5 μg i 1 μg wszystkich IgG w czterech powtórzeniach w buforze do analizy i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej.
Wykrywanie kompleksów: Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl koniugatu peroksydazy HRP z kozią anty-ludzką IgG (γ) specyficzną wobec łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w stosunku 1:10000 w buforze do analizy i inkubuje przez 90 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanej HRP koziej anty-ludzkiej IgG, a związane anty-IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl roztworu sub42
PL 220 113 B1 stratu (0,4 mg/ml dichlowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubowano przez 8 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymuje się przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a produkty barwne mierzy się w 490 nm na 96 studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Devices). Związanie kompleksów wariant-E27 przedstawiono jako procent kompleksu zawierającego E27 dzikiego typu.
P r z y k ł a d 2
Identyfikacja unikalnych miejsc wiązania C1q w ludzkim przeciwciele IgG
W prezentowanym badaniu zidentyfikowano mutacje w domenie CH2 ludzkiego przeciwciała IgG1, „C2B8” (Reff i inni, Blood 83:435 (1994)), które znoszą wiązanie przeciwciała C1q, ale ani nie zmieniają konformacji przeciwciała, ani nie wpływają na wiązanie każdego z FcyR. Poprzez mutagenezę z użyciem skanowania alaniny zidentyfikowano pięć wariantów IgG1, D270K, D270V, K322A, P329A oraz P331, które nie były lityczne i które zmniejszyły wiązanie C1q. Wyniki sugerowały, że rdzeniowe miejsca wiązania C1q w ludzkiej IgG1 są różne od miejsc w mysich IgG2b. Dodatkowo stwierdzono, że K322A, P329A oraz P331A wiążą się normalnie z antygenem CD20 i czterema receptorami Fc, FcyRI, FcyRII, FcyRIII oraz FcyRn.
Materiały i metody
Tworzenie wariantów C2B8: Użyto chimerowe łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciała anty-CD20, C2B8, (Reff i inni. Blood 83:435 (1994)), subklonowane oddzielnie do wcześniej opisanych wektorów PRK (Gorman i inni, DNA Protein Eng. Tech. 2:3 (1990). Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Ku nkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) skonstruowano warianty otrzymane przez skanowanie alaniny regionów Fc w łańcuchu ciężkim. Plazmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego kotran sfekowano do transformowanej adenowirusem linii komórek embrionalnych nerki człowieka jak to wcześniej opisano (Werther i inni, J. Immunol. 157:4986 (1996)). Pożywki zmieniano na wolne od surowicy 24 godzinny po transfekcji, a po 5 dniach zebrano wydzielone przeciwciało. Przeciwciała oczyszczano przy użyciu Protein A-SEPHAROSE CL-4B™ (Pharmacia), zmieniono bufor i zatężono do 0,5 ml z PBS przy użyciu Centricon-30 (Amicon) i przechowywano w 4°C. Stężenie przeciwciał określono przy użyciu ELISA z wiązaniem wszystkich Ig.
ELISA z wiązaniem C1q: 96 studzienkowe płytki Costar pokrywano przez noc C2B8 w temp. 4°C w znanych stężęniach w buforze do pokrywania (0,05 M bufor z węglanem sodu), pH 9. Następnie płytki płukano trzykrotnie PBS/ 0,05% TWEEN 20™, pH 7,4 i blokowano 200 μl rozcieńczalnika do ELISA bez timerosalu (0,1 M NaPO4/0,1 M NaCl/0,1% żelatyna/0,05% Tween 20™/0,05% Proclin 300) przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Płytki płukano trzykrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl z 2 μg/ml C1q (Quidel, San Diego, CA) i inkubowano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Płytkę następnie płukano sześciokrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl rozcieńczonego 1:1000 koniugatu peroksydazy z przeciwciałem owczym przeciwko C1q (Biodesign) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Płytki ponownie sześciokrotnie płukano buforem do płukania i dodano 100 μl buforu substratu (PBS/ /0,012% H2O2) zawierającego OPD (dichlorowodorek o-fenylenodiaminy) (Sigma). Reakcja utleniania, obserwowana dzięki wystąpieniu żółtego koloru, przebiegała przez 30 minut i zatrzymano ją przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Następnie odczytano absorbancję przy (492-405) nm przy użyciu czytnika mikropłytek (SPCTRA MAX 250™, Molecular Devices Corp.). Równolegle analizowano odpowie dnie kontrole (tj. test ELISA przeprowadzono bez C1q dla każdego użytego stężenia C2B8 a ponadto przeprowadzono ELISA bez C2B8). W przypadku każdego wariantu mierzono wiązanie C1q przez naniesienie na wykres absorbancji (492-405) nm względem stężenia C2B8 w μg/ml przy użyciu 4-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™) i porównanie z wartością EC50.
Analiza cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Analizę tę przeprowadzono jak opisano to wcześniej (Gazzano-Santoro i inni, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)). Różne stężenia C2B8 (0,08-20 pg/ ml) rozcieńczono buforem RHB (RPMI 1640/20 mM HEPES (pH 7,2)/2 mM Glutaminae/0,1% BSA/100 pg/ m. gentamycyna). Ludzki dopełniacz (Quidel) rozcieńczono w stosunku 1:3 w buforze RHB, a komórki WIL2-S (dostępne z ATCC, Manassas, VA), które ekspresjonują antygen CD20, rozcieńczono do gęstości 1x106 komórek/ml buforem RHB. 150 pl mieszaniny zawierające równe objętości C2B8, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza oraz komórek WIL2-S dodano do płaskodennej 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubowano przez 2 godziny w temp. 37°C i 5% CO2 w celu ułatwienia lizy komórek zależnej od dopełniacza. 50 pl barwnika alamar blue (Accumed International) dodano do każdej studzienki i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C.
PL 220 113 B1
Następnie zmierzono absorbancję przy użyciu 96-studzienkowego fluorometru z wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Jak opisał to Gazzano-Santoro i inni, wyniki wyrażono we względnych jednostkach fluoroscencji (RFU). Stężenie próbek obliczano z krzywej standardowej dla C2B8 a procent aktywności w porównaniu do dzikiego typu C2B8 opisano dla każdego wariantu.
Siła wiązania CD20 wariantów C2B8: Wiązanie C2B8 oraz wariantów do antygenu CD20 test owano przy użyciu wcześniej opisanej metody (Reff i inni, (1994) supra, Gazzano-Santoro i inni, (1996), supra). Komórki WIL2-S hodowano przez 3-4 dni do gęstości komórkowej wynoszącej 1x106 kom/ml. Komórki płukano i wirowano dwa razy w buforze FACS (PBS/0,1% BSA/0,02% NaN3) i zawieszono ponownie do gęstości komórkowej wynoszącej 5x106 komórek/ml. 200 μl komórek (5x106 kom/ml) oraz 20 μl rozcieńczonych próbek C2B8 dodano do 5 ml probówek i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Następnie mieszaninę płukano 2 ml zimnego buforu FACS, wirowano i powtórnie zawieszono w 200 μl zimnego buforu FACS. Do zawiesiny dodano 10 μl koziego anty-ludzkiego IgG-FITC (American Qualex Labs.) i mieszaninę inkubowano w ciemności w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Po inkubacji mieszaninę płukano 2 ml buforu FACS, wirowano i ponownie zawieszono w 1 ml zimnego buforu utrwalającego (1% formaldehyd w PBS). Próbki analizowano na cytometrze przepływowym a wyniki wyrażono jako względne jednostki fluoroscencji (RFU) i przedstawiono na wykresie względem stężeń przeciwciał przy użyciu 4 parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™). Wartości dla EC50 są wyrażone jako procent wartości dla referencyjnego materiału CD28.
Test ELISA wiązania FcyRI: fuzję GST podjednostka α FcyRI przeniesiono na płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439454) przez dodanie 100 μl fuzji receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w temp. 4°C. Przed testem płytki trzykrotnie płukano 250 μl buforu do płukania (PBS, pH 7,4, zawierający 0,5% TWEEN 20™) i blokowano 250 μl buforu do analizy (sól fizjologiczna buforowana 50 mM Tris, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA o pH 7,4). Próbki rozcieńczono do 10 μg/ml w 1 ml buforu do analizy i dodano do płytek pokrytych podjednostką α FcyRI i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywano przez dodanie 100 μl peroksydazy HRP sprzęgniętej z kozim anty-ludzkim przeciwciałem IgG (y) specyficznym dla łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w 1:10000 w buforze do analizy i inkubowano przez 90 minut w temperaturze 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych HRP kozich anty-ludzkich IgG, a związane anty-IgG wykrywano przez dodanie 100 μl roztworu substratu (0,4 mg/ml o-dichlorowodorek fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) inkubując przez 8 minut w temperaturze 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a barwne produkty oznaczono przy 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Device). Wiązanie wariantu wyrażono jako procent cząsteczki dzikiego typu.
Analizę ELISA wiązania FcyRII oraz III przeprowadzono jak opisano w przykładzie 1 powyżej.
Aby zmierzyć zdolność wiązana FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml streptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6 w temperaturze 4°C przez noc, i blokowano za pomocą PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowane FcRn (wytwarzane z użyciem biotyno-X-NHS, z Research Organics, Cleveland, OH i użyte w ilości 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 7,2, dodano do płytki i inkubowano przez jedną godzinę. Do płytki dodano dwukrotne rozcieńczenia seryjne standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 i inkubowano przez dwie godziny. Związane IgG wykrywano za pomocą znakowanego peroksydazą koziego F(ab)' anty-ludzki IgG F(ab)'2 w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano pomiędzy etapami PBS-0,05% polisorbatu 20 w pH albo 7,2 albo 6,0. Absorbancję odczytywano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywą miareczkowania dop asowano za pomocą czteroparametrowego programu do dopasowywania krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania standardu a następnie podzielono przez stężenie standardu odpowiadające środkowemu punktowi absorbacji krzywej miareczkowania standardu.
PL 220 113 B1
Wyniki oraz dyskusja
Dzięki mutagenezie skanowania alaniny skonstruowano kilka pojedynczych mutacji punktowych w domenie CH2 C2B8, rozpoczynając od E318A, K320A i K322A. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się do antygenu CD20 (Tabela 3).
T a b e l a 3
wt E318A K320A K322A P329A P331A
FcRn + + + +
CD20 + + + + + +
FcγRI + + + + + +
FcγRII + + + + + +
FcγRIII + + + + + +
*C1q +++ ++ +++ - - -
CDC + + + - - -
(+) oznacza wiązanie a (-)oznacza zniesione wiązanie * w przypadku wiązania C1q każdy + jest równoważny w przybliżeniu 33% wiązania.
Tam gdzie analizowano ludzki dopełniacz względem przeciwciała z ludzkim Fc zdolność E318A oraz K320A do aktywowania dopełniacza była zasadniczo jednakowa jak w przypadku C2B8 typu dzikiego (Tabela 3). W przypadku porównania do C2B8 typu dzikiego wydaje się, iż istnieje niewielka różnica w wiązaniu E318A i K320A do C1q. Zauważono tylko 10% zmniejszenie wiązania K320A i około 30% zmniejszenie wiązania E318A do C1q (Figura 2). Wyniki te wskazują, że wpływ substytucji E318A oraz K320A na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q jest minimalny. Ludzką IgG1 z C2B8 zastąpiono ludzką IgG2 i użyto jako kontrolę ujemną w badaniach wiązania C1q. Wariant IgG2 wydaje się posiadać o wiele mniejsze powinowactwo do C1q niż warianty E318A i K320A (Figura 2). Zatem wyniki wykazują, że E318 oraz K320A nie stanowią rdzeniowych miejsc wiązania C 1q dla ludzkiej IgG1. Odwrotnie substytucja K322A znacząco wpłynęła na zarówno aktywność dopełniacza, jak i wiązanie C1q. Wariant K322A nie posiadał aktywności CDC podczas analizy w powyższym teście CDC, wykazywał ponad 100-krotnie niższe wiązanie z C1q niż C2B8 typu dzikiego (figura 2). W układzie ludzkim K322 jest jedyną resztą spośród zaproponowanych rdzeniowych miejsc wiązania C1q, która wydawała się posiadać znaczący wpływ na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q.
Ze względu na to, że badania Duncan'a oraz Winter'a przeprowadzono przy użyciu mysiej IgG2b a powyższe rezultaty ujawniły, że K320 oraz E318 w ludzkiej IgG1 nie są zaangażowane w wiązanie C1q, nie wiążąc się przy tym z żadną teorią, powyższe wyniki sugerują, iż region wiązania C1q w mysich IgG jest inny niż w ludzkich. Aby zbadać to bardziej, a również aby zidentyfikować dodatkowe warianty, które nie wiążą z C1q a zatem nie aktywują dopełniacza, skonstruowano kilka innych mutacji punktowych w sąsiedztwie K322, co oceniono na podstawie struktury trójwymiarowej Fc C2B8. Uzyskane warianty K274A, N276A, Y278A, S324A, P329A, P331A, K334A oraz T335A oceniano pod kątem ich zdolności do wiązania z C1q, a także aktywacji dopełniacza. Wiele z tych substytucji miało mały wpływ na wiązanie C1q lub aktywację dopełniacza, lub nie miało żadnego wpływu na takie wiązanie lub aktywację. W powyższych testach warianty P329A oraz P331A nie aktywowały dopełniacza i obniżały wiązanie C1q. Wariant P331A nie aktywował dopełniacza i wykazywał około 60-krotnie słabsze wiązanie z C1q (Figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2). Zakres stężenia wariantów przeciwciał użyty na Figurze 3 rozszerzono do 100 μg/ml w celu zaobserwowania wysycenia wiązania C1q z wariantem P331A. Mutacja P329A powoduje, że przeciwciało nie aktywuje dopełniacza i wykazuje ponad stukrotne obniżenie wiązania z C1q (figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2).
Warianty, które nie wiązały się z C1q a zatem nie aktywowały dopełniacza badano pod kątem ich zdolności do wiązania receptorów Fc: FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. To szczególne badanie przeprowadzono przy zastosowaniu przeciwciała humanizowanego anty-IgE, przeciwciała IgG1 z tymi mutacjami (zobacz przykład 1 powyżej). Wyniki ujawniły, że warianty K322A oraz P329A wiążą się ze wszystkimi receptorami Fc w tym samym stopniu co białko typu dzikiego (Tabela 4). Jednakże zauważono niewielkie obniżenie wiązania P331A z FcγRIIB.
PL 220 113 B1
Podsumowując, zidentyfikowano dwie substytucje aminokwasowe w końcowym regionie COOH domeny CH2 ludzkiej IgG1, K322A oraz P329A, które powodują ponad 100-krotne obniżenie wiązania z C1q, i które nie aktywują szlaku CDC. Te dwa warianty, K322A oraz P329A, wiążą się z wszystkimi receptorami Fc z takim samym powinowactwem jak przeciwciało typu dzikiego. Bazując na wynikach przedstawionych w Tabeli 4, i nie wiążąc się z żadną teorią, proponuje się, iż epicentrum wiązania C1q ludzkiej IgG1 jest umiejscowione wokół K322, P329 oraz P331 i jest inne niż epicentrum mysiej IgG2b, które składa się z E318, K320 oraz K322.
T a b e l a 4
wt E318A K320A K322A P329A P331A
CD20 100 89 102 86 112 103
a FcγRI 100 93 102 90 104 74
a FcγRIIA 100 113 94 109 111 86
a FcγRIIB 100 106 83 101 96 58
a FcγRIII 100 104 72 90 85 73
CDC 100 108 108 brak brak brak
a w przypadku wiązania z Fc-,'R warianty utworzono z wykorzystaniem tła E27 (anty-IgE).
Wyniki przedstawiono jako procent dzikiego typu.
Przy zastosowaniu sposobów opisanych w prezentowanym przykładzie zidentyfikowano pona dto inną resztę zaangażowaną w wiązanie z ludzkim C1q. Resztę D270 zastąpiono lizyną i waliną w celu wytworzenia odpowiednio wariantów D270K i D270V. Warianty wykazywały zarówno mniejsze wiązanie z ludzkim C1q (Figura 6), jak również były nielityczne (Figura 7). Oba te warianty wiązały się z antygenem CD20 normalnie i wywoływały ADCC.
P r z y k ł a d 3
Warianty o zwiększonym wiązaniu C1q
Następujące badanie pokazuje, że substytucja reszt w pozycjach K326, A327, E333 oraz K334 skutkowała powstaniem wariantów o zwiększonym o co najmniej 30% wiązaniu z C1q w porównaniu do przeciwciała typu dzikiego. Wskazane reszty K326, A327, E333 oraz K334 są potencjalnymi miejscami do poprawy skuteczności przeciwciał ze szlaku CDC. Celem tego badania była poprawa aktywności CDC przeciwciała przez wzrost wiązania z C1q. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną na reszty K326 oraz E333 skonstruowano kilka wariantów o zwiększonym wiązaniu z C1q. Reszty, w porządku zwiększonego wiązania w przypadku K326 to K<V<E<A<G<D<M<W, a reszty w porządku zwiększonego wiązania w przypadku E333 to E<Q<D<V<G<A<S. Skonstruowano cztery warianty K326M, K326D, K326D, K326E oraz E333S, które wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania C 1q w porównaniu do typu dzikiego. Wariant K326W wykazywał co najmniej pięciokrotny wzrost wiązania z C1q.
Warianty przeciwciała C2B8 typu dzikiego otrzymano jak opisano to w przykładzie 2. Kolejne przeciwciało kontrolne, C2B8 typu dzikiego wytworzone w komórkach jajnika chomika chińskiego (CHO) zasadniczo tak jak opisano w Patencie USA nr 5,736,134, zawarto w teście ELISA wiązania C1q w celu potwierdzenia czy wt CdB8 produkowane w linii komórek nerki 293 wykazują taką samą aktywność wiązania C1q jak przeciwciało wytwarzane w CHO (zobacz „CHO-wt-CDB8” na Figurze 8). Testy ELISA wiązania C1q, CDC oraz potencjału wiązania CD20 w tym przykładzie przeprowadzono tak jak opisano w przykładzie 2 powyżej.
Jak pokazano na Figurze 8 substytucja alaniny przy K326 i E333 w C2B8 skutkowała powstaniem wariantów, które wykazywały około 30% wzrost wiązania z C1q.
Skonstruowano kilka innych pojedynczych wariantów z mutacjami punktowymi przy K326 i E333, i przetestowano je pod kątem ich zdolności wiązania z C1q i aktywacji dopełniacza. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się z antygenem CD20.
W przypadku K326, inne wytworzone warianty z pojedynczymi mutacjami punktowymi to K326A, K326D, K326E, K326G, K326V, K326M oraz K326W. Jak pokazano to na Figurze 9 wszystkie te warianty wiązały się z C1q z lepszym powinowactwem niż przeciwciało typu dzikiego. K326W, K326M, K326D oraz K326E wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania z C1q (Tabela 5). Spośród wariantów K326, wariant K326W wykazywał najlepsze powinowactwo do C1q.
PL 220 113 B1
T a b e l a 5
Wariant wartość EC50
typ dziki 1,53
K326V 1,30
K326A 1,03
K326E 1,08
K326G 0,95
K326D 0,76
K326M 0,67
K326W 0,47
E333S 0,81
E333A 0,98
E333G 1,14
E333V 1,18
E333D 1,22
E333Q 1,52
K334A 1,07
Substytucje resztami hydrofobowymi, jak również resztami naładowanymi skutkują powstaniem wariantów o podwyższonym wiązaniu z C1q. Nawet substytucja glicyną, która jak wiadomo nadaje łańcuchowi elastyczności i jest dobrze konserwowana w naturze, skutkowała powstania wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do typu dzikiego. Wydawałoby się, że dowolna substytucja aminokwasowa w tym rejonie będzie powodowała powstanie wariantu o wyższym powinowactwie do C1q. Na podstawie struktury trójwymiarowej stwierdzono, że K326 oraz E333 znajdują się w sąsiedztwie miejsc wiązania C1q (Figura 10).
Oprócz alaniny E333 podstawiono także innymi resztami aminokwasowymi. Warianty te, E333S, E333G, E333V, E333D, i E333Q, wykazywały zwiększone wiązanie z C1q w porównaniu do typu dzikiego (Figura 11). Jak pokazano w Tabeli 5, porządek powinowactwa wiązania z C1q przedstawiał się następująco: E333S>E333A>E333G>E333V>E333D>E333Q. Substytucja resztami aminokwasowymi z łańcuchami bocznymi o małej objętości tj. seryną, alaniną i glicyną skutkuje powstaniem wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do innych wariantów, E333V, E333D oraz E333Q o łańcuchach bocznych o większej objętości. Wariant E333S wykazywał najwyższe powinowactwo do C1q, i wykazał dwukrotny wzrost w porównaniu do typu dzikiego. Bez związku z jakąkolwiek teorią pokazuje to, że wpływ na wiązanie C1 w pozycji 333 może być również wynikiem po części polarności reszty.
Wytworzono także warianty podwójne. Jak pokazano na Figurach 12 oraz 13 podwójne warianty K326M-E333S oraz K326A-E333A wykazywały około trzykrotnie lepsze wiązanie z ludzkim C1q niż C2B8 typu dzikiego (Figura 12) i co najmniej dwukrotnie lepsze pośredniczenie w CDC w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 13). Addytywność pokazuje, że są to warianty o niezależnej aktywności.
Jak pokazano na Figurze 14, skonstruowano inny wariant o poprawionym wiązaniu z C1q (50% wzrost) przez zamianę A327 w regionie stałym na glicynę. Odwrotnie, w regionie stałym ludzkiej IgG2, zamiana G327 na alaninę zmniejsza wiązanie z C1q przeciwciała IgG2.
P r z y k ł a d 4
Identyfikacja miejsc wiązania FcR ludzkich przeciwciał IgG
W prezentowanym badaniu oceniano wpływ mutacji różnych regionów reszt regionu Fc przeciwciała IgG1 pod względem wiązania z FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB oraz FcyRIIIA jak również FcRn. Zidentyfikowano warianty przeciwciał o zwiększonym, jak również o zmniejszonym wiązaniu FcR.
PL 220 113 B1
Materiały i metody
Konstrukcja wariantów IgG1: Rekombinowane E27 anty-IgE posiadające sekwencje łańcucna lekkiego oraz ciężkiego przedstawione na Figurach 4A oraz 4B odpowiednio użyto jako przeciwciało macierzyste w następujących eksperymentach. Przeciwciało to wiąże antygen IgE i posiada region Fc allotypu nie-A IgG1. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Kunkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) utworzono warianty regionu Fc łańcucha ciężkiego powyższego przeciwciała macierzystego. Plaizmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego ko-transfekowano do transformowanej adenowirusem ludzkiej zarodkowej linii komórki nerki jak to opisano wcześniej (Werther i inni, J. Immunol. 157: 4986 (1996)). Pożywkę zmieniono na wolną od surowicy 24 godziny po transfekacji, a wydzielone przeciwciało zebrano po pięciu dniach. Przeciwciała oczyszczono przy użyciu SEPHAROSE® z białkiem G (Pharmacia), bufor zmieniono i zatężono do 0,5 ml przy użyciu PBS stosując Centricon-30 (Amicon)i przechowywano w 4°C. Stężenie określono przez adsorpcję przy 280 nm przy użyciu współczynników ekstynkcji pochodzących z analizy składu aminokwasowego.
Analiza ELISA wiązania FcyRIA o wysokim stopniu powinnowactwa: FcyRIA ekspresjonowano jako fuzję GST ze znakowaną His6 zewnątrzkomórkową domeną w komórkach 293 i oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej Ni-NTA.
Aby oczyścić FcyRIA po trzech dniach usunięto supernatant znad transfekowanych komórek 293. Dodano inhibitory proteaz: 50 pl aprotyniny (Sigma)/ 50 ml supernatantu oraz PMSF (1 mM). Supernatanty zatężono do 10 ml w probówkach (Amicon) i dializowano przez noc w temperaturze 4°C w jednym litrze buforu kolumnowego (50 mM Tris, pH 8,0, 20 mM imidazol, 300 mM NaCl). Dodatkową dializę przeprowadzono następnego ranka wobec świeżego buforu kolumnowego przez 4 godziny w 4°C. Roztwór nałożono na 1 ml kolumny Ni++ (NTA super flow resin, Qiagen), zrównoważone wcześniej 10 ml buforu kolumnowego. Kolumny płukano 10 ml buforu kolumnowego a białko eluowano 2,5 ml buforu elucyjnego (50 mM Tris pH 8,0, 250 mM imidazol, 300 mM NaCl). Białko zastężono do 0,5 ml oraz wymieniono bufor na PBS. Stężenia określono za pomocą adsorpcji przy 280 nm stosując współczynniki ekstynkcji pochodzące z analizy składu aminokwasowego.
Oczyszczonymi receptorami pokryto płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439545) w ilości średnio 150 ng na studzienkę przez dodanie 100 pl receptora w 1,5 pg/ml PBS i inkubowano przez 24 godziny w 4°C. Przed testem płytki płukano trzykrotnie 250 pl buforu do płukania (buforowana 50 mM Tris sól fizjologiczna, zawierająca TWEEN 20TM, 0,5% albuminy wołowej klasy RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA, pH 7,4).
100 pl E27 dodano do pierwszych czterech studzienek płytek pokrytych podjednostką FcyRIA w stężeniu 10 pg/ml. 80 pl buforu do analizy dodano do następnych czterech studzienek a następnie 20 pl z 10 pg/ml IgG E27 tak, aby otrzymać końcowe stężenie 2 pg/ml. Płytki inkubowano w 25°C przez dwie godziny na wytrząsarce rotacyjnej.
Do detekcji płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG do GST FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl białka G (BIORAD) sprzężonego z peroksydazą HRP, w stosunku 1:5000. Koniugaty HRP inkubowano przez 1,5 godziny w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego koniugatu HRP. Wiązanie wykrywano przez dodanie 100 pl roztworu substratu (0,4 mg/ml dichlorowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma p6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubację przez 10 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 pl 4,5 N H2SO4 a produkt barwny mierzono w 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze (Molecular Devices).
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 2 pg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Test FcyRIA THP-1: 100 pl E27 dodano do pierwszych trzech studzienek płytki typu seracluster (Costar) w ilości 20 pg/ml w buforze do analizy (1X PBS, 0,1% BSA, 0,01% NaN3). 92,5 pl buforu do analizy dodano do następnych trzech studzienek a następnie po 7,5 pl z 20 pg/ml IgG E27, tak aby otrzymać końcowe stężenie 1,5 pg/ml. Do każdej studzienki dodano 100 pl komórek THP-1 w stężeniu 5 milionów komórek/ml w buforze do analizy FACS. Płytkę inkubowano na lodzie przez 30 minut.
Do detekcji komórki płukano dwukrotnie buforem do analizy w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG z FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl sprzężonego z FITC fragmentu F(ab)' koziej IgG specyficznej przeciwko ludzkiemu łańcuchowi ciężkiemi (Jackson Immunoresearch) w stosunku 1:200. Koniugaty FITC inkubowano z komórkami przez 30 minut na lodzie. Komórki płukano trzykrotnie buforem do analizy tak, aby usunąć niezwiązany koniugat FITC. Komórki wybarwiono P.I. (SIGMA) w stężeniu 2,5 pg/ml i analizowano przez cytometrię przepływową.
PL 220 113 B1
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 1,5 μg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Otrzymane wyniki z testów płytkowych (FcγRIA FLISA) oraz testów komórkowych (test FcγRIA THP-1) uśredniono, aby otrzymać aktywność wiązania FcγRIA.
Test ELISA wiązania FcγR o niskim stopniu powinowactwa: testy ELISA FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA przeprowadzono tak jak w przykładzie 1 powyżej, wraz z detekcją cząsteczek stabilnego heksameru (składającego się z trzech anty-IgG i trzech cząsteczek IgE).
Test ELISA wiązania FcRn: w celu zmierzenia aktywności wiązania FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml sterptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6, w 4°C przez noc i blokowano przy użyciu PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowany FcRn (wytworzany z użyciem z biotyno-X-NHS z Research Organics, Cleveland, OH i użyty w stężeniu 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbat 20, pH 7,2 dodano do płytki i inkubowano przez godzinę. Dwukrotne seryjne rozcieńczenia standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 dodano do płytki i inkubowano przez dwie godziny. Związaną IgG wykrywano przy użyciu znakowanego perdydazą koziego F(ab)' przeciwko F(ab)' ludzkiej IgG w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano między etapami postępowania przy użyciu PBS-0,05% TWEEN 20® w pH 7,2 lub 6,0. Absorbancję odczytano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywe miareczkowania dopasowano przy pomocy cztero-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji miareczkowania dla krzywej standardu i podzielono przez stężenie standardu odpowiadającego środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania dla standardu.
Analiza ADCC in vitro. W celu otrzymania znakowanych chromem komórek docelowych, linie komórek rakowych hodowano na płytkach do hodowli tkankowej i zbierano przy użyciu sterylnego 10 mM EDTA w PBS. Jako komórki docelowe we wszystkich testach zastosowano komórki SK-BR-3, ludzką linię komórkową raka sutka wykazującą nadekspresję 3+ HER2-. Komórki płukano dwukrotnie
51 pożywką do hodowli komórkowej. Komórki (5x10 ) znakowano 200 μ Ci chromu (New England Nuclear/Du Pont) w temp. 37°C przez jedną godzinę z mieszaniem co pewien czas. Znakowane komórki płukano trzykrotnie pożywką do hodowli komórkowej, a następnie zawieszono ponownie do stężenia 5
1x10 komórek/ml. Komórki stosowano bez opsonizacji lub opsonizowano je przed analizą przez inkubację z rhuMAb HER2 dzikiego typu (HERCEPTIN®) lub siedmioma mutantami Fc (G14, G18, G17, G36, G30, G31 oraz G34) w ilości 100 ng/ml i 1,25 ng/ml w analizie PBMC lub 20 ng/ml i 1 ng/ml w analizie NK.
Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej przygotowano przez zebranie krwi na heparynę od normalnych zdrowych dawców i rozcieńczono równą objętością buforowanej fosforanem soli fizjologicznej (PBS). Krew następnie rozwarstwiono na LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM® (LSM: Organon Teknika) i wirowano zgodnie z zaleceniami producenta. Komórki jednojądrzaste zebrano z powierzchni LSM-osocza i płukano trzykrotnie PBS. Komórki efektorowe zawieszano ponownie w pożywce hodowlanej do końcowego stężenia 1x107 komórek/ml.
Po oczyszczeniu przez LSM, z PBMC wyizolowano komórki naturalnych zabójców (NK) przez negatywną selekcję przy użyciu zestawu do izolacji komórek NK oraz kolumny magnetycznej (Miltenyi Biotech) zgodnie z instrukcjami producenta. Wyizolowane komórki NK zebrano, płukano i powtórnie zawieszono w pożywce hodowlanej do stężenia 2x106 komórek/ml. Identyfikację komórek NK potwierdzono przez analizę cytometrii przepływowej.
Przez dwukrotne seryjne rozcieńczanie komórek efektorowych (albo PBMC albo NK) wzdłuż rzędów płytki do mikromiareczkowania otrzymano różne stosunki komórek efektorowych i docelowych (100 μl objętości końcowej) w podłożu do hodowli. Stężenie komórek efektorowych wahało się od 1,0x107/ml do 2,0x104/ml dla PBMC i od 2,0x106/ml do 3,9x103/ml dla NK. Po miareczkowaniu komórek efektorowych do każdej studzienki płytki dodano 100 μl komórek docelowych znakowanych chromem (opsonizowanych lub nie) w ilości 1x105 komórek/ml. Dzięki temu wyjściowy stosunek komórek efektorowych: komórek docelowych wynosił 100:1 dla PBMC i 20:1 dla komórek NK. Wszystkie anal izy przeprowadzono w dwóch powtórzeniach, a każda płytka zawierała kontrole dla zarówno lizy spo ntanicznej (bez komórek efektorowych), jak i lizy całkowitej (komórki docelowe plus 100 μl 1% siarczanu dodecylu sodu, 1 N wodorotlenku sodu). Płytki inkubowano w 37°C przez 18 godzin a następnie
PL 220 113 B1 supernatanty hodowli komórkowej zebrano przy użyciu układu do zbierania supernatantów (Skatron Instrument, Inc.) i zliczano w liczniku Minaxi auto-gamma serii 5000 gamma (Packard) przez jedną minutę. Wyniki przedstawiono następnie jako procent cytotoksyczności przy użyciu wzoru:
% cytotoksyczności = (próbka cpm - spontaniczna liza)/ (całkowita liza - spontaniczna liza) x 100.
Następnie w celu analizy danych zastosowano czteroparametrowe dopasowanie do krzywych (KaleidaGraph 3.0.5).
Wyniki
Wytworzono różne warianty przeciwciał, które cechowały się inną aktywnością wiązania FcR niż przeciwciało macierzyste. Wyniki wiązania FcR dla różnych uzyskanych wariantów pokazano w Tabelach 6 i 7 poniżej. Dodatkowy wariant, T307Q, wykazywał także poprawione wiązanie FcR w poró wnaniu do przeciwciała macierzystego E27.
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH2
T2S6A(269) 1.91 (0.43) 6 1.14 (0.14) 4 1.41 (0.27) 2.06 (0.66) 1.32 (0.1S)
PL 220 113 B1
D312A{331) 1.50 (0,06) 4 1.01 ¢0.12)
(0.18)
PL 220 113 B1
L309A{328) 0.63 ¢0.18) 4 0.93 ¢0.18) 6 1.13 (0.08) 1.26 (0.12) 1.07 (0.20)
PL 220 113 B1
R301A{320) 0.86
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH3
10Γ0)
PL 220 113 B1
Β17 A378(401)Q 1.32 ¢0.13) 3 1.06 (0.05) 3 1.40 (0.17) 1,45 ¢0.17) 1.19 (0.17)
B36 Q419(450)A 0.76 (0.01) 2 0.97 (0.02) 3 0.68 (0.09) 0.63 (0.07) 0,86 (0.08)
PL 220 113 B1
Oprócz wariantów alaninowych otrzymano różne warianty z substytuc ją nic al ani nową, których aktywność wiązania FcR podsumowano w kolejnej tabeli.
(εθ'0) Ο6Ό ε (ΐΟΌ) 66Ό 86Ό tSżN zxa
PL 220 113 B1
WARIANTY NIEALANINOWE
>“* «Τ3 u 05 !l b. «
US 8
Ή K ii ηι II M II II. H H
C i
C
Οί
U
Uł
O w
(0
0>
cd
T3 m
Τ3
Ή
C
Ί3 <Ł>
>W
-P «3
Xł ro &
CM
O n
U i
B ϋ
II
id ! O ! z i Z ! td ' e? ! z CG > J O J O [ z J td ! o ί z ! a ! z i
1 ί -1·—' I *—« ; ί ł—» 1 <—· ( X—. J ł—i k • Χ-*. J W—k .
CM σι <*** CO 00 o ’-Μ r-ł r—ł . CM CM 00 i r- , en ;
MO MO r- [ r*- , 00 CD 03 CD 00 ! ao 00 I °° 00 00 ao
CM cm ί ™ ! CM CM CM J CM CM 01 CM CM CM ; cm ! ! cm cm : CM
- 1 j r 'Η-Χ 1 w ’ >-» ‘ >—· • * —' 1 *
CTi j ! ω ! in [ in 1 r- 00 00 <3\ σι j O ! θ ! ϊ cj ! TT * MO t
*7 1 l/> (£> <ao '4? MO (O <Ώ MO ! kO Γ ! 0* r- r~ : r~
CM J CM CM CM CM CM CM CM 04 ; cm · CM : cm CM CM CM CM
O | H ί Η I O [ Q [ ω 1 X tC □C J ω { td ; Q 1 Q ] Id i ω ί « ; Z [
CM | K£> 1 1 t -«j· 1 r- 1 OO J <J\ 1 1 co t σ> t i 1 1 1 co i i 1 ττ | 0- t m t
CM 1 r- ί *η I Łf) I »n i CO 1 Ti· lTi C ί Φ F kD Ł CM 1 PO 1 CM 1 CM 1 <£· 1 MO 1
CM 1 *“ł I CM 1 Ή 1 rH ! rH ί OD 00 00 i Ά 1 i—t ! σ» t σ\ F CM 1 CM | Ή | <—1 1
PL 220 113 B1
D280(295)N 1.26 (0.07) 1.38 (0.04) 1.13 (0.13)
CO j o 1 W 1 2 l O j O> [ CO ! o ! O ! w ! w ! 01 i o w t π J o I 7 1 a 1 °
·»»» ·
in J o ! o ! O i o ! CO ! Cl ! co i r- Γ* i r ! ί 1 ° ί <7» <n ! ; o 1 O
<n o ! o ί o ! o « o o ; o o o J ° r o O O O 1 ł—t
CM co ! 1 Cl i co J co [ co [ CO J CO ! i co ! <*> I co • co Γ0 co i i co i !2
i ł_. ·»—* ΊΜΤ *** 1 ·«* • ·—> l *“ *“*
o i co ! co ! co ! co ! K0 J \D ’ C£> ! o ! o ! o o o ! <N CM ! CM ! ! CO ! ™
00 i a> i <*> <*> co [ co ! co i 00 T CT> σ\ 431 <5*3 σ* σ»
CM J CM i CM 1 <M ! CM cm , CM CM , CM CM 1 CM CM CM CM
Q [ Id J id i ω 1 Id J Z [ 2 J z i & ! i ! * ! 1 02 1 oi i al l 02 i Id j ta
1 <Xł | V£> 4 ί Γ 1 1 i oa l 1 cft i 1 1 i r- i i CO 1 I 1 1 1 ί 1 1 1 Γ* 1 1 1 1 i i 1 1 «r 1 *A
1 CM 1 cm 1 CM 1 CM 1 ΓΟ 1 co i co i rO 1 ιΛ ł r* ί 00 1 r- 1 O 1 r-1 | CM I co 1 *r i **
rd | CM 1 CM t CM 1 CM 1 CM 1 CM I CM > i r- i r* I C~ I «-Μ i ao i 00 1 ao I 00 ł 4—ł 1 ΓΜ
147 E293(310)K 1.13 (0.04) 1.31 ¢0.17)
PL 220 113 B1
173 E294(311)Q 1,01 0.95
Q X s o B- 55 > -4 e- to to s o ω j to to o to z
ł *-% , »*»» 1 . ** *·«· 1 —·». *W *—- •—w 1
T“ł J n t0 r* ! f· J r* Γ* J r* CM CM r- to to to to { to t-d i rd - rd rd
w ! t-d r-d t-d . rd 1 Td . rd ‘ t-i CM CM ΓΟ <0 <0 m <0 ! 40 *9· 'O* M1 dr
<0 j <0 C0 «0 (0 ’ 10 f0 ] r0 <0 <0 m <0 <0 (0 <0 (0 <0 <0 <0 C0
·_- *—* * - 1 1 *—· ·—· J ---- ·—* «— - { *-* ··»* j -«e· J *— ***·
m· i ko KO ! 00 ! 00 J 00 <» to en C0 to Gł o O O CM CM CM CM
to σι to ; to to ! to to to o o rd CM CM CM CM CM CM CM CM CM
cm : CM cm CM CM 1 cm CM CM m : f0 <0 <0 m C0 <0 , i0 <0 <0 <0 <0
to } >d ! W [ ω j w J W [ to > [ > N to to to to i to to ’ to [ to to
i 10 ko i to ł to O 1 «—ł r- CM CM *3 Ł0 1 10 10 1 C£> 1 KO C-
r— i 00 00 1 O 1 ·-1 1 CM 1 rd 1 ł—4 10 1 »0 td r· O O O ( <0 Ł0 1 10 1 O O
*h i ed rd ] r~ i Γ~ 1 Γ* 1 CM 1 CM rd 1 H CM t-d CM CM CM 1 CM ed I I-d i CM CM
PL 220 113 B1
Z O 1 hi ω ł co 1 z 1 1 σ i | Cl 1 | ω 3 | w 1 | o t 1 Q 1 | h; (O z 1 | ω I ] hi 1 | σ i ] z CO 1 | z
1 1 ,Λ 1 1 i—. i—» 1 »—» 1
PO 1 po 3 PO co 1 MO ł uo 1 UD 1 Ifi 1 MO 1 | CD 3 CD CO o o o o 1 ] (N CN CN 1 I CN
T ! 1 'T *r ł T 1 ’Τ 1 M· Γ •*3· 1 *3· 1 I T <T =7 1 ςρ md MO MO MD I cn j in UD liD
cd 1 PO 1 n PO 1 co 1 co 1 CO 1 PO 1 1 PO l 1 PO PO r i PO PO co PO i I PO 1 | n ) CD 4 PO PO PO
1 5 1 1 —-' ·—' 1 —· k—* I — »-* 1 i *-' | •w· 1
f 1 ^r 1 CD ł MD 1 MD 3 MD 1 M> i Γ 1 r~ 1 I O 1 ( o «—1 1 I r-M 1 I r-t 1 1 CD 1 I PD PO | PO
(N 1 CN 1 CN CN 1 CN 1 <N 1 I CN 1 I CN 1 I CN 1 I <N 1 CN 1 1 ro J PO <0 PO 1 | co 1 CO > | PO t | PD PO | PO
CD i Π 1 PO co f co [ PO CO PO 1 CO 1 ro ΓΟ PO <o n PO PO 1 PO ł PO i PD CD i o
co i 1 σ) 1 1 CO (Z) t 1 hi 1 1 hi I 1 hi I 1 hi { 1 hi 1 ł i 1 < r < 1 a, cu 1 1 CU 1 CU 1 1 ω J 1 ω ω 1 1 w
o I I ^r ł l uo v£> 1 1 a? i 1 <51 1 1 o 1 1 rH 1 1 CN I 1 rH ł 1 od 1 1 KD 1 1 r~ co Ch 1 1 o 1 1 PO 1 1 w 1 1 CN PO ł ł CN
r—) i cH 1 t-M «—ł 1 o 1 o 1 ·—1 I r-· 1 H 1 CO 1 uo 1 ch 1 co 03 1 o 1 o 1 1 ςτ TT 1 u0
CN 1 CN 1 CN CN I CN 1 CN 1 C4 OJ 1 CN 1 r—4 1 c-< I r-M 1 «Ή r-C <—4 1 CN 1 CN 1 <-4 1 <—1 rH [ r-4
153 E333(352)R 0.75 (0.04) 0.66 (0.03) 0,84 (0.05)
PL 220 113 B1
154 E333(352)D
o j O ! * i ° 2 ω ! ω 1 Q Σ >< X > i Ο 1 * Η
1 . » 4 ·—- 1 1 r— 1 ι ' 1 *“* 1
<M J σ') ! ! £*) ! στ ! στ στ στ <*> στ [ στ ΧΓ
in lT5 ! 1 ifT στ m η σ> «η η
στ j σι 1 ! *** J σι j στ στ ; στ [ σι ! 1 στ [ m ! ! <2 !
1 1 •w
στ ! 1* μ* ! * •‘T* ; φ xr ! •σ : -σ ι *3* I ! η ! “> ! στ
σι ; en <*> σ> στ σι ϊ σι σι σι σι I <*>
στ ’ rn στ στ σ> ; στ ' σι <*Τ σι σι Ρ σι
u j ! * ! i * ! [ ! id 1 id [ id ! ί 5d J id 1 I J Η ι
1 co 1 στ l 1 LO 1 1 ł I 1 Γ- i CO ΐ 1 ι στ ι ι ο I i Ο ! r—< 1 <Μ | ί σι ι ο 1 I rd 1 1 rd ’τ 1 ι ιη ι ι σι
r* i i σ> i στ i n j στ i στ ι f στ f στ ι <η ι στ ι C\l 1 <Μ ί Γ~· στ ι στ I X
d 1 H 1 «-d i T-* J td i »—I 1 rd 1 rd { τ—ί ί rd 1 ¢-< ϊ rd | CM 1 <Μ 1 rd rd i xd 1 CM
Kolejna tabela przedstawia aktywność wiązania z FcR różnych wariantów łączonych.
PL 220 113 B1
WARIANTY ŁĄCZONE
247 S267(280)A 1.60 (0.18) 1.72 (0.13)
R255(268)A
PL 220 113 B1
OD ί ! ! γ- ί ! ! ή [
Ο I ι 1—1 ί ο ! ο ι i *-*
. * , «
ο } ο 1 ° ί ° ! ο 1 ° I ι 1 °
·*-* 1 1 1 ί 1 1 1 ***
5Γ ί ! r- ! 00 ί 04 ! σ\ ί 00 ί
ιΛ 10 ι 1 σ\ ί
♦ ϊ * ; *
< < < «ΐ << rt < <ε <
ο-w .»->. ζ—«. Ζ-». Z-* , a-*» χ-\ ζ«·
Ο Ul ο m ο ο Ο Α ιΠ φ
σο σι οο ; <30 <Μ ί GD Γ σι \ΰ
<\ι ηι 1 οι ; <μ m ; 04 ΟΙ CM 04
«·%»· *»* ~—' -w.» '•w·' -**
Γ* ο ! Γ** 04 ! Γ* C! ί Γ- 00 ο σ>
kO οο ί Γ* i ίΡ <Γ J ιο ιη 00 ιΛ
Οί 04 1 ™ οι : οι <ν : 04 Ο| Ο» 04
w ο i ω J σι ω ; (Λ ω Ο <£
οο ί ί ο I ι ι «-< I
φ ι »η I m ι to
ΟΙ 1 <Ν 1 ΟΙ ί 04
σ> ; i ί 04
! *-* ł Λ
—* [ r-ł 1
Ch r- o 1
* 1 ’
ο ί <h : o I °
·*«* * 1 ** j
ιΠ ! 1P ! r-1 !
tn t * ° i <*·
• . Ol J ·
CO j r-l r-1 i
*:*: ! 1 < < < j << < 1 } < <
#—s . . z**·. z*·*
tn in J *o tn tp [ tn co tn in
o to J O tO 04 J O Ol ! to o
-θ’ -5Ϊ- T* CO [ ; o
—* ·— ’ -RR* »R. ’ «—- '~-* ’ —· 'W-Z
o ! o *r o* ! o σι ! 00
00 ro co m o 1 oo o m co
co ; ro xr co : nn «r oi
ω τζ · Ul 2 H { 01 u } 2
1 σι i 1 O 1 r-ł i 1 Ol
t£> f θ' 1 r- 1 c-
04 1 Ol 1 Ol 1 OJ
PL 220 113 B1
Dyskusja
Badanie to obejmuje całkowite mapowanie ludzkiej IgG1 względem FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. Przedstawiono skanowanie alaniny dla wszystkich aminokwasów ludzkiego Fc IgG1 (CH2 i CH3 domen) eksponowanych na rozpuszczalnik, w oparciu o strukturę krystaliczną ludzkiego Fc (Deisenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). Każdy eksponowany aminokwas w CH2 oraz CH3 został indywidualnie zamieniony na alaninę, a wariant IgG testowano względem wszystkich 5 ludzkich receptorów; oceniano wszystkie warianty przy użyciu humanizowanej IgG1 anty-IgE, E27, jako polipeptydu macierzystego. FcγRI oraz FcRn to receptory o wysokim powinowactwie, a monomer IgG mógł być oceniany w tych analizach dla dwóch z tych dwóch receptorów. FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA to receptory o niskim powinowactwie i wymagają zastosowania kompleksu immunologiczn ego. Zatem w przypadku FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA zastosowano test ELISA, w którym wstępnie utworzone heksamery, złożone z trzech cząsteczek E27 anty-IgE oraz trzech cząsteczek IgE, związano do FcγR, i jako reagent do detekcji użyto anty-ludzkie Fc IgG-HRP, albo lub białko G-HRP. Aby zwiększyć wiązanie heksamery te można połączyć w multimery przez dodanie ludzkiego VEGF (używając IgE anty-VEGF). Heksamery wiążą się do FcγR o niskim powinowactwie znacząco lepiej niż monomery IgG, multimery wiążą lepiej niż heksamery (Figury 15A oraz 15B). Zastosowano kompleksy heksametryczne, ponieważ zapewniały one wystarczające wiązanie i wymagały mniej IgG. Innymi reagentami, które można zastosować są kompleksy wytworzone przy użyciu innych kombinacji przeciwciało:antygen pod warunkiem, że w przypadku przeciwciała antygen będzie zawierał dwa identyczne miejsca wiązania na cząsteczkę. Przykładowo, VEGF zawiera dwa miejsca wiązania na dimer VEGF dla anty-VEGF A.4.6.1 (Kim i inni. Growth Factors 7: 53 (1992) oraz Kim i inni. Nature 362: 841 (1993)). Multimery VEGF: anty-VEGF wiązały się także do FcγRIIA oraz FcγRIIIA o niskim powinowactwie (Figury 16A i 16B).
Po przeprowadzeniu kompletnego skanowania alaniny stwierdzono występowanie kilku klas wariantów alaninowych. Niektóre warianty wykazywały obniżone wiązanie z wszystkimi FcγR (G14, Figura 17), podczas gdy inne warianty wykazywały zredukowane wiązanie tylko z jednym FcγR (G36, Figura 17), poprawione wiązanie tylko z jednym FcγR (G15, G54, G55, Figura 17), albo równoczesną redukcję wiązania z jednym FcγR wraz z poprawą wiązania z innym (G16, Figura 17).
Pojedyncze warianty alaninowe łączono ponadto z pojedynczymi wariantami regionu Fc, np. połączenie S298(317)A z K334(353)A poprawiało wiązanie z FcγRIIIA bardziej niż sama S298(317)A lub K334(353)A (Figury 18A oraz B, porównaj warianty 36, 55 oraz 109 w Tabeli 6 i 9) (numery reszt w nawiasie są numerami według indeksu EU zgodnie z Kabat). Podobnie, przez połączenie S298(317)A z E333(352)A poprawiono wiązanie z FcγRIIIA w porównaniu do samej S298(317)A lub E333(352) (porównaj warianty 36, 53 i 107 w Tabelach 6 i 9).
Wyselekcjownowane warianty IgG testowano także pod kątem wiązania FcγR transfekowanych do komórek ssaczych. Zewnątrzkomórkową cześć łańcucha α ludzkiego FcγRIIIA transfekowano do komórek CHO przy użyciu łącznika GPI, podczas gdy pełnej długości ludzki receptor FcγRIIB transfekowano do komórek CHO. Dla testowanych wariantów wzorzec wiązania do komórek był taki sam jak wzorzec wiązania białko: białko w analizie ELISA (Figury 18A-B i 19A-B).
Jednym z zastosowań tych wariantów jest poprawa funkcji efektorowych ADCC przeciwciała. Można to osiągniąć przez modyfikację aminokwasów regionu Fc jednej czy większej ilości reszt, pr owadzącej do poprawy wiązania do FcγRIIIA. Poprawione wiązanie do FcγRIIIA doprowadziłoby do poprawy wiązania przez komórki NK, które mają tylko FcγRIIIA i mogą pośredniczyć w ADCC. Wyselekcjonowane warianty alaninowe, które miały albo zredukowane wiązanie z FcγRIIIA (warianty 17, 18, 34; Tabela 6), albo nie miały wpływu na wiązanie FcγRIIIA (odmiana 31, Tabela 6), albo które miały zwiększone wiązanie z FcγRIIIA (wariant 30, 36; Tabela 6) testowano w analizach in vitro przy użyciu ludzkich PBMC jako komórek efektorowych. Ze względu na to, że komórki docelowe były komórkami SKBR3 z nadekspresją HER2, to warianty Fc IgG użyte w tej analizie wytworzono przez substytucję domen VH/VL E27 anty-IgE odpowiednimi domenami z przeciwciała anty-HER2; HERCEPTIN® (ludzkie Ab4D5-8 w Tabeli 1 z Carter i inni, PNAS (USA) 89: 4285 (1992)). Wzorzec ADCC wykazywany przez warianty był skorelowany z wzorcami wiązania z FcγRIIIA (Figury 20 oraz 21). W szczególności wariant wykazujący większą poprawę wiązania z FcγRIIIA w analizach białko:białko, wariant 36S298(317)A, wykazywał również poprawę ADCC w porównaniu do dzikiego typu HERCEPTIN® w ilości 1,25 ng/ml (Figura 21).
PL 220 113 B1
P r z y k ł a d 5
Wiązanie wariantów Fc do polimorficznych receptorów Fc
W populacji ludzkiej stwierdzono występowanie wariantów allelicznych kilku ludzkich FcγR. Warianty te wykazywały różnice w wiązaniu ludzkiej oraz mysiej IgG, a wiele badań skorelowało wyniki z obecnością specyficznych wariantów alleicznych (dla przeglądu zobacz LehrnBecher i inni, Blood 94 (12): 4220-4232 (1999)). W kilku badaniach badano dwie postaci FcγRIIA, R131 oraz H131, oraz ich związek z wynikami klinicznymi (Hatta i inni. Genes and Immunity 1:53-60 (1999); Yap i inni Lupus 8:305-310 (1999); jak również Lorenz i inni European J. Immunogenetics 22:397-401 (1995)). Obecnie badane są dwie postaci alleliczne FcγRIIIA, F158 oraz V158 (Lehrebecher i inni, supra; i Wu i inni. J. Clin. Invest. 100 (5):1059-1070)). W przykładzie tym wyselekcjonowane warianty IgG testowano względem tych obu postaci allelicznych FcγRIIA i FcγRIIIA. Analizy wiązania receptora Fc przeprowadzono zasadniczo tak jak w powyższych przykładach. Jednakże dla FcγRIIIA-V158 przeprowadzono zarówno (a) test wiązania receptora o niskim powinowactwie z przykładu 1 (w którym analizowano wiązanie kompleksu IgG do FcγRIIIA-V158); oraz (b) test wiązania FcγR o wysokim stopniu powinowactwa z przykładu 4 (w którym analizowano wiązanie monomeru IgG do FcγRIIIA-V158). Wyniki badań podsumowano w tabeli 10 poniżej.
PL 220 113 B1
WIĄZANIE WARIANTÓW Z RECEPTORAMI POLIMORFICZNYMI FcyRIIA 1 FcyRUIA
177 K290(307)G 1.07 1 1.23 1 1.11 1 2.29
PL 220 113 B1
σ τ γ-1 Ο Γ~ CM Ο γο ’ I Ρ « r™ł , Ο | 1 rH ! Γ | Ο j CM στ ο ο τ—1 <Μ Ο co si s ! t 1— J '-i· J O [ CO W r~1 O o· in o CM CO O O ιΟ 03 O LD σι τΉ O Γ- ΟΟ o <—( t—1 O 1-ł 1 1 1 1 1 1 < J ł i i 1 l i—ł r- co o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 CM rH 00 O O o *f> o 1 1 l 1 i 1 1 1 1 1 1 1 1 M* r- r-ł O Γ- ΟΟ O
rt te ! Λ o ί z σ rt σ [ ł O 1 l rt 1 I ϋ
a-'· ·*—» 1 X—. 1 —» I
σ στ στ Ch [ στ o T^ł i—ł | i—ł | r— | r-
ο ο Ο o o r—1 r-t rM i rt | r-H | t-H
CO co [ C0 co co co CO co CO 1 co [ CO
—·
<~\Ι CM ! <Μ CM ! CM co | co co
στ σι στ στ στ στ στ σ σ | σ | στ
CM 04 CM CM CM CM CM CM CM | CM | (M
PŚ Οί { Cd o; j a. W ŁJ ω 1 ω 1 00 1 09
1 I 1 1 M* co 1 1 ΧΓ 1 1
c—1 Ο 1 CM 1 co 'O* CO r- ł r- 1 VO 1 O
co 03 | 00 CO 1 OÓ r-C co ł—ł 1 J—i 1 CO 1 r*
co j i r-l i CM j 2 i 1 CM J i rH j o ; 2 ! CO kO o o ! i ! 2 ! ! ° I 1 1 «σ' CM t-f o ! - i ;E; 1 2 ί 1 1 m ] 1 CD ! O 2 i «4· 00 o o ] -3* j isi :si o r—( CM r-ł O
<-ł ί □□ ! r-ł 1 M* ! CM 1 στ i uo ’ ΓΟ 1 | CM 1 | CM
rr J O f—4 1 1 r—1 r-ί 1 <—i ! r-ł 1“< i ł-1 1 OT
O J o j o 1 1 1-1 i H 1 1 r-1 j i-1 1 1 f—1 1 1 O
1 1 z, J > 1 1 I 1 .-3 ! rt 1 1 I rt i rt ! 1 ł rt 1 i rf
t- ! r— i Γ- 1 r- ! «3· 1 CO ! ! to 1 I στ | CM
1-4 r—ł 1 ·“* CM 1 CM ! ro co co I uo
CO ! co { CO 1 <*0 J CO CO j co j co 1 co | co
1 —
CO ! od ; 00 1 CO ! lD 1 r— : tn 5 r— 1 o 1 co
σ στ στ 1 στ O 1 o r~ł i «—, I CM co
CM CM (Μ 1 CM CO 1 co CO co I CO co
w i CO 00 1 1 co > 1 h ; S , te 1 te 1 Cd
1 1 l 1 co 1 1 1 σ i 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1-4 1 <M 1 r—ł 1 r—1 | o 1 r—i 1 iA 1 k£> 1 00 1 a1
Γ 1 r- i CM 1 CM 1 f vr i Μ· 1 rtT 1 ^r 1 iD
PL 220 113 B1
!
CM uO o o o r- o 1 1 1 1 l ! 1 1 i 1 I 1 1 1 CM o o co UO o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I 1 1 J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 I ł CM J 1 i O J o j O J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i—1 C' OD o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i 1 1 1 C- uo rd o ł~ł o r-1 I 1 ( I 1 ! 1 i 1 i 1 ! 1 i uo σ> o o UO f-1 1—1 1 l [ 1 1 Γ Γ 1 i 1 1 1 1 1 i rd ! W | S ! 1 CD f O rd ] Γ rd r-1 o c—I rd
o 1 1 2 1 1 co J 1 f « J es ! o 1 1 I u 1 1 < 1 | CXJ 1 l σ •z
,— —I —. r—'
CM 1 CM 1 CM t CM ! CM CM CM ' co | co CO 1 co
uo 1 uo uo uo uo uO JO JO JO UO UO
ro 1 co 1 co I CO ] CO j CO co CO co CO j co
1 1 *—'
<O 1 co 1 co 1 co ί CO ! CO 1 co ef 1 ’Τ
co 1 co i co co CO CO CO Γ0 CO J co CO
CO 1 CO co P0 co ; CO co co co CO CO
ω 1 1 Cd 1 1 Id ł 1 ω ; u ] ω 1 td ! y 1 i y
1 1 CM 1 1 co 1 i 1 CM ί 1 co 1 sr 1 1 co ł 1 1 JO i i VP i Γ'
τ}· 1 <r 1 «Τ 1 UO 1 uo i CO 1 r~ i UO 1 co 1 co i co
1 f—1 1 w 1 1—f I rd I t—4 1 t—i i UO 1 C—1 1 rd 1 i—i
CO i UO [ rd rd rd ί ! co [ rd
,__ f _ 1 _ 1 _ i 1 1 1 1 1
rd ! ! °o ! co ! rd f
«—1 ! 1 ° 1 o 1 1 t 1 1 <-d
O 1 ° 1 ° 1 O [ 1 { 1 1 O ‘
1 1 ’ i i 1 1 f 1 I Ά
I—1 ! ! kD i ko ! CD J ! cn ] co ! UO
o j r~ I 10 [ o i O j Φ I ° 1 0 ' o
1—· ! ° I ° ! o ! rd j rd j O ! i rd [ i—ł
ω ! ω ! α ! o j s | > J 3 > j dl
s 1
CO ! ! m ! CO ! co co co CO co ! co
uo “0 JO UO uo UO ‘O UO UO
co co co co CO i 00 i co j co
-r
rr 3 rr TT I * ! 3 TT
CO <Ό o co CO CO CO ^0 CO CO
CO CO CO CO CO ro CO CO CO CO
1 « 1 id J id ! id j id ! κ ί id J
00 1 i 1 I 1 O 1 1 co | 1 O 1 1 rd 1 CM 1 1 i CO 1 1 O 1 rd
co 1 co 1 i r- 1 CO 1 <n i co 1 co | CM 1 CM
i-d 1 «—1 1 rd ( rd | rd I rd | t—1 i rd | CM 1 CM
PL 220 113 B1
PL 220 113 B1
W przypadku FcyRIIIA wzorzec wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 z FcvRIIIA-V158 o stosunkowo wysokim powinowactwie był taki sam jak do FcyRIIIA-F158 o stosunkowo niższym powinowactwie (postać F158 stosowano w analizie wszystkich wariantów). Warianty IgG1, które wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIIA-F158 wykazywały także poprawione wiązanie z FcyRIIIA-V158, chociaż poprawa nie była tak wyraźna. W przypadku FcvRIIA-R131 (stosowanego do analizy wszystkich wariantów) oraz FcyRIIA-H131 wzór wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 nie wykazywał wyraźnych różnic. S267(280)A, H268(281)A oraz S267(280)A/H268(281)A wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131 w porównaniu do natywnej IgG1, ale nie z FcvRIIA-H131. Przeciwnie 3267(280)G wykazywał poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131, ale zmniejszone wiązanie z FcvRIIA-H131 (Tabela 10). Inne warianty wiązały się podobnie z następującymi postaciami allelic znymi FcyRIIA: V305(324)A, T307(326)A, N315(324)A, K317(336)A oraz K320(339)A.
PL 220 113 B1
Lista sekwencji <11C> Genenrech, IńC.
<12C> ariant tnacieizy siego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (Fc-R), polipeptyd zawierający- wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozy cja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposob otrzymywania w-anantu regionu Fc <130 P1726RIPCT <U1> 2000-01-14 <ise> us sd/iis,ca3 <153» 1399-01-15 iiia> ii <210> 1 <211» 213 <212» PRT
Setawnej»«tjctw <220» <221» <22 2> <22 3»
Se*w®(K}a sibcisi
1-213
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <400» 1
Aap l Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15
5 10
Gly Asp Arg Vsl Thr ile Thr Cys Arg Ala iSer Lys Pro V<X Aao
20 25 30
Gly Glu Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly
35 40 45
Lys Ala Pro L/S Leu Leu Ile Tys Ali Ala Ser Tyr Leu Gi5ł Ser
50 55 60
Gly vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Aap Phs
«3 70 35
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala the Tyr
80 35 90
Ty i Cys Gin Gin Ser 8ia Glu Ajp Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly
95 too 135
Thr Lys val 51« 11« Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Vai Phe
110 115 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Set
125 130 135
Val Val Cys L&U. Leu As Λ Α3Π Phe Tyr Pro Acg Ala Lyo Val
140 145 150
Gira Trp Lys Vai Asp Asn Al A Leu Gin Ser OŁy Ser Gin Glu
1.35 ISO 155
Ser Val Thr Glu Gin Asp Sar Lys Asp Ser Thr Tys Ser Leu Ser
170 1?5 180
Ster Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala As;» Tyr Lys His Ły’ Val
185 ISO 195
PL 220 113 B1
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 218 <210 2 <211> 451 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <n?n>
Sekwencja sztuczna <221>
<222> 1-451 <223>
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <40Q> 2
Glu Val Gin 1 Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gin Pro Gly 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr
20 25 30
Ser Gly Tyr Ser Trp Asn Trp Ile Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Lys Tyr Ser Gly Glu Thr Lys Tyr
50 55 60
Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
65 70 75
Lys Asn Thr Phe Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser His Tyr Phe Gly His
95 100 105
Trp His Phe Ala Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
110 115 120
Ser Ala ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
125 130 135
Ser Lys ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
140 145 150
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
155 160 165
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser
17 0 175 180
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
185 190 195
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn val Asn His Lys Pro
200 205 210
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Aso
215 220 225
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
230 235 240
PL 220 113 B1
Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 Phe Pro Pro lys 250 Pro Lys Asp Thr Leu 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin
305 310 315
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
320 325 330
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
335 340 345
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
350 355 360
Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
365 370 375
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin
380 335 390
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
395 400 405
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
410 415 420
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
425 430 4 35
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
440 445 450
Lys
451 <210 3 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 3
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
PL 220 113 B1
70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218 <210> 4 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 4
Pro 1 Ala Pro Glu Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu A3p Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
PL 220 113 B1
Leu Thr Cys Leu Val 140 Ly3 Gly Phe Tyr Pro 145 Ser Asp Ile Ala Val 150
Glu Trp Glu Ser Asn 155 Gly Gin Pro Glu Asn 160 Asn Tyr Lys Thr Thr 165
Pro Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Phe 175 Phe Leu Tyr Ser Lys 180
Leu Thr val Asp Lys 185 Ser Arg Trp Gin Gin 190 Gly Asn Val Phe Ser 195
Cys Ser Val Met His 200 Glu Ala Leu His Asn 205 His Tyr Thr Gin Lys 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 218 <210> 5 <211> 217 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 5
Pro 1 Ala Pro Pro Val 5 Ala Gly Pro Ser Val 10 Phe Leu Phe Pro Pro 15
Lys Pro Lys Asp Thr 20 Leu Met Ile Ser Arg 25 Thr Pro Glu Val Thr 30
Cys Val Val Val Asp 35 Val Ser His Glu Asp 40 Pro Glu Val Gin Phe 45
Asn Trp Tyr Val Asp 50 Gly Val Glu Val His 55 Asn Ala Lys Thr Lys 60
Pro Arg Glu GlU Gin 65 Phe Asn Ser Thr Phe 70 Arg Val Val Ser Val 75
Leu Thr Val Val His 80 Gin Asp Trp Leu Asn 85 Gly Lys Glu Tyr Lys 90
Cys .Lys Val Ser Asn 95 Lys Gly Leu Pro Ala 100 Pro Ile Glu Lys Thr 105
Ile Ser Lys Thr Lys 110 Gly Gin Pro Arg Glu 115 Pro Gin Val Tyr Thr 120
Leu Pro Pro Ser Arg 125 Glu Glu Met Thr Lys 130 Asn Gin Val Ser Leu 135
Thr Cys Leu Val Lys 140 Gly Phe Tyr Pro Ser 145 Asp Ile Ala Val Glu 150
Trp Glu Ser Asn Gly 155 Gin Pro Glu Asn Asn 160 Tyr Lys Thr Thr Pro 165
Pro Met Leu Asp Ser 170 Asp Gly Ser Phe Phe 175 Leu Tyr Ser Lys Leu 180
Thr Val Asp Ly3 Ser 185 Arg Trp Gin Gin Gly 190 Asn Val Phe Ser Cys 195
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Sec
PL 220 113 B1
200 205 210
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 217 <210> 6 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 6
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin
35 40 45
Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Ile Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218
<210> 7 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400 7
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 15 10 15
PL 220 113 B1
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 35 40 45
Ehe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr 50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Ly3 Val Ser Α3Π Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glx Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Α3Π Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
215 218 <210> 8 <211> 215
<212> PRT <213> Mus musculus
<400> 8 Thr Val 1 Pro Glu Val 5 Ser Ser Val Phe Ile 10 Phe Pro Pro Lys Pro 15
Lys Asp Val Leu Thr 20 Ile Thr Leu Thr Pro 25 Lys Val Thr Cys Val 30
Val Val Asp Ile Ser 35 Lys Asp Asp Pro Glu 40 Val Glu Phe Ser Trp 45
Phe Val Asp Asp Val 50 Glu Val His Thr Ala 55 Gin Thr Gin Pro Arg 60
Glu Glu Gin Phe Asn 65 ser Thr Phe Arg Ser 70 Val Ser Glu Leu Pro 75
Ile Met His Gin Asp Cys Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
PL 220 113 B1
85 90
Val Asn Ser A.La Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 95 100 105
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 110 115 120
Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 125 130 135
Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gin 140 145 150
Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Ly3 Asn Thr Gin Pro Ile
155 160 165
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
170 175 180
Gin Lys Ser Α3Π Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
185 190 195
Leu His Glu Gly Leu His Asn Hi3 His Thr Glu Ly3 Ser Leu Ser
200 205 210
His Ser Pro Gly Lys
215 <210> 9 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9
Pro 1 Ala Pro Asn Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Ser Pro Ile Val 30
Thr Cy3 Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Giu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Leu Arg Val Val Ser 75
Ala Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ala Pro Ile Glu Arg 105
Thr He Ser Lys Pro 110 Lys Gly Ser Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Val Leu Pro Pro Pro 125 Glu Glu Glu Met Thr 130 Lys Lys Gin Val Thr 135
Leu Thr Cys Met Val 140 Thr Asp Phe Met Pro 145 Glu Asp Ile Tyr Val 150
PL 220 113 B1
Glu Trp Thr Asn Asn 155 Gly Lys Thr Glu Leu 160 Asn Tyr Lys A3n Thr 165
Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp dy Ser Tyr Phe Mec Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
200 205 210
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
215 218
<210> 10 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculu9
<400> 10 Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
1 5
Pro Asn Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Thr Pro Lys Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe Val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Glu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Ile Arg Val Val Ser 75
His Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn J 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ser Pro Ile Glu Arg 105
Thr Ile Ser Lys Pro 110 Lys Gly Leu Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Thr Leu Pro Pro Pro 125 Ala Glu Gin Leu Ser 130 Arg Lys Asp Val Ser 135
Leu Thr Cys Leu Val 140 Val Gly Phe Asn Pro 145 Gly Asp Ile Ser Val 150
Glu Trp Thr Ser Asn 155 Gly His Thr Glu Glu 160 Asn Tyr Lys Asp Thr 165
Ala Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Tyr 175 Phe Ile Tyr Ser Lys 180
Leu Asn Met Lys Thr 185 Ser Lys Trp Glu Ly3 190 Thr Asp Ser Phe Ser 195
Cys Thr Asn Val Arg His 200 Ile Ser Arg Ser Glu Pro Gly Leu Lys Asn ' 205 Gly Lys Tyr Tyr Leu Lys Lys 210
PL 220 113 B1
215 218 <210> 11 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400 11
Pro Pro Gly i ' Asn Ile 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His
35 40 45
Val Ser Trp Phe Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr
50 55 60
Gin Pro Arg Glu Ala Gin Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Ala Leu Pro Ile Gin His Gin Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe
80 85 90
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg Ala Gin Thr Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gin Met Ser Lys Lys Lys Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser Glu Ala Ile Ser Val
140 145 150
Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gin Asp Tyr Lys Asn Thr
155 160 165
Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gin Gly Glu Ile Phe Thr
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gin Lys
200 205 210
Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys
215 218

Claims (44)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc ludzkiej IgG1 który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych od około 1,5-raza do około 100-razy skuteczniej, lub wiąże receptor FcyRIII z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239,
    248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285,
    286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327,
    329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437,
    438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  2. 2. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje przeciwciało.
  3. 3. Wariant według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
  4. 4. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 3, znamienny tym, że wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  5. 5. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 4, znamienny tym, że ponadto wiąże FcyRII z niższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  6. 6. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 5, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w domenie CH2 regionu Fc.
  7. 7. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 6, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
  8. 8. Wariant według według jednego z zastrz. 1 do 7, znamienny tym, że zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  9. 9. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  10. 10. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  11. 11. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256,
    258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294,
    295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335,
    337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  12. 12. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 298, 301, 303, 322, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  13. 13. Polipeptyd według zastrz. 11 albo 12, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI.
  14. 14. Polipeptyd według zastrz. 13, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  15. 15. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 14, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  16. 16. Polipeptyd według zastrz. 15, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
    PL 220 113 B1
  17. 17. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 16, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie z FcyRIII.
  18. 18. Polipeptyd według zastrz. 17, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  19. 19. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  20. 20. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRIII.
  21. 21. Polipeptyd według zastrz. 20, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  22. 22. Polipeptyd według zastrz. 21, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  23. 23. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII.
  24. 24. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 267, 268, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  25. 25. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII.
  26. 26. Polipeptyd według zastrz. 25, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  27. 27. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania ludzkiego noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 307, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  28. 28. Polipeptyd według zastrz. 27, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn.
  29. 29. Polipeptyd według zastrz. 28, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 252, 253, 254, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  30. 30. Polipeptyd według zastrz, 27, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcRn.
  31. 31. Polipeptyd według zastrz. 30, znamienny tym, że wykazuje zwiększone FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 256, 265, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  32. 32. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera wariant polipeptydu określony w zastrz. 1 i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
  33. 33. Kompozycja według zastrz. 32, znamienna tym, że jest sterylna.
  34. 34. Wyizolowany kwas nukleinowy, znamienny tym, że koduje wariant polipeptydu określony w zastrz. 1.
  35. 35. Wektor, znamienny tym, że zawiera kwas nukleinowy określony w zastrz. 34.
  36. 36. Komórka gospodarza, znamienna tym, że zawiera wektor określony w zastrz. 35.
    PL 220 113 B1
  37. 37. Sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, znamienny tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną w zastrz. 36 tak, że uzyskuje się ekspresję tego kwasu nukleinowego.
  38. 38. Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
  39. 39. Zastosowanie wariantu polipeptydu określonego w zastrz. 1 do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
  40. 40. Sposób otrzymywania wariantu regionu Fc IgG1 o zwiększonym powinowactwie wiązania receptora FcyRIII lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w porównaniu z macierzystym polipeptydem, znamienny tym, że obejmuje etapy, w których:
    a) wprowadza się dwie lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
    b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcyRIII lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
  41. 41. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określenie wiązania wariantu regionu Fc z FcyRIII in vitro.
  42. 42. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcyRIII lub o zwiększonej aktywności ADCC.
  43. 43. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
  44. 44. Sposób według zastrz. 43, znamienny tym, że obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
PL394232A 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc PL220113B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11602399P 1999-01-15 1999-01-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL394232A1 PL394232A1 (pl) 2011-07-04
PL220113B1 true PL220113B1 (pl) 2015-08-31

Family

ID=22364785

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
PL394232A PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna

Country Status (17)

Country Link
US (4) US7371826B2 (pl)
EP (4) EP2366713A3 (pl)
JP (4) JP2003512019A (pl)
KR (5) KR100940380B1 (pl)
CN (2) CN1763097B (pl)
AU (2) AU778683B2 (pl)
BR (1) BR0008758A (pl)
CA (1) CA2359067C (pl)
ES (1) ES2694002T3 (pl)
HK (1) HK1090066A1 (pl)
HU (2) HU230769B1 (pl)
IL (5) IL144056A0 (pl)
MX (2) MX353234B (pl)
NZ (1) NZ539776A (pl)
PL (3) PL209392B1 (pl)
WO (1) WO2000042072A2 (pl)
ZA (1) ZA200105484B (pl)

Families Citing this family (1670)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
NZ514914A (en) 1999-05-07 2004-09-24 Genentech Inc Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to B cell surface markers
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
JP4524074B2 (ja) * 2001-03-09 2010-08-11 アーナソン， バリー ジー． 低親和性Ｆｃγレセプターを標的化する重合体の免疫グロブリン融合タンパク質
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
AU2002337935B2 (en) * 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7351803B2 (en) 2002-05-30 2008-04-01 Macrogenics, Inc. CD16A binding proteins and use for the treatment of immune disorders
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
EP1534335B9 (en) 2002-08-14 2016-01-13 Macrogenics, Inc. Fcgammariib-specific antibodies and methods of use thereof
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
BRPI0314814C1 (pt) * 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
SG2013036975A (en) 2002-12-16 2016-07-28 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
AU2011265460B2 (en) * 2003-01-09 2014-07-17 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2368578A1 (en) * 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2272533A1 (en) 2003-01-13 2011-01-12 MacroGenics, Inc. Soluble FcyR fusion proteins and methods of use thereof
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
UA91961C2 (ru) 2003-04-09 2010-09-27 Дженентек, Инк. Лечение аутоимунных заболеваний у пациента с неадекватным ответом на ингибитор tnf-альфа
JP4685764B2 (ja) * 2003-04-10 2011-05-18 アボット バイオセラピューティクス コーポレイション 変異誘発による抗体のＦｃＲｎ結合親和力又は血清半減期の改変
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
KR100973564B1 (ko) * 2003-05-02 2010-08-03 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
WO2005000351A2 (en) 2003-06-05 2005-01-06 Genentech, Inc. Combination therapy for b cell disorders
KR101299599B1 (ko) 2003-07-24 2013-08-23 위니베르시따 데글리 스뚜디 디 뻬루지아 Ｎｋ 세포 강화 화합물을 사용하여 치료용 항체의 효율을 높이는 방법 및 조성물
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2536408A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US20070148170A1 (en) * 2005-10-03 2007-06-28 Desjarlais John R Fc Variants With Optimized Fc Receptor Binding Properties
EP1673395A1 (en) 2003-10-15 2006-06-28 PDL BioPharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
GB0324368D0 (en) * 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
NZ588860A (en) 2003-11-05 2012-03-30 Roche Glycart Ag CD20 antibodies with increased Fc receptor binding affinity and effector function
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
EP1697415A1 (en) 2003-11-12 2006-09-06 Biogen Idec MA Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
EP1684790A4 (en) * 2003-11-18 2008-04-30 Iconic Therapeutics Inc HOMOGENEOUS PREPARATIONS OF CHIMERIC PROTEINS
EP2221315A1 (en) 2003-12-04 2010-08-25 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
AU2004298492B2 (en) 2003-12-10 2011-08-18 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. IP-10 antibodies and their uses
PT1711207E (pt) 2003-12-10 2013-02-13 Medarex Inc Anticorpos alfa interferão e seus usos
CA2552788C (en) 2004-01-12 2013-09-24 Applied Molecular Evolution, Inc. Fc region variants
EP3653641A1 (en) 2004-02-19 2020-05-20 Genentech, Inc. Cdr-repaired antibodies
ES2403055T3 (es) * 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
JP2007536932A (ja) 2004-05-10 2007-12-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ヒト化ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法
KR100545720B1 (ko) * 2004-05-31 2006-01-24 메덱스젠 주식회사 당화된 면역글로불린 및 이를 포함하는 면역접합체
EP3130349A1 (en) 2004-06-04 2017-02-15 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
CA2570823C (en) 2004-06-21 2015-02-24 Medarex, Inc. Interferon alpha receptor 1 antibodies and their uses
CN101189028B (zh) * 2004-07-12 2013-05-29 马克罗基因公司 具有变异Fc区的抗体的鉴定和工程化以及使用方法
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
CN101987870B (zh) * 2004-07-15 2013-07-03 赞科股份有限公司 优化的Fc变体
CZ200755A3 (cs) 2004-07-26 2007-04-11 Biogen Idec Ma Inc. Peptidy protilátek anti-CD154
EP2213683B1 (en) 2004-08-04 2013-06-05 Mentrik Biotech, LLC Variant Fc regions
AU2005277641A1 (en) 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Llc Eph receptor Fc variants with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
RU2367667C2 (ru) * 2004-08-19 2009-09-20 Дженентек, Инк. Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией
EP1812060A2 (en) 2004-10-05 2007-08-01 Genentech, Inc. Method for treating vasculitis
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2007024249A2 (en) * 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CA2587617C (en) 2004-11-12 2011-02-01 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
EA200701211A1 (ru) * 2004-12-31 2007-12-28 Дженентек, Инк. Полипептиды, которые связываются с br3, и их применение
MX2007008768A (es) 2005-01-21 2007-10-19 Genentech Inc Dosificacion fija de anticuerpos her.
US8029783B2 (en) * 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
KR101289537B1 (ko) 2005-02-15 2013-07-31 듀크 유니버시티 항-ｃｄ19 항체 및 종양학에서 이의 용도
US8444973B2 (en) 2005-02-15 2013-05-21 Duke University Anti-CD19 antibodies and uses in B cell disorders
RU2404806C2 (ru) 2005-02-23 2010-11-27 Дженентек, Инк. Продление времени до прогрессирования заболевания или продолжительности жизни у онкологических больных с применением ингибиторов димеризации her
CA2602375C (en) 2005-03-23 2018-07-24 Genmab A/S Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma
US20110123440A1 (en) * 2005-03-29 2011-05-26 Genevieve Hansen Altered Antibody FC Regions and Uses Thereof
EP1871808A2 (en) * 2005-03-31 2008-01-02 Xencor, Inc. Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES
US11254748B2 (en) 2005-04-15 2022-02-22 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
EP1868650B1 (en) 2005-04-15 2018-10-03 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
JO3058B1 (ar) 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
CA2607281C (en) 2005-05-05 2023-10-03 Duke University Anti-cd19 antibody therapy for autoimmune disease
CA3151350A1 (en) 2005-05-09 2006-11-16 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
KR20080046135A (ko) 2005-05-20 2008-05-26 제넨테크, 인크. 자가면역 질환 대상체로부터의 생물학적 샘플의 예비처리
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
SI1896073T1 (sl) 2005-06-30 2013-06-28 Janssen Biotech, Inc. Protitelesa proti il-23, sestavki, prostopki in uporabe
EA019344B1 (ru) 2005-07-01 2014-03-31 МЕДАРЕКС, Эл.Эл.Си. Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения
ES2530265T3 (es) * 2005-07-21 2015-02-27 Genmab A/S Ensayos de potencia de unión de una sustancia medicamentosa de anticuerpo a un receptor FC
EP1919505A2 (en) 2005-07-25 2008-05-14 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Single dose use of cd20-specific binding molecules
KR101251157B1 (ko) 2005-07-25 2013-04-10 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 Ｃｄ37-특이적 결합 분자 및 ｃｄ20-특이적 결합 분자를사용한 ｂ-세포 감소
HUE029465T2 (en) 2005-08-10 2017-02-28 Macrogenics Inc Identification and preparation of antibodies with variant fc regions and methods for their use
RU2482132C2 (ru) 2005-08-26 2013-05-20 Роше Гликарт Аг Модифицированные антигенсвязывающие молекулы с измененной клеточной сигнальной активностью
US7973136B2 (en) 2005-10-06 2011-07-05 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
KR20080049113A (ko) 2005-10-21 2008-06-03 노파르티스 아게 Ｉｌ-13에 대항한 인간 항체 및 치료적 용도
WO2007056227A2 (en) 2005-11-04 2007-05-18 Genentech, Inc. Use of complement pathway inhibitors to treat ocular diseases
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
CA2627981A1 (en) 2005-11-07 2007-05-18 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
ES2618543T3 (es) 2005-11-23 2017-06-21 Genentech, Inc. Métodos y composiciones relacionados con ensayos de linfocitos B
RU2426742C2 (ru) 2005-12-02 2011-08-20 Дженентек, Инк. Составы и способы лечения заболеваний и нарушений, связанных с передачей сигналов цитокинами
ES2388932T3 (es) 2005-12-02 2012-10-19 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión y usos de los mismos
ES2390476T3 (es) 2005-12-08 2012-11-13 Medarex, Inc. Anticuerpos monoclonales frente a fucosil-GM1 y procedimientos de uso de anti-fucosil-GM1
EP1969010A4 (en) 2005-12-20 2009-07-22 Peptech Ltd ANTIBODY TO ANOTHER ANTI-INFLAMMATORY DOMAIN
MY162559A (en) 2005-12-29 2017-06-15 Centocor Inc Human anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
CA2638785C (en) 2006-01-05 2017-02-21 Genentech, Inc. Anti-ephb4 antibodies and methods using same
JP5368110B2 (ja) 2006-01-20 2013-12-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗エフリンｂ２抗体とその使用方法
BRPI0707425A2 (pt) 2006-02-01 2011-05-03 Arana Therapeutics Ltd construção de anticorpo de domìnio, molécula isolada de ácido nucleico, composição farmacêutica, e, métodos para detectar tnf-alfa humano em uma amostra, e para tratar um distúrbio
EP2540741A1 (en) 2006-03-06 2013-01-02 Aeres Biomedical Limited Humanized anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
KR101454491B1 (ko) 2006-03-21 2014-10-29 제넨테크, 인크. 알파5베타1 길항제를 포함하는 조합 치료법
EP3345616A1 (en) 2006-03-31 2018-07-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
JP5624276B2 (ja) 2006-03-31 2014-11-12 中外製薬株式会社 抗体の血中動態を制御する方法
WO2007119796A1 (ja) 2006-04-14 2007-10-25 Medical And Biological Laboratories Co., Ltd. エフェクター機能を有するポリペプチド変異体
RS54163B1 (en) 2006-05-30 2015-12-31 Genentech Inc. ANTI-CD22 ANTIBODIES, THEIR IMMUNCONJUGATES AND THEIR USE
SG175615A1 (en) 2006-06-06 2011-11-28 Genentech Inc Anti-dll4 antibodies and methods using same
RU2487888C2 (ru) 2006-06-12 2013-07-20 ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЭлЭлСи Одноцепочечные мультивалентные связывающие белки с эффекторной функцией
PT2029173T (pt) 2006-06-26 2016-11-02 Macrogenics Inc Anticorpos específicos fc rib e seus métodos de uso
CA2656224C (en) 2006-06-26 2018-01-09 Macrogenics, Inc. Combination of fc.gamma.riib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
EP2468770B1 (en) 2006-07-14 2017-12-20 AC Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta.
JP2009543579A (ja) 2006-07-19 2009-12-10 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア 抗炎症反応のための標的としてのＷＳＸ−１／ｐ２８
RS53263B (en) 2006-08-14 2014-08-29 Xencor Inc. CD19 OPTIMIZED ANTIBODY
EP2074144A4 (en) 2006-09-05 2011-03-16 Medarex Inc ANTIBODIES TO BONE MORPHOGENIC PROTEINS AND RECEPTORS THEREFOR AND METHOD FOR THEIR USE
MX2009002414A (es) 2006-09-08 2009-05-20 Medimmune Llc Anticuerpos anti-cd19 humanizados y su uso en el tratamiento de oncologia, transplante y enfermedad autoinmunitaria.
EP2845912A1 (en) 2006-09-12 2015-03-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for the diagnosis and treatment of lung cancer using KIT gene as genetic marker
US20100297103A1 (en) 2006-09-14 2010-11-25 Medical & Biological Laboratories Co., Ltd. Antibody having enhanced adcc activity and method for production thereof
US8394374B2 (en) 2006-09-18 2013-03-12 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target HM1.24
HUE033630T2 (en) 2006-10-02 2017-12-28 Squibb & Sons Llc CXCR4 binding human antibodies and their use
AR063257A1 (es) * 2006-10-12 2009-01-14 Genentech Inc Anticuerpos anti-linfotoxina alfa
JP2010506842A (ja) * 2006-10-16 2010-03-04 メディミューン，エルエルシー 半減期が短縮された分子、その組成物および使用
CA2666682C (en) 2006-10-19 2014-07-08 Merck & Co., Inc. Anti-il-13r.alpha.1 antibodies and their uses thereof
ES2501947T3 (es) 2006-10-19 2014-10-02 Csl Limited Antagonistas de anticuerpos de alta afinidad del receptor alfa 1 de interleucina
DK2845866T3 (en) 2006-10-27 2017-07-10 Genentech Inc Antibodies and immunoconjugates and their applications
US8618248B2 (en) 2006-10-31 2013-12-31 President And Fellows Of Harvard College Phosphopeptide compositions and anti-phosphopeptide antibody compositions and methods of detecting phosphorylated peptides
DK2097455T3 (en) 2006-11-02 2014-12-15 Genentech Inc HUMANIZED ANTI-FACTOR D ANTIBODIES
US8247537B2 (en) 2006-11-15 2012-08-21 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to BTLA and methods of use
WO2008067547A2 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Research Development Foundation Improved immunoglobulin libraries
CN101626782B (zh) 2006-12-01 2013-03-27 梅达雷克斯公司 结合cd22的人抗体及其用途
US20080127996A1 (en) * 2006-12-04 2008-06-05 Weinhold Dennis G Method and apparatus to remediate an acid and/or liquid spill
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
JP2010513306A (ja) 2006-12-14 2010-04-30 メダレックス インコーポレーティッド Ｃｄ７０に結合するヒト抗体およびその使用
SG176448A1 (en) 2006-12-19 2011-12-29 Genentech Inc Vegf-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors
WO2009077483A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Novo Nordisk A/S Antibodies against human nkg2d and uses thereof
JPWO2008090960A1 (ja) 2007-01-24 2010-05-20 協和発酵キリン株式会社 ガングリオシドｇｍ２に特異的に結合する遺伝子組換え抗体組成物
EP2119780B1 (en) 2007-01-24 2015-03-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition having enhanced effector activity
EP2468776A3 (en) 2007-02-09 2012-11-14 Genentech, Inc. Anti-Robo4 antibodies and uses therefor
CN101680897B (zh) 2007-03-02 2013-11-13 健泰科生物技术公司 基于低her3表达预测对her二聚化抑制剂的响应
EP3199180B1 (en) 2007-03-08 2022-01-05 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of solid tumors
ES2713859T3 (es) 2007-03-22 2019-05-24 Biogen Ma Inc Proteínas de unión, incluyendo anticuerpos, derivados de anticuerpo y fragmentos de anticuerpo, que se unen específicamente a CD154 y usos de los mismos
WO2008118324A2 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Macrogenics, Inc. Composition and method of treating cancer with an anti-uroplakin ib antibody
TWI570135B (zh) 2007-04-27 2017-02-11 建南德克公司 高效、穩定且非免疫抑制之抗－ｃｄ４抗體
US8629245B2 (en) * 2007-05-01 2014-01-14 Research Development Foundation Immunoglobulin Fc libraries
JP5575636B2 (ja) 2007-05-07 2014-08-20 メディミューン，エルエルシー 抗ｉｃｏｓ抗体ならびに、腫瘍、移植および自己免疫疾患の治療におけるその使用
WO2008141197A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Sea Lane Biotechnologies, Llc Chain reaction creating oligomers from repeat units of binding molecules
PT2173381E (pt) 2007-05-14 2013-12-13 Novimmune Sa Polipéptidos que se ligam ao receptor fc, com funções efectivadoras modificadas
EP2176298B1 (en) 2007-05-30 2017-11-15 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting cd32b expressing cells
CA2688275A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-04 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
EP2592156B1 (en) 2007-06-08 2016-04-20 Genentech, Inc. Gene expression markers of tumor resistance to HER2 inhibitor treatment
WO2008156622A1 (en) * 2007-06-12 2008-12-24 Ac Immune S.A. Humanized antibodies to amyloid beta
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
EP3424951A1 (en) 2007-06-21 2019-01-09 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US20100254992A1 (en) * 2007-06-29 2010-10-07 Anuk Das Anti-mcp-1 antibodies, compositions, methods and uses
JP5687057B2 (ja) 2007-07-09 2015-03-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド ポリペプチドの組換え生産中におけるジスルフィド結合還元の防止
EP2078091A4 (en) * 2007-07-10 2010-09-01 Medimmune Llc CRYSTALS AND STRUCTURE OF THE VARIANT OF IGG FC HUMAN
CL2008002085A1 (es) 2007-07-16 2008-11-21 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti-cd79b/igbeta/b29; polinucleotido codificacnte, vector, celula huesped; metodo de fabricacion; inmunoconjugado; composicion farmaceutica; uso para tratar cancer; metodo in vitro para determinar presencia de cd79b, oinhibir crecimiento de celulas quqe expresa cd79b; ensayo in vitro para detectar celulas b
TW200918089A (en) 2007-07-16 2009-05-01 Genentech Inc Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP2069401A4 (en) 2007-07-31 2011-02-23 Medimmune Llc MULTISPECIENT EPITOP BINDING PROTEINS AND THEIR USE
LT2769729T (lt) 2007-09-04 2019-05-10 Compugen Ltd. Polipeptidai ir polinukleotidai ir jų panaudojimas kaip vaistų taikinio vaistų ir biologinių preparatų gamybai
US9096651B2 (en) 2007-09-26 2015-08-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
ES2687808T3 (es) 2007-09-26 2018-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Región constante de anticuerpo modificado
EP2586795B1 (en) 2007-10-05 2018-05-16 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
BRPI0818623A2 (pt) * 2007-10-05 2017-05-23 Ac Immune Sa composição farmacêutica, e, métodos para reduzir a carga da placa na camada de célula de gânglio retinal de um animal, para reduzir a quantidade de placas na camada de célula de gânglio retinal de um animal, para diminuir a quantidade total de amilóide-beta solúvel na camada de célula de gânglio retinal de um animal, para prevenir, tratar e/ou aliviar os efeitos de uma doença ocular associada com anormalidades patológicas/mudanças no tecido do sistema visual, para monitorar doença ocular residual mínima associada com anormalidades patológicas/mudanças nos tecidos do sistema visual, para predizer responsividade de um paciente, e para reter ou diminuir a pressão ocular nos olhos de um animal
AR068767A1 (es) 2007-10-12 2009-12-02 Novartis Ag Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina
CA2701329C (en) 2007-10-16 2017-08-22 Zymogenetics, Inc. Combination of blys inhibition and anti-cd 20 agents for treatment of autoimmune disease
US20120047586A9 (en) 2007-10-24 2012-02-23 Otsuka Chemical Co., Ltd Polypeptide having enhanced effector function
EA201000718A1 (ru) 2007-11-02 2011-06-30 Новартис Аг Молекулы и способы, предназначенные для модуляции родственного рецептору липопротеидов низкой плотности белка 6 (lrp6)
US20090202475A1 (en) 2007-11-07 2009-08-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
AR069501A1 (es) 2007-11-30 2010-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti- vegf (factor de crecimiento endotelial vascular)
WO2009117030A2 (en) 2007-12-19 2009-09-24 Macrogenics, Inc. Improved compositions for the prevention and treatment of smallpox
CN104788563A (zh) 2007-12-21 2015-07-22 米迪缪尼有限公司 白介素-4受体α(IL-4Rα)-173的结合成员
DK2235059T3 (en) * 2007-12-26 2015-03-30 Xencor Inc FC-VERSIONS OF MODIFIED BINDING TO FcRn
EP2077281A1 (en) 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
US7914785B2 (en) 2008-01-02 2011-03-29 Bergen Teknologieverforing As B-cell depleting agents, like anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
CN102083460A (zh) 2008-01-18 2011-06-01 米迪缪尼有限公司 用于位点特异性偶联的半胱氨酸工程化抗体
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
AU2009210636B2 (en) 2008-01-31 2014-08-28 Genentech, Inc. Anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
US8039596B2 (en) 2008-02-05 2011-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Alpha 5-beta 1 antibodies and their uses
JP5608100B2 (ja) 2008-02-08 2014-10-15 メディミューン，エルエルシー 低下したＦｃリガンド親和性を有する抗ＩＦＮＡＲ１抗体
MX348362B (es) * 2008-03-31 2017-06-07 Genentech Inc * Composiciones y metodos para tratar y diagnosticar asma.
EP3045475B1 (en) 2008-04-02 2017-10-04 MacroGenics, Inc. Bcr-complex-specific antibodies and methods of using same
CA2720368C (en) 2008-04-02 2017-08-22 Macrogenics, Inc. Her2/neu-specific antibodies and methods of using same
TR201808046T4 (tr) 2008-04-11 2018-06-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd İki veya daha fazla sayıda antijen molekülüne tekrar tekrar bağlanabilen antijen bağlanma molekülü.
WO2009126944A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof
CR20170001A (es) 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados
EP2899209A1 (en) * 2008-04-29 2015-07-29 Abbvie Inc. Dual Variable Domain Immunoglobulins and uses thereof
TW201006485A (en) 2008-06-03 2010-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2726087A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CA2726845C (en) 2008-06-04 2017-09-26 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
NZ603698A (en) 2008-07-08 2014-03-28 Abbvie Inc Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20100021460A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-28 Genentech, Inc. Methods of Treating Autoimmune Diseases Using CD4 Antibodies
PL2328616T3 (pl) 2008-08-05 2015-10-30 Novartis Ag Kompozycje i sposoby dla przeciwciał celujących białko dopełniacza C5
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
JP5778577B2 (ja) 2008-09-19 2015-09-16 メディミューン，エルエルシー Ｄｌｌ４に対する抗体およびその使用
BRPI0914091B1 (pt) * 2008-10-14 2022-05-10 Genentech Inc Igg variante, composição farmacêutica, kit e usos de um igg variante
US8298533B2 (en) 2008-11-07 2012-10-30 Medimmune Limited Antibodies to IL-1R1
CA2743469C (en) 2008-11-12 2019-01-15 Medimmune, Llc Antibody formulation
US20100143351A1 (en) 2008-11-22 2010-06-10 Genentech, Inc. Anti-Angiogenesis Therapy for the Treatment of Breast Cancer
AU2009325878B2 (en) 2008-12-08 2014-01-16 Compugen Ltd. TMEM154 polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
EP2373689A1 (en) 2008-12-12 2011-10-12 MedImmune, LLC Crystals and structure of a human igg fc variant with enhanced fcrn binding
MX2011006416A (es) 2008-12-19 2011-07-12 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos.
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
WO2010072740A2 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Astrazeneca Ab TARGETED BINDING AGENTS DIRECTED TO α5β1 AND USES THEREOF
EP2382238A1 (en) 2008-12-31 2011-11-02 Biogen Idec MA Inc. Anti-lymphotoxin antibodies
WO2010096394A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
BRPI1005984A2 (pt) 2009-02-23 2016-10-04 Glenmark Pharmaceuticals Sa anticorpo humanizado ou fragmento do mesmo que se liga ao cd19 humano, acido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo humanizado ou fragmento do mesmo que se liga à cd12 humano, composição, imunoconjugado, uso de um anticorpo humanizado ou fragmento do mesmo, artigo de manufatura e kit
PL2403878T3 (pl) 2009-03-05 2017-12-29 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. W pełni ludzkie przeciwciała specyficzne dla CADM1
WO2010102244A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Treatment of leukemias and chronic myeloproliferative diseases with antibodies to epha3
MA33194B1 (fr) 2009-03-16 2012-04-02 Cephalon Australia Pty Ltd Anticorps humanisés ayant une activité antitumorale
MA33198B1 (fr) 2009-03-20 2012-04-02 Genentech Inc Anticorps anti-her di-spécifiques
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
CA2756197A1 (en) * 2009-03-24 2010-09-30 Bayer Healthcare Llc Factor viii variants and methods of use
CN102378767B (zh) 2009-03-25 2015-01-14 健泰科生物技术公司 抗-fgfr3抗体及其使用方法
JP6051048B2 (ja) 2009-03-25 2016-12-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 新規な抗α５β１抗体及びその使用
ES2363358B1 (es) 2009-04-03 2012-06-21 FUNDACIÓ INSTITUT DE RECERCA HOSPITAL UNIVERSITARI VALL D'HEBRON (Titular al Agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades asociadas con una proliferación celular indeseable.
MX2011010168A (es) 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos, trivalentes.
AU2010239351C1 (en) 2009-04-20 2015-02-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies specific to Cadherin-17
US9062116B2 (en) 2009-04-23 2015-06-23 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Anti-fatty acid amide hydrolase-2 antibodies and uses thereof
EP2424894A1 (en) 2009-04-27 2012-03-07 Novartis AG Composition and methods of use for therapeutic antibodies specific for the il-12 receptore betal subunit
CA2993053A1 (en) 2009-04-27 2010-11-04 Novartis Ag Antagonistic activin receptor iib (actriib) antibodies for increasing muscle growth
AU2010242840B2 (en) * 2009-05-01 2014-04-17 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
RU2011151287A (ru) 2009-06-18 2013-07-27 Пфайзер Инк. АНТИ Notch-1 АНТИТЕЛА
WO2011005481A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
EP2448972A4 (en) * 2009-06-30 2012-11-28 Res Dev Foundation IMMUNOGLOBULIN FC POLYPEPTIDES
BR112012000735A2 (pt) 2009-07-13 2016-11-16 Genentech Inc "métodos, kits e conjuntos de compostos"
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
CN102498129B (zh) 2009-07-31 2016-03-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 使用bv8拮抗剂或g-csf拮抗剂抑制肿瘤转移
AU2010276580A1 (en) 2009-07-31 2012-03-15 Medarex, L.L.C. Fully human antibodies to BTLA
SG178358A1 (en) 2009-08-11 2012-03-29 Genentech Inc Production of proteins in glutamine-free cell culture media
CN102575298A (zh) 2009-08-14 2012-07-11 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于监测患者对vegf拮抗剂的响应的生物学标志物
CN102573909A (zh) 2009-08-15 2012-07-11 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗血管发生疗法用于治疗先前治疗过的乳腺癌
WO2011021146A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pfizer Inc. Osteopontin antibodies
GB0914691D0 (en) * 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
EP2470559B1 (en) 2009-08-24 2017-03-22 Amunix Operating Inc. Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US9321823B2 (en) 2009-09-02 2016-04-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
EP2473637B1 (en) 2009-09-03 2017-03-29 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
WO2011029823A1 (en) 2009-09-09 2011-03-17 Novartis Ag Monoclonal antibody reactive with cd63 when expressed at the surface of degranulated mast cells
SG179070A1 (en) 2009-09-11 2012-04-27 Genentech Inc Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer agent
EP2478114B1 (en) 2009-09-17 2014-12-17 F.Hoffmann-La Roche Ag Diagnostic methods for lung cancer
US8568726B2 (en) 2009-10-06 2013-10-29 Medimmune Limited RSV specific binding molecule
RU2583298C2 (ru) 2009-10-07 2016-05-10 Макродженикс, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ, СОДЕРЖАЩИЕ Fc-УЧАСТОК, КОТОРЫЕ ДЕМОНСТРИРУЮТ ПОВЫШЕННУЮ ЭФФЕКТОРНУЮ ФУНКЦИЮ БЛАГОДАРЯ ИЗМЕНЕНИЯМ СТЕПЕНИ ФУКОЗИЛИРОВАНИЯ, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
US20120231004A1 (en) 2009-10-13 2012-09-13 Oxford Biotherapeutic Ltd. Antibodies
WO2011053465A1 (en) 2009-10-14 2011-05-05 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to epha3
CA2775959A1 (en) * 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112012009412A2 (pt) 2009-10-22 2016-11-29 Genentech Inc 'anticorpo anti-hepsina isolado, molécula de ácido nucleico, célula hospedeira, método para fabricar um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso do anticorpo e método para fabricar um anticorpo anti-serina protease'
PL2490720T3 (pl) 2009-10-23 2020-08-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Cząsteczki przeciwciał anty-gcc oraz powiązane kompozycje i sposoby
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
NZ774435A (en) 2009-11-02 2024-08-30 Univ Washington Therapeutic nuclease compositions and methods
AU2010315304B2 (en) 2009-11-04 2014-03-27 Merck Sharp & Dohme Llc Engineered anti-TSLP antibody
EP2496601B1 (en) 2009-11-05 2017-06-07 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
CN102740885B (zh) 2009-11-05 2015-04-01 梯瓦制药澳大利亚私人有限公司 涉及突变的kras或braf基因的癌症的治疗
WO2011060015A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Genentech, Inc. Methods and compositions for detecting target proteins
BR112012012465B1 (pt) 2009-11-24 2023-03-14 Medimmune Limited Anticorpo isolado ou fragmento de ligação do mesmo que se liga especificamente a b7-h1 humano, composição compreendendo o mesmo e usos
KR101791430B1 (ko) * 2009-11-30 2017-10-30 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이펙터 기능이 제거된 항체 Ｆｃ 돌연변이체
EP2507265B1 (en) 2009-12-01 2016-05-11 Compugen Ltd. Antibody specific for heparanase splice variant T5 and its use.
IN2012DN05169A (pl) 2009-12-02 2015-10-23 Acceleron Pharma Inc
AR078377A1 (es) 2009-12-11 2011-11-02 Genentech Inc Anticuerpos anti-vegf-c (factor de crecimiento endotelial anti-vascular aislado c) y sus metodos de uso
AU2010334974A1 (en) 2009-12-22 2012-07-12 Novartis Ag Tetravalent CD47-antibody constant region fusion protein for use in therapy
RU2559542C2 (ru) 2009-12-23 2015-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против bv8 и их применение
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
EP2533810B1 (en) 2010-02-10 2016-10-12 ImmunoGen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
CN102770767A (zh) 2010-02-10 2012-11-07 诺瓦提斯公司 用于肌肉生长的方法和组合物
ES2519348T3 (es) 2010-02-18 2014-11-06 Genentech, Inc. Antagonistas de neurregulina y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer
RU2015102845A (ru) 2010-02-23 2015-06-10 Санофи АНТИТЕЛА К ИНТЕГРИНУ α2 И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
KR20180028561A (ko) 2010-02-23 2018-03-16 제넨테크, 인크. 난소암의 치료를 위한 항혈관신생 요법
US9260529B2 (en) 2010-02-24 2016-02-16 The University Of Washington Through Its Center For Commercialization Molecules that bind CD180, compositions and methods of use
JP5820800B2 (ja) 2010-03-02 2015-11-24 協和発酵キリン株式会社 改変抗体組成物
MY156358A (en) 2010-03-04 2016-02-15 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
US8802091B2 (en) 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
JP6093692B2 (ja) 2010-03-24 2017-03-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｌｒｐ６抗体
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
JP6034283B2 (ja) 2010-03-26 2016-11-30 トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ Ｖｉｓｔａ制御性ｔ細胞メディエータタンパク質、ｖｉｓｔａ結合剤、およびその使用
US20130108623A1 (en) 2010-03-29 2013-05-02 Zymeworks Inc Antibodies with Enhanced or Suppressed Effector Function
TWI667257B (zh) * 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的ＦｃＲｎ親和力之抗體
EP2371860A1 (en) 2010-04-05 2011-10-05 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall d'Hebron Antibody recognising human leukemia inhibitory factor (LIF) and use of anti-LIF antibodies in the treatment of diseases associated with unwanted cell proliferation
SG185415A1 (en) 2010-05-06 2012-12-28 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein - related protein 6 (lrp6) multivalent antibodies
JP2013527762A (ja) 2010-05-06 2013-07-04 ノバルティス アーゲー 治療的低密度リポタンパク質関連タンパク質６（ｌｒｐ６）抗体の組成物および使用方法
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
EP2576616A4 (en) 2010-05-27 2014-05-21 Merck Sharp & Dohme PROCESS FOR PREPARING ANTIBODIES WITH IMPROVED PROPERTIES
WO2011153224A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
WO2011153243A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer
NZ602840A (en) 2010-06-03 2014-11-28 Genentech Inc Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
BR112012027995A2 (pt) 2010-06-18 2017-01-10 Genentech Inc anticorpo e ácido nucleíco isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo com câncer, de um indivíduo possuíndo um distúrbio imune, de inibição da angiogênese e para inibir a ativação constitutiva de axl
WO2011163401A2 (en) 2010-06-22 2011-12-29 Neogenix Oncology, Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
NZ605449A (en) 2010-07-09 2015-03-27 Genentech Inc Anti-neuropilin antibodies and methods of use
WO2012006633A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Chimeric clotting factors
EP2596359A1 (en) 2010-07-19 2013-05-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy
BR112012033162A2 (pt) 2010-07-19 2016-10-25 Hoffmann La Roche método de identificação de pacientes, método de previsão da capacidade de reação de pacientes, método de determinação da probabilidade de um paciente com câncer exibir benefícios de terapia anticâncer, método de otimização da eficácia terapêutica, método de tratamento de câncer, kit e conjunto de compostos
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
KR20130048242A (ko) 2010-07-22 2013-05-09 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 항-종양 항원 항체 및 이용 방법
AU2011280969A1 (en) 2010-07-23 2013-02-07 Trustees Of Boston University Anti-Despr inhibitors as therapeutics for inhibition of pathological angiogenesis and tumor cell invasiveness and for molecular imaging and targeted delivery
ES2952394T3 (es) 2010-07-29 2023-10-31 Buzzard Pharmaceuticals AB Antagonistas quiméricos del receptor IL-1 de tipo I
WO2012016173A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Ac Immune S.A. Safe and functional humanized antibodies
CA2807127C (en) 2010-08-02 2019-02-12 Leslie S. Johnson Covalent diabodies and uses thereof
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112013002535A2 (pt) 2010-08-03 2019-09-24 Hoffmann La Roche biomarcadores de leucemia linfocítica crônica (cll)
BR112013002532A2 (pt) 2010-08-05 2016-05-31 Hoffmann La Roche proteína de fusão de citocina anti-viral do anticorpo anti-mhc
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
MX2013001336A (es) 2010-08-13 2013-03-08 Roche Glycart Ag Anticuerpos ani-tenascina c a2 y metodos de utilizacion.
PT2603530T (pt) 2010-08-13 2018-01-09 Roche Glycart Ag Anticorpos anti-fap e métodos de utilização
JP2013537416A (ja) 2010-08-13 2013-10-03 メディミューン リミテッド 変異型Ｆｃ領域を含むモノマーポリペプチド及び使用方法
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
UA114883C2 (uk) 2010-08-20 2017-08-28 Новартіс Аг Антитіло до рецептора епідермального фактора росту-3 (her3)
KR101603001B1 (ko) 2010-08-25 2016-03-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 Il-18r1에 대한 항체 및 그의 용도
US9046513B2 (en) 2010-08-26 2015-06-02 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201506782XA (en) 2010-08-27 2015-10-29 Stem Centrx Inc Notum protein modulators and methods of use
UY33578A (es) 2010-08-31 2012-03-30 Sanofi Sa PÉPTIDO O COMPLEJO PEPTÍDICO QUE SE UNE A INTEGRINA a(ALFA) Y MÉTODOS Y USOS QUE IMPLICAN A LOS MISMOS
JP2013537966A (ja) 2010-08-31 2013-10-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド バイオマーカー及び治療の方法
WO2012031273A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 Stem Centrx, Inc. Novel modulators and methods of use
SG188324A1 (en) 2010-09-03 2013-04-30 Academia Sinica Anti-c-met antibody and methods of use thereof
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
US8999335B2 (en) 2010-09-17 2015-04-07 Compugen Ltd. Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma
US9068014B2 (en) 2010-09-23 2015-06-30 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
HUE031956T2 (en) 2010-09-27 2017-08-28 Morphosys Ag Anti-CD38 antibody and lenalidomide or bortezomib for the treatment of multiple myeloma and NHL
EP2625203A1 (en) 2010-10-05 2013-08-14 Novartis AG Anti-il12rbeta1 antibodies and their use in treating autoimmune and inflammatory disorders
US8481680B2 (en) 2010-10-05 2013-07-09 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
BR112013009083B1 (pt) 2010-10-13 2021-08-10 Janssen Biotech, Inc. Anticorpos humanos para oncostatina m, seu processo de fabricação, fragmento de ligação a antígeno, composição farmacêutica, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante estavelmente transformada ou transfectada
KR20130138802A (ko) * 2010-10-20 2013-12-19 옥스포드 바이오테라퓨틱스 리미티드 항체
WO2012058768A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
EP3351559A3 (en) 2010-11-08 2018-10-31 F. Hoffmann-La Roche AG Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
EP3176184B1 (en) 2010-11-10 2020-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-bace1 antibodies for neural disease immunotherapy
BR112013012627A2 (pt) 2010-11-23 2016-10-04 Glaxo Group Ltd proteína de ligação de antígeno, polinucleotídeo, composição farmacêutica, e uso da referida composição
EP2643018B1 (en) 2010-11-23 2020-10-14 AlderBio Holdings LLC Anti-il-6 antibodies for the treatment of oral mucositis
MX2013005847A (es) 2010-11-24 2013-12-12 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno multiespecificas que eligen como blanco a hgf.
AR084053A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico que induce citotoxicidad
KR102099462B1 (ko) 2010-11-30 2020-04-10 제넨테크, 인크. 저친화도 혈액-뇌 장벽 수용체 항체 및 그의 용도
RU2642318C2 (ru) 2010-11-30 2018-01-24 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антигенсвязывающая молекула, способная многократно связываться с множеством антигенных молекул
CA2820885A1 (en) 2010-12-08 2012-09-07 Stem Centrx, Inc. Novel modulators and methods of use
MX346995B (es) 2010-12-15 2017-04-06 Wyeth Llc Anticuerpos anti-notch1.
SG190885A1 (en) 2010-12-16 2013-07-31 Genentech Inc Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition
PE20141114A1 (es) 2010-12-20 2014-09-15 Genentech Inc Anticuerpos anti-mesotelina e inmunoconjugados
AR084456A1 (es) 2010-12-22 2013-05-15 Genentech Inc Anticuerpo anti-pcsk9 y metodos de uso
PL2654780T3 (pl) 2010-12-23 2017-07-31 Janssen Biotech, Inc Aktywne mutanty przeciwciała fc odporne na proteazy
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
CN102128937B (zh) * 2010-12-31 2014-05-28 江苏华冠生物技术股份有限公司 用于脱敏治疗效果评价的过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒的制备方法
WO2012097333A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
JP6228014B2 (ja) 2011-02-07 2017-11-08 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 操作された免疫グロブリンＦｃポリペプチド
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
EP2679681B2 (en) 2011-02-25 2023-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha FcgammaRIIB-specific FC antibody
WO2012132067A1 (ja) 2011-03-30 2012-10-04 中外製薬株式会社 抗原結合分子の血漿中滞留性と免疫原性を改変する方法
KR101638224B1 (ko) 2011-02-28 2016-07-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 항원 결합 단백질
KR101572338B1 (ko) 2011-02-28 2015-11-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 1가 항원 결합 단백질
MX353143B (es) 2011-02-28 2017-12-20 Genentech Inc Marcadores biologicos y metodos para pronosticar respuesta a antagonistas de celulas b.
KR101614195B1 (ko) * 2011-03-29 2016-04-20 로슈 글리카트 아게 항체 Fc 변이체
CN113999307A (zh) 2011-03-30 2022-02-01 中外制药株式会社 改变抗原结合分子的血浆中滞留性和免疫原性的方法
DK2698431T3 (da) 2011-03-30 2020-11-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Opretholdelse af antigen-bindende molekyler i blodplasma og fremgangsmåde til modifikation af immunogenicitet
AR085826A1 (es) 2011-03-31 2013-10-30 Genentech Inc METODOS DE ADMINISTRACION DE ANTAGONISTAS DE INTEGRINA b7
EP2694551A1 (en) 2011-04-07 2014-02-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr4 antibodies and methods of use
EP3415528B1 (en) 2011-04-13 2021-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements
CN105601741A (zh) 2011-04-15 2016-05-25 卡姆普根有限公司 多肽和多核苷酸及其用于治疗免疫相关失调和癌症的用途
WO2012145493A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Amplimmune, Inc. Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
US10654916B2 (en) 2011-04-21 2020-05-19 The Regents Of The University Of California, A California Corporation Compositions and methods for the treatment of neuromyelitis optica
GB201107170D0 (en) 2011-04-28 2011-06-15 Clark Michael Binding molecules with biased recognition
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
DK2704737T3 (en) 2011-04-29 2018-04-23 Univ Washington THERAPEUTIC NUCLEASE COMPOSITIONS AND PROCEDURES
KR101992502B1 (ko) 2011-05-12 2019-06-24 제넨테크, 인크. 프레임워크 시그너처 펩티드를 사용하여 동물 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 다중 반응 모니터링 lc-ms/ms 방법
DK2707391T3 (en) 2011-05-13 2018-02-05 Gamamabs Pharma ANTIBODIES AGAINST HER3
MX339662B (es) 2011-05-16 2016-06-03 Genentech Inc Antagonistas de fgfr1 y sus metodos de uso.
BR122016016837A2 (pt) 2011-05-21 2019-08-27 Macrogenics Inc moléculas de ligação a cd3; anticorpos de ligação a cd3; composições farmacêuticas; e usos da molécula de ligação a cd3
NZ618016A (en) 2011-05-21 2015-05-29 Macrogenics Inc Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
CN103582650A (zh) 2011-05-25 2014-02-12 默沙东公司 用于制备具有改善性质的含Fc多肽的方法
US9561274B2 (en) 2011-06-07 2017-02-07 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists
WO2012170740A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
PT2717898T (pt) 2011-06-10 2019-05-20 Bioverativ Therapeutics Inc Compostos pró-coagulantes e processos para a sua utilização
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
CA2837914A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
EA201490020A1 (ru) 2011-06-16 2014-04-30 Новартис Аг Растворимые белки для применения в качестве терапевтических средств
BR112013032899A2 (pt) 2011-06-22 2017-01-24 Inserm Inst Nat De La Santé Et De La Rech Médicale anticorpos anti-axl e utilizações dos mesmos
AU2012273954A1 (en) 2011-06-22 2014-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-Axl antibodies and uses thereof
CN103649125A (zh) 2011-06-22 2014-03-19 霍夫曼-拉罗奇有限公司 利用包含mhc i类的复合物通过循环中的病毒特异性细胞毒性t细胞清除靶细胞
EP2537864B1 (en) * 2011-06-24 2019-08-07 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Fc variants with reduced effector functions
AU2012275271B9 (en) 2011-06-28 2017-11-30 Oxford Biotherapeutics Ltd. Antibodies to ADP-ribosyl cyclase 2
KR20140045440A (ko) 2011-06-30 2014-04-16 제넨테크, 인크. 항-c-met 항체 제제
CA2836855C (en) 2011-06-30 2020-07-14 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
CN109517059B (zh) 2011-06-30 2023-03-28 中外制药株式会社 异源二聚化多肽
JP6472999B2 (ja) 2011-07-01 2019-02-20 ノバルティス アーゲー 代謝障害を治療するための方法
UA117901C2 (uk) * 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
US9738707B2 (en) 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
WO2013010955A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Morphosys Ag Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (mif) and d-dopachrome tautomerase (d-dt)
GB201112429D0 (en) 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
US20130022551A1 (en) 2011-07-22 2013-01-24 Trustees Of Boston University DEspR ANTAGONISTS AND AGONISTS AS THERAPEUTICS
US9499612B2 (en) 2011-07-27 2016-11-22 Glaxo Group Limited Antigen binding constructs
CA2845536A1 (en) 2011-08-15 2013-02-21 Amplimmune, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and their uses
MX2014001736A (es) 2011-08-17 2014-03-31 Genentech Inc Inhibicion de angiogenesis en tumores refractarios.
WO2013025853A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Genentech, Inc. Neuregulin antibodies and uses thereof
EP2748195A1 (en) 2011-08-23 2014-07-02 Roche Glycart AG Anti-mcsp antibodies
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
CA2846083A1 (en) 2011-09-15 2013-03-21 Genentech, Inc. Methods of promoting differentiation
SG11201400724SA (en) 2011-09-19 2014-04-28 Genentech Inc Combination treatments comprising c-met antagonists and b-raf antagonists
TW201817744A (zh) * 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
SI2760471T1 (sl) 2011-09-30 2017-04-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Terapevtski peptidi
RU2014117505A (ru) 2011-09-30 2015-11-10 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антигенсвязывающая молекула для ускорения удаления антигенов
EP2762493B1 (en) 2011-09-30 2021-06-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
KR102366029B1 (ko) 2011-09-30 2022-02-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 표적 항원에 대한 면역응답을 유도하는 항원 결합 분자
EP3617313A1 (en) 2011-10-05 2020-03-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule for promoting clearance from plasma of antigen comprising saccharide chain receptor-binding domain
BR112014008212A2 (pt) 2011-10-05 2017-06-13 Genentech Inc método para tratar uma condição hepática, método de indução por diferenciação hepática e método de redução de proliferação anormal do ducto biliar
US9738727B2 (en) 2011-10-14 2017-08-22 Genentech, Inc. Anti-HtrA1 antibodies and methods of use
JP2014530816A (ja) 2011-10-14 2014-11-20 ノバルティスアーゲー Ｗｎｔ経路関連疾患のための抗体および方法
JP6254087B2 (ja) 2011-10-15 2017-12-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌を治療するためのｓｃｄ１アンタゴニスト
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
MX360741B (es) 2011-10-28 2018-11-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Constructos de polipéptidos y sus usos.
MX2014004991A (es) 2011-10-28 2014-05-22 Genentech Inc Combinaciones terapeuticas y metodos para tratar el melanoma.
CN109111524B (zh) 2011-10-31 2022-10-28 中外制药株式会社 控制了重链与轻链的缔合的抗原结合分子
US10598653B2 (en) 2011-11-01 2020-03-24 Bionomics Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
US9221907B2 (en) 2011-11-01 2015-12-29 Bionomics Inc. Anti-GPR49 monoclonal antibodies
CN104053671A (zh) 2011-11-01 2014-09-17 生态学有限公司 治疗癌症的抗体和方法
AU2012332590B2 (en) 2011-11-01 2016-10-20 Bionomics, Inc. Anti-GPR49 antibodies
CA2854233C (en) 2011-11-04 2020-05-12 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
CN103906533A (zh) 2011-11-07 2014-07-02 米迪缪尼有限公司 多特异性和多价结合蛋白及其用途
AR088920A1 (es) 2011-11-21 2014-07-16 Genentech Inc Purificacion de anticuerpos anti-c-met
RU2014124530A (ru) 2011-11-23 2015-12-27 Идженика, Инк. Антитела к cd98 и способы их применения
CN113416257A (zh) 2011-11-30 2021-09-21 中外制药株式会社 包含进入细胞内以形成免疫复合体的搬运体(载体)的药物
KR20140103135A (ko) 2011-12-05 2014-08-25 노파르티스 아게 Her3의 도메인 ii에 대해 지시된 표피 성장 인자 수용체 3 (her3)에 대한 항체
EP2788379B1 (en) 2011-12-05 2020-02-05 X-Body, Inc. Pdgf receptor beta binding polypeptides
JP6243345B2 (ja) 2011-12-05 2017-12-06 ノバルティス アーゲー 上皮細胞増殖因子受容体３（ｈｅｒ３）に対する抗体
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2013101509A2 (en) 2011-12-15 2013-07-04 Alternative Innovative Technologies Llc Hsp70 fusion protein conjugates and uses thereof
US9527927B2 (en) 2011-12-20 2016-12-27 Medimmune, Llc Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds
BR112014015111A2 (pt) 2011-12-21 2017-06-13 Novartis Ag composições e processos para anticorpos que se direcionam ao fator p
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
TWI593705B (zh) 2011-12-28 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanized anti-epiregulin antibody and cancer therapeutic agent containing the antibody as an active ingredient
UY34558A (es) 2011-12-30 2013-07-31 Abbvie Inc Proteínas de unión específicas duales dirigidas contra il-13 y/o il-17
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
US20150011431A1 (en) 2012-01-09 2015-01-08 The Scripps Research Institute Humanized antibodies
US20140050720A1 (en) 2012-01-09 2014-02-20 The Scripps Research Institute Ultralong complementarity determining regions and uses thereof
MX357403B (es) 2012-01-12 2018-07-09 Bioverativ Therapeutics Inc Polipeptidos de factor viii quimericos y usos de los mismos.
SG11201403927XA (en) 2012-01-13 2014-08-28 Genentech Inc Biological markers for identifying patients for treatment with vegf antagonists
IN2014DN05885A (pl) 2012-01-18 2015-06-05 Hoffmann La Roche
KR20140119114A (ko) 2012-01-18 2014-10-08 제넨테크, 인크. Fgf19 조절제의 사용 방법
EP2756093A4 (en) 2012-02-01 2015-07-01 Compugen Ltd C10RF32 ANTIBODIES AND USES THEREOF FOR THE TREATMENT OF CANCER
JP6405242B2 (ja) 2012-02-07 2018-10-17 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｍｉｃａ結合剤
MX366804B (es) 2012-02-11 2019-07-25 Genentech Inc Translocaciones de la r-espondina y sus metodos de uso.
US20150018241A1 (en) 2012-02-15 2015-01-15 Hoffmann-La Roche Inc. Fc-receptor based affinity chromatography
MY188897A (en) 2012-02-15 2022-01-12 Bioverativ Therapeutics Inc Factor viii compositions and methods of making and using same
WO2013123457A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
ES2812849T3 (es) 2012-02-24 2021-03-18 Abbvie Stemcentrx Llc Anticuerpos anti-DLL3 y procedimientos de utilización de los mismos
RU2736349C2 (ru) 2012-02-24 2020-11-16 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩАЯ МОЛЕКУЛА ДЛЯ УСКОРЕНИЯ ИСЧЕЗНОВЕНИЯ АНТИГЕНА ЧЕРЕЗ FcγRIIB
JP2015514710A (ja) 2012-03-27 2015-05-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｈｅｒ３阻害剤に関する診断及び治療
TR201808486T4 (tr) 2012-03-28 2018-07-23 Sanofi Sa Bradikinin B1 reseptör ligandlarına karşı antikorlar.
US9751942B2 (en) 2012-03-29 2017-09-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-LAMP5 antibody and utilization thereof
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
SG11201406184XA (en) 2012-03-30 2014-10-30 Genentech Inc Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
JP6293731B2 (ja) 2012-04-05 2018-03-14 エーシー イミューン エス．エー． ヒト化タウ抗体
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
BR112014027166A2 (pt) 2012-05-01 2017-06-27 Genentech Inc anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento, método de inibir proliferação e métodos de detecção.
WO2013166290A1 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Abbvie Biotherapeutics Inc. P21 biomarker assay
SG11201407209YA (en) 2012-05-07 2014-12-30 Sanofi Sa Methods for preventing biofilm formation
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
TR201810930T4 (tr) 2012-05-18 2018-08-27 Genentech Inc Yüksek konsantrasyonlu monoklonal antikor formülasyonları.
CN104520325A (zh) 2012-05-21 2015-04-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于提高血脑屏障转运的安全性的方法
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
EP2852610B1 (en) 2012-05-23 2018-07-11 Glykos Finland Oy Production of fucosylated glycoproteins
RU2625771C2 (ru) 2012-05-23 2017-07-18 Дженентек, Инк. Способ отбора терапевтических средств
WO2013177386A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Biotherapeutics Inc. Biomarkers for predicting response to tweak receptor (tweakr) agonist therapy
EP3892638A1 (en) 2012-05-30 2021-10-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule for eliminating aggregated antigens
DK2857420T3 (da) 2012-05-30 2020-11-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Målvævsspecifikt antigenbindende molekyle
SG11201407017WA (en) 2012-06-04 2014-12-30 Irm Llc Site-specific labeling methods and molecules produced thereby
EP2858659B1 (en) 2012-06-08 2019-12-25 Bioverativ Therapeutics Inc. Procoagulant compounds
EP2863940A4 (en) 2012-06-08 2016-08-10 Biogen Ma Inc CHIMERIC COAGULATION FACTORS
EA201492163A1 (ru) 2012-06-08 2015-08-31 Гленмарк Фармасьютикалс С.А. ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА К TrkA, СОДЕРЖАЩИЕ АМИНОКИСЛОТНЫЕ ЗАМЕНЫ
EP2862875B1 (en) * 2012-06-14 2023-09-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIGEN-BINDING MOLECULE CONTAINING MODIFIED Fc REGION
AR091462A1 (es) 2012-06-15 2015-02-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-pcsk9, formulaciones, dosificacion y metodos de uso
RU2015101699A (ru) * 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Слитые полипептиды и конъюгаты полипептида лиганда рецептора инкретина и fc-области с измененной fc-эффекторной функцией
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
US9499634B2 (en) 2012-06-25 2016-11-22 Zymeworks Inc. Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
RU2630296C2 (ru) 2012-07-04 2017-09-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к биотину и способы их применения
WO2014006118A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-theophylline antibodies and methods of use
SI2869848T1 (sl) 2012-07-04 2017-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Kovalentno vezani konjugati antigen-protitelo
CN110042114B (zh) 2012-07-05 2024-09-10 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
AU2013285355A1 (en) 2012-07-06 2015-01-29 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
US10023628B2 (en) 2012-07-06 2018-07-17 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor VIII polypeptides and uses thereof
EA201590171A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. ИММУНОКОНЪЮГАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К CD79b
JP2015527318A (ja) 2012-07-09 2015-09-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２２を含む免疫複合体
CN104411337A (zh) 2012-07-09 2015-03-11 基因泰克公司 包含抗cd79b抗体的免疫偶联物
CN104428007B (zh) 2012-07-09 2018-03-16 基因泰克公司 包含抗cd22抗体的免疫缀合物
PL2882450T3 (pl) 2012-07-11 2020-06-29 Bioverativ Therapeutics Inc. Kompleks czynnika viii z xten i białkiem czynnika von willebranda oraz jego zastosowania
MA37794B1 (fr) 2012-07-13 2017-07-31 Roche Glycart Ag Anticorps bispécifiques anti-vegf/anti-ang-2 et leur utilisation dans le cadre du traitement de pathologies vasculaires oculaires
KR20150036710A (ko) 2012-07-18 2015-04-07 글리코토페 게엠베하 낮은 푸코실화를 갖는 항-her2 항체를 이용한 신규한 치료적 처리
BR112015001459B1 (pt) 2012-07-25 2023-02-14 Celldex Therapeutics, Inc Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo, conjugado, usos dos mesmos, composição farmacêutica, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, célula isolada, kit, método in vitro para inibir atividade da kit, método para produzir um anticorpo
WO2014029752A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Glaxo Group Limited Anti lrp6 antibodies
BR112015001955A2 (pt) 2012-08-24 2017-11-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd variante de região fc específica de fcgamariib
EP3597747B1 (en) 2012-08-24 2023-03-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Mouse fcgammarii-specific fc antibody
CA2879496C (en) 2012-08-29 2024-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Blood brain barrier shuttle
US9381244B2 (en) 2012-09-07 2016-07-05 King's College London VISTA modulators for diagnosis and treatment of cancer
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
KR102185151B1 (ko) 2012-09-12 2020-12-01 젠자임 코포레이션 변경된 당화 및 감소된 효과기 기능을 갖는 fc 함유 폴리펩티드
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
US20150231240A1 (en) 2012-10-09 2015-08-20 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
KR20180008921A (ko) 2012-11-01 2018-01-24 애브비 인코포레이티드 항-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
AU2013337277B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel NTRK1 fusion molecules and uses thereof
EP2917243B1 (en) 2012-11-08 2018-03-14 F.Hoffmann-La Roche Ag Her3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of her3
JP2015536339A (ja) 2012-11-09 2015-12-21 ファイザー・インク 血小板由来増殖因子ｂ特異的抗体ならびにこれらの組成物および使用
KR20150083124A (ko) 2012-11-13 2015-07-16 제넨테크, 인크. 항-헤마글루티닌 항체 및 사용 방법
EP2733153A1 (en) 2012-11-15 2014-05-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the preparation of immunoconjugates and uses thereof
US9914785B2 (en) 2012-11-28 2018-03-13 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
US20150322152A1 (en) 2012-11-30 2015-11-12 Institut Pasteur Use of anti-fcyri and/or anti-fcyriia antibodies for treating arthritis, inflammation, thrombocytopenia and allergic shock
PT2928921T (pt) 2012-12-05 2021-04-06 Novartis Ag Composições e métodos para anticorpos que visam epo
EP2928923B1 (en) 2012-12-10 2020-01-22 Biogen MA Inc. Anti-blood dendritic cell antigen 2 antibodies and uses thereof
CA2894879A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Amplimmune, Inc. B7-h4 specific antibodies, and compositions and methods of use thereof
KR20150100715A (ko) 2012-12-21 2015-09-02 앰플리뮨, 인크. 항-h7cr 항체
EP3557260B1 (en) 2012-12-21 2022-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3-targeting drug which is administered to patient responsive to gpc3-targeting drug therapy
CN104884474A (zh) 2012-12-21 2015-09-02 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 包含i类mhc的二硫键连接多价多功能蛋白质
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
US10766960B2 (en) 2012-12-27 2020-09-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
NZ709828A (en) 2012-12-28 2019-07-26 Prec Biologics Inc Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
JP2016503818A (ja) 2013-01-02 2016-02-08 グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． Ｔｌ１ａと結合する抗体およびその使用
WO2014107739A1 (en) 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
EA201500741A1 (ru) 2013-01-10 2016-01-29 Генмаб Б.В. ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ IGG1 ЧЕЛОВЕКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
AU2014207342C1 (en) 2013-01-18 2019-04-04 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
CA2898262A1 (en) 2013-01-24 2014-07-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Tnf-alpha antigen-binding proteins
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
WO2014122143A1 (en) 2013-02-05 2014-08-14 Engmab Ag Method for the selection of antibodies against bcma
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
EA031537B1 (ru) 2013-02-08 2019-01-31 Новартис Аг Антитела против il-17a и их применение для лечения аутоиммунных и воспалительных нарушений
EA201591465A1 (ru) 2013-02-08 2015-12-30 АйАрЭм ЭлЭлСи Специфичные участки для модификации антител для получения иммуноконъюгатов
WO2015198217A2 (en) 2013-02-08 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long-acting antibodies targeting il-17
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
EP3744728A1 (en) 2013-02-12 2020-12-02 Bristol-Myers Squibb Company Tangential flow filtration based protein refolding methods
WO2014126884A1 (en) 2013-02-12 2014-08-21 Bristol-Myers Squibb Company High ph protein refolding methods
DK2956482T3 (en) 2013-02-14 2017-10-16 Innate Pharma TREATMENT OF PERFECT T cell lymphoma
LT3889173T (lt) 2013-02-15 2023-10-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimizuotas viii faktoriaus genas
ES2878749T3 (es) 2013-02-20 2021-11-19 Innate Pharma Un compuesto que se une específicamente a KIR3DL2 para el uso en el tratamiento de linfoma de células T periférico
CA2900097A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cancer and preventing drug resistance
PT2958944T (pt) 2013-02-22 2019-06-27 Medimmune Ltd Conjugados de anticorpos anti-dll3 e pbd e suas utilizações
EP2959014B1 (en) 2013-02-25 2019-11-13 Genentech, Inc. Methods and compositions for detecting and treating drug resistant akt mutant
US20140242083A1 (en) 2013-02-26 2014-08-28 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
JP2016510751A (ja) 2013-03-06 2016-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗がん剤耐性を治療及び予防する方法
WO2014164534A2 (en) 2013-03-11 2014-10-09 Genzyme Corporation Site-specific antibody-drug conjugation through glycoengineering
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
SG10201707477SA (en) 2013-03-13 2017-10-30 Eleven Biotherapeutics Inc Chimeric cytokine formulations for ocular delivery
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
MX2015010777A (es) 2013-03-14 2016-04-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-b7-h4.
RU2721707C2 (ru) 2013-03-14 2020-05-21 Макродженикс, Инк. Биспецифичные молекулы, иммунореактивные с иммунными эффекторными клетками, экспрессирующими активирующий рецептор
WO2014159239A2 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Novartis Ag Antibodies against notch 3
WO2014152358A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
KR102389677B1 (ko) 2013-03-15 2022-04-21 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
US10150800B2 (en) 2013-03-15 2018-12-11 Zyngenia, Inc. EGFR-binding modular recognition domains
EP3460054B1 (en) 2013-03-15 2020-10-21 aTyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetase-fc conjugates
FR3003171B1 (fr) * 2013-03-15 2015-04-10 Lab Francais Du Fractionnement Nouveaux medicaments comprenant une composition d'anticorps enrichie en isoforme de charge majoritaire
EP3385277A1 (en) 2013-03-15 2018-10-10 F. Hoffmann-La Roche AG Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
SG11201507427QA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Genentech Inc Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
PT3611180T (pt) 2013-03-15 2022-03-15 Biomolecular Holdings Llc Imunoglobulina híbrida que contém uma ligação não peptídica
WO2014144865A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Genentech, Inc. Anti-crth2 antibodies and methods of use
IL240838B (en) 2013-03-15 2022-09-01 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Anti-3–lag binding proteins
UY35463A (es) 2013-03-15 2014-10-31 Biogen Idec Inc Formulaciones de polipéptido fc-factor ix.
KR102233349B1 (ko) 2013-03-15 2021-03-31 에이씨 이뮨 에스.에이. 항-타우(tau) 항체 및 사용 방법
MX2015012059A (es) 2013-03-15 2016-01-12 Merck Patent Gmbh Anticuerpos biespecificos tetravalentes.
WO2014143739A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biogen Idec Ma Inc. Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof
MX366978B (es) 2013-03-15 2019-08-01 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo - farmaco.
WO2014144466A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biogen Idec Ma Inc. Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof
CN105324396A (zh) 2013-03-15 2016-02-10 艾伯维公司 针对IL-1β和/或IL-17的双重特异性结合蛋白
WO2014144850A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
MX2015011075A (es) 2013-03-15 2015-10-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Peptidos terapeuticos.
WO2014151680A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Biogen Idec Ma Inc. Treatment and prevention of acute kidney injury using anti-alpha v beta 5 antibodies
EP2979087A4 (en) 2013-03-27 2017-03-15 F. Hoffmann-La Roche AG Use of biomarkers for assessing treatment of gastrointestinal inflammatory disorders with beta7 integrin antagonists
MX2015014017A (es) 2013-04-02 2016-02-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Variante de la region fc.
EA201591977A1 (ru) 2013-04-22 2016-06-30 Гликотоп Гмбх Противораковая терапия анти-egfr антителами, имеющими низкое фукозилирование
SG11201508911PA (en) 2013-04-29 2015-11-27 Hoffmann La Roche Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
ES2774976T3 (es) 2013-04-29 2020-07-23 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anticuerpos anti-CD38 y fusiones con interferón alfa-2b atenuado
EP3878866A1 (en) 2013-04-29 2021-09-15 F. Hoffmann-La Roche AG Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
EP3594240B1 (en) 2013-05-20 2023-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
US20160115237A1 (en) 2013-05-24 2016-04-28 The University Of British Columbia Cell senescence markers as diagnostic and therapeutic targets
SG10201709715RA (en) 2013-05-24 2017-12-28 Medimmune Llc Anti-b7-h5 antibodies and their uses
DK3004174T3 (da) 2013-05-31 2019-07-22 Zymeworks Inc Heteromultimerer med reduceret eller nedreguleret effektorfunktion
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
RU2016101716A (ru) 2013-06-24 2017-07-27 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Терапевтический агент, содержащий гуманизированное антиэпирегулиновое антитело в качестве действующего ингредиента для немелкоклеточной карциномы легкого, за исключением аденокарциномы
US20160168231A1 (en) 2013-07-18 2016-06-16 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
AU2014290361B2 (en) 2013-07-18 2019-04-18 Taurus Biosciences, Llc Humanized antibodies with ultralong complementarity determining regions
WO2015021423A2 (en) 2013-08-08 2015-02-12 Biogen Idec Ma Inc. Purification of chimeric fviii molecules
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
PE20160192A1 (es) 2013-08-12 2016-04-27 Genentech Inc Composiciones y metodo para tratar condiciones asociadas con el complemento
TW201734054A (zh) 2013-08-13 2017-10-01 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑-１（ｐａｉ-１）之抗體及其用途
ES2770507T3 (es) 2013-08-13 2020-07-01 Sanofi Sa Anticuerpos dirigidos contra el inhibidor de los activadores del plasminógeno de tipo 1 (PAI-1) y usos de los mismos
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
RU2016108652A (ru) 2013-08-14 2017-09-14 Новартис Аг Способы лечения спорадического миозита с тельцами включений
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
CN105792836A (zh) 2013-08-28 2016-07-20 施特姆森特克斯股份有限公司 新型sez6调节剂以及应用方法
SG11201601424PA (en) 2013-08-28 2016-03-30 Stemcentrx Inc Site-specific antibody conjugation methods and compositions
IL296026B2 (en) 2013-09-13 2024-10-01 Beigene Switzerland Gmbh Anti-PD1 antibodies and their uses as drugs and for diagnosis
CN105518027A (zh) 2013-09-17 2016-04-20 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗lgr5抗体的方法
HUE057005T2 (hu) 2013-09-25 2022-04-28 Bioverativ Therapeutics Inc Oszlopon történõ vírusinaktiváló eljárások
AU2014325063B2 (en) 2013-09-27 2019-10-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
US10494419B2 (en) 2013-10-02 2019-12-03 Medimmune, Llc Neutralizing anti-influenza A antibodies and uses thereof
CN105612182B (zh) 2013-10-11 2019-12-10 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性结构域交换共有可变轻链抗体
MX2016004573A (es) 2013-10-11 2016-07-21 Genentech Inc Inhibidores de nsp4 y metodos de uso.
BR112016008477A2 (pt) 2013-10-18 2017-10-03 Genentech Inc Corpos, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica e usos do anticorpo
RU2016119425A (ru) 2013-10-23 2017-11-28 Дженентек, Инк. Способы диагностики и лечения эозинофильных заболеваний
ES2759252T3 (es) 2013-10-31 2020-05-08 Resolve Therapeutics Llc Fusiones y métodos terapéuticos de nucleasa-albúmina
JP6515111B2 (ja) 2013-11-06 2019-05-22 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規の抗クローディン抗体および使用方法
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
US10196455B2 (en) 2013-11-07 2019-02-05 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Neuregulin allosteric anti-HER3 antibody
EP3065769A4 (en) 2013-11-08 2017-05-31 Biogen MA Inc. Procoagulant fusion compound
BR112016010025A2 (pt) 2013-11-11 2017-12-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd molécula de ligação de antígeno contendo região variável de anticorpo modificado
CN105814081B (zh) 2013-11-13 2021-02-02 辉瑞大药厂 肿瘤坏死因子样配体1a特异性抗体及其组合物和用途
CN105722857B (zh) 2013-11-21 2023-03-24 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-α-突触核蛋白抗体及使用方法
US10961530B2 (en) 2013-12-04 2021-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecules, the antigen-binding activity of which varies according to the concentration of compounds, and libraries of said molecules
AU2014360273A1 (en) 2013-12-06 2016-06-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides
WO2015089117A1 (en) 2013-12-09 2015-06-18 Allakos Inc. Anti-siglec-8 antibodies and methods of use thereof
EP3461845B1 (en) 2013-12-13 2020-09-16 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
US20160333063A1 (en) 2013-12-13 2016-11-17 The General Hospital Corporation Soluble high molecular weight (hmw) tau species and applications thereof
EP3527587A1 (en) 2013-12-17 2019-08-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-l1 binding antagonists
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
HUE047699T2 (hu) 2013-12-17 2020-05-28 Hoffmann La Roche Eljárások rákbetegségek kezelésére PD-1-tengelyhez kötõdõ antagonisták és taxánok alkalmazásával
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
MX2016007885A (es) 2013-12-17 2017-01-11 Genentech Inc Metodos de tratamiento de cancer usando antagonistas de union del eje de pd-1 y un anticuerpo anti-cd20.
TWI701261B (zh) 2013-12-17 2020-08-11 美商建南德克公司 抗cd3抗體及使用方法
CA2932958A1 (en) * 2013-12-20 2015-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
EP4043493A1 (en) 2013-12-24 2022-08-17 Janssen Pharmaceutica NV Anti-vista antibodies and fragments
PL3087095T3 (pl) 2013-12-24 2020-03-31 Argenx Bvba Antagoniści fcrn i sposoby stosowania
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
KR102278979B1 (ko) 2014-01-03 2021-07-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 공유적으로 연결된 헬리카-항-헬리카 항체 접합체 및 그의 용도
EP3089759B1 (en) 2014-01-03 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates
PL3089996T3 (pl) 2014-01-03 2021-12-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste przeciwciała przeciw haptenowi/przeciw receptorowi występującemu w barierze krew-mózg, ich kompleksy i ich zastosowanie jako przenośniki wahadłowe występujące w barierze krew-mózg
WO2015101588A1 (en) 2014-01-06 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
JP6749836B2 (ja) 2014-01-10 2020-09-02 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子キメラタンパク質及びその使用
JP6786392B2 (ja) 2014-01-15 2020-11-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ＦｃＲｎ結合特性が改変され、プロテインＡ結合特性が保持されているＦｃ領域変異体
WO2015109212A1 (en) 2014-01-17 2015-07-23 Pfizer Inc. Anti-il-2 antibodies and compositions and uses thereof
AU2015209154A1 (en) 2014-01-24 2017-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-STEAP1 antibodies and immunoconjugates
SG10201806108TA (en) 2014-01-24 2018-08-30 Ngm Biopharmaceuticals Inc Binding proteins and methods of use thereof
CA2937539A1 (en) 2014-02-04 2015-08-13 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
TWI769970B (zh) 2014-02-08 2022-07-11 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
AU2015214058B2 (en) 2014-02-08 2020-07-09 Genentech, Inc. Methods of treating Alzheimer's Disease
SI3105253T1 (sl) 2014-02-12 2018-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-Jagged1 in načini njihove uporabe
US10100115B2 (en) 2014-02-14 2018-10-16 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of vascularizing cancers
MX2016010729A (es) 2014-02-21 2016-10-26 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos.
US9732154B2 (en) * 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
EP4014995A1 (en) 2014-02-28 2022-06-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
NZ711451A (en) 2014-03-07 2016-05-27 Alexion Pharma Inc Anti-c5 antibodies having improved pharmacokinetics
WO2015138615A2 (en) 2014-03-12 2015-09-17 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
CN106456728A (zh) 2014-03-14 2017-02-22 达纳－法伯癌症研究所公司 恢复对抗癌症的nkg2d通路功能的疫苗组合物和方法
PT3116486T (pt) 2014-03-14 2020-03-12 Biomolecular Holdings Llc Imunoglobulina híbrida que contém uma ligação não peptídica
AU2015229035B2 (en) 2014-03-14 2021-08-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
MX2016011748A (es) 2014-03-14 2016-12-12 Innate Pharma Anticuerpos humanizados con estabilidad incrementada.
HRP20230260T1 (hr) 2014-03-19 2023-04-28 Genzyme Corporation Glikoinženjering ciljajućih dijelova specifičan za mjesto
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
RU2723940C2 (ru) 2014-03-21 2020-06-18 Экс-Боди, Инк. Биспецифические антигенсвязывающие полипептиды
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
KR20160137599A (ko) 2014-03-24 2016-11-30 제넨테크, 인크. C-met 길항제로의 암 치료 및 이것과 hgf 발현과의 상관관계
EP3122377A4 (en) 2014-03-27 2018-03-14 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
JP6588461B2 (ja) 2014-03-31 2019-10-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗血管新生剤及びｏｘ４０結合アゴニストを含む併用療法
ES2763898T3 (es) 2014-03-31 2020-06-01 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-OX40 y procedimientos de uso
AU2015240599B2 (en) 2014-04-04 2020-11-19 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
ES2900898T3 (es) 2014-04-07 2022-03-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos biespecíficos inmunoactivadores
TW201542594A (zh) 2014-04-11 2015-11-16 Medimmune Llc 雙特異性ｈｅｒ２抗體
JP2017518737A (ja) 2014-04-21 2017-07-13 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ＳＹＫ標的治療薬のための抗ｐＳＹＫ抗体分子及びその使用
TW201622746A (zh) 2014-04-24 2016-07-01 諾華公司 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
BR112016025312A2 (pt) 2014-05-01 2017-10-17 Genentech Inc variantes de anticorpo, anticorpo anti-fator d, formulação farmacêutica, dispositivo de distribuição, utilização da formulação e de uma composição, composição e método de tratamento de uma desordem
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
TWI735410B (zh) 2014-05-08 2021-08-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投予的ｇｐｃ３標的治療劑
AU2015260230A1 (en) 2014-05-13 2016-11-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function
WO2015173325A2 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Ablynx Nv Improved immunoglobulin variable domains
CN106414499A (zh) 2014-05-22 2017-02-15 基因泰克公司 抗gpc3抗体和免疫偶联物
CN106661622B (zh) 2014-05-23 2020-08-21 豪夫迈·罗氏有限公司 Mit生物标志物和使用它们的方法
LT3148579T (lt) 2014-05-28 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-gitr antikūnai ir jų panaudojimo būdai
WO2015184203A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Macrogenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
US10584171B2 (en) 2014-05-30 2020-03-10 Henlix Biotech Co., Ltd. Anti-epidermal growth factor receptor (EGFR) antibodies
ES2901705T3 (es) 2014-06-06 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra el receptor del factor de necrosis tumoral inducido por glucocorticoides (GITR) y usos de los mismos
CA2949982A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Genentech, Inc. Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
EP3154585B1 (en) 2014-06-11 2022-02-23 Kathy A. Green Use of vista agonists and antagonists to suppress or enhance humoral immunity
EP3154589A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CA2947504A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
EP3160994A2 (en) 2014-06-27 2017-05-03 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3161002A1 (en) 2014-06-27 2017-05-03 Innate Pharma MULTISPECIFIC NKp46 BINDING PROTEINS
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
US10544225B2 (en) 2014-07-03 2020-01-28 Beigene, Ltd. Anti-PD-L1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics
JP7032929B2 (ja) 2014-07-11 2022-03-09 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． 抗ｐｄ－ｌ１抗体及びその診断上の使用
JP2017526641A (ja) 2014-07-11 2017-09-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ経路阻害
NZ728688A (en) 2014-07-22 2023-06-30 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-1 antibodies
SG11201700687TA (en) 2014-08-05 2017-02-27 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-l1 antibodies
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
US9771417B2 (en) 2014-08-07 2017-09-26 Novartis Ag Angiopoietin-like 4 antibodies and methods of use
WO2016020882A2 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (angptl4) antibodies and methods of use
MA40513A (fr) 2014-08-12 2017-06-21 Novartis Ag Conjugués médicament-anticorps anti-cdh6
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
MA40475A (fr) 2014-08-19 2017-06-28 Fayadat Dilman Laurence Anticorps anti-tigit
WO2016030488A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Innate Pharma Treatment of celiac disease
US20170260261A1 (en) 2014-08-28 2017-09-14 Bioatla, Llc Conditionally Active Chimeric Antigen Receptors for Modified T-Cells
FR3025515B1 (fr) 2014-09-05 2016-09-09 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'un anticorps monoclonal
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
AU2015314826A1 (en) 2014-09-12 2017-03-02 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
AU2015314954B2 (en) 2014-09-12 2021-05-13 Genentech, Inc. Anti-HER2 antibodies and immunoconjugates
KR20170055521A (ko) 2014-09-17 2017-05-19 제넨테크, 인크. 항-her2 항체를 포함하는 면역콘주게이트
ES2796903T3 (es) 2014-09-23 2020-11-30 Hoffmann La Roche Procedimiento de uso de inmunoconjugados anti-CD79b
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
CA2962486A1 (en) 2014-09-26 2016-03-31 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Stabilized adrenomedullin derivatives and use thereof
US10717778B2 (en) 2014-09-29 2020-07-21 Duke University Bispecific molecules comprising an HIV-1 envelope targeting arm
WO2016056812A1 (en) * 2014-10-06 2016-04-14 Genexine, Inc. Human igg4 fc polypeptide variant
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
PL3204425T3 (pl) 2014-10-09 2021-03-08 Genzyme Corporation Glikomodyfikowane koniugaty przeciwciał z lekami
DK3207130T3 (da) 2014-10-14 2019-11-11 Halozyme Inc Sammensætninger af Adenosin Deaminase-2 (ADA2), varianter deraf og fremgangsmåder til anvendelse af samme
US9732148B2 (en) 2014-10-16 2017-08-15 Genentech, Inc. Anti-α-synuclein antibodies and methods of use
MA41480A (fr) 2014-10-17 2017-12-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps qui se lient au ccr6 et leurs utilisations
CA2959841A1 (en) 2014-10-23 2016-04-28 Innate Pharma Treatment of cancers using anti-nkg2a agents
WO2016065409A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd INTERFERON α2B VARIANTS
SG11201703448QA (en) 2014-11-03 2017-05-30 Genentech Inc Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
EP3215637B1 (en) 2014-11-03 2019-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and biomarkers for predicting efficacy and valuation of an ox40 agonist treatment
EP3753948A1 (en) 2014-11-05 2020-12-23 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria
JP6875276B2 (ja) 2014-11-05 2021-05-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 細菌における２鎖タンパク質の生成方法
MX2017003478A (es) 2014-11-05 2018-02-01 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr2/3 y metodos para su uso.
AR102521A1 (es) 2014-11-06 2017-03-08 Hoffmann La Roche Variantes de región fc con unión de fcrn modificada y métodos de utilización
KR20170076697A (ko) 2014-11-06 2017-07-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 개질된 FCRN-결합 특성 및 단백질 A-결합 특성을 가진 Fc-영역 변이체
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
MX2017005929A (es) 2014-11-06 2017-11-20 Genentech Inc Terapia de combinacion con agonistas de unión ox40 e inhibidores de tigit.
US10093730B2 (en) 2014-11-10 2018-10-09 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
SG11201703332SA (en) 2014-11-10 2017-05-30 Medimmune Ltd Binding molecules specific for cd73 and uses thereof
JP2018500882A (ja) 2014-11-10 2018-01-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 腎症の動物モデルおよびそれを治療するための薬剤
EP3218407A1 (en) 2014-11-11 2017-09-20 Medimmune Limited Therapeutic combinations comprising anti-cd73 antibodies and a2a receptor inhibitor and uses thereof
TWI831044B (zh) 2014-11-11 2024-02-01 日商中外製藥股份有限公司 抗原結合分子、包含抗原結合分子的醫藥組合物以及製造及選擇抗原結合分子之方法
CA2967188A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Novartis Ag Antibody drug conjugates
SI3221359T1 (sl) 2014-11-17 2020-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Metode zravljenja tumorja z uporabo bispecifičnega protitelesa CD3XCD20
BR112017010198A2 (pt) 2014-11-17 2017-12-26 Genentech Inc terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação a ox40 e antagonistas de ligação ao eixo de pd-1
CN107250158B (zh) 2014-11-19 2022-03-25 基因泰克公司 抗转铁蛋白受体/抗bace1多特异性抗体和使用方法
EP3221362B1 (en) 2014-11-19 2019-07-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
SI3221349T1 (sl) 2014-11-19 2021-02-26 Axon Neuroscience Se Humanizirano tau protitelo pri alzheimerjevi bolezni
JP6859259B2 (ja) 2014-11-19 2021-04-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＢＡＣＥｌに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用
ES2807182T3 (es) 2014-11-21 2021-02-22 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos frente a CD73 y sus usos
EP3789399A1 (en) 2014-11-21 2021-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
US9382321B2 (en) * 2014-11-26 2016-07-05 Adventis Health System/Sunbelt, Inc. Effector-deficient anti-CD32A antibodies
PL3227332T3 (pl) 2014-12-03 2020-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Wielospecyficzne przeciwciała
WO2016090347A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Immunext, Inc. Identification of vsig8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/vsig8 modulators
TWI713480B (zh) 2014-12-05 2020-12-21 美商建南德克公司 抗ＣＤ７９ｂ抗體及其使用方法
ES2764299T3 (es) 2014-12-09 2020-06-02 Inst Nat Sante Rech Med Anticuerpos monoclonales humanos contra AXL
KR20170085595A (ko) 2014-12-10 2017-07-24 제넨테크, 인크. 혈뇌 장벽 수용체 항체 및 사용 방법
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
EP3234598B1 (en) 2014-12-18 2019-11-06 F.Hoffmann-La Roche Ag Assay and method for determining cdc eliciting antibodies
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
MY181199A (en) 2014-12-19 2020-12-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
HUE056489T2 (hu) 2014-12-19 2022-02-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-C5 antitestek és alkalmazási eljárások
CN107278206B (zh) 2014-12-19 2021-04-02 雷根尼桑斯公司 结合人c6的抗体及其用途
MA40662B1 (fr) 2014-12-23 2020-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorps contre tigit
JP7152156B2 (ja) 2015-01-14 2022-10-12 ザ・ブリガーム・アンド・ウーメンズ・ホスピタル・インコーポレーテッド 抗ｌａｐモノクローナル抗体による癌の処置
US20180016327A1 (en) 2015-01-22 2018-01-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A Combination of Two or More Anti-C5 Antibodies and Methods of Use
SG11201706024YA (en) 2015-01-26 2017-08-30 Macrogenics Inc Multivalent molecules comprising dr5-binding domains
JP2018506275A (ja) 2015-01-28 2018-03-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多発性硬化症の遺伝子発現マーカー及び治療
CA2975875A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
EA201791754A1 (ru) 2015-02-05 2019-01-31 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ЗАВИСЯЩИЙ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН, ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ, IL-8-СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
JP6724023B2 (ja) 2015-02-09 2020-07-15 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 改善された補体活性化を示す操作された免疫グロブリンｆｃポリペプチド
SI3295951T1 (sl) 2015-02-19 2020-10-30 Compugen Ltd. Anti-PVRIG protitelesa in metode uporabe
WO2016134335A2 (en) 2015-02-19 2016-08-25 Compugen Ltd. Pvrig polypeptides and methods of treatment
WO2016138207A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 Genentech, Inc. Integrin beta7 antagonists and methods of treating crohn's disease
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
DK3268391T3 (da) 2015-03-09 2021-09-13 Argenx Bvba Fremgangsmåder til reduktion af serumniveauer af Fc-indeholdende midler ved anvendelse af FcRn-antagonister
CA2977285A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
PL3277725T3 (pl) 2015-03-30 2021-06-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Regiony stałe łańcucha ciężkiego o zmniejszonym wiązaniu do receptorów Fc gamma
FR3034420A1 (fr) 2015-03-31 2016-10-07 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-cd303
AU2016243026B2 (en) 2015-04-03 2022-03-31 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting AFP peptide/MHC complexes and uses thereof
AR104368A1 (es) 2015-04-03 2017-07-19 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos anti-cd20- / anti-baff
KR20180002653A (ko) 2015-04-07 2018-01-08 제넨테크, 인크. 효능작용 활성을 갖는 항원 결합 복합체 및 사용 방법
EP3875477A1 (en) 2015-04-17 2021-09-08 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
ES2881694T3 (es) 2015-04-24 2021-11-30 Hoffmann La Roche Procedimientos de identificación de bacterias que comprenden polipéptidos de unión
EP3288981A1 (en) 2015-05-01 2018-03-07 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
CN108137686B (zh) 2015-05-07 2022-06-17 阿吉纳斯公司 抗ox40抗体及其使用方法
JP6963508B2 (ja) 2015-05-11 2021-11-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎を治療する組成物及び方法
IL255312B (en) 2015-05-12 2022-08-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer containing a pd–l1 binding antagonist
ES2898023T3 (es) 2015-05-22 2022-03-03 Inst Nat Sante Rech Med Fragmentos de anticuerpos monoclonales humanos que inhiben tanto la actividad catalítica de Cath-D como su unión al receptor LRP1
EP3297673A4 (en) 2015-05-22 2019-05-08 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center FOR A PRAME-PEPTIDE SPECIFIC T-CELL RECEPTOR-SIMILAR ANTIBODIES
SG10202008304TA (en) 2015-05-29 2020-10-29 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against ox40 and uses thereof
JP6884111B2 (ja) 2015-05-29 2021-06-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌におけるｐｄ−ｌ１プロモーターのメチル化
EP3302563A1 (en) 2015-05-29 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
EP3303632B2 (en) 2015-05-29 2023-05-10 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic and diagnostic methods for cancer
JP6771492B2 (ja) 2015-05-30 2020-10-21 モレキュラー テンプレーツ, インク.Molecular Templates, Inc. 脱免疫化された志賀毒素ａサブユニット足場及びそれを含む細胞標的化分子
JP2018516933A (ja) 2015-06-02 2018-06-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−３４抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法
PE20180317A1 (es) 2015-06-05 2018-02-09 Genentech Inc Anticuerpos anti-tau y metodos de uso
CN107614526A (zh) 2015-06-05 2018-01-19 诺华股份有限公司 靶向骨形成蛋白9(bmp9)的抗体及其方法
AU2016274584A1 (en) 2015-06-08 2018-01-04 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-OX40 antibodies and PD-1 axis binding antagonists
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
KR20180011839A (ko) 2015-06-08 2018-02-02 제넨테크, 인크. 항-ox40 항체를 이용한 암의 치료 방법
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
US10017577B2 (en) 2015-06-15 2018-07-10 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
JP6996983B2 (ja) 2015-06-16 2022-02-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｌｌ－１抗体及び使用方法
KR20180023952A (ko) 2015-06-16 2018-03-07 제넨테크, 인크. FcRH5에 대한 인간화 및 친화도 성숙 항체 및 사용방법
JP2018526972A (ja) 2015-06-16 2018-09-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体及び使用方法
EP3310815A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
MX2017016169A (es) 2015-06-17 2018-08-15 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 y metodos de uso.
EP3310813A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 Novartis AG Antibody drug conjugates
CA2987797A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Christopher Robert Bebbington Methods and compositions for treating fibrotic diseases
WO2016207278A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific nk engager proteins
CA2990511A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
DK3313882T3 (da) 2015-06-24 2020-05-11 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-VISTA antistoffer og fragmenter
MY180297A (en) 2015-06-24 2020-11-27 Hoffmann La Roche Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
CN113929779A (zh) 2015-06-24 2022-01-14 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化的抗-Tau(pS422)抗体和使用方法
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
CA2990214A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Spring Bioscience Corporation Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
EP3313885A1 (en) 2015-06-29 2018-05-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
AU2016291846B2 (en) 2015-07-13 2022-05-26 Compugen Ltd. HIDE1 Compositions and Methods
HUE053296T2 (hu) * 2015-07-22 2021-06-28 Inatherys TFR-elleni antitestek és alkalmazásuk proliferatív és gyulladásos rendellenességek kezelése során
CA3025896A1 (en) 2015-07-23 2017-01-26 The Regents Of The University Of California Antibodies to coagulation factor xia and uses thereof
US11466093B2 (en) 2015-07-27 2022-10-11 The General Hospital Corporation Antibody derivatives with conditionally enabled effector function
CR20220194A (es) 2015-07-30 2022-06-16 Macrogenics Inc Moléculas de unión a pd-1 y métodos de uso de las mismas
CA2994412A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antigen-binding proteins targeting cd56 and uses thereof
UA126016C2 (uk) 2015-08-03 2022-08-03 Біовератів Терапеутікс Інк. Злитий білок фактора іх
CA3185706A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Novartis Ag Methods of treating fgf21-associated disorders
AU2016302881B2 (en) 2015-08-03 2022-09-15 Bristol-Myers Squibb Company Monoclonal antibodies against BCMA
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
JP6914919B2 (ja) 2015-08-28 2021-08-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヒプシン抗体及びその使用
CA2993432A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
KR20180042412A (ko) 2015-09-02 2018-04-25 이뮤텝 에스.에이.에스. 항-lag-3 항체
TN2018000076A1 (en) 2015-09-09 2019-07-08 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding molecules and methods of using the molecules
BR112018003326A2 (pt) 2015-09-09 2018-09-18 Novartis Ag anticorpos de ligação de linfopoietina estromal tímica (tslp) e métodos de uso dos anticorpos
US20190022092A1 (en) 2015-09-15 2019-01-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor and a GITR Binding Molecule, a 4-1BB Agonist, or an OX40 Agonist
US9862760B2 (en) 2015-09-16 2018-01-09 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
TW202342532A (zh) 2015-09-18 2023-11-01 日商中外製藥股份有限公司 Il-8結合抗體及其用途
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
WO2017053469A2 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
AU2016328357B2 (en) 2015-09-22 2023-03-02 Ventana Medical Systems, Inc. Anti-OX40 antibodies and diagnostic uses thereof
AU2016326666B2 (en) 2015-09-23 2023-06-15 Genentech, Inc. Optimized variants of anti-VEGF antibodies
CA2999917A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Abvitro Llc Hiv antibody compositions and methods of use
WO2017053748A2 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Genentech, Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use
EP3355920A4 (en) 2015-09-29 2019-05-15 Celgene Corporation PD-1 BINDING PROTEINS AND METHOD OF USE THEREOF
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
KR20180053674A (ko) 2015-10-02 2018-05-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 공자극 tnf 수용체에 특이적인 이중특이성 항체
CR20180161A (es) 2015-10-02 2018-05-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos para pd1 y tim3
RU2746409C1 (ru) 2015-10-02 2021-04-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к pd1 и способы их применения
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
RU2753390C1 (ru) 2015-10-02 2021-08-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
KR20240107346A (ko) 2015-10-06 2024-07-09 제넨테크, 인크. 다발성 경화증을 치료하기 위한 방법
MX2018004157A (es) 2015-10-07 2019-04-01 F Hoffmann ­La Roche Ag Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador.
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
US10138298B2 (en) 2015-10-23 2018-11-27 The Regents Of The University Of California Anti-IL-2 antibodies and compositions and uses thereof
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
JO3555B1 (ar) 2015-10-29 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme جسم مضاد يبطل فعالية فيروس الالتهاب الرئوي البشري
CN114891102A (zh) 2015-10-29 2022-08-12 豪夫迈·罗氏有限公司 抗变体Fc区抗体及使用方法
CN108289951A (zh) 2015-10-30 2018-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-因子d抗体和缀合物
JP2018536650A (ja) 2015-10-30 2018-12-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体変異体コンジュゲート及びその使用
SI3368578T1 (sl) 2015-10-30 2021-08-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa proti HtrA1 in postopki uporabe
CN109071674B (zh) 2015-10-30 2022-08-05 豪夫迈·罗氏有限公司 铰链修饰的抗体片段和其制备方法
JP6998869B2 (ja) 2015-11-08 2022-02-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体のスクリーニング方法
WO2017086419A1 (ja) 2015-11-18 2017-05-26 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
AU2016356780A1 (en) 2015-11-19 2018-06-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) and uses thereof
KR102630475B1 (ko) 2015-11-30 2024-01-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항 인간 ip-10 항체 및 이의 용도
CN114470194A (zh) 2015-12-02 2022-05-13 斯特库伯株式会社 与btn1a1免疫特异性结合的抗体和分子及其治疗用途
EP3383908A1 (en) 2015-12-02 2018-10-10 Stsciences, Inc. Antibodies specific to glycosylated btla (b- and t- lymphocyte attenuator)
US11447557B2 (en) 2015-12-02 2022-09-20 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
PE20181358A1 (es) 2015-12-04 2018-08-22 Novartis Ag Composiciones de anticuerpo injertado con citoquina y metodos para su uso en inmunorregulacion
KR102424513B1 (ko) 2015-12-14 2022-07-25 마크로제닉스, 인크. Pd-1 및 ctla-4과의 면역반응성을 가진 이중특이적 분자, 및 이것의 사용 방법
WO2017106129A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-lag3 antibodies and antigen-binding fragments
BR112018009067A8 (pt) 2015-12-18 2019-02-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpos anti-c5 e métodos de uso
CA3008102A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
US11649262B2 (en) 2015-12-28 2023-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for promoting efficiency of purification of Fc region-containing polypeptide
AR107303A1 (es) 2016-01-08 2018-04-18 Hoffmann La Roche Métodos de tratamiento de cánceres positivos para ace utilizando antagonistas de unión a eje pd-1 y anticuerpos biespecíficos anti-ace / anti-cd3, uso, composición, kit
CN109069627A (zh) 2016-01-14 2018-12-21 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 对foxp3衍生肽特异性的t细胞受体样抗体
CN114113625A (zh) 2016-01-20 2022-03-01 基因泰克公司 用于阿尔茨海默氏病的高剂量治疗
BR112018015659A2 (pt) 2016-02-01 2018-12-26 Bioverativ Therapeutics Inc genes otimizados do fator viii
CN109071625A (zh) 2016-02-04 2018-12-21 柯瑞斯公司 平滑化突变体和其使用方法
CN109069626A (zh) 2016-02-12 2018-12-21 詹森药业有限公司 抗-vista(b7h5)抗体
CU20180088A7 (es) 2016-02-17 2019-05-03 Novartis Ag Anticuerpos anti tgfbeta 2
AU2017225854B2 (en) 2016-02-29 2020-11-19 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
SG10201913033UA (en) 2016-03-04 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy with anti-cd73 antibodies
TW201735947A (zh) 2016-03-14 2017-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 用於癌之治療的細胞傷害誘導治療劑
CN116789830A (zh) * 2016-03-14 2023-09-22 奥斯陆大学 具有改变的FcRn结合的工程化免疫球蛋白
TW202248213A (zh) 2016-03-15 2022-12-16 日商中外製藥股份有限公司 使用pd-1軸結合拮抗劑和抗gpc3抗體治療癌症的方法
SG11201806542PA (en) 2016-03-15 2018-08-30 Innate Pharma Anti-mica antibodies
WO2017161173A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Engineered trail for cancer therapy
JP2019509322A (ja) 2016-03-22 2019-04-04 バイオノミクス リミテッド 抗ｌｇｒ５モノクローナル抗体の投与
KR102438140B1 (ko) 2016-03-22 2022-08-31 엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔 인간화 항-클라우딘-1 항체 및 이의 용도
US20170315132A1 (en) 2016-03-25 2017-11-02 Genentech, Inc. Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
JP7468992B2 (ja) 2016-03-29 2024-04-16 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２及び／又は－２３抗体の増加した間隔投与による乾癬の処置
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
PL3443350T3 (pl) 2016-04-15 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby monitorowania i leczenia nowotworu
CN109563164A (zh) 2016-04-15 2019-04-02 生物蛋白有限公司 抗axl抗体、抗体片段和它们的免疫缀合物以及其用途
CN118108843A (zh) 2016-04-15 2024-05-31 伊穆奈克斯特股份有限公司 抗人vista抗体及其用途
MA43552A (fr) 2016-04-15 2018-11-07 Alpine Immune Sciences Inc Protéines immunomodulatrices à variants de cd80 et leurs utilisations
WO2017181143A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis
EP3443120A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
KR102514317B1 (ko) 2016-04-15 2023-03-27 마크로제닉스, 인크. 신규 b7-h3-결합 분자, 그것의 항체 약물 콘쥬게이트 및 그것의 사용 방법
KR20230051601A (ko) 2016-04-15 2023-04-18 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Icos 리간드 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
US11230591B2 (en) 2016-04-20 2022-01-25 Merck Sharp & Dohme Corp. CMV neutralizing antigen binding proteins
TW201805309A (zh) 2016-04-21 2018-02-16 艾伯維史坦森特瑞斯有限責任公司 新穎抗－bmpr1b抗體及使用方法
JP2019515677A (ja) 2016-04-26 2019-06-13 アール．ピー．シェーラー テクノロジーズ エルエルシー 抗体複合体ならびにそれを作製および使用する方法
US11312766B2 (en) 2016-04-27 2022-04-26 Novartis Ag Antibodies against growth differentiation factor 15 and uses thereof
EP3452502B1 (en) 2016-05-02 2021-03-03 H. Hoffnabb-La Roche Ag The contorsbody - a single chain target binder
SG11201809793UA (en) 2016-05-09 2018-12-28 Bristol Myers Squibb Co Tl1a antibodies and uses thereof
EP3455252B1 (en) 2016-05-11 2022-02-23 F. Hoffmann-La Roche AG Modified anti-tenascin antibodies and methods of use
EP3455261B1 (en) 2016-05-13 2022-08-03 BioAtla, Inc. Anti-ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
KR102366813B1 (ko) 2016-05-27 2022-02-24 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
WO2017214024A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
EP4371570A3 (en) 2016-06-08 2024-07-17 Xencor, Inc. Treatment of igg4-related diseases with anti-cd19 antibodies crossbinding to cd32b
JP7231411B2 (ja) 2016-06-15 2023-03-01 ノバルティス アーゲー 骨形成タンパク質６（ｂｍｐ６）の阻害剤を使用して疾患を処置する方法
CN116059346A (zh) 2016-06-17 2023-05-05 中外制药株式会社 抗-肌肉生长抑制因子抗体及使用方法
EP3475298A1 (en) 2016-06-24 2019-05-01 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
AU2017290389B2 (en) 2016-07-01 2024-09-26 Resolve Therapeutics, Llc Optimized binuclease fusions and methods
JP6983824B2 (ja) 2016-07-04 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 新規抗体フォーマット
WO2018007885A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Beigene, Ltd. COMBINATION OF A PD-l ANTAGONIST AND A RAF INHIBITOR FOR TREATING CANCER
MX2019000443A (es) 2016-07-14 2019-06-20 Squibb Bristol Myers Co Anticuerpos contra proteina 3 que contiene el dominio de mucina e inmunoglobulina de linfocitos t (tim3) y sus usos.
CA3030926A1 (en) 2016-07-19 2018-01-25 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Anti-cd47 combination therapy
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US20200148750A1 (en) 2016-07-21 2020-05-14 Emory University Ebola Virus Antibodies and Binding Agents Derived Therefrom
MA45715A (fr) 2016-07-25 2019-05-29 Biogen Ma Inc Anticorps anti-hspa5 (grp78) et leurs utilisations
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2018022945A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2018022946A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11186634B2 (en) 2016-07-29 2021-11-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies targeting tumor associated macrophages and uses thereof
NL2017267B1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
EP3492496A4 (en) 2016-07-29 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha BISPECIFIC ANTIBODY WITH INCREASED ACTIVITY OF THE FUNCTION OF THE ALTERNATIVE FVIII COFACTOR
NL2017270B1 (en) 2016-08-02 2018-02-09 Aduro Biotech Holdings Europe B V New anti-hCTLA-4 antibodies
WO2018052556A1 (en) 2016-08-02 2018-03-22 Visterra, Inc. Engineered polypeptides and uses thereof
WO2018027042A1 (en) 2016-08-03 2018-02-08 Bio-Techne Corporation Identification of vsig3/vista as a novel immune checkpoint and use thereof for immunotherapy
KR102538749B1 (ko) 2016-08-05 2023-06-01 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
SG11201901020RA (en) 2016-08-05 2019-03-28 Allakos Inc Anti-siglec-7 antibodies for the treatment of cancer
BR112019002039A2 (pt) 2016-08-05 2019-05-07 Medimmune, Llc anticorpos anti-o2 e uso dos mesmos
JP7250674B2 (ja) 2016-08-08 2023-04-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療及び診断方法
CN109689111B (zh) 2016-08-11 2024-04-05 基因泰克公司 吡咯并苯并二氮杂䓬前药及其抗体缀合物
JP7178342B2 (ja) * 2016-08-12 2022-11-25 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド アゴニズム及びエフェクター機能が増強した改変抗体、及び他のＦｃドメイン含有分子
JP7068275B2 (ja) 2016-08-17 2022-05-16 コンピュジェン リミテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体、抗ｐｖｒｉｇ抗体およびそれらの組み合せ
CA3034326A1 (en) 2016-08-19 2018-02-22 Beigene, Ltd. Use of a combination comprising a btk inhibitor for treating cancers
US10981976B2 (en) 2016-08-31 2021-04-20 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus K envelope (HERV-K) and use thereof
AU2017321973B2 (en) 2016-09-02 2024-09-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating B cell disorders
WO2018053032A1 (en) 2016-09-13 2018-03-22 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of pulmonary fibrosis
KR102391338B1 (ko) 2016-09-16 2022-04-26 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-pd-1 항체
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
AU2017329024A1 (en) 2016-09-19 2019-03-21 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
EP3515932B1 (en) 2016-09-19 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Complement factor based affinity chromatography
US10766958B2 (en) 2016-09-19 2020-09-08 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies
WO2018057735A1 (en) 2016-09-21 2018-03-29 Nextcure, Inc. Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof
EP4360714A3 (en) 2016-09-21 2024-07-24 Nextcure, Inc. Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof
PL3528838T3 (pl) 2016-09-23 2023-12-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Zastosowania antagonistów IL-13 do leczenia atopowego zapalenia skóry
JOP20190055A1 (ar) 2016-09-26 2019-03-24 Merck Sharp & Dohme أجسام مضادة ضد cd27
MX2019003703A (es) 2016-09-30 2020-08-13 Janssen Biotech Inc Método seguro y eficaz para tratar la psoriasis con el anticuerpo específico anti-il23.
EP3522933B1 (en) 2016-10-05 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for preparing antibody drug conjugates
WO2018068028A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
SG10201912663YA (en) 2016-10-11 2020-03-30 Agenus Inc Anti-lag-3 antibodies and methods of use thereof
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
US11117956B2 (en) 2016-10-19 2021-09-14 Medimmune, Llc Anti-O1 antibodies and uses thereof
US11286295B2 (en) 2016-10-20 2022-03-29 Sanofi Anti-CHIKV monoclonal antibodies directed against the E2 structural protein
BR112019008010A2 (pt) 2016-10-20 2019-07-09 I Mab anticorpo monoclonal isolado ou fragmento imunologicamente ativo do mesmo, anticorpo monoclonal biespecífico isolado, composição farmacêutica, método para tratamento de uma doença em um sujeito humano em necessidade do mesmo, proteína de fusão, epítopo imunodominante codificado pelo gene cd47, e, molécula biológica
KR20190068602A (ko) 2016-10-21 2019-06-18 이나뜨 파르마 항-kir3dl2 작용제에 의한 치료
CN110267678A (zh) 2016-10-29 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗mic抗体和使用方法
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
AU2017353427A1 (en) 2016-11-02 2019-05-16 Bristol-Myers Squibb Company Bispecific antibody against BCMA and CD3 and an immunological drug for combined use in treating multiple myeloma
AU2017359467A1 (en) 2016-11-09 2019-05-02 Agenus Inc. Anti-OX40 antibodies, anti-GITR antibodies, and methods of use thereof
WO2018087720A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 Novartis Ag Compositions, methods, and therapeutic uses related to fusogenic protein minion
KR20190074300A (ko) 2016-11-15 2019-06-27 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
US11208474B2 (en) 2016-11-16 2021-12-28 Janssen Biotech, Inc. Method of treating psoriasis with anti-IL23 specific antibody
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
JP7313684B2 (ja) 2016-11-21 2023-07-25 キュレアブ ゲーエムベーハー 抗ｇｐ７３抗体及びイムノコンジュゲート
TN2019000164A1 (en) 2016-11-23 2020-10-05 Bioverativ Therapeutics Inc Mono- and bispecific antibodies binding to coagulation factor ix and coagulation factor x
MX2019006444A (es) 2016-12-02 2019-10-30 Bioverativ Therapeutics Inc Métodos de tratamiento de artropatía hemofílica utilizando factores de coagulación quiméricos.
JP2019536794A (ja) 2016-12-02 2019-12-19 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 凝固因子に対する免疫寛容を誘導する方法
WO2018104893A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Alpha4-beta7 antibodies with incrased fcrn binding and/or half-life
JP7193457B2 (ja) 2016-12-07 2022-12-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔａｕ抗体及び使用方法
JP2020511937A (ja) 2016-12-07 2020-04-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔａｕ抗体及び使用方法
KR102603681B1 (ko) 2016-12-07 2023-11-17 아게누스 인코포레이티드 항체 및 이의 사용방법
KR102504605B1 (ko) 2016-12-07 2023-03-02 아게누스 인코포레이티드 항-ctla-4 항체 및 이의 사용 방법
CA3045495A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens
US11390670B2 (en) 2016-12-19 2022-07-19 Medimmune Limited Antibodies against LIF and uses thereof
WO2018115960A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Mosaic Biomedicals, S.L. Antibodies against lif and uses thereof
CA3039446A1 (en) 2016-12-20 2018-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and 4-1bb (cd137) agonists
IL267113B2 (en) 2016-12-21 2024-09-01 Cephalon Llc Antibodies that bind specifically to human IL-15 and their uses
US20190322767A1 (en) 2016-12-23 2019-10-24 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
AU2017383232B2 (en) 2016-12-23 2024-09-12 Novartis Ag Factor XI antibodies and methods of use
JP7122311B2 (ja) 2017-01-03 2022-08-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗４－１ｂｂクローン２０ｈ４．９を含む二重特異性抗原結合分子
TW201825515A (zh) 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
CN110462027A (zh) 2017-01-06 2019-11-15 艾欧凡斯生物治疗公司 用肿瘤坏死因子受体超家族（tnfrsf）激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞（til）及til和tnfrsf激动剂的治疗组合
CA3049165A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof
US11274157B2 (en) 2017-01-12 2022-03-15 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting histone H3 peptide/MHC complexes and uses thereof
TWI774726B (zh) 2017-01-25 2022-08-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 (S)-7-(1-(丁-2-炔醯基)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺的晶型、及其製備和用途
CR20220563A (es) 2017-01-31 2022-12-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-c5 contra una enfermedad relacionada con c5 y un producto de la misma
WO2018146594A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Novartis Ag Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
WO2018146317A1 (en) * 2017-02-10 2018-08-16 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
SG11201907364WA (en) 2017-02-10 2019-09-27 Genentech Inc Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
EP3583124A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to alpha-synuclein and uses thereof
PE20191551A1 (es) 2017-02-17 2019-10-24 Denali Therapeutics Inc Polipeptidos de union al receptor de transferrina disenados
WO2018160536A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-ctla-4 antibodies with enhanced adcc to enhance immune response to a vaccine
NZ756323A (en) 2017-02-28 2022-07-01 Seagen Inc Cysteine mutated antibodies for conjugation
MX2019010295A (es) 2017-03-01 2019-11-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
JP2020510432A (ja) 2017-03-02 2020-04-09 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ｎｅｃｔｉｎ−４への特異性を有する抗体及びその使用
ES2963638T3 (es) 2017-03-16 2024-04-01 Alpine Immune Sciences Inc Proteínas inmunomoduladoras de variantes de PD-L1 y usos de las mismas
CA3053812A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-l2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3054068A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3056248A1 (en) 2017-03-22 2018-09-27 Genentech, Inc. Optimized antibody compositions for treatment of ocular disorders
US10982000B2 (en) 2017-03-24 2021-04-20 Novartis Ag Methods for treating and/or reducing the likelihood of heart failure by administering anti-activin receptor type II (anti-ActRII) antibody
JP2020515543A (ja) 2017-03-28 2020-05-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 神経変性疾患の治療方法
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
EP3601346A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
MX2019011907A (es) 2017-04-04 2020-01-09 Hoffmann La Roche Nuevas moleculas de union a antigeno biespecificas capaces de unirse especificamente a cd40 y a fap.
UA128451C2 (uk) 2017-04-05 2024-07-17 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Біспецифічне антитіло, яке специфічно зв'язується з pd1 і lag3
PL3606954T3 (pl) 2017-04-05 2022-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała anty-LAG3
TWI796329B (zh) 2017-04-07 2023-03-21 美商默沙東有限責任公司 抗－ilt4抗體及抗原結合片段
CA3059366A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Agenus Inc. Anti-cd137 antibodies and methods of use thereof
US20230227566A1 (en) 2017-04-14 2023-07-20 Gamamabs Pharma Amhrii-binding compounds for preventing or treating lung cancers
CN110891970B (zh) 2017-04-14 2024-05-10 埃克塞里艾克西斯公司 用于预防或治疗癌症的amhrii结合化合物
CA3058478A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
DK3612215T3 (da) 2017-04-20 2024-10-28 Atyr Pharma Inc Sammensætninger til behandling af lungeinflammation
US20190078160A1 (en) 2017-04-21 2019-03-14 Genentech, Inc. Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
MY201065A (en) 2017-04-26 2024-02-01 Eureka Therapeutics Inc Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
TWI791519B (zh) 2017-04-27 2023-02-11 美商提薩羅有限公司 針對淋巴細胞活化基因-3（lag-3）之抗體藥劑及其用途
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
PT3618863T (pt) 2017-05-01 2023-08-23 Agenus Inc Anticorpos anti-tigit e seus métodos de utilização
US11203638B2 (en) 2017-05-05 2021-12-21 Allakos Inc. Methods and compositions for treating perennial allergic conjunctivitis and keratoconjunctivitis
KR20200003913A (ko) 2017-05-10 2020-01-10 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 액상 종양으로부터의 종양 침윤 림프구의 확장 및 그의 치료 용도
CN111094335B (zh) 2017-05-15 2022-08-23 罗切斯特大学 广泛中和的抗流感单克隆抗体及其用途
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
MX2019014023A (es) 2017-05-24 2020-02-17 Novartis Ag Proteinas de anticuerpo injertadas con citocina y metodos de uso en el tratamiento del cancer.
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
EP3630162A1 (en) 2017-05-24 2020-04-08 Novartis AG Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use
SG10201913206RA (en) 2017-05-25 2020-02-27 Bristol Myers Squibb Co Antibodies comprising modified heavy constant regions
KR20200024158A (ko) 2017-05-31 2020-03-06 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 Btn1a1에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 분자를 사용하여 암을 치료하는 방법
JP7369038B2 (ja) 2017-05-31 2023-10-25 ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド Ｂｔｎ１ａ１に免疫特異的に結合する抗体及び分子並びにその治療的使用
MX2019014265A (es) 2017-06-01 2020-08-03 Compugen Ltd Tratamientos conjuntos triples con anticuerpos.
KR20200026209A (ko) 2017-06-06 2020-03-10 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 Btn1a1 또는 btn1a1-리간드에 결합하는 항체 및 분자를 사용하여 암을 치료하는 방법
UY37758A (es) 2017-06-12 2019-01-31 Novartis Ag Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos
WO2018229706A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
BR112019024410A2 (pt) 2017-06-20 2020-07-14 Amgen Inc. método de tratamento ou melhoria de disfunções metabólicas usando proteínas de ligação para receptor do peptídeo inibidor gástrico (gipr) em combinação com agonistas de glp 1
AU2018289581B2 (en) 2017-06-23 2024-09-19 VelosBio Inc. ROR1 antibody immunoconjugates
CA3066518A1 (en) 2017-06-26 2019-01-03 Beigene, Ltd. Immunotherapy for hepatocellular carcinoma
TW201906865A (zh) 2017-06-28 2019-02-16 瑞士商諾華公司 預防及治療尿失禁之方法
KR20200093518A (ko) 2017-07-21 2020-08-05 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
CN107748258A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRII受体的ELISA检测方法
CN107748259A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcRn受体的ELISA检测方法
SG11202000658PA (en) 2017-07-26 2020-02-27 Forty Seven Inc Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
CN107748253A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRI受体的ELISA检测方法
CN107748262A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRIIIA受体的ELISA检测方法
KR20230066126A (ko) 2017-07-27 2023-05-12 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 고농도 항-c5 항체 제형
JP7374883B2 (ja) 2017-08-09 2023-11-07 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 核酸分子およびその使用
JP2020530297A (ja) 2017-08-11 2020-10-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ８抗体及びその使用
WO2019040674A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Sanabio, Llc SOLUBLE INTERFERON RECEPTORS AND USES THEREOF
EP3672990A1 (en) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
DK3456736T3 (da) 2017-09-19 2021-05-03 Tillotts Pharma Ag Antistofvarianter
EP3456737B1 (en) 2017-09-19 2024-02-14 Tillotts Pharma Ag Antibody variants
WO2019059411A1 (en) 2017-09-20 2019-03-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha DOSAGE FOR POLYTHERAPY USING PD-1 AXIS BINDING ANTAGONISTS AND GPC3 TARGETING AGENT
TW201922780A (zh) 2017-09-25 2019-06-16 美商健生生物科技公司 以抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗體治療狼瘡之安全且有效之方法
AU2018338859A1 (en) 2017-09-29 2020-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Multispecific antigen-binding molecule having blood coagulation factor VIII (FVIII) cofactor function-substituting activity, and pharmaceutical formulation containing said molecule as active ingredient
EP3694552A1 (en) 2017-10-10 2020-08-19 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibodies and uses thereof
KR20230020022A (ko) 2017-10-10 2023-02-09 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Ctla-4 변이체 면역조절 단백질 및 이의 용도
AU2018347521A1 (en) 2017-10-12 2020-05-07 Immunowake Inc. VEGFR-antibody light chain fusion protein
AU2018347607A1 (en) 2017-10-14 2020-03-26 Cytomx Therapeutics, Inc. Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof
JP7282760B2 (ja) 2017-10-18 2023-05-29 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド バリアントｉｃｏｓリガンド免疫調節タンパク質ならびに関連する組成物および方法
TW201932142A (zh) 2017-10-20 2019-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 自單特異性抗體產生多特異性抗體之方法
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
US12128101B2 (en) 2017-10-26 2024-10-29 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of anti-C5 antibodies for treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) and atypical hemolytic uremic syndrome (aHUS)
KR20200074195A (ko) 2017-10-30 2020-06-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 단일특이적 항체로부터 다중특이적 항체의 생체내 생성 방법
EP3707510B1 (en) 2017-11-06 2024-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2019093342A1 (ja) 2017-11-08 2019-05-16 協和発酵キリン株式会社 ＣＤ４０とＥｐＣＡＭに結合するバイスペシフィック抗体
CN111556895B (zh) 2017-11-14 2024-09-13 中外制药株式会社 抗-c1s抗体及使用方法
EP3713959A1 (en) 2017-11-21 2020-09-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3713965A1 (en) 2017-11-22 2020-09-30 Novartis AG Reversal binding agents for anti-factor xi/xia antibodies and uses thereof
JP2021503885A (ja) 2017-11-22 2021-02-15 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 末梢血からの末梢血リンパ球（ｐｂｌ）の拡大培養
US11786529B2 (en) 2017-11-29 2023-10-17 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive B-cell lymphomas using a combination comprising BTK inhibitors
US11433132B2 (en) 2017-12-01 2022-09-06 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
EP3720963A4 (en) 2017-12-05 2021-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIGEN BINDING MOLECULE INCLUDING A VARIABLE REGION OF MODIFIED ANTIBODIES BINDING TO CD3 AND CD137
EP3720877A1 (en) 2017-12-08 2020-10-14 Argenx BVBA Use of fcrn antagonists for treatment of generalized myasthenia gravis
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
WO2019118873A2 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for determining the beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof and beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
WO2019126536A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals Inc. Humanized anti-cd200 antibodies and uses thereof
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
EP3728321A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 F. Hoffmann-La Roche AG Use of pilra binding agents for treatment of a disease
TWI817974B (zh) 2017-12-28 2023-10-11 日商中外製藥股份有限公司 細胞毒性誘導治療劑
WO2019129211A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Antibodies and variants thereof against pd-l1
CN117050184A (zh) 2017-12-28 2023-11-14 南京传奇生物科技有限公司 针对tigit的单域抗体和其变体
CN111511400A (zh) 2017-12-29 2020-08-07 豪夫迈·罗氏有限公司 抗vegf抗体及其使用方法
FR3076294B1 (fr) 2017-12-29 2022-01-28 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'anticorps a partir de lait brut
SG11202006148UA (en) 2018-01-03 2020-07-29 Alpine Immune Sciences Inc Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
US11466077B2 (en) 2018-01-05 2022-10-11 Ac Immune Sa Misfolded TDP-43 binding molecules
EP3737700A1 (en) 2018-01-12 2020-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
CN111699200B (zh) 2018-01-15 2023-05-26 南京传奇生物科技有限公司 针对pd-1的单域抗体和其变体
WO2019143636A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
JP7399880B2 (ja) * 2018-01-26 2023-12-18 ジェンザイム・コーポレーション ＦｃＲｎへの増強された結合及び延長された半減期を有するＦｃ変異体
CN111655717A (zh) 2018-01-26 2020-09-11 豪夫迈·罗氏有限公司 IL-22 Fc融合蛋白及使用方法
JP7345479B2 (ja) 2018-01-26 2023-09-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 組成物及び使用方法
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
US20210038744A1 (en) 2018-02-01 2021-02-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
WO2019148412A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
JP2021512120A (ja) 2018-02-02 2021-05-13 バイオ−テクネ コーポレーション Ｖｉｓｔａとｖｓｉｇ３との相互作用を調節する化合物ならびにその製造および使用方法
JP7475275B2 (ja) 2018-02-08 2024-04-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 二重特異性抗原結合分子及びその使用方法
CA3088557C (en) 2018-02-09 2024-02-27 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
WO2019160829A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with adenosine a2a receptor antagonists and therapeutic combinations of tils and adenosine a2a receptor antagonists
CA3091646A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Abba Therapeutics Ag Anti-human pd-l2 antibodies
TW201946647A (zh) 2018-02-21 2019-12-16 美商建南德克公司 利用il-22 fc融合蛋白進行治療之投藥
MX2020008882A (es) 2018-02-26 2021-01-08 Genentech Inc Dosificación para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1.
WO2019169229A1 (en) 2018-03-01 2019-09-06 Nextcure, Inc. Klrg1 binding compositions and methods of use thereof
EA202091810A1 (ru) 2018-03-02 2021-01-29 Файв Прайм Терапьютикс, Инк. Антитела к b7-h4 и способы их применения
NL2020520B1 (en) 2018-03-02 2019-09-12 Labo Bio Medical Invest B V Multispecific binding molecules for the prevention, treatment and diagnosis of neurodegenerative disorders
IL310216A (en) 2018-03-05 2024-03-01 Janssen Biotech Inc Methods for treating Crohn's disease with a specific anti-IL23 antibody
KR20200132913A (ko) 2018-03-13 2020-11-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 4-1bb 작용제와 항-cd20 항체의 치료 조합
MX2020009514A (es) 2018-03-14 2020-12-07 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co Ltd Anticuerpos anti-claudina 18.2 (cldn18.2).
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
TWI827585B (zh) 2018-03-15 2024-01-01 日商中外製藥股份有限公司 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法
AU2019240247A1 (en) * 2018-03-21 2020-10-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Fc variant compositions and methods of use thereof
BR112020019083A2 (pt) 2018-03-21 2020-12-29 Five Prime Therapeutics, Inc. Anticorpos, ácido nucleico, composições, célula e métodos para preparar um anticorpo, para tratar câncer, para tratar uma doença infecciosa, para tratar uma inflamação, para a identificação de um anticorpo, para melhorar a eficácia antitumoral de um anticorpo, para melhorar a farmacocinética de um anticorpo, para selecionar um anticorpo, para melhorar a eficácia de anticorpos, para isolar anticorpos, para detectar vista em uma amostra e para tratar câncer
PE20210665A1 (es) 2018-03-23 2021-03-31 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra mica y/o micb y sus usos
PE20210313A1 (es) 2018-03-28 2021-02-12 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de fusion interleucina-2/receptor alfa de interleucina-2 y metodos de uso
JP2021519073A (ja) 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
SG11202006674QA (en) 2018-03-30 2020-08-28 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Single-domain antibodies against lag-3 and uses thereof
CR20200450A (es) 2018-04-02 2021-02-11 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti-trem-l y usos de los mismos
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
CN112585164A (zh) 2018-04-12 2021-03-30 免疫医疗有限公司 用于治疗癌症的、lif抑制剂和pd-1轴抑制剂的组合
WO2019200322A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Genentech, Inc. Stable anti-cd79b immunoconjugate formulations
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
EP3787678A1 (en) 2018-05-03 2021-03-10 University Of Rochester Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
US20190345245A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Janssen Biotech, Inc. Methods of Treating Crohn's Disease with Anti-IL23 Specific Antibody
EP3794031A2 (en) 2018-05-14 2021-03-24 MedImmune Limited Antibodies against lif and dosage forms thereof
BR112020022405A2 (pt) 2018-05-16 2021-04-13 Csl Limited Variantes de receptor de complemento solúvel tipo 1 e usos dos mesmos
CN112512555A (zh) 2018-05-18 2021-03-16 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 治疗血友病a的方法
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
KR20210013708A (ko) 2018-05-23 2021-02-05 베이진 엘티디 항-ox40 항체 및 사용 방법
TW202015726A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
US11932681B2 (en) 2018-05-31 2024-03-19 Novartis Ag Hepatitis B antibodies
KR20210016448A (ko) 2018-06-01 2021-02-15 컴퓨젠 엘티디. 항-pvrig/항-tigit 이중특이적 항체 및 사용 방법
CU20200089A7 (es) 2018-06-01 2021-07-02 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma
JP7457661B2 (ja) 2018-06-04 2024-03-28 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド 低減したエフェクター機能を有する抗ｖｌａ－４抗体
US20210238308A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
WO2019236739A1 (en) 2018-06-05 2019-12-12 Amgen Inc. Modulating antibody dependent cellular phagocytosis
TWI848953B (zh) 2018-06-09 2024-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 針對癌症治療之多特異性結合蛋白
WO2019241758A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2019243900A2 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Mosaic Biomedicals Slu Combination of lif inhibitors and platinum-based antineoplastic agents for use in treating cancer
SG11202012342WA (en) 2018-06-18 2021-01-28 Eureka Therapeutics Inc Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
CA3103017A1 (en) 2018-06-23 2019-12-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
CA3104686A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Fgf-21 formulations
JP2021528988A (ja) 2018-07-04 2021-10-28 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規の二重特異性アゴニスト４−１ｂｂ抗原結合分子
EP3820904A2 (en) 2018-07-09 2021-05-19 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
KR20210031722A (ko) 2018-07-11 2021-03-22 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체
EP3824295A4 (en) 2018-07-18 2022-04-27 Janssen Biotech, Inc. PREDICTORS OF PROLONGED RESPONSE AFTER TREATMENT WITH AN ANTI-IL23 SPECIFIC ANTIBODY
CN112839644A (zh) 2018-07-18 2021-05-25 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法
KR20200033225A (ko) 2018-08-01 2020-03-27 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 C5-관련 질환의 치료 또는 예방용 의약 조성물 및 c5-관련 질환을 치료 또는 예방하기 위한 방법
BR112021001693A2 (pt) 2018-08-03 2021-05-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha molécula de ligação ao antígeno contendo dois domínios de ligação ao antígeno q ligados entre si
MA50586A (fr) 2018-08-09 2020-09-16 Regeneron Pharma Procédés d'évaluation de l'affinité de liaison d'une variante d'anticorps au récepteur fc néonatal
US20200069817A1 (en) 2018-08-09 2020-03-05 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
CA3108369A1 (en) 2018-08-10 2020-02-13 Tomoyuki Igawa Anti-cd137 antigen-binding molecule and utilization thereof
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
IL280875B1 (en) 2018-08-31 2024-08-01 Regeneron Pharma Cytokine Release Syndrome Attenuating Dosing Strategy for Bispecific Antibodies to CD3 and CD20
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020052542A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against cll1 and constructs thereof
WO2020053742A2 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Novartis Ag Anti-hla-hbv peptide antibodies
US20220033511A1 (en) 2018-09-11 2022-02-03 Amgen Inc. Methods of modulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
US20210371518A1 (en) 2018-09-13 2021-12-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Novel lilrb4 antibodies and uses thereof
AU2019342017A1 (en) 2018-09-18 2021-05-13 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-TNFR2 antibodies and uses thereof
CA3112578A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
WO2020061060A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2020061349A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
HUE063462T2 (hu) 2018-09-24 2024-01-28 Janssen Biotech Inc A colitis ulcerosa kezelésének biztonságos és hatékony eljárása anti-IL12/IL23 antitesttel
CN113286812A (zh) 2018-09-27 2021-08-20 西里欧发展公司 掩蔽型细胞因子多肽
SG11202102851XA (en) 2018-09-27 2021-04-29 Celgene Corp SIRPa BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
KR20210068079A (ko) 2018-09-28 2021-06-08 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Cd3 및 cd137에 결합할 수 있지만 동시에는 결합하지 않는 항원 결합 분자
MX2021003609A (es) 2018-09-28 2021-05-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno que comprende una region variable de anticuerpo alterada.
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
JP7221379B2 (ja) 2018-10-01 2023-02-13 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｆａｐクローン２１２を含む二重特異性抗原結合分子
US11130802B2 (en) 2018-10-10 2021-09-28 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
WO2020089437A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Engmab Sàrl Combination therapy
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
JP2022524175A (ja) 2018-11-02 2022-04-28 オクラホマ メディカル リサーチ ファウンデーション Ｅｌｔｄ１に対するモノクローナル抗体及びその使用
SG11202104104VA (en) 2018-11-05 2021-05-28 Genentech Inc Methods of producing two chain proteins in prokaryotic host cells
KR20210091212A (ko) 2018-11-05 2021-07-21 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 항-pd-1 항체에 불응성인 nsclc 환자의 치료
EP3880714A4 (en) 2018-11-16 2022-07-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center ANTIBODIES TO MUCIN-16 AND METHODS OF USE THEREOF
EP3883607A4 (en) 2018-11-20 2022-08-17 Janssen Biotech, Inc. SAFE AND EFFECTIVE PROCESS FOR TREATING PSORIASIS WITH A SPECIFIC ANTI-IL-23 ANTIBODY
EP3884276A2 (en) 2018-11-23 2021-09-29 Katholieke Universiteit Leuven Predicting a treatment response in inflammatory bowel disease
KR20210096559A (ko) 2018-11-27 2021-08-05 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 항IL-23p19 항체 및 이의 용도
WO2020112781A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
JP2022510276A (ja) 2018-11-30 2022-01-26 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｄ８６バリアント免疫調節タンパク質およびその使用
EP3891185A2 (en) 2018-12-05 2021-10-13 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
WO2020116560A1 (ja) 2018-12-05 2020-06-11 株式会社バイカ・セラピュティクス 抗体のＦｃ領域改変体
WO2020115115A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Morphosys Ag Multispecific antigen-binding molecules
US20220098310A1 (en) 2018-12-06 2022-03-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
AU2018451747A1 (en) 2018-12-06 2021-06-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of diffuse large B-cell lymphoma comprising an anti-CD79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-CD20 antibody
JP2022513198A (ja) 2018-12-10 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｃ含有タンパク質への部位特異的コンジュゲーションのための光架橋性ペプチド
EP3894439A4 (en) 2018-12-14 2022-11-30 Boehringer Ingelheim IO Canada Inc. ANTI-PERIOSTIN ANTIBODIES AND THEIR USES
JP2022514867A (ja) 2018-12-18 2022-02-16 カタパルト セラピューティクス ビー．ヴイ． 移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の防止又は処置のための抗ＣＣＲ７ ＭＡＢの使用
JP2022514561A (ja) 2018-12-18 2022-02-14 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗体でループスを治療する安全かつ有効な方法
TW202039554A (zh) 2018-12-19 2020-11-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＮＦ－α抗體
EP3898667A2 (en) 2018-12-20 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Modified antibody fcs and methods of use
TWI851632B (zh) 2018-12-21 2024-08-11 美商建南德克公司 使用抗細胞凋亡性細胞株產生多肽之方法
SG11202106198YA (en) 2018-12-21 2021-07-29 Hoffmann La Roche Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
SG11202106498XA (en) 2018-12-26 2021-07-29 Xilio Development Inc Anti-ctla4 antibodies and methods of use thereof
CN113227135A (zh) 2018-12-28 2021-08-06 斯帕克斯治疗公司 用于治疗癌症和其他疾病的对紧密连接蛋白18.2具有特异性的结合分子、其组合物和方法
CN113226371A (zh) 2018-12-28 2021-08-06 协和麒麟株式会社 与TfR结合的双特异性抗体
CN113272327A (zh) 2018-12-30 2021-08-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗兔cd19抗体及其使用方法
KR20210113261A (ko) 2019-01-04 2021-09-15 리졸브 테라퓨틱스, 엘엘씨 뉴클레아제 융합 단백질을 사용한 쇼그렌병의 치료
KR20210116525A (ko) 2019-01-14 2021-09-27 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 rna 백신으로 암을 치료하는 방법
WO2020148207A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies binding to hla-a2
AU2020210710A1 (en) 2019-01-22 2021-07-29 Innate Pharma Treatment of T cell lymphoma
WO2020154405A2 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Genentech, Inc. Immunoglobulin a antibodies and methods of production and use
CN113396162B (zh) 2019-01-22 2024-08-16 百时美施贵宝公司 抗IL-7Rα亚基的抗体及其用途
EP3914358A1 (en) 2019-01-23 2021-12-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd38 antibodies
CA3124515A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Genentech, Inc. Methods of producing multimeric proteins in eukaryotic host cells
CA3127520A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Encefa Cd31 competitors and uses thereof
JPWO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2021-12-02 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
WO2020176748A1 (en) 2019-02-27 2020-09-03 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
WO2020180712A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-tnfr2 antibodies and uses thereof
AU2020233284A1 (en) 2019-03-01 2021-09-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
TW202101000A (zh) 2019-03-08 2021-01-01 美商建南德克公司 用於偵測且量化膜相關蛋白之方法
WO2020183418A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions
UA128654C2 (uk) 2019-03-14 2024-09-18 Дженентек, Інк. Лікування раку біспецифічними антитілами до her2xcd3 у комбінації з моноклональним антитілом до her2
BR112021018441A2 (pt) 2019-03-18 2023-02-28 Janssen Biotech Inc Método para tratamento de psoríase em indivíduos pediátricos com anticorpo anti-il12/il23
CN113613676A (zh) 2019-03-19 2021-11-05 中外制药株式会社 包含对抗原的结合活性因mta而变化的抗原结合结构域的抗原结合分子及用于获得该抗原结合结构域的文库
EP3947446A1 (en) 2019-03-25 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Treatment of taupathy disorders by targeting new tau species
CA3135032A1 (en) 2019-04-03 2020-10-08 Genzyme Corporation Anti-alpha beta tcr binding polypeptides with reduced fragmentation
EP3953389A1 (en) 2019-04-08 2022-02-16 Biogen MA Inc. Anti-integrin antibodies and uses thereof
GB2589049C (en) 2019-04-11 2024-02-21 argenx BV Anti-IgE antibodies
US12006511B2 (en) 2019-04-15 2024-06-11 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Recombinant PD-L1 peptides and methods of use
JP2022529059A (ja) 2019-04-17 2022-06-16 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド バリアントｉｃｏｓリガンド（ｉｃｏｓｌ）融合タンパク質の方法および使用
US20220298231A1 (en) 2019-04-18 2022-09-22 Ac Immune Sa Novel Molecules for Therapy and Diagnosis
WO2020214748A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Ipilimumab variants with enhanced specificity for binding at low ph
EP3956364A1 (en) 2019-04-19 2022-02-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-mertk antibodies and their methods of use
US20220143094A1 (en) 2019-04-19 2022-05-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimeric receptor that recognizes engineered site in antibody
AU2020270376A1 (en) 2019-05-03 2021-10-07 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-PD-L1 antibody
CN114206340A (zh) 2019-05-14 2022-03-18 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗cd79b免疫缀合物治疗滤泡性淋巴瘤的方法
WO2020230899A1 (ja) 2019-05-15 2020-11-19 協和キリン株式会社 Ｃｄ４０とｆａｐに結合するバイスペシフィック抗体
TW202108625A (zh) 2019-05-15 2021-03-01 日商協和麒麟股份有限公司 與cd40及gpc3結合之雙專一性抗體
US20230091510A1 (en) 2019-05-20 2023-03-23 Novartis Ag Antibody drug conjugates having linkers comprising hydrophilic groups
KR20220010743A (ko) 2019-05-21 2022-01-26 노파르티스 아게 Bcma에 대한 삼중특이적 결합 분자 및 이의 용도
US12037378B2 (en) 2019-05-21 2024-07-16 Novartis Ag Variant CD58 domains and uses thereof
JOP20210309A1 (ar) 2019-05-21 2023-01-30 Novartis Ag جزيئات ربط بـ cd19 واستخدامتها
JP2022533432A (ja) 2019-05-23 2022-07-22 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用
CA3142676A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody cleavage site binding molecule
JP7565951B2 (ja) 2019-06-07 2024-10-11 アルジェニクス ビーブイ 皮下投与に好適なＦｃＲｎインヒビターの医薬製剤
JP7082245B2 (ja) 2019-06-10 2022-06-07 中外製薬株式会社 サイトカイン阻害剤と組み合わせて使用するための抗ｔ細胞抗原結合分子
US20220298230A1 (en) * 2019-06-11 2022-09-22 The Rockefeller University Antibodies and methods for treatment of viral infections
WO2020260326A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
PE20220392A1 (es) 2019-07-10 2022-03-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moleculas de union a claudina-6 y usos de las mismas
WO2021005232A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Umc Utrecht Holding B.V. Intranasal administration of neutralising antiviral antibodies
CN114341187A (zh) 2019-07-12 2022-04-12 中外制药株式会社 抗突变型fgfr3抗体及其用途
JP2022540904A (ja) 2019-07-15 2022-09-20 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー ヒトｔｒｅｍ－１に対する抗体およびその使用
WO2021011678A1 (en) 2019-07-15 2021-01-21 Bristol-Myers Squibb Company Anti-trem-1 antibodies and uses thereof
KR20220034807A (ko) 2019-07-16 2022-03-18 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) Cd38에 대해 특이성을 갖는 항체 및 이의 용도
JP2022542863A (ja) 2019-07-24 2022-10-07 ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット 抗ｍＧｌｕＲ５抗体及びその使用
US20220289828A1 (en) 2019-07-26 2022-09-15 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to enterovirus d68
CN112300279A (zh) 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
BR112022001575A2 (pt) 2019-07-29 2022-04-19 Compugen Ltd Formulações de anticorpos anti-pvrig e usos dos mesmos
CN115137815A (zh) 2019-07-31 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 通过使用抗c5抗体可伐利单抗来治疗或预防c5相关疾病的剂量和施用方案
JP7437261B2 (ja) 2019-07-31 2024-02-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃ５抗体クロバリマブの使用によるｃ５関連疾患の治療または予防のための薬用量および投与レジメン
AU2020325770B2 (en) 2019-08-06 2022-08-25 Aprinoia Therapeutics Limited Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof
JP7515567B2 (ja) 2019-08-06 2024-07-12 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド 生物医薬組成物及び関連する方法
CA3150762A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Aptevo Research And Development Llc 4-1 bb and ox40 binding proteins and related compositions and methods, antibodies against 4-1 bb, antibodies against ox40
KR20220044534A (ko) 2019-08-13 2022-04-08 엘피스 바이오파마슈티컬즈 조작된 인터류킨-2 수용체 베타 효능제
BR112022003740A2 (pt) 2019-08-30 2022-05-31 Agenus Inc Anticorpos anti-cd96 e métodos de uso dos mesmos
JP2022547577A (ja) 2019-09-12 2022-11-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎を治療する組成物及び方法
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
PE20221906A1 (es) 2019-09-18 2022-12-23 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecificos anti-klk5/klk7 y metodos de uso
WO2021053559A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Novartis Ag Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
PE20220566A1 (es) 2019-09-19 2022-04-13 Bristol Myers Squibb Co ANTICUERPOS DE UNION A VISTA A pH ACIDO
AU2020348393A1 (en) 2019-09-20 2022-02-24 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
CN114729045A (zh) 2019-09-26 2022-07-08 斯特库比公司 对糖基化的ctla-4特异性的抗体及其使用方法
WO2021058729A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof
JP2022550325A (ja) 2019-09-27 2022-12-01 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 抗ミュラー管抑制物質抗体およびその使用
EP4424321A2 (en) 2019-09-27 2024-09-04 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
US11760801B2 (en) 2019-09-27 2023-09-19 Janssen Biotech, Inc. Anti-CEACAM antibodies and uses thereof
CN115279896A (zh) 2019-09-30 2022-11-01 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 慢病毒载体配制品
JP2022553129A (ja) 2019-10-08 2022-12-22 ネクチン セラピューティクス エルティーディー． ポリオウイルス受容体（ｐｖｒ）に対する抗体およびその使用
JP2022552282A (ja) 2019-10-09 2022-12-15 エスティーキューブ アンド カンパニー グリコシル化ｌａｇ３に対して特異的な抗体およびその使用方法
CR20220166A (es) 2019-10-18 2022-06-15 Genentech Inc Métodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes
US20220378742A1 (en) 2019-11-04 2022-12-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
CA3155922A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Huang Huang Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
JP2023504642A (ja) 2019-12-04 2023-02-06 メドイミューン・リミテッド Ｌｉｆに対する抗体及びその使用
JP2023504699A (ja) 2019-12-04 2023-02-06 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 治療および診断のための新規な分子
US20230057899A1 (en) 2019-12-05 2023-02-23 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
WO2021116119A1 (en) 2019-12-09 2021-06-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
BR112022011357A2 (pt) 2019-12-13 2022-08-23 Genentech Inc Anticorpos isolado, um ou mais ácidos nucleicos isolados, um ou mais vetores, uma ou mais células hospedeiras, composição, kit, uso do anticorpo, métodos para produzir o anticorpo e método para tratar ou retardar a progressão de um câncer ly6g6d positivo
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
US20230058982A1 (en) 2019-12-27 2023-02-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ctla-4 antibody and use thereof
TWI845803B (zh) 2020-01-06 2024-06-21 美商法西尼克斯股份有限公司 抗ｃｃｒ８抗體及其用途
EP4087875B1 (en) 2020-01-08 2024-08-28 Argenx BV Antagonists of human neonatal fc receptor (fcrn) for treating pemphigus disorders
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
MX2022009391A (es) 2020-01-31 2022-09-26 Genentech Inc Metodos para inducir linfocitos t especificos para neoepitopo con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn.
US20230087600A1 (en) 2020-02-06 2023-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Il-10 and uses thereof
AU2021220847A1 (en) 2020-02-11 2022-09-01 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV- 2)
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
TW202140561A (zh) 2020-02-14 2021-11-01 日商協和麒麟股份有限公司 與cd3結合之雙特異性抗體
WO2021173844A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Biograph 55, Inc. C19 c38 bispecific antibodies
CN115151573A (zh) 2020-02-28 2022-10-04 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗cd137构建体、多特异性抗体及其用途
KR20220148235A (ko) 2020-02-28 2022-11-04 젠자임 코포레이션 최적화된 약물 접합을 위한 변형된 결합 폴리펩티드
BR112022016491A2 (pt) 2020-02-28 2022-10-11 Shanghai Henlius Biotech Inc Construto anti-cd137 e usos do mesmo
IL295979A (en) 2020-03-06 2022-10-01 Ona Therapeutics S L Anti-cd36 antibodies and their use for cancer treatment
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
US20240043530A1 (en) 2020-03-13 2024-02-08 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. PVRIG Binding Protein And Its Medical Uses
CR20220524A (es) 2020-03-19 2022-12-02 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta con selectividad de isoforma y métodos de uso
US11365239B2 (en) 2020-03-20 2022-06-21 Tsb Therapeutics (Beijing) Co., Ltd. Anti-SARS-COV-2 antibodies and uses thereof
CN115867577A (zh) 2020-03-23 2023-03-28 基因泰克公司 用于预测covid-19肺炎中对il-6拮抗剂反应的生物标志物
US20230174656A1 (en) 2020-03-23 2023-06-08 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
US20240025991A1 (en) 2020-03-23 2024-01-25 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
US11999787B2 (en) 2020-03-24 2024-06-04 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
PL4045533T3 (pl) 2020-03-26 2024-04-15 Vanderbilt University Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko ciężkiemu ostremu zespołowi oddechowemu wywołanemu koronawirusem 2 (sars-cov-2)
KR20220159426A (ko) 2020-03-26 2022-12-02 제넨테크, 인크. 감소된 숙주 세포 단백질을 보유하는 변형된 포유동물 세포
WO2021195385A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS 2 (SARS-GoV-2)
JP2023520773A (ja) 2020-03-27 2023-05-19 ノバルティス アーゲー 増殖性疾患及び自己免疫疾患を治療するための二重特異性組合せ治療
WO2021198034A1 (en) 2020-03-30 2021-10-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
SG11202105302PA (en) 2020-03-31 2021-11-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Dll3-targeting multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
CA3173519A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Vishnu Priyanka Reddy CHICHILI Method for producing multispecific antigen-binding molecules
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
JP2023519930A (ja) 2020-04-01 2023-05-15 ユニバーシティ オブ ロチェスター インフルエンザｈ３ｎ２ウイルスのヘマグルチニン（ｈａ）およびノイラミニダーゼ（ｎａ）に対するモノクローナル抗体
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
EP4132971A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Merck Sharp & Dohme LLC Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
WO2021204179A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for coronavirus
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
AU2021256226A1 (en) 2020-04-17 2022-11-17 Hutchison Medipharma Limited Anti-OX40 antibody and uses thereof
BR112022021441A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-13 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células b e kits
IL296664A (en) 2020-04-24 2022-11-01 Hoffmann La Roche Enzyme and pathway modulation with sulfhydryl compounds and their derivatives
JP2023523145A (ja) 2020-04-27 2023-06-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア リポ蛋白（ａ）に対するイソ型非依存性抗体
EP4143345A1 (en) 2020-04-28 2023-03-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
KR20230002261A (ko) 2020-04-28 2023-01-05 더 락커펠러 유니버시티 항-sars-cov-2 중화 항체 및 이의 사용 방법
AU2021267995A1 (en) 2020-05-03 2022-12-08 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (ADCs) comprising an anti-Trop-2 antibody, compositions comprising such ADCs, as well as methods of making and using the same
TW202208414A (zh) 2020-05-08 2022-03-01 美商艾爾潘免疫科學有限公司 April及baff抑制性免疫調節蛋白及其使用方法
KR20230008751A (ko) 2020-05-12 2023-01-16 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 피부 t-세포 림프종 및 tfh 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법
WO2021231732A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
IL297977A (en) 2020-05-17 2023-01-01 Astrazeneca Uk Ltd sars-cov-2 antibodies and methods for selecting and using them
GB2595299B (en) 2020-05-21 2022-08-03 Mabsolve Ltd Modified immunoglobulin FC regions
US20210363512A1 (en) 2020-05-22 2021-11-25 Formycon Ag ACE2 fusion proteins and uses thereof
WO2021238886A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
BR112022024629A2 (pt) 2020-06-02 2023-02-23 Dynamicure Biotechnology Llc Construtos anti-cd93 e seus usos
WO2021249990A2 (en) 2020-06-08 2021-12-16 Hoffmann-La Roche Inc. Anti-hbv antibodies and methods of use
JPWO2021251438A1 (pl) 2020-06-10 2021-12-16
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
KR20230025691A (ko) 2020-06-16 2023-02-22 제넨테크, 인크. 삼중 음성 유방암을 치료하기 위한 방법과 조성물
EP4168118A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
TW202214286A (zh) 2020-06-19 2022-04-16 日商中外製藥股份有限公司 用於與血管新生抑制劑組合使用之抗t細胞抗原結合分子
CN115734972A (zh) 2020-06-22 2023-03-03 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd73抗体及其用途
CN115943158A (zh) 2020-06-24 2023-04-07 基因泰克公司 抗细胞凋亡的细胞系
MX2022016322A (es) 2020-06-25 2023-01-24 Merck Sharp & Dohme Llc Anticuerpos de alta afinidad dirigidos a tau fosforilada en la serina 413.
EP4153636A1 (en) 2020-06-29 2023-03-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-protein s single-domain antibodies and polypeptides comprising thereof
US20230355722A1 (en) 2020-06-29 2023-11-09 Resolve Therapeutics, Llc Treatment of sjogren’s syndrome with nuclease fusion proteins
CR20230087A (es) 2020-07-17 2023-03-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch2 y métodos de uso
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
WO2022026763A1 (en) 2020-07-29 2022-02-03 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
IL300225A (en) 2020-07-31 2023-03-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A pharmaceutical composition including chimeric receptor expressing cells
JP2023536602A (ja) 2020-08-03 2023-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
MX2023001492A (es) 2020-08-06 2023-03-08 Bioverativ Usa Inc Citocinas inflamatorias y fatiga en sujetos con una enfermedad mediada por el complemento.
AU2021325339A1 (en) 2020-08-10 2023-04-06 Astrazeneca Uk Limited SARS-CoV-2 antibodies for treatment and prevention of COVID-19
CN116615452A (zh) 2020-08-14 2023-08-18 Ac免疫有限公司 人源化抗tdp-43结合分子及其用途
PE20231187A1 (es) 2020-08-18 2023-08-15 Cephalon Llc Anticuerpos anti-par-2 y metodos de uso de los mismos
IL300500A (en) 2020-08-20 2023-04-01 A2 Biotherapeutics Inc Preparations and methods for the treatment of mesothelin positive cancer
KR20230052291A (ko) 2020-08-20 2023-04-19 에이투 바이오쎄라퓨틱스, 인크. Ceacam 양성 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법
WO2022040470A1 (en) * 2020-08-20 2022-02-24 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
WO2022044248A1 (ja) 2020-08-28 2022-03-03 中外製薬株式会社 ヘテロ二量体Ｆｃポリペプチド
WO2022047316A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
CN116648507A (zh) 2020-08-28 2023-08-25 基因泰克公司 宿主细胞蛋白的CRISPR/Cas9多重敲除
EP4208201A1 (en) 2020-09-04 2023-07-12 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
WO2022060412A1 (en) 2020-09-17 2022-03-24 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
WO2022069940A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
KR20230082632A (ko) 2020-10-05 2023-06-08 제넨테크, 인크. 항-fcrh5/항-cd3 이중특이성 항체를 사용한 치료를 위한 투약
JP2023546359A (ja) 2020-10-06 2023-11-02 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
EP4229082A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 AC Immune SA Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
AU2021366287A1 (en) 2020-10-20 2023-04-13 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to Gremlin-1 and uses thereof
JP2023548034A (ja) 2020-10-22 2023-11-15 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド デルタ様リガンド３（ｄｌｌ３）抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用
EP4232822A2 (en) 2020-10-26 2023-08-30 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
AU2021367988A1 (en) 2020-10-29 2023-05-11 Formycon Ag Ace2 fusion proteins and uses thereof
WO2022098870A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
CA3196076A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
US20220162329A1 (en) 2020-11-04 2022-05-26 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
MX2023005131A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3 y conjugados anticuerpo farmaco anti-cd79b.
JP2023548529A (ja) 2020-11-06 2023-11-17 ノバルティス アーゲー Ｃｄ１９結合分子及びその使用
CA3199839A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
MX2023006426A (es) 2020-12-01 2023-07-17 Aptevo Res & Development Llc Antígenos asociados a tumores y proteínas de unión a cd3 y composiciones y métodos relacionados.
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
JP2024501452A (ja) 2020-12-11 2024-01-12 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｂｒａｆ阻害剤及び／またはｍｅｋ阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球治療によるがん患者の治療
EP4259661A1 (en) 2020-12-14 2023-10-18 Novartis AG Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor 1 (npr1) antibodies and uses thereof
JP2024500403A (ja) 2020-12-17 2024-01-09 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球によるがんの治療
KR20230120665A (ko) 2020-12-17 2023-08-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-hla-g 항체 및 이의 용도
AU2021401302A1 (en) 2020-12-17 2023-07-06 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with ctla-4 and pd-1 inhibitors
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
WO2022135467A1 (zh) 2020-12-23 2022-06-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
WO2022147196A2 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
KR20230117406A (ko) 2021-01-06 2023-08-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1-lag3 이중특이성 항체와 cd20 t 세포 이중특이성항체를 이용한 조합 요법
US12060411B2 (en) 2021-01-15 2024-08-13 The Rockefeller University Neutralizing anti-SARS-CoV-2 antibodies
CN117083297A (zh) 2021-01-22 2023-11-17 艾佩斯瑞生物制药公司 抗PD-L1单克隆抗体以及与白细胞介素-15(IL-15)、白细胞介素-15受体15α或白细胞介素-2的融合蛋白
WO2022165275A2 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1-antibodies
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022162201A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
US20240082397A1 (en) 2021-01-28 2024-03-14 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
JP2024506557A (ja) 2021-01-29 2024-02-14 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
US20240226295A9 (en) 2021-02-15 2024-07-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
CR20230445A (es) 2021-02-17 2023-11-14 Prometheus Biosciences Inc Anticuerpos anti-cd30l y usos de estos
WO2022187270A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
WO2022187272A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
WO2022184082A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
US20240139296A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Formycon Ag Formulations of ace2 fc fusion proteins
CA3210755A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Kenneth ONIMUS Tumor storage and cell culture compositions
JP2024509191A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｖｉｓｔａ構築物およびその使用
JP2024518013A (ja) 2021-03-10 2024-04-24 イミュノウェイク インコーポレイテッド 免疫調節分子及びその使用
IL305802A (en) 2021-03-12 2023-11-01 Janssen Biotech Inc A safe and effective method for the treatment of rheumatoid arthritis with a specific anti-IL23 antibody
AU2022232007A1 (en) 2021-03-12 2023-10-26 Janssen Biotech, Inc. Method of treating psoriatic arthritis patients with inadequate response to tnf therapy with anti-il23 specific antibody
EP4304732A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
IL305283A (en) 2021-03-15 2023-10-01 Genentech Inc Compositions and methods for the treatment of lupus nephritis
EP4308691A1 (en) 2021-03-19 2024-01-24 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd69 selection and gene knockout in tils
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
EP4313122A1 (en) 2021-03-23 2024-02-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cish gene editing of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
AU2022246174A1 (en) 2021-03-25 2023-09-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
TW202300648A (zh) 2021-03-25 2023-01-01 美商當康生物科技有限公司 抗-igfbp7構築體及其用途
MX2023011310A (es) 2021-03-26 2023-10-05 Innate Pharma Anclajes de citocina para proteinas de celulas nk de union a nkp46.
US20240166731A1 (en) 2021-03-26 2024-05-23 Janssen Biotech, Inc. Humanized antibodies against paired helical filament tau and uses thereof
CN117241828A (zh) 2021-03-31 2023-12-15 美国比奥维拉迪维股份有限公司 减少冷凝集素病患者的手术相关溶血
WO2022212876A1 (en) 2021-04-02 2022-10-06 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
JP2024514222A (ja) 2021-04-19 2024-03-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 改変された哺乳動物細胞
JP2024515189A (ja) 2021-04-19 2024-04-05 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 細胞免疫療法におけるキメラ共刺激受容体、ケモカイン受容体、及びそれらの使用
EP4334343A2 (en) 2021-05-06 2024-03-13 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof
AU2022269139A1 (en) 2021-05-07 2023-11-16 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein
CN118593725A (zh) 2021-05-12 2024-09-06 基因泰克公司 使用抗cd79b免疫缀合物治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤的方法
AU2022273303A1 (en) 2021-05-14 2023-11-02 Genentech, Inc. Agonists of trem2
WO2022245859A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
US20230115257A1 (en) 2021-05-17 2023-04-13 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
CA3219148A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Frederick G. Vogt Pd-1 gene-edited tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
EP4341385A1 (en) 2021-05-21 2024-03-27 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
CA3220227A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Matthew Bruce Combination therapies for treating cancer
US20240270862A1 (en) 2021-06-01 2024-08-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of b cell depleting agents for the treatment of rheumatic heart disease
WO2022255440A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
BR112023025331A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína multiespecífica, composição farmacêutica, célula recombinante, ácido nucleico ou conjunto de ácidos nucleicos, uso de uma proteína ou composição, métodos ou uso
JP2024521408A (ja) 2021-06-09 2024-05-31 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム Ｃｄ２０、ｎｋｐ４６、ｃｄ１６に結合し、かつｉｌ－２にコンジュゲートされた多特異性抗体
BR112023025863A2 (pt) 2021-06-11 2024-03-05 Genentech Inc Métodos para tratar doença pulmonar obstrutiva crônica (dpoc), para reduzir a frequência de exacerbações moderadas a graves em um paciente com dpoc, para tratar ou prevenir dpoc, para manter e/ou melhorar a função pulmonar, para melhorar a contagem de linha de base de eosinófilos no sangue, kit, antagonistas de st2 e anticorpo anti-st2
WO2022263357A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Argenx Iip Bv Anti-il-9 antibodies and methods of use thereof
WO2022266660A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
TW202306989A (zh) 2021-06-22 2023-02-16 瑞士商諾華公司 用於在治療化膿性汗腺炎中使用的雙特異性抗體
MX2023013897A (es) 2021-06-25 2023-12-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-antigeno 4 del linfocito t citotoxico (anti-ctla-4).
JP7477127B2 (ja) 2021-06-25 2024-05-01 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体の使用
EP4363450A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Compugen Ltd. Anti-tigit and anti-pvrig in monotherapy and combination treatments
AU2022302170A1 (en) 2021-07-02 2023-12-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
TW202317633A (zh) 2021-07-08 2023-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｔｎｆｒ２的抗體及其用途
EP4367138A1 (en) 2021-07-09 2024-05-15 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions
TW202306985A (zh) 2021-07-12 2023-02-16 美商建南德克公司 降低抗體－脂酶結合之結構
MX2024000611A (es) 2021-07-14 2024-02-02 Genentech Inc Anticuerpos anti-receptor de quimiocinas de motivo c-c 8 (ccr8) y metodos de uso.
US20240343817A1 (en) 2021-07-14 2024-10-17 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibody that specifically recognizes cd40 and application thereof
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
JP2024528631A (ja) 2021-07-22 2024-07-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヘテロ二量体Ｆｃドメイン抗体
JP2024526898A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 固形腫瘍断片の凍結保存のための方法
JP2024527977A (ja) 2021-07-27 2024-07-26 ノヴァブ， インコーポレイテッド 免疫エフェクター機能を有する操作されたｖｌｒｂ抗体
WO2023010095A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
CA3226942A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
EP4377344A1 (en) 2021-07-30 2024-06-05 Ona Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
CA3231174A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-cd79bxcd3 bispecific antibody and use thereof
WO2023012669A2 (en) 2021-08-03 2023-02-09 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Biopharmaceutical compositions and stable isotope labeling peptide mapping method
CN117794953A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗体及使用方法
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
JP2024534067A (ja) 2021-08-19 2024-09-18 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多価抗バリアントｆｃ領域抗体および使用方法
WO2023027177A1 (ja) 2021-08-26 2023-03-02 協和キリン株式会社 Ｃｄ１１６およびｃｄ１３１に結合するバイスペシフィック抗体
AU2022332303A1 (en) 2021-08-27 2024-02-01 Genentech, Inc. Methods of treating tau pathologies
TW202325727A (zh) 2021-08-30 2023-07-01 美商建南德克公司 抗聚泛素多特異性抗體
KR20240067079A (ko) 2021-08-30 2024-05-16 라센 테라퓨틱스 1, 인코포레이티드 항-IL-11Rα 항체
JP2024535002A (ja) 2021-09-09 2024-09-26 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｐｄ－１ ｔａｌｅｎノックダウンを使用したｔｉｌ製品を生成するためのプロセス
EP4403576A1 (en) * 2021-09-17 2024-07-24 Korea University Research and Business Foundation Glycosylated fc variants with improved selective binding affinity to fc gamma riiia
WO2023043124A1 (ko) * 2021-09-17 2023-03-23 고려대학교 산학협력단 Fcγrⅲa 결합력이 향상된 당화 fc 변이체들
CA3232700A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Rafael CUBAS Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
WO2023053282A1 (ja) 2021-09-29 2023-04-06 中外製薬株式会社 がんの治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
AU2022358522A1 (en) 2021-09-30 2024-03-28 Seagen Inc. B7-h4 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer
EP4412713A1 (en) 2021-10-05 2024-08-14 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd Combination therapies for treating cancer
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
IL311956A (en) 2021-10-08 2024-06-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for preparing a prefilled syringe formulation
WO2023064958A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
AR127482A1 (es) 2021-10-27 2024-01-31 Iovance Biotherapeutics Inc Sistemas y métodos para coordinar la fabricación de células para inmunoterapia específica de paciente
WO2023073615A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn's disease with anti-il23 specific antibody
KR20240099315A (ko) 2021-11-05 2024-06-28 아메리칸 다이어그노스틱스 앤드 테라피, 엘엘씨 (에이디엑스알엑스) 암배아성 항원에 대한 단클론성 항체 및 이의 용도
TW202342095A (zh) 2021-11-05 2023-11-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 用於治療和預防ｃｏｖｉｄ—１９之組成物
CA3237410A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Friedrich Graf Finck VON FINCKENSTEIN Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
MX2024005860A (es) 2021-11-15 2024-08-06 Janssen Biotech Inc Métodos para tratar la enfermedad de crohn con el anticuerpo específico anti-il23.
AU2022389969A1 (en) 2021-11-16 2024-05-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
AR127692A1 (es) 2021-11-16 2024-02-21 Ac Immune Sa Anticuerpos anti-asc para uso en tratamientos antiinflamatorios
AU2022394462A1 (en) 2021-11-17 2024-05-02 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Methods for treating anemia of kidney disease
US20230159633A1 (en) 2021-11-23 2023-05-25 Janssen Biotech, Inc. Method of Treating Ulcerative Colitis with Anti-IL23 Specific Antibody
WO2023094507A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Formycon Ag Improved ace2 fusion proteins
WO2023094571A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Formycon Ag Stabilization of ace2 fusion proteins
WO2023103788A1 (zh) 2021-12-06 2023-06-15 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合肺炎克雷伯菌o2抗原和o1抗原的双特异性抗体以及组合物
CA3237618A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Genentech, Inc. Stabilized il-18 polypeptides and uses thereof
WO2023114951A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Viiv Healthcare Company Combination therapies for hiv infections and uses thereof
WO2023109900A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
EP4448579A1 (en) 2021-12-17 2024-10-23 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
IL314129A (en) 2022-01-07 2024-09-01 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materials and methods of IL-1BETA binding proteins
WO2023139107A1 (en) 2022-01-18 2023-07-27 argenx BV Galectin-10 antibodies
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
WO2023147399A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023147486A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
AR128540A1 (es) 2022-02-16 2024-05-22 Ac Immune Sa Moléculas de unión anti-tdp-43 humanizadas y usos de las mismas
TW202342510A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 英商Ｒｑ生物科技有限公司 抗體
WO2023168352A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Yale University Humanized 3e10 antibodies, variants, and antigen binding fragments thereof
WO2023172883A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies thereof and related methods and uses
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
IL315541A (en) 2022-03-11 2024-11-01 Janssen Pharmaceutica Nv Multispecific antibodies and their uses
TW202346355A (zh) 2022-03-11 2023-12-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(二)
TW202345899A (zh) 2022-03-11 2023-12-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(三)
MX2024011278A (es) 2022-03-15 2024-09-25 Compugen Ltd Anticuerpos antagonistas de il-18bp y su uso en monoterapia y terapia de combinacion en el tratamiento del cancer.
AU2023236386A1 (en) 2022-03-18 2024-10-10 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules and methods of use thereof
US20240103010A1 (en) 2022-03-18 2024-03-28 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
AU2023240941A1 (en) 2022-03-25 2024-09-19 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-msln antibodies and methods of use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
IL316022A (en) 2022-03-30 2024-11-01 Janssen Biotech Inc A method for the treatment of mild to moderate psoriasis with a specific IL-23 antibody
TW202405009A (zh) 2022-03-30 2024-02-01 瑞士商諾華公司 使用抗利尿鈉肽受體１（ｎｐｒ１）抗體治療障礙之方法
GB202204813D0 (en) 2022-04-01 2022-05-18 Bradcode Ltd Human monoclonal antibodies and methods of use thereof
IL315770A (en) 2022-04-01 2024-11-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-FCRH5/anti-CD3 antibodies
WO2023196877A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
AU2023253705A1 (en) 2022-04-13 2024-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
AU2023258146A1 (en) 2022-04-20 2024-09-05 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
AR129182A1 (es) 2022-04-29 2024-07-24 23Andme Inc Proteínas de unión al antígeno
WO2023209177A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 Astrazeneca Uk Limited Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023220608A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
WO2023220597A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Elpis Biopharmaceuticals Engineered interleukin-2 receptor beta reduced-binding agonist
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
US20230374122A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Janssen Biotech, Inc. Method for Evaluating and Treating Psoriatic Arthritis with IL23 Antibody
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2023239803A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
US20230406942A1 (en) 2022-06-10 2023-12-21 Horizon Therapeutics Ireland Dac Igf1r antibodies
WO2023242372A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 argenx BV Fcrn/hsa binding molecules and methods of use
TW202417039A (zh) 2022-06-15 2024-05-01 美商百歐維拉提夫美國公司 抗補體ｃ１ｓ抗體調配物
WO2023250507A1 (en) 2022-06-24 2023-12-28 Bioverativ Usa Inc. Methods for treating complement-mediated diseases
WO2024011114A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020407A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
TW202413433A (zh) 2022-07-19 2024-04-01 美商建南德克公司 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
TW202423992A (zh) 2022-07-22 2024-06-16 美商必治妥美雅史谷比公司 結合至人類pad4之抗體及其用途
WO2024026386A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Cephalon Llc Anti-tl1a antibody formulations
WO2024026395A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Cephalon Llc Anti-tl1a antibodies for the treatment of ulcerative colitis and crohn's disease
WO2024026496A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024037633A2 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Formulations comprising g-csf and uses thereof
WO2024042112A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Antigen binding proteins and uses thereof
WO2024044675A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024050524A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for directing apolipoprotein l1 to induce mammalian cell death
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024056668A1 (en) 2022-09-12 2024-03-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New anti-itgb8 antibodies and its uses thereof
US12054552B2 (en) 2022-09-21 2024-08-06 Sanofi Biotechnology Humanized anti-IL-1R3 antibody and methods of use
WO2024061930A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New method to treat and diagnose peripheral t-cell lymphoma (ptcl)
WO2024077018A2 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of taci-fc fusion immunomodulatory protein
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
WO2024089609A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Ablynx N.V. Glycoengineered fc variant polypeptides with enhanced effector function
TW202426505A (zh) 2022-10-25 2024-07-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
WO2024092038A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Ablexis, Llc Anti-cd3 antibodies
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
WO2024098024A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
WO2024098027A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd103 selection
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024107731A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
WO2024107752A2 (en) 2022-11-15 2024-05-23 Onestone Therapeutics Llc Compositions and methods for immunomodulatory bifunctional fusion molecules
US20240226313A1 (en) 2022-11-17 2024-07-11 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
WO2024112711A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for assessing proliferation potency of gene-edited t cells
WO2024110898A1 (en) 2022-11-22 2024-05-30 Janssen Biotech, Inc. Method of treating ulcerative colitis with anti-il23 specific antibody
WO2024110905A1 (en) 2022-11-24 2024-05-30 Beigene, Ltd. Anti-cea antibody drug conjugates and methods of use
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
EP4386084A1 (en) 2022-12-14 2024-06-19 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
WO2024145398A1 (en) 2022-12-27 2024-07-04 Yale University Antibody drug conjugates
TW202432591A (zh) 2023-01-06 2024-08-16 美商拉森醫療公司 抗ｉｌ－１８ｂｐ抗體
WO2024148240A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE
WO2024148241A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024150074A2 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Coronavirus antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024151885A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy
US20240360229A1 (en) 2023-01-18 2024-10-31 Genentech, Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
WO2024153168A2 (en) 2023-01-19 2024-07-25 Beigene, Ltd. Anti-cmet antibodies and methods of use
WO2024158824A1 (en) 2023-01-23 2024-08-02 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024170543A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cd44 antibodies and uses thereof
WO2024173607A2 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
WO2024182443A2 (en) 2023-02-27 2024-09-06 Compugen Ltd. Triple combination therapy with anti-pvrig antibodies, anti-tigit antibodies, and pembrolizumab
WO2024182714A1 (en) 2023-03-02 2024-09-06 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-cd22 antibodies and uses thereof
WO2024183636A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Cd16a antibodies and methods of use
WO2024186635A2 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-stem cell factor (scf) and anti-thymic stromal lymphopoietin (tslp) antibodies and bispecific constructs
WO2024183635A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene, Ltd. Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
WO2024183637A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Muc1 antibodies and methods of use
WO2024184811A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184810A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 and anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184812A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 antibodies and methods of use
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024188965A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
WO2024194685A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
WO2024194686A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
WO2024200846A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 272BIO Limited Gnrh-binding polypeptides and uses thereof
US20240327522A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
WO2024206738A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Immunai Inc. Humanized anti-trem2 antibodies
WO2024211235A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024212827A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
WO2024220546A2 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Peak Bio, Inc. Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates
WO2024226829A2 (en) 2023-04-26 2024-10-31 Yale University Enpp3-binding molecules, compositions formed therefrom, and methods of use thereof for the treatment of cancer

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4490473A (en) 1983-03-28 1984-12-25 Panab Labeled antibodies and methods
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4752601A (en) * 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5985599A (en) * 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5576184A (en) * 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
EP0435911B1 (en) 1988-09-23 1996-03-13 Cetus Oncology Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
WO1991000360A1 (en) 1989-06-29 1991-01-10 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
GB8916400D0 (en) * 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
US5364930A (en) 1990-10-16 1994-11-15 Northwestern University Synthetic C1q peptide fragments
US5419904A (en) * 1990-11-05 1995-05-30 The Regents Of The University Of California Human B-lymphoblastoid cell line secreting anti-ganglioside antibody
CA2102511A1 (en) 1991-05-14 1992-11-15 Paul J. Higgins Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
US6136310A (en) * 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
GB9206422D0 (en) * 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
CA2140280A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Avi J. Ashkenazi Bispecific immunoadhesins
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
PT752248E (pt) 1992-11-13 2001-01-31 Idec Pharma Corp Aplicacao terapeutica de anticorpos quimericos e marcados radioactivamente contra antigenios de diferenciacao restrita de linfocitos b humanos para o tratamento do linfoma de celulas b
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) * 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5730977A (en) * 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1998023289A1 (en) * 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
DE19721700C1 (de) 1997-05-23 1998-11-19 Deutsches Krebsforsch Mutierter OKT3-Antikörper
JP2002506353A (ja) * 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
PL199659B1 (pl) 1998-02-25 2008-10-31 Merck Patent Gmbh Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP2002510481A (ja) * 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6676927B1 (en) * 1999-01-20 2004-01-13 The Rockefeller University Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies
DE60122286T2 (de) 2000-02-11 2007-08-02 Merck Patent Gmbh Steigerung der zirkulierenden halbwertzeit von auf antikörpern basierenden fusionsproteinen
IL151348A0 (en) * 2000-04-13 2003-04-10 Univ Rockefeller Enhancement of antibody-mediated immune responses
DE60143544D1 (de) 2000-12-12 2011-01-05 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20060062727A1 (en) 2002-07-09 2006-03-23 Philips Heidi S Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7608260B2 (en) 2003-01-06 2009-10-27 Medimmune, Llc Stabilized immunoglobulins
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP1673395A1 (en) 2003-10-15 2006-06-28 PDL BioPharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
RU2367667C2 (ru) 2004-08-19 2009-09-20 Дженентек, Инк. Полипептидные варианты с измененной эффекторной функцией
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)

Also Published As

Publication number Publication date
CN1237076C (zh) 2006-01-18
MX353234B (es) 2018-01-08
HUP1500355A2 (en) 2002-04-29
JP6230257B2 (ja) 2017-11-15
IL144056A (en) 2014-04-30
CN1343221A (zh) 2002-04-03
KR20080090572A (ko) 2008-10-08
ZA200105484B (en) 2002-07-29
KR100940380B1 (ko) 2010-02-02
AU2008229968A1 (en) 2008-11-06
US7785791B2 (en) 2010-08-31
CA2359067A1 (en) 2000-07-20
HK1090066A1 (en) 2006-12-15
HU230769B1 (hu) 2018-03-28
CN1763097A (zh) 2006-04-26
EP2386574A2 (en) 2011-11-16
NZ539776A (en) 2006-12-22
JP2010227116A (ja) 2010-10-14
KR20100045527A (ko) 2010-05-03
EP2364997A3 (en) 2012-07-04
BR0008758A (pt) 2001-12-04
JP2016136951A (ja) 2016-08-04
EP2386574A3 (en) 2012-06-27
KR20010102976A (ko) 2001-11-17
ES2694002T3 (es) 2018-12-17
EP1141024A2 (en) 2001-10-10
PL209392B1 (pl) 2011-08-31
US20080274105A1 (en) 2008-11-06
JP6312092B2 (ja) 2018-04-18
PL394232A1 (pl) 2011-07-04
EP2364997A2 (en) 2011-09-14
KR101077001B1 (ko) 2011-10-26
WO2000042072A3 (en) 2000-11-30
US20080274506A1 (en) 2008-11-06
US20060194291A1 (en) 2006-08-31
CA2359067C (en) 2017-03-14
EP2366713A3 (en) 2012-06-27
US7371826B2 (en) 2008-05-13
IL223048A (en) 2016-09-29
IL222149B (en) 2018-11-29
HUP0104865A3 (en) 2004-07-28
IL223048A0 (en) 2012-12-31
JP2003512019A (ja) 2003-04-02
IL223047A (en) 2016-10-31
WO2000042072A2 (en) 2000-07-20
EP1141024B1 (en) 2018-08-08
JP2013166770A (ja) 2013-08-29
CN1763097B (zh) 2011-04-13
AU2008229968B2 (en) 2012-08-09
MXPA01007170A (es) 2002-07-30
US7790858B2 (en) 2010-09-07
KR20060067983A (ko) 2006-06-20
HUP0104865A2 (hu) 2002-04-29
PL209786B1 (pl) 2011-10-31
US20060194290A1 (en) 2006-08-31
KR20090078369A (ko) 2009-07-17
KR100887482B1 (ko) 2009-03-10
AU2850500A (en) 2000-08-01
IL223047A0 (en) 2012-12-31
PL349770A1 (en) 2002-09-09
IL144056A0 (en) 2002-04-21
JP5335735B2 (ja) 2013-11-06
AU778683B2 (en) 2004-12-16
KR101155191B1 (ko) 2012-06-13
EP2366713A2 (en) 2011-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6312092B2 (ja) 変化したエフェクター機能を有するポリペプチド変異体
US7122637B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
US20070009523A1 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2012211437B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2004233493B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function