MX2011004985A - Terapias de combinacion inmunoterapeutica de cd37 y usos de las mismas. - Google Patents

Terapias de combinacion inmunoterapeutica de cd37 y usos de las mismas.

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Abstract

La presente descripción proporciona métodos para usar moléculas de unión específicas de CD37 (tal como un anticuerpo o SMIP específico de CD37) en combinación con inhibidores de mTOR (tal como rapamicina y derivados o análogos de la misma) o inhibidores de fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K) (tal como inhibidores específicos de p110 o similares), que se puede hacer concurrentemente o de manera secuencial, para tratar o prevenir una enfermedad hiperproliferativa relacionada a células B, tal como un linfoma, carcinoma, mieloma o similares.

Description

TERAPIAS DE COMBINACION INMUNOTERAPEUTICA DE CD37 Y USOS DE LAS MISMAS Campo de la Invención La presente descripción proporciona en general composiciones y métodos para tratar trastornos de células B, y de manera más específica, al uso de moléculas de unión específica a CD37 en combinación con inhibidores de mTOR o de fosfatidilinositol-3 -cinasa (PI3K) , incluyendo composiciones de las mismas, que actúan de manera sinérgica al tratar o prevenir enfermedades hiperproliferativas relacionadas a células B, tal como linfoma, carcinoma, mieloma, o similares.
Antecedentes de la Invención El sistema inmunitario humano protege en general al cuerpo de la invasión de sustancias extrañas y patógenos. Un componente del; sistema inmunitario son los linfocitos B, también referidos como células B, que producen anticuerpos que protegen al cuerpo al unirse a, y en algunos casos al mediar la destrucción de, una sustancia extraña o patógeno. Sin embargo, en algunos casos, el sistema inmunitario funciona mal y resulta la enfermedad. Por ejemplo, hay numerosos cánceres, enfermedades autoinmunitarias , y enfermedades inflamatorias que comprenden la proliferación descontrolada de células B.
Se pueden identificar células B por moléculas en su Ref . =220064 superficie celular, tal como CD37. CD37 es una proteína de 40-52 kDa pesadamente glicosilada que corresponde a la familia transmembrana de tetraespaninas de antígeno de superficie celular, que se expresa altamente en células B normales productoras de anticuerpos pero no en pre-células B o células de plasma. Además de las células B normales, casi todas las malignidades de origen de células B son positivas a la expresión de CD37, incluyendo leucemia linfocítica crónica (CLL) , linfoma no de Hodgkins (NHL) , y leucemia de células pilosas (Moore et al., J. Pathol . 152:13 (1987); Merson y Brochier, Immunol . Lett . 19:269 (1988); y Faure et al., Am. J. Dermatopathol . 12:122 (1990)).
Se han desarrollado unas pocas inmunoterapias específicas de CD37. Un anticuerpo monoclonal murino tipo IgGl específico para CD37, MB-1, se marcó con 131I y se probó en un ensayo clínico en el tratamiento de NHL (ver Press et al., J. Clin. Oncol. 7:1027 (1989); Bernstein et al., Cáncer Res. (Suppl.) 50:1017 (1990); Press et al., Front . Radiat . Ther. Oncol. 24:204 (1990); Press et al., Adv. Exp . Med. Biol. 303:91 (1991) y Brown et al., Nucí. Med. Biol. 24:657 (1997) ) . El anticuerpo MB-1 carece de funciones efectoras de Fe, tal como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) , y el anticuerpo MB-1 desnudo no inhibe el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto in vivo (Buchsbaum et al., Cáncer Res. 52:6476 (1992)). Además, a ratones se administró un inmunoconjugado que tiene adriamicina enlazada a G28-1, otro anticuerpo monoclonal murino anti-CD37, y se mostró que se internaliza con adriamicina que se libera de manera intracelular (ver, Braslawsky et al., Cáncer Immunol . Immunother. 33:367 (1991)). Una proteína de fusión manejada, llamada un producto inmunofarmacéutico modular pequeño (SMIPMR) , dirigido a CD37 actualmente se está probando en humanos (ver, por ejemplo, Publicaciones de Solicitudes de Patente de los Estados unidos Nos. 2003/0133939 y 2007/0059306; Publicación PCT No. O 2009/126944) .
Aunque se ha llevado a cabo investigación extensiva en terapias basadas en anticuerpos, permanece la necesidad en la técnica de composiciones y métodos alternativos o mejorados para tratar desórdenes o enfermedades asociadas a células B.
Breve Descripción de la Invención La presente descripción proporciona métodos, composiciones y kits para el uso combinado de moléculas de unión específica a CD37 e inhibidores de mTOR o PI3K para reducir células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B.
En un aspecto, la presente descripción proporciona un método para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal en células B en un sujeto que tiene o se sospecha que tiene la enfermedad o trastorno que comprende tratar (es decir, administrar a) un sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de una molécula de unión específica a CD37 y una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de mTO o PI3K. Se proporcionan métodos adicionales de acuerdo a las reivindicaciones 2 a 20 y se describen en la presente.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona un kit para tratar un linfoma de Hodgkin que comprende: (a) una dosis unitaria de una molécula de unión específica a CD37, y (b) una dosis unitaria de un inhibidor de mTOR o PI3K. Se proporcionan kits adicionales de acuerdo a la reivindicación 22 y se describen en la presente.
En otro aspecto, la presente descripción proporciona una composición, que comprende: (a) una molécula de unión específica a CD37, y (b) un inhibidor de mTOR o de fosfatidilinositol-3 -cinasa (PI3K) . Se proporcionan composiciones adicionales de acuerdo a las reivindicaciones 24-36 y se describen en la presente.
Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra el efecto de combinación de CAS-024 y rapamicina en el crecimiento de células Rec-1. Se usaron ambas moléculas a concentraciones equivalentes.
La Figura 2 muestra el efecto de combinación de CAS-024 y rapamicina en el crecimiento de células SU-DHL-6. Ambas moléculas se usaron a concentraciones equivalentes.
Las Figuras 3A y 3B muestran gráficas del índice de Combinación (CI) para las líneas de células Rec-1 y SU-DHL-6. Los valores CI ilustran la interacción de CAS- 024 y rapamicina graficados a través de (A) nivele de efecto y (B) el CI medio ± intervalo de confianza en 95 % para el intervalo de efecto completo.
La Figura 4 muestra el efecto de combinación de CAS-024 y temsirolimus en el crecimiento de células SU-DHL-6. Se usaron ambas moléculas a concentraciones equivalentes.
La Figura 5 muestra el efecto de combinación de CAS-024 y temsirolimus en el crecimiento de células Rec-1. Se usaron ambas moléculas a concentraciones equivalentes.
La Figura 6 muestra gráficas de CI de la combinación de CAS-024 con temsirolimus para la línea de células SU-DHL-6 a través de los niveles de efecto.
La Figura 7 muestra gráficas de CI de la combinación de CAS-024 con temsirolimus para la línea de células Rec-1 á través de los niveles de efecto.
La Figura 8 muestra gráficas de CI de la combinación de CAS-024 con temsirolimus de las líneas de células Rec-1 y S U-DHL-6. Los valores de CI representan el CI medio + intervalo de confianza de 95 % para el intervalo completo de efecto.
La Figura 9 es una gráfica de CI para CAS-024 con LY294002 para las líneas de células SU-DHL-6 a través de los niveles de efecto. Los valores son la media de tres experimentos independientes.
Descripción Detallada de la Invención La presente descripción proporciona composiciones y métodos para el uso combinado de moléculas de unión específica a CD37 e inhibidores de mTOR o PI3K para reducir células B que están asociadas a ciertas enfermedades o trastornos, tal como cáncer. Un resultado sorprendente de esta combinación es que estos compuestos actúan de manera sinérgica, lo que da por resultado una reducción incrementada de las células B. En un aspecto relacionado, esta descripción proporciona métodos para tratar un individuo que tiene, o se sospecha que tiene, una enfermedad asociada con actividad anormal de células B, tal como un linfoma de células B tal como linfoma no de Hodgkin de células B (NHL) o leucemia de células B tal como leucemia linfocítica crónica, o similares.
Antes de exponer esta descripción en más detalle, puede ser útil para un entendimiento de la misma, proporcionar definiciones de ciertos términos que se van a usar en la presente. Se exponen definiciones adicionales a todo lo largo de esta descripción.
En la presente descripción, cualquier intervalo de concentración, intervalo de porcentaje, intervalo de relación, o intervalo de números enteros se va a entender que incluye el valor de cualquier número entero dentro del intervalo citado, y cuando es apropiado, fracciones de los mismos (tal como un décimo y céntimo de un entero) , a menos que se indique de otro modo. También, cualquier intervalo de números citado en la presente que se relacione a cualquier característica física, tal como subunidades de polímero, tamaño o espesor, se van a entender que incluyen cualquier número entero dentro del intervalo citado, a menos que se indique de otro modo. Como se usa en la presente, "aproximadamente" significa + 20 % del intervalo, valor o estructura indicada, a menos que se indique de otro modo. Se debe entender que los términos "uno" y "una" como se usa en la presente se refieren a "uno o más" de los componentes enumerados. El uso de la alternativa (por ejemplo, "o") se debe entender que significa ya sea uno, o ambos, o cualquier combinación de los mismos de las alternativas. Como se usa en la presente, lós términos "incluye" y "comprende" se usan de manera sinónima. Además, se debe entender que los compuestos individuales, o grupos de compuestos, derivados de las varias combinaciones en las estructuras y sustituyentes descritos en la presente, se describen por la presente solicitud al mismo grado como si cada compuesto o grupo de compuestos se expusiera de manera individual. De esta manera, la selección de estructuras particulares o sustituyentes particulares está dentro del alcance de la presente descripción.
Un "dominio de unión" o "región de unión" de acuerdo a la presente descripción puede ser, por ejemplo, cualquier proteína, polipéptido, oligopéptido o péptido que posee la capacidad de reconocer de manera específica y de unirse a una molécula biológica (por ejemplo, CD37) o complejo de más de una de las mismas o diferentes moléculas o montajes o agregados. Los dominios de unión de ejemplo incluyen regiones variables de anticuerpo de cadena individual (por ejemplo, anticuerpos de dominio, sFv, scFv, Fab) . Se conocen una variedad de ensayos para identificar dominios de unión para la presente descripción que se une de manera específica a un objetivo o diana particular, incluyendo transferencia Western, ELISA, o análisis BiacoreMR.
Los dominios de unión y proteínas de fusión de los mismos de esta descripción pueden ser capaces de unirse a un grado deseado, incluyendo "unión de manera específica o selectiva" a un objetivo o diana en tanto que no se une de manera significativa a otros componentes presentes en la muestra de prueba, si se unen a una molécula objetivo o diana con una afinidad o Ka (es decir, una constante de asociación en equilibrio de una interacción de unión particular con unidades de l/M) de, por ejemplo, mayor que igual a aproximadamente 105 M"1 , 106 NT1 , 107 M"1, 108 109 M"1, 1010 M"1, 1011 M"1, 1012 M"1, o 1013 M"1. Dominios de unión a "alta afinidad" se refiere a aquellos dominios de unión con una Ka de al menos 107 M-l, al menos 108 M"1, al menos 109 M"1, al menos 1010 M"1, al menos 1011 M"1, al menos 1012 M"1, al menos 1013 M"1, o mayor. Dominios de unión "baja afinidad" se refiere a aquellos dominios de unión con una Ka hasta 107 M"1, hasta 106 M"1, hasta 105 M"1, o menos. De manera alternativa, la afinidad se puede definir como una constante de disociación en equilibrio (Ka) de una interacción de unión a particular con unidades de M (por ejemplo, 10"5 M a 10~13 M) . La afinidades de los polipéptidos de dominio de unión y proteínas de unión de acuerdo a la presente descripción se pueden determinar fácilmente usando técnicas convencionales (ver, por ejemplo, Scatchard et al. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660; y patentes de los Estados Unidos Nos. 5,283,173, 5,468,614, o equivalente).
El término "molécula de unión específica a CD37" se refiere a una proteína, polipéptido, oligopéptido o péptido que se une de . manera preferencial al antígeno de proteína CD37 de humano (ver, por ejemplo, Accesos a GenBank Nos. EAW52467.1, EA 52468.1, BAG62633.1, BAH14719.1, BAG62877.1, NP 001765.1 y NP 001035120.1) con respecto a otras proteínas y se une con una Ka de al menos aproximadamente 106 M"1 (por ejemplo, al menos aproximadamente 107 M"1, 108 M"1, 109 M"1, 1010 1011 M"1, 1012 M"1 , o 1013 NT1) .
El término "dominio de unión específica a CD37" se refiere a una porción o dominio de una molécula de unión específica a CD37 directamente responsable de la unión a CD37. Un dominio de unión específica a CD37, por sí mismo (es decir, sin ninguna otra porción de la molécula de unión específica a CD37) se une a CD37 con una Ka de al menos aproximadamente 106 M"1 (por ejemplo, al menos aproximadamente 107 NT1, 108 NT1 , 109 1010 M"1, 1011 M"1, 1012 M"1 o 1013 M"1) . Un dominio de unión especifica a CD37 por sí mismo puede ser suficiente como una molécula de unión específica a CD37. Los dominios de unión específica a CD37 de ejemplo incluyen fragmentos scFv y Fab específicos de CD37, que se pueden usar en dominios variables de anticuerpo anti-CD37 o CDR, tal como dominios variables o CDR de anticuerpos monoclonales G28-1, IP024, WR17, MB371, HH1, o HD28.
Los términos entendidos por aquellos expertos en la tecnología de anticuerpos se dan cada uno con el significado adquirido en la técnica a menos que se defina expresamente de forma diferente: en la presente. Se conoce que los anticuerpos tienen dominios variables de unión al antígeno, una región de articulación, y regiones constantes que median la función efectora. El término "anticuerpo" se refiere a un anticuerpo intacto que comprenden al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces de disulfuro, así como una porción de unión al antígeno de un anticuerpo intacto que tiene o retiene la capacidad para unirse a una molécula objetivo. Un anticuerpo monoclonal o porción de unión al antígeno del mismo puede ser no humano, quimérico, humanizado o humano. Se revisan la función y estructura de inmunoglobulina, por ejemplo, en Harlow et al., Eds . , Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988) .
Por ejemplo, los términos "VL" y "VH" se refieren al dominio de unión variable de una cadena ligera y pesada de anticuerpo, respectivamente. Los dominios de unión variable están constituidos de sub-regiones discretas bien definidas conocidas como "regiones determinantes de complementariedad" (CDR) y "regiones menos variables" (FR) . De manera más específica, cada dominio VH y VL de un anticuerpo está compuesto de CDR y cuatro FR, arregladas del amino terminal a carboxilo terminal en el siguiente orden; FR1, CDR1, FR2 , CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Los dominios variables de cadena pesada y ligera se pueden fusionar conjuntamente a través de una secuencia ligadora de aminoácidos para formar un "fragmento variable de cadena individual" (scFv) . Un "ligador de dominio variable" es una secuencia de aminoácidos de aproximadamente 5 a aproximadamente 35 aminoácidos (por ejemplo, (GlynSer)m, en donde n y m son números enteros independientemente seleccionados de 1 a 6 , de manera preferente n es 4 y m es 3, 4, o 5) interpuestos entre y que conectan un dominio variable de cadena pesada con un dominio variable de cadena ligera o que conecta un dominio de cadena ligera con un dominio variable de cadena pesada, que comprende una función separadora compatible con la interacción de los dos dominios variables de modo que el polipéptido resultante retenga una afinidad de unión específica a la misma molécula objetivo como un anticuerpo que tiene las mismas regiones variables de cadena ligera y pesada.
Los anticuerpos tienen una región de articulación que se sitúa típicamente entre la porción Fab y la región constante (pero una sección inferior de la articulación puede incluir una porción amino-terminal de la región constante) . A manera de antecedente, una articulación inmunoglobulina actúa como un separador flexible para permitir que la porción Fab se mueva libremente en el espacio. De acuerdo a estudios cristalográficos, un dominio de articulación de IgG se puede subdividir de manera funcional y estructural en tres regiones: la superior, el núcleo o intermedia, y las regiones de articulación, inferiores (Shin et al. (1992) Immunol . Rev. 130:87) . Las regiones de articulación, superiores, de ejemplo incluyen EPKSCDKTHT (SEQ ID NO: 263) como se encuentra en IgGl, ERKCCVE (SEQ ID NO: 270) como se encuentra en IgG2 , ELKTPLGDTTHT (SEQ ID NO: 271 ) o EPKSCDTPPP (SEQ ID NO: 272) como se encuentra en IgG3 , y ESKYGPP (SEQ ID NO: 273) como se encuentra en IgG4. Las regiones de articulación, intermedia o de núcleo, de ejemplo incluyen CPPCP (SEQ ID NO: 274) como se encuentra en IgGl e IgG2 , CPRCP (SEQ ID NO: 275) como se encuentra en IgG3 , y CPSCP (SEQ ID NO: 276) como se encuentra en IgG4. En tanto que los anticuerpos tipo IgGl, IgG2, e IgG4 parecen cada uno tener una articulación superior e intermedia individual, IgG3 tiene cuatro en tándem - una que es ELKTPLGDTTHTCPRCP (SEQ ID NO: 277) y tres que son EPKSCDTPPPCPRCP (SEQ ID NO:278).
Los anticuerpos tipo IgA e IgD parecen carecer de una región núcleo tipo IgG, e IgD parece tener dos regiones de articulación, superiores, en tándem (ver, por ejemplo, ESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNT, SEQ ID NO: 279 y GRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTP, SEQ ID NO: 280) . Las regiones de articulación, superiores, tipo silvestre, de ejemplo encontradas en los anticuerpos tipo IgAl e IgA2 son VPSTPPTPSPSTPPTPSPS (SEQ ID NO: 281 ) y VPPPPP (SEQ ID NO:282), respectivamente.
Los anticuerpos tipo IgE e IgM, en contraste, carecen de una región de articulación típica, en lugar de tener un dominio CH2 con propiedades tipo articulación. Las secuencias tipo articulación, superiores, CH2 tipo silvestre, de ejemplo de IgE e IgM se exponen en SEQ ID NO: 283 (VCSRDFTPPTVKILQSSSDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDG QVMDVDLSTASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCA) y SEQ ID NO: 284 (VIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLIC QATGFSPRQIQVS LREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESD LGQSMF TCRVDHRGLTFQQNASSMCVP) , respectivamente.
Como se usa en la presente, una "región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre" se refiere a secuencias de aminoácidos de articulación, superior o intermedia, que se presentan de manera natural interpuestas entre y que conectan los dominios CHl y CH2 (para IgG, IgA, e IgD) o interpuestas entre y conectando los dominios CHl y CH3 (para igE e ig ) encontrados en la cadena pesada de un anticuerpo .
Como se usa en la presente, una "región de articulación de inmunoglobulina, alterada" se refiere a (a) una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre con hasta 30 % de cambios de aminoácidos (por ejemplo, hasta 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, o 5 % sustituciones o supresiones de aminoácidos) , o (b) una porción de una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre que tiene una longitud de aproximadamente: 5 aminoácidos (por ejemplo, aproximadamente 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 aminoácidos) hasta aproximadamente 120 aminoácidos (que tiene de manera preferente una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 40 aminoácidos o de aproximadamente 15 a aproximadamente 30 aminoácidos o de aproximadamente 15 a aproximadamente 20 aminoácidos o de aproximadamente 20 a aproximadamente 25 aminoácidos) , tiene hasta aproximadamente 30 % de cambios de aminoácidos (por ejemplo, hasta aproximadamente 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, o 1 % sustituciones o supresiones de aminoácidos o una combinación de éstos) , y tiene una región de articulación núcleo de IgG como se expone en SEQ ID N0S:274-276.
Además, los anticuerpos contienen regiones constantes. El término "CL" se refiere a una "región constante de cadena ligera de inmunoglobulina" o una "región constante de cadena ligera" es decir, una región constante de una cadena ligera de anticuerpo. El término "CH" se refiere a una "región constante de cadena pesada de inmunoglobulina" o una "región constante de cadena pesada" , que es adicionalmente divisible, dependiendo del isotipo de anticuerpo, en los dominio CH1, CH2 , y CH3 (IgA, IgD, IgG), o CH1, CH2, CH3, y CH4 (IgE, IgM) . Una porción de los dominios de región constante constituye la región Fe (la región "cristalizable de fragmento") de un anticuerpo y es responsable de las funciones efectoras (tal como citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) , fagocitosis celular dependiente de anticuerpo (ADCP) , citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) y fijación de complemento), que se une a receptores Fe (por ejemplo, CD16, CD32, FcRn) , unión a proteína A de vida media in vivo prolongado, y quizá a un transferencia placentaria (ver Capón et al. (1989) Nature 337:525).
Los dominios CH2 humanos tipo silvestre de ejemplo se exponen en SEQ ID NOS: 285-293, los dominios CH3 humanos tipo silvestre se exponen en SEQ ID NOS: 294-302, y los dominios CH4 humanos tipo silvestre se exponen en SEQ ID NO:303 y 304. Una "región constante de inmunoglobulina alterada" se refiere a una región constante de inmunoglobulina con una identidad de secuencia a una región constante tipo silvestre de al menos 75 % (por ejemplo, 80 %, 82 %, 84 %, 86 %, 88 %, 90 %, 91 %, 92 ¾, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o 99.5 %). Por ejemplo, una "región CH2 de inmunoglobulina alterada" o "región CH2 alterada" se refiere a una región CH2 con una identidad de secuencia a una región CH2 de inmunoglobulina tipo silvestre (por ejemplo, una CH2 humana) de al menos 75 % (por ejemplo, 80 %, 82 %, 84 %, 86 %, 88 ¾, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o 99.5 %) . De manera similar, una "región CH3 de inmunoglobulina alterada" o "región CH3 alterada" se refiere a una región CH3 con una identidad de secuencia a una región CH3 de inmunoglobulina tipo silvestre (por ejemplo, una CH3 humana) de al menos 75 % (por ejemplo, 80 %, 82 %, 84 %, 86 %, 88 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, o 99.5 %) .
"Identidad de secuencia", como se usa en la presente, se refiere al porcentaje de residuos de aminoácido en una secuencia que son idénticos con los residuos de aminoácido en otra secuencia de polipéptido de referencia después de alinear la secuencia y de introducir separaciones, si son necesarias, para lograr el porcentaje máximo de identidad de secuencia y no considerando ninguna sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. Los valores del porcentaje de identidad de secuencia se generan por el software NCBI BLAST2.0 como se define por Altschul et al. (1997) "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein datábase search programs" , Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, con los parámetros ajustados por defecto.
En ciertas modalidades, un dominio o región de inmunoglobulina alterada contiene sólo sustituciones conservadoras de aminoácidos de un dominio de inmunoglobulina tipo silvestre. En ciertas modalidades diferentes, un dominio de inmunoglobulina, alterado, contiene sólo sustituciones no conservadoras de aminoácidos de un dominio de inmunoglobulina tipo silvestre. En aún otras modalidades, un dominio alterado de inmunoglobulina contiene sustituciones tanto conservadoras como no conservadoras de aminoácidos.
Una "sustitución conservadora" se reconoce en la técnica como una sustitución de un aminoácido por otro aminoácido que tiene propiedades similares. Las sustituciones conservadoras de ejemplo son bien conocidas en la técnica (ver, por ejemplo, Publicación PCT WO 97/09433, página 10; Lehniger, Biochemistry Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp. 71-77; Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY and Cell Press, Cambridge, MA (1990), p. 8. En ciertas modalidades, una sustitución conservadora incluye una sustitución de leucina a serina.
"Derivado" como se usa en la presente se refiere a una versión químicamente o biológicamente modificada de un compuesto que es estructuralmente similar a un compuesto de origen y (real o teóricamente) derivable de este compuesto de origen. En general, un "derivado" difiere de un "análogo" ya que un compuesto de origen puede ser el material de inicio para generar un "derivado" en tanto que el compuesto de origen no necesariamente se puede usar como el material de inicio para generar un "análogo" .
Una "proteína o polipéptido inmunofarmacéutico modular pequeño "SMIPMR) " se refiere a una proteína de fusión de cadena individual que comprende desde su término amino a carbóxidos . (i) un dominio de unión que se une de manera específica a una molécula objetivo, (ii) un polipéptido ligador (por ejemplo, una articulación de inmunoglobulina, o derivado de la misma, y (iii) (a) un polipéptido CH2 de inmunoglobulina y un polipéptido CH3 de inmunoglobulina de IgG, IgA o IgD, o (b) un polipéptido CH3 de inmunoglobulina y un polipéptido CH4 de inmunoglobulina de IgM o IgE (ver, Publicaciones de Patente Nos. 2003/0133939, 2003/0118592 y 2005/0136049; y Publicación PCT No. O 2005/017148) .
Una "proteína PIMS" es una molécula S IP inversa en donde el dominio de unión está colocado en el carboxi terminal de la proteína de fusión. Las construcciones y métodos para producir proteínas PIMS se describen en la Publicación PCT No. WO 2009/023386 y en la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. US 2009/0148447, construcciones que pueden contener un dominio de unión a CD37 se incorporan en la presente como referencia. Una molécula PIMS de ejemplo es un polipéptido de cadena individual que comprende, en la orientación amino-terminal a carboxi-terminal , una sub-región constante derivada de un anticuerpo (por ejemplo, una región que comprende un dominio CH2 y un dominio CH3) , un péptido ligador (por ejemplo, una región de tallo de molécula CD o variante funcional de la misma) , y un dominio de unión (por ejemplo, CD37) . En ciertas modalidades, una PIMS comprende además un segundo péptido ligador colocado amino-terminal a la sub-región constante (por ejemplo, una región de articulación de inmunoglobulinas) , que puede ser la misma como o diferente del péptido ligador entre la sub-región constante y el dominio de unión.
Una "proteína SCORPION" es una proteína de fusión que comprende dos dominios de unión que comprenden regiones variables de inmunoglobulina o moléculas tipo inmunoglobulina. Las construcciones y métodos para producir proteínas SCORPION se describen en la Publicación PCT No. WO 2007/146968 y en la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. US 2009/0175867, construcciones que pueden contener un dominio de unión a CD37 se incorporan en la presente como referencia. Una proteína SCORPION de ejemplo es una proteína de unión multi-específica o multivalente de cadena individual con una función efectora, que comprende del amino terminal al carboxi terminal: (a) un primer dominio de unión que comprende regiones variables de una molécula de inmunoglobulina o tipo inmunoglobulina (b) un primer péptido ligador, (c) una sub-región constante de inmunoglobulina que proporciona una función efectora, (d) un segundo péptido ligador, y (e) un segundo dominio de unión que comprende regiones variables de una molécula de inmunoglobulina o tipo inmunoglobulina. En ciertas modalidades, el primero y segundo dominios de unión se unen al mismo objetivo (por ejemplo, CD37) . En ciertas modalidades diferentes, el primero y segundo dominios de unión se unen a diferentes objetivos o dianas.
Como se usa en la presente, a menos que se proporcione de otro modo, una posición de un residuo de aminoácido en una región variable de una molécula de inmunoglobulina o una proteína de fusión que contiene dominios o regiones de inmunoglobulina se numera de acuerdo a la convención de numeración de Kabat (Kabat, Seguences of Proteins of Immnulogical Interest, 5th Ed. Bethesda, MD: Public Health Service, Nacional Institutes of Health (1991)), y una posición de un residuo aminoácido en una región constante de una molécula de inmunoglobulina se numera de acuerdo a la nomenclatura EU (Ward et al., 1995 Therap. Immunol . 2:77-94; Kabat , supra) .
"Trastorno o enfermedad asociada a células B" o "una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B" se refiere a una enfermedad o trastorno asociado con "por ejemplo que provoca o resulta de) actividad anormal de células B o actividad que se desvía del curso normal, apropiado o esperado. Por ejemplo, una enfermedad o trastorno asociado a células B puede incluir proliferación inapropiada de células B que tienen ADN dañado o defectuoso u otros componentes celulares dañados o defectuosos. La actividad anormal de células B puede incluir proliferación celular caracterizada por niveles inapropiadamente altos de inhibición de células B, niveles inapropiadamente bajos de apóptosis de células B, o ambos. Estas enfermedades pueden tener, por ejemplo, proliferaciones anormales locales individuales o múltiples de células B, grupos de células B o tejidos, ya sea cancerosos o no cancerosos, benignos o malignos. Una enfermedad o trastorno asociado a células B también puede incluir producción anormal de anticuerpos, tal como producción de auto-anticuerpos, o sobreproducción de anticuerpos más deseables cuando se producen a niveles normales. También se contempla en la presente que la actividad anormal de células B puede presentarse en ciertas sub-poblaciones de células B y no en otras sub-poblaciones, o puede incluir la estimulación inapropiada de células B, tal como por presentación inapropiada del antígeno a células T o por otra ruta de células B.
"Tratamiento" o "que trata" se refiere ya sea a un tratamiento terapéutico o tratamiento profiláctico/preventivo. Un tratamiento terapéutico puede mejorar al menos un síntoma de la enfermedad en un individuo que recibe tratamiento o puede retrasar el empeoramiento de una enfermedad progresiva en un individuo, o impedir el comienzo de síntomas adicionales asociados, o enfermedades, o cualquier combinación de esto.
Una "cantidad o (dosis) terapéuticamente efectiva" o "cantidad (o dosis efectiva) " de una molécula de unión específica (por ejemplo, una molécula de unión específica a CD37) o compuesto (por ejemplo, un inhibidor de mTOR, un inhibidor de -PI3K) se refiere a esa cantidad del compuesto o combinación de compuesto suficiente para dar por resultado mejora de uno o más síntomas de la enfermedad que se trate, retraso del empeoramiento de una enfermedad progresiva, o que previene el comienzo de síntomas adicionales asociados, o enfermedades, o cualquier combinación de esto.
"Un sujeto que tiene, o se sospecha que tiene, una enfermedad asociada con actividad anormal de células B" es un sujeto (humano u otro animal) en quien se puede provocar una enfermedad o un síntoma de un trastorno por actividad anormal de células B o proliferación anormal de células B, se puede exacerbar por actividad anormal de células B, o se puede aliviar por regulación de la actividad de células B. Los ejemplos de estas enfermedades incluyen una malignidad de células B o cáncer en células B (por ejemplo, linfoma de células B, leucemia de células B o mieloma de células B) , una enfermedad caracterizada por producción de auto-anticuerpos (por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias , o inflamación o una enfermedad caracterizada por estimulación inapropiada de células T provocada por presentación inapropiada de antígenos y células B a células T o provocada a otras rutas que comprendan células B.
Moléculas de Unión Específica a CD37 Las moléculas de unión específica a CD37 útiles para la terapia de combinación descrita en la presente contienen un dominio de unión específica a CD37. Se puede usar un dominio de unión específica a CD37 sólo o en un núcleo molecular, incluyendo en la forma de un anticuerpo anti-CD37 o fragmento de unión de antígeno del mismo, una porción Fab o porción (Fab)2 de anticuerpo anti-CD37, un Fv de cadena individual (scFv) de anticuerpo anti-CD37, una proteína PIMS de anti-CD37, una proteína PIMS de anti-CD37, una proteína SCORPION de anti-CD37, o similares.
Los dominios de unión específica a CD37 basados en inmunoglobulina útiles en la presente invención incluyen aquellos conocidos en la técnica como se describe en la presente, o aquellos generados por una variedad de métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,291,161 y 6,291,158). Por ejemplo, se pueden identificar dominios de unión específica a CD37 al examinar una biblioteca de fagos de Fab para fragmentos Fab que se unen de manera específica a CD37 (ver Hoet et al. (20005) Nature Biotechnol . 23:344). Adicionalmente , se pueden usar estrategias adicionales para desarrollo de hibridomas, tal como al usar CD37 como un inmunógeno en sistemas inconvenientes (por ejemplo, ratones, ratón HuMAbMR, ratón TCMR, ratón KMMR, llamas, ovejas, pollos, ratas hámsteres, conejos, etc.) para desarrollar anticuerpos anti-CD37 que tienen dominios de unión específica a CD37 de interés.
Las fuentes de dominios de unión adicionales incluyen dominios variables de anticuerpo específicos de CD37 de varias especies (que se pueden formatear como anticuerpos, Fv, scFv, Fab, o dominio VH soluble o anticuerpos de dominio), incluyendo de humano, roedor, de ave y de ovejas. Las fuentes adicionales de dominios de unión incluyen dominios variables de anticuerpos de otras especies, tal como camélido, dromedarios o llamas (Ghahrouddi et al. (1997) FEBS Letters 414:521; Vincke et al . (2009) J Biol . Chem. 284:3273; y Hamers-Casterman et al . (1993) Nature, 363:446; y Nguyen et al . (1998) J. Mol. Biol., 275:413), tiburones nodriza (Roux et al. (1998) Proc . Nat'l. Acad. Sci. (EUA) 95:11804), pez rata moteado (Nguyen et al. (2002) Immunogenetics , 54:39) o lamprey (Herrín et al., (2008) Proc. Nat'l. Acad. Sci. (EUA) 105:2040 y Alder et al. (2008) Nature Immunol . 9:319). Estos anticuerpos pueden formar aparentemente regiones de unión al antígeno usando sólo la región variable de cadena pesada, es decir, estos anticuerpos funcionales son homodímeros de cadenas pesadas únicamente (referidos como "anticuerpos de cadena pesada") (Jespers et al. (2004) Nature Biotechnol. 22:1161; Cortez-Retamozo et al. (2004) Cáncer Res. 64:2853, Baral et al. (2006) Nature Med. 12:580, y Barthelemy et al. (2008) J. Biol. Chem. 283:3639).
Otras, fuentes alternativas de dominios de unión específica a CD37 incluyen secuencias que codifican para bibliotecas de péptidos aleatorios o secuencias que codifican para una diversidad manejada de aminoácidos en regiones asa de núcleos moleculares no de anticuerpos alternativos, tal como dominios de fibrinógeno (ver, por ejemplo, eisel et al. (1985) Science 230:1388), dominios Kunitz (ver, por ejemplo, Patente de los Estados Unidos No. 6,423,498), proteínas de repetición de anquirina (Binz et al. (2003) J. Mol. Biol. 332:489 y Binz et al. (2004) Nature Biotechnology 22:575), dominios de unión a fibronectina (Richards et al. (2003) J.
Mol. Biol. 326:1475, Parket et al. (2005) Protein Eng. Des.
Sel. 18:435 y Hackel et al. (2008) J. Mol. Biol. 381:1238), mini -proteínas de grupos de cisteína (Vita et al. (1995) Proc. Nat'l. Acad. Sci. (EUA) 92:6404; Martin et al. (2002) Nature Biotechnol, 21:71 y Huang et al. (2005) Structure 13:755), dominios de repetición de tetratricopéptido (Main et al. (2003) structure 11:497 y Cortajarena et al. (2008) ACS Chem. Biol. 3:161), dominios de repetición ricos en leucina (Stumpp et al. (2003) J. Mol. Biol. 332:471), dominios de lipocalina (ver, ejemplo, Publicación PCT No. O 2006/095164, Beste et al. (1999) Proc. Nat'l. Acad. Sci.
(EUA)) 96:1898 y Schónfeld et al. (2009) Proc. Nat'l. Acad.
Sci (USA) 106:8198), dominios tipo V (ver, por ejemplo, Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2007/0065431, dominios de lectina tipo C (Zelensky y Gready (2005) FEBS J. 272:7169; Beavil et al. (1992) Proc. Nat'l.
Acad. Sci. (USA) 89:753 y Sato et al. (2003) Proc. Nat'l.
Acad. Sci. (USA) 100:7779), mAb2 o FcabMR (ver, por ejemplo, Publicaciones PCT Nos. WO 2007/098934; WO 2006/072620), o similares (Nord et al. (1995 Protein Eng. 8:601; Nord et al. (1997) Nature Biotechnol. 15:772; Nord. et al. (2001) Eur. J.
Biochem. 268:4269; y Binz et al. (2005) Nature Biotechnol. 23 : 1257) .
En ciertas modalidades, el dominio de unión específica a CD37 contiene un dominio VH derivado de o basado en una VH de un anticuerpo monoclonal anti-CD37. En modalidades adicionales, un dominio de unión específica a CD37 contiene un dominio VL derivado de o basado en una VL de un anticuerpo monoclonal anti-CD37. En aún modalidades adicionales, un dominio de unión específica a CD37 contiene un dominio VH y un dominio VL derivados de o basados en una VH y VL, respectivamente, de un anticuerpo monoclonal anti-CD37 individual o de al menos dos diferentes anticuerpos monoclonales anti-CD37. En una modalidad preferida, los dominios VH y VL son del anticuerpo monoclonal G28-1 (SEQ ID Nos. 241 y 236, respectivamente) o del anticuerpo monoclonal o proteínas SMIP CAS-024 (SEQ ID Nos. 245 y 238, respectivamente) .
En ciertas modalidades, un dominio de unión específica a CD37 contiene dominios VH y VL que se modifican cada uno independientemente para contener una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) inserciones de aminoácido, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) supresiones de aminoácido, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) sustituciones de aminoácido (por ejemplo, sustituciones conservadoras de aminoácidos) , o combinaciones de esto, en comparación con los dominios VH y VL tipo silvestre, respectivamente, de los anticuerpos o anticuerpo monoclonal anti-CD37, parental . Las inserciones, supresiones o sustituciones pueden ser donde quiera en el dominio VH, dominio VL o ambos, incluyendo en el amino o carboxilo terminal o ambos extremos de cada uno o ambos dominios, con la condición que cada CDR comprenda cero cambios o al menos uno, dos, o tres cambios y con la condición que un dominio de unión a CD37 que contenga el dominio VH, dominio VL, modificado, o ambos, pueden unirse de manera específica a CD37 con una afinidad similar a o mayor que el dominio de unión tipo silvestre.
Los dominios de unión específica a CD37 que comprenden los dominios VH y VL de inmunoglobulina comprenderán un total de dos, tres, cuatro, cinco, de manera preferente seis CDR (es decir, tres en VL y tres en VH) . Estas CDR pueden ser CDR humanas o no humanas variantes de las mismas que comprenden al menos uno, dos o tres cambios de aminoácido por CDR. En ciertas modalidades, un dominio de unión específica a CD37 comprende (a) un dominio variable de cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera, CDR2 de cadena ligera, y una CDR3 de cadena ligera, y (b) un dominio variable de cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada, una CDR2 de cadena pesada y una CDR3 de cadena pesada .
La CDR de ejemplo incluye en CDR1 de la cadena ligera como se expone en SEQ ID No. 61 (RASENVYSYLA) , SEQ ID No. 62 (RTSENVYSYLA) , SEQ ID No. 311 (KASQDVSTAVA) , o SEQ ID No. 312 (RASSSIVYMH) ; CDR1 de la cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 63 (GYNMN) , SEQ ID No. 313 (GYSFTDFNMY) , o SEQ ID No. 314 (GFTFRSYGMS) ; CDR2 de la cadena ligera como se expone en SEQ ID No. 64 (FAKTLAE) , SEQ ID No. 315 (WASTRHT) , o SEQ ID No. 316 (DTSKLAS) ; CDR2 de la cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 65 (NIDPYYGGTYNRKFKG) , SEQ ID No. 317 (YIDPYNGDTTYNQKFKG) , o SEQ ID No . 318 (SINSDGGSTYYPDVKG) ; CDR3 de la cadena ligera como se expone en SEQ ID No. 66 (QHHSDNPWT) , SEQ ID No. 319 (QQHYSTPLT) o SEQ ID No. 320 (HQRSSYPTT) , y CDR3 de la cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 67 (SVGPFDY) , SEQ ID No. 68 (SVGPFDS) , SEQ ID No. 69 (SVGPMDY) , SEQ ID No. 321 (GPNWVAMDY) , o SEQ ID No. 322 (GGALIVTSDAMDY) . La DCR1 de cadena ligera preferida es SEQ ID No. 61 (RASENVYSYLA) y de manera preferente la CDR3 de cadena pesada incluye SEQ ID No. 68 (SVGPFDS) o SEQ ID No. 69 (SVGPMDY) . La CDR de ejemplo adicionales se exponen en SEQ ID Nos. 128-137 (para secuencias de CDR1 de cadena ligera), 138 y 139 (para secuencias de CDR2 de cadena pesada) y 213 y 215-219 (para secuencias de CDR3 de cadena pesada) . La CDR de ejemplos adicionales se pueden encontrar en la Publicación PCT No. WO 2009/126944, CDR que se incorpora en la presente como referencia.
En modalidades adicionales, los dominios de unión específicos para CD37 de humano comprenden los dominios VH y VL de inmunoglobulina que no son de humano, están humanizados o son de humano. Como se usa en la presente, "dominio de unión específica a CD37 humanizado se refiere a un dominio de unión que comprende dominios VH y VL de inmunoglobulina no de humano que forman un dominio de unión específico para CD37 de humano y cada uno que tiene al menos una, dos, tres, o de manera preferente cuatro regiones menos variables de humano.
Una "región menos variable humana" se refiere a regiones menos variables humanas (FR) encontradas en dominios variables de inmunoglobulina, que pueden ser (i) FR humanas tipo silvestre de línea germinal que se presenta de manera natural o secuencias somáticas, (ii) FR humanas alteradas con menos de aproximadamente 50 % (por ejemplo, de manera preferente menos de aproximadamente 40 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, o 1 %) de los aminoácidos que corresponden a los aminoácidos no humanos en las posiciones correspondientes de FR, o (iii) FR no humanas alteradas con al menos aproximadamente 50 % (por ejemplo, al menos aproximadamente 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, o 99 % de los aminoácidos que corresponden a aminoácidos humanos en las posiciones correspondientes de FR de modo que se reduce la inmunogenicidad.
Las FR humanas de ejemplo se exponen en SEQ ID Nos. 140-146 (FR1 de cadena pesada humana), SEQ ID Nos. 147, 150 y 151 (FR2 de cadena pesada humana), SEQ ID No. 154-160 (FR3 de cadena pesada humana), SEQ ID Nos. 161-163, 168 y 169 (FR4 de cadena pesada humana), SEQ ID Nos. 170-172, 175, y 177-181 (FR1 de cadena ligera humana), SEQ ID Nos. 182, 184-188 y 191 (FR2 de cadena ligera humana), SEQ ID Nos. 194-198, 203 y 205 (FR3 de cadena ligera humana), y SEQ ID Nos. 206-210 (FR4 de cadena ligera humana) . Las regiones FR humanas de ejemplo adicionales se pueden encontrar en las proteínas SMIP específicas de CD37 proporcionadas en la presente, tal como en CAS-001, CAS-002, CAS-003 y CAS-024 (SEQ ID Nos. 248, 249, 250 y 253, respectivamente) .
En ciertas modalidades, los dominios de unión específica a CD37 comprenden una región variable de cadena pesada humanizada que comprende desde su amino terminal al carboxilo terminal: FR1 de cadena pesada humana, CDR1 de cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 63, FR2 de cadena pesada humana, CDR2 de cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 65, FR3 de> cadena pesada humana, CDR3 de cadena pesada como se expone en SEQ ID Nos. 67, 68 o 69, FR4 de cadena pesada humana. En modalidades adicionales, los dominios de unión específica a CD37 comprenden, consisten esencialmente, o consisten de una región variable de cadena pesada humanizada que comprende desde su amino terminal al carboxilo terminal : FR1 de cadena pesada humana como se expone en SEQ ID No. 144, CDR1 de cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 63, FR2 de cadena pesada humana como se expone en SEQ ID No. 151, CDR2 de cadena pesada como se expone en SEQ ID No. 65, FR3 de cadena pesada humana como se expone en SEQ ID No. 158, CDR3 de cadena pesada como se expone en SEQ ID Nos. 67, 68 o 69 y FR4 de cadena pesada humana como se expone en SEQ ID No. 161. Las cadenas ligeras humanizadas de ejemplo adicionales se exponen en SEQ ID Nos. 242-245 e incluyen las cadenas ligeras en las proteínas SMIP específicas de CD37, humanizadas, proporcionadas en la presente.
En aún modalidades adicionales, sólo se humaniza el dominio variable de cadena ligera o pesada. Por ejemplo, los dominios de unión específica a CD37 pueden comprender un dominio variable de cadena ligera, humanizado (es decir, una región variable de cadena ligera que comprende al menos una FR humana) y una región de cadena variable, de cadena pesada, no humana (por ejemplo, de ratón o rata) . De manera alternativa, los dominios de unión específico CD37 pueden comprender un dominio variable de cadena ligera no humana (por ejemplo, de ratón o rata) y un dominio de cadena variable de cadena pesada, humanizado (es decir, una región variable de cadena pesada que comprende al menos una FR humana) . Ambos tipos de dominios de unión específica a CD37 se pueden referir como un "dominio de unión específica a CD37, de humano-no humano, híbrido" o como un "dominio de unión específica a CD37 quimérico" .
En ciertas modalidades, los dominios de unión específica a CD37 están en la forma de un fragmento scFv.
En una modalidad preferida, el dominio de unión específica a CD37 es un scFv específico de CD37, humano o humanizado que comprende un dominio de unión de cadena ligera y un dominio variable de cadena pesada, conj ntamente unidos mediante un ligador de dominio variable. En modalidades adicionales, se humanizan tanto los dominios variables de cadena ligera como pesada, y pueden comprender ambos un dominio variable de cadena ligera humanizada como se expone en SEQ ID No. 238 y un dominio variable de cadena pesada humanizado como se expone en SEQ ID No. 245. En modalidades aún adicionales, sólo el dominio variable de cadena ligera o pesada del scFv se humaniza.
En una modalidad preferida, el carboxilo terminal del dominio VL en un CD37 específico de scFv humanizado se enlaza al amino terminal del dominio VH mediante un ligador de dominio variable. De esta manera, el scFv resultante tiene desde su amino terminal a su carboxilo terminal : el dominio VL, el ligador de dominio variable, y el dominio VH. En otra modalidad preferida, el carboxilo terminal del dominio VH en un scFv específico de CD37 humanizado se enlaza al amino terminal del domino VL mediante un ligador de dominio variable. De esta manera, el scFv resultante tiene desde su amino terminal hasta su carboxilo terminal: el dominio VH el ligador de dominio variable y el dominio VL. En una modalidad preferida, los dominios VH y VL de un scFv son de anticuerpo monoclonal G28-1 (SEQ ID Nos. 241 y 236, respectivamente) o de anticuerpo monoclonal o proteína SMIP CAS-024 (SEQ ID Nos. 245 y 238, respectivamente) y el ligador de dominio variable tiene aproximadamente de cinco a aproximadamente 35 aminoácidos, de manera preferente de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 aminoácidos.
En ciertas modalidades, un ligador de dominio variable que se une a los dominios VH y VL o los dominios VL y VH son aquellos que corresponden a la familia (GlynSer) como se describe en la presente. Por ejemplo, el ligador de dominio variable comprende (GlynSer)m/ en donde n y m pueden ser un número entero independientemente seleccionado de 1 a 6. En ciertas modalidades preferidas, n es 4 y m es 1, 2, 3, 4, 5, o 6. Y de manera más preferente n es 4 y m es 3, 4 o 5. En modalidades adicionales, uno o dos aminoácidos diferentes de Gly o Ser pueden estar presentes en el amino terminal, en el carboxilo terminal o en ambos términos. En ciertas modalidades diferentes, se pueden sustituir uno o dos aminoácidos de la (GlynSer)m, con un aminoácido diferente de Gly o Ser. Una secuencia de enlace de dominio variable de ejemplo que tiene la secuencia (Gly4Ser)5, se expone en SEQ ID Nos. 229. Las secuencias de enlace de dominio variable de ejemplo adicionales se exponen en SEQ ID Nos. 225-228.
En ciertas modalidades, la molécula de unión específica a CD37 o dominio de unión compite por la unión a la proteína CD37 humana con un anticuerpo monoclonal (mAb) G28-1, un mAb CAS-024, o una proteína SMIP CAS-024. Como se usa en la presente, "compite con la unión" significa que la unión a una molécula objetivo por una molécula de unión específica para este objetivo se reduce o inhibe por la presencia de otra molécula de unión específica para el mismo objetivo, significando que las dos diferentes moléculas de unión, tal como dos diferentes anticuerpos anti-CD37, pueden unirse al mismo o similar sitio de unión al antígeno, o epitopo (por ejemplo, secuencial o conformacional) , o puede impedir estéricamente la unión a epitopos o sitios de unión al antígeno, vecinos. Por ejemplo, el mAb G28-1 que se une a CD37 se reduce en la presencia de la proteína SMIP CAS-024 en comparación a la unión de CD37 por el mAb G28-1 en la ausencia de la proteína SMIP CAS-024 (es decir, CAS-024 está compitiendo en mAb G28-1 por la unión a CD37) . Los ensayos de unión competitiva se conocen en la técnica, tal como aquellos descritos en el Ejemplo 2 de la Publicación PCT No. O 2007/014278 y los Ejemplos 4-6 de la Publicación PCT No. WO 2009/126944, y se pueden usar para determinar si un dominio de unión específica a CD37, determinado, o molécula de unión específica a CD37 es capaz de competir con un mAb G28-1, mAb CAS-024, o una proteína SMIP CAS-024 para la unión a CD37.
Las moléculas de unión específica a CD37 de la presente descripción pueden comprender un polipéptido de articulación o ligador que se une al dominio de unión específica a CD37 a una inmunoglobulina constante de la región Fe. Como se usa en la presente, una "región de articulación", una "articulación", un "polipéptido de articulación", o un "polipéptido ligador" se refiere a (a) una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre; (b) una región de articulación de inmunoglobulina alterada; (c) un péptido basado en o derivado de una región interdominio de un miembro de la súper familia de inmunoglobulinas ; (d) una agrupación de la región de tallo de molécula de diferenciación (CD) o una variante funcional de la misma; o (e) una región de tallo de lectinas tipo C, una familia de proteínas de membrana tipo II (ver, por ejemplo, las secuencias de la región de tallo de lectinas de ejemplo expuestas en la Publicación de Solicitud PCT No. WO 2007/146968, tal como SEQ ID Nos. 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 287, 289, 297, 305, 307, 309-311, 313-331, 346, 373-377, 380 o 381 de esa publicación secuencias que se incorporan en la presente como referencia), o una variante funcional de las mismas.
En ciertas modalidades, una región de articulación es una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre, tal como una articulación de IgG, articulación de IgA, articulación de IgD, articulación de IgE o un fragmento funcional de esto (por ejemplo, de 4 a 20 o de 5 a 15 aminoácidos de longitud) que comprende al menos una región de articulación, núcleo de IgGl. En ciertas modalidades preferidas, una región de articulación puede ser una región de anticuerpos seleccionada de IgGl humana, IgG2 humana, IgG3 humana, IgG4 humana, o variantes funcionales de las mismas. En algunas modalidades, la región de articulación es una región de articulación de inmunoglobulina humana tipo silvestre o variante funcional de la misma. Las articulaciones de ejemplo para estas modalidades son región de articulación de IgGl de humano tipo silvestre como se expone en SEQ ID No. 90, articulación de IgAl humana tipo silvestre como se expone en SEQ ID No. 115, articulación de IgA2 humana tipo silvestre como se expone en SEQ ID No. 116, articulación de IgG3 humana tipo silvestre como se expone en SEQ ID No. 118, una porción de la articulación de IgG3 de humano como se expone en SEQ ID No. 258, y articulación de IgD de humano como se expone en SEQ ID No. 127. En ciertas modalidades, se pueden adicionar uno o más residuos de aminoácido en el amino o carboxilo terminal de una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre como parte del diseño de construcción de proteína de fusión. Estos residuos de aminoácidos se refieren como "aminoácidos de unión" (ver, por ejemplo, SEQ ID Nos. 231-235) .
En ciertas modalidades, la región de articulación es una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre, alterada (mutada) , tal como una región de articulación de inmunoglobulina tipo IgG tipo silvestre. Por ejemplo, la región de articulación de IgGl de humano tipo silvestre contiene tres residuos de cisteína, la cisteína más N-terminal se refiere a la primera cisteína, en tanto que la cisteína más N-terminal en la región de articulación es la tercera cisteína. En ciertas modalidades, la región de articulación de IgGl humana mutada tiene sólo dos residuos de cisteína, tal como una región de articulación de IgGl humana con una de la primera, segunda o tercera cisteína sustituidas con una serina, preferentemente la segunda serina. En ciertas modalidades diferentes, una región de articulación de IgGl, humana, mutada tiene sólo un residuo de cisteína, de manera preferente la tercera cisteína. En ciertas modalidades, la prolina C-terminal a la tercera cisteína en la región de articulación de IgGl, humana, se sustituye, por ejemplo, por una serina. Las regiones de articulación de IgGl humanas, mutadas, de ejemplo se exponen en SEQ ID Nos. 92, 94, 102, 104, 255, 256, 106, 108, 257, 96, 110, 112, 98, y 100. Las porciones mutadas de ejemplo de las regiones de articulación de IgG3 , humanas se exponen en SEQ ID Nos. 120, 126, 259-261, 122 y 124. En ciertas modalidades, se pueden adicionar uno o más residuos de aminoácido en el amino o carboxilo terminal de una región de articulación de inmunoglobulina, mutada como parte del diseño de construcción de la proteína de fusión. Los ejemplos de estas regiones de articulación, modificada se indican en cursivas, en SEQ ID NOS. 231-235.
En ciertas modalidades, una región de articulación comprende o tiene una secuencia que es al menos 80 g. al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 "ó , al menos 86 0, ¾ / al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 o ¦o , al menos 90 %, al menos 91 o, "° / al menos 92 %, al menos 93 O. 0 / al menos 94 o / al menos 95 Q. o / al menos 96 a al menos 97 al menos 98 al menos 99 o o idéntica a una región de articulación de inmunoglobulina tipo silvestre, tal como las articulaciones de IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4 , IgAl, IgA2 , IgD e IgE de humano, tipo silvestre.
Las secuencias ligadoras o de articulación, alternativas, se pueden elaborar de porciones de receptores de superficie celular que conectan dominios tipo IgV o tipo IgC. Las regiones entre los dominios tipo IgV donde un receptor de superficie celular contiene múltiples dominios tipo IgV en tándem y entre dominios IgC donde un receptor de superficie celular contiene múltiples regiones tipos IgC en tándem también se pueden usar como una región de conexión o un péptido ligador. Las secuencias ligadoras o de articulación, representativas, de las regiones interdominio entre los dominios IgV y tipo IgC o entre los dominios IgC o IgV se encuentran en CD2 , CD4 , CD22, CD33, CD48, CD58, CD66, CD80, CD86, CD96, CD150, CD166, y CD244. Se pueden elaborar más articulaciones alternativas de las regiones que contienen disulfuro de receptores Tipo II de miembros de la súper familia no de inmunoglobulina, tal como CD69, CD72 y CD161.
En ciertas modalidades, las secuencias de articulación, o ligadoras, tienen de 2 a 150 aminoácidos, de 5 a 60 aminoácidos, de 2 a 40 aminoácidos, de manera preferente tienen 8-20, de manera más preferente tienen 12-15 aminoácidos, y pueden ser principalmente flexibles, pero también pueden proporcionar características más rígidas o pueden contener principalmente una estructura a helicoidal con estructura¦ mínima de ß-hoja. De manera preferente, las secuencias ligadoras y de articulación son estables en plasma y suero, y son resistentes a escisión proteolítica . En ciertas modalidades, la primera lisina en la región de articulación, superior, de IgGl se muta para reducir al mínimo la escisión proteolítica, de manera preferente la lisina se sustituye con metionina, treonina, alanina o glicina, o se suprime. Las secuencias de ácido nucleico que codifican para ligadores de ejemplo se exponen en SEQ ID NOS:89, 91, 93, 95, 97, 99, 101 , 103, 105, 107, 109, 111, 117, 119, 121, 123, y 125.
Las moléculas de unión específica a CD37 de la presente descripción pueden comprender una sub-región constante derivada de un anticuerpo, tal como las regiones CH2 y CH3 de IgG, IgA, o IgD y las regiones CH3 y CH4 de IgM o IgE.
Un dominio a CH2 que forma una porción de una molécula de unión específica a CD37 puede ser un dominio CH2 de inmunoglobulina, alterado o tipo silvestre, en base a, o derivado de, ciertas clases o subclases de inmunoglobulina (por ejemplo, IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl , IgA2 , o IgD) o de varias especies (incluyendo, de humano, ratón, rata y de otros mamíferos) . En ciertas modalidades, un dominio es un dominio CH2 es un domino CH2 de inmunoglobulina, humano, tipo silvestre, tal como los dominios CH2 tipo silvestre de IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl , IgA2 , o IgD de humano como se expone en SEQ ID NOS:285, 290-292 y 286-288, respectivamente. En ciertas modalidades preferidas, el dominio CH2 es un dominio CH2 de IgGl, humano, tipo silvestre como se expone en SEQ ID NO: 285. En ciertas modalidades, un dominio CH2 es un dominio CH2 de inmunoglobulina, humano, alterado, tal como un dominio CH2 alterado en base a, o derivado de, un dominio CH2 tipo silvestre de anticuerpos tipo IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4 , IgAl, IgA2 , o IgD de humano. Por ejemplo un dominio CH2 alterado puede ser un dominio CH2 de IgGl de humano con una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más mutaciones en las posiciones 234-238, 253, 255-258, 290, 297, 310, 318, 320, 322, 331, y 339 (posiciones se numeran de acuerdo a la numeración EU) . En ciertas modalidades, un dominio CH2 alterado comprende: (i) una sustitución de aminoácido en la asparagina de la posición 297; (ii) una o más sustituciones o supresiones de aminoácido en las posiciones 234-238; (iii) al menos una sustitución o supresión de aminoácido en las posiciones 253, 310, 318, 320, 322, o 331; (iv) una sustitución de aminoácido en la asparagina en la posición 297 y una o más sustituciones o supresiones en las posiciones 234-238; (v) una sustitución de aminoácido en la asparagina de la posición 297 y al menos una sustitución o supresión en la posición 253, 310, 318, 320, 322, o 331; (vi) una o más sustituciones o supresiones de aminoácido en las posiciones 234-238, y al menos una sustitución o supresión de aminoácido en la posición 253, 310, 318, 320, 322, o 331; o (vi) una sustitución de aminoácido en la asparagina de la posición 297, una o más sustituciones o supresiones de aminoácido en las posiciones 234-238, y al menos una sustitución o supresión de aminoácido en la posición 253, 310, 318, 320, 322, o 331. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el dominio CH2 alterado es un dominio CH2 de IgGl, de humano, con una sustitución alcalina en la posición 297. En ciertas modalidades diferentes, el dominio CH2 alterado es un dominio CH2 de IgGl de humano con sustituciones de alanina en las posiciones 235, 318, 320, y 322 (es decir, un dominio CH2 de IgGl de humano con sustituciones L235A, E318A, K320A y K322A) (SEQ ID NO:305). En ciertas modalidades diferentes, el domino CH2 alterado es un dominio CH2 de IgGl de humano con sustituciones de alanina en las posiciones 234, 235, 237, 318, 320 y 322 (es decir, un dominio CH2 de IgGl de humano con sustituciones L234A, L235A, G237A, E318A, K320A y K322A) (SEQ ID NO:306). Las mutaciones en las posiciones señaladas anteriormente pueden reducir o eliminar la actividad de ADCC, actividad de ADCP, unión al receptor Fe, o fijación de complemento.
Un dominio CH3 que forma una porción de una molécula de unión específica a CD37 puede ser un dominio CH3 de inmunoglobulina tipo silvestre o un dominio CH3 de inmunoglobulina, alterado del mismo de ciertas clases o subclases de inmunoglobulina (por ejemplo, IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG , IgAl, IgA2 , IgD, IgE, IgM) de varias especies (incluyendo de humano, ratón, rata y de otros mamíferos) . En ciertas modalidades, un dominio CH3 es un dominio CH3 de inmunoglobulina, de humano, tipo silvestre, tal como los dominios CH3 tipo silvestre de IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl, IgA2, IgD, IgE, o IgM de humano como se expone en SEQ ID NOS: 294, 299-301, 295-298 y 302, respectivamente. En ciertas modalidades preferidas, el dominio CH3 es un dominio CH3 de IgGl, de humano, tipo silvestre como se expone en SEQ ID NO:294. En ciertas modalidades, un dominio CH3 es un dominio CH3 de inmunoglobulina, de humano, alterado, tal como un dominio CH3 alterado basado en o derivado de un dominio CH3 tipo silvestre de anticuerpos tipo IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl, IgA2, IgD, IgE, o IgM de humano. Por ejemplo, un dominio CH3 alterado puede ser un dominio CH3 de IgGl, de humano con una o dos mutaciones en las posiciones H433 y N434 (las posiciones se numeran de acuerdo a la numeración EU) . Las mutaciones en estas posiciones pueden estar comprendidas en la fijación de complemento. En ciertas modalidades diferentes, un dominio CH3 alterado puede ser un dominio CH3 de IgGl de humano pero con una o dos sustituciones de aminoácido en las posiciones F405 o Y407. Los aminoácidos en estas posiciones están comprendidos en la interacción con otro domino CH3.
Un dominio CH4 que forma una porción de una molécula de unión específica a CD37 puede ser un dominio CH4 de inmunoglobulina, tipo silvestre o un dominio CH4 de inmunoglobulina, alterado, del mismo de moléculas de IgE o IgM. En ciertas modalidades, el domino CH4 es un domino CH4 de inmunoglobulina, de humano, tipo silvestre, tal como los dominios CH4 tipo silvestre de moléculas de IgE e IgM de humano como se expone en SEQ ID NOS: 303 y 304, respectivamente. En ciertas modalidades, un dominio CH4 es un dominio CH4 de inmunoglobulina, de humano, alterado, tal como un dominio CH4 alterado basado en o derivado de un dominio CH4 o moléculas de IgE o IgM de humano, que tienen mutaciones que incrementan o disminuyen una actividad inmunológica que se conoce que está asociada con una región Fe de IgE o IgM.
En ciertas modalidades, una subregion constante de una molécula de unión específica a CD37 comprende una combinación de dominio CH2 , CH3 y/o CH4 (es decir, más de un subdominio constante seleccionado de CH2 , CH3 y CH4) . Por ejemplo, una subregion constaten puede comprender dominios CH2 y CH3 o dominio CH3 y CH4. Los múltiples sub-dominios constantes que forman una subregion constante se pueden basar en, o derivar de la misma molécula de inmunoglobulina (por ejemplo, una subregion constante formada de CH2 y CH3 de IgGl de humano como se expone en SEQ ID NO:246), o las moléculas de inmunoglobulina de la misma clase o subclase. De manera alternativa, los múltiples sub-dominios constantes se pueden basar en, o derivar de diferentes moléculas de inmunoglobulina, o moléculas de inmunoglobulina de diferentes clases o subclases. Por ejemplo, en ciertas modalidades, una subregion constaten comprende tanto un dominio CH3 de IgM de humano como un dominio CH3 de IgGl de humano.
En ciertas modalidades preferidas, una subregion constante comprende un dominio CH2 de IgGl, de humano, tipo silvestre y un domino CH3 de IgGl de humano, tipo silvestre. En ciertas modalidades preferidas diferentes, una subregion constante comprende un dominio CH2 de IgGl, de humano, alterado (por ejemplo, que tiene una mutación de aminoácido en N297, que tiene una mutación de aminoácido en N297 y al menos una mutación adicional de aminoácido en la posición 234-238, o que tiene mutaciones de aminoácido en las posiciones 234, 235, 237, 318, 320 y 322) y un dominio CH3 de humano, tipo silvestre, de modo que la subregión constante no promueve actividades inmunológicas , tal como ADCC, ADCP, CDC, unión al receptor Fe, o cualquiera combinación de éstas. En otras modalidades, un dominio CH2 de IgGl, de humano, alterado, puede tener mutaciones conocidas en la técnica que mejoran las actividades inmunológicas, tal como ADCC, ADCP, CDC, unión al receptor Fe, o cualquier combinación de éstas. En ciertas modalidades preferidas diferentes, una subregión constante comprende un dominio CH3 de IgM, de humano, tipo silvestre y un dominio CH4 de IgM, de humano, tipo silvestre, o un dominio CH3 de igE, de humano, tipo silvestre y un dominio CH4 de IgE, de humano, tipo silvestre.
En ciertas modalidades, una molécula de unión específica a CD37 puede contener una o más regiones adicionales. Estas regiones adicionales pueden ser una secuencia guía en el amino terminal para la secreción de una molécula de unión específica a CD37, expresada, una secuencia final en su carboxi terminal para propósitos de identificación o purificación (por ejemplo, marcas de epítopo para detección o purificación, incluyendo una marca de 6-Histidina o un epítopo FLAG) , residuos adicionales de aminoácido que surgen del uso de sistemas específicos de expresión. Los péptído guía de ejemplo de esta descripción incluyen secuencias guías naturales u otras, tal como aquellas expuestas en SEQ ID NOS: 223 y 224.
En ciertas modalidades, las proteínas de fusión pueden tener uno o unos pocos (por ejemplo, 2-8) residuos de aminoácido entre dos dominios (tal como entre dominios variables de inmunoglobulina y un polipéptido ligador, entre un domino de unión y un polipéptido ligador o articulación, entre un polipéptido ligador o articulación y un polipéptido de región CH2 de inmunoglobulina, o entre un polipéptido de región CH2 de inmunoglobulina y un polipéptido de región CH3 de inmunoglobulina) , tal como residuos de aminoácido que resultan del diseño de construcción de la proteína de fusión (por ejemplo, residuos de aminoácido que resultan del uso de un sitio de enzima de restricción durante la construcción de una molécula de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de cadena individual) . Como se describe en la presente, estos residuos de aminoácido se pueden referir como "aminoácidos de unión" o "residuos de aminoácido de unión" .
Como se usa en la presente, una proteína "consiste esencialmente de" un domino (por ejemplo, un domino de unión específica a CD37) o de varios dominios (por ejemplo, un dominio de unión específica a CD37, un polipéptido ligador, una región CH2 de inmunoglobulina , y una región CH3 de inmunoglobulina) y las otras porciones de la proteína (por ejemplo, aminoácidos en el amino o carboxilo terminal entre dos dominios) , en combinación, contribuyen a lo mucho al 20 % (por ejemplo, a lo mucho 15 %, 10 % , 8 % , 6 % , 5 % , 4 % , 3 %, 2 % o 1 %) de la longitud de la proteína y no afectan de manera sustancial (es decir, no reducen la actividad por más de 50 %, tal como más de 40 %, 30 %, 25 %, 20 ¾, 15 %, 10 %, o 5 %) e la actividad de proteína, tal como la afinidad a CD37 o la capacidad de reducir el número de células B. En ciertas modalidades, una molécula de unión específica a CD37 es una proteína SMIP que consiste esencialmente de un dominio de unión específica a CD37, un polipéptido de articulación de inmunoglobulina, un polipéptido de región CH2 de inmunoglobulina, un polipéptido de región CH3 de inmunoglobulina. Estas moléculas pueden comprender además aminoácidos de unión en el amino-o carboxi terminal de la molécula o entre dos diferentes dominios (por ejemplo, entre el domino de unión y el polipéptido de articulación, entre el polipéptido de articulación y el polipéptido de la región CH2 de inmunoglobulina, y/o entre el polipéptido de la región CH2 de inmunoglobulina y el polipéptido de la región CH3 de inmunoglobulina) .
En ciertas modalidades, las moléculas de unión específica a CD37 son anticuerpos anti-CD37, incluyendo aquellos conocidos en la técnica. Los anticuerpos anti-CD37 de ejemplo incluyen HD28, G28-1, HH1 , BI14, R17 y F93G6 usados al caracterizar el antígeno CD37 en el Third HLDA Workshop (ver, Ling y MacLennan, pp. 302-335 in Leucocyte Typing III. White Cell Differentiation Antigens, Oxford University Press, 1987) . Otros anticuerpos específicos a CD37 que se han descrito incluyen RFB-7, Y29/55, MB-1, M-B371, M-B372 e IPO-24 (ver Moldenhaurer (2000) J. Biol . Regul . Homeost. Agents 14: 281, finding that all these antibodies recognize a single CD37 epitope) . Sch artz-Albiez et al. (J. Immunol . 140:905, 1988) señalan que el epítopo está igualmente situado en la porción de carbohidrato de CD37. Otro anticuerpo específico de CD37 es SB3 (Biosys) . En ciertas modalidades preferidas, cualquiera de estos anticuerpos anti-CD37 son anticuerpos quiméricos o humanizados o porciones de unión al antígeno de los mismos para el uso en combinación con un inhibidor de mTOR o un inhibidor de PI3K como se describe en la presente.
En una modalidad preferida, un dominio de unión a CD37 de esta descripción es una porción de unión al antígeno de un anticuerpo o incluye dominios variables de inmunoglobulina que se une de manera específica a CD37. Las porciones de unión al antígeno CD37 de ejemplo de un anticuerpo incluyen (i) una porción (Fab) de unión al antígeno de fragmento, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (ii)un fragmento a F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab en lazados por un puente de disulfuro en la región de articulación; (iii) un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de un brazo individual de un anticuerpo, (v) un fragmento Ab de dominio (Ward et al. (1989) Nature 341:544) que consiste de un domino VH; (vi) un fragmento variable de cadena individual (scFv) que consiste de los dominios VL y VH unidos por un ligador de 5-35 aminoácidos (ver, por ejemplo, Huston et al. (1988) Proc . Nat'l. Acad. Sci. EUA 85:5879; Shan et al. (1999) J. Immunol . 162:6589), y (vii) una CDR aislada.
En ciertas modalidades, las moléculas de unión específica a CD37 son polipéptidos SMIP específicos de CD37. Por ejemplo, una molécula de unión específica a CD37 puede ser un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende desde su amino- a carboxi terminal: (a) un dominio de unión específica a CD37, (ii) una región de articulación o péptido ligador, (iii) (a) un polipéptido de CH2 de inmunoglobulina de IgG, IgA o IgD y un un polipéptido de CH3 de inmunoglobulina de IgG, IgA o IgD, o (b) un polipéptido de CH3 de inmunoglobulina de IgM o IgE y un polipéptido de CH4 de inmunoglobulina de IgM o IgE. El dominio de unión específica a CD37, el polipéptido ligador, el polipéptido de CH2 de inmuno-globulina, el polipéptido de CH3 de inmunoglobulina, el polipéptido de CH4 de inmunoglobulina son como se describen en la presente.
Los polipéptidos SMIP específicos de CD37 de ejemplo comprenden la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 2 o 253. Los polipéptidos SMIP específicos de CD37 de ejemplo adicional se describen en la Publicación PCT No. WO 2005/017148, tal como (1) G28-1 scFv (SSS-S) H CH2 WCH3 que comprenden un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual los tres residuos de cisteína y una prolina carboxilo terminal al tercer residuo en una región de articulación de IgGl de humano se mutan a residuos de murina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano tipo silvestre; (2) G28-1 scFv IgAH WCH2 WCH3 que comprende un G28-1 scFv, una porción de la articulación de IgA de humano, y los dominios CH2 y Ch3 de IgGl de humano; (3) G28-1 scFv VHL11 S (SSS-S) H CH2 CH3 que comprenden G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual los tres residuos de cisteína y una prolina carboxilo terminal a la tercera cisteína en la región de articulación se mutan a residuos de serina, y los dominios Ch2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; (4) G28-1 scFv VH L11S (CSS-S) H WCH2 CH3 que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual los residuos de cisteína en la segunda y tercera posiciones y una prolina carboxilo terminal a la tercera cisteína se sustituyen con residuos de serina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; (5) G28-1 scFv VHL11 S (CSC-S) H WCH2 CH3 que comprende una G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual el residuo de cisteína en la segunda posición y una prolina carboxilo terminal a la cisteína a la tercera posición se sustituyeron con los residuos de serina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de la cadena pesada se sustituye con una serina; (6) G28-1 scFv VH11 S (SSC-P) H CH2 CH3 que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual el primero y segundo residuos de cisteína en la región de articulación se mutan a residuos de serina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; (7) G28-1 scFv VH11 S (SCS-S) H CH2 CH3 que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual el primero y tercer residuos de cisteína y una prolina carboxilo terminal a la tercera cisteína en las regiones de articulación se mutan a residuos de serina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de la cadena pesada se sustituye con una serina; (8) G28-1 scFv VHL11 S (CCS-P) H CH2 CH3 que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual el tercer residuo de cisteína en la región de articulación se sustituye con una serina, y los dominios CH2 y CH3 de IgGl de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de la cadena pesada se sustituye con una serina; (9) G28-1 scFv VHL11 S (SCC-P) H WCH2 CH3 que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgGl de humano, alterada, en la cual la primera cisteína se sustituye con una serina, y los dominios CH2 y CH3 humanos, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de la cadena pesada se sustituye con una serina; (10) G28-1 scFv VH L11S mlgE CH2 CH3 CH4 , que comprende un G28-1 scFv y las regiones CH2 , CH3 y CH4 de igE de ratón, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; (11) G28-1 scFv VH Lll S mlgA lgACH2 T4CH3, que comprende un G28-1 scFv, una articulación de IgA de ratón, y CH2 de IgA tipo silvestre y el dominio CH3 de IgA truncado que carece de los 4 carboxi-aminoácidos GTCY (SEQ ID NO:265); (12) G28-1 scFv VHL11 S hlgE CH2 CH3 CH4 , que comprende un G28-1 scFv y las regiones CH2 , CH3 y CH4 de IgE de humano, en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; y (13) G28-1 scFv VHL11S hlgAH WlgACH2 TCH3 que comprende un G28-1 scFv, una porción de la articulación de IgA de humano, un CH2 de IgA tipo silvestre y un dominio CH3 de IgA, truncado que carece de los 4 carboxi -aminoácidos GTCY (SEQ ID NO:265), en donde la leucina en la posición 11 de la región variable de cadena pesada se sustituye con una serina; todos los cuales se incorporan en la presente como referencia.
En modalidades preferidas, los polipéptidos SMIP específicos de CD37 comprenden dominios de unión específica a CD37, humanizados. En ciertas modalidades, los polipéptidos SMIP específicos de CD37 humanizados exhiben al menos 70 por ciento de identidad (por ejemplo, al menos 70 %, 72 %, 74 %, 76 %, 80 %, 82 %, 84 %, 85 %, 86 ¾, 88 %, 90 %, 92 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 %) al polipéptido expuesto en SEQ ID NO: 2 o 253, y de manera específica se unen a CD37. Los polipéptidos SMIP específicos de CD37, humanizados, de ejemplo comprenden, consisten esencialmente de, o consisten de, cualquier secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NOS : 6 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 80, 82, 84, 86, 88, 222 y 262, pero sin las secuencias guía, así como SEQ ID NOS:247-254 y 266-269. Las moléculas de ácido nucleico, aisladas, que codifican para los polipéptidos SMIP específicos de CD37, humanizados, de ejemplo, proporcionados en la presente incluyen aquellos que comprenden SEQ ID NOS: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 51, 79, 81, 83, 85, 87, y 221.
En una modalidad preferida, una molécula de unión específica a CD37 comprende o consiste de la secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253. En otra modalidad preferida, una molécula de unión específica a CD37 consiste esencialmente de la secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253. En aún otra modalidad preferida, una molécula de unión específica a CD37 consiste de la secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO:253.
En ciertas modalidades, las moléculas de unión específica a CD37 son polipéptidos PIMS específicos de CD37. Por ejemplo, un polipéptido PIMS específico de CD37 puede comprender desde su orientación amino- a carboxi -terminal , una subregión : constante derivada de un anticuerpo (por ejemplo, una región que comprende un domino CH2 y un dominio Ch3 de IgG, IgA o IgD, o una región que comprende un dominio CH3 y un dominio CH4 de IgM o IgE) , un péptido ligador de un dominio de unión específica a CD37 (incluyendo un domino de unión específica a CD37 humanizado) . En ciertas modalidades, un polipéptido PIMS específico de CD37 puede comprender además un segundo péptido ligador, que puede ser o no el mismo como el péptido ligador entre la sub-región constante y el dominio de unión específica a CD37. El dominio de unión específica a CD37, el polipéptido ligador, el polipéptido de CH2 de inmunoglobulina , el polipéptido de CH3 de inmunoglobulina, el polipéptido de CH4 de inmunoglobulina son como se describen en la presente.
En ciertas modalidades, las moléculas de unión específica a CD37 son polipéptidos SCORPION específicos de CD37. Por ejemplo, una proteína SCORPION específica de CD37 puede ser una proteína de unión multivalente de cadena individual con una función efectora, que comprenden desde el amino terminal y el carboxi terminal: (a) un primer domino de unión que comprende dominios variables de una inmunoglobulina o molécula tipo inmunoglobulina, (b) un primer polipéptido de articulación o ligador, (c) una subregión constante de inmunoglobulina que proporciona una función efectora, (d) un segundo péptido de articulación o ligador, y (e) un segundo dominio de unión que comprende dominios variables de una inmunoglobulina o molécula tipo inmunoglobulina, en donde el primer dominio de unión, el segundo dominio de unión, o tanto el primero como el segundo dominios de unión se unen de manera específica a CD37 de humano. El dominio de unión específica a CD37, el polipéptido de articulación o ligador, y la sub-región constante de inmunoglobulina son como se describen en la presente.
En modalidades adicionales, una región Fe de inmunoglobulina (por ejemplo, regiones CH2, CH3, y/o CH4) de moléculas de unión específica a CD37 de la presente descripción pueden tener un patrón alterado de glicosilación con relación a una secuencia de referencia de inmunoglobulina . Por ejemplo, se puede emplear cualquiera de una variedad de técnicas genéticas para alternar uno o más residuos particulares de aminoácido que forman un sitio de glicosilación (ver Co et al. (1993) Mol. Immunol . 30:1361; Jacquemon et al. (2006) J. Thromb . Haemost. 4:1047; Schuster et al. (2005) Cáncer Res. 65:7934; Warnock et al. (2005) Biotechnol. Bioeng. 92:831), tal como N297 del dominio CH2 (numeración EU) . De manera alternativa, las células hospedadoras que producen proteínas de fusión de esta descripción se pueden manejar para producir un patrón alterado de glicosilación. Un método conocido en la técnica, por ejemplo, proporciona glicosilación alterada en la forma de variantes biseccionadas , no fucolizadas que incrementan la ADCC. Las variantes resultan de la expresión en una célula hospedadora que contiene una enzima modificadora de oligosacáridos . De manera alternativa, se contempla la tecnología Potelligent de BioWa/Kyowa Hakko para reducir el contenido de fucosa de las moléculas glicosiladas de acuerdo a esta descripción. En un método conocido, se proporciona una célula hospedadora CHO para producción de inmunoglobulina recombinante que modifica el patrón de glicosilación de la región Fe de inmunoglobulina, a través de la producción de GDP-fucosa.
De manera alternativa, se usan técnicas químicas para alterar el patrón de glicosilación de proteínas de fusión de esta descripción, por ejemplo, una variedad de inhibidores de glicosidasa y/o mannosidasa proporcionan uno o más de los efectos deseados de incrementar la actividad de ADCC, incrementar la unión al receptor Fe, y alternar el patrón de glicosilación. En ciertas modalidades, las células que expresan una molécula de unión específica a CD37 de la presente descripción se cultivan en un medio de cultivo que comprenden un modificador de carbohidratos a una concentración que incrementa la ADCC de las moléculas de inmunoglicoproteína producidas por esta célula hospedadora, en donde el modificador de carbohidratos se está a una concentración de menos de 800 µ?. En una modalidad preferida, las células que expresan estas proteínas de fusión multiespecíficas se cultivan en un medio de cultivo que comprende castanospermina o quifunensina , de manera más preferente castanospermina a una concentración de 100-800 µ?, tal como 100 µ?, 200 µ?, 300 µ?, 400 µ?, 500 µ?, 600 µ?, 700 µ?, o 800 µ?. Los métodos para alterar la glicosilación con un modificador de carbohidratos tal como castanospermina se proporcionan en la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2009/0041756 o Publicación PCT No. O 2008/052030.
La presente descripción proporciona el uso de inhibidores de mTOR o PI3K en combinación con cualquiera de las moléculas de unión específica a CD37 descritas en la presente o conocidas en la técnica para reducir células B o tratar enfermedades o trastornos asociados con actividad anormal de células B.
Inhibidores de mTOR De manera de antecedente, las enfermedades hiperproliferativas (tal como cáncer) pueden ser debidas a señalización celular anormal. Por ejemplo, el objetivo mamífero de la rapamicina ("mTOR") es una serina/treonina-cinasa grande, multidominio, que tiene un dominio catalítico que tiene homología con la familia de PI3K de proteína-cinasas. mTOR (también conocido como proteína de unión a FK506, proteína 1 asociada a 12 -rapamicina, o FRAP) es una importante molécula intermedia de señalización de etapa posterior en la ruta de PI3K/AKT que inhibe la apoptosis y funciona como un sensor de niveles de nutrientes y de energía y el estado de reducción de una oxidación (ver, por ejemplo, Tokunaga et al. (2004) Biochem. Biophys . Res. Commun. 313:443; Grunwald et al. (2002) Cáncer Res. 62:6141; Stolovich et al. (2002) Mol. Cell Biol . 22:8101). mTOR parece estar comprendido en el crecimiento celular, proliferación celular, motilidad celular, supervivencia celular, síntesis de proteínas, y transcripción (ver, por ejemplo, Hay y Sonenberg (2004) Genes Dev. 18:1926; Beevers et al . (2006) Int . J. Cáncer 119:757). La desregulación de la ruta de mTOR está implicada como un factor contribuyente a varias proteasas de enfermedades humanas, especialmente varios tipos de cáncer (Beevers et al., 2006) que incluye células B transformadas (ver Wlodarski et al. (2005) Cáncer Res. 65:7800; Leseux et al. (2006) Blood 108:4156). La ruta de mTOR también se ha implicado en glioblastoma multiforme, carcinoma de células renales, y mieloma múltiple.
Existe mTOR en dos complejos, el complejo 1 de mTOR (mTORCl) y el complejo 2 de mTOR 2 (mTORC2) en células (Wullschleger et al. (2006) Cell 124:471). mTORCl está compuesto de mTOR, proteína asociada regulatoria de mTOR (Raptor) , proteína tipo ß sub-unidad de LST8/G-proteína de mamífero (mLST8/G L) y PRAS40. Este complejo se caracteriza por las características clásicas de mTOR al funcionar como un sensor de nutrientes/energía/reducción de una oxidación y al controlar la síntesis de proteína. mTORCl regula la actividad de al menos dos proteínas: P70S6 cinasa 1 y 4E-BP1, la proteína 1 de unión al factor 4E de inicio eucariótico (elF4E) . mTORCl fosforila la p70S6 cinasa 1 en la serina 389 y en la treonina 412. Esta fosforilación se puede detectar en extractos de células enteras de células tratadas con factor de crecimiento con un anticuerpo específico para el residuo 389 de fosfoserina.
También se ha mostrado que mTORCl fosforila al menos cuatro residuos de 4E-BP1. mT0RC2 está compuesto de mTOR, un compañero insensible a rapamicina de mTOR (Rictor) , G L, , y la proteína activada por estrés mamífero, proteína de interacción con cinasa (mSINl) . Se ha mostrado que mT0RC2 funciona como un importante regulador del citoesqueleto a través de su estimulación de fibras de estrés de F-actina, paxilina, RhoA, Rae, Cdc42, y proteína-cinasa Ca (PKCa) . Fosforila la serina/treonina-proteína-cinasa AKT/PKB en el residuo 473 de serina .
Como se usa en la presente, el término "inhibidor de mTOR" se refiere a un compuesto o un ligando que inhibe al menos una actividad de un mTOR, tal como la actividad de serina/treonina-proteína-cinasa en al menos uno de sus substratos (por ejemplo, p70S6 cinasa 1, 4E-BP1, AKT/PKB y eEF2). Una persona experta en la técnica puede terminar fácilmente si un compuesto, tal como rapamicina o un análogo derivado del mismo, es un inhibidor de mTOR. Un método específico para identificar estos compuestos o ligandos se describe, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2003/0008923.
En ciertas modalidades, un inhibidor de mTOR inhibe al menos una actividad de mTORCl. En modalidades adicionales, un inhibidor de mTOR inhibe al menos una actividad de mT0RC2.
En aún modalidades adicionales, un inhibidor de mTOR inhibe al menos una actividad de mTORCl y al menos una actividad de mT0RC2. En ciertas modalidades, un inhibidor de mTOR es un compuesto o ligando que inhibe la replicación celular al bloquear el progreso del ciclo celular desde Gl a S al inhibir la fosforilación de la serina 389 o treonina 412 de la cinasa p70s6.
Un inhibidor preferido de mTOR, la rapamicina (nombre genérico USAN es sirolimus) , se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 3,929,992. En ciertas modalidades, una composición que comprende una molécula de unión específica a CD37 se puede combinar o usar en combinación con un inhibidor de mTOR, tal como rapamicina (sirolimus), temsirolimus, deforolimus, everolimus, tacrolimus, zotarolimus, curcumin, ácido farnesiltiosalicílico, o similares.
Como se usa en la presente, el término "análogo de rapamicina o derivado del mismo" incluye compuestos que tienen la estructura núcleo de la rapamicina como se define en la Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2003/0008923 (la estructura núcleo de rapamicina se incorpora en la presente como referencia) , que se puede modificar químicamente de manera biológica en tanto que aún retiene las propiedades inhibitorias de mTOR. Estos derivados incluyen ésteres, éteres, oximas, hidrazonas, e hidroxilaminas de rapamicina, así como compuestos en los cuales se han modificado los grupos funcionales en la estructura núcleo de rapamicina, por ejemplo, por reducción a oxidación. También se considera que las sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos son derivados de rapamicina.
Los ejemplos específicos de esteres y éteres de rapamicina son ásteres y éteres de los grupos hidroxilo en las posiciones 42 y/o 31 del núcleo de rapamicina, y ésteres y éteres de un grupo hidroxilo en la posición 27 (después de la reducción química de la 27-cetona) . Los ejemplos específicos de oximas, hidrazonas, e hidroxilaminas son de una acetona en la posición 42 (después de la oxidación del grupo 42-hidoxilo) y de 27-cetona del núcleo de rapamicina.
Los ejemplos de los 42- y/o 31-ésteres y éteres de rapamicina se describen en las siguientes patentes, que se incorporan de este modo como referencia en sus totalidades: ésteres de alquilo (Patente de los Estados Unidos No. 4,316,885); ésteres de aminoalquilo (Patente de los Estados Unidos No. 4,650,803); ésteres fluorados (Patente de los Estados Unidos No. 5,100,883); ésteres de amida (Patente de los Estados Unidos No. 5,118,677); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No: 5,118,678); silil-éteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,120,842); aminoésteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,130,307); acétales (Patente de los Estados Unidos No. 551 ,413); aminodiésteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,162,333); ésteres de sulfonato y sulfato (Patente de los Estados Unidos No. 5,177,203); ésteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,221,670); alcoxiésteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,233,036); 0-aril, -alquil, -alquenil, y -alquinil-éteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,258,389); ésteres de carbonato (Patente de los Estados Unidos No. 5,260,300); carbamatos de arilcarbonilo y alcoxicarbonilo (Patente de los Estados Unidos No. 5,262,423); carbamatos (Patente de los Estados Unidos No. 5,302,584); hidrox ésteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,362,718); ésteres impedidos (Patente de los Estados Unidos No. 5,385,908); ésteres heterocíclicos (Patente de los Estados Unidos No. 5,385,909); ésteres gem-disustituidos (Patente de los Estados Unidos No. 5,385,910); ésteres alcamino amino-alcanoicos (Patente de los Estados Unidos No. 5,389,639); ésteres de fosforilcarbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,391,730); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,411 ,967); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,434,260); ésteres de amidino-carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,463,048); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,480,988); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,480,989); ésteres de carbamato (Patente de los Estados Unidos No. 5,489,680); ésteres de N-óxido impedido (Patente de los Estados Unidos No. 5,491,231); ésteres de biotina (Patente de los Estados Unidos No. 5,504,091 ) ; O-alquil-éteres (Patente de los Estados Unidos No. 5,665,772); y ésteres de PEG de rapamicina (Patente de los Estados Unidos No. 5,780,462).
Los ejemplos de 27-ésteres y éteres de rapamicina se describen en la Patente de los Estados Unidos No. 5,256,790, que se incorpora de este modo como referencia en su totalidad.
Los ejemplos de oximas, hidrazonas e hidroxilaminas de rapamicina se describen en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,373,014, 5,378,836, 5,023,264, y 5,563,145, que se incorporan de este modo como referencia. La preparación de estas oximas, hidrazonas e hidroxilaminas se escribe en las patentes listadas anteriormente. La preparación de 42-oxorapamicina se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 5,023,263, que se incorpora de este modo como referencia.
Otros compuestos dentro del alcance de "análogo de rapamicina o derivado del mismo" incluyen aquellos compuestos y clases de compuestos referidos, "rapalogos", por ejemplo, en WO 98/02441 y referencias citadas en la misma, y "epirapalogos" , por ejemplo, en WO 01/14387 y referencias citadas en la misma.
Otro compuesto dentro del alcance de "derivados de rapamicina" es everolimus, una 4-0- (2-hidroxietil) -rapamicina derivada de un antibiótico de macrólido producido por Streptomyces hygroscopicus (Novartis) . Everolimus también se conoce como Certican"R, RAD-001 y SDZ-RAD. Otro inhibidor preferido de mTOR es zotarolimus, un agente antiproliferativo (Abbott Laboratories) . Se cree que zotarolimus inhibe la proliferación de células de músculo liso con un efecto citostático que resulta de la inhibición de mTOR. Otro inhibidor preferido de mTOR es tacrolimus, un inmunosupresor de lactona de macrólido aislado del hongo de suelo Streptomyces tsukubaensis . También se conoce Tacrolimus como FK 506, FR 900506, Fujimicina, L 679934, Tsukubaenolido, PROTOPICMR y PR0GRAFr. Otros inhibidores preferidos de mTOR incluyen AP-23675, AP-23573, y AP-23841 (Ariad Pharmaceuticals) .
Los derivados preferidos de rapamicina incluyen everolimus, CCI-779 (42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropionico; Patente de los Estados Unidos No. 5,362,718); 7 -epi-rapamicina; 7-tiometil-rapamicina; 7-epi-trimetoxifenil-rapamicina; 7-epi-tiometil-rapamicina; 7-demetoxi-rapamicina; 32 -demetoxi-rapamicina; 2-desmetil-rapamicina; y 42-0- (2-hidroxi) etil-rapamicina (Patente de los Estados Unidos No. 5,665,772).
Los compuestos inhibidores de mTOR de ejemplo de la Fórmula A proporcionada en US 2008/0214596 (Novartis) se incorporan en la presente como referencia. Por ejemplo, también se describen compuestos de la Fórmula A en las Publicaciones PCT Nos. WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, O 99/15530, y en la Patente de los Estados Unidos No. 5,362,718, compuestos que se comparan en la presente como referencia. Estos compuestos se pueden preparar usando los procedimientos descritos en estas referencias.
Los inhibidores de mTOR, adicionales, incluyen inhibidores de TORCI y TORC2. Por ejemplo, OSI-027 (OSI Pharmaceuticals) es un inhibidor de TORC1/TORC2 de molécula pequeña. OSI-027 inhibe los complejos de señalización tanto de TORCI como TORC2 , permitiendo el potencial de truncamiento completo de la señalización celular anormal a través de esta ruta. Además, también se pueden usar torkinibs, inhibidores de dominio de cinasa de mTOR competitivos en ATP e inhibidores tanto de mTORCl y mTORC2 en combinación con moléculas de unión específica a CD37 de acuerdo a la presente descripción. Los torkinibs de ejemplo incluyen PP242 y PP30 (ver, Feldman et al. (2009) PLoS Biology 7:371) y Torin (Thoreen et al. (2009) J Biol Chem 284:8023).
Inhibidores de PI3K Las fosfoinositida-3-cinasas (PI-3 -cinasas o PI3K) son una familia de enzimas de transductor individual, intracelulares , relacionadas, capaces de fosforilar el grupo hidroxilo de la posición 3 del anillo de inositol de fosfatidilinositol (Ptdlns o PI) . Estas enzimas también se conocen como fosfatidilinositol-3-cinasas . En base a la estructura primaria, la regulación y la especificidad de substrato de lípido in vitro, la familia de fosfoinositol-3 -cinasa se pueden dividir en tres clases diferentes: Clase I, Clase II y Clase III (ver Leevers et al. (1999) Current Op . Cell Biol . 11 :219) .
Las PI3K de la Clase I son responsables de la producción de fosfatidilinositol -3 -fosfato (PI(3)P), de fosfatidilinositol- (3 , 4) bisfosfato (PI(3,4)P2) y de fosfatidilinositol- (3,4, 5) -trisfosfato (PI (3 , 4 , 5) P3. La PI3K se activa por receptores acoplados a proteína G y receptores de tirosina-cinasas . Las PI3K de la Clase I son moléculas heterodiméricas compuestas de una subunidad reguladora y una catalítica; adicionalmente se dividen en los subconjuntos IA y IB por la similitud de secuencia. Las PI3K de la Clase IA se componen de una a cinco subunidades reguladoras P85a, ?55a, ?50a, ?85ß o ?55? unidas a la subunidad catalítica pllOoc, ß o d. Las primeras dos isoformas pllO (a y ß) se expresan en todas las células, pero ????d se expresa principalmente en leucocitos. Se ha sugerido que ????d evolucionó en paralelo con el sistema inmunitario adaptable. Las subunidades plOl reguladora y ????? catalítica comprenden la PI3K del tipo IB.
Se han enlazado las PI3K a un grupo diverso de funciones celulares, incluyendo crecimiento, proliferación, diferenciación, motilidad, supervivencia celular y tráfico intracelular . Muchas de estas funciones se refieren a la capacidad de las PI3K de la Clase I para activar la proteína-cinasa B (PKB, aka AKT) . La PI3K de la Clase IA, pllOa está mutada en muchos cánceres en muchas de estas mutaciones provocan que sea más activa la cinasa. La fosfatasa PTEN Ptdlns (3,4,5) P3, que antagoniza la señalización de PI3K, está ausente en muchos tumores. Por lo tanto, la actividad de PI3K contribuye a la transformación celular y al desarrollo de cáncer. Los reportes sugieren que pllOoc pueden jugar un papel en la supervivencia celular, en tanto que ????ß puede ser más importante en la promoción de la proliferación celular (ver Benistant et al. (2000) Oncogene 19:5083). Las isoformas ????d y ????? regulan diferentes aspectos de las respuestas inmunitarias (Rommel et al. (2007) Nat . Rev. Immunol . 7:191; Ruckle et al. (2007) Nat. Rev. Drug Discov. 5:903) . Se sugirió que la isoforma ????? juega un papel clave como un modulador de la inflamación y alergia (Wymann et al. (2003) Biochem. Soc . Trans . 31:275), en tanto que se sugirió que la isoforma ????d es crítica para la señalización del receptor de antígeno completo de células B y T (Okkenhaug et al. (2002) Science 297:1031). Las PI3K también son un componente clave de la ruta de señalización de insulina.
Las PI3K de la Clase II comprenden tres isoformas catalíticas (C2aoc, 02ß, y C2y) , pero, diferentes de las Clases I y III, no son proteínas reguladoras. Las PI3K de Clase II catalizan la producción de PI(3)P y PI(3,4)P2 a partir de PI . Se expresan C2 y C2 a todo lo largo del cuerpo, sin embargo, la expresión C2y se limita a los hepatocitos. Se ha presentado alguna evidencia que las PI3K de la Clase II, similar a las PI3K de la Clase I, se pueden activar por estímulos externos mediante las receptor-tirosina-cinasas (RTK) , los receptores de citocinas y las integrinas, sugiriendo un papel en cáncer, curación de heridas y señalización de insulina.
Las PI3K de la Clase III producen sólo PI(3)P a partir de PI , pero son más similares a la Clase I en la estructura puesto que existen como un heterodímero que tiene subunidades catalíticas (Vps34) y reguladoras (pl50) . Parece que las PI3K de la Clase III están comprendidas principalmente en el tráfico de proteínas y vesículas, maduración de fagosoma, y autofagia (Falasca et al. (2007) Biochem. Soco Trans . 35:211).
Las varias fosfoinositidas 3-fosforiladas que se producen por las PI3K (por ejemplo, Ptdlns3P, Ptdlns ( 3 , 4 ) p2 , Ptdlns (3 , 5) 2 y Ptdlns (3 , 4 , 5 ) P3 ) funcionan en un mecanismo por el cual se reclutan un grupo diverso de proteínas de señalización que contienen el dominio PX, el dominio de homología de pleckstrina (dominios PH) , dominios FYVE y otros dominios de unión a fosfoinositidos , a varias membranas celulares a través de interacciones directas de lípido-proteína (Fruman et al. (1998) Annu. Rev. Biochem. 67:481; Hawkins et al. (2006) Biochem. Soc . Trans . 34:647). Por ejemplo, se activa AKT como resultado de la actividad de PI3-cinasa debido a que AKT requiere la formación de la molécula Ptdlns (3 , 4, 5) P3 (o "PIP3") a fin de ser transcolocada a la membrana celular. En PIP3, entonces se fosforila AKT por otra cinasa llamada proteína-cinasa I dependiente de fosfoinositido (PDPK1) , y de este modo se activa. Se ha mostrado que la ruta de señalización de "PI3K/AKT" se refiere por un arreglo muy diverso de actividades celulares, más notablemente supervivencia y proliferación celular.
Además de AKT y de PDK1 , otra serina-treonina-cinasa relacionada, la SGK, se une a la molécula de PIP3 creada como resultado de la actividad de PI3 -cinasa. También se ha implicado PI3K en potenciación a largo plazo (LTP) . La ruta de PI3K también recluta muchas otras proteínas en etapa posterior, incluyendo mTOR, GSK3 , y PSD-95.
Como se usa en la presente, el término "inhibidor de PI3K" se refiere a un compuesto que inhibe al menos una actividad de una PI3K de la Clase I, II o III en al menos uno de sus sustratos (por ejemplo, fosforila el fosfatidilinositol para producir fosfatidilinositol-3-fosfato (PI(3)P), el fosfatidilinositol- (3 , 4) -bisfosfato (PI(3,4)P2), o el fosfatidilinositol- (3,4, 5) -trifosfato (PI (3 , 4 , 5) P3) . Un experto en la técnica puede determinar fácilmente si un compuesto, tal como wortmannina o LY294002, es un inhibidor de PI3K. Un método específico para identificar estos compuestos o ligandos, se describe, por ejemplo, en las patentes de los Estados Unidos Números 5,858,753; 5,882,910; y 5,985,589, Jackson et al. (2005) Nat . Med. 11:507, Pomel et al. (2006) J. Med. Chem. 49:3857; Palanki et al. (2007) J. Med. Chem. 50:4279), métodos que se incorporan en la presente como referencia.
En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K inhibe la actividad de una PI3K de Clase I. Por ejemplo, un inhibidor de PI3K puede inhibir pllOa, ????ß, ?????, o ????d. En modalidades preferidas, un inhibidor de PI3K bloquea o reduce la actividad de ????? o ????d en comparación a ????? o ????d no tratado. En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K inhibe la actividad de una PI3K de Clase II. Por ejemplo, un inhibidor de PI3K puede inhibir PI3K-C2oc, PI3K-C2 , o PI3K-C2y. En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K inhibe la actividad de PI3K de Clase III, Vps34.
En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K es selectivo o específico para una isoforma particular de PI3K. Un inhibidor es "selectivo" o "específico" para una isoforma particular de PI3K si inhibe la isoforma particular de PI3K de manera más efectiva que otras isoforma de PI3K. Por ejemplo, un inhibidor específico para una isoforma particular de PI3K puede tener una IC50 para la isoforma particular de PI3K de a lo mucho aproximadamente 1/10 (por ejemplo, a lo mucho aproximadamente 1/20, 1/30, 1/40, 1/50, 1/60, 1/80, 1/100, 1/200, 1/300, 1/400, 1/500, 1/600, 1/800, o 1/1000) de la IC50 para otras isoformas de PI3K. Por ejemplo, un inhibidor específico de ????d puede tener un valor de IC50 para ????d de a lo mucho aproximadamente 1/10 de la IC5o para otras isoformas de PI3K (por ejemplo, ???? , ????ß, o ?????) .
En modalidades preferidas, un inhibidor de PI3K es específico para ????a, ????ß, ?????, o ????d. En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K inhibe dos o más clases o subclases de PI3K. En ciertas modalidades, un inhibidor de PI3K también es un inhibidor de mTOR.
Un inhibidor preferido de PI3K es LY294002 (2-morfolin-4-il-8-fenilcromen-4 -ona) o wortmannina. Tanto LY294002 como wormannina son inhibidores amplios contra PI3K y también pueden inhibir mTOR. Los inhibidores de PI3K útiles en la terapia de combinación con moléculas de unión específica a CD37 incluyen derivados de wortmannina, tal como PX-866 (ver, Ihle efc al., Mol Cáncer Ther 3:763-72, 2004).
Los inhibidores específicos de ????? de ejemplo útiles en la presente descripción incluyen furan-2 - ilmetilen-tiazolidinadionas (AS-252424) (ver, Pomel et al., 2006, supra) y 3 , 3 ' - (2 , 4-diaminopteridina-6 , 7-diil) difenol (ver, Palanki et al., supra) . Los inhibidores específicos de ????d de ejemplo útiles en la presente descripción incluyen IC486068 y IC87114 (ICOS Corp., now Eli Lilly and Company) y CAL-101 y CAL-263 (Calistoga Pharmaceuticals) . Otro inhibidor de PI3K que se puede usar en combinación con una molécula de unión específica a CD37 es CAL-120, un inhibidor de PI3K con inhibición de ????d y ????ß (Calistoga Pharmaceuticals) . Otro inhibidor de PI3K de ejemplo que se puede usar en combinación con una molécula de unión específica a CD37 es GDC-0941 bismesilato (2- (lH-indazol-4-il) -6- (4 -metanosulfonil-piperazin-l-ilmetil) -4-morfolin-4-il-tieno [3 , 2-d] irimidina, sal de bimesilato) , un inhibidor selectivo de pllOa y ???d.
Los inhibidores adicionales de PI3K incluyen derivados de pirazol descritos en la Publicación PCT No. WO 2009/059030, derivados de amino-triazol descritos en WO 2009/068482, un , compuesto de imidazotiadiazol descrito en la WO 2009/040552, compuestos de pirimidin- -ona fusionados específicos para ????d descritos en WO 2009/064802, compuestos de morfolino-pirimidina que inhiben pllOa descritos en la WO 2009/066084, un derivado de 4 -pirimidin-4 -il-morfolina descritos en la WO 2009/042607, un compuesto de 4-morfolin-4-il-tienopirimidina descritos en la WO 2009/036082, un derivado de piridosulfonamida descrito en la WO 2009/055418, derivados de piridopirimidina que inhiben pllOoc y/o ????? descritos en la WO 2009039140, derivados heterocíclico que inhiben pllOOC descritos en O 2009046448, furanopirimidinas y zolopirimidinas específicas para ????d descritos en WO 2008/152394 y WO 2008/152390, compuestos de quinazolina específicos para ????d descritos en WO 2008/152387, derivados de purina sustituidos con pirimidina descritos en WO 2009/045175, compuestos de tienopirimidina y pirazolopirimidina descritos en WO 2009/052145, análogos de imidazolopirimidina, pirrolopirimidina y pirazolopirimidina descritos en WO 2009/070524, imidazopiridazina sustituida descrita en la WO 2008/138834, derivados de tienopirimidieno selectivos para ????d descritos en WO 2009/053715, derivados de purina selectivos para ????d descritos en la WO 2009/053716, derivados de purina 2- (morfolin-4-il) -sustituidos descritos en la WO 2009/045174, inhibidores de ??3?d (????d) descritos en las Patente de los Estados Unidos Nos. 6,518,277 y 6,800,620 y Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2005/0261317, y BGT226, XL765 y BEZ235 (Novartis) .
Combinaciones y Composiciones Farmacéuticas La presente descripción proporciona combinaciones y composiciones farmacéuticas que comprende moléculas de unión específica a CD37 con inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K, o cualquier combinación de estos.
En ciertas modalidades, la presente descripción proporciona una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR. La molécula de unión específica a CD37 puede ser una proporcionada en la presente o conocida en la técnica, incluyendo anticuerpos específicos a CD37, scFv, Fab, SMIP, polipéptidos de PI S' y SCORPION. Un inhibidor de mTOR puede ser cualquiera conocido en la técnica o proporcionado en la presente. Por ejemplo, en ciertas modalidades, una combinación o composición de la presente descripción comprende un anticuerpo específico de CD37 o proteína SMIP y un inhibidor de mTOR seleccionado de sirolimus, temsirolimus , deforolimus, everolimus, tacrolimus, zotarolimus, curcumin, o ácido farnesiltiosalicílico . En otras modalidades preferidas, la composición comprende un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, o un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 82, 84, 86, 88 o 253.
En ciertas modalidades preferidas, una combinación o una composición de la presente descripción comprende (1) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y sirolimus, (2) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y temsirolimus, (3) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y everolimus, (4) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y deforolimus, (5) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y PP242, o (6) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y PP30. En ciertas modalidades preferidas, diferentes, una combinación o composición de la presente descripción comprende (1) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y sirolimus, (2) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y temsirolimus , (3) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS:309 y 310, respectivamente, y everolimus, (4) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y deforolimus, (5) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y PP242, o (6) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y PP30. En otras modalidades preferidas, una combinación o composición de la presente descripción comprende (1) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 respectivamente, y sirolimus, (2) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 y temsirolimus , (3) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 y everolimus, (4) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 y deforolimus, (5) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 y PP242, o (6) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253, y PP30.
En modalidades adicionales, la presente descripción proporciona una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de PI3K. La molécula de unión específica a CD37 puede ser una proporciona en la presente, incluyendo los anticuerpos específicos de CD37, scFv, Fab, SMIP, polipéptidos de PIMS y SCORPION. El inhibidor de PI3K puede ser cualquiera conocido en la técnica o proporcionado en la presente. Por ejemplo, en ciertas modalidades, una combinación o composición de la presente descripción comprende un anticuerpo específico de CD37 o proteína SMIP y un inhibidor de PI3K seleccionado de LY294002, wortmannina, inhibidores específicos de ????? e inhibidores específicos de ????d. En algunas de estas modalidades, la composición comprende un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS:309 y 310, respectivamente, o un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO:6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 82, 84, 86, 88 o 253.
En ciertas modalidades, la composición de la presente descripción comprende (1) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS:307 y 308, respectivamente, y LY294002, (2) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprendan SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y un inhibidor específico de ?????, o (3) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprendan SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, y un inhibidor específico de ????d. En ciertas modalidades diferentes, la composición de la presente descripción comprende (1) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprendan SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y LY294002, (2) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprendan SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y un inhibidor específico de ?????, o (3) un anticuerpo específico de CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprendan SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y un inhibidor específico de ????d. En ciertas modalidades adicionales, la composición de la presente descripción comprende un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID NO: 253 y LY294002 o SEQ ID NO: 253 y un inhibidor específico de ?????, o SEQ ID NO: 253 y un inhibidor específico de ????d.
En ciertas modalidades, una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K se formulan conjuntamente en una solución o en una suspensión. En estas formulaciones, la relación molar de la molécula de unión específica a CD37 al inhibidor de mTOR o PI3K puede estar en el intervalo de 1:1000 a 1000:1, tal como 1:1000 a 1:500, 1:500 a 1:100, 1:100 a 1:10, 1:10 a 1:1, 1:5 a 5:1, 1:1 a 10:1, 10:1 a 1:10, 10:1 a 100:1, 100:1 a 500:1, O 500:1 a 1000:1.
Las composiciones farmacéuticas comprenden de manera preferente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. La frase "farmacéuticamente o farmacológicamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen reacciones alérgicas, u otras reacciones adversas cuando se administran usando reglas bien conocidas en la técnica, como se describe más adelante. Los "portadores farmacéuticamente aceptables" incluyen cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifungoideos , agentes isotónicos y de retraso de absorción, clínicamente útiles y similares. Además, los compuestos pueden formar solvatos con agua o solventes orgánicos comunes. Estos solvatos se contemplan también .
Los portadores adecuados farmacéuticamente aceptables que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas de la presente descripción incluyen agua, un solvente orgánico aceptable farmacéutico, colágeno, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, un polímero de carboxivinilo, carboximetilcelulosa sódica, sodio poliacrílico, linato de sodio, dextrano soluble en agua, carboximetil -almidón sódico, peptina, metilcelulosa , etilcelulosa , goma de xantano, goma arábiga, caseína, gelatina, agar, diglicerina, glicerina, propilenglicol , polietilenglicol , vaselina, parafina, alcohol estearílico, ácido esterárico, albúmina de suero humano (HSA) , manitol, sorbitol, lactosa, un agente tensioactivo farmacéuticamente aceptable y similares. Los portadores usados se eligen de, pero no se limitan a, lo anterior o combinaciones de los mismos, como sea apropiado, dependiendo de la forma de dosis de la presente descripción.
La formulación de la composición farmacéutica variará de acuerdo a la ruta de administración seleccionada (por ejemplo, solución, emulsión, tabletas). Para soluciones o emulsiones, los portadores adecuados incluyen, por ejemplo, soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas o alcohólicas/acuosas, incluyendo solución salina y medios amortiguados. Los vehículos parenterales pueden incluir solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer lactado o aceites fijos. Los vehículos intravenosos pueden incluir aditivos, conservadores o fluidos varios, reabastecedores y nutrientes o electrolitos.
Una variedad de portadores acuosos, por ejemplo, agua, agua amortiguada, solución salina al 0.4 ¾, glicina al 0.3 %, o suspensiones acuosas pueden contener un compuesto activo (por ejemplo, una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K) en mezcla con excipientes adecuados para la elaboración de suspensiones acuosas. Estos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa , alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma de acacia; agentes dispersantes o humectantes pueden ser una fosfatida que se presenta de manera natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetil -eno-oxicetanol , o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilen-sorbitol , o productos de condensación de óxido de etileno con esteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de polietilen-sorbitano. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservadores, por ejemplo, etil-, o n-propil-, p-hidroxi-benzoato .
La molécula de unión, inhibidor o composiciones de combinación, se pueden liofilizar para almacenamiento y reconstituir en un portador adecuado antes del uso. Se ha mostrado que esta técnica es efectiva con inmunoglobulinas convencionales. Se puede emplear cualquier técnica adecuada de liofilización y reconstitución. Se apreciará por los expertos en la técnica que la liofilización y reconstitución puede conducir a grados variables de pérdida de actividad de anticuerpo y que los niveles de uso pueden tener que ser ajustados para compensar.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa por la adición de agua proporcionan el compuesto activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservadores. Los agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por aquellos mencionados ya anteriormente.
En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden estar en una forma adecuada para administración oral, tal como una forma de una pildora, cápsula, solución o suspensión. Estas formulaciones se pueden preparar de acuerdo a cualquier método conocido en la técnica para producir formulaciones orales y pueden contener uno o más agentes que incluyen agente edulcorantes, agentes saborizantes , agentes colorantes y agentes conservadores. Si está en la forma de tableta, las composiciones pueden comprender excipientes de tableta, tal como un agente de relleno o diluyente (por ejemplo, carbonato de calcio o sodio, lactosa, fosfato de calcio o sodio) , un desintegrante (almidón de maíz o ácido algínico) , un aglutinante (por ejemplo, almidón, gelatina o acacia) , un deslizante, un lubricante (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco) , un antiadherente , un sabor o un colorante.
La concentración de la molécula de unión específica a CD37 o un inhibidor de mTOR o PI3K en estas formulaciones puede variar ampliamente, por ejemplo, desde menos de aproximadamente 0.5 %, usualmente a o al menos aproximadamente 1 %, a lo mucho 15 o 20 % en peso y se seleccionará principalmente en base a volúmenes de fluido, viscosidades, etc., de acuerdo con el modo particular de administración seleccionada. Una composición farmacéutica típica para inyección parenteral se puede constituir para contener 1 mL de agua amortiguada estéril y 50 mg de anticuerpo. Una composición típica para infusión intravenosa se puede constituir para contener 250 mL de solución estéril de Ringer y 150 mg de anticuerpo. Los métodos actuales para preparar composiciones parenteralmente administrables se conocen o son aparentes para aquellos expertos en la técnica y se describen en más detalle, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed. , Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1980) .
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una solución oleaginosa, acuosa, inyectable, estéril, dispersiones o polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables, estériles. La suspensión se puede formular de acuerdo a la técnica conocida usando aquellos agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes .de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solución en 1 , 3 -butanodiol . El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol , y polietilenglicol líquido, y similares) , mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites estériles fijos se emplean de manera convencional como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo e insípido incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tal como ácido oleico encuentran uso en la preparación de productos inyectables.
En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida al grado que exista fácilmente capacidad de manejo en jeringa. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, por el uso de un revestimiento, tal como lecitina, por el mantenimiento del tamaño requerido de partícula en el caso de dispersión y por el uso de agentes tensioactivos . Debe ser estable bajo las condiciones de elaboración y almacenamiento y se debe conservar contra la acción contamínate de microorganismos, tal como bacterias y hongos. La prevención de la acción de microorganismos se puede provocar por varios agentes antibacterianos o antifungoidéos , por ejemplo, parabenos, clorobutanol , fenol, ácido sórbico, timerosal o similares. En muchos casos, sería deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede provocar por el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las composiciones útiles para administración se pueden formular con mej oradores de captación o absorción para incrementar su eficiencia. Estos mej oradores incluyen, por ejemplo, salicilato, glicolato/linoleato, glicolato, aprotinina, bacitracina, SDS, caprato y similares. Ver, por ejemplo, Fix (J. Pharm. Sci., 85:1282-1285, 1996) y Oliyai y Stella (Ann. Rev. Pharmacol . Toxicol . , 32:521-544, 1993).
Además, están bien equilibradas las propiedades de hidrofilicidad e hidrofobicidad de las composiciones contempladas para el uso en la descripción, mejorando de este modo su utilidad tanto in vitro y especialmente usos in vivo, en tanto que otras composiciones que carecen de este equilibrio son sustancialmente de menos utilidad. Específicamente, las composiciones contempladas para el uso en la descripción tienen un grado apropiado de solubilidad en medios acuosos lo que permite la absorción y biodisponibilidad en el cuerpo, en tanto que también tiene un grado de solubilidad en lípidos que permite que los compuestos atraviesen la membrana celular a un sitio putativo de acción. De esta manera, las composiciones de anticuerpo contempladas son máximamente efectivas cuando se pueden administrar al sitio de actividad de antígeno objetivo o diana .
Una composición de ejemplo de una molécula de unión específica a CD37 adecuada para infusión intravenosa comprende un anticuerpo específico de CD37 (por ejemplo, un anticuerpo cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS:307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS:309 y 310, respectivamente) a una concentración en el intervalo de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 25 mg/ml, tal como de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2.5, de aproximadamente 2.5 a aproximadamente 10, y de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 mg/ml.
Una composición de ejemplo de una molécula de unión específica a CD37 adecuada para administración subcutánea comprende un anticuerpo específico de CD37 (por ejemplo, un anticuerpo cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente) , a un intervalo de concentración de aproximadamente 25 a aproximadamente 250 mg/ml, tal como de aproximadamente 25 a aproximadamente 100, y de aproximadamente 100 a aproximadamente 250 mg/ml.
Una composición de ejemplo de una molécula de unión específica a CD37 adecuada para infusión intravenosa comprende un polipéptido SMPI específico de CD37 (por ejemplo, un polipéptido SMIP que comprende SEQ ID NO: 253) a un intervalo de concentración de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 25 mg/ml, tal como de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2.5, de aproximadamente 2.5 a aproximadamente 10, y de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 mg/ml.
Una composición de ejemplo de una molécula de unión específica a CD37 adecuada para administración subcutánea comprende un polipéptido SMIP específico de CD37 (por ejemplo, un polipéptido SMIP que comprende SEQ ID NO: 253) a un intervalo de concentración de aproximadamente 25 a aproximadamente 250 mg/ml, tal como de aproximadamente 25 a aproximadamente 100, y de aproximadamente 100 a aproximadamente 250 mg/ml.
Una composición de ejemplo de un inhibidor de mTOR es una solución que comprende rapamicina a un intervalo de concentración de 0.1 a 5 mg/ml (por ejemplo, 1 mg/ml) adecuada para administración oral. Otra composición de ejemplo de un inhibidor de mTOR es una tableta que comprende de 0.1 a 5 mg (por ejemplo, de 0.1 a 0.5 mg, de 0.5 a 1 mg, de 1 a 2 mg, de 2 a 3 mg, o de 3 a 5 mg; o 0.25, 0.5, l o 2 mg) de rapamicina adecuada para administración oral. Otra composición de ejemplo de un inhibidor de mTOR es una solución oral que comprende rapamicina a un intervalo de concentración de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 mg/ml (por ejemplo, de 0.1 a 0.5 mg/ml, de 0.5 a 1 mg/ml, de 1 a 5 mg/ml, o de 5 a 10 mg/ml; o de aproximadamente 0.5, 1 o 2 mg/ml) . Otra composición de ejemplo de un inhibidor de mTOR es una solución que comprende temsirolimus a un intervalo de concentración de 1 a 50 mg/ml (por ejemplo, de 1 a 5 mg/ml, de 5 a 10 mg/ml, de 10 a 20 mg/ml, de 20 a 30 mg/ml, o de 30 a 50 mg/ml; o de 5, 10 o 25 mg/ml) . Esta composición se puede diluir adicionalmente antes de la administración mediante infusión intravenosa. Otra composición de ejemplo de un inhibidor de mTOR es una tableta que comprende de 1 a 25 mg (por ejemplo, de 1 a 2.5 mg, de 2.5 a 5 mg, de 5 a 10 mg, o de 10 a 25 mg, o 1, 2.5, 5, 10, 15, 20, o 25 mg) de everolimus, adecuada para administración oral. Otras composiciones de ejemplo de inhibidores de PI3K son formulaciones orales de CA-101, CAL-120 y CAL-263. Estas formulaciones orales pueden comprender de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 500 mg, tal como de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 200 mg, de aproximadamente 200 mg a aproximadamente 300 mg, de aproximadamente 300 mg a aproximadamente 400 mg, y aproximadamente 400 mg a aproximadamente 500 mg.
Métodos de Tratamiento La presente descripción proporciona un método para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B (por ejemplo, cánceres de células B y enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias) en un sujeto que tiene o es sospechoso de tener la enfermedad o trastorno. El método comprende tratar un sujeto con una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR, una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de PI3K, o cualquier combinación de estos. Una combinación de una molécula de unión específica a CD37 (por ejemplo, anticuerpo anti-CD37 o proteína SMIP) y un inhibidor de mTOR o PI3K puede actuar de manera sinérgica para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B.
Dos o más compuestos que actúan de manera sinérgica interactúan tal que el efecto combinado de los compuestos es mayor que la suma de los efectos individuales de cada compuesto cuando se administran solos (ver, por ejemplo, Berenbaum, Pharmacol . Rev. 41:93, 1989). Por ejemplo, una interacción entre SMIP específico de CD37 y otro agente o compuesto se puede analizar por una variedad de modelos mecanísticos y empíricos (Ver, por ejemplo, Ouzounov et al., Antivir. Res. 55:425, 2002). Un planteamiento comúnmente usado para analizar la interacción entre una combinación de agentes emplea la construcción de isobolas (curvas de iso-efecto, también referidas como isobologramas , en las cuales la combinación de agentes (da, db) se representa por un punto en una gráfica, los ejes de la cual son el eje de dosis de los agentes individuales (ver, por ejemplo, Ouzounov et al., supra; ver también Tallarida, J. Pharmacol. Exp. Therap. 298 :865, 2001) .
Otro método para analizar las interacciones fármaco- fármaco (antagonismo, aditividad, sinergismo) conocidas en la técnica incluyen determinación de índices de combinación (CI) de acuerdo al principio de efecto medio para proporcionar estimados de valores de IC50 de los compuestos administrados solos y en combinación (ver, por ejemplo Chou. In Synergism and Antagonism Chemotherapy . Eds . Chou and Rideout . Academic Press, San Diego Calif., páginas 61-102, 1991 software; CalcuSynMR) . Un valor de CI de menos de uno representa actividad sinérgica, igual a uno representa actividad aditiva, y mayor de uno representa antagonismo.
Aún otro método de ejemplo es el método de efecto independiente (Pritchard y Shipman, Antiviral Res. 14:181,1990; Pritchard y Shipman, Antiviral Therapy 1:9, 1996; software MacSynergy^ II, University of Michigan, Ann Arbor, Mich.) . El software MacSynergy"1* II permite un examen tridimensional (3-D) de interacciones de compuestos al comparar una superficie aditiva calculada a datos observados para generar gráficas diferenciales que revelan regiones (en la forma de un volumen) estadísticamente mayor que lo esperado (sinergia) o menor que lo esperado (antagonismo) de interacciones de compuestos. Por ejemplo, una composición que comprende una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K se considerará que tiene actividad sinérgica o tiene un efecto sinérgico cuando el volumen de sinergia producido como se calcula por el volumen de los picos de sinergia es de manera preferente cerca de 15 % mayor que el efecto aditivo (es decir, el efecto de cada agente solo adicionado con untamente) , aproximadamente 50 % mayor, de manera preferente aproximadamente 2 veces a 10 veces mayor, o de manera preferente aproximadamente 3 veces a 5 veces o mayor, que el efecto aditivo.
En modalidades adicionales, una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K se puede administrar para actuar de manera sinérgica en el tratamiento de malignidades de células B o cánceres de células B. Las malignidades de células B o cánceres de células B de ejemplo incluyen linfornas de células B, tal como varias formas de la enfermedad de Hodgkin, linforna no de Hodgkin (NHL) o linfornas del sistema nervioso central, linforna linfocítico pequeño, leucemias tal como leucemia prolinfocítica, leucemia linfoblástica aguda (ALL) , leucemia mieloide aguda (AML) , leucemia linfocítica crónica (CLL) , leucemia de células pilosas y leucemia mioblástica crónica y mielomas (tal como mieloma múltiple) . Los cánceres de células B adicionales incluyen linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico (incluyendo macroglobulinemia de Waldenstróm) , linfomas de células marginales (incluyendo linfoma esplénico de zonas marginales y linfoma nodal de células B de zonas marginales) , mieloma/plasmacitoma de células de plasma, plasmacitoma solitario de hueso, plasmacitoma extraóseo, linfoma nodal de zonas marginales, linfoma extranodal de células B de zonas marginales de tejido linfoide asociado a mucosa (MALT) , linfoma folicular, linfoma de células de manto (MCL) , linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células B grandes transformantes, linfoma de células B grandes mediastinales (tímicas) , linfoma de células B grandes intravasculares , linfoma de fusión primaria, linforna/leucemia de Burkitt, proliferaciones de células B de potencial maligno incierto, granulomatosis linfomatoide , y trastorno linfoproliferativo post-trasplante .
En ciertas modalidades, la malignidad de células B que los compuestos, composiciones o combinaciones de la presente descripción se pueden usar para tratar es linfoma de Burkitt. El linfoma de Burkitt (o "malignidad.de células B de Burkitt", o "tumor de Burkitt", o "linfoma maligno, tipo Burkitt") es un cáncer del sistema linfático (en particular, linfocitos B) . Se puede dividir en tres variantes clínicas principales: la variante endémica, la variante esporádica y la variante asociada a inmunodeficiencia .
Las malignidades de células B no de Burkitt que se pueden tratar con los compuestos, composiciones, o combinaciones de la presente descripción incluyen leucemia linfocítica crónica de células B (CLL) /linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de células B, una leucemia linfoblástica aguda (ALL) , linfoma linfoplacítico (incluyendo, pero no limitado a, macroglobulinemia de Waldenstrom) , linfomas de zonas marginales (incluyendo, pero no limitado a, linfoma esplénico de células B de zonas marginales, linfoma nodal de zonas marginales, y linfoma extranodal de células B de zonas marginales del tipo de tejido linfoide asociado a mucosa (MALT) ) , leucemia de células pilosas, mieloma/plasmacitoma de células de plasma, linfoma folicular, linfoma de células de manto (MCL) , linfoma de células B grandes difusas, linfoma de céluals B grandes transformantes, linfoma de células B grandes mediastinales , linfoma de células B grandes intravasculares , linfoma de fusión primaria, y linfoma no de Hodgkin (NHL) .
Las composiciones y tratamientos de combinación de la presente descripción también son útiles en el tratamiento de trastornos caracterizados por producción de autoanticuerpos (por ejemplo, enfermedades autoimunitarias) . Las enfermedades autoinmunitarias incluyen artritis, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis , policondritis , artritis psoriática, psoriasis, dermatitis, polimiositis/dermatomiositis, miostitis de cueros de inclusión, miositis inflamatoria, necrolisis epidérmica tóxica, escleroderma sistémico y esclerosis, síndrome de CREST, enfermedad inflamatoria de intestino, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, síndrome de esfuerzo respiratorio, meningitis, encefalitis, uveitis, colitis, glomerulonefritis , condiciones alérgicas, eccema, asma, condiciones que comprenden inflamación de células T y respuestas inflamatorias crónicas, aterosclerosis , miocarditis autoinmunitaria, deficiencia de adhesión de leucocitos, lupus eritematosos sistémico (SLE) , lupus eritematoso cutáneo subagudo, lupus, diabetes de comienzo juvenil, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica, neuromielitis , fiebre reumática, corea de Sydenham, respuestas inmunitarias asociadas con hipersensibilidad aguda y retrasada mediada por citocinas y linfocitos T, tuberculosis, sarcoidosis, granulomatosis incluyendo granulomatosis de egener y enfermedad de Churg-Strauss , agranulocitosis , vasculitis, (incluyendo vasculitis/angiitis de hipersensibilidad, ANCA y vasculitis reumatoide) , anemia aplástica, anemia de Diamond Blackfan, anemia hemolítica inmunitaria incluyendo anemia hemolítica autoinmunitaria (AIHA) , anemia perniciosa, aplasia de células rojas puras (PRCA), deficiencia de Factor VIII, hemofilia A, neutropenia autoinmunitaria, pancitopenia, leucopenia, enfermedades que comprenden diapedesis de leucoticos, trastornos inflamatorios del sistema nervioso central (CNS) , síndrome de lesión de múltiples órganos, miastenia gravis, enfermedades mediadas por complejo de antígeno-anticuerpo, enfermedad de membrana base anti-glomerular, síndrome de anticuerpo anti-fosfolípido, neuritis alérgica, enfermedad de Behcet, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome Miasténico de Lambert-Eaton, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjorgen, síndrome de Stevens-Johnson, rechazo de trasplante de órgano sólido, enfermedad de injerto versus hospedador (GVHD) , penfigoide buloso, pénfigo, poliendocrinopatías autoinmunitarias , espondiloartropatías seronegativas , enfermedad de Reiter, síndrome de hombre rígido, arteritis de células gigantes, nefritis e inmunocomplej o, nefropatía de IgA, polineuropatías de IgM o neuropatía mediada por IgM, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , púrpura trombocitopénica trombótica (TTP) , púrpura de Henoch-Schonlein, trombocitopenia autoinmunitaria, enfermedad autoinmunitaria de los testículos y ovario que incluyen orquitis y ooforitis autoinmunitaria, hipotiroidismo primario; enfermedades endocrinas autoinmunitarias que incluyen tiroiditis autoinmunitaria, tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto) , tiroiditis subaguda, hipotiroidismo idiopático, enfermedad e Addison, enfermedad de Grave, síndromes poliglandulares autoinmunitarios (o síndromes de endocrinopatía poliglandular) , diabetes Tipo I también referida como diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM) y síndrome de Sheehan; hepatitis autoimunitaria, pneumonitis intersticial linfoide (HIV) , bronquiolitis obliterante (sin trasplante) vs NSIP, síndrome de Guillain-Barre, vasculitis de vasos grandes (incluyendo polimialgia reumática y arteritis de células gigantes (Takayasu) ) , vasculitis de vasos medios (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa) , poliarteritis nodosa (PAN) espondilitis anquilosante, enfermedad de Berger (nefropatía de IgA) , glomerulonefritis rápidamente progresiva, cirrosis biliar primaria, enfermedad Celiaca (enteropatía por gluten) , crioglobulinemia, crioglobulinemia asociada con hepatitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) , esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , enfermedad de arterias coronarias, fiebre familiar del mediterráneo, poliangiitis microscópica, síndrome de Cogan, síndrome de Whiskott-Aldrich y tromboangiitis obliterante, enfermedad de tiroides autoinmunitaria (tal como enfermedad de Graves y tiroiditis de Hashimoto) , síndrome de Sjogren, y miopatía inflamatoria idiopática (IIM) , incluyendo dermatomiositis (DM) y polimiositis (P ) .
Las composiciones o tratamientos de combinación de la presente descripción se usan de manera preferente para tratar leucemias o linfomas de células B tal como linfoma no de Hodgkins de células B (NHL) (incluyendo linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crónica (CLL) , linfoma linfocítico pequeño (SLL) , linfoma de células B grandes difusas, linfoma folicular, linfoma de células grandes inmunoblástica , linfoma B-linfoblástico precursor, y linfoma de células de manto, leucemia de células pilosas, leucemia de pro-linfocítica de células B, linfoma de células dendríticas CD37+, linfoma linfoplasmacítico, linfoma esplénico de zonas marginales, linfoma extranodal de células B de zonas marginales de tejido linfoide asociado a mucosa (MALT) , linfoma nodal de células B de zonas marginales, linfoma de células B grandes mediastinales (tímica) linfoma de células B grandes intravasculares , y linfoma de fusión primaria.
Adicionalmente , las composiciones o tratamientos de combinación de la presente descripción se usan de manera preferente para tratar una enfermedad caracterizada por la producción de autoanticuerpos tal como miopatía inflamatoria idiopática, a artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, miastenia gravis, enfermedad de Grave, diabetes mellitus tipo I, enfermedad de membrana de basamento anti-glomerular, glomerulonefritis rápidamente progresiva, enfermedad de Berger (neufropatía de IgA) , lupus eritematosos sistémico (SLE) , enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , síndrome de anticuerpo anti-fosfolípido, neuromielitis óptica, esclerosis múltiple, una enfermedad autoinmunitaria, dermatomiositis , polimiositis , o macroglobinemia de Waldenstróm. En otras modalidades preferidas, las composiciones o tratamientos de combinación de la presente descripción se usan para tratar una enfermedad caracterizada por estimulación inapropiada de células T, asociada con una ruta de células B.
En ciertos casos, las lesiones genéticas se pueden enlazar a, o ser la causa de ciertos cánceres. Por ejemplo, el análisis citogenético ha revelado que, el linfoma de células de manto (MCL) está asociado cercanamente con la transcolocación t ( 11 ; 14) (ql3 ; q32) (Rimokh et al., Genes Chromo. Cáncer 2:223 (1990); Leroux et al., Br. J. Haematol . 77:346 (1991); Vandenberghe et al., Br. J. Haematol 81:212 (1992)). Esta transcolocación juxtapone secuencias del gen de cadena pesada de inmunoglobulina (IGH) con el locus BCL-1, que conduce al favorecimiento de la expresión del gen CCNDl y en consecuencia a una sobreexpresión de ciclina DI (de Boer et al., Cáncer Res. 53:4148 (1993); de Boer et al., Oncogene 10:1833 (1995)). La sobreexpresión de ciclina DI se piensa que se presenta en 100 % de los pacientes con MCL, pero se encuentra t(ll;14) (ql3,-q32) sólo en 70 % a 75 % (Leroux et al., 1991; Vandenberghe et al., 1992). Además, la frecuencia de esta transcolocación en otros cánceres es 10-20 % en leucemia B-prolinfocítica , leucemia de células de plasma y leucemia esplénica con linfocitos vellosos, y 2-5 % en leucemia linfocítica crónica y en mieloma múltiple (Huret, Atlas Genet . Cytogenet . Oncol . Haematol. (Mayo 1998)). En modalidades adicionales, las composiciones de la presente descripción, se usan para tratar linfoma de células manto o mieloma múltiple asociado con transcolocación cromosómica t(ll;14) (ql3;q32) o sobreexpresión de ciclina DI.
Un método de la presente descripción incluye los pasos de administración de una molécula de unión específica a CD37 y la administración de un inhibidor de mTOR o PI3K. En ciertas modalidades, la combinación de compuestos se puede administrar de manera concurrente, conjuntamente en el mismo portador farmacéuticamente aceptable, o de manera separada (pero de manera concurrente) . En otras modalidades, el inmunoterapeutico de CD37 y el inhibidor de mTOR o PI3K se pueden administrar secuencialmente (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, o siete días de separación; una, dos, tres o cuatro semanas de separación; o similares) , en cualquier orden y en cualquiera combinación.
La molécula de unión, el inhibidor o las composiciones de combinación se puede administrar de manera oral, tópicamente, de forma transdérmica , de manera parenteral, por aspersión de inhalación, vaginalmente , de forma rectal o por inyección intracraneal, o cualquier combinación de estos. Cuando se administra de manera separada, un inhibidor específico de CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K se pueden administrar por la misma ruta o por diferentes rutas. Por ejemplo, en una modalidad, la molécula de unión específica de CD37 se administra de manera parenteral y el inhibidor de mTOR o PI3K se administra de forma oral, que puede ser de manera concurrente o secuencialmente. El término "parenteral", como se usa en la presente, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intracisternal , o técnicas de infusión. La administración por inyección intravenosa, intradérmica, intramuscular, intramamaria, intraperitoneal , intratecal, retrovulvar, intrapulmonar, y/o implantación quirúrgica en un sitio particular también se contempla. En general, las composiciones están esencialmente libres de pirógenos, así como otras impurezas que pueden ser perjudiciales al receptor. La inyección o infusión, especialmente intravenosa, se prefiere para administrar una molécula de unión específica a CD37.
En una modalidad, la administración se realiza en el sitio de un tejido afectado con cáncer que necesita tratamiento por inyección directa en el sitio o mediante un mecanismo de administración sostenida o de liberación sostenida, que puede administrar internamente la formulación. Por ejemplo, las microesferas o cápsulas biodegradables u otras configuraciones de polímero biodegradable capaces de administración sostenida de una composición (por ejemplo, un péptido, anticuerpo o inhibidor soluble) se pueden incluir en las formulaciones de la descripción implantada cerca del cáncer .
También se pueden administrar composiciones farmacéuticas al receptor en múltiple sitios. Las múltiples administraciones se pueden volver de forma simultánea y se pueden administrar durante un período de tiempo. En ciertos casos, es benéfico proporcionar un flujo continuo de la composición farmacéutica. Se puede administrar terapia adicional en una base periódica, por ejemplo, por hora, por día, de manera semanal o mensualmente .
La molécula de unión, el inhibidor o las combinaciones y composiciones de esta descripción pueden comprender uno o más de una molécula de unión, de inhibidor, o cualquier combinación de éstos. También se contempla por la presente descripción la administración de la molécula de unión, inhibidor, combinaciones y composiciones en unión con un agente terapéutico adicional, tal como pretratamiento con esteroides o acetaminofeno . Adicionalmente , los productos terapéuticos contemplados por la descripción se listan en párrafos posteriores.
Un agente terapéutico adicional puede ser una molécula asociada a células B. otras moléculas asociadas a células B contempladas por la descripción incluyen moléculas de unión que se unen a las moléculas de superficie de células B que no son CD37. Las moléculas asociadas a células B, incluyen CD19 (antígeno CD19 de linfocitos B, también referido como antígeno B4 de superficie de linfocitos B, o Leu-12) , CD20 (moléculas de unión específica a CD20 incluyen TRU-015, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab) , CD21, CD22 (receptor CD22 de células B, también referido como Leu-14, molécula de adhesión celular de linfocitos B. o BL-CAM) , CD23, CD40 (antígeno CD40 de superficie de células B, también referido como miembro 5 de la superfamilia de Receptores del Factor de Necrosis tumoral, receptor CD40L, o Bp50) , CD80 (antígeno CD80 de activación de linfocitos T, también referido como antígeno de activación B7-1, B7, B7-1, o BB1) , CD86 (antígeno CD86 de activación de linfocitos T, también referido como antígeno de activación B7-2, B70, FUN-1, o BU63) , CD137 (también referido como miembro 9 de la superfamilia de Receptores de Factor de Necrosis Tumoral) , CD152 (también referido como proteína 4 de linfocitos T citotóxico o CTLA-4) , L6 (antígeno L6 asociado a tumor, también referido como miembro 1 de la superfamilia Transmembrana 4, marcador 1 de superficie de componente de Membrana, o M3S1) , CD30 (antígeno CD30 de activación de linfocitos, también referido como miembro 8 de la superfamilia de receptores de Factor de Necrosis Tumoral, receptor CD30L, o Ki-1) , CD50 (también referido como molécula 3 de adhesión intercelular (ICAM3) , o ICAM-R) , CD54 (también referido como molécula 1 de adhesión intercelular (ICAM1) , o el receptor de rinovirus de grupo principal) , B7-H1 (ligando para un receptor inmunoinhibitorio expresado por células T activadas, células B, y células mieloides, también referido como PD-Ll; ver Dong, et al., "B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion", Nat . Med. , 5:1365-1369 (1999), CD134 (también referido como miembro 4 de la superfamilia de receptores del Factor de Necrosis Tumoral, OX40, receptor OX40L, antígeno ACT35, o receptor de glicoproteína 1 TAX- transcripcionalmente activadas) , 41BB (receptor de ligando 4-1BB, antígeno 4-1BB de células T, o antígeno ILA de células T) , CD153 (también referido como miembro 8 de la superfamilia de ligando del Factor de Necrosis Tumoral, ligando CD30, o CD30-L) , CD154 (también referido como miembro 5 de la superfamilia de ligandos del Factor de Necrosis Tumoral, proteína de activación relacionada a TNF, TRAP, o antígeno de células T Gp39) , receptores de cuota, o similares.
Las citocinas y factores de crecimiento son agentes terapéuticos adicionales contemplados por esta descripción e incluyen uno o más de TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IFN, G-CSF, Meg-CSF, GM-CSF, trombopoyetina , factor de células madre, y eritropoyetina . Las composiciones farmacéuticas o combinaciones de acuerdo con esta descripción también pueden incluir otras angiopoyetinas conocidas, por ejemplo, Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, y/o el polipéptido tipo angiopoyetina humana, y/o el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) . Los factores de crecimiento para el uso en las composiciones farmacéuticas de la descripción incluyen angiogenina, proteína morfogénica ósea, proteína 2 morfogénica ósea, proteína 3 morfogénica ósea, proteína 4 morfogénica ósea, proteína 5 morfogénica ósea, proteína 6 morfogénica ósea, proteína 7 morfogénica ósea, proteína 8 morfogénica ósea, proteína 9 morfogénica ósea, proteína 10 morfogénica ósea, proteína 11 morfogénica ósea, proteína 12 morfogénica ósea, proteína 13 morfogénica ósea, proteína 14 morfogénica ósea, proteína 15 morfogénica ósea, receptor IA de proteína morfogénica ósea, receptor IB de proteína morfogénica ósea, factor neurotrófico derivado de cerebro, factor neutrófico siliar, receptor a de factor neutrófico siliar, factor 1 quimiotáctico de neutrófilos inducido por citocinas, factor 2a quimiotáctico de neutrófilos inducido por citocinas, factor 2ß quimiotáctico de neutrófilos inducido por citocina, factor de crecimiento de células endoteliales ß, factor de crecimiento epidérmico, atrayente de neutrófilos derivado de epitelio, factor 4 de crecimiento de fibroblastos, factor 5 de crecimiento de fibroblastos, factor 6 de crecimiento de fibroblastos, factor 7 de crecimiento de fibroblastos, factor 8 de crecimiento de fibroblastos, factor 8b de crecimiento de fibroblastos, factor 8c de crecimiento de fibroblastos, factor 9 de crecimiento de fibroblastos, factor 10 de crecimiento de fibroblastos, factor ácido de crecimiento de fibroblastos, factor básico de crecimiento de fibroblastos, receptor al de factor neutrófico derivado de línea de células glaliales, receptor a.2 de factor neutrófico derivado de línea de células gliales, proteína relacionada a crecimiento, proteína a relacionada a crecimiento, proteína ß relacionada a crecimiento, proteína ? relacionada a crecimiento, factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina, factor de crecimiento de hepatocitos, receptor de factor de crecimiento de hepatocitos, factor I de crecimiento tipo insulina, receptor de factor de crecimiento tipo insulina, factor II de crecimiento tipo insulina, proteína de unión a factor de crecimiento tipo insulina, factor de crecimiento de queratinocitos , factor inhibitorio de leucemia, receptor de factor inhibitorio de leucemia, factor de crecimiento de nervios, receptor de factor de crecimiento de nervios, neurotrofina-3 , neurotrofina-4 , factor de crecimiento de placenta, factor 2 de crecimiento de placenta, factor de crecimiento de células endoteliales derivado de plaquetas, factor de crecimiento derivado de plaquetas, cadena de factor A de crecimiento derivado de plaquetas, factor AA de crecimiento derivado de plaquetas, factor AB de crecimiento derivado de plaquetas, cadena de factor B de crecimiento derivado de plaquetas, factor BB de crecimiento derivado de plaquetas, receptor a de factor de crecimiento derivado de plaquetas, receptor ß de factor de crecimiento derivado de plaquetas, factor estimulador de crecimiento de pre-células B, factor de células madre, receptor de factor de células madre, factor a de crecimiento transformante, factor ß de crecimiento transformante, factor ß? de crecimiento transformante, factor ß?.2 de crecimiento transformante, factor ß2 de crecimiento transformante, factor ß3 de crecimiento transformante, factor ß5 de crecimiento transformante, factor ß? de crecimiento transformante latente, proteína I de unión al factor ß de crecimiento transformante, proteína II de unión al factor ß de crecimiento transformante, proteína III de unión al factor ß de crecimiento transformante, receptor tipo I de factor de necrosis tumoral , receptor tipo II de factor de necrosis tumoral, receptor de activador de plasminógeno tipo urocinasa, factor de crecimiento endotelial vascular, y proteínas quiméricas y fragmentos biológicamente o inmunológicamente activos de los mismos.
Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos contemplados como agentes terapéuticos adicionales incluyen agentes de alquilación, tal como mostazas de nitrógeno (por ejemplo, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano, y clorambucilo) ; nitrosoureas (por ejemplo, carmustina (BCNU) , lomustina (CCNU) , y semustina (metil-CCNU) ) ; etilenoiminas y metil-melaminas (por ejemplo, trietilenomelamina (TEM) , trietileno-tiofosforamida (tiotepa) , y hexametilmelamina (HMM, altretamina) ) ; sulfonatos de alquilo (por ejemplo, busulfano) ; y triazinas (por ejemplo, dacabazina (DTIC) ) ; antimetabolitos , tal como análogos de ácido fólico (por ejemplo, metotrexato, trimetrexato, y pemetrexed (antifoliato de múltiples objetivos)); análogos de pirimidina (tal como 5 - fluorouracilo (5-FU) , fluorodesoxiuridina, gemcitabina, citosina-arabinosida (AraC, citarabina) , 5 -azacitidina , y 2,2'-difluorodesoxicitidina) ; análogos de purina (por ejemplo, 6-mercaptopurina, 6 -tioguanina, azatioprina, 2'-desoxicoformicina (pentostatina) , eritrohidroxinoniladenina (EHNA) , fosfato de fludarabina, 2 -clorodesoxiadenosina (cladribina, 2-CdA) ) ; inhibidores de topoisomerasa Tipo I tal como camptotecina (CPT) , topotecano, e irinotecano; productos naturales, tal como epipodofilotoxinas (por ejemplo, etoposido y teniposido) ; alcaloides de vinca pervinca (por ejemplo, vinblastina, vincristina, y vinorelbina) ; antibióticos anti-tumorales tal como actinomicina D, doxorubicina, y bleomicina ; radiosensibilizadores tal como 5-bromodesoxiuridina, 5-yododesoxiuridina, y bromodesoxicitidina; complejos de coordinación de platino tal como cisplatina, carboplatina, y oxaliplatina ; ureas sustituidas, tal. como hidroxiurea; derivados de metilhidrazina tal como N-metilhidrazina (MIH) y procarbazina; y compuestos bifuncionales tal como bendamustina (análogo de purina y agente de alquilación) .
Los agentes terapéuticos adicionales contemplados por esta descripción para tratamiento de enfermedades autoinmunitarias se refieren como agentes inmunosupresores , que actúan para suprimirlo enmascarar el sistema inmunitario del individuo que se trata. Los agentes inmunosupresores incluyen, por ejemplo, fármacos anti -inflamatorios no esteroidales (NSAID) , analgésicos, glucocorticoides , fármacos antireumáticos modificadores de enfermedad (DMARD) para el tratamiento de artritis, o modificadores de respuesta biológica. Las composiciones en la descripción de DMARD también son útiles en el tratamiento de muchas otras enfermedades autoinmunitarias además de RA.
Los NSAID de ejemplo se eligen del grupo que consiste de ibuprofeno, naproxeno, naproxeno sódico, inhibidores de Cox-2 tal como Vioxx y Celebrex, y sialilatos. Los analgésicos de ejemplo se eligen del grupo que consiste de acetaminofeno, oxicodona, tramadol de clorhidrato de proporxifeno . Los glucocorticoides de ejemplo se eligen el grupo que consiste de cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, o prednisona. Los modificadores de respuesta biológica de ejemplo incluyen moléculas dirigidas contra marcadores de superficie celular (por ejemplo, CD19, CD20, etcétera), inhibidores de citocina, tal como los antagonistas de TNF (por ejemplo, etanercept (EnbrelMR) , adalimumab (HumiraMR) y infliximab (RemicadeMR) ) , inhibidores de quimiocina, e inhibidores de molécula de adhesión. Los modificadores de respuesta biológica incluyen anticuerpos monoclonales así como formas recombinantes de moléculas. Los DMARD de ejemplo incluyen azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, metotrexato, penicilamina, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, Oro ( (auranofin) oral e intramuscular) y minociclina. En las modalidades preferidas, el anti-CD37 con las composiciones de inhibidor de mTOR o PI3K o combinaciones de esta descripción se usan con metotrexato.
Se contempla que la molécula de unión específica a CD37 con la composición de inhibidor de mTOR o PI3K o combinación y el agente terapéutico adicional se puede preparar y administrar en la misma formulación. De manera alternativa, cada uno de los agentes se administra como una formulación separada pero de forma concurrente (por ejemplo, de forma simultánea o en el espacio de unos pocos minutos entre sí) , de manera secuencial (por ejemplo, con un retraso de al menos pocas horas a un día o una semana o más entre la administración de cada agente) , o cualquiera combinación de esto .
En un aspecto, el agente terapéutico adicional se administra antes de la administración de la molécula de unión, del inhibidor o de la composición de combinación. La administración anterior se refiere a la administración del agente terapéutico adicional en el espacio del intervalo de 10 o más minutos, horas, o una semana antes del tratamiento con la molécula de unión, con el inhibidor o con la composición de combinación. Además, se contempla que el agente terapéutico adicional se administre de manera subsiguiente a la administración de la composición de molécula de unión. La administración subsiguiente se propone para describir la administración dentro del intervalo de 10 o más minutos, horas, semanas después de la administración o tratamiento con la composición de la molécula de unión, inhibidor o de combinación.
Adicionalmente , se contempla que cuando la molécula de unión se administra en combinación con un agente terapéutico adicional, en donde el agente terapéutico adicional es una citosina o factor de crecimiento, o un agente quimioterapéutico, la administración también puede incluir el uso de un agente radio-terapéutico o terapia de radiación. La terapia de radiación administrada en combinación con una composición de anticuerpos se administra como se determina por el facultativo que trata, y a las dosis típicamente dadas a pacientes que se tratan para cáncer.
Las combinaciones y composiciones farmacéuticas de la presente descripción (por ejemplo, combinaciones y composiciones que comprenden una molécula de unión específica a CD37, un inhibidor de mTOR o PI3K, o un agente terapéutico adicional) se van a dosificar y administrar de una manera (por ejemplo, cantidades, programas y rutas) consistente con la buena práctica médica. Los factores para consideración en este contexto incluyen la enfermedad o trastorno particular que se trate, la molécula de unión específica a CD37, particular, el inhibidor de mTOR o PI3K, particular, el agente terapéutico adicional (si lo hay) particular, el mamífero particular que se trate, la condición clínica del paciente individual, el sitio de administración, el método de administración, la programación de administración y otros factores conocidos por los practicantes médicos.
Las composiciones farmacéuticas de la presente descripción se pueden administrar en una dosis individual o en múltiples dosis. Los estudios de la respuesta a la dosis normal, primero en modelos animales y luego en la prueba clínica, se pueden usar para determinar las dosis óptimas para los estados particulares de enfermedad y para las poblaciones de pacientes.
En general, la cantidad inicial terapéuticamente efectiva de una molécula de unión específica a CD37, un inhibidor de mTOR o PI3K, o un agente terapéutico adicional, cuando se administra, por ejemplo, mediante inyección intravenosa o infusión o mediante inyección subcutánea puede estar en el intervalo de aproximadamente 0.1 a 1000 mg/kg de peso corporal del paciente, tal como de aproximadamente 0.1 a 1 mg/kg, de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, de aproximadamente 10-50 mg/kg, de aproximadamente 50-100 mg/kg, de aproximadamente 100-500 mg/kg o de aproximadamente 500-1000 mg/kg del peso corporal del paciente. Las cantidades efectivas de una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR 0 PI3K cuando se usan en la terapia de combinación de acuerdo a la presente descripción son menos que las cantidades correspondientes cuando se usan solas. La administración de la molécula de unión específica a CD37, el inhibidor de mTOR o PI3K, o el agente terapéutico adicional se puede repetir de manera semanal, mensualmente , cada tres meses, cada seis meses, cada año, o cada dos años a la misma dosis o a una dosis diferente de la dosis inicial (por ejemplo, tres veces, dos veces, dos tercios, la mitad, un tercio, un cuarto de la dosis inicial) , dependiendo de las propiedades farmacocinéticas (PK) y farmacodinámicas (PD) , incluyendo absorción, distribución, metabolismo, y excreción de la molécula de unión específica a CD37 particular, del inhibidor mTOR o PI3K particular, o del agente terapéutico adicional, particular.
Una dosis de una molécula de unión específica a CD37, un inhibidor de mTOR o PI3K, o un agente terapéutico adicional cuando se administra de manera oral puede estar en el intervalo de 0.1 a 1000 mg de la molécula de unión específica a CD37, del inhibidor de mTOR o PI3K, o el agente terapéutico adicional, tal como de 0.1 a 1 mg, de 1 a 10 mg, de 10 a 50 mg, de 50 a 100 mg, de 100 a 500 mg, o de 500-1000 mg. Una dosis se puede administrar dos veces por día, una vez al día, una vez por semana, una vez por mes, o más o menos frecuentemente, también dependiendo de las propiedades farmacocinéticas (PK) y farmacodinámica (PD) , que incluyen absorción, distribución, metabolismo, y excreción de la molécula de unión específica a CD37, particular, el inhibidor de mTOR o PI3K, particular, o el agente terapéutico adicional, particular.
La administración de la molécula de unión, del inhibidor o de la composición de combinación, disminuye la población de células B por al menos 20 % después de una dosis individual de tratamiento. En una modalidad, la población de células B se disminuye por aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, aproximadamente 80, aproximadamente 90, o aproximadamente 100 %. La reducción de células B se define como una disminución en la cuenta absoluta de células B por abajo del límite inferior del intervalo normal . La recuperación de células B se define como un retorno de la cuenta absoluta de las células B, por ejemplo a 70 %, 80 %, 90 % del valor de línea base o intervalo normal del sujeto. Además, la administración de la molécula de unión, del inhibidor o de la composición de combinación de combinación de esta descripción da por resultado efectos clínicos deseados en la enfermedad o trastorno que se trata.
En algunas modalidades, los pacientes que padecen de un cáncer de células B reciben un tratamiento de acuerdo a la descripción y demuestran una respuesta benéfica completa al tratamiento, en base a criterios clínicos bien conocidos y comúnmente usados en la técnica, y como se describe más adelante, tal como una disminución en el tamaño del tumor, una disminución en el número del tumor o una mejora en los síntomas de la enfermedad.
Los criterios clínicos de ejemplos se proporcionan por el Instituto Nacional de Cáncer (NCI) de los Estados Unidos de América, que ha dividido algunas de las clases de cánceres en las categorías clínicas de linfomas "indolente" y "agresivo" . Los linfomas indolentes incluyen linfomas de células foliculares, separado por "grados" de citología, linfoma linfocítico pequeño difuso/leucemia linfocítica crónica (CLL) , macroglobulinemia linfoplasmacitoide/de Waldenstrom, linfoma de zonas marginales y leucemia de células filosas. Los linfomas agresivos incluyen linfoma de células mezcladas y grandes difusas, linfoma de Burkitt/linforna de células no extendidas pequeñas difusas, linfoma linfoblástico, linfoma de células de manto, linfoma relacionado a SIDA. En algunos casos, el índice de pronóstico internacional (IPI) se usa en casos de linfoma agresivo y folicular. Los factores a considerar en el IPI incluyen la edad (< 60 años versus > 60 años de edad) , lactato-sérico-deshidrogenasa (niveles normales versus elevados) , estado de desempeño (0 o 1 versus 2-4) (ver definición más adelante) , etapa de la enfermedad (I o II versus III o IV) , e implicación de sitios extranodales (0 o 1 versus 2-4) . Los pacientes con 2 o más factores de riesgo tienen menos de 50 % de probabilidad de supervivencia completa y libre de recaída en 5 años.
El estado de desempeño en el IPI agresivo se define como sigue: Descripción de Grado: 0 completamente activo, capaz de realizar todas las funciones antes de la enfermedad sin restricción; 1 Restringido en la actividad físicamente agotadora pero ambulatorio y capaz de llevar a cabo el trabajo de una naturaleza ligera o sedentaria por ejemplo, trabajo casero ligero, trabajo de oficina; 2 Ambulatorio y capaz de todo el autocuidado pero incapaz de llevar a cabo actividades de trabajo, hasta y aproximadamente más de 50 % de horas de vigilia; 3 Capaz de sólo autocuidado limitado, confinado a cama o silla más del 50 % de las horas de vigilia; 4 Completamente discapacitado, incapaz de lograr cualquier autocuidado, totalmente confinado a la cama o silla; y Muerto (ver The Internacional Non-Hodgkin' s Lymphoma Prognostic Factors Project. A predictive model for agressive non-Hodgkin' s lymphoma. N. Engl . J. Med. 329:987-94, 1993) .
En general, el grado de linfoma se evalúa clíni camente usando los criterios que el linfoma de bajo grado usualmente se presenta como una enfermedad nodal. Y frecuentemente es indolente o de crecimiento lento. La enfermedad de grado intermedio y alto usualmente se presenta como una enfermedad mucho más agresiva con tumores voluminosos, extranodales , grandes.
El sistema de clasificación de Ann Arbor también se puede usar para medir el progreso de tumores, especialmente de linfoma no de Hodgkins . Para detalles adicionales, ver, The Internacional Non-Hodgkin' s Lymphoma Prognostic Factors Project: A predictive model for agressive non-Hodgkin' s lymphoma, New England J. Med. (1993) 329:987. De acuerdo a los criterios de Cheson para valorar NHL desarrollado en colaboración con el Instituto Nacional del Cáncer de los Estados Unidos (Cheson et al., J Clin Oncol . 1999, 17:1244; Grillo-Lopez et al., Ann Oncol. 2000, 11:399), se obtuvo una respuesta completa cuando hubo una desaparición completa de toda la evidencia radiográfica y clínica detectable de la enfermedad y de los síntomas relacionados a la enfermedad, todos los nodulos linfáticos se han regresado al tamaño normal, el bazo ha regresado al tamaño, y la médula ósea está limpia de linfoma. Se han desarrollado criterios similares para varias formas diferentes de cánceres o enfermedades hiperproliferativas están fácilmente disponibles a la persona experta en la técnica. Ver, por ejemplo Cheson et al., Clin Adv. Hematol Oncol. 2006, 4:4-5, que describe criterios para valorar CLL; Cheson et al., J Clin Oncol 2003, 21:4642-9, que describe criterios para valorar AML; Cheson et al., Blood 2000, 96:3671-4, que describe criterios para síndromes mielodisplásticos .
En un aspecto, un efecto terapéutico de los métodos de acuerdo a la descripción se determina por el nivel de respuesta, por ejemplo una respuesta parcial se define como reducción tumoral a menos de la mitad de su tamaño original. Una respuesta completa se define como eliminación total de la enfermedad confirmado por evaluación clínica o radiológica. En una modalidad, el individuo que recibe el tratamiento de acuerdo a la descripción demuestra al menos una respuesta parcial al tratamiento. En otro aspecto, se obtiene una respuesta completa no confirmada cuando un paciente muestra desaparición completa de la enfermedad y el bazo regresa al tamaño, pero los nodulos linfáticos han regresado por más de 75 % y la médula ósea está indeterminada. Una respuesta completa no confirmada satisface y excede los criterios de la respuesta parcial. Una respuesta total se define como una reducción de al menos 50 por ciento en la carga tumoral completa.
En otro aspecto, una respuesta terapéutica en pacientes que tienen cáncer en células B se manifiesta como una desacelaración del progreso de la enfermedad en comparación a pacientes que no reciben terapia. La medición del progreso desacelerado de la enfermedad o cualquiera de los factores anteriores, se puede llevar a cabo usando técnicas bien conocidas, que incluyen exploración ósea, exploración con CT, exploración con galio, linfangiograma , MRI , exploraciones de PET, ultrasonido y similares.
En ciertas modalidades, el método para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B en un sujeto que tiene o que se sospecha que tiene la enfermedad o trastorno comprende tratar un sujeto con una combinación de una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor mTOR. Por ejemplo, el método puede comprender administrar a un sujeto en necesidad de esto una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR seleccionado de sirolimus, temsirolimus , deforolimus, everolimus, tacrolimus, zotarolimus, curcumin, o ácido farnesiltiosalicílico . En algunas de las modalidades anteriores, la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37 o una molécula de unión específica a CD37.
En modalidades adicionales, la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente. En aún modalidades adicionales, la molécula de unión específica a CD37 es un polipéptido SMIP específico de CD37, tal como un polipéptido SMIP que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID No. 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 84, 86, 88 ó 253. En ciertas modalidades preferidas la combinación es (1) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente y sirolimus, (2) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y temsirolimus , (3) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y everolimus, (4) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y deforolimus, (5) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente y PP242, o (6) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente y PP30. En ciertas modalidades preferidas diferentes, la combinación es (1) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y sirolimus, (2) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y tensirolimus , (3) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y everolimusm, (4) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y deforolimus , (5) n anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y PP242, o (6) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y PP30. En otras modalidades preferidas, las combinaciones (1) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y sirolimus, (2) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y temsirolimus , (3) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y everolimus, (4) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y deforolimus, (5) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y PP242, o (6) un polipéptido SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253 y PP30.
En ciertas modalidades diferentes, el método para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B en un sujeto que tiene o sospecha que tiene la enfermedad o trastorno comprende tratar un sujeto con una combinación de una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de PI3K. Por ejemplo, el método puede comprender administrar a un sujeto en necesidad del mismo una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de PI3K seleccionado de LY294002, wortmannina, inhibidores específicos de ?????, o inhibidores específicos de ????d. En algunas de las modalidades anteriores, la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico de CD37 o un polipéptido SMIP específico de CD37.
En modalidades adicionales, la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente. En aún modalidades adicionales, la molécula de unión específica a CD37 es un polipéptido SMIP específico de GD37, tal como un polipéptido SMIP que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nos. 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 84, 86, 88 ó 253. En ciertas modalidades preferidas, la combinación es (1) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y LY294002, (2) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y un inhibidor específico de ?????, o (3) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respectivamente, y un inhibidor específico a ????d. En ciertas modalidades preferidas diferentes, la combinación de la presente descripción es (1) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y LY294002, (2) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y un inhibidor específico de ?????, o (3) un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, y un inhibidor específico de ????d. En otras modalidades preferidas, la combinación es un polipéptido SMIP específico a CD37 que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID No. 253 con el inhibidor de PI3K, LY294002, o SEQ ID No. 253 con un inhibidor específico de ?????, o SEQ ID No. 253 con un inhibidor específico de ????d.
En ciertas modalidades preferidas, una molécula de unión específica a CD37 (por ejemplo, un anticuerpo específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID Nos. 307 y 308, respec ivamente, o SEQ ID Nos. 309 y 310, respectivamente, o un SMIP específico de CD37 que comprende SEQ ID No. 253) se administra a una dosis que varía desde aproximadamente 0.03 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg (por ejemplo, de 0.03 a 0.1 mg/kg, de 0.1 a 0.5 mg/kg, de 0.5 a 2.5 mg/kg, de 2.5 a 5 mg/kg, de 5 a 7.5 mg/kg, de 7.5 a 10 mg/kg/ de 10 a 12.5 mg/kg, de 12.5 a 15 mg/kg, de 15 a 17.5 mg/kg, o de 17.5 a 20 mg/kg) del peso corporal de un sujeto para la administración con un intervalo entre administraciones que varían desde 1 día a 180 días (por ejemplo, de 1 a 7 días, de 1 a 14 días, de 1 a 30 días, de 1 a 60 días, de 1 a 90 días, de 1 a 120 días, de 1 a 150 días, o diariamente, semanalmente , mensualmente , cada 2 meses, cada 3 meses, cada 4 meses, cada 5 meses, o cada 6 meses) . En ciertas modalidades preferidas, la molécula de unión específica a CD37 se administra de manera intravenosa (por ejemplo, por infusión o inyección intravenosa) . En ciertas modalidades preferidas diferentes, la molécula de unión específica a CD37 se administra de manera subcutánea.
En ciertas modalidades preferidas, se usa rapamicina como un inhibidor de mTOR en combinación con una molécula de unión específica a CD37. Se puede administrar oralmente rapamicina con una dosis inicial de 1 a 15 mg (por ejemplo, de 1 a 2.5 mg, 2.5 a 5 mg, 5 a 7.5 mg, 7.5 a 10 mg, 10 a 12.5 mg, o 12.5 a 15 mg, o aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ó 15 mg) en 1 día seguido por dosis de mantenimiento diarias de 0.2 a 5 mg (por ejemplo, de 0.2 a 0.5 mg, 0.5 a 1 mg, 1 a 2 mg, 2 a 3 mg, 3 a 4 mg, ó 4 a 5 mg; ó 0.2, 0.4, 0.5, 0.6, 0.8, 1, 1.5, 2 , 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 ó 5 mg) . En ciertas modalidades , se administra oralmente rapamicina con una dosis inicial de 6 mg en el día 1 seguido por dosis diarias de mantenimiento de 2 mg. En ciertas modalidades diferentes, se administra oralmente rapamicina con una dosis inicial de hasta 15 mg en el día 1 seguido por dosis diarias de mantenimiento de 5 mg.
En ciertas modalidades preferidas, se usa temsirolimus como un inhibidor de mTOR en combinación con una molécula de unión específica a CD37. Se puede administrar temsirolimus mediante infusión intravenosa a una dosis de aproximadamente 1 a 25 mg (por ejemplo, 1 a 2.5 mg, 2.5 a mg, 5 a 7.5 mg, 7.5 a 10 mg, 10 a 12.5 mg, 12.5 a 15 mg, 15 a 20 mg, ó 20 a 25 mg, o aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ó 25 mg) una vez a la semana. En ciertas modalidades, se administra temsirolimus mediante infusión intravenosa a una dosis de 25 mg durante un periodo de 30-60 minutos una vez a la semana.
En ciertas modalidades preferidas, se usa everolimus como un inhibidor de mTOR en combinación con una molécula de unión específica a CD37. Se puede administrar oralmente everolimus diariamente a una dosis de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg (por ejemplo, 1 a 2.5 mg, 2.5 a 5 mg, 5 a 7.5 mg, ó 7.5 a 10 mg; ó 1, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 7.5, 8, 9, ó 10 mg) . En ciertas modalidades, se administra oralmente everolimus diariamente a una dosis de 5 mg. En ciertas modalidades, se administra oralmente everolimus diariamente a una dosis de 10 mg.
En ciertas modalidades preferidas, se usa CAL-101, CAL-120 o CAL-263 como un inhibidor de PI3K con una molécula de unión específica a CD37. Se puede administrar oralmente CAL-101, CAL 120 ó CAL-263 dos veces o una vez diariamente a un intervalo de dosis de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 mg (por ejemplo, 10 a 25 mg, 25 a 50 mg, 50 a 75 mg, 75 a 100 mg, 100 a 150 mg, 150 a 200 mg, 200 a 250 mg, 250 a 300 mg, 300 a 350 mg, 350 a 400 mg, 400 a 450 mg, ó 450 a 500 mg; ó 10, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, ó 500 mg) . En ciertas modalidades, se administra oralmente CAL-101 dos veces diariamente una dosis de 50 mg, 100 mg, 200 mg, ó 3350 mg por administración .
Para una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K a los efectos cinérgicamente deseables (por ejemplo, reducir o agotar las células B o lograr mejora clínica) se prefiere que la molécula de unión específica a CD37 y el inhibidor de mTOR o PI3K estén presentes de forma simultánea en un sujeto que se trata. En ciertas modalidades preferidas, una molécula de unión específica a CD37 se administra inicialmente en el mismo día como se administra un inhibidor de mTOR o PI3K. En ciertas modalidades preferidas diferentes, inicialmente se administra una molécula de unión específica a CD37 en el espacio de 30 días (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14, 21, ó 30 días) antes de la administración inicial de un inhibidor de mTOR o PI3K. En ciertas modalidades adicionales preferidas, una molécula de unión específica a CD37 se administra inicialmente en el espacio de 30 días (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14, 21 ó 30 días) subsiguiente a la administración inicial de un inhibidor de mTOR o PI3K.
Kits Como un aspecto adicional, la descripción incluye kits que comprenden uno o más compuestos o composiciones útiles en los métodos de esta descripción envasados de una manera que facilita su uso para practicar los métodos de la descripción. En una modalidad más simple, este kit incluye un compuesto o composición descrita en la presente como útil para la práctica de un método de la descripción envasado en un recipiente tal como una botella o recipiente sellado, con una marca fijada al recipiente o incluida en el envase que describe el uso del compuesto o composición para practicar el método de la descripción. De manera preferente, el compuesto o composición se envasa en una forma de dosis unitaria. El kit puede incluir además un dispositivo adecuado para administrar la composición de acuerdo a una ruta preferida de administración o para practicar un ensayo de examen. El kit puede incluir una marca que describe el uso de las composiciones de la molécula de unión en un método de la descripción .
En ciertas modalidades, un kit de la presente descripción comprende una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K envasado separados uno del otro como dosis unitarias o como dosis unitarias independientes, con o sin instrucciones que se pueden administrar de manera concurrente o secuencialmente . Por ejemplo, un kit de la presente descripción adecuado para tratar un linfoma de células de manto puede comprender una dosis unitaria de una molécula de unión específica a CD37 (por ejemplo, un anticuerpo específico CD37 o un polipéptido SMIP específico de CD37) y una dosis unitaria de un inhibidor de mTOR envasado de forma separada. En ciertas modalidades, el kit puede comprender además un agente terapéutico adicional (por ejemplo, una molécula de unión específica a CD20 (tal como TRU-015, rituximab, ofatumumab o acrelizumab) , citosina, quimiocina, factor de crecimiento, agente quimioterapéutico o agente radioterapéutico) en otro recipiente separado.
En ciertas modalidades diferentes, una molécula de unión específica a CD37 y un inhibidor de mTOR o PI3K se formulan conjuntamente. Las formulaciones resultantes se pueden envasar en recipientes de dosis unitarias o de múltiples dosis y se pueden almacenar en una condición secada por congelación ( 1 iof il i zada ) que requiere sólo la adición del portador líquido estéril, tal como agua para inyección, inmediatamente antes del uso.
Ejemplos Ejemplo 1 Moléculas de Unión Específica a CD37 Se pueden producir varias proteínas de unión específica a CD37 con los componentes de ejemplo proporcionados en la presente. Por ejemplo, se pueden producir moléculas SMIP o anticuerpos específicos a CD37, y estas moléculas pueden ser quiméricas, humanizadas, o humanas. De manera más específica, las CDR de región variable de cadena ligera, preferidas, se encuentran en SEQ ID NOS: 236-240 y 247-254 y las CDR de dominio variable de cadena pesada, preferidas incluyen SEQ ID NOS: 241-245 y 247-254. También, se proporcionan regiones variables de cadena ligera y pesada, preferidas, en SEQ ID NOS: 236-240 y SEQ ID NOS: 241-245, respectivamente. Las regiones variables de cadena ligera y pesada, preferidas, también se pueden encontrar en SEQ ID NOS: 247-254. Los ligadores de dominio variable preferidos incluyen SEQ ID NOS:225-229, en tanto que las articulaciones preferidas incluyen SEQ ID NOS: 230-235.
Los polipéptidos SMIP específicos de CD37, preferidos, incluyen SEQ ID NOS : 6 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 80, 82, 84, 86, 88, 222 y 262 (pero sin las secuencias guía) así como SEQ ID NOS : 247-254 y 266-269. Una modalidad particularmente preferida es CAS-024 [G28-1 VH (M99F, Y102S) - VL (T25A) scFv (SSC-P) H WCH2 CH3] , que es una proteíha de fusión de cadena individual de 483 aminoácidos, recombiiiante que se une a CD37 humano. El dominio de unión comprende un scFv humanizado basado en las CDR de región variable de anticuerpo G28-1, que incluye mutaciones en la CDR3 de cadena pesada y en la CDR1 de cadena ligera. Los dominios variables se enlazan por una secuencia de (G4S)5 (25 aminoácidos) (SEQ ID NO:229), que se conecta mediante una unión de tres aminoácidos (GDQ) al amino terminal de una región de articulación de IgGl, superior y núcleo, modificada (en donde las primeras dos de las tres cisteínas encontradas en estas regiones de articulación se sustituyen cada una con una serina) . El carboxi terminal de la articulación se fusiona a un dominio efector que comprende los dominios CH2 y CH3 de IgGl. La secuencia de aminoácidos de CAS-024 se expone en SEQ ID NO:253.
Las partes componentes preferidas de ejemplo de las moléculas SMIP específicas a CD37 incluyen secuencias guía usadas para la expresión y portación, pero que se remueven de la proteína de fusión madura cuando se exportan de una célula como se expone en SEQ ID NOS: 223 y 224; secuencias ligadoras usadas para unir dominios variables de cadena ligera y pesada para formar dominios de unión a scFv como se expone en SEQ ID NOS : 225-229 ; articulaciones usadas para unir los dominios de unión a scFv a dominios efectores como se expone en SEQ ID NOS: 230-235; regiones variables de cadena ligera como se expone en SEQ ID NOS: 236-240; regiones variables de cadena pesada como se expone en SEQ ID NOS: 241-245; y dominios efectores) , así como ciertas' moléculas SMIP específicas a CD37, incluyendo la proteína de fusión CAS-024, se proporcionan en SEQ ID NOS: 247-253.
Ejemplo 2 Inhibición de Crecimiento por Combinación de Rapamicina y CAS-024 Específico a CD37 Se describe en el ejemplo 1 CAS-024 [G28-1 VH (M99F, Y102S) - VL (T25A) scFv (SSC-P) H WCH2 CH3] . Una secuencia de nucleótidos que codifica para CAS-024 (que incluye una secuencia guía) se expone en SEQ ID NO: 221, Se disolvió rapamicina (Sigma, St . Louis, MO) en DIVISO y se almacenó a -20 °C hasta el uso. Las líneas de células humanas que expresan CD37 usadas fueron Rec-1 (una Línea de Células de Linfoma de Células de Manto) , y SU-DHL-6 (Línea de Células de Linfoma de Células Grandes difusas) (ambas de DSMZ, Braunschweig, Alemania) .
Se sembraron en placa células Rec-1 y SU-DHL-6 a lxlO4 células/concavidad en 100 µ? de medio en placas de 96 concavidades . Las células se trataron con varias concentraciones de CAS-024 (para concentraciones, ver Figuras 1 y 2) que se han preincubado con F(ab)'2 anti-IgG humana y las placas se incubaron durante 96 horas a 37°C, 5 % de C02 en la presencia de diluciones en serie de rapamicina. El volumen final en cada concavidad fue 150 µ]1?. Después de la incubación, las placas se enfriaron a temperatura ambiente y se marcaron con 100 µL/concavidad del reactivo de detección ATPlite (Perkin Elmer, Boston, MA) . El ensayo mide ATP celular como un marcador para células viables. Las muestras se analizaron por detección de luminiscencia usando un lector de placa Topcount NXT (Perkin Elmer, altham, MA) . Los datos se redujeron usando un ajuste a la curva de 4 parámetros en Prism (versión 4.0, Graphpad Software, San Diego, CA) y la IC50 se define como la concentración que da por resultado 50 % de inhibición en comparación a cultivos no tratados.
Para determinar si estos compuestos estuvieron actuando de manera sinérgica, se usó el método de Efecto Medio/índice de Combinación (CI) para análisis de datos (Chou y Talalay) . Un valor numérico, asignado a cada combinación de fármaco a niveles predefinidos de dosis permite comparaciones cuantitativas de la interacción fármaco/fármaco entre diferentes combinaciones de fármaco. Los valores de CI asignan interacciones en tres categorías: sinergismo, aditividad y antagonismo (CI<1.0, = 1, o >1.0, respectivamente) . Después del etiquetado y reducción da datos, se determinaron los valores de CI usando el paquete de software Calcusyn (BiosoftMR, Cambridge, RU) .
La combinación de una molécula de unión a CD37 con el inhibidor de mTOR, rapamicina, inhibió el crecimiento de células Rec-1 (Figura 1) y SU-DHL-6 (Figura 2) más que cualquier compuesto solo. En realidad, el CI medido del CAS-024 y rapamicina fue de manera sorprendente fuertemente sinérgico en la inhibición del crecimiento celular (ver Figura 3 ) .
Ejemplo 3 Inhibición de Crecimiento por Combinación de Temsirolimus y CAS-024 Específico a CD37 Los efectos de la combinación de CAS-024 con otro inhibidor de mTOR, temsirulimus , en el crecimiento de células Rec-1 y SU-DHL-6 y el CI se determinaron usando los métodos como se describe en el ejemplo 2. Las concentraciones de CAS-024 y temsirulimus usadas se indican en las Figuras 4 y 5.
Los resultados muestran que la combinación de CAS- 024 con temsirulimus inhibió el crecimiento de células SU-DHL-6 (Figura 4) y Rec-1 (Figura 5) más que cualquier compuesto solo. Los valores de CI medidos muestran que CAS-024 en combinación con temsirolimus inhibió sinérgicamente el crecimiento de células SU-DHL-6 y Rec-1 (Figuras 6-8) . ; Ejemplo 4 Inhibición de Crecimiento por Combinación de LY294002 y CAS-024 Específico de CD37 Los efectos de la combinación de CAS-024 con un inhibidor de PI3K, LY294002, en el crecimiento de células Rec-1 y SU-DHL-6 y el CI se determinaron usando los métodos como se describe en el Ejemplo 2. Los intervalos s de concentración de CAS-024 y LY294002 usados son de 2 a 0.2 nM y de 50 a 0.4 UM, respectivamente.
Los resultados muestran que CAS-024 en combinación con LY294002 inhibió sinérgicamente el crecimiento de células SU-DHL-6 y Rec-1 (Figura 9) .
Las varias modalidades descritas anteriormente se pueden combinar para proporcionar modalidades adicionales. Todas las patentes de los Estados Unidos, publicaciones de solicitudes de patente de los Estados Unidos, solicitudes de patente de los Estados Unidos, patentes extranjeras, solicitudes de patentes extranjeras y publicaciones no de patente, referidas en esta especificación y/o listadas en la hoja de datos de la solicitud, se incorporan en la presente como referencia, en su totalidad. Los aspectos de las modalidades se pueden modificar, si es necesario para emplear conceptos de las varias patentes, solicitudes y publicaciones para proporcionar modalidades aún adicionales.
Estos y otros cambios se pueden hacer en las modalidades en vista de la descripción detallada anteriormente. En general, en las siguientes reivindicaciones, los términos usados no se deben considerar como que limitan las reivindicaciones a las modalidades específicas descritas en la especificación y en las reivindicaciones, pero se deben considerar que incluyen todas las posibles modalidades junto con el alcance completo de los equivalentes a los cuales se facultan estas reivindicaciones. Por consiguiente, las reivindicaciones no se limitan por la descripción .
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (36)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un método para reducir el número de células B o para tratar una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B en un sujeto que tiene o se sospecha que tiene la enfermedad o trastorno, caracterizado porque comprende tratar un sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de una molécula de unión específica a CD37 y una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de mTOR o PI3K.
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende administrar al sujeto un inhibidor de mTOR.
3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de mTOR es sirolimus, temsirolimus , o a torkinib.
4. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de mTOR es deforolimus, everolimus, tacrolimus, zotarolimus, curcumina, o ácido farnesiltiosalicílico .
5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende administrar al sujeto un inhibidor de PI3K.
6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el inhibidor de PI3K es un inhibidor específico de ????d.
7. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37 o una porción de unión al antígeno del mismo, o una proteína SMIP.
8. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la molécula de unión especifica a CD37 es un anticuerpo humanizado o una porción de unión al antígeno del mismo, o una proteína SMIP humanizada .
9. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 es una proteína SMIP específica CD37 humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO : 6 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 82, 84, 86, o 88.
10. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 es una proteína SMIP específica CD37 humanizada que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253.
11. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo humanizado específico CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente.
12. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 comprende una proteína SMIP que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253, y en donde el inhibidor de mTOR es sirolimus o temsirolimus .
13. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 comprende un anticuerpo cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEO ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y en donde el inhibidor de mTOR es sirolimus, temsirolimus, o a torkinib.
14. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 y el inhibidor de mTOR o PI3K se administran de manera secuencial .
15. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la molécula de unión no específica a CD37 y el inhibidor de mTOR o PI3K se administran de manera concurrente.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la molécula de unión específica a CD37 y el inhibidor de mTOR o PI3K se formulan conjuntamente.
17. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la molécula de unión no específica a CD37 se administra de manera parenteral y el inhibidor de mTOR o P13K se administra de manera oral.
18. El método de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque la enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal de células B es un linfoma o leucemia de células B tal como linfoma no de Hodgkin de células B (NHL) (que incluye linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crónica (CLL) , linfoma linfocítico pequeño (SLL) , linfoma de células B grandes difusas, linfoma folicular, linfoma de células grandes inmunoblásticas , linfoma linfoblástico de precursor B, y linfoma de células de manto) , leucemia de células pilosas, macroglubulinemia de aldesntróm, leucemia pro- linfocítica de células B, linfoma de células dendríticas CD37+, linfoma linfoplasmacítico, linfoma esplénico de zonas marginales, linfoma extranodal de células B de zonas marginales de tejido linfoide asociado a mucosa (MALT) , linfoma nodal de células B de células marginales, linfoma mediastinal (tímico) de células B grandes, linfoma intravascular de células B grandes, linfoma de fusión primaria; una enfermedad particularizada por producción de autoanticuerpos tal como miopatía inflamatoria idiopática, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, miastenia gravis, enfermedad de Grave, diabetes mellitus tipo I, enfermedad de membrana de basamento anti -glomerular, glomerulonefritis rápidamente progresiva, enfermedad de Berger (nefropatía de IgA) , lupus eritematoso sistémico (SLE) , enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) , síndrome de anticuerpo anti-fosfolípido, neuromielitis óptica, esclerosis múltiple, una enfermedad autoinmunitaria, dermatomiositis , polimiositis , o macroglobinemia de aldenstrom; o una enfermedad particularizada por estimulación inapropiada de células T asociada con una ruta de células B.
19. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque el sujeto tiene además la transcolocación cromosómica t(ll;14) (ql3;q32) o sobre-expresión de ciclina DI.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el trastorno o enfermedad asociada con actividad anormal de células B es linfoma de células de manto .
21. Un kit para tratar un linfoma no de hodgkins, caracterizado porque comprende: (a) una dosis unitaria de una molécula de unión no específica a CD37, y (b) una dosis unitaria de un inhibidor de mTOR o PI3K.
22. El kit de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque además comprende una molécula de unión específica a CD20 tal como TRU-015, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab; citocina; quimiocina; factor de crecimiento; agente quimioterapéu ico tal como bendamustina; o agente radioterapéutico .
23. Una composición, caracterizada porqué comprende : (a) una molécula de unión específica a CD37, y (b) un inhibidor de mTOR o de fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K) .
24. La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque comprende un inhibidor de mTOR.
25. La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque el inhibidor de mTOR es sirolimus, temsirolimus , o un torkinib.
26. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el inhibidor de mTOR es deforolimus, everolimus, tacrolimus, zotarolimus, curcumina, o ácido farnesiltiosalicílico .
27. La composición de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque comprende un inhibidor de PI3K.
28. La composición de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porque el inhibidor de PI3K es un inhibidor específico de ????d.
29. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37 o una porción de unión al antígeno del mismo, o una proteína SMIP.
30. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo humanizado o una porción de unión al antígeno del mismo, o una proteína SMIP humanizada.
31. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 es una proteína SMIP específica CD37, humanizada, que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO : 6 , 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 60, 80, 82, 84, 86, o 88.
32. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 es una proteína SMIP específica CD37 humanizada que comprende una secuencia de I aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253. 1 i
33. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, caracterizada porqué la molécula de unión específica a CD37 es un anticuerpo específico CD37, humanizado, cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS:307 y 308, respectivamente, o SÉQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente.
34. La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 comprende una proteína SMIP con una .secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 253, y en donde el inhibidor de mTOR es sirolimus, temsirolimus o torkinib .
35. La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque la molécula de unión específica a CD37 cuyas cadenas ligeras y pesadas comprenden SEQ ID NOS: 307 y 308, respectivamente, o SEQ ID NOS: 309 y 310, respectivamente, y en donde el inhibidor de mTOR es sirolimus, temsirolimus, o a torkinib.
36. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 35, caracterizada porque además comprende una molécula de unión específica a CD20 tal como TRU-015, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab ; citocina; quimiocina; factor de crecimiento; agente quimioterapéutico tal como bendamustina ; o agente radioterapéutico .
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