本申請案主張2016年5月25日提出申請之美國臨時申請案第62/341,574號及2016年12月23日提出申請之美國臨時申請案第62/438,754號之權益，各案件之全部內容皆以引用方式併入本文中。
術語
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬技術者所通常理解之意義相同之意義。 除非上下文另外明確指示，否則說明書及申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a、an)」及「該」包含複數個指示物。舉例而言，術語「細胞」包含複數個細胞，包含其混合物。 所有數字標號(例如pH、溫度、時間、濃度及分子量，包含範圍)皆係變化(+)或(-)增量0.1之近似值。因理解但並非總是明確陳述，所有數字標號皆在前面具有術語「約」。亦應理解但並非總是明確陳述，本文所闡述之試劑僅係實例且該等試劑之等效物在業內已知。 術語「結合劑」、「逆轉劑」及「解毒劑」可互換使用，且在特異性結合至因子XI及/或因子XIa之抗體(「抗FXI/FXIa抗體」)之背景中係指蛋白質、多肽或其複合物(例如抗個體遺傳型抗體或其片段(例如Fab片段)或特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如抗FXI/FXIa抗體之抗原結合區或可變區)之惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段)。在本文所提供之具體態樣中，結合劑能夠逆轉(例如部分地逆轉至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%)抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之一或多種抗凝血效應。在本文所提供之其他具體態樣中，結合劑能夠阻斷抗FXI/FXIa抗體至其抗原(例如FXI/FXIa)之結合。在一具體態樣中，如本文中所使用，術語「抗NOV1401」、「抗NOV1401抗體」、「抗NOV1401 Fab」、「NOV1401結合劑」、「NOV1401解毒劑」及諸如此類可互換使用且係指特異性結合至抗因子XI抗體NOV1401之結合劑或逆轉劑例如(抗個體遺傳型抗體或其片段) (參見表1)。NOV1401結合/逆轉劑之非限制性實例闡述於本文之(例如)表2中。 術語「抗個體遺傳型抗體」、「抗Id抗體」及「抗個體遺傳型抗體」可互換使用，且係指特異性結合至另一抗體之抗原結合區之抗體及其片段(例如Fab片段)。抗個體遺傳型抗體通常係針對靶抗體之抗原結合區或互補決定區(CDR) (個體遺傳型)所產生。抗個體遺傳型抗體可藉由各種先前所闡述方法產生，例如參見Pan等人，1995, FASEB J. 9:43-49。 術語「FXI蛋白」、「FXI抗原」及「FXI」可互換使用，且係指不同物種中之因子XI蛋白。因子XI係哺乳動物血漿凝血因子XI，其係以25-30 nM濃度作為在藉由限制性蛋白水解轉化成活性絲胺酸蛋白酶時參與凝血之內因性路徑之酶原存在於人類血漿中之醣蛋白。 術語「FXIa蛋白」、「FXIa抗原」及「FXIa」可互換使用，且係指不同物種中之活化FXI蛋白。經由凝血之接觸期或經由血小板表面上之凝血酶調介之活化來將酶原因子XI轉化成其活性形式，亦即凝血因子Xla (FXIa)。在因子XI之此活化期間，在兩條鏈中之每一者中裂解內部肽鍵，從而產生活化因子Xla，其係由藉由二硫鍵固持在一起之兩條重鏈及兩條輕鏈構成之絲胺酸蛋白酶。此絲胺酸蛋白酶FXIa將凝血因子IX轉化成IXa，其隨後活化凝血因子X (Xa)。Xa然後可調介凝血因子ll/凝血酶活化。舉例而言，人類FXI具有如表1中所陳述之序列(SEQ ID NO:1)，且已闡述於先前報導及文獻中(Mandle RJ Jr等人(1979) Blood;54(4):850；NCBI參考序列：AAA51985)。 在本發明背景中，術語「FXI」及「FXIa」 (及諸如此類)分別包含天然FXI及FXIa蛋白之突變體及變體，該等突變體及變體與上文所提及報導中所闡述之自然一級結構(胺基酸序列)實質上具有相同胺基酸序列。 在FXI背景中，本文所用之術語「催化結構域」、「絲胺酸蛋白酶催化結構域」及類似術語意指胺基酸Ile370至Val607，如自處於循環中之成熟蛋白質之N-末端處之Glu1所計數。其亦可闡述為FXI之C-末端處之殘基388-625。如本文中所使用，術語「活性位點」意指包括胺基酸His413、Asp462及Se557之催化三合體。(Bane及Gailani (2014) Drug Disc. 19(9)，其全部內容以引用方式併入本文中)。 本文所用之術語「抗體」意指完整抗體及其任一抗原結合片段(亦即「抗原結合部分」)或單鏈且衍生自特異性結合至抗原之免疫球蛋白分子。完整抗體係包括由二硫鍵相互連結之至少兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈之醣蛋白。每一重鏈包括重鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包括三個結構域：CH1、CH2及CH3。每一輕鏈包括輕鏈可變區(在本文中縮寫為VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包括一個結構域(CL)。可將VH及VL區進一步細分成超變性之區(稱為互補決定區(CDR))及較為保守之區(稱為框架區(FR))，二者間雜排列。各VH及VL由三個CDR及四個FR構成，其自胺基端至羧基端按下列順序佈置：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合結構域。抗體之恆定區可調介免疫球蛋白與宿主組織或因子(包含免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組份(Clq))的結合。在一些具體態樣中，抗體可為單株抗體、人類抗體、人類化抗體、駱駝化抗體或嵌合抗體。抗體可為任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、種類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。 如本文中所使用，術語抗體之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」係指完整抗體中保持能夠特異性結合至給定抗原(例如抗FXI/FXIa抗體，例如NOV1401)之一或多個片段。可藉由完整抗體之片段實施抗體之抗原結合功能。術語抗體之抗原結合部分或抗原結合片段內所涵蓋之結合片段之實例包含Fab片段，亦即由VL、VH、CL及CH1結構域組成之單價片段；F(ab)2片段，亦即包括兩個在鉸鏈區由二硫橋連接之Fab片段的二價片段；由VH及CH1結構域組成之Fd片段；由抗體單臂之VL及VH結構域組成的Fv片段；單結構域抗體(dAb)片段(Ward等人，1989 Nature 341:544-546)，其由VH結構域或VL結構域組成；及分離互補決定區(CDR)。 另外，儘管Fv片段之兩個結構域(VL及VH)係由單獨基因編碼，但可使用重組方法藉由人工肽連接體使該兩個結構域接合在一起，該人工肽連接體使該兩個結構域能夠形成其中VL及VH區配對形成單價分子之單一蛋白鏈(稱為單鏈Fv (scFv)；例如參見Bird等人，1988 Science 242:423-426；及Huston等人，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883)。該等單鏈抗體包含抗體之一或多個抗原結合部分或片段。使用熟習此項技術者已知之習用技術獲得該等抗體片段，且篩選以與完整抗體相同之方式使用之片段。 亦可將抗原結合片段納入單一結構域抗體、巨抗體、微抗體、細胞內抗體、二價抗體、三價抗體、四價抗體、v-NAR及bis-scFv中(例如參見Hollinger及Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136)。可將抗體之抗原結合部分移植至基於多肽(例如III型纖連蛋白(Fn3))之支架(參見美國專利第6,703,199號，其闡述纖連蛋白多肽單抗體)。 可將抗原結合片段納入包括一對串聯Fv區段(VH-CH1-VH-CH1)之單鏈分子，該等串聯Fv區段與互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區(Zapata等人，1995 Protein Eng. 8(10):1057-1062；及美國專利第5,641,870號)。 如本文中所使用，術語「親和力」係指單一抗原性位點處抗體與抗原之間之相互作用強度。在每一抗原性位點內，抗體「臂」之可變區經由弱非共價力與抗原諸多位點相互作用；相互作用愈大，則親和力愈強。如本文中所使用，術語抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之「高親和力」通常係指抗體或抗原結合片段具有10-9 M或更小之K
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(例如10-10 M或更小之K
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、10-11 M或更小之K
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、10-12 M或更小之K
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、10-13 M或更小之K
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、10-14 M或更小之K
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等)。 術語「胺基酸」係指天然及合成胺基酸以及以類似於天然胺基酸之方式起作用之胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然胺基酸係由遺傳密碼編碼者以及彼等稍後經修飾之胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸鹽及O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然胺基酸相同之基本化學結構(亦即結合至氫、羧基、胺基及R基團之α-碳)之化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。該等類似物具有經修飾之R基團(例如正白胺酸)或經修飾之肽主鏈，但保留與天然胺基酸相同之基本化學結構。胺基酸模擬物係指具有不同於胺基酸之一般化學結構之結構但以類似於天然胺基酸之方式起作用的化學化合物。 本文所用之術語「結合特異性」係指個別抗體組合位點僅與一種抗原性決定子反應之能力。 如本文中所使用，術語「免疫特異性結合」、「免疫特異性識別」、「特異性結合」及「特異性識別」係抗體背景中之類似術語且係指分子結合至一種抗原(例如表位或免疫複合物)，該結合由熟習此項技術者所理解。舉例而言，特異性結合至一種抗原之分子可通常以較低親和力結合至其他肽或多肽，如藉由(例如)免疫分析、Biacore™、KinExA 3000儀器(Sapidyne Instruments, Boise, ID)或業內已知之其他分析所測定。在一具體實施例中，免疫特異性結合至一種抗原之分子以大於在分子結合至另一抗原時之Ka至少2 log、2.5 log、3 log、4 log之Ka結合至抗原。在另一具體實施例中，免疫特異性結合至一種抗原之分子不與其他蛋白質交叉反應。 術語「FXI及/或FXIa調介」係指如下事實：FXI及/或FXIa藉由直接或間接活化因子IX (亦稱為FIX)、因子X (FX)及/或凝血酶及/或藉由結合至血小板受體來調介內因性及/或常見凝血路徑。 術語「止血」代表分別阻止損傷位點處之血液流動且在傷口癒合期間恢復血管通暢之主要機制。在正常止血及病理學血栓形成期間，三種機制同時激活：一級止血意指活化血小板與血管壁之相互作用、形成纖維蛋白及稱為纖維蛋白溶解之過程。 術語「凝血及凝血級聯」、「凝血級聯模型」及諸如此類係指用於穩定經形成以密封傷口之凝血之基於蛋白質之系統。凝血路徑係蛋白水解級聯。該路徑之每一酶作為酶原(以惰性形式)存在於血漿中，其在活化時發生蛋白水解裂解以自前體分子釋放活性因子。凝血級聯用作一系列控制活化過程之正向及負向反饋迴路。該路徑之最終目標係產生凝血酶，該凝血酶然後可將可溶性纖維蛋白原轉化成形成凝血之纖維蛋白。 生成凝血酶之過程可分成以下三個階段：內因性及外因性路徑，其提供生成活性凝血因子：FXa (活化因子-X)之替代途徑；及最終常見路徑，其使得形成凝血酶(Hoffman M.M.及Monroe D.M. (2005) Curr Hematol Rep. 4:391 -396；Johne J等人(2006) Biol Chem. 387:173-178)。 如本文中所使用，術語「管控(manage、managing及management)」係指關於個體之源自療法(例如預防劑或治療劑)之有益效應，其並不治癒疾病、病症或病狀(例如血栓形成或血栓栓塞性病症)。在某些實施例中，向個體投與一或多種療法(例如本文所闡述之結合劑或抗體)以「管控」血栓形成或血栓栓塞性病症、其一或多種症狀，從而預防病狀或病症之進展或惡化。 「血小板聚集」係指在血管發生破裂時暴露通常不與血流直接接觸之物質之過程。該等物質(主要係膠原及溫韋伯氏因子(von Willebrand factor))使得血小板黏附至破裂表面。在血小板黏附至表面後，其立即釋放將其他血小板吸引至損害區域(稱為血小板聚集)之化學物質。該兩個過程係停止出血之第一反應。 本文所用之「血栓栓塞性病症」或類似術語係指任一數量之內因性及/或常見凝血路徑發生異常激活或並非天然鈍化(例如無治療方式)之病狀或疾病。該等病狀包含(但不限於)血栓性中風、心房顫動、心房顫動中之中風預防(SPAF)、深層靜脈血栓形成、靜脈血栓栓塞及肺栓塞。該等病狀亦可包含導管變得形成血栓之導管相關病狀(例如腫瘤學患者中之希克曼導管(Hickman catheter))及管發生凝血之體外膜式氧合(ECMO)。 本文所用之「血栓栓塞性」或類似術語亦可係指任一數量之可使用本發明之抗FXI及/或FXIa Ab或其抗原結合片段以進行預防或治療或減小風險之下列病狀： -懷疑或證實心律失常(例如陣發性、持久性或永久性心房顫動或心房撲動)之個體之血栓栓塞； -心房顫動中之中風預防(SPAF)，其亞群體係經歷經皮冠狀動脈干預(PCI)之AF患者； -處於高出血風險下之患者中之急性靜脈血栓栓塞性事件(VTE)治療及延長二級VTE預防； -在短暫性缺血性發作(TIA)或非失能性中風之後之二級預防中之腦及心血管事件及預防具有竇性心律之心臟衰竭中之血栓栓塞性事件； -針對心律失常經歷心臟複律之個體中之左心房凝血形成及血栓栓塞； -在針對心律失常進行燒蝕程序之前、期間及之後之血栓形成； -靜脈血栓形成，此包含(但非排他性地)治療及二級預防下肢或上肢中之深層或淺層靜脈血栓形成、腹部及胸部靜脈中之血栓形成、竇血栓形成及頸靜脈中之血栓形成； -靜脈中之任一人工表面(例如導管或起搏器金屬線)上之血栓形成； -患有或不患有靜脈血栓形成之患者中之肺栓塞； -慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)； -破裂動脈粥樣硬化性斑塊上之動脈血栓形成、動脈內假體或導管上之血栓形成及明顯正常動脈中之血栓形成，此包含(但不限於)急性冠狀動脈症候群、ST升高心肌梗塞、非ST升高心肌梗塞、不穩定性心絞痛、支架血栓形成、動脈系統中之任一人工表面之血栓形成及患有或不患有肺高血壓之個體中之肺動脈之血栓形成； -經歷經皮冠狀動脈干預(PCI)之患者中之血栓形成及血栓栓塞； -心源性栓塞性及隱原性中風； -患有浸潤性及非浸潤性癌症惡性腫瘤之患者中之血栓形成； -留置導管上之血栓形成； -嚴重患病患者中之血栓形成及血栓栓塞； -心臟血栓形成及血栓栓塞，此包含(但非排他性地)在心肌梗塞之後之心臟血栓形成、與諸如心臟動脈瘤、心肌纖維化、心臟增大及機能不全、心肌炎等病狀及心臟中之人工表面相關之心臟血栓形成； -患有具有或不具有心房顫動之瓣膜性心臟病之患者中之血栓栓塞； -瓣膜性機械或生物假體上之血栓栓塞； -在簡單或複雜心臟畸形之心臟修復之後具有自然或人工心臟補片、動脈或靜脈導管之患者中之血栓栓塞； -在膝蓋置換手術、臀部置換手術及矯形手術、胸部或腹部手術之後之靜脈血栓形成及血栓栓塞； -在神經手術(包含顱內及骨髓干預)之後之動脈或靜脈血栓形成； -先天性或獲得性血栓形成傾向，包含(但非排他性地)萊頓第五因子、凝血酶原突變、抗凝血酶III、蛋白質C及蛋白質S缺陷、因子XIII突變、家族性異常纖維蛋白原血症、纖維蛋白溶酶原之先天缺陷、增加濃度之因子XI、鐮狀細胞疾病、抗磷脂症候群、自體免疫疾病、慢性腸病、腎病症候群、溶血性尿毒癥、骨髓增殖性疾病、瀰漫性血管內凝血、陣發性夜間血尿症及肝素誘導之血小板減少症； -慢性腎病中之血栓形成及血栓栓塞；及 -經歷血液透析之患者及經歷體外膜式氧合之患者中之血栓形成及血栓栓塞。 術語「嵌合抗體」係如下抗體分子：其中(a)恆定區或其部分發生改變、代替或交換，從而抗原結合位點(可變區)連接至不同或改變種類、效應物功能及/或物種之恆定區，或連接至賦予嵌合抗體之新性質之完全不同分子(例如酶、毒素、激素、生長因子、藥物等)；或(b)可變區或其部分經具有不同或改變之抗原特異性之可變區改變、代替或交換。舉例而言，小鼠抗體可藉由使用來自人類免疫球蛋白之恆定區代替其恆定區來進行修飾。因經人類恆定區代替，故嵌合抗體可保留其識別抗原之特異性，同時與原始小鼠抗體相比具有減小之人類中抗原性。 術語「保守修飾變體」適用於胺基酸序列及核酸序列二者。關於特定核酸序列，保守修飾之變體係指彼等編碼一致或基本上一致之胺基酸序列之核酸，或在該核酸不編碼胺基酸序列之情況下係指基本上一致之序列。由於基因密碼之簡並性，大量功能相同之核酸編碼任一給定蛋白質。舉例而言，密碼子GCA、GCC、GCG及GCU皆編碼胺基酸丙胺酸。因此，在丙胺酸由密碼子指定之每一位置，可在不改變所編碼多肽之情況下將該密碼子改變成所闡述之任一相應密碼子。該等核酸變化為「沉默變化」，其係保守修飾變化中之一種。本文中編碼多肽之每一核酸序列亦闡述核酸之每一可能沉默變化。熟習此項技術者應認識到，核酸中之每一密碼子(AUG (其通常為甲硫胺酸之唯一密碼子)及TGG (其通常為色胺酸之唯一密碼子)除外)可經修飾以產生功能相同之分子。因此，編碼多肽之核酸之每一沉默變化隱含在每一所闡述序列中。 對於多肽序列而言，「經保守修飾之變體」包含對多肽序列之個別取代、缺失或添加，此導致胺基酸經化學類似之胺基酸取代。提供功能類似胺基酸之保守取代表為本技術領域所熟知。該等保守修飾變體亦包含且不排除多型變體、種間同系物及本發明對偶基因。下列八組含有互為保守取代之胺基酸：1)丙胺酸(A)、甘胺酸(G)；2)天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)；3)天門冬醯胺(N)、麩醯胺酸(Q)；4)精胺酸(R)、離胺酸(K)；5)異白胺酸(I)、白胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)；6)苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)；7)絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)；及8)半胱胺酸(C)、甲硫胺酸(M) (例如參見Creighton, Proteins (1984))。在一些實施例中，術語「保守序列修飾」用於係指並不顯著影響或改變含有胺基酸序列之抗體之結合特性的胺基酸修飾。 術語「表位」意指能夠特異性結合至抗體之蛋白質決定子。表位通常由分子之化學活性表面基團(例如胺基酸或糖側鏈)組成，且通常具有特定三維結構特性以及特定電荷特性。構象性及非構象性表位之區別在於在存在變性溶劑時與構象性表位之結合喪失，但不喪失與非構象性表位之結合。若一種抗體展示與第二抗體在競爭性結合分析中藉由熟習此項技術者所熟知之任一方法結合相同表位，則此兩種抗體可視為「競爭」。 本文所用之術語「人類抗體」意欲包含具有可變區之抗體，在該等可變區中框架區及CDR區二者皆係衍生自人類起源之序列。另外，若該抗體含有恆定區，則該恆定區亦衍生自該等人類序列，例如人類種系序列或人類種系序列之突變形式。本發明之人類抗體可包含並非由人類序列編碼之胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機誘變或位點特異性誘變或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。 術語「人類單株抗體」係指具有可變區之展示單一結合特異性之抗體，在該等可變區中框架區及CDR區二者皆係衍生自人類序列。在一實施例中，使用用於篩選人類免疫球蛋白基因文庫之噬菌體顯示方法來製備人類單株抗體。 「人類化」抗體係保持非人類抗體之反應性同時在人類中之免疫原性較低之抗體。此可藉由(例如)保持非人類CDR區並使用其人類對應體(亦即恆定區以及可變區之框架部分)代替該抗體之剩餘部分來達成。例如參見Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984；Morrison及Oi, Adv. Immunol., 44:65-92, 1988；Verhoeyen等人，Science, 239:1534-1536, 1988；Padlan, Molec. Immun., 28:489-498, 1991；及Padlan, Molec. Immun., 31:169-217, 1994。人類改造技術之其他實例包含(但不限於) US 5,766,886中所揭示之Xoma技術。 術語「一致」或「一致性」百分比在兩個或更多個核酸或多肽序列之背景下係指兩個或更多個序列或子序列相同。若在對比窗口或指定區內如使用一種下列序列對比算法或藉由手動比對及目測檢查來進行最大程度相應性比較及比對時，兩個序列具有指定百分比之相同胺基酸殘基或核苷酸(亦即在指定區內或在未指定時在整個序列內60%一致，視情況65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致)，則兩個序列「實質上一致」。視情況，一致性存在於長度為至少約50個核苷酸(或10個胺基酸)之區域內或更佳存在於長度為100至500或1000或更多個核苷酸(或20、50、200或更多個胺基酸)之區域內。 就序列對比而言，一個序列通常將作為參考序列與測試序列進行比較。在使用序列對比算法時，將測試序列及參考序列輸入電腦中，必要時指定子序列坐標，且指定序列算法程式參數。可使用默認程式參數或可指定替代參數。然後序列對比算法將基於程式參數來計算測試序列相對於參考序列之序列一致性百分比。 本文所用之「對比窗口」包含提及選自由以下組成之群之任一數量之鄰接位置的區段：20至600、通常約50至約200、更通常約100至約150，其中在對兩個序列最佳比對後可將序列與相同數量之鄰接位置之參照序列進行比較。用於對比之序列之比對方法為本技術領域所熟知。用於對比之序列之最佳比對可藉由以下方法來實施：例如Smith及Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c之局部同源性算法、Needleman及Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970之同源性比對算法、Pearson及Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988之類似性方法之研究、該等算法之電腦化實施方案(Wisconsin Genetics軟體包，Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl中之GAP、BESTFIT、FASTA及TFASTA)或手動比對及目測檢查(例如參見Brent等人，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (Ringbou編輯，2003))。 適於測定序列一致性百分比及序列類似性之算法之兩個實例為BLAST及BLAST 2.0算法，其分別闡述於Altschul等人(1977)，Nuc. Acids Res. 25:3389-3402；及Altschul等人(1990)，J. Mol. Biol. 215:403-410中。用於實施BLAST分析之軟體可經由National Center for Biotechnology Information公開獲得。此算法首先涉及藉由識別詢問序列中之代碼長度縮寫W來識別高評分序列對(HSP)，在代碼與一個資料庫序列中具有相同長度之代碼進行比對時，其將與某一正臨限評分T相匹配或滿足其條件。T稱為相鄰代碼評分臨限值(Altschul等人，見上文)。該等初始相鄰字符串用作種子以供開始發現含有其之更長HSP的搜尋。將字符串沿每一序列之兩個方向延伸，只要可使累積比對評分增加即可。對於核苷酸序列而言，累積評分係使用參數M (匹配殘基對之獎勵評分；始終＞0)及N (不匹配殘基之懲罰評分；始終＜ 0)來計算。對於胺基酸序列而言，使用評分矩陣來計算累積評分。字符串在每一方向上之延伸在以下時候停止：累積比對評分自其所達成之最大值降低了X數量；由於一或多個負評分殘基比對累加而使累積評分變為零或負值；或達到任一序列之端點。BLAST算法參數W、T及X決定比對之靈敏度及速度。BLASTN程式(對於核苷酸序列)使用之缺省值有長度(W) 11、預期值(E) 10、M=5、N=-4及兩條鏈之對比值。對於胺基酸序列而言，該BLASTN程式使用之缺省值有代碼長度3及預期值(E) 10及BLOSUM62評分矩陣(參見Henikoff及Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915, 1989)比對(B) 50、預期值(E) 10、M=5、N=-4及兩條鏈之對比值。 BLAST算法亦實施兩個序列間之類似性之統計分析(例如參見Karlin及Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787, 1993)。BLAST算法所提供之類似性之一個量度為最小和概率(P(N))，其提供兩個核苷酸或胺基酸序列間偶爾匹配之概率之指示。舉例而言，若在測試核酸與參考核酸之比較中最小總和概率小於約0.2、更佳小於約0.01且最佳小於約0.001，則認為該核酸與該參照序列相似。 兩個胺基酸序列間之一致性百分比亦可使用E. Meyers及W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988)之算法並使用PAM120權重殘基表、12之間隔長度罰分及4之間隔罰分測定，該算法已納入ALIGN程式(2.0版)中。另外，兩個胺基酸序列間之一致性百分比可使用Needleman及Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970)算法並使用Blossom 62矩陣或PAM250矩陣及16、14、12、10、8、6或4之間隔權重及1、2、3、4、5或6之長度權重測定，該算法已納入GCG軟件包(可在全球資訊網gcg.com上獲得)中之GAP程式中。 除上述序列一致性百分比外，兩個核酸序列或多肽實質上一致之另一指示為第一核酸編碼之多肽與針對第二核酸編碼之多肽產生之抗體在免疫上具有交叉反應性，如下文所闡述。因此，多肽通常與第二多肽實質上一致，舉例而言，其中兩個肽僅因保守取代而不同。兩個核酸序列實質上一致之另一指示為兩個分子或其補體在嚴格條件下彼此融合，如下文所闡述。指示兩個核酸序列實質上一致之又一情形係可使用相同引子來擴增序列。 本文所用之術語「經分離抗體」係指實質上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(舉例而言，特異性結合FXI及/或FXIa之經分離抗體實質上不含特異性結合除FXI及/或FXIa外之抗原的抗體)。然而，特異性結合FXI及/或FXIa之經分離抗體可與其他抗原具有交叉反應性。此外，經分離抗體可實質上不含其他細胞材料及/或化學物質。 術語「同型」係指由重鏈恆定區基因提供之抗體種類(例如IgM、IgE、IgG，例如IgG1或IgG4)。同型亦包含該等種類中之一者之經修飾形式，其中已作出修飾以改變Fc功能，例如以增強或減少效應物功能或結合至Fc受體。 本文所用之術語「Kassoc」或「Ka」意欲係指特定抗體-抗原相互作用之締合速率，而本文所用之術語「Kdis」或「Kd」意欲係指特定抗體-抗原相互作用之解離速率。本文所用之術語「KD」意欲指解離常數，其係自kd對ka之比率(亦即kd/ka)獲得且以莫耳濃度(M)表示。可使用業內充分確立之方法來測定抗體之KD值。測定抗體之KD之方法包含使用生物感測器系統(例如BiacoreTM系統)量測表面電漿共振或藉由溶液平衡滴定(SET)量測溶液中之親和力。 本文所用之術語「單株抗體」或「單株抗體組合物」係指具有單一分子組成之抗體分子製劑。單株抗體組合物對於特定表位顯示單一結合特異性及親和力。 術語「核酸」在本文中可與術語「多核苷酸」互換使用，且係指呈單鏈或雙鏈形式之去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或經修飾主鏈殘基或鍵之核酸，其係合成的、天然的及非天然的，其具有與參考核酸類似之結合性質，且其係以與參考核苷酸類似之方式代謝。該等類似物之實例包含(但不限於)硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、磷酸甲酯、對掌性-磷酸甲酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。 除非另外指示，否則特定核酸序列亦隱含地涵蓋其經保守修飾變體(例如簡並密碼子取代)及互補序列以及明確指出之序列。具體而言，可藉由產生一或多個所選(或全部)密碼子之第三位置經混合鹼基及/或去氧肌苷殘基取代之序列達成簡並密碼子取代(Batzer等人，Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991；Ohtsuka等人，J. Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985；及Rossolini等人，Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994)。 術語「可操作地連接」係指兩個或更多個多核苷酸(例如DNA)區段間之功能關係。通常，該術語係指轉錄調控序列與轉錄序列之功能關係。舉例而言，若啟動子或增強子序列刺激或調節適當宿主細胞或其他表現系統中之編碼序列之轉錄，則其係可操作地連接至編碼序列。通常，可操作地連接至轉錄序列之啟動子轉錄調控序列與轉錄序列物理上鄰接，亦即其係順式作用。然而，一些轉錄調控序列(例如增強子)不需要物理上鄰接，或緊鄰其增強轉錄之編碼序列定位。 本文所用之術語「最佳化」意指核苷酸序列已經改變以使用產生細胞或有機體(通常真核細胞，例如，畢赤酵母菌屬(Pichia)細胞、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)或人類細胞)中之較佳密碼子編碼胺基酸序列。經最佳化核苷酸序列係經改造以完全或儘可能多地保持由起始核苷酸序列(其亦稱為「親代」序列)初始編碼之胺基酸序列。本文中之經最佳化序列已經改造以具有在哺乳動物細胞中較佳之密碼子。然而，本文中亦設想該等序列在其他真核細胞或原核細胞中之經最佳化表現。由經最佳化核苷酸序列編碼之胺基酸序列亦稱為經最佳化。 術語「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且係指胺基酸殘基之聚合物。該等術語適用於一或多個胺基酸殘基為相應天然胺基酸之人工化學模擬物之胺基酸聚合物以及天然胺基酸聚合物及非天然胺基酸聚合物。除非另外指示，否則特定多肽序列亦隱含地涵蓋其保守修飾之變體。 本文所用之術語「重組人類抗體」包含藉由重組方式製備、表現、產生或分離之所有人類抗體，例如自人類免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體之動物(例如小鼠)或自其製備之融合瘤分離之抗體、自經轉型以表現人類抗體之宿主細胞(例如自轉染瘤)分離之抗體、自重組之組合人類抗體文庫分離之抗體，及藉由任何涉及將人類免疫球蛋白基因、序列之全部或一部分剪接至其他DNA序列之其他方式製備、表現、產生或分離之抗體。該等重組人類抗體具有其中框架區及CDR區係衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區。然而，在某些實施例中，該等重組人類抗體可經歷活體外誘變(或者，在使用人類Ig序列轉基因動物時，經歷活體內體細胞誘變)，且因此重組抗體之VH及VL區的胺基酸序列儘管衍生自人類種系VH及VL序列並與其相關，但其係可不天然出現於人類活體內抗體種系譜中之序列。 術語「重組宿主細胞」(或簡稱為「宿主細胞」)意指已引入重組表現載體之細胞。應理解，該等術語不僅意欲係指特定個體細胞而且亦係指此一細胞之子代。由於突變或環境影響可使後續各代發生某些改變，因此，該子代實際上可能與母細胞不同但卻仍涵蓋於本文所用之術語「宿主細胞」之範圍內。 術語「個體」包含人類及非人類動物。非人類動物包含所有脊椎動物(例如：哺乳動物及非哺乳動物)，例如非人類靈長類動物(例如：食蟹猴)、綿羊、兔、狗、牛、雞、兩棲動物及爬行動物。除非指明，否則術語「患者」或「個體」在本文中可互換使用。如本文中所使用，術語「食蟹猴(cyno或cynomolgus)」係指食蟹猴(cynomolgus monkey
、
Macaca fascicularis)。在本文所提供之一些具體態樣中，患者或個體係人類。 在一實施例中，本文所用之術語「治療」 (「treating」或「treatment」)任一疾病或病症(例如血栓栓塞性病症)係指改善該疾病或病症(亦即，減緩或阻止或降低該疾病或其至少一種臨床症狀的發展)。在另一實施例中，「治療」 (「treating」或「treatment」)係指減輕或改善包含至少一個彼等患者可無法辨別者之物理參數。在又一實施例中，「治療」係指在物理方面調節疾病或病症(例如穩定可感受到之症狀)或在生理學方面調節疾病或病症(例如穩定物理參數)或二者兼有。在再一實施例中，「治療」 (「treating」或「treatment」)係指預防或延遲疾病或病症之發作或發展或進展。 「預防」 (在其涉及本文所闡述之適應症(包含(例如)血栓栓塞性病症)時)意指預防或減緩處於患有血栓栓塞性病症風險或處於惡化風險之患者中之(例如)如下文所闡述血栓栓塞性疾病參數之該惡化之任何作用。 術語「載體」意欲係指能夠運輸其已連接之另一多核苷酸之多核苷酸分子。一類載體為「質體」，其係指其他DNA區段可接合至其中之環形雙鏈DNA環。另一類載體為病毒載體，例如腺相關病毒載體(AAV或AAV2)，其中可將其他DNA區段接合至病毒基因體中。某些載體能夠在已引入其之宿主細胞中進行自主複製(例如具有細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中時整合至該宿主細胞之基因體中，並藉此隨宿主基因體一同複製。此外，某些載體能夠引導與其操作性連接之基因的表現。該等載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡稱為「表現載體」)。一般而言，在重組DNA技術中可使用之表現載體經常呈質體形式。在本說明書中，「質體」與「載體」可互換使用，此乃因質體係載體之最常用形式。然而，本發明意欲包含可提供等效功能之其他形式之表現載體，例如病毒載體(例如複製缺陷型逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。
因子 XI/XIa 及抗因子 XI/FXIa 抗體
此部分闡述本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段)特異性結合之實例性抗FXI/FXIa抗體(例如表1中所闡述之抗體)，其中逆轉結合劑能夠逆轉該等抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血效應及/或抑制該等抗FXI/FXIa抗體至FXI及/或FXIa之結合。 FXI在內因性及外因性凝血路徑二者中及在橋接血漿止血之引發期及擴增期中保持具有重要作用。因子XIIa及凝血酶皆可活化FXI，從而引起持續凝血酶生成及纖維蛋白溶解抑制。FXI 「在血管損傷之後」於高組織因子環境中之正常止血中發揮微小作用，而其似乎在血栓形成中發揮關鍵作用。嚴重因子XI缺陷涉及缺血性中風及靜脈血栓栓塞性事件之較低發生率(Salomon等人，2008；Salomon等人(2011) Thromb Haemost.; 105:269-73)。具有嚴重因子XI缺陷之個體中之出血表現不常見、通常較為溫和、係損傷誘導性且較佳地影響具有增加之纖維蛋白溶解活性之組織(例如口腔黏膜、鼻黏膜及泌尿道) (Salomon等人2011)。關節器官中之出血極為罕見或不存在。 血漿凝血係血液中之凝血因子相互作用且發生活化且最終引起纖維蛋白生成及凝血形成之順序過程。在凝血之經典級聯模型中，纖維蛋白生成過程可藉由兩種不同路徑來引發，亦即分別係內因性路徑及外因性路徑(Mackman, 2008)。 在外因性路徑中，血管損傷使得血管外組織因子(TF)與因子VII (FVII)相互作用且將其活化，此將依序活化因子X及凝血酶原。活性凝血酶最終將可溶性纖維蛋白原轉化成纖維蛋白。外因性路徑對於止血極為重要，干擾此路徑中之凝血因子會引起出血風險。 在內因性路徑中，因子XII可在一些情形下藉由稱為接觸活化之過程活化。活化因子XIIa之生成會依序活化因子XI及因子IX。隨著因子IXa活化因子X，外因性路徑及內因性路徑在此階段匯合(在常見路徑中)。藉由經由前饋迴路(其中凝血酶獨立於因子XII來活化因子XI)擴增自身生成來加強凝血酶活性。此前饋迴路有助於持續血栓生長，但僅最小程度地涉及止血，此乃因藉由血管外組織因子達成之強活化足以形成凝血。內因性路徑由此並不實質上涉及止血(Gailani及 Renné (2007) Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007, 27(12):2507-13, Müller、Gailiani及Renné 2011)。 使用各種方式抑制各種物種中之FXI或FXIa之臨床前研究有助於驗證此目標。FXI-/-小鼠可抵抗實驗性靜脈(Wang等人(2006) J Thromb Haemost；4:1982-8)及動脈(Wang等人(2005) J Thromb Haemost；3:695-702)血栓形成。使用阻斷FXIIa之FXI活化之抗體(Ab, 14E11)治療小鼠使得可抑制實驗性血栓形成(Cheng等人(2010) Blood, 116:3981-9)且減小缺血性中風之小鼠模型中的腦梗塞大小(Leung等人(2012) Transl Stroke Res 2012；3:381-9)。在投與阻斷FXIa對FIX之結合及活化之抗FXI抗體之狒狒中，在經膠原塗覆之血管移植物上觀察到富血小板血栓之減小之生長(Tucker等人(2009) Blood 2009；113:936-44)，且使用14E11在此模型中發現類似結果(Cheng 2010)。在該等研究中之任一者未發現過量出血。 在小鼠(Zhang等人(2010) Blood 2010；116:4684-92)、食蟹猴(Younis等人(2012) Blood 2012；119:2401-8)及狒狒(Crosby等人(2013) Arterioscler Thromb Vasc Biol 2013；33:1670-8)中使用反義寡核苷酸阻斷FXI合成會產生並不過量出血之抗血栓及抗凝血效應。此外，已藉由在大鼠(Schumacher等人(2007) Eur J Pharmacol 2007；570:167-74)及兔(Wong等人(2011) J Thromb Thrombolysis 2011；32:129-37)中之靜脈及動脈血栓形成模型中使用低分子量抑制劑阻斷FXIa來產生類似效應。 具有嚴重FXI缺陷之患者極少自發出血且其展示僅輕微之創傷誘導性出血，具有高纖維蛋白溶解活性之組織除外。嚴重FXI缺陷之稀有性使得需要使用群體研究來揭示該等患者相對於一般群體之血栓特徵。值得注意地，該等研究報導，缺血性中風(Salomon 2008)及深層靜脈血栓形成(DVT) (Salomon等人(2011) Blood 2008；111: 4113-17)之發生率在該等患者中有所減小。因此，在115名具有嚴重FXI缺陷之患者中所觀察之缺血性中風數(N = 1)小於(p ＜ 0.003)以色列一般群體中之預期發生率(N = 8.6)，而具有嚴重FXI缺陷之患者中之DVT發生率(N = 0)較低於(p ＜ 0.019)對照群體中之預期值(N = 4.7)。相反，FXI濃度高於90%之個體具有兩倍之發生DVT之風險(Meijers等人(2000) N Engl J Med. 2000；342:696-701)。 最近，使用FXI反義療法或標準護理(依諾肝素)治療經歷全膝置換(誘發DVT之程序)之患者。反義組(300 mg)展示與標準護理相比靜脈血栓形成之發生率降低7倍且具有較少(不顯著)出血事件(Büller等人(2014) N Engl J Med. 372(3):232-40. doi: 10.1056/NEJMoa1405760. Epub 2014 Dec 7)。 已闡述特異性結合至FXI及/或FXIa之抗體。例如參見PCT國際公開案第WO2017/015619號、第WO2016/207858號、第WO 2013/167669號、第WO2009/067660號、第WO 2009/154461號及第WO 2010/080623號，其中之每一者之全部內容皆以引用方式併入本文中。抗FXI/FXIa抗體之非限制性實例包含：076D-M007-H04、076D-M007-H04-CDRL3-N110D及076D-M028-H17，如WO 2013/167669中所闡述；1A6，如WO2009/067660中所闡述；及14E11，如WO 2010/080623中所闡述。在具體態樣中，本文提供結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其特異性結合至抗FXI/FXIa抗體076D-M007-H04、076D-M007-H04-CDRL3-N110D或076D-M028-H17，且能夠抑制抗FXI/FXIa抗體至FXI/FXIa之結合及/或能夠逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應。在具體態樣中，本文提供結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其特異性結合至與076D-M007-H04、076D-M007-H04-CDRL3-N110D或076D-M028-H17競爭(例如以劑量依賴性方式)結合至FXI/FXIa之抗FXI/FXIa抗體，且能夠抑制抗FXI/FXIa抗體至FXI/FXIa之結合及/或能夠逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應。 表1提供用於人類FXI及抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401及NOV1090)之實例性胺基酸序列及相應編碼核苷酸序列。特定而言，表1提供用於抗體NOV1401、NOV1090、AM1、AM2、AM3及AM4之下列胺基酸序列以及相應編碼核苷酸序列：重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)、重鏈、輕鏈、VH互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3、VL互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑特異性結合至表1中所闡述之抗FXI/FXIa抗體，且能夠抑制(例如以劑量依賴性方式)抗FXI/FXIa抗體至人類FXI/FXIa之結合及/或逆轉抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血活性。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab))特異性結合至抗FXI/FXIa抗體NOV1401、NOV1090、AM1、AM2、AM3及/或AM4，且能夠抑制抗FXI/FXIa抗體至人類FXI/FXIa之結合及/或能夠逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應。 抗體NOV1401係特異性結合人類FXI之催化結構域之人類抗體，且先前已闡述，例如參見2016年6月24日提出申請之PCT國際專利申請案第PCT/IB2016/053790號(PCT國際公開案第WO2016/207858號)及2016年6月24日提出申請之美國專利申請案第15/192,020號，其中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中。抗體NOV1401能夠結合人類FXI酶原以及FXIa。NOV1401已闡述可接觸由下列殘基形成之人類FXI/FXIa表位：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604 (參見PCT國際公開案第WO2016/207858號)。在具體態樣中，抗體NOV1401接觸人類FXI中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多個或所有選自以下之胺基酸殘基：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。 另外，已闡述NOV1401之互補位(參見PCT國際公開案第WO2016/207858號)。特定而言，NOV1401之輕鏈之下列殘基接觸人類FXI/FXIa：Ser27、Gly30、Ser31、Asn32、Asp33、Tyr50、Lys51、Tyr53、Asn54、Lys67、Trp92、Gln94、Arg95、Phe97、Asp98及Val99 (殘基係參照SEQ ID NO: 25來編號)；且NOV1401之重鏈之下列殘基接觸人類FXI/FXIa：Phe27、Thr28、Ser30、Thr31、Ala33、Trp47、Ser52、Tyr59、Tyr60、Glu99、Ser101、Tyr102、Leu103、Tyr104、及 Ser105 (殘基係參照SEQ ID NO: 14來編號)。因此，在具體態樣中，本文提供結合至NOV1401之抗原結合區之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))，且該逆轉結合劑接觸NOV1401之輕鏈及重鏈中形成互補位之一或多個殘基。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸NOV1401之輕鏈中下列殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多者或全部：Ser27、Gly30、Ser31、Asn32、Asp33、Tyr50、Lys51、Tyr53、Asn54、Lys67、Trp92、Gln94、Arg95、Phe97、Asp98及Val99 (殘基係參照SEQ ID NO: 25來編號)。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸NOV1401接觸人類FXI/FXIa之重鏈中下列殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多者或全部：Phe27、Thr28、Ser30、Thr31、Ala33、Trp47、Ser52、Tyr59、Tyr60、Glu99、Ser101、Tyr102、Leu103、Tyr104及Ser105 (殘基係參照SEQ ID NO: 14來編號)。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個選自NOV1401之輕鏈及/或重鏈中形成互補位之下列殘基之胺基酸殘基：(i) NOV1401之輕鏈中之Ser27、Gly30、Ser31、Asn32、Asp33、Tyr50、Lys51、Tyr53、Asn54、Lys67、Trp92、Gln94、Arg95、Phe97、Asp98及Val99 (殘基係參照SEQ ID NO: 25來編號)；及(ii) NOV1401之重鏈中之Phe27、Thr28、Ser30、Thr31、Ala33、Trp47、Ser52、Tyr59、Tyr60、Glu99、Ser101、Tyr102、Leu103、Tyr104及Ser105 (殘基係參照SEQ ID NO: 14來編號)。 本文表1中所闡述之其他抗FXI/FXIa抗體包含NOV1090、AM1、AM2、AM3及AM4。抗體NOV1401及NOV1090共有相同CDR。抗體AM1、AM2、AM3及AM4係抗體NOV1090之實例性親和力成熟變體。 在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)結合至與NOV1401競爭(例如以劑量依賴性方式)結合至人類FXI/FXIa之抗FXI/FXIa抗體。在其他態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至如同NOV1401結合至FXI/FXIa之相同表位之抗FXI/FXIa抗體。在特定態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體，該抗FXI/FXIa抗體接觸人類FXI中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多個或所有選自以下之胺基酸殘基：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體不接觸人類FXI/FXIa之胺基酸殘基Asp480。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體不接觸人類FXI/FXIa之一或多個選自以下之胺基酸殘基： His414、Ser477、Asp480、Lys572、Asp569及Gly598。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體接觸人類FXI/FXIa之以下胺基酸殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8或更多者或全部：Leu415、Cys416、His431、Cys432、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Glu476、Arg548、His552、Ser575、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至接觸人類FXI/FXIa之胺基酸殘基His431及Ser575之抗FXI/FXIa抗體。 在特定態樣中，抗FXI/FXIa抗體具有下列抗凝血活性(其可藉由本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體或其片段(例如Fab))逆轉(例如部分地逆轉))中之一或多者：(i) aPTT延長，如藉由aPTT分析所測定；(ii)在凝血酶生成分析(TGA)中於人類血漿中凝血酶之量之減小；及(iii)抑制因子XI活性。該等活性可易於使用業內所闡述及本文所提供之分析來量測。舉例而言，TGA及aPTT分析闡述於業內及本文中(例如實例部分)。在其他態樣中，可量測外因性凝血路徑之其他生物標記物以測定抗凝血活性，舉例而言凝血酶原時間(PT)分析及凝血酶時間(TT)分析。用於抗凝血/凝血活性之分析之其他非限制性實例包含發色分析(例如蛇靜脈酶發色分析(ECA))、蛇靜脈酶凝血時間(ECT)分析及抗因子Xa活性分析。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)能夠逆轉(例如部分地逆轉)該等抗凝血活性中之一或多者。在特定態樣中，本文所提供之逆轉結合劑能夠減小投與抗FXI/FXIa抗體之患者中之出血時間。
表 1.FXI/FXIa 抗體、 Fab 及 FXI/FXIa 蛋白之實例 結合劑 / 逆轉劑
在具體態樣中，本文提供特異性結合結合人類因子XI (「FXI」)及/或因子XIa (「FXIa」)之靶抗體(「抗FXI/FXIa抗體」)之逆轉劑或結合劑(例如惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段及抗個體遺傳型抗體及其片段)。在特定態樣中，該等逆轉劑或結合劑抑制靶抗體之抗凝血活性。在一具體態樣中，該等逆轉劑或結合劑阻斷靶抗體至人類FXI及/或FXIa之結合。在一具體態樣中，該等逆轉劑或結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段)結合至靶抗FXI/FXIa抗體之抗原結合區且阻斷靶抗體至人類FXI及/或FXIa之結合。 在一具體態樣中，本文提供一種逆轉劑或結合劑，其係特異性結合至靶抗FXI/FXIa抗體(例如表1中所闡述之抗體)且能夠抑制靶抗體之抗凝血活性及/或能夠阻斷靶抗體至人類FXI及/或FXIa之結合之惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段。人類FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段之活性可使用業內所述方法來測定，例如檢測經螢光標記之肽之裂解之生物化學分析，該經螢光標記之肽可藉由FXIa來裂解(例如具有序列D-Leu-Pro-Arg*Rh110-D-Pro之經螢光標記之肽(產品編號BS-2494；Biosyntan GmbH, Berlin, Germany)，其中「*」指示易斷裂鍵，D-Leu：D-白胺酸，Pro：脯胺酸，Arg：精胺酸，Rh110：玫瑰紅110，D-Pro：D-脯胺酸)。在一特定態樣中，作為惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段之逆轉劑或結合劑包括人類FXI之催化結構域之不完整片段或基本上由其組成，且包括人類FXI之下列胺基酸殘基中之一或多者：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在一特定態樣中，作為惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段之逆轉劑或結合劑包括人類FXI (例如SEQ ID NO: 1)之胺基酸殘基 400、401、402、403、404或405最多胺基酸殘基600、601、602、603、604或605之片段或其大約100-150個胺基酸殘基的片段或基本上由其組成。在一具體態樣中，在一特定態樣中，本文所闡述作為惰性FXI/FXIa源多肽或蛋白質片段之逆轉劑或結合劑包括一或多個突變，該等突變致使片段為惰性，例如如藉由檢測經螢光標記之肽之裂解之生物化學分析所量測。可使用逆轉劑之FXIa變體之其他非限制性實例闡述於PCT國際公開案第WO2017/015558號中。 在一態樣中，本發明係關於一種逆轉劑或結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其特異性結合結合人類因子XI (「FXI」)及/或因子XIa (「FXIa」)之靶抗體(「抗FXI/FXIa抗體」，例如表1中所闡述之抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)或其親和力成熟變體(例如抗體AM1、AM2、AM3或AM4))。在一特定態樣中，本文提供特異性結合在催化結構域內結合人類因子XI (「FXI」)及/或因子XIa (「FXIa」)之靶抗體(「抗FXI/FXIa抗體」，例如抗體NOV1401)之結合劑，其中結合劑抑制靶抗體之抗凝血活性，其中結合劑以1 nM或更小之解離常數(K
D
)結合至靶抗體，且其中結合劑能夠將靶抗體延遲活化部分凝血活素時間(aPTT)之能力抑制至少35%。在其他具體態樣中，結合劑能夠將靶抗體延遲活化部分凝血活素時間(aPTT)之能力抑制至少40%。在其他具體態樣中，結合劑能夠將靶抗體延遲活化部分凝血活素時間(aPTT)之能力抑制至少50%。在其他具體態樣中，結合劑能夠將靶抗體延遲活化部分凝血活素時間(aPTT)之能力抑制至少60%。在其他具體態樣中，結合劑能夠將靶抗體延遲活化部分凝血活素時間(aPTT)之能力抑制至少70%。測定aPTT及aPTT延遲之方法在業內已闡述，且亦闡述於本文中(例如實例部分)。 在具體態樣中，本文提供抑制或逆轉靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗凝血活性之結合劑，其中結合劑係結合抗原之人類抗體片段(例如人類Fab)。在特定態樣中，本文提供抑制或逆轉靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑之抗凝血活性，其結合劑係人類抗個體遺傳型Fab。在特定態樣中，本文提供抑制或逆轉靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗凝血活性之結合劑，其中結合劑係人類IgG1、IgG2或IgG4抗體或其變體。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體包括(i)包括SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包括SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)；或(ii)包括SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈及包括SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體包括(i)重鏈可變區(VH)；其包括與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列至少90%或95%一致之胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包括與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列至少90%或95%一致之胺基酸序列；或(ii)重鏈，其包括與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列至少90%或95%一致之胺基酸序列；及輕鏈，其包括與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列至少90%或95%一致之胺基酸序列。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體包括(i) VH，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(ii) VL，其包括含有SEQ ID NO: 23之VL之胺基酸序列之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體包括： (A)(i) VH，其包括分別包括SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(ii) VL，其包括分別包括SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3； (B)(i) VH，其包括分別包括SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(ii) VL，其包括分別包括SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3； (C)(i) VH，其包括分別包括SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(ii) VL，其包括分別包括SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3；或 (D)(i) VH，其包括分別包括SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(ii) VL，其包括分別包括SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3； 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體與另一包括含有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈的抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)競爭結合至FXI/FXIa。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體與另一包括含有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈的抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)結合相同表位。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體結合人類FXI及/或FXIa之包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多個或所有選自以下之胺基酸殘基之表位：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，且其中靶抗FXI/FXIa抗體接觸人類FXI之選自以下之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多個或所有胺基酸殘基：Pro410、Arg413、Leu415、Cys416、His431、Cys432、Tyr434、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Met474、Ala475、Glu476、Tyr521、Arg522、Lys523、Leu524、Arg525、Asp526、Lys527、Arg548、His552、Ser575、Ser594、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體不接觸人類FXI/FXIa之胺基酸殘基Asp480。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體不接觸人類FXI/FXIa之一或多個選自以下之胺基酸殘基：His414、Ser477、Asp480、Lys572、Asp569及Gly598。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至抗FXI/FXIa抗體(其係NOV1401)或與NOV1401競爭結合至人類FXI/FXIa，且該抗FXI/FXIa抗體接觸人類FXI/FXIa之以下胺基酸殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8或更多者或全部：415、Cys416、His431、Cy s432、Gly435、Glu437、Tyr472、Lys473、Glu476、Arg548、His552、Ser575、Trp595、Gly596、Glu597、Arg602、Glu603及Arg604。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如人類抗個體遺傳型抗體)結合至接觸人類FXI/FXIa之胺基酸殘基His431及Ser575之抗FXI/FXIa抗體。在具體態樣中，本文所提供結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之逆轉結合劑並非抗體C4 (靶向抗FXI/FXIa抗體DEF之抗個體遺傳型抗體，如PCT國際公開案第WO2017/015619號中所闡述)。 在具體態樣中，本文提供結合至NOV1401之抗原結合區之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))，且該逆轉結合劑接觸NOV1401之輕鏈及重鏈中形成互補位之一或多個殘基。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab)) 在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸NOV1401之輕鏈中下列殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多者或全部：Ser27、Gly30、Ser31、Asn32、Asp33、Tyr50、Lys51、Tyr53、Asn54、Lys67、Trp92、Gln94、Arg95、Phe97、Asp98及Val99 (殘基係參照SEQ ID NO: 25來編號)。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸NOV1401接觸人類FXI/FXIa之重鏈中下列殘基中之1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多者或全部：Phe27、Thr28、Ser30、Thr31、Ala33、Trp47、Ser52、Tyr59、Tyr60、Glu99、Ser101、Tyr102、Leu103、Tyr104及Ser105 (殘基係參照SEQ ID NO: 14來編號)。在具體態樣中，本文所提供之逆轉結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab))在抗原結合區內結合至NOV1401，且接觸1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個選自NOV1401之輕鏈及/或重鏈中形成互補位之下列殘基之胺基酸殘基：(i) NOV1401之輕鏈中之Ser27、Gly30、Ser31、Asn32、Asp33、Tyr50、Lys51、Tyr53、Asn54、Lys67、Trp92、Gln94、Arg95、Phe97、Asp98及Val99 (殘基係參照SEQ ID NO: 25來編號)；及(ii) NOV1401之重鏈中之Phe27、Thr28、Ser30、Thr31、Ala33、Trp47、Ser52、Tyr59、Tyr60、Glu99、Ser101、Tyr102、Leu103、Tyr104及Ser105 (殘基係參照SEQ ID NO: 14來編號)。 在特定態樣中，本文所提供之抗FXI/FXIa抗體結合劑能夠減小、抑制或逆轉(例如部分地逆轉)由抗FXI/FXIa抗體調介之下列抗凝血效應中之一或多者：(i) aPTT分析中之aPTT延長及(ii)在凝血酶生成分析(TGA)中於人類血漿中凝血酶之量之減小。已闡述量測該等抗凝血活性之方案及分析，且實例性分析闡述於本文中(例如在實例部分中)。 在一具體態樣中，本文所提供之抗FXI/FXIa抗體結合劑能夠逆轉靶FXI/FXIa抗體之抗凝血效應，如藉由將抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之aPTT延長減小、抑制或逆轉至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90% (如藉由業內或本文所闡述之aPTT分析所測定)所描述。 在一具體態樣中，本文所提供之抗FXI/FXIa抗體結合劑能夠逆轉靶FXI/FXIa抗體之抗凝血效應，如藉由將藉由抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)所達成在凝血酶生成分析(TGA)中於人類血漿中凝血酶之量之減小減小、抑制或逆轉至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%所描述。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體包括(i)包括SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之重鏈可變區(VH)及包括SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之輕鏈可變區(VL)；或(ii)包括SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之重鏈及包括SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之輕鏈，且其中結合劑係包括以下之抗體或其抗原結合片段：(1) VH，其包括選自表2中所陳述區域之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3；及(2) VL，其包括選自表2中所陳述區域之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之組合之HCDR1、HCDR2及HCDR3及選自表2中所陳述區域之組合之LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之Kabat HCDR1、HCDR2及HCDR3及選自表2中所陳述區域之Kabat LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之Chothia HCDR1、HCDR2及HCDR3及選自表2中所陳述區域之Chothia LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之IMGT HCDR1、HCDR2及HCDR3及選自表2中所陳述區域之IMGT LCDR1、LCDR2及LCDR3。
表 2. 抗 FXI/FXIa 抗體結合劑 ( 例如抗個體遺傳型抗體及 Fab 片段 ) 之實例
本文所用之術語「互補決定區」及「CDR」係指抗體可變區內賦予抗原特異性及結合親和力之胺基酸序列。一般而言，在每一重鏈可變區中存在三個CDR (HCDR1、HCDR2、HCDR3)且在每一輕鏈可變區中存在三個CDR (LCDR1、LCDR2、LCDR3)。 可易於使用諸多熟知方案中之任一者來測定給定CDR之精確胺基酸序列邊界，包含由以下文獻所闡述者：Kabat等人(1991), 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」，第5版，Public Health Service，國立衛生研究院(National Institutes of Health), Bethesda, MD (「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani等人(1997) JMB 273,927-948 (「Chothia」編號方案)；或Lefranc等人(2003) Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (「IMGT」編號方案)。可替代地使用描繪CDR區之其他方法。舉例而言，可組合Kabat及Chothia之CDR定義(「組合」系統)。 舉例而言，在Kabat下，將抗體之重鏈可變結構域(VH)中之CDR胺基酸殘基編號為31-35 (HCDR1)、50-66 (HCDR2)及99-111 (HCDR3)；且將輕鏈可變結構域(VL)中之CDR胺基酸殘基編號為22-35 (LCDR1)、51-57 (LCDR2)及90-100 (LCDR3)。在Chothia下，將VH中之CDR胺基酸編號為26-32 (HCDR1)、52-57 (HCDR2)及99-111 (HCDR3)；且將VL中之胺基酸殘基編號為25-33 (LCDR1)、51-53 (LCDR2)及92-99 (LCDR3)。藉由組合Kabat及Chothia之CDR定義，「組合」 CDR係由人類VH中之胺基酸殘基26-35 (HCDR1)、50-66 (HCDR2)及99-108 (HCDR3)及人類VL中之胺基酸殘基24-38 (LCDR1)、54-60 (LCDR2)及93-101 (LCDR3)組成。作為另一實例，在IMGT下，將重鏈可變結構域(VH)中之CDR胺基酸殘基編號為26-33 (HCDR1)、51-58 (HCDR2)及97-108 (HCDR3)；且將輕鏈可變結構域(VL)中之CDR胺基酸殘基編號為27-36 (LCDR1)、54-56 (LCDR2)及93-101 (LCDR3)。表2提供實例性用於抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體，例如IDT1-IDT10Kabat)之Chothia、組合及IMGT HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3。 因表2中所揭示之每一抗體可結合至抗FXI/FXIa抗體NOV1401，且抗原結合特異性主要藉由CDR1、2及3區提供，故可「混合且匹配」 VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列(亦即可混合且匹配來自不同抗體之CDR)，但每一抗體較佳地含有VH CDR1、2及3及VL CDR1、2及3以產生本文所提供之其他FXI及/或FXIa結合分子。可使用業內已知及闡述於實例中之結合分析(例如ELISA、SET、BIACORETM分析)來測試該等「混合且匹配」之抗FXI/FXIa抗體結合劑。在將VH CDR序列混合且匹配時，來自特定VH序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應經結構上類似之CDR序列代替。同樣，在將VL CDR序列混合且匹配時，來自特定VL序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應經結構上類似之CDR序列代替。熟習此項技術者將易知，新穎VH及VL序列可藉由使用來自本文針對本文所提供抗體所展示之CDR序列之結構上類似之序列取代一或多個VH及/或VL CDR區序列來產生。除前述內容外，在一態樣中，本文所提供之結合劑可為抗體之抗原結合片段且可包括VH CDR1、2及3或VL CDR 1、2及3，其中該片段作為單一可變結構域結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 27、59、91、123、155、187、219、251、283或315之胺基酸序列； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 28、60、92、124、156、188、220、252、284或316之胺基酸序列； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 29、61、93、125、157、189、221、253、285或317之胺基酸序列； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 43、75、107、139、171、203、235、267、299或331之胺基酸序列； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 44、76、108、140、172、204、236、268、300或332之胺基酸序列；且 f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 45、77、109、141、173、205、237、269、301或333之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 30、62、94、126、158、190、222、254、286或318之胺基酸序列； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 31、63、95、127、159、191、223、255、287或319之胺基酸序列； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 32、64、96、128、160、192、224、256、288或320之胺基酸序列； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 46、78、110、142、174、206、238、270、302或334之胺基酸序列； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 47、79、111、143、175、207、239、271、303或335之胺基酸序列；且 f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 48、80、112、144、176、208、240、272、304或336之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中 a. 該HCDR1包括胺基酸序列GFTF-X1-SAAVH (SEQ ID NO: 347)，其中X1係任一胺基酸或係S或Q； b. 該HCDR2包括胺基酸序列RIKSKA-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 357)、RIKSK-X3-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 358)、RIKSK-X3-X4-GGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 349)或RIKSKA-X4-GGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 348)，其中X3係任一胺基酸或係T或A，X4係任一胺基酸或係S或D，且X5係任一胺基酸或係G或A； c. 該HCDR3包括胺基酸序列DSPSISSYSIPYFSGMDV (SEQ ID NO: 350)； d. 該LCDR1包括胺基酸序列RASQGIRAWLN (SEQ ID NO: 351)或RASQ-X6-I-X7-X8-X9-LN (SEQ ID NO: 352)，其中X6係任一胺基酸或係S或G，X7係任一胺基酸或係R或S，X8係任一胺基酸或係A或N，且X9係任一胺基酸或係W或Y； e. 該LCDR2包括胺基酸序列AASSLQS (SEQ ID NO: 353)；且 f. 該LCDR3包括胺基酸序列HQYITHPPT (SEQ ID NO: 354)或HQYI-X10-X11-P-X12-T (SEQ ID NO: 355)，其中X10係任一胺基酸或係T或A，X11係任一胺基酸或係H或K，且X12係任一胺基酸或係P或I。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中 a. 該HCDR1包括胺基酸序列GFTF-X1-SAAVH (SEQ ID NO: 347)，其中X1係S或Q； b. 該HCDR2包括胺基酸序列RIKSKA-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 357)，其中X4係S或D且X5係G或A； c. 該HCDR3包括胺基酸序列DSPSISSYSIPYFSGMDV (SEQ ID NO: 350)； d. 該LCDR1包括胺基酸序列RASQGIRAWLN (SEQ ID NO: 351)； e. 該LCDR2包括胺基酸序列AASSLQS (SEQ ID NO: 353)；且 f. 該LCDR3包括胺基酸序列HQYITHPPT (SEQ ID NO: 354)。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中 a. 該HCDR1包括胺基酸序列SAAVH (SEQ ID NO: 356)； b. 該HCDR2包括胺基酸序列RIKSKA-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 357)、RIKSK-X3-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 358)、RIKSK-X3-X4-GGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 349)或RIKSKA-X4-GGTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 348)，其中X3係任一胺基酸或係T或A，X4係任一胺基酸或係S或D，且X5係任一胺基酸或係G或A； c. 該HCDR3包括胺基酸序列DSPSISSYSIPYFSGMDV (SEQ ID NO: 350)； d. 該LCDR1包括胺基酸序列RASQGIRAWLN (SEQ ID NO: 351)或RASQ-X6-I-X7-X8-X9-LN (SEQ ID NO: 352)，其中X6係任一胺基酸或係S或G，X7係任一胺基酸或係R或S，X8係任一胺基酸或係A或N，且X9係任一胺基酸或係W或Y； e. 該LCDR2包括胺基酸序列AASSLQS (SEQ ID NO: 353)；且 f. 該LCDR3包括胺基酸序列HQYITHPPT (SEQ ID NO: 354)或HQYI-X10-X11-P-X12-T (SEQ ID NO: 355)，其中X10係任一胺基酸或係T或A，X11係任一胺基酸或係H或K，且X12係任一胺基酸或係P或I。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中 a. 該HCDR1包括胺基酸序列SAAVH (SEQ ID NO: 356)； b. 該HCDR2包括胺基酸序列RIKSKA-X4-X5-GTTDYAAPVKG (SEQ ID NO: 357)，其中X4係S或D且X5係G或A； c. 該HCDR3包括胺基酸序列DSPSISSYSIPYFSGMDV (SEQ ID NO: 350)； d. 該LCDR1包括胺基酸序列RASQGIRAWLN (SEQ ID NO: 351)； e. 該LCDR2包括胺基酸序列AASSLQS (SEQ ID NO: 353)；且 f. 該LCDR3包括胺基酸序列HQYITHPPT (SEQ ID NO: 354)。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 91之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 92之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 93之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 107之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 108之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 109之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 94之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 95之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 96之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 110之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 111之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 112之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 97之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 98之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 99之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 113之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 114之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 115之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 100之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 101之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 102之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 116之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 117之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 118之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 29之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 43之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 45之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 46之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 47之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 48之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 35之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 49之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 51之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 38之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 52之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 53之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 54之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 59之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 60之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 61之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 75之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 76之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 62之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 63之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 64之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 78之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 79之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 80之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 65之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 66之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 67之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 81之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 82之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 68之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 69之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 70之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 84之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 85之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 86之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 123之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 124之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 125之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 139之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 140之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 141之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 126之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 127之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 128之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 142之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 143之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 144之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 129之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 130之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 131之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 145之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 146之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 147之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 132之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 133之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 134之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 148之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 149之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 150之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 155之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 156之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 157之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 171之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 173之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 158之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 159之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 160之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 174之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 175之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 176之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 161之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 162之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 163之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 177之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 178之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 179之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 164之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 165之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 166之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 180之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 181之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 182之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 187之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 188之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 189之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 203之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 204之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 205之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 190之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 191之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 192之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 206之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 207之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 208之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 193之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 194之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 195之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 209之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 210之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 211之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 196之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 197之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 198之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 212之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 213之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 214之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 219之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 220之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 221之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 235之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 236之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 237之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 222之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 223之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 224之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 238之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 239之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 240之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 225之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 226之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 227之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 241之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 242之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 243之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 228之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 229之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 230之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 244之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 245之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 246之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 251之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 252之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 253之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 267之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 268之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 269之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 254之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 255之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 256之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 270之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 271之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 272之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 257之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 258之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 259之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 273之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 274之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 275之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 260之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 261之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 262之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 276之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 277之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 278之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 283之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 284之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 285之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 299之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 300之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 301之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 286之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 287之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 288之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 302之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 303之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 304之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 289之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 290之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 291之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 305之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 306之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 307之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 292之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 293之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 294之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 308之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 309之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 310之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 315之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 316之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 317之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 331之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 332之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 333之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 318之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 319之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 320之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 334之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 335之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 336之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 321之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 322之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 323之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 337之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 338之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 339之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中HCDR1包括SEQ ID NO: 324之胺基酸序列，HCDR2包括SEQ ID NO: 325之胺基酸序列，HCDR3包括SEQ ID NO: 326之胺基酸序列，LCDR1包括SEQ ID NO: 340之胺基酸序列，LCDR2包括SEQ ID NO: 341之胺基酸序列，且LCDR3包括SEQ ID NO: 342之胺基酸序列。 因表2中所揭示之每一結合劑(例如抗體)可結合至抗FXI/FXIa抗體NOV1401，故可「混合且匹配」 VH、VL、全長輕鏈及全長重鏈序列(胺基酸序列及編碼胺基酸序列之核苷酸序列)以產生其他抗FXI/FXIa抗體結合劑。可使用業內已知之結合分析(例如ELISA及實例部分中所闡述之其他分析)來測試該等「混合且匹配」之抗FXI/FXIa抗體結合劑。在混合且匹配該等鏈時，應使用結構上類似之VH序列來代替來自特定VH/VL配對之VH序列。同樣，應使用結構上類似之全長重鏈序列來代替來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對之全長重鏈序列。同樣，應使用結構上類似之VL序列來代替來自特定VH/VL配對之VL序列。同樣，應使用結構上類似之全長輕鏈序列來代替來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對之全長輕鏈序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，其中VH包括SEQ ID NO: 39、71、103、135、167、199、231、263、295或327之胺基酸序列，且VL包括SEQ ID NO: 55、87、119、151、183、215、247、279、311或343之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，其中VH包括SEQ ID NO: 39之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 71之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 87之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 103之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 119之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 135之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 151之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 167之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 183之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 199之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 215之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 231之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 247之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 263之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 279之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 295之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 311之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括SEQ ID NO: 327之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 343之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，其中重鏈包括SEQ ID NO: 41、73、105、137、169、201、233、265、297或329之胺基酸序列，且輕鏈包括SEQ ID NO: 57、89、121、153、185、217、249、281、313或345之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 41之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 73之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 89之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 105之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 121之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 137之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 153之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 169之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 185之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 201之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 217之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 233之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 249之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 265之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 281之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 297之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 313之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括重鏈及輕鏈之抗體或其抗原結合片段，且其中重鏈包括SEQ ID NO: 329之胺基酸序列且輕鏈包括SEQ ID NO: 345之胺基酸序列。 在某些態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，例如包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10 (例如如表2中所陳述)之抗體Fab片段。 在某些態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，例如包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係抗體係抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10 (例如如表2中所陳述)之Fab片段，且係重組單株人類抗體。 如本文中所使用，若人類抗體之重鏈或輕鏈可變區或全長重鏈或輕鏈係自使用人類種系免疫球蛋白基因之系統獲得，則該抗體包括為特定種系序列「之產物」或「衍生自」其之可變區或全長鏈。該等系統包含使用所關注抗原對攜帶人類免疫球蛋白基因之轉基因小鼠進行免疫或使用所關注抗原篩選噬菌體上所展示之人類免疫球蛋白基因文庫。為人類種系免疫球蛋白序列「之產物」或「衍生自」其之人類抗體由此可藉由以下方式來鑑別：比較該人類抗體之胺基酸序列與人類種系免疫球蛋白之胺基酸序列並選擇序列與該人類抗體之序列最接近(亦即最大一致性百分比)之人類種系免疫球蛋白序列。 為特定人類種系免疫球蛋白序列「之產物」或「衍生自」其之人類抗體可含有與該種系序列相比歸因於(例如)天然之體細胞突變或定點突變之有意引入之胺基酸差異。然而，在具體態樣中，在VH或VL框架區中，所選人類抗體之胺基酸序列通常與由人類種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有至少90%一致性，並在與其他物種之種系免疫球蛋白胺基酸序列(例如鼠類種系序列)相比時，其含有鑑別該人類抗體為人類之胺基酸殘基。在某些情形下，人類抗體之胺基酸序列可與由種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列具有至少60%、70%、80%、90%或至少95%或甚至至少96%、97%、98%或99%之一致性。 在具體態樣中，通常，重組人類抗體與由VH或VL框架區中之人類種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列顯示不超過10個胺基酸之差異。在某些情形下，該人類抗體可與由種系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列顯示不超過5個或甚至不超過4個、3個、2個或1個胺基酸之差異。人類種系免疫球蛋白基因之實例包含(但不限於)本文所闡述之可變結構域種系片段以及DP47及DPK9。
同源抗體
在另一態樣中，本發明提供包括與表2中所闡述之序列同源之胺基酸序列之結合劑，其中結合劑結合至抗FXI/FXIa抗體，且保留表2中所闡述之彼等抗體(例如抗體IDT1-IDT10中之任一者)之期望功能性質(例如逆轉一或多種抗凝血效應)。在具體態樣中，該等同源抗體保留表2中所闡述之CDR胺基酸序列(例如Kabat CDR、Chothia CDR、IMGT CDR或組合CDR)。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH及VL包括與選自表2之VH及VL序列至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 39之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 55之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 71之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 87之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 103之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括SEQ ID NO: 119之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 135之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 151之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 167之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 183之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 199之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 215之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 247之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 263之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 279之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 295之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 311之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401，其包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括VH及VL之抗體或其抗原結合片段，且其中VH包括與SEQ ID NO: 327之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列且VL包括與SEQ ID NO: 343之胺基酸序列至少90%或至少95%一致之胺基酸序列。在另一具體態樣中，結合劑之VL及/或VH中之胺基酸序列差異並不位於互補決定區內。 如本文中所使用，兩個序列間之一致性百分比隨該等序列所共用之一致位置數而變化(亦即，一致性% = 一致位置數/位置總數×100)，其中考慮為達成兩個序列最佳比對而需要引入之引入間隔數及每一間隔之長度。序列之對比及兩個序列間之一致性百分比之測定可使用數學算法來達成，如下文非限制性實例中所闡述。 另外或或者，本發明之蛋白質序列可進一步用作「詢問序列」來針對公共資料庫進行搜索以(例如)鑑別相關序列。舉例而言，該等搜索可使用Altschul等人
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1990 J.Mol. Biol. 215:403-10之BLAST程式(2.0版)實施。 本發明亦提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑係包括表2中所列示之VH胺基酸序列(或替代地由其組成)之抗體或其抗原結合片段，其中框架序列(例如並非CDR之序列)中之不超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個之胺基酸已發生突變(其中作為各種非限制性實例，突變係添加、取代或缺失)。 本發明亦提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑係包括表2中所列示之VL胺基酸序列(或替代地由其組成)之抗體或其抗原結合片段，其中框架序列(例如並非CDR之序列)中之不超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個之胺基酸已發生突變(其中作為各種非限制性實例，突變係添加、取代或缺失)。
具有保守修飾之抗體
在某些態樣中，本發明係關於特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(其係抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段))，其中結合劑包括含有CDR1、CDR2及CDR3序列之VH及含有CDR1、CDR2及CDR3序列之VL，其中該等CDR序列中之一或多者具有基於本文所闡述抗體(例如闡述於表2中者)之指定胺基酸序列或其保守修飾，且其中結合劑保留本文所闡述之結合劑(例如結合劑 IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之期望功能性質(例如逆轉抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血效應)。 在具體態樣中，本文所闡述特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(其係抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段))包括表2中所陳述包括CDR1、CDR2及CDR3序列之VH及包括CDR1、CDR2及CDR3序列之VL且在一或多個CDR中具有一個、兩個、三個或更多個保守修飾，且其中結合劑保留本文所闡述之結合劑(例如結合劑IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之期望功能性質(例如結合至抗FXI/FXIa抗體及/或逆轉抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血效應)。 在其他具體態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括以下之抗體或其抗原結合片段：(1) VH，其包括選自表2中所陳述區域之互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3及其保守修飾；及(2) VL，其包括選自表2中所陳述區域之互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3及其保守修飾。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之組合之HCDR1、HCDR2及HCDR3及其保守修飾及選自表2中所陳述區域之組合之LCDR1、LCDR2及LCDR3及其保守修飾。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之Kabat HCDR1、HCDR2及HCDR3及其保守修飾及選自表2中所陳述區域之Kabat LCDR1、LCDR2及LCDR3及其保守修飾。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之Chothia HCDR1、HCDR2及HCDR3及其保守修飾及選自表2中所陳述區域之Chothia LCDR1、LCDR2及LCDR3及其保守修飾。在一特定態樣中，結合劑(例如抗個體遺傳型抗體)包括選自表2中所陳述區域之IMGT HCDR1、HCDR2及HCDR3及其保守修飾及選自表2中所陳述區域之IMGT LCDR1、LCDR2及LCDR3及其保守修飾。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 27、59、91、123、155、187、219、251、283或315之胺基酸序列或其保守修飾； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 28、60、92、124、156、188、220、252、284或316之胺基酸序列或其保守修飾； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 29、61、93、125、157、189、221、253、285或317之胺基酸序列或其保守修飾； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 43、75、107、139、171、203、235、267、299或331之胺基酸序列或其保守修飾； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 44、76、108、140、172、204、236、268、300或332之胺基酸序列或其保守修飾；且 f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 45、77、109、141、173、205、237、269、301或333之胺基酸序列或其保守修飾。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 30、62、94、126、158、190、222、254、286或318之胺基酸序列或其保守修飾； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 31、63、95、127、159、191、223、255、287或319之胺基酸序列或其保守修飾； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 32、64、96、128、160、192、224、256、288或320之胺基酸序列或其保守修飾； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 46、78、110、142、174、206、238、270、302或334之胺基酸序列或其保守修飾； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 47、79、111、143、175、207、239、271、303或335之胺基酸序列或其保守修飾；且 f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 48、80、112、144、176、208、240、272、304或336之胺基酸序列或其保守修飾。 本發明亦提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑係包括表2中所列示之VH胺基酸序列(或替代地由其組成)之抗體或其抗原結合片段，其中框架序列(例如並非CDR之序列)中之不超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個之胺基酸具有保守修飾。 本發明亦提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑係包括表2中所列示之VL胺基酸序列(或替代地由其組成)之抗體或其抗原結合片段，其中框架序列(例如並非CDR之序列)中之不超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個之胺基酸具有保守修飾。
結合至相同表位之結合劑
本發明提供與表2中所闡述結合劑(例如抗體)中之一者(例如IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9及IDT10中之任一者)結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之相同表位之結合劑。可由此基於在抗FXI/FXIa結合分析(例如闡述於實例部分中者)中與本文所闡述之其他結合劑競爭(例如以統計學顯著方式競爭性抑制至相同或重疊表位之結合)之能力來鑑別額外結合劑。 測試結合劑抑制本文所闡述之參考結合劑(例如抗體IDT3)至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合之能力顯示，測試結合劑可與參考結合劑競爭結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)；根據非限制性理論，該結合劑可與其所競爭之參考結合劑結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)上之相同或相關(例如結構類似或空間相鄰)表位。在某一某些實施例中，與本文所提供之結合劑(例如抗體IDT3)結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)上之相同表位之結合劑係人類單株抗體。可如本文所闡述來製備及分離該等人類單株抗體。 如本文中所使用，在競爭結合劑(例如抗體)與參考結合劑(例如抗體IDT1-IDT10中之任一者)結合至相同抗FXI/FXIa抗體表位且在等莫耳濃度之競爭結合劑存在下將參考結合劑之抗FXI/FXIa抗體結合抑制40%或50% (例如60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%或99%)時，則該結合劑(例如抗體) 「競爭」結合。此可(例如)在競爭性結合分析中藉由熟習此項技術者所熟知之任一方法來測定。 如本文中所使用，除非結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)與本文所提供之參考結合劑(例如抗體IDT1-IDT10中之任一者)結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)內之相同表位或重疊表位，否則該競爭結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)並不與本文所提供之參考結合劑(例如抗體IDT1-IDT10中之任一者) 「競爭」。如本文中所使用，競爭結合劑(例如抗體或其抗原結合片段)不包含以下情形：(i)在空間上阻斷本文所提供之參考結合劑(例如抗體IDT1-IDT10中之任一者)結合其靶(例如在該競爭結合劑結合至附近非重疊表位且在物理上防止本文所提供之參考結合劑結合其靶)；及/或(ii)結合至抗FXI/FXIa抗體內之不同非重疊表位且向抗FXI/FXIa抗體誘導構象變化，從而該抗FXI/FXIa抗體可能不再由本文所提供之參考結合劑以在不存在該構象變化時發生之方式結合。
改造及修飾抗體
本文所提供作為抗體之結合劑(例如抗FXI/FXIa抗體結合劑)可使用具有本文所展示VH及/或VL序列中之一或多者之抗體作為起始材料以改造經修飾抗體(該經修飾抗體可具有自起始抗體改變之性質)來製備。可藉由對一或兩個可變區(亦即VH及/或VL)內(例如一或多個CDR區內及/或一或多個框架區內)之一或多個殘基進行修飾來改造抗體。另外或或者，可藉由對恆定區內之殘基進行修飾來改造抗體以(例如)改變抗體之效應物功能。 可實施之一類可變區改造係CDR移植。抗體與靶抗原主要經由位於6個重鏈及輕鏈互補決定區(CDR)中之胺基酸殘基發生相互作用。出於此原因，CDR內之胺基酸序列較CDR外側之序列在個別抗體之間更為不同。因CDR序列負責大部分抗體-抗原相互作用，故可藉由構築包含來自特異性天然抗體(移植於來自具有不同性質之不同抗體之框架序列上)之CDR序列之表現載體來表現模擬特異性天然抗體之性質的重組抗體(例如參見Riechmann, L.等人，1998 Nature 332:323-327；Jones, P.等人，1986 Nature 321:522-525；Queen, C.等人，1989 Proc. Natl. Acad., U.S.A. 86:10029-10033；頒予Winter之美國專利第5,225,539號及頒予Queen等人之美國專利第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號)。 框架序列可自包含種系抗體基因序列之公開DNA資料庫或公開參考文獻獲得。舉例而言，用於人類重鏈及輕鏈之可變區基因種系DNA序列可參見「VBase」人類種系序列資料庫(可在全球資訊網mrc- cpe.cam.ac.uk/vbase上獲得)以及Kabat, E. A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開案第91-3242號；Tomlinson, I. M.等人1992 J. Mol. Biol. 227:776-798；及Cox, J. P. L.等人，1994 Eur.J Immunol. 24:827-836；每一者之內容皆以引用方式明確併入本文中。 用於本發明抗體之框架序列之一實例係在結構上類似於藉由所選本文所闡述抗體所使用之框架序列(例如藉由本發明之單株抗體所使用之共有序列及/或框架序列)者。可將VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列移植於與在衍生框架序列之種系免疫球蛋白基因中所發現序列具有相同序列之框架區上，或可將CDR序列移植於與種系序列相比含有一或多個突變之框架區上。舉例而言，已發現，在某些情況下，可有益地使框架區內之殘基發生突變以維持或增強抗體之抗原結合能力(例如參見頒予Queen等人之美國專利第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號)。可用作在上面構建本文所闡述之抗體及抗原結合片段之支架之片段包含(但不限於) VH1A、VH1B、VH3、Vk1、Vl2及Vk2。業內已知其他框架且可參見(例如)全球資訊網vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/index.php?&MMN_position=1:1上之vBase資料庫。 因此，在具體態樣中，本發明係關於結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之結合劑(例如經分離抗體)，其包括包括選自由SEQ ID NO: 39、71、103、135、167、199、231、263、295及327組成之群之胺基酸序列或在該等序列之框架區中具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的重鏈可變區，且另外包括包括選自由SEQ ID NO: 55、87、119、151、183、215、247、279、311及343組成之群之胺基酸序列或在該等序列之框架區中具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列的輕鏈可變區。 另一類型之可變區修飾係使VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3區內之胺基酸殘基發生突變以由此改良所關注抗體之一或多種結合性質(例如親和力，稱為「親和力成熟」)。可實施定點誘變或PCR調介之誘突以引入突變，且可在活體外或活體內分析(如本文所闡述且提供於實例部分中)中評估對於抗體結合或所關注其他功能性質之效應。可引入保守修飾(如上文所論述)。突變可為胺基酸取代、添加或缺失。此外，通常，改變CDR區內之不超過一種、兩種、三種、四種或五種殘基。 因此，在具體態樣中，本文提供抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10之親和力成熟變體，其中親和力成熟變體對抗FXI/FXIa抗體NOV1401之親和力高於親代抗體，且能夠逆轉NOV1401之一或多種抗凝血效應。在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 27、59、91、123、155、187、219、251、283或315之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 28、60、92、124、156、188、220、252、284或316之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 29、61、93、125、157、189、221、253、285或317之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 43、75、107、139、171、203、235、267、299或331之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 44、76、108、140、172、204、236、268、300或332之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 45、77、109、141、173、205、237、269、301或333之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列。 在特定態樣中，本文提供特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體及其片段(例如Fab片段))，其中結合劑抑制靶抗FXI/FXIa抗體之抗凝血活性，其中靶抗FXI/FXIa抗體係抗體NOV1401(包括含有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之VH及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之VL)，且其中結合劑係包括(1)包括互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3之VH及(2)包括互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3之VL之抗體或其抗原結合片段；其中： a. 該HCDR1包括SEQ ID NO: 30、62、94、126、158、190、222、254、286或318之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； b. 該HCDR2包括SEQ ID NO: 31、63、95、127、159、191、223、255、287或319之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； c. 該HCDR3包括SEQ ID NO: 32、64、96、128、160、192、224、256、288或320之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； d. 該LCDR1包括SEQ ID NO: 46、78、110、142、174、206、238、270、302或334之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； e. 該LCDR2包括SEQ ID NO: 47、79、111、143、175、207、239、271、303或335之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列； f. 該LCDR3包括SEQ ID NO: 48、80、112、144、176、208、240、272、304或336之胺基酸序列或其具有1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列。
將抗原結合結構域移植至替代框架或支架中
對於本文所提供之抗FXI/FXIa抗體結合劑(其係抗體)而言，可採用眾多種抗體/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含至少一個特異性結合至靶抗FXI/FXIa抗體之結合區。該等框架或支架包含人類免疫球蛋白或其片段之5種主要個體遺傳型，且包含其他動物物種之免疫球蛋白、較佳地具有人類化態樣。就此而言，單一重鏈抗體(例如駱駝科中所鑑別者)尤其值得關注。 在一態樣中，本發明係關於使用非免疫球蛋白支架(在上面可移植CDR，例如闡述於表2中者)生成基於非免疫球蛋白之抗體。可採用已知或將來之非免疫球蛋白框架及支架，只要其包括對靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)具有特異性之結合區。已知非免疫球蛋白框架或支架包含(但不限於)纖連蛋白(Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA)、錨蛋白(Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland)、結構域抗體(Domantis, Ltd., Cambridge, MA及Ablynx nv, Zwijnaarde, Belgium)、脂質運載蛋白(Pieris Proteolab AG, Freising, Germany)、小模塊免疫藥物(Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA)、馬克西抗體(maxybody) (Avidia, Inc., Mountain View, CA)、蛋白質A (Affibody AG, Sweden)及親和素(γ-晶體蛋白或泛素) (Scil Proteins GmbH, Halle, Germany)。 該纖連蛋白支架係基於纖連蛋白III型結構域(例如纖連蛋白III型之第十模組(10 Fn3結構域))。該纖連蛋白III型結構域具有7個或8個分佈於兩個β片之間之β鏈，該等β鏈自身彼此包裹以形成蛋白質之核心，且該結構域進一步含有將β鏈彼此連結並係溶劑暴露之環(類似於CDR)。在β片夾心結構之每一邊緣處存在至少三個該等環，其中該邊緣係蛋白質之垂直於β鏈之方向之邊界(參見US 6,818,418)。該等基於纖連蛋白之支架並非免疫球蛋白，但整體摺疊與最小功能抗體片段(亦即重鏈之可變區，其包括駱駝及駱馬IgG中之整個抗原識別單元)之摺疊緊密相關。由於此結構，該非免疫球蛋白抗體模擬在性質及親和力方面與抗體類似之抗原結合性質。該等支架可用於與抗體之活體內親和力成熟過程類似之活體外環隨機化及改組策略。該等基於纖連蛋白之分子可用作支架，在支架中該分子之環區可使用標準選殖技術經本發明之CDR代替。 該錨蛋白技術係基於使用以錨蛋白衍生之重複模組作為支架之蛋白質攜帶可用於結合至不同靶之可變區。錨蛋白重複模組係由兩個逆平行α-螺旋及β-轉角組成之33胺基酸多肽。藉由使用核糖體顯示來基本上最佳化可變區之結合。 高親和性多聚體係衍生自含有天然A-結構域之蛋白質，例如LRP-1。該等結構域天生係用於蛋白質-蛋白質相互作用，且在人類中超過250種蛋白質在結構上係基於A-結構域。高親和性多聚體係由許多經由胺基酸連接體連接之不同「A-結構域」單體(2-10)組成。可使用(例如)美國專利申請案公開案第20040175756號、第20050053973號、第20050048512號及第20060008844號中所闡述之方法來產生可結合至靶抗原之高親和性多聚體。 親合體親和力配體係較小簡單蛋白質，其由基於蛋白質A之一IgG結合結構域之支架之3螺旋束構成。蛋白質A係來自細菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)之表面蛋白。此支架結構域係由58個胺基酸組成，其中13個係經隨機化以生成具有大量配體變體之親合體文庫(例如參見US 5,831,012)。親合體分子模擬抗體，與抗體之分子量(其為150 kDa)相比，其具有6 kDa之分子量。儘管其大小較小，但親合體分子之結合位點與抗體類似。 抗運載蛋白係由公司Pieris ProteoLab AG研發之產品。其係衍生自脂質運載蛋白，亦即經常參與化學敏感或不溶性之化合物之生理學運輸或儲存之較小且穩健之廣泛蛋白質組。若干天然脂質運載蛋白出現於人類組織或體液中。蛋白質構造類似於免疫球蛋白，且在剛性框架頂部具有超變環。然而，與抗體或其重組片段相比，脂質運載蛋白係由具有160個至180個胺基酸殘基之單一多肽鏈構成，該單一多肽鏈僅略大於單一免疫球蛋白結構域。構成結合袋之4個環之集合展示顯著結構塑性並容許存在各種側鏈。因此可於專門製程中重塑結合位點以以高親和力及特異性識別所規定之不同形狀之靶分子。脂質運載蛋白家族之一蛋白質、亦即大菜粉蝶(Pieris brassicae)之膽汁三烯結合蛋白(BBP)已用於藉由誘變處理4個環之集合來研發抗運載蛋白。闡述「抗運載蛋白」之專利申請案之一實例係PCT公開案第WO 199916873號。 親和素分子係針對對蛋白質及小分子之特異性親和力經設計之較小非免疫球蛋白蛋白質。新親和素分子可極快地自兩個文庫選出，其每一者係基於不同人類源支架蛋白。親和素分子對免疫球蛋白蛋白質不展示任何結構同源性。當前，採用兩種親和支架，其中之一者係γ結晶、亦即人類結構性眼晶狀體蛋白，且另一者係「泛素」超家族蛋白。兩種人類支架皆極小，展示高溫穩定性，且對pH變化及變性劑幾乎具有抗性。此高穩定性主要係歸因於蛋白質之經擴展之β片結構。γ結晶衍生之蛋白質之實例闡述於WO200104144中，且「泛素樣」蛋白質之實例闡述於WO2004106368中。 蛋白質表位模擬物(PEM)係模擬蛋白質之β髮夾二級結構(亦即參與蛋白質-蛋白質相互作用之主要二級結構)之中等大小環狀肽樣分子(MW 1-2kDa)。 在具體態樣中，本發明提供特異性結合至靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之全人類抗體。與嵌合或人類化抗體相比，人類抗體在投與人類個體時具有進一步減小之抗原性。
雙特異性分子及多價抗體
在另一態樣中，本發明描述特異性結合靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)且逆轉一或多種抗凝血效應之雙特異性或多特異性分子(包括抗體或其片段)。本文所提供之抗體或其抗原結合區可衍生或連接至另一功能分子、例如另一肽或蛋白質(例如受體之另一抗體或配體)以生成結合至至少兩個不同結合位點或靶分子之雙特異性分子。事實上，本發明之抗體可衍生或連接至一個以上其他功能分子以生成結合至兩個以上不同結合位點及/或靶分子之多特異性分子；該等多特異性分子亦意欲涵蓋於本文所用之術語「雙特異性分子」中。為產生本發明雙特異性分子，本發明抗體可功能連接(例如藉由化學偶合、遺傳融合、非共價締合或以其他方式)至一或多種其他結合分子(例如另一抗體、抗體片段、肽或結合模擬物)，從而產生雙特異性分子。 因此，本發明包含含有至少一種針對靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之第一結合特異性及針對第二靶表位之第二結合特異性之雙特異性分子。舉例而言，第二靶表位係抗FXI/FXIa抗體之不同於第一靶表位之另一表位。 另外，對於雙特異性分子為多特異性之態樣而言，該分子除第一及第二靶表位外可進一步包含第三結合特異性。 在一態樣中，本發明雙特異性分子以結合特異性包括至少一種抗體或其抗體片段，包含(例如) Fab、Fab’、F(ab’)
2
、Fv或單鏈Fv。該抗體亦可為輕鏈或重鏈二聚體或其任何極小片段(例如Fv或單鏈構築體)，如Ladner等人美國專利第4,946,778中所闡述。 雙價抗體係二價、雙特異性分子，其中VH及VL結構域在單一多肽鏈上表現，藉由過短而不允許在相同鏈上之兩個結構域之間配對之連接體連結。VH及VL結構域與另一鏈之互補結構域配對，從而產生兩個抗原結合位點(例如參見Holliger等人，1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Poljak等人，1994 Structure 2:1121-1123)。雙價抗體可藉由在同一細胞內表現兩個具有結構VHA-VLB及VHB-VLA (VH-VL構形)或VLA-VHB及VLB-VHA (VL-VH構形)之多肽鏈來產生。其大部分可以可溶性形式表現於細菌中。單鏈雙價抗體(scDb)係藉由利用大約15個胺基酸殘基之連接體連結兩個形成雙價抗體之多肽鏈來產生(參見Holliger及Winter, 1997 Cancer Immunol. Immunother., 45(3-4): 128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology, 2(1):21-36)。scDb可以可溶之活性單體形式表現於細菌中(參見Holliger及Winter, 1997 Cancer Immunol. Immunother., 45(34): 128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology, 2(1):21-36；Pluckthun及Pack, 1997 Immunotechnology, 3(2): 83-105；Ridgway等人，1996 Protein Eng., 9(7):617-21)。雙價抗體可與Fc融合以生成「雙-雙價抗體(di-diabody)」 (參見Lu等人，2004 J. Biol. Chem., 279(4):2856-65)。 可用於雙特異性分子之其他抗體係鼠類、嵌合及人類化單株抗體。 雙特異性分子可藉由使用業內已知之方法偶聯構成結合特異性來製備。舉例而言，雙特異性分子之每一結合特異性皆可單獨生成，且然後彼此偶聯。在結合特異性為蛋白質或肽時，可使用各種偶合劑或交聯劑用於共價偶聯。交聯劑之實例包含蛋白質A、碳化二亞胺、S-乙醯基-硫代乙酸N-琥珀醯亞胺酯(SATA)、5,5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸) (DTNB)、鄰-伸苯基二馬來醯亞胺(oPDM)、3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)及4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-l-甲酸磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-SMCC) (例如參見Karpovsky等人，1984 J. Exp. Med. 160:1686；Liu, MA等人，1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648)。其他方法包含Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132；Brennan等人，1985 Science 229:81-83及Glennie等人，1987 J. Immunol. 139: 2367-2375中所闡述者。偶聯劑係SATA及磺基-SMCC，二者皆自Pierce Chemical Co. (Rockford, IL)購得。 在該等結合特異性為抗體時，其可藉由兩個重鏈之C端鉸鏈區之巰基鍵結來偶聯。在一特定實施例中，在偶聯之前鉸鏈區係經修飾以含有奇數個巰基(例如一個)。 或者，兩種結合特異性可在同一載體中編碼，並在同一宿主細胞中表現及組裝。若該雙特異性分子係mAb × mAb、mAb × Fab、Fab × F(ab’)
2
或配體× Fab融合蛋白，則此方法尤其有用。本發明雙特異性分子可係包括一個單鏈抗體及結合決定簇之單鏈分子或包括兩個結合決定簇之單鏈雙特異性分子。雙特異性分子可包括至少兩個單鏈分子。製備雙特異性分子之方法闡述於(例如)以下專利中：美國專利第5,260,203號；美國專利第5,455,030號；美國專利第4,881,175號；美國專利第5,132,405號；美國專利第5,091,513號；美國專利第5,476,786號；美國專利第5,013,653號；美國專利第5,258,498號；及美國專利第5,482,858號。 雙特異性分子與其特異性靶之結合可藉由(例如)酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(REA)、FACS分析、生物分析(例如生長抑制)或西方印漬(Western Blot)分析來證實。每一該等分析通常藉由採用對尤其關注之蛋白質-抗體複合物具有特異性之經標記試劑(例如抗體)來檢測該所關注之複合物之存在。 在另一態樣中，本發明提供包括本發明抗體之至少兩個結合至FXIa之相同或不同抗原結合部分的多價化合物。抗原結合部分可經由蛋白質融合或共價或非共價鏈接來連接在一起。或者，已針對雙特異性分子闡述鏈接方法。四價化合物可藉由(例如)將本發明抗體與結合至本發明抗體之恆定區(例如Fc或鉸鏈區)之抗體交聯來獲得。 三聚化結構域闡述於(例如) Borean專利EP 1 012 280B1中。五聚化模組闡述於(例如) PCT/EP97/05897中。
抗體偶聯物及融合體
在具體態樣中，本發明提供結合劑，其係特異性結合至靶抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)且重組融合或化學偶聯(包含共價及非共價偶聯)至異源蛋白質或多肽(或其片段)之抗體或其片段。在一特定態樣中，異源蛋白質係至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90或至少100個胺基酸之多肽且使用其來生成融合蛋白。在特定態樣中，本發明提供作為包括本文所闡述抗體之抗原結合片段(例如Fab片段、Fd片段、Fv片段、(Fab)2片段、VH結構域、VH CDR、VL結構域或VL CDR)及異源蛋白質、多肽或肽之融合蛋白之結合劑。業內已知將蛋白質、多肽或肽與抗體或抗體片段融合或偶聯之方法。例如參見美國專利第5,336,603號、第5,622,929號、第5,359,046號、第5,349,053號、第5,447,851號及第5,112,946號；歐洲專利第EP 307,434號及第EP 367,166號；國際公開案第WO 96/04388號及第WO 91/06570號；Ashkenazi等人，1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539；Zheng等人，1995, J. Immunol. 154:5590-5600；及Vil等人，1992, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 89:11337- 11341。 其他融合蛋白可藉助基因改組、基序改組、外顯子改組及/或密碼子改組(通稱為「DNA改組」)之技術生成。可採用DNA改組來改變本發明抗體或其片段之活性(例如具有較高親和力及較低解離速率之抗體或其片段)。一般參見美國專利第5,605,793號、第5,811,238號、第5,830,721號、第5,834,252號及第5,837,458號；Patten等人
,
1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33；Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson,等人，1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；及Lorenzo及Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308- 313 (該等專利及公開案中之每一者之全部內容以引用方式併入本文中)。抗體或其片段或所編碼抗體或其片段可藉由經歷藉由易錯PCR、隨機核苷酸插入或其他方法達成隨機誘變、然後重組來改變。可將編碼特異性結合至FXIa蛋白之抗體或其片段多核苷酸與一或多種異源分子之一或多種組份、基序、區段、部分、結構域、片段等重組。 此外，抗體或其片段可融合至標記物序列(例如肽)以促進純化。在特定實施例中，標記物胺基酸序列係六組胺酸肽，例如pQE載體(QIAGEN, Inc.，9259 Eton Avenue，Chatsworth，CA，91311)中所提供之標籤，其中許多尤其市面有售。如Gentz等人，1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824中所闡述，舉例而言，六組胺酸提供融合蛋白之便利純化。用於純化之其他肽包含(但不限於)血球凝集素(「HA」)標籤(其與衍生自流行性感冒血球凝集素蛋白之表位相對應(Wilson等人，1984, Cell 37:767))及「旗」標籤。 在其他態樣中，結合劑(例如本文所闡述之抗體或其片段)偶聯至化合物(例如診斷劑或可檢測劑)。在一態樣中，可藉由將抗體與包含(但不限於)以下之可檢測物質偶合來偶聯該等抗體或其片段：各種酶，例如(但不限於)辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，例如(但不限於)鏈黴抗生物素生物素及抗生物素蛋白(avidin)/生物素；螢光材料，例如(但不限於)傘形酮、螢光黃、異硫氰酸螢光黃、玫瑰紅、二氯三嗪基胺螢光黃、丹磺醯氯或棗紅素；發光材料，例如(但不限於)發光胺(luminol)；生物發光材料，例如(但不限於)螢光素酶、螢光素及水母素(aequorin)；放射性材料，例如(但不限於)碘(131I、125I、123I及121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In及111In)、鍀(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn及117Tin；及使用各種正電子發射斷層掃描術之正電子發射金屬及非放射性順磁性金屬離子。 另外，可使抗體或其片段偶聯至修飾給定生物反應之治療部分或藥物部分。治療部分或藥物部分並不解釋為限於經典化學治療劑。舉例而言，藥物部分可為具有期望生物活性之蛋白質、肽或多肽。 將治療部分偶聯至抗體之技術已眾所周知，例如參見Arnon等人，「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」, Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld等人(編輯), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)；Hellstrom等人，「Antibodies For Drug Delivery」, Controlled Drug Delivery (第2版), Robinson等人(編輯), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)；Thorpe, 「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」, Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera等人(編輯), pp. 475-506 (1985)；「Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy」, Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin等人(編輯), pp. 303-16 (Academic Press 1985)及Thorpe等人，1982, Immunol. Rev. 62:119-58。 抗體亦可附接至固體載體上，此尤其可用於靶抗原之免疫分析或純化。該等固體載體包含(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸(nylon)、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
產生抗體之方法
本文提供編碼本文所闡述結合劑之多肽之核酸分子(例如實質上純化之核酸分子)、包括其之載體(例如表現載體)、包括該等載體或核酸分子之宿主細胞及產生本文所闡述之結合劑(例如特異性結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段))之方法。 在具體態樣中，本文提供包括本文所闡述之多核苷酸(例如表2)之載體(例如表現載體)。 在某些態樣中，本文提供包括本文所闡述之載體或本文所闡述之多核苷酸之宿主細胞。在具體態樣中，宿主細胞係真核細胞。在某些態樣中，宿主細胞係哺乳動物細胞(例如非人類哺乳動物細胞，例如CHO細胞)。在特定態樣中，宿主細胞包括(i)包括編碼VH或重鏈之核苷酸序列之載體或多核苷酸及(ii)包括編碼VL或輕鏈之核苷酸序列之載體或多核苷酸。在具體態樣中，第一宿主細胞包括含有編碼VH或重鏈之核苷酸序列之載體或多核苷酸且第二宿主細胞包括含有編碼VL或輕鏈之核苷酸序列之載體或多核苷酸。 在特定態樣中，本文提供產生結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗體或抗原結合片段(例如Fab片段))之方法，其包括在適於表現結合劑之條件下培養本文所闡述之宿主細胞之步驟。 在某些態樣中，產生抗FXI/FXIa抗體或其片段之方法進一步包括純化抗FXI/FXIa抗體或其片段。
編碼結合劑之核酸
本發明提供包括編碼本文所闡述之結合劑之核苷酸序列之多核苷酸。在具體態樣中，本發明提供包括編碼本文所闡述特異性結合至靶抗FXI/FXIa抗體之抗體(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9及IDT10)之VH、VL、全長重鏈及/或全長輕鏈之核酸序列的多核苷酸。可最佳化該等核酸序列以用於表現於哺乳動物細胞中(例如參見表2)。 在結合劑係抗體或其抗原結合片段之具體態樣中，本文提供包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之VL、VH或VL及VH之核苷酸序列的多核苷酸。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之VL的核苷酸序列。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之VH的核苷酸序列。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之VH及VL的核苷酸序列。 在結合劑係抗體或其抗原結合片段之具體態樣中，本文提供包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之重鏈、輕鏈或重鏈及輕鏈之核苷酸序列的多核苷酸。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之重鏈的核苷酸序列。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之輕鏈的核苷酸序列。在一態樣中，本文所提供之多核苷酸包括編碼本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)之重鏈及輕鏈的核苷酸序列。 在特定態樣中，本文提供包括表2中所陳述之一或多個核苷酸序列之多核苷酸，例如包括編碼VH之SEQ ID NO: 40、72、104、136、168、200、232、264、296或328之核苷酸序列且包括編碼VL之SEQ ID NO: 56、88、120、152、184、216、248、280、312或344之核苷酸序列的多核苷酸。 在特定態樣中，本文所提供包括表2中所陳述之一或多個核苷酸序列之多核苷酸，例如包括編碼重鏈之SEQ ID NO: 42、74、106、138、170、202、234、266、298或330之核苷酸序列且包括編碼輕鏈之SEQ ID NO: 58、90、122、154、186、218、250、282、314或346之核苷酸序列的多核苷酸。 在某些態樣中，本文所提供之多核苷酸包括與表2中所鑑別之彼等核苷酸序列實質上一致(例如至少65%、80%、80%、90%、95%、98%或99%)之核苷酸序列，例如編碼VH之SEQ ID NO: 40、72、104、136、168、200、232、264、296或328；及編碼VL之SEQ ID NO: 56、88、120、152、184、216、248、280、312或344。在自適當表現載體表現時，由該等多核苷酸編碼之多肽能夠結合至抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)。 本發明亦提供編碼來自本文所闡述結合劑(例如表2，例如作為結合抗FXI/FXIa抗體之抗體或其抗原結合片段之結合劑)之重鏈或輕鏈可變區之至少一個CDR區及通常所有三個CDR區之多核苷酸。在其他態樣中，一些多核苷酸編碼本文所闡述結合劑(例如表2，例如作為結合抗FXI/FXIa抗體之抗體或其抗原結合片段之結合劑)之重鏈及/或輕鏈之所有或實質上所有可變區序列。在具體態樣中，本文提供可編碼抗體(例如結合抗FXI/FXIa抗體之抗體或其抗原結合片段)之可變區及恆定區之多核苷酸。由於密碼之簡並性，各種核酸序列將編碼每一免疫球蛋白胺基酸序列。 可藉由新生固相DNA合成或藉由編碼結合劑(例如作為結合抗FXI/FXIa抗體之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑)之現有序列(例如如本文所闡述之序列)之PCR誘變來產生多核苷酸序列。核酸之直接化學合成可藉由業內已知之方法來達成，例如Narang等人，1979, Meth. Enzymol. 68:90之磷酸三酯方法；Brown等人
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Meth. Enzymol. 68:109, 1979之磷酸二酯方法；Beaucage等人
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Tetra. Lett., 22:1859, 1981之二乙基亞磷醯胺方法；及美國專利第4,458,066號之固體載體方法。藉由PCR將突變引入多核苷酸序列中可如(例如)以下文獻中所闡述來實施：PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (編輯), Freeman Press, NY, NY, 1992；PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis等人(編輯), Academic Press, San Diego, CA, 1990；Mattila等人，Nucleic Acids Res. 19:967, 1991；及Eckert等人，PCR Methods and Applications 1:17, 1991。 本發明亦提供表現用於產生本文所闡述之結合劑(例如作為結合抗FXI/FXIa抗體之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑)之載體及宿主細胞。可採用各種表現載體來表現編碼FXIa結合抗體鏈或結合片段之多核苷酸。基於病毒及非病毒表現載體可用於在哺乳動物宿主細胞中產生該等抗體。非病毒載體及系統包含質體、游離型載體(通常具有用於表現蛋白質或RNA之表現盒)及人類人工染色體(例如參見Harrington等人，Nat Genet 15:345, 1997)。舉例而言，可用於在哺乳動物(例如人類)細胞中表現多核苷酸及多肽之非病毒載體包含pThioHis A、B及C、pcDNA3.1/His、pEBVHis A、B及C (Invitrogen, San Diego, CA)、MPSV載體及許多業內已知用於表現其他蛋白質之其他載體。有用病毒載體包含基於逆轉錄病毒之載體、基於腺病毒之載體、基於腺相關病毒之載體、基於皰疹病毒之載體、基於SV40之載體、基於乳頭狀瘤病毒之載體、基於HBP愛潑斯坦巴爾病毒(Epstein Barr virus)之載體、痘瘡病毒載體及基於塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus, SFV)之載體。參見Brent等人(見上文)；Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995；及Rosenfeld等人，Cell 68:143, 1992。 表現載體之選擇端視擬表現載體之預期宿主細胞而定。通常，表現載體含有啟動子及其他可操作地連接至編碼本文所闡述之結合劑(例如作為結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑)之多核苷酸之調控序列(例如增強子)。在一些實施例中，採用可誘導啟動子以防止插入序列在除誘導條件外之條件下表現。可誘導啟動子包含(例如)阿拉伯糖(arabinose)、lacZ、金屬硫蛋白啟動子或熱激啟動子。轉型有機體之培養物可在非誘導條件下擴展，且並不使該群體偏向編碼表現產物可由宿主細胞較佳耐受之序列。除啟動子外，亦可需要或期望其他調控元件來有效表現結合劑，例如作為結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑。該等元件通常包含ATG起始密碼子及相鄰核糖體結合位點或其他序列。另外，表現效率可藉由納入適於使用中之細胞系統之增強子來提高(例如參見Scharf等人，Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994；及Bittner等人，Meth. Enzymol., 153:516, 1987)。舉例而言，SV40增強子或CMV增強子可用於增加在哺乳動物宿主細胞中之表現。 表現載體亦可提供分泌信號序列位置以形成具有由所插入抗FXI/FXIa抗體結合劑序列編碼之多肽之融合蛋白。在具體態樣中，在納入載體中之前，所插入抗FXI/FXIa抗體結合劑序列連接至信號序列。在某些態樣中，擬用於接收編碼抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)輕鏈及重鏈可變結構域之序列之載體亦編碼其恆定區或部分。該等載體允許將可變區表現為具有恆定區之融合蛋白，從而使得產生完整抗體或其片段。通常，該等恆定區為人類的。 含有並表現抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)之宿主細胞可為原核或真核。大腸桿菌(E. coli)係可用於選殖及表現本發明多核苷酸之一種原核宿主。適於使用之其他微生物宿主包含桿菌(例如枯草桿菌(Bacillus subtilis))及其他腸桿菌科(enterobacteriaceae) (例如沙門氏菌屬(Salmonella)、沙雷氏菌屬(Serratia))及各種假單胞菌屬(Pseudomonas species)。在該等原核宿主中，亦可製備通常含有與宿主細胞相容之表現控制序列(例如複製起點)之表現載體。另外，將存在任何數量之各種熟知啟動子，例如乳糖啟動子系統、色胺酸(trp)啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ之啟動子系統。啟動子通常視情況與操縱子序列一起控制表現，且具有核糖體結合位點序列及諸如此類以用於開始及完成轉錄及轉譯。亦可採用其他微生物(例如酵母)來表現本發明之結合FXIa之多肽。亦可使用與桿狀病毒載體組合之昆蟲細胞。 在一些具體實施例中，使用哺乳動物宿主細胞來表現及產生本發明之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)多肽。該等細胞包含任何正常的必死的或正常或異常的永生的動物或人類細胞。舉例而言，已研發諸多能夠分泌完整免疫球蛋白之適宜宿主細胞系，包含CHO細胞系、各種Cos細胞系、HeLa細胞、骨髓瘤細胞系及經轉型B細胞。哺乳動物組織細胞培養物表現多肽之用途通常論述於(例如) Winnacker, FROM GENES TO CLONES, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987中。用於哺乳動物宿主細胞之表現載體可包含表現控制序列(例如複製起點、啟動子及增強子) (例如參見Queen等人
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Immunol. Rev. 89:49-68, 1986)及必要加工資訊位點(例如核糖體結合位點、RNA間接位點、多腺苷酸化位點及轉錄終止子序列)。 該等表現載體通常含有衍生自哺乳動物基因或衍生自自哺乳動物病毒之啟動子。適宜啟動子可為組成型的、具有細胞類型特異性、階段特異性及/或可調節性或可調控性。有用啟動子包含(但不限於)金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松(dexamethasone)誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP polIII啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素(tetracycline)誘導型CMV啟動子(例如人類即早CMV啟動子)、組成型CMV啟動子及業內已知之啟動子-增強子組合。 用於引入含有所關注多核苷酸序列之表現載體之方法端視細胞宿主之類型而變化。舉例而言，氯化鈣轉染通常用於原核細胞，而磷酸鈣處理或電穿孔可用於其他細胞宿主。(通常參見Sambrook等人，見上文)。其他方法包含(例如)電穿孔、磷酸鈣處理、脂質體調介之轉型、注射及顯微注射、彈射方法、病毒體、免疫脂質體、多價陽離子:核酸偶聯物、裸DNA、人工病毒粒子、與皰疹病毒結構蛋白質VP22融合(Elliot及O’Hare, Cell 88:223, 1997)、DNA之試劑增強攝取及離體轉導。對於重組蛋白之長期、高產率產生而言，通常期望穩定表現。舉例而言，可使用含有病毒複製起點或內源表現元件及可選擇標記物基因之本發明表現載體來製備穩定表現結合FXIa之抗體鏈或結合片段之細胞系。在引入載體後，可使細胞在加富培養基中生長1天至2天，然後將其切換到選擇性培養基。選擇性標記物之目的係賦予選擇抗性，且其存在允許成功表現所引入序列之細胞在選擇性培養基中生長。使用對於細胞類型適當之組織培養技術可增殖具有抗性之穩定轉染細胞。
框架或 Fc 改造
本發明之經改造抗體包含已對VH及/或VL內之框架殘基進行修飾以(例如)改良抗體之性質者。通常，進行該等框架修飾以降低抗體之免疫原性。舉例而言，一種方式係將一或多種框架殘基「回復突變」至相應種系序列。更具體而言，已經歷體細胞突變之抗體可含有與衍生該抗體之種系序列不同之框架殘基。該等殘基可藉由比較抗體框架序列與衍生該抗體之種系序列來鑑別。為使框架區序列返回至其種系構形，可藉由(例如)定點誘變使體細胞突變「回復突變」至種系序列。該等「經回復突變」抗體亦意欲涵蓋於本發明內。 另一類型之框架修飾涉及使一或多個於框架區內或甚至於一或多個CDR區內之殘基突變以去除T細胞-表位，由此減小該抗體之潛在免疫原性。此方式亦稱為「去免疫化」，且更詳細闡述於Carr等人之美國專利公開案第20030153043號中。 此外或作為框架或CDR區內之修飾之替代方式，可改造本發明抗體以包含Fc區內之修飾，從而通常改變抗體之一或多種功能性質，例如血清半衰期、補體固定、Fc受體結合及/或抗原依賴性細胞毒性。此外，本發明抗體可經化學修飾(例如可將一或多個化學部分附接至該抗體)或經修飾以改變其醣基化以再次改變該抗體之一或多個功能性質。該等實施例中之每一者更詳細闡述於下文中。Fc區中之殘基之編號係根據Kabat之EU索引之編號。 在一態樣中，對CH1之鉸鏈區實施修飾，從而改變(例如增加或降低)鉸鏈區中之半胱胺酸殘基之數量。此方法進一步闡述於Bodmer等人之美國專利第5,677,425號中。改變CH1之鉸鏈區中之半胱胺酸殘基數以(例如)促進輕鏈及重鏈之組裝或增加或降低該抗體之穩定性。 在另一態樣中，使抗體之Fc鉸鏈區發生突變以降低抗體之生物半衰期。更具體而言，將一或多種胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段之CH2-CH3結構域界面區中，從而抗體相對於原始Fc鉸鏈結構域葡萄球菌蛋白A (SpA)結合具有損壞之SpA結合。此方式更詳細闡述於Ward等人之美國專利第6,165,745號中。 在另一態樣中，該抗體經修飾以延長其生物學半衰期。各種方式皆可。舉例而言，可使用如頒予Ward等人之美國專利第6,277,375號中所闡述之一或多種突變。或者，為延長生物學半衰期，該抗體可於CH1或CL區內經改變以含有自IgG之Fc區之CH2結構域之兩個環獲得之補救受體結合表位，如Presta等人之美國專利第5,869,046號及第6,121,022號中所闡述。 在其他態樣中，Fc區係藉由使用不同胺基酸殘基代替至少一個胺基酸殘基來改變以改變該抗體之效應物功能。舉例而言，一或多種胺基酸可經不同胺基酸殘基代替，從而該抗體對效應物配體具有經改變親和力，但保留親代抗體之抗原結合能力。親和力經改變之效應物配體可係(例如) Fc受體或補體之C1組份。此方法更詳細闡述於Winter等人之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號中。 在另一態樣中，一或多個選自胺基酸殘基之胺基酸可經不同胺基酸殘基代替，從而該抗體具有經改變之C1q結合及/或經降低或廢除之補體依賴性細胞毒性(CDC)。此方法更詳細闡述於Idusogie等人之美國專利第6,194,551號中。 在另一態樣中，改變一或多個胺基酸殘基以由此改變該抗體結合補體之能力。此方法進一步闡述於Bodmer等人之PCT公開案WO 94/29351中。 在一具體態樣中，本文所闡述之結合劑(例如表2中所闡述之結合劑，例如作為結合抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑)包括包括胺基酸取代D265A及/或P329A之人類IgG (例如IgG1) Fc區，從而減小藉由任一表面相關FXI引起ADCC或CDC之可能性。該等丙胺酸取代已展示可減小ADCC及CDC (例如參見Idosugie等人，J. Immunol. 164:4178-4184, 2000；Shields等人，J. Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001)。 在又一態樣中，修飾Fc區以增加該抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之能力及/或以藉由修飾一或多個胺基酸來增加該抗體對Fcγ受體之親和力。此方法進一步闡述於Presta之PCT公開案WO 00/42072中。此外，已對人類IgG1上針對FcγRl、FcγRII、FcγRIII及FcRn之結合位點進行定位，且已闡述具有經改良結合之變體(參見Shields, R.L.等人，2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604)。 在再一態樣中，對抗體之醣基化實施修飾。舉例而言，可製備無醣基化抗體(亦即抗體並未醣基化)。醣基化可經改變以(例如)增加抗體對「抗原」之親和力。可藉由(例如)改變抗體序列內之一或多個醣基化位點來達成該等碳水化合物修飾。舉例而言，可進行一或多個可消除一或多個可變區框架醣基化位點、由此消除彼位點處之醣基化之胺基酸取代。此一醣基化可增加抗體對抗原之親和力。此一方法更詳細闡述於Co等人之美國專利第5,714,350號及第6,350,861號中。 另外或或者，可製備具有經改變之醣基化類型之抗體，例如具有減少量之岩藻醣基殘基之經低岩藻醣基化之抗體或具有增加之二等分GlcNac結構之抗體。已證實該經改變醣基化模式增加抗體之ADCC能力。該等碳水化合物修飾可藉由(例如)於具有經改變之醣基化機制之宿主細胞中表現抗體來達成。業內已闡述具有經改變之醣基化機制之細胞，且其可用作其中表現本發明之重組抗體以由此產生具有經改變之醣基化之抗體的宿主細胞。舉例而言，頒予Hang等人之EP 1,176,195闡述具有編碼岩藻醣轉移酶之功能破壞之FUT8基因之細胞系，從而在此一細胞系中表現之抗體展現低岩藻醣基化。Presta之PCT公開案WO 03/035835闡述變體CHO細胞系Lecl3細胞，其具有減小之將岩藻醣附接至Asn(297)連接之碳水化合物之能力，亦導致彼宿主細胞中所表現之抗體之低岩藻醣基化(亦參見Shields, R.L.等人2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740)。Umana等人之PCT公開案WO 99/54342闡述以下細胞系：其經改造以表現修飾糖蛋白之糖基轉移酶(例如β(1,4)-N乙醯基葡萄糖胺基轉移酶III (GnTIII))，從而經改造細胞系中所表現之抗體呈現增加之二等分GlcNac結構，此導致該等抗體之增加之ADCC活性(亦參見Umana等人1999 Nat. Biotech. 17:176-180)。
改造經改變抗體之方法
如上所述，本文所闡述之結合劑(例如作為結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)之結合劑)，且可使用本文所提供之VH及VL序列或全長重鏈及輕鏈序列(例如表2)藉由修飾全長重鏈及/或輕鏈序列、VH及/或VL序列或所附接恆定區來產生新抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)。因此，在本發明之另一態樣中，使用本發明抗FXI/FXIa抗體結合劑之結構特徵來產生保留本發明抗體之至少一種功能性質(例如結合至抗FXI/FXIa抗體，例如NOV1401)且亦逆轉抗FXI/FXIa抗體之一或多種活性(例如逆轉抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血活性)之結構相關性抗FXI/FXIa抗體結合劑。 舉例而言，本發明抗體之一或多個CDR區或其突變可與已知框架區及/或其他CDR重組組合以產生如上文所論述之其他經重組改造之本發明抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)。其他類型之修飾包含先前部分中所闡述者。用於改造方法之起始材料為一或多個本文中所提供之VH及/或VL序列或其一或多個CDR區。為產生經改造抗體，實際上不必製備(亦即表現為蛋白質形式)具有一或多個本文中所提供之VH及/或VL序列或其一或多個CDR區之抗體。而是，使用序列中所含資訊作為起始材料來產生衍生自原始序列之「第二代」序列，且然後製備「第二代」序列並表現為蛋白質形式。 因此，在另一態樣中，本發明提供製備經最佳化以用於表現於哺乳動物細胞中之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)之方法，該結合劑由以下部分組成：具有選自表2中所提供彼等序列之序列之全長重鏈抗體序列；及具有選自表2中所提供彼等序列之序列之全長輕鏈抗體序列；改變全長重鏈抗體序列及/或全長輕鏈抗體序列內之至少一個胺基酸殘基以產生至少一種經改變抗體序列；且將經改變抗體序列表現為蛋白質。在一實施例中，重鏈或輕鏈之改變位於重鏈或輕鏈之框架區中。 經改變抗體序列亦可藉由篩選具有固定CDR3序列或US2005/0255552中所闡述之最小必需結合決定簇以及CDR1及CDR2序列之多樣性的抗體文庫來製備。根據任何適於自抗體文庫篩選抗體之篩選技術(例如噬菌體顯示技術)實施篩選。 可使用標準分子生物學技術來製備及表現經改變抗體序列。由經改變抗體序列編碼之抗體係保留本文所闡述抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)之一種、一些或所有功能性質者，該等功能性質包含(但不限於) (例如)特異性結合抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)且接觸抗FXI/FXIa之一或多個CDR胺基酸殘基；抑制靶抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)至人類FXI及/或FXIa之結合；抑制靶抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)阻斷FXIa活性之能力；及抑制或逆轉靶抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之一或多種抗凝血效應。 在改造本發明抗體之方法之某些實施例中，可沿抗FXI/FXIa抗體結合劑編碼序列之全部或一部分隨機或選擇性引入突變且可篩選所得經修飾抗FXI/FXIa抗體結合劑之結合活性及/或如本文所闡述之其他功能性質。業內已闡述突變方法。舉例而言，PCT公開案WO 02/092780簡短闡述使用飽和誘變、合成連接組裝或其組合產生並篩選抗體突變之方法。或者，Lazar等人之PCT公開案WO 03/074679闡述使用計算篩選方法使抗體之生理化學性質最佳化之方法。 在本發明之某些態樣中，改造抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)以去除去醯胺化位點。已知去醯胺化造成肽或蛋白質之結構及功能變化。去醯胺化可導致生物活性降低以及蛋白質醫藥之藥物動力學及抗原性改變。(Anal Chem. 2005 Mar 1 ;77(5): 1432-9)。 在本發明之某些態樣中，改造本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如抗體NOV1401結合劑)以增加pI且改良其藥物樣性質。蛋白質之pI係分子之整體生物物理性質之關鍵決定子。具有低pI之抗體及多肽已知具有較小可溶性，較不穩定，且易於聚集。另外，具有低pI之抗體及多肽之純化具有挑戰性且可尤其在放大用於臨床應用期間成問題。增加本發明結合劑(例如抗體或Fab)之pI可改良其溶解性，從而使得能夠在較高濃度(＞100 mg/ml)下調配抗體。在高濃度(例如＞100mg/ml)下調配抗體可提供能夠投與較高劑量抗體之優點，此繼而可使得能夠減小投藥頻率，此係治療慢性疾病(包含血栓及/或血栓栓塞性病症)之重大優點。較高pI亦可增加抗體之IgG形式之FcRn調介之再循環，由此使得藥物能夠在身體中保持較長持續時間，從而需要較少注射。最後，抗體之整體穩定性因較高pI而得以顯著改良，從而較長儲放壽命及活體內生物活性。在具體態樣中，抗FXI/FXIa抗體結合劑之pI大於或等於8.2。 經改變抗體之功能性質可使用業內可獲得及/或本文中所闡述之標準分析(例如實例中所闡述者，例如ELISA、aPTT分析、TGA分析)來評估。
預防性及治療性用途
本發明係關於逆轉(例如部分地逆轉)或降低使用抗FXI/FXIa抗體或其抗原結合片段治療之患者中抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗凝血效應之方法，其包括投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠逆轉一或多種抗凝血效應之結合劑(例如抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))。在具體態樣中，患者針對急救手術/緊急程序及在危及生命或不受控之出血中可能需要逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應。在特定態樣中，使用抗FXI/FXIa抗體治療患者以管控、治療、預防血栓栓塞性疾病或病症或減小其風險，例如減小患有心房顫動(例如非瓣膜性心房顫動)、慢性腎病(例如經歷血液透析之晚期腎衰竭(ESRD))之患者中之中風或血栓形成(例如全身性栓塞)之風險。在其他具體態樣中，患者已顯示高出血風險。在具體態樣中，用於該等方法中之抗FXI/FXIa抗體結合劑之非限制性實例包含本文(例如在表2中)所闡述之抗體(例如抗個體遺傳型抗體)及抗原結合片段(例如Fab片段)，例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9及IDT10；包括該等抗體之VH CDR及VL CDR之抗體；與該等抗體結合靶抗體NOV1401內之相同表位之抗體。 在某些態樣中，本發明係關於減小投與抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之個體中之凝血時間之方法，其包括投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠抑制抗FXI/FXIa抗體至人類FXI/FXIa之結合之結合劑(例如抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))。 在具體態樣中，本發明係關於管控使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療之患者中之出血或出血風險或減小出血或出血風險之方法，其包括投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠逆轉一或多種抗凝血效應之結合劑(例如抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))。在具體態樣中，患者針對急救手術/緊急程序及在危及生命或不受控之出血中可能需要逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應。在特定態樣中，使用抗FXI/FXIa抗體治療患者以管控、治療、預防血栓栓塞性疾病或病症或減小其風險，例如減小患有心房顫動(例如非瓣膜性心房顫動)、慢性腎病(例如經歷血液透析之晚期腎衰竭(ESRD))之患者中之中風或血栓形成(例如全身性栓塞)之風險。在其他具體態樣中，患者已顯示高出血風險。在具體態樣中，用於該等方法中之抗FXI/FXIa抗體結合劑之非限制性實例包含本文(例如在表2中)所闡述之抗體(例如抗個體遺傳型抗體或其片段(例如Fab))及抗原結合片段(例如Fab片段)，例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9及IDT10；包括該等抗體之VH CDR及VL CDR之抗體；與該等抗體結合靶抗體NOV1401內之相同表位之抗體。 在一特定態樣中，本文提供管控使用本文所闡述抗FXI抗體(例如表1中所闡述之抗體，例如NOV1401或包括NOV1401之HCDR及LCDR之抗FXI抗體)治療或投與該抗體之患者中之出血或出血風險之方法，其包括向有需要之患者投與抗FXI抗體之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)之步驟，其中抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)特異性結合至抗FXI抗體且阻斷抗FXI抗體至FXI之結合。在具體實施例中，抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)逆轉本文所闡述抗FXI抗體之效應以減輕出血風險(例如在急切重大手術或創傷期間)。 在具體態樣中，抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)逆轉或抑制抗FXI抗體之抗凝血效應。在特定態樣中，將抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)投與有需要之患者以短暫逆轉本文所闡述抗FXI抗體(例如表1中所闡述之抗體，例如NOV1401或包括NOV1401之HCDR及LCDR之抗FXI抗體)之抗凝血效應。 在一特定態樣中，本文提供管控使用抗FXI抗體(例如NOV1401) (例如SEQ ID NO: 14及25)治療或投與該抗體之患者中之出血或出血風險之方法，其包括向有需要之患者投與抗FXI抗體(例如NOV1401) (例如SEQ ID NO: 14及25)之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)之步驟，其中抗個體遺傳型或其抗原結合片段(例如Fab)特異性結合至抗FXI抗體(例如NOV1401) (例如SEQ ID NO: 14及25)之抗原結合區且阻斷抗FXI抗體至FXI及/或FXIa之結合。在一具體實施例中，FXI抗體(例如NOV1401) (例如SEQ ID NO: 14及25)之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab)抗逆轉或抑制抗FXI抗體(例如NOV1401)之一或多種抗凝血效應。在某些實施例中，達成抗FXI抗體(例如NOV1401)之一或多種抗凝血效應之短暫逆轉或抑制。在具體實施例中，在短暫逆轉或抑制FXI抗體(例如NOV1401)後，再次向患者投與抗FXI抗體(例如NOV1401)。 如本文中所使用，術語「有效量」或「治療有效量」係指足以減小及/或改善給定病狀、病症或疾病及/或其相關症狀之嚴重程度及/或持續時間之治療劑(例如本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗個體遺傳型抗體)或本文所提供之醫藥組合物)之量。該等術語亦涵蓋達成以下情形所需之量：減小、減緩或改善給定病狀、病症或疾病之前進或進展、減小、減緩或改善給定病狀、病症或疾病之復發、發生或發作及/或改良或增強另一治療劑(例如除本文所提供抗FXI/FXIa抗體結合劑外之治療劑)之預防性或治療性效應。在一些態樣中，本文所用之「有效量」亦係指本文所闡述抗體達成諸如以下等指定結果之量：減小或逆轉靶抗FXI/FXIa抗體之一或多種抗凝血效應(例如aPTT延長及在凝血酶生成分析(TGA)中於人類血漿中凝血酶之量之減小)；及減小或阻斷靶抗FXI/FXIa抗體至FXI/FXIa之結合。 在具體態樣中，已使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療可需要或可受益於本文所闡述方法(例如使用抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗凝血效應之方法)之患者以管控、治療、預防血栓栓塞性疾病或病症(例如血栓性中風、心房顫動、心房顫動中之中風預防(SPAF)、深層靜脈血栓形成、靜脈血栓栓塞、肺栓塞、急性冠狀動脈症候群(ACS)、缺血性中風、急性肢體缺血、慢性血栓栓塞性肺高血壓或全身性栓塞)或減小其風險。在其他具體態樣中，患者已顯示高出血風險。 在其他態樣中，已使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療可需要或可受益於本文所闡述方法(例如逆轉抗FXI/FXIa抗體結合劑之抗凝血效應之方法)之患者以用於治療急性VTE、一級及延長二級預防VTE、預防經歷透析之患者(患有或不患有AF)中之主要不良血栓栓塞性事件、預防經歷PCI及接受單一或雙重血小板療法之CAD患者中之主要心血管及腦事件(MACCE)、後急性冠狀動脈症候群(ACS)患者、肝素誘導之血小板減少症(HIT)、預防心臟衰竭患者中之血栓栓塞性事件及二級中風預防。 在具體態樣中，下列個體組中之一者正使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)進行治療且可需要或受益於本文所闡述之方法(例如使用抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗凝血效應之方法)： ● 患有關於慢性抗凝血療法之適應症(例如AF、左心室血栓、先前心源性栓塞性中風)之個體 ● 處於重大出血之中等風險至高風險下之個體； ● 經歷使用支架之選擇性或直接經皮冠狀動脈干預(PCI)之個體，其可需要接受雙重抗血小板療法(阿司匹林(aspirin)及P2Y12受體拮抗劑)以預防支架血栓形成。 在具體態樣中，已使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療可需要或受益於本文所闡述方法(例如使用抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗凝血效應之方法)之個體以管控、治療、預防下列病狀中之一者或減小其風險： ● 懷疑或證實心律失常(例如陣發性、持久性或永久性心房顫動或心房撲動)之個體之血栓栓塞； ● 心房顫動中之中風預防(SPAF)，其亞群體係經歷經皮冠狀動脈干預(PCI)之AF患者； ● 處於高出血風險下之患者中之急性靜脈血栓栓塞性事件(VTE)治療及延伸繼發性VTE預防； ● 在短暫性缺血性發作(TIA)或非失能性中風之後之二級預防中之腦及心血管事件及預防具有竇性心律之心臟衰竭中之血栓栓塞性事件； ● 針對心律失常經歷心臟複律之個體中之左心房凝塊形成及血栓栓塞； ● 在針對心律失常進行燒蝕程序之前、期間及之後之血栓形成； ● 靜脈血栓形成，此包含(但非排他性地)治療及二級預防下肢或上肢中之深層或淺層靜脈血栓形成、腹部及胸部靜脈中之血栓形成、竇血栓形成及頸靜脈中之血栓形成； ● 靜脈中之任一人工表面(例如導管或起搏器金屬線)上之血栓形成； ● 患有或不患有靜脈血栓形成之患者中之肺栓塞； ● 慢性血栓栓塞性肺高血壓(CTEPH)； ● 破裂動脈粥樣硬化性斑塊上之動脈血栓形成、動脈內假體或導管上之血栓形成及明顯正常動脈中之血栓形成，此包含(但非排他性地)急性冠狀動脈症候群、ST升高心肌梗塞、非ST升高心肌梗塞、不穩定性心絞痛、支架血栓形成、動脈系統中之任一人工表面之血栓形成及患有或不患有肺高血壓之個體中之肺動脈之血栓形成； ● 經歷經皮冠狀動脈干預(PCI)之患者中之血栓形成及血栓栓塞； ● 心源性栓塞性及隱原性中風； ● 患有浸潤性及非浸潤性癌症惡性腫瘤之患者中之血栓形成； ● 留置導管上之血栓形成； ● 嚴重患病患者中之血栓形成及血栓栓塞； ● 心臟血栓形成及血栓栓塞，此包含(但非排他性地)在心肌梗塞之後之心臟血栓形成、與諸如心臟動脈瘤、心肌纖維化、心臟增大及機能不全、心肌炎等病狀及心臟中之人工表面相關之心臟血栓形成； ● 患有具有或不具有心房顫動之瓣膜性心臟病之患者中之血栓栓塞； ● 瓣膜性機械或生物假體上之血栓栓塞； ● 在簡單或複雜心臟畸形之心臟修復之後具有自然或人工心臟補片、動脈或靜脈導管之患者中之損傷或創傷； ● 在膝蓋置換手術、臀部置換手術及矯形手術、胸部或腹部手術之後之靜脈血栓形成及血栓栓塞； ● 在神經手術(包含顱內及骨髓干預)之後之動脈或靜脈血栓形成； ● 先天性或獲得性血栓形成傾向，包含(但非排他性地)萊頓第五因子、凝血酶原突變、抗凝血酶III、蛋白質C及蛋白質S缺陷、因子XIII突變、家族性異常纖維蛋白原血症、纖維蛋白溶酶原之先天缺陷、增加濃度之因子XI、鐮狀細胞疾病、抗磷脂症候群、自體免疫疾病、慢性腸病、腎病症候群、溶血性尿毒癥、骨髓增殖性疾病、瀰漫性血管內凝血、陣發性夜間血尿症及肝素誘導之血小板減少症； ● -慢性腎病中之血栓形成及血栓栓塞； ● 晚期腎疾病(ESRD)中之血栓形成及血栓栓塞； ● 患有慢性腎病或ESRD且經歷血液透析之患者中之血栓形成及血栓栓塞；及 ● 經歷血液透析及/或體外膜式氧合之患者中之血栓形成及血栓栓塞。 在一具體態樣中，將抗FXI/FXIa抗體結合劑用於減小使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體以減小中風及/或全身性栓塞之風險之患者中之出血或出血風險或管控出血或出血風險的方法中，其中患者患有非瓣膜性心房顫動。 在一具體態樣中，將抗FXI/FXIa抗體結合劑用於減小使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體以減小中風及/或全身性栓塞之風險之患者中之出血或出血風險或管控出血或出血風險的方法中，其中患者患有非瓣膜性心房顫動且已顯示高出血風險。 在一具體態樣中，將抗FXI/FXIa抗體結合劑用於減小使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體以減小中風及/或全身性栓塞之風險之患者中之出血或出血風險或管控出血或出血風險的方法中，其中患者患有ESRD且正經歷血液透析。 在一具體態樣中，將抗FXI/FXIa抗體結合劑用於減小使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體以減小中風及/或全身性栓塞之風險之患者中之出血或出血風險或管控出血或出血風險的方法中，其中患者患有非瓣膜性心房顫動及ESRD且正經歷血液透析。 在具體態樣中，已使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)與其他藥劑之組合來治療可需要或受益於本文所闡述方法(例如使用抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗凝血效應之方法)之個體以用於預防、治療或改進血栓栓塞性病症。舉例而言，可將他汀類療法與本發明之FXIa抗體及抗原結合片段組合使用以用於治療患有血栓及/或血栓栓塞性病症之患者。該等經歷組合療法之個體可需要或受益於本文所闡述之方法(例如使用抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗凝血效應之方法)。 在一具體態樣中，本文所提供減小使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體之患者中之出血或出血風險或管控出血或出血風險之方法，該方法包括投與特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)且逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應之結合劑。在特定態樣中，出血或出血風險與創傷、手術或產後有關。在另一特定態樣中，出血或出血風險與急救手術或緊急程序有關。在其他特定態樣中，出血危及生命或不受控。在具體態樣中，結合劑係抗體，例如特異性結合抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗個體遺傳型抗體。在其他具體態樣中，結合劑係特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之可變區內之一或多個表位之抗個體遺傳型抗體。在更具體態樣中，結合劑係特異性結合至抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)之抗個體遺傳型抗體之Fab片段。在特定態樣中，結合劑係包括選自表2之胺基酸序列之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段。在特定態樣中，結合劑係包括如表2中所陳述抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10之VH及VL胺基酸序列之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)。在特定態樣中，結合劑係包括如表2中所陳述抗體IDT2、IDT3、IDT4或IDT5之VH及VL胺基酸序列之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)。在特定態樣中，結合劑係包括如表2中所陳述抗體IDT1或IDT3之VH及VL胺基酸序列之抗個體遺傳型抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)。 在具體態樣中，出血通常與(但不限於)創傷、手術、月經或產後有關。因此，在該等情況下，使用抗FXI/FXIa抗體(例如NOV1401)治療之個體可需要迅速及有效之治療劑(例如本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑)以減小出血或減小出血風險。在具體態樣中，延長出血可發生於嚴重創傷之後或手術(例如涉及具有高纖維蛋白溶解面積之器官(例如頰黏膜、鼻黏膜、生殖器黏膜或泌尿黏膜)之手術)之後。拔牙、扁桃體切除術及子宮或前列腺燒蝕係使得承擔高出血風險之手術之額外非限制性實例。在具體態樣中，同時使用抗血小板劑、其他抗凝血劑及纖維蛋白溶解劑可增加出血風險。 在某些態樣中，期望短暫逆轉或抑制抗FXI抗體(例如抗體NOV1401)之一或多種抗凝血效應。在一特定態樣中，本文提供減小或管控使用抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)治療或投與該抗體之患者中之出血或出血風險之方法，其包括以下步驟：經一定時間段(例如1小時至24小時或至48小時)向有需要之患者投與本文所闡述之結合劑(例如抗體IDT1、IDT2、IDT3、IDT4、IDT5、IDT6、IDT7、IDT8、IDT9或IDT10)或其Fab片段一次或兩次，隨後投與抗FXI/FXIa抗體，其中達成抗FXI抗體之一或多種抗凝血效應之短暫逆轉或抑制。 在某些態樣中，本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑可與另一抗凝血逆轉治療劑組合投與。用於逆轉抗凝血效應之習用策略之非限制性實例包含(i)使用膠體、類晶體、人類血漿或諸如白蛋白等血漿蛋白進行補液；或(ii)使用濃縮紅血或全血進行輸液。用於(例如)在嚴重緊急狀況情形下逆轉抗凝血效應之療法之實例包含(但不限於)促止血血液組份(例如新鮮冷凍血漿(FFP)、凝血酶原複合濃縮物(PCC)及活化PCC [(APCC)；例如因子VIII抑制劑旁路活性(FEIBA)])及重組活化因子VII (rFVIIa)。 在具體態樣中，本發明係關於逆轉使用抗FXI/FXIa抗體或其抗原結合片段治療之患者中抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗凝血效應之方法，其包括(i)向患者投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠逆轉一或多種抗凝血效應之結合劑(例如抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))；及(ii)向患者投與另一抗凝血逆轉治療劑，例如新鮮冷凍血漿(FFP)、凝血酶原複合濃縮物(PCC)、活化PCC或重組活化因子VII (rFVIIa)。在具體態樣中，本發明係關於逆轉a使用抗FXI/FXIa抗體或其抗原結合片段治療之患者中抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗凝血效應之方法，其包括(i)向患者投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠逆轉一或多種抗凝血效應之結合劑(例如抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))；及(ii)向患者投與新鮮冷凍血漿(FFP)。在具體態樣中，該方法達成穩態。 在某些態樣中，本文提供管控使用本文所提供抗FXI抗體(例如表1中所闡述之抗體，例如包括NOV1401之VL CDR及VHCDR之抗FXI抗體)治療之患者中之出血之方法，該方法包括短暫逆轉抗凝血效應足夠時間以管控出血。在具體實施例中，逆轉抗凝血效應之步驟包括(i)使用膠體、類晶體、人類血漿或諸如白蛋白等血漿蛋白進行補液；或(ii)使用濃縮紅血或全血進行輸液。在具體態樣中，用於(例如)在嚴重緊急狀況情形下逆轉抗凝血效應之治療劑包含(但不限於)促止血血液組份(例如新鮮冷凍血漿(FFP)、凝血酶原複合濃縮物(PCC)及活化PCC ((APCC)；例如因子VIII抑制劑旁路活性(FEIBA)))及重組活化因子VII (rFVIIa)。在一特定態樣中，方案可包括經24-48小時每2-4小時以30 μg/kg之劑量投與rFVIIa、隨後以15-30 μg/kg之劑量投與rFVIIa以及經5至7天每6小時投與1 g胺甲環酸，其可恢復使用抗FXI抗體(例如NOV1401或包括NOV1401之VL CDR及VH CDR之抗體)治療且經歷重大手術之個體及具有活性不可及出血位點之患者中之止血且停止出血。舉例而言，Riddell等人報導4名具有嚴重FXI缺陷、不使用抑制劑且經歷手術之患者中之經歷(Riddell等人，2011, Thromb.Haemost., 106: 521-527)；在誘導麻醉下經靜脈內向患者投與30 μg/kg rFVIIa及1 g胺甲環酸。以2至4小時間隔投與15-30 μg/kg rFVIIa之後續濃注劑量，如由旋轉血栓彈力描記術(ROTEM)結果所引導。在具體實例中，使用rFVIIa以上文所提及劑量治療患者24-48小時。在特定實例中，繼續每6小時投與1 g胺甲環酸5天。在此較小系列中，劑量低達15-30 μg/kg之rFVIIa與胺甲環酸之組合可安全且有效地校正此研究中之嚴重FXI缺陷之止血缺陷。在包括4名具有嚴重FXI缺陷、使用抑制劑(通常在將血液產品輸液或投與具有嚴重FXI缺陷之患者之後獲得之自體中和FXI抗體)且經歷5次手術之患者之另一研究中，作者(Livnat等人，2009, Thromb. Haemost.；102: 487-492)應用下列方案：在手術之前兩小時經口投與1 g胺甲環酸，然後患者在即將干預之前經靜脈內再接收1 g胺甲環酸。在完成手術時，輸注劑量介於15 μg/kg至30 μg/kg之間之重組FVIIa。隨後，經至少7天每6小時給予1 g口服胺甲環酸。將纖維蛋白膠噴霧於一名患者中之切除膽囊床上。此方案保證了具有嚴重FXI缺陷且使用抑制劑之患者中之正常止血。在一態樣中，可在牙科手術期間於具有FXI缺陷之患者中使用纖維蛋白膠來恢復局部止血(Bolton-Maggs (2000) Haemophilia；6 (S1):100-9)。在關於用以管控使用本文所提供抗FXI抗體(例如NOV1401)治療之患者中之出血之方法的某一實施例中，可使用由1 g胺甲環酸(每6小時，經5至7天)以及使用纖維蛋白膠組成之方案來確立經歷微小手術之個體及具有可及出血位點(包含口腔及鼻出血事件)之個體中的局部止血。 在某些態樣中，本文提供管控使用本文所提供抗FXI/FXIa抗體(例如表1中所闡述之抗體(例如NOV1401)或包括NOV1401之VL CDR及VHCDR之抗FXI/FXIa抗體)治療之患者中之出血或出血風險之方法，該方法包括向患者投與能夠逆轉(例如部分地逆轉)抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應之抗凝血逆轉治療劑。在具體態樣中，能夠逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應之抗凝血逆轉治療劑係rFVIIa (重組因子VIIa)、艾米珠單抗(emicizumab) (ACE910)、胺甲環酸、新鮮冷凍血漿(FFP)、海默來溫(Hemoeleven)、凝血酶原複合濃縮物(PCC)、活化PCC或FEIBA (FVIII抑制劑複合物)。在具體態樣中，單獨投與抗凝血逆轉治療劑，或與本文所提供之結合劑(例如表2中所闡述之結合劑)組合投與。 在具體態樣中，本發明係關於逆轉(例如部分地逆轉)使用抗FXI/FXIa抗體(例如表1中所闡述之抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)或包括NOV1401之VH CDR及VL CDR之抗FXI/FXIa抗體)或其抗原結合片段治療之患者中抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應之方法，其包括向患者投與抗凝血逆轉治療劑(例如 rFVIIa (重組因子VIIa)、艾米珠單抗(ACE910)、胺甲環酸、新鮮冷凍血漿(FFP)、海默來溫/凝血酶原複合濃縮物(PCC)、活化PCC或FEIBA (FVIII抑制劑複合物))。 在具體態樣中，本發明係關於逆轉使用抗FXI/FXIa抗體(例如表1中所闡述之抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)或包括NOV1401之VH CDR及VL CDR之抗FXI/FXIa抗體)或其抗原結合片段治療之患者中抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應之方法，其包括(i)向患者投與有效量之本文所提供之結合劑(例如結合抗FXI/FXIa抗體且能夠逆轉一或多種抗凝血效應之結合劑(例如抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)))；及(ii)向患者投與另一抗凝血逆轉治療劑(例如rFVIIa (重組因子VIIa)、艾米珠單抗(ACE910)、胺甲環酸、新鮮冷凍血漿(FFP)、海默來溫、凝血酶原複合濃縮物(PCC)、活化PCC或FEIBA (FVIII抑制劑複合物))。 在具體態樣中，血栓栓塞性事件之風險(包含中風、全身性栓塞、冠狀動脈或周邊動脈血栓形成、靜脈血栓形成及肺栓塞)隨著誘病因素(例如血栓形成傾向、血管壁損害及腫瘤)之存在而增加。醫學史、家族前情及相關共病之評估可幫助根據血栓栓塞性風險將患者分級。在患有心房顫動之患者中，已研發若干評分系統(例如CHADS2及CHA2DS2-VASc)來評價中風風險。每一系統係基於來自隨機化試驗及臨床與流行病學小組研究之數據來研發，且將中風風險因子之加權、多變量式轉變成簡化、易於使用之助記裝置、算法、計算器或在線工具。使用CHADS2風險評分作為分級工具來預測心房顫動患者中之血栓栓塞性風險(Lip (2011) Am J Med;124(2):111-4；Camm等人(2012) Eur Heart J；33: 2719-2747)；然而，累積證據展示，CHA2DS2-VASc與諸如CHADS2等評分至少同等良好或可能較佳地鑑別發生中風及血栓栓塞之患者且最終較佳地鑑別患有心房顫動之「真正低風險」患者。導則(Camm等人(2012) Eur Heart J 33, 2719-2747；January等人，AHA/ACC/HRS Atrial Fibrillation Guideline；J Am Coll Cardiol 2014;64:2246-80)當前推薦使用CHA2DS2-VASc評分來指導關於患者應受益於抗凝血療法之決定且亦鑑別不能保證抗凝血療法之低風險患者。 研發專用於心房顫動患者之出血風險評價工具(例如HAS-BLED、ATRIA、HEMORR2HAGES或BIT及ABC風險評分)來預測患有心房顫動之患者中之出血風險。不幸的是，因出血風險與中風風險密切相關，故彼等風險評分係引導使用維他命K拮抗劑(例如華法林或NOACS)之治療決定之極其受限值。然而，出血風險評分可變得相當有助於鑑別可受益於具有減小之出血風險之新治療劑(例如抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401))之患者。 在某些態樣中，可藉由先前醫學出血史(例如在手術期間或之後之出血或在使用抗凝血劑(例如華法林)治療時之出血)來鑑別具有出血風險(例如顯示高出血風險)之個體。另外，可藉由業內已知之活體外/離體分析來鑑別具有出血風險(例如顯示高出血風險)之個體，例如使用個體血漿之量測aPTT及外因性凝血路徑之其他生物標記物(例如凝血酶原時間(PT)及凝血酶時間(TT))之分析。 在特定態樣中，具有中等至高中風及全身性栓塞風險之個體之CHA2DS2VASc風險評分≥ 2。在其他特定態樣中，將HAS BLED風險評分≥ 3之個體描述為具有高出血風險(參見Gallego等人(2012) Carc Arrhythm Electrophysiol.；5:312-318及Friberg等人(2012) Circulation.；125:2298-2307)。 在具體態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體係至少18歲之人類個體。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體係至少50歲之人類個體。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體係至少55歲之人類個體。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體係至少60歲之人類個體。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體係至少65歲之人類個體。 在特定態樣中，藉由本文所提供方法(例如治療VTE或二級預防VTE之方法)治療之個體之年齡介於2歲與18歲之間。在特定態樣中，藉由本文所提供方法(例如治療VTE或二級預防VTE之方法)治療之個體之年齡介於12歲與18歲之間。在特定態樣中，藉由本文所提供方法(例如治療VTE或二級預防VTE之方法)治療之個體係至少2歲且小於18歲之兒童。在特定態樣中，藉由本文所提供方法(例如治療VTE或二級預防VTE之方法)治療之個體係至少12歲且小於18歲之兒童。 在具體態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體(例如人類個體)具有大於或等於18 kg/m
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之身體質量指數(BMI)。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體具有大於或等於30 kg/m
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之BMI。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體具有大於或等於35 kg/m
2
之BMI。在另一態樣中，藉由本文所提供方法治療之個體具有大於或等於40 kg/m
2
之BMI。 在某些態樣中，使用本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗凝血效應之方法產生以下結果：(i)減小或逆轉aPTT延長，如使用利用人類血漿之aPTT分析所測定；(ii)減小在凝血酶生成分析(TGA)中於人類血漿中凝血酶之量；及/或(iii)減小或逆轉出血或出血風險。在具體態樣中，抗凝血效應之逆轉小於100%，但足以達成臨床上有益之結果(例如減小或停止出血)。 在某些態樣中，使用本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑逆轉抗FXI/FXIa抗體(例如抗體NOV1401)之抗凝血效應之方法使得aPTT延長(如使用利用人類血漿之aPTT分析所測定)減小或逆轉至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。
醫藥組合物
本發明提供包括調配至一起之本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑(例如表2中所闡述之抗體及其Fab片段)及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。該等組合物可另外含有一或多種適於治療或預防(例如)血栓栓塞性病症(例如血栓病症)之其他治療劑。醫藥上可接受之載劑增強或穩定該組合物，或可用於促進該組合物之製備。醫藥上可接受之載劑包含生理上相容之溶劑、分散介質、塗覆劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑及諸如此類。 本發明醫藥組合物可藉由業內已知之各種方法投與。投與之途徑及/或模式視期望結果而變。投與較佳係靜脈內、肌內、腹膜腔內或皮下的，或毗鄰靶位點投與。醫藥上可接受之載劑應適於靜脈內、肌內、皮下、非經腸、脊柱或表皮投與(例如藉由注射或輸注)。視投與途徑而定，活性化合物(亦即抗體、雙特異性及多特異性分子)可塗覆於材料中以保護該化合物免受酸及可使該化合物鈍化之其他天然條件之作用。 在具體態樣中，組合物應無菌且係流體。可(例如)藉由以下各項來維持合適流動性：使用諸如卵磷酯等塗覆材料，若為分散液則藉由維持所需粒徑，以及使用表面活性劑。在許多情形下，組合物中較佳包含等滲劑，例如糖、多元醇(例如甘露醇或山梨醇)及氯化鈉。藉由向組合物中納入可延遲吸收之試劑(例如單硬脂酸鋁或明膠)可以使可注射組合物的吸收延長。 可參照業內熟知且以常規方式實踐之方法來製備本發明醫藥組合物。例如參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co.，第20版，2000；及Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson編輯，Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。較佳在GMP條件下製造醫藥組合物。通常，本發明醫藥組合物中採用治療有效劑量(effective dose或efficacious dose)之結合FXIa之抗體。藉由熟習此項技術者已知之習用方法將結合FXIa之抗體調配成醫藥上可接受之劑型。調整劑量方案以提供最佳期望反應(例如治療反應)。舉例而言，可投與單次推注，可經一段時間投與若干分開劑量或可如治療狀況緊急情況所指示按比例減少或增加劑量。以劑量單位形式來調配非經腸組合物尤其有利於方便投與及劑量一致性。本文所用之劑量單位形式意指適於作為單位劑量供擬治療個體使用之物理分散單位；各單位含有預定量之活性化合物，該預定量經計算與所需醫藥載劑一起產生期望治療效應。 本發明醫藥組合物中之活性成份之實際劑量量可有所不同以獲得有效達成對特定患者、組合物及投與模式有期望治療反應而對患者無毒性之活性成份量。所選劑量量將視多種藥物動力學因素而定，該等參數包含所採用之本發明特定組合物之活性、投與途徑、投與時間、所採用之特定化合物之排泄速率、治療之持續時間、與所採用之特定組合物組合使用之其他藥物、化合物及/或材料、所治療患者之年齡、性別、體重、身體狀況、一般健康狀況及先前醫學史以及類似因素。 內科醫師開始時所採用之本發明抗體在醫藥組合物中之劑量可低於達成期望治療效應所需量，且內科醫師逐漸增加該劑量直至達成期望效應為止。通常，本發明組合物有效治療本文所闡述之血栓及/或血栓栓塞性病症之劑量視許多不同因素而定，包含投與方式、靶位點、患者之生理狀態、所投與其他藥品及治療係預防性的還是治療性的。治療劑量需經調整以使安全性及效能最佳化。對於全身性投與抗體而言，劑量介於約0.01 mg/kg宿主體重至15 mg/kg宿主體重之間。對於投與抗體而言，劑量可介於0.1 mg至5 mg之間。例如0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.6 mg/kg、0.7 mg/kg、0.8 mg/kg、0.9 mg/kg、1.0 mg/kg、1.1 mg/kg、1.2 mg/kg、1.3 mg/kg、1.4 mg/kg、1.5 mg/kg、1.6 mg/kg、1.7 mg/kg、1.8 mg/kg、1.9 mg/kg、2.0 mg/kg、2.1 mg/kg、2.2 mg/kg、2.3 mg/kg、2.4 mg/kg、2.5 mg/kg、2.6 mg/kg、2.7 mg/kg、2.8 mg/kg、2.9 mg/kg、3.0 mg/kg、3.1 mg/kg、3.2 mg/kg、3.3 mg/kg、3.4 mg/kg、3.5 mg/kg、3.6 mg/kg、3.7 mg/kg、3.8 mg/kg、3.9 mg/kg、4.0 mg/kg、4.1 mg/kg、4.2 mg/kg、4.3 mg/kg、4.4 mg/kg、4.5 mg/kg、4.6 mg/kg、4.7 mg/kg、4.8 mg/kg、4.9 mg/kg或5.0 mg/kg。 在某一態樣中，舉例而言，藉由靜脈內或皮下途徑以在5 mg至600 mg範圍內之劑量來投與本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑。 在某一態樣中，舉例而言，藉由靜脈內或皮下途徑以以下劑量來投與本文所闡述之抗FXI/FXIa抗體結合劑：大約5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg、60 mg、90 mg、100 mg、120 mg、150 mg、180 mg、200 mg、210 mg、240 mg、250 mg、270 mg、300 mg、330 mg、350 mg、360 mg、390 mg、400 mg、420 mg、450 mg、480 mg、500 mg、510 mg、540 mg、550 mg、570 mg或600 mg。 在特定態樣中，通常投與抗體多次。單一劑量間之間隔可係每週、每兩週、每月或每年的。間隔亦可如藉由量測抗體在患者中之血液濃度所指示為不規則的。另外，替代投藥間隔可由內科醫生確定，並每個月或根據有效性視需要投與。在全身性投與之一些方法中，調節劑量以達成1-1000 µg/ml及在一些方法中25-500 µg/ml之血漿抗體濃度。或者，可以持續釋放調配物形式投與抗體，在該情形下需要以較小頻率投與。劑量及頻率視抗體在患者中之半衰期而變。通常，人類化抗體展示較嵌合抗體及非人類抗體長之半衰期。投與之劑量及頻率可端視治療為預防性抑或治療性而變化。在預防性應用之某些態樣中，在長時間內以相對不頻繁間隔投與相對較低劑量。一些患者在其餘生中持續接受治療。在治療性應用之某些態樣中，有時需要相對較短間隔之相對較高劑量，直至減緩或終止疾病進展為止，且較佳地直至患者展示疾病症狀部分或完全改善為止。然後，可向患者投與預防方案。 在具體態樣中，在期望逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應時，投與本文所闡述之抗FXI/FXIa結合劑短暫持續時間或時間段。在具體態樣中，在期望逆轉抗FXI/FXIa抗體之抗凝血效應以達成穩態時，一次、數次投與本文所闡述之抗FXI/FXIa結合劑短暫持續時間或時間段(例如1小時至24小時或至48小時，但通常不超過7天)。
實例
提供下列實例以進一步闡釋本發明，但並不限制其範圍。熟習此項技術者易於明瞭本發明之其他變體且由隨附申請專利範圍涵蓋。
實例 1 人類 Fab 噬菌體文庫淘選 噬菌體顯示淘選
藉由選擇結合至NOV1401之純系使用市售噬菌體顯示文庫-Morphosys HuCAL PLATINUM
®
文庫作為抗體來源來生成針對NOV1401之抗體。噬菌粒文庫係基於HuCAL
®
概念(Knappik等人，2000, J Mol Biol 296: 57-86)且採用CysDisplayTM技術來顯示噬菌體表面上之Fab (WO01/05950)。為分離抗NOV1401抗體，採用固相淘選策略，其中將NOV1401直接塗覆至Maxisorp™ (Nunc) 96孔板上，隨後使用增加之洗滌嚴格度淘選三輪。
所選 Fab 片段之亞選殖及微表現
為促進可溶性Fab之快速表現，將所選HuCALPLATINUM
®
噬菌體之Fab編碼插入體自pMORPH
®
30顯示載體亞選殖至pMORPH
®
x11表現載體pMORPH
®
x11_FH中。 對於初始篩選及表徵而言，使用補充有2.5 mg/mL溶菌酶之2× BBS溶液(400mM硼酸、300mM氯化鈉、5mM EDTA)裂解表現Fab之個別大腸桿菌純系之過夜培養物。將含有Fab之大腸桿菌裂解物用於ELISA篩選。
ELISA 篩選
使用ELISA篩選，自針對NOV1401結合之淘選輸出鑑別單一Fab純系。使用含有Fab之粗製大腸桿菌裂解物測試Fab。 為鑑別結合NOV1401之Fab片段，使用5ug/ml NOV1401直接塗覆Maxisorp™ (Nunc) 384孔板。在使用Superblock
®
阻斷板之後，添加含有Fab之大腸桿菌裂解物。藉由結合鹼性磷酸酶之F(ab)2特異性山羊抗人類IgG (以1:5000稀釋)使用Attophos螢光受質(Roche，目錄編號11681982001)檢測Fab結合。在430 nm下激發之情況下，記錄535 nm下之螢光發射。
去除潛在去醯胺化位點之改造
為去除長期儲存中之潛在傾向，藉由使用絲胺酸或麩醯胺酸代替天門冬醯胺來去除潛在去醯胺化位點(Asn-Gly或Asn-Ser) 。經由基因合成來生成包含改變胺基酸之基因。
HuCAL®
Fab 片段之表現及純化
在大腸桿菌TG1 F-細胞中表現Fab片段。在37℃下培育培養物直至OD600達到0.5之值為止。藉由添加IPTG至最終濃度為0.75 mM來誘導Fab表現且在30及180 rpm下將進一步過夜培育培養物。收穫細胞且將其破碎。經由IMAC及凝膠過濾分離加His6標籤之Fab片段且藉由UV-分光光度法在280 nm下測定蛋白質濃度。
實例 2 結合數據 結合至 NOV1401 之抗 NOV1401 Fab 之表面電漿共振 (SPR) 結合分析
在ProteOn XPR36儀器(Bio-RadLaboratories, Inc.)上於PBS/T緩衝液(50 mM磷酸鹽、150 mM pH 7.4 NaCl、0.005% v/v Tween-20)在25℃下實施SPR結合實驗。使用標準胺偶合程序如由製造商所闡述將NOV1401 (「配體」)固定於活化ProteOn GLC感測器晶片(Bio-Rad Laboratories, Inc.)上。簡言之，在10 µg/ml之濃度下(於20 mM乙酸鈉下，pH 5.0)且在30 µl/min之流速下注射NOV1401 10 min。藉由注射1 M乙醇胺來阻斷未反應基團。 對於動力學研究而言，將抗NOV1401 Fab (「分析物」)稀釋於PBS/T緩衝液中以生成濃度介於0.125-4 nM之間之稀釋系列。將Fab以100 µL/min之流速注射於含有固定NOV1401之表面上且分別在220 s及1800 s之締合及解離時間下記錄感測圖。使用空白表面進行背景校正。無需再生表面，此乃因ProteOn蛋白質相互作用陣列系統容許在同一表面上平行運行最多6個結合實驗。 使用ProteOn Manager
TM
軟體第3.1.0.6版實施數據處理及分析(包含k締合、k解離及K
D
測定)。藉由應用蘭格繆爾(Langmuir) 1:1結合模型(整體設定Rmax)來擬合感測圖且自k締合及k解離計算解離常數。表3展示藉由SPR測得之10種抗NOV1401 Fab之解離常數。
表 3.SPR 結合數據之匯總 結合至 NOV1401 之抗 NOV1401 Fab 之溶液平衡滴定 (SET) 結合分析
在試樣緩衝液(PBS，pH 7.4，含有0.5 % (w/v) BSA及0.02 % Tween 20)中製備14份連續(2×) NOV1401稀釋液且將恆定濃度之抗NOV1401 Fab添加至濃度介於40 pM至240 pM之間之每一NOV1401中。在中試實驗中測定NOV1401稀釋系列之最佳恆定抗NOV1401 Fab濃度及最佳起始濃度。較弱結合劑使用10 nM NOV1401之起始濃度(K
D
~ 1nM或更高)且較強結合劑使用2 nM之起始濃度(K
D
＜ 0.2 nM)。 將30 μl/孔之每一稀釋混合物一式兩份分佈至384孔聚丙烯埃彭道夫(Eppendorf)微量板(MTP)中。試樣緩衝液用作陰性對照且不含抗原之試樣用作陽性對照(Bmax)。將板密封且在室溫下於板振盪器上培育過夜。藉由添加30 μl/孔之0.5 μg/ml生物素化NOV1401 (稀釋於PBS中)來塗覆來自Pierce®之鏈黴抗生物素蛋白(Streptavidin) (SA)板(預阻斷鏈黴抗生物素蛋白高結合能力384孔板，15505號)，密封且在室溫下於MTP振盪器上培育2 h。 在培育且使用PBST (含有0.05 % Tween 20之PBS)洗滌三次之後，將30 μl/孔之NOV1401/抗NOV1401 Fab製劑自聚丙烯MTP轉移至經NOV1401塗覆之SA板中且在室溫下於MTP振盪器上培育30 min。在三個額外洗滌步驟之後，將30 μl稀釋於試樣緩衝液中之0.5 μg/ml檢測抗體(山羊抗人類κ LC-HRP, BETHYL A80-115P號)添加至每一孔中且在室溫及振盪下培育1 h。在將板再次洗滌三次之後，將30 μl檢測試劑(LumiGLO過氧化酶化學發光受質，KPL 54-61-01號)添加至每一孔中。生成電化學發光(ECL)信號且立即使用發光成像儀(SpectraMax M5, Molecular Devices, LLC)進行檢測。 自每一分析內之重複量測計算平均ECL信號。藉由自所有數據點扣除最低值來對數據進行基線調節且針對相應抗原濃度繪圖。藉由使用下列非線性1:1結合曲線擬合模型根據Haenel等人，2005擬合圖線來測定K
D
值：
其中y繫扣除空白之ECL信號，[Fab]係所施加Fab濃度，x係所施加總可溶性抗原(此處係NOV1401)，Bmax係針對x = 0之扣除空白之ECL信號，且K
D
係解離常數。 9種抗NOV1401 Fab之SET結果匯總於表4中且代表性結合反應曲線展示於圖1中。可並不針對IDT6擬合SET數據且並不包含在內。
表 4. 抗 NOV1401 抗體之 SET 結果之匯總 實例 3 SPR 結合競爭
原則上，如實例2中所闡述來實施SPR實驗且具有下列變化。使用人類血漿源FXIa作為配體且使用標準胺偶合程序如所闡述且藉由以10 µg/ml之濃度(於20 mM乙酸鈉中，pH 5.0)且以30 µl/min之流速注射FXIa 10 min來固定於活化ProteOn GLC感測器晶片(Bio-Rad Laboratories, Inc.)上。 對於結合競爭研究而言，在PBS/T緩衝液中製備NOV1401及NOV1401與抗NOV1401 Fab之三種混合物(以1:1、1:2及1:10之莫耳比率)且以100 µL/min之流速同時注射於含有固定FXI之表面上。分別在220 s及1800 s之締合及解離時間下記錄感測圖。使用空白表面進行背景校正。 NOV1401/抗NOV1401 Fab混合物對固定FXIa所產生之結合反應顯著低於單獨之NOV1401，其中1/10混合物(NOV1401/抗NOV1401 Fab)並不展示FXIa結合。因SPR中之反應單位(RU)與結合至晶片之質量成正比，故增加抗NOV1401 Fab之濃度似乎可防止NOV1401結合至FXIa，從而指示抗NOV1401可結合至NOV1401且阻斷NOV1401至FXIa之結合。 圖2展示抗NOV1401 Fab之兩種代表性實例(IDT1、IDT3)。抗NOV1401 Fab顯著減小NOV1401至其抗原FXIa之結合，由此與FXIa競爭結合至NOV1401。在以10×莫耳過量(5×莫耳過量/NOV1401結合位點)添加至NOV1401溶液中時，抗NOV1401 Fab完全防止NOV1401結合至FXIa，從而指示抗NOV1401 Fab能夠中和溶液中之游離NOV1401。
實例 4 NOV1401 之抗凝血活性之逆轉
藉由使用活化部分凝血活素時間(aPTT)分析及凝血酶生成分析(TGA)來測試抗NOV1401 Fab對NOV1401之抗凝血活性之效應。
aPTT 分析：
自Technoclone GmbH (Vienna, Austria)購買低壓凍乾之正常人類血漿「凝血對照N」 (目錄編號5020050)。其係自所選健康供體之檸檬酸鹽血漿彙集而來。使用此正常血漿所獲得之凝血時間反映了涉及凝血之凝血因子之正常濃度。將凍乾血漿儲存於4℃下。在使用之前，藉由小心旋轉 小瓶來將血漿再懸浮於1 mL蒸餾水中且然後在室溫下保持10分鐘。 自Technoclone GmbH (Vienna, Austria)購買觸發內因性路徑之Dapttin TC (目錄編號5035090)，其含有磷脂、腦硫脂及矽酸鹽。將凍乾觸發劑重構於蒸餾水中且體積指示於小瓶上。 在蒸餾水中以25 mM之儲備濃度製備氯化鈣(Fluka，目錄編號21115)。使用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS, Life Technologies，目錄編號10010-023)作為抗體稀釋緩衝液。 在球式凝血計模型MC10 (Merlin medical, Germany)量測凝血時間，該模型係半自動化機械凝血檢測系統。該系統利用分佈有不銹鋼球之特殊光析槽(Merlin medical，目錄編號Z05100)。 將光析槽置於球式凝血計之量測孔中。在將試樣、血漿及觸發劑添加至光析槽中後，緩慢旋轉量測孔以使光析槽沿其縱向軸旋轉。因光析槽係以較小角度定位，故重力及慣性總是將球定位於光析槽之最低點處。與球位置正好相對者係磁感測器。在適當培育時段之後，在添加氯化鈣溶液下開啟計時器。隨著發生凝血，在反應混合物中形成纖維蛋白鏈。纖維蛋白鏈牽引球離開其觸發磁感測器中之脈衝之慣性位置。脈衝以電子方式停止計時器。 在PBS中製備NOV1401之連續稀釋液。將重構人類血漿、觸發試劑(Dapttin)、氯化鈣在37℃下之水浴中升溫10分鐘。 在含有不銹鋼球之專用光析槽中排他性地實施分析。移液方案概述於表5中。
表 5. 用於量測 aPTT 分析中之 NOV1401 活性之移液方案
在37℃之溫度下於上述Merlin球式凝血計中一式兩份量測試樣。 針對每一NOV1401濃度對凝血形成進行計時且針對相應抗體濃度繪圖。使用非線性回歸程式GraphPad Prism (GraphPad Spftware Inc., La Jolla, CA, USA)擬合所得劑量-反應曲線。藉由擬合劑量反應曲線，測定加倍初始凝血時間(含有無抗體血漿之試樣) (亦闡述為「2× aPTT」)之NOV1401濃度。
抗 NOV1401 Fab 阻斷 NOV1401 之抗凝血活性：
為測定抗NOV1401 Fab是否可阻斷NOV1401延長aPTT分析中之凝血時間之能力，生成於PBS中之若干NOV1401/抗NOV1401 Fab混合物，其中將NOV1401濃度保持恆定於在如上文所闡述單獨實驗中測得之2× aPTT所需之值。以等莫耳量(1/1)或以莫耳過量(通常1/3或1/5及1/10 (n/n))添加抗NOV1401 Fab。移液方案展示於表6中。
表 6. 用於量測抗 NOV1401 Fab 在 aPTT 分析中對 NOV1401 活性之效應之移液方案。
在37℃之溫度下於上述Merlin球式凝血計中一式兩份量測試樣。 兩種抗NOV1401 Fab - IDT1及IDT3之結果展示於圖3中。在0.096 µM之恆定NOV1401濃度下，增加之量可阻斷NOV1401對凝血之效應，如在aPTT分析中所量測。三倍莫耳過量之IDT1或IDT3 (1.5×莫耳過量/結合位點)足以完全抑制NOV1401對aPTT之效應。 該等數據可證實及擴展來自SPR競爭實驗之結果，此乃因其表明，抗NOV1401 Fab在與NOV1401預混合時會阻斷NOV1401之功能。總而言之，該等結果表明，抗NOV1401 Fab能夠防止游離NOV1401結合至FXI且阻斷FXI之效應。
抗 NOV1401 Fab 部分地逆轉 NOV1401 之抗凝血活性：
為測定抗NOV1401 Fab是否可逆轉NOV1401延長aPTT中之凝血時間之能力，在添加抗NOV1401 Fab之前，將NOV1401與含FXI人類血漿一起預培育5 min。如在阻斷實驗中，將NOV1401之濃度保持恆定於在如上文所闡述之單獨劑量反應實驗中測得之2× aPTT所需之值。 以等莫耳量(1/1)或以莫耳過量(通常1/3及1/10 (n/n))添加抗NOV1401 Fab。移液方案展示於表7中。
表 7. 用於量測藉由抗 NOV1401 Fab 逆轉 NOV1401 對 aPTT 之效應之移液方案。
在37℃之溫度下於上述Merlin球式凝血計中一式兩份量測試樣。使用下列方程式測定每一抗NOV1401 Fab之NOV1401凝血時間之逆轉百分比： 逆轉百分比= (NOV1401凝血時間-解毒劑凝血時間)/ (NOV1401凝血時間-初始凝血時間)*100。 所有10種抗NOV1401 Fab之結果展示於圖4中。在0.096 µM之恆定NOV1401濃度下，增加在將NOV1401與含FXI人類血漿一起培育之後添加之抗NOV1401 Fab之量可部分地逆轉NOV1401對凝血之效應，如在aPTT分析中所量測。儘管所有抗NOV1401皆展示一定逆轉，在給定濃度下之逆轉程度有所不同且在10×莫耳過量下觀察到55-65%之最大逆轉。所有抗NOV1401 Fab之逆轉百分比匯總於表8中。該等結果表明，抗NOV1401 Fabs能夠逆轉、至少部分地逆轉NOV1401之抗凝血效應，如在aPTT分析中所量測。
表 8 ：抗 NOV1401 抗體之 aPTT 逆轉數據之匯總 凝血酶生成分析：
為在另一功能分析中證實在aPTT分析中所觀察之NOV1401抗凝血活性之逆轉，採用TGA來量測經由凝血酶反饋迴路生成之凝血酶，其取決於FXIa之活性。 對於TGA而言，自Technoclone GmbH (目錄編號5020040)購買凍乾之正常人類血漿(凝血對照N)且以由製造商指示之體積重構於蒸餾水中。 使用來自Technoclone GmbH之螢光受質Z-Gly-Gly-Arg-AMC (目錄編號5006230)來製備受質溶液。將凍乾受質之等分試樣保持於4℃下。在用於分析中之前20分鐘，將受質新溶於指示於小瓶上之一定體積蒸餾水中。重構受質溶液含有1 mM濃度之螢光肽及15 mM濃度之CaCl2。 自Thrombinoscope購買觸發試劑「乏血小板血漿(PPP)-低濃度試劑」 (目錄編號TS31.00)且重構於如小瓶上所指示之蒸餾水中。「PPP-低濃度試劑」以極低濃度含有磷脂及組織因子之混合物。將該試劑在即將使用之前8倍稀釋於80 mM pH7.4 Tris/HCl、0.05% (w/v) CHAPS中。 將試樣等分且在購自Costar之96孔黑色/透明底板(產品編號3603)中量測。對於自動化轉移而言，將試樣置於V形底96孔板(Costar, 3894)中且使用CyBio自動化系統(Analytik Jena US, Woburn, MA, USA)進行轉移。 將重構人類血漿、觸發試劑「PPP-低濃度試劑」及受質在37℃下於水浴中預培育10分鐘。在96孔板中自5 µM之NOV1401濃度(5×最高最終濃度1 µM)開始製備於PBS中之連續1:3抗體稀釋液且總共稀釋8次。將222 µl觸發試劑與1108 µl受質溶液混合以生成10+50觸發試劑受質混合物。在V形底96孔板之每孔中添加80 µl以用於隨後使用自動化系統進行轉移。將板保持於37℃下。根據表9中給出之方案添加試劑。
表 9. 用於使用 NOV1401 之 TGA 之移液方案
使用自動化系統轉移觸發劑/受質混合物。在添加混合物之後，立即使用Synergy Neo儀器(BioTek Instrument Inc., Winooski, VT, USA)記錄分別在360 nm及460 nm下之激發及發射。在37℃之溫度下於讀板儀中以55秒之間隔一式兩份量測試樣90分鐘。 為生成峰凝血酶濃度值，使用由Technoclone提供之TGA評估軟體文件處理數據。為生成峰凝血酶濃度對抗體濃度之繪圖，使用GraphPad軟體擬合數據。將該等數據在GraphPad Prism5軟體(GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA)中擬合至非線性回歸模型。使用內部4參數劑量-反應曲線方程式(可變斜率)測定IC50值：y =最小值+ (最大值-最小值) / (1 + 10^ ((LogIC50- x)*Hillslope))，其中y係在抑制劑濃度x下形成之最大凝血酶濃度，且最大值及最小值分別代表在不含抑制劑及最高抑制劑濃度下之凝血酶濃度。 NOV1401劑量依賴性地減少TGA中之凝血酶且使用藉由此方法測得之IC
50
值作為使用抗NOV1401 Fab之逆轉實驗中之NOV1401濃度。
抗 NOV1401 Fab 部分地逆轉 NOV1401 在 TGA 中對凝血酶生成之效應 ：
為測定抗NOV1401 Fab是否可逆轉NOV1401減小TGA中之凝血酶生成之能力，在添加抗NOV1401 Fab之前，將NOV1401與含FXI人類血漿一起預培育5 min。將NOV1401之濃度保持恆定於在如上文所闡述之劑量反應實驗中單獨測得之IC
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值。以等莫耳量(1/1)或以莫耳過量(通常1/3及1/10 (n/n))添加抗NOV1401 Fab。移液方案展示於表10中。
表 10. 用於量測藉由抗 NOV1401 Fab 達成之 NOV1401 對 TGA 之效應逆轉之移液方案。
將每一分析條件之凝血酶生成之最大濃度繪圖且使用下列方程式測定逆轉百分比： y = (A - B)/ (C - B)*100。 其中y係逆轉百分比，A係使用抗NOV1401之分析條件之凝血酶濃度，B係不使用抗NOV1401之分析條件之凝血酶濃度，C係初始凝血酶濃度。 所有10種抗NOV1401 Fab之結果展示於圖5中。在0.05 µM之恆定NOV1401濃度下，增加在將NOV1401與含FXI人類血漿一起培育之後添加之抗NOV1401 Fab之量會增加凝血酶濃度，由此逆轉(例如至少部分地逆轉) NOV1401對TGA中之凝血酶生成之效應。儘管所有抗NOV1401皆展示一定逆轉，但給定濃度下之逆轉程度有所不同且在10×莫耳過量下觀察到37-72%之最大逆轉。所有抗NOV1401 Fab之逆轉百分比匯總於表11中。該等結果表明，抗NOV1401 Fab可逆轉(例如至少部分地逆轉) TGA中藉由NOV1401所達成之凝血酶減小。
表 11 ：抗 NOV1401 抗體之 TGA 逆轉數據之匯總 抗 NOV1401 Fab 顯著逆轉 NOV1401 在食蟹猴中之抗凝血效應 ：
為測試抗NOV1401 Fab是否可逆轉NOV1401延長活體內凝血時間之能力，在研究之第一天向食蟹猴投與NOV1401之單一3 mg/kg皮下劑量，隨後分別在研究之第4及5天投與兩個靜脈內IDT3劑量。選擇3 mg/kg之皮下劑量用於NOV1401，此乃因此劑量已顯示在食蟹猴中產生持續aPTT延長。基於使用人類血漿之活體外實驗，投與莫耳過量之抗NOV1401 Fab，舉例而言，在一種動物中經靜脈內投與10 mg/kg IDT3，隨後投與30 mg/kg；且在第二動物中，投與30 mg/kg，隨後投與90 mg/kg。亦向其他動物(N=2)僅投與NOV1401 (在研究之第一天經靜脈內投與一個3 mg/kg劑量)，或僅投與IDT3 (分別在研究之第4及5天投與30 mg/kg及90 mg/kg之兩個靜脈內劑量)。 對於離體aPTT分析而言，在研究之第3天及在研究之第4及5天於IDT3劑量後30 min、2小時、8小時及12小時將血樣收集至檸檬酸鈉凝血管中。在研究之第6、7、8及9天收集其他試樣。將所有血樣離心；獲得血樣且冷凍於大約-70℃或更低溫度下。 在僅使用NOV1401治療之動物中，3 mg/kg之單一皮下劑量在研究結束時將aPTT延長1.7至1.8倍，從而證實NOV1401在食蟹猴中具有強力抗凝血效應且證實了較早研究
。
在NOV1401之後三天經靜脈內投用10 mg/kg IDT3之動物中，立即將aPTT正規化且在投藥之後30 min之最早時間點下已達到基線值(圖6)。在8-12小時之後，NOV1401之aPTT延長效應已返回接近最大值，但在投與30 mg/kg之第二劑量之後再次減小至基線。在投用30 mg/kg及90 mg/kg之IDT3時，觀察到極類似效應。較高劑量似乎可延長逆轉效應。在僅投與30 mg/kg及90 mg/kg之IDT3之動物中未觀察到對aPTT之效應(圖6)。 該等數據表明，抗NOV1401 Fab (例如IDT3)能夠在活體內顯著逆轉MAA868對aPTT之效應且本文所提供之抗NOV1401 Fab (例如IDT3)可用作抗FXI/FXIa抗體NOV1401之有效逆轉劑(例如倘若需要迅速中和抗FXI/FXIa抗體NOV1401)。該等數據亦指示，在活體內於此猴研究中所觀察之顯著逆轉與在使用人類血漿之活體外實驗(例如本文所闡述之aPTT分析)中所觀察之部分逆轉相關。
參考文獻之引用
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等效形式
前述書面說明書可視為足以使得熟習此項技術者能夠實踐本發明。前述說明及實例詳述本發明之某些較佳實施例且闡述發明者所涵蓋之最佳模式。然而，應瞭解，無論前述內容可在文件中表現為如何詳細，可以許多方式來實踐本發明且應根據隨附申請專利範圍及其任何等效內容來解釋本發明。
其中y繫扣除空白之ECL信號，[Fab]係所施加Fab濃度，x係所施加總可溶性抗原(此處係NOV1401)，Bmax係針對x = 0之扣除空白之ECL信號，且KD
係解離常數。 9種抗NOV1401 Fab之SET結果匯總於表4中且代表性結合反應曲線展示於圖1中。可並不針對IDT6擬合SET數據且並不包含在內。表 4. 抗 NOV1401 抗體之 SET 結果之匯總 
