KR20160124165A - 항-il-13/il-17 이중특이적 항체 및 그의 용도 - Google Patents

항-il-13/il-17 이중특이적 항체 및 그의 용도 Download PDF

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마이클 딜론
데이비드 에프. 초이
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크리스토프 스피스
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Abstract

본 발명은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체, 특히 항-IL13/IL17 AA, AF 및 FF 항체, 및 비제한적으로 중등도 내지 중증 천식 및/또는 호산구성 천식을 치료하기 위해 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 사용하는 방법을 비롯한 그의 사용 방법을 제공한다.
<대표도>
도 14a, 14b, 14c

Description

항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 및 그의 용도 {ANTI-IL-13/IL-17 BISPECIFIC ANTIBODIES AND USES THEREOF}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 35 U.S.C. 119 하에 2014년 2월 21일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/942823 및 2014년 4월 24일에 출원된 61/983945에 관한 것이며, 그에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 각각의 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 EFS-웹을 통해 제출되고 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2015년 2월 19일에 작성된 상기 ASCII 복사본은 P5707R1-WO_SL.txt로 명명되고, 크기는 226,329 바이트이다.
기술분야
본 발명은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체, 이중특이적 항체를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
천식은 전세계적으로 발병률이 증가하고 있는 복합 질환이다. 다른 사례 중에서, 호산구성 염증이 천식 환자의 기도에서 보고된 바 있다. 질환의 병리생리상태는 가변성 기류 폐쇄, 기도 염증, 점액 과다분비 및 상피하 섬유증을 특징으로 한다. 임상적으로, 환자는 기침, 천명 및 숨가쁨을 나타낼 수 있다. 많은 환자가 현재 이용가능한 요법으로 적절히 치료받고 있지만, 천식에 걸린 일부 환자는 현행 요법의 사용에도 불구하고 지속성 질환을 갖는다.
다수의 연구는 천식 및 알레르기의 발병기전에서 IL-13 및 그의 수용체를 연루시켜 왔다 (예를 들어, 문헌 [Wills-Karp, 2004, Immunol. Rev. 202, 175-190; Brightling et al., 2010, Clin. Exp. Allergy 40, 42-49; Finkelman et al., 2010, J Immunol 184, 1663-1674; Maes et al., 2012, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 47, 261-270; Steinke and Borish, 2001, Respir. Res. 2, 66-70] 참조). IL-13은, 하나는 IL-4 수용체 알파 (IL-4Rα) 및 IL-13 수용체 알파 1 (IL-13Rα1)의 이종이량체이고 다른 것은 IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2)로 이루어진 단일 쇄 수용체인, 2종의 수용체에 결합한다. IL-13 및 IL-4Rα 유전자의 다형성은 IgE 수준, 아토피 유병률, 및 천식 질환의 중증도와 같은 특색을 비롯하여 천식 및 알레르기와 연관된다. 또한, IL-13 및 그의 수용체의 발현은 천식 및 다른 알레르기성 질환에서 증가된다. 더욱이, IL-13 및 그의 수용체의 중화 또는 결핍은 천식의 전임상 모델에서 질환을 개선시킨다.
천식을 치료하기 위해 다수의 약물이 시판되고 있거나 개발되고 있다. 천식 요법을 위한 수많은 표적 중 하나는 IL-13이다. IL-13은 활성화 T 세포, NKT 세포, 호염기구, 호산구 및 비만 세포에 의해 생산되는 다면발현성 TH2 시토카인이고, 이는 전임상 모델에서 천식의 발병기전에 강하게 연루되어 왔다. 항-IL-13 항체를 비롯한 IL-13 길항제가 이전에 기재된 바 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2005/062967을 참조한다. 이러한 항체는 또한 인간 치료제로서 개발된 바 있다. 최근에, 여러 연구는 천식의 치료에서 IL-13에 대한 모노클로날 항체의 임상 활성을 제시한 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Corren et al., 2011, N. Engl. J. Med. 365, 1088-1098; Gauvreau et al., 2011, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 183, 1007-1014; Ingram and Kraft, 2012, J. Allergy Clin. Immunol. 130, 829-42; Webb, 2011, Nat Biotechnol 29, 860-863] 참조). 이들 중, IL-13 활성을 중화시키는 인간화 IgG4 항체인 레브리키주맙은, 대부분 흡입용 코르티코스테로이드 및/또는 장기-작용 베타2-아드레날린성 수용체 효능제를 사용한 치료에도 불구하고 증후성인 천식환자에서 폐 기능을 개선시켰다 (Corren et al., 2011, N. Engl. J. Med. 365, 1088-1098).
늘어나는 증거는 천식이 다중 경로에 연루될 수 있는 이질적 질환이라는 것을 보여준다. 예를 들어, IL-17A 및 IL-17F의 발현은 중증 천식과 연관이 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, IL-17A 및 IL-17F 둘 다는 인간 질환의 인간 및 마우스 모델에서 다양한 염증성 및 자가면역 질환의 진행 및 병리상태에 대한 기여제로서 연루되어 왔다. 구체적으로, IL-17A 및 IL-17F는 염증 반응을 촉발하여 그에 의해 다수의 자가염증성 질환에 기여하는 주요 이펙터 시토카인으로서 연루되어 왔다.
IL-17A (원래 명칭은 CTLA-8이고, 기술분야에서 때때로 IL-17로 지칭됨)는 시토카인의 IL-17 패밀리의 원형적/설립 구성원이다. IL-17A에 더하여, IL-17 시토카인 패밀리의 구성원은 현재, 보존된 C-말단 영역을 공유하지만 그의 N-말단 절편이 상이한, 단백질 IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E (IL-25로도 불림) 및 IL-17F를 포함한다.
IL-17A 및 IL-17F는 서열 및 생물학적 특성의 면 둘 다에서 2종의 가장 밀접하게 관련된 패밀리 구성원이다. IL-17F는 아미노산 수준에서 IL-17A와 55%의 서열 동일성을 공유한다. IL-17A 및 IL-17F 둘 다는 디술피드 연결된 동종이량체로서 또는 이종이량체로서 분비되고, 이는 IL-17RA 및 IL-17RC로 구성된 이종이량체 수용체를 통해 신호를 전달한다. IL-17 수용체는 다양한 T 세포 하위세트 (예컨대 Th17 CD4+ T 세포) 상에서 발현된다.
IL-17이 천식에서 소정의 역할을 할 수 있다고 시사됨에도 불구하고, 기도 과민반응에서 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 또는 IL-17A/F 이종이량체의 개별 기여사항은 불명료하게 남아있다. 문헌 [McKinley et al., 2008, J. Immunol., 181:4089]. 천식을 치료하기 위해 IL-17 경로를 표적화한 치료 길항제 항체의 임상 시험은 부정적 결과로 이어졌다. 예를 들어, 문헌 [Kirsten et al.]은 초기 개발에서 항염증성 약물의 안전성 및 효능을 시험하기 위한 호중구성 기도 염증 모델인 건강한 지원자에서 치료 항-IL-17A 항체가 오존-유도된 기도 호중구증가증에 대한 치료 효과를 입증할 수 없었다고 보고하였다. 문헌 [Kirsten et al. 2013, European Respiratory Journal, 41:239, Scheerens et al., 2013, Clinical & Experimental Allergy 44:38-46]. 또한, 최근의 임상 시험 결과는 무작위화, 이중-맹검, 위약-대조 연구에서 중등도 내지 중증 천식에 걸린 대상체에서 치료 항-IL-17RA 인간 항체 브로달루맙이 치료 효과를 생성하지 않음을 보여주었다. 문헌 [Busse et al., 2013, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 188:1294-1302]을 참조한다. 최근의 임상 종설 논문은 동일한 브로달루맙 연구를 언급하였고, 혈액 호중구 또는 호산구의 존재에 의한 하위표현형분석 조차도 반응자 군을 보다 우수하게 확인하지 못함을 보고하였다. 문헌 [Fajt et al., J. Allergy Clin. Immunology, 2014, 135:299]. IL-17RA는 IL-17AA, FF 및 AF 이종이량체에 대한 수용체 성분일 뿐만 아니라, TH2 염증에서 중요한 역할을 하고 IL-13 발현을 유도하는 IL-25에 대한 수용체 성분이다. 문헌 [Tamachi et al. 2006, Intl. Archives Allergy and Imunol. 140 (suppl 1):59]을 참조한다. 따라서, IL-17A 및 F 경로의 차단이 천식의 유효 치료로 이어질 수 있는지 여부는 불확실하다.
WO 2013/102042는 IL-13 및 IL-17A를 표적화하는 여러 이중 가변 도메인 (DVD) 항체를 기재하고, 항-IL-13/IL-17 DVD 항체의 친화도 및 시험관내 중화 활성을 특징화한다. WO 2013/102042는 DVD 이중특이적 항체가 다양한 질환, 예를 들어 감염성 질환, 자가면역 질환, 천식, 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 패혈증, 신경계 장애, 척수 손상 및 종양학 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 제안한다. 그러나 항-IL-13/IL-17 DVD 항체 중 어느 하나를 사용하는 것에 의해서든 또는 IL-13 및 IL-17 둘 다를 표적화하는 개념을 증명하는 것에 의해서는 이들 질환에서 어떠한 전임상 결과 또는 임상 효능도 입증된 바 없다.
따라서, 중등도 내지 중증 천식 환자는 여전히 대체 치료 옵션을 필요로 한다. 따라서, 천식을 치료하기 위한 보다 우수한 요법 및 천식 환자를 치료하는 방법을 이해하기 위한 개선된 방법을 확인할 필요가 있다.
기도에서의 또 다른 염증 질환인 특발성 폐 섬유증 (IPF)은, 미국에서 대략 100,000명의 환자에게 영향을 미친, 폐 실질의 진행성 간질성 섬유증을 특징으로 하는 제한성 폐 질환이다 (Raghu et al., Am J Respir Crit Care Med 174:810-816 (2006)). IPF와 연관된 이러한 간질성 섬유증은 폐 기능의 진행성 상실로 이어져, 대부분의 환자에서 호흡 부전으로 인한 사망을 야기한다. 진단 시점으로부터의 중앙 생존기간은 2-3년이다 (Raghu et al., Am J Respir Crit Care Med 183:788-824 (2011)). IPF의 병인 및 주요 분자 및 병리생리학적 구동인자는 알려져 있지 않다. IPF 환자에서 생존을 연장시키는 것으로 밝혀진 유일한 치료는 폐 이식이다 (Thabut et al., Annals of internal medicine 151:767-774 (2009)). 그러나 폐 이식은 상당한 이환율과 연관된다. 추가로, 모든 IPF 환자가 이식을 위한 적절한 후보자인 것은 아니고, 적합한 공여자 폐는 상대적으로 부족하다. 수많은 시도에도 불구하고, 일부 개입은 일부 환자에서 폐 기능 저하 속도를 늦추는 것으로 보였으나, 현재까지 어떠한 약물 요법도 IPF 환자에서의 무작위화, 위약-대조 개입 시험에서 생존을 실질적으로 연장시키는 것으로 밝혀지지 않았다 (Raghu et al., Am J Respir Crit Care Med 183:788-824 (2011); Richeldi et al., The New England J. of Med. 365:1079-1087 (2011)).
IPF 환자는 대체 치료 옵션을 여전히 필요로 한다. 따라서, IPF를 치료하기 위한 보다 우수한 요법 및 IPF 환자를 치료하는 방법을 이해하기 위한 개선된 방법을 확인할 필요가 있다.
특허 출원 및 공개를 비롯한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 임의의 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
한 측면에서, 본 발명은 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체, 특히 IL-13 및 IL-17AA, AF 및 FF에 결합하고 억제하는 이중특이적 항체를 사용한 치료 방법, 및 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체를 제공한다. 본원에 기재된 본 발명은 부분적으로 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 사용한 천식에 대한 개선된 요법의 발견을 기초로 한다. 특정 실시양태에서, 천식은 호산구성 천식이다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 야생형 전장 항체 포맷을 보유하지만, 이중특이적 항체가 각각의 표적에 대한 1가 결합제라는 점에서 야생형 단일특이적 2가 항체와 상이하다. 여전히, 이중특이적 항체는 각각의 모 단일특이적 2가 항체와 비교하여 각각의 표적에 대해 대등한 친화도 및 효력을 유지한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 또한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 본원에 추가로 기재된 바와 같이 제조하기 어렵다는 놀라운 발견에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면에서, 본원에 기재된 항체는 의약으로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, IL-17 매개 장애, 및/또는 호흡기 장애를 치료하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위해 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, IL-17 매개 장애, 및/또는 호흡기 장애를 치료하는데 사용하기 위해 제공된다. 일부 실시양태에서, 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, IL-17 매개 장애, 및/또는 호흡기 장애를 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본원에 기재된 항체의 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 본원에 기재된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, IL-17 매개 장애, 및/또는 호흡기 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 호산구성 장애 및 호중구성 장애를 치료하는데 사용하기 위해 제공된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 호산구성 천식, 호중구성 천식, 호산구성 및 호중구성 천식, 혼합 천식 및/또는 혼합 과립구성 천식을 치료하는데 사용하기 위해 제공된다. 특정 실시양태에서, 호산구성 장애 및 호중구성 장애의 치료를 필요로 하는 개체에게 유효량의 본원에 기재된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 호산구성 장애 및 호중구성 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 호산구성 천식, 호중구성 천식, 호산구성 및 호중구성 천식, 혼합 천식 및/또는 혼합 과립구성 천식의 치료를 필요로 하는 개체에게 유효량의 본원에 기재된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 호산구성 천식, 호중구성 천식, 호산구성 및 호중구성 천식, 혼합 천식 및/또는 혼합 과립구성 천식을 치료하는 방법이 제공된다.
특정 실시양태에서, 호산구성 염증 또는 장애를 앓고 있는 환자는 호산구성 서명 유전자 중 1종 이상의 상승된 수준을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, 환자는 대조군과 비교하여 상승된 혈청 페리오스틴 수준, 및/또는 CSF1 (대식세포 콜로니 자극 인자 1, 엔트레즈(Entrez) ID 1435), MEIS2 (메이스 호메오박스(Meis homeobox) 2, 엔트레즈 ID 4212), LGALS12 (렉틴, 갈락토시드-결합, 가용성, 12, 엔트레즈 ID 85329), IDO1 (인돌아민 2,3-디옥시게나제 1, 엔트레즈 ID 3620), THBS4 (트롬보스폰딘 4, 엔트레즈 ID 7060), OLIG2 (핍지교세포 계통 전사 인자 2, 엔트레즈 ID 10215), ALOX15 (아라키도네이트 15-리폭시게나제, 엔트레즈 ID 246), SIGLEC8 (시알산 결합 Ig-유사 렉틴 8, 엔트레즈 ID 27181), CCL23 (케모카인 (C-C 모티프) 리간드 23, 엔트레즈 ID 6368), PYROXD2 (피리딘 뉴클레오티드-디술피드 옥시도리덕타제 도메인 2, 엔트레즈 ID 84795), HSD3B7 (히드록시-델타-5-스테로이드 데히드로게나제, 3 베타- 및 스테로이드 델타-이소머라제 7, 엔트레즈 ID 80270), SORD (소르비톨 데히드로게나제, 엔트레즈 ID 6652), ASB2 (안키린 반복부 및 SOCS 박스 함유 2, 엔트레즈 ID 51676), CACNG6 (칼슘 채널, 전압-의존성, 감마 서브유닛 6, 엔트레즈 ID 59285), GPR44 (G 단백질-커플링된 수용체 44, 엔트레즈 ID 11251), MGAT3 (만노실 (베타-1,4-)-당단백질 베타-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제, 엔트레즈 ID 4248), SLC47A1 (용질 운반체 패밀리 47, 구성원 1, 엔트레즈 ID 55244), SMPD3 (스핑고미엘린 포스포디에스테라제 3, 중성 막, 엔트레즈 ID 55512), CCR3 (케모카인 (C-C 모티프) 수용체 3, 엔트레즈 ID 1232), CLC (샤르코-라이덴 결정 단백질, 엔트레즈 ID 1178), CYP4F12 (시토크롬 P450, 패밀리 4, 서브패밀리 F, 폴리펩티드 12, 엔트레즈 ID 66002), 및 ABTB2 (안키린 반복부 및 BTB (POZ) 도메인 함유 2, 엔트레즈 ID 25841)로부터 선택된 1종 이상의 상승된 수준을 나타내는 호산구성 염증 양성 (EIP) 환자로서 확인된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 환자는 호중구성 서명 유전자, 예컨대 CXCR1, CXCR2, 호중구 엘라스타제, 또는 CEACAM6 중 1종 이상의 상승된 수준을 나타낼 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 환자에서 혈청 페리오스틴 및/또는 호산구 서명 유전자 중 1종 이상 또는 호중구 서명 유전자 중 1종 이상의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 환자에서 혈청 페리오스틴의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 혈청 페리오스틴은 총 페리오스틴이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 환자에서 혈액 호산구 카운트를 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 환자에서 혈액 호중구 카운트를 측정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 개체에게 TH2 경로 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, TH2 경로 억제제는 ITK, BTK, IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33, IgE, IL-9 수용체, IL-5 수용체, IL-4 수용체 알파, IL-13수용체알파1 (IL-13Rα1), IL-13수용체알파2 (IL-13Rα2), OX40, TSLP-R, IL-7R알파, IL-17RB, ST2, CCR3, CCR4, CRTH2, Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23, Flap, Syk 키나제; CCR4, TLR9, CCR3, IL5, IL3, 및 GM-CSF로부터 선택된 적어도 1종의 표적을 억제한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체에게 TH17 경로 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, TH17 경로 억제제는 IL-1β, IL-6, IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, IL-17AF 이종이량체, IL-22, IL-21, TGF-β, IL-23, IL-26, IL-1β 수용체, IL-6 수용체, IL-17 수용체, IL-17RA, IL-17RC, IL-22R1, IL10R2, IL-21 수용체, TGF-β 수용체, IL-26 수용체 및 IL-23 수용체 (IL-12Rb1, IL23R)로부터 선택된 적어도 1종의 표적을 억제한다. 일부 실시양태에서, 중등도 내지 중증 천식을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 특발성 폐 섬유증을 치료하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 아토피성 피부염을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 높은 혈청 페리오스틴을 갖는 개체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 고-페리오스틴 천식을 치료하는 방법이 제공된다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 호산구성 장애는 천식 (아스피린 감수성 천식 포함), 아토피성 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염 (계절성 알레르기성 비염 포함), 비-알레르기성 비염, 천식, 중증 천식, 만성 호산구성 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 복강 질환, 처그-스트라우스 증후군 (결절성 동맥주위염 플러스 아토피), 호산구성 근육통 증후군, 과다호산구성 증후군, 에피소드적 혈관부종을 비롯한 부종성 반응, 연충 감염, 회선사상충 피부염 및 호산구-연관 위장 장애, 호산구성 식도염, 호산구성 위염, 호산구성 위장염, 호산구성 장염, 호산구성 결장염, 비강 미세폴립증 및 폴립증, 아스피린 불내성, 천식 및 폐쇄성 수면 무호흡, 만성 천식, 크론병, 경피증 및 심내막심근 섬유증, 암 (예를 들어, 교모세포종 (예컨대 다형성 교모세포종), 비-호지킨 림프종 (NHL)), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 폐 섬유증 (특발성 폐 섬유증 (IPF) 및 경화증에 속발성인 폐 섬유증 포함), COPD, 및 간 섬유증으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-13 매개 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 크론병, 호흡기 장애, 폐 염증성 장애, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간 섬유증, 암, 교모세포종 및 비-호지킨 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 호중구성 장애 또는 IL-17 매개 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 크론병, 폐 염증성 장애, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간 섬유증, 호흡기 장애, 암, 교모세포종 및 비-호지킨 림프종으로부터 선택될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 호흡기 장애는 천식, 알레르기성 천식, 비-알레르기성 천식, 기관지염, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 기종, 담배-유도된 기종, 기도 염증, 낭성 섬유증, 폐 섬유증, 알레르기성 비염 및 기관지확장증으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 천식 또는 호흡기 장애를 치료하는데 사용하기 위한 본원에 기재된 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 천식은 중등도 내지 중증 천식이다. 특정 실시양태에서, 천식은 고 TH2 천식이다. 특정 실시양태에서, 천식은 Th2-유발 천식이다. 특정의 다른 실시양태에서, 천식은 호산구성 천식이다. 특정 실시양태에서, 천식은 알레르기성 천식이다. 일부 실시양태에서, 개체는 호산구성 염증 양성 (EIP)인 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 호산구성 서명 유전자 중 적어도 1종의 상승된 수준을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 천식은 고-페리오스틴 천식이다. 특정 실시양태에서, 천식은 고-호산구 천식이다. 일부 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴을 갖는다. 특정 실시양태에서, 개체는 18세 이상이다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 혈청 페리오스틴의 상승된 수준을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 20 ng/ml 이상의 혈청 페리오스틴을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 25 ng/ml 이상의 혈청 페리오스틴을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 50 ng/ml 이상의 혈청 페리오스틴을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 혈청 페리오스틴의 대조 또는 참조 수준 20 ng/ml, 25 ng/ml 또는 50 ng/ml이다. 특정 실시양태에서, 혈청 페리오스틴은 총 페리오스틴이다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 카운트 또는 수준과 비교하여 혈액 호산구 카운트의 상승된 수준을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 카운트 또는 수준과 비교하여 상승된 객담 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 적어도 150, 적어도 200, 적어도 250, 적어도 300 또는 적어도 400 /ul를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 개체와 비교하여 하기 유전자: CXCL1, IL8, CXCL2, CXCL3, 및 CSF3 중 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4종, 또는 모두의 상승된 발현 또는 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 개체와 비교하여 높은 혈청 페리오스틴, 및 하기 유전자: CXCL1, IL8, CXCL2, CXCL3, 및 CSF3 중 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4종, 또는 모두의 상승된 발현 또는 수준을 갖는다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴 및 높은 혈청 또는 혈장 CXCL1을 갖는다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴 및 높은 혈청 또는 혈장 IL8을 갖는다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴 및 높은 혈청 또는 혈장 CXCL2를 갖는다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴 및 높은 혈청 또는 혈장 CXCL3을 갖는다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴 및 높은 혈청 또는 혈장 CSF3을 갖는다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 혈청 페리오스틴 및/또는 혈액 호산구 카운트 및/또는 혈액 호중구 카운트의 상승된 수준을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 총 페리오스틴이 측정 또는 결정된다. 일부 실시양태에서, 상승된 혈청 페리오스틴 수준은 적어도 20 ng/ml, 적어도 25 ng/ml, 적어도 30 ng/ml, 적어도 40 ng/ml, 또는 적어도 50 ng/ml의 총 페리오스틴을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 총 페리오스틴은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 ELISA에 의해 측정 또는 결정된다. 일부 실시양태에서, 총 페리오스틴은 본원에 기재된 E4 검정 또는 엘렉시스(ELECSYS)® 페리오스틴 검정에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 일부 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 흡입용 코르티코스테로이드이다. 일부 실시양태에서, 흡입용 코르티코스테로이드는 베클로메타손 디프로피오네이트 (예를 들어, 큐바르(Qvar)®), 부데소니드 (예를 들어, 풀미코르트(Pulmicort)®), 부데소니드/포르모테롤 푸마레이트 데히드레이트 (예를 들어, 심비코르트(Symbicort)®), 플루니솔리드 (예를 들어, 에어로비드(Aerobid)®), 플루티카손 프로피오네이트 (예를 들어, 플로벤트(Flovent)®, 플로나제(Flonase)®), 플루티카손 프로피오네이트 및 살메테롤 (예를 들어, 애드베어(Advair)®) 및 트리암시놀론 아세토니드 (예를 들어, 아즈마코르트(Azmacort)®)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 개체는 또한 제2 제어제로 치료받고 있다. 일부 실시양태에서, 제2 제어제는 장기-작용 기관지 확장제 (LABD)이다. 일부 실시양태에서, LABD는 장기-작용 베타-2 효능제 (LABA), 류코트리엔 수용체 길항제 (LTRA), 장기-작용 무스카린성 길항제 (LAMA), 테오필린 및 경구 코르티코스테로이드 (OCS)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, LABD는 부데소니드/포르모테롤 푸마레이트 데히드레이트 (예를 들어, 심비코르트®), 플루티카손 프로피오네이트 및 살메테롤 (예를 들어, 애드베어®), 아르포르모테롤 타르트레이트 (예를 들어, 브로바나(Brovana)®), 포르모테롤 푸마레이트 (예를 들어, 포라딜(Foradil)®, 페르포르미스트(Performist)®) 및 살메테롤 크시나포에이트 (예를 들어, 세레벤트(Serevent)®)로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 천식을 치료하는 방법은 환자에게 본원에 기재된 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체를 투여하는 것을 포함하고, 환자에게 코르티코스테로이드를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
본 발명의 한 측면에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 IL-17AA 및 IL-17AF에 결합하고, IL-17AA- 및 IL-17AF-유도된 활성을 억제하고/거나 IL-13-유도된 활성을 억제한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 추가로 IL-17FF에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 IL-17AA 및 IL-17AF에 결합하고, IL-17AA- 및 IL-17AF-유도된 활성을 억제하고, IL-13-유도된 활성을 억제한다. 특정의 특정한 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 IL-17AA, IL-17AF 및 IL-17FF에 결합하고, IL-17AA- , IL-17AF, 및 IL-17FF-유도된 활성을 억제하고, IL-13-유도된 활성을 억제한다. 특정의 이러한 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17AA, AF 및 FF 이중특이적 항체는 IL-17A 또는 IL-17F 단독에 의해 유도된 활성과 대조적으로 IL-17A 및 F 시토카인 모두에 의해 유도된 활성을 유리하게 차단한다. 일부 실시양태에서, IL-17AA-유도된 활성은 IL-17AA-유도된 유전자 발현 및/또는 시험관내 또는 생체내 세포의 증식이다. 일부 실시양태에서, IL-17AF-유도된 활성은 IL-17AF-유도된 유전자 발현 및/또는 시험관내 또는 생체내 세포의 증식이다. 일부 실시양태에서, IL-13-유도된 활성은 IL-13-유도된 유전자 발현 및/또는 시험관내 또는 생체내 세포의 증식이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 IL-17AA, IL-17AF, 및 IL-17FF에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 추가로 IL-17FF-유도된 활성을 억제한다. 일부 이러한 실시양태에서, IL-17FF-유도된 활성은 IL-17FF-유도된 유전자 발현 및/또는 시험관내 또는 생체내 세포의 증식이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 다중특이적 항체는 IL-13의 IL-13Rα1에의 결합을 억제하지 않는다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 또는 (b) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 또는 (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 또는 (b) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 또는 (c) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (c) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (c) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 IL-13에 대한 1가 결합제 및 IL-17에 대한 1가 결합제인 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 IL-13에 대한 1가 결합제 및 IL-17AA, AF, 및 FF에 대한 1가 결합제이다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛이 (a) (i) 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열; 또는 (b) (i) 서열식별번호: 48 또는 50의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열; 또는 (c) (i) 서열식별번호: 58의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 59 또는 60의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 (iii) (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 37, 39, 48, 50, 58, 82, 83, 및 115로부터 선택된 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 38, 49, 59, 및 60으로부터 선택된 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛은 (a) 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열; 또는 (b) 서열식별번호: 48 또는 50의 VH 서열 및 서열식별번호: 49의 VL 서열; (c) 서열식별번호: 58의 VH 서열 및 서열식별번호: 59 또는 60의 VL 서열; 또는 (d) 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 또는 (b) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 또는 (b) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛이 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는 (b) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛이 (a) (i) 서열식별번호: 11 또는 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 12 또는 14의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열; 또는 (b) (i) 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열; (ii) 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 (i)에서와 같은 VH 서열 및 (ii)에서와 같은 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 11, 13, 또는 30의 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 12, 14, 또는 29의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 11 또는 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 12 또는 14의 VL 서열; 또는 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열; 또는 서열식별번호: 30의 VH 서열 및 서열식별번호: 29의 VL 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하는 항체; 또는 서열식별번호: 50의 VH 서열 및 서열식별번호: 49의 VL 서열을 포함하는 항체; 또는 서열식별번호: 58의 VH 서열 및 서열식별번호: 60의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁하는 다중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 IL-17A 동종이량체 및/또는 IL-17AF 이종이량체에의 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IL-17F 동종이량체에의 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 11의 VH 서열 및 서열식별번호: 12의 VL 서열을 포함하는 항체; 또는 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함하는 항체; 또는 서열식별번호: 30의 VH 서열 및 서열식별번호: 29의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 77 내지 89 내, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 82 내지 89 내의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 VH/VL은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 VH/VL은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 43으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, 제1 절반-항체 및 제2 절반-항체를 포함하는 항-IL13/IL-17 이중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 절반-항체는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 제2 절반-항체는 제2 VH/VL 유닛을 포함하며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 43으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 레브리키주맙의 CDR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 중등도 내지 중증 천식에 걸린 개체를 치료하기 위한 레브리키주맙의 효능을 개선시킨다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 수준과 비교하여 상승된 수준의 총 혈액 또는 혈청 페리오스틴 및/또는 상승된 혈액 호산구 카운트 및/또는 상승된 호중구 카운트를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 수준과 비교하여 상승된 수준의 FENO를 갖는다. 특정 실시양태에서, 대조 수준은 동일한 환자 집단의 중간 수준이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 고-페리오스틴, 중등도 내지 중증 천식을 치료하기 위한 레브리키주맙의 효능을 개선시킨다. 일부 실시양태에서, 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 일부 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 흡입용 코르티코스테로이드이다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
일부 실시양태에서, 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 항-IL13/IL-17 이중특이적 항체가 제공되며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IgG 항체일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IgG1 또는 IgG4 항체일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IgG4 항체일 수 있다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 노브(knob) 돌연변이를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역 및 홀(hole) 돌연변이를 포함하는 제2 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 IL-17에 결합하는 VH/VL 유닛의 중쇄 가변 영역 부분에 융합된다. 일부 실시양태에서, 제2 중쇄 불변 영역은 IL-13에 결합하는 VH/VL 유닛의 중쇄 가변 영역 부분에 융합된다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 불변 영역은 IL-13에 결합하는 VH/VL 유닛의 중쇄 가변 영역 부분에 융합된다. 일부 실시양태에서, 제2 중쇄 불변 영역은 IL-17에 결합하는 VH/VL 유닛의 중쇄 가변 영역 부분에 융합된다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 항체이고, 여기서 노브 돌연변이는 T366W 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 항체이고, 여기서 홀 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 3개의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이고, 여기서 노브 돌연변이는 T366W 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이고, 여기서 홀 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V 돌연변이로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 3개의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 67의 서열을 포함하는 제1 중쇄 불변 영역 및 서열식별번호: 68의 서열을 포함하는 제2 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 69의 서열을 포함하는 제1 중쇄 불변 영역 및 서열식별번호: 70의 서열을 포함하는 제2 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체가 제공되며, 여기서 항체는 서열식별번호: 72 또는 서열식별번호: 117의 서열을 포함하는 제1 중쇄, 서열식별번호: 73의 서열을 포함하는 제1 경쇄, 서열식별번호: 21 또는 서열식별번호: 116의 서열을 포함하는 제2 중쇄, 및 서열식별번호: 22의 서열을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-13에 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-17에 결합하지 않는다.
VH 및 중쇄는 N-말단 글루타민을 포함할 수 있고, 중쇄는 또한 C-말단 리신을 포함할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, N-말단 글루타민 잔기는 피로글루타메이트를 형성할 수 있고, C-말단 리신 잔기는 제조 방법 동안 클리핑될 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, N-말단 글루타민은 임의로 제거될 수 있다. 또한, C-말단 리신 잔기를 갖는 또는 갖지 않는 중쇄 둘 다가 본 발명에서 고려된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 다중특이적 항체 또는 단리된 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 다중특이적 항체의 제1 VH/VL 유닛을 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 다중특이적 항체의 제2 VH/VL 유닛을 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산(들)을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포이다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이(E. coli) 세포 또는 CHO 세포이다. 특정 실시양태에서, 다중특이적 항체는 제1 VH/VL 유닛 및 제2 VH/VL 유닛을 포함하며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이 세포이다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이 세포이고, 다중특이적 항체는 비-글리코실화된다. 특정 실시양태에서, 방법은 절반-항체 또는 다중특이적 항체를 회수하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 107 또는 103 또는 118의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열; (b) 서열식별번호: 108 또는 104의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열; 또는 (c) (a)의 서열 및 (b)의 서열을 포함하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 105 또는 99 또는 119의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열; (b) 서열식별번호: 106 또는 100의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열; 또는 (c) (a)의 서열 및 (b)의 서열을 포함하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 107 또는 103 또는 108의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공되며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 105 또는 99 또는 119의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106 또는 100의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공되며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포이다. 일부 실시양태에서, 원핵 세포는 이. 콜라이 세포이고, 진핵 세포는 CHO 세포이다. 일부 실시양태에서, 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 회수하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, (i) 서열식별번호: 105 또는 99의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106 또는 100의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제1 숙주 세포를 배양하여 제1 절반 항체를 생산하는 단계, 및 (ii) 서열식별번호: 107 또는 103 또는 118의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하여 (여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함됨) 제2 절반 항체를 생산하는 단계를 포함하는 다중특이적 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, (i) 서열식별번호: 105, 99, 119 또는 101의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106, 100 또는 102의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제1 숙주 세포를 배양하여 제1 절반 항체를 생산하는 단계, 및 (ii) 서열식별번호: 107 또는 103 또는 118의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하여 (여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함됨) 제2 절반 항체를 생산하는 단계를 포함하는, 다중특이적 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, (i) 서열식별번호: 105 또는 99 또는 119의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106 또는 100의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제1 숙주 세포를 배양하여 제1 절반 항체를 생산하는 단계, 및 (ii) 서열식별번호: 107 또는 103 또는 118의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하여 (여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함됨) 제2 절반 항체를 생산하는 단계를 포함하는 다중특이적 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 제1 절반 항체를 회수하고 제2 절반 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 다중특이적 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 제1 절반 항체 및 제2 절반 항체를 포함하는 혼합물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 의해 생산된 다중특이적 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 다중특이적 항체는 제1 VH/VL 유닛 및 제2 VH/VL 유닛을 포함하며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 동일하거나 상이한 핵산 분자는 1종 이상의 벡터, 특히 발현 벡터일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 다중특이적 항체 또는 단리된 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역접합체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 다중특이적 항체 또는 단리된 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 제제가 제공된다.
도 1a-c는 실시예 1에 기재된 바와 같은, (a) 호중구 및 호산구, (b) 호산구 및 IL-17A+ 세포, 및 (c) IL-17F+ 및 IL-17A+ 세포에 대한 기관지 생검 조직 카운트의 쌍별 비교를 보여준다.
도 2a-b는 실시예 2에 기재된 바와 같은, 검출불가능 (정량 하한치 미만; <LLOQ) 및 검출가능 (정량 하한치 이상, ≥LLOQ)과 관련하여 매칭되는 생검 호중구 샘플에서의 (a) IL-17A 및 (b) IL-17F 발현을 보여준다.
도 3은 실시예 2에 기재된 바와 같은, UK 코호트 기관지 생검의 마이크로어레이 분석으로부터의 특정 호중구-연관 유전자 발현의 이원 계층적 클러스터링을 보여준다. 열린 원형은 스테로이드를 복용하지 않은 천식환자에 상응한다. 닫힌 원형은 스테로이드 (흡입용 코르티코스테로이드 (ICS) 또는 경구 코르티코스테로이드 (OCS))를 복용한 천식환자를 나타낸다.
도 4a-b는 실시예 3에 기재된 바와 같은, (a) BOBCAT 연구로부터의 건강한 대조군 및 중등도-중증 천식환자에서의 CXCL1 수준, 및 (b) 혈청 페리오스틴 수준이 50 ng/ml 미만 또는 50 ng/ml 이상인 천식환자에서의 혈장 CXCL1 수준을 보여준다. 160 pg/ml 초과의 CXCL1 수준 (파선)은 상승된 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 경향이 있다 (피셔 정확 검정에 의해 p=0.02).
도 5는 실시예 3에 기재된 바와 같은, 매칭 샘플에서의 검출불가능 (<LLOQ) 또는 검출가능 (≥LLOQ) IL-17A 발현을 갖는 UK 코호트에서의 혈청 페리오스틴 수준을 보여준다. 혈청 페리오스틴은 검출가능한 기관지 생검 IL-17A mRNA를 갖는 대상체에서 상승된다 (P=0.03, 크루스칼-왈리스).
도 6a-d는 실시예 4에 기재된 바와 같은, 마우스 집 먼지 응애 천식 모델에서의 항-IL-13 항체, 항-IL-17AA/AF 항체 및 항-IL-17FF 항체의 혼합물, 또는 모든 3종의 항체의 혼합물의 투여 후의 기관지폐포 세척액 (BAL; a, b) 및 혈액 (c, d)에서의 (a, c) 호산구 수 및 (b, d) 호중구 수를 보여준다. *p<0.05, **p<0.005.
도 7a-d는 실시예 6에 기재된 바와 같은, (a) 항-IL-13 노브 및 항-IL-17 홀 절반 항체의 SDS-PAGE 분석, (b) 이중특이적 항체의 SEC 분석, (c) 비환원 (레인 a) 및 환원 (레인 c) 조건 하에서의 이중특이적 항체의 SDS PAGE 분석, 및 (d) 이중특이적 항체의 F(ab')2 단편의 LC-ESI/TOF 분석을 보여준다.
도 8a-b는 실시예 8에 기재된 바와 같은, 레브리키주맙 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 TF-1 세포의 (a) IL-13-유도된 및 (b) IL-13 R130Q-유도된 증식의 용량-의존성 억제를 보여준다.
도 9a-c는 실시예 8에 기재된 바와 같은, 항-IL-17 항체 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 정상 인간 포피 섬유모세포에서의 G-CSF의 (a) IL-17A-유도된 및 (b) IL-17AF-유도된, 및 (c) IL-17F-유도된 발현의 용량-의존성 억제를 보여준다.
도 10a-b는 실시예 9에 기재된 바와 같은, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 (a) IL-13-유도된 CCL26 발현 및 (b) IL-17A-유도된 CXCL1 발현 둘 다의 용량-의존성 억제를 보여준다.
도 11은 실시예 10에 기재된 바와 같은, 마우스에서의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 단일 정맥내 투여 후의 혈청 농도를 보여준다.
도 12는 실시예 11에 기재된 바와 같은, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 단일 정맥내 투여 후의 개별 시노몰구스 원숭이에서의 혈청 농도를 보여준다.
도 13은 실시예 11에 기재된 바와 같은, 시노몰구스 원숭이에의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 투여 후의 IL-17A 동종이량체 수준을 보여준다.
도 14a-c는 실시예 13에 기재된 바와 같은, 항-IL-13 항체, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체, 또는 항-IL-17 항체의 투여 후의 집 먼지 응애 천식 모델 마우스에서의 (a) 혈장 TARC 수준, (b) 혈청 G-CSF 수준, 및 (c) 혈청 CXCL1 수준을 보여준다.
도 15a-d는 실시예 5에 기재된 바와 같은, 임상 연구의 위약 및 레브리키주맙 부문에 대한 FEV1에서의 퍼센트 변화를 기준선 호산구 카운트 및 호중구 카운트 (a: 호산구-저 및 호중구-고; b: 호산구-저 및 호중구-저; c: 호산구-고 및 호중구-고; 및 d: 호산구-고 및 호중구-저)에 의해 규정된 4종의 군으로 플롯팅한 그래프를 보여준다. 이들 분석의 기초가 되는 대상체의 수를 각각의 하위-플롯에 주해한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문헌 [Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley &　Sons (New York, N.Y. 1994), and March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley &　Sons (New York, N.Y. 1992)]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 출원에 사용된 많은 용어에 대한 일반적 지침을 제공한다.
특정 정의
본 명세서를 해석하고자 하는 목적상, 하기 정의가 적용될 것이고, 적절한 경우에는 언제라도 단수형으로 사용된 용어는 복수형을 또한 포함할 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 하기 제시된 임의의 정의가 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에, 하기 제시된 정의가 우선할 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "단백질" 또는 "항체"에 대한 언급은 각각 복수의 단백질 또는 항체를 포함하고; "세포"에 대한 언급은 세포의 혼합물 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 혈액, 혈청, 혈장, 객담, 기관지폐포 세척, 조직 생검 (예를 들어, 폐 샘플), 및 비강 스왑 또는 비강 폴립을 비롯한 비강 샘플을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
FENO 검정은 FENO (분획 호기 산화질소) 수준을 측정하는 검정을 지칭한다. 이러한 수준은, 예를 들어 2005년에 미국 흉부 학회 (ATS)에 의해 공개된 가이드라인에 따라 핸드-헬드 휴대용 장치, 니옥스 미노(NIOX MINO)™ (에어로크린(Aerocrine), 스웨덴 솔나)를 사용하여 평가될 수 있다. FENO는 다른 유사한 방식, 예를 들어 FeNO 또는 FENO로 나타내어질 수 있고, 모든 이러한 유사한 변형이 동일한 의미를 갖는다는 것을 이해하여야 한다.
천식은 가변성 및 재발성 증상, 가역적 기류 폐쇄 (예를 들어, 기관지확장제에 의함), 및 기저 염증과 연관될 수 있거나 연관되지 않을 수 있는 기관지 과민성을 특징으로 하는 복합 장애이다. 천식의 예는 아스피린 감수성/악화된 천식, 아토피성 천식, 중증 천식, 경도 천식, 중등도 내지 중증 천식, 코르티코스테로이드 나이브 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 새로이 진단된 비치료 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드 비제어된 천식, 및 문헌 [J Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938]에서 언급된 바와 같은 다른 천식을 포함한다.
"호산구성 장애"는 과잉 호산구 수와 연관된 장애를 의미하고, 체내 국부적 또는 전신적 호산구의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. 특정 실시양태에서, 과잉 혈액 호산구 카운트는 적어도 200/μl, 적어도 250/μl, 적어도 300/μl, 또는 적어도 400/μl이다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 혈액 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 적어도 150/μl, 적어도 200/μl, 적어도 250/μl, 적어도 300/μl, 또는 적어도 400/μl의 기준선 혈액 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 과잉 호산구 수 또는 활성과 연관된 장애는 천식 (아스피린 감수성 천식 포함), 아토피성 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염 (계절성 알레르기성 비염 포함), 비-알레르기성 비염, 천식, 중증 천식, 만성 호산구성 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 복강 질환, 처크-스트라우스 증후군 (결절성 동맥주위염 플러스 아토피), 호산구성 근육통 증후군, 과다호산구성 증후군, 간헐성 혈관부종을 비롯한 부종성 반응, 연충 감염 (여기서 호산구는 보호적 역할을 가질 수 있음), 회선사상충 피부염, 및 호산구성 식도염, 호산구성 위염, 호산구성 위장염, 호산구성 장염 및 호산구성 결장염을 포함하나 이에 제한되지는 않는 호산구-연관된 위장 장애, 비강 미세폴립증 및 폴립증, 아스피린 불내성 천식 및 폐쇄성 수면 무호흡을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 호산구-유래 분비 산물도 또한 종양에서의 혈관신생 및 결합 조직 형성의 촉진, 및 만성 천식, 크론병, 경피증 및 심내막심근 섬유증과 같은 상태에서 관찰되는 섬유화 반응과 연관된다 (Munitz A, Levi-Schaffer F. Allergy 2004; 59: 268-75, Adamko et al. Allergy 2005; 60: 13-22, Oldhoff, et al. Allergy 2005; 60: 693-6). 다른 예는 암 (예를 들어, 교모세포종 (예컨대, 다형성 교모세포종), 비-호지킨 림프종 (NHL)), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 폐 섬유증 (특발성 폐 섬유증 (IPF) 및 경화증에 속발성인 폐 섬유증 포함), COPD, 간 섬유증을 포함한다. 특정 실시양태에서, 환자는 대조군과 비교하여 상승된 페리오스틴 수준, 및/또는 CSF1, MEIS2, LGALS12, IDO1, THBS4, OLIG2, ALOX15, SIGLEC8, CCL23, PYROXD2, HSD3B7, SORD, ASB2, CACNG6, GPR44, MGAT3, SLC47A1, SMPD3, CCR3, CLC, CYP4F12, 및 ABTB2로부터 선택된 1종 이상의 상승된 수준을 나타내는 호산구성 염증 양성 (EIP) 환자로서 확인된다.
"호중구성 장애"는 과잉 호중구 수와 연관된 장애를 의미한다. 일부 실시양태에서, 체내 국부적 또는 전신적 호중구의 수준 또는 활성으로 인해 호중구성 장애에서 비정형 증상이 나타날 수 있다. 특정 실시양태에서, 과잉 혈액 호중구 카운트는 적어도 3000/μl, 3500/μl, 4000/μl, 또는 4500/μl이다. 특정 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 혈액 호중구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 특정 실시양태에서, 개체는 적어도 3000/μl, 3500/μl, 4000/μl, 또는 4500/μl의 기준선 혈액 호중구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 과잉 호중구 수 또는 활성과 연관된 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 크론병, 폐 염증성 장애, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간 섬유증, 호흡기 장애, 암, 교모세포종 및 비-호지킨 림프종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 호흡기 장애는 천식, 알레르기성 천식, 비-알레르기성 천식, 기관지염, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 기종, 담배-유도된 기종, 기도 염증, 낭성 섬유증, 폐 섬유증, 알레르기성 비염 및 기관지확장증으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 환자 집단 내 중간 기준선 혈액 호중구 카운트를 초과하는 기준선 혈액 호중구 카운트를 갖는 것으로 결정된 바 있다. 일부 실시양태에서, 상승된 호중구 카운트를 갖는 개체는 중등도 내지 중증 천식 환자 집단 내 중간 기준선 혈액 호중구 카운트를 초과하는 기준선 혈액 호중구 카운트를 갖는다.
IL-13 매개 장애는 과잉 IL-13 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL-13의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL-13 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 크론병, 폐 염증성 장애 (폐 섬유증, 예컨대 IPF 포함), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
IL-17 매개 장애는 과잉 IL-17 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL-17의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL-17 매개 장애의 예는 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환, 크론병, 폐 염증성 장애, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간 섬유증, 호흡기 장애, 암, 교모세포종, 및 비-호지킨 림프종을 포함한다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 호흡기 장애는 천식, 알레르기성 천식, 비-알레르기성 천식, 기관지염, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 기종, 담배-유도된 기종, 기도 염증, 낭성 섬유증, 폐 섬유증, 알레르기성 비염 및 기관지확장증으로부터 선택될 수 있다.
천식-유사 증상은 숨가쁨, 기침 (객담 생성 및/또는 객담 질 및/또는 기침 빈도에서의 변화), 천명, 흉부 압박, 기관지수축, 및 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성으로 이루어진 군으로부터 선택된 증상 또는 이들 증상의 조합을 포함한다 (Juniper et al. (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334.).
용어 "호흡기 장애"는 천식 (예를 들어, 알레르기성 및 비-알레르기성 천식 (예를 들어, 보다 어린 어린이에서 예를 들어 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)에 의한 예를 들어 감염으로 인함)); 기관지염 (예를 들어, 만성 기관지염); 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) (예를 들어, 기종 (예를 들어, 담배-유발된 기종)); 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 및 과다 점액 생산을 수반하는 상태, 예를 들어 낭성 섬유증, 폐 섬유증 및 알레르기성 비염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 기도 염증, 과다 기도 분비 및 기도 폐쇄를 특징으로 할 수 있는 질환의 예는 천식, 만성 기관지염, 기관지확장증 및 낭성 섬유증을 포함한다.
악화 (통상적으로 천식 발작 또는 급성 천식으로 지칭됨)는 숨가쁨, 기침 (객담 생성 및/또는 객담 질 및/또는 기침 빈도에서의 변화), 천명, 흉부 압박, 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성 또는 이들 증상의 조합에서의 신규 에피소드 또는 진행성 증가이다. 악화는 종종 호기 기류 (PEF 또는 FEV1)에서의 감소를 특징으로 한다. 그러나, PEF 가변성은 악화로부터 회복까지 또는 회복 동안에는 증가할 수 있지만, 악화 동안에는 통상적으로 증가하지 않는다. 악화의 중증도는 경도 내지 생명-위협의 범위이고, 증상 및 폐 기능 둘 다를 기초로 하여 평가될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 중증 천식 악화는 하기 천식 치료를 위한 입원, 높은 코르티코스테로이드 사용 (예를 들어, 총 1일 코르티코스테로이드 용량을 4배로 하는 것, 또는 연속 3일 이상 동안 플루티카손 프로피오네이트 (FP) 또는 등가물의 500 마이크로그램 이상의 총 1일 용량), 또는 경구/비경구 코르티코스테로이드 사용 중 어느 하나 또는 그의 조합을 야기하는 악화를 포함한다.
"TH2 경로 억제제" 또는 "TH2 억제제"는 TH2 경로를 억제하는 작용제이다. TH2 경로 억제제의 억제제는: ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS No. 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN No. 910649-32-0; QAX-576; IL-4/IL-13 trap), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS No. 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL-4/IL-13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33, 및 IgE (예를 들어, 졸레어, QGE-031; MEDI-4212); 및 수용체, 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS No. 1044511-01-4), IL-4 수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645), IL-13 수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13 수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL-17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)로부터 선택된 표적 중 어느 하나의 활성의 억제제, 및 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제를 포함한다. 상기 언급된 표적의 억제제의 예는, 예를 들어 WO2008/086395; WO2006/085938; US 7,615,213; US 7,501,121; WO2006/085938; WO 2007/080174; US 7,807,788; WO2005007699; WO2007036745; WO2009/009775; WO2007/082068; WO2010/073119; WO2007/045477; WO2008/134724; US2009/0047277; 및 WO2008/127271에 개시되어 있다.
"TH17 경로 억제제" 또는 "TH17 억제제"는 TH17 경로를 억제하는 작용제이다. TH17 경로 억제제의 예는 IL-1β, IL-6 (예를 들어, 토실리주맙), IL-17A (예를 들어, 세쿠키누맙, 익세키주맙, ABT-122), IL-17F, IL-17AF 이종이량체, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-22, IL-21, TGF-β, IL-23, IL-1β수용체, IL-6 수용체, IL-17RA (예를 들어, 브로달루맙), IL-17RC, IL-17RB, IL-22R1, IL10R2, IL-21 수용체, TGF-β 수용체, 및 IL-23 수용체 (IL-12Rb1, IL23R)로부터 선택된 표적 중 어느 하나의 활성의 억제제를 포함한다. 상기 언급된 표적의 억제제의 예는, 예를 들어 US 7,807,15; US 7,838,638; US 8,580,265; US 20140314743; US 8,519,107; US 7,833,527; WO2014044758; US 20130005659; 및 WO2011023685에 개시되어 있다.
용어 "소분자"는 50 달톤 내지 2500 달톤의 분자량을 갖는 유기 분자를 지칭한다.
용어 "항체"는 가장 넒은 의미로 사용되고, 구체적으로 예를 들어 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체, 단일 쇄 항체, 다중-특이적 항체, 및 항원-결합 단편을 비롯한 항체의 단편을 포괄한다. 이러한 항체는 키메라, 인간화, 인간 및 합성 항체일 수 있다. 이러한 항체 및 이를 생성하는 방법은 하기에 보다 상세하게 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "절반-항체" 또는 "반량체"는 1가 항원 결합 폴리펩티드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 절반 항체 또는 반량체는 VH/VL 유닛, 및 임의로 이뮤노글로불린 불변 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 특정 실시양태에서, 절반 항체 또는 반량체는 1개의 이뮤노글로불린 경쇄와 회합된 1개의 이뮤노글로불린 중쇄 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 절반 항체 또는 반량체는 단일-특이적이고, 즉 단일 항원 또는 에피토프에 결합한다. 특정의 이러한 실시양태에서, 절반 항체는 IL-13에 결합하고 IL-17에는 결합하지 않는다. 특정의 다른 실시양태에서, 절반 항체는 IL-17에 결합하고 IL-13에는 결합하지 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 절반-항체가, 예를 들어 낙타류 기원의 단일 가변 도메인으로 이루어진 항원 결합 도메인을 가질 수 있음을 용이하게 인지할 것이다.
용어 "VH/VL 유닛"은 적어도 1개의 VH HVR 및 적어도 1개의 VL HVR을 포함하는 항체의 항원-결합 영역을 지칭한다. 특정 실시양태에서, VH/VL 유닛은 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 및 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH/VL 유닛은 추가로 프레임워크 영역 (FR)의 적어도 일부를 포함한다. 일부 실시양태에서, VH/VL 유닛은 3개의 VH HVR 및 3개의 VL HVR을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, VH/VL 유닛은 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3 또는 모든 4개의 VH FR 및 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3 또는 모든 4개의 VL FR을 포함한다.
용어 "다중특이적 항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 폴리에피토프 특이성 (즉, 1개의 생물학적 분자 상의 2개 이상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있거나 또는 2개 이상의 상이한 생물학적 분자 상의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있음)을 갖는 항원-결합 도메인을 포함하는 항체를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체)의 항원-결합 도메인은 2개의 VH/VL 유닛을 포함하며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 제1 에피토프에 특이적으로 결합하고, 제2 VH/VL 유닛은 제2 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 각각의 VH/VL 유닛은 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함한다. 이러한 다중특이적 항체는 전장 항체, 2개 이상의 VL 및 VH 도메인을 갖는 항체, 항체 단편, 예컨대 Fab, Fv, dsFv, scFv, 디아바디, 이중특이적 디아바디 및 트리아바디, 공유 또는 비-공유 연결된 항체 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 중쇄 불변 영역의 적어도 일부 및/또는 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 추가로 포함하는 VH/VL 유닛도 또한 "반량체" 또는 "절반 항체"로 지칭될 수 있다. 일부 실시양태에서, 절반 항체는 단일 중쇄 가변 영역의 적어도 일부 및 단일 경쇄 가변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 2개의 절반 항체를 포함하고 2개의 항원에 결합하는 이중특이적 항체는 제1 항원 또는 제1 에피토프에 결합하지만 제2 항원 또는 제2 에피토프에는 결합하지 않는 제1 절반 항체 및 제2 항원 또는 제2 에피토프에 결합하고 제1 항원 또는 제1 에피토프에는 결합하지 않는 제2 절반 항체를 포함한다. 일부 실시양태에 따르면, 다중특이적 항체는 각각의 항원 또는 에피토프에 5 μM 내지 0.001 pM, 3 μM 내지 0.001 pM, 1 μM 내지 0.001 pM, 0.5 μM 내지 0.001 pM, 또는 0.1 μM 내지 0.001 pM의 친화도로 결합하는 IgG 항체이다. 일부 실시양태에서, 반량체는 제2 반량체와 분자내 디술피드 결합의 형성을 가능하게 하는 중쇄 가변 영역의 충분한 일부를 포함한다. 일부 실시양태에서, 반량체는 예를 들어 상보적 홀 돌연변이 또는 노브 돌연변이를 포함하는 제2 반량체 또는 절반 항체와의 이종이량체화를 가능하게 하는 노브 돌연변이 또는 홀 돌연변이를 포함한다. 노브 돌연변이 및 홀 돌연변이는 이하에서 추가로 논의된다.
"이중특이적 항체"는 1개의 생물학적 분자 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있거나, 또는 2개의 상이한 생물학적 분자 상의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 항원-결합 도메인을 포함하는 다중특이적 항체이다. 이중특이적 항체는 또한 "이중 특이성"을 갖는 것 또는 "이중 특이적"인 것으로 본원에서 지칭될 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 이중특이적 항체 명칭에서 이중특이적 항체에 의해 결합되는 항원이 열거되는 순서는 임의적이다. 즉, 일부 실시양태에서, 용어 "항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체" 및 "항-IL-17/IL-13 이중특이적 항체"는 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 2개의 절반 항체를 포함하며, 여기서 각각의 절반 항체는 단일 중쇄 가변 영역 및 임의로 중쇄 불변 영역의 적어도 일부, 및 단일 경쇄 가변 영역 및 임의로 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 2개의 절반 항체를 포함하며, 여기서 각각의 절반 항체는 단일 중쇄 가변 영역 및 단일 경쇄 가변 영역을 포함하고, 1개 초과의 단일 중쇄 가변 영역을 포함하지 않고, 1개 초과의 단일 경쇄 가변 영역을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 2개의 절반 항체를 포함하며, 여기서 각각의 절반 항체는 단일 중쇄 가변 영역 및 단일 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 제1 절반 항체는 제1 항원에 결합하고 제2 항원에는 결합하지 않으며, 제2 절반 항체는 제2 항원에 결합하고 제1 항원에는 결합하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "노브-인투-홀" 또는 "KnH" 기술은 돌출부 (노브)를 하나의 폴리펩티드 내로 및 함몰부 (홀)를 다른 폴리펩티드 내로 이들이 상호작용하는 계면에서 도입함으로써 시험관내 또는 생체내에서 함께 2개의 폴리펩티드의 쌍형성을 지시하는 기술을 지칭한다. 예를 들어, KnH는 항체의 Fc:Fc 결합 계면, CL:CH1 계면 또는 VH/VL 계면에 도입된 바 있다 (예를 들어, US 2011/0287009, US2007/0178552, WO 96/027011, WO 98/050431, 및 문헌 [Zhu et al., 1997, Protein Science 6:781-788] 참조). 일부 실시양태에서, KnH는 다중특이적 항체의 제조 동안 2개의 상이한 중쇄가 함께 쌍형성하도록 유도한다. 예를 들어, 그의 Fc 영역에 KnH를 갖는 다중특이적 항체는 각각의 Fc 영역에 연결된 단일 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있거나, 또는 유사하거나 상이한 경쇄 가변 도메인과 쌍형성하는 상이한 중쇄 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있다. KnH 기술은 또한 2개의 상이한 수용체 세포외 도메인이 함께, 또는 상이한 표적 인식 서열을 포함하는 임의의 다른 폴리펩티드 서열 (예를 들어, 아피바디, 펩티바디 및 다른 Fc 융합체 포함)이 쌍형성하도록 하는데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "노브 돌연변이"는 돌출부 (노브)를 폴리펩티드 내로, 폴리펩티드가 또 다른 폴리펩티드와 상호작용하는 계면에서 도입하는 돌연변이를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 다른 폴리펩티드는 홀 돌연변이를 갖는다 (예를 들어, 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 US 5,731,168, US 5,807,706, US 5,821,333, US 7,695,936, US 8,216,805 참조).
본원에 사용된 용어 "홀 돌연변이"는 함몰부 (홀)를 폴리펩티드 내로, 폴리펩티드가 또 다른 폴리펩티드와 상호작용하는 계면에서 도입하는 돌연변이를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 다른 폴리펩티드는 노브 돌연변이를 갖는다 (예를 들어, 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 US 5,731,168, US 5,807,706, US 5,821,333, US 7,695,936, US 8,216,805 참조).
항체는, 항체의 부재 하에 측정된 활성과 비교하여 활성이 감소된 경우에, 항원에 의해 유도되거나 또는 그와 연관된 활성, 예컨대 IL-17- 및/또는 IL-13-유도된 활성을 "억제한다". 특정 실시양태에서, 항체는 항체의 부재 하의 활성과 비교하여 항체의 존재 하에서 항원의 활성을 적어도 10% 억제한다. 일부 실시양태에서, 항체는 활성을 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 또는 100% 억제한다. 항체는, 항체의 부재 하의 활성과 비교하여 항체의 존재 하에 활성이 적어도 50% 감소된 경우에, 항원 또는 그의 연관된 활성을 "중화시키는" 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 중화 항체는 활성을 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 또는 100% 억제한다. 특정 실시양태에서, IL-17- 및/또는 IL-13-유도된 활성은 시험관내 또는 생체내 세포의 증식이다. 특정의 다른 실시양태에서, IL-17- 및/또는 IL-13-유도된 활성은 IL-17 매개 및/또는 IL-13 매개 염증 반응 또는 면역-관련 장애이다. 다른 실시양태에서, IL-17- 및/또는 IL-13-유도된 활성은 IL-17 매개 및/또는 IL-13 매개 염증 세포의 침윤이다.
용어 "치료제"는 질환을 치료하는데 사용되는 임의의 작용제를 지칭한다. 치료제는 예를 들어, 단백질에 결합할 수 있는 폴리펩티드(들) (예를 들어, 항체, 이뮤노어드헤신 또는 펩티바디), 압타머 또는 소분자, 또는 표적을 코딩하는 핵산 분자에 결합할 수 있는 핵산 분자 (즉, siRNA) 등일 수 있다.
용어 "제어제" 또는 "예방제"는 천식 염증을 제어하는데 사용되는 임의의 치료제를 지칭한다. 제어제의 예는 코르티코스테로이드, 류코트리엔 수용체 길항제 (예를 들어, 류코트리엔의 합성 또는 활성을 억제함, 예컨대 몬테루카스트, 질류톤, 프란루카스트, 자피르루카스트), LABA, 코르티코스테로이드/LABA 조합 조성물, 테오필린 (아미노필린 포함), 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 오말리주맙, LAMA, MABA (예를 들어, 이관능성 무스카린성 길항제-베타2 효능제), 5-리폭시게나제 활성화 단백질 (FLAP) 억제제, 및 효소 PDE-4 억제제 (예를 들어, 로플루밀라스트)를 포함한다. "제2 제어제"는 전형적으로 제1 제어제와 동일하지 않은 제어제를 지칭한다.
용어 "코르티코스테로이드 절약" 또는 "CS"는 또 다른 치료제의 투여로 인한, 질환의 치료를 위해 코르티코스테로이드를 제공받는 환자에서 질환을 치료하기 위해 사용된 코르티코스테로이드의 빈도 및/또는 양에서의 감소, 또는 그의 제거를 의미한다. "CS 작용제"는 코르티코스테로이드를 제공받는 환자에서 CS를 유발할 수 있는 치료제를 지칭한다.
용어 "코르티코스테로이드"는 플루티카손 (플루티카손 프로피오네이트 (FP) 포함), 베클로메타손, 부데소니드, 시클레소니드, 모메타손, 플루니솔리드, 베타메타손 및 트리암시놀론을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "흡입가능한 코르티코스테로이드"는 흡입에 의한 전달에 적합한 코르티코스테로이드를 의미한다. 예시적인 흡입가능한 코르티코스테로이드는 플루티카손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데노시드, 모메타손 푸로에이트, 시클레소니드, 플루니솔리드, 트리암시놀론 아세토니드 및 현재 이용가능하거나 미래에 이용가능하게 될 임의의 다른 코르티코스테로이드이다. 흡입될 수 있고 장기-작용 베타2-효능제와 조합되는 코르티코스테로이드의 예는 부데소니드/포르모테롤 및 플루티카손/살메테롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
코르티코스테로이드/LABA 조합 약물의 예는 플루티카손 푸로에이트/빌란테롤 트리페나테이트 및 인다카테롤/모메타손을 포함한다.
용어 "LABA"는 장기-작용 베타-2 효능제를 의미하며, 이러한 효능제는 예를 들어 살메테롤, 포르모테롤, 밤부테롤, 알부테롤, 인다카테롤, 아르포르모테롤 및 클렌부테롤을 포함한다.
용어 "LAMA"는 장기-작용 무스카린성 길항제를 의미하며, 이러한 효능제는 티오트로피움을 포함한다.
LABA/LAMA 조합물의 예는 올로다테롤 티오트로피움 (베링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)) 및 인다카테롤 글리코피로늄 (노파르티스(Novartis))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "SABA"는 단기-작용 베타-2 효능제를 의미하며, 이러한 효능제는 살부타몰, 레보살부타몰, 페노테롤, 테르부탈린, 피르부테롤, 프로카테롤, 비톨테롤, 리미테롤, 카부테롤, 툴로부테롤 및 레프로테롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
류코트리엔 수용체 길항제 (때때로 류카스트로 지칭됨) (LTRA)는 류코트리엔을 억제하는 약물이다. 류코트리엔 억제제의 예는 몬테루카스트, 질류톤, 프란루카스트 및 자피르루카스트를 포함한다.
용어 "FEV1"은 강제 호기의 처음 1초간 내쉰 공기의 부피를 지칭한다. 이는 기도 폐쇄의 척도이다. FEV1에서 20% 감소를 유도하는데 필요한 메타콜린의 유발 농도 (PC20)는 기도 과민반응의 척도이다. FEV1은 다른 유사한 방식, 예를 들어 FEV1로 기재될 수 있으며, 모든 이러한 유사한 변형이 동일한 의미를 갖는다는 것을 이해해야 한다.
용어 "FEV1에서의 상대 변화" = (치료 제12주에서의 FEV1 - 치료 시작 전의 FEV1) / FEV1이다.
용어 "PEF"는 완전 흡기 후 최대 강제 호기 동안 달성된 최대 유량을 지칭하는, 최고 호기 유량을 의미한다. 이는 기도 기능을 측정하는데 사용될 수 있는 파라미터이다.
본원에 사용된 "FVC"는 (FEV1에서와 같이 1초에 배출된 공기의 부피와 대조적으로) 완전 흡기 및 잔류 부피까지의 최대 호기 사이의 폐 공기 부피에서의 변화를 측정하는 표준 시험을 지칭하는 "강제 폐활량"을 지칭한다. 이는 기능적 폐 용량의 척도이다. 제한성 폐 질환, 예컨대 간질성 폐 질환, 예를 들어 IPF, 과민성 폐장염, 사르코이드증 및 전신 경화증을 갖는 환자에서, FVC는 전형적으로 폐 실질의 반흔형성으로 인해 감소된다.
용어 "경도 천식"은 일반적으로 1주 2회 미만의 증상 또는 악화, 1개월 2회 미만의 야간 증상을 경험하는 환자를 지칭하며, 악화 사이에는 무증상이다. 경도 간헐성 천식은 종종 필요한 경우에 하기로 치료된다: 흡입용 기관지확장제 (단기-작용 흡입용 베타2-효능제); 공지된 유발인자의 회피; 매년 인플루엔자 백신접종; 6 내지 10년마다의 폐렴구균 백신접종, 및 일부 경우에, 흡입용 베타2-효능제, 크로몰린, 또는 확인된 유발인자에 대한 노출 전의 네도크로밀. 환자가 단기-작용 베타2-효능제에 대해 증가하는 필요를 갖는 경우에 (예를 들어, 급성 악화에 대해 1일에 3 내지 4회 초과의 단기-작용 베타2-효능제를 사용하거나, 또는 증상에 대해 1개월 1개 초과의 캐니스터를 사용함), 환자는 요법에서의 증강을 필요로 할 수 있다.
용어 "중등도 천식"은 일반적으로 환자가 1주 2회 초과의 악화를 경험하고, 악화가 수면 및 활동에 영향을 미치고; 환자가 1개월 2회 초과의 천식으로 인한 야간 각성을 갖고; 환자가 매일 또는 격일의 단기-작용 흡입용 베타2-효능제를 필요로 하는 만성 천식 증상을 가지며; 환자의 치료전 기준선 PEF 또는 FEV1이 60 내지 80 퍼센트 예측치이고, PEF 가변성이 20 내지 30 퍼센트인 천식을 지칭한다.
용어 "중증 천식"은 일반적으로 환자가 거의 계속적인 증상, 빈번한 악화, 천식으로 인한 빈번한 야간 각성, 제한된 활동, 60 퍼센트 예측치 미만의 PEF 또는 FEV1 기준선, 및 20 내지 30 퍼센트의 PEF 가변성을 갖는 것인 천식을 지칭한다.
구급 의약의 예는 알부테롤, 벤토린 등을 포함한다.
"저항성"은 치료제로의 치료 후에 임상적으로 유의한 개선을 거의 또는 전혀 나타내지 않는 질환을 지칭한다. 예를 들어, 고용량 ICS로의 치료 (예를 들어, 천식이 비제어 상태로 남아있거나 또는 FEV1이 개선되지 않는 경우에 확립하기 위해 총 1일 코르티코스테로이드 용량을 4배로 하는 것 또는 적어도 연속 3일 이상 동안 FP (또는 등가물) 500 마이크로그램 이상의 총 1일 용량, 또는 2주 동안 전신성 코르티코스테로이드 시행)를 필요로 하는 천식은 종종 중증 불응성 천식으로 간주된다.
본원에 제공된 치료제는 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비강내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 흡입된다. 일부 실시양태에 따르면, 투약은 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료제는 시린지 (예를 들어, 사전충전되거나 그렇지 않음) 또는 자가주사기를 사용하여 투여된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 치료제의 적절한 투여량은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 치료제가 예방 또는 치료 목적을 위해 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 치료제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 의존할 수 있다. 치료제는 적합하게는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. 치료제 조성물은 우수한 의료 행위에 부합하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다.
"환자 반응" 또는 "반응" (및 그의 문법적 변형)은, 제한 없이, (1) 지연 및 완전한 저지를 비롯한 질환 진행의 어느 정도까지의 억제; (2) 질환 에피소드 및/또는 증상의 수에서의 감소; (3) 병변 크기에서의 감소; (4) 인접한 말초 기관 및/또는 조직으로의 질환 세포 침윤의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (5) 질환 확산의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (6) 질환 병변의 퇴행 또는 제거를 야기할 수 있지만 그래야 하는 것은 아닌, 자가면역 반응의 감소; (7) 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 완화; (8) 치료 후 무질환 표출 기간에서의 증가; 및/또는 (9) 치료 후 주어진 시점에서의 감소된 사망률을 비롯한, 환자에 대한 이익을 나타내는 임의의 종점을 사용하여 평가될 수 있다.
"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합계의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내인성 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 비롯하여, 관련 기술분야에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시양태가 본원에 기재된다.
"친화도 성숙" 항체는 항원에 대한 항체의 친화도에서의 개선을 생성하는 변경을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 하나 이상의 초가변 영역 (HVR)에서 하나 이상의 변경을 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항-IL-17 항체" 및 "IL-17에 결합하는 항체"는 항체가 IL-17을 표적화하는데 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및/또는 IL-17AF 이종이량체에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 비관련, 비-IL-17 단백질에 대한 항-IL-17 항체의 결합의 정도는, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA)에 의한 측정 시, IL-17에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, IL-17에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 상이한 종으로부터의 IL-17 사이에서 보존된 IL-17의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-IL17 항체는 IL-17A 동종이량체에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL17 항체는 IL-17A 동종이량체 및 IL-17AF 이종이량체에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17AF 이종이량체에 결합할 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17AF 이종이량체에 결합할 수 있는 항-IL-17 항체는 또한 IL-17A 및 F 항체 또는 IL-17A 및 IL-17F 교차-반응성 항체 또는 IL-17A/F 교차-반응성 항체로도 지칭될 수 있다. 특정의 이러한 실시양태에서, IL-17A 및 F 교차-반응성 항체는 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17AF 이종이량체 상의 동일 또는 유사 에피토프에 결합한다. 특정 실시양태에서, IL-17A 및 F 교차-반응성 항체는 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17AF 이종이량체 상의 동일 또는 유사 에피토프에 충분한 친화도로 결합한다. 특정의 유리한 실시양태에서, IL-17A 및 F 교차-반응성 항체 또는 이중특이적 항-IL-13/IL-17 항체는 IL-17A, IL-17F 및 IL-17AF에 높은 친화도로 결합한다. IL-17A 및 IL-17F의 구조가 보고되어 있다. 문헌 [Hymowitz et al., 2001, Embo J, 20(19):5332-41, Ely et al., 2009, Nature Immunology 10(12):1245-1252, 및 Liu et al., 2013, Nature Communications DOI: 10.1038/ ncomms2880]을 참조한다. IL-17A 및 IL-17F의 표면 구역에 제시된 아미노산 잔기를 포함하는 유사 또는 동일 에피토프는 구조로부터 추정될 수 있다.
용어 "항-IL-13 항체" 및 "IL-13에 결합하는 항체"는 항체가 IL-13을 표적화하는데 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 IL-13에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 비관련, 비-IL-13 단백질에 대한 항-IL-13 항체의 결합의 정도는, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA)에 의한 측정 시, IL-13에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, IL-13에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 상이한 종으로부터의 IL-13 사이에서 보존된 IL-13의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적 항체이다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 목적하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 항체 구조를 포괄한다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는, 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
경쟁 검정은 표적 항원에의 결합에 대해 참조 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 참조 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하는 상세한 예시적인 방법이 문헌 [Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에 제공되어 있다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 검정에서 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다 (때때로 교차-차단으로 지칭됨). 예시적인 경쟁 검정이 본원에 제공된다. 경쟁 분석 및 에피토프 맵핑에 적합한 검정은 비제한적으로 교차-차단 검정, 경쟁 ELISA 또는 비아코어, NMR 및 X선 결정학을 포함한다.
본원의 목적상 "수용자 인간 프레임워크"는 하기 정의되는 바와 같은, 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 실시양태에서, VL 수용자 인간 프레임워크는 VL 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공급원 또는 종으로부터 유래된 반면에, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
항체의 "부류"는 그의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5종의 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 나뉘어질 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 방사성 동위원소 (예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제 또는 약물 (예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아미신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 삽입제); 성장 억제제; 효소 및 그의 단편, 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소, 예컨대 소분자 독소 또는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소 (그의 단편 및/또는 변이체 포함); 및 본원에 개시되어 있는 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에서 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.
작용제, 예를 들어 제약 제제의 "유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 목적하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기에 유효한 양을 지칭한다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실-말단으로 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은, EU 인덱스로도 지칭되는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 본원에 정의된 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환가능하게 사용되고, 외인성 핵산이 도입된 세포 (이러한 세포의 자손 포함)를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 1차 형질전환된 세포 및 계대 횟수와 관계없이 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 사용하는 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 구체적으로 제외된다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택 시 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서와 같은 하위군이다. 일부 실시양태에서, VL의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 카파 I이다. 일부 실시양태에서, VH의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 III이다.
"인간화" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, CDR)은 비-인간 항체의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 그것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 거친 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열에서 초가변적 ("상보성 결정 영역" 또는 "CDR")이고/거나 구조적으로 한정된 루프 ("초가변 루프")를 형성하고/거나 항원-접촉 잔기 ("항원 접촉")를 함유하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR: VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 본원의 예시적인 HVR은:
(a) 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3) (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))에서 발생한 초가변 루프;
(b) 아미노산 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2), 및 95-102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))에서 발생한 CDR;
(c) 아미노산 잔기 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2), 및 93-101 (H3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996))에서 발생한 항원 접촉; 및
(d) HVR 아미노산 잔기 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3), 및 94-102 (H3)를 포함하는 (a), (b), 및/또는 (c)의 조합
을 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인 내의 다른 잔기 (예를 들어, FR 잔기)는 상기 문헌 [Kabat et al.]에 따라 본원에서 넘버링된다.
"면역접합체"는 세포독성제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분에서 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어, 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가 방법의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
"단리된" 핵산은 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 통상적으로 함유하는 세포 내에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외에 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항-IL-17 항체를 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 단편)를 코딩하는 1개 이상의 핵산 분자 (단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 이러한 핵산 분자(들) 및 숙주 세포 내 1개 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들) 포함)를 지칭한다.
"항-IL-13 항체를 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 단편)를 코딩하는 1개 이상의 핵산 분자 (단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 이러한 핵산 분자(들) 및 숙주 세포 내 1개 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들) 포함)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 상기 집단을 구성하는 개개의 항체는, 일반적으로 소량으로 존재하는 예를 들어 자연 발생 돌연변이를 함유하거나 모노클로날 항체 제제의 생산 동안 생성되는 가능한 변이체 항체를 제외하고, 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 동종인 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하는 다른 예시적인 방법이 본원에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 모노클로날 항체는 다중특이적 (예컨대 이중특이적) 항체이다.
"네이키드 항체"는 이종 모이어티 (예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 제약 제제에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 자연 발생 이뮤노글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디술피드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VH)에 이어서 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VL)에 이어서 불변 경쇄 (CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2가지 유형 중 1가지로 할당될 수 있다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보가 담긴, 이러한 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침을 지칭하는 것으로 사용된다. 용어 "패키지 삽입물"은 또한 의도된 용도, 시험 원리, 시약의 제조 및 취급, 시편 수집 및 제조, 검정 및 검정 절차의 보정, 성능 및 정밀도 데이터, 예컨대 검정의 감도 및 특이성에 대한 정보가 담긴, 진단 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하는 것으로 사용된다.
참조 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열을 정렬시키고 필요한 경우에 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후 임의의 보존적 치환은 서열 동일성 부분으로 간주하지 않으면서 참조 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 관련 기술분야 기술 내의 다양한 방식으로, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈라인(Megalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 통상의 기술자는 비교할 전장 서열에 대한 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적상, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.) 소유로서, 소스 코드는 미국 저작권청 (20559 워싱턴 디.씨.)에 사용자 문서로 제출되어 있고, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크. (캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)로부터 공개적으로 입수가능하거나, 소스 코드로부터 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 비롯한 UNIX 운영 시스템에서의 사용을 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 있으며 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 경우에, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 이를 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라는 어구로 기재될 수 있음)은 하기와 같이 계산되며:
X/Y 분율 x 100
여기서 X는 A 및 B의 프로그램 정렬 시 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우에는 B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성이 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임을 인식할 것이다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 직전 단락에 기재된 바와 같이 수득한다.
용어 "제약 제제"는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 하는 형태로 존재하며, 제제가 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 다른 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "IL-17"은 달리 나타내지 않는 한 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및/또는 IL-17AF 이종이량체를 지칭한다. 용어 IL-17A, IL-17AA, IL-17AA 동종이량체, 및 IL-17A 동종이량체는 달리 나타내지 않는 한 상호교환가능하게 사용된다. 용어 IL-17F, IL-17FF, IL-17FF 동종이량체, 및 IL-17F 동종이량체는 달리 나타내지 않는 한 상호교환가능하게 사용된다. 용어 IL-17AF, IL-17AF 이종이량체, 및 IL-17A/F 이종이량체는 달리 나타내지 않는 한 상호교환가능하게 사용된다. 용어 IL-17는 달리 나타내지 않는 한 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 IL-17A, IL-17F 및/또는 IL-17AF 이종이량체를 지칭한다. 상기 용어는 "전장" 비프로세싱된 IL-17 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 생성된 임의의 형태의 IL-17을 포괄한다. 상기 용어는 또한 IL-17의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. 예시적인 인간 IL-17A의 아미노산 서열이 서열식별번호: 7 및 8에 제시된다. 예시적인 인간 IL-17F의 아미노산 서열이 서열식별번호: 9 및 10에 제시된다. 특정 실시양태에서, IL-17 서열은 외인성, 즉 비-천연 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-17 단백질은 신호 펩티드를 갖지 않는 성숙 단백질이다.
본원에 사용된 용어 "IL-13"은 달리 나타내지 않는 한 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 IL-13을 지칭한다. 상기 용어는 "전장" 비프로세싱된 IL-13 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 생성된 임의의 형태의 IL-13을 포괄한다. 상기 용어는 또한 IL-13의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다. 예시적인 인간 IL-13의 아미노산 서열이 서열식별번호: 1 및 2, 및 스위스-프롯 수탁 번호 P35225.2에 제시된다. 예시적인 시노몰구스 원숭이 IL-13의 아미노산 서열이 서열식별번호: 4에 제시된다. 특정 실시양태에서, IL-13 서열은 외인성, 즉 비-천연 신호 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-13 단백질은 신호 펩티드를 갖지 않는 성숙 단백질이다.
본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키기 위한 시도로의 임상 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 예방을 위해 또는 그 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발을 방지하는 것, 증상의 완화, 증상의 감소, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이를 방지하는 것, 질환 진행의 속도를 감소시키는 것, 질환 상태의 개선 또는 경감, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 질환 발달을 지연시키는데 또는 질환 진행을 느리게 하는데 사용된다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다. (예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)] 참조.) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정한 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는, 연결된 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라, 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
조성물 및 방법
특정 실시양태에서, IL-17 및 IL-13에 결합하는 이중특이적 항체가 제공된다. 항체는, 예를 들어 호흡기 장애 (예컨대, 천식 및 IPF)를 비롯한 호산구성 장애, 호중구성 장애, IL-17 매개 장애, 및 IL-13 매개 장애의 진단 또는 치료를 위해 유용하다. 예를 들어, US 2012/0141492, US 8,715,669 또는 WO2009/136,286을 참조한다 (각각 그의 전문은 본원에 참조로 포함됨).
본원에 기재된 바와 같이, 고-호산구 천식 환자 집단에서, 고-호중구 및 저-호중구의 하위군이 확인될 수 있다. 항-IL13 길항제, 레브리키주맙은 ΔFEV1%에 의한 측정 시, 고-호산구 및 저-호중구 하위군 내에서 높은 치료 효능을 나타내는 반면에, 레브리키주맙은 고-호산구 및 고-호중구 하위군 내에서 덜 효과적이다. 도 15c 및 d를 참조한다. 따라서, 구분되는 대신, 개별 군인 고-호중구 천식은 호산구성 천식과 공존할 수 있고, 이는 중등도 내지 중증 천식을 치료하기 위한 본원에 기재된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 이점 및 그의 용도를 추가로 지지한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명은 천식, 특히 중등도 내지 중증 천식의 치료를 필요로 하는 개체에게 본원에 기재된 다중특이적 항체를 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 천식, 특히 중등도 내지 중증 천식을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 다중특이적 항체는 개체에서 레브리키주맙보다 개선된 효능을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 천식은 호산구성 천식, 고-Th2 천식, Th2-유발 천식 또는 고-IL-13 천식이다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 혈액 호산구 카운트 및/또는 상승된 혈액 호중구 카운트를 갖는다. 특정 실시양태에서, 개체는 적어도 150 또는 적어도 300개의 호산구/혈액 ul의 혈액 호산구 카운트를 갖는다. 특정 실시양태에서, 개체는 환자 집단의 적어도 중간 혈액 호중구 카운트인 혈액 호중구 카운트를 갖는다. 특정 실시양태에서, 개체는 적어도 3800개 호중구/혈액 ul를 갖는다.
예시적인 항-IL-17 항체
일부 실시양태에서, IL-17에 결합하는 단리된 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 임의로 IL-17AF 이종이량체에 결합하는, 단리된 IL-17 항체 또는 교차-반응성 항-IL-17A 및 F 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 단리된 IL-17 항체 또는 교차-반응성 항- IL-17A 및 F 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17AF 이종이량체에 결합한다.
항체 15E6 및 15E6FK
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) (i) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열식별번호: 41, 43, 80, 및 81로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
서열식별번호: 80을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 N 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 80을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 G, A, Q, H, D, K, S, 및 R로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 80을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 G, A, Q, D, 및 S로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 80을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 D, S 및 Q로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 81을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 S 또는 T 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 81을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G, P, N 및 V로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 81을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G 및 N으로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 114를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 D, S, 또는 Q로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 43의 NWS 모티브는 NPS로 바뀐다.
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 37에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 39에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 82에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 83에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 115에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 37의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 39의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 82의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 83의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 115의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 중쇄 가변 도메인은: (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 40, 41, 42, 43, 44, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 43과 적어도 94% 서열 동일성을 갖는 HVR-H2 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 글리코실화되지 않은 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 갖는 HVR-H2를 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 80, 81, 또는 114의 아미노산 서열을 갖는 HVR-H2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 38에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 38의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VL은 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 서열식별번호: 45, 46, 및 47로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 37 및 서열식별번호: 38의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 39 및 서열식별번호: 38의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 82 및 서열식별번호: 38의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 83 및 서열식별번호: 38의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 115 및 서열식별번호: 38의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
서열식별번호: 82를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 N 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 82를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 G, A, Q, H, D, K, 및 R로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 82를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 G, A, 및 Q로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 83을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 S 또는 T 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 83을 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G, P 또는 V일 수 있다. 서열식별번호: 115를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 D, S, 또는 Q일 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에서 따른 항-IL-17 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-17 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
항체 30D12 및 30D12BF
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) (i) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 서열식별번호: 54로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 48에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 50에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 48의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 50의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 51, 52, 53, 및 54로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 49에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 49의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VL은 (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 서열식별번호: 55, 56, 및 57로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 48 및 서열식별번호: 49의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 50 및 서열식별번호: 49의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 50의 VH 서열 및 서열식별번호: 49의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 50의 VH 서열 및 서열식별번호: 49의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에서 따른 항-IL-17 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-17 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
항체 39F12 및 39F12A
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) (i) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 서열식별번호: 63으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 58에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 58의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 61, 62, 및 63으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-17 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 59에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 60에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 59의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-17 항체는 서열식별번호: 60의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VL은 (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 서열식별번호: 64, 65 및 66으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-17 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 58 및 서열식별번호: 59의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 58 및 서열식별번호: 60의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 58의 VH 서열 및 서열식별번호: 60의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 58의 VH 서열 및 서열식별번호: 60의 VL 서열을 포함하는 항-IL-17 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에서 따른 항-IL-17 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-17 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
예시적인 항-IL-13 항체
일부 실시양태에서, IL-13에 결합하는 단리된 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다. 예를 들어, US 8,088,618 및 WO2005/062967을 참조한다 (각각 그의 전문은 본원에 참조로 포함됨).
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) (i) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 서열식별번호: 17로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 인간화된다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 13의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VH를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 14의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VL를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 11의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VH를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 12의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VL를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-13에 대한 항-IL13 항체의 결합은 IL-13Rα1/IL-4Rα에 의해 매개되는 IL-13의 세포내 신호전달을 억제한다. 일부 이러한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 IL-13Rα1에 대한 IL-13의 결합을 억제하지 않는다. 일부 이러한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 IL-4Rα에 대한 IL-13의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 레브리키주맙이다. 문헌 [Ultsch et al., 2013, J. Mol. Biol. 425:1330-1339]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 경쇄 (서열식별번호: 14)에서 M4L 치환 및 중쇄 (서열식별번호: 13)에서 Q1E 치환을 함유한다.
일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 13에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 13의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 11의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 14에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 14의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 12의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, VL은 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 15, 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 서열식별번호: 18, 19 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 VH 서열 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 문헌 [Ultsch, M. et al., Structural Basis of Signaling Blockade by Anti-IL-13 Antibody Lebrikizumab, J. Mol. Biol. (2013), dx.doi.org/10.1016/j.jmb.2013.01.024]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, IL-13 (서열식별번호: 1)의 아미노산 77 내지 89, 즉 YCAALESLINVSG (서열식별번호: 6) 내의 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, IL-13 (서열식별번호: 1)의 아미노산 82 내지 89, 즉 ESLINVSG (서열식별번호: 5) 내의 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
또 다른 예시적인 항-IL-13 항체는 11H4, 및 hu11H4v6을 비롯한 그의 인간화 버전이다. Mu11H4는 각각 서열식별번호: 26 및 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화 hu11H4v6은 각각 서열식별번호: 30 및 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 인간화 hu11H4v6은 각각 서열식별번호: 28 및 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 및 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3, 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) (i) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 서열식별번호: 33으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항체가 제공된다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 인간화된다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 30의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VH를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 서열식별번호: 29의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 서열을 포함하는 VL를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 30에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 30의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 29에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 29의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VL은 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, VH 서열은 서열식별번호: 31, 32, 및 33으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 서열식별번호: 34, 35 및 36으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 60%, 64%, 65%, 68%, 70%, 75%, 80%, 82%, 85%, 88%, 90%, 92%, 93%, 94%, 100% 서열 동일성을 갖는 HVR 서열을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다.
일부 실시양태에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 각각 서열식별번호: 30 및 서열식별번호: 29의 VH 및 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 30의 VH 서열 및 서열식별번호: 29의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 경쟁하는 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 문헌 [Ultsch, M. et al., Structural Basis of Signaling Blockade by Anti-IL-13 Antibody Lebrikizumab, J. Mol. Biol. (2013), dx.doi.org/10.1016/j.jmb.2013.01.053]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 30의 VH 서열 및 서열식별번호: 29의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
예시적인 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체
일부 실시양태에서, IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인은 다른 표적에는 특이적으로 결합하지 않는다. IL-17 및 IL-13에 결합하는 다중특이적 항체는 항-IL-17 항체에 대해 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 제1 세트의 가변 영역 (VH 및 VL; VH/VL 유닛으로도 지칭됨), 및 항-IL-13 항체에 대해 본원에 기재된 임의의 실시양태에 따른 제2 세트의 가변 영역 (VH 및 VL; VH/VL 유닛으로도 지칭됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 (i) 제1 VH/VL 유닛 및 중쇄 불변 영역의 적어도 일부 및/또는 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 제1 절반 항체, 및 (ii) 제2 VH/VL 유닛 및 중쇄 불변 영역의 적어도 일부 및/또는 경쇄 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 제2 절반 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 절반 항체는 IL-17에 결합하지만 IL-13에는 결합하지 않고, 제2 절반 항체는 IL-13에 결합하지만 IL-17에는 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 천연 항체 포맷을 유지하고, 이중 가변 도메인 (DVD) 항체가 아니다. 예를 들어, PCT 공개 번호 2013/102042를 참조한다. WO2013/102042는, 각각의 표적에 대한 결합력에 기여할 수 있는, IL-13에 대한 2가 결합제 및 IL-17A에 대한 2가 결합제인 IL-13 및 IL-17A에 대한 이중 특이적 항원 결합 단백질을 기재한다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 IL-13에 대한 1가 결합제 및 IL-17AA, AF 및 FF에 대한 1가 결합제이다. 본원에 논의된 바와 같이, 각각의 절반 항체가 IL-13 및 IL-17 (IL-17AA, AF, FF) 각각에 대해 1가 결합제를 포함하는 이중특이적 항체는 각각의 모 2가 단일특이적 항체와 비교하여 대등한 결합 활성 및 효력을 유지한다는 것이 추가로 발견되었다. 하기 추가로 기재되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 제1 VH/VL 유닛 및 제2 VH/VL 유닛을 포함하며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 IL-17에 결합하고, 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 43으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하며, 제2 VH/VL 유닛은 IL-13에 결합하고, 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하며, 여기서 IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 IL-13 및 IL-17AA, AF 및 FF에 결합하고 억제한다.
15E6 또는 15E6FK를 포함하는 다중특이적 항체
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 82 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 77 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 37, 39, 82, 83, 및 115로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 및 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 41, 43, 80, 81, 및 114로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 42 또는 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 47로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, 및 IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, 및 IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 홀 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 68 (IgG1) 또는 서열식별번호: 70 (IgG4)에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 노브 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 67 (IgG1) 또는 서열식별번호: 69 (IgG4)에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 71, 72, 84, 및 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 73의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체, 및 서열식별번호: 21 또는 23의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22 또는 24의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 71, 72, 84, 및 85로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 73의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체, 및 서열식별번호: 21의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다.
서열식별번호: 80, 82, 또는 84를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 N 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 80, 82, 또는 84를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G, Q, H, D, K, 및 R로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 80, 82, 또는 84를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G, 및 Q로부터 선택될 수 있다. 서열식별번호: 81, 83, 또는 85를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 S 또는 T 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 서열식별번호: 81, 83 또는 85를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 A, G, P 또는 V일 수 있다. 서열식별번호: 114 또는 115를 포함하는 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, X는 D, S, 또는 Q일 수 있다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
30D12 또는 30D12BF를 포함하는 다중특이적 항체
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 및 50으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 82 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 77 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 48 또는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 49의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 52 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, 및 IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 홀 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 68 (IgG1) 또는 서열식별번호: 70 (IgG4)에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 노브 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 67 (IgG1) 또는 서열식별번호: 69 (IgG4)에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 74 또는 75의 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 76의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체, 및 서열식별번호: 21 또는 23의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22 또는 24의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 74 또는 75의 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 76의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체, 및 서열식별번호: 21의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
39F12 또는 39F12A를 포함하는 다중특이적 항체
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 59 및 60으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-17에의 결합에 대해 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 82 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 77 내지 89로 이루어진 IL-13의 에피토프에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH (중쇄 가변 도메인)를 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL (경쇄 가변 도메인)을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 IL-13에의 결합에 대해 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VH 및 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고; 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 58의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VH 및 서열식별번호: 59 또는 서열식별번호: 60의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제1 VL을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VH 및 서열식별번호: 29의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 제2 VL을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 상기 서열에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 적어도 2, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하며, 여기서 항체는 (a) 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (d) 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 66으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제1 VH/VL 유닛; 및 (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 3개의 VH HVR 서열; 및 (a) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 제2 VH/VL 유닛을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, 및 IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 IL-17에 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 홀 돌연변이를 포함하는 제1 반량체, 및 IL-13에 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하고 중쇄 불변 영역에서 노브 돌연변이를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 홀 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 68 (IgG1) 또는 서열식별번호: 70 (IgG4)에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 노브 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 67 (IgG1) 또는 서열식별번호: 69 (IgG4)에 제시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 77의 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 78 또는 79의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체, 및 서열식별번호: 21 또는 23의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22 또는 24의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 서열식별번호: 77의 서열을 갖는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 78 또는 79의 서열을 갖는 제1 경쇄를 포함하는 제1 반량체 및 서열식별번호: 21의 서열을 갖는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22의 서열을 갖는 제2 경쇄를 포함하는 제2 반량체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/IL-17 다중특이적 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
1. 항체 친화도
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 항원에 대한 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
일부 실시양태에서, Kd는 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, RIA는 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된다. 예를 들어, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터(MICROTITER)® 멀티-웰 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중의 5 μg/ml 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, PBS 중의 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단한다. 비-흡착 플레이트 (눈크(Nunc) #269620)에서는 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만; 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 폴리소르베이트 20 (트윈-20®)으로 8회 세척한다. 플레이트가 건조된 경우에, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MICROSCINT)-20™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드) 상에서 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁적 결합 검정에 사용한다.
일부 실시양태에 따르면, Kd는 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 예를 들어, 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000 (비아코어, 인크.(BIAcore, Inc.), 뉴저지주 피스카타웨이)를 사용하는 검정은 ~10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.8을 사용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석시킨 후에 커플링된 단백질의 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주입한다. 항원의 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 미반응기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2-배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (트윈-20™) 계면활성제를 갖는 PBS (PBST) 내에 주입한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센소그램을 동시에 피팅시켜 회합률 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 koff/kon의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 온-레이트가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106 M- 1 s-1을 초과하는 경우에, 온-레이트는 분광계, 예컨대 정지-유동 설비 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠) 또는 교반 큐벳이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코™ 분광광도계 (써모스펙트로닉)에서 측정되는 바와 같은, 증가하는 농도의 항원의 존재 하에 PBS, pH 7.2 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역-통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하는 것에 의해 결정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의에 대해서는, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 교체된" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 면역원성이 감소되도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 내의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 개선시키기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; 문헌 [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (특이성 결정 영역 (SDR) 그라프팅 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) ("재표면화" 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) ("FR 셔플링" 기재); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링에 대한 "유도 선택" 접근법 기재)]에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, "최적-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
4. 인간 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하는 것에 의해 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술을 기재하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; 휴맙(HuMab)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 벨로시마우스(VelociMouse)® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시키는 것에 의해 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하는 것에 의해 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기술은 하기 기재된다.
5. 라이브러리-유래 항체
본원에 기재된 항체는 목적 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 목적하는 결합 특성을 보유하는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에 검토되어 있고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 비재배열 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도의 가변 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공개는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. 다중특이적 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 IL-17에 대한 것이고, 다른 것은 IL-13에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17AF 이종이량체에 대한 것이고, 다른 것은 IL-13에 대한 것이다. 이중특이적 항체는 세포독성제를 세포에 국재화시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하는 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168; 미국 공개 번호 2011/0287009 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기적 스티어링 효과를 조작하는 것 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교하는 것 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생성하기 위해 류신 지퍼 또는 코일드 코일을 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 및 WO2011/034605 참조); 단일 VH/VL 유닛 내의 CL 도메인과 VH 도메인 사이의 푸린 절단가능한 테더를 사용하는 것 (예를 들어, WO2013/119966 및 WO2013/055958 참조); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 이중특이적 항체를 제조하기 위한 이뮤노글로불린 도메인 교차를 사용하는 것 (예를 들어, WO2009/080251 참조); 및 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같이 삼중특이적 항체를 제조하는 것에 의해 제조될 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 비롯하여, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
본원의 항체 또는 단편은 또한 예를 들어 IL-17 뿐만 아니라, 또 다른 상이한 항원, 예컨대 IL-13에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어 US 2008/0069820 참조). DAF 이중특이적 항체 포맷은 이중특이적 항체에서 종종 직면하는 문제인 쇄 쌍형성오류의 문제를 제거하고, 천연 항체 포맷을 여전히 유지한다.
노브 인투 홀
다중특이적 항체를 생산하는 방법으로서 노브 인투 홀의 사용이 예를 들어 미국 특허 번호 5,731,168, WO2009/089004, US2009/0182127, US2011/0287009, 문헌 [Marvin and Zhu, Acta Pharmacol. Sin. (2005) 26(6):649-658, 및 Kontermann (2005) Acta Pharmacol. Sin., 26:1-9]에 기재되어 있다. 간단한 비제한적 논의가 하기 제공된다.
"돌출부"는, 제1 폴리펩티드의 계면으로부터 돌출되어 이종다량체를 안정화하도록 인접한 계면 (즉, 제2 폴리펩티드의 계면)에 있는 상보적 함몰부에 위치가능하고 그에 의해 예를 들어 동종다량체 형성에 비해 이종다량체 형성이 유리한, 적어도 1개의 아미노산 측쇄를 지칭한다. 돌출부는 원래 계면에 존재할 수 있거나, 또는 합성적으로 (예를 들어, 계면을 코딩하는 핵산을 변경하여) 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드의 계면을 코딩하는 핵산을 돌출부를 코딩하도록 변경한다. 이를 달성하기 위해, 제1 폴리펩티드의 계면에 있는 적어도 1개의 "원래" 아미노산 잔기를 코딩하는 핵산을, 원래 아미노산 잔기보다 큰 측쇄 부피를 갖는 적어도 1개의 "유입" 아미노산 잔기를 코딩하는 핵산으로 대체한다. 1개 초과의 원래 및 상응하는 유입 잔기가 존재할 수 있음이 인식될 것이다. 다양한 아미노 잔기의 측쇄 부피가 예를 들어 US2011/0287009의 표 1 또는 US 7,642,228의 표 1에 제시되어 있다.
일부 실시양태에서, 돌출부의 형성을 위한 유입 잔기는 아르기닌 (R), 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y) 및 트립토판 (W)으로부터 선택된 자연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 실시양태에서, 유입 잔기는 트립토판 또는 티로신이다. 일부 실시양태에서, 돌출부의 형성을 위한 원래 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린과 같이 작은 측쇄 부피를 갖는다. 예를 들어 US 7,642,228을 참조한다.
"함몰부"는 제2 폴리펩티드의 계면으로부터 함요되어 제1 폴리펩티드의 인접한 계면 상의 상응하는 돌출부를 수용하는 적어도 1개의 아미노산 측쇄를 지칭한다. 함몰부는 원래 계면에 존재할 수 있거나, 또는 합성적으로 (예를 들어, 계면을 코딩하는 핵산을 변경하여) 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드의 계면을 코딩하는 핵산을 함몰부를 코딩하도록 변경한다. 이를 달성하기 위해, 제2 폴리펩티드의 계면에 있는 적어도 1개의 "원래" 아미노산 잔기를 코딩하는 핵산을, 원래 아미노산 잔기보다 작은 측쇄 부피를 갖는 적어도 1개의 "유입" 아미노산 잔기를 코딩하는 DNA로 대체한다. 1개 초과의 원래 및 상응하는 유입 잔기가 존재할 수 있음이 인식될 것이다. 일부 실시양태에서, 함몰부의 형성을 위한 유입 잔기는 알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T) 및 발린 (V)으로부터 선택된 자연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 실시양태에서, 유입 잔기는 세린, 알라닌 또는 트레오닌이다. 일부 실시양태에서, 함몰부의 형성을 위한 원래 잔기는 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같이 큰 측쇄 부피를 갖는다.
돌출부는 함몰부에 "위치가능"하며, 이는 각각 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드의 계면 상의 돌출부 및 함몰부의 공간적 위치 및 돌출부 및 함몰부의 크기가, 돌출부가 계면에서 제1 및 제2 폴리펩티드의 정상적 회합을 유의하게 방해하지 않으면서 함몰부에 위치될 수 있도록 한다는 것을 의미한다. 돌출부, 예컨대 Tyr, Phe 및 Trp는 전형적으로 계면의 축으로부터 수직으로 연장되지 않고 바람직한 입체형태를 갖기 때문에, 돌출부의 상응하는 함몰부와의 정렬은, 일부 경우에, X선 결정학 또는 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 수득되는 것과 같은 3차원 구조에 기초하여 돌출부/함몰부 쌍을 모델링하는 것에 의존할 수 있다. 이는 관련 기술분야에서 널리 허용되는 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역 내의 노브 돌연변이는 T366W이다. 일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역 내의 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V로부터 선택된 1개 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 불변 영역 내의 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V를 포함한다. 서열식별번호: 67은 노브 돌연변이를 갖는 예시적인 IgG1 불변 영역을 보여주고, 서열식별번호: 68은 홀 돌연변이를 갖는 예시적인 IgG1 불변 영역을 보여준다.
일부 실시양태에서, IgG4 불변 영역 내의 노브 돌연변이는 T366W이다. 일부 실시양태에서, IgG4 불변 영역 내의 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V로부터 선택된 1개 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG4 불변 영역의 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V를 포함한다. 서열식별번호: 69는 노브 돌연변이를 갖는 예시적인 IgG4 불변 영역을 보여주고, 서열식별번호: 70은 홀 돌연변이를 갖는 예시적인 IgG4 불변 영역을 보여준다. 예를 들어, US 7,642,228을 참조한다.
7. 항체 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하는 것에 의해 또는 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있고, 단 최종 구축물은 목적하는 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유한다.
치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 1에서 "보존적 치환"의 표제 하에 제시된다. 보다 실질적인 변화는 표 1에서 "예시적인 치환"의 표제 하에 제공되고, 아미노산 측쇄 부류에 관하여 하기에 추가로 기재된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입될 수 있고, 산물은 목적 활성, 예를 들어 보유/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
<표 1>
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아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 유형은 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성 (예를 들어, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)에서 변형 (예를 들어, 개선)을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 보유할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 편리하게 생성될 수 있는 친화도 성숙 항체이다. 간략하게, 1개 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고, 특정한 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경 (예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체 친화도를 개선시키기 위해 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩된 잔기 (예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 SDR (a-CDR)에서 이루어질 수 있으며, 생성된 변이체 VH 또는 VL는 결합 친화도에 대해 시험된다. 2차 라이브러리로부터 구축 및 재선택하는 것에 의한 친화도 성숙은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)]에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지시된 돌연변이유발)에 의한 성숙을 위해 선택된 가변 유전자로 도입된다. 이어서, 2차 라이브러리가 생성된다. 이어서, 라이브러리를 스크리닝하여 목적 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 수반하며, 여기서 여러 HVR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 수반되는 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 변경이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 1개 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부일 수 있다. 특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 이뮤노글로불린 분자의 1개 이상의 번역후 변형을 변경시키거나 제거하기 위해, 또는 항체 생산 수율을 개선시키기 위해 도입될 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같이, 돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기의 군 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu)이 확인되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체되어 항체와 항원의 상호작용에 영향을 미치는지 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감수성이 입증된 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조가 사용된다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 치환을 위한 후보로 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 목적하는 특성을 함유하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드의 융합을 포함한다.
글리코실화 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 1개 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우에, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에의 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이루어질 수 있다.
일부 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의한 측정 시, Asn297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조물)의 합계에 관하여 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균 양을 계산하는 것에 의해 결정될 수 있다. Asn297은 Fc 영역 내의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체에서의 부차적 서열 변이로 인해 위치 297의 약 ± 3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294 및 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공개 문헌의 예는 US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]을 포함한다. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11에서), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.
이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체가 추가로 제공되며, 예를 들어 여기서 항체의 Fc 영역에 부착된 이중안테나 올리고사카라이드는 GlcNAc에 의해 이등분된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예가, 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
Fc 영역 변이체
특정 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어, 그에 의해 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 1개 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 불변 영역, 예컨대 중쇄 불변 영역은 다중특이적 항체의 형성을 용이하게 하기 위해 노브 돌연변이 및/또는 홀 돌연변이를 포함한다. 비제한적인 예시적 노브 돌연변이 및 홀 돌연변이, 및 노브-인투-홀 기술은 일반적으로, 예를 들어 미국 특허 번호 5,731,168, WO2009/089004, US2009/0182127, US2011/0287009, 문헌 [Marvin and Zhu, Acta Pharmacol. Sin. (2005) 26(6):649-658, 및 Kontermann (2005) Acta Pharmacol. Sin., 26:1-9]에 기재되어 있다. 특정의 비제한적인 예시적 노브 돌연변이 및 홀 돌연변이가 본원에서 논의된다.
특정 실시양태에서, 생체내에서 항체의 반감기가 중요하지만 특정의 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 적용에 대해 바람직한 후보가 되게 하는, 모든 이펙터 기능은 아니지만 일부 이펙터 기능을 보유하는 항체 변이체가 제공된다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결여되어 있지만 (따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합 능력은 보유함을 확실하게 하기 위해 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)] 참조) 및 문헌 [Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)]; 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 사용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 사이토톡스(CytoTox) 96® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 기재된 바와 같이 동물 모델에서 평가될 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 클리어런스/반감기 결정은 또한 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 1개 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는, 잔기 265 (D) 및 297 (N)이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 비롯하여, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 개선되거나 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.)
특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 1개 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 생성하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
증가된 반감기, 및 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 1개 이상의 치환을 그 내부에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 1개 이상에서 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826). Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.
일부 실시양태에서, 항체 불변 영역은 본원에 논의된 돌연변이 중 1개 초과를 포함한다 (예를 들어, 노브 및/또는 홀 돌연변이 및/또는 안정성을 증가시키는 돌연변이 및/또는 ADCC를 감소시키는 돌연변이 등).
시스테인 조작된 항체 변이체
특정 실시양태에서, 항체의 1개 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 생성된다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 그에 의해 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 위치하게 되고, 이것을 사용하여 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 본원에 추가로 기재되는 바와 같은 면역접합체를 생성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 어느 1개 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
항체 유도체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 관련 기술분야에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 1개 초과의 중합체가 부착되는 경우에 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선시킬 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 요법에서 규정된 조건 하에 사용될 것인지 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기초로 하여 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체, 및 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장의 것일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IL-17 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IL-13 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 1개 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 하나의 이러한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질감염된다).
일부 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일부 실시양태에서, 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계 및 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 임의로 회수하는 단계를 포함하는, 상기에 제공된 바와 같은 항체를 제조하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 다중특이적 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계 및 임의로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 다중특이적 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 다중특이적 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체의 제1 VH/VL 유닛 (존재하는 경우에 불변 영역 포함, 때때로 "반량체" 또는 "절반-항체"로 지칭됨)을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 숙주 세포를 제1 VH/VL 유닛의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계, 및 임의로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 제1 VH/VL 유닛을 회수하는 단계, 및 다중특이적 항체의 제2 VH/VL 유닛 (존재하는 경우에 불변 영역 포함)을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 제2 VH/VL 유닛의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계, 및 임의로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 제2 VH/VL 유닛을 회수하는 단계를 포함하는, 다중특이적 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 단리된 제1 VH/VL 유닛 및 단리된 제2 VH/VL 유닛으로부터 다중특이적 항체를 어셈블리시키는 단계를 추가로 포함한다. 이러한 어셈블리는, 일부 실시양태에서, 2개의 VH/VL 유닛 (또는 반량체 또는 절반 항체) 사이에 분자내 디술피드를 형성시키기 위한 산화환원 단계를 포함할 수 있다. 다중특이적 항체를 생산하는 비제한적인 예시적 방법이, 예를 들어 US 2011/0287009, US 2007/0196363, US2007/0178552, 미국 특허 번호 5,731,168, WO 96/027011, WO 98/050431, WO 2013/055958, WO 2011/133886, 및 문헌 [Zhu et al., 1997, Protein Science 6:781-788]에 기재되어 있다. 비제한적인 예시적 방법은 또한 하기 실시예에 기재되어 있다.
항-IL-17 항체, 항-IL-13 항체 또는 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 추가의 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 1개 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 사용하여 용이하게 단리되고 서열분석될 수 있다 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의함).
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우에, 항체를 박테리아에서 생산할 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조한다. (또한, 이. 콜라이에서 항체 단편의 발현을 기재하는 문헌 [Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참조.) 발현 후에, 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 항체를 단리할 수 있고, 추가로 정제할 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분 또는 완전 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체가 생산되게 하는 진균 및 효모 균주를 비롯한 사상 진균 또는 효모가 항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 숙주 발현에 적합하다. 문헌 [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 바큘로바이러스 균주가 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 형질감염시키는데 사용될 수 있는 것으로 확인되어 있다.
식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플랜티바디스(PLANTIBODIES)™ 기술을 기재함)를 참조한다.
척추동물 세포를 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장시키는데 적합화된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 비롯한 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
예시적인 검정
결합 검정 및 다른 검정
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 등과 같은 공지된 방법에 의해 그의 항원 결합 활성이 시험된다.
일부 실시양태에서, IL-17에의 결합에 대해 본원에 기재된 IL-17 항체와 경쟁하는 항체를 확인하기 위해 경쟁 검정이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-17 및/또는 IL-13에의 결합에 대해 본원에 기재된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와 경쟁하는 항체를 확인하기 위해 경쟁 검정이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-17은 IL-17A이다. 일부 실시양태에서, IL-17은 IL-17AF 이종이량체이다. 일부 실시양태에서, IL-17은 IL-17F이다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 IL-17에의 결합의 경우에 서열식별번호: 39를 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 38을 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 IL-13에의 결합의 경우에 서열식별번호: 13을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 14를 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 IL-13에의 결합의 경우에 서열식별번호: 30을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 29를 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 IL-17에의 결합의 경우에 서열식별번호: 39를 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 38을 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합하고, IL-13에의 결합의 경우에 서열식별번호: 13을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 14를 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합하는 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 에피토프의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 초과 또는 모든 아미노산 잔기에 결합한다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 이중특이적 항체는 서열식별번호: 39를 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 38을 포함하는 VL 아미노산 서열 및 서열식별번호: 13을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 14를 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 이중특이적 항체의 IL-13 및/또는 IL-17에 대한 결합을 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%만큼 감소시킨다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하는 상세한 예시적인 방법이 문헌 [Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에 제공되어 있다.
예시적인 경쟁 검정에서, 고정된 IL-17은 IL-17에 결합하는 제1 표지된 항체 (예를 들어, 서열식별번호: 39를 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 38을 포함하는 VL 아미노산 서열 (또는 서열식별번호: 40, 43, 44, 45, 46, 47을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 CDR)을 포함하는 항체) 및 IL-17에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험될 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 IL-17은 제1 표지된 항체를 포함하나 제2 비표지된 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. IL-17에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션한 후에, 잉여량의 미결합 항체를 제거하고, 고정된 IL-17과 회합된 표지의 양을 측정한다. 고정된 IL-17과 회합된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된 경우에, 이는 제2 항체가 IL-17에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌 [Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)]을 참조한다.
추가의 예시적인 경쟁 검정에서, 고정된 IL-13은 IL-13에 결합하는 제1 표지된 항체 (예를 들어, 서열식별번호: 13을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 14를 포함하는 VL 아미노산 서열 (또는 서열식별번호: 15, 16, 17, 18, 19, 20을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 CDR)을 포함하는 항체, 또는 서열식별번호: 30을 포함하는 VH 아미노산 서열 및 서열식별번호: 29를 포함하는 VL 아미노산 서열 (또는 서열식별번호: 31, 32, 33, 34, 45, 36을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 CDR)을 포함하는 항체) 및 IL-13에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험될 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 IL-13은 제1 표지된 항체를 포함하나 제2 비표지된 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. IL-13에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션한 후에, 잉여량의 미결합 항체를 제거하고, 고정된 IL-13과 회합된 표지의 양을 측정한다. 고정된 IL-13과 회합된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된 경우에, 이는 제2 항체가 IL-13에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다.
활성 검정
일부 실시양태에서, 생물학적 활성을 갖는 항-IL-17 항체 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 확인하기 위한 검정이 제공된다. 생물학적 활성은, 예를 들어 IL17Ra 및/또는 Rc에의 IL-17AA, IL-17AF, 및/또는 IL-17FF 결합의 억제; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 세포 증식의 억제; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 G-CSF 발현의 억제; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 CXCL1, CXCL2, 또는 CXCL3 발현의 억제; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 IL-6 또는 IL-8 발현의 억제; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 NF-κB 발현의 억제, 천식을 억제하는데 있어서의 활성; 및 특발성 폐 섬유증 (IPF)을 억제하는데 있어서의 활성; IL-17AA-, IL-17AF-, 및/또는 IL-17FF-유도된 호중구 동원의 억제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 활성은, 예를 들어 IL-13 수용체 (예를 들어, IL-4Rα 및 IL-13Rα1을 포함하는 이종이량체 수용체)에의 IL-13 결합의 억제, IL-13-유도된 STAT6 인산화의 억제, IL-13-유도된 CCL26 발현의 억제, IL-13-유도된 세포 증식의 억제, IgE로의 B 세포의 IL-13-유도된 부류 교체의 억제, IL-13-유도된 점액 생산의 억제, 천식을 억제하는데 있어서의 활성, IPF를 억제하는데 있어서의 활성, 및 IL-13-유도된 호산구 동원의 억제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 활성은, 예를 들어 IL-13 수용체 (예를 들어, IL-4Rα 및 IL-13Rα1을 포함하는 이종이량체 수용체)에의 IL-13 결합의 억제가 없는 각각의 경우에서의, IL-13-유도된 STAT6 인산화의 억제, IL-13-유도된 세포 증식의 억제, IgE로의 B 세포의 IL-13-유도된 부류 교체의 억제, IL-13-유도된 점액 생산의 억제, 천식에서의 활성, 및 IPF에서의 활성을 포함한다. 생체내 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 또한 제공된다. 이러한 생물학적 활성을 시험하는 비제한적인 예시적 검정이 본원에 기재되어 있고/거나 관련 기술분야에 공지되어 있다.
면역접합체
일부 실시양태에서, 1종 이상의 세포독성제에 접합된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 포함하는 면역접합체가 제공된다. 비제한적인 예시적인 이러한 세포독성제는 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 그의 단편) 및 방사성 동위원소를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 항체가 메이탄시노이드 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1 참조); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF (MMAE 및 MMAF) (예를 들어, 미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 그의 유도체 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 및 5,877,296; 문헌 [Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)] 참조); 안트라시클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (예를 들어, 문헌 [Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)]; 및 미국 특허 번호 6,630,579 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065를 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 약물에 접합된, 항체-약물 접합체 (ADC)이다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함하나 이에 제한되지는 않는 효소적 활성 독소 또는 그의 단편에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 방사성접합체를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성접합체의 생산을 위해 이용가능하다. 예는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성접합체가 검출을 위해 사용되는 경우에, 신티그래피 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 tc99m 또는 I123, 또는 핵 자기 공명 (NMR) 영상화 (자기 공명 영상화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예컨대 마찬가지로 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질 커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 방사성뉴클레오티드를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트화제이다. 예를 들어, WO94/11026을 참조한다. 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 디술피드-함유 링커 (Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.
본원의 면역접합체 또는 ADC는 상업적으로 입수가능한 (예를 들어, 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc.), 미국 일리노이주 록포드로부터) BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 술포-EMCS, 술포-GMBS, 술포-KMUS, 술포-MBS, 술포-SIAB, 술포-SMCC, 및 술포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 가교 시약을 사용하여 제조된 이러한 접합체를 명백하게 고려하나, 이에 제한되지는 않는다.
진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 임의의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 생물학적 샘플에서 IL-17 및/또는 IL-13의 존재를 검출하는데 유용하다. 본원에 사용된 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직, 예컨대 혈청, 혈장, 비강 스왑, 기관지폐포 세척액 및 객담을 포함한다.
일부 실시양태에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 추가 측면에서, 생물학적 샘플에서 IL-17 및/또는 IL-13의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 방법은 생물학적 샘플을 본원에 기재된 바와 같은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 IL-17 및/또는 IL-13에 결합하는 것을 허용하는 조건 하에 접촉시키는 단계, 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와 IL-17 및/또는 IL-13 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체, 또는 임의의 다른 TH2 경로 억제제를 사용하는 요법에 적격인 대상체를 선택하기 위해 사용되고, 예를 들어 여기서 IL-17 및/또는 IL-13은 환자의 선택을 위한 바이오마커이다.
항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 사용하여 진단될 수 있는 예시적인 장애가 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 표지된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티 (예컨대, 형광, 발색, 전자-밀집, 화학발광 및 방사성 표지) 뿐만 아니라 간접적으로, 예를 들어 효소적 반응 또는 분자 상호작용을 통해 검출되는 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 표지는 방사성동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단, 예컨대 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인 및 그의 유도체, 로다민 및 그의 유도체, 단실, 움벨리페론, 루시페라제, 예를 들어 반딧불이 루시페라제 및 박테리아 루시페라제 (미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들어 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제, 염료 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 사용하는 효소, 예컨대 HRP, 락토퍼옥시다제, 또는 마이크로퍼옥시다제와 커플링된 헤테로시클릭 옥시다제, 예컨대 우리카제 및 크산틴 옥시다제, 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파지 표지, 안정한 자유 라디칼 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
제약 제제
본원에 기재된 바와 같은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 제약 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체를 1종 이상의 임의적인 제약상 허용되는 담체와 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 혼합하는 것에 의해 제조된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 간질성 약물 분산액 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 추가로 포함한다. rHuPH20을 비롯한, 특정의 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, sHASEGP는 1개 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
예시적인 동결건조 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원의 제제는 또한 치료되는 특정한 적응증에의 필요에 따라 1종 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 보완적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 예를 들어, 제어제 및/또는 TH2 경로 억제제를 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와 함께 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분은 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 내에, 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균성이다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
치료 방법 및 조성물
본원에 제공된 임의의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 치료 방법에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 호산구성 및 호중구성 염증 또는 장애의 치료를 필요로 하는 환자에서 호산구성 및 호중구성 염증 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 호산구성 염증은 알레르기성 및 비-알레르기성 둘 다의 다양한 질병과 연관된다 (Gonlugur (2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45). 염증은 손상에 대한 살아있는 조직의 회복적 반응이다. 염증 반응의 특징은 조직 자체에서 생산된 특정 화학물질로 인한 손상된 조직에서의 백혈구의 축적이다. 호산구 백혈구는 매우 다양한 상태, 예컨대 알레르기성 장애, 기생충 감염 및 신생물성 질환에서 축적된다 (Kudlacz et al., (2002) Inflammation 26: 111-119). 면역계의 성분인 호산구 백혈구는 점막 표면의 방어적 성분이다. 이는 항원 뿐만 아니라 기생충, 화학물질 및 외상에도 반응한다. 조직 호산구 및 조직 호중구 카운트가 혈청 페리오스틴 수준과 양의 상관관계가 있는 것으로 밝혀진 바 있다. 예를 들어, US 2012/0156194를 참조한다. 호산구성 염증을 갖는 환자는, 일부 실시양태에서, 예를 들어 US 2012/0156194에 기재된 바와 같이 총 혈청 페리오스틴 수준을 측정하는 것에 의해 확인될 수 있다.
본원에 제시된 바와 같이, IL-17 및 호중구성 염증은 중증 비제어된 천식에서 IL-13 및 호산구성 염증과 양의 상관관계가 있다. 폐 IL-17은 또한 흡입용 코르티코스테로이드를 복용 중인 개체에서의 증등도-내지-중증 천식의 조직 호중구 수준과 연관된다. 추가로, IL-17 수준은 혈청 페리오스틴 수준과 상관된다.
항-IL-17RA 항체에 의한 IL-17A 및 IL-17F 경로의 차단이 천식에 걸린 대상체에서 치료 효과를 생성하지 못한다는 것이 부세(Busse) 등에 의해 이전에 보고되었다. 문헌 [Busse et al., 2013, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 188:1294]. 저자는 고-기관지확장제 가역성 하위군에서만 명목상 유의성을 갖는 ACQ 변화가 관찰되었고, 고-가역성 하위군 분석의 결과의 유의성은 불확실하게 남아있음을 지적하였다.
대조적으로, 본 발명은 천식 또는 호흡기 장애의 치료를 필요로 하는 개체에게 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 투여하는 것을 포함하는 천식 또는 호흡기 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 개체는 참조 또는 대조 수준과 비교하여 상승된 호산구 카운트 또는 상승된 수준의 혈청 페리오스틴을 갖는 것으로 결정된 바 있다. 페리오스틴은 Th2 바이오마커이고, 상승된 수준의 페리오스틴을 갖는 환자는 IL-13-매개 질환에 걸릴 가능성이 있고, 고-IL-13 환자 집단일 가능성이 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 고-페리오스틴 환자 집단에서 항-IL-13 치료 항체 레브리키주맙의 치료 효과는 이질적이다. 고-호산구 (고-페리오스틴) 환자 집단은 고-호중구 및 저-호중구 하위군으로 추가로 세분될 수 있고, 그러한 레브리키주맙은 고-호산구 및 저-호중구 하위군에 대해 더 효과적이고, 고-호산구 및 고-호중구 하위군에 대해서는 덜 효과적이다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명은 개체에게 유효량의 본원에 기재된 항-IL13/IL-17 이중특이적 항체를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 천식 또는 호흡기 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 천식은 중등도 내지 중증 천식이다. 일부 실시양태에서, 개체는 높은 혈청 페리오스틴을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 혈청 페리오스틴을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 추가로 임의로 CXCL1, IL8, CXCL2, CXCL3, 및 CSF3 중 적어도 1종의 상승된 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 혈청 페리오스틴 및 상승된 수준의 CXCL1을 갖는다.
일부 실시양태에서, 개체에서 호산구성 장애, 호중구성 장애, IL-13 매개 장애, IL-17 매개 장애, 및/또는 호흡기 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 개체에게 유효량의 본원에 기재된 항체를 투여하는 것을 포함한다.
일부 이러한 실시양태에서, 방법은 추가로 개체에게 TH2 경로 억제제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, TH2 경로 억제제는 ITK, BTK , IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33, IgE, IL-9 수용체, IL-5 수용체, IL-4 수용체 알파, IL-13수용체알파1 (IL-13Rα1), IL-13수용체알파2 (IL-13Rα2), OX40, TSLP-R, IL-7R알파, IL-17RB, ST2, CCR3, CCR4, CRTH2, Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23, Flap, Syk 키나제; CCR4, TLR9, CCR3, IL5, IL3, 및 GM-CSF로부터 선택된 적어도 1종의 표적을 억제한다. 일부 실시양태에서, 중등도 내지 중증 천식을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 특발성 폐 섬유증을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 대조 또는 참조 수준과 비교하여 높거나 상승된 혈청 페리오스틴을 갖는 개체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 고-페리오스틴 천식을 치료하는 방법이 제공된다. 혈청 페리오스틴 수준을 결정하는 방법은, 예를 들어 US2012/0156194에 제공되어 있다.
일부 실시양태에서, 개체에서 천식 또는 호흡기 장애를 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 천식 또는 호흡기 장애는 코르티코스테로이드로 비제어된다. 비제한적인 예시적 코르티코스테로이드는 흡입용 코르티코스테로이드, 예컨대 베클로메타손 디프로피오네이트 (예를 들어, 큐바르®), 부데소니드 (예를 들어, 풀미코르트®), 부데소니드/포르모테롤 푸마레이트 데히드레이트 (예를 들어, 심비코르트®), 플루니솔리드 (예를 들어, 에어로비드®), 플루티카손 프로피오네이트 (예를 들어, 플로벤트®, 플로나제®), 플루티카손 프로피오네이트 및 살메테롤 (예를 들어, 애드베어®) 및 트리암시놀론 아세토니드 (예를 들어, 아즈마코르트®)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자는 또한 제2 제어제로 치료된다. 제2 제어제는, 일부 실시양태에서, 장기-작용 기관지 확장제 (LABD)일 수 있다. 비제한적인 예시적 장기-작용 기관지 확장제는 장기-작용 베타-2 효능제 (LABA), 류코트리엔 수용체 길항제 (LTRA), 장기-작용 무스카린성 길항제 (LAMA), 테오필린 및 경구 코르티코스테로이드 (OCS)를 포함한다. 비제한적인 예시적 LABD는 부데소니드/포르모테롤 푸마레이트 데히드레이트 (예를 들어, 심비코르트®), 플루티카손 프로피오네이트 및 살메테롤 (예를 들어, 애드베어®), 아르포르모테롤 타르트레이트 (예를 들어, 브로바나®), 포르모테롤 푸마레이트 (예를 들어, 포라딜®, 페르포르미스트®) 및 살메테롤 크시나포에이트 (예를 들어, 세레벤트®)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 추가로 환자에게 코르티코스테로이드를 투여하는 것을 포함한다.
특정 실시양태에서, 의약으로서 사용하기 위한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 천식, IPF, 호흡기 장애, 호산구성 장애, 호중구성 장애, IL-13 매개 장애, 또는 IL-17 매개 장애를 치료하는데 사용하기 위한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 치료 방법에 사용하기 위한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 개체에게 유효량의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 투여하는 것을 포함하는 천식, 호흡기 장애, 호산구성 장애, 호중구성 장애, IL-13 매개 장애, 또는 IL-17 매개 장애에 걸린 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 제공된다. 하나의 이러한 실시양태에서, 상기 방법은 개체에게 유효량의, 예를 들어 하기 기재된 바와 같은 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
임의의 상기 실시양태에 따른 "개체" 또는 "환자"는 바람직하게는 인간이다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 환자는 천식 또는 호흡기 장애에 대한 치료를 필요로 하거나, 또는 천식 또는 호흡기 장애가 발생할 위험이 높다. 특정 실시양태에서, 천식 환자는 높은 페리오스틴 발현 수준을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 천식 환자는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 상승된 수준의 페리오스틴을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 환자는 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있다.
특정 실시양태에서, 호산구성 염증 또는 장애를 앓고 있는 환자는, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 2013년 10월 23일에 출원된 61/894831 및 2014년 10월 22일에 출원된 "Methods of Diagnosing and Treating Eosinophilic Disorders" 표제 하의 PCT/US14/61759에 기재된 바와 같은 호산구성 서명 유전자 중 1종 이상의 상승된 수준을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, 환자는 대조 환자와 비교하여 상승된 페리오스틴 수준 및/또는 CSF1, MEIS2, LGALS12, IDO1, THBS4, OLIG2, ALOX15, SIGLEC8, CCL23, PYROXD2, HSD3B7, SORD, ASB2, CACNG6, GPR44, MGAT3, SLC47A1, SMPD3, CCR3, CLC, CYP4F12, 및 ABTB2로부터 선택된 1종 이상의 상승된 수준을 나타내는 호산구성 염증 양성 (EIP) 환자로서 확인된다. 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 US 2012/0156194를 참조한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 환자는 호중구성 서명 유전자, 예컨대 CXCR1, CXCR2, 호중구 엘라스타제, 또는 CEACAM6 중 1종 이상의 상승된 수준을 나타낼 수 있다.
그 중 Th2-유발/호산구성 천식 하위표현형의 비침습적 바이오마커는 혈청 페리오스틴, 분획 호기 산화질소 (FeNO), 및 말초 혈액 호산구 카운트이다. 문헌 [Arron et al. (2013) Adv Pharmacol 66: 1-49]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 호산구성 천식을 앓고 있는 환자는 대조 또는 참조 수준과 비교하여 총 혈청 또는 혈장 페리오스틴의 높은 수준 또는 상승된 수준을 나타낸다. 특정 실시양태에서, EIP 환자는 혈청 또는 혈장 페리오스틴 수준이 환자 집단의 중간 또는 평균 혈청 또는 혈장 페리오스틴 수준 이상인 (또한 높은 페리오스틴으로 지칭될 수 있음), 혈청 또는 혈장 페리오스틴 수준에 대해 시험된 환자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 ELISA 또는 샌드위치 면역검정을 사용하여 혈청 또는 혈장 페리오스틴 수준에 대해 시험된 환자는 20 ng/ml 이상의 총 페리오스틴 수준을 가질 것이다 (호산구성 양성). 특정 실시양태에서, 환자는 50 ng/ml 이상의 총 페리오스틴 수준을 가질 것이다. 특정 실시양태에 따르면, EIP인 환자의 총 페리오스틴 수준은 혈청 또는 혈장 중 21 ng/ml 이상, 22 ng/ml 이상, 23 ng/ml 이상, 24 ng/ml 이상, 25 ng/ml 이상, 26 ng/ml 이상, 27 ng/ml 이상, 28 ng/ml 이상, 29 ng/ml 이상, 30 ng/ml 이상, 31 ng/ml 이상, 32 ng/ml 이상, 33 ng/ml 이상, 34 ng/ml 이상, 35 ng/ml 이상, 36 ng/ml 이상, 37 ng/ml 이상, 38 ng/ml 이상, 39 ng/ml 이상, 40 ng/ml 이상, 41 ng/ml 이상, 42 ng/ml 이상, 43 ng/ml 이상, 44 ng/ml 이상, 45 ng/ml 이상, 46 ng/ml 이상, 47 ng/ml 이상, 48 ng/ml 이상, 49 ng/ml 이상, 50 ng/ml 이상, 51 ng/ml 이상, 52 ng/ml 이상, 53 ng/ml 이상, 54 ng/ml 이상, 55 ng/ml 이상, 56 ng/ml 이상, 57 ng/ml 이상, 58 ng/ml 이상, 59 ng/ml 이상, 60 ng/ml 이상, 61 ng/ml 이상, 62 ng/ml 이상, 63 ng/ml 이상, 64 ng/ml 이상, 65 ng/ml 이상, 66 ng/ml 이상, 67 ng/ml 이상, 68 ng/ml 이상, 69 ng/ml 이상 및 70 ng/ml 이상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. EIP 상태는 환자의 상태를 나타내는 것으로 이해되어야 하고, 상태를 결정하는데 사용된 검정의 유형에 의존하지 않는다. 따라서, ELISA 검정 및 US2012/0156194에 제시된 엘렉시스® 페리오스틴 검정과 같은 다른 페리오스틴 검정을 비롯한 다른 호산구성 염증 진단 검정이 호산구성 염증 상태를 시험하고 총 페리오스틴 수준을 측정하는데 사용될 수 있거나, 또는 그에 사용되기 위해 개발될 수 있다. 또한, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Jia et al., 2012, J. Allergy Clin. Immunol. 130:647-654], 및 US2012/0156194를 참조한다. 예시적인 총 페리오스틴 검정 절차가 하기 제시된다.
US2012/0156194 (그 전문은 본원에 참조로 포함됨)의 실시예 4는 매우 감수성인 (감수성 1.88ng/ml) 페리오스틴 포획 ELISA 검정 (E4 검정)을 제공한다. 항체는 페리오스틴 이소형 1-4를 nM 친화도에서 인식한다.
E4 검정: 80 uL의 정제된 모노클로날 항체, 25D4 (하이브리도마 또는 CHO 세포주로부터 발현된 코트 항체, 서열식별번호: 121 (VH) 및 122 (VL))를 포스페이트 완충 염수로 2 ug/mL의 최종 농도까지 희석시킨다. 2-8℃에서 웰당 코트 항체 100 μL로, 커버를 덮은 마이크로타이터 플레이트를 밤새 코팅한다. 플레이트를 실온에서 세척 완충제 사이클당 웰당 400 μL의 세척 완충제 (PBS/0.05% 트윈(Tween) (폴리소르베이트 20))로 3회 세척한다. 웰당 200 μL의 차단 완충제를 플레이트에 첨가한다. 커버를 덮은 플레이트를 실온에서 1.5시간 동안 진탕시키면서 인큐베이션한다.
류페리오스틴 표준 곡선을 제조한다 (류페리오스틴의 표준 스톡 = 검정 희석제 (PBS/0.5% 소 혈청 알부민 (BSA)/0.05% 폴리소르베이트 20/0.05% 프로클린300(ProClin300), pH7.4) 중 류페리오스틴 이소형 1, 알앤디 시스템즈(R&D systems) #3548-F2, 5.25ng/ml). 표준 곡선 희석제 = PBS/0.5%BSA/0.05% 폴리소르베이트 20, 0.05% 프로클린300, pH 7.4. 예를 들어:
Figure pct00002
대조군 및 샘플을 제조한다. 3개의 대조군: 스파이크 소스(Spike Source) 대조군 (류페리오스틴 전장, 이소형 1, 알앤디 시스템즈 #3548-F2), 노말 매트릭스(Normal Matrix) 대조군 (정상 인간 혈청 풀, 바이오리클레메이션, 인크.(Bioreclamation, Inc.)), 하이 매트릭스(High Matrix) 대조군 (정상 인간 혈청 풀 + 100ng/ml 류페리오스틴 스파이크). 예를 들어,
10 μL 대조군 (또는 샘플) 혈청 + 1.99 mL 샘플/대조군 희석제 = 1:200
300 μL 1:200 희석 + 300 μL 샘플/대조군 희석제 = 1:400
300 μL 1:400 희석 + 300 μL 샘플/대조군 희석제 = 1:800
300 μL 1:800 희석 + 300 μL 샘플/대조군 희석제 = 1:1600
각각의 희석은 단독으로 실행된다
정상 인간 혈청 풀을 사용하여 매트릭스 대조군을 구축한다. 섞지 않은 풀링된 인간 혈청을 노말 대조군으로서 사용한다. 상기 기재된 바와 같이 풀링된 혈청 내로 100 ng/mL rhuPOSTN을 섞음으로써 하이 대조군을 생성한다. 모든 플레이트 상의 각각의 대조군에 대한 4종의 희석에 대해 평균, 표준 편차 (SD) 및 % 분산 계수 (CV, 퍼센트로 표현됨)를 계산한다. CV는 반복의 평균과 관련하여 반복 측정에서의 분산의 규모를 정량화한다. %CV=100*(SD/평균). 모든 플레이트에 걸쳐 이들 평균 농도를 평가하여 플레이트간 정밀도를 결정한다. 이어서, 이러한 대조군 표를 사용하여 노말 및 하이 대조군 통과/실패 기준을 정의하고, 각각의 대조군에 대해 허용가능한 분산을 평균 농도의 ± 20%로 설정한다.
플레이트를 사이클당 웰당 400 μL의 세척 완충제 (PBS/0.05% 폴리소르베이트 20)로 3회 세척한다. 희석된 표준물 (이중 웰), 대조군 (모든 4종의 희석), 및 샘플 (모든 4종의 희석)을 플레이트에 웰당 100 μL 첨가한다. 커버를 덮은 플레이트를 실온에서 2시간 동안 진탕시키면서 실온에서 인큐베이션한다. 80 uL 검출 MAb 스톡 I (비오티닐화 뮤린 항-인간 페리오스틴, MAb 23B9 (VH: 서열식별번호: 123, VL: 서열식별번호: 124, 검정 완충제 중 7.5ug/ml)를 검정 완충제로 12 mL까지 희석시킨다 = 50 ng/mL. 플레이트를 사이클당 웰당 400 μL의 세척 완충제로 4회 세척한다. 희석된 검출 MAb를 플레이트에 웰당 100 μL 첨가한다. 커버를 덮은 플레이트를 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 검정 완충제 중 1:80으로 희석된 80 uL 스트렙타비딘-HRP 스톡 I (AMDEX 스트렙타비딘-HRP, 지이 헬스케어(GE Healthcare) #RPN4401, 대략 1mg/ml)를 검정 완충제로 12 mL까지 희석시킨다 = 1:12k. 플레이트를 사이클당 웰당 400 μL의 세척 완충제로 4회 세척한다. 희석된 스트렙타비딘-HRP를 플레이트에 웰당 100 μL 첨가한다. 커버를 덮은 플레이트를 진탕시키면서 실온에서 45분 동안 인큐베이션한다. 키르케가드 및 페리(Kirkegaard and Perry) (KPL) 2-단계 TMB 시약이 실온이 되게 하고; 합하지 않는다. 플레이트를 사이클당 웰당 400 μL의 세척 완충제로 4회 세척한다. 동등 부피의 KPL TMB 기질 성분을 혼합하고, 플레이트에 웰당 100 μL 첨가한다. 플레이트를 진탕시키면서 실온에서 20분 동안 인큐베이션한다. 1 M 인산을 플레이트에 웰당 100 μL 첨가한다. 450 nm 판독 파장 및 650 nm 참조 파장을 사용하여 플레이트를 판독한다.
이소형 1 (총 페리오스틴이 아님)에 대한 항체를 사용한 페리오스틴 검정을 유사한 항체 포획 포맷을 사용하여 상이한 천식 환자 샘플에 대해 시험하였다. 예비 결과는 페리오스틴 이소형 1이 TH2 염증에 대한 마커로서 총 페리오스틴만큼 강건하지 않음을 보여준다 (데이터는 제시되지 않음).
대안적으로, 자동화 로슈(Roche) 코바스 e601 엘렉시스® 분석기 (로슈 다이아그노스틱스 게엠베하(Roche Diagnostics GmbH))에서 총 페리오스틴의 정량적 검출을 평가한다 (엘렉시스® 페리오스틴 검정). 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 US2012/0156194의 실시예 7을 참조한다. 시험은 분석물 페리오스틴이 페리오스틴 상의 2개의 상이한 에피토프에 결합하는 2종의 모노클로날 항체 사이에 샌드위치된, 샌드위치 포맷으로 수행된다. 1종의 항체는 비오티닐화되고, 스트렙타비딘-코팅된 자기 비드에의 면역 복합체의 포획을 가능하게 한다. 제2 항체는 결합된 면역 복합체의 전압 의존성 전기화학발광 검출을 가능하게 하는 신호전달 모이어티로서 복합체화된 루테늄 양이온을 보유한다. 사용되는 예시적인 시약이 하기와 같이 제시된다:
- 비드 (M): 스트렙타비딘-코팅된 자기 마이크로입자 0.72 mg/mL; 보존제.
- 시약 1 (R1): 항-페리오스틴-항체~비오틴:
이 정제된 마우스 모노클로날-항체는 US2012/0156194의 실시예 4에 따른 코팅 항체 25D4에 상응하고, 비오티닐화 형태 >1.0 mg/L; 트리스 완충제 >100 mmol/L, pH 7.0; 보존제 중에서 사용된다.
- 시약 2 (R2): 항-페리오스틴-항체~Ru(bpy):
이 정제된 마우스 모노클로날 항-페리오스틴 항체는 US2012/0156194의 실시예 4에 따른 검출 항체 23B9에 상응하고, 표지된 형태 (트리스(2,2'-비피리딜)루테늄(II)-복합체 (Ru(bpy)) 복합체로 표지됨) >1.0 mg/L; 트리스 완충제 >100 mmol/L, pH 7.0; 보존제 중에서 사용된다.
면역검정은 2회의 인큐베이션을 사용하여 수행될 수 있다. 약 9분의 제1 인큐베이션에서, 20 μL의 샘플 중 페리오스틴과 비오티닐화 모노클로날 항-페리오스틴 항체 (R1)는 복합체를 형성한다. 추가의 9분 동안의 제2 인큐베이션 단계에서, 루테닐화 모노클로날 항-페리오스틴 항체 (R2) 및 스트렙타비딘-코팅된 마이크로입자 (M)를 제1 인큐베이션의 바이알에 첨가하여, 3-원 샌드위치 복합체가 형성되고 비오틴 및 스트렙타비딘의 상호작용을 통해 고체 상 (마이크로입자)에 결합되도록 한다.
마이크로입자가 백금 전극의 표면 상에 자기적으로 포획된 경우에 반응 혼합물을 측정 세포로 흡인해낸다. 미결합 물질을 세척하고, 트리프로필아민을 함유하는 시약인 프로셀(ProCell)로 세포를 플러싱한다. 이어서 전극에의 전압의 적용은 화학발광 방출을 유도하고, 이는 광전자증배관에 의해 측정된다.
결과는 2-점 보정에 의해 생성되는 기기-특이적 보정 곡선 및 시약 바코드를 통해 제공되는 마스터 곡선을 통해 결정된다. 보정기 1은 분석물 무함유이고, 보정기 2는 완충된 매트릭스 중 50 ng/mL 재조합 인간 페리오스틴을 함유한다. 보정을 검증하기 위해, 대략 30 및 80 ng/mL 페리오스틴을 갖는 2개의 대조군을 사용한다.
본원에 사용된 용어 "총 페리오스틴"은 페리오스틴의 적어도 이소형 1, 2, 3 및 4를 지칭한다. 인간 페리오스틴 이소형 1, 2, 3 및 4는 NCBI 데이터베이스에 따라 각각 하기 아미노산 서열: NP_006466 (서열식별번호: 109); NP_001129406 (서열식별번호: 110), NP_001129407 (서열식별번호: 111), 및 NP_001129408 (서열식별번호: 112)을 포함하는 것으로서 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이소형 5는 부분적으로 서열분석되어 있다. 이소형 5는 서열식별번호: 113의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 페리오스틴의 이소형은 인간 페리오스틴이다. 추가 실시양태에서, 용어 총 페리오스틴은 이소형 1-4에 더하여 인간 페리오스틴의 이소형 5를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 총 페리오스틴은 총 혈청 페리오스틴 또는 총 혈장 페리오스틴이다 (즉, 각각 전혈로부터 수득된 혈청 샘플 또는 전혈로부터 수득된 혈장 샘플로부터의 총 페리오스틴, 전혈은 환자로부터 수득됨). 특정 실시양태에서, 총 페리오스틴은 E4 검정 또는 엘렉시스® 검정에 의해 측정된다.
일부 실시양태에서, 의약의 제작 또는 제조에서의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 용도가 제공된다. 한 실시양태에서, 의약은 천식, 호흡기 장애, 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, 또는 IL-17 매개 장애의 치료를 위한 것이다. 추가 실시양태에서, 의약은 천식, 호흡기 장애, 호산구성 장애, IL-13 매개 장애, 또는 IL-17 매개 장애에 걸린 개체에게 유효량의 의약을 투여하는 것을 포함하는 천식, IPF, 호흡기 장애, 호산구성 장애, 호중구성 장애, IL-13 매개 장애, 또는 IL-17 매개 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 것이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 유효량의, 예를 들어 하기 기재된 바와 같은 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 예를 들어 임의의 상기 치료 방법에 사용하기 위한, 본원에 기재된 임의의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 포함하는 제약 제제가 제공된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 본원에 제공된 임의의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 본원에 제공된 임의의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체, 및 예를 들어 하기 기재된 바와 같은 적어도 1종의 추가의 치료제를 포함한다.
본원에 제공된 항체는 요법에서 단독으로 또는 다른 작용제와 조합되어 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 항체는 적어도 1종의 추가의 치료제와 공-투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 TH2 억제제 및/또는 TH17 억제제이다. 특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 천식 염증의 제어제, 예컨대 코르티코스테로이드, 류코트리엔 수용체 길항제, LABA, 코르티코스테로이드/LABA 조합 조성물, 테오필린, 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 오말리주맙, LAMA, MABA (예를 들어, 이관능성 무스카린성 길항제-베타2 효능제), 5-리폭시게나제 활성화 단백질 (FLAP) 억제제, 또는 효소 PDE-4 억제제이다.
상기 언급된 이러한 조합 요법은 조합 투여 (2종 이상의 치료제가 동일 또는 개별 제제에 포함됨) 및 개별 투여를 포괄하고, 이러한 경우에 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 투여는 추가의 치료제 또는 치료제들의 투여 전에, 그와 동시에, 및/또는 그 후에 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 투여 및 추가의 치료제의 투여는 서로 약 1개월 내, 또는 약 1, 2 또는 3주 내, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일 내에 이루어진다.
일부 실시양태에서, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 암, 예컨대 교모세포종 또는 비-호지킨 림프종을 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 또한 방사선 요법과 조합되어 사용될 수 있다.
항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 (및 임의의 추가의 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 원하는 경우에 국부 치료를 위해 병변내 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 임의의 적합한 경로, 예를 들어 부분적으로는 투여가 단기적인지 또는 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 우수한 의료 행위에 부합하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개개의 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는, 그러할 필요는 없지만, 해당 장애를 예방 또는 치료하는데 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 함께 임의로 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이는 일반적으로 상기 기재된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량 및 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 적절한 투여량 (단독으로, 또는 1종 이상의 다른 추가의 치료제와 조합되어 사용되는 경우)은 치료할 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 따라 다를 것이다. 항체는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 질환의 유형 및 중증도에 따라 항체의 적합한 용량을 결정할 수 있다. 항-IL-13 항체에 대한 비제한적인 예시적 투여는, 예를 들어 PCT 공개 번호 WO 2012/083132에 기재되어 있다. 항체의 투여에 대한 일반적 안내는, 예를 들어 문헌 [Bai et al., Clinical Pharmacokinetics, 51: 119-135 (2012) 및 Deng et al., Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 8(2):141-160 (2012)]에서 찾아볼 수 있다. 항체 요법의 진행은 통상적인 기술 및 검정에 의해 모니터링될 수 있다.
임의의 상기 제제 또는 치료 방법은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 대신하여 또는 이에 더하여 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해된다.
제조 물품
일부 실시양태에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 용기 상에 있거나 용기와 회합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 조성물을 그 자체로 수용하거나 또는 상태의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 또 다른 조성물과 조합하여 수용하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 또한, 제조 물품은 (a) 내부에 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 포함하는 조성물이 수용된 제1 용기; 및 (b) 내부에 추가의 세포독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 수용된 제2 용기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제조 물품은 조성물이 특정한 상태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 비롯하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 개시된 모든 실시양태는 문맥상 명백하게 달리 나타내지 않는 한 서로 조합될 수 있다.
임의의 상기 제조 물품은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 대신하여 또는 이에 더하여 면역접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
실시예
하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기 제공된 일반적 설명을 고려하여 다양한 다른 실시양태가 실시될 수 있는 것으로 이해된다.
실시예 1 - 중증 비제어된 천식에서 IL-17AF 및 호중구성 염증은 IL-13 및 호산구성 염증과 공존하고 이와 상관된다
BOBCAT 연구는 천식 환자 코호트에서 기도 염증의 지수 및 비침습적 바이오마커 사이의 관계를 특징화하기 위해 설계된 다기관 관찰 연구이다. BOBCAT 코호트는 혈액 페리오스틴 수준과 관련하여 기도 호산구증가증의 지시자로서 이전에 기재된 바 있다. 문헌 [Jia et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 130: 647-654]을 참조한다. 연구 참가자를 캐나다, 미국 및 유럽의 18개 센터에서 동원하였다. 각각의 연구 현장에서 임상시험 심사 위원회는 프로토콜을 승인하였고, 모든 대상체는 서면 사전 동의를 제공하였다.
이전에 기재된 바와 같이, 환자당 2개의 기관지내 생검을 포르말린 중에 고정하고, 후속 절편화 및 염색을 위해 단일 파라핀 블록 내에 포매하였다. 예를 들어, 문헌 [Hauber et al., 2003, J. Allergy Clin. Immunology 112:58-63; Al-Ramli, 2009, J. Allergy Clin Immunol, 123: 1185-1187; Prefontaine et al., 2009, J. Immunol., 183: 5094-5103; Letuve et al., 2006, J. Allergy Clin Immunol, 117: 590-596; Shikotra et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 129: 104-111]을 참조한다. 세포 (제시된 바와 같은 호산구, 호중구, 또는 시토카인에 대한 양성-염색 세포)를 카운팅하고, 생검 조직 mm2당 절대 수로 표현하였다.
모든 분석의 경우에, 면역조직화학 (IHC)에 의해 폐의 다양한 구획 내 과립구 수준 및 양성-염색 세포의 분포를 적절한 경우에 기술 통계학을 사용하여 특징화하였다. 양성-염색 세포 사이의 상관관계는 스피어만의 순위 상관관계로서 주어진다.
이전의 보고는 건강한 대조군 및/또는 경도 천식환자와 비교하여 중증 천식환자로부터의 기관지 생검 조직에서 정규 Th17 시토카인 IL-17A 및 IL-17F의 수준을 분석하는데 면역조직화학 (IHC)을 사용해왔다. 예를 들어, 문헌 [Doe et al., 2010, Chest, 138: 1140-1147; Al-Ramli, 2009, J. Allergy Clin Immunol, 123: 1185-1187]을 참조한다. 이들 시토카인에 대한 IHC는 BOBCAT 연구로부터 생검에서 수행되었고, 매칭되는 생검 조직에서 시토카인과 과립구의 분포 및 그 사이의 관계를 검사하였다. 도 1을 참조한다. 각각의 측정은 코호트 내의 값의 범위에 걸쳐 검출가능하였다. 조직 호중구와 호산구 카운트 사이에 유의한 양의 상관관계가 관찰되었다 (도 1a, rS=0.68, P = 4.2x10-9; 문헌 [Arron et al., 2014, Eur Respir J, 43:627] 참조). 본 출원에서, 본 발명자들은 본 발명자들이 최초로 기관지내 생검에서 호산구 카운트와 IL-17A에 대해 염색된 세포의 수가 상관된다는 것을 밝혀내었다고 믿는다 (도 1b, rS=0.39, P=3.2x10- 3). 본 발명자들은 또한 기관지내 생검에서 IL-17A 및 IL-17F에 대해 염색된 세포가 상관된다는 것을 밝혀내었다 (도 1c, rS=0.56, P=9.0x10- 6). 이전에, 기도 호산구는 혈청 페리오스틴, 혈액 호산구, 및 호기 산화질소 (FeNO)와 양의 상관관계가 있는 것으로 밝혀진 바 있다. WO2009/124090 및 문헌 [Jia et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol,130:647-54]을 참조한다. 요약하면, 여기서 제공되는 연구는 인간 폐 조직 생검에서, 조직 호산구가 IL17A+ 세포와 양의 상관관계가 있고, IL17A+ 세포가 IL17F+ 세포와 양의 상관관계가 있음을 분명하게 보여준다.
실시예 2 - 폐 IL-17AF는 흡입용 코르티코스테로이드 (ICS) 복용 중인 증등도-내지-중증 천식에서 조직 호중구와 연관된다
UK 연구를 위한 천식환자를 동원하고, 레스터 대학교 및 퀸스 대학교 벨파스트에서 이전에 기재된 바와 같은 임상 평가를 행하였다. 문헌 [Shikotra et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 129: 104-111]을 참조한다.
이전에 기재된 바와 같이, 환자당 2개의 기관지내 생검을 포르말린 중에 고정하고, 후속 절편화 및 염색을 위해 단일 파라핀 블록 내에 포매하였다. 예를 들어, 문헌 [Hauber et al., 2003, J. Allergy Clin. Immunology 112:58-63; Al-Ramli, 2009, J. Allergy Clin Immunol, 123: 1185-1187; Prefontaine et al., 2009, J. Immunol., 183: 5094-5103; Letuve et al., 2006, J. Allergy Clin Immunol, 117: 590-596; Shikotra et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 129: 104-111]을 참조한다. 세포 (제시된 바와 같은 호산구, 호중구, 또는 시토카인에 대한 양성-염색 세포)를 카운팅하고, 생검 조직 mm2당 절대 수로 표현하였다.
1차 정상 인간 기관지 상피 (NHBE) 세포를 론자(Lonza) (메릴랜드주 워커스빌)에서 구입하였다. 코닝 라이프 사이언시스(Corning Life Sciences) (뉴욕주 코닝)로부터의 6.5 mm 직경 0.4 μM 세공 밀도 트랜스웰 플레이트를 어드밴스드 바이오매트릭스(Advanced BioMatrix) (캘리포니아주 샌디에고)로부터의 100 μg/ml 퓨어콜(PureCol)을 사용하여 콜라겐 코팅하였다. NHBE를 트랜스웰 내에 시딩하고, 혈청-무함유 기관지 상피 세포 성장 배지 (BEGM, 론자) 내에서 96시간 동안 또는 전면생장까지 유지시켰다. 이어서 정단 배지를 제거하고, 세포를 뉴마컬트(Pneumacult) 완전 공기 액체 계면 (ALI) 배지 (스템 셀(Stem Cell))와 함께 기저측으로 공급하고, 21일의 기간 동안 분화시켰다.
택맨(TaqMan) 유전자 발현 검정 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 캘리포니아주 포스터 시티)을 구입하여, 제조업체의 지침에 따라 IL-17A (id: Hs99999082_m1) 및 IL-17F (id: Hs00369400_m1)에 대해 수행하였다. 어플라이드 바이오시스템즈 사용자 게시판 번호 2 (P/N 4303859)에 기재된 바와 같이 2(-ΔΔCT) 방법에 의해 상대 발현 수준을 결정하였다. 정량 한계 (LOQ) 미만의 발현 수준은 표적 유전자 CT (사이클 역치) 값이: 1) 40 또는 2) 모의 RT (역전사된 것) 음성 대조군의 평균 CT 값 중 보다 적은 값보다 크거나 그와 동등한 것이다.
문헌 [Shikotra et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 129: 104-111]에 기재된 바와 같이, 애질런트(Agilent) (캘리포니아주 산타 클라라) 2-색 전체 인간 게놈 4 x 44k 유전자 발현 마이크로어레이에 대해 RNA를 증폭시키고 (MessageAmp II, 암비온(Ambion), 텍사스주 오스틴), 제조업체의 지침에 따라 수행하였다.
모든 분석의 경우에, 면역조직화학 (IHC)에 의해 폐의 다양한 구획 내 과립구 수준 및 양성 염색 세포의 분포를 적절한 경우에 기술 통계학을 사용하여 특징화하였다.
기도와 관련된 시험관내 시스템에서 IL-17A의 효과를 검사하기 위해, NHBE 세포를 기관지 상피 세포의 점액섬모 가성중층 상피로의 분화를 촉진하는 공기-액체 계면 (ALI)에서 성장시켰다. ALI에서 배양된 NHBE 세포를 IL-17A (10 ng/mL) 및 TNFα (10 ng/mL)로 24시간 동안 자극한 후, RNA를 단리하였다. 유전자 발현 마이크로어레이의 분석을 수행하였고, 차등 발현된 유전자 중에서 IL-17A + TNFα 자극은 특정 호중구-연관 유전자를 상향조절한다는 것을 발견하였다. 표 2를 참조한다.
<표 2> IL-17A+TNFα 자극된 NHBE 세포에서의 호중구-연관 유전자 발현
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CSF3은 조혈 전구체로부터 호중구 분화에 관여하는 시토카인, 과립구 콜로니-자극 인자를 코딩한다. CXCL1, 2, 3, 및 8은 호중구 이동을 촉진하는, 분화된 호중구 상에서 발현된 수용체인 CXCR1 및 CXCR2에 결합하는 케모카인을 코딩한다.
UK 코호트로부터의 기관지 생검 조직에서의 IL-17A 및 IL-17F mRNA의 발현을 qPCR에 의해 평가하였다. 시험된 대부분의 샘플에 대해 발현 수준은 검출가능하지 않았다: 72% (61명 중 44명) 및 75% (61명 중 46명)는 < 정량 하한치 (LLOQ)였다. 본 발명자들은 검출불가능 (<LLOQ) 대 검출가능 (> LLOQ) IL-17A 및 IL-17F 발현을 갖는 샘플에서 IHC에 의해 수득된 이용가능한 매칭 조직 호중구 카운트를 비교하고 (61 케이스 중 50 케이스), 변연의 유의한 상승을 관찰하였다. 도 2a (IL-17A; P=0.08) 및 도 2b (IL-17F; P=0.087)를 참조한다. UK 코호트에서, IHC에 의한 조직 호중구 카운트 및 qPCR에 의한 IL-17A 및 IL-17F 발현 사이에 상관관계가 존재하였고, 즉 검출가능한 호중구 카운트를 나타내는 IHC 샘플은 또한 qPCR에 의해 높은 IL-17A 또는 IL-17F 발현을 나타내었다.
특정 IL-17-유도성, 호중구-연관 유전자 (CXCL1/2/3, IL8, CSF3)의 유전자 발현을 기관지 생검 마이크로어레이 데이터의 2-원 계층적 클러스터링에 의해 검사하였다. 도 3을 참조한다. 유전자는 개별 환자 샘플에서 서로상관된다는 것을 발견하였고; 즉, 모든 유전자를 상대적으로 상승된 수준으로 발현하는 대상체를 확인할 수 있었다. 모든 유전자의 최고 동등 발현을 갖는 대상체는 중등도 내지 중증 천식에 걸렸고, 흡입용 코르티코스테로이드 (ICS)를 복용하고 있었다. 추가로, UK 코호트에서 유전자 세트는 조직 호중구와 상관되었다 (스피어만 ρ = 0.3902; p = 0.0117). 결과는 상승된 호중구 카운트, 상승된 IL-17A 및 IL-17F 발현, 및 상승된 호중구-연관 유전자 발현이 ICS를 복용하고 있는 환자의 하위세트에서 관찰된다는 것을 보여주었다.
실시예 3 -IL-17AF 바이오마커는 높은 혈청 페리오스틴과 연관된다
BOBCAT 연구 및 UK 연구는 각각 실시예 1 및 2에 기재되어 있다.
택맨 유전자 발현 검정 (어플라이드 바이오시스템즈, 캘리포니아주 포스터 시티)을 구입하여, 제조업체의 지침에 따라 IL-17A (id: Hs99999082_m1) 및 IL-17F (id: Hs00369400_m1)에 대해 수행하였다. 어플라이드 바이오시스템즈 사용자 게시판 번호 2 (P/N 4303859)에 기재된 바와 같이 2(- ΔΔCT ) 방법에 의해 상대 발현 수준을 결정하였다. 정량 한계 (LOQ) 미만의 발현 수준은 표적 유전자 CT 값이: 1) 40 또는 2) 모의 RT 음성 대조군의 평균 CT 값 중 보다 적은 값보다 크거나 그와 동등한 것이다.
문헌 [Shikotra et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 129: 104-111]에 기재된 바와 같이, 애질런트 (캘리포니아주 산타 클라라) 2-색 전체 인간 게놈 4 x 44k 유전자 발현 마이크로어레이에 대해 RNA를 증폭시키고 (MessageAmp II, 암비온, 텍사스주 오스틴), 제조업체의 지침에 따라 수행하였다.
혈청 페리오스틴 측정은 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. 예를 들어, 문헌 [Jia et al., 2012, J. Allergy Clin Immunol, 130: 647-654]을 참조한다.
정량적 샌드위치 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 키트가 인간 혈장 샘플에서 CXCL1/GROa 농도를 측정하기 위해 특징화되었다 (인간 CXCL1/GRO 알파 면역검정을 위한 알앤디 시스템즈 퀀티킨(Quantikine) ELISA 키트, 카탈로그 #DGR00). 간단하게, 인간 CXCL1에 특이적인 모노클로날 항체를 96-웰 마이크로플레이트 상에 코팅하였다. 표준물, 품질 대조군, 및 샘플을 제조하고, 검정 희석제를 함유하는 웰에 첨가하였다. 실온에서 인큐베이션한 후에, 플레이트를 세척하여 임의의 잉여량의 미결합 시약을 제거하고, 적절히 희석된 검출 시약, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)에 접합된 항-인간 CXCL1 폴리클로날 항체를 첨가하였다. 실온에서 인큐베이션하고 플레이트를 세척한 후, 색 발현을 위해 3,3',5,5' 테트라메틸벤지딘 (TMB)을 함유하는 기질 용액을 첨가하였다. 황산을 첨가하여 효소 반응을 정지시키고, 발현된 색의 강도를 450 nm에서, 참조 파장은 650 nm에서 측정하였다. 인간 혈장에서 이러한 검정의 감수성은 30 pg/mL인 것으로 결정되었다.
모든 분석의 경우에, 면역조직화학 (IHC)에 의해 폐의 다양한 구획 내 과립구 수준 및 양성 염색 세포의 분포를 적절한 경우에 기술 통계학을 사용하여 특징화하였다.
IL-17-유도성 전사체에 의해 코딩된 단백질 수준이 말초 혈액에서 상승된 수준으로 검출가능한지 여부를 결정하기 위해, 본 발명자들은 중등도-중증 천식환자 (N=65) 및 건강한 대조군 대상체 (N=22)의 BOBCAT 코호트에서 혈장 CXCL1 수준을 평가하였다. 건강한 대조군에서 혈장 CXCL1은 10/22 대상체 (45%)에서 정량 하한치 (LLOQ) 미만이었고, 천식환자에서 혈장 CXCL1은 16/65 대상체 (25%)에서 LLOQ 미만이었다. 검출가능한 혈장 CXCL1 수준을 갖는 대상체 중에서, 천식환자에서의 수준은 건강한 대조군보다 유의하게 더 높았다. 도 4a를 참조한다. 검출가능한 혈장 CXCL1 수준을 갖는 천식환자 대상체 중에서, 매우 상승된 CXCL1 수준 (> 160 pg/ml)을 갖는 대상체가 또한 상승된 혈청 페리오스틴 수준 (> 50 ng/ml)을 갖는 경향이 존재하였다. 도 4b를 참조한다. 결과는, 단정적으로, 혈장에서 상승된 CXCL1 수준을 갖는 중증 천식환자가 상승된 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 경향이 있음을 보여준다 (피셔 정확 검정에 의해 p = 0.02).
UK 코호트 천식환자에서의 혈청 페리오스틴 측정치를 매칭되는 기관지 생검에서의 IL-17A의 발현 수준과 비교하였다. 검출가능한 IL-17A mRNA 수준을 갖는 대상체는 IL-17A mRNA 수준이 LLOQ 미만인 대상체와 비교하여 상승된 수준의 혈청 페리오스틴을 가졌다 (P=0.03). 도 5를 참조한다.
실시예 4 - 마우스 집 먼지 응애 천식 모델에서 항-IL-13 및 항-IL-17 항체의 독립적 및 추가적 활성
8-9 주령 C57BL6 마우스 (잭슨 래보러토리(Jackson Laboratory), 캘리포니아주 새크라멘토)에서 집 먼지 응애 추출물 (Df 추출물, 로트#114218, 그리어 랩스 인크.(Greer Labs Inc.))을 100 μg/50 μL PBS로 3회 매주 비강내 챌린지하여 마우스 집 먼지 응애 천식 모델을 유도하였다. 항체 처리의 경우에, IgG1 대조군 항체 (600μg 대조군 항체/마우스/주사), 항-IL-13 IgG1 항체 (제넨테크 항체 262A5-1, 200μg 항체/마우스/주사), 및/또는 항-IL-17FF IgG1 항체 (제넨테크 항체 28E12)와 조합된 항-IL-17AA/AF IgG1 항체 (제넨테크 항체 16H4.4F3)를 2-주 감작 기간 동안 1주에 3회 복강내 주사를 통해 200μg/항체/마우스 (총 600μg 항체/마우스/주사)로 투여하였다. 최종 챌린지 24시간 후에, 총 및 차등 백혈구 카운트를 위해 혈액 및 기관지폐포 세척액 (BALF)을 수거하였다. 완전 혈액 카운트는 시스멕스(Sysmex) XT-2000iV 자동화 혈액 분석기를 사용하여 수행하였다. 각각 유동 세포측정법 (팩스칼리버3(FacsCaliber3)) 및 현미경 하에서의 200 라이트-김자(Wright-Giemsa) 염색된 세포의 수동 카운팅에 의해 BALF 총 및 차등 세포 카운트를 결정하였다. 계산된 세포 수를 그래프화하고, 프리즘 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어(Graphpad Software), 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 통계적 분석을 수행하였다.
도 6에 제시된 바와 같이, BAL 중 계산된 호산구 (a) 및 호중구 (b) 수는 항-IL-13 항체 처리가 감소된 호산구, 비변화된 호중구 수를 발생시키는 반면에, 항-IL-17 항체 처리 (항-IL-17AA/AF 및 IL-17FF 항체와의 조합 처리)는 감소된 호중구, 비변화된 호산구 수를 발생시킴을 보여주었다. 항-IL-13 및 항-IL-17 항체를 사용한 조합 처리는 호산구 및 호중구 수 둘 다에서의 감소로 이어졌고, 이는 IL-13 및 IL-17 항체의 개별 효과와 일관되었다. 감소는 대조군과 비교하여 통계적으로 유의하였다. 말초 혈액에서, 항-IL-13 항체 처리는 증가된 호산구 (도 6c) 수로 이어진 반면에, 항-IL-17 항체 처리는 호산구 수에 영향을 미치지 않으면서 호중구 (도 6d) 수에서의 통계적으로 유의한 감소로 이어졌다. 이들 결과는 IL-13 및 IL-17AA/AF/FF가 호산구 및 호중구에 대해 독립적 활성을 가지며, IL-13 및 IL-17AA/AF/FF의 조합 중화는 IL-13 또는 IL-17AA/AF/FF 단독의 중화보다 더 넓은 범위의 생물학적 작용을 억제함을 보여준다. 도 6에서, *은 통계적으로 유의하다.
실시예 5 임상 시험 데이터는 고-호산구 천식 및 레브리키주맙 처리에 대한 반응에서 이질성을 보여준다
결과는 임상 시험 샘플로부터 분석된 데이터와 일관된다. 이전에 본 발명자들은 인간화 항-IL-13 항체 레브리키주맙이 흡입용 코르티코스테로이드 요법에 의한 비제어 중등도 내지 중증 천식에 걸린 환자, 특히 혈청 페리오스틴의 상승된 수준을 갖는 이러한 환자에서 FEV1을 유효하게 개선시킨다는 것을 밝혀내었다. 문헌 [Corren et al., 2011, N. Engl. J. Med. 365:1088-98]을 참조하고, 여기서 고-페리오스틴은 환자 집단 내 중간 혈청 페리오스틴보다 더 높은 혈청 페리오스틴의 수준을 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같이, 페리오스틴이 처리 반응에 대해 풍부화되었지만, 고-페리오스틴 환자 군 내 레브리키주맙에 대한 반응은 균질하지 않음을 추가로 발견하였다.
본 발명자들은 레브리키주맙의 2상 연구, MILLY에서 중등도 내지 중증 천식환자에서의 IL-13 억제 시 폐 기능 개선 (FEV1)의 풍부화에 대해, 기준선 혈액 호중구 수준과 함께 기준선에서의 혈청 페리오스틴, 혈액 호산구 및 FeNO를 비롯한 Th2 바이오마커를 검사하였다. MILLY는 흡입용 글루코코르티코이드 요법에도 불구하고 불충분하게 제어되는 천식에 걸린 성인에서의 레브리키주맙 (항-IL-13)의 무작위화, 이중-맹검, 위약 대조 연구이다 (Corren et al., 2011, N. Engl. J. Med. 365:1088-98). 고려되는 대상체는 치료 의향 (ITT) 집단 중의 대상체이다.
도 15는 호산구 카운트 및 호중구 카운트로 나눈, 레브리키주맙 처리된 환자에서의 FEV1의 퍼센트 변화의 결과를 보여준다. 혈액 호산구 카운트는 중앙 실험실에서 자동화 혈액 분석기 상 완전 혈액 세포 카운트 (CBC)의 부분으로서 평가되었다. 혈액 호중구 카운트는 자동화 혈액 분석기 상 완전 혈액 세포 카운트 (CBC)의 부분으로서 평가되었다. 고-호산구 군은 동일한 환자 집단 내 중간 호산구 카운트 (이 케이스에서 210/μl) 이상의 기준선 호산구 카운트를 갖는 환자이고, 저-호산구 군은 중간 호산구 카운트 미만의 기준선 호산구 카운트를 갖는 환자이다. 고-호중구 군은 동일한 환자 집단 내 중간 호중구 카운트 (이 케이스에서 3890/μl) 이상의 기준선 호중구 카운트를 갖는 환자이고, 저-호중구 군은 중간 호중구 카운트 미만의 기준선 호중구 카운트를 갖는 환자이다.
도 15에 제시된 바와 같이, 레브리키주맙은 낮은 호산구 카운트를 갖는 환자보다 높은 기준선 호산구 카운트를 갖는 환자에서 더 효과적이었다. 도 15d를 a, b와 비교한다. 고-호산구 군 내에서, 낮은 호중구 카운트를 갖는 환자는 레브리키주맙에 의해 FEV1의 퍼센트 변화에서 현저한 개선을 나타내었지만 (도 15d); 높은 기준선 호중구 카운트를 갖는 고-호산구 환자는 낮은 기준선 호중구 카운트를 갖는 고-호산구 군 내의 환자와 비교하여 레브리키주맙에 의해 감소된 이익을 나타내었다. 도 15c를 d와 비교한다. 유사한 경향이 기준선 페리오스틴 수준 및 FeNO에 의해 세분한 환자에서 관찰되었다 (데이터는 제시되지 않음).
도 15의 결과는, 도 1b 및 c와 함께, 호중구성 길항제, 예를 들어 항-IL17 항체와 조합된 항-IL-13 항체, 예를 들어 레브리키주맙이 중등도 내지 중증 천식에 걸린 환자에게 추가로 이익이 될 수 있고/거나 레브리키주맙의 효능을 추가로 개선시킬 수 있음을 시사한다. 이하는 이중특이적 항-IL-13/항-IL-17 항체의 생성을 기재한다.
실시예 6 - 항-IL-13/IL-17 IgG4 이중특이적 항체의 생성
본 발명자들은 이전에 이. 콜라이에서 2개의 상이한 경쇄를 갖는 인간 IgG1 이중특이적 항체를 생성하는 기술을 확립하였다 (Yu et al., 2011, Sci Transl Med 3, 84ra44). 방법은 이뮤노글로불린 중쇄의 이종-이량체화를 촉진하기 위해 노브-인투-홀 기술을 사용한다 (Ridgway et al., 1996, Protein Eng. 9, 617-621; Atwell et al., 1997, J Mol Biol 270, 26-35). 경쇄 쌍형성오류 없이 2개의 상이한 경쇄의 사용을 가능하게 하기 위해, 본 발명자들은 각각의 아암을 개별 이. 콜라이 세포에서 반량체로서 배양하였다. 본 발명자들은 이러한 접근법을 적용하여, 항-IL-17 및 항-IL-13 모 항체를 항-IL-17 아암이 인간 IgG4 홀로서 항-IL-13 아암이 인간 IgG4 노브로서 발현되도록 하는 벡터 내로 서브클로닝함으로써 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 생성하였다. IgG4 노브 중쇄 불변 영역의 서열을 서열식별번호: 69에 제시하고, IgG4 홀 중쇄 불변 영역의 서열을 서열식별번호: 70에 제시한다.
본 발명자들은 이전에 생성되어 특징화된, 레브리키주맙에 대한 이중특이적 항체의 항-IL-13 CDR을 기초로 하였다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2005/062967 A2를 참조한다. 레브리키주맙은 가용성 인간 IL-13에 10 pM의 검출 한계보다 낮은 비아코어-유래 Kd로 결합한다. IL-13에 대한 레브리키주맙의 결합은 IL-13Rα1에 대한 시토카인의 결합을 억제하지 않지만, 이종이량체성 신호전달 적격 IL-4Rα /IL-13Rα1 복합체의 후속 형성을 차단한다 (Ultsch, M. et al., 2013, J. Mol. Biol., dx.doi.org/10.1016/j.jmb.2013.01.024; Corren et al., 2011, N. Engl. J. Med. 365, 1088-1098). 이중특이적 항체의 경우에, 항-IL-13 항체는 레브리키주맙과 비교하여 FR 영역에서 2개의 편차를 갖는다: 중쇄 상 Q1E 및 경쇄 상 M4L. 각각 서열식별번호: 13 및 14를 참조한다. 2개의 변화를 단일 항-IL-13 절반 항체에서 조합하였고, 생성된 절반 항체는 야생형 항-IL-13 절반-항체에 비해 개선된 수율 및 폴딩을 갖는 것으로 발견되었다.
항체 발현을 위해, 이. 콜라이 균주 64B4를 사용하였다. 밤샘 배양물을 30℃에서 LB (100 μg/ml 카르베니실린) 중에서 성장시키고, 5 ml CRAP 배지 (100 μg/ml 카르베니실린)로 1:100으로 희석시키고 (Simmons et al., 2002, J. Immunol. Methods, 263: 133-147), 30℃에서 24시간 동안 성장시켰다.
SDS-PAGE에 의한 비-환원 분석을 위해, 200μl의 CRAP 발현 배양물을 펠릿화하고, 100μl NR-용해 완충제 (88 μl 팝컬쳐(PopCulture) 시약 (노바젠(Novagen)), 10 μl 100 mM 아이오도아세트아미드, 2 μl 리소나제 시약 (EMD 바이오사이언시스(EMD Biosciences))) 중에 재현탁시켰다. 샘플을 실온에서 15분 동안 인큐베이션한 다음, 9300 rcf에서 5분 동안 회전시켜 불용성 성분을 펠릿화하였다. 50 μl 상청액을 새로운 튜브로 옮기고, 50 μl 2x LDS 샘플 완충제 (인비트로젠)와 혼합하였다. 이어서 샘플을 95℃에서 5분 동안 가열하고, 5 μl를 누페이지(NuPAGE) 4-12 % 비스-트리스/메스(MES) 겔 (인비트로젠) 상에 로딩하였다. 겔을 아이블롯(iBlot) (인비트로젠)에 의해 니트로셀룰로스 막 상으로 옮기고, IRDye800CW 접합된 항-인간 (H&L) 항체 (록랜드(Rockland))와 이뮤노블롯팅하고, 리코르(LiCOR) 오디세이 이미저로 영상화하였다.
도 7a는 노브 및 홀 절반 항체의 SDS-PAGE 분석을 보여준다. IL-17 절반 항체에 대한 중쇄 및 경쇄의 코돈 최적화 버전을 또한 제조하고 발현에 대해 시험하였다. 원래 코딩 서열 및 코돈 최적화 코딩 서열의 서열을 서열식별번호: 99 내지 102에 제시한다. 항-IL17 절반 항체의 CDR을 서열식별번호: 40, 43, 44, 45, 46 및 47에 제시한다. US 2012/0141492 또는 US 8,715,669를 참조한다. 각각의 배양물에서, 절반-항체 종은 우세한 밴드였다. 원래 코딩 서열을 항체 생산 규모 확대를 위해 선택하였다.
10L 발효기로의 규모 확대를 위해, 초기 출발 배양물 (500 ml)을 고정상으로 성장시키고, 이를 사용하여 10L 발효물을 접종시켰다 (Simmons et al., 2002, J. Immunol. Methods, 263: 133-147). 10L 유가식 배양물을 성장시키고, 마이크로유체를 통해 전체 브로쓰를 수거하였다. 이어서 용해된 세포를 0.8% PEI (v/v)의 최종 농도로 4℃에서 밤새 처리하였다. 후속해서 각각의 혼합물을 15,000 x g에서 20분 동안 원심분리한 다음, 0.22μm 필터를 통해 여과하였다. 이어서 각각의 절반 항체를 250mL 맙슈어 셀렉트(MabSURE SELECT) 칼럼 (지이 헬스케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences)) 상에서 포획시켰다. 칼럼을 50 mM 트리스 pH 8.0, 150mM NaCl로 이루어진 10 칼럼 부피 (CV)의 평형 완충제로 평형화한 다음, 50 mM 트리스 pH 8.0, 150 mM NaCl, 0.05% 트리톤 X-100, 0.05% 트리톤 X-114로 이루어진 제1, 및 25 mM 시트르산나트륨 pH 6.0으로 이루어진 제2의 2종의 상이한 세척 완충제로 세척하였다. 각각의 아암을 0.15 M 아세트산나트륨 pH 2.7 내로 용리시킨 다음, 1:10 1M 아르기닌/숙시네이트 pH 8.7을 사용하여 pH 5.0으로 적정하였다.
각각의 절반 항체의 정체를 액체 크로마토그래피 전기분무 이온화와 함께 비행 시간 (LC-ESI/TOF) 분석에 의해 확인하였다. 순도는 4-20% 트리스-글리신 SDS PAGE 겔에 의해 분석하였다. 응집체 수준은 SEC에 의해 결정하였다.
초기 평가 동안, 본 발명자들은 항-IL-17 절반-항체가 7보다 높은 pH에서 침전을 형성한다는 것을 발견하였다. 절반-항체를 포획한 다음, 낮은 pH에서 단백질 A 칼럼으로부터 용리시키고, 용리액을 pH 8.5로 조정하여 산화환원 반응으로 이중특이적 항체의 어셈블리를 수행하였다. 약 20%의 항-IL-17 절반 항체 용리액이 pH 조정 후 침전되어 상실되었다. 항-IL-13 절반 항체와의 쌍형성을 위해 이용가능한 항-IL-17 절반 항체의 감소는 2종의 절반 항체의 비 사이의 불균형으로 이어졌고, 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 수율을 감소시켰다. 어셈블리 후에, 이중특이적 항체를 양이온 교환기 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 그러나 다른 이중특이적 항체와 달리, 일부 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 양이온 이온 교환기 수지 SPHP에 비가역적으로 결합하였다. 상기 관찰의 결과로서, 형성된 이중특이적 항체의 백분율은 통상적으로 약 10%로 낮았다.
어셈블리 전 및 그 동안의 항-IL-17 절반-항체의 용해도 및 안정성을 개선시키기 위해, 여러 조건, 예를 들어 용리된 절반 항체에 상이한 농도의 아르기닌을 100mM, 250mM, 350mM 및 500mM로 첨가하고/거나, 4% 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 첨가하고/거나, pH를 pH 8.5에서 10으로 0.5 pH 단위 증분으로 증가시키는 것을 시험하였다. 약 pH 9에서의 높은 농도의 아르기닌 (0.5 M)은 IL-17 절반-항체의 용해도를 매우 증가시키고 pH-유도된 침전을 1% 미만으로 감소시키는 것으로 발견되었다. 500 mM 아르기닌은 pH 8.5에서 또한 양호한 결과로 이어졌다. 본 발명자들은 또한 디술피드 산화를 위한 pH 조정 전에 pH 8.5에서 0.5 M 아르기닌을 첨가하는 것에 의해 항-IL-13 절반-항체와 항-IL-17 절반 항체를 조합시킴으로써 형성된 이중특이적 항체의 백분율을 증가시킬 수 있음을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 소수성 상호작용 칼럼에 비가역적으로 결합하지 않았기 때문에 양이온 교환기 칼럼을 소수성 상호작용 칼럼으로 대체하였다. 개선된 과정에 따를 경우, 형성된 이중특이적 항체의 백분율은 10%에서 65%까지 증가하였다.
하나의 예시적인 실험에서, 항-IL-17 절반 항체를 항-IL-13과 1:1 비로 조합한 다음, 0.5M 아르기닌/숙시네이트 pH 8.7로 적정하고, 그 후 새로이 제조된 환원제, 환원 L-글루타티온 (GSH)을 첨가하여 1:200의 몰비를 달성하였다. 혼합물을 3일 동안 실온에 두었다. 산화환원 후에, 어셈블리된 이중특이적 항체를 45mL HIC ProPac 10 칼럼 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific)) 상에서 30 CV 구배를 사용하여 정제하였다. 구동 완충제는 25 mM 인산칼륨, 1 M 황산암모늄 pH 6.5였고, 용리 완충제는 25 mM 인산칼륨 pH 6.5, 25% 이소프로판올이었다. 30 mL 분획을 수집하고, 피크 분획을 4-20% 트리스-글리신 SDS PAGE에 의해 분리하여 순도를 분석하고, 그에 따라 풀링하였다. 이어서 풀을 10 mg/mL로 농축시키고, PBS 내로 투석하였다. 농축된 이중특이적 항체 풀을 칼럼 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하여 내독소를 제거하였다. 예상외로, 정제 과정 동안 응집체가 다시 관찰되었다. 응집체를 감소시키기 위해, 트리톤 X-114를 단백질 풀 내로 0.1% (v/v)의 최종 농도로 섞었다. 풀을 완전히 혼합하고, 빙상에서 5분 동안 인큐베이션한 다음, 37℃에서 15분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 3,000 x g에서 10분 동안 원심분리하고, 수성 층을 흡인하여 겔 여과를 통과시켜 나머지 트리톤 X-114를 제거하였다. 트리톤 X-114의 첨가는 모든 검출가능한 응집체를 제거하였다.
순도를 4-20% 트리스-글리신 SDS PAGE 겔에 의해 분석하고, 응집체 수준은 SEC에 의해 결정하였다. 어셈블리된 이중특이적 항체의 정체를 LC-ESI/TOF에 의해 그의 무손상 및 환원된 형태에서 확인하였다. 이론적 동종이량체 및 이종이량체 질량이 서로 수 달톤 내에 있기 때문에, 페브리케이터(Fabricator)를 사용하여 Fc 제거 후에 이중특이적 항체를 또한 분석하였다. 무손상 항체를 pH 6.5에서 단백질 1 ug당 1 단위의 패브리케이터로 처리하고, 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. F(ab')2의 정체를 LC-ESI/TOF에 의해 확인하였다.
도 7b는 SEC 분석을 보여주며, 이는 단일의 우세한 종을 밝혀내었다. 도 7c는 (레인 a) 비환원 및 (레인 c) 환원 조건 하에서의 이중특이적 항체의 SDS PAGE 분석을 보여준다. 레인 b는 분자량 마커를 보여준다. 도 7d는 F(ab')2 단편의 LC-ESI/TOF 분석, 및 IL-17 동종이량체, IL-13 동종이량체, 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 F(ab')2에 대한 이론적 분자량을 보여준다.
실시예 7 - 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 시토카인 결합 친화도
인간 및 시노몰구스 원숭이 IL-13 시토카인에 대한 항-IL-17/항-IL-13 이중특이적 항체의 결합 친화도를 비아코어™-T200 기기를 사용하여 측정하였다. 항-IL-13 항체를 CM5 바이오센서 칩 상에 코팅된 마우스 항-인간 Fc 항체 (지이 헬스케어, cat# BR-1008-39)로 포획하여 대략 500 반응 단위 (RU)를 달성하였다. 인간 IL-13, 인간 IL-13R130Q (알레르기 및 천식과 연관된 통상적인 IL-13 변이체, 문헌 [Vladich et al., 2005, J. Clin Invest., 115:747-754] 참조), 및 시노 IL-13의 4-배 연속 희석물 (50nM 내지 49pM)을 25℃에서 HBS-P 완충제 (지이 헬스케어) 중에 30μl/분의 유량으로 주입하였다. 단순 1-대-1 랭뮤어 결합 모델 (비아코어 T200 평가 소프트웨어 버전 2.0)을 사용하여 회합률 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산하였다. 평형 해리 상수 (KD)를 비 koff / kon으로서 계산하였다. 결과를 표 3에 제시한다.
<표 3> 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 비아코어 회합률 및 해리율
Figure pct00004
다양한 IL-17 시토카인에 대한 항-IL-17/항-IL-13 이중특이적 항체의 결합 친화도를 비아코어™-T200 기기를 사용하여 표면 플라즈몬 공명 (SRP)에 의해 측정하였다. 항-IL-17/항-IL-13 이중특이적 항체를 CM5 바이오센서 칩 상에 코팅된 마우스 항-인간 Fc 항체 (지이 헬스케어, cat# BR-1008-39)로 포획하여 대략 500 반응 단위 (RU)를 달성하였다. 동역학적 측정을 위해, 인간 IL-17AA (알앤디 시스템즈, cat#317-ILB-050), 인간 IL-17AF 이종이량체, 인간 IL-17FF (알앤디 시스템즈, cat#1335-IL-025/CF), 시노 IL-17AA, 시노 IL-17AF, 및 시노 IL-17FF의 5-배 연속 희석물 (20nM 내지 32pM)을 25℃에서 HBS-P 완충제 (지이 헬스케어) 중에 30 μl/분의 유량으로 주입하였다. 단순 1-대-1 랭뮤어 결합 모델 (비아코어 T200 평가 소프트웨어 버전 2.0)을 사용하여 회합률 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산하였다. 평형 해리 상수 (KD)를 비 koff/kon으로서 계산하였다. 결과를 표 4에 제시한다.
<표 4> 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 비아코어 회합률 및 해리율
Figure pct00005
실시예 8 - 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 시토카인-유도된 증식의 억제
IL-13-유도된 활성에 대한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 효과를 TF-1 세포에서 다음과 같이 연구하였다. 인간 TF-1 세포 (적백혈병성 세포, 알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)를 37℃ 및 5% CO2의 가습 인큐베이터 내에서 10% 열 불활성화된 소 태아 혈청 (FBS) (카탈로그 번호 SH30071.03, 하이클론 래보러토리즈, 인크.(HyClone Laboratories, Inc.), 유타주 로간); 및 1X 페니실린:스트렙토마이신:글루타민 (카탈로그 번호 10378-016, 깁코 인비트로젠 코포레이션(Gibco Invitrogen Corp.), 캘리포니아주 칼스배드) 및 2 ng/mL rhGM-CSF (카탈로그 번호 215-GM, 알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)를 함유하는 RPMI 1640 성장 배지 중에서 배양하였다. 검정 배지는 2 ng/mL rhGM-CSF가 없는 성장 배지이다. 시토카인을 명시된 바와 같이 하기 최종 농도, 10 ng/ml 인간 IL-13 또는 10ng/ml 인간 IL-13 R130Q로 검정 배지에 첨가하였다.
항체를 96 웰 조직 배양 플레이트 (카탈로그 번호 353072, 팔콘 BD(Falcon BD), 뉴저지주 프랭클린 레이크스)에서 인간 시토카인을 함유하는 검정 배지 중에 3.3배 연속 희석시켰다. 플레이트를 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. TF-1세포를 검정 배지 중에서 2회 세척하고, 2.5 x 105개 세포/ml의 최종 부피로 재현탁시키고, 50μl의 TF-1 세포를 각각의 웰에 첨가하였다. 웰당 총 부피는 100 μL였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2의 가습 인큐베이터 내에서 4일 동안 인큐베이션한 후 웰당 1 μCi의 3H-티미딘을 첨가하였다. 추가로 4시간 인큐베이션한 후에, 3H-티미딘 혼입에 의해 증식을 측정하였다. 세포-회합된 방사능을 섬광 계수에 의해 정량화하였다. 결과를 이중 샘플의 평균으로 표현하였다. 그래프를 생성하고, 칼레이다그래프 (시너지 소프트웨어, 펜실베니아주 레딩)를 사용하여 통계적 분석을 수행하였다.
그러한 실험의 결과를 도 8에 제시한다. 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 TF-1 세포의 IL-13-유도된 (도 8a) 및 IL-13 R130Q-유도된 (도 8b) 증식을 용량 의존성 방식으로, 레브리키주맙과 대등한 효력으로 억제하였다. 표 5는 각각의 항체 및 각각의 시토카인에 대한 IC90 결과를 보여준다.
<표 5> 레브리키주맙 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 대한 IC90 값
Figure pct00006
정상 인간 포피 섬유모세포의 IL-17-유도된 증식에 대한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 효과를 하기와 같이 연구하였다. 정상 인간 포피 섬유모세포 (NHFF)의 동결 분취물을 라이프 테크놀로지스(Life Technologies) (카탈로그 번호 C-004-5C, 라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드)로부터 입수하고, 저 혈청 성장 보충제 (LSGS; 카탈로그 번호 S00310, 라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드)로 보충된 배지 106 (카탈로그 번호 M106500, 라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드) 중에서 증량시켰다. 재조합 인간 IL-17AA 및 IL-17 FF를 알앤디 시스템즈 (IL-17AA: 317-ILB-050 및 IL-17FF: 1335-IL-025/CF)에서 입수하고, 제조업체의 지침에 따라 4mN HCl 중에서 재구성하였다. 재조합 인간 IL-17AF를 사내에서 생성하고 정제하였다.
전날 검정을 수행하고, NHFF의 분취물을 해동하여, 96-웰 편평 바닥 조직 배양 플레이트 내의 100μL의 LSGS-보충된 배지 106 중에 0.125x106개 세포/웰로 시딩하고, 부착을 위해 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 검정 오전에, 배지를 신선한 배지로 100μL/웰로 대체하고, 평형을 위해 세포를 추가로 2+ 시간 동안 인큐베이션하였다.
항체를 최고 농도로서 50μg/ml에서 출발하여 1:3 연속 희석시켰다. 10x 작업 스톡을 500μg/ml로 제조하고, 조직 배양 배지 중에서 연속 희석을 수행하였다. 또한 시토카인을 조직 배양 배지 중에서 10x 작업 스톡으로서 제조하였다. IL-17AA를 1.6ng/ml의 최종 농도를 위해 16ng/ml로, IL-17AF를 125ng/ml의 최종 농도를 위해 1.25ug/ml로, 및 IL-17FF 1.5ug/ml의 최종 농도를 위해 15ug/ml로 희석시켰다. 항체 및 시토카인의 작업 스톡을 각각 10μL/100μL/웰로 첨가하고, 24시간 동안 인큐베이션하였다. 상청액을 수거하고, 새로운 96-웰 둥근 바닥 플레이트로 옮기고, 분석 시까지 -80℃에서 동결시켰다.
알앤디 시스템즈 (미네소타주 미네아폴리스, 카탈로그 번호 DY214)로부터 구입한 상업용 키트를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 G-CSF ELISA를 수행하였다. 엑셀 (마이크로소프트(Microsoft), 워싱턴주 레드먼드) 및 프리즘 (그래프패드 소프트웨어(Graphpad Software), 캘리포니아주 샌디에고) 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하여 IC50 및 IC90 값을 계산하였다.
실험의 결과를 도 9에 제시한다. IL-17AA (1.6 ng/ml, 0.05 nM과 동등함), IL-17AF (125 ng/ml, 4 nM과 동등함), 및 IL-17FF (1.5 μg/ml, 50 nM과 동등함)는 NHFF 세포에서 시토카인-의존성 G-CSF 발현을 도출하였다 (각각 도 9a, b, 및 c에서 열린 사각형 참조). IgG4 대조군 항체는 G-CSF 발현에 대해 어떠한 영향도 미치지 않았지만, 항-IL-17 모 항체 및 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 둘 다는 IL-17의 모든 3종의 이소형에 의해 유도되는 G-CSF 발현을 용량-의존성 방식으로 억제하였다. 표 6은 IL-17 유도된 G-CSF 발현의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 억제에 대한 IC90을 보여준다.
<표 6> 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 대한 IC90 값
Figure pct00007
IL-17AF 이종이량체 및 IL-17F 동종이량체는 강건한 반응을 도출하기 위해 높은 시토카인 농도를 필요로 한다. 그러한 반응의 억제를 위한 IC90은 각각 IL-17AF 및 IL-17F의 경우에 ~2 및 ~1의 항체:시토카인 몰비에서 생성된다.
실시예 9 - 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 의한 IL-13 및 IL-17 둘 다의 중화
동일한 검정에서 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 IL-13 및 IL-17 둘 다를 중화시키는 활성을 BEAS-2B 세포 검정에서 평가하였다. CCL26 mRNA 수준을 사용하여 IL-13 반응을 평가하였고, CXCL1 분비를 ELISA에 의해 측정하여 IL-17 반응을 평가하였다.
BEAS-2B 인간 기관지 상피 세포를 ATCC (카탈로그 번호 ATCC CRL-9609, 버지니아주 마나사스)에서 입수하여 콜라겐-처리된 조직 배양 플라스크 내의 완전 보충 BEGM 배지 (카탈로그 번호 CC-3170, 론자, 메릴랜드주 워커스빌) 중에서 성장시켰다. 재조합 인간 IL-13을 사내에서 생성하고, 재조합 인간 IL-17AA (카탈로그 번호 IL-17AA: 317-ILB-050) 및 TNFα (카탈로그 번호 210-TA-005/CF)는 알앤디 시스템즈 (미네소타주 미네아폴리스)에서 입수하였다.
BEAS-2B 세포의 동결 분취물을 해동하여, 콜라겐-처리된 96-웰 편평 바닥 플레이트 내의 완전 BEGM 배지 중에 104개 세포/웰로 시딩하고, 전면생장률에 도달할 때까지 2-3일 동안 증량되게 하였다. 이어서 배지를 히드로코르티손이 결여된 신선한 BEGM 배지로 대체하고, 스테로이드 금단을 위해 추가로 2-3일 동안 배양하였다. 검정일에, 배지를 100 μL/웰의 히드로코르티손이 결여된 신선한 BEGM으로 대체하고, 37℃에서 수시간 동안 평형화하였다.
항체 희석을 IL-17 섬유모세포 세포 검정에 대해 상기 기재된 바와 같이 수행하였다. 시토카인의 경우에, IL-13 (100 ng/ml), IL-17AA (16 ng/ml), 및 TNFα (1 ng/ml)의 10x 작업 스톡을 제조하고, 각각 10ng/ml, 1.6ng/ml, 및 0.1ng/ml의 최종 농도를 위해 웰에 첨가하고, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후에, 상청액을 수거하고, -80℃에서 동결시키고, 웰 내의 나머지 배지를 흡인하고, 부착된 세포를 함유하는 웰을 차가운 RNase-무함유 PBS로 1회 세척하고, 흡인하고, 세포-대-cDNA II 키트 (카탈로그 번호 AM1723, 라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드)를 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 cDNA 합성을 위해 가공하였다.
인간 CCL26에 대한 택맨 프라이머 및 프로브를 라이프 테크놀로지스 (카탈로그 번호 4331182; 검정 ID: Hs00171146_m1)에서 구입하고, 내부 대조군 RPL19에 대한 것은 사내에서 설계하고 생성하였다 (정방향 프라이머 5'- AGC GGA TTC TCA TGG AAC A-3' (서열식별번호: 96); 역방향 프라이머 5'- CTG GTC AGC CAG GAG CTT-3' (서열식별번호: 97); 및 프로브 5'- TCC ACA AGC TGA AGG CAG ACA AGG-3' (서열식별번호: 98)). 택맨 qPCR 반응을 택맨 유니버셜 PCR 마스터 믹스 (카탈로그 번호 4304437, 라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드)를 사용하여 20 μL 부피/반응으로 설정하고, 어플라이드 바이오시스템즈 7500 실시간 PCR 시스템을 사용하여 PCR 반응을 구동시켰다. 상대량 (RQ) 값은 기준선 반응으로서 처리한 무자극 조건 대비 실험 값의 정규화된 델타 사이클 역치 (dCT) 값의 비로서 계산하였다. RQ 값을 프리즘에서 log[Ab]에 대해 플롯팅하여 IC90 값을 계산하였다.
BEAS-2B 배양물로부터의 상청액을 알앤디 시스템즈로부터 구입한 키트 (카탈로그 번호 DY275)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 ELISA에 의해 CXCL1에 대해 분석하였다. 데이터를 엑셀 및 프리즘 소프트웨어를 사용하여 분석하여 IC50 및 IC90 값을 계산하였다. CXCL1의 농도를 프리즘에서 log[Ab]에 대해 플롯팅하여 IC90 값을 계산하였다.
그러한 실험의 결과를 도 10에 제시한다. 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는 CCL26 발현 (도 10a) 및 CXCL1 발현 (도 10b) 둘 다를 용량-의존성 방식으로 억제하였고, 이는 이중특이적 항체가 동일한 검정에서 IL-13 및 IL-17 둘 다를 중화시킬 수 있음을 시사한다. IC90 값을 비-선형 회귀에 의해 계산하였고, 이를 표 7에 제시한다.
<표 7> 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체에 대한 IC90 값
Figure pct00008
CCL26 발현에 대한 IC90 값 (0.04 μg/ml)은 상기 기재된 IL-13 검정에서의 이중특이적 항체의 IC90과 유사하고 (표 5 참조), CXCL1 발현에 대한 IC90 값 (0.19 μg/ml)은 상기 기재된 IL-17 세포 검정에서의 이중특이적 항체에 대한 IC90과 유사하다 (표 6 참조).
실시예 10 - 마우스에의 투여 후의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 약동학
C57BL/6N 마우스에의 단일 정맥내 (IV) 투여 후의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 약동학을 평가하였다. 체중 범위가 20.4-22.19 그램인 9마리의 암컷 C57BL/6N 마우스에게 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 10 mg/kg 단일 IV 볼루스 용량을 꼬리 정맥을 통해 투여하였다. 투여-후 하기 시점에, n=3 마우스/시점으로부터 혈액을 수집하고, 혈청으로 가공하였다: 5분; 2, 8 및 24시간; 3, 7, 10, 14 및 21일. 각각의 혈청 샘플 중 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 농도를 하기 기재된 바와 같이 ELISA에 의해 결정하였다. 군 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 혈청 농도 대 시간 프로파일을 사용하여, 포에닉스 윈논린(Phoenix WinNonlin) v6 (파르사이트(Pharsight); 캘리포니아주 마운틴 뷰)에 의해 나이브-풀링된 접근법 및 비 구획화 분석 (NCA)을 사용하여 약동학을 평가하였다. 하기 PK 파라미터를 결정하였다:
Figure pct00009
Cmax: 최대 관찰된 혈청 농도
Figure pct00010
AUClast: 제0일부터 측정가능한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 혈청 농도가 존재하는 최종 시점까지의 혈청 농도-시간 곡선하 면적
Figure pct00011
CL: 클리어런스
각각의 마우스 PK 혈청 샘플 중 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 농도를 인간 IgG에 대한 샌드위치 ELISA에 의해 결정하였다. 이 검정에서, 양 항-인간 IgG (H+L) (카탈로그 AU003CUS01, 결합 부위; 영국 버밍엄) 및 염소 항-인간 IgG (H+L) HRP (카탈로그 A80-319P-12, 베틸(Bethyl); 텍사스주 몽고메리)를 각각 포획 및 검출 항체로서 사용하였다. 동물에의 투여를 위한 동일한 로트의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체를 표준물로서 사용하였다. 인간 IgG ELISA는 10% C57BL/6 마우스 혈청 매트릭스까지 검정 범위 0.39 - 25 ng/mL로 허용되었다. 최소 정량화가능한 농도는 순수한 마우스 혈청에서 0.039 μg/mL인 것으로 결정되었다 (1/100의 최소 샘플 희석이 설명됨).
그러한 실험의 결과를 도 11에 제시한다. 풀링된 접근법을 사용하여 PK를 평가하였기 때문에, 오직 단일 PK 파라미터 추정치만을 도 11에 제시한다. C57BL/6N 마우스에의 단일 IV 투여 후에, 항-IL-13/IL-17은 투여후 처음 24시간 내에 혈청 농도에서 신속한 강하를 나타내었고, 이어서 다음 20일에 걸쳐 서서히 감소하였다. Cmax는 211μg/mL였고, 혈청 농도-시간 곡선하 면적 (AUClast)은 1610일 x μg/mL였다. 클리어런스 (CL)는 6.2 mL/일/kg이었다.
실시예 11 - 시노몰구스 원숭이에서의 약동학
시노몰구스 원숭이에의 단일 정맥내 (IV) 투여 후의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 약동학을 평가하였다. 체중 범위가 2.8-3.7 kg인 15마리의 수컷 시노몰구스 원숭이를 3개의 군으로 나누었다 (n=5/군). 각각의 군의 모든 동물에게 비히클 대조군 (군 1), 또는 3 또는 30 mg/kg의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 (각각 군 2 및 3)의 단일 IV 용량을 투여하였다. 투여-후 하기 시점에, 혈액을 수집하고, 혈청으로 가공하였다: 투여전; 15분; 1, 2, 4, 8 및 24시간; 3, 7, 10, 14 및 21일. 각각의 혈청 샘플 중 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 농도를 하기 기재된 바와 같이 ELISA에 의해 결정하였다. 또한 혈청을 하기 기재된 바와 같이 항-치료 항체 (ATA)의 존재에 대해 시험하였다. 개별 동물에 대한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 혈청 농도 대 시간 프로파일을 사용하여, 포에닉스 윈논린 v6 (파르사이트; 캘리포니아주 마운틴 뷰)에 의해 약동학을 평가하고, 개별 및 군 평균 약동학적 파라미터를 보고하였다. 하기 PK 파라미터를 결정하였다:
Figure pct00012
Cmax: 최대 관찰된 혈청 농도
Figure pct00013
AUClast: 제0일부터 측정가능한 항-IL-13/IL-17 혈청 농도가 존재하는 최종 시점까지의 혈청 농도-시간 곡선하 면적
Figure pct00014
CL: 클리어런스
Figure pct00015
Vss: 정상 상태에서의 분포의 부피
개별 시노몰구스 원숭이 혈청 샘플 중 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 농도를 마우스 약동학적 연구에 대해 상기 기재된 바와 같이 샌드위치 인간 IgG ELISA에 의해 분석하였다. 인간 IgG ELISA는 5% 시노몰구스 원숭이 혈청 매트릭스까지 검정 범위 0.39 - 25 ng/mL로 허용되었다. 최소 정량화가능한 농도는 순수한 시노몰구스 원숭이 혈청에서 0.039 μg/mL인 것으로 결정되었다 (1/100의 최소 샘플 희석이 설명됨).
시노몰구스 원숭이 혈청 샘플 중 항-치료 항체 (ATA)를 균질 가교 ELISA를 사용하여 검출하였고, 여기서 ATA는 비오티닐화 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 및 디곡시게닌 (DIG)-표지된 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와 가교하게 하였다. 비오틴-항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 및 DIG-항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체는, 각각 EZ-링크 술포-NHS-Lc-비오틴 (카탈로그 21327, 피어스(Pierce); 뉴욕주 로체스터) 및 3-아미노-3-데옥시디곡시게닌 헤미숙신이미드, 숙신이미딜 에스테르 (카탈로그 A2952, 인비트로젠; 캘리포니아주 칼스배드)를 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 사내에서 제조하였다. 샘플을 비오틴-항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 및 DIG-항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체와 함께 4℃에서 밤새 제1 인큐베이션하였다. 이어서 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체-ATA 면역 복합체를 2 μg/mL의 뉴트라비딘 (써모 사이언티픽; 일리노이주 록포드)으로 사전-코팅된 눈크 맥시소르프 384-웰 플레이트 상에 포획시키고, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)-표지된 마우스 항-DIG 항체 (잭슨 이뮤노리서치; 펜실베니아주 웨스트 그로브)를 사용하여 검출하였다. 기질 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 (TMBE-1000, 모스(Moss); 메릴랜드주 파사데나)과 함께 인큐베이션한 후에, 각각의 샘플 웰의 흡광도 (광학 밀도, OD)를 수득하였다. 검정 컷포인트 (하기 기재됨) 이상의 OD를 갖는 샘플을 ATA 양성으로 간주하였다. 검정은 2% 혈청 매트릭스까지 허용되었고, 순수한 혈청 중에서 50 μg/mL의 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 존재 하에 0.6 μg/mL ATA를 검출할 수 있었다.
검정 컷포인트를 규정하기 위해, 32개의 약물-나이브 시노몰구스 원숭이 혈청 샘플의 패널 (바이오리클레메이션; 뉴욕주 웨스트베리)에 대해 개별 OD를 수득하였다. 또한, 음성 대조군 (풀링된 나이브 시노몰구스 원숭이 혈청, 바이오리클레메이션)의 OD를 동일한 검정 플레이트로부터 수득하였다. 개별 OD를 음성 대조군의 OD로 나누어 개별 OD 비를 제공함으로써 각각의 동물을 정규화하고, 비의 평균 값을 결정하였다. 컷포인트 인자는 이 값 플러스 1.65배 그의 표준 편차로서 계산되었다. 3회의 개별 실험을 구동하고, 결과를 평균하여 검정 컷포인트 인자를 1.9인 것으로 결정하였다. 샘플 분석 시, 이러한 컷포인트 인자를 동일한 플레이트에 대한 음성 대조군의 평균 OD로 곱하여 각각의 검정 플레이트의 컷포인트를 결정하였다. 이러한 검정에 대해 계산된 컷포인트는 대략 5%의 추정 가-양성률을 제공하였다.
실험 결과를 도 12 및 표 8에 제시한다. 표 8은 도 12에 제시된 각각의 동물에 투여된 용량을 보여준다.
<표 8> 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체가 투여된 시노몰구스 원숭이에 대한 약동학적 값
Figure pct00016
비히클 대조군으로 처리된 동물 (군 1)에 대한 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체 혈청 농도는 보고가능한 것 미만 (LTR)인 것으로 발견되었고, 따라서 이들 동물에 대해서는 어떠한 약동학적 분석도 수행되지 않았다.
군 2 및 3에 대한 군 평균 Cmax는 각각 89.9 ± 107 및 1050 ± 102 μg/mL였다. 군 2 및 3에 대한 군 평균 AUClast는 각각 499 ± 107 및 5500 ± 571일*μg/mL였다. Cmax 및 AUClast 둘 다는 용량에 비례하여 증가하는 것으로 관찰되었다. 군 2 및 3에 대한 군 평균 클리어런스 (CL)는 각각 6.12 ± 1.33 및 5.50 ± 0.567 mL/일/kg이었다. 군 2 및 3에 대한 군 평균 Vss는 각각 43.1 ± 12.1 및 23.4 ± 6.51이었다.
항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체로 처리된 10마리의 동물 중, 8마리가 항-치료 항체에 대해 양성으로 시험되었다 (군 2에서 3/5마리의 동물 및 군 3에서 5/5 마리의 동물).
실시예 12 - 시노몰구스 원숭이에서의 IL-17AA 표적 관여
시노몰구스 원숭이 PK 연구가 상기 실시예 11에 기재되어 있다. ELISA를 전개하여 시노몰구스 원숭이 혈청 중 총 IL-17AA를 정량화하여 표적 관여를 입증하였다. 포획 및 검출을 위해 IL-17AA에 특이적인 항체를 사용하였고, 검정 표준물 및 대조군을 제조하기 위해 사내 생성된 재조합 시노몰구스 원숭이 IL-17AA를 사용하였다. 기준선 값을 위해 제-7일 및 제0일, 및 투여-후 제1일, 제3일, 제8일, 제11일, 제15일, 제22일, 제29일, 및 제36일에 혈청을 수집하고, 이들 샘플의 총 IL-17AA 수준을 결정하였다.
결과를 도 13에 제시한다. 혈청 중 유리 IL-17AA는 시토카인의 전형적인 매우 짧은 반감기를 가졌고, 기준선에서 검정 검출 한계 미만이었다. 혈청 IL-17AA가 항체에 결합된 경우에, 항체의 보다 긴 반감기를 나타낼 것이고, 검출가능해질 것이다. 시노몰구스 원숭이 PK 연구에서, IL-17AA 수준은 기준선에서 검출불가능하였고, IL-17AA 수준에서의 강건한 증가는 항-IL-13/IL-17 이중특이적 항체의 투여 후에 관찰되었고, 이는 IL-17AA 관여를 확인시켜주었다. 효과는 둘 다의 용량에 의해 관찰되었고, 용량-의존성이었다. 반응은 상기 기재된 약동학적 결과와 상관되었다.
실시예 13 - 마우스 집 먼지 응애 천식 모델에서의 항-IL-17, 항-IL-13, 및 항-IL-13 플러스 항-IL-17 항체 효능
마우스 집 먼지 응애 (HDM) 천식 모델은 실시예 4에서 상기 기재된 바와 같이 실질적으로 수행되었다. 하기 검정을 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 혈청 및 혈장 중 바이오마커 수준을 결정하였다: TARC (R&D, MCC170), CXCL1 (밀리포어(Millipore), MCYTOMAG-70K), 및 G-CSF (밀리포어, MCYTOMAG-70K).
혈청 TARC 수준은 2상 연구에서 레브리키주맙 처리 후에 감소되는 것으로 제시되었다. 예를 들어, 문헌 [Corren et al., 2011, New England J. Medicine 365:1088-98] 및 US2012/0156194를 참조한다. 도 14a에 제시된 바와 같이, HDM 모델에서, 혈장 TARC 수준은 항-IL-13 항체 또는 항-IL-13 항체 플러스 항-IL-17 항체 처리 후에 하향 추세였지만, 항-IL-17 항체 처리 후에는 그렇지 않았고, 이는 IL-13 경로-특이적 조정을 확인시켜준다. 유사하게, 도 14b 및 9c에 제시된 바와 같이, IL-17 경로 바이오마커, G-CSF 및 CXCL1은 항-IL-17 항체 및 항-IL-13 항체 플러스 항-IL-17 항체 처리 후에 혈청 중에서 유의하게 감소되었다. 도 14에서, *p<0.05, **p<0.005, 및 ***p<0.0005.
상기 본 발명은 이해의 명료함을 위해 예시 및 예의 방식으로 어느 정도 상세하게 기재되었지만, 상기 설명 및 예는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전문이 명백하게 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC. ET AL. <120> ANTI-IL-13/IL-17 BISPECIFIC ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> P5707R1-WO <140> <141> <150> 61/983,945 <151> 2014-04-24 <150> 61/942,823 <151> 2014-02-21 <160> 124 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly 1 5 10 15 Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu 20 25 30 Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys 35 40 45 Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys 50 55 60 Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu 65 70 75 80 Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala 85 90 95 Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala 100 105 110 Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu 115 120 125 Gly Arg Phe Asn 130 <210> 2 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu 1 5 10 15 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gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctca gcagcgtggt gactgtgccc tctagcagct tgggcaccaa gacctacacg 600 tgcaacgtgg atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca aacgcgttga gtccaaatat 660 ggtcccccat gcccaccatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720 ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780 gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080 gtcagcctgt ggtgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260 ttctcatgct 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Lys Phe 50 55 60 Arg Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Thr Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Arg Thr Gly Thr Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val 115 120 125 <210> 122 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 122 Gln Thr Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys 100 <210> 123 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 123 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr His Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Arg Leu 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Glu Gly Asn Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val 115 120 125 <210> 124 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 124 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Ser 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Thr Asp Tyr Phe Cys Leu Gln Tyr Gly Thr Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg 100

Claims (60)

  1. 환자에게 IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 항-IL-13/IL-17 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 호산구성 장애를 치료하는 방법이며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 43으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고, 여기서 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함하는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG 항체인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG1 또는 IgG4 항체인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 절반 항체가 서열식별번호: 72의 서열을 포함하는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 73의 서열을 포함하는 제1 경쇄를 포함하고, 제2 절반 항체가 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22의 서열을 포함하는 제2 경쇄를 포함하는 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 호산구성 장애가 천식인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 호산구성 장애가 중등도 내지 중증 천식인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 천식이 코르티코스테로이드로 비제어되는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 코르티코스테로이드를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 코르티코스테로이드가 흡입용 코르티코스테로이드인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 20 ng/ml 이상의 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 50 ng/ml 이상의 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 혈청 페리오스틴 수준이 ELISA에 의해 결정된 것인 방법.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 페리오스틴 수준이 E4 검정 또는 엘렉시스(ELECSYS)® 페리오스틴 검정에 의해 결정된 것인 방법.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 혈청 페리오스틴이 총 페리오스틴인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 적어도 150/μl의 혈액 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 적어도 200/μl의 혈액 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 적어도 300/μl의 혈액 호산구 카운트를 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
  23. IL-17에 특이적으로 결합하는 제1 VH/VL 유닛을 포함하는 제1 절반 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 VH/VL 유닛을 포함하는 제2 절반 항체를 포함하는 다중특이적 항체이며, 여기서 제1 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 43으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고, 여기서 제2 VH/VL 유닛은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  24. 제23항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 서열과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 39의 VH 서열 및 서열식별번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 제2 VH/VL 유닛이 서열식별번호: 13의 VH 서열 및 서열식별번호: 14의 VL 서열을 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  28. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG 항체인 다중특이적 항체.
  29. 제23항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG1 또는 IgG4 항체인 다중특이적 항체.
  30. 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 다중특이적 항체.
  31. 제23항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 절반 항체가 서열식별번호: 72의 서열을 포함하는 제1 중쇄 및 서열식별번호: 73의 서열을 포함하는 제1 경쇄를 포함하고, 제2 절반 항체가 서열식별번호: 21의 서열을 포함하는 제2 중쇄 및 서열식별번호: 22의 서열을 포함하는 제2 경쇄를 포함하는 것인 다중특이적 항체.
  32. (a) 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항의 다중특이적 항체;
    (b) 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항의 다중특이적 항체의 제1 VH/VL 유닛; 또는
    (c) 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항의 다중특이적 항체의 제2 VH/VL 유닛
    을 코딩하는 단리된 핵산.
  33. 제32항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  34. 제33항에 있어서, 원핵 세포, 바람직하게는 이. 콜라이(E. coli) 세포인 숙주 세포.
  35. 제33항에 있어서, 진핵 세포, 바람직하게는 CHO 세포인 숙주 세포.
  36. 제33항 또는 제34항에 있어서, 이. 콜라이 세포인 숙주 세포.
  37. 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 항체를 생산하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  39. a) 서열식별번호: 107의 서열;
    b) 서열식별번호: 108의 서열; 또는
    c) (a)의 서열 및 (b)의 서열
    을 포함하는 단리된 핵산.
  40. a) 서열식별번호: 105의 서열;
    b) 서열식별번호: 106의 서열; 또는
    c) (a)의 서열 및 (b)의 서열
    을 포함하는 단리된 핵산.
  41. a) 서열식별번호: 103의 서열;
    b) 서열식별번호: 104의 서열; 또는
    c) (a)의 서열 및 (b)의 서열
    을 포함하는 단리된 핵산.
  42. a) 서열식별번호: 99 또는 101의 서열;
    b) 서열식별번호: 100 또는 102의 서열; 또는
    c) (a)의 서열 및 (b)의 서열
    을 포함하는 단리된 핵산.
  43. 제39항 또는 제41항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  44. 제40항 또는 제42항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  45. 서열식별번호: 107 또는 103의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포이며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함되는 것인 숙주 세포.
  46. 서열식별번호: 105, 99 또는 101의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106, 100 또는 102의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포이며, 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함되는 것인 숙주 세포.
  47. 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 원핵 세포인 숙주 세포.
  48. 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 진핵 세포, 바람직하게는 CHO 세포인 숙주 세포.
  49. 제47항에 있어서, 이. 콜라이 세포인 숙주 세포.
  50. 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 제43항 내지 제49항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 생산하는 방법.
  51. 제50항에 있어서, 절반 항체 또는 다중특이적 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  52. (i) 제1 절반 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 서열식별번호: 99, 101 또는 105의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106, 100 또는 102의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계이며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된 것인 단계, 및 (ii) 제2 절반 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 서열식별번호: 107 또는 103의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하는 단계이며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된 것인 단계를 포함하는, 다중특이적 항체를 생산하는 방법.
  53. 제52항에 있어서, 제1 절반 항체를 회수하고 제2 절반 항체를 회수하는 단계를 포함하는 방법.
  54. 제52항 또는 제53항에 있어서, 다중특이적 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 제1 절반 항체 및 제2 절반 항체를 포함하는 혼합물을 형성하는 단계를 포함하는 방법.
  55. 제54항에 있어서, 다중특이적 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  56. (a) 제1 절반 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 서열식별번호: 105, 99 또는 101의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 106, 100 또는 102의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계이며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된 것인 단계, 및 (b) 제2 절반 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 서열식별번호: 107 또는 103의 서열을 포함하는 제1 핵산 및 서열식별번호: 108 또는 104의 서열을 포함하는 제2 핵산을 포함하는 제2 숙주 세포를 배양하는 단계이며, 여기서 제1 핵산 및 제2 핵산은 동일한 핵산 분자 상에 포함되거나 또는 상이한 핵산 분자 상에 포함된 것인 단계; (c) 제1 절반 항체를 회수하고 제2 절반 항체를 회수하는 단계; 및 (d) 다중특이적 항체를 생산하기에 충분한 조건 하에 제1 절반 항체 및 제2 절반 항체를 포함하는 혼합물을 형성하는 단계를 포함하는, 다중특이적 항체를 생산하는 방법.
  57. 제56항에 있어서, 다중특이적 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  58. 제37항, 제38항 및 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산된 다중특이적 항체.
  59. 제23항 내지 제31항 및 제58항 중 어느 한 항의 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역접합체.
  60. 제23항 내지 제31항 및 제58항 중 어느 한 항의 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 제제.
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