EA035324B1 - АНТАГОНИСТЫ НЕОНАТАЛЬНЫХ Fc-РЕЦЕПТОРОВ (FCRN) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ - Google Patents

АНТАГОНИСТЫ НЕОНАТАЛЬНЫХ Fc-РЕЦЕПТОРОВ (FCRN) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Download PDF

Info

Publication number
EA035324B1
EA035324B1 EA201691304A EA201691304A EA035324B1 EA 035324 B1 EA035324 B1 EA 035324B1 EA 201691304 A EA201691304 A EA 201691304A EA 201691304 A EA201691304 A EA 201691304A EA 035324 B1 EA035324 B1 EA 035324B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
fcrn antagonist
region
fcrn
disease
variant
Prior art date
Application number
EA201691304A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201691304A1 (ru
Inventor
Петер Ульрихтс
Кристоф Бланшето
Торстен Дрейер
Йоханнес Де Хард
Э. Салли Вард Обер
Николас Г.Х. Онгена
Original Assignee
Ардженкс Бвба
Дзе Борд Оф Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Техас Систем
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52347464&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA035324(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ардженкс Бвба, Дзе Борд Оф Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Техас Систем filed Critical Ардженкс Бвба
Publication of EA201691304A1 publication Critical patent/EA201691304A1/ru
Publication of EA035324B1 publication Critical patent/EA035324B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Abstract

Предоставлены новые композиции антагониста FcRn, включающие вариантный Fc-участок, который специфически связывается с FcRn с повышенной аффинностью и сниженной pH-зависимостью по сравнению с нативным Fc-участком. Также предоставлены антагонисты FcRn с усиленной аффинностью связывания с CD16. Также предоставлены способы лечения заболеваний, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний), при помощи данных композиций антагониста FcRn, нуклеиновых кислот, кодирующих композиции антагониста FcRn, рекомбинантных экспрессионных векторов и клеток-хозяев для получения композиций антагониста FcRn, а также фармацевтических композиций, включающих композиции антагониста FcRn.

Description

Родственные заявки
Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США с серийным номером
61/920,547, поданной 24 декабря 2013 года, которая включена в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
Уровень техники
Антитела иммуноглобулины гамма (IgG) играют ключевую роль в патологических процессах многих нарушений, таких как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания и нарушения, в которых патологический процесс характеризуется избыточной экспрессией антител IgG (например, гипергаммаглобулинемия) (см., например, Jungans, Immunologic Research 16(1):29 (1997)).
Период полувыведения IgG из сыворотки крови пролонгирован относительно периода полувыведения из сыворотки крови других белков плазмы крови (Roopenian с соавт., J. Immunology 170:3528 (2003); Junghans и Anderson, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996)). Такой длительный период полувыведения обеспечивается в некоторой степени связыванием Fc-участка IgG с Fc-рецептором, FcRn. Хотя FcRn изначально представляет собой неонатальный транспортный рецептор для материнских IgG, он также функционирует у взрослых, обеспечивая защиту IgG от распада. FcRn связывается с пиноцитированным IgG и защищает IgG от транспортировки в разрушающие лизосомы путем рециклинга его обратно во внеклеточный компартмент. Данный рециклинг облегчается путем pH-зависимого связывания IgG с FcRn, при котором взаимосвязь IgG/FcRn является более сильной при кислотном эндосомальном pH по сравнению с внеклеточным физиологическим pH.
Когда концентрация IgG в сыворотке крови достигает уровня, который превышает количество доступных молекул FcRn, несвязанные IgG оказываются незащищенными от разрушающих механизмов и будут, следовательно, иметь более короткий период полувыведения из сыворотки крови. Таким образом, ингибирование связывания IgG с FcRn уменьшает период полувыведения IgG из сыворотки крови путем предотвращения эндосомального рециклинга IgG. Соответственно, средства, которые представляют собой антагонисты связывания IgG с FcRn, могут быть полезными для регулирования, лечения или профилактики заболеваний, опосредованных антителами, таких, как аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний и т.д. Один из примеров способа антагонизирования функции связывания IgG Fc с FcRn включает образование блокирующих FcRn антител (см., например, WO2002/43658). Также определены пептиды, которые связывают и антагонизируют функцию FcRn (см., например, US6,212,022 и US8,101,186). В дополнение, полноразмерные антитела IgG, включающие вариантные Fc-рецепторы с усиленным FcRn связыванием и сниженной pH-зависимостью, также были определены как антагонисты связывания FcRn с IgG (см., например, 8,163,881). Тем не менее, в области техники существует необходимость разработки улучшенных средств, которые антагонизируют связывание FcRn с IgG, для их применения в лечении заболеваний, опосредованных антителами.
Сущность
Настоящее раскрытие предоставляет новые композиции антагониста FcRn. Данные композиции в целом включают вариантный Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, который специфически связывается с FcRn, обладая повышенной аффинностью и сниженной pH-зависимостью по сравнению с нативным Fc-участком. Изобретение основывается в некоторой степени на неожиданных данных о том, что выделенный вариантный Fc-участок (например, вариантный Fc-участок, включающий аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в положениях по системе EU (EU нумерация) 252, 254, 256, 433, 434 и 436, соответственно) является более эффективным антагонистом FcRn in vivo по сравнению с полноразмерным антителом, включающим данный вариантный Fc-участок. Композиции антагониста FcRn настоящего раскрытия являются в частности полезными в отношении снижения концентраций Fc-содержащих средств в сыворотке крови (например, антител и иммуноадгезинов). Соответственно, текущее раскрытие также предоставляет способы лечения заболеваний, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний), при помощи раскрытых в данной заявке композиций антагонистов FcRn. Также предоставлены нуклеиновые кислоты, кодирующие композиции антагониста FcRn, рекомбинантные экспрессионные векторы и клетки-хозяева для получения композиций антагониста FcRn, a также фармацевтические композиции, включающие композиции антагониста FcRn.
Раскрытые в данной заявке антагонисты FcRn являются в частности более эффективными по сравнению с ранее описываемыми композициями антагониста FcRn и известными методами лечения заболеваний, опосредованных антителами. Например, раскрытые в данной заявке антагонисты FcRn меньше по размеру и более активны по сравнению с внутривенным гамма-глобулином (IVIG, ВВИГ), текущим препаратом для лечения многих заболеваний, опосредованных антителами. Соответственно, эффективная доза раскрытых антагонистов FcRn может быть значительно ниже, чем таковая для ВВИГ. Более того, ВВИГ выделен и очищен от людей-доноров и, как следствие, страдает от множественных вариаций внутри серии. Раскрытые в данной заявке композиции антагонистов FcRn могут быть созданы при помощи генной инженерии или химически синтезированы и, таким образом, могут быть намного более гомогенными. Как продемонстрировано в данной заявке, раскрытые в данной заявке антагонисты FcRn также неожиданно являются более эффективными по сравнению с полноразмерными антителами IgG, включающими вариантные Fc-рецепты, как изложено у Vaccaro с соавт., Nature Biotech 23(9) 1283-1288
- 1 035324 (1997).
Соответственно, в одном аспекте настоящее раскрытие предоставляет выделенный антагонист FcRn, включающий вариантный Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-участок или фрагмент включает аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях по системе EU 252, 254, 256, 433, 434 и 436, соответственно, и где антагонист FcRn не является полноразмерным антителом.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn не включает вариабельный участок антитела или CH1 домен. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn не включает свободный цистеиновый остаток. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок представляет собой Fc-участок IgG (например, Fc-участок IgG человека). В некоторых вариантах осуществления Fc-участок представляет собой Fc-участок IgG1 (например, Fc-участок IgG1 человека). В некоторых вариантах осуществления Fc-участок представляет собой химерный Fc-участок.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок с аминокислотной последовательностью, изложенной в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn состоит из вариантного Fc-участка, где аминокислотная последовательность Fc-домена вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, который имеет отличную (повышенную или сниженную) аффинность к Fc-рецептору по сравнению с аффинностью Fc-участка IgG1 дикого типа для Fc-гамма рецептора. В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc обладает повышенной аффинностью к CD16a.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, который не включает N-связанный гликан в положении 297 по системе EU. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, который включает афукозилированный Nсвязанный гликан в положении 297 по системе EU. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, который включает N-связанный гликан, имеющий Н-ацетил^глюкозамин в точках ветвления в положении 297 по системе EU.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, связанный с удлинителем периода полувыведения. В некоторых вариантах осуществления удлинитель периода полувыведения представляет собой полиэтиленгликоль или сывороточный альбумин человека. В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где по меньшей мере 50% (опционально, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) молекул включают вариантный Fcучасток или его FcRn-связывающий фрагмент, имеющий афукозилированный N-связанный гликан. В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где по меньшей мере 50% (опционально, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) молекул включают вариантный Fcучасток или его FcRn-связывающий фрагмент, включающий афукозилированный N-связанный гликан, имеющий N-ацетил-D-глюкозамин в точках ветвления.
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, как раскрыто в данной заявке, где более 95% молекул антагониста FcRn в композиции представляют собой мономеры (например, более 95, 96, 97, 98, 99, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9%).
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где менее 5% молекул антагониста FcRn в композиции находятся в виде агрегатов (например, менее 5, 4, 3, 2, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1%).
В некоторых вариантах осуществления текущее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где композиция практически не содержит продукты распада молекулы антагониста FcRn.
В другом аспекте текущее раскрытие предоставляет фармацевтические композиции, включающие антагониста FcRn или композицию антагониста FcRn, раскрытую в данной заявке, а также фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
В другом аспекте текущее раскрытие предоставляет способ ингибирования функции FcRn у субъекта, где способ включает введение субъекту эффективного количества раскрытой в данной заявке композиции антагониста FcRn.
В другом аспекте текущее раскрытие предоставляет способ снижения концентраций Fcсодержащего средства в сыворотке крови у субъекта, которому вводили Fc-содержащее средство, способ, включающий введение субъекту эффективного количества раскрытой в данной заявке композиции антагониста FcRn. В некоторых вариантах осуществления Fc-содержащее средство представляет собой антитело или иммуноадгезин. В некоторых вариантах осуществления Fc-содержащее средство представляет
- 2 035324 собой терапевтическое или диагностическое средство. В некоторых вариантах осуществления Fcсодержащее средство представляет собой радиофармацевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления Fc-содержащее средство представляет собой конъюгат антитела с лекарственным средством.
В другом аспекте настоящее раскрытие предоставляет способ лечения заболеваний, опосредованных антителами, у субъекта, способ, включающий введение субъекту эффективного количества композиции антагониста FcRn, раскрытой в данной заявке. В некоторых вариантах осуществления заболевание, опосредованное антителами, представляет собой гиперглобулинемию. В некоторых вариантах осуществления заболевание, опосредованное антителами, представляет собой заболевание или нарушение, которые лечится при помощи внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ). В некоторых вариантах осуществления заболевание, опосредованное антителами, представляет собой заболевание или нарушение, которые лечится при помощи плазмафереза и/или иммуносорбции.
В некоторых вариантах осуществления заболевание, опосредованное антителами, представляют собой аутоиммунное заболевание. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание выбирают из группы, состоящей из отторжения аллогенного островкового трансплантата, очаговой алопеции, анкилозирующего спондилита, антифосфолипидного синдрома, аутоиммунной Аддисоновой болезни, болезни Альцгеймера, антинейтрофильных цитоплазматических антител (ANCA), аутоиммунных заболеваний надпочечников, аутоиммунной гемолитической анемии, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного миокардита, аутоиммунной нейтропении, аутоиммунного оофорита или орхита, аутоиммунной тромбоцитопении, аутоиммунной крапивницы, болезни Бехчета, буллезного пемфигоида, кардиомиопатии, болезни Кастлемена, дерматита спруцелиакии, синдрома хронической усталости и иммунной дисфункции, хронической воспалительной демиелинизирующей полинейропатии (CIDP), синдрома ЧерджаСтросс, рубцового пемфигоида, синдрома Тибьержа-Вайсенбаха, болезни холодовых агглютининов, болезни Крона, дерматомиозита, дилятационной кардиомиопатии, дискоидной волчанки, приобретенного буллезного эпидермолиза, идиопатической криоглобулинемии смешанного типа, недостаточности фактора VIII, фибромиалгии-фибромиозита, гломерулонефрита, диффузного токсического зоба, синдрома Гийена-Барре, синдрома Гудпасчера, болезни трансплантат против хозяина (GVHD, БТПХ), тиреоидита Хашимото, гемофилии A, идиопатической мембранозной нейропатии, идиопатического легочного фиброза, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP, ИТП), IgA нейропатии, IgM полинейропатии, иммуно-опосредованной тромбоцитопении, ювенильного артрита, синдрома Кавасаки, плоского лишая, склерозирующего лишая, красной волчанки, болезни Меньера, смешанной болезни соединительной ткани, пемфигоида слизистых оболочек, рассеянного склероза, сахарного диабета I типа, мультифокальной моторной нейропатии (MMN), миастении gravis, паранеопластического буллезного пемфигоида, пемфигоида беременных, вульгарного пемфигоида, эксфолиативного пемфигоида, пернициозной анемии, нодозного полиартериита, полихондрии, полигландулярного синдрома, ревматической полимиалгии, полимиозита и дерматомиозита, первичной агаммаглобулинемии, первичного билиарного цирроза, псориаза, псориатического артрита, рецидивирующего полихондрита, феномена Рейно, синдрома Рейтера, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, реакции отторжения солидного органа, синдрома мышечной скованности, системной красной волчанки, синдрома Такаясу, токсического эпидермального некролиза (TEN, ТЭН), синдрома Стивенса-Джонсона (SJS), височного артериита/гигантоклеточного артериита, тромботической тромбоцитопенической пурпуры, язвенного колита, увеита, герпетиформного дерматита, васкулита, ассоциированного с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, витилиго и гранулематоза Вегенера.
В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную каналопатию. В некоторых вариантах осуществления каналопатию выбирают из группы, состоящей из аутоиммунного энцефалита с поражением лимбической системы, эпилепсии, нейромиелита зрительного нерва, миастенического синдрома Ламберта-Итона, миастении gravis, энцефалита с антителами к Nметил-Э-аспартатным (NMDA) рецепторам, энцефалита с антителами к рецепторам а-амино-3-гидрокси5-метил-4-изоксазолепропионовой кислоты (AMPA), синдрома Морвана, нейромиотонии, детских аутоиммунных психоневрологических заболеваний, ассоциированных со стрептококковой инфекцией (PANDAS) и болезни глициновых рецепторов, ассоциированной с антителами.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn вводят субъекту одновременно с дополнительным лекарственным средством или после него. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противовоспалительное средство. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой ритуксимаб, даклизумаб, базиликсимаб, муромонаб<43, инфликсимаб, адалимумаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб, тоцилизумаб, экулизумаб, голимумаб, канакинумаб, устекинумаб или белимумаб. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой средство, истощающие лейкоциты. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой средство, истощающее B-клетки. В некоторых вариантах осуществления средство, истощающее Bклетки, представляет собой антитело, например, антитело, которое специфически связывается с CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b,
- 3 035324
CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 или CD86.
В другом аспекте текущее раскрытие предоставляет молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующей раскрытый в данной заявке антагонист FcRn. В другом аспекте настоящее раскрытие предоставляет экспрессионный вектор или нуклеиновую кислоту, кодирующую раскрытый в данной заявке антагонист FcRn. В другом аспекте настоящее раскрытие предоставляет способ изготовления антагониста FcRn, способ, включающий культивирование клеток-хозяев, раскрытых в данной заявке, в условиях для экспрессирования антагониста FcRn.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на концентрации помеченного радиоактивным изотопом антитела в сыворотке крови (FR70-hIgG1) у яванских макак.
Фиг. 2 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на общие концентрации IgG в сыворотке крови у яванских макак.
Фиг. 3 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на концентрации альбуминов у яванских макак.
Фиг. 4 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg и ВВИГ на концентрации помеченного радиоактивным изотопом антитела (FR70-hIgG1) в сыворотке крови у яванских макак.
Фиг. 5 отображает результаты анализов ИФА (ELISA) по сравнению аффинности Fc-Abdeg, FcAbdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E по отношению к CD16a человека.
Фиг. 6 отображает результаты анализов ИФА (ELISA) по сравнению аффинности Fc-Abdeg, FcAbdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E по отношению к CD16-2 мышей.
Фиг. 7 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E на анти-CD20-опосредованный ADCC сигнал при помощи биотеста по генурепортеру на ADCC (антителозависимую клеточную цитотоксичность) Promega с клетками Raji.
Фиг. 8 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg и Abdeg-POT на анти-CD70-опосредованный лизис CD70+ U266 клеток in vitro.
Фиг. 9 отображает результаты экспериментов для определения влияния Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT, Fc-Abdeg-S239D/I332E и ВВИГ на содержание тромбоцитов на мышиной модели острой иммунной тромбоцитопении.
Фиг. 10 отображает результаты типичной очистки Fc-Abdeg при помощи гель-фильтрации.
Подробное описание
Настоящее раскрытие предоставляет новые композиции антагониста FcRn. Данные композиции в целом включают вариантный Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, который специфически связывается с FcRn с повышенной аффинностью и сниженной pH-зависимостью по сравнению с нативным Fc-участком. Изобретение отчасти основывается на неожиданных данных о том, что выделенный вариантный Fc-участок (например, вариантный Fc-участок, включающий аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 по системе EU, соответственно) является более эффективным антагонистом FcRn in vivo по сравнению с полноразмерным антителом, включающим данный вариантный Fc-участок. Композиции антагониста FcRn настоящего раскрытия являются в частности полезными в отношении снижения уровней Fc-содержащих средств в сыворотке крови (например, антител и иммуноадгезинов). Соответственно, текущее раскрытие также предоставляет способы лечения заболеваний, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний) при помощи раскрытых в данной заявке композиций антагонистов FcRn. Также предоставлены нуклеиновые кислоты, кодирующие композиции антагониста FcRn, рекомбинантные экспрессионные векторы и клетки-хозяева для получения композиций антагониста FcRn, a также фармацевтические композиции, включающие композиции антагониста FcRn.
I. Определения.
Если в данной заявке не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, будут иметь значения, под которыми они обычно понимаются специалистами в данной области техники. Значение и объем терминов должны быть ясными, но тем не менее, в случае скрытой неясности определения, предоставленные в данной заявке, имеют преимущества над любыми значениями из словаря или значениями, лежащими вне данного документа. Дополнительно, если контекстом не предусмотрено иное, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. В целом, описанная в данной заявке номенклатура, связанная с технологиями культуры клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики и белковой химии, химии нуклеиновых кислот, а также гибридизации, хорошо известна и широко применяется в данной области техники.
Для более быстрого понимания настоящего изобретения сначала даются определения некоторых терминов.
Как применяют в данной заявке, термин антагонист FcRn относится к любому средству, включающему Fc-участок (например, вариантный Fc-участок, раскрытый в данной заявке), который специфи- 4 035324 чески связывается с FcRn через Fc-участок и ингибирует связывание FcRn с иммуноглобулином при условии, что средство не является полноразмерным IgG антителом.
Как применяют в данной заявке, термин Fc-участок относится к части нативного иммуноглобулина, образуемой Fc-доменами двух его тяжелых цепей. Нативный Fc-участок является гомодимерным.
Как применяют в данной заявке, термин вариантный Fc-участок относится к Fc-участку с одним или более модификациями по сравнению с нативным Fc-участком. Модификации могут включать аминокислотные замещения, инсерции и/или делеции, присоединение дополнительных фрагментов и/или модификацию нативных гликанов. Термин включает гетеродимерные Fc-участки, где составляющие Fcдомены отличаются друг от друга. Примеры таких гетеродимерных Fc-участков включают без ограничений Fc-участки, полученные при помощи технологии выступов и впадин, как описано, например, в US 8216805, который включен в данную заявку во всей полноте посредством ссылки. Термин также включает одноцепочечные Fc-участки, где составляющие их Fc-домены связаны между собой связывающими фрагментами, как описано, например, в US20090252729A1 и US20110081345A1, каждый из которых включен в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
Как применяют в данной заявке, термин Fc-домен относится к части одиночной тяжелой цепи иммуноглобулина, начинающейся от шарнирной области сразу против хода транскрипции от участка рестрикции папаина, и заканчивающейся на C-конце антитела. Соответственно, полноценный Fc-домен включает по меньшей мере часть шарнирного (например, верхний, средний и/или нижний шарнирный участок) домена, ОП2-домен и ОП3-домен.
Как применяют в данной заявке, термин FcRn-связывающий фрагмент относится к части Fcучастка, которой достаточно для обеспечения FcRn связывания.
Как применяют в данной заявке, термин положение по системе EU относится к положению аминокислоты в системе нумерации EU для Fc-участка, описанной у Edelman, G.M. с соавт., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) и Kabat с соавт. в Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991.
Как применяют в данной заявке, термин СП1 домен относится к первому (наиболее аминоконцевому) домену константного участка тяжелой цепи иммуноглобулина, который продолжается приблизительно от положений 118-215 по системе EU. СП1 домен расположен недалеко от VH домена и аминоконца шарнирной области молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина и не образует часть Fc-участка тяжелой цепи иммуноглобулина.
Как применяют в данной заявке, термин шарнирная область относится к части молекулы тяжелой цепи, которая соединяет CH1 домен с CH2 доменом. Данная шарнирная область включает приблизительно 25 остатков и является гибкой, таким образом обеспечивая независимую подвижность двух Nконцевых антиген-связывающих участков. Шарнирные области можно подразделить на три отдельных участка: верхний, средний и нижний шарнирные домены (Roux с соавт. J Immunol. 161: 4083 (1998)). Антагонисты FcRn настоящего раскрытия могут включать всю шарнирную область или ее часть.
Как применяют в данной заявке, термин CH2 домен относится к участку тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина, который продолжается от приблизительно положений 231-340 по системе EU.
Как применяют в данной заявке, термин CH3 домен включает участок тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина, который имеет продолжительность приблизительно 110 остатков от N-конца CH2 домена, например, от приблизительно положений 341-446 (по системе нумерации EU).
Как применяют в данной заявке, термин FcRn относится к неонатальному Fc-рецептору. Типичные молекулы FcRn включают FcRn человека, закодированный FCGRT геном, как изложено в RefSeq NM_004107.
Как применяют в данной заявке, термин CD16 относится к FcyRIII Fc-рецепторам, которые требуются для антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC, АЗКЦ). Типичные молекулы CD16 включают CD16a человека, как изложено в RefSeq NM_000569.
Как применяют в данной заявке, термин свободный цистеин относится к нативному или разработанному остатку аминокислоты цистеин, которая существует зрелом антагонисте FcRn в практически восстановленной форме.
Как применяют в данной заявке, термин антитело относится к молекулам иммуноглобулина, включающим четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, связанные друг с другом при помощи дисульфидных связей, а также к их мультимерам (например, IgM). Каждая тяжелая цепь включает вариабельный участок тяжелой цепи (сокращаемый как VH) и константный участок тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи включает три домена, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь включает вариабельный участок легкой цепи (сокращаемый как VL) и константный участок легкой цепи. Константный участок легкой цепи включает один домен (CL). VH и VL участки могут дополнительно подразделяться на участки гипервариабельности, называемые гипервариабельными участками (CDR), которые перемежаются с участками, которые являются более постоянными, называемыми каркасными областями (FR).
Как применяют в данной заявке, термин N-связанный гликан относится к N-связанному гликану, прикрепленному к азоту (N) боковой цепи аспарагина в сиквоне (т.е., Asn-X-Ser или Asn-X-Thr последо- 5 035324 вательность, где X представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина), имеющемся в
CH2 домене Fc-участка. Такие N-гликаны подробно описаны, например, у Drickamer K, Taylor ME (2006) в Introduction to Glycobiology, 2nd ed., включенном в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
Как применяют в данной заявке, термин афукозилированный относится к N-связанному гликану, которому не хватает центральной молекулы фукозы, как описано в US8067232, содержание которого включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
Как применяют в данной заявке, термин №ацетил^-глюкозамин в точках ветвления относится к N-связанному гликану, имеющему молекулу N-ацетилглюкозамина (GlcNAc), связанную с центральной молекулой маннозы, как описано в US8021856, содержание которого включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
Как применяют в данной заявке, термин заболевание, опосредованное антителами относится к любому заболеванию или нарушению, вызванному или усиленному наличием у субъекта антител.
Как применяют в данной заявке, термин Fc-содержащее средство представляет собой любую молекулу, которая включает Fc-участок.
Как применяют в данной заявке, термин средство, истощающее лейкоциты относится к средству, которое уменьшает количество лейкоцитов у субъекта после его введения.
Как применяют в данной заявке, термин средство, истощающее B-клетки относится к средству, которое уменьшает количество B-клеток у субъекта после его введения.
Как применяют в данной заявке, термин средство, истощающее T-клетки относится к средству, которое уменьшает количество T-клеток у субъекта после его введения.
Как применяют в данной заявке, термин аутоиммунная каналопатия относится к заболеваниям, вызываемым аутоантителами, действующими против субъединиц ионных каналов или против молекулы, которая регулирует функцию канала.
Как применяют в данной заявке, термины лечить и лечение относятся к терапевтическим или профилактическим мерам, описанным в данной заявке. Способы лечения включают введение субъекту антитела или его антиген-связывающего фрагмента настоящего изобретения, например, субъекту, имеющему ИЛ-6-опосредованное заболевание или нарушение (например, воспаление или рак) или предрасположенному к развитию такового заболевания или нарушения, с целью профилактики, излечения, замедления, уменьшения тяжести или облегчения одного или более симптомов заболевания или нарушения, а также субъекту, имеющему рецидивирующее заболевание или нарушение, с целью пролонгирования выживаемости субъекта по сравнению с ожидаемой выживаемостью при отсутствии подобного лечения. Как применяют в данной заявке, термин субъект включает людей и нечеловекообразных животных.
Как применяют в данной заявке, термин иммуноадгезин относится к антителоподобной молекуле, которая включает функциональный домен связывающего протеина (например, рецептор, лиганд или молекулу клеточной адгезии) с Fc-участком.
II. Антагонисты FcRn.
В одном аспекте изобретение предоставляет новые композиции антагониста FcRn. В целом, данные композиции включают вариантный Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, который специфически связывается с FcRn с повышенной аффинностью и сниженной pH-зависимостью по сравнению с нативным Fc-участком. Данные антагонисты FcRn ингибируют связывание Fc-содержащих средств (например, антител и иммуноадгезинов) с FcRn in vivo, что приводит к повышенной частоте разрушения Fcсодержащих средств и, следовательно, к снижению концентрации данных средств в сыворотке крови.
Текущее описание впервые раскрывает тот факт, что выделенный вариантный Fc-участок (например, вариантный Fc-участок, включающий аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 по системе EU, соответственно) является более эффективным антагонистом FcRn in vivo по сравнению с полноразмерным антителом, включающим такой же вариантный Fc-участок. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn не являются полноразмерными антителами. В некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn не включают вариабельный домен антитела. В некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn не включают вариабельный домен или CH1 домен антитела. Тем не менее, в некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn могут включать вариантный Fc-участок, связанный с одним или более дополнительными связывающими доменами или фрагментами, включая вариабельные домены антитела.
Любой Fc-участок может быть модифицирован для образования вариантного Fc-участка для его использования в раскрытых в данной заявке композициях антагониста FcRn. В целом, Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент получен из иммуноглобулина человека. Тем не менее, следует понимать, что Fc-участок может быть получен из иммуноглобулина любого другого вида млекопитающих, включая, например, семейство верблюдовых, грызунов (например, мышей, крыс, кроликов, морских свинок) или виды нечеловекообразных приматов (например, шимпанзе, макак). Более того, Fc-участок или его часть могут быть получены из любого класса иммуноглобулинов, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, а также из любого изотипа иммуноглобулинов, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. В некоторых вариантах
- 6 035324 осуществления Fc-участок представляет собой Fc-участок IgG (например: участок IgG человека). В некоторых вариантах осуществления Fc-участок представляет собой Fc-участок IgG1 (например: участок IgG1 человека). В некоторых вариантах осуществления Fc-участок представляет собой химерный Fcучасток, включающий части нескольких различных Fc-участков. Подходящие примеры химерных Fcучастков изложены в US20110243966A1, который включен в данную заявку во всей полноте посредством ссылки. Множество нуклеотидных последовательностей гена Fc-участка (например, нуклеотидных последовательностей гена константного участка человека) доступны в форме общедоступных депозитов. Специалистам должно быть ясно, что объем данного изобретения включает аллели, варианты и мутации Fc-участков.
Fc-участок может быть дополнительно укорочен или удален изнутри для образования его минимального FcRn-связывающего фрагмента. Способность фрагмента Fc-участка связываться с FcRn можно определить при помощи любого принятого в данной области анализа связывания, например, ИФА.
Для увеличения технологичности производства раскрытых в данной заявке антагонистов FcRn предпочтительным является то, что составляющие Fc-участки не включают никакие недисульфидносвязанные остатки цистеина. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления Fcучастки не включают свободные остатки цистеина.
Любой вариантный Fc или его FcRn-связывающий фрагмент, который специфически связывается с FcRn с повышенной аффинностью и сниженной pH зависимостью по сравнению с нативным Fcучастком, можно применять в раскрытых в данной заявке композициях антагонистов FcRn. В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок включает модификации аминокислот, замещения, инсерции и/или делеции, которые обеспечивают желаемые характеристики. В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок или фрагмент включают аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 по системе EU, соответственно. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей, которые можно применять в вариантных Fc-участках, изложены в данной заявке в табл. 1. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка включает аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fcучастка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn состоит из вариантного Fc-участка, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
Таблица 1. Аминокислотные последовательности неограничивающих примеров вариантных Fc-участков
SEQ ID NO Аминокислотная последовательность
1 CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPG
2 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPGK
3 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPG
Аминокислоты в положениях 252, 254, 256, 433 и 434 по системе EU подчеркнуты.
В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок изменяет (например, повышает или снижает) аффинность связывания с дополнительным Fc-рецептором. Вариантный Fc-участок может иметь измененную (например, повышенную или сниженную) аффинность связывания с одним или более Fcy рецепторов, например, FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32), FcyRIIB (CD32), FcyRIIIA (CD16a), и FcyRIIIB (CD16b). Можно применять принятые в данной области способы модификации аффинности для дополнительного Fc-рецептора. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность вариантного Fc-участка модифицирована.
- 7 035324
В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок включает неприродный аминокислотный остаток в одном или более положениях, выбираемых из группы, состоящей из 234, 235, 236, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 296, 297, 298, 299, 313, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 333 и 334, как перечислено в списке EU и изложено у Kabat. Опционально Fc-участок может включать неприродный аминокислотный остаток в дополнительном и/или альтернативном положениях, известных специалисту в данной области техники (см., например, US. Pat. Nos. 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT Patent Publications WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752 и WO 05/040217, содержание которых включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки).
В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок включает по меньшей мере один аминокислотный остаток неестественного происхождения, выбираемый из группы, состоящей из 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R, 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247V, 247G, 252Y, 254T, 256E, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 269H, 269Y, 269F, 269R, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 313F, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, и 332A, как перечислено в списке EU и изложено у Kabat. Опционально Fc-участок может включать дополнительные и/или альтернативные неприродные аминокислотные остатки, известные специалисту в данной области техники (см., например, U.S. Pat. Nos. 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; РСТ Patent Publications WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752 и WO 05/040217, содержание которых включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки).
Другие известные варианты Fc, которые можно применять в антагонистах FcRn, раскрытых в данной заявке, включают без ограничений таковые, раскрытые у Ghetie с соавт., 1997 Nat. Biotech. 15:637-40; Duncan с соавт., 1988, Nature 332:563-564; Lund с соавт., 1991, J. Immunol., 147:2657-2662; Lund с соавт., 1992, Mol. Immunol., 29:53-59; Alegre с соавт., 1994, Transplantation 57:1537-1543; Hutchins с соавт., 1995, Proc Natl. Acad Sci USA, 92:11980-11984; Jefferis с соавт., 1995, Immunol Lett., 44:111-117; Lund с соавт., 1995, Faseb J., 9:115-119; Jefferis с соавт., 1996, Immunol Lett., 54:101-104; Lund с соавт., 1996, J. Immunol., 157:4963-4969; Armour с соавт., 1999, Eur J Immunol 29:2613-2624; Idusogie с соавт., 2000, J. Immunol., 164:4178-4184; Reddy с соавт., 2000, J. Immunol., 164:1925-1933; Xu с соавт., 2000, Cell Immunol., 200:16-26; Idusogie с соавт., 2001, J. Immunol., 166:2571-2575; Shields с соавт., 2001, J Biol. Chem., 276:6591-6604; Jefferis с соавт., 2002, Immunol Lett., 82:57-65; Presta с соавт., 2002, Biochem Soc Trans., 30:487-490); U.S. Pat. Nos. 5,624,821; 5,885,573; 5,677,425; 6,165,745; 6,277,375; 5,869,046; 6,121,022; 5,624,821; 5,648,260; 6,528,624; 6,194,551; 6,737,056; 6,821,505; 6,277,375; U.S. Patent Publication Nos. 2004/0002587 и PCT Publications WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351, содержание которых включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки.
В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок представляет собой гетеродимер, где составляющие Fc-домены отличаются друг от друга. Способы получения Fc-гетеродимеров известны в области техники (см., например, US 8216805, который включен в данную заявку во всей полноте посредством ссылки). В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок представляет собой одноцепочечный Fc-участок, где составляющие Fc-домены связаны друг с другом связывающим фрагментом. Способы получения одноцепочечных Fc-участков известны в области техники (см, например, US20090252729A1 и US20110081345A1, которые включены в данную заявку во всей полноте посредством ссылки).
Считается, что патогенетически значимые IgG антитела, наблюдаемые при аутоиммунных заболеваниях являются и патогенетическими триггерами для развития данных заболеваний, и вносят вклад в прогрессирование заболевания и обуславливают развитие заболевания благодаря неподходящей активации клеточных Fc-рецепторов. Агрегированные антитела и/или аутоантитела в комплексе с аутоантигенами (иммунные комплексы), связываются с активирующими Fc-рецепторами, вызывая множество аутоиммунных заболеваний (которые развиваются отчасти из-за иммунологически обусловленного воспаления против аутотканей) (см, например, Clarkson с соавт., NEJM 314(9), 1236-1239 (2013)); US20040010124A1; US20040047862A1; и US2004/0265321AL каждый из которых включен в данную заявку во всей полноте посредством ссылки. Соответственно, для лечения обусловленных антителами нарушений например, аутоиммунных заболеваний) будет иметь преимущество как удаление вредных антител, так и блокировка взаимодействия иммунных комплексов данных антител с активирующими Fcрецепторами (например, Fcy рецепторами, такими, как CD 16a).
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок антагониста FcRn
- 8 035324 ингибирует повышенное связывание с CD16a (например, CD16a человека). Это в частности имеет преимущество в отношении того, что позволяет антагонисту FcRn дополнительно антагонизировать опосредованный иммунными комплексами воспалительный ответ антител, выступающих мишенью для удаления путем ингибирования FcRn. Можно применять любые принятые в данной области способы повышения аффинности к CD16a (например, CD16a человека). В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, включающий N-связанный гликан (например, в положении 297 по системе EU). В данном случае возможно повышение аффинности связывания антагониста FcRn к CD16a путем модификации структуры гликана. Модификации N-связанного гликана Fc-участков хорошо известны в области техники. Например, афукозилированные N-связанные гликаны или гликаны, имеющие структуру с N-ацетил-О-глюкозамином в точках ветвления, демонстрируют повышенную аффинность к CD16a. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления N-связанный гликан является афукозилированным. Афукозилирование может быть достигнуто любыми принятыми в данной области способами. Например, антагонист FcRn может быть экспрессирован на клетках, у которых отсутствует фукозилтрансфераза, так, что фукоза не добавляется к N-связанному гликану в положение 297 по системе EU вариантного Fc-участка (см., например, US 8,067,232, содержание которого включено в данную заявку во всей полноте посредством ссылки). В некоторых вариантах осуществления N-связанный гликан имеет структуру с N-ацетил-О-глюкозамином в точках ветвления. Структуру с N-ацетил-Оглюкозамином в точках ветвления можно получить при помощи любых принятых в данной области способов. Например, антагонист FcRn может быть экспрессирован на клетках, экспрессирующих бетаЛ-4-Nацетилглюкозаминилтрансферазу III (GnTIII), так, что №ацетил-Э-глюкозамин в точках ветвления добавляется к N-связанному гликану в положении 297 по системе EU вариантного Fc-участка (см., например, US 8021856, содержание которого включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Дополнительно или в качестве альтернативы модификация структуры N-связанного гликана также может быть достигнута ферментными средствами in vitro.
В некоторых вариантах осуществления текущее раскрытие предоставляет композиции антагониста FcRn, где часть молекул антагониста FcRn, содержащихся в ней, включают модифицированные структуры гликана. В некоторых вариантах осуществления композиция антагониста FcRn включает множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где по меньшей мере 50% (опционально по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) молекул включают Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, имеющий в составе афукозилированный N-связанный гликан. В некоторых вариантах осуществления композиция антагониста FcRn, включает множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где по меньшей мере 50% (опционально по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) молекул включают Fc-участок или его FcRn-связывающий фрагмент, включающий N-связанный гликан, имеющий №ацетил-Э-глюкозамин в точках ветвления.
В некоторых вариантах осуществления вариантный Fc-участок не включает N-связанный гликан. Этого можно достичь, применяя любые принятые в данной области способы. Например, вариантный Fc может быть экспрессирован в клетке, не способной к N-связанному гликозилированию. Дополнительно или в качестве альтернативы аминокислотная последовательность вариантного Fc может быть модифицирована для профилактики или ингибирования N-связанного гликозилирования (например, путем мутации в NXT сиквоне. В качестве альтернативы вариантный Fc может быть синтезирован в бесклеточной системе (например, химически синтезирован).
В некоторых вариантах осуществления молекулы антагониста FcRn могут быть модифицированы, например, путем ковалентного присоединения молекулы (например, связывающего или радиофармацевтического фрагмента) к антагонисту FcRn так, что ковалентное присоединение не предотвращает специфическое связывание антагониста FcRn с FcRn. Например, без ограничений, антагонист FcRn может быть модифицирован при помощи гликозилирования, ацетилирования, пегилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации при помощи известных защищающих блокирующих групп, протеолитического расщепления, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn включает вариантный Fc-участок, связанный с удлинителем периода полувыведения. Как применяют в данной заявке, термин удлинитель периода полувыведения относится к любой молекуле, которая при связи с антагонистом FcRn, раскрытым в данной заявке, повышает период полувыведения антагониста FcRn. Любой удлинитель периода полувыведения может быть связан (как ковалентно, так и нековалентно) с антагонистом FcRn. В некоторых вариантах осуществления удлинитель периода полувыведения представляет собой полиэтиленгликоль или сывороточный альбумин человека. В некоторых вариантах осуществления антагонист FcRn связан со связывающей молекулой, которая специфически связывается с удлинителем периода полувыведения, присутствующем у субъекта, такой, как переносимая с током крови молекула, или клетка, такая как сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека), IgG, эритроциты и т.д.
Антагонисты FcRn, раскрытые в данной заявке, обладают превосходной технологичностью производства. Например, как показано в примере 5 в данной заявке, они могут быть экспрессированы в высоких концентрациях в клетках млекопитающих (например, в концентрации 6 г/л в клетках ЯКХ в биореакторе с механическим перемешиванием объемом 10 л). Более того, после очищения Белка A конечная
- 9 035324 очищенная композиция антагониста FcRn имеет очень высокое содержание мономеров антагонистов FcRn и содержит чрезвычайно небольшую концентрацию белковых агрегатов и продуктов распада антагониста FcRn. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, как раскрыто в данной заявке, где более 95% молекул антагонистов FcRn в композиции представляют собой мономеры (например, более 95, 96, 97, 98, 99, 99,1, 99,2, 99,3, 00,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9%). В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где менее 5% молекул антагониста FcRn в композиции присутствует в виде агрегатов (например, менее 5, 4, 3, 2, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1%), В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет композицию антагониста FcRn, включающую множество молекул антагониста FcRn, раскрытого в данной заявке, где композиция практически не содержит продукты распада молекулы антагониста FcRn.
III. Применения антагонистов FcRn.
Композиции антагонистов FcRn в настоящем раскрытии являются в частности полезными для снижения концентрации Fc-содержащих средств в сыворотке крови (например, антител и иммуноадгезинов). Соответственно, в одном аспекте текущее раскрытие предоставляет способ ингибирования функции FcRn у субъекта, где способ в целом включает введение субъекту эффективного количества композиции антагониста FcRn (например, фармацевтической композиции), раскрытого в данной заявке.
Снижение концентраций Fc-содержащих средств в сыворотке крови (например, антител и иммуноадгезинов) в частности применяют для лечения нарушений, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний). Соответственно, в одном аспекте текущее раскрытие предоставляет способы лечения нарушений, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний), при помощи раскрытых в данной заявке композиций антагониста FcRn.
Любое заболевание, опосредованное антителами, можно лечить при помощи раскрытых в данной заявке композиций антагониста FcRn. В некоторых вариантах осуществления нарушение, опосредованное антителами, представляет собой одно из тех, которые чувствительны к лечению ВВИГ. В некоторых вариантах осуществления заболевание, опосредованное антителами, представляет собой аутоиммунное заболевание. Неограничивающие аутоиммунные заболевания включают отторжение аллогенного островкового трансплантата, очаговую алопецию, анкилозирующий спондилит, антифосфолипидный синдром, аутоиммунную Аддисонову болезнь, болезнь Альцгеймера, антинейтрофильные цитоплазматические антитела (ANCA), аутоиммунные заболевания надпочечников, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный миокардит, аутоиммунную нейтропению, аутоиммунный оофорит или орхит, аутоиммунную тромбоцитопению, аутоиммунную крапивницу, болезнь Бехчета, буллезный пемфигоид, кардиомиопатию, болезнь Кастлемена, дерматит спруцелиакии, синдром хронической усталости и иммунной дисфункции, хроническую воспалительную демиелинизирующую полинейропатию (CIDP), синдром Черджа-Стросс, рубцовый пемфигоид, синдром Тибьержа-Вайсенбаха, болезнь холодовых агглютининов, болезнь Крона, дерматомиозит, дилятационную кардиомиопатию, дискоидную волчанку, приобретенный буллезный эпидермолиз, идиопатическую криоглобулинемию смешанного типа, недостаточность фактора VIII, фибромиалгию-фибромиозит, гломерулонефрит, диффузный токсический зоб, синдром Гийена-Барре, синдром Гудпасчера, болезнь трансплантат против хозяина (GVHD, БТПХ), тиреоидит Хашимото, гемофилия A, идиопатическую мембранозную нейропатию, идиопатический легочный фиброз, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ITP, ИТП), IgA нейропатию, IgM полинейропатию, иммуно-опосредованную тромбоцитопению, ювенильный артрит, синдром Кавасаки, плоский лишай, склерозирующий лишай, красную волчанку, болезнь Меньера, смешанную болезнь соединительной ткани, пемфигоид слизистых оболочек, рассеянный склероз, сахарный диабет I типа, мультифокальную моторную нейропатию (MMN), миастению gravis, паранеопластический буллезный пемфигоид, пемфигоид беременных, вульгарный пемфигоид, эксфолиативный пемфигоид, пернициозную анемию, нодозный полиартериит, полихондрию, полигландулярный синдром, ревматическую полимиалгию, полимиозит и дерматомиозит, первичную агаммаглобулинемию, первичный билиарный цирроз, псориаз, псориатический артрит, рецидивирующий полихондрит, феномен Рейно, синдром Рейтера, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермию, синдром Шегрена, реакцию отторжения солидного органа, синдром мышечной скованности, системную красную волчанку, синдром Такаясу, токсический эпидермальный некролиз (TEN, ТЭН), синдром Стивенса-Джонсона (SJS), височный артериит/гигантоклеточный артериит, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, язвенный колит, увеит, герпетиформный дерматит, васкулит, ассоциированный с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, витилиго и гранулематоз Вегенера.
В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную каналопатию. Неорганичивающие каналопатии включают нейромиелит зрительного нерва, миастенический синдром Ламберта-Итона, миастению gravis, энцефалит с антителами к Х-метилЮаспартатным (NMDA) рецепторам, энцефалит с антителами к рецепторам а-амино-3-гидрокси-5-метил4-изоксазолепропионовой кислоты (AMPA), синдром Морвана и болезни глициновых рецепторов, ассоциированной с антителами.
- 10 035324
Композиции антагонистов FcRn текущего раскрытия в частности подходят для лечения заболеваний, опосредованных антителами, характеризующихся избыточной выработкой сывороточного иммуноглобулина. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn применяют для лечения гипергаммаглобулинемии.
Композиции антагониста FcRn также можно применять в комбинации с одним или более дополнительных лекарственных средств. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой противовоспалительной средство. Любое противовоспалительное средство можно применять в комбинации с раскрытыми в данной заявке композициями. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство представляет собой ритуксимаб, даклизумаб, базиликсимаб, муромонаб-cdS, инфликсимаб, адалимумаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб, тоцилизумаб, экулизумаб, голимумаб, канакинумаб, устекинумаб или белимумаб. В некоторых вариантах осуществления дополнительное лекарственное средство представляет собой средство, истощающее лейкоциты (например, средство, истощающее B-клетки или T-клетки). Любое средство, истощающее лейкоциты, можно применять в комбинации с композициями антагониста FcRn, раскрытыми в данной заявке. В некоторых вариантах осуществления средство, истощающее лейкоциты, представляет собой средство, истощающее Bклетки. В некоторых вариантах осуществления средство, истощающее лейкоциты, представляет собой антитело против маркера клеточной поверхности. Подходящие маркеры клеточной поверхности включают, без ограничений, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 или CD86. Антагонист FcRn и дополнительное(ые) лекарственное(ые) средство(а) можно вводить субъекту одновременно или последовательно одним(и) и тем(и) же путем (путями) введения.
Композиции антагониста FcRn текущего раскрытия также хорошо подходят для снижения концентрации средства, содержащего Fc в сыворотке крови субъекта. Такое быстрое очищение является выгодным в случаях, когда средство, содержащее Fc, является токсичным (например, конъюгатом антитела с лекарственным препаратом или средством, которое является иммуногенным), поскольку оно снижает экспозицию субъекта по отношению к лекарственному средству. Быстрое очищение также является выгодным в случаях, когда средство, содержащее Fc, представляет собой радиофармацевтическое средство, которое требует низкой концентрации средства для облегчения визуализации.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления композиции антагониста FcRn применяют для снижения концентрации средства, содержащего Fc, в сыворотке крови у субъекта, которому вводят средство, содержащее Fc. Концентрации средства, содержащего Ас, в сыворотке крови (например, лекарственного или диагностического средства), можно снизить, применяя композиции антагониста Ac, раскрытые в настоящей заявке. Неограничивающие примеры средств, содержащих Ac, включают радиофармацевтические средства (например, меченые антитела), конъюгаты антитела с лекарственным средством или иммуногенные средства (например, нечеловеческие антитела или иммуноадгезины). Антагонист FcRn можно вводить одновременно со средством, содержащим Fc, или последовательно (например, перед введением средства, содержащего Fc, или после него).
Более того, при заболеваниях или состояниях, требующих введения лекарственного средства, у пациента часто вырабатываются антитела (например, противолекарственные антитела) к лекарственному средству, которые в свою очередь мешают доступности лекарственного средства в отношении его лекарственных целей или вызывая развитие нежелательных реакций у субъекта. Соответственно, композиции антагониста FcRn, раскрытые в данной заявке, также можно применять для удаления антител (например, противолекарственных антител) к лекарственному средству, которые вырабатываются у субъекта.
Композиции антагониста FcRn, раскрытые в данной заявке, также можно применять в комбинации с лечебным белком для усиления пользы лечебного белка благодаря снижению концентраций IgG, где антитела IgG отвечают за снижение биодоступности лечебного белка. В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие предоставляет способ лечения заболевания, развивающегося в результате иммунного ответа в отношении фактора свертывания, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества композиций антагониста FcRn, раскрытых в данной заявке. Подходящие факторы свертывания включают без ограничений фибриноген, протромбин, фактор V, фактор VII, фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор XI, фактор XII, фактор XIII или фактор Виллебранда. Данный способ можно применять для регулирования или лечения, а также для профилактики иммунного ответа в отношении фактора свертывания у пациента, страдающего, например, от гемофилии A или гемофилии B. В некоторых вариантах осуществления способа можно применять для регулирования или лечения иммунного ответа в отношении, например, лечебного эритропоэтина у пациента, страдающего истинной эритроцитарной аплазией (ИЭЦА).
FcRn отвечает за транспортировку материнских антител через плаценту к плоду у беременных женщин. Соответственно, если беременная женщина принимает средство, содержащее Fc (например, лекарственный препарат на основе моноклональных антител), средство может контактировать с плодом в результате его переноса через плаценту, регулируемого FcRn. Для избежания любого вредного влияния средства, содержащего Fc, на развитие плода будет выгодным блокировать функцию FcRn. Соответственно, текущее раскрытие предоставляет способ профилактики чресплацентарного переноса средства,
- 11 035324 содержащего Fc (например, лекарственного препарата на основе моноклональных антител), к плоду беременной женщины, где способ включает введение женщине композиции антагониста FcRn, раскрытой в данной заявке, как одновременно со средством, содержащим Fc, так и последовательно (до или после его введения).
Композиции антагониста FcRn, раскрытые в данной заявке, также можно применять для лечения воспалительных заболеваний, включающих, но не ограничивающихся астмой, язвенным колитом и синдромом раздраженного кишечника, аллергическими реакциями, включая аллергический ринит/синусит, кожными аллергическими реакциями (крапивницей/сыпью, ангионевротическим отеком, атопическим дерматитом), аллергической реакцией на пищевые продукты, аллергической реакцией на лекарственные средства, аллергическими реакциями на насекомых, мастоцитозом, артритом, включая остеоартрит, ревматоидным артритом и спондилоартропатией.
Успешное применение генотерапии для лечения заболевания или состояния может быть приостановлено выработкой антител, специфических к лечебному белку, кодируемому трансгеном, а также к вектору, применяемому для доставки трансгена. Соответственно композиции антагониста FcRn, раскрытые здесь, можно вводить в сочетании с генотерапией для усиления выгоды закодированного лечебного белка путем снижения концентраций IgG. Данные способы являются в частности полезными в ситуациях, когда антитела IgG несут ответственность за сниженную биодоступность генотерапевтического вектора или закодированного лечебного белка. Генотерапевтический вектор может представлять собой, например, вирусный вектор, например, вектор аденовируса и аденосателлитного вируса. Заболевания, которые можно лечить при помощи генотерапии, включают, но не ограничиваются муковисцидозом, гемофилией, ИЭЦА, мышечной дистрофией или лизосомальными болезнями накопления, такими, как болезнь Гоше и болезнь Фабри.
Специалист в данной области техники сможет при помощи стандартных исследований определить эффективное нетоксическое количество композиции антагониста FcRn для лечения заболеваний, опосредованных антителами. Например, терапевтически эффективное количество полипептида может варьироваться в соответствии с такими факторами, как стадия заболевания (например, на I стадии по сравнению с IV стадией), возраст, пол, медицинские осложнения (например, иммунодефицитные состояния или заболевания), а также вес субъекта и способность антитела вызывать желаемый ответ у субъекта. Например, несколько разделенных доз можно вводит ежедневно, или дозу можно пропорционально снижать, как показано при наличии необходимости в текущей ситуации. В целом, тем не менее, ожидают, что эффективная доза находится в диапазоне от приблизительно 0,1 до 10000 мг/кг веса тела в сутки, например, от приблизительно 1 до 1000, от приблизительно 10 до 500 или от приблизительно 50 до 250 мг/кг веса тела в сутки (например, приблизительно 70 мг/кг веса тела в сутки).
IV. Фармацевтические композиции
В другом аспекте текущее раскрытие предоставляет фармацевтические композиции, включающие антагонист FcRn или композицию антагониста FcRn, раскрытую в данной заявке, а также фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, написанной E.W. Martin. Примеры эксципиентов могут включать крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, карбонат кальция, силикагель, стеарат натрия, глицеринмоностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое снятое молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и т.п. Композиция также может содержать реагенты, буферирующие рН, а также смачивающие или эмульгирующие средства.
Фармацевтические композиции можно разрабатывать для парентерального введения (например, для внутривенного или внутримышечного введения) при помощи болюсной инъекции. Составы для инъекции могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например, в ампулах или многодозовых контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут находиться в форме суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных растворителях, а также могут содержать вспомогательные вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства. В качестве альтернативы активный ингредиент может находиться в форме порошка для разбавления подходящим растворителем, например, апирогенной водой.
Антагонисты FcRn могут быть связаны с хелаторами, такими, как те, которые описаны в U.S. Pat. №5,326,856. Комплекс пептид-хелатор может быть далее помечен радиоактивным изотопом для предоставления радиофармацевтического средства для диагностики или лечения заболеваний или состояний, включающих регулирование концентраций IgG.
V. Изготовление антагонистов FcRn.
В одном аспекте изобретение предоставляет полинуклеотиды, векторы и клетки-хозяева, кодирующие антагонисты FcRn, раскрытые в данной заявке. Также предоставлены способы получения антагонистов FcRn, включающие экспрессирование данных полинуклеотидов.
Полинуклеотиды, кодирующие антагонисты FcRn, раскрытые в данной заявке, обычно вставляются в экспрессионный вектор для введения в клетки-хозяева, которые можно применять для изготовления желаемого количества заявленных антагонистов FcRn. Соответственно, в некоторых аспектах, изобретение предоставляет экспрессионные векторы, включающие полинуклеотиды, раскрытые в данной заявке,
- 12 035324 и клетки-хозяева, включающие данные векторы и полинуклеотиды.
Термин вектор или экспрессионный вектор применяют в данной заявке с целью описания и заявления, для обозначения векторов, применяемых в соответствии с настоящим изобретением в качестве носителя для введения и экспрессирования желаемого гена в клетке. Как известно специалистам в данной области техники, такие векторы можно легко выбирать из группы, состоящей из плазмид, фагов, вирусов и ретровирусов. В целом, векторы, совместимые с текущим изобретением, будут включать селективный маркер, подходящие сайты рестрикции для облегчения клонирования желаемого гена и возможности проникновения и/или репликации в эукариотических или прокариотических клетках.
Для целей данного изобретения можно применять множество различных систем экспрессионных векторов. Например, вектор одного класса использует элементы ДНК, которые получены из животных вирусов, таких, как вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус полиомы, аденовирус, вирус осповакцины, бакуловирус, ретровирусы (респираторно-синцитиальный вирус (PCB), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирус мышиного лейкоза Молони (MOMLV)) или вакуолизирующий обезьяний вирус (SV40). Другие включают применение полицистронных систем с внутренними сайтами связывания рибосом. В дополнение, клетки со встроенными в их хромосомы ДНК, можно выбирать путем введения одного или нескольких маркеров, которые обеспечат селекцию трансфектированных клеток-хозяев. Маркер может обеспечить прототропность к ауксотрофному хозяину, резистентность к биоцидам (например, к антибиотикам) или резистентность к тяжелым металлам, таким, как медь. Селектируемый маркер гена может быть как напрямую связан с ДНК-последовательностью для экспрессирования, так и введен в ту же клетку путем котрансформации. Для оптимального синтеза мРНК также необходимы дополнительные элементы. Эти элементы могут включать сигнальные последовательности, сигналы сплайсинга, а также промотеры транскрипции, сигналы усиления и терминальные сигналы.
В более общем смысле после подготовки вектора или ДНК-последовательности, кодирующей антагонист FcRn, экспрессионный вектор можно вводить в подходящую клетку-хозяин. Таким образом происходит трансформация клетки-хозяина. Введение плазмиды в клетку-хозяин можно выполнить при помощи различных техник, хорошо известных специалисту в данной области техники. Они включают, но не ограничиваются трансфекцией (включая электрофорез и электропорацию), слиянием протопластов, осаждением фосфата кальция, слиянием клеток с ДНК в оболочке, микроинъекцией и инфицированием интактным вирусом. См. Ridgway, A. A. G. Mammalian Expression Vectors Chapter 24.2, pp. 470-472 Vectors, Rodriguez and Denhardt, Eds. (Butterworths, Boston, Mass. 1988). Более предпочтительным является введение плазмиды в клетку-хозяин при помощи электропорации. Трансформированные клетки растут в условиях, подходящих для производства антагонистов FcRn, и оцениваются на предмет экспрессии антагониста FcRn. Типичные методы анализа включают иммуноферментный твердофазный анализ (ИФА), радиоиммунологический анализ (РИА) или анализ с помощью клеточного сортера с активацией флуоресценции (FACS), иммуногистохимию и т.п.
Как применяют в данной заявке, термин трансформация используют в широком смысле для обозначения введения ДНК в клетку-хозяин, являющуюся реципиентом, для изменения генотипа, что, следовательно, приводит к изменениям в клетке-реципиенте.
В тех же строчках клетки-хозяева обозначают клетки, которые были трансформированы при помощи векторов, созданных с применением технологий рекомбинантных ДНК, и кодирующих по меньшей мере один гетерологичный ген. В описаниях процессов выделения полипептидов из рекомбинантных хозяев термины клетка и культура клеток являются взаимозаменяемыми и обозначают источник антагониста FcRn, если не указано иное. Другими словами, восстановление антагониста FcRn из клеток может означать как его получение из центрифугированных цельных клеток, так и из культуры клеток, содержащей как среду, так и суспендированные клетки.
В одном варианте осуществления линия клеток-хозяев, применяемая для экспрессирования антагониста FcRn, имеет происхождение от млекопитающих; специалисты в данной области техники могут определить конкретные линии клеток-хозяев, которые подходят для экспрессирования на них желаемого генного продукта. Типичные линии клеток-хозяев включают, но не ограничиваются DG44 и DUXB11 (линии клеток яичника китайского хомячка, DHFR минус), HELA (карцинома шейки матки человека), CVI (линия клеток почки обезьяны), COS (производное CVI с SV40 T антигеном), R1610 (фибробласты китайского хомячка) BALBC/3T3 (фибробласты мышей), HAK (линия клеток почки хомячка), SP2/O (миелома мышей), BFA-1c1BPT (эндотелиальные клетки крупного рогатого скота), RAJI (лимфоциты человека), 293 (почка человека). В одном варианте осуществления линия клеток обеспечивает модифицированное гликозилирование, например, афукозилирование экспрессированного на ней антагониста FcRn (например, PER.C6.RTM. (Crucell) или FUTS-нокаутированные CHO линии клеток (Potelligent™ Cells) (Biowa, Princeton, N.J.)). В одном варианте осуществления можно применять NS0 клетки. CHO клетки являются в частности предпочтительными. Линии клеток-хозяев обычно доступны в коммерческой среде, в Американской Коллекции Тканевых Культур или в опубликованных данных литературы.
Изготовление in vitro позволяет увеличить мощность для получения большего количества желаемого антагониста FcRn. Техники культивирования клеток млекопитающих в условиях выращивания тканевых культур известны в данной области техники и включают гомогенную суспензионную культуру, на
- 13 035324 пример, в аэролифтном реакторе или в проточном реакторе смешения, или неподвижную или инкапсулированную клеточную культуру, например, в полых волокнах, микрокапсулах, на агарозных микрочастицах или пьезоэлектрических головках. При необходимости и/или желании растворы полипептидов можно очистить при помощи обычных хроматографических способов, например, гель-фильтрации, ионообменной хроматографии, хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе и/или (иммуно-) аффинной хроматографии.
Гены, кодирующие антагонисты FcRn изобретения, также могут быть экспрессированы на клетках не млекопитающих, таких, как клетки бактерий или дрожжей, а также клетки растений. Поэтому следует иметь в виду, что различные одноклеточные микроорганизмы, не относящиеся к млекопитающим, такие, как бактерии, также могут быть модифицированы; т.е., речь идет о тех из них, которые способны расти в культурах клеток или в процессе ферментации. Бактерии, чувствительные к модификации, включают члены семейства Enterobacteriaceae, такие, как штаммы Escherichia coli или Salmonella; Bacillaceae, такие, как Bacillus subtils; Pneumococcus; Streptococcus и Haemophilus influenzae. Также следует помнить, что при экспрессировании на бактериях антагонисты FcRn могут стать частью телец включения. Антагонисты FcRn должны быть выделены, очищены и далее объединены в функциональные молекулы. В дополнение к прокариотам можно использовать эукариотические микроорганизмы. Среди эукариотических микроорганизмов Saccharomyces cerevisiae или обычные хлебопекарские дрожжи применяются наиболее часто, хотя множество других штаммов находятся в широком доступе.
В дополнение к системе экспрессирования на клетках антагонисты FcRn также можно производить при помощи бесклеточных методов или методов химического синтеза. В некоторых вариантах осуществления антагонисты FcRn изготавливают in vitro путем химического синтеза.
IV. Иллюстративные примеры.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые не следует считать дополнительно ограничивающими. Содержание Списка последовательностей, чертежей и все ссылки, патенты и опубликованные патентные заявки, цитируемые на протяжении данной заявки, явным образом включены в данную заявку посредством ссылки.
Пример 1. Влияние Fc-Abdeg на концентрации IgG в сыворотке крови у яванских макак.
Определяют влияние антилизосомальных IgG человека (HEL-Abdeg) и Fc-участка IgG человека (FcAbdeg), включающего аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436, соответственно, по системе EU (Fc-Abdeg; SEQ ID NO: 2), на концентрации меченых антител IgG в сыворотке крови у яванских макак. Конкретно яванским макакам вводят 1 мг/кг антимышиного CD70 hIgG1 меченого антитела (FR70-hIgG1; Oshima с соавт., Int Immunol 10(4): 517-26 (1998)) при помощи внутривенной (в/в) болюсной инъекции. Животным через 5 минут вводят при помощи инфузии либо 7 мг/кг FcAbdeg, либо 20 мг/кг HEL-Abdeg, либо фосфатно-солевой буфер (PBS) (2 обезьяны в каждой группе). Инфузию проводят в течение 1 часа и животным вводят объем, равный 10 мл/кг. Пробы крови (3x150 мкл) забирают за 5 мин до введения дозы (до приема препарата) и через 5 мин, 2 ч, 6 ч, 24 ч, 48 ч, 72 часа, 96 ч и 120 ч после завершения инфузии. Концентрации меченых веществ определяют при помощи mCD-70-связывающего ИФА, и данные распределяют относительно концентраций меченых веществ в конце дозирования (фиг. 1). Также определяют общие концентрации IgG у яванских макак (фиг. 2). Результаты данных экспериментов демонстрируют, что Fc-Abdeg снижает количество меченых антител более эффективно по сравнению с эквимолярными количествами HEL-Abdeg.
В дополнение к его ключевой роли в реутилизационном пути IgG FcRn также участвует в гомеостазе альбуминов (Chauldhury с соавт., J Exp Med. 197(3):315-22 (2003). FcRn взаимодействует с определенными сайтами IgG-Fc и альбумина, и связывание может происходить одновременно (Andersen с соавт., Nat Commun. 3:610 (2012)). В принципе, блокада утилизации IgG при помощи Abdegмодифицированных молекул не должна вмешиваться во взаимодействие альбумин-FcRn. In vivo исследование на мышах, где авторы показали отсутствие влияния Abdeg-экипированной молекулы hIgG1 на концентрации альбуминов, подтверждает гипотезу (Patel с соавт, J Immunol 187(2): 1015-22 (2011)). В эксперименте, описанном выше, концентрации альбуминов также определяют на -3 день, 3 день и 17 день после завершения инфузии. Аналогично исследованию с участием мышей, никакие значимые изменения в концентрациях альбуминов не наблюдались после лечения Fc-Abdeg или HEL-Abdeg (см. фиг. 3).
В последующем эксперименте антитело-истощающую способность Fc-Abdeg сравнивают с ВВИГ. Конкретно, яванским макакам вводят 1 мг/кг меченого антитела (FR70-hIgG1) за 2 дня до дозирования 70 мг/кг Fc-Abdeg или 2 г/кг ВВИГ (2 обезьяны в каждой группе). Инфузию Fc-Abdeg и ВВИГ проводят в течение 4 ч, и животным вводят объем, равный 20 мл/кг. Пробы крови (3x150 мкл) забирают за 5 минут до введения дозы (до приема препарата) и через 5 мин, 2 ч, 6 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 96 ч, 120 ч и 168 ч после завершения инфузии. Концентрации меченых веществ определяют при помощи mCD70-связывающего ИФА, и распределяют относительно концентраций до приема препарата (фиг. 4). По сравнению с лечением ВВИГ в клинической дозе (2 г/кг) 70 мг/кг Fc-Abdeg показывает значительно улучшенную кинетику клиренса меченого вещества и также большую способность к более эффективному очищению (>95% клиренса меченого вещества за 4 дня для Abdeg по сравнению с ~75% за 7 дней для ВВИГ).
- 14 035324
Пример 2. Влияние афукозилирования на аффинность Fc-Abdeg по отношению к CD16a человека и
CD16-2 мышей.
Аффинность связывания Fc-Abdeg в отношении hCD16a определяют и сравнивают с афукозилированной формой (Fc-Abdeg-POT). В тот же эксперимент включен вариант Fc-Abdeg, демонстрирующий улучшенную аффинность для всех FcyR (Fc-Abdeg-S239D/I332E). Конкретно луночный планшет Maxisorp покрывают 100 нг/лунку Нейтравидин Биотин-связывающего Белка (ThermoScientific, 31000) и инкубируют в течение ночи при 4°C. На следующий день луночный планшет блокируют ФСБ+1% казеином в течение 2 ч при комнатной температуре. Далее 100 мкл/лунка раствора 250 нг/мл (разведение в ФСБ+0,1% казеине) биотинилированного hCD16a (Sino Biological Inc., 10389-H28H1-B) добавляют в луночный планшет и инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре до применения градиента концентрации молекул Fc-Abdeg или Fc-Abdeg-POT (1 мкмоль-0,005 нмоль) в течение еще одного часа. Связывание с hCD16a определяют при помощи HRP-конъюгированного поликлонального античеловеческого козьего Fc-антитела (Jackson ImmunoResearch, 109-035-008) (инкубирование в течение 1 ч при КТ, разведение 1/50000 в ФСБ+0,1% казеине), после чего добавляют 100 мкл уравновешенного при комнатной температуре ТМБ (TMB) (SDT-реагенты #s TMB). Луночный планшет инкубируют в течение 10 минут до добавления 100 мкл 0,5 N H2SO4 и измеряют оптическую плотность OD450 нм (ОП450 нм). Величину EC50 (эффективной концентрации, вызывающей 50% ингибирование вирусной репликации) определяют при помощи программного обеспечения GraphPad Prism. Результаты данных экспериментов, отображаемые на фиг. 5, демонстрируют тот факт, что дефукозилирование молекулы Fc-Abdeg приводит к повышению аффинности к hCD16a в >30 раз (EC50=13 нмоль для Fc-Abdeg-POT по сравнению с EC50>0,4 мкмоль для фукозилированного Fc-Abdeg). Как ожидалось, аффинность связывания вариантного FcAbdeg-S239D/I332E для hCD16a выше по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа (EC50=6 нмоль).
Используя схожую экспериментальную процедуру, как описано выше, определяют аффинность связывания для CD16-2 мышей (Sino Biological Inc., 50036-M27H-B). Результаты данных экспериментов, отображаемые на фиг. 6, снова демонстрируют повышенную аффинность афукозилированного варианта по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа (EC50=11 нмоль по сравнению с EC50>100 нмоль). Степень повышения аффинности для mCD16-2 варианта Fc-Abdeg-POT по сравнению с Fc-Abdeg дикого пита ниже той, которая наблюдается для связывания с CD16a человека. Это влияние не наблюдается в отношении варианта Fc-Abdeg-S239D/I332E (EC50=2 нмоль), для которого наблюдается сходная степень повышения аффинности по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа как для CD16a человека, так и мыши (EC50=2 нмоль).
Аутоантитела в комплексе с аутоантигенами связываются с активирующими FcyR и, таким образом, запускают аутоиммунные заболевания, которые развиваются отчасти из-за опосредованного иммунным воспалением, направленным на собственные ткани. Способность Fc-Abdeg антагонизировать взаимодействие аутоиммунных антител и FcyRIII-рецепторов на НК-клетках оценивают в двух анализах на основе АЗКЦ.
Изначально биотест по гену-репортеру на АЗКЦ (Promega, G7016) используют для анализа сравнительной hCD16a связывающей способности Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E. Конкретно 10000 клеток Raji, экспрессирующих CD20 (клетки-мишени), инкубируют с 60000 клеток Jurkat, экспрессирующих hCD16a (эффекторные клетки), в присутствии 100 нг/мл aнти-CD20 антитела и растущей концентрации конкурирующего вещества. Клетки инкубируют в течение 6 часов при 37°C перед измерением биолюминесцирующего сигнала, который является мерой АЗКЦ активности. Сигнал от люциферазы определяют относительно сигнала, полученного 100 нг/мл aнти-CD20 в отсутствие конкурирующего вещества (см. фиг. 7). Эти эксперименты демонстрируют тот факт, что как Fc-Abdeg-POT, так и FcAbdeg-S239D/I332E эффективно блокируют aнти-CD20-индуцировaнный АЗКЦ сигнал, во время, как инкубирование Fc-Abdeg дикого типа не ведет к конкурентному связыванию hCD16a, экспрессированных на клетках Jurkat.
В следующем анализе АЗКЦ тестируют литическую активность aнти-hCD70 антитела (27B3-hIgG1) Fc-Abdeg и Fc-Abdeg-POT в качестве меры конкурентного связывания hCD16. Конкретно, приблизительно 50000 hCD70-экспрессирующих клеток U266 вносят в приблизительно 300000 свежеочищенных мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК, PBMC) от здорового донора в присутствии 50 нг/мл aнти-hCD70 антитела и градиента концентрации Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT и ВВИГ. Клетки U266 инкубируют в течение 2 дней с последующим анализом клеточного лизиса при помощи FACS с применением специфического для клеток U266 маркера (CD28). Результаты данных экспериментов, отображаемые на фиг. 8, демонстрируют тот факт, что aнти-CD70 антитело эффективно лизирует клетки U266, и что это истощение можно ослабить в зависимости от дозы путем добавления Fc-Abdeg-POT, но не FcAbdeg дикого типа или ВВИГ. Эти данные демонстрирую, что Fc-Abdeg POT усиливает конкурентно связывающие CD16a свойства по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа и ВВИГ.
Пример 3. Мышиная модель ОИТ (острой иммунной тромбоцитопении).
Терапевтическую эффективность молекул Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT, Fc-Abdeg-S239D/I332E тестируют на мышиной модели острой иммунной тромбоцитопении. Конкретно мышей C57BL/6 лечат ВВИГ (20 мг/животное), Fc-Abdeg (1 мг/животное), Fc-Abdeg-POT (1 мг/животное), Fc-abdeg-S239D/I332E (1
- 15 035324 мг/животное) или раствором хлорида натрия при помощи интраперитонеальной инфузии (5 животных в каждой группе). Перед лечением производят забор пробы крови для исходных измерений содержания тромбоцитов. Через час мыши получают 5 мкг/животное антимышиного тромбоцитарного антитела MWReg30 (Nieswandt с соавт., Blood 94:684-93 (1999)). Содержание тромбоцитов мониторируют в течение 24 ч. Содержание тромбоцитов нормализуют относительно исходного содержания для каждой мыши, и число тромбоцитов определяют при помощи проточной цитометрии с ημη-ΟΟ61 окрашиванием. Результаты данных экспериментов, отображаемые на фиг. 9, демонстрируют, что предварительное лечение Fc-Abdeg снижает MWReg30-индуцированную тромбоцитопению со сходной эффективностью по сравнению с семикратно более высокой молярной дозой ВВИГ, и дополнительно, что блокада FcyR при помощи Fc-Abdeg POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E оказывает синергическое положительное влияние в этой модели, что можно наблюдать по улучшенному содержанию тромбоцитов во временные точки 180 и 1440 мин.
Пример 4. Технологичность производства Fc-Abdeg Fc-Abdeg (включающий Fc-домены, имеющие SEQ ID NO: 2) получают в CHO клетках (Evitria, Switzerland) путем транзиентной трансфекции. После трансфекции высокие титры Fc-Abdeg определяют в надосадочных жидкостях (между 2 00 и 400 мг/мл). Сходная предпочтительная структура изготовления наблюдается в случае, когда Fc-Abdeg экспрессируется из экспрессирующей конструкции, стабильно встроенной в линию клеток CHO GS-XCEED (Lonza, Great-Britain). В среднем, стабильные трансфектанты производят 3 г/л, и определяют несколько клонов, которые производят вплоть до 6 г/л Fc-Abdeg в биореакторе с механическим перемешиванием объемом 10 л.
Технологичность производства Fc-Abdeg дополнительно исследуют при помощи анализа агрегатов и продуктов распада после очищения белка-A вышеупомянутого массового производства Fc-Abdeg. Конкретно, 137 мкг Fc-Abdeg загружают в колонку для гель-фильтрации Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare), соединенную с хроматографической системой AktaPurifier. Результаты данного эксперимента, отображаемые на фиг. 10, демонстрируют тот факт, что наблюдается всего лишь очень небольшой процент Fc-Abdeg агрегатов (~0,5%), в то время, как определяются продукты распада Fc-Abdeg. Дополнительно применение различных стрессовых условий (заморозка-разморозка, ротационное напряжение или температурное напряжение) к очищенному с белком-A Fc-Abdeg не приводит к каким-либо явным изменениям физико-химических или функциональных свойств. Собранные вместе, эти данные демонстрируют превосходную технологичность производства Fc-Abdeg.

Claims (23)

1. Выделенный антагонист FcRn, который состоит из вариантного Fc-участка IgG1, где Fc-домены Fc-участка содержат аминокислоты Y, Т, E, K, F и Y в положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 по системе EU, соответственно, и где Fc-участок связывается с FcRn с повышенной аффинностью и сниженной pH-зависимостью по сравнению с Fc-участком IgG1 дикого типа.
2. Антагонист FcRn по п.1, где Fc-участок имеет повышенную аффинность для Fc гамма-рецептора по сравнению с аффинностью Fc-участка IgG дикого типа в отношении Fc гамма-рецептора.
3. Выделенный антагонист FcRn, который состоит из вариантного Fc-участка IgG1, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
4. Выделенный антагонист FcRn по п.3, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 1.
5. Выделенный антагонист FcRn по п.3, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2.
6. Выделенный антагонист FcRn по п.3, где аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантного Fc-участка состоит из аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 3.
7. Выделенный антагонист FcRn по любому из пп.1-6, где вариантный Fc-участок обладает повышенной аффинностью к CD16a.
8. Выделенный антагонист FcRn по любому из пп.1-7, где Fc-домены вариантного Fc-участка включают Fc-домен, имеющий афукозилированный N-связанный гликан в положении 297 по системе EU, или где Fc-домены вариантного Fc-участка включают N-связанный гликан, имеющий N-ацетил-Оглюкозамин в точках ветвления в положении 297 по системе EU Fc-доменов.
9. Выделенный антагонист FcRn по любому из предшествующих пунктов формулы изобретения, где вариантный Fc-участок связан с удлинителем периода полувыведения, или связан со связывающей молекулой, которая специфически связывается с удлинителем периода полувыведения, присутствующем у субъекта.
10. Выделенный антагонист FcRn по п.9, где удлинитель периода полувыведения представляет собой полиэтиленгликоль или сывороточный альбумин человека.
11. Выделенный антагонист FcRn по п.9, где удлинитель периода полувыведения является связывающей молекулой, которая специфически связывается с сывороточным альбумином человека.
- 16 035324
12. Композиция антагониста FcRn, включающая множество молекул антагониста FcRn по п.9, где по меньшей мере 50% молекул включают вариантный Fc-участок, включающий афукозилированный Nсвязанный гликан, или где по меньшей мере 50% молекул включают вариантный Fc-участок, включающий N-связанный гликан, имеющий N-ацетил-О-глюкозамин в точках ветвления.
13. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, опосредованного антителами, у субъекта, включающая антагониста FcRn по любому из предшествующих пунктов формулы изобретения, а также фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
14. Применение антагониста FcRn по любому из пп.1-12 для снижения концентраций Fcсодержащего средства в сыворотке крови субъекта, которому вводят Fc-содержащее средство, где указанный антагонист FcRn вводят одновременно или последовательно указанному субъекту.
15. Применение антагониста FcRn по п.14, где Fc-содержащее средство представляет собой антитело или иммуноадгезин, или где Fc-содержащее средство представляет собой лекарственное или диагностическое средство, или где Fc-содержащее средство представляет собой радиофармацевтическое средство, или где Fc-содержащее средство представляет собой конъюгат антитела с лекарственным средством.
16. Применение антагониста FcRn по любому из пп.1-12 для лечения заболеваний, опосредованных антителами, у субъекта.
17. Применение антагониста FcRn по по п.16, где заболевание, опосредованной антителами, представляет собой аутоиммунное заболевание, где аутоиммунное заболевание выбирают из группы, состоящей из отторжения аллогенного островкового трансплантата, очаговой алопеции, анкилозирующего спондилита, антифосфолипидного синдрома, аутоиммунной Аддисоновой болезни, болезни Альцгеймера, антинейтрофильных цитоплазматических антител (ANCA), аутоиммунных заболеваний надпочечников, аутоиммунной гемолитической анемии, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного миокардита, аутоиммунной нейтропении, аутоиммунного оофорита или орхита, аутоиммунной тромбоцитопении, аутоиммунной крапивницы, болезни Бехчета, буллезного пемфигоида, кардиомиопатии, болезни Кастлемена, дерматита спруцелиакии, синдрома хронической усталости и иммунной дисфункции, хронической воспалительной демиелинизирующей полинейропатии (CIDP), синдрома Черджа-Стросс, рубцового пемфигоида, синдрома Тибьержа-Вайсенбаха, болезни холодовых агглютининов, болезни Крона, дерматомиозита, дилятационной кардиомиопатии, дискоидной волчанки, приобретенного буллезного эпидермолиза, идиопатической криоглобулинемии смешанного типа, недостаточности фактора VIII, фибромиалгиифибромиозита, гломерулонефрита, диффузного токсического зоба, синдрома Гийена-Барре, синдрома Гудпасчера, болезни трансплантат против хозяина (GVHD, БТПХ), тиреоидита Хашимото, гемофилии A, идиопатической мембранозной нейропатии, идиопатического легочного фиброза, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP, ИТП), IgA нейропатии, IgM полинейропатии, иммуно-опосредованной тромбоцитопении, ювенильного артрита, синдрома Кавасаки, плоского лишая, склерозирующего лишая, красной волчанки, болезни Меньера, смешанной болезни соединительной ткани, пемфигоида слизистых оболочек, рассеянного склероза, сахарного диабета I типа, мультифокальной моторной нейропатии (MMN), миастении gravis, паранеопластического буллезного пемфигоида, пемфигоида беременных, вульгарного пемфигоида, эксфолиативного пемфигоида, пернициозной анемии, нодозного полиартериита, полихондрии, полигландулярного синдрома, ревматической полимиалгии, полимиозита и дерматомиозита, первичной агаммаглобулинемии, первичного билиарного цирроза, псориаза, псориатического артрита, рецидивирующего полихондрита, феномена Рейно, синдрома Рейтера, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, реакции отторжения солидного органа, синдрома мышечной скованности, системной красной волчанки, синдрома Такаясу, токсического эпидермального некролиза (TEN, ТЭН), синдрома Стивенса-Джонсона (SJS), височного артериита/гигантоклеточного артериита, тромботической тромбоцитопенической пурпуры, язвенного колита, увеита, герпетиформного дерматита, васкулита, ассоциированный с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, витилиго и гранулематоза Вегенера.
18. Применение антагониста FcRn по п.16, где заболевание, опосредованное антителами, лечат при помощи внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ), плазмафереза и/или иммуносорбции.
19. Применение антагониста FcRn по п.18, где аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную каналопатию, где каналопатию выбирают из группы, состоящей из аутоиммунного энцефалита с поражением лимбической системы, эпилепсии, нейромиелита зрительного нерва, миастенического синдрома Ламберта-Итона, миастении gravis, энцефалита с антителами к №метил^-аспартатным (NMDA) рецепторам, энцефалита с антителами к рецепторам а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолепропионовой кислоты (AMPA), синдрома Морвана, нейромиотонии, детских аутоиммунных психоневрологических заболеваний, ассоциированных со стрептококковой инфекцией (PANDAS) и болезни глициновых рецепторов, ассоциированной с антителами.
20. Применение антагониста FcRn по п.16, где нарушение, опосредованное антителами, представляет собой гиперглобулинемию.
21. Применение антагониста FcRn по п.16, где антагонист FcRn вводят субъекту одновременно с дополнительным лекарственным средством или последовательно, где дополнительное лекарственное
- 17 035324 средство представляет собой противовоспалительное средство или средство, истощающее лейкоциты.
22. Применение антагониста FcRn по п.21, где средство, истощающее лейкоциты, представляет собой средство, истощающее B-клетки, антитело, где антитело специфически связывается с CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85, или CD86.
23. Применение антагониста FcRn по п.21, где дополнительное лекарственное средство представляет собой ритуксимаб, даклизумаб, базиликсимаб, муромонаб-cd3, инфликсимаб, адалимумаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб, тоцилизумаб, экулизумаб, голимумаб, канакинумаб, устекинумаб, белимумаб или комбинации вышеперечисленных веществ.
EA201691304A 2013-12-24 2014-12-23 АНТАГОНИСТЫ НЕОНАТАЛЬНЫХ Fc-РЕЦЕПТОРОВ (FCRN) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ EA035324B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361920547P 2013-12-24 2013-12-24
PCT/US2014/072087 WO2015100299A1 (en) 2013-12-24 2014-12-23 Fcrn antagonists and methods of use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201691304A1 EA201691304A1 (ru) 2016-10-31
EA035324B1 true EA035324B1 (ru) 2020-05-28

Family

ID=52347464

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691304A EA035324B1 (ru) 2013-12-24 2014-12-23 АНТАГОНИСТЫ НЕОНАТАЛЬНЫХ Fc-РЕЦЕПТОРОВ (FCRN) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Country Status (23)

Country Link
US (3) US10316073B2 (ru)
EP (2) EP3626738A1 (ru)
JP (2) JP6554473B2 (ru)
KR (3) KR20240033084A (ru)
CN (2) CN112142843A (ru)
AU (1) AU2014369999B2 (ru)
BR (1) BR112016014810B1 (ru)
CA (1) CA2934644C (ru)
DK (1) DK3087095T3 (ru)
EA (1) EA035324B1 (ru)
ES (1) ES2742682T3 (ru)
FI (1) FIC20230003I1 (ru)
FR (1) FR23C1004I2 (ru)
HU (2) HUE046822T2 (ru)
IL (1) IL246223B (ru)
LT (2) LT3087095T (ru)
MX (1) MX368804B (ru)
NL (1) NL301203I2 (ru)
NZ (1) NZ722055A (ru)
PL (1) PL3087095T3 (ru)
PT (1) PT3087095T (ru)
SG (2) SG10202009832XA (ru)
WO (1) WO2015100299A1 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112016014810B1 (pt) 2013-12-24 2023-12-26 Argenx Bvba Antagonistas de fcrn e métodos de uso
PL3268391T3 (pl) * 2015-03-09 2022-01-03 Argenx Bvba Sposoby zmniejszania poziomów środków zawierających Fc w surowicy z zastosowaniem antagonistów FcRn
FR3038517B1 (fr) * 2015-07-06 2020-02-28 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation de fragments fc modifies en immunotherapie
CN106957364B (zh) * 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb12及其应用
CN106957365B (zh) * 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb8及其应用
EP3257866A1 (en) * 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
KR20190039937A (ko) 2016-07-08 2019-04-16 스태튼 바이오테크놀로지 비.브이. 항-ApoC3 항체 및 이의 사용 방법
GB201618424D0 (en) * 2016-11-01 2016-12-14 Argenix Bvba Treatment of antibody mediated disease
CA3045797A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 The Texas A&M University System Fusion proteins for selectively depleting antigen-specific antibodies
AU2018255938A1 (en) 2017-04-21 2019-10-31 Staten Biotechnology B.V. Anti-ApoC3 antibodies and methods of use thereof
US10538583B2 (en) 2017-10-31 2020-01-21 Staten Biotechnology B.V. Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof
CA3080103A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
EA202091410A1 (ru) * 2017-12-08 2021-01-13 Ардженкс Бвба Применение антагонистов fcrn для лечения генерализованной миастении гравис
EP3802590A2 (en) * 2018-06-08 2021-04-14 Argenx BVBA Compositions and methods for treating immune thrombocytopenia
JOP20210013A1 (ar) * 2018-07-20 2021-01-19 Momenta Pharmaceuticals Inc تركيبات جسم مضاد fcrn
WO2020054979A1 (ko) * 2018-09-12 2020-03-19 아주대학교산학협력단 Cd83 억제제를 유효성분으로 포함하는 베체트병의 예방 또는 치료용 조성물
GB2589049C (en) 2019-04-11 2024-02-21 argenx BV Anti-IgE antibodies
WO2020232247A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
SG11202112010RA (en) 2019-06-07 2021-12-30 Argenx Bvba PHARMACEUTICAL FORMULATIONS OF FcRn INHIBITORS SUITABLE FOR SUBCUTANEOUS ADMINISTRATION
TW202140552A (zh) 2020-01-08 2021-11-01 比利時商阿根思公司 用於治療天皰瘡病症的方法
TW202140560A (zh) * 2020-02-10 2021-11-01 大陸商北京拓界生物醫藥科技有限公司 抗ＦｃＲｎ抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
CN117580857A (zh) 2021-06-23 2024-02-20 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Apoc-ii短模拟肽及使用方法
WO2023139107A1 (en) 2022-01-18 2023-07-27 argenx BV Galectin-10 antibodies
WO2023156614A1 (en) 2022-02-21 2023-08-24 argenx BV Methods for treating myositis using fcrn antagonists
WO2023198806A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Ose Immunotherapeutics New class of molecules for selective clearance of antibody
WO2023215838A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Short apolipoprotein e mimetic peptides and methods of use
CN115645537A (zh) * 2022-10-25 2023-01-31 成都臻拓医药科技有限公司 FcRn抑制剂在制备抑制自身免疫性疾病复发的药物中的用途

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO2002060919A2 (en) * 2000-12-12 2002-08-08 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
WO2006130834A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System IGGl ANTIBODIES WITH MUTATED FC PORTION FOR INCREASED BINDING TO FCRN RECEPTOR AND USES THEREOF
WO2009100105A2 (en) * 2008-02-04 2009-08-13 Attogen Inc. Inhibitors of oncogenic isoforms and uses thereof
WO2009131702A2 (en) * 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof
WO2010014909A1 (en) * 2008-08-01 2010-02-04 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunomodulatory peptides
WO2010106180A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Lfb Biotechnologies Optimized fc variants
WO2013074598A1 (en) * 2011-11-18 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES AND INCREASED FcRN BINDING

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62153300A (ja) * 1985-12-26 1987-07-08 Teijin Ltd ヒト免疫グロブリンＧＦｃ領域蛋白質およびその製造方法
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5326856A (en) 1992-04-09 1994-07-05 Cytogen Corporation Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
DK0805628T3 (da) 1995-01-17 2003-07-14 Brigham & Womens Hospital Receptor specifik transepitheltransport af immunogener
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
DE69731289D1 (de) 1996-03-18 2004-11-25 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
US6128119A (en) 1997-01-10 2000-10-03 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Beam shaping optical system
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2364997A3 (en) 1999-01-15 2012-07-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
AU4314801A (en) 2000-02-11 2001-08-20 Lexigen Pharm Corp Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6725230B2 (en) 2000-07-18 2004-04-20 Aegis Analytical Corporation System, method and computer program for assembling process data of multi-database origins using a hierarchical display
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002043658A2 (en) 2000-11-06 2002-06-06 The Jackson Laboratory Fcrn-based therapeutics for the treatment of auto-immune disorders
WO2002040047A2 (en) 2000-11-20 2002-05-23 Canadian Blood Services Method for treating thrombocytopenia with monoclonal ivig
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
JP3945281B2 (ja) 2002-03-19 2007-07-18 富士ゼロックス株式会社 画像形成装置
WO2003101485A1 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Macrogenics, Inc. Cd16a binding proteins and use for the treatment of immune disorders
US7425620B2 (en) 2002-08-14 2008-09-16 Scott Koenig FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
CN1705491B (zh) 2002-09-27 2013-05-29 赞科股份有限公司 优化的Fc变体及其产生方法
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP4773947B2 (ja) 2003-01-09 2011-09-14 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 細菌細胞及び哺乳動物細胞における抗体発現のための二重発現ベクター系
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7700100B2 (en) 2003-01-13 2010-04-20 Macrogenics, Inc. FcγRIIB fusion proteins and compositions thereof
US7662928B2 (en) 2003-08-08 2010-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-FcRn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
JP4281800B2 (ja) 2004-09-30 2009-06-17 ブラザー工業株式会社 無線タグ通信装置、無線タグ、無線通信システム、及び無線通信方法
WO2006118772A2 (en) 2005-04-29 2006-11-09 The Jackson Laboratory Fcrn antibodies and uses thereof
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
EP2144930A1 (en) 2007-04-18 2010-01-20 ZymoGenetics, Inc. Single chain fc, methods of making and methods of treatment
MX2009012343A (es) 2007-05-14 2010-02-10 Biogen Idec Inc Regiones fc (sc fc) de cadena sencilla, polipeptidos de enlace que comprenden las mismas, y metodos relacionados con ello.
MX2009013004A (es) * 2007-06-01 2010-01-20 Univ Maryland Agentes de union al receptor de la region constante fc de inmunoglobulina.
WO2009070748A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Umber Systems System for collecting and analyzing data on application-level activity on a mobile data network
US9260525B2 (en) * 2008-02-04 2016-02-16 Xiao-Jia Chang Antibody molecules to oncogenic isoforms of fibroblast growth factor receptor-2 and uses thereof
US9096877B2 (en) 2009-10-07 2015-08-04 Macrogenics, Inc. Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use
GB201111291D0 (en) 2011-06-30 2011-08-17 Agco Int Gmbh Engine control system
BR112014010008A2 (pt) 2011-10-26 2018-09-04 Novartis Ag anticorpos monoclonais, seus usos e ácidos nucleicos
KR102041412B1 (ko) * 2011-12-30 2019-11-11 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 Ｆｃ 단편 유도체
GB201208370D0 (en) 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Antibodies
CN110042114A (zh) 2012-07-05 2019-07-23 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
KR101815265B1 (ko) 2013-06-20 2018-01-04 한올바이오파마주식회사 FcRn 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물
EP3074039A4 (en) 2013-11-26 2017-10-11 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Compositions and methods for modulating an immune response
BR112016014810B1 (pt) 2013-12-24 2023-12-26 Argenx Bvba Antagonistas de fcrn e métodos de uso
BR112017004189A2 (pt) 2014-09-17 2017-12-12 Affibody Ab dímero de ligação ao fcrn, proteína de fusão ou conjugado, e, composição
US10676526B2 (en) 2015-01-30 2020-06-09 Momenta Pharmaceuticals, Inc. FcRn antibodies and methods of use thereof
PL3268391T3 (pl) 2015-03-09 2022-01-03 Argenx Bvba Sposoby zmniejszania poziomów środków zawierających Fc w surowicy z zastosowaniem antagonistów FcRn
ES2956662T3 (es) 2015-05-12 2023-12-26 Syntimmune Inc Anticuerpos anti-FcRn humanizados con afinidad madurada
GB201508180D0 (en) 2015-05-13 2015-06-24 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
EP3325004A1 (en) 2015-07-17 2018-05-30 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for inducing immune tolerance by mucosal vaccination with fc-coupled antigens
CN106957365B (zh) 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb8及其应用
GB201618424D0 (en) 2016-11-01 2016-12-14 Argenix Bvba Treatment of antibody mediated disease
EA202091410A1 (ru) 2017-12-08 2021-01-13 Ардженкс Бвба Применение антагонистов fcrn для лечения генерализованной миастении гравис
EP3802590A2 (en) 2018-06-08 2021-04-14 Argenx BVBA Compositions and methods for treating immune thrombocytopenia
WO2020236695A1 (en) 2019-05-17 2020-11-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of anti-fcrn antibodies in the treatment of pemphighus and pemphigoid diseases

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6277375B1 (en) * 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO2002060919A2 (en) * 2000-12-12 2002-08-08 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
WO2006130834A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System IGGl ANTIBODIES WITH MUTATED FC PORTION FOR INCREASED BINDING TO FCRN RECEPTOR AND USES THEREOF
WO2009100105A2 (en) * 2008-02-04 2009-08-13 Attogen Inc. Inhibitors of oncogenic isoforms and uses thereof
WO2009131702A2 (en) * 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof
WO2010014909A1 (en) * 2008-08-01 2010-02-04 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunomodulatory peptides
WO2010106180A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Lfb Biotechnologies Optimized fc variants
WO2013074598A1 (en) * 2011-11-18 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES AND INCREASED FcRN BINDING

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARLOS VACCARO, JINCHUN ZHOU, RAIMUND J OBER, E SALLY WARD: "Engineering the Fc region of immunoglobulin G to modulate in vivo antibody levels", NATURE BIOTECHNOLOGY, GALE GROUP INC., vol. 23, no. 10, 1 October 2005 (2005-10-01), pages 1283 - 1288, XP055049342, ISSN: 10870156, DOI: 10.1038/nbt1143 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112142843A (zh) 2020-12-29
FR23C1004I1 (fr) 2023-03-10
MX2016008399A (es) 2016-12-15
KR20240033084A (ko) 2024-03-12
LT3087095T (lt) 2019-09-10
EP3087095B1 (en) 2019-08-07
CN106103476B (zh) 2020-11-27
SG11201605203UA (en) 2016-07-28
KR20220152546A (ko) 2022-11-16
IL246223A0 (en) 2016-07-31
HUE046822T2 (hu) 2020-03-30
DK3087095T3 (da) 2019-10-28
WO2015100299A1 (en) 2015-07-02
US20220275035A1 (en) 2022-09-01
AU2014369999B2 (en) 2019-12-12
ES2742682T3 (es) 2020-02-17
LTPA2022014I1 (ru) 2022-12-12
NZ722055A (en) 2020-02-28
FR23C1004I2 (fr) 2024-01-05
IL246223B (en) 2021-06-30
EP3087095A1 (en) 2016-11-02
SG10202009832XA (en) 2020-11-27
US20180179258A1 (en) 2018-06-28
PL3087095T3 (pl) 2020-03-31
JP2017501725A (ja) 2017-01-19
KR102452173B1 (ko) 2022-10-17
BR112016014810A2 (pt) 2017-09-19
PT3087095T (pt) 2019-10-09
EA201691304A1 (ru) 2016-10-31
MX368804B (es) 2019-10-17
KR20160111937A (ko) 2016-09-27
BR112016014810B1 (pt) 2023-12-26
NL301203I1 (ru) 2022-11-09
US20150218239A1 (en) 2015-08-06
AU2014369999A1 (en) 2016-07-07
JP6554473B2 (ja) 2019-07-31
EP3626738A1 (en) 2020-03-25
JP2019076103A (ja) 2019-05-23
NL301203I2 (nl) 2023-05-24
CA2934644A1 (en) 2015-07-02
FIC20230003I1 (fi) 2023-01-19
US11505585B2 (en) 2022-11-22
US10316073B2 (en) 2019-06-11
CA2934644C (en) 2023-11-21
CN106103476A (zh) 2016-11-09
HUS2200048I1 (hu) 2022-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220275035A1 (en) Fcrn antagonists and methods of use
JP7391132B2 (ja) ＦｃＲｎアンタゴニストを用いてＦｃ含有剤の血清レベルを低下させる方法
KR20140148411A (ko) 항-cd19 항체를 이용한 다발성 경화증의 치료