TW202043291A - 抗mertk抗體及使用方法 - Google Patents

抗mertk抗體及使用方法 Download PDF

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Abstract

本揭示案提供抗MerTK抗體及其使用方法。該等方法包括投與抗MerTK抗體或其免疫結合物。

Description

抗MERTK抗體及使用方法
本揭示案係關於抗MerTK抗體及其使用方法。
當前，大多數癌症免疫腫瘤學(IO)療法關注於藉由阻斷作為免疫檢查點之抑制性路徑來調節T細胞活性(免疫系統之適應性分支)。然而，該等療法所引發之長期反應僅限於癌症患者之亞群體。相對較低之反應率係由腫瘤微環境中之各種免疫抑制機制引起的。先天性免疫系統係有效免疫反應之組成部分。先天性免疫細胞在適應性免疫反應之起始及後續方向中起至關重要之作用。靶向先天性免疫系統可對適應性免疫腫瘤學療法予以補充(Mullard, A., Nat. Rev. Drug Discov., 17: 3-5 (2018))。
先天性免疫系統之巨噬細胞在各種類型之實體腫瘤中大量存在，且其可導致對基於T細胞之療法的相對較低之反應率。該等巨噬細胞係能夠執行各種功能(包括吞噬作用)之多功能細胞。巨噬細胞係專業吞噬細胞，其高度專攻於去除瀕死或死亡細胞以及細胞碎片。據估計，人體中每天有數十億之細胞死亡。但是，由於吞噬細胞之快速且有效之清除，故很少在正常生理條件下之組織中發現凋亡細胞。在穩態中，凋亡細胞在細胞死亡早期在喪失質膜完整性之前去除。因此，一般而言，凋亡在免疫學上係沈默的。在實體腫瘤中，不受控之腫瘤生長通常伴隨由於缺氧及代謝壓力所致之細胞死亡增加。為逃避免疫監督，腫瘤利用凋亡之非免疫原性性質。腫瘤相關巨噬細胞(TAM)主動去除瀕死之腫瘤細胞，以避免向免疫系統發出警報。
已顯示MerTK在凋亡細胞之清除中起作用。因此，使用MerTK抑制劑降低MerTK介導之凋亡細胞清除係治療癌症之有吸引力的治療方法。已對現有抗MerTK抗體予以闡述，但其可能不適於治療性開發。舉例而言，White等人 (在美國癌症研究協會(American Association for Cancer Research)年會上提出之「MERTK-Specific Antibodies That Have Therapeutic Antitumor Activity in Mice Disrupt the Integrity of the Retinal Pigmented Epithelium in Cynomolgus Monkeys」；2019年3月31日；Atlanta，GA)闡述兩種抗MerTK抗體：一種抗MerTK抗體以較高之親和力結合至人類MerTK (8.7×10-11 M；SRF1)，且一種抗MerTK抗體以較低之親和力(4.4×109 )結合至人類MerTK，但與鼠類MerTK交叉反應(SRF2)。該等抗體顯示在小鼠模型中與抗PD-L1抗體組合可抑制各種MerTK功能且抑制腫瘤生長。然而，發現該兩種抗體均促進食蟹猴中之視網膜毒性。因此，該兩種抗體均不可接受作為治療候選物。該等發現強調在開發具有可接受安全性概況之有效治療候選物中檢查多種因素而非僅抗體親和力之重要性。
因此，業內仍需要用於治療、穩定、預防及/或延遲各種癌症之發展之最佳療法。特定而言，需要具有最佳結合特性(例如結合及解離速率)以及期望生物效應之抗MerTK抗體。
本文所引用之所有參考文獻，包括專利申請案、專利公開案及UniProtKB/Swiss-Prot登錄號均係以全文引用的方式併入本文中，如同每一個別參考文獻明確地且個別地指示以引用方式併入一般。
本文闡述滿足用於治療、穩定、預防及/或延遲各種癌症之發展之最佳化療法所需之抗MerTK抗體及其使用方法。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體降低MerTK介導之凋亡細胞清除。在一些實施例中，該抗體降低MerTK介導之吞噬細胞對凋亡細胞之清除。在一些實施例中，吞噬細胞係巨噬細胞。在例示性實施例中，巨噬細胞係腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，如在室溫下在凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體降低配位體介導之MerTK信號傳導。在一些實施例中，該等抗體誘導促發炎反應，包括(但不限於) I型IFN反應。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體係單株抗體。在一些實施例中，該等抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，該等抗體係結合至MerTK之抗體片段。在一些實施例中，抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域或免疫球蛋白樣結構域。
在例示性實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 83之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 65之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 85之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 67之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 89之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 71之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 91之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 73之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 93之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 75之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL。
在例示性實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 95之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 77之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 97之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 79之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 99之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 81之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域之抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在一些實施例中，該抗體包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 101之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL。在一些實施例中，該抗體包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體係全長IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在某些實施例中，該抗體係全長IgG1抗體。在某些實施例中，該抗體包含LALAPG突變。在一些實施例中，該抗體包含輕鏈可變區中之Q2及L4殘基及重鏈可變區中之I48、G49及K71殘基。在一些實施例中，該抗體包含輕鏈可變區中之L4及F87及重鏈可變區中之V24、I48、G49及K71。在一些實施例中，該抗體包含輕鏈可變區中之L4及P43及重鏈可變區中之K71。在一些實施例中，該抗體包含重鏈可變區中之G49及V78殘基。
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體以≤ 100 nM之25℃下解離常數(Kd)結合至人類MerTK。在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體以≤ 100 nM之25℃下解離常數(Kd)結合至食蟹猴MerTK。在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體以≤ 10 nM之25℃下解離常數(Kd)結合至小鼠MerTK。在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體以≤ 10 nM之25℃下解離常數(Kd)結合至大鼠MerTK。在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體以≤ 10 nM、≤ 5 nM或≤ 2 nM之25℃下解離常數(Kd)結合至人類MerTK。
在一態樣中，本揭示案提供與參照抗體競爭結合至MerTK之經分離抗體。此等參照抗體包括包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL之抗體；及包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之抗體。在一些實施例中，經分離抗體結合至人類MerTK。在一些實施例中，參照抗體係Y323。
在一態樣中，本揭示案提供與參照抗體競爭結合至MerTK上之相同抗原決定基之經分離抗體。此等參照抗體包括包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL之抗體；及包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之抗體。在一些實施例中，經分離抗體結合至人類MerTK。在一些實施例中，參照抗體係Y323。
在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈。在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈。在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈。在另一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈。在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈。在一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈。在另一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈。在另一態樣中，本揭示案提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK降低MerTK介導之凋亡細胞清除。在具體實施例中，抗MerTK抗體降低MerTK介導之吞噬細胞對凋亡細胞之清除。在某些實施例中，吞噬細胞係巨噬細胞。在具體實施例中，巨噬細胞係腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，如在室溫下在凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體增加血液或血漿中之循環腫瘤DNA (ctDNA)。在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體增加血液或血漿中之無細胞DNA (cfDNA)。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK係單株抗體。在某些實施例中，抗MerTK抗體係人類化或嵌合抗體。在某些實施例中，抗MerTK抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在某些實施例中，抗MerTK抗體係結合MerTK之抗體片段。在某些實施例中，抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域或免疫球蛋白樣結構域。在某些實施例中，抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。在某些實施例中，抗MerTK抗體結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域。
在一態樣中，本揭示案提供經分離核酸，其編碼本文所闡述之任一抗MerTK抗體。在另一態樣中，本揭示案提供載體，其包括編碼本文所闡述之任一抗MerTK抗體之核酸。在另一態樣中，本揭示案提供宿主細胞，其含有適於表現編碼本文所闡述之任一抗MerTK抗體之核酸之載體。
本文進一步提供產生本揭示案之抗MerTK抗體之方法，其包括在適於表現抗MerTK抗體之條件下培養含有編碼該抗體之核酸之宿主細胞。在一些實施例中，該方法進一步包括自細胞培養物回收抗MerTK抗體。
在一態樣中，本揭示案係關於免疫結合物，其包括與細胞毒性劑結合之本文所提供之抗MerTK抗體。在另一態樣中，本揭示案係關於醫藥調配物，其包括上文所闡述抗MerTK抗體中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。在另一態樣中，本揭示案係關於醫藥調配物，其包括上文所闡述抗MerTK免疫結合物中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
在一態樣中，本揭示案提供如上文所闡述之抗MerTK抗體或免疫結合物，其用作藥劑。在一些實施例中，用途係治療癌症。在一些實施例中，用途係降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
本文進一步提供如上文所闡述之抗MerTK抗體或免疫結合物之用途，其用於製造藥劑。在一些實施例中，該藥劑用於治療癌症。在一些實施例中，癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。在一些實施例中，癌症包含表現功能性STING多肽之腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性cGAS多肽之腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性Cx43多肽之腫瘤細胞。在某些實施例中，癌症係結腸癌。在一些實施例中，該藥劑用於降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
在一些實施例中，用法可進一步包括額外療法或投與有效量之額外治療劑。在一些實施例中，該額外療法係選自以下中之一或多者：他莫昔芬(tamoxifen)、來曲唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、伊立替康(irinotecan)、西妥昔單抗(cetuximab)、氟維司群(fulvestrant)、長春瑞濱(vinorelbine)、厄洛替尼(erlotinib)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、長春新鹼(vincristine)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、索拉菲尼(sorafenib)、拉帕替尼(lapatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、順鉑(cisplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、胺甲喋呤(methotrexate)、長春鹼(vinblastine)、卡鉑(carboplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、5-氟尿嘧啶、多柔比星(doxorubicin)、硼替佐米(bortezomib)、美法侖(melphalan)、普賴松(prednisone)及多西他賽(docetaxel)。在一些實施例中，該額外治療劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係選自以下中之一或多者：細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)抑制劑、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)結合拮抗劑或程式化死亡配位體1 (PDL1)結合拮抗劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係PDL1結合拮抗劑。在例示性實施例中，PDL1結合拮抗劑係抗PDL1抗體。在一些此等實施例中，抗PDL1抗體係阿替珠單抗(atezolizumab)。在一些實施例中，藥劑進一步與有效量之化學治療劑組合使用。
在另一態樣中，本文提供用於治療個體之癌症或延遲其進展之方法，其包括向該個體投與有效量之如本揭示案中所闡述之抗MerTK抗體或其免疫結合物。在一些實施例中，癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。在一些實施例中，癌症包含表現功能性STING多肽之腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性cGAS多肽之腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性Cx43多肽之腫瘤細胞。在某些實施例中，癌症係結腸癌。
在一些實施例中，該等方法可進一步包括額外療法或投與有效量之額外治療劑。在一些實施例中，該額外療法係選自以下中之一或多者：他莫昔芬、來曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔單抗、氟維司群、長春瑞濱、厄洛替尼、貝伐珠單抗、長春新鹼、甲磺酸伊馬替尼、索拉菲尼、拉帕替尼、曲妥珠單抗、順鉑、吉西他濱、胺甲喋呤、長春鹼、卡鉑、太平洋紫杉醇、5-氟尿嘧啶、多柔比星、硼替佐米、美法侖、普賴松及多西他賽。
在一些實施例中，該額外治療劑係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係選自以下中之一或多者：細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)抑制劑、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)結合拮抗劑或程式化死亡配位體1 (PDL1)結合拮抗劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係PDL1結合拮抗劑。在例示性實施例中，PDL1結合拮抗劑係抗PDL1抗體。在一些此等實施例中，抗PDL1抗體係阿替珠單抗。在一些實施例中，該等方法可進一步包括向個體投與有效量之額外化學治療劑。
在另一態樣中，本文提供降低個體中MerTK介導之凋亡細胞清除之方法，其包括向該個體投與有效量之如本揭示案中所闡述之抗MerTK抗體或其免疫結合物以降低MerTK介導之凋亡細胞清除。在一些實施例中，凋亡細胞之清除降低約1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍或3-4倍，或約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。
應理解，可將本文所闡述各個實施例之一個、一些或全部性質加以組合以形成本揭示案之其他實施例。本揭示案之該等及其他態樣將對熟習此項技術者變得顯而易見。藉由下文之詳細說明來進一步闡述本揭示案之該等及其他實施例。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2019年4月19日提出申請之美國臨時申請案第62/836,580號及2019年8月23日提出申請之美國臨時申請案第62/890,858號之優先權權益；該等臨時申請案中之每一者在此係以全文引用的方式併入。 以ASCII文本檔案提交序列表
以下在ASCII文本檔案上提交之內容係以全文引用的方式併入本文中：序列表之電腦可讀形式(CRF) (檔案名稱：146392047940SEQLIST.TXT，記錄日期：2020年3月30日，大小：136 KB)。 I.    定義
應理解，本揭示案不限於特定組合物或生物系統，其當然可變化。亦應理解，本文所用之術語僅係出於闡述特定實施例之目的，且不意欲具有限制性。
除非內容另外明確指示，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個指示物。因此，舉例而言，對「分子」之提及視情況包括兩個或更多個此等分子之組合及諸如此類。
如本文所用之術語「約」係指為熟習本技術領域者容易知曉之各別值之一般誤差範圍。在本文中提及「約」一值或參數包括(且闡述)關於該值或參數本身之實施例。
應理解，本揭示案之態樣及實施例包括「包含」態樣及實施例、「由其組成」及「基本上由其組成」。
出於本文目的之「接受體人類框架」係包含源自如下文所定義之人類免疫球蛋白框架或人類一致框架之輕鏈可變結構域(VL)框架或重鏈可變結構域(VH)框架之胺基酸序列的框架。「源自」人類免疫球蛋白框架或人類一致框架之接受體人類框架可包含其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數量為10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小、或2或更小或1或更小。在一些實施例中，VL接受體人類框架之序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類一致框架序列一致。在一些實施例中，VH接受體人類框架之序列與VH人類免疫球蛋白框架序列或人類一致框架序列一致。在一些實施例中，VL及VH接受體人類框架之序列與VH及VL人類免疫球蛋白框架序列或人類一致框架序列一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和強度。除非另有指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對成員(例如抗體與抗原)之間的1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可藉由解離常數(Kd)來表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所闡述之彼等方法)來量測。用於量測結合親和力之具體說明性及例示性實施例闡述於下文中。
「親和力成熟」抗體係指與不具有改變之親代抗體相比，在一或多個超變區(HVR)中具有一或多個改變之抗體，此等改變使得抗體對抗原之親和力改良。
術語「抗MerTK抗體」及「結合至MerTK之抗體」係指能夠以足夠親和力結合MerTK，使得該抗體可用作靶向MerTK之診斷劑及/或治療劑之抗體。在一個實施例中，如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)所量測，抗MerTK抗體與不相關、非MerTK蛋白之結合程度小於該抗體與MerTK結合之約10%。在某些實施例中，結合至MerTK之抗體之解離常數(Kd)為≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM (例如10-8 M或更小，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。在某些實施例中，抗MerTK抗體結合至在來自不同物種之MerTK中保守的MerTK抗原決定基。
本文中之術語「抗體」係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗原片段，只要其展現期望之抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指與完整抗體不同包含完整抗體中結合完整抗體所結合抗原之一部分的分子。抗體片段之實例包括(但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及自抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「嵌合」抗體係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定結構域或恆定區之類型。存在5大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且該等類別中之若干者可進一步分成亞類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素(例如At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 、P32 、Pb212 及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如胺甲蝶呤、阿黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(vinca alkaloid) (長春新鹼、長春鹼、依託泊苷(etoposide))、多柔比星、美法侖、絲裂黴素C (mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如溶核酶；抗生素；毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物起源之小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變異體；及下文所揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
「效應功能」係指可歸因於抗體Fc區之彼等生物活性，其可隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在所需劑量及所需時間段內有效達成期望治療或預防結果之量。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈中含有恆定區之至少一部分的C末端區。該術語包括天然序列Fc區及變異體Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文中另外指定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。
「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基以外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常係由四個FR結構域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列通常按以下順序出現在VH (或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，其係指具有實質上與天然抗體結構相似之結構或具有含有如本文所定義Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指其中已引入外源性核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型株」及「經轉型細胞」，其包括原代經轉型細胞及源自其之子代(與傳代次數無關)。子代之核酸含量與親代細胞可不完全相同，而是可含有突變。本文包括經篩選或選擇用於原始經轉型細胞中之具有相同功能或生物活性之突變體子代。
「人類抗體」係具有對應於如下抗體之胺基酸序列之胺基酸序列的抗體：其係由人類或人類細胞產生或源自利用人類抗體譜或其他人類抗體編碼序列之非人類來源。此人類抗體之定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類一致框架」係代表在人類免疫球蛋白VL或VH框架序列之選擇中最常出現之胺基酸殘基之框架。通常，人類免疫球蛋白VL或VH序列之選擇係來自可變結構域序列之亞組。通常，序列之亞組係如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，NIH出版91-3242，Bethesda MD (1991)，第1卷至第3卷中之亞組。在一個實施例中，對於VL而言，該亞組係如Kabat等人，上文文獻中之亞組κ I。在一個實施例中，對於VH而言，該亞組係如Kabat等人，上文文獻中之亞組III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上全部之至少一個、且通常兩個可變結構域，其中全部或實質上全部之HVR (例如CDR)對應於非人類抗體之彼等HVR，且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包含源自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已經歷人類化之抗體。
如本文所用之術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域中在序列上超變(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成結構明確環(「超變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原觸點」)之每一區。通常，抗體包含6個HVR：3個在VH中(H1、H2、H3)，且3個在VL中(L1、L2、L3)。本文中之例示性HVR包括： (a) 超變環，其出現於胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3)處(Chothia及Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))； (b) CDR，其出現於胺基酸殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)處(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))； (c) 抗原觸點，其出現於胺基酸殘基27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)及93-101 (H3)處(MacCallum等人，J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996))；及 (d) (a)、(b)及/或(c)之組合，包括HVR胺基酸殘基46-56 (L2)、47-56 (L2)、48-56 (L2)、49-56 (L2)、26-35 (H1)、26-35b (H1)、49-65 (H2)、93-102 (H3)及94-102 (H3)。
在一個實施例中，HVR殘基包含本揭示案之表 6 中所鑑別之彼等殘基。
除非另有指示，否則可變結構域中之HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據Kabat等人，上文文獻來編號。
「免疫結合物」係結合至一或多種異源分子(包括(但不限於)細胞毒性劑)之抗體。
「個體(individual或subject)」係哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家養動物(例如牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及囓齒類動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體(individual或subject)係人類。
「經分離」抗體係已自其自然環境之組分分離之抗體。在一些實施例中，如藉由(例如)電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或反相HPLC)所測定，抗體純化至大於95%或99%之純度。關於評價抗體純度之方法之綜述，例如參見Flatman等人，J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)。
「經分離」核酸係指已自其自然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含之核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置處。
「編碼抗MerTK抗體之經分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多種核酸分子，包括單一載體或單獨載體中之此(等)核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之此(等)核酸分子。
如本文所用之術語「LALAPG突變」係指抗體Fc區中之突變，其包含以下三種突變：白胺酸234突變為丙胺酸(L234A)、白胺酸235突變為丙胺酸(L235A)及脯胺酸239突變為甘胺酸(P329G)，其先前已顯示降低與Fc受體及補體之結合(例如，參見美國公開案第2012/0251531號及美國專利第8,969,526號)。Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上同源抗體群體獲得之抗體，亦即構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基，可能之變異體抗體(例如含有天然突變或在產生單株抗體製劑期間產生)除外，此等變異體通常以較小量存在。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每一單株抗體係針對抗原上之單一決定子。因此，修飾詞「單株」指示抗體之特徵在於自實質上同源之抗體群體獲得，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由各種技術來製備，包括(但不限於)雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖動物之方法，此等用於製備單株抗體之方法及其他例示性方法闡述於本文中。
「裸抗體」係指不與異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記結合之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體係約150,000道耳頓(dalton)之異四聚體糖蛋白，其由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈構成。自N末端至C末端，每一重鏈具有可變區(VH) (亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域)，之後為三個恆定結構域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N末端至C末端，每一輕鏈具有可變區(VL) (亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域)，之後為恆定輕鏈(CL)結構域。基於抗體恆定結構域之胺基酸序列，可將該抗體之輕鏈指派為稱為卡帕(kappa，κ)及拉姆達(lambda，λ)之兩種類型中之一者。
術語「包裝插頁」用於指通常包括在治療產品之商業包裝內之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或關於此等治療產品之使用警告之資訊。
關於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」係定義為在比對序列且引入空位(視需要)以達成最大序列一致性百分比之後，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分時，候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基之百分比。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的，比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於比對序列之適當參數，包括在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何演算法。然而，出於本文目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來生成胺基酸序列一致性%之值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech, Inc.編寫，且原始碼已與使用者文件一起提交至U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559，在此其以美國著作權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech, Inc., South San Francisco, California公開獲得，或可自原始碼進行編譯。ALIGN-2程式應經編譯用於UNIX作業系統(包括數位UNIX V4.0D)中。所有序列比較參數均由ALIGN-2程式設定且不改變。
在採用ALIGN-2以進行胺基酸序列比較之情形下，如下計算既定胺基酸序列A與既定胺基酸序列B、同既定胺基酸序列B或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者其可表述為與既定胺基酸序列B、同既定胺基酸序列B或相對於既定胺基酸序列B具有或包含一定胺基酸序列一致性%之既定胺基酸序列A)： 100 ×分數X/Y 其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評定為一致性匹配之胺基酸殘基數，且其中Y係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解，在胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度之情形下，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。除非另有明確說明，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性%之值均係如緊接前述段落中所闡述使用ALIGN-2電腦程式獲得。
術語「PD-1軸結合拮抗劑」係指抑制PD-1軸結合搭配物與其一或多個結合搭配物相互作用以去除由PD-1信號傳導軸上之信號傳導引起之T細胞功能障礙，且結果為恢復或增強T細胞功能(例如增殖、產生細胞介素、殺死靶T細胞)的分子。如本文所用，PD-1軸結合拮抗劑包括PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。
術語「PD-1結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與其一或多個結合搭配物(諸如PD-L1及PD-L2)之相互作用引起的信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抑制PD-1與其一或多個結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及/或PD-L2之結合。舉例而言，PD-1結合拮抗劑包括減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與PD-L1及/或PD-L2之相互作用引起的信號轉導之抗PD-1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子。在一個實施例中，PD-1結合拮抗劑降低藉由或藉助經由PD-1之信號傳導所介導T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，以使功能障礙T細胞功能障礙較少(例如增強對抗原識別之效應功能反應(effector response))。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抗PD-1抗體。下文提供PD-1結合拮抗劑之具體實例。
術語「PD-L1結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其一或多個結合搭配物(諸如PD-1及/或B7-1)之相互作用引起的信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抑制PD-L1與其結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及/或B7-1之結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑包括減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L1與其一或多個結合搭配物(諸如PD-1及/或B7-1)之相互作用引起的信號轉導之抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子。在一個實施例中，PD-L1結合拮抗劑降低藉由或藉助經由PD-L1之信號傳導所介導T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，以使功能障礙T細胞功能障礙較少(例如增強對抗原識別之效應功能反應)。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑係抗PD-L1抗體。下文提供PD-L1結合拮抗劑之具體實例。
術語「PD-L2結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其一或多個結合搭配物(諸如PD-1)之相互作用引起的信號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑係抑制PD-L2與其一或多個結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PD-L2結合拮抗劑抑制PD-L2與PD-1之結合。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑包括減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-L2與其一或多個結合搭配物(諸如PD-1)之相互作用引起的信號轉導之抗PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽及其他分子。在一個實施例中，PD-L2結合拮抗劑降低藉由或藉助經由PD-L2之信號傳導所介導T淋巴球上表現之細胞表面蛋白介導的負共刺激信號，以使功能障礙T細胞功能障礙較少(例如增強對抗原識別之效應功能反應)。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑係免疫黏附素。
術語「醫藥調配物」係指如下製劑：其所呈現形式允許其中所含活性成分之生物活性有效，且不含對該調配物將投與之個體具有不可接受毒性之額外組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之成分，其對個體係無毒的。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
除非另有指示，否則如本文所用之術語「MerTK」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然MerTK，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及囓齒類動物(例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋未經處理之「全長」MerTK以及由於在細胞中處理而產生的MerTK之任何形式。該術語亦涵蓋MerTK之天然變異體，例如剪接變異體或等位基因變異體。例示性人類MerTK之胺基酸序列闡述於US 2006/0121562中。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其文法變化形式，諸如「治療(treat或treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程之臨床干預，且其可出於預防性目的或在臨床病理學病程期間實施。治療之合意效應包括(但不限於)預防疾病之發生或復發、緩和症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理結果、預防轉移、降低疾病進展之速率、改善或緩解疾病狀態以及緩解或改良預後。在一些實施例中，使用本發明之抗體來延遲疾病發生或減緩疾病進展。
術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)通常具有相似結構，其中每一結構域包含四個保守框架區(FR)及三個超變區(HVR)。(例如，參見Kindt等人，Kuby Immunology，第6版，W.H. Freeman and Co.，第91頁(2007))。單一VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體的VH或VL結構域來分離以分別篩選互補VL或VH結構域文庫。例如，參見Portolano等人，J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628 (1991)。
如本文所用之術語「載體」係指能夠轉運其所連接之另一核酸之核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構之載體以及納入至引入其之宿主細胞基因體中之載體。某些載體能夠引導與其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。 II.   抗MerTK抗體
本揭示案係基於新穎抗MerTK抗體之發現。此等新穎抗MerTK抗體可用於治療癌症。特定而言，本揭示案係基於如下發現：本文所闡述之抗MerTK抗體增強基於免疫檢查點抑制劑之療法之有效性。
C-Mer原癌基因酪胺酸激酶(MerTK)係一種受體酪胺酸激酶，其在結合至各種配位體(諸如半乳糖凝集素-3、蛋白質S及Gas6)時轉導細胞外信號，由此激活效應基因之表現。MerTK路徑調控基本細胞過程，包括細胞存活、細胞介素產生、遷移、分化及吞噬作用(Cabernoy N.等人，J Cell Physio . 227 (2012): 401-407；Wu, G.等人，Cell Death & Disease 8 (2017): e2700)。MerTK之表現在多種造血細胞類型中發現，諸如巨噬細胞、樹突細胞、天然殺手(NK)細胞。重要的是，MerTK受體路徑在若干種實體及血液癌症中具有活性，包括結腸癌(Wu, G.等人，Cell Death & Disease 8 (2017): e2700)。
MerTK受體係由細胞外組分、跨膜(TM)結構域及細胞內組分構成。如下圖所示，MerTK之細胞外或配位體結合區含有兩個免疫球蛋白(Ig)樣結構域及兩個III型纖連蛋白(FN)樣結構域。
Figure 02_image001
舉例而言，在人類MerTK中，該兩個Ig樣結構域分別由胺基酸殘基76-195及胺基酸殘基199-283界定。另外，人類MerTK之該兩個纖連蛋白樣結構域分別由胺基酸殘基286-384及胺基酸殘基388-480界定。MerTK之細胞內區域含有酪胺酸激酶(TK)結構域，該結構域在配位體結合至細胞外區域後使特定酪胺酸殘基自磷酸化且促進MerTK受體二聚化，由此激活下游效應基因表現(Toledo, R.A等人，Clin Can. Res . 22 (2016): 2301-2312)。人類MerTK包含以下胺基酸序列： MGPAPLPLLLGLFLPALWRRAITEAREEAKPYPLFPGPFPGSLQTDHTPLLSLPHASGYQPALMFSPTQPGRPHTGNVAIPQVTSVESKPLPPLAFKHTVGHIILSEHKGVKFNCSISVPNIYQDTTISWWKDGKELLGAHHAITQFYPDDEVTAIIASFSITSVQRSDNGSYICKMKINNEEIVSDPIYIEVQGLPHFTKQPESMNVTRNTAFNLTCQAVGPPEPVNIFWVQNSSRVNEQPEKSPSVLTVPGLTEMAVFSCEAHNDKGLTVSKGVQINIKAIPSPPTEVSIRNSTAHSILISWVPGFDGYSPFRNCSIQVKEADPLSNGSVMIFNTSALPHLYQIKQLQALANYSIGVSCMNEIGWSAVSPWILASTTEGAPSVAPLNVTVFLNESSDNVDIRWMKPPTKQQDGELVGYRISHVWQSAGISKELLEEVGQNGSRARISVQVHNATCTVRIAAVTRGGVGPFSDPVKIFIPAHGWVDYAPSSTPAPGNADPVLIIFGCFCGFILIGLILYISLAIRKRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM (SEQ ID NO: 137)。
本文提供結合至MerTK之經分離抗體，其中該等抗體具有以下性質中之一或多者：(i)拮抗MerTK之一或多種生物活性，(ii)降低MerTK介導之凋亡細胞清除，(iii)降低MerTK介導之吞噬活性，(iv)增強檢查點抑制劑之腫瘤免疫原性，(v)結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域，(vi)結合至MerTK上之Ig樣結構域，(vii)特異性結合至人類MerTK，(viii)結合至人類、小鼠及/或食蟹猴MerTK中之一或多者，及/或(ix)以小於20 nM (例如小於10 nM、小於5 nM或小於2 nM)之KD 結合至MerTK。A. 例示性抗 MerTK 抗體
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 83之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 83中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 83中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 65之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 65中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 65中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 83及SEQ ID NO: 65中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 84中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 84中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 66中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 66中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 84及SEQ ID NO: 66中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 85之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 85中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 85中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 67之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 67中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 67中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 85及SEQ ID NO: 67中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 102中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 102中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 110之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 110中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 110中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 102及SEQ ID NO: 110中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 86中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 86中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 68中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 68中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 86及SEQ ID NO: 68中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 103之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 103中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 103中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 111之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 111中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 111中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 103及SEQ ID NO: 111中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 87中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 87中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 69中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 69中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 87及SEQ ID NO: 69中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 88中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 88中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 70中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 70中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 88及SEQ ID NO: 70中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 104中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 104中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 112之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 112中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 112中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 104及SEQ ID NO: 112中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 89之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 89中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 89中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 70中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 70中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 89及SEQ ID NO: 70中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 105中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 105中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 113之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 113中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 113中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 113中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 90中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 90中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 71之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 71中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 71中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 90及SEQ ID NO: 71中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 91之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 91中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 91中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 72中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 72中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 91及SEQ ID NO: 72中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 106中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 106中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 114之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 114中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 114中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 114中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 92中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 92中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 73之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 73中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 73中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 92及SEQ ID NO: 73中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 107之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 107中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 107中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 115之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 115中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 115中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 107及SEQ ID NO: 115中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 93之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 93中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 93中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 74中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 74中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 93及SEQ ID NO:74中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 94中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 94中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 75之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 75中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 75中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 94及SEQ ID NO: 75中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 95之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 95中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 95中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 76中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 76中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 95及SEQ ID NO: 76中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 46之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO:43之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 96中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 96中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 77之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 77中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 77中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 96及SEQ ID NO: 77中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 52之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 97之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 97中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 97中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 78中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 78中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 97及SEQ ID NO: 78中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 98中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 98中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 79之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 79中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 79中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 98及SEQ ID NO: 79中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 108之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 108中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 108中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO:52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 116之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 116中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 116中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 116中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 99之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 99中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 99中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 80中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 80中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 99及SEQ ID NO: 80中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 109之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之重鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 109中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 109中之重鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，重鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 117之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之輕鏈序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 117中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 117中之輕鏈序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，輕鏈包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之重鏈及如上文所提供任一實施例中之輕鏈。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 109及SEQ ID NO: 117中之重鏈及輕鏈序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 100中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 100中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 81之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 81中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 81中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 100及SEQ ID NO: 81中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列；及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明之抗MerTK抗體包含(a) VH結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列：(i) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，及(iii) HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO: 64之胺基酸序列；及(b) VL結構域，其包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：(i) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列，(ii) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列，及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供抗MerTK抗體，該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列；(d) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含選自SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在上述任一實施例中，抗MerTK抗體係人類化的。在一個實施例中，抗MerTK抗體包含如上述任一實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類一致框架，其視情況具有最多10個胺基酸取代(例如1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸取代)。在例示性實施例中，此等胺基酸取代對應於來自兔框架區序列之胺基酸殘基，諸如以下殘基中之一或多者：輕鏈可變區框架序列中之Q2、L4、P43及/或F87及/或以下殘基中之一或多者：重鏈可變區框架序列中之V24、I48、G49、K71及/或V78。胺基酸殘基之編號係根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述之EU編號系統(亦稱為EU索引)。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
在另一態樣中，抗MerTK抗體包含與SEQ ID NO: 101之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 101中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 101中之VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗MerTK抗體保留結合至MerTK之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 82中總計有1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況，該抗MerTK抗體包含SEQ ID NO: 82中之VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。在特定實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，提供抗MerTK抗體，其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中，該抗體分別包含SEQ ID NO: 101及SEQ ID NO: 82中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。在例示性實施例中，該抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。
在另一態樣中，本發明提供與本文所提供之抗MerTK參照抗體競爭結合至MerTK之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供與以下抗MerTK參照抗體中之一或多者競爭結合至MerTK之抗體：包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL之抗體；及包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之抗體。在一些實施例中，經分離抗體結合至人類MerTK。在一些實施例中，參照抗體係Y323，其可商業購得(abcam目錄號ab52968)。
在另一態樣中，本發明提供與本文所提供之抗MerTK抗體結合相同抗原決定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供與以下抗MerTK抗體中之任一者結合相同抗原決定基之抗體：包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL之抗體。在某些實施例中，提供結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域內之抗原決定基之抗體，該抗原決定基係由MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基286-384或388-480組成。在一些實施例中，該抗體結合至與抗體Y323所結合相同之抗原決定基，該Y323可商業購得(abcam目錄號ab52968)。
在另一態樣中，本發明提供與本文所提供之抗MerTK抗體結合相同抗原決定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供與以下抗MerTK抗體中之任一者結合相同抗原決定基之抗體：包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈之抗體；包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL之抗體；及包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL之抗體。在某些實施例中，提供結合至MerTK之Ig樣結構域內之抗原決定基之抗體，該抗原決定基係由MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基76-195或199-283組成。
在本發明之另一態樣中，根據上述任一實施例之抗MerTK抗體係單株抗體，包括嵌合、人類化或人類抗體。在一個實施例中，抗MerTK抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙價抗體或F(ab’)2 片段。在另一實施例中，該抗體係全長抗體，例如完整IgG1抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同型。在某些實施例中，該抗體在Fc區中包含突變，該突變降低與Fc受體及/或補體之結合。在一個實施例中，該抗體在Fc區中包含LALAPG突變。
在另一態樣中，根據上述任一實施例之抗MerTK抗體可單獨地或組合地納入如下文部分1至8中所闡述之任一特徵：1.    MerTK 生物活性
在一些實施例中，抗體降低MerTK介導之吞噬細胞對凋亡細胞之清除，例如凋亡細胞之清除降低1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍、3-4倍，或約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。在一些實施例中，吞噬細胞係巨噬細胞。在一些此等實施例中，巨噬細胞係腫瘤相關巨噬細胞(TAM)。在人類中，可基於各種細胞表面標記物之表現來鑑別TAM，該等細胞表面標記物包括CD14、HLA-DR (II類MHC)、CD312、CD115、CD16、CD163、CD204、CD206及CD301。此外，可將特定功能性生物標記物(諸如基質金屬蛋白酶、IL-10、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α或IL-12)之產生與細胞表面生物標記物組合以準確地鑑別TAM群體(Quatromoni, J.等人，Am J Transl Res. 4 (2012): 376-389。)凋亡細胞之清除可藉由熟習此項技術者已知之出於此目的之任一分析來量測。舉例而言，對於活體外凋亡細胞清除分析，使用諸如小鼠腹腔巨噬細胞或人類單核球源性巨噬細胞等吞噬細胞。藉由利用地塞米松處理產生凋亡細胞且利用偵測探針標記。在使凋亡細胞與吞噬細胞一起培育之後，可藉由顯微鏡術或流式細胞術分析吞噬作用。在一些實施例中，如在室溫下在此一凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。舉例而言，在活體內凋亡清除分析中，向小鼠注射地塞米松以誘導胸腺細胞死亡。胸腺中之駐留巨噬細胞識別且吞食瀕死/死亡細胞(Seitz, H. M. J Immunol. 178(9) 5635-5642 (2007)。在一些實施例中，如在此一活體內凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。在一些實施例中，抗體降低配位體介導之MerTK信號傳導。在一些實施例中，配位體係hGAS6-Fc (EC50 =約84 pM)。在一些實施例中，抗體誘導促發炎反應。在一些實施例中，抗體誘導I型IFN反應。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體將對凋亡細胞之吞噬活性降低約10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、75-100%、80-100%、85-100%、90-100%、95-100%、10-95%、20-95%、30-95%、40-95%、50-95%、60-95%、70-95%、75-95%、80-95%、85-95%、90-95%、10-90%、20-90%、30-90%、40-90%、50-90%、60-90%、70-90%、75-90%、80-90%、85-90%、10-85%、20-85%、30-85%、40-85%、50-85%、60-85%、70-85%、75-85%、80-85%、10-80%、20-80%、30-80%、40-80%、50-80%、60-80%、70-80%、75-80%、10-75%、20-75%、30-75%、40-75%、50-75%、60-75%、70-75%、10-70%、20-70%、30-70%、40-70%、50-70%、60-70%、10-65%、20-65%、30-65%、40-65%、50-65%、60-65%、10-60%、20-60%、30-60%、40-60%、50-60%、10-55%、20-55%、30-55%、40-55%、50-55%、10-40%、20-40%或30-40%，或降低至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些實施例中，抗MerTK抗體降低對凋亡細胞之吞噬活性之半最大抑制濃度(IC50)為約1 pM - 50 pM、1 pM - 100 pM、1 pM - 500 pM、1 pM - 1 nM、1 pM - 1.5 nM、5 pM - 50 pM、5 pM - 100 pM、5 pM - 500 pM、5 pM - 1 nM、5 pM - 1.5 nM、10 pM - 50 pM、10 pM - 100 pM、10 pM - 500 pM、10 pM - 1 nM、10 pM - 1.5 nM、50 pM - 100 pM、50 pM - 500 pM、50 pM - 1 nM、50 pM - 1.5 nM、100 pM - 500 pM、100 pM - 1 nM或100 pM - 1.5 nM。測定吞噬活性及IC50之例示性方法闡述於下文實例中。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體使檢查點抑制劑之活性增強約1-2倍、1-5倍、1-10倍、1-15倍、1-20倍、1-25倍、1-30倍、1-50倍、1-75倍、1-100倍、1-150倍、1-200倍、1-250倍、1.5-2倍、1.5-5倍、1.5-10倍、1.5-15倍、1.5-20倍、1.5-25倍、1.5-30倍、1.5-50倍、1.5-75倍、1.5-100倍、1.5-150倍、1.5-200倍、1.5-250倍、2-5倍、2-10倍、2-15倍、2-20倍、2-25倍、2-30倍、2-50倍、2-75倍、2-100倍、2-150倍、2-200倍、2-250倍、2.5-5倍、2.5-10倍、2.5-15倍、2.5-20倍、2.5-25倍、2.5-30倍、2.5-50倍、2.5-75倍、2.5-100倍、2.5-150倍、2.5-200倍、2.5-250倍、5-10倍、5-15倍、5-20倍、5-25倍、5-30倍、5-50倍、5-75倍、5-100倍、5-150倍、5-200倍、5-250倍、10-15倍、10-20倍、10-25倍、10-30倍、10-50倍、10-75倍、10-100倍、10-150倍、10-200倍、10-250倍、20-25倍、20-30倍、20-50倍、20-75倍、20-100倍、20-150倍、20-200倍、20-250倍、25-30倍、25-50倍、25-75倍、25-100倍、25-150倍、25-200倍或25-250倍，或增強至少約1倍、2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、75倍、80倍、90倍、100倍、125倍、150倍、200倍、225倍或250倍。在某些實施例中，如使用如下文實例中所闡述之分析測定，本揭示案之抗MerTK抗體增強檢查點抑制劑之活性，該分析諸如藉由測定與僅使用檢查點抑制劑時腫瘤體積之減少相比，在小鼠腫瘤模型中使用抗MerTK抗體加檢查點抑制劑之組合時腫瘤體積之減少來實施。在某些實施例中，腫瘤體積之減少係在利用治療劑治療後至少10天、14天、20天、21天或30天後來測定。在某些實施例中，檢查點抑制劑係抗PD1軸拮抗劑。在一個例示性實施例中，檢查點抑制劑係抗PD-L1抗體。在另一實施例中，檢查點抑制劑係抗PD1抗體。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體將(例如)血液或血漿樣品中之無細胞DNA (cfDNA)及/或循環腫瘤DNA (ctDNA)增加約1-2倍、1-3倍、1-4倍、1-5倍、1-10倍、1.5-2倍、1.5-3倍、1.5-4倍、1.5-5倍、1.5-10倍、2-3倍、2-4倍、2-5倍、2-10倍、3-5倍、3-10倍、4-5倍、4-10倍、5-10倍，或增加至少約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍。在某些實施例中，如使用如下文實例中所闡述之分析測定，本揭示案之抗MerTK抗體增加無細胞DNA (cfDNA)及/或循環腫瘤DNA (ctDNA)，該分析諸如藉由自血液或血漿樣品分離cfDNA及/或ctDNA且使用PCR及定量DNA電泳偵測cfDNA及/或ctDNA之水準來實施。2. 抗體親和力及特異性
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體之解離常數(Kd)為≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM或≤ 0.001 nM，或約1 pM - 0.1 nM、1 pM - 0.2 nM、1 pM - 0.5 nM、1 pM - 1 nM、1 pM -2 nM、1 pM - 5 nM、1 pM - 10 nM、1 pM - 15 nM、5 pM - 0.1 nM、5 pM - 0.2 nM、5 pM - 0.5 nM、5 pM - 1 nM、5 pM -2 nM、5 pM - 5 nM、5 pM - 10 nM、5 pM - 15 nM、10 pM - 0.1 nM、10 pM - 0.2 nM、10 pM - 0.5 nM、10 pM - 1 nM、10 pM -2 nM、10 pM - 5 nM、10 pM - 10 nM、10 pM - 15 nM、20 pM - 0.1 nM、20 pM - 0.2 nM、20 pM - 0.5 nM、20 pM - 1 nM、20 pM -2 nM、20 pM - 5 nM、20 pM - 10 nM、20 pM - 15 nM、25 pM - 0.1 nM、25 pM - 0.2 nM、25 pM - 0.5 nM、25 pM - 1 nM、25 pM -2 nM、25 pM - 5 nM、25 pM - 10 nM、25 pM - 15 nM、50 pM - 0.1 nM、50 pM - 0.2 nM、50 pM - 0.5 nM、50 pM - 1 nM、50 pM -2 nM、50 pM - 5 nM、50 pM - 10 nM、50 pM - 15 nM、100 pM - 0.2 nM、100 pM - 0.5 nM、100 pM - 1 nM、100 pM -2 nM、100 pM - 5 nM、100 pM - 10 nM或100 pM - 15 nM。在某些實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體之Kd係在25℃下量測。在某些實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體之Kd係在37℃下量測。
在一個實施例中，藉由放射性標記抗原結合分析(RIA)來量測Kd。在一個實施例中，利用相關抗體之Fab型式及其抗原來實施RIA。舉例而言，Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由以下來量測：在滴定系列之未標記抗原存在下，利用最低濃度之(125 I)標記抗原平衡Fab，接著利用抗Fab抗體包被之板捕獲所結合抗原(例如，參見Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881(1999))。為確立該分析之條件，利用50 mM碳酸鈉(pH 9.6)中之5 μg/ml捕獲用抗Fab抗體(Cappel Labs)將MICROTITER® 多孔板(Thermo Scientific)包被隔夜，且隨後在室溫下(大約23℃)利用PBS中之2% (w/v)牛血清白蛋白封閉2至5小時。在非吸附性板(Nunc編號269620)中，將100 pM或26 pM [125 I]抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評價一致)。接著將相關Fab培育隔夜；然而，可繼續培育較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕獲板以在室溫下進行培育(例如1小時)。接著將溶液去除且利用PBS中之0.1%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20® )將板洗滌8次。在板已乾燥時，添加150 μl/孔之閃爍體(MICROSCINT-20TM ; Packard)，且經10分鐘在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對該等板進行計數。選擇得到小於或等於20%最大結合之每一Fab之濃度用於競爭性結合分析。
根據另一實施例，使用BIACORE® 表面電漿子共振分析來量測Kd。舉例而言，在25℃下利用固定化抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)實施使用BIACORE® -2000或BIACORE® -3000 (BIAcore Inc., Piscataway, NJ)之分析。在一個實施例中，根據供應商之說明書，利用N -乙基-N’ -(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N -羥基琥珀醯亞胺(NHS)使羧甲基化之聚葡萄糖生物感測器晶片(CM5, BIACORE, Inc.)活化。利用10 mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5 μg/ml (約0.2 μM)，之後以5 μl/分鐘之流量注射以達成大約10個反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原後，注射1 M乙醇胺以封閉未反應之基團。對於動力學量測，在25℃下以大約25 μl/min之流量注射Fab於含有0.05%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20TM )表面活性劑之PBS (PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78 nM至500 nM)。使用簡單一對一Langmuir結合模型(BIACORE® 評估軟體3.2版)，藉由同時擬合締合及解離感測圖來計算締合速率(k締合 )及解離速率(k解離 )。平衡解離常數(Kd)計算為比率k解離 / k締合 。例如，參見Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)。若藉由上述表面電漿子共振分析測得之締合速率超過106 M-1 s-1 ，則締合速率可藉由使用螢光淬滅技術來測定，該技術在25℃下在漸增濃度之抗原存在下量測於PBS (pH 7.2)中之20 nM抗-抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度之增加或減少(激發= 295 nm；發射= 340 nm，16 nm帶通)，如在光譜儀(諸如具有攪拌比色管之停流裝備之分光光度計(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCOTM 分光光度計(ThermoSpectronic))中所量測。
在某些實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類MerTK、食蟹猴MerTK、小鼠MerTK及/或大鼠MerTK中之一或多者。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體特異性結合至人類MerTK。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類MerTK及食蟹猴MerTK。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類MerTK及小鼠MerTK。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類MerTK、食蟹猴MerTK及小鼠MerTK。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類MerTK、食蟹猴MerTK、小鼠MerTK及大鼠MerTK。在一個實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體特異性結合至小鼠MerTK。
在某些實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至MerTK之Ig樣結構域。在一個實施例中，結合至MerTK之Ig樣結構域之抗MerTK抗體結合至該Ig樣結構域中對應於MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基76-195之一或多個胺基酸殘基，例如該抗MerTK抗體結合至MerTK SEQ ID NO: 129之殘基76-195中之至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸或1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸殘基。在一個實施例中，結合至MerTK之Ig樣結構域之抗MerTK抗體結合至該Ig樣結構域中對應於MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基199-283之一或多個胺基酸殘基，例如該抗MerTK抗體結合至MerTK SEQ ID NO: 129之殘基199-283中之至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸或1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸殘基。
在某些實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。在一個實施例中，結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體結合至該纖連蛋白樣結構域中對應於MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基286-384之一或多個胺基酸殘基，例如該抗MerTK抗體結合至MerTK SEQ ID NO: 129之殘基286-384中之至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸或1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸殘基。在一個實施例中，結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域之抗MerTK抗體結合至該纖連蛋白樣結構域中對應於MerTK SEQ ID NO: 129之胺基酸殘基388-480之一或多個胺基酸殘基，例如該抗MerTK抗體結合至MerTK SEQ ID NO: 129之殘基388-480中之至少1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個胺基酸或1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個或1-10個胺基酸殘基。
在例示性實施例中，如本文所揭示之抗MerTK抗體結合至人類及食蟹猴MerTK之Ig樣結構域。在一個實施例中，此一抗體以大約相同之37℃下Kd結合至人類及食蟹猴MerTK，例如該抗體結合至食蟹猴MerTK之37℃下Kd與該抗體對於人類MerTK之37℃下Kd相差不超過10%、15%或20%。在某些實施例中，此一抗體結合至人類及食蟹猴MerTK之37℃下Kd較該抗體對於小鼠及大鼠MerTK之37℃下Kd優至少20倍、25倍或50倍。3. 抗體片段
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體係抗體片段。抗體片段包括(但不限於) Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2 、Fv及scFv片段，以及下文所闡述之其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)。關於scFv片段之綜述，例如參見Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies ，第113卷，Rosenburg及Moore編輯，(Springer-Verlag, New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包含補救受體結合抗原決定基殘基且具有延長之活體內半衰期之Fab及F(ab')2 片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
雙價抗體係具有兩個抗原結合位點之可為二價或雙特異性之抗體片段。例如，參見EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)。三價抗體及四價抗體亦闡述於Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)中。
單一結構域抗體係包含抗體中重鏈可變結構域之全部或一部分或輕鏈可變結構域之全部或一部分之抗體片段。在某些實施例中，單一結構域抗體係人類單一結構域抗體(Domantis, Inc., Waltham, MA；例如，參見美國專利第6,248,516 B1號)。
如本文所闡述，抗體片段可藉由各種技術來製備，該等技術包括(但不限於)蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E. coli )或噬菌體)來產生。4. 嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體係嵌合抗體。某些嵌合抗體闡述於(例如)美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81:6851-6855 (1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如源自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體係類別或亞類已自親代抗體之類別或亞類發生變化之「類別切換」抗體。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。通常，使非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包含一或多個可變結構域，其中HVR、例如CDR (或其部分)源自非人類抗體，且FR (或其部分)源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所源自之抗體)之相應殘基取代，以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法綜述於(例如) Almagro及Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)中，且進一步闡述於(例如) Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；美國專利第5, 821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36:25-34 (2005) (闡述特異性決定區(SDR)移植)；Padlan，Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (闡述「表面重修」)；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60 (2005) (闡述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36:61-68 (2005)及Klimka等人，Br. J. Cancer , 83:252-260 (2000) (闡述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人類化之人類框架區包括(但不限於)：使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(例如，參見Sims等人，J. Immunol. 151:2296 (1993))；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體一致序列之框架區(例如，參見Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 89:4285 (1992)；及Presta等人，J. Immunol. , 151:2623 (1993))；人類成熟(體細胞突變)框架區或人類生殖系框架區(例如，參見Almagro及Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008))；及源自篩選FR文庫之框架區(例如，參見Baca等人，J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及Rosok等人，J. Bio l. Chem. 271:22611-22618 (1996))。5. 人類抗體
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體係人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術來產生。人類抗體通常闡述於van Dijk及van de Winkel，Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及Lonberg，Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)中。
可藉由向基因轉殖動物投與免疫原來製備人類抗體，該基因轉殖動物已經改良以產生完整人類抗體或具有因應抗原性攻擊之人類可變區之完整抗體。此等動物通常含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分，該等基因座替代內源性免疫球蛋白基因座，或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在此等基因轉殖小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。關於自基因轉殖動物獲得人類抗體之方法之綜述，參見Lonberg，Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)。亦參見(例如)闡述XENOMOUSETM 技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；闡述HUMAB®技術之美國專利第5,770,429號；闡述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號及闡述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號)。可(例如)藉由與不同人類恆定區進行組合來進一步修飾來自由此等動物所產生完整抗體之人類可變區。
人類抗體亦可藉由基於雜交瘤之方法來製備。已闡述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。(例如，參見KozborJ. Immunol. , 133:3001 (1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications ，第51-63頁(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及Boerner等人，J. Immunol. , 147:86 (1991))。經由人類B細胞雜交瘤技術產生之人類抗體亦闡述於Li等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 103:3557-3562 (2006)中。其他方法包括(例如)美國專利第7,189,826號(闡述自雜交瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni，Xiandai Mianyixue , 26(4):265-268 (2006) (闡述人類-人類雜交瘤)中所闡述之彼等方法。人類雜交瘤技術(三源雜交瘤技術)亦闡述於Vollmers及Brandlein，Histology and Histopathology , 20(3):927-937 (2005)以及Vollmers及Brandlein，Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology , 27(3):185-91 (2005)中。
亦可藉由分離選自人類源性噬菌體展示文庫之Fv純系可變結構域序列來產生人類抗體。接著可將此等可變結構域序列與期望之人類恆定結構域組合。自抗體文庫選擇人類抗體之技術闡述於下文中。6. 文庫源性抗體
本發明之抗MerTK抗體可藉由篩選組合文庫中具有一或多種期望活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知用於產生噬菌體展示文庫及自此等文庫篩選具有期望結合特性之抗體之多種方法。此等方法綜述於(例如) Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien等人編輯，Human Press, Totowa, NJ, 2001)中，且進一步闡述於(例如) McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352:624-628 (1991)；Marks等人，J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992)；Marks及Bradbury，Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo編輯，Human Press, Totowa, NJ, 2003)；Sidhu等人，J. Mol. Biol. 338(2):299-310 (2004)；Lee等人，J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004)；Fellouse，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)；及Lee等人，J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)。
在某些噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈式反應(PCR)單獨地選殖VH及VL基因譜且將其隨機重組於噬菌體文庫中，接著可如Winter等人，Ann. Rev. Immunol. , 12: 433-455 (1994)中所闡述篩選抗原結合噬菌體。噬菌體通常展示呈單鏈Fv (scFv)片段或呈Fab片段之抗體片段。來自經免疫來源之文庫無需構築雜交瘤即可提供針對免疫原之高親和力抗體。或者，可如Griffiths等人，EMBO J, 12: 725-734 (1993)中所闡述來選殖原初譜(例如自人類)，以向各種無任何免疫之非自體抗原以及自體抗原提供單一來源之抗體。最終，亦可如Hoogenboom及Winter，J. Mol. Biol. , 227: 381-388 (1992)中所闡述，藉由自幹細胞選殖未重排之V基因區段，且使用含有隨機序列之PCR引子編碼高度可變之CDR3區並在活體外完成重排來合成地製備原初文庫。闡述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括(例如)：美國專利第5,750,373號及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。7. 多特異性抗體
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，一種結合特異性係針對MerTK的，且另一種係針對任一其他抗原的。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合至MerTK之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑局域化至表現MerTK之細胞。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。
用於製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello，Nature 305:537 (1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J. 10:3655 (1991))及「杵臼結構(knob-in-hole)」工程改造(例如，參見美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式來製備：工程改造用於製備抗體Fc-異源二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(例如，參見美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science , 229:81 (1985))；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體(例如，參見Kostelny等人，J. Immunol. , 148(5):1547-1553 (1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙價抗體」技術(例如，參見Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 90:6444-6448 (1993))；及使用單鏈Fv (scFv)二聚體(例如，參見Gruber等人，J. Immunol. , 152:5368 (1994))；及製備三特異性抗體(例如，如Tutt等人，J. Immunol. 147: 60 (1991)中所闡述)。
本文亦包括具有三個或更多個功能性抗原結合位點之工程改造抗體，包括「章魚抗體」(例如，參見US 2006/0025576A1)。
本文中之抗體或片段亦包括「雙重作用之FAb」或「DAF」，其包含結合至MerTK以及另一不同抗原之抗原結合位點(例如，參見US 2008/0069820)。8. 抗體變異體
在某些實施例中，預期本文所提供之抗MerTK抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可期望改良抗MerTK抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入至編碼該抗體之核酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括(例如)抗體之胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入及取代之任一組合以達成最終構築體，條件係最終構築體具有期望特性，例如抗原結合。a) 取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代誘變之相關位點包括HVR及FR。保守取代示於表1中之「較佳取代」標題下。更多實質性變化提供於表1中之「例示性取代」標題下，且如下文關於胺基酸側鏈類別所進一步闡述。可將胺基酸取代引入至相關抗體中且針對期望活性對產物進行篩選，該期望活性係(例如)保留/改良抗原結合、降低免疫原性或改良ADCC或CDC。表 1
原始 殘基 例示性 取代 較佳 取代
Ala (A) Val；Leu；Ile Val
Arg (R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn (N) Gln；His；Asp、Lys；Arg Gln
Asp (D) Glu；Asn Glu
Cys (C) Ser；Ala Ser
Gln (Q) Asn；Glu Asn
Glu (E) Asp；Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸 Leu
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys (K) Arg；Gln；Asn Arg
Met (M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val；Ser Ser
Trp (W) Tyr；Phe Tyr
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸 Leu
可根據常見側鏈性質將胺基酸分組： (1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性：Asp、Glu； (4) 鹼性：His、Lys、Arg； (5) 影響鏈定向之殘基：Gly、Pro； (6) 芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將導致該等類別中之一者之成員交換為另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親代抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個超變區殘基。通常，選擇進行進一步研究之一或多種所得變異體相對於親代抗體將在某些生物性質方面(例如增加之親和力、降低之免疫原性)具有改質(例如改良)及/或將實質上保留親代抗體之某些生物性質。例示性取代變異體係親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(諸如本文所闡述之彼等技術)便捷地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變，且將變異體抗體展示在噬菌體上並針對特定生物活性(例如結合親和力)進行篩選。
可對HVR作出改變(例如取代)以例如改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點(hotspot)」(亦即由在體細胞成熟過程期間經歷高頻率突變之密碼子編碼的殘基) (例如，參見Chowdhury，Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008))及/或接觸抗原之殘基中進行，其中測試所得變異體VH或VL之結合親和力。藉由自二級文庫構築及重新選擇來達成親和力成熟已闡述於(例如) Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien等人編輯，Human Press, Totowa, NJ, (2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法中之任一者(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向誘變)將多樣性引入至選擇用於成熟之可變基因中。二級文庫由此創建。接著對該文庫進行篩選以鑑別具有期望親和力之任一抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR定向方法，其中將若干個HVR殘基(例如一次4至6個殘基)隨機化。可(例如)使用丙胺酸掃描誘變或建模來特定地鑑別參與抗原結合之HVR殘基。特定而言，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生於一或多個HVR內，只要此等改變不會實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可對HVR作出不會實質上降低結合親和力之保守改變(例如如本文所提供之保守取代)。此等改變可(例如)在HVR中之抗原接觸殘基之外。在上文所提供變異體VH及VL序列之某些實施例中，每一HVR未經改變，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
如Cunningham及Wells (1989)Science , 244:1081-1085中所闡述，用於鑑別抗體中可靶向用於誘變之殘基或區域之有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」。在此方法中，鑑別出殘基或目標殘基組(例如帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)，且用中性或帶負電胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)替代以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代展現功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。或者或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體與抗原之間的接觸點。作為取代候選物，可靶向或消除此等接觸殘基及相鄰殘基。可篩選變異體以確定其是否含有期望性質。
胺基酸序列插入包括胺基末端及/或羧基末端融合物(長度在一個殘基至含有上百或更多個殘基之多肽範圍內)以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N末端或C末端與酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽之融合物。b) 糖基化變異體
在某些實施例中，對本文所提供之抗MerTK抗體進行改變以增加或降低抗體糖基化之程度。可藉由改變胺基酸序列從而使得產生或移除一或多個糖基化位點來便捷地完成抗體中糖基化位點之增加或缺失。
在抗體包含Fc區之情形下，可對與Fc區連接之碳水化合物進行改變。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含具支鏈、二分枝寡糖，其通常由N鍵聯連接至Fc區之CH2結構域之Asn297。例如，參見Wright等人，TIBTECH 15:26-32 (1997)。該寡糖可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及連接至二分枝寡糖結構「主幹」中之GlcNAc之岩藻糖。在一些實施例中，可對本發明抗體中之寡糖進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變異體。
在一個實施例中，提供抗體變異體，該變異體具有缺乏連接(直接或間接)至Fc區之岩藻糖之碳水化合物結構。舉例而言，此抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如(例如) WO 2008/077546中所闡述，岩藻糖之量係藉由計算糖鏈內Asn297處之岩藻糖相對於連接至Asn 297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和的平均量來測定，該等量如藉由MALDI-TOF質譜法量測。Asn297係指位於Fc區中約位置297處之天冬醯胺殘基(Fc區殘基之Eu編號)；然而，因抗體中之微小序列變化，故Asn297亦可位於位置297上游或下游之約± 3個胺基酸處，亦即，介於位置294與300之間。此等岩藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。例如，參見美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta, L.)；第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。與「去岩藻糖基化」或「岩藻糖缺乏」抗體變異體有關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87:614 (2004)。能夠產生去岩藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人，Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta, L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其在實例11中)及剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8 剔除CHO細胞(例如，參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87:614 (2004)；Kanda, Y.等人，Biotechnol. Bioeng ., 94(4):680-688 (2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供具有二等分寡糖之抗體變異體，例如其中連接至抗體Fc區之二分枝寡糖由GlcNAc二等分。此等抗體變異體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變異體之實例闡述於(例如) WO 2003/011878 (Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546 (Umana等人)中。亦提供在連接至Fc區之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。此等抗體變異體可具有改良之CDC功能。此等抗體變異體闡述於(例如) WO 1997/30087 (Patel等人)；WO 1998/58964 (Raju, S.)；及WO 1999/22764 (Raju, S.)中。c)    Fc 區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入至本文所提供抗MerTK抗體之Fc區中，藉此產Fc區變異體。該Fc區變異體可包含人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，該序列在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)。
在某些實施例中，本發明涵蓋抗體變異體，該抗體變異體具有一些(但非全部)效應功能，從兒使得該抗體變異體成為許多應用之合意候選物，在該等應用中抗體之活體內半衰期較為重要，但某些效應功能(諸如補體及ADCC)係不必要的或有害的。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以證實CDC及/或ADCC活性降低/缺失。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR於造血細胞上之表現彙總於Ravetch及Kinet，Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)之第464頁上之表3中。評價相關分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例闡述於美國專利第5,500,362號(例如，參見Hellstrom, I.等人，Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人，Proc.Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；第5,821,337號(參見Bruggemann, M.等人，J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987))中。或者，可採用非放射性分析方法(例如，參見用於流式細胞術之ACTI™非放射性細胞毒性分析(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA；及CytoTox 96® 非放射性細胞毒性分析(Promega, Madison, WI)。用於此等分析之可用效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。或者或另外，可在活體內評價相關分子之ADCC活性，例如在諸如Clynes等人，Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型中。亦可實施C1q結合分析以證實抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。例如，參見WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評價補體活化，可實施CDC分析(例如， 參見Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163 (1996)；Cragg, M.S.等人，Blood 101:1045-1052 (2003)；及Cragg, M.S.及M.J. Glennie，Blood 103:2738-2743 (2004))。亦可使用此項技術中已知之方法來實施FcRn結合及活體內清除/半衰期測定(例如， 參見Petkova, S.B.等人，Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006))。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之彼等抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處具有取代之Fc突變體，包括在殘基265及297處取代為丙胺酸之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
闡述具有經改良或降低之FcR結合之某些抗體變異體。(例如，參見美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312，及Shields等人，J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001))。
在某些實施例中，抗體變異體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代之Fc區，例如在Fc區之位置298、333及/或334 (殘基之EU編號)處之取代。
在一些實施例中，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人，J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)中所闡述，在Fc區中作出改變，從而改變(亦即改良或降低) C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
半衰期延長且與新生兒Fc受體(FcRn) (其負責將母體IgG轉移至胎兒中) (Guyer等人，J. Immunol . 117:587 (1976)及Kim等人，J. Immunol . 24:249 (1994))之結合改良之抗體闡述於US2005/0014934A1 (Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有一或多個取代之Fc區，該一或多個取代改良Fc區與FcRn之結合。此等Fc變異體包括在以下Fc區殘基中之一或多者處具有取代之彼等變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如取代Fc區殘基434 (美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan及Winter，Nature 322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及關於Fc區變異體之其他實例之WO 94/29351。
在例示性實施例中，本文所揭示之抗MerTK抗體在Fc區中包含LALPG突變。d) 半胱胺酸工程改造之抗體變異體
在某些實施例中，可期望產生半胱胺酸工程改造之抗體，例如「硫MAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基係在抗體之可及位點處出現。如本文所進一步闡述，藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團藉此定位於抗體之可及位點處，且可用於使抗體結合至其他部分(諸如藥物部分或連接體-藥物部分)，以產生免疫結合物。在某些實施例中，以下殘基中之任一或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205 (Kabat編號)；重鏈之A118 (EU編號)；及重鏈Fc區之S400 (EU編號)。可如(例如)美國專利第7,521,541號中所闡述來產生半胱胺酸工程改造之抗體。e) 抗體衍生物
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體可經進一步修飾以含有此項技術中已知且容易獲得之其他非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三氧雜環己烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或隨機共聚物)及聚葡萄糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有穩定性而在製造方面具有優勢。該聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或無支鏈。連接至抗體之聚合物之數量可有所變化，且若連接一個以上之聚合物，則該等聚合物可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生之聚合物之數量及/或類型可基於包括(但不限於)以下之考慮因素來確定：欲改良抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於定義條件下之療法等。
在另一實施例中，提供抗體與非蛋白質性部分之結合物，其可藉由曝露於輻射來選擇性地加熱。在一個實施例中，非蛋白質性部分係碳奈米管(Kam等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:11600-11605 (2005))。輻射可具有任何波長，且包括(但不限於)如下波長：其並不會危害正常細胞，但會將非蛋白質性部分加熱至可殺死抗體-非蛋白質性部分附近之細胞之溫度。B. 重組方法及組合物
可使用如(例如)美國專利第4,816,567號中所闡述之重組方法及組合物來產生抗體。在一個實施例中，提供編碼本文所闡述之抗MerTK抗體之經分離核酸。此核酸可編碼構成該抗體之VL之胺基酸序列及/或構成該抗體之VH之胺基酸序列(例如該抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多個包含此核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供包含此核酸之宿主細胞。在一個此實施例中，宿主細胞包含以下載體(例如已經以下載體轉型)：(1)包含如下核酸之載體：其編碼構成抗體之VL之胺基酸序列及構成抗體之VH之胺基酸序列，或(2)第一載體，其包含編碼構成抗體之VL之胺基酸序列的核酸，及第二載體，其包含編碼構成抗體之VH之胺基酸序列的核酸。在一個實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供製備抗MerTK抗體之方法，其中該方法包括在適於表現該抗體之條件下培養如上文所提供之包含編碼該抗體之核酸之宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為了重組產生抗MerTK抗體，將例如如上文所闡述之編碼抗體之核酸分離且插入至一或多種載體中以用於進一步選殖及/或在宿主細胞中表現。此核酸可使用習用程序容易地分離且測序(例如藉由使用能夠與編碼該抗體之重鏈及輕鏈的基因特異性結合之寡核苷酸探針)。
用於選殖或表現抗體編碼載體之適宜宿主細胞包括本文所闡述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，特別是在無需糖基化及Fc效應功能時。關於在細菌中表現抗體片段及多肽，例如參見美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton，Methods in Molecular Biology ，第 248 卷 (B.K.C. Lo編輯，Humana Press, Totowa, NJ, 2003)，第245-254頁，其闡述在大腸桿菌中表現抗體片段。)在表現後，抗體可以可溶性部分自細菌細胞漿分離且可經進一步純化。
除原核生物以外，真核微生物(諸如絲狀真菌或酵母)亦係抗體編碼載體之適宜選殖或表現宿主，包括其糖基化路徑已經「人類化」，從而產生具有部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gerngross，Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)，及Li等人，Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)。
用於表現糖基化抗體之適宜宿主細胞亦可源自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出可結合昆蟲細胞使用、特別是用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda )細胞之多種桿狀病毒株。
亦可利用植物細胞培養物作為宿主。例如，參見美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(闡述用於在基因轉殖植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM 技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，可使用適應於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株。可用哺乳動物宿主細胞株之其他實例係藉由SV40轉型之猴腎CV1株(COS-7)；人類胚腎株(293或293細胞，如(例如) Graham等人，J. Gen Virol. 36:59 (1977)中所闡述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠賽特利細胞(TM4細胞，如(例如) Mather，Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)中所闡述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；布法羅大鼠肝細胞(buffalo rat liver cell) (BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如(例如) Mather等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)中所闡述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他可用之哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR- CHO細胞(Urlaub等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，例如參見Yazaki及Wu，Methods in Molecular Biology ，第 248 卷 (B.K.C. Lo編輯，Humana Press, Totowa, NJ)，第255-268頁(2003)。C. 分析
可藉由此項技術中已知之各種分析來鑑別、篩選或表徵本文所提供之抗MerTK抗體之其物理/化學性質及/或生物活性。
在一態樣中，測試本發明抗體之抗原結合活性，例如藉由諸如ELISA、西方墨點等已知方法來實施。
在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別與本文所揭示抗MerTK抗體中之一或多者競爭結合至MerTK之抗體。在某些實施例中，此一競爭性抗體結合至由本文所揭示抗MerTK抗體中之一或多者所結合之相同抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)。用於定位抗體所結合抗原決定基之詳細例示性方法提供於Morris (1996)「Epitope Mapping Protocols」，Methods in Molecular Biology ，第66卷 (Humana Press, Totowa, NJ)中。
在例示性競爭分析中，在溶液中培育固定化MerTK，該溶液包含結合至MerTK之第一經標記抗體及正在測試與該第一抗體競爭結合至MerTK之能力之第二未經標記抗體。該第二抗體可存在於雜交瘤上清液中。作為對照，將固定化MerTK於包含第一經標記抗體而非第二未經標記抗體之溶液中培育。在允許第一抗體與MerTK結合之條件下培育後，去除過量未結合抗體，且量測與固定化MerTK締合之標記的量。若與固定化MerTK締合之標記的量在測試樣品中相對於對照樣品實質上減少，則此指示第二抗體與第一抗體競爭與MerTK之結合。參見Harlow及Lane (1988)Antibodies: A Laboratory Manual ，第14章(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。
在另一態樣中，提供用於鑑別具有生物活性之其抗MerTK抗體之分析。生物活性可包括(例如)降低MerTK介導之吞噬活性、降低MerTK介導之凋亡細胞清除及/或增強檢查點抑制劑之腫瘤免疫原性。亦提供在活體內及/或在活體外具有此生物活性之抗體。
在某些實施例中，測試本發明抗體之此生物活性。本文(包括下文之例示部分)進一步闡述適於量測此生物活性之分析之實例。D. 免疫結合物
本發明亦提供免疫結合物，其包含本文中與一或多種細胞毒性劑結合之抗MerTK抗體，該(等)細胞毒性劑諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素、細菌、真菌、植物或動物起源之酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。
在一個實施例中，免疫結合物係抗體-藥物結合物(ADC)，其中抗體結合至一或多種藥物，該(等)藥物包括(但不限於)類美登素(maytansinoid) (參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧里斯他汀(auristatin)，諸如單甲基奧里斯他汀藥物部分DE及DF (MMAE及MMAF) (參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；多拉司他汀(dolastatin)；卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及Lode等人，Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))；蒽環，諸如道諾黴素或多柔比星(參見Kratz等人，Current Med. Chem. 13:477-523 (2006)；Jeffrey等人，Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006)；Torgov等人，Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005)；Nagy等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000)；Dubowchik等人，Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002)；King等人，J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及美國專利第6,630,579號)；胺甲喋呤；長春地辛(vindesine)；紫杉烷，諸如多西他賽、太平洋紫杉醇、拉洛他賽(larotaxel)、替司他賽(tesetaxel)及奧他賽(ortataxel)；單端孢黴烯(trichothecene)；及CC1065。
在另一實施例中，免疫結合物包含結合至酶活性毒素或其片段之如本文所闡述之抗體，該酶活性毒素或其片段包括(但不限於)白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思子素A鏈、莫迪素(modeccin) A鏈、α-八疊球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、瀉果素(curcin)、巴豆毒素、皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及新月毒素(tricothecene)。
在另一實施例中，免疫結合物包含結合至放射性原子以形成放射性結合物之如本文所闡述之抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性結合物。實例包括At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 、P32 、Pb212 及Lu之放射性同位素。在使用放射性結合物進行偵測時，其可包含用於閃爍法研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，諸如碘-123 (同上)、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙功能蛋白質偶合劑來製備，諸如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)、4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯之雙功能衍生物(諸如己二醯亞胺二甲酯HCl)、活性酯(諸如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，可如Vitetta等人，Science 238:1098 (1987)中所闡述，製備蓖麻毒素免疫毒素。經碳-14標記之1-異氰硫基苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO94/11026。連接體可係有助於細胞中細胞毒性藥物釋放之「可裂解連接體」。舉例而言，可使用酸不穩定連接體、肽酶敏感性連接體、光不穩定連接體、二甲基連接體或含二硫鍵之連接體(Chari等人，Cancer Res. 52:127-131 (1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文之免疫結合物或ADC明確地涵蓋(但不限於)利用交聯試劑製備之此等結合物，該等交聯試劑包括(但不限於) BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB以及SVSB ((4-乙烯基碸)苯甲酸琥珀醯亞胺酯)，以上試劑可商業購得(例如購自Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A)。E. 用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中，本文所提供之抗MerTK抗體中之任一者可用於偵測生物樣品中MerTK之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。
在一個實施例中，提供用於診斷或偵測方法中之抗MerTK抗體。在另一態樣中，提供偵測生物樣品中MerTK之存在之方法。在某些實施例中，該方法包括在允許抗MerTK抗體與MerTK結合之條件下使生物樣品與如本文所闡述之抗MerTK抗體接觸，及偵測在抗MerTK抗體與MerTK之間是否形成複合物。此方法可係活體外或活體內方法。在一個實施例中，抗MerTK抗體用於選擇適用於利用抗MerTK抗體進行治療之個體，例如在MerTK係用於選擇患者之生物標記物之情形下。
在某些實施例中，提供經標記之抗MerTK抗體。標記包括(但不限於)直接偵測之標記或部分(諸如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)，以及經由(例如)酶反應或分子相互作用間接偵測之部分(諸如酶或配位體)。例示性標記包括(但不限於)放射性同位素32 P、14 C、125 I、3 H及131 I、螢光團(諸如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物)、玫瑰紅及其衍生物、丹磺醯、傘形酮、螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、雜環氧化酶(諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶結合)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。F. 醫藥組合物及調配物
本文亦提供醫藥組合物及調配物，其包含抗MerTK抗體及醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，本文所闡述之抗MerTK抗體係在包含約60 mg/mL之量之該抗體、約20 mM濃度之組胺酸乙酸鹽、約120 mM濃度之蔗糖及0.04% (w/v)濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)之調配物中，且該調配物之pH為約5.8。在一些實施例中，本文所闡述之抗PDL1抗體係在包含約125 mg/mL之量之該抗體、約20 mM濃度之組胺酸乙酸鹽、約240 mM濃度之蔗糖及0.02% (w/v)濃度之聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)之調配物中，且該調配物之pH為約5.5。
在製備相關抗MerTK抗體(例如，用於產生可如本文所揭示來調配之抗體之技術詳細闡述於本文中且為此項技術中所已知)之後，製備包含其之醫藥調配物。在某些實施例中，待調配之抗MerTK抗體未經受先前凍乾，且本文中之相關調配物係水性調配物。在某些實施例中，抗MerTK抗體係全長抗體。在一個實施例中，調配物中之抗MerTK抗體係抗體片段，諸如F(ab’)2 ，在該情形下，可能需要解決全長抗體可能不會發生之問題(諸如將抗體剪切成Fab)。藉由慮及(例如)期望之劑量體積及投與模式來確定調配物中存在之抗MerTK抗體之治療有效量。約25 mg/mL至約150 mg/mL、或約30 mg/mL至約140 mg/mL、或約35 mg/mL至約130 mg/mL、或約40 mg/mL至約120 mg/mL、或約50 mg/mL至約130 mg/mL、或約50 mg/mL至約125 mg/mL、或約50 mg/mL至約120 mg/mL、或約50 mg/mL至約110 mg/mL、或約50 mg/mL至約100 mg/mL、或約50 mg/mL至約90 mg/mL、或約50 mg/mL至約80 mg/mL、或約54 mg/mL至約66 mg/mL係調配物中之例示性抗體濃度。
製備水性調配物，其包含於pH緩衝溶液中之抗體。在一些實施例中，本揭示案之緩衝液之pH係在約5.0至約7.0範圍內。在某些實施例中，pH係在約5.0至約6.5範圍內，pH係在約5.0至約6.4範圍內，在約5.0至約6.3範圍內，pH係在約5.0至約6.2範圍內，pH係在約5.0至約6.1範圍內，pH係在約5.5至約6.1範圍內，pH係在約5.0至約6.0範圍內，pH係在約5.0至約5.9範圍內，pH係在約5.0至約5.8範圍內，pH係在約5.1至約6.0範圍內，pH係在約5.2至約6.0範圍內，pH係在約5.3至約6.0範圍內，pH係在約5.4至約6.0範圍內，pH係在約5.5至約6.0範圍內，pH係在約5.6至約6.0範圍內，pH係在約5.7至約6.0範圍內，或pH係在約5.8至約6.0範圍內。在一些實施例中，調配物之pH為6.0或約6.0。在一些實施例中，調配物之pH為5.9或約5.9。在一些實施例中，調配物之pH為5.8或約5.8。在一些實施例中，調配物之pH為5.7或約5.7。在一些實施例中，調配物之pH為5.6或約5.6。在一些實施例中，調配物之pH為5.5或約5.5。在一些實施例中，調配物之pH為5.4或約5.4。在一些實施例中，調配物之pH為5.3或約5.3。在一些實施例中，調配物之pH為5.2或約5.2。將pH控制在此範圍內之緩衝液之實例包括組胺酸(諸如L-組胺酸)或乙酸鈉。在某些實施例中，緩衝液含有濃度為約15 mM至約25 mM之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉。在一些實施例中，緩衝液含有以下濃度之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉：約15 mM至約25 mM、約16 mM至約25 mM、約17 mM至約25 mM、約18 mM至約25 mM、約19 mM至約25 mM、約20 mM至約25 mM、約21 mM至約25 mM、約22 mM至約25 mM、約15 mM、約16 mM、約17 mM、約18 mM、約19 mM、約20 mM、約21 mM、約22 mM、約23 mM、約24 mM或約25 mM。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.0。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.1。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.2。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.3。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.4。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.5。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.6。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.7。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.8。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.9。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.0。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.1。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.2。在一個實施例中，緩衝液係約20 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.3。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.2。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.3。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.4。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.5。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.6。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.7。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.8。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 5.9。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.0。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.1。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.2。在一個實施例中，緩衝液係約25 mM之量之組胺酸乙酸鹽或乙酸鈉，pH 6.3。
在一些實施例中，調配物進一步包含約60 mM至約240 mM之量之蔗糖。在一些實施例中，調配物中之蔗糖為約60 mM至約230 mM、約60 mM至約220 mM、約60 mM至約210 mM、約60 mM至約200 mM、約60 mM至約190 mM、約60 mM至約180 mM、約60 mM至約170 mM、約60 mM至約160 mM、約60 mM至約150 mM、約60 mM至約140 mM、約80 mM至約240 mM、約90 mM至約240 mM、約100 mM至約240 mM、約110 mM至約240 mM、約120 mM至約240 mM、約130 mM至約240 mM、約140 mM至約240 mM、約150 mM至約240 mM、約160 mM至約240 mM、約170 mM至約240 mM、約180 mM至約240 mM、約190 mM至約240 mM、約200 mM至約240 mM、約80 mM至約160 mM、約100 mM至約140 mM或約110 mM至約130 mM。在一些實施例中，調配物中之蔗糖為約60 mM、約70 mM、約80 mM、約90 mM、約100 mM、約110 mM、約120 mM、約130 mM、約140 mM、約150 mM、約160 mM、約170 mM、約180 mM、約190 mM、約200 mM、約210 mM、約220 mM、約230 mM或約240 mM。
在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約40 mg/ml至約125 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗體濃度為約40 mg/ml至約120 mg/ml、約40 mg/ml至約110 mg/ml、約40 mg/ml至約100 mg/ml、約40 mg/ml至約90 mg/ml、約40 mg/ml至約80 mg/ml、約40 mg/ml至約70 mg/ml、約50 mg/ml至約120 mg/ml、約60 mg/ml至約120 mg/ml、約70 mg/ml至約120 mg/ml、約80 mg/ml至約120 mg/ml、約90 mg/ml至約120 mg/ml或約100 mg/ml至約120 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約60 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約65 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約70 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約75 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約80 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約85 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約90 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約95 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約100 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約110 mg/ml。在一些實施例中，調配物中之抗MerTK抗體濃度為約125 mg/ml。
在一些實施例中，將表面活性劑添加至抗MerTK抗體調配物。例示性表面活性劑包括非離子表面活性劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamer) (例如泊洛沙姆188等)。所添加表面活性劑之量應可降低所調配抗體之聚集及/或使調配物中微粒之形成最小化及/或降低吸附。舉例而言，表面活性劑可以約0.001%至約0.5% (w/v)之量存在於調配物中。在一些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)為約0.005%至約0.2%、約0.005%至約0.1%、約0.005%至約0.09%、約0.005%至約0.08%、約0.005%至約0.07%、約0.005%至約0.06%、約0.005%至約0.05%、約0.005%至約0.04%、約0.008%至約0.06%、約0.01%至約0.06%、約0.02%至約0.06%、約0.01%至約0.05%或約0.02%至約0.04%。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.005%或約0.005%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.006%或約0.006%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.007%或約0.007%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.008%或約0.008%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.009%或約0.009%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.01%或約0.01%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.02%或約0.02%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.03%或約0.03%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.04%或約0.04%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.05%或約0.05%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.06%或約0.06%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.07%或約0.07%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.08%或約0.08%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.1%或約0.1%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.2%或約0.2%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.3%或約0.3%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.4%或約0.4%之量存在於調配物中。在某些實施例中，表面活性劑(例如聚山梨醇酯20)係以0.5%或約0.5%之量存在於調配物中。
在一個實施例中，調配物含有上文所鑑別之劑(例如抗體、緩衝劑、蔗糖及/或表面活性劑)，且基本上不含一或多種防腐劑，諸如苄醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇及苄索氯銨。在另一實施例中，調配物中可包括防腐劑，特別是在調配物係多劑量調配物之情形下。防腐劑之濃度可在約0.1%至約2%、較佳約0.5%至約1%範圍內。調配物中可包括一或多種其他醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(諸如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol, A.編輯(1980)中所闡述之彼等劑)，條件係其不會不利地影響調配物之期望特性。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒，且包括：額外緩衝劑；共溶劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；螯合劑，諸如EDTA；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；生物可降解聚合物，諸如聚酯；及/或成鹽相對離子。本文之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX® , Baxter International, Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)闡述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一態樣中，將sHASEGP與一或多種額外糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
本文之調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之蛋白質，較佳為互補活性不會對其他蛋白質產生不利影響之彼等蛋白質。舉例而言，倘若抗體係抗MerTK，則可將其與另一劑(例如化學治療劑及/或抗瘤劑)組合。
如本文所闡述之醫藥組合物及調配物可藉由將具有期望純度之活性成分(諸如抗體或多肽)與一或多種視情況存在之醫藥學上可接受之載劑混合來製備(Remington’s Pharmaceutical Sciences ，第16版，Osol, A編輯(1980))，其呈凍乾調配物或水溶液之形式。醫藥學上可接受之載劑在所採用之劑量及濃度下通常對接受者無毒，且包括(但不限於)：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨(benzalkonium chloride)、苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲基酯或對羥基苯甲酸丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子表面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX® , Baxter International, Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)闡述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一態樣中，將sHASEGP與一或多種額外糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
例示性凍乾抗體調配物闡述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中所闡述之彼等調配物，後者調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文之組合物及調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成分，較佳為互補活性不會對彼此產生不利影響之彼等成分。此等活性成分適於以對預期目的有效之量以組合形式存在。
可將活性成分分別裝入(例如)藉由凝聚技術或藉由界面聚合製備之微膠囊(例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠質藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或粗滴乳液中。此等技術揭示於Remington’s Pharmaceutical Sciences ，第16版，Osol, A.編輯(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適宜實例包括含有抗MerTK抗體之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物件之形式，例如膜或微膠囊。欲用於活體內投與之調配物通常係無菌的。無菌性可藉由(例如)經由無菌濾膜過濾來容易地實現。 III. 治療方法及用途
在一態樣中，本揭示案提供治療患有癌症之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之如上文所闡述之抗MerTK抗體。(i) 單一療法
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體係作為單一療法投與以治療患有癌症之個體。如本文所用，「癌症」係指或闡述哺乳動物中之通常以細胞生長失調為特徵之生理狀況。在某些實施例中，癌症可係實體癌症或血液癌症。實體癌症之特徵通常在於特定組織中之腫瘤團塊形成。如本文所用，「腫瘤」係指所有贅瘤細胞生長及增殖(無論係惡性的抑或良性的)，及所有癌前期及癌性細胞及組織。欲利用本揭示案之抗MerTK抗體治療之實體癌症之非限制性實例包括癌、淋巴瘤、胚細胞瘤及肉瘤。此等癌症之更特定實例包括(但不限於)鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(gastric cancer或stomach cancer) (包括胃腸癌及胃腸基質癌)、胰臟癌、神經膠母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿路癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidney cancer或renal cancer)、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、黑色素瘤、表淺性擴散性黑色素瘤、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、肢端著色斑性黑色素瘤、結節性黑色素瘤以及與斑痣性錯構瘤病相關之異常血管增生、水腫(諸如與腦瘤相關之水腫)、麥格氏症候群(Meigs’ syndrome)、腦頭頸癌及相關轉移。在某些實施例中，適於藉由本揭示案之抗MerTK抗體治療之癌症包括乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰臟癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi’s sarcoma)、類癌、頭頸癌、卵巢癌及間皮瘤。在一些實施例中，癌症係選自：小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經胚細胞瘤、黑色素瘤、乳癌、胃癌、結腸直腸癌(CRC)及肝細胞癌。然而，在一些實施例中，癌症係選自：非小細胞肺癌、結腸直腸癌、神經膠母細胞瘤及乳癌，包括彼等癌症之轉移形式。在一些實施例中，癌症係結腸直腸癌，包括結腸癌及直腸癌。
相比之下，血液癌症起源於血液或骨髓。在一些實施例中，欲利用本揭示案之抗MerTK抗體治療之血液癌症係白血病。白血病之實例包括(但不限於)慢性淋巴球性白血病(CLL)；急性淋巴母細胞性白血病(ALL)；毛細胞白血病；慢性骨髓母細胞性白血病；及急性骨髓母細胞性白血病。在一些實施例中，欲利用本揭示案之抗MerTK抗體治療之血液癌症係淋巴瘤。淋巴瘤之非限制性實例包括T細胞淋巴瘤(諸如成人T細胞白血病/淋巴瘤；肝脾T細胞淋巴瘤；外周T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤；及血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤)、B細胞淋巴瘤(包括低級/濾泡性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)；小淋巴球性(SL) NHL；中級/濾泡性NHL；中級瀰漫性NHL；高級免疫母細胞性NHL；高級淋巴母細胞性NHL；高級非裂解小細胞NHL；巨大腫瘤病變(bulky disease) NHL；瀰漫性大B細胞淋巴瘤；外套細胞淋巴瘤；柏基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)；AIDS相關性淋巴瘤；及瓦登斯特隆巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia))、霍奇金氏淋巴瘤及移植後淋巴增殖性病症 (PTLD)。在一些實施例中，欲利用本揭示案之抗MerTK抗體治療之血液癌症係骨髓瘤。在具體實施例中，骨髓瘤係漿細胞瘤或多發性骨髓瘤。在某些實施例中，適於藉由本揭示案之抗MerTK抗體治療之癌症包括非霍奇金氏淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在另一態樣中，本文提供用於治療個體之癌症或延遲其進展之方法，其包括向該個體投與有效量之如本揭示案中所闡述之抗MerTK抗體。在一些實施例中，治療使得在停止治療之後個體之反應持續。本文所闡述之方法可用於治療期望增強免疫原性之疾患，諸如增加腫瘤免疫原性以供治療癌症。本文亦提供增強患有癌症之個體的免疫功能之方法，其包括向該個體投與有效量之如本揭示案中所闡述之抗MerTK抗體。在一些實施例中，癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。功能性蛋白質係能夠在細胞中執行其常規功能之蛋白質。功能性蛋白質之實例可包括野生型蛋白質、帶標籤之蛋白質及突變蛋白質，其與野生型蛋白質相比保留或改良蛋白質功能。蛋白質功能可藉由熟習此項技術者已知之任何方法來量測，包括對蛋白質或mRNA表現進行分析及對基因體DNA或mRNA進行測序。在一些實施例中，癌症包含表現功能性STING多肽之腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性cGAS多肽之腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性Cx43多肽之腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症係結腸直腸癌，包括結腸癌及直腸癌。
本文亦提供降低個體中MerTK介導之凋亡細胞清除之方法，其包括向該個體投與有效量之如本揭示案中所闡述之抗MerTK抗體，以降低MerTK介導之凋亡細胞清除。在一些實施例中，凋亡細胞之清除降低1-10倍、1-8倍、1-5倍、1-4倍、1-3倍、1-2倍、2-10倍、2-8倍、2-5倍、2-4倍、2-3倍、3-10倍、3-8倍、3-5倍、3-4倍，或降低至少約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。可藉由將投與有效量之抗MerTK抗體或其免疫結合物之後個體樣品中的MerTK介導之凋亡細胞清除水準與MerTK介導之凋亡細胞清除之參照水準進行比較來確定MerTK介導之凋亡細胞清除之降低。在一些實施例中，參照水準係參照樣品中MerTK介導之凋亡細胞清除之水準。在一些實施例中，參照樣品取自投與有效量之抗MerTK抗體或其免疫結合物之前的個體。在一些實施例中，樣品包含腫瘤組織或腫瘤細胞。
在一些實施例中，本揭示案之抗MerTK抗體將對凋亡細胞之吞噬活性降低約10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、75-100%、80-100%、85-100%、90-100%、95-100%、10-95%、20-95%、30-95%、40-95%、50-95%、60-95%、70-95%、75-95%、80-95%、85-95%、90-95%、10-90%、20-90%、30-90%、40-90%、50-90%、60-90%、70-90%、75-90%、80-90%、85-90%、10-85%、20-85%、30-85%、40-85%、50-85%、60-85%、70-85%、75-85%、80-85%、10-80%、20-80%、30-80%、40-80%、50-80%、60-80%、70-80%、75-80%、10-75%、20-75%、30-75%、40-75%、50-75%、60-75%、70-75%、10-70%、20-70%、30-70%、40-70%、50-70%、60-70%、10-65%、20-65%、30-65%、40-65%、50-65%、60-65%、10-60%、20-60%、30-60%、40-60%、50-60%、10-55%、20-55%、30-55%、40-55%、50-55%、10-40%、20-40%或30-40%，或降低至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些實施例中，抗MerTK抗體降低對凋亡細胞之吞噬活性之半最大抑制濃度(IC50)為約1 pM - 50 pM、1 pM - 100 pM、1 pM - 500 pM、1 pM - 1 nM、1 pM - 1.5 nM、5 pM - 50 pM、5 pM - 100 pM、5 pM - 500 pM、5 pM - 1 nM、5 pM - 1.5 nM、10 pM - 50 pM、10 pM - 100 pM、10 pM - 500 pM、10 pM - 1 nM、10 pM - 1.5 nM、50 pM - 100 pM、50 pM - 500 pM、50 pM - 1 nM、50 pM - 1.5 nM、100 pM - 500 pM、100 pM - 1 nM或100 pM - 1.5 nM。
在一些實施例中，個體係人類。
抗MerTK抗體可靜脈內、肌內、皮下、經局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、室內或鼻內投與。抗MerTK抗體之適當劑量可基於欲治療疾病之類型、疾病之嚴重程度及病程、個體之臨床狀況、個體之臨床病史及對治療之反應以及主治醫師之判斷來確定。(ii) 與額外療法之組合
在一些實施例中，該等用途及方法可進一步包含額外療法或投與有效量之額外治療劑。額外療法可係放射療法、手術(例如乳房腫瘤切除術及乳房切除術)、化學療法、基因療法、DNA療法、病毒療法、RNA療法、免疫療法、骨髓移植、奈米療法、單株抗體療法或前述之組合。額外療法可呈輔助或前導性療法形式。在一些實施例中，額外療法係投與小分子酶抑制劑或抗轉移劑。在一些實施例中，額外療法係投與副作用限制劑(例如意欲減輕治療副作用之出現及/或嚴重程度之劑，諸如抗噁心劑等)。在一些實施例中，額外療法係放射療法。在一些實施例中，額外療法係手術。在一些實施例中，額外療法係放射療法與手術之組合。在一些實施例中，額外療法係伽馬輻照。在一些實施例中，額外療法係靶向PI3K/AKT/mTOR路徑之療法、HSP90抑制劑、微管蛋白抑制劑、凋亡抑制劑及/或化學預防劑。
在一些實施例中，額外療法係針對B7-H3 (亦稱為CD276)之拮抗劑，例如阻斷性抗體MGA271；針對TGF β之拮抗劑，例如美替木單抗(metelimumab) (亦稱為CAT-192)、夫蘇木單抗(fresolimumab) (亦稱為GC1008)或LY2157299；包含過繼性轉移表現嵌合抗原受體(CAR)之T細胞(例如細胞毒性T細胞或CTL)之治療；包含過繼性轉移包含顯性負性TGF β受體(例如顯性負性TGF β II型受體)之T細胞之治療；包含HERCREEM方案(例如，參見ClinicalTrials.gov標識符NCT00889954)之治療；針對CD137 (亦稱為TNFRSF9、4-1BB或ILA)之促效劑，例如活化性抗體烏瑞魯單抗(urelumab) (亦稱為BMS-663513)；針對CD40之促效劑，例如活化性抗體CP-870893；針對OX40 (亦稱為CD134)之促效劑，例如與不同抗OX40抗體(例如AgonOX)聯合投與之活化性抗體；針對CD27之促效劑，例如活化性抗體CDX-1127、吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)、1-甲基-D-色胺酸(亦稱為1-D-MT)；抗體-藥物結合物(在一些實施例中，包含莫登素(mertansine)或單甲基奧里斯他汀E (MMAE))；抗NaPi2b抗體-MMAE結合物(亦稱為DNIB0600A或RG7599)曲妥珠單抗艾坦辛(trastuzumab emtansine) (亦稱為T-DM1、阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(ado-trastuzumab emtansine)或KADCYLA®, Genentech)、DMUC5754A；靶向內皮素B受體(EDNBR)之抗體-藥物結合物，例如針對EDNBR之抗體與MMAE (血管生成抑制劑)之結合物；針對VEGF (例如VEGF-A)之抗體貝伐珠單抗(亦稱為AVASTIN®, Genentech)；針對血管生成素2 (亦稱為Ang2)之抗體MEDI3617 (抗贅瘤劑)；靶向CSF-1R (亦稱為M-CSFR或CD115)之劑抗CSF-1R (亦稱為IMC-CS4)；干擾素，例如干擾素α或干擾素γ；羅飛龍-A (Roferon-A)；GM-CSF (亦稱為重組人類顆粒球巨噬細胞群落刺激因子、rhu GM-CSF、沙格司亭(sargramostim)或Leukine®)；IL-2 (亦稱為阿地介白素(aldesleukin)或Proleukin®)；IL-12；靶向CD20之抗體(在一些實施例中，靶向CD20之抗體係奧妥珠單抗(obinutuzumab) (亦稱為GA101或Gazyva®)或利妥昔單抗(rituximab))；靶向GITR之抗體(在一些實施例中，靶向GITR之抗體係TRX518)，聯合癌症疫苗(在一些實施例中，癌症疫苗係肽癌症疫苗，其在一些實施例中係個人化肽疫苗；在一些實施例中，肽癌症疫苗係多價長肽、多肽、肽混合劑、雜合肽或肽脈衝樹突細胞疫苗(例如，參見Yamada等人，Cancer Sci, 104:14-21, 2013))，其聯合佐劑使用；TLR促效劑，例如聚-ICLC (亦稱為Hiltonol®)、LPS、MPL或CpG ODN；腫瘤壞死因子(TNF) α；IL-1；HMGB1；IL-10拮抗劑；IL-4拮抗劑；IL-13拮抗劑；HVEM拮抗劑；ICOS促效劑，例如藉由投與ICOS-L或針對ICOS之促效抗體；靶向CX3CL1之治療；靶向CXCL10之治療；靶向CCL5之治療；LFA-1或ICAM1促效劑；選擇素促效劑；靶向療法；B-Raf抑制劑威羅菲尼(vemurafenib) (亦稱為Zelboraf®)、達拉菲尼(dabrafenib) (亦稱為Tafinlar®)、厄洛替尼(亦稱為Tarceva®)；MEK (諸如MEK1 (亦稱為MAP2K1)或MEK2 (亦稱為MAP2K2))之抑制劑考比替尼(cobimetinib) (亦稱為GDC-0973或XL-518)、曲美替尼(trametinib) (亦稱為Mekinist®)；K-Ras抑制劑；c-Met抑制劑昂妥珠單抗(onartuzumab) (亦稱為MetMAb)；Alk抑制劑AF802 (亦稱為CH5424802或阿雷替尼(alectinib))；磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑BKM120、艾代拉里斯(idelalisib) (亦稱為GS-1101或CAL-101)、哌立福辛(perifosine) (亦稱為KRX-0401)、Akt、MK2206、GSK690693、GDC-0941；mTOR抑制劑西羅莫司(sirolimus) (亦稱為雷帕黴素(rapamycin))、替西羅莫司(temsirolimus) (亦稱為CCI-779或Torisel®)、依維莫司(everolimus) (亦稱為RAD001)、利達莫司(ridaforolimus) (亦稱為AP-23573、MK-8669或地伏莫司(deforolimus))、OSI-027、AZD8055、INK128；雙重PI3K/mTOR抑制劑XL765、GDC-0980、BEZ235 (亦稱為NVP-BEZ235)、BGT226、GSK2126458、PF-04691502或PF-05212384 (亦稱為PKI-587)。在一些實施例中，額外治療劑係CT-011 (亦稱為匹利珠單抗(Pidilizumab)或MDV9300；CAS登記號1036730-42-3；CureTech/Medivation)。CT-011亦稱為hBAT或hBAT-1，其係WO2009/101611中所闡述之抗體。(iii) 與免疫檢查點抑制劑之組合
在一些實施例中，額外治療劑係免疫檢查點抑制劑。在某些態樣中，本申請案提供增強患有癌症之個體之免疫功能之方法，其包括投與有效量之抗MerTK抗體與免疫檢查點抑制劑之組合。在某些實施例中，抗MERTK抗體使免疫檢查點抑制劑之免疫效應提高約2倍、3倍、5倍、8倍、10倍、15倍或20倍。在某些實施例中，抗MERTK抗體使免疫檢查點抑制劑之免疫效應提高約1-2倍、1-5倍、1-10倍、1-15倍、1-20倍、1-25倍、1-30倍、1-50倍、1-75倍、1-100倍、1-150倍、1-200倍、1-250倍、1.5-2倍、1.5-5倍、1.5-10倍、1.5-15倍、1.5-20倍、1.5-25倍、1.5-30倍、1.5-50倍、1.5-75倍、1.5-100倍、1.5-150倍、1.5-200倍、1.5-250倍、2-5倍、2-10倍、2-15倍、2-20倍、2-25倍、2-30倍、2-50倍、2-75倍、2-100倍、2-150倍、2-200倍、2-250倍、2.5-5倍、2.5-10倍、2.5-15倍、2.5-20倍、2.5-25倍、2.5-30倍、2.5-50倍、2.5-75倍、2.5-100倍、2.5-150倍、2.5-200倍、2.5-250倍、5-10倍、5-15倍、5-20倍、5-25倍、5-30倍、5-50倍、5-75倍、5-100倍、5-150倍、5-200倍、5-250倍、10-15倍、10-20倍、10-25倍、10-30倍、10-50倍、10-75倍、10-100倍、10-150倍、10-200倍、10-250倍、20-25倍、20-30倍、20-50倍、20-75倍、20-100倍、20-150倍、20-200倍、20-250倍、25-30倍、25-50倍、25-75倍、25-100倍、25-150倍、25-200倍或25-250倍，或增加至少約1倍、2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、75倍、80倍、90倍、100倍、125倍、150倍、200倍、225倍或250倍。
在一些實施例中，個體患有對一或多種免疫檢查點抑制劑具有抗性(已展示具有抗性)之癌症。在一些實施例中，對免疫檢查點抑制劑之抗性包括癌症或難治性癌症之復發。復發可係指在治療後，癌症在原始位點或新位點重新出現。在一些實施例中，對免疫檢查點抑制劑之抗性包括在利用免疫檢查點抑制劑治療期間癌症之進展。在一些實施例中，對免疫檢查點抑制劑之抗性包括對治療沒有反應之癌症。癌症可在治療開始具有抗性，或其可在治療期間產生抗性。在一些實施例中，癌症處於早期或晚期。
關於治療性免疫檢查點抑制劑之進一步細節提供於下文及例如Byun等人(2017)Nat Rev Endocrinol . 13: 195-207；La-Beck等人(2015)Pharmacotherapy . 35(10): 963-976；Buchbinder等人(2016)Am J Clin Oncol. 39(1): 98-106；Michot等人(2016)Eur J Cancer . 54: 139-148，及Topalian等人(2016)Nat Rev Cancer. 16: 275-287中。 CTLA4 抑制劑
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4) (亦稱為CD152)抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4抑制劑係阻斷性抗體伊匹單抗(ipilimumab) (亦稱為MDX-010、MDX-101或Yervoy®)、曲美目單抗(tremelimumab) (亦稱為替西木單抗(ticilimumab)或CP-675,206)。 PD-1 軸結合拮抗劑
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係PD-1軸結合拮抗劑。
本文提供用於治療個體癌症之方法，其包括向該個體投與有效量之PD-1軸結合拮抗劑及本揭示案之抗MerTK抗體。本文亦提供增強個體(例如患有癌症之個體)之免疫功能或反應之方法，其包括向該個體投與有效量之PD-1軸結合拮抗劑及本揭示案之抗MerTK抗體。
在此等方法中，PD-1軸結合拮抗劑包括PD-1結合拮抗劑、PDL1結合拮抗劑及/或PDL2結合拮抗劑。「PD-1」之替代名稱包括CD279及SLEB2。「PDL1」之替代名稱包括B7-H1、B7-4、CD274及B7-H。「PDL2」之替代名稱包括B7-DC、Btdc及CD273。在一些實施例中，PD-1、PDL1及PDL2係人類PD-1、PDL1及PDL2。
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抑制PD-1與其配位體結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PD-1配位體結合搭配物係PDL1及/或PDL2。在另一實施例中，PDL1結合拮抗劑係抑制PDL1與其結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PDL1結合搭配物係PD-1及/或B7-1。在另一實施例中，PDL2結合拮抗劑係抑制PDL2與其結合搭配物之結合之分子。在具體態樣中，PDL2結合搭配物係PD-1。拮抗劑可係抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽或小分子。若拮抗劑係抗體，則在一些實施例中，該抗體包含選自由IgG1、IgG2、IgG3及IgG4組成之群之人類恆定區。 A. 抗PD-1抗體
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係抗PD-1抗體(例如人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體)。多種抗PD-1抗體可用於本文所揭示之方法中。在本文之任一實施例中，PD-1抗體可結合至人類PD-1或其變異體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係選自由Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、scFv及(Fab’)2 片段組成之群之抗體片段。在一些實施例中，抗PD-1抗體係嵌合或人類化抗體。在其他實施例中，抗PD-1抗體係人類抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係尼沃魯單抗(nivolumab) (CAS登記號：946414-94-4)。尼沃魯單抗(Bristol-Myers Squibb/Ono)亦稱為MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558及OPDIVO®，其係WO2006/121168中所闡述之抗PD-1抗體。在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈包含以下胺基酸序列： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWY DGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 118)，且 (b)  輕鏈包含以下胺基酸序列： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 119)。
在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含來自SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 119之六個HVR序列(例如來自SEQ ID NO: 118之三個重鏈HVR及來自SEQ ID NO: 119之三個輕鏈HVR)。在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含來自SEQ ID NO: 118之重鏈可變結構域及來自SEQ ID NO: 119之輕鏈可變結構域。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係派姆單抗(pembrolizumab) (CAS登記號：1374853-91-4)。派姆單抗(Merck)亦稱為MK-3475、Merck 3475、蘭布魯珠單抗(lambrolizumab)、SCH-900475及KEYTRUDA®，其係WO2009/114335中所闡述之抗PD-1抗體。在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈包含以下胺基酸序列： QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGG INPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 120)，且 (b)  輕鏈包含以下胺基酸序列： EIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLES GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 121)。
在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含來自SEQ ID NO: 120及SEQ ID NO: 121之六個HVR序列(例如來自SEQ ID NO: 120之三個重鏈HVR及來自SEQ ID NO: 121之三個輕鏈HVR)。在一些實施例中，該抗PD-1抗體包含來自SEQ ID NO: 120之重鏈可變結構域及來自SEQ ID NO: 121之輕鏈可變結構域。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係MEDI-0680 (AMP-514; AstraZeneca)。MEDI-0680係人類化IgG4抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係PDR001 (CAS登記號1859072-53-9; Novartis)。PDR001係阻斷PDL1及PDL2與PD-1之結合之人類化IgG4抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係REGN2810 (Regeneron)。REGN2810係人類抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係BGB-108 (BeiGene)。在一些實施例中，抗PD-1抗體係BGB-A317 (BeiGene)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係JS-001 (Shanghai Junshi)。JS-001係人類化抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係STI-A1110 (Sorrento)。STI-A1110係人類抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係INCSHR-1210 (Incyte)。INCSHR-1210係人類IgG4抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係PF-06801591 (Pfizer)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係TSR-042 (亦稱為ANB011；Tesaro/AnaptysBio)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係AM0001 (ARMO Biosciences)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係ENUM 244C8 (Enumeral Biomedical Holdings)。ENUM 244C8係抑制PD-1功能而不阻斷PDL1與PD-1之結合之抗PD-1抗體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體係ENUM 388D4 (Enumeral Biomedical Holdings)。ENUM 388D4係競爭性地抑制PDL1與PD-1之結合之抗PD-1抗體。
在一些實施例中，PD-1抗體包含來自以下各項中所闡述PD-1抗體之六個HVR序列(例如三個重鏈HVR及三個輕鏈HVR)及/或重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域：WO2015/112800 (申請者：Regeneron)、WO2015/112805 (申請者：Regeneron)、WO2015/112900 (申請者：Novartis)、US20150210769 (轉讓給Novartis)、WO2016/089873 (申請者：Celgene)、WO2015/035606 (申請者：Beigene)、WO2015/085847 (申請者：Shanghai Hengrui Pharmaceutical/Jiangsu Hengrui Medicine)、WO2014/206107 (申請者：Shanghai Junshi Biosciences/Junmeng Biosciences)、WO2012/145493 (申請者：Amplimmune)、US9205148 (轉讓給MedImmune)、WO2015/119930 (申請者：Pfizer/Merck)、WO2015/119923 (申請者：Pfizer/Merck)、WO2016/032927 (申請者：Pfizer/Merck)、WO2014/179664 (申請者：AnaptysBio)、WO2016/106160 (申請者：Enumeral)及WO2014/194302 (申請者：Sorrento)。 B. 抗PDL1抗體
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑係抗PDL1抗體。本文涵蓋且闡述多種抗PDL1抗體。在本文之任一實施例中，經分離之抗PDL1抗體可結合至人類PDL1 (例如如UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q9NZQ7.1中所示之人類PDL1)或其變異體。在一些實施例中，抗PDL1抗體能夠抑制PDL1與PD-1之間及/或PDL1與B7-1之間的結合。在一些實施例中，抗PDL1抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗PDL1抗體係選自由Fab、Fab’-SH、Fv、scFv及(Fab’)2 片段組成之群之抗體片段。在一些實施例中，抗PDL1抗體係人類化抗體。在一些實施例中，抗PDL1抗體係人類抗體。可用於本揭示案方法之抗PDL1抗體之實例及其製備方法闡述於PCT專利申請案WO 2010/077634 A1及美國專利第8,217,149號中，其係以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係阿替珠單抗(CAS登記號：1422185-06-5)。阿替珠單抗(Genentech)亦稱為MPDL3280A，其係抗PDL1抗體。
在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中： (a)  該重鏈可變區分別包含GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 122)、AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 123)及RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 124)之HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，且 (b)  該輕鏈可變區分別包含RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 125)、SASFLYS (SEQ ID NO: 126)及QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 127)之HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3序列。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係MPDL3280A，其亦稱為阿替珠單抗及TECENTRIQ® (CAS登記號：1422185-06-5)。在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈可變區序列包含以下胺基酸序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 128)，且 (b)  輕鏈可變區序列包含以下胺基酸序列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 129)。
在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈包含以下胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 130)，且 (b)  輕鏈包含以下胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 131)。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係阿維魯單抗(avelumab) (CAS登記號：1537032-82-8)。阿維魯單抗亦稱為MSB0010718C，其係人類單株IgG1抗PDL1抗體(Merck KGaA, Pfizer)。在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈包含以下胺基酸序列： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 132)，且 (b)  輕鏈包含以下胺基酸序列： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 133)。
在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含來自SEQ ID NO: 132及SEQ ID NO: 133之六個HVR序列(例如來自SEQ ID NO:132之三個重鏈HVR及來自SEQ ID NO: 133之三個輕鏈HVR)。在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含來自SEQ ID NO: 132之重鏈可變結構域及來自SEQ ID NO: 133之輕鏈可變結構域。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係德瓦魯單抗(durvalumab) (CAS登記號：1428935-60-7)。德瓦魯單抗亦稱為MEDI4736，其係WO2011/066389及US2013/034559中所闡述之Fc最佳化之人類單株IgG1 κ抗PDL1抗體(MedImmune, AstraZeneca)。在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含重鏈及輕鏈序列，其中： (a)  重鏈包含以下胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 134)，且 (b)  輕鏈包含以下胺基酸序列： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 135)。
在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含來自SEQ ID NO:134及SEQ ID NO:135之六個HVR序列(例如來自SEQ ID NO:134之三個重鏈HVR及來自SEQ ID NO:135之三個輕鏈HVR)。在一些實施例中，該抗PDL1抗體包含來自SEQ ID NO: 134之重鏈可變結構域及來自SEQ ID NO: 135之輕鏈可變結構域。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係MDX-1105 (Bristol Myers Squibb)。MDX-1105亦稱為BMS-936559，其係WO2007/005874中所闡述之抗PDL1抗體。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係LY3300054 (Eli Lilly)。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係STI-A1014 (Sorrento)。STI-A1014係人類抗PDL1抗體。
在一些實施例中，抗PDL1抗體係KN035 (Suzhou Αlphamab)。KN035係自駱駝噬菌體展示文庫產生之單一結構域抗體(dAB)。
在一些實施例中，抗PDL1抗體包含可裂解部分或連接體，該可裂解部分或連接體在裂解(例如由腫瘤微環境中之蛋白酶裂解)時使抗體之抗原結合結構域活化以容許該抗體結合其抗原，例如藉由去除非結合之空間部分。在一些實施例中，抗PDL1抗體係CX-072 (CytomX Therapeutics)。
在一些實施例中，PDL1抗體包含來自以下各項中所闡述PDL1抗體之六個HVR序列(例如三個重鏈HVR及三個輕鏈HVR)及/或重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域：US20160108123 (轉讓給Novartis)、WO2016/000619 (申請者：Beigene)、WO2012/145493 (申請者：Amplimmune)、US9205148 (轉讓給MedImmune)、WO2013/181634 (申請者：Sorrento)及WO2016/061142 (申請者：Novartis)。
在另一具體態樣中，PD-1或PDL1抗體具有降低或最低之效應功能。在另一具體態樣中，最低效應功能係由「無效應子之Fc突變」或糖基化突變導致。在另一實施例中，無效應子之Fc突變係恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。在一些實施例中，經分離之抗PDL1抗體係無糖基化的。抗體之糖基化通常係N連接或O連接的。N連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈連接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸(其中X係除脯胺酸外之任一胺基酸)係碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈酶連接之識別序列。因此，多肽中存在該等三肽序列中之任一者均可產生潛在糖基化位點。O連接之糖基化係指糖N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖中之一者與羥基胺基酸(最常見為絲胺酸或蘇胺酸，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸)之連接。自抗體去除糖基化位點可藉由改變胺基酸序列，使得上文所闡述三肽序列中之一者(對於N連接之糖基化位點而言)去除來便捷地完成。改變可藉由用另一胺基酸殘基取代糖基化位點內之天冬醯胺、絲胺酸或蘇胺酸殘基(例如甘胺酸、丙胺酸或保守取代)來進行。
在一些實施例中，在20天之組合治療後，抗MERTK抗體使抗PDL1抗體之免疫效應提高約3倍。在一些實施例中，在30天之治療後，抗MERTK抗體使抗PDL1抗體之免疫效應提高約10倍。 C. 其他PD-1抑制劑
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係免疫黏附素(例如包含融合至恆定區(例如免疫球蛋白序列之Fc區)之PDL1或PDL2之細胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係AMP-224。AMP-224 (CAS登記號1422184-00-6；GlaxoSmithKline/MedImmune)亦稱為B7-DCIg，其係WO2010/027827及WO2011/066342中所闡述之PDL2-Fc融合可溶性受體。
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係肽或小分子化合物。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑係AUNP-12 (PierreFabre/Aurigene)。例如，參見WO2012/168944、WO2015/036927、WO2015/044900、WO2015/033303、WO2013/144704、WO2013/132317及WO2011/161699。
在一些實施例中，PDL1結合拮抗劑係抑制PD-1之小分子。在一些實施例中，PDL1結合拮抗劑係抑制PDL1之小分子。在一些實施例中，PDL1結合拮抗劑係抑制PDL1及VISTA之小分子。在一些實施例中，PDL1結合拮抗劑係CA-170 (亦稱為AUPM-170)。在一些實施例中，PDL1結合拮抗劑係抑制PDL1及TIM3之小分子。在一些實施例中，該小分子係WO2015/033301及WO2015/033299中所闡述之化合物。 免疫功能之增強
在另一態樣中，本文提供用於增強患有癌症之個體的免疫功能之方法，其包括投與有效量之抗MerTK抗體與免疫檢查點抑制劑之組合。可由本文所闡述之抗MerTK抗體增強的免疫功能之各個態樣及量測此增強之方法闡述於下文中。
在本揭示案方法之一些實施例中，癌症(在一些實施例中，使用診斷測試檢查之患者癌症樣品)具有升高之T細胞浸潤水準。如本文所用，癌症之T細胞浸潤可係指在癌症組織內存在T細胞(諸如腫瘤浸潤性淋巴球(TIL))，或該等T細胞以其他方式與癌症組織締合。此項技術中已知，在某些癌症中，T細胞浸潤可與改善之臨床結果相關(例如，參見Zhang等人，N. Engl. J. Med. 348(3):203-213 (2003))。
然而，T細胞耗竭亦係癌症之主要免疫特徵，其中許多腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)表現高水準之抑制性輔受體且缺乏產生效應細胞介素之能力(Wherry, E.J. Nature immunology 12: 492-499 (2011)；Rabinovich, G.A.等人，Annual review of immunology 25:267-296 (2007))。在本揭示案方法之一些實施例中，個體患有T細胞功能障礙病症。在本揭示案方法之一些實施例中，T細胞功能障礙病症之特徵在於T細胞無反應性或分泌細胞介素、增殖或執行細胞溶解活性之能力降低。在本揭示案方法之一些實施例中，T細胞功能障礙病症之特徵在於T細胞耗竭。在本揭示案方法之一些實施例中，T細胞係CD4+及CD8+ T細胞。在一些實施例中，T細胞係CD4+及/或CD8+ T細胞。
在一些實施例中，CD8+ T細胞之特徵在於(例如)存在CD8b表現(例如藉由rtPCR，使用(例如) Fluidigm) (Cd8b亦稱為T細胞表面糖蛋白CD8 β鏈；CD8抗原，α多肽p37；登錄號係NM_172213)。在一些實施例中，CD8+ T細胞來自外周血。在一些實施例中，CD8+ T細胞來自腫瘤。
在一些實施例中，Treg細胞之特徵在於(例如)存在Fox3p表現(例如藉由rtPCR，使用(例如) Fluidigm) (Foxp3亦稱為叉頭框蛋白P3；scurfin；FOXP3δ7；免疫缺失，多內分泌病變，腸病變，X連鎖；登錄號係NM_014009)。在一些實施例中，Treg來自外周血。在一些實施例中，Treg細胞來自腫瘤。
在一些實施例中，發炎性T細胞之特徵在於(例如)存在Tbet及/或CXCR3表現(例如藉由rtPCR，使用(例如) Fluidigm)。在一些實施例中，發炎性T細胞來自外周血。在一些實施例中，發炎性T細胞來自腫瘤。
在本揭示案方法之一些實施例中，CD4及/或CD8 T細胞展現選自由IFN- γ、TNF-α及介白素組成之群之細胞介素之釋放增加。細胞介素釋放可藉由此項技術中已知之任何方式來量測，例如使用西方墨點、ELISA或免疫組織化學分析以偵測含有CD4及/或CD8 T細胞之樣品中釋放的細胞介素之存在。
在本揭示案方法之一些實施例中，CD4及/或CD8 T細胞係效應記憶T細胞。在本揭示案方法之一些實施例中，CD4及/或CD8效應記憶T細胞之特徵在於具有CD44高 CD62L低 之表現。CD44高 CD62L低 之表現可藉由此項技術中已知之任何方式來偵測，例如藉由製備組織(例如癌症組織)之單細胞懸浮液且使用針對CD44及CD62L之市售抗體實施表面染色及流式細胞術。在本揭示案方法之一些實施例中，CD4及/或CD8效應記憶T細胞之特徵在於具有CXCR3 (亦稱為3型C-X-C趨化介素受體；Mig受體；IP10受體；G蛋白偶合受體9；干擾素誘導蛋白10受體；登錄號NM_001504)之表現。在一些實施例中，CD4及/或CD8效應記憶T細胞來自外周血。在一些實施例中，CD4及/或CD8效應記憶T細胞來自腫瘤。
在本揭示案方法之一些實施例中，相對於投與該組合之前，Treg功能被抑制。在一些實施例中，相對於投與該組合之前，T細胞耗竭降低。
在一些實施例中，相對於投與該組合之前，Treg之數量減少。在一些實施例中，相對於投與該組合之前，血漿干擾素γ增加。可(例如)藉由測定CD4+Fox3p+ CD45+細胞之百分比(例如藉由FACS分析)來評價Treg數量。在一些實施例中，測定例如樣品中Treg之絕對數量。在一些實施例中，Treg來自外周血。在一些實施例中，Treg來自腫瘤。
在一些實施例中，相對於投與該組合之前，T細胞啟動、活化及/或增殖增加。在一些實施例中，T細胞係CD4+及/或CD8+ T細胞。在一些實施例中，藉由測定Ki67+ CD8+ T細胞之百分比(例如藉由FACS分析)來偵測T細胞增殖。在一些實施例中，藉由測定Ki67+ CD4+ T細胞之百分比(例如藉由FACS分析)來偵測T細胞增殖。在一些實施例中，T細胞來自外周血。在一些實施例中，T細胞來自腫瘤。 劑量及投與
本文所闡述之任一抗MerTK抗體及此項技術中已知或闡述於本文中之任一免疫檢查點抑制劑可用於本揭示案之方法中。
在一些實施例中，本揭示案之組合療法包含投與抗MerTK抗體及免疫檢查點抑制劑。抗MerTK抗體及免疫檢查點抑制劑可以此項技術中已知之任何適宜方式來投與。舉例而言，抗MerTK抗體及免疫檢查點抑制劑可依序(在不同時間)或並行(同時)投與。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑與抗MerTK抗體在分開的組合物中。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑與抗MerTK抗體在同一組合物中。
抗MerTK抗體及免疫檢查點抑制劑可藉由相同投與途徑或藉由不同投與途徑來投與。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係以靜脈內、肌內、皮下、經局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、室內或鼻內方式投與。在一些實施例中，抗MerTK抗體係以靜脈內、肌內、皮下、經局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、室內或鼻內方式投與。可投與有效量之免疫檢查點抑制劑及抗MerTK抗體以供預防或治療疾病。抗MerTK抗體及/或免疫檢查點抑制劑之適當劑量可基於以下來確定：欲治療疾病之類型、免疫檢查點抑制劑及抗MerTK抗體之類型、疾病之嚴重程度及病程、個體之臨床狀況、個體之臨床病史及對治療之反應以及主治醫師之判斷。在一些實施例中，抗MerTK抗體與免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1或抗PDL1抗體)之組合治療具有協同性，其中抗MerTK抗體在組合中之有效劑量相對於抗MerTK抗體作為單一劑之有效劑量降低。
作為一般主張，無論藉由一次抑或多次投與，投與人類之抗體之治療有效量均將在約0.01 mg/kg患者體重至約50 mg/kg患者體重範圍內。在一些實施例中，所用抗體每天投與例如約0.01 mg/kg至約45 mg/kg、約0.01 mg/kg至約40 mg/kg、約0.01 mg/kg至約35 mg/kg、約0.01 mg/kg至約30 mg/kg、約0.01 mg/kg至約25 mg/kg、約0.01 mg/kg至約20 mg/kg、約0.01 mg/kg至約15 mg/kg、約0.01 mg/kg至約10 mg/kg、約0.01 mg/kg至約5 mg/kg或約0.01 mg/kg至約1 mg/kg。在一些實施例中，以15 mg/kg投與抗體。然而，其他劑量方案可係有用的。在一個實施例中，在21天週期之第1天，以下列劑量向人類投與本文所闡述之抗MerTK抗體或本文所闡述之抗PDL1抗體：約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg或約1400 mg。劑量可作為單劑量或作為多劑量(例如2劑或3劑)投與，諸如輸注。與單一治療相比，組合治療中所投與之抗體劑量可降低。藉由習用技術可容易地監測此療法之進展。(iv) 用途
在一態樣中，本揭示案提供如上文所闡述之抗MerTK抗體，其用作藥劑。在一些實施例中，用途係治療癌症。在一些實施例中，用途係降低MerTK介導之凋亡細胞清除。本文進一步提供如上文所闡述之抗MerTK抗體用於製造藥劑之用途。在一些實施例中，該藥劑用於治療癌症。在一些實施例中，癌症表現功能性cGAS-STING胞質DNA感測路徑蛋白質。該等蛋白質係cGAS-STING信號傳導路徑之一部分，且在先天性免疫中起作用以偵測胞質DNA之存在，從而觸發發炎基因之表現。cGAS-STING胞質DNA感測路徑蛋白質之實例包括(但不限於) cGAS、STING、TBK-1、IRF3、p50、p60、p65、NF-κΒ、ISRE、IKK及STAT6。在一些實施例中，癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。功能性蛋白質係能夠在細胞中執行其常規功能之蛋白質。功能性蛋白質之實例可包括野生型蛋白質、帶標籤之蛋白質及突變蛋白質，其與野生型蛋白質相比保留或改良蛋白質功能。蛋白質功能可藉由熟習此項技術者已知之任何方法來量測，包括對蛋白質或mRNA表現進行分析及對基因體DNA或mRNA進行測序。在一些實施例中，癌症包含表現功能性STING多肽之腫瘤相關巨噬細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性cGAS多肽之腫瘤細胞。在一些實施例中，癌症包含表現功能性Cx43多肽之腫瘤細胞。在某些實施例中，癌症係結腸癌。在一些實施例中，藥劑用於降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
在另一態樣中，個體患有表現(例如在診斷測試中已顯示表現) PDL1生物標記物之癌症。在一些實施例中，患者之癌症表現低PDL1生物標記物。在一些實施例中，患者之癌症表現高PDL1生物標記物。在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，當PDL1生物標記物佔樣品之0%時，其不存在。
在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，當PDL1生物標記物佔樣品之0%以上時，其存在於樣品中。在一些實施例中，PDL1生物標記物以樣品之至少1%存在。在一些實施例中，PDL1生物標記物以樣品之至少5%存在。在一些實施例中，PDL1生物標記物以樣品之至少10%存在。
在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，使用選自由以下組成之群之方法偵測樣品中之PDL1生物標記物：FACS、西方墨點、ELISA、免疫沈澱、免疫組織化學、免疫螢光、放射免疫分析、斑點印漬、免疫偵測方法、HPLC、表面電漿子共振、光譜法、質譜法、HPLC、qPCR、RT-qPCR、多工qPCR或RT-qPCR、RNA-seq、微陣列分析、SAGE、MassARRAY技術及FISH以及其組合。
在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，藉由蛋白質表現偵測樣品中之PDL1生物標記物。在一些實施例中，藉由免疫組織化學(IHC)測定蛋白質表現。在一些實施例中，使用抗PDL1抗體偵測PDL1生物標記物。在一些實施例中，PDL1生物標記物藉由IHC偵測為弱染色強度。在一些實施例中，PDL1生物標記物藉由IHC偵測為中等染色強度。在一些實施例中，PDL1生物標記物藉由IHC偵測為強染色強度。在一些實施例中，在腫瘤細胞、腫瘤浸潤性免疫細胞、基質細胞及其任何組合上偵測到PDL1生物標記物。在一些實施例中，染色係膜染色、細胞質染色或其組合。
在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，不存在PDL1生物標記物偵測為在樣品中不存在或無染色。在任一方法、分析及/或套組之一些實施例中，存在PDL1生物標記物偵測為樣品中之任何染色。 IV.  偵測方法
在一些態樣中，本揭示案提供抗MerTK抗體或其免疫結合物，其用於偵測MerTK蛋白及表現MerTK蛋白之細胞。
在某些實施例中，使用IHC及染色方案檢查樣品中蛋白質之存在及/或表現水準/量。已顯示，組織切片之IHC染色係測定或偵測樣品中蛋白質之存在之可靠方法。在一些實施例中，藉由免疫組織化學偵測MerTK。在一些實施例中，使用IHC測定升高之蛋白質表現。在一個實施例中，使用如下方法測定MerTK之表現水準，該方法包括：(a)利用抗體對樣品(諸如個體癌症樣品)實施IHC分析；及b)測定樣品中該蛋白質之表現水準。在一些實施例中，相對於參照來測定IHC染色強度。在一些實施例中，參照係參照值。在一些實施例中，參照係參照樣品(例如對照細胞株染色樣品或來自非癌患者之組織樣品)。
IHC可與諸如形態學染色及/或螢光原位雜交等其他技術組合實施。IHC有兩種通用方法；直接及間接分析。根據第一分析，抗體與靶抗原之結合係直接測定的。此直接分析使用經標記之試劑(諸如螢光標籤或酶標記一級抗體)，其可在無需進行進一步抗體相互作用之情形下可視化。在典型間接分析中，使非結合之一級抗體結合至抗原，且接著將標記之二級抗體結合至該一級抗體。在二級抗體結合至酶標記之情形下，添加發色或螢光受質以提供抗原之可視化。由於若干種二級抗體可與一級抗體上之不同抗原決定基反應，故發生信號放大。
用於IHC之一級及/或二級抗體通常將標記有可偵測部分。多種標記可供使用，其通常可分成以下類別：(a)放射性同位素，諸如35 S、14 C、125 I、3 H及131 I；(b)膠體金顆粒；(c)螢光標記，包括(但不限於)稀土螯合物(銪螯合物)、德克薩斯紅(Texas Red)、玫瑰紅、螢光黃、丹磺醯、麗絲胺(Lissamine)、繖形酮、藻紅蛋白、藻青蛋白或市售螢光團(諸如SPECTRUM ORANGE7及SPECTRUM GREEN7)及/或以上任一或多者之衍生物；(d)各種酶-受質標記可供使用且美國專利第4,275,149號提供一些該等標記之綜述。酶標記之實例包括螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶；美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、蘋果酸去氫酶、脲酶、過氧化物酶(諸如辣根過氧化物酶(HRPO))、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、雜環氧化酶(諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶)、乳過氧化物酶、微過氧化物酶及諸如此類。
酶-受質組合之實例包括(例如)辣根過氧化物酶(HRPO)與作為受質之過氧化氫酶；鹼性磷酸酶(AP)與作為發色受質之磷酸對硝基苯酯；及β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)與發色受質(例如對硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶)或螢光受質(例如4-甲基繖形酮基-β-D-半乳糖苷酶)。關於該等酶-受質組合之一般性綜述，參見美國專利第4,275,149號及第4,318,980號。
可將由此製備之試樣安裝並加蓋玻片。接著(例如)使用顯微鏡來測定玻片評估，且可採用此項技術中慣常使用之染色強度準則。在一個實施例中，應理解，當使用IHC檢查來自腫瘤之細胞及/或組織時，通常在腫瘤細胞及/或組織中測定或評價染色(與樣品中可能存在之基質或周圍組織形成對照)。在一些實施例中，應理解，當使用IHC檢查來自腫瘤之細胞及/或組織時，染色包括測定或評價腫瘤浸潤性免疫細胞，包括腫瘤內或瘤周免疫細胞。 V.   製品或套組
在本揭示案之另一實施例中，提供包含抗MerTK抗體之製品或套組。在一些實施例中，該製品或套組進一步包含包裝插頁，該包裝插頁包含關於使用抗MerTK抗體治療個體癌症或延遲其進展或增強患有癌症之個體的免疫功能之說明書。本文所闡述之任一抗MerTK抗體均可包括在該製品或套組內。該製品或套組可進一步包含免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抗PDL1抗體。
在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑及抗MerTK抗體係在同一容器中或在分開之容器中。適宜容器包括(例如)瓶、小瓶、袋及注射器。容器可自多種材料形成，諸如玻璃、塑膠(諸如聚氯乙烯或聚烯烴)或金屬合金(諸如不鏽鋼或哈氏合金(hastelloy))。在一些實施例中，容器容納調配物，且容器上或與容器相連之標記可指示使用說明。製品或套組可進一步包括自商業及使用者角度期望之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器及帶有使用說明書之包裝插頁。在一些實施例中，製品進一步包括一或多種另一劑(例如化學治療劑及抗瘤劑)。用於該一或多種劑之適宜容器包括(例如)瓶、小瓶、袋及注射器。
認為本說明書足以使得熟習此項技術者能夠實踐本揭示案之組合物及方法。除本文所顯示及闡述之彼等修改以外，熟習此項技術者自前述說明將明瞭各種修改，且該等修改屬於隨附申請專利範圍之範疇內。本文所引用之所有公開案、專利及專利申請案出於所有目的均係以全文引用的方式併入本文中。 實例
藉由參考以下實例將更全面地理解本揭示案。然而，不應將該等實例解釋為限制本揭示案之範疇。應理解，本文所闡述之實例及實施例僅係出於說明性目的，且基於其之各種修改或變化應為熟習此項技術者所瞭解且欲包括在本申請案之精神及範圍以及隨附申請專利範圍之範疇內。 實例1：產生兔抗MerTK單株抗體且進行人類化
在兔中產生針對MerTK之單株抗體。接著，使該等抗體人類化，且鑑別對穩定性及親和力重要之殘基。 產生兔抗MerTK單株抗體
利用人類及小鼠MerTK對紐西蘭白兔進行免疫。使用源自已公開文獻之改良方案來分離個別B細胞(Offner 等人 PLoS ONE 9(2), 2014 )。使用直接FACS IgG+ 分選將人類及小鼠MerTK+ B細胞分選至單一孔中。針對人類及小鼠MerTK結合，經由初步ELISA篩選對B細胞培養上清液進行分析，且使B細胞溶解並儲存在-80℃下。
如已公開文獻中所闡述，藉由PCR擴增MerTK特異性B細胞之輕鏈及重鏈可變區，且將其選殖至表現載體中(Offner 等人， PLoS ONE 9(2), 2014 )。使每一重組兔單株抗體在Expi293細胞中表現且利用蛋白質A進行純化。接著使經純化之抗MerTK抗體經受功能性表徵、親和力測定及抗原決定基分倉。
使所提及之每一抗體之殘基編號與Kabat等人，Sequences of proteins of immunological interest ，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)匹配。圖 1A 及圖 1B 分別顯示每一抗MerTK兔抗體之輕鏈及重鏈可變區之比對序列。如Kabat等人所定義之CDR序列在圖 1A 及圖 1B 中加下劃線。 MerTK抗體人類化 步驟1：產生一級人類化抗體
使所提及之每一抗體之殘基編號與Kabat等人匹配。首先，將每一兔抗體之超變區工程改造至其最接近之人類生殖系接受者框架中，以產生第1型式之(標記為「v1」)一級人類化抗體(人類IgG1) (圖 2A 至圖 2D )。具體而言，保留兔抗體輕鏈可變結構域(VL)位置24-34 (L1)、50-56 (L2)及89-97 (L3)以及重鏈可變結構域(VH)位置26-35 (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)用於來自每一兔抗體之CDR (圖 2A 至圖 2D )。在該框架中，亦包括在「游標」區域之兔殘基，該等殘基可調整CDR結構且微調抗原配合度(例如，參見Foote及Winter，J. Mol. Biol. 224: 487-499 (1992))。圖 2A 至圖 2D 顯示在第一步人類化之後，每一抗體之比對序列。 步驟2：框架精製(polishing)人類化抗體
使第1形式之一級人類化抗體之框架「游標(Vernier)」區域中之每一兔殘基根據其相應最接近之人類接受者框架突變為人類殘基。
使每一人類化突變變異體經受BIAcore分析，以確定對於結合及穩定性而言重要之兔殘基。使用來自BIAcore™-T200儀器之表面電漿子共振(SRP)量測值獲得結合親和力測定值。簡言之，捕獲每一人類化突變變異體抗體以達成大約100個RU (反應單位)。接著，在37℃下，將稀釋於HBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl、3 mM EDTA及0.05% v/v表面活性劑P20)中之人類MerTK之3倍連續稀釋液(0.4 nM至100 nM)以30 μl/min之流量注射至BIAcore™-T200儀器中。使用簡單1:1 Langmuir結合模型(BIAcore T200評估軟體第2.0版)計算締合速率(k締合 )及解離速率(k解離 )。將平衡解離常數(KD )計算為比率k解離 /k締合 。
表 2 至表 5 在灰色陰影中鑑別對於結合及穩定性重要之殘基。純系h10C3.V1之重要殘基係輕鏈可變區中之Q2及L4以及重鏈可變區中之I48、G49S及K71 (表 2 )。純系h10F7.V1之重要殘基係輕鏈可變區中之L4及F87以及重鏈可變區中之V24、I48、G49、K71及S73 (表 3 )。純系h9E3.FN.V1之重要殘基係輕鏈可變區中之L4及P43以及重鏈可變區中之K71 (表 4 )。純系h13B4.V1之重要殘基係重鏈可變區中之G49及V78 (表 5 )。表 2
h10C3.V1 ( 親代 ) KD (nM)
13.8
LC Q2I 17.1
LC L4M 12.3
HC Q2V 12.5
HC I48V 17.1
HC G49S 30.2
HC K71R 20.0
HC S73N 15.0
HC V78L 7.4
HC F91Y 14.9
表 3
h10F7.V1 ( 親代 ) KD (nM)
7.3
LC A2I 5.9
LC L4M 6.2
LC F87Y 8.8
HC Q2V 5.9
HC V24A 9.4
HC I48V 9.3
HC G49S 9.5
HC K71R 15.3
HC S73N 7.6
HC V78L 5.1
HC F91Y 6.4
表 4
h9E3.FN.V1 ( 親代 ) KD (nM)
12.2
LC A2I 10.7
LC L4M 7.5
LC P43A 15.0
HC Q2V 10.2
HC V24A 8.7
HC I48V 10.2
HC G49S 5.6
HC K71R 41.3
HC S73N 12.3
HC M78L 12.5
HC F91Y 11.5
表 5
h13B4.V1 ( 親代 ) KD (nM)
4.8
LC V2I 5.6
LC P43A 4.6
HC Q2V 4.5
HC V24A 6.0
HC W47Y 3.1
HC I48V 5.8
HC G49S 51.5
HC S73N 4.7
HC V78L 9.2
HC F91Y 4.5
HC P105R 4.2
為產生最終人類化框架精製抗體，維持重要的結合及穩定性兔框架殘基，而使其他殘基變為最接近之人類生殖系框架殘基。圖 2A 至圖 2D 顯示每一抗體之比對序列，包括最終人類化框架精製抗體型式(v.14或v.16)之序列。
表 6 至表 8 中提供兔及人類化抗體序列之彙總。表 6
結合纖連蛋白樣結構域之抗體
名稱 CDR L1 CDR L2 CDR L3 CDR H1 CDR H2 CDR H3
Rbt8F4 QSSPNIYSNYLS (SEQ ID NO: 1) GASTLAS (SEQ ID NO: 2) AGGYSDSSEAYA (SEQ ID NO: 3) NYPMS (SEQ ID NO: 4) VISSTGGTNYASWAKG (SEQ ID NO: 5) VDFLVYLGGAYIIWGLDL (SEQ ID NO: 6)
Rbt9E3.FN QSSKSIYNNNWLS (SEQ ID NO: 7) DASDLAS (SEQ ID NO: 8) AGGYSGDSDYA (SEQ ID NO: 9) SNAMS (SEQ ID NO: 10) IISSSGSTYSASWAKG (SEQ ID NO: 11) VGFFVGYGAYDYGIIHRLDL (SEQ ID NO: 12)
h9E3.FN.v1 QSSKSIYNNNWLS (SEQ ID NO: 7) DASDLAS (SEQ ID NO: 8) AGGYSGDSDYA (SEQ ID NO: 9) SNAMS (SEQ ID NO: 10) IISSSGSTYSASWAKG (SEQ ID NO: 11) VGFFVGYGAYDYGIIHRLDL (SEQ ID NO: 12)
h9E3.FN.v16 QSSKSIYNNNWLS (SEQ ID NO: 7) DASDLAS (SEQ ID NO: 8) AGGYSGDSDYA (SEQ ID NO: 9) SNAMS (SEQ ID NO: 10) IISSSGSTYSASWAKG (SEQ ID NO: 11) VGFFVGYGAYDYGIIHRLDL (SEQ ID NO: 12)
Rbt10C3 QSSESVYNNDYLA (SEQ ID NO: 13) SASTLAS (SEQ ID NO: 14) AGGYLGNNV (SEQ ID NO: 15) GYTMG (SEQ ID NO: 16) VISSGGTTYYTNWAKG (SEQ ID NO: 17) VAFTAYGGGGFPTLHRLDL (SEQ ID NO: 18)
h10C3.v1 QSSESVYNNDYLA (SEQ ID NO: 13) SASTLAS (SEQ ID NO: 14) AGGYLGNNV (SEQ ID NO: 15) GYTMG (SEQ ID NO: 16) VISSGGTTYYTNWAKG (SEQ ID NO: 17) VAFTAYGGGGFPTLHRLDL (SEQ ID NO: 18)
h10C3.v14 QSSESVYNNDYLA (SEQ ID NO: 13) SASTLAS (SEQ ID NO: 14) AGGYLGNNV (SEQ ID NO: 15) GYTMG (SEQ ID NO: 16) VISSGGTTYYTNWAKG (SEQ ID NO: 17) VAFTAYGGGGFPTLHRLDL (SEQ ID NO: 18)
Rbt10F7 QSSKSVYNNNWLS (SEQ ID NO: 19) RASTLES (SEQ ID NO: 20) AGGYSSSSSANA (SEQ ID NO: 21) GYAMS (SEQ ID NO: 22) VISSSGSSYYPSWAKG (SEQ ID NO: 23) VQFYVGYAVYGYGIIDRLDL (SEQ ID NO: 24)
h10F7.v1 QSSKSVYNNNWLS (SEQ ID NO: 19) RASTLES (SEQ ID NO: 20) AGGYSSSSSANA (SEQ ID NO: 21) GYAMS (SEQ ID NO: 22) VISSSGSSYYPSWAKG (SEQ ID NO: 23) VQFYVGYAVYGYGIIDRLDL (SEQ ID NO: 24)
h10F7.v16 QSSKSVYNNNWLS (SEQ ID NO: 19) RASTLES (SEQ ID NO: 20) AGGYSSSSSANA (SEQ ID NO: 21) GYAMS (SEQ ID NO: 22) VISSSGSSYYPSWAKG (SEQ ID NO: 23) VQFYVGYAVYGYGIIDRLDL (SEQ ID NO: 24)
Rbt13D8 QASQSVYDSKWLA (SEQ ID NO: 25) SASTLAS (SEQ ID NO: 14) AGAYTDNIV (SEQ ID NO: 26) SYSMG (SEQ ID NO: 27) VISASGTTYYASWVNG (SEQ ID NO: 28) AAFTAYNRGSCVIHRLDL (SEQ ID NO: 29)
Rbt22C4 QSSPSVYNHNWLS (SEQ ID NO: 30) EASKLAS (SEQ ID NO: 31) AGGFSSGSDSFA (SEQ ID NO: 32) TYSMS (SEQ ID NO: 33) IVSVAIDPVYATWARG (SEQ ID NO: 34) VAFSTNGIPHRLDL (SEQ ID NO: 35)
結合Ig 樣結構域之抗體
名稱 CDR L1 CDR L2 CDR L3 CDR H1 CDR H2 CDR H3
Rbt11G11 QASESISSRLA (SEQ ID NO: 36) SASTLAS (SEQ ID NO: 14) QTYYGGSTTGWYV (SEQ ID NO: 37) SYGIS (SEQ ID NO: 38) YIYPGFGITNYAHSVKG (SEQ ID NO: 39) DLDYTGGVVGYAYVTYYFTL (SEQ ID NO: 40)
Rbt12H4 QASQSIGNALA (SEQ ID NO: 41) AASNLAS (SEQ ID NO: 42) QTYYAINRYGGA (SEQ ID NO: 43) VYGMG (SEQ ID NO: 44) FINNVGNTYYASWAKG (SEQ ID NO: 45) GGGGDWGYFNI (SEQ ID NO: 46)
Rbt13B4 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 47) GASKLAS (SEQ ID NO: 48) QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 49) SYAMG (SEQ ID NO: 50) IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 51) DPGVSSNL (SEQ ID NO: 52)
h13B4.v1 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 47) GASKLAS (SEQ ID NO: 48) QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 49) SYAMG (SEQ ID NO: 50) IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 51) DPGVSSNL (SEQ ID NO: 52)
h13B4.v16 QASQNIYSGLA (SEQ ID NO: 47) GASKLAS (SEQ ID NO: 48) QATYYSSNSVA (SEQ ID NO: 49) SYAMG (SEQ ID NO: 50) IINSYGNTYYANWAKG (SEQ ID NO: 51) DPGVSSNL (SEQ ID NO: 52)
Rbt14C9 QASQSISSSLA (SEQ ID NO: 53) AASILAS (SEQ ID NO: 54) QCTSYGSLFLGP (SEQ ID NO: 55) ANTMN (SEQ ID NO: 56) IFTATGSTYYATWVNG (SEQ ID NO: 57) SGSGSSSGAFNI (SEQ ID NO: 58)
Rbt18G7 QASQSISNFLA (SEQ ID NO: 59) AASHLAS (SEQ ID NO: 60) QSYFYSSTSIYNA (SEQ ID NO: 61) SYALG (SEQ ID NO: 62) IISSTGTTYYATWAKG (SEQ ID NO: 63) GAYAGYVAFGPYYFHI (SEQ ID NO: 64)
表 7
結合纖連蛋白樣結構域之抗體
名稱 輕鏈可變區 重鏈可變區
Rbt8F4 AAVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQSSPNIYSNYLSWFQQKPGQPPKILIYGASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCAGGYSDSSEAYAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 65) QSVQESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLINYPMSWVRQAPGKGLEWIGVISSTGGTNYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVDFLVYLGGAYIIWGLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 83)
Rbt9E3.FN AAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSKSIYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFEGSGSGTEFTLTISDLECDDAATYYCAGGYSGDSDYAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 66) QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSNAMSWVRQAPGKGLEWIGIISSSGSTYSASWAKGRFTISKTSTTMDLKITSPTTEDTATYFCARVGFFVGYGAYDYGIIHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 84)
h9E3.FN.v1 DAQLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSIYNNNWLSWYQQKPGKPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGYSGDSDYAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 67) EQQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSNAMSWVRQAPGKGLEWIGIISSSGSTYSASWAKGRFTISKDSSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYFCARVGFFVGYGAYDYGIIHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 85)
h9E3.FN.v16 DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSIYNNNWLSWYQQKPGKPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGYSGDSDYAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 68) EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSNAMSWVRQAPGKGLEWVSIISSSGSTYSASWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGFFVGYGAYDYGIIHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 86)
Rbt10C3 AQVLIQTASSVSAAVGGTVTISCQSSESVYNNDYLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGYLGNNVFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 69) QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSGYTMGWVRQAPGKGLEYIGVISSGGTTYYTNWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVAFTAYGGGGFPTLHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 87)
h10C3.v1 DQVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSESVYNNDYLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCAGGYLGNNVFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 70) EQQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSGYTMGWVRQAPGKGLEYIGVISSGGTTYYTNWAKGRFTISKDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARVAFTAYGGGGFPTLHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 88)
h10C3.v14 DQVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSESVYNNDYLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCAGGYLGNNVFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 70) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSGYTMGWVRQAPGKGLEYIGVISSGGTTYYTNWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARVAFTAYGGGGFPTLHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 89)
Rbt10F7 AAVLTQTPSPVSATMGGTVSISCQSSKSVYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVHCDDAATYFCAGGYSSSSSANAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 71) QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSGYAMSWVRQAPGKGLEYIGVISSSGSSYYPSWAKGRFTISKTSTTVDLQITSPTTEDTATYFCARVQFYVGYAVYGYGIIDRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 90)
h10F7.v1 DAVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSKSVYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCAGGYSSSSSANAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 72) EQQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSGYAMSWVRQAPGKGLEYIGVISSSGSSYYPSWAKGRFTISKDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARVQFYVGYAVYGYGIIDRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 91)
h10F7.v16 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSKSVYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCAGGYSSSSSANAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 73) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSGYAMSWVRQAPGKGLEYIGVISSSGSSYYPSWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARVQFYVGYAVYGYGIIDRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 92)
Rbt13D8 AQVLTQTASSVSAAVGGTVTINCQASQSVYDSKWLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGAYTDNIVFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 74) QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSFSSYSMGWVRQAPGKGPEYIGVISASGTTYYASWVNGRFTISKTSTTMDLKMTSPTAADTATYFCARAAFTAYNRGSCVIHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 93)
Rbt22C4 AQVLTQTASSVSAAVGGTVTISCQSSPSVYNHNWLSWYQQKPGQPPKLLIYEASKLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDEAATYYCAGGFSSGSDSFAFGGGTEVVVT (SEQ ID NO: 75) QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYSMSWVRQAPGKGLEWLGIVSVAIDPVYATWARGRFTISRTSTTVNLKITSPTTEDTATYFCVRVAFSTNGIPHRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 94)
結合Ig 樣結構域之抗體
名稱 輕鏈可變區 重鏈可變區
Rbt11G11 DPVLTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASESISSRLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQTYYGGSTTGWYVFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 76) QELVESGGGLVQAGESLKLSCKASGIDFSSYGISWVRQAPGKGLEWIAYIYPGFGITNYAHSVKGRFTISSDNAQNTVFLQMPSLTASDTATYFCARDLDYTGGVVGYAYVTYYFTLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 95)
Rbt12H4 DVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSIGNALAWYQQKPGQRPKLLIYAASNLASGVPSRFAGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQTYYAINRYGGAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 77) QSVEESGGRLVTPGTPLTVTCTVSGFSLSVYGMGWVRQAPGKGLEYIGFINNVGNTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCAKGGGGDWGYFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 96)
Rbt13B4 DVVMTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQNIYSGLAWYQQKPGQPPKLLIYGASKLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQATYYSSNSVAFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 78) QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRTSTTVDLRMPSLTTEDTATYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 97)
h13B4.v1 DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 79) EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 98)
h13B4.v16 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 80) EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 99)
Rbt14C9 DPVLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSISSSLAWYQQKPGQPPKLLIYAASILASEISSRFKGSRSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTSYGSLFLGPFGGGTEVVVK (SEQ ID NO: 81) QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSANTMNWVRQAPGKGLEWIGIFTATGSTYYATWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARSGSGSSSGAFNIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 100)
Rbt18G7 DIVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSISNFLAWYQQKPGQPPKVLIYAASHLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSYFYSSTSIYNAFGGGTEVVVR (SEQ ID NO: 82) QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYALGWVRQAPGKGLEYIGIISSTGTTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLKITGPTTEDTATYFCARGAYAGYVAFGPYYFHIWGPGTLVTISL (SEQ ID NO: 101)
表 8
名稱 重鏈序列 輕鏈序列
h9E3.FN.v1 人類LALAPG EQQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAVSGFSLSSNAMSWVRQAPGKGLEWIGIISSSGSTYSASWAKGRFTISKDSSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYFCARVGFFVGYGAYDYGIIHRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 102) DAQLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSIYNNNWLSWYQQKPGKPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGYSGDSDYAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 110)
h9E3.FN.v16 人類LALAPG EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFSLSSNAMSWVRQAPGKGLEWVSIISSSGSTYSASWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGFFVGYGAYDYGIIHRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 103) DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCQSSKSIYNNNWLSWYQQKPGKPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCAGGYSGDSDYAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 111)
h10C3.v1 人類LALAPG EQQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSGYTMGWVRQAPGKGLEYIGVISSGGTTYYTNWAKGRFTISKDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARVAFTAYGGGGFPTLHRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 104) DQVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSESVYNNDYLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCAGGYLGNNVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 112)
h10C3.v14 人類LALAPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSGYTMGWVRQAPGKGLEYIGVISSGGTTYYTNWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARVAFTAYGGGGFPTLHRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 105) DQVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSESVYNNDYLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCAGGYLGNNVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 113)
h10F7.v1 人類LALAPG EQQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSGYAMSWVRQAPGKGLEYIGVISSSGSSYYPSWAKGRFTISKDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARVQFYVGYAVYGYGIIDRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 106) DAVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSKSVYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCAGGYSSSSSANAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 114)
h10F7.v16 人類LALAPG EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSGYAMSWVRQAPGKGLEYIGVISSSGSSYYPSWAKGRFTISKDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARVQFYVGYAVYGYGIIDRLDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 107) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCQSSKSVYNNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCAGGYSSSSSANAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 115)
h13B4.v1 人類LALAPG EQQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEWIGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDSSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYFCARDPGVSSNLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 108) DVQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKPPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 116)
h13B4.v16 人類LALAPG EVQLVESGEGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYAMGWVRQAPGKGLEYVGIINSYGNTYYANWAKGRFTISRDNSKNTVYLQMGSLRAEDMAVYYCARDPGVSSNLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO: 109) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQNIYSGLAWYQQKPGKAPKLLIYGASKLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQATYYSSNSVAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 117)
在某些實施例中，SEQ ID NO: 102-109中之每一者可視情況在胺基酸序列之C末端包含離胺酸(K)，例如每一序列可以PGK終止，而非以PG終止。 實例2：抗體結合親和力
使每一兔及人類化抗體經受結合分析，以測定其對源自各物種之MerTK之親和力。
使用來自BIAcore™-T200儀器之表面電漿子共振(SPR)量測值獲得所有結合親和力測定值。簡言之，捕獲每一兔或人類化抗體以達成大約100個RU (反應單位)。接著，在25℃或37℃下，將稀釋於HBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl、3 mM EDTA及0.05% v/v表面活性劑P20)中之來自各物種之MerTK之3倍連續稀釋液(0.4 nM至100 nM)以30 μl/min之流量注射至BIAcore™-T200儀器中。使用簡單1:1 Langmuir結合模型(BIAcore T200評估軟體第2.0版)計算締合速率(k締合 )及解離速率(k解離 )。將平衡解離常數(KD )計算為比率k解離 /k締合 。
表 9 顯示經由BIAcore分析量測之每一兔抗MerTK抗體與人類、食蟹猴及小鼠MerTK蛋白結合之平衡解離常數KD 。表 10 至表 13 對在第一步人類化(V1)之後，所量測之兔抗MerTK單株抗體與其匹配抗體之KD 進行比較。表 14 至表 17 對在最後一步人類化(人類化精製mAb)之後每一抗體與人類、食蟹猴、大鼠及小鼠MerTK蛋白結合之KD 與在第一步人類化(V1)之後相同抗體之KD 進行比較。精製人類化mAb分別係h10C3.v14、h9E3.FN.v1、h10F7.v16及h13B4.v16。表 9
MerTK 抗體 BIAcore (KD ：nM) ， 25℃
人類 MerTK 食蟹猴 MerTK 小鼠 MerTK
Rbt8F4 44 14.7 2.3
Rbt9E3.FN 2.6 2.5 0.6
Rbt10C3 3.4 3.0 0.7
Rbt10F7 7.0 4.7 4.1
Rbt11G11 31.3 14.3 4.1
Rbt12H4 18 13.9 8.5
Rbt13B4 2.9 1.8 ＞1000
Rbt13D8 4.3 3.8 1.2
Rbt14C9 ＞1000 NA 0.6
Rbt18G7 2.3 4.3 1.7
Rbt22C4 94 82.2 2.2
表 10
純系 10C3 (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
兔 mAb 9.9 4.1 2.4 0.8
人類化 mAb V1 12.9 5.3 3.3 1.1
表 11
純系 9E3.FN (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
兔 mAb 5.1 2.5 1.7 0.6
人類化 mAb V1 10.6 4.5 3.7 1.5
表 12
純系 10F7 (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
兔 mAb 10.9 5.1 5.8 2.4
人類化 mAb V1 7.1 3.1 3.6 1.5
表 13
純系 13B4 (Ig 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
兔 mAb 4.9 5.9 ＞100 ＞100
人類化 mAb V1 4.8 5.6 ＞100 ＞100
表 14
純系 10C3 (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
人類化 V1 mAb 11.6 5.3 3.3 1
* 人類化精製 mAb 6.9 3.2 2.4 0.9
表 15
純系 9E3.FN (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
人類化 V1 mAb 11.2 4.8 3.8 1.4
* 人類化精製 mAb 5.8 2.5 3 1.1
表 16
純系 10F7 (FN 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
人類化 V1 mAb 6.7 3 4.1 1.5
* 人類化精製 mAb 4.9 2.1 3.2 1.4
表 17
純系 13B4 (Ig 結合體 ) ， 37℃
MerTK 人類 食蟹猴 大鼠 小鼠
KD ：nM KD ：nM KD ：nM KD ：nM
人類化 V1 mAb 4.3 5 ＞100 ＞100
* 人類化精製 mAb 5.1 5.7 ＞100 ＞100
該等結果證實，大多數兔抗體係跨物種MerTK結合體，14C9 (其係小鼠特異性MerTK結合體)及13B4 (其係人類特異性MerTK結合體)除外。該等結果進一步指示，在步驟1人類化之後，抗體10F7對所有四種物種之MerTK之親和力均存在略微改良，但10C3及9E3.FN無改良，其顯示略微的親和力下降。對於抗體13B4而言，其在人類化之前及之後係相當的。在步驟2之人類化之後，10C3、9E3.FN及10F7對所有四種物種之MerTK之親和力均改良，但13B4無改良。 實例3：抗體抗原決定基表徵
藉由抗原決定基分倉及結合分析對經分離之抗MerTK抗體進行表徵，以測定抗原決定基結構域特異性。 抗原決定基分倉
使用基於96 × 96陣列之SPR成像系統(Carterra USA)對一組MerTK單株抗體進行抗原決定基分倉。首先，於連續流動微量點樣器(Carterra, USA)中，使用胺偶合化學，將以10 ug/ml稀釋於10 mM乙酸鈉緩衝液pH 4.5中之每一抗MerTK兔抗體直接固定至SPR sensorprism CMD 200M感測器晶片(XanTec Bioanalytics, Germany)上。接著，將100 nM之MerTK注射在感測器晶片上且保持4分鐘以容許結合，之後使10 ug/ml之每一分倉兔抗體再結合4分鐘。
在每一循環之間使用10 mM甘胺酸pH 1.5使表面再生，且在25℃下使用HBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl、3 mM EDTA及0.05%表面活性劑P20)進行實驗。使用IBIS MX96 SPRi儀器(Carterra USA)來記錄對所固定抗體之結合反應。使用Wasatch分倉軟體工具分析結合資料以生成抗原決定基網絡圖。
圖 3 中分倉實驗之結果指示哪些抗體在某些MerTK抗原決定基上相互競爭結合。針對小鼠MerTK產生之抗體8F4、22C4及13D8以及針對人類MerTK產生之抗體10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4及13D8相互競爭結合(圖 3 )。針對小鼠MerTK產生之抗體12H4、18G7、14C9及11G11以及針對人類MerTK產生之抗體13B4、12H4、18G7及11G11相互競爭(圖 3 )。如下文所闡述，抗體10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4及13D8結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域，且抗體13B4、12H4、18G7及11G11結合至MerTK之Ig樣結構域。 抗原決定基結合分析
亦藉由結合實驗測定兔抗體之抗原決定基特異性。測試每一兔抗體與來自人類MerTK或小鼠MerTK之以下四個結構域之結合：細胞外結構域(HuMER R26-A499或MuMER E23-S496)，其包括兩個Ig樣結構域及兩個纖連蛋白樣結構域；Ig樣1及2結構域(HuMER G76-P284或MuMER A70-P279)；Ig樣1結構域(HuMER G76-G195或MuMER A70-G190)；及Ig樣2結構域(HuMER G195-P284或MuMER G190-P279)。
使用來自BIAcore™-T200儀器之表面電漿子共振(SRP)量測值獲得結合親和力測定值。簡言之，捕獲每一兔抗體以達成大約100個RU (反應單位)。接著，在25℃或37℃下，將稀釋於HBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl、3 mM EDTA及0.05% v/v表面活性劑P20)中之各種MerTK結構域之3倍連續稀釋液(0.4 nM至100 nM)以30 μl/min之流量注射至BIAcore™-T200儀器中。使用簡單1:1 Langmuir結合模型(BIAcore T200評估軟體第2.0版)計算締合速率(k締合 )及解離速率(k解離 )。將平衡解離常數(KD )計算為比率k解離 /k締合 。
藉由BIAcore分析來評價針對人類及小鼠MerTK細胞外結構域二者(HuMER R26-A499及MuMER E23-S496)、Ig1及2結構域、僅Ig1結構域及僅Ig2結構域結合之兔抗體之抗體抗原決定基測定(表 18 )。人類MerTK及其結構域以淺灰色顯示，而小鼠MerTK及其結構域以深灰色顯示。
抗原決定基結合分析之結果展示，交叉反應性FN結構域抗體Rbt8F4、Rbt22C4及Rbt13D8在1 uM下不結合人類或小鼠Ig1及Ig2結構域(表 18 )。未收集抗體Rbt9E3.FN、Rbt10C3及Rbt10F7之抗原決定基結合資料。然而，Wasatch分倉展示，Rbt9E3.FN、Rbt10C3及Rbt10F7之抗原決定基特異性與FN結構域抗體Rbt8F4、Rbt22C4及Rbt13D8有所重疊(圖 3 )。因此，該等結果表明，Rbt9E3.FN、Rbt10C3及Rbt10F7係不會結合經分離之Ig1及Ig2結構域之FN結合結構域抗體。
抗原決定基結合分析之結果進一步展示，抗體Rbt11G11、Rbt12H4、Rbt18G7、Rbt13B4及Rbt14C9係Ig結構域結合抗體(表 18 )。抗體Rbt11G11、Rbt12H4及Rbt18G7係結合人類及小鼠MerTK Ig二者之交叉反應性Ig結構域抗體(表 18 )。相比之下，Rbt13B4及Rbt14C9係物種特異性Ig結構域抗體，其分別結合人類及小鼠Ig (表 18 )。表 18
HuMER 上之抗原決定基 MerTK 抗體 BIAcore 分析 (KD ： nM) ， 25℃
HuMER (R26-A499) HuMER. Ig1 及 2 (G76-P284) HuMER. Ig1 (G76-G195) HuMER. Ig2 (G195-P284) MuMER (E23-S496) MuMER. Ig1 及 2 (A70-P279) MuMER. Ig1 (A70-G190) MuMER. Ig2 (G190-P279)
FN Rbt8F4 44 ＞1000 ＞1000 ＞1000 2.3 ＞1000 na na
FN Rbt22C4 94 ＞1000 ＞1000 ＞1000 2.2 ＞1000 na na
FN Rbt13D8 4.3 ＞1000 ＞1000 ＞1000 1.2 ＞1000 na na
*FN *Rbt9E3.FN 2.6 na na na 0.6 na na na
*FN *Rbt10C3 3.4 na na na 0.7 na na na
*FN *Rbt10F7 7.0 na na na 4.1 na na na
Ig1 Rbt11G11 31.3 ＞1000 39.8 ＞1000 4.1 3.4 na na
Ig1 Rbt12H4 18 92 16.7 ＞1000 8.5 11 2.2 ＞1000
Ig1 Rbt18G7 2.3 21 0.5 ＞1000 1.7 1.9 0.2 ＞1000
Ig1 Rbt13B4 2.9 8.8 0.3 ＞1000 ＞1000 ＞1000 ＞1000 ＞1000
- Rbt14C9 ＞1000 na na na 0.6 0.5 0.1 ＞1000
實例4：抗MerTK抑制活體外人類及小鼠巨噬細胞之吞噬作用
實施胞葬作用分析以評估抗MerTK抗體之活體外巨噬細胞吞噬作用抑制活性。
簡言之，使用IncuCyte實時成像平台對胞葬作用(亦即對凋亡細胞之吞噬作用)進行定量。凋亡細胞用pH敏感性探針(pHrodo)標記。pHrodo在被巨噬細胞吞噬後將僅在吞噬溶酶體之酸性環境中發螢光。將吞噬作用事件定量為總螢光強度(TFI)，且根據每孔中巨噬細胞之數量進行正規化。將觀察到的最大正規化TFI指定為100%吞噬活性。最大吞噬作用抑制(0%吞噬活性)指定為在沒有巨噬細胞之對照孔中僅由經pHrodo標記之凋亡細胞產生之自體螢光。
胞葬作用分析展示，人類化抗MerTK抗體可抑制人類巨噬細胞對凋亡細胞之吞噬作用(圖 4A 、圖 4B 及圖 4C )。該等結果表明，人類化抗體h13B4.v16係最強效之吞噬作用抑制劑(表 19 )。此外，發現抗MerTK抗體h13B4.v16 (13B4完全人類化) (一種Ig結構域結合抗體)抑制人類巨噬細胞之吞噬作用之功效為抗MerTK抗體h10F7.v16 (10F7完全人類化) (一種纖連蛋白結構域結合抗體)之5.2倍(表 20 ；圖 4D )。
另外，圖 4E 顯示評價抗MerTK抗體抑制小鼠巨噬細胞吞噬作用之能力的胞葬作用分析之結果。該等結果展示，抗MerTK抗體能夠阻斷小鼠巨噬細胞吞噬作用(圖 4E )。此外，該等結果顯示，抗MerTK抗體14C9 mIgG2a LALAPG (一種Ig結構域結合抗體)在抑制小鼠巨噬細胞之吞噬作用方面之功效為抗MerTK抗體h10F7.v16 (10F7完全人類化) (一種纖連蛋白結構域結合抗體)之4.8倍(表 21 )。 表19
完全人類化抗體 供體A 供體B 供體C 平均值(3 個供體)
IC50 (nM) 最大抑制(%) IC50 (nM) 最大抑制(%) IC50 (nM) 最大抑制(%) IC50 (nM) 最大抑制(%)
h13B4.v16 0.07 91 0.08 82 0.09 77 0.08 83
h10F7.v16 0.42 76 0.53 73 0.27 60 0.41 69
h10C3.v14 0.52 64 1.2 58 1.2 62 0.95 61
h9E3.FN.v16 0.59 58 NA NA 1.5 55 1.02 57
表20
抗 MerTK 抗體 平均值 (3 個供體 )
IC50 (nM) 最大抑制 (%)
13B4 ，完全人類化 0.08 83
10F7 ，完全人類化 0.41 69
表21
抗 MerTK 抗體 平均值
IC50 (nM) 最大抑制 (%)
14C9 mIgG2a LALAPG 0.19 73
10F7 ，完全人類化 0.91 64
實例5：抗MerTK活體內抑制凋亡細胞之清除
實施凋亡細胞清除分析以評估抗MerTK抗體之活體內活性(Seitz, H. M.等人，Macrophages and dendritic cells use different Axl/Mertk/Tyro3 receptors in clearance of apoptotic cells, J Immunol. 178(9) 5635-5642 (2007))。
簡言之，向5至7週齡C57BL/6小鼠腹膜內注射0.2 mg/25 g地塞米松(Dex)。8小時或24小時後，分離出胸腺且將其解離成單細胞懸浮液。利用VAD-FMK-FITC (1:500於PBS中，Promega，目錄號G7461)使細胞染色，以偵測半胱天冬酶3陽性活性凋亡細胞。使用碘化丙啶對死細胞進行染色(1:1000，Biochemika，目錄號：70335)。在BD FACSCalibur流式細胞儀上分析細胞。藉由VAD-FMK-FITC單陽性細胞(早期凋亡細胞)及PI/VAD-FMK-FITC雙陽性細胞(晚期凋亡細胞)來量測凋亡細胞之累積。圖 5A 展示，在Dex治療後8小時，凋亡細胞累積，且大部分在24小時內清除。
來自胸腺之凋亡細胞之清除依賴於巨噬細胞上表現之MerTK。因此，測試一組功能阻斷性抗MerTK抗體之每一抗體抑制凋亡/死亡細胞之清除之能力。在Dex治療後24小時，抗MerTK (純系14C9，mIgG2a，LALAPG)阻斷胸腺中凋亡細胞之清除，而對照抗體抗gp120 (mIgG2a，LALAPG)不阻斷(圖 5B )。在經抗gp120或抗MerTK治療之小鼠中，在Dex注射後24小時，對胸腺中凋亡/死亡細胞累積之定量展示，相對於抗gp120對照，抗MerTK抗體阻斷凋亡細胞之清除(圖 5C )。 實例6：抗MerTK抗體在MC-38同基因腫瘤模型中之治療效應
在MC-38同基因腫瘤模型中實施腫瘤效能研究以確定抗MerTK抗體是否影響腫瘤生長。
向年齡相匹配之6至8週齡雌性C57BL/6小鼠之右側腹中皮下接種1 × 105 個懸浮於漢克氏緩衝鹽水溶液(Hank’s Buffered Saline Solution，HBSS)及無酚紅基質膠(BD Bioscience)中之MC-38腫瘤細胞。當腫瘤達到150-250 mm3 之體積時(第0天)，將小鼠分成n=10之不同治療組。經由靜脈內(IV)注射在第1天及第5天以30 mg kg−1 投與抗MerTK抗體(mIgG2a，LALAPG)或對照抗gp120 (mIgG2a，LALAPG)抗體，之後在第9天及第13天進行腹膜內(IP)注射。經由IV注射在第1天以30 mg kg−1 投與抗PDL1抗體，之後在第5天、第9天及第13天以5 mg kg−1 進行IP注射。每週量測兩次腫瘤體積且使用修正之橢球公式½ (長度×寬度2 )進行計算。腫瘤＞2,000 mm3 視為進展。
在腫瘤體積追蹤圖中，灰線代表截至數據收集之日仍處於研究中之動物之腫瘤大小(圖 6A 及圖 6B )。紅線代表處以安樂死且自研究移除之具有潰爛或進展腫瘤之動物(圖 6A 及圖 6B )。紅色水平虛線指示自治療開始腫瘤體積之倍增，而綠色水平虛線代表可量測之最小腫瘤體積(圖 6A 及圖 6B )。在綠色虛線下方區域中的具有腫瘤之動物視為已具有完全反應。
作為單一療法，免疫檢查點抑制劑抗PDL1展現中等抗腫瘤活性(圖 6A 至圖 6D )。量測每一治療組之個別腫瘤大小(圖 6A 及圖 6B )及平均腫瘤大小(圖 6C 及圖 6D )隨時間之變化。與抗MerTK抗體之組合治療極大地增強抗PDL1抗體之抗腫瘤效能(圖 6A 至圖 6D )。
在實體腫瘤之正常生理環境中，表現MerTK之腫瘤相關巨噬細胞(TAM)對瀕死腫瘤細胞之快速去除係免疫沈默的。不受限於理論，據信，在上文所闡述實驗中利用抗MerTK抗體完成的對MerTK之阻斷可激活先天性促發炎反應，此進而可進一步增強抗PD-1療法所釋放之適應性T細胞反應。 實例7：抗MerTK抗體降低活體外及活體內凋亡胸腺細胞之清除
實施胞葬作用分析以評估抗MerTK抗體(純系14C9，重新格式化成mIgG2a，LALAPG框架)之活體外巨噬細胞吞噬作用抑制活性。
對於活體外胞葬作用分析，自4至6週齡C57BL/6N小鼠採集胸腺組織且將其切碎以產生單細胞懸浮液。藉由2 μM地塞米松在37℃下誘導胸腺細胞凋亡5小時。使用具有PI之APC膜聯蛋白V凋亡偵測套組(Biolegend)評價膜完整性及磷酯醯絲胺酸在細胞表面上之暴露。凋亡胸腺細胞用1 μg/ml pHrodo紅琥珀醯亞胺基酯標記。使巨噬細胞與30 μg/ml對照抗體或抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)一起預先培育1小時，之後添加經pHrodo紅標記之凋亡細胞。pHrodo在被巨噬細胞吞噬後將僅在吞噬溶酶體之酸性環境中發螢光。在培育45分鐘後，洗去其餘之凋亡細胞，且利用FITC結合之抗CD11b抗體(eBioscience，純系M1/70)標記巨噬細胞。在拍攝螢光影像之後，將細胞自細胞培養板分離以供藉由FACS分析進行定量。
對於活體內胞葬作用分析，向5至7週齡C57BL/6N小鼠投用20 mg/kg抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體，且接著在1小時後腹膜內注射0.2 mg/25 g地塞米松(Dex)。8小時或24小時後，分離出胸腺且將其解離成單細胞懸浮液。利用VAD-FMK-FITC (1:500於PBS中，Promega，目錄號G7461)使細胞染色，以偵測半胱天冬酶3陽性活性凋亡細胞。使用碘化丙啶對死細胞進行染色(1:1000，Biochemika，目錄號：70335)。在BD FACSCalibur流式細胞儀上分析細胞。藉由VAD-FMK-FITC單陽性細胞(早期凋亡細胞)及PI/VAD-FMK-FITC雙陽性細胞(晚期凋亡細胞)來量測凋亡細胞之累積。
在活體外胞葬作用分析中，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)實質上降低腹腔巨噬細胞對凋亡胸腺細胞之攝取(圖 7B )。此外，在活體內分析中，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)有效地抑制經地塞米松治療之小鼠中凋亡胸腺細胞之清除(圖 7C 及圖 8B )。此活體內結果與在MerTK缺陷型小鼠中觀察到的缺陷性胞葬作用(Scott, R.S.等人，Phagocytosis and clearance of apoptotic cells is mediated by MER.Nature 411, 207-211 (2001))一致，此展示抗MerTK抗體之功能有效性。 實例8：抗MerTK抗體抑制配位體介導之MerTK信號傳導
量測MerTK配位體依賴性AKT磷酸化以評估抗MerTK抗體對配位體介導之MerTK信號傳導之效應。
簡言之，於96孔板中將來自指數生長培養物之J774A.1小鼠巨噬細胞以2.0 × 105個細胞/孔之密度接種於RPMI培養基+ 10% FBS中。第二天，將細胞用200 µL無血清RPMI洗滌兩次，且於200 µL無血清RPMI中培育4小時。在血清饑餓後，添加10 μg/mL為MerTK配位體之重組人類GAS6-Fc蛋白且培育20分鐘。使用磷酸-AKT-1 (Ser473) HTRF套組(Cisbio，編號63ADK078PEG)，遵循製造商之說明書(兩板分析方案之標準方案，20 µL最終體積)，自經處理之細胞溶解物進行磷酸-AKT (pAKT)量測。AKT磷酸化分析展示，如藉由巨噬細胞中之pAKT活性所量測，與同型對照相比，抗MerTK抗體強效地抑制配位體介導之MerTK信號傳導(圖 8A )。 實例9：抗MerTK抗體對腫瘤相關巨噬細胞之效應
在腫瘤相關巨噬細胞(TAM)中實施MerTK表現及分佈研究，TAM係最豐富之腫瘤浸潤性免疫細胞之一。為分離TAM，採集腫瘤且將其解離成單細胞懸浮液。使用淋巴球M培養基(Cedarlane Labs)富集活細胞。利用生物素結合之抗體標記CD335+、Siglec F+及抗Ly6G/6C+細胞，且用抗生物素MACSiBeadTM 顆粒(Miltenyi Biotec)耗盡。接著利用抗F4/80微型珠粒(Miltenyi Biotec)純化TAM (圖 10A )。如藉由FACS所評價，證實所分離TAM之純度＞90% (圖 10B )。使用螢光顯微鏡術來測定TAM中之MerTK分佈及TAM清除凋亡細胞之能力(圖 8C 及圖 8E )。實施qPCR及轉錄體分析以鑑別在經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或對照抗體處理之細胞中差異表現之基因(圖 9 、圖 10 、圖 11 及圖 13 )。
對在野生型(WT )或Mertk-/- 小鼠中生長的MC38同基因鼠類結腸腺癌腫瘤之分析顯示MerTK在TAM中之特異性表現(圖 8C )。另外，來自MC38腫瘤之TAM能夠吞食凋亡細胞，且重要的是，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抑制此攝取(圖 8E )。該等結果展示，在腫瘤微環境中，MerTK在TAM對凋亡細胞之清除中起重要作用，且利用抗MerTK抗體處理TAM抑制此攝取。
對來自經抗MerTK抗體治療之已確立MC38腫瘤之TAM實施轉錄體分析以測定MerTK抑制對TAM之影響。轉錄體分析揭露，與經對照抗體治療之TAM相比，來自經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之小鼠之TAM展示基因表現之顯著變化(圖 9A 及圖 10C )。基因集合富集分析揭露I型IFN反應係最顯著上調之基因印記(圖 9B 及圖 10D )。qPCR分析證實在來自抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之腫瘤之TAM中，Ifnb1 及多個干擾素刺激基因(ISG)上調(圖 9C 及圖 11A )。在腫瘤樣品中亦觀察到IFNβ蛋白之顯著增加(圖 9D )及ISG之伴隨誘導(圖 10E 及圖 11B )。Ifnb1 表現之上調限於CD45+免疫細胞，且IFNβ在CD45+免疫細胞中之基礎水準表現顯著高於CD45-細胞。另外，IFNβ在TAM中顯著上調，但在DC中不顯著(圖 9E )，且在MC38腫瘤中，TAM較DC明顯更豐富(圖 14B )。 實例10：MerTK在人類癌症中之分佈
使用來自癌症基因體圖譜(TCGA)之表現資料來確定MerTK表現在人類癌症中之分佈。如Daemen等人所闡述獲得TCGA樣品中之表現資料。(Daemen, A.等人，Pan-Cancer Metabolic Signature Predicts Co-Dependency on Glutaminase and De Novo Glutathione Synthesis Linked to a High-Mesenchymal Cell State.Cell Metab 28, 383-399 e389 (2018))。RPKM形式之基因表現用作TIMER軟體(Li, T.等人，TIMER: A Web Server for Comprehensive Analysis of Tumor-Infiltrating Immune Cells.Cancer Res 77, e108-e110 (2017))之輸入，以計算六個腫瘤浸潤性免疫子集之相對水準。已證實，MerTK不係用於估計免疫集合豐度之印記之一部分。針對每一細胞類型及適應症計算基因表現水準與免疫細胞類型估計值之間的皮爾遜(Pearson)相關係數。在人類癌症中，與其他免疫細胞類型相比，MerTK表現展現出更大的與TAM豐度之相關性(圖 8D )，此與MerTK由TAM表現一致。 實例11：抗MerTK抗體在腫瘤微環境中誘導局部I型IFN反應
對抗MerTK抗體治療與I型IFN反應之間的關係進行研究。簡言之，向雌性C57BL/6小鼠之右側腹中皮下接種1 × 105 個懸浮於漢克氏緩衝鹽水溶液(HBSS)及無酚紅基質膠(1:1 v/v) (BD Bioscience)中之MC38腫瘤細胞，且接著利用20 mg/kg抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體或對照抗體進行治療。治療後三天，使用gentleMACS解離器(Miltenyi Biotec)遵循製造商之方案，於gentleMACS M管(Miltenyi Biotec)中，使腫瘤於補充有HaltTM 蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合劑(ThermoFisher Scientific)之PBS中進行均質化。每100 mg腫瘤組織使用500 μL緩衝液。藉由在4℃下以12,000 ×g離心20分鐘使腫瘤勻漿澄清。基於藉由BCA蛋白質分析套組(Piece)所測定之總蛋白質濃度使勻漿正規化。分別使用高敏感性小鼠IFN β ELISA套組(PBL Assay Science)及小鼠MCP-3即時ELISA套組(Invitrogen)來分析IFN-β及CCL7 (MCP-3)。使用MILLIPLEX MAP小鼠細胞介素/趨化介素磁珠平板預混合15-Plex及32-Plex (Millipore)來分析其他細胞介素/趨化介素。細胞介素/趨化介素結果表示為腫瘤勻漿中之pg/mg總蛋白質。
I型IFN激活調節先天性及適應性免疫反應之細胞介素及趨化介素之自分泌及/或旁分泌產生。與此相一致，在經抗MerTK抗體治療之腫瘤勻漿中觀察到細胞介素或趨化介素CCL3、CCL4、CCL5、CCL7及CCL12之蛋白質水準(圖 13A )。I型IFN反應似乎侷限於腫瘤部位，此乃因在自經抗MerTK抗體治療之荷瘤小鼠收集之外周血單核細胞(PBMC)中未發現ISG表現之顯著變化(圖 13B )。未觀察到先前報導與MerTK活化相關之細胞介素(包括IL10、TGFβ1、IL6及IL12a)表現之顯著變化(圖 13C )。總之，該等數據展示，抗MerTK抗體可在腫瘤微環境中誘導局部I型IFN反應。 實例12：抗MerTK抗體增強抗腫瘤免疫性
鑒於抗MerTK抗體誘導I型IFN反應且I型IFN正向調控抗原呈遞細胞(APC)之各個方面，實施抗原呈遞分析以確定抗MerTK抗體是否增強TAM及腫瘤相關DC對抗原之呈遞。簡言之，向雌性C57BL/6小鼠之右側腹中皮下接種5 × 106個懸浮於漢克氏緩衝鹽水溶液(HBSS)及無酚紅基質膠(1:1 v/v) (BD Bioscience)中之MC38.OVA腫瘤細胞。當腫瘤達到100-150 mm3 之體積時(第0天)，經由腹膜內(IP)注射以20 mg/kg之劑量向小鼠投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體或對照抗體抗gp120。稍後對腫瘤進行抗原呈遞增強分析。在MC38.OVA腫瘤模型中，可容易地偵測H-2Kb 結合之OVA源性SIINFEKL肽以供監測抗原呈遞。使用抗H-2Kb -SIINFEKL (Biolegend，純系25-D1.16)特異性地偵測結合至I類MHC H-2Kb 之OVA源性肽SIINFEKL，但不偵測未結合之H-2Kb 或與其他肽結合之H-2Kb 。
抗MerTK抗體顯著地增加TAM上H-2Kb -SIINFEKL複合體之水準(圖 12A )。T細胞活化之共刺激分子CD86在TAM中亦升高，但在DC中不升高(圖 12A )。在抗MerTK抗體治療後，亦在TAM上觀察到「M2樣」巨噬細胞標記物CD206之下調(圖 14C )。該等發現表明，抗MerTK抗體誘導腫瘤微環境之免疫原性再程式化，此進而可增強適應性T細胞反應。
腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)純系形成能力反映在腫瘤部位使用特定TCR鏈之T細胞之頻率。為確定抗MerTK抗體治療是否影響抗原特異性TIL之純系擴增，使用Dynabeads Mouse Pan T套組(ThermoFisher Scientific)來富集腫瘤浸潤性T細胞。使用AllPrep DNA/RNA/蛋白質小型套組(Qiagen)提取來自經富集T細胞之基因體DNA，且使用調查水準Immunoseq平台(Adaptive Biotechnologies)使該基因體DNA經受TCRβ CDR3測序。使用ImmunoSEQ分析儀(Adaptive Biotechnologies)分析測序結果。將純系形成能力評分計算為1-(熵)/log2(有效單一序列之數量)，其中熵計及變化之純系頻率。
抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療使得TIL純系形成能力顯著增加(圖 12B )，此指示抗原特異性TIL之純系擴增。另外，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療增加總CD8+ T細胞以及抗原特異性CD8+ T細胞(例如識別由MC38腫瘤細胞呈遞之內源性抗原p15e之T細胞)之頻率(圖 12C )。因此，MerTK阻斷增強對腫瘤細胞之免疫識別及腫瘤特異性CD8+ T反應。 實例13：抗MerTK抗體在與抗PD-1、抗PD-L1及吉西他濱組合時係有效的
為進一步表徵抗MerTK抗體作為組合療法之有效性，如先前所闡述實施腫瘤生長分析。簡言之，向雌性C57BL/6小鼠之右側腹中皮下接種1 × 105 個懸浮於漢克氏緩衝鹽水溶液(HBSS)及無酚紅基質膠(1:1 v/v) (BD Bioscience)中之MC38腫瘤細胞。在接種後之預定日，向小鼠投與(1)作為單一療法之抗MerTK抗體(圖 15A )；(2)作為組合療法之抗MerTK抗體及抗PD-L1抗體(圖 15B )；或(3)作為組合療法之抗MerTK抗體、抗PD-1抗體及化學治療性吉西他濱(圖 15C )。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)係以20 mg/kg投與，抗PD-L1係以10 mg/kg投與，抗PD1係以8 mg/kg投與，且吉西他濱係以120 mg/kg投與。在腫瘤進展早期(圖 15A )或在腫瘤完全確立時(圖 15B 及圖 15C )投與治療。
當在腫瘤進展早期開始治療時，單一劑抗MerTK抗體能夠顯著降低腫瘤生長(圖 15A )。相比之下，在治療完全確立腫瘤之干預背景中，單獨之抗MerTK抗體或抗PD-L1抗體具有微小效應(圖 15B )。相比之下，利用抗MerTK抗體及抗PD-L1抗體同時治療展現強勁之抗腫瘤效應(圖 15B )。類似地，利用抗MerTK抗體治療顯著地改良靶向PD-1 (PD-L1之受體)之抗體之效能(圖 15C )。化學療法藥物吉西他濱中等地改良抗PD-1抗體療法。然而，向吉西他濱加抗PD-1抗體之組合療法增加抗MerTK抗體使所有治療腫瘤完全消退(圖 15C )。 實例14：抗MerTK抗體抗腫瘤效應依賴於腫瘤宿主中功能性STING之存在
為探索I型IFN信號傳導在抗MerTK誘導之抗腫瘤免疫反應中之作用，使用針對IFNAR1之功能性中和抗體(抗IFNAR1純系MAR1-5A3 BioXCell)來干擾I型IFN信號傳導，且如先前所闡述實施腫瘤生長分析。簡言之，向雌性C57BL/6小鼠之右側腹中皮下接種1 × 105 個懸浮於漢克氏緩衝鹽水溶液(HBSS)及無酚紅基質膠(1:1 v/v) (BD Bioscience)中之MC38腫瘤細胞。在接種後之預定日，向小鼠投與(1)作為單一療法之抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體；(2)作為單一療法之抗IFNAR1抗體；(3)作為組合療法之抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1抗體；或(4)作為組合療法之抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)、抗PD-L1抗體及抗INFAR1抗體。
抗IFNAR1抗體治療完全消除MerTK阻斷對ISG之調節(圖 16A )。阻斷I型IFN信號傳導亦使抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)作為單一劑(圖 17A )或與抗PD-L1之組合(圖 16B )之抗腫瘤活性無效。該等結果展示，抗MerTK抗體之抗腫瘤效應依賴於完整之I型IFN信號傳導。
STING路徑已成為驅動抗腫瘤I型IFN反應之關鍵信號傳導機制(Woo, S.R.等人，STING-dependent cytosolic DNA sensing mediates innate immune recognition of immunogenic tumors.Immunity 41, 830-842 (2014)；Deng, L.等人，STING-Dependent Cytosolic DNA Sensing Promotes Radiation-Induced Type I Interferon-Dependent Antitumor Immunity in Immunogenic Tumors.Immunity 41, 843-852 (2014))。為確定STING信號傳導對MerTK阻斷之抗腫瘤效應之作用，對WT 及STING缺陷(Stinggt/gt )小鼠進行腫瘤研究。與WT 小鼠相反，在抗MerTK抗體治療之後，在Stinggt/gt 小鼠中未偵測到ISG之上調(圖 17B )。此外，在小鼠中不存在功能性STING之情形下，MerTK抑制之抗腫瘤效應喪失(圖 17C )。該等數據展示，抗MerTK抗體之抗腫瘤效應依賴於宿主中功能性STING之存在。 實例15：抗MerTK抗體抗腫瘤效應依賴於腫瘤細胞中功能性cGAS之存在
實施細胞質DNA轉染實驗以評估STING及cGAS對抗MerTK抗體抗腫瘤效應之效應。簡言之，使用lipofectamine 3000 (Invitrogen)，利用鯡魚睪丸-DNA (HT-DNA)轉染WT 骨髓源性巨噬細胞(BMDM)、Stinggt/gt BMDM、WT J774A.1巨噬細胞及cGAS-/- J774A.1巨噬細胞，且接著使用UV交聯劑(Stratagene)藉由250 mJ/cm2 UV-C進行輻照以誘導凋亡，且使用高敏感性小鼠IFN β ELISA套組(PBL Assay Science)量測所產生之IFN-β蛋白之量。巨噬細胞因應於經由脂質體介導之轉染所外源性遞送之胞質DNA進行IFNβ誘導需要功能性cGAS及STING (圖 18A 及圖 18B )。對MC38腫瘤細胞及J774A.1巨噬細胞中cGAS及STING表現之西方墨點分析確定，J774A.1巨噬細胞表現cGAS及STING，而MC38腫瘤細胞僅表現cGAS (圖 18C )。與缺乏STING表現一致，MC38細胞自身在UV輻射後不產生任何可偵測到之IFNβ (圖 18C 及圖 19A )。當UV輻照之腫瘤細胞與WT 而非Stinggt/gt 巨噬細胞共培養時，會誘導IFNβ (圖 19A )。
在另一實驗中，利用如上文所闡述之DNA轉染瀕死腫瘤細胞，使其與巨噬細胞共培養24小時，且使用高敏感性小鼠IFN β ELISA套組(PBL Assay Science)測定培養上清液中之IFNβ蛋白水準。缺乏cGAS之巨噬細胞在與瀕死腫瘤細胞共培養時仍能夠產生IFNβ (圖 19B )。為研究腫瘤細胞是否向巨噬細胞提供功能性cGAS從而導致IFN-β表現，測試cGAS-/- MC38細胞誘導IFN-β表現之能力。此顯示，不管巨噬細胞之基因型為何，cGAS-/- MC38細胞均不能刺激IFNβ產生(圖 19A 及圖 19B )。該等結果支持巨噬細胞中之STING係由腫瘤源性cGAS反式活化之模型。
為研究腫瘤源性cGAS在活體內使STING反式活化之意義，吾人利用cGAS-/- MC38或AB22腫瘤細胞進行腫瘤研究。簡言之，向C57BL/6N小鼠接種1 × 105 個WT 或cGAS-/- MC38細胞或向BALB/c小鼠接種1 × 107 個WT 或cGAS-/- AB22細胞，接著如實例11中所闡述利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或對照抗體進行治療。對於早期腫瘤研究，在接種後4天向小鼠投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或對照抗體(圖 19C )，或在腫瘤細胞接種後4天、7天及10天投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)、抗PD-L1或對照抗體(圖 19D 及圖 19E )。對於已確立腫瘤研究，在接種後18天、22天、26天及30天向小鼠投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)與抗PD-L1之組合或對照抗體(圖 18E )，或使腫瘤生長至100-150 mm3 之體積，且接著在當天向小鼠投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或對照抗體(圖 18D )。
在抗MerTK抗體治療後，在MC38腫瘤中觀察到的I型IFN反應在cGAS-/- MC38腫瘤中完全消失(圖 19C )。在間皮瘤AB22腫瘤中獲得類似結果(圖 18D )。重要的是，cGAS缺乏使腫瘤在早期腫瘤進展設定中對抗MerTK抗體或抗PD-L1抗體之單一劑治療具有抗性(圖 19D 及圖 19E )，或在治療完全確立之腫瘤時對組合療法具有抗性(圖 18E )。因此，抗MerTK抗體抗腫瘤效應依賴於腫瘤細胞中功能性cGAS之存在。 實例16：抗MerTK抗體抗腫瘤效應可能依賴於腫瘤細胞與巨噬細胞之間的隙型連結之存在
已知cGAS之活化導致產生cGAMP。為確定腫瘤細胞源性cGAMP是否導致免疫細胞中STING之活化，使用藉由LC-MS/MS之蛋白質定量來量測經DNA轉染之WT 及cGAS-/- MC38腫瘤細胞中之cGAMP產生。在經HT-DNA轉染後，WT 腫瘤細胞中cGAMP增加，但cGAS-/- 腫瘤細胞失去因應於胞質DNA產生cGAMP之能力(圖 18F )。為確定緊密連結是否有助於腫瘤細胞源性cGAMP傳遞至巨噬細胞中，實施腫瘤細胞與巨噬細胞之間的染料轉移分析及IFN-β轉移分析。對於染料轉移分析，在37℃下利用於PBS中之0.5 μg/ml鈣黃綠素-AM染料(ThermoFisher)使供體細胞(WT MC38腫瘤細胞、Cx43-/- MC38腫瘤細胞或J774A.1巨噬細胞)染色30分鐘，且用培養基充分洗滌以去除游離染料。將載有鈣黃綠素之供體細胞與接受者細胞(WT 或Cx43-/- MC38腫瘤細胞)以3:1之比率共培養4至5小時。藉由FACS分析細胞以評價染料轉移。為增加Cx43表現，在用於染料轉移實驗之前，將J774A.1巨噬細胞用0.5 μg/ml LPS (Invivogen)刺激隔夜。使用PE-德克薩斯紅結合之抗CD11b (ThermoFisher)區分巨噬細胞與腫瘤細胞。
Cx43係最遍在表現之連結蛋白家族蛋白質(Cx)，其組裝以形成鄰近細胞之間的隙型連結。Cx43之丟失消除MC38細胞之間的染料轉移(圖 20B 及圖 20C )，此證實Cx43係用於形成功能性隙型連結之關鍵連結蛋白。染料轉移實驗亦顯示巨噬細胞與MC38腫瘤細胞之間的Cx43依賴性細胞間通訊(圖 20D )。
在另一實驗中，將DNA轉染至WT 或Cx43-/- MC38腫瘤細胞中以誘導cGAMP之產生。在DNA轉染後，將5 × 105 個腫瘤細胞與5 × 105 個經LPS處理之J774A.1巨噬細胞共培養24小時以容許cGAMP轉移。利用高敏感性小鼠IFN β ELISA套組(PBL Assay Science)量測培養上清液中之IFNβ蛋白。由於MC38腫瘤細胞因缺乏STING表現而不能產生IFNβ，故IFNβ之產生反映cGAMP自腫瘤細胞向巨噬細胞之有效轉移。DNA轉染之WT MC38細胞而非Cx43-/- MC38細胞誘導IFNβ產生(圖 21B )。鑒於WT 及Cx43-/- MC38細胞表現類似水準之cGAS (圖 20A )，Cx43-/- MC38細胞無法誘導IFNβ有可能係由於有缺陷之隙型連結。總之，該等數據支持cGAMP自腫瘤細胞向巨噬細胞之隙型連結依賴性轉移之可能性。
進一步研究WT 及Cx43-/- MC38腫瘤細胞，以確定在此模型中缺陷性隙型連結是否消除抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)之抗腫瘤效應。簡言之，如實例11中所闡述向C57BL/6N小鼠接種Cx43-/- MC38細胞，且4天後利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)進行治療。在抗MerTK抗體治療後，與WT MC38腫瘤不同，在Cx43-/- MC38腫瘤中未觀察到ISG表現之顯著變化(圖 21C )。
亦研究Cx43丟失對抗MerTK抗體抗腫瘤效應之效應。簡言之，向C57BL/6N小鼠接種1 × 105 個WT 或cGAS-/- MC38細胞或向BALB/c小鼠接種1 × 107 個WT 或Cx43-/- MC38細胞，接著如實例11中所闡述利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或對照抗體進行治療。在接種腫瘤細胞後14天、18天、22天及26天向小鼠投與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1作為組合療法或對照抗體。Cx43-/- MC38腫瘤對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)與抗PD-L1之組合療法產生抗性(圖 20E )。總之，該等結果展示，抗MerTK抗體有效治療腫瘤，且抗MerTK抗體之有效性依賴於宿主STING、腫瘤源性cGAS及腫瘤細胞與巨噬細胞之間的緊密連結之存在。 實例17：抗MerTK抗體阻斷腫瘤相關巨噬細胞(TAM)對凋亡細胞之持續清除
血液循環中之無細胞DNA (cfDNA)係由受損或死亡細胞釋放(Wan, J.C.M.等人(2017)Nat. Rev. Cancer 17:223-238)。在癌症患者或荷瘤小鼠中，cfDNA之一個亞群體係腫瘤源性的，稱為循環腫瘤DNA (ctDNA)。在此實例中，利用SNP來區分MC38腫瘤模型中之宿主源性cfDNA與腫瘤源性ctDNA，以研究抗MerTK抗體治療之效應。
將MC38腫瘤細胞接種至C57BL/6J小鼠中且使腫瘤確立。在腫瘤確立後，投與抗MerTK或對照抗體。治療後三天，藉由心臟穿刺將全血收集至無細胞DNA BCT管(Streck)中。藉由雙旋轉程序(1,600 g 10分鐘，分離，之後16,000 g 10分鐘)獲得血漿。使用MagMAXTM無細胞DNA分離套組(ThermoFisher Scientific)遵循製造商之方案獲得cfDNA (12.5 μL，200 μL血漿)。
為分析宿主源性cfDNA及MC38源性ctDNA之水準，使用含有靶向基因Jmjd1c 之SNP (rs13480628, ThermoFisher Scientific)之引子及探針之分析實施多工液滴數位PCR (Bio-Rad Laboratories)。C57BL/6J小鼠及MC38細胞分別在此基因座表現「T」及「C」等位基因。對於液滴數位PCR，每一20 μL反應物中使用4 μL經分離之cfDNA，且以一式兩份分析每一樣品。使用QuantaSoft軟體(Bio-Rad Laboratories)實施樣品分析，且計算靶標DNA (拷貝/μL血漿)作為定量結果。使用Agilent Bioanalyzer 2100亦證實經分離cfDNA之大小主要為約170bp。
如上文所闡述將MC38腫瘤細胞接種至C57BL/6J小鼠中，且在腫瘤確立後投與抗MerTK或對照抗體。在抗MerTK治療後三天，在荷瘤小鼠之血漿中偵測到ctDNA之顯著增加(圖 22A )。抗MerTK亦使血液循環中宿主源性cfDNA之水準增加(圖 22B )。該等結果清楚地展示，腫瘤微環境抗MerTK能夠阻斷TAM對凋亡細胞之持續清除。 實例18：抗MerTK抗體結合親和力之分析及抗原決定基定位
對於本揭示案之抗MerTK抗體作為對照連同市售MerTK抗體之結合親和力測定，使用BIAcore™-T200儀器進行表面電漿子共振(SPR)量測。首先，藉由蛋白質A感測器晶片捕獲兩種兔抗體(Y323及10g86_D21F11)及抗MerTK抗體h13B4.v16，且藉由山羊抗小鼠IgG感測器晶片在每一流動槽上分別捕獲八種小鼠抗體(A3KCAT、2D2、7E5G1、7N-20、590H11G1E3、MAB891、MAB8911及MAB8912-100)以達成大約100個RU。在25℃下以50 μl/min之流量注射人類MerTK於HBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl、3 mM EDTA及0.05% v/v表面活性劑P20)中之三倍連續稀釋液(0.4 nM至100 nM)，以記錄隨時間而變化之結合反應。利用1:1 Langmuir結合模型對感測圖進行擬合以計算締合速率(k締合 )及解離速率(k解離 ) (BIAcore T200評估軟體第2.0版)。將結合親和力(平衡解離常數(KD))計算為比率k解離 /k締合 。
如圖 23 中所示，所選10種市售抗體中僅有4種顯示結合至人類MerTK。該等結果指示Y323對人類MerTK之結合親和力為0.4 nM，A3KCAT為6.8 nM，590H11G1E3為7.6 nM，MAB8912-100為17.3 nM且h13B4.v16為1.6 nM，而其餘抗體不顯示結合。圖 23 顯示，Y323係親和力高於h13B4.v16之抗體，包括與h13B4.v16相比，締合速率(ka)為其約12倍且解離速率(kd)為其3倍。另外，如上所述，圖 3 、圖 4A 至圖 4C 及表 19 展示，h13B4.v16具有抗MerTK抗體所期望之生物性質，諸如對胞葬作用更強效之抑制。因此，h13B4.v16具有獨特的結合特性(包括締合及解離速率)、親和力、結合抗原決定基及所產生之期望生物效應(例如胞葬作用)，從而使得此抗體成為特別有用之治療候選物。
進一步評價該4種抗體(Y323、A3KCAT、590H11G1E3及MAB8912-100)，以確定其結合抗原決定基是否與h13B4.v16競爭結合人類MerTK。為進行此實驗，使用相同BIAcore™-T200儀器，且應用經典夾心形式(圖24A )。首先藉由山羊抗人類Fab感測器晶片捕獲2 ug/mL之h13B4.v16，且接著以50 μl/min之流量注射於HBS-EP緩衝液中之50 nM人類MerTK以記錄第1次結合，之後記錄注射或不注射10 ug/mL測試抗體之情形下之第2次結合。若觀察到第2次結合，則測試抗體不與前導分子競爭，且反之亦然，若未觀察到第2次結合，則測試抗體與h13B4.v16競爭。
該等結果指示，僅抗體Y323與h13B4.v16競爭結合至人類MerTK (圖 24B )。其餘三種抗體不與h13B4.v16競爭結合至人類MerTK (圖 24C )。
儘管已出於理解清晰之目的藉助說明及實例相當詳細地闡述本揭示案，但闡述及實例不應解釋為限制本揭示案之範疇。本文所引用之所有專利及科學文獻之揭示內容均明確地以全文引用的方式併入。
圖 1 A 及圖 1B ： 藉由PCR擴增在兔中產生的每一MerTK特異性抗體之輕鏈及重鏈可變區，且將其選殖至表現載體中以進行純化及測序。將輕鏈可變區(圖1A)及重鏈可變區(圖1B)之胺基酸序列進行比對。使所提及之殘基編號與Kabat等人所定義之序列匹配，且對CDR序列加下劃線。SEQ ID NO係如下：Rbt8F4 (SEQ ID NO: 65)、Rbt9E3.FN (SEQ ID NO: 66)、Rbt10C3 (SEQ ID NO: 69)、Rbt10F7 (SEQ ID NO: 71)、Rbt11G11 (SEQ ID NO: 76)、Rbt12H4 (SEQ ID NO: 77)、Rbt13B4 (SEQ ID NO: 78)、Rbt13D8 (SEQ ID NO: 74)、Rbt14C9 (SEQ ID NO: 81)、Rbt18G7 (SEQ ID NO: 82)及Rbt22C4 (SEQ ID NO: 75)。圖1B中之SEQ ID NO係如下：Rbt8F4 (SEQ ID NO: 83)、Rbt9E3.FN (SEQ ID NO: 84)、Rbt10C3 (SEQ ID NO: 87)、Rbt10F7 (SEQ ID NO: 90)、Rbt11G11 (SEQ ID NO: 95)、Rbt12H4 (SEQ ID NO: 96)、Rbt13B4 (SEQ ID NO: 97)、Rbt13D8 (SEQ ID NO: 93)、Rbt14C9 (SEQ ID NO: 100)、Rbt18G7 (SEQ ID NO: 101)及Rbt22C4 (SEQ ID NO: 94)。圖 2A 、圖 2B 、圖 2C 及圖 2D ： 選擇抗體10F7、9E3、13B4及10C3進行人類化。將抗體10F7在人類化之前、人類化階段1之後(.v1)及人類化階段2之後(.v16)的輕鏈及重鏈可變區之胺基酸序列進行比對(圖2A)。將抗體9E3在人類化之前、人類化階段1之後(.v1)及人類化階段2之後(.v16)的輕鏈及重鏈可變區之胺基酸序列進行比對(圖2B)。將抗體13B4在人類化之前、人類化階段1之後(.v1)及人類化階段2之後(.v16)的輕鏈及重鏈可變區之胺基酸序列進行比對(圖2C)。將抗體10C3在人類化之前、人類化階段1之後(.v1)及人類化階段2之後(.v14)的輕鏈及重鏈可變區之胺基酸序列進行比對(圖2D)。使所提及之殘基編號與Kabat等人所定義之序列匹配，且對CDR序列加下劃線。輕鏈序列之SEQ ID NO係如下：Rbt10F7 (SEQ ID NO: 71)、h10F7.v1 (SEQ ID NO: 72)、h10F7.v16 (SEQ ID NO: 73)、Rbt9E3.FN (SEQ ID NO: 66)、h9E3.FN.v1 (SEQ ID NO: 67)、h9E3.FN.v16 (SEQ ID NO: 68)、Rbt13B4 (SEQ ID NO: 78)、h13B4.v1 (SEQ ID NO: 79)、h13B4.v16 (SEQ ID NO: 80)、Rbt10C3 (SEQ ID NO: 69)、h10C3.v1及h10C3.v14 (SEQ ID NO: 70)。圖2A至圖2D中重鏈序列之SEQ ID NO係如下：Rbt10F7 (SEQ ID NO: 90)、h10F7.v1 (SEQ ID NO: 91)、h10F7.v16 (SEQ ID NO: 92)、Rbt9E3.FN (SEQ ID NO: 84)、h9E3.FN.v1 (SEQ ID NO: 85)、h9E3.FN.v16 (SEQ ID NO: 86)、Rbt13B4 (SEQ ID NO: 97)、h13B4.v1 (SEQ ID NO: 98)、h13B4.v16 (SEQ ID NO: 99)、Rbt10C3 (SEQ ID NO: 87)、h10C3.v1 (SEQ ID NO: 88)及h10C3.v14 (SEQ ID NO: 89)。圖 3 ： 使用抗原決定基分倉(Epitope binning)來測定每一抗MerTK抗體之抗原決定基結構域特異性。針對小鼠MerTK產生之抗體8F4、22C4及13D8以及針對人類MerTK產生之抗體10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4及13D8相互競爭結合。針對小鼠MerTK產生之抗體12H4、18G7、14C9及11G11以及針對人類MerTK產生之抗體13B4、12H4、18G7及11G11相互競爭。如下文實例中所進一步闡述，抗體10C3、9E3.FN、10F7、22C4、8F4及13D8結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域，且抗體13B4、12H4、18G7及11G11結合至MerTK之Ig樣結構域。圖 4A 、圖 4B 、圖 4C 、圖 4D 及圖 4E ： 實施胞葬作用分析以評估抗MerTK抗體之活體外吞噬作用抑制活性。抗MerTK抗體抑制自三個不同供體分離之人類巨噬細胞之吞噬活性(圖4A至圖4C)。抗MerTK抗體h13B4.v16 (13B4完全人類化) (一種Ig結構域結合抗體)抑制人類巨噬細胞之吞噬作用之功效為抗MerTK抗體h10F7.v16 (10F7完全人類化) (一種纖連蛋白結構域結合抗體)之5.2倍(圖4D)。抗MerTK抗體14C9 mIgG2a LALAPG抑制小鼠巨噬細胞之吞噬作用之功效為抗MerTK抗體h10F7.v16 (10F7完全人類化)之4.8倍(圖4E)。圖 5 A 、圖 5B 及圖 5C ： 實施凋亡細胞清除分析以評估抗MerTK抗體之活體內活性。在Dex治療後8小時，凋亡細胞累積，且大部分在24小時內清除(圖5A)。在Dex治療後24小時，抗MerTK (純系14C9，mIgG2a，LALAPG)阻斷胸腺中凋亡細胞之清除，而對照抗體抗gp120 (mIgG2a，LALAPG)不阻斷(圖5B)。相對於抗gp120對照，抗MerTK抗體阻斷凋亡細胞之清除(圖5C)。圖 6 A 、圖 6B 、圖 6C 及圖 6D ： 在MC-38同基因腫瘤模型中實施腫瘤效能研究以確定抗MerTK抗體是否影響腫瘤生長。量測每一治療組之個別腫瘤大小(圖6A及圖6B；每一線代表單一腫瘤)及平均腫瘤大小(圖6C及圖6D)隨時間之變化。在腫瘤體積追蹤圖中，灰線代表截至數據收集之日仍處於研究中之動物之腫瘤大小(圖6A及圖6B)。紅線代表處以安樂死且自研究移除之具有潰爛或進展腫瘤之動物(圖6A及圖6B)。紅色水平虛線指示自治療開始腫瘤體積之倍增，而綠色水平虛線代表可量測之最小腫瘤體積(圖6A及圖6B)。在綠色虛線下方區域中的具有腫瘤之動物視為已具有完全反應。抗gp120與抗PDL1抗體之治療組合並沒有在很大程度上抑制腫瘤生長。然而，將抗PDL1與抗MerTK抗體組合之治療則展現增強之抗腫瘤活性(圖6A至圖6D)。圖 7A 、圖 7B 及圖 7C ： 抗MerTK抗體阻斷MerTK依賴性胞葬作用之示意圖(圖7A)。實施活體外胞葬作用分析以評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療之吞噬作用抑制效應。與經對照抗體抗gp120 (mIgG2a LALAPG)處理之巨噬細胞(黑色)相比，經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體處理之腹腔巨噬細胞(綠色)展現降低大約8倍之對凋亡胸腺細胞(紅色)之吞噬清除(圖7B)。實施活體內凋亡細胞清除分析以測定抗MerTK治療對胸腺中凋亡細胞之清除之效應。在利用地塞米松(dexamethasone，Dex)誘導胸腺細胞凋亡後24小時，與經對照抗體抗gp120 (mIgG2a LALAPG)治療之小鼠(黑色)相比，經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療之小鼠累積大約6倍之凋亡胸腺細胞(紅色)(圖7C)。圖 8A 、圖 8B 、圖 8C 、圖 8D 及圖 8E ： 藉由量測與配位體hGAS6-Fc一起培育之巨噬細胞中之pAKT水準來實施對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對配位體介導之MerTK信號傳導之效應進行定量之活體外分析(EC50 =約84 pM)。利用漸增濃度之抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體處理J774A.1巨噬細胞阻斷配位體介導之MerTK信號傳導，如與經同型對照抗體處理之巨噬細胞相比，經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)處理之巨噬細胞中pAKT之水準更低所證明(圖8A)。實施凋亡細胞清除分析以評估Dex對胸腺細胞之活體內效應。在Dex治療後8小時，凋亡胸腺細胞累積，且大部分在24小時內清除(圖8B)。使用螢光顯微鏡術對MC38腫瘤切片內MerTK蛋白之分佈進行成像。MerTK蛋白與CD68 (腫瘤相關巨噬細胞(TAM)之標記物)共定位，此指示MerTK在TAM中特異性地表現(圖8C)。在經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體染色之Mertk -/- 組織切片內未觀察到背景信號。(圖8C)。使用來自癌症基因體圖譜(The Cancer Genome Atlas，TCGA)之表現資料來確定MerTK表現之分佈。與其他免疫細胞類型相比，MerTK表現展現出更大的與TAM豐度之相關性(圖8D)。實施胞葬作用分析以評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體對TAM (TAM，綠色)活體外吞噬凋亡胸腺細胞(AC，紅色)之抑制效應。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體抑制自MC38腫瘤分離的TAM之吞噬活性(圖8E)。圖 9 A 、圖 9B 、圖 9C 、圖 9D 及圖 9E ： 評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對MC38 TAM之基因表現模式之效應的RNA測序實驗。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療引起TAM中基因表現之顯著變化(圖9A)。實施基因集合富集分析(GSEA)以揭示因應於利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療而差異調控之基因群。在抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療後，IFN-α反應基因群富集(圖9B)。藉由qPCR評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對TAM中Ifnb1 及多種干擾素刺激基因(ISG)之表現之效應。相對於對照抗體治療，在抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療後，所指示基因之表現更高(圖9C)。實施定量ELISA以測定抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對IFN-β蛋白水準之效應。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療使得MC38腫瘤中IFN-β蛋白顯著累積(圖9D)。藉由qPCR評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對所指示MC38腫瘤源性細胞類型中之IFN-β表現之效應。相對於經對照抗體處理之細胞，經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)處理之CD45+細胞及TAM中IFN-β之表現更高。在CD45-細胞或樹突細胞(DC)中未觀察到IFN-β表現之顯著變化(圖9E)。圖 10A 、圖 10B 、圖 10C 、圖 10D 及圖 10E ： 繪示自腫瘤源性單細胞懸浮液分離TAM之方法(圖10A)。藉由FACS評估經分離TAM之純度(圖10B)。繪製為火山圖之統計分析鑑別因抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療而表現增加、減少或不變之基因(圖10C)。實施基因集合富集分析(GSEA)以揭示因應於利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療而差異調控之基因群。根據在抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療後之富集程度，對所指示基因群進行排序(圖10D)。進行qPCR分析以對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對總MC38腫瘤中所指示ISG之表現之效應進行定量。相對於對照抗體，在抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療後，所指示基因之表現更高(圖10E)。圖 11A 及圖 11B ： 實施qPCR分析以對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對MC38腫瘤源性TAM (圖11A)或總MC38腫瘤勻漿(圖11B)中所指示基因之表現之效應進行定量。使用Actb 、 Gapdh 、 Rpl13a 、 Rpl19 、 Hprt 及Rpl4 作為管家基因。圖 12A 、圖 12B 及圖 12C ： 採用活體內抗原呈遞分析來評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療對TAM及樹突細胞(DC)呈遞抗原之效應。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療顯著地增加TAM對結合至I類MHC分子H-2Kb 之MC38.OVA腫瘤源性SIINFEKL抗原之呈遞，但不增加DC對其之呈遞(圖12A)。對CD86 (一種促進T細胞活化之蛋白質)之表現進行定量以評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體對T細胞活化之效應。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療在TAM上誘導更高水準之CD86，但在DC上不誘導(圖12A)。藉由對MC38腫瘤源性T細進行基因體DNA測序來量測抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療對T細胞受體(TCR)之有效重排及純系形成能力(clonality)之效應。相對於對照抗體，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療使得TCR純系形成能力及有效重排顯著更強(圖12B)。對MC38腫瘤中CD8+、CD4+及p15e四聚體反應性T細胞之相對豐度進行定量以測定抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療對抗腫瘤免疫反應之效應。如在抗MerTK抗體治療後，CD8+及p15e四聚體反應性T細胞之相對豐度顯著增加所證明，相對於對照抗體，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療顯著地增強抗腫瘤反應(圖12C)。圖 13A 、圖 13B 及圖 13C ： 對腫瘤勻漿中CCL3、CCL4、CCL5、CCL7及CCL12之蛋白質水準進行定量以評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療對自分泌及旁分泌細胞介素及趨化介素之效應。相對於利用對照抗體治療，抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療引起所有測試蛋白質之顯著富集(圖13A)。藉由qPCR分析來測定外周血單核細胞(PBMC)中ISG之表現，以測定抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之效應。相對於對照抗體，在抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療後，未觀察到所指示基因之表現之顯著差異(圖13B)。對腫瘤(n = 10)中所指示細胞介素及趨化介素之表現之定量揭露抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療無顯著效應。圖 14A 、圖 14B 及圖 14C ： 採用如圖14A中之代表性FACS圖中所繪示之門控策略自MC38腫瘤之單細胞懸浮液分離特定細胞類型(圖14A)。對MC38腫瘤中之TAM及DC隨時間推移之頻率(n = 8，第8天；n = 10，第13天及第15天)進行定量。在MC38腫瘤中，TAM較DC明顯更豐富，且隨時間推移，腫瘤中CD45+ TAM之頻率增加，而DC保持恆定(圖14B)。為評估抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療對TAM中之CD206表現之效應，實施流式細胞分析且報告MFI (中位螢光強度) (n = 10)。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療使TAM上之CD206表現減少(圖14C)。圖 1 5A 、圖 1 5B 及圖 1 5C ： MC38腫瘤在早期進展階段開始利用單一劑抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)進行治療(圖15A)或在確立階段利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1組合治療(n = 10)進行治療(圖15B)。單一劑抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療抑制早期進展階段腫瘤之生長(圖15A)。在確立階段利用抗PD-L1及抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體組合治療抑制MC38腫瘤之生長，而單一劑抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)或抗PD-L1治療分別具有微小或中等效應(圖15B)。利用抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)與吉西他濱(gemcitabine，Gem)及抗PD-1之組合治療已確立之MC38腫瘤(n =15，對照Ab組；n = 8，抗PD-1 +抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)；n = 10，其他組)。抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療與吉西他濱(Gem)及抗PD-1之組合抑制腫瘤生長。單一劑抗PD-1或Gem療法抑制腫瘤生長之程度低於抗PD-1及/或Gem與抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)之組合治療(圖15C)。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖15A、圖15B及圖15C)。圖 16A 及圖 16B ： 對在存在或不存在抗IFNAR1 (n = 5)之情形下經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之腫瘤中的代表性ISG之表現進行定量，以評估1型IFN信號傳導對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之效應。抗IFNAR1治療消除由抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)引起的所指示ISG之增強表現(圖16A)。對經抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1連同抗IFNARI之組合治療的MC38腫瘤之生長進行評估，以測定1型IFN信號傳導對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1組合治療之效應(n=10)。抗IFNAR1抗體治療降低抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)及抗PD-L1組合療法之腫瘤抑制效應。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖16B)。圖 17A 、圖 17B 及圖 17C ： 對經單一劑抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)療法連同抗IFNARI抗體治療的MC38腫瘤之生長進行評估(n=10)，以測定1型IFN信號傳導對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之效應。抗IFNAR1抗體治療使抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體療法之腫瘤抑制效應無效(圖17A)。對在WT 或Stinggt/gt 小鼠中生長之MC38腫瘤中的代表性ISG之表現進行定量，以評估STING對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療之效應(n = 9，WT宿主；n =10，Stinggt/gt 宿主)。STING破壞消除由抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)引起的所指示ISG之增強表現(圖17B)。對WT 或Stinggt/gt 宿主小鼠中MC38腫瘤之生長進行定量，以評估STING對抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)抗體治療之效應(n=10)。STING破壞消除抗MerTK 14C9 (mIgG2a LALAPG)治療之腫瘤抑制效應(圖17C)。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖17A及圖17C)。圖 18A 、圖 18B 、圖 18C 、圖 18D 、圖 18E 及圖 18F ： 實施細胞質DNA轉染實驗以評估STING及cGAS在巨噬細胞對細胞質DNA之反應中之功能。IFN-β之累積需要因應於DNA轉染之巨噬細胞中表現功能性STING (圖18A)及cGAS (圖18B)二者。對MC38腫瘤細胞及J774A.1巨噬細胞中cGAS及STING表現之西方墨點(Western blot)分析確定，J774A.1巨噬細胞表現cGAS及STING，而MC38腫瘤細胞僅表現cGAS (圖18C)。對WT及cGAS-/- AB22腫瘤中的代表性ISG之表現進行定量，以評估在抗MerTK治療期間腫瘤細胞中cGAS表現之作用。腫瘤細胞中cGAS表現之破壞消除所指示ISG因應於抗MerTK治療之累積(圖18D)。對WT或cGAS-/- MC38腫瘤之生長進行定量，以評估腫瘤細胞中cGAS表現對作為單一劑或與抗PD-L1組合之抗MerTK之效應(n = 9，組合治療之WT MC38；n = 10，其他組)。在cGAS-/- MC38腫瘤中，抗MerTK及抗PD-L1組合療法對腫瘤生長之抑制降低。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖18E)。使用藉由LC-MS/MS之蛋白質定量來量測MC38腫瘤細胞中之cGAMP產生，在經HT-DNA轉染後，WT 腫瘤細胞中之cGAMP產生增加，但在cGAS-/- 腫瘤細胞中不增加(圖18F)。圖 19A 、圖 19B 、圖 19C 、圖 19D 及圖 19E ： 對與UV輻照WT 或cGAS-/- MC38細胞共培養之WT 及Stinggt/gt BMDM (圖19A)或WT 及cGAS-/- J774A.1巨噬細胞(圖19B)之IFN-β蛋白產生進行定量。IFN-β蛋白累積依賴於腫瘤細胞中之cGAS表現及巨噬細胞中之STING表現(圖19A及圖19B)。巨噬細胞中之cGAS表現對於IFN-β蛋白累積係非必需的(圖19B)。對在WT 宿主小鼠(n = 10)中生長之WT 或cGAS-/- MC38腫瘤中的代表性ISG之表現進行定量，以評估腫瘤細胞中之cGAS表現對抗MerTK單一劑療法之效應。腫瘤細胞中之cGAS破壞消除所指示ISG因應於抗MerTK治療而增強之表現(圖19C)。在單一劑抗MerTK或抗PD-L1治療後，對在WT宿主小鼠中生長之WT 或cGAS-/- 早期MC38腫瘤之生長進行量測(n = 10)。如藉由腫瘤生長抑制所量測，cGAS缺陷型腫瘤細胞對單一劑抗MerTK或抗PD-L1治療具有抗性。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖19D及圖19E)。圖 20A 、圖 20B 、圖 20C 、圖 20D 及圖 20E ： 實施西方墨點分析以證實Cx43蛋白在Cx43-/- MC38腫瘤細胞中丟失(圖20A)。繪示染料轉移分析之示意圖，該分析量測鈣黃綠素經由Cx43在細胞之間的運動(圖20B)。實施圖20B之染料轉移分析以對Cx43在鈣黃綠素在MC38腫瘤細胞之間轉移(圖20C)或在鈣黃綠素自巨噬細胞轉移至腫瘤細胞(圖20D)中之作用進行定量。Cx43之丟失損害螢光染料鈣黃綠素在MC38細胞之間的轉移(圖20C)及自J774A.1巨噬細胞向MC38腫瘤細胞之轉移(圖20D)。在利用抗MerTK及抗PD-L1組合療法治療後，對WT宿主小鼠中WT 或Cx43-/- MC38腫瘤之生長進行量測(n = 10，WT MC38；n = 8，Cx43-/- MC38)。如藉由腫瘤生長抑制所量測，Cx43缺陷型腫瘤細胞對抗MerTK及抗PD-L1組合療法具有抗性。呈現每一組之個別腫瘤生長曲線及LME擬合之腫瘤生長曲線二者(圖20E)。圖 21A 、圖 21B 、圖 21C 及圖 21D ： cGAMP自MC38細胞之隙型連結依賴性轉移及由巨噬細胞產生IFN-β之示意圖(圖21A)。對與經HT-DNA轉染(+ DNA)之WT 或Cx43-/- MC38腫瘤細胞共培養之J774A.1巨噬細胞之IFN-β蛋白產生進行定量。腫瘤細胞中Cx43之破壞消除由DNA轉染腫瘤細胞所引起的增加之巨噬細胞IFN-β產生(圖21B)。對代表性ISG在Cx43-/- MC38腫瘤中之mRNA表現進行定量以確定腫瘤細胞中之Cx43破壞對抗MerTK治療之效應(n = 10，對照Ab；n = 9，抗MerTK)。利用抗MerTK治療Cx43-/- MC38腫瘤不會導致ISG表現之顯著變化(圖21C)。此係繪示阻斷MerTK依賴性先天性免疫檢查點之模型。TAM中之MerTK信號傳導介導應激或瀕死腫瘤細胞之快速清除，此導致對腫瘤源性材料之靜態處置而不會向免疫系統發出警報。利用抗MerTK進行治療防止胞葬作用，容許表現cGAS之腫瘤細胞延長產生cGAMP且增加cGAMP經由隙型連結向宿主巨噬細胞之轉移。TAM產生之IFN-β以自分泌/旁分泌方式起作用，以增加抗原呈遞細胞之抗原呈遞及對共刺激分子之表現，最終使得T細胞反應增強(圖21D)。圖 22A 及圖 22B ： 利用抗MerTK或對照抗體治療後，小鼠MC38腫瘤模型中循環腫瘤DNA (ctDNA)及無細胞DNA (cfDNA)之定量。將MC38腫瘤細胞接種至C57BL/6J小鼠中。在腫瘤確立後，投與抗MerTK或對照抗體。在抗MerTK治療後三天，在荷瘤小鼠之血漿中偵測到ctDNA之顯著增加(圖22A)。抗MerTK亦使血液循環中宿主源性cfDNA之水準增加(圖22B)。所指示之p值係基於未配對之雙尾司徒頓氏(Student)t 測試。該等結果展示，在腫瘤微環境中，抗MerTK治療能夠阻斷TAM對凋亡細胞之持續清除。圖 23 顯示使用表面電漿子共振(SPR)之抗MerTK抗體對人類MerTK之結合親和力之分析。測定10種市售抗體及h13B4.v16對人類MerTK之結合親和力。所觀察到之結合親和力如下：Y323為0.4 nM，A3KCAT為6.8 nM，590H11G1E3為7.6 nM，MAB8912-100為17.3 nM且h13B4.v16為1.6 nM。其餘六種抗體(10g86_D21F11、2D2、7E5G1、7N-20、MAB891及MAB8911)不顯示結合至人類MerTK。圖 24A 至圖 24C 顯示檢查抗MerTK抗體之競爭性結合實驗之結果。使用經典夾心形式測試抗MerTK抗體Y323、A3KCAT、590H11G1E3及MAB8912-100與抗體h13B4.v16結合至人類MerTK之競爭性(圖 24A )。發現抗體Y323與h13B4.v16競爭結合至人類MerTK (圖 24B )，而抗體A3KCAT、590H11G1E3及MAB8912-100不與h13B4.v16競爭結合至人類MerTK (圖 24C )。
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Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070

Claims (233)

  1. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
  2. 如請求項1之抗體，其中該抗體降低MerTK介導之吞噬細胞對凋亡細胞之清除。
  3. 如請求項2之抗體，其中該等吞噬細胞係巨噬細胞。
  4. 如請求項3之抗體，其中該等巨噬細胞係腫瘤相關巨噬細胞。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體，其中如在室溫下在凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。
  6. 如請求項1至4中任一項之抗體，其中該抗體降低配位體介導之MerTK信號傳導。
  7. 如請求項1至5中任一項之抗體，其中該抗體誘導促發炎反應或I型IFN反應。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體，其中該抗體係單株抗體。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體，其中該抗體係人類、人類化或嵌合抗體。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體，其中該抗體係結合MerTK之抗體片段。
  11. 如請求項1至10中任一項之抗體，其中該抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域或免疫球蛋白樣結構域。
  12. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
  13. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。
  14. 如請求項13之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。
  15. 如請求項13或14之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 83之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 65之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  16. 如請求項15之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH。
  17. 如請求項15或16之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL。
  18. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之VL。
  19. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列。
  20. 如請求項19之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
  21. 如請求項19或20之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 84之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 66之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  22. 如請求項21之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH。
  23. 如請求項21或22之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL。
  24. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列之VL。
  25. 如請求項19或20之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 85之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 67之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  26. 如請求項25之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH。
  27. 如請求項25之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL。
  28. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列之VL。
  29. 如請求項25至28中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈。
  30. 如請求項25至29中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈。
  31. 如請求項19或20之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 86之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 68之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  32. 如請求項31之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH。
  33. 如請求項31或32之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL。
  34. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之VL。
  35. 如請求項31至34中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈。
  36. 如請求項31至35中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈。
  37. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  38. 如請求項37之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
  39. 如請求項37或38之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  40. 如請求項39之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH。
  41. 如請求項39或40之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL。
  42. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列之VL。
  43. 如請求項37或38之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  44. 如請求項43之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH。
  45. 如請求項43或44之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
  46. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
  47. 如請求項43至46中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈。
  48. 如請求項43至47中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈。
  49. 如請求項37或38之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 89之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  50. 如請求項49之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH。
  51. 如請求項49或50之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
  52. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列之VL。
  53. 如請求項49至52中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈。
  54. 如請求項49至53中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈。
  55. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。
  56. 如請求項55之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
  57. 如請求項55或56之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 90之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 71之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  58. 如請求項57之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH。
  59. 如請求項57或58之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL。
  60. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列之VL。
  61. 如請求項55或56之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 91之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  62. 如請求項61之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH。
  63. 如請求項61或62之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL。
  64. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列之VL。
  65. 如請求項61至64中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈。
  66. 如請求項61至65中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈。
  67. 如請求項55或56之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 92之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 73之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  68. 如請求項67之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH。
  69. 如請求項67或68之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL。
  70. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列之VL。
  71. 如請求項67至70中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈。
  72. 如請求項67至71中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈。
  73. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。
  74. 如請求項73之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列。
  75. 如請求項73或74之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 93之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  76. 如請求項75之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH。
  77. 如請求項75或76之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL。
  78. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之VL。
  79. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。
  80. 如請求項79之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。
  81. 如請求項79或80之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 94之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 75之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  82. 如請求項81之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH。
  83. 如請求項81或82之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL。
  84. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之VL。
  85. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域。
  86. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
  87. 如請求項86之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。
  88. 如請求項86或87之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 95之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  89. 如請求項88之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH。
  90. 如請求項88或89之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL。
  91. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之VL。
  92. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。
  93. 如請求項92之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。
  94. 如請求項92或93之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 77之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  95. 如請求項94之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH。
  96. 如請求項94或95之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL。
  97. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之VL。
  98. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
  99. 如請求項98之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。
  100. 如請求項98或99之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 97之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  101. 如請求項100之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH。
  102. 如請求項100或101之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL。
  103. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之VL。
  104. 如請求項98或99之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 79之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  105. 如請求項104之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH。
  106. 如請求項104或105之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL。
  107. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之VL。
  108. 如請求項104至107中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈。
  109. 如請求項104至108中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈。
  110. 如請求項98或99之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 99之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  111. 如請求項110之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH。
  112. 如請求項110或111之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL。
  113. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之VL。
  114. 如請求項110至113中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈。
  115. 如請求項110至114中任一項之抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈。
  116. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。
  117. 如請求項116之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。
  118. 如請求項116或117之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 81之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  119. 如請求項118之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH。
  120. 如請求項118或119之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL。
  121. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之VL。
  122. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含(a) HVR-H1，其包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列，(b) HVR-H2，其包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，及(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。
  123. 如請求項122之抗體，其進一步包含(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；(b) HVR-L2，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；及(c) HVR-L3，其包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。
  124. 如請求項122或123之抗體，其包含(a)重鏈可變結構域(VH)，其包含與SEQ ID NO: 101之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；(b)輕鏈可變結構域(VL)，其包含與SEQ ID NO: 82之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之序列；或(c)如(a)中之VH及如(b)中之VL。
  125. 如請求項124之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH。
  126. 如請求項124或125之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL。
  127. 一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之VH及包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之VL。
  128. 一種經分離抗體，其與包含如請求項18之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  129. 一種經分離抗體，其與包含如請求項18之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  130. 一種經分離抗體，其與包含如請求項24之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  131. 一種經分離抗體，其與包含如請求項24之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  132. 一種經分離抗體，其與包含如請求項28之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  133. 一種經分離抗體，其與包含如請求項28之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  134. 一種經分離抗體，其與包含如請求項34之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  135. 一種經分離抗體，其與包含如請求項34之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  136. 一種經分離抗體，其與包含如請求項42之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  137. 一種經分離抗體，其與包含如請求項42之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  138. 一種經分離抗體，其與包含如請求項46之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  139. 一種經分離抗體，其與包含如請求項46之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  140. 一種經分離抗體，其與包含如請求項52之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  141. 一種經分離抗體，其與包含如請求項52之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  142. 一種經分離抗體，其與包含如請求項60之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  143. 一種經分離抗體，其與包含如請求項60之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  144. 一種經分離抗體，其與包含如請求項64之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  145. 一種經分離抗體，其與包含如請求項64之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  146. 一種經分離抗體，其與包含如請求項70之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  147. 一種經分離抗體，其與包含如請求項70之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  148. 一種經分離抗體，其與包含如請求項78之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  149. 一種經分離抗體，其與包含如請求項78之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  150. 一種經分離抗體，其與包含如請求項84之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  151. 一種經分離抗體，其與包含如請求項84之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  152. 一種經分離抗體，其與包含如請求項91之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  153. 一種經分離抗體，其與包含如請求項91之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  154. 一種經分離抗體，其與包含如請求項97之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  155. 一種經分離抗體，其與包含如請求項97之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  156. 一種經分離抗體，其與包含如請求項103之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  157. 一種經分離抗體，其與包含如請求項103之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  158. 一種經分離抗體，其與包含如請求項107之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  159. 一種經分離抗體，其與包含如請求項107之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  160. 一種經分離抗體，其與包含如請求項113之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  161. 一種經分離抗體，其與包含如請求項113之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  162. 一種經分離抗體，其與包含如請求項121之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  163. 一種經分離抗體，其與包含如請求項121之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  164. 一種經分離抗體，其與包含如請求項127之抗體在內的參照抗體競爭結合至MerTK。
  165. 一種經分離抗體，其與包含如請求項127之抗體在內的參照抗體結合至MerTK上之相同抗原決定基。
  166. 如請求項128至165中任一項之經分離抗體，其中該抗體結合至人類MerTK。
  167. 如請求項1至166中任一項之抗體，其中該抗體係全長IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  168. 如請求項167之抗體，其中該抗體係全長IgG1抗體。
  169. 如請求項167或168之抗體，其中該抗體包含LALAPG突變。
  170. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體包含輕鏈可變區中之Q2及L4殘基及重鏈可變區中之I48、G49及K71殘基。
  171. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體包含輕鏈可變區中之L4及F87以及重鏈可變區中之V24、I48、G49及K71。
  172. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體包含輕鏈可變區中之L4及P43以及重鏈可變區中之K71。
  173. 如請求項1至11中任一項之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區中之G49及V78殘基。
  174. 如請求項1至115及122至127中任一項之抗體，其中該抗體以≤ 100 nM之25℃下解離常數結合至人類MerTK。
  175. 如請求項1至97及122至127中任一項之抗體，其中該抗體以≤ 100 nM之25℃下解離常數結合至食蟹猴MerTK。
  176. 如請求項1至97及116至127中任一項之抗體，其中該抗體以≤ 10 nM之25℃下解離常數結合至小鼠MerTK。
  177. 如請求項1至97及116至127中任一項之抗體，其中該抗體以≤ 10 nM之37℃下解離常數結合至大鼠MerTK。
  178. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之輕鏈。
  179. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之輕鏈。
  180. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之輕鏈。
  181. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之輕鏈。
  182. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之輕鏈。
  183. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之輕鏈。
  184. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之輕鏈。
  185. 一種結合至MerTK之經分離抗體，其中該抗體包含有包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之重鏈及包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之輕鏈。
  186. 如請求項13至84或86至185中任一項之經分離抗體，其中該抗體降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
  187. 如請求項186之抗體，其中該抗體降低MerTK介導之吞噬細胞對凋亡細胞之清除。
  188. 如請求項187之抗體，其中該等吞噬細胞係巨噬細胞。
  189. 如請求項之188抗體，其中該等巨噬細胞係腫瘤相關巨噬細胞。
  190. 如請求項186至189中任一項之抗體，其中如在室溫下在凋亡細胞清除分析中所量測，凋亡細胞之清除降低。
  191. 如請求項13至190中任一項之抗體，其中該抗體係單株抗體。
  192. 如請求項186至138或178至185中任一項之抗體，其中該抗體係人類化或嵌合抗體。
  193. 如請求項128至185中任一項之抗體，其中該抗體係人類、人類化或嵌合抗體。
  194. 如請求項13至193中任一項之抗體，其中該抗體係結合MerTK之抗體片段。
  195. 如請求項13至194中任一項之抗體，其中該抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域或免疫球蛋白樣結構域。
  196. 如請求項195之抗體，其中該抗體結合至MerTK之纖連蛋白樣結構域。
  197. 如請求項195之抗體，其中該抗體結合至MerTK之免疫球蛋白樣結構域。
  198. 一種經分離核酸，其編碼如請求項1至197中任一項之抗體。
  199. 一種載體，其包含如請求項198之核酸。
  200. 一種宿主細胞，其包含如請求項199之載體。
  201. 一種產生抗MerTK抗體之方法，其包括在適於表現該抗體之條件下在細胞培養物中培養如請求項200之宿主細胞。
  202. 如請求項201之方法，其進一步包括自該細胞培養物回收該抗MerTK抗體。
  203. 一種免疫結合物，其包含連接至細胞毒性劑之如請求項1至197中任一項之抗體。
  204. 一種醫藥調配物，其包含如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。
  205. 如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物，其用作藥劑。
  206. 如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物，其用於治療癌症。
  207. 如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物，其用於降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
  208. 一種如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物用於製造藥劑之用途。
  209. 如請求項208之用途，其中該藥劑用於治療癌症。
  210. 如請求項209之用途，其中該癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。
  211. 如請求項209之用途，其中該癌症係結腸癌。
  212. 一種如請求項1至197中任一項之抗體或如請求項203之免疫結合物用於製造用以降低MerTK介導之凋亡細胞清除之藥劑的用途。
  213. 如請求項208至212中任一項之用途，其中該藥劑與有效量之額外治療劑組合使用。
  214. 如請求項213之用途，其中該額外治療劑係選自以下中之一或多者：他莫昔芬(tamoxifen)、來曲唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、伊立替康(irinotecan)、西妥昔單抗(cetuximab)、氟維司群(fulvestrant)、長春瑞濱(vinorelbine)、厄洛替尼(erlotinib)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、長春新鹼(vincristine)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、索拉菲尼(sorafenib)、拉帕替尼(lapatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、順鉑(cisplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、胺甲喋呤(methotrexate)、長春鹼(vinblastine)、卡鉑(carboplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、5-氟尿嘧啶、多柔比星(doxorubicin)、硼替佐米(bortezomib)、美法侖(melphalan)、普賴松(prednisone)及多西他賽(docetaxel)。
  215. 如請求項213之用途，其中該額外治療劑係免疫檢查點抑制劑。
  216. 如請求項215之用途，其中該免疫檢查點抑制劑係選自由以下組成之群：細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)抑制劑、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)結合拮抗劑或程式化死亡配位體1 (PDL1)結合拮抗劑。
  217. 如請求項216之用途，其中該免疫檢查點抑制劑係PDL1結合拮抗劑。
  218. 如請求項217之用途，其中該PDL1結合拮抗劑係抗PDL1抗體。
  219. 如請求項218之用途，其中該抗PDL1抗體係阿替珠單抗(atezolizumab)。
  220. 如請求項215至219中任一項之用途，其中該藥劑進一步與有效量之化學治療劑組合使用。
  221. 一種治療患有癌症之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之如請求項1至197中任一項之抗體或有效量之如請求項203之免疫結合物。
  222. 如請求項221之方法，其中該癌症表現功能性STING、功能性Cx43及功能性cGAS多肽。
  223. 如請求項221或221之方法，其進一步包括向該個體投與額外治療劑。
  224. 如請求項223之方法，其中該額外治療劑係選自以下中之一或多者：他莫昔芬、來曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔單抗、氟維司群、長春瑞濱、厄洛替尼、貝伐珠單抗、長春新鹼、甲磺酸伊馬替尼、索拉菲尼、拉帕替尼、曲妥珠單抗、順鉑、吉西他濱、胺甲喋呤、長春鹼、卡鉑、太平洋紫杉醇、5-氟尿嘧啶、多柔比星、硼替佐米、美法侖、普賴松及多西他賽。
  225. 如請求項223之方法，其中該額外治療劑係免疫檢查點抑制劑。
  226. 如請求項225之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係選自由以下組成之群：細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA4)抑制劑、程式化細胞死亡蛋白1 (PD-1)結合拮抗劑及程式化死亡配位體1 (PDL1)結合拮抗劑。
  227. 如請求項226之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係PDL1結合拮抗劑。
  228. 如請求項227之方法，其中該PDL1結合拮抗劑係抗PDL1抗體。
  229. 如請求項228之方法，其中該抗PDL1抗體係阿替珠單抗。
  230. 如請求項225至229中任一項之方法，其進一步包括向該個體投與有效量之額外化學治療劑。
  231. 如請求項216至230中任一項之方法，其中該癌症係結腸癌。
  232. 一種降低個體中MerTK介導之凋亡細胞清除之方法，其包括向該個體投與有效量之如請求項1至195中任一項之抗體或如請求項201之免疫結合物以降低MerTK介導之凋亡細胞清除。
  233. 如請求項232之方法，其中凋亡細胞之清除降低約1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍或8.0倍。
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