PL220113B1 - Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc - Google Patents

Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc

Info

Publication number
PL220113B1
PL220113B1 PL394232A PL39423200A PL220113B1 PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1 PL 394232 A PL394232 A PL 394232A PL 39423200 A PL39423200 A PL 39423200A PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
region
polypeptide
binding
variant
amino acid
Prior art date
Application number
PL394232A
Other languages
English (en)
Other versions
PL394232A1 (pl
Inventor
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL394232A1 publication Critical patent/PL394232A1/pl
Publication of PL220113B1 publication Critical patent/PL220113B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc.
Dziedzina wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających wariant regionu Fc. W szczególności niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających region Fc o zmienionej funkcji efektorowej, wynikającej z modyfikacji jednej lub więcej reszt aminokwasowych w obrębie regionu Fc tych polipeptydów.
Opis stanu techniki
Przeciwciała są białkami wykazującymi swoiste powinowactwo do wiązania ze specyficznym antygenem. Natywne przeciwciała są zazwyczaj heterotetramerycznymi glikoproteinami o masie około 150000 daltonów, składającymi się z dwóch identycznych łańcuchów lekkich (L) i dwóch identycznych łańcuchów ciężkich (H). Każdy z łańcuchów lekkich połączony jest z łańcuchem ciężkim za pomocą jednego kowalencyjnego wiązania disiarczkowego, natomiast liczba wiązań disiarczkowych pomiędzy łańcuchami ciężkimi jest zmienna dla różnych odmian izotypowych immunoglobulin. Każdy łańcuch ciężki i lekki posiada również regularnie rozmieszczone wewnątrzłańcuchowe wiązania disiarczkowe. Każdy łańcuch ciężki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VH), poprzedzoną licznymi domenami stałymi. Każdy łańcuch lekki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VL) oraz na drugim swym końcu pewną liczbę domen stałych, domena stała łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do pierwszej domeny stałej łańcucha ciężkiego, natomiast domena zmienna łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do domeny zmiennej łańcucha ciężkiego. Uważa się, że za powstanie powierzchni styku pomiędzy domenami zmiennymi łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiedzialne są szczególne reszty aminokwasowe.
Termin „zmienny” odnosi się do faktu, że w różnych przeciwciałach pewne fragmenty domen zmiennych różnią się znacznie sekwencją i warunkują swoistość wiązania specyficznego antygenu przez specyficzne przeciwciało. Jednakże, zmienność nie jest rozmieszczona równomiernie w obrębie domen zmiennych przeciwciał. Skupia się ona w trzech segmentach, zwanych regionami determinującymi dopasowanie (CDR), zarówno w domenach zmiennych łańcuchów lekkich, jak i ciężkich. Najbardziej konserwatywne części domen zmiennych, zwane są regionami zrębowymi (FR). Każda z domen zmiennych natywnych łańcuchów lekkich i ciężkich obejmuje cztery FR, przyjmujące głównie strukturę harmonijki β, połączone poprzez trzy CDR, tworzące pętle łączące, a w pewnych przypadkach stanowiące fragment, o konformacji harmonijki β. W obrębie każdego z łańcuchów CDR znajdują się w bliskim sąsiedztwie FR i, wraz z CDR innego łańcucha, uczestniczą w formowaniu miejsca wiązania antygenu przeciwciała (patrz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).
Domeny stale nie uczestniczą bezpośrednio w wiązaniu przeciwciała z antygenem, jednakże wykazują różne funkcje efektorowe. W zależności od sekwencji aminokwasowej regionu stałego łańcuchów ciężkich przeciwciała lub immunoglobuliny podlegają podziałowi na różne klasy. Istnieje pięć głównych klas immunoglobulin: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM oraz kilka podklas (odmiany izotypowe), wynikających z podziału klas głównych, np. IgG1, IgG2, IgG3 oraz IgG4; IgA1 oraz IgA2. Regiony stałe łańcucha ciężkiego odpowiadające różnym klasom immunoglobulin nazywane są odpowiednio, α, β, ε, γ oraz μ. Spośród różnych klas ludzkich immunoglobulin, jedynie ludzkie IgG 1, IgG2, IgG3 oraz IgM są zdolne do aktywacji dopełniacza, przy czym ludzkie IgG 1 i IgG3 pośredniczą w ADCC skuteczniej niż IgG2 i IgG4.
Na Figurze 1 schematycznie przedstawiono strukturę natywnej IgG1 i wskazano różne fragmenty natywnego przeciwciała. Trawienie przeciwciała papainą skutkuje powstaniem dwóch identycznych fragmentów wiążących antygen, zwanych fragmentami Fab, przy czym każdy zawiera pojedyncze miejsce wiązania antygenu oraz pozostały fragment „Fc”, którego nazwa wywodzi się z jego łatwej krystalizacji. Określono strukturę krystaliczną regionu Fc ludzkiej IgG (Delsenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). W cząsteczkach ludzkich IgG region Fc otrzymywany jest w wyniku cięcia papainą od N-końca do reszty Cys 226. Fragment Fc jest kluczowy dla funkcji efektorowych przeciwciał.
PL 220 113 B1
Zależne od regionu Fc funkcje efektorowe przeciwciał można podzielić na dwie kategorie:
(1) funkcje efektorowe występujące po związaniu antygenu przez przeciwciało (funkcje te obejmują udział w kaskadzie dopełniacza lub wiązanie się z receptorami Fc przeciwciał (komórki z FcR); oraz (2) funkcje efektorowe występujące niezależnie od wiązania antygenu (funkcje te zapewniają ciągłość działania i zdolność przenoszenia przez bariery komórkowe w wyniku transcytozy). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77-94 (1995).
Podczas gdy wiązanie przeciwciała z wymaganym antygenem wywiera efekt neutralizujący, który może chronić przed wiązaniem obcego antygenu z endogenną cząsteczką docelową (np. receptorem lub ligandem), samo wiązanie nie usuwa obcego antygenu. W celu skutecznego usunięcia i/lub zniszczenia obcych antygenów, przeciwciało powinno wykazywać zarówno wysokie powinowactwo do swoistego antygenu, jak i skuteczne funkcje efektorowe.
Wiązanie receptora Fc (FcR)
Oddziaływania przeciwciał i kompleksów przeciwciało-antygen z komórkami układu immunologicznego wywołuje różnego typu odpowiedzi, włączając cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC) oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC) (praca przeglądowa, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997); Ward i Ghetie, Therapeutic Immunol. 2: 77-94 (1995); jak również Ravetch i Knet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)).
W kilku funkcjach efektorowych przeciwciał uczestniczą receptory Fc (FcR), wiążące region Fc przeciwciała. FcR definiowane są na podstawie ich specyficzności względem poszczególnych odmian izotypowych immunoglobulin; receptory Fc dla przeciwciał IgG to FcyR, dla IgE - FceR, dla IgA - FcaR, itd. Zidentyfikowano trzy podklasy FcyR: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) oraz FcyRIII (CD16). Ze względu na to, że każda podklasa FcyR kodowana jest przez dwa lub trzy geny, a alternatywne składanie RNA prowadzi do powstania różnorodnych transkryptów, występuje duże zróżnicowanie pomiędzy odmianami izotypowymi FcyR. Trzy geny kodujące podklasę FcyRI (FcyRIA, FcyRIB i FcyRIC) skupione są w regionie 1q21.1 długiego ramienia chromosomu 1; geny kodujące odmiany izotypowe FcyRII (FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIC) oraz geny kodujące FcyRIII (FcyRIIIA i FcyRIIIB) skupiają się w regionie 1q22. Te różne podtypy FcR ulegają ekspresji na różnych typach komórek (praca przeglądowa, Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)). Przykładowo FcyRIIIB występuje u ludzi tylko na neutrofiłach, natomiast FcyRIIIA występuje na makrofagach, monocytach, komórkach naturalnych zabójców (NK) i w subpopulacji komórek T. W szczególności, FcyRIIIA jest jedynym FcR obecnym na komórkach NK, jednym z typów komórek uczestniczących w ADCC.
FcyRI, FcyRII oraz FcyRIII należą do nadrodziny receptorów immunoglobulinowych (IgSF); FcyRI posiada trzy domeny IgSF w obszarze domeny zewnątrzkomórkowej, podczas gdy FcyRII i FcyRIII posiadają jedynie dwa fragmenty IgSF w swych domenach zewnątrzkomórkowych.
Innym typem receptora Fc jest noworodkowy receptor Fc (FcRn). FcRn wykazuje podobieństwo strukturalne do głównego układu zgodności tkankowej i składa się z łańcucha α niekowalencyjnie związanego z mikroglobuliną β2.
Miejsce wiązania FcyR na ludzkich i mysich przeciwciałach zostało uprzednio zmapowane do tzw. „dolnego regionu zawiasowego” składającego się z reszt 233-239 (indeks EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986); Duncan i wsp., Nature 332: 563 (1988); Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-1491 (1991); Chappel i wsp., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 9036-9040 (1991). Region obejmujący reszty 233-239, P238 i S239 był brany pod uwagę jako mogący uczestniczyć w wiązaniu, ale rola tych dwóch reszt nie była nigdy oceniana drogą substytucji lub delecji.
Inne opisane wcześniej obszary prawdopodobnie zaangażowane w wiązanie z FcyR to: G316 -K338 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRI (jedynie na podstawie porównania sekwencji, nie analizowano żadnych mutantów substytucyjnych) (Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986)); K274 -R301 (ludzka IgG1) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Sarmay i wsp., Molec. Immunol. 21: 43-51 (1984)); Y407-R416 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Gergely i wsp., Biochem. Soc. Trans. 12: 739-743 (1984)); jak również N297 i E318 (mysie IgG2b) dla mysiego FcyRII (Lund i wsp., Molec. Immunol,. 29: 53-59 (1992)).
Pro331 w IgG3 zastąpiono Ser i analizowano powinowactwo tego wariantu względem komórek docelowych. Powinowactwo to było sześciokrotnie niższe od powinowactwa obserwowanego dla niezmutowanej IgG3, co wskazało na udział Pro331 w wiązaniu FcyRI. Morrison i wsp., Immunologist, 2: 119-124 (1994); oraz Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-91 (1991).
PL 220 113 B1
Wiązanie C1q
C1q oraz dwie proteazy serynowe, C1r i C1s, tworzą kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). C1q jest sześciowartościową cząsteczką o masie cząsteczkowej w przybliżeniu 460000 i strukturze przypominającej bukiet tulipanów, w którym sześć kolagenowych „łodyg” jest połączonych z sześcioma regionami globularnych główek. Burton i Woof, Advances in Immunol. 51: 1-84 (1992). Do aktywacji kaskady dopełniacza niezbędne jest związanie z C1q przy najmniej dwóch cząsteczek IgG1, IgG2 lub IgG3 (istnieje zgoda co do tego, że IgG4 nie aktywuje dopełniacza), natomiast tylko jednej cząsteczki IgM, przyłączonej do docelowego antygenu. Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology, 2: 77-94 (1995), str. 80.
W oparciu o wyniki uzyskane na podstawie modyfikacji chemicznych i analizy krystalograficznej Burton i wsp., (Nature, 288: 338-344, (1980)) zaproponowali, że miejsce wiązania dla jednego ze składników dopełniacza C1q na IgG, obejmuje przynajmniej dwie (C-końcowe) nici β domeny CH2. Burton następnie zasugerował (Molec.Immunol., 22(3): 161-206 (1985)), że region zawierający reszty aminokwasowe 318 do 337 może uczestniczyć w wiązaniu dopełniacza.
Duncan i Winter (Nature 332: 738-40 (1988)), stosując mutagenezę ukierunkowaną, odkryli, że Glu318, Lys320 i Lys322 tworzą miejsce wiązania C1q. Dane dostarczone przez Duncan'a i Winter'a pochodzą z testów wiązania mysiej odmiany izotypowej IgG2b z pochodzącym ze świnki morskiej C1q. Znaczenie reszt Glu318, Lys320 i Lys322 w wiązaniu C1q zostało potwierdzone na podstawie zdolności jaką wykazywał krótki, syntetyczny peptyd zawierający te reszty do hamowania zależnej od dopełniacza lizy. Podobne rezultaty ujawniono w Patencie USA Nr 5, 648, 260, wydanym 15 lipca, 1997r. oraz Patencie USA Nr 5, 624, 821, wydanym 29 kwietnia, 1997 r.
Na podstawie analizy zdolności podklasy ludzkiej IgG do uczestniczenia w zależnej od dopełniacza lizie komórkowej, wykazano, że reszta Pro331 jest zaangażowana w wiązanie C1q. Mutacja reszty Ser331 do reszty Pro331 w IgG nadaje zdolność aktywacji dopełniacza. (Tao i wsp., J.Exp.Med., 178: 661-667 (1993); Brekke i wsp., Eur.J.Immunol., 24: 2542-47 (1994)).
Ward i Ghetie zaprezentowali w swoim artykule przeglądowym, na podstawie porównania wyn ików otrzymanych przez zespół Winter'a i Tao i wsp. oraz Brekke i wsp., twierdzenie, że istnieją przynajmniej dwa różne regiony zaangażowane w wiązanie C1q: jeden w obrębie nici β domeny CH2, zawierającej reszty Glu318, Lys320 i Lys322 oraz drugi, w obszarze skrętu, w bliskim sąsiedztwie tej samej nici β, zawierający kluczową resztę aminokwasową w pozycji 331.
Inne doniesienia literaturowe sugerowały, że reszty Leu235 i Gly237 ludzkiego białka IgG1, zlokalizowane w dolnym regionie zawiasowym, odgrywają krytyczną rolę w wiązaniu i aktywacji dopełni acza. Xu i wsp., Immunol. 150:15A (Streszczenie) (1993). WO94/29351, wydany 2 grudnia, 1994 r. donosi, że reszty aminokwasowe niezbędne do wiązania C1q i FcR ludzkiej IgG1 zlokalizowane są w N-końcowym regionie domeny CH2, tj. reszty 231-238.
Ponadto zaproponowano, że zdolność IgG do wiązania C1q i aktywacji kaskady dopełniacza zależy również od obecności, braku lub modyfikacji, ugrupowania węglowodanowego znajdującego się pomiędzy dwiema domenami CH2 (zazwyczaj zakotwiczonego przy reszcie Asn297). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-04 (1995), str. 81.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiąże receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten obejmuje przeciwciało.
Korzystnie region Fc macierzystego polipeptydu zawiera region Fc ludzkiej IgG.
Korzystniej region Fc ludzkiej IgG zawiera region ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4.
Korzystnie wariant ten uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
Korzystniej wariant ten wiąże FcyRII z niższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedno podstawienie reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w dom enie CH2 regionu Fc.
PL 220 113 B1
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc, innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
Korzystnie wariant ten zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej wariant ten zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Korzystniej wariant ten zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wariant regionu Fc zawiera wariant Fc ludzkiej IgG.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyRI.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wykazuje zredukowane wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie z FcyRIII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435, lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyR i zawiera modyfikacje reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRIII.
Jeszcze korzystniej ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRII.
Najkorzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcyRIII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej
PL 220 113 B1 pozycjach 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcRn.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja, charakteryzująca się tym, że zawiera wariant polipeptydu określony powyżej i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
Korzystnie kompozycja ta jest sterylna.
Przedmiotm wynalazku jest ponadto wyizolowany kwas nukleinowy, charakteryzujący się tym, że koduje wariant polipeptydu określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest także wektor, charakteryzujący się tym, że zawiera kwas nukleinowy określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest też komórka gospodarza, charakteryzująca się tym, że zawiera wektor określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, polegający na tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną powyżej, który pozwala na ekspresję tego kwasu nukleinowego.
Korzystnie sposób ten obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie wariantu polipeptydu określonego powyżej do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc (FcR) lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórk owej zależnej od przeciwciał (ADCC), polegający na tym, że obejmuje etapy, w których:
(a) wprowadza się jedną lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierz ystego polipeptydu, w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
(b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcR lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
Korzystnie etap (b) obejmuje określenie in vitro wiązania wariantu regionu Fc z FcR.
Korzystnie etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC.
Korzystnie FcR jest ludzkim receptorem Fc gamma III (FcyRIII).
Korzystnie etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
Korzystniej obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
Zgodnie z wynalazkiem opisano wariant macierzystego polipeptydu zawierający region Fc, uczestniczący w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiążący receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd i zawierający przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regionie Fc. Taki wariant polipeptydu może, na przykład, zawierać przeciwciało lub immunoadhezynę. Taki region Fc macierzystego polipeptydu dogodnie zawiera ludzki region Fc, np. region Fc ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Taki wariant polipeptydu zawiera dogodnie modyfikację aminokwasową
PL 220 113 B1 (np. substytucję) w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycji 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, którego reszty aminokwasowe oznaczone są zgodnie z indeksem EU według Kabat.
Ponadto, zgodnie z wynalazkiem opisano polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wariant regionu Fc dogodnie zawiera wariant regionu Fc ludzkiej IgG, np. wariant regionu ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Zauważono, że w powyżej cytowanych pracach z tej dziedziny, dotyczących macierzystego polipeptydu posiadającego niepochodzący od ludzi mysi region Fc, wymienionym powyżej resztom przypisywano udział w wiązaniu Fc. Na przykład, w układzie mysia IgG2b/mysi FcyRII, wykazano, że IgGE318 jest istotna w procesie wiązania (Lund i wsp., Molec.Immunol. 27(1): 53-59 (1992)), podczas gdy E318A nie wywierała żadnego wpływu w układzie ludzka IgG/ludzki FcyRII (Tabela 6, poniżej).
W jednym z rozwiązań wariant polipeptydu o zmienionej aktywności wiązania FcyR charakteryzuje się zredukowanym wiązaniem z Fc-,'R i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 28 9, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRI oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Będący przedmiotem zainteresowania wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRIII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
W innym rozwiązaniu, wariant polipeptydu o zmienionym powinowactwie wiązania Fc-/R wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zwiększone wiązanie FcyRIII oraz, ewentualnie, może dodatkowo wykazywać zredukowane wiązanie FcyRII. Przykładowo, taki wariant zawiera modyfikację lub modyfikacje reszty aminokwasowej lub reszt aminokwasowych w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283,
285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Takie warianty pol ipeptydu o zwiększonym wiązaniu FcyRII mogą, ewentualnie, dodatkowo charakteryzować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII i mogą, na przykład, zawierać modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272,
286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z in8
PL 220 113 B1 deksem EU według Kabat. Takie warianty polipeptydu o zredukowanym wiązaniu FcRn mogą zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wyżej wymienione warianty polipeptydu mogą, alternatywnie, wyk azywać silniejsze wiązanie FcRn i zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311,312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też kompozycję zawierającą wariant polipeptydu i fizjologicznie lub farmaceutycznie akceptowany nośnik lub rozpuszczalnik. Kompozycja ta, służąca do potencjalnego zastosowania terapeutycznego, jest sterylna i może być liofilizowana.
Rozważano diagnostyczne i terapeutyczne zastosowanie zawartych w niniejszym opisie waria ntów polipeptydu. W jednym z zastosowań diagnostycznych zgodnie w wynalazkiem opisano sposób określenia obecności antygenu będącego przedmiotem zainteresowania, obejmujący kontaktowanie próbki przypuszczalnie zawierającej antygen z wariantem polipeptydu i określanie wiązania wariantu polipeptydu z tą próbką. W jednym z zastosowań terapuetycznych zgodnie z wynalazkiem opisano sposób leczenia ssaków dotkniętych chorobą lub zaburzeniem, lub predysponowanych do wystąpienia takiej choroby lub zaburzenia, obejmujący podawanie ssakom terapeutycznie skutecznej ilości wariantu opisywanego polipeptydu, lub kompozycji zawierającej wariant polipeptydu i farmaceutycznie a kceptowany nośnik.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również: wyizolowany kwas nukleinowy kodujący wariant polipeptydu; wektor zawierający kwas nukleinowy, ewentualnie operacyjnie połączony z sekwencją rozpoznawaną przez transformowane wektorem komórki kontrolną gospodarza; komórki gospodarza zawierające wektor; sposób otrzymywania wariantu polipeptydu obejmujący hodowlę tych komórek gospodarza w celu osiągnięcia w nich ekspresji kwasu nukleinowego, i ewentualnie odzyskanie wariantu polipeptydu z hodowli komórek gospodarza (np. z pożywki hodowlanej komórek gospodarza).
Zgodnie z wynalazkiem opisano również sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmieni onym powinowactwie wiązania receptora (FcR) lub o zmienionej cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC), który to sposób obejmuje:
(a) wprowadzanie jednej lub więcej modyfikacji aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu uzyskania wariantu regionu Fc;
(b) określanie wiązania wariantu regionu Fc z FcR lub określanie aktywności ADCC regionu Fc wariantu polipeptydu.
Etap (b) sposobu może obejmować określanie wiązania in vitro regionu Fc wariantu polipeptydu z jednym lub więcej FcR. Ponadto, sposób może pozwalać na identyfikację regionu Fc wariantu polipeptydu o zwiększonym powinowactwie wiązania z FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC w et apie (b). Etap (b) obejmuje określanie wiązania regionu Fc z FcR, który na przykład, może być ludzkim receptorem III Fc gamma (FcγRIII). Gdy etap (b) dotyczy określania wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR, to testowane FcR dogodnie zawierają ludzki receptor II Fc ga mma (FcγRII) oraz ludzki receptor III Fc gamma (FcγRIII).
Krótki opis Rysunków
Na Figurze 1 przedstawiono schematycznie natywną IgG. Wiązania disiarczkowe zaznaczono grubą linią pomiędzy domenami CH1 a CL oraz dwiema domenami CG2. V jest domeną zmienną; C jest domeną stałą; literą L oznaczono łańcuch lekki, zaś literą H łańcuch ciężki.
Na Figurze 2 przedstawiono wiązanie C1q przeciwciała dzikiego typu (wt) C2B8; przeciwciała C2B8 zawierającego region stały ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz warianty K322A, K320A i K318A.
Na Figurze 3 zaprezentowano wiązanie C1q wariantów P331A, P329A i K322A.
Na Figurze 4A oraz 4B przedstawiono sekwencje aminokwasowe łańcucha lekkiego (Fig. 4A; SEQ ID NO:1) oraz łańcucha ciężkiego (Fig. 4B; SEQ ID NO:2) przeciwciała E27 skierowanego przeciwko IgE.
Na Figurze 5 zaprezentowano schematyczny diagram „kompleksu immunologicznego” przygotowanego do zastosowania w analizie FcR opisanej w Przykładzie 1. Przedstawiono heksamer zawi erający trzy cząsteczki przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (polipeptyd zawierający region Fc) oraz trzy cząsteczki IgE („pierwsza cząsteczka docelowa”). IgE posiada dwa „miejsca wiązania” przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (E27) w regionie Fc tego białka. Każda cząsteczka IgE w tym kompleksie jest ponadto zdolna do wiązania dwóch cząsteczek VEGF („drugi polipeptyd docelowy”). VEGF posiada dwa „miejsca wiązania” IgE.
PL 220 113 B1
Na Figurze 6 zademonstrowano wyniki wiązania C1q otrzymanego dla wariantów D270K oraz D270V, w porównaniu z wynikami uzyskanymi dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 7 przedstawiono wyniki dotyczące cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) wariantów D270K i D270V w porównaniu do wyników uzyskanych dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 8 zawarto wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez komórki 293 (293-Wt-C2B8), dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez CHO (CHO-Wt-C2B8) oraz różnych typów przeciwciał.
Na Figurze 9 przedstawiono wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu (wt) C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 10 zamieszczono strukturę trójwymiarową regionu Fc ludzkiego białka IgG, zaznaczono reszty aminokwasowe: Asp270, Lys326, Pro329, Pro331, Lys322 oraz Glu333.
Na Figurze 11 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 12 przedstawiono wyniki testu ELISA wiązania C1q uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 13 przedstawiono CDC dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 14 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla C2B8 z ludzką IgG4 (IgG4), dzikiego typu C2B8 (Wt-C2B8), C2B8 z regionem stałym ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz dla wariantów przeciwciał, zgodnie z opisem w Przykładzie 3.
Na Figurze 15A i 15B pokazano wzorce wiązania uzyskane dla macierzystego przeciwciała (E27) z FcyRIIB oraz FcyRIIIA. Na Figurze 15A przedstawiono wzorce wiązania dla humanizowanego przeciwciała IgG1, E27, skierowanego przeciwko IgE, w postaci monomeru (okręgi), heksameru (pełne kwadraty) oraz kompleksu immunologicznego składającego się z wielu heksamerów (pełne trójkąty), z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIB (CD32). Heksameryczny kompleks (pełne kwadraty) utworzono poprzez zmieszanie równych stężeń molarnych E27 (wiążącego się z regionem Fc ludzkiej IgE) oraz IgE ludzkiego szpiczaka. Heksamer jest stabilnym, 1.1 kDa kompleksem, składającym się z 3 cząsteczek IgG (każda o masie 150 kDa) oraz 3 cząsteczek IgE (każda o masie 200 kDa). Kompleks immunologiczny (pełne trójkąty) utworzono kolejno łącząc równe stężenia molarne E27 oraz rekombinowanej IgE, skierowanej przeciwko VEGF (ludzka IgE z domenami zmiennymi wiążącymi ludzki VEGF) z utworzeniem heksameru. Następnie, w celu utworzenia kompleksu immunologicznego, heksamery łączono z 2x stężeniem molarnym ludzkiego VEGF, homodimeru 44 kDa, posiadającego dwa miejsca wiązania dla IgE skierowanej przeciwko VEGF na mol VEGF. Na Figurze 15B pokazano przebieg wiązania z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIIA (CD16).
Na Figurze 16A przedstawiono wiązanie kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem różnych par typu antygen-przeciwciało w reakcji z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α receptora FcyRIIA. Na Figurze 16B pokazano wiązanie tych samych par antygen-przeciwciało z fuzyjnym białkiem GST podjednostki α receptora FcyRIIIA. Wiązanie ludzkiego IgE:anty-IgE E27 IgG1 zaznaczono za pomocą pełnych kółek; wiązanie ludzkiego VEGF: humanizowane anty-VEGF IgG1 zaznaczono za pomocą pustych kółek.
Na Figurze 17 podsumowano różnice w selektywności wiązania pomiędzy pewnymi wariantami alaninowymi różnych FcyR. Wiązanie wariantów alaninowych w miejscu reszt domeny CH2 IgG1 anty-IgE, E27, przedstawiono dla FcyRIIA, FcyRIIB oraz dla FcyRIIIA. Typ 1 nie wykazuje wiązania z żadnym z trzech receptorów: D278A (265 według indeksu EU). Typ 2 cechuje się zwiększonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, podczas gdy wiązanie z FcyRIIIA nie ulega zmianie: S280A (267 według indeksu EU). Typ 3 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB, natomiast zredukowane wiązanie z FcyRIIIA: H281A (268 według indeksu EU). Typ 4 cechuje się zmniejszonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, ale zwiększonym wiązaniem z FcyRIIIA: S317A (298 według indeksu EU). Typ 5 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIIA, natomiast wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB nie ulega zmianie: E352A, K353A (333 i 334 według indeksu EU).
Na Figurze 18A i 18B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIIA/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIIA. Na Figurze 18A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIIA-GST. S317A (298 według indeksu EU) oraz S317A/K353A (298 i 334 według indeksu EU) wykazywały się lepszym wiązaniem niż dzikiego typu E27, podczas gdy D278A (265 według indeksu EU) utracił niemal
PL 220 113 B1 całkowicie zdolność wiązania. Na Figurze 18B wykazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO, wykazujących ekspresję rekombinowanej postaci FcyRIIIA związanej z GPI.
Na Figurze 19A i 19B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIB/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIB. Na Figurze 19A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIB-GST. H281A (268 według indeksu EU) wykazał się lepszym wiązaniem niż dziki typ E27, podczas gdy dla S317A (298 według indeksu EU) odnotowano zredukowane wiązanie. Na Figurze 19B pokazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO wykazujących ekspresję rekombinowanego FcyRIIB związanego z błoną.
Na Figurze 20 zademonstrowano pojedyncze substytucje alaniny w domenie CH2 przeciwciała IgG1 skierowanego przeciwko HER2 (HERCEPTIN®), które wpływają na wiązanie FcyRIIIA w obu analizach, typu białko-białko i analizie opartei na wykorzystaniu komórek, zmieniając zdolność wiązania z FcyRIIIA na efektorowych jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC). Rekombinowane humanizowane przeciwciała anty-HER2 (HERCEPTIN®), które wiążą się z ekspresjonującymi
HER-2 komórkami raka sutka SK-BR-3, inkubowano wstępnie ze znakowanymi Cr komórkami SK-BR-3 przez 30 min (opsonizacja), stosując stężenie 100 ng/ml (pełne kółka) i 1,25 ng/ml (pełne kw adraty). Stosując stałe stężenie docelowych komórek nowotworowych, zwiększano stosunek komórek efektorowych od 0 do 100. Poziom spontanicznej cytotoksyczności przy braku przeciwciała (przekreślone kwadraty) wynosił 20%, przy stosunku komórka efektorowa:komórka docelowa wynoszącym 100:1. Pojedyncza mutacja alaninowa, niewywierająca wpływu na wiązanie z FcyRIIIA, wariant G31=R309A (292 według indeksu EU), nie wpływała na ADCC (pełne trójkąty). Pojedyncza mutacja alaninowa, zwiększająca jedynie nieznacznie wiązanie z FcyRIIIA, wariant G30=K307A (290 według indeksu EU), również powodowała niewielki wzrost ADCC (tj. 1,1-krotne zwiększenie aktywności ADCC, obliczonej na podstawie obszaru pod krzywą) w stężeniu 1,25 ng/ml dla stosunków komórka efektorowa:komórka docelowa (pełne romby) porównywanych do przeciwciała dzikiego typu w stężeniu 1,25 ng/ml (pełne kwadraty). Pojedyncza mutacja alaninowa obniżająca wiązanie z FcyRIIIA, wariant G34=Q312A (295 według indeksu EU), również powodowała obniżenie aktywności ADCC (pełne, odwrócone trójkąty).
Na Figurze 21 pokazano, że pojedyncza mutacja alaninowa, powodująca wzmocnienie wiąz ania z FcyRIIIA, wariant G36=S317A (298 według indeksu EU), w analizie typu białko-białko i analizie opartej na zastosowaniu komórek również powoduje wzrost ADCC (pełne trójkąty), obserwowany wśród wariantów porównywanych z dzikim typem (pełne kwadraty), w stężeniu 1,25 ng/ml. Zastosowanie G36 powodowało 1,7-krotny wzrost aktywności ADCC, wyrażony jako obszar pod krzywą. Oba warianty, G17=E282A (269 według indeksu EU) oraz G18=D283A (270 według indeksu EU), wykazywały zredukowane wiązanie z FcyRIIIA, jak również obniżoną skuteczność ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC.
Na Figurze 22A przedstawiono przyrównania natywnych sekwencji regionów Fc IgG. Przedst awiono natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypy nie-A i A) (odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7). Sekwencja ludzkiej IgG1 jest allotypem nie-A, a różnice pomiędzy tą sekwencją a allotypem A (w pozycjach 356 i 358; zgodnie z indeksem EU) pokazano poniżej sekwencji ludzkiej IgG1. Przedstawiono również natywne sekwencje regionu Fc mysiej IgG, murIgG1 (SEQ ID NO: 8), murIgG2A (SEQ ID NO: 9), murIgG2B (SEQ ID NO: 10) oraz murIgG3 (SEQ ID NO: 11). Na Figurze 22B pokazano procent identyczności pomiędzy sekwencjami regionu Fc przedstawionymi na Figurze 22A.
Na Figurze 23 pokazano przyrównania natywnych sekwencji regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypu nie-A i A; odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7), przy czym różnice pomiędzy sekwencjami zaznaczono za pomocą gwiazdek.
Na Figurze 24 przedstawiono obszar pod krzywą (AUC) dla wybranych wariantów w porówn aniu z IgG1 anty-HER2 (HERCEPTIN®) w 4-godzinnej analizie ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC (N=5). Wariant G36 (S317A; 298 według indeksu EU) o zwiększonym wiązaniu FcyRIIIA wykazywał zwiększoną aktywność ADCC; wariant G31 (R309A; 292 według indeksu EU), niewykazujący zmiany wiązania FcyRIIIA, również nie posiadał zmienionej aktywności ADCC, a G14 (D265A; 278 według indeksu EU) cechujący się zredukowanym wiązaniem FcyRIIIA, także posiadał obniżoną aktywność ADCC.
PL 220 113 B1
Szczegółowy opis zalecanych wykonań
I. Definicje
W niniejszym opisie i zastrzeżeniach numeracja reszt w łańcuchu ciężkim immunoglobuliny jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), wyraźnie włączonym tu przez odesłanie. „Indeks EU według Kabat” dotyczy numeracji reszt ludzkiego przeciwciała IgG1 EU.
„Macierzysty polipeptyd” jest polipeptydem o sekwencji aminokwasowej bezujawnionych tu, jednej lub więcej, modyfikacji w regionie Fc, różniącym się od ujawnionego tu wariantu polipeptydu funkcją efektorową. Polipeptyd macierzysty może zawierać natywną sekwencję regionu Fc lub reg ionu Fc obejmującego istniejące pierwotnie modyfikacje sekwencji aminokwasowej (takie jak addycje, delecje i/lub substytucje).
Termin „region Fc” stosowany jest w celu zdefiniowania C-końcowego regionu łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, np. jak przedstawiono na Figurze 1. „Region Fc” może być natywną sekwencją regionu Fc lub wariantem regionu Fc. Mimo, że granice regionu Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny mogą różnić się, region Fc łańcucha ciężkiego ludzkiej immunoglobuliny IgG rozciąga się od reszty aminokwasowej w pozycji Cys226, lub od Pro230, do jego karboksylowego końca. Region Fc immunoglobuliny, ogólnie, obejmuje dwie domeny stałe, CH2 i CH3, jak przedstawiono na Figurze 1.
„Domena CH2” regionu Fc ludzkiej IgG (również nazywana domeną „Cy2”) obejmuje zazwyczaj obszar od reszty aminokwasowej 231 do około aminokwasu 340. Domena CH2 jest jedynym fragmentem, który nie jest połączony ściśłe z inną domeną. Dwa rozgałęzione, połączone wiązaniem przez atom N, łańcuchy węglowodanowe umieszczone są pomiędzy dwiema domenami CH2 we wnętrzu nienaruszonej natywnej cząsteczki IgG. Przypuszcza się, że te węglowodany zastępują łączenia pomiędzy domenami i pomagają stabilizować domenę CH2. Burton, Molec.Immunol.22 : 161-206 (1985).
„Domena CH3” obejmuje obszar reszt od C-końcowych do domeny CH2 regionu Fc (tj. od około reszty aminokwasowej 341 do około reszty aminokwasowej 447 IgG).
„Funkcjonalny region Fc” posiada „funkcję efektorową” natywnej sekwencji regionu Fc. Przykładowe, „funkcje efektorowe” obejmują wiązanie C1q; cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc, cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC); fagocytozę; inhibicję receptorów powierzchniowych komórki (np. receptora komórki B, BCR), itp. Takie funkcje efektorowe wymagają połączenia regionu Fc z domeną wiążącą (np. domeną zmienną przeciwciała) oraz mogą być oceniane za pomocą różnych analiz, np. opisanych w niniejszym wynalazku.
„Natywna sekwencja regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową identyczną z sekwencją aminokwasową regionu Fc występującą w naturze. Natywne sekwencje ludzkich regionów Fc przedstawiono na Figurze 23 i obejmują one natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypu nie-A i allotypu A); natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG2; natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG3 oraz natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG4, jak również ich warianty występujące w naturze. Na Figurze 22A przedstawiono natywną sekwencję mysiego regionu Fc.
„Wariant regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową różniącą się od natywnej sekwencji regionu Fc tym, że zawiera przynajmniej jedną, zgodnie z niniejszym opisem, „modyfikację aminokwasową”. Dogodnie wariant regionu Fc posiada przynajmniej jedną substytucję aminokwasu innym am inokwasem, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu, np. od około jednej do około dziesięciu substytucji aminokwasowych, i dogodnie, od około jednej do około pięciu substytucji aminokwasowych w obrębie natywnej sekwencji regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu. Wariant regionu Fc dogodnie wykazuje przynajmniej około 80% homologii z natywną sekwencją regionu Fc i/lub z regionem Fc macierzystego polipeptydu, a dogodniej około 90% homologii z tymi regionami, a zwłaszcza przynajmniej około 95% homologii z tymi regionami.
„Homologia” definiowana jest jako procent reszt sekwencji aminokwasowej wariantu, które są identyczne po przyrównaniu sekwencji i, w razie konieczności, wstawieniu odpowiednich przerw celem uzyskania maksymalnego procentu homologii. Metody i programy komputerowe do przyrównywania sekwencji są dobrze znane w dziedzinie. Jednym z takich programów jest program komputerowy „Align 2”, Genetech, Inc., złożony wraz z dokumentacją dla użytkownika w the United States Copyright Office, Washington, DC 20559, 10 grudnia, 1991.
Termin „polipeptyd zawierający region Fc” odnosi się do polipeptydu, takiego jak przeciwciało lub immunoadhezyna (patrz definicje poniżej), który zawiera region Fc.
PL 220 113 B1
Terminy „receptor Fc” lub „FcR” stosowane są w celu określenia receptora wiążącego region Fc przeciwciała. Zalecany FcR jest natywną sekwencją ludzkiego FcR. Ponadto, zalecany FcR posiada zdolność wiązania przeciwciała IgG (receptor gamma) i obejmuje receptory podklasy FcyRI, FcyRII i FcyRIII, włączając warianty alleliczne i warianty alternatywnego składania tych receptorów. Receptory FcyRII obejmują receptory FcyRIIA (receptor aktywujący) oraz FcyRIIB (receptor hamujący), które posiadają podobne sekwencje aminokwasowe, różniące się głównie w obs zarze ich domen cytoplazmatycznych. Receptor aktywujący FcyRIIA zawiera w swojej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw aktywujący (ITAM) obejmujący resztę tyrozyny. Receptor hamujący FcyRIIB zawiera w swej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw hamujący (ITIM) obejmujący resztę tyrozyny. (Patrz praca przeglądowa M. Daeron, Annu.Rev.Immunol. 15: 203-234 (1997)). FcR opisane są w Raveth i Kinet, Annu.Rev.Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4: 25 -34 (1994) oraz de Haas i wsp., J.Lab.Clin.Med. 126: 330-41 (1995). Inne FcR, w tym również te które zostaną zidentyfikowane w przyszłości, nazywane są w niniejszym opisie „FcR”. Termin ten obejmuje również receptor noworodkowy, FcRn, odpowiedzialny za przeniesienie matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117: 587 (1976) oraz Kim i wsp., J.Immunol. 24: 249 (1994)).
„Cytotoksyczność komórkowa zależna od przeciwciał” i „ADCC” odnosi się do zależnej od komórek reakcji, w której niespecyficzne, cytotoksyczne komórki ekspresjonujące FcR (np. komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), neutrofile i makrofagi) rozpoznają przeciwciało związane z komórką docelową, a następnie powodują lizę tej komórki. Główne komórki uczestniczące w ADCC, komórki NK, ekspresjonują jedynie FcyRIII, podczas gdy monocyty ekspresjonują FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresję FcR na komórkach uczestniczących w hematopoezie podsumowano w Tabeli 3, na stronie 464, Ravetch i Kinet, Annu.Rev.Immunol 9: 457-92, (1991).
„Ludzkie komórki efektorowe” są leukocytami ekspresjonującymi jeden lub więcej FcR i wykazującymi funkcję efektorową. Zalecane komórki ekspresjonują przynajmniej FcyRIII i wykazują funkcję efektorową ADCC. Przykładami ludzkich leukocytów uczestniczących w ADCC są jednojądrzaste k omórki krwi obwodowej (PBMC), komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), monocyty, cytotoksyczne komórki T i neutrofile; przy czym zalecane są komórki PBMC i NK. Komórki efektorowe mogą być izolowane ze źródła natywnego np. z krwi lub komórek PBMC, zgodnie z niniejszym opisem.
Wariant polipeptydu o „zmienionym” powinowactwie wiązania FcR lub aktywności ADCC jest polipeptydem o zwiększonej lub zmniejszonej aktywności wiązania FcR i/lub aktywności ADCC, w porównaniu z polipeptydem macierzystym lub z polipeptydem zawierającym natywną sekwencję regionu Fc. Wariant polipeptydu, który „wykazuje zwiększone wiązanie” z FcR wiąże przynajmniej jeden FcR z większym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Wariant polipeptydu, który „ wykazuje zmniejszone wiązanie” z FcR, wiąże przynajmniej jeden FcR z mniejszym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty, wykazujące osłabione wiązanie FcR, mogą posiadać małą lub nie posiadać żadnej znaczącej zdolności wiązania FcR, np. 0-20% wiązania z FcR, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc IgG, np. jak określono w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który wiąże FcR z „lepszym powinowactwem” niż macierzysty polipeptyd, wykazuje zdolność wiązania jakiegokolwiek, jednego lub więcej, z powyżej wymienionych FcR z istotnie lepszym powinowactwem wiązania niż macierzyste przeciwciało, w przypadku gdy zastosowane w analizie wiązania ilości wariantu polipeptydu i polipeptydu macierzystego są zasadniczo takie sa me. Na przykład, wariant polipeptydu o lepszym powinowactwie wiązania FcR może wykazywać od około 1,15-krotną do około 100-krotnej, np. od około 1,2-krotną do około 50-krotną poprawę powinowactwa wiązania FcR niż polipeptyd macierzysty, przy czym powinowactwo wiązania jest określane, na przykład, zgodnie z opisem w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który „uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej” niż przeciwciało macierzyste jest polipeptydem, który jest in vitro lub in vivo zasadniczo skuteczniejszy w procesie ADCC, przy czym zastosowane w analizie ilości wariantu polipeptydu i przeciwciała macierzystego są zasadniczo takie same. Ogólnie, takie warianty są identyfikowane za pomocą analizy ADCC in vitro, zgodnie z niniejszym opisem. Jednakże, rozważa się zastosowanie również innych analiz i metod służących wykrywaniu aktywności ADCC, np. w doświadczeniu na zwierzętach itp. Zalecany wariant jest około 1,5-krotnie do około 100-krotnie, np. od około dwukrotnie do około pięciokrotnie, bardziej skuteczny w procesie ADCC niż macierzysty polipeptyd, np. w opisanej tu analizie in vitro.
PL 220 113 B1 „Modyfikacja aminokwasowa” odnosi się do zmiany sekwencji aminokwasowej w stosunku do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Przykładowe modyfikacje obejmują substytucję am inokwasową, insercję i/lub delecję. Zalecaną modyfikacją aminokwasową jest substytucja.
„Modyfikacja aminokwasowa w” specyficznej pozycji, np. regionu Fc, odnosi się do substytucji lub delecji specyficznej reszty, lub wstawienia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej w sąsied ztwie specyficznej reszty. Przez wstawienie „w sąsiedztwie” specyficznej reszty rozumie się wstawienie w tym miejscu jednej lub dwóch reszt aminokwasowych. Wstawienie może dotyczyć wstawienia reszty od N-końca lub C-końca względem specyficznej reszty.
„Substytucja aminokwasowa” odnosi się do zastąpienia przynajmniej jednej istniejącej reszty aminokwasowej w pierwotnie określonej sekwencji aminokwasowej, inną, odmienną „zastępczą” resztą aminokwasową. Zastępcza reszta lub reszty mogą być „naturalnie występującymi resztami aminokwasowymi” (tj. kodowanymi przez kod genetyczny) i wybranymi z grupy istniejących reszt, takich jak: alanina (Ala); arginina (Arg); aspargina (Asn); kwas asparaginowy (Asp); cysteina (Cys); glutamina (Gln); kwas glutaminowy (Glu); glicyna (Gly); histydyna (His); izoleucyna (Ile); leucyna (Leu); lizyna (Lys); metionina (Met); fenyloalanina (Phe); prolina (Pro); seryna (Ser); treonina (thr); tryptofan (Trp); tyrozyna (Tyr) i walina (Val). Zaleca się jednak, żeby reszta zastępcza nie była cysteiną. Definicja obejmuje również substytucję jedną lub więcej niewystępującymi naturalnie resztami aminokwasowymi. „Niewystępująca naturalnie reszta aminokwasowa” odnosi się do reszty innej niż wymienione powyżej naturalnie występujące reszty aminokwasowe, zdolnej do kowalencyjnego wiązania z sąsiednią resztą aminokwasową sąsiednimi resztami aminokwasowymi w łańcuchu polipeptydowym. Przykłady niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych obejmują norleucynę, ornitynę, homoserynę oraz inne analogi reszt aminokwasowych, takie jak opisane przez Ellman i wsp., Meth. Enzym. 202: 301 -336 (1991). W celu uzyskania takich niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych można zastosować procedury według Noren i wsp., Science 244: 182 (1989) i Ellman i wsp., jak wyżej. W skrócie, procedury te obejmują chemiczną aktywację supresorowego tRNA z niewystępującą naturalnie resztą aminokwasową, a następnie transkrypcją in vitro i translacją RNA.
„Wstawienie aminokwasu” (insercja) odnosi się do wbudowania przynajmniej jednego aminokwasu do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Podczas gdy insercja dotyczy zazwyczaj wstawienia jednej lub dwóch reszt aminokwasowych, w niniejszym zgłoszeniu brane są pod uwagę większe „insercje peptydowe”, np. wstawienie około trzech do około pięciu lub nawet do około dziesięciu reszt aminokwasowych. Wstawiona reszta lub reszty mogą być resztami występującymi naturalnie lub niewystępującymi naturalnie, jak opisano powyżej.
„Delecja aminokwasu” odnosi się do usunięcia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej z określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej.
„Region zawiasowy” jest ogólnie zdefiniowany jako obszar od Glu216 do Pro230 ludzkiej IgG1 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985)). Regiony zawiasowe innych postaci izotypowych IgG mogą być porównane z sekwencją IgG1 poprzez umieszczenie w tych samych pozycjach pierwszej i ostatniej reszty cysteiny, tworzących wiązania disiarczkowe S-S pomiędzy łańcuchami ciężkimi.
„Niższy region zawiasowy” regionu Fc jest zazwyczaj zdefiniowany jako obszar rozciągający się od reszt następujących bezpośrednio od C-końca do regionu zawiasowego, tj. od reszty 233 do reszty 239 regionu Fc. W badaniach wykonanych wcześniej niż niniejszy wynalazek stwierdzono, że wiązanie Fc-,'R było ogólnie związane z resztami aminokwasowymi niższego regionu zawiasowego w regionie Fc białka IgG.
„C1q” jest polipeptydem zawierającym miejsce wiązania regionu Fc immunoglobuliny. C 1q wraz z dwiema proteazami serynowymi, C1r i C1s, tworzy kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności (CDC) zależnej od dopełniacza. Ludzki polipeptyd C1q można zakupić np. w Quidel, San Diego, CA.
Termin „domena wiążąca” odnosi się do regionu polipeptydu, który wiąże inną cząsteczkę. W przypadku FcR, domena wiążąca może obejmować fragment jego łańcucha polipeptydowego np. jego łańcuch a, który jest odpowiedzialny za wiązanie regionu Fc. Jedną z użytecznych domen wiążących jest zewnątrzkomórkowa domena łańcucha a FcR.
Termin „przeciwciało” stosowane jest w najszerszym możliwym znaczeniu, a specyficznie dotyczy przeciwciał monoklonalnych (włączając pełnej długości przeciwciała monoklonalne), przeciwciała poliklonalne, przeciwciała wielospecyficzne (np. bispecyficzne) oraz fragmenty przeciwciał pod warunkiem, że wykazują aktywność biologiczną.
PL 220 113 B1 „Fragmenty przeciwciała” zdefiniowane są dla potrzeb niniejszego wynalazku jako zawierające część nienaruszonego przeciwciała, ogólnie włączając region wiązania antygenu lub region zmienny nienaruszonego przeciwciała, lub też zachowujący zdolność wiązania FcR region Fc przeciwciała. Przykłady fragmentów przeciwciała obejmują przeciwciała liniowe; jednołańcuchowe cząsteczki przeciwciał oraz, utworzone z fragmentów przeciwciał, przeciwciała wielospecyficzne. Zalecane fragmenty przeciwciał posiadają przynajmniej część regionu zawiasowego i, ewentualnie, region CH1 łańcucha ciężkiego IgG. Bardziej zalecane fragmenty przeciwciał obejmują cały region stały łańcucha ciężkiego IgG i zawierają łańcuch lekki IgG.
Stosowany tu termin „przeciwciało monoklonalne” odnosi się do przeciwciała otrzymanego z populacji zasadniczo homogennych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała wchodzące w skład populacji są identyczne, za wyjątkiem różnic wynikających z możliwych, naturalnie występujących mutacji, które mogą pojawiać się w nieznacznych ilościach. Przeciwciała monoklonalne są wysoce swoiste i skierowane są przeciwko pojedynczemu miejscu antygenowemu. Ponadto, w przeciwieństwie do konwencjonalnych preparatów przeciwciał (poliklonalnych), zawierających zazwyczaj różne przeciwciała skierowane przeciwko różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciwko pojedynczej determinancie na antygenie. Modyfikacje „monoklonalne” wskazują na charakter przeciwciała wynikający z otrzymania go z zasadniczo homogennej populacji przeciwciał i nie wymagają wytwarzania jakąkolwiek szczególną metodą. Na przykład, według niniejszego wynalazku, przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane metodą z użyciem hybrydom, opisaną po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature 256: 495 (1975), lub metodami rekombinacji DNA (patrz, np. Patent USA Nr 4, 816, 567). „Przeciwciała monoklonalne” mogą być również wyizolowane z fagowej biblioteki przeciwciał, za pomocą technik opisanych, na przykład, przez Clackson i wsp., Nature 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol. 222: 581-594 (1991).
Opisane tu przeciwciała monoklonalne specyficznie obejmują przeciwciała (immunoglobuliny) „chimerowe”, których fragment łańcucha ciężkiego i/lub lekkiego jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z poszczególnych gatunków, lub należącymi do poszczególnej klasy lub podklasy, przy czym pozostały łańcuch (lub łańcuchy) jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z innego gatunku lub należącymi do innej klasy lub podklasy, jak również obejmują fragmenty takich przeciwciał pod warunkiem, że wykazują one aktywność biologiczną (Patent USA Nr 4, 816, 567; oraz Morrison i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)).
Postaci „humanizowane” przeciwciał niepochodzących od ludzi (np. mysich) to chimerowe przeciwciała, które zawierają minimalnej długości sekwencję niepochodzącą od immunogłobuliny człowieka. W większości, humanizowane przeciwciała są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało biorcy), w których reszty regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione resztami z regionu hiperzmiennego innego gatunku (przeciwciało dawcy), takiego jak mysz, szczur, królik lub Naczelny inny niż człowiek, posiadające pożądaną swoistość, powinowactwo i zdolność wiązania. W pewnych przypadkach, res zty regionu zrębowego (FR) Fv ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione odpowiadającymi im resztami innych gatunków. Ponadto, przeciwciała humanizowane mogą zawierać reszty niewystępujące w przeciwciele biorcy lub w przeciwciele dawcy. Modyfikacje te służą dalszemu udoskonaleniu przeciwciała. Ogólnie, przeciwciało humanizowane obejmuje zasadniczo każdą z przynajmniej jednej, a zazwyczaj dwóch domen zmiennych, w których wszystkie lub zasadnicza większość pętli hiperzmiennych odpowiada pętlom immunoglobulin z gatunku innego niż człowiek, a wszystkie lub zasadn icza większość regionów FR pochodzi z sekwencji immunoglobuliny ludzkiej. Humanizowane przeci wciało może, ewentualnie, zawierać również przynajmniej fragment regionu stałego immunoglobuliny (Fc), zazwyczaj ludzkiej immunoglobuliny. Bardziej szczegółowo omówiono to zagadnienie w Jones i wsp., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann i wsp., Nature 332: 323-329 (1988) oraz Presta, Curr.Op.Struct.Biol. 2: 593-596 (1992).
Termin „region hiperzmienny” dotyczy reszt aminokwasowych przeciwciała odpowiedzialnych za wiązanie antygenu. Region hiperzmienny zawiera reszty aminokwasowe z „regionu determinującego dopasowanie” lub „CDR” (tj. reszty 24-34 (L1), 50-56 (L2) oraz 89-97 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego; Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)) i/lub reszty „pętli hiperzmiennej” (tj. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego oraz reszty 26-32 (H1), 53 -55 (H2) i 96-101 (H3) domeny zmiennej łańcucha ciężkiego; Chothia i Lesk, J.Mol.Biol. 196: 901-917
PL 220 113 B1 (1987)). Reszty „regionu zrębowego” lub „FR” są resztami domeny zmiennej, innymi niż zdefiniowane w niniejszym opisie reszty regionu hiperzmiennego.
Stosowany tu termin „immunoadhezyna” określa cząsteczkę podobną do przeciwciała, której struktura stanowi połączenie „domeny wiążącej” heterologicznego białka o właściwościach „adhezyjnych” (np. receptora, ligandu lub enzymu) z domeną stałą immnoglobuliny. Strukturalnie immunoadhezyna obejmuje fuzję sekwencji aminokwasowej adhezyny z sekwencją o pożądanej swoistości wiązania, inną niż miejsce rozpoznawania i wiązania antygenu (miejsce łączenia antygenu) przeci wciała (tj. jest „hetrologiczna”) oraz z sekwencją domeny stałej immunogłobuliny.
Stosowany tu termin „domena wiążąca ligand” odnosi się do jakiegokolwiek natywnego receptora powierzchniowego komórki lub jakiegokolwiek regionu, lub jego pochodnej, zachowującego przynajmniej jakościowo w stosunku do odpowiadającego mu natywnego receptora zdolność wiązania ligandu. W specyficznym wykonaniu receptor pochodzi z polipeptydu powierzchni komórki, posiadającego domenę zewnątrzkomórkową homologiczną z domeną kodowaną przez nadrodzinę genów immunoglobulin. Inne receptory, nienależące do nadrodziny genów immunoglobulin, lecz objęte niniejszą definicją, należą do nadrodzin receptorów cytokin i, w szczególności, receptorów cechujących się aktywnością kinazy tyrozynowej (receptory kinaz tyrozynowych), nadrodzin receptorów hematopoet yny oraz nadrodzin czynnika wzrostu nerwów, i cząsteczek adhezji komórkowej, np. selektyn (E-, L-, i P-selektyny).
Termin „domena wiążąca receptor” stosowany jest w celu określenia jakiegokolwiek natywnego ligandu receptora, włączając cząsteczki adhezji komórkowej, lub jakikolwiek region lub pochodną t akiego natywnego ligandu o zachowanej, przynajmniej jakościowo, względem natywnego ligandu, zdolności wiązania receptora. Definicja ta, między innymi, dotyczy specyficznie sekwencji wiążących ligandów dla wyżej wymienionych receptorów.
„Chimera przeciwciało-immunoadhezyna” obejmuje cząsteczkę stanowiącą połączenie przynajmniej jednej domeny wiążącej przeciwciała (zgodnie z niniejszą definicją) z przynajmniej jedną immunoadhezyną (zgodnie z niniejszą definicją). Przykładowymi chimerami przeciwciało-immunoadhezyna są bispecyficzne chimery CD4-IgG, opisane przez Berg i wsp., PNAS (USA), 88: 4723 -4727 (1991) oraz Chamow i wsp., J.Immunol. 153: 4268 (1994).
„Wyizolowany” polipeptyd jest zidentyfikowanym i wydzielonym i/lub odzyskanym polipeptydem ze składnika jego naturalnego środowiska. Składnikami stanowiącymi zanieczyszczenie naturalnego środowiska polipeptydu są materiały, mogące kolidować z diagnostycznym lub terapeutycznym zastosowaniem polipeptydu, i mogą one obejmować enzymy, hormony i inne białkowe lub niebiałkowe substancje rozpuszczone. W zalecanych wykonaniach polipeptyd podlega oczyszczeniu (1) na poziomie ponad 95% wagowo, określonym metodą Lowry'ego i w szczególności, ponad 99% wagowo, (2) w stopniu wystarczającym do uzyskania, za pomocą sekwentatora (spinning cup seguentator), co najmniej 15 reszt z N-końca lub wewnętrznej sekwencji aminokwasowej, lub (3) do homogenności, w warunkach redukującej i nieredukującej elektroforezy SDS-PAGE z wykorzystaniem Coomassie blue lub, dogodnie, barwiena srebrem. Wyizolowany polipeptyd obejmuje polipeptyd in situ w komórkach rekombinowanych, ponieważ nie będzie obecny przynajmniej jeden składnik naturalnego środowiska polipeptydu. Jednakże, zazwyczaj, wyizolowany polipeptyd otrzymywany jest w wyniku co najmniej jednego etapu oczyszczania.
„Leczenie” odnosi się zarówno do leczenia terapeutycznego, jak i środków profilaktycznych lub zapobiegawczych. Osobniki potrzebujące leczenia obejmują zarówno osobniki chore, jak i osobniki, u których należy zapobiegać zaburzeniu.
„Zaburzenie” jest dowolnym stanem, w którym leczenie za pomocą wariantu polipeptydu może spowodować poprawę. Obejmuje to przewlekłe i ostre zaburzenia lub choroby, włączając stany pat ologiczne predysponujące do pojawienia się rozważanego zaburzenia u ssaka. W jednymi z wykonań zaburzenie jest nowotworem.
Termin „nowotwór” i „nowotworowy” odnosi się do, lub opisuje, stan fizjologiczny organizmu ssaka zazwyczaj cechujący się niekontrolowanym wzrostem komórek. Przykłady nowotworów obejm ują, lecz bez ograniczenia, raka, chłoniaka, blastomę, mięsaka i białaczkę. Bardziej szczegółowe przykłady takich nowotworów obejmują raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, gruczolakoraka płuc, raka płaskonabłonkowego płuc, raka otrzewnej, raka komórek wątroby, raka żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki macicy, raka jajników, raka wątroby, raka pęcherza, wątrobiaka, raka piersi, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka
PL 220 113 B1 śluzówki macicy lub macicy, raka ślinianek, raka nerek, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątrobowego oraz różnych typów nowotworów głowy i szyi.
„Rak z ekspresją HER2” jest nowotworem zawierającym komórki posiadające białko receptora HER2 (Semba i wsp., PNAS (USA) 82: 6497-6501 (1985) oraz Yamamoto i wsp., Nature 319: 230 -234 (1986) (Genebank, numer dostępu Χ03363)) obecne na powierzchni tych komórek, co powoduje, że możliwe jest wiązanie z tymi komórkami przeciwciała skierowanego przeciwko HER2.
Słowo „znacznik” odnosi się do wykrywalnego związku lub kompozycji, połączonych bezpośrednio lub pośrednio z polipeptydem. Znacznik może być sam w sobie wykrywalny (np. znaczniki radioizotopowe lub znaczniki fluoroscencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować chemiczne zmiany w obrębie wykrywanego związku substratu lub kompozycji.
„Wyizolowana” cząsteczka kwasu nukleinowego jest cząsteczką kwasu nukleinowego zidentyfikowaną i oddzieloną od przynajmniej jednej będącej zanieczyszczeniem cząsteczki kwasu nukleinowego, z którą jest zazwyczaj związana w naturalnym źródle kwasu nukleinowego polipeptydu. Wyizoiowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest inną cząsteczką niż w postaci lub zestawie występującym w naturze. Wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego są zatem inne niż cząsteczki kwasu nukleinowego występujące w naturalnych warunkach. Jednakże, wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego znajdującą się w komórkach, które zazwyczaj ekspresjonują polipeptyd, na przykład, cząsteczka kwasu nukleinowego znajduje się w lokalizacji chromosomowej innej niż w naturalnych komórkach.
Termin „sekwencje kontrolne” odnosi się do sekwencji DNA niezbędnych do ekspresji operacyjnie połączonej sekwencji kodującej w organizmie szczególnego gospodarza. Odpowiednie dla organ izmów prokariotycznych sekwencje kontrolne, na przykład, zawierają promotor, ewentualnie, sekwencję operatorową i miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne wykorzystują pr omotory, sygnały poliadenylacji i sekwencje wzmacniaczy.
Kwas nukleinowy jest „operacyjnie połączony” gdy umieszczony jest w funkcjonalnej zależności z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA presekwencji lub liderowej sekwencji wydzielniczej jest operacyjnie połączony z DNA polipeptydu jeśli ten DNA ekspresjonowany jest jako białko uczestniczące w wydzielaniu tego polipeptydu; promotor lub wzmacniacz jest operacyjnie połączony z sekwencją kodującą jeżeli oddziałuje na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiązania rybosomu jest operacyjnie połączone z sekwencją kodującą jeśli jego lokalizacja ułatwia translację. Ogólnie, „operacyjnie połączony” oznacza, że związane sekwencje DNA są ciągłe, a w przypadku liderowej sekwencji wydzielniczej ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże, wzmacniacze nie muszą być ciągłe. Łączenie przeprowadza się poprzez ligaćję w odpowiednich miejscach restrykcyjnych. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, stosuje się, zgodnie z przyjętymi metodami, syntetyczne oligonukleotydowe sekwencje adapterowe lub łączniki.
Wyrażenie „komórka”, „linia komórkowa” i „hodowla komórkowa” stosowane są w niniejszym opisie zamiennie i wszystkie te określenia obejmują potomstwo. Zatem, termin „transformanty” i „komórki transformowane” obejmuje pierwotne komórki i pochodzące z nich hodowle, bez względu na liczbę pasaży. Przyjmuje się też, że, na skutek zaplanowanych i przypadkowych mutacji, nie całe potomstwo musi posiadać dokładnie identyczną zawartość DNA. Objęte tą definicją jest potomstwo, które posiada taką samą funkcję lub aktywność biologiczną jak pierwotnie transformowane komórki. W przypadku stosowania odmiennych znaczeń, ich znaczenie jest zrozumiałe z kontekstu opisu.
Stosowany tu termin „kompleks molekularny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku wiązania dwóch lub więcej heterologicznych cząsteczek (np. polipeptydów) (dogodnie połączonych wiązaniem niekowalencyjnym). Zalecanym tu kompleksem molekularnym jest kompleks immunologiczny.
„Kompleks immunologiczny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku połączenia przynajmniej jednej docelowej cząsteczki i przynajmniej jednego polipeptydu zawierając ego region Fc. Takie połączenie powoduje powstanie kompleksu o wyższej masie cząsteczk owej. Przykładami kompleksów immunologicznych są agregaty antygen-przeciwciało i agregaty cząsteczka docelowa-immunoadhezyna. Stosowany tu termin „kompleks immunologiczny” w wypadku jeśli nie został określony inaczej, odnosi się do kompleksu ex vivo (tj. różnego od postaci lub ułożenia występującego w naturze). Jednakże, kompleks immunologiczny może być podawany ssakom, np. w celu oszacowania klirensu kompleksu immunologicznego u ssaka.
Termin „cząsteczka docelowa” odnosi się do cząsteczki, zazwyczaj polipeptydu, zdolnej do wiązania przez cząsteczkę heterologiczną, i posiadającej jedno lub więcej miejsc wiążących dla cząPL 220 113 B1 steczki heterologicznej. Termin „miejsce wiążące” odnosi się do regionu cząsteczki, z którym możliwe jest związanie innej cząsteczki. „Pierwsza cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa różne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla analizowanej cząsteczki (np. polipeptyd zawierający region Fc), takie, że przynajmniej dwie analizowane cząsteczki mogą ulec związaniu z pierwszą cząsteczką docelową. W zalecanym wykonaniu, dwa lub więcej miejsc wiążących jest identycznych (np. posiadający taką samą sekwencję aminokwasową, gdy cząsteczka docelowa jest polipeptydem). W poniżej zamieszczonym Przykładzie 1 pierwszą cząsteczką docelową jest IgE, posiadająca dwa oddzielne miejsca wiążące w jej regionie Fc, z którymi może ulec związaniu polipeptyd posiadający region Fc (przeciwciało skierowane przeciwko IgE, E27). Inne pierwsze cząsteczki docelowe obejmują dimery składające się z zasadniczo identycznych monomerów (np. neurotrofiny, IL8 i VEGF) lub są polipeptydami zawierającymi dwa lub więcej zasadniczo identycznych łańcuchów polipeptydowych (np. przeciwciała lub immunoadhezyny). „Druga cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa oddzielne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla pierwszej cząsteczki docelowej, takie, że przynajmniej dwie pierwsze cząsteczki docelowe mogą ulec związaniu z drugą cząsteczką docelową. Dogodnie dwa lub więcej miejsca wiążące są identyczne (np. posiadają taką samą sekwencję aminokwasową, gdy docelowa cząsteczka jest polipeptydem). W Przykładzie 2, drugą cząsteczką docelową jest VEGF, posiadająca parę oddzielnych miejsc wiążących, do których może ulec przyłączeniu domena zmienna przeciwciała IgE. Innymi drugimi cząsteczkami docelowymi są np. inne dimery składające się z zasadniczo ide ntycznych monomerów (np. neurotrofiny lub IL8) lub polipeptydy zawierające dwa lub więcej zasadniczo identycznych domen (np. przeciwciała lub immunoadhezyny).
„Analit” jest substancją poddawaną analizie. Zalecanym analitem jest polipeptyd zawierający region Fc, który ma być analizowany pod kątem jego zdolności do wiązania receptora Fc.
„Receptor” jest polipeptydem zdolnym do wiązania przynajmniej jednego ligandu. Zalecanym receptorem jest receptor powierzchni komórkowej, posiadający zewnątrzkomórkową domenę wiążącą ligand i, ewentualnie, inne domeny (np. domenę przezbłonową, domenę wewnątrzkomórkową i/lub domenę zakotwiczoną w błonie komórkowej). Oceniany w tym teście receptor może być stosowany w całości lub jako jego fragment, lub też pochodna (np. białko fuzyjne zawierające domenę wiążącą receptora połączone z jednym lub więcej heterologicznym polipeptydem). Ponadto, receptor oceniany pod kątem właściwości wiązania może być obecny w komórce lub w postaci wyizolowanej i, ewentua lnie, analizowany na płytkach lub innych stałych fazach.
Wyrażenie „receptor o niskim powinowactwie” dotyczy receptora o słabym powinowactwie wiązania badanego ligandu, np. posiadającego stałą wiązania wynoszącą około 50 nM lub słabsze powinowactwo. Przykłady receptorów o niskim powinowactwie obejmują FcyRII i FcyRIII.
II. Sposoby wykonania wynalazku
Zgodnie z wynalazkiem opisano sposób otrzymywania wariantu polipeptydu. „Macierzysty”, „wyjściowy” lub „niezmieniony” polipeptyd wytwarza się za pomocą znanych w dziedzinie technik wytwarzania polipeptydów zawierających region Fc. W zalecanym wykonaniu wynalazku polipeptyd m acierzysty jest przeciwciałem, a przykładowe sposoby otrzymywania przeciwciał opisano bardziej szczegółowo w kolejnych podrozdziałach. Polipeptyd macierzysty może, jednakże, być jakimkolwiek polipeptydem zawierającym region Fc, np. cząsteczką immunoadhezyny. Sposoby otrzymywania immunoadhezyny omówiono szczegółowo poniżej.
W alternatywnym wykonaniu wariant regionu Fc może być otrzymany zgodnie ze sposobami zawartymi w niniejszym opisie i taki „wariant regionu Fc” może być poddany fuzji z wybranym heterologicznym polipeptydem, takim jak domena zmienna przeciwciała lub domena wiążąca receptora lub ligandu.
Polipeptyd macierzysty zawiera region Fc. Ogólnie, region Fc macierzystego polipepcydu zawiera natywną sekwencję regionu Fc i dogodnie, ludzką natywną sekwencję regionu Fc. Jednakże, region Fc macierzystego polipeptydu może posiadać jedną lub więcej istniejących wcześniej zmian w sekwencji aminokwasowej lub modyfikacji w stosunku do natywnego regionu Fc. Na przykład, aktywność wiążąca C1q regionu Fc może być uprzednio zmieniona (inne rodzaje modyfikacji regionu Fc opisano bardziej szczegółowo poniżej). W kolejnym rozwiązaniu region Fc macierzystego polipeptydu istnieje na poziomie „koncepcyjnym”, podczas gdy region ten fizycznie nie istnieje, projektant przeciwciała może zdecydować co do wyboru pożądanej sekwencji aminokwasowej regionu Fc i otrzymać polipeptyd zawierający sekwencję lub DNA kodujący pożądaną sekwencję aminokwasową wariantu regionu Fc.
PL 220 113 B1
Jednakże w zalecanym rozwiązaniu kwas nukleinowy kodujący region Fc macierzystego polipeptydu jest dostępny i, w celu uzyskania wariantu sekwencji kwasu nukleinowego kodującego wariant regionu Fc, sekwencja tego kwasu jest poddawana zmianie.
DNA kodujący wariant sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu otrzymywany jest w wyniku zastosowania różnych, znanych w dziedzinie, sposobów. Sposoby te obejmują, lecz bez ograniczenia, ukierunkowaną (lub zależną od oligonukleotydu) mutagenezę, mutagenezę PGR i mutagenezę kasetową uprzednio otrzymanego DNA kodującego polipeptyd.
Mutageneza ukierunkowana jest zalecanym sposobem otrzymywania wariantów substytucyjnych. Technika ta jest dobrze znana w dziedzinie (patrz np. Carter i wsp., Nucleic Acids Res. 13: 4431-4443 (1985) oraz Kunkel i wsp., Proc.Natl.Acad.Sei.USA 82: 488 (1987)). W skrócie, podczas mutagenezy ukierunkowanej DNA zmianie ulega najpierw wyjściowy DNA, na drodze hybrydyzacji oligonukleotydu kodującego pożądaną mutację z pojedynczą nicią tego wyjściowego DNA. Po hybrydyzacji, stosowana jest polimeraza DNA, służąca syntezie całości drugiej nici, przy pomocy przyłączonego na etapie hybrydyzacji oligonukleotydu jako startera i pojedynczej nici wyjściowego DNA jako matrycy. Zatem, w rezultacie, oligonukleotyd kodujący pożądaną mutację zostaje wbudowany w uzyskany w ten sposób dwuniciowy DNA.
Mutageneza PGR jest również odpowiednia w celu uzyskania wariantów sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu. Patrz, Higuchi, PGR Protocols, str. 177-183 (Academic Press, 1990) oraz Vallette i wsp., Nuci.Acids Res. 17: 723-733 (1989). W skrócie, w przypadku zastosowania m ałych ilości matrycowego DNA jako materiału wyjściowego w PGR, w celu uzyskania względnie dużych ilości specyficznego fragmentu DNA, różniącego się od sekwencji matrycy jedynie w pozycjach, w których startery różnią się od matrycy, stosuje się startery o jedynie nieznacznie zmienionej s ekwencji, w stosunku do odpowiadającego im regionu na matrycy DNA.
Innym sposobem otrzymywania wariantów jest mutageneza kasetowa, oparta na technice opisanej przez Wells i wsp., Gene 34: 315-323 (1985). Wyjściowy materiał jest plazmidem (lub innym wektorem) zawierającym poddawany mutagenezie wyjściowy polipeptyd DNA. W poddawanym mutagenezie wyjściowym DNA identyfikowany jest kodon lub kodony. Po obu stronach wskazanego miejsca lub miejsc mutacji powinno znajdować się unikalne miejsce dla endonukleazy restrykcyjnej. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, można je utworzyć za pomocą opisanych powyżej metod mutagenezy zależnej od oligonukleotydu, pozwalających na wprowadzenie takich miejsc w odpowiednim położeniu w wyjściowym polipeptydzie DNA. Następnie, w celu linearyzacji, plazmidowy DNA jest w tych miejscach poddawany trawieniu. Dwuniciowy oligonukleotyd kodujący sekwencję DNA znajdującą się pomiędzy miejscami restrykcyjnymi, lecz również zawierający pożądaną mutację lub mutacje syntetyzowany jest za pomocą standardowych procedur, w których dwie nici oligonukleotydu syntetyzowane są oddzielnie, a następnie poddawane wzajemnej hybrydyzacji za pomocą standardowych technik. Dwuniciowy oligonukleotyd określany jest jako kaseta. Kaseta ta zaprojektowana jest w taki sposób, żeby zawierała końce 5' i 3' kompatybilne z końcami zlinearyzowanego plazmidu, co pozwala na bezpośrednie włączenie jej do plazmidu. W rezultacie plazmid zawiera zmutowaną sekwencję DNA.
Alternatywnie, lub dodatkowo, możliwe jest określenie pożądanej sekwencji aminokwasowej, kodującej wariant polipeptydu i otrzymanie na drodze syntezy sekwencji kwasu nukleinowego kodującej wariant takiej sekwencji aminokwasowej.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc lub aktywności in vitro i/lub in vivo i/lub zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) in vitro i/lub in vivo, sekwencję aminokwasową macierzystego polipeptydu poddaje się modyfikacji.
Ogólnie, modyfikacja obejmuje jedną lub więcej substytucji aminokwasowych. W jednym z ro związań zastąpiona reszta nie odpowiada żadnej reszcie w tej samej pozycji w jakimkolwiek z regionów Fc o natywnej sekwencji przedstawionych na Figurze 22A. Na przykład, zgodnie z tym rozwiązaniem, Pro331 z regionu ludzkiej IgG3 lub IgG1, zastąpiona jest inną niż seryna resztą (odpowiadająca jej przyrównana reszta w natywnej sekwencji ludzkiej IgG4). W jednym z rozwiązań reszta z polipeptydu macierzystego, która zastąpiona jest inną resztą jest inna niż alanina i/lub nie jest resztą Ala339 z regionu Fc. W przypadku substytucji aminokwasowej zalecane jest by reszta macierzystego polipeptydu zastąpiona była resztą alaniny. Jednakże, zgodnie z niniejszym wynalazkiem brana jest pod uwagę substytucja reszty macierzystego polipeptydu jakąkolwiek inną resztą aminokwasową. Substytucja może, na przykład, mieć charakter „substytucji konserwatywnej”. Takie konserwatywne substytucje
PL 220 113 B1 zaprezentowano w Tabeli 1, pod nagłówkiem „zalecane substytucje”. Bardziej istotne zmiany mogą być uzyskane w wyniku jednego lub więcej „przykładowych substytucji”, które nie należą do zalecanych podstawień zawartych w Tabeli 1.
T a b e l a 1
Pierwotna reszta Przykładowe substytucje Zalecane substytucje
Ala (A) val; leu; ile val
Arg (R) lys; gln; asn lys
Asn(N) gln; his;lys;arg gln
Asp(D) glu glu
Cys (C) ser ser
Gln (Q) asn asn
Glu (E) asp asp
Gly (G) pro; ala ala
His (H) asn; gln; lys; arg arg
Ile (I) leu, val, met; ala; phe; norleucyna leu
Leu (L) norleucyna; ile; val; met, ala, phe ile
Lys (K) arg; gln; asn arg
Met (M) leu; phe; ile leu
Phe (F) leu; val; ile, ala; tyr leu
Pro (P) ala ala
Ser (S) thr thr
Thr (T) ser ser
Trp (W) tyr; phe tyr
Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucyna leu
Istotne modyfikacje właściwości biologicznych regionu Fc można uzyskać w wyniku selekcji substytucji wywołujących silnie zróżnicowany efekt na utrzymanie (a) struktury szkieletu polipeptydu w obszarze substytucji, na przykład, konformacji harmonijki lub struktury helisy, (b) ładunku lub hydrofobowości cząsteczki w miejscu docelowym, lub (c) objętości łańcuchów bocznych. Naturalnie występujące reszty aminokwasowe podzielono na grupy w oparciu o wspólne właściwości łańcucha bocznego.
(1) hydrofobowe: norleucyna, met, ala, val, leu, ile;
(2) obojętne hydrofilowe: cys, ser, thr;
(3) kwaśne: asp, glu;
(4) zasadowe: asn, gln, his, lys, arg;
(5) reszty wpływające na ułożenie łańcucha: gly, pro, i (6) aromatyczne: trp, tyr, phe.
Substytucje o charakterze niekonserwatywnym dotyczą wymiany reszty należącej do jednej z tych klas na resztę należącą do innej klasy. Przykłady konserwatywnych i niekonserwatywnych substytucji aminokwasowych przedstawiono poniżej w Tabeli 8.
Jak pokazano w Przykładzie 4, możliwe jest utworzenie wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania jednego lub więcej FcR. Jak zademonstrowano w tym Przykładzie, możliwe j est uzyskanie różnych klas wariantów regionu Fc, np. przedstawionych w poniższej tabeli. W przypadku
PL 220 113 B1 gdy wariant regionu Fc posiada więcej niż jedną substytucję aminokwasową, ogólnie, lecz niekoniecznie, łączy się substytucje aminokwasowe w tych samych klasach w celu uzyskania pożądanego efektu.
Ta b ela 2
Klasy wariantów regionu Fc
Klasa Właściwości wiązania FcR Pozycja substytucji w regionie Fc
1A zredukowane wiązanie wszystkich FcyR 238, 265, 269, 270, 297*, 327, 329
1B zredukowane wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 239, 294, 295, 303, 338, 373, 376, 416, 435
2 wzmocnione wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 256, 290, 312, 326, 330, 339#, 378, 430
3 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz brak efektu na wiązanie FcyRIII 255, 258, 267,276, 280, 283, 285, 286, 305, 307, 309, 315, 320, 331, 337, 398
4 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie dla FcyRIII 268, 272, 301, 322, 340
5 zredukowane wiązanie FcyRII ora brak efektu na wiązanie FcyRIII 292, 324, 335, 414, 419
6 zredukowane wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 298, 333
7 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie FcyRIII 248, 249, 252, 254, 278, 289, 293, 296, 338, 382, 388, 389, 434, 437
8 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 334, 360
* Wersja deglikozylowa #
Zalecane połączenie z inną lub innymi modyfikacjami regionu Fc (np. ujawnionymi w niniejszym opisie)
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem oprócz substancji aminokwasowych opisano inne modyfik acje sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc, które służą do otrzymania wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej.
W celu zredukowania wiązania z FcR możliwe jest, na przykład, usunięcie jednej lub więcej reszt aminokwasowych regionu Fc. Ogólnie, w celu stworzenia wariantu regionu Fc możliwe jest wycięcie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako reszty wpływające na wiązanie FcR (patrz poniżej. Przykład 4). Ogólnie, w takim wykonaniu można wyciąć nie więcej niż jedną do dziesięciu reszt regionu Fc. Opisywany tu region Fc, z delecją jednej lub więcej reszt aminokwas owych, zachowuje dogodnie przynajmniej 80%, i w szczególności przynajmniej 90%, a zwłaszcza prz ynajmniej 95% sekwencji macierzystego regionu Fc lub natywnej sekwencji ludzkiego regionu Fc.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej poprzez insercje aminokwasowe. Na przykład, możliwe jest wprowadzenie przynajmniej jednej reszty aminokwasowej (np. jednej do dwóch reszt aminokwasowych, ogólnie nie więcej niż dziesięciu reszt), w sąsiedztwie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako wpływające na wiązanie FcR. Terminem „w sąsiedztwie” określa się położenie w odległości jednej do dwóch reszt aminokwasowych od zidentyfikowanych tu reszt regionu Fc. Takie warianty regionu Fc mogą wykazywać wzmocnione lub osłabione wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC. W celu otrzymania takich wariantów insercyjnych i racjonalnego zaprojektowania wariantu regionu Fc, np. o wzm ocnionym wiązaniu FcR, można dokonać oceny struktury krystalicznej polipeptydu zawierającego region wiążący FcR (np. zewnątrzkomórkowej domeny FcR) będącego przedmiotem zainteresowań i regionu Fc, do którego ma być wstawiona reszta lub reszty aminokwasowe (patrz, na przykład, Deisenhofer, Biochemistry 20(9): 2361-2370 (1981) oraz Burmeister i wsp., Nature 342: 379-383, (1994)). Taką insercję lub insercje, ogólnie, wprowadza się w obszarze pętli regionu Fc, a nie w obrębie struktur drugorzędowych (tj. w strukturze nici β) regionu Fc.
W wyniku wprowadzenia odpowiednich modyfikacji sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc, który (a) skuteczniej uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych
PL 220 113 B1 i/lub (b) wiąże receptor gamma Fc (FcγR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty regionu Fc, ogólnie, zawierają przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regi onie Fc. Uważa się, że szczególnie zalecane jest połączenie modyfikacji aminokwasowych. Na przykład, wariant regionu Fc może obejmować dwie, trzy, cztery, pięć, itd. substytucji, np. w specyficznych, zidentyfikowanych tu pozycjach regionu Fc.
Zalecany region Fc macierzystego polipeptydu jest ludzkim regionem Fc, np. natywną sekwencją ludzkiego regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypy A i nie-A), regionu Fc IgG2, IgG3 lub IgG4. Sekwencje te przedstawiono na Figurze 23.
W celu uzyskania regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, polipeptyd macierzysty powinien, dogodnie, wykazywać już wcześniej aktywność ADCC, np. posiadać region Fc ludzkiej IgG1 lub ludzkiej IgG3. W jednym rozwiązaniu wariant o wzmocnionej ADCC uczestniczy w ADCC istotnie sk uteczniej niż przeciwciało o natywnej sekwencji regionu Fc IG1 lub IgG3 i regionu wiążącego antygen wariantu. Dogodnie, wariant zawiera substytucje dwóch lub trzech reszt w pozycjach 298, 333 i 334 regionu Fc, dogodniej mogą to być jedyne substytucje. Dogodnie substytucji poddaje się reszty w pozycjach 298, 333 i 334 (np. resztami alaniny). Ponadto, w celu otrzymania wariantu regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, możliwe jest ogólnie, otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII, który uważany jest za istotny FcR w procesie ADCC. Na przykład, w celu otrzymania takiego wariantu, możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej (np. substytucji) w obrębie macierzystego regionu Fc w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycjach aminokwasowych 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430. Wariant o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII może ponadto wykazywać zredukowane powinowactwo wiązania FcγRII, w szczególności zredukowane powinowactwo dla hamującego receptora FcγRIIB.
Modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe dogodnie wprowadza się w domenie CH2 regionu Fc, ponieważ ujawnione tu doświadczenia wskazują, że domena CH2 jest istotna dla aktywności wiązania FcR. Ponadto, odmiennie niż w cytowanej powyżej literaturze, w niniejszym zgłoszeniu ro zważane jest wprowadzanie modyfikacji w części regionu Fc innej niż niższy region zawiasowy.
Użyteczne do modyfikacji celem otrzymania wariantu regionu Fc IgG o zmienionym powinowa ctwie wiązania receptora gamma (FcγR) lub aktywności pozycje aminokwasowe obejmują jedną lub więcej spośród następujących pozycji aminokwasowych: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258,
265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298,
301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338,
340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc. W celu otrzymania takich wariantów, stosowany jako matryca region macierzysty Fc dogodnie zawiera region Fc ludzkiej IgG. W przypadku substytucji reszty 331, region macierzysty Fc, dogodnie, nie jest natywną sekwencją ludzkiej IgG3, lub gdy wariant regionu Fc zawiera substytucję w pozycji 331, dogodnie wykazuje on wzrost wiązania FcR, np. FcγRII.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zredukowanym wiązaniu FcγR możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji aminokwasowej spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Warianty cechujące się zredukowanym wiązaniem FcγRI, obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 327 lub 329.
Warianty wykazujące zredukowane wiązanie FcγRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439.
Warianty regionu Fc wykazujące zredukowane wiązanie FcγRIII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301,303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów o wzmocnionym wiązaniu jednego lub więcej Fc γΚ. Takie warianty regionu Fc mogą zawierać, modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290,
PL 220 113 B1
298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc.
Na przykład, wariant o wzmocnionej aktywności wiązania Fc-,'R może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRIII i, ewentualnie, może również cechować się zredukowanym wiązaniem z FcyRII; np. wariant może zawierać modyfikację aminokwasową w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc.
Warianty wykazujące wzmocnione wiązanie FcyRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc. Takie warianty mogą również cechować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII. Na przykład, mogą one zawierać modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 268, 272, 298, 301,322 lub 340.
Chociaż zmiana wiązania FcyR jest zalecana, to rozważa się tu również warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora (FcRn). Uważa się, że warianty regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcRn posiadają dłuższy okres półtrwania w surowicy i takie cząsteczki są użyteczne w sposobach leczenia ssaków, gdzie pożądany jest długi okres półtrwania podawanego polipeptydu, np. w leczeniu przewlekłych chorób lub zaburzeń. Przeciwnie, oczekuje się, że warianty regionów Fc o zredukowanym powinowactwie wiązania FcRn posiadają krótszy okres półtrwania, i tego typu cząsteczki mogą, na przykład, być podawane ssakom w sytuacjach gdy zalecany jest skrócony okres półtrwania w krążeniu, np. w celu obrazowania diagnostyc znego in vivo lub w przypadku polipeptydów wywołujących toksyczne skutki uboczne podczas krążenia przez dłuższy czas w krwioobiegu, itp. W wypadku wariantów regionu Fc o obniżonym powinowactwie wiązania FcRn jest mniej prawdopodobne, że przekroczą one łożysko i mogą być zatem użyteczne w leczeniu chorób i zaburzeń u kobiet w ciąży.
Warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania FcRn obejmują te warianty, które posiadają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447. Te, które wykazują zredukowane wiązanie FcRn obejmują ogólnie modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447, natomiast te, które cechują się wzmocnionym wiązaniem FcRn obejmują zazwyczaj modyfikacją aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 282, 413, 424 lub 434.
Wariant lub warianty polipeptydu otrzymane zgodnie z powyższym opisem mogą być poddane dalszym modyfikacjom, często zależnym od przewidywanego zastosowania polipeptydu. Modyfikacje te mogą obejmować dalsze zmiany sekwencji aminokwasowej (substytucję, insercję i/lub delecję reszt aminokwasowych), fuzję z heterologicznym polipeptydem lub polipeptydami heterologicznymi i/lub modyfikacje kowalencyjne. Takie „dalsze modyfikacje” mogą być wprowadzane wcześniej, równolegle lub po opisanej powyżej modyfikacji lub modyfikacjach aminokwasowych, w których efekcie następuje zmiana wiązania receptora Fc i/lub aktywności ADCC. W jednym rozwiązaniu możliwe jest połączenie opisywanej tu modyfikacji regionu Fc z substytucjami w regionie Fc, ujawnionymi w cytowanych publikacjach w opisie stanu techniki niniejszego zgłoszenia.
Alternatywnie, lub dodatkowo, użyteczne może być połączenie powyższych modyfikacji aminokwasowych z jedną lub więcej dalszych modyfikacji aminokwasowych, zmieniających wiązanie C1q i/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza regionu Fc.
Wyjściowym polipeptydem będącym tu przedmiotem zainteresowania jest zazwyczaj polipeptyd, który wiąże się z C1q i wykazuje cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC). Dalsze, ujawnione powyżej, substytucje aminokwasowe służą ogólnie zmianie zdolności wyjściowego polipeptydu wiązania C1q i/lub modyfikacji jego funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza, np. w celu zreduk owania, a w szczególności zniesienia, tych funkcji efektorowych. Jednakże, rozważane są tu również polipeptydy zawierające substytucje w jednej lub więcej spośród opisanych pozycji i wykazujące wzmocnione wiązanie C1q l/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Na przykład, wyjściowy polipeptyd może być niezdolny do wiązania C1q i/lub uczestniczenia w CDC a w wyniku zastosowania opisywanych tu modyfikacji możliwe jest nadanie mu tych funkcji efektorowych. Ponadto, polipeptydy posiadające wcześniej aktywność wiązania C1q, i, ewentualnie, zdolność uczestniczenia
PL 220 113 B1 w CDC, mogą zostać poddane modyfikacjom, w wyniku których jedna, lub obie, z tych funkcji ulegną wzmocnieniu.
W celu otrzymania regionu Fc o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) do modyfikacji wybiera się ogólnie reszty aminokwasowe spośród pozycji łańcucha ciężkiego 270, 322, 326, 327, 329, 331,333 i 334, przy czym numeracja w łańcuchu ciężkim IgG jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). W jednym rozwiązaniu w celu otrzymania wariantu polipeptydu o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) zmianie poddawana jest jedynie jedna z ośmiu wymienionych powyżej pozycji. W tym przypadku, zmianie podlega dogodnie jedynie reszta 270, 329 lub 322. Alternatywnie, modyfikowane mogą być dwie lub więcej spośród wymienionych reszt. W przypadku gdy substytucje mają być połączone, ogólnie łączy się substytucje zwiększające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 326, 327, 333 i 334) lub osłabiające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 270, 322, 329 i 331). W kolejnym rozwiązaniu możliwa jest substytucja wszystkich czt erech pozycji (tj. 270, 322, 329 i 331). W celu otrzymania polipeptydu o zwiększonej zdolności wiązania ludzkiego C1q, a zwłaszcza wyższej aktywności CDC in vitro lub in vivo, dogodnie łączy się dalsze substytucje w dwóch, trzech lub wszystkich pozycji spośród 326, 327, 333 lub 334, ewentualnie z innymi substytucjami w regionie Fc.
Prolina w pozycji 329 jest konserwowana w ludzkich IgG. Reszta ta jest dogodnie zastępowana alaniną, jednakże brana jest również pod uwagę substytucja jakimkolwiek innym aminokwasem, np. seryną, treoniną, asparaginą, glicyną lub waliną.
Prolina w pozycji 331 jest konserwowana w ludzkiej IgG1, IgG2 i IgG3, lecz nie w IgG4 (w której w pozycji 331 występuje seryna). Reszta 331 jest dogodnie zastępowana alaniną lub innym aminokwasem, np. seryną (dla regionów IgG innych niż IgG4), glicyną lub waliną.
Lizyna 322 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta jest dogodnie zastępowana resztą alaniny, brana jest również pod uwagę substytucja jakąkolwiek inną resztą aminokwasową, np. seryną, treoniną, glicyną lub waliną.
D270 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta może być zastąpiona inną resztą aminokwasową, np. alaniną, seryną, treoniną, glicyną, waliną lub lizyną.
K326 jest również resztą konserwowaną w ludzkich IgG. Reszta ta może być podstawiona przez inną resztę, w tym, lecz bez ograniczenia, walinę, kwas glutaminowy, alaninę, glicynę, kwas asparaginowy, metioninę lub tryptofan, przy czym zalecany jest tryptofan.
Podobnie, E333 jest również konserwowana w ludzkich IgG. E333 jest dogodnie zastępowana resztą aminokwasową o mniejszym łańcuchu bocznym, taką jak walina, glicyna, alanina lub seryna, przy czym zalecana jest seryna.
K334 jest resztą konserwowaną w ludzkich IgG, i która może być podstawiona inną resztą, taką jak alanina lub inną resztą.
W ludzkich IgG1 i IgG3 resztą 327 jest alanina. W celu otrzymania wariantu o zwiększonym wiązaniu C1q ta reszta alaniny może być podstawiona inną resztą, taką jak glicyna. W IgG2 i IgG4 resztą 327 jest glicyna, która, w celu osłabienia wiązania C1q, może być zastąpiona alaniną (lub inną resztą).
Jak ujawniono powyżej, możliwe jest zaprojektowanie regionu Fc o zmienionej funkcji efektor owej, np. poprzez modyfikację wiązania C1q i/lub wiązania FcR, a przez to zmianę aktywności CDC i/lub aktywności ADCC. Na przykład, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym wiązaniu C1q i wzmocnionym wiązaniu FcyRIII; np. wykazującego zarówno podwyższoną aktywność ADCC, jak i podwyższoną aktywność CDC. Alternatywnie, w celu zredukowania lub zniesienia funkcji efektorowych, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o zredukowanej aktywności CDC i/lub zredukowanej aktywności ADCC. W innych rozwiązaniach, możliwe jest nasilenie jedynie jednej z tych aktywności i, ewentualnie, również obniżenie innej aktywności, np. w celu otrzymania wariantu regionu Fc o podwyższonej aktywności ADCC, lecz obniżonej aktywności CDC, i odwrotnie.
W odniesieniu do dalszych zmian sekwencji aminokwasowej, możliwe jest podstawienie jakiejkolwiek reszty cysteiny, która nie jest zaangażowana w utrzymanie odpowiedniej konformacji polipeptydu, ogólnie seryną, w celu zwiększenia stabilności wobec utleniania cząsteczki i zapobiegnięcia powstawania nieprawidłowego sieciowania.
Inny typ substytucji aminokwasowej służy do zmiany wzorca glikozylacji polipeptydu. Można ją uzyskać poprzez delecję jednej lub więcej jednostek węglowodanowych polipeptydu i/lub dodania
PL 220 113 B1 jednego lub więcej miejsc glikozylacji, nieobecnych uprzednio w polipeptydzie. Glikozylacja polipept ydów związana jest zazwyczaj z powstaniem wiązań poprzez atom N lub atom O. Wiązanie poprzez atom N dotyczy przyłączenia jednostki węglowodanowej do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Sekwencje trójpeptydowe, obejmujące reszty takie jak asparagina-X-seryna oraz asparagina-X-treonina, gdzie X jest jakimkolwiek aminokwasem za wyjątkiem proliny, są sekwencjami rozpoznawanymi do enzymatycznego przyłączenia jednostki węgłowodanowej do łańcucha bocznego asparaginy. Zatem, obecność dowolnej z tych sekwencji trójpeptydowych w polipeptydzie stwarza potencjalne miejsce glikozylacji. Glikozylacja poprzez wiązanie przez atom O odnosi się do przyłączenia jednego z cukrów N-acetylogalaktozoaminy, galaktozy lub ksylozy do hydroksyaminokwasu, najczęściej seryny lub treoniny, jednakże do tego celu mogą być także wykorzystane 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna. Wprowadzenie miejsc glikozylacji do polipeptydu przeprowadza się dogodnie poprzez zmianę sekwencji aminokwasowej, w wyniku której zawiera ona jedną lub więcej powyżej w ymienionych sekwencji trójpeptydowych (dla miejsc N-glikozylacji). Zmiana ta może być dokonana również poprzez dodanie lub substytucję, jednej lub więcej reszt seryny lub treoniny, w pierwotnej s ekwencji polipeptydu (dla miejsc O-glikozylacji). Przykładowy wariant glikozylacji posiada substytucję aminokwasową reszty Asn297 łańcucha ciężkiego.
Ponadto, w wyniku jednej lub więcej dalszych substytucji aminokwasowych możliwa jest zmiana klasy, podklasy lub allotypu regionu Fc, co prowadzi, w razie potrzeby, do otrzymania regionu Fc o sekwencji aminokwasowej o wyższej homologii względem innej klasy, podklasy lub allotypu. Na przykład, możliwa jest zmiana mysiego regionu Fc, dająca w rezultacie sekwencję aminokwasową bardziej homologiczną względem ludzkiego regionu Fc; możliwe jest zmodyfikowanie ludzkiego regionu Fc, allotypu nie-A, prowadzące do otrzymania ludzkiego regionu Fc IgG1 allotypu A, itp. W jednym rozwiązaniu w regionie Fc przeprowadza się modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe w domenie CH2, które zmieniają wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC oraz poddaje się delecji domenę CH3, lub zastępuje się ją inną domeną dimeryzacji. Dogodnie jednak domena CH3 pozostaje (oprócz ujawnionych tu modyfikacji aminokwasowych, wywołujących zmianę funkcji efektorowej).
Wariant polipeptydu może być poddany jednej lub więcej analizom pozwalającym na oszacowanie jakiejkolwiek zmiany aktywności biologicznej w porównaniu do aktywności wyjściowego polipeptydu.
Wariant polipeptydu dogodnie zachowuje zasadniczo zdolność wiązania antygenu w porówn aniu do polipeptydu niezmienionego, tj. zdolność wiązania nie ulega więcej niż 20-krotnemu obniżeniu, np. nie ulega obniżeniu większemu niż około 5-krotnemu w porównaniu do polipeptydu niezmienionego. Zdolność wiązania wariantu polipeptydu może być określona za pomocą takich technik jak np. sortowanie fluorescencyjnie aktywowanych komórek (FACS) lub radioimmunoprecypitacja (RIA).
Możliwe jest określenie zdolności wariantu polipeptydu do wiązania FcR. W przypadku gdy receptor FcR jest receptorem Fc o wysokim powinowactwie FR, takim jak FcyRI, FcRn lub FcyRIIIA-V158, wiązanie to może być mierzone poprzez miareczkowanie monomeru wariantu polipeptydu i pomiar związanego wariantu polipeptydu za pomocą specyficznie łączącego się z wariantem polipeptydu w standardowym teście ELISA przeciwciała (patrz, poniżej. Przykład 2). Inną analizę wiązania FcR w przypadku FcR o niskim powinowactwie opisano w Przykładach 1 i 4.
W celu określenia aktywności ADCC wariantu polipeptydu analizę ADCC in vitro, taką jak w Przykładzie 4, można przeprowadzić z użyciem różnych stosunków komórka efektorowa: komórka docelowa. Użytecznymi do takich analiz komórkami efektorowymi: komórkami docelowymi są jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) oraz komórki NK. Alternatywnie, lub dodatkowo, aktywność ADCC wariantu polipeptydu można oceniać in vivo, np. w analizie modelu zwierzęcego opisanego przez Clynes i wsp., PNAS (USA) 95: 652-656 (1998).
Możliwa jest również ocena zdolności wiązania wariantu z C1q oraz jego udziału w cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC).
W celu określenia wiązania C1q możliwe jest wykonanie analizy wiązania C1q w teście ELISA. W skrócie, płytki do analizy można pokrywać wariantem polipeptydu lub wyjściowym polipeptydem (kontrola) w buforze do pokrywania w temperaturze 4°C przez noc. Następnie płytki można płukać i blokować. Po płukaniu do każdej studzienki można dodać porcję C1q i inkubować w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po kolejnym płukaniu do każdej studzienki można dodać 100 pl owczego przeciwciała skoniugowanego z peroksydazą, skierowanego przeciwko dopełniaczowi C1q, a następnie płytki można inkubować w temperaturze pokojowej przez godzinę. Płytki można pono wnie płukać buforem do płukania i do każdej studzienki można dodawać 100 pl buforu substratowego,
PL 220 113 B1 zawierającego OPD (dichlorowodorek O-fenylenodiaminy (Sigma)). Reakcja utleniania, obserwowana na podstawie pojawienia się żółtego koloru, może być prowadzona przez 30 minut, a następnie zatrzymana przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Absorbancję można następnie odczytywać przy długości fali (492-405) nm.
Przykładowy wariant polipeptydu w takiej analizie cechuje się „znaczną redukcję wiązania C1q”. Oznacza to, że około 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 50-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do kontrolnego przeciwciała posiadającego niezmutowany region Fc IgG1. W najbardziej zalecanym rozwiązaniu wariant polipeptydu „nie wiąże C1q”, tj. 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 100-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do 100 nl/ml kontrolnego przeciwciała.
Innym przykładem wariantu jest wariant „posiadający wyższe powinowactwo wiązania ludzkiego C1q niż macierzysty polipeptyd”. Cząsteczka taka może cechować się, na przykład, około dwukrotnym lub wyższym, a zwłaszcza około pięciokrotnym, lub wyższym, wiązaniem ludzkiego C1q, w porównaniu do macierzystego polipeptydu (np. określonym dla IC50 tych cząsteczek). Na przykład, wiązanie ludzkiego C1q może być około dwukrotnie do około 500-krotnie, a zwłaszcza od około dwukrotnie lub od około pięciokrotnie do około 1000-krotnie wyższe w porównaniu do macierzystego polipeptydu.
W celu określenia aktywacji dopełniacza można zmierzyć cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC), np. zgodnie z Gazzano-Santoro i wsp., J.Immunol.Methods 202: 1633 (1996). W skrócie, poprzez wykonanie odpowiednich rozcieńczeń w buforze otrzymać można różne stężenia wariantu polipeptydu i ludzkiego dopełniacza. Komórki ekspresjonujące antygen, z którym wiąże się wariant polipeptydu, można rozcieńczyć do gęstości ~1x106 kom./ml. Mieszaninę wariantu polipeptydu, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza i komórek ekspresjonujących antygen można przenosić do płaskodennej, 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubować przez 2 godziny w 37°C i w atmosferze 5% CO2, celem ułatwienia zależnej od dopełniacza lizy komórek. Następnie, do każdej studzienki można dodać 50 μl alamar blue (Accumed International) i inkubować przez noc w temperaturze 37°C. Absorbancję mierzy się za pomocą 96-studzienkowego fluoromertru ze wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Wyniki można wyrazić we względnych jednostkach fluorescencji (RFU). Stężenia próbek można obliczyć na podstawie krzywej standardowej, a następnie dla wariantu pol ipeptydu podaje się procent aktywności w porównaniu do polipeptydu niezmienionego.
Jeszcze innym przykładem jest wariant „nieaktywujący dopełniacza”. Na przykład, w analizie tej 0,6 μg/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 0-10% aktywności CDC w porównaniu do aktywności 0,6 μg/ml przeciwciała kontrolnego z niezmutowanym regionionem Fc IgG1. W powyższej analizie CDC wariant nie przejawia żadnej aktywności CDC.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również wariant polipeptydu o podwyższonej CDC w porównaniu do polipeptydu macierzystego, np. wykazującego, in vitro lub in vivo, około dwukrotnie do około 100-krotnie wyższą aktywność CDC (np. dla wartości IC50 każdej porównywanej cząsteczki).
A. Analiza wiązania receptora i kompleksu immunologicznego
Opracowana zgodnie z niniejszym wynalazkiem analiza wiązania receptora jest szczególnie użyteczna do określania wiązania badanej cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania (analitu) z receptorem w przypadku gdy powinowactwo wiązania receptora, dla badanej cząsteczki jest relatywnie słabe, np. rzędu mikromoli, jak w przypadku FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA i FcyRIIIB. W sposobie tym dochodzi do tworzenia kompleksu molekularnego o zwiększonej zachłanności wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania w porównaniu do badanej cząsteczki w postaci nieskompleksowanej. Zalecany kompleks molekularny jest kompleksem immunologicznym zawierającym: (a) polipeptyd zawierający region Fc (taki jak przeciwciało lub immunoadhezyna); (b) pierwszą cząsteczkę docelową, która posiada przynajmniej dwa miejsca wiążące polipeptyd zawierający region Fc i (c) drugą cząsteczkę docelową, posiadającą przynajmniej dwa miejsca wiążące pierwszą cząsteczkę docelową.
W poniżej przedstawionym Przykładzie 1, polipeptydem zawierającym region Fc jest przeciwciało skierowane przeciwko IgE, takie jak przeciwciało E27 (Figury 4A-4B). E27, po zmieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzy stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek E27 i trzech cząsteczek IgE. W poniższym Przykładzie 1, „pierwszą cząsteczką docelową” jest chimerowa postać IgE, w której fragment Fab skierowanego przeciwko VEGF przeciwciała jest połączony z fragmentem Fc ludzkiej IgE, a „drugą cząsteczką docelową” jest antygen, z którym wiąże się Fab (tj. VEGF). Każda cząsteczka IgE wiąże dwie cząsteczki VEGF. VEGF również wiąże dwie cząsteczki IgE na cząsteczkę VEGF. Po dodaniu rekombinowanego ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do
PL 220 113 B1 heksamerów IgE:E27, heksamery ulegały połączeniu z utworzeniem postaci kompleksów o wyższej masie cząsteczkowej poprzez interakcję IgE:VEGF (Fig. 5). Region Fc przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (anty-IgE) otrzymanego w ten sposób kompleksu immunologicznego wiąże FcR z wyższą zachłannością wiązania niż zarówno nieskompleksowane anty-IgE, jak i heksamery anty-IgE:IgE.
Również inne formy kompleksów molekularnych mogą być zastosowane w analizie wiązania receptora. Przykłady, obejmujące jedynie połączenie polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka docelowa, obejmują połączenie immunoadhezyna:ligand, takie jak receptor VEGF (KDR)-immunoadhezyna:VEGF oraz pełnej długości przeciwciało bispecyficzne (bsAb): pierwsza cząsteczka docelowa. Kolejny przykład połączenia polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka doc elowa: druga cząsteczka docelowa, obejmuje połączenie przeciwciało nieblokujące:rozpuszczalny receptor:ligand, takie jak przeciwciało any-Trk:rozpuszczalny receptor Trk:neutrofina (Urfer i wsp., J.Biol.Chem. 273 (10): 5829-5840 (1998)).
Oprócz zastosowania w analizie wiązania receptora, opisane powyżej kompleksy immunologiczne posiadają inne zastosowania, włączając ocenę funkcji polipeptydu zawierającego region Fc oraz klirensu kompleksu immunologicznego in vivo. Zatem, kompleksy immunologiczne mogą być podawane ssakom (np. w przedklinicznej fazie badań na zwierzętach) i oceniane pod kątem ich okresu półtrwania, itp.
W celu określenia wiązania receptora, polipeptyd zawierający przynajmniej domenę wiążącą receptor będący przedmiotem zainteresowania (np. zewnątrzkomórkowa domena podjednostki α FcR) może być umieszczony na fazie stałej, takiej jak płytka do analizy. Sama domena wiążąca receptor, albo białko fuzyjne receptora mogą być rozmieszczane na płytce za pomocą standardowych procedur. Przykłady białek fuzyjnych receptora obejmują białko fuzyjne receptor-transferaza S glutationu (GST), białko fuzyjne receptor-domena wiążąca chitynę, białko fuzyjne receptor-znacznik heksahistydynowy, (umieszczone na płytkach pokrytych, odpowiednio, glutationem, chityną i niklem). Alternatywnie, możliwe jest pokrywanie płytek do analaizy cząsteczką wychwytującą i wiązanie białka fuzyjnego receptora poprzez fragment niereceptorowy białka fuzyjnego. Przykłady obejmują pokrycie płytki do analizy F(ab')2 anty-heksaHis, w celu wychwycenia fuzji receptora z końcem heksaHis lub pokrycie płytki do analizy przeciwciałem skierowanym przeciwko GST (anty-GST), w celu wychwycenia białka fuzyjnego receptor-GST. W innych rozwiązaniach, oceniane może być wiązanie komórek ekspresjonujących przynajmniej domenę wiążącą receptora. Komórki mogą być naturalnie występującymi komórkami hematopoetycznymi ekspresjonującymi FcR będący przedmiotem zainteresowania lub komórkami transformowanymi kwasem nukleinowym kodującym FcR lub jego domenę wiążącą, przy czym taka domena wiążąca ulega ekspresji na powierzchni komórek do analizy.
Następnie, opisany powyżej kompleks immunologiczny dodawany jest do płytek pokrytych receptorem i całość inkubowana jest przez czas wystarczający do związania receptora przez badaną cząsteczkę. Płytki można następnie płukać w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów, po czym wiązanie badanej cząsteczki można wykrywać za pomocą znanych metod. Na przykład, wiązanie można wykrywać za pomocą reagenta (np. przeciwciała lub jego fragmentu) specyficznie wiążącego się z badaną cząsteczką, i, ewentualnie, sprężonego z wykrywalnym znacznikiem (wykrywalne znac zniki i metody sprzęgania polipeptydami opisano poniżej, w rozdziale zatytułowanym „Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu”).
Dogodnie, reagenty mogą znajdować się w zestawie do analizy, tj. opakowana kombinacja reagentów do połączenia z badaną cząsteczką przy analizie zdolności badanej cząsteczki do wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania. Zestawy takie powinny zawierać składniki w określonych wcześniej stosunkach. Zestaw może zawierać pierwszą cząsteczkę docelową i/lub drugą cząsteczkę docelową, ewentualnie obie w kompleksie ze sobą. Zestaw może również zawierać płytki do analizy, pokryte receptorem lub jego domeną wiążącą (np. zewnątrzkomórkową domeną podje dnostki α FcR). Zazwyczaj, w skład zestawu wchodzą również inne reagenty, takie jak przeciwciało wiążące się swoiście z badaną cząsteczką do analizy, bezpośrednio lub pośrednio znakowane za pomocą znacznika enzymatycznego. W przypadku gdy znacznikiem wykrywalnym jest enzym, zestaw zawiera także wymagane przez enzym substraty i kofaktory (np. prekursor substratu dostarczający wykrywalny chromofor lub fluorofor). Ponadto, mogą być zawarte inne dodatki, takie jak stabilizatory, bufory (np. bufor do analizy i/lub bufor do płukania i lizaty) itp. Względne ilości różnych reagentów mogą podlegać szerokim zmianom, po to by zapewnić stężenia reagentów w roztworze, które pozwalają na zasadnicze zoptymalizowanie czułości analizy. Szczególnie, reagenty mogą być udostępniane w postaci suchych proszków, zazwyczaj liofilizowanych, zawierających zaróbki, które po rozpuszczeniu
PL 220 113 B1 zapewniają odpowiednie stężenie reagentu w roztworze. Zestaw zawiera również odpowiednie instrukcje do przeprowadzenia analizy.
B. Otrzymywanie przeciwciała
W zalecanym rozwiązaniu polipeptyd zawierający region Fc, modyfikowany zgodnie z niniejszym opisem, jest przeciwciałem. Techniki otrzymywania przeciwciał obejmują:
(i) Selekcję i otrzymywanie antygenu
W przypadku gdy polipeptyd jest przeciwciałem, skierowany jest on przeciwko antygenowi będącemu przedmiotem zainteresowania. Zalecany antygen jest polipeptydem istotnym biologicznie, a podawanie przeciwciała dotkniętym chorobą i zaburzeniem ssakom może przynieść im korzyść t erapeutyczną. Jednakże brane są również pod uwagę przeciwciała skierowane przeciwko antygenom niepolipeptydowym (takim jak antygeny glikolipidowe związane z guzem nowotworowym; patrz Patent USA nr 5, 091, 178).
W przypadku, gdy antygen jest polipeptydem może on być cząsteczką przezbłonową (np. receptorem) lub ligandem, takim jak czynnik wzrostu. Przykładowe antygeny obejmują cząsteczki, takie jak renina; hormon wzrostu, włączając ludzki hormon wzrostu i wołowy hormon wzrostu; czynnik uwalniający hormon wzrostu; hormon przytarczyczny; hormon stymulujący tarczycę; lipoproteiny; alfa-1-antytrypsynę; łańcuch A insuliny; łańcuch B insuliny; proinsulinę, hormon folikulotropowy; kalcytoninę; hormon lutenizujący; glukagon; czynniki krzepnięcia, takie jak czynnik VIIIC, czynnik IX, czynnik tkankowy (TF) oraz czynnik von Wilebrand'a; czynniki przeciwkrzepliwe, takie jak Białko C; przedsionkowy czynnik natriuretyczny; surfaktant płucny; aktywator plazminogenu, taki jak urokinaza lub ludzki aktywator plazminogenu moczu, lub też tkankowy aktywator plazminogenu (t-PA); bombezynę; trombinę; hemopoetyczny czynnik wzrostu; czynnik martwicy nowotworu alfa i beta; enkefalinazę; RANTES (czynnik regulowany przez aktywację, zazwyczaj ekspresjonowany i wydzielany przez komórki T); ludzkie makrofagowe białko zapalne (MIP-1-alfa); albuminę surowicy krwi, taką jak ludzka albumina surowicy; substancję hamującą Muellerian; łańcuch A relaksyny; łańcuch B relaksyny; prorelaksynę; mysi peptyd związany z gonadotropiną; białko drobnoustrojowe, takie jak beta-laktamaza; Dnaza; IgE; antygen związany z cytotoksycznym limfocytem T (CTLA), takie jak CTLA-4; inhibinę; aktywinę; czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF); receptory hormonów lub czynników wzrostu; białko A lub D; czynniki reumatoidalne; czynnik neurotroficzny, taki jak kościopochodny czynnik neurotroficzny (BDNF), neutrofina 3, 4, 5 lub 6 (NT-3, NT-4, NT-5 lub NT-6) ; lub czynnik wzrostu nerwów, taki jak NGF-β; płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF); czynnik wzrostu fibroblastów, taki jak aFGF i bFGF; czynnik wzrostu naskórka (EGF); transformujący czynnik wzrostu (TGF), taki jak TGF-alfa i TGF-beta, włączając TGF-β! TGF^2, TGF^3, TGF^4 lub TGF^5; insulinopodobny czynnik wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF (mózgowy IGF-1), białka wiążące insulinopodobny czynnik wzrostu; białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19 i CD20; erytropoetynę; czynniki osteoindukcyjne; immunotoksyny; białko morfogenetyczne kości (BMP); interferon, taki jak interferon alfa, beta i gamma; czynniki stymulujące powstawanie kolonii (CSF), np. M-CSF, GM-CSF i G-CSF; interleukiny (IL), np. IL-1 do IL-10; dysmutaze nadtlenkową; receptory komórek T; białka powierzchniowo-błonowe; czynnik przyspieszający rozkład, antygen wirusowy, taki jak np. fragment otoczki AIDS; białka transportowe; receptory zasiedlania; adresyny; białka regulatorowe; integryny, takie jak CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 i VCAM; antygen związany z guzem nowotworowym, taki jak receptor HER-2, HER3 lub HER4; oraz fragmenty jakiegokolwiek z wyżej wymienionych polipeptydów.
Zalecanymi cząsteczkami docelowymi dla przeciwciał tu opisanych są białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 i CD34; białka wchodzące w skład rodziny receptora ErbB, takie jak receptor EGF, receptor HER2, HER3 lub HER4; cząsteczki adhezji komórkowej, takie jak LFA-1, Mac1, p150.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, integryna α4/β7 oraz integryna αν/β3, zawierająca albo jej podjednostkę α albo β (np. przeciwciała antyCD11a, anty-CD18 lub anty-CD11b); czynniki wzrostu, takie jak VEGF); czynnik tkankowy (TF); interferon alfa (α-IFN); interleukinę, taką jak IL-8; IgE; antygeny grupowe krwi; receptor flk2/flt3; receptor otyłości OB; receptor mp1; CTLA-4; białko C, itp.
Rozpuszczalne antygeny lub ich fragmenty, ewentualnie sprężone z innymi cząsteczkami, m ogą być stosowane jako immunogeny do produkcji przeciwciał. W przypadku cząsteczek przezbłonowych, takich jak receptory, możliwe jest zastosowanie jako immunogenów ich fragmentów (np. zewnątrzkomórkowej domeny receptora). Alternatywnie, rolę immunogenów mogą odgrywać cząsteczki ekspresjonujące cząsteczki przezbłonowe. Komórki te mogą pochodzić z naturalnego źródła (np. linie komórek nowotworowych) lub mogą być otrzymane drogą transformacji z zastosowaniem technik
PL 220 113 B1 rekombinacji, mających na celu uzyskanie ekspresji cząsteczki przezbłonowej. Inne antygeny i ich postacie, użyteczne do otrzymywania przeciwciał są oczywiste dla specjalistów w dziedzinie.
(ii) Przeciwciała poliklonalne
Przeciwciała poliklonalne są wzbudzane dogodnie w organizmach zwierzęcych poprzez podskórne (sc) lub wewnątrzotrzewne (ip) wstrzyknięcia odpowiedniego antygenu i adiuwantu. Użyteczne może być sprzęganie odpowiednio wybranego antygenu z białkiem o właściwościach immunogennych w immunizowanym gatunku, np. hemocyjaniną ze skałoczepa, albuminą surowicy, tyroglobuliną wołową lub inhibitorem trypsyny z soi z użyciem czynnika dwufunkcyjnego lub derywatyzującego, na przykład, estru maleimidobenzoilowego sukcynoimidu (sprzęganie przez reszty cysteiny), N-hydroksysukcynoimidu (przez reszty lizyny), glutaraldehydu, bezwodnika bursztynowego, SOCI2 lub
R N=C=NR, gdzie R i R są różnymi grupami alkilowymi.
Zwierzęta immunizuje się przeciwko antygenowi, koniugatom immunogennym lub pochodnym poprzez łączenie, np. 100 μg lub 5 μg, białka lub koniugatu (odpowiednio dla królików lub myszy) z trzema objętościami kompletnego adiuwanta Freunda i wstrzykuje się śródskórnie w wielu miejscach. Miesiąc później zwierzęta szczepione są dawką przypominającą, poprzez podskórne wstrzyknięcie w wielu miejscach 1/5 do 1/10 pierwotnej ilości peptydu lub koniugatu w kompletnym adiuwancie Freunda. 7 do 14 dni później, zwierzęta skrwawia się i oznacza się miano przeciwciała w surowicy. Zwierzętom podaje się dawki przypominające aż do uzyskania maksymalnego miana. Dogodne dawki przypominające zawierają koniugat tego samego antygenu, lecz połączony z innym białkiem i/lub za pomocą innego reagenta sieciującego. Koniugaty można także otrzymać w hodowli komórek rekombinowanych jako białka fuzyjne. Również czynniki agregujące, takie jak ałun, mogą być odpowiednie do zastosowannia w celu wzmacniania odpowiedzi immunologicznej.
(iii) Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane przy użyciu metody z zastosowaniem hybrydom, opisanej po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature, 256: 495 (1975) lub metody rekombinacji DNA (Patent U.S.A. Nr 4, 816, 567).
W metodzie z zastosowaniem hybrydom, myszy lub inne organizmy zwierzęce gospodarza, takie jak chomiki lub małpy makaki, szczepi się (jak opisano powyżej), w celu otrzymania limfocytów produkujących lub zdolnych do produkcji przeciwciał swoiście wiążących białko zastosowane do i mmunizacji. Alternatywnie, możliwa jest immunizacja in vitro limfocytów. Następnie limfocyty poddaje się fuzji z komórkami szpiczaka, za pomocą odpowiedniego czynnika fuzyjnego, takiego jak glikol poliet ylenowy, co pozwala na uzyskanie komórek hybrydoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Tak otrzymane komórki hybrydoma wysiewa się i hoduje w odpowiedniej pożywce hodowlanej, zawierającej dogodnie jedną lub więcej substancji hamujących wzrost lub przeżycie macierzystych komórek szpiczaka, jakie nie uległy fuzji. Na przykład, jeżeli macierzyste komórki szpiczaka nie posi adają enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantyno-guaninowej (HGPRT lub HPRT), pożywka hodowlana dla hybrydom zazwyczaj będzie zawierała hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek nieposiadających HGPRT.
Zalecanymi komórkami szpiczaka są komórki wydajnie ulegające fuzji, wspomagające stabilną produkcję na wysokim poziomie przeciwciała przez wyselekcjonowane komórki produkujące przeciwciało oraz wrażliwe na pożywkę typu HAT. Wśród tych komórek, zalecanymi liniami komórkowymi szpiczaka są linie komórkowe pochodzące z mysich guzów MOPC-21 i MPC-11, dostępne w Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA oraz komórki SP-2 lub X63-Ag8-653, dostępne w American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Ludzkie linie komórkowe szpiczaka i mysio-ludzkie linie komórkowe hetero-szpiczkowe zostały również opisane jako odpowiednie do produkcji ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J.Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur i wsp., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywkę hodowlaną, w której rosną komórki hybrydoma analizuje się pod kątem produkcji przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko antygenowi. Dogodnie, określa się swoistość wiązania wyprodukowanego przez komórki hybrydoma przeciwciała monoklonalnego, na drodze immunoprecypitacji lub analizy wiązania in vitro, takiej jak test radioimmunologiczny (RIA) lub test immunoenzymatyczny (ELISA).
Po dokonaniu identyfikacji komórek hybrydoma produkujących przeciwciało o pożądanej swoistości, powinowactwie i/lub aktywności klony te można subklonować metodą ograniczających
PL 220 113 B1 rozcieńczeń i hodować według standardowych metod (Coding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practoce, str. 59-103 (Academic Press, 1986)). Odpowiednie do tego celu pożywki hodowlane obejmują, na przykład, D-MEM lub RPMI-1640. Ponadto, komórki hybrydoma można hodować in vivo w postaci wysięku nowotworowego u zwierząt.
Wydzielane przez subklony przeciwciała monoklonalne odpowiednio oddziela się od pożywki hodowlanej, płynu wysiękowego lub surowicy konwencjonalnymi metodami oczyszczania immunoglobulin, takimi jak chromatografia na sefarozie z białkiem A, chromatografia na hydroksylacie, elektroforeza żelowa, dializa lub chromatografia powinowactwa.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np.poprzez zastosowanie sond oligonukleotydowych, zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciał monoklonalnych). Komórki hybryd oma stanowią zalecane źródło takiego DNA. W celu uzyskania syntezy przeciwciał monoklonalnych w rekombinowanych komórkach gospodarza wyizolowany DNA można umieszczać w wektorach ek spresyjnych, którymi transfekuje się następnie komórki gospodarza, takie jak komórki E.coli, małpie komórki COS, komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) lub komórki szpiczaka, które w inny sposób nie produkują białka immunoglobuliny. Rekombinowaną produkcję przeciwciał opisano bardziej szczegółowo poniżej.
W kolejnym rozwiązaniu, przeciwciała lub ich fragmenty, mogą zostać wyi zolowane z biblioteki fagowej przeciwciał, utworzonej za pomocą technik opisanych w McCafferty i wsp., Nature, 348: 552 -554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581 -597 (1991) opisali izolację, odpowiednio, mysich i ludzkich przeciwciał przy użyciu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują produkcję ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (rzędu nM) za pomocą tasowania łańcuchów (Marks i wsp., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)) oraz kombinatorycznego zakażenia, jak również rekombinacji in vivo, jako strategii pozwalającej na otrzymanie bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc.Acids.Res., 21: 2265-2266 (1993)). Techniki te są zatem alternatywnymi, względem tradycyjnej metody z zastosowaniem hybrydom, sposobami izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA może również podlegać modyfikacjom, na przykład przez substytucję sekwencji kodującej ludzkie domeny stałe łańcucha ciężkiego i lekkiego w miejscu homologicznych mysich sekwencji (Patent USA nr 4, 816, 567; Morrison i wsp., Proc.Natl. Acad.Sci. USA, 81: 6851 (1984)) lub przez kowalencyjne łączenie sekwencji kodującej immunoglobulinę z całą lub częścią sekwencji kodującej polipeptyd nie-immunoglobulinowy.
Zazwyczaj, takie polipeptydy nie-immunoglobulinowe podstawiane są za domeny stałe przeciwciała lub za domeny zmienne jednego miejsca przyłączającego antygen przeciwciała, w celu otr zymania chimerowych, biwalentnych przeciwciał, zawierających jedno miejsce przełączania antygenu o swoistości wobec jednego antygenu i drugie miejsce przyłączania antygenu, wykazujące swoistość dla innego antygenu.
(iv) Przeciwciała humanizowane i ludzkie
Humanizowane przeciwciało posiada jedną lub więcej reszt aminokwasowych wprowadzonych z organizmu innego niż ludzki. Takie niepochodzące z organizmu człowieka reszty aminokwasowe określane są często jako reszty „importowane”, zazwyczaj pobierane z „importowanej” domeny zmiennej. Humanizacja może być przeprowadzona zasadniczo zgodnie z metodą Winter i wsp., (J ones i wsp., Nature, 321: 522-525 (1986), Riechmann i wsp., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen i wsp., Sciene, 239: 1534-1536 (1988)), przez substytucję sekwencji CDR gryzoni lub sekwencji CDR dla odpowiednich sekwencji ludzkiego przeciwciała. Zatem, takie „humanizowane” przeciwciała są przeciwciałami chimerowymi (Patent USA nr 4, 816, 567), w których zasadniczo mniej niż całość ludzkiej domeny zmiennej została podstawiona odpowiadającą temu obszarowi sekwencją pochodzącą z innego niż człowiek gatunku. W praktyce, przeciwciała humanizowane są zazwyczaj ludzkimi przeciwciałami, w obrębie których pewne reszty CDR i, ewentualnie, pewne reszty FR, podstawiono resztami pochodzącymi z analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno łańcucha lekkiego, jak i ciężkiego, do zastosowania w metodzie otrzymywania przeciwciał humanizowanych jest bardzo istotny ze względu na obniżenie ich antygenności. Zgodnie z tzw. metodą „best-fit”, sekwencja domeny zmiennej przeciwciała gryzonia podlega przeszukiwaniu wobec całej biblioteki znanych ludzkich sekwencji domeny zmiennej. Ludzka sekwencja, najbliższa sekwencji gryzonia, przyjmowana jest jako ludzki region zrębowy przeciwciała humanizowanego (Sims i wsp., J.Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia i wsp., J.Mol.Biol.,
PL 220 113 B1
196: 901 (1987)). W innej metodzie wykorzystywany jest szczególny region zrębowy, pochodzący z sekwencji najwyższej zgodności wszystkich ludzkich przeciwciał należących do danej podgrupy łańcuchów lekkich lub ciężkich. Ten sam region zrębowy może być zastosowany do otrzymania kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 89: 4285 (1992); Presta i wsp., J.Immunol., 151: 2623 (1993)).
Istotne jest również, żeby przeciwciała były humanizowane z zachowaniem wysokiego powinowactwa do antygenu i innych zalecanych właściwości biologicznych. W celu osiągnięcia takiego rezu ltatu, zgodnie z zalecanym sposobem, przeciwciała humanizowane otrzymuje się w wyniku analizy sekwencji i różnych zaprojektowanych produktów humanizowanych, za pomocą trójwymiarowych m odeli wyjściowych i sekwencji humanizowanych. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępne i znane specjalistom w dziedzinie. Dostępne są również programy komputerowe preze ntujące i wykazujące prawdopodobną konformację trójwymiarowej struktury wybranych sekwencji i mmunoglobulin. Analiza ich pozwala na określenie prawdopodobnej roli reszt w funkcjonowaniu badanej sekwencji immunoglobuliny, tj. określenie wpływu tych reszt na zdolność badanej immunoglobuliny do wiązania antygenu. W ten sposób, możliwe jest dokonanie wyboru reszt FR i połączenie z sekwe ncjami biorcy i importowanymi w sposób pozwalający na uzyskanie pożądanych właściwości przeciwciała, takich jak zwiększone powinowactwo względem docelowego antygenu lub antygenów. Ogólnie, reszty CDR bezpośrednio i istotnie uczestniczą w wiązaniu antygenu.
Alternatywnie, możliwe jest obecnie otrzymanie zwierząt transgenicznych (np. myszy) zdolnych, po immunizacji, do produkcji pełnego zestawu ludzkich przeciwciał, przy braku produkcji immunogl obulin endogennych. Na przykład, opisano, że homozygotyczna delecja regionu genu łączącego łańcuch ciężki przeciwciała (JH) w chimerowych i zarodkowych mysich mutantach skutkuje całkowitym zahamowaniem produkcji endogennych przeciwciał. Przeniesienie macierzy genów immunoglobulin ludzkiej linii zarodkowej do takiej zmutowanej linii zarodkowej myszy wywołuje po prowokacji antygenem produkcję przeciwciał ludzkich. Patrz np., Jakobovits i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann i wsp., Year in Immuno., 7: 33 (1993) oraz Duchosal i wsp., Nature, 355: 258 (1992). Ludzkie przeciwciała mogą również być otrzymane z bibliotek prezentacji na fagach (Hoogenboom i wsp., J.Mol.Biol., 227: 381 (1991); Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581-597 (1991); Vaughan i wsp., Nature Biotech, 14: 309 (1996)).
(v) Przeciwciała wieloswoiste
Przeciwciała wieloswoiste wykazują specyficzność wiązania względem przynajmniej dwóch różnych antygenów. Cząsteczki takie zazwyczaj wiążą jedynie dwa antygeny (tj. są przeciwciałami biswoistymi, BsAb), jednak pojęcie to obejmuje przeciwciała o dodatkowych swoistościach, takie jak przeciwciała o potrójnej swoistości. Przykłady BsAb obejmują przeciwciała posiadające jedno ramię skierowane przeciwko antygenowi komórki nowotworowej, a drugie skierowane przeciwko cytoto kHER2 sycznej cząsteczce wzbudzającej, takiej jak anty-FcyRI/anty-CD15, anty-p185 /FcyRIII (CD16), anty-CD3/anty-uzłośliwione komórki B (1D10), anty-CD3/anty-p185HER2, anty-CD3/anty-p97, anty-CD3/przeciwko komórce raka nerki, anty-CD3/anty-OVCAR-3, antyCD3/L-D1 (przeciwko rakowi jelita grubego), anty-CD3/anty-analog czynnika stymulującego melanocyty, anty-receptor EGF/anty-CD3, anty-CD3/anty-CAMA1, anty-CD3/anty-CD19, anty-CD3/moV18, anty-cząsteczka adhezji komórek nerwowych (NCAM)/anty-CD3, białko wiążące folian(FBP)/anty-CD3, związany z rakiem anty-antygen AMOC-31 (ang. anti-pan carcinoma associated antigen)(AMOC-31)/anty-CD3; BsAb o jednym ramieniu wiążącym swoiście antygen rakowy i drugim, wiążącym toksynę, takie jak anty-saporyna/anty-Id-1, anty-CD22/anty-saporyna, anty-CD7/anty-saporyna, anty-CD38/anty-saporyna, anty-CEA/przeciwko łańcuchowi A rycyny, anty-interferon-a(IFN-a)/przeciwko idiotypowi hybrydomu, anty-CEA/anty-alkaloid winka; BsAb do konwersji enzymatycznie aktywowanych proleków, takich jak anty-CD30/anty-alkaliczna fosfataza (która katalizuje zamianę proleku fosforanu mitomycyny do alkoholu mitomycynowego); BsAb, które mogą być stosowane jako czynniki fibrynolityczne, takie jak anty-fibryna/anty-tkankowy aktywator plazminogenu (tPA), anty-fibryna/anty-aktywator plazminogenu typu urokinazy (uPA); BsAb do kierowania kompleksów immunologicznych do receptorów powierzchniowo-komórkowych, takie jak anty-lipoproteina o niskiej gęstości (LDL)/anty-receptor Fc (np. FcyRI, FcyRII lub FcyRIII); BsAb do zastosowania w terapii chorób zakaźnych, takie jak anty-CD3/anty-wirus opryszczki (HSV), anty-receptor komórek T: kompleks CD3/anty-wirus grypy, anty-FcyR/anty-HIV; BsAb do wykrywania nowotworów in vitro lub in vivo, takie jak anty-CEA/anty-EOTUBE, antyHER”
-CEA/anty-DPTA, anty-p185 /anty-hapten; BsAb jako adiuwanty szczepionkowe; oraz BsAb jako narzędzia diagnostyczne, takie jak anty-królicza IgG/anty-ferrytyna, anty-peroksydaza chrzanowa
PL 220 113 B1 (HRP)/anty-hormon, anty-somatostatyna/anty-substancja P, anty-HRP/anty-FITC, anty-CEA/anty-β-galaktozydaza. Przykłady przeciwciał o potrójnej swoistości obejmują anty-CD3/anty-CD4/anty-CD37, anty-CD3/anty-CD5/anty-CD37 oraz anty-CD3/anty-CD8/anty-CD37. Przeciwciała o podwójnej swoistości można otrzymywać w postaci pełnej długości przeciwciał lub fragmentów przeciwciał (np. przeciwciała o podwójnej swoistości F(ab')2).
Metody otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości są znane w dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie pełnej długości przeciwciał o podwójnej swoistości opiera się na koekspresji dwóch par łańcucha ciężkiego-łańcucha lekkiego immunoglobulin, w których dwa łańcuchy posiadają różną swoistość (Millstein i wsp., Nature, 305: 537-539 (1983)). Z powodu losowego doboru łańcuchów ciężkich i lekkich hybrydomy te (kwadromy) wytwarzają potencjalnie mieszaninę 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których jedynie jedna posiada właściwą strukturę o podwójnej swoistości. Oczyszczenie tej właściwej cząsteczki, zazwyczaj drogą chromatografii powinowactwa, jest niewygodne, a wydajność procesu jest niska. Podobne procedury opisano w WO 93/08829 i w Traunecker i wsp., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).
Zgodnie z innym podejściem, domeny zmienne przeciwciała o pożądanej swoistości wiązania (miejsca połączenia przeciwciało-antygen) poddaje się fuzji z sekwencjami domeny stałej immunoglobuliny. Fuzja ta dogodnie zachodzi z domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, zawierającą przynajmniej część regionu zawiasowego, regionów CH2 i CH3. Dogodnie przynajmniej jeden z pr oduktów fuzji obejmuje pierwszy region stały z łańcucha ciężkiego (CH1), zawierający miejsce niezbędne do wiązania łańcucha lekkiego. DNA kodujące fuzje łańcuchów ciężkich immunoglobuliny oraz, w razie potrzeby, łańcuchów lekkich immunoglobuliny, wstawia się do oddzielnych wektorów ekspresyjnych, którymi następnie kotransfekuje się odpowiednie komórki gospodarza. Pozwala to na dużą elastyczność dostosowywania wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydów w przypadku rozwiązań, w których stosuje się nierówne proporcje trzech łańcuchów polipeptydowych, celem zapewnienia optymalnej wydajności. Możliwe jest, jednakże, wstawienie sekwencji kodujących dwa lub trzy łańcuchy polipeptydowe w jednym wektorze ekspresyjnym, gdy ekspresja przynajmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach zapewnia wysoką wydajność, lub gdy proporcje te nie mają żadnego szczególnego znaczenia.
W zalecanym tego rodzaju rozwiązaniu, przeciwciała o podwójnej swoistości składają się z h ybrydowego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny o pierwszej swoistości wiązania w obszarze jednego ramienia, i pary hybrydowych łańcuchów, ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny (dostarczającej drugą swoistość wiązania) na drugim ramieniu. Zaobserwowano, że taka asymetryczna struktura ułatwia rozdzielanie pożądanego składnika o podwójnej swoistości od niepożądanych połączeń łańcuchów immunoglobulin, ponieważ oddzielanie cząsteczek jest łatwiejsze, gdy łańcuch lekki immunoglobuliny obecny jest jedynie w połowie struktury cząsteczki o podwójnej swoistości. Obserwację tę ujawniono w WO 94/04690. Więcej szczegółów na temat otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości można znaleźć, na przykład, w Suresh i wsp., Methods in Enzymology, 121: 210 (1936). Zgodnie z innym podejściem zaprezentowanym w WO 96/27011, powierzchnia pomiędzy parą cząsteczek przeciwciał może zostać zaprojektowana tak, by procent heterodimerów odzyskiwanych z hodowli komórek rekombinowanych był maksymalny. Zalecana powierzchnia obejmuje przynajmniej część domeny CH3 domeny stałej przeciwciała. W prezentowanym sposobie, jeden, lub więcej małych, aminokwasowych łańcuchów bocznych z powierzchni pierwszej cząsteczki przeciwciała zastępuje się większymi łańc uchami bocznymi (np. tyrozyną lub tryptofanem). Kompensujące „jamy”, o rozmiarach identycznych lub zbliżonych do rozmiarów większego łańcucha lub łańcuchów bocznych tworzy się na powierzchni drugiej cząsteczki przeciwciała poprzez zastąpienie dużych aminokwasowych łańcuchów bocznych mniejszymi (np. alaniny lub treoniny). Sposób ten zapewnia wzrost wydajności otrzymywania heterodimerów w stosunku do niepożądanych produktów końcowych, takich jak homodimery.
Przeciwciała o podwójnej swoistości obejmują przeciwciała sieciowane lub „heterokoniugatowe”. Na przykład, jedno z przeciwciał heterokoniugatu może być sprzęgnięte z awidyną, drugie z biotyną. Zastosowanie takich przeciwciał zaproponowano do nakierowywania, na przykład, komórek układu immunologicznego na komórki niepożądane (Patent USA nr 4, 676, 980) oraz do leczenia infekcji HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 oraz EP 03089). Przeciwciała heterokoniugatowe można otrzymać za pomocą jakiejkolwiek metody sieciowania. Odpowiednie czynniki umożliwiające takie sieciowanie są znane w dziedzinie i ujawnione w Patencie USA nr 4, 676, 980, wraz z licznymi technikami sieciowania.
PL 220 113 B1
Bierze się również pod uwagę przeciwciała o więcej niż dwóch swoistościach. Na przykład, można otrzymywać przeciwciała o potrójnej swoistości. Tutt i wsp., J.Immunol.147 : 60 (1991).
Chociaż polipeptyd będący przedmiotem zainteresowania stanowi dogodnie przeciwciało, to bierze się tu również pod uwagę inne polipeptydy zawierające region Fc, które można modyfikować, zgodnie z opisanymi tu sposobami. Przykładem takiej cząsteczki jest immunoadhezyna.
C. Otrzymywanie immunoadhezyny
Najprostsza immunoadhezyna zawiera domenę lub domeny wiążące adhezyny (np. zewnątrzkomórkową domenę receptora (EDC)) wraz z regionem Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Zw ykle, w celu otrzymania opisanej tu immunoadhezyny, kwas nukleinowy, kodujący domenę wiążącą tej adhezyny jest poddawany fuzji od strony C-końca z kwasem nukleinowym kodującym N-koniec sekwencji domeny stałej immunoglobuliny, możliwe są, jednakże, również fuzje od strony N-końca.
Zazwyczaj w takich fuzjach kodowany chimerowy polipeptyd zachowuje przynajmniej funkcjonalnie aktywny zawias, domeny CH2 i CH3 regionu stałego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Fuzje przeprowadza się także od strony C-końca fragmentu Fc domeny stałej, lub bezpośrednio, od N-końca CH1 łańcucha ciężkiego lub odpowiadającego temu obszarowi regionu łańcucha lekkiego. Dokładne miejsce przeprowadzenia fuzji nie jest krytyczne; poszczególne miejsca są dobrze znane i można je tak wybrać, żeby zoptymalizować aktywność biologiczną, wydzielanie lub właściwości wiązania immunoadhezyny.
W zalecanym rozwiązaniu sekwencja adhezyny poddawana jest fuzji z N-końcem regionu Fc immunoglobuliny G1 (IgG1). Możliwa jest przy tym fuzja całego regionu stałego łańcucha ciężkiego z sekwencją adhezyny. Jednakże, dogodniej fuzji poddaje się sekwencję rozpoczynającą się w regionie zawiasowym, tuż powyżej miejsca cięcia papainą, które określa chemicznie Fc IgG (np. reszta 216, przyjmując resztę 114 za pierwszą resztę regionu stałego łańcucha ciężkiego), lub w analogic znych miejscach innych immunoglobulin. W szczególnie zalecanym rozwiązaniu sekwencję aminokwasową adhezyny poddaje się fuzji z (a) regionem zawiasowym oraz CH2 i CH3 lub (b) CH1, regionem zawiasowym, domeną CH2 oraz CH3 łańcucha ciężkiego IgG.
W przypadku immunoadhezyn o podwójnej swoistości, immunoadhezyny tworzą multimery, a w szczególności heterodimery lub heterotetramery. Ogólnie, takie multimetryczne immunoglobuliny będą w postaci znanych jednostek strukturalnych. Podstawowa, czterołańcuchowa, jednostka strukturalna jest postacią, w jakiej występuje IgG, IgD oraz IgE. Jednostka czterołańcuchowa powtarzana jest w immunoglobulinach o wyższej masie cząsteczkowej; IgM ogólnie występuje w postaci pentameru, składającego się z czterech podstawowych jednostek połączonych ze sobą wiązaniami disiarczkowymi. W postaci multimeru w surowicy może występować również globulina IgA i czasem, globulina IgG. W przypadku postaci multimetru, każda z czterech jednostek może być taka sama lub inna.
Poniżej, przedstawiono schematycznie różne przykłady opisanych tu immunoadhezyn złożonych:
(a) ACl-ACl;
(b) ACh-(ACh, ACl-ACh, ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(c) ACl-ACh-(ACl-ACh, ACl-VhCh, VlCl-ACh lub VlCl-VhCh);
(d) ACl-VhCh-(ACh lub ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(e) VlCl-ACh-(ACl-VhCh lub VlCl-ACh); oraz (f) (A-YMVlCl-VhCh)2, gdzie każda litera A oznacza identyczne lub różne sekwencje aminokwasowe adhezyn;
VL oznacza domeną zmienną łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
VH oznacza domeną zmienną łańcucha ciężkiego immunoglobuliny;
CL oznacza domeną stałą łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
CH oznacza domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny; n oznacza liczbę całkowitą większą niż 1;
Y oznacza resztę czynnika sieciującego.
Dla zwięzłości w powyższych strukturach zaznaczono jedynie kluczowe cechy; nie wskazano w nich ani domeny łączącej (J) lub innych domen immunoglobulin, ani też wiązań disiarczkowych. Jednakże, gdy domeny te wymagane są do przejawienia aktywności biologicznej, należy przyjąć, że występują one w typowych lokalizacjach występowania w cząsteczkach immunoglobulin.
Alternatywnie, sekwencje adhezyn można wstawić pomiędzy sekwencje łańcucha ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny, w taki sposób, że immunoglobulina zawiera chimerowy łańcuch ciężki. W takim rozwiązaniu sekwencje adhezyny poddaje się fuzji z 3' końcem łańcucha ciężkiego immunoglobuliny w każdym ramieniu, albo pomiędzy regionem zawiasowym a domeną CH2, albo pomiędzy
PL 220 113 B1 domenami CH2 a CH3. Podobne struktury opisane zostały przez Hoogenboom i wsp., Mol.Immunol. 28: 1027-1037 (1991).
Chociaż w opisanych tu immunoadhezynach nie jest wymagana obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny, to łańcuch ten może być obecny w strukturze, albo w postaci kowalencyjnie związanej z polipeptydem fuzyjnym adhezyjna-łańcuch ciężki immunoglobuliny, albo w postaci fuzji bezpośrednio z adhezyną. W ostatnim przypadku, DNA kodujący łańcuch lekki immunoglobuliny ulega zazwyczaj koekspresji z DNA kodującym białko fuzyjne adhezyna-łańcuch ciężki immunoglobuliny. Po wydzieleniu hybrydowy łańcuch ciężki i łańcuch lekki będą miały postać kowalencyjnie związaną c elem uzyskania struktury immunoglobulino-podobnej, zawierającej dwie połączone za pomocą wiązań disiarczkowych pary łańcuchów: ciężkich i lekkich. Odpowiednie sposoby, pozwalające na otrzymanie takich struktur ujawniono, na przykład, w Patencie USA nr 4, 816, 567, wydanym 28 marca 1989r.
Immunoadhezyny zazwyczaj otrzymuje się poprzez fuzję sekwencji cDNA kodującej fragment adhezyny w ramce odczytu z sekwencją cDNA immunoglobuliny. Jednakże, zastosować można również fuzję z genomowymi fragmentami immunoglobuliny (patrz, np. Aruffo i wsp., Cell 61: 1303-1313 (1990) oraz Stamenkovic i wsp., Cell 66: 1133-1144 (1991)). W przypadku ostatniego typu fuzji do ekspresji wymagana jest obecność sekwencji regulatorowych Ig. cDNA kodujące regiony stałe łańcucha ciężkiego IgG można wyizolować w oparciu o opublikowane sekwencje pochodzące z bibliotek cDNA pochodzących z limfocytów ze śledziony lub krwi obwodowej, z zastosowaniem technik hybrydyzacji lub łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR). cDNA kodujący części „adhezyny” i immunoglobuliny cząsteczki immunoadhezyny wstawia się razem do wektora plazmidowego, wywołującego wydajną ekspresję w wybranych komórkach gospodarza.
D. Wektory, komórki gospodarza i sposoby rekombinacji
Zgodnie z wynalazkiem opisano wyizolowany kwas nukleinowy kodujący ujawniony tu wariant polipeptydu, wektory i komórki gospodarza oraz techniki rekombinacji, pozwalające na otrzymanie wariantu polipeptydu.
W celu otrzymania wariantu polipeptydu za pomocą techniki rekombinacji kodujący go kwas nukleinowy izoluje się, a następnie wstawia do odpowiedniego wektora do replikacji w celu dalszego klonowania (amplifikacji DNA) lub ekspresji. DNA kodujący wariant polipeptydu łatwo izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np. z zastosowaniem sond oligonukleinowych zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących wariant polipeptydu). Dostępnych jest wiele wektorów. Wektor składa się, ogólnie, lecz bez ograniczenia, z jednego lub więcej spośród następujących elementów: sekwencji sygnałowej, miejsca początku replikacji, jednego lub więcej genów markerowych, elementu wzmacniającego (enhancer), promotora i sekwencji terminacji transkrypcji.
(i) Element sekwencji sygnałowej
Opisany tu wariant polipeptydu może być otrzymany drogą rekombinacji, nie tylko bezpośrednio, ale również jako polipeptyd fuzyjny z polipeptydem heterologicznym, który dogodnie jest sekwe ncją sygnałową lub innym polipeptydem posiadającym specyficzne miejsce cięcia na N-końcu dojrzałego białka lub polipeptydu. Dogodnie wybraną sekwencją sygnałową jest sekwencja rozpoznawana i przekształcana przez komórki gospodarza (tj. cięta przez peptydazę sygnałową). W przypadku prokariotycznych komórek gospodarza, nie rozpoznających i nie przekształcających natywnej sekwencji sygnałowej wariantu polipeptydu, sekwencją tą zastąpuje się odpowiednią prokariotyczną sekwencją sygnałową wybraną, na przykład, z grupy sekwencji liderowych alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, Ipp lub termostabilnej enterotoksyny II. W przypadku wydzielania przez komórki drożdży natywną sekwencję sygnałową można podstawić, np. drożdżową sekwencją liderową inwertazy, czynnika α (włączając sekwencje liderowe czynników α Saccharomyces i Kluyveromyces) lub kwaśnej fosfatazy, glukoamylazy z C.albicans lub sekwencji sygnałowych opisanych w WO 90/13646. W przypadku ekspresji w komórkach ssaczych dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe wydzie lnicze sekwencje liderowe, na przykład, sekwencja sygnałowa gD wirusa opryszczki.
DNA takiego regionu prekursorowego poddaje się ligacji w ramce odczytu z DNA kodującym wariant polipeptydu.
(II) Element miejsca początku replikacji
Zarówno wektory ekspresyjne, jak i wektory do klonowania, zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, pozwalającą na replikację wektora w jednej lub więcej wybranych komórkach gospodarza. Ogólnie, w wektorach do klonowania sekwencją tą jest sekwencja, która umożliwia niezależną od chromosowego DNA gospodarza replikację wektora oraz zawiera miejsce początku replikacji lub autonomicznie replikujące sekwencje. Sekwencje te są dobrze znane dla wielu bakterii, drożdży i wirusów.
PL 220 113 B1
Miejsce początku replikacji plazmidu pBR322 jest odpowiednie dla większości bakterii Gram-ujemnych, miejsce początku replikacji plazmidu 2μ jest odpowiednie dla drożdży, natomiast dla wektorów do klonowania w komórkach ssaczych odpowiednie są miejsca początku replikacji różnych wirusów (SV40, polioma, adenowirus, VSV lub BPV). Ogólnie, element miejsca początku replikacji nie jest niezbędny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (miejsce początku replikacji z SV40 stosowane jest zazwyczaj jedynie z tego powodu, że zawiera wczesny promotor).
(iii) Element genu selekcyjnego
Wektory do klonowania i wektory ekspresyjne mogą zawierać gen selekcji, zwany również markerem selekcyjnym. Zazwyczaj geny selekcyjne kodują białka, które (a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np. ampicylinę, metotreksat lub tetracyklinę, (b) uzupełniają auksotroficzne niedobory, lub (c) dostarczają istotnych składników odżywczych, niedostępnych w pożywkach złożonych, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
W jednym z przykładów schematu selekcji w celu zahamowania wzrostu komórek gospodarza wykorzystuje się lek. Te komórki, które zostały skutecznie transformowane heterologicznym genem, wytwarzają białko nadające oporność na lek, i przeżywają zatem w warunkach schematu selekcji. Przykładem takiej selekcji dominującej jest zastosowanie leków, takich jak neomycyna, kwas mykofenolowy i higromycyna.
Innym przykładem odpowiednich markerów selekcyjnych dla komórek ssaczych są markery, które pozwalają na identyfikację komórek, które są kompetentne do pobrania kwasu nukleinowego kodującego wariant polipeptydu, takie jak DHFR, kinaza tymidynowa, metalotioneina I i II, zwłaszcza geny metalotioneiny naczelnych, deaminazy adenozynowej, dekarboksylazy ornitynowej, itp.
Na przykład, komórki transformowane genem selekcyjnym DHFR najpierw identyfikuje się poprzez hodowlę wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej zawierającej metotreksat (Mtx), antagonistę kompetycyjnego DHFR. W przypadku dzikiego typu DHFR odpowiednią komórką gospodarza jest linia komórkowa komórek jajnika chomika chińskiego (CHO), bez aktywności DHFR.
Alternatywnie, komórki gospodarza (szczególnie dzikiego typu zawierające endogenną DHFR), transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi wariant polipeptydu, białka DHFR dzikiego typu i inny marker selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferaza aminoglikozydowa (APH), mogą być poddawane selekcji poprzez wzrost komórek w pożywce zawierającej czynnik selekcyjny dla markera selekcyjnego, taki jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycyna, neomycyna lub G418. Patrz Patent USA nr 4, 965, 199.
Odpowiednim genem selekcyjnym do zastosowania w przypadku drożdży jest gen trp1 obecny w plazmidzie drożdżowym Yrp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282: 39 (1979)). Gen trp1 dostarcza markera selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży, pozbawionego zdolności do wzrostu na tryptofanie, na przykład, ATCC Nr 44076 lub PEP4-1. Jones, Genetics, 85: 12 (1977). Obecność uszkodzonego trp1 w genomie drożdżowych komórek gospodarza zapewnia skuteczne warunki do wykrywania transformacji poprzez hodowlę bez tryptofanu. Podobnie, zdolność do wzrostu szczepów drożdży nie posiadających Leu2 (ATCC 20,622 lub 38,626) jest uzupełniana za pomocą plazmidów dostarczających gen Leu2.
Ponadto, wektory pochodzące z 1,6 μm, kolistego plazmidu pKD1 mogą być wykorzystane do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, dla K.lactis opisano system ekspresji do wytwarzania na dużą skalę rekombinowanej chymozyny cielęcej. Van den Berg, Bio/Technology, 8; 135 (1990). Ujawniono również stabilne, wielokopijne wektory ekspresyjne służące do wydzielania dojrzałej, rekombinowanej, ludzkiej albuminy przez szczepy drożdży przemysłowych Kluyveromyces. Fleer i wsp., Bio/Technology, 9: 968-975 (1991).
(iv) Element promotora
Wektory ekspresyjne i wektory do klonowania zazwyczaj posiadają rozpoznawany przez organizm gospodarza promotor, operacyjnie przyłączony do kwasu nukleinowego wariantu polipeptydu. Odpowiednie do zastosowania w prokariotycznych komórkach gospodarza promotory obejmują układy promotora phoA, β-laktamazy i laktozy, układ promotora alkalicznej fosfatazy, tryptofanu (trp) oraz promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże, odpowiednie są również inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w układach bakteryjnych zawierają także sekwencję Shine-Dalgarno, połączoną operacyjnie z DNA kodującym wariant polipeptydu.
Znane są sekwencje promotorowe dla Eukariotów. Prawie wszystkie geny eukariotyczne posi adają region bogaty w reszty AT, zlokalizowany w przybliżeniu 25 do 30 reszt powyżej miejsca, gdzie rozpoczyna się transkrypcja. Inną sekwencją występującą w wielu genach 70 do 80 reszt powyżej
PL 220 113 B1 miejsca rozpoczęcia transkrypcji jest region CNCAAT, gdzie N jest dowolnym nukleotydem. Przy 3'-końcu większości genów eukariotycznych znajduje się sekwencja AATAAA, która może stanowić sygnał do dodania ogona poli-A do 3'-końca sekwencji kodującej. Wszystkie te sekwencje odpowiednio wstawia się do eukariotycznych wektorów ekspresyjnych.
Przykładami odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania w drożdżowych komórkach gospodarza są kinaza 3-fosfoglicerynianowa lub inne enzymy glikolityczne, takie jak enolaza, dehydrogenaza gliceroaldehyd-3-fosforanowa, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza glukozo-6-fosforanowa, mutaza 3-fosfoglicerynianowa, kinaza pirogronianowa, izomeraza triozofosforanowa, izomeraza fosfoglukozowa i glukokinaza.
Innymi promotorami drożdżowymi są promotory indukowalne, pozwalające na dogodną kontrolę transkrypcji poprzez warunki wzrostu, takie jak regiony promotorowe dla dehydrogenazy alkoholowej 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów degradacyjnych związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy gliceroaldehyd-3-fosforanowej oraz enzymów odpowiedzialnych za wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania w przypadku ekspresji u drożdży opisano ponadto w EP 73,657. Wraz z promotorami drożdżowymi dogodnie stosuje się drożdżowe sekwencje wzmacniające.
Transkrypcja wariantu polipeptydu z wektorów w ssaczych komórkach gospodarza jest kontrolowana, na przykład, przez promotory otrzymane z genomu wirusów, takich jak wirus polioma, wirus ospy ptasiej, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), wirus brodawczaka wołowego, wirus mięsaka ptaków, cytomegalowirus, retrowirus, wirus zapalenia wątroby typu B i w szczególności, Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np. promotor aktyny lub promotor immunoglobuliny, z promotorów genów szoku cieplnego, pod warunkiem że, promotory te są kompatybilne z układem komórek gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 otrzymuje się zazwyczaj z fragmentu restrykcyjnego SV40, zawierającego również miejsce początku replikacji wirusa SV40. Bardzo wczesny promotor ludzkiego cytomegalowirusa dogodnie otrzymuje się w postaci fragmentu restrykcyjnego HindIIIE. Układ do ekspresji DNA w ssaczych komórkach gospodarza wykorzystujący jako wektor wirus brodawczaka wołowego ujawniono w Patencie USA nr 4,601,978. Patrz również Reyes i wsp., Nature 297: 598-601 (1982), gdzie omówiono ekspresję cDNA ludzkiego interferonu β w mysich komórkach pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki. Alternatywnie, w funkcji promotora może być zastosowane długie końcowe powtórzenie z wirusa mięsaka Rous'a.
(v) Element wzmacniający
Transkrypcję DNA kodującego opisany tu wariant polipeptydu u wyższych Eukariotów często zwiększa się poprzez wstawienie sekwencji wzmacniających do wektora. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniających, pochodzących z genów ssaczych (globina, elastaza, albumina, α-fetoproteina oraz insulina). Jednakże zazwyczaj możliwe jest zastosowanie sekwencji wzmacniającej pochodzącej z wirusa komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują sekwencje wzmacniające SV40, po stronie późnej miejsca początku replikacji (100-270 pz), sekwencje wzmacniające wczesnego promotora cytomegalowirusa, sekwencje wzmacniające wirusa polioma po stronie późnej miejsca początku repl ikacji i sekwencje wzmacniające adenowirusa. Patrz również, Yaniv, Nature 297; 17-18 (1982), gdzie opisano elementy wzmacniające aktywację promotorów eukariotycznych. Sekwencja wzmacniająca może być wstawiona do wektora w pozycji 5' lub 3' względem sekwencji kodującej wariant polipept ydu, lecz zalecaną lokalizacją jest położenie 5' od promotora.
(vi) Element terminacji transkrypcji
Wektory ekspresyjne stosowane w eukariotycznych komórkach gospodarza (drożdże, grzyby, owady, rośliny, zwierzęta, ludzie lub komórki jądrowe innych organizmów wielokomórkowych) obejm ują również sekwencje niezbędne do terminacji transkrypcji i stabilizacji mRNA. Sekwencje te powszechnie występują od 5' końca, czasami końca 3', niepodlegających translacji regionów DNA lub cDNA eukariotycznego lub wirusowego. Regiony te zawierają segmenty nukleotydowe transkrybowane w postaci poliadenylowanych fragmentów w niepodlegającym translacji regionie mRNA kodującego wariant polipeptydu. Jednym z użytecznych elementów terminacji transkrypcji jest region poliadenyl acji wołowego hormonu wzrostu. Patrz WO 94/11026 i zawarty tam opis wektora ekspresyjnego.
(vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednimi komórkami gospodarza do klonowania lub ekspresji DNA w wektorach są opisane powyżej komórki prokariotyczne, drożdżowe lub komórki wyższych Eukariotów. Odpowiednie do tego celu komórki prokariotyczne obejmują eubacteria, takie jak mikroorganizmy Gram-ujemne lub
PL 220 113 B1
Gram-dodatnie, na przykład, Enterobacteriaceae, takie jak Escherichia, np. E.coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np. Salmonella typhimurium, Serratia, np. Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacillus, np. B.subtilis i B.licheniformis (np. B.licheniformis 41P, zawarty w DD 266,710, opublikowany 12 kwietnia 1989), Pseudomonas, np. P. aeruginosa i Streptomyces. Jednymi z zalecanych komórek gospodarza E.coli do klonowania są komórki E.coli294 (ATCC 31,446), jednak odpowiednie są również inne szczepy, takie jak E.coliB, E.coliX1776 (ATCC 31,537) i E.coliW3110 (ATCC 27,325). Wymienione tu szczepy nie służą ograniczeniu, ale podane zostały jedynie przykładowo.
Oprócz mikroorganizmów prokariotycznych, również mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak grzyby strzępkowate lub drożdże, są odpowiednie do klonowania i ekspresji gospodarzami dla wektorów kodujących wariant polipeptydu. Spośród niższych Eukariotów najpowszechniej stosowanymi mikroorganizmami gospodarza są drożdże Saccharomyces cerevisiae, lub powszechnie znane drożdże piekarskie. Jednakże, powszechnie dostępne są i użyteczne w niniejszym wynalazku liczne inne rodzaje, gatunki i szczepy, takie jak Schizosaccharomyces pombe : Kluyveromyces, tak jak np., K.lactis, K.fragilis (ATCC 12,424), K.bulgaricus (ATCC 16,045), K.wickeramii (ATCC 24,178), K.waltii (ATCC 56,500), K.drosophilarum (ATCC 36,906), K. thermotolerans i K.marxianus; Yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, tak jak Schwanniomyces occidentalis i grzyby strzępkowe, takie jak, np., Neurospora, Penicillium, Tolypocladium oraz Aspergillus, takie jak A.nidulans i A.niger.
Odpowiednie komórki gospodarza do ekspresji glikozylowanego wariantu polipeptydu pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i owadzie. Zidentyfikowano liczne szczepy i warianty bakulowirusowe oraz odpowiednie permisywne owadzie komórki gospodarza, z gospodarzy takich jak Spodoptera frugiperda (gąsienica), Aedes aegypti (komar), Aedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) oraz Bombyx mori. Dostępnych jest wiele szczepów wirusowych do transfekcji, np. wariant L-1 Autographa californica NPV oraz szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i wirusy te mogą być stosowane zgodnie z niniejszym wynalazkiem, w szczególności do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Jako organizmy gospodarza mogą być również wykorzystane hodowle komórek roślinnych bawełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu.
Jednakże, bardziej interesujące były komórki kręgowców, i dlatego namnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowle tkankowe) stało się powszechnie stosowaną procedurą. Przykładami użytecznych ssaczych linii komórek gospodarza są linia komórek nerki małpy transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linia komórek embrionalnych nerki człowieka (komórki 293 lub 293 subklonowane do wzrostu w zawiesinie, Graham i wsp., J.Gen Virol. 36:59 (1977); komórki nerki młodego chomika (BHK, ATCC CCL10); komórki jajnika chomika chińskiego/-DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77: 4216 (1980)); komórki Sertoliego myszy (TM4, Mather, Biol.Reprod. 23: 243-251 (1980)); komórki nerki małpy (CV1 ATCC CCL 70); komórki nerki afrykańskiej małpy zielonej (VERO-76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL2).; komórki nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątroby szczura (Buffalo)(BRL 3A, ATCC CRL 1442); komórki płuca człowieka (W138, ATCC CCL 75); komórki wątroby człowieka (Hep G2, HB 8065); komórki raka sutka myszy (MMT 060562, ATCC CCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N.Y.Acad.Sci. 383: 44-68 (1982)); komórki MRC5; komórki FS4 oraz linia komórek ludzkiego wątrobiaka (Hep G2).
W celu otrzymania wariantu polipeptydu komórki gospodarza poddaje się transformacji za pomocą wyżej wymienionych wektorów ekspresyjnych lub do klonowania, i hodowli w konwencjonalnych pożywkach odżywczych, zmodyfikowanych odpowiednio do indukcji promotorów, selekcji transformantów lub amplifikacji genów kodujących pożądane sekwencje.
(viii) Hodowla komórek gospodarza
Komórki gospodarza stosowane do produkcji opisanego tu wariantu polipeptydu mogą być hodowane w rozmaitych pożywkach. Do hodowli takich komórek gospodarza odpowiednie są dostępne handlowo pożywki, takie jak pożywka Ham'a F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) oraz Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma). Ponadto, jako pożywki hodowlane dla komórek gospodarza może być zastosowana jakakolwiek pożywka opisana w Ham i wsp., Meth.Enz. 58: 44 (1979), Bames i wsp., A102: 255 (1980), U.S. Patent No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655 lub 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195 lub US. Patent Re. 30,985. Jakakolwiek z tych pożywek może być, w razie potrzeby, uzupełniona hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostu (takimi jak insulina, transferyna lub naskórkowy czynnik wzrostu), solami (takimi
PL 220 113 B1 jak chlorek sodu, wapnia, magnezu i fosforan), buforami (takimi jak HEPES), nukleotydami (takimi jak adenozyna i tymidyna), antybiotykami (takimi jak GENTAMYCYNA™), pierwiastkami śladowymi (zdefiniowanymi jako związki nieorganiczne obecne zazwyczaj w końcowych stężeniach rzędu mikromola) oraz glukozą lub równoważnym źródłem energii. Do pożywki można dodać jakiekolwiek inne dodatki w odpowiednich stężeniach, znanych specjalistom w dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH itp., są takie jak stosowano już uprzednio do selekcji komórek gospodarza do ekspresji, i są znane specjalistom w dziedzinie.
(ix) Oczyszczanie wariantu polipeptydu
W przypadku stosowania technik rekombinacyjnych wariant polipeptydu można otrzymywać wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni peryplazmatycznej, lub w postaci bezpośrednio wydzielanej do pożywki. Jeżeli wariant polipeptydu wytwarza się wewnątrzkomórkowo, to w pierwszym etapie usuwa się szczątki, albo komórek gospodarza albo fragmentów poddanych lizie, na przykład drogą wirowania lub ultrafiltracji. Carter i wsp., Bio/Technology 10: 163-167 (1992) opisali procedurę izolacji przeciwciał wydzielanych do przestrzeni peryplazmatycznej E.coli. W skrócie, pastę komórkową rozmraża się w obecności octanu sodu (pH 3,5), EDTA i fluorku fenylometylosulfonylu (PMSF) przez około 30 min. Szczątki można usunąć drogą wirowania. W przypadku gdy wariant polipeptydu wydzielany jest do podłoża, supernatanty z takich układów ekspresyjnych zazwyczaj zatęża się za pomocą dostępnych handlowo filtrów odpowiednich do zatężania białek, na przykład, Amicon lub Millipore Pellicon ultrafiltracion unit. W celu zahamowania proteolizy na jakimkolwiek etapie można dodać inhibitor proteazy, taki jak PMSF, jak również antybiotyki, zapobiegające wzrostowi przypadkowej mikroflory zanieczyszczającej.
Kompozycja wariantu polipeptydu otrzymana z komórek może być poddana oczyszczaniu za pomocą, na przykład, chromatografii na hydroksyapatycie, elektroforezy żelowej, dializy i chromatografii powinowactwa, przy czym ta ostatnia technika jest zalecaną techniką oczyszczania. Skuteczność białka A jako liganda powinowactwa zależy od gatunku i odmiany izotypowej jakiegokolwiek regionu Fc immunoglobuliny, obecnego w wariancie polipeptydu. Białko A może być stosowane do oczyszczania wariantów polipeptydów opartych na ludzkich łańcuchach ciężkich y1, y2 lub y4 (Lidmark i wsp., J.Immunol.Meth. 62: 1-13 (1983)). Białko G jest polecane w przypadku wszystkich mysich odmian izotypowych oraz w przypadku ludzkiego y3 (Guss i wsp., EMBO J. 5: 1567-1575 (1986)). W większości przypadków macierzą, do której przyłączony jest ligand jest agaroza, lecz dostępne również są inne macierze. Macierze mechanicznie stabilne, takie jak szkło o kontrolowanej porowatości lub poli(styrenodiwynylo)benzen, pozwalają osiągnąć szybszy przepływ i krótszy czas oczyszczania niż w przypadku zastosowania agarozy. W przypadku oczyszczania wariantu polipeptydu zawierającego domenę CH3 użyteczna jest żywica Bakerbond ABX™ (J.T.Baker, Phillipsburg, NJ). W zależności od oczyszczanego wariantu polipeptydu mogą być zastosowane także inne techniki oczyszczania białka, takie jak frakcjonowanie na kolumnie do chromatografii jonowymiennej, wytrącanie etan olem, HPLC z odwróconą fazą, chromatografia na krzemionce, chromatografia na SEPHAROSE™ z heparyną, chromatografia kationowymienna lub anionowymienna na żywicy (taka jak na kolumnie z kwasem poliasparaginowym), ogniskowanie chromatograficzne, SDS-PAGE oraz wytrącanie siarczanem amonu.
Po jakimkolwiek z etapów oczyszczania mieszaninę wariantu polipeptydu będącego przedmiotem zainteresowania i zanieczyszczeń można poddać chromatografii oddziaływań hydrofobowych w niskim pH, z wykorzystaniem buforu elucyjnego w pH 2,5-4,5, dogodnie przy niskich stężeniach soli (np. od około 0-0,25 M soli).
E. Preparaty farmaceutyczne
Preparaty terapeutyczne wariantu polipeptydu przygotowuje się do przechowywania poprzez wymieszanie wariantu polipeptydu o pożądanym stopniu czystości z dowolnymi, farmaceutycznie akceptowanymi, nośnikami, zaróbkami lub substancjami stabilizującymi (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Ed., Osol, A.Ed. (1960)), w postaci preparatów liofilizowanych lub roztworów wodnych. Akceptowalne nośniki, zaróbki lub substancje stabilizujące są nietoksyczne dla przyjmujących lek w stosowanych dawkach i stężeniach, i obejmują bufory, takie jak fosforanowy, cytrynianowy i bufory innych kwasów organicznych; antyutleniacze, włączając kwas askorbinowy i metioninę; konserwanty (takie jak chlorek oktadecylodimetylobenzyloamonu; chlorek heksametonium; chlorek benzalkonium; chlorek benzetonium; fenol, alkohol butylowy lub benzylowy; parabeny alkilowe, takie jak paraben metylu lub propylu; katechol; rezorcynol; cykloheksanol; 3-pentanol oraz m-krezol); polipeptyd o niskiej masie cząsteczkowej (krótszy niż około 10 reszt); białka, takie jak albumina surowicy, żelatyna
PL 220 113 B1 lub immunoglobuliny; hydrofilowe polimery, takie jak poliwinylopirolidon; aminokwasy, takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histydyna, arginina lub lizyna; monosacharydy, dwusacharydy i inne węglowodany, włączając glukozę, mannozę lub dekstryny; czynniki chelatujące, takie jak EDTA; cukry, takie jak sacharoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol, tworzące sole przeciwjony, takie jak sód,; kompleksy z jonami metali (np. kompleksy Zn-białko) i/lub surfaktanty niejonowe, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Opisywany tu preparat może również zawierać więcej niż jeden związek czynny, jeżeli jest to niezbędne w przypadku danego wskazania terapeutycznego, dogodnie takie, które mają komplementarne aktywności, i które nie wpływają niekorzystnie na siebie. Cząsteczki te występują dogodnie w połączeniach, w ilościach odpowiednich dla zamierzonego celu.
Składniki czynne mogą również być zawarte w mikrokapsułkach otrzymanych, na przykład, techniką koacerwacji lub polimeryzacji międzyfazowej, na przykład, odpowiednio mikrokapsułkach hydroksymetylocelulozowych lub żelatynowych oraz z polimetakrylanu metylu, w koloidalnych ukł adach dostarczania leku (na przykład liposomy, mikrosfery albumiowe, mikroemulsje, nanocząsteczki i nanokapsułki) lub makroemulsje. Techniki te opisano w Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Osol, A.Ed. (1980).
Preparaty do podawania in vivo muszą być sterylne. Można to łatwo uzyskać poprzez filtrację przez sterylne błony do filtracji.
Możliwe jest przygotowanie preparatów o przedłużonym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o przedłużonym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne matryce ze stałych polimerów hydrofobowych zawierających wariant polipeptydu, przy czym matryce te mają różną postać, np. warstwy lub mikrokapsułki. Przykładami matryc o przedłużonym uwalnianiu są poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) lub alkohol poliwinylowy, polilaktydy (Patent USA nr 3,773,919), kopolimery kwasu L-glutaminowego i γ-etylo L-glutaninianu, niedegradowalny octan etyleno-winylu, degradowalne kopolimery kwasu mlekowego i kwasu glikolowego, takie jak LUPRON DEPOT™ (wstrzykiwalne mikrosfery składające się z kopolimeru kwasu mlekowego i kwasu glikolowego oraz octanu leuprolidu), oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksymasłowy. Podczas gdy polimery, takie jak octan etyleno-winylu i kwas mlekowy-kwas glikolowy, pozwalają na uwalnianie cząsteczek przez ponad 100 dni, to pewne hydrożele uwalniają białka przez krótsze okresy czasu. W przypadku gdy znajdujące się w kapsułkach przeciwciała pozostają w organizmie przez dłuższy czas, mogą one ul egać denaturacji lub agregacji na skutek panujących warunków wilgotności w temperaturze 37°C, powodujących brak aktywności biologicznej i możliwe zmiany immunogenności. W zależności od m echanizmu działania opracować można racjonalne strategie. Na przykład, w przypadku wystąpienia procesu agregacji, przebiegającego w wyniku powstawania międzycząsteczkowych wiązań disiarczkowych S-S poprzez wymianę grup tio-disiarczkowych, stabilizację można uzyskać poprzez modyfikację reszt sulfhydrylowych, liofilizację z kwaśnych roztworów, kontrolę wilgotności, zastosowanie odpowiednich dodatków i opracowanie specyficznych kompozycji matrycy polimerowej.
F. Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu
Opisany tu wariant polipeptydu może być zastosowany jako czynnik do oczyszczania przez p owinowactwo. W procesie tym, wariant polipeptydu immobilizuje się jest na fazie stałej, takiej jak żywica Sephadex lub papier filtracyjny, za pomocą dobrze znanych w dziedzinie metod. Immobilizowany w ariant polipeptydu kontaktuje się z próbką zawierającą oczyszczany antygen, a następnie nośnik płucze się odpowiednim rozpuszczalnikiem, usuwającym zasadniczo wszystkie składniki z próbki, za wyją tkiem oczyszczanego antygenu związanego z immobilizowanym wariantem polipeptydu. Ostatecznie, nośnik płucze się odpowiednim innym rozpuszczalnikiem, takim jak bufor glicynowy, pH 5,0, który uwalnia oczyszczany antygen od wariantu polipeptydu.
Wariant polipeptydu może być również użyteczny w testach diagnostycznych, np. do wykryw ania ekspresji antygenu będącego przedmiotem zainteresowania w specyficznych komórkach, tkankach lub surowicy.
Do celów diagnostycznych wariant polipeptydu zazwyczaj bedzie znakowany za pomocą wykrywalnych ugrupowań. Dostępne są liczne znaczniki, które ogólnie można podzielić na następujące grupy:
(a) radioizotopy, takie jak 35S, 14C, 125I, 3H i 131I.
Wariant polipeptydu może być znakowany izotopowo przykładowo za pomocą technik opisanych w Current Protocols in Immunology, tom 1 i 2, Coligen i wsp., Ed. Wiley-Interscience, New York, New York Pubs. (1991), a radioaktywność można mierzyć za pomocą licznika scyntylacyjnego.
PL 220 113 B1 (b) znaczniki fluorescencyjne, które można zastosować to chelaty metali ziem rzadkich (chelaty europu) lub fluoresceina i jej pochodne, rodamina i jej pochodne, dansyl, lissamina, fikoerytryna i barwnik Texas Red. Znaczniki fluorescencyjne można sprzęgać z wariantem polipeptydu za pomocą technik ujawnionych, na przykład, w Current Protocols in Immunology, jak powyżej. Fluorescencję można oceniać częściowo za pomocą fluorymetru.
(c) różne znaczniki typu enzym-substrat, z których część opisano w Patencie USA nr 4,257,149. Enzym, ogólnie, katalizuje chemiczną zmianę substratu chromogennego, którą można mierzyć za pomocą różnych technik. Na przykład, enzym może katalizować zmianę koloru substratu, którą można mierzyć spektrofotometrycznie. Alternatywnie, enzym może zmieniać fluorescencję lub chemiluminescencję substratu. Techniki oceny ilościowej zmian fluorescencji opisano powyżej. Substrat chemiluminescencyjny zostaje elektronowo wzbudzony w wyniku reakcji chemicznej, i może emitować następnie światło, które można mierzyć (na przykład za pomocą chemiluminometru) lub przekazuje energię na akceptor fluorescencyjny. Przykłady znaczników enzymatycznych obejmują lucyferazy (np. lucyferazę ze świetlika i lucyferazę bakteryjną; Patent USA nr 4,737,456), lucyferynę, 2,3-dihydroftalazynodiony, dehydrogenazę jabłczanową, ureazę, peroksydazę, taką jak peroksydaza chrzanowa (HRPO), alkaliczną fosfatazę, β-galaktozydazę, glukoamylazę, lizozym, oksydazy sacharydów (np. oksydazę glukozy, oksydazę galaktozy i dehydrogenazę glukozo-6-fosforanową) oraz heterocykliczne oksydazy (takie jak urykaza i oksydaza ksantynowa), laktoperoksydaza, mikroperoksydaza, itp. Techniki sprzęgania enzymów z przeciwciałami opisano w O'Sullivan i wsp., Methods for the Preparation of Enzyme-Antybody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, Methods in Enzym, (ed J.Langone&H.Van Vunakis), Academic Press, New York, 73: 147-166 (1981).
Przykłady połączeń enzym-substrat obejmują, na przykład:
(i) Peroksydazę chrzanową (HRPO) i peroksydazę wodorową jako substrat, przy czym peroks ydaza wodorowa utlenia prekursor barwnika (np. diaminę ortofenylenu (OPD) lub chlorowodorek 3,3',5,5'-tetrametylobenzydyny (TMB));
(ii) Alkaliczną fosfatazę (AP)i fosforan paranitrofenylu jako substrat chromogenny; i (iii) β-D-galaktozydazę (β-D-Gal) i substrat chromogenny (np. p-nitrofenylo^-D-galaktozydaza) lub substrat fluorogenny (4-metylolumbelliferylo^-D-galaktozydaza).
Istnieją również liczne inne połączenia enzym-substrat, znane specjalistom w dziedzinie. Ogólny ich przegląd można znaleźć w Patencie USA nr 4,257,149 i 4,318,980.
Znacznik może być czasami sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Specjal istom w dziedzinie znane są liczne techniki odpowiednie do tego celu. Na przykład, wariant polipeptydu może być sprzęgany z biotyną, a jakikolwiek z trzech wymienionych powyżej grup znaczników może być sprzęgany z awidyną i odwrotnie. Biotyna ulega selektywnemu wiązaniu z awidyną, co powoduje, że znacznik może być sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Alternatywnie, w celu sprzęgania pośredniego znacznika z wariantem polipeptydu, wariant polipeptydu sprzęga się z małym haptenem (np. digoksyną), a jeden z wymienionych powyżej znaczników sprzęga się ze skierowanym przeciwko cząsteczce haptenu wariantem polipeptydu (np. przeciwciałem przeciwko digoksynie). Zatem, można przez to uzyskać pośrednie sprzęganie znacznika z wariantem polipeptydu.
W innym rozwiązaniu nie jest konieczne znakowanie wariantu polipeptydu, a jego obecność wykrywa się z użyciem znakowanego przeciwciała wiążącego się z wariantem polipeptydu.
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w jakiejkolwiek znanej metodzie analizy, takiej jak analiza wiązania kompetycyjnego, bezpośrednie i pośrednie analizy kanapkowe i immunoprecypitacyjne. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
Wariant polipeptydu może być także wykorzystany w testach diagnostycznych in vivo. Ogólnie, wariant polipeptydu jest znakowany radioizotopowo (tak jak 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H, 32P lub
S), co pozwala na zlokalizowanie antygenu lub ekspresjonującej go komórki za pomocą immunoscyntygrafii.
G. Zastosowania wariantu polipeptydu in vivo
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w leczeniu ssaków, np. pacjentów cierpiących na choroby lub zaburzenia lub predysponowanych do takich chorób lub zaburzeń, gdzie p odawanie wariantu polipeptydu mogłoby przynieść korzyść. Wiele stanów można leczyć z zastosowaniem wariantu polipeptydu i obejmują one raka (np. gdzie wariant polipeptydu wiąże się z receptorem HER2, CD20 lub czynnik wzrostu śródłonka naczyniowego (VEGF)); alergie, takie jak astma (przeci w40
PL 220 113 B1 ciało anty-IgE) oraz zaburzenia zależne od LFA1 (np. gdzie wariantem polipeptydu jest przeciwciało anty-LFA-1 lub anty-ICAM-1), itp.
W przypadku gdy przeciwciało wiąże się z receptorem HER2, zalecanym zaburzeniem jest rak z ekspresją HER2, np. łagodny lub złośliwy guz wykazujący nadekspresję receptora HER2. Raki te obejmują, lecz bez ograniczenia, raka sutka, raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, raka przewodu żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki, raka jajników, raka pęcherza, wątrobiaka, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka śluzówki macicy, raka ślinianek, raka nerki, raka wątroby, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątroby i różnych typów nowotworów głowy i szyi.
Zgodnie z niniejszym opisem możliwe jest otrzymanie polipeptydu zawierającego wariant regionu Fc o udoskonalonej lub zredukowanej aktywności ADCC. Cząsteczki takie znajdą zastosowanie w leczeniu różnorodnych zaburzeń.
Na przykład, wariant polipeptydu o wzmocnionej aktywności ADCC może być zastosowany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zniszczenie lub wyeliminowanie tkanki lub obcego mikroorganizmu. Na przykład, taki polipeptyd może znaleźć zastosowanie w leczeniu raka, zaburzeń zapalnych, zakażeń (np. bakteryjnych, wirusowych, grzybowych lub drożdżowych) lub innych stanów (takich jak wole), gdzie pożądane jest usunięcie tkanki, itp.
W przypadku gdy wariant polipeptydu wykazuje zredukowaną aktywność ADCC, może on być wykorzystany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zastosowanie polipeptydu zawierającego region Fc o dłuższym okresie półtrwania, przy czym dogodnie polipeptyd nie wykazuje ni epożądanych funkcji efektorowych. Na przykład, polipeptyd zawierający region Fc może być przeci wciałem skierowanym przeciwko czynnikowi tkankowemu (TF); przeciwciałem skierowanym przeciwko IgE i przeciwciałem skierowanym przeciwko integrynie (np. przeciwciałem anty-a437). Pożądanym mechanizmem działania takich polipeptydów zawierających region Fc może być blokowanie par wiążących ligand-receptor. Ponadto, polipeptyd zawierający region Fc o zredukowanej aktywności ADCC może być agonistą przeciwciała.
Wariant polipeptydu podaje się za pomocą dowolnych w jakikolwiek możliwch środków, włączając podawanie pozajelitowe, podskórne, dootrzewnowe, dopłucne i donosowe, a w razie potrzeby miejscowego leczenia immunosupresyjnego podawanie w obrębie zmiany. Wlewy pozajelitowe obejmują podawanie domięśniowe, dożylne, dotętnicze, dootrzewnowe lub podskórne.
Ponadto, wariant polipeptydu podaje się odpowiednio drogą wlewu pulsowego, szczególnie w malejących dawkach wariantu polipeptydu. Dawkę podaje się dogodnie przez wstrzyknięcia, a w szczególności wstrzyknięcia dożylne lub podskórne, co częściowo zależy od tego czy czas pod awania jest krótki czy przewlekły.
W przypadku profilaktyki lub leczenia choroby odpowiednie dawki wariantu polipeptydu będą zależały od typu leczonej choroby, stopnia jej ciężkości i przebiegu, od tego czy podawanie wariantu polipeptydu ma charakter profilaktyczny czy terapeutyczny, poprzednio stosowanej terapii, historii choroby pacjenta i odpowiedzi na wariant polipeptydu oraz decyzji lekarza prowadzącego. Wariant polipeptydu podaje się pacjentowi jednorazowo lub w seriach.
W zależności od typu i ciężkości choroby wstępną dawkę do podania pacjentowi stanowi około 1 pg/kg do 15 mg/kg (np. 0,1-20 mg/kg) wariantu polipeptydu w zależności przykładowo od tego czy podawanie jest jednokrotne czy w kilku oddzielnych dawkach lub przez wlew ciągły. Typowa dzienna dawka wynosi w zakresie od około 1 pg/kg do 100 mg/kg lub więcej, zależnie od wymienionych powyżej czynników. W przypadku podawania wielokrotnego przez okres kilku dni lub dłuższy, w zależności od stanu, leczenie kontynuuje się aż do momentu zahamowania występowania objawów chorobowych. Jednakże użyteczne są również inne schematy dawkowania. Postęp terapii łatwo monitoruje się za pomocą konwencjonalnych technik i analiz.
Kompozycję wariantu polipeptydu otrzymuje się, dawkuje i podaje w zgodzie z dobrą praktyką lekarską. Czynniki, które należy rozważyć w tym kontekście to szczególnie choroba do leczenia, szczególny ssak do leczenia, stan kliniczny poszczególnego pacjenta, przyczyna zaburzenia, miejsce dostarczenia czynnika, sposób podawania, schemat podawania i inne czynniki znane lekarzom.
„Terapeutycznie skuteczna ilość” wariantu polipeptydu, którą należy podać będzie ustalana ogólnie na podstawie wymienionych czynników, i stanowi minimalną ilość niezbędną do zapobiegnięcia, złagodzenia lub wyleczenia choroby lub zaburzenia. Wariant polipeptydu nie musi być, ale może być otrzymany wraz z jednym lub więcej czynnikami stosowanymi obecnie do zapobiegania lub lecz enia danego zaburzenia. Skuteczna ilość takich dodatkowych czynników uzależniona będzie od ilości
PL 220 113 B1 wariantu polipeptydu obecnego w preparacie, typu zaburzenia lub leczenia i innych dyskutowanych powyżej czynników. Stosuje się je, ogólnie, w takich samych dawkach i w taki sam sposób, jak wcześniej to opisano, lub stosuje się około od 1 do 99% opisanych powyżej dawek.
Wynalazek będzie bardziej zrozumiały w kontekście zamieszczonych poniżej przykładów. Przykładów tych nie należy jednak interpretować jako ograniczających zakres wynalazku. Wszystkie odnośniki literaturowe i odwołania do patentów włączone są tu przez odesłanie.
P r z y k ł a d 1
Analiza wiązania receptora o niskim powinowactwie
Analiza ta określa wiązanie regionu Fc IgG z rekombinowanymi podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIA, ekspres jonowanymi jako białko fuzyjne ze znakowaną His6 S transferazą glutationu (GST). Ze względu na to, że powinowactwo regionu Fc IgG1 względem FcyRI jest rzędu nanomoli, wiązanie wariantów Fc IgG1 można mierzyć za pomocą miareczkowania monomeru IgG i pomiaru wiązania IgG z przeciwciałem poliklonalnym anty-IgG w standardowym teście ELISA (Przykład 2, poniżej). Jednakże powinowactwo pozostałych członków rodziny FcyR, tj. FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA względem IgG jest rzędu mikromolarnego i wiązania tych receptorów z monomerem IgG1 nie można mierzyć za pomocą testu ELISA.
W poniższej analizie wykorzystuje się warianty Fc rekombinowanego przeciwciała anty-IgE E27 (Figury 4A i 4B), które po wymieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzą stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek anty-IgE i trzech cząsteczek IgE. Otrzymano rekombinowaną chimerową postać IgE (chimerową IgE), składającą się z regionu Fc ludzkiej IgE i Fab przeciwciała anty-VEGF, (Presta i wsp. Cancer Research 57: 4593-4599(1997)), która wiąże się z dwiema cząsteczkami VEGF na mol przeciwciała anty-VEGF. Po dodaniu ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do chimerowych heksamerów IgE:E27, heksamery łączą się w kompleksy o większej masie cząsteczkowej poprzez oddziaływanie chimerowe IgE:VEGF. Składnik E27 tego kompleksu wiąże się z podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA z silniejszą zachłannością wiązania, co umożliwia ich wykrycie w teście ELISA.
Materiały i metody
Pokrywanie receptorem: Podjednostki α receptora Fcy ekspresjonowane były jako białka fuzyjne GST domen zewnątrzkomórkowych (ECD) znakowanych His6 w komórkach 293, dzięki czemu otrzymano białko fuzyjne ECD-6His-GST (Graham i wsp., J.Gen.Virol. 36: 59-74 (1977) i Gorman i wsp., DNA Prot.Eng.Tech. 2:3-10 (1990)), które oczyszczono na kolumnie chromatograficznej Ni-NTA (Qiagen, Australia) i przez wymianę buforu na buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej (PBS). Stężenia określano na podstawie absorpcji przy 280 nm, z użyciem współczynników ekstynkcji ustalonych w analizie składu aminokwasowego. Płytki Nunc F96 maxisorb pokrywano receptorami (Nr kat. 439454) w ilości 100 ng na studzienkę poprzez dodanie 100 μl białka fuzyjnego receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w 4°C. Przed analizą płytki płukano 250 μl 3x buforu do płukania (PBS, pH 7,4 zawierającego 0,5% TWEEN 20™) i blokowano za pomocą 250 μl buforu do analizy (50 mM buforowanego Tris roztworu soli fizjologicznej, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) oraz 2 mM EDTA, pH 7,4).
Tworzenie kompleksów immunologicznych: równe molowe ilości (1:1) E27 i rekombinowanej chimerowej IgE, które wiążą dwa mole rekombinowanego ludzkiego VEGF na mol chimerowej IgE dodano do próbki polipropylenowej 12 x 75 mm w PBS i zmieszano przez obracanie przez 30 minut w temperaturze 25°C. Heksamery E27 (anty-IgE)/chimerowa IgE (IGE) powstają w czasie inkubacji. Rekombinowany ludzki VEGF (postać 165, MW 44000) dodano w ilości molowej 2:1 względem stężenia IgE i zmieszano przez obracanie przez dodatkowe 30 minut w 25°C. Wiązanie VEGF-chimerowa IgE łączy heksamery E27:chimerowa IgE w kompleksy o większej masie cząsteczkowej, które wiążą podjednostki FcyR α ECD na powleczonych płytkach poprzez regiony Fc przeciwciała E27.
Kompleksy E27:chimerowa IgE:VEGF: (stosunek molowy 1:1:2) dodano do powleczonych podjednostek α FcyR płytek w stężeniu E27 wynoszącym 5 μg i 1 μg wszystkich IgG w czterech powtórzeniach w buforze do analizy i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej.
Wykrywanie kompleksów: Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl koniugatu peroksydazy HRP z kozią anty-ludzką IgG (γ) specyficzną wobec łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w stosunku 1:10000 w buforze do analizy i inkubuje przez 90 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanej HRP koziej anty-ludzkiej IgG, a związane anty-IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl roztworu sub42
PL 220 113 B1 stratu (0,4 mg/ml dichlowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubowano przez 8 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymuje się przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a produkty barwne mierzy się w 490 nm na 96 studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Devices). Związanie kompleksów wariant-E27 przedstawiono jako procent kompleksu zawierającego E27 dzikiego typu.
P r z y k ł a d 2
Identyfikacja unikalnych miejsc wiązania C1q w ludzkim przeciwciele IgG
W prezentowanym badaniu zidentyfikowano mutacje w domenie CH2 ludzkiego przeciwciała IgG1, „C2B8” (Reff i inni, Blood 83:435 (1994)), które znoszą wiązanie przeciwciała C1q, ale ani nie zmieniają konformacji przeciwciała, ani nie wpływają na wiązanie każdego z FcyR. Poprzez mutagenezę z użyciem skanowania alaniny zidentyfikowano pięć wariantów IgG1, D270K, D270V, K322A, P329A oraz P331, które nie były lityczne i które zmniejszyły wiązanie C1q. Wyniki sugerowały, że rdzeniowe miejsca wiązania C1q w ludzkiej IgG1 są różne od miejsc w mysich IgG2b. Dodatkowo stwierdzono, że K322A, P329A oraz P331A wiążą się normalnie z antygenem CD20 i czterema receptorami Fc, FcyRI, FcyRII, FcyRIII oraz FcyRn.
Materiały i metody
Tworzenie wariantów C2B8: Użyto chimerowe łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciała anty-CD20, C2B8, (Reff i inni. Blood 83:435 (1994)), subklonowane oddzielnie do wcześniej opisanych wektorów PRK (Gorman i inni, DNA Protein Eng. Tech. 2:3 (1990). Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Ku nkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) skonstruowano warianty otrzymane przez skanowanie alaniny regionów Fc w łańcuchu ciężkim. Plazmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego kotran sfekowano do transformowanej adenowirusem linii komórek embrionalnych nerki człowieka jak to wcześniej opisano (Werther i inni, J. Immunol. 157:4986 (1996)). Pożywki zmieniano na wolne od surowicy 24 godzinny po transfekcji, a po 5 dniach zebrano wydzielone przeciwciało. Przeciwciała oczyszczano przy użyciu Protein A-SEPHAROSE CL-4B™ (Pharmacia), zmieniono bufor i zatężono do 0,5 ml z PBS przy użyciu Centricon-30 (Amicon) i przechowywano w 4°C. Stężenie przeciwciał określono przy użyciu ELISA z wiązaniem wszystkich Ig.
ELISA z wiązaniem C1q: 96 studzienkowe płytki Costar pokrywano przez noc C2B8 w temp. 4°C w znanych stężęniach w buforze do pokrywania (0,05 M bufor z węglanem sodu), pH 9. Następnie płytki płukano trzykrotnie PBS/ 0,05% TWEEN 20™, pH 7,4 i blokowano 200 μl rozcieńczalnika do ELISA bez timerosalu (0,1 M NaPO4/0,1 M NaCl/0,1% żelatyna/0,05% Tween 20™/0,05% Proclin 300) przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Płytki płukano trzykrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl z 2 μg/ml C1q (Quidel, San Diego, CA) i inkubowano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Płytkę następnie płukano sześciokrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl rozcieńczonego 1:1000 koniugatu peroksydazy z przeciwciałem owczym przeciwko C1q (Biodesign) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Płytki ponownie sześciokrotnie płukano buforem do płukania i dodano 100 μl buforu substratu (PBS/ /0,012% H2O2) zawierającego OPD (dichlorowodorek o-fenylenodiaminy) (Sigma). Reakcja utleniania, obserwowana dzięki wystąpieniu żółtego koloru, przebiegała przez 30 minut i zatrzymano ją przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Następnie odczytano absorbancję przy (492-405) nm przy użyciu czytnika mikropłytek (SPCTRA MAX 250™, Molecular Devices Corp.). Równolegle analizowano odpowie dnie kontrole (tj. test ELISA przeprowadzono bez C1q dla każdego użytego stężenia C2B8 a ponadto przeprowadzono ELISA bez C2B8). W przypadku każdego wariantu mierzono wiązanie C1q przez naniesienie na wykres absorbancji (492-405) nm względem stężenia C2B8 w μg/ml przy użyciu 4-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™) i porównanie z wartością EC50.
Analiza cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Analizę tę przeprowadzono jak opisano to wcześniej (Gazzano-Santoro i inni, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)). Różne stężenia C2B8 (0,08-20 pg/ ml) rozcieńczono buforem RHB (RPMI 1640/20 mM HEPES (pH 7,2)/2 mM Glutaminae/0,1% BSA/100 pg/ m. gentamycyna). Ludzki dopełniacz (Quidel) rozcieńczono w stosunku 1:3 w buforze RHB, a komórki WIL2-S (dostępne z ATCC, Manassas, VA), które ekspresjonują antygen CD20, rozcieńczono do gęstości 1x106 komórek/ml buforem RHB. 150 pl mieszaniny zawierające równe objętości C2B8, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza oraz komórek WIL2-S dodano do płaskodennej 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubowano przez 2 godziny w temp. 37°C i 5% CO2 w celu ułatwienia lizy komórek zależnej od dopełniacza. 50 pl barwnika alamar blue (Accumed International) dodano do każdej studzienki i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C.
PL 220 113 B1
Następnie zmierzono absorbancję przy użyciu 96-studzienkowego fluorometru z wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Jak opisał to Gazzano-Santoro i inni, wyniki wyrażono we względnych jednostkach fluoroscencji (RFU). Stężenie próbek obliczano z krzywej standardowej dla C2B8 a procent aktywności w porównaniu do dzikiego typu C2B8 opisano dla każdego wariantu.
Siła wiązania CD20 wariantów C2B8: Wiązanie C2B8 oraz wariantów do antygenu CD20 test owano przy użyciu wcześniej opisanej metody (Reff i inni, (1994) supra, Gazzano-Santoro i inni, (1996), supra). Komórki WIL2-S hodowano przez 3-4 dni do gęstości komórkowej wynoszącej 1x106 kom/ml. Komórki płukano i wirowano dwa razy w buforze FACS (PBS/0,1% BSA/0,02% NaN3) i zawieszono ponownie do gęstości komórkowej wynoszącej 5x106 komórek/ml. 200 μl komórek (5x106 kom/ml) oraz 20 μl rozcieńczonych próbek C2B8 dodano do 5 ml probówek i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Następnie mieszaninę płukano 2 ml zimnego buforu FACS, wirowano i powtórnie zawieszono w 200 μl zimnego buforu FACS. Do zawiesiny dodano 10 μl koziego anty-ludzkiego IgG-FITC (American Qualex Labs.) i mieszaninę inkubowano w ciemności w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Po inkubacji mieszaninę płukano 2 ml buforu FACS, wirowano i ponownie zawieszono w 1 ml zimnego buforu utrwalającego (1% formaldehyd w PBS). Próbki analizowano na cytometrze przepływowym a wyniki wyrażono jako względne jednostki fluoroscencji (RFU) i przedstawiono na wykresie względem stężeń przeciwciał przy użyciu 4 parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™). Wartości dla EC50 są wyrażone jako procent wartości dla referencyjnego materiału CD28.
Test ELISA wiązania FcyRI: fuzję GST podjednostka α FcyRI przeniesiono na płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439454) przez dodanie 100 μl fuzji receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w temp. 4°C. Przed testem płytki trzykrotnie płukano 250 μl buforu do płukania (PBS, pH 7,4, zawierający 0,5% TWEEN 20™) i blokowano 250 μl buforu do analizy (sól fizjologiczna buforowana 50 mM Tris, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA o pH 7,4). Próbki rozcieńczono do 10 μg/ml w 1 ml buforu do analizy i dodano do płytek pokrytych podjednostką α FcyRI i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywano przez dodanie 100 μl peroksydazy HRP sprzęgniętej z kozim anty-ludzkim przeciwciałem IgG (y) specyficznym dla łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w 1:10000 w buforze do analizy i inkubowano przez 90 minut w temperaturze 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych HRP kozich anty-ludzkich IgG, a związane anty-IgG wykrywano przez dodanie 100 μl roztworu substratu (0,4 mg/ml o-dichlorowodorek fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) inkubując przez 8 minut w temperaturze 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a barwne produkty oznaczono przy 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Device). Wiązanie wariantu wyrażono jako procent cząsteczki dzikiego typu.
Analizę ELISA wiązania FcyRII oraz III przeprowadzono jak opisano w przykładzie 1 powyżej.
Aby zmierzyć zdolność wiązana FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml streptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6 w temperaturze 4°C przez noc, i blokowano za pomocą PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowane FcRn (wytwarzane z użyciem biotyno-X-NHS, z Research Organics, Cleveland, OH i użyte w ilości 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 7,2, dodano do płytki i inkubowano przez jedną godzinę. Do płytki dodano dwukrotne rozcieńczenia seryjne standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 i inkubowano przez dwie godziny. Związane IgG wykrywano za pomocą znakowanego peroksydazą koziego F(ab)' anty-ludzki IgG F(ab)'2 w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano pomiędzy etapami PBS-0,05% polisorbatu 20 w pH albo 7,2 albo 6,0. Absorbancję odczytywano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywą miareczkowania dop asowano za pomocą czteroparametrowego programu do dopasowywania krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania standardu a następnie podzielono przez stężenie standardu odpowiadające środkowemu punktowi absorbacji krzywej miareczkowania standardu.
PL 220 113 B1
Wyniki oraz dyskusja
Dzięki mutagenezie skanowania alaniny skonstruowano kilka pojedynczych mutacji punktowych w domenie CH2 C2B8, rozpoczynając od E318A, K320A i K322A. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się do antygenu CD20 (Tabela 3).
T a b e l a 3
wt E318A K320A K322A P329A P331A
FcRn + + + +
CD20 + + + + + +
FcγRI + + + + + +
FcγRII + + + + + +
FcγRIII + + + + + +
*C1q +++ ++ +++ - - -
CDC + + + - - -
(+) oznacza wiązanie a (-)oznacza zniesione wiązanie * w przypadku wiązania C1q każdy + jest równoważny w przybliżeniu 33% wiązania.
Tam gdzie analizowano ludzki dopełniacz względem przeciwciała z ludzkim Fc zdolność E318A oraz K320A do aktywowania dopełniacza była zasadniczo jednakowa jak w przypadku C2B8 typu dzikiego (Tabela 3). W przypadku porównania do C2B8 typu dzikiego wydaje się, iż istnieje niewielka różnica w wiązaniu E318A i K320A do C1q. Zauważono tylko 10% zmniejszenie wiązania K320A i około 30% zmniejszenie wiązania E318A do C1q (Figura 2). Wyniki te wskazują, że wpływ substytucji E318A oraz K320A na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q jest minimalny. Ludzką IgG1 z C2B8 zastąpiono ludzką IgG2 i użyto jako kontrolę ujemną w badaniach wiązania C1q. Wariant IgG2 wydaje się posiadać o wiele mniejsze powinowactwo do C1q niż warianty E318A i K320A (Figura 2). Zatem wyniki wykazują, że E318 oraz K320A nie stanowią rdzeniowych miejsc wiązania C 1q dla ludzkiej IgG1. Odwrotnie substytucja K322A znacząco wpłynęła na zarówno aktywność dopełniacza, jak i wiązanie C1q. Wariant K322A nie posiadał aktywności CDC podczas analizy w powyższym teście CDC, wykazywał ponad 100-krotnie niższe wiązanie z C1q niż C2B8 typu dzikiego (figura 2). W układzie ludzkim K322 jest jedyną resztą spośród zaproponowanych rdzeniowych miejsc wiązania C1q, która wydawała się posiadać znaczący wpływ na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q.
Ze względu na to, że badania Duncan'a oraz Winter'a przeprowadzono przy użyciu mysiej IgG2b a powyższe rezultaty ujawniły, że K320 oraz E318 w ludzkiej IgG1 nie są zaangażowane w wiązanie C1q, nie wiążąc się przy tym z żadną teorią, powyższe wyniki sugerują, iż region wiązania C1q w mysich IgG jest inny niż w ludzkich. Aby zbadać to bardziej, a również aby zidentyfikować dodatkowe warianty, które nie wiążą z C1q a zatem nie aktywują dopełniacza, skonstruowano kilka innych mutacji punktowych w sąsiedztwie K322, co oceniono na podstawie struktury trójwymiarowej Fc C2B8. Uzyskane warianty K274A, N276A, Y278A, S324A, P329A, P331A, K334A oraz T335A oceniano pod kątem ich zdolności do wiązania z C1q, a także aktywacji dopełniacza. Wiele z tych substytucji miało mały wpływ na wiązanie C1q lub aktywację dopełniacza, lub nie miało żadnego wpływu na takie wiązanie lub aktywację. W powyższych testach warianty P329A oraz P331A nie aktywowały dopełniacza i obniżały wiązanie C1q. Wariant P331A nie aktywował dopełniacza i wykazywał około 60-krotnie słabsze wiązanie z C1q (Figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2). Zakres stężenia wariantów przeciwciał użyty na Figurze 3 rozszerzono do 100 μg/ml w celu zaobserwowania wysycenia wiązania C1q z wariantem P331A. Mutacja P329A powoduje, że przeciwciało nie aktywuje dopełniacza i wykazuje ponad stukrotne obniżenie wiązania z C1q (figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2).
Warianty, które nie wiązały się z C1q a zatem nie aktywowały dopełniacza badano pod kątem ich zdolności do wiązania receptorów Fc: FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. To szczególne badanie przeprowadzono przy zastosowaniu przeciwciała humanizowanego anty-IgE, przeciwciała IgG1 z tymi mutacjami (zobacz przykład 1 powyżej). Wyniki ujawniły, że warianty K322A oraz P329A wiążą się ze wszystkimi receptorami Fc w tym samym stopniu co białko typu dzikiego (Tabela 4). Jednakże zauważono niewielkie obniżenie wiązania P331A z FcγRIIB.
PL 220 113 B1
Podsumowując, zidentyfikowano dwie substytucje aminokwasowe w końcowym regionie COOH domeny CH2 ludzkiej IgG1, K322A oraz P329A, które powodują ponad 100-krotne obniżenie wiązania z C1q, i które nie aktywują szlaku CDC. Te dwa warianty, K322A oraz P329A, wiążą się z wszystkimi receptorami Fc z takim samym powinowactwem jak przeciwciało typu dzikiego. Bazując na wynikach przedstawionych w Tabeli 4, i nie wiążąc się z żadną teorią, proponuje się, iż epicentrum wiązania C1q ludzkiej IgG1 jest umiejscowione wokół K322, P329 oraz P331 i jest inne niż epicentrum mysiej IgG2b, które składa się z E318, K320 oraz K322.
T a b e l a 4
wt E318A K320A K322A P329A P331A
CD20 100 89 102 86 112 103
a FcγRI 100 93 102 90 104 74
a FcγRIIA 100 113 94 109 111 86
a FcγRIIB 100 106 83 101 96 58
a FcγRIII 100 104 72 90 85 73
CDC 100 108 108 brak brak brak
a w przypadku wiązania z Fc-,'R warianty utworzono z wykorzystaniem tła E27 (anty-IgE).
Wyniki przedstawiono jako procent dzikiego typu.
Przy zastosowaniu sposobów opisanych w prezentowanym przykładzie zidentyfikowano pona dto inną resztę zaangażowaną w wiązanie z ludzkim C1q. Resztę D270 zastąpiono lizyną i waliną w celu wytworzenia odpowiednio wariantów D270K i D270V. Warianty wykazywały zarówno mniejsze wiązanie z ludzkim C1q (Figura 6), jak również były nielityczne (Figura 7). Oba te warianty wiązały się z antygenem CD20 normalnie i wywoływały ADCC.
P r z y k ł a d 3
Warianty o zwiększonym wiązaniu C1q
Następujące badanie pokazuje, że substytucja reszt w pozycjach K326, A327, E333 oraz K334 skutkowała powstaniem wariantów o zwiększonym o co najmniej 30% wiązaniu z C1q w porównaniu do przeciwciała typu dzikiego. Wskazane reszty K326, A327, E333 oraz K334 są potencjalnymi miejscami do poprawy skuteczności przeciwciał ze szlaku CDC. Celem tego badania była poprawa aktywności CDC przeciwciała przez wzrost wiązania z C1q. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną na reszty K326 oraz E333 skonstruowano kilka wariantów o zwiększonym wiązaniu z C1q. Reszty, w porządku zwiększonego wiązania w przypadku K326 to K<V<E<A<G<D<M<W, a reszty w porządku zwiększonego wiązania w przypadku E333 to E<Q<D<V<G<A<S. Skonstruowano cztery warianty K326M, K326D, K326D, K326E oraz E333S, które wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania C 1q w porównaniu do typu dzikiego. Wariant K326W wykazywał co najmniej pięciokrotny wzrost wiązania z C1q.
Warianty przeciwciała C2B8 typu dzikiego otrzymano jak opisano to w przykładzie 2. Kolejne przeciwciało kontrolne, C2B8 typu dzikiego wytworzone w komórkach jajnika chomika chińskiego (CHO) zasadniczo tak jak opisano w Patencie USA nr 5,736,134, zawarto w teście ELISA wiązania C1q w celu potwierdzenia czy wt CdB8 produkowane w linii komórek nerki 293 wykazują taką samą aktywność wiązania C1q jak przeciwciało wytwarzane w CHO (zobacz „CHO-wt-CDB8” na Figurze 8). Testy ELISA wiązania C1q, CDC oraz potencjału wiązania CD20 w tym przykładzie przeprowadzono tak jak opisano w przykładzie 2 powyżej.
Jak pokazano na Figurze 8 substytucja alaniny przy K326 i E333 w C2B8 skutkowała powstaniem wariantów, które wykazywały około 30% wzrost wiązania z C1q.
Skonstruowano kilka innych pojedynczych wariantów z mutacjami punktowymi przy K326 i E333, i przetestowano je pod kątem ich zdolności wiązania z C1q i aktywacji dopełniacza. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się z antygenem CD20.
W przypadku K326, inne wytworzone warianty z pojedynczymi mutacjami punktowymi to K326A, K326D, K326E, K326G, K326V, K326M oraz K326W. Jak pokazano to na Figurze 9 wszystkie te warianty wiązały się z C1q z lepszym powinowactwem niż przeciwciało typu dzikiego. K326W, K326M, K326D oraz K326E wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania z C1q (Tabela 5). Spośród wariantów K326, wariant K326W wykazywał najlepsze powinowactwo do C1q.
PL 220 113 B1
T a b e l a 5
Wariant wartość EC50
typ dziki 1,53
K326V 1,30
K326A 1,03
K326E 1,08
K326G 0,95
K326D 0,76
K326M 0,67
K326W 0,47
E333S 0,81
E333A 0,98
E333G 1,14
E333V 1,18
E333D 1,22
E333Q 1,52
K334A 1,07
Substytucje resztami hydrofobowymi, jak również resztami naładowanymi skutkują powstaniem wariantów o podwyższonym wiązaniu z C1q. Nawet substytucja glicyną, która jak wiadomo nadaje łańcuchowi elastyczności i jest dobrze konserwowana w naturze, skutkowała powstania wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do typu dzikiego. Wydawałoby się, że dowolna substytucja aminokwasowa w tym rejonie będzie powodowała powstanie wariantu o wyższym powinowactwie do C1q. Na podstawie struktury trójwymiarowej stwierdzono, że K326 oraz E333 znajdują się w sąsiedztwie miejsc wiązania C1q (Figura 10).
Oprócz alaniny E333 podstawiono także innymi resztami aminokwasowymi. Warianty te, E333S, E333G, E333V, E333D, i E333Q, wykazywały zwiększone wiązanie z C1q w porównaniu do typu dzikiego (Figura 11). Jak pokazano w Tabeli 5, porządek powinowactwa wiązania z C1q przedstawiał się następująco: E333S>E333A>E333G>E333V>E333D>E333Q. Substytucja resztami aminokwasowymi z łańcuchami bocznymi o małej objętości tj. seryną, alaniną i glicyną skutkuje powstaniem wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do innych wariantów, E333V, E333D oraz E333Q o łańcuchach bocznych o większej objętości. Wariant E333S wykazywał najwyższe powinowactwo do C1q, i wykazał dwukrotny wzrost w porównaniu do typu dzikiego. Bez związku z jakąkolwiek teorią pokazuje to, że wpływ na wiązanie C1 w pozycji 333 może być również wynikiem po części polarności reszty.
Wytworzono także warianty podwójne. Jak pokazano na Figurach 12 oraz 13 podwójne warianty K326M-E333S oraz K326A-E333A wykazywały około trzykrotnie lepsze wiązanie z ludzkim C1q niż C2B8 typu dzikiego (Figura 12) i co najmniej dwukrotnie lepsze pośredniczenie w CDC w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 13). Addytywność pokazuje, że są to warianty o niezależnej aktywności.
Jak pokazano na Figurze 14, skonstruowano inny wariant o poprawionym wiązaniu z C1q (50% wzrost) przez zamianę A327 w regionie stałym na glicynę. Odwrotnie, w regionie stałym ludzkiej IgG2, zamiana G327 na alaninę zmniejsza wiązanie z C1q przeciwciała IgG2.
P r z y k ł a d 4
Identyfikacja miejsc wiązania FcR ludzkich przeciwciał IgG
W prezentowanym badaniu oceniano wpływ mutacji różnych regionów reszt regionu Fc przeciwciała IgG1 pod względem wiązania z FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB oraz FcyRIIIA jak również FcRn. Zidentyfikowano warianty przeciwciał o zwiększonym, jak również o zmniejszonym wiązaniu FcR.
PL 220 113 B1
Materiały i metody
Konstrukcja wariantów IgG1: Rekombinowane E27 anty-IgE posiadające sekwencje łańcucna lekkiego oraz ciężkiego przedstawione na Figurach 4A oraz 4B odpowiednio użyto jako przeciwciało macierzyste w następujących eksperymentach. Przeciwciało to wiąże antygen IgE i posiada region Fc allotypu nie-A IgG1. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Kunkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) utworzono warianty regionu Fc łańcucha ciężkiego powyższego przeciwciała macierzystego. Plaizmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego ko-transfekowano do transformowanej adenowirusem ludzkiej zarodkowej linii komórki nerki jak to opisano wcześniej (Werther i inni, J. Immunol. 157: 4986 (1996)). Pożywkę zmieniono na wolną od surowicy 24 godziny po transfekacji, a wydzielone przeciwciało zebrano po pięciu dniach. Przeciwciała oczyszczono przy użyciu SEPHAROSE® z białkiem G (Pharmacia), bufor zmieniono i zatężono do 0,5 ml przy użyciu PBS stosując Centricon-30 (Amicon)i przechowywano w 4°C. Stężenie określono przez adsorpcję przy 280 nm przy użyciu współczynników ekstynkcji pochodzących z analizy składu aminokwasowego.
Analiza ELISA wiązania FcyRIA o wysokim stopniu powinnowactwa: FcyRIA ekspresjonowano jako fuzję GST ze znakowaną His6 zewnątrzkomórkową domeną w komórkach 293 i oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej Ni-NTA.
Aby oczyścić FcyRIA po trzech dniach usunięto supernatant znad transfekowanych komórek 293. Dodano inhibitory proteaz: 50 pl aprotyniny (Sigma)/ 50 ml supernatantu oraz PMSF (1 mM). Supernatanty zatężono do 10 ml w probówkach (Amicon) i dializowano przez noc w temperaturze 4°C w jednym litrze buforu kolumnowego (50 mM Tris, pH 8,0, 20 mM imidazol, 300 mM NaCl). Dodatkową dializę przeprowadzono następnego ranka wobec świeżego buforu kolumnowego przez 4 godziny w 4°C. Roztwór nałożono na 1 ml kolumny Ni++ (NTA super flow resin, Qiagen), zrównoważone wcześniej 10 ml buforu kolumnowego. Kolumny płukano 10 ml buforu kolumnowego a białko eluowano 2,5 ml buforu elucyjnego (50 mM Tris pH 8,0, 250 mM imidazol, 300 mM NaCl). Białko zastężono do 0,5 ml oraz wymieniono bufor na PBS. Stężenia określono za pomocą adsorpcji przy 280 nm stosując współczynniki ekstynkcji pochodzące z analizy składu aminokwasowego.
Oczyszczonymi receptorami pokryto płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439545) w ilości średnio 150 ng na studzienkę przez dodanie 100 pl receptora w 1,5 pg/ml PBS i inkubowano przez 24 godziny w 4°C. Przed testem płytki płukano trzykrotnie 250 pl buforu do płukania (buforowana 50 mM Tris sól fizjologiczna, zawierająca TWEEN 20TM, 0,5% albuminy wołowej klasy RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA, pH 7,4).
100 pl E27 dodano do pierwszych czterech studzienek płytek pokrytych podjednostką FcyRIA w stężeniu 10 pg/ml. 80 pl buforu do analizy dodano do następnych czterech studzienek a następnie 20 pl z 10 pg/ml IgG E27 tak, aby otrzymać końcowe stężenie 2 pg/ml. Płytki inkubowano w 25°C przez dwie godziny na wytrząsarce rotacyjnej.
Do detekcji płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG do GST FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl białka G (BIORAD) sprzężonego z peroksydazą HRP, w stosunku 1:5000. Koniugaty HRP inkubowano przez 1,5 godziny w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego koniugatu HRP. Wiązanie wykrywano przez dodanie 100 pl roztworu substratu (0,4 mg/ml dichlorowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma p6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubację przez 10 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 pl 4,5 N H2SO4 a produkt barwny mierzono w 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze (Molecular Devices).
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 2 pg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Test FcyRIA THP-1: 100 pl E27 dodano do pierwszych trzech studzienek płytki typu seracluster (Costar) w ilości 20 pg/ml w buforze do analizy (1X PBS, 0,1% BSA, 0,01% NaN3). 92,5 pl buforu do analizy dodano do następnych trzech studzienek a następnie po 7,5 pl z 20 pg/ml IgG E27, tak aby otrzymać końcowe stężenie 1,5 pg/ml. Do każdej studzienki dodano 100 pl komórek THP-1 w stężeniu 5 milionów komórek/ml w buforze do analizy FACS. Płytkę inkubowano na lodzie przez 30 minut.
Do detekcji komórki płukano dwukrotnie buforem do analizy w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG z FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl sprzężonego z FITC fragmentu F(ab)' koziej IgG specyficznej przeciwko ludzkiemu łańcuchowi ciężkiemi (Jackson Immunoresearch) w stosunku 1:200. Koniugaty FITC inkubowano z komórkami przez 30 minut na lodzie. Komórki płukano trzykrotnie buforem do analizy tak, aby usunąć niezwiązany koniugat FITC. Komórki wybarwiono P.I. (SIGMA) w stężeniu 2,5 pg/ml i analizowano przez cytometrię przepływową.
PL 220 113 B1
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 1,5 μg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Otrzymane wyniki z testów płytkowych (FcγRIA FLISA) oraz testów komórkowych (test FcγRIA THP-1) uśredniono, aby otrzymać aktywność wiązania FcγRIA.
Test ELISA wiązania FcγR o niskim stopniu powinowactwa: testy ELISA FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA przeprowadzono tak jak w przykładzie 1 powyżej, wraz z detekcją cząsteczek stabilnego heksameru (składającego się z trzech anty-IgG i trzech cząsteczek IgE).
Test ELISA wiązania FcRn: w celu zmierzenia aktywności wiązania FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml sterptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6, w 4°C przez noc i blokowano przy użyciu PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowany FcRn (wytworzany z użyciem z biotyno-X-NHS z Research Organics, Cleveland, OH i użyty w stężeniu 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbat 20, pH 7,2 dodano do płytki i inkubowano przez godzinę. Dwukrotne seryjne rozcieńczenia standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 dodano do płytki i inkubowano przez dwie godziny. Związaną IgG wykrywano przy użyciu znakowanego perdydazą koziego F(ab)' przeciwko F(ab)' ludzkiej IgG w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano między etapami postępowania przy użyciu PBS-0,05% TWEEN 20® w pH 7,2 lub 6,0. Absorbancję odczytano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywe miareczkowania dopasowano przy pomocy cztero-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji miareczkowania dla krzywej standardu i podzielono przez stężenie standardu odpowiadającego środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania dla standardu.
Analiza ADCC in vitro. W celu otrzymania znakowanych chromem komórek docelowych, linie komórek rakowych hodowano na płytkach do hodowli tkankowej i zbierano przy użyciu sterylnego 10 mM EDTA w PBS. Jako komórki docelowe we wszystkich testach zastosowano komórki SK-BR-3, ludzką linię komórkową raka sutka wykazującą nadekspresję 3+ HER2-. Komórki płukano dwukrotnie
51 pożywką do hodowli komórkowej. Komórki (5x10 ) znakowano 200 μ Ci chromu (New England Nuclear/Du Pont) w temp. 37°C przez jedną godzinę z mieszaniem co pewien czas. Znakowane komórki płukano trzykrotnie pożywką do hodowli komórkowej, a następnie zawieszono ponownie do stężenia 5
1x10 komórek/ml. Komórki stosowano bez opsonizacji lub opsonizowano je przed analizą przez inkubację z rhuMAb HER2 dzikiego typu (HERCEPTIN®) lub siedmioma mutantami Fc (G14, G18, G17, G36, G30, G31 oraz G34) w ilości 100 ng/ml i 1,25 ng/ml w analizie PBMC lub 20 ng/ml i 1 ng/ml w analizie NK.
Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej przygotowano przez zebranie krwi na heparynę od normalnych zdrowych dawców i rozcieńczono równą objętością buforowanej fosforanem soli fizjologicznej (PBS). Krew następnie rozwarstwiono na LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM® (LSM: Organon Teknika) i wirowano zgodnie z zaleceniami producenta. Komórki jednojądrzaste zebrano z powierzchni LSM-osocza i płukano trzykrotnie PBS. Komórki efektorowe zawieszano ponownie w pożywce hodowlanej do końcowego stężenia 1x107 komórek/ml.
Po oczyszczeniu przez LSM, z PBMC wyizolowano komórki naturalnych zabójców (NK) przez negatywną selekcję przy użyciu zestawu do izolacji komórek NK oraz kolumny magnetycznej (Miltenyi Biotech) zgodnie z instrukcjami producenta. Wyizolowane komórki NK zebrano, płukano i powtórnie zawieszono w pożywce hodowlanej do stężenia 2x106 komórek/ml. Identyfikację komórek NK potwierdzono przez analizę cytometrii przepływowej.
Przez dwukrotne seryjne rozcieńczanie komórek efektorowych (albo PBMC albo NK) wzdłuż rzędów płytki do mikromiareczkowania otrzymano różne stosunki komórek efektorowych i docelowych (100 μl objętości końcowej) w podłożu do hodowli. Stężenie komórek efektorowych wahało się od 1,0x107/ml do 2,0x104/ml dla PBMC i od 2,0x106/ml do 3,9x103/ml dla NK. Po miareczkowaniu komórek efektorowych do każdej studzienki płytki dodano 100 μl komórek docelowych znakowanych chromem (opsonizowanych lub nie) w ilości 1x105 komórek/ml. Dzięki temu wyjściowy stosunek komórek efektorowych: komórek docelowych wynosił 100:1 dla PBMC i 20:1 dla komórek NK. Wszystkie anal izy przeprowadzono w dwóch powtórzeniach, a każda płytka zawierała kontrole dla zarówno lizy spo ntanicznej (bez komórek efektorowych), jak i lizy całkowitej (komórki docelowe plus 100 μl 1% siarczanu dodecylu sodu, 1 N wodorotlenku sodu). Płytki inkubowano w 37°C przez 18 godzin a następnie
PL 220 113 B1 supernatanty hodowli komórkowej zebrano przy użyciu układu do zbierania supernatantów (Skatron Instrument, Inc.) i zliczano w liczniku Minaxi auto-gamma serii 5000 gamma (Packard) przez jedną minutę. Wyniki przedstawiono następnie jako procent cytotoksyczności przy użyciu wzoru:
% cytotoksyczności = (próbka cpm - spontaniczna liza)/ (całkowita liza - spontaniczna liza) x 100.
Następnie w celu analizy danych zastosowano czteroparametrowe dopasowanie do krzywych (KaleidaGraph 3.0.5).
Wyniki
Wytworzono różne warianty przeciwciał, które cechowały się inną aktywnością wiązania FcR niż przeciwciało macierzyste. Wyniki wiązania FcR dla różnych uzyskanych wariantów pokazano w Tabelach 6 i 7 poniżej. Dodatkowy wariant, T307Q, wykazywał także poprawione wiązanie FcR w poró wnaniu do przeciwciała macierzystego E27.
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH2
T2S6A(269) 1.91 (0.43) 6 1.14 (0.14) 4 1.41 (0.27) 2.06 (0.66) 1.32 (0.1S)
PL 220 113 B1
D312A{331) 1.50 (0,06) 4 1.01 ¢0.12)
(0.18)
PL 220 113 B1
L309A{328) 0.63 ¢0.18) 4 0.93 ¢0.18) 6 1.13 (0.08) 1.26 (0.12) 1.07 (0.20)
PL 220 113 B1
R301A{320) 0.86
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH3
10Γ0)
PL 220 113 B1
Β17 A378(401)Q 1.32 ¢0.13) 3 1.06 (0.05) 3 1.40 (0.17) 1,45 ¢0.17) 1.19 (0.17)
B36 Q419(450)A 0.76 (0.01) 2 0.97 (0.02) 3 0.68 (0.09) 0.63 (0.07) 0,86 (0.08)
PL 220 113 B1
Oprócz wariantów alaninowych otrzymano różne warianty z substytuc ją nic al ani nową, których aktywność wiązania FcR podsumowano w kolejnej tabeli.
(εθ'0) Ο6Ό ε (ΐΟΌ) 66Ό 86Ό tSżN zxa
PL 220 113 B1
WARIANTY NIEALANINOWE
>“* «Τ3 u 05 !l b. «
US 8
Ή K ii ηι II M II II. H H
C i
C
Οί
U
Uł
O w
(0
0>
cd
T3 m
Τ3
Ή
C
Ί3 <Ł>
>W
-P «3
Xł ro &
CM
O n
U i
B ϋ
II
id ! O ! z i Z ! td ' e? ! z CG > J O J O [ z J td ! o ί z ! a ! z i
1 ί -1·—' I *—« ; ί ł—» 1 <—· ( X—. J ł—i k • Χ-*. J W—k .
CM σι <*** CO 00 o ’-Μ r-ł r—ł . CM CM 00 i r- , en ;
MO MO r- [ r*- , 00 CD 03 CD 00 ! ao 00 I °° 00 00 ao
CM cm ί ™ ! CM CM CM J CM CM 01 CM CM CM ; cm ! ! cm cm : CM
- 1 j r 'Η-Χ 1 w ’ >-» ‘ >—· • * —' 1 *
CTi j ! ω ! in [ in 1 r- 00 00 <3\ σι j O ! θ ! ϊ cj ! TT * MO t
*7 1 l/> (£> <ao '4? MO (O <Ώ MO ! kO Γ ! 0* r- r~ : r~
CM J CM CM CM CM CM CM CM 04 ; cm · CM : cm CM CM CM CM
O | H ί Η I O [ Q [ ω 1 X tC □C J ω { td ; Q 1 Q ] Id i ω ί « ; Z [
CM | K£> 1 1 t -«j· 1 r- 1 OO J <J\ 1 1 co t σ> t i 1 1 1 co i i 1 ττ | 0- t m t
CM 1 r- ί *η I Łf) I »n i CO 1 Ti· lTi C ί Φ F kD Ł CM 1 PO 1 CM 1 CM 1 <£· 1 MO 1
CM 1 *“ł I CM 1 Ή 1 rH ! rH ί OD 00 00 i Ά 1 i—t ! σ» t σ\ F CM 1 CM | Ή | <—1 1
PL 220 113 B1
D280(295)N 1.26 (0.07) 1.38 (0.04) 1.13 (0.13)
CO j o 1 W 1 2 l O j O> [ CO ! o ! O ! w ! w ! 01 i o w t π J o I 7 1 a 1 °
·»»» ·
in J o ! o ! O i o ! CO ! Cl ! co i r- Γ* i r ! ί 1 ° ί <7» <n ! ; o 1 O
<n o ! o ί o ! o « o o ; o o o J ° r o O O O 1 ł—t
CM co ! 1 Cl i co J co [ co [ CO J CO ! i co ! <*> I co • co Γ0 co i i co i !2
i ł_. ·»—* ΊΜΤ *** 1 ·«* • ·—> l *“ *“*
o i co ! co ! co ! co ! K0 J \D ’ C£> ! o ! o ! o o o ! <N CM ! CM ! ! CO ! ™
00 i a> i <*> <*> co [ co ! co i 00 T CT> σ\ 431 <5*3 σ* σ»
CM J CM i CM 1 <M ! CM cm , CM CM , CM CM 1 CM CM CM CM
Q [ Id J id i ω 1 Id J Z [ 2 J z i & ! i ! * ! 1 02 1 oi i al l 02 i Id j ta
1 <Xł | V£> 4 ί Γ 1 1 i oa l 1 cft i 1 1 i r- i i CO 1 I 1 1 1 ί 1 1 1 Γ* 1 1 1 1 i i 1 1 «r 1 *A
1 CM 1 cm 1 CM 1 CM 1 ΓΟ 1 co i co i rO 1 ιΛ ł r* ί 00 1 r- 1 O 1 r-1 | CM I co 1 *r i **
rd | CM 1 CM t CM 1 CM 1 CM 1 CM I CM > i r- i r* I C~ I «-Μ i ao i 00 1 ao I 00 ł 4—ł 1 ΓΜ
147 E293(310)K 1.13 (0.04) 1.31 ¢0.17)
PL 220 113 B1
173 E294(311)Q 1,01 0.95
Q X s o B- 55 > -4 e- to to s o ω j to to o to z
ł *-% , »*»» 1 . ** *·«· 1 —·». *W *—- •—w 1
T“ł J n t0 r* ! f· J r* Γ* J r* CM CM r- to to to to { to t-d i rd - rd rd
w ! t-d r-d t-d . rd 1 Td . rd ‘ t-i CM CM ΓΟ <0 <0 m <0 ! 40 *9· 'O* M1 dr
<0 j <0 C0 «0 (0 ’ 10 f0 ] r0 <0 <0 m <0 <0 (0 <0 (0 <0 <0 <0 C0
·_- *—* * - 1 1 *—· ·—· J ---- ·—* «— - { *-* ··»* j -«e· J *— ***·
m· i ko KO ! 00 ! 00 J 00 <» to en C0 to Gł o O O CM CM CM CM
to σι to ; to to ! to to to o o rd CM CM CM CM CM CM CM CM CM
cm : CM cm CM CM 1 cm CM CM m : f0 <0 <0 m C0 <0 , i0 <0 <0 <0 <0
to } >d ! W [ ω j w J W [ to > [ > N to to to to i to to ’ to [ to to
i 10 ko i to ł to O 1 «—ł r- CM CM *3 Ł0 1 10 10 1 C£> 1 KO C-
r— i 00 00 1 O 1 ·-1 1 CM 1 rd 1 ł—4 10 1 »0 td r· O O O ( <0 Ł0 1 10 1 O O
*h i ed rd ] r~ i Γ~ 1 Γ* 1 CM 1 CM rd 1 H CM t-d CM CM CM 1 CM ed I I-d i CM CM
PL 220 113 B1
Z O 1 hi ω ł co 1 z 1 1 σ i | Cl 1 | ω 3 | w 1 | o t 1 Q 1 | h; (O z 1 | ω I ] hi 1 | σ i ] z CO 1 | z
1 1 ,Λ 1 1 i—. i—» 1 »—» 1
PO 1 po 3 PO co 1 MO ł uo 1 UD 1 Ifi 1 MO 1 | CD 3 CD CO o o o o 1 ] (N CN CN 1 I CN
T ! 1 'T *r ł T 1 ’Τ 1 M· Γ •*3· 1 *3· 1 I T <T =7 1 ςρ md MO MO MD I cn j in UD liD
cd 1 PO 1 n PO 1 co 1 co 1 CO 1 PO 1 1 PO l 1 PO PO r i PO PO co PO i I PO 1 | n ) CD 4 PO PO PO
1 5 1 1 —-' ·—' 1 —· k—* I — »-* 1 i *-' | •w· 1
f 1 ^r 1 CD ł MD 1 MD 3 MD 1 M> i Γ 1 r~ 1 I O 1 ( o «—1 1 I r-M 1 I r-t 1 1 CD 1 I PD PO | PO
(N 1 CN 1 CN CN 1 CN 1 <N 1 I CN 1 I CN 1 I CN 1 I <N 1 CN 1 1 ro J PO <0 PO 1 | co 1 CO > | PO t | PD PO | PO
CD i Π 1 PO co f co [ PO CO PO 1 CO 1 ro ΓΟ PO <o n PO PO 1 PO ł PO i PD CD i o
co i 1 σ) 1 1 CO (Z) t 1 hi 1 1 hi I 1 hi I 1 hi { 1 hi 1 ł i 1 < r < 1 a, cu 1 1 CU 1 CU 1 1 ω J 1 ω ω 1 1 w
o I I ^r ł l uo v£> 1 1 a? i 1 <51 1 1 o 1 1 rH 1 1 CN I 1 rH ł 1 od 1 1 KD 1 1 r~ co Ch 1 1 o 1 1 PO 1 1 w 1 1 CN PO ł ł CN
r—) i cH 1 t-M «—ł 1 o 1 o 1 ·—1 I r-· 1 H 1 CO 1 uo 1 ch 1 co 03 1 o 1 o 1 1 ςτ TT 1 u0
CN 1 CN 1 CN CN I CN 1 CN 1 C4 OJ 1 CN 1 r—4 1 c-< I r-M 1 «Ή r-C <—4 1 CN 1 CN 1 <-4 1 <—1 rH [ r-4
153 E333(352)R 0.75 (0.04) 0.66 (0.03) 0,84 (0.05)
PL 220 113 B1
154 E333(352)D
o j O ! * i ° 2 ω ! ω 1 Q Σ >< X > i Ο 1 * Η
1 . » 4 ·—- 1 1 r— 1 ι ' 1 *“* 1
<M J σ') ! ! £*) ! στ ! στ στ στ <*> στ [ στ ΧΓ
in lT5 ! 1 ifT στ m η σ> «η η
στ j σι 1 ! *** J σι j στ στ ; στ [ σι ! 1 στ [ m ! ! <2 !
1 1 •w
στ ! 1* μ* ! * •‘T* ; φ xr ! •σ : -σ ι *3* I ! η ! “> ! στ
σι ; en <*> σ> στ σι ϊ σι σι σι σι I <*>
στ ’ rn στ στ σ> ; στ ' σι <*Τ σι σι Ρ σι
u j ! * ! i * ! [ ! id 1 id [ id ! ί 5d J id 1 I J Η ι
1 co 1 στ l 1 LO 1 1 ł I 1 Γ- i CO ΐ 1 ι στ ι ι ο I i Ο ! r—< 1 <Μ | ί σι ι ο 1 I rd 1 1 rd ’τ 1 ι ιη ι ι σι
r* i i σ> i στ i n j στ i στ ι f στ f στ ι <η ι στ ι C\l 1 <Μ ί Γ~· στ ι στ I X
d 1 H 1 «-d i T-* J td i »—I 1 rd 1 rd { τ—ί ί rd 1 ¢-< ϊ rd | CM 1 <Μ 1 rd rd i xd 1 CM
Kolejna tabela przedstawia aktywność wiązania z FcR różnych wariantów łączonych.
PL 220 113 B1
WARIANTY ŁĄCZONE
247 S267(280)A 1.60 (0.18) 1.72 (0.13)
R255(268)A
PL 220 113 B1
OD ί ! ! γ- ί ! ! ή [
Ο I ι 1—1 ί ο ! ο ι i *-*
. * , «
ο } ο 1 ° ί ° ! ο 1 ° I ι 1 °
·*-* 1 1 1 ί 1 1 1 ***
5Γ ί ! r- ! 00 ί 04 ! σ\ ί 00 ί
ιΛ 10 ι 1 σ\ ί
♦ ϊ * ; *
< < < «ΐ << rt < <ε <
ο-w .»->. ζ—«. Ζ-». Z-* , a-*» χ-\ ζ«·
Ο Ul ο m ο ο Ο Α ιΠ φ
σο σι οο ; <30 <Μ ί GD Γ σι \ΰ
<\ι ηι 1 οι ; <μ m ; 04 ΟΙ CM 04
«·%»· *»* ~—' -w.» '•w·' -**
Γ* ο ! Γ** 04 ! Γ* C! ί Γ- 00 ο σ>
kO οο ί Γ* i ίΡ <Γ J ιο ιη 00 ιΛ
Οί 04 1 ™ οι : οι <ν : 04 Ο| Ο» 04
w ο i ω J σι ω ; (Λ ω Ο <£
οο ί ί ο I ι ι «-< I
φ ι »η I m ι to
ΟΙ 1 <Ν 1 ΟΙ ί 04
σ> ; i ί 04
! *-* ł Λ
—* [ r-ł 1
Ch r- o 1
* 1 ’
ο ί <h : o I °
·*«* * 1 ** j
ιΠ ! 1P ! r-1 !
tn t * ° i <*·
• . Ol J ·
CO j r-l r-1 i
*:*: ! 1 < < < j << < 1 } < <
#—s . . z**·. z*·*
tn in J *o tn tp [ tn co tn in
o to J O tO 04 J O Ol ! to o
-θ’ -5Ϊ- T* CO [ ; o
—* ·— ’ -RR* »R. ’ «—- '~-* ’ —· 'W-Z
o ! o *r o* ! o σι ! 00
00 ro co m o 1 oo o m co
co ; ro xr co : nn «r oi
ω τζ · Ul 2 H { 01 u } 2
1 σι i 1 O 1 r-ł i 1 Ol
t£> f θ' 1 r- 1 c-
04 1 Ol 1 Ol 1 OJ
PL 220 113 B1
Dyskusja
Badanie to obejmuje całkowite mapowanie ludzkiej IgG1 względem FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. Przedstawiono skanowanie alaniny dla wszystkich aminokwasów ludzkiego Fc IgG1 (CH2 i CH3 domen) eksponowanych na rozpuszczalnik, w oparciu o strukturę krystaliczną ludzkiego Fc (Deisenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). Każdy eksponowany aminokwas w CH2 oraz CH3 został indywidualnie zamieniony na alaninę, a wariant IgG testowano względem wszystkich 5 ludzkich receptorów; oceniano wszystkie warianty przy użyciu humanizowanej IgG1 anty-IgE, E27, jako polipeptydu macierzystego. FcγRI oraz FcRn to receptory o wysokim powinowactwie, a monomer IgG mógł być oceniany w tych analizach dla dwóch z tych dwóch receptorów. FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA to receptory o niskim powinowactwie i wymagają zastosowania kompleksu immunologiczn ego. Zatem w przypadku FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA zastosowano test ELISA, w którym wstępnie utworzone heksamery, złożone z trzech cząsteczek E27 anty-IgE oraz trzech cząsteczek IgE, związano do FcγR, i jako reagent do detekcji użyto anty-ludzkie Fc IgG-HRP, albo lub białko G-HRP. Aby zwiększyć wiązanie heksamery te można połączyć w multimery przez dodanie ludzkiego VEGF (używając IgE anty-VEGF). Heksamery wiążą się do FcγR o niskim powinowactwie znacząco lepiej niż monomery IgG, multimery wiążą lepiej niż heksamery (Figury 15A oraz 15B). Zastosowano kompleksy heksametryczne, ponieważ zapewniały one wystarczające wiązanie i wymagały mniej IgG. Innymi reagentami, które można zastosować są kompleksy wytworzone przy użyciu innych kombinacji przeciwciało:antygen pod warunkiem, że w przypadku przeciwciała antygen będzie zawierał dwa identyczne miejsca wiązania na cząsteczkę. Przykładowo, VEGF zawiera dwa miejsca wiązania na dimer VEGF dla anty-VEGF A.4.6.1 (Kim i inni. Growth Factors 7: 53 (1992) oraz Kim i inni. Nature 362: 841 (1993)). Multimery VEGF: anty-VEGF wiązały się także do FcγRIIA oraz FcγRIIIA o niskim powinowactwie (Figury 16A i 16B).
Po przeprowadzeniu kompletnego skanowania alaniny stwierdzono występowanie kilku klas wariantów alaninowych. Niektóre warianty wykazywały obniżone wiązanie z wszystkimi FcγR (G14, Figura 17), podczas gdy inne warianty wykazywały zredukowane wiązanie tylko z jednym FcγR (G36, Figura 17), poprawione wiązanie tylko z jednym FcγR (G15, G54, G55, Figura 17), albo równoczesną redukcję wiązania z jednym FcγR wraz z poprawą wiązania z innym (G16, Figura 17).
Pojedyncze warianty alaninowe łączono ponadto z pojedynczymi wariantami regionu Fc, np. połączenie S298(317)A z K334(353)A poprawiało wiązanie z FcγRIIIA bardziej niż sama S298(317)A lub K334(353)A (Figury 18A oraz B, porównaj warianty 36, 55 oraz 109 w Tabeli 6 i 9) (numery reszt w nawiasie są numerami według indeksu EU zgodnie z Kabat). Podobnie, przez połączenie S298(317)A z E333(352)A poprawiono wiązanie z FcγRIIIA w porównaniu do samej S298(317)A lub E333(352) (porównaj warianty 36, 53 i 107 w Tabelach 6 i 9).
Wyselekcjownowane warianty IgG testowano także pod kątem wiązania FcγR transfekowanych do komórek ssaczych. Zewnątrzkomórkową cześć łańcucha α ludzkiego FcγRIIIA transfekowano do komórek CHO przy użyciu łącznika GPI, podczas gdy pełnej długości ludzki receptor FcγRIIB transfekowano do komórek CHO. Dla testowanych wariantów wzorzec wiązania do komórek był taki sam jak wzorzec wiązania białko: białko w analizie ELISA (Figury 18A-B i 19A-B).
Jednym z zastosowań tych wariantów jest poprawa funkcji efektorowych ADCC przeciwciała. Można to osiągniąć przez modyfikację aminokwasów regionu Fc jednej czy większej ilości reszt, pr owadzącej do poprawy wiązania do FcγRIIIA. Poprawione wiązanie do FcγRIIIA doprowadziłoby do poprawy wiązania przez komórki NK, które mają tylko FcγRIIIA i mogą pośredniczyć w ADCC. Wyselekcjonowane warianty alaninowe, które miały albo zredukowane wiązanie z FcγRIIIA (warianty 17, 18, 34; Tabela 6), albo nie miały wpływu na wiązanie FcγRIIIA (odmiana 31, Tabela 6), albo które miały zwiększone wiązanie z FcγRIIIA (wariant 30, 36; Tabela 6) testowano w analizach in vitro przy użyciu ludzkich PBMC jako komórek efektorowych. Ze względu na to, że komórki docelowe były komórkami SKBR3 z nadekspresją HER2, to warianty Fc IgG użyte w tej analizie wytworzono przez substytucję domen VH/VL E27 anty-IgE odpowiednimi domenami z przeciwciała anty-HER2; HERCEPTIN® (ludzkie Ab4D5-8 w Tabeli 1 z Carter i inni, PNAS (USA) 89: 4285 (1992)). Wzorzec ADCC wykazywany przez warianty był skorelowany z wzorcami wiązania z FcγRIIIA (Figury 20 oraz 21). W szczególności wariant wykazujący większą poprawę wiązania z FcγRIIIA w analizach białko:białko, wariant 36S298(317)A, wykazywał również poprawę ADCC w porównaniu do dzikiego typu HERCEPTIN® w ilości 1,25 ng/ml (Figura 21).
PL 220 113 B1
P r z y k ł a d 5
Wiązanie wariantów Fc do polimorficznych receptorów Fc
W populacji ludzkiej stwierdzono występowanie wariantów allelicznych kilku ludzkich FcγR. Warianty te wykazywały różnice w wiązaniu ludzkiej oraz mysiej IgG, a wiele badań skorelowało wyniki z obecnością specyficznych wariantów alleicznych (dla przeglądu zobacz LehrnBecher i inni, Blood 94 (12): 4220-4232 (1999)). W kilku badaniach badano dwie postaci FcγRIIA, R131 oraz H131, oraz ich związek z wynikami klinicznymi (Hatta i inni. Genes and Immunity 1:53-60 (1999); Yap i inni Lupus 8:305-310 (1999); jak również Lorenz i inni European J. Immunogenetics 22:397-401 (1995)). Obecnie badane są dwie postaci alleliczne FcγRIIIA, F158 oraz V158 (Lehrebecher i inni, supra; i Wu i inni. J. Clin. Invest. 100 (5):1059-1070)). W przykładzie tym wyselekcjonowane warianty IgG testowano względem tych obu postaci allelicznych FcγRIIA i FcγRIIIA. Analizy wiązania receptora Fc przeprowadzono zasadniczo tak jak w powyższych przykładach. Jednakże dla FcγRIIIA-V158 przeprowadzono zarówno (a) test wiązania receptora o niskim powinowactwie z przykładu 1 (w którym analizowano wiązanie kompleksu IgG do FcγRIIIA-V158); oraz (b) test wiązania FcγR o wysokim stopniu powinowactwa z przykładu 4 (w którym analizowano wiązanie monomeru IgG do FcγRIIIA-V158). Wyniki badań podsumowano w tabeli 10 poniżej.
PL 220 113 B1
WIĄZANIE WARIANTÓW Z RECEPTORAMI POLIMORFICZNYMI FcyRIIA 1 FcyRUIA
177 K290(307)G 1.07 1 1.23 1 1.11 1 2.29
PL 220 113 B1
σ τ γ-1 Ο Γ~ CM Ο γο ’ I Ρ « r™ł , Ο | 1 rH ! Γ | Ο j CM στ ο ο τ—1 <Μ Ο co si s ! t 1— J '-i· J O [ CO W r~1 O o· in o CM CO O O ιΟ 03 O LD σι τΉ O Γ- ΟΟ o <—( t—1 O 1-ł 1 1 1 1 1 1 < J ł i i 1 l i—ł r- co o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 CM rH 00 O O o *f> o 1 1 l 1 i 1 1 1 1 1 1 1 1 M* r- r-ł O Γ- ΟΟ O
rt te ! Λ o ί z σ rt σ [ ł O 1 l rt 1 I ϋ
a-'· ·*—» 1 X—. 1 —» I
σ στ στ Ch [ στ o T^ł i—ł | i—ł | r— | r-
ο ο Ο o o r—1 r-t rM i rt | r-H | t-H
CO co [ C0 co co co CO co CO 1 co [ CO
—·
<~\Ι CM ! <Μ CM ! CM co | co co
στ σι στ στ στ στ στ σ σ | σ | στ
CM 04 CM CM CM CM CM CM CM | CM | (M
PŚ Οί { Cd o; j a. W ŁJ ω 1 ω 1 00 1 09
1 I 1 1 M* co 1 1 ΧΓ 1 1
c—1 Ο 1 CM 1 co 'O* CO r- ł r- 1 VO 1 O
co 03 | 00 CO 1 OÓ r-C co ł—ł 1 J—i 1 CO 1 r*
co j i r-l i CM j 2 i 1 CM J i rH j o ; 2 ! CO kO o o ! i ! 2 ! ! ° I 1 1 «σ' CM t-f o ! - i ;E; 1 2 ί 1 1 m ] 1 CD ! O 2 i «4· 00 o o ] -3* j isi :si o r—( CM r-ł O
<-ł ί □□ ! r-ł 1 M* ! CM 1 στ i uo ’ ΓΟ 1 | CM 1 | CM
rr J O f—4 1 1 r—1 r-ί 1 <—i ! r-ł 1“< i ł-1 1 OT
O J o j o 1 1 1-1 i H 1 1 r-1 j i-1 1 1 f—1 1 1 O
1 1 z, J > 1 1 I 1 .-3 ! rt 1 1 I rt i rt ! 1 ł rt 1 i rf
t- ! r— i Γ- 1 r- ! «3· 1 CO ! ! to 1 I στ | CM
1-4 r—ł 1 ·“* CM 1 CM ! ro co co I uo
CO ! co { CO 1 <*0 J CO CO j co j co 1 co | co
1 —
CO ! od ; 00 1 CO ! lD 1 r— : tn 5 r— 1 o 1 co
σ στ στ 1 στ O 1 o r~ł i «—, I CM co
CM CM (Μ 1 CM CO 1 co CO co I CO co
w i CO 00 1 1 co > 1 h ; S , te 1 te 1 Cd
1 1 l 1 co 1 1 1 σ i 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1-4 1 <M 1 r—ł 1 r—1 | o 1 r—i 1 iA 1 k£> 1 00 1 a1
Γ 1 r- i CM 1 CM 1 f vr i Μ· 1 rtT 1 ^r 1 iD
PL 220 113 B1
!
CM uO o o o r- o 1 1 1 1 l ! 1 1 i 1 I 1 1 1 CM o o co UO o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I 1 1 J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 I ł CM J 1 i O J o j O J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i—1 C' OD o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i 1 1 1 C- uo rd o ł~ł o r-1 I 1 ( I 1 ! 1 i 1 i 1 ! 1 i uo σ> o o UO f-1 1—1 1 l [ 1 1 Γ Γ 1 i 1 1 1 1 1 i rd ! W | S ! 1 CD f O rd ] Γ rd r-1 o c—I rd
o 1 1 2 1 1 co J 1 f « J es ! o 1 1 I u 1 1 < 1 | CXJ 1 l σ •z
,— —I —. r—'
CM 1 CM 1 CM t CM ! CM CM CM ' co | co CO 1 co
uo 1 uo uo uo uo uO JO JO JO UO UO
ro 1 co 1 co I CO ] CO j CO co CO co CO j co
1 1 *—'
<O 1 co 1 co 1 co ί CO ! CO 1 co ef 1 ’Τ
co 1 co i co co CO CO CO Γ0 CO J co CO
CO 1 CO co P0 co ; CO co co co CO CO
ω 1 1 Cd 1 1 Id ł 1 ω ; u ] ω 1 td ! y 1 i y
1 1 CM 1 1 co 1 i 1 CM ί 1 co 1 sr 1 1 co ł 1 1 JO i i VP i Γ'
τ}· 1 <r 1 «Τ 1 UO 1 uo i CO 1 r~ i UO 1 co 1 co i co
1 f—1 1 w 1 1—f I rd I t—4 1 t—i i UO 1 C—1 1 rd 1 i—i
CO i UO [ rd rd rd ί ! co [ rd
,__ f _ 1 _ 1 _ i 1 1 1 1 1
rd ! ! °o ! co ! rd f
«—1 ! 1 ° 1 o 1 1 t 1 1 <-d
O 1 ° 1 ° 1 O [ 1 { 1 1 O ‘
1 1 ’ i i 1 1 f 1 I Ά
I—1 ! ! kD i ko ! CD J ! cn ] co ! UO
o j r~ I 10 [ o i O j Φ I ° 1 0 ' o
1—· ! ° I ° ! o ! rd j rd j O ! i rd [ i—ł
ω ! ω ! α ! o j s | > J 3 > j dl
s 1
CO ! ! m ! CO ! co co co CO co ! co
uo “0 JO UO uo UO ‘O UO UO
co co co co CO i 00 i co j co
-r
rr 3 rr TT I * ! 3 TT
CO <Ό o co CO CO CO ^0 CO CO
CO CO CO CO CO ro CO CO CO CO
1 « 1 id J id ! id j id ! κ ί id J
00 1 i 1 I 1 O 1 1 co | 1 O 1 1 rd 1 CM 1 1 i CO 1 1 O 1 rd
co 1 co 1 i r- 1 CO 1 <n i co 1 co | CM 1 CM
i-d 1 «—1 1 rd ( rd | rd I rd | t—1 i rd | CM 1 CM
PL 220 113 B1
PL 220 113 B1
W przypadku FcyRIIIA wzorzec wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 z FcvRIIIA-V158 o stosunkowo wysokim powinowactwie był taki sam jak do FcyRIIIA-F158 o stosunkowo niższym powinowactwie (postać F158 stosowano w analizie wszystkich wariantów). Warianty IgG1, które wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIIA-F158 wykazywały także poprawione wiązanie z FcyRIIIA-V158, chociaż poprawa nie była tak wyraźna. W przypadku FcvRIIA-R131 (stosowanego do analizy wszystkich wariantów) oraz FcyRIIA-H131 wzór wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 nie wykazywał wyraźnych różnic. S267(280)A, H268(281)A oraz S267(280)A/H268(281)A wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131 w porównaniu do natywnej IgG1, ale nie z FcvRIIA-H131. Przeciwnie 3267(280)G wykazywał poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131, ale zmniejszone wiązanie z FcvRIIA-H131 (Tabela 10). Inne warianty wiązały się podobnie z następującymi postaciami allelic znymi FcyRIIA: V305(324)A, T307(326)A, N315(324)A, K317(336)A oraz K320(339)A.
PL 220 113 B1
Lista sekwencji <11C> Genenrech, IńC.
<12C> ariant tnacieizy siego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (Fc-R), polipeptyd zawierający- wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozy cja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposob otrzymywania w-anantu regionu Fc <130 P1726RIPCT <U1> 2000-01-14 <ise> us sd/iis,ca3 <153» 1399-01-15 iiia> ii <210> 1 <211» 213 <212» PRT
Setawnej»«tjctw <220» <221» <22 2> <22 3»
Se*w®(K}a sibcisi
1-213
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <400» 1
Aap l Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15
5 10
Gly Asp Arg Vsl Thr ile Thr Cys Arg Ala iSer Lys Pro V<X Aao
20 25 30
Gly Glu Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly
35 40 45
Lys Ala Pro L/S Leu Leu Ile Tys Ali Ala Ser Tyr Leu Gi5ł Ser
50 55 60
Gly vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Aap Phs
«3 70 35
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala the Tyr
80 35 90
Ty i Cys Gin Gin Ser 8ia Glu Ajp Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly
95 too 135
Thr Lys val 51« 11« Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Vai Phe
110 115 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Set
125 130 135
Val Val Cys L&U. Leu As Λ Α3Π Phe Tyr Pro Acg Ala Lyo Val
140 145 150
Gira Trp Lys Vai Asp Asn Al A Leu Gin Ser OŁy Ser Gin Glu
1.35 ISO 155
Ser Val Thr Glu Gin Asp Sar Lys Asp Ser Thr Tys Ser Leu Ser
170 1?5 180
Ster Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala As;» Tyr Lys His Ły’ Val
185 ISO 195
PL 220 113 B1
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 218 <210 2 <211> 451 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <n?n>
Sekwencja sztuczna <221>
<222> 1-451 <223>
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <40Q> 2
Glu Val Gin 1 Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gin Pro Gly 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr
20 25 30
Ser Gly Tyr Ser Trp Asn Trp Ile Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Lys Tyr Ser Gly Glu Thr Lys Tyr
50 55 60
Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
65 70 75
Lys Asn Thr Phe Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser His Tyr Phe Gly His
95 100 105
Trp His Phe Ala Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
110 115 120
Ser Ala ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
125 130 135
Ser Lys ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
140 145 150
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
155 160 165
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser
17 0 175 180
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
185 190 195
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn val Asn His Lys Pro
200 205 210
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Aso
215 220 225
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
230 235 240
PL 220 113 B1
Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 Phe Pro Pro lys 250 Pro Lys Asp Thr Leu 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin
305 310 315
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
320 325 330
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
335 340 345
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
350 355 360
Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
365 370 375
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin
380 335 390
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
395 400 405
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
410 415 420
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
425 430 4 35
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
440 445 450
Lys
451 <210 3 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 3
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
PL 220 113 B1
70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218 <210> 4 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 4
Pro 1 Ala Pro Glu Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu A3p Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
PL 220 113 B1
Leu Thr Cys Leu Val 140 Ly3 Gly Phe Tyr Pro 145 Ser Asp Ile Ala Val 150
Glu Trp Glu Ser Asn 155 Gly Gin Pro Glu Asn 160 Asn Tyr Lys Thr Thr 165
Pro Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Phe 175 Phe Leu Tyr Ser Lys 180
Leu Thr val Asp Lys 185 Ser Arg Trp Gin Gin 190 Gly Asn Val Phe Ser 195
Cys Ser Val Met His 200 Glu Ala Leu His Asn 205 His Tyr Thr Gin Lys 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 218 <210> 5 <211> 217 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 5
Pro 1 Ala Pro Pro Val 5 Ala Gly Pro Ser Val 10 Phe Leu Phe Pro Pro 15
Lys Pro Lys Asp Thr 20 Leu Met Ile Ser Arg 25 Thr Pro Glu Val Thr 30
Cys Val Val Val Asp 35 Val Ser His Glu Asp 40 Pro Glu Val Gin Phe 45
Asn Trp Tyr Val Asp 50 Gly Val Glu Val His 55 Asn Ala Lys Thr Lys 60
Pro Arg Glu GlU Gin 65 Phe Asn Ser Thr Phe 70 Arg Val Val Ser Val 75
Leu Thr Val Val His 80 Gin Asp Trp Leu Asn 85 Gly Lys Glu Tyr Lys 90
Cys .Lys Val Ser Asn 95 Lys Gly Leu Pro Ala 100 Pro Ile Glu Lys Thr 105
Ile Ser Lys Thr Lys 110 Gly Gin Pro Arg Glu 115 Pro Gin Val Tyr Thr 120
Leu Pro Pro Ser Arg 125 Glu Glu Met Thr Lys 130 Asn Gin Val Ser Leu 135
Thr Cys Leu Val Lys 140 Gly Phe Tyr Pro Ser 145 Asp Ile Ala Val Glu 150
Trp Glu Ser Asn Gly 155 Gin Pro Glu Asn Asn 160 Tyr Lys Thr Thr Pro 165
Pro Met Leu Asp Ser 170 Asp Gly Ser Phe Phe 175 Leu Tyr Ser Lys Leu 180
Thr Val Asp Ly3 Ser 185 Arg Trp Gin Gin Gly 190 Asn Val Phe Ser Cys 195
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Sec
PL 220 113 B1
200 205 210
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 217 <210> 6 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 6
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin
35 40 45
Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Ile Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218
<210> 7 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400 7
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 15 10 15
PL 220 113 B1
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 35 40 45
Ehe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr 50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Ly3 Val Ser Α3Π Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glx Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Α3Π Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
215 218 <210> 8 <211> 215
<212> PRT <213> Mus musculus
<400> 8 Thr Val 1 Pro Glu Val 5 Ser Ser Val Phe Ile 10 Phe Pro Pro Lys Pro 15
Lys Asp Val Leu Thr 20 Ile Thr Leu Thr Pro 25 Lys Val Thr Cys Val 30
Val Val Asp Ile Ser 35 Lys Asp Asp Pro Glu 40 Val Glu Phe Ser Trp 45
Phe Val Asp Asp Val 50 Glu Val His Thr Ala 55 Gin Thr Gin Pro Arg 60
Glu Glu Gin Phe Asn 65 ser Thr Phe Arg Ser 70 Val Ser Glu Leu Pro 75
Ile Met His Gin Asp Cys Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
PL 220 113 B1
85 90
Val Asn Ser A.La Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 95 100 105
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 110 115 120
Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 125 130 135
Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gin 140 145 150
Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Ly3 Asn Thr Gin Pro Ile
155 160 165
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
170 175 180
Gin Lys Ser Α3Π Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
185 190 195
Leu His Glu Gly Leu His Asn Hi3 His Thr Glu Ly3 Ser Leu Ser
200 205 210
His Ser Pro Gly Lys
215 <210> 9 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9
Pro 1 Ala Pro Asn Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Ser Pro Ile Val 30
Thr Cy3 Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Giu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Leu Arg Val Val Ser 75
Ala Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ala Pro Ile Glu Arg 105
Thr He Ser Lys Pro 110 Lys Gly Ser Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Val Leu Pro Pro Pro 125 Glu Glu Glu Met Thr 130 Lys Lys Gin Val Thr 135
Leu Thr Cys Met Val 140 Thr Asp Phe Met Pro 145 Glu Asp Ile Tyr Val 150
PL 220 113 B1
Glu Trp Thr Asn Asn 155 Gly Lys Thr Glu Leu 160 Asn Tyr Lys A3n Thr 165
Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp dy Ser Tyr Phe Mec Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
200 205 210
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
215 218
<210> 10 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculu9
<400> 10 Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
1 5
Pro Asn Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Thr Pro Lys Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe Val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Glu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Ile Arg Val Val Ser 75
His Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn J 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ser Pro Ile Glu Arg 105
Thr Ile Ser Lys Pro 110 Lys Gly Leu Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Thr Leu Pro Pro Pro 125 Ala Glu Gin Leu Ser 130 Arg Lys Asp Val Ser 135
Leu Thr Cys Leu Val 140 Val Gly Phe Asn Pro 145 Gly Asp Ile Ser Val 150
Glu Trp Thr Ser Asn 155 Gly His Thr Glu Glu 160 Asn Tyr Lys Asp Thr 165
Ala Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Tyr 175 Phe Ile Tyr Ser Lys 180
Leu Asn Met Lys Thr 185 Ser Lys Trp Glu Ly3 190 Thr Asp Ser Phe Ser 195
Cys Thr Asn Val Arg His 200 Ile Ser Arg Ser Glu Pro Gly Leu Lys Asn ' 205 Gly Lys Tyr Tyr Leu Lys Lys 210
PL 220 113 B1
215 218 <210> 11 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400 11
Pro Pro Gly i ' Asn Ile 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His
35 40 45
Val Ser Trp Phe Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr
50 55 60
Gin Pro Arg Glu Ala Gin Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Ala Leu Pro Ile Gin His Gin Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe
80 85 90
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg Ala Gin Thr Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gin Met Ser Lys Lys Lys Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser Glu Ala Ile Ser Val
140 145 150
Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gin Asp Tyr Lys Asn Thr
155 160 165
Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gin Gly Glu Ile Phe Thr
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gin Lys
200 205 210
Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys
215 218

Claims (44)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc ludzkiej IgG1 który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych od około 1,5-raza do około 100-razy skuteczniej, lub wiąże receptor FcyRIII z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239,
    248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285,
    286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327,
    329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437,
    438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  2. 2. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje przeciwciało.
  3. 3. Wariant według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
  4. 4. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 3, znamienny tym, że wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  5. 5. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 4, znamienny tym, że ponadto wiąże FcyRII z niższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  6. 6. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 5, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w domenie CH2 regionu Fc.
  7. 7. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 6, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
  8. 8. Wariant według według jednego z zastrz. 1 do 7, znamienny tym, że zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  9. 9. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  10. 10. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  11. 11. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256,
    258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294,
    295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335,
    337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  12. 12. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 298, 301, 303, 322, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  13. 13. Polipeptyd według zastrz. 11 albo 12, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI.
  14. 14. Polipeptyd według zastrz. 13, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  15. 15. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 14, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  16. 16. Polipeptyd według zastrz. 15, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
    PL 220 113 B1
  17. 17. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 16, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie z FcyRIII.
  18. 18. Polipeptyd według zastrz. 17, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  19. 19. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  20. 20. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRIII.
  21. 21. Polipeptyd według zastrz. 20, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  22. 22. Polipeptyd według zastrz. 21, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  23. 23. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII.
  24. 24. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 267, 268, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  25. 25. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII.
  26. 26. Polipeptyd według zastrz. 25, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  27. 27. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania ludzkiego noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 307, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  28. 28. Polipeptyd według zastrz. 27, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn.
  29. 29. Polipeptyd według zastrz. 28, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 252, 253, 254, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  30. 30. Polipeptyd według zastrz, 27, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcRn.
  31. 31. Polipeptyd według zastrz. 30, znamienny tym, że wykazuje zwiększone FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 256, 265, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  32. 32. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera wariant polipeptydu określony w zastrz. 1 i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
  33. 33. Kompozycja według zastrz. 32, znamienna tym, że jest sterylna.
  34. 34. Wyizolowany kwas nukleinowy, znamienny tym, że koduje wariant polipeptydu określony w zastrz. 1.
  35. 35. Wektor, znamienny tym, że zawiera kwas nukleinowy określony w zastrz. 34.
  36. 36. Komórka gospodarza, znamienna tym, że zawiera wektor określony w zastrz. 35.
    PL 220 113 B1
  37. 37. Sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, znamienny tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną w zastrz. 36 tak, że uzyskuje się ekspresję tego kwasu nukleinowego.
  38. 38. Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
  39. 39. Zastosowanie wariantu polipeptydu określonego w zastrz. 1 do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
  40. 40. Sposób otrzymywania wariantu regionu Fc IgG1 o zwiększonym powinowactwie wiązania receptora FcyRIII lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w porównaniu z macierzystym polipeptydem, znamienny tym, że obejmuje etapy, w których:
    a) wprowadza się dwie lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
    b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcyRIII lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
  41. 41. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określenie wiązania wariantu regionu Fc z FcyRIII in vitro.
  42. 42. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcyRIII lub o zwiększonej aktywności ADCC.
  43. 43. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
  44. 44. Sposób według zastrz. 43, znamienny tym, że obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
PL394232A 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc PL220113B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11602399P 1999-01-15 1999-01-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL394232A1 PL394232A1 (pl) 2011-07-04
PL220113B1 true PL220113B1 (pl) 2015-08-31

Family

ID=22364785

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL394232A PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna

Country Status (16)

Country Link
US (4) US7371826B2 (pl)
EP (4) EP2386574A3 (pl)
JP (4) JP2003512019A (pl)
KR (5) KR100887482B1 (pl)
CN (2) CN1763097B (pl)
AU (2) AU778683B2 (pl)
BR (1) BR0008758A (pl)
CA (1) CA2359067C (pl)
ES (1) ES2694002T3 (pl)
HU (2) HU230769B1 (pl)
IL (5) IL144056A0 (pl)
MX (2) MXPA01007170A (pl)
NZ (1) NZ539776A (pl)
PL (3) PL220113B1 (pl)
WO (1) WO2000042072A2 (pl)
ZA (1) ZA200105484B (pl)

Families Citing this family (1821)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2015-08-31 Genentech Inc Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
DE60024436T2 (de) 1999-05-07 2006-08-17 Genentech, Inc., South San Francisco Behandlung von autoimmunkrankheiten mit antagonisten die oberflächenmarker von b zellen binden
US6855493B2 (en) 2000-11-28 2005-02-15 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
ES2727425T3 (es) 2000-12-12 2019-10-16 Medimmune Llc Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
EP1395605B8 (en) * 2001-03-09 2014-12-17 Iterative Therapeutics, Inc. Polymeric immunoglobulin fusion proteins that target low-affinity fcgamma receptors
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
ES2326964T3 (es) * 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20070122406A1 (en) 2005-07-08 2007-05-31 Xencor, Inc. Optimized proteins that target Ep-CAM
US20040132101A1 (en) * 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
AU2003232456B2 (en) 2002-05-30 2009-06-04 Macrogenics, Inc. CD16A binding proteins and use for the treatment of immune disorders
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
CA2495251C (en) * 2002-08-14 2018-03-06 Macrogenics, Inc. Fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
DK2364996T3 (en) * 2002-09-27 2017-02-06 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1562972B1 (en) 2002-10-15 2010-09-08 Facet Biotech Corporation ALTERATION OF FcRn BINDING AFFINITIES OR SERUM HALF-LIVES OF ANTIBODIES BY MUTAGENESIS
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
UA89350C2 (uk) 2002-12-16 2010-01-25 Дженентек, Інк. Гуманізоване антитіло, що зв'язує людський cd20
US7355008B2 (en) * 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
AU2011265460B2 (en) * 2003-01-09 2014-07-17 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
JP2007525149A (ja) 2003-01-13 2007-09-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 可溶性ＦｃγＲ融合タンパク質およびその使用法
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
CN101371924A (zh) 2003-04-09 2009-02-25 健泰科生物技术公司 治疗对tnf-alpha抑制剂应答不充分的患者中的自身免疫病
JP4685764B2 (ja) * 2003-04-10 2011-05-18 アボット バイオセラピューティクス コーポレイション 変異誘発による抗体のＦｃＲｎ結合親和力又は血清半減期の改変
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
KR100973564B1 (ko) * 2003-05-02 2010-08-03 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
PT1631313E (pt) 2003-06-05 2015-07-02 Genentech Inc Terapêutica de combinação para distúrbios de células b
JP5642328B2 (ja) 2003-07-24 2014-12-17 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｎｋ細胞増強化合物を使用する治療抗体の有効性を増大させる方法および組成物
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2004266159A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2545539A1 (en) 2003-10-15 2005-04-28 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
GB0324368D0 (en) * 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
EP2380911B1 (en) 2003-11-05 2018-05-09 Roche Glycart AG Antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
EP2385069A3 (en) 2003-11-12 2012-05-30 Biogen Idec MA Inc. Neonatal Fc rReceptor (FcRn)- binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto
CA2546580A1 (en) * 2003-11-18 2005-06-09 Iconic Therapeutics, Inc. Homogeneous preparations of chimeric proteins
EP1697741A4 (en) 2003-12-04 2008-02-13 Xencor Inc PROCESS FOR PRODUCING PROTEIN VARIANTS WITH INCREASED HOST STRUCTURE CONTENT AND COMPOSITIONS THEREOF
ES2641831T3 (es) 2003-12-10 2017-11-14 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos contra interferón alfa y sus usos
HRP20120702T1 (hr) 2003-12-10 2012-09-30 Medarex Ip-10 protutijela i njihova uporaba
UA86605C2 (ru) 2004-01-12 2009-05-12 Аплайд Молекьюлер Иволюшн, Инк. Антитело, которое содержит вариант исходного человеческого fс-участка
CA2555820C (en) 2004-02-19 2016-01-19 Genentech, Inc. Cdr-repaired antibodies
CA2561264A1 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
ES2403055T3 (es) * 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
US7521542B2 (en) 2004-05-10 2009-04-21 Macrogenics, Inc. Humanized FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
KR100545720B1 (ko) * 2004-05-31 2006-01-24 메덱스젠 주식회사 당화된 면역글로불린 및 이를 포함하는 면역접합체
US20060051345A1 (en) 2004-06-04 2006-03-09 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
KR101335079B1 (ko) 2004-06-21 2013-12-12 메다렉스, 엘.엘.시. 인터페론 알파 수용체 1 항체 및 그의 용도
MX2007000404A (es) * 2004-07-12 2008-03-04 Macrogenics Inc Identificacion de ingenieria de anticuerpos con regiones de fc variante y metodos para usar las mismas.
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
PL2471813T3 (pl) * 2004-07-15 2015-09-30 Xencor Inc Zoptymalizowane warianty Fc
CN101072587B (zh) 2004-07-26 2012-12-26 比奥根艾迪克Ma公司 抗-cd154抗体
WO2006020114A2 (en) 2004-08-04 2006-02-23 Applied Molecular Evolution, Inc. Variant fc regions
WO2006023420A2 (en) * 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Inc. Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
AU2005285347A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CN101087807A (zh) 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
AU2005304624B2 (en) 2004-11-12 2010-10-07 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
KR20070107687A (ko) * 2004-12-31 2007-11-07 제넨테크, 인크. Ｂｒ３과 결합하는 폴리펩티드, 및 그의 용도
ES2710439T3 (es) 2005-01-21 2019-04-25 Genentech Inc Dosificación fija de anticuerpos HER
US8029783B2 (en) * 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
US8444973B2 (en) 2005-02-15 2013-05-21 Duke University Anti-CD19 antibodies and uses in B cell disorders
EP2548575A1 (en) 2005-02-15 2013-01-23 Duke University Anti-CD19 antibodies that mediate ADCC for use in treating autoimmune diseases
JP2008531576A (ja) 2005-02-23 2008-08-14 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｈｅｒ二量体化阻害剤を使用した、ガン患者における疾患の進行までの期間または生存の延長
NZ561883A (en) 2005-03-23 2010-11-26 Genmab As Antibodies against CD38 for treatment of multiple myeloma
US20100104564A1 (en) * 2005-03-29 2010-04-29 Genevieve Hansen Altered Antibody Fc Regions and Uses Thereof
WO2006105338A2 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Xencor, Inc. Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
EP1868650B1 (en) 2005-04-15 2018-10-03 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US11254748B2 (en) 2005-04-15 2022-02-22 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
PA8672101A1 (es) 2005-04-29 2006-12-07 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, métodos y usos
JP5047947B2 (ja) 2005-05-05 2012-10-10 デューク ユニバーシティ 自己免疫疾患のための抗ｃｄ１９抗体治療
EP2161336B2 (en) 2005-05-09 2017-03-29 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
ZA200709956B (en) 2005-05-20 2009-02-25 Genentech Inc Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
JP2008546805A (ja) 2005-06-23 2008-12-25 メディミューン，エルエルシー 最適な凝集および断片化プロフィールを有する抗体製剤
HRP20130400T1 (en) 2005-06-30 2013-06-30 Janssen Biotech, Inc. Anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
AU2006265108C1 (en) 2005-07-01 2013-01-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (PD-L1)
AU2006272204A1 (en) * 2005-07-21 2007-01-25 Genmab A/S Potency assays for antibody drug substance binding to an Fc receptor
RS53318B (sr) 2005-07-25 2014-10-31 Emergent Product Development Seattle, Llc Smanjenje broja b-ćelija upotrebom cd37-specifično i cd20-specifično vezujućih molekula
EP2415483A1 (en) 2005-07-25 2012-02-08 Emergent Product Development Seattle, LLC Single dose use of cd20-specific binding molecules
SI2573114T1 (sl) * 2005-08-10 2016-08-31 Macrogenics, Inc. Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo
AR055137A1 (es) 2005-08-26 2007-08-08 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de union al antigeno modificadas con actividad de senalizacion celular alterada
WO2007041635A2 (en) * 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
JP4860703B2 (ja) 2005-10-06 2012-01-25 ゼンコー・インコーポレイテッド 最適化された抗ｃｄ３０抗体
CA2625664C (en) 2005-10-21 2016-01-05 Novartis Ag Human antibodies against il13 and therapeutic uses
KR20130137716A (ko) 2005-11-04 2013-12-17 제넨테크, 인크. 안질환 치료를 위한 보체 경로 억제제의 용도
EP1957099B1 (en) 2005-11-07 2015-03-25 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CA2629306A1 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
WO2007126439A2 (en) 2005-12-02 2007-11-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of diseases and disorders associated with cytokine signaling involving antibodies that bind to il-22 and il-22r
CA2631327C (en) 2005-12-02 2015-10-13 Genentech, Inc. Her2 binding polypeptides and uses thereof
JP5512128B2 (ja) 2005-12-08 2014-06-04 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー フコシルｇｍ１に対するヒトモノクローナル抗体および抗フコシルｇｍ１を使用するための方法
AU2006326937B2 (en) 2005-12-20 2012-01-19 Cephalon Australia Pty Ltd Anti-inflammatory dAb
DK3219328T3 (da) 2005-12-29 2020-07-13 Janssen Biotech Inc Humane anti-il-23-antistoffer, sammensætninger, fremgangsmåder og anvendelser
ES2526204T3 (es) 2006-01-05 2015-01-08 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-EphB4 y métodos para usar los mismos
BRPI0706935A2 (pt) 2006-01-20 2011-04-19 Genentech Inc anticorpos anti-efrina b2 isolado, vetor, célula hospedeira, método de elaboração de anticorpo anti-efrina b2, método de elaboração de imunoconjugado anti-efrina b2, método de detecção de efrina b2, método de diagnóstico de disfunção, composição, método de inibição da angiogênese e uso de anticorpo anti-efrina b2
US7846439B2 (en) 2006-02-01 2010-12-07 Cephalon Australia Pty Ltd Domain antibody construct
EP2650306A1 (en) 2006-03-06 2013-10-16 Aeres Biomedical Limited Humanized Anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
KR101454491B1 (ko) 2006-03-21 2014-10-29 제넨테크, 인크. 알파5베타1 길항제를 포함하는 조합 치료법
IN2014DN10515A (pl) 2006-03-31 2015-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
WO2007114325A1 (ja) 2006-03-31 2007-10-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法
US20100080794A1 (en) 2006-04-14 2010-04-01 Takashi Tsuji Mutant polypeptide having effector function
ES2444010T3 (es) 2006-05-30 2014-02-21 Genentech, Inc. Anticuerpos e inmunoconjugados y usos de los mismos
US7803377B2 (en) 2006-06-06 2010-09-28 Genentech, Inc. Anti-DLL4 antibodies and methods using same
NZ573646A (en) 2006-06-12 2012-04-27 Wyeth Llc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
DK2029173T3 (en) 2006-06-26 2016-11-07 Macrogenics Inc FC-RIIB-specific antibodies and methods of use thereof
WO2008002933A2 (en) 2006-06-26 2008-01-03 Macrogenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
AR062065A1 (es) 2006-07-14 2008-10-15 Ac Immune Sa Anticuerpo humanizado
CA2657934C (en) 2006-07-19 2017-04-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Wsx-1/p28 as a target for anti-inflammatory responses
EP2383297B8 (en) 2006-08-14 2023-03-22 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target CD19
KR20090088852A (ko) 2006-09-05 2009-08-20 메다렉스, 인코포레이티드 골형성 단백질의 항체와 이의 수용체 및 이의 사용방법
ATE551071T1 (de) 2006-09-08 2012-04-15 Medimmune Llc Humanisierte anti-cd19-antikörper und ihre verwendung für die behandlung von krebs, transplantationen und autoimmunerkrankungen
ES2372217T3 (es) 2006-09-12 2012-01-17 Genentech, Inc. Procedimientos y composiciones para el diagnóstico y tratamiento del cáncer de pulmón utilizando el gen de pdgfra, kit o kdr como marcador genético.
EP2083017A4 (en) 2006-09-14 2011-01-12 Med & Biological Lab Co Ltd ANTIBODIES HAVING INCREASED ADCC ACTIVITY AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME
US8394374B2 (en) 2006-09-18 2013-03-12 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target HM1.24
TWI522366B (zh) 2006-10-02 2016-02-21 Ｅ Ｒ 施貴寶＆聖斯有限責任公司 與ｃｘｃｒ４結合之人抗體及彼之用途
CL2007002926A1 (es) * 2006-10-12 2008-05-16 Genentech Inc Anticuerpo antilinfotoxina alfa (lt-alfa); composicion con el anticuerpo; hibridoma pta-7538; acido nucleico codificante del anticuerpo; vector y celula huesped que comprenden el acido nucleico; metodo para inhibir la proliferacion celular activada p
US20100143254A1 (en) * 2006-10-16 2010-06-10 Medimmune, Llc Molecules with reduced half-lives, compositions and uses thereof
CA2666682C (en) 2006-10-19 2014-07-08 Merck & Co., Inc. Anti-il-13r.alpha.1 antibodies and their uses thereof
WO2008060813A2 (en) 2006-10-19 2008-05-22 Merck & Co., Inc. High affinity antibody antagonists of interleukin-13 receptor alpha 1
DK2502938T3 (en) 2006-10-27 2015-04-20 Genentech Inc Antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US8618248B2 (en) 2006-10-31 2013-12-31 President And Fellows Of Harvard College Phosphopeptide compositions and anti-phosphopeptide antibody compositions and methods of detecting phosphorylated peptides
MY157948A (en) 2006-11-02 2016-08-30 Genentech Inc Humanized anti-factor d antibodies
WO2008076560A2 (en) 2006-11-15 2008-06-26 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to btla and methods of use
WO2008067547A2 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Research Development Foundation Improved immunoglobulin libraries
KR101552735B1 (ko) 2006-12-01 2015-09-14 메다렉스, 엘.엘.시. 씨디22에 결합하는 인간 항체 및 이의 용도
US20080127996A1 (en) * 2006-12-04 2008-06-05 Weinhold Dennis G Method and apparatus to remediate an acid and/or liquid spill
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
CA2672468A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
HUE029445T2 (en) 2006-12-19 2017-02-28 Genentech Inc VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and treatment of early-stage tumors
EP2107115A1 (en) 2007-01-24 2009-10-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition capable of binding specifically to ganglioside gm2
EP2119780B1 (en) 2007-01-24 2015-03-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition having enhanced effector activity
US7834154B2 (en) 2007-02-09 2010-11-16 Genentech, Inc. Anti-ROBO4 antibodies and uses therefor
WO2008109440A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Genentech, Inc. Predicting response to a her dimerisation inhibitor based on low her3 expression
EP3199180B1 (en) 2007-03-08 2022-01-05 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of solid tumors
NZ580245A (en) 2007-03-22 2012-01-12 Biogen Idec Inc Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 and uses thereof
WO2008118324A2 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Macrogenics, Inc. Composition and method of treating cancer with an anti-uroplakin ib antibody
EP2150562A1 (en) 2007-04-27 2010-02-10 Genetech, Inc. Potent, stable and non-immunosuppressive anti-cd4 antibodies
DK2155789T3 (da) * 2007-05-01 2013-10-21 Res Dev Foundation Immunoglobulin-Fc-biblioteker
AU2008247382B2 (en) 2007-05-07 2014-06-05 Medimmune, Llc Anti-ICOS antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
US20100233167A1 (en) * 2007-05-10 2010-09-16 Ramesh Bhatt Chain reaction creating oligomers from repeat units of binding molecules
SI2173381T1 (sl) 2007-05-14 2014-01-31 Novimmune Sa Fc receptor-vezavni polipeptidi z modificiranimi efektorskimi funkcijami
AU2008260498B2 (en) 2007-05-30 2012-11-29 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting CD32b expressing cells
WO2008145142A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-04 Genmab A/S Stable igg4 antibodies
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
PL2171090T3 (pl) 2007-06-08 2013-09-30 Genentech Inc Markery ekspresji genów odporności guza na leczenie hamujące HER2
PL2170389T3 (pl) * 2007-06-12 2015-03-31 Ac Immune Sa Humanizowane przeciwciało przeciw amyloidowi beta
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
CN107226864A (zh) 2007-06-21 2017-10-03 宏观基因有限公司 共价双抗体及其用途
US20100254992A1 (en) * 2007-06-29 2010-10-07 Anuk Das Anti-mcp-1 antibodies, compositions, methods and uses
EP4365189B1 (en) 2007-07-09 2025-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides
US20110091992A1 (en) * 2007-07-10 2011-04-21 Medimmune, Llc CRYSTALS AND STRUCTURE OF HUMAN IgG Fc VARIANT
PL2474557T3 (pl) 2007-07-16 2015-02-27 Genentech Inc Przeciwciała anty- CD79b i immunokoniugaty i sposoby stosowania
WO2009012256A1 (en) 2007-07-16 2009-01-22 Genentech, Inc. Humanized anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
US20090155275A1 (en) 2007-07-31 2009-06-18 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
PL2769729T3 (pl) 2007-09-04 2019-09-30 Compugen Ltd. Polipeptydy i polinukleotydy i ich zastosowanie jako cel dla leków do wytwarzania leków i środków biologicznych
PL3059246T3 (pl) 2007-09-26 2018-11-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Zmodyfikowany region stały przeciwciała
AU2008304778B9 (en) 2007-09-26 2014-05-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
EP2650308A3 (en) * 2007-10-05 2014-11-12 Genentech, Inc. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
SI2238166T1 (sl) 2007-10-05 2014-03-31 Genentech, Inc. Uporaba protitelesa proti amiloidu beta pri očesnih bolezni
AR068767A1 (es) 2007-10-12 2009-12-02 Novartis Ag Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina
DK2233149T3 (en) 2007-10-16 2016-05-17 Zymogenetics Inc COMBINATION OF TRANSMEMBRANAKTIVATOR AND CALCIUM MODULATOR AND cyclophilin-LIGAND INTERAKTOR (TACI) AND ANTI-CD20 MEANS FOR TREATMENT OF AUTO-IMMUNE DISEASE
US20120047586A9 (en) 2007-10-24 2012-02-23 Otsuka Chemical Co., Ltd Polypeptide having enhanced effector function
EP2209491B1 (en) 2007-11-02 2015-10-28 Novartis AG Molecules and methods for modulating low-density-lipoprotein receptor-related protein 6 (lrp6)
MX373155B (es) 2007-11-07 2020-04-21 Genentech Inc Composiciones y metodos para el tratamiento de trastornos microbianos.
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
DK2222706T4 (en) 2007-12-14 2016-11-21 Novo Nordisk As Antibodies that bind to NKG2D and its use
WO2009117030A2 (en) 2007-12-19 2009-09-24 Macrogenics, Inc. Improved compositions for the prevention and treatment of smallpox
ES2518415T3 (es) 2007-12-21 2014-11-05 Medimmune Limited Elementos de unión para receptor alfa de interleucina-4 (IL-4Ralfa)
RU2529951C2 (ru) * 2007-12-26 2014-10-10 Ксенкор, Инк. ВАРИАНТЫ Fc С ИЗМЕНЕННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ C FcRn
EP2077281A1 (en) 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
US7914785B2 (en) 2008-01-02 2011-03-29 Bergen Teknologieverforing As B-cell depleting agents, like anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
AU2009205995B2 (en) 2008-01-18 2014-04-03 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
NZ587132A (en) 2008-01-31 2012-10-26 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
KR20100115360A (ko) 2008-02-05 2010-10-27 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 알파 ５-베타 １ 항체 및 이의 용도
SI2250279T1 (sl) 2008-02-08 2016-10-28 Medimmune, Llc Protitelesa anti-IFNAR1 z zmanjšano afiniteto do FC liganda
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
EP2631302A3 (en) * 2008-03-31 2014-01-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
DK2247304T3 (en) 2008-04-02 2016-09-26 Macrogenics Inc Her2 / neu-specific antibodies and methods of use thereof
CN106349390B (zh) 2008-04-02 2019-12-10 宏观基因有限公司 Bcr-复合体-特异性抗体和其使用方法
HRP20160209T1 (hr) 2008-04-11 2016-03-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigenski vežuća molekula koja se može višekratno vezati na dva ili više antigena
CR20170001A (es) 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados
EP2899209A1 (en) * 2008-04-29 2015-07-29 Abbvie Inc. Dual Variable Domain Immunoglobulins and uses thereof
US9035027B2 (en) 2008-06-03 2015-05-19 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2010153578A (ru) 2008-06-03 2012-07-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применение
WO2010033279A2 (en) 2008-06-04 2010-03-25 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
EP2321422A4 (en) 2008-07-08 2013-06-19 Abbvie Inc PROSTAGLANDINE E2 VARIABLE DOUBLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND USES THEREOF
WO2010009129A2 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 Genentech, Inc. Methods of treating autoimmune diseases using cd4 antibodies
ES2643411T3 (es) 2008-08-05 2017-11-22 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a la proteína del complemento C5
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
RU2581962C2 (ru) 2008-09-19 2016-04-20 Медиммун Ллк Нацеленные средства связывания, направленные на dll4, и их применение
CN110317272A (zh) * 2008-10-14 2019-10-11 霍夫曼-拉罗奇有限公司 免疫球蛋白变体及其用途
US8298533B2 (en) 2008-11-07 2012-10-30 Medimmune Limited Antibodies to IL-1R1
JP5933975B2 (ja) 2008-11-12 2016-06-15 メディミューン，エルエルシー 抗体製剤
SMT201700173T1 (it) 2008-11-22 2017-05-08 Hoffmann La Roche Uso di un anticorpo anti-vegf in combinazione con la chemioterapia per trattare il cancro del seno
AU2009325878B2 (en) 2008-12-08 2014-01-16 Compugen Ltd. TMEM154 polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
EP2373689A1 (en) 2008-12-12 2011-10-12 MedImmune, LLC Crystals and structure of a human igg fc variant with enhanced fcrn binding
EP3482769B1 (en) 2008-12-19 2024-05-29 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
JP2012513194A (ja) 2008-12-23 2012-06-14 アストラゼネカ アクチボラグ α５β１に向けられた標的結合剤およびその使用
AU2009334498A1 (en) 2008-12-31 2011-07-21 Biogen Idec Ma Inc. Anti-lymphotoxin antibodies
WO2010096394A2 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
AP2011005859A0 (en) 2009-02-23 2011-10-31 Glenmark Pharmaceuticals Sa Humanized antibodies that bind to CD19 and their uses.
ME02842B (me) 2009-03-05 2018-01-20 Squibb & Sons Llc Potpuno ljudska antitijela specifična za cadm1
AU2010221159B2 (en) 2009-03-06 2015-11-26 Humanigen, Inc. Treatment of leukemias and chronic myeloproliferative diseases with antibodies to EphA3
EP2408820A4 (en) 2009-03-16 2013-01-23 Cephalon Australia Pty Ltd HUMANIZED ANTIBODIES WITH ANTITUMOR EFFECT
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
BRPI1006215A2 (pt) 2009-03-20 2019-09-24 Genentech Inc " anticorpos multiespecíficos, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratamento, método de inibição de uma atividade bíologica e uso do anticorpo "
CN102427823A (zh) * 2009-03-24 2012-04-25 拜耳医药保健有限公司 因子viii变体及使用方法
RU2011142974A (ru) 2009-03-25 2013-04-27 Дженентек, Инк. НОВЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ α5β1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
ES2549769T3 (es) 2009-03-25 2015-11-02 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-FGFR3 y métodos que emplean los mismos
ES2363358B1 (es) 2009-04-03 2012-06-21 FUNDACIÓ INSTITUT DE RECERCA HOSPITAL UNIVERSITARI VALL D'HEBRON (Titular al Agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades asociadas con una proliferación celular indeseable.
ES2537100T3 (es) 2009-04-07 2015-06-02 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecíficos trivalentes
CN102482353B (zh) 2009-04-20 2016-08-24 牛津生物疗法有限公司 特异于钙粘素-17的抗体
WO2010124113A1 (en) 2009-04-23 2010-10-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Anti-fatty acid amide hydrolase-2 antibodies and uses thereof
US8715657B2 (en) 2009-04-27 2014-05-06 Novartis Ag Therapeutic antibodies binding IL12Rβ1
RS56661B1 (sr) 2009-04-27 2018-03-30 Novartis Ag Kompozicije i postupci za povećanje rasta mišića
EP2424566A4 (en) * 2009-05-01 2013-07-31 Abbvie Inc IMMUNOGLOBULINE WITH DOUBLE VARIABLE DOMAIN AND ITS USE
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
BRPI1011805A2 (pt) 2009-06-18 2016-10-11 Pfizer anticorpos anti incisura-1
BRPI1015234A2 (pt) 2009-06-22 2018-02-20 Medimmune Llc regiões fc projetadas para conjugação sítio específica.
EP2448972A4 (en) * 2009-06-30 2012-11-28 Res Dev Foundation IMMUNOGLOBULIN FC POLYPEPTIDES
CN106148547A (zh) 2009-07-13 2016-11-23 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于癌症治疗的诊断方法和组合物
WO2011014457A1 (en) 2009-07-27 2011-02-03 Genentech, Inc. Combination treatments
WO2011014750A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Genentech, Inc. Inhibition of tumor metastasis using bv8- or g-csf-antagonists
SG177689A1 (en) 2009-07-31 2012-02-28 Organon Nv Fully human antibodies to btla
MX2012001742A (es) 2009-08-11 2012-03-21 Genentech Inc Produccion de proteinas en medios de cultivo de celulas libres de glutamina.
WO2011020049A1 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Genentech, Inc. Biological markers for monitoring patient response to vegf antagonists
WO2011022264A1 (en) 2009-08-15 2011-02-24 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for the treatment of previously treated breast cancer
WO2011021146A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pfizer Inc. Osteopontin antibodies
GB0914691D0 (en) * 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
AU2010290131C1 (en) 2009-08-24 2015-12-03 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
AU2010289400B2 (en) 2009-09-02 2014-10-23 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
CA2772929A1 (en) 2009-09-03 2011-03-11 Genentech, Inc. Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
WO2011029823A1 (en) 2009-09-09 2011-03-17 Novartis Ag Monoclonal antibody reactive with cd63 when expressed at the surface of degranulated mast cells
CN102597776A (zh) 2009-09-11 2012-07-18 霍夫曼-拉罗奇有限公司 鉴定响应抗癌剂的可能性升高的患者的方法
US20110064732A1 (en) 2009-09-17 2011-03-17 Sanne Lysbet De Haas Methods and compositions for diagnostic use in cancer patients
US8568726B2 (en) 2009-10-06 2013-10-29 Medimmune Limited RSV specific binding molecule
AU2010303415B2 (en) 2009-10-07 2015-02-19 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
US20120231004A1 (en) 2009-10-13 2012-09-13 Oxford Biotherapeutic Ltd. Antibodies
ES2743558T3 (es) 2009-10-14 2020-02-19 Humanigen Inc Anticuerpos de-EphA3
KR20140015139A (ko) * 2009-10-15 2014-02-06 애브비 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
JP5814925B2 (ja) 2009-10-22 2015-11-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヘプシン抗体及びその使用方法
PH12012500665B1 (en) 2009-10-23 2019-10-30 Amgen British Columbia Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
PL3202898T3 (pl) 2009-11-02 2019-04-30 Univ Washington Terapeutyczne kompozycje nukleazy i sposoby
CN102782149B (zh) 2009-11-04 2014-11-12 默沙东公司 经工程改造的抗-tslp抗体
WO2011054030A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Cephalon Australia Pty Ltd Treatment of cancer involving mutated kras or braf genes
MX2012005168A (es) 2009-11-05 2012-06-08 Genentech Inc Metodos y composicion para secrecion de polipeptidos heterologos.
WO2011060015A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Genentech, Inc. Methods and compositions for detecting target proteins
MX359551B (es) 2009-11-24 2018-10-02 Medimmune Ltd Agentes de union diana contra b7-h1.
KR101791430B1 (ko) * 2009-11-30 2017-10-30 얀센 바이오테크 인코포레이티드 이펙터 기능이 제거된 항체 Ｆｃ 돌연변이체
EP2507265B1 (en) 2009-12-01 2016-05-11 Compugen Ltd. Antibody specific for heparanase splice variant T5 and its use.
EP2507267B1 (en) 2009-12-02 2016-09-14 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life of fc fusion proteins
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
WO2011076781A1 (en) 2009-12-22 2011-06-30 Novartis Ag Tetravalent cd47-antibody constant region fusion protein for use in therapy
RU2559542C2 (ru) 2009-12-23 2015-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против bv8 и их применение
US8362210B2 (en) 2010-01-19 2013-01-29 Xencor, Inc. Antibody variants with enhanced complement activity
AR080154A1 (es) 2010-02-10 2012-03-14 Immunogen Inc Anticuerpos cd20 y su utilizacion
CA2789125A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Novartis Ag Methods and compounds for muscle growth
US9556249B2 (en) 2010-02-18 2017-01-31 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
RU2545401C2 (ru) * 2010-02-23 2015-03-27 Санофи Антитела к интегрину альфа-2 и их применения
MA34059B1 (fr) 2010-02-23 2013-03-05 Genentech Inc Thérapie anti-angiogénique pour le traitement du cancer des ovaires
US9260529B2 (en) 2010-02-24 2016-02-16 The University Of Washington Through Its Center For Commercialization Molecules that bind CD180, compositions and methods of use
JP5820800B2 (ja) 2010-03-02 2015-11-24 協和発酵キリン株式会社 改変抗体組成物
PH12012501751A1 (en) 2010-03-04 2012-11-12 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
US9150656B2 (en) 2010-03-04 2015-10-06 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
BR112012022044A2 (pt) 2010-03-24 2020-08-25 Genentech Inc ''anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica,uso do anticorpo,método de tratamento,anticorpo biespecifico isolado e célula hospedeira''.
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
US9631018B2 (en) 2010-03-26 2017-04-25 The Trustees Of Dartmouth College Vista regulatory T cell mediator protein, vista binding agents and use thereof
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US9296815B2 (en) 2010-03-29 2016-03-29 Zymeworks Inc. Antibodies with enhanced or suppressed effector function
TWI667346B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的FcRn親和力之抗體
EP2371860A1 (en) 2010-04-05 2011-10-05 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall d'Hebron Antibody recognising human leukemia inhibitory factor (LIF) and use of anti-LIF antibodies in the treatment of diseases associated with unwanted cell proliferation
AU2011249783B9 (en) 2010-05-06 2014-11-06 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein -related protein 6 (LRP6) antibodies
EA201291181A1 (ru) 2010-05-06 2013-05-30 Новартис Аг Композиции и способы применения терапевтических поливалентных антител против белка, родственного рецептору липопротеинов низкой плотности 6 (lrp6)
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
NZ603883A (en) 2010-05-27 2015-01-30 Merck Sharp & Dohme Method for preparing antibodies having improved properties
WO2011153243A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer
WO2011153224A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
EP2577310B1 (en) 2010-06-03 2018-11-14 F.Hoffmann-La Roche Ag Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
AR082017A1 (es) 2010-06-18 2012-11-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-axl (receptor de tirosina quinasas) y metodos de uso
EP3327035A1 (en) 2010-06-22 2018-05-30 Precision Biologics Inc. Colon and pancreas cancer specific antigens and antibodies
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
JP2013539962A (ja) 2010-07-09 2013-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ニューロピリン抗体及び使用方法
HRP20191305T1 (hr) 2010-07-09 2019-10-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Preradive jednolančane molekule i polipeptidi izrađeni koristeći iste
BR112012033162A2 (pt) 2010-07-19 2016-10-25 Hoffmann La Roche método de identificação de pacientes, método de previsão da capacidade de reação de pacientes, método de determinação da probabilidade de um paciente com câncer exibir benefícios de terapia anticâncer, método de otimização da eficácia terapêutica, método de tratamento de câncer, kit e conjunto de compostos
SG187119A1 (en) 2010-07-19 2013-02-28 Hoffmann La Roche Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
AU2011280893C1 (en) 2010-07-22 2016-02-04 The Regents Of The University Of California Anti-tumor antigen antibodies and methods of use
CA2806921C (en) 2010-07-23 2019-11-26 Trustees Of Boston University Anti-despr inhibitors as therapeutics for inhibition of pathological angiogenesis and tumor cell invasiveness and for molecular imaging and targeted delivery
HRP20230776T1 (hr) 2010-07-29 2023-10-27 Buzzard Pharmaceuticals AB Himerni antagonisti receptora il-1 tipa i
JP6081356B2 (ja) 2010-07-30 2017-02-15 エーシー イミューン エス．エー． 安全で機能的なヒト化抗βアミロイド抗体
CA2807127C (en) 2010-08-02 2019-02-12 Leslie S. Johnson Covalent diabodies and uses thereof
CN103153341B (zh) 2010-08-03 2015-05-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 慢性淋巴细胞性白血病(cll)生物标志物
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
MX2013001305A (es) 2010-08-05 2013-03-20 Hoffmann La Roche Proteina de fusion de citoquina anti-viral de anticuerpo anti-mhc.
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
CA2806640A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use
SG187746A1 (en) 2010-08-13 2013-03-28 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
JP2013537416A (ja) 2010-08-13 2013-10-03 メディミューン リミテッド 変異型Ｆｃ領域を含むモノマーポリペプチド及び使用方法
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
DK2606070T3 (en) 2010-08-20 2017-03-27 Novartis Ag Antibodies for the epidermal growth factor receptor 3 (HER3)
AR082518A1 (es) 2010-08-25 2012-12-12 Hoffmann La Roche Anticuerpos contra il-18r1 y usos de los mismos
AU2011293253B2 (en) 2010-08-26 2014-12-11 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201506782XA (en) 2010-08-27 2015-10-29 Stem Centrx Inc Notum protein modulators and methods of use
TWI560199B (en) 2010-08-31 2016-12-01 Sanofi Sa Peptide or peptide complex binding to α2 integrin and methods and uses involving the same
AU2011295919A1 (en) 2010-08-31 2013-03-07 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treatment
EP2611928B1 (en) 2010-09-03 2016-04-27 Academia Sinica Anti-c-met antibody and methods of use thereof
AU2011295715B9 (en) 2010-09-03 2017-02-23 Abbvie Stemcentrx Llc Novel modulators and methods of use
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
US8999335B2 (en) 2010-09-17 2015-04-07 Compugen Ltd. Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma
US9068014B2 (en) 2010-09-23 2015-06-30 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
PT2621531T (pt) 2010-09-27 2017-03-13 Morphosys Ag Anticorpo anti-cd38 e lenalidomida ou bortezomibe para o tratamento de mieloma múltiplo e linfoma não-hodgkins
CN103154037A (zh) 2010-10-05 2013-06-12 诺瓦提斯公司 抗IL12Rβ1抗体及它们在治疗自身免疫病和炎性疾病中的用途
CA2813738A1 (en) 2010-10-05 2012-04-12 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
UA118646C2 (uk) 2010-10-13 2019-02-25 Янссен Байотек, Інк. Виділене антитіло, яке специфіічно зв'язується з онкостатином м (оm) людини
EP2629796A4 (en) * 2010-10-20 2015-01-28 Oxford Biotherapeutics Ltd ANTIBODY
CN103429620B (zh) 2010-11-05 2018-03-06 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
RU2013126477A (ru) 2010-11-08 2014-12-20 Дженентек, Инк. Вводимые подкожно антитела против рецептора il-6
AU2011326564A1 (en) 2010-11-10 2013-05-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
AU2011332810A1 (en) 2010-11-23 2013-06-13 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of oral mucositis
LT2643352T (lt) 2010-11-23 2018-08-10 Glaxo Group Limited Antigeną onkostatiną m (osm) surišantys baltymai
EP2643351A1 (en) 2010-11-24 2013-10-02 Glaxo Group Limited Multispecific antigen binding proteins targeting hgf
KR102447595B1 (ko) 2010-11-30 2022-09-26 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 세포상해 유도 치료제
CN110251668A (zh) 2010-11-30 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
TWI654203B (zh) 2010-11-30 2019-03-21 中外製藥股份有限公司 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
KR20140031175A (ko) 2010-12-08 2014-03-12 스템 센트알엑스 인코포레이티드 신규 조절제 및 용법
SG191039A1 (en) 2010-12-15 2013-08-30 Wyeth Llc Anti-notch1 antibodies
JP6005657B2 (ja) 2010-12-16 2016-10-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｔｈ２阻害に関連する診断及び治療
AR084356A1 (es) 2010-12-20 2013-05-08 Genentech Inc Anticuerpos anti-mesotelina e inmunoconjugados
CN103261230A (zh) 2010-12-22 2013-08-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗pcsk9抗体及使用方法
SI2654780T1 (sl) 2010-12-23 2017-06-30 Janssen Biotech Inc. Aktivni proteazno rezistentni protitelesni mutanti Fc
CN102128937B (zh) * 2010-12-31 2014-05-28 江苏华冠生物技术股份有限公司 用于脱敏治疗效果评价的过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒的制备方法
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
EP2663647A4 (en) 2011-01-14 2015-08-19 Redwood Bioscience Inc POLYPEPTIDE IMMUNOGLOBULINS WITH ALDEHYDIC MARKING AND THEIR USE METHOD
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
CA2826467C (en) 2011-02-07 2019-11-12 Research Development Foundation Engineered immunoglobulin fc polypeptides
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
WO2012115241A1 (ja) * 2011-02-25 2012-08-30 中外製薬株式会社 FcγRIIb特異的Fc抗体
WO2012132067A1 (ja) 2011-03-30 2012-10-04 中外製薬株式会社 抗原結合分子の血漿中滞留性と免疫原性を改変する方法
AR085403A1 (es) 2011-02-28 2013-09-25 Hoffmann La Roche Proteinas monovalentes que se unen a antigenos
BR112013019975A2 (pt) 2011-02-28 2017-08-01 Hoffmann La Roche proteínas de ligação de antígeno, composição farmacêutica, uso de uma proteína de ligação de antígeno, método para o tratamento de um paciente e método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira"
JP6271254B2 (ja) 2011-02-28 2018-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂ細胞アンタゴニストに対する生物学的マーカー及び応答を予測するための方法
RS57895B2 (sr) * 2011-03-29 2025-02-28 Roche Glycart Ag Fc varijante antitela
CN113980952A (zh) 2011-03-30 2022-01-28 中外制药株式会社 改变抗原结合分子的血浆中滞留性和免疫原性的方法
DK2698431T3 (da) 2011-03-30 2020-11-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Opretholdelse af antigen-bindende molekyler i blodplasma og fremgangsmåde til modifikation af immunogenicitet
WO2012135589A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Genentech, Inc. Methods of administering beta7 integrin antagonists
MX342240B (es) 2011-04-07 2016-09-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr4 y metodos de uso.
WO2012142515A2 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements
SG10201603034TA (en) 2011-04-15 2016-05-30 Compugen Ltd Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof for treatment of immune related disorders and cancer
RS57324B1 (sr) 2011-04-20 2018-08-31 Medimmune Llc Antitela i drugi molekuli koji vezuju b7-h1 i pd-1
WO2012145746A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for the treatment of neuromyelitis optica
GB201107170D0 (en) 2011-04-28 2011-06-15 Clark Michael Binding molecules with biased recognition
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CA2834626A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 University Of Washington Therapeutic nuclease compositions and methods
JP5987053B2 (ja) 2011-05-12 2016-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングｌｃ−ｍｓ／ｍｓ法
US9346883B2 (en) 2011-05-13 2016-05-24 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Antibodies against HER3
PE20140995A1 (es) 2011-05-16 2014-08-23 Genentech Inc Agonistas de fgfr1 y sus metodos de uso
AU2012259162C1 (en) 2011-05-21 2020-05-21 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
JP6141831B2 (ja) 2011-05-21 2017-06-07 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ヒト及び非ヒトｃｄ３に結合可能なｃｄ３結合分子
WO2012162561A2 (en) 2011-05-24 2012-11-29 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
CA2834589A1 (en) 2011-05-25 2012-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing fc-containing polypeptides having improved properties
US9561274B2 (en) 2011-06-07 2017-02-07 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012170969A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Biogen Idec Ma Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
MX343117B (es) 2011-06-15 2016-10-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos del receptor eritropoyetina (epo) anti-humana y metodos de uso.
KR20140030250A (ko) 2011-06-16 2014-03-11 노파르티스 아게 치료제로서 사용하기 위한 가용성 단백질
ES2677367T3 (es) 2011-06-22 2018-08-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anticuerpos anti-Axl y usos de los mismos
AU2012273954A1 (en) 2011-06-22 2014-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-Axl antibodies and uses thereof
JP6246711B2 (ja) 2011-06-22 2017-12-13 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 複合体を含むｍｈｃクラスｉを用いてウイルス特異的細胞傷害性ｔ細胞を循環させることによる標的細胞の除去
EP2537864B1 (en) * 2011-06-24 2019-08-07 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Fc variants with reduced effector functions
UA114478C2 (uk) 2011-06-28 2017-06-26 Берлін-Хемі Аг Антитіло, яке специфічно зв'язується з bst1
WO2013002362A1 (ja) 2011-06-30 2013-01-03 中外製薬株式会社 ヘテロ二量化ポリペプチド
WO2013001517A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
RU2013155695A (ru) 2011-06-30 2015-08-10 Дженентек, Инк. Препараты антител против с-мет
EP2726099B1 (en) 2011-07-01 2018-07-25 Novartis AG Method for treating metabolic disorders
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
JP6261499B2 (ja) 2011-07-11 2018-01-17 グレンマーク ファーマシューティカルズ， エセ．アー． Ｏｘ４０と結合する抗体およびその使用
JP2014526886A (ja) 2011-07-15 2014-10-09 モルフォシス・アー・ゲー マクロファージ遊走阻止因子（ｍｉｆ）とｄ−ドーパクロームトートメラーゼ（ｄ−ｄｔ）に交差反応性がある抗体
US9738707B2 (en) 2011-07-15 2017-08-22 Biogen Ma Inc. Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
GB201112429D0 (en) 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
US20130022551A1 (en) 2011-07-22 2013-01-24 Trustees Of Boston University DEspR ANTAGONISTS AND AGONISTS AS THERAPEUTICS
JP5987057B2 (ja) 2011-07-27 2016-09-06 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｆｃドメインと融合した抗ｖｅｇｆ単一可変ドメイン
EP2756094B1 (en) 2011-08-15 2017-12-27 Medlmmune, LLC Anti-b7-h4 antibodies and their uses
BR112014003599A2 (pt) 2011-08-17 2018-04-17 Genentech Inc método de inibição da angiogênese tumoral, método de supressão do crescimento tumoral e método de tratamento de tumor
RU2014109093A (ru) 2011-08-17 2015-09-27 Дженентек, Инк. Антитела против нейрегулина и их применение
KR20140048292A (ko) 2011-08-23 2014-04-23 로슈 글리카트 아게 항-mcsp 항체
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
CA2846083A1 (en) 2011-09-15 2013-03-21 Genentech, Inc. Methods of promoting differentiation
WO2013043715A1 (en) 2011-09-19 2013-03-28 Genentech, Inc. Combination treatments comprising c-met antagonists and b-raf antagonists
TW201326209A (zh) * 2011-09-30 2013-07-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
CN104093424A (zh) 2011-09-30 2014-10-08 中外制药株式会社 诱导针对靶抗原的免疫应答的抗原结合分子
EP2760471B9 (en) 2011-09-30 2017-07-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides
KR20250078601A (ko) 2011-09-30 2025-06-02 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항원의 소실을 촉진시키는 항원 결합 분자
US20150050269A1 (en) 2011-09-30 2015-02-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule promoting disappearance of antigens having plurality of biological activities
JP6271251B2 (ja) 2011-10-05 2018-01-31 中外製薬株式会社 糖鎖受容体結合ドメインを含む抗原の血漿中からの消失を促進する抗原結合分子
WO2013052155A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using notch2 antagonists
WO2013055998A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Genentech, Inc. ANTI-HtrA1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP2766033B1 (en) 2011-10-14 2019-11-20 Novartis AG Antibodies and methods for wnt pathway-related diseases
KR20140084164A (ko) 2011-10-15 2014-07-04 제넨테크, 인크. 암의 치료를 위한 scd1 길항제
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
WO2013059740A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Foundation Medicine, Inc. Novel alk and ntrk1 fusion molecules and uses thereof
KR102037541B1 (ko) 2011-10-28 2019-10-29 테바 파마슈티컬즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 폴리펩티드 구축물 및 이의 용도
SG11201401815XA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Genentech Inc Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
WO2013065708A1 (ja) 2011-10-31 2013-05-10 中外製薬株式会社 重鎖と軽鎖の会合が制御された抗原結合分子
US9221907B2 (en) 2011-11-01 2015-12-29 Bionomics Inc. Anti-GPR49 monoclonal antibodies
US10598653B2 (en) 2011-11-01 2020-03-24 Bionomics Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
HK1201855A1 (en) 2011-11-01 2015-09-11 Bionomics, Inc. Antibodies and methods of treating cancer
AU2012332590B2 (en) 2011-11-01 2016-10-20 Bionomics, Inc. Anti-GPR49 antibodies
US9574010B2 (en) 2011-11-04 2017-02-21 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
WO2013070565A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
AU2012340826A1 (en) 2011-11-21 2014-05-29 Genentech, Inc. Purification of anti-c-met antibodies
HK1202877A1 (en) 2011-11-23 2015-10-09 伊格尼卡生物治疗公司 Anti-cd98 antibodies and methods of use thereof
US20150056182A1 (en) 2011-11-30 2015-02-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Drug containing carrier into cell for forming immune complex
UY34486A (es) 2011-12-05 2013-07-31 Novartis Ag Anticuerpos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico 3 (her3) dirigidos contra el dominio ii del her3
JP6243345B2 (ja) 2011-12-05 2017-12-06 ノバルティス アーゲー 上皮細胞増殖因子受容体３（ｈｅｒ３）に対する抗体
CN107353342B (zh) 2011-12-05 2021-08-10 X 博迪生物科学公司 PDGF受体β结合多肽
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
RU2685867C2 (ru) 2011-12-15 2019-04-23 Алтернатив Инновейтив Текнолоджиз Ллц Гибридные белки и белковые конъюгаты на основе белка теплового шока-70 (БТШ70) и способы их применения (варианты)
RS60499B1 (sr) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune Llc Modifikovani polipeptidi za bispecifične skelete antitela
KR102159843B1 (ko) 2011-12-21 2020-09-24 노파르티스 아게 인자 p를 표적화하는 항체에 대한 조성물 및 방법
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
US11147852B2 (en) 2011-12-23 2021-10-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
TWI593705B (zh) 2011-12-28 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanized anti-epiregulin antibody and cancer therapeutic agent containing the antibody as an active ingredient
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
EP2797955A2 (en) 2011-12-30 2014-11-05 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins against il-13 and/or il-17
WO2013106489A1 (en) 2012-01-09 2013-07-18 The Scripps Research Institute Humanized antibodies with ultralong cdr3s
CN104520321A (zh) 2012-01-09 2015-04-15 斯克利普斯研究所 超长互补决定区及其用途
US11370827B2 (en) 2012-01-12 2022-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeric factor VIII polypeptides and uses thereof
SG11201403927XA (en) 2012-01-13 2014-08-28 Genentech Inc Biological markers for identifying patients for treatment with vegf antagonists
JP6242813B2 (ja) 2012-01-18 2017-12-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｌｒｐ５抗体及び使用方法
JP2015506944A (ja) 2012-01-18 2015-03-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｇｆ１９修飾薬を使用する方法
BR112014018481A2 (pt) 2012-02-01 2017-07-04 Compugen Ltd anticorpo monoclonal ou policlonal ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, polinucleotídeo, anticorpo monoclonal, vetor, hibridoma, anticorpo, hibridoma 5166-2 e/ou 5166-9, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, composição farmacêutica, uso do anticorpo ou fragmento de ligação a anticorpo, método para tratar câncer, método para diagnosticar câncer em um indivíduo, anticorpo, método, composição ou uso
SG11201404177PA (en) 2012-02-07 2014-08-28 Innate Pharma Mica binding agents
WO2013118858A1 (ja) 2012-02-09 2013-08-15 中外製薬株式会社 抗体のFc領域改変体
WO2013120056A1 (en) 2012-02-11 2013-08-15 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
HRP20190454T1 (hr) 2012-02-15 2019-05-03 Bioverativ Therapeutics Inc. Rekombinantni faktor viii proteini
EP2814587B1 (en) 2012-02-15 2018-05-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
EA201491470A1 (ru) 2012-02-15 2015-01-30 Амуникс Оперэйтинг Инк. Композиции фактора viii и способы получения и использования подобных
ES2645272T3 (es) 2012-02-24 2017-12-04 Abbvie Stemcentrx Llc Moduladores de DLL3 y procedimientos de utilización
KR20220136441A (ko) 2012-02-24 2022-10-07 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 ＦｃγＲＩＩＢ를 매개로 항원의 소실을 촉진하는 항원 결합 분자
AU2013240261A1 (en) 2012-03-27 2014-09-18 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to HER3 inhibitors
HUE037720T2 (hu) 2012-03-28 2018-09-28 Sanofi Sa Bradikinin B1 receptor ligandumok elleni antitestek
EP2832856A4 (en) 2012-03-29 2016-01-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd ANTI-LAMP5 ANTIBODIES AND USE THEREOF
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
CA2867588A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
US9657091B2 (en) 2012-04-05 2017-05-23 Ac Immune S.A. Humanized tau antibody
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
CN104470544B (zh) 2012-05-01 2018-01-12 基因泰克公司 抗pmel17抗体和免疫缀合物
WO2013166290A1 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Abbvie Biotherapeutics Inc. P21 biomarker assay
CN104662042A (zh) 2012-05-07 2015-05-27 赛诺菲 防止生物膜形成的方法
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
NZ725654A (en) 2012-05-18 2018-04-27 Genentech Inc High-concentration monoclonal antibody formulations
CN108992668B (zh) 2012-05-21 2023-12-05 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于提高血脑屏障转运的安全性的方法
US9695454B2 (en) 2012-05-23 2017-07-04 Glykos Finland Oy Production of fucosylated glycoproteins
KR101843614B1 (ko) 2012-05-23 2018-03-29 제넨테크, 인크. 치료제의 선택 방법
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
WO2013177386A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Biotherapeutics Inc. Biomarkers for predicting response to tweak receptor (tweakr) agonist therapy
SG10202006507XA (en) 2012-05-30 2020-08-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Target-tissue-specific antigen-binding molecule
EP3892638A1 (en) 2012-05-30 2021-10-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule for eliminating aggregated antigens
JP6321633B2 (ja) 2012-06-04 2018-05-09 ノバルティス アーゲー 部位特異的標識法およびそれによって生成される分子
JP2015525222A (ja) 2012-06-08 2015-09-03 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． キメラ性凝固因子
JP2015521589A (ja) 2012-06-08 2015-07-30 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． プロコアグラント化合物
MX362394B (es) 2012-06-08 2019-01-15 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticuerpos anti-trka humanizados con sustituciones de aminoacidos.
WO2013187495A1 (ja) 2012-06-14 2013-12-19 中外製薬株式会社 改変されたFc領域を含む抗原結合分子
EP2861624A1 (en) 2012-06-15 2015-04-22 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pcsk9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
JP2015531748A (ja) * 2012-06-21 2015-11-05 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション 改変ｆｃエフェクター機能を有するインクレチン受容体リガンドポリペプチドｆｃ領域融合ポリペプチド及び複合物
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
WO2014039983A1 (en) 2012-09-07 2014-03-13 The Trustees Of Dartmouth College Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
WO2013192504A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The Trustees Of Dartmouth College Novel vista-ig constructs and the use of vista-ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US9499634B2 (en) 2012-06-25 2016-11-22 Zymeworks Inc. Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
HUE030858T2 (en) 2012-07-04 2017-06-28 Hoffmann La Roche Covalently linked antigen-antibody conjugates
BR112014030843A2 (pt) 2012-07-04 2019-10-15 Hoffmann La Roche anticorpo anti-teofilina, formulação farmacêutica e uso do anticorpo
EP3339328A1 (en) 2012-07-04 2018-06-27 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-biotin antibodies and methods of use
WO2014008391A1 (en) 2012-07-05 2014-01-09 Genentech, Inc. Expression and secretion system
EP3404105A1 (en) 2012-07-06 2018-11-21 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof
SG10201605703TA (en) 2012-07-06 2016-09-29 Genmab Bv Dimeric protein with triple mutations
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
CN104411337A (zh) 2012-07-09 2015-03-11 基因泰克公司 包含抗cd79b抗体的免疫偶联物
CA2873884A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
SG11201500142RA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
EA201590174A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие анти-cd22 антитела
MX381011B (es) 2012-07-11 2025-03-12 Bioverativ Therapeutics Inc Complejo del factor viii con xten y proteína del factor von willebrand, y sus usos.
EA032192B1 (ru) 2012-07-13 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Биспецифическое антитело к vegf/ang-2, нуклеиновая кислота, кодирующая это антитело, вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, клетка-хозяин, способ получения биспецифического антитела и содержащая его фармацевтическая композиция
AU2013291964B2 (en) 2012-07-18 2017-12-14 Glycotope Gmbh Novel therapeutic treatments with anti-HER2 antibodies having a low fucosylation
US9334332B2 (en) 2012-07-25 2016-05-10 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies
WO2014029752A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Glaxo Group Limited Anti lrp6 antibodies
EP2889376A4 (en) 2012-08-24 2016-11-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd ANTIBODIES Fc SPECIFIC TO FCTRII OF MOUSE
DK2889377T3 (da) 2012-08-24 2020-03-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fc?RIIb-Specifik Fc-regionsvariant
SI2890712T1 (sl) 2012-08-29 2019-08-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Prenašalec prek krvno-možganske pregrade
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
MA37949B1 (fr) 2012-09-12 2017-07-31 Genzyme Corp Polypeptides contenant fc ayant une glycosylation modifiée et une fonction effectrice réduite
EP2906598A1 (en) 2012-10-09 2015-08-19 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
WO2014071074A2 (en) 2012-11-01 2014-05-08 Abbvie Inc. Anti-vegf/dll4 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
HK1214831A1 (zh) 2012-11-05 2016-08-05 Foundation Medicine, Inc. 新型融合分子及其应用
WO2014071358A2 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
CN104755500B (zh) 2012-11-08 2020-10-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 结合HER3 β-发夹的HER3抗原结合蛋白
HK1216428A1 (zh) 2012-11-09 2016-11-11 辉瑞公司 血小板衍生生长因子b之特异性抗体及其组合物和用途
MX2015005860A (es) 2012-11-13 2015-08-10 Genentech Inc Anticuerpos de antihemaglutinina y metodo de uso.
EP2733153A1 (en) 2012-11-15 2014-05-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the preparation of immunoconjugates and uses thereof
US9914785B2 (en) 2012-11-28 2018-03-13 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
US20150322152A1 (en) 2012-11-30 2015-11-12 Institut Pasteur Use of anti-fcyri and/or anti-fcyriia antibodies for treating arthritis, inflammation, thrombocytopenia and allergic shock
SI2928921T1 (sl) 2012-12-05 2021-05-31 Novartis Ag Sestavki in postopki za protitelesa, ki ciljajo epo
SI2928923T1 (sl) 2012-12-10 2020-03-31 Biogen Ma Inc. Protitelesa proti antigenu 2 dendritičnih celic v krvi in njihova uporaba
SG11201504764SA (en) 2012-12-19 2015-07-30 Amplimmune Inc Anti-human b7-h4 antibodies and their uses
EP3557260B1 (en) 2012-12-21 2022-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3-targeting drug which is administered to patient responsive to gpc3-targeting drug therapy
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
HK1214276A1 (zh) 2012-12-21 2016-07-22 F. Hoffmann-La Roche Ag 包含i类mhc的二硫键连接多价多功能蛋白质
RU2650756C2 (ru) 2012-12-21 2018-04-17 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела к h7cr
ES2876009T3 (es) 2012-12-27 2021-11-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Polipéptido heterodimerizado
NZ709828A (en) 2012-12-28 2019-07-26 Prec Biologics Inc Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
EP2941302B1 (en) 2013-01-02 2018-08-01 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Antibodies that bind to tl1a and their uses
WO2014107739A1 (en) 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
KR20210096697A (ko) 2013-01-10 2021-08-05 젠맵 비. 브이 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도
US10980804B2 (en) 2013-01-18 2021-04-20 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
CA2898262A1 (en) 2013-01-24 2014-07-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Tnf-alpha antigen-binding proteins
TWI635098B (zh) 2013-02-01 2018-09-11 再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
CN104968682A (zh) 2013-02-05 2015-10-07 英格玛布股份公司 针对CD3ε和BCMA的双特异性抗体
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
WO2015198217A2 (en) 2013-02-08 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long-acting antibodies targeting il-17
EA201591465A1 (ru) 2013-02-08 2015-12-30 АйАрЭм ЭлЭлСи Специфичные участки для модификации антител для получения иммуноконъюгатов
AU2014213599C1 (en) 2013-02-08 2017-09-07 Novartis Ag Anti-IL-17A antibodies and their use in treating autoimmune and inflammatory disorders
EP3617220B1 (en) 2013-02-12 2021-03-24 Bristol-Myers Squibb Company High ph protein refolding methods
ES2813501T3 (es) 2013-02-12 2021-03-24 Bristol Myers Squibb Co Métodos de replegado de proteínas basados en filtración de flujo tangencial
DK3255062T3 (da) 2013-02-14 2019-10-07 Innate Pharma Anti-nkp46-antistof til diagnosticering af et ikke-kutant perifert t-cellelymfom (ptcl)
FI3889173T3 (fi) 2013-02-15 2023-10-02 Bioverativ Therapeutics Inc Optimoitu tekijä viii:n geeni
DK2958941T3 (da) 2013-02-20 2019-06-24 Innate Pharma Forbindelse, der binder specifikt til kir3dl2, til anvendelse til behandling af perifert t-cellelymfom
HK1211235A1 (en) 2013-02-22 2016-05-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Methods of treating cancer and preventing drug resistance
US9968687B2 (en) 2013-02-22 2018-05-15 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibody drug conjugates
AR094873A1 (es) 2013-02-25 2015-09-02 Genentech Inc Métodos y composiciones para detectar y tratar mutantes de akt resistentes a fármacos
MX2015010789A (es) 2013-02-26 2015-11-26 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti-pcsm.
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
RU2015137610A (ru) 2013-03-06 2017-04-10 Дженентек, Инк. Способы лечения и профилактики лекарственной резистентности злокачественных опухолей
IL275376B2 (en) 2013-03-11 2024-01-01 Genzyme Corp Hyperglycosylated binding polypeptides
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
CN107693781B (zh) 2013-03-13 2021-11-09 巴扎德制药公司 用于眼部递送的嵌合细胞因子制剂
AU2014239903A1 (en) 2013-03-14 2015-09-17 Genentech, Inc. Combinations of a MEK inhibitor compound with an HER3/EGFR inhibitor compound and methods of use
PE20151672A1 (es) 2013-03-14 2015-11-27 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-b7-h4
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
EP2968520B1 (en) 2013-03-14 2021-05-12 MacroGenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells that express an activating receptor
EP2970479B1 (en) 2013-03-14 2019-04-24 Novartis AG Antibodies against notch 3
BR112015022604A2 (pt) 2013-03-14 2017-10-24 Genentech Inc usos de um modulador de modificador de cromatina e um antagonista de egfr
JP6387392B2 (ja) 2013-03-15 2018-09-05 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｉｘ因子ポリペプチド製剤
AR095517A1 (es) 2013-03-15 2015-10-21 Genentech Inc ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR QUIMIOATRAYENTE EXPRESADO EN CÉLULAS T HELPER 2 (ANTI-CRTh2) Y MÉTODOS DE USO
AU2014227638A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Merck Patent Gmbh Tetravalent bispecific antibodies
KR102426481B1 (ko) 2013-03-15 2022-07-27 제넨테크, 인크. IL-22 폴리펩티드 및 IL-22 Fc 융합 단백질 및 사용 방법
US9062108B2 (en) 2013-03-15 2015-06-23 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 and/or IL-17
HK1219983A1 (zh) 2013-03-15 2017-04-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. 治疗性肽
KR101763352B1 (ko) 2013-03-15 2017-07-31 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 항­ｌａｇ­3 결합 단백질
CN114717206A (zh) 2013-03-15 2022-07-08 Atyr 医药公司 组氨酰-trna合成酶-fc缀合物
EA038918B1 (ru) 2013-03-15 2021-11-09 Зинджения, Инк. Пептид, связывающий рецептор эпидермального фактора роста, мультиспецифические комплексы, содержащие пептид и антитела, и их применение
DK2968495T3 (da) 2013-03-15 2019-10-14 Daniel J Capon Hybrid immunoglobulin indeholdende en ikke-peptid-bro
KR20150130451A (ko) 2013-03-15 2015-11-23 제넨테크, 인크. 암 치료 방법 및 항암제 내성 예방을 위한 방법
FR3003171B1 (fr) * 2013-03-15 2015-04-10 Lab Francais Du Fractionnement Nouveaux medicaments comprenant une composition d'anticorps enrichie en isoforme de charge majoritaire
US10035859B2 (en) 2013-03-15 2018-07-31 Biogen Ma Inc. Anti-alpha V beta 6 antibodies and uses thereof
US10035860B2 (en) 2013-03-15 2018-07-31 Biogen Ma Inc. Anti-alpha V beta 6 antibodies and uses thereof
MX374488B (es) 2013-03-15 2025-03-06 Genentech Inc Biomarcadores y su uso en el tratamiento de condiciones relacionadas con pd-1 y pd-l1.
TW201511770A (zh) 2013-03-15 2015-04-01 Genentech Inc 診斷及治療肝癌之組合物及方法
HK1219740A1 (zh) 2013-03-15 2017-04-13 Biogen Ma Inc. 使用抗αVβ5抗体治疗和预防急性肾损伤
CA2902910A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Ac Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
EP2968590B1 (en) 2013-03-15 2018-09-05 Novartis AG Antibody drug conjugates
EP3933401A3 (en) 2013-03-27 2022-04-13 F. Hoffmann-La Roche AG Use of biomarkers for assessing treatment of gastrointestinal inflammatory disorders with beta7 integrin antagonists
SG11201508170TA (en) 2013-04-02 2015-11-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fc REGION VARIANT
BR112015025955A2 (pt) 2013-04-22 2017-10-17 Glycotope Gmbh tratamentos anticancerosos com anticorpos anti-egfr apresentando uma baixa fucosilação
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
CN105164157B (zh) 2013-04-29 2024-05-28 豪夫迈·罗氏有限公司 Fc-受体结合的修饰的非对称抗体及使用方法
UA113129C2 (xx) 2013-04-29 2016-12-12 ЗЛИТА КОНСТРУКЦІЯ АНТИТІЛО ПРОТИ CD38 З ОСЛАБЛЕНИМ ІНТЕРФЕРОНОМ АЛЬФА-2b
TWI747803B (zh) 2013-04-29 2021-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 人類結合ｆｃｒｎ之經修飾抗體及使用方法
CA2908743C (en) 2013-05-20 2024-06-25 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
SG11201509618QA (en) 2013-05-24 2015-12-30 Medimmune Llc Anti-b7-h5 antibodies and their uses
CA2922704A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Neil R. Cashman Cell senescence markers as diagnostic and therapeutic targets
DK3004174T3 (da) 2013-05-31 2019-07-22 Zymeworks Inc Heteromultimerer med reduceret eller nedreguleret effektorfunktion
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
JPWO2014208482A1 (ja) 2013-06-24 2017-02-23 中外製薬株式会社 ヒト化抗Ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ抗体を有効成分として含む腺癌以外の非小細胞肺癌の治療剤
JP6687520B2 (ja) 2013-07-18 2020-04-22 トーラス バイオサイエンシズ リミテッド ライアビリティ カンパニー 極めて長い相補性決定領域を有するヒト化抗体
US20160168231A1 (en) 2013-07-18 2016-06-16 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
EP3043813B1 (en) 2013-08-08 2021-01-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric fviii molecules
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
AU2014306867B2 (en) 2013-08-12 2017-10-26 Genentech, Inc. Compositions and method for treating complement-associated conditions
UA118267C2 (uk) 2013-08-13 2018-12-26 Санофі Антитіло до інгібітора активатора плазміногену 1 (раі-1) та його застосування
TW201734054A (zh) 2013-08-13 2017-10-01 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑-１（ｐａｉ-１）之抗體及其用途
AU2014307589A1 (en) 2013-08-14 2016-02-11 Novartis Ag Methods of treating sporadic inclusion body myositis
WO2015023891A2 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Biogen Idec Ma Inc. Factor viii-xten fusions and uses thereof
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
WO2015031673A2 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Bioasis Technologies Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
PE20160674A1 (es) 2013-08-28 2016-07-21 Stemcentrx Inc Metodos de conjugacion de anticuerpos especificos de sitio y composiciones
CN105792836A (zh) 2013-08-28 2016-07-20 施特姆森特克斯股份有限公司 新型sez6调节剂以及应用方法
CN108715615B (zh) 2013-09-13 2020-11-27 百济神州(广州)生物科技有限公司 抗pd1抗体及其作为治疗剂与诊断剂的用途
CA2922889A1 (en) 2013-09-17 2015-03-26 Genentech, Inc. Methods of using anti-lgr5 antibodies
EP3048899B1 (en) 2013-09-25 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
RU2730594C2 (ru) 2013-09-27 2020-08-24 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Способ получения полипептидного гетеромультимера
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
CN118005782A (zh) 2013-10-02 2024-05-10 免疫医疗有限责任公司 中和抗甲型流感抗体及其用途
CA2922912A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
JP2016537965A (ja) 2013-10-11 2016-12-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｓｐ４阻害剤及び使用方法
KR20160070136A (ko) 2013-10-18 2016-06-17 제넨테크, 인크. 항-rspo2 및/또는 항-rspo3 항체 및 그의 용도
KR20160068802A (ko) 2013-10-23 2016-06-15 제넨테크, 인크. 호산구성 장애를 진단 및 치료하는 방법
EP3063275B1 (en) 2013-10-31 2019-09-25 Resolve Therapeutics, LLC Therapeutic nuclease-albumin fusions and methods
BR112016010169A2 (pt) 2013-11-06 2017-12-05 Stemcentrx Inc anticorpos anticlaudina e métodos de uso
MX2016005854A (es) 2013-11-07 2017-07-28 Inserm (Institut Nat De La Santé Et De La Rech Médicale) Anticuerpo anti-her3 alosterico de la neuregulina.
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
US10584147B2 (en) 2013-11-08 2020-03-10 Biovertiv Therapeutics Inc. Procoagulant fusion compound
JPWO2015068847A1 (ja) 2013-11-11 2017-03-09 中外製薬株式会社 改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子
TWI736515B (zh) 2013-11-13 2021-08-21 美商輝瑞大藥廠 類腫瘤壞死因子之配體１ａ之專一性抗體及其組合物及用途
NZ717673A (en) 2013-11-21 2020-02-28 Hoffmann La Roche Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
TWI702316B (zh) 2013-12-04 2020-08-21 日商中外製藥股份有限公司 因應化合物濃度使抗原結合能力變化的抗原結合分子及其資料庫
ES2755129T3 (es) 2013-12-06 2020-04-21 Dana Farber Cancer Inst Inc Péptidos terapéuticos
CN114044825A (zh) 2013-12-09 2022-02-15 爱乐科斯公司 抗Siglec-8抗体及其使用方法
US20160333063A1 (en) 2013-12-13 2016-11-17 The General Hospital Corporation Soluble high molecular weight (hmw) tau species and applications thereof
EA201691214A1 (ru) 2013-12-13 2016-12-30 Дженентек, Инк. Антитела к cd33 и иммуноконъюгаты
EP3647324A1 (en) 2013-12-17 2020-05-06 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
AU2014364606A1 (en) 2013-12-17 2016-07-07 Genentech, Inc. Combination therapy comprising OX40 binding agonists and PD-1 axis binding antagonists
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
EP3083690A1 (en) 2013-12-17 2016-10-26 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
CN112390883A (zh) 2013-12-17 2021-02-23 基因泰克公司 抗cd3抗体及使用方法
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
BR112016013562A2 (pt) * 2013-12-20 2017-10-03 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-tau(ps422) humanizados, seus usos, e formulações farmacêuticas
TWI670283B (zh) 2013-12-23 2019-09-01 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN106661107B (zh) 2013-12-24 2021-12-24 杨森制药公司 抗vista抗体及片段
CN106103476B (zh) 2013-12-24 2020-11-27 阿尔金克斯有限公司 FcRn拮抗剂及使用方法
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
JP6476194B2 (ja) 2014-01-03 2019-02-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 二重特異性抗ハプテン／抗血液脳関門受容体抗体、それらの複合体、及び血液脳関門シャトルとしてのそれらの使用
JP6521464B2 (ja) 2014-01-03 2019-05-29 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート
MX373856B (es) 2014-01-03 2020-03-25 Hoffmann La Roche Conjugados helicoidales-anticuerpo anti-helicoidal unidos covalentemente y usos de los mismos.
CA2932547C (en) 2014-01-06 2023-05-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
RS65533B1 (sr) 2014-01-10 2024-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc Himerni proteini faktora viii i njihova upotreba
MX382848B (es) 2014-01-15 2025-03-13 Hoffmann La Roche Variantes de región fc con propiedades de unión a receptor fc neonatal (fcrn) modificadas y de unión a proteína a mantenidas.
WO2015109212A1 (en) 2014-01-17 2015-07-23 Pfizer Inc. Anti-il-2 antibodies and compositions and uses thereof
AU2015209154A1 (en) 2014-01-24 2017-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-STEAP1 antibodies and immunoconjugates
CA2937898C (en) 2014-01-24 2025-05-06 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies that bind to beta-klotho and their uses
DK3102197T3 (en) 2014-02-04 2018-11-19 Genentech Inc Smoothened mutant and methods for its use
TWI785472B (zh) 2014-02-08 2022-12-01 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
SG11201606316XA (en) 2014-02-08 2016-08-30 Genentech Inc Methods of treating alzheimer's disease
CN106068277B (zh) 2014-02-12 2021-08-24 豪夫迈·罗氏有限公司 抗锯齿蛋白1抗体及使用方法
US10100115B2 (en) 2014-02-14 2018-10-16 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of vascularizing cancers
JP2017507939A (ja) 2014-02-21 2017-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−１３／ｉｌ−１７二重特異性抗体及びその使用
US9732154B2 (en) * 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
EP3110446B1 (en) 2014-02-28 2021-12-01 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
NZ711451A (en) 2014-03-07 2016-05-27 Alexion Pharma Inc Anti-c5 antibodies having improved pharmacokinetics
SG11201606850QA (en) 2014-03-12 2016-09-29 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
DK3116908T3 (da) 2014-03-14 2019-10-07 Innate Pharma Humaniserede kir3dl2-antistoffer
HRP20211748T1 (hr) 2014-03-14 2022-02-18 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupci i sastavi za sekreciju heterolognih polipeptida
WO2015139020A2 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Vaccine compositions and methods for restoring nkg2d pathway function against cancers
SI3116486T1 (sl) 2014-03-14 2020-07-31 Biomolecular Holdings Llc Hibridni imunoglobulin, ki vsebuje nepeptidilno vezavo
TWI754319B (zh) 2014-03-19 2022-02-01 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
EP4015535B1 (en) 2014-03-19 2025-08-06 Genzyme Corporation Site-specific glycoengineering of targeting moieties
CA2943242A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 X-Body, Inc. Bi-specific antigen-binding polypeptides
WO2015140591A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
JP2017516458A (ja) 2014-03-24 2017-06-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド ｃ−ｍｅｔ拮抗剤による癌治療及びｃ−ｍｅｔ拮抗剤のＨＧＦ発現との相関
AU2015235986B2 (en) 2014-03-27 2020-12-03 Genentech, Inc. Methods for diagnosing and treating inflammatory bowel disease
EP3126386A1 (en) 2014-03-31 2017-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
CR20160500A (es) 2014-03-31 2016-12-14 Genentech Inc Anticuerpos anti-ox40 y métodos de uso
US9546214B2 (en) 2014-04-04 2017-01-17 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
WO2015156268A1 (ja) 2014-04-07 2015-10-15 中外製薬株式会社 免疫活性化抗原結合分子
SG11201608192SA (en) 2014-04-11 2016-10-28 Medimmune Llc Bispecific her2 antibodies
JP2017518737A (ja) 2014-04-21 2017-07-13 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ＳＹＫ標的治療薬のための抗ｐＳＹＫ抗体分子及びその使用
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
TW201622746A (zh) 2014-04-24 2016-07-01 諾華公司 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
US10179821B2 (en) 2014-05-01 2019-01-15 Genentech, Inc. Anti-factor D antibodies
KR102409014B1 (ko) 2014-05-08 2022-06-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Gpc3 표적 치료제 요법이 유효한 환자에게 투여되는 gpc3 표적 치료제
CA2947157A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function
EP3693386A1 (en) 2014-05-16 2020-08-12 Ablynx NV Immunoglobulin variable domains
KR20250099289A (ko) 2014-05-16 2025-07-01 아블린쓰 엔.브이. 개선된 면역글로불린 가변 도메인
WO2015179658A2 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
EP3146071B1 (en) 2014-05-23 2020-09-02 F. Hoffmann-La Roche AG Mit biomarkers and methods using the same
PH12022550194A1 (en) 2014-05-28 2022-09-19 Agenus Inc Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
AU2015266797C1 (en) 2014-05-29 2019-04-04 Macrogenics, Inc. Tri-Specific Binding Molecules that specifically bind to multiple Cancer Antigens and methods of use thereof
SI3148581T1 (sl) 2014-05-30 2020-02-28 Henlix Biotech Co., Ltd. Protitelesa receptorja anti-epidermalnega rastnega faktroja (EGFR)
HUE047385T2 (hu) 2014-06-06 2020-04-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek glükokortikoid indukált tumornekrózis faktor receptor (GITR) ellen és annak felhasználásai
CN107073109B (zh) 2014-06-11 2021-08-06 凯西·A·格林 Vista激动剂和拮抗剂抑制或增强体液免疫的用途
KR20170010785A (ko) 2014-06-11 2017-02-01 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체 및 이의 용도
EP3154589A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CA2947504A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
WO2015197598A2 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
CA2952727A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Innate Pharma Multispecific nkp46 binding proteins
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
CN110156892B (zh) 2014-07-03 2023-05-16 百济神州有限公司 抗pd-l1抗体及其作为治疗剂及诊断剂的用途
JP2017526641A (ja) 2014-07-11 2017-09-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ経路阻害
US20160009805A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Genentech, Inc. Anti-pd-l1 antibodies and diagnostic uses thereof
BR112017001385B1 (pt) 2014-07-22 2023-12-05 Cb Therapeutics, Inc. Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo que liga a pd-1, uso deste, composição, polinucleotídeo isolado e vetor de expressão
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
CA2956399A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Cb Therapeutics, Inc. Anti-pd-l1 antibodies
EA201790336A1 (ru) 2014-08-07 2017-06-30 Новартис Аг Антитела к ангиопоэтинподобному белку 4 и способы применения
TW201613977A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
CA2954599A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
KR102050082B1 (ko) 2014-08-19 2019-11-29 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-tigit 항체
WO2016030488A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Innate Pharma Treatment of celiac disease
AU2015308818B2 (en) 2014-08-28 2021-02-25 Bioatla Llc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified T-cells
FR3025515B1 (fr) 2014-09-05 2016-09-09 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'un anticorps monoclonal
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
CN107001479B (zh) 2014-09-12 2021-09-28 基因泰克公司 抗her2抗体和免疫缀合物
AR101844A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos y conjugados modificados genéticamente con cisteína
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
KR20170055521A (ko) 2014-09-17 2017-05-19 제넨테크, 인크. 항-her2 항체를 포함하는 면역콘주게이트
US20160082120A1 (en) 2014-09-23 2016-03-24 Genentech, Inc. METHODS OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
KR20170062490A (ko) 2014-09-26 2017-06-07 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 안정화된 아드레노메둘린 유도체 및 그의 용도
AU2015323860B2 (en) 2014-09-29 2021-05-27 Duke University Bispecific molecules comprising an HIV-1 envelope targeting arm
WO2016056812A1 (en) * 2014-10-06 2016-04-14 Genexine, Inc. Human igg4 fc polypeptide variant
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
CA3205824A1 (en) 2014-10-09 2016-04-14 Genzyme Corporation Glycoengineered antibody drug conjugates
BR112017007765B1 (pt) 2014-10-14 2023-10-03 Halozyme, Inc Composições de adenosina deaminase-2 (ada2), variantes do mesmo e métodos de usar o mesmo
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
MA41480A (fr) 2014-10-17 2017-12-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps qui se lient au ccr6 et leurs utilisations
JP6889660B2 (ja) 2014-10-23 2021-06-18 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 抗ｎｋｇ２ａ剤を用いた癌の処置
MX393988B (es) 2014-10-29 2025-03-24 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Variantes de interferon a2b.
RU2017119009A (ru) 2014-11-03 2018-12-05 Дженентек, Инк. Анализы для обнаружения субпопуляций иммунных т-клеток и способы их применения
SG11201703521UA (en) 2014-11-03 2017-05-30 Genentech Inc Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment
WO2016073791A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria
KR20170080675A (ko) 2014-11-05 2017-07-10 제넨테크, 인크. 항-fgfr2/3 항체 및 이의 이용 방법
ES2819256T3 (es) 2014-11-05 2021-04-15 Genentech Inc Métodos para producir proteínas bicatenarias en bacterias
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
CN107074966A (zh) 2014-11-06 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 具有改变的FCRN‑和蛋白A‑结合性质的Fc区变体
EP3215528B1 (en) 2014-11-06 2019-08-07 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn-binding and methods of use
EP3215536A1 (en) 2014-11-06 2017-09-13 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
TWI705976B (zh) 2014-11-10 2020-10-01 美商建南德克公司 抗介白素-33抗體及其用途
CN107105632A (zh) 2014-11-10 2017-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 肾病动物模型及其治疗剂
LT3218406T (lt) 2014-11-10 2021-06-25 Medimmune Limited Surišančios molekulės, specifiškos cd73 ir jų panaudojimas
HK1246304A1 (zh) 2014-11-11 2018-09-07 Medimmune Limited 包含抗cd73抗体和a2a受体抑制剂的治疗组合及其用途
US11154615B2 (en) 2014-11-11 2021-10-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Library of antigen-binding molecules including modified antibody variable region
MA40913A (fr) 2014-11-14 2017-09-20 Novartis Ag Conjugués anticorps-médicament
JP2017537090A (ja) 2014-11-17 2017-12-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｏｘ４０結合アゴニスト及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストを含む併用療法
RS60739B1 (sr) 2014-11-17 2020-09-30 Regeneron Pharma Postupci za lečenje tumora upotrebom cd3xcd20 bispecifičnog antitela
HRP20210124T1 (hr) 2014-11-19 2021-03-19 Axon Neuroscience Se Humanizirana tau antitijela u alzheimerovoj bolesti
EP3845565A3 (en) 2014-11-19 2021-09-08 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
US11008403B2 (en) 2014-11-19 2021-05-18 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-BACE1 multispecific antibodies and methods of use
HUE050596T2 (hu) 2014-11-21 2020-12-28 Bristol Myers Squibb Co Antitestek CD73 ellen és azok felhasználásai
MX386942B (es) 2014-11-21 2025-03-19 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos que comprenden regiones constantes pesadas modificadas.
US9382321B2 (en) * 2014-11-26 2016-07-05 Adventis Health System/Sunbelt, Inc. Effector-deficient anti-CD32A antibodies
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
JP2018505911A (ja) 2014-12-05 2018-03-01 イミュネクスト，インコーポレーテッド 推定上のｖｉｓｔａ受容体としてのｖｓｉｇ８の同定と、ｖｉｓｔａ／ｖｓｉｇ８調節剤を産生するためのその使用
MA40938A (fr) 2014-12-05 2017-10-11 Hoffmann La Roche Anticorps anti-cd79b et méthodes d'utilisation desdits anticorps
JP6864953B2 (ja) 2014-12-09 2021-04-28 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ａｘｌに対するヒトモノクローナル抗体
EP3230317A2 (en) 2014-12-10 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
CA2966551A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Assay and method for determining cdc eliciting antibodies
MX2017005774A (es) 2014-12-19 2017-07-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos antimiostatina, polipeptidos que contienen regiones fc variantes, y metodos de uso.
TWI725847B (zh) 2014-12-19 2021-04-21 日商中外製藥股份有限公司 抗c5抗體及使用方法
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
PL3233912T3 (pl) 2014-12-19 2021-12-27 Regenesance B.V. Przeciwciała, które wiążą ludzkie c6 oraz ich zastosowania
TWI708786B (zh) 2014-12-23 2020-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 針對ｔｉｇｉｔ之抗體
EP3244926B8 (en) 2015-01-14 2024-08-21 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Treatment of cancer with anti-lap monoclonal antibodies
WO2016117346A1 (en) 2015-01-22 2016-07-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
EP3250601A4 (en) 2015-01-26 2018-07-11 MacroGenics, Inc. Multivalent molecules comprising dr5-binding domains
CN107407677B (zh) 2015-01-28 2020-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 多发性硬化的基因表达标志和治疗
AU2016215227A1 (en) 2015-02-04 2017-09-21 Assistance Publique-Hopitaux De Paris Mutant smoothened and methods of using the same
CA2974547A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibodies comprising an ion concentration dependent antigen-binding domain, fc region variants, il-8-binding antibodies, and uses thereof
JP6724023B2 (ja) 2015-02-09 2020-07-15 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 改善された補体活性化を示す操作された免疫グロブリンｆｃポリペプチド
KR102669294B1 (ko) 2015-02-19 2024-05-23 컴퓨젠 엘티디. 항-pvrig 항체 및 사용 방법
WO2016134335A2 (en) 2015-02-19 2016-08-25 Compugen Ltd. Pvrig polypeptides and methods of treatment
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
MX2017010336A (es) 2015-02-26 2017-12-20 Genentech Inc Antagonistas de integrina beta7 y métodos para el tratamiento de la enfermedad de crohn.
KR102720769B1 (ko) 2015-03-09 2024-10-22 아르제넥스 비브이 FcRn 길항제를 사용하여 Fc-함유된 제제의 혈청 수준을 감소시키는 방법
HK1247287A1 (zh) 2015-03-16 2018-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag 检测和定量il-13的方法和在诊断和治疗th2相关疾病中的用途
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
PL3277725T3 (pl) 2015-03-30 2021-06-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Regiony stałe łańcucha ciężkiego o zmniejszonym wiązaniu do receptorów Fc gamma
FR3034420A1 (fr) 2015-03-31 2016-10-07 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-cd303
RU2754041C2 (ru) 2015-04-03 2021-08-25 Еурека Терапьютикс, Инк. Конструкции, направленные на комплексы пептида afp/мнс, и виды их использования
AR104368A1 (es) 2015-04-03 2017-07-19 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos anti-cd20- / anti-baff
WO2016164480A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Genentech, Inc. Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use
SMT202100467T1 (it) 2015-04-17 2021-09-14 Alpine Immune Sciences Inc Proteine immunomodulatorie con affinità regolabili
SI3286315T1 (sl) 2015-04-24 2021-09-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek identifikacije bakterij, ki obsegajo vezavne polipeptide
HK1250997A1 (zh) 2015-05-01 2019-01-18 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
PH12017502013B1 (en) 2015-05-07 2022-07-22 Agenus Inc Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
EP3936524A3 (en) 2015-05-11 2022-06-15 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
DK3294770T4 (da) 2015-05-12 2024-05-21 Hoffmann La Roche Terapeutiske og diagnostiske fremgangsmåder til cancer
CA2986713A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center T cell receptor-like antibodies specific for a prame peptide
ES2898023T3 (es) 2015-05-22 2022-03-03 Inst Nat Sante Rech Med Fragmentos de anticuerpos monoclonales humanos que inhiben tanto la actividad catalítica de Cath-D como su unión al receptor LRP1
JP2018520658A (ja) 2015-05-29 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体及びその使用
CN108137687B (zh) 2015-05-29 2021-10-29 百时美施贵宝公司 抗ox40抗体及其用途
EP3763827A1 (en) 2015-05-29 2021-01-13 F. Hoffmann-La Roche AG Pd-l1 promoter methylation in cancer
IL255372B (en) 2015-05-29 2022-07-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer
HRP20200640T1 (hr) 2015-05-30 2020-07-10 Molecular Templates, Inc. De-imunizirane, okosnice podjedinice shiga toksina a i molekule koje ciljaju stanice koje ih sadrže
WO2016196679A1 (en) 2015-06-02 2016-12-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
AU2016273028B2 (en) 2015-06-05 2019-02-14 Novartis Ag Antibodies targeting bone morphogenetic protein 9 (BMP9) and methods therefor
EP4465050A3 (en) 2015-06-05 2025-06-11 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
EP3303399A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
JP2018518483A (ja) 2015-06-08 2018-07-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストを使用して癌を治療する方法
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HK1255483A1 (zh) 2015-06-15 2019-08-16 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
HRP20231134T1 (hr) 2015-06-16 2024-01-05 F. Hoffmann - La Roche Ag Humanizirana i afinitetno zrela protutijela na fcrh5 i postupci za uporabu
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
CN107849145B (zh) 2015-06-16 2021-10-26 基因泰克公司 抗cd3抗体及其使用方法
AU2016278239B9 (en) 2015-06-17 2022-08-11 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
CA2986263A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
DK3310812T3 (da) 2015-06-17 2025-09-29 Hoffmann La Roche Anti-HER2-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
EP3310813A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 Novartis AG Antibody drug conjugates
AU2016284866B2 (en) 2015-06-23 2022-09-29 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
US10113003B2 (en) 2015-06-23 2018-10-30 Innate Pharma Multispecific NK engager proteins
SG10202107165XA (en) 2015-06-24 2021-08-30 Hoffmann La Roche Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
WO2016207717A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-vista antibodies and fragments
EP3744732B1 (en) 2015-06-24 2025-09-10 F. Hoffmann-La Roche AG Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
CA2990305A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Mab Discovery Gmbh Monoclonal anti-il-1racp antibodies
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
ES2898065T3 (es) 2015-06-29 2022-03-03 Ventana Med Syst Inc Materiales y procedimientos para realizar ensayos histoquímicos para proepirregulina y anfirregulina humanas
KR20180021864A (ko) 2015-06-29 2018-03-05 제넨테크, 인크. 장기 이식에서 사용하기 위한 유형 ii 항-cd20 항체
DK3322733T3 (da) 2015-07-13 2021-10-18 Compugen Ltd Hide1-sammensætninger og fremgangsmåder
RS61586B1 (sr) * 2015-07-22 2021-04-29 Inatherys Anti-tfr antitela i njihova upotreba u lečenju proliferativnih i zapaljenjskih poremećaja
WO2017015619A1 (en) 2015-07-23 2017-01-26 The Regents Of The University Of California Antibodies to coagulation factor xia and uses thereof
EP3328427B1 (en) 2015-07-27 2024-05-29 The General Hospital Corporation Antibody derivatives with conditionally enabled effector function
MA42542B1 (fr) 2015-07-30 2021-09-30 Macrogenics Inc Molécules se liant à pd-1 et méthodes d'utilisation correspondantes
WO2017023859A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antigen-binding proteins targeting cd56 and uses thereof
WO2017024060A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Biogen Ma Inc. Factor ix fusion proteins and methods of making and using same
PL3331910T3 (pl) 2015-08-03 2020-05-18 Engmab Sàrl Przeciwciała monoklonalne przeciwko ludzkiemu antygenowi dojrzewania limfocytów B (BCMA)
RU2752530C2 (ru) 2015-08-03 2021-07-29 Новартис Аг Способы лечения расстройств, связанных с fgf21
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
JP6914919B2 (ja) 2015-08-28 2021-08-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヒプシン抗体及びその使用
WO2017040790A1 (en) 2015-09-01 2017-03-09 Agenus Inc. Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
EP3798234A1 (en) 2015-09-02 2021-03-31 Immutep S.A.S. Anti-lag-3 agonistic antibodies
MY186352A (en) 2015-09-09 2021-07-15 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding antibodies and methods of using the antibodies
KR20180042433A (ko) 2015-09-09 2018-04-25 노파르티스 아게 흉선 기질 림포포이에틴 (tslp)-결합 항체 및 항체의 사용 방법
US20190022092A1 (en) 2015-09-15 2019-01-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor and a GITR Binding Molecule, a 4-1BB Agonist, or an OX40 Agonist
US9862760B2 (en) 2015-09-16 2018-01-09 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
MY203894A (en) 2015-09-18 2024-07-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Il-8-binding antibodies and uses thereof
UA126278C2 (uk) 2015-09-21 2022-09-14 Аптево Рісьорч Енд Девелопмент Ллс Поліпептиди, які зв'язують cd3
JP6904947B2 (ja) 2015-09-22 2021-07-21 スプリング バイオサイエンス コーポレーション 抗ｏｘ４０抗体及びその診断用途
JP6959912B2 (ja) 2015-09-23 2021-11-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｖｅｇｆ抗体の最適化変異体
WO2017053906A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Abvitro Llc Hiv antibody compositions and methods of use
LT3353210T (lt) 2015-09-25 2025-01-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš tigit ir jų naudojimo būdai
AR106184A1 (es) 2015-09-29 2017-12-20 Celgene Corp Proteínas de unión a pd-1 y sus métodos de uso
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
CN108137699B (zh) 2015-10-02 2022-05-27 豪夫迈·罗氏有限公司 对pd1和tim3特异性的双特异性抗体
CN115746143A (zh) 2015-10-02 2023-03-07 豪夫迈·罗氏有限公司 对共刺激性tnf受体特异性的双特异性抗体
MA43023A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Anticorps de récepteur de la transferrine humaine/anti-humaine cd20 bispécifique et leurs procédés d'utilisation
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
HUE056033T2 (hu) 2015-10-02 2022-01-28 Hoffmann La Roche Anti-pd1 antitestek és felhasználási módszerek
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
SI3359572T1 (sl) 2015-10-06 2025-03-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za zdravljenje multiple skleroze
AU2016334623A1 (en) 2015-10-07 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory TNF receptor
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
EP3365369A1 (en) 2015-10-23 2018-08-29 Pfizer Inc Anti-il-2 antibodies and compositions and uses thereof
IL295756A (en) 2015-10-29 2022-10-01 Hoffmann La Roche Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
JO3555B1 (ar) 2015-10-29 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme جسم مضاد يبطل فعالية فيروس الالتهاب الرئوي البشري
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
HRP20220064T1 (hr) 2015-10-30 2022-04-15 F. Hoffmann - La Roche Ag Zglobno modificirani fragmenti protutijela i postupci za pripravu
US10654932B2 (en) 2015-10-30 2020-05-19 Genentech, Inc. Anti-factor D antibody variant conjugates and uses thereof
TW201730211A (zh) 2015-10-30 2017-09-01 建南德克公司 抗因子d抗體及結合物
KR102162324B1 (ko) 2015-10-30 2020-10-07 제넨테크, 인크. 항-HtrA1 항체 및 이의 사용 방법
CN118725134A (zh) 2015-11-08 2024-10-01 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
JP6925278B2 (ja) 2015-11-18 2021-08-25 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
WO2017086367A1 (ja) 2015-11-18 2017-05-26 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
KR20180082563A (ko) 2015-11-19 2018-07-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체 (gitr)에 대한 항체 및 그의 용도
JP6849694B2 (ja) 2015-11-30 2021-03-24 ブリストル−マイヤーズ スクウィブ カンパニー 抗ヒトｉｐ−１０抗体およびそれらの使用
TWI717432B (zh) 2015-12-02 2021-02-01 美商艾吉納斯公司 抗體和使用彼之方法
EP3909983A1 (en) 2015-12-02 2021-11-17 STCube & Co. Inc. Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof
US11253590B2 (en) 2015-12-02 2022-02-22 Stsciences, Inc. Antibodies specific to glycosylated BTLA (B- and T- lymphocyte attenuator)
CU20180047A7 (es) 2015-12-04 2018-07-05 Novartis Ag Composiciones de anticuerpo injertado con citoquina y métodos para su uso en inmunorregulación
JP6955507B2 (ja) 2015-12-14 2021-10-27 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｐｄ‐１及びｃｔｌａ‐４との免疫応答性を有する二重特異性並びにその使用方法
RU2018123481A (ru) 2015-12-16 2020-01-20 Мерк Шарп И Доум Корп. Анти-lag3 антитела и антигенсвязывающие фрагменты
FI3390442T3 (fi) 2015-12-18 2023-11-10 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-C5-vasta-aineita ja käyttömenetelmiä
JP2019506844A (ja) 2015-12-18 2019-03-14 ノバルティス アーゲー ＣＤ３２ｂを標的とする抗体およびその使用方法
JP6142069B1 (ja) 2015-12-18 2017-06-07 中外製薬株式会社 抗ミオスタチン抗体、変異Ｆｃ領域を含むポリペプチド、および使用方法
JP7141336B2 (ja) 2015-12-25 2022-09-22 中外製薬株式会社 抗ミオスタチン抗体および使用方法
JP7219005B2 (ja) 2015-12-28 2023-02-07 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
US10596257B2 (en) 2016-01-08 2020-03-24 Hoffmann-La Roche Inc. Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies
CN109069627A (zh) 2016-01-14 2018-12-21 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 对foxp3衍生肽特异性的t细胞受体样抗体
CA3011739A1 (en) 2016-01-20 2017-07-27 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
HRP20221089T1 (hr) 2016-02-01 2022-11-25 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimizirani geni faktora viii
CN109071625A (zh) 2016-02-04 2018-12-21 柯瑞斯公司 平滑化突变体和其使用方法
WO2017137830A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-vista (b7h5) antibodies
KR20180107151A (ko) 2016-02-17 2018-10-01 노파르티스 아게 Tgf베타 2 항체
MX2018010361A (es) 2016-02-29 2019-07-08 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
JP2019514844A (ja) 2016-03-04 2019-06-06 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｃｄ７３抗体を用いた併用療法
AU2017232546B2 (en) * 2016-03-14 2024-05-02 Universitetet I Oslo Engineered immunoglobulins with altered FCRN binding
RU2746754C2 (ru) 2016-03-14 2021-04-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Индуцирующее повреждение клеток терапевтическое лекарственное средство, предназначенное для противораковой терапии
KR20180118673A (ko) 2016-03-15 2018-10-31 이나뜨 파르마 항-mica 항체
AU2017235097B2 (en) 2016-03-15 2023-08-31 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-GPC3 antibodies
WO2017161173A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Engineered trail for cancer therapy
US10745487B2 (en) 2016-03-22 2020-08-18 Bionomics Limited Method of treating cancer by administering an anti-LGR5 monoclonal antibody
KR102438140B1 (ko) 2016-03-22 2022-08-31 엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔 인간화 항-클라우딘-1 항체 및 이의 용도
JP6943872B2 (ja) 2016-03-25 2021-10-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重全抗体及び抗体複合体化薬物定量化アッセイ
CN109071653A (zh) 2016-03-29 2018-12-21 詹森生物科技公司 用增加的抗-il12和/或-23抗体给药间隔治疗牛皮癣
WO2017180864A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
NZ787243A (en) 2016-04-15 2025-12-19 Alpine Immune Sciences Inc ICOS ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11078282B2 (en) 2016-04-15 2021-08-03 Alpine Immune Sciences, Inc. CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2017181139A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Michael Molloy Anti-human vista antibodies and use thereof
PL3443350T3 (pl) 2016-04-15 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby monitorowania i leczenia nowotworu
KR102514317B1 (ko) 2016-04-15 2023-03-27 마크로제닉스, 인크. 신규 b7-h3-결합 분자, 그것의 항체 약물 콘쥬게이트 및 그것의 사용 방법
CA3021086C (en) 2016-04-15 2023-10-17 Bioatla, Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
AU2017248766A1 (en) 2016-04-15 2018-11-01 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
ES2930351T3 (es) 2016-04-15 2022-12-09 Evive Biotechnology Shanghai Ltd Un dímero de IL-22 para su uso en el tratamiento de enterocolitis necrosante
EP3445393B1 (en) 2016-04-20 2026-01-14 Merck Sharp & Dohme LLC Cmv neutralizing antigen binding proteins
JP2019522960A (ja) 2016-04-21 2019-08-22 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規の抗ｂｍｐｒ１ｂ抗体及び使用方法
US11208632B2 (en) 2016-04-26 2021-12-28 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
US11312766B2 (en) 2016-04-27 2022-04-26 Novartis Ag Antibodies against growth differentiation factor 15 and uses thereof
RU2018141360A (ru) 2016-05-02 2020-06-03 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Contorsbody - одноцепочечный связывающий мишень агент
IL321475A (en) 2016-05-06 2025-08-01 Medimmune Llc Bispecific binding proteins and their uses
JP7012665B6 (ja) 2016-05-09 2023-12-14 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｌ１ａ抗体およびその使用
CN109071640B (zh) 2016-05-11 2022-10-18 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰抗生腱蛋白抗体及使用方法
US11254742B2 (en) 2016-05-13 2022-02-22 Bioatla, Inc. Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
CN118436801A (zh) 2016-05-20 2024-08-06 豪夫迈·罗氏有限公司 Protac抗体缀合物及其使用方法
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
MY195089A (en) 2016-05-27 2023-01-10 Agenus Inc Anti-Tim-3 Antibodies and Methods of use thereof
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
AU2017269839A1 (en) 2016-05-27 2018-11-22 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of refractory generalized myasthenia gravis
WO2017214024A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
PT3468997T (pt) 2016-06-08 2023-12-07 Debra Zack Tratamento de doenças relacionadas com igg4 com anticorpos anti-cd19 com ligação cruzada a cd32b
CA3027651A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
CA3019904A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
JP7133477B2 (ja) 2016-06-24 2022-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリユビキチン多重特異性抗体
MA45554A (fr) 2016-07-01 2019-05-08 Resolve Therapeutics Llc Fusions de binucléase optimisées.
EP3478717B1 (en) 2016-07-04 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody format
JP6993056B2 (ja) 2016-07-05 2022-02-15 ベイジーン リミテッド 癌治療のためのｐｄ－１アンタゴニスト及びｒａｆ阻害剤の組合せ
US20190248893A1 (en) 2016-07-14 2019-08-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
JP7241677B2 (ja) 2016-07-19 2023-03-17 テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド 抗ｃｄ４７併用療法
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US20200148750A1 (en) 2016-07-21 2020-05-14 Emory University Ebola Virus Antibodies and Binding Agents Derived Therefrom
WO2018022479A1 (en) 2016-07-25 2018-02-01 Biogen Ma Inc. Anti-hspa5 (grp78) antibodies and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CN110088127A (zh) 2016-07-28 2019-08-02 高山免疫科学股份有限公司 Cd155变体免疫调节蛋白及其用途
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
NL2017267B1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
EP3491022B1 (en) 2016-07-29 2025-09-10 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Antibodies targeting tumor associated macrophages and uses thereof
CN109415444B (zh) 2016-07-29 2024-03-01 中外制药株式会社 显示增加的备选fviii辅因子功能活性的双特异性抗体
NL2017270B1 (en) 2016-08-02 2018-02-09 Aduro Biotech Holdings Europe B V New anti-hCTLA-4 antibodies
KR20250036943A (ko) 2016-08-02 2025-03-14 비스테라, 인크. 조작된 폴리펩티드 및 그의 용도
US11649285B2 (en) 2016-08-03 2023-05-16 Bio-Techne Corporation Identification of VSIG3/VISTA as a novel immune checkpoint and use thereof for immunotherapy
AU2017305073B2 (en) 2016-08-05 2024-02-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for prevention or treatment of IL-8 related diseases
KR20190077306A (ko) 2016-08-05 2019-07-03 메디뮨 엘엘씨 항-o2 항체 및 이의 용도
US11773162B2 (en) 2016-08-05 2023-10-03 Allakos, Inc. Anti-Siglec-7 antibodies for the treatment of cancer
JP7250674B2 (ja) 2016-08-08 2023-04-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療及び診断方法
WO2018031662A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
CA3033661A1 (en) * 2016-08-12 2018-02-15 Janssen Biotech, Inc. Engineered antibodies and other fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions
US10751415B2 (en) 2016-08-17 2020-08-25 Compugen Ltd. Anti-TIGIT antibodies, anti-PVRIG antibodies and combinations thereof
DK3500299T3 (da) 2016-08-19 2024-01-29 Beigene Switzerland Gmbh Kombination af zanubrutinib med et anti-CD20- eller et anti-PD-1-antistof til anvendelse i behandling af cancer
WO2018044970A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus k envelope (herv-k) and uses thereof
EP3507305A1 (en) 2016-09-02 2019-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
US20190270821A1 (en) 2016-09-13 2019-09-05 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of pulmonary fibrosis
JP7072576B2 (ja) 2016-09-16 2022-05-20 シャンハイ・ヘンリウス・バイオテック・インコーポレイテッド 抗ｐｄ－１抗体
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
CN116731197A (zh) 2016-09-19 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
EA201990747A1 (ru) 2016-09-19 2019-10-31 Способы лечения иммунных нарушений с применением белков, связывающих pd–1
EP4360714A3 (en) 2016-09-21 2024-07-24 Nextcure, Inc. Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof
WO2018057735A1 (en) 2016-09-21 2018-03-29 Nextcure, Inc. Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof
PL3528838T3 (pl) 2016-09-23 2023-12-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Zastosowania antagonistów IL-13 do leczenia atopowego zapalenia skóry
JOP20190055A1 (ar) 2016-09-26 2019-03-24 Merck Sharp & Dohme أجسام مضادة ضد cd27
IL316404A (en) 2016-09-30 2024-12-01 Janssen Biotech Inc A safe and effective method for treating psoriasis with a specific anti-IL23 antibody
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
CA3038712A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CN117586403A (zh) 2016-10-11 2024-02-23 艾吉纳斯公司 抗lag-3抗体及其使用方法
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
AU2017346488A1 (en) 2016-10-19 2019-05-30 Humabs Biomed Sa Anti-O1 antibodies and uses thereof
TWI778985B (zh) 2016-10-20 2022-10-01 法商賽諾菲公司 抗chikv抗體及其用途
WO2018075857A1 (en) 2016-10-20 2018-04-26 I-Mab Novel cd47 monoclonal antibodies and uses thereof
AU2017345203B2 (en) 2016-10-21 2024-08-01 Innate Pharma Treatment with anti-KIR3DL2 agents
EP3532091A2 (en) 2016-10-29 2019-09-04 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-mic antibidies and methods of use
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
EA201990787A1 (ru) 2016-11-02 2019-12-30 Энгмаб Сарл Биспецифичное антитело к всма и cd3 и иммунологическое лекарственное средство для комбинированного применения в лечении множественной миеломы
WO2018089628A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
WO2018089695A1 (en) 2016-11-11 2018-05-17 Dynavax Technologies Corporation Toll-like receptor antagonist compounds and methods of use
JP2020500020A (ja) 2016-11-14 2020-01-09 ノバルティス アーゲー 融合誘導性タンパク質ｍｉｎｉｏｎに関連する組成物、方法、および治療上の使用
CA3042435A1 (en) 2016-11-15 2018-05-24 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
MA46861A (fr) 2016-11-16 2019-09-25 Janssen Biotech Inc Procédé de traitement du psoriasis avec un anticorps anti-il-23 spécifique
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
KR102221364B1 (ko) 2016-11-21 2021-03-04 쿠레아브 게엠베하 항-gp73　항체　및　면역접합체
US20230192896A1 (en) 2016-11-23 2023-06-22 Bioverativ Therapeutics Inc. Bispecific antibodies binding to coagulation factor ix and coagulation factor x
WO2018102760A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of inducing immune tolerance to clotting factors
CA3045660A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
WO2018104893A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Alpha4-beta7 antibodies with incrased fcrn binding and/or half-life
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
MX2019006330A (es) 2016-12-07 2019-09-26 Genentech Inc Anticuerpos anti-tau y metodos de uso.
CA3044679A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
JP6992068B2 (ja) 2016-12-07 2022-02-03 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｃｔｌａ－４抗体およびそれらの使用方法
MX2019006331A (es) 2016-12-12 2019-07-12 Genentech Inc Métodos para tratar el cáncer usando anticuerpos anti-pd-l1 y antiandrógenos.
JP7100056B2 (ja) 2016-12-19 2022-07-12 メディミューン リミテッド Ｌｉｆに対する抗体及びその使用
US10583191B2 (en) 2016-12-19 2020-03-10 Mosaic Biomedicals Slu Antibodies against LIF and uses thereof
MX2019006954A (es) 2016-12-20 2019-08-01 Hoffmann La Roche Terapia de combinacion de anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3 y agonistas de 4-1bb (cd137).
US11267883B2 (en) 2016-12-21 2022-03-08 Cephalon, Inc. Antibodies that specifically bind to human IL-15 and uses thereof
IL308980A (en) 2016-12-23 2024-01-01 Novartis Ag Antibodies against factor XI and methods of their use
EP3559032A1 (en) 2016-12-23 2019-10-30 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
JP7122311B2 (ja) 2017-01-03 2022-08-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗４－１ｂｂクローン２０ｈ４．９を含む二重特異性抗原結合分子
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CA3049165A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof
US20200121719A1 (en) 2017-01-06 2020-04-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists and therapeutic combinations of tils and tnfrsf agonists
US11274157B2 (en) 2017-01-12 2022-03-15 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting histone H3 peptide/MHC complexes and uses thereof
US11555038B2 (en) 2017-01-25 2023-01-17 Beigene, Ltd. Crystalline forms of (S)-7-(1-(but-2-ynoyl)piperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide, preparation, and uses thereof
CA3051389A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 Kenji SHINOMIYA A pharmaceutical composition for use in the treatment or prevention of a c5-related disease and a method for treating or preventing a c5-related disease
EP3580237B1 (en) 2017-02-08 2025-05-14 Novartis AG Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
CN110494453B (zh) 2017-02-10 2023-05-26 豪夫迈·罗氏有限公司 抗类胰蛋白酶抗体、其组合物及其用途
UA128814C2 (uk) * 2017-02-10 2024-10-30 Генмаб Б.В. Поліпептид та його застосування
NZ756763A (en) 2017-02-17 2023-04-28 Denali Therapeutics Inc Engineered transferrin receptor binding polypeptides
AU2018222743B2 (en) 2017-02-17 2024-05-02 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to alpha-synuclein and uses thereof
EP3589320A4 (en) 2017-02-28 2020-12-23 Seagen Inc. ANTIBODIES UNDERGOING CYSTEINE MUTATION FOR CONJUGATION
AU2018227428A1 (en) 2017-02-28 2019-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-CTLA-4 antibodies with enhanced ADCC to enhance immune response to a vaccine
KR20190134631A (ko) 2017-03-01 2019-12-04 제넨테크, 인크. 암의 진단 및 치료 방법
WO2018158398A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
EP3596114A2 (en) 2017-03-16 2020-01-22 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20190141146A (ko) 2017-03-16 2019-12-23 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-l2 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
PL3596116T3 (pl) 2017-03-16 2024-05-13 Alpine Immune Sciences, Inc. Białka immunomodulujące wariant Pd-l1 i ich zastosowania
CN110612124B (zh) 2017-03-22 2024-04-16 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗眼部病症的优化的抗体组合物
CN119971025A (zh) 2017-03-24 2025-05-13 诺华股份有限公司 用于预防和治疗心脏病的方法
SG10201911225WA (en) 2017-03-28 2020-01-30 Genentech Inc Methods of treating neurodegenerative diseases
EP3601345A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
EP3601346A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
RU2766234C2 (ru) 2017-04-04 2022-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Новые биспецифические антигенсвязывающие молекулы, обладающие способностью специфически связываться с cd40 и fap
EP4112644A1 (en) 2017-04-05 2023-01-04 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-lag3 antibodies
WO2018185043A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
TWI796329B (zh) 2017-04-07 2023-03-21 美商默沙東有限責任公司 抗－ilt4抗體及抗原結合片段
WO2018191502A2 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Agenus Inc. Anti-cd137 antibodies and methods of use thereof
BR112019021472A8 (pt) 2017-04-14 2023-05-02 Inst Curie Compostos de ligação ao amhrii para prevenção ou tratamento de cânceres
AU2018251993A1 (en) 2017-04-14 2019-10-24 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
CN110944665B (zh) 2017-04-14 2024-04-19 埃克塞里艾克西斯公司 用于预防或治疗肺癌的amhrii结合化合物
EP3612215B1 (en) 2017-04-20 2024-08-28 aTyr Pharma, Inc. Compositions for treating lung inflammation
CN110536691A (zh) 2017-04-21 2019-12-03 豪夫迈·罗氏有限公司 Klk5拮抗剂治疗疾病的用途
JP7295030B2 (ja) 2017-04-26 2023-06-20 ユーリカ セラピューティックス， インコーポレイテッド グリピカン３を特異的に認識するコンストラクト及びその使用
WO2018201096A1 (en) 2017-04-27 2018-11-01 Tesaro, Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
MA50957A (fr) 2017-05-01 2020-10-14 Agenus Inc Anticorps anti-tigit et leurs méthodes d'utilisation
KR20200016232A (ko) 2017-05-05 2020-02-14 알라코스 인크. 알레르기성 안구 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물
WO2018209115A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
EP3625251A1 (en) 2017-05-15 2020-03-25 University Of Rochester Broadly neutralizing anti-influenza monoclonal antibody and uses thereof
MY206158A (en) 2017-05-24 2024-12-02 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
WO2018215938A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
CA3064321A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
WO2018222685A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 Stcube & Co., Inc. Methods of treating cancer using antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1
AU2018277838C1 (en) 2017-05-31 2025-08-07 Stcube & Co., Inc. Antibodies and molecules that immunospecifically bind to BTN1A1 and the therapeutic uses thereof
CN110799213A (zh) 2017-06-01 2020-02-14 康姆普根有限公司 三联组合抗体疗法
US11542331B2 (en) 2017-06-06 2023-01-03 Stcube & Co., Inc. Methods of treating cancer using antibodies and molecules that bind to BTN1A1 or BTN1A1-ligands
UY37758A (es) 2017-06-12 2019-01-31 Novartis Ag Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
WO2018229706A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
MX2019013919A (es) 2017-06-20 2020-01-21 Amgen Inc Metodo para tratar o mejorar trastornos metabolicos con proteinas de union para el receptor peptidico inhibidor gastrico (gipr) en combinacion con agonistas de glp-1.
TWI804499B (zh) 2017-06-23 2023-06-11 美商維洛斯生物公司 Ror1抗體免疫接合物
CN110799543A (zh) 2017-06-26 2020-02-14 百济神州有限公司 肝细胞癌的免疫治疗
WO2019003104A1 (en) 2017-06-28 2019-01-03 Novartis Ag METHOD FOR PREVENTING AND TREATING URINARY INCONTINENCE
KR20200093518A (ko) 2017-07-21 2020-08-05 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
CA3071193A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 Forty Seven, Inc. Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
CN107748259A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcRn受体的ELISA检测方法
CN107748262A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRIIIA受体的ELISA检测方法
CN107748258A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRII受体的ELISA检测方法
CN107748253A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRI受体的ELISA检测方法
EP3658184B1 (en) 2017-07-27 2023-09-06 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High concentration anti-c5 antibody formulations
KR102780287B1 (ko) 2017-08-09 2025-03-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 핵산 분자 및 이의 용도
EP3665197A2 (en) 2017-08-11 2020-06-17 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-cd8 antibodies and uses thereof
AU2018321359B2 (en) 2017-08-22 2023-11-30 Sanabio, Llc Soluble interferon receptors and uses thereof
MA49950A (fr) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics Inc Anticorps anti-b7-h4 et leurs procédés d'utilisation
PT3456736T (pt) 2017-09-19 2021-05-28 Tillotts Pharma Ag Variantes de anticorpos
ES2978167T3 (es) 2017-09-19 2024-09-06 Tillotts Pharma Ag Variantes de anticuerpos
EP3684413A1 (en) 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
TW201922780A (zh) 2017-09-25 2019-06-16 美商健生生物科技公司 以抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗體治療狼瘡之安全且有效之方法
CR20210381A (es) 2017-09-29 2021-09-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MOLÉCULA DE UNIÓN AL ANTÍGENO MULTIESPECÍFICA QUE TIENE ACTIVIDAD DE SUSTITUCIÓN DE LA FUNCIÓN DE COFACTOR DEL FACTOR VIII DE COAGULACIÓN DE SANGRE (FVIII) Y FORMULACIÓN FARMACÉUTICA QUE CONTIENE TAL MOLÉCULA COMO INGREDIENTE (Divisional Exp. 2020-0158)
WO2019075090A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Tilos Therapeutics, Inc. ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF
JP7749319B2 (ja) 2017-10-10 2025-10-06 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４変異型免疫調節タンパク質およびそれらの使用
CN111372950B (zh) 2017-10-12 2024-11-05 免疫苏醒公司 Vegfr-抗体轻链融合蛋白
CN111247171A (zh) 2017-10-14 2020-06-05 西托姆克斯治疗公司 抗体、可活化抗体、双特异性抗体和双特异性可活化抗体及其使用方法
EP3697810B1 (en) 2017-10-18 2025-12-03 Alpine Immune Sciences, Inc. Variant icos ligand immunomodulatory proteins and related compositions and methods
KR20200067197A (ko) 2017-10-20 2020-06-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 단일특이적 항체로부터 다중특이적 항체의 생성 방법
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
KR20200070355A (ko) 2017-10-26 2020-06-17 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 발작성 야간 혈색소뇨 (pnh) 및 비정형 용혈성 요독 증후군 (ahus)의 치료를 위한 항-c5 항체의 투여량 및 투여
AU2018358883B2 (en) 2017-10-30 2025-09-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies
WO2019090329A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriatic arthritis with anti-il23 specific antibody
WO2019090263A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
US11773180B2 (en) 2017-11-08 2023-10-03 Kyowa Kirin Co., Ltd. Bispecific antibody which binds to CD40 and EpCAM
EP3710589A4 (en) 2017-11-14 2021-11-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-C1S ANTIBODIES AND METHOD OF USING
EP3713959A1 (en) 2017-11-21 2020-09-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
WO2019102353A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-factor xi/xia antibodies and uses thereof
CA3083118A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of peripheral blood lymphocytes (pbls) from peripheral blood
CN111801334B (zh) 2017-11-29 2023-06-09 百济神州瑞士有限责任公司 使用包含btk抑制剂的组合治疗惰性或侵袭性b-细胞淋巴瘤
EP3717510A2 (en) 2017-12-01 2020-10-07 Novartis AG Polyomavirus neutralizing antibodies
US11952422B2 (en) 2017-12-05 2024-04-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule comprising altered antibody variable region binding CD3 and CD137
SG11202003944WA (en) 2017-12-08 2020-06-29 Argenx Bvba Use of fcrn antagonists for treatment of generalized myasthenia gravis
JP7565795B2 (ja) 2017-12-15 2024-10-11 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与を決定するシステム及び方法並びにその使用方法、並びに腫瘍浸潤リンパ球の有益な投与及びその使用方法
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
US12139533B2 (en) 2017-12-20 2024-11-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-CD200 antibodies
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
US20190211098A1 (en) 2017-12-22 2019-07-11 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
WO2019131988A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Cytotoxicity-inducing therapeutic agent
JP7383617B2 (ja) 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
WO2019129221A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
FR3076294B1 (fr) 2017-12-29 2022-01-28 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'anticorps a partir de lait brut
WO2019129679A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
AU2019205273B2 (en) 2018-01-03 2024-04-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
US20220153871A1 (en) 2018-01-04 2022-05-19 Iconic Therapeutics, Inc. Anti-Tissue Factor Antibodies, Antibody-Drug Conjugates, and Related Methods
MX2020006956A (es) 2018-01-05 2020-11-06 Ac Immune Sa Moleculas de union a tdp-43 mal plegadas.
EP3737692A4 (en) 2018-01-09 2021-09-29 Elstar Therapeutics, Inc. CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES
CN120192415A (zh) 2018-01-12 2025-06-24 百时美施贵宝公司 抗tim3抗体及其用途
KR102839330B1 (ko) 2018-01-15 2025-07-30 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-1에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체
WO2019143636A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
JP7399880B2 (ja) * 2018-01-26 2023-12-18 ジェンザイム・コーポレーション ＦｃＲｎへの増強された結合及び延長された半減期を有するＦｃ変異体
AU2019212703A1 (en) 2018-01-26 2020-08-13 Genentech, Inc. Compositions and methods of use
CR20200327A (es) 2018-01-26 2020-11-05 Genentech Inc Proteínas de fusión fc il-22 y métodos de uso
WO2019148412A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
WO2019152692A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Bioverativ Therapeutics, Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
US11787857B2 (en) 2018-02-02 2023-10-17 Bio-Techne Corporation Compounds that modulate the interaction of VISTA and VSIG3 and methods of making and using
CN118772287A (zh) 2018-02-08 2024-10-15 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
CN111787947A (zh) 2018-02-09 2020-10-16 豪夫迈·罗氏有限公司 用于肥大细胞介导的炎性疾病的治疗和诊断方法
JP2021512962A (ja) 2018-02-13 2021-05-20 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストによる腫瘍浸潤性リンパ球（ｔｉｌ）の拡大培養並びにｔｉｌ及びアデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストの治療的組み合わせ
WO2019158645A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Abba Therapeutics Ag Anti-human pd-l2 antibodies
BR112020016986A2 (pt) 2018-02-21 2021-03-02 Five Prime Therapeutics, Inc. formulações de anticorpo contra b7-h4
MX2020008502A (es) 2018-02-21 2020-09-25 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con proteinas de fusion il-22 fc.
MX2020008882A (es) 2018-02-26 2021-01-08 Genentech Inc Dosificación para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1.
WO2019169229A1 (en) 2018-03-01 2019-09-06 Nextcure, Inc. Klrg1 binding compositions and methods of use thereof
EP3759142A1 (en) 2018-03-02 2021-01-06 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
NL2020520B1 (en) 2018-03-02 2019-09-12 Labo Bio Medical Invest B V Multispecific binding molecules for the prevention, treatment and diagnosis of neurodegenerative disorders
MA54132A (fr) 2018-03-05 2022-04-27 Janssen Biotech Inc Méthodes de traitement de la maladie de crohn avec un anticorps spécifique anti-il23
JP7159332B2 (ja) 2018-03-13 2022-10-24 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ４－１ｂｂアゴニストと抗ｃｄ２０抗体の治療的組み合わせ
EP3765517A1 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
BR112020014591A2 (pt) 2018-03-14 2020-12-01 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. anticorpos anticlaudina 18.2
WO2019177543A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
SG11202008593PA (en) 2018-03-21 2020-10-29 Five Prime Therapeutics Inc ANTIBODIES BINDING TO VISTA AT ACIDIC pH
US20210070860A1 (en) * 2018-03-21 2021-03-11 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Fc variant compositions and methods of use thereof
EP3768715A1 (en) 2018-03-23 2021-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
MX2020009975A (es) 2018-03-28 2020-10-12 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de fusion interleucina-2/receptor alfa de interleucina-2 y metodos de uso.
AU2019245243A1 (en) 2018-03-29 2020-09-03 Genentech, Inc Modulating lactogenic activity in mammalian cells
CN111886254B (zh) 2018-03-30 2023-12-08 南京传奇生物科技有限公司 针对lag-3的单结构域抗体及其用途
CR20250022A (es) 2018-04-02 2025-02-25 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti-trem-1, ácidos nucleicos y vectores de los mismos (divisional 2020-0450)
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
KR20210021287A (ko) 2018-04-12 2021-02-25 메디뮨 리미티드 암을 치료하는 데 사용하기 위한 lif 억제제와 pd-1 축 억제제의 조합
CR20250325A (es) 2018-04-13 2025-08-29 Genentech Inc Formulaciones inmunoconjugadas anti-cd79b estables (divisional expediente 2020-0550)
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
EP3787678A1 (en) 2018-05-03 2021-03-10 University Of Rochester Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof
EP3790587A4 (en) 2018-05-11 2022-01-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating depression using il-23 antibodies
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
CN112638941A (zh) 2018-05-14 2021-04-09 免疫医疗有限公司 针对lif的抗体及其剂量形式
EP4410379A3 (en) 2018-05-16 2024-10-02 CSL Ltd. Soluble complement receptor type 1 variants and uses thereof
MX2020012397A (es) 2018-05-18 2021-04-12 Bioverativ Therapeutics Inc Metodos de tratamiento de la hemofilia a.
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
AU2019272384A1 (en) 2018-05-23 2021-01-07 Beigene, Ltd. Anti-OX40 antibodies and methods of use
TWI869346B (zh) 2018-05-30 2025-01-11 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
EP3802593B1 (en) 2018-05-31 2024-09-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of anti-c5 antibodies for treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (pnh) in pediatric patients
CN119490583A (zh) 2018-05-31 2025-02-21 诺华股份有限公司 乙型肝炎抗体
AU2019276578A1 (en) 2018-06-01 2021-01-14 Compugen Ltd Anti-PVRIG/anti-TIGIT bispecific antibodies and methods of use
MX2020012495A (es) 2018-06-01 2021-02-15 Novartis Ag Moleculas de union contra bcma y usos de las mismas.
US20210238308A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
EP3800999A4 (en) 2018-06-04 2022-06-01 Biogen MA Inc. ANTI-VLA-4 ANTIBODY WITH REDUCED EFFECTIVE FUNCTION
WO2019236345A1 (en) 2018-06-04 2019-12-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. DOSAGE AND ADMINISTRATION OF ANTI-C5 ANTIBODIES FOR TREATMENT OF ATYPICAL HEMOLYTIC UREMIC SYNDROME (aHUS) IN PEDIATRIC PATIENTS
MX2020013036A (es) 2018-06-05 2021-02-26 Amgen Inc Modulacion de la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos.
TW202519270A (zh) 2018-06-07 2025-05-16 美商思進公司 喜樹鹼結合物
JP7486437B2 (ja) 2018-06-08 2024-05-17 アルジェニクス ビーブイ 免疫性血小板減少症を治療する組成物及び方法
TWI848953B (zh) 2018-06-09 2024-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 針對癌症治療之多特異性結合蛋白
US12065476B2 (en) 2018-06-15 2024-08-20 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3103936A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
KR20210022065A (ko) 2018-06-18 2021-03-02 메디뮨 리미티드 암을 치료하는 데 사용하기 위한 lif 억제제와 백금-기반 항신생물제의 조합
CA3102829A1 (en) 2018-06-22 2019-12-26 Cugene Inc. Interleukin-2 variants and methods of uses thereof
SG11202012446UA (en) 2018-06-23 2021-01-28 Genentech Inc Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
US12312394B2 (en) 2018-06-28 2025-05-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of producing anti-C5 antibodies
CN112955465A (zh) 2018-07-03 2021-06-11 马伦戈治疗公司 抗tcr抗体分子及其用途
AU2019297327A1 (en) 2018-07-03 2021-02-18 Bristol-Myers Squibb Company FGF21 formulations
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
MY201995A (en) 2018-07-09 2024-03-28 Five Prime Therapeutics Inc Antibodies binding to ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN112638948B (zh) 2018-07-11 2025-08-15 戊瑞治疗有限公司 在酸性pH下结合至VISTA的抗体
EP3824295A4 (en) 2018-07-18 2022-04-27 Janssen Biotech, Inc. PREDICTORS WITH DELAYED ACTION AFTER TREATMENT WITH ANTI-IL23 SPECIFIC ANTIBODIES
US20200171146A1 (en) 2018-07-18 2020-06-04 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
SG10202002898RA (en) 2018-08-01 2020-05-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A Pharmaceutical Composition For Use In The Treatment Or Prevention Of A C5-Related Disease And A Method For Treating Or Preventing A C5-Related Disease
AU2019315226B2 (en) 2018-08-03 2025-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
AU2019319984A1 (en) 2018-08-09 2021-03-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
EP3608674A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
AR114550A1 (es) 2018-08-10 2020-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moléculas de unión al antígeno anti-cd137 y sus usos
WO2020037258A1 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Ab Studio Inc. Catabodies and methods of use thereof
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
MX2021002190A (es) 2018-08-31 2021-05-14 Regeneron Pharma Estrategia de dosificacion que mitiga el sindrome de liberacion de citoquinas para los anticuerpos biespecificos cd3/cd20.
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
CN112673022B (zh) 2018-09-10 2024-07-09 南京传奇生物科技有限公司 针对cd33的单结构域抗体及其构建体
WO2020053742A2 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Novartis Ag Anti-hla-hbv peptide antibodies
CA3110530A1 (en) 2018-09-11 2020-03-19 Amgen Inc. Methods of modulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
JP7534303B2 (ja) 2018-09-13 2024-08-14 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム 新規のｌｉｌｒｂ４抗体およびその使用
WO2020061210A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-tnfr2 antibodies and uses thereof
SG11202102644XA (en) 2018-09-19 2021-04-29 Alpine Immune Sciences Inc Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
AU2019342099A1 (en) 2018-09-19 2021-04-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
CA3111809A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
EP3883606B9 (en) 2018-09-24 2024-11-20 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating ulcerative colitis with anti-il12/il23 antibody
WO2020069398A1 (en) 2018-09-27 2020-04-02 Akrevia Therapeutics Inc. Masked cytokine polypeptides
JP7266670B2 (ja) 2018-09-27 2023-04-28 セルジーン コーポレイション ＳＩＲＰα結合タンパク質及びその使用方法
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
MX2021003609A (es) 2018-09-28 2021-05-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno que comprende una region variable de anticuerpo alterada.
JP7519990B2 (ja) 2018-09-28 2024-07-22 中外製薬株式会社 Ｃｄ３およびｃｄ１３７に結合することができるが、同時には結合しない、抗原結合分子
PH12021500024A1 (en) 2018-10-01 2022-05-02 Hoffmann La Roche Bispecific antigen binding molecules comprising anti-fap clone 212
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
EP3863722A2 (en) 2018-10-10 2021-08-18 Tilos Theapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants and uses thereof
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
CN119033685A (zh) 2018-10-29 2024-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体制剂
KR20210084533A (ko) 2018-10-30 2021-07-07 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 발작성 야간 혈색소뇨증 (pnh)의 치료를 위한 항-c5 항체의 피하 투여량 및 투여
US20230053449A1 (en) 2018-10-31 2023-02-23 Novartis Ag Dc-sign antibody drug conjugates
WO2020089437A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Engmab Sàrl Combination therapy
KR20250099286A (ko) 2018-11-02 2025-07-01 오클라호마 메디컬 리써치 화운데이션 Eltd1에 대한 단일클론성 항체 및 이의 용도
TWI872030B (zh) 2018-11-05 2025-02-11 美商建南德克公司 在原核宿主細胞中產生二鏈蛋白質之方法
CA3118634A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients refractory for anti-pd-1 antibody
EP4640698A2 (en) 2018-11-16 2025-10-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies to mucin-16 and methods of use thereof
AR117091A1 (es) 2018-11-19 2021-07-07 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra cd40 y sus usos
AU2019383017A1 (en) 2018-11-20 2021-06-03 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriasis with anti-IL-23 specific antibody
WO2020104705A2 (en) 2018-11-23 2020-05-28 Katholieke Universiteit Leuven Predicting a treatment response in inflammatory bowel disease
TWI779253B (zh) 2018-11-27 2022-10-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 抗IL-23p19抗體及其用途
WO2020108423A1 (en) 2018-11-27 2020-06-04 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing granulocyte-macrophage colony stimulating factor receptor alpha and uses thereof
KR20210096167A (ko) 2018-11-28 2021-08-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체
JP7713886B2 (ja) 2018-11-30 2025-07-28 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｄ８６バリアント免疫調節タンパク質およびその使用
EP4198057A1 (en) 2018-12-05 2023-06-21 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
WO2020115115A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Morphosys Ag Multispecific antigen-binding molecules
WO2020116560A1 (ja) 2018-12-05 2020-06-11 株式会社バイカ・セラピュティクス 抗体のＦｃ領域改変体
WO2020118011A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-alk2 antibodies and uses thereof
CA3119798A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Genentech, Inc. Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody
JP2022513198A (ja) 2018-12-10 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｃ含有タンパク質への部位特異的コンジュゲーションのための光架橋性ペプチド
EP3894439A4 (en) 2018-12-14 2022-11-30 Boehringer Ingelheim IO Canada Inc. ANTI-PERIOSTIN ANTIBODIES AND THEIR USES
JP2022514561A (ja) 2018-12-18 2022-02-14 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗体でループスを治療する安全かつ有効な方法
WO2020127509A1 (en) 2018-12-18 2020-06-25 Catapult Therapeutics B.V. The use of anti-ccr7 mabs for the prevention or treatment of graft-versus-host disease (gvhd)
CR20210327A (es) 2018-12-18 2021-09-27 Boehringer Ingelheim Io Canada Inc Anticuerpos agonistas de flt3 y usos de estos
WO2020128863A1 (en) 2018-12-19 2020-06-25 Novartis Ag Anti-tnf-alpha antibodies
CN113227131B (zh) 2018-12-20 2025-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰的抗体Fc及其使用方法
KR20240042566A (ko) 2018-12-21 2024-04-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 Vegf 및 il-1베타에 결합하는 항체 및 이의 사용 방법
WO2020132231A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Genentech, Inc. Methods of producing polypeptides using a cell line resistant to apoptosis
MX2021007768A (es) 2018-12-26 2021-08-24 Xilio Dev Inc Anticuerpos anti-ctla4 y metodos de uso de los mismos.
US11447551B2 (en) 2018-12-28 2022-09-20 Sparx Bioscience Limited Binding molecules specific for claudin 18.2, compositions and methods thereof, for the treatment of cancer and other diseases
SG11202106990PA (en) 2018-12-28 2021-07-29 Kyowa Kirin Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY BINDING TO TfR
JP7650802B2 (ja) 2018-12-30 2025-03-25 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ウサギｃｄ１９抗体および使用方法
SG11202106686PA (en) 2019-01-04 2021-07-29 Resolve Therapeutics Llc Treatment of sjogren's disease with nuclease fusion proteins
WO2020148207A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies binding to hla-a2
AU2020208193A1 (en) 2019-01-14 2021-07-29 BioNTech SE Methods of treating cancer with a PD-1 axis binding antagonist and an RNA vaccine
BR112021014236A2 (pt) 2019-01-22 2021-09-28 Innate Pharma Anticorpo, composição farmacêutica, kit e método para predizer ou avaliar a eficácia
PH12021551783A1 (en) 2019-01-22 2022-05-30 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against il-7r alpha subunit and uses thereof
WO2020154405A2 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Genentech, Inc. Immunoglobulin a antibodies and methods of production and use
AU2020211976A1 (en) 2019-01-23 2021-07-15 Genentech, Inc. Methods of producing multimeric proteins in eukaryotic host cells
WO2020154540A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd38 antibodies
WO2020152290A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Encefa Cd31 competitors and uses thereof
CN113329770A (zh) 2019-01-24 2021-08-31 中外制药株式会社 新型癌抗原及所述抗原的抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
CA3130508A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof
SG11202109061YA (en) 2019-02-21 2021-09-29 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
CN113874051A (zh) 2019-02-27 2021-12-31 安吉克公司 包含抗tm4sf1抗体的抗体-药物缀合物及其使用方法
JP7664167B2 (ja) 2019-03-01 2025-04-17 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 液性腫瘍からの腫瘍浸潤リンパ球の拡大培養及びその治療的使用
US12435151B2 (en) 2019-03-01 2025-10-07 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-TNFR2 antibodies and uses thereof
KR20250143873A (ko) 2019-03-08 2025-10-02 제넨테크, 인크. 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법
JP7660067B2 (ja) 2019-03-14 2025-04-10 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗体組成物を生成するための製造方法
TW202100556A (zh) 2019-03-14 2021-01-01 美商建南德克公司 使用her2 t細胞依賴性雙特異性抗體之治療
JP2022526493A (ja) 2019-03-18 2022-05-25 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗体を用いた小児被験者の乾癬の治療方法
WO2020189748A1 (ja) 2019-03-19 2020-09-24 中外製薬株式会社 Ｍｔａ依存的に抗原に対する結合活性が変化する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子及び当該抗原結合ドメイン取得用ライブラリ
US20220177558A1 (en) 2019-03-25 2022-06-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Treatment of taupathy disorders by targeting new tau species
CN120192414A (zh) 2019-04-03 2025-06-24 建新公司 具有降低的断裂的抗αβTCR结合多肽
KR20220005471A (ko) 2019-04-08 2022-01-13 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 항-인테그린 항체 및 이의 용도
GB2589049C (en) 2019-04-11 2024-02-21 argenx BV Anti-IgE antibodies
US12006511B2 (en) 2019-04-15 2024-06-11 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Recombinant PD-L1 peptides and methods of use
US20220218785A1 (en) 2019-04-17 2022-07-14 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant icos ligand (icosl) fusion proteins
CN114206444B (zh) 2019-04-18 2026-01-06 Ac免疫有限公司 用于治疗和诊断的新分子
CN113924118A (zh) 2019-04-18 2022-01-11 百时美施贵宝公司 在低ph下具有增强的结合特异性的伊匹单抗变体
AU2020258480A1 (en) 2019-04-19 2021-10-21 Genentech, Inc. Anti-mertk antibodies and their methods of use
JPWO2020213724A1 (pl) 2019-04-19 2020-10-22
TWI879768B (zh) 2019-05-03 2025-04-11 美商建南德克公司 用抗pd-l1抗體治療癌症之方法
EP3968993A1 (en) 2019-05-14 2022-03-23 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat follicular lymphoma
TWI875760B (zh) 2019-05-15 2025-03-11 日商協和麒麟股份有限公司 與cd40及gpc3結合之雙專一性抗體
CN113891728A (zh) 2019-05-15 2022-01-04 协和麒麟株式会社 与cd40和fap结合的双特异性抗体
AU2020275348A1 (en) 2019-05-15 2021-12-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha An antigen-binding molecule, a pharmaceutical composition, and a method
KR20220010527A (ko) 2019-05-20 2022-01-25 노파르티스 아게 친수성 기를 포함하는 링커를 갖는 항체 약물 콘쥬게이트
WO2020236797A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Variant cd58 domains and uses thereof
CU20210096A7 (es) 2019-05-21 2022-06-06 Novartis Ag Moléculas de unión a cd19
AU2020279224B2 (en) 2019-05-21 2024-12-05 Novartis Ag Trispecific binding molecules against BCMA and uses thereof
WO2020234473A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
CA3142667A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriatic arthritis with anti-il23 specific antibody
WO2020246563A1 (ja) 2019-06-05 2020-12-10 中外製薬株式会社 抗体切断部位結合分子
US11591388B2 (en) 2019-06-07 2023-02-28 argenx BV Pharmaceutical formulations of FcRn inhibitors suitable for subcutaneous administration
MA56131A (fr) 2019-06-10 2022-04-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécule de liaison à l'antigène anti-lymphocytes t à utiliser en association avec un inhibiteur de cytokines
US20220298230A1 (en) * 2019-06-11 2022-09-22 The Rockefeller University Antibodies and methods for treatment of viral infections
EP3990492A1 (en) 2019-06-27 2022-05-04 F. Hoffmann-La Roche AG Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
PH12022550030A1 (en) 2019-07-09 2022-11-21 Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd Antibodies specifically recognizing pseudomonas pcrv and uses thereof
CR20220049A (es) 2019-07-10 2022-03-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moléculas de unión a claudina-6 y usos de las mismas
WO2021005232A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Umc Utrecht Holding B.V. Intranasal administration of neutralising antiviral antibodies
US20220267452A1 (en) 2019-07-12 2022-08-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
JP2022540904A (ja) 2019-07-15 2022-09-20 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー ヒトｔｒｅｍ－１に対する抗体およびその使用
US20220372139A1 (en) 2019-07-15 2022-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Anti-trem-1 antibodies and uses thereof
JP7753184B2 (ja) 2019-07-16 2025-10-14 インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） Ｃｄ３８に特異性を有する抗体及びその使用
WO2021014389A1 (en) 2019-07-24 2021-01-28 H. Lundbeck A/S Anti-mglur5 antibodies and uses thereof
WO2021021605A1 (en) 2019-07-26 2021-02-04 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to enterovirus d68
CN112300279A (zh) 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
WO2021021837A2 (en) 2019-07-29 2021-02-04 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
CA3144923A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 Alexandre Antoine Bernard SOSTELLY Dosage and administration regimen for the treatment or prevention of c5-related diseases by the use of the anti-c5 antibody crovalimab
TWI886139B (zh) 2019-07-31 2025-06-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 藉由使用抗c5抗體克羅伐單抗（crovalimab）之治療或預防c5相關疾病之劑量及投藥療程
CN120204384A (zh) 2019-08-06 2025-06-27 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 生物药物组合物和相关方法
KR102509648B1 (ko) 2019-08-06 2023-03-15 아프리노이아 테라퓨틱스 리미티드 병리학적 타우 종에 결합하는 항체 및 이의 용도
CN114867751B (zh) 2019-08-12 2024-11-29 阿帕特夫研究和发展有限公司 4-1bb和ox40结合蛋白及相关组合物和方法、抗-4-1bb抗体、抗-ox40抗体
US20230002466A1 (en) 2019-08-13 2023-01-05 Elpis Biopharmaceuticals Engineered interleukin-2 receptor beta agonists
AU2020335928A1 (en) 2019-08-30 2022-02-17 Agenus Inc. Anti-CD96 antibodies and methods of use thereof
EP4438057A3 (en) 2019-09-12 2025-01-01 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
BR112022004972A2 (pt) 2019-09-18 2022-06-28 Genentech Inc Anticorpos, ácidos nucleicos isolados, células hospedeiras isoladas, métodos de produção de um anticorpo, de produção de um anticorpo biespecífico e de tratamento de um indivíduo, anticorpos biespecíficos, composição farmacêutica, anticorpo, anticorpo biespecífico ou composição farmacêutica, combinação de um anticorpo, uso do anticorpo, uso de uma combinação do anticorpo e métodos para reduzir a inflamação e para melhorar a descamação e/ou de erupção cutânea e combinação para uso
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
CN114502590A (zh) 2019-09-18 2022-05-13 诺华股份有限公司 Entpd2抗体、组合疗法、以及使用这些抗体和组合疗法的方法
TW202124448A (zh) 2019-09-19 2021-07-01 美商必治妥美雅史谷比公司 於酸性pH結合VISTA之抗體
EP4031580A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for anti-tryptase antibodies
WO2021062323A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Stcube & Co. Antibodies specific to glycosylated ctla-4 and methods of use thereof
JP2022550067A (ja) 2019-09-27 2022-11-30 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｅａｃａｍ抗体及びその使用
US12441788B2 (en) 2019-09-27 2025-10-14 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-müllerian inhibiting substance antibodies and uses thereof
WO2021058729A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof
JP2022548978A (ja) 2019-09-27 2022-11-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 薬抗ｔｉｇｉｔ及び抗ｐｄ－ｌ１アンタゴニスト抗体を用いた処置のための投薬
KR20220097891A (ko) 2019-09-30 2022-07-08 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 렌티바이러스 벡터 제형
CN114502595B (zh) 2019-10-08 2025-05-23 奈克汀治疗有限公司 针对脊髓灰质炎病毒受体(pvr)的抗体及其用途
US20220356248A1 (en) 2019-10-09 2022-11-10 Stcube & Co Antibodies specific to glycosylated lag3 and methods of use thereof
CR20220166A (es) 2019-10-18 2022-06-15 Genentech Inc Métodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes
US20220378742A1 (en) 2019-11-04 2022-12-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
CN115066613A (zh) 2019-11-06 2022-09-16 基因泰克公司 用于治疗血液癌症的诊断和治疗方法
TWI895295B (zh) 2019-11-12 2025-09-01 美商方得生醫療公司 偵測編碼新生抗原之融合基因之方法
US20250340623A1 (en) 2019-12-04 2025-11-06 Ac Immune Sa Novel Molecules for Therapy and Diagnosis
CN114929741A (zh) 2019-12-04 2022-08-19 免疫医疗有限公司 针对lif的抗体及其用途
US20230057899A1 (en) 2019-12-05 2023-02-23 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
US20230040928A1 (en) 2019-12-09 2023-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
US20230048046A1 (en) 2019-12-13 2023-02-16 Cugene Inc Novel interleukin-15 (il-15) fusion proteins and uses thereof
AU2020403145B2 (en) 2019-12-13 2025-06-26 Genentech, Inc. Anti-Ly6G6D antibodies and methods of use
JP7373588B2 (ja) 2019-12-27 2023-11-02 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体およびその使用
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
AU2020416273A1 (en) 2020-01-03 2022-07-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
KR102821932B1 (ko) 2020-01-06 2025-06-17 백시넥스 인코포레이티드 항-ccr8 항체 및 이의 용도
CA3163172A1 (en) 2020-01-08 2021-07-15 Peter Verheesen Methods for treating pemphigus disorders
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
MX2022009391A (es) 2020-01-31 2022-09-26 Genentech Inc Metodos para inducir linfocitos t especificos para neoepitopo con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn.
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
WO2021163265A1 (en) 2020-02-11 2021-08-19 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov- 2)
TWI895351B (zh) 2020-02-12 2025-09-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
TWI888487B (zh) 2020-02-14 2025-07-01 日商協和麒麟股份有限公司 與ｃｄ３結合之雙特異性抗體
WO2021173844A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Biograph 55, Inc. C19 c38 bispecific antibodies
AR121462A1 (es) 2020-02-28 2022-06-08 Genzyme Corp Polipéptidos de unión modificados para conjugación optimizada con drogas
EP4112642A4 (en) 2020-02-28 2024-06-26 Shanghai Henlius Biotech, Inc. ANTI-CD137 CONSTRUCTION AND ITS USE
AU2021228078A1 (en) 2020-02-28 2022-09-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-CD137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
IL295979A (en) 2020-03-06 2022-10-01 Ona Therapeutics S L Anti-cd36 antibodies and their use for cancer treatment
AU2021236302A1 (en) 2020-03-12 2022-10-20 Immune-Onc Therapeutics, Inc. Novel anti-LILRB4 antibodies and derivative products
CR20220461A (es) 2020-03-13 2022-10-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y usos de estos
WO2021180205A1 (zh) 2020-03-13 2021-09-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pvrig结合蛋白及其医药用途
PE20230259A1 (es) 2020-03-19 2023-02-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta con selectividad de isoforma y metodos de uso
US11365239B2 (en) 2020-03-20 2022-06-21 Tsb Therapeutics (Beijing) Co., Ltd. Anti-SARS-COV-2 antibodies and uses thereof
EP4107185A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Biomarkers for predicting response to il-6 antagonist in covid-19 pneumonia
WO2021194860A1 (en) 2020-03-23 2021-09-30 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
US20240025991A1 (en) 2020-03-23 2024-01-25 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
CN120757644A (zh) 2020-03-24 2025-10-10 基因泰克公司 Tie2结合剂及其使用方法
HRP20240182T1 (hr) 2020-03-26 2024-04-26 Vanderbilt University Ljudska monoklonska protutijela za teški akutni respiratorni sindrom koronavirusa 2 (sars-cov-2)
JP2023518841A (ja) 2020-03-26 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 宿主細胞タンパク質が減少した修飾哺乳動物細胞
WO2021195385A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS 2 (SARS-GoV-2)
US20230128499A1 (en) 2020-03-27 2023-04-27 Novartis Ag Bispecific combination therapy for treating proliferative diseases and autoimmune diseases
CN115397850A (zh) 2020-03-30 2022-11-25 豪夫迈·罗氏有限公司 与vegf和pdgf-b结合的抗体及其使用方法
KR20220161375A (ko) 2020-03-31 2022-12-06 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 다중 특이성 항원 결합 분자를 제조하기 위한 방법
AR121695A1 (es) 2020-03-31 2022-06-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moléculas de unión al antígeno multiespecíficas dirigidas a dll3 y sus usos
CA3170570A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 James J. KOBIE Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
EP4132971A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Merck Sharp & Dohme LLC Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
CN113874507A (zh) 2020-04-09 2021-12-31 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
WO2021209019A1 (en) 2020-04-17 2021-10-21 Hutchison Medipharma Limited Anti-ox40 antibody and uses thereof
EP4139359A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
CN115427443A (zh) 2020-04-24 2022-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 巯基化合物及其衍生物的酶和途径调节
KR20230004520A (ko) 2020-04-27 2023-01-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 지단백(ａ)에 대한 이소형-비의존성 항체
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
SG11202112792WA (en) 2020-04-28 2021-12-30 Univ Rockefeller Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies and methods of use thereof
MX2022013768A (es) 2020-05-03 2023-01-05 Levena Suzhou Biopharma Co Ltd Conjugados anticuerpo-fármaco (adc) que comprenden un anticuerpo anti-trop-2, composiciones que comprenden dichos adc, así como métodos para fabricar y utilizar los mismos.
JP2023524125A (ja) 2020-05-05 2023-06-08 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ２３特異的抗体によるクローン病の治療方法
WO2021226551A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Alpine Immune Sciences, Inc. April and baff inhibitory immunomodulatory proteins and methods of use thereof
US20230181753A1 (en) 2020-05-12 2023-06-15 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas
KR20230012539A (ko) 2020-05-13 2023-01-26 디스크 메디슨, 인크. 골수섬유증을 치료하기 위한 항-헤모주벨린 (hjv) 항체
US20230192867A1 (en) 2020-05-15 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
WO2021233834A1 (en) 2020-05-17 2021-11-25 Astrazeneca Uk Limited Sars-cov-2 antibodies and methods of selecting and using the same
GB2595299B (en) 2020-05-21 2022-08-03 Mabsolve Ltd Modified immunoglobulin FC regions
EP4139002A2 (en) 2020-05-22 2023-03-01 Formycon AG Ace2-fc fusion proteins and uses thereof
US20230220057A1 (en) 2020-05-27 2023-07-13 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
MX2022015376A (es) 2020-06-02 2023-04-14 Dynamicure Biotechnology Llc Construcciones anti grupo de diferenciacion 93 (cd93) y usos de las mismas.
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
EP4161644A2 (en) 2020-06-08 2023-04-12 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hbv antibodies and methods of use
WO2021251438A1 (ja) 2020-06-10 2021-12-16 株式会社バイカ・セラピュティクス エリスロポエチンポリペプチドを含む融合タンパク質
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
KR20230025691A (ko) 2020-06-16 2023-02-22 제넨테크, 인크. 삼중 음성 유방암을 치료하기 위한 방법과 조성물
MX2022015881A (es) 2020-06-18 2023-01-24 Genentech Inc Tratamiento con anticuerpos anti-tigit y antagonistas de union al eje de pd-1.
PE20230435A1 (es) 2020-06-19 2023-03-08 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moleculas de union al antigeno anti-celulas t para usarse en combinacion con un inhibidor de angiogenesis
AU2021297856A1 (en) 2020-06-22 2023-02-02 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-CD73 antibody and use thereof
CN116033927A (zh) 2020-06-24 2023-04-28 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 从经修饰以表达因子viii的慢病毒载体的制剂中去除游离因子viii的方法
KR20230026491A (ko) 2020-06-24 2023-02-24 제넨테크, 인크. 아폽토시스 내성 세포주
JP7554292B2 (ja) 2020-06-25 2024-09-19 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー セリン４１３においてリン酸化されたタウを標的化する高親和性抗体
JP2023532726A (ja) 2020-06-29 2023-07-31 インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） 抗プロテインｓシングルドメイン抗体及びそれを含むポリペプチド
EP4171614A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Resolve Therapeutics, LLC Treatment of sjogren's syndrome with nuclease fusion proteins
WO2022013745A1 (en) 2020-07-13 2022-01-20 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriatic arthritis with anti-il23 specific antibody
TW202216780A (zh) 2020-07-17 2022-05-01 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及其使用方法
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
CA3190328A1 (en) 2020-07-29 2022-02-03 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
US20220073603A1 (en) 2020-07-30 2022-03-10 Janssen Biotech, Inc. Method of Treating Psoriasis in Pediatric Subjects with Anti-IL12/IL23 Antibody
US20230322898A1 (en) 2020-07-31 2023-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition comprising cell expressing chimeric receptor
CN116568824A (zh) 2020-08-03 2023-08-08 基因泰克公司 淋巴瘤的诊断和治疗方法
EP4193153A1 (en) 2020-08-06 2023-06-14 Bioverativ USA Inc. Inflammatory cytokines and fatigue in subject with a complement mediated disease
BR112023002234A2 (pt) 2020-08-10 2023-03-07 Astrazeneca Uk Ltd Anticorpos sars-cov-2 para tratamento e prevenção de covid-19
TW202221026A (zh) 2020-08-14 2022-06-01 瑞士商Ａｃ 免疫有限公司 人源化抗ｔｄｐ－４３結合分子及其用途
EP4200018B1 (en) 2020-08-18 2025-01-01 Cephalon LLC Anti-par-2 antibodies and methods of use thereof
JP2023540888A (ja) * 2020-08-19 2023-09-27 アステラス製薬株式会社 非天然の改変Ｆｃ受容体に特異的に結合する、ヒトＩｇＧの非天然の改変Ｆｃ領域
CA3188862A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 Carl Alexander Kamb Compositions and methods for treating mesothelin positive cancers
WO2022040470A1 (en) * 2020-08-20 2022-02-24 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
EP4097486A4 (en) 2020-08-20 2023-09-06 A2 Biotherapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF POSITIVE CANCERS AT CEACAM
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
CN116648507A (zh) 2020-08-28 2023-08-25 基因泰克公司 宿主细胞蛋白的CRISPR/Cas9多重敲除
WO2022044248A1 (ja) * 2020-08-28 2022-03-03 中外製薬株式会社 ヘテロ二量体Ｆｃポリペプチド
EP4204447A1 (en) 2020-08-28 2023-07-05 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
PE20230986A1 (es) 2020-09-04 2023-06-21 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a y ang2, y metodos de uso
EP4213877A1 (en) 2020-09-17 2023-07-26 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
CA3193569A1 (en) 2020-09-28 2022-03-31 Xiaofeng Liu Anti-sclerostin constructs and uses thereof
WO2022069940A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
CN116406291A (zh) 2020-10-05 2023-07-07 基因泰克公司 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
JP2023546359A (ja) 2020-10-06 2023-11-02 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療
WO2022079297A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Ac Immune Sa Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
WO2022084400A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
US20240025992A1 (en) 2020-10-22 2024-01-25 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses
EP4232822A2 (en) 2020-10-26 2023-08-30 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
WO2022090469A2 (en) 2020-10-29 2022-05-05 Formycon Ag Ace2 fusion proteins and uses thereof
TWI838660B (zh) 2020-11-04 2024-04-11 美商建南德克公司 以抗cd20/抗cd3雙特異性抗體和抗cd79b抗體藥物結合物治療的給藥方法
US11919945B2 (en) 2020-11-04 2024-03-05 The Rockefeller University Neutralizing anti-SARS-CoV-2 antibodies
TWI888665B (zh) 2020-11-04 2025-07-01 美商建南德克公司 抗cd20/抗cd3雙特異性抗體之皮下給藥
IL302396A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
MX2023005353A (es) 2020-11-06 2023-05-22 Novartis Ag Moleculas de union a cd19 y usos de las mismas.
EP4240494A1 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Novartis AG Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
EP4251187A4 (en) 2020-11-25 2025-09-10 Xilio Dev Inc TUMOR-SPECIFIC CLASSIBLE LINKERS
AU2021390501A1 (en) 2020-12-01 2023-06-29 Aptevo Research And Development Llc Heterodimeric psma and cd3-binding bispecific antibodies
AU2021391054A1 (en) 2020-12-02 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. ANTI-GARP/TGFβ ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP4255451A4 (en) 2020-12-03 2025-01-01 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods for identifying lilrb-blocking antibodies
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
US20240131064A1 (en) 2020-12-11 2024-04-25 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors
US20240052042A1 (en) 2020-12-14 2024-02-15 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor i (npri) antibodies and uses thereof
AU2021401302A1 (en) 2020-12-17 2023-07-06 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with ctla-4 and pd-1 inhibitors
IL303656A (en) 2020-12-17 2023-08-01 Hoffmann La Roche ANTI-HLA-G antibodies and their use
CA3202473A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Friedrich Graf Finckenstein Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
KR20230124959A (ko) 2020-12-23 2023-08-28 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 항-b7-h3 항체 및 이의 용도
CA3202832A1 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Romesh R. Subramanian Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CA3203382A1 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Adrian Emanual Wells Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
CA3207090A1 (en) 2021-01-06 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and a cd20 t cell bispecific antibody
JP2024505636A (ja) 2021-01-15 2024-02-07 ザ ロックフェラー ユニバーシティー 抗ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２中和抗体
EP4281186A1 (en) 2021-01-22 2023-11-29 Elpis Biopharmaceuticals Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fusion proteins with interleukin-15 (il-15), interleukin-15 receptor 15 alpha or interleukin-2
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022165266A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
US20240076373A1 (en) 2021-01-28 2024-03-07 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
US20250270311A1 (en) 2021-01-28 2025-08-28 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
US20240307437A1 (en) 2021-01-29 2024-09-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2022169872A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
JP2024506200A (ja) 2021-02-15 2024-02-09 武田薬品工業株式会社 細胞治療用組成物及びｔｇｆ－ｂシグナル伝達を調節する方法
BR112023016445A2 (pt) 2021-02-17 2023-12-12 Dr Falk Pharma Gmbh Anticorpos anti-cd30l e seus usos
US20220306743A1 (en) 2021-03-01 2022-09-29 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301781A1 (en) 2021-03-01 2024-01-10 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
CA3205815A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Alwin REITER Formulations of ace2 fc fusion proteins
WO2022184082A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
CN117279506A (zh) 2021-03-05 2023-12-22 艾欧凡斯生物治疗公司 肿瘤储存及细胞培养组合物
TW202302646A (zh) 2021-03-05 2023-01-16 美商當康生物科技有限公司 抗vista構築體及其用途
EP4294927A2 (en) 2021-03-10 2023-12-27 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
US20220298236A1 (en) 2021-03-12 2022-09-22 Janssen Biotech, Inc. Safe and Effective Method of Treating Psoriatic Arthritis with Anti-IL23 Specific Antibody
EP4304732A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
JP2024510588A (ja) 2021-03-12 2024-03-08 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ２３特異的抗体による、ｔｎｆ療法に対する不十分な応答を有する乾癬性関節炎患者を治療する方法
BR112023018621A2 (pt) 2021-03-15 2023-10-24 Hoffmann La Roche Métodos para tratar nefrite lúpica, esgotar células b periféricas, kits para tratar nefrite lúpica e anticorpos anti-cd20 tipo ii
WO2022198141A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd69 selection and gene knockout in tils
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
TW202305118A (zh) 2021-03-23 2023-02-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 腫瘤浸潤淋巴球之ｃｉｓｈ基因編輯及其在免疫療法中之用途
WO2022204724A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
CA3213163A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
BR112023019205A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-24 Janssen Biotech Inc Anticorpos humanizados contra tau de filamento helicoidal pareado e usos dos mesmos
BR112023019138A2 (pt) 2021-03-26 2023-10-24 Innate Pharma Proteína multiespecífica, composição farmacêutica, célula recombinante, método de preparação de uma composição de célula nk, composição de células nk, uso de uma proteína ou composição, métodos e uso
TW202304508A (zh) 2021-03-31 2023-02-01 美商百歐維拉提夫美國公司 減少冷凝集素疾病患者之手術相關溶血
US20240376224A1 (en) 2021-04-02 2024-11-14 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
TW202308669A (zh) 2021-04-19 2023-03-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 嵌合共刺激性受體、趨化激素受體及彼等於細胞免疫治療之用途
KR20230173164A (ko) 2021-04-19 2023-12-26 제넨테크, 인크. 변형된 포유류 세포
WO2022235867A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof
US20240279310A1 (en) 2021-05-07 2024-08-22 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein
AU2022273063A1 (en) 2021-05-12 2023-11-23 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
MX2023013363A (es) 2021-05-14 2023-11-27 Genentech Inc Metodos para el tratamiento de un trastorno proliferativo cd20 positivo con mosunetuzumab y polatuzumab vedotina.
BR112023023777A2 (pt) 2021-05-14 2024-01-30 Genentech Inc Anticorpos isolados, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, vetor isolado, célula hospedeira isolada, método para produzir um anticorpo, método para tratar uma condição associada à perda de função de trem2, método para reduzir os níveis de strem2 e uso de um anticorpo
WO2022245877A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
WO2022245859A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
JP2024519029A (ja) 2021-05-17 2024-05-08 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｐｄ－１遺伝子編集された腫瘍浸潤リンパ球及び免疫療法におけるその使用
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
EP4341385A1 (en) 2021-05-21 2024-03-27 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
US20250263495A1 (en) 2021-05-28 2025-08-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination Therapies for Treating Cancer
US20240270862A1 (en) 2021-06-01 2024-08-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of b cell depleting agents for the treatment of rheumatic heart disease
CN117480184A (zh) 2021-06-04 2024-01-30 中外制药株式会社 抗ddr2抗体及其用途
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
AU2022288574A1 (en) 2021-06-09 2023-11-30 Innate Pharma Multispecific antibodies binding to cd20, nkp46, cd16 and conjugated to il-2
BR112023025331A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína multiespecífica, composição farmacêutica, célula recombinante, ácido nucleico ou conjunto de ácidos nucleicos, uso de uma proteína ou composição, métodos ou uso
IL308597A (en) 2021-06-11 2024-01-01 Genentech Inc A method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an ST2 antagonist
CN118696057A (zh) 2021-06-14 2024-09-24 阿根思有限公司 抗il-9抗体及其使用方法
US12227574B2 (en) 2021-06-17 2025-02-18 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-CD3 constructs and uses thereof
WO2022269451A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Novartis Ag Bispecific antibodies for use in treatment of hidradenitis suppurativa
CA3220353A1 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Use of anti-ctla-4 antibody
WO2022270611A1 (ja) 2021-06-25 2022-12-29 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体
US12448451B2 (en) 2021-06-25 2025-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
US20250382364A1 (en) 2021-07-01 2025-12-18 Compugen Ltd. Anti-tigit and anti-pvrig in monotherapy and combination treatments
MX2023015416A (es) 2021-07-02 2024-04-30 Genentech Inc Procedimientos y composiciones para tratar el cancer.
CN118103397A (zh) 2021-07-08 2024-05-28 舒泰神(加州)生物科技有限公司 特异性识别tnfr2的抗体及其用途
JP2024527581A (ja) 2021-07-09 2024-07-25 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗体組成物を生産するための製造方法
EP4370545A1 (en) 2021-07-12 2024-05-22 Genentech, Inc. Structures for reducing antibody-lipase binding
KR20240058075A (ko) 2021-07-14 2024-05-03 스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드 Cd40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용
TW202309097A (zh) 2021-07-14 2023-03-01 美商建南德克公司 抗ｃ－ｃ模體趨化因子受體８（ｃｃｒ８）抗體及其使用方法
EP4373576A1 (en) 2021-07-22 2024-05-29 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
CA3219606A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
US20240365776A1 (en) 2021-07-22 2024-11-07 Iovance Biotherapeutics, Inc Method for cryopreservation of solid tumor fragments
WO2023010060A2 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Novab, Inc. Engineered vlrb antibodies with immune effector functions
EP4377446A1 (en) 2021-07-28 2024-06-05 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
CN118488964A (zh) 2021-07-30 2024-08-13 Ona疗法有限公司 抗cd36抗体及其治疗癌症的用途
WO2023011338A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 信达生物制药(苏州)有限公司 抗CD79b×CD3双特异性抗体及其用途
EP4380980A1 (en) 2021-08-03 2024-06-12 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies and methods of use
US20240369568A1 (en) 2021-08-03 2024-11-07 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Biopharmaceutical Compositions and Stable Isotope Labeling Peptide Mapping Method
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
CN117897409A (zh) 2021-08-13 2024-04-16 基因泰克公司 抗类胰蛋白酶抗体的给药
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
EP4393952A4 (en) 2021-08-26 2025-11-12 Kyowa Kirin Co Ltd Bispecific antibodies binding to CD116 and CD131
EP4392067A1 (en) 2021-08-27 2024-07-03 Genentech, Inc. Methods of treating tau pathologies
EP4396223A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
JP2024532620A (ja) 2021-08-30 2024-09-05 ラッセン・セラピューティクス１・インコーポレイテッド 抗ＩＬ－１１Ｒα抗体
MX2024002861A (es) 2021-09-09 2024-06-28 Iovance Biotherapeutics Inc Procesos de generacion de productos de linfocitos infiltrantes del tumor (til) mediante atenuacion de nucleasa efectora similar al activador de transcripción (talen) de proteína de muerte programada (pd-1).
WO2023043124A1 (ko) * 2021-09-17 2023-03-23 고려대학교 산학협력단 Fcγrⅲa 결합력이 향상된 당화 fc 변이체들
WO2023043123A1 (ko) * 2021-09-17 2023-03-23 고려대학교 산학협력단 Fcγrⅲa 선택적 결합력 향상 당화 fc 변이체들
WO2023049862A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
CN118541392A (zh) 2021-09-28 2024-08-23 准星生物医药有限公司 多种形式的分子复合物
JPWO2023053282A1 (pl) 2021-09-29 2023-04-06
US20230117205A1 (en) 2021-09-30 2023-04-20 Seagen Inc. B7-h4 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
CA3233953A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Matthew Bruce Combination therapies for treating cancer
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
AR127269A1 (es) 2021-10-08 2024-01-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulación de anticuerpo anti-hla-dq2.5
US20250339522A1 (en) 2021-10-15 2025-11-06 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
JP2024541911A (ja) 2021-10-27 2024-11-13 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 患者特異的免疫療法のための細胞の製造を調整するためのシステム及び方法
IL312401A (en) 2021-10-29 2024-06-01 Janssen Biotech Inc Methods of treating crohn's disease with anti-il23 specific antibody
EP4426748A4 (en) 2021-11-05 2025-11-26 Mab Biotec Inc Monoclonal antibodies against carcinomebryonal antigens and their uses
TW202342095A (zh) 2021-11-05 2023-11-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 用於治療和預防ｃｏｖｉｄ—１９之組成物
JP2024544867A (ja) 2021-11-10 2024-12-05 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｃｄ８腫瘍浸潤リンパ球を利用する拡張治療の方法
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
US20230151087A1 (en) 2021-11-15 2023-05-18 Janssen Biotech, Inc. Methods of Treating Crohn's Disease with Anti-IL23 Specific Antibody
JP2024544997A (ja) 2021-11-16 2024-12-05 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 治療および診断のための新規分子
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
EP4433160A1 (en) 2021-11-17 2024-09-25 Disc Medicine, Inc. Methods for treating anemia of kidney disease
CA3239216A1 (en) 2021-11-23 2023-06-01 Janssen Biotech, Inc. Method of treating ulcerative colitis with anti-il23 specific antibody
US20250027067A1 (en) 2021-11-24 2025-01-23 Formycon Ag Improved ace2 fusion proteins
WO2023094571A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Formycon Ag Stabilization of ace2 fusion proteins
CN116829179A (zh) 2021-12-06 2023-09-29 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合肺炎克雷伯菌o2抗原和o1抗原的双特异性抗体以及组合物
TW202330582A (zh) 2021-12-15 2023-08-01 美商建南德克公司 穩定的ｉｌ－１８多肽及其用途
WO2023109900A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
CA3240565A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Wenfeng Xu Anti-ox40 antibodies and methods of use
CA3241017A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Robert Ferris Combination therapies for hiv infections and uses thereof
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
JP2025503707A (ja) 2022-01-18 2025-02-04 アルジェニクス ビーブイ ガレクチン－１０抗体
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
EP4469159A1 (en) 2022-01-27 2024-12-04 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
EP4469065A1 (en) 2022-01-28 2024-12-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
EP4469066A1 (en) 2022-01-28 2024-12-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
CR20240378A (es) 2022-02-16 2024-10-03 Ac Immune Sa Moléculas de unión anti -tdp-43 humanizadas y usos de las mismas
TW202342510A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 英商Ｒｑ生物科技有限公司 抗體
CA3254017A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Yale University Humanized 3E10 antibodies, variants, and antigen-binding fragments thereof
EP4490173A1 (en) 2022-03-07 2025-01-15 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies thereof and related methods and uses
JP2025509286A (ja) 2022-03-10 2025-04-11 ビバソル， インコーポレイテッド 抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用
EP4490184A1 (en) 2022-03-11 2025-01-15 JANSSEN Pharmaceutica NV Multispecific antibodies and uses thereof
TW202346355A (zh) 2022-03-11 2023-12-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(二)
US20250136672A1 (en) 2022-03-11 2025-05-01 Janssen Pharmaceutica Nv Multispecific antibodies and uses thereof
KR20240144422A (ko) 2022-03-15 2024-10-02 컴퓨젠 엘티디. 암 치료의 단독치료법 및 병용치료법에서 il-18bp 길항제 항체 및 이의 용도
WO2023178357A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules and methods of use thereof
EP4245374A3 (en) 2022-03-18 2024-07-10 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
CA3245762A1 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. ANTI-MSLN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP2025511000A (ja) 2022-03-28 2025-04-15 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト インターフェロンガンマバリアントおよびこれを含む抗原結合分子
EP4499689A1 (en) 2022-03-30 2025-02-05 Janssen Biotech, Inc. Method of treating mild to moderate psoriasis with il-23 specific antibody
JP2025510997A (ja) 2022-03-30 2025-04-15 ノバルティス アーゲー 抗ナトリウム利尿ペプチド受容体１（ｎｐｒ１）抗体を使用して障害を治療する方法
CA3246312A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. DOSAGE FOR TREATMENT WITH BISOPECIFIC ANTI-FCRH5/ANTI-CD3 ANTIBODIES
GB202204813D0 (en) 2022-04-01 2022-05-18 Bradcode Ltd Human monoclonal antibodies and methods of use thereof
EP4504220A1 (en) 2022-04-06 2025-02-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
KR20250004705A (ko) 2022-04-08 2025-01-08 에이씨 이뮨 에스에이 항-tdp-43 결합 분자
KR20250004768A (ko) 2022-04-13 2025-01-08 제넨테크, 인크. 치료 단백질의 약학적 조성물 및 사용 방법
CA3248034A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. METHODS FOR EXPANSION OF TIL CELLS BY MEANS OF SPECIFIC CYTOKINE COMBINATIONS AND/OR AKT INHIBITOR TREATMENT
EP4511395A1 (en) 2022-04-20 2025-02-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
EP4514842A1 (en) 2022-04-29 2025-03-05 AstraZeneca UK Limited Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same
AR129182A1 (es) 2022-04-29 2024-07-24 23Andme Inc Proteínas de unión al antígeno
CR20240526A (es) 2022-05-03 2025-01-10 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6e, inmunoconjugados y usos de estos
US20250326828A1 (en) 2022-05-09 2025-10-23 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies Specifically Recognizing Gdf15 and Uses Thereof
EP4522202A1 (en) 2022-05-10 2025-03-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
KR20250044482A (ko) 2022-05-10 2025-03-31 엘피스 바이오파마슈티컬즈 조작된 인터루킨-2 수용체 베타 결합 감소 작용제
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
EP4522653A1 (en) 2022-05-11 2025-03-19 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
IL317070A (en) 2022-05-18 2025-01-01 Janssen Biotech Inc Method for evaluating and treating psoriatic arthritis with IL23 antibody
CA3257929A1 (en) 2022-05-31 2025-04-22 Futuregen Biopharmaceutical (Beijing) Co., Ltd. Anti-CD40 antibodies, bispecific anti-PD-L1×CD40 antibodies, and their use
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
EP4536290A1 (en) 2022-06-08 2025-04-16 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
CR20240552A (es) 2022-06-10 2025-01-29 Horizon Therapeutics Ireland Dac Anticuerpos igf1r
CN119630697A (zh) 2022-06-15 2025-03-14 阿根思有限公司 Ph依赖性hsa结合分子及使用方法
EP4539881A1 (en) 2022-06-15 2025-04-23 Bioverativ USA Inc. Anti-complement c1s antibody formulation
MA71249A (fr) 2022-06-24 2025-04-30 Bioverativ Usa Inc. Méthodes de traitement de maladies médiées par complément
US20260008990A1 (en) 2022-07-06 2026-01-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
CN119585308A (zh) 2022-07-13 2025-03-07 基因泰克公司 针对用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行的治疗的给药
EP4558524A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4558226A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
MA71559A (fr) 2022-07-22 2025-05-30 Genentech, Inc. Molécules de liaison à l'antigène anti-steap1 et leurs utilisations
CN120865421A (zh) 2022-07-22 2025-10-31 百时美施贵宝公司 结合至人类pad4的抗体及其用途
MA71621A (fr) 2022-07-27 2025-05-30 Cephalon Llc Anticorps anti-tl1a pour le traitement de la colite ulcéreuse et de la maladie de crohn
WO2024026386A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Cephalon Llc Anti-tl1a antibody formulations
WO2024026496A1 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
JP2025525959A (ja) 2022-08-05 2025-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 脳腫瘍を治療するためのトランスフェリン受容体結合タンパク質
JP2025525969A (ja) 2022-08-05 2025-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 脳腫瘍を治療するためのｃｄ９８結合構築物
AU2023325906A1 (en) 2022-08-19 2025-02-13 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Formulations comprising g-csf and uses thereof
JP2025529896A (ja) 2022-08-22 2025-09-09 アブデラ セラピューティクス インク． Ｄｌｌ３結合分子およびその使用
EP4577569A1 (en) 2022-08-25 2025-07-02 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd Antigen binding proteins and uses thereof
WO2024044675A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
CN119744182A (zh) 2022-08-29 2025-04-01 第一三共株式会社 包含突变Fc区的抗体药物偶联物
CN120153254A (zh) 2022-09-01 2025-06-13 基因泰克公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
JP2025529210A (ja) 2022-09-01 2025-09-04 ユニバーシティ・オブ・ジョージア・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド アポリポタンパク質ｌ１を導いて哺乳動物の細胞死を誘導するための組成物及び方法
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
EP4587473A1 (en) 2022-09-12 2025-07-23 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New anti-itgb8 antibodies and its uses thereof
KR20250060305A (ko) 2022-09-21 2025-05-07 사노피 바이오테크놀로지 인간화 항-il-1r3 항체 및 사용 방법
WO2024061930A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New method to treat and diagnose peripheral t-cell lymphoma (ptcl)
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
KR20250099778A (ko) 2022-10-04 2025-07-02 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 자가항체-매개 질환의 치료에 사용하기 위한 돌연변이된 taci-fc 융합 단백질
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
EP4606886A1 (en) 2022-10-20 2025-08-27 Beijing SoloBio Genetechnology Company Ltd. Antibody combination specifically binding to trail or fasl, and bispecific antibody
EP4608512A2 (en) 2022-10-25 2025-09-03 Ablexis, LLC Anti-cd3 antibodies
WO2024089609A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Ablynx N.V. Glycoengineered fc variant polypeptides with enhanced effector function
TW202426505A (zh) 2022-10-25 2024-07-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
JP2025541593A (ja) 2022-11-03 2025-12-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ１９／抗ｃｄ２８二重特異性抗体による併用療法
WO2024098024A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
EP4612277A1 (en) 2022-11-04 2025-09-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd103 selection
AU2023375342A1 (en) 2022-11-08 2025-04-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024107731A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
WO2024107752A2 (en) 2022-11-15 2024-05-23 Onestone Therapeutics Llc Compositions and methods for immunomodulatory bifunctional fusion molecules
EP4619045A1 (en) 2022-11-17 2025-09-24 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
EP4623073A2 (en) 2022-11-21 2025-10-01 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for assessing proliferation potency of gene-edited t cells
CN120584182A (zh) 2022-11-21 2025-09-02 艾欧凡斯生物治疗公司 肿瘤浸润淋巴细胞扩增的二维过程及其疗法
IL321059A (en) 2022-11-22 2025-07-01 Janssen Biotech Inc Method for treating ulcerative colitis with a specific anti-IL23 antibody
AR131143A1 (es) 2022-11-24 2025-02-19 Beigene Switzerland Gmbh Conjugados anticuerpo-fármaco anti-cea y métodos de uso
AU2023387113A1 (en) 2022-11-25 2025-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing protein
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
CN119546630A (zh) 2022-12-08 2025-02-28 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 特异性结合rsv的抗体
EP4386084A1 (en) 2022-12-14 2024-06-19 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
EP4640708A1 (en) 2022-12-23 2025-10-29 Chimagen Biosciences, Ltd Novel anti-gprc5d antibody
JP2025542322A (ja) 2022-12-23 2025-12-25 チマゲン・バイオサイエンシズ，リミテッド Ｇｐｒｃ５ｄを標的とする多重特異性ポリペプチド複合物
KR20250137203A (ko) 2022-12-27 2025-09-17 예일 유니버시티 항체 약물 접합체
WO2024148241A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
KR20250133728A (ko) 2023-01-06 2025-09-08 라센 테라퓨틱스, 인코포레이티드 항-il-18bp 항체
AU2024206846A1 (en) 2023-01-06 2025-08-21 Lassen Therapeutics, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE
WO2024150074A2 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Coronavirus antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024151885A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy
CR20250338A (es) 2023-01-18 2025-09-02 Genentech Inc Anticuerpos multiespecíficos y usos de estos
AU2024209475A1 (en) 2023-01-19 2025-09-04 Beone Medicines I Gmbh Anti-cmet antibodies and methods of use
EP4655007A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
EP4665392A2 (en) 2023-02-14 2025-12-24 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
WO2024170543A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cd44 antibodies and uses thereof
WO2024182443A2 (en) 2023-02-27 2024-09-06 Compugen Ltd. Triple combination therapy with anti-pvrig antibodies, anti-tigit antibodies, and pembrolizumab
EP4673469A1 (en) 2023-03-02 2026-01-07 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-cd22 antibodies and uses thereof
EP4676975A1 (en) 2023-03-03 2026-01-14 Beone Medicines I GmbH Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
AR132043A1 (es) 2023-03-03 2025-05-21 Beigene Switzerland Gmbh Anticuerpos muc1 y métodos de uso
CN121219315A (zh) 2023-03-03 2025-12-26 塞德斯医疗公司 抗干细胞因子(scf)和抗胸腺基质淋巴细胞生成素(tslp)抗体及双特异性构建体
TW202436344A (zh) 2023-03-03 2024-09-16 瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司 Ｃｄ１６ａ抗體及使用方法
AR132064A1 (es) 2023-03-06 2025-05-21 Beigene Switzerland Gmbh Anticuerpos anti-cldn6 y métodos de uso
AR132063A1 (es) 2023-03-06 2025-05-21 Beigene Switzerland Gmbh Anticuerpos multiespecíficos anti-cldn6 y anti-cd3 y métodos de uso
WO2024184811A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
CN120858109A (zh) 2023-03-10 2025-10-28 基因泰克公司 与蛋白酶的融合物及其用途
EP4680635A1 (en) 2023-03-13 2026-01-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
WO2024194685A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
EP4680632A2 (en) 2023-03-17 2026-01-21 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
US12173081B2 (en) 2023-03-21 2024-12-24 Biograph 55, Inc. CD19/CD38 multispecific antibodies
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
AU2024245676A1 (en) 2023-03-30 2025-10-09 272BIO Limited Gnrh-binding polypeptides and uses thereof
WO2024206738A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Immunai Inc. Humanized anti-trem2 antibodies
KR20250167591A (ko) 2023-03-31 2025-12-01 제넨테크, 인크. 항-알파 v 베타 8 인테그린 항체 및 사용 방법
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211235A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024212827A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
CN121263210A (zh) 2023-04-17 2026-01-02 沛科生物公司 抗体和抗体-药物偶联物以及使用方法和合成工艺及中间体
WO2024226829A2 (en) 2023-04-26 2024-10-31 Yale University Enpp3-binding molecules, compositions formed therefrom, and methods of use thereof for the treatment of cancer
WO2024233341A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AR132623A1 (es) 2023-05-08 2025-07-16 Hoffmann La Roche PROTEÍNAS DE FUSIÓN DE INTERFERÓN a DIRIGIDAS Y MÉTODOS DE USO
WO2024233646A1 (en) 2023-05-10 2024-11-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
CN121263435A (zh) 2023-05-16 2026-01-02 豪夫迈·罗氏有限公司 Pd-1调节的il-2免疫细胞因子及其用途
AU2024273407A1 (en) 2023-05-17 2025-12-04 Centre National De La Recherche Scientifique Anti-cathepsin-d antibodies
WO2024254455A1 (en) 2023-06-08 2024-12-12 Genentech, Inc. Macrophage signatures for diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2024251884A1 (en) 2023-06-09 2024-12-12 Innate Pharma Nk cell engager proteins comprising anti-cd20 and ant-nkp46 antibody, linked to il-2 in treatment of r/r b-nhl
EP4477236A1 (en) 2023-06-14 2024-12-18 Inatherys Combination therapy for treating a tumor using adc comprising anti-cd71 antibodies and bh3 mimetics
WO2024263761A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Antibodies and uses thereof
WO2024263845A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Treatment of multiple myeloma
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
TW202515608A (zh) 2023-06-26 2025-04-16 以色列商坎布根有限公司 Ｉｌ—１８ｂｐ拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途
WO2025002410A1 (en) 2023-06-30 2025-01-02 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd G-csf dimer for use in the treatment or prevention of chemotherapy or radiotherapy induced neutropenia
WO2025012417A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-neurotensin long fragment and anti-neuromedin n long fragment antibodies and uses thereof
TW202509219A (zh) 2023-07-13 2025-03-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 編碼細胞介素之慢病毒載體及其用於製備腫瘤浸潤性淋巴球之用途
WO2025019790A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc
WO2025022280A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Astrazeneca Ab Treatment of neurodegenerative diseases
WO2025024265A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of assessing citrullination and activity of pad4 modulators
WO2025021790A2 (en) 2023-07-24 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
AU2024323186A1 (en) 2023-08-09 2026-01-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof
WO2025032071A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
TW202525845A (zh) 2023-08-23 2025-07-01 法商賽諾菲公司 基於ｃｔｌａ—４之溶體降解劑及其用途
US20250101101A1 (en) 2023-09-01 2025-03-27 iTeos Belgium SA Anti-trem2 antibodies and methods of use
WO2025049905A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Gennao Bio, Inc. Dnase co-expression in host cells
WO2025045251A2 (en) 2023-09-03 2025-03-06 Kira Pharmaceuticals (Us) Llc Multispecific constructs comprising anti-factor d moiety
WO2025059037A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting b7-h4 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064890A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting cd180 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064885A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies that bind cd3 and cd2 and methods of use thereof
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
WO2025072888A2 (en) 2023-09-28 2025-04-03 Novavax, Inc. Anti-sars-cov-2 spike (s) antibodies and their use in treating covid-19
WO2025068957A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Novartis Ag Bispecific antibodies for use in lowering the risk of cardiovascular disease events in subjects known to be a carrier of clonal expansion of hematopoietic cell lines with somatic mutations
WO2025076081A1 (en) 2023-10-03 2025-04-10 Absci Corporation Tl1a associated antibody compositions and methods of use
WO2025076389A1 (en) 2023-10-06 2025-04-10 Seagen Inc. Methods of treating advanced solid tumors with b7-h4 antibody-drug conjugates
WO2025085489A1 (en) 2023-10-17 2025-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Gspt1-degrading compounds, anti-cd33 antibodies and antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2025101484A1 (en) 2023-11-06 2025-05-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of endometrial cancers with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2025114862A1 (en) 2023-11-27 2025-06-05 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Il-33 binding antibodies
WO2025120015A1 (en) 2023-12-06 2025-06-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd5 targeting antibodies with depleting and t or b-cell activation effects
WO2025122885A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Absci Corporation Anti-her2 associated antibody compositions designed by artificial intelligence and methods of use
WO2025128839A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Horizon Therapeutics Ireland Dac Methods for the treatment of thyroid eye disease with anti igf-1r antagonistic antibodies
WO2025133707A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Vectory Therapeutics B.V. Anti-tdp-43 antibodies and uses thereof
GB202319605D0 (en) 2023-12-20 2024-01-31 argenx BV Monovalent binding molecules and methods of use
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025133694A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 argenx BV Fcrn/hsa-binding molecules and methods of use
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
WO2025147696A1 (en) 2024-01-05 2025-07-10 Resolve Therapeutics, Llc Treatment of symptoms associated with sars-cov viral infection or a prior sars-cov viral infection with nuclease agents
US20250222125A1 (en) 2024-01-05 2025-07-10 Beigene, Ltd. Anti-FGFR2b Antibodies, Conjugates and Methods of Use
WO2025149947A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Seagen Inc. Antibody-drug conjugates
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
WO2025155877A2 (en) 2024-01-18 2025-07-24 The Regents Of The University Of California Antibodies binding to pad4 and uses thereof
WO2025158389A1 (en) 2024-01-24 2025-07-31 Shattuck Labs, Inc. Antibodies that bind tnfrsf25
JP2025115976A (ja) 2024-01-26 2025-08-07 フューチャージェン・バイオファーマシューティカル（ベイジン）カンパニー・リミテッド Ｔｌ１ａに特異的に結合できる抗体及びその使用
WO2025171182A1 (en) 2024-02-08 2025-08-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with cancer vaccine
WO2025174974A1 (en) 2024-02-14 2025-08-21 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd33 antibodies and uses thereof
WO2025172924A1 (en) 2024-02-15 2025-08-21 Janssen Biotech, Inc. Anti-transferrin receptor compositions and methods thereof
EP4658320A1 (en) 2024-02-27 2025-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibody drug conjugates
WO2025184208A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
WO2025186332A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Ac Immune Sa Vectorized anti-tdp-43 antibodies
CA3249015A1 (en) 2024-03-20 2025-10-31 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn’s disease with anti-il23 specific antibody
WO2025196639A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody-drug conjugates, and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
WO2025226603A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Surface Oncology, LLC Methods for treating cancer using anti-ccr8 antibodies
WO2025226808A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
EP4644413A1 (en) 2024-05-03 2025-11-05 Genmab B.V. Binding agents having altered fc-mediated effector functions
WO2025242732A1 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Pan antibodies against sars-cov-2 spike protein and uses thereof for therapeutical purposes
WO2025245176A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Multispecific antibody constructs
WO2025250969A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Anti-cd74 antibodies, conjugates and uses thereof
WO2025254987A1 (en) 2024-06-03 2025-12-11 Alector Llc Siglec-9 ecd fusion molecule variants and methods of use thereof
WO2025255405A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Anti-fap antibodies and uses thereof
US20250376536A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Multispecific anti-cd40 / anti-fap antibodies and uses thereof
WO2025257181A1 (en) 2024-06-11 2025-12-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies targeting trans-active response dna-binding protein-43 (tdp-43)
WO2025262604A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn's disease with anti-il23 specific antibody
WO2025262216A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Multispecific antigen binding proteins binding to il23 and il18
WO2026006492A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Ypsilon Therapeutics, Inc. Anti-prame/hla-a2 antibodies and uses thereof
WO2026006494A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-cd3 antibodies and uses thereof
WO2026006495A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-wt1/hla-a2 antibody and uses thereof
WO2026003761A1 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating ulcerative colits with anti-il23 specific antibody
WO2026006784A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of making tumor reactive peripheral blood lymphocytes (trpbl)
CN119552212B (zh) * 2025-01-26 2025-04-25 杭州康源食品科技有限公司 一种具有降尿酸活性的三肽lfp及其应用

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4490473A (en) * 1983-03-28 1984-12-25 Panab Labeled antibodies and methods
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4752601A (en) * 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5985599A (en) * 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5204244A (en) * 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5576184A (en) * 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
EP0435911B1 (en) 1988-09-23 1996-03-13 Cetus Oncology Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
EP0479909B1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
GB8916400D0 (en) * 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
US5364930A (en) * 1990-10-16 1994-11-15 Northwestern University Synthetic C1q peptide fragments
US5419904A (en) * 1990-11-05 1995-05-30 The Regents Of The University Of California Human B-lymphoblastoid cell line secreting anti-ganglioside antibody
JPH06507398A (ja) 1991-05-14 1994-08-25 リプリジェン　コーポレーション Ｈｉｖ感染治療のための異種複合抗体
US6136310A (en) * 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
GB9206422D0 (en) * 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
CA2118508A1 (en) * 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
AU668423B2 (en) 1992-08-17 1996-05-02 Genentech Inc. Bispecific immunoadhesins
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DE122004000036I1 (de) 1992-11-13 2005-07-07 Biogen Idec Inc Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antik¦rper gegen menschlichen B Lymphozyt beschr{nkter Differenzierung antigen f}r die Behandlung von B-Zell-Lymphoma.
US6491916B1 (en) * 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) * 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5730977A (en) * 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US5834597A (en) * 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1998023289A1 (en) * 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
DE19721700C1 (de) 1997-05-23 1998-11-19 Deutsches Krebsforsch Mutierter OKT3-Antikörper
WO1998058964A1 (en) * 1997-06-24 1998-12-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
PL199659B1 (pl) 1998-02-25 2008-10-31 Merck Patent Gmbh Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ES2532910T3 (es) * 1998-04-02 2015-04-01 Genentech, Inc. Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2015-08-31 Genentech Inc Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc
US7183387B1 (en) * 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6676927B1 (en) * 1999-01-20 2004-01-13 The Rockefeller University Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies
EP1252192B1 (en) 2000-02-11 2006-08-16 MERCK PATENT GmbH Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
EP1272526A4 (en) * 2000-04-13 2004-10-13 Univ Rockefeller REINFORCING ANTIBODY-IMMUNE RESPONSE
ES2727425T3 (es) 2000-12-12 2019-10-16 Medimmune Llc Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
EP1572091A4 (en) 2002-07-09 2008-03-05 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TUMOR DIAGNOSIS AND TREATMENT
DK2364996T3 (en) 2002-09-27 2017-02-06 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
EP1562972B1 (en) 2002-10-15 2010-09-08 Facet Biotech Corporation ALTERATION OF FcRn BINDING AFFINITIES OR SERUM HALF-LIVES OF ANTIBODIES BY MUTAGENESIS
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7608260B2 (en) * 2003-01-06 2009-10-27 Medimmune, Llc Stabilized immunoglobulins
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
CA2545539A1 (en) 2003-10-15 2005-04-28 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
AU2005285347A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)

Also Published As

Publication number Publication date
PL394232A1 (pl) 2011-07-04
IL222149B (en) 2018-11-29
EP1141024B1 (en) 2018-08-08
EP2366713A2 (en) 2011-09-21
WO2000042072A3 (en) 2000-11-30
CN1237076C (zh) 2006-01-18
KR20080090572A (ko) 2008-10-08
US7785791B2 (en) 2010-08-31
IL223048A0 (en) 2012-12-31
PL209392B1 (pl) 2011-08-31
PL209786B1 (pl) 2011-10-31
PL349770A1 (en) 2002-09-09
EP2364997A2 (en) 2011-09-14
HK1090066A1 (en) 2006-12-15
HU230769B1 (hu) 2018-03-28
IL223047A (en) 2016-10-31
EP1141024A2 (en) 2001-10-10
KR20010102976A (ko) 2001-11-17
KR100887482B1 (ko) 2009-03-10
HUP0104865A3 (en) 2004-07-28
EP2386574A3 (en) 2012-06-27
AU2850500A (en) 2000-08-01
KR100940380B1 (ko) 2010-02-02
JP2016136951A (ja) 2016-08-04
US20080274506A1 (en) 2008-11-06
MX353234B (es) 2018-01-08
JP2010227116A (ja) 2010-10-14
JP2013166770A (ja) 2013-08-29
CA2359067C (en) 2017-03-14
HUP0104865A2 (hu) 2002-04-29
JP6312092B2 (ja) 2018-04-18
KR20060067983A (ko) 2006-06-20
NZ539776A (en) 2006-12-22
ZA200105484B (en) 2002-07-29
CN1763097B (zh) 2011-04-13
BR0008758A (pt) 2001-12-04
US7790858B2 (en) 2010-09-07
US20080274105A1 (en) 2008-11-06
MXPA01007170A (es) 2002-07-30
EP2386574A2 (en) 2011-11-16
IL144056A0 (en) 2002-04-21
CN1343221A (zh) 2002-04-03
CN1763097A (zh) 2006-04-26
EP2366713A3 (en) 2012-06-27
US7371826B2 (en) 2008-05-13
KR20100045527A (ko) 2010-05-03
WO2000042072A2 (en) 2000-07-20
AU2008229968A1 (en) 2008-11-06
JP5335735B2 (ja) 2013-11-06
KR20090078369A (ko) 2009-07-17
JP6230257B2 (ja) 2017-11-15
AU778683B2 (en) 2004-12-16
IL223047A0 (en) 2012-12-31
CA2359067A1 (en) 2000-07-20
KR101155191B1 (ko) 2012-06-13
HUP1500355A2 (en) 2002-04-29
US20060194291A1 (en) 2006-08-31
EP2364997A3 (en) 2012-07-04
AU2008229968B2 (en) 2012-08-09
US20060194290A1 (en) 2006-08-31
IL144056A (en) 2014-04-30
KR101077001B1 (ko) 2011-10-26
IL223048A (en) 2016-09-29
ES2694002T3 (es) 2018-12-17
JP2003512019A (ja) 2003-04-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6312092B2 (ja) 変化したエフェクター機能を有するポリペプチド変異体
US7122637B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2012211437B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2004233493B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
HK1090066B (en) Polypeptide variants with altered effector function
HK1162530A (en) Polypeptide variants with altered effector function