CN101087807A - 治疗血管炎的方法 - Google Patents

治疗血管炎的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101087807A
CN101087807A CNA2005800417165A CN200580041716A CN101087807A CN 101087807 A CN101087807 A CN 101087807A CN A2005800417165 A CNA2005800417165 A CN A2005800417165A CN 200580041716 A CN200580041716 A CN 200580041716A CN 101087807 A CN101087807 A CN 101087807A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
patient
medicament
time
anca
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005800417165A
Other languages
English (en)
Inventor
保罗·G·布鲁内塔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genentech Inc
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of CN101087807A publication Critical patent/CN101087807A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

提供治疗适于治疗的病人的抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(ANCA相关血管炎)的方法，包括在大约一个月时间内以大约400mg至1.3克的剂量、一至三剂的频率为所述病人施用结合B细胞表面标志的拮抗剂，如CD20抗体。还提供治疗适于治疗的ANCA相关血管炎患者的另一种方法，包括为患者施用有效量的结合B细胞表面标志的抗体，以在特定剂量给药方案中提供对抗体的初始暴露和后续暴露。还提供用于这些方法的制品。

Description

治疗血管炎的方法
相关申请
本申请是依据37 CFR 1.53(b)(1)提交的非临时申请，依据35 USC 119(e)要求2004年10月5日提交的临时申请60\616,104的优先权，此处将其内容纳入本文作为参考。
发明所属领域
本发明涉及治疗患者抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)-相关血管炎的方法，和带有用于这种用途的说明的试剂盒。
发明背景
血管炎
除了其它疾病以外，自身免疫病如类风湿性关节炎、多发性硬化、血管炎、和狼疮仍然是临床上重要的人类疾病。顾名思义，自身免疫病通过机体自身免疫系统施加其严重的破坏性。尽管各种自身免疫病类型之间病理学机理不同，但是存在一种涉及特定抗体(这里称为自身反应性抗体或自身抗体)结合的普遍机理。
血管炎定义为血管壁的炎症，构成多种类别的个体疾病的病理学基础。抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关血管炎(Anti-neutrophil cytoplasmicantibodies(ANCA)-associated vasculitis)是常见的主要系统性血管炎，包括显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis)、韦格纳肉芽肿病(Wegener′sgranulomatosis)、丘-斯综合征(Churg-Strauss syndrome)、局限于肾的血管炎(renal-limited vasculitis)(特发性坏死性新月体肾小球肾炎(idiopathicnecrotizing crescentic glomerulonephritis))(Falk et al.N.Engl.J.Med.，318：1651-1657(1988))，和特定类型的药物诱导的血管炎。Jennette et al.ArthritisRheum 37：187-92(1994)；Jennette and Falk，N.Engl.J.Med.337：1512-1523(1997)。上述疾病影响所有年龄段的人，但在50多和60多岁的较为年长的成年人中最常见，对男人和女人有同等的影响。Pettersson et al，Clin.Nephrol.，43：141-149(1995)；Falk et al.，Ann.Intern.Med.113：656-663(1990)。
ANCA是针对嗜中性粒细胞和单核细胞溶酶体胞质颗粒中的抗原的特异性抗体，1982年首次报导。Niles et al.，Arch.Intern.Med，156：440-445(1996)。ANCA最初在乙醇固定的嗜中性粒细胞上通过间接免疫荧光检测到。Wiik，″Delineation of a standard procedure for indirectimmunofluorescence detection of ANCA″APMIS Suppl.6：12-13(1989)。已经鉴别了至少三种不同样式的荧光：在具有核小叶(lobes)的区域中具有加强的荧光强度的胞质/经典模式(cANCA)、核周模式(pANCA)、和更分散的胞质染色模式(非典型ANCA)。大约90％的产生cANCA样式的血清与蛋白酶3(PR3)反应，蛋白酶3(PR3)是来自髓样细胞(myeloid cells)嗜天青颗粒的丝氨酸蛋白酶。Jennette and Falk，N Engl.J.Med.，同上。在患主要影响中等-和小型血管的原发性系统性血管炎的病人中，大约75％的产生核周样式(pANCA)的血清与髓样溶酶体酶髓过氧化物酶(MPO)反应。Cohen Tervaert et al.，Am.J.Med 91：59-66(1991)。在患其它非血管炎性疾病的ANCA阳性病人中，通常抗原的特异性被识别。现在很好地证实了PR3-ANCA和MPO-ANCA的诊断潜力。在具有血管炎症状和体征的病人中，具有针对PR3的特异性的ANCA(PR3-ANCA)提示对韦格纳肉芽肿病的诊断，而具有针对MPO的特异性的ANCA(MPO-ANCA)对显微镜下多血管炎、特发性坏死性新月体肾小球肾炎、或活动性丘-斯综合征是高度灵敏的。Cohen Tervaert et al.，SarcoidosisVasc.Diffuse Lung Dis.13：241-245(1996)。也可参见Xiao et al.，J.Clin.Invest.，110：955-963(2002)，其描述了人肾小球肾炎和血管炎中，为ANCA IgG的直接病原性作用提供有力支持的动物模型，和Popa et al.，J.Allergy Clin.Immunol.，103：885-894(1999)，其显示在韦格纳肉芽肿病中，B细胞活化与活动性疾病有关，而在疾病症状缓解期间T细胞持续活化，这表明了这种疾病中内在紊乱的免疫系统。也可参见Cupps et al.，J.Immunol.，128：2453-2457(1982)，其涉及环磷酰胺在抑制人B淋巴细胞功能中的作用。
在原发性血管炎性综合征范围内，ANCA相关综合征形成具有重叠特征的独特群组。大多数病人具有包括不适、肌肉疼痛、关节痛、发烧、和体重减轻的有前驱症状的(prodromal)流感样发作。该流感样发作在明显血管炎性或肾脏疾病发作前数天至数周内出现。韦格纳肉芽肿病通过上下呼吸道坏死性肉芽肿炎症的存在与其它的区分开，它通常伴随系统性坏死的小血管血管炎和肾小球肾炎。除了伴随或不伴随肾小球肾炎的系统性血管炎之外，丘-斯综合征还以哮喘、过敏性鼻炎、系统性嗜酸性粒细胞增多症(病史)的存在来区分。显微镜下多血管炎以坏死性和/或新月形肾小球肾炎和涉及小型血管的多系统血管炎为特征。显微镜下多血管炎与韦格纳肉芽肿病和丘-斯综合征有许多共有特征，但没有呼吸道坏死性肉芽肿炎症和哮喘。Jennette et al.，Arthritis Rheum.，同上。在特发性坏死性和/或新月形肾小球肾炎中，血管炎性进程限于肾。因为存在主要器官损伤时显微镜下多血管炎或韦格纳肉芽肿病病人的治疗基本上是相同的，所以在启动治疗前不必确实区分这些ANCA-相关血管炎的密切相关的不同疾病。Jennette et al.Arthritis Rheum.，同上。
在治疗成为可能前，患泛发性韦格纳肉芽肿病的病人具有五个月的中值存活期(median survival)。在二十世纪70年代早期，Fauci和Wolff介绍了将实现症状缓解后一年时间中每天给予环磷酰胺治疗与强的松治疗组合的方案，所述强的松治疗以每天每公斤体重1mg的剂量起始，并隔天(alternate-day schedule)逐渐减少。已经可重复地发现该治疗在百分之80至100的病人中诱导症状缓解，并且能够导致长期存活。事实上，长期用环磷酰胺和类固醇进行免疫抑制治疗(大于1年)对于诱导疾病症状缓解和防止大多数血管炎性紊乱的早期复发是有效的。Balow et al.，″Vasculitic diseases ofthe kidney，polyarteritis，Wegener′s granulomatosis，necrotizing and crescenticglomerulonephritis，and other disorders.″In：Schrier and Gottschalk(eds)：Diseases of the kidney，5th edition，(Little，Brown and Company，Boston，1993)，pp.2095-2117；Jayne et al.，N.Engl.J. Med.，349：36-44(2003)；Gaskin et al，″Systemic vasculitis″In：Cameon et al.(eds)：Oxford textbook of clinicalnephrology.(Oxford University Press，Oxford，1992)，pp.612-636；Fauci et al，Ann.Intern.Med.89：660-676(1978)；Fauci et al.，Ann.Intern.Med.，98：76-85(1983)；Hoffman et al.，Ann.Int.Med.，116：488-498(1992)；and Andrassyet al.，Clin.Nephrol.，35：139-147(1991)。
然而，治疗逐渐减少并中断时复发是常见的。在一个研究中，复发在百分之50的病人中发生，此研究中对韦格纳肉芽肿病病人跟踪平均八年。另外，不推荐持续使用环磷酰胺以维持症状缓解，因为该治疗方案与严重和潜在的致命副作用如机会性感染(opportunistic infection)的发生和恶性疾病的发生相关。例如，重复的环磷酰胺疗程与骨-髓抑制、感染、膀胱炎、不育、脊髓发育不良、和膀胱过渡型细胞癌相关。在一些例子中，这种毒性效应阻止了进一步使用环磷酰胺。Stillwell et al.，Arthritis Rheum.，31：465-470(1988)；Radis et al.，Arthritis Rheum.38：1120-1127(1995)。因此，一旦获得症状缓解则逐渐减少或终止环磷酰胺并用咪唑硫嘌呤替换以预防副作用，这是在严格的多中心试验中进行测试而证明在18个月跟踪期中同样有效的策略。Gaskin et al，同上，1992；Jayne，Rheumatology 39：585-595(2000)。人们认为咪唑硫嘌呤与环磷酰胺相比，对于诱导症状缓解不太有效，但其长期毒性低得多。Bouroncle et al.，Am.J.Med.，42：314-318(1967)；Norton etal.，Arch.Intern.Med.，121：554-560(1968)。
其它替代性维持治疗方案包括氨甲蝶呤(methotrexate)((de Groot et al，Arthritis Rheum.，39：2052-2061(1996))、环孢霉素A(cyclosporine A)(Haubitzet al.，Nephrol.Dial.Transplannt，13：2074-2076(1998))、霉酚酸酯(mycophenolate)(或盐)(Nowack et al.，J.Am.Soc.Nephrol.，10：1965-1971(1999))、或甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)(Stegeman et al.，N.Engl.J.Med，335：16-20(1996))。也可参见Sanders，et al.N.Engl.J.Med.349：2072-2073(2003)。然而，由于在ANCA相关血管炎中经常观察到复发，因而这种情况下治疗不得不加强或再制定(reinstituted)。Hoffman et al，同上；Gordon et al，Q J.Med.，86：779-789(1993)；Nachman etal.，J.Am.Soc.Nephrol.，7：33-39(1996)；Guillevin et al.，Medicine 78：26-37(1999)；Reinhold-Keller et al.，Arthritis.Rheum.43：1021-1032(2000)；Langforrd，New Eng.J.Med.，349：3-4(July 2003)。
对于初始治疗和顽固性疾病来说，用infliximab阻断肿瘤坏死因子-α(TNF-α)都是ANCA相关血管炎的可能疗法。Infliximab在88％的ANCA相关血管炎病人中诱导症状缓解是有效的，并允许减小类固醇剂量。Boothet al.，J.Am.Soc.Nephrol.15：717-721(2004)。此外，Stone et al.，Arthritis andRheumatism，44：1149-1154(2001)披露病人对每周两次皮下给予25mgTNF-α抑制剂etanercept(ENBREL)与韦格纳肉芽肿病的标准疗法的联合治疗有很好的耐受，几乎没有不良后果，但间歇性活动性疾病(偶尔是严重的)是常见的。
丘-斯综合征病人通常对高剂量的单独皮质类固醇治疗有反应，尽管一些病例可能需要添加细胞毒性药物。Jayne and Rasmussen，Mayo Clin.Proc.72：737-47(1997)。应当适当地控制加快血管损伤的伴随疾病状态(co-morbidcondition)，例如高血压、糖尿病、高胆固醇血症、和吸烟。
在药物诱导的血管炎中，应当停止攻击性药剂。抗组胺剂和非类固醇抗炎药帮助缓和皮肤不适并减轻相关的关节痛和肌肉痛。严重皮肤疾病可以允许口服皮质类固醇疗法。Jennette et al.，Arthritis Rheum，同上。
ANCA的持续或再现是疾病活动复发发展的风险因素，其显示了这些自身抗体的体内病理生理学作用。Stegeman et al.，Ann.Intern.Med.，120：12-17(1994)；De′Oliviera et al，Am.J.Kidney Dis.，25：380-389(1995)；Jayne etal.，Q.J.Med.，88：127-133(1995)。韦格纳肉芽肿病复发之前常常是间接免疫荧光检测发现cANCA效价升高(Cohen Tervaert et al.，Arch.Intern.Med，149：2461-2465(1989))，可以根据cANCA的升高通过用免疫抑制剂治疗来预防(Cohen Tervaert et al.，Lancet，336：706-711(1990))。
有关ANCA相关血管炎的一般性讨论参见Lhote and Guillevin，Rheum.Dis.Clin.North Am.21：911-947(1995)；″ANCA-associated vasculitis：occurrence，prediction，prevention，and outcome of relapses″by MaartenBoomsma，PhD Thesis，Thesis University Groningen，ISBN90-367-1451-6(M.M.Boomsma，Groningen，2001)( http://www.ub.rug.nl/eldoc/dis/medicine/m.m.boomsma/thesis.pdf)；Kamesh et al.，J.Am.Soc.Nephrol.13：1953-1960(2002)；和Jayne，Kidney &Blood Pressure Research 26：231-239(2003)。
CD20抗体以及用其进行的治疗
淋巴细胞是造血作用过程中在骨髓中产生的许多种白细胞之一。有两种主要的淋巴细胞群体：B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞(T细胞)。本文特别感兴趣的淋巴细胞是B细胞。
B细胞在骨髓中成熟并在其细胞表面表达结合抗原的抗体时离开骨髓。当初始B细胞首次遭遇抗原时，细胞开始快速分裂，其后代分化为记忆性B细胞和称为“浆细胞”的效应细胞，其中所述抗原对膜结合抗体而言是特异性的。记忆性B细胞具有更长的生命周期，其继续以与原始母细胞相同的特异性表达膜结合抗体。浆细胞不生产膜结合抗体，但生产可分泌形式的抗体。分泌抗体是体液免疫的主要效应分子。
CD20抗原(也称为人B-淋巴细胞限制性分化抗原，Bp35)是分子量大约为35kD的疏水性跨膜蛋白，位于前B(pre-B)和成熟B淋巴细胞上。Valentineet al.，J.Biol.Chem.264(19)：11282-11287(1989)and Einfeld et al.，EMBO J.7(3)：711-717(1988)。抗原也表达于超过90％的B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上(Anderson et al.Blood 63(6)：1424-1433(1984))，但在造血干细胞、原B细胞(pro-B cell)、正常浆细胞或其它正常组织上没有发现(Tedder et al J.Immunol.135(2)：973-979(1985))。CD20调节细胞周期起始和分化的活化过程的早期步骤(Tedder et al.，同上)，可能作为钙离子通道起作用。Tedder et al.，J.Cell.Biochem.14D：195(1990)。
假使CD20在B细胞淋巴瘤中表达，此抗原可以作为这种淋巴瘤的靶向候选抗原。本质上，这样的靶向可以概括如下：将特异于B细胞的CD20表面抗原的抗体施用于患者。这些抗CD20抗体特异性地结合于正常和恶性B细胞的CD20抗原(在表面上)；结合于CD20表面抗原的抗体能导致肿瘤性B细胞的破坏和损耗。另外，可以将具有破坏肿瘤潜力的化学试剂或放射性标记偶联于抗CD20抗体以将该试剂特异性地“递送”到肿瘤性B细胞。不考虑方法，首要目标是破坏肿瘤；可以用所使用的特定抗CD20抗体确定特异性方法，这样，可以使用的靶向CD20抗原的方法可以有相当大的变化。
美罗华(RJTUXAN)抗体是抗CD20抗原的遗传工程化嵌合鼠/人单克隆抗体。美罗华于1998年4月7日授权的美国专利5,736,137(Anderson etal.)中称为“C2B8”的抗体。复发的或顽固性低级或滤泡性、CD20-阳性、B细胞非霍奇金淋巴瘤患者的治疗需要美罗华。体外作用机理研究已表明美罗华通过补体依赖的细胞毒(CDC)结合人补体并裂解淋巴样B细胞系。Reff et al.，Blood 83(2)：435-445(1994)。另外，其在抗体依赖的细胞毒(ADCC)试验中具有显著的活性。近来，已显示美罗华在氚标记胸苷掺入试验中具有抗增殖效果，并直接诱导细胞凋亡，而其它抗CD19和抗CD20抗体不能。Maloney et al.Blood 88(10)：637a(1996)。也已在实验中观测到美罗华与化疗剂和毒素之间的协同作用。特别地，美罗华使抗药性人B细胞淋巴瘤细胞系对阿霉素(doxorubicin)、CDDP、VP-16、白喉毒素和蓖麻毒素的细胞毒性作用敏感(Demidem et al.，Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals12(3)：177-186(1997))。体内临床前(preclinical)研究已显示美罗华损耗来自猕猴外周血、淋巴结、和骨髓的B细胞，推测是通过补体和细胞介导的过程。Reff et al.，Blood 83：435-445(1994)。
1997年11月，美罗华在美国批准用于复发的或顽固性低级或滤泡性CD20+B细胞NHL患者的治疗，剂量为每周375mg/m2，四剂。2001年4月，Food and Drug Administration(FDA)批准了低级NHL治疗的附加要求：再治疗(re-treatment)(每周一剂共四剂)和附加剂量给药方案(每周一剂共八剂)。已有超过300,000名患者或者作为单一治疗或者与免疫抑制剂或化疗药物组合进行美罗华治疗。还用美罗华作为维护疗法治疗患者达2年。Hainsworth et al.，J.Clin.Oncol.21：1746-1751(2003)；Hainsworth et al，J.Clin.Oncol.20：4261-4267(2002)。另外，美罗华已用于治疗恶性和非恶性浆细胞疾病。Treon and Anderson，Semin.Oncol.27：79-85(2000)。
也已在多种非恶性自身免疫紊乱中研究了美罗华，其中，看起来B细胞和自身抗体在疾病病理生理中起作用。Edwards et al.，Biochem Soc.Trans.30：824-828(2002)。已经报导美罗华潜在地减轻例如类风湿性关节炎(RA)(Leandro et al.，Ann.Rheum.Dis.61：883-888(2002)；Edwards et al.，Arthritis Rheum.，46(Suppl.9)：S46(2002)；Stahl et al，Ann.Rheum.Dis.，62(Suppl.1)：OP004(2003)；Shaw et al.Ann.Rheum.Dis.62Suppl2：ii55-ii59(2003)；Weyand and Goronzy，Ann.N.Y Acad.Sci.987：140-149(2003)；Emery et al.，Arthritis Rheum.48(9)：S439(2003))、狼疮(Eisenberg，Arthritis.Res.Ther5：157-159(2003)；Anolik et al.，Arthritis Rheum.48：455-459(2003)；Leandro et al.Arthritis Rheum.46：2673-2677(2002)；Gorman et al.，Lupus，13：312-316(2004)；Tomietto et al.，Thromb.Haemost.92：1150-1153(2004))、免疫性血小板减少性紫癜(D’Arena et al.，Leuk.Lymphoma44：561-562(2003)；Stasi et al.，Blood，98：952-957(2001)；Saleh et al.，Semin.Oncol.，27(Supp 12)：99-103(2000)；Zaja et al.，Haematologica，87：189-195(2002)；Zaja et al.，Haematologica 88：538-546(2003)；Cooper et al.，Br.J.Haematol.125：232-239(2004)；Ratanatharathorn et al.，Ann.Int.Med，133：275-279(2000))、单纯红细胞发育不全(pure red cell aplasia)(Auner et al.，Br.J.Haematol.，116：725-728(2002))；自身免疫性贫血(Zaja et al.，Haematologica87：189-195(2002)(erratum appears in Haematologica 87：336(2002)；Raj et al.，J.Pediatr.Hematol.Oncol.26：312-314(2004)；Zecca et al.，Blood 101：3857-3861(2003)；Quartie et al.，Lancet 358：1511-1513(2001))、自身免疫性血细胞减少症(Robak，Eur.J.Haematol.72：79-88(2004))；冷凝集素疾病(Layioset al.，Leukemia，15：187-8(2001)；Berentsen et al.，Blood，103：2925-2928(2004)；Berentsen et al.，Br.J.Haematol.，115：79-83(2001)；Bauduer，Br.J.Haematol.，112：1083-1090(2001)；Damiani et al.，Br.J.Haematol.，114：229-234(2001)；Lee and Kueck，Blood 92：3490-3491(1998))、B型严重胰岛素抗性综合征(Coll et al.，N.Engl.J. Med，350：310-311(2004)、混合冷球蛋白血症(DeVita et al.，Arthritis Rheum.46 Suppl.9：S206/S469(2002)；Zaja et al.Haematologica 84：1157-1158(1999))、重症肌无力(Zaja et al.，Neurology，55：1062-63(2000)；Wylam et al.，J.Pediatr.，143：674-677(2003))、韦格纳肉芽肿病(Specks et al.，Arthritis & Rheumatism 44：2836-2840(2001))、顽固性寻常天疱疮(Dupuy et al.，Arch Dermatol.，140：91-96(2004))、皮肌炎(Levine，ArthritisRheum.，46(Suppl.9)：S1299(2002))、干燥综合征(Somer et al.，Arthritis &Rheumatism，49：394-398(2003))、活动性II型混合冷球蛋白血症(Zaja et al.，Blood，101：3827-3834(2003))、寻常天疱疮(Dupay et al.，Arch.Dermatol.，140：91-95(2004))、自身免疫性神经病(Pestronk et al.，J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry 74：485-489(2003)；Nobile-Orazio，Curr.Opin.Neurol.17：599-605(2004)；Rojas-Garcia et al.，Neurology 61：1814-1816(2003)；Renaud etal.Muscle Nerve 27：611-615(2003))、副肿瘤性斜视性眼阵挛-肌阵挛综合征(paraneoplastic opsoclonus-myoclonus syndrome)(Pranzatelli et al.Neurology60(Suppl.1)PO5.128：A395(2003))、获得性因子VIII抑制剂(Wiestner et al.Blood 100：3426-3428(2002)；以及复发-好转型多发性硬化(RRMS)。Cross etal.(摘要)″Preliminary Results from a Phase II Trial of美罗华in MS″美国多发性硬化研究与治疗委员会第八次年会，20-21(2003)。
已对类风湿性关节炎(RA)病人进行了II期研究(WA16291)，该研究提供了有关美罗华的安全性和功效的48周跟踪数据。Emery et al.Arthritis Rheum48(9)：S439(2003)；Szczepanski et al.Arthritis Rheum 48(9)：S121(2003)。将总共161个病人随机地平均分为四个治疗组：氨甲蝶呤、仅美罗华、美罗华联合氨甲蝶呤、美罗华联合环磷酰胺(CTX)。美罗华治疗方案为第一天和第15天静脉内施用一克。大多数RA病人对输注美罗华都很好地耐受，其中36％的病人在其初次输注期间经历至少一种不良事件(与30％接受安慰剂的病人相比)。总的说来，认为大多数不良反应在严重程度上都是轻度至中度的，所有处理组之间都很平衡。48周中所有四个组共有19次严重的不良事件，其中美罗华/CTX组中稍多一些。所有组之间感染发生率都很平衡。该RA患者群体中，严重感染的平均比率为每100个病人4.66个(4.66 per 100patient-years)，低于流行病学研究团体所报导的需要住院的RA病人感染比率(每100个病人-年为9.57)(9.57per 100patient-years)。Doran et al.，ArthritisRheum.46：2287-2293(2002)。
所报导的美罗华在少数神经病学紊乱病人中的安全谱与在肿瘤学或RA中所报导的类似，所述神经病学紊乱包括自身免疫性神经病(Pestronk etal.，同上)、斜视性眼阵挛-肌阵挛综合症(Pranzatelli et al.，同上)、和RRMS(Cross et al.，同上)。正在RRMS病人(Cross et al.，同上)中进行的美罗华与干扰素-β(IFN-β)或glatiramer acetate组合的研究者支助的试验(IST)中，10个被治疗病人中有1个在首次美罗华输注后经历了中度发烧和打寒战，之后入院彻夜观察，其它9个病人完成了四次输注方案，没有报导任何不良事件。
涉及CD20抗体和CD20结合分子的专利和专利出版物包括美国专利5,776,456、5,736,137、5,843,439、6,399,061、和6,682,734，以及US2002/0197255、US 2003/0021781、US 2003/0082172、US 2003/0095963、US2003/0147885(Anderson et al.)；美国专利6,455,043和WO2000/09160(Grillo-Lopez，A.)；WO 2000/27428(Grillo-Lopez and White)；WO2000/27433(Grillo-Lopez and Leonard)；WO 2000/44788(Braslawsky et al.)；WO 2001/10462(Rastetter，W.)；WO 2001/10461(Rastetter and White)；WO2001/10460(White and Grillo-Lopez)；US 2001/0018041、US 2003/0180292、WO 2001/34194(Hanna and Hariharan)；US 2002/0006404和WO2002/04021(Hanna and Hariharan)；US 2002/0012665、WO 2001/74388和6,896,885B5(Hanna，N.)；US 2002/0058029(Hanna，N.)；US2003/0103971(Hariharan and Hanna)；US 2005/0123540(Hanna et al.)；US2002/0009444和WO 2001/80884(Grillo-Lopez，A.)；WO 2001/97858；US2005/0112060、以及美国专利6,846,476(White，C.)；US 2002/0128488和WO2002/34790(Reff，M.)；WO 2002/060955(Braslawsky et al.)；WO2002/096948(Braslawsky et al.)；WO 2002/079255(Reff and Davies)；美国专利6,171,586和WO 1998/56418(Lam et al.)；WO 1998/58964(Raju，S.)；WO1999/22764(Raju，S.)；WO 1999/51642、美国专利6,194,551、美国专利6,242,195、美国专利6,528,624和美国专利6,538,124(Idusogie et al.)；WO2000/42072(Presta，L.)；WO2000/67796(Curd et al.)；WO2001/03734(Grillo-Lopez et al.)；US 2002/0004587和WO 2001/77342(Millerand Presta)；US 2002/0197256(Grewal，I.)；US 2003/0157108(Presta，L.)；美国专利6,565,827、6,090,365、6,287,537、6,015,542、5,843,398，和5,595,721(Kaminski et al.)；美国专利5,500,362、5,677,180、5,721,108、6,120,767、6,652,852、6,893,625(Robinson et al.)；美国专利6,410,391(Raubitschek et al.)；美国专利6,224,866和WO00/20864(Barbera-Guillem，E.)；WO 2001/13945(Barbera-Guillem，E.)；WO 2000/67795(Goldenberg)；US 2003/0133930和WO2000/74718(Goldenberg and Hansen)；US2003/0219433和WO2003/68821(Hansen et al.)；WO 2004/058298(Goldenberg and Hansen)；WO2000/76542(Golay et al.)；WO 2001/72333(Wolin and Rosenblatt)；美国专利6,368,596(Ghetie et al.)；美国专利6,306,393和US 2002/0041847(Goldenberg，D.)；US 2003/0026801(Weiner and Hartmann)；WO 2002/102312(Engleman，E.)；US 2003/0068664(Albitar et al.)；WO 2003/002607(Leung，S.)；WO2003/049694、US 2002/0009427，和US 2003/0185796(Wolin et al.)；WO2003/061694(Sing and Siegall)；US 2003/0219818(Bohen et al.)；US2003/0219433和WO 2003/068821(Hansen et al.)；US 2003/0219818(Bohen etal.)；US 2002/0136719(Shenoy et al.)；WO 2004/032828和US2005/0180972(Wahl et al.)；和WO 2002/56910(Hayden-Ledbetter)。也可参见美国专利5,849,898和EP 330,191(Seed et al.)；EP332,865A2(Meyer andWeiss)；美国专利4,861,579(Meyer et al.)；US2001/0056066(Bugelski et al.)；WO 1995/03770(Bhat et al.)；US 2003/0219433 A1(Hansen et al.)；WO2004/035607(Teeling et al.)；WO 2004/056312(Lowman et al.)；US2004/0093621(Shitara et al.)；WO 2004/103404(Watkins et al.)；WO2005/000901(Tedder et al.)；US 2005/0025764(Watkins et al.)；WO2005/016969(Carr et al.)；US 2005/0069545(Carr et al.)；WO2005/014618(Chang et al.)；US 2005/0079174(Barbera-Guillem and Nelson)；US 2005/0106108(Leung and Hansen)；WO2005/044859和US2005/0123546(Umana et al.)；WO 2005/070963(Allan et al.)；US2005/0186216(Ledbetter and Hayden-Ledbetter)；和美国专利6,897,044(Braslawski et al.)。
涉及用美罗华治疗的出版物包括：Perotta和Abuel，“Response of chronierelapsing ITP of 10 years duration to美罗华”摘要#3360 Blood 10(1)(part1-2)：p.88B(1998)；Perotta et al.，″Rituxan in the treatment of chronicidiopathic thrombocytopaenic purpura(ITP)″，Blood，94：49(摘要)(1999)；Matthews，R.，“Medical Heretics”New Scientist(7 April，2001)；Leandro etal.，“Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with Blymphocyte depletion”Ann Rheum Dis，同上；Leandro et al.，“Lymphocytedepletion in rheumatoid arthritis：early evidence for safety，efficacy and doseresponse″Arthritis and Rheumatism 44(9)：S370(2001)；Leandro et al.，“Anopen study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus”，Arthritis and Rheumatism，46：2673-2677(2002)，其中在2周期间，每个患者接受两次500-mg美罗华输注、两次750-mg环磷酰胺输注、和高剂量口服皮质类固醇，其中尽管已用不同的方案两个被治疗的患者分别在第7和8个月时复发，但已进行了再次治疗；″Successful long-term treatment ofsystemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy″Weide etal.，Lupus，12：779-782(2003)，其中用美罗华治疗的患者(375mg/m2×4，每周间隔重复进行)，并且每5-6个月再应用美罗华，然后每三个月用375mg/m2的美罗华进行维持治疗，成功地用美罗华治疗了第二个顽固性SLE患者并且每三个月接受维持治疗，两个患者对美罗华治疗都有很好的应答；Edwards和Cambridge，“Sustained improvement in rheumatoid arthritisfollowing a protocol designed to deplete B lymphocytes”Rheumatology40：205-211(2001)；Cambridge et al.，″B lymphocyte depletion in patientswith rheumatoid arthritis：serial studies of immunological parameters″ArthritisRheum.，46(Suppl.9)：S1350(2002)；Cambridge et al，″Serologic changesfollowing B lymphocyte depletion therapy for rheumatoid arthritis″ArthritisRheum.，48：2146-2154(2003)；Edwards et al.，“B-lymphocyte depletiontherapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders”Biochem Soc.Trans.，同上；Edwards et al.，“Efficacy and safety of rituximab，a B-celltargeted chimeric monoclonal antibody：A randomized，placebo controlled trial inpatients with rheumatoid arthritis.Arthritis and Rheumatism 46(9)：S197(2002)；Edwards et al.，″Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patientswith rheumatoid arthritis″N Engl.J. Med.350：2572-2582(2004)；Pavelka etal.，Ann.Rheum.Dis.63：(S1)：289-290(2004)；Emery et al.，Arthritis Rheum.50(S9)：S659(2004)；Levine和Pestronk，“IgM antibody-related polyneuropathies：B-cell depletion chemotherapy using rituximab”Neuro logy52：1701-1704(1999)；Uchida et al.，″The innate mononuclear phagocyte networkdepletes B lymphocytes through Fc receptor-dependent mechanisms duringanti-CD20 antibody immunotherapy″J.Exp.Med.199：1659-1669(2004)；Gonget al.，″Importance of cellular microenvironment and circulatory dynamics in Bcell immunotherapy″J.Immunol.174：817-826(2005)；Hamaguchi et al.，″Theperitoneal cavity provides a protective niche for B1 and conventional Blymphocytes during anti-CD20 immunotherapy in mice″J.Immunol.174：4389-4399(2005)；Cragg et al.″The biology of CD20 and its potential as a targetfor mAb therapy″Curr.Dir.Autoimmun.8：140-174(2005)；Eisenberg，″Machanisms of autoimmunity″Immunol.Res.27：203-218(2003)；De Vita etal.，“Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoidarthritis”Arthritis & Rheum 46：2029-2033(2002)；Hidashida et al.“Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab.”发表在Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology；Oct 24-29；New Orleans，LA 2002；Tuscano，J.“Successful treatment ofinfliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab”发表在AnnualScientific Meeting of the American College of Rheumatology；Oct 24-29；NewOrleans，LA 2002；并且在Tuscano出版，Arthritis Rheum.46：3420(2002)；″Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity；insights from the clinic″Martin and Chan，Immunity 20：517-527(2004)；Silverman和Weisman，″rituximab therapy and autoimmune disorders，prospects for anti-B cell therapy″，Arthritis and Rheumatism，48：1484-1492(2003)；Kazkaz和lsenberg，″Anti Bcell therapy(rituximab)in the treatment of autoimmune diseases″，Currentopinion in pharmacology，4：398-402(2004)；Virgolini和Vanda，″rituximab inautoimmune diseases″，Biomedicine & pharmacotherapy，58：299-309(2004)；Klemmer et al.，″Treatment of antibody mediated autoimmune disorders witha AntiCD20 monoclonal antibody rituximab″，Arthritis And Rheumatism，48：(9)9，S(SEP)，page：S624-S624(2003)；Kneitz et al.，″Effective B celldepletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases″，Immunobiology，206：519-527(2002)；Arzoo et al.，″Treatment of refractoryantibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonalantibody(rituximab)″Annals of the Rheumatic Diseases，61(10)，p922-924(2002)Comment in Ann Rheum Dis.61：863-866(2002)；″Futurestrategies in immunotherapy″，Lake和Dionne，Burger′s Medicinal Chemistryand Drug Discovery(2003，John Wiley & Sons，Inc.)，文章在线发表日：2003年1月15日(第二章″Antibody-Directed Immunotherapy″)；Liang和Tedder，Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine，CD20 as an Immunotherapy Target的章节，文章在线发表日：2002年1月15日，标题″CD20″；附录4A标题为″Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens″，Stockinger etal.，编者：Coligan et al.，Current Protocols in Immunology(2003 John Wiley& Sons，Inc)Online Posting Date：May，2003；Print Publication Date：February，2003；Penichet和Morrison，″CD Antibodies/molecules：Definition；AntibodyEngineering″in Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section：Chimeric，Humanized and Human Antibodies；在线发表于2002年1月15日。
更多参见Looney″B cells as a therapeutic target in autoimmune diseasesother than rheumatoid arthritis″Rheumatology，44 Suppl 2：ii13-ii17(2005)；Chambers and Isenberg，″Anti-B cell therapy(rituximab)in the treatment ofautoimmune diseases″Lupus 14(3)：210-214(2005)；Looney et al.，″B-celldepletion as a novel treatment for systemic lupus erythematosus：a phase I/IIdose-escalating trial of rituximab″Arthritis Rheum.50：2580-2589(2004)；Looney，″Treating human autoimmune disease by depleting B cells″Ann Rheum.Dis.61：863-866(2002)；Edelbauer et al.，″rituximab in childhood systemic lupuserythematosus refractory to conventional immunosuppression Case report″Pediatr.Nephrol.20(6)：811-813(2005)；D’Cruz and Hughes，″The treatment oflupus nephritis″BMJ 330(7488)：377-378(2005)；Looney，″B cell-targetedtherapy in diseases other than rheumatoid arthritis”J.Rheumatol．Suppl.73：25-28；discussion 29-30(2005)；Sfikakis et al.，″Remission of proliferative lupusnephritis following B cell depletion therapy is preceded by down-regulation ofthe T cell costimulatory molecule CD40 ligand：an open-label trial″ArthritisRheum．52(2)：501-513(2005)；Rastetter et al.，″rituximab：expanding role intherapy for lymphomas and autoimmune diseases″diseases″Annu.Rev.Med.55：477-503(2004)；Silverman，″Anti-CD20 therapy in systemic lupuserythematosus：a step closer to the clinic″Arthritis Rheum.52(2)：371-7(2005)，Erratum in：Arthritis Rheum.52(4)：1342(2005)；Ahn et al.，″Long-termremission from life-threatening hypercoagulable state associated with lupusanticoagulant(LA)following rituximab therapy″Am.J.Hematol.78(2)：127-129(2005)；Tahir et al.，″Humanized anti-CD20 monoclonal antibody in thetreatment of severe resistant systemic lupus erythematosus in a patient withantibodies against rituximab”Rheumatology，44(4)：561-562(2005)，Epub 2005Jan 11；Looney et al.，″Treatment of SLE with anti-CD20 monoclonalantibody”Curr.Dir.Autoimmun.8：193-205(2005)；Cragg et al.，″The biology ofCD20 and its potential as a target for mAb therapy″Curr.Dir.Autoimmmun.8：140-174(2005)；Gottenbelerg et al.，″Tolerance and short term efficacy ofrituximab in 43 patients with systemic autoimmune diseases″Ann.Rheum.Dis.64(6)：913-920(2005)Epub 2004 Nov 18；Tokunaga et al.，”Down-regulation ofCD40 and CD80 on B cells in patients with life-threatening systemic lupuservthematosus after successful treatment with rituximab″Rheumatology 44(2)：176-182(2005)，Epub 2004 Oct 19。也可参见Leandro et al.，″B cellrepopulation occurs mainly from
Figure A20058004171600231
B cells in patient with rheumatoidarthritis and systemic lupus erythematosus″Arthritis Rheum.，48(Suppl 9)：S1160(2003)。
Specks et al.“Response of Wegener’s  granulomatosis to anti-CD20chimeric monoclonal antibody therapy”Arthritis & Rheumatism44(12)：2836-2840(2001)公开了成功利用四次375mg/m2美罗华(rituximab)和高剂量糖皮质激素输注治疗韦格纳肉芽肿病。11个月后cANCA复发时重复治疗，但不用糖皮质激素。第二个美罗华疗程后8个月时，病人的疾病仍然保持完全缓解。另外，在另一研究中，发现当与1mg/kg/天的口服强的松一起，以375mg/m2×4的剂量使用时，美罗华是很好地耐受的、用于严重ANCA-相关血管炎的有效的缓解诱导剂，口服强的松到第4周时减小到40mg/天，在接下来的16周完全中止。美罗华(rituximab)由于ANCA效价再现/ANCA效价升高，四个病人单独用美罗华再治疗。除了糖皮质激素之外，看起来对于症状缓解诱导和持续症状缓解(6个月或更长)的保持来说，其它免疫抑制剂都不是必需的。参见在线报导Keogh et al.，″rituximab forRemission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis：Report of aProspective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients″，American College ofRheumatology，Session Number：28-100，Session Title：Vasculitis，Session Type：ACR Concurrent Session，Primary Category：28 Vasculitis，Session 10/18/2004( <www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp>)。也可参见Keogh et al.，Kidney Blood Press.Res.26：293(2003)，其中报导了用四次每周375mg/m2剂量(four weekly doses of 375mg/m2)的美罗华和高剂量糖皮质激素治疗十一个顽固性ANCA相关血管炎病人导致症状缓解。
连同免疫抑制药物如静脉内环磷酰胺(cyclophosphamide)、霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、或来氟米特(leflunomide)一起为顽固性ANCA相关血管炎病人施用美罗华，具有显著的功效。Eriksson，″Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positivevasculitis treated with rituximab″，Kidney and Blood Pressure Research，26：294(2003)(每周一次用375mg/m2美罗华治疗4周，五个ANCA相关血管炎病人对所述治疗有反应)；Jayne et al.，″B-cell depletion with rituximab forrefractory vasculitis″Kidney and Blood Pressure Research，26：294-295(2003)(伴随环磷酰胺与背景免疫抑制和泼尼松龙(prednisolone)一起接受四次每周375mg/m2的美罗华输注的六个顽固性血管炎病人血管炎性活动大幅度减弱)。Jayne，poster 88(11th International Vasculitis and ANCAworkshop)，2003 American Society of Nephrology提供了另一个报告，该报告中，与静脉内环磷酰胺一起为顽固性全身性血管炎病人施用每剂375mg/m2的四剂美罗华的量。也可参见Stone and Specks，″rituximab Therapy for theInduction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vaseulitis″，in theClinical Trial Research Summary of the 2002-2003 Immune Tolerance Network，http://www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html，其中建议用于ANCA相关血管炎的美罗华试验合计长18个月。也可参见Eriksson，J.Internal Med.，257：540-548(2005)，其提到用两个或四个每周500mg剂量的美罗华成功地治疗了九个ANCA阳性血管炎病人，还有Keogh etal.，Arthritis and Rheumatism，52：262-268(2005)，他们报导了在11个顽固性ANCA相关血管炎病人中，用四个每周375mg/m2剂量的美罗华治疗或再治疗通过B淋巴细胞损耗诱导了症状缓解，该研究在2000年1月与2002年9月之间进行。
人源化抗CD20抗体的活性参见例如，Vugmeyster et al.，″Depletion of Bcells by a humanized anti-CD20 antibody PRO70769 in Macaca fascicularis″J.Immunother.28：212-219(2005)。人单克隆抗体的讨论参见Baker et al.，″Generation and characterization of LymphoStat-B，a human monoclonalantibody that antagonizes the bioactivities of B lymphocyte stimulator″ArthritisRheum.48：3253-3265(2003)。
仍然需要在一个月时间内减少活性药物输注频率的治疗手段。另外，需要减小目前使用的药物如类固醇和化疗剂的毒性效应风险，需要减小ANCA相关血管炎病人疾病发作(disease flare)、复发、和反复的风险，也需要维持症状缓解和长期保持持续的症状缓解。
发明概述
本发明涉及施用CD20抗体，其在ANCA相关血管炎患者中提供安全有效的治疗方案，包括选择有效的剂量给药方案和定期或不定期的再治疗。该拮抗剂在初始治疗和顽固性疾病的管控中均有效。
因此，本发明在以下方面提出权利要求。第一个方面，本发明涉及治疗病人的ANCA相关血管炎，包括以约400mg至1.3克的剂量、约一个月时间内一至三剂的频率为所述病人施用CD20抗体。
另一个方面，本发明提供制品，包括：包含CD20抗体的容器，和带有治疗病人ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明在约一个月内以一至三剂的频率，为所述病人施用约400mg至1.3克的CD20抗体。
在本发明以上方面的优选实施方案中，所述血管炎是韦格纳肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)或显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis)，和/或以有效量为所述病人施用第二药剂，其中所述CD20抗体是第一药剂。这样的药剂可以是一种或多种药剂。更优选此第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、缓解疾病的抗风湿药物(disease-modifying anti-rheumatic drug)(DMARD)、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、激素、或其组合。
在其它方面，本发明涉及治疗患者ANCA相关血管炎的方法，包括为患者施用有效量的CD20抗体，以提供初始抗体暴露，之后是第二次抗体暴露，其中第二次抗体暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供。
在该最后一个涉及多次抗体暴露的方法的一个优选实施方案中，本发明涉及治疗患者ANCA相关血管炎的方法，包括为患者施用有效量的CD20抗体，以提供约0.5至4克的初始抗体暴露，之后为约0.5至4克的第二次抗体暴露，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供，并且每次抗体暴露都以约1至4剂抗体(1 to 4 doses of antibody)、更优选以单剂(a single dose)或以二或三分剂抗体(two or three separate doses of antibody)提供给患者。
此处特别优选的实施方案是治疗患者ANCA相关血管炎的方法，包括为所述患者施用有效量的CD20抗体，以提供初始抗体暴露，之后是第二次抗体暴露，其中第二次暴露直至自初始暴露起约16至54周时才提供，并且每次抗体暴露都以单剂或以二或三分剂抗体提供给患者。优选在这种方法中，所述抗体暴露为每次约0.5至4克。
在这些最后的方法的另一优选实施方案中，第二药剂与初始暴露和/或后续暴露一起施用，其中所述抗体是第一药剂。在优选实施方案中，第二药剂是以上列出的那些优选药剂中的一种或多种。在更优选的实施方案中，第二药剂是类固醇和/或免疫抑制剂。在更优选的实施方案中，类固醇与首次暴露一起施用，而不与第二次暴露一起施用，或者以低于初始暴露所用的量施用。
在这些最后方面的又一优选实施方案中，所述患者之前从未用CD20抗体治疗过，和/或不为所述患者施用除CD20抗体之外的其它药剂来治疗血管炎。在另一优选实施方案中，初始和第二次抗体暴露用相同抗体，更优选所有抗体暴露都用相同抗体。在另一优选实施方案中，优选提供第二次抗体暴露时，所述患者处于初始或后续抗体暴露后的症状缓解中。更优选提供所有抗体暴露时，患者处于症状缓解中。最优选这样的患者处于提供最后一次抗体暴露后的至少约六个月的症状缓解(remission)中。
在这些最后方面的又一优选实施方案中，患者具有水平升高的抗核抗体(ANA)、抗类风湿因子(RF)抗体、肌酐、血尿素氮、抗内皮抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、或上述两种或多种的组合。
此外，在其它方面，本发明提供制品，包括：
(a)包含CD20抗体的容器；和
(b)带有治疗ANCA相关血管炎患者的说明的包装插页，其中所述说明指明为患者施用的抗体的量，所述抗体的量是有效提供初始抗体暴露和初始抗体暴露之后的第二次抗体暴露有效的量，其中第二次抗体暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供。
优选这种包装插页提供有治疗患者ANCA相关血管炎的说明，其中所述说明指明为患者施用抗体的量，所述抗体的量对于提供约0.5至4克的初始抗体暴露、初始抗体暴露之后为约0.5至4克的第二次抗体暴露是有效的，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供，并且每次抗体暴露都以约1至4剂(one to four doses)、更优选以单剂(single dose)或以两或三分剂(two or three separate doses)的抗体提供给患者。
在特定方面，提供制品，包括：
(a)包含CD20抗体的容器；和
(b)带有治疗患者ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明施用于患者的抗体的量，所述抗体的量对于提供初始抗体暴露以及此后的第二次抗体暴露是有效的，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周时才提供，并且每次抗体暴露都以单剂或二或三分剂抗体提供给患者。
此处所述治疗优选减小、最小化、或去除对过量的第二药剂如免疫抑制剂和/或化疗剂共同施用、预先施用、或之后施用的需要，所述的施用过量的第二药剂对于这样的患者通常是标准疗法，这样做是为了尽可能避免这种标准疗法的副作用，同时降低成本并为患者增加便利，如施用时间和频率的便利。
附图简述
图1A为比较鼠2H7(SEQ ID NO：1)、人源化2H7.v16变体(SEQ IDNO：2)、和人kappa轻链亚组I(SEQ ID NO：3)的轻链可变区(VL)氨基酸序列的序列对比。2H7和hu2H7.v16的VL的CDRs如下：CDR1(SEQ ID NO：4)、CDR2(SEQ ID NO：5)、以及CDR3(SEQ ID NO：6)。
图1B为比较鼠2H7(SEQ ID NO：7)、人源化2H7.v16变体(SEQ IDNO：8)、以及重链亚组III的人共有序列(SEQ ID NO：9)的重链可变区(VH)的序列对比。2H7和hu2H7.v16的VH的CDRs如下：CDR1(SEQ ID NO：10)、CDR2(SEQ ID NO：11)、以及CDR3(SEQ ID NO：12)。
图1A和图1B中，每条链中的CDR1、CDR2和CDR3都包含在括号内，侧翼为框架区FR1-FR4。2H7指小鼠2H7抗体。两行序列之间的星号指示两个序列之间不同的位置。按照Kabat et al.Sequences of ImmunologicalInterest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991)为残基编号，插入显示为a、b、c、d、和e。
图2显示成熟2H7.v16L链的氨基酸序列(SEQ ID NO：13)
图3显示成熟2H7.v16H链的氨基酸序列(SEQ ID NO：14)。
图4显示成熟2H7.v31H链的氨基酸序列(SEQ ID NO：15)。2H7.v31的L链与2H7.v16相同。
图5为比较人源化2H7.v16变体(SEQ ID NO：2)和人源化2H7.v138变体(SEQ ID NO：28)的轻链氨基酸序列的序列对比。
图6为比较人源化2H7.v16变体(SEQ ID NO：8)和人源化2H7.v138变体(SEQ ID NO：29)的重链氨基酸序列的序列对比。
图7显示成熟2H7.v16和2H7.v511轻链(分别为SEQ ID NOS：13和30)的比对，带有Kabat可变结构域残基编号和Eu恒定结构域残基编号。
图8显示成熟2H7.v16和2H7.v511重链(分别为SEQ ID NOS：14和31)的比对，带有Kabat可变结构域残基编号和Eu恒定结构域残基编号。
图9A显示人源化2H7.v114轻链可变区的序列(SEQ ID NO：32)；图9B显示人源化2H7.v114重链可变区的序列(SEQ ID NO：33)；图9C显示人源化2H7.v114全长重链的序列(SEQ ID NO：34)，带有Kabat可变结构域残基编号和Eu恒定结构域残基编号。
优选实施方案的详细描述
I.定义
“B细胞”是在骨髓内成熟的淋巴细胞，包括幼稚型B细胞(naive B cell)、记忆性B细胞、或效应B细胞(浆细胞)。此处B细胞可以是正常或非恶性B细胞。
此处“B细胞表面标志”或“B细胞表面抗原”是表达于B细胞表面上的抗原，其可以由与其结合的拮抗剂所靶向。示例性B细胞表面标志包括CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86白细胞表面标志(其描述参见The Leukocyte Antigen Facts Book，2nd Edition.1997，ed.Barclay et al.Academic Press，Harcourt Brace & Co.，New York)。其它B细胞表面标志包括RP105、FcRH2、B细胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA、和239287。特别感兴趣的B细胞表面标志是与哺乳动物其它非B细胞组织相比优先表达于B细胞上的B细胞表面标志，其可能同时表达于前体B细胞和成熟B细胞。此处优选的B细胞表面标志是CD20和CD22。
″CD20″抗原、或″CD20″是发现于90％以上的外周血或淋巴器官B细胞表面上的约35 kDa的、非糖基化磷蛋白。CD20同时存在于正常B细胞和恶性B细胞，但不表达于干细胞。文献中CD20的其它名称包括″B淋巴细胞限制性抗原″和″Bp35″。例如，Clark et al.Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)82：1766(1985)中描述了CD20抗原。
″CD22″抗原，或″CD22″，也称为BL-CAM或Lyb8，是1型整合膜糖蛋白，分子量约130(缩短的)至140kD(未缩短的)。其同时表达于B淋巴细胞的细胞质和细胞膜。CD22抗原在B细胞淋巴细胞分化的早期出现，大约在与CD19抗原相同的阶段。不像其它的B细胞标记，CD22膜表达限于包含在成熟B细胞(CD22+)和浆细胞(CD22-)之间的晚期分化阶段。例如，Wilson et al.J.Exp.Med.173：137(1991)和Wilson et al.J.Immunol.150：5013(1993)中描述了CD22抗原。
″拮抗剂″为当其结合于B细胞上的表面标志时，通过例如减少或防止B细胞所引发的体液反应而破坏或损耗哺乳动物的B细胞和/或干扰一种或多种B细胞机能的分子。所述拮抗剂优选能够损耗由其治疗的哺乳动物的B细胞(即减少循环B细胞水平)。这种损耗可以通过多种机理如抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒(CDC)、B细胞增殖的抑制和/或B细胞死亡的诱导(例如通过凋亡)实现。包括在本发明范围内的拮抗剂包括抗体、合成或天然序列的肽、免疫粘附素、以及结合CD20的小分子拮抗剂，任选偶联于细胞毒剂或融合于细胞毒剂。优选的拮抗剂包括抗体。
此处“抗体拮抗剂”为当其结合于B细胞上的B细胞表面标志时，例如通过减少或防止B细胞所引发的体液反应而破坏或损耗哺乳动物的B细胞和/或干扰一种或多种B细胞机能的抗体。所述抗体拮抗剂优选能够损耗由其治疗的哺乳动物的B细胞(即减少循环B细胞水平)。这种损耗可以通过多种机理如抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒(CDC)、B细胞增殖的抑制和/或B细胞死亡的诱导(例如，通过凋亡)实现。
此处术语″抗体″以其最广义使用，特别包括单克隆抗体、多克隆抗体、至少由两种完整抗体所形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、以及抗体片段，只要其具有所需的生物学活性。
″抗体片段″包括完整抗体的一部分，优选包括其抗原结合区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2、以及Fv片段；双抗体(diabody)；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
为了本文的目的，“完整抗体”是包含重链和轻链可变区以及Fc区的一种抗体。
此处“结合B细胞表面标志的抗体”为当其结合于B细胞表面标志时，例如通过减少或防止B细胞所引发的体液反应而破坏或损耗哺乳动物的B细胞和/或干扰一种或多种B细胞机能的分子。所述抗体优选能够损耗由其治疗的哺乳动物的B细胞(即减少循环B细胞水平)。这种损耗可以通过多种机理如抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒(CDC)、B细胞增殖的抑制和/或B细胞死亡的诱导(例如，通过凋亡)实现。在一个优选实施方案中，所述抗体诱导显著的(major)临床反应。在另一优选实施方案中，所述B细胞表面标志是CD20，这样结合B细胞表面标志的抗体就是结合CD20的抗体，或者″CD20抗体″。特别优选的实施方案是诱导显著临床反应的CD20抗体。为了本文的目的，″显著的临床反应″定义为连续六个月获得American College of Rheumatology 70的反应(ACR 70)。ACR反应分数分为ACR 20、ACR 50和ACR 70，在此评价系统中ACR 70为体征和症状得到控制的最高水平。ACR反应分数测量类风湿性关节炎疾病活动包括关节肿胀和触痛、疼痛、无力水平(level of disability)和整体病人和医师评估的改善。诱导显著临床反应的不同抗体类型的例子是etanercept(ENBREL)，其由FDA认可并且如本文所定义，
CD20抗体的例子包括：“C2B8″，现在称为“美罗华”(“RITUXAN”)(美国专利5,736,137)；钇-[90]-标记的2B8鼠抗体，命名为“Y2B8″或商业上可由IDEC Pharmaceuticals，Inc.获得的“IbritumomabTiuxetan”(ZEVALIN)(美国专利5,736,137；2B8于1993年6月22日保藏在ATCC，登录号HB11388)；鼠IgG2a“B1″，也称为“Tositumomab”，可选地用131I标记得到“131I-B1″或“碘I131 tositumomab”抗体(BEXXARTM)，商业上可由Corixa获得(也可参见美国专利5,595,721)；鼠单克隆抗体“1F5″(Press et al.Blood 69(2)：584-591(1987)及其变体包括“框架拼接的(patched)”或人源化的1F5(WO 2003/002607，Leung，S.；ATCC保藏号HB-96450)；鼠2H7和嵌合2H7抗体(美国专利5,677,180)；人源化2H7(WO2004/056312(Lowman et al.)，如以下所列出的)；HUMAX-CD20TM完全人、高亲合性抗体，靶向在B细胞细胞膜中的CD20分子(Genmab，Denmark；例如参见，Glennie and van de Winkel，Drug Discovery Today 8：503-510(2003)和Cragg et al.，Blood 101：1045-1052(2003))；WO04/035607中列出的人单克隆抗体(Teeling et al.)；AME-133TM抗体(Applied Molecular Evolution)；A20抗体及其变体如嵌合或人源化A20抗体(分别为cA20、hA20)(US 2003/0219433，Immunomedics)；以及单克隆抗体L27、G28-2、93-1B3、B-C1或NU-B2，分别可由International Leukocyte Typing Workshop获得(Valentine et al.，In：Leukocyte Typing III(McMichael，Ed.，p.440，Oxford University Press(1987))。此处优选的CD20抗体是嵌合的、人源化的、或人CD20抗体，更优选美罗华、人源化2H7、嵌合的或人源化A20抗体(Immunomedics)、和HUMAX-CD20TM人CD20抗体(Genmab)。
此处术语“美罗华(rituximab)”或“RITUXAN”指针对CD20抗原的遗传工程化嵌合鼠/人单克隆抗体，包括其保留结合CD20能力的片段，所述单克隆抗体在美国专利5,736,137中称为“C2B8”。
单纯为了本文的目的，并且，除非另有指明，“人源化2H7”指结合人CD20的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体在体内有效损耗灵长类B细胞，所述抗体在其H链可变区(VH)至少包含来自抗人CD20抗体的SEQ ID NO：12的CDR H3序列(图1B)，且基本上包含人重链亚组III(VHIII)的人共有框架(FR)残基。在优选实施方案中，该抗体进一步包含SEQ IDNO：10的H链CDR H1序列和SEQ ID NO：11的CDR H2序列，更优选进一步包含SEQ ID NO：4的L链CDR L1序列、SEQ ID NO：5的CDR L2序列、SEQ ID NO：6的CDR L3序列并且基本上包含人轻链亚组I(VI)的人共有框架(FR)残基，其中VH区可以连接到人IgG链恒定区，其中所述区域可以是例如IgG1或IgG3。也可参见WO 2004/056312(Lowman et al.)。
在优选实施方案中，这种抗体包含SEQ ID NO：8的VH序列(v16，如图1B所示)，任选还包含SEQ ID NO：2的VL序列(v16，如图1A所示)，其在H链中可以具有氨基酸取代D56A和N100A，在L链中具有S92A(v96)。优选所述抗体是分别包含SEQ ID NOS：13和14的轻链和重链氨基酸序列的完整抗体，如图2和3所示。另一优选实施方案中，所述抗体是分别包含SEQID NOS：13和15的轻链和重链氨基酸序列的2H7.v31，如图2和4所示。本文的抗体在Fc区中可以进一步包含至少一个改善ADCC和/或CDC活性的氨基酸取代，例如其中所述氨基酸取代为S298A/E333A/K334A的取代，更优选具有SEQ ID NO：15的重链氨基酸序列的2H7.v31(如图4所示)。另一优选实施方案中，所述抗体为分别包含SEQ ID NOS：28和29的轻链和重链氨基酸序列的2H7.v138，如图5和6所示，其为带有2H7.v16的相应轻链和重链氨基酸序列的这种序列的比对。或者，此优选的完整人源化2H7抗体是2H7.v477，其具有除氨基酸取代N434W以外的2H7.v138的轻链和重链序列。这些抗体中任何一个在Fc区可以进一步包含至少一个降低CDC活性的氨基酸取代，例如，至少包含取代K322A。参见美国专利6,528,624B1(Idusogie et al.)。
最优选的人源化2H7变体是那些具有SEQ ID NO：2的轻链可变区和SEQ ID NO：8的重链可变区的变体，即那些在Fc区具有或没有取代的变体，和那些具有SEQ ID NO：8中含N100A或D56A和N100A改变的重链可变区和SEQ ID NO：2中含M32L、或S92A、或M32L和S92A改变的轻链可变区的变体，即那些在Fc区中具有或没有取代的变体。如果在Fc区构建取代，则优选是下表中所列出的那些取代的其中一个。
在本发明不同优选实施方案的概括中，基于2H716型的变体V区将具有除下表指出的氨基酸取代位置之外的v16的氨基酸序列。除非另有说明，2H7变体将具有与v16的相同的L链。
2H7型式 重链(VH)改变 轻链(VL)改变 Fc改变
16 -
31 - - S298A，E333A，K334A
73 N100A M32L
75 N100A M32L S298A，E333A，K334A
96 D56A，N100A S92A
114 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A
115 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A，E356D，M358L
116 D56A，N100A M32L，S92A S298A，K334A，K322A
138 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A，K326A
477 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A，K326A，N434W
375 - - K334L
特别优选的人源化2H7是完整抗体或抗体片段，包含可变区轻链序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR(SEQID NO：2)；
和可变区重链序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPaKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO：8)。
其中人源化2H7抗体是完整抗体，优选其包含轻链氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：13)；
和重链氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：14)
或重链氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：15)。
在另一优选实施方案中，所述完整人源化2H7抗体包含轻链氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：28)
和重链氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATsYNQKFKGRFTISVDKsKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSASYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：29)。
“抗体依赖的细胞介导的细胞毒”和“ADCC”指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcRs)的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞、和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，随后导致靶细胞裂解。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、Fcγ RII和FcγRIII。造血细胞上FcR的表达概括于Ravetch and Kinet，Annu.Rev.Immunol9：457-492(1991)第464页表3。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测试，如美国专利5,500,362或5,821,337中所描述的。可用于此测试的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者，或除此之外，可以体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，如Clynes et al.PNAS(USA)95：652-656(1998)中所公开的。
“人效应细胞”为表达一种或多种FcRs并执行效应器机能的白细胞。优选所述细胞至少表达FcγRIII并执行ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞；PBMCs和NK细胞是优选。
术语″Fc受体″或″FcR″用于描述结合于抗体Fc区的受体。优选的FcR为天然序列的人FcR。另外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)，包括受体FcγRI、FcγRII、和FcγRIII亚类，包括这些受体的等位变体和不同剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(″活化受体″)和FcγRIIB(″抑制受体″)，其具有类似的氨基酸序列，所述氨基酸序列主要在其细胞质结构域中有所不同。活化受体FcγRIIA在其细胞质结构域申包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见Daёron，Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。Ravetch and Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-492(1991)；Capel et al.，Immunomethods 4：25-34(1994)；以及de Haas et al.，J.Lab.Clin.Med.126：330-341(1995)中综述了FcRs。此处术语″FcR″包括其它的FcRs，包括将来要鉴定的那些。所述术语还包括新生儿受体FcRn，其负责母系IgGs到胎儿的转移(Guyer et al.，J.Immunol.117：587(1976)和Kim et al.，J.Immunol.24：249(1994))。
″补体依赖的细胞毒″或″CDC″指分子在补体的存在下裂解靶物的能力。补体激活途径由补体系统的第一个组件(C1q)结合于与相关抗原复合在一起的分子(例如抗体)所启动。为了评估补体活化，可以进行CDC测试，例如Gazzano-Santoro et al.，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所描述。
″生长抑制性″抗体是防止或减少细胞增殖的那些抗体，所述细胞表达所述抗体结合的抗原。例如，所述抗体在体外和/或体内可以防止或减少B细胞的增殖。
″诱导凋亡″的抗体是诱导程序性细胞死亡例如B细胞死亡的那些抗体，其用标准细胞凋亡测试来测定，例如annexin V的结合、DNA片段化、细胞皱缩、内质网膨胀、细胞破碎、和/或膜囊(称为凋亡体)的形成。
″天然抗体″通常为约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条轻链由一个共价二硫键连接于重链，然而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型重链之间有变化。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫键。每条重链一端具有可变区(VH)，接下来是许多恒定区。每条轻链一端具有可变区(VL)，另一端具有恒定区；所述轻链的恒定区与重链的第一个恒定区对齐，轻链可变区与重链可变区对齐。据信特定氨基酸残基形成轻链和重链可变区之间的界面。
术语″可变″指抗体中可变区的某些部分在序列中差异非常大，用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性在所有抗体的可变区中不是均匀分布的。在轻链和重链可变区中，注意力都集中在三个称为高变区的片段。可变区保守程度较高的部分称为框架区(FRs)。天然重链和轻链可变区各包括四个FRs，大多采用β-片层构象，由三个高变区所连接，形成连接β片层结构的环，并且有时构成β片层结构的一部分。每条链中的高变区通过FRs非常紧密地靠在一起，并且与来自另一条链的高变区一起为抗体的抗原结合部位的形成作出贡献(参见Kabat et al.，Sequences ofProteins of Immunological Interest，5th Ed.Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。恒定区不直接涉及抗体与抗原的结合，但显示多种效应器功能，例如抗体依赖的细胞毒(ADCC)中抗体的参与。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生两条相同的抗原结合片段(称为″Fab″片段，每条都具有单个抗原结合部位)和残留的″Fc″片段，其名称反映了其易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab′)2片段，其具有两个抗原结合部位，仍然能够交联抗原。
″Fv″是包含完全抗原识别和抗原结合部位的最小抗体片段。该区域由一条重链和一条轻链可变区紧密的、非共价结合的二聚体组成。正是以这种每个可变区的三个高变区相互作用的构象确定了VH-VL二聚体表面上的抗原结合部位。六个高变区共同赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是单一的可变区(或者是只包含三个抗原特异性高变区的Fv的一半)也具有识别并结合抗原的能力，虽然其亲合力低于完整的结合部位。
Fab片段也包含轻链的恒定区和重链的第一个恒定区(CH1)。Fab′片段与Fab片段不同，其在重链CH1区的羧基末端添加了几个残基，包括一个或多个来自抗体绞链区的半胱氨酸。此处将恒定区的半胱氨酸残基具有至少一个自由硫醇基的Fab′称为Fab′-SH。F(ab′)2抗体片段起初以Fab′片段对的形式产生，所述Fab′片段对在Fab′片段之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的″轻链″都可以根据其恒定区的氨基酸序列将其指定为称为kappa(k)和lambda(λ)的两种清楚确定的类型中的其中一种。
依据其重链恒定区的氨基酸序列，可以将抗体指定为不同的类别。有五种主要的完整抗体类别：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，其中几种可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、以及IgA2。相应于不同抗体类别的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ、和μ。不同类别免疫球蛋白的亚单位结构和三维构象是熟知的。
″单链Fv″或″scFv″抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。优选Fv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含多肽连接序列，其使scFv能够形成所需的抗原结合结构。scFv的综述可参见Plückthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。
术语″双抗体″指具有两个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包含连接到同一多肽链(VH-VL)中的轻链可变区(VL)的重链可变区(VH)。通过使用太短而不允许同一条链上的两个结构域配对的连接序列，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域配对，产生两个抗原结合部位。例如EP 404,097；WO 93/11161；以及Hollinger et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993)中更为详细地描述了双抗体。
此处所用术语″单克隆抗体″指由基本上同质的抗体群体获得的抗体，即所述群体包含的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了可能在生产单克隆抗体期间产生的可能变体之外，而这种变体通常只少量存在。与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制品相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了其特异性之外，由于单克隆抗体未被其它免疫球蛋白所污染，因而它们具有优势。所述修饰语“单克隆”指从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，不能理解为需要以任何特定方法生产所述抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法制备，所述杂交瘤方法由Kohler et al.，Nature 256：495(1975)首次描述，或者可以通过重组DNA方法(参见，例如，美国专利4,816,567)制备。例如，″单克隆抗体″也可以利用Clackson et al.，Nature，352：624-628(1991)和Marks etal.，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)描述的技术从噬菌体抗体文库分离。
此处单克隆抗体尤其包括″嵌合″抗体(免疫球蛋白)以及这些抗体的片段，只要其显示所需的生物活性，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种的抗体，或者属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与源自其它物种的抗体，或者属于另一抗体类别或者亚类的抗体中的相应序列相同或者同源。(美国专利4,816,567；Morrison et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984))。此处感兴趣的嵌合抗体包括″灵长类化(primatized)″抗体，包含源于非人灵长类(例如旧世纪猴(OldWorld Monkey)，如狒狒、恒河猴或猕猴)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列(美国专利5,693,780)。
″人源化″形式的非人(例如，鼠)抗体为包含源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在很大程度上，人源化抗体为其中来自受体高变区的残基被来自非人物种(供体抗体)高变区的残基所置换的人免疫球蛋白(受体抗体)，所述非人物种为例如具有所需特异性、亲合力、和能力的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类。一些例子中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基由相应的非人残基所置换。另外，人源化抗体可以包含受体抗体或供体抗体中未发现的残基。构建了这些修饰以进一步改善抗体性能。总的来说，人源化抗体会包含基本上所有的或至少一个、和典型地两个可变区，其中所有的或者基本上所有的高变环相应于非人免疫球蛋白的那些高变环，并且所有的或者基本上所有的FRs均为人免疫球蛋白序列的FRs，除了如上所述的FR取代之外。人源化抗体任选还将包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分，典型地人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。更多详情参见Jones et al.，Nature321：522-525(1986)；Riechmann et al.，Nature 332：323-329(1988)；and Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。
此处使用术语“高变区”时指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。所述高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，轻链可变区中的残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)以及重链可变区中的31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat et al.，Sequences of Proteins of InmunologicalInterest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重链可变区中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia and Lesk J.Mol.Biol.，196：901-917(1987))。″框架″或″FR″残基是除了此处定义的高变区残基外的那些可变区残基。
“裸抗体”是未偶联于异源分子如细胞毒性部分或放射性标记的抗体(如此处定义的)。
″分离的″抗体指已经从那些天然环境组分中鉴别和分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染物组分指会干扰抗体的诊断或治疗用途的材料，可能包括酶、激素、和其它的蛋白质或非蛋白质溶解物。在优选实施方案中，所述抗体将被纯化至(1)用Lowry法测定时以重量计大于抗体的95％，最优选以重量计超过99％，纯化至(2)使用旋杯(spinning cup)测序仪测定时达到足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或者纯化至(3)在还原性或非还原性条件下进行SDS-PAGE，用考马斯蓝或优选银染时达到均质。由于抗体天然环境的至少一种组分不存在，因而分离的抗体包括重组细胞内原位存在的抗体。然而，通常分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。
本文所用″ANCA相关血管炎(ANCA-associated vasculitis)″或″抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies-associatedvasculitis)″或″AAV″指涉及全身性血管炎(或血管壁炎症)的自身免疫疾病或紊乱，其中正常情况下患者血液中存在循环的抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)，或者存在确定所述血管炎的其它临床表现，如以下指出的。本文所用术语″ANCA相关血管炎″适用于任何类型和阶段或严重程度的ANCA相关血管炎，无论症状是否明显，只要作出了诊断结论。ANCA相关血管炎的例子包括显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis)、韦格纳肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)、丘-斯综合征(Churg-Strauss syndrome)、局限于肾的血管炎(renal-limited vasculitis)(特发性坏死性新月形肾小球肾炎(idiopathic necrotizing crescentic glomerulonephritis))、和特定类型的药物诱导的血管炎(drug-induced vasculitis)。ANCA相关血管炎的诊断结论及其多种表现形式包括以下列出的那些。
几种诊断测试常用于怀疑患有ANCA相关血管炎的人。可以帮助确定血管炎性紊乱的特定类型的特征包括所涉及器官的类型、ANCA的存在和类型(髓过氧化物酶-ANCA或蛋白酶3-ANCA)、血清冷球蛋白的存在、以及肉芽肿炎症存在的证据。
与ANCA相关血管炎相关的示例性自身抗体包括水平升高的抗核抗体(ANA)、抗类风湿因子(RF)抗体、肌酐、血尿素氮、抗内皮抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)如针对蛋白酶3(PR3)或针对髓过氧化物酶(MPO)的自身抗体、或其组合。
可以利用抗原特异性免疫化学测试鉴定PR3-ANCA和MPO-ANCA以检测ANCA抗体。Niles et al.，同上。由于用于ANCA的ELISA测试与本质上更高的ANCA相关血管炎阳性预测值和概率比相关，因而ELISA测试只可以在ANCA阳性样品上通过免疫荧光实施。 Stone et al.，Arthritis Care andResearch，13：424-34(2000)，Comment on Arthritis Care Res.13：341-342(2000)；Russell et al.，Clin.Immunol.，103：196-203(2002)。
大约百分之10的显微镜下多血管炎(最常见的ANCA相关血管炎类型)和韦格纳肉芽肿病病人具有ANCA阴性检测结果；然而，此发现并不能完全排除这些疾病，ANCA效价并不总是与疾病活动相关。Jennette and Falk，N.EnglJ Med.，同上。另一方面，阳性ANCA测试结果不只是ANCA相关血管炎的诊断标志。
表1概括了ANCA相关血管炎的可能临床表现，这些在任何存在多系统疾病的病人都应当被怀疑，其中所述多系统疾病不是由感染性或恶性进程(例如，肾机能障碍、皮疹、肺病表现、或神经病表现)所引起的。全身症状(constitutional symptom)是常见的。频率和所涉及的不同系统的组合在各疾病实体之间有所不同。也可参见Guillevin et al.Arthritis Rheum.42：421-430(1999)；Pettersson et al，Clin.Nephrol.43：141-149(1995)；Savage etal.，Lancet 349：553-558(1997)；Guillevin et al.，Br.J.Rheumatol35：958-964(1996)。
表1
ANCA相关血管炎的临床表现
  系统   表现
  全身性的(constitutional)肌肉骨骼皮肤肾脏呼吸道神经系统胃肠道   发烧、体重减轻、厌食、全身不适肌肉痛、关节痛可触知的紫癜(Palpable purpura)、荨麻疹蛋白尿症、血尿症、肾机能不全、肾衰竭、坏死性肾小球肾炎呼吸困难、咳嗽、咳血；肺浸润、间质肺部疾病、肺出血周围神经病，尤其是单神经炎便血、肝酶升高；腹泻、恶心、呕吐、腹痛
最常见的皮肤病变是可触知的紫癜--通常在下肢开始的轻微提高的、非变白性(non-blanching)出疹。偶尔所述皮疹是泡状的或轻微溃烂的。荨麻疹也可能是ANCA相关血管炎的表现形式。与非-血管炎性变应性荨麻疹不同，血管炎性荨麻疹持续一天以上，可能发展成紫癜性损伤病变。低补体血症的存在可能表明所述血管炎是免疫复合体介导的而非ANCA相关血管炎。
血管炎涉及肾可能发展为肾衰竭。肾脏活组织检查结果通常显示肾小球肾炎。局灶性坏死、新月形成和免疫球蛋白沉积的缺乏(absence)或稀少(paucity)表征ANCA相关血管炎病人的肾小球肾炎。Pettersson et al.，Clin.Nephrol.43：141-149(1995)。涉及肺脏的范围从浅层病灶浸润或间质疾病到大规模肺出血性肺泡毛细管炎。后者是小型血管血管炎最危及生命的特征。
然而，重要的是将ANCA相关血管炎从导致多系统表现的其它疾病区分开。具有不同器官的广布性栓塞的疾病(例如，动脉栓塞病、心内膜炎、抗磷脂综合征、和心房粘液瘤)能够产生类似的临床表现。Kelley，″Vasculitisand related disorders″In：Textbook of rheumatology.5th ed.(Philadelphia：Saunders，1997)，pp.1079-1101。患脓毒病的人也可能表现为涉及多系统。认识到ANCA相关血管炎可以继发于感染或恶性疾病也是很重要的。血管炎可以并发一些病毒性、细菌性、和真菌性感染，这主要是皮肤血管炎。病史提示所述诊断。恶性疾病如淋巴瘤、白血病、骨髓增生性疾病、和骨髓发育不良综合征可能与ANCA相关血管炎相关；而实体肿瘤不常与这种血管炎相关。在作出ANCA相关血管炎的诊断结论之前，应当充分评估其背后的感染性或恶性病因--即使ANCA测试结果是阳性的。
表2列出一些可以帮助诊断特定血管炎类型的临床特征。实验室评估应当包括完全血细胞计数和常规化学检测项目、尿分析、便潜血试验、和胸部射线照相。可能有正常红细胞性贫血、血小板增多、红细胞沉降率升高、肝功能增强、或涉及肾的征象。还应当测定ANCA血清水平。为了排除ANCA相关血管炎而应当实施的其它实验室测试包括抗核抗体、类风湿因子、冷球蛋白、补体、乙型肝炎和丙型肝炎的抗体、以及人免疫缺陷病毒(HIV)测试。如果合适的话，也可以实施胸部和鼻窦计算机断层摄影(computed tomographic)扫描。所波及的组织(例如，皮肤、神经、肺脏、或肾脏)的病理检查可以帮助证明ANCA相关血管炎的类型。应当从有症状和易接近的部位获得活组织切片。来自无症状部位的活组织切片具有低的阳性结果得率。
表2
帮助诊断具体血管炎类型的临床特征
临床特征   可能的血管炎类型
肺和肾症状肺-皮肤症状哮喘和嗜酸性粒细胞增多症累及上呼吸道   韦格纳肉芽肿病显微镜下多血管炎冷球蛋白血症；亨-舍紫癜(Henoch-Schonlein purpura)丘-斯综合征韦格纳肉芽肿病(例如，鼻窦炎和中耳炎)
表2的信息来自Jennette and Falk，N.Engl.J.Med.，同上，和Kelley，同上。
韦格纳肉芽肿病以上下呼吸道坏死性肉芽瘤以及肾小球肾炎和全身性血管炎为特征，其通常波及中型血管，随之形成肉芽瘤和实质(parenchyma)坏死。Kelley，同上。上呼吸道征象包括鼻窦炎、鼻溃疡、中耳炎、或听力丧失。在百分之70的病人中观察到上呼吸道的体征和症状，在百分之85的病人中滋长出肺部浸润或可以空洞化的结节。Kelley，同上。百分之75至90中血清抗蛋白酶3-ANCA(c-ANCA)是阳性的，而百分之20可能具有阳性p-ANCA。开放的肺活组织检查是最确定的诊断测试。鼻窦活组织检查只在百分之30的病例中是具有诊断性的，因为炎性结果通常是非特异性的，肾活组织检查也是相对非特异性的。射线照相结果是中部和下部区域浑浊(opacities)，是弥散的，并且肺泡和间质也是。能够空洞化的结节在儿童中是罕见的。CT扫描可能显示弥散的、不易确定的血管周围浑浊。韦格纳肉芽肿病能够侵袭任何年龄的病人，最高发病率在生命的第四个十年期间，并且在男性中更为常见。Duna et al.，Rheum.Dis.Clin.North Am.21：949-986(1995)。最准确的诊断韦格纳肉芽肿病的方法是对累及的器官部位(通常为窦道、肺或肾脏)进行活组织检查以证实血管炎和肉芽瘤的存在，血管炎和肉芽瘤一起对所述疾病是具有诊断性的。
显微镜下多血管炎以ANCA的存在和在所波及的血管中极少或没有免疫沉积物为特征。Savage et al.，Lancet 349：553-558(1997)。在百分之90的患有这类血管炎的病人中，肾脏是最常见的被侵袭器官。Kelley，同上。病人表现出肾表象(manifestation)、可触知的紫癜、腹痛、咳嗽、和咳血的不同组合。虽然PR3-ANCA(c-ANCA)也可能存在于百分之40的病人中，但大多数病人具有阳性MPO-ANCA(p-ANCA)。最常见的发作年龄是40至60岁，最常见的性别是男性。
丘-斯综合征是罕见疾病，有三个阶段：过敏性鼻炎和哮喘、类似于肺炎的嗜酸性粒细胞浸润性疾病、以及带有肉芽肿性炎症的全身性小血管血管炎。Guillevin et al.，Br.J.Rheumatol，35：958-964(1996)。血管炎性阶段通常在哮喘发作三年内显现出来。几乎所有的病人在血液中都具有百分之10以上的嗜酸性粒细胞。冠状动脉炎和心肌炎是发病率和死亡率的主要原因。发病的年龄自15至70岁不一，在男性中更为常见。药物诱导的血管炎通常在药物开始后七至21天内显现出来，可能局限于皮肤。Jennette and Falk，N.Engl.J.Med.，同上。皮肤病变与全身性小血管血管炎中看到的相同。药物导致大约百分之10的血管炎性皮肤病变。已涉及的药物包括青霉素、氨苄青霉素(aminopenicillins)、磺胺类药物、别嘌呤醇(allopurinol)、噻嗪、喹诺酮(quinolone)、乙内酰脲(hydantoins)、和丙基硫氧嘧啶(propylthiouracil)。一些药物如丙基硫氧嘧啶和肼苯哒嗪(hydralazine)(APRESOLINETM)看来似乎通过诱导ANCA引发血管炎。
检测活动性疾病和测定哪些病人/患者适合于治疗的另一手段是测定病人的伯明翰血管炎活动度分数(Birmingham Vasculitis Activity Score)/韦格纳肉芽肿病(BVAS/WG)值，无论是主要的还是次要的。此分数是血管炎活动指数，设计用于记录直接起因于活动性韦格纳肉芽肿病的临床特征。已发现它是韦格纳肉芽肿病有效且可靠的疾病特异性指标。Stone et al.，Arthritis& Rheumatism，44：912-920(2001)。它也可以用于其它的ANCA相关血管炎疾病。所述分数将代表新的或更糟的疾病活动的特征从那些代表持久活动的特征分开。典型地，病人的BVAS/WG分数为3或更大(或者在28天的治疗中曾经为3或更大)。有关BVAS/WG评估形式的每种主要项目都记为3个点。每种次要项目都记为1个点。然而，所用的另一种区别是首次出现的或复发的急性病显示至少为10的BVAS/WG，而持久病显示至少为4的BVAS/WG。淋巴细胞减少也可以是韦格纳肉芽肿病的良好标志。Izzedine et al.，Nephron92：466-471(2002)。
此处″患者(subject)″是人类患者，包括适于进行ANCA相关血管炎治疗的病人，其正经历或者已经经历过ANCA相关血管炎的一种或多种体征、症状、或其它指标，已被诊断为患ANCA相关血管炎，例如无论是新诊断的或者是之前诊断的并且目前正经历反复或复发，或者处于发展为ANCA相关血管炎的风险中。所述患者可以之前已经用CD20抗体治疗过或者没有这样治疗过。适于ANCA相关血管炎治疗的患者可以任选是根据血液中浸润性CD20细胞水平(infiltrating CD20 cell)的升高而筛选出来的患者，或者是用检测自身抗体的测试方法筛选出来的患者，其中通过定性评估自身抗体的产生，并优选通过定量评估。
此处″病人″指适于进行ANCA相关血管炎治疗的人类患者，其正在经历或已经经历过一种或多种体征、症状、或其它ANCA相关血管炎指标，无论是例如新诊断的或者是之前诊断的而现在正经历反复或复发。所述病人可以之前已经用CD20抗体治疗过或者没有这样治疗过。适于ANCA相关血管炎治疗的病人可以任选是用检测自身抗体的测试方法筛选出来的病人，如上述那些，其中通过定性评估自身抗体的产生，并优选通过定量评估。
此处患者的″治疗″同时指治疗性治疗和预防性治疗或防止措施。需要治疗的患者包括那些已经患ANCA相关血管炎的患者以及要预防其ANCA相关血管炎的那些患者。因此，所述患者可以已经诊断为患有ANCA相关血管炎或者可能倾向于患ANCA相关血管炎或对ANCA相关血管炎易患。对患者的治疗包括对病人的治疗。
此处病人的″治疗″指治疗学意义上的治疗。需要治疗的那些病人是诊断为患ANCA相关血管炎的那些病人。
为了本文的目的，如果病人或者患者没有活动性ANCA相关血管炎疾病的症状，例如可通过本文披露的方法检测的那些，并且已经没有ANCA效价的复现或者没有与B细胞重建同时出现的或紧接B细胞重建之后的ANCA效价上升，那么他/她处于″症状缓解″中，因为已经发现持续的或再现的ANCA水平是处于韦格纳肉芽肿病临床症状缓解中的病人复发的前兆。Boomsma ei al.，Arthritis Rheum.，43：2025-2033(2000)。非处于症状缓解中的那些患者包括，例如，B细胞重建后经历疾病发作(disease flare)的那些、经历器官损伤如肾脏损伤的那些患者、或者无症状但已经有ANCA复发或与B细胞重建同时出现的或紧接B细胞重建之后的ANCA效价上升的那些患者。经历了症状的反复，包括活动性疾病和/或器官损伤、或者显示出复发的或上升的ANCA效价的这些患者和病人是已经″复发(relapsed)″或具有″反复(recurrence)″的患者和病人。
ANCA相关血管炎的″症状″是患者或病人经历的任何病态现象或结构、功能、或感觉上脱离常态，以及疾病的征象，如上述的那些。
措辞“有效量”指治疗ANCA相关血管炎有效的抗体或拮抗剂的量。
″抗体暴露(antibody exposure)″指在约1天至约5周的时间内以此处所述的一次或多次施用剂量的抗体接触或暴露于所述抗体。所述剂量可以给予一次或者在该暴露期间以固定或不定的时间间隔给予，例如每周一剂，给予四周，或者以约13-17天的时间间隔分开给予两剂。初始的和随后的抗体暴露如此处详述的在时间上相互分开。
在所述暴露中，如果施用一剂以上(more than one dose)，则直到″自初始暴露″或任何在先暴露起特定时间后才施用或提供，上述特定时间指对于第二次或以后的暴露的时间，从施用在先暴露的任何剂次的时间开始计算。例如，当在初始暴露中施用两剂时，第二次暴露直到至少约16-54周时才给予，所述16-54周从所述在先暴露中施用第一剂或第二剂的时间开始计算。类似地，当初始暴露分三剂施用时，第二次暴露可以从在先暴露的第一、第二、或第三剂的时间开始计算。优选″从初始暴露起″或者从任何在先暴露起是从第一剂的时间起计算。
此处所用用于辅助治疗的术语″免疫抑制剂″指发挥作用以抑制或屏蔽(mask)此处治疗的哺乳动物的免疫系统的物质。这将包括抑制细胞因子生产、下调或抑制自身抗原表达、或屏蔽MHC抗原的物质。这种试剂的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代嘧啶(参见美国专利4,665,077)；非类固醇抗炎药(NSAIDs)；更昔洛韦(ganciclovir)、他克莫司(Tacrolimus)、糖皮质激素如皮质醇或醛甾酮(aldosterone)、抗炎药如环加氧酶抑制剂、5-脂肪氧合酶(lipoxygenase)抑制剂、或白三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂如硫唑嘌呤或霉酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)；烷化剂如环磷酰胺；溴隐亭(Bromocryptine)；达那唑(Danazol)；氨苯砜(dapsone)；戊二醛(其屏蔽MHC抗原，如美国专利4,120,649所述)；MHC抗原和MHC片段的抗独特性抗体；环孢菌素A；类固醇如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物，例如强的松(predisone)、甲基强的松龙(methylprednisolone)包括SOLU-MEDROL甲基强的松龙琥珀酸钠、和地塞米松(dexamethasone)；二氢叶酸还原酶抑制剂如氨甲蝶呤(口服或皮下施用)；抗疟剂如氯喹和羟氯喹；柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)；来氟米特(leflunomide)；细胞因子或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-α、-β、或-γ抗体、抗肿瘤坏死因子(TNF)-α抗体(infliximab(REMICADE)或adalimumab)、抗TNF-α免疫粘附素(etanercept)、抗TNF-β抗体、抗白介素-2(IL-2)抗体和抗IL-2受体抗体、和抗白介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；pan-T抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；可溶性肽，包括LFA-3结合结构域(WO90/08187，公布于7/26/90)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链脱酶(streptodornase)；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；去氧精胍啉(deoxyspergualin)；雷帕霉素(rapamycin)；T细胞受体(Cohen et al，美国专利5,114,721)；T细胞受体片段(Ofiner et al.，Science，251：430-432(1991)；WO90/11294；Ianeway，Nature，341：482(1989)；和WO91/01133)；BAFF拮抗剂如BAFF抗体和BR3抗体和zTNF4拮抗剂(综述参见Mackay and Mackay，Trends Immunol.，23：113-5(2002)，也可参见以下的定义)；干扰T细胞辅助信号的生物学药剂，如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括CD40-CD40配体的阻断性抗体(例如，Durie et al.，Science，261：1328-30(1993)；Mohan et al.，J.Immunol.，154：1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck et al.，Science，265：1225-7(1994))；和T细胞受体抗体(EP340,109)如T10B9。此处一些优选的免疫抑制剂包括环磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、MMF、或氨甲蝶呤。
此处所用术语″细胞毒剂″指抑制或者阻止细胞机能和/或导致细胞破坏的物质。所述术语将包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、p32和Lu的放射性同位素)、化疗剂、以及毒素如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物来源的酶学活性毒素、或其片段。
″化疗剂″是对癌症治疗有用的化合物。化疗剂的实例包括烷化剂，例如噻替派(thiotepa)和CYTOXAN环磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，例如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine )；番荔枝内酯类(acetogenin)(特别是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成的类似物托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(依立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR)、乙酰喜树碱(acetylcamptothecin)、东莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜树碱(aminocamptothecin))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成的类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，例如烯二炔类抗生素(enediyne)(例如加利车霉素(calicheamicin)，特别是加利车霉素γII和加利车霉素ωI1(例如，参见Agnew，Chem Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))；蒽环类抗生素(dynemicin)、包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和有关的色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、阿霉素HCl脂质体注射剂(DOXIL)和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨蝶呤、吉西他滨(gemcitabine)(GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他滨(capecitabine)(XELODA)、epothilone和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；抗肾上腺素，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，例如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，例如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖复合物(JHS NaturalProducts，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2，2′，2″-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)(ELDISINE，FILDESIN)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如，紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL)、清蛋白改造的纳米颗粒剂型紫杉醇(ABRAXANETM)和多西他塞(doxetaxel)(TAXOTERE)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，例如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)(VELBAN)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)(ONCOVIN)；奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovorin)；长春瑞滨(vinorelbine)(NAVELBINE)；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)；上述所有物质的药学可接受盐、酸或衍生物；以及上述的两种或更多种的组合，例如CHOP和FOLFOX，CHOP是环磷酰胺(cyclophosphamide)、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱(vincristine)和泼尼松龙(prednisolone)的组合治疗的缩写，FOLFOX是奥沙利铂(oxaliplatin)(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸(leucovovin)进行治疗的缩写。
调节、降低、阻断或抑制激素作用的经常以系统或整体治疗形式存在的抗激素制剂也包括在该定义内，其中所述的激素可以促进癌症生长。所述抗激素制剂可以是激素本身。实例包括抗雌激素剂和选择性的雌激素受体调节剂(SERMs)，包括，例如：他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)(EVISTA)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬(hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(FARESTON)；抗孕酮类；雌激素受体下调剂(ERDs)；雌激素受体拮抗剂，例如氟维司群(fulvestrant)(FASLODEX)；那些起抑制或阻断卵巢作用的制剂，例如：促黄体素释放激素(LHRH)激动剂，例如醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON和ELIGARD)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(triptorelin)；抗雄激素剂，例如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；和抑制肾上腺中调节雌激素产生的芳香酶的芳香酶抑制剂，例如，4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)(MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、formestanie、法倔唑(fadrozole)、伏罗唑(vorozole)(RIVISOR)、来曲唑(letrozole)(FEMARA)和阿那曲唑(anastrozole)(ARIMIDEX)。另外，化疗剂的这种定义包括二膦酸酯(盐)类(bisphosphonates)，例如氯膦酸盐(酯)(clodronate)(例如：BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸钠(etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronicacid/zoledronate)(ZOMETA)、阿伦膦酸盐(alendronate)(FOSAMAX)、帕米膦酸盐(pamidronate)(AREDIA)、替鲁膦酸盐(tiludronate)(SKELID)或利塞膦酸盐(risedronate)(ACTONEL)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶(1，3-dioxolane nucleoside cytosine)类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些抑制信号路径中和异常细胞增殖有关联的基因的表达的寡核苷酸，例如：PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，例如THERATOPE疫苗和基因治疗疫苗，例如：ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，LURTOTECAN)；rmRH(例如，ABARELIX)；lapatinib ditosylate(ErbB-2和EGFR双酪氨酸激酶小分子抑制剂，又名GW572016)；和上述所有物质的药学可接受盐、酸或衍生物。
术语″细胞因子″是由细胞群体释放的作为细胞间介质而作用于另一细胞的蛋白质的通称。这种细胞因子的例子为淋巴因子、单核因子；白介素(ILs)如IL-1、IL-1a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6 IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12、IL-15、包括PROLEUKINrIL-2；肿瘤坏死因子如TNF-α或TNF-β；以及其它多肽因子包括LIF和kit配体(KL)。此处所用术语细胞因子包括天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物学活性等同物，包括合成生产的小分子物质及其药学上可接受的衍生物和盐。
术语″激素″指多肽激素、其通常由带导管的腺体所分泌。包括于所述激素的是例如生长激素如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素、和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；雌二醇；激素替代治疗物；雄激素如卡鲁睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone)、环硫雄醇(propionate)、美雄烷(epitiostanol)、mepitiostane、或睾内酯(testolactone)；松弛素原；糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)、和促黄体生成素(LH)；催乳素；胎盘催乳素；小鼠促性腺激素相关肽、促性腺激素释放激素；抑制素；活化素；苗勒-抑制物质；以及促血小板生成素。此处所用术语激素包括天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列激素的生物学活性等同物，包括合成生产的小分子物质及其药学上可接受的衍生物和盐。
术语″生长因子″指促进生长的蛋白质，包括例如肝生长因子；成纤维细胞生长因子；血管内皮生长因子；神经生长因子如NGF-β；血小板衍生生长因子；转化生长因子(TGFs)如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；成骨诱导因子；干扰素如干扰素-α、-β、和-γ；以及集落刺激因子(CSFs)如巨噬细胞-CSF(M-CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)、和粒细胞-CSF(G-CSF)。此处所用术语生长因子包括天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列生长因子的生物学活性等同物，包括合成生产的小分子物质及其药学上可接受的衍生物和盐。
术语″整联蛋白″指允许细胞同时结合于胞外基质并对胞外基质作出应答的受体蛋白，其涉及多种细胞机能如创伤愈合、细胞分化、肿瘤细胞归巢(homing)和凋亡。它们是涉及细胞-胞外基质和细胞-细胞相互作用的细胞粘附受体大家族的一部分。功能性整联蛋白由称为α和β的两个跨膜糖蛋白亚基组成，它们非共价结合。α亚基均相互共有一些同源性，β亚基也一样。受体总是包含一个α链和一个β链。例子包括α6β1、α3β1、α7β1、LFA-1等。此处所用术语″整联蛋白″包括天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列整联蛋白的生物学活性等同物，包括合成生产的小分子物质及其药学上可接受的衍生物和盐。
为本文的目的，“肿瘤坏死因子α(TNF-α)”指包括Pennica et al.，Nature，312：721(1984)或Aggarwal et al.，JBC，260：2345(1985)中所述氨基酸序列的人TNF-α分子。此处“TNF-α抑制剂”指在某种程度上通常通过结合TNF-α并中和其活性而抑制TNF-α的生物学功能的药剂。本文特别预期的TNF抑制剂的例子为etanercept(ENBREL)、infliximab(REMICADE)、和adalimumab(HUMIRATM)。
“缓解疾病的抗风湿性药物(disease-modifying anti-rheumatic drugs)”或“DMARD”的例子包括hydroxycloroquine、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、氨甲蝶呤、来氟米特(leflunomide)、etanercept、infliximab(加口服和皮下的methrotrexate)、硫唑嘌呤(azathioprine)、D-青霉胺(D-penicillamine)、氯金酸钠(gold salts)(口服)氯金酸钠(肌肉内)、二甲胺四环素(minocycline)、环孢霉素(cyclosporine)包括环孢霉素A和局部用(topical)环孢霉素、葡萄球菌蛋白A(Goodyear and Silverman，J.Exp.Med.，197，(9)，p1125-39(2003))，包括其盐和衍生物等。
“非类固醇抗炎药”或“NSAIDs”的例子包括阿斯匹林、乙酰水杨酸、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、消炎痛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美汀(tolmetin)、COX-2抑制剂如塞来考昔(CELEBREX；4-(5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(pyrazol)-1-基)苯磺酰胺和戊地昔布(valdecoxib)(BEXTRA)、和美洛昔康(meloxicam)(MOBIC)，包括其盐和衍生物等等。优选为阿斯匹林、萘普生、布洛芬、消炎痛、或托美汀。
此处″整联蛋白拮抗剂或抗体″的例子包括LFA-1抗体，如商业上可由Genentech获得的efalizumab(RAPTIVA)，或α4整联蛋白抗体如可由Biogen获得的natalizumab(ANTEGREN)，或者二氮杂环苯丙氨酸衍生物(WO2003/89410)，苯丙氨酸衍生物(WO 2003/70709、WO 2002/28830、WO2002/16329和WO 2003/53926)，苯基丙酸衍生物(WO 2003/10135)，烯胺衍生物(enamine derivative)(WO 2001/79173)，丙酸衍生物(WO 2000/37444)，链烷酸衍生物(WO 2000/32575)，取代的苯基衍生物(美国专利6,677,339和6,348,463)，芳香胺衍生物(美国专利专利6,369,229)，ADAM disintegrin结构域多肽(US2002/0042368)，αvβ3整联蛋白的抗体(EP 633945)，氮杂桥二环氨基酸衍生物(WO 2002/02556)等。
“皮质类固醇”指具有类固醇的共同化学结构的几种合成或天然发生物质中的任一种，其模拟或增强天然产生的皮质类固醇的作用。合成皮质类固醇的例子包括强的松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)(包括甲基强的松龙(methylprednisolone)，如SOLU-MEDROL甲基强的松龙琥珀酸钠)、地塞米松(dexamethasone)或地塞米曲安西龙(triamcinolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、和倍他米松(betamethasone)。此处优选的皮质类固醇为强的松、甲基强的松龙、氢化可的松或地塞米松。
此处使用术语“BAFF”、“BAFF多肽”、“TALL-1”或“TALL-1多肽”和“ BLyS”时包括“天然序列BAFF多肽和“BAFF变体”。“BAFF”是给予具有如下所示任一个氨基酸序列的那些多肽的名称：
人BAFF序列(SEQ ID NO：16)：
1   MDDSTEREQSRLTSCLKKREEMKLKECVSILPRKESPSVRSSKDGKLLAATLLLALLSCC
61  LTVVSFYQVAALQGDLASLRAELQGHHAEKLPAGAGAPKAGLEEAPAVTAGLKIFEPPAP
121 GEGNSSQNSRNKRAVQGPEETVTQDCLQLIADSETPTIQKGSYTFVPWLLSFKRGSALEE
181 KENKILVKETGYFFIYGQVLYTDKTYAMGHLIQRKKVHVFGDELSLVTLFRCIQNMPETL
241 PNNSCYSAGIAKLEEGDELQLAIPRENAQISLDGDVTFFGALKLL
小鼠BAFF序列(SEQ ID NO：17)：
1   MDESAKTLPPPCLCFCSEKGEDMKVGYDPITPQKEEGAWFGICRDGRLLAATLLLALLSS
61  SFFAMSLYQLAALQADLMNLRMELQSYRGSATPAAAGAPELTAGVKLLTPAAPRPHNSSR
121 GHRNRRAFQGPEETEQDVDLSAPPAPCLPGCRHSQHDDNGMNLRNHQDCLQLIADSDTP
181 TIRKGTYTFVPWLLSFKRGNALEEKENKIVVRQTGYFFIYSQVLYTDPIFAMGHVIQRKK
241 VHVFGDELSLVTLFRCIQNMPKTLPNNSCYSAGIARLEEGDEIQLAIPRENAQISRNGDD
301 TFFGALKLL
及其具有天然BAFF的生物学活性的其同源物和其片段及其变体。BAFF的生物学活性可以选自促进B细胞存活、促进B细胞成熟和结合BR3。BAFF的变体与BAFF多肽的天然序列将优选具有至少80％或直至100％的任何连续整数包括，更优选至少90％、再优选至少95％的氨基酸序列同一性。
″天然序列″BAFF多肽包括具有与源于自然界的相应BAFF多肽相同的氨基酸序列的多肽。例如在由弗林蛋白酶(furin)-型蛋白酶从细胞表面裂解后，BAFF以可溶性形式存在。这样的天然序列BAFF多肽可以从自然界分离，和/或可以通过重组和/或合成手段生产。
术语″天然序列BAFF多肽″或“天然BAFF”特别包括所述多肽天然发生的截断或分泌形式(例如，胞外结构域序列)、天然发生的变体形式(例如，不同剪接形式)、和天然发生的等位变体。术语“BAFF”包括Shu et al.，J.Leukocyte Biol.，65：680(1999)；GenBank Accession No.AF136293；WO1998/18921 published May 7，1998；EP 869，180 published October 7，1998；WO1998/27114 published June 25，1998；WO 1999/12964 published March 18，1999；WO 1999/33980 published July 8，1999；Moore et al.，Science，285：260-263(1999)；Schneider et al.，J Exp.Med.，189：1747-1756(1999)andMukhopadhyay et al.，J.Biol.Chem.，274：15978-15981(1999)中所描述的那些多肽。
此处所用术语“BAFF拮抗剂”以最广义使用，包括任何(1)结合天然序列BAFF多肽或结合BR3的天然序列以部分或完全阻断BR3与BAFF多肽的相互作用，和(2)部分或完全阻断、抑制、或中和天然序列BAFF活性的分子。在一个优选实施方案中，要阻断的BAFF受体是BR3受体。其中，天然BAFF活性促进B细胞存活和/或B细胞成熟等等。在一个实施方案中，BAFF活性的抑制、阻断或中和导致B细胞数目的减少。根据本发明的BAFF拮抗剂会在体外和/或体内部分或完全阻断、抑制、或中和BAFF多肽的一种或多种生物学活性。在一个实施方案中，生物学活性BAFF在体外和/或体内强化下述事件的任一种或任一组合：增加B细胞存活、提高IgG和/或IgM水平、增加浆细胞数目、和将脾B细胞中的NF-κb2/100加工为p52NF-κb(例如，Batten et al.，J.Exp.Med. 192：1453-1465(2000)；Moore et al.，Science 285：260-263(1999)；Kayagaki et al.Immunity 17：515-524(2002))。
如上所述，BAFF拮抗剂能够在体外或体内以直接的或间接的方式发挥作用，部分或完全阻断、抑制或中和BAFF信号。例如，BAFF拮抗剂能够直接结合BAFF。例如，在包含残基162-275的人BAFF的区域内结合和/或结合选自如下的残基(该残基选自：人BAFF残基162、163、206、211、231、233、264和265)的邻近残基，以便所述抗体在空间上阻碍BAFF结合BR3的BAFF抗体是可以预期的，其中这些残基编号参照SEQ ID NO：16。在另一个例子中，直接结合剂是包含结合BAFF的BAFF受体的任意部分的多肽，如BAFF受体的胞外结构域，或者其结合天然BAFF的片段和变体。在另一个例子中，BAFF拮抗剂包括具有包含式I序列的多肽序列的多肽：
X1-C-X3-D-X5-L-X7-X8-X9-X10-X11-X12-C-X14-X15-X16-X17(式I)(SEQ IDNO：18)
其中X1、X3、X5、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X14、X15和X17是除半胱氨酸之外的任意氨基酸；和
其中X16是选自L、F、I和V的氨基酸；并且
其中所述多肽在式IN末端到N最末端半胱氨酸C和C末端到C最末端半胱氨酸C的七个氨基酸残基内不包含半胱氨酸。
在一个实施方案中，包含式I序列的多肽具有由二硫键连接的两个C；X5LX7X8与L和X7之间的回转中心(center of turn)形成I型β回转结构构象；并且X8的二面角phi具有正值。在一个实施方案中，X10选自W、F、V、L、I、Y、M和非极性氨基酸。在另一实施方案中，X10是W。在另一实施方案中，X3是选自W、V、L、I、Y、F、W和非极性氨基酸的氨基酸。在另一实施方案中，X5选自V、L、P、S、I、A和R。在另一实施方案中，X7选自V、T、I和L。在另一实施方案中，X8选自R、K、G、N、H和D-氨基酸。在另一实施方案中，X9选自H、K、A、R和Q。在另一实施方案中X11是I或V。在另一实施方案中，X12选自P、A、D、E和S。在另一实施方案中，X16是L。在一个特定实施方案中，式I的序列是选自ECFDLLVRAWVPCSVLK(SEQ IDNO：19)、ECFDLLVRHWVPCGLLR(SEQ ID NO：20)、ECFDLLVRRWVPCEMLG(SEQ ID NO：21)、ECFDLLVRSWVPCHMLR(SEQID NO：22)、ECFDLLVRHWVACGLLR(SEQ ID NO：23)、和QCFDRLNAWVPCSVLK(SEQ ID NO：24)的序列。在优选实施方案中，BAFF拮抗剂包含选自SEQ ID NO：19、20、21、22、和23的任一氨基酸序列。
在另一个例子中，BAFF拮抗剂包括具有包含式II序列的多肽序列的多肽：
X1-C-A3-D-X5-L-V-X8-X9-W-V-P-C-X14-X15-L-X17(式II)(SEQ ID NO：25)
其中X1、X3、X5、X8、X9、X14、X15和X17是除半胱氨酸外的任意氨基酸；和
其中所述多肽在式II N末端到N最末端半胱氨酸C和C末端到C最末端半胱氨酸C的七个氨基酸残基内不包含半胱氨酸。
在一个实施方案中，包含式II序列的多肽在两个C之间具有二硫键，并且具有与L和X7之间的回转中心形成I型β回转结构的X5LX7X8构象；并且，X8的二面角phi具有正值。在式II的另一实施方案中，X3是选自M、A、V、L、I、Y、F、W和非极性氨基酸的氨基酸。在式II的另一实施方案中，X5选自V、L、P、S、I、A和R。在式II的另一实施方案中，X8选自R、K、G、N、H和D-氨基酸。在式II的另一实施方案中，X9选自H、K、A、R和Q。
在另一实施方案中，由其衍生出胞外结构域或BAFF-结合片段或BAFF-结合变体的BAFF受体是TACI、BR3或BCMA。或者，BAFF拮抗剂能够在其BAFF结合区结合天然序列BR3的胞外结构域，以在体外、原位、或体内部分或完全阻断、抑制或中和BAFF与BR3的结合。例如，这种间接拮抗剂是抗BR3抗体，所述抗BR3抗体结合于包含以下定义的人BR3(SEQID NO：26)残基23-38的BR3区域内或者结合于那些残基的邻近区域，以在空间上阻碍人BR3与BAFF的结合。
在一些实施方案中，根据本发明的BAFF拮抗剂包括BAFF抗体和免疫粘附素，所述免疫粘附素包含BAFF受体的胞外结构域，或其结合天然BAFF的片段和变体。在另一实施方案中，由其衍生出胞外结构域或BAFF-结合片段或BAFF-结合变体的BAFF受体是TACI、BR3或BCMA。在另一实施方案中，免疫粘附素包含如上列出的式I或式II的氨基酸序列，包括选自SEQ ID NOS：19、20、21、22、23、和24的任一个氨基酸序列。
根据一个实施方案，BAFF拮抗剂以100nM或100nM以下的结合亲合力结合BAFF多肽或BR3多肽。根据另一实施方案，BAFF拮抗剂以10nM或10nM以下的结合亲合力结合BAFF多肽或BR3多肽。根据另一实施方案，BAFF拮抗剂以1nM或1nM以下的结合亲合力结合BAFF多肽或BR3多肽。
此处使用术语“BR3”、“BR3多肽”或“BR3受体”时包括“天然序列BR3多肽”和“BR3变体”(此处对其作进一步的定义)。“BR3”是给予包含下述氨基酸序列及其同源物的那些多肽的名称，及其结合天然BAFF的变体或片段：
人BR3序列(SEQ ID NO：26)：
1   MRRGPRSLRGRDAPAPTPCVPAECFDLLVRHCVACGLLRTPRPKPAGASSPAPRTALQPQ
61  ESVGAGAGEAALPLPGLLFGAPALLGLALVLALVLVGLVSWRRRQRRLRGASSAEAPDGD
121 KDAPEPLDKVIILSPGISDATAPAWPPPGEDPGTTPPGHSVPVPATELGSTELVTTKTAG
181 PEQQ。
本发明的BR3多肽可由多种来源分离，如由人各组织类型或由其它来源分离，或者通过重组和/或合成方法制备。术语BR3包括WO 2002/24909和WO 2003/14294中描述的BR3多肽。
″天然序列″BR3多肽或“天然BR3”包括具有与源于自然界的相应BR3多肽相同的氨基酸序列的多肽。这样的天然序列BR3多肽可以从自然界分离，和/或可以通过重组和/或合成手段生产。术语″天然序列BR3多肽″特别包括所述多肽天然发生的截断、可溶或分泌形式(例如，胞外结构域序列)、天然发生的变体形式(例如，不同剪接形式)、和天然发生的等位变体。本发明的BR3多肽包括包含人BR3(SEQ ID NO：26)的连续氨基酸序列残基1至184或由其组成的BR3多肽。
BR3″胞外结构域″或″ECD″指基本上没有跨膜和胞质结构域的BR3多肽形式。BR3的ECD形式包括包含选自人BR3的氨基酸1-77、2-62、2-71、1-61、7-71、23-38和2-63的任一氨基酸序列的多肽。本发明涉及这样的BAFF拮抗剂，它是包含人BR3的上述ECD形式及其结合天然BAFF的变体和片段中任一种的多肽。
Mini-BR3是BR3的BAFF结合结构域的26个残基的核心区，即氨基酸序列：TPCVPAECFD LLVRHCVACG LLRTPR(SEQ ID NO：27)
″BR3变体″指与天然序列、全长BR3或BR3 ECD具有至少约80％的氨基酸序列同一性，并且结合天然序列BAFF多肽的BR3多肽。任选BR3变体包括富含半胱氨酸的结构域。这样的BR3变体多肽包括例如其中在全长氨基酸序列的N-和/或C-末端、以及一个或多个内部结构域内添加、或删除一个或多个氨基酸残基的BR3多肽。本发明还包括结合天然序列BAFF多肽的BR3 ECD的片段。根据一个实施方案，BR3变体多肽与人BR3多肽或其特定片段(例如，ECD)将具有至少约80％的氨基酸序列同一性、至少约81％的氨基酸序列同一性、至少约82％的氨基酸序列同一性、至少约83％的氨基酸序列同一性、至少约84％的氨基酸序列同一性、至少约85％的氨基酸序列同一性、至少约86％的氨基酸序列同一性、至少约87％的氨基酸序列同一性、至少约88％的氨基酸序列同一性、至少约89％的氨基酸序列同一性、至少约90％的氨基酸序列同一性、至少约91％的氨基酸序列同一性、至少约92％的氨基酸序列同一性、至少约93％的氨基酸序列同一性、至少约94％的氨基酸序列同一性、至少约95％的氨基酸序列同一性、至少约96％的氨基酸序列同一性、至少约97％的氨基酸序列同一性、至少约98％的氨基酸序列同一性或至少约99％的氨基酸序列同一性。BR3变体多肽不包括天然BR3多肽序列。根据另一实施方案，BR3变体多肽至少长约10个氨基酸、至少长约20个氨基酸、至少长约30个氨基酸、至少长约40个氨基酸、至少长约50个氨基酸、至少长约60个氨基酸、或至少长约70个氨基酸。
在一个优选实施方案中，此处的BAFF拮抗剂是包含结合BAFF的BR3、TACl或BCMA的一部分，或其结合BAFF的变体的免疫粘附素。在其它实施方案中，BAFF拮抗剂是BAFF抗体。″BAFF抗体″是结合BAFF、优选在包含人BAFF序列的残基162-275的人BAFF区域内结合BAFF的抗体，其中所述人BAFF序列公开于此处的″BAFF″定义(SEQ ID NO：16)。在另一实施方案中，BAFF拮抗剂是BR3抗体。″BR3抗体″是结合BR3的抗体，优选是在包含人BR3序列的残基23-38的人BR3区域内结合BR3的抗体，其中所述人BR3序列公开于此处的″BR3″定义(SEQ ID NO：26)。通常，此处所提到的人BAFF和人BR3的氨基酸位置分别依照人BAFF和人BR3SEQ ID NOS：16和26的序列编号，其公开于此处的″BAFF″和“BR3”定义。
其它结合BAFF的多肽或BAFF抗体的例子可以在例如WO2002/092620、WO2003/014294、Gordon et al.，Biochemistry42(20)：5977-5983(2003)、Kelley et al.，J.Biol.Chem.，279(16)：16727-16735(2004)、WO 1998/18921、WO 2001/12812、WO2000/68378和WO 2000/40716中找到。
术语“包装插页”用于指习惯上包括在治疗产品商业包装中的说明书，其包含有关适应症、用法、剂量、服法、禁忌、与所包装的产品组合(联合)使用的其它治疗产品、和/或涉及此治疗产品使用的警告等。
″药剂″指治疗ANCA相关血管炎或其症状或副作用的活性药物。
II.治疗
一个方面，本发明提供治疗病人的ANCA相关血管炎的方法，包括以大约400mg至1.3克的剂量、以大约一个月时间内一至三剂的频率为病人施用结合B细胞表面标志的拮抗剂，优选抗体(更优选CD20抗体)。
因此，本发明涉及治疗病人的ANCA相关血管炎的方法，包括以大约400rmg至1.3克的剂量、以大约一个月时间内一至三剂(one to three doses)的频率为所述病人施用结合B细胞表面标志的抗体。
本发明还涉及治疗病人的ANCA相关血管炎的方法，包括以大约400mg至1.3克的剂量、以大约一个月时间内一至三剂的频率为所述病人施用结合B细胞表面标志的拮抗剂。
本发明还涉及治疗病人的ANCA相关血管炎的方法，包括以大约400mg至1.3克的剂量、以大约一个月时间内一至三剂的频率为所述病人施用CD20抗体。
在这些方面中每一个的优选实施方案中，所述剂量为大约500mg至1.2克，更优选大约750mg至1.1克。在另一优选实施方案中，所述抗体以二至三剂，更优选以两剂，但可选三剂施用。在更优选的实施方案中，所述抗体在大约2至3周，更优选约两周，但可选三周时间内施用。
在另一实施方案中，本发明提供在适于治疗的患者中治疗ANCA相关血管炎的方法，包括为所述患者施用有效量的结合B细胞表面标志的抗体(优选CD20抗体)，以提供初始抗体暴露(优选约0.5至4克，更优选约1.5至3.5克，更加优选约1.5至2.5克)，之后提供第二次抗体暴露(优选约0.5至4克，更优选约1.5至3.5克，更加优选约1.5至2.5克)，第二次暴露直到自初始暴露约16至54周(优选约20至30周，更优选约46至54周)时才提供。
对于本发明来说，第二次抗体暴露是在初始抗体暴露后，又一次用CD20抗体治疗所述患者，在初始和第二次暴露之间没有介入的CD20抗体治疗或暴露。这种再治疗可以是定期的或不定期的，但优选为定期的再次定量给药，尤其是为了保护器官如肾脏不受损伤。
所述方法优选包括为患者施用有效量的CD20抗体，以提供第三次抗体暴露(优选约0.5至4克，更优选约1.5至3.5，更加优选约1.5至2.5克)，所述第三次暴露直到自初始暴露约46至60周(优选约46至55，更优选约46到52周)时才提供。优选直到自初始暴露至少约70-75周才提供进一步的抗体暴露，更加优选直到自初始暴露约74至80周时才提供进一步的抗体暴露。
此处的任何一次或多次抗体暴露可以作为单剂(single dose)抗体或者作为分剂(separate dose)，例如约1-4个分剂的抗体(例如，由第一和第二剂构成，或由第一、第二、和第三剂构成，或者由第一、第二、第三、和第四剂构成等)提供给患者。每次抗体暴露所使用的特定剂数(一、两或三或更多)依赖于例如所治疗的ANCA相关血管炎的类型、所使用的抗体的类型、是否使用以下记录的第二药剂、使用什么类型的第二药剂和使用多少量多少种第二药剂、以及施用的方法和频率。分剂施用时，在后之剂(例如，第二或第三剂)优选自施用前剂起约1至20天，更优选约6至16天、最优选约14至16天时施用。分剂优选在约1天至4周、更优选约1至20天的总时间段内施用(例如，在6-18天时间段内)。在这样的一个方面，所述分剂约每周施用一次，自第一剂起约一周时施用第二剂，任何第三剂或后续剂自第二剂起约一周时施用。每次这样的分剂抗体优选约0.5至1.5克，更优选约0.75至1.3克。
在最优选的实施方案中，提供治疗患者ANCA相关血管炎的方法，包括为所述患者施用有效量的结合B细胞表面标志的抗体(例如，CD20抗体)，以提供初始抗体暴露，之后是第二次抗体暴露，其中第二次暴露直至自初始暴露起约16至54周时才提供，并且每次抗体暴露都以单剂或以二或三分剂抗体提供给患者。优选在这样的方法中，所述抗体暴露为每次抗体暴露约0.5至4克，最优选如上给予的量。
在一个实施方案中，为所述患者提供至少约三次抗体暴露，例如约3至60次暴露，更具体地约3至40次暴露，最具体地约3至20次暴露。优选这样的暴露每隔24周施用一次。在一个实施方案中，每次抗体暴露作为单剂抗体提供。在可选实施方案中，每次抗体暴露作为分剂抗体(separatedose of antibody)提供。然而，不是每次抗体暴露都需要作为单剂或作为分剂提供。
在一个优选实施方案中，施用约2-3克的CD20抗体作为初始暴露。如果施用约3克，那么每周施用约1克CD20抗体，施用约三周，作为初始暴露。如果施用约2克CD20抗体作为初始暴露，那么施用约1克CD20抗体，之后在约两周内再次施用约1克抗体，作为初始暴露。在优选方面，第二次暴露在自初始暴露起约六个月时提供，并以约2克的量施用。在另一优选方面，第二次暴露于自初始暴露起约六个月时提供，并施用约1克的抗体，之后在约两周内，再次提供约1克抗体。
在此处列出的所有的本发明的方法中，CD20或B细胞表面标志抗体可以是裸抗体，或者可以与另一种分子例如细胞毒剂如放射性化合物偶联。此处优选的CD20抗体是嵌合的、人源化的、或人CD20抗体，更优选美罗华、人源化2H7(例如包含SEQ ID Nos.2和8中的可变区序列，或者包含在SEQ ID NO：8中具有改变N100A或D56A和N100A的重链可变区和在SEQID NO：2中具有改变M32L、或S92A、或M32L和S92A的轻链可变区)、嵌合或人源化的A20抗体(Immunomedics)、以及HUMAX-CD20TM人CD20抗体(Genmab)。更优选为美罗华或人源化2H7。同时，尽管在本文的所有方法中ANCA相关血管炎可以是任何的这种疾病，但在一个优选实施方案中，它是韦格纳肉芽肿病或显微镜下多血管炎。
在本文所有方法的又一实施方案中，之前患者或病人从未用药物如免疫抑制剂治疗过以治疗ANCA相关血管炎，和/或之前从未用B细胞表面标志的拮抗剂(例如，抗体)治疗过(例如之前从未用CD20抗体治疗过)。又一方面，在上述任一方法治疗之前，包括初始或之后的抗体暴露后，所述患者或病人可能已经复发了ANCA相关血管炎或者经历了器官损伤如肾脏损伤。然而，优选所述病人或患者尚未复发所述血管炎，更优选至少在初始治疗之前尚未有这种复发。
在另一实施方案中，所述患者或病人之前已经用药物处理过，以治疗所述血管炎和/或之前已经用这种抗体或拮抗剂治疗过。在另一实施方案中，所述拮抗剂(例如，CD20抗体)是施用于所述患者或病人以治疗所述血管炎的唯一药剂。在另一实施方案中，所述拮抗剂(例如，CD20抗体)是用于治疗所述血管炎的药剂中的其中一种药剂。在又一实施方案中，所述患者或病人未患恶性疾病。在又一实施方案中，所述患者或病人未患风湿性关节炎。在又一实施方案中，所述患者或病人未患多发性硬化。在又一实施方案中，所述患者或病人未患狼疮或干燥综合征(sjgren’s syndrome)。在另一实施方案中，所述患者或病人未患除ANCA相关血管炎之外的自身免疫疾病。在本发明的另一个方面，ANCA相关血管炎不与另一自身免疫疾病相关或者不与发展为另一自身免疫疾病的风险相关。对于最后的表述，此处“自身免疫疾病”指起源于并且针对个体的自身组织或器官或共分离体(co-segregate)的疾病或紊乱，或其表现形式或由其产生的病症。不限于任何一种理论，B细胞通过许多机制(mechanistic)途径在人类自身免疫病中显示致病效应，包括自身抗体产生、免疫复合体形成、树突状细胞和T细胞活化、细胞因子合成、定向趋化因子释放、以及提供异位新淋巴生成(ectopicneo-lymphogenesis)的孵育所(nidus)。每种这些途径都不同程度地参与在自身免疫病的病理中。
在又一实施方案中，施用所述拮抗剂或抗体后，在大约三个月、优选大约六个月、最优选大约一年或更长时间时，所述患者或病人具有小于3、更优选小于大约2、再优选小于大约1、最优选为0(症状完全缓解)的BVAS/WG分数。此BVAS反应的特定实施方案是在施用后三个月时获得小于2的BVAS/WG分数，或者在施用后14周或三个月时获得小于1(例如，0.2或0.4)的BVAS/WG分数，或者在施用后6个月时获得小于1(例如，0.6)的BVAS/WG分数，或者最优选，在施用后三或六个月时获得BVAS/WG分数0。在另一实施方案中，与治疗起始时相比，减少类固醇如强的松的量，而实质上不影响降低的BVAS/WG分数。因此，例如，优选治疗后的指定时间间隔时(例如治疗后三个月或六个月)患者或病人具有自基线起降低的BVAS/WG分数，并且正接受自基线起(基线处于施药起始时)更少的类固醇剂量。在又一实施方案中，所述治疗方法包括检测患者或病人在施药步骤后对治疗的反应的步骤，以确定反应的水平对于治疗血管炎是有效的。例如，包括检测施药后的BVAS/WG分数并将其与施药前获得的基线BVAS/WG分数比较，以通过测量其是否降低以及降低了多少来测定治疗是否有效的步骤。可以在施药后不同的定期或不定期时间间隔重复该检测，以测定任何部分或完全症状缓解的保持。或者，本文所述方法包括在施药前检测病人或患者，看是否存在一种或多种ANCA相关血管炎生物标志的步骤，例如一种或多种自身抗体、BVAS/WG分数、或者ANCA相关血管炎特有的症状，如以上列出的。在另一方法中，可以包括在为患者或病人施用抗体或拮抗剂之前核查病人或患者的临床病史的步骤，如以上所详述的，例如以排除病人或患者病症的病因，例如原发性病因为感染或恶性疾病。优选ANCA相关血管炎是原发性的(即先导性(leading)疾病)，而不是继发性的，例如继发于感染或恶性疾病，例如实体或液态肿瘤。
在本文的多次暴露方法的优选实施方案中，所述患者处于初始或任何后续抗体暴露后的症状缓解中。更优选本文的多次暴露方法涉及定期的再次剂量给药(re-dosing)或再治疗(re-treating)，以便提供第二次(提供第二次暴露的情况下)，优选所有抗体暴露时，病人处于症状缓解中。安排这样的再次剂量给药是为了阻止任何的复发、反复、或器官损伤，而不是在治疗学上治疗它。最优选自用于所述再治疗方法的最后一次抗体暴露起，所述患者处于症状缓解中至少约六个月，更加优选至少约九个月，再优选至少约一年。
在另一实施方案中，对于至少两次抗体暴露，优选对于每次抗体暴露，都用相同的CD20抗体治疗所述患者。因此，优选初始和第二次抗体暴露用相同抗体，更优选所有抗体暴露都用相同抗体，即用于前两次暴露的治疗，优选所有暴露都用结合B细胞表面标志的一种类型的抗体，如CD20抗体，例如都用美罗华或都用相同的人源化2H7。
在本文的任一方法中，可以随同结合B细胞表面标志的拮抗剂或抗体一起为患者或病人施用有效量的第二药剂(其中所述结合B细胞表面标志的拮抗剂或抗体(例如，CD20抗体)是第一药剂)。所述第二药剂可以是一种或多种药剂，包括例如细胞毒剂、化疗剂、免疫抑制剂、细胞因子、细胞因子拮抗剂或抗体、生长因子、激素、整联蛋白、整联蛋白拮抗剂或抗体、或其任意组合。此第二药剂的类型取决于多种因素，包括血管炎的类型、血管炎的严重性、病人的症状和年龄、所用的第一药剂的类型和剂量等等。
这种附加药剂的例子包括化疗剂、干扰素类药物如干扰素-α(例如，来自Amarillo Biosciences，Inc.的)、IFN-β-1a(REBIF和AVONEX)或IFN-β-1b(BETASERON)、寡肽如glatiramer acetate(COPAXONE)、阻断CD40-CD40配体的药剂、细胞毒剂或免疫抑制剂(如米托蒽醌(mitoxantrone)(NOVANTRONE)、氨甲蝶呤、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、来氟米特、和硫唑嘌呤)、静脉内免疫球蛋白(丙种球蛋白)、淋巴细胞-损耗治疗剂(例如，米托蒽醌、环磷酰胺、CAMPATHTM抗体、抗CD4、克拉屈滨(cladribine)、具有至少两个结构域的多肽构建体，所述结构域包含脱免疫(de-imunized)、自身反应性抗原或其由自身反应性B细胞的Ig受体特异性地识别的片段(WO2003/68822)、全身照射、骨髓移植)、整联蛋白拮抗剂或抗体(例如，LFA-1抗体如efalizumab/RAPTIVA，商业上可由Genentech获得，或者α4整联蛋白抗体如natalizumab/ANTEGREN，可由Biogen获得，或如上所述的其它试剂)、治疗继发于或与ANCA相关血管炎相关的症状(例如，真菌或其它感染)的药物，如此处记录的那些、类固醇如皮质类固醇(例如，泼尼松龙、甲基强的松龙如用于注射的SOLU-MEDROLTM甲基泼尼松龙琥珀酸酯钠(methylprednisolone sodium succinate)、强的松如低剂量强的松、地塞米松、或糖皮质激素，例如借助于关节注射的，包括全身性皮质类固醇治疗剂)、不损耗淋巴细胞的免疫抑制治疗剂(例如，MMF或环孢霉素(cyclosporine))、“ 他汀(statin)”类降胆固醇药物(其包括西立伐他汀(cerivastatin)(BAYCOLTM)、氟伐他汀(Fluvastatin)(LESCOLTM)、阿托伐他汀(atorvastatin)(LIPITORTM)、洛弗斯特丁(lovastatin)(MEVACORTM)、普伐他汀(Pravastatin)(PRAVACHOLTM)、和辛伐他汀(simvastatin)(ZOCORTM))、雌二醇(estradiol)、睾丸激素(任选以提高的剂量；Stuve et al.Neurology8：290-301(2002))、雄激素、激素替代治疗剂、TNF抑制剂如TNF-α的抗体、DMARD、NSAID、血浆去除剂(plasmapheresis)或血浆交换剂(plasmaexchange)、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(trimethoprim-sulfamethoxazole)(BACTRIMTM，SEPTRATM)、霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)、H2-阻断剂或质子-泵抑制剂(使用可能产生溃疡的免疫抑制治疗剂期间)、左旋甲状腺素(levothyroxine)、环孢菌素A(例如SANDIMMUNE)、somatastatin类似物、细胞因子、抗细胞因子拮抗剂或抗体、抗代谢物、免疫抑制剂、复原性外科手术(rehabilitative surgery)、放射性碘、甲状腺切除术、BAFF拮抗剂如BAFF或BR3抗体或免疫粘附素、抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)、抗IL-6受体拮抗剂/抗体、另一种B细胞表面拮抗剂或抗体如人源化2H7或其它人源化或人CD20抗体连同美罗华等。
优选的这种药剂为化疗剂、细胞毒剂、抗整联蛋白、γ球蛋白、抗CD4、克拉屈滨、三甲基苯嘧啶-磺胺甲氧唑(trimethoprimsulfamethoxazole)、H2-阻断剂、质子-泵抑制剂、皮质类固醇、环孢霉素(cyclosporine)、他汀类降胆固醇药物、雌二醇、睾丸激素、雄激素、激素替代药物、TNF抑制剂、DMARD、NSAID(用于治疗例如肌骨胳症状)、左旋甲状腺素、环孢菌素A、somatastatin类似物、细胞因子拮抗剂或细胞因子受体拮抗体、抗代谢物、BAFF拮抗剂如BAFF抗体或BR3抗体，尤其是BAFF抗体、免疫抑制剂、和另外的B细胞表面标志抗体如美罗华与人源化2H7或其它人源化CD20抗体的组合。
更优选这种药剂是化疗剂、免疫抑制剂，包括抗TNF-α抗体、抗CD40-CD40配体抗体、和BAFF拮抗剂如BAFF或BR3抗体、DMARD、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、NSAID、细胞因子拮抗剂、或激素、或它们的组合。例如涉及主要器官的非常活跃的疾病可能需要免疫抑制剂，包括如环磷酰胺(CYTOXAN)、苯丁酸氮芥、来氟米特(leflunomide)、MMF、硫唑嘌呤(azathioprine)(IMURAN)、和氨甲蝶呤这些药剂。为了发挥功效，BAFF拮抗剂可以与第一药剂组合使用。
更优选为类固醇、化疗剂、免疫抑制剂、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、细胞因子拮抗剂或激素、或它们的组合，最优选类固醇和/或免疫抑制剂、再优选皮质类固醇和/或免疫抑制剂。
在一个特别优选的实施方案中，第二药剂是一种或多种类固醇的药剂或包含一种或多种类固醇的药剂，例如，皮质类固醇，其优选为强的松、泼尼松龙(prednisolone)、甲基强的松龙、氢化可的松、或地塞米松。如果不将第一药剂例如CD20抗体施用于用类固醇治疗的病人，则这种类固醇优选以低于前者所用类固醇的量施用。在优选方面，类固醇不与任何第二次抗体暴露一起施用，或者与第二次暴露一起施用，但以低于初始抗体暴露所使用的量施用。还优选类固醇不与第三次或随后的抗体暴露一起施用。
在又一特别优选的方面，第二药剂为免疫抑制剂，更优选环磷酰胺、MMF、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、或氨甲蝶呤，并且优选至少与初始抗体暴露一起施用。在一个实施方案中，为了维持症状缓解，优选用硫唑嘌呤、氨甲蝶呤或MMF代替环磷酰胺。
在又一优选的方面，第二药剂是一种或多种类固醇与免疫抑制剂的组合。
也可以利用用于真菌感染的口服fluconazole(DIFLUCANTM)预防性治疗ANCA相关血管炎，也可以每周三次用甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(480mg)预防性治疗卡氏肺孢子虫(pneumocystis carinii)病人。Jayne and Rasmussen，同上。
所有这些第二药剂可以互相组合使用或者单独与第一药剂一起使用，这样此处所用措辞″第二药剂″不意味着它分别是除了第一药剂之外的唯一药剂。因此，第二药剂不必是一种药剂，而可以由一种以上的这种药物构成或者包含一种以上的这种药物。
此处列出的这些第二药剂通常以与本文之前所用相同的剂量和施药途径使用，或者以迄今所用剂量的约1至99％使用。如果使用这些第二药剂，优选以低于第一药剂不存在时的量使用，尤其是在与第一药剂一起进行初始给药之外的后续给药中以消除或减小由此引发的副作用。
对于本文的再治疗方法，其中第二药剂以有效量与抗体暴露一起施用时，它可以与任何次暴露一起施用，例如只与一次暴露(one exposure)一起，或者与一次以上的暴露一起。在一个实施方案中，第二药剂与初始暴露一起施用。在另一实施方案中，第二药剂与初始暴露和第二次暴露一起施用。在其它实施方案中，第二药剂与所有暴露一起施用。优选在初始暴露后，例如类固醇这第二药剂的量减小或消除，以减少患者暴露于具有副作用的试剂如强的松、泼尼松龙、甲基强的松龙、和环磷酰胺。
作为特定的例子，患显微镜下多血管炎和韦格纳肉芽肿病的病人的治疗有三个阶段：(1)症状缓解的诱导，(2)症状缓解的维持，和(3)复发的治疗。目前的诱导疗法通常由环磷酰胺(CYTOXAN)和皮质类固醇构成。这包括几天(例如，一到五天)的高剂量静脉内甲基强的松龙，加上一定时间内，如3-5月，逐渐减少的口服强的松。对于侵袭性疾病(aggressive disease)，推荐使用三天的高剂量静脉内甲基强的松龙，其与静脉内或口服环磷酰胺联合。优选之后是递减剂量的强的松与环磷酰胺一起维持12到18个月。当使用第一药剂时，优选进一步减小这样的给药量和频率，因为应当使用最低剂量的控制疾病的类固醇。如果症状看起来加剧了则应当考虑感染。对于12个月时处于持续症状缓解中的病人，与不同时使用第一药剂相比，优选同时使用第一药剂时以更快的速率中止使用所有这些第二药剂。然而，必须以六个月的时间间隔密切跟踪病人复发的症状和体征，所述病人的症状处于良好的控制之下。用这些药剂治疗期间，应当定期进行全血细胞计数和肝功能测试。
第二药剂的组合(联合)施用包括使用分开的制剂(separate formulation)或单个药物制剂的共同施用(co-administration)(同时施用(concurrentadministration))，和任何顺序的连续施用(consecutive administration)，其中优选有两种(或所有)活性试剂(药剂)同时发挥其生物学活性的时间段。
此处抗体或拮抗剂以任何合适的方式施用，包括肠胃外、局部、皮下、腹膜内、肺内、鼻内、和/或损伤部位内施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内(i.v.)、动脉内、腹膜内、或皮下施用。还预期鞘内施用(参见，例如，US 2002/0009444，Grillo-Lopez，A concerning intrathecal delivery of a CD20antibody)。另外，所述抗体或拮抗剂可以适当地以递减剂量的抗体或拮抗剂通过脉冲输注施用。优选静脉内或皮下给药，更优选通过静脉内输注给药。
如果提供多次抗体暴露，那么可以用相同或不同的施用方式提供每次暴露。在一个实施方案中，每次暴露都静脉内施用。在另一实施方案中每次暴露都通过皮下施用给予。在又一实施方案中，所述暴露既通过静脉内也通过皮下施用给予。
在一个实施方案中，CD20抗体作为缓慢的静脉内输注(infusion)而非静脉内推注(intravenous push)或静脉快速推注(bolus)施用。例如，类固醇如泼尼松龙(prednisolone)或甲基强的松龙(例如，约80-120 mg i.v.，具体地约100mg i.v.)在任何CD20抗体输注约30分钟前施用。例如CD20抗体通过专用线(dedicated line)灌注。
对于与CD20抗体的多剂暴露(multi-dose exposure)的初始剂量来说，或者对于只涉及一剂的单剂量来说，此输注优选以约50mg/小时的速率开始。这可以例如以约每30分钟约50mg/小时的增量的速率逐步升高到约400mg/小时的最大值。然而，如果患者正在发生输注相关反应，则输注速率优选减少到例如当前速率的一半，例如从100mg/小时到50mg/小时。优选这种剂量的CD20抗体的输注(例如，约1000-mg总剂量)在大约255分钟(4小时15分钟)时完成。任选所述患者在输注开始前约30到60分钟，经口腔服用醋氨酚/对乙酰氨基酚(acetaminophen/paracetamol)(例如，约1g)和盐酸苯海拉明(diphenhydramine)(例如，约50mg或等剂量的类似药剂)，接受预防性治疗。
如果给予一次以上的CD20抗体输注(剂量)以完成总暴露，那么在该输注实施方案中，优选以高于初始输注的速率例如以约100mg/小时的速率开始第二次或随后的CD20抗体输注。该速率可以例如以约每30分钟约100mg/小时的增量的速率逐步升高到约400mg/小时的最大值。发生输注相关反应的患者优选具有减少到该速率一半的输注速率，例如从100mg/小时到50mg/小时。优选CD20抗体的这种第二个或后续的输注(例如，约1000-mg总剂量)在大约195分钟(3小时15分钟)时完成。
以下讨论生产、改造、和配制这种抗体的方法。
III.抗体的生产
本发明的方法和制品使用、或加入结合B细胞表面标志的抗体，尤其是结合CD20的抗体。因此，这里将描述生产此抗体的方法。
用于生产或筛选抗体的CD20抗原可以是例如包含所需表位的可溶性形式的CD20或其一部分。或者，或除此之外，在其细胞表面表达CD20的细胞可用于制备、或筛选抗体。用于生产抗体的其它形式的CD20对本领域技术人员来说是显而易见的。
以下涉及生产根据本发明使用的抗体的示例性技术。
(i)多克隆抗体
多克隆抗体优选在动物中通过多次皮下(s.c.)或腹膜内(i.p.)注射相关抗原和佐剂制备。将有关抗原偶联于在所要免疫的物种中为免疫原性的蛋白质，例如匙孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制剂可能是有用的，所述偶联使用双功能或衍生试剂进行，例如，马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基偶联)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2、或R1N＝C＝NR，其中R和R1是不同的烷基。
通过将例如100μg或5μg的蛋白质或偶联物(分别用于兔子或小鼠)与3个体积的弗氏完全佐剂组合并将所述溶液皮肤内注射于多个部位而用所述抗原、免疫原性偶联物、或衍生物免疫动物。一个月后以弗氏完全佐剂中原始量1/5至1/10的肽或偶联物在多个部位为所述动物皮下注射以加强免疫。7至14天后对动物放血，测定血清的抗体滴度。对动物加强免疫直至滴度稳定在高水平。优选用相同抗原的偶联物为动物加强免疫，但所述抗原偶联于不同的蛋白质和/或通过不同的交联剂偶联。偶联物也可以在重组细胞培养物中作为蛋白质融合物制备。同样，聚集试剂如明矾适合用于增强免疫应答。
(ii)单克隆抗体
单克隆抗体从基本上同质的抗体群体获得，即除了生产单克隆抗体期间可能发生的变体外(该变体通常少量存在)，组成所述群体的单个抗体是相同的和/或结合相同的表位。因此，修饰语″单克隆″表明所述抗体的特征，其不是无关的或多克隆抗体的混合物。
例如，单克隆抗体可以用杂交瘤方法制备，杂交瘤方法由Kohler etal.，Nature 256：495(1975)首次描述，或者可以通过重组DNA方法(美国专利4,816,567)制备。
在杂交瘤方法中，如本文以上所述免疫小鼠或其它适当的宿主动物如仓鼠，以激发产生或能够产生抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异地结合用于免疫的蛋白质。或者，可以体外免疫淋巴细胞。然后用适当的融合剂如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，pp.59-103(Academic Press，1986))。
接种如此制备的杂交瘤细胞并将其培养于适当的培养基中，所述培养基优选包含一种或多种抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，用于所述杂交瘤的培养基典型地将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤、和胸苷(HAT培养基)，这些物质防止HGPRT-缺陷细胞的生长。
优选的骨髓瘤细胞是那些有效融合、支持所选择的抗体生产细胞稳定高水平地生产抗体、并对培养基如HAT培养基敏感的骨髓瘤细胞。其中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，如源于MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤的鼠骨髓瘤细胞系，其可由Salk Institute Cell Distribution Center，SanDiego，California USA获得，以及SP-2或X63-Ag8-653细胞，其可由美国典型培养物保藏中心，Rockville，Maryland USA获得。也已描述了人骨髓瘤和小鼠-人杂交瘤细胞系用于人单克隆抗体的生产(Kozbor，J.Immunol.，133：3001(1984)；Brodeur et al.，Monoclonal Antibody Production TechniquesandApplications，pp.51-63(Marcel Dekker，Inc.，New York，1987))。
测试了其中培养有杂交瘤细胞的培养基，用于针对所述抗原的单克隆抗体的生产。优选通过免疫沉淀法或者通过体外结合测试如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测试(ELISA)测定由杂交瘤细胞生产的单克隆抗体的结合特异性。
例如可以通过Munson et al.，Anal.Biochem.，107：220(1980)的Scatchard分析测定单克隆抗体的结合亲合力。
鉴定了生产具有所需特异性、亲合力、和/或活性的抗体的杂交瘤细胞之后，可以通过有限稀释法亚克隆所述克隆，并以标准方法培养(Goding，Monoclonal Antibodies.：Principles and Practice，pp.59-103(Aeademic Press，1986))。用于该目的的合适的培养基包括例如D-MEM或者RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可以作为动物中的腹水肿瘤体内培养。
由所述亚克隆分泌的单克隆抗体适于以传统免疫球蛋白纯化程序，例如蛋白质A-SEPHAROSETM、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲合层析从培养基、腹水流体、或血清分离。
利用常规程序(例如，通过使用能够特异地结合编码鼠抗体重链和轻链的寡核苷酸探针)可以很容易地分离编码单克隆抗体的DNA并测序。杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离了DNA，可以将其置于表达载体中，然后将其转染到原本不生产免疫球蛋白的宿主细胞如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中华仓鼠卵巢(CHO)细胞、或骨髓瘤细胞中，以获得单克隆抗体在重组宿主细胞中的合成。有关编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述包括Skerra et al.Curr.Opinion in Immunol.，5：256-262(1993)和Plickthun，Immunol.Revs.，130：151-188(1992)。
在另一实施方案中，可以使用McCafferty et al.，Nature，348：552-554(1990)描述的技术从抗体噬菌体文库中分离抗体或抗体片段。Clackson et al.，Nature，352：624-628(1991)和Marks et al.，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)分别描述了用噬菌体文库分离鼠和人抗体。后来的出版物描述了高亲合力(nM范围)人抗体的生产，其通过链改组(chainshuffling)(Marks et al.，Bio/Technology，10：779-783(1992))、以及作为构建极大噬菌体文库策略的组合感染和体内重组(Waterhouse et al.，Nuc.Acids.Res.，21：2265-2266(1993))进行。因此，这些技术是分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行性替代技术。
也可以修饰DNA，例如通过用人重链和轻链恒定区取代同源鼠序列(美国专利4,816,567；Morrison，et al.，Proc.Natl Acad.Sci.USA，81：6851(1984))，或者通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列全部或部分共价连接到免疫球蛋白编码序列来修饰。
典型地，这样的非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域，或者取代抗体的一个抗原结合部位的可变结构域，形成嵌合二价抗体，其包括具有抗原特异性的一个抗原结合部位和具有不同抗原特异性的另一个抗原结合部位。
此外，包含对FcγR具有高度亲合力的变异Fc区的抗体可用于治疗效应细胞功能的功效需要增强的疾病，如自身免疫病，例如US 2005/0037000和WO 2004/63351(Macrogenics，Inc.STAVENHAGEN et al.)中列出的。
(iii)人源化抗体
本领域已经描述了人源化非人抗体的方法。优选人源化抗体具有从非人来源导入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为″引入的″残基，其典型地从″引入的″可变区获取。人源化基本上可以按照Winter及其同事(Jones et al.，Nature，321：522-525(1986)；Riechmann et al.，Nature，332：323-327(1988)；Verhoeyen et al.，Science，239：1534-1536(1988))的方法实施，通过用高变区序列取代人抗体的相应序列而完成。因此，这样的″人源化″抗体是嵌合抗体(美国专利4,816,567)，其中基本上小于完整的人可变区已经被来自非人物种的相应序列所取代。在实践中，人源化抗体典型地为人抗体，在该人抗体中，一些高变区残基可能还有一些FR残基被来自啮齿类动物抗体的类似位点所取代。
选择用于制备人源化抗体的人轻链和重链可变区对于减少抗原性是非常重要的。按照所谓的″最佳适应(best-fit)″方法，针对已知的人可变区序列完全文库筛选啮齿类动物抗体的可变区序列。然后接受与啮齿类动物的序列最接近的人序列作为人源化抗体的人框架区(FR)(Sims et al.，J.Immunol.，151：2296(1993)；Chothia et al，J.Mol.Biol.，196：901(1987))。另一种方法使用特定的框架区，所述框架区来源于特定轻链或重链可变区亚组的所有人抗体的共有序列。相同框架可用于几种不同的人源化抗体(Carteret al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；Presta et al.，J.Immunol.，151：2623(1993))。
人源化的抗体保持对抗原的高度亲合力以及其它的有利生物学特性是更为重要的。为了实现此目标，按照优选的方法，用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和多种概念性人源化产物，通过该分析方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型一般是有用的，并为本领域技术人员所熟知。说明并展示所选择的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序是可以获得的。对此展示的观察允许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能运行中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方法，可以从受者和引入的序列选择并组合FR残基以便获得所需的抗体特性，如增加对目标抗原的亲合力。通常，高变区残基直接地、最本质地涉及了影响抗原结合。
(iv)人抗体
作为人源化的替代方案，可以生产人抗体。例如，现在生产转基因动物(例如，小鼠)是可能的，在没有内源免疫球蛋白生产的情况下，所述转基因动物在免疫时能够生产全套人抗体。例如，已经描述了嵌合的生殖细胞系突变小鼠中同型删除抗体重链偶联区(JH)基因导致内源抗体生产的完全抑制。在这种生殖细胞系突变小鼠中，一旦抗原攻击，人生殖细胞系免疫球蛋白基因阵列的转移将导致人抗体的生产。参见，例如，Jakobovits et al.，Proc.Natl.Acad. Sci.USA，90：2551(1993)；Jakobovits et al.，Nature，362：255-258(1993)；Bruggermann et al.，Year in Immuno.，7：33(1993)；和美国专利5,591,669、5,589,369和5,545,807。
或者，噬菌体展示技术(McCafferty et al， Nature 348：552-553(1990))可用于从来自非免疫化供体的免疫球蛋白可变(V)区全套基因体外生产人抗体和抗体片段。依照该技术，将抗体V区基因框架内克隆到丝状噬菌体如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，在该噬菌体颗粒表面上将其作为功能性抗体片段展示。因为丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，所以基于抗体功能特性的选择也导致编码显示那些特性抗体的基因的选择。因此，噬菌体模拟B细胞的一些特性。可以以多种方式完成噬菌体展示；其综述参见，例如，Johnson et al.，Current Opinion in Structural Biology3：564-571(1993)。V基因片段的几种来源可用于噬菌体展示。Clackson et al.，Nature，352：624-628(1991)从源于免疫小鼠脾的小型随机组合文库中分离了多个批次的抗恶唑酮抗体。可以从未被免疫的人供体构建全套V基因，可以基本上按照Marks et al.，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)，或Griffith et al.，EMBO J.12：725-734(1993)所述技术分离针对多个抗原(包括自身抗原)批次的抗体。也可参见美国专利5,565,332和5,573,905。
也可以通过体外活化的B细胞生产人抗体(参见美国专利5,567,610和5,229,275)。
(v)抗体片段
已经开发了多种生产抗体片段的技术。传统上，这些片段通过完整抗体的蛋白水解消化而衍生(参见，例如，Morimoto et al.，Journal ofBiochemical and Biophysical Methods24：107-117(1992)；和Brennan et al.，Science，229：81(1985))。然而，现在可以直接通过重组宿主细胞生产这些片段。例如，可以从以上讨论的抗体噬菌体文库中分离抗体片段。或者，可以直接从大肠杆菌回收Fab′-SH片段并进行化学偶联以形成F(ab′)2片段(Carter et al.Bio/Technology 10：163-167(1992))。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab′)2片段。其它生产抗体片段的技术对于熟练技术人员来说将是显而易见的。在其它实施方案中，所选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利5,571,894；以及美国专利5,587,458。例如，抗体片段也可以是“线性抗体”，例如美国专利5,641,870中所述。这种线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
(vi)双特异性抗体
双特异性抗体是具有针对至少两个不同表位的结合特异性的抗体。示例性双特异性抗体可以结合CD20抗原的两个不同表位。其它的这种抗体可以结合CD20并进一步结合第二种B细胞表面标志。或者，抗CD20的结合臂可以与结合白细胞上的激发分子如T细胞受体分子(例如CD2或CD3)、或IgG的Fc受体(FcγR)如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、和FcγRIII(CD16)的臂结合，以使细胞的防御机制集中于所述B细胞。双特异性抗体也可用于将细胞毒性试剂定位于B细胞。这些抗体拥有CD20结合臂和结合细胞毒性试剂(例如肥皂草素(saporin)、抗干扰素-α、长春碱(vinca alkaloid)、蓖麻毒素A链、氨甲蝶呤、或放射性同位素半抗原)的臂。可以将双特异性抗体制备为全长抗体或抗体片段(例如F(ab′)2双特异性抗体)。
制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生产基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中所述两条链具有不同的特异性(Millstein et al.，Nature，305：537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四重杂交瘤(quadromas))生产10种可能的不同抗体分子混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化通常通过亲合层析步骤进行，相当繁琐且产物产率低。WO 93/08829、和Traunecker et al.，EMBO J.，10：3655-3659(1991)中公开了类似的方法。
依据不同方法将具有所需结合特异性的抗体可变区(抗体-抗原结合部位)融合于免疫球蛋白恒定区序列。所述融合优选与免疫球蛋白重链恒定区融合，所述免疫球蛋白重链恒定区至少包含铰链区、CH2区和CH3区部分。优选在至少一种融合物中具有第一个重链恒定区(CH1)，其包含轻链结合必需的位点。将编码免疫球蛋白重链融合物和，如果需要的话，免疫球蛋白轻链的DNAs插入到单独的表达载体中，共转染到合适的宿主生物中。这在实施方案中为调整三种多肽片段的相互比例提供了很大的弹性，此时构建体中使用的三种多肽链的不同比率提供了最佳产率。然而，将两种或所有三种多肽链的编码序列插入到一个表达载体中也是可能的，此时至少两种多肽链以相同比率表达导致高的产率，或者此时所述比率没有特定意义。
在此方法的优选实施方案中，所述双特异性抗体由具有一个臂中的第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)组成。发现该不对称结构促进所需双特异性化合物从不需要的免疫球蛋白链组合中分离，因为只以双特异性分子的一半中存在的免疫球蛋白轻链提供了很便利的分离路线。此方法公开于WO94/04690。生产双特异性抗体的更多详情参见例如，Suresh et al.，Methods inEnzymology，121：210(1986)。
依据美国专利5,731,168中描述的另一种方法，工程化一对抗体分子之间的接触面，以最大化从重组细胞培养物中回收的异源二聚体的百分比。优选的接触面至少包括抗体恒定区的一部分CH3区。在该方法中，来自第一抗体分子接触面的一个或多个小型氨基酸侧链被更大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)所替换。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二抗体分子的接触面上形成了与大型侧链大小相同或相似的补偿″腔″。这提供了增加异二聚体产率的机制，所述产率超过其它不需要的终产物如同二聚体的产率。
双特异性抗体包括交联的或″异源偶联的″抗体。例如，可以将异源偶联物中的抗体之一偶联于抗生物素蛋白，另一个偶联于生物素。已建议用这些抗体将免疫系统细胞引导到不需要的细胞(美国专利4,676,980)，用于HIV感染的治疗(WO 91/00360、WO 92/200373、和EP 03089)。可以用任何适当的交联方法制备异源偶联抗体。合适的交联剂是本领域所熟知的，其公开于美国专利4,676,980，其中也公开了许多交联技术。
文献中也已描述了从抗体片段生产双特异性抗体的技术。例如，可以用化学键制备双特异性抗体。Brennan et al.，Science，229：81(1985)描述了一种方法，在该方法中通过完整抗体的蛋白水解生产F(ab′)2片段。在二巯基配位剂亚砷酸钠的存在下还原这些片段，以稳定附近的二巯基并防止分子间二硫化物的形成。然后将所得到的Fab′片段转变为硫代硝基苯甲酸盐(TNB)衍生物。然后通过巯基乙胺还原，将其中一种Fab′-TNB衍生物再转变为Fab′-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab′-TNB衍生物混合，形成双特异性抗体。所生产的双特异性抗体可用作酶选择性固定的试剂。
已经描述了多种直接从重组细胞培养物中制备分离双特异性抗体片段的技术。例如，已用亮氨酸拉链生产了双特异性抗体。Kostelny et al.，J.Immunol.，148(5)：1547-1553(1992)。通过基因融合将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽连接于两种不同抗体的Fab′部分。在绞链区还原抗体同二聚体以形成单体，然后再将其氧化，形成抗体异二聚体。该方法还可用于抗体同二聚体的生产。Hollinger et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993)描述的″双抗体(diabody)″技术提供了制备双特异性抗体片段的替代机制。所述片段包含通过连接序列连接到轻链可变区(VL)的重链可变区(VH)，连接序列非常短，不允许在同一条链上的两个结构域配对。因此，迫使一个片段的VH和VL结构域与另一片段的互补VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合部位。还报导了利用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gruber et al.，J.Immunol.，152：5368(1994)。
可以预期超过二价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tutt et al.，J.Immunol.147：60(1991)。
IV.抗体的偶联和其它修饰
用于所述方法或包括于此处所述制品的抗体任选偶联于细胞毒性试剂。例如，(CD20)抗体可以偶联于药物，如WO2004/032828所述。
上面已经描述了可用于这些抗体-细胞毒性试剂偶联物生产的化疗剂。
此处还可以预期抗体与一种或多种小分子毒素，如加利车霉素(calicheamicin)、美登素(美国专利5,208,020)、单端孢霉烯(trichothene)、和CC1065的偶联物。在本发明的一个实施方案中，抗体偶联于一个或多个美登素分子(例如每个抗体分子偶联约1至约10个美登素分子)。例如可以将美登素转变为May-SS-Me，其可以还原为May-SH3并与修饰的抗体反应(Chari et al.，Cancer Research 52：127-131(1992))产生美登木素生物碱-抗体偶联物。
或者将抗体偶联于一个或多个加利车霉素分子。抗生素的加利车霉素家族能够在亚皮摩尔浓度产生双链DNA断裂物。可以使用的加利车霉素结构类似物包括但不限于γ1 I、α2 I、α3 I、N-乙酰-γ1 I、PSAG和θI 1(Hinman et al.，Cancer Research 53：3336-3342(1993)和Lode et al.，Cancer Research 58：2925-2928(1998))。
可以使用的酶学活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲素(Modeccin)A链、α-sarcin、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、康乃馨蛋白(dianthin)、美国商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII、和PAP-S)、苦瓜抑制剂(momordica charantia inhibitor)、麻疯树毒素(curcin)、巴豆毒素(crotin)、sapaonaria officinalis抑制剂、凝胶素(gelonin)、mitogellin、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)和镰刀菌毒素(tricothecenes)。参见，例如，出版于1993年10月28日的WO 93/21232。
本发明还预期与具有核酸酶活性的化合物(例如核糖核酸酶或DNA核酸内切酶如脱氧核糖核酸酶；DNase)偶联的抗体。
可获得多种放射性同位素用于放射性偶联抗体的生产。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素。
可以用多种双功能蛋白偶联剂制备抗体和细胞毒性试剂的偶联物，所述偶联剂为例如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二巯基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯、亚氨基噻吩(IT)、酰亚胺酯(imidoester)的双功能衍生物(如盐酸二甲氧苯丙胺(dimethyl adipimidate))、活性酯(如二琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛(glutaraldehyde))、二叠氮基化合物(如二(对叠氮苯甲酰)己二胺)、二重氮衍生物(如二-(对-重氮苯甲酰)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2，6-二异氰酸酯)、和双活性氟化合物(如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，可以如Vitetta et al.，Science 238：1098(1987)所述制备蓖麻毒素免疫毒素。碳14标记的1-异氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸偶联到抗体的示例性螯合剂。参见WO94/11026。连接子可以是促进细胞中细胞毒性药物释放的“可裂解连接序列“。例如，可以使用酸不稳定性连接子、肽酶敏感的连接子、二甲基连接子或含二硫化物的连接子(Chari et al.，Cancer Research52：127-131(1992))。
或者，可以通过重组技术或肽合成制备包含抗体和细胞毒性试剂的融合蛋白。
在又一实施方案中，所述抗体可以偶联于″受体″(如链霉亲和素)以用于肿瘤预靶向，其中将抗体-受体偶联物施用于患者，然后用清除剂(clearingagent)从循环中去除未结合的偶联物，接下来施用偶联于细胞毒性试剂(例如放射性核苷酸)的″配体″(例如抗生物素蛋白)。
还可以将本发明的抗体与前药-活化酶偶联，所述前药-活化酶将前药(例如，肽基化疗剂，参见WO81/01145)转变为活性抗癌药。参见，例如，WO 88/07378和美国专利4,975,278。
这些偶联物的酶成分包括任何能够以这种方式作用于前药以将其转变为其更有活性的细胞毒性形式的酶。
用于本发明的方法的酶包括但不限于用于将含磷酸酯的前药转变为游离药的碱性磷酸酶；用于将含硫酸酯的前药转变为游离药的芳基硫酸酯酶；用于将非毒性5-氟胞嘧啶转变为抗癌药5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；蛋白酶，如沙雷氏菌蛋白酶(serratia protease)、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、羧肽酶和组织蛋白酶(如组织蛋白酶B和L)，其用于将含肽的前药转变为游离药；D-丙氨酰羧肽酶，用于转变含D-氨基酸取代基的前药；碳水化合物裂解酶如β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶，其用于将糖基化前药转变为游离药；β-内酰胺酶，其用于将由β-内酰胺衍生的药物转变为游离药；和青霉素酰胺酶，如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶，其用于将分别由苯氧乙酰或苯乙酰基于其胺氮处衍生的药物转变为游离药。或者，具有酶活性的抗体，本领域也称为″抗体酶(abzymes)″，可用于将本发明的前药转变为游离的活性药(参见，例如，Massey，Nature 328：457-458(1987))。可以如本文所述制备抗体-抗体酶偶联物，用于将抗体酶递送到肿瘤细胞群。
可以通过本领域熟知的技术将本发明的酶共价结合于抗体，例如使用以上讨论的杂合双功能交联剂。或者，可以用本领域熟知的重组DNA技术(参见，例如，Neuberger et al.，Nature，312：604-608(1984))构建融合蛋白，所述融合蛋白至少包含本发明抗体的抗原结合区，该抗原结合区至少连接到本发明酶的功能活性部分。
此处也可以预期抗体的其它修饰。例如，抗体可以连接到多种非蛋白质类聚合物的其中一种，例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。连接到一个或多个PEG分子的抗体片段如Fab′是本发明特别优选的实施方案。
本文公开的抗体也可制备成脂质体。通过本领域已知的方法制备含抗体的脂质体，例如Epstein et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688(1985)；Hwang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：4030(1980)；美国专利4,485,045和4,544,545；以及公开于1997年10月23日的WO 97/38731中所述。美国专利5,013,556公开了循环时间增加的脂质体。
特别有用的脂质体可以用脂质组合物通过反相蒸发法生产，所述脂质组合物包含磷脂酰胆碱、胆固醇、和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。通过孔径确定的滤器挤出脂质体，以产生具有所需直径的脂质体。可以通过二硫化物交换反应如Martin et al.J.Biol.Chem.257：286-288(1982)所述将本发明抗体的Fab′片段偶联于脂质体。任选脂质体内包含化疗剂。参见Gabizon et al.，J.National Cancer Inst.81(19)：1484(1989)。
可以预期对本文所述的蛋白质或肽抗体进行氨基酸序列修饰。例如，可能希望改善抗体的结合亲合力和/或其它生物学特性。通过向抗体核酸引入适当的核苷酸变化或通过肽合成制备抗体的氨基酸序列变体。这种修饰包括，例如，从抗体的氨基酸序列内删除残基、和/或往抗体的氨基酸序列内插入残基和/或取代抗体氨基酸序列内的残基。实施删除、插入、和取代的任意组合以得到最终的构建体，以使所述最终构建体拥有所需的特征。氨基酸变化也可能改变抗体的翻译后加工，例如改变糖基化位点的数目或位置。
用于鉴定抗体的特定残基或区域的方法称为″丙氨酸-扫描诱变″，如Cunningham and Wells，Science，244：1081-1085(1989)所述，其中所述的特定残基或区域为优选的诱变部位。此处，鉴定了残基或目标残基组(例如，带电荷的残基如arg、asp、his、lys、和glu)并用中性的或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)取代，以影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在所述取代位点或者为所述取代位点引入更多的或其它的变体，而改进那些对取代显示出功能敏感性的氨基酸位置。这样，当用于引入氨基酸序列变异的位点预先确定时，突变本身的性质不必预先确定。例如，为了分析给定位点突变的性能，在目标密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，根据所需活性筛选表达的抗体变体。
氨基酸序列插入包括从一个残基到包含一百个或更多残基的多肽氨基和/或羧基末端的融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端蛋氨酰残基的抗体或融合于细胞毒性多肽的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体N-或C-末端的融合物，与酶或增加抗体血清半衰期的多肽融合。
另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中至少有一个氨基酸残基被不同的残基所取代。最感兴趣的抗体的取代诱变位点包括高变区，但也可涉及FR改变。保守性取代如表3中标题为″优选的取代″所示。如果这些取代导致生物学活性的改变，那么可以引入表3中命名为″示例性取代″或依照下述的关于氨基酸类别的更多实质性改变，并筛选产物。
表3
  原始残基   示例性取代   优选的取代
  Ala(A)   Val；Leu；Ile   Val
  Arg(R)   Lys；Gln；Asn   Lys
  Asn(N)   Gln；His；Asp，Lys；Arg   Gln
  Asp(D)   Glu；Asn   Glu
  Cys(C)   Ser；Ala   Ser
  Gln(Q)   Asn；Glu   Asn
  Glu(E)   Asp；Gln   Asp
  Gly(G)   Ala   Ala
  His(H)   Asn；Gln；Lys；Arg   Arg
  Ile(I)   Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸   Leu
  Leu(L)   正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe   Ile
  Lys(K)   Arg；Gln；Asn   Arg
  Met(M)   Leu；Phe；Ile   Leu
  Phe(F)   Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr   Tyr
  Pro(P)   Ala   Ala
  Ser(S)   Thr   Thr
  Thr(T)   Val；Ser   Ser
  Trp(W)   Tyr；Phe   Tyr
  Tyr(Y)   Trp；Phe；Thr；Ser   Phe
  Val(V)   Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸   Leu
抗体生物学特性的实质性修饰伴随着选择取代，所述选择取代对维持(a)取代区域中多肽骨架的结构，例如片层或螺旋构象，(b)目标部位的所述分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的大小的影响方面差异显著。可以根据氨基酸的侧链特性的相似性对氨基酸分组(A.L.Lehninger，in Biochemistry，second ed.，pp.73-75，Worth Publishers，New York(1975)中)：
(1)非极性氨基酸：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)
(2)不带电的极性氨基酸：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)
(3)酸性氨基酸：Asp(D)、Glu(E)
(4)碱性氨基酸：Lys(K)、Arg(R)、His(H)
或者，可以基于常见侧链特性将天然发生的残基分为以下的组：
(1)疏水性氨基酸：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性氨基酸：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性氨基酸：Asp、Glu；
(4)碱性氨基酸：His、Lys、Arg；
(5)影响链方向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香氨基酸：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代必然会伴随用这些类别中其中一类的成员交换另一类。
通常也可以用丝氨酸取代不涉及维持抗体的正确构象的任何半胱氨酸残基，以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。反之，可以将半胱氨酸键加至抗体以改善其稳定性(特别是抗体为抗体片段如Fv片段时)。
特别优选的取代变体类型涉及取代亲本抗体的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的所得变体相对于生产所述变体的亲本抗体而言会具有改善的生物学特性。用于生产这些取代变体的方便方式为利用噬菌体展示的亲合力成熟。简单地说，突变数个高变区位点(例如6-7个位点)，在每个位点产生所有可能的氨基酸取代。如此产生的抗体变体作为融合物以单价形式从丝状噬菌体颗粒展示，所述融合物融合于包装在每个颗粒内部的M13的基因III产物。然后如本文所述筛选噬菌体展示变体的生物学活性(例如结合亲合力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可以进行丙氨酸扫描诱变，以鉴定明显促进抗原结合的高变区残基。或者，或除此之外，分析抗原抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原之间的接触点可能是有益的。根据本文详细描述的技术，这些接触的残基和邻近的残基是用于取代的候选残基。一旦制备了这样的变体，如本文所述筛选这一系列变体，可以选择在一种或多种相关测试中具有优越特性的抗体用于进一步的开发。
抗体的另一类型的氨基酸变体改变抗体原来的糖基化模式。这种改变包括删除抗体中发现的一个或多个碳水化合物部分，和/或添加一个或多个抗体中不存在的糖基化位点。
多肽的糖基化典型地为N-连接的或O-连接的。N-连接指碳水化合物部分附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸是碳水化合物部分向天冬酰胺侧链酶学附着的识别顺序，其中X为除脯氨酸之外的任何氨基酸。因此，多肽中任何一个这种三肽序列的存在都形成潜在的糖基化位点。O-连接糖基化指N-乙酰半乳糖胺、半乳糖、或木糖的其中一种附着于羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。
通过改变氨基酸序列使其包含一个或多个上述的三肽序列(对于N-连接糖基化位点)而方便地完成向抗体添加糖基化位点。也可以通过向原抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或者用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代而获得所述改变(对于O-连接糖基化位点)。
抗体包含Fc区时，可以改变附着于其上的碳水化合物。例如，美国专利申请US 2003/0157108(Presta，L.)描述了具有成熟碳水化合物结构的抗体，所述碳水化合物结构缺乏附着于抗体Fc区的岩藻糖。也可参见US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd).在附着于抗体Fc区的碳水化合物中具有二等分(bisecting)N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)的抗体参见WO2003/011878，Jean-Mairet et al.和美国专利6,602,684，Umana et al。在附着于抗体Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体报导于WO 1997/30087，Patel et al。还可参见WO 1998/58964(Raju，S.)和WO 1999/22764(Raju，S.)，这些文献涉及具有附着于其Fc区的改变的碳水化合物的抗体。也可参见US 2005/0123546(Umana et al.)，其涉及具有修饰的糖基化的抗原结合分子。
此处优选的糖基化变体包含Fc区，其中附着于Fc区的碳水化合物结构缺乏岩藻糖。这些变体具有改善的ADCC功能。任选在所述Fc区中进一步包含一个或多个氨基酸取代，所述取代进一步改善ADCC，例如Fc区的位点298、333、和/或334的取代(残基的Eu编号)。与“脱岩藻糖化的”或“岩藻糖缺陷的”抗体有关的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US2004/0109865；WO 2003/085 119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；Okazaki et al.J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87：614(2004)。生产脱岩藻糖化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美国专利申请US 2003/0157108 A1，Presta，L；和WO 2004/056312 A1，Adams et al.，尤其是实施例11)、和敲除(knockout)细胞系，如α-1，6-岩藻糖转移酶基因FUT8敲除的CHO细胞(Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87：614(2004))。
编码抗体氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域已知的多种方法制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然发生的氨基酸序列变体的情况下)或者通过寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变、以及早先制备的抗体的变体或抗体的非变体型式的盒式诱变。
可能希望改变本发明所述抗体的效应器功能，例如以增强抗体的抗原依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒(CDC)。这可以通过在抗体的Fc区引入一个或多个氨基酸取代来实现。或者或除此之外，可以将半胱氨酸残基引入Fc区，从而允许在该区域形成链间二硫键。如此制备的同二聚体抗体可能具有改善的内化能力和/或提高的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖的细胞毒(ADCC)。参见Caron et al.，J.Exp Med.176：1191-1195(1992)和Shopes，J.Immunol.148：2918-2922(1992)。也可以如Wolff et al.Cancer Research53：2560-2565(1993)所述用异双功能交联剂制备抗肿瘤活性增加的同二聚体抗体。或者，可以工程化抗体使之具有双Fc区，并可能由此具有增强的补体裂解和ADCC能力。参见Stevenson et al.Anti-Cancer Drug Design 3：219-230(1989)。
WO00/42072(Presta，L.)描述了在人效应细胞存在下具有改善的ADCC功能的抗体，其中所述抗体在其Fc区包含氨基酸取代。优选具有改善的ADCC的抗体包含Fc区位点298、333、和/或334的取代。优选改变的Fc区是人IgG1 Fc区，其在一个、两个或三个这些位点包含取代，或由这些取代组成。
具有改变的C1q结合和/或补体依赖的细胞毒(CDC)的抗体描述于WO99/51642、美国专利6,194,551B1、美国专利6,242,195B1、美国专利6,528,624B1和美国专利6,538,124(Idusogie et al.)。所述抗体包含其Fc区位点270、322、326、327、329、313、333和/或334的一个或多个氨基酸位点的氨基酸取代。
为了增加抗体的血清半衰期，例如可以如美国专利5,739,277所述将补救受体结合表位掺入到抗体(尤其是抗体片段)中。此处所用术语″补救受体结合表位″指IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4)Fc区的表位，其负责增加IgG分子的体内血清半衰期。在其Fc区中具有取代并具有提高的血清半衰期的抗体也描述于WO00/42072(Presta，L.)。
还预期具有三个或更多(优选四个)功能性抗原结合位点的工程化抗体(美国专利申请US2002/0004587 A1，Miller et al.)。
V.药物制剂
通过将具有所需纯度的抗体与可选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备所使用的根据本发明的抗体治疗学制剂(Remington′sPharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编著(1980))，其为冻干制剂或水溶液形式。可接受的载体、赋形剂、或稳定剂在所用剂量和浓度对接受者来说是无毒的，其包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐、和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如八癸二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、氯化苄甲乙氧铵；苯酚、丁基醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯类如甲基或丙基对羟苯甲酸酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、白明胶、或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、或赖氨酸；单糖、二糖、和其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；形成盐的反离子如钠；金属复合物(例如锌-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
WO98/56418描述了示例性抗CD20抗体制剂。该出版物描述了液态多剂制剂(liquid multi-dose formulation)，其包含40mg/mL美罗华、25mM醋酸、150mM海藻糖、0.9％苯甲醇、和0.02％聚山梨酸酯20，pH5.0，2-8℃存储具有至少两年的保存期。另一种感兴趣的抗CD20制剂包含9.0mg/mL氯化钠、7.35mg/mL二水柠檬酸钠、0.7mg/mL聚山梨酸酯80、和灭菌注射水、pH6.5中10mg/mL的美罗华。
美国专利6,267,958(Andya et al.)描述了适合于皮下施用的冻干制剂。可以用合适的稀释剂将这种冻干制剂重建为高蛋白质浓度，重建的制剂可皮下施用于此处所要治疗的哺乳动物。
还预期结晶形式的抗体。参见例如，US 2002/0136719A1(Shenoy et al.)。
此处的制剂也可以包含一种以上的必需的活性化合物(如上所述的第二药剂)，优选具有互补活性而不会互相有负面影响的那些活性化合物。这些药剂的类型和有效量依赖于例如制剂中存在的抗体的量，和患者的临床参数。优选的这些药剂为如上所述的。
例如，也可以通过凝聚技术或界面聚合将活性成分包装于所制备的微胶囊中，例如分别包装于羟甲基纤维素或白明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊中，包装于胶状药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或者包装于常规乳液中。这些技术公开于Remington′s Pharmaceutical Sciences 16th edition，Osol，A.Ed.(1980)。
可以制备缓释制品。适当的缓释制品的例子包括包含抗体的固态疏水性聚合物半透性基质，其中基质为成形制品形式的，例如薄膜、或微胶囊。缓释基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-丙烯酸甲酯)、或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯、可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)、以及聚-D-(-)-3-羟丁酸。
要用于体内施用的制剂必须是无菌的。这很容易通过除菌滤膜过滤而实现。
VI.制品
在本发明的另一实施方案中，提供包含可用于治疗ANCA相关血管炎的上述材料的制品。一个方面，所述制品包括(a)包含结合B细胞表面标志的拮抗剂(例如，如此结合的抗体包括CD20抗体)的容器(优选在所述容器内包含拮抗剂或抗体和药学上可接受的载体或稀释剂)；和(b)带有治疗病人ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明在约一个月时间内以一至三剂的频率为所述病人施用约400mg至1.3克的拮抗剂或抗体剂量。
因此，本发明提供制品，包括：含有CD20抗体，或结合B细胞表面标志的抗体或拮抗剂的容器；和带有治疗病人ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明在约一个月时间内以一到三剂的频率为所述病人施用约400mg至1.3克剂量的CD20抗体，或结合B细胞表面标志的抗体或拮抗剂。
在优选实施方案中，本文的制品进一步包括包含第二药剂的容器，其中所述拮抗剂或抗体是第一药剂。该制品在所述包装插页上进一步包括以有效量用第二药剂治疗所述病人的说明。第二药剂可以是以上列出的那些中任何一种，示例性的第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、细胞因子拮抗剂、或激素。优选的第二药剂是以上列出的优选的那些，最优选为类固醇或免疫抑制剂或两者都有。
另一个方面，本发明提供制品，该制品包括：(a)包含结合B细胞表面标志的抗体(例如，CD20抗体)的容器(优选在所述容器内包含所述抗体和药学上可接受的载体或稀释剂)；和(b)带有治疗患者ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明施用于患者的抗体的量，所述量对于提供初始抗体暴露，之后提供第二次抗体暴露是有效的，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周时才提供。
优选这种包装插页提供有治疗患者ANCA相关血管炎的说明，其中所述说明指明为患者施用抗体的量，所述抗体的量对于提供约0.5至4克的初始抗体暴露之后约0.5至4克的第二次抗体暴露是有效的，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周时才提供，并且每次抗体暴露都以约1至4剂、更优选以单剂量或以两或三分剂抗体提供给患者。
在特定方面，提供制品，包括：
(a)包含结合B细胞表面标志的抗体(例如，CD20抗体)的容器(优选在所述容器内包含抗体和药学上可接受的载体或稀释剂)；和
(b)带有治疗患者ANCA相关血管炎的说明的包装插页，其中所述说明指明施用于患者的抗体的量，所述抗体的量对于提供初始抗体暴露以及此后的第二次抗体暴露是有效的，其中第二次暴露直到自初始暴露起约1 6至54周时才提供，并且每次抗体暴露都以单剂或二或三分剂抗体提供给患者。优选所述抗体暴露为约0.5至4克。
在本发明这些方面的优选实施方案中，此处所述制品进一步包括包含第二药剂的容器，其中所述抗体为第一药剂，并且该制品在所述包装插页上进一步包含用第二药剂以有效量治疗患者的说明。第二药剂可以是以上列出的那些中的任何一种，示例性的第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、细胞因子拮抗剂、或激素，最优选类固醇或免疫抑制剂，或两者都有。
在所有这些方面，所述包装插页在容器上或者与所述容器关联。合适的容器包括例如瓶子、管形瓶、注射器等等。所述容器可以由多种材料如玻璃或塑料构成。所述容器装有或包含治疗ANCA相关血管炎有效的组合物，可以具有无菌存取口(例如，所述容器可以为静脉内溶液袋或管形瓶，所述管形瓶具有可用皮下注射针穿透的塞子)。在所述组合物中至少一种活性试剂是所述拮抗剂或抗体。标签或包装插页指明所述组合物用来治疗适于治疗的ANCA相关血管炎病人或患者，所述标签或包装插页带有涉及拮抗剂或抗体和提供的任何其它药剂的给药量和间隔的具体指示。所述制品可以进一步包含额外的容器，该额外的容器包含药学上可接受的稀释剂缓冲液，如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸缓冲盐水、Ringer′s溶液、和/或右旋糖溶液。所述制品可以进一步包括从商业和用户的观点来看所需要的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针、和注射器。
以下的非限制性实施例阐述本发明的更多细节。本文特别加入说明书中所有引证文件的内容作为参考。
实施例1
韦格纳肉芽肿病病人中美罗华的功效研究
该研究评估在特定剂量给药方案中美罗华(MABTHERA/RITUXAN)相对于安慰剂，对韦格纳肉芽肿病病人体征和症状的治疗的功效和安全性上的优越性，所述韦格纳肉芽肿显示全身疾病的一种或多种症状。
在第1天和第15天的两个初始剂量中，与每天1mg/kg的口服强的松(其在第4周减小到40mg/天，并在接下来的3-5个月采用标准化递减方案递减，直至完全中止强的松)一起i.v.施用美罗华(1000mg i.v.x2)。除了用美罗华(rituximab)安慰剂代替美罗华之外，将该试验方案与相同的方案比较，其中在两个研究组之间1∶1随机化，每组约48个病人(合计96个病人)。活动性疾病定义为Birmingham Vasculitis Activity Score/韦格纳肉芽肿病(BVAS/WG)分数大于0的疾病。包括于试验中的病人的BVAS/WG分数必须为3或更大(或者在28天的随机化中已经为3或更大)。有关BVAS/WG评估形式的每种主要项目(major item)都记分为3个点。每种次要项目(minor item)都记为1个点。在疾病活动程度的测定中，研究者将区分活动性血管炎(新的/更糟的BVAS/WG项目，与持久性项目相反)和永久性器官损伤(由之前的活动性血管炎所引发)。
严重发作(severe flare)是一种或多种主要BVAS/WG项目的新近发生。(主要项目在BVAS/WG记分表上带有*)通常，通过增加强的松的剂量或环磷酰胺的剂量治疗这样的发作。
严重韦格纳肉芽肿病发生在其疾病不能根据以下的定义分类为局限型疾病的病人中。
局限型发作(limited flare)是一种或多种次要BVAS/WG项目的新近发生。通常，这种发作通过提高强的松剂量或提高氨甲蝶呤剂的剂量来治疗。
局限型韦格纳肉芽肿病发生于满足修订的American College ofRheumatology(ACR)标准、但未患对单个重要器官或病人生命有直接威胁的疾病的病人中，其中所述标准用于韦格纳肉芽肿病的诊断。具体地，这意味着：
·所述病人在尿中没有红细胞脱落物(casts)。
·如果存在血尿症(但没有+RBC脱落物)，血清肌酐必须小于或等于1.4，并且必须有肌酐上升不超过病人基线以上25％的证据。
·肺部的波及必须是受限的，以使室内空气pO2＞70mmHg或者通过脉冲血氧定量法(pulse oximetry)测定的室内空气O2饱和度＞92％。假设所述进程没有进展(progression)的迹象，则可以将肺出血作为局限型疾病治疗。不存在有关进展的数据时，可以按照医师的判断将肺出血作为严重疾病治疗。
·其它任何重要器官(例如，胃肠道、眼睛、中枢神经系统)内不存在这样的疾病，即如果不立即制定最大限度疗法(without the immediate institutionof maximal therapy)(即，脉冲甲基强的松龙和每天口服环磷酰胺)就会威胁器官的功能和/或病人生命的疾病。
新诊断的病人指处在他/她韦格纳肉芽肿病的第一个皮质类固醇和/或化疗剂或免疫抑制剂疗程中，在进入所述研究之前没有免疫抑制治疗增强史的病人。
为了记录BVAS/WG分数，持久性疾病定义为存在进行性疾病活动，所述进行性疾病活动在先前的试验评估上已存在(即，不是新的或更严重的疾病活动)。
纯化的蛋白质衍生物皮肤试验可用于检测潜伏性肺结核感染。
顽固性病人指在韦格纳肉芽肿病活性治疗起始前已有免疫抑制治疗(皮质类固醇和/或免疫抑制剂或化疗剂)史，使所述病人适合于此研究的病人。
当病人的BVAS/WG分数为0时，认为其处于症状缓解中。
该基于美罗华的方案挑战现行的处理标准，目的在于限制病人接触类固醇及其已知毒性，并显示改善的净临床益处。在一年的试验期中监测病人的疾病活动、其它免疫抑制剂的使用、类固醇的使用、安全性，在第3个月测量试验的主要功效终点(primary endpoint)，跟踪监测16.8个月。在美罗华的最后剂量或者ANCA回复到正常范围之后，以后发生者为准，需要进行12个月的安全性跟踪。
主要目的在于确定获得BVAS/WG分数0和在第6个月时成功的强的松递减、以及没有在先指定的不良后果的病人的比例。
美罗华(或者用于取代美罗华的人源化2H7)在至少80％的入选的韦格纳肉芽肿病病人中，对于诱导症状缓解(获得BVAS/WG分数0)，并且相对于对照组来说，允许减少类固醇剂量是有效的。于第14周时，BVAS/WG从开始时的分数下降到约0.2至0.4。截止到第14周，C反应性蛋白(mg/L)从开始时的水平下降到约3至11的范围。第14周时，平均泼尼松龙剂量(mg/天)从开始时的值下降到统计学上显著的更低值。在平均27周后，复发在五个以下的病人中发生。如果开始时平均BVAS/WG为3.6，那么在治疗6个月时，其数值降至统计学上显著的0.6。在70％以下的病人中观察到间歇性活动性疾病。相比之下，对于BVAS/WG和C反应性蛋白、以及类固醇使用，对照组显示降低的程度大大减少，并且更少的病人处于症状缓解中。
实施例2
显微镜下多血管炎病人中美罗华的功效研究
除了治疗病人的显微镜下多血管炎之外，沿用实施例1中的方案。观察到与韦格纳肉芽肿病类似的结果，即，通过BVAS/WG分数0测量的症状缓解发生于研究组中所治疗的至少80％的病人中，并且在整个研究进程中，类固醇应用减少，在统计学显著意义上，与对照结果相比，此结果好得多。
实施例3
韦格纳肉芽肿病病人中美罗华功效的再治疗研究
该研究评估在韦格纳肉芽肿病成年患者中，与安慰剂相比用美罗华再治疗(MABTHERA/RITUXAN)的功效和安全性的优越性。研究I检查急性疾病，首次出现的或者复发的(BVAS≥10；n＝16)；研究II检查持久性疾病(BVAS≥4；n＝16)。对于研究I和II，病人在第1、8、和15天时的三个初始剂量中接受美罗华(1g i.v.)。研究I中的伴随治疗包括依照实施例1中的方案递减的1mg/kg/天的口服强的松和环磷酰胺(按照标准治疗)。研究II的病人依照实施例1中的方案接受美罗华和递减的1mg/kg/天的口服强的松。所有患者都分别于第24周和第26周间隔14天接受1000mg的第二次美罗华/安慰剂i.v.输注疗程，不接受类固醇或环磷酰胺，无论病人显示症状还是处于完全的症状缓解中。美罗华治疗的疗程必须由16周的最小间隔分开。
将所述试验方案与美罗华安慰剂+相同剂量的递减口服强的松和环磷酰胺(研究I)，或递减的口服强的松(研究II)相比较。
研究期间不允许改变免疫抑制药物，除非迫于毒性，并且逐渐减少除口服强的松之外的药物的要求必须事先由医疗监测员讨论过。研究人员将训练如何适当地施用美罗华。按照调查员的意思，患者可以入院观察，特别是对于其首次输注。美罗华必须在严密监测下施用，并且全部的复生设备必须是立即可用的。
在52周的研究中，在每个月监测病人的疾病活动、其它免疫抑制剂的使用、疾病的发作(flares of disease)、强的松的利用和安全性结果，监测12个月。试验的主要功效终点在第52周，由唯一的检查评定员评估功效测量值，该检查评定员不参与病人治疗或其它研究程序。评估病人的BVAS/WG分数和成功的强的松递减。在52周结束时，接受美罗华安慰剂或美罗华，但在6个月时显示BVAS/WG分数为0和成功的强的松递减的患者将结束研究。接受美罗华但在52周时没有显示此分数的患者在最后一个美罗华疗程后观察6个月，或者直到BVAS/WG分数为0，以先发生者为准。将会得知患者是否必须继续跟踪的位点，但不会得知患者是接受安慰剂还是美罗华。在美罗华的最后剂量或者BVAS/WG分数为0之后，以后发生者为准，需要进行12个月的安全性跟踪。
这些基于美罗华的方案挑战现行的处理标准，显示改善的净(net)临床益处，主要目的在于确定获得BVAS/WG分数为0的主要终点、和成功的强的松递减的病人的比例。
以上阐述的研究I和II的方案中的患者施用美罗华或人源化2H7后，症状缓解在入选的至少80％的韦格纳肉芽肿病病人中诱导(获得BVAS/WG分数0)，并且相对于对照组来说，允许减少类固醇剂量。于第14周时，BVAS/WG从开始时的分数下降到约0.2至0.4。截止到第14周，C反应性蛋白(mg/L)从开始时的水平下降到约3至11的范围。对于研究I和II来说，在14周时，平均类固醇应用从开始时的值降低到统计学上显著的更低的值。在平均27周后，复发在少于五个病人中发生。对于研究I和II，这些结果明显好于对照组的结果。
大约在第48-54周，另一次全部一次给予2g美罗华抗体或者在大约14-16天期间以每次1克量分散给予2g剂量美罗华，有或者没有类固醇和/或其它免疫抑制剂，在整个第二年有效治疗韦格纳肉芽肿病(在至少80％入选病人中BVAS/WG分数为0)，相对于接受美罗华安慰剂而非美罗华的对照病人具有显著的改善。这样，最初美罗华(或人源化2H7)在大约2-周期间内施用，之后自初始治疗(从给予任何一次剂量起计算)起大约4-8个月时进行另一次治疗，大约一年时进行另一次治疗，之后自初始治疗起大约两年时治疗，对于每次治疗以大约一克x2-4次，一起施用，在约二到四周期间大约每周一次或者大约每隔一周一次，治疗成功。预期该再治疗方案将成功使用几年而几乎没有副作用。
实施例4
韦格纳肉芽肿病病人中美罗华功效的第二次再治疗研究
除了以1000mg i.v.x2(于第0天，第二次输注发生于第15+/-1天)给予初始剂量的美罗华或美罗华安慰剂，以及于第24和26周施用的、由2个每两周一次剂量(2 weekly doses)组成的后续美罗华或安慰剂输注疗程只施用于处于症状缓解中的那些患者之外，该研究与实施例3中相同，所述处于症状缓解中的患者为例如没有显示通过ANCA效价升高、ANCA效价持续升高和其它症状而确定的疾病活动增强的那些患者。所有其它标准均相同。
为上述制定的再次剂量给药方案中的患者施用美罗华或人源化2H7后，在入选的至少80％的韦格纳肉芽肿病病人中有效诱导症状缓解(获得BVAS/WG分数0)，并且相对于对照组来说，允许减少类固醇剂量。于第14周时，BVAS/WG从开始时的分数下降到约0.2至0.4。截止到第14周，C反应性蛋白(mg/L)从开始时的水平下降到约3至11的范围。对于研究I和II来说，在14周时，平均泼尼松龙剂量(mg/天)从开始时的值降低到统计学上显著的更低的值。在平均27周后，复发在少于五个病人中发生。这些结果明显好于对照的结果。
大约在第48-54周，另一次全部一次给予2g剂量的CD20抗体(例如，美罗华或人源化2H7)或者在大约14-16天期间以每次1克量分散给予2g剂量CD20抗体(例如，美罗华或人源化2H7)，有或者没有递减的强的松和i.v.甲基强的松龙和/或其它免疫抑制剂，在整个第二年有效地治疗韦格纳肉芽肿病(至少80％的入选病人具有BVAS/WG分数0)。这样，最初CD20抗体在大约2-周期间施用，之后自初始治疗(从给予任何一次剂量起计算)起大约4-8个月时进行另一次治疗，大约一年时进行另一次治疗，之后自初始治疗起大约两年时治疗，对于每次治疗以大约一克x 2-4次在约二到四周期间大约每周一次或者大约每隔一周一次一起施用，治疗成功。该治疗的结果比使用安慰剂的对照的结果好得多。预期该再治疗方案将成功使用几年而几乎没有副作用。
实施例5
韦格纳肉芽肿病病人中美罗华功效的第三次再治疗研究
最初用美罗华治疗病人，然后在首次治疗一年后用美罗华再治疗，除了以一年的间隔而非六个月的间隔给予美罗华外，使用相同的剂量和实施例4的其它方案，获得实施例4的结果。
实施例6
泛发性ANCA相关血管炎患者中的美罗华功效研究
利用美罗华在泛发性ANCA相关血管炎(generalized ANCA-associtatedvasculitis)病人中进行随机、多中心(multi-center)、双盲(double-masked)、安慰剂对照试验。将两百个病人随机分为(1)常规治疗(环磷酰胺和皮质类固醇，之后为硫唑嘌呤)；或者(2)美罗华(起初加皮质类固醇)，用于症状缓解诱导，于第1天并再次于第15天使用1克美罗华。
主要的临床对比是该剂量给药方案中的美罗华和皮质类固醇诱导疾病症状缓解的能力，其通过六个月时累积的疾病活动测得。与用于ANDA相关血管炎的标准治疗持续时间一致，常规治疗组的病人都接受达6个月的环磷酰胺，之后是硫唑嘌呤，以完成18个月的总治疗时长。为评估美罗华恢复B细胞耐受的能力，跟踪两个试验组中的病人共计18个月。
美罗华(或者取代美罗华的人源化2H7)在ANCA相关血管炎病人中诱导稳定的症状缓解，并在至少三分之二的病人中重建对ANCA目标抗原的B细胞耐受。美罗华或其它CD20抗体至少与诱导和维持疾病症状缓解的常规治疗方案一样有效，凭借其优越的副作用谱(profile)，例如，比化疗剂和类固醇更小的毒性、和更好的恢复耐受，相对于标准治疗提供了实质性的优势。
实施例7
严重韦格纳肉芽肿病或严重显微镜下多血管炎患者中美罗华功效的再治疗研究
登记了二十名具有活动性严重韦格纳肉芽肿痛或严重显微镜下多血管炎、阳性ANCA检测结果、和BVAS/WG分数至少为3的病人，他们对环磷酰胺无反应或者忌用环磷酰胺。参见实施例1中严重韦格纳肉芽肿病的定义。症状缓解诱导方案由口服强的松(1mg/kg/天)和美罗华(第1天1克，第15天1克)组成。截止第4周，强的松减少到40mg/天。接下来为标准化的递减方案，直至在之后的16周完全中止强的松。将此与用美罗华安慰剂而非美罗华(对照研究)的相同方案作比较，。对于所有病人，所述方案规定于6个月时用相同的症状缓解诱导方案再治疗，无论他们是否正在经历B细胞重建后的疾病发作，无论他们是否是无症状的且具有与B细胞重建同时发生的或在B细胞重建之后的ANCA反复或ANCA效价上升，或者无论是否处于完全的症状缓解中。对于美罗华和美罗华安慰剂，该再治疗方案包括1gx2，两周间隔。缺乏B细胞的情况下的临床发作被认为是治疗失败。每月评估病人一次，评估一年。
治疗组中的病人很好地耐受美罗华输注，他们的B细胞很快损耗，并且到三个月为止，所有病人实现完全的症状缓解(BVAS/WG为0)。截止6个月时，治疗组中的所有病人都完成糖皮质激素递减。12个月后，治疗组中没有病人经历临床发作，并且在12个月内，大多数这些病人的B细胞都恢复，如果不是全部的话。除了糖皮质激素之外，对于在美罗华(rituximab)治疗的病人中诱导症状缓解和维持持续的症状缓解来说，没有额外的免疫抑制剂是必需的。
实施例8
此处可使用的人源化2H7变体
可用于本发明目的的人源化2H7抗体包括下述CDR序列中的一个、两个、三个、四个、五个、或六个：
CDR L1序列RASSSVSYXH，其中X是M或L(SEQ ID NO：35)，例如，SEQ ID NO：4(图1A)，
SEQ ID NO：5的CDR L2序列(图1A)，
CDR L3序列QQWXFNPPT，其中X是S或A(SEQ ID NO：36)，例如，SEQ ID NO：6(图1A)，
SEQ ID NO：10的CDR H1序列(图1B)，
CDR H2序列AIYPGNGXTSYNQKFKG，其中X是D或A(SEQ IDNO：37)，例如，SEQ ID NO：11(图1B)，和
CDR H3序列VVYYSXXYWYFDV，其中位点6的X是N、A、Y、W、或D，位点7的X是S或R(SEQ ID NO：38)，例如，SEQ ID NO：12(图1B)。
此处的人源化2H7抗体包括那些具有包含C末端赖氨酸的重链氨基酸序列的和那些不具有包含C末端赖氨酸的重链氨基酸序列的抗体。上述CDR序列通常存在于人可变区轻链和可变区重链框架序列内，例如基本上为人轻链kappa亚组I(VLκI)的人共有FR残基，以及基本上为人重链亚组III(VHIII)的人共有FR残基。也可参见WO 2004/056312(Lowman et al.)。
重链可变区可以连接到人IgG链恒定区，其中所述区域可以是例如IgG1或IgG3，包括天然序列和非天然序列恒定区。
在优选实施方案中，这种抗体包含SEQ ID NO：8的重链可变区序列(v16，如图1B所示)，任选还包含SEQ ID NO：2的轻链可变区序列(v16，如图1A所示)，任选在重链可变区的位点56、100、和/或100a包含一个或多个氨基酸取代，例如D56A、N100A、或N100Y、和/或S100aR，在轻链可变区的位点32和/或92包含一个或多个氨基酸取代，例如M32L和/或S92A。优选所述抗体是包含SEQ ID NO：13或30的轻链氨基酸序列，和SEQ IDNO：14、15、29、31、34、或39的重链氨基酸序列的完整抗体，以下给出了SEQ ID NO：39的序列。
优选的人源化2H7抗体是ocrelizumab(Genentech，Inc.)。
此处的抗体在Fc区可以进一步包含至少一个改善ADCC活性的氨基酸取代，例如其中所述氨基酸取代位于位点298、333、和334的抗体，优选S298A、E333A、和K334A，其使用重链残基的Eu编号。也可参见美国专利6,737,056，L.Presta。
任何的这种抗体在Fc区可以包含至少一个改善FcRn结合或血清半衰期的取代，例如，重链位点434的取代，如N434W。也可参见美国专利6,737,056 ， L.Presta。
任何的这种抗体在Fc区可以进一步包含至少一个提高CDC活性的氨基酸取代，例如至少包含位点326的取代，优选K326A或K326W。也可参见美国专利6,528,624，Idusogie et al。
一些优选的人源化2H7变体是那些包含SEQ ID NO：2的轻链可变区和SEQ ID NO：8的重链可变区的变体，包括那些在Fc区(如果存在的话)具有或没有取代的变体，和那些包括在SEQ ID NO：8中含有改变N100A；或D56A和N100A；或D56A、N100Y和S100aR的重链可变区；并且包括在SEQ ID NO：2中含有改变M32L；或S92A；或M32L和S92A的轻链可变区的变体。
2H7.v16重链可变区中的M34已经鉴定为抗体稳定性的可能来源，是另一个可能的候选取代。
在本发明一些不同优选实施方案的概括中，基于2H7.v16的变体可变区包含除以下表4指出的氨基酸取代位点之外的v16的氨基酸序列。除非另有说明，2H7变体将具有与v16相同的轻链。
表4
示例性人源化2H7抗体变体
2H7型式 重链(VH)变化 轻链(VL)变化 Fc变化
用作参照的16型 -
31 - - S298A，E333A，K334A
73 N100A M32L
75 N100A M32L S298A，E333A，K334A
96 D56A，N100A S92A
114 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A
115 D56A，N100A M32L，S92A S298A，E333A，K334A，E356D，M358L
116 D56A，N100A M32L，S92A S298A，K322A，K334A，
138 D56A，N100A M32L，S92A S298A，K326A，E333A，K334A，
477 D56A，N100A M32L，S92A S298A，K326A，E333A，K334A，N434W
375 - - K334L
588 - - S298A，K326A，E333A，K334A
511 D56A，N100Y，S100aR M32L，S92A S298A，K326A，E333A，K334A
一个优选的人源化2H7包括2H7.v16可变轻链区序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：2)；
和2H7.v16可变重链区序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO：8)。
其中人源化2H7.v16抗体是完整抗体，其可以包含轻链氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：13)；
和重链氨基酸序列SEQ ID NO：14或：
EVQLVESGGGLVQPGGsLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPApIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：15)。
另一个优选的人源化2H7抗体包括2H7.v511可变轻链区序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：39)
和2H7.v511可变重链区序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQApGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ IDNO：40)。
其中人源化2H7.v511抗体是完整抗体，其可以包含轻链氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：30)
和重链氨基酸序列SEQ ID NO：31或：
EVQLVEsGGGLVQPGGSLRLSCAAsGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYsKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：41)。
参见图7和8，其用重链的C端赖氨酸序列分别将2H7.v511的成熟轻链和重链与人源化2H7.v16比对。
其中人源化2H7.v31抗体是完整抗体，其可以包含轻链氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWAFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO：13)
和重链氨基酸序列SEQ ID NO：15或：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：42)
或：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTpEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNATYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNAALPAPIAATISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO：43)。
这里优选的实施方案是其中所述抗体为包含SEQ ID NOS：2和8中的可变区序列的人源化2H7(16型)。这里另一个优选的实施方案是其中所述抗体为包含SEQ ID NOS：39和40中的可变区序列的人源化2H7(511型)。更优选其中所述抗体是包含SEQ ID NOS：32和33中的可变区序列的人源化2H7(参见图9114型)，如包含SEQ ID NO：32中的轻链可变区和SEQ IDNO：34的重链氨基酸序列的抗体。更优选其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQ ID NO：8中具有变化N100A，或D56A和N100A，或D56A、N100Y、和S100aR的重链可变区，和在SEQ ID NO：2中具有变化M32L，或S92A，或M32L和S92A的轻链可变区。

Claims (124)

1.治疗病人的抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(ANCA相关血管炎)的方法，包括以大约400mg至1.3克的剂量、以大约一个月时间内一至三剂的频率为所述病人施用CD20抗体。
2.权利要求1的方法，其中所述剂量为大约500mg至1.2克。
3.权利要求1或2的方法，其中所述剂量为大约750mg至1.1克。
4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述抗体以二到三剂施用。
5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述抗体以三剂施用。
6.权利要求1-5任一项的方法，其中所述抗体在大约2至3周时间内施用。
7.权利要求6的方法，其中所述时间为大约三周。
8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述ANCA相关血管炎是韦格纳肉芽肿病。
9.权利要求1-7任一项的方法，其中所述ANCA相关血管炎是显微镜下多血管炎。
10.权利要求1-9任一项的方法，其中第二药剂以有效量施用，其中CD20抗体为第一药剂。
11.权利要求10的方法，其中第二药剂是一种以上的药剂。
12.权利要求10或11的方法，其中第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、或激素、或其组合。
13.权利要求12的方法，其中第二药剂是类固醇或免疫抑制剂或两者都有。
14.权利要求13的方法，其中第二药剂是类固醇。
15.权利要求14的方法，其中所述类固醇是皮质类固醇。
16.权利要求15的方法，其中所述类固醇是强的松、泼尼松龙、甲基强的松龙、氢化可的松、或地塞米松。
17.权利要求14-16任一项的方法，其中如果不将CD20抗体施用于用类固醇治疗的病人，则以低于前者所用类固醇的量施用所述类固醇。
18.权利要求13的方法，其中第二药剂是免疫抑制剂。
19.权利要求18的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺、苯丁酸氮芥、霉酚酸酯、来氟米特、硫唑嘌呤、或氨甲蝶呤。
20.权利要求19的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺。
21.权利要求13的方法，其中第二药剂是类固醇和免疫抑制剂。
22.权利要求1-21任一项的方法，其中所述病人之前从未用CD20抗体治疗过。
23.权利要求1-22任一项的方法，其中所述病人尚未复发所述血管炎。
24.权利要求1-22任一项的方法，其中所述抗体是裸抗体。
25.权利要求1-22任一项的方法，其中所述抗体与其它分子偶联。
26.权利要求25的方法，其中所述其它分子是细胞毒剂。
27.权利要求1-26任一项的方法，其中静脉内施用所述抗体。
28.权利要求1-26任一项的方法，其中皮下施用所述抗体。
29.权利要求1-28任一项的方法，其中除了CD20抗体之外没有为患者施用其它药剂以治疗ANCA相关血管炎。
30.权利要求1-29任一项的方法，其中所述抗体是美罗华(rituximab)。
31.权利要求1-29任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ ID Nos.2和8中的可变区序列的人源化2H7。
32.权利要求1-29任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ ID NOS：39和40中的可变区序列的人源化2H7。
33.权利要求1-29任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ ID NOS：32和33中的可变区序列的人源化2H7。
34.权利要求1-29任一项的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQ ID NO：8中具有变化N100A，或D56A和N100A，或D56A、N100Y和S100aR的重链可变区，和在SEQ ID NO：2中具有变化M32L，或S92A，或M32L和S92A的轻链可变区。
35.权利要求1-34任一项的方法，其中所述病人在施用所述抗体后六个月时具有BVAS/WG分数0。
36.权利要求1-35任一项的方法，其中所述病人具有水平升高的抗核抗体(ANA)、抗类风湿因子(RF)抗体、肌酐、血尿素氮、抗内皮抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、或其组合。
37.制品，其包括：
包含CD20抗体的容器；和
带有治疗病人的抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(ANCA相关血管炎)的说明的包装插页，其中所述说明指明在大约一个月时间内将大约400mg至1.3克的CD20抗体剂量以一至三剂的频率施用于所述病人。
38.权利要求37的制品，进一步包括包含第二药剂的容器，其中CD20抗体是第一药剂，并且进一步在包装插页上包括用第二药剂治疗病人的说明。
39.权利要求38的制品，其中第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、细胞因子拮抗剂、或激素。
40.权利要求38或39的制品，其中第二药剂是类固醇或免疫抑制剂或两者都有。
41.治疗患者抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(ANCA相关血管炎)的方法，包括为患者施用有效量的CD20抗体，以提供初始抗体暴露，之后是第二次抗体暴露，其中第二次暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供。
42.权利要求41的方法，其中每次抗体暴露均作为单剂或者作为二或三分剂抗体提供给患者。
43.权利要求41或42的方法，其中第二次暴露直到自初始暴露起大约20至30周时才提供。
44.权利要求41-43任一项的方法，其中第二次暴露直到自初始暴露起大约46至54周时才提供。
45.权利要求41-44任一项的方法，其中初始抗体暴露和第二次抗体暴露均以大约0.5至4克的量提供。
46.权利要求41-45任一项的方法，其中初始抗体暴露和第二次抗体暴露均以大约1.5至3.5克的量提供。
47.权利要求41-46任一项的方法，其中初始抗体暴露和第二次抗体暴露均以大约1.5至2.5克的量提供。
48.权利要求41-47任一项的方法，还额外包括为患者施用有效量的CD20抗体，以提供第三次抗体暴露，其中所述第三次暴露直到自初始暴露起大约46至60周时才提供。
49.权利要求48的方法，其中第三次抗体暴露以大约0.5至4克的量提供。
50.权利要求48或49的方法，其中第三次抗体暴露以大约1.5至3.5克的量提供。
51.权利要求48-50任一项的方法，其中第三次抗体暴露以大约1.5至2.5克的量提供。
52.权利要求48-51任一项的方法，其中第三次暴露直到自初始暴露起大约46至55周时才提供。
53.权利要求48-52任一项的方法，其中直到自初始暴露起至少约70-75周时才提供进一步的抗体暴露。
54.权利要求53的方法，其中直到自初始暴露起约74至80周时才提供进一步的抗体暴露。
55.权利要求41或43-54任一项的方法，其中一次或多次抗体暴露作为单剂抗体提供给患者。
56.权利要求41-55任一项的方法，其中每次抗体暴露均作为单剂抗体提供给患者。
57.权利要求41或43-54任一项的方法，其中一次或多次抗体暴露作为分剂抗体提供给患者。
58.权利要求41-54或57任一项的方法，其中每次抗体暴露均作为分剂抗体提供。
59.权利要求57的方法，其中所述分剂为大约2至3剂。
60.权利要求57-59任一项的方法，其中所述分剂由第一和第二剂构成。
61.权利要求57-59任一项的方法，其中所述分剂由第一、第二、和第三剂构成。
62.权利要求57-61任一项的方法，其中后一剂自施用在先剂的时间起大约1到20天时施用。
63.权利要求50-62任一项的方法，其中后一剂自施用在先剂的时间起大约6到16天时施用。
64.权利要求50-63任一项的方法，其中后一剂自施用在先剂的时间起大约14到16天时施用。
65.权利要求57-64任一项的方法，其中所述分剂在总计大约1天到4周的时间内施用。
66.权利要求57-65任一项的方法，其中所述分剂在总计大约1天到25天的时间内施用。
67.权利要求57-66任一项的方法，其中所述分剂大约每周施用一次，自第一剂起约一周时施用第二剂，任何后续剂自前一剂起约一周时施用。
68.权利要求57-67任一项的方法，其中每个分剂抗体大约为0.5至1.5克。
69.权利要求57-68任一项的方法，其中每个分剂抗体大约为0.75至1.3克。
70.权利要求41-69任一项的方法，其中为患者施用4至20次抗体暴露。
71.权利要求41-70任一项的方法，其中第二药剂与抗体暴露一起以有效量施用，其中CD20抗体为第一药剂。
72.权利要求71的方法，其中第二药剂与初始暴露一起施用。
73.权利要求71或72的方法，其中第二药剂与初始暴露和第二次暴露一起施用。
74.权利要求71-73任一项的方法，其中第二药剂与所有暴露一起施用。
75.权利要求71-74任一项的方法，其中第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、非类固醇抗炎药(NSAID)、细胞因子拮抗剂、或激素、或其组合。
76.权利要求71-75任一项的方法，其中第二药剂包含类固醇或免疫抑制剂或两者都有。
77.权利要求71-76任一项的方法，其中第二药剂为类固醇。
78.权利要求77的方法，其中所述类固醇是皮质类固醇。
79.权利要求78的方法，其中所述类固醇是强的松、泼尼松龙、甲基强的松龙、氢化可的松、或地塞米松。
80.权利要求77-79任一项的方法，其中如果不将CD20抗体施用于用类固醇治疗的患者，则以低于前者所用类固醇的量施用所述的类固醇。
81.权利要求71-76任一项的方法，其中第二药剂为免疫抑制剂。
82.权利要求81的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺、苯丁酸氮芥、来氟米特、霉酚酸酯、硫唑嘌呤、或氨甲蝶呤。
83.权利要求82的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺。
84.权利要求71-76任一项的方法，其中第二药剂包含类固醇和免疫抑制剂。
85.权利要求72的方法，其中第二药剂不与第二次暴露一起施用，或者以低于与初始暴露一起使用时的量施用。
86.权利要求41-85任一项的方法，其中大约2-3克的CD20抗体作为初始暴露施用。
87.权利要求86的方法，其中每周一次施用大约1克CD20抗体，施用大约三周，作为初始暴露。
88.权利要求86或87的方法，其中第二次暴露在自初始暴露起约六个月时进行，并且以大约2克的量施用。
89.权利要求86-88任一项的方法，其中第二次暴露于初始暴露起约六个月时提供，施用约1克的抗体，之后在约两周内，再次施用约1克所述抗体。
90.权利要求86的方法，其中施用大约1克的CD20抗体，之后大约两周内，再次施用大约1克所述抗体，作为初始暴露。
91.权利要求90的方法，其中第二次暴露于初始暴露起的六个月时进行，并以大约2克的量施用。
92.权利要求90或91任一项的方法，其中第二次暴露于初始暴露起约六个月时提供，施用约1克的抗体，之后在约两周内，再次施用约1克所述抗体。
93.权利要求86-92任一项的方法，其中类固醇在初始暴露之前或者与初始暴露一起施用于患者。
94.权利要求93的方法，其中类固醇不与第二次暴露一起施用，或者与第二次暴露一起施用但以低于与初始暴露一起使用时的量施用。
95.权利要求93或94的方法，其中类固醇不与第三次或之后的暴露一起施用。
96.权利要求41-95任一项的方法，其中所述患者之前从未用CD20抗体治疗过。
97.权利要求41-96任一项的方法，其中所述患者处于初始或后续抗体暴露之后的症状缓解中。
98.权利要求41-96任一项方法，其中提供第二次抗体暴露时所述患者处于症状缓解中。
99.权利要求98的方法，其中提供所有抗体暴露时所述患者处于症状缓解中。
100.权利要求41-99任一项的方法，其中初始和第二次抗体暴露使用相同的CD20抗体。
101.权利要求41-100任一项的方法，其中所有抗体暴露均使用相同的CD20抗体。
102.权利要求41-101任一项的方法，其中所述抗体是裸抗体。
103.权利要求41-101任一项的方法，其中所述抗体与其它分子偶联。
104.权利要求103的方法，其中所述其它分子是细胞毒剂。
105.权利要求41-104任一项的方法，其中静脉内施用所述抗体。
106.权利要求105的方法，其中对于每次抗体暴露均静脉内施用所述抗体。
107.权利要求41-104任一项的方法，其中皮下施用所述抗体。
108.权利要求107的方法，其中对于每次抗体暴露均皮下施用所述抗体。
109.权利要求41-108任一项的方法，其中除了CD20抗体之外不为患者施用其它药剂以治疗ANCA相关血管炎。
110.权利要求41-109任一项的方法，其中所述ANCA相关血管炎是韦格纳肉芽肿病。
111.权利要求41-109任一项的方法，其中所述ANCA相关血管炎是显微镜下多血管炎。
112.权利要求41-111任一项的方法，其中所述抗体是美罗华(rituximab)。
113.权利要求41-111任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ ID Nos.2和8中的可变区序列的人源化2H7。
114.权利要求41-111任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ IDNOS：39和40中的可变区序列的人源化2H7。
115.权利要求41-111任一项的方法，其中所述抗体是包含SEQ IDNOS：32和33中的可变区序列的人源化2H7。
116.权利要求41-111任一项的方法，其中所述抗体是人源化2H7，其包含在SEQ ID NO：8中具有变化N100A，或D56A和N100A，或D56A、N100Y和S100aR的重链可变区，和在SEQ ID NO：2中具有变化M32L，或S92A，或M32L和S92A的轻链可变区。
117.权利要求41-116任一项的方法，其中所述患者在施用所述抗体后六个月时具有BVAS/WG分数0。
118.权利要求41-117任一项的方法，其中所述患者具有水平升高的抗核抗体(ANA)、抗类风湿因子(RF)抗体、肌酐、血尿素氮、抗内皮抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、或其组合。
119.制品，其包括：
包含CD20抗体的容器；和
带有治疗患者抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎(ANCA相关血管炎)的说明的包装插页，其中所述说明指明为患者施用的抗体的量，所述抗体的量对于提供初始抗体暴露以及初始抗体暴露之后的第二次抗体暴露是有效的，其中第二次抗体暴露直到自初始暴露起约16至54周才提供。
120.权利要求119的制品，其中每次抗体暴露均作为单剂或者作为二或三分剂抗体提供给患者。
121.权利要求119或120的商品，其中初始和第二次抗体暴露均以O.5至4克的量提供。
122.权利要求119-121任一项的制品，进一步包括包含第二药剂的容器，其中CD20抗体是第一药剂，并且进一步在包装插页上包括用第二药剂治疗患者的说明。
123.权利要求122的制品，其中第二药剂是化疗剂、免疫抑制剂、细胞毒剂、整联蛋白拮抗剂、细胞因子拮抗剂、或激素。
124.权利要求123的制品，其中第二药剂是类固醇或免疫抑制剂或两者都有。
CNA2005800417165A 2004-10-05 2005-09-28 治疗血管炎的方法 Pending CN101087807A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US61610404P 2004-10-05 2004-10-05
US60/616,104 2004-10-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101087807A true CN101087807A (zh) 2007-12-12

Family

ID=36148785

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800417165A Pending CN101087807A (zh) 2004-10-05 2005-09-28 治疗血管炎的方法

Country Status (20)

Country Link
US (2) US20060110387A1 (zh)
EP (1) EP1812060A2 (zh)
JP (1) JP2008515890A (zh)
KR (1) KR20070100228A (zh)
CN (1) CN101087807A (zh)
AR (1) AR052219A1 (zh)
AU (1) AU2005294666A1 (zh)
BR (1) BRPI0516297A (zh)
CA (1) CA2580271A1 (zh)
GT (1) GT200500276A (zh)
IL (1) IL181922A0 (zh)
NO (1) NO20072312L (zh)
PA (1) PA8647601A1 (zh)
PE (1) PE20060934A1 (zh)
RU (1) RU2411956C2 (zh)
SG (1) SG165344A1 (zh)
SV (1) SV2006002256A (zh)
TW (1) TW200628169A (zh)
WO (1) WO2006041680A2 (zh)
ZA (2) ZA200702335B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105688208A (zh) * 2016-03-04 2016-06-22 刘文霞 一种用于治疗视网膜血管炎的复方颗粒及其制备方法
CN113226353A (zh) * 2018-12-20 2021-08-06 甘布罗伦迪亚股份公司 治疗与抗中性粒细胞胞质抗体相关的疾病的体外装置和方法
CN113509541A (zh) * 2014-06-26 2021-10-19 埃克西金炎症有限公司 Jnk信号转导途径的细胞穿透肽抑制剂用于治疗多种疾病的新用途

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1637160A3 (en) * 1999-05-07 2006-05-03 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to B cell surface markers
US20020058029A1 (en) * 2000-09-18 2002-05-16 Nabil Hanna Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using B cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
RS58420B1 (sr) * 2003-11-05 2019-04-30 Roche Glycart Ag Cd20 antitela sa povećanim afinitetom za vezivanje fc receptora i efektornom funkcijom
UA97469C2 (uk) 2005-07-25 2012-02-27 Емерджент Продакт Дівелопмент Сіетл, Елелсі Гуманізована специфічна до cd37 зв'язувальна молекула імуноглобуліну
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
WO2009018411A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to human cd20 and method of using thereof
NZ603059A (en) 2008-04-11 2014-07-25 Emergent Product Dev Seattle Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof
JPWO2010021385A1 (ja) * 2008-08-22 2012-01-26 持田製薬株式会社 Ａｎｃａ関連血管炎治療薬
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
MX2012002766A (es) 2009-09-03 2012-04-02 Genentech Inc Metodos para el tratamiento, diagnosis y monitoreo de artritis reumatoide.
AR078161A1 (es) * 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
EP2533810B1 (en) 2010-02-10 2016-10-12 ImmunoGen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
US9044479B2 (en) 2010-06-16 2015-06-02 Bruce Chandler May Use of levocetirizine and montelukast in the treatment of influenza, common cold and inflammation
CA2827859A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Genentech, Inc. Biological markers and methods for predicting response to b-cell antagonists
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
EP3308835B1 (en) 2013-03-13 2020-01-01 Inflammatory Response Research, Inc. Use of levocetirizine and montelukast in the treatment of traumatic injury
CN105263579B (zh) * 2013-03-13 2020-01-10 炎症反应研究公司 左西替利嗪和孟鲁司特在治疗血管炎中的用途
AU2014249456B2 (en) 2013-03-13 2018-08-09 IRR, Inc. Use of levocetirizine and montelukast in the treatment of autoimmune disorders
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
JP2017526728A (ja) 2014-09-15 2017-09-14 インフラマトリー・レスポンス・リサーチ・インコーポレイテッド 炎症介在性状態の治療におけるレボセチリジン及びモンテルカスト
PL3221359T3 (pl) 2014-11-17 2020-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sposoby leczenia nowotworów przy użyciu dwuswoistego przeciwciała CD3XCD20
WO2018071524A1 (en) * 2016-10-11 2018-04-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Gene-specific dna methylation changes predict relapse/remission in anca-associated vasculitis patients
WO2019157050A1 (en) * 2018-02-07 2019-08-15 Insmed Incorporated Certain (2s)-n-[(1s)-1-cyano-2-phenylethyl]-1,4-oxazepane-2-carboxamides for treating anca associated vasculitides
SG11202007498YA (en) * 2018-02-23 2020-09-29 Duke Univ & Medical Center Cultured thymus tissue transplantation promotes donor-specific tolerance to allogeneic solid organ transplants
US11819520B2 (en) 2018-02-23 2023-11-21 Duke University Cultured thymus tissue transplantation promotes donor-specific tolerance to allogeneic solid organ transplants
CA3110513A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4690905A (en) * 1983-11-16 1987-09-01 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Method for removal of human antibodies to native DNA from serum
US6893625B1 (en) * 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) * 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5506126A (en) * 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
US4861579A (en) * 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
IE922437A1 (en) * 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
US5565332A (en) * 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
DK1136556T3 (da) 1991-11-25 2005-10-03 Enzon Inc Fremgangsmåde til fremstilling af multivalente antigen-bindende proteiner
US5573905A (en) * 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
EP0752248B1 (en) * 1992-11-13 2000-09-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US7744877B2 (en) * 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
US5601855A (en) * 1993-08-12 1997-02-11 Schreiber Foods, Inc. Apparatus for producing shredded cheese
US5595721A (en) * 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
CA2195557C (en) * 1994-08-12 2006-10-17 Shui-On Leung Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
DE59609131D1 (de) 1995-07-21 2002-05-29 Siemens Ag Dachcontainer
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US20010056066A1 (en) * 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
PT939804E (pt) 1996-10-25 2005-11-30 Human Genome Sciences Inc Neutroquina alfa
AU5605398A (en) * 1996-12-11 1998-07-03 University Of Florida Novel methods and compositions for treatment of autoimmune diseases
WO1998027114A2 (en) 1996-12-17 1998-06-25 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US6306393B1 (en) * 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
CA2232743A1 (en) 1997-04-02 1998-10-02 Smithkline Beecham Corporation A tnf homologue, tl5
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ATE296315T1 (de) 1997-06-24 2005-06-15 Genentech Inc Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
WO1999002567A2 (en) * 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
WO1999012964A2 (en) 1997-09-12 1999-03-18 Biogen, Inc. Kay - a novel immune system protein
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
AU2093499A (en) 1997-12-30 1999-07-19 Chiron Corporation Members of tnf and tnfr families
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1068241B1 (en) 1998-04-02 2007-10-10 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
CN1689646A (zh) * 1998-08-11 2005-11-02 拜奥根Idec公司 包括施用抗－cd20抗体的b－细胞淋巴瘤联合疗法
US6224866B1 (en) * 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
CA2350064C (en) * 1998-11-09 2012-05-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Chimeric anti-cd20 antibody treatment of patients receiving bmt or pbsc transplants
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR100940380B1 (ko) 1999-01-15 2010-02-02 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6897044B1 (en) * 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6383276B1 (en) * 1999-03-12 2002-05-07 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
EP1637160A3 (en) * 1999-05-07 2006-05-03 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to B cell surface markers
US7074403B1 (en) * 1999-06-09 2006-07-11 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells
DE19930748C2 (de) * 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
WO2001013945A1 (en) * 1999-08-23 2001-03-01 Biocrystal Ltd. Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion of a disease condition comprising multiple sclerosis
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
CN1407901A (zh) * 1999-11-08 2003-04-02 Idec药物公司 使用抗cd40l抗体并联合抗cd20抗体和/或化疗剂和放疗治疗b细胞恶性瘤
US20020028178A1 (en) * 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
US20020006404A1 (en) * 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
US20020009427A1 (en) * 2000-03-24 2002-01-24 Wolin Maurice J. Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20030185796A1 (en) * 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
JP2004500412A (ja) * 2000-03-31 2004-01-08 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞リンパ腫の治療のための抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストおよび抗ｃｄ２０の併用
NZ521540A (en) * 2000-04-11 2004-09-24 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses therefor
US20020009444A1 (en) * 2000-04-25 2002-01-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
EP1299128A2 (en) * 2000-06-20 2003-04-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
DE60139689D1 (de) * 2000-06-22 2009-10-08 Univ Iowa Res Found Kombination von CpG und Antikörpern gegen CD19,CD20,CD22 oder CD40 zur Prävention oder Behandlung von Krebs.
US20020058029A1 (en) * 2000-09-18 2002-05-16 Nabil Hanna Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using B cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
IL156618A0 (en) * 2000-12-28 2004-01-04 Altus Biologics Inc Crystals of whole antibodies and fragments thereof, methods for the preparation thereof and diagnostic kits utilizing the same
US20030133939A1 (en) * 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030103971A1 (en) * 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
US20020197256A1 (en) * 2001-04-02 2002-12-26 Genentech, Inc. Combination therapy
CA2838062C (en) 2001-08-03 2015-12-22 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
JP3838890B2 (ja) * 2001-08-21 2006-10-25 Ｎｅｃエレクトロニクス株式会社 半導体集積回路とその設計方法
ATE443259T1 (de) * 2001-09-20 2009-10-15 Univ Texas Bestimmung der zirkulierenden therapeutischen antikörper, antigene sowie antigen-antikörper- komplexe mit elisa-tests
AU2002337935B2 (en) 2001-10-25 2008-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
EP1519959B1 (en) * 2002-02-14 2014-04-02 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
CN102911987B (zh) 2002-04-09 2015-09-30 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
JPWO2003084569A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
WO2003085118A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production de composition anticorps
US20030219818A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
US7166120B2 (en) 2002-07-12 2007-01-23 Ev3 Inc. Catheter with occluding cuff
US20050180972A1 (en) * 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
WO2004035607A2 (en) * 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
BRPI0316779B1 (pt) * 2002-12-16 2020-04-28 Genentech Inc anticorpo humanizado que liga cd20 humano, composição, artigo manufaturado, método de indução da apoptose, método de tratamento de câncer cd20 positivo, métodos de tratamento de doenças autoimunes, ácidos nucléicos isolados, vetores de expressão, células hospedeiras, método para a produção de um anticorpo 2h7 humanizado, polipeptídeo isolado, formulação líquida, método de tratamento de artrite reumatóide (ra) e anticorpos de ligação de cd20 humanizados
ES2322267T3 (es) * 2003-04-09 2009-06-18 Genentech, Inc. Terapia de una enfermedad autoinmunologica en un paciente que presenta una respuesta inadecuada a un inhibidor de tnf-alfa.
AR044388A1 (es) * 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
CA2532556A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-24 Genentech, Inc. Assay for human anti cd20 antibodies and uses therefor
US8147832B2 (en) * 2003-08-14 2012-04-03 Merck Patent Gmbh CD20-binding polypeptide compositions and methods
BRPI0412629A (pt) * 2003-08-29 2006-09-26 Genentech Inc método de tratamento de disfunção ocular em mamìferos
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
CA2542125A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of .alpha.1,6-fucosyltransferase
RS58420B1 (sr) * 2003-11-05 2019-04-30 Roche Glycart Ag Cd20 antitela sa povećanim afinitetom za vezivanje fc receptora i efektornom funkcijom
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
JP5254524B2 (ja) * 2004-11-17 2013-08-07 株式会社ナチュラレーザ・ワン 原稿圧着板自動開閉装置及びこの原稿圧着板自動開閉装置を備えた事務機器

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113509541A (zh) * 2014-06-26 2021-10-19 埃克西金炎症有限公司 Jnk信号转导途径的细胞穿透肽抑制剂用于治疗多种疾病的新用途
CN105688208A (zh) * 2016-03-04 2016-06-22 刘文霞 一种用于治疗视网膜血管炎的复方颗粒及其制备方法
CN113226353A (zh) * 2018-12-20 2021-08-06 甘布罗伦迪亚股份公司 治疗与抗中性粒细胞胞质抗体相关的疾病的体外装置和方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2008515890A (ja) 2008-05-15
EP1812060A2 (en) 2007-08-01
AR052219A1 (es) 2007-03-07
PA8647601A1 (es) 2007-01-17
PE20060934A1 (es) 2006-10-11
US20060110387A1 (en) 2006-05-25
TW200628169A (en) 2006-08-16
RU2411956C2 (ru) 2011-02-20
AU2005294666A1 (en) 2006-04-20
NO20072312L (no) 2007-07-05
IL181922A0 (en) 2008-04-13
WO2006041680A3 (en) 2007-08-23
US20070025987A1 (en) 2007-02-01
SV2006002256A (es) 2006-04-20
RU2007116980A (ru) 2008-11-20
SG165344A1 (en) 2010-10-28
KR20070100228A (ko) 2007-10-10
WO2006041680A2 (en) 2006-04-20
ZA200702335B (en) 2009-05-27
CA2580271A1 (en) 2006-04-20
BRPI0516297A (pt) 2008-09-02
GT200500276A (es) 2006-05-08
ZA200804339B (en) 2010-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101087807A (zh) 治疗血管炎的方法
CN102215868B (zh) 用于治疗进行性多发性硬化的方法
CN101027100A (zh) 治疗干燥综合征的方法
TWI433682B (zh) Cd20抗體於治療多發性硬化症之用途及用於該用途之物品
RU2358762C9 (ru) Лечение аутоиммунных заболеваний у пациента с неадекватным ответом на ингибитор tnf-альфа
US20070025988A1 (en) Method for Treating Lupus
JP2008501706A5 (zh)
US20070031331A1 (en) Treatment of Disorders
KR20070122543A (ko) 항-ｃｄ20 항체에 의한 염증성 장 질환 (ｉｂｄ)의 치료방법
CN103212070A (zh) 用于治疗关节损伤的方法
CN1980697A (zh) 通过使用抗cd20抗体预防自身免疫病
CN101809036A (zh) 奥瑞珠单抗(2h7)的固定的单次注射剂量
CN1917901A (zh) 自身免疫病疗法中cd20的检测
RU2489166C2 (ru) Применение антитела для лечения аутоиммунных заболеваний у пациента с неадекватным ответом на ингибитор tnf-альфа
CN1993142A (zh) 用于治疗狼疮的方法
CN101022829A (zh) 用抗cd20抗体治疗多软骨炎和多发性单神经炎
KR20070035555A (ko) 루푸스의 치료 방법
MX2007003857A (en) Method for treating vasculitis

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1107823

Country of ref document: HK

C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Open date: 20071212

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1107823

Country of ref document: HK