JP2004500412A - Ｂ細胞リンパ腫の治療のための抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストおよび抗ｃｄ２０の併用 - Google Patents

Abstract

本発明は、Ｂ細胞リンパ腫および白血病または非血液学的腫瘍を含む血液学的悪性腫瘍を治療するための併用治療法であって、抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを、Ｂ細胞の活性を不滅にする役割を果たすサイトカインの活性を阻害するために投与することを含む方法を開示する。このような抗体およびアンタゴニスト、特に抗ＩＬ１０抗体およびアンタゴニストの投与は、特に血液学的悪性腫瘍細胞または固形細胞の化学療法剤および抗ＣＤ２０または抗ＣＤ２２抗体に対する抵抗性を回避低下させるのに有用である。本発明はまた、Ｂ細胞が関与する固形腫瘍の併用治療であって、抗サイトカイン抗体およびリツキサン（登録商標）等のＢ細胞枯渇抗体を投与することを含む方法を提供する。

Description

【０００１】
（発明の分野）
本発明は、Ｂ細胞リンパ腫および白血病等の血液学的悪性病変を抗体およびアンタゴニスト等の抗サイトカイン剤によって治療する方法に関し、ここで標的とされるサイトカインは、Ｂリンパ腫細胞および白血病細胞を含めた血液学的悪性病変細胞を刺激することによって疾病過程において働きを高める作用を果たす。治療を抗サイトカイン剤と化学療法および治療抗体の投与等の他の既知の療法との併用で行うと、相乗効果が与えられることが見出されている。
【０００２】
本発明はまた、Ｂ細胞の関与を特徴とする腫瘍である固形非血液学的（非リンパ性）腫瘍、例えば、結腸直腸癌または肝臓癌を、サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストの投与をＢ細胞の標的、例えばＣＤ２０に対する抗体による治療と併用することによって治療することも包含する。
【０００３】
（発明の背景）
脊椎動物類（例えば、ヒト、類人猿、サル等を含む霊長類）の免疫系は、いくつかの器官および細胞からなり、これらは脊椎動物宿主に侵入した外来微生物（「抗原」）を正確かつ特異的に認識し、このような外来微生物と特異的に結合し、このような外来微生物を排除／破壊するように進化してきた。リンパ球は他の種の細胞と共に免疫系および外来微生物の排除および破壊にとっては重要である。リンパ球は、胸腺、脾臓および骨髄（成人）で産生され、ヒト（成人）の循環系に存在する全白血球細胞の約３０％に相当する。リンパ球には２つの主要な副集団、Ｔ細胞およびＢ細胞がある。Ｔ細胞は細胞性免疫に関与するが、Ｂ細胞は抗体生産（体液性免疫）に関与する。しかしながら、Ｔ細胞とＢ細胞は典型的な免疫応答においては相互依存していると考えることができる。すなわち、Ｔ細胞受容体が抗原提示細胞表面上の主要組織適合性複合体（「ＭＨＣ」）糖タンパクに結合する抗原のフラグメントに結合すると、Ｔ細胞が活性化され、このような活性化によって、本質的にはＢ細胞を刺激して分化させ、抗原に対する抗体（「イムノグロブリン」）を産生させる生物学的メディエイター（「インターロイキン」または「サイトカイン」）の分泌が引き起こされる。
【０００４】
宿主内のＢ細胞は各々その表面上に異なる抗体を発現する。つまり、このように１つのＢ細胞は１つの抗原に対して特異的な抗体を発現し、一方、別のＢ細胞は、別の抗原に対して特異的な抗体を発現する。したがって、Ｂ細胞は非常に多様であり、この多様性が免疫系にとっては重要なのである。ヒトにおいては、個々のＢ細胞は非常に多く（すなわち、約１０^７から１０^８）の抗体分子を産生することができる。このような抗体産生は、外来抗原が中和されると止まる（あるいは実質的に低下する）のがいちばん典型的である。しかし、ときには、特定のＢ細胞の増殖が引き続き衰えず、このような増殖が結果として「Ｂ細胞リンパ腫」と呼ばれる癌となる。
【０００５】
非ホジキンリンパ腫はＢリンパ球の悪性成長を特徴とするリンパ腫の１種である。米国癌学会によると、推定５４，０００例の新しい症例が診断され、そのうち６５％が中等度または高度のリンパ腫と分類される。中等度のリンパ腫と診断された患者は２から５年の平均生存率を有し、高度のリンパ腫と診断された患者は診断後平均６カ月から２年生存する。
【０００６】
従来の治療法には化学療法および放射線療法があり、適切なドナーがいる場合、または採集したときに骨髄が余りに多くの腫瘍細胞を含んでいる場合、自己あるいは同種型の骨髄または幹細胞移植を伴なうことは可能である。患者は従来の療法に応答することが多いが、通常は数カ月以内に再発する。
【０００７】
非ホジキンリンパ腫の治療の比較的新しいアプローチは、癌性Ｂ細胞の表面上のタンパク質に対するモノクローナル抗体で患者を治療するものである。この抗体はトキシンまたは放射線標識と結合させることができ、それによって結合後に細胞死を招く。あるいは、抗体が結合するとヒト抗体エフェクター機構が生成され、その結果アポトーシスまたは細胞死をおこすように、抗体をヒト定常領域で操作してもよい。
【０００８】
リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）、ＩＤＥＣファーマシューテイカルズ・コーポレーション）は、Ｂ細胞リンパ腫および特に非ホジキンリンパ腫の治療のために開発された新世代のモノクローナル抗体の１つである。リツキシマブ（登録商標）は、ネズミの軽鎖および重鎖の可変領域およびヒトガンマのＩ重鎖およびカッパ軽鎖定常領域を有す遺伝子工学で創出された抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。リツキシマブ（登録商標）は、ネズミの親物質よりも効果的に補体を修復し、またＡＤＣＣを媒介し、またリツキシマブ（登録商標）はヒト補体の存在下でＣＤＣを媒介する。この抗体はＢ細胞系ＦＬ−１８、ラモス（Ｒａｍｏｓ）、ラジ（Ｒａｊｉ）の細胞成長を阻害し、化学耐性のヒトリンパ細胞系をジフテリア毒、リシン（ｒｉｃｉｎ）、ＣＤＤＰ、ドキソルビシンおよびエトポサイド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）に対して感作し、ＤＨＬ−４ヒトＢ細胞リンパ腫系で用量依存的にアポトーシスを引き起こす。
【０００９】
しかしながら、多くの患者は、化学療法と同様、リツキシマブ（登録商標）治療後に治療抵抗性を示したり、再発する。したがって、リンパ腫患者において寛解の可能性を高め、再発率を低下させるために、リツキシマブ（登録商標）治療または化学療法と併用することができるリンパ腫治療の必要性がまだ残されている。
【００１０】
多くのグループが様々なタイプの癌の治療にサイトカインを使用することを提案してきた。例えば、ワン（Ｗａｎｇ）らは、サイトカインが「腫瘍細胞に対して直接的に細胞毒性」を示すことを示唆し、インターロイキン−１アルファ（ＩＬ１α）がｉｎ　ｖｉｔｒｏで数種のヒト腫瘍細胞に対する抗腫瘍薬の抗腫瘍効果を強化することを示した（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（Ｎｏｖ．２７、１９９６）６８（５）：５８３−５８７）。ボンビダ（Ｂｏｎｖｉｄａ）らは、サイトカインが、「化学療法剤の有効性を高める」可能性を有すことを開示しており、また組換え腫瘍壊死因子と化学療法剤シスプラチンが卵巣癌細胞に対して相乗効果を呈することを示している（Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．（Ｓｅｐｔ．１９９０）３８（３）：３３３−３３９）。米国特許第５，７１６，６１２号はＩＬ−４が癌の治療において化学療法剤の効果を高めるために使用できることを教示している。
【００１１】
しかしながら、いくつかのグループはまた、サイトカインがいくつかの癌の進行を妨害する役割を果たし得ることを確認している。例えば、インターロイキン−６（ＩＬ６）は、いくつかの事例において、白血病細胞のアポトーシスを阻害する能力があることが知られている（Ｙｏｎｉｓｈ−Ｒｏｕａｃｈら、「野性型ｐ５３は脊髄性白血病細胞のアポトーシスを誘発し、またインターロイキン−６によって阻害される」Ｎａｔｕｒｅ　３５２：３４５−３４７（１９９１）参照）。近年、ＩＬ６が抗癌化学療法剤に対するいくつかの白血病細胞が耐性を示すことに役割を果たし得ること、およびｉｎ　ｖｉｔｒｏで、抗ＩＬ６抗体がシスプラチン耐性のＫ５６２細胞のシスプラチンで誘導されるアポトーシスに対する感受性を高めることが示された（Ｄｅｄｏｕｓｓｉｓら「内在性インターロイキン６は、ジアミンジクロロプラチナに媒介されるＫ５６２ヒト白血病細胞系のアポトーシスに対する耐性を与える」参照）。
【００１２】
Ｂ細胞に対する増強効果は、その生成がＢ細胞リンパ腫に由来するある細胞系でアップレギュレートされることが報告されているＩＬ１０についても当然あるとみなされている（Ｃｏｒｔｅｓら、「非ホジキンリンパ腫におけるインターロイキン−１０」、Ｌｅｕｋ　Ｌｙｍｐｈｏｍａ　２６（３−４）：２５１−２５９（Ｊｕｌｙ、１９９７）参照）。しかしながらＮＨＬ患者の血清をＩＬ１０レベルと予後との間に相関性があるかについてテストしたところ、同種のオープン・リーディング・フレームＢＣＦＲ１から生成され、エプシュタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）のゲノムに位置するウイルスのＩＬ１０レベルに、より有意性が見られた。事実、別のグループが、ほぼ同時期に、ＩＬ１０がＥＢＶが感染したリンパ腫細胞の自己分泌成長因子であると報告した（Ｂｅａｔｔｙら、「ＥＢＶで形質転換されたＢ細胞系の自己増殖におけるＩＬ１０関与」、Ｊ．Ｉｍｍｏｎｏｌ．１５８（９）：４０４５−５１（Ｍａｙ　１、１９９７）参照）。一方、他のグループは、マクロファージによるＩＬ６およびＩＬ１０の生成はリンパ球性疾病の発症に重要な役割を果たすのではないかと仮定している（米国特許第５，６３９，６００号参照）。
【００１３】
ＩＬ１０がＩＬ６、ＩＬ２およびＴＮＦ−アルファと組合せで作用し、非ホジキンリンパ腫細胞の増殖を高めることができるとの報告もなされている（Ｖｏｏｒｚａｎｇｅｒら、「インターロイキン−（ＩＬ）１０およびＩＬ６が非ホジキンリンパ腫細胞によってｉｎ　ｖｉｖｏで産生され、協同的な成長因子として作用する」Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、５６（２３）：５４９９−５０５（Ｄｅｃ．１、１９９６）参照）。また、対照群と比較すると統計学的に有意に高いレべルのＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、溶解性ＩＬ２受容体、溶解性トランスフェリン受容体およびネオプテリンがＮＨＬ患者で観察されたが、予後に重要な単一パラメータは見つからなかった（Ｓｔａｓｉら、「新たに非ホジキンリンパ腫と診断された患者におけるサイトカインおよび溶解性受容体の測定の臨床的含意」Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍｏｔｏｌ．５４（１）：９−１７（Ｊａｎ．１９９５）参照）。
【００１４】
しかしながら、ＩＬ１０等のサイトカインは疾病の進行との相関は示さず、またこのようなサイトカインは現実に疾病に貢献するというよりむしろリンパ腫の治療に有用となり得ることを示唆する文献が実際多く報告されている。例えば、Ｂｏｎｎｅｆｏｉｘらが１０種のサイトカイン（ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＩＬ１３、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン・アルファ、およびインターフェロン・ガンマ）の、様々な組織学的サブタイプの非ホジキンＢリンパ腫細胞の自然発生的増殖反応を調整する可能性をテストしたとき、各サイトカインがサンプルに依存して阻害的に働くかあるいは促進的に働くかのいずれかであり得ること、および組織学的に異なるサブタイプ間には何の関係もないことを発見した。事実、本明細書に引用によって掲載されている米国特許第５，７７０，１９０号は、急性白血病の治療法としてＩＬ１０の投与を化学療法剤と併用することを示唆している。
【００１５】
抗サイトカイン抗体を取り入れた治療レジメン（ｒｅｇｉｍｅｎ）を考案し、それによって、このような抗体が他種治療薬に対するＢリンパ腫細胞の感受性を高めることが可能ならばリンパ腫患者には有益となろう。リンパ腫患者において化学療法剤に対するＢリンパ腫細胞の耐性を回避するかまたは解消する目的で、また治療抗体のアポトーシス活性を強化する目的で抗サイトカイン抗体が投与されることが可能であれば、特に有用となろう。このような併用療法がリンパ腫患者に利用可能な治療法に加えられて、これら患者において再発率を減らす可能性がある。
【００１６】
（発明の目的）
本発明の目的は、血液学的悪性細胞または固形非血液学的腫瘍細胞の、少なくとも１つの化学療法剤に対する耐性を回避、低下または解消する方法であって、血液学的悪性腫瘍と診断された患者に対して、少なくとも１つの化学療法剤の投与前、投与時、または投与後に抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを投与することを含む方法を提供することである。
【００１７】
本発明のより具体的な目的は、血液学的悪性腫瘍細胞の、治療剤によって誘発されるアポトーシスに対する耐性を回避、低下、または解消する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを血液学的悪性腫瘍と診断された患者に対して投与することを含む方法を提供することである。
【００１８】
本発明のもう１つの目的は、化学療法後再発した血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを該患者に投与することを含む方法を提供することである。
【００１９】
本発明のもう１つの目的は、化学療法に対して治療抵抗性である血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを該患者に投与することを含む方法を提供することである。
【００２０】
本発明のさらにもう１つの目的は、治療抗体による治療の後再発した血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを該患者に投与することを含む方法を提供することである。
【００２１】
本発明のさらにもう１つの目的は、治療抗体による治療に対して治療抵抗性である血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを該患者に投与することを含む方法を提供することである。
【００２２】
本発明のもう１つの目的は、Ｂ細胞リンパ腫患者を治療する方法であって、該患者に対して治療上有効量の抗ＣＤ２０抗体を抗サイトカイン抗体と同時にまたは連続してどちらかの順番で投与することを含む方法を提供することである。
【００２３】
本発明のもう１つの目的は、固形非血液学的（非リンパ）腫瘍を治療する方法であって、Ｂ細胞が抗サイトカイン抗体、例えば抗ＩＬ１０抗体、および少なくとも１つのＢ細胞枯渇抗体（Ｂ　ｃｅｌｌ　ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）、例えば抗ＣＤ２０抗体を投与することによって前腫瘍反応を誘発することを含む方法を提供することである。
【００２４】
本発明のさらに具体的な目的は、消化器系に関与する固形非リンパ腫瘍、殊に結腸直腸癌または肝臓癌を、抗サイトカイン抗体、好ましくは抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗体、特に枯渇抗ＣＤ２０抗体（ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ　ａｎｔｉ−ＣＤ２０　ａｎｔｉｂｏｄｙ）を投与することによって治療する方法を提供することである。
【００２５】
（発明の概要）
第１の態様において、本発明は、抗サイトカイン抗体およびサイトカインアンタゴニスト、特にＩＬ１０に対する抗体を、化学療法薬および／または治療抗体と併用投与して、血液学的悪性腫瘍（Ｂ細胞リンパ腫および白血病等）または固形非血液学的腫瘍（乳癌、卵巣癌、精巣癌他等）を有する患者の応答率を高め、および応答期間を延長することに関する。したがって、本発明は血液学的悪性腫瘍（Ｂ細胞リンパ腫または白血病等）を有する患者に対して、Ｂ細胞受容体に対する抗体および特定のサイトカインの作用を妨害する抗体またはアンタゴニストを投与することによって、血液学的悪性腫瘍（Ｂ細胞リンパ腫または白血病等）を治療する方法に関する。特に、本発明は、Ｂリンパ腫細胞のアポトーシスを開始するＢ細胞マーカーに対する抗体（抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ４０、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ３７、および後で特定するもの等）、およびアポトーシスを妨害し得るサイトカインに対する抗体またはアンタゴニスト（例えば抗ＩＬ１０）の投与に関する。抗サイトカイン療法（すなわち化学療法）からの恩恵をも受けるであろう他の治療法を含めた併用療法もまた包含される。これらの方法は、化学療法剤および治療抗体に対して耐性となった細胞によって特徴付けられる血液学的悪性腫瘍（Ｂリンパ腫または白血病等）を有する患者を治療するために特に使用される。
【００２６】
第２の態様において、本発明は、サイトカイン（例えばＩＬ１０）に対する抗体の投与を、Ｂ細胞に特異的な抗体療法、特にＢ細胞枯渇抗体および好ましくはＣＤ２０抗体療法と組み合わせて、場合によっては、放射線療法または化学療法と組み合わせて投与することによって、Ｂ細胞が関与する、ただしＢ細胞起源ではない固形非血液学的（非リンパ系）腫瘍、特にＢ細胞が前腫瘍応答（ｐｒｏ−ｔｕｍｏｒ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を誘発する癌を治療する新規な方法を提供する。このような固形腫瘍の例には、結腸直腸癌、肝臓癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、胃癌、頭頚部癌、卵巣癌、精巣癌、食道癌等がある。好ましい化学療法については後述する。これらの癌は前癌、病期Ｉおよび病期ＩＩの癌、および進行癌、例えば、病期ＩＩ以降および転移した固形腫瘍を含み得る。
【００２７】
（発明の詳細な説明）
第１の態様において、本発明は、少なくとも１つの化学療法剤に対する血液学的悪性腫瘍細胞（例えばＢリンパ腫細胞および白血病細胞を含む）の耐性を回避、低下または解消する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストをＢ細胞リンパ腫と診断された患者に投与することを含む方法を包含する。
【００２８】
多くの場合、血液学的悪性腫瘍患者のＢ細胞によるこのような耐性は、１つまたは複数のサイトカインが、腫瘍形成性Ｂ細胞を、細胞がアポトーシス信号に反応しないように刺激することによって媒介される。このような場合、本発明の方法は、このような腫瘍形成性Ｂ細胞のアポトーシスに対する耐性を回避、低下または解消する方法であると記載し得る化学療法剤がアポトーシスを誘発する薬剤の例として挙げられる。また包含されるのは、Ｂ細胞の表面上の標的に向けられた治療抗体（抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ４０および抗ＣＤ２８等）および後で特定される他のＢ細胞目標物に向けられた治療抗体である。
【００２９】
患者が治療剤によって最初に治療を受けた後再発を起した後、または治療抵抗性を示した後に、Ｂ細胞の耐性が単に明らかになることが往々にしてあるため、本発明の方法は、化学療法または治療抗体による治療の後再発を起こしたりまたは治療抵抗性である血液学的悪性腫瘍（Ｂ細胞リンパ腫または白血病等）を有する患者を治療することを多くの場合包含することになる。しかしながら、本発明の抗サイトカイン抗体およびアンタゴニストはまた、新たにリンパ腫と診断された患者において、他の治療と併用してまたは他の治療の前に使用されて、再発率を減らしたり、また治療に対する応答期間の長さを延ばし得る。
【００３０】
本発明の方法は、多種多様の血液学的悪性腫瘍（殊にはＢ細胞リンパ腫および白血病であって、軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽性ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病（ｂｕｌｋｙ　ｄｉｓｅａｓｅ）ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ　Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）；慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球白血病、リンパ球性白血病、単核球性白血病、骨髄性白血病、および前骨髄球白血病を含むがこれらに限定されない）を治療するのに適切である。これらのリンパ腫が分類系の変更によってしばしば異なる名前を有することになること、および異なる名前の下で分類されたリンパ腫および白血病を有する患者も本発明の併用治療レジメンから恩恵を得ることは当業者には明らかであるはずである。
【００３１】
例えば、ヨーロッパおよびアメリカ病理学者によって提唱された近年のシステムは、改定欧米リンパ腫（ＲＥＡＬ）分類と呼ばれる。この分類システムでは、他の末梢Ｂ細胞新生物の中でも外套細胞リンパ腫および辺縁細胞リンパ腫を認めて、いくつかの分類項目を細胞学（すなわち小細胞、混合小および大細胞、大細胞）に基づく等級に選別している。このように分類されたすべてのリンパ腫が本発明の併用治療法から恩恵を受けるであろうことが理解されることであろう。
【００３２】
米国国立癌研究所（ＮＣＩ）は、次にＲＥＡＬクラスのいくつかをより臨床的に有用な「不活性」または「急速進行性」リンパ腫という呼称に分けている。不活性リンパ腫には、濾胞細胞リンパ腫が含まれ、細胞学的等級である、散在性小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、リンパ腫形質細胞増加症／ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、辺縁層リンパ腫およびヘアリーセルリンパ腫に分類されている。急速進行性リンパ腫には、散在性混合大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫／散在性小非分割細胞リンパ腫、リンパ芽リンパ腫、外套細胞リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫が含まれる。必要とされるすべてのことは、前記抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与した結果、治療に対する応答性の程度または応答期間が延ばされることである。これらの方法は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する患者を治療するために使用されることが最も好ましいが、ここで本発明者らは驚くべきことに抗サイトカイン抗体およびアンタゴニストの投与が相乗効果を有することを発見した。このようなサイトカインの効果および有害なサイトカインの特定は、個々の患者、個々のリンパ腫間で異なってもよいし、Ｂリンパ腫細胞の耐性に対する種々のサイトカインの影響は、個々の化学療法および免疫療法剤で異なってもよいので、個々の患者における各サイトカインのレベルは、抗サイトカイン治療を患者に施す前にテストすることが示唆される。
【００３３】
第２の態様において、本発明は、Ｂ細胞がタンパク質応答（腫瘍成長および／または転移を促進する）を誘発する固形非血液学的腫瘍を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＬ１０抗体）およびＢ細胞標的に対する抗体（好ましくはＢ細胞枯渇活性を有する抗ＣＤ２０抗体）を投与することを含む方法を提供する。しかしながら、本発明は後に特定される他のＢ細胞標的に対する抗体の使用を包含するものである。また、この態様はさらに化学療法および／または放射線療法の追加的使用を包含する。
【００３４】
様々な化学療法剤が異なるタイプの癌の治療に適用されてきており、本発明の方法は、少なくとも１つ、しかしできれば数種のこれら化学療法剤に対する悪性腫瘍（例えばリンパ腫）細胞の耐性を回避、低下または解消することになる。特に、補助抗サイトカイン療法によって恩恵を得るであろう化学療法には、ＣＨＯＰ、ＩＣＥ、ミトザントロン、シタラビン、ＤＶＰ、ＡＴＲＡ、イダルビシン、へルザー（ｈｏｅｌｚｅｒ）化学療法レジメン、ララ化学療法レジメン、ＡＢＶＤ、ＣＥＯＰ、２−ＣｄＡ、ＦＬＡＧ＆ＩＤＡ（続いてＧ−ＣＳＦ治療を施しても施さなくても可）、ＶＡＤ、Ｍ＆Ｐ、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ、ＡＢＣＭ、ＭＯＰＰ、ＤＨＡＰ、メトトレキサート、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、およびシスプラチンが含まれるが、これらには限定されない。他の化学療法剤は後の好ましい実施の形態に関連した項中で特定されている。
【００３５】
種々のサイトカインが、白血病およびリンパ腫疾病含めた血液学的または非血液学的悪性腫瘍において、単独または他のサイトカインと協同して有害な刺激的役割を果たしている可能性がある。このように、患者あるいは疾病によっては、複数の抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストが、補助的治療法として特定の患者を利することがあり得る。そのようなサイトカインには、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１０およびＴＮＦ−アルファがあるがこれらに限定されない。他の適切なサイトカインが以下の好ましい実施の形態中で特定されている。非ホジキンリンパ腫については、好ましい抗サイトカイン療法に抗ＩＬ１０療法が含まれる。
【００３６】
現況技術では数個の抗ＩＬ−１０抗体が知られており、本発明の目的のために使用し得る。米国特許第５，８７１，７２５号には１９Ｆ１と命名されたラットの抗ヒト抗体が記載されている。別の抗ＩＬ１０抗体であるアルファ−ＩＬ１０は米国特許第５，８３７，２９３号に記載されている。抗ＩＬ１０抗体はまた、Ｔｉｍ　Ｒ．Ｍｏｓｍａｎｎら「固相ラジオ免疫吸着法使用によるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６および新Ｔｈ２特異的サイトカイン（ＩＬ−１０）に特異的なモノクローナル抗体、すなわち、サイトカイン合成阻害因子の単離」、（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４５（９）：２９３８−２９４５、Ｎｏｖ．１、１９９０）にも記載されている。アンタゴニストは受容体結合について競合するタンパク質の形態を取り、例えば、アンタゴニストは受容体活性化能に欠ける一方、ＩＬ−１０結合またはＩＬ−１０結合分子（抗体等）を阻止する。または用語「抗体」は抗体全部のみならず抗体フラグメント（すなわち、Ｆａｂ、Ｆａｂ_２、Ｆｖフラグメント）も含むものと理解すべきである。抗体は別の動物をヒトＩＬ−１０で免疫化することによって単離し得るが、その後、その免疫性を低下させるために現況技術で知られている方法を使用して一旦、抗体をヒト患者に投与してヒト化してもよい。
【００３７】
抗サイトカイン抗体の適切な投与量は、標的とされるサイトカイン、個々の患者の事前血清プロフィールの結果、治療されるリンパ腫のタイプおよび疾病の段階に依存する。新たに診断された軽度の非ホジキンリンパ腫の治療における抗ＩＬ１０抗体については、好ましい投与量は０．００１ｍｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約０．１から１００ｍｇ／ｋｇ、最も典型的には、約０．４から２０ｍｇ／体重ｋｇであり、抗体が他の治療剤と同時に投与されるかまたは前もって投与されるかに依存している。好ましくは、抗サイトカイン抗体は化学療法剤または他の療法と同時または前もって投与され、典型的には、約１時間から約１カ月、好ましくは１日から７日、化学療法剤または他の作用剤の投与より前に投与される。
【００３８】
また、本発明において包含されるのは、開示した方法を達成するためのキットである。本発明によるキットは、薬剤として許容される担体と簡単に混合されるかまたは再懸濁され、簡単にリンパ腫患者に注入し得る少なくとも１つの抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを含む。前記抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストの投与前にリンパ腫患者の血清を、好ましくはサイトカインプロフィールについてテストする場合、キットはまたあるいは代替として、患者の血清中の様々なサイトカイン個々の量をテストするための試薬および材料を含んでいてもよい。
【００３９】
また本発明に包含されるのは、血液学的悪性腫瘍（Ｂ細胞リンパ腫および白血病等）を治療する併用治療法であって、血液学的悪性腫瘍を有する患者に治療上有効量の治療抗体を、抗サイトカイン抗体と同時にまたは連続していずれかの順番で投与することを含む方法である。治療抗体は血液学的悪性腫瘍細胞（例えば、腫瘍形成性Ｂ細胞）の表面上の受容体に結合する抗体であって、抗体がすなわち抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ３７および後に特定する他のＢ細胞標的と結合すると、抗体の破壊または消耗を媒介するものと定義される。本発明の抗サイトカイン剤は単独で、サイトカインに媒介される腫瘍形成性Ｂ細胞の増殖を阻害するという有益な効果を有するが、治療抗体の投与と抗サイトカイン剤とを併用投与すると応答期間および／または応答の程度が独立して適用した両方の治療の相加効果よりも良くなるという相乗効果を有する。
【００４０】
次の理論に固執する気はないが、本発明者らは本発明の抗サイトカイン剤を併用投与することによって見られる相乗効果が、アポトーシスを阻害する効果を通常は有する目標となるサイトカインを阻害することに関与していると確信している。したがって、本発明の抗サイトカイン剤をアポトーシスを誘導することによって作用する剤（例えば、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ２３、または抗ＣＤ４０抗体）と併用すると、併用投与は、それぞれの剤の単独添加効果を超える良好な相乗効果を示す。
【００４１】
にもかかわらず、これによって有効性がアポトーシスを通して促進されるのではない別の抗体または治療抗体との併用治療において本発明の抗サイトカイン抗体およびアンタゴニストの使用が除外されるものではない。例えば、放射線標識された抗体は、Ｂ細胞表面に結合し致死量の放射線を与えることによって腫瘍細胞の破壊を促進する。このような抗体ならびに毒素と結合された抗体もまた本発明の抗サイトカイン剤と組み合わせて使用され得る。好ましい放射線標識された抗体は、イットリウム−［９０］（^９０Ｙ）で標識されたものである。特に好ましい放射線標識された抗体は、ゼベリン（ＩＤＥＣファーマシューテイカルズ株式会社）であって、これは^９０Ｙに結合された抗ＣＤ２０抗体である。
【００４２】
本発明の併用治療法はさらに、少なくとも１つの化学療法剤または化学療法を施すことを含むものであって、このような化学療法には、例えば、ＣＨＯＰ、ＩＣＥ、ミトザントロン、シタラビン、ＤＶＰ、ＡＴＲＡ、イダルビシン、ヘルザー化学療法レジメン、ララ化学療法レジメン、ＡＢＶＤ、ＣＥＯＰ、２−ＣｄＡ、ＦＬＡＧ＆ＩＤＡ（続いてＧ−ＣＳＦ治療を施しても施さなくても可）、ＶＡＤ、Ｍ＆Ｐ、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ、ＡＢＣＭ、ＭＯＰＰ、ＤＨＡＰ、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、メトトレキサートならびに後に特定されているその他の化学療法剤がある。非ホジキンリンパ腫患者の治療として好ましい化学療法レジメンは、ＣＨＯＰである。抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストは、好ましくはＢ細胞標的抗体（例えば抗ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１９またはＣＤ４０）および／または化学療法の前に投与され、したがって、サイトカインを標的とした結果としてＢ細胞治療法を施す前にＢリンパ腫細胞の増殖が沈静化される。上記に記載されたように、標的のサイトカインは、中でもＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１０またはＴＮＦ−アルファがあげられ、治療の前の患者のサイトカイン・プロフィールに依存する。しかし目標とされるサイトカインはＩＬ１０であることが好ましい。
【００４３】
上記に述べたように、本発明の治療抗体はＢ細胞の表面上で発現される分子を標的とするどんな抗体でもよいが、特にＢ細胞枯渇活性を有するものがよい。適切なＢ細胞標的の一覧表が後に明記されている。
【００４４】
患者および疾病の程度に依存して、抗Ｂ細胞標的結合抗体（例えばリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標））が０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１から５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約０．４から２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲の投与量で投与され得る。抗サイトカイン剤を含む併用治療レジメンにおいて有効投与量は少なくなり得る。というのはＢリンパ腫細胞の増殖可能性が減少されるからである。また、有効投与量は選択された抗サイトカイン療法および患者の血清のサイトカインの個々の増強レベルに依存することになる。
【００４５】
本発明の併用治療法はまた広範のリンパ腫を治療するのにふさわしく、リンパ腫には軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症、慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球白血病、リンパ球性白血病、単核球性白血病、骨髄性白血病、前骨髄球白血病があるがこれらに限定されない。好ましい標的疾病は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、特に軽度濾胞ＮＨＬである。また、抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストの投与の前に、リンパ腫患者の血清をサイトカインのプロフィールについてテストすることは有用であろう。
【００４６】
既に論じたように、本明細書に提供された併用治療法、特に抗サイトカイン抗体（たとえば抗ＩＬ１０）および抗Ｂ細胞標的抗体（例えば抗ＣＤ２０）の併用使用もまた固形非血液学的（非リンパ）癌を治療するのに有用である。固形非血液学的（非リンパ）癌には、例えば、結腸直腸癌、肝臓癌、および他の消火器系癌、乳癌、食道癌、頭頚部癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、および精巣癌が含まれる。これらの癌は初期、中期または進行（たとえば転移）段階にあってもよい。
【００４７】
本発明はまた、開示された方法による治療抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与するキットも包含する。キットは１種以上の治療抗体および１つ以上の抗サイトカイン剤を含んでいてもよい。キットはまた治療抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与する前にサイトカインプロフィールをテストする試薬および材料を含んでいてもよい。
【００４８】
注記したように、本発明はさらに、抗サイトカイン抗体（例えば抗ＩＬ１０抗体）およびＢ細胞特異的抗体、好ましくは実質的にＢ細胞枯渇活性を有する抗体（リツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））等）を投与することによって固形非リンパ腫を治療することを包含する。いくつかの固形腫瘍は明らかにＢ細胞が関与していると報告されている。すなわち、Ｂ細胞は腫瘍形成状態を促進または維持することに幾分関与し、このような腫瘍に対する体の免疫防御システムを妨害しているようだ。これに関し、本明細書に引用されて組み込まれているＷＯ０２０８６４Ａ１（バイオクリスタル（Ｂｉｏｃｒｙｓｔａｌ　Ｉｎｃ．）が出願人であると明記）は、Ｂ細胞を標的とする抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））を使用した固形非リンパ系腫瘍の治療を記載している。この治療が進行性結腸直腸癌、肺癌および肝臓癌を有する患者においてさえも著しい抗腫瘍応答性を示すと報告されている。
【００４９】
対照的に本発明は、改良された併用治療を提供するものであって、固形非リンパ系腫瘍が抗サイトカイン抗体（抗ＩＬ１０等）およびＢ細胞枯渇抗体（抗ＣＤ２０抗体の使用によって治療されるものである。
【００５０】
この併用レジメンは固形腫瘍、特にＢ細胞が関与するがそれ自体は癌性細胞ではない腫瘍を治療する改良法を提供することになる。このレジメンではサイトカインアンタゴニスト（例えば抗サイトカイン抗体）およびＢ細胞枯渇抗体（例えばＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）は別々にまたは共に、どういう順番でも投与される。
【００５１】
加えて、このレジメンには、放射線治療（例えば外からのビーム照射、体全体の照射）、放射免疫療法または化学療法が含まれる。適切な化学療法は後に特定される。放射免疫療法は、固形腫瘍によって発現される標的に結合する放射性同位元素標識された抗体による治療を含む。
【００５２】
典型的には、抗サイトカイン抗体はＢ細胞枯渇抗体の前に投与される。この併用療法はＢ細胞が関与しているいかなる固形腫瘍の治療にも適すると期待されている。適切な固形腫瘍の例は先に明記されている。１つ注意に値する例は、結腸直腸癌である。
【００５３】
本実施の形態において、Ｂ細胞枯渇抗体およびサイトカインは、固形腫瘍部位に行き渡るように投与される。抗体は腫瘍部位の近くまたは直接腫瘍部位に、例えば腫瘍近辺の静脈に注射で注入されることが好ましい。
【００５４】
本併合レジメンでは、固形腫瘍（例えば肺腫瘍または結腸直腸腫瘍）が結果として寛解または縮小する。
【００５５】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
好ましい実施の形態および本発明の全範囲をさらに述べるために、下記の定義を行う。
【００５６】
Ｉ．定義
「サイトカインアンタゴニスト」は、サイトカイン（例えばインターロイキンまたはインターフェロン）または別のサイトカインの発現および／または活性を阻害または阻止する化合物である。
【００５７】
本明細書の「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞標的」あるいは「Ｂ細胞抗原」はＢ細胞の表面で発現される抗原であって、そこに結合するアンタゴニストの標的となり得る抗原である。Ｂ細胞表面マーカーの例には、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８　ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる。特に興味あるＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比べてＢ細胞上で優先的に発現されるものであって、Ｂ細胞前駆体および成熟Ｂ細胞の両方で発現されるものである。１つの実施形態では、マーカーは、ＣＤ２０またはＣＤ１９のように、幹細胞段階から形質細胞への最終分化の直前の時点までの系統分化の全体にわたってＢ細胞上で見られるものである。本明細書における好ましいＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９およびＣＤ２０である。
【００５８】
「ＣＤ２０」抗原は、３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質で、末梢血液またはリンパ系器官由来のＢ細胞の９０％以上の表面に見られる。ＣＤ２０は初期の前Ｂ細胞発生期間中に発現され形質細胞分化まで残っている。ＣＤ２０は通常のＢ細胞のみならず悪性Ｂ細胞の両方の上に存在している。文献にあるＣＤ２０の別名には、「Ｂリンパ球に制約される抗原」および「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原は、例えば、Ｃｌａｒｋら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：１７６６（１９８５）に記載されている。「ＣＤ１９」抗原は、９０ｋＤａ抗原であって、例えば、ＨＤ２３７−ＣＤ１９または１３４抗体によって特定される（Ｋｉｅｓｅｌら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１１、１２：１１１９（１９８７））。ＣＤ２０のように、ＣＤ１９は幹細胞段階から形質細胞への最終分化の直前の時点までの系統分化の全体にわたって細胞上に認められる。アンタゴニストがＣＤ１９に結合することによってＣＤ１９抗原の嵌入がひき起こされ得る。
【００５９】
「血液学的悪性病変」には、血流中の細胞に随伴するいかなる悪性病変も含まれる。その例として、ＢおよびＴ細胞リンパ腫、白血病であって、これには、軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽性ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症；慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球白血病、リンパ球性白血病、単核球性白血病、骨髄性白血病、および前骨髄球白血病が含まれるが、これらに限定されない。これらのリンパ腫が分類系（先に記載）の変更によってしばしば異なる名前を有することになること、および異なる名前の下で分類されたリンパ腫および白血病を有する患者も本発明の併用治療レジメンから恩恵を得ることができることは当業者には明らかであるはずである。
【００６０】
固形、非血液学的（非リンパ）腫瘍は、Ｂ細胞が関与する（つまりＢ細胞が前腫瘍応答にかかわる）非血液学的悪性腫瘍のことをいう。このような固形腫瘍は触診可能な、典型的には少なくとも直径０．５ｍｍ、より典型的には、少なくとも直径１．０ｍｍの腫瘍であると特徴付けられる。その例としては、結腸直腸癌、肝臓癌、乳癌、肺癌、頭頚部癌、胃癌、精巣癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮癌他が含まれる。これらの癌は、初期段階（前癌）、中期段階（段階ＩおよびＩＩ）または進行段階（たとえば転移した固形癌）にあってもよい。これらの固形癌はＢ細胞が前癌応答を誘発している癌であること、すなわち、Ｂ細胞の存在が腫瘍の進行、維持、または転移にかかわっていることが好ましい。
【００６１】
Ｂ細胞「アンタゴニスト」は、哺乳動物中でＢ細胞表面マーカーに結合するや否やＢ細胞を破壊または枯渇させるかおよび／または、１つまたは複数のＢ細胞機能を、例えばＢ細胞によって誘発される体液性応答を減少させるかまたは防ぐことによって、妨害する分子である。アンタゴニストは、アンタゴニストによって処理された哺乳動物中でＢ細胞を枯渇させる（すなわち、循環しているＢ細胞のレベルを下げる）ことができることが好ましい。このような枯渇は、例えば、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖阻害および／または（例えばアポトーシス経由で）Ｂ細胞死の誘導といった様々なメカニズムを通して達成し得る。本発明の範疇に含まれるアンタゴニストには、Ｂ細胞マーカーに結合し、場合によっては細胞毒性剤と結合されるかまたは融合される抗体、合成または自然配列のペプチドおよび小分子アンタゴニストが含まれる。好ましいアゴニストは抗体で、より好ましくはＢ細胞枯渇抗体である。
【００６２】
「抗体依存性細胞媒介細胞毒性」および「ＡＤＣＣ」は、細胞に媒介される反応であって、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｓ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）を発現する非特異的細胞毒性細胞が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶菌をひき起こす反応である。ＡＤＣＣを媒介する主要細胞、ＮＫ細胞はＦｃＲＩＩＩのみを発現するが、単核球はＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩおよびＦｃｙＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現はＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ、Ｉｍｍｕｎｏｌ　９；４５７−９２（１９９１）の４６４頁、表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または５，８２１，３３７号に記載のようなｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＡＤＣＣ分析を実行してもよい。このような分析用に有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいはまたは加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）で開示されているような動物モデルにおいてｉｎ　ｖｉｖｏで評価され得る。
【００６３】
「ヒト・エフェクター細胞」はひとつ以上のＦｃＲを発現しエフェクター作用をする白血球である。この細胞は、好ましくは少なくともＦｃｙＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター作用を実施する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血液単核球細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単核球、細胞毒性Ｔ細胞、および好中球が含まれ、中でもＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。
【００６４】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦＣＲ」は抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するために使用される。
【００６５】
好ましいＦｃＲは未変性配列（ｎａｔｉｖｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ）のヒトＦｃＲである。さらにまた、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）を結合するものであって、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩおよびＦｃｙＲＩＩＩのサブクラスの受容体を含み、これら受容体の突然変異体および交互スプライス型もふくむ。ＦｃｙＲＩＩ受容体には、ＦｃｙＲＩＩＡ（活性受容体）、ＦｃｙＲＩＩＢ（阻害受容体）が含まれ、これらは細胞質ドメインの配列が基本的に異なる類似アミノ酸配列を有す。活性受容体ＦｃｙＲＩＩＡは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を細胞質ドメインに含む。阻害受容体ＦｃｙＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）をその細胞質ドメインに含む（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）参照）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ　９：４５７−９２（１９９１）：Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ　４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ　Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）を参照。その他のＦｃＲは、将来特定されるものも含めて用語「ＦＣＲ」で包括される。この用語はまた、新生児受容体ＦｃＲｎを含み、これは母方ＩｇＧｓを胎児に移す役割を荷う（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【００６６】
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」は、分子が補体存在下で標的を溶菌する能力のことをいう。補体活性化経路は、補体系（Ｃｌｑ）の第一補体成分が同源抗原と複合体となっている分子（例えば抗体）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣ分析（例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０２：１６３（１９９６）に記載されている）を行うことができる。
【００６７】
「成長阻害」アンタゴニストは、アンタゴニストが結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止したりあるいは減少させるものである。例えば、アンタゴニストは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ　ｖｉｖｏでＢ細胞の増殖を防止したり減少させ得る。
【００６８】
「アポトーシスを誘発」するアンタゴニストは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞縮小、小胞体の拡大、細胞フラグメント化、および／または膜小胞（アポトーシス体）の形成等の標準アポトーシス分析で決定されるような（プログラムされた細胞死（例えばＢ細胞の細胞死）を誘発するものである。
【００６９】
本明細書における用語「抗体」は、最も広範な意味で使用され、特に完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成される多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、および所望の生物学的活性を示す限りは抗体フラグメントも包含する。
【００７０】
「抗体フラグメント」は、完全な抗体の部分、抗原結合領域または可変領域を含む部分が好ましい。抗体フラグメントの例にはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、直鎖抗体、単鎖抗体分子、抗原フラグメントから形成された多重特異的抗体が含まれる。
【００７１】
「天然の抗体」は、通常へテロ四分節の約１５０，０００ダルトンの糖タンパク質であり、２つの全く同一の軽鎖（Ｌ鎖）と２つの全く同一の重鎖（Ｈ鎖）からなる。各軽鎖は重鎖と単一の共有ジスルフィド結合で連結されているが、ジスルフィド結合の数は種々のイムノグロブリン・イソタイプの重鎖の間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、一定の間を開けた鎖間ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は、可変領域を一端（ＶＬ）に有し、定常ドメインを他方の端に有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１定常ドメインと並んでおり、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並んでいる。特有のアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖可変ドメイン間の境界面を形成していると思われる。
【００７２】
用語「可変」は、抗体間で可変ドメインの特定部分の配列が大きく異なるという事実をいい、特定部分は特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性に使用される。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン中に均一に分布しているわけではない。軽鎖および重鎖可変領域の両者にある超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集結されている。可変ドメインのより高度に保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々４つのＦＲを含んでおり、多くがＰ字紙状をとり、３つの超可変領域によって結合されてループを形成し、３つの紙状構造をつなぎ、場合によってはその３つの紙状構造の部分を形成する。核鎖の超可変領域は一方の鎖由来の超可変領域と一緒に、ＦＲによって極至近距離に保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に貢献する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ　Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（１９９１））。定常ドメインは抗体抗原結合に直接的にはかかわっていないが、様々なエフェクター作用（抗体依存細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）において抗体の関与等）を示す。
【００７３】
抗体をパパインで分解すると、Ｆａｂフラグメントと呼ばれる２つの全く同一の抗原結合フラグメント（各Ｆａｂフラグメントは単一抗原結合部位を有す）と残りのＦｃフラグメント（この名前にたやすく結晶化する能力が反映している）が生成される。ペプシン処理によって２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、これは抗原とまだ架橋することができる。
【００７４】
「Ｆｖ」は最小の抗体フラグメントであって完全な抗原認識および抗原結合部位を含んでいる。この領域は、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインが堅く非共有結合したダイマーからなる領域である。この形状では、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ−ＶＬダイマーの表面に抗原結合部位を規定している。一括すると、６個の超可変領域は抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても結合部位全体よりも親和性は低いが抗原を認識して結合する能力を有す。
【００７５】
Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨＩ）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域から１つまたは複数のシスチンを含む重鎖ＣＨＩドメインのカルボキシル末端に付加している数個の残基によってＦａｂフラグメントとは異なる。その定常ドメインのシスチン残基が少なくとも１つの遊離チオール基を有すＦａｂ’を本明細書ではＦａｂ’ＳＨと呼ぶ。Ｆ（ａｂ’）Ｚ抗体フラグメントは、その間にヒンジのシスチンを有す一対のＦａｂ’フラグメントとしてもともとは生成された。抗体フラグメントの他の化学的結合をすることも知られている。
【００７６】
いかなる脊椎動物種由来の抗体（イムノグロブリン）の「軽鎖」も、その定常ドメインのアミノ酸配列が明らかに異なる２つのタイプ、カッパ（ｘ）およびラムダ（ｋ）の１つが割り当てられている。
【００７７】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、抗体を異なるクラスに割り当てることができる。５つの主要クラスの完全な抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、およびこれらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２）に分類されてもよい。異なるクラスの抗体に対応する重鎖可変ドメインはそれぞれａ、８、ｓ、ｙおよびＲと呼ばれる。様々なクラスのイムノグロブリンのサブユニット構造および三次元形状はよく知られている。
【００７８】
「単一鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、単一のポリペプチド鎖に存在しているＶＨおよびＶＬドメインを含む。好ましくはＦｖポリペプチドはさらにＶＨおよびＶＬドメイン間にポリペプチド・リンカーを含むことが好ましく、このリンカーによって抗原を結合させるに望ましい構造をｓｃＦｖに形成させることができる。ｓｃＦｖについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ　ａｎｄ　Ｍｏｏｒｅ，ｅｄｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｐｐ２６９−３１５（１９９４））参照。
【００７９】
用語「ダイアボディ」は２つの抗原結合部位を有する小抗体フラグメントのことをいい、該フラグメントは、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を同じペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中にふくんでいる。あまりに小さいので同じ鎖上で２つのドメイン間の対合ができないリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補的ドメインとの対合が強いられて２つの抗原結合部位が創出される。ダイアボディについてはもっと十分に、例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載されている。
【００８０】
本明細書の使用されている用語「モノクローナル抗体」は、実質的の同質の抗体の集団、（すなわち、集団が自然に起こり得る微量に存在しているかもしれない突然変異を除いて集団を構成する個々の抗体が同一である）から得られる抗体のことをいう。モノクローナル抗体は、高度に特異的であって単一の抗原部位に向けられている。さらに、種々の決定因子（エピトープ）に対して向けられる様々な抗体を典型的には含む従来の（ポリクローナル）抗体の調製と比較して、各モノクローナル抗体は抗原上の単一な決定因子に対して向けられている。その特異性に加え、モノクローナル抗体は、他のイムノグロブリンに汚染されていないハイブリドーマ培養によって合成されるという点で、有益である。修飾語である「モノクローナル」は、実質的に同質の抗体集団から得られた抗体の特徴を示しているのであって、なにか特殊の方法によって抗体を生成することを必要としていると解釈されるものではない。例えば、本発明にしたがって使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって記載されたハイブリドーマ法によって作成されるかまたは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）によって作成し得る。このモノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載の技法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【００８１】
本明細書ではモノクローナル抗体には、重鎖および／または軽鎖の部分が特定の種に由来するかまたは特定の抗体またはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一かまたは相同であって、鎖の残りの部分が別の種に由来するかまたは別の抗体またはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一かまたは相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物学的活性を示す限りいかなる抗体のフラグメントも特に含まれる（米国特許第４，８１６，５６７；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中の目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えばヒヒ、アカゲザル、ヒヨケザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ　ｍｏｎｋｅｙ）等の古代ザル）由来の可変ドメイン抗原結合配列およびヒトの定常領域配列を含む「（霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）」抗体を含む（米国特許第５，６９３，７８０号）。
【００８２】
非ヒト（例えばネズミ）抗体のヒト化型は、非ヒト・イムノグロブリン由来の配列を最小限含むキメラ抗体である。ほとんどの部分、ヒト化された抗体はヒト・イムノグロブリン（受益者抗体）であって、受容者の超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ラビット、非ヒト霊長類等の非ヒト種（提供者抗体）の超可変領域由来の残基によって置換されているヒト・イムノグロブリンである。ある例では、ヒト・イムノグロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置換されている。さらに、ヒト化された抗体は、受益者抗体または提供者抗体中には見られない。これらの変更は、抗体性能をさらに改良するためになされる。一般に、ヒト化された抗体は実質的に少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にはすべてを含み、該可変ドメイン中では、超可変ループのすべてまたは実質的にはすべてが非ヒト・イムノグロブリンのループに対応しており、またＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト・イムノグロブリン配列のＦＲである。ヒト化された抗体はまた、場合によっては少なくともイムノグロブリン定常領域（Ｆｃ）の部分、典型的にはヒト・イムノグロブリン部分を含むことになる。さらに詳細は、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ　３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）参照。
【００８３】
用語「超可変領域」を本明細書で使用するときは、抗原結合の役割を担う抗体のアミノ酸残基のことをいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば軽鎖可変ドメインでは残基２４から３４（ＬＩ）、５０から５６（Ｌ２）および８９から９７（Ｌ３）残基、重鎖可変ドメインでは、３１から３５（Ｈ１），５０から６５（Ｈ２）、９５から１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ　Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（１９９１）由来のアミノ酸残基、および／または、「超可変ループ」（例えば、軽鎖可変ドメインでは残基２６から３２（Ｌ１）、５０から５２（Ｌ２）および９１から９６（Ｌ３）および重鎖可変ドメインでは２６から３２（Ｈ１）、５３から５５（Ｈ２）、および９６から１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ　Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））由来のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で規定された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。目的の抗原（例えばＢ細胞表面マーカー）に「結合する」アンタゴニストは、抗原を発現する細胞を標的とする治療剤として有用であるように、十分な親和性および／または結合力を持って抗原に結合することができるものである。
【００８４】
ＣＤ２０抗原と結合する抗体の例には、「Ｃ２Ｂ８」、これはリツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（米国特許第５，７３６，１３７号、引用によって本明細書中に明白に取り入れられている）と現在呼ばれている；「Ｙ２Ｂ８」と呼ばれるイットリウム−［９０］−標識された２１３８ネズミ抗体（米国特許第５，７３６，１３７号、引用によって本明細書中に特別に取り入れられている）；１３１Ｉで任意に標識されたネズミＩｇＧ２ａ「１３１」であって「１３１Ｉ−Ｂ１」抗体（ＢＥＸＸＡＲＴＭ）（米国特許第５，５９５，７２１号、引用によって本明細書中に特別に取り入れられている）を生成するもの；ネズミモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ　６９（２）：５８４−５９１（１９８７））；「キメラ状２Ｈ７」抗体（米国特許第５，６７７，１８０号引用によって本明細書中に明確に取り入れられている）およびモノクローナル抗体Ｌ２７，Ｇ２８−２，９３−１１３３、Ｂ−ＣｌまたはＮＵ−Ｂ２（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　ＩＩＩ（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ｅｄ．、ｐ４４０、Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ（１９８７））が含まれる。ＣＤ１９抗原と結合する抗体の例には、抗ＣＤ−１９抗体（Ｈｅｋｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３２：３６４−３７２（１９９１）およびＶａｌｓｖｅｌｄら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４０：３７−４７（１９９５）およびＢ４抗体（Ｋｉｅｓｅｌら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１１、１２：１１１９（１９８７）が含まれる。
【００８５】
本明細書の用語「リツキシマブ」（ＲｉｔｕｘｉｍａｂまたはＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）は、ＣＤ２０抗原に対して向けられた遺伝子工学で作成されたキメラネズミ／ヒトモノクローナル抗体のことをいい、特別に本明細書に引用されている米国特許５，７３６，１３７中ではＣ２Ｂ８」と命名されている。該抗体は、ネズミの軽鎖および重鎖可変領域配列およびヒト定常領域配列を含むＩｇＧカッパ・イムノグロブリンである。リツキシマブは、約８．０ｎＭのＣＤ２０抗原に対する結合親和性を有する。
【００８６】
「単離」されたアンタゴニストは自然環境の成分から特定され、分離されおよびまたは回収されてきた。その自然環境の汚染成分は、アンタゴニストの診断用、治療用使用を妨害する物質であり、これには酵素、ホルモン、他のたんぱく質性または非たんぱく質性の溶質である。好ましい態様では、アンタゴニストは、（１）ローリー法により定量する場合、アンタゴニストの９５重量％を上回って、より好ましくは９９重量％を上回るまで（２）回転カップシークエンサーを使用することによって、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るに十分な程度まで、または（３）コマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用した還元または非還元状態でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。単離されたアンタゴニストには、組換え細胞内のｉｎ　ｓｉｔｕでのアンタゴニストが含まれる。なぜなら、アンタゴニストの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないからである。しかしながら通常は、単離されたアンタゴニストは少なくとも１つの精製工程によって調製されることになる。処置の目標となる「哺乳類」は、哺乳類（ヒト、家畜および農場動物：および動物園、スポーツ、またはペット動物（犬、馬、猫、牛等））に分類される動物なら何でもよい。哺乳動物はヒトであることが好ましい。
【００８７】
「処置」は、治療的処置および予防的または防御手段のことをいう。治療を必要とするものは、既に疾病または疾患に罹患しているものならびに疾病または疾患にかかるのを防御すべきものである。したがって、哺乳類は疾病または疾患を有すると診断されていてもまたは疾病にかかり易いまたは受け入れやすくてもよい。
【００８８】
「治療上有効量」という表現は、問題の自己免疫疾患を予防、改善または治療するために有効なアンタゴニストの量のことをいう。付加的治療のために明細書に使用されている用語「免疫抑制剤」は、本明細書中で治療される哺乳類の免疫系を抑制するかまたは遮蔽するような作用する物質のことをいう。これにはサイトカイン生成を抑制、または自己抗原の発現をダウンレギュレートまたは抑制するか、あるいはＭＨＣ抗原を遮蔽する物質が含まれる。
【００８９】
このような抗原の例には、２−アミノ−６−アリール−５で置換されたピリミジン（本明細書に開示が引用されている米国特許４，６６５，０７７参照）、アザチオプリン、シクロホスホアミド、ブロモクリプチン、ダナゾール、ダプゾーン、グルタアルデヒド（これは米国特許４，１２０，６４９に記載されているように、ＭＨＣ抗原を遮蔽する）、ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体、シクロスポリンＡ、糖質副腎皮質ステロイド（例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン）、サイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト（抗インターフェロン−ｙ−（３、またはａ抗体、抗腫瘍壊死因子−ａ−抗体、抗腫瘍壊死因子−（ｉ抗体、抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体を含む）；抗ＬＦＡ−１抗体（抗ＣＤ１Ｌａおよび抗ＣＤ１８抗体を含む）、抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む溶解性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、９０年７月２６日発行）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−０；ストレプトドルナーゼ；宿主のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスパガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎら、米国特許５，１１４，７２１）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；Ｉａｎｅｗａｙ、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：４８２（１９８９）およびＷＯ９１／０１１３３）；およびＴＬＯＢ９等のＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が含まれる。
【００９０】
本明細書に使用されている用語「細胞毒性剤」は、細胞機能を阻害または阻止および／または細胞の破壊を引き起こす物質のことをいう。該用語は、放射活性同位元素（例えば、Ｉ^１３１、Ｙ^９０、Ａｒ^２１１、Ｐ^３２、Ｒｅ^１８８、Ｒｅ^１８６、Ｓｍ^１５３、Ｂ^２１２他）、化学療法剤、および小分子トキシンまたはバクテリア、菌類、植物または動物起源の酵素学的に活性なトキシン等のトキシン類、またはそれらのフラグメント）を含むことを企図する。
【００９１】
「化学療法剤」とは、癌の治療に有用な化合物のことをいう。化学療法剤の例には、アルキル化剤（チオテパおよびシクロホスホアミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等）；アルキルスルホン酸（ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン等）；アジリジン（ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ等）；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（オルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレン燐アミド、トリエチレンチオ燐アミド、トリメチロロメラミンを含む）；窒素マスタード（クロラムブシル、クロルマファジン、クロロホスホアミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロールエタミン、メクロールエタミンオキサイド塩酸塩、メルファラン、ノベムビーヒン（ｎｏｖｅｍｂｉｅｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファアミド、ウラシルマスタード等）；ニトロスウレア（カルマスチン、クロロゾトシン、ホテマスチン、ロマスチン、ニマスチン、ラニマスチン等）、抗生物質（アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリキアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモイニシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダムビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、プロマイシン、クエロマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシデン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ユベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等；抗代謝剤（メトトレキサート、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等）；葉酸類似物（デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトトレキサート等）；プリン類似物（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等）、ピリミジン類似物（アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフアー、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ等）；アンドロゲン（カルステロン、ドロモスタノロンプロピン酸塩、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン類；抗副腎剤（アミノグルテチミド、ミトーテン、トリロスタン等）；葉酸補充剤（フロリニックアシッド等；アセガラトン；アルドホスホアミドグリコシド；アミノレブリン酸；アマサクリン；ベストラブシル；バイサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルニチン；エリプチニウム酢酸；エトグルチド；硝酸ガリウム；水酸化尿素；レンチナン；ロニダミン；マイトグアゾン；マイトキサントロン；モピダモール；ナイトラクリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ポドフィリニックアシド；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキザン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾニックアシド；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マノムスチン；マイトブロニトール：マイトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスホアミド；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬＯ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）およびドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＷ、Ｒｈ６ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ　Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲンシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトキシレート、プラチナ類似物（シスプラチン、カルボプラチン等）；ビンブラスチン；プラチナム；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスホアミド；マイトマイシンＣ；マイトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ、イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラマイシン；カペシタビン；および薬剤として許容される塩、酸または上記の各誘導体が含まれる。また、この規定には、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤（抗エストロゲン等）が含まれ、これには例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、トレミフエン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）および抗アンドロゲン（フルタアミド、ニルタミド、バイカルタミド、レウプロリド、ゴセレリィン等）；および薬剤として許容される塩、酸または上記の各誘導体が含まれる。
【００９２】
用語「サイトカイン」は、細胞間メデイエーターとして別の細胞上で作用する１つの細胞集団によって分泌されるタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、伝統的ポリペプチドホルモンである。これらサイトカインの中でも、成長ホルモン（ヒト成長ホルモン、Ｎメチオニルヒト成長ホルモンおよび牛成長ホルモン等）、副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン（卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）等）；肝臓成長因子；フィブロブラスト成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子ａ、および−０；ミューラー管阻害物質；マウスゴナドロピン付随ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞成長因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子（ＮＧＦ−Ｐ等）；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦｓ）（ＴＧＦ−ａおよびＴＧＦ−０等）；インシュリン様成長因子ＩおよびＩＩ；エリスロポイエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン（インターフェロンα、Ｐおよびｙ等）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ等）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球ＣＳＦ（ＧＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）（ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５等）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａまたはＴＮＦ−Ｐ、および他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む）がある。本明細書で使用されているように、用語サイトカインには、天然の供給源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質、および天然配列のサイトカインと生物学的に活性な同等物が含まれる。
【００９３】
本出願で使用されている用語「プロドラッグ」は、親ドラックと比較すると腫瘍細胞に対してやや細胞毒性が低く、酵素的に活性化してまたは変換してより活性化された親医薬型にすることが可能な薬剤として活性な物質の前駆体または誘導体のことをいう。例えば、Ｗｉｈｎａｎ、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｓ、１４、ｐｐ．３７５−３８２、６１５ｔｈ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ；Ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら、（ｅｄ）、ｐｐ．２４７−２６７、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ（１９８５）参照。本発明のプロドラッグには、これらはより活性で細胞毒性の薬剤に変換可能である燐酸塩配合プロドラッグ、チオ燐酸塩配合プロドラッグ、硫酸塩配合プロドラッグ、ペプチド配合プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸に修飾されたプロドラッグ、グリコシルされたプロドラッグ（３−ラクタムを含むプロドラッグ、場合によっては、置換フェノキシアセトアミド配合プロドラッグ、または場合によってはフェニルアセトアミド配合プロドラッグ、５フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグが含まれるがこれらに限定されない。本発明に使用するためプロドラッグ型に誘導され得る細胞毒性薬には上記に記載の化学治療剤を含むがこれには限定されない。
【００９４】
「リポソーム」は、薬剤（本明細書に開示されているアンタゴニスト、場合によっては、化学療法剤等）を哺乳類に送達するのに有用な多種の脂質、燐酸脂質、および／または表面活性剤から構成される小胞である。リポソームの構成材料は、生物膜の脂質配置と同様に通例は二層型に配置されている。用語「添付文書」は、適応症、使用方法、用法用量、治療用製品の使用に関連する禁忌および／または警告についての情報を含む、治療用製品の商業用包装形態に通常含まれる説明書のことをいう。
【００９５】
ＩＩ．アンタゴニストの生成
本発明の製造方法、製造品は、Ｂ細胞表面マーカーおよび／またはサイトカインに結合するアンタゴニストを使用するかまたは含む。したがって、このようなアンタゴニストを生成する方法を本明細書に記載する。アンタゴニストを生成するためまたはスクリーニングするために使用されるＢ細胞表面マーカーまたはサイトカインは、例えば、所望のエピトープを含む溶解型の抗原またはその一部であってよい。その代わりまたは加えて、アンタゴニストを生成またはスクリーニングするために細胞表面にＢ細胞表面マーカーを発現する細胞を使用することができる。アンタゴニストを生成するのに有利な他の形のＢ細胞表面マーカーは当業者には自明である。好ましくは、Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ１９またはＣＤ２０抗原である。サイトカインはＩＬ−１０であることが好ましい。
【００９６】
好ましいアンタゴニストは抗体であるが、抗体以外のアンタゴニストをここでは考えてみる。例えば、アンタゴニストには、場合によっては（ここに記載されているような）細胞毒性剤と融合または結合されている小分子アンタゴニストが含まれ得る。小分子ライブラリーを、目標のＢ細胞表面マーカーに対してスクリーニングして、抗原と結合する小分子を特定してもよい。小分子はさらにアンタゴニスト特性についてスクリーニングしておよび／または細胞毒性剤と結合してもよい。
【００９７】
アンタゴニストは、合理的な設計またはファージ・デイスプレーによって生成され得る（例えば、ＷＯ９８／３５０３６、１９９８年８月１３日発行を参照）。一態様においては、選択される分子は抗体のＣＤＲにもとづいてデザインされた「ＣＤＲ類似物」または抗体類似物であってよい。このようなペプチドはそれ自身アンタゴニスト的であるが、場合によってはペプチドのアンタゴニスト特性を加えるかまたは高めるために細胞毒性剤と融合されてもよい。
【００９８】
本発明に従って使用される抗体アンタゴニストの生成の模範技術を次に記載する。
【００９９】
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、関連する抗原およびアジュバントの複数回の皮下注射（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物中で生成されることが好ましい。免疫感作すべき種において免疫原性であるタンパク質（例えばキーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシ・チログロブリン、または二作用性または誘導剤（例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（シスチン残基経由で結合）、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド（リジン残基経由）、グルタルアルデヒド、無水琥珀酸、ＳＯＣ１２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は異なるアルキル基））を使用している大豆トリプシン阻害剤）に対して対応する抗原を結合することが有用である。動物は、抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して、例えば（それぞれラビットまたはネズミに対して）タンパク質または結合体１００ｐｇまたは５ｗｇと３体積のフロイント完全アジュバントとを併せ、その液を多部位に皮内に注入し免疫感作させる。１カ月後、その動物は、フロイント完全アジュバンド中ペプチドまたは結合体がもとの量の１／５から１／１０で、多数部位に皮下注射することによってブーストされた。７から１４日後、動物を放血させ血清を抗体力価について分析する。動物は力価がプラトーになるまでブーストされる。好ましくは、動物は、同じ抗原の結合体であるが、異なるタンパク質に対しておよび／または異なる架橋試薬を経て結合されたものでブーストされる。結合体はまた、タンパク質融合体として組換え細胞培養物中で作成できる。また、ミョウバン等の凝集剤は、免疫応答を高めるために適切に使用される。
【０１００】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体、すなわち少量で存在しているかもしれない自然発生の可能性のある突然変異を除いた細胞集団が同質である個々の抗体から得られる。このように、限定語「モノクローナル」は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示している。例えば、モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ法を使用して作成されるかまたは組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６、５６７号）によって作製し得る。
【０１０１】
ハイブリドーマ法では、マウスまたはその他適宜な宿主動物（ハムスター等）を上記に記載されたように免疫感作し、免疫感作に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するかまたは生成することができるリンパ球を誘導する。または、リンパ球はｉｎ　ｖｉｔｒｏで免疫感作されてもよい。リンパ球は骨髄腫細胞と適切な融合剤（ポリエチレングリコール等）を使用して融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する［Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ　５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　１９８６）］。
【０１０２】
このように調製されたハイブリドーマ細胞は、未融合の親骨髄腫細胞の生育または生存を阻害する１つまたは複数の物質を好ましくは含む適切な培地に播種され生育される。例えば、もし親骨髄腫細胞が酵素ハイポキサンチン・グアニン・ホスホリボシル・トランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いていたとしたら、ハイブリドーマの培地は概して、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質であるハイポキサンチン・アミノプテリンおよびチミジン（ＨＡＴ培地）を含むことになる。
【０１０３】
好ましい骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体生成細胞によって抗体の安定で高度な生成を助け、ＨＡＴ培地等の培地に感受性のある細胞である。中でも、好ましい骨髄腫細胞系は、Ｓａｌｋ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｃｅｌｌ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ　ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来の細胞およびＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ　ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒト骨髄腫細胞およびマウス・ヒトヘテロ骨髄腫細胞系もまたヒト・モノクローナル抗体を生成すると記載されている［Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９８７）］。
【０１０４】
ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクロナル抗体の生成について分析する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈澱によって、または放射免疫測定法（ＲＩＡ）または酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）等の免疫沈澱またはｉｎ　ｖｉｔｒｏ結合分析によって求められる。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎらのスカッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）分析（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）によって求められる。
【０１０５】
ハイブリドーマ細胞が所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を生成することを確認した後、クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準法によって生育させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８６）。この目的のための適切な培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞を動物において腹水腫瘍としてｉｎ　ｖｉｖｏで生育してもよい。
【０１０６】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、培地、腹水または血清から従来のイムノグロブリン精製法（例えばタンパク質Ａ−セファロース、ハイドロキシアパタイト・クロマトグラフィ、ゲル電気分解、透析、またはアフィニテイ・クロマトグラフ）によって適宜分離される。
【０１０７】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来法で（例えば、ネズミ抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子と特異的に結合することができるオリゴヌクレオチド・プローブを使用して）容易に単離され、シークエンスされる。ハイブリドーマ細胞はこのようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ＤＮＡは一端単離されると、発現ベクターに入れられ、ベクターは次に、イムノグロブリンタンパク質を別に生成しない宿主細胞（大腸菌、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズ・ハムスター卵胞細胞（ＣＨＯ）または骨髄腫細胞等）にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードしているＤＮＡのバクテリア中での組換え発現についての参照論文には、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．、１３０：１５１−１８８（１９９２）がある。
【０１０８】
さらなる実施の形態において、抗体または抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技法を使用して生成された抗体ファージのライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）はそれぞれ、ネズミおよびヒト抗体をファージ・ライブラリーを使用して単離することを記載している。その後の出版物では、大規模ファージ・ライブラリーを構築する戦略である鎖再編成（Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２）、ならびに組合せ感染およびｉｎ　ｖｉｖｏ組換えによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生成を記載している（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２１：２２６５−２２６６（１９９３）。したがって、このような技法は、モノクローナル抗体を単離するために伝統的抗体ハイブリドーマ技法にとって替わることが可能である。
【０１０９】
ＤＮＡはまた、たとえば、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインのコード配列を相同のネズミ配列の代りに置き換えること（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１（１９８４））によって、またはイムノグロブリンをコードする配列に対して非イムノグロブリン・ポリペプチドのすべてあるいは一部を共有結合することによって、変更してもよい。典型的には、このような非イムノグロブリン・ポリペプチドが抗体の定常ドメインにかわって置き換えられるか、またはこのペプチドは抗体の抗体結合部位の可変ドメインに代って置き換えられて、ある抗原に対して特異性を有する抗原結合部位と別の抗原に対して特異性を有するもう１つの抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を創生する。
【０１１０】
（ｉｉｉ）ヒト化された抗体
非ヒト抗体をヒト化する方法は現況技術に記載されている。好ましくは、ヒト化された抗体は非ヒトである供給源から該抗体に導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有す。これらの非ヒトアミノ酸残基は「インポート」可変ドメインから一般的にとられるので、しばしば「インポート」残基と呼ばれる。ヒト化はＷｉｎｔｅｒと同僚達の方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６（１９８８）に従って基本的に行われるのであって、超可変領域の配列をヒト抗体の対応配列の代りに置き換えることによって行うことが可能である。従って、このようなヒト化された抗体は、キメラ抗体で（米国特許第４，８１６，５６７号）あって、完全なヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応配列によって置き換えられていることは実質的に少ないキメラ抗体である。実践では、ヒト化された抗体は概してヒト抗体であって、いくつかの超可変領域残基およびいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体における類似部位由来の残基によって置き換えられているヒト抗体である。
【０１１１】
ヒト化された抗体を作製する際に使用される、軽鎖、重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は抗原性を減少させるために重要である。いわゆる「最適」法によると、齧歯類抗体の可変ドメインの配列が、既知ヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。そして齧歯類の配列に一番近いヒト配列が、ヒト抗体に対してのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）とされる（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、１９６：９０１（１９８７））。もう１つの方法では、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特殊なフレームワーク領域が使用される。同じフレームワークが数種の異なるヒト化された抗体に対して使用されてもよい（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５１：２６２３（１９９３））。
【０１１２】
さらに、抗体を抗原に対する高親和性および他の好ましい生物学的特質を保持したままヒト化させることが重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従うと、ヒト化された抗体は、親の配列および親およびヒト化された配列の三次元モデルを使用して様々に概念的にヒト化された生成物を分析する方法によって調製される。三次元イムノグロブリン・モデルは、通常入手可能であり当業者には公知である。選択されたイムノグロブリン配列候補の推定される三次元構造を図表示するコンピューター・プログラムが利用可能である。これらの表示を詳細に調べることでイムノグロブリン配列候補の作用における残基の予想される役割の分析、すなわち、候補イムノグロブリンの抗体と結合する能力に影響を与える残基の分析が可能となる。このように、ＦＲ残基は受益者およびインポート配列から、所望の抗体特徴（目的抗原に対する親和性の増大等）が達成されるように選択され結合される。一般的に、超可変領域残基は、直接および最も実質的に抗原結合に影響する。
【０１１３】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化に代るものとして、ヒト抗体を生成することが可能である。例えば、免疫化されると内在性イムノグロブリン生成がない状態でヒト抗体の全範囲を生成することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を生成することが現在可能である。例えば、キメラ生殖細胞系変異マウスの抗体重鎖Ｊ領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合が欠損していれば結果として内在性抗体の生成が完全に阻害されることになる。ヒト生殖細胞系イムノグロブリン遺伝子アレイをこのような生殖細胞系変異マウスへの移入すると、抗原投与によってヒト抗体が生成される結果となる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｍａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２；２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏ．、７；３３（１９９３）；および米国特許第５，５９１，６６９号，５，５８９，３６９号および５，５４５，８０７号参照。また、ファージ表示技法（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して、ヒト抗体および抗体フラグメントが、未免疫化ドナー由来のイムノグロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからｉｎ　ｖｉｔｒｏで生成できる。この技法によると、抗体Ｖドメイン遺伝子は、糸状性バクテリオファージ（Ｍ１３またはｆｄ）のメジャーまたはマイナー・コートタンパク質遺伝子のどちらかにインフレーム（ｉｎ−ｆｌａｍｅ）でクローンされ、機能的抗体フラグメントとしてファージ粒子の表面に表示される。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含んでいるので、抗体を機能的特質に基づいて選択するとそれらの特質を示す抗体をコードしている遺伝子を選択する事になる。このように、ファージはＢ細胞のいくつかの特質と類似する。ファージは様々なフォーマットで表示される。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ　Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ　Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　３：５６４−５７１（１９９３））参照下さい。Ｖ遺伝子セグメントの数個の供給源がファージ表示のために使用できる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１））は抗オキサゾロン抗体の多様化したアレイを、免疫化されたマウスの脾臓由来のＶ遺伝子の小さなランダムに組み合わせたライブラリーから単離した。未免疫化ヒト供与者由来のＶ遺伝子のレパートリーが構築され、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体を、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ　Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載の技法に本質的には従って単離することができる。また米国特許第５，５６５，３３２号および５，５７３，９０５号も参照。ヒト抗体はまたｉｎ　ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞によって生成し得る（米国特許第５，５６７，６１０号および５，２２９，２７５号）。
【０１１４】
（Ｖ）抗体フラグメント
様々な技法が抗体フラグメントを生成するために開発されてきた。従来よりこれらのフラグメントは完全な抗体のタンパク質分解消化を経て得られた（例えばＭｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）参照）。しかしながら、これらのフラグメントは現在では組換え宿主細胞によって直接生成することができる。例えば、抗体フラグメントは上記で記載された抗体ファージ・ライブラリーから単離可能である。またＦａｂ’−Ｓｌｉフラグメントは大腸菌から直接回収できまた化学的に結合してＦ（ａｂ’）２フラグメントを作ることが可能である［Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：１６３−１６７（１９９２）］。もう１つのアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離できる。他の抗体フラグメントを生成する別の技法は熟練者には明らかであろう。他の実施形態では、選択された抗体は一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および米国特許第５，５８７，４５８参照。抗体フラグメントもまた、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載のような直鎖抗体であってもよい。このような直鎖フラグメントは単一特異性または二重特異性であってよい。
【０１１５】
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。典型的二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープ結合し得る。別のこのような抗体は、第１のＢ細胞マーカーに結合し、さらに第２のＢ細胞表面マーカーに結合する。また、抗Ｂ細胞マーカー結合アームは、Ｔ細胞受容体分子（例えばＣＤ２またはＣＤ３）またはＩｇＧ（ＦｃｙＲ）の受容体（例えば、ＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４），ＦｃｙＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃｙＲＩＩＩ（ＣＤ１６等）といった白血球上のトリガー分子と結合するアームと、Ｂ細胞に対する細胞防御機構に焦点をあわせるように、組み合わさっていてもよい。二重特異性抗体はＢ細胞に対して細胞毒性剤を局在化するために使用されてもよい。これらの抗体はＢ細胞マーカー結合アームおよび細胞毒性剤（例えば、サポリン（ｓａｐｏｒｉｎ）、抗インターフェロンａ、ビンカ・アルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセートまたは放射活性アイソトープ・ハプテン）と結合するアームを有する。二重特異性抗体は完全長の抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）Ｚ二重特異性抗体）として調製できる。
【０１１６】
二重特異性抗体を作る方法は現況技術ではよく知られている。完全長二重特異性抗体を従来法で生成する場合は、２つのイムノグロブリン重鎖・軽鎖対（２つの鎖は異なる特異を有す）の共に発現させることに基づいて行う（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７−５３９（１９８３））。イムノグロブリン重鎖および軽鎖をランダムに組み合わせるために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ、ｑｕａｄｒｏｍａ）は、１０個の異なる抗体分子の混合物を生成できてしまうが、その内ただ１つが正しい双特異的構造をもつのである。正しい分子の精製は、通常は親和性クロマトグラフィー工程で行われるが、これはどちらかといえば厄介で、生産量は低い。同様の手法がＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ　Ｊ、１０：３６５５−３６５９（１９９１））に開示されている。
【０１１７】
異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体の可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、イムノグロブリン定常ドメイン配列と融合されている。融合は、少なくともヒンジ部分、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含むイムノグロブリン重鎖定常ドメインと行うのが好ましい。軽鎖結合に必要な部位を含み、少なくとも１つの融合物中に存在する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有するのが好ましい。イムノグロブリン重鎖融合物、所望であれば、イムノグロブリンの軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入されて適切な宿主微生物中に共トランスフェクトされる。これによって、至適生成量が３つのポリペプチド鎖異なる割合で構築に使用されていることにより得られる実施の形態中、３つのポリペプチドフラグメントのお互い比率が高いフレキシビリテイをもって調節される。しかしながら、少なくとも２つのポリペプチド鎖が、同一量で発現されて高生成量となる場合、またはその割合が特に重要性をもたない場合に、２つまたは３つのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクター中に挿入することが可能である。
【０１１８】
本アプローチの好ましい実施の形態では、二重特異性抗体は、１つのアーム中の第１の結合特異性をもつハイブリッド・イムノグロブリン重鎖、および他のアーム中のハイブリッド・イムノグロブリン重鎖軽鎖対（第２結合特異性が与えられている）から構成されている。非対称構造によって、所望の二重特異性化合物が望ましくないイムノグロブリン鎖の組合せからの分離が容易になる。つまり、二重特異性分子の半分のみにイムノグロブリン軽鎖が存在するので、容易な分離方法が提供される。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体生成のさらなる詳細については、例えばＳｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）を参照。
【０１１９】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている別のアプローチによると、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーのパーセンテージを最大にすることができる。界面は、抗体定常ドメインのうちＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含むことが好ましい。この方法では、第１抗体分子の界面由来の１つまたは複数の小さなアミノ酸側鎖がより大きな側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）によって置換される。第２抗体分子の界面上には、大きな側鎖と同一あるいは同様のサイズの埋め合わせの「腔」が大きなアミノ酸側鎖を小さなアミノ酸側鎖（例えばアラニンまたはスレオニン）で置換することによって作られる。これによって、ヘテロダイマーの生成量を、他の望ましくないホモダイマー等の最終産物を超えて増加させるためのメカニズムが提供される。
【０１２０】
二重特異性抗体には、架橋または「ヘテロ接合」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ接合の抗体の１つはアビジンと結合可能であり、もう１つはビオチンと結合可能である。例えば、このような抗体が望ましくない細胞に対する免疫系細胞を標的とすること（米国特許第４，６７６，９８０号）が提案されておりまたＨＩＶ感染（ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３およびＥＰ０３０８９）の治療用として提案されている。ヘテロ接合抗体はどんな簡便な架橋方法を用いても作成し得る。適切な架橋剤は現況技術でよく知られており、米国特許第４，６７６，９８０号では多くの架橋技法と共に開示されている。
【０１２１】
二重特異性抗体を抗体フラグメントから生成する技術もまた文献に記載されている。たとえば、二重特異性抗体は化学架橋を使用して調製することが可能である。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）には、完全な抗体がタンパク質溶解で開裂されてＦ（ａｂ’）２フラグメントが生成される方法が記載されている。これらのフラグメントはジチオール錯化剤ヒ酸ソーダの存在下還元されて近隣のジチオールを安定化させて分子内ジスルフィド形成を防ぐ。生成されたＦａｂ’フラグメントは、次にチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次にＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つはメルカプトエチルアミンで還元されてＦａｂ’−チオールに再変換され、別の等分子量Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて二重特異性抗体を形成する。生成された二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用剤として使用可能である。
【０１２２】
最近の進展により、大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接回収が容易となり、化学的に結合されて二重特異性抗体を形成することが可能である。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７５：２１７−２２５（１９９２）には十分にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成が記載されている。各Ｆａｂ’フラグメントは別々に大腸菌から分泌されｉｎ　ｖｉｔｒｏでの直接化学結合に供され二重特異性抗体を形成する。このように形成された二重特異性抗体はＥｒｂＢ２受容体を過発現している細胞および通常のヒトＴ細胞と結合できたばかりでなくヒト胸部腫瘍標的に対するヒト細胞毒性リンパ球の溶菌活性を誘発することができた。
【０１２３】
二重特異性抗体フラグメントを作成および組換え細胞培養物から直接単離するための様々技法もまた記載されてきた。例えば、二重特異性抗体はロイシン・ジッパーを使用して生成されてきた（Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２））。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシン・ジッパー・ペプチドは２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に遺伝子融合でリンクされた。抗体のホモダイマーはヒンジ領域において還元されモノマーを形成し、次に再び酸化されて抗体ヘテロダイマーを形成した。この方法はまた抗体ホモダイマーを生成するために利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載される「ダイアボディ」技法では二重特異的抗体フラグメントを作成するためのもう１つの機構が提供してされている。フラグメントは軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、同じ鎖上の２つのドメインの間のペアを作るには短すぎるリンカーによって結合されている重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が含まれる。
【０１２４】
したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは他のフラグメントの相補的ＶＬおよびＶＨドメインと対にさせられ、これによって２つの抗原結合部位を形成する。二重特異性抗体フラグメントを、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用して作成する別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）参照。２原子価以上の抗体も考えられる。例えば三重特異性抗体が調製可能である。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０１２５】
ＩＩＩ．アンタゴニストの結合体および他の修飾法
該方法に使用されるかまたは本明細書で製造された製品に含まれるアンタゴニストは、場合によっては細胞毒性剤と結合されている。このようなアンタゴニスト−細胞毒性剤の結合体の生成に有用な化学療法剤は上記に記載してある。
【０１２６】
アンタゴニストおよびひとつまたは複数の小分子トキシン（カリキアマイシン、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコセンおよびＣＣ１０６５等）との結合物も本明細書では考えられる。本発明の実施形態では、アンタゴニストは、ひとつまたは複数のメイタンシン分子（例えばアンタゴニスト分子につき約１から約１０メイタンシン分子）に結合される。メイタンシンは、例えば、Ｍａｙ−ＳＳ−Ｍｅに変換され、これがＭａｙ−ＳＨ３に還元され、修飾されたアンタゴニストと反応して（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）−アンタゴニスト結合体が生成される。
【０１２７】
また、アンタゴニストはひとつまたは複数のカリキアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）分子と結合される。抗生物質のカリキアマイシン族は、サブ−ピコモル濃度で二本鎖ＤＮＡの分断を生成することができる。使用可能なカリキアマイシンとの構造類似しているのは‘ｙＪ１、ａ２１、ａ３１、Ｎ−アセチル−ｙｌ’、ＰＳＡＧおよび０１１があるがこれには限られない（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３：３３３６−３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５８：２９２５−２９２８（１９９８））。
【０１２８】
使用可能な酵素学的に活性なトキシンおよびそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア・トキシンの非結合活性フラグメント、エクソトキシン（ｅｘｏｔｏｘｉｎ）Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーザ由来）、リシンＡ鎖、アブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、４１オイリテスフォルジ（４１ｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ディアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ，ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルデイカ・キャランティア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、カーシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レスティクトシン（ｒｅｓｔｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコセシーン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が含まれる。例えば１９９３年１０月２８日発行のＷＯ９３／２１２３２を参照。
【０１２９】
本発明はさらに核溶解活性（例えば、リボヌクレアーゼまたはデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）等のＤＮＡエンドヌクレアーゼ）を有する化合物と結合されたアンタゴニストを企図する。様々な放射活性同位元素が、放射活性結合されたアンタゴニストの生成に利用できる。例としては、Ａｔｅ”，１１３’，１１２５、Ｙ９ｏ、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８，Ｓｍ１５３，Ｂｉ２１２Ｐ３２およびＬｕの放射活性同位元素が含まれる。アンタゴニストおよび細胞毒性剤との結合体は、様々な二機能性タンパク質カップリング剤（Ｎ−サクシンイミデイル−３−（２−ピリミジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、サクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボキシレート、イミノチオレーン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬ等）、活性エステル（ジサクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）等を使用して作成され得る。例えば、リチン・イムノトキシンはＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３８：１０９８（１９８７）に記載されたように調製することが可能である。炭素１４標識された１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射活性ヌクレオチドとアンタゴニストを結合用の模範的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６参照。リンカーは細胞で細胞毒性ドラッグの分泌を促進する「開裂可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド配合リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））を使用し得る。また、アンタゴニストおよび細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、例えば組換え技法またはペプチド合成によって作成される。
【０１３０】
また別の実施の形態では、アンタゴニストは腫瘍を予備目標として使用するためには「受容体」（ストレプトアビジン等）と結合されていてもよく、この場合、アンタゴニスト・受容体結合体は患者に投与され、続いて未結合の結合体を循環系からキレート剤を使用して除去し、そして細胞毒性剤（例えば放射ヌクレオチド等）と結合されている「リガンド」（例えばアビジン）を投与する。本発明のアンタゴニストはプロドラッグ（例えば、ペプチデイル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５参照）を活性抗癌剤に変換するプロドラッグ活性化酵素と結合されてもよい。例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８参照。
【０１３１】
このような結合体の酵素成分には、プロドラッグをより活性な細胞毒性型に変換するようにプロドラッグに作用することができる酵素ならどれでも含まれる。本発明の方法に有用な酵素には、燐酸配合プロドラッグをフリードラッグ（ｆｒｅｅ　ｄｒｕｇ）に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩配合プロドラッグをフリードラッグに変換するのに有用なアリールサルファターゼ；無毒性５フルオロシトシンを抗癌剤５フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシン・デアミナーゼ；ペプチド配合プロドラッグをフリードラッグに変換するのに有用なプロテアーゼ（例えば、セラチア・プロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシルペプチダーゼ、およびカテプシン（カテプシンＢおよびＬ等）等）；Ｄアミノ酸代替物を含むプロドラッグを変換するのに有用なＤアラニルカルボキシペプチダーゼ；グルコシル化されたプロドラッグをフリードラッグに変換するのに有用な炭水化物開裂酵素（１ｉガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ等）：（３−ラクタムで誘導体化されたドラッグをフリードラッグに変換するのに有用な３−ラクタマーゼ；およびフェノキシアセチルまたはフェノキシアセチル基でそれぞれアミンナイトロジェンで誘導化したドラッグをフリードラッグに変換するのに有用なペニシリンアミダーゼ（ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼ等）が含まれるが、これらに限定されない。また、酵素活性を有する抗体、「アブザイム（ａｂｚｙｍｅ）」としても現況技術では知られているが、本発明のプロドラッグをフリーの活性ドラッグに変換するのに使用可能である（例えばＭａｓｓｅｙ、Ｎａｔｕｒｅ　３２８：４５７−４５８（１９８７）参照）。アンタゴニスト−アブザイム結合体は、腫瘍細胞集団にアブサイムを行き渡らせるために本明細書に記載されたように調製できる。
【０１３２】
本発明の酵素は、現況技術によく知られている技法（上記に記載されているヘテロ二機能性架橋用試薬を使用する等）によって共有結合でアンタゴニストに結合できる。また本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部分と連結されている本発明のアンタゴニストの少なくとも抗原結合領域を含む融合タンパク質が現況技術によく知られている組換えＤＮＡ技法を用いて構築することができる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６０４−６０８（１９８４）参照）。
【０１３３】
本明細書ではアンタゴニストの別の修飾法が考えられる。例えば、アンタゴニストは様々な非タンパク質系ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマー）の１つと連結されてもよい。本明細書に開示されているアンタゴニストはまた、リポソームとして処方されてもよい。アンタゴニストを配合するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｍａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８２：３６８８（１９８５）．Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０（１９８０）；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４，４８５，０４５および４，５４４，５４５；およびＷＯ９７／３８７３１（１９９７年１０月２３日発行）に記載されているような現況技術に既知の方法で調製される。循環時間が高められたリポソームは米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１３４】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、ＰＥＧに誘導されるホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成による逆相蒸発法で生成することができる。リポソームは規定サイズの孔を有するフィルターを通して押し出されると、所望の直径を有するリポソームが生成される。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントはＭａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載のリポソームとジスルフィド交換反応を経て結合することができる。場合によっては化学療法剤はリポソーム内に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）参照。本明細書に記載されたタンパク質またはペプチド・アンタゴニストのアミノ酸配列の修飾も考えられる。例えば、アンタゴニストの結合親和性および／または生物学的特質の改善することが望ましい。
【０１３５】
アンタゴニストのアミノ酸配列変異は、アンタゴニスト核酸中に適切なヌクレオチドの変化を導入すること、またはペプチド合成によって調製される。このような修飾には例えば、アンタゴニストのアミノ酸配列内における残基の欠損および／または挿入および／または置換が含まれる。仮に最終構築物が所望の特質を有しているとすると、欠損、挿入、および置換のどのような組合せでも最終構築物に到達する。アミノ酸を変化させると、例えばグリコシル化部位の数または位置を変える等のアンタゴニストの翻訳後の過程を変化させることになる。
【０１３６】
変異誘発に好ましい場所であるアンタゴニストの特定の残基または領域を特定する有用な方法はＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５（１９８９）によって記載される「アラニン・スキャニング変異誘発」と呼ばれる。よって残基または目的残基グループが（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ等の荷電残基）と特定され、中性あるいはマイナスに荷電されたアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）によって置換され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を与える。置換に機能的感受性を示すそのようなアミノ酸の位置を、更なるまたは別の変種を置換部位にまたは置換部位に代えて導入することで細かに区別する。このようにアミノ酸配列変異を導入するための部位は予め特定される一方、変異の性質自体は予め特定する必要はない。例えば、所与の部位における変異の性能を分析するために、目的コドンまたは領域にてアラニン・スキャニングまたはランダム変異誘発を行い、発現された変異種が所望される活性についてえり分けられる。
【０１３７】
アミノ酸配列の挿入物には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドにわたる長さのアミノおよび／またはカルボキシル末端の融合物、ならびに１または多数のアミノ酸残基の配列内挿入物を含まれる。末端挿入物の例には、Ｎ末端メチオニン残基を有するアンタゴニストまたは細胞毒性のポリペプチドと融合されたアンタゴニストを含む。他のアンタゴニスト分子の挿入変異種には、アンタゴニストの血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドのアンタゴニストのＮ末端またはＣ末端に対する挿入物が含まれる。
【０１３８】
別のタイプの変異にはアミノ酸置換変異種がある。これらの変異種は別の残基によって置換されたアンタゴニスト分子中に少なくとも１つのアミノ残基を有す。抗体アンタゴニストの置換変異誘発の最も興味深い部位には超可変領域があるが、ＦＲ変化もまた考えられる。
【０１３９】
保存的置換を「好ましい置換」と見出し下の表１に示す。もしこのような置換が結果として生物学的活性を変化されるとしたら、表１またはさらに下記に記載するように、アミノ酸クラスを参照して「典型的置換」と称すより多くの置換的変化がスクリーンされた生成物に導入される。
【０１４０】

【０１４１】
アンタゴニストの生物学的特質における実質的修飾は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えばシートまたはらせん構造等、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対するその影響が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。自然に発生する残基は、共通の側鎖の特質に基づいたグループにわけられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中間的親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０１４２】
非保存性置換は、これらのクラスの１つのメンバーと他のクラスとを交換することを伴う。
【０１４３】
分子の酸化安定性を改善し異常な架橋を防ぐために、アンタゴニストの適正な構造を維持することに係わらないシスチン残基であればどれでも通常はセリンと置換し得る。逆に安定性を改良するために、アンタゴニスト（特にアンタゴニストがＦｖフラグメントのような抗体フラグメントである場合）にシスチン結合を添加してもよい。
【０１４４】
特に好ましいタイプの置換変異種は、１つまたは複数の親抗体の超可変領域の置換を含む。通常、更なる進展のために選択された異種は、そこから生成された親抗体に対して生物学的特質が改良されることになる。このような置換変異種を生成する簡便な方法は、ファージ表示を使用する親和性成熟である。要するに、いくつかの超可変領域部位（例えば６から７部位）が変異化され、各部位に可能性のあるすべての置換を生成する。このように生成された抗体変異種は、各粒子内にパッケージされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物として、糸状ファージ粒子から単一分子価で表示される。該ファージに表示された変異種は、次に本明細書中で開示されたその生物学的活性（例えば結合親和性）についてふり分けられる。修飾のための候補となる超可変領域部位を特定するために、アラニン・スキャニング変異誘発を行い、抗原結合に顕著に貢献する超可変領域残基が特定される。別にあるいは加えて、抗体と抗原間の接合点を特定するために、抗原・抗体複合体の結晶構造を分析することが有益であろう。このような接合残基とその近傍の残基は本明細書で詳述した技法による置換候補である。このような変種が一度生成されると、変種団が本明細書で記載されたスクリーニングに供され、１つまたは複数の関連分析に優れた性質を有する抗体がさらなる開発のため選択され得る。
【０１４５】
別種のアンタゴニストのアミノ酸変種は、アンタゴニストのもともとのグリコシル化・パターンを変える。変えることは、アンタゴニストにおいては１つまたは複数の炭水化物部分の欠損が見られることを、および／またはアンタゴニト中には存在しない１つまたは複数のグリコシル化部位が添加することを意味する。
【０１４６】
ポリペプチドのグリコシル化は、一般的にＮリンクまたはＯリンクのどちらかである。Ｎリンクは炭水化物部分をアスパラギン残基の側鎖に対して付加することをいう。トリペプチド配列、つまり、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリン以外のアミノ酸）が炭水化物部分のアスパラギン側鎖に対する酵素的付加の認識配列である。このように、ポリペプチドにおいてこれらトリペプチド配列のどれかが存在することによって、潜在的グリコシル化部位が創出される。Ｏリンクのグリコシル化はＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの糖のいずれかひとつがヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはスレオニン（５ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用してもよい）に対する付加のことをいう。グリコシル化部位をアンタゴニストに付加することは、アミノ酸配列を（Ｎリンクグリコシル化部位の場合）１つまたは複数の上記記載のトリペプチド配列含むように変更させることによって簡単に達成される。この変更はまた、（Ｏリンクのグリコシル化部位の場合）もともとのアンタゴニストの配列に対して１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基を付加または置換する事によって行い得る。
【０１４７】
アンタゴニストのアミノ酸配列変種をコードする核酸分子は、現況技術に知られている多くの方法を使用して調製される。これらの方法には、（自然派生するアミノ酸配列変種の場合は）天然供給源からの単離、またはオリゴヌクレオチドに媒介される（または部位に向けて行われる）変異、ＰＣＲ変異およびアンタゴニストの初期調製変種または非変種物のカセット変異による調製が含まれるがこれらには限定されない。
【０１４８】
エフェクター作用については、例えば、アンタゴニストの抗原依存細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存細胞毒性（ＣＤＣ）を高めるように本発明のアンタゴニストを修飾することは望ましい。これは１つまたは複数のアミノ酸置換を、抗体アンタゴニストのＦｃ領域に導入することにより達成され得る。別にまたは付加的に、シスチン残基をＦｃ領域に導入して、これによってこの領域に鎖内ジスルフィド結合形成をしてもよい。このように生成されたホモ二量体抗体がインターナリゼーション能力を高め、および／または補体媒介される細胞死および抗体依存細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）を増加させてきたかもしれない。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）参照。抗腫瘍活性が高められたホモ二量体抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されたように、ヘテロ二作用性クロスリンカーを使用しても調製され得る。また、二重Ｆｃ領域を有する抗体が工作でき、これによって補体の溶菌およびＡＤＣＣ能力が高められ得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　３：２１９−２３０（１９８９）参照。
【０１４９】
アンタゴニストの血清半減期を増加させるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載のように、アンタゴニスト（特に抗体フラグメント）にサルベージ受容体結合エピトープを入れてもよい。本明細書で使用された、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」はＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）Ｆｃ領域のエピトープをいい、ｉｎ　ｖｉｖｏでの血清半減期を増加させることに関与する。
【０１５０】
ＩＶ．医薬製剤
本発明によるアンタゴニストの治療用製剤が、所望の純度を有する１種または複数のアンタゴニストを任意の薬剤として許容される担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　１６ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ．Ａ．Ｅｄ．（１９８０）と混合して冷凍乾燥製剤または水性溶液の形に貯蔵用として調製される。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒であって、緩衝液（燐酸、クエン酸、他の有機酸等）；抗酸化剤（アスコルビン酸、メチオニンを含む）；保存剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；ヘキサメソニウムクロライド；ベンズアルコニウムクロライド；ベンズエソニウムクロライド；フェノール；ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン：セタコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；ｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基以下）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、またはイムノグロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含むモノサッカライド、ジサッカライド、および他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；シュークロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等の糖；ナトリウム等のカウンターイオンを作る塩；金属複合体（例えば、Ｚｎタンパク複合体）；および／または；ツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）、プルロニクス（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ）（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン系表面活性剤が含まれる。
【０１５１】
典型的抗ＣＤ２０抗体製剤がＷＯ９８／５６４１８に記載されており、引用によって明確に本明細書にとり入れられている。この公報には４０ｍｇ／ｍＬのリツキシマブ、２５ｍＭ酢酸、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジルアルコール、０．０２％ポリソルベート２０（ｐＨ５．０）を含んだ、２から８℃にて２年の最小貯蔵期間を有する液体の複数回投与用製剤が記載されている。別の所定の抗ＣＤ２０製剤は、９．０ｍｇ／ｍＬ塩酸ナトリウム中にいれた１０ｍｇ／ｍＬリツキシマブ、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、注射用滅菌水、ＰＨ６．５が含まれる。皮下投与用に適する冷凍乾燥組成はＷＯ９７／０４８０１に記載されている。このような冷凍乾燥組成は、適切な希釈剤で高タンパク質濃度に戻され、この戻された組成が本明細書で処理される哺乳類に皮下投与されてもよい。
【０１５２】
本明細書の製剤はまた、特定の兆候を治療するのに必要なひとつ以上の化合物ｚｉ；好ましくはお互いに不利に影響しあわない相補的活性を有するものを含んでいてもよい。例えば、細胞毒性剤、化学療法剤、サイトカインまたは免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン等のＴ細胞上で作用するもの、Ｔ細胞と結合する抗体、例えばＬＦＡ−１と結合するもの）がさらに提供されることが望ましい。このような他剤の有効量は、組成中に存在するアンタゴニストの量、疾病または疾患もしくは治療のタイプ、および上記に記載した他のファクターに左右される。これらは、上記で使用したような同じ投与量および同じ投与ルート、または上記で使用された投与量の約１から９９％で一般的に使用される。
【０１５３】
活性成分は、例えばコアセルベーション（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ）技法または界面ポリメリゼーションによって調整されたマイクロカプセル（例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンのマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）中に、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミン微細球、マイクロエマルジョン、ナノ−パーティクルおよびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中に閉じこめられてもよい。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　１６ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ（１９８０）に開示されている。
【０１５４】
持続放出調製物を調製してもよい。持続放出調製物の適切な例には、アンタゴニストを含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが含まれる。このマトリックスは、成形品（例えばフィルムまたはマイクロカプセル）になっている。持続性分泌マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシメチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第３，７７３，９１９）、Ｌ−グルタミン酸とｙエチルＬ−グルタミン酸のコポリマー、非生分解性エチレンー酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ　ＤＥＰＯＴ（登録商標）（乳酸／グリコール酸コポリマーおよびロイプロリド酢酸からなる注入可能な微細球化合物）等の生物分解性乳酸／グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸が含まれる。
【０１５５】
ｉｎ　ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は殺菌されていなければならない。これは、殺菌した濾過膜を通して濾過することで容易に達成される。
【０１５６】
Ｖ．アンタゴニストによる治療
Ｂ細胞表面抗原に結合するアンタゴニストを含む組成物およびサイトキシン・アンタゴニスト（例えば抗体）を含む組成物は、両方とも同じ組成物中に配合され、服用量に分けられ、適切な医学的慣習に合致した方法で投与され得るであろう。好ましくは、抗サイトカインは、抗ＩＬ１０抗体を含んでおり、Ｂ細胞アンタゴニストはＢ細胞枯渇抗体、好ましくはリツキサン（登録商標）等の抗ＣＤ２０抗体を含むことになる。本文章中で考慮される因子には、治療される特定の疾病または疾患、治療される特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、疾病または疾患の原因、薬剤の送達部位、投与法、投与スケジュール、医療従事者に知られている他の要因が含まれる。投与すべきアンタゴニストの治療上有効な量はこのようなことを考慮することによって決定される。
【０１５７】
一般的に、非経口的に投与されるアンタゴニストの治療上有効な１回当たりの量は、患者の体重当たり１日約０．１から２０ｍｇ／ｋｇの範囲であって、使用されるアンタゴニストの初期範囲は、通常２から１０ｍｇ／ｋｇであるといわれている。
【０１５８】
好ましいアンタゴニストは、例えば細胞毒性剤と結合されていないリツキサン（登録商標）のような抗体である。未結合の抗体の適切な投与量は、例えば、約２０ｍｇ／ｍ^２から約１０００ｍｇ／ｍ^２である。ある実施の形態では、抗体の投与量は、現在リツキサン（登録商標）について推奨されている量とは異なる。例えば、実質的に３７５ｍｇ／ｍ^２未満の抗体（１回の服用量は、約２０ｍｇ／ｍ^２から約２５０ｍｇ／ｍ^２、例えば、５０ｍｇ／ｍ^２から約２００ｍｇ／ｍ^２の範囲である）を１回かまたは複数回で、患者に投与してもよい。
【０１５９】
さらに、抗体の初回投与量を１回または複数回投与したあと、後続投与量を１回または複数回投与する。ここで、後続投与量の抗体のｍｇ／ｍ^２は、初回投与量の抗体のｍｇ／ｍ^２より多い。例えば、初回投与量は、約２０ｍｇ／ｍ^２から約２５０ｍｇ／ｍ^２（例えば、５０ｍｇ／ｍ^２から約２００ｍｇ／ｍ^２）の範囲であって、後続投与量は約２５０ｍｇ／ｍ^２から約１０００ｍｇ／ｍ^２の範囲でよい。
【０１６０】
しかしながら、上記に注釈したように、これらのアンタゴニストの示唆量はかなり治療的裁量にゆだねられる。適切な投与量および投与スケジュールを選択する際の重要な因子は、上記に記載された様に、得られる結果である。
【０１６１】
例えば、進行性の急性疾病の治療用には、比較的高い投与量が最初に必要とされるであろう。最も有効な結果を得るためには、疾病または疾患によってはアンタゴニストを疾病または疾患の最初の兆候、診断、出現または発生のあったできるだけ近時に、または疾病および疾患の緩解期に投与することである。
【０１６２】
アンタゴニストは、つまり、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内および、望ましくは、局所的免疫抑制のためには病変内投与、を含めた手段のうち適宜な手段で投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。
【０１６３】
加えて、アンタゴニストは、脈動注入（パルス・インフュージョン）によって、例えばアンタゴニストを減らしながら適切に投与され得る。好ましくは、投与は注射によって、最も好ましくは静脈または皮下注入によって行われるが部分的には投与が短期であるかまた常習的であるかによって左右される。
【０１６４】
他の化合物（細胞毒性剤、化学療法剤、免疫抑制剤および／またはサイトカイン等）をアンタゴニストと共に投与してもよい。この併用投与には、別々の製剤をまたは単一医薬品的製剤を用いて同時投与すること、いずれかの順番で連続投与することが含まれ、両方（またはすべて）の活性薬剤が同時にその生物学的活性を示す期間があることが好ましい。
【０１６５】
タンパク質アンタゴニストの患者への投与とは別に、本出願では遺伝子治療によるアンタゴニストの投与が考えられる。アンタゴニストをコードする核酸のこのような投与は「治療学的有効量のアンタゴニストを投与する」という表現によって包含される。例えば、細胞内抗体を生成するための遺伝子治療の使用に関する１９９６年３月１４日発行ＷＯ９６／０７３２１を参照。
【０１６６】
（ベクター中に任意に含まれる）核酸を患者の細胞中にいれるには、ｉｎ　ｖｉｖｏおよびｅｘ　ｖｉｖｏの２つの主なアプローチがある。ｉｎ　ｖｉｖｏデリバリーの場合は、核酸は患者の通常はアンタゴニストが必要とされる部位に直接注入される。ｅｘ　ｖｉｖｏ治療の場合は、患者の細胞を取り出し、核酸をこれらの単離された細胞中に導入し、この改造された細胞は直接患者に投与されるかまたは例えば多孔質膜内にカプセル化されて患者に移植される（米国特許第４，８９２，５３８および５，２８３，１８７参照）。核酸を生細胞中に導入するには様々な技法がある。これらの技法は、核酸が培養細胞にｉｎ　ｖｉｔｒｏで移されるかまたは所期のホストの細胞中にｉｎ　ｖｉｖｏで移されるかどうかに依存して異なる。核酸をｉｎ　ｖｉｔｒｏで哺乳類細胞中に移すのに適した技法には、リポソームの使用、電気穿孔法、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、燐酸カルシウム沈殿法等が含まれる。遺伝子のエクスビボ・デリバリーに通常使用されるベクターはレトロウイルスである。
【０１６７】
現在好まれているｉｎ　ｖｉｖｏ核酸トランスファー技法には、ウイルスベクター（アデノウイスル、ヘルペスシンプレックスＩウイルスまたはアデノ系ウイルス）によるトランスフェクションおよび脂質系（脂質に媒介される遺伝子の転移に有用な脂質には、例えばＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ）がある）が含まれる。ある状況では、核酸供給源に、目標細胞を標的とする作用剤（細胞表面膜タンパク質または目標細胞に特異的な抗体）および目標細胞上の受容体に対するリガンド等を供給することが望ましい。リポソームを使用する場合、例えば特定の細胞型に反応するキャプシドタンパク質またはフラグメント、循環中に内包化を行うタンパク質に対する抗体、および細胞内局在化を目標とし細胞内半減期を引き伸ばすタンパク質を標的とするか／または取り込みを促進するために、エンドサイトーシスに付随する細胞表面膜タンパク質と結合するタンパク質を使用し得る。受容体に媒介されるエンドサイトーシスの技法は、例えばＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）、およびＷａｎｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８７：３４１０−３４１４（１９９０）に記載されている。現在知られている遺伝子作成および遺伝子治療プロトコールについては、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５６：８０８−８１３（１９９２）参照。またＷＯ９３／２５６７３およびそこに引用された引用例を参照。
【０１６８】
ＶＩ．製品
本発明の他の実施形態では、上記に記載された疾病または疾患の治療に有用な物質を含む製品が提供される。製品は、容器、および容器上のまたは容器に付随したラベルまたは添付文書が含まれる。適切な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジ等がある。容器はガラスまたはプラスチック等の様々な材質から作成されてもよい。容器は選択された疾病または疾患を治療するのに効果的な組成物を保持または含み、滅菌されたアクセス口を有す（例えば、容器は静脈溶液袋または皮下注射針によって孔があけられる穏やかなストッパーを有すバイアルであってよい）。構成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、Ｂ細胞表面マーカーに結合するアンタゴニストである。好ましくはＣＤ２０および抗サイトカイン抗体（例えば、抗ＩＬ１０抗体）である。ラベルまたはパッケージ挿入物には、構成物が本明細書中に掲載されているような自己免疫疾病を有する患者またはかかりやすい患者を治療するために使用されることが表示されている。製品には、注入用静菌性水（ＢＷＦ１）、燐酸緩衝生理食塩水、リンガー液およびデキストローゼ溶液等の薬剤として許容される希釈緩衝液を含む第２の容器が含まれていてもよい。商業的および使用者の立場からの望ましい他の物質（他の緩衝液、希釈材、フィルター、針、およびシリンジ等）を含んでいてもよい。
【０１６９】
本発明はさらに詳細に次の非限定実施例によって説明される。明細書中のすべての引用の開示が、引用することによって明確に取り込まれている。
【０１７０】
（例）
例１
非ホジキンリンパ腫の治療
非ホジキンリンパ腫を有す患者に、抗ＩＬ１０抗体を１週に５０ｍｇ／ｍ^２静脈注射の投与量で４週間、静脈内に投与する。その後、患者には、リツキサン（登録商標）を次の投与スケジュールに従って静脈内に投与する。
（Ａ）５０ｍｇ／ｍ^２静脈注射、１日目
１５０ｍｇ／ｍ^２静脈注射、８、１５、および２２日目
（Ｂ）１５０ｍｇ／ｍ^２静脈注射、１日目
３７５ｍｇ／ｍ^２静脈注射、８、１５、および２２日目
（Ｃ）３７５ｍｇ／ｍ^２静脈注射、１、８、１５、および２２日目
同じ患者に、米国特許５，７３６，１３７に記載のレジメンにしたがってＣＨＯＰ化学療法を投与する。
治療後、患者をモニターし、リンパ腫の状態、数、および腫瘍のサイズに与える影響を評価する。
【０１７１】
例２
進行病気における固形腫瘍の処置
Ｂ細胞の関与によって特徴付けられる結腸直腸進行癌患者に、抗ＩＬ１０抗体およびリツキサン（登録商標）を例１と同じ投与量で同時に投与する。
【０１７２】
治療後、腫瘍の縮小、腫瘍抗原の発現低下、または疾病の予後を評価する他の手段を基にして、このような処置が抗腫瘍応答を生じるかを決定するために、患者を評価した。

Claims (86)

1. 血液学的悪性腫瘍細胞または固形非血液学的腫瘍細胞の、少なくとも１つの化学療法剤に対する耐性を回避、低下または解消する方法であって、血液学的悪性腫瘍または非血液学的腫瘍と診断された患者に対して、少なくとも１つの化学療法剤の投与前、投与時、または投与後に抗サイトカイン抗体またはそのフラグメントもしくはサイトカインアンタゴニストを投与することを含む方法。
2. 前記血液学的細胞がＢ細胞リンパ腫または白血病細胞である請求項１記載の方法。
3. 前記Ｂ細胞リンパ種が、軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽性ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症からなる群より選択される請求項２記載の方法。
4. 前記Ｂ細胞リンパ種が軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である請求項３に記載の方法。
5. 前記白血病細胞が、急性リンパ芽球白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球白血病、リンパ球性白血病、単核球性白血病、骨髄性白血病、および前骨髄球白血病からなる群より選択される請求項２記載の方法。
6. 前記少なくとも１つの化学療法剤が、ＣＨＯＰ、ＩＣＥ、ミトザントロン、シタラビン、ＤＶＰ、ＡＴＲＡ、イダルビシン、へルザー化学療法レジメン、ララ化学療法レジメン、ＡＢＶＤ、ＣＥＯＰ、２−ＣｄＡ、ＦＬＡＧ＆ＩＤＡ（続いてＧ−ＣＳＦ治療を施しても施さなくても可）、ＶＡＤ、Ｍ＆Ｐ、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ、ＡＢＣＭ、ＭＯＰＰ、ＤＨＡＰ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、メトトレキセートおよびシスプラチンからなる群より選択される請求項１記載の方法。
7. 前記サイトカインが、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１０およびＴＮＦアルファからなる群より選択される請求項１記載の方法。
8. 前記サイトカインがＩＬ１０である請求項７記載の方法。
9. 前記抗ＩＬ１０抗体がヒト化されているかまたはヒトモノクロナール抗体である請求項８記載の方法。
10. 前記抗ＩＬ１０抗体を体重ｋｇ当たり０．０１から１０００ｍｇの投与量で投与する請求項９記載の方法。
11. 抗体の投与量が体重ｋｇ当たり約０．１から５０ｍｇの範囲にある請求項１０記載の方法。
12. 前記抗サイトカイン抗体を前記化学療法剤と同時におよび／または化学療法剤の前に投与する請求項１記載の方法。
13. 前記抗サイトカイン抗体を化学療法剤と同時にまたは化学療法剤投与の約１時間から３０日前に投与する請求項１２記載の方法。
14. 前記リンパ腫の患者の血清を、前記抗サイトカイン抗体またはそのフラグメントもしくはアンタゴニストの投与の前にサイトカインプロフィールについてテストする請求項１記載の方法。
15. 請求項１記載の方法に従って抗体またはアンタゴニストを投与するためのキット。
16. 請求項１４記載の方法に従ってサイトカインプロフィールをテストするキット。
17. 請求項１６記載の方法に従ってサイトカインプロフィールをテストして抗体またはアンタゴニストを投与するキット。
18. 血液学的悪性腫瘍細胞の、治療剤に対する耐性を回避、低下、または解消する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを血液学的悪性腫瘍と診断された患者に対して投与することを含む上記方法。
19. 血液学的悪性腫瘍細胞の、治療剤によって誘発されるアポトーシスに対する耐性を回避、低下、または解消する方法であって、抗サイトカイン抗体またはサイトカインアンタゴニストを血液学的悪性腫瘍と診断された患者に対して投与することを含む上記方法。
20. 前記悪性腫瘍がＢ細胞リンパ腫または白血病である請求項１８記載の方法。
21. 前記悪性腫瘍がＢ細胞リンパ腫または白血病である請求項１９記載の方法。
22. 化学療法後再発をした血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはそのフラグメントもしくはサイトカインアンタゴニストを前記患者に投与することを含む上記方法。
23. 化学療法に対して治療抵抗性である血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはそのフラグメントもしくはサイトカインアンタゴニストを前記患者に投与することを含む上記方法。
24. 前記悪性腫瘍がＢ細胞リンパ腫または白血病である請求項２１記載の方法。
25. 治療抗体またはフラグメントによる治療の後再発した血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはフラグメントもしくはサイトカインアンタゴニストを前記患者に投与することを含む上記方法。
26. 前記治療抗体が、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３７、抗ＣＤ４０または抗ＣＤ２８抗体である請求項２３記載の方法。
27. 治療抗体による治療に対して治療抵抗性である血液学的悪性腫瘍を有する患者を治療する方法であって、抗サイトカイン抗体またはフラグメントもしくはサイトカインアンタゴニストを前記患者に投与することを含む上記方法。
28. 前記血液学的悪性腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫または白血病である請求項２５記載の方法。
29. Ｂ細胞リンパ腫患者を治療する方法であって、前記患者に治療上有効量のＢ細胞枯渇抗体を、抗サイトカイン抗体またはフラグメントと同時にまたは連続していずれかの順番で投与することを含む上記方法。
30. このようなＢ細胞枯渇抗体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２７、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤω７８　ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６からなる群より選択されるＢ細胞抗原と結合する請求項２９記載の方法。
31. 前記Ｂ細胞枯渇抗体がＣＤ２０と結合する請求項２１記載の方法。
32. 前記Ｂ細胞枯渇抗体がＣＤ２２と結合する請求項２９記載の方法。
33. 少なくとも１つの化学療法剤を投与することをさらに含む請求項２９記載の方法。
34. 前記少なくとも１つの化学療法剤が、ＣＨＯＰ、ＩＣＥ、ミトザントロン、シタラビン、ＤＶＰ、ＡＴＲＡ、イダルビシン、へルザー化学療法レジメン、ララ化学療法レジメン、ＡＢＶＤ、ＣＥＯＰ、２−ＣｄＡ、ＦＬＡＧ＆ＩＤＡ（続いてＧ−ＣＳＦ治療を施しても施さなくても可）、ＶＡＤ、Ｍ＆Ｐ、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ、ＡＢＣＭ、ＭＯＰＰ、ＤＨＡＰ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、メトトレキセートおよびシスプラチンからなる群より選択される請求項３３記載の方法。
35. 前記抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストが、前記抗ＣＤ２０抗体および前記少なくとも１つの化学療法剤の前に投与される請求項３３記載の方法。
36. 前記抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストが抗ＣＤ２０抗体の前に投与される請求項２９記載の方法。
37. 前記サイトカインが、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１０およびＴＮＦアルファからなる群より選択される請求項２９記載の方法。
38. 前記サイトカインがＩＬ１０である請求項３７記載の方法。
39. 前記抗ＣＤ２０抗体が、キメラ抗ＣＤ抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体またはヒト抗ＣＤ２０抗体である請求項２９記載の方法。
40. 前記抗ＣＤ２０抗体がキメラ抗ＣＤ２０抗体である請求項３９記載の方法。
41. 前記キメラ抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブ（登録商標）である請求項４０記載の方法。
42. 前記リツキシマブ（登録商標）を体重ｋｇ当たり０．４から２０ｍｇの投与量で投与する請求項４１記載の方法。
43. 前記少なくとも１つの化学療法剤がＣＨＯＰ化学療法レジメンの一部である請求項３３記載の方法。
44. 前記Ｂ細胞リンパ腫が、軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽性ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症からなる群より選択される請求項２９記載の方法。
45. 前記Ｂ細胞リンパ種が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である請求項４４記載の方法。
46. 前記Ｂ細胞リンパ種が軽度濾胞ＮＨＬである請求項４５記載の方法。
47. 前記リンパ腫の患者の血清を抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストの投与の前にサイトカインプロフィールについてテストする請求項２９記載の方法。
48. 請求項２９記載の方法に従って抗ＣＤ２０抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与するためのキット。
49. 請求項４２記載の方法に従ってサイトカインプロフィールをテストし、抗ＣＤ２０抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与するためのキット。
50. Ｂ細胞が関与する腫瘍を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、サイトカインに特異的な抗体およびＢ細胞によって発現される抗原と結合するＢ細胞枯渇抗体を有効量投与することを含む上記方法。
51. 請求項５０記載の方法に従って抗ＣＤ２０抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与するためのキット。
52. 前記抗サイトカイン抗体が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子およびコロニー刺激因子からなる群より選択されるサイトカインに結合する請求項５０記載の方法。
53. 前記抗サイトカイン抗体が、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子およびコロニー刺激因子からなる群より選択されるサイトカインに結合する請求項５１記載の方法。
54. 前記抗サイトカイン抗体がＩＬ１０に特異的に結合する請求項５０記載の方法。
55. 前記抗サイトカイン抗体がＩＬ１０に特異的に結合する請求項５１記載の方法。
56. Ｂ細胞抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２７、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤω７８　ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６からなる群より選択される請求項５０記載の方法。
57. 請求項５１記載の方法に従って抗ＣＤ２０抗体および抗サイトカイン抗体またはアンタゴニストを投与するためのキット。
58. 前記Ｂ細胞抗原がＣＤ２０である請求項５６記載の方法。
59. 前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体またはキメラ抗ＣＤ２０抗体である請求項５８記載の方法。
60. 前記抗体がＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を有する請求項５９記載の方法。
61. 前記抗ＣＤ２０がＢ細胞のアポトーシスを誘導する請求項５９記載の方法。
62. 前記抗ＣＤ２０抗体が、ＡＴＣＣ６９１１９によって産生されるリツキサン（登録商標）、キメラ抗ＣＤ２０抗体である請求項５９記載の方法。
63. 前記患者は、肝臓癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、卵巣癌、肺癌、食道癌、気管癌、腎臓癌、膀胱癌および結腸直腸癌からなる群より選択された癌に付随した固形非リンパ腫腫瘍を有する請求項５１記載の方法。
64. 前記Ｂ細胞リンパ腫が、軽度／濾胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球腫（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度／濾胞ＮＨＬ、中等度散在性ＮＨＬ、高度免疫芽性ＮＨＬ、高度リンパ芽性ＮＨＬ、高度小非分割細胞ＮＨＬ、嵩高疾病ＮＨＬ、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症からなる群より選択される請求項５０記載の方法。
65. 前記抗体を、静脈内、筋肉内、腫瘍内または腹腔内投与によって投与する請求項５０記載の方法。
66. 前記抗体を、静脈内、筋肉内、腫瘍内または腹腔内投与によって投与する請求項５１記載の方法。
67. 前記固形腫瘍が、前癌、初期病期（病期Ｉおよび病期ＩＩ固形癌）、（病期ＩＩ以降の）進行癌、または転移した腫瘍を含む請求項５１記載の方法。
68. 前記患者が結腸直腸癌または肺癌を有する請求項５１記載の方法。
69. Ｂ細胞が関与する結腸直腸癌または肺癌を治療する方法であって、このような治療を必要としている患者にＩＬ１０に特異的な抗体および枯渇抗ＣＤ２０抗体を有効量投与することを含む上記方法。
70. 前記枯渇抗ＣＤ２０抗体が、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体である請求項６９記載の方法。
71. 前記抗体がＡＴＣＣ６９１１９によって産生されるリツキサン（登録商標）である請求項７０記載の方法。
72. その治療を必要としている患者でＢ細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体を投与することを含む上記方法。
73. その治療を必要としている患者で非ホジキンリンパ腫を治療する方法であって、少なくとも抗ＩＬ１０抗体の投与することを含む上記方法。
74. その治療を必要としている患者でＢ細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体および少なくとも１つのＢ細胞枯渇抗体を投与することを含む上記方法。
75. 前Ｂ細胞枯渇抗体が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２７、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤω７８　ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６からなる群より選択されるＢ細胞抗原と結合する請求項６３記載の方法。
76. その治療を必要としている患者でＢ細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗ＣＤ２０または抗ＣＤ２２抗体を投与することを含む上記方法。
77. その治療を必要としている患者でＢ細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む上記方法。
78. その治療を必要としている患者で非ホジキンリンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗体を投与することを含む上記方法。
79. その治療を必要としている患者で非ホジキンリンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む上記方法。
80. その治療を必要としている患者で非ホジキンリンパ腫を治療する方法であって、抗ＩＬ１０抗体およびＢ細胞枯渇抗ＣＤ２２抗体を投与することを含む方法。
81. 前記抗体がリツキサン（登録商標）である請求項７７記載の方法。
82. 前記抗体がリツキサン（登録商標）である請求項７９記載の方法。
83. 患者においてＢ細胞リンパ腫を治療する併用療法であって、抗ＩＬ１０抗体、Ｂ細胞枯渇抗ＣＤ２０抗体を有効量投与することおよび化学療法を含む上記方法。
84. 前記抗ＣＤ２０抗体がリツキサン（登録商標）である請求項８３記載の方法。
85. 前記患者がＢ細胞枯渇抗体による先治療の後再発する請求項８３記載の方法。
86. 前記抗体がリツキサン（登録商標）である請求項８５記載の方法。