PL220113B1 - Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc - Google Patents

Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc

Info

Publication number
PL220113B1
PL220113B1 PL394232A PL39423200A PL220113B1 PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1 PL 394232 A PL394232 A PL 394232A PL 39423200 A PL39423200 A PL 39423200A PL 220113 B1 PL220113 B1 PL 220113B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
region
polypeptide
binding
variant
amino acid
Prior art date
Application number
PL394232A
Other languages
English (en)
Other versions
PL394232A1 (pl
Inventor
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL394232A1 publication Critical patent/PL394232A1/pl
Publication of PL220113B1 publication Critical patent/PL220113B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc.
Dziedzina wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających wariant regionu Fc. W szczególności niniejszy wynalazek dotyczy polipeptydów zawierających region Fc o zmienionej funkcji efektorowej, wynikającej z modyfikacji jednej lub więcej reszt aminokwasowych w obrębie regionu Fc tych polipeptydów.
Opis stanu techniki
Przeciwciała są białkami wykazującymi swoiste powinowactwo do wiązania ze specyficznym antygenem. Natywne przeciwciała są zazwyczaj heterotetramerycznymi glikoproteinami o masie około 150000 daltonów, składającymi się z dwóch identycznych łańcuchów lekkich (L) i dwóch identycznych łańcuchów ciężkich (H). Każdy z łańcuchów lekkich połączony jest z łańcuchem ciężkim za pomocą jednego kowalencyjnego wiązania disiarczkowego, natomiast liczba wiązań disiarczkowych pomiędzy łańcuchami ciężkimi jest zmienna dla różnych odmian izotypowych immunoglobulin. Każdy łańcuch ciężki i lekki posiada również regularnie rozmieszczone wewnątrzłańcuchowe wiązania disiarczkowe. Każdy łańcuch ciężki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VH), poprzedzoną licznymi domenami stałymi. Każdy łańcuch lekki posiada na jednym końcu domenę zmienną (VL) oraz na drugim swym końcu pewną liczbę domen stałych, domena stała łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do pierwszej domeny stałej łańcucha ciężkiego, natomiast domena zmienna łańcucha lekkiego jest położona równolegle w stosunku do domeny zmiennej łańcucha ciężkiego. Uważa się, że za powstanie powierzchni styku pomiędzy domenami zmiennymi łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiedzialne są szczególne reszty aminokwasowe.
Termin „zmienny” odnosi się do faktu, że w różnych przeciwciałach pewne fragmenty domen zmiennych różnią się znacznie sekwencją i warunkują swoistość wiązania specyficznego antygenu przez specyficzne przeciwciało. Jednakże, zmienność nie jest rozmieszczona równomiernie w obrębie domen zmiennych przeciwciał. Skupia się ona w trzech segmentach, zwanych regionami determinującymi dopasowanie (CDR), zarówno w domenach zmiennych łańcuchów lekkich, jak i ciężkich. Najbardziej konserwatywne części domen zmiennych, zwane są regionami zrębowymi (FR). Każda z domen zmiennych natywnych łańcuchów lekkich i ciężkich obejmuje cztery FR, przyjmujące głównie strukturę harmonijki β, połączone poprzez trzy CDR, tworzące pętle łączące, a w pewnych przypadkach stanowiące fragment, o konformacji harmonijki β. W obrębie każdego z łańcuchów CDR znajdują się w bliskim sąsiedztwie FR i, wraz z CDR innego łańcucha, uczestniczą w formowaniu miejsca wiązania antygenu przeciwciała (patrz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).
Domeny stale nie uczestniczą bezpośrednio w wiązaniu przeciwciała z antygenem, jednakże wykazują różne funkcje efektorowe. W zależności od sekwencji aminokwasowej regionu stałego łańcuchów ciężkich przeciwciała lub immunoglobuliny podlegają podziałowi na różne klasy. Istnieje pięć głównych klas immunoglobulin: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM oraz kilka podklas (odmiany izotypowe), wynikających z podziału klas głównych, np. IgG1, IgG2, IgG3 oraz IgG4; IgA1 oraz IgA2. Regiony stałe łańcucha ciężkiego odpowiadające różnym klasom immunoglobulin nazywane są odpowiednio, α, β, ε, γ oraz μ. Spośród różnych klas ludzkich immunoglobulin, jedynie ludzkie IgG 1, IgG2, IgG3 oraz IgM są zdolne do aktywacji dopełniacza, przy czym ludzkie IgG 1 i IgG3 pośredniczą w ADCC skuteczniej niż IgG2 i IgG4.
Na Figurze 1 schematycznie przedstawiono strukturę natywnej IgG1 i wskazano różne fragmenty natywnego przeciwciała. Trawienie przeciwciała papainą skutkuje powstaniem dwóch identycznych fragmentów wiążących antygen, zwanych fragmentami Fab, przy czym każdy zawiera pojedyncze miejsce wiązania antygenu oraz pozostały fragment „Fc”, którego nazwa wywodzi się z jego łatwej krystalizacji. Określono strukturę krystaliczną regionu Fc ludzkiej IgG (Delsenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). W cząsteczkach ludzkich IgG region Fc otrzymywany jest w wyniku cięcia papainą od N-końca do reszty Cys 226. Fragment Fc jest kluczowy dla funkcji efektorowych przeciwciał.
PL 220 113 B1
Zależne od regionu Fc funkcje efektorowe przeciwciał można podzielić na dwie kategorie:
(1) funkcje efektorowe występujące po związaniu antygenu przez przeciwciało (funkcje te obejmują udział w kaskadzie dopełniacza lub wiązanie się z receptorami Fc przeciwciał (komórki z FcR); oraz (2) funkcje efektorowe występujące niezależnie od wiązania antygenu (funkcje te zapewniają ciągłość działania i zdolność przenoszenia przez bariery komórkowe w wyniku transcytozy). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77-94 (1995).
Podczas gdy wiązanie przeciwciała z wymaganym antygenem wywiera efekt neutralizujący, który może chronić przed wiązaniem obcego antygenu z endogenną cząsteczką docelową (np. receptorem lub ligandem), samo wiązanie nie usuwa obcego antygenu. W celu skutecznego usunięcia i/lub zniszczenia obcych antygenów, przeciwciało powinno wykazywać zarówno wysokie powinowactwo do swoistego antygenu, jak i skuteczne funkcje efektorowe.
Wiązanie receptora Fc (FcR)
Oddziaływania przeciwciał i kompleksów przeciwciało-antygen z komórkami układu immunologicznego wywołuje różnego typu odpowiedzi, włączając cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC) oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC) (praca przeglądowa, Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997); Ward i Ghetie, Therapeutic Immunol. 2: 77-94 (1995); jak również Ravetch i Knet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)).
W kilku funkcjach efektorowych przeciwciał uczestniczą receptory Fc (FcR), wiążące region Fc przeciwciała. FcR definiowane są na podstawie ich specyficzności względem poszczególnych odmian izotypowych immunoglobulin; receptory Fc dla przeciwciał IgG to FcyR, dla IgE - FceR, dla IgA - FcaR, itd. Zidentyfikowano trzy podklasy FcyR: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) oraz FcyRIII (CD16). Ze względu na to, że każda podklasa FcyR kodowana jest przez dwa lub trzy geny, a alternatywne składanie RNA prowadzi do powstania różnorodnych transkryptów, występuje duże zróżnicowanie pomiędzy odmianami izotypowymi FcyR. Trzy geny kodujące podklasę FcyRI (FcyRIA, FcyRIB i FcyRIC) skupione są w regionie 1q21.1 długiego ramienia chromosomu 1; geny kodujące odmiany izotypowe FcyRII (FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIC) oraz geny kodujące FcyRIII (FcyRIIIA i FcyRIIIB) skupiają się w regionie 1q22. Te różne podtypy FcR ulegają ekspresji na różnych typach komórek (praca przeglądowa, Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991)). Przykładowo FcyRIIIB występuje u ludzi tylko na neutrofiłach, natomiast FcyRIIIA występuje na makrofagach, monocytach, komórkach naturalnych zabójców (NK) i w subpopulacji komórek T. W szczególności, FcyRIIIA jest jedynym FcR obecnym na komórkach NK, jednym z typów komórek uczestniczących w ADCC.
FcyRI, FcyRII oraz FcyRIII należą do nadrodziny receptorów immunoglobulinowych (IgSF); FcyRI posiada trzy domeny IgSF w obszarze domeny zewnątrzkomórkowej, podczas gdy FcyRII i FcyRIII posiadają jedynie dwa fragmenty IgSF w swych domenach zewnątrzkomórkowych.
Innym typem receptora Fc jest noworodkowy receptor Fc (FcRn). FcRn wykazuje podobieństwo strukturalne do głównego układu zgodności tkankowej i składa się z łańcucha α niekowalencyjnie związanego z mikroglobuliną β2.
Miejsce wiązania FcyR na ludzkich i mysich przeciwciałach zostało uprzednio zmapowane do tzw. „dolnego regionu zawiasowego” składającego się z reszt 233-239 (indeks EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986); Duncan i wsp., Nature 332: 563 (1988); Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-1491 (1991); Chappel i wsp., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 9036-9040 (1991). Region obejmujący reszty 233-239, P238 i S239 był brany pod uwagę jako mogący uczestniczyć w wiązaniu, ale rola tych dwóch reszt nie była nigdy oceniana drogą substytucji lub delecji.
Inne opisane wcześniej obszary prawdopodobnie zaangażowane w wiązanie z FcyR to: G316 -K338 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRI (jedynie na podstawie porównania sekwencji, nie analizowano żadnych mutantów substytucyjnych) (Woof i wsp., Molec. Immunol. 23: 319-330 (1986)); K274 -R301 (ludzka IgG1) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Sarmay i wsp., Molec. Immunol. 21: 43-51 (1984)); Y407-R416 (ludzka IgG) dla ludzkiego FcyRIII (w oparciu o peptydy) (Gergely i wsp., Biochem. Soc. Trans. 12: 739-743 (1984)); jak również N297 i E318 (mysie IgG2b) dla mysiego FcyRII (Lund i wsp., Molec. Immunol,. 29: 53-59 (1992)).
Pro331 w IgG3 zastąpiono Ser i analizowano powinowactwo tego wariantu względem komórek docelowych. Powinowactwo to było sześciokrotnie niższe od powinowactwa obserwowanego dla niezmutowanej IgG3, co wskazało na udział Pro331 w wiązaniu FcyRI. Morrison i wsp., Immunologist, 2: 119-124 (1994); oraz Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173: 1483-91 (1991).
PL 220 113 B1
Wiązanie C1q
C1q oraz dwie proteazy serynowe, C1r i C1s, tworzą kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). C1q jest sześciowartościową cząsteczką o masie cząsteczkowej w przybliżeniu 460000 i strukturze przypominającej bukiet tulipanów, w którym sześć kolagenowych „łodyg” jest połączonych z sześcioma regionami globularnych główek. Burton i Woof, Advances in Immunol. 51: 1-84 (1992). Do aktywacji kaskady dopełniacza niezbędne jest związanie z C1q przy najmniej dwóch cząsteczek IgG1, IgG2 lub IgG3 (istnieje zgoda co do tego, że IgG4 nie aktywuje dopełniacza), natomiast tylko jednej cząsteczki IgM, przyłączonej do docelowego antygenu. Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology, 2: 77-94 (1995), str. 80.
W oparciu o wyniki uzyskane na podstawie modyfikacji chemicznych i analizy krystalograficznej Burton i wsp., (Nature, 288: 338-344, (1980)) zaproponowali, że miejsce wiązania dla jednego ze składników dopełniacza C1q na IgG, obejmuje przynajmniej dwie (C-końcowe) nici β domeny CH2. Burton następnie zasugerował (Molec.Immunol., 22(3): 161-206 (1985)), że region zawierający reszty aminokwasowe 318 do 337 może uczestniczyć w wiązaniu dopełniacza.
Duncan i Winter (Nature 332: 738-40 (1988)), stosując mutagenezę ukierunkowaną, odkryli, że Glu318, Lys320 i Lys322 tworzą miejsce wiązania C1q. Dane dostarczone przez Duncan'a i Winter'a pochodzą z testów wiązania mysiej odmiany izotypowej IgG2b z pochodzącym ze świnki morskiej C1q. Znaczenie reszt Glu318, Lys320 i Lys322 w wiązaniu C1q zostało potwierdzone na podstawie zdolności jaką wykazywał krótki, syntetyczny peptyd zawierający te reszty do hamowania zależnej od dopełniacza lizy. Podobne rezultaty ujawniono w Patencie USA Nr 5, 648, 260, wydanym 15 lipca, 1997r. oraz Patencie USA Nr 5, 624, 821, wydanym 29 kwietnia, 1997 r.
Na podstawie analizy zdolności podklasy ludzkiej IgG do uczestniczenia w zależnej od dopełniacza lizie komórkowej, wykazano, że reszta Pro331 jest zaangażowana w wiązanie C1q. Mutacja reszty Ser331 do reszty Pro331 w IgG nadaje zdolność aktywacji dopełniacza. (Tao i wsp., J.Exp.Med., 178: 661-667 (1993); Brekke i wsp., Eur.J.Immunol., 24: 2542-47 (1994)).
Ward i Ghetie zaprezentowali w swoim artykule przeglądowym, na podstawie porównania wyn ików otrzymanych przez zespół Winter'a i Tao i wsp. oraz Brekke i wsp., twierdzenie, że istnieją przynajmniej dwa różne regiony zaangażowane w wiązanie C1q: jeden w obrębie nici β domeny CH2, zawierającej reszty Glu318, Lys320 i Lys322 oraz drugi, w obszarze skrętu, w bliskim sąsiedztwie tej samej nici β, zawierający kluczową resztę aminokwasową w pozycji 331.
Inne doniesienia literaturowe sugerowały, że reszty Leu235 i Gly237 ludzkiego białka IgG1, zlokalizowane w dolnym regionie zawiasowym, odgrywają krytyczną rolę w wiązaniu i aktywacji dopełni acza. Xu i wsp., Immunol. 150:15A (Streszczenie) (1993). WO94/29351, wydany 2 grudnia, 1994 r. donosi, że reszty aminokwasowe niezbędne do wiązania C1q i FcR ludzkiej IgG1 zlokalizowane są w N-końcowym regionie domeny CH2, tj. reszty 231-238.
Ponadto zaproponowano, że zdolność IgG do wiązania C1q i aktywacji kaskady dopełniacza zależy również od obecności, braku lub modyfikacji, ugrupowania węglowodanowego znajdującego się pomiędzy dwiema domenami CH2 (zazwyczaj zakotwiczonego przy reszcie Asn297). Ward i Ghetie, Therapeutic Immunology 2: 77-04 (1995), str. 81.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiąże receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten obejmuje przeciwciało.
Korzystnie region Fc macierzystego polipeptydu zawiera region Fc ludzkiej IgG.
Korzystniej region Fc ludzkiej IgG zawiera region ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4.
Korzystnie wariant ten uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
Korzystniej wariant ten wiąże FcyRII z niższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedno podstawienie reszty aminokwasowej w regionie Fc.
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w dom enie CH2 regionu Fc.
PL 220 113 B1
Korzystnie wariant ten zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc, innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
Korzystnie wariant ten zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej wariant ten zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Korzystniej wariant ten zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wariant regionu Fc zawiera wariant Fc ludzkiej IgG.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie FcyRI.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie wykazuje zredukowane wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia zredukowane wiązanie z FcyRIII.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435, lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyR i zawiera modyfikacje reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRIII.
Jeszcze korzystniej ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRII.
Najkorzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcyRIII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie FcyRII i dodatkowo przejawia zredukowane wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej
PL 220 113 B1 pozycjach 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie ponadto przejawia zredukowane wiązanie FcRn.
Korzystniej przejawia zredukowane wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Korzystnie przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn.
Korzystniej przejawia wzmocnione wiązanie z FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dowolnej przynajmniej jednej lub więcej pozycjach 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU, według Kabat.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja, charakteryzująca się tym, że zawiera wariant polipeptydu określony powyżej i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
Korzystnie kompozycja ta jest sterylna.
Przedmiotm wynalazku jest ponadto wyizolowany kwas nukleinowy, charakteryzujący się tym, że koduje wariant polipeptydu określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest także wektor, charakteryzujący się tym, że zawiera kwas nukleinowy określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest też komórka gospodarza, charakteryzująca się tym, że zawiera wektor określony powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, polegający na tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną powyżej, który pozwala na ekspresję tego kwasu nukleinowego.
Korzystnie sposób ten obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie wariantu polipeptydu określonego powyżej do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc (FcR) lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórk owej zależnej od przeciwciał (ADCC), polegający na tym, że obejmuje etapy, w których:
(a) wprowadza się jedną lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierz ystego polipeptydu, w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
(b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcR lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
Korzystnie etap (b) obejmuje określenie in vitro wiązania wariantu regionu Fc z FcR.
Korzystnie etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC.
Korzystnie FcR jest ludzkim receptorem Fc gamma III (FcyRIII).
Korzystnie etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
Korzystniej obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
Zgodnie z wynalazkiem opisano wariant macierzystego polipeptydu zawierający region Fc, uczestniczący w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej, lub wiążący receptor gamma Fc (FcyR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd i zawierający przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regionie Fc. Taki wariant polipeptydu może, na przykład, zawierać przeciwciało lub immunoadhezynę. Taki region Fc macierzystego polipeptydu dogodnie zawiera ludzki region Fc, np. region Fc ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Taki wariant polipeptydu zawiera dogodnie modyfikację aminokwasową
PL 220 113 B1 (np. substytucję) w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycji 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, którego reszty aminokwasowe oznaczone są zgodnie z indeksem EU według Kabat.
Ponadto, zgodnie z wynalazkiem opisano polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wariant regionu Fc dogodnie zawiera wariant regionu Fc ludzkiej IgG, np. wariant regionu ludzkiej IgG1, IgG2, IgG3 lub IgG4. Zauważono, że w powyżej cytowanych pracach z tej dziedziny, dotyczących macierzystego polipeptydu posiadającego niepochodzący od ludzi mysi region Fc, wymienionym powyżej resztom przypisywano udział w wiązaniu Fc. Na przykład, w układzie mysia IgG2b/mysi FcyRII, wykazano, że IgGE318 jest istotna w procesie wiązania (Lund i wsp., Molec.Immunol. 27(1): 53-59 (1992)), podczas gdy E318A nie wywierała żadnego wpływu w układzie ludzka IgG/ludzki FcyRII (Tabela 6, poniżej).
W jednym z rozwiązań wariant polipeptydu o zmienionej aktywności wiązania FcyR charakteryzuje się zredukowanym wiązaniem z Fc-,'R i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 28 9, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRI oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Będący przedmiotem zainteresowania wariant polipeptydu może wykazywać zredukowane wiązanie z FcyRIII oraz zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
W innym rozwiązaniu, wariant polipeptydu o zmienionym powinowactwie wiązania Fc-/R wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Na przykład, wariant polipeptydu może wykazywać zwiększone wiązanie FcyRIII oraz, ewentualnie, może dodatkowo wykazywać zredukowane wiązanie FcyRII. Przykładowo, taki wariant zawiera modyfikację lub modyfikacje reszty aminokwasowej lub reszt aminokwasowych w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Wariant polipeptydu może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRII oraz zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283,
285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Takie warianty pol ipeptydu o zwiększonym wiązaniu FcyRII mogą, ewentualnie, dodatkowo charakteryzować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII i mogą, na przykład, zawierać modyfikację reszty aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272,
286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z in8
PL 220 113 B1 deksem EU według Kabat. Takie warianty polipeptydu o zredukowanym wiązaniu FcRn mogą zawierać modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat. Wyżej wymienione warianty polipeptydu mogą, alternatywnie, wyk azywać silniejsze wiązanie FcRn i zawierać modyfikację aminokwasu w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311,312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
Zgodnie z wynalazkiem opisano też kompozycję zawierającą wariant polipeptydu i fizjologicznie lub farmaceutycznie akceptowany nośnik lub rozpuszczalnik. Kompozycja ta, służąca do potencjalnego zastosowania terapeutycznego, jest sterylna i może być liofilizowana.
Rozważano diagnostyczne i terapeutyczne zastosowanie zawartych w niniejszym opisie waria ntów polipeptydu. W jednym z zastosowań diagnostycznych zgodnie w wynalazkiem opisano sposób określenia obecności antygenu będącego przedmiotem zainteresowania, obejmujący kontaktowanie próbki przypuszczalnie zawierającej antygen z wariantem polipeptydu i określanie wiązania wariantu polipeptydu z tą próbką. W jednym z zastosowań terapuetycznych zgodnie z wynalazkiem opisano sposób leczenia ssaków dotkniętych chorobą lub zaburzeniem, lub predysponowanych do wystąpienia takiej choroby lub zaburzenia, obejmujący podawanie ssakom terapeutycznie skutecznej ilości wariantu opisywanego polipeptydu, lub kompozycji zawierającej wariant polipeptydu i farmaceutycznie a kceptowany nośnik.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również: wyizolowany kwas nukleinowy kodujący wariant polipeptydu; wektor zawierający kwas nukleinowy, ewentualnie operacyjnie połączony z sekwencją rozpoznawaną przez transformowane wektorem komórki kontrolną gospodarza; komórki gospodarza zawierające wektor; sposób otrzymywania wariantu polipeptydu obejmujący hodowlę tych komórek gospodarza w celu osiągnięcia w nich ekspresji kwasu nukleinowego, i ewentualnie odzyskanie wariantu polipeptydu z hodowli komórek gospodarza (np. z pożywki hodowlanej komórek gospodarza).
Zgodnie z wynalazkiem opisano również sposób otrzymywania wariantu regionu Fc o zmieni onym powinowactwie wiązania receptora (FcR) lub o zmienionej cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC), który to sposób obejmuje:
(a) wprowadzanie jednej lub więcej modyfikacji aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu uzyskania wariantu regionu Fc;
(b) określanie wiązania wariantu regionu Fc z FcR lub określanie aktywności ADCC regionu Fc wariantu polipeptydu.
Etap (b) sposobu może obejmować określanie wiązania in vitro regionu Fc wariantu polipeptydu z jednym lub więcej FcR. Ponadto, sposób może pozwalać na identyfikację regionu Fc wariantu polipeptydu o zwiększonym powinowactwie wiązania z FcR lub o zwiększonej aktywności ADCC w et apie (b). Etap (b) obejmuje określanie wiązania regionu Fc z FcR, który na przykład, może być ludzkim receptorem III Fc gamma (FcγRIII). Gdy etap (b) dotyczy określania wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR, to testowane FcR dogodnie zawierają ludzki receptor II Fc ga mma (FcγRII) oraz ludzki receptor III Fc gamma (FcγRIII).
Krótki opis Rysunków
Na Figurze 1 przedstawiono schematycznie natywną IgG. Wiązania disiarczkowe zaznaczono grubą linią pomiędzy domenami CH1 a CL oraz dwiema domenami CG2. V jest domeną zmienną; C jest domeną stałą; literą L oznaczono łańcuch lekki, zaś literą H łańcuch ciężki.
Na Figurze 2 przedstawiono wiązanie C1q przeciwciała dzikiego typu (wt) C2B8; przeciwciała C2B8 zawierającego region stały ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz warianty K322A, K320A i K318A.
Na Figurze 3 zaprezentowano wiązanie C1q wariantów P331A, P329A i K322A.
Na Figurze 4A oraz 4B przedstawiono sekwencje aminokwasowe łańcucha lekkiego (Fig. 4A; SEQ ID NO:1) oraz łańcucha ciężkiego (Fig. 4B; SEQ ID NO:2) przeciwciała E27 skierowanego przeciwko IgE.
Na Figurze 5 zaprezentowano schematyczny diagram „kompleksu immunologicznego” przygotowanego do zastosowania w analizie FcR opisanej w Przykładzie 1. Przedstawiono heksamer zawi erający trzy cząsteczki przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (polipeptyd zawierający region Fc) oraz trzy cząsteczki IgE („pierwsza cząsteczka docelowa”). IgE posiada dwa „miejsca wiązania” przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (E27) w regionie Fc tego białka. Każda cząsteczka IgE w tym kompleksie jest ponadto zdolna do wiązania dwóch cząsteczek VEGF („drugi polipeptyd docelowy”). VEGF posiada dwa „miejsca wiązania” IgE.
PL 220 113 B1
Na Figurze 6 zademonstrowano wyniki wiązania C1q otrzymanego dla wariantów D270K oraz D270V, w porównaniu z wynikami uzyskanymi dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 7 przedstawiono wyniki dotyczące cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) wariantów D270K i D270V w porównaniu do wyników uzyskanych dla dzikiego typu C2B8.
Na Figurze 8 zawarto wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez komórki 293 (293-Wt-C2B8), dzikiego typu przeciwciała C2B8 produkowanego przez CHO (CHO-Wt-C2B8) oraz różnych typów przeciwciał.
Na Figurze 9 przedstawiono wyniki testu ELISA dotyczące wiązania C1q dla dzikiego typu (wt) C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 10 zamieszczono strukturę trójwymiarową regionu Fc ludzkiego białka IgG, zaznaczono reszty aminokwasowe: Asp270, Lys326, Pro329, Pro331, Lys322 oraz Glu333.
Na Figurze 11 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz różnych wariantów przeciwciał, zgodnie z tym jak określono w Przykładzie 3.
Na Figurze 12 przedstawiono wyniki testu ELISA wiązania C1q uzyskane dla dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 13 przedstawiono CDC dzikiego typu C2B8 oraz podwójnych wariantów, K326M-E333S i K326A-E333A.
Na Figurze 14 zawarto wyniki testu ELISA wiązania C1q, uzyskane dla C2B8 z ludzką IgG4 (IgG4), dzikiego typu C2B8 (Wt-C2B8), C2B8 z regionem stałym ludzkiej IgG2 (IgG2) oraz dla wariantów przeciwciał, zgodnie z opisem w Przykładzie 3.
Na Figurze 15A i 15B pokazano wzorce wiązania uzyskane dla macierzystego przeciwciała (E27) z FcyRIIB oraz FcyRIIIA. Na Figurze 15A przedstawiono wzorce wiązania dla humanizowanego przeciwciała IgG1, E27, skierowanego przeciwko IgE, w postaci monomeru (okręgi), heksameru (pełne kwadraty) oraz kompleksu immunologicznego składającego się z wielu heksamerów (pełne trójkąty), z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIB (CD32). Heksameryczny kompleks (pełne kwadraty) utworzono poprzez zmieszanie równych stężeń molarnych E27 (wiążącego się z regionem Fc ludzkiej IgE) oraz IgE ludzkiego szpiczaka. Heksamer jest stabilnym, 1.1 kDa kompleksem, składającym się z 3 cząsteczek IgG (każda o masie 150 kDa) oraz 3 cząsteczek IgE (każda o masie 200 kDa). Kompleks immunologiczny (pełne trójkąty) utworzono kolejno łącząc równe stężenia molarne E27 oraz rekombinowanej IgE, skierowanej przeciwko VEGF (ludzka IgE z domenami zmiennymi wiążącymi ludzki VEGF) z utworzeniem heksameru. Następnie, w celu utworzenia kompleksu immunologicznego, heksamery łączono z 2x stężeniem molarnym ludzkiego VEGF, homodimeru 44 kDa, posiadającego dwa miejsca wiązania dla IgE skierowanej przeciwko VEGF na mol VEGF. Na Figurze 15B pokazano przebieg wiązania z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α ludzkiego receptora FcyRIIIA (CD16).
Na Figurze 16A przedstawiono wiązanie kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem różnych par typu antygen-przeciwciało w reakcji z rekombinowanym białkiem fuzyjnym GST podjednostki α receptora FcyRIIA. Na Figurze 16B pokazano wiązanie tych samych par antygen-przeciwciało z fuzyjnym białkiem GST podjednostki α receptora FcyRIIIA. Wiązanie ludzkiego IgE:anty-IgE E27 IgG1 zaznaczono za pomocą pełnych kółek; wiązanie ludzkiego VEGF: humanizowane anty-VEGF IgG1 zaznaczono za pomocą pustych kółek.
Na Figurze 17 podsumowano różnice w selektywności wiązania pomiędzy pewnymi wariantami alaninowymi różnych FcyR. Wiązanie wariantów alaninowych w miejscu reszt domeny CH2 IgG1 anty-IgE, E27, przedstawiono dla FcyRIIA, FcyRIIB oraz dla FcyRIIIA. Typ 1 nie wykazuje wiązania z żadnym z trzech receptorów: D278A (265 według indeksu EU). Typ 2 cechuje się zwiększonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, podczas gdy wiązanie z FcyRIIIA nie ulega zmianie: S280A (267 według indeksu EU). Typ 3 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB, natomiast zredukowane wiązanie z FcyRIIIA: H281A (268 według indeksu EU). Typ 4 cechuje się zmniejszonym wiązaniem z FcyRIIA i FcyRIIB, ale zwiększonym wiązaniem z FcyRIIIA: S317A (298 według indeksu EU). Typ 5 wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIIIA, natomiast wiązanie z FcyRIIA i FcyRIIB nie ulega zmianie: E352A, K353A (333 i 334 według indeksu EU).
Na Figurze 18A i 18B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIIA/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIIA. Na Figurze 18A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIIA-GST. S317A (298 według indeksu EU) oraz S317A/K353A (298 i 334 według indeksu EU) wykazywały się lepszym wiązaniem niż dzikiego typu E27, podczas gdy D278A (265 według indeksu EU) utracił niemal
PL 220 113 B1 całkowicie zdolność wiązania. Na Figurze 18B wykazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO, wykazujących ekspresję rekombinowanej postaci FcyRIIIA związanej z GPI.
Na Figurze 19A i 19B porównano wyniki uzyskane, odpowiednio, w wyniku analizy typu białko FcyRIIB/białko oraz analizy wykonanej w oparciu o komórki CHO GPI-FcyRIIB. Na Figurze 19A przedstawiono wiązanie wybranych wariantów alaninowych z białkiem fuzyjnym FcyRIIB-GST. H281A (268 według indeksu EU) wykazał się lepszym wiązaniem niż dziki typ E27, podczas gdy dla S317A (298 według indeksu EU) odnotowano zredukowane wiązanie. Na Figurze 19B pokazano, że podobny wzorzec wiązania występuje w przypadku komórek CHO wykazujących ekspresję rekombinowanego FcyRIIB związanego z błoną.
Na Figurze 20 zademonstrowano pojedyncze substytucje alaniny w domenie CH2 przeciwciała IgG1 skierowanego przeciwko HER2 (HERCEPTIN®), które wpływają na wiązanie FcyRIIIA w obu analizach, typu białko-białko i analizie opartei na wykorzystaniu komórek, zmieniając zdolność wiązania z FcyRIIIA na efektorowych jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC). Rekombinowane humanizowane przeciwciała anty-HER2 (HERCEPTIN®), które wiążą się z ekspresjonującymi
HER-2 komórkami raka sutka SK-BR-3, inkubowano wstępnie ze znakowanymi Cr komórkami SK-BR-3 przez 30 min (opsonizacja), stosując stężenie 100 ng/ml (pełne kółka) i 1,25 ng/ml (pełne kw adraty). Stosując stałe stężenie docelowych komórek nowotworowych, zwiększano stosunek komórek efektorowych od 0 do 100. Poziom spontanicznej cytotoksyczności przy braku przeciwciała (przekreślone kwadraty) wynosił 20%, przy stosunku komórka efektorowa:komórka docelowa wynoszącym 100:1. Pojedyncza mutacja alaninowa, niewywierająca wpływu na wiązanie z FcyRIIIA, wariant G31=R309A (292 według indeksu EU), nie wpływała na ADCC (pełne trójkąty). Pojedyncza mutacja alaninowa, zwiększająca jedynie nieznacznie wiązanie z FcyRIIIA, wariant G30=K307A (290 według indeksu EU), również powodowała niewielki wzrost ADCC (tj. 1,1-krotne zwiększenie aktywności ADCC, obliczonej na podstawie obszaru pod krzywą) w stężeniu 1,25 ng/ml dla stosunków komórka efektorowa:komórka docelowa (pełne romby) porównywanych do przeciwciała dzikiego typu w stężeniu 1,25 ng/ml (pełne kwadraty). Pojedyncza mutacja alaninowa obniżająca wiązanie z FcyRIIIA, wariant G34=Q312A (295 według indeksu EU), również powodowała obniżenie aktywności ADCC (pełne, odwrócone trójkąty).
Na Figurze 21 pokazano, że pojedyncza mutacja alaninowa, powodująca wzmocnienie wiąz ania z FcyRIIIA, wariant G36=S317A (298 według indeksu EU), w analizie typu białko-białko i analizie opartej na zastosowaniu komórek również powoduje wzrost ADCC (pełne trójkąty), obserwowany wśród wariantów porównywanych z dzikim typem (pełne kwadraty), w stężeniu 1,25 ng/ml. Zastosowanie G36 powodowało 1,7-krotny wzrost aktywności ADCC, wyrażony jako obszar pod krzywą. Oba warianty, G17=E282A (269 według indeksu EU) oraz G18=D283A (270 według indeksu EU), wykazywały zredukowane wiązanie z FcyRIIIA, jak również obniżoną skuteczność ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC.
Na Figurze 22A przedstawiono przyrównania natywnych sekwencji regionów Fc IgG. Przedst awiono natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypy nie-A i A) (odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7). Sekwencja ludzkiej IgG1 jest allotypem nie-A, a różnice pomiędzy tą sekwencją a allotypem A (w pozycjach 356 i 358; zgodnie z indeksem EU) pokazano poniżej sekwencji ludzkiej IgG1. Przedstawiono również natywne sekwencje regionu Fc mysiej IgG, murIgG1 (SEQ ID NO: 8), murIgG2A (SEQ ID NO: 9), murIgG2B (SEQ ID NO: 10) oraz murIgG3 (SEQ ID NO: 11). Na Figurze 22B pokazano procent identyczności pomiędzy sekwencjami regionu Fc przedstawionymi na Figurze 22A.
Na Figurze 23 pokazano przyrównania natywnych sekwencji regionu Fc ludzkiej IgG, hum IgG1 (allotypu nie-A i A; odpowiednio SEQ ID NO: 3 i 4), humIgG2 (SEQ ID NO: 5), humIgG3 (SEQ ID NO: 6) oraz humIgG4 (SEQ ID NO: 7), przy czym różnice pomiędzy sekwencjami zaznaczono za pomocą gwiazdek.
Na Figurze 24 przedstawiono obszar pod krzywą (AUC) dla wybranych wariantów w porówn aniu z IgG1 anty-HER2 (HERCEPTIN®) w 4-godzinnej analizie ADCC. Komórkami efektorowymi były PBMC (N=5). Wariant G36 (S317A; 298 według indeksu EU) o zwiększonym wiązaniu FcyRIIIA wykazywał zwiększoną aktywność ADCC; wariant G31 (R309A; 292 według indeksu EU), niewykazujący zmiany wiązania FcyRIIIA, również nie posiadał zmienionej aktywności ADCC, a G14 (D265A; 278 według indeksu EU) cechujący się zredukowanym wiązaniem FcyRIIIA, także posiadał obniżoną aktywność ADCC.
PL 220 113 B1
Szczegółowy opis zalecanych wykonań
I. Definicje
W niniejszym opisie i zastrzeżeniach numeracja reszt w łańcuchu ciężkim immunoglobuliny jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), wyraźnie włączonym tu przez odesłanie. „Indeks EU według Kabat” dotyczy numeracji reszt ludzkiego przeciwciała IgG1 EU.
„Macierzysty polipeptyd” jest polipeptydem o sekwencji aminokwasowej bezujawnionych tu, jednej lub więcej, modyfikacji w regionie Fc, różniącym się od ujawnionego tu wariantu polipeptydu funkcją efektorową. Polipeptyd macierzysty może zawierać natywną sekwencję regionu Fc lub reg ionu Fc obejmującego istniejące pierwotnie modyfikacje sekwencji aminokwasowej (takie jak addycje, delecje i/lub substytucje).
Termin „region Fc” stosowany jest w celu zdefiniowania C-końcowego regionu łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, np. jak przedstawiono na Figurze 1. „Region Fc” może być natywną sekwencją regionu Fc lub wariantem regionu Fc. Mimo, że granice regionu Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny mogą różnić się, region Fc łańcucha ciężkiego ludzkiej immunoglobuliny IgG rozciąga się od reszty aminokwasowej w pozycji Cys226, lub od Pro230, do jego karboksylowego końca. Region Fc immunoglobuliny, ogólnie, obejmuje dwie domeny stałe, CH2 i CH3, jak przedstawiono na Figurze 1.
„Domena CH2” regionu Fc ludzkiej IgG (również nazywana domeną „Cy2”) obejmuje zazwyczaj obszar od reszty aminokwasowej 231 do około aminokwasu 340. Domena CH2 jest jedynym fragmentem, który nie jest połączony ściśłe z inną domeną. Dwa rozgałęzione, połączone wiązaniem przez atom N, łańcuchy węglowodanowe umieszczone są pomiędzy dwiema domenami CH2 we wnętrzu nienaruszonej natywnej cząsteczki IgG. Przypuszcza się, że te węglowodany zastępują łączenia pomiędzy domenami i pomagają stabilizować domenę CH2. Burton, Molec.Immunol.22 : 161-206 (1985).
„Domena CH3” obejmuje obszar reszt od C-końcowych do domeny CH2 regionu Fc (tj. od około reszty aminokwasowej 341 do około reszty aminokwasowej 447 IgG).
„Funkcjonalny region Fc” posiada „funkcję efektorową” natywnej sekwencji regionu Fc. Przykładowe, „funkcje efektorowe” obejmują wiązanie C1q; cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc, cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał (ADCC); fagocytozę; inhibicję receptorów powierzchniowych komórki (np. receptora komórki B, BCR), itp. Takie funkcje efektorowe wymagają połączenia regionu Fc z domeną wiążącą (np. domeną zmienną przeciwciała) oraz mogą być oceniane za pomocą różnych analiz, np. opisanych w niniejszym wynalazku.
„Natywna sekwencja regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową identyczną z sekwencją aminokwasową regionu Fc występującą w naturze. Natywne sekwencje ludzkich regionów Fc przedstawiono na Figurze 23 i obejmują one natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypu nie-A i allotypu A); natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG2; natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG3 oraz natywną sekwencję regionu Fc ludzkiej IgG4, jak również ich warianty występujące w naturze. Na Figurze 22A przedstawiono natywną sekwencję mysiego regionu Fc.
„Wariant regionu Fc” obejmuje sekwencję aminokwasową różniącą się od natywnej sekwencji regionu Fc tym, że zawiera przynajmniej jedną, zgodnie z niniejszym opisem, „modyfikację aminokwasową”. Dogodnie wariant regionu Fc posiada przynajmniej jedną substytucję aminokwasu innym am inokwasem, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu, np. od około jednej do około dziesięciu substytucji aminokwasowych, i dogodnie, od około jednej do około pięciu substytucji aminokwasowych w obrębie natywnej sekwencji regionu Fc lub regionu Fc macierzystego polipeptydu. Wariant regionu Fc dogodnie wykazuje przynajmniej około 80% homologii z natywną sekwencją regionu Fc i/lub z regionem Fc macierzystego polipeptydu, a dogodniej około 90% homologii z tymi regionami, a zwłaszcza przynajmniej około 95% homologii z tymi regionami.
„Homologia” definiowana jest jako procent reszt sekwencji aminokwasowej wariantu, które są identyczne po przyrównaniu sekwencji i, w razie konieczności, wstawieniu odpowiednich przerw celem uzyskania maksymalnego procentu homologii. Metody i programy komputerowe do przyrównywania sekwencji są dobrze znane w dziedzinie. Jednym z takich programów jest program komputerowy „Align 2”, Genetech, Inc., złożony wraz z dokumentacją dla użytkownika w the United States Copyright Office, Washington, DC 20559, 10 grudnia, 1991.
Termin „polipeptyd zawierający region Fc” odnosi się do polipeptydu, takiego jak przeciwciało lub immunoadhezyna (patrz definicje poniżej), który zawiera region Fc.
PL 220 113 B1
Terminy „receptor Fc” lub „FcR” stosowane są w celu określenia receptora wiążącego region Fc przeciwciała. Zalecany FcR jest natywną sekwencją ludzkiego FcR. Ponadto, zalecany FcR posiada zdolność wiązania przeciwciała IgG (receptor gamma) i obejmuje receptory podklasy FcyRI, FcyRII i FcyRIII, włączając warianty alleliczne i warianty alternatywnego składania tych receptorów. Receptory FcyRII obejmują receptory FcyRIIA (receptor aktywujący) oraz FcyRIIB (receptor hamujący), które posiadają podobne sekwencje aminokwasowe, różniące się głównie w obs zarze ich domen cytoplazmatycznych. Receptor aktywujący FcyRIIA zawiera w swojej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw aktywujący (ITAM) obejmujący resztę tyrozyny. Receptor hamujący FcyRIIB zawiera w swej domenie cytoplazmatycznej immunoreceptorowy motyw hamujący (ITIM) obejmujący resztę tyrozyny. (Patrz praca przeglądowa M. Daeron, Annu.Rev.Immunol. 15: 203-234 (1997)). FcR opisane są w Raveth i Kinet, Annu.Rev.Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4: 25 -34 (1994) oraz de Haas i wsp., J.Lab.Clin.Med. 126: 330-41 (1995). Inne FcR, w tym również te które zostaną zidentyfikowane w przyszłości, nazywane są w niniejszym opisie „FcR”. Termin ten obejmuje również receptor noworodkowy, FcRn, odpowiedzialny za przeniesienie matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117: 587 (1976) oraz Kim i wsp., J.Immunol. 24: 249 (1994)).
„Cytotoksyczność komórkowa zależna od przeciwciał” i „ADCC” odnosi się do zależnej od komórek reakcji, w której niespecyficzne, cytotoksyczne komórki ekspresjonujące FcR (np. komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), neutrofile i makrofagi) rozpoznają przeciwciało związane z komórką docelową, a następnie powodują lizę tej komórki. Główne komórki uczestniczące w ADCC, komórki NK, ekspresjonują jedynie FcyRIII, podczas gdy monocyty ekspresjonują FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresję FcR na komórkach uczestniczących w hematopoezie podsumowano w Tabeli 3, na stronie 464, Ravetch i Kinet, Annu.Rev.Immunol 9: 457-92, (1991).
„Ludzkie komórki efektorowe” są leukocytami ekspresjonującymi jeden lub więcej FcR i wykazującymi funkcję efektorową. Zalecane komórki ekspresjonują przynajmniej FcyRIII i wykazują funkcję efektorową ADCC. Przykładami ludzkich leukocytów uczestniczących w ADCC są jednojądrzaste k omórki krwi obwodowej (PBMC), komórki zwane naturalnymi zabójcami (NK), monocyty, cytotoksyczne komórki T i neutrofile; przy czym zalecane są komórki PBMC i NK. Komórki efektorowe mogą być izolowane ze źródła natywnego np. z krwi lub komórek PBMC, zgodnie z niniejszym opisem.
Wariant polipeptydu o „zmienionym” powinowactwie wiązania FcR lub aktywności ADCC jest polipeptydem o zwiększonej lub zmniejszonej aktywności wiązania FcR i/lub aktywności ADCC, w porównaniu z polipeptydem macierzystym lub z polipeptydem zawierającym natywną sekwencję regionu Fc. Wariant polipeptydu, który „wykazuje zwiększone wiązanie” z FcR wiąże przynajmniej jeden FcR z większym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Wariant polipeptydu, który „ wykazuje zmniejszone wiązanie” z FcR, wiąże przynajmniej jeden FcR z mniejszym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty, wykazujące osłabione wiązanie FcR, mogą posiadać małą lub nie posiadać żadnej znaczącej zdolności wiązania FcR, np. 0-20% wiązania z FcR, w porównaniu z natywną sekwencją regionu Fc IgG, np. jak określono w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który wiąże FcR z „lepszym powinowactwem” niż macierzysty polipeptyd, wykazuje zdolność wiązania jakiegokolwiek, jednego lub więcej, z powyżej wymienionych FcR z istotnie lepszym powinowactwem wiązania niż macierzyste przeciwciało, w przypadku gdy zastosowane w analizie wiązania ilości wariantu polipeptydu i polipeptydu macierzystego są zasadniczo takie sa me. Na przykład, wariant polipeptydu o lepszym powinowactwie wiązania FcR może wykazywać od około 1,15-krotną do około 100-krotnej, np. od około 1,2-krotną do około 50-krotną poprawę powinowactwa wiązania FcR niż polipeptyd macierzysty, przy czym powinowactwo wiązania jest określane, na przykład, zgodnie z opisem w załączonych Przykładach.
Wariant polipeptydu, który „uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych skuteczniej” niż przeciwciało macierzyste jest polipeptydem, który jest in vitro lub in vivo zasadniczo skuteczniejszy w procesie ADCC, przy czym zastosowane w analizie ilości wariantu polipeptydu i przeciwciała macierzystego są zasadniczo takie same. Ogólnie, takie warianty są identyfikowane za pomocą analizy ADCC in vitro, zgodnie z niniejszym opisem. Jednakże, rozważa się zastosowanie również innych analiz i metod służących wykrywaniu aktywności ADCC, np. w doświadczeniu na zwierzętach itp. Zalecany wariant jest około 1,5-krotnie do około 100-krotnie, np. od około dwukrotnie do około pięciokrotnie, bardziej skuteczny w procesie ADCC niż macierzysty polipeptyd, np. w opisanej tu analizie in vitro.
PL 220 113 B1 „Modyfikacja aminokwasowa” odnosi się do zmiany sekwencji aminokwasowej w stosunku do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Przykładowe modyfikacje obejmują substytucję am inokwasową, insercję i/lub delecję. Zalecaną modyfikacją aminokwasową jest substytucja.
„Modyfikacja aminokwasowa w” specyficznej pozycji, np. regionu Fc, odnosi się do substytucji lub delecji specyficznej reszty, lub wstawienia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej w sąsied ztwie specyficznej reszty. Przez wstawienie „w sąsiedztwie” specyficznej reszty rozumie się wstawienie w tym miejscu jednej lub dwóch reszt aminokwasowych. Wstawienie może dotyczyć wstawienia reszty od N-końca lub C-końca względem specyficznej reszty.
„Substytucja aminokwasowa” odnosi się do zastąpienia przynajmniej jednej istniejącej reszty aminokwasowej w pierwotnie określonej sekwencji aminokwasowej, inną, odmienną „zastępczą” resztą aminokwasową. Zastępcza reszta lub reszty mogą być „naturalnie występującymi resztami aminokwasowymi” (tj. kodowanymi przez kod genetyczny) i wybranymi z grupy istniejących reszt, takich jak: alanina (Ala); arginina (Arg); aspargina (Asn); kwas asparaginowy (Asp); cysteina (Cys); glutamina (Gln); kwas glutaminowy (Glu); glicyna (Gly); histydyna (His); izoleucyna (Ile); leucyna (Leu); lizyna (Lys); metionina (Met); fenyloalanina (Phe); prolina (Pro); seryna (Ser); treonina (thr); tryptofan (Trp); tyrozyna (Tyr) i walina (Val). Zaleca się jednak, żeby reszta zastępcza nie była cysteiną. Definicja obejmuje również substytucję jedną lub więcej niewystępującymi naturalnie resztami aminokwasowymi. „Niewystępująca naturalnie reszta aminokwasowa” odnosi się do reszty innej niż wymienione powyżej naturalnie występujące reszty aminokwasowe, zdolnej do kowalencyjnego wiązania z sąsiednią resztą aminokwasową sąsiednimi resztami aminokwasowymi w łańcuchu polipeptydowym. Przykłady niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych obejmują norleucynę, ornitynę, homoserynę oraz inne analogi reszt aminokwasowych, takie jak opisane przez Ellman i wsp., Meth. Enzym. 202: 301 -336 (1991). W celu uzyskania takich niewystępujących naturalnie reszt aminokwasowych można zastosować procedury według Noren i wsp., Science 244: 182 (1989) i Ellman i wsp., jak wyżej. W skrócie, procedury te obejmują chemiczną aktywację supresorowego tRNA z niewystępującą naturalnie resztą aminokwasową, a następnie transkrypcją in vitro i translacją RNA.
„Wstawienie aminokwasu” (insercja) odnosi się do wbudowania przynajmniej jednego aminokwasu do określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej. Podczas gdy insercja dotyczy zazwyczaj wstawienia jednej lub dwóch reszt aminokwasowych, w niniejszym zgłoszeniu brane są pod uwagę większe „insercje peptydowe”, np. wstawienie około trzech do około pięciu lub nawet do około dziesięciu reszt aminokwasowych. Wstawiona reszta lub reszty mogą być resztami występującymi naturalnie lub niewystępującymi naturalnie, jak opisano powyżej.
„Delecja aminokwasu” odnosi się do usunięcia przynajmniej jednej reszty aminokwasowej z określonej uprzednio sekwencji aminokwasowej.
„Region zawiasowy” jest ogólnie zdefiniowany jako obszar od Glu216 do Pro230 ludzkiej IgG1 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985)). Regiony zawiasowe innych postaci izotypowych IgG mogą być porównane z sekwencją IgG1 poprzez umieszczenie w tych samych pozycjach pierwszej i ostatniej reszty cysteiny, tworzących wiązania disiarczkowe S-S pomiędzy łańcuchami ciężkimi.
„Niższy region zawiasowy” regionu Fc jest zazwyczaj zdefiniowany jako obszar rozciągający się od reszt następujących bezpośrednio od C-końca do regionu zawiasowego, tj. od reszty 233 do reszty 239 regionu Fc. W badaniach wykonanych wcześniej niż niniejszy wynalazek stwierdzono, że wiązanie Fc-,'R było ogólnie związane z resztami aminokwasowymi niższego regionu zawiasowego w regionie Fc białka IgG.
„C1q” jest polipeptydem zawierającym miejsce wiązania regionu Fc immunoglobuliny. C 1q wraz z dwiema proteazami serynowymi, C1r i C1s, tworzy kompleks C1, pierwszy składnik szlaku cytotoksyczności (CDC) zależnej od dopełniacza. Ludzki polipeptyd C1q można zakupić np. w Quidel, San Diego, CA.
Termin „domena wiążąca” odnosi się do regionu polipeptydu, który wiąże inną cząsteczkę. W przypadku FcR, domena wiążąca może obejmować fragment jego łańcucha polipeptydowego np. jego łańcuch a, który jest odpowiedzialny za wiązanie regionu Fc. Jedną z użytecznych domen wiążących jest zewnątrzkomórkowa domena łańcucha a FcR.
Termin „przeciwciało” stosowane jest w najszerszym możliwym znaczeniu, a specyficznie dotyczy przeciwciał monoklonalnych (włączając pełnej długości przeciwciała monoklonalne), przeciwciała poliklonalne, przeciwciała wielospecyficzne (np. bispecyficzne) oraz fragmenty przeciwciał pod warunkiem, że wykazują aktywność biologiczną.
PL 220 113 B1 „Fragmenty przeciwciała” zdefiniowane są dla potrzeb niniejszego wynalazku jako zawierające część nienaruszonego przeciwciała, ogólnie włączając region wiązania antygenu lub region zmienny nienaruszonego przeciwciała, lub też zachowujący zdolność wiązania FcR region Fc przeciwciała. Przykłady fragmentów przeciwciała obejmują przeciwciała liniowe; jednołańcuchowe cząsteczki przeciwciał oraz, utworzone z fragmentów przeciwciał, przeciwciała wielospecyficzne. Zalecane fragmenty przeciwciał posiadają przynajmniej część regionu zawiasowego i, ewentualnie, region CH1 łańcucha ciężkiego IgG. Bardziej zalecane fragmenty przeciwciał obejmują cały region stały łańcucha ciężkiego IgG i zawierają łańcuch lekki IgG.
Stosowany tu termin „przeciwciało monoklonalne” odnosi się do przeciwciała otrzymanego z populacji zasadniczo homogennych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała wchodzące w skład populacji są identyczne, za wyjątkiem różnic wynikających z możliwych, naturalnie występujących mutacji, które mogą pojawiać się w nieznacznych ilościach. Przeciwciała monoklonalne są wysoce swoiste i skierowane są przeciwko pojedynczemu miejscu antygenowemu. Ponadto, w przeciwieństwie do konwencjonalnych preparatów przeciwciał (poliklonalnych), zawierających zazwyczaj różne przeciwciała skierowane przeciwko różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciwko pojedynczej determinancie na antygenie. Modyfikacje „monoklonalne” wskazują na charakter przeciwciała wynikający z otrzymania go z zasadniczo homogennej populacji przeciwciał i nie wymagają wytwarzania jakąkolwiek szczególną metodą. Na przykład, według niniejszego wynalazku, przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane metodą z użyciem hybrydom, opisaną po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature 256: 495 (1975), lub metodami rekombinacji DNA (patrz, np. Patent USA Nr 4, 816, 567). „Przeciwciała monoklonalne” mogą być również wyizolowane z fagowej biblioteki przeciwciał, za pomocą technik opisanych, na przykład, przez Clackson i wsp., Nature 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol. 222: 581-594 (1991).
Opisane tu przeciwciała monoklonalne specyficznie obejmują przeciwciała (immunoglobuliny) „chimerowe”, których fragment łańcucha ciężkiego i/lub lekkiego jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z poszczególnych gatunków, lub należącymi do poszczególnej klasy lub podklasy, przy czym pozostały łańcuch (lub łańcuchy) jest identyczny lub homologiczny z odpowiadającymi mu sekwencjami przeciwciał pochodzących z innego gatunku lub należącymi do innej klasy lub podklasy, jak również obejmują fragmenty takich przeciwciał pod warunkiem, że wykazują one aktywność biologiczną (Patent USA Nr 4, 816, 567; oraz Morrison i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)).
Postaci „humanizowane” przeciwciał niepochodzących od ludzi (np. mysich) to chimerowe przeciwciała, które zawierają minimalnej długości sekwencję niepochodzącą od immunogłobuliny człowieka. W większości, humanizowane przeciwciała są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało biorcy), w których reszty regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione resztami z regionu hiperzmiennego innego gatunku (przeciwciało dawcy), takiego jak mysz, szczur, królik lub Naczelny inny niż człowiek, posiadające pożądaną swoistość, powinowactwo i zdolność wiązania. W pewnych przypadkach, res zty regionu zrębowego (FR) Fv ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione odpowiadającymi im resztami innych gatunków. Ponadto, przeciwciała humanizowane mogą zawierać reszty niewystępujące w przeciwciele biorcy lub w przeciwciele dawcy. Modyfikacje te służą dalszemu udoskonaleniu przeciwciała. Ogólnie, przeciwciało humanizowane obejmuje zasadniczo każdą z przynajmniej jednej, a zazwyczaj dwóch domen zmiennych, w których wszystkie lub zasadnicza większość pętli hiperzmiennych odpowiada pętlom immunoglobulin z gatunku innego niż człowiek, a wszystkie lub zasadn icza większość regionów FR pochodzi z sekwencji immunoglobuliny ludzkiej. Humanizowane przeci wciało może, ewentualnie, zawierać również przynajmniej fragment regionu stałego immunoglobuliny (Fc), zazwyczaj ludzkiej immunoglobuliny. Bardziej szczegółowo omówiono to zagadnienie w Jones i wsp., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann i wsp., Nature 332: 323-329 (1988) oraz Presta, Curr.Op.Struct.Biol. 2: 593-596 (1992).
Termin „region hiperzmienny” dotyczy reszt aminokwasowych przeciwciała odpowiedzialnych za wiązanie antygenu. Region hiperzmienny zawiera reszty aminokwasowe z „regionu determinującego dopasowanie” lub „CDR” (tj. reszty 24-34 (L1), 50-56 (L2) oraz 89-97 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego; Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)) i/lub reszty „pętli hiperzmiennej” (tj. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) domeny zmiennej łańcucha lekkiego oraz reszty 26-32 (H1), 53 -55 (H2) i 96-101 (H3) domeny zmiennej łańcucha ciężkiego; Chothia i Lesk, J.Mol.Biol. 196: 901-917
PL 220 113 B1 (1987)). Reszty „regionu zrębowego” lub „FR” są resztami domeny zmiennej, innymi niż zdefiniowane w niniejszym opisie reszty regionu hiperzmiennego.
Stosowany tu termin „immunoadhezyna” określa cząsteczkę podobną do przeciwciała, której struktura stanowi połączenie „domeny wiążącej” heterologicznego białka o właściwościach „adhezyjnych” (np. receptora, ligandu lub enzymu) z domeną stałą immnoglobuliny. Strukturalnie immunoadhezyna obejmuje fuzję sekwencji aminokwasowej adhezyny z sekwencją o pożądanej swoistości wiązania, inną niż miejsce rozpoznawania i wiązania antygenu (miejsce łączenia antygenu) przeci wciała (tj. jest „hetrologiczna”) oraz z sekwencją domeny stałej immunogłobuliny.
Stosowany tu termin „domena wiążąca ligand” odnosi się do jakiegokolwiek natywnego receptora powierzchniowego komórki lub jakiegokolwiek regionu, lub jego pochodnej, zachowującego przynajmniej jakościowo w stosunku do odpowiadającego mu natywnego receptora zdolność wiązania ligandu. W specyficznym wykonaniu receptor pochodzi z polipeptydu powierzchni komórki, posiadającego domenę zewnątrzkomórkową homologiczną z domeną kodowaną przez nadrodzinę genów immunoglobulin. Inne receptory, nienależące do nadrodziny genów immunoglobulin, lecz objęte niniejszą definicją, należą do nadrodzin receptorów cytokin i, w szczególności, receptorów cechujących się aktywnością kinazy tyrozynowej (receptory kinaz tyrozynowych), nadrodzin receptorów hematopoet yny oraz nadrodzin czynnika wzrostu nerwów, i cząsteczek adhezji komórkowej, np. selektyn (E-, L-, i P-selektyny).
Termin „domena wiążąca receptor” stosowany jest w celu określenia jakiegokolwiek natywnego ligandu receptora, włączając cząsteczki adhezji komórkowej, lub jakikolwiek region lub pochodną t akiego natywnego ligandu o zachowanej, przynajmniej jakościowo, względem natywnego ligandu, zdolności wiązania receptora. Definicja ta, między innymi, dotyczy specyficznie sekwencji wiążących ligandów dla wyżej wymienionych receptorów.
„Chimera przeciwciało-immunoadhezyna” obejmuje cząsteczkę stanowiącą połączenie przynajmniej jednej domeny wiążącej przeciwciała (zgodnie z niniejszą definicją) z przynajmniej jedną immunoadhezyną (zgodnie z niniejszą definicją). Przykładowymi chimerami przeciwciało-immunoadhezyna są bispecyficzne chimery CD4-IgG, opisane przez Berg i wsp., PNAS (USA), 88: 4723 -4727 (1991) oraz Chamow i wsp., J.Immunol. 153: 4268 (1994).
„Wyizolowany” polipeptyd jest zidentyfikowanym i wydzielonym i/lub odzyskanym polipeptydem ze składnika jego naturalnego środowiska. Składnikami stanowiącymi zanieczyszczenie naturalnego środowiska polipeptydu są materiały, mogące kolidować z diagnostycznym lub terapeutycznym zastosowaniem polipeptydu, i mogą one obejmować enzymy, hormony i inne białkowe lub niebiałkowe substancje rozpuszczone. W zalecanych wykonaniach polipeptyd podlega oczyszczeniu (1) na poziomie ponad 95% wagowo, określonym metodą Lowry'ego i w szczególności, ponad 99% wagowo, (2) w stopniu wystarczającym do uzyskania, za pomocą sekwentatora (spinning cup seguentator), co najmniej 15 reszt z N-końca lub wewnętrznej sekwencji aminokwasowej, lub (3) do homogenności, w warunkach redukującej i nieredukującej elektroforezy SDS-PAGE z wykorzystaniem Coomassie blue lub, dogodnie, barwiena srebrem. Wyizolowany polipeptyd obejmuje polipeptyd in situ w komórkach rekombinowanych, ponieważ nie będzie obecny przynajmniej jeden składnik naturalnego środowiska polipeptydu. Jednakże, zazwyczaj, wyizolowany polipeptyd otrzymywany jest w wyniku co najmniej jednego etapu oczyszczania.
„Leczenie” odnosi się zarówno do leczenia terapeutycznego, jak i środków profilaktycznych lub zapobiegawczych. Osobniki potrzebujące leczenia obejmują zarówno osobniki chore, jak i osobniki, u których należy zapobiegać zaburzeniu.
„Zaburzenie” jest dowolnym stanem, w którym leczenie za pomocą wariantu polipeptydu może spowodować poprawę. Obejmuje to przewlekłe i ostre zaburzenia lub choroby, włączając stany pat ologiczne predysponujące do pojawienia się rozważanego zaburzenia u ssaka. W jednymi z wykonań zaburzenie jest nowotworem.
Termin „nowotwór” i „nowotworowy” odnosi się do, lub opisuje, stan fizjologiczny organizmu ssaka zazwyczaj cechujący się niekontrolowanym wzrostem komórek. Przykłady nowotworów obejm ują, lecz bez ograniczenia, raka, chłoniaka, blastomę, mięsaka i białaczkę. Bardziej szczegółowe przykłady takich nowotworów obejmują raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, gruczolakoraka płuc, raka płaskonabłonkowego płuc, raka otrzewnej, raka komórek wątroby, raka żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki macicy, raka jajników, raka wątroby, raka pęcherza, wątrobiaka, raka piersi, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka
PL 220 113 B1 śluzówki macicy lub macicy, raka ślinianek, raka nerek, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątrobowego oraz różnych typów nowotworów głowy i szyi.
„Rak z ekspresją HER2” jest nowotworem zawierającym komórki posiadające białko receptora HER2 (Semba i wsp., PNAS (USA) 82: 6497-6501 (1985) oraz Yamamoto i wsp., Nature 319: 230 -234 (1986) (Genebank, numer dostępu Χ03363)) obecne na powierzchni tych komórek, co powoduje, że możliwe jest wiązanie z tymi komórkami przeciwciała skierowanego przeciwko HER2.
Słowo „znacznik” odnosi się do wykrywalnego związku lub kompozycji, połączonych bezpośrednio lub pośrednio z polipeptydem. Znacznik może być sam w sobie wykrywalny (np. znaczniki radioizotopowe lub znaczniki fluoroscencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować chemiczne zmiany w obrębie wykrywanego związku substratu lub kompozycji.
„Wyizolowana” cząsteczka kwasu nukleinowego jest cząsteczką kwasu nukleinowego zidentyfikowaną i oddzieloną od przynajmniej jednej będącej zanieczyszczeniem cząsteczki kwasu nukleinowego, z którą jest zazwyczaj związana w naturalnym źródle kwasu nukleinowego polipeptydu. Wyizoiowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest inną cząsteczką niż w postaci lub zestawie występującym w naturze. Wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego są zatem inne niż cząsteczki kwasu nukleinowego występujące w naturalnych warunkach. Jednakże, wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego znajdującą się w komórkach, które zazwyczaj ekspresjonują polipeptyd, na przykład, cząsteczka kwasu nukleinowego znajduje się w lokalizacji chromosomowej innej niż w naturalnych komórkach.
Termin „sekwencje kontrolne” odnosi się do sekwencji DNA niezbędnych do ekspresji operacyjnie połączonej sekwencji kodującej w organizmie szczególnego gospodarza. Odpowiednie dla organ izmów prokariotycznych sekwencje kontrolne, na przykład, zawierają promotor, ewentualnie, sekwencję operatorową i miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne wykorzystują pr omotory, sygnały poliadenylacji i sekwencje wzmacniaczy.
Kwas nukleinowy jest „operacyjnie połączony” gdy umieszczony jest w funkcjonalnej zależności z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA presekwencji lub liderowej sekwencji wydzielniczej jest operacyjnie połączony z DNA polipeptydu jeśli ten DNA ekspresjonowany jest jako białko uczestniczące w wydzielaniu tego polipeptydu; promotor lub wzmacniacz jest operacyjnie połączony z sekwencją kodującą jeżeli oddziałuje na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiązania rybosomu jest operacyjnie połączone z sekwencją kodującą jeśli jego lokalizacja ułatwia translację. Ogólnie, „operacyjnie połączony” oznacza, że związane sekwencje DNA są ciągłe, a w przypadku liderowej sekwencji wydzielniczej ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże, wzmacniacze nie muszą być ciągłe. Łączenie przeprowadza się poprzez ligaćję w odpowiednich miejscach restrykcyjnych. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, stosuje się, zgodnie z przyjętymi metodami, syntetyczne oligonukleotydowe sekwencje adapterowe lub łączniki.
Wyrażenie „komórka”, „linia komórkowa” i „hodowla komórkowa” stosowane są w niniejszym opisie zamiennie i wszystkie te określenia obejmują potomstwo. Zatem, termin „transformanty” i „komórki transformowane” obejmuje pierwotne komórki i pochodzące z nich hodowle, bez względu na liczbę pasaży. Przyjmuje się też, że, na skutek zaplanowanych i przypadkowych mutacji, nie całe potomstwo musi posiadać dokładnie identyczną zawartość DNA. Objęte tą definicją jest potomstwo, które posiada taką samą funkcję lub aktywność biologiczną jak pierwotnie transformowane komórki. W przypadku stosowania odmiennych znaczeń, ich znaczenie jest zrozumiałe z kontekstu opisu.
Stosowany tu termin „kompleks molekularny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku wiązania dwóch lub więcej heterologicznych cząsteczek (np. polipeptydów) (dogodnie połączonych wiązaniem niekowalencyjnym). Zalecanym tu kompleksem molekularnym jest kompleks immunologiczny.
„Kompleks immunologiczny” odnosi się do względnie stabilnej struktury utworzonej w wyniku połączenia przynajmniej jednej docelowej cząsteczki i przynajmniej jednego polipeptydu zawierając ego region Fc. Takie połączenie powoduje powstanie kompleksu o wyższej masie cząsteczk owej. Przykładami kompleksów immunologicznych są agregaty antygen-przeciwciało i agregaty cząsteczka docelowa-immunoadhezyna. Stosowany tu termin „kompleks immunologiczny” w wypadku jeśli nie został określony inaczej, odnosi się do kompleksu ex vivo (tj. różnego od postaci lub ułożenia występującego w naturze). Jednakże, kompleks immunologiczny może być podawany ssakom, np. w celu oszacowania klirensu kompleksu immunologicznego u ssaka.
Termin „cząsteczka docelowa” odnosi się do cząsteczki, zazwyczaj polipeptydu, zdolnej do wiązania przez cząsteczkę heterologiczną, i posiadającej jedno lub więcej miejsc wiążących dla cząPL 220 113 B1 steczki heterologicznej. Termin „miejsce wiążące” odnosi się do regionu cząsteczki, z którym możliwe jest związanie innej cząsteczki. „Pierwsza cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa różne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla analizowanej cząsteczki (np. polipeptyd zawierający region Fc), takie, że przynajmniej dwie analizowane cząsteczki mogą ulec związaniu z pierwszą cząsteczką docelową. W zalecanym wykonaniu, dwa lub więcej miejsc wiążących jest identycznych (np. posiadający taką samą sekwencję aminokwasową, gdy cząsteczka docelowa jest polipeptydem). W poniżej zamieszczonym Przykładzie 1 pierwszą cząsteczką docelową jest IgE, posiadająca dwa oddzielne miejsca wiążące w jej regionie Fc, z którymi może ulec związaniu polipeptyd posiadający region Fc (przeciwciało skierowane przeciwko IgE, E27). Inne pierwsze cząsteczki docelowe obejmują dimery składające się z zasadniczo identycznych monomerów (np. neurotrofiny, IL8 i VEGF) lub są polipeptydami zawierającymi dwa lub więcej zasadniczo identycznych łańcuchów polipeptydowych (np. przeciwciała lub immunoadhezyny). „Druga cząsteczka docelowa” obejmuje przynajmniej dwa oddzielne miejsca wiążące (na przykład, dwa do pięciu oddzielnych miejsc wiążących) dla pierwszej cząsteczki docelowej, takie, że przynajmniej dwie pierwsze cząsteczki docelowe mogą ulec związaniu z drugą cząsteczką docelową. Dogodnie dwa lub więcej miejsca wiążące są identyczne (np. posiadają taką samą sekwencję aminokwasową, gdy docelowa cząsteczka jest polipeptydem). W Przykładzie 2, drugą cząsteczką docelową jest VEGF, posiadająca parę oddzielnych miejsc wiążących, do których może ulec przyłączeniu domena zmienna przeciwciała IgE. Innymi drugimi cząsteczkami docelowymi są np. inne dimery składające się z zasadniczo ide ntycznych monomerów (np. neurotrofiny lub IL8) lub polipeptydy zawierające dwa lub więcej zasadniczo identycznych domen (np. przeciwciała lub immunoadhezyny).
„Analit” jest substancją poddawaną analizie. Zalecanym analitem jest polipeptyd zawierający region Fc, który ma być analizowany pod kątem jego zdolności do wiązania receptora Fc.
„Receptor” jest polipeptydem zdolnym do wiązania przynajmniej jednego ligandu. Zalecanym receptorem jest receptor powierzchni komórkowej, posiadający zewnątrzkomórkową domenę wiążącą ligand i, ewentualnie, inne domeny (np. domenę przezbłonową, domenę wewnątrzkomórkową i/lub domenę zakotwiczoną w błonie komórkowej). Oceniany w tym teście receptor może być stosowany w całości lub jako jego fragment, lub też pochodna (np. białko fuzyjne zawierające domenę wiążącą receptora połączone z jednym lub więcej heterologicznym polipeptydem). Ponadto, receptor oceniany pod kątem właściwości wiązania może być obecny w komórce lub w postaci wyizolowanej i, ewentua lnie, analizowany na płytkach lub innych stałych fazach.
Wyrażenie „receptor o niskim powinowactwie” dotyczy receptora o słabym powinowactwie wiązania badanego ligandu, np. posiadającego stałą wiązania wynoszącą około 50 nM lub słabsze powinowactwo. Przykłady receptorów o niskim powinowactwie obejmują FcyRII i FcyRIII.
II. Sposoby wykonania wynalazku
Zgodnie z wynalazkiem opisano sposób otrzymywania wariantu polipeptydu. „Macierzysty”, „wyjściowy” lub „niezmieniony” polipeptyd wytwarza się za pomocą znanych w dziedzinie technik wytwarzania polipeptydów zawierających region Fc. W zalecanym wykonaniu wynalazku polipeptyd m acierzysty jest przeciwciałem, a przykładowe sposoby otrzymywania przeciwciał opisano bardziej szczegółowo w kolejnych podrozdziałach. Polipeptyd macierzysty może, jednakże, być jakimkolwiek polipeptydem zawierającym region Fc, np. cząsteczką immunoadhezyny. Sposoby otrzymywania immunoadhezyny omówiono szczegółowo poniżej.
W alternatywnym wykonaniu wariant regionu Fc może być otrzymany zgodnie ze sposobami zawartymi w niniejszym opisie i taki „wariant regionu Fc” może być poddany fuzji z wybranym heterologicznym polipeptydem, takim jak domena zmienna przeciwciała lub domena wiążąca receptora lub ligandu.
Polipeptyd macierzysty zawiera region Fc. Ogólnie, region Fc macierzystego polipepcydu zawiera natywną sekwencję regionu Fc i dogodnie, ludzką natywną sekwencję regionu Fc. Jednakże, region Fc macierzystego polipeptydu może posiadać jedną lub więcej istniejących wcześniej zmian w sekwencji aminokwasowej lub modyfikacji w stosunku do natywnego regionu Fc. Na przykład, aktywność wiążąca C1q regionu Fc może być uprzednio zmieniona (inne rodzaje modyfikacji regionu Fc opisano bardziej szczegółowo poniżej). W kolejnym rozwiązaniu region Fc macierzystego polipeptydu istnieje na poziomie „koncepcyjnym”, podczas gdy region ten fizycznie nie istnieje, projektant przeciwciała może zdecydować co do wyboru pożądanej sekwencji aminokwasowej regionu Fc i otrzymać polipeptyd zawierający sekwencję lub DNA kodujący pożądaną sekwencję aminokwasową wariantu regionu Fc.
PL 220 113 B1
Jednakże w zalecanym rozwiązaniu kwas nukleinowy kodujący region Fc macierzystego polipeptydu jest dostępny i, w celu uzyskania wariantu sekwencji kwasu nukleinowego kodującego wariant regionu Fc, sekwencja tego kwasu jest poddawana zmianie.
DNA kodujący wariant sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu otrzymywany jest w wyniku zastosowania różnych, znanych w dziedzinie, sposobów. Sposoby te obejmują, lecz bez ograniczenia, ukierunkowaną (lub zależną od oligonukleotydu) mutagenezę, mutagenezę PGR i mutagenezę kasetową uprzednio otrzymanego DNA kodującego polipeptyd.
Mutageneza ukierunkowana jest zalecanym sposobem otrzymywania wariantów substytucyjnych. Technika ta jest dobrze znana w dziedzinie (patrz np. Carter i wsp., Nucleic Acids Res. 13: 4431-4443 (1985) oraz Kunkel i wsp., Proc.Natl.Acad.Sei.USA 82: 488 (1987)). W skrócie, podczas mutagenezy ukierunkowanej DNA zmianie ulega najpierw wyjściowy DNA, na drodze hybrydyzacji oligonukleotydu kodującego pożądaną mutację z pojedynczą nicią tego wyjściowego DNA. Po hybrydyzacji, stosowana jest polimeraza DNA, służąca syntezie całości drugiej nici, przy pomocy przyłączonego na etapie hybrydyzacji oligonukleotydu jako startera i pojedynczej nici wyjściowego DNA jako matrycy. Zatem, w rezultacie, oligonukleotyd kodujący pożądaną mutację zostaje wbudowany w uzyskany w ten sposób dwuniciowy DNA.
Mutageneza PGR jest również odpowiednia w celu uzyskania wariantów sekwencji aminokwasowej wyjściowego polipeptydu. Patrz, Higuchi, PGR Protocols, str. 177-183 (Academic Press, 1990) oraz Vallette i wsp., Nuci.Acids Res. 17: 723-733 (1989). W skrócie, w przypadku zastosowania m ałych ilości matrycowego DNA jako materiału wyjściowego w PGR, w celu uzyskania względnie dużych ilości specyficznego fragmentu DNA, różniącego się od sekwencji matrycy jedynie w pozycjach, w których startery różnią się od matrycy, stosuje się startery o jedynie nieznacznie zmienionej s ekwencji, w stosunku do odpowiadającego im regionu na matrycy DNA.
Innym sposobem otrzymywania wariantów jest mutageneza kasetowa, oparta na technice opisanej przez Wells i wsp., Gene 34: 315-323 (1985). Wyjściowy materiał jest plazmidem (lub innym wektorem) zawierającym poddawany mutagenezie wyjściowy polipeptyd DNA. W poddawanym mutagenezie wyjściowym DNA identyfikowany jest kodon lub kodony. Po obu stronach wskazanego miejsca lub miejsc mutacji powinno znajdować się unikalne miejsce dla endonukleazy restrykcyjnej. W przypadku gdy takie miejsca nie istnieją, można je utworzyć za pomocą opisanych powyżej metod mutagenezy zależnej od oligonukleotydu, pozwalających na wprowadzenie takich miejsc w odpowiednim położeniu w wyjściowym polipeptydzie DNA. Następnie, w celu linearyzacji, plazmidowy DNA jest w tych miejscach poddawany trawieniu. Dwuniciowy oligonukleotyd kodujący sekwencję DNA znajdującą się pomiędzy miejscami restrykcyjnymi, lecz również zawierający pożądaną mutację lub mutacje syntetyzowany jest za pomocą standardowych procedur, w których dwie nici oligonukleotydu syntetyzowane są oddzielnie, a następnie poddawane wzajemnej hybrydyzacji za pomocą standardowych technik. Dwuniciowy oligonukleotyd określany jest jako kaseta. Kaseta ta zaprojektowana jest w taki sposób, żeby zawierała końce 5' i 3' kompatybilne z końcami zlinearyzowanego plazmidu, co pozwala na bezpośrednie włączenie jej do plazmidu. W rezultacie plazmid zawiera zmutowaną sekwencję DNA.
Alternatywnie, lub dodatkowo, możliwe jest określenie pożądanej sekwencji aminokwasowej, kodującej wariant polipeptydu i otrzymanie na drodze syntezy sekwencji kwasu nukleinowego kodującej wariant takiej sekwencji aminokwasowej.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc lub aktywności in vitro i/lub in vivo i/lub zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) in vitro i/lub in vivo, sekwencję aminokwasową macierzystego polipeptydu poddaje się modyfikacji.
Ogólnie, modyfikacja obejmuje jedną lub więcej substytucji aminokwasowych. W jednym z ro związań zastąpiona reszta nie odpowiada żadnej reszcie w tej samej pozycji w jakimkolwiek z regionów Fc o natywnej sekwencji przedstawionych na Figurze 22A. Na przykład, zgodnie z tym rozwiązaniem, Pro331 z regionu ludzkiej IgG3 lub IgG1, zastąpiona jest inną niż seryna resztą (odpowiadająca jej przyrównana reszta w natywnej sekwencji ludzkiej IgG4). W jednym z rozwiązań reszta z polipeptydu macierzystego, która zastąpiona jest inną resztą jest inna niż alanina i/lub nie jest resztą Ala339 z regionu Fc. W przypadku substytucji aminokwasowej zalecane jest by reszta macierzystego polipeptydu zastąpiona była resztą alaniny. Jednakże, zgodnie z niniejszym wynalazkiem brana jest pod uwagę substytucja reszty macierzystego polipeptydu jakąkolwiek inną resztą aminokwasową. Substytucja może, na przykład, mieć charakter „substytucji konserwatywnej”. Takie konserwatywne substytucje
PL 220 113 B1 zaprezentowano w Tabeli 1, pod nagłówkiem „zalecane substytucje”. Bardziej istotne zmiany mogą być uzyskane w wyniku jednego lub więcej „przykładowych substytucji”, które nie należą do zalecanych podstawień zawartych w Tabeli 1.
T a b e l a 1
Pierwotna reszta Przykładowe substytucje Zalecane substytucje
Ala (A) val; leu; ile val
Arg (R) lys; gln; asn lys
Asn(N) gln; his;lys;arg gln
Asp(D) glu glu
Cys (C) ser ser
Gln (Q) asn asn
Glu (E) asp asp
Gly (G) pro; ala ala
His (H) asn; gln; lys; arg arg
Ile (I) leu, val, met; ala; phe; norleucyna leu
Leu (L) norleucyna; ile; val; met, ala, phe ile
Lys (K) arg; gln; asn arg
Met (M) leu; phe; ile leu
Phe (F) leu; val; ile, ala; tyr leu
Pro (P) ala ala
Ser (S) thr thr
Thr (T) ser ser
Trp (W) tyr; phe tyr
Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucyna leu
Istotne modyfikacje właściwości biologicznych regionu Fc można uzyskać w wyniku selekcji substytucji wywołujących silnie zróżnicowany efekt na utrzymanie (a) struktury szkieletu polipeptydu w obszarze substytucji, na przykład, konformacji harmonijki lub struktury helisy, (b) ładunku lub hydrofobowości cząsteczki w miejscu docelowym, lub (c) objętości łańcuchów bocznych. Naturalnie występujące reszty aminokwasowe podzielono na grupy w oparciu o wspólne właściwości łańcucha bocznego.
(1) hydrofobowe: norleucyna, met, ala, val, leu, ile;
(2) obojętne hydrofilowe: cys, ser, thr;
(3) kwaśne: asp, glu;
(4) zasadowe: asn, gln, his, lys, arg;
(5) reszty wpływające na ułożenie łańcucha: gly, pro, i (6) aromatyczne: trp, tyr, phe.
Substytucje o charakterze niekonserwatywnym dotyczą wymiany reszty należącej do jednej z tych klas na resztę należącą do innej klasy. Przykłady konserwatywnych i niekonserwatywnych substytucji aminokwasowych przedstawiono poniżej w Tabeli 8.
Jak pokazano w Przykładzie 4, możliwe jest utworzenie wariantu regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania jednego lub więcej FcR. Jak zademonstrowano w tym Przykładzie, możliwe j est uzyskanie różnych klas wariantów regionu Fc, np. przedstawionych w poniższej tabeli. W przypadku
PL 220 113 B1 gdy wariant regionu Fc posiada więcej niż jedną substytucję aminokwasową, ogólnie, lecz niekoniecznie, łączy się substytucje aminokwasowe w tych samych klasach w celu uzyskania pożądanego efektu.
Ta b ela 2
Klasy wariantów regionu Fc
Klasa Właściwości wiązania FcR Pozycja substytucji w regionie Fc
1A zredukowane wiązanie wszystkich FcyR 238, 265, 269, 270, 297*, 327, 329
1B zredukowane wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 239, 294, 295, 303, 338, 373, 376, 416, 435
2 wzmocnione wiązanie zarówno FcyRII, jak i FCyRIII 256, 290, 312, 326, 330, 339#, 378, 430
3 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz brak efektu na wiązanie FcyRIII 255, 258, 267,276, 280, 283, 285, 286, 305, 307, 309, 315, 320, 331, 337, 398
4 wzmocnione wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie dla FcyRIII 268, 272, 301, 322, 340
5 zredukowane wiązanie FcyRII ora brak efektu na wiązanie FcyRIII 292, 324, 335, 414, 419
6 zredukowane wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 298, 333
7 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz zredukowane wiązanie FcyRIII 248, 249, 252, 254, 278, 289, 293, 296, 338, 382, 388, 389, 434, 437
8 brak efektu na wiązanie FcyRII oraz wzmocnione wiązanie FcyRIII 334, 360
* Wersja deglikozylowa #
Zalecane połączenie z inną lub innymi modyfikacjami regionu Fc (np. ujawnionymi w niniejszym opisie)
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem oprócz substancji aminokwasowych opisano inne modyfik acje sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc, które służą do otrzymania wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej.
W celu zredukowania wiązania z FcR możliwe jest, na przykład, usunięcie jednej lub więcej reszt aminokwasowych regionu Fc. Ogólnie, w celu stworzenia wariantu regionu Fc możliwe jest wycięcie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako reszty wpływające na wiązanie FcR (patrz poniżej. Przykład 4). Ogólnie, w takim wykonaniu można wyciąć nie więcej niż jedną do dziesięciu reszt regionu Fc. Opisywany tu region Fc, z delecją jednej lub więcej reszt aminokwas owych, zachowuje dogodnie przynajmniej 80%, i w szczególności przynajmniej 90%, a zwłaszcza prz ynajmniej 95% sekwencji macierzystego regionu Fc lub natywnej sekwencji ludzkiego regionu Fc.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów regionu Fc o zmienionej funkcji efektorowej poprzez insercje aminokwasowe. Na przykład, możliwe jest wprowadzenie przynajmniej jednej reszty aminokwasowej (np. jednej do dwóch reszt aminokwasowych, ogólnie nie więcej niż dziesięciu reszt), w sąsiedztwie jednej lub więcej reszt regionu Fc, zidentyfikowanych tu jako wpływające na wiązanie FcR. Terminem „w sąsiedztwie” określa się położenie w odległości jednej do dwóch reszt aminokwasowych od zidentyfikowanych tu reszt regionu Fc. Takie warianty regionu Fc mogą wykazywać wzmocnione lub osłabione wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC. W celu otrzymania takich wariantów insercyjnych i racjonalnego zaprojektowania wariantu regionu Fc, np. o wzm ocnionym wiązaniu FcR, można dokonać oceny struktury krystalicznej polipeptydu zawierającego region wiążący FcR (np. zewnątrzkomórkowej domeny FcR) będącego przedmiotem zainteresowań i regionu Fc, do którego ma być wstawiona reszta lub reszty aminokwasowe (patrz, na przykład, Deisenhofer, Biochemistry 20(9): 2361-2370 (1981) oraz Burmeister i wsp., Nature 342: 379-383, (1994)). Taką insercję lub insercje, ogólnie, wprowadza się w obszarze pętli regionu Fc, a nie w obrębie struktur drugorzędowych (tj. w strukturze nici β) regionu Fc.
W wyniku wprowadzenia odpowiednich modyfikacji sekwencji aminokwasowej macierzystego regionu Fc możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc, który (a) skuteczniej uczestniczy w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych
PL 220 113 B1 i/lub (b) wiąże receptor gamma Fc (FcγR) z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd. Takie warianty regionu Fc, ogólnie, zawierają przynajmniej jedną modyfikację aminokwasową w regi onie Fc. Uważa się, że szczególnie zalecane jest połączenie modyfikacji aminokwasowych. Na przykład, wariant regionu Fc może obejmować dwie, trzy, cztery, pięć, itd. substytucji, np. w specyficznych, zidentyfikowanych tu pozycjach regionu Fc.
Zalecany region Fc macierzystego polipeptydu jest ludzkim regionem Fc, np. natywną sekwencją ludzkiego regionu Fc ludzkiej IgG1 (allotypy A i nie-A), regionu Fc IgG2, IgG3 lub IgG4. Sekwencje te przedstawiono na Figurze 23.
W celu uzyskania regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, polipeptyd macierzysty powinien, dogodnie, wykazywać już wcześniej aktywność ADCC, np. posiadać region Fc ludzkiej IgG1 lub ludzkiej IgG3. W jednym rozwiązaniu wariant o wzmocnionej ADCC uczestniczy w ADCC istotnie sk uteczniej niż przeciwciało o natywnej sekwencji regionu Fc IG1 lub IgG3 i regionu wiążącego antygen wariantu. Dogodnie, wariant zawiera substytucje dwóch lub trzech reszt w pozycjach 298, 333 i 334 regionu Fc, dogodniej mogą to być jedyne substytucje. Dogodnie substytucji poddaje się reszty w pozycjach 298, 333 i 334 (np. resztami alaniny). Ponadto, w celu otrzymania wariantu regionu Fc o wzmocnionej aktywności ADCC, możliwe jest ogólnie, otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII, który uważany jest za istotny FcR w procesie ADCC. Na przykład, w celu otrzymania takiego wariantu, możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej (np. substytucji) w obrębie macierzystego regionu Fc w jakiejkolwiek jednej lub więcej pozycjach aminokwasowych 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430. Wariant o wzmocnionym powinowactwie wiązania FcγRIII może ponadto wykazywać zredukowane powinowactwo wiązania FcγRII, w szczególności zredukowane powinowactwo dla hamującego receptora FcγRIIB.
Modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe dogodnie wprowadza się w domenie CH2 regionu Fc, ponieważ ujawnione tu doświadczenia wskazują, że domena CH2 jest istotna dla aktywności wiązania FcR. Ponadto, odmiennie niż w cytowanej powyżej literaturze, w niniejszym zgłoszeniu ro zważane jest wprowadzanie modyfikacji w części regionu Fc innej niż niższy region zawiasowy.
Użyteczne do modyfikacji celem otrzymania wariantu regionu Fc IgG o zmienionym powinowa ctwie wiązania receptora gamma (FcγR) lub aktywności pozycje aminokwasowe obejmują jedną lub więcej spośród następujących pozycji aminokwasowych: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258,
265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298,
301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338,
340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc. W celu otrzymania takich wariantów, stosowany jako matryca region macierzysty Fc dogodnie zawiera region Fc ludzkiej IgG. W przypadku substytucji reszty 331, region macierzysty Fc, dogodnie, nie jest natywną sekwencją ludzkiej IgG3, lub gdy wariant regionu Fc zawiera substytucję w pozycji 331, dogodnie wykazuje on wzrost wiązania FcR, np. FcγRII.
W celu otrzymania wariantu regionu Fc o zredukowanym wiązaniu FcγR możliwe jest wprowadzenie modyfikacji aminokwasowej w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, pozycji aminokwasowej spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc.
Warianty cechujące się zredukowanym wiązaniem FcγRI, obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 327 lub 329.
Warianty wykazujące zredukowane wiązanie FcγRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 265, 269, 270, 292, 294, 295, 298, 303, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 373, 376, 414, 416, 419, 435, 438 lub 439.
Warianty regionu Fc wykazujące zredukowane wiązanie FcγRIII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301,303, 322, 327, 329, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 416, 434, 435 lub 437.
Możliwe jest również otrzymanie wariantów o wzmocnionym wiązaniu jednego lub więcej Fc γΚ. Takie warianty regionu Fc mogą zawierać, modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290,
PL 220 113 B1
298, 301,305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331,333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc.
Na przykład, wariant o wzmocnionej aktywności wiązania Fc-,'R może wykazywać silniejsze wiązanie z FcyRIII i, ewentualnie, może również cechować się zredukowanym wiązaniem z FcyRII; np. wariant może zawierać modyfikację aminokwasową w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc.
Warianty wykazujące wzmocnione wiązanie FcyRII obejmują te warianty, które zawierają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 255, 256, 258, 267, 268, 272, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc. Takie warianty mogą również cechować się zredukowanym wiązaniem FcyRIII. Na przykład, mogą one zawierać modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 268, 272, 298, 301,322 lub 340.
Chociaż zmiana wiązania FcyR jest zalecana, to rozważa się tu również warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora (FcRn). Uważa się, że warianty regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcRn posiadają dłuższy okres półtrwania w surowicy i takie cząsteczki są użyteczne w sposobach leczenia ssaków, gdzie pożądany jest długi okres półtrwania podawanego polipeptydu, np. w leczeniu przewlekłych chorób lub zaburzeń. Przeciwnie, oczekuje się, że warianty regionów Fc o zredukowanym powinowactwie wiązania FcRn posiadają krótszy okres półtrwania, i tego typu cząsteczki mogą, na przykład, być podawane ssakom w sytuacjach gdy zalecany jest skrócony okres półtrwania w krążeniu, np. w celu obrazowania diagnostyc znego in vivo lub w przypadku polipeptydów wywołujących toksyczne skutki uboczne podczas krążenia przez dłuższy czas w krwioobiegu, itp. W wypadku wariantów regionu Fc o obniżonym powinowactwie wiązania FcRn jest mniej prawdopodobne, że przekroczą one łożysko i mogą być zatem użyteczne w leczeniu chorób i zaburzeń u kobiet w ciąży.
Warianty regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania FcRn obejmują te warianty, które posiadają modyfikację aminokwasową w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447. Te, które wykazują zredukowane wiązanie FcRn obejmują ogólnie modyfikację aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 lub 447, natomiast te, które cechują się wzmocnionym wiązaniem FcRn obejmują zazwyczaj modyfikacją aminokwasową regionu Fc w jakiejkolwiek, jednej lub więcej, spośród pozycji aminokwasowych 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 282, 413, 424 lub 434.
Wariant lub warianty polipeptydu otrzymane zgodnie z powyższym opisem mogą być poddane dalszym modyfikacjom, często zależnym od przewidywanego zastosowania polipeptydu. Modyfikacje te mogą obejmować dalsze zmiany sekwencji aminokwasowej (substytucję, insercję i/lub delecję reszt aminokwasowych), fuzję z heterologicznym polipeptydem lub polipeptydami heterologicznymi i/lub modyfikacje kowalencyjne. Takie „dalsze modyfikacje” mogą być wprowadzane wcześniej, równolegle lub po opisanej powyżej modyfikacji lub modyfikacjach aminokwasowych, w których efekcie następuje zmiana wiązania receptora Fc i/lub aktywności ADCC. W jednym rozwiązaniu możliwe jest połączenie opisywanej tu modyfikacji regionu Fc z substytucjami w regionie Fc, ujawnionymi w cytowanych publikacjach w opisie stanu techniki niniejszego zgłoszenia.
Alternatywnie, lub dodatkowo, użyteczne może być połączenie powyższych modyfikacji aminokwasowych z jedną lub więcej dalszych modyfikacji aminokwasowych, zmieniających wiązanie C1q i/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza regionu Fc.
Wyjściowym polipeptydem będącym tu przedmiotem zainteresowania jest zazwyczaj polipeptyd, który wiąże się z C1q i wykazuje cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC). Dalsze, ujawnione powyżej, substytucje aminokwasowe służą ogólnie zmianie zdolności wyjściowego polipeptydu wiązania C1q i/lub modyfikacji jego funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza, np. w celu zreduk owania, a w szczególności zniesienia, tych funkcji efektorowych. Jednakże, rozważane są tu również polipeptydy zawierające substytucje w jednej lub więcej spośród opisanych pozycji i wykazujące wzmocnione wiązanie C1q l/lub funkcję cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Na przykład, wyjściowy polipeptyd może być niezdolny do wiązania C1q i/lub uczestniczenia w CDC a w wyniku zastosowania opisywanych tu modyfikacji możliwe jest nadanie mu tych funkcji efektorowych. Ponadto, polipeptydy posiadające wcześniej aktywność wiązania C1q, i, ewentualnie, zdolność uczestniczenia
PL 220 113 B1 w CDC, mogą zostać poddane modyfikacjom, w wyniku których jedna, lub obie, z tych funkcji ulegną wzmocnieniu.
W celu otrzymania regionu Fc o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) do modyfikacji wybiera się ogólnie reszty aminokwasowe spośród pozycji łańcucha ciężkiego 270, 322, 326, 327, 329, 331,333 i 334, przy czym numeracja w łańcuchu ciężkim IgG jest zgodna z indeksem EU według Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). W jednym rozwiązaniu w celu otrzymania wariantu polipeptydu o zmienionym wiązaniu C1q i/lub funkcji cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC) zmianie poddawana jest jedynie jedna z ośmiu wymienionych powyżej pozycji. W tym przypadku, zmianie podlega dogodnie jedynie reszta 270, 329 lub 322. Alternatywnie, modyfikowane mogą być dwie lub więcej spośród wymienionych reszt. W przypadku gdy substytucje mają być połączone, ogólnie łączy się substytucje zwiększające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 326, 327, 333 i 334) lub osłabiające wiązanie ludzkiego C1q (np. reszty w pozycjach 270, 322, 329 i 331). W kolejnym rozwiązaniu możliwa jest substytucja wszystkich czt erech pozycji (tj. 270, 322, 329 i 331). W celu otrzymania polipeptydu o zwiększonej zdolności wiązania ludzkiego C1q, a zwłaszcza wyższej aktywności CDC in vitro lub in vivo, dogodnie łączy się dalsze substytucje w dwóch, trzech lub wszystkich pozycji spośród 326, 327, 333 lub 334, ewentualnie z innymi substytucjami w regionie Fc.
Prolina w pozycji 329 jest konserwowana w ludzkich IgG. Reszta ta jest dogodnie zastępowana alaniną, jednakże brana jest również pod uwagę substytucja jakimkolwiek innym aminokwasem, np. seryną, treoniną, asparaginą, glicyną lub waliną.
Prolina w pozycji 331 jest konserwowana w ludzkiej IgG1, IgG2 i IgG3, lecz nie w IgG4 (w której w pozycji 331 występuje seryna). Reszta 331 jest dogodnie zastępowana alaniną lub innym aminokwasem, np. seryną (dla regionów IgG innych niż IgG4), glicyną lub waliną.
Lizyna 322 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta jest dogodnie zastępowana resztą alaniny, brana jest również pod uwagę substytucja jakąkolwiek inną resztą aminokwasową, np. seryną, treoniną, glicyną lub waliną.
D270 jest konserwowana w ludzkich IgG i reszta ta może być zastąpiona inną resztą aminokwasową, np. alaniną, seryną, treoniną, glicyną, waliną lub lizyną.
K326 jest również resztą konserwowaną w ludzkich IgG. Reszta ta może być podstawiona przez inną resztę, w tym, lecz bez ograniczenia, walinę, kwas glutaminowy, alaninę, glicynę, kwas asparaginowy, metioninę lub tryptofan, przy czym zalecany jest tryptofan.
Podobnie, E333 jest również konserwowana w ludzkich IgG. E333 jest dogodnie zastępowana resztą aminokwasową o mniejszym łańcuchu bocznym, taką jak walina, glicyna, alanina lub seryna, przy czym zalecana jest seryna.
K334 jest resztą konserwowaną w ludzkich IgG, i która może być podstawiona inną resztą, taką jak alanina lub inną resztą.
W ludzkich IgG1 i IgG3 resztą 327 jest alanina. W celu otrzymania wariantu o zwiększonym wiązaniu C1q ta reszta alaniny może być podstawiona inną resztą, taką jak glicyna. W IgG2 i IgG4 resztą 327 jest glicyna, która, w celu osłabienia wiązania C1q, może być zastąpiona alaniną (lub inną resztą).
Jak ujawniono powyżej, możliwe jest zaprojektowanie regionu Fc o zmienionej funkcji efektor owej, np. poprzez modyfikację wiązania C1q i/lub wiązania FcR, a przez to zmianę aktywności CDC i/lub aktywności ADCC. Na przykład, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o wzmocnionym wiązaniu C1q i wzmocnionym wiązaniu FcyRIII; np. wykazującego zarówno podwyższoną aktywność ADCC, jak i podwyższoną aktywność CDC. Alternatywnie, w celu zredukowania lub zniesienia funkcji efektorowych, możliwe jest otrzymanie wariantu regionu Fc o zredukowanej aktywności CDC i/lub zredukowanej aktywności ADCC. W innych rozwiązaniach, możliwe jest nasilenie jedynie jednej z tych aktywności i, ewentualnie, również obniżenie innej aktywności, np. w celu otrzymania wariantu regionu Fc o podwyższonej aktywności ADCC, lecz obniżonej aktywności CDC, i odwrotnie.
W odniesieniu do dalszych zmian sekwencji aminokwasowej, możliwe jest podstawienie jakiejkolwiek reszty cysteiny, która nie jest zaangażowana w utrzymanie odpowiedniej konformacji polipeptydu, ogólnie seryną, w celu zwiększenia stabilności wobec utleniania cząsteczki i zapobiegnięcia powstawania nieprawidłowego sieciowania.
Inny typ substytucji aminokwasowej służy do zmiany wzorca glikozylacji polipeptydu. Można ją uzyskać poprzez delecję jednej lub więcej jednostek węglowodanowych polipeptydu i/lub dodania
PL 220 113 B1 jednego lub więcej miejsc glikozylacji, nieobecnych uprzednio w polipeptydzie. Glikozylacja polipept ydów związana jest zazwyczaj z powstaniem wiązań poprzez atom N lub atom O. Wiązanie poprzez atom N dotyczy przyłączenia jednostki węglowodanowej do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Sekwencje trójpeptydowe, obejmujące reszty takie jak asparagina-X-seryna oraz asparagina-X-treonina, gdzie X jest jakimkolwiek aminokwasem za wyjątkiem proliny, są sekwencjami rozpoznawanymi do enzymatycznego przyłączenia jednostki węgłowodanowej do łańcucha bocznego asparaginy. Zatem, obecność dowolnej z tych sekwencji trójpeptydowych w polipeptydzie stwarza potencjalne miejsce glikozylacji. Glikozylacja poprzez wiązanie przez atom O odnosi się do przyłączenia jednego z cukrów N-acetylogalaktozoaminy, galaktozy lub ksylozy do hydroksyaminokwasu, najczęściej seryny lub treoniny, jednakże do tego celu mogą być także wykorzystane 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna. Wprowadzenie miejsc glikozylacji do polipeptydu przeprowadza się dogodnie poprzez zmianę sekwencji aminokwasowej, w wyniku której zawiera ona jedną lub więcej powyżej w ymienionych sekwencji trójpeptydowych (dla miejsc N-glikozylacji). Zmiana ta może być dokonana również poprzez dodanie lub substytucję, jednej lub więcej reszt seryny lub treoniny, w pierwotnej s ekwencji polipeptydu (dla miejsc O-glikozylacji). Przykładowy wariant glikozylacji posiada substytucję aminokwasową reszty Asn297 łańcucha ciężkiego.
Ponadto, w wyniku jednej lub więcej dalszych substytucji aminokwasowych możliwa jest zmiana klasy, podklasy lub allotypu regionu Fc, co prowadzi, w razie potrzeby, do otrzymania regionu Fc o sekwencji aminokwasowej o wyższej homologii względem innej klasy, podklasy lub allotypu. Na przykład, możliwa jest zmiana mysiego regionu Fc, dająca w rezultacie sekwencję aminokwasową bardziej homologiczną względem ludzkiego regionu Fc; możliwe jest zmodyfikowanie ludzkiego regionu Fc, allotypu nie-A, prowadzące do otrzymania ludzkiego regionu Fc IgG1 allotypu A, itp. W jednym rozwiązaniu w regionie Fc przeprowadza się modyfikację lub modyfikacje aminokwasowe w domenie CH2, które zmieniają wiązanie FcR i/lub aktywność ADCC oraz poddaje się delecji domenę CH3, lub zastępuje się ją inną domeną dimeryzacji. Dogodnie jednak domena CH3 pozostaje (oprócz ujawnionych tu modyfikacji aminokwasowych, wywołujących zmianę funkcji efektorowej).
Wariant polipeptydu może być poddany jednej lub więcej analizom pozwalającym na oszacowanie jakiejkolwiek zmiany aktywności biologicznej w porównaniu do aktywności wyjściowego polipeptydu.
Wariant polipeptydu dogodnie zachowuje zasadniczo zdolność wiązania antygenu w porówn aniu do polipeptydu niezmienionego, tj. zdolność wiązania nie ulega więcej niż 20-krotnemu obniżeniu, np. nie ulega obniżeniu większemu niż około 5-krotnemu w porównaniu do polipeptydu niezmienionego. Zdolność wiązania wariantu polipeptydu może być określona za pomocą takich technik jak np. sortowanie fluorescencyjnie aktywowanych komórek (FACS) lub radioimmunoprecypitacja (RIA).
Możliwe jest określenie zdolności wariantu polipeptydu do wiązania FcR. W przypadku gdy receptor FcR jest receptorem Fc o wysokim powinowactwie FR, takim jak FcyRI, FcRn lub FcyRIIIA-V158, wiązanie to może być mierzone poprzez miareczkowanie monomeru wariantu polipeptydu i pomiar związanego wariantu polipeptydu za pomocą specyficznie łączącego się z wariantem polipeptydu w standardowym teście ELISA przeciwciała (patrz, poniżej. Przykład 2). Inną analizę wiązania FcR w przypadku FcR o niskim powinowactwie opisano w Przykładach 1 i 4.
W celu określenia aktywności ADCC wariantu polipeptydu analizę ADCC in vitro, taką jak w Przykładzie 4, można przeprowadzić z użyciem różnych stosunków komórka efektorowa: komórka docelowa. Użytecznymi do takich analiz komórkami efektorowymi: komórkami docelowymi są jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) oraz komórki NK. Alternatywnie, lub dodatkowo, aktywność ADCC wariantu polipeptydu można oceniać in vivo, np. w analizie modelu zwierzęcego opisanego przez Clynes i wsp., PNAS (USA) 95: 652-656 (1998).
Możliwa jest również ocena zdolności wiązania wariantu z C1q oraz jego udziału w cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC).
W celu określenia wiązania C1q możliwe jest wykonanie analizy wiązania C1q w teście ELISA. W skrócie, płytki do analizy można pokrywać wariantem polipeptydu lub wyjściowym polipeptydem (kontrola) w buforze do pokrywania w temperaturze 4°C przez noc. Następnie płytki można płukać i blokować. Po płukaniu do każdej studzienki można dodać porcję C1q i inkubować w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po kolejnym płukaniu do każdej studzienki można dodać 100 pl owczego przeciwciała skoniugowanego z peroksydazą, skierowanego przeciwko dopełniaczowi C1q, a następnie płytki można inkubować w temperaturze pokojowej przez godzinę. Płytki można pono wnie płukać buforem do płukania i do każdej studzienki można dodawać 100 pl buforu substratowego,
PL 220 113 B1 zawierającego OPD (dichlorowodorek O-fenylenodiaminy (Sigma)). Reakcja utleniania, obserwowana na podstawie pojawienia się żółtego koloru, może być prowadzona przez 30 minut, a następnie zatrzymana przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Absorbancję można następnie odczytywać przy długości fali (492-405) nm.
Przykładowy wariant polipeptydu w takiej analizie cechuje się „znaczną redukcję wiązania C1q”. Oznacza to, że około 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 50-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do kontrolnego przeciwciała posiadającego niezmutowany region Fc IgG1. W najbardziej zalecanym rozwiązaniu wariant polipeptydu „nie wiąże C1q”, tj. 100 nl/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 100-krotną, lub większą, redukcję wiązania C1q w porównaniu do 100 nl/ml kontrolnego przeciwciała.
Innym przykładem wariantu jest wariant „posiadający wyższe powinowactwo wiązania ludzkiego C1q niż macierzysty polipeptyd”. Cząsteczka taka może cechować się, na przykład, około dwukrotnym lub wyższym, a zwłaszcza około pięciokrotnym, lub wyższym, wiązaniem ludzkiego C1q, w porównaniu do macierzystego polipeptydu (np. określonym dla IC50 tych cząsteczek). Na przykład, wiązanie ludzkiego C1q może być około dwukrotnie do około 500-krotnie, a zwłaszcza od około dwukrotnie lub od około pięciokrotnie do około 1000-krotnie wyższe w porównaniu do macierzystego polipeptydu.
W celu określenia aktywacji dopełniacza można zmierzyć cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC), np. zgodnie z Gazzano-Santoro i wsp., J.Immunol.Methods 202: 1633 (1996). W skrócie, poprzez wykonanie odpowiednich rozcieńczeń w buforze otrzymać można różne stężenia wariantu polipeptydu i ludzkiego dopełniacza. Komórki ekspresjonujące antygen, z którym wiąże się wariant polipeptydu, można rozcieńczyć do gęstości ~1x106 kom./ml. Mieszaninę wariantu polipeptydu, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza i komórek ekspresjonujących antygen można przenosić do płaskodennej, 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubować przez 2 godziny w 37°C i w atmosferze 5% CO2, celem ułatwienia zależnej od dopełniacza lizy komórek. Następnie, do każdej studzienki można dodać 50 μl alamar blue (Accumed International) i inkubować przez noc w temperaturze 37°C. Absorbancję mierzy się za pomocą 96-studzienkowego fluoromertru ze wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Wyniki można wyrazić we względnych jednostkach fluorescencji (RFU). Stężenia próbek można obliczyć na podstawie krzywej standardowej, a następnie dla wariantu pol ipeptydu podaje się procent aktywności w porównaniu do polipeptydu niezmienionego.
Jeszcze innym przykładem jest wariant „nieaktywujący dopełniacza”. Na przykład, w analizie tej 0,6 μg/ml wariantu polipeptydu wykazuje około 0-10% aktywności CDC w porównaniu do aktywności 0,6 μg/ml przeciwciała kontrolnego z niezmutowanym regionionem Fc IgG1. W powyższej analizie CDC wariant nie przejawia żadnej aktywności CDC.
Zgodnie z wynalazkiem opisano również wariant polipeptydu o podwyższonej CDC w porównaniu do polipeptydu macierzystego, np. wykazującego, in vitro lub in vivo, około dwukrotnie do około 100-krotnie wyższą aktywność CDC (np. dla wartości IC50 każdej porównywanej cząsteczki).
A. Analiza wiązania receptora i kompleksu immunologicznego
Opracowana zgodnie z niniejszym wynalazkiem analiza wiązania receptora jest szczególnie użyteczna do określania wiązania badanej cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania (analitu) z receptorem w przypadku gdy powinowactwo wiązania receptora, dla badanej cząsteczki jest relatywnie słabe, np. rzędu mikromoli, jak w przypadku FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA i FcyRIIIB. W sposobie tym dochodzi do tworzenia kompleksu molekularnego o zwiększonej zachłanności wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania w porównaniu do badanej cząsteczki w postaci nieskompleksowanej. Zalecany kompleks molekularny jest kompleksem immunologicznym zawierającym: (a) polipeptyd zawierający region Fc (taki jak przeciwciało lub immunoadhezyna); (b) pierwszą cząsteczkę docelową, która posiada przynajmniej dwa miejsca wiążące polipeptyd zawierający region Fc i (c) drugą cząsteczkę docelową, posiadającą przynajmniej dwa miejsca wiążące pierwszą cząsteczkę docelową.
W poniżej przedstawionym Przykładzie 1, polipeptydem zawierającym region Fc jest przeciwciało skierowane przeciwko IgE, takie jak przeciwciało E27 (Figury 4A-4B). E27, po zmieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzy stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek E27 i trzech cząsteczek IgE. W poniższym Przykładzie 1, „pierwszą cząsteczką docelową” jest chimerowa postać IgE, w której fragment Fab skierowanego przeciwko VEGF przeciwciała jest połączony z fragmentem Fc ludzkiej IgE, a „drugą cząsteczką docelową” jest antygen, z którym wiąże się Fab (tj. VEGF). Każda cząsteczka IgE wiąże dwie cząsteczki VEGF. VEGF również wiąże dwie cząsteczki IgE na cząsteczkę VEGF. Po dodaniu rekombinowanego ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do
PL 220 113 B1 heksamerów IgE:E27, heksamery ulegały połączeniu z utworzeniem postaci kompleksów o wyższej masie cząsteczkowej poprzez interakcję IgE:VEGF (Fig. 5). Region Fc przeciwciała skierowanego przeciwko IgE (anty-IgE) otrzymanego w ten sposób kompleksu immunologicznego wiąże FcR z wyższą zachłannością wiązania niż zarówno nieskompleksowane anty-IgE, jak i heksamery anty-IgE:IgE.
Również inne formy kompleksów molekularnych mogą być zastosowane w analizie wiązania receptora. Przykłady, obejmujące jedynie połączenie polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka docelowa, obejmują połączenie immunoadhezyna:ligand, takie jak receptor VEGF (KDR)-immunoadhezyna:VEGF oraz pełnej długości przeciwciało bispecyficzne (bsAb): pierwsza cząsteczka docelowa. Kolejny przykład połączenia polipeptyd zawierający region Fc: pierwsza cząsteczka doc elowa: druga cząsteczka docelowa, obejmuje połączenie przeciwciało nieblokujące:rozpuszczalny receptor:ligand, takie jak przeciwciało any-Trk:rozpuszczalny receptor Trk:neutrofina (Urfer i wsp., J.Biol.Chem. 273 (10): 5829-5840 (1998)).
Oprócz zastosowania w analizie wiązania receptora, opisane powyżej kompleksy immunologiczne posiadają inne zastosowania, włączając ocenę funkcji polipeptydu zawierającego region Fc oraz klirensu kompleksu immunologicznego in vivo. Zatem, kompleksy immunologiczne mogą być podawane ssakom (np. w przedklinicznej fazie badań na zwierzętach) i oceniane pod kątem ich okresu półtrwania, itp.
W celu określenia wiązania receptora, polipeptyd zawierający przynajmniej domenę wiążącą receptor będący przedmiotem zainteresowania (np. zewnątrzkomórkowa domena podjednostki α FcR) może być umieszczony na fazie stałej, takiej jak płytka do analizy. Sama domena wiążąca receptor, albo białko fuzyjne receptora mogą być rozmieszczane na płytce za pomocą standardowych procedur. Przykłady białek fuzyjnych receptora obejmują białko fuzyjne receptor-transferaza S glutationu (GST), białko fuzyjne receptor-domena wiążąca chitynę, białko fuzyjne receptor-znacznik heksahistydynowy, (umieszczone na płytkach pokrytych, odpowiednio, glutationem, chityną i niklem). Alternatywnie, możliwe jest pokrywanie płytek do analaizy cząsteczką wychwytującą i wiązanie białka fuzyjnego receptora poprzez fragment niereceptorowy białka fuzyjnego. Przykłady obejmują pokrycie płytki do analizy F(ab')2 anty-heksaHis, w celu wychwycenia fuzji receptora z końcem heksaHis lub pokrycie płytki do analizy przeciwciałem skierowanym przeciwko GST (anty-GST), w celu wychwycenia białka fuzyjnego receptor-GST. W innych rozwiązaniach, oceniane może być wiązanie komórek ekspresjonujących przynajmniej domenę wiążącą receptora. Komórki mogą być naturalnie występującymi komórkami hematopoetycznymi ekspresjonującymi FcR będący przedmiotem zainteresowania lub komórkami transformowanymi kwasem nukleinowym kodującym FcR lub jego domenę wiążącą, przy czym taka domena wiążąca ulega ekspresji na powierzchni komórek do analizy.
Następnie, opisany powyżej kompleks immunologiczny dodawany jest do płytek pokrytych receptorem i całość inkubowana jest przez czas wystarczający do związania receptora przez badaną cząsteczkę. Płytki można następnie płukać w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów, po czym wiązanie badanej cząsteczki można wykrywać za pomocą znanych metod. Na przykład, wiązanie można wykrywać za pomocą reagenta (np. przeciwciała lub jego fragmentu) specyficznie wiążącego się z badaną cząsteczką, i, ewentualnie, sprężonego z wykrywalnym znacznikiem (wykrywalne znac zniki i metody sprzęgania polipeptydami opisano poniżej, w rozdziale zatytułowanym „Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu”).
Dogodnie, reagenty mogą znajdować się w zestawie do analizy, tj. opakowana kombinacja reagentów do połączenia z badaną cząsteczką przy analizie zdolności badanej cząsteczki do wiązania receptora będącego przedmiotem zainteresowania. Zestawy takie powinny zawierać składniki w określonych wcześniej stosunkach. Zestaw może zawierać pierwszą cząsteczkę docelową i/lub drugą cząsteczkę docelową, ewentualnie obie w kompleksie ze sobą. Zestaw może również zawierać płytki do analizy, pokryte receptorem lub jego domeną wiążącą (np. zewnątrzkomórkową domeną podje dnostki α FcR). Zazwyczaj, w skład zestawu wchodzą również inne reagenty, takie jak przeciwciało wiążące się swoiście z badaną cząsteczką do analizy, bezpośrednio lub pośrednio znakowane za pomocą znacznika enzymatycznego. W przypadku gdy znacznikiem wykrywalnym jest enzym, zestaw zawiera także wymagane przez enzym substraty i kofaktory (np. prekursor substratu dostarczający wykrywalny chromofor lub fluorofor). Ponadto, mogą być zawarte inne dodatki, takie jak stabilizatory, bufory (np. bufor do analizy i/lub bufor do płukania i lizaty) itp. Względne ilości różnych reagentów mogą podlegać szerokim zmianom, po to by zapewnić stężenia reagentów w roztworze, które pozwalają na zasadnicze zoptymalizowanie czułości analizy. Szczególnie, reagenty mogą być udostępniane w postaci suchych proszków, zazwyczaj liofilizowanych, zawierających zaróbki, które po rozpuszczeniu
PL 220 113 B1 zapewniają odpowiednie stężenie reagentu w roztworze. Zestaw zawiera również odpowiednie instrukcje do przeprowadzenia analizy.
B. Otrzymywanie przeciwciała
W zalecanym rozwiązaniu polipeptyd zawierający region Fc, modyfikowany zgodnie z niniejszym opisem, jest przeciwciałem. Techniki otrzymywania przeciwciał obejmują:
(i) Selekcję i otrzymywanie antygenu
W przypadku gdy polipeptyd jest przeciwciałem, skierowany jest on przeciwko antygenowi będącemu przedmiotem zainteresowania. Zalecany antygen jest polipeptydem istotnym biologicznie, a podawanie przeciwciała dotkniętym chorobą i zaburzeniem ssakom może przynieść im korzyść t erapeutyczną. Jednakże brane są również pod uwagę przeciwciała skierowane przeciwko antygenom niepolipeptydowym (takim jak antygeny glikolipidowe związane z guzem nowotworowym; patrz Patent USA nr 5, 091, 178).
W przypadku, gdy antygen jest polipeptydem może on być cząsteczką przezbłonową (np. receptorem) lub ligandem, takim jak czynnik wzrostu. Przykładowe antygeny obejmują cząsteczki, takie jak renina; hormon wzrostu, włączając ludzki hormon wzrostu i wołowy hormon wzrostu; czynnik uwalniający hormon wzrostu; hormon przytarczyczny; hormon stymulujący tarczycę; lipoproteiny; alfa-1-antytrypsynę; łańcuch A insuliny; łańcuch B insuliny; proinsulinę, hormon folikulotropowy; kalcytoninę; hormon lutenizujący; glukagon; czynniki krzepnięcia, takie jak czynnik VIIIC, czynnik IX, czynnik tkankowy (TF) oraz czynnik von Wilebrand'a; czynniki przeciwkrzepliwe, takie jak Białko C; przedsionkowy czynnik natriuretyczny; surfaktant płucny; aktywator plazminogenu, taki jak urokinaza lub ludzki aktywator plazminogenu moczu, lub też tkankowy aktywator plazminogenu (t-PA); bombezynę; trombinę; hemopoetyczny czynnik wzrostu; czynnik martwicy nowotworu alfa i beta; enkefalinazę; RANTES (czynnik regulowany przez aktywację, zazwyczaj ekspresjonowany i wydzielany przez komórki T); ludzkie makrofagowe białko zapalne (MIP-1-alfa); albuminę surowicy krwi, taką jak ludzka albumina surowicy; substancję hamującą Muellerian; łańcuch A relaksyny; łańcuch B relaksyny; prorelaksynę; mysi peptyd związany z gonadotropiną; białko drobnoustrojowe, takie jak beta-laktamaza; Dnaza; IgE; antygen związany z cytotoksycznym limfocytem T (CTLA), takie jak CTLA-4; inhibinę; aktywinę; czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF); receptory hormonów lub czynników wzrostu; białko A lub D; czynniki reumatoidalne; czynnik neurotroficzny, taki jak kościopochodny czynnik neurotroficzny (BDNF), neutrofina 3, 4, 5 lub 6 (NT-3, NT-4, NT-5 lub NT-6) ; lub czynnik wzrostu nerwów, taki jak NGF-β; płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF); czynnik wzrostu fibroblastów, taki jak aFGF i bFGF; czynnik wzrostu naskórka (EGF); transformujący czynnik wzrostu (TGF), taki jak TGF-alfa i TGF-beta, włączając TGF-β! TGF^2, TGF^3, TGF^4 lub TGF^5; insulinopodobny czynnik wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II); des(1-3)-IGF (mózgowy IGF-1), białka wiążące insulinopodobny czynnik wzrostu; białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19 i CD20; erytropoetynę; czynniki osteoindukcyjne; immunotoksyny; białko morfogenetyczne kości (BMP); interferon, taki jak interferon alfa, beta i gamma; czynniki stymulujące powstawanie kolonii (CSF), np. M-CSF, GM-CSF i G-CSF; interleukiny (IL), np. IL-1 do IL-10; dysmutaze nadtlenkową; receptory komórek T; białka powierzchniowo-błonowe; czynnik przyspieszający rozkład, antygen wirusowy, taki jak np. fragment otoczki AIDS; białka transportowe; receptory zasiedlania; adresyny; białka regulatorowe; integryny, takie jak CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 i VCAM; antygen związany z guzem nowotworowym, taki jak receptor HER-2, HER3 lub HER4; oraz fragmenty jakiegokolwiek z wyżej wymienionych polipeptydów.
Zalecanymi cząsteczkami docelowymi dla przeciwciał tu opisanych są białka CD, takie jak CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 i CD34; białka wchodzące w skład rodziny receptora ErbB, takie jak receptor EGF, receptor HER2, HER3 lub HER4; cząsteczki adhezji komórkowej, takie jak LFA-1, Mac1, p150.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, integryna α4/β7 oraz integryna αν/β3, zawierająca albo jej podjednostkę α albo β (np. przeciwciała antyCD11a, anty-CD18 lub anty-CD11b); czynniki wzrostu, takie jak VEGF); czynnik tkankowy (TF); interferon alfa (α-IFN); interleukinę, taką jak IL-8; IgE; antygeny grupowe krwi; receptor flk2/flt3; receptor otyłości OB; receptor mp1; CTLA-4; białko C, itp.
Rozpuszczalne antygeny lub ich fragmenty, ewentualnie sprężone z innymi cząsteczkami, m ogą być stosowane jako immunogeny do produkcji przeciwciał. W przypadku cząsteczek przezbłonowych, takich jak receptory, możliwe jest zastosowanie jako immunogenów ich fragmentów (np. zewnątrzkomórkowej domeny receptora). Alternatywnie, rolę immunogenów mogą odgrywać cząsteczki ekspresjonujące cząsteczki przezbłonowe. Komórki te mogą pochodzić z naturalnego źródła (np. linie komórek nowotworowych) lub mogą być otrzymane drogą transformacji z zastosowaniem technik
PL 220 113 B1 rekombinacji, mających na celu uzyskanie ekspresji cząsteczki przezbłonowej. Inne antygeny i ich postacie, użyteczne do otrzymywania przeciwciał są oczywiste dla specjalistów w dziedzinie.
(ii) Przeciwciała poliklonalne
Przeciwciała poliklonalne są wzbudzane dogodnie w organizmach zwierzęcych poprzez podskórne (sc) lub wewnątrzotrzewne (ip) wstrzyknięcia odpowiedniego antygenu i adiuwantu. Użyteczne może być sprzęganie odpowiednio wybranego antygenu z białkiem o właściwościach immunogennych w immunizowanym gatunku, np. hemocyjaniną ze skałoczepa, albuminą surowicy, tyroglobuliną wołową lub inhibitorem trypsyny z soi z użyciem czynnika dwufunkcyjnego lub derywatyzującego, na przykład, estru maleimidobenzoilowego sukcynoimidu (sprzęganie przez reszty cysteiny), N-hydroksysukcynoimidu (przez reszty lizyny), glutaraldehydu, bezwodnika bursztynowego, SOCI2 lub
R N=C=NR, gdzie R i R są różnymi grupami alkilowymi.
Zwierzęta immunizuje się przeciwko antygenowi, koniugatom immunogennym lub pochodnym poprzez łączenie, np. 100 μg lub 5 μg, białka lub koniugatu (odpowiednio dla królików lub myszy) z trzema objętościami kompletnego adiuwanta Freunda i wstrzykuje się śródskórnie w wielu miejscach. Miesiąc później zwierzęta szczepione są dawką przypominającą, poprzez podskórne wstrzyknięcie w wielu miejscach 1/5 do 1/10 pierwotnej ilości peptydu lub koniugatu w kompletnym adiuwancie Freunda. 7 do 14 dni później, zwierzęta skrwawia się i oznacza się miano przeciwciała w surowicy. Zwierzętom podaje się dawki przypominające aż do uzyskania maksymalnego miana. Dogodne dawki przypominające zawierają koniugat tego samego antygenu, lecz połączony z innym białkiem i/lub za pomocą innego reagenta sieciującego. Koniugaty można także otrzymać w hodowli komórek rekombinowanych jako białka fuzyjne. Również czynniki agregujące, takie jak ałun, mogą być odpowiednie do zastosowannia w celu wzmacniania odpowiedzi immunologicznej.
(iii) Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne mogą być otrzymane przy użyciu metody z zastosowaniem hybrydom, opisanej po raz pierwszy przez Kohler i wsp., Nature, 256: 495 (1975) lub metody rekombinacji DNA (Patent U.S.A. Nr 4, 816, 567).
W metodzie z zastosowaniem hybrydom, myszy lub inne organizmy zwierzęce gospodarza, takie jak chomiki lub małpy makaki, szczepi się (jak opisano powyżej), w celu otrzymania limfocytów produkujących lub zdolnych do produkcji przeciwciał swoiście wiążących białko zastosowane do i mmunizacji. Alternatywnie, możliwa jest immunizacja in vitro limfocytów. Następnie limfocyty poddaje się fuzji z komórkami szpiczaka, za pomocą odpowiedniego czynnika fuzyjnego, takiego jak glikol poliet ylenowy, co pozwala na uzyskanie komórek hybrydoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Tak otrzymane komórki hybrydoma wysiewa się i hoduje w odpowiedniej pożywce hodowlanej, zawierającej dogodnie jedną lub więcej substancji hamujących wzrost lub przeżycie macierzystych komórek szpiczaka, jakie nie uległy fuzji. Na przykład, jeżeli macierzyste komórki szpiczaka nie posi adają enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantyno-guaninowej (HGPRT lub HPRT), pożywka hodowlana dla hybrydom zazwyczaj będzie zawierała hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek nieposiadających HGPRT.
Zalecanymi komórkami szpiczaka są komórki wydajnie ulegające fuzji, wspomagające stabilną produkcję na wysokim poziomie przeciwciała przez wyselekcjonowane komórki produkujące przeciwciało oraz wrażliwe na pożywkę typu HAT. Wśród tych komórek, zalecanymi liniami komórkowymi szpiczaka są linie komórkowe pochodzące z mysich guzów MOPC-21 i MPC-11, dostępne w Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA oraz komórki SP-2 lub X63-Ag8-653, dostępne w American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Ludzkie linie komórkowe szpiczaka i mysio-ludzkie linie komórkowe hetero-szpiczkowe zostały również opisane jako odpowiednie do produkcji ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J.Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur i wsp., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywkę hodowlaną, w której rosną komórki hybrydoma analizuje się pod kątem produkcji przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko antygenowi. Dogodnie, określa się swoistość wiązania wyprodukowanego przez komórki hybrydoma przeciwciała monoklonalnego, na drodze immunoprecypitacji lub analizy wiązania in vitro, takiej jak test radioimmunologiczny (RIA) lub test immunoenzymatyczny (ELISA).
Po dokonaniu identyfikacji komórek hybrydoma produkujących przeciwciało o pożądanej swoistości, powinowactwie i/lub aktywności klony te można subklonować metodą ograniczających
PL 220 113 B1 rozcieńczeń i hodować według standardowych metod (Coding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practoce, str. 59-103 (Academic Press, 1986)). Odpowiednie do tego celu pożywki hodowlane obejmują, na przykład, D-MEM lub RPMI-1640. Ponadto, komórki hybrydoma można hodować in vivo w postaci wysięku nowotworowego u zwierząt.
Wydzielane przez subklony przeciwciała monoklonalne odpowiednio oddziela się od pożywki hodowlanej, płynu wysiękowego lub surowicy konwencjonalnymi metodami oczyszczania immunoglobulin, takimi jak chromatografia na sefarozie z białkiem A, chromatografia na hydroksylacie, elektroforeza żelowa, dializa lub chromatografia powinowactwa.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np.poprzez zastosowanie sond oligonukleotydowych, zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciał monoklonalnych). Komórki hybryd oma stanowią zalecane źródło takiego DNA. W celu uzyskania syntezy przeciwciał monoklonalnych w rekombinowanych komórkach gospodarza wyizolowany DNA można umieszczać w wektorach ek spresyjnych, którymi transfekuje się następnie komórki gospodarza, takie jak komórki E.coli, małpie komórki COS, komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) lub komórki szpiczaka, które w inny sposób nie produkują białka immunoglobuliny. Rekombinowaną produkcję przeciwciał opisano bardziej szczegółowo poniżej.
W kolejnym rozwiązaniu, przeciwciała lub ich fragmenty, mogą zostać wyi zolowane z biblioteki fagowej przeciwciał, utworzonej za pomocą technik opisanych w McCafferty i wsp., Nature, 348: 552 -554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352: 624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581 -597 (1991) opisali izolację, odpowiednio, mysich i ludzkich przeciwciał przy użyciu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują produkcję ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (rzędu nM) za pomocą tasowania łańcuchów (Marks i wsp., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)) oraz kombinatorycznego zakażenia, jak również rekombinacji in vivo, jako strategii pozwalającej na otrzymanie bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc.Acids.Res., 21: 2265-2266 (1993)). Techniki te są zatem alternatywnymi, względem tradycyjnej metody z zastosowaniem hybrydom, sposobami izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA może również podlegać modyfikacjom, na przykład przez substytucję sekwencji kodującej ludzkie domeny stałe łańcucha ciężkiego i lekkiego w miejscu homologicznych mysich sekwencji (Patent USA nr 4, 816, 567; Morrison i wsp., Proc.Natl. Acad.Sci. USA, 81: 6851 (1984)) lub przez kowalencyjne łączenie sekwencji kodującej immunoglobulinę z całą lub częścią sekwencji kodującej polipeptyd nie-immunoglobulinowy.
Zazwyczaj, takie polipeptydy nie-immunoglobulinowe podstawiane są za domeny stałe przeciwciała lub za domeny zmienne jednego miejsca przyłączającego antygen przeciwciała, w celu otr zymania chimerowych, biwalentnych przeciwciał, zawierających jedno miejsce przełączania antygenu o swoistości wobec jednego antygenu i drugie miejsce przyłączania antygenu, wykazujące swoistość dla innego antygenu.
(iv) Przeciwciała humanizowane i ludzkie
Humanizowane przeciwciało posiada jedną lub więcej reszt aminokwasowych wprowadzonych z organizmu innego niż ludzki. Takie niepochodzące z organizmu człowieka reszty aminokwasowe określane są często jako reszty „importowane”, zazwyczaj pobierane z „importowanej” domeny zmiennej. Humanizacja może być przeprowadzona zasadniczo zgodnie z metodą Winter i wsp., (J ones i wsp., Nature, 321: 522-525 (1986), Riechmann i wsp., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen i wsp., Sciene, 239: 1534-1536 (1988)), przez substytucję sekwencji CDR gryzoni lub sekwencji CDR dla odpowiednich sekwencji ludzkiego przeciwciała. Zatem, takie „humanizowane” przeciwciała są przeciwciałami chimerowymi (Patent USA nr 4, 816, 567), w których zasadniczo mniej niż całość ludzkiej domeny zmiennej została podstawiona odpowiadającą temu obszarowi sekwencją pochodzącą z innego niż człowiek gatunku. W praktyce, przeciwciała humanizowane są zazwyczaj ludzkimi przeciwciałami, w obrębie których pewne reszty CDR i, ewentualnie, pewne reszty FR, podstawiono resztami pochodzącymi z analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno łańcucha lekkiego, jak i ciężkiego, do zastosowania w metodzie otrzymywania przeciwciał humanizowanych jest bardzo istotny ze względu na obniżenie ich antygenności. Zgodnie z tzw. metodą „best-fit”, sekwencja domeny zmiennej przeciwciała gryzonia podlega przeszukiwaniu wobec całej biblioteki znanych ludzkich sekwencji domeny zmiennej. Ludzka sekwencja, najbliższa sekwencji gryzonia, przyjmowana jest jako ludzki region zrębowy przeciwciała humanizowanego (Sims i wsp., J.Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia i wsp., J.Mol.Biol.,
PL 220 113 B1
196: 901 (1987)). W innej metodzie wykorzystywany jest szczególny region zrębowy, pochodzący z sekwencji najwyższej zgodności wszystkich ludzkich przeciwciał należących do danej podgrupy łańcuchów lekkich lub ciężkich. Ten sam region zrębowy może być zastosowany do otrzymania kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 89: 4285 (1992); Presta i wsp., J.Immunol., 151: 2623 (1993)).
Istotne jest również, żeby przeciwciała były humanizowane z zachowaniem wysokiego powinowactwa do antygenu i innych zalecanych właściwości biologicznych. W celu osiągnięcia takiego rezu ltatu, zgodnie z zalecanym sposobem, przeciwciała humanizowane otrzymuje się w wyniku analizy sekwencji i różnych zaprojektowanych produktów humanizowanych, za pomocą trójwymiarowych m odeli wyjściowych i sekwencji humanizowanych. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępne i znane specjalistom w dziedzinie. Dostępne są również programy komputerowe preze ntujące i wykazujące prawdopodobną konformację trójwymiarowej struktury wybranych sekwencji i mmunoglobulin. Analiza ich pozwala na określenie prawdopodobnej roli reszt w funkcjonowaniu badanej sekwencji immunoglobuliny, tj. określenie wpływu tych reszt na zdolność badanej immunoglobuliny do wiązania antygenu. W ten sposób, możliwe jest dokonanie wyboru reszt FR i połączenie z sekwe ncjami biorcy i importowanymi w sposób pozwalający na uzyskanie pożądanych właściwości przeciwciała, takich jak zwiększone powinowactwo względem docelowego antygenu lub antygenów. Ogólnie, reszty CDR bezpośrednio i istotnie uczestniczą w wiązaniu antygenu.
Alternatywnie, możliwe jest obecnie otrzymanie zwierząt transgenicznych (np. myszy) zdolnych, po immunizacji, do produkcji pełnego zestawu ludzkich przeciwciał, przy braku produkcji immunogl obulin endogennych. Na przykład, opisano, że homozygotyczna delecja regionu genu łączącego łańcuch ciężki przeciwciała (JH) w chimerowych i zarodkowych mysich mutantach skutkuje całkowitym zahamowaniem produkcji endogennych przeciwciał. Przeniesienie macierzy genów immunoglobulin ludzkiej linii zarodkowej do takiej zmutowanej linii zarodkowej myszy wywołuje po prowokacji antygenem produkcję przeciwciał ludzkich. Patrz np., Jakobovits i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann i wsp., Year in Immuno., 7: 33 (1993) oraz Duchosal i wsp., Nature, 355: 258 (1992). Ludzkie przeciwciała mogą również być otrzymane z bibliotek prezentacji na fagach (Hoogenboom i wsp., J.Mol.Biol., 227: 381 (1991); Marks i wsp., J.Mol.Biol., 222: 581-597 (1991); Vaughan i wsp., Nature Biotech, 14: 309 (1996)).
(v) Przeciwciała wieloswoiste
Przeciwciała wieloswoiste wykazują specyficzność wiązania względem przynajmniej dwóch różnych antygenów. Cząsteczki takie zazwyczaj wiążą jedynie dwa antygeny (tj. są przeciwciałami biswoistymi, BsAb), jednak pojęcie to obejmuje przeciwciała o dodatkowych swoistościach, takie jak przeciwciała o potrójnej swoistości. Przykłady BsAb obejmują przeciwciała posiadające jedno ramię skierowane przeciwko antygenowi komórki nowotworowej, a drugie skierowane przeciwko cytoto kHER2 sycznej cząsteczce wzbudzającej, takiej jak anty-FcyRI/anty-CD15, anty-p185 /FcyRIII (CD16), anty-CD3/anty-uzłośliwione komórki B (1D10), anty-CD3/anty-p185HER2, anty-CD3/anty-p97, anty-CD3/przeciwko komórce raka nerki, anty-CD3/anty-OVCAR-3, antyCD3/L-D1 (przeciwko rakowi jelita grubego), anty-CD3/anty-analog czynnika stymulującego melanocyty, anty-receptor EGF/anty-CD3, anty-CD3/anty-CAMA1, anty-CD3/anty-CD19, anty-CD3/moV18, anty-cząsteczka adhezji komórek nerwowych (NCAM)/anty-CD3, białko wiążące folian(FBP)/anty-CD3, związany z rakiem anty-antygen AMOC-31 (ang. anti-pan carcinoma associated antigen)(AMOC-31)/anty-CD3; BsAb o jednym ramieniu wiążącym swoiście antygen rakowy i drugim, wiążącym toksynę, takie jak anty-saporyna/anty-Id-1, anty-CD22/anty-saporyna, anty-CD7/anty-saporyna, anty-CD38/anty-saporyna, anty-CEA/przeciwko łańcuchowi A rycyny, anty-interferon-a(IFN-a)/przeciwko idiotypowi hybrydomu, anty-CEA/anty-alkaloid winka; BsAb do konwersji enzymatycznie aktywowanych proleków, takich jak anty-CD30/anty-alkaliczna fosfataza (która katalizuje zamianę proleku fosforanu mitomycyny do alkoholu mitomycynowego); BsAb, które mogą być stosowane jako czynniki fibrynolityczne, takie jak anty-fibryna/anty-tkankowy aktywator plazminogenu (tPA), anty-fibryna/anty-aktywator plazminogenu typu urokinazy (uPA); BsAb do kierowania kompleksów immunologicznych do receptorów powierzchniowo-komórkowych, takie jak anty-lipoproteina o niskiej gęstości (LDL)/anty-receptor Fc (np. FcyRI, FcyRII lub FcyRIII); BsAb do zastosowania w terapii chorób zakaźnych, takie jak anty-CD3/anty-wirus opryszczki (HSV), anty-receptor komórek T: kompleks CD3/anty-wirus grypy, anty-FcyR/anty-HIV; BsAb do wykrywania nowotworów in vitro lub in vivo, takie jak anty-CEA/anty-EOTUBE, antyHER”
-CEA/anty-DPTA, anty-p185 /anty-hapten; BsAb jako adiuwanty szczepionkowe; oraz BsAb jako narzędzia diagnostyczne, takie jak anty-królicza IgG/anty-ferrytyna, anty-peroksydaza chrzanowa
PL 220 113 B1 (HRP)/anty-hormon, anty-somatostatyna/anty-substancja P, anty-HRP/anty-FITC, anty-CEA/anty-β-galaktozydaza. Przykłady przeciwciał o potrójnej swoistości obejmują anty-CD3/anty-CD4/anty-CD37, anty-CD3/anty-CD5/anty-CD37 oraz anty-CD3/anty-CD8/anty-CD37. Przeciwciała o podwójnej swoistości można otrzymywać w postaci pełnej długości przeciwciał lub fragmentów przeciwciał (np. przeciwciała o podwójnej swoistości F(ab')2).
Metody otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości są znane w dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie pełnej długości przeciwciał o podwójnej swoistości opiera się na koekspresji dwóch par łańcucha ciężkiego-łańcucha lekkiego immunoglobulin, w których dwa łańcuchy posiadają różną swoistość (Millstein i wsp., Nature, 305: 537-539 (1983)). Z powodu losowego doboru łańcuchów ciężkich i lekkich hybrydomy te (kwadromy) wytwarzają potencjalnie mieszaninę 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których jedynie jedna posiada właściwą strukturę o podwójnej swoistości. Oczyszczenie tej właściwej cząsteczki, zazwyczaj drogą chromatografii powinowactwa, jest niewygodne, a wydajność procesu jest niska. Podobne procedury opisano w WO 93/08829 i w Traunecker i wsp., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).
Zgodnie z innym podejściem, domeny zmienne przeciwciała o pożądanej swoistości wiązania (miejsca połączenia przeciwciało-antygen) poddaje się fuzji z sekwencjami domeny stałej immunoglobuliny. Fuzja ta dogodnie zachodzi z domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny, zawierającą przynajmniej część regionu zawiasowego, regionów CH2 i CH3. Dogodnie przynajmniej jeden z pr oduktów fuzji obejmuje pierwszy region stały z łańcucha ciężkiego (CH1), zawierający miejsce niezbędne do wiązania łańcucha lekkiego. DNA kodujące fuzje łańcuchów ciężkich immunoglobuliny oraz, w razie potrzeby, łańcuchów lekkich immunoglobuliny, wstawia się do oddzielnych wektorów ekspresyjnych, którymi następnie kotransfekuje się odpowiednie komórki gospodarza. Pozwala to na dużą elastyczność dostosowywania wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydów w przypadku rozwiązań, w których stosuje się nierówne proporcje trzech łańcuchów polipeptydowych, celem zapewnienia optymalnej wydajności. Możliwe jest, jednakże, wstawienie sekwencji kodujących dwa lub trzy łańcuchy polipeptydowe w jednym wektorze ekspresyjnym, gdy ekspresja przynajmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach zapewnia wysoką wydajność, lub gdy proporcje te nie mają żadnego szczególnego znaczenia.
W zalecanym tego rodzaju rozwiązaniu, przeciwciała o podwójnej swoistości składają się z h ybrydowego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny o pierwszej swoistości wiązania w obszarze jednego ramienia, i pary hybrydowych łańcuchów, ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny (dostarczającej drugą swoistość wiązania) na drugim ramieniu. Zaobserwowano, że taka asymetryczna struktura ułatwia rozdzielanie pożądanego składnika o podwójnej swoistości od niepożądanych połączeń łańcuchów immunoglobulin, ponieważ oddzielanie cząsteczek jest łatwiejsze, gdy łańcuch lekki immunoglobuliny obecny jest jedynie w połowie struktury cząsteczki o podwójnej swoistości. Obserwację tę ujawniono w WO 94/04690. Więcej szczegółów na temat otrzymywania przeciwciał o podwójnej swoistości można znaleźć, na przykład, w Suresh i wsp., Methods in Enzymology, 121: 210 (1936). Zgodnie z innym podejściem zaprezentowanym w WO 96/27011, powierzchnia pomiędzy parą cząsteczek przeciwciał może zostać zaprojektowana tak, by procent heterodimerów odzyskiwanych z hodowli komórek rekombinowanych był maksymalny. Zalecana powierzchnia obejmuje przynajmniej część domeny CH3 domeny stałej przeciwciała. W prezentowanym sposobie, jeden, lub więcej małych, aminokwasowych łańcuchów bocznych z powierzchni pierwszej cząsteczki przeciwciała zastępuje się większymi łańc uchami bocznymi (np. tyrozyną lub tryptofanem). Kompensujące „jamy”, o rozmiarach identycznych lub zbliżonych do rozmiarów większego łańcucha lub łańcuchów bocznych tworzy się na powierzchni drugiej cząsteczki przeciwciała poprzez zastąpienie dużych aminokwasowych łańcuchów bocznych mniejszymi (np. alaniny lub treoniny). Sposób ten zapewnia wzrost wydajności otrzymywania heterodimerów w stosunku do niepożądanych produktów końcowych, takich jak homodimery.
Przeciwciała o podwójnej swoistości obejmują przeciwciała sieciowane lub „heterokoniugatowe”. Na przykład, jedno z przeciwciał heterokoniugatu może być sprzęgnięte z awidyną, drugie z biotyną. Zastosowanie takich przeciwciał zaproponowano do nakierowywania, na przykład, komórek układu immunologicznego na komórki niepożądane (Patent USA nr 4, 676, 980) oraz do leczenia infekcji HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 oraz EP 03089). Przeciwciała heterokoniugatowe można otrzymać za pomocą jakiejkolwiek metody sieciowania. Odpowiednie czynniki umożliwiające takie sieciowanie są znane w dziedzinie i ujawnione w Patencie USA nr 4, 676, 980, wraz z licznymi technikami sieciowania.
PL 220 113 B1
Bierze się również pod uwagę przeciwciała o więcej niż dwóch swoistościach. Na przykład, można otrzymywać przeciwciała o potrójnej swoistości. Tutt i wsp., J.Immunol.147 : 60 (1991).
Chociaż polipeptyd będący przedmiotem zainteresowania stanowi dogodnie przeciwciało, to bierze się tu również pod uwagę inne polipeptydy zawierające region Fc, które można modyfikować, zgodnie z opisanymi tu sposobami. Przykładem takiej cząsteczki jest immunoadhezyna.
C. Otrzymywanie immunoadhezyny
Najprostsza immunoadhezyna zawiera domenę lub domeny wiążące adhezyny (np. zewnątrzkomórkową domenę receptora (EDC)) wraz z regionem Fc łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Zw ykle, w celu otrzymania opisanej tu immunoadhezyny, kwas nukleinowy, kodujący domenę wiążącą tej adhezyny jest poddawany fuzji od strony C-końca z kwasem nukleinowym kodującym N-koniec sekwencji domeny stałej immunoglobuliny, możliwe są, jednakże, również fuzje od strony N-końca.
Zazwyczaj w takich fuzjach kodowany chimerowy polipeptyd zachowuje przynajmniej funkcjonalnie aktywny zawias, domeny CH2 i CH3 regionu stałego łańcucha ciężkiego immunoglobuliny. Fuzje przeprowadza się także od strony C-końca fragmentu Fc domeny stałej, lub bezpośrednio, od N-końca CH1 łańcucha ciężkiego lub odpowiadającego temu obszarowi regionu łańcucha lekkiego. Dokładne miejsce przeprowadzenia fuzji nie jest krytyczne; poszczególne miejsca są dobrze znane i można je tak wybrać, żeby zoptymalizować aktywność biologiczną, wydzielanie lub właściwości wiązania immunoadhezyny.
W zalecanym rozwiązaniu sekwencja adhezyny poddawana jest fuzji z N-końcem regionu Fc immunoglobuliny G1 (IgG1). Możliwa jest przy tym fuzja całego regionu stałego łańcucha ciężkiego z sekwencją adhezyny. Jednakże, dogodniej fuzji poddaje się sekwencję rozpoczynającą się w regionie zawiasowym, tuż powyżej miejsca cięcia papainą, które określa chemicznie Fc IgG (np. reszta 216, przyjmując resztę 114 za pierwszą resztę regionu stałego łańcucha ciężkiego), lub w analogic znych miejscach innych immunoglobulin. W szczególnie zalecanym rozwiązaniu sekwencję aminokwasową adhezyny poddaje się fuzji z (a) regionem zawiasowym oraz CH2 i CH3 lub (b) CH1, regionem zawiasowym, domeną CH2 oraz CH3 łańcucha ciężkiego IgG.
W przypadku immunoadhezyn o podwójnej swoistości, immunoadhezyny tworzą multimery, a w szczególności heterodimery lub heterotetramery. Ogólnie, takie multimetryczne immunoglobuliny będą w postaci znanych jednostek strukturalnych. Podstawowa, czterołańcuchowa, jednostka strukturalna jest postacią, w jakiej występuje IgG, IgD oraz IgE. Jednostka czterołańcuchowa powtarzana jest w immunoglobulinach o wyższej masie cząsteczkowej; IgM ogólnie występuje w postaci pentameru, składającego się z czterech podstawowych jednostek połączonych ze sobą wiązaniami disiarczkowymi. W postaci multimeru w surowicy może występować również globulina IgA i czasem, globulina IgG. W przypadku postaci multimetru, każda z czterech jednostek może być taka sama lub inna.
Poniżej, przedstawiono schematycznie różne przykłady opisanych tu immunoadhezyn złożonych:
(a) ACl-ACl;
(b) ACh-(ACh, ACl-ACh, ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(c) ACl-ACh-(ACl-ACh, ACl-VhCh, VlCl-ACh lub VlCl-VhCh);
(d) ACl-VhCh-(ACh lub ACl-VhCh lub VlCl-ACh);
(e) VlCl-ACh-(ACl-VhCh lub VlCl-ACh); oraz (f) (A-YMVlCl-VhCh)2, gdzie każda litera A oznacza identyczne lub różne sekwencje aminokwasowe adhezyn;
VL oznacza domeną zmienną łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
VH oznacza domeną zmienną łańcucha ciężkiego immunoglobuliny;
CL oznacza domeną stałą łańcucha lekkiego immunoglobuliny;
CH oznacza domeną stałą łańcucha ciężkiego immunoglobuliny; n oznacza liczbę całkowitą większą niż 1;
Y oznacza resztę czynnika sieciującego.
Dla zwięzłości w powyższych strukturach zaznaczono jedynie kluczowe cechy; nie wskazano w nich ani domeny łączącej (J) lub innych domen immunoglobulin, ani też wiązań disiarczkowych. Jednakże, gdy domeny te wymagane są do przejawienia aktywności biologicznej, należy przyjąć, że występują one w typowych lokalizacjach występowania w cząsteczkach immunoglobulin.
Alternatywnie, sekwencje adhezyn można wstawić pomiędzy sekwencje łańcucha ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny, w taki sposób, że immunoglobulina zawiera chimerowy łańcuch ciężki. W takim rozwiązaniu sekwencje adhezyny poddaje się fuzji z 3' końcem łańcucha ciężkiego immunoglobuliny w każdym ramieniu, albo pomiędzy regionem zawiasowym a domeną CH2, albo pomiędzy
PL 220 113 B1 domenami CH2 a CH3. Podobne struktury opisane zostały przez Hoogenboom i wsp., Mol.Immunol. 28: 1027-1037 (1991).
Chociaż w opisanych tu immunoadhezynach nie jest wymagana obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny, to łańcuch ten może być obecny w strukturze, albo w postaci kowalencyjnie związanej z polipeptydem fuzyjnym adhezyjna-łańcuch ciężki immunoglobuliny, albo w postaci fuzji bezpośrednio z adhezyną. W ostatnim przypadku, DNA kodujący łańcuch lekki immunoglobuliny ulega zazwyczaj koekspresji z DNA kodującym białko fuzyjne adhezyna-łańcuch ciężki immunoglobuliny. Po wydzieleniu hybrydowy łańcuch ciężki i łańcuch lekki będą miały postać kowalencyjnie związaną c elem uzyskania struktury immunoglobulino-podobnej, zawierającej dwie połączone za pomocą wiązań disiarczkowych pary łańcuchów: ciężkich i lekkich. Odpowiednie sposoby, pozwalające na otrzymanie takich struktur ujawniono, na przykład, w Patencie USA nr 4, 816, 567, wydanym 28 marca 1989r.
Immunoadhezyny zazwyczaj otrzymuje się poprzez fuzję sekwencji cDNA kodującej fragment adhezyny w ramce odczytu z sekwencją cDNA immunoglobuliny. Jednakże, zastosować można również fuzję z genomowymi fragmentami immunoglobuliny (patrz, np. Aruffo i wsp., Cell 61: 1303-1313 (1990) oraz Stamenkovic i wsp., Cell 66: 1133-1144 (1991)). W przypadku ostatniego typu fuzji do ekspresji wymagana jest obecność sekwencji regulatorowych Ig. cDNA kodujące regiony stałe łańcucha ciężkiego IgG można wyizolować w oparciu o opublikowane sekwencje pochodzące z bibliotek cDNA pochodzących z limfocytów ze śledziony lub krwi obwodowej, z zastosowaniem technik hybrydyzacji lub łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR). cDNA kodujący części „adhezyny” i immunoglobuliny cząsteczki immunoadhezyny wstawia się razem do wektora plazmidowego, wywołującego wydajną ekspresję w wybranych komórkach gospodarza.
D. Wektory, komórki gospodarza i sposoby rekombinacji
Zgodnie z wynalazkiem opisano wyizolowany kwas nukleinowy kodujący ujawniony tu wariant polipeptydu, wektory i komórki gospodarza oraz techniki rekombinacji, pozwalające na otrzymanie wariantu polipeptydu.
W celu otrzymania wariantu polipeptydu za pomocą techniki rekombinacji kodujący go kwas nukleinowy izoluje się, a następnie wstawia do odpowiedniego wektora do replikacji w celu dalszego klonowania (amplifikacji DNA) lub ekspresji. DNA kodujący wariant polipeptydu łatwo izoluje się i sekwencjonuje za pomocą konwencjonalnych procedur (np. z zastosowaniem sond oligonukleinowych zdolnych do specyficznego wiązania genów kodujących wariant polipeptydu). Dostępnych jest wiele wektorów. Wektor składa się, ogólnie, lecz bez ograniczenia, z jednego lub więcej spośród następujących elementów: sekwencji sygnałowej, miejsca początku replikacji, jednego lub więcej genów markerowych, elementu wzmacniającego (enhancer), promotora i sekwencji terminacji transkrypcji.
(i) Element sekwencji sygnałowej
Opisany tu wariant polipeptydu może być otrzymany drogą rekombinacji, nie tylko bezpośrednio, ale również jako polipeptyd fuzyjny z polipeptydem heterologicznym, który dogodnie jest sekwe ncją sygnałową lub innym polipeptydem posiadającym specyficzne miejsce cięcia na N-końcu dojrzałego białka lub polipeptydu. Dogodnie wybraną sekwencją sygnałową jest sekwencja rozpoznawana i przekształcana przez komórki gospodarza (tj. cięta przez peptydazę sygnałową). W przypadku prokariotycznych komórek gospodarza, nie rozpoznających i nie przekształcających natywnej sekwencji sygnałowej wariantu polipeptydu, sekwencją tą zastąpuje się odpowiednią prokariotyczną sekwencją sygnałową wybraną, na przykład, z grupy sekwencji liderowych alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, Ipp lub termostabilnej enterotoksyny II. W przypadku wydzielania przez komórki drożdży natywną sekwencję sygnałową można podstawić, np. drożdżową sekwencją liderową inwertazy, czynnika α (włączając sekwencje liderowe czynników α Saccharomyces i Kluyveromyces) lub kwaśnej fosfatazy, glukoamylazy z C.albicans lub sekwencji sygnałowych opisanych w WO 90/13646. W przypadku ekspresji w komórkach ssaczych dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe wydzie lnicze sekwencje liderowe, na przykład, sekwencja sygnałowa gD wirusa opryszczki.
DNA takiego regionu prekursorowego poddaje się ligacji w ramce odczytu z DNA kodującym wariant polipeptydu.
(II) Element miejsca początku replikacji
Zarówno wektory ekspresyjne, jak i wektory do klonowania, zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, pozwalającą na replikację wektora w jednej lub więcej wybranych komórkach gospodarza. Ogólnie, w wektorach do klonowania sekwencją tą jest sekwencja, która umożliwia niezależną od chromosowego DNA gospodarza replikację wektora oraz zawiera miejsce początku replikacji lub autonomicznie replikujące sekwencje. Sekwencje te są dobrze znane dla wielu bakterii, drożdży i wirusów.
PL 220 113 B1
Miejsce początku replikacji plazmidu pBR322 jest odpowiednie dla większości bakterii Gram-ujemnych, miejsce początku replikacji plazmidu 2μ jest odpowiednie dla drożdży, natomiast dla wektorów do klonowania w komórkach ssaczych odpowiednie są miejsca początku replikacji różnych wirusów (SV40, polioma, adenowirus, VSV lub BPV). Ogólnie, element miejsca początku replikacji nie jest niezbędny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (miejsce początku replikacji z SV40 stosowane jest zazwyczaj jedynie z tego powodu, że zawiera wczesny promotor).
(iii) Element genu selekcyjnego
Wektory do klonowania i wektory ekspresyjne mogą zawierać gen selekcji, zwany również markerem selekcyjnym. Zazwyczaj geny selekcyjne kodują białka, które (a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np. ampicylinę, metotreksat lub tetracyklinę, (b) uzupełniają auksotroficzne niedobory, lub (c) dostarczają istotnych składników odżywczych, niedostępnych w pożywkach złożonych, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
W jednym z przykładów schematu selekcji w celu zahamowania wzrostu komórek gospodarza wykorzystuje się lek. Te komórki, które zostały skutecznie transformowane heterologicznym genem, wytwarzają białko nadające oporność na lek, i przeżywają zatem w warunkach schematu selekcji. Przykładem takiej selekcji dominującej jest zastosowanie leków, takich jak neomycyna, kwas mykofenolowy i higromycyna.
Innym przykładem odpowiednich markerów selekcyjnych dla komórek ssaczych są markery, które pozwalają na identyfikację komórek, które są kompetentne do pobrania kwasu nukleinowego kodującego wariant polipeptydu, takie jak DHFR, kinaza tymidynowa, metalotioneina I i II, zwłaszcza geny metalotioneiny naczelnych, deaminazy adenozynowej, dekarboksylazy ornitynowej, itp.
Na przykład, komórki transformowane genem selekcyjnym DHFR najpierw identyfikuje się poprzez hodowlę wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej zawierającej metotreksat (Mtx), antagonistę kompetycyjnego DHFR. W przypadku dzikiego typu DHFR odpowiednią komórką gospodarza jest linia komórkowa komórek jajnika chomika chińskiego (CHO), bez aktywności DHFR.
Alternatywnie, komórki gospodarza (szczególnie dzikiego typu zawierające endogenną DHFR), transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi wariant polipeptydu, białka DHFR dzikiego typu i inny marker selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferaza aminoglikozydowa (APH), mogą być poddawane selekcji poprzez wzrost komórek w pożywce zawierającej czynnik selekcyjny dla markera selekcyjnego, taki jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycyna, neomycyna lub G418. Patrz Patent USA nr 4, 965, 199.
Odpowiednim genem selekcyjnym do zastosowania w przypadku drożdży jest gen trp1 obecny w plazmidzie drożdżowym Yrp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282: 39 (1979)). Gen trp1 dostarcza markera selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży, pozbawionego zdolności do wzrostu na tryptofanie, na przykład, ATCC Nr 44076 lub PEP4-1. Jones, Genetics, 85: 12 (1977). Obecność uszkodzonego trp1 w genomie drożdżowych komórek gospodarza zapewnia skuteczne warunki do wykrywania transformacji poprzez hodowlę bez tryptofanu. Podobnie, zdolność do wzrostu szczepów drożdży nie posiadających Leu2 (ATCC 20,622 lub 38,626) jest uzupełniana za pomocą plazmidów dostarczających gen Leu2.
Ponadto, wektory pochodzące z 1,6 μm, kolistego plazmidu pKD1 mogą być wykorzystane do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, dla K.lactis opisano system ekspresji do wytwarzania na dużą skalę rekombinowanej chymozyny cielęcej. Van den Berg, Bio/Technology, 8; 135 (1990). Ujawniono również stabilne, wielokopijne wektory ekspresyjne służące do wydzielania dojrzałej, rekombinowanej, ludzkiej albuminy przez szczepy drożdży przemysłowych Kluyveromyces. Fleer i wsp., Bio/Technology, 9: 968-975 (1991).
(iv) Element promotora
Wektory ekspresyjne i wektory do klonowania zazwyczaj posiadają rozpoznawany przez organizm gospodarza promotor, operacyjnie przyłączony do kwasu nukleinowego wariantu polipeptydu. Odpowiednie do zastosowania w prokariotycznych komórkach gospodarza promotory obejmują układy promotora phoA, β-laktamazy i laktozy, układ promotora alkalicznej fosfatazy, tryptofanu (trp) oraz promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże, odpowiednie są również inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w układach bakteryjnych zawierają także sekwencję Shine-Dalgarno, połączoną operacyjnie z DNA kodującym wariant polipeptydu.
Znane są sekwencje promotorowe dla Eukariotów. Prawie wszystkie geny eukariotyczne posi adają region bogaty w reszty AT, zlokalizowany w przybliżeniu 25 do 30 reszt powyżej miejsca, gdzie rozpoczyna się transkrypcja. Inną sekwencją występującą w wielu genach 70 do 80 reszt powyżej
PL 220 113 B1 miejsca rozpoczęcia transkrypcji jest region CNCAAT, gdzie N jest dowolnym nukleotydem. Przy 3'-końcu większości genów eukariotycznych znajduje się sekwencja AATAAA, która może stanowić sygnał do dodania ogona poli-A do 3'-końca sekwencji kodującej. Wszystkie te sekwencje odpowiednio wstawia się do eukariotycznych wektorów ekspresyjnych.
Przykładami odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania w drożdżowych komórkach gospodarza są kinaza 3-fosfoglicerynianowa lub inne enzymy glikolityczne, takie jak enolaza, dehydrogenaza gliceroaldehyd-3-fosforanowa, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza glukozo-6-fosforanowa, mutaza 3-fosfoglicerynianowa, kinaza pirogronianowa, izomeraza triozofosforanowa, izomeraza fosfoglukozowa i glukokinaza.
Innymi promotorami drożdżowymi są promotory indukowalne, pozwalające na dogodną kontrolę transkrypcji poprzez warunki wzrostu, takie jak regiony promotorowe dla dehydrogenazy alkoholowej 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów degradacyjnych związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy gliceroaldehyd-3-fosforanowej oraz enzymów odpowiedzialnych za wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania w przypadku ekspresji u drożdży opisano ponadto w EP 73,657. Wraz z promotorami drożdżowymi dogodnie stosuje się drożdżowe sekwencje wzmacniające.
Transkrypcja wariantu polipeptydu z wektorów w ssaczych komórkach gospodarza jest kontrolowana, na przykład, przez promotory otrzymane z genomu wirusów, takich jak wirus polioma, wirus ospy ptasiej, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), wirus brodawczaka wołowego, wirus mięsaka ptaków, cytomegalowirus, retrowirus, wirus zapalenia wątroby typu B i w szczególności, Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np. promotor aktyny lub promotor immunoglobuliny, z promotorów genów szoku cieplnego, pod warunkiem że, promotory te są kompatybilne z układem komórek gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 otrzymuje się zazwyczaj z fragmentu restrykcyjnego SV40, zawierającego również miejsce początku replikacji wirusa SV40. Bardzo wczesny promotor ludzkiego cytomegalowirusa dogodnie otrzymuje się w postaci fragmentu restrykcyjnego HindIIIE. Układ do ekspresji DNA w ssaczych komórkach gospodarza wykorzystujący jako wektor wirus brodawczaka wołowego ujawniono w Patencie USA nr 4,601,978. Patrz również Reyes i wsp., Nature 297: 598-601 (1982), gdzie omówiono ekspresję cDNA ludzkiego interferonu β w mysich komórkach pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki. Alternatywnie, w funkcji promotora może być zastosowane długie końcowe powtórzenie z wirusa mięsaka Rous'a.
(v) Element wzmacniający
Transkrypcję DNA kodującego opisany tu wariant polipeptydu u wyższych Eukariotów często zwiększa się poprzez wstawienie sekwencji wzmacniających do wektora. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniających, pochodzących z genów ssaczych (globina, elastaza, albumina, α-fetoproteina oraz insulina). Jednakże zazwyczaj możliwe jest zastosowanie sekwencji wzmacniającej pochodzącej z wirusa komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują sekwencje wzmacniające SV40, po stronie późnej miejsca początku replikacji (100-270 pz), sekwencje wzmacniające wczesnego promotora cytomegalowirusa, sekwencje wzmacniające wirusa polioma po stronie późnej miejsca początku repl ikacji i sekwencje wzmacniające adenowirusa. Patrz również, Yaniv, Nature 297; 17-18 (1982), gdzie opisano elementy wzmacniające aktywację promotorów eukariotycznych. Sekwencja wzmacniająca może być wstawiona do wektora w pozycji 5' lub 3' względem sekwencji kodującej wariant polipept ydu, lecz zalecaną lokalizacją jest położenie 5' od promotora.
(vi) Element terminacji transkrypcji
Wektory ekspresyjne stosowane w eukariotycznych komórkach gospodarza (drożdże, grzyby, owady, rośliny, zwierzęta, ludzie lub komórki jądrowe innych organizmów wielokomórkowych) obejm ują również sekwencje niezbędne do terminacji transkrypcji i stabilizacji mRNA. Sekwencje te powszechnie występują od 5' końca, czasami końca 3', niepodlegających translacji regionów DNA lub cDNA eukariotycznego lub wirusowego. Regiony te zawierają segmenty nukleotydowe transkrybowane w postaci poliadenylowanych fragmentów w niepodlegającym translacji regionie mRNA kodującego wariant polipeptydu. Jednym z użytecznych elementów terminacji transkrypcji jest region poliadenyl acji wołowego hormonu wzrostu. Patrz WO 94/11026 i zawarty tam opis wektora ekspresyjnego.
(vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednimi komórkami gospodarza do klonowania lub ekspresji DNA w wektorach są opisane powyżej komórki prokariotyczne, drożdżowe lub komórki wyższych Eukariotów. Odpowiednie do tego celu komórki prokariotyczne obejmują eubacteria, takie jak mikroorganizmy Gram-ujemne lub
PL 220 113 B1
Gram-dodatnie, na przykład, Enterobacteriaceae, takie jak Escherichia, np. E.coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np. Salmonella typhimurium, Serratia, np. Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacillus, np. B.subtilis i B.licheniformis (np. B.licheniformis 41P, zawarty w DD 266,710, opublikowany 12 kwietnia 1989), Pseudomonas, np. P. aeruginosa i Streptomyces. Jednymi z zalecanych komórek gospodarza E.coli do klonowania są komórki E.coli294 (ATCC 31,446), jednak odpowiednie są również inne szczepy, takie jak E.coliB, E.coliX1776 (ATCC 31,537) i E.coliW3110 (ATCC 27,325). Wymienione tu szczepy nie służą ograniczeniu, ale podane zostały jedynie przykładowo.
Oprócz mikroorganizmów prokariotycznych, również mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak grzyby strzępkowate lub drożdże, są odpowiednie do klonowania i ekspresji gospodarzami dla wektorów kodujących wariant polipeptydu. Spośród niższych Eukariotów najpowszechniej stosowanymi mikroorganizmami gospodarza są drożdże Saccharomyces cerevisiae, lub powszechnie znane drożdże piekarskie. Jednakże, powszechnie dostępne są i użyteczne w niniejszym wynalazku liczne inne rodzaje, gatunki i szczepy, takie jak Schizosaccharomyces pombe : Kluyveromyces, tak jak np., K.lactis, K.fragilis (ATCC 12,424), K.bulgaricus (ATCC 16,045), K.wickeramii (ATCC 24,178), K.waltii (ATCC 56,500), K.drosophilarum (ATCC 36,906), K. thermotolerans i K.marxianus; Yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, tak jak Schwanniomyces occidentalis i grzyby strzępkowe, takie jak, np., Neurospora, Penicillium, Tolypocladium oraz Aspergillus, takie jak A.nidulans i A.niger.
Odpowiednie komórki gospodarza do ekspresji glikozylowanego wariantu polipeptydu pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i owadzie. Zidentyfikowano liczne szczepy i warianty bakulowirusowe oraz odpowiednie permisywne owadzie komórki gospodarza, z gospodarzy takich jak Spodoptera frugiperda (gąsienica), Aedes aegypti (komar), Aedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) oraz Bombyx mori. Dostępnych jest wiele szczepów wirusowych do transfekcji, np. wariant L-1 Autographa californica NPV oraz szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i wirusy te mogą być stosowane zgodnie z niniejszym wynalazkiem, w szczególności do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Jako organizmy gospodarza mogą być również wykorzystane hodowle komórek roślinnych bawełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu.
Jednakże, bardziej interesujące były komórki kręgowców, i dlatego namnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowle tkankowe) stało się powszechnie stosowaną procedurą. Przykładami użytecznych ssaczych linii komórek gospodarza są linia komórek nerki małpy transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linia komórek embrionalnych nerki człowieka (komórki 293 lub 293 subklonowane do wzrostu w zawiesinie, Graham i wsp., J.Gen Virol. 36:59 (1977); komórki nerki młodego chomika (BHK, ATCC CCL10); komórki jajnika chomika chińskiego/-DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77: 4216 (1980)); komórki Sertoliego myszy (TM4, Mather, Biol.Reprod. 23: 243-251 (1980)); komórki nerki małpy (CV1 ATCC CCL 70); komórki nerki afrykańskiej małpy zielonej (VERO-76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL2).; komórki nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątroby szczura (Buffalo)(BRL 3A, ATCC CRL 1442); komórki płuca człowieka (W138, ATCC CCL 75); komórki wątroby człowieka (Hep G2, HB 8065); komórki raka sutka myszy (MMT 060562, ATCC CCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N.Y.Acad.Sci. 383: 44-68 (1982)); komórki MRC5; komórki FS4 oraz linia komórek ludzkiego wątrobiaka (Hep G2).
W celu otrzymania wariantu polipeptydu komórki gospodarza poddaje się transformacji za pomocą wyżej wymienionych wektorów ekspresyjnych lub do klonowania, i hodowli w konwencjonalnych pożywkach odżywczych, zmodyfikowanych odpowiednio do indukcji promotorów, selekcji transformantów lub amplifikacji genów kodujących pożądane sekwencje.
(viii) Hodowla komórek gospodarza
Komórki gospodarza stosowane do produkcji opisanego tu wariantu polipeptydu mogą być hodowane w rozmaitych pożywkach. Do hodowli takich komórek gospodarza odpowiednie są dostępne handlowo pożywki, takie jak pożywka Ham'a F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) oraz Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma). Ponadto, jako pożywki hodowlane dla komórek gospodarza może być zastosowana jakakolwiek pożywka opisana w Ham i wsp., Meth.Enz. 58: 44 (1979), Bames i wsp., A102: 255 (1980), U.S. Patent No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655 lub 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195 lub US. Patent Re. 30,985. Jakakolwiek z tych pożywek może być, w razie potrzeby, uzupełniona hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostu (takimi jak insulina, transferyna lub naskórkowy czynnik wzrostu), solami (takimi
PL 220 113 B1 jak chlorek sodu, wapnia, magnezu i fosforan), buforami (takimi jak HEPES), nukleotydami (takimi jak adenozyna i tymidyna), antybiotykami (takimi jak GENTAMYCYNA™), pierwiastkami śladowymi (zdefiniowanymi jako związki nieorganiczne obecne zazwyczaj w końcowych stężeniach rzędu mikromola) oraz glukozą lub równoważnym źródłem energii. Do pożywki można dodać jakiekolwiek inne dodatki w odpowiednich stężeniach, znanych specjalistom w dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH itp., są takie jak stosowano już uprzednio do selekcji komórek gospodarza do ekspresji, i są znane specjalistom w dziedzinie.
(ix) Oczyszczanie wariantu polipeptydu
W przypadku stosowania technik rekombinacyjnych wariant polipeptydu można otrzymywać wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni peryplazmatycznej, lub w postaci bezpośrednio wydzielanej do pożywki. Jeżeli wariant polipeptydu wytwarza się wewnątrzkomórkowo, to w pierwszym etapie usuwa się szczątki, albo komórek gospodarza albo fragmentów poddanych lizie, na przykład drogą wirowania lub ultrafiltracji. Carter i wsp., Bio/Technology 10: 163-167 (1992) opisali procedurę izolacji przeciwciał wydzielanych do przestrzeni peryplazmatycznej E.coli. W skrócie, pastę komórkową rozmraża się w obecności octanu sodu (pH 3,5), EDTA i fluorku fenylometylosulfonylu (PMSF) przez około 30 min. Szczątki można usunąć drogą wirowania. W przypadku gdy wariant polipeptydu wydzielany jest do podłoża, supernatanty z takich układów ekspresyjnych zazwyczaj zatęża się za pomocą dostępnych handlowo filtrów odpowiednich do zatężania białek, na przykład, Amicon lub Millipore Pellicon ultrafiltracion unit. W celu zahamowania proteolizy na jakimkolwiek etapie można dodać inhibitor proteazy, taki jak PMSF, jak również antybiotyki, zapobiegające wzrostowi przypadkowej mikroflory zanieczyszczającej.
Kompozycja wariantu polipeptydu otrzymana z komórek może być poddana oczyszczaniu za pomocą, na przykład, chromatografii na hydroksyapatycie, elektroforezy żelowej, dializy i chromatografii powinowactwa, przy czym ta ostatnia technika jest zalecaną techniką oczyszczania. Skuteczność białka A jako liganda powinowactwa zależy od gatunku i odmiany izotypowej jakiegokolwiek regionu Fc immunoglobuliny, obecnego w wariancie polipeptydu. Białko A może być stosowane do oczyszczania wariantów polipeptydów opartych na ludzkich łańcuchach ciężkich y1, y2 lub y4 (Lidmark i wsp., J.Immunol.Meth. 62: 1-13 (1983)). Białko G jest polecane w przypadku wszystkich mysich odmian izotypowych oraz w przypadku ludzkiego y3 (Guss i wsp., EMBO J. 5: 1567-1575 (1986)). W większości przypadków macierzą, do której przyłączony jest ligand jest agaroza, lecz dostępne również są inne macierze. Macierze mechanicznie stabilne, takie jak szkło o kontrolowanej porowatości lub poli(styrenodiwynylo)benzen, pozwalają osiągnąć szybszy przepływ i krótszy czas oczyszczania niż w przypadku zastosowania agarozy. W przypadku oczyszczania wariantu polipeptydu zawierającego domenę CH3 użyteczna jest żywica Bakerbond ABX™ (J.T.Baker, Phillipsburg, NJ). W zależności od oczyszczanego wariantu polipeptydu mogą być zastosowane także inne techniki oczyszczania białka, takie jak frakcjonowanie na kolumnie do chromatografii jonowymiennej, wytrącanie etan olem, HPLC z odwróconą fazą, chromatografia na krzemionce, chromatografia na SEPHAROSE™ z heparyną, chromatografia kationowymienna lub anionowymienna na żywicy (taka jak na kolumnie z kwasem poliasparaginowym), ogniskowanie chromatograficzne, SDS-PAGE oraz wytrącanie siarczanem amonu.
Po jakimkolwiek z etapów oczyszczania mieszaninę wariantu polipeptydu będącego przedmiotem zainteresowania i zanieczyszczeń można poddać chromatografii oddziaływań hydrofobowych w niskim pH, z wykorzystaniem buforu elucyjnego w pH 2,5-4,5, dogodnie przy niskich stężeniach soli (np. od około 0-0,25 M soli).
E. Preparaty farmaceutyczne
Preparaty terapeutyczne wariantu polipeptydu przygotowuje się do przechowywania poprzez wymieszanie wariantu polipeptydu o pożądanym stopniu czystości z dowolnymi, farmaceutycznie akceptowanymi, nośnikami, zaróbkami lub substancjami stabilizującymi (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Ed., Osol, A.Ed. (1960)), w postaci preparatów liofilizowanych lub roztworów wodnych. Akceptowalne nośniki, zaróbki lub substancje stabilizujące są nietoksyczne dla przyjmujących lek w stosowanych dawkach i stężeniach, i obejmują bufory, takie jak fosforanowy, cytrynianowy i bufory innych kwasów organicznych; antyutleniacze, włączając kwas askorbinowy i metioninę; konserwanty (takie jak chlorek oktadecylodimetylobenzyloamonu; chlorek heksametonium; chlorek benzalkonium; chlorek benzetonium; fenol, alkohol butylowy lub benzylowy; parabeny alkilowe, takie jak paraben metylu lub propylu; katechol; rezorcynol; cykloheksanol; 3-pentanol oraz m-krezol); polipeptyd o niskiej masie cząsteczkowej (krótszy niż około 10 reszt); białka, takie jak albumina surowicy, żelatyna
PL 220 113 B1 lub immunoglobuliny; hydrofilowe polimery, takie jak poliwinylopirolidon; aminokwasy, takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histydyna, arginina lub lizyna; monosacharydy, dwusacharydy i inne węglowodany, włączając glukozę, mannozę lub dekstryny; czynniki chelatujące, takie jak EDTA; cukry, takie jak sacharoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol, tworzące sole przeciwjony, takie jak sód,; kompleksy z jonami metali (np. kompleksy Zn-białko) i/lub surfaktanty niejonowe, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Opisywany tu preparat może również zawierać więcej niż jeden związek czynny, jeżeli jest to niezbędne w przypadku danego wskazania terapeutycznego, dogodnie takie, które mają komplementarne aktywności, i które nie wpływają niekorzystnie na siebie. Cząsteczki te występują dogodnie w połączeniach, w ilościach odpowiednich dla zamierzonego celu.
Składniki czynne mogą również być zawarte w mikrokapsułkach otrzymanych, na przykład, techniką koacerwacji lub polimeryzacji międzyfazowej, na przykład, odpowiednio mikrokapsułkach hydroksymetylocelulozowych lub żelatynowych oraz z polimetakrylanu metylu, w koloidalnych ukł adach dostarczania leku (na przykład liposomy, mikrosfery albumiowe, mikroemulsje, nanocząsteczki i nanokapsułki) lub makroemulsje. Techniki te opisano w Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., Osol, A.Ed. (1980).
Preparaty do podawania in vivo muszą być sterylne. Można to łatwo uzyskać poprzez filtrację przez sterylne błony do filtracji.
Możliwe jest przygotowanie preparatów o przedłużonym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o przedłużonym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne matryce ze stałych polimerów hydrofobowych zawierających wariant polipeptydu, przy czym matryce te mają różną postać, np. warstwy lub mikrokapsułki. Przykładami matryc o przedłużonym uwalnianiu są poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) lub alkohol poliwinylowy, polilaktydy (Patent USA nr 3,773,919), kopolimery kwasu L-glutaminowego i γ-etylo L-glutaninianu, niedegradowalny octan etyleno-winylu, degradowalne kopolimery kwasu mlekowego i kwasu glikolowego, takie jak LUPRON DEPOT™ (wstrzykiwalne mikrosfery składające się z kopolimeru kwasu mlekowego i kwasu glikolowego oraz octanu leuprolidu), oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksymasłowy. Podczas gdy polimery, takie jak octan etyleno-winylu i kwas mlekowy-kwas glikolowy, pozwalają na uwalnianie cząsteczek przez ponad 100 dni, to pewne hydrożele uwalniają białka przez krótsze okresy czasu. W przypadku gdy znajdujące się w kapsułkach przeciwciała pozostają w organizmie przez dłuższy czas, mogą one ul egać denaturacji lub agregacji na skutek panujących warunków wilgotności w temperaturze 37°C, powodujących brak aktywności biologicznej i możliwe zmiany immunogenności. W zależności od m echanizmu działania opracować można racjonalne strategie. Na przykład, w przypadku wystąpienia procesu agregacji, przebiegającego w wyniku powstawania międzycząsteczkowych wiązań disiarczkowych S-S poprzez wymianę grup tio-disiarczkowych, stabilizację można uzyskać poprzez modyfikację reszt sulfhydrylowych, liofilizację z kwaśnych roztworów, kontrolę wilgotności, zastosowanie odpowiednich dodatków i opracowanie specyficznych kompozycji matrycy polimerowej.
F. Nieterapeutyczne zastosowania wariantu polipeptydu
Opisany tu wariant polipeptydu może być zastosowany jako czynnik do oczyszczania przez p owinowactwo. W procesie tym, wariant polipeptydu immobilizuje się jest na fazie stałej, takiej jak żywica Sephadex lub papier filtracyjny, za pomocą dobrze znanych w dziedzinie metod. Immobilizowany w ariant polipeptydu kontaktuje się z próbką zawierającą oczyszczany antygen, a następnie nośnik płucze się odpowiednim rozpuszczalnikiem, usuwającym zasadniczo wszystkie składniki z próbki, za wyją tkiem oczyszczanego antygenu związanego z immobilizowanym wariantem polipeptydu. Ostatecznie, nośnik płucze się odpowiednim innym rozpuszczalnikiem, takim jak bufor glicynowy, pH 5,0, który uwalnia oczyszczany antygen od wariantu polipeptydu.
Wariant polipeptydu może być również użyteczny w testach diagnostycznych, np. do wykryw ania ekspresji antygenu będącego przedmiotem zainteresowania w specyficznych komórkach, tkankach lub surowicy.
Do celów diagnostycznych wariant polipeptydu zazwyczaj bedzie znakowany za pomocą wykrywalnych ugrupowań. Dostępne są liczne znaczniki, które ogólnie można podzielić na następujące grupy:
(a) radioizotopy, takie jak 35S, 14C, 125I, 3H i 131I.
Wariant polipeptydu może być znakowany izotopowo przykładowo za pomocą technik opisanych w Current Protocols in Immunology, tom 1 i 2, Coligen i wsp., Ed. Wiley-Interscience, New York, New York Pubs. (1991), a radioaktywność można mierzyć za pomocą licznika scyntylacyjnego.
PL 220 113 B1 (b) znaczniki fluorescencyjne, które można zastosować to chelaty metali ziem rzadkich (chelaty europu) lub fluoresceina i jej pochodne, rodamina i jej pochodne, dansyl, lissamina, fikoerytryna i barwnik Texas Red. Znaczniki fluorescencyjne można sprzęgać z wariantem polipeptydu za pomocą technik ujawnionych, na przykład, w Current Protocols in Immunology, jak powyżej. Fluorescencję można oceniać częściowo za pomocą fluorymetru.
(c) różne znaczniki typu enzym-substrat, z których część opisano w Patencie USA nr 4,257,149. Enzym, ogólnie, katalizuje chemiczną zmianę substratu chromogennego, którą można mierzyć za pomocą różnych technik. Na przykład, enzym może katalizować zmianę koloru substratu, którą można mierzyć spektrofotometrycznie. Alternatywnie, enzym może zmieniać fluorescencję lub chemiluminescencję substratu. Techniki oceny ilościowej zmian fluorescencji opisano powyżej. Substrat chemiluminescencyjny zostaje elektronowo wzbudzony w wyniku reakcji chemicznej, i może emitować następnie światło, które można mierzyć (na przykład za pomocą chemiluminometru) lub przekazuje energię na akceptor fluorescencyjny. Przykłady znaczników enzymatycznych obejmują lucyferazy (np. lucyferazę ze świetlika i lucyferazę bakteryjną; Patent USA nr 4,737,456), lucyferynę, 2,3-dihydroftalazynodiony, dehydrogenazę jabłczanową, ureazę, peroksydazę, taką jak peroksydaza chrzanowa (HRPO), alkaliczną fosfatazę, β-galaktozydazę, glukoamylazę, lizozym, oksydazy sacharydów (np. oksydazę glukozy, oksydazę galaktozy i dehydrogenazę glukozo-6-fosforanową) oraz heterocykliczne oksydazy (takie jak urykaza i oksydaza ksantynowa), laktoperoksydaza, mikroperoksydaza, itp. Techniki sprzęgania enzymów z przeciwciałami opisano w O'Sullivan i wsp., Methods for the Preparation of Enzyme-Antybody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, Methods in Enzym, (ed J.Langone&H.Van Vunakis), Academic Press, New York, 73: 147-166 (1981).
Przykłady połączeń enzym-substrat obejmują, na przykład:
(i) Peroksydazę chrzanową (HRPO) i peroksydazę wodorową jako substrat, przy czym peroks ydaza wodorowa utlenia prekursor barwnika (np. diaminę ortofenylenu (OPD) lub chlorowodorek 3,3',5,5'-tetrametylobenzydyny (TMB));
(ii) Alkaliczną fosfatazę (AP)i fosforan paranitrofenylu jako substrat chromogenny; i (iii) β-D-galaktozydazę (β-D-Gal) i substrat chromogenny (np. p-nitrofenylo^-D-galaktozydaza) lub substrat fluorogenny (4-metylolumbelliferylo^-D-galaktozydaza).
Istnieją również liczne inne połączenia enzym-substrat, znane specjalistom w dziedzinie. Ogólny ich przegląd można znaleźć w Patencie USA nr 4,257,149 i 4,318,980.
Znacznik może być czasami sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Specjal istom w dziedzinie znane są liczne techniki odpowiednie do tego celu. Na przykład, wariant polipeptydu może być sprzęgany z biotyną, a jakikolwiek z trzech wymienionych powyżej grup znaczników może być sprzęgany z awidyną i odwrotnie. Biotyna ulega selektywnemu wiązaniu z awidyną, co powoduje, że znacznik może być sprzęgany z wariantem polipeptydu w sposób pośredni. Alternatywnie, w celu sprzęgania pośredniego znacznika z wariantem polipeptydu, wariant polipeptydu sprzęga się z małym haptenem (np. digoksyną), a jeden z wymienionych powyżej znaczników sprzęga się ze skierowanym przeciwko cząsteczce haptenu wariantem polipeptydu (np. przeciwciałem przeciwko digoksynie). Zatem, można przez to uzyskać pośrednie sprzęganie znacznika z wariantem polipeptydu.
W innym rozwiązaniu nie jest konieczne znakowanie wariantu polipeptydu, a jego obecność wykrywa się z użyciem znakowanego przeciwciała wiążącego się z wariantem polipeptydu.
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w jakiejkolwiek znanej metodzie analizy, takiej jak analiza wiązania kompetycyjnego, bezpośrednie i pośrednie analizy kanapkowe i immunoprecypitacyjne. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).
Wariant polipeptydu może być także wykorzystany w testach diagnostycznych in vivo. Ogólnie, wariant polipeptydu jest znakowany radioizotopowo (tak jak 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H, 32P lub
S), co pozwala na zlokalizowanie antygenu lub ekspresjonującej go komórki za pomocą immunoscyntygrafii.
G. Zastosowania wariantu polipeptydu in vivo
Opisany tu wariant polipeptydu może być wykorzystany w leczeniu ssaków, np. pacjentów cierpiących na choroby lub zaburzenia lub predysponowanych do takich chorób lub zaburzeń, gdzie p odawanie wariantu polipeptydu mogłoby przynieść korzyść. Wiele stanów można leczyć z zastosowaniem wariantu polipeptydu i obejmują one raka (np. gdzie wariant polipeptydu wiąże się z receptorem HER2, CD20 lub czynnik wzrostu śródłonka naczyniowego (VEGF)); alergie, takie jak astma (przeci w40
PL 220 113 B1 ciało anty-IgE) oraz zaburzenia zależne od LFA1 (np. gdzie wariantem polipeptydu jest przeciwciało anty-LFA-1 lub anty-ICAM-1), itp.
W przypadku gdy przeciwciało wiąże się z receptorem HER2, zalecanym zaburzeniem jest rak z ekspresją HER2, np. łagodny lub złośliwy guz wykazujący nadekspresję receptora HER2. Raki te obejmują, lecz bez ograniczenia, raka sutka, raka płaskokomórkowego, raka drobnokomórkowego płuc, raka niedrobnokomórkowego płuc, raka przewodu żołądkowo-jelitowego, raka trzustki, glejaka, raka szyjki, raka jajników, raka pęcherza, wątrobiaka, raka okrężnicy, raka jelita grubego, raka śluzówki macicy, raka ślinianek, raka nerki, raka wątroby, raka prostaty, raka sromu, raka tarczycy, raka wątroby i różnych typów nowotworów głowy i szyi.
Zgodnie z niniejszym opisem możliwe jest otrzymanie polipeptydu zawierającego wariant regionu Fc o udoskonalonej lub zredukowanej aktywności ADCC. Cząsteczki takie znajdą zastosowanie w leczeniu różnorodnych zaburzeń.
Na przykład, wariant polipeptydu o wzmocnionej aktywności ADCC może być zastosowany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zniszczenie lub wyeliminowanie tkanki lub obcego mikroorganizmu. Na przykład, taki polipeptyd może znaleźć zastosowanie w leczeniu raka, zaburzeń zapalnych, zakażeń (np. bakteryjnych, wirusowych, grzybowych lub drożdżowych) lub innych stanów (takich jak wole), gdzie pożądane jest usunięcie tkanki, itp.
W przypadku gdy wariant polipeptydu wykazuje zredukowaną aktywność ADCC, może on być wykorzystany do leczenia chorób lub zaburzeń, gdzie pożądane jest zastosowanie polipeptydu zawierającego region Fc o dłuższym okresie półtrwania, przy czym dogodnie polipeptyd nie wykazuje ni epożądanych funkcji efektorowych. Na przykład, polipeptyd zawierający region Fc może być przeci wciałem skierowanym przeciwko czynnikowi tkankowemu (TF); przeciwciałem skierowanym przeciwko IgE i przeciwciałem skierowanym przeciwko integrynie (np. przeciwciałem anty-a437). Pożądanym mechanizmem działania takich polipeptydów zawierających region Fc może być blokowanie par wiążących ligand-receptor. Ponadto, polipeptyd zawierający region Fc o zredukowanej aktywności ADCC może być agonistą przeciwciała.
Wariant polipeptydu podaje się za pomocą dowolnych w jakikolwiek możliwch środków, włączając podawanie pozajelitowe, podskórne, dootrzewnowe, dopłucne i donosowe, a w razie potrzeby miejscowego leczenia immunosupresyjnego podawanie w obrębie zmiany. Wlewy pozajelitowe obejmują podawanie domięśniowe, dożylne, dotętnicze, dootrzewnowe lub podskórne.
Ponadto, wariant polipeptydu podaje się odpowiednio drogą wlewu pulsowego, szczególnie w malejących dawkach wariantu polipeptydu. Dawkę podaje się dogodnie przez wstrzyknięcia, a w szczególności wstrzyknięcia dożylne lub podskórne, co częściowo zależy od tego czy czas pod awania jest krótki czy przewlekły.
W przypadku profilaktyki lub leczenia choroby odpowiednie dawki wariantu polipeptydu będą zależały od typu leczonej choroby, stopnia jej ciężkości i przebiegu, od tego czy podawanie wariantu polipeptydu ma charakter profilaktyczny czy terapeutyczny, poprzednio stosowanej terapii, historii choroby pacjenta i odpowiedzi na wariant polipeptydu oraz decyzji lekarza prowadzącego. Wariant polipeptydu podaje się pacjentowi jednorazowo lub w seriach.
W zależności od typu i ciężkości choroby wstępną dawkę do podania pacjentowi stanowi około 1 pg/kg do 15 mg/kg (np. 0,1-20 mg/kg) wariantu polipeptydu w zależności przykładowo od tego czy podawanie jest jednokrotne czy w kilku oddzielnych dawkach lub przez wlew ciągły. Typowa dzienna dawka wynosi w zakresie od około 1 pg/kg do 100 mg/kg lub więcej, zależnie od wymienionych powyżej czynników. W przypadku podawania wielokrotnego przez okres kilku dni lub dłuższy, w zależności od stanu, leczenie kontynuuje się aż do momentu zahamowania występowania objawów chorobowych. Jednakże użyteczne są również inne schematy dawkowania. Postęp terapii łatwo monitoruje się za pomocą konwencjonalnych technik i analiz.
Kompozycję wariantu polipeptydu otrzymuje się, dawkuje i podaje w zgodzie z dobrą praktyką lekarską. Czynniki, które należy rozważyć w tym kontekście to szczególnie choroba do leczenia, szczególny ssak do leczenia, stan kliniczny poszczególnego pacjenta, przyczyna zaburzenia, miejsce dostarczenia czynnika, sposób podawania, schemat podawania i inne czynniki znane lekarzom.
„Terapeutycznie skuteczna ilość” wariantu polipeptydu, którą należy podać będzie ustalana ogólnie na podstawie wymienionych czynników, i stanowi minimalną ilość niezbędną do zapobiegnięcia, złagodzenia lub wyleczenia choroby lub zaburzenia. Wariant polipeptydu nie musi być, ale może być otrzymany wraz z jednym lub więcej czynnikami stosowanymi obecnie do zapobiegania lub lecz enia danego zaburzenia. Skuteczna ilość takich dodatkowych czynników uzależniona będzie od ilości
PL 220 113 B1 wariantu polipeptydu obecnego w preparacie, typu zaburzenia lub leczenia i innych dyskutowanych powyżej czynników. Stosuje się je, ogólnie, w takich samych dawkach i w taki sam sposób, jak wcześniej to opisano, lub stosuje się około od 1 do 99% opisanych powyżej dawek.
Wynalazek będzie bardziej zrozumiały w kontekście zamieszczonych poniżej przykładów. Przykładów tych nie należy jednak interpretować jako ograniczających zakres wynalazku. Wszystkie odnośniki literaturowe i odwołania do patentów włączone są tu przez odesłanie.
P r z y k ł a d 1
Analiza wiązania receptora o niskim powinowactwie
Analiza ta określa wiązanie regionu Fc IgG z rekombinowanymi podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIA, ekspres jonowanymi jako białko fuzyjne ze znakowaną His6 S transferazą glutationu (GST). Ze względu na to, że powinowactwo regionu Fc IgG1 względem FcyRI jest rzędu nanomoli, wiązanie wariantów Fc IgG1 można mierzyć za pomocą miareczkowania monomeru IgG i pomiaru wiązania IgG z przeciwciałem poliklonalnym anty-IgG w standardowym teście ELISA (Przykład 2, poniżej). Jednakże powinowactwo pozostałych członków rodziny FcyR, tj. FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA względem IgG jest rzędu mikromolarnego i wiązania tych receptorów z monomerem IgG1 nie można mierzyć za pomocą testu ELISA.
W poniższej analizie wykorzystuje się warianty Fc rekombinowanego przeciwciała anty-IgE E27 (Figury 4A i 4B), które po wymieszaniu z ludzką IgE w stosunku molowym 1:1, tworzą stabilny heksamer, składający się z trzech cząsteczek anty-IgE i trzech cząsteczek IgE. Otrzymano rekombinowaną chimerową postać IgE (chimerową IgE), składającą się z regionu Fc ludzkiej IgE i Fab przeciwciała anty-VEGF, (Presta i wsp. Cancer Research 57: 4593-4599(1997)), która wiąże się z dwiema cząsteczkami VEGF na mol przeciwciała anty-VEGF. Po dodaniu ludzkiego VEGF w stosunku molowym 2:1 do chimerowych heksamerów IgE:E27, heksamery łączą się w kompleksy o większej masie cząsteczkowej poprzez oddziaływanie chimerowe IgE:VEGF. Składnik E27 tego kompleksu wiąże się z podjednostkami α FcyRIIA, FcyRIIB i FcyRIIIA z silniejszą zachłannością wiązania, co umożliwia ich wykrycie w teście ELISA.
Materiały i metody
Pokrywanie receptorem: Podjednostki α receptora Fcy ekspresjonowane były jako białka fuzyjne GST domen zewnątrzkomórkowych (ECD) znakowanych His6 w komórkach 293, dzięki czemu otrzymano białko fuzyjne ECD-6His-GST (Graham i wsp., J.Gen.Virol. 36: 59-74 (1977) i Gorman i wsp., DNA Prot.Eng.Tech. 2:3-10 (1990)), które oczyszczono na kolumnie chromatograficznej Ni-NTA (Qiagen, Australia) i przez wymianę buforu na buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej (PBS). Stężenia określano na podstawie absorpcji przy 280 nm, z użyciem współczynników ekstynkcji ustalonych w analizie składu aminokwasowego. Płytki Nunc F96 maxisorb pokrywano receptorami (Nr kat. 439454) w ilości 100 ng na studzienkę poprzez dodanie 100 μl białka fuzyjnego receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w 4°C. Przed analizą płytki płukano 250 μl 3x buforu do płukania (PBS, pH 7,4 zawierającego 0,5% TWEEN 20™) i blokowano za pomocą 250 μl buforu do analizy (50 mM buforowanego Tris roztworu soli fizjologicznej, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) oraz 2 mM EDTA, pH 7,4).
Tworzenie kompleksów immunologicznych: równe molowe ilości (1:1) E27 i rekombinowanej chimerowej IgE, które wiążą dwa mole rekombinowanego ludzkiego VEGF na mol chimerowej IgE dodano do próbki polipropylenowej 12 x 75 mm w PBS i zmieszano przez obracanie przez 30 minut w temperaturze 25°C. Heksamery E27 (anty-IgE)/chimerowa IgE (IGE) powstają w czasie inkubacji. Rekombinowany ludzki VEGF (postać 165, MW 44000) dodano w ilości molowej 2:1 względem stężenia IgE i zmieszano przez obracanie przez dodatkowe 30 minut w 25°C. Wiązanie VEGF-chimerowa IgE łączy heksamery E27:chimerowa IgE w kompleksy o większej masie cząsteczkowej, które wiążą podjednostki FcyR α ECD na powleczonych płytkach poprzez regiony Fc przeciwciała E27.
Kompleksy E27:chimerowa IgE:VEGF: (stosunek molowy 1:1:2) dodano do powleczonych podjednostek α FcyR płytek w stężeniu E27 wynoszącym 5 μg i 1 μg wszystkich IgG w czterech powtórzeniach w buforze do analizy i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej.
Wykrywanie kompleksów: Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl koniugatu peroksydazy HRP z kozią anty-ludzką IgG (γ) specyficzną wobec łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w stosunku 1:10000 w buforze do analizy i inkubuje przez 90 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płucze się pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanej HRP koziej anty-ludzkiej IgG, a związane anty-IgG wykrywa się przez dodanie 100 μl roztworu sub42
PL 220 113 B1 stratu (0,4 mg/ml dichlowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubowano przez 8 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymuje się przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a produkty barwne mierzy się w 490 nm na 96 studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Devices). Związanie kompleksów wariant-E27 przedstawiono jako procent kompleksu zawierającego E27 dzikiego typu.
P r z y k ł a d 2
Identyfikacja unikalnych miejsc wiązania C1q w ludzkim przeciwciele IgG
W prezentowanym badaniu zidentyfikowano mutacje w domenie CH2 ludzkiego przeciwciała IgG1, „C2B8” (Reff i inni, Blood 83:435 (1994)), które znoszą wiązanie przeciwciała C1q, ale ani nie zmieniają konformacji przeciwciała, ani nie wpływają na wiązanie każdego z FcyR. Poprzez mutagenezę z użyciem skanowania alaniny zidentyfikowano pięć wariantów IgG1, D270K, D270V, K322A, P329A oraz P331, które nie były lityczne i które zmniejszyły wiązanie C1q. Wyniki sugerowały, że rdzeniowe miejsca wiązania C1q w ludzkiej IgG1 są różne od miejsc w mysich IgG2b. Dodatkowo stwierdzono, że K322A, P329A oraz P331A wiążą się normalnie z antygenem CD20 i czterema receptorami Fc, FcyRI, FcyRII, FcyRIII oraz FcyRn.
Materiały i metody
Tworzenie wariantów C2B8: Użyto chimerowe łańcuchy ciężkie i lekkie przeciwciała anty-CD20, C2B8, (Reff i inni. Blood 83:435 (1994)), subklonowane oddzielnie do wcześniej opisanych wektorów PRK (Gorman i inni, DNA Protein Eng. Tech. 2:3 (1990). Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Ku nkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) skonstruowano warianty otrzymane przez skanowanie alaniny regionów Fc w łańcuchu ciężkim. Plazmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego kotran sfekowano do transformowanej adenowirusem linii komórek embrionalnych nerki człowieka jak to wcześniej opisano (Werther i inni, J. Immunol. 157:4986 (1996)). Pożywki zmieniano na wolne od surowicy 24 godzinny po transfekcji, a po 5 dniach zebrano wydzielone przeciwciało. Przeciwciała oczyszczano przy użyciu Protein A-SEPHAROSE CL-4B™ (Pharmacia), zmieniono bufor i zatężono do 0,5 ml z PBS przy użyciu Centricon-30 (Amicon) i przechowywano w 4°C. Stężenie przeciwciał określono przy użyciu ELISA z wiązaniem wszystkich Ig.
ELISA z wiązaniem C1q: 96 studzienkowe płytki Costar pokrywano przez noc C2B8 w temp. 4°C w znanych stężęniach w buforze do pokrywania (0,05 M bufor z węglanem sodu), pH 9. Następnie płytki płukano trzykrotnie PBS/ 0,05% TWEEN 20™, pH 7,4 i blokowano 200 μl rozcieńczalnika do ELISA bez timerosalu (0,1 M NaPO4/0,1 M NaCl/0,1% żelatyna/0,05% Tween 20™/0,05% Proclin 300) przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Płytki płukano trzykrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl z 2 μg/ml C1q (Quidel, San Diego, CA) i inkubowano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Płytkę następnie płukano sześciokrotnie buforem do płukania, do każdej studzienki dodano 100 μl rozcieńczonego 1:1000 koniugatu peroksydazy z przeciwciałem owczym przeciwko C1q (Biodesign) i inkubowano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Płytki ponownie sześciokrotnie płukano buforem do płukania i dodano 100 μl buforu substratu (PBS/ /0,012% H2O2) zawierającego OPD (dichlorowodorek o-fenylenodiaminy) (Sigma). Reakcja utleniania, obserwowana dzięki wystąpieniu żółtego koloru, przebiegała przez 30 minut i zatrzymano ją przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4. Następnie odczytano absorbancję przy (492-405) nm przy użyciu czytnika mikropłytek (SPCTRA MAX 250™, Molecular Devices Corp.). Równolegle analizowano odpowie dnie kontrole (tj. test ELISA przeprowadzono bez C1q dla każdego użytego stężenia C2B8 a ponadto przeprowadzono ELISA bez C2B8). W przypadku każdego wariantu mierzono wiązanie C1q przez naniesienie na wykres absorbancji (492-405) nm względem stężenia C2B8 w μg/ml przy użyciu 4-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™) i porównanie z wartością EC50.
Analiza cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC). Analizę tę przeprowadzono jak opisano to wcześniej (Gazzano-Santoro i inni, J. Immunol. Methods 202:163 (1996)). Różne stężenia C2B8 (0,08-20 pg/ ml) rozcieńczono buforem RHB (RPMI 1640/20 mM HEPES (pH 7,2)/2 mM Glutaminae/0,1% BSA/100 pg/ m. gentamycyna). Ludzki dopełniacz (Quidel) rozcieńczono w stosunku 1:3 w buforze RHB, a komórki WIL2-S (dostępne z ATCC, Manassas, VA), które ekspresjonują antygen CD20, rozcieńczono do gęstości 1x106 komórek/ml buforem RHB. 150 pl mieszaniny zawierające równe objętości C2B8, rozcieńczonego ludzkiego dopełniacza oraz komórek WIL2-S dodano do płaskodennej 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej i inkubowano przez 2 godziny w temp. 37°C i 5% CO2 w celu ułatwienia lizy komórek zależnej od dopełniacza. 50 pl barwnika alamar blue (Accumed International) dodano do każdej studzienki i inkubowano przez noc w temperaturze 37°C.
PL 220 113 B1
Następnie zmierzono absorbancję przy użyciu 96-studzienkowego fluorometru z wzbudzeniem przy 530 nm i emisją przy 590 nm. Jak opisał to Gazzano-Santoro i inni, wyniki wyrażono we względnych jednostkach fluoroscencji (RFU). Stężenie próbek obliczano z krzywej standardowej dla C2B8 a procent aktywności w porównaniu do dzikiego typu C2B8 opisano dla każdego wariantu.
Siła wiązania CD20 wariantów C2B8: Wiązanie C2B8 oraz wariantów do antygenu CD20 test owano przy użyciu wcześniej opisanej metody (Reff i inni, (1994) supra, Gazzano-Santoro i inni, (1996), supra). Komórki WIL2-S hodowano przez 3-4 dni do gęstości komórkowej wynoszącej 1x106 kom/ml. Komórki płukano i wirowano dwa razy w buforze FACS (PBS/0,1% BSA/0,02% NaN3) i zawieszono ponownie do gęstości komórkowej wynoszącej 5x106 komórek/ml. 200 μl komórek (5x106 kom/ml) oraz 20 μl rozcieńczonych próbek C2B8 dodano do 5 ml probówek i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Następnie mieszaninę płukano 2 ml zimnego buforu FACS, wirowano i powtórnie zawieszono w 200 μl zimnego buforu FACS. Do zawiesiny dodano 10 μl koziego anty-ludzkiego IgG-FITC (American Qualex Labs.) i mieszaninę inkubowano w ciemności w temperaturze pokojowej przez 30 minut z wytrząsaniem. Po inkubacji mieszaninę płukano 2 ml buforu FACS, wirowano i ponownie zawieszono w 1 ml zimnego buforu utrwalającego (1% formaldehyd w PBS). Próbki analizowano na cytometrze przepływowym a wyniki wyrażono jako względne jednostki fluoroscencji (RFU) i przedstawiono na wykresie względem stężeń przeciwciał przy użyciu 4 parametrowego programu do dopasowywania do krzywych (KALEIDAGRAPH™). Wartości dla EC50 są wyrażone jako procent wartości dla referencyjnego materiału CD28.
Test ELISA wiązania FcyRI: fuzję GST podjednostka α FcyRI przeniesiono na płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439454) przez dodanie 100 μl fuzji receptor-GST w stężeniu 1 μg/ml w PBS i inkubowano przez 48 godzin w temp. 4°C. Przed testem płytki trzykrotnie płukano 250 μl buforu do płukania (PBS, pH 7,4, zawierający 0,5% TWEEN 20™) i blokowano 250 μl buforu do analizy (sól fizjologiczna buforowana 50 mM Tris, 0,05% TWEEN 20™, 0,5% albumina wołowa klasy odpowiedniej do RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA o pH 7,4). Próbki rozcieńczono do 10 μg/ml w 1 ml buforu do analizy i dodano do płytek pokrytych podjednostką α FcyRI i inkubowano przez 120 minut w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych kompleksów a wiązanie IgG wykrywano przez dodanie 100 μl peroksydazy HRP sprzęgniętej z kozim anty-ludzkim przeciwciałem IgG (y) specyficznym dla łańcucha ciężkiego (Boehringer Mannheim 1814249) w 1:10000 w buforze do analizy i inkubowano przez 90 minut w temperaturze 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanych HRP kozich anty-ludzkich IgG, a związane anty-IgG wykrywano przez dodanie 100 μl roztworu substratu (0,4 mg/ml o-dichlorowodorek fenylenodiaminy, Sigma P6912, 6 mM H2O2 w PBS) inkubując przez 8 minut w temperaturze 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 μl 4,5 N H2SO4 a barwne produkty oznaczono przy 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze płytkowym (Molecular Device). Wiązanie wariantu wyrażono jako procent cząsteczki dzikiego typu.
Analizę ELISA wiązania FcyRII oraz III przeprowadzono jak opisano w przykładzie 1 powyżej.
Aby zmierzyć zdolność wiązana FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml streptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6 w temperaturze 4°C przez noc, i blokowano za pomocą PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowane FcRn (wytwarzane z użyciem biotyno-X-NHS, z Research Organics, Cleveland, OH i użyte w ilości 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 7,2, dodano do płytki i inkubowano przez jedną godzinę. Do płytki dodano dwukrotne rozcieńczenia seryjne standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 i inkubowano przez dwie godziny. Związane IgG wykrywano za pomocą znakowanego peroksydazą koziego F(ab)' anty-ludzki IgG F(ab)'2 w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano pomiędzy etapami PBS-0,05% polisorbatu 20 w pH albo 7,2 albo 6,0. Absorbancję odczytywano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywą miareczkowania dop asowano za pomocą czteroparametrowego programu do dopasowywania krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania standardu a następnie podzielono przez stężenie standardu odpowiadające środkowemu punktowi absorbacji krzywej miareczkowania standardu.
PL 220 113 B1
Wyniki oraz dyskusja
Dzięki mutagenezie skanowania alaniny skonstruowano kilka pojedynczych mutacji punktowych w domenie CH2 C2B8, rozpoczynając od E318A, K320A i K322A. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się do antygenu CD20 (Tabela 3).
T a b e l a 3
wt E318A K320A K322A P329A P331A
FcRn + + + +
CD20 + + + + + +
FcγRI + + + + + +
FcγRII + + + + + +
FcγRIII + + + + + +
*C1q +++ ++ +++ - - -
CDC + + + - - -
(+) oznacza wiązanie a (-)oznacza zniesione wiązanie * w przypadku wiązania C1q każdy + jest równoważny w przybliżeniu 33% wiązania.
Tam gdzie analizowano ludzki dopełniacz względem przeciwciała z ludzkim Fc zdolność E318A oraz K320A do aktywowania dopełniacza była zasadniczo jednakowa jak w przypadku C2B8 typu dzikiego (Tabela 3). W przypadku porównania do C2B8 typu dzikiego wydaje się, iż istnieje niewielka różnica w wiązaniu E318A i K320A do C1q. Zauważono tylko 10% zmniejszenie wiązania K320A i około 30% zmniejszenie wiązania E318A do C1q (Figura 2). Wyniki te wskazują, że wpływ substytucji E318A oraz K320A na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q jest minimalny. Ludzką IgG1 z C2B8 zastąpiono ludzką IgG2 i użyto jako kontrolę ujemną w badaniach wiązania C1q. Wariant IgG2 wydaje się posiadać o wiele mniejsze powinowactwo do C1q niż warianty E318A i K320A (Figura 2). Zatem wyniki wykazują, że E318 oraz K320A nie stanowią rdzeniowych miejsc wiązania C 1q dla ludzkiej IgG1. Odwrotnie substytucja K322A znacząco wpłynęła na zarówno aktywność dopełniacza, jak i wiązanie C1q. Wariant K322A nie posiadał aktywności CDC podczas analizy w powyższym teście CDC, wykazywał ponad 100-krotnie niższe wiązanie z C1q niż C2B8 typu dzikiego (figura 2). W układzie ludzkim K322 jest jedyną resztą spośród zaproponowanych rdzeniowych miejsc wiązania C1q, która wydawała się posiadać znaczący wpływ na aktywację dopełniacza i wiązanie C1q.
Ze względu na to, że badania Duncan'a oraz Winter'a przeprowadzono przy użyciu mysiej IgG2b a powyższe rezultaty ujawniły, że K320 oraz E318 w ludzkiej IgG1 nie są zaangażowane w wiązanie C1q, nie wiążąc się przy tym z żadną teorią, powyższe wyniki sugerują, iż region wiązania C1q w mysich IgG jest inny niż w ludzkich. Aby zbadać to bardziej, a również aby zidentyfikować dodatkowe warianty, które nie wiążą z C1q a zatem nie aktywują dopełniacza, skonstruowano kilka innych mutacji punktowych w sąsiedztwie K322, co oceniono na podstawie struktury trójwymiarowej Fc C2B8. Uzyskane warianty K274A, N276A, Y278A, S324A, P329A, P331A, K334A oraz T335A oceniano pod kątem ich zdolności do wiązania z C1q, a także aktywacji dopełniacza. Wiele z tych substytucji miało mały wpływ na wiązanie C1q lub aktywację dopełniacza, lub nie miało żadnego wpływu na takie wiązanie lub aktywację. W powyższych testach warianty P329A oraz P331A nie aktywowały dopełniacza i obniżały wiązanie C1q. Wariant P331A nie aktywował dopełniacza i wykazywał około 60-krotnie słabsze wiązanie z C1q (Figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2). Zakres stężenia wariantów przeciwciał użyty na Figurze 3 rozszerzono do 100 μg/ml w celu zaobserwowania wysycenia wiązania C1q z wariantem P331A. Mutacja P329A powoduje, że przeciwciało nie aktywuje dopełniacza i wykazuje ponad stukrotne obniżenie wiązania z C1q (figura 3) w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 2).
Warianty, które nie wiązały się z C1q a zatem nie aktywowały dopełniacza badano pod kątem ich zdolności do wiązania receptorów Fc: FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. To szczególne badanie przeprowadzono przy zastosowaniu przeciwciała humanizowanego anty-IgE, przeciwciała IgG1 z tymi mutacjami (zobacz przykład 1 powyżej). Wyniki ujawniły, że warianty K322A oraz P329A wiążą się ze wszystkimi receptorami Fc w tym samym stopniu co białko typu dzikiego (Tabela 4). Jednakże zauważono niewielkie obniżenie wiązania P331A z FcγRIIB.
PL 220 113 B1
Podsumowując, zidentyfikowano dwie substytucje aminokwasowe w końcowym regionie COOH domeny CH2 ludzkiej IgG1, K322A oraz P329A, które powodują ponad 100-krotne obniżenie wiązania z C1q, i które nie aktywują szlaku CDC. Te dwa warianty, K322A oraz P329A, wiążą się z wszystkimi receptorami Fc z takim samym powinowactwem jak przeciwciało typu dzikiego. Bazując na wynikach przedstawionych w Tabeli 4, i nie wiążąc się z żadną teorią, proponuje się, iż epicentrum wiązania C1q ludzkiej IgG1 jest umiejscowione wokół K322, P329 oraz P331 i jest inne niż epicentrum mysiej IgG2b, które składa się z E318, K320 oraz K322.
T a b e l a 4
wt E318A K320A K322A P329A P331A
CD20 100 89 102 86 112 103
a FcγRI 100 93 102 90 104 74
a FcγRIIA 100 113 94 109 111 86
a FcγRIIB 100 106 83 101 96 58
a FcγRIII 100 104 72 90 85 73
CDC 100 108 108 brak brak brak
a w przypadku wiązania z Fc-,'R warianty utworzono z wykorzystaniem tła E27 (anty-IgE).
Wyniki przedstawiono jako procent dzikiego typu.
Przy zastosowaniu sposobów opisanych w prezentowanym przykładzie zidentyfikowano pona dto inną resztę zaangażowaną w wiązanie z ludzkim C1q. Resztę D270 zastąpiono lizyną i waliną w celu wytworzenia odpowiednio wariantów D270K i D270V. Warianty wykazywały zarówno mniejsze wiązanie z ludzkim C1q (Figura 6), jak również były nielityczne (Figura 7). Oba te warianty wiązały się z antygenem CD20 normalnie i wywoływały ADCC.
P r z y k ł a d 3
Warianty o zwiększonym wiązaniu C1q
Następujące badanie pokazuje, że substytucja reszt w pozycjach K326, A327, E333 oraz K334 skutkowała powstaniem wariantów o zwiększonym o co najmniej 30% wiązaniu z C1q w porównaniu do przeciwciała typu dzikiego. Wskazane reszty K326, A327, E333 oraz K334 są potencjalnymi miejscami do poprawy skuteczności przeciwciał ze szlaku CDC. Celem tego badania była poprawa aktywności CDC przeciwciała przez wzrost wiązania z C1q. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną na reszty K326 oraz E333 skonstruowano kilka wariantów o zwiększonym wiązaniu z C1q. Reszty, w porządku zwiększonego wiązania w przypadku K326 to K<V<E<A<G<D<M<W, a reszty w porządku zwiększonego wiązania w przypadku E333 to E<Q<D<V<G<A<S. Skonstruowano cztery warianty K326M, K326D, K326D, K326E oraz E333S, które wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania C 1q w porównaniu do typu dzikiego. Wariant K326W wykazywał co najmniej pięciokrotny wzrost wiązania z C1q.
Warianty przeciwciała C2B8 typu dzikiego otrzymano jak opisano to w przykładzie 2. Kolejne przeciwciało kontrolne, C2B8 typu dzikiego wytworzone w komórkach jajnika chomika chińskiego (CHO) zasadniczo tak jak opisano w Patencie USA nr 5,736,134, zawarto w teście ELISA wiązania C1q w celu potwierdzenia czy wt CdB8 produkowane w linii komórek nerki 293 wykazują taką samą aktywność wiązania C1q jak przeciwciało wytwarzane w CHO (zobacz „CHO-wt-CDB8” na Figurze 8). Testy ELISA wiązania C1q, CDC oraz potencjału wiązania CD20 w tym przykładzie przeprowadzono tak jak opisano w przykładzie 2 powyżej.
Jak pokazano na Figurze 8 substytucja alaniny przy K326 i E333 w C2B8 skutkowała powstaniem wariantów, które wykazywały około 30% wzrost wiązania z C1q.
Skonstruowano kilka innych pojedynczych wariantów z mutacjami punktowymi przy K326 i E333, i przetestowano je pod kątem ich zdolności wiązania z C1q i aktywacji dopełniacza. Wszystkie skonstruowane warianty normalnie wiązały się z antygenem CD20.
W przypadku K326, inne wytworzone warianty z pojedynczymi mutacjami punktowymi to K326A, K326D, K326E, K326G, K326V, K326M oraz K326W. Jak pokazano to na Figurze 9 wszystkie te warianty wiązały się z C1q z lepszym powinowactwem niż przeciwciało typu dzikiego. K326W, K326M, K326D oraz K326E wykazywały co najmniej dwukrotny wzrost wiązania z C1q (Tabela 5). Spośród wariantów K326, wariant K326W wykazywał najlepsze powinowactwo do C1q.
PL 220 113 B1
T a b e l a 5
Wariant wartość EC50
typ dziki 1,53
K326V 1,30
K326A 1,03
K326E 1,08
K326G 0,95
K326D 0,76
K326M 0,67
K326W 0,47
E333S 0,81
E333A 0,98
E333G 1,14
E333V 1,18
E333D 1,22
E333Q 1,52
K334A 1,07
Substytucje resztami hydrofobowymi, jak również resztami naładowanymi skutkują powstaniem wariantów o podwyższonym wiązaniu z C1q. Nawet substytucja glicyną, która jak wiadomo nadaje łańcuchowi elastyczności i jest dobrze konserwowana w naturze, skutkowała powstania wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do typu dzikiego. Wydawałoby się, że dowolna substytucja aminokwasowa w tym rejonie będzie powodowała powstanie wariantu o wyższym powinowactwie do C1q. Na podstawie struktury trójwymiarowej stwierdzono, że K326 oraz E333 znajdują się w sąsiedztwie miejsc wiązania C1q (Figura 10).
Oprócz alaniny E333 podstawiono także innymi resztami aminokwasowymi. Warianty te, E333S, E333G, E333V, E333D, i E333Q, wykazywały zwiększone wiązanie z C1q w porównaniu do typu dzikiego (Figura 11). Jak pokazano w Tabeli 5, porządek powinowactwa wiązania z C1q przedstawiał się następująco: E333S>E333A>E333G>E333V>E333D>E333Q. Substytucja resztami aminokwasowymi z łańcuchami bocznymi o małej objętości tj. seryną, alaniną i glicyną skutkuje powstaniem wariantów o wyższym powinowactwie do C1q w porównaniu do innych wariantów, E333V, E333D oraz E333Q o łańcuchach bocznych o większej objętości. Wariant E333S wykazywał najwyższe powinowactwo do C1q, i wykazał dwukrotny wzrost w porównaniu do typu dzikiego. Bez związku z jakąkolwiek teorią pokazuje to, że wpływ na wiązanie C1 w pozycji 333 może być również wynikiem po części polarności reszty.
Wytworzono także warianty podwójne. Jak pokazano na Figurach 12 oraz 13 podwójne warianty K326M-E333S oraz K326A-E333A wykazywały około trzykrotnie lepsze wiązanie z ludzkim C1q niż C2B8 typu dzikiego (Figura 12) i co najmniej dwukrotnie lepsze pośredniczenie w CDC w porównaniu do C2B8 typu dzikiego (Figura 13). Addytywność pokazuje, że są to warianty o niezależnej aktywności.
Jak pokazano na Figurze 14, skonstruowano inny wariant o poprawionym wiązaniu z C1q (50% wzrost) przez zamianę A327 w regionie stałym na glicynę. Odwrotnie, w regionie stałym ludzkiej IgG2, zamiana G327 na alaninę zmniejsza wiązanie z C1q przeciwciała IgG2.
P r z y k ł a d 4
Identyfikacja miejsc wiązania FcR ludzkich przeciwciał IgG
W prezentowanym badaniu oceniano wpływ mutacji różnych regionów reszt regionu Fc przeciwciała IgG1 pod względem wiązania z FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB oraz FcyRIIIA jak również FcRn. Zidentyfikowano warianty przeciwciał o zwiększonym, jak również o zmniejszonym wiązaniu FcR.
PL 220 113 B1
Materiały i metody
Konstrukcja wariantów IgG1: Rekombinowane E27 anty-IgE posiadające sekwencje łańcucna lekkiego oraz ciężkiego przedstawione na Figurach 4A oraz 4B odpowiednio użyto jako przeciwciało macierzyste w następujących eksperymentach. Przeciwciało to wiąże antygen IgE i posiada region Fc allotypu nie-A IgG1. Poprzez mutagenezę ukierunkowaną (Kunkel i inni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488 (1987)) utworzono warianty regionu Fc łańcucha ciężkiego powyższego przeciwciała macierzystego. Plaizmidy łańcucha ciężkiego oraz lekkiego ko-transfekowano do transformowanej adenowirusem ludzkiej zarodkowej linii komórki nerki jak to opisano wcześniej (Werther i inni, J. Immunol. 157: 4986 (1996)). Pożywkę zmieniono na wolną od surowicy 24 godziny po transfekacji, a wydzielone przeciwciało zebrano po pięciu dniach. Przeciwciała oczyszczono przy użyciu SEPHAROSE® z białkiem G (Pharmacia), bufor zmieniono i zatężono do 0,5 ml przy użyciu PBS stosując Centricon-30 (Amicon)i przechowywano w 4°C. Stężenie określono przez adsorpcję przy 280 nm przy użyciu współczynników ekstynkcji pochodzących z analizy składu aminokwasowego.
Analiza ELISA wiązania FcyRIA o wysokim stopniu powinnowactwa: FcyRIA ekspresjonowano jako fuzję GST ze znakowaną His6 zewnątrzkomórkową domeną w komórkach 293 i oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej Ni-NTA.
Aby oczyścić FcyRIA po trzech dniach usunięto supernatant znad transfekowanych komórek 293. Dodano inhibitory proteaz: 50 pl aprotyniny (Sigma)/ 50 ml supernatantu oraz PMSF (1 mM). Supernatanty zatężono do 10 ml w probówkach (Amicon) i dializowano przez noc w temperaturze 4°C w jednym litrze buforu kolumnowego (50 mM Tris, pH 8,0, 20 mM imidazol, 300 mM NaCl). Dodatkową dializę przeprowadzono następnego ranka wobec świeżego buforu kolumnowego przez 4 godziny w 4°C. Roztwór nałożono na 1 ml kolumny Ni++ (NTA super flow resin, Qiagen), zrównoważone wcześniej 10 ml buforu kolumnowego. Kolumny płukano 10 ml buforu kolumnowego a białko eluowano 2,5 ml buforu elucyjnego (50 mM Tris pH 8,0, 250 mM imidazol, 300 mM NaCl). Białko zastężono do 0,5 ml oraz wymieniono bufor na PBS. Stężenia określono za pomocą adsorpcji przy 280 nm stosując współczynniki ekstynkcji pochodzące z analizy składu aminokwasowego.
Oczyszczonymi receptorami pokryto płytki Nunc F96 maxisorb (nr kat. 439545) w ilości średnio 150 ng na studzienkę przez dodanie 100 pl receptora w 1,5 pg/ml PBS i inkubowano przez 24 godziny w 4°C. Przed testem płytki płukano trzykrotnie 250 pl buforu do płukania (buforowana 50 mM Tris sól fizjologiczna, zawierająca TWEEN 20TM, 0,5% albuminy wołowej klasy RIA (Sigma A7888) i 2 mM EDTA, pH 7,4).
100 pl E27 dodano do pierwszych czterech studzienek płytek pokrytych podjednostką FcyRIA w stężeniu 10 pg/ml. 80 pl buforu do analizy dodano do następnych czterech studzienek a następnie 20 pl z 10 pg/ml IgG E27 tak, aby otrzymać końcowe stężenie 2 pg/ml. Płytki inkubowano w 25°C przez dwie godziny na wytrząsarce rotacyjnej.
Do detekcji płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG do GST FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl białka G (BIORAD) sprzężonego z peroksydazą HRP, w stosunku 1:5000. Koniugaty HRP inkubowano przez 1,5 godziny w temp. 25°C na wytrząsarce rotacyjnej. Płytki płukano pięciokrotnie buforem do płukania w celu usunięcia niezwiązanego koniugatu HRP. Wiązanie wykrywano przez dodanie 100 pl roztworu substratu (0,4 mg/ml dichlorowodorku o-fenylenodiaminy, Sigma p6912, 6 mM H2O2 w PBS) i inkubację przez 10 minut w temp. 25°C. Reakcję enzymatyczną zatrzymano przez dodanie 100 pl 4,5 N H2SO4 a produkt barwny mierzono w 490 nm na 96-studzienkowym densytometrze (Molecular Devices).
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 2 pg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Test FcyRIA THP-1: 100 pl E27 dodano do pierwszych trzech studzienek płytki typu seracluster (Costar) w ilości 20 pg/ml w buforze do analizy (1X PBS, 0,1% BSA, 0,01% NaN3). 92,5 pl buforu do analizy dodano do następnych trzech studzienek a następnie po 7,5 pl z 20 pg/ml IgG E27, tak aby otrzymać końcowe stężenie 1,5 pg/ml. Do każdej studzienki dodano 100 pl komórek THP-1 w stężeniu 5 milionów komórek/ml w buforze do analizy FACS. Płytkę inkubowano na lodzie przez 30 minut.
Do detekcji komórki płukano dwukrotnie buforem do analizy w celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała. Wiązanie IgG z FcyRIA wykrywano przez dodanie 100 pl sprzężonego z FITC fragmentu F(ab)' koziej IgG specyficznej przeciwko ludzkiemu łańcuchowi ciężkiemi (Jackson Immunoresearch) w stosunku 1:200. Koniugaty FITC inkubowano z komórkami przez 30 minut na lodzie. Komórki płukano trzykrotnie buforem do analizy tak, aby usunąć niezwiązany koniugat FITC. Komórki wybarwiono P.I. (SIGMA) w stężeniu 2,5 pg/ml i analizowano przez cytometrię przepływową.
PL 220 113 B1
Wiązanie wariantów E27 w stężeniu IgG wynoszącym 1,5 μg/ml wyrażono w stosunku do E27 typu dzikiego.
Otrzymane wyniki z testów płytkowych (FcγRIA FLISA) oraz testów komórkowych (test FcγRIA THP-1) uśredniono, aby otrzymać aktywność wiązania FcγRIA.
Test ELISA wiązania FcγR o niskim stopniu powinowactwa: testy ELISA FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA przeprowadzono tak jak w przykładzie 1 powyżej, wraz z detekcją cząsteczek stabilnego heksameru (składającego się z trzech anty-IgG i trzech cząsteczek IgE).
Test ELISA wiązania FcRn: w celu zmierzenia aktywności wiązania FcRn wariantów IgG płytki ELISA pokryto 2 μg/ml sterptawidyny (Zymed, South San Francisco) w 50 mM buforu węglanowego, pH 9,6, w 4°C przez noc i blokowano przy użyciu PBS-0,5% BSA, pH 7,2 w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Biotynylowany FcRn (wytworzany z użyciem z biotyno-X-NHS z Research Organics, Cleveland, OH i użyty w stężeniu 1-2 μg/ml) w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbat 20, pH 7,2 dodano do płytki i inkubowano przez godzinę. Dwukrotne seryjne rozcieńczenia standardu IgG (1,6 -100 ng/ml) lub wariantów w PBS-0,5% BSA, 0,05% polisorbatu 20, pH 6,0 dodano do płytki i inkubowano przez dwie godziny. Związaną IgG wykrywano przy użyciu znakowanego perdydazą koziego F(ab)' przeciwko F(ab)' ludzkiej IgG w powyższym buforze o pH 6,0 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) a następnie dodano 3,3',5,5'-tetrametylobenzydynę (Kirgaard & Perry Laboratories) jako substrat. Płytki płukano między etapami postępowania przy użyciu PBS-0,05% TWEEN 20® w pH 7,2 lub 6,0. Absorbancję odczytano przy 450 nm na czytniku płytek Vmax (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Krzywe miareczkowania dopasowano przy pomocy cztero-parametrowego programu do dopasowywania do krzywych wykorzystującego regresję nieliniową (KaleidaGraph, Synergy software, Reading, PA). Obliczono stężenia wariantów IgG odpowiadające środkowemu punktowi absorbancji miareczkowania dla krzywej standardu i podzielono przez stężenie standardu odpowiadającego środkowemu punktowi absorbancji krzywej miareczkowania dla standardu.
Analiza ADCC in vitro. W celu otrzymania znakowanych chromem komórek docelowych, linie komórek rakowych hodowano na płytkach do hodowli tkankowej i zbierano przy użyciu sterylnego 10 mM EDTA w PBS. Jako komórki docelowe we wszystkich testach zastosowano komórki SK-BR-3, ludzką linię komórkową raka sutka wykazującą nadekspresję 3+ HER2-. Komórki płukano dwukrotnie
51 pożywką do hodowli komórkowej. Komórki (5x10 ) znakowano 200 μ Ci chromu (New England Nuclear/Du Pont) w temp. 37°C przez jedną godzinę z mieszaniem co pewien czas. Znakowane komórki płukano trzykrotnie pożywką do hodowli komórkowej, a następnie zawieszono ponownie do stężenia 5
1x10 komórek/ml. Komórki stosowano bez opsonizacji lub opsonizowano je przed analizą przez inkubację z rhuMAb HER2 dzikiego typu (HERCEPTIN®) lub siedmioma mutantami Fc (G14, G18, G17, G36, G30, G31 oraz G34) w ilości 100 ng/ml i 1,25 ng/ml w analizie PBMC lub 20 ng/ml i 1 ng/ml w analizie NK.
Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej przygotowano przez zebranie krwi na heparynę od normalnych zdrowych dawców i rozcieńczono równą objętością buforowanej fosforanem soli fizjologicznej (PBS). Krew następnie rozwarstwiono na LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM® (LSM: Organon Teknika) i wirowano zgodnie z zaleceniami producenta. Komórki jednojądrzaste zebrano z powierzchni LSM-osocza i płukano trzykrotnie PBS. Komórki efektorowe zawieszano ponownie w pożywce hodowlanej do końcowego stężenia 1x107 komórek/ml.
Po oczyszczeniu przez LSM, z PBMC wyizolowano komórki naturalnych zabójców (NK) przez negatywną selekcję przy użyciu zestawu do izolacji komórek NK oraz kolumny magnetycznej (Miltenyi Biotech) zgodnie z instrukcjami producenta. Wyizolowane komórki NK zebrano, płukano i powtórnie zawieszono w pożywce hodowlanej do stężenia 2x106 komórek/ml. Identyfikację komórek NK potwierdzono przez analizę cytometrii przepływowej.
Przez dwukrotne seryjne rozcieńczanie komórek efektorowych (albo PBMC albo NK) wzdłuż rzędów płytki do mikromiareczkowania otrzymano różne stosunki komórek efektorowych i docelowych (100 μl objętości końcowej) w podłożu do hodowli. Stężenie komórek efektorowych wahało się od 1,0x107/ml do 2,0x104/ml dla PBMC i od 2,0x106/ml do 3,9x103/ml dla NK. Po miareczkowaniu komórek efektorowych do każdej studzienki płytki dodano 100 μl komórek docelowych znakowanych chromem (opsonizowanych lub nie) w ilości 1x105 komórek/ml. Dzięki temu wyjściowy stosunek komórek efektorowych: komórek docelowych wynosił 100:1 dla PBMC i 20:1 dla komórek NK. Wszystkie anal izy przeprowadzono w dwóch powtórzeniach, a każda płytka zawierała kontrole dla zarówno lizy spo ntanicznej (bez komórek efektorowych), jak i lizy całkowitej (komórki docelowe plus 100 μl 1% siarczanu dodecylu sodu, 1 N wodorotlenku sodu). Płytki inkubowano w 37°C przez 18 godzin a następnie
PL 220 113 B1 supernatanty hodowli komórkowej zebrano przy użyciu układu do zbierania supernatantów (Skatron Instrument, Inc.) i zliczano w liczniku Minaxi auto-gamma serii 5000 gamma (Packard) przez jedną minutę. Wyniki przedstawiono następnie jako procent cytotoksyczności przy użyciu wzoru:
% cytotoksyczności = (próbka cpm - spontaniczna liza)/ (całkowita liza - spontaniczna liza) x 100.
Następnie w celu analizy danych zastosowano czteroparametrowe dopasowanie do krzywych (KaleidaGraph 3.0.5).
Wyniki
Wytworzono różne warianty przeciwciał, które cechowały się inną aktywnością wiązania FcR niż przeciwciało macierzyste. Wyniki wiązania FcR dla różnych uzyskanych wariantów pokazano w Tabelach 6 i 7 poniżej. Dodatkowy wariant, T307Q, wykazywał także poprawione wiązanie FcR w poró wnaniu do przeciwciała macierzystego E27.
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH2
T2S6A(269) 1.91 (0.43) 6 1.14 (0.14) 4 1.41 (0.27) 2.06 (0.66) 1.32 (0.1S)
PL 220 113 B1
D312A{331) 1.50 (0,06) 4 1.01 ¢0.12)
(0.18)
PL 220 113 B1
L309A{328) 0.63 ¢0.18) 4 0.93 ¢0.18) 6 1.13 (0.08) 1.26 (0.12) 1.07 (0.20)
PL 220 113 B1
R301A{320) 0.86
PL 220 113 B1
WARIANTY DOMENY CH3
10Γ0)
PL 220 113 B1
Β17 A378(401)Q 1.32 ¢0.13) 3 1.06 (0.05) 3 1.40 (0.17) 1,45 ¢0.17) 1.19 (0.17)
B36 Q419(450)A 0.76 (0.01) 2 0.97 (0.02) 3 0.68 (0.09) 0.63 (0.07) 0,86 (0.08)
PL 220 113 B1
Oprócz wariantów alaninowych otrzymano różne warianty z substytuc ją nic al ani nową, których aktywność wiązania FcR podsumowano w kolejnej tabeli.
(εθ'0) Ο6Ό ε (ΐΟΌ) 66Ό 86Ό tSżN zxa
PL 220 113 B1
WARIANTY NIEALANINOWE
>“* «Τ3 u 05 !l b. «
US 8
Ή K ii ηι II M II II. H H
C i
C
Οί
U
Uł
O w
(0
0>
cd
T3 m
Τ3
Ή
C
Ί3 <Ł>
>W
-P «3
Xł ro &
CM
O n
U i
B ϋ
II
id ! O ! z i Z ! td ' e? ! z CG > J O J O [ z J td ! o ί z ! a ! z i
1 ί -1·—' I *—« ; ί ł—» 1 <—· ( X—. J ł—i k • Χ-*. J W—k .
CM σι <*** CO 00 o ’-Μ r-ł r—ł . CM CM 00 i r- , en ;
MO MO r- [ r*- , 00 CD 03 CD 00 ! ao 00 I °° 00 00 ao
CM cm ί ™ ! CM CM CM J CM CM 01 CM CM CM ; cm ! ! cm cm : CM
- 1 j r 'Η-Χ 1 w ’ >-» ‘ >—· • * —' 1 *
CTi j ! ω ! in [ in 1 r- 00 00 <3\ σι j O ! θ ! ϊ cj ! TT * MO t
*7 1 l/> (£> <ao '4? MO (O <Ώ MO ! kO Γ ! 0* r- r~ : r~
CM J CM CM CM CM CM CM CM 04 ; cm · CM : cm CM CM CM CM
O | H ί Η I O [ Q [ ω 1 X tC □C J ω { td ; Q 1 Q ] Id i ω ί « ; Z [
CM | K£> 1 1 t -«j· 1 r- 1 OO J <J\ 1 1 co t σ> t i 1 1 1 co i i 1 ττ | 0- t m t
CM 1 r- ί *η I Łf) I »n i CO 1 Ti· lTi C ί Φ F kD Ł CM 1 PO 1 CM 1 CM 1 <£· 1 MO 1
CM 1 *“ł I CM 1 Ή 1 rH ! rH ί OD 00 00 i Ά 1 i—t ! σ» t σ\ F CM 1 CM | Ή | <—1 1
PL 220 113 B1
D280(295)N 1.26 (0.07) 1.38 (0.04) 1.13 (0.13)
CO j o 1 W 1 2 l O j O> [ CO ! o ! O ! w ! w ! 01 i o w t π J o I 7 1 a 1 °
·»»» ·
in J o ! o ! O i o ! CO ! Cl ! co i r- Γ* i r ! ί 1 ° ί <7» <n ! ; o 1 O
<n o ! o ί o ! o « o o ; o o o J ° r o O O O 1 ł—t
CM co ! 1 Cl i co J co [ co [ CO J CO ! i co ! <*> I co • co Γ0 co i i co i !2
i ł_. ·»—* ΊΜΤ *** 1 ·«* • ·—> l *“ *“*
o i co ! co ! co ! co ! K0 J \D ’ C£> ! o ! o ! o o o ! <N CM ! CM ! ! CO ! ™
00 i a> i <*> <*> co [ co ! co i 00 T CT> σ\ 431 <5*3 σ* σ»
CM J CM i CM 1 <M ! CM cm , CM CM , CM CM 1 CM CM CM CM
Q [ Id J id i ω 1 Id J Z [ 2 J z i & ! i ! * ! 1 02 1 oi i al l 02 i Id j ta
1 <Xł | V£> 4 ί Γ 1 1 i oa l 1 cft i 1 1 i r- i i CO 1 I 1 1 1 ί 1 1 1 Γ* 1 1 1 1 i i 1 1 «r 1 *A
1 CM 1 cm 1 CM 1 CM 1 ΓΟ 1 co i co i rO 1 ιΛ ł r* ί 00 1 r- 1 O 1 r-1 | CM I co 1 *r i **
rd | CM 1 CM t CM 1 CM 1 CM 1 CM I CM > i r- i r* I C~ I «-Μ i ao i 00 1 ao I 00 ł 4—ł 1 ΓΜ
147 E293(310)K 1.13 (0.04) 1.31 ¢0.17)
PL 220 113 B1
173 E294(311)Q 1,01 0.95
Q X s o B- 55 > -4 e- to to s o ω j to to o to z
ł *-% , »*»» 1 . ** *·«· 1 —·». *W *—- •—w 1
T“ł J n t0 r* ! f· J r* Γ* J r* CM CM r- to to to to { to t-d i rd - rd rd
w ! t-d r-d t-d . rd 1 Td . rd ‘ t-i CM CM ΓΟ <0 <0 m <0 ! 40 *9· 'O* M1 dr
<0 j <0 C0 «0 (0 ’ 10 f0 ] r0 <0 <0 m <0 <0 (0 <0 (0 <0 <0 <0 C0
·_- *—* * - 1 1 *—· ·—· J ---- ·—* «— - { *-* ··»* j -«e· J *— ***·
m· i ko KO ! 00 ! 00 J 00 <» to en C0 to Gł o O O CM CM CM CM
to σι to ; to to ! to to to o o rd CM CM CM CM CM CM CM CM CM
cm : CM cm CM CM 1 cm CM CM m : f0 <0 <0 m C0 <0 , i0 <0 <0 <0 <0
to } >d ! W [ ω j w J W [ to > [ > N to to to to i to to ’ to [ to to
i 10 ko i to ł to O 1 «—ł r- CM CM *3 Ł0 1 10 10 1 C£> 1 KO C-
r— i 00 00 1 O 1 ·-1 1 CM 1 rd 1 ł—4 10 1 »0 td r· O O O ( <0 Ł0 1 10 1 O O
*h i ed rd ] r~ i Γ~ 1 Γ* 1 CM 1 CM rd 1 H CM t-d CM CM CM 1 CM ed I I-d i CM CM
PL 220 113 B1
Z O 1 hi ω ł co 1 z 1 1 σ i | Cl 1 | ω 3 | w 1 | o t 1 Q 1 | h; (O z 1 | ω I ] hi 1 | σ i ] z CO 1 | z
1 1 ,Λ 1 1 i—. i—» 1 »—» 1
PO 1 po 3 PO co 1 MO ł uo 1 UD 1 Ifi 1 MO 1 | CD 3 CD CO o o o o 1 ] (N CN CN 1 I CN
T ! 1 'T *r ł T 1 ’Τ 1 M· Γ •*3· 1 *3· 1 I T <T =7 1 ςρ md MO MO MD I cn j in UD liD
cd 1 PO 1 n PO 1 co 1 co 1 CO 1 PO 1 1 PO l 1 PO PO r i PO PO co PO i I PO 1 | n ) CD 4 PO PO PO
1 5 1 1 —-' ·—' 1 —· k—* I — »-* 1 i *-' | •w· 1
f 1 ^r 1 CD ł MD 1 MD 3 MD 1 M> i Γ 1 r~ 1 I O 1 ( o «—1 1 I r-M 1 I r-t 1 1 CD 1 I PD PO | PO
(N 1 CN 1 CN CN 1 CN 1 <N 1 I CN 1 I CN 1 I CN 1 I <N 1 CN 1 1 ro J PO <0 PO 1 | co 1 CO > | PO t | PD PO | PO
CD i Π 1 PO co f co [ PO CO PO 1 CO 1 ro ΓΟ PO <o n PO PO 1 PO ł PO i PD CD i o
co i 1 σ) 1 1 CO (Z) t 1 hi 1 1 hi I 1 hi I 1 hi { 1 hi 1 ł i 1 < r < 1 a, cu 1 1 CU 1 CU 1 1 ω J 1 ω ω 1 1 w
o I I ^r ł l uo v£> 1 1 a? i 1 <51 1 1 o 1 1 rH 1 1 CN I 1 rH ł 1 od 1 1 KD 1 1 r~ co Ch 1 1 o 1 1 PO 1 1 w 1 1 CN PO ł ł CN
r—) i cH 1 t-M «—ł 1 o 1 o 1 ·—1 I r-· 1 H 1 CO 1 uo 1 ch 1 co 03 1 o 1 o 1 1 ςτ TT 1 u0
CN 1 CN 1 CN CN I CN 1 CN 1 C4 OJ 1 CN 1 r—4 1 c-< I r-M 1 «Ή r-C <—4 1 CN 1 CN 1 <-4 1 <—1 rH [ r-4
153 E333(352)R 0.75 (0.04) 0.66 (0.03) 0,84 (0.05)
PL 220 113 B1
154 E333(352)D
o j O ! * i ° 2 ω ! ω 1 Q Σ >< X > i Ο 1 * Η
1 . » 4 ·—- 1 1 r— 1 ι ' 1 *“* 1
<M J σ') ! ! £*) ! στ ! στ στ στ <*> στ [ στ ΧΓ
in lT5 ! 1 ifT στ m η σ> «η η
στ j σι 1 ! *** J σι j στ στ ; στ [ σι ! 1 στ [ m ! ! <2 !
1 1 •w
στ ! 1* μ* ! * •‘T* ; φ xr ! •σ : -σ ι *3* I ! η ! “> ! στ
σι ; en <*> σ> στ σι ϊ σι σι σι σι I <*>
στ ’ rn στ στ σ> ; στ ' σι <*Τ σι σι Ρ σι
u j ! * ! i * ! [ ! id 1 id [ id ! ί 5d J id 1 I J Η ι
1 co 1 στ l 1 LO 1 1 ł I 1 Γ- i CO ΐ 1 ι στ ι ι ο I i Ο ! r—< 1 <Μ | ί σι ι ο 1 I rd 1 1 rd ’τ 1 ι ιη ι ι σι
r* i i σ> i στ i n j στ i στ ι f στ f στ ι <η ι στ ι C\l 1 <Μ ί Γ~· στ ι στ I X
d 1 H 1 «-d i T-* J td i »—I 1 rd 1 rd { τ—ί ί rd 1 ¢-< ϊ rd | CM 1 <Μ 1 rd rd i xd 1 CM
Kolejna tabela przedstawia aktywność wiązania z FcR różnych wariantów łączonych.
PL 220 113 B1
WARIANTY ŁĄCZONE
247 S267(280)A 1.60 (0.18) 1.72 (0.13)
R255(268)A
PL 220 113 B1
OD ί ! ! γ- ί ! ! ή [
Ο I ι 1—1 ί ο ! ο ι i *-*
. * , «
ο } ο 1 ° ί ° ! ο 1 ° I ι 1 °
·*-* 1 1 1 ί 1 1 1 ***
5Γ ί ! r- ! 00 ί 04 ! σ\ ί 00 ί
ιΛ 10 ι 1 σ\ ί
♦ ϊ * ; *
< < < «ΐ << rt < <ε <
ο-w .»->. ζ—«. Ζ-». Z-* , a-*» χ-\ ζ«·
Ο Ul ο m ο ο Ο Α ιΠ φ
σο σι οο ; <30 <Μ ί GD Γ σι \ΰ
<\ι ηι 1 οι ; <μ m ; 04 ΟΙ CM 04
«·%»· *»* ~—' -w.» '•w·' -**
Γ* ο ! Γ** 04 ! Γ* C! ί Γ- 00 ο σ>
kO οο ί Γ* i ίΡ <Γ J ιο ιη 00 ιΛ
Οί 04 1 ™ οι : οι <ν : 04 Ο| Ο» 04
w ο i ω J σι ω ; (Λ ω Ο <£
οο ί ί ο I ι ι «-< I
φ ι »η I m ι to
ΟΙ 1 <Ν 1 ΟΙ ί 04
σ> ; i ί 04
! *-* ł Λ
—* [ r-ł 1
Ch r- o 1
* 1 ’
ο ί <h : o I °
·*«* * 1 ** j
ιΠ ! 1P ! r-1 !
tn t * ° i <*·
• . Ol J ·
CO j r-l r-1 i
*:*: ! 1 < < < j << < 1 } < <
#—s . . z**·. z*·*
tn in J *o tn tp [ tn co tn in
o to J O tO 04 J O Ol ! to o
-θ’ -5Ϊ- T* CO [ ; o
—* ·— ’ -RR* »R. ’ «—- '~-* ’ —· 'W-Z
o ! o *r o* ! o σι ! 00
00 ro co m o 1 oo o m co
co ; ro xr co : nn «r oi
ω τζ · Ul 2 H { 01 u } 2
1 σι i 1 O 1 r-ł i 1 Ol
t£> f θ' 1 r- 1 c-
04 1 Ol 1 Ol 1 OJ
PL 220 113 B1
Dyskusja
Badanie to obejmuje całkowite mapowanie ludzkiej IgG1 względem FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA oraz FcRn. Przedstawiono skanowanie alaniny dla wszystkich aminokwasów ludzkiego Fc IgG1 (CH2 i CH3 domen) eksponowanych na rozpuszczalnik, w oparciu o strukturę krystaliczną ludzkiego Fc (Deisenhofer, Biochemistry 20: 2361-2370 (1981)). Każdy eksponowany aminokwas w CH2 oraz CH3 został indywidualnie zamieniony na alaninę, a wariant IgG testowano względem wszystkich 5 ludzkich receptorów; oceniano wszystkie warianty przy użyciu humanizowanej IgG1 anty-IgE, E27, jako polipeptydu macierzystego. FcγRI oraz FcRn to receptory o wysokim powinowactwie, a monomer IgG mógł być oceniany w tych analizach dla dwóch z tych dwóch receptorów. FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA to receptory o niskim powinowactwie i wymagają zastosowania kompleksu immunologiczn ego. Zatem w przypadku FcγRIIA, FcγRIIB oraz FcγRIIIA zastosowano test ELISA, w którym wstępnie utworzone heksamery, złożone z trzech cząsteczek E27 anty-IgE oraz trzech cząsteczek IgE, związano do FcγR, i jako reagent do detekcji użyto anty-ludzkie Fc IgG-HRP, albo lub białko G-HRP. Aby zwiększyć wiązanie heksamery te można połączyć w multimery przez dodanie ludzkiego VEGF (używając IgE anty-VEGF). Heksamery wiążą się do FcγR o niskim powinowactwie znacząco lepiej niż monomery IgG, multimery wiążą lepiej niż heksamery (Figury 15A oraz 15B). Zastosowano kompleksy heksametryczne, ponieważ zapewniały one wystarczające wiązanie i wymagały mniej IgG. Innymi reagentami, które można zastosować są kompleksy wytworzone przy użyciu innych kombinacji przeciwciało:antygen pod warunkiem, że w przypadku przeciwciała antygen będzie zawierał dwa identyczne miejsca wiązania na cząsteczkę. Przykładowo, VEGF zawiera dwa miejsca wiązania na dimer VEGF dla anty-VEGF A.4.6.1 (Kim i inni. Growth Factors 7: 53 (1992) oraz Kim i inni. Nature 362: 841 (1993)). Multimery VEGF: anty-VEGF wiązały się także do FcγRIIA oraz FcγRIIIA o niskim powinowactwie (Figury 16A i 16B).
Po przeprowadzeniu kompletnego skanowania alaniny stwierdzono występowanie kilku klas wariantów alaninowych. Niektóre warianty wykazywały obniżone wiązanie z wszystkimi FcγR (G14, Figura 17), podczas gdy inne warianty wykazywały zredukowane wiązanie tylko z jednym FcγR (G36, Figura 17), poprawione wiązanie tylko z jednym FcγR (G15, G54, G55, Figura 17), albo równoczesną redukcję wiązania z jednym FcγR wraz z poprawą wiązania z innym (G16, Figura 17).
Pojedyncze warianty alaninowe łączono ponadto z pojedynczymi wariantami regionu Fc, np. połączenie S298(317)A z K334(353)A poprawiało wiązanie z FcγRIIIA bardziej niż sama S298(317)A lub K334(353)A (Figury 18A oraz B, porównaj warianty 36, 55 oraz 109 w Tabeli 6 i 9) (numery reszt w nawiasie są numerami według indeksu EU zgodnie z Kabat). Podobnie, przez połączenie S298(317)A z E333(352)A poprawiono wiązanie z FcγRIIIA w porównaniu do samej S298(317)A lub E333(352) (porównaj warianty 36, 53 i 107 w Tabelach 6 i 9).
Wyselekcjownowane warianty IgG testowano także pod kątem wiązania FcγR transfekowanych do komórek ssaczych. Zewnątrzkomórkową cześć łańcucha α ludzkiego FcγRIIIA transfekowano do komórek CHO przy użyciu łącznika GPI, podczas gdy pełnej długości ludzki receptor FcγRIIB transfekowano do komórek CHO. Dla testowanych wariantów wzorzec wiązania do komórek był taki sam jak wzorzec wiązania białko: białko w analizie ELISA (Figury 18A-B i 19A-B).
Jednym z zastosowań tych wariantów jest poprawa funkcji efektorowych ADCC przeciwciała. Można to osiągniąć przez modyfikację aminokwasów regionu Fc jednej czy większej ilości reszt, pr owadzącej do poprawy wiązania do FcγRIIIA. Poprawione wiązanie do FcγRIIIA doprowadziłoby do poprawy wiązania przez komórki NK, które mają tylko FcγRIIIA i mogą pośredniczyć w ADCC. Wyselekcjonowane warianty alaninowe, które miały albo zredukowane wiązanie z FcγRIIIA (warianty 17, 18, 34; Tabela 6), albo nie miały wpływu na wiązanie FcγRIIIA (odmiana 31, Tabela 6), albo które miały zwiększone wiązanie z FcγRIIIA (wariant 30, 36; Tabela 6) testowano w analizach in vitro przy użyciu ludzkich PBMC jako komórek efektorowych. Ze względu na to, że komórki docelowe były komórkami SKBR3 z nadekspresją HER2, to warianty Fc IgG użyte w tej analizie wytworzono przez substytucję domen VH/VL E27 anty-IgE odpowiednimi domenami z przeciwciała anty-HER2; HERCEPTIN® (ludzkie Ab4D5-8 w Tabeli 1 z Carter i inni, PNAS (USA) 89: 4285 (1992)). Wzorzec ADCC wykazywany przez warianty był skorelowany z wzorcami wiązania z FcγRIIIA (Figury 20 oraz 21). W szczególności wariant wykazujący większą poprawę wiązania z FcγRIIIA w analizach białko:białko, wariant 36S298(317)A, wykazywał również poprawę ADCC w porównaniu do dzikiego typu HERCEPTIN® w ilości 1,25 ng/ml (Figura 21).
PL 220 113 B1
P r z y k ł a d 5
Wiązanie wariantów Fc do polimorficznych receptorów Fc
W populacji ludzkiej stwierdzono występowanie wariantów allelicznych kilku ludzkich FcγR. Warianty te wykazywały różnice w wiązaniu ludzkiej oraz mysiej IgG, a wiele badań skorelowało wyniki z obecnością specyficznych wariantów alleicznych (dla przeglądu zobacz LehrnBecher i inni, Blood 94 (12): 4220-4232 (1999)). W kilku badaniach badano dwie postaci FcγRIIA, R131 oraz H131, oraz ich związek z wynikami klinicznymi (Hatta i inni. Genes and Immunity 1:53-60 (1999); Yap i inni Lupus 8:305-310 (1999); jak również Lorenz i inni European J. Immunogenetics 22:397-401 (1995)). Obecnie badane są dwie postaci alleliczne FcγRIIIA, F158 oraz V158 (Lehrebecher i inni, supra; i Wu i inni. J. Clin. Invest. 100 (5):1059-1070)). W przykładzie tym wyselekcjonowane warianty IgG testowano względem tych obu postaci allelicznych FcγRIIA i FcγRIIIA. Analizy wiązania receptora Fc przeprowadzono zasadniczo tak jak w powyższych przykładach. Jednakże dla FcγRIIIA-V158 przeprowadzono zarówno (a) test wiązania receptora o niskim powinowactwie z przykładu 1 (w którym analizowano wiązanie kompleksu IgG do FcγRIIIA-V158); oraz (b) test wiązania FcγR o wysokim stopniu powinowactwa z przykładu 4 (w którym analizowano wiązanie monomeru IgG do FcγRIIIA-V158). Wyniki badań podsumowano w tabeli 10 poniżej.
PL 220 113 B1
WIĄZANIE WARIANTÓW Z RECEPTORAMI POLIMORFICZNYMI FcyRIIA 1 FcyRUIA
177 K290(307)G 1.07 1 1.23 1 1.11 1 2.29
PL 220 113 B1
σ τ γ-1 Ο Γ~ CM Ο γο ’ I Ρ « r™ł , Ο | 1 rH ! Γ | Ο j CM στ ο ο τ—1 <Μ Ο co si s ! t 1— J '-i· J O [ CO W r~1 O o· in o CM CO O O ιΟ 03 O LD σι τΉ O Γ- ΟΟ o <—( t—1 O 1-ł 1 1 1 1 1 1 < J ł i i 1 l i—ł r- co o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 CM rH 00 O O o *f> o 1 1 l 1 i 1 1 1 1 1 1 1 1 M* r- r-ł O Γ- ΟΟ O
rt te ! Λ o ί z σ rt σ [ ł O 1 l rt 1 I ϋ
a-'· ·*—» 1 X—. 1 —» I
σ στ στ Ch [ στ o T^ł i—ł | i—ł | r— | r-
ο ο Ο o o r—1 r-t rM i rt | r-H | t-H
CO co [ C0 co co co CO co CO 1 co [ CO
—·
<~\Ι CM ! <Μ CM ! CM co | co co
στ σι στ στ στ στ στ σ σ | σ | στ
CM 04 CM CM CM CM CM CM CM | CM | (M
PŚ Οί { Cd o; j a. W ŁJ ω 1 ω 1 00 1 09
1 I 1 1 M* co 1 1 ΧΓ 1 1
c—1 Ο 1 CM 1 co 'O* CO r- ł r- 1 VO 1 O
co 03 | 00 CO 1 OÓ r-C co ł—ł 1 J—i 1 CO 1 r*
co j i r-l i CM j 2 i 1 CM J i rH j o ; 2 ! CO kO o o ! i ! 2 ! ! ° I 1 1 «σ' CM t-f o ! - i ;E; 1 2 ί 1 1 m ] 1 CD ! O 2 i «4· 00 o o ] -3* j isi :si o r—( CM r-ł O
<-ł ί □□ ! r-ł 1 M* ! CM 1 στ i uo ’ ΓΟ 1 | CM 1 | CM
rr J O f—4 1 1 r—1 r-ί 1 <—i ! r-ł 1“< i ł-1 1 OT
O J o j o 1 1 1-1 i H 1 1 r-1 j i-1 1 1 f—1 1 1 O
1 1 z, J > 1 1 I 1 .-3 ! rt 1 1 I rt i rt ! 1 ł rt 1 i rf
t- ! r— i Γ- 1 r- ! «3· 1 CO ! ! to 1 I στ | CM
1-4 r—ł 1 ·“* CM 1 CM ! ro co co I uo
CO ! co { CO 1 <*0 J CO CO j co j co 1 co | co
1 —
CO ! od ; 00 1 CO ! lD 1 r— : tn 5 r— 1 o 1 co
σ στ στ 1 στ O 1 o r~ł i «—, I CM co
CM CM (Μ 1 CM CO 1 co CO co I CO co
w i CO 00 1 1 co > 1 h ; S , te 1 te 1 Cd
1 1 l 1 co 1 1 1 σ i 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1-4 1 <M 1 r—ł 1 r—1 | o 1 r—i 1 iA 1 k£> 1 00 1 a1
Γ 1 r- i CM 1 CM 1 f vr i Μ· 1 rtT 1 ^r 1 iD
PL 220 113 B1
!
CM uO o o o r- o 1 1 1 1 l ! 1 1 i 1 I 1 1 1 CM o o co UO o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I 1 1 J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 t 1 1 1 1 I ł CM J 1 i O J o j O J 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i—1 C' OD o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i 1 1 1 C- uo rd o ł~ł o r-1 I 1 ( I 1 ! 1 i 1 i 1 ! 1 i uo σ> o o UO f-1 1—1 1 l [ 1 1 Γ Γ 1 i 1 1 1 1 1 i rd ! W | S ! 1 CD f O rd ] Γ rd r-1 o c—I rd
o 1 1 2 1 1 co J 1 f « J es ! o 1 1 I u 1 1 < 1 | CXJ 1 l σ •z
,— —I —. r—'
CM 1 CM 1 CM t CM ! CM CM CM ' co | co CO 1 co
uo 1 uo uo uo uo uO JO JO JO UO UO
ro 1 co 1 co I CO ] CO j CO co CO co CO j co
1 1 *—'
<O 1 co 1 co 1 co ί CO ! CO 1 co ef 1 ’Τ
co 1 co i co co CO CO CO Γ0 CO J co CO
CO 1 CO co P0 co ; CO co co co CO CO
ω 1 1 Cd 1 1 Id ł 1 ω ; u ] ω 1 td ! y 1 i y
1 1 CM 1 1 co 1 i 1 CM ί 1 co 1 sr 1 1 co ł 1 1 JO i i VP i Γ'
τ}· 1 <r 1 «Τ 1 UO 1 uo i CO 1 r~ i UO 1 co 1 co i co
1 f—1 1 w 1 1—f I rd I t—4 1 t—i i UO 1 C—1 1 rd 1 i—i
CO i UO [ rd rd rd ί ! co [ rd
,__ f _ 1 _ 1 _ i 1 1 1 1 1
rd ! ! °o ! co ! rd f
«—1 ! 1 ° 1 o 1 1 t 1 1 <-d
O 1 ° 1 ° 1 O [ 1 { 1 1 O ‘
1 1 ’ i i 1 1 f 1 I Ά
I—1 ! ! kD i ko ! CD J ! cn ] co ! UO
o j r~ I 10 [ o i O j Φ I ° 1 0 ' o
1—· ! ° I ° ! o ! rd j rd j O ! i rd [ i—ł
ω ! ω ! α ! o j s | > J 3 > j dl
s 1
CO ! ! m ! CO ! co co co CO co ! co
uo “0 JO UO uo UO ‘O UO UO
co co co co CO i 00 i co j co
-r
rr 3 rr TT I * ! 3 TT
CO <Ό o co CO CO CO ^0 CO CO
CO CO CO CO CO ro CO CO CO CO
1 « 1 id J id ! id j id ! κ ί id J
00 1 i 1 I 1 O 1 1 co | 1 O 1 1 rd 1 CM 1 1 i CO 1 1 O 1 rd
co 1 co 1 i r- 1 CO 1 <n i co 1 co | CM 1 CM
i-d 1 «—1 1 rd ( rd | rd I rd | t—1 i rd | CM 1 CM
PL 220 113 B1
PL 220 113 B1
W przypadku FcyRIIIA wzorzec wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 z FcvRIIIA-V158 o stosunkowo wysokim powinowactwie był taki sam jak do FcyRIIIA-F158 o stosunkowo niższym powinowactwie (postać F158 stosowano w analizie wszystkich wariantów). Warianty IgG1, które wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIIA-F158 wykazywały także poprawione wiązanie z FcyRIIIA-V158, chociaż poprawa nie była tak wyraźna. W przypadku FcvRIIA-R131 (stosowanego do analizy wszystkich wariantów) oraz FcyRIIA-H131 wzór wiązania wyselekcjonowanych wariantów IgG1 nie wykazywał wyraźnych różnic. S267(280)A, H268(281)A oraz S267(280)A/H268(281)A wykazywały poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131 w porównaniu do natywnej IgG1, ale nie z FcvRIIA-H131. Przeciwnie 3267(280)G wykazywał poprawione wiązanie z FcvRIIA-R131, ale zmniejszone wiązanie z FcvRIIA-H131 (Tabela 10). Inne warianty wiązały się podobnie z następującymi postaciami allelic znymi FcyRIIA: V305(324)A, T307(326)A, N315(324)A, K317(336)A oraz K320(339)A.
PL 220 113 B1
Lista sekwencji <11C> Genenrech, IńC.
<12C> ariant tnacieizy siego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (Fc-R), polipeptyd zawierający- wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozy cja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposob otrzymywania w-anantu regionu Fc <130 P1726RIPCT <U1> 2000-01-14 <ise> us sd/iis,ca3 <153» 1399-01-15 iiia> ii <210> 1 <211» 213 <212» PRT
Setawnej»«tjctw <220» <221» <22 2> <22 3»
Se*w®(K}a sibcisi
1-213
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <400» 1
Aap l Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 15
5 10
Gly Asp Arg Vsl Thr ile Thr Cys Arg Ala iSer Lys Pro V<X Aao
20 25 30
Gly Glu Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly
35 40 45
Lys Ala Pro L/S Leu Leu Ile Tys Ali Ala Ser Tyr Leu Gi5ł Ser
50 55 60
Gly vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Aap Phs
«3 70 35
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala the Tyr
80 35 90
Ty i Cys Gin Gin Ser 8ia Glu Ajp Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly
95 too 135
Thr Lys val 51« 11« Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Vai Phe
110 115 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Set
125 130 135
Val Val Cys L&U. Leu As Λ Α3Π Phe Tyr Pro Acg Ala Lyo Val
140 145 150
Gira Trp Lys Vai Asp Asn Al A Leu Gin Ser OŁy Ser Gin Glu
1.35 ISO 155
Ser Val Thr Glu Gin Asp Sar Lys Asp Ser Thr Tys Ser Leu Ser
170 1?5 180
Ster Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala As;» Tyr Lys His Ły’ Val
185 ISO 195
PL 220 113 B1
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 218 <210 2 <211> 451 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <n?n>
Sekwencja sztuczna <221>
<222> 1-451 <223>
Sekwencja jest w całości zsyntetyzowana <40Q> 2
Glu Val Gin 1 Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gin Pro Gly 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr
20 25 30
Ser Gly Tyr Ser Trp Asn Trp Ile Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Leu Glu Trp Val Ala Ser Ile Lys Tyr Ser Gly Glu Thr Lys Tyr
50 55 60
Asn Pro Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
65 70 75
Lys Asn Thr Phe Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
80 85 90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser His Tyr Phe Gly His
95 100 105
Trp His Phe Ala Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
110 115 120
Ser Ala ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
125 130 135
Ser Lys ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
140 145 150
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
155 160 165
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser
17 0 175 180
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
185 190 195
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Ile Cys Asn val Asn His Lys Pro
200 205 210
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Aso
215 220 225
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
230 235 240
PL 220 113 B1
Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 Phe Pro Pro lys 250 Pro Lys Asp Thr Leu 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin
305 310 315
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
320 325 330
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
335 340 345
Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
350 355 360
Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
365 370 375
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin
380 335 390
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
395 400 405
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
410 415 420
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
425 430 4 35
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
440 445 450
Lys
451 <210 3 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 3
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
PL 220 113 B1
70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218 <210> 4 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 4
Pro 1 Ala Pro Glu Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Leu Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu A3p Pro Glu Val Lys
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
PL 220 113 B1
Leu Thr Cys Leu Val 140 Ly3 Gly Phe Tyr Pro 145 Ser Asp Ile Ala Val 150
Glu Trp Glu Ser Asn 155 Gly Gin Pro Glu Asn 160 Asn Tyr Lys Thr Thr 165
Pro Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Phe 175 Phe Leu Tyr Ser Lys 180
Leu Thr val Asp Lys 185 Ser Arg Trp Gin Gin 190 Gly Asn Val Phe Ser 195
Cys Ser Val Met His 200 Glu Ala Leu His Asn 205 His Tyr Thr Gin Lys 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 218 <210> 5 <211> 217 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 5
Pro 1 Ala Pro Pro Val 5 Ala Gly Pro Ser Val 10 Phe Leu Phe Pro Pro 15
Lys Pro Lys Asp Thr 20 Leu Met Ile Ser Arg 25 Thr Pro Glu Val Thr 30
Cys Val Val Val Asp 35 Val Ser His Glu Asp 40 Pro Glu Val Gin Phe 45
Asn Trp Tyr Val Asp 50 Gly Val Glu Val His 55 Asn Ala Lys Thr Lys 60
Pro Arg Glu GlU Gin 65 Phe Asn Ser Thr Phe 70 Arg Val Val Ser Val 75
Leu Thr Val Val His 80 Gin Asp Trp Leu Asn 85 Gly Lys Glu Tyr Lys 90
Cys .Lys Val Ser Asn 95 Lys Gly Leu Pro Ala 100 Pro Ile Glu Lys Thr 105
Ile Ser Lys Thr Lys 110 Gly Gin Pro Arg Glu 115 Pro Gin Val Tyr Thr 120
Leu Pro Pro Ser Arg 125 Glu Glu Met Thr Lys 130 Asn Gin Val Ser Leu 135
Thr Cys Leu Val Lys 140 Gly Phe Tyr Pro Ser 145 Asp Ile Ala Val Glu 150
Trp Glu Ser Asn Gly 155 Gin Pro Glu Asn Asn 160 Tyr Lys Thr Thr Pro 165
Pro Met Leu Asp Ser 170 Asp Gly Ser Phe Phe 175 Leu Tyr Ser Lys Leu 180
Thr Val Asp Ly3 Ser 185 Arg Trp Gin Gin Gly 190 Asn Val Phe Ser Cys 195
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Sec
PL 220 113 B1
200 205 210
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 215 217 <210> 6 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 6
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin
35 40 45
Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Ile Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
215 218
<210> 7 <211> 218 <212> PRT <213> homo sapiens <400 7
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 15 10 15
PL 220 113 B1
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 35 40 45
Ehe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr 50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Vai Val Ser
65 70 75
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
80 85 90
Lys Cys Ly3 Val Ser Α3Π Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
140 145 150
Glu Trp Glx Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Α3Π Tyr Lys Thr Thr
155 160 165
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
170 175 180
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser
185 190 195
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys
200 205 210
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
215 218 <210> 8 <211> 215
<212> PRT <213> Mus musculus
<400> 8 Thr Val 1 Pro Glu Val 5 Ser Ser Val Phe Ile 10 Phe Pro Pro Lys Pro 15
Lys Asp Val Leu Thr 20 Ile Thr Leu Thr Pro 25 Lys Val Thr Cys Val 30
Val Val Asp Ile Ser 35 Lys Asp Asp Pro Glu 40 Val Glu Phe Ser Trp 45
Phe Val Asp Asp Val 50 Glu Val His Thr Ala 55 Gin Thr Gin Pro Arg 60
Glu Glu Gin Phe Asn 65 ser Thr Phe Arg Ser 70 Val Ser Glu Leu Pro 75
Ile Met His Gin Asp Cys Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
PL 220 113 B1
85 90
Val Asn Ser A.La Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 95 100 105
Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gin Val Tyr Thr Ile Pro 110 115 120
Pro Pro Lys Glu Gin Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys 125 130 135
Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gin 140 145 150
Trp Asn Gly Gin Pro Ala Glu Asn Tyr Ly3 Asn Thr Gin Pro Ile
155 160 165
Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
170 175 180
Gin Lys Ser Α3Π Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
185 190 195
Leu His Glu Gly Leu His Asn Hi3 His Thr Glu Ly3 Ser Leu Ser
200 205 210
His Ser Pro Gly Lys
215 <210> 9 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9
Pro 1 Ala Pro Asn Leu 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Ser Pro Ile Val 30
Thr Cy3 Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Giu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Leu Arg Val Val Ser 75
Ala Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ala Pro Ile Glu Arg 105
Thr He Ser Lys Pro 110 Lys Gly Ser Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Val Leu Pro Pro Pro 125 Glu Glu Glu Met Thr 130 Lys Lys Gin Val Thr 135
Leu Thr Cys Met Val 140 Thr Asp Phe Met Pro 145 Glu Asp Ile Tyr Val 150
PL 220 113 B1
Glu Trp Thr Asn Asn 155 Gly Lys Thr Glu Leu 160 Asn Tyr Lys A3n Thr 165
Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp dy Ser Tyr Phe Mec Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
200 205 210
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
215 218
<210> 10 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculu9
<400> 10 Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser 10 Val Phe Ile Phe Pro 15
1 5
Pro Asn Ile Lys Asp 20 Val Leu Met Ile Ser 25 Leu Thr Pro Lys Val 30
Thr Cys Val Val Val 35 Asp Val Ser Glu Asp 40 Asp Pro Asp Val Gin 45
Ile Ser Trp Phe Val 50 Asn Asn Val Glu Val 55 His Thr Ala Gin Thr 60
Gin Thr His Arg Glu 65 Asp Tyr Asn Ser Thr 70 Ile Arg Val Val Ser 75
His Leu Pro Ile Gin 80 His Gin Asp Trp Met 85 Ser Gly Lys Glu Phe 90
Lys Cys Lys Val Asn J 95 Asn Lys Asp Leu Pro 100 Ser Pro Ile Glu Arg 105
Thr Ile Ser Lys Pro 110 Lys Gly Leu Val Arg 115 Ala Pro Gin Val Tyr 120
Thr Leu Pro Pro Pro 125 Ala Glu Gin Leu Ser 130 Arg Lys Asp Val Ser 135
Leu Thr Cys Leu Val 140 Val Gly Phe Asn Pro 145 Gly Asp Ile Ser Val 150
Glu Trp Thr Ser Asn 155 Gly His Thr Glu Glu 160 Asn Tyr Lys Asp Thr 165
Ala Pro Val Leu Asp 170 Ser Asp Gly Ser Tyr 175 Phe Ile Tyr Ser Lys 180
Leu Asn Met Lys Thr 185 Ser Lys Trp Glu Ly3 190 Thr Asp Ser Phe Ser 195
Cys Thr Asn Val Arg His 200 Ile Ser Arg Ser Glu Pro Gly Leu Lys Asn ' 205 Gly Lys Tyr Tyr Leu Lys Lys 210
PL 220 113 B1
215 218 <210> 11 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <400 11
Pro Pro Gly i ' Asn Ile 5 Leu Gly Gly Pro Ser 10 Val phe Ile Phe Pro 15
Pro Lys Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val
20 25 30
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His
35 40 45
Val Ser Trp Phe Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr
50 55 60
Gin Pro Arg Glu Ala Gin Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
65 70 75
Ala Leu Pro Ile Gin His Gin Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe
80 85 90
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
95 100 105
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg Ala Gin Thr Pro Gin Val Tyr
110 115 120
Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gin Met Ser Lys Lys Lys Val Ser
125 130 135
Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser Glu Ala Ile Ser Val
140 145 150
Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gin Asp Tyr Lys Asn Thr
155 160 165
Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
170 175 180
Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gin Gly Glu Ile Phe Thr
185 190 195
Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gin Lys
200 205 210
Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys
215 218

Claims (44)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc ludzkiej IgG1 który to wariant uczestniczy w procesie cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w obecności ludzkich komórek efektorowych od około 1,5-raza do około 100-razy skuteczniej, lub wiąże receptor FcyRIII z wyższym powinowactwem, niż macierzysty polipeptyd i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239,
    248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285,
    286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327,
    329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437,
    438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  2. 2. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje przeciwciało.
  3. 3. Wariant według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że uczestniczy w ADCC około 1,5-krotnie do około 100-krotnie skuteczniej niż macierzysty polipeptyd.
  4. 4. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 3, znamienny tym, że wiąże FcyRIII z wyższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  5. 5. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 4, znamienny tym, że ponadto wiąże FcyRII z niższym powinowactwem niż macierzysty polipeptyd.
  6. 6. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 5, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w domenie CH2 regionu Fc.
  7. 7. Wariant według jednego z zastrz. 1 do 6, znamienny tym, że zawiera przynajmniej jedną modyfikację reszty aminokwasowej w regionie Fc innym niż niższy region zawiasowy tego fragmentu.
  8. 8. Wariant według według jednego z zastrz. 1 do 7, znamienny tym, że zawiera podstawienie reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 256, 290, 298, 312, 326, 330, 333, 334, 360, 378 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  9. 9. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera dwa lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  10. 10. Wariant według zastrz. 8, znamienny tym, że zawiera trzy lub więcej podstawienia reszt aminokwasowych w wymienionych pozycjach.
  11. 11. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcyR), który to polipeptyd zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256,
    258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294,
    295, 296, 298, 301, 303, 305, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335,
    337, 338, 340, 360, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  12. 12. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 298, 301, 303, 322, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  13. 13. Polipeptyd według zastrz. 11 albo 12, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI.
  14. 14. Polipeptyd według zastrz. 13, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRI i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 270, 327 lub 329 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  15. 15. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 14, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  16. 16. Polipeptyd według zastrz. 15, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 265, 269, 419, 435, 438 lub 439 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
    PL 220 113 B1
  17. 17. Polipeptyd według jednego z zastrz. 11 do 16, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie z FcyRIII.
  18. 18. Polipeptyd według zastrz. 17, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 293, 294, 295, 296, 301, 303, 322, 327, 329, 338, 340, 435 lub 437 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  19. 19. Polipeptyd według zastrz. 11, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyR i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 276, 280, 283, 285, 286, 290, 298, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  20. 20. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRIII.
  21. 21. Polipeptyd według zastrz. 20, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII.
  22. 22. Polipeptyd według zastrz. 21, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie z FcyRIII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w pozycji 298 i/lub 333 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  23. 23. Polipeptyd według zastrz. 19, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII.
  24. 24. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 255, 256, 258, 267, 268, 286, 290, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 326, 330, 331, 337, 340, 378, 398 lub 430 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  25. 25. Polipeptyd według zastrz. 23, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII.
  26. 26. Polipeptyd według zastrz. 25, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcyRII i dodatkowo wykazuje zmniejszone wiązanie FcyRIII i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 268, 272, 298, 301, 322 lub 340 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  27. 27. Polipeptyd zawierający wariant regionu Fc ludzkiej IgG1 o zmienionym powinowactwie wiązania ludzkiego noworodkowego receptora Fc (FcRn), który to polipeptyd zawiera modyfik ację reszty aminokwasowej w dwóch lub więcej pozycjach spośród 307, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie Fc jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  28. 28. Polipeptyd według zastrz. 27, znamienny tym, że ponadto wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn.
  29. 29. Polipeptyd według zastrz. 28, znamienny tym, że wykazuje zmniejszone wiązanie FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 252, 253, 254, 439 lub 447 regionu Fc, przy czym numeracja reszt w regionie jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  30. 30. Polipeptyd według zastrz, 27, znamienny tym, że wykazuje zwiększone wiązanie FcRn.
  31. 31. Polipeptyd według zastrz. 30, znamienny tym, że wykazuje zwiększone FcRn i zawiera modyfikację reszty aminokwasowej w jednej lub więcej pozycjach spośród 238, 256, 265, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 lub 434 regionu Fc, przy czym numeracja w regionie Fc reszt jest zgodna z indeksem EU według Kabat.
  32. 32. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera wariant polipeptydu określony w zastrz. 1 i farmaceutycznie akceptowany nośnik.
  33. 33. Kompozycja według zastrz. 32, znamienna tym, że jest sterylna.
  34. 34. Wyizolowany kwas nukleinowy, znamienny tym, że koduje wariant polipeptydu określony w zastrz. 1.
  35. 35. Wektor, znamienny tym, że zawiera kwas nukleinowy określony w zastrz. 34.
  36. 36. Komórka gospodarza, znamienna tym, że zawiera wektor określony w zastrz. 35.
    PL 220 113 B1
  37. 37. Sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, znamienny tym, że obejmuje etap, w którym hoduje się komórkę gospodarza określoną w zastrz. 36 tak, że uzyskuje się ekspresję tego kwasu nukleinowego.
  38. 38. Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że obejmuje ponadto etap, w którym odzyskuje się wariant polipeptydu z hodowli komórek gospodarza.
  39. 39. Zastosowanie wariantu polipeptydu określonego w zastrz. 1 do wytwarzania leku do leczenia zaburzenia u ssaka.
  40. 40. Sposób otrzymywania wariantu regionu Fc IgG1 o zwiększonym powinowactwie wiązania receptora FcyRIII lub o zmienionej aktywności cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał (ADCC) w porównaniu z macierzystym polipeptydem, znamienny tym, że obejmuje etapy, w których:
    a) wprowadza się dwie lub więcej modyfikacji reszt aminokwasowych w regionie Fc macierzystego polipeptydu w celu otrzymania wariantu regionu Fc;
    b) określa się wiązanie wariantu regionu Fc z FcyRIII lub określa się aktywność ADCC wariantu regionu Fc.
  41. 41. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określenie wiązania wariantu regionu Fc z FcyRIII in vitro.
  42. 42. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje identyfikację wariantu regionu Fc o zwiększonym powinowactwie wiązania FcyRIII lub o zwiększonej aktywności ADCC.
  43. 43. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że etap (b) obejmuje określanie wiązania wariantu regionu Fc z przynajmniej dwoma różnymi FcR.
  44. 44. Sposób według zastrz. 43, znamienny tym, że obejmuje ludzki receptor Fc gamma II (FcyRII) oraz ludzki receptor Fc gamma III (FcyRIII).
PL394232A 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc PL220113B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11602399P 1999-01-15 1999-01-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL394232A1 PL394232A1 (pl) 2011-07-04
PL220113B1 true PL220113B1 (pl) 2015-08-31

Family

ID=22364785

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
PL394232A PL220113B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Wariant macierzystego polipeptydu zawierającego region Fc, polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania receptora Fc gamma (FcγR), polipeptyd zawierający wariant regionu Fc o zmienionym powinowactwie wiązania noworodkowego receptora Fc (FcRn), kompozycja, wyizolowany kwas nukleinowy, wektor, komórka gospodarza, sposób otrzymywania wariantu polipeptydu, zastosowanie wariantu polipeptydu i sposób otrzymywania wariantu regionu Fc

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349770A PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
PL388183A PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2000-01-14 Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna

Country Status (16)

Country Link
US (4) US7371826B2 (pl)
EP (4) EP2366713A3 (pl)
JP (4) JP2003512019A (pl)
KR (5) KR100940380B1 (pl)
CN (2) CN1763097B (pl)
AU (2) AU778683B2 (pl)
BR (1) BR0008758A (pl)
CA (1) CA2359067C (pl)
ES (1) ES2694002T3 (pl)
HU (2) HUP0104865A3 (pl)
IL (5) IL144056A0 (pl)
MX (2) MX353234B (pl)
NZ (1) NZ539776A (pl)
PL (3) PL209392B1 (pl)
WO (1) WO2000042072A2 (pl)
ZA (1) ZA200105484B (pl)

Families Citing this family (1879)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
IL146005A0 (en) 1999-05-07 2002-07-25 Genentech Inc Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US6855493B2 (en) 2000-11-28 2005-02-15 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
EP1355919B1 (en) 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2437958C (en) * 2001-03-09 2018-10-30 University Of Chicago Polymeric immunoglobulin fusion proteins that target low-affinity fc.gamma.receptors
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
PL213948B1 (pl) * 2001-10-25 2013-05-31 Genentech Inc Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US8093357B2 (en) 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2487932A1 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Macrogenics, Inc. Cd16a binding proteins and use for the treatment of immune disorders
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
PT1534335E (pt) 2002-08-14 2012-02-28 Macrogenics Inc Anticorpos específicos de fcγriib e processos para a sua utilização
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
CA2832136C (en) 2002-09-27 2015-11-17 Xencor Optimized fc variants and methods for their generation
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
ATE480562T1 (de) 2002-10-15 2010-09-15 Facet Biotech Corp Veränderung von fcrn-bindungsaffinitäten oder von serumhalbwertszeiten von antikörpern mittels mutagenese
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
HUE035898T2 (en) 2002-12-16 2018-05-28 Genentech Inc Immunoglobulin variants and their applications
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7355008B2 (en) * 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
AU2011265460B2 (en) * 2003-01-09 2014-07-17 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
AU2004204817C1 (en) 2003-01-13 2011-01-20 Macrogenics, Inc. Soluble FcyR fusion proteins and methods of use thereof
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
ME00426B (me) 2003-04-09 2011-10-10 Genentech Inc Liječenje autoimunih bolesti kod pacijenata sa neadekvatnim odgovorom na tnf-alfa inhibitor
CN1798767B (zh) * 2003-04-10 2011-02-16 晶面生物技术公司 通过诱变来改变抗体对FcRn的结合亲和力或血清半衰期
KR100973564B1 (ko) * 2003-05-02 2010-08-03 젠코어 인코포레이티드 최적화된 Ｆｃ 변이체 및 그의 제조 방법
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
ES2537738T3 (es) 2003-06-05 2015-06-11 Genentech, Inc. Terapia de combinación para trastornos de células B
HUE033129T2 (en) 2003-07-24 2017-11-28 Innate Pharma Sa Methods and compositions for increasing the efficacy of therapeutic antibodies using compounds that potentiate NK cells
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2004266159A1 (en) 2003-08-22 2005-03-03 Biogen Idec Ma Inc. Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same
US8101720B2 (en) * 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
EP1673395A1 (en) 2003-10-15 2006-06-28 PDL BioPharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
GB0324368D0 (en) * 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
HUE038955T2 (hu) * 2003-11-05 2018-12-28 Roche Glycart Ag Antigén-kötõ molekulák fokozott Fc receptor-kötõ affinitással és effektor funkcióval
WO2005047327A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
CA2546580A1 (en) * 2003-11-18 2005-06-09 Iconic Therapeutics, Inc. Homogeneous preparations of chimeric proteins
JP2007512846A (ja) 2003-12-04 2007-05-24 ゼンコー・インコーポレイテッド 増加した宿主ストリング含有量を有する変異体タンパク質の生成方法およびその組成物
DK2383295T3 (en) 2003-12-10 2015-06-15 Squibb & Sons Llc Ip-10 antibodies and uses thereof
PT2418220T (pt) 2003-12-10 2017-10-04 Squibb & Sons Llc Anticorpos contra interferão alfa e suas utilizações
JP4762156B2 (ja) 2004-01-12 2011-08-31 アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド Ｆｃ領域変異体
EP2168986A3 (en) 2004-02-19 2010-07-28 Genentech, Inc. CDR-repaired antibodies
US7276585B2 (en) 2004-03-24 2007-10-02 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
WO2005100402A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
CA2565874C (en) 2004-05-10 2017-10-03 Macrogenics, Inc. Humanized fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof
KR100545720B1 (ko) * 2004-05-31 2006-01-24 메덱스젠 주식회사 당화된 면역글로불린 및 이를 포함하는 면역접합체
SG183012A1 (en) 2004-06-04 2012-08-30 Genentech Inc Method for treating multiple sclerosis
ES2643237T3 (es) 2004-06-21 2017-11-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos del receptor 1 de interferón alfa y sus usos
CN101189028B (zh) * 2004-07-12 2013-05-29 马克罗基因公司 具有变异Fc区的抗体的鉴定和工程化以及使用方法
EP3342782B1 (en) * 2004-07-15 2022-08-17 Xencor, Inc. Optimized fc variants
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
AU2005287406B2 (en) 2004-07-26 2011-08-18 Biogen Ma Inc. Anti-CD154 antibodies
BRPI0514068B8 (pt) 2004-08-04 2021-05-25 Applied Molecular Evolution Inc anticorpo anti-cd20, e, composição farmacêutica
AU2005277641A1 (en) 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Llc Eph receptor Fc variants with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
CA2577133A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CN101087807A (zh) 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
AU2005335714B2 (en) * 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
US9200079B2 (en) 2004-11-12 2015-12-01 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US20070135620A1 (en) * 2004-11-12 2007-06-14 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
BRPI0518994A2 (pt) * 2004-12-31 2008-12-02 Biogen Idec Inc anticorpos ou polipeptÍdeos que se ligam a br3, seus usos e formulaÇÕes lÍquidas
EP3698807A1 (en) 2005-01-21 2020-08-26 Genentech, Inc. Fixed dosing of her antibodies
US8029783B2 (en) * 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
US20060263357A1 (en) 2005-05-05 2006-11-23 Tedder Thomas F Anti-CD19 antibody therapy for autoimmune disease
PT1853718E (pt) 2005-02-15 2015-11-12 Univ Duke Anticorpos anti-cd19 e usos em oncologia
US8444973B2 (en) 2005-02-15 2013-05-21 Duke University Anti-CD19 antibodies and uses in B cell disorders
RS53128B (sr) 2005-02-23 2014-06-30 Genentech Inc. Produžavanje vremena progresije bolesti ili preživljavanja kod pacijenata obolelih od kancera jajnika korišćenjem pertuzumaba
EP2551282A3 (en) 2005-03-23 2013-02-13 Genmab A/S Antibodies against CD38 for treatment of multiple myeloma
US20110123440A1 (en) * 2005-03-29 2011-05-26 Genevieve Hansen Altered Antibody FC Regions and Uses Thereof
AU2006230413B8 (en) * 2005-03-31 2011-01-20 Xencor, Inc Fc variants with optimized properties
JP5838021B2 (ja) 2005-04-15 2015-12-24 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 共有結合型ダイアボディとその使用
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US11254748B2 (en) 2005-04-15 2022-02-22 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
PA8672101A1 (es) 2005-04-29 2006-12-07 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, métodos y usos
EP3530736A3 (en) 2005-05-09 2019-11-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US7601335B2 (en) 2005-05-20 2009-10-13 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
WO2007094842A2 (en) 2005-12-02 2007-08-23 Genentech, Inc. Binding polypeptides and uses thereof
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
CA2613818C (en) 2005-06-30 2013-08-27 Centocor, Inc. Anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
KR101704734B1 (ko) 2005-07-01 2017-02-09 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체
WO2007008943A2 (en) 2005-07-08 2007-01-18 Xencor, Inc. Optimized anti-ep-cam antibodies
SG164379A1 (en) * 2005-07-21 2010-09-29 Genmab As Potency assays for antibody drug substance binding to an fc receptor
AU2006272555B2 (en) 2005-07-25 2012-03-08 Aptevo Research And Development Llc B-cell reduction using CD37-specific and CD20-specific binding molecules
WO2007014238A2 (en) 2005-07-25 2007-02-01 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Single dose use of cd20-specific binding molecules
DK2573114T3 (en) 2005-08-10 2016-07-04 Macrogenics Inc The identification and production of antibodies with variant Fc regions, and methods of using same
AU2006290433B2 (en) 2005-08-26 2012-06-07 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
DK1931709T3 (en) 2005-10-03 2017-03-13 Xencor Inc FC VARIETIES WITH OPTIMIZED FC RECEPTOR BINDING PROPERTIES
JP4860703B2 (ja) 2005-10-06 2012-01-25 ゼンコー・インコーポレイテッド 最適化された抗ｃｄ３０抗体
EP2532677A1 (en) 2005-10-21 2012-12-12 Novartis AG Human antibodies against il13 and therapeutic uses
DK2500030T4 (en) 2005-11-04 2018-10-29 Genentech Inc Use of complement pathway inhibitors for the treatment of eye diseases
AU2006312148B2 (en) 2005-11-07 2012-04-12 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CA2629306A1 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
JP2009518314A (ja) 2005-12-02 2009-05-07 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｉｌ−２２に結合する抗体およびｉｌ−２２ｒに結合する抗体を含む、サイトカインシグナリングに関連する疾患および障害の処置のための組成物および方法
EA017491B1 (ru) 2005-12-08 2012-12-28 Медарекс, Инк. Человеческие моноклональные антитела к фукозил-gm1 и способы применения антифукозил-gm1 антител
US20090286962A1 (en) 2005-12-20 2009-11-19 Woolven Benjamin P Chimeric antibodies with part new world primate binding regions
SI3219328T1 (sl) 2005-12-29 2020-10-30 Janssen Biotech, Inc. Človeška protitelesa proti-IL-23, sestavki, postopki in uporabe
US8101365B2 (en) 2006-01-05 2012-01-24 Genentech, Inc. Anti-EphB4 antibodies and methods using same
RU2451031C2 (ru) 2006-01-20 2012-05-20 Дженентек, Инк. Антитела к эфрину в2 и способы их применения
NZ569988A (en) 2006-02-01 2011-09-30 Cephalon Australia Pty Ltd Domain antibody construct which binds to human TNF-alpha and contains a modified hinge region sequence and a truncated CH1 domain
EP2650306A1 (en) 2006-03-06 2013-10-16 Aeres Biomedical Limited Humanized Anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
AR060040A1 (es) 2006-03-21 2008-05-21 Genentech Inc Antagonistas de vefg y de alfa5 beta 1
JP5144499B2 (ja) 2006-03-31 2013-02-13 中外製薬株式会社 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法
EP4793360A2 (en) 2006-03-31 2026-08-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
JP5242382B2 (ja) * 2006-04-14 2013-07-24 株式会社医学生物学研究所 エフェクター機能を有するポリペプチド変異体
PT2032606E (pt) 2006-05-30 2014-02-05 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados e respetivas utilizações
AU2007319672B2 (en) 2006-06-06 2011-06-30 Genentech, Inc. Anti-DLL4 antibodies and methods using same
CN105837690A (zh) 2006-06-12 2016-08-10 新兴产品开发西雅图有限公司 具有效应功能的单链多价结合蛋白
EP2029173B1 (en) 2006-06-26 2016-07-20 MacroGenics, Inc. Fc riib-specific antibodies and methods of use thereof
EP2032159B1 (en) 2006-06-26 2015-01-07 MacroGenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
RU2498999C2 (ru) 2006-07-14 2013-11-20 Ац Иммуне Са Гуманизированное антитело к амилоиду бета
DK2046809T3 (en) 2006-07-19 2017-03-13 Univ Pennsylvania WSX-1 / IL-27 AS A TARGET OBJECTIVE FOR ANTI-INFLAMMATORY REACTIONS
RS53263B (sr) 2006-08-14 2014-08-29 Xencor Inc. Optimizovana antitela usmerena na cd19
CN101627055A (zh) 2006-09-05 2010-01-13 梅达雷克斯公司 骨形成蛋白及其受体的抗体以及它们的使用方法
US8323653B2 (en) 2006-09-08 2012-12-04 Medimmune, Llc Humanized anti-CD19 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
EP2061906B1 (en) 2006-09-12 2011-08-31 Genentech, Inc. Methods and compositions for the diagnosis and treatment of lung cancer using pdgfra, kit or kdr gene as genetic marker
US20100297103A1 (en) 2006-09-14 2010-11-25 Medical & Biological Laboratories Co., Ltd. Antibody having enhanced adcc activity and method for production thereof
EP2064240A2 (en) * 2006-09-18 2009-06-03 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target hm1.24
SI2066351T1 (sl) 2006-10-02 2016-02-29 E.R. Squibb & Sons, L.L.C. Humana protitelesa, ki vežejo cxcr4 in njihova uporaba
NZ576032A (en) * 2006-10-12 2012-03-30 Genentech Inc Antibodies to lymphotoxin-alpha
EP2064335A4 (en) * 2006-10-16 2011-03-30 Medimmune Llc MOLECULES WITH REDUCED HALF TIME, COMPOSITIONS AND ITS USE
ES2501947T3 (es) 2006-10-19 2014-10-02 Csl Limited Antagonistas de anticuerpos de alta afinidad del receptor alfa 1 de interleucina
PL2068922T3 (pl) 2006-10-19 2012-11-30 Csl Ltd Przeciwciała anty-IL-13R alfa1 i ich zastosowania
PT2845866T (pt) 2006-10-27 2017-08-09 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados e utilizações dos mesmos
US8618248B2 (en) 2006-10-31 2013-12-31 President And Fellows Of Harvard College Phosphopeptide compositions and anti-phosphopeptide antibody compositions and methods of detecting phosphorylated peptides
CN106084055A (zh) 2006-11-02 2016-11-09 健泰科生物技术公司 人源化的抗‑d因子抗体
MX2009005189A (es) 2006-11-15 2009-06-30 Medarex Inc Anticuerpos humanos monoclonales para btla y metodos de uso.
DK2102239T3 (da) 2006-11-30 2012-05-29 Res Dev Foundation Forbedrede immunoglobulin-biblioteker
SG177168A1 (en) 2006-12-01 2012-01-30 Medarex Inc Human antibodies that bind cd22 and uses thereof
US20080127996A1 (en) * 2006-12-04 2008-06-05 Weinhold Dennis G Method and apparatus to remediate an acid and/or liquid spill
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
US20100150950A1 (en) 2006-12-14 2010-06-17 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
US20080248033A1 (en) 2006-12-19 2008-10-09 Genentech, Inc. VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors
WO2009077483A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Novo Nordisk A/S Antibodies against human nkg2d and uses thereof
EP2107115A1 (en) 2007-01-24 2009-10-07 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition capable of binding specifically to ganglioside gm2
CA2676529C (en) 2007-01-24 2014-03-25 Kyowa Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition having enhanced effector activity
US7834154B2 (en) 2007-02-09 2010-11-16 Genentech, Inc. Anti-ROBO4 antibodies and uses therefor
MX2009008981A (es) 2007-03-02 2009-09-02 Genentech Inc Prediccion de respuesta a un inhibidor her.
EP3199180B1 (en) 2007-03-08 2022-01-05 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of solid tumors
BRPI0809042B1 (pt) 2007-03-22 2021-08-31 Biogen Ma Inc. Proteína de ligação a cd154 isolada, seu uso, e composição
WO2008118324A2 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Macrogenics, Inc. Composition and method of treating cancer with an anti-uroplakin ib antibody
EP3067368A1 (en) 2007-04-27 2016-09-14 Genentech, Inc. Potent, stable and non-immunosuppressive anti-cd4 antibodies
US8629245B2 (en) * 2007-05-01 2014-01-14 Research Development Foundation Immunoglobulin Fc libraries
BRPI0811466A2 (pt) 2007-05-07 2014-10-14 Medimmune Llc Anticorpo anti-icos isolado, ácido nucleico, vetor, célula isolada, métodos para produzir um anticorpo, para tratar uma doença ou distúrbio, para tratar ou prevenir a rejeição em um paciente de transplante humano, para tratar uma malignidade de célula t em um ser humano, para esgotar células t que expressam icos em um paciente humano, para romper a arquitetura do centro germinal em um órgão linfóide secundário de um primata, para esgotar células b centrais germinais de órgão linfóide secundário de um primata, e para esgotar células b comutadas em classes circulantes em um primata, e, composição farmacêutica.
US20100233167A1 (en) * 2007-05-10 2010-09-16 Ramesh Bhatt Chain reaction creating oligomers from repeat units of binding molecules
SI2173381T1 (sl) 2007-05-14 2014-01-31 Novimmune Sa Fc receptor-vezavni polipeptidi z modificiranimi efektorskimi funkcijami
CA2693053C (en) * 2007-05-30 2021-01-05 Xencor, Inc. Methods and compositions for inhibiting cd32b expressing cells
AU2008255352B2 (en) * 2007-05-31 2014-05-22 Genmab A/S Stable IgG4 antibodies
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
WO2008154249A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Genentech, Inc. Gene expression markers of tumor resistance to her2 inhibitor treatment
US8613923B2 (en) 2007-06-12 2013-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
US8048420B2 (en) 2007-06-12 2011-11-01 Ac Immune S.A. Monoclonal antibody
HRP20150086T1 (xx) * 2007-06-12 2015-02-27 Ac Immune S.A. Humanizirana antitijela za beta amiloid
EP2158221B1 (en) 2007-06-21 2018-08-29 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US20100254992A1 (en) * 2007-06-29 2010-10-07 Anuk Das Anti-mcp-1 antibodies, compositions, methods and uses
EP2586788B1 (en) 2007-07-09 2017-11-29 Genentech, Inc. Prevention of disulfide bond reduction during recombinant production of polypeptides
US20110091992A1 (en) * 2007-07-10 2011-04-21 Medimmune, Llc CRYSTALS AND STRUCTURE OF HUMAN IgG Fc VARIANT
PE20140625A1 (es) 2007-07-16 2014-05-29 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-CD79b E INMUNOCONJUGADOS HUMANIZADOS
PT2474557E (pt) 2007-07-16 2014-12-03 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados anti-cd79b e métodos de utilização
CN101952312A (zh) 2007-07-31 2011-01-19 米迪缪尼有限公司 多特异性表位结合蛋白及其应用
SI2769729T1 (sl) 2007-09-04 2019-06-28 Compugen Ltd. Polipeptidin in polinukleotidi in njihove uporabe kot tarča zdravila za izdelavo zdravil in bioloških zdravil
EP3127921A1 (en) 2007-09-26 2017-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substition in cdr
ES2687808T3 (es) 2007-09-26 2018-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Región constante de anticuerpo modificado
AU2008311366B2 (en) * 2007-10-05 2015-03-12 Ac Immune S.A. Use of anti-amyloid beta antibody in ocular diseases
PL2238166T3 (pl) 2007-10-05 2014-07-31 Genentech Inc Zastosowanie przeciwciała anty-Beta amyloidowego w chorobach oczu
AR068767A1 (es) 2007-10-12 2009-12-02 Novartis Ag Anticuerpos contra esclerostina, composiciones y metodos de uso de estos anticuerpos para tratar un trastorno patologico mediado por esclerostina
DK2233149T3 (en) 2007-10-16 2016-05-17 Zymogenetics Inc COMBINATION OF TRANSMEMBRANAKTIVATOR AND CALCIUM MODULATOR AND cyclophilin-LIGAND INTERAKTOR (TACI) AND ANTI-CD20 MEANS FOR TREATMENT OF AUTO-IMMUNE DISEASE
EP2230300A4 (en) 2007-10-24 2012-08-08 Otsuka Chemical Holdings Co Ltd POLYPEPTIDE WITH IMPROVED EFFECTOR FUNCTION
MX2010004761A (es) 2007-11-02 2010-05-19 Novartis Ag Moleculas y metodos para modular la proteina relacionada con el receptor de lipoproteina de baja densidad 6 (lrp6).
US20090202475A1 (en) 2007-11-07 2009-08-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
WO2015164330A1 (en) 2014-04-21 2015-10-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-psyk antibody molecules and use of same for syk-targeted therapy
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
WO2009117030A2 (en) 2007-12-19 2009-09-24 Macrogenics, Inc. Improved compositions for the prevention and treatment of smallpox
MX2010006735A (es) 2007-12-21 2010-09-30 Medimmune Ltd Miembros de union para receptor alfa de interleucina-4 (il-4ra) - 173.
KR101616758B1 (ko) 2007-12-26 2016-04-29 젠코어 인코포레이티드 ＦｃＲｎ에 대한 변경된 결합성을 갖는 Ｆｃ 변이체
US7914785B2 (en) 2008-01-02 2011-03-29 Bergen Teknologieverforing As B-cell depleting agents, like anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
EP2077281A1 (en) 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
KR20100107501A (ko) 2008-01-18 2010-10-05 메디뮨 엘엘씨 부위 특이적 접합을 위한 시스테인 조작 항체
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
DK2657253T3 (en) 2008-01-31 2017-10-09 Genentech Inc Anti-CD79b antibodies and immune conjugates and methods of use
WO2009100110A1 (en) 2008-02-05 2009-08-13 Medarex, Inc. Alpha 5 - beta 1 antibodies and their uses
MX2010008578A (es) 2008-02-08 2010-11-10 Medimmune Llc Anticuerpos anti-receptor 1 de interferon alfa con afinidad reducida al ligando fc.
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
NZ601815A (en) * 2008-03-31 2014-10-31 Genentech Inc Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
SG189730A1 (en) 2008-04-02 2013-05-31 Macrogenics Inc Her2/neu-specific antibodies and methods of using same
CN106349390B (zh) 2008-04-02 2019-12-10 宏观基因有限公司 Bcr-复合体-特异性抗体和其使用方法
TW201920257A (zh) 2008-04-11 2019-06-01 日商中外製藥股份有限公司 重複結合複數個抗原的抗原結合分子
CR20170001A (es) 2008-04-28 2017-08-10 Genentech Inc Anticuerpos anti factor d humanizados
EP2282769A4 (en) * 2008-04-29 2012-04-25 Abbott Lab DUAL VARIABLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND ITS USES
KR20110016959A (ko) 2008-06-03 2011-02-18 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2297209A4 (en) 2008-06-03 2012-08-01 Abbott Lab IMMUNOGLOBULINS WITH TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF
WO2010033279A2 (en) 2008-06-04 2010-03-25 Macrogenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
US8822645B2 (en) 2008-07-08 2014-09-02 Abbvie Inc. Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AR077718A1 (es) * 2008-07-15 2011-09-21 Genentech Inc Metodos para tratar enfermedades autoinmunes usando anticuerpos anti cd4. formulacion farmaceutica
PY09026846A (es) 2008-08-05 2015-09-01 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos que se dirigen a la proteína de complemento c5
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
CN102264763B (zh) 2008-09-19 2016-04-27 米迪缪尼有限公司 定向于dll4的抗体及其用途
AU2009303526B2 (en) * 2008-10-14 2015-01-15 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US8298533B2 (en) 2008-11-07 2012-10-30 Medimmune Limited Antibodies to IL-1R1
WO2010056804A1 (en) 2008-11-12 2010-05-20 Medimmune, Llc Antibody formulation
KR20180117734A (ko) 2008-11-22 2018-10-29 제넨테크, 인크. 유방암의 치료를 위한, 화학요법과 조합된 항-ｖｅｇｆ 항체의 용도
WO2010067308A2 (en) 2008-12-08 2010-06-17 Compugen Ltd. Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
US8775090B2 (en) 2008-12-12 2014-07-08 Medimmune, Llc Crystals and structure of a human IgG Fc variant with enhanced FcRn binding
JP5734201B2 (ja) 2008-12-19 2015-06-17 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 共有結合型ダイアボディ及びその使用
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
EP2379595A2 (en) 2008-12-23 2011-10-26 AstraZeneca AB Targeted binding agents directed to 5 1 and uses thereof
CN102341411A (zh) 2008-12-31 2012-02-01 比奥根艾迪克Ma公司 抗-淋巴细胞毒素抗体
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
CA2753158A1 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Humanized antibodies that bind to cd19 and their uses
JP5816558B2 (ja) 2009-03-05 2015-11-18 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＭｅｄａｒｅｘ， Ｌ．Ｌ．Ｃ． Ｃａｄｍ１に特異的な完全ヒト抗体
US8834870B2 (en) 2009-03-06 2014-09-16 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Treatment of leukemias and chronic myeloproliferative diseases with antibodies to EphA3
MX2011009704A (es) 2009-03-16 2011-09-28 Cephalon Australia Pty Ltd Anticuerpos humanizados con actividad anti-tumor.
TWI544077B (zh) 2009-03-19 2016-08-01 中外製藥股份有限公司 Antibody constant region change body
KR20150036824A (ko) 2009-03-20 2015-04-07 제넨테크, 인크. 이중특이적 항-ｈｅｒ 항체
EP2233500A1 (en) * 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
EP2411024A4 (en) * 2009-03-24 2013-02-27 Bayer Healthcare Llc Variants of factor viii and associated methods of use
CN103755808B (zh) 2009-03-25 2016-02-10 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-α5β1抗体及其应用
ES2549769T3 (es) 2009-03-25 2015-11-02 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-FGFR3 y métodos que emplean los mismos
ES2363358B1 (es) 2009-04-03 2012-06-21 FUNDACIÓ INSTITUT DE RECERCA HOSPITAL UNIVERSITARI VALL D'HEBRON (Titular al Agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades asociadas con una proliferación celular indeseable.
PT2417156E (pt) 2009-04-07 2015-04-29 Roche Glycart Ag Anticorpos trivalentes, biespecíficos
NZ616382A (en) 2009-04-20 2015-04-24 Oxford Biotherapeutics Ltd Antibodies specific to cadherin-17
WO2010124113A1 (en) 2009-04-23 2010-10-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Anti-fatty acid amide hydrolase-2 antibodies and uses thereof
CA2759942A1 (en) 2009-04-27 2010-10-07 Novartis Ag Composition and methods of use for therapeutic antibodies specific for the il-12 receptore betai subunit
ES2655877T3 (es) 2009-04-27 2018-02-22 Novartis Ag Composiciones y métodos para aumentar el crecimiento muscular
BRPI1012195A2 (en) * 2009-05-01 2018-04-24 Abbott Laboratories double variable domain immunoglobulins and their uses
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
MX337468B (es) 2009-06-18 2016-03-02 Pfizer Anticuerpos anti notch-1.
BRPI1015234A2 (en) 2009-06-22 2018-02-20 Medimmune Llc fc regions designed for site specific conjugation.
CN102549016B (zh) * 2009-06-30 2015-05-06 研究发展基金会 免疫球蛋白fc多肽
SG177640A1 (en) 2009-07-13 2012-02-28 Genentech Inc Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
CA2769473A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 N.V. Organon Fully human antibodies to btla
ES2513292T3 (es) 2009-07-31 2014-10-24 Genentech, Inc. Inhibición de metástasis tumoral usando anticuerpos anti-G-CSF
MX355650B (es) 2009-08-11 2018-04-26 Genentech Inc Produccion de proteinas en medios de cultivo de celulas libres de glutamina.
KR20120059553A (ko) 2009-08-14 2012-06-08 제넨테크, 인크. Ｖｅｇｆ 길항제에 대한 환자 반응을 모니터링하기 위한 생물학적 마커
KR20120107069A (ko) 2009-08-15 2012-09-28 제넨테크, 인크. 이전에 치료된 유방암의 치료를 위한 항혈관신생 요법
WO2011021146A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Pfizer Inc. Osteopontin antibodies
GB0914691D0 (en) * 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
CA2771999A1 (en) 2009-08-24 2011-03-10 Amunix Operating Inc. Coagulation factor vii compositions and methods of making and using same
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
JP5887270B2 (ja) 2009-09-02 2016-03-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 突然変異体ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄおよびその使用方法
JP5996429B2 (ja) 2009-09-03 2016-09-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 関節リウマチの治療、診断及びモニターするための方法
WO2011029823A1 (en) 2009-09-09 2011-03-17 Novartis Ag Monoclonal antibody reactive with cd63 when expressed at the surface of degranulated mast cells
RU2012114094A (ru) 2009-09-11 2013-10-20 Дженентек, Инк. Способ идентификации пациента с увеличенной вероятностью ответа на противораковый агент
KR101557545B1 (ko) 2009-09-17 2015-10-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 암 환자에서 진단 용도를 위한 방법 및 조성물
US8568726B2 (en) 2009-10-06 2013-10-29 Medimmune Limited RSV specific binding molecule
MX2012004029A (es) 2009-10-07 2012-05-08 Macrogenics Inc Polipeptidos que contienen la region fc que exhiben funcion efectora mejorada debido a alteraciones del grado de fucosilacion, y metodos para su uso.
US20120231004A1 (en) 2009-10-13 2012-09-13 Oxford Biotherapeutic Ltd. Antibodies
AU2010313621C1 (en) 2009-10-14 2015-11-26 Humanigen, Inc. Antibodies to EphA3
AR078651A1 (es) * 2009-10-15 2011-11-23 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2491059B1 (en) 2009-10-22 2015-02-25 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods using same
MY173390A (en) 2009-10-23 2020-01-22 Takeda Pharmaceuticals Co Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
HUE041426T2 (hu) 2009-11-02 2019-05-28 Univ Washington Terápiás nukleáz-készítmények és eljárások
EP3594356A1 (en) 2009-11-04 2020-01-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-tslp antibody
KR101968766B1 (ko) 2009-11-05 2019-04-12 제넨테크, 인크. 이종 폴리펩티드의 분비를 위한 방법 및 조성물
CA2778552A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Cephalon Australia Pty Ltd Treatment of cancer involving mutated kras or braf genes
WO2011060015A1 (en) 2009-11-11 2011-05-19 Genentech, Inc. Methods and compositions for detecting target proteins
EP3279215B1 (en) 2009-11-24 2020-02-12 MedImmune Limited Targeted binding agents against b7-h1
CN102711810B (zh) * 2009-11-30 2015-04-22 詹森生物科技公司 效应子功能已消除的抗体Fc区突变体
WO2011067711A2 (en) 2009-12-01 2011-06-09 Compugen Ltd Novel heparanase splice variant
EP2507267B1 (en) 2009-12-02 2016-09-14 Acceleron Pharma, Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life of fc fusion proteins
US8486397B2 (en) 2009-12-11 2013-07-16 Genentech, Inc. Anti-VEGF-C antibodies and methods using same
KR20120107122A (ko) 2009-12-22 2012-09-28 노파르티스 아게 치료법에서 사용하기 위한 ４가 ｃｄ４７―항체 불변 영역 융합 단백질
MX2012007379A (es) 2009-12-23 2012-08-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-bv8 y usos de los mismos.
US8362210B2 (en) 2010-01-19 2013-01-29 Xencor, Inc. Antibody variants with enhanced complement activity
MX2012009318A (es) 2010-02-10 2012-09-07 Novartis Ag Metodos y compuestos para el crecimiento muscular.
AR080154A1 (es) 2010-02-10 2012-03-14 Immunogen Inc Anticuerpos cd20 y su utilizacion
ES2519348T3 (es) 2010-02-18 2014-11-06 Genentech, Inc. Antagonistas de neurregulina y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer
RU2545401C2 (ru) * 2010-02-23 2015-03-27 Санофи Антитела к интегрину альфа-2 и их применения
SG10201401123VA (en) 2010-02-23 2014-08-28 Genentech Inc Anti-Angiogenesis Therapy For The Treatment Of Ovarian Cancer
US9260529B2 (en) 2010-02-24 2016-02-16 The University Of Washington Through Its Center For Commercialization Molecules that bind CD180, compositions and methods of use
CA2791652C (en) 2010-03-02 2018-06-12 Kyowa Kirin Co., Ltd. Modified antibody composition
PH12012501751A1 (en) 2010-03-04 2012-11-12 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
DK2542256T3 (da) 2010-03-04 2019-08-26 Macrogenics Inc Antistoffer reagerende med b7-h3, immunologisk aktive fragmenter deraf og anvendelser deraf
KR101899835B1 (ko) 2010-03-24 2018-09-19 제넨테크, 인크. 항-ｌｒｐ６ 항체
US20150231215A1 (en) 2012-06-22 2015-08-20 Randolph J. Noelle VISTA Antagonist and Methods of Use
CN103119054B (zh) 2010-03-26 2017-01-18 达特茅斯大学理事会 Vista调节性t细胞介体蛋白、vista结合剂及其用途
US10745467B2 (en) 2010-03-26 2020-08-18 The Trustees Of Dartmouth College VISTA-Ig for treatment of autoimmune, allergic and inflammatory disorders
US20130108623A1 (en) 2010-03-29 2013-05-02 Zymeworks Inc Antibodies with Enhanced or Suppressed Effector Function
TWI667346B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的FcRn親和力之抗體
EP2371860A1 (en) 2010-04-05 2011-10-05 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall d'Hebron Antibody recognising human leukemia inhibitory factor (LIF) and use of anti-LIF antibodies in the treatment of diseases associated with unwanted cell proliferation
SG185416A1 (en) 2010-05-06 2012-12-28 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein -related protein 6 (lrp6) antibodies
MX2012012927A (es) 2010-05-06 2013-05-01 Novartis Ag Composiciones y metodos de uso para anticuerpos multivalentes terapeuticos de proteina relacionada con lipoproteina de baja densidad 6 (lrp6).
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
AU2011258425B2 (en) 2010-05-27 2015-12-10 Merck Sharp & Dohme Llc Method for preparing antibodies having improved properties
WO2011153243A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer
WO2011153224A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
NZ701208A (en) 2010-06-03 2016-05-27 Genentech Inc Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN103080136B (zh) 2010-06-18 2015-08-12 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗Axl抗体及使用方法
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
CA2803391C (en) 2010-06-22 2021-11-09 Neogenix Oncology, Inc. Npc1 antibodies that bind a muc5ac epitope
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
NZ605449A (en) 2010-07-09 2015-03-27 Genentech Inc Anti-neuropilin antibodies and methods of use
PT2591006T (pt) 2010-07-09 2019-07-29 Bioverativ Therapeutics Inc Moléculas de cadeia simples processáveis e polipéptidos preparados utilizando as mesmas
WO2012010549A1 (en) 2010-07-19 2012-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy
CN104634971A (zh) 2010-07-19 2015-05-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 鉴定响应抗癌疗法的可能性升高的患者的方法
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
KR20130048242A (ko) 2010-07-22 2013-05-09 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 항-종양 항원 항체 및 이용 방법
SG187592A1 (en) 2010-07-23 2013-03-28 Univ Boston Anti-despr inhibitors as therapeutics for inhibition of pathological angiogenesis and tumor cell invasiveness and for molecular imaging and targeted delivery
HRP20230776T1 (hr) 2010-07-29 2023-10-27 Buzzard Pharmaceuticals AB Himerni antagonisti receptora il-1 tipa i
US9221900B2 (en) 2010-07-30 2015-12-29 Ac Immune S.A. Methods for identifying safe and functional humanized antibodies
ES2667100T3 (es) 2010-08-02 2018-05-09 Macrogenics, Inc. Diacuerpos covalentes y sus usos
KR20130045914A (ko) 2010-08-03 2013-05-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 만성 림프구성 백혈병(cll) 생체지표
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
BR112013002532A2 (pt) 2010-08-05 2016-05-31 Hoffmann La Roche proteína de fusão de citocina anti-viral do anticorpo anti-mhc
PE20171512A1 (es) 2010-08-13 2017-10-20 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti-fap
JP2013537416A (ja) 2010-08-13 2013-10-03 メディミューン リミテッド 変異型Ｆｃ領域を含むモノマーポリペプチド及び使用方法
BR112013002444A2 (pt) 2010-08-13 2016-05-24 Roche Glycart Ag anticorpo, polinucleotídeo e polipeotídeo isolados, composição, vetor, cécula hospedeira, conjulgado de anticorpo, formulação farmacêutica, uso do anticorpo, métodos para produzir um anticorpo, tratar um indivíduo, induzir a lise celular de uma célula tumorosa e diagnosticar uma doença em um indivíduo
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
ME02637B (me) 2010-08-20 2017-06-20 Novartis Ag Antitela za receptor 3 faktora rasta epiderma (her3)
KR101603001B1 (ko) 2010-08-25 2016-03-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 Il-18r1에 대한 항체 및 그의 용도
US9046513B2 (en) 2010-08-26 2015-06-02 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG10201506782XA (en) 2010-08-27 2015-10-29 Stem Centrx Inc Notum protein modulators and methods of use
TWI560199B (en) 2010-08-31 2016-12-01 Sanofi Sa Peptide or peptide complex binding to α2 integrin and methods and uses involving the same
SG10201408229WA (en) 2010-08-31 2015-02-27 Genentech Inc Biomarkers and methods of treatment
KR20140019284A (ko) 2010-09-03 2014-02-14 아카데미아 시니카 항-C-Met 항체 및 이의 이용 방법들
CN106620693A (zh) 2010-09-03 2017-05-10 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 新型调节剂及使用方法
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
EP2616100B1 (en) 2010-09-17 2016-08-31 Compugen Ltd. Compositions and methods for treatment of drug resistant multiple myeloma
EP2622091B1 (en) 2010-09-23 2019-03-13 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
US8877899B2 (en) 2010-09-27 2014-11-04 Morphosys Ag Anti-CD38 antibody and lenalidomide or bortezomib for the treatment of multipe myeloma and NHL
EP2625203A1 (en) 2010-10-05 2013-08-14 Novartis AG Anti-il12rbeta1 antibodies and their use in treating autoimmune and inflammatory disorders
US8481680B2 (en) 2010-10-05 2013-07-09 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
PH12013500703A1 (en) 2010-10-13 2013-05-20 Janssen Biotech Inc Human oncostatin m antibodies and methods of use
CN103534268B (zh) * 2010-10-20 2016-05-18 牛津生物疗法有限公司 抗体
CN103429620B (zh) 2010-11-05 2018-03-06 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
KR101933197B1 (ko) 2010-11-08 2018-12-27 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
AU2011326564A1 (en) 2010-11-10 2013-05-09 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
US8992908B2 (en) 2010-11-23 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of oral mucositis
MX351887B (es) 2010-11-23 2017-11-01 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno para oncostatina m (osm).
MX2013005847A (es) 2010-11-24 2013-12-12 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno multiespecificas que eligen como blanco a hgf.
TWI736437B (zh) * 2010-11-30 2021-08-11 日商中外製藥股份有限公司 細胞傷害誘導治療劑
TWI654203B (zh) 2010-11-30 2019-03-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
CN103443125B (zh) 2010-11-30 2019-05-03 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
PH12013501137A1 (en) 2010-12-08 2021-06-02 Abbvie Stemcentrx Llc Novel modulators and methods of use
WO2012080926A2 (en) 2010-12-15 2012-06-21 Wyeth Llc Anti-notch1 antibodies
KR101615420B1 (ko) 2010-12-16 2016-04-26 제넨테크, 인크. Th2 억제에 관한 진단 및 치료
AU2011349443B2 (en) 2010-12-20 2015-12-24 Genentech, Inc. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
CN103261230A (zh) 2010-12-22 2013-08-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗pcsk9抗体及使用方法
SG191233A1 (en) 2010-12-23 2013-07-31 Janssen Biotech Inc Active protease-resistant antibody fc mutants
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
CN102128937B (zh) * 2010-12-31 2014-05-28 江苏华冠生物技术股份有限公司 用于脱敏治疗效果评价的过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒的制备方法
EP2663647A4 (en) 2011-01-14 2015-08-19 Redwood Bioscience Inc POLYPEPTIDE IMMUNOGLOBULINS WITH ALDEHYDIC MARKING AND THEIR USE METHOD
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
CA2826467C (en) 2011-02-07 2019-11-12 Research Development Foundation Engineered immunoglobulin fc polypeptides
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
SG10201609665PA (en) 2011-02-25 2017-01-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd FcɣRIIb-SPECIFIC Fc ANTIBODY
WO2012116926A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding proteins
JP5768147B2 (ja) 2011-02-28 2015-08-26 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 一価抗原結合タンパク質
RU2013140975A (ru) 2011-02-28 2015-04-10 Дженентек, Инк. Биологические маркеры и способы прогнозирования восприимчивости к антагонистам в-клеток
LT2691417T (lt) * 2011-03-29 2018-10-25 Roche Glycart Ag Antikūno fc variantai
EP2698431B1 (en) 2011-03-30 2020-09-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Retention of antigen-binding molecules in blood plasma and method for modifying immunogenicity
MX2013011366A (es) 2011-03-30 2014-05-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Retencion de las moleculas de union al antigeno en el plasma sanguineo y metodo para modificar la inmunogenicidad.
MX2013011130A (es) 2011-03-31 2013-10-30 Genentech Inc Metodos de administracion de antagonistas de integrina beta7.
CA2828890A1 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Genentech, Inc. Anti-fgfr4 antibodies and methods of use
EP3415528B1 (en) 2011-04-13 2021-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements
RU2623161C2 (ru) 2011-04-15 2017-06-22 Компуджен Лтд. Полипептиды и полинуклеотиды и их применение для лечения иммунологических нарушений и рака
CA2833636A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Amplimmune, Inc. Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
EP2699256B1 (en) 2011-04-21 2017-09-27 The Regents of the University of Colorado, a body corporate Compositions and methods for the treatment of neuromyelitis optica
GB201107170D0 (en) 2011-04-28 2011-06-15 Clark Michael Binding molecules with biased recognition
CA2834626A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 University Of Washington Therapeutic nuclease compositions and methods
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
EP2707723B1 (en) 2011-05-12 2016-02-10 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature pepides
NO2707391T3 (pl) 2011-05-13 2018-04-07
WO2012158704A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Genentech, Inc. Fgfr1 agonists and methods of use
US9376495B2 (en) 2011-05-21 2016-06-28 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use in extending serum half-life
WO2012162067A2 (en) 2011-05-21 2012-11-29 Macrogenics, Inc. Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
DK2714738T3 (en) 2011-05-24 2019-01-28 Zyngenia Inc MULTIVALENT AND MONOVALENT MULTISPECIFIC COMPLEXES AND THEIR APPLICATIONS
AU2012258907A1 (en) 2011-05-25 2013-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing Fc-containing polypeptides having improved properties
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
US9561274B2 (en) 2011-06-07 2017-02-07 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists
CA2838833A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Biogen Idec Ma Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
WO2012171996A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
MX2013014789A (es) 2011-06-16 2014-01-20 Novartis Ag Proteinas solubles para utilizarse como productos terapeuticos.
AU2012273955A1 (en) 2011-06-22 2014-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-Axl antibodies and uses thereof
PL2723773T3 (pl) 2011-06-22 2018-07-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Eliminacja komórek docelowych przez obecne w krążeniu, swoiste dla wirusa, cytotoksyczne limfocyty T z wykorzystaniem kompleksów zawierających MHC klasy I
WO2012175691A1 (en) 2011-06-22 2012-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-axl antibodies and uses thereof
EP2537864B1 (en) * 2011-06-24 2019-08-07 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Fc variants with reduced effector functions
EA031181B1 (ru) 2011-06-28 2018-11-30 Оксфорд Байотерепьютикс Лтд. Антитело, которое специфически связывается с bst1, или его антигенсвязывающий фрагмент, нуклеиновые кислоты, кодирующие его цепи, клетка-хозяин, способ получения этого антитела и применение для лечения рака и воспалительных заболеваний
RU2013155695A (ru) 2011-06-30 2015-08-10 Дженентек, Инк. Препараты антител против с-мет
EP2726503B1 (en) 2011-06-30 2019-09-04 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
WO2013002362A1 (ja) 2011-06-30 2013-01-03 中外製薬株式会社 ヘテロ二量化ポリペプチド
JP6472999B2 (ja) 2011-07-01 2019-02-20 ノバルティス アーゲー 代謝障害を治療するための方法
UA117901C2 (uk) * 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
KR102119840B1 (ko) 2011-07-11 2020-06-09 아이크노스 사이언스 에스. 아. Ox40에 결합하는 항체 및 이들의 용도
US9238689B2 (en) 2011-07-15 2016-01-19 Morpho Sys AG Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (MIF) and D-dopachrome tautomerase (D-DT)
WO2013012733A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Biogen Idec Ma Inc. Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
GB201112429D0 (en) 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
US20130022551A1 (en) 2011-07-22 2013-01-24 Trustees Of Boston University DEspR ANTAGONISTS AND AGONISTS AS THERAPEUTICS
PH12014500220A1 (en) 2011-07-27 2019-03-22 Glaxo Group Ltd Anti-vegf single variable domains fused to fc domains
US9676854B2 (en) 2011-08-15 2017-06-13 Medimmune, Llc Anti-B7-H4 antibodies and their uses
BR112014003431A2 (pt) 2011-08-17 2017-06-13 Genentech Inc anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, agente farmacêutico, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo que tem câncer e método de aumento de tempo para recorrência de tumor
JP2014525412A (ja) 2011-08-17 2014-09-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 難治性腫瘍における血管新生の阻害
JP2014534806A (ja) 2011-08-23 2014-12-25 ロシュ グリクアート アーゲー 抗ｍｃｓｐ抗体
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
CN103930781A (zh) 2011-09-15 2014-07-16 霍夫曼-拉罗奇有限公司 促进分化的方法
AU2012312515A1 (en) 2011-09-19 2014-03-13 Genentech, Inc. Combination treatments comprising c-met antagonists and B-raf antagonists
KR102366029B1 (ko) 2011-09-30 2022-02-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 표적 항원에 대한 면역응답을 유도하는 항원 결합 분자
DK2760471T3 (en) 2011-09-30 2017-05-08 Dana Farber Cancer Inst Inc THERAPEUTIC PEPTIDES
KR20250078601A (ko) 2011-09-30 2025-06-02 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항원의 소실을 촉진시키는 항원 결합 분자
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
JP6322411B2 (ja) 2011-09-30 2018-05-09 中外製薬株式会社 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子
US20130089562A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Genenthech, Inc. Methods of treating liver conditions using notch2 antagonists
EP2765192A4 (en) 2011-10-05 2015-04-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd ANTIGENBINDING MOLECULE FOR PREPARING A SPACE BETWEEN A PLASMA AND AN ANTIGEN WITH A SACCHARIDE CHAIN RECEPTOR BINDING DOMAIN
ES2769786T3 (es) 2011-10-14 2020-06-29 Recordati Ag Anticuerpos y métodos para enfermedades relacionadas con la vía Wnt
PE20141562A1 (es) 2011-10-14 2014-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-htra1 y metodos de uso
US9358250B2 (en) 2011-10-15 2016-06-07 Genentech, Inc. Methods of using SCD1 antagonists
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
WO2013059740A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Foundation Medicine, Inc. Novel alk and ntrk1 fusion molecules and uses thereof
CN104203982B (zh) 2011-10-28 2018-08-31 特瓦制药澳大利亚私人有限公司 多肽构建体及其用途
KR20140097205A (ko) 2011-10-28 2014-08-06 제넨테크, 인크. 흑색종을 치료하는 치료 조합물 및 방법
BR112014010257A2 (pt) 2011-10-31 2017-04-18 Chugai Pharmaceutical Co Ltd molécula de ligação ao antígeno tendo conjugação regulada entre cadeias pesadas e cadeias leves
HK1201855A1 (en) 2011-11-01 2015-09-11 Bionomics, Inc. Antibodies and methods of treating cancer
EP2773664A1 (en) 2011-11-01 2014-09-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
WO2013067060A1 (en) 2011-11-01 2013-05-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
ES2697674T3 (es) 2011-11-01 2019-01-25 Bionomics Inc Procedimientos para bloquear el crecimiento de células madre cancerosas
US9574010B2 (en) 2011-11-04 2017-02-21 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
CN103906533A (zh) 2011-11-07 2014-07-02 米迪缪尼有限公司 多特异性和多价结合蛋白及其用途
SG11201402485UA (en) 2011-11-21 2014-06-27 Genentech Inc Purification of anti-c-met antibodies
HK1202877A1 (en) 2011-11-23 2015-10-09 伊格尼卡生物治疗公司 Anti-cd98 antibodies and methods of use thereof
KR20210074395A (ko) 2011-11-30 2021-06-21 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 면역 복합체를 형성하는 세포내로의 운반체（캐리어）를 포함하는 의약
EP2788382A2 (en) 2011-12-05 2014-10-15 Novartis AG Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3) directed to domain ii of her3
CN107353342B (zh) 2011-12-05 2021-08-10 X 博迪生物科学公司 PDGF受体β结合多肽
CN108341873B (zh) 2011-12-05 2022-03-25 诺华股份有限公司 表皮生长因子受体3(her3)的抗体
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
RU2685867C2 (ru) 2011-12-15 2019-04-23 Алтернатив Инновейтив Текнолоджиз Ллц Гибридные белки и белковые конъюгаты на основе белка теплового шока-70 (БТШ70) и способы их применения (варианты)
US9527927B2 (en) 2011-12-20 2016-12-27 Medimmune, Llc Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds
SG10201703249PA (en) 2011-12-21 2017-05-30 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting factor p
EP3539982B1 (en) 2011-12-23 2025-02-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
TWI593705B (zh) 2011-12-28 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanized anti-epiregulin antibody and cancer therapeutic agent containing the antibody as an active ingredient
AR089529A1 (es) 2011-12-30 2014-08-27 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-13 y/o il-17
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
US20140050720A1 (en) 2012-01-09 2014-02-20 The Scripps Research Institute Ultralong complementarity determining regions and uses thereof
EP2802601B1 (en) 2012-01-09 2019-11-13 The Scripps Research Institute Humanized antibodies with ultralong cdr3s
HRP20191920T1 (hr) 2012-01-12 2020-01-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Kimerni polipeptidi faktora viii i njihova uporaba
CA2862835A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Genentech, Inc. Biological markers for identifying patients for treatment with vegf antagonists
SG10201601747XA (en) 2012-01-18 2016-04-28 Genentech Inc Anti-LRP5 Antibodies And Methods Of Use
RU2014133547A (ru) 2012-01-18 2016-03-10 Дженентек, Инк. Способы применения модуляторов fgf19
AU2013216320A1 (en) 2012-02-01 2014-04-03 Compugen Ltd. C10RF32 antibodies, and uses thereof for treatment of cancer
JP6405242B2 (ja) 2012-02-07 2018-10-17 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｍｉｃａ結合剤
EP4624490A3 (en) 2012-02-09 2025-11-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified fc region of antibody
BR112014019741A2 (pt) 2012-02-11 2020-12-22 Genentech, Inc Usos de um antagonista da via wnt, uso de uma terapia anticâncer, método de identificação de um indivíduo com câncer, métodos para prever, método de inibição da proliferação de uma célula de câncer, uso de um antagonista da translocação de r-spondina e antagonista da translocação de r-spondina isolado
KR102069397B1 (ko) 2012-02-15 2020-01-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｆｃ-수용체 기재 친화성 크로마토그래피
CN111548418A (zh) 2012-02-15 2020-08-18 比奥贝拉蒂治疗公司 因子viii组合物及其制备和使用方法
WO2013123457A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
CA2865158C (en) 2012-02-24 2022-11-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule for promoting disappearance of antigen via fc.gamma.riib
CN104520324A (zh) 2012-02-24 2015-04-15 施特姆森特Rx股份有限公司 Dll3调节剂及其使用方法
WO2013148315A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
WO2013148296A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Sanofi Antibodies to bradykinin b1 receptor ligands
US9751942B2 (en) 2012-03-29 2017-09-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-LAMP5 antibody and utilization thereof
MX2014011582A (es) 2012-03-30 2014-11-21 Genentech Inc Metodos y composiciones de diagnostico para el tratamiento de cancer.
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
CA2869438C (en) 2012-04-05 2021-08-17 Ac Immune S.A. Humanized tau antibody
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
KR20150006000A (ko) 2012-05-01 2015-01-15 제넨테크, 인크. 항-pmel17 항체 및 면역접합체
WO2013166290A1 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Abbvie Biotherapeutics Inc. P21 biomarker assay
WO2013169657A1 (en) 2012-05-07 2013-11-14 Sanofi Methods for preventing biofilm formation
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
SI2849723T1 (sl) 2012-05-18 2018-09-28 Genentech, Inc. Formulacije z visoko koncentracijo monoklonskih protiteles
WO2013177062A2 (en) 2012-05-21 2013-11-28 Genentech, Inc. Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
DK2852610T3 (en) 2012-05-23 2018-09-03 Glykos Finland Oy PRODUCTION OF FUCOSYLED GLYCOPROTEIN
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
EP2852840B1 (en) 2012-05-23 2019-10-09 F.Hoffmann-La Roche Ag Selection method for therapeutic agents
WO2013177386A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Biotherapeutics Inc. Biomarkers for predicting response to tweak receptor (tweakr) agonist therapy
WO2013180200A1 (ja) 2012-05-30 2013-12-05 中外製薬株式会社 標的組織特異的抗原結合分子
JPWO2013180201A1 (ja) 2012-05-30 2016-01-21 中外製薬株式会社 会合化した抗原を消失させる抗原結合分子
SG11201407017WA (en) 2012-06-04 2014-12-30 Irm Llc Site-specific labeling methods and molecules produced thereby
AU2013270682A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Procoagulant compounds
AU2013270683A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Chimeric clotting factors
UA113879C2 (xx) 2012-06-08 2017-03-27 ГУМАНІЗОВАНЕ АНТИТІЛО ПРОТИ ТrkА З АМІНОКИСЛОТНИМИ ЗАМІЩЕННЯМИ
EP4310191A3 (en) 2012-06-14 2024-05-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing modified fc region
AR091462A1 (es) 2012-06-15 2015-02-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-pcsk9, formulaciones, dosificacion y metodos de uso
MX2014015557A (es) * 2012-06-21 2015-02-24 Univ Indiana Res & Tech Corp Polipeptidos de fusion de region fc de polipeptido de ligando receptor de incretina y conjugados con función efectora fc alterada.
US9890215B2 (en) 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
CN104619722B (zh) 2012-06-22 2022-10-04 达特茅斯大学理事会 新型vista-ig构建体和vista-ig用于治疗自身免疫性、过敏性和炎性疾病的用途
WO2014004586A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Zymeworks Inc. Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
EP2869837B1 (en) 2012-07-04 2016-09-14 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-theophylline antibodies and methods of use
MX354303B (es) 2012-07-04 2018-02-23 Hoffmann La Roche Anticuerpos de anti-biotina y metodos de uso.
SG11201407420RA (en) 2012-07-04 2015-02-27 Hoffmann La Roche Covalently linked antigen-antibody conjugates
PL2870247T3 (pl) 2012-07-05 2019-10-31 Hoffmann La Roche Układ ekspresji i wydzielania
WO2014006217A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
US10023628B2 (en) 2012-07-06 2018-07-17 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor VIII polypeptides and uses thereof
EP3632462A1 (en) 2012-07-06 2020-04-08 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
AU2013288932A1 (en) 2012-07-09 2014-12-11 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti - CD79b antibodies
KR20150027829A (ko) 2012-07-09 2015-03-12 제넨테크, 인크. 항-cd22 항체를 포함하는 면역접합체
CA2874904A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
BR112015000437A2 (pt) 2012-07-09 2017-06-27 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica, métodos de tratamento e de inbir a proliferação de uma célula
ES2770501T3 (es) 2012-07-11 2020-07-01 Bioverativ Therapeutics Inc Complejo del factor VIII con XTEN y proteína del factor de Von Willebrand y sus usos
SI3495387T1 (sl) 2012-07-13 2021-12-31 Roche Glycart Ag Bispecifična protitelesa proti VEGF/proti ANG-2 in njihova uporaba pri zdravljenju bolezni očesnih žil
WO2014013019A1 (en) 2012-07-18 2014-01-23 Glycotope Gmbh Novel therapeutic treatments with anti-her2 antibodies having a low fucosylation
EP4063391A1 (en) 2012-07-25 2022-09-28 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
EP2888279A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 Glaxo Group Limited Anti lrp6 antibodies
TWI855488B (zh) 2012-08-24 2024-09-11 日商中外製藥股份有限公司 FcγRIIb特異性Fc區域變異體
JP6774164B2 (ja) 2012-08-24 2020-10-21 中外製薬株式会社 マウスＦｃγＲＩＩ特異的Ｆｃ抗体
MX367126B (es) 2012-08-29 2019-08-06 Hoffmann La Roche Transporte para atravesar la barrera hematoencefálica.
US9376489B2 (en) 2012-09-07 2016-06-28 Novartis Ag IL-18 binding molecules
CA2884704C (en) 2012-09-07 2023-04-04 Randolph J. Noelle Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
FI3366705T3 (fi) 2012-09-12 2023-07-28 Genzyme Corp Muuttuneen glykosylaation ja vähentyneen efektoritoiminnan omaavia fc:n sisältäviä polypeptidejä
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
SG11201502757QA (en) 2012-10-09 2015-05-28 Igenica Biotherapeutics Inc Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
PE20151179A1 (es) 2012-11-01 2015-09-12 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas
EP2914621B1 (en) 2012-11-05 2023-06-07 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP4223770A3 (en) 2012-11-05 2023-10-18 Foundation Medicine, Inc. Novel fusion molecules and uses thereof
CN104755500B (zh) 2012-11-08 2020-10-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 结合HER3 β-发夹的HER3抗原结合蛋白
RU2015115956A (ru) 2012-11-09 2017-01-10 Пфайзер Инк. Антитела, специфичные в отношении фактора роста тромбоцитов в, и их композиции и применения
BR112015010817A8 (pt) 2012-11-13 2018-01-23 Genentech Inc anticorpos anti-hemaglutinina isolado, método de tratamento, inibição ou prevenção de infecções, composição, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de anticorpos e uso do anticorpo anti-hemaglutinina
EP2733153A1 (en) 2012-11-15 2014-05-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the preparation of immunoconjugates and uses thereof
US9914785B2 (en) 2012-11-28 2018-03-13 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
US20150322152A1 (en) 2012-11-30 2015-11-12 Institut Pasteur Use of anti-fcyri and/or anti-fcyriia antibodies for treating arthritis, inflammation, thrombocytopenia and allergic shock
DK2928921T3 (da) 2012-12-05 2021-04-19 Novartis Ag Sammensætninger og fremgangsmåder til antistoffer målrettet epo
BR122020023058B1 (pt) 2012-12-10 2023-12-05 Biogen Ma Inc Ácido nucleico isolado ou ácidos nucleicos
AU2013361275B2 (en) 2012-12-19 2016-11-24 Amplimmune, Inc. Anti-human B7-H4 antibodies and their uses
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
EP3557260B1 (en) 2012-12-21 2022-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3-targeting drug which is administered to patient responsive to gpc3-targeting drug therapy
JP6359031B2 (ja) 2012-12-21 2018-07-18 メディミューン，エルエルシー 抗ｈ７ｃｒ抗体
JP6475167B2 (ja) 2012-12-21 2019-02-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ジスルフィド結合した多価ｍｈｃクラスｉを含む多機能タンパク質
CN105102618B (zh) 2012-12-27 2018-04-17 中外制药株式会社 异源二聚化多肽
EP3336104A1 (en) 2012-12-28 2018-06-20 Precision Biologics, Inc. Humanized monoclonal antibodies and methods of use for the diagnosis and treatment of colon and pancreas cancer
WO2014106602A1 (en) 2013-01-02 2014-07-10 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Antibodies that bind to tl1a and their uses
WO2014107739A1 (en) 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
MX387324B (es) 2013-01-10 2025-03-18 Genmab Bv Variantes de regiones fc de igg1 de humano y usos de las mismas.
CA2898326C (en) 2013-01-18 2022-05-17 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
WO2014114651A1 (en) 2013-01-24 2014-07-31 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Tnf-alpha antigen-binding proteins
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
JP6636803B2 (ja) 2013-02-05 2020-01-29 エンクマフ エスアーエールエル Ｂｃｍａに対する抗体の選択のための方法
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
LT2953969T (lt) 2013-02-08 2019-12-10 Novartis Ag Anti-il-17a antikūnai ir jų panaudojimas autoimuninių ir uždegiminių ligų gydymui
EA201591465A1 (ru) 2013-02-08 2015-12-30 АйАрЭм ЭлЭлСи Специфичные участки для модификации антител для получения иммуноконъюгатов
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
EP2956468B1 (en) 2013-02-12 2020-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Tangential flow filtration based protein refolding methods
US10065987B2 (en) 2013-02-12 2018-09-04 Bristol-Myers Squibb Company High pH protein refolding methods
WO2014125041A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Innate Pharma Treatment of peripheral t cell lymphoma
RS61387B2 (sr) 2013-02-15 2024-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc Gen optimizovanog faktora viii
DK3896088T3 (da) 2013-02-20 2025-09-29 Innate Pharma Behandling af perifert t-cellelymfom
ES2731681T3 (es) 2013-02-22 2019-11-18 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados de anticuerpo anti-DLL3 y PBD y usos de los mismos
WO2014128235A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cancer and preventing drug resistance
RU2015140573A (ru) 2013-02-25 2017-03-30 Дженентек, Инк. Способы и композиции для обнаружения и лечения устойчивого к лекарственным средствам мутанта акт
MX2015010789A (es) 2013-02-26 2015-11-26 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti-pcsm.
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
JP2016510751A (ja) 2013-03-06 2016-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗がん剤耐性を治療及び予防する方法
US9580511B2 (en) 2013-03-11 2017-02-28 Genzyme Corporation Site-specific antibody-drug conjugation through glycoengineering
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
JP6450364B2 (ja) 2013-03-13 2019-01-09 セセン バイオ， インコーポレイテッド 眼送達のためのキメラサイトカイン製剤
WO2014159239A2 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Novartis Ag Antibodies against notch 3
CA2906566C (en) 2013-03-14 2024-09-10 Macrogenics, Inc. Immunoreactive bispecific molecules at immune effector cells expressing an activation receptor
MX2015010777A (es) 2013-03-14 2016-04-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-b7-h4.
WO2014152358A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
EP2968565A2 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
MX2015011444A (es) 2013-03-15 2015-12-16 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento del cancer hepatico.
US10035859B2 (en) 2013-03-15 2018-07-31 Biogen Ma Inc. Anti-alpha V beta 6 antibodies and uses thereof
KR20150131269A (ko) 2013-03-15 2015-11-24 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
WO2014144791A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides
RS60538B1 (sr) 2013-03-15 2020-08-31 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Anti-lag-3 vezujući proteini
DK3611180T3 (da) 2013-03-15 2022-02-28 Biomolecular Holdings Llc Hybrid immunoglobulin indeholdende ikke-peptidyl-binding
SG11201505926VA (en) 2013-03-15 2015-09-29 Biogen Ma Inc Factor ix polypeptide formulations
MX366978B (es) 2013-03-15 2019-08-01 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo - farmaco.
WO2014143739A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biogen Idec Ma Inc. Anti-alpha v beta 6 antibodies and uses thereof
HK1214533A1 (zh) 2013-03-15 2016-07-29 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症耐药性的方法
PL2970422T3 (pl) 2013-03-15 2018-09-28 F.Hoffmann-La Roche Ag Polipeptydy IL-22 i białka fuzyjne IL-22 Fc i sposoby zastosowania
FR3003171B1 (fr) * 2013-03-15 2015-04-10 Lab Francais Du Fractionnement Nouveaux medicaments comprenant une composition d'anticorps enrichie en isoforme de charge majoritaire
JP2016515120A (ja) 2013-03-15 2016-05-26 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． 抗アルファｖベータ５抗体を用いた急性腎損傷の治療及び予防
CN114717206A (zh) 2013-03-15 2022-07-08 Atyr 医药公司 组氨酰-trna合成酶-fc缀合物
EP2970485A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Merck Patent GmbH Tetravalent bispecific antibodies
AU2014227732A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 beta and IL-17
MX2015013163A (es) 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
MX374811B (es) 2013-03-15 2025-03-06 Ac Immune Sa Anticuerpos anti-tau y métodos de uso.
BR112015021521A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Genentech Inc anticorpos anti-crth2 e métodos para seu uso
JP6615745B2 (ja) 2013-03-27 2019-12-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド ベータ７インテグリンアンタゴニストによる胃腸炎症障害の治療を評価するためのバイオマーカーの使用
SG11201508170TA (en) 2013-04-02 2015-11-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fc REGION VARIANT
CA2908819A1 (en) 2013-04-22 2014-10-30 Glycotope Gmbh Anti-cancer treatments with anti-egfr antibodies having a low fucosylation
US9963515B2 (en) 2013-04-29 2018-05-08 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
CA2909952C (en) 2013-04-29 2021-10-12 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Anti-cd38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2b
CA2904806C (en) 2013-04-29 2021-11-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
CA2904805A1 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
SG11201509566RA (en) 2013-05-20 2015-12-30 Genentech Inc Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
CA2922704A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Neil R. Cashman Cell senescence markers as diagnostic and therapeutic targets
AU2014268298B2 (en) 2013-05-24 2019-01-17 Medlmmune, Llc Anti-B7-H5 antibodies and their uses
EP3004174B1 (en) 2013-05-31 2019-04-17 Zymeworks Inc. Heteromultimers with reduced or silenced effector function
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
US20160159919A1 (en) 2013-06-24 2016-06-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic Agent Comprising Humanized Anti-Epiregulin Antibody as Active Ingredient for Non-Small-Cell Lung Carcinoma Excluding Adenocarcinoma
JP6687520B2 (ja) 2013-07-18 2020-04-22 トーラス バイオサイエンシズ リミテッド ライアビリティ カンパニー 極めて長い相補性決定領域を有するヒト化抗体
WO2015017146A2 (en) 2013-07-18 2015-02-05 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
EP3875106A1 (en) 2013-08-08 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric fviii molecules
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
MX2016001854A (es) 2013-08-12 2016-09-06 Genentech Inc Composiciones y metodo para tratar condiciones asociadas con el complemento.
TW201722994A (zh) 2013-08-13 2017-07-01 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑-１（ｐａｉ-１）之抗體及其用途
BR112016002753A2 (pt) 2013-08-13 2017-11-21 Sanofi Sa anticorpos contra o inibidor-1 de ativador de plasminogênio (pai-1) e usos dos mesmos
WO2015022658A2 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Novartis Ag Methods of treating sporadic inclusion body myositis
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
US20150093399A1 (en) 2013-08-28 2015-04-02 Bioasis Technologies, Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
CA2922529A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Novel sez6 modulators and methods of use
JP2016531915A (ja) 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
SMT202300039T1 (it) 2013-09-13 2023-03-17 Beigene Switzerland Gmbh Anticorpi anti-pd1 e loro uso come terapia e per diagnostica
BR112016004450A2 (pt) 2013-09-17 2017-10-17 Genentech Inc métodos para tratar uma doença, para aumentar a eficácia de um tratamento, para adiar e/ou prevenir desenvolvimento da reincidência e/ou resistência de uma doença, para aumentar a sensibilidade a um inibidor, para estender o período de sensibilidade a um inibidor e para estender a duração de resposta a um inibidor
US10611794B2 (en) 2013-09-25 2020-04-07 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
CA2925256C (en) 2013-09-27 2023-08-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
SG11201602522VA (en) 2013-10-02 2016-04-28 Medimmune Llc Neutralizing anti-influenza a antibodies and uses thereof
WO2015054670A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Genentech, Inc. Nsp4 inhibitors and methods of use
BR112016006929A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-19 Hoffmann La Roche Anticorpo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de preparação de anticorpo, de tratamento de pacientes e de geração de um anticorpo, composição farmacêutica e uso do anticorpo
US20150147333A1 (en) 2013-10-18 2015-05-28 Genentech, Inc. Anti-rspo antibodies and methods of use
JP6715767B2 (ja) 2013-10-23 2020-07-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 好酸球性疾患の診断及び治療方法
SI3063275T1 (sl) 2013-10-31 2020-02-28 Resolve Therapeutics, Llc Terapevtske fuzije nukleaza-albumin in postopki
AU2014346792A1 (en) 2013-11-06 2016-06-02 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-claudin antibodies and methods of use
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
WO2015067986A1 (en) 2013-11-07 2015-05-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Neuregulin allosteric anti-her3 antibody
WO2015070014A1 (en) 2013-11-08 2015-05-14 Biogen Idec Ma Inc. Procoagulant fusion compound
CA2929044A1 (en) 2013-11-11 2015-05-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing modified antibody variable region
CN105814081B (zh) 2013-11-13 2021-02-02 辉瑞大药厂 肿瘤坏死因子样配体1a特异性抗体及其组合物和用途
LT3071597T (lt) 2013-11-21 2020-10-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš alfa-sunukleiną ir jų naudojimo būdai
TWI702316B (zh) 2013-12-04 2020-08-21 日商中外製藥股份有限公司 因應化合物濃度使抗原結合能力變化的抗原結合分子及其資料庫
MX371187B (es) 2013-12-06 2020-01-22 Dana Farber Cancer Inst Inc Péptidos terapéuticos.
KR20210125114A (ko) 2013-12-09 2021-10-15 알라코스 인크. 항-Siglec-8 항체 및 그의 사용 방법
AR098743A1 (es) 2013-12-13 2016-06-08 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33
JP2017505756A (ja) 2013-12-13 2017-02-23 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 可溶性高分子量（ｈｍｗ）タウ種およびその用途
MX2016007965A (es) 2013-12-17 2016-10-28 Genentech Inc Terapia de combinacion que comprende agonistas de union a ox40 y antagonistas de union al eje pd-1.
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US20150210772A1 (en) 2013-12-17 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
HUE050159T2 (hu) 2013-12-17 2020-11-30 Genentech Inc Anti-CD3 antitestek és alkalmazási eljárások
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
ES2763429T5 (es) 2013-12-17 2023-06-21 Hoffmann La Roche Procedimientos de tratamiento de cánceres usando antagonistas de la unión al eje de PD-1 y taxanos
CR20160270A (es) 2013-12-20 2016-09-05 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS ANTI-TAU (pS422) HUMANIZADOS Y MÉTODOS DE UTILIZACIÓN
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
US10273301B2 (en) 2013-12-24 2019-04-30 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-vista antibodies and fragments
US11014987B2 (en) 2013-12-24 2021-05-25 Janssen Pharmaceutics Nv Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same
CN106103476B (zh) 2013-12-24 2020-11-27 阿尔金克斯有限公司 FcRn拮抗剂及使用方法
BR112016014945A2 (pt) 2014-01-03 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag conjugado, formulação farmacêutica e uso
WO2015101586A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
EP3089758B1 (en) 2014-01-03 2021-01-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
PL3092251T3 (pl) 2014-01-06 2021-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Jednowartościowe moduły transportera wahadłowego przez barierę krew-mózg
EA201691111A1 (ru) 2014-01-10 2017-01-30 Байоджен Ма Инк. Химерные белки фактора viii и их применение
CN110903398B (zh) 2014-01-15 2023-08-15 豪夫迈·罗氏有限公司 具有修饰的FCRN和保持的蛋白A结合性质的Fc区变体
WO2015109212A1 (en) 2014-01-17 2015-07-23 Pfizer Inc. Anti-il-2 antibodies and compositions and uses thereof
WO2015112909A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
RS60593B1 (sr) 2014-01-24 2020-08-31 Ngm Biopharmaceuticals Inc Antitela koja vezuju domen 2 beta-kloto i postupci za njihovu upotrebu
US20170044232A1 (en) 2014-02-04 2017-02-16 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
NZ723884A (en) 2014-02-08 2023-02-24 Genentech Inc Methods of treating alzheimer’s disease
TW202239429A (zh) 2014-02-08 2022-10-16 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
SI3105253T1 (sl) 2014-02-12 2018-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-Jagged1 in načini njihove uporabe
SG11201606714TA (en) 2014-02-14 2016-09-29 Andrew S Chi Improved methods for the treatment of vascularizing cancers
JP2017507939A (ja) 2014-02-21 2017-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−１３／ｉｌ−１７二重特異性抗体及びその使用
US9732154B2 (en) * 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
JP6825909B2 (ja) 2014-02-28 2021-02-03 アラコス インコーポレイテッド シグレック−８関連疾患を処置するための方法および組成物
NZ711451A (en) 2014-03-07 2016-05-27 Alexion Pharma Inc Anti-c5 antibodies having improved pharmacokinetics
BR112016020065A2 (pt) 2014-03-12 2018-02-20 Novartis Ag sítios específicos para modificar anticorpos para fazer imunoconjugados
EP3116903A2 (en) 2014-03-14 2017-01-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Vaccine compositions and methods for restoring nkg2d pathway function against cancers
SG11201607519VA (en) 2014-03-14 2016-10-28 Genentech Inc Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
EP3116908B1 (en) 2014-03-14 2019-06-26 Innate Pharma Humanized kir3dl2 antibodies
EP4169944A1 (en) 2014-03-14 2023-04-26 Biomolecular Holdings LLC Process for preparing hybrid immunoglobulin containing non-peptidyl linkage
TWI754319B (zh) 2014-03-19 2022-02-01 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
HUE061339T2 (hu) 2014-03-19 2023-06-28 Genzyme Corp Targetáló csoportok helyspecifikus glikotechnikai átalakítása
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
CA2943242A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 X-Body, Inc. Bi-specific antigen-binding polypeptides
EP3122900A1 (en) 2014-03-24 2017-02-01 F. Hoffmann-La Roche AG Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
JP7054990B2 (ja) 2014-03-27 2022-04-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 炎症性腸疾患の診断及び治療のための方法
SG11201607969XA (en) 2014-03-31 2016-10-28 Genentech Inc Anti-ox40 antibodies and methods of use
KR20160146747A (ko) 2014-03-31 2016-12-21 제넨테크, 인크. 항혈관신생제 및 ox40 결합 효능제를 포함하는 조합 요법
CA2944649C (en) 2014-04-04 2022-06-21 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind lgr5
MX380176B (es) 2014-04-07 2025-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula ligada a antigeno inmunoactivada.
CA2943299A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Medimmune, Llc Bispecific her2 antibodies
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
TW201622746A (zh) 2014-04-24 2016-07-01 諾華公司 改善或加速髖部骨折術後身體復原之方法
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
SG11201608868PA (en) 2014-05-01 2016-11-29 Genentech Inc Anti-factor d antibody variants and uses thereof
KR102409014B1 (ko) 2014-05-08 2022-06-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Gpc3 표적 치료제 요법이 유효한 환자에게 투여되는 gpc3 표적 치료제
KR20170017916A (ko) 2014-05-13 2017-02-15 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 면역 억제 기능을 갖는 세포에 대한 t 세포 리다이렉트 항원 결합 분자
LT3248986T (lt) 2014-05-16 2022-03-25 Ablynx Nv Imunoglobulino kintami domenai
IL318433A (en) 2014-05-16 2025-03-01 Ablynx Nv Improved immunoglobulin variable complexes
JP2017522861A (ja) 2014-05-22 2017-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｇｐｃ３抗体及びイムノコンジュゲート
KR20170005016A (ko) 2014-05-23 2017-01-11 제넨테크, 인크. MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법
LT3148579T (lt) 2014-05-28 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-gitr antikūnai ir jų panaudojimo būdai
US10647768B2 (en) 2014-05-29 2020-05-12 Macrogenics, Inc. Multi-chain polypeptide-containing tri-specific binding molecules
EP3613433B1 (en) 2014-05-30 2022-01-05 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-epidermal growth factor receptor (egfr) antibodies
PL3151921T3 (pl) 2014-06-06 2020-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Przeciwciała przeciwko receptorowi indukowanego glukokortykoidami czynnika martwicy nowotworu (gitr) i ich zastosowania
JP6997619B2 (ja) 2014-06-11 2022-01-17 キャシー・エイ・グリーン 液性免疫の抑制または増進のための、ｖｉｓｔａアゴニスト及びｖｉｓｔａアンタゴニストの使用
MX2016016233A (es) 2014-06-11 2017-03-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 y sus usos.
WO2015191986A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
EP3161001A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Antibodies specific for il-17a fused to hyaluronan binding peptide tags
CN106687476B (zh) 2014-06-26 2020-11-13 豪夫迈·罗氏有限公司 抗brdu抗体及使用方法
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
AU2015279321B2 (en) 2014-06-27 2021-03-04 Innate Pharma, S.A. Multispecific antigen binding proteins
JP6822849B2 (ja) 2014-06-27 2021-01-27 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 多重特異的ＮＫｐ４６結合タンパク質
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
TWI726608B (zh) 2014-07-03 2021-05-01 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 抗pd-l1抗體及其作為治療及診斷之用途
EP3166627A1 (en) 2014-07-11 2017-05-17 Genentech, Inc. Notch pathway inhibition
CN106604933B (zh) 2014-07-11 2021-08-10 文塔纳医疗系统公司 抗pd-l1抗体及其诊断用途
WO2016011035A2 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Medlmmune, Llc Neutralizing anti-influenza b antibodies and uses thereof
KR102524920B1 (ko) 2014-07-22 2023-04-25 아폴로믹스 인코포레이티드 항-pd-1 항체
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
SG10201901057UA (en) 2014-08-05 2019-03-28 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-l1 antibodies
EA201790336A1 (ru) 2014-08-07 2017-06-30 Новартис Аг Антитела к ангиопоэтинподобному белку 4 и способы применения
TW201613977A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
MX2017001946A (es) 2014-08-12 2017-06-19 Novartis Ag Conjugados de farmacos con anticuerpos anti-cdh6.
CA2957722C (en) 2014-08-19 2022-05-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-tigit antibodies
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
WO2016030488A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Innate Pharma Treatment of celiac disease
DK3186284T3 (da) 2014-08-28 2022-05-09 Bioatla Inc Betinget aktive kimæriske antigenreceptorer til modificerede t-celler
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
FR3025515B1 (fr) 2014-09-05 2016-09-09 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'un anticorps monoclonal
MA40579A (fr) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech Inc Anticorps anti-cll-1 et immunoconjugués
JP2017531620A (ja) 2014-09-12 2017-10-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド システイン操作抗体及びコンジュゲート
SI3191135T1 (sl) 2014-09-12 2021-01-29 Genentech, Inc. Anti-HER2 protitelesa in imunokonjugati
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
CA2957148A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
CA2979671C (en) 2014-09-23 2020-03-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
CN107001440A (zh) 2014-09-26 2017-08-01 拜耳制药股份公司 稳定化的肾上腺髓质素衍生物及其用途
WO2016054101A1 (en) 2014-09-29 2016-04-07 Duke University Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm
TW201629100A (zh) * 2014-10-06 2016-08-16 格納西尼有限公司 人類ＩｇＧ４ Ｆｃ多肽變異體
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
PL3204425T3 (pl) 2014-10-09 2021-03-08 Genzyme Corporation Glikomodyfikowane koniugaty przeciwciał z lekami
AU2015332533B2 (en) 2014-10-14 2018-08-30 Halozyme, Inc. Compositions of adenosine deaminase-2 (ADA2), variants thereof and methods of using same
JP2017536102A (ja) 2014-10-16 2017-12-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法
MA41480A (fr) 2014-10-17 2017-12-19 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps qui se lient au ccr6 et leurs utilisations
EP3209687A1 (en) 2014-10-23 2017-08-30 Innate Pharma Treatment of cancers using anti-nkg2a agents
PE20170908A1 (es) 2014-10-29 2017-07-12 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd VARIANTES DE INTERFERON a2b
KR20170086540A (ko) 2014-11-03 2017-07-26 제넨테크, 인크. T 세포 면역 하위세트를 검출하기 위한 검정 및 그의 사용 방법
CA2966507A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Genentech, Inc. Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment
RU2739500C2 (ru) 2014-11-05 2020-12-25 Дженентек, Инк. Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
CN108064308B (zh) 2014-11-05 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 细菌中产生双链蛋白的方法
CA2961439A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr2/3 antibodies and methods using same
CA2963974A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
RU2713131C1 (ru) 2014-11-06 2020-02-03 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ С МОДИФИЦИРОВАННЫМИ СВОЙСТВАМИ СВЯЗЫВАНИЯ FcRn И БЕЛКА А
PT3215528T (pt) 2014-11-06 2019-10-11 Hoffmann La Roche Variantes da região fc com ligação modificada ao fcrn e métodos de utilização
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
JP6929771B2 (ja) 2014-11-10 2021-09-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン−３３抗体及びその使用
RS62003B2 (sr) 2014-11-10 2025-01-31 Medimmune Ltd Vezujući molekuli specifični za cd73 i njihove upotrebe
JP2018500882A (ja) 2014-11-10 2018-01-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 腎症の動物モデルおよびそれを治療するための薬剤
EP3789403A1 (en) 2014-11-11 2021-03-10 MedImmune Limited Therapeutic combinations comprising anti-cd73 antibodies and a2a receptor inhibitor and uses thereof
US11154615B2 (en) 2014-11-11 2021-10-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Library of antigen-binding molecules including modified antibody variable region
UY36401A (es) 2014-11-14 2016-06-30 Novartis Ag Conjugados anticuerpos-fármacos
ES2809455T3 (es) 2014-11-17 2021-03-04 Regeneron Pharma Métodos para tratamiento tumoral usando anticuerpo biespecífico CD3xCD20
CN106999583A (zh) 2014-11-17 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和pd‑1轴结合拮抗剂的组合疗法
EP3221361B1 (en) 2014-11-19 2021-04-21 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
EP3221349B1 (en) 2014-11-19 2020-11-04 Axon Neuroscience SE Humanized tau antibodies in alzheimer's disease
EP3221364B1 (en) 2014-11-19 2020-12-16 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
JP6779876B2 (ja) 2014-11-19 2020-11-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体抗体及びその使用方法
JP6805142B2 (ja) 2014-11-21 2020-12-23 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｄ７３に対する抗体およびその使用
ES2826566T3 (es) 2014-11-21 2021-05-18 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos que comprenden regiones constantes pesadas modificadas
US9382321B2 (en) * 2014-11-26 2016-07-05 Adventis Health System/Sunbelt, Inc. Effector-deficient anti-CD32A antibodies
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
MX2017007136A (es) 2014-12-05 2017-12-04 Immunext Inc Identificacion de vsig8 como el receptor vista putativo y su uso para producir moduladores vista/vsig8.
MX386587B (es) 2014-12-05 2025-03-19 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-CD79b Y MÉTODOS DE USO.
EP3229836B1 (en) 2014-12-09 2019-11-13 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Human monoclonal antibodies against axl
SG11201703750XA (en) 2014-12-10 2017-06-29 Genentech Inc Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
BR112017011170A2 (pt) 2014-12-18 2018-02-27 Hoffmann La Roche método para determinar a citotoxicidade dependente do complemento de uma composição
EA201791366A1 (ru) 2014-12-19 2018-02-28 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к c5 и способы их применения
EP3233912B1 (en) 2014-12-19 2021-05-19 Regenesance B.V. Antibodies that bind human c6 and uses thereof
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
MX2017005774A (es) 2014-12-19 2017-07-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos antimiostatina, polipeptidos que contienen regiones fc variantes, y metodos de uso.
AR103268A1 (es) 2014-12-23 2017-04-26 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra tigit
SG11201705721WA (en) 2015-01-14 2017-08-30 Brigham & Womens Hospital Inc Treatment of cancer with anti-lap monoclonal antibodies
US20180016327A1 (en) 2015-01-22 2018-01-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A Combination of Two or More Anti-C5 Antibodies and Methods of Use
CN107250161A (zh) 2015-01-26 2017-10-13 宏观基因有限公司 包含dr5‑结合结构域的多价分子
EP3250927B1 (en) 2015-01-28 2020-02-19 H. Hoffnabb-La Roche Ag Gene expression markers and treatment of multiple sclerosis
CN107636170A (zh) 2015-02-04 2018-01-26 健泰科生物技术公司 突变型Smoothened及其使用方法
CN114773469B (zh) 2015-02-05 2025-12-19 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
JP6724023B2 (ja) 2015-02-09 2020-07-15 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 改善された補体活性化を示す操作された免疫グロブリンｆｃポリペプチド
US10550173B2 (en) 2015-02-19 2020-02-04 Compugen, Ltd. PVRIG polypeptides and methods of treatment
IL254039B2 (en) 2015-02-19 2023-12-01 Compugen Ltd Anti-pvrig antibodies and methods of use
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
EP3978530A1 (en) 2015-02-26 2022-04-06 F. Hoffmann-La Roche AG Integrin beta7 antagonists and methods of treating crohn's disease
MX386491B (es) 2015-03-09 2025-03-18 argenx BV Metodos para reducir los niveles de suero de agentes que contienen fc que usan antagonistas de fcrn.
EP3271723A1 (en) 2015-03-16 2018-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
DK3277725T3 (da) 2015-03-30 2021-01-11 Regeneron Pharma Konstante tungkædeområder med reduceret binding til FC-gammareceptorer
FR3034420A1 (fr) 2015-03-31 2016-10-07 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-cd303
AR104368A1 (es) 2015-04-03 2017-07-19 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos anti-cd20- / anti-baff
CN114456272A (zh) 2015-04-03 2022-05-10 优瑞科生物技术公司 靶向afp肽/mhc复合体的构建体及其用途
MX2017012805A (es) * 2015-04-07 2018-04-11 Genentech Inc Complejo de unión a antígenos con actividad agonista y métodos de uso.
SMT202100467T1 (it) 2015-04-17 2021-09-14 Alpine Immune Sciences Inc Proteine immunomodulatorie con affinità regolabili
EP3286315B1 (en) 2015-04-24 2021-05-26 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of identifying bacteria comprising binding polypeptides
EP3778640A1 (en) 2015-05-01 2021-02-17 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
EP3292152A1 (en) 2015-05-07 2018-03-14 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
CN116196414A (zh) 2015-05-11 2023-06-02 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗狼疮性肾炎的组合物和方法
DK3294770T4 (da) 2015-05-12 2024-05-21 Hoffmann La Roche Terapeutiske og diagnostiske fremgangsmåder til cancer
WO2016188911A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies fragments inhibiting both the cath-d catalytic activity and its binding to the lrp1 receptor
TW201702272A (zh) 2015-05-22 2017-01-16 美國紀念斯隆 凱特琳癌症中心 Ｐｒａｍｅ肽專一性類ｔ細胞受體抗體
EP3303632B2 (en) 2015-05-29 2023-05-10 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic and diagnostic methods for cancer
AU2016271111B2 (en) 2015-05-29 2022-04-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against OX40 and uses thereof
EP3302563A1 (en) 2015-05-29 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
MX388405B (es) 2015-05-29 2025-03-19 Genentech Inc Un anticuerpo anti-pd-l1 para usarse en el tratamiento de cáncer en sujetos que tienen nivel medio o bajo de metilación en la región promotora pd-l1.
CN114656573B (zh) 2015-05-30 2024-09-27 分子模板公司 去免疫化的志贺毒素a亚基支架和包含它们的细胞靶向分子
HK1249016A1 (zh) 2015-06-02 2018-10-26 豪夫迈‧罗氏有限公司 使用抗il-34抗体治疗神经疾病的组合物和方法
SG11201707815RA (en) 2015-06-05 2017-12-28 Novartis Ag Antibodies targeting bone morphogenetic protein 9 (bmp9) and methods therefor
NZ775762A (en) 2015-06-05 2025-02-28 Genentech Inc Anti-tau antibodies and methods of use
EP3303397A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
AU2016274585A1 (en) 2015-06-08 2017-12-14 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-OX40 antibodies
US10017577B2 (en) 2015-06-15 2018-07-10 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
US10323094B2 (en) 2015-06-16 2019-06-18 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use
EP3310811B1 (en) 2015-06-16 2021-06-16 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
TW201718647A (zh) 2015-06-16 2017-06-01 建南德克公司 抗-cll-1抗體及使用方法
HK1254432A1 (zh) 2015-06-17 2019-07-19 Allakos Inc. 用於治疗纤维性疾病的方法和组合物
ES3043088T3 (en) 2015-06-17 2025-11-24 Hoffmann La Roche Anti-her2 antibodies and methods of use
HRP20260689T1 (hr) 2015-06-17 2026-07-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Postupci za liječenje lokalno uznapredovalog ili metastatskog raka dojke primjenom antagonista vezivanja osi pd-1 i taksana
US20190194315A1 (en) 2015-06-17 2019-06-27 Novartis Ag Antibody drug conjugates
JP6840682B2 (ja) 2015-06-23 2021-03-10 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 多重特異的抗原結合タンパク質
AU2016284871B2 (en) 2015-06-23 2022-09-29 Innate Pharma Multispecific NK engager proteins
AU2016282334B2 (en) 2015-06-24 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
ES2809728T3 (es) 2015-06-24 2021-03-05 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-tau(pS422) humanizados y procedimientos de uso
EP3722314A1 (en) 2015-06-24 2020-10-14 Janssen Pharmaceutica NV Anti-vista antibodies and fragments
CN108026172B (zh) 2015-06-26 2022-04-29 赛诺菲生物技术公司 单克隆抗il-1racp抗体
JOP20160131B1 (ar) 2015-06-26 2022-03-14 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
WO2017004091A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
ES2878316T3 (es) 2015-06-29 2021-11-18 Ventana Med Syst Inc Materiales y procedimientos para realizar ensayos histoquímicos de pro-epirregulina y anfirregulina humanas
EP3971211A1 (en) 2015-07-13 2022-03-23 Compugen Ltd. Hide1 compositions and methods
IL257065B (en) * 2015-07-22 2022-07-01 Inatherys Antibodies to tfr for use in the treatment of proliferative and inflammatory diseases
US11066481B2 (en) 2015-07-23 2021-07-20 The Regents Of The University Of California Antibodies to coagulation factor XIa and uses thereof
US11466093B2 (en) 2015-07-27 2022-10-11 The General Hospital Corporation Antibody derivatives with conditionally enabled effector function
PE20231958A1 (es) 2015-07-30 2023-12-06 Macrogenics Inc Moleculas de union a pd-1 y metodos de uso de las mismas
WO2017023859A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antigen-binding proteins targeting cd56 and uses thereof
CA2992797A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Engmab Sarl Monoclonal antibodies against bcma
UA126016C2 (uk) 2015-08-03 2022-08-03 Біовератів Терапеутікс Інк. Злитий білок фактора іх
EP3331914A1 (en) 2015-08-03 2018-06-13 Novartis AG Methods of treating fgf21-associated disorders
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3341415B1 (en) 2015-08-28 2021-03-24 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-hypusine antibodies and uses thereof
JP6869987B2 (ja) 2015-09-01 2021-05-12 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｐｄ−１抗体及びその使用方法
RU2760582C2 (ru) 2015-09-02 2021-11-29 Иммутеп С.А.С. Анти-LAG-3 антитела
EA038332B1 (ru) 2015-09-09 2021-08-10 Новартис Аг Молекулы, связывающиеся с тимусным стромальным лимфопоэтином (tslp), и способы применения таких молекул
EP3842457A1 (en) 2015-09-09 2021-06-30 Novartis AG Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding molecules and methods of using the molecules
WO2017046746A1 (en) 2015-09-15 2017-03-23 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor and a gitr binding molecule, a 4-1bb agonist, or an ox40 agonist
US9862760B2 (en) 2015-09-16 2018-01-09 Novartis Ag Polyomavirus neutralizing antibodies
PE20181336A1 (es) 2015-09-18 2018-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos que se unen a interleucina 8 (il-8) y sus usos
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
HK1251480A1 (zh) 2015-09-21 2019-02-01 Aptevo Research And Development Llc Cd3结合多肽
JP6904947B2 (ja) 2015-09-22 2021-07-21 スプリング バイオサイエンス コーポレーション 抗ｏｘ４０抗体及びその診断用途
JP6959912B2 (ja) 2015-09-23 2021-11-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｖｅｇｆ抗体の最適化変異体
MY195059A (en) 2015-09-23 2023-01-05 Regeneron Pharma Optimized Anti-CD3 Bispecific Antibodies and Uses Thereof
ES2768957T3 (es) 2015-09-24 2020-06-24 Abvitro Llc Composiciones de anticuerpos contra el VIH y métodos de uso
SG10202007764TA (en) 2015-09-25 2020-09-29 Genentech Inc Anti-tigit antibodies and methods of use
BR112018006237A2 (pt) 2015-09-29 2018-10-09 Celgene Corp proteínas de ligação a pd-1 e métodos de uso das mesmas
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MX2018003822A (es) 2015-10-02 2018-06-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso.
MA43028B1 (fr) 2015-10-02 2021-09-30 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques pour pd1 et tim3
SI3356404T1 (sl) 2015-10-02 2021-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa proti PD1 in postopki uporabe
CR20180243A (es) 2015-10-02 2018-07-31 Genentech Inc Conjugados de anticuerpo-fármaco de pirrolobenzodiazepina y métodos de uso
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MY206406A (en) 2015-10-02 2024-12-16 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for a costimulatory tnf receptor
JP2018529747A (ja) 2015-10-06 2018-10-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多発性硬化症を治療するための方法
PE20181349A1 (es) 2015-10-07 2018-08-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
JP6852065B2 (ja) 2015-10-20 2021-03-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド カリケアマイシン−抗体−薬物コンジュゲート及び使用方法
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
EP3365369A1 (en) 2015-10-23 2018-08-29 Pfizer Inc Anti-il-2 antibodies and compositions and uses thereof
JO3555B1 (ar) 2015-10-29 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme جسم مضاد يبطل فعالية فيروس الالتهاب الرئوي البشري
EP4015533A1 (en) 2015-10-29 2022-06-22 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
CR20180229A (es) 2015-10-29 2018-08-24 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden un agonista del receptor tipo toll
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
TW201730211A (zh) 2015-10-30 2017-09-01 建南德克公司 抗因子d抗體及結合物
SI3368579T1 (sl) 2015-10-30 2022-04-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Tečajni modificirani fragmenti protitelesa in metode priprave
BR112018007703A2 (pt) 2015-10-30 2018-11-06 Genentech Inc anticorpos, ácido nucleico isolado, métodos de produção de um anticorpo e de tratamento de um distúrbio, composição farmacêutica, terapia de combinação e uso do anticorpo
JP2018536650A (ja) 2015-10-30 2018-12-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体変異体コンジュゲート及びその使用
WO2017079768A1 (en) 2015-11-08 2017-05-11 Genentech, Inc. Methods of screening for multispecific antibodies
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
EP3378488A4 (en) 2015-11-18 2019-10-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for enhancing humoral immune response
MX2018006072A (es) 2015-11-19 2018-08-01 Squibb Bristol Myers Co Anticuerpos contra receptor de factor de necrosis de tumor inducido por glucocorticoides (gitr) y usos de los mismos.
US10556948B2 (en) 2015-11-30 2020-02-11 Bristol-Myers Squibb Company IP-10 antibodies and their uses
KR102803158B1 (ko) 2015-12-02 2025-05-08 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 Btn1a1에 면역특이적으로 결합하는 항체와 분자 및 그의 치료 용도
JP7227007B2 (ja) 2015-12-02 2023-02-21 ストサイエンシス， インコーポレイテッド グリコシル化ｂｔｌａ（ｂ－及びｔ－リンパ球減弱因子）に特異的な抗体
WO2017096179A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
US10144768B2 (en) 2015-12-04 2018-12-04 Novartis Ag Antibody cytokine engrafted compositions and methods of use for immunoregulation
CN108367069B (zh) 2015-12-14 2022-08-23 宏观基因有限公司 对于pd-1和ctla-4具有免疫反应性的双特异性分子及其使用方法
BR112018012352A2 (pt) 2015-12-16 2018-12-11 Merck Sharp & Dohme Corp. anticorpos anti-lag3 e fragmentos de ligação ao antígeno
CN108401431B (zh) 2015-12-18 2022-01-25 中外制药株式会社 抗-c5抗体及使用方法
EA201891420A1 (ru) 2015-12-18 2019-02-28 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к миостатину, полипептиды, содержащие варианты fc-областей, и способы их применения
TW201731872A (zh) 2015-12-18 2017-09-16 諾華公司 標靶CD32b之抗體及其使用方法
EP3394098A4 (en) 2015-12-25 2019-11-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHOD OF USE
SG11201803989WA (en) 2015-12-28 2018-06-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
BR112018011029A2 (pt) 2016-01-08 2018-11-21 Hoffmann La Roche métodos para tratar ou atrasar a progressão do câncer e para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, usos de um antagonista de ligação e de um anticorpo biespecífico, composições e kits
US11505599B2 (en) 2016-01-14 2022-11-22 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center T cell receptor-like antibodies specific for Foxp3-derived peptides
EP3405489A1 (en) 2016-01-20 2018-11-28 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
AU2017213826A1 (en) 2016-02-04 2018-08-23 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US10899836B2 (en) 2016-02-12 2021-01-26 Janssen Pharmaceutica Nv Method of identifying anti-VISTA antibodies
RU2018131123A (ru) 2016-02-17 2020-03-17 Новартис Аг Антитела к tgf-бета2
WO2017151502A1 (en) 2016-02-29 2017-09-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
AU2017228470A1 (en) 2016-03-04 2018-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-CD73 antibodies
CN109071631B (zh) 2016-03-14 2023-07-14 奥斯陆大学 具有改变的FcRn结合的工程化免疫球蛋白
EP3431102A4 (en) 2016-03-14 2019-09-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha CELL DAMAGING THERAPEUTIC MEDICAMENT FOR USE IN CANCER THERAPY
CN109153719B (zh) 2016-03-15 2022-12-30 中外制药株式会社 使用pd-1轴结合拮抗剂和抗gpc3抗体治疗癌症的方法
CA3016765A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Innate Pharma Anti-mica antibodies
AU2017234679A1 (en) 2016-03-16 2018-08-30 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Engineered trail for cancer therapy
KR102438140B1 (ko) 2016-03-22 2022-08-31 엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔 인간화 항-클라우딘-1 항체 및 이의 용도
US10745487B2 (en) 2016-03-22 2020-08-18 Bionomics Limited Method of treating cancer by administering an anti-LGR5 monoclonal antibody
CN108700598A (zh) 2016-03-25 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 多路总抗体和抗体缀合的药物量化测定法
EP3436477A2 (en) 2016-03-29 2019-02-06 Janssen Biotech, Inc. Method of treating psoriasis with increased interval dosing of anti-il12 and/or -23 antibody
CN117986363A (zh) 2016-03-31 2024-05-07 恩格姆生物制药公司 结合蛋白及其使用方法
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
AU2017248830B2 (en) 2016-04-15 2023-03-09 Alpine Immune Sciences, Inc. CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP4656204A3 (en) 2016-04-15 2026-06-03 BioAtla, Inc. Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
PL3443350T3 (pl) 2016-04-15 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby monitorowania i leczenia nowotworu
WO2017181143A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis
PE20190115A1 (es) 2016-04-15 2019-01-16 Immunext Inc Anticuerpos vista antihumanos y su uso
CN109069633A (zh) 2016-04-15 2018-12-21 宏观基因有限公司 新颖的b7-h3-结合分子、其抗体药物缀合物及其使用方法
WO2017181079A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
SG11201808457PA (en) 2016-04-15 2018-10-30 Alpine Immune Sciences Inc Icos ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3445393B1 (en) 2016-04-20 2026-01-14 Merck Sharp & Dohme LLC Cmv neutralizing antigen binding proteins
EP3454864A4 (en) 2016-04-21 2021-01-13 Abbvie Stemcentrx LLC Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
CA3019398A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
JP7138567B2 (ja) 2016-04-27 2022-09-16 ノバルティス アーゲー 成長分化因子１５に対する抗体およびそれらの使用
JP6675017B2 (ja) 2016-05-02 2020-04-01 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ コントースボディ−単鎖標的結合物質
IL321475A (en) 2016-05-06 2025-08-01 Medimmune Llc Bispecific binding proteins and their uses
US10968279B2 (en) 2016-05-09 2021-04-06 Bristol-Myers Squibb Company TL1A antibodies and uses thereof
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
EP4122958A1 (en) 2016-05-13 2023-01-25 BioAtla, Inc. Anti-ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
CN109152843A (zh) 2016-05-20 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 Protac抗体缀合物及其使用方法
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
KR102543118B1 (ko) 2016-05-27 2023-06-14 아게누스 인코포레이티드 항-tim-3 항체 및 이의 사용 방법
CA3024618A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of refractory generalized myasthenia gravis
CN109313200B (zh) 2016-05-27 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法
JP7043425B2 (ja) 2016-06-06 2022-03-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド シルベストロール抗体－薬物コンジュゲート及び使用方法
WO2017214452A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Xencor, Inc. Treatment of igg4-related diseases with anti-cd19 antibodies crossbinding to cd32b
WO2017216724A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
TWI760396B (zh) 2016-06-17 2022-04-11 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素抗體及使用方法
JP7133477B2 (ja) 2016-06-24 2022-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリユビキチン多重特異性抗体
MA45554A (fr) 2016-07-01 2019-05-08 Resolve Therapeutics Llc Fusions de binucléase optimisées.
JP6983824B2 (ja) 2016-07-04 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 新規抗体フォーマット
WO2018007885A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Beigene, Ltd. COMBINATION OF A PD-l ANTAGONIST AND A RAF INHIBITOR FOR TREATING CANCER
US20190248893A1 (en) 2016-07-14 2019-08-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
JP7241677B2 (ja) 2016-07-19 2023-03-17 テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド 抗ｃｄ４７併用療法
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US20200148750A1 (en) 2016-07-21 2020-05-14 Emory University Ebola Virus Antibodies and Binding Agents Derived Therefrom
MA45715A (fr) 2016-07-25 2019-05-29 Biogen Ma Inc Anticorps anti-hspa5 (grp78) et leurs utilisations
EP3491013A1 (en) 2016-07-28 2019-06-05 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2018022945A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
NL2017267B1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
CA3027018A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Bispecific antibody exhibiting increased alternative fviii-cofactor-function activity
EP3491022B1 (en) 2016-07-29 2025-09-10 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Antibodies targeting tumor associated macrophages and uses thereof
NL2017270B1 (en) 2016-08-02 2018-02-09 Aduro Biotech Holdings Europe B V New anti-hCTLA-4 antibodies
CA3032820A1 (en) 2016-08-02 2018-03-22 Visterra, Inc. Engineered polypeptides and uses thereof
US11649285B2 (en) 2016-08-03 2023-05-16 Bio-Techne Corporation Identification of VSIG3/VISTA as a novel immune checkpoint and use thereof for immunotherapy
BR112019002039A2 (pt) 2016-08-05 2019-05-07 Medimmune, Llc anticorpos anti-o2 e uso dos mesmos
IL264674B2 (en) 2016-08-05 2023-09-01 Allakos Inc Antibodies to siglec7 for cancer treatment
CN116271014A (zh) 2016-08-05 2023-06-23 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
WO2018029124A1 (en) 2016-08-08 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic and diagnostic methods for cancer
PL3896091T3 (pl) 2016-08-10 2024-04-29 Legend Biotech Ireland Limited Chimeryczne receptory antygenowe nakierowane na bcma i sposoby ich zastosowania
WO2018031662A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
EP3497120A1 (en) * 2016-08-12 2019-06-19 Janssen Biotech, Inc. Engineered antibodies and other fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions
KR102585976B1 (ko) 2016-08-17 2023-10-05 컴퓨젠 엘티디. 항-tigit 항체, 항-pvrig 항체 및 이들의 조합
CN110087680B (zh) 2016-08-19 2024-03-19 百济神州有限公司 使用包含btk抑制剂的组合产品治疗癌症
WO2018044970A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus k envelope (herv-k) and uses thereof
CA3035081A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
EP3512883A1 (en) 2016-09-13 2019-07-24 Humanigen, Inc. Epha3 antibodies for the treatment of pulmonary fibrosis
SI4339615T1 (sl) 2016-09-16 2026-01-30 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Protitelesa anti-pd-1 za uporabo pri zdravljenju raka
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515944A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHOD FOR TREATING IMMUNE DISEASES USING PD-1 BINDING PROTEINS
CN116731197A (zh) 2016-09-19 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
KR102644544B1 (ko) 2016-09-21 2024-03-11 넥스트큐어 인코포레이티드 Siglec-15를 위한 항체 및 이의 사용 방법
EP4360714A3 (en) 2016-09-21 2024-07-24 Nextcure, Inc. Antibodies for siglec-15 and methods of use thereof
TWI787203B (zh) 2016-09-23 2022-12-21 美商建南德克公司 Il-13拮抗劑用於治療異位性皮炎之用途
JOP20190055A1 (ar) 2016-09-26 2019-03-24 Merck Sharp & Dohme أجسام مضادة ضد cd27
EP3519049B1 (en) 2016-09-30 2025-12-03 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriasis with anti-il23 specific antibody
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
KR102804118B1 (ko) 2016-10-06 2025-05-09 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
KR20230133934A (ko) 2016-10-11 2023-09-19 아게누스 인코포레이티드 항-lag-3 항체 및 이의 사용 방법
CA3039686A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Medimmune, Llc Anti-o1 antibodies and uses thereof
US20200140565A1 (en) 2016-10-20 2020-05-07 I-Mab Novel cd47 monoclonal antibodies and uses thereof
US11286295B2 (en) 2016-10-20 2022-03-29 Sanofi Anti-CHIKV monoclonal antibodies directed against the E2 structural protein
WO2018073363A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Innate Pharma Treatment with anti-kir3dl2 agents
EP3532091A2 (en) 2016-10-29 2019-09-04 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-mic antibidies and methods of use
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
US11124577B2 (en) 2016-11-02 2021-09-21 Engmab Sàrl Bispecific antibody against BCMA and CD3 and an immunological drug for combined use in treating multiple myeloma
CA3041340A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
US11370794B2 (en) 2016-11-11 2022-06-28 Dynavax Technologies Corporation Toll-like receptor antagonist compounds and methods of use
CN109996809A (zh) 2016-11-14 2019-07-09 诺华股份有限公司 与促融合蛋白minion相关的组合物、方法和治疗用途
EP3541843A1 (en) 2016-11-15 2019-09-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
JP7645607B2 (ja) 2016-11-16 2025-03-14 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ２３特異的抗体で乾癬を治療する方法
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
CA3036983A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
AU2017363309A1 (en) 2016-11-23 2019-07-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Mono- and bispecific antibodies binding to coagulation factor IX and coagulation factor X
CA3044838A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of inducing immune tolerance to clotting factors
KR20190090827A (ko) 2016-12-02 2019-08-02 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 키메라 응고 인자를 사용해 혈우병성 관절증을 치료하는 방법
WO2018104893A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Alpha4-beta7 antibodies with incrased fcrn binding and/or half-life
IL307242B1 (en) 2016-12-07 2026-07-01 Agenus Inc Anti-CTLA-4 antibodies and methods of using them
EP3551655A2 (en) 2016-12-07 2019-10-16 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of their use
EP3551220B1 (en) 2016-12-07 2025-01-29 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
WO2018111890A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens
EP4321219A3 (en) 2016-12-19 2024-05-15 Medimmune Limited Antibodies against lif and uses thereof
US10583191B2 (en) 2016-12-19 2020-03-10 Mosaic Biomedicals Slu Antibodies against LIF and uses thereof
KR102692708B1 (ko) 2016-12-20 2024-08-07 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
HRP20250482T1 (hr) 2016-12-21 2025-06-20 Cephalon Llc Protutijela koja se specifično vežu na ljudski il-15 i njihove uporabe
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
EP3559032A1 (en) 2016-12-23 2019-10-30 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
KR102616666B1 (ko) 2016-12-23 2023-12-27 노파르티스 아게 인자 xi 항체 및 사용 방법
CA3047070A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 F.Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
TW201825515A (zh) 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
AU2018205234B2 (en) 2017-01-06 2024-09-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (TILs) with tumor necrosis factor receptor superfamily (TNFRSF) agonists and therapeutic combinations of TILs and TNFRSF agonists
ES3055314T3 (en) 2017-01-06 2026-02-11 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
EP3573989A4 (en) 2017-01-25 2020-11-18 Beigene, Ltd. CRYSTALLINE FORMS OF (S) -7- (1- (BUT-2-YNOYL) PIPERIDIN-4-YL) -2- (4-PHENOXYPHENYL) -4, 5, 6, 7-TETRAHY DROPYRAZOLO [1, 5-A ] PYRIMIDINE-3-CARBOXAMIDE, PREPARATION AND ASSOCIATED USES
TWI828672B (zh) 2017-01-31 2024-01-11 日商中外製藥股份有限公司 用於治療或預防c5相關疾病的醫藥組合物以及治療或預防c5相關疾病的方法
CA3052911A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Novartis Ag Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
CN116715775A (zh) 2017-02-10 2023-09-08 豪夫迈·罗氏有限公司 抗类胰蛋白酶抗体、其组合物及其用途
BR112019015900A2 (pt) * 2017-02-10 2020-04-07 Genmab B.V. polipeptídeo, métodos para aumentar a atividade agonística de um polipeptídeo, para aumentar a atividade de cdc de um polipeptídeo e de tratamento de um indivíduo tendo uma doença, composição, kit de partes, e, uso de um polipeptídeo ou uma composição
JP7136790B2 (ja) 2017-02-17 2022-09-13 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー アルファ－シヌクレインに対する抗体およびその使用
RS63818B1 (sr) 2017-02-17 2023-01-31 Denali Therapeutics Inc Konstruisani polipeptidi za vezivanje za receptor transferina
SG11201907288RA (en) 2017-02-28 2019-09-27 Seattle Genetics Inc Cysteine mutated antibodies for conjugation
SG11201907867TA (en) 2017-02-28 2019-09-27 Bristol Myers Squibb Co Use of anti-ctla-4 antibodies with enhanced adcc to enhance immune response to a vaccine
MX2019010295A (es) 2017-03-01 2019-11-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
US11274160B2 (en) 2017-03-02 2022-03-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to Nectin-4 and uses thereof
JP2020511144A (ja) 2017-03-16 2020-04-16 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｐｄ−ｌ２バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
MX2019010887A (es) 2017-03-16 2019-10-15 Alpine Immune Sciences Inc Proteinas inmunomoduladoras de cb80 variante y usos de estas.
FI3596116T3 (fi) 2017-03-16 2023-11-09 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatorisia pd-l1-varianttiproteiineja ja niiden käyttöjä
EP3600442A1 (en) 2017-03-22 2020-02-05 Genentech, Inc. Optimized antibody compositions for treatment of ocular disorders
KR102628323B1 (ko) 2017-03-24 2024-01-22 노바르티스 아게 심장질환 예방 및 치료 방법
CN117205311A (zh) 2017-03-28 2023-12-12 基因泰克公司 治疗神经退行性疾病的方法
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
CN110402255B (zh) 2017-04-04 2022-12-02 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的能够特异性结合cd40和fap的双特异性抗原结合分子
UA128387C2 (uk) 2017-04-05 2024-07-03 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитіло до lag3
CA3052532A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
TWI796329B (zh) 2017-04-07 2023-03-21 美商默沙東有限責任公司 抗－ilt4抗體及抗原結合片段
BR112019017241A2 (pt) 2017-04-13 2020-04-14 Agenus Inc. anticorpos anti-cd137 e métodos de uso dos mesmos
BR112019021495A8 (pt) 2017-04-14 2023-05-02 Inst Curie Compostos de ligação ao amhrii para prevenção ou tratamento de cânceres de pulmão
CN110621787A (zh) 2017-04-14 2019-12-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
WO2018189379A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Gamamabs Pharma Amhrii-binding compounds for preventing or treating cancers
ES2994451T3 (en) 2017-04-20 2025-01-24 Atyr Pharma Inc Compositions for treating lung inflammation
TW201841656A (zh) 2017-04-21 2018-12-01 美商建南德克公司 Ｋｌｋ５拮抗劑用於治療疾病之用途
EP3615574B1 (en) 2017-04-26 2026-06-24 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
TWI791519B (zh) 2017-04-27 2023-02-11 美商提薩羅有限公司 針對淋巴細胞活化基因-3（lag-3）之抗體藥劑及其用途
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
LT3618863T (lt) 2017-05-01 2023-10-10 Agenus Inc. Anti-tigit antikūnai ir jų panaudojimo būdai
BR112019022912A2 (pt) 2017-05-05 2020-05-26 Allakos Inc. Métodos e composições para tratar doenças oculares alérgicas
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
WO2018209115A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
WO2018213097A1 (en) 2017-05-15 2018-11-22 University Of Rochester Broadly neutralizing anti-influenza monoclonal antibody and uses thereof
US20200362058A1 (en) 2017-05-24 2020-11-19 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
KR102920712B1 (ko) 2017-05-24 2026-01-30 노파르티스 아게 항체-사이토카인 생착된 단백질 및 암 치료에 있어서의 사용 방법
MX2019013132A (es) 2017-05-25 2020-01-27 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos que comprenden regiones constantes pesadas modificadas.
CN111051346A (zh) 2017-05-31 2020-04-21 斯特库伯株式会社 使用免疫特异性结合btn1a1的抗体和分子治疗癌症的方法
CN111148762A (zh) 2017-05-31 2020-05-12 斯特库伯株式会社 免疫特异性结合至btn1a1的抗体和分子及其治疗性用途
JP7348072B2 (ja) 2017-06-01 2023-09-20 コンピュジェン リミテッド 三重併用抗体療法
JP2020522562A (ja) 2017-06-06 2020-07-30 ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド Ｂｔｎ１ａ１又はｂｔｎ１ａ１リガンドに結合する抗体及び分子を用いて癌を治療する方法
UY37758A (es) 2017-06-12 2019-01-31 Novartis Ag Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos
WO2018229706A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
CA3062194A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 Amgen Inc. Method of treating or ameliorating metabolic disorders using binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (gipr) in combination with glp-1 agonists
TWI804499B (zh) 2017-06-23 2023-06-11 美商維洛斯生物公司 Ror1抗體免疫接合物
EP3645569A4 (en) 2017-06-26 2021-03-24 BeiGene, Ltd. IMMUNOTHERAPY FOR LIVER CELL CARCINOMA
EP3645564A1 (en) 2017-06-28 2020-05-06 Novartis AG Methods for preventing and treating urinary incontinence
AU2018304458B2 (en) 2017-07-21 2021-12-09 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CN107748253A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRI受体的ELISA检测方法
CN107748259A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcRn受体的ELISA检测方法
EP3658589B1 (en) 2017-07-26 2023-09-27 Forty Seven, Inc. Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
CN107748258A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRII受体的ELISA检测方法
CN107748262A (zh) * 2017-07-26 2018-03-02 东曜药业有限公司 一种FcγRIIIA受体的ELISA检测方法
ES2965486T3 (es) 2017-07-27 2024-04-15 Alexion Pharma Inc Formulaciones de anticuerpos anti-C5 de alta concentración
MX2020001593A (es) 2017-08-09 2020-07-13 Bioverativ Therapeutics Inc Moleculas de acido nucleico y usos de las mismas.
WO2019033043A2 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Genentech, Inc. ANTI-CD8 ANTIBODIES AND USES THEREOF
CN111315767B (zh) 2017-08-22 2025-03-18 萨纳生物有限责任公司 可溶性干扰素受体及其用途
SG11202000387YA (en) 2017-08-25 2020-03-30 Five Prime Therapeutics Inc B7-h4 antibodies and methods of use thereof
SI3456736T1 (sl) 2017-09-19 2021-06-30 Tillotts Pharma Ag Variante protitelesa
ES2978167T3 (es) 2017-09-19 2024-09-06 Tillotts Pharma Ag Variantes de anticuerpos
JP7382922B2 (ja) 2017-09-20 2023-11-17 中外製薬株式会社 Ｐｄ－１系結合アンタゴニストおよびｇｐｃ３標的化剤を使用する併用療法のための投与レジメン
TW201922780A (zh) 2017-09-25 2019-06-16 美商健生生物科技公司 以抗ｉｌ１２／ｉｌ２３抗體治療狼瘡之安全且有效之方法
CA3071236A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Multispecific antigen-binding molecule having blood coagulation factor viii (fviii) cofactor function-substituting activity, and pharmaceutical formulation containing said moleculeas active ingredient
EP3694870A1 (en) 2017-10-10 2020-08-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Ctla-4 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2019075090A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Tilos Therapeutics, Inc. ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF
CN119264274A (zh) 2017-10-12 2025-01-07 免疫苏醒公司 Vegfr-抗体轻链融合蛋白
CN111247171A (zh) 2017-10-14 2020-06-05 西托姆克斯治疗公司 抗体、可活化抗体、双特异性抗体和双特异性可活化抗体及其使用方法
JP7282760B2 (ja) 2017-10-18 2023-05-29 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド バリアントｉｃｏｓリガンド免疫調節タンパク質ならびに関連する組成物および方法
WO2019077092A1 (en) 2017-10-20 2019-04-25 F. Hoffmann-La Roche Ag METHOD FOR GENERATING MULTISPECIFIC ANTIBODIES FROM MONOSPECIFIC ANTIBODIES
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP7518764B2 (ja) 2017-10-26 2024-07-18 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）および非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）の処置のための抗Ｃ５抗体の投薬量および投与
IL274071B2 (en) 2017-10-30 2025-10-01 Hoffmann La Roche Method for generating in vivo multispecific antibodies from monospecific antibodies
MX2020004716A (es) 2017-11-06 2020-11-06 Janssen Biotech Inc Método seguro y eficaz para tratar la artritis psoriásica con el anticuerpo específico anti-il23.
WO2019090263A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
AU2018363922B2 (en) 2017-11-08 2025-06-12 Kyowa Kirin Co., Ltd. Bispecific antibody which binds to CD40 and EpCAM
EP4640703A3 (en) 2017-11-14 2026-04-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c1s antibodies and methods of use
EP3713959A1 (en) 2017-11-21 2020-09-30 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3713965A1 (en) 2017-11-22 2020-09-30 Novartis AG Reversal binding agents for anti-factor xi/xia antibodies and uses thereof
JP2021503885A (ja) 2017-11-22 2021-02-15 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 末梢血からの末梢血リンパ球（ｐｂｌ）の拡大培養
US11786529B2 (en) 2017-11-29 2023-10-17 Beigene Switzerland Gmbh Treatment of indolent or aggressive B-cell lymphomas using a combination comprising BTK inhibitors
CN111417651B (zh) 2017-12-01 2023-09-29 诺华股份有限公司 多瘤病毒中和抗体
JP7357616B2 (ja) 2017-12-05 2023-10-06 中外製薬株式会社 Ｃｄ３およびｃｄ１３７に結合する改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子
MA51032A (fr) 2017-12-08 2021-03-17 Argenx Bvba Utilisation d'antagonistes de fcrn pour le traitement de la myasthénie grave généralisée
EP3724885A2 (en) 2017-12-15 2020-10-21 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for determining the beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof and beneficial administration of tumor infiltrating lymphocytes, and methods of use thereof
EP3498293A1 (en) 2017-12-15 2019-06-19 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Treatment of monogenic diseases with an anti-cd45rc antibody
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
US12139533B2 (en) 2017-12-20 2024-11-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-CD200 antibodies
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
US20190211098A1 (en) 2017-12-22 2019-07-11 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
SG11202004158QA (en) 2017-12-28 2020-06-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
KR102845020B1 (ko) 2017-12-28 2025-08-12 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-l1에 대한 항체 및 변이체
JP7314146B2 (ja) 2017-12-28 2023-07-25 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤
WO2019129677A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-vegf antibodies and methods of use
FR3076294B1 (fr) 2017-12-29 2022-01-28 Lab Francais Du Fractionnement Procede de purification d'anticorps a partir de lait brut
SG11202006148UA (en) 2018-01-03 2020-07-29 Alpine Immune Sciences Inc Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
KR20240134250A (ko) 2018-01-04 2024-09-06 아이코닉 테라퓨틱스, 인코포레이티드 항-조직 인자 항체, 항체-약물 결합체, 및 관련 방법
US11466077B2 (en) 2018-01-05 2022-10-11 Ac Immune Sa Misfolded TDP-43 binding molecules
US12247060B2 (en) 2018-01-09 2025-03-11 Marengo Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered T cells for the treatment of diseases
JP7358361B2 (ja) 2018-01-12 2023-10-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
CA3084518A1 (en) 2018-01-15 2019-07-18 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against pd-1
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
BR112020015006A2 (pt) * 2018-01-26 2020-12-29 Genzyme Corporation Variantes de fc com ligação realçada ao fcrn e meia-vida prolongada
CN111655717A (zh) 2018-01-26 2020-09-11 豪夫迈·罗氏有限公司 IL-22 Fc融合蛋白及使用方法
PL3743088T3 (pl) 2018-01-26 2023-03-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Kompozycje i sposoby stosowania il-22 fc
WO2019148412A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1/lag3 bispecific antibodies
US20210038744A1 (en) 2018-02-01 2021-02-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor viii
WO2019148410A1 (en) 2018-02-01 2019-08-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-pd-1 antibodies
US11787857B2 (en) 2018-02-02 2023-10-17 Bio-Techne Corporation Compounds that modulate the interaction of VISTA and VSIG3 and methods of making and using
CN111699004A (zh) 2018-02-06 2020-09-22 豪夫迈·罗氏有限公司 眼科疾病的治疗
CR20200391A (es) 2018-02-08 2020-10-19 Genentech Inc Moléculas biespecíficas de unión al antígeno y métodos de uso
KR20220098056A (ko) 2018-02-09 2022-07-08 제넨테크, 인크. 비만 세포 매개 염증성 질환에 대한 치료 및 진단 방법
CA3090795A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with adenosine a2a receptor antagonists and therapeutic combinations of tils and adenosine a2a receptor antagonists
CA3091646A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Abba Therapeutics Ag Anti-human pd-l2 antibodies
WO2019165077A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibody formulations
CA3091139A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins
US20200399376A1 (en) 2018-02-26 2020-12-24 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
US20210002373A1 (en) 2018-03-01 2021-01-07 Nextcure, Inc. KLRG1 Binding Compositions and Methods of Use Thereof
KR20200144094A (ko) 2018-03-02 2020-12-28 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. B7-h4 항체 및 이의 사용 방법
NL2020520B1 (en) 2018-03-02 2019-09-12 Labo Bio Medical Invest B V Multispecific binding molecules for the prevention, treatment and diagnosis of neurodegenerative disorders
JP7516250B2 (ja) 2018-03-05 2024-07-16 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ－２３特異的抗体を用いたクローン病の治療方法
PL3765489T3 (pl) 2018-03-13 2025-02-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapeutyczne połączenie agonistów 4-1BB z przeciwciałami anty-CD20
EP3765517A1 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
CA3087423A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibodies
TWI827585B (zh) 2018-03-15 2024-01-01 日商中外製藥股份有限公司 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法
WO2019183362A1 (en) * 2018-03-21 2019-09-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Fc variant compositions and methods of use thereof
SG11202008593PA (en) 2018-03-21 2020-10-29 Five Prime Therapeutics Inc ANTIBODIES BINDING TO VISTA AT ACIDIC pH
JP7351845B2 (ja) 2018-03-23 2023-09-27 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｍｉｃａおよび／またはｍｉｃｂに対する抗体ならびにそれらの使用
PE20210313A1 (es) 2018-03-28 2021-02-12 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de fusion interleucina-2/receptor alfa de interleucina-2 y metodos de uso
JP2021519073A (ja) 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
AU2019241350B2 (en) 2018-03-30 2025-10-02 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
CR20250022A (es) 2018-04-02 2025-02-25 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti-trem-1, ácidos nucleicos y vectores de los mismos (divisional 2020-0450)
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
WO2019195770A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising anti-nrp2 antibodies
EP3552631A1 (en) 2018-04-10 2019-10-16 Inatherys Antibody-drug conjugates and their uses for the treatment of cancer
CN112585164A (zh) 2018-04-12 2021-03-30 免疫医疗有限公司 用于治疗癌症的、lif抑制剂和pd-1轴抑制剂的组合
CR20250325A (es) 2018-04-13 2025-08-29 Genentech Inc Formulaciones inmunoconjugadas anti-cd79b estables (divisional expediente 2020-0550)
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
CA3096703A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 University Of Rochester Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof
JP2021523138A (ja) 2018-05-11 2021-09-02 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｉｌ−２３抗体を使用してうつを治療する方法
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
EP3794031A2 (en) 2018-05-14 2021-03-24 MedImmune Limited Antibodies against lif and dosage forms thereof
CN112118859A (zh) 2018-05-16 2020-12-22 杰特有限公司 1型可溶性补体受体变体及其用途
KR102914074B1 (ko) 2018-05-18 2026-01-16 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. A형 혈우병의 치료 방법
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
CN112566935B (zh) 2018-05-23 2024-12-13 百济神州有限公司 抗ox40抗体和使用方法
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
EP3802593B1 (en) 2018-05-31 2024-09-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of anti-c5 antibodies for treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (pnh) in pediatric patients
CN119490583A (zh) 2018-05-31 2025-02-21 诺华股份有限公司 乙型肝炎抗体
PE20210320A1 (es) 2018-06-01 2021-02-16 Novartis Ag Moleculas de union contra bcma y usos de las mismas
SG11202011461TA (en) 2018-06-01 2020-12-30 Compugen Ltd Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibodies and methods of use
CN112867394B9 (zh) 2018-06-04 2024-12-06 马萨诸塞州渤健公司 具有降低的效应功能的抗vla-4抗体
EP3805400A4 (en) 2018-06-04 2022-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
EP3802603A1 (en) 2018-06-04 2021-04-14 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of anti-c5 antibodies for treatment of atypical hemolytic uremic syndrome (ahus) in pediatric patients
MA52783A (fr) 2018-06-05 2021-04-14 Amgen Inc Modulation de la phagocytose cellulaire dépendant de l'anticorps
TWI920652B (zh) 2018-06-07 2026-04-01 美商思進公司 喜樹鹼結合物
JP7486437B2 (ja) 2018-06-08 2024-05-17 アルジェニクス ビーブイ 免疫性血小板減少症を治療する組成物及び方法
TWI848953B (zh) 2018-06-09 2024-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 針對癌症治療之多特異性結合蛋白
WO2019241758A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CN112469440B (zh) 2018-06-18 2024-09-06 优瑞科生物技术公司 靶向前列腺特异性膜抗原(psma)的构建体和其用途
JP7379390B2 (ja) 2018-06-18 2023-11-14 メドイミューン・リミテッド 癌の治療に使用するためのｌｉｆ阻害剤と白金系抗悪性腫瘍剤の組み合わせ
AU2019288496B2 (en) 2018-06-22 2024-11-21 Cugene Inc. Interleukin-2 variants and methods of uses thereof
TWI890148B (zh) 2018-06-23 2025-07-11 美商建南德克公司 以pd-1軸結合拮抗劑、鉑劑及拓撲異構酶ii抑制劑治療肺癌之方法
JP7538723B2 (ja) 2018-06-28 2024-08-22 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 抗ｃ５抗体の産生方法
WO2020010250A2 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
KR20210027426A (ko) 2018-07-03 2021-03-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Fgf21 제제
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
MY201995A (en) 2018-07-09 2024-03-28 Five Prime Therapeutics Inc Antibodies binding to ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
AU2019301120A1 (en) 2018-07-11 2021-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to VISTA at acidic pH
EP3823611A1 (en) 2018-07-18 2021-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
WO2020016838A2 (en) 2018-07-18 2020-01-23 Janssen Biotech, Inc. Sustained response predictors after treatment with anti-il23 specific antibody
AU2019312366B2 (en) 2018-07-26 2025-08-14 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating NRP2-associated diseases
MX2021000516A (es) 2018-08-01 2021-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composicion farmaceutica para usarse en el tratamiento o prevencion de una enfermedad relacionada con c5 y metodo para tratar o prevenir una enfermedad relacionada con c5.
EP3830259A4 (en) 2018-08-02 2022-05-04 Dyne Therapeutics, Inc. MUSCLE TARGETED COMPLEXES AND THEIR USES IN THE TREATMENT OF FACIOSCAPULOHUMERAL MUSCULAR DYSTROPHY
US12435137B2 (en) 2018-08-03 2025-10-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
JP7602454B2 (ja) 2018-08-09 2024-12-18 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 核酸分子及び非ウイルス遺伝子治療のためのそれらの使用
US12172106B2 (en) 2018-08-09 2024-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal Fc receptor
MX2021001431A (es) 2018-08-10 2021-05-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union al antigeno anti grupo de diferenciacion 137 (cd137) y su uso.
US12259395B2 (en) 2018-08-17 2025-03-25 Ab Studio Inc. Catabodies and methods of use thereof
ES3009025T3 (en) 2018-08-31 2025-03-25 Regeneron Pharma Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/cd20 bispecific antibodies
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020053742A2 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Novartis Ag Anti-hla-hbv peptide antibodies
WO2020052543A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against cd33 and constructs thereof
EP3850006A1 (en) 2018-09-11 2021-07-21 Amgen Inc. Methods of modulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
AU2019339469A1 (en) 2018-09-13 2021-03-11 Immune-Onc Therapeutics, Inc. Novel LILRB4 antibodies and uses thereof
US20210371537A1 (en) 2018-09-18 2021-12-02 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anti-tnfr2 antibodies and uses thereof
CA3111401A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
CN113544144A (zh) 2018-09-19 2021-10-22 高山免疫科学股份有限公司 变体cd80融合蛋白和相关构建体的方法和用途
AU2019342133B8 (en) 2018-09-21 2025-08-07 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
HUE063462T2 (hu) 2018-09-24 2024-01-28 Janssen Biotech Inc A colitis ulcerosa kezelésének biztonságos és hatékony eljárása anti-IL12/IL23 antitesttel
SG11202102851XA (en) 2018-09-27 2021-04-29 Celgene Corp SIRPa BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
CN113286812B (zh) 2018-09-27 2025-05-30 西里欧发展公司 掩蔽型细胞因子多肽
KR20210068079A (ko) 2018-09-28 2021-06-08 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Cd3 및 cd137에 결합할 수 있지만 동시에는 결합하지 않는 항원 결합 분자
JP2022501325A (ja) 2018-09-28 2022-01-06 中外製薬株式会社 改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子
US11242396B2 (en) 2018-10-01 2022-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
EP3863722A2 (en) 2018-10-10 2021-08-18 Tilos Theapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants and uses thereof
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
AU2019361923B2 (en) 2018-10-15 2026-07-09 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
CN119033684A (zh) 2018-10-29 2024-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体制剂
US12240893B2 (en) 2018-10-30 2025-03-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Subcutaneous dosage and administration of anti-C5 antibodies for treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)
WO2020089437A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Engmab Sàrl Combination therapy
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
EP4219550A1 (en) 2018-11-02 2023-08-02 Oklahoma Medical Research Foundation Monoclonal antibodies to eltd1 and uses thereof
CN113260626B (zh) 2018-11-05 2024-09-13 豪夫迈·罗氏有限公司 在原核宿主细胞中产生双链蛋白质的方法
BR112021008549A2 (pt) 2018-11-05 2022-01-04 Iovance Biotherapeutics Inc Método de tratamento de carcinoma pulmonar de células não pequenas com uma população de linfócitos infiltrantes de tumor
JP7627216B2 (ja) 2018-11-16 2025-02-05 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ムチン－１６に対する抗体およびそれを使用する方法
AR117091A1 (es) 2018-11-19 2021-07-07 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra cd40 y sus usos
MA55149A (fr) 2018-11-20 2021-09-29 Janssen Biotech Inc Procédé sûr et efficace de traitement du psoriasis avec un anticorps spécifique anti-il-23
EP3884276A2 (en) 2018-11-23 2021-09-29 Katholieke Universiteit Leuven Predicting a treatment response in inflammatory bowel disease
US12098195B2 (en) 2018-11-27 2024-09-24 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-IL-23p19 antibody and use thereof in treating diseases
CN116003597A (zh) 2018-11-27 2023-04-25 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α的抗体及其用途
JP2022513653A (ja) 2018-11-28 2022-02-09 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 修飾された重鎖定常領域を含む抗体
CN113727998A (zh) 2018-11-30 2021-11-30 高山免疫科学股份有限公司 Cd86变体免疫调节蛋白及其用途
KR20210099614A (ko) 2018-12-04 2021-08-12 노파르티스 아게 Cd3에 대한 결합 분자 및 이의 용도
CA3121699A1 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Morphosys Ag Multispecific antigen-binding molecules
MX2021006578A (es) 2018-12-05 2021-07-07 Genentech Inc Procedimientos de diagnostico y composiciones para la inmunoterapia contra el cancer.
WO2020116560A1 (ja) 2018-12-05 2020-06-11 株式会社バイカ・セラピュティクス 抗体のＦｃ領域改変体
BR112021010908A2 (pt) 2018-12-06 2021-08-31 Genentech, Inc. Método para tratamento de linfoma difuso de grandes células b, kit e imunoconjugado
US12428484B2 (en) 2018-12-06 2025-09-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-ALK2 antibodies and uses thereof
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
CA3120059A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 Boehringer Ingelheim Io Canada Inc. Anti-periostin antibodies and uses thereof
JP2022514867A (ja) 2018-12-18 2022-02-16 カタパルト セラピューティクス ビー．ヴイ． 移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の防止又は処置のための抗ＣＣＲ７ ＭＡＢの使用
EP3902836B1 (en) 2018-12-18 2026-03-25 Boehringer Ingelheim IO Canada Inc. Flt3 agonist antibodies and uses thereof
WO2020128864A1 (en) 2018-12-18 2020-06-25 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating lupus with anti-il12/il23 antibody
US12703762B2 (en) 2018-12-18 2026-08-11 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-factor XI/XIa antibodies and uses thereof
TW202039554A (zh) 2018-12-19 2020-11-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＮＦ－α抗體
CN113227131B (zh) 2018-12-20 2025-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰的抗体Fc及其使用方法
WO2020127873A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
JP7560459B2 (ja) 2018-12-21 2024-10-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシスに耐性のある細胞株を使用してポリペプチドを生成する方法
BR112021012631A2 (pt) 2018-12-26 2021-12-14 Xilio Dev Inc Anticorpos anti-ctla4 e métodos de uso dos mesmos
US11447551B2 (en) 2018-12-28 2022-09-20 Sparx Bioscience Limited Binding molecules specific for claudin 18.2, compositions and methods thereof, for the treatment of cancer and other diseases
KR102991359B1 (ko) 2018-12-28 2026-07-16 쿄와 기린 가부시키가이샤 TfR에 결합하는 이중 특이적 항체
WO2020141145A1 (en) 2018-12-30 2020-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-rabbit cd19 antibodies and methods of use
CA3124352A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Resolve Therapeutics, Llc Treatment of sjogren's disease with nuclease fusion proteins
WO2020148207A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies binding to hla-a2
CN115120716A (zh) 2019-01-14 2022-09-30 健泰科生物技术公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗治疗癌症的方法
CN118894938A (zh) 2019-01-22 2024-11-05 百时美施贵宝公司 抗IL-7Rα亚基的抗体及其用途
BR112021014236A2 (pt) 2019-01-22 2021-09-28 Innate Pharma Anticorpo, composição farmacêutica, kit e método para predizer ou avaliar a eficácia
SG11202107981VA (en) 2019-01-22 2021-08-30 Genentech Inc Immunoglobulin a antibodies and methods of production and use
US11414496B2 (en) 2019-01-23 2022-08-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Anti-CD38 binding domains
CN113614107A (zh) 2019-01-23 2021-11-05 Encefa公司 Cd31竞争剂及其用途
MX2021008561A (es) 2019-01-23 2021-08-19 Genentech Inc Metodos de produccion de proteinas multimericas en celulas huesped eucariotas.
WO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2020-07-30 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
JP7386877B2 (ja) 2019-01-31 2023-11-27 イミューンセント バイオテクノロジー，インコーポレイテッド 新規の抗ｉｆｎａｒ１抗体
AU2020226893B2 (en) 2019-02-21 2025-02-27 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to T cell related cancer cells and uses thereof
JP7579795B2 (ja) 2019-02-21 2024-11-08 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド ＮＫｐ３０に結合する抗体分子およびその使用
CN113710706A (zh) 2019-02-27 2021-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit抗体和抗cd20抗体或抗cd38抗体治疗的给药
MX2021010254A (es) 2019-02-27 2021-09-21 Angiex Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden anticuerpos anti-tm4sf1 y metodos de uso de los mismos.
SG11202109331QA (en) 2019-03-01 2021-09-29 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
CN113874083A (zh) 2019-03-01 2021-12-31 梅里麦克制药股份有限公司 抗-tnfr2抗体及其用途
BR112021017144A2 (pt) 2019-03-08 2021-11-09 Genentech Inc Ensaio para detectar uma proteína associada à membrana, métodos para quantificar a concentração de proteína circulante, para determinar se um paciente com linfoma de células b tem probabilidade de exibir uma resposta a uma terapia anti-cd20, para determinar a afinidade de um anticorpo anti-cd20, para determinar a ativação de células t e método de tratamento de um tumor
KR20210141990A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법
MA55296A (fr) 2019-03-14 2022-03-23 Hoffmann La Roche Traitement du cancer avec des anticorps bispécifiques de her2xcd3 en combinaison avec un mab anti-her2
MX2021011328A (es) 2019-03-18 2021-12-10 Janssen Biotech Inc Método para tratar la psoriasis en sujetos pediátricos con anticuerpo anti-il12/il23.
JP7601758B2 (ja) 2019-03-19 2024-12-17 中外製薬株式会社 Ｍｔａ依存的に抗原に対する結合活性が変化する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子及び当該抗原結合ドメイン取得用ライブラリ
EP3947446A1 (en) 2019-03-25 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Treatment of taupathy disorders by targeting new tau species
JP7575401B2 (ja) 2019-04-03 2024-10-29 ジェンザイム・コーポレーション 断片化が低減した抗アルファベータｔｃｒ結合ポリペプチド
MA55613A (fr) 2019-04-08 2022-02-16 Biogen Ma Inc Anticorps anti-intégrine et leurs utilisations
GB2589049C (en) 2019-04-11 2024-02-21 argenx BV Anti-IgE antibodies
WO2020214606A1 (en) * 2019-04-15 2020-10-22 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Recombinant pd-l1 peptides and methods of use
BR112021020447A2 (pt) 2019-04-17 2022-05-17 Alpine Immune Sciences Inc Métodos e usos de proteínas de fusão de ligante icos variante (icosl)
CA3133909A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Elpida TSIKA Novel molecules for therapy and diagnosis
JP7720785B2 (ja) 2019-04-18 2025-08-08 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 低ｐＨで結合するために特異性が増強されたイピリムマブバリアント
KR20220002967A (ko) 2019-04-19 2022-01-07 제넨테크, 인크. 항 mertk 항체 및 이의 사용 방법
JPWO2020213724A1 (pl) 2019-04-19 2020-10-22
MX2021013222A (es) 2019-05-03 2022-01-06 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer con un anticuerpo anti-pd-l1.
BR112021022815A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina
WO2020230901A1 (ja) 2019-05-15 2020-11-19 協和キリン株式会社 Ｃｄ４０とｇｐｃ３に結合するバイスペシフィック抗体
CA3137649A1 (en) 2019-05-15 2020-11-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha An antigen-binding molecule, a pharmaceutical composition, and a method
CA3140385A1 (en) 2019-05-15 2020-11-19 Kyowa Kirin Co., Ltd. Bispecific antibody binding to cd40 and fap
CA3140063A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Novartis Ag Antibody drug conjugates having linkers comprising hydrophilic groups
US12037378B2 (en) 2019-05-21 2024-07-16 Novartis Ag Variant CD58 domains and uses thereof
AU2020279224B2 (en) 2019-05-21 2024-12-05 Novartis Ag Trispecific binding molecules against BCMA and uses thereof
UY38701A (es) 2019-05-21 2020-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión a cd19, conjugados, composiciones que las comprenden y usos de las mismas
CN114008073B (zh) 2019-05-23 2025-08-12 Ac免疫有限公司 抗tdp-43结合分子及其用途
WO2020243021A2 (en) 2019-05-24 2020-12-03 Foundation Medicine, Inc. Ntrk fusion molecules and uses thereof
US20200385453A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Janssen Biotech, Inc. Safe and Effective Method of Treating Psoriatic Arthritis with Anti-IL23 Specific Antibody
CN113905757B (zh) 2019-06-05 2026-01-13 中外制药株式会社 抗体切割位点结合分子
BR112021024632A2 (pt) 2019-06-07 2022-01-18 Argenx Bvba Formulações farmacêuticas de inibidores de fcrn adequados para administração subcutânea
JP7082245B2 (ja) 2019-06-10 2022-06-07 中外製薬株式会社 サイトカイン阻害剤と組み合わせて使用するための抗ｔ細胞抗原結合分子
US20220298230A1 (en) * 2019-06-11 2022-09-22 The Rockefeller University Antibodies and methods for treatment of viral infections
EP3990492A1 (en) 2019-06-27 2022-05-04 F. Hoffmann-La Roche AG Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
EP3997121A4 (en) 2019-07-09 2024-03-27 Beijing SoloBio Genetechnology Company Ltd. ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY RECOGNIZE PSEUDOMONAS PCRV AND THEIR USES
JP7359864B2 (ja) 2019-07-10 2023-10-11 中外製薬株式会社 クローディン６結合分子およびその使用
WO2021005232A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Umc Utrecht Holding B.V. Intranasal administration of neutralising antiviral antibodies
WO2021010326A1 (ja) 2019-07-12 2021-01-21 中外製薬株式会社 抗変異型ｆｇｆｒ３抗体およびその使用
WO2021011678A1 (en) 2019-07-15 2021-01-21 Bristol-Myers Squibb Company Anti-trem-1 antibodies and uses thereof
EP3999541A1 (en) 2019-07-15 2022-05-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against human trem-1 and uses thereof
WO2021009263A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity for cd38 and uses thereof
BR112021005478A2 (pt) 2019-07-24 2021-06-15 H. Lundbeck A/S anticorpos anti-mglur5 e uso dos mesmos
CN114466663B (zh) 2019-07-25 2026-01-02 建新公司 以FcRn拮抗剂治疗抗体介导的障碍的方法
CN112300279A (zh) 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
EP4004037A1 (en) 2019-07-26 2022-06-01 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to enterovirus d68
US20220280643A1 (en) 2019-07-29 2022-09-08 Mark White Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
EP4003409A1 (en) 2019-07-31 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Dosage and administration regimen for the treatment or prevention of c5-related diseases by the use of the anti-c5 antibody crovalimab
CN114466660A (zh) 2019-07-31 2022-05-10 豪夫迈·罗氏有限公司 通过使用抗c5抗体可伐利单抗来治疗或预防c5相关疾病的剂量和施用方案
MX2022001626A (es) 2019-08-06 2022-03-02 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Composiciones biofarmaceuticas y procedimientos conexos.
TWI832183B (zh) 2019-08-06 2024-02-11 香港商新旭生技股份有限公司 結合至病理性tau種類之抗體及其用途
MX2022001882A (es) 2019-08-12 2022-05-30 Aptevo Res & Development Llc Proteinas de union a 4-1bb y ox40 y composiciones y metodos relacionados anticuerpos contra 4-1bb, anticuerpos contra ox40.
CN114787182A (zh) 2019-08-13 2022-07-22 艾佩斯瑞生物制药公司 工程化的白细胞介素-2受体β激动剂
CN114585644A (zh) 2019-08-30 2022-06-03 艾吉纳斯公司 抗cd96抗体及其使用方法
ES3064633T3 (en) 2019-09-12 2026-04-28 Hoffmann La Roche Compositions and methods of treating lupus nephritis
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
AU2020349509A1 (en) 2019-09-18 2022-03-31 Genentech, Inc. Anti-KLK7 antibodies, anti-KLK5 antibodies, multispecific anti-KLK5/KLK7 antibodies, and methods of use
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
CA3149719A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
MX2022003266A (es) 2019-09-20 2022-04-11 Genentech Inc Dosis para anticuerpos anti-triptasa.
KR20220088428A (ko) 2019-09-26 2022-06-27 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 글리코실화된 ctla-4에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
AU2020351734A1 (en) 2019-09-27 2022-04-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-TIGIT and anti-PD-L1 antagonist antibodies
CN114746119A (zh) 2019-09-27 2022-07-12 詹森生物科技公司 抗-ceacam抗体及其用途
WO2021058729A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof
US12441788B2 (en) 2019-09-27 2025-10-14 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-müllerian inhibiting substance antibodies and uses thereof
JP7803014B2 (ja) 2019-09-30 2026-01-21 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド レンチウイルスベクター製剤
AU2020358854B2 (en) 2019-10-03 2026-08-13 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising anti-NRP2 antibodies
KR20220082007A (ko) 2019-10-08 2022-06-16 넥틴 테라퓨틱스 리미티드 폴리오바이러스 수용체(pvr)에 대한 항체 및 이의 용도
KR20220088438A (ko) 2019-10-09 2022-06-27 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 글리코실화된 lag3에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
US20240148891A1 (en) 2019-10-18 2024-05-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CR20220166A (es) 2019-10-18 2022-06-15 Genentech Inc Métodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes
WO2021091605A1 (en) 2019-11-04 2021-05-14 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
IL292458A (en) 2019-11-06 2022-06-01 Genentech Inc Diagnostic and treatment methods for the treatment of hematological cancer
US20220396839A1 (en) 2019-11-12 2022-12-15 Foundation Medicine, Inc. Methods of detecting a fusion gene encoding a neoantigen
MX2022006676A (es) 2019-12-04 2022-07-05 Ac Immune Sa Nuevas moleculas para terapia y diagnostico.
WO2021110873A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Medimmune Limited Antibodies against lif and uses thereof
WO2021113831A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
EP4072682A1 (en) 2019-12-09 2022-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
KR20220114063A (ko) 2019-12-13 2022-08-17 큐진 인크. 신규한 인터루킨-15 (ｉｌ-15) 융합 단백질 및 이의 용도
CR20220330A (es) 2019-12-13 2022-08-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y métodos de uso.
JP7702954B2 (ja) 2019-12-27 2025-07-04 ハイファイバイオ， インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体およびその使用
MY202559A (en) 2019-12-27 2024-05-08 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-ctla-4 antibody and use thereof
WO2021138474A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
AU2021205877B2 (en) 2020-01-06 2024-06-20 Vaccinex, Inc. Anti-CCR8 antibodies and uses thereof
ES2992247T3 (es) 2020-01-08 2024-12-11 argenx BV Antagonistas del receptor de Fc neonatal humano (FcRn) para el tratamiento de trastornos del pénfigo
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
JP7858532B2 (ja) 2020-01-10 2026-05-14 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド 筋肉標的複合体および筋肉の健康に関連する遺伝子のモジュレーションのためのその使用
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
BR112022015077A2 (pt) 2020-01-31 2022-10-04 Genentech Inc Métodos para induzir células t cd8+ específicas de neoepítopos em um indivíduo com um tumor e para induzir o tráfico de células t cd8+, vacinas de rna, vacina de rna para uso e antagonistas de ligação
WO2021158938A1 (en) 2020-02-06 2021-08-12 Bristol-Myers Squibb Company Il-10 and uses thereof
KR20220140568A (ko) 2020-02-11 2022-10-18 벤더르빌트 유니버시티 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)에 대한 인간 단일클론 항체
IL295382B1 (en) 2020-02-12 2026-08-01 Chugai Seiyaku Kk Anti-CD137 antigen-binding molecule for use in cancer treatment
TWI888487B (zh) 2020-02-14 2025-07-01 日商協和麒麟股份有限公司 與ｃｄ３結合之雙特異性抗體
EP4106794A4 (en) 2020-02-19 2024-03-20 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd METHOD FOR TREATING TRANSPLANT AND HOST DISEASE
WO2021173844A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Biograph 55, Inc. C19 c38 bispecific antibodies
AU2021225962A1 (en) 2020-02-28 2022-10-20 Genzyme Corporation Modified binding polypeptides for optimized drug conjugation
JP7715722B2 (ja) 2020-02-28 2025-07-30 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト及びその使用
KR20220145859A (ko) 2020-02-28 2022-10-31 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항cd137 작제물, 다중 특이적 항체 및 그 용도
WO2021176424A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Ona Therapeutics, S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
CN115551894A (zh) 2020-03-12 2022-12-30 以明生物免疫医疗公司 新型抗lilrb4抗体和衍生产物
EP4119162A4 (en) 2020-03-13 2023-08-23 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. PVRIG-BINDING PROTEIN AND ITS MEDICAL USES
EP4118114A1 (en) 2020-03-13 2023-01-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
CA3169626A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Genentech, Inc. Isoform-selective anti-tgf-beta antibodies and methods of use
US11365239B2 (en) 2020-03-20 2022-06-21 Tsb Therapeutics (Beijing) Co., Ltd. Anti-SARS-COV-2 antibodies and uses thereof
JP2023518814A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ－１９肺炎における、ｉｌ－６アンタゴニストに対する応答を予測するためのバイオマーカー
EP4107186A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Tocilizumab and remdesivir combination therapy for covid-19 pneumonia
EP4107184A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Method for treating pneumonia, including covid-19 pneumonia, with an il6 antagonist
CA3169967A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
US12098365B2 (en) 2020-03-26 2024-09-24 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
WO2021195418A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2)
WO2021195385A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Vanderbilt University HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME CORONAVIRUS 2 (SARS-GoV-2)
WO2021195513A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Novartis Ag Bispecific combination therapy for treating proliferative diseases and autoimmune disorders
JP7674383B2 (ja) 2020-03-30 2025-05-09 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｖｅｇｆ及びｐｄｇｆ－ｂに結合する抗体及び使用方法
CA3173587A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Chugai Seiyaku Kabushiki-Kaisha Dll3-targeting multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
JP7736688B2 (ja) 2020-03-31 2025-09-09 中外製薬株式会社 多重特異性抗原結合分子を製造するための方法
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
WO2021202235A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 University Of Rochester Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
EP4132971A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Merck Sharp & Dohme LLC Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
WO2021204179A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for coronavirus
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
EP4136116A4 (en) 2020-04-17 2024-06-19 Hutchison Medipharma Limited ANTI-OX40 ANTIBODIES AND USES THEREOF
MX2022013173A (es) 2020-04-24 2022-11-30 Hoffmann La Roche Modulacion de enzimas y vias con compuestos de sulfhidrilo y sus derivados.
MX2022013198A (es) 2020-04-24 2022-11-14 Genentech Inc Metodos de uso de inmunoconjugados anti-cd79b.
JP2023523145A (ja) 2020-04-27 2023-06-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア リポ蛋白（ａ）に対するイソ型非依存性抗体
US11634477B2 (en) 2020-04-28 2023-04-25 The Rockefeller University Neutralizing anti-SARS-CoV-2 antibodies and methods of use thereof
EP4143345A1 (en) 2020-04-28 2023-03-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
JP2023527962A (ja) 2020-05-03 2023-07-03 レヴィーナ （スジョウ） バイオファーマ カンパニー， リミテッド 抗ｔｒｏｐ２抗体を含む抗体薬物複合体（ａｄｃ）、かかるａｄｃを含む組成物、ならびにそれらを作製および使用する方法
CA3181949A1 (en) 2020-05-05 2021-11-11 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn's disease with anti-il23 specific antibody
US12202882B2 (en) 2020-05-08 2025-01-21 Alpine Immune Sciences, Inc. APRIL and BAFF inhibitory immunomodulatory proteins and methods of use thereof
EP4149558A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas
ES3075793T3 (en) 2020-05-13 2026-08-07 Disc Medicine Inc Anti-hemojuvelin (hjv) antibodies for treating myelofibrosis
AU2021273014A1 (en) 2020-05-13 2022-11-17 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Anti-hemojuvelin (HJV) antibodies for treating anemia of chronic disease
US20230192867A1 (en) 2020-05-15 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
PH12022553106A1 (en) 2020-05-17 2023-11-20 Astrazeneca Uk Liimited Sars-cov-2-antibodies and methods of selecting and using the same
GB2595299B (en) 2020-05-21 2022-08-03 Mabsolve Ltd Modified immunoglobulin FC regions
US20210363512A1 (en) 2020-05-22 2021-11-25 Formycon Ag ACE2 fusion proteins and uses thereof
WO2021238886A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
WO2021247769A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
CA3184495A1 (en) 2020-06-08 2021-12-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hbv antibodies and methods of use
EP4166574A4 (en) 2020-06-10 2025-01-15 Bica Therapeutics Inc. FUSION PROTEIN WITH ERYTHROPOIETIN POLYPEPTIDE
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
WO2021257503A1 (en) 2020-06-16 2021-12-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
WO2021257124A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
BR112022025536A2 (pt) 2020-06-19 2023-01-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de ligação ao antígeno de células anti-t para uso em combinação com o inibidor da angiogênese
CN115734972A (zh) 2020-06-22 2023-03-03 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd73抗体及其用途
EP4172192A1 (en) 2020-06-24 2023-05-03 Genentech, Inc. Apoptosis resistant cell lines
JP2023537565A (ja) 2020-06-24 2023-09-04 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド タンパク質を発現するように改変されたレンチウイルスベクターの調製物から遊離第ｖｉｉｉ因子を除去する方法
CN116194478A (zh) 2020-06-24 2023-05-30 阿雷克森制药公司 皮下（sc）施用抗c5抗体治疗补体相关病症
CN116723856A (zh) 2020-06-25 2023-09-08 默沙东有限责任公司 靶向丝氨酸413处磷酸化的tau的高亲和力抗体
US20230355722A1 (en) 2020-06-29 2023-11-09 Resolve Therapeutics, Llc Treatment of sjogren’s syndrome with nuclease fusion proteins
WO2022002880A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-protein s single-domain antibodies and polypeptides comprising thereof
AU2021308574A1 (en) 2020-07-13 2023-03-09 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriatic arthritis with anti-IL23 specific antibody
JP7846667B2 (ja) 2020-07-16 2026-04-15 レジェンド バイオテック アイルランド リミテッド Ｃｄ２０結合分子及びその使用
CA3186065A1 (en) 2020-07-16 2022-01-20 Xiaohu FAN Cd19 binding molecules and uses thereof
CA3185122A1 (en) 2020-07-17 2022-01-20 Cecilia Pui Chi Chiu Anti-notch2 antibodies and methods of use
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
IL300121A (en) 2020-07-29 2023-03-01 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
WO2022024065A1 (en) 2020-07-30 2022-02-03 Janssen Biotech, Inc. Method of treating psoriasis in pediatric subjects with anti-il12/il23 antibody
TW202220677A (zh) 2020-07-31 2022-06-01 日商中外製藥股份有限公司 含有表現嵌合受體之細胞的醫藥組成物
JP7904195B2 (ja) 2020-08-03 2026-08-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド リンパ腫のための診断及び治療方法
BR112023001942A2 (pt) 2020-08-06 2023-02-28 Bioverativ Usa Inc Citocinas inflamatórias e fadiga em indivíduo com doença mediada por complemento
IL300257A (en) 2020-08-10 2023-03-01 Astrazeneca Uk Ltd SARS-COV-2 antibodies for the treatment and prevention of COVID-19
CN116615452A (zh) 2020-08-14 2023-08-18 Ac免疫有限公司 人源化抗tdp-43结合分子及其用途
AU2021328375A1 (en) 2020-08-18 2023-04-13 Cephalon Llc Anti-PAR-2 antibodies and methods of use thereof
KR20230052279A (ko) * 2020-08-19 2023-04-19 아스테라스 세이야쿠 가부시키가이샤 비-천연 발생 변형 fc 수용체에 특이적으로 결합하는 igg의 인간 비-천연 발생 변형 fc 영역
US11433100B2 (en) 2020-08-20 2022-09-06 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
EP4097486A4 (en) * 2020-08-20 2023-09-06 A2 Biotherapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CEACAM POSITIVE CANCER
WO2022040454A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating mesothelin positive cancers
EP4204448A2 (en) 2020-08-27 2023-07-05 cureab GmbH Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
US20230416371A1 (en) * 2020-08-28 2023-12-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimer fc polypeptide
WO2022047316A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
JP2023539201A (ja) 2020-08-28 2023-09-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 宿主細胞タンパク質のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９マルチプレックスノックアウト
CN116323663A (zh) 2020-09-04 2023-06-23 豪夫迈·罗氏有限公司 与vegf-a和ang2结合的抗体及其使用方法
WO2022060412A1 (en) 2020-09-17 2022-03-24 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
MX2023002191A (es) 2020-09-18 2023-03-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti antigenos de leucocitos humanos (hla) isoforma dq2.5 y su uso para el tratamiento de la enfermedad celiaca.
PH12023550779A1 (en) 2020-09-28 2023-11-20 Angitia Biomedicines Ltd Anti-sclerostin constructs and uses thereof
US20230365680A1 (en) 2020-09-30 2023-11-16 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
TW202446417A (zh) 2020-10-05 2024-12-01 美商建南德克公司 用抗 fcrh5/抗 cd3 雙特異性抗體進行治療之給藥
CA3195019A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Maria Fardis Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022082030A2 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Gritstone Bio, Inc. Antigen-binding proteins and related methods of use
WO2022079297A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Ac Immune Sa Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
EP4232475A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
US20240025992A1 (en) 2020-10-22 2024-01-25 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses
EP4232822A2 (en) 2020-10-26 2023-08-30 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
WO2022090469A2 (en) 2020-10-29 2022-05-05 Formycon Ag Ace2 fusion proteins and uses thereof
JP7716473B2 (ja) 2020-11-04 2025-07-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の皮下投薬
WO2022098638A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
US11919945B2 (en) 2020-11-04 2024-03-05 The Rockefeller University Neutralizing anti-SARS-CoV-2 antibodies
EP4240493A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
US20250215081A1 (en) 2020-11-06 2025-07-03 Novartis Ag Anti-cd19 agent and b cell targeting agent combination therapy for treating b cell malignancies
AU2021373366A1 (en) 2020-11-06 2023-06-01 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
EP4251187A4 (en) 2020-11-25 2025-09-10 Xilio Dev Inc TUMOR-SPECIFIC CLASSIBLE LINKERS
AU2021390501A1 (en) 2020-12-01 2023-06-29 Aptevo Research And Development Llc Heterodimeric psma and cd3-binding bispecific antibodies
CN116723861A (zh) 2020-12-02 2023-09-08 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗GARP/TGFβ抗体及使用方法
EP4255451A4 (en) 2020-12-03 2025-01-01 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods for identifying lilrb-blocking antibodies
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
JP2024501452A (ja) 2020-12-11 2024-01-12 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｂｒａｆ阻害剤及び／またはｍｅｋ阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球治療によるがん患者の治療
EP4259661A1 (en) 2020-12-14 2023-10-18 Novartis AG Reversal binding agents for anti-natriuretic peptide receptor 1 (npr1) antibodies and uses thereof
JP2023554395A (ja) 2020-12-17 2023-12-27 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４及びｐｄ－１阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法による治療
US20240123067A1 (en) 2020-12-17 2024-04-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022129120A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hla-g antibodies and use thereof
US20240400708A1 (en) * 2020-12-18 2024-12-05 Zoetis Services Llc Mutations in feline antibody constant regions
EP4740951A3 (en) 2020-12-22 2026-08-05 Foundation Medicine, Inc. Igh rearrangements and uses thereof
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
CA3203257A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Li Li Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
JP2024501845A (ja) 2020-12-31 2024-01-16 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の自動化された産生のためのデバイス及びプロセス
AU2021414227A1 (en) 2020-12-31 2023-07-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CN116829598A (zh) 2021-01-06 2023-09-29 豪夫迈·罗氏有限公司 采用pd1-lag3双特异性抗体和cd20 t细胞双特异性抗体的组合疗法
WO2022155503A1 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Gritstone Bio, Inc. Multi-specific antibodies and methods of use
EP4277926A1 (en) 2021-01-15 2023-11-22 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
JP2024504372A (ja) 2021-01-22 2024-01-31 エルピス・バイオファーマシューティカルズ 抗ｐｄ－ｌ１モノクローナル抗体及びインターロイキン１５（ｉｌ－１５）、インターロイキン１５受容体１５アルファまたはインターロイキン２との融合タンパク質
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
US20240076373A1 (en) 2021-01-28 2024-03-07 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
KR20230147099A (ko) 2021-01-28 2023-10-20 백신벤트 게엠베하 B 세포 매개 면역 반응을 조절하기 위한 방법 및 수단(method and means for modulating b-cell mediated immune responses)
KR20230147098A (ko) 2021-01-28 2023-10-20 백신벤트 게엠베하 B 세포 매개 면역 반응을 조절하기 위한 방법 및 수단(method and means for modulating b-cell mediated immune responses)
WO2022165266A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
CA3206549A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Frederick G. Vogt Methods of making modified tumor infiltrating lymphocytes and their use in adoptive cell therapy
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
WO2022172085A2 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
PE20231680A1 (es) 2021-02-17 2023-10-19 Dr Falk Pharma Gmbh Anticuerpos anti-cd30l y usos de estos
TW202317612A (zh) 2021-03-01 2023-05-01 美商艾希利歐發展股份有限公司 用於治療癌症的ｃｔｌａ４及ｐｄ１／ｐｄｌ１抗體之組合
WO2022187272A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
CA3205815A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Alwin REITER Formulations of ace2 fc fusion proteins
WO2022184082A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
JP2024509184A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍保存及び細胞培養組成物
CN117715933A (zh) 2021-03-05 2024-03-15 当康生物技术有限责任公司 抗vista的构建体及其用途
EP4294927A2 (en) 2021-03-10 2023-12-27 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
EP4305062A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Janssen Biotech, Inc. Method of treating psoriatic arthritis patients with inadequate response to tnf therapy with anti-il23 specific antibody
BR112023018353A2 (pt) 2021-03-12 2024-02-06 Janssen Biotech Inc Método seguro e eficaz para tratamento da artrite psoriática com anticorpo específico anti-il23
EP4304732A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
EP4454652A3 (en) 2021-03-15 2025-05-21 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods for treating lupus nephritis
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
TW202304480A (zh) 2021-03-19 2023-02-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 腫瘤浸潤淋巴球（ｔｉｌ）中之與ｃｄ３９／ｃｄ６９選擇及基因剔除相關之ｔｉｌ擴增之方法
CN118019546A (zh) 2021-03-23 2024-05-10 艾欧凡斯生物治疗公司 肿瘤浸润淋巴细胞的cish基因编辑及其在免疫疗法中的用途
WO2022204724A1 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
EP4314253A2 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
WO2022201122A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Janssen Biotech, Inc. Humanized antibodies against paired helical filament tau and uses thereof
CN117321087A (zh) 2021-03-26 2023-12-29 先天制药公司 包含与细胞因子融合用于nk细胞衔接的nkp46结合位点、癌抗原结合位点的多特异性蛋白质
TW202304508A (zh) 2021-03-31 2023-02-01 美商百歐維拉提夫美國公司 減少冷凝集素疾病患者之手術相關溶血
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
AU2022263418A1 (en) 2021-04-19 2023-10-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
JP2024514222A (ja) 2021-04-19 2024-03-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 改変された哺乳動物細胞
WO2022235867A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof
AU2022269139A1 (en) 2021-05-07 2023-11-16 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein
EP4337266A1 (en) 2021-05-12 2024-03-20 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
KR20240007171A (ko) 2021-05-14 2024-01-16 제넨테크, 인크. 모수네투주맙 및 폴라투주맙 베도틴을 이용한 cd20 양성 증식성 장애의 치료 방법
WO2022241082A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Genentech, Inc. Agonists of trem2
WO2022245877A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
US20240269180A1 (en) 2021-05-17 2024-08-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Pd-1 gene-edited tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
US20220372114A1 (en) 2021-05-17 2022-11-24 Curia Ip Holdings, Llc Sars-cov-2 spike protein antibodies
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
CN117396599A (zh) 2021-05-21 2024-01-12 基因泰克公司 用于生产目的重组产物的经修饰的细胞
CA3220227A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Matthew Bruce Combination therapies for treating cancer
WO2022253756A1 (en) 2021-06-01 2022-12-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of b cell depleting agents for the treatment of rheumatic heart disease
JP2024520261A (ja) 2021-06-04 2024-05-24 中外製薬株式会社 抗ｄｄｒ２抗体およびその使用
CN117616050A (zh) 2021-06-09 2024-02-27 先天制药公司 与nkp46、细胞因子受体、肿瘤抗原和cd16a结合的多特异性蛋白质
KR20240019786A (ko) 2021-06-09 2024-02-14 이나뜨 파르마 에스.에이. Cd20, nkp46, cd16에 결합하고 il-2에 접합된 다중특이적 항체
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
CA3221924A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 Genentech, Inc. Method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an st2 antagonist
CA3218481A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 argenx BV Anti-il-9 antibodies and methods of use thereof
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
WO2022269451A1 (en) 2021-06-22 2022-12-29 Novartis Ag Bispecific antibodies for use in treatment of hidradenitis suppurativa
IL308633B2 (en) 2021-06-25 2025-12-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Use of anti-ctla-4 antibody
CN117616123B (zh) 2021-06-25 2024-11-08 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体
US12448451B2 (en) 2021-06-25 2025-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
EP4363450A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Compugen Ltd. Anti-tigit and anti-pvrig in monotherapy and combination treatments
KR20240028452A (ko) 2021-07-02 2024-03-05 제넨테크, 인크. 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
CN118103397A (zh) 2021-07-08 2024-05-28 舒泰神(加州)生物科技有限公司 特异性识别tnfr2的抗体及其用途
US20230038355A1 (en) 2021-07-09 2023-02-09 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing Methods for Producing Anti-IL12/IL23 Antibody Compositions
EP4370545A1 (en) 2021-07-12 2024-05-22 Genentech, Inc. Structures for reducing antibody-lipase binding
JP7833531B2 (ja) 2021-07-14 2026-03-19 舒泰神（北京）生物製薬股フン有限公司 Ｃｄ４０を特異的に認識する抗体およびその使用
PE20240638A1 (es) 2021-07-14 2024-03-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-receptor de quimiocinas de motivo c-c 8 (ccr8) y metodos de uso
CA3226111A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Method for cryopreservation of solid tumor fragments
JP2024528631A (ja) 2021-07-22 2024-07-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヘテロ二量体Ｆｃドメイン抗体
JP2024526880A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 脳標的化組成物及びその使用方法
WO2023010060A2 (en) 2021-07-27 2023-02-02 Novab, Inc. Engineered vlrb antibodies with immune effector functions
CA3226942A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
IL309120A (en) 2021-07-28 2024-02-01 Hoffmann La Roche Methods and compositions for the treatment of cancer
CA3226281A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 ONA Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
CA3231174A1 (en) 2021-08-02 2023-02-09 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-cd79bxcd3 bispecific antibody and use thereof
JP2024528217A (ja) 2021-08-03 2024-07-26 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗体および使用方法
KR20240040786A (ko) 2021-08-03 2024-03-28 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 생물제약 조성물 및 안정한 동위원소 표지 펩티드 맵핑 방법
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
CN117897409A (zh) 2021-08-13 2024-04-16 基因泰克公司 抗类胰蛋白酶抗体的给药
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
IL311003A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Denali Therapeutics Inc Anti-2HER antibodies and methods of using them
TW202317637A (zh) 2021-08-26 2023-05-01 日商協和麒麟股份有限公司 與cd116及cd131結合之雙特異性抗體
WO2023028591A1 (en) 2021-08-27 2023-03-02 Genentech, Inc. Methods of treating tau pathologies
JP2024532620A (ja) 2021-08-30 2024-09-05 ラッセン・セラピューティクス１・インコーポレイテッド 抗ＩＬ－１１Ｒα抗体
TW202325727A (zh) 2021-08-30 2023-07-01 美商建南德克公司 抗聚泛素多特異性抗體
CA3231018A1 (en) 2021-09-09 2023-03-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products using pd-1 talen knockdown
WO2023043124A1 (ko) * 2021-09-17 2023-03-23 고려대학교 산학협력단 Fcγrⅲa 결합력이 향상된 당화 fc 변이체들
WO2023043123A1 (ko) * 2021-09-17 2023-03-23 고려대학교 산학협력단 Fcγrⅲa 선택적 결합력 향상 당화 fc 변이체들
US20250000903A1 (en) 2021-09-24 2025-01-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
CN118541392A (zh) 2021-09-28 2024-08-23 准星生物医药有限公司 多种形式的分子复合物
JPWO2023053282A1 (pl) 2021-09-29 2023-04-06
KR20240099190A (ko) 2021-09-30 2024-06-28 씨젠 인크. 암 치료를 위한 b7-h4 항체 약물 접합체
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
EP4412713A1 (en) 2021-10-05 2024-08-14 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd Combination therapies for treating cancer
EP4413998A4 (en) 2021-10-08 2026-02-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR PREPARING A PRE-FILLED SYRINGE FORMULATION
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
WO2023064958A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
US20230187042A1 (en) 2021-10-27 2023-06-15 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
KR20240099352A (ko) 2021-10-29 2024-06-28 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il23 특이적 항체로 크론병을 치료하는 방법
JP2024540374A (ja) 2021-11-05 2024-10-31 アメリカン ダイアグノスティックス アンド セラピー， エルエルシー （エーディーエックスアールエックス） がん胎児性抗原に対するモノクローナル抗体、及びそれらの使用
TW202342095A (zh) 2021-11-05 2023-11-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 用於治療和預防ｃｏｖｉｄ—１９之組成物
AU2022388729A1 (en) 2021-11-10 2024-05-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
JP2024544555A (ja) 2021-11-15 2024-12-03 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｉｌ２３特異的抗体によるクローン病を処置する方法
WO2023091887A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
EP4433167A1 (en) 2021-11-16 2024-09-25 AC Immune SA Novel molecules for therapy and diagnosis
EP4433160A1 (en) 2021-11-17 2024-09-25 Disc Medicine, Inc. Methods for treating anemia of kidney disease
KR20240103043A (ko) 2021-11-23 2024-07-03 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il23 특이적 항체로 궤양성 결장염을 치료하는 방법
EP4437112A1 (en) 2021-11-24 2024-10-02 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
WO2023094571A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Formycon Ag Stabilization of ace2 fusion proteins
EP4445911A4 (en) 2021-12-06 2025-10-22 Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY THAT BINDS SPECIFICALLY TO KLEBSIELLA PNEUMONIAE O1 AND O2 ANTIGENS AND COMPOSITION
JP2024546930A (ja) 2021-12-15 2024-12-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 安定化ｉｌ－１８ポリペプチド及びその使用
CN118488965A (zh) 2021-12-17 2024-08-13 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗ox40抗体、多特异性抗体及其使用方法
IL313306A (en) 2021-12-17 2024-08-01 Viiv Healthcare Co Combined treatments for HIV infections and their uses
AU2022411573A1 (en) 2021-12-17 2024-06-27 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-ox40 antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
IL314367A (en) 2022-01-18 2024-09-01 argenx BV Antibodies to galectin 10
WO2023141445A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use
EP4469159A1 (en) 2022-01-27 2024-12-04 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
JP2025503987A (ja) 2022-01-28 2025-02-06 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド ペイロードを発現するように操作された腫瘍浸潤リンパ球
EP4469065A1 (en) 2022-01-28 2024-12-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
AU2023221539A1 (en) 2022-02-16 2024-08-22 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
TW202342510A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 英商Ｒｑ生物科技有限公司 抗體
AU2023228912A1 (en) 2022-03-03 2024-09-19 Yale University Humanized 3e10 antibodies, variants, and antigen binding fragments thereof
US20250243260A1 (en) 2022-03-07 2025-07-31 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies and related methods and uses
JP2025509286A (ja) 2022-03-10 2025-04-11 ビバソル， インコーポレイテッド 抗体－薬物コンジュゲートおよびその使用
EP4490185A1 (en) 2022-03-11 2025-01-15 JANSSEN Pharmaceutica NV Multispecific antibodies and uses thereof
CA3254442A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Janssen Pharmaceutica Nv MULTISPECIFIC ANTIBODIES AND THEIR USES
TW202400636A (zh) 2022-03-11 2024-01-01 比利時商健生藥品公司 多特異性抗體及其用途(一)
CA3259975A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
EP4245374A3 (en) 2022-03-18 2024-07-10 Compugen Ltd. Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
EP4493593A1 (en) 2022-03-18 2025-01-22 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules and methods of use thereof
KR20240163119A (ko) 2022-03-25 2024-11-18 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-msln 항체 및 사용 방법
EP4499229A1 (en) 2022-03-28 2025-02-05 F. Hoffmann-La Roche AG Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
JP2025512860A (ja) 2022-03-30 2025-04-22 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｉｌ－２３に特異的な抗体によって軽度から中等度の乾癬を治療する方法
JP2025510997A (ja) 2022-03-30 2025-04-15 ノバルティス アーゲー 抗ナトリウム利尿ペプチド受容体１（ｎｐｒ１）抗体を使用して障害を治療する方法
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
GB202204813D0 (en) 2022-04-01 2022-05-18 Bradcode Ltd Human monoclonal antibodies and methods of use thereof
JP2025512313A (ja) 2022-04-06 2025-04-17 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療
IL316153A (en) 2022-04-08 2024-12-01 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
TW202545564A (zh) 2022-04-13 2025-12-01 美商建南德克公司 治療性蛋白質之醫藥組成物及使用方法
EP4507704A1 (en) 2022-04-15 2025-02-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
AU2023258146A1 (en) 2022-04-20 2024-09-05 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
CA3250968A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 23Andme, Inc. Antigen binding proteins
CR20240528A (es) 2022-04-29 2025-04-04 Astrazeneca Uk Ltd Anticuerpos contra el sars-cov-2 y métodos para utilizarlos
PE20242350A1 (es) 2022-05-03 2024-12-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6e, inmunoconjugados y usos de estos
EP4524158A4 (en) 2022-05-09 2025-12-17 Staidson Beijing Biopharmaceuticals Co Ltd Antibody that specifically recognizes gdf15 and use thereof
EP4522202A1 (en) 2022-05-10 2025-03-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
WO2023220597A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Elpis Biopharmaceuticals Engineered interleukin-2 receptor beta reduced-binding agonist
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
JP2025517650A (ja) 2022-05-11 2025-06-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５／抗ＣＤ３二重特異性抗体による処置のための投与
EP4526342A1 (en) 2022-05-18 2025-03-26 Janssen Biotech, Inc. Method for evaluating and treating psoriatic arthritis with il23 antibody
JP7881232B2 (ja) 2022-05-31 2026-06-29 明済生物製薬（北京）有限公司 抗ｃｄ４０抗体と抗ｐｄ－ｌ１×ｃｄ４０二重特異性抗体及びその使用
JP2025523387A (ja) 2022-06-07 2025-07-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｄ－ｌ１アンタゴニストおよび抗ｔｉｇｉｔアンタゴニスト抗体を含む、肺がん治療の有効性を判定するための方法
WO2023239803A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
US20250382354A1 (en) 2022-06-08 2025-12-18 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
TW202421661A (zh) 2022-06-10 2024-06-01 愛爾蘭商赫瑞森治療學愛爾蘭指定活動公司 Igf1r抗體
KR20250037789A (ko) 2022-06-15 2025-03-18 아르젠엑스 비브이 Fcrn/항원-결합 분자 및 사용 방법
IL317666A (en) 2022-06-15 2025-02-01 Bioverativ Usa Inc Anti-complement formulation for C1S antibody
MA71249A (fr) 2022-06-24 2025-04-30 Bioverativ Usa Inc. Méthodes de traitement de maladies médiées par complément
WO2024011114A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
CN119585308A (zh) 2022-07-13 2025-03-07 基因泰克公司 针对用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行的治疗的给药
EP4558226A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
KR20250040020A (ko) 2022-07-19 2025-03-21 제넨테크, 인크. 항-fcrh5/항-cd3 이중특이성 항체로 치료하기 위한 투약법
CN119654349A (zh) 2022-07-22 2025-03-18 基因泰克公司 抗steap1抗原结合分子及其用途
EP4558529A1 (en) 2022-07-22 2025-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to human pad4 and uses thereof
AR130041A1 (es) 2022-07-27 2024-10-30 Cephalon Llc Formulaciones de anticuerpos anti-tl1a
CN119894931A (zh) 2022-07-27 2025-04-25 赛福伦有限责任公司 用于治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病的抗tl1a抗体
US20260035460A1 (en) 2022-07-28 2026-02-05 Adeboye Henry ADEWOYE, MD Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
EP4565683A1 (en) 2022-08-01 2025-06-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
EP4565331A1 (en) 2022-08-05 2025-06-11 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
CN120077064A (zh) 2022-08-05 2025-05-30 詹森生物科技公司 用于治疗脑肿瘤的转铁蛋白受体结合蛋白
KR20250049554A (ko) 2022-08-19 2025-04-11 이바이브 바이오테크놀로지 (상하이) 엘티디 G-csf를 포함하는 제형 및 이의 용도
CN121293357A (zh) 2022-08-22 2026-01-09 雅博得乐医疗公司 Dll3结合分子及其用途
WO2024044675A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Beigene, Ltd. Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
CA3265178A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Antigen-binding proteins and their uses
KR20250054799A (ko) 2022-08-29 2025-04-23 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 변이 Fc 영역을 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트
WO2024050524A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for directing apolipoprotein l1 to induce mammalian cell death
EP4581366A1 (en) 2022-09-01 2025-07-09 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
US20260078185A1 (en) 2022-09-07 2026-03-19 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
EP4584291A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024056668A1 (en) 2022-09-12 2024-03-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New anti-itgb8 antibodies and its uses thereof
US12054552B2 (en) 2022-09-21 2024-08-06 Sanofi Biotechnology Humanized anti-IL-1R3 antibody and methods of use
WO2024061930A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale New method to treat and diagnose peripheral t-cell lymphoma (ptcl)
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
IL319997A (en) 2022-10-04 2025-06-01 Alpine Immune Sciences Inc Mutated taci-fc fusion proteins for use in the treatment of autoantibody-mediated diseases
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
CN120693395A (zh) 2022-10-20 2025-09-23 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合TRAIL或FasL的抗体组合以及双特异性抗体
JP2026502768A (ja) 2022-10-25 2026-01-27 アブレクシス， エルエルシー 抗ｃｄ３抗体
JP2026513101A (ja) 2022-10-25 2026-04-23 アブリンクス エン．ヴェー． エフェクター機能が強化された糖鎖改変Ｆｃ変異ポリペプチド
JP2026500084A (ja) 2022-10-25 2026-01-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多発性骨髄腫の治療方法および診断方法
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
EP4612277A1 (en) 2022-11-04 2025-09-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd103 selection
US20260124242A1 (en) 2022-11-04 2026-05-07 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof
IL320029A (en) 2022-11-08 2025-06-01 Genentech Inc Compositions and methods for treating childhood idiopathic nephrotic syndrome
WO2024107731A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Ablexis, Llc Anti-pd-l1 antibodies
US20240190978A1 (en) 2022-11-15 2024-06-13 CSBioAsset LLC Compositions and methods for immunomodulatory bifunctional fusion molecules
WO2024108053A1 (en) 2022-11-17 2024-05-23 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024112711A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods for assessing proliferation potency of gene-edited t cells
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
AU2023383916A1 (en) 2022-11-22 2025-07-10 Janssen Biotech, Inc. Method of treating ulcerative colitis with anti-il23 specific antibody
TW202434306A (zh) 2022-11-24 2024-09-01 瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司 抗ｃｅａ抗體藥物軛合物及使用方法
WO2024111657A1 (ja) 2022-11-25 2024-05-30 中外製薬株式会社 タンパク質の製造方法
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
EP4588936A4 (en) 2022-12-08 2026-08-12 Changchun Bcht Biotechnology Co ANTIBODIES THAT BIND SPECIFICALLY TO VRS
EP4386084A1 (en) 2022-12-14 2024-06-19 Formycon AG Improved ace2 fusion proteins
AU2023412611A1 (en) 2022-12-23 2025-07-10 Chimagen Biosciences, Ltd Novel anti-gprc5d antibody
CN120476149A (zh) 2022-12-23 2025-08-12 成都恩沐生物科技有限公司 靶向gprc5d的多特异性多肽复合物
KR20250137203A (ko) 2022-12-27 2025-09-17 예일 유니버시티 항체 약물 접합체
TW202430560A (zh) 2023-01-06 2024-08-01 美商拉森醫療公司 抗ｉｌ－１８ｂｐ抗體
WO2024148240A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE
EP4646433A1 (en) 2023-01-06 2025-11-12 Lassen Therapeutics, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024150074A2 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Coronavirus antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024151885A1 (en) 2023-01-13 2024-07-18 Iovance Biotherapeutics, Inc. Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy
PE20252286A1 (es) 2023-01-18 2025-09-18 Genentech Inc Anticuerpos multiespecificos y usos de estos
CN120603850A (zh) 2023-01-19 2025-09-05 广州百济神州生物制药有限公司 抗cmet抗体及使用方法
EP4655007A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
TW202436339A (zh) 2023-01-31 2024-09-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療選自非小細胞肺癌或三陰性乳癌的癌症之用途
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
US20260234253A1 (en) 2023-02-14 2026-08-13 Evolvelmmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
WO2024170543A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cd44 antibodies and uses thereof
WO2024182443A2 (en) 2023-02-27 2024-09-06 Compugen Ltd. Triple combination therapy with anti-pvrig antibodies, anti-tigit antibodies, and pembrolizumab
AU2024229544A1 (en) 2023-03-02 2025-10-16 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-cd22 antibodies and uses thereof
EP4676965A1 (en) 2023-03-03 2026-01-14 Beone Medicines I GmbH Cd16a antibodies and methods of use
KR20250167153A (ko) 2023-03-03 2025-11-28 셀덱스 쎄라퓨틱스, 인크. 항-줄기 세포 인자(scf) 및 항-흉선 기질 림포포이에틴(tslp) 항체, 및 이중특이적 구축물
EP4676975A1 (en) 2023-03-03 2026-01-14 Beone Medicines I GmbH Muc1 and cd16a antibodies and methods of use
TW202436357A (zh) 2023-03-03 2024-09-16 瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司 Ｍｕｃ１抗體及使用方法
TW202436345A (zh) 2023-03-06 2024-09-16 瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司 抗ｃｄ３多特異性抗體及使用方法
WO2024184812A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 antibodies and methods of use
WO2024184810A1 (en) 2023-03-06 2024-09-12 Beigene Switzerland Gmbh Anti-cldn6 and anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
EP4676951A1 (en) 2023-03-10 2026-01-14 Genentech Inc. Fusions with proteases and uses thereof
CN120835901A (zh) 2023-03-13 2025-10-24 豪夫迈·罗氏有限公司 采用pd1-lag3双特异性抗体和hla-g t细胞双特异性抗体的组合疗法
WO2024194685A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
WO2024194686A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Oxitope Pharma B.V. Anti-phosphocholine antibodies and methods of use thereof
TW202440636A (zh) 2023-03-21 2024-10-16 美商傳記５５有限公司 Ｃｄ１９／ｃｄ３８多特異性抗體
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
AU2024245676A1 (en) 2023-03-30 2025-10-09 272BIO Limited Gnrh-binding polypeptides and uses thereof
KR20250167591A (ko) 2023-03-31 2025-12-01 제넨테크, 인크. 항-알파 v 베타 8 인테그린 항체 및 사용 방법
WO2024206738A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Immunai Inc. Humanized anti-trem2 antibodies
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
CN121985963A (zh) 2023-04-05 2026-05-05 维硕公司 抗体偶联药物及其用途
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
EP4695282A1 (en) 2023-04-12 2026-02-18 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
KR20260012304A (ko) 2023-04-17 2026-01-26 피크 바이오, 인크. 항체 및 항체-약물 접합체 및 사용 방법 및 합성 공정 및 중간체
WO2024226829A2 (en) 2023-04-26 2024-10-31 Yale University Enpp3-binding molecules, compositions formed therefrom, and methods of use thereof for the treatment of cancer
WO2024233341A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AU2024269754A1 (en) 2023-05-08 2025-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
AU2024268933A1 (en) 2023-05-10 2025-11-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods and compositions for treating cancer
JP2026517390A (ja) 2023-05-16 2026-05-29 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ－１調節ｉｌ－２免疫サイトカインおよびその使用
WO2024236156A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cathepsin-d antibodies
WO2024254455A1 (en) 2023-06-08 2024-12-12 Genentech, Inc. Macrophage signatures for diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2024251884A1 (en) 2023-06-09 2024-12-12 Innate Pharma Nk cell engager proteins comprising anti-cd20 and ant-nkp46 antibody, linked to il-2 in treatment of r/r b-nhl
EP4725501A1 (en) 2023-06-09 2026-04-15 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibody specifically binding to masp3, and multi-specific antibody specifically binding to masp3 and masp2
EP4477236A1 (en) 2023-06-14 2024-12-18 Inatherys Combination therapy for treating a tumor using adc comprising anti-cd71 antibodies and bh3 mimetics
EP4729546A1 (en) 2023-06-16 2026-04-22 Jiangsu BioJeTay Biotechnology Co., Ltd. Antibody specifically recognizing factor xiia and use thereof
JP2026522631A (ja) 2023-06-22 2026-07-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びその使用
TW202504929A (zh) 2023-06-22 2025-02-01 美商建南德克公司 用於癌症治療之方法及組成物
CN121729432A (zh) 2023-06-23 2026-03-24 派克西斯肿瘤学公司 抗klrg1抗体及其用途
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
TW202515608A (zh) 2023-06-26 2025-04-16 以色列商坎布根有限公司 Ｉｌ—１８ｂｐ拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途
EP4735020A1 (en) 2023-06-30 2026-05-06 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd G-csf dimer for use in the treatment or prevention of chemotherapy or radiotherapy induced neutropenia
WO2025012417A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-neurotensin long fragment and anti-neuromedin n long fragment antibodies and uses thereof
IL325907A (en) 2023-07-13 2026-03-01 Iovance Biotherapeutics Inc Cytokine encoding lentiviral vectors and uses thereof for making tumor infiltrating lymphocytes
WO2025019790A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc
WO2025024265A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of assessing citrullination and activity of pad4 modulators
WO2025022280A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 Astrazeneca Ab Treatment of neurodegenerative diseases
CN121548587A (zh) 2023-07-24 2026-02-17 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性抗体
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
CR20260043A (es) 2023-08-09 2026-03-26 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-proteína a-beta, métodos y usos de estos
AU2024323186A1 (en) 2023-08-09 2026-01-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
AU2024320793A1 (en) 2023-08-09 2026-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
TW202525845A (zh) 2023-08-23 2025-07-01 法商賽諾菲公司 基於ｃｔｌａ—４之溶體降解劑及其用途
WO2025049905A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Gennao Bio, Inc. Dnase co-expression in host cells
WO2025046298A2 (en) 2023-09-01 2025-03-06 iTeos Belgium SA Anti-trem2 antibodies and methods of use
CN122003435A (zh) 2023-09-03 2026-05-08 科越医药(美国)有限责任公司 包含抗因子d部分的多特异性构建体
EP4777539A1 (en) 2023-09-11 2026-07-22 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting b7-h4 and cd3 and methods of use thereof
CN122094980A (zh) 2023-09-20 2026-05-26 进化免疫治疗公司 靶向cd180和cd3的双特异性抗体融合分子及其使用方法
EP4780849A1 (en) 2023-09-20 2026-07-29 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies that bind cd3 and cd2 and methods of use thereof
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
US20250109187A1 (en) 2023-09-28 2025-04-03 Novavax, Inc. ANTI-SARS-CoV-2 SPIKE (S) ANTIBODIES AND THEIR USE IN TREATING COVID-19
WO2025068957A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Novartis Ag Bispecific antibodies for use in lowering the risk of cardiovascular disease events in subjects known to be a carrier of clonal expansion of hematopoietic cell lines with somatic mutations
US12473370B2 (en) 2023-10-03 2025-11-18 Absci Corporation TL1A associated antibody compositions and methods of use
TW202517301A (zh) 2023-10-06 2025-05-01 美商思進公司 用ｂ７－ｈ４抗體－藥物結合物治療晚期實體腫瘤之方法
CN122422333A (zh) 2023-10-17 2026-07-17 百时美施贵宝公司 Gspt1降解化合物、抗cd33抗体和抗体-药物缀合物及其用途
IL328125A (en) 2023-11-06 2026-06-01 Iovance Biotherapeutics Inc Treatment of endometrial cancers with tumor infiltrating lymphocyte therapies
CN122161849A (zh) 2023-11-09 2026-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 具有条件性活性的多特异性抗体
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
KR20260115642A (ko) 2023-11-20 2026-07-24 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 재조합 반응을 통해 이종다량체를 제조하는 방법
AU2024392535A1 (en) 2023-11-27 2026-06-04 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Il-33 binding antibodies
WO2025120015A1 (en) 2023-12-06 2025-06-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Cd5 targeting antibodies with depleting and t or b-cell activation effects
WO2025122885A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Absci Corporation Anti-her2 associated antibody compositions designed by artificial intelligence and methods of use
US20250197511A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Horizon Therapeutics Ireland Dac Methods for the treatment of thyroid eye disease
AU2024403128A1 (en) 2023-12-19 2026-06-25 Vectory Therapeutics B.V. Anti-tdp-43 antibodies and uses thereof
GB202319605D0 (en) 2023-12-20 2024-01-31 argenx BV Monovalent binding molecules and methods of use
CN122422356A (zh) 2023-12-20 2026-07-17 豪夫迈·罗氏有限公司 与ceacam5结合的抗体
WO2025133694A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 argenx BV Fcrn/hsa-binding molecules and methods of use
AU2024402334A1 (en) 2023-12-22 2026-05-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
WO2025147696A1 (en) 2024-01-05 2025-07-10 Resolve Therapeutics, Llc Treatment of symptoms associated with sars-cov viral infection or a prior sars-cov viral infection with nuclease agents
WO2025146131A1 (en) 2024-01-05 2025-07-10 Beigene, Ltd. ANTI-FGFR2b ANTIBODIES, CONJUGATES AND METHODS OF USE
WO2025151752A1 (en) 2024-01-10 2025-07-17 Xilio Development, Inc. Masked il-2 cytokines and methods of use thereof
WO2025149947A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Seagen Inc. Antibody-drug conjugates
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
WO2025155877A2 (en) 2024-01-18 2025-07-24 The Regents Of The University Of California Antibodies binding to pad4 and uses thereof
AU2025213136A1 (en) 2024-01-24 2026-07-16 Shattuck Labs, Inc. Antibodies that bind tnfrsf25
WO2025160331A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Futuregen Biopharmaceutical (Beijing) Co., Ltd. Antibodies capable of specifically binding tl1a and use thereof
WO2025167631A1 (zh) 2024-02-05 2025-08-14 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合HBV pre-S1抗原、PD-L1抗原和CD3抗原的多特异性抗体及其应用
WO2025171182A1 (en) 2024-02-08 2025-08-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with cancer vaccine
WO2025174974A1 (en) 2024-02-14 2025-08-21 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd33 antibodies and uses thereof
WO2025172924A1 (en) 2024-02-15 2025-08-21 Janssen Biotech, Inc. Anti-transferrin receptor compositions and methods thereof
US12521446B2 (en) 2024-02-27 2026-01-13 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CEACAM5 antibody drug conjugates
US20250361320A1 (en) 2024-02-27 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
WO2025186332A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Ac Immune Sa Vectorized anti-tdp-43 antibodies
CA3249015A1 (en) 2024-03-20 2025-10-31 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn’s disease with anti-il23 specific antibody
US20250295801A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
WO2025226603A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Surface Oncology, LLC Methods for treating cancer using anti-ccr8 antibodies
TW202604943A (zh) 2024-04-24 2026-02-01 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎之組成物及方法
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
EP4644413A1 (en) 2024-05-03 2025-11-05 Genmab B.V. Binding agents having altered fc-mediated effector functions
WO2025242732A1 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Pan antibodies against sars-cov-2 spike protein and uses thereof for therapeutical purposes
WO2025245176A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Multispecific antibody constructs
TW202606758A (zh) 2024-05-31 2026-02-16 美商維泰克斯製藥公司 抗cd74抗體組合物及方法
WO2025254987A1 (en) 2024-06-03 2025-12-11 Alector Llc Siglec-9 ecd fusion molecule variants and methods of use thereof
US20250376536A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Multispecific anti-cd40 / anti-fap antibodies and uses thereof
TW202607016A (zh) 2024-06-06 2026-02-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗fap抗體及其用途
WO2025257181A1 (en) 2024-06-11 2025-12-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies targeting trans-active response dna-binding protein-43 (tdp-43)
WO2025262604A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating crohn's disease with anti-il23 specific antibody
WO2025262216A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Multispecific antigen binding proteins binding to il23 and il18
WO2026006494A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-cd3 antibodies and uses thereof
WO2026006495A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-wt1/hla-a2 antibody and uses thereof
WO2026006492A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Ypsilon Therapeutics, Inc. Anti-prame/hla-a2 antibodies and uses thereof
CA3258952A1 (en) 2024-06-27 2026-03-01 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating ulcerative colitis with anti-il23 specific antibody
WO2026006784A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of making tumor reactive peripheral blood lymphocytes (trpbl)
WO2026013218A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 vectors, binding molecules and uses thereof
WO2026021476A1 (en) 2024-07-24 2026-01-29 Beone Guangzhou Biologics Manufacturing Co., Ltd. Anti-cmet and anti-egfr multispecific antibody drug conjugates
WO2026030464A1 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genentech, Inc. Dosage regimen for reducing cytokine release syndrome (crs) with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies in multiple myeloma therapy
WO2026035866A1 (en) 2024-08-07 2026-02-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with a lag-3 inhibitor and a pd-1 inhibitor
WO2026039779A1 (en) 2024-08-15 2026-02-19 Yale University Humanized 3e10 antibodies and antigen binding fragments optimized for rad51 binding
WO2026044000A1 (en) 2024-08-20 2026-02-26 Ethyreal Bio, Inc. Multispecific antibodies and methods of use thereof
WO2026052839A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Hone Bio Limited Targeting fusion proteins
WO2026062585A1 (en) 2024-09-20 2026-03-26 Novartis Ag Methods of treatment using anti-trem2 antibodies
WO2026062582A1 (en) 2024-09-20 2026-03-26 Novartis Ag Methods of treatment using anti-trem2 antibodies
WO2026068504A2 (en) 2024-09-24 2026-04-02 The University Of Bristol Novel protein conjugates
WO2026072685A1 (en) 2024-09-25 2026-04-02 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2026072794A2 (en) 2024-09-26 2026-04-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion processes for til product enriched with neoantigen- reactive t cells (narts)
WO2026078029A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Splitted interleukin-2 prodrugs and uses thereof
WO2026088163A1 (en) 2024-10-25 2026-04-30 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions of engineered cytokine expressing cells and methods of use thereof
WO2026096695A1 (en) 2024-10-31 2026-05-07 Bristol-Myers Squibb Company Anti-fucosyl-gm1 antibody drug conjugates
WO2026102349A1 (en) 2024-11-08 2026-05-15 Genentech, Inc. Anti-interleukin-23 receptor vhh antibodies and uses thereof
WO2026104330A1 (en) 2024-11-12 2026-05-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Pd-1-regulated il-2 immunoconjugates and uses thereof
WO2026107307A1 (en) 2024-11-15 2026-05-21 Hinge Bio, Inc. Tetrahedral constructs binding folate and cd3
US20260144884A1 (en) 2024-11-22 2026-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lrrc15 antibody drug conjugates
US20260144885A1 (en) 2024-11-22 2026-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lrrc15 antibodies and uses thereof
WO2026114819A1 (en) 2024-11-26 2026-06-04 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Il-13 antigen binding proteins
US12673112B2 (en) 2024-12-09 2026-07-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited CCR8 antibodies, antibody conjugates, and uses thereof
WO2026128221A1 (en) 2024-12-12 2026-06-18 University Of Rochester Antt-tgfbp3 antibodies to treat cancer and sarcopenia
WO2026150085A1 (en) 2025-01-10 2026-07-16 argenx BV Igg-binding molecules and methods of use thereof
CN119552212B (zh) * 2025-01-26 2025-04-25 杭州康源食品科技有限公司 一种具有降尿酸活性的三肽lfp及其应用

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4490473A (en) * 1983-03-28 1984-12-25 Panab Labeled antibodies and methods
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4752601A (en) * 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5985599A (en) * 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5204244A (en) * 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5576184A (en) * 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
WO1990003430A1 (en) 1988-09-23 1990-04-05 Cetus Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
GB8916400D0 (en) * 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
US5364930A (en) * 1990-10-16 1994-11-15 Northwestern University Synthetic C1q peptide fragments
US5419904A (en) * 1990-11-05 1995-05-30 The Regents Of The University Of California Human B-lymphoblastoid cell line secreting anti-ganglioside antibody
WO1992020373A1 (en) 1991-05-14 1992-11-26 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
US6136310A (en) * 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
GB9206422D0 (en) * 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
AU4116793A (en) * 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
DE69308573T2 (de) 1992-08-17 1997-08-07 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
ATE139900T1 (de) 1992-11-13 1996-07-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US6491916B1 (en) * 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) * 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5731168A (en) * 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5730977A (en) * 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
CA2249195A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US5834597A (en) * 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1998023289A1 (en) * 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
DE19721700C1 (de) 1997-05-23 1998-11-19 Deutsches Krebsforsch Mutierter OKT3-Antikörper
JP2002506353A (ja) * 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
BR9908226A (pt) 1998-02-25 2000-10-24 Lexigen Pharm Corp Melhoramento da meia vida de circulação de proteìnas de fusão com base em anticorpo
CA2323757C (en) * 1998-04-02 2011-08-02 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
JP2002522063A (ja) 1998-08-17 2002-07-23 アブジェニックス インコーポレイテッド 増加した血清半減期を有する改変された分子の生成
US7183387B1 (en) * 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6676927B1 (en) * 1999-01-20 2004-01-13 The Rockefeller University Animal model and methods for its use in the selection of cytotoxic antibodies
JP5179689B2 (ja) 2000-02-11 2013-04-10 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体ベース融合タンパク質の循環系内半減期の増強
AU5345901A (en) * 2000-04-13 2001-10-30 Univ Rockefeller Enhancement of antibody-mediated immune responses
EP1355919B1 (en) 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
WO2004004662A2 (en) 2002-07-09 2004-01-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2832136C (en) 2002-09-27 2015-11-17 Xencor Optimized fc variants and methods for their generation
ATE480562T1 (de) 2002-10-15 2010-09-15 Facet Biotech Corp Veränderung von fcrn-bindungsaffinitäten oder von serumhalbwertszeiten von antikörpern mittels mutagenese
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7608260B2 (en) * 2003-01-06 2009-10-27 Medimmune, Llc Stabilized immunoglobulins
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP1673395A1 (en) 2003-10-15 2006-06-28 PDL BioPharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
CA2577133A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)

Also Published As

Publication number Publication date
US7790858B2 (en) 2010-09-07
KR20060067983A (ko) 2006-06-20
IL223047A (en) 2016-10-31
JP6312092B2 (ja) 2018-04-18
KR20100045527A (ko) 2010-05-03
MXPA01007170A (es) 2002-07-30
NZ539776A (en) 2006-12-22
WO2000042072A2 (en) 2000-07-20
IL223048A0 (en) 2012-12-31
IL223048A (en) 2016-09-29
US20080274105A1 (en) 2008-11-06
CN1763097A (zh) 2006-04-26
EP2366713A3 (en) 2012-06-27
HUP1500355A2 (en) 2002-04-29
US7371826B2 (en) 2008-05-13
IL144056A0 (en) 2002-04-21
JP2003512019A (ja) 2003-04-02
JP2010227116A (ja) 2010-10-14
US7785791B2 (en) 2010-08-31
IL223047A0 (en) 2012-12-31
EP2364997A3 (en) 2012-07-04
EP2364997A2 (en) 2011-09-14
KR100887482B1 (ko) 2009-03-10
JP5335735B2 (ja) 2013-11-06
AU2850500A (en) 2000-08-01
KR100940380B1 (ko) 2010-02-02
PL394232A1 (pl) 2011-07-04
JP2016136951A (ja) 2016-08-04
KR20090078369A (ko) 2009-07-17
AU778683B2 (en) 2004-12-16
HUP0104865A2 (hu) 2002-04-29
US20060194291A1 (en) 2006-08-31
EP1141024A2 (en) 2001-10-10
HUP0104865A3 (en) 2004-07-28
KR20080090572A (ko) 2008-10-08
AU2008229968B2 (en) 2012-08-09
CA2359067A1 (en) 2000-07-20
CA2359067C (en) 2017-03-14
PL209786B1 (pl) 2011-10-31
EP2386574A2 (en) 2011-11-16
KR101077001B1 (ko) 2011-10-26
JP2013166770A (ja) 2013-08-29
CN1343221A (zh) 2002-04-03
US20080274506A1 (en) 2008-11-06
HK1090066A1 (en) 2006-12-15
PL209392B1 (pl) 2011-08-31
WO2000042072A3 (en) 2000-11-30
IL144056A (en) 2014-04-30
ZA200105484B (en) 2002-07-29
PL349770A1 (en) 2002-09-09
BR0008758A (pt) 2001-12-04
US20060194290A1 (en) 2006-08-31
IL222149B (en) 2018-11-29
KR101155191B1 (ko) 2012-06-13
CN1763097B (zh) 2011-04-13
EP2386574A3 (en) 2012-06-27
ES2694002T3 (es) 2018-12-17
EP2366713A2 (en) 2011-09-21
KR20010102976A (ko) 2001-11-17
MX353234B (es) 2018-01-08
AU2008229968A1 (en) 2008-11-06
CN1237076C (zh) 2006-01-18
HU230769B1 (hu) 2018-03-28
EP1141024B1 (en) 2018-08-08
JP6230257B2 (ja) 2017-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6312092B2 (ja) 変化したエフェクター機能を有するポリペプチド変異体
US7122637B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2012211437B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
AU2004233493B2 (en) Polypeptide variants with altered effector function
HK1090066B (en) Polypeptide variants with altered effector function
HK1162530A (en) Polypeptide variants with altered effector function