CN116406291A - 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药 - Google Patents

用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药 Download PDF

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Abstract

本发明提供了使用抗片段可结晶受体样5(FcRH5)/抗分化簇3(CD3)双特异性抗体治疗癌症，诸如多发性骨髓瘤的给药方法。

Description

用抗FCRH5/抗CD3双特异性抗体进行治疗的给药
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子化提交，且以全文引用方式并入本文。所述ASCII复本创建于2021年10月4日，命名为50474-213WO5_Sequence_Listing_10_4_21_ST25，且大小为33,733字节。
技术领域
本发明关于对癌症，诸如B细胞增殖性病症的治疗。更具体而言，本发明关于使用抗片段可结晶受体样5(FcRH5)/抗分化簇3(CD3)双特异性抗体对患有多发性骨髓瘤(MM)的人类患者的特异性治疗。
背景技术
癌症仍然是对人类健康最致命的威胁之一。在美国，癌症每年影响超过170万新病患，且是仅次于心脏病的第二大死因，约占死亡的四分之一。
特别地，血液癌症为癌症相关死亡的第二大原因。血液癌症包括多发性骨髓瘤(MM)，其为以恶性浆细胞增殖和积累为特征的肿瘤。在全球范围内，每年约有110,000人被诊断出患有MM。尽管治疗取得进展，但MM仍无法治愈，在接受自体干细胞移植之后，标准风险骨髓瘤的估计中位存活期仍为8-10年，且高风险疾病的中位存活期仍为2-3年。尽管过去20年患者的存活期显著提高，但与匹配的一般群体相比，仅10-15％的患者达到或超过预期存活期。蛋白酶体抑制剂、免疫调节药物(IMiD)和单克隆抗体的引入实现了存活期提高。尽管如此，大多数患者(若非全部)最终会复发，且在变得难治或无资格接受蛋白酶体抑制剂或IMiD之后，MM患者的结果相当差，存活期不到1年。因此，特定而言，复发性或难治性(R/R)MM继续构成显著未满足的医疗需求，且需要新型治疗剂。对于此类患者，替代或二次治疗模式，诸如基于双特异性抗体的免疫疗法，可能特别有效。在该领域中对开发给予治疗性双特异性抗体(例如，抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体)以治疗癌症(例如MM，例如R/R MM)的有效方法存在未满足的需求，这些方法实现更有利的受益-风险情形。
发明内容
在一个方面，本公开提供了一种治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者的方法，该方法包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向该受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，该第一给药周期包含该双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中，该C1D1在约0.01mg至约2.9mg之间，该C1D2在约3mg至约19.9mg之间，且该C1D3在约20mg至约600mg之间。
在一些方面，该C1D1在约0.1mg至约1.5mg之间；该C1D2在约3.2mg至约10mg之间；且该C1D3在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C1D1为约0.3mg；该C1D2为约3.6mg；且该C1D3为约160mg。
在一些方面，该给药方案进一步包含第二给药周期，该第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，该C2D1等于或大于该C1D3且在约20mg至约600mg之间。在一些方面，该C2D1在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C2D1为约160mg。
在另一方面，本公开提供一种治疗患有MM的受试者的方法，该方法包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向该受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，该第一给药周期包含该双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中，该C1D1在约0.2mg至约0.4mg之间，该C1D2大于该C1D1，且该C1D3大于该C1D2。
在一些方面，该C1D1为约0.3mg。在一些方面，该C1D2在约3mg至约19.9mg之间。在一些方面，该C1D2在约3.2mg至约10mg之间。在一些方面，该C1D2为约3.6mg。在一些方面，该C1D3在约20mg至约600mg之间。在一些方面，该C1D3在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C1D3为约160mg。
在一些方面，该给药方案进一步包含第二给药周期，该第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，该C2D1等于或大于该C1D3且在约20mg至约600mg之间。在一些方面，该C2D1在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C2D1为约160mg。
在一些方面，第一给药周期的长度为21天。在一些方面，该方法包括分别在该第一给药周期的第1天、第8天和第15天或大约第1天、第8天和第15天向该受试者施用该C1D1、该C1D2和该C1D3。
在一些方面，第二给药周期的长度为21天。在一些方面，该方法包括在该第二给药周期的第1天或大约第1天向该受试者施用该C2D1。
在一些方面，该给药方案包含一个或多个额外给药周期。在一些方面，该给药方案包含四个额外给药周期，其中，该四个额外给药周期中的每一个的长度为21天。在一些方面，该四个额外给药周期各自包含该双特异性抗体的单一剂量，其中，该单一剂量在约80mg至约300mg之间，且其中，该方法包含在该四个额外给药周期中的每一个的第1天或大约第1天向该受试者施用该单一剂量。在一些方面，该给药方案进一步包含多至17个额外给药周期，其中，这些额外给药周期中的每一个的长度为21天。在一些方面，该多至17个额外给药周期各自包含该双特异性抗体的单一剂量，其中，该单一剂量在约80mg至约300mg之间，且其中，该方法包含在该多至17个额外给药周期中的每一个的第1天或大约第1天向该受试者施用该单一剂量。
在一些方面，在该C1D1与该C1D2之间，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D1与该C1D2之间，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。在一些方面，在该C1D2与该C1D3之间，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D2与该C1D3之间，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。在一些方面，在该C1D3之后，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D3之后，根据该方法治疗的受试者群体中的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。在一些方面，在周边血液样品中测量IL-6水平。
在一些方面，在该第一给药周期中，该受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2与该C1D3之间。在一些方面，在该第一给药周期中，该受试者中CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2的24小时内。
在另一方面，本公开提供了一种治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者的方法，该方法包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向该受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，该第一给药周期包含该双特异性抗体的第一剂量(C1D1)和第二剂量(C1D2)，其中该C1D1在约0.5mg至约19.9mg之间且该C1D2在约20mg至约600mg之间。在一些方面，该C1D1在约1.2mg至约10.8mg之间且该C1D2在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C1D1为约3.6mg且该C1D2为约198mg。在一些方面，第一给药周期的长度为21天。在一些方面，该方法包括分别在该第一给药周期的第1和第8天或大约第1和第8天向该受试者施用该C1D1和该C1D2。在一些方面，该给药方案进一步包含第二给药周期，该第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，该C2D1等于或大于该C1D2且在约20mg至约600mg之间。在一些方面，该C2D1在约80mg至约300mg之间。在一些方面，该C2D1为约198mg。在一些方面，第二给药周期的长度为21天。在一些方面，该方法包括在该第二给药周期的第1天向该受试者施用该C2D1。在一些方面，该给药方案包含一个或多个额外给药周期。在一些方面，该给药方案包含1至17个额外给药周期。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的每一个的长度为21天。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的每一个包含该双特异性抗体的单一剂量。在一些方面，该方法包括在该一个或多个额外给药周期的第1天向该受试者施用该双特异性抗体的单一剂量。
在本文所述的任何方法的一些方面，该双特异性抗体包含抗FcRH5臂，该抗FcRH5臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含以下六个高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)；(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)；(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)；(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ IDNO:4)；(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)；和(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)。在一些方面，该双特异性抗体包含抗FcRH5臂，该抗FcRH5臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。在一些方面，该第一结合结构域包含：VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7；以和VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8。在一些方面，其中该双特异性抗体包含抗CD3臂，该抗CD3臂包含第二结合结构域，该第二结合结构域包含以下六个HVR：(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQ ID NO:9)；(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQ IDNO:10)；(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO:11)；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)；(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)；和(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)。在一些方面，该双特异性抗体包含抗CD3臂，该抗CD3臂包含第二结合结构域，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO:15具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO:16具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。在一些方面，该第二结合结构域包含：VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:15；以和VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:16。在一些方面，该双特异性抗体包含：抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)；以及抗CD3臂，其包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，且其中：(a)H1包含氨基酸序列SEQ IDNO:35；(b)L1包含氨基酸序列SEQ ID NO:36；(c)H2包含氨基酸序列SEQ ID NO:37；和(d)L2包含氨基酸序列SEQ ID NO:38。
在本文所述的任何方法的一些方面，该双特异性抗体包含去糖基化位点突变。在一些方面，该去糖基化位点突变降低该双特异性抗体的效应子功能。在一些方面，其中，该去糖基化位点突变为取代突变。在一些方面，该双特异性抗体在Fc区中包含降低效应子功能的取代突变。在一些方面，该双特异性抗体为单克隆抗体。在一些方面，该双特异性抗体为人源化抗体。在一些方面，该双特异性抗体为嵌合抗体。在一些方面，该双特异性抗体为结合FcRH5和CD3的抗体片段。在一些方面，该抗体片段选自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段所组成的群组。在一些方面，该双特异性抗体为全长抗体。在一些方面，该双特异性抗体为IgG抗体。在一些方面，该IgG抗体为IgG1抗体。
在本文所述的任何方法的一些方面，该双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中，该一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。在一些方面，该一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。在一些方面，该CH31和CH32结构域各自包含突起或空腔，且其中，该CH31结构域中的突起或空腔分别位于该CH32结构域的空腔或突起中。在一些方面，该CH31结构域和该CH32结构域在该突起与空腔之间的界面处相接。在一些方面，该CH21和CH22结构域各自包含突起或空腔，且其中，该CH21结构域中的突起或空腔分别位于该CH22结构域的空腔或突起中。在一些方面，该CH21和该CH22结构域在所述突起和空腔之间的界面处相接。在一些方面，该抗FcRH5臂包含该突起且该抗CD3臂包含该空腔。在一些方面，该抗FcRH5臂的CH3结构域包含含有T366W氨基酸取代突变(EU编号)的突起，且该抗CD3臂的CH3结构域包含含有T366S、L368A和Y407V氨基酸取代突变(EU编号)的空腔。
在本文所述的任何方法的一些方面，将该双特异性抗体作为单一疗法施用至该受试者。
在本文所述的任何方法的一些方面，将该双特异性抗体作为组合疗法施用至该受试者。在一些方面，将该双特异性抗体与一种或多种额外治疗剂同时施用至该受试者。在一些方面，在施用一种或多种额外治疗剂之前，将该双特异性抗体施用至该受试者。在一些方面，在施用一种或多种额外治疗剂之后，将该双特异性抗体施用至该受试者。在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包含有效量的托珠单抗(tocilizumab)。在一些方面，将托珠单抗通过静脉内输注施用至该受试者。在一些方面，(a)该受试者体重≥100kg，且托珠单抗以800mg的剂量施用至该受试者；(b)该受试者体重≥30kg且<100kg，且将托珠单抗以8mg/kg的剂量施用至该受试者；或(c)该受试者体重<30kg，且将托珠单抗以12mg/kg的剂量施用至该受试者。在一些方面，在施用双特异性抗体之前2小时，将托珠单抗施用至该受试者。在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包含有效量的泊马度胺(pomalidomide)、达雷木单抗(daratumumab)或B细胞成熟抗原(BCMA)定向疗法。
在本文所述的任何方法的一些方面，将该双特异性抗体通过静脉内输注施用至该受试者。
在本文所述的任何方法的一些方面，将该双特异性抗体经皮下施用至该受试者。
在本文所述的任何方法的一些方面，受试者具有细胞因子释放综合征(CRS)事件，且该方法进一步包括在暂停用该双特异性抗体进行的治疗的同时治疗该CRS事件的症状。在一些方面，该方法进一步包括向该受试者施用有效量的托珠单抗以治疗该CRS事件。在一些方面，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至该受试者。在一些方面，该CRS事件在治疗该CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化，且该方法进一步包括向该受试者施用一个或多个额外剂量的托珠单抗以控制该CRS事件。在一些方面，将该一个或多个额外剂量的托珠单抗以约8mg/kg的剂量经静脉内施用至该受试者。在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包含有效量的皮质类固醇。在一些方面，将该皮质类固醇经静脉内施用至受试者。在一些方面，该皮质类固醇为甲泼尼龙。在一些方面，甲泼尼龙以约80mg的剂量施用。在一些方面，该皮质类固醇为地塞米松。在一些方面，该地塞米松以约20mg的剂量施用。在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包含有效量的乙酰胺酚或对乙酰胺基酚。在一些方面，乙酰胺酚(acetaminophen)或对乙酰胺基酚(paracetamol)以约500mg至约1000mg之间的剂量施用。在一些方面，将乙酰胺酚或对乙酰胺基酚口服施用至该受试者。在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包含有效量的苯海拉明。在一些方面，苯海拉明以约25mg至约50mg之间的剂量施用。在一些方面，将该苯海拉明口服施用至受试者。
在本文所述的任何方法的一些方面，该MM为复发性或难治性(R/R)MM。在一些方面，该个体已接受至少三个针对该MM的先前治疗线。在一些方面，该个体已接受至少四个针对该MM的先前治疗线。在一些方面，该个体已暴露包含蛋白酶体抑制剂、IMiD和/或抗CD38治疗剂的先前治疗。在一些方面，该蛋白酶体抑制剂为硼替佐米、卡非佐米或伊沙佐米。在一些方面，该IMiD为沙利度胺、来那度胺或泊马度胺。在一些方面，该抗CD38治疗剂为抗CD38抗体。在一些方面，该抗CD38抗体为达雷木单抗、MOR202或艾沙妥昔单抗。在一些方面，该抗CD38抗体为达雷木单抗。在一些方面，该个体已暴露包含以下的先前治疗：抗SLAMF7治疗剂、出核抑制剂、组蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制剂、自体干细胞移植(ASCT)、双特异性抗体、抗体-药物结合物(ADC)、CAR-T细胞疗法或BCMA定向疗法。在一些方面，该抗SLAMF7治疗剂为抗SLAMF7抗体。在一些方面，该抗SLAMF7抗体为埃罗妥珠单抗。在一些方面，该出核抑制剂为塞利尼索。在一些方面，该HDAC抑制剂为帕比司他。在一些方面，该BCMA定向疗法为靶向BCMA的抗体-药物结合物。
附图说明
图1为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组A(单步剂量递增组)和组B(多步剂量递增组)的剂量递增时间表。C：循环；D：天；Q：每一个。
图2为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组A可能的单步剂量递增场景。AE：不良事件；DLT；剂量限制性毒性；ISC：内部安全委员会；MAD：最大达到剂量；MTD：最大耐受剂量；pts：患者。剂量水平以毫克为单位。剂量水平和剂量修改仅用于说明目的。“AE”是指研究者不认为可归因于另一明确可鉴定原因(例如疾病进展)的不良事件。
图3为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组B可能的双步剂量递增场景。CRS：细胞因子释放综合征。剂量水平以毫克为单位。剂量水平和剂量修改仅用于说明目的。
图4A为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的单步剂量递增组(组A)和单步扩大组(组C)的剂量进展。剂量水平以毫克为单位。
图4B为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的双步剂量递增组(组B)和双步扩大组(组D)的剂量进展。剂量水平以毫克为单位。
图5为条形图，其分别示出在C1D1(第1周期，第1天)和C1D8(第1周期，第8天)用3.6mg和20mg、40mg、60mg或90mg Cevostamab(BFCR4350A)治疗的患者相对于基线(轻链多发性骨髓瘤(LCMM)患者的M蛋白或受影响轻链的基线水平)的最佳百分比变化,以及表，该表示出最佳缓解(PD：病情进展；SD：病情稳定；MR：轻度缓解；PR：部分缓解；VGPR：极好部分缓解；SCR：严格完全缓解；CR：完全缓解)和以天为单位的达到最佳缓解的时间；治疗史(Dara：达雷木单抗。PI：蛋白酶体抑制剂；IMiD：免疫调节药物；auto：自体干细胞移植(ASCT)；和各患者的细胞学检查。高风险细胞学检查(包括1q21、t(4；14)、t(11；14)、t(14；16)和del(17p))是使用国际骨髓瘤工作组(IMWG)标准定义的，如表1所示。
图6为表，其示出最佳缓解；存在或不存在髓外(ext med)疾病；存在或不存在高风险细胞学检查；和十三名因Cevostamab疗法而缓解的患者的先前达雷木单抗状态，以及图表，其示出各患者的治疗时间线。示出了剂量水平、总体缓解(MRD：微小残留病)和事件(不良事件、正在进行的治疗、总体缓解和疾病进展)。
图7为示出1级和2+级CRS的临床症状频率的条形图。各症状(不良事件；AE)的等级用阴影表示。
图8为一组表，其示出参加GO39775 I期剂量递增研究的组B或组A的患者的最佳总体缓解(PD，病情进展；SD/MR，病情稳定/轻度缓解；PR，部分缓解；VGPR，极好部分缓解；CR/sCR，完全缓解/严格完全缓解)和CRS频率和严重程度。
图9为一组箱形图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组A、B和C中指定的Cevostamab剂量水平下的药效学(PD)参数。CRS等级(无CRS、1级、2级或3级)用阴影表示。峰值IL-6图中的虚线表示100-125pg/mL的IL-6水平，其为基于CAR-T数据的临床显著性的粗略阈值。所有流式细胞术时间点均为给药前。
图10A为一组箱形图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组A(≥20mg目标剂量)和组C(3.6/90mg)患者的基线FcRH5表达水平(等效可溶性荧光染料(MESF))。
图10B为一组箱形图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的组A(≥20mg目标剂量)和组C(3.6/90mg)患者的基线FcRH5表达水平(MESF)和缓解(R，缓解；NR，未缓解；NA，数据不可用)。
图11A为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的托珠单抗预防组的实验方案。15名患者接受托珠单抗预防和Cevostamab治疗，该研究因安全性审查而暂停，且另外20名患者在安全性审查后接受治疗。
图11B为示意图，其示出GO39775 I期剂量递增研究的托珠单抗预防组的6+6实验方案。最初的一组患者接受托珠单抗预防和Cevostamab治疗，对安全性进行审查，且另外约30名患者在安全性审查后接受治疗。
图11C为示意图，其示出在C1D8开启一组包括预防性托珠单抗治疗的托珠单抗预防性研究的指南。*：基于成功准则。
图12为散布图，其示出GO39775 I期研究中无CRS或具有1级、2级或3级CRS的患者的峰值IL-6水平(pg/mL)。
图13为一组散布图，其示出GO39775 I期研究的所有生物标记可评估患者(左图)和活性剂量群组(剂量在第1周期第1天为等于或高于3.6mg且在第1周期第8天为20mg)中未达成部分缓解(<PR；包括病情进展、最小程度的缓解和病情稳定)或至少部分缓解(≥PR；包括部分缓解、极好部分缓解和严格完全缓解)的患者中的生物标记可评估患者(右图)的FcRH5表达水平(MESF)。
图14A为一组散布图，其示出在GO39775 I期研究中在指定时间点，在患者周边血液中测量的CD8+T细胞和CD4+T细胞的绝对计数。EOI：输液结束。
图14B为一组散布图，其示出在GO39775 I期研究中在指定时间点，在患者周边血液中测量的T细胞活化水平(评估为CD8+CD69+T细胞的水平)和T细胞增殖水平(评估为CD8+CD69+T细胞的水平)。
图14C为散布图，其示出在GO39775 I期研究中在指定时间点，在活性剂量群组的患者的血浆中测量的IFN-γ水平。
图15A为散布图，其示出在GO39775 I期研究中在指定时间点，在活性剂量群组的患者的血浆中测量的IL-6水平(pg/mL)。
图15B为散布图，其示出在该C1D1剂量(左图)或C1D8剂量(右图)后，在GO39775 I期研究的活性剂量群组中未经历CRS或经历1，2或3级CRS的患者的血浆中测量的峰值IL-6水平(pg/mL)。符号表示患者在该C1D1剂量后是否接受托珠单抗作为CRS治疗的一部分。
图16A为一组图，其示出在GO39775 I期研究中在第1周期期间为未缓解者或缓解者的患者的肿瘤区域中的CD8+肿瘤浸润性T细胞的密度(细胞/mm2)，和散布图，其示出未缓解者和缓解者的CD8+肿瘤浸润T细胞的对数倍数变化。**：p<0.01；NS：不显著。
图16B为一组显微照片，其示出具有严格完全缓解的患者在筛选时(左图，标记为“A”)和治疗时(右图，标记为“B”)，福尔马林固定、脱钙和石蜡包埋的骨髓活检切片中的CD8和CD138的双显色免疫组织化学(IHC)染色。影像以200倍放大率示出。在筛选时，观察到大量CD138+浆细胞，以及分散的CD8+T细胞。在治疗时，观察到单个CD138+浆细胞，周围有大量CD8+T细胞。
图17为条形图，其示出在指定周期日期CRS事件的发生率(％)和严重程度。
图18为条形图，其示出在GO39775 I期研究中用指定剂量的Cevostamab治疗的患者的缓解率。
图19为图表，其示出用指定剂量水平的Cevostamab治疗的患者的治疗时间线。总体缓解(PD、SD、MR(轻度缓解)、PR、VGPR、CR或sCR))和事件(治疗完成、不良事件、病情进展、医师决定和正在进行的治疗)用颜色和符号表示。
图20为示出在输注后指定天数和指定剂量下，血清中Cevostamab的平均PK浓度(ng/mL)的图。
图21为条形图，其示出接受指定先前疗法且在GO39775 I期研究中用等于或高于3.6/20mg剂量水平的Cevostamab治疗的疗效可评估患者的总体缓解率(ORR)(％)。BCMA：B细胞成熟抗原；CAR-T：嵌合抗原受体T细胞疗法；ADC，抗体-药物结合物；ASCT，自体干细胞移植。
图22A为散布图，其示出来自接受过六个或更多个(≥6L)或五个或更少个(≤5L)先前MM治疗方案的患者的样品中的骨髓瘤细胞的FcRH5表达(MESF)。
图22B为一对散布图，其示出来自对于用先前MM疗法为三类难治性(左图；Y：三类难治性；N；非三类难治性)或五类难治性(右图；Y：五类难治性；N；非五类难治性)的患者的样品中的肿瘤细胞上的FcRH5表达(MESF)。
图22C为一组散布图，其示出来自以下患者的样品中的骨髓瘤细胞上的FcRH5表达(MESF)：接受过先前抗CD8抗体疗法的患者(左图；Y：接受过先前抗CD8抗体疗法；N；未接受此类疗法)；接受过先前抗BCMA疗法的患者(中图；Y：接受过先前抗BCMA疗法；N；未接受此类疗法)；和接受过先前ASCT疗法的患者(中图；Y：接受过先前ASCT疗法；N；未接受此类疗法)。
图23A为一组散布图，其示出来自以下患者的样品中的肿瘤细胞上的FcRH5表达(MESF)：具有2、1或0个高风险细胞遗传学异常的患者(左图)和具有高风险细胞遗传学(至少一个高风险细胞遗传学异常)或标准风险细胞遗传学的所有患者(右图)。n.s.：不显著。
图23B为一组散布图，其示出来自具有(Y)或不具有(N)1q21增益(左图)；t(4；14)异常(中图)；和del(17p)异常(右图)的患者的样品中的肿瘤细胞上的FcRH5表达(MESF)。
图24为示出Cevostamab(BFCR4350A)的化学结构的示意图。抗CD3：抗分化簇3；抗FcRH5：抗片段可结晶受体样5；TDB：T细胞依赖性双特异性抗体。
图25为条形图，其示出GO39775研究中单步递增(右)和双步递增(左)给药方案中的的细胞因子释放综合征(CRS)概况。TD：目标剂量。
图26为暴露-缓解(E-R)图，其示出基于来自研究GO39775的单步和双步方案的汇总数据，在施用目标剂量后，Cevostamab的接受-安全关系(发生≥2级CRS事件的概率与第1周期中的目标剂量Cmax)。≥2级CRS概率为0％和100％的实心圆代表使用来自该单步递增和双步递增方案的汇总数据所观察到的数据。该E-R图被分成多个表示相应暴露指标的五分位数的区间(灰色虚线)。各五分位数处的黑色实心圆表示观察到的中位暴露量和观察到的≥2级CRS患者的概率。阴影区域和黑色曲线分别代表来自1000个自举样品的90％CI和拟合逻辑回归模型的中位数。水平条代表在各群组500次仿真的计划剂量群组的群体药物动力学模型预测暴露量(几何平均值和90％CI)。AIC＝赤池信息标准；Cmax第1周期目标剂量＝Cevostamab目标剂量施用后的最大浓度；CRS＝细胞因子释放综合征；E0＝疗效的基线估计；EC50＝半最大有效浓度；Emax＝最大效果；E-R＝暴露-缓解；Gr＝2级。
图27A为E-R图，其示出使用来自该单步递增和双步递增方案的汇总数据，在C1D1递增剂量施用后，Cevostamab关于发生≥1级CRS事件的暴露-安全关系。
图27B为E-R图，其示出使用来自该单步递增和双步递增方案的汇总数据，在目标剂量施用后，Cevostamab关于发生≥1级CRS事件的暴露-安全关系。
图28A为E-R图，其示出使用来自该单步递增和双步递增方案的汇总数据，在C1D1递增剂量施用后，Cevostamab关于发生≥1级ICANS事件的暴露-安全关系。
图28B为E-R图，其示出使用来自该单步递增和双步递增方案的汇总数据，在目标剂量施用后，Cevostamab关于发生≥1级ICANS事件的暴露-安全关系(Cmax,SS)。Cmax,SS＝在该单步递增和双步递增方案中，在稳态时，Cevostamab的目标剂量施用后的最大浓度。
图29为一对曲线图，其示出使用来自研究GO39775的单步和双步给药方案的汇总数据，在Cevostamab施用后，Cevostamab关于客观缓解概率的暴露-疗效关系(左侧：AUCss；右侧：Cmin,ss)。E0＝疗效的基线估计；EC50＝半最大有效浓度；Emax＝最大效果。
图30A为曲线图，其示出使用来自研究GO39775的单步和双步给药方案的汇总数据，在Cevostamab施用后，Cevostamab关于≥VGPR概率的暴露-疗效关系(AUCss)。
图30B为曲线图，其示出使用来自研究GO39775的单步和双步给药方案的汇总数据，在Cevostamab施用后，Cevostamab关于≥VGPR概率的暴露-疗效关系(Cmin,ss)。
图31为曲线图，其示出使用来自研究GO39775的单步和双步给药方案的汇总数据，在Cevostamab施用后，Cevostamab暴露(AUCss)关于PR或更好的ORR的概率的暴露-疗效关系。
图32为一组桑基图，其示出在指定给药方案的指定周期中未经历CRS或1、2或3级CRS的患者的比例。
图33A为盒须图，其示出与在单步给药计划表中接受3.6mg的患者相比，在双步给药计划表中接受0.3mg剂量的Cevostamab的患者在C1D1至C1D8之间确定的峰值介白素6(IL-6)浓度。针对各患者，还示出了CRS级别和托珠单抗(toci)施用(是或否)。
图33B为盒须图，其示出与在单步给药计划表中接受3.6mg C1D1剂量的患者在C1D1至C1D8之间确定的峰值IL-6水平相比，在双步给药计划表中在接受0.3mg C1D1剂量后接受3.6mg C1D8剂量Cevostamab(表示为0.3/3.6)的患者在C1D8至C1D15之间确定的峰值IL-6浓度。针对各患者，还示出了CRS级别和托珠单抗(toci)施用(是或否)。
图33C为盒须图，其示出与在单步给药计划表中在C1D8的浓度相比，在双步给药计划表中在C1D15的目标剂量后确定的峰值IL-6浓度。针对各患者，还示出了CRS级别和托珠单抗(toci)施用(是或否)。
图34为一对盒须图，其示出支持0.3mg作为最低C1D1剂量的IL-6浓度和CD8 T细胞活化药效学(PD)数据。针对各患者，还示出了CRS级别和托珠单抗(toci)施用(是或否)。Trt：治疗。
图35为曲线图，其示出使用来自研究GO39775中的单步和双步给药方案的汇总数据(分步剂量Cmax)，在C1D1分步剂量施用后，Cevostamab与≥2级CRS事件发生率的暴露-安全关系。
图36为堆栈条形图，其示出在推荐的II期剂量的各第1周期剂量后至CRS发作的时间。
图37A为曲线图，其示出在该单步递增剂量群组中在第1周期第8天施用Cevostamab的目标剂量(范围为0.15mg至198mg)后，目标剂量与AUC7-21d之间的关系。黑色实线代表使用幂模型的最佳拟合回归线。彩色圆点代表在测试目标剂量下观察到的数据。黑色实心圆代表暴露量的几何平均值，黑色条代表在测试剂量下的暴露量的90％CI。
图37B为曲线图，其示出在单递增剂量群组中在第1周期第8天(范围为0.15mg至198mg)和在双步递增剂量群组中在第1周期第14天(范围为60mg至160mg)施用目标剂量的Cevostamab后，目标剂量与Cmax之间的关系。
图38为一组盒须图，其示出与在单步给药计划表中接受3.6mg C1D1的患者相比，接受0.3mg、0.6mg、1.2mg或3.6mg剂量的Cevostamab的患者在C1D1之后(左图)和在双步给药计划表中接受0.3/3.6mg、0.6/3.6mg或1.2/3.6mg C1D1/C1D8剂量的患者在C1D8之后(右图)测定的介白素6(IL-6)峰值浓度。针对各患者，还示出了CRS级别和托珠单抗(toci)施用(是或否)。
图39为一组曲线图，其示出在用指定的Cevostamab给药方案治疗期间在指定时间点的CD8+T细胞活化百分比。
图40A为散布图，其示出在增加剂量的Cevostamab后观察到的峰值IL-6水平与1+级CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。对托珠单抗施用之后的IL-6数据进行审查。
图40B为散布图，其示出在增加剂量的Cevostamab后观察到的峰值IL-6水平与2+级CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。对托珠单抗施用之后的IL-6数据进行审查。
图41A为散布图，其示出在目标剂量的Cevostamab后观察到的峰值IL-6水平与1+级CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。对托珠单抗施用之后的IL-6数据进行审查。
图41B为散布图，其示出在目标剂量的Cevostamab后观察到的峰值IL-6水平与2+级CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。对托珠单抗施用之后的IL-6数据进行审查。
图42为一对散布图，其示出在该C1D1递增剂量的Cevostamab之后观察到的CD8+T细胞活化百分比与1+级(左图)或2+级(右图)CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。
图43为一对散布图，其示出在目标剂量的Cevostamab之后观察到的CD8+T细胞活化百分比与1+级(左图)或2+级(右图)CRS的概率之间的关系。示出了线性逻辑回归分析。
图44为散布图，其示出在施用该C1D1分步剂量后，该Cevostamab C1D1分步剂量Cmax与峰值IL-6浓度之间的关系。示出了来自研究GO39775的单步和双步方案的汇总数据。
图45为散布图，其示出在施用该目标剂量后，该Cevostamab目标剂量Cmax与峰值IL-6浓度之间的关系。示出了来自研究GO39775的单步和双步方案的汇总数据。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，术语“约”是指本技术领域技术人员易于知晓的各个值的通常误差范围。在本文中，关于“约”的值或参数包括(并描述)指向该值或参数本身的方面。
应当理解，本文所描述的本发明的各个方面包括“包含”、“由……组成”、和“基本上由……组成”方面。
如本文所用，术语“FcRH5”或“片段可结晶受体样5”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然FcRH5，包括哺乳动物，例如灵长类动物(例如人类)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)，除非另有说明，其涵盖“全长”未处理的FcRH5，以及因在细胞中处理所产生的任何形式的FcRH5。该术语亦涵盖天然生成的FcRH5变异体，例如，剪接变异体或对偶基因变异体。FcRH5包括例如人FcRH5蛋白(UniProtKB/Swiss-Prot ID：Q96RD9.3)，其长度为977个氨基酸。
术语“抗FcRH5抗体”和“结合至FcRH5的抗体”是指能够以足够亲和力结合FcRH5从而使得该抗体可作为靶向FcRH5的诊断剂和/或治疗剂的抗体。在一个实施例中，抗FcRH5拮抗剂抗体与无关、非FcRH5蛋白质结合的程度低于该抗体与FcRH5结合程度的约10％，其通过例如放射免疫测定(RIA)所量测。在某些实施例中，与FcRH5结合的抗体具有的解离常数(KD)为≤1μM、≤250nM、≤100nM、≤15nM、≤10nM、≤6nM、≤4nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在某些实施例中，抗FcRH5抗体结合至FcRH5的抗原决定位，其在来自不同物种的FcRH5之间是保守性。
如本文所用，术语“分化簇3”或“CD3”涉及来自任何脊椎动物来源的任何天然CD3，包括哺乳动物，例如灵长类动物(例如人类)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)，除非另有说明，包括例如CD3ε、CD3γ、CD3α和CD3β链。该术语涵盖“全长”、未处理的CD3(例如未处理或未修饰的CD3ε或CD3γ)以及在细胞处理中得到的任何形式的CD3。该术语亦涵盖天然生成的CD3变异体，例如，剪接变异体或对偶基因变异体。CD3包括例如长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeqNo.NP_000064)。
术语“抗CD3抗体”和“结合至CD3的抗体”是指能够以足够亲和力结合CD3从而使得该抗体可作为靶向CD3的诊断剂和/或治疗剂的抗体。在一个实施例中，抗CD3拮抗剂抗体与无关、非CD3蛋白质结合的程度低于该抗体与CD3结合程度的约10％，其通过例如放射免疫测定(RIA)所量测。在某些实施例中，与CD3结合的抗体具有的解离常数(KD)为≤1μM、≤250nM、≤100nM、≤15nM、≤10nM、≤5nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如0-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在某些实施例中，抗CD3抗体结合至CD3的抗原决定位，其在来自不同物种的CD3之间是保守性。
为了本文中的目的，也被称为BFCR4350A或RO7187797的“Cevostamab”是一种Fc工程化、人源化、全长非糖基化IgG1κT细胞依赖性双特异性抗体(TDB)，其结合FcRH5和CD3并包含：抗FcRH5臂，其包含重链多肽序列SEQ ID NO:35和轻链多肽序列SEQ ID NO:36；和抗CD3臂，其包含重链多肽序列SEQ ID NO:37和轻链多肽序列SEQ ID NO:38。Cevostamab在使用Fc区氨基酸残基的EU编号的该抗FcRH5臂的重链的366位处包含苏胺酸至色胺酸(T366W)的氨基酸取代，且在使用Fc区氨基酸残基的EU编号的该抗CD3臂的重链上包含三个氨基酸取代(407位处的酪胺酸至缬胺酸、366位处的苏胺酸至丝胺酸和368位处的白胺酸至丙胺酸)(Y407V、T366S和L368A)，以驱动两个臂(半抗体)的异源二聚化。Cevostamab还包含在使用Fc区氨基酸残基的EU编号的各重链(N297G)上的297位处的氨基酸取代(甘胺酸取代天冬酰胺)，其产生与Fc(Fcγ)受体最小限度结合的非糖基化抗体，且因此阻止Fc效应子功能。在WHO药物信息(药物物质的国际非专利名称)中也描述了Cevostamab，推荐INN：List 84,Vol.34,No.3,发布于2020年(参见第701页)。
本文中的术语“抗体”以最广义使用且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展示出预期抗原结合活性即可。
“亲和力”是指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价交互作用总和的强度。除非另有说明，否则如本文中所使用的“结合亲和力”，是指反映结合对成员(例如抗体和抗原)之间1:1交互作用的内在结合亲和力。分子X对于其搭配物Y的亲和力通常可通过该解离常数(KD)来表示。可以通过本领域已知的常规方法测量亲和力，包括那些本文所描述的方法。下面描述了用于测量结合亲和性的具体的说明性和示例性方面。
“亲和力成熟”抗体是指在一个或多个高变区(HVR)中具有一种或多种变化的抗体，与不具有这种变化的亲本抗体相比，这种变化引起该抗体对抗原的亲和力的改善。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指具有与天然抗体结构实质上类似的结构或具有含有如本文中所定义的Fc区的重链的抗体。
“抗体片段”是指除完整抗体以外的分子，其包含结合完整抗体所结合抗原的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、双功能抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv、ScFab)和抗原片段形成的多特异性抗体。
“单结构域抗体”是指包含抗体的重链可变结构域的全部或部分或抗体的轻链可变结构域的全部或部分的抗体片段。在某些实施例中，单结构域抗体为人单结构域抗体(参见例如美国第6,248,516B1号专利)。单结构域(single-domain)抗体的实例包括但不限于VHH。
“Fab”片段是由木瓜蛋白酶消化抗体产生的抗原结合片段，并由完整的L链以及H链的可变区结构域(VH)和一个重链的第一恒定结构域(CH1)组成。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的Fab片段。抗体的胃蛋白酶处理产生单一大的F(ab')2片段，该片段大致对应于两个具有二价抗原结合活性并且仍能够交联抗原的双硫键连接的Fab片段。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于，在该CH1结构域的羧基末端具有额外的少数残基，其包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱胺酸。本文中，Fab'-SH是指恒定结构域的(多个)半胱胺酸残基带有一个游离硫醇基的Fab'。F(ab')2抗体片段最初作为成对Fab'片段产生，其间具有铰链半胱胺酸。抗体片段的其他化学耦联也是已知的。
“Fv”由紧密、非共价结合的一个重链可变区和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。由这两个结构域的折叠产生六个高度变异环(H和L链各3个环)，这些环构成用于抗原结合的氨基酸残基，并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域(或仅包含三个针对抗原的CDR的半个Fv)也具有辨识和结合抗原的能力，虽然通常亲和力低于整个结合位点。
本文中术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区域，包括天然序列Fc区和变异Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但通常将人IgG重链的Fc区定义为从Cys226或Pro230位置的氨基酸残基延伸至其羧基端。例如，在抗体生产或纯化过程中，或通过重组工程化编码抗体重链的核酸，可去除Fc区的C端离胺酸(根据EU编号系统的残基447)。因此，完整抗体的组合物可包含去除所有Lys447残基的抗体群体、未去除Lys447残基的抗体群体和具有含和不包含Lys447残基的抗体混合物的抗体群体。
“功能Fc片段”具有原生序列Fc区的“效应子功能”。示例性的“效应子功能”包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调等。此类效应子功能通常需要将Fc区与结合结构域(例如，抗体可变结构域)结合，且可使用例如在本文中定义的已揭示的各种测定法进行评估。
“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列具有同一性的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括但不限于天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区，以及其天然生成的变异体。
“变异体Fc区”包含由于至少一种氨基酸修饰，优选地由于一个或多个氨基酸取代，而不同于天然序列Fc区的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，该变异体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如，该天然序列Fc区或该亲本多肽的Fc区中约一个至约十个氨基酸取代，优选地约一个至约五个氨基酸取代。本文的变异体Fc区将优选地与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，优选地与其具有至少约90％的同源性，或优选地具有至少约95％的同源性。
如本文所用，“Fc复合物”是指两个Fc区的CH3结构域一起相互作用以形成二聚体，或者在某些方面，两个Fc区相互作用以形成二聚体，其中在铰链区和/或CH3结构域的半胱胺酸残基通过键和/或力(例如，凡得瓦力(Van der Waals)、疏水力、氢键、静电力或二硫键)相互作用。
如本文所用，“Fc成分”是指Fc区的铰链区、CH2结构域或CH3结构域。
“铰链区”通常定义为从IgG的约残基216延伸至230(EU编号)、从IgG的约残基226延伸至243(Kabat编号)或从IgG的约残基1延伸至15(IMGT唯一编号)。
Fc区的“下部铰链区”通常定义为紧接在铰链区C端的残基延伸，即，该Fc区的残基233至239(EU编号)。
“变异体Fc区”包含由于至少一种氨基酸修饰，优选地由于一个或多个氨基酸取代，而不同于天然序列Fc区的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，该变异体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如，该天然序列Fc区或该亲本多肽的Fc区中约一个至约十个氨基酸取代，优选地约一个至约五个氨基酸取代。本文的变异体Fc区将优选地与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，优选地与其具有至少约90％的同源性，更优地具有至少约95％的同源性。
“Fc受体”或“FcR”是指与抗体的Fc区结合的受体。优选FcR为天然序列人FcR。再者，优选的FcR是结合IgG抗体(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII次类的受体，包括这些受体的等位基因变异体和交替剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，其主要区别在于其胞质结构域。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含基于免疫受体酪胺酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪胺酸的抑制模体(ITIM)(参见综述M.
Figure BDA0004161870440000211
Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR综述于：Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)；Capel等人，Immunomethods 4:25-34(1994)；和deHaas等人，J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。本文中术语“FcR”涵盖其他FcR，包括将来要鉴定的那些。该术语还包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人，J.Immunol.117:587(1976)and Kim等人，J.Immunol.24:249(1994))。
如本文中所提及，术语“杵和臼(knob-into-hole)”或“KnH”技术是指通过将突起(杵状物)导入一个多肽并将空腔(臼状物)在它们相互作用的界面处引入其他多肽，在活体外或活体内指导两个多肽的配对在一起的技术。例如，KnHs已被导入抗体的Fc:Fc相互作用界面、CL：CH1界面或VH/VL界面中(例如，US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431和Zhu et al.(1997)Protein Science 6:781-788)。在多特异性抗体的制造中，这对于驱动两个不同重链配对在一起特别有用。例如，在其Fc区中具有KnH的多特异性抗体可进一步包含与各Fc区连接的单个可变结构域，或进一步包含与相同、相似或不同轻链可变结构域配对的不同重链可变结构域。KnH技术还可用于将两个不同的受体胞外结构域或包含不同目标识别序列的任何其他多肽序列配对在一起。
“骨架(framework)”或“FR”是指除高变区(hypervariable region)(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3、和 FR4。因此，该 HVR 和 FR 序列通常以如下顺序出现在 VH (或 VL) 中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
“CH1 区”或“CH1 结构域”包含从 IgG 的约残基 118 至残基 215(EU 编号)、从IgG 的约残基 114 至 223(Kabat 编号)或 IgG 的约残基1.4 至残基 121 的残基延伸(IMGT 唯一编号)(Lefranc M-P, Giudicelli V,Duroux P, Jabado-Michaloud J, FolchG, Aouinti S, Carillon E, Duvergey H,Houles A, Paysan-Lafosse T, Hadi-SaljoqiS, Sasorith S, Lefranc G, Kossida S.
Figure BDA0004161870440000223
the internationalImMunoGeneTics information
Figure BDA0004161870440000221
25 yearson.Nucleic Acids Res. 2015 Jan；43(Database issue):D413-22)。
人 IgG Fc 区的“CH2 结构域”通常从 IgG 的约残基 244 延伸至约 360(Kabat编号)、从 IgG 的约残基 231 延伸至约 340(EU 编号)或从 IgG的约残基 1.6 延伸至约残基 125(IGMT 唯一编号)。该 CH2 结构域的独特之处在于其没有与另一结构域紧密配对。而是，两个 N-连接的分支碳水化合物链插入完整的天然 IgG 分子的所述两个 CH2 结构域之间。经推测，该碳水化合物可提供该结构域-结构域配对的替代物，并有助于稳定该CH2 结构域。Burton, Molec. Immunol.22：161-206 (1985)。
该“CH3 结构域”包含 Fc 区中 CH2 结构域的 C 端残基延伸(即，从IgG 的约氨基酸残基 361 至约氨基酸残基 478(Kabat 编号)、从 IgG 的约氨基酸残基 341 至约氨基酸残基 447(EU 编号)或 IgG 的约氨基酸残基1.4 至约氨基酸残基 130(IGMT 唯一编号))。
该“CL 结构域”或“轻链恒定结构域 (constant light domain)”包含轻链可变结构域 (VL) 的 C 端残基延伸。抗体的轻链可为卡帕 (kappa，κ)(“Cκ”) 或拉目达(lambda，λ) (“Cλ”) 轻链区。该 Cκ 区通常从 IgG 的约残基 108 延伸至残基 214(Kabat或 EU 编号)或从 IgG 的约残基 1.4 延伸至残基 126(IMGT 唯一编号)。该 Cλ 残基通常从约残基 107a 延伸至残基215(Kabat 编号)或从约残基 1.5 延伸至残基 127(IMGT 唯一编号)(Lefranc M-P, Giudicelli V, Duroux P, Jabado-Michaloud J, Folch G,Aouinti S,Carillon E, Duvergey H, Houles A, Paysan-Lafosse T, Hadi-Saljoqi S,Sasorith S,Lefranc G,Kossida S.
Figure BDA0004161870440000222
the international ImMunoGeneTicsinformation
Figure BDA0004161870440000231
25 years on.Nucleic Acids Res. 2015 Jan；43(Databaseissue):D413-22)。
基于其恒定结构域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物的轻链 (LC) 可归类为两种明显不同的类型中的一种，称为卡帕 (κ) 和兰姆达 (λ)。根据其重链(CH)的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可归类为不同的类别或同型。有五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM，其分别具有名为α、δ、γ、ε 和 μ 的重链。基于 CH 序列和功能的相对较小的差异，该 γ 和 α类进一步分为子类，例如，人类表达以下子类： IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 和 IgA2。
术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。
抗体的“类别 (class)”是指为其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。有五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM，且这些种类中的若干种可进一步分为亚类(同型)，例如 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为 α、δ、ε、γ 和 μ。
“人抗体 (human antibody)”为具有氨基酸序列的抗体，该氨基酸序列对应于由人或人体细胞产生的或自利用人抗体谱系 (antibody repertoire) 或其他人抗体编码序列的非人来源衍生的抗体的氨基酸序列。人抗体的此定义特定地排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域中已知的各种技术(包括噬菌体显示库)来生产。Hoogenboom andWinter.J. Mol. Biol. 227:381， 1991；Marks 等人 J. Mol. Biol.222:581，1991。 可用于制备人单克隆抗体的方法也被描述于： Cole 等人，MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy，Alan R. Liss，第 77 页 (1985)；Boerner 等人，J.Immunol.，147(1)：86-95,1991。另请参见 van Dijk and vande Winkel.Curr. Opin.Pharmacol. 5:368-74, 2001. 可通过将抗原施用至转基因动物来制备人抗体，该转基因动物已被改进为反应于抗原攻击而产生这样的抗体，但其内源基因座已失去功能，例如，异源小鼠(参见例如关于XENOMOUSETM 技术的美国第 6,075,181 和 6,150,584 号专利)。参见，例如，Li et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.103:3557-3562，2006regarding humanantibodies generated via a human B-cell hybridoma technology。
“人共通骨架”是代表一系列人免疫球蛋白VL或VH骨架序列中最常见的氨基酸残基的骨架。通常，该系列人免疫球蛋白VL或VH序列来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest(第5版，NIH Publication 91-3242，Bethesda MD(1991)，第1-3卷)中所述的亚群组。在一个方面，对于VL，该亚组是如Kabat等人在上述文献中所述的亚组κI。在一个方面，对于VH，该亚组是如Kabat等人在上述文献中所述的亚组III。
“人源化(humanized)”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施例中，人源化抗体将包括至少一个(且通常两个)可变结构域中的基本上所有，其中所有或基本上所有HVR(例如CDR)对应于非人抗体的HVR，并且所有或基本上所有FR对应对于人抗体的FR。在某些方面，其中人源化抗体的所有或基本上所有FR都对应于人抗体的那些FR，该人源化抗体的任何FR可包含来自非人FR的一个或多个氨基酸残基(例如，FR的一个或多个光标位残基)。可选地，人源化抗体可包含衍生自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如非人抗体)的“人源化形式(humanized form)”是指已经历人源化的抗体。
术语“可变区(variable region)”或“可变结构域(variable domain)”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链(分别为VH和VL)的可变结构域通常具有类似的结构，且每个结构域均包含四个保守性框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如，Kindt等人，Kuby Immunology，6th ed.，W.H.Freeman和Co.，第91页(2007)。)单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用VH或VL结构域从结合抗原的抗体中分离结合特定抗原的抗体，以分别筛选互补VL或VH结构域的文库。参见，例如，Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用，术语“高变区(hypervariable region)”或“HVR”是指抗体可变结构域的序列中高度变异的每个区域(“互补决定区域”或“CDR”)。通常，抗体包括六个CDR：三个在VH中(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，和三个在VL中(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。在本文中，示例性CDR包括：
(a)在氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)处出现的CDR(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917,1987)；
(b)在氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)、和95-102(H3)处出现的CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda,MD(1991))；
(c)在氨基酸残基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)、和93-101(H3)处出现的抗原接触(MacCallum等人J.Mol.Biol.262：732-745(1996))。
除非另有说明，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)在本文中根据Kabat等人(同上文)编号。
也简称为“sFv”或“scFv”的“单链Fv”为包含连接到单一多肽链中的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，该scFv多肽在该VH和VL结构域之间进一步包含多肽连接符，其使scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于scFv的综述，参见例如Plückthun，ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269页至第315页(1994)；亦可参见Malmborg等人，J.Immunol.Methods183:7-13,1995。
“靶向结构域”意为与目标抗原决定位、抗原、配体或受体特异性结合的化合物或分子的一部分。靶向结构域包括,但不限于抗体(例如，单克隆、多克隆、重组、人源化和嵌合抗体)、抗体片段或其部分(例如，双Fab片段、Fab片段，F(ab')2、scFab、scFv抗体、SMIP、单结构域抗体、双抗体、微抗体、scFv-Fc、亲合体(affibody)、奈米抗体和抗体的VH和/或VL结构域)、受体、配体、适体、肽靶向结构域(例如半胱胺酸结蛋白(cysteine knot protein，CKP))和具有确定的结合伴侣的其他分子。靶向结构域可靶向、阻断、激动或拮抗与其结合的抗原。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同源的抗体群体获得的抗体，即包含群体的个别抗体是相同的和/或结合相同的抗原决定位，除了例如含有天然生成的突变或于单克隆抗体制剂生产过程中产生的可能的变异体抗体之外，这样的变异体通常少量存在。与通常包括针对不同决定位(抗原决定位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对于抗原上的单一决定位。因此，修饰词“克隆”表示抗体的特征是从基本上同源的抗体群体获得的，且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，将要根据本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来制备，包括但不限于融合瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和利用包含全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文描述的这些方法和用于制备单克隆抗体的其他示例性方法。
术语“多特异性抗体”以最广义使用，并特别涵盖具有多抗原决定位特异性的抗体。在一方面，该多特异性抗体结合至两个不同的目标(例如，双特异性抗体)。这种多特异性抗体包括但不限于包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的抗体，其中该VH/VL单元具有多抗原决定位特异性、具有两个或以上各自结合至不同抗原决定位的VL和VH结构域的抗体、具有两个或以上各自结合至不同抗原决定位的单一可变结构域的抗体、全长抗体、抗体片段，例如Fab、Fv、dsFv、scFv、双抗体、双特异性双抗体和三抗体，已经共价或非共价连接的抗体片段。“多抗原决定位特异性(polyepitopic specificity)”是指特异性结合至相同或不同靶标上的两个或以上不同抗原决定位的能力。“单特异性”涉及仅结合一个抗原的能力。在一个方面，该单特异性双抗原决定位抗体结合同一目标/抗原上的两个不同抗原决定位。在一个方面，该单特异性多抗原决定位抗体结合相同目标/抗原的多个不同抗原决定位。根据一个方面，该多特异性抗体为IgG抗体，其以5μM至0.001pM、3μM至0.001pM、1μM至0.001pM、0.5μM至0.001pM或0.1μM至0.001pM的亲和力结合至各抗原决定位。
“裸抗体”是指未结合到异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记的抗体。该裸抗体可存在于药物组合物中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然生成的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体为约150,000道耳顿异四聚体糖蛋白，其由二条相同的轻链和二条相同的重链经二硫键键合所构成。从N端至C端，每条重链具有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，接着是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N端至C端，每条轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，接着是轻链恒定(CL)结构域。基于其恒定结构域的氨基酸序列，抗体的轻链可被归类为两种类型中的一种，称为卡帕(κ)和兰姆达(λ)。
如本文所使用，术语“免疫粘附素”表明结合异源蛋白(“粘附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定结构域的效应子功能的分子。在结构上，该免疫粘附素包含具有所需结合特异性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定结构域序列(例如，IgG的CH2和/或CH3序列)的融合体，所述具有所需结合特异性的氨基酸序列不同于抗体的抗原识别和结合位点(即与抗体的恒定区相比是“异源的”)。该粘附素和免疫球蛋白恒定结构域可选地被氨基酸间隔区分开。示例性粘附素序列包括连续的氨基酸序列，其包含结合至所关注蛋白的受体或配体的一部分。粘附素序列也可以是结合所关注蛋白的序列，但不是受体或配体序列(例如肽体(peptibody)的粘附素序列)。可通过各种方法选择或鉴定这种多肽序列，包括噬菌体展示技术和高通量分选方法。该免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定结构域序列可以从任何免疫球蛋白获得，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型、IgA(包括IgA1和IgA2)、IgE、IgD或IgM。
“化学治疗剂”包括用于癌症治疗的化合物。化学治疗剂的实例包括：厄洛替尼(
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Genentech/OSI Pharm.)；硼替佐米(
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MillenniumPharm.)；双硫仑；表没食子儿茶素没食子酸酯；盐孢子酰胺A；卡非佐米；17-AAG(格尔德霉素)；根赤壳菌素；乳酸脱氢酶(LDH-A)；氟司特芬(
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AstraZeneca)；舒尼替尼(
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Pfizer/Sugen)；来曲唑(
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Novartis)；甲磺酸伊马替尼(
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Novartis)；非那沙酸酯(
Figure BDA00041618704400002712
Novartis)；奥沙利铂(
Figure BDA0004161870440000277
Sanofi)；5-FU(5-氟尿嘧啶)；甲酰四氢叶酸；雷帕霉素(Sirolimus，
Figure BDA0004161870440000278
Wyeth)；拉帕替尼(
Figure BDA0004161870440000279
GSK572016，Glaxo Smith Kline)；罗讷非单抗(SCH 66336)；索拉非尼(
Figure BDA00041618704400002710
Bayer Labs)；吉非替尼(
Figure BDA00041618704400002711
AstraZeneca)；AG1478；烷基化剂，诸如噻替派和
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环磷酰胺； 烷基磺酸盐，诸如环丁砜、次硫丹和吡磺砜； 氮丙啶，诸如 Benzodopa、卡波醌和Uredop； 乙烯亚胺和甲基三聚氰胺， 包括奥曲胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺；番荔枝内酯(尤其是布洛他辛和布洛他辛酮)；喜树碱(包括托泊替康和伊立替康)；草苔虫素；Callystatin；CC-1065(包括其 Adozelesin、Carzelesin 和 Bizelesin合成类似物)；念珠藻素(特别是念珠藻素 1 和念珠藻素 8)； 肾上腺皮质类固醇(包括强体松和肾上腺皮质酮)；醋酸环丙孕酮；5α-还原酶(包括非那雄胺和度他雄胺)；伏立诺他、罗帕地他汀、丙戊酸、MocetinostatDolastatin；阿地白介素，Talc Duocarmycin(包括合成类似物 KW-2189 和CB1-TM1)；Eleutherobin；水鬼蕉碱；Sarcodictyin；Spongistatin；氮芥，诸如氯丁酸苯丙胺、氯丁草胺、Chlomaphazine、Chlorophosphamide、Estramustine、依弗酰胺、甲基二(氯乙基)胺、盐酸甲氧氮芥、霉法兰、新恩比兴、苯芥胆固醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基尿素，诸如卡莫斯汀、氯脲霉素、福莫汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀和拉尼莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1I 和 加利车霉素 ω1I (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 1994 33：183-186)；强力霉素， 包括达尼霉素A；双膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯佩拉霉素； 以及新制癌菌素生色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素生色团)、紫胶菌素、放线菌素 (Actinomycin)、Authromycin、Azaserine、博来霉素、放线菌素(Cactinomycin)、Carzinophilin、Chromomycinis、放线菌素(Dactinomycin)、道诺霉素，地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正白胺酸、
Figure BDA0004161870440000282
(阿霉素)、吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯烷-阿霉素和脱氧阿霉素、表柔比星、埃索比星、伊达比星、马赛霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、Quelamycin、罗多比星、链霉黑素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，诸如甲胺蝶呤和 5-氟尿嘧啶 (5-FU)；叶酸类似物，诸如美蝶呤、甲胺蝶呤、蝶呤素、三甲蝶呤；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、噻虫嘌呤、硫代鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿嘧啶、卡莫呋、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿嘧啶；雄激素，诸如卡芦睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素，诸如胺基麸酰胺酸、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂诸如叶酸；醋葡醛内酯；醛糖苷；胺基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；Bestrabucil；比生群；Edatraxate；Defofamine；秋水仙胺；地美可辛；地嗪酮；依洛美丁；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；Lonidainine；Maytansinoids诸如美登素和安神霉素；米托胍腙；米托蒽醌；Mopidamnol；Nitraerine；喷司他丁；Phenamet；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙酰肼；丙卡巴肼；
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多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；Razoxane；Rhizoxin；Sizofuran；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯(尤其是T-2毒素、Verracurin A、Roridin A和Anguidine)；尿烷；长春地辛；达喀尔巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；胞嘧啶；阿拉伯糖苷(Ara-C)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类，例如，TAXOL(紫杉醇；Bristol-Myers SquibbOncology，Princeton，N.J.)、
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(Cremophor-Free)、紫杉醇的白蛋白工程化奈米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和
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(多西他赛，多烯紫杉醇；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥；
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(吉西他滨)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲胺蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；
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(长春瑞滨)；米托蒽醌；替尼泊苷；依达曲沙；卡培他滨
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伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟胺酸(DMFO)；类维生素A，诸如视黄酸；以及上述任何一项的药用盐、酸和衍生物。
化学治疗剂还包括(i)对肿瘤具有调节或抑制激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括
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他莫昔芬柠檬酸盐)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、Iodoxyfene、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和
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(柠檬酸托瑞米芬)；(ii)抑制酶芳香化酶的芳香化酶抑制剂，其酶调节肾上腺的雌激素生成，例如，4(5)-咪唑、胺基戊二酰亚胺、
Figure BDA0004161870440000299
(醋酸甲地孕酮)、
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(依西美坦；Pfizer)、Formestanie、Fadrozole、
Figure BDA0004161870440000301
(伏洛唑)、
Figure BDA0004161870440000302
(来曲唑；Novartis)和
Figure BDA0004161870440000303
(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；布舍瑞林、Tripterelin、甲羟孕酮醋酸酯、己二烯雌酚、普力马、氟甲孕酮、所有反式维甲酸、芬太尼以及曲沙西他滨(1,3-二氧嘧啶核苷)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是那些抑制与异常细胞增殖有关的信号路径中的基因表达的寡核苷酸，诸如PKC-Alpha、Ralf和H-Ras；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂（例如，
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）和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如
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rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如
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rmRH；以及(ix)上述任何一项的药用盐、酸和衍生物。化学治疗剂还包括抗体诸如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(
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Genentech)、西妥昔单抗
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Imclone)、帕尼单抗(
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Amgen)、利妥昔单抗(
Figure BDA00041618704400003010
Genentech/BiogenIdec)、帕妥珠单抗(
Figure BDA00041618704400003011
2C4，Genentech)、曲妥珠单抗(
Figure BDA00041618704400003012
Genentech)、托西莫单抗(Bexxar，Corixia)，以及抗体药物结合物，诸如吉妥单抗(
Figure BDA00041618704400003013
Wyeth)。作为与本发明所述的化合物相结合的药剂并具有治疗潜力的其他人源化单克隆抗体包括：阿波珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、阿替珠单抗(atlizumab)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)、比伐单抗美登醇(bivatuzumab mertansine)、坎珠单抗美登醇(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、塞妥珠单抗聚乙二醇(certolizumab pegol)、西弗丝妥珠单抗(cidfusituzumab)、西地妥珠单抗(cidtuzumab)、达利珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法利珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、吉妥单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、伊珠单抗奥佐米星(inotuzumabozogamicin)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、诺维珠单抗(nolovizumab)、努维珠单抗(numavizumab)、奥卡利珠单抗(ocrelizumab)、奥马佐单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、帕考珠单抗(pascolizumab)、派弗西妥珠单抗(pecfusituzumab)、派妥珠单抗(pectuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、来利珠单抗(ralivizumab)、兰尼单抗(ranibizumab)、来丝利维珠单抗(reslivizumab)、来丝利珠单抗(reslizumab)、来西维珠单抗(resyvizumab)、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、希普利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、他珠单抗四西坦(tacatuzumab tetraxetan)、他西珠单抗(tadocizumab)、他利珠单抗(talizumab)、特菲巴珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、土考妥珠单抗西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、土库西妥珠单抗(tucusituzumab)、恩维珠单抗(umavizumab)、乌珠单抗(urtoxazumab)、乌司奴单抗(ustekinumab)、维西珠单抗(visilizumab)、和抗介白素12(ABT-874/J695,WyethResearch and Abbott Laboratories)，抗介白素12为经过基因改造以识别介白素12p40蛋白的专门用于人序列的全长IgG1λ抗体。
化学治疗剂还包括“EGFR抑制剂”，其是指结合至EGFR或直接与EGFR交互作用并阻止或降低其信号传递活性的化合物，或者称为“EGFR拮抗剂”。这种药剂的实例包括抗体以及结合至EGFR的小分子。结合至EGFR的抗体的实例包括MAb 579(ATCC CRL HB 8506)、MAb455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb 528(ATCC CRL 8509)(参见，美国第4,943,533号专利，Mendelsohn等人)及其变异体，诸如嵌合225(C225或西妥昔单抗；
Figure BDA0004161870440000311
)和重塑的人225(H225)(参见，WO 96/40210，Imclone Systems Inc.)；IMC-11F8，一种完整的人EGFR靶向抗体(Imclone)；结合II型突变体EGFR的抗体(美国第5,212,290号专利)；如美国第5,891,996号专利中所述的结合EGFR的人源化和嵌合抗体；以及结合EGFR的人抗体，诸如ABX-EGF或帕尼单抗(参见WO98/50433，Abgenix/Amgen)；EMD 55900(Stragliotto等人，Eur.J.Cancer 32A：636-640(1996))；EMD7200(马妥珠单抗)，一种针对EGFR的人源化EGFR抗体，可与EGF和TGF-alpha两者都竞争以用于EGFR结合(EMD/Merck)；人EGFR抗体，HuMax-EGFR(GenMab)；全人抗体，其被称为E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3和E7.6.3，并在US 6,235,883中有所描述；MDX-447(Medarex Inc)；以及mAb 806或人源化mAb 806(Johns等人，J.Biol.Chem.279(29)：30375-30384(2004))。该抗EGFR抗体可与细胞毒性剂结合，从而产生免疫结合物(参见例如，EP659,439A2，Merck Patent GmbH)。EGFR拮抗剂包括小分子，诸如以下美国专利号中所述的化合物：5,616,582、5,457,105、5,475,001、5,654,307、5,679,683、6,084,095、6,265,410、6,455,534、6,521,620、6,596,726、6,713,484、5,770,599、6,140,332、5,866,572、6,399,602、6,344,459、6,602,863、6,391,874、6,344,455、5,760,041、6,002,008和5,747,498，以及以下PCT出版物的化合物：WO98/14451、WO98/50038、WO99/09016和WO99/24037。特定的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774，厄洛替尼，
Figure BDA0004161870440000321
Genentech/OSI Pharmaceuticals)；PD 183805(CI 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-二盐酸盐，Pfizer Inc.)；ZD1839，吉非替尼
Figure BDA0004161870440000322
4-(3'-氯-4'-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，AstraZeneca)；ZM 105180(6-胺基-4-(3-甲基苯基-胺基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，Boehringer Ingelheim)；PKI-166((R)-4-[[4-[(1-苯乙基)胺基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟苯基)-4-[(1-苯基乙基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)胺基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基胺基)-2-丁烯酰胺)(Wyeth)；AG1478(Pfizer)；AG1571(SU 5271；Pfizer)；双重EGFR/HER2酪胺酸激酶抑制剂，诸如拉匹替尼(
Figure BDA0004161870440000323
GSK572016或N-[3-氯-4-[(3-氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2-磺酰基)乙基]胺基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。
化学治疗剂还包括“酪胺酸激酶抑制剂”，其包括先前段落中所提及的EGFR靶向药物；小分子HER2酪胺酸激酶抑制剂，例如可从Takeda获得的TAK165；CP-724,714，其为ErbB2受体酪胺酸激酶的口服选择性抑制剂(Pfizer和OSI)；优先结合EGFR但抑制HER2和EGFR过表达细胞二者的双重HER抑制剂，例如EKB-569(可从Wyeth获得)；拉帕替尼(lapatinib)(GSK572016，可从Glaxo-SmithKline获得)，其为口服HER2和EGFR酪胺酸激酶抑制剂；PKI-166(可从Novartis获得)；泛HER抑制剂，例如卡奈替尼(canertinib)(CI-1033，Pharmacia)；Raf-1抑制剂，例如抑制Raf-1信号传递的反义药剂ISIS-5132，可从ISISPharmaceuticals获得；非HER靶向的TK抑制剂，例如甲磺酸伊马替尼(imatinib)(
Figure BDA0004161870440000331
可从Glaxo SmithKline获得)；多靶向酪胺酸激酶抑制剂，例如舒尼替尼(sunitinib)(
Figure BDA0004161870440000332
可从Pfizer获得)；VEGF受体酪胺酸激酶抑制剂，例如瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787/ZK222584，可从Novartis/Schering AG获得)；MAPK胞外调控激酶I抑制剂CI-1040(可从Pharmacia获得)；喹唑啉类，例如PD 153035,4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶类；嘧啶并嘧啶类；吡咯并嘧啶类，例如CGP 59326、CGP 60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶类，4-(苯基胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶类；姜黄素(二阿魏酰基甲烷、4,5-双(4-氟苯胺基)-酞酰亚胺)；含硝基噻吩部分的酪弗斯汀(tyrphostine)；PD-0183805(Warner-Lamber)；反义分子(例如，那些结合至编码HER的核酸的分子)；喹喔啉类(美国专利号5,804,396)；tryphostin(美国专利号5,804,396)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；泛HER抑制剂，例如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/Lilly)；甲磺酸伊马替尼
Figure BDA0004161870440000333
PKI 166(Novartis)；GW2016(GlaxoSmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；Semaxinib(Pfizer)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)，雷帕霉素(rapamycin)(sirolimus，
Figure BDA0004161870440000334
)；或如任何下列专利公布中所描述：美国专利号5,804,396；WO 1999/09016(American Cyanamid)；WO 1998/43960(AmericanCyanamid)；WO 1997/38983(Warner Lambert)；WO 1999/06378(Warner Lambert)；WO1999/06396(Warner Lambert)；WO 1996/30347(Pfizer,Inc)；WO 1996/33978(Zeneca)；WO1996/3397(Zeneca)和WO 1996/33980(Zeneca)。
化学治疗剂还包括地塞米松、干扰素、秋水仙碱、氯苯胺啶、环孢菌素、两性霉素、甲硝唑、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、胺磷汀、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活BCG、贝伐单抗、克拉屈滨、氯法拉滨、阿法达贝泊汀、Denileukin、右雷佐生、阿法依泊汀、Elotinib、非格司亭、醋酸组胺瑞林，Ibritumomab、干扰素alfa-2a、干扰素alfa-2b、来那度胺、左旋咪唑、美司钠、甲氧沙林、诺龙、奈拉滨、Nofetumomab、奥普瑞白介素、帕利夫明、帕米磷酸二钠、培加酶、培门冬酶、培非格司亭、培美曲塞二钠、普卡霉素、卟吩姆钠、奎纳克林、拉布立酶、沙格司亭、替莫唑胺、VM-26、6-TG、托瑞米芬、维甲酸、ATRA、缬沙星、唑来膦酸盐和唑来膦酸及其药用盐。
化学治疗剂还包括氢化可体松、醋酸氢化可体松、醋酸可体松、特戊酸巯基氢化可体松(tixocortol pivalate)、丙酮特安皮质醇(triamcinolone acetonide)、乙醇特安皮质醇、莫米松(mometasone)、安西奈德(amcinonide)、布地奈德(budesonide)、地松奈德(desonide)、氟轻松(fluocinonide)、氟轻松醋酸酯、倍他米松(betamethasone)、倍他米松磷酸钠、地塞米松(dexamethasone)、地塞米松磷酸钠、氟可龙(fluocortolone)、氢化可体松-17-丁酸盐、氢化可体松-17-戊酸盐、二丙酸阿氯米松(aclometasone dipropionate)、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯(prednicarbate)、氯倍他松(clobetasone)-17-丁酸盐、氯倍他松-17-丙酸盐、己酸氟可龙、特戊酸氟可龙和醋酸氟泼尼定(fluprednideneacetate)；免疫选择性抗炎肽(ImSAID)，例如苯丙胺酸-谷胺酰胺-甘胺酸(FEG)及其D-异构体形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics,LLC)；抗风湿药物，例如硫唑嘌呤(azathioprine)、环孢素(cyclosporine A)、D-青霉素、金盐、羟氯喹(hydroxychloroquine)、来氟米特米诺环素(leflunomideminocycline)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断剂，例如依那西普(etanercept，Enbrel)、英夫利昔单抗(infliximab，Remicade)、阿达木单抗(adalimumab，Humira)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol，Cimzia)、高利单抗(golimumab，Simponi)、介白素-1(IL-1)阻断剂，例如阿那白滞素(anakinra，Kineret)、T细胞共刺激阻断剂，例如阿巴西普(abatacept，Orencia)、介白素-6(IL-6)阻断剂，例如托珠单抗(tocilizumab，
Figure BDA0004161870440000341
)；介白素-13(IL-13)阻断剂，例如利比克株单抗(lebrikizumab)；干扰素α(IFN)阻断剂，例如罗利珠单抗(Rontalizumab)；β7-整联蛋白阻断剂，例如rhuMAbβ7；IgE途径阻断剂，例如抗M1prime；分泌型同三聚LTa3和膜结合型异三聚LTa1/β2阻断剂，例如抗淋巴毒素α(LTa)；放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；混杂调查性药剂，例如硫普汀(thioplatin)、PS-341、丁酸苯酯、ET-18-OCH3或法呢基转移酶抑制剂(L-739749，L-744832)；多酚，例如槲皮素，白藜芦醇，白皮杉醇，没食子酸表没食子儿茶精，茶黄素，黄烷醇，原花青素，桦木酸及其衍生物；自噬抑制剂，例如氯喹；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，
Figure BDA0004161870440000351
)；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类；白桦脂脂酸(betulinic acid)；乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)和9-胺基喜树碱)；鬼臼毒素；替加氟(tegafur，
Figure BDA0004161870440000352
)；贝沙罗汀(bexarotene，
Figure BDA0004161870440000353
)；二膦酸盐类，例如氯膦酸盐(例如，
Figure BDA0004161870440000354
或
Figure BDA0004161870440000355
)、依替膦酸钠(etidronate，
Figure BDA0004161870440000356
)、NE-58095、唑来膦酸(zoledronicacid)/唑来膦酸盐
Figure BDA0004161870440000357
阿仑膦酸盐(alendronate，
Figure BDA0004161870440000358
)、帕米膦酸盐(pamidronate，
Figure BDA0004161870440000359
)、替鲁膦酸盐(tiludronate，
Figure BDA00041618704400003510
)或利塞膦酸盐(risedronate，
Figure BDA00041618704400003511
)；和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，例如
Figure BDA00041618704400003512
疫苗；哌立福辛(perifosine)、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布(celecoxib)或依托昔布(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如，PS341)；CCI-779；替吡法尼(tipifarnib，R11577)；欧拉菲尼(orafenib)、ABT510；Bcl-2抑制剂，例如奥利默森钠(oblimersen sodium，
Figure BDA00041618704400003513
)、匹杉琼(pixantrone)；法呢基转移酶抑制剂，例如洛那法尼(lonafarnib)(SCH 6636，SARASARTM)；和上述任一项的药用盐、酸或衍生物；以及上述两项或多项的组合，例如CHOP(环磷酰胺、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱和普赖苏浓联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(oxaliplatin)(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸(leucovorin)的治疗方案的缩写)。
化学治疗剂还包括具有镇痛、退热和抗发炎作用的非类固醇抗炎药。NSAID包括环氧化酶的非选择性抑制剂。NSAID的具体实例包括：阿斯匹林；丙酸衍生物，诸如伊布洛芬、非诺洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、氟白普洛芬(flurbiprofen)、奥沙普嗪(oxaprozin)和萘普生(naproxen)；乙酸衍生物，诸如吲哚美洒辛、舒林酸、依托度酸(etodolac)、双氯芬酸(diclofenac)；烯醇酸衍生物，诸如吡罗昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)、替诺昔康(tenoxicam)、屈昔康(droxicam)、氯诺昔康(lornoxicam)和伊索昔康(isoxicam)；芬那酸(fenamic acid)衍生物，诸如甲芬那酸(mefenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、氟芬那酸(flufenamic acid)、托芬那酸(tolfenamic acid)；以及COX-2抑制剂，诸如塞来昔布(celecoxib)、依托考昔(etoricoxib)、罗美昔布(lumiracoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、罗非昔布(rofecoxib)和伐地昔布(valdecoxib)。NSAID可适用于病情的症状缓解，诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、发炎性关节炎、关节黏连性脊椎炎、牛皮癣性关节炎、Reiter氏综合征、急性痛风、经痛、转移性骨痛、头痛和偏头痛、术后疼痛、发炎症和组织损伤引起的轻度至中度疼痛、发热、肠阻塞和肾绞痛。
如本文所使用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能并/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如，甲胺蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)，多柔比星、霉法兰、丝裂霉素C、氯芥苯丁酸、道诺霉素或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如核酸酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，包括其片段和/或变异体；以及下文所公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
“病症”是将从治疗中受益的任何病情，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理性情况。在一个方面，该病症为癌症，例如多发性骨髓瘤(MM)。
术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”是指与某种程度的异常细胞增殖相关的病症。在一个方面，该细胞增殖性病症为癌症。在一个方面，该细胞增殖性病症为肿瘤。
如本文所用，术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论恶性或良性，和所有癌前和癌性细胞和组织。如本文所述，术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”并不互相排斥。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述了哺乳动物中通常以不受调控的细胞生长/增殖为特征的生理情况。癌症方面包括实体瘤癌症和非实体瘤癌症。癌症的实例包括但不限于B细胞增殖性病症，诸如多发性骨髓瘤(MM)，其可为复发性或难治性MM。MM可为例如典型MM(例如，免疫球蛋白G(IgG)MM、IgA MM、IgD MM、IgE MM或IgM MM)、轻链MM(LCMM)(例如，λ轻链MM或κ轻链MM)或非分泌型MM。MM可具有一种或多种细胞遗传学特征(例如高风险细胞发生特征)，例如t(4；14)、t(11；14)、t(14；16)和/或del(17p)，如表1和Sonneveld等人,Blood,127(24)：2955-2962,2016中提供的国际骨髓瘤工作组(IMWG)准则中所述，和/或1q21，如Chang等人,Bone Marrow Transplantation,45：117-121,2010中所述。细胞发生特征可例如使用荧光原位杂交(FISH)检测。
表1.MM的细胞发生特征
Figure BDA0004161870440000371
术语“B细胞增殖性病症”或“B细胞恶性病变”是指与某种程度的异常B细胞增殖相关的病症，且包括例如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和骨髓增生不良综合征。在一个实施例中，该B细胞增殖性病症为淋巴瘤，例如非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)，包括例如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性DLBCL)。在另一实施例中，该B细胞增殖性病症为白血病，例如慢性淋巴球白血病(CLL)。癌症的其他具体实例还包括生发中心B细胞样(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、活化B细胞样(ABC)DLBCL、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴性白血病(CLL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、小淋巴球白血病(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LL)、瓦氏巨球蛋白血症(Waldenstrommacroglobulinemia，WM)、中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma，BL)、B细胞幼淋巴球白血病、脾边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、脾淋巴瘤/白血病、无法分类、脾弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤、变异型毛细胞白血病、重链病(α重链病、γ重链病、μ重链病)、浆细胞骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿滤泡性淋巴瘤、原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、CNS的原发性DLBCL、原发性皮肤DLBCL、腿型、老年人EBV阳性DLBCL、与慢性炎症相关的DLBCL、淋巴瘤样肉芽肿、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、ALK阳性大B细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、HHV8相关多中心卡斯特莱曼病(Castleman disease)引起的大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤(无法分类且具有介于DLBCL与伯基特氏淋巴瘤之间的特征的B细胞淋巴瘤，以及无法分类并具有介于DLBCL与经典霍奇金氏淋巴瘤之间的特征的B细胞淋巴瘤)。癌症的更多实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性病，包括B细胞淋巴瘤。此类癌症的更具体实例包括但不限于低级/滤泡性NHL；小淋巴球(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞NHL；大块病NHL；AIDS相关淋巴瘤；和急性淋巴母细胞白血病(ALL)；慢性骨髓母细胞性白血病；和移植后淋巴增生性病症(PTLD)。实体肿瘤的实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric/stomach cancer)，包括胃肠道癌和胃肠道间质癌、胰脏癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney/renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、肢端雀斑样痣黑色素瘤、结节性黑色素瘤、以及与母斑病(phakomatoses)相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯氏综合征(Meigs'syndrome)、脑癌以及头颈癌和相关转移。在某些实施例中，适合用通过本发明抗体进行治疗的癌症包括乳癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、类癌、头颈癌、卵巢癌和间皮瘤。
“效应子功能(effector function)”是指由抗体的Fc区结构域引起的那些生物活性，其随抗体同型而变化。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖细胞介导细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”涉及在补体存在下目标细胞的裂解。补体经典途径的活化是通过将补体系统的第一组分(C1q)结合至与其同源抗原结合的抗体(适当次类别的)而开始的。为了评估补体的活化，可进行CDC测定，例如Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述的。
“抗体依赖细胞介导细胞毒性(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity)”或“ADCC”是指细胞毒性的一种形式，其中结合到出现在某些细胞毒性细胞(例如，自然杀手(NK)细胞、嗜中性球和巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)上的分泌Ig使这些细胞毒性效应细胞能特异性结合至带有抗原的目标细胞，并随后用细胞毒素剂杀伤目标细胞。该抗体“武装”细胞毒性细胞且对于这种杀伤是绝对必需的。用于介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，然而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达汇总于Ravetch和Kinet的论文的第464页的表3中。Annu.Rev.Immunol.9:457-92,1991。为了评估所关注分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定，例如美国专利号5,500,362或5,821,337中所述。用于这种测定的有用效应细胞包括周边血液单核细胞(PBMC)和自然杀手(NK)细胞。替代性地或另外地，可体内评估所关注ADCC活性，例如在动物模型中，如Clynes等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA.95:652-656,1998中所公开的。
如本文所使用，“复合物”或“复合的”是指两个或以上分子的联合，所述两个或以上分子通过键和/或力(例如，凡得瓦力、疏水力、亲水力)相互作用并且所述两个或以上分子不是肽键。在一个方面，该复合物是异源多聚体。应该理解的是，如本文所使用，术语“蛋白质复合物”或“多肽复合物”包括具有非蛋白质实体的复合物(例如，包括但不限于，化学分子，诸如毒素或检测剂)，所述非蛋白质实体结合于该蛋白质复合物中的蛋白质。
如本文所使用，病症或疾病的“延迟进展”意思是推迟、阻碍、减缓、延迟、稳定和/或推迟该疾病或病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的发展。此延迟可具有不同的时间长度，取决于正在被治疗的疾病和/或个体的病史。因为对于本领域技术人员是显而易见的，因此充分或显著延迟可实际上涵盖预防，使得该个体不发展该疾病。举例而言，可推迟晚期癌症，诸如癌转移发展。
本发明的化合物(例如抗FcRH5/抗CD3 T细胞依赖性双特异性抗体(TDB))或其组合物(例如药物组合物)的“有效量”至少为达成所需治疗或预防结果所需要的最小数量，例如特定病症(例如细胞增殖性病症，如癌症)的可测改善或预防。本文中的有效量可根据诸如以下因素而变化：患者的疾病状态、年龄、性别和体重，以及抗体引发个体内预期反应的能力。有效量也是该治疗的任意毒性或有害效应被治疗上有益的效应超过的量。对于预防性使用，有益或期望的结果包括：消除或降低风险、减轻严重程度或延迟疾病发作，包括疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症以及疾病发展过程中出现的中间病理表型。对于治疗用途，有益或期望的结果包括诸如以下的临床结果：减少由疾病引起的一种或多种症状、提高患病者的生活质量、降低治疗疾病所需的其他药物的剂量、增强另一药剂的作用(诸如经由靶向)、推迟疾病进展和/或延长存活期。就癌症或肿瘤而言，药物的有效量可具有以下效果：减少癌细胞数；减小肿瘤尺寸；抑制(即，在一定程度上减缓或在理想情况下终止)癌细胞浸润入周边器官中；抑制(即，在一定程度上减缓或在理想情况下终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与该病变相关的症状中的一者或多者。有效量可于一次或多次投药中施用。出于本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效量为足以直接或间接完成预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景中理解的，药物、化合物或药物组合物的有效量可与或不与另一药物、化合物或药物组合物联合而达成。因此，在施用一种或多种治疗剂的背景中可考虑“有效量”，并且若单一药剂与一种或多种其他药剂联合而可达成或已经达成所期望的结果，则该单一药剂可视为以有效量给出。
如本文所用，“总生存率”或“OS”是指在特定持续时间后组中可能存活的个体的百分比。
如本文所用，“客观缓解率”(ORR)是指使用国际骨髓瘤工作组缓解标准(表4)确定的严格完全缓解(sCR)、完全缓解(CR)、极好部分缓解(VGPR)和部分缓解(PR)率的总和。
术语“抗原决定位”是指抗体结合的抗原分子上的特定位点。在一些方面，抗体结合的抗原分子上的特定位点由羟基自由基足迹分析确定。在一些方面，抗体结合的抗原分子上的特定位点由结晶学确定。
当用于本文时，“生长抑制剂”是指在体外或体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个方面，生长抑制剂为生长抑制抗体，其防止或减少表达该抗体所结合的抗原的细胞的增殖。在另一方面，该生长抑制剂可为一种显著降低S期细胞百分比的抑制剂。各方面的生长抑制剂包括阻断细胞周期进程(在S期以外的地方)的药剂，例如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。典型M期阻滞剂包括长春花(vincas)(长春新碱和长春碱)、紫杉烷类和拓扑异构酶II抑制剂，例如多柔比星、表柔比星(epirubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。阻滞G1的那些药剂也会涌出至S期阻滞中，例如DNA烷化剂，诸如他莫昔芬(tamoxifen)、强体松(prednisone)、达喀尔巴嗪(dacarbazine)、氮芥、顺铂、甲胺蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶和ara-C，更多信息可见于Mendelsohn和Israel编，The Molecular Basis of Cancer，第1章，标题为“Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs”，Murakami等人(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如，第13页中所述。紫杉烷类(紫杉醇和多西紫杉醇)都是抗癌药，均来源于紫杉。多西紫杉醇(
Figure BDA0004161870440000421
Rhone-Poulenc Rorer)源自欧洲紫杉，是紫杉醇的半合成类似物(
Figure BDA0004161870440000422
Bristol-Myers Squibb)。紫杉醇和多西紫杉醇促进微管蛋白二聚体的微管组装，并通过防止解聚作用稳定微管，从而抑制细胞的有丝分裂。
“免疫结合物”为与一个或多个异源分子结合的抗体，其包括但不限于细胞毒性剂。
术语“免疫调节剂”是指修饰免疫系统反应或免疫系统功能的一类分子。免疫调节剂包括但不限于PD-L1轴结合拮抗剂、沙利度胺(α-N-邻苯二甲酰亚胺-戊二酰亚胺)及其类似物、
Figure BDA0004161870440000423
(阿普司特)、
Figure BDA0004161870440000424
(来那度胺)和
Figure BDA0004161870440000425
(泊马度胺)，以及其药用盐或酸。
“受试者”或“个体”为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人类灵长类动物诸如猴)、兔以及啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些方面，该个体或受试者为人类。
“单离的”蛋白质或多肽是从其自然环境的组分中分离出来的蛋白质或多肽。在一些方面，将抗体纯化至大于95％或99％纯度，通过(例如)电泳(例如SDS-PAGE、等电位聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)来测定。
“分离的”核酸是指已经与其天然环境的组分分离的核酸分子。分离的核酸包括通常包含核酸分子的细胞中所含的核酸分子，但是核酸分子存在于染色体外或与其自然染色体位置不同的染色体位置。
术语“PD-L1轴结合拮抗剂”是指一种分子，其抑制PD-L1轴结合配偶体与其一个或多个结合配偶体的交互作用，从而消除由PD-L1信号传递轴上的信号传递引起的T细胞功能障碍，其结果是恢复或增强T细胞功能(例如，增殖、细胞因子产生、靶细胞杀灭)。如本文所用，PD-L1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-L1、PD-L2)的交互作用引起的信号转导。在一些方面，PD-1结合拮抗剂为抑制PD-1与其一种或多种结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1到PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括抗PD-1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2的交互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-1结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-1介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-1结合拮抗剂为抗PD-1拮抗剂抗体。在具体方面，PD-1结合拮抗剂为MDX-1106(纳武利尤单抗(nivolumab))。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为MK-3475(帕博利珠单抗(pembrolizumab))。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为AMP-224。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为MED1-0680。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为PDR001。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为REGN2810。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1、B7-1)的交互作用引起的信号转导。在一些方面，PD-L1结合拮抗剂为抑制PD-L1与其结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1到PD-1和/或B7-1的结合。在一些方面，该PD-L1结合拮抗剂包括抗PD-L1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一种或多种结合伴侣(例如PD-1或B7-1)的交互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-L1结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-L1介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-L1结合拮抗剂为抗PD-L1拮抗剂抗体。在又一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MPDL3280A(阿托珠单抗)，以商品名TECENTRIQTM进行销售，其WHO药物信息(国际非专利药物名称)见：Recommended INN：List 74，第29卷第3期，2015(见第387页)。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为YW243.55.S70。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MDX-1105。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MSB0015718C。在又一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-1)的交互作用引起的信号转导。在一些方面，PD-L2结合拮抗剂为抑制PD-L2与其一种或多种结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些方面，该PD-L2结合拮抗剂包括抗PD-L2抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合伴侣(例如PD-1)的交互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-L2结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-L2介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-L2结合拮抗剂为免疫粘附素。
除非另有说明，否则如本文所使用的术语“蛋白质”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然蛋白质，该脊椎动物包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如，人类)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。该术语涵盖“全长”未经加工的蛋白质以及在细胞中加工产生的任何形式的蛋白质。该术语还涵盖天然生成的蛋白质变异体，例如，剪接变异体或对偶基因变异体。
相对于参考多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”被定义为候选序列中氨基酸残基与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比，在比对序列并引入差异后(如有必要)，可实现最大的序列同一性百分比，并且不考虑将任何保守性替换作为序列同一性的一部分。为确定氨基酸序列同一性百分比的目的而进行的比对可透过本领域中技术范围内的各种方式实现，例如，使用公众可取得的计算机软件诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域的技术人员可确定用于比对序列的合适参数，包括在所比较的序列全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生％氨基酸序列同一性值。该ALIGN-2序列比较计算机程序由建南德克公司(Genentech，Inc.)编写，并且源代码已与用户文档一起存盘于美国版权局，华盛顿特区，20559，并以美国版权注册号TXU510087进行注册。该ALIGN-2程序可从加利福尼亚南旧金山的建南德克公司(Genentech，Inc.)公开获得，还可以从源代码进行编译。该ALIGN-2程序应编译为在UNIX操作系统(包括数字UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数均由该ALIGN-2程序设置，并且没有变化。
在使用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A对、与、或相对于给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(其替代性地可表述为给定氨基酸序列A，其对、与、或相对于给定氨基酸序列B具有或包含一定％的氨基酸序列同一性)计算如下：
100乘以分数X/Y
其中X是该序列比对程序ALIGN-2在A与B程序比对中评分为同一匹配的氨基酸残基数，Y是B中氨基酸残基的总数。应当理解的是，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的％氨基酸序列同一性将不等于B与A的％氨基酸序列同一性。除非另有特别说明，否则如前一段所述，使用该ALIGN-2计算机程序获得本文使用的所有％氨基酸序列同一值。
术语“药物制剂”是指以下制剂，其形式为允许其中所含的活性成分的生物活性有效，并且不包含将要施用该制剂的受试者具有不可接受的毒性的其他组分。
“药用载体”是指药物制剂中除对受试者无毒的活性成分以外的成分。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
“放射疗法”意指使用定向的伽马射线或β射线来诱导对细胞的充分损害，从而限制其正常功能的能力或完全破坏细胞。将理解的是，在本技术领域中将有许多方法可确定治疗的剂量和持续时间。典型治疗为一次施用，且典型剂量范围为每天10至200单位(Grays)。
如本文中所使用，“治疗(treatment)”(及其语法变体，诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指试图改变正在接受治疗的受试者的疾病自然病程的临床干预，并且可进行预防或在临床病理过程中执行。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减轻疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、缓解或改善预后。在一些方面，本发明的抗体(例如，本发明的抗FcRH5/抗CD3 TDB)用于延迟疾病的发展或减慢疾病的进展。
“降低或抑制”意指引起总体减少的能力，例如，为20％或更大、50％或更大、或为75％、85％、90％、95％或更大。在某些方面，减少或抑制可指经抗体Fc区介导的抗体效用子功能，此类效应子功能具体包括补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体-依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
根据本发明，术语“疫苗”涉及药物制剂(药物组合物)或产品，在施用该药物制剂或产品后诱导免疫反应，特别是细胞免疫反应，其识别并攻击病原体或患病细胞例如癌细胞。疫苗可用于预防或治疗疾病。疫苗可为癌症疫苗。如本文所使用，“癌症疫苗”是一种刺激受试者针对癌症产生免疫反应的组合物。癌症疫苗通常由与癌症有关的物质或细胞(抗原)来源所组成，其对于受试者可能是自体的(来自自身)或同种异体的(来自别处)，以及包含其他成分(例如佐剂)，以进一步刺激和增强肿瘤对抗原的免疫反应。癌症疫苗可刺激受试者的免疫系统，以产生针对一种或几种特定抗原的抗体，和/或产生杀手T细胞来攻击具有那些抗原的癌细胞。
如本文所使用，“施用”意指给予受试者化合物(例如，本发明的抗FcRH5/抗CD3TDB)剂量的方法。在一些方面，在本文的方法中所使用的组合物是静脉内施用的。例如，本文所描述的方法中所用的组合物可通过例如肌内、静脉内、皮内、经皮、动脉内、腹膜内、病灶内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、外用、肿瘤内、腹膜、皮下、结膜下、囊内、黏膜、心包内、脐内、眼内、口服、外用、局部、经吸入、经注射、经输注、经连续输注、经局部直接灌注浴靶细胞、经导管、经灌洗、经乳脂或脂质组合物进行施用。该施用方法可以根据多种因素而变化(例如，正在施用的化合物或组合物以及正在治疗的病状、疾病或病症的严重程度)。
除非另有说明，否则如本文所用，“CD38”是指在许多免疫细胞表面发现的CD38糖蛋白，包括CD4+、CD8+、B淋巴球和自然杀伤(NK)细胞，且包括来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人类)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)的任何天然CD38。与正常淋巴球和骨髓细胞相比，CD38在骨髓瘤细胞上的表达水平更高且更均匀。该术语涵盖“全长”未经加工的CD38以及在细胞中加工所产生的任何形式的CD38。该术语还涵盖天然CD38变异体，例如剪接变异体或等位基因变异体。CD38在本领域中也被称为分化簇38、ADP-核糖基环化酶1、cADPr水解酶1和环状ADP-核糖水解酶1。CD38由该CD38基因编码。示例性人类CD38的核酸序列如NCBI参考序列：NM_001775.4或SEQ ID NO：33中所示。由CD38编码的示例性人类CD38蛋白的氨基酸序列如UniProt寄存编号P28907或SEQ ID NO：34中所示。
术语“抗CD38抗体”涵盖所有以足够亲和力结合CD38以用作靶向表达抗原的细胞的治疗剂且不会与其他蛋白质，诸如下述测定中的阴性对照蛋白质发生显著交叉反应的抗体。例如，抗CD38抗体可与MM细胞表面的CD38结合，且经由活化补体依赖性细胞毒性、ADCC、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和Fc交联介导的细胞凋亡来介导细胞裂解，导致恶性细胞的消耗和整体癌症负担的减少。抗CD38抗体还可通过抑制核糖基环化酶活性和刺激CD38的环腺苷二磷酸核糖(cADPR)水解酶活性来调节CD38酶活性。在某些方面，结合至CD38的抗CD38抗体的解离常数(KD)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9至10-13M)。在某些方面，抗CD38抗体可结合至人类CD38和黑猩猩CD38两者。抗CD38抗体还包括抗CD38拮抗剂抗体。还涵盖双特异性抗体，其中该抗体的一个臂结合CD38。抗CD38抗体的此定义还包括先前抗体的功能片段。结合CD38的抗体的实例包括：达雷木单抗
Figure BDA0004161870440000471
(美国专利号：7,829,673和美国公开号：20160067205A1)；“MOR202”(美国专利号：8,263,746)；和艾沙妥昔单抗(SAR-650984)。
II.治疗方法
本发明部分基于使用具有抗片段可结晶受体样5(FcRH5)/抗分化簇3(CD3)双特异性抗体的分次、剂量递增给药方案治疗患有癌症(例如，多发性骨髓瘤(MM))的受试者的方法。该方法有望减少或抑制不需要的治疗效果，包括细胞因子驱动的毒性(例如，细胞因子释放综合征(CRS))、输注相关反应(IRR)、巨噬细胞活化综合征(MAS)、神经系统毒性、重度肿瘤溶解综合征(TLS)、嗜中性球减少症、血小板减少症和/或肝酵素升高。因此，该方法适用于治疗受试者，同时实现更有利的受益-风险情形。
本发明提供了适用于治疗患有癌症(例如，多发性骨髓瘤)的受试者的方法，该方法包括以分次、剂量递增给药方案向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体(即抗FcRH5/抗CD3抗体)。
A.给药方案
单步递增给药方案
在一些方面，本发明提供了治疗患有癌症(例如，多发性骨髓瘤(MM))的受试者的方法，其包含以单步递增给药方案向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体。
在一些方面，本发明提供了一种治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)和第二剂量(C1D2)，其中该C1D1为约0.05mg至约180mg(例如约0.1mg至约160mg、约0.5mg至约140mg、约1mg至约120mg、约1.5mg至约100mg、约2.0mg至约80mg、约2.5mg至约50mg、约3.0mg至约25mg、约3.0mg至约15mg、约3.0mg至约10mg或约3.0mg至约5mg)，且该C1D2为约0.15mg至约1000mg(例如约0.5mg至约800mg、约1mg至约700mg、约5mg至约500mg、约10mg至约400mg、约25mg至约300mg、约50mg至约250mg、约100mg至约225mg或约150mg至约200mg)。
在一些方面，本发明提供了一种治疗患有癌症(例如，多发性骨髓瘤)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中(a)第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1；第1周期，剂量1)和第二剂量(C1D2；第1周期，剂量2)，其中该C1D1小于C1D2，且其中该C1D1为约0.05mg至约180mg(例如约0.1mg至约160mg、约0.5mg至约140mg、约1mg至约120mg、约1.5mg至约100mg、约2.0mg至约80mg、约2.5mg至约50mg、约3.0mg至约25mg、约3.0mg至约15mg、约3.0mg至约10mg或约3.0mg至约5mg)，且C1D2为约0.15mg至约1000mg(例如约0.5mg至约800mg、约1mg至约700mg、约5mg至约500mg、约10mg至约400mg、约25mg至约300mg、约50mg至约100mg、约100mg至约100mg或约85mg至约200mg)；以及(b)第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1；第2周期，剂量1)，其中该C2D1等于或大于该C1D2且为约0.15mg至约1000mg(例如约0.5mg至约800mg、约1mg至约700mg、约5mg至约500mg、约10mg至约400mg、约25mg至约300mg、约40mg至约200mg、约50mg至约100mg、约75mg至约100mg或约85mg至约100mg)。
在一些方面，(a)该C1D1为约0.5mg至约19.9mg(例如约1mg至约18mg、约2mg至约15mg、约3mg至约10mg、约3.3mg至约6mg或约3.4mg至约4mg，例如约3mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5mg、5.2mg、5.6mg、5.8mg、6mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10mg、10.2mg、10.4mg、10.6mg、10.8mg、11mg、11.2mg、11.4mg、11.6mg、11.8mg、12mg、12.2mg、12.4mg、12.6mg、12.8mg、13mg、13.2mg、13.4mg、13.6mg、13.8mg、14mg、14.2mg、14.4mg、14.6mg、14.8mg、15mg、15.2mg、15.4mg、15.6mg、15.8mg、16mg、16.2mg、16.4mg、16.6mg、16.8mg、17mg、18.2mg、18.4mg、18.6mg、18.8mg、19mg、19.2mg、19.4mg、19.6mg或19.8mg)，且(b)该C1D2为约20mg至约600mg(例如约30mg至500mg、40mg至400mg、60mg至350mg、80mg至300mg、100mg至200mg或140mg至180mg，例如约20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。
在一些方面，该C1D1为约1.2mg至约10.8mg且该C1D2为约80mg至约300mg。在一些方面，该C1D1为约3.6mg且该C1D2为约198mg。在一些方面，该C1D1为1.2mg至10.8mg且该C1D2为80mg至300mg。在一些方面，该C1D1为3.6mg且该C1D2为198mg。
在一些实例中，上述方法可包括三周或21天的第一给药周期。在一些实例中，该方法可包括分别在第一给药周期的第1和第8天或大约第1和第8天向受试者施用C1D1和C1D2。
双步递增给药方案
在其他方面，本发明提供了治疗患有癌症(例如，多发性骨髓瘤(MM))的受试者的方法，其包含以双步递增给药方案向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体。
在一些方面，本公开提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.2mg至约0.4mg(例如约0.20mg、0.21mg、0.22mg、0.23mg、0.24mg、0.25mg、0.26mg、0.27mg、0.28mg、0.29mg、0.30mg、0.31mg、0.32mg、0.33mg、0.34mg、0.35mg、0.36mg、0.37mg、0.38mg、0.39mg或0.40mg)；该C1D2大于C1D1，且该C1D3大于C1D2。在一些方面，该C1D1为约0.3mg。
在一些方面，该C1D1为0.2mg至0.4mg(例如为0.20mg、0.21mg、0.22mg、0.23mg、0.24mg、0.25mg、0.26mg、0.27mg、0.28mg、0.29mg、0.30mg、0.31mg、0.32mg、0.33mg、0.34mg、0.35mg、0.36mg、0.37mg、0.38mg、0.39mg或0.40mg)。在一些方面，该C1D1为0.3mg。
在一些方面，本公开提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该C1D1为约0.01mg至约2.9mg，该C1D2为约3mg至约19.9mg，且该C1D3为约20mg至约600mg。
在一些方面，本发明提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中(a)第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该C1D1和该C1D2各自小于C1D3，且其中该C1D1为约0.01mg至约2.9mg，该C1D2为约3mg至约19.9mg，且该C1D3为约20mg至约600mg；以及(b)第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中该C2D1等于或大于该C1D3且为约20mg至约600mg。
在一些方面，该C1D1为约0.05mg至约2.5mg、约0.1mg至约2mg、约0.2mg至约1mg或约0.2mg至约0.4mg(例如约0.01mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.9mg、1mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg或2.9mg)。在一些方面，该C1D1为约0.3mg。
在一些方面，该C1D1为0.05mg至2.5mg、0.1mg至2mg、0.2mg至1mg或0.2mg至0.4mg(例如0.01mg、0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.9mg、1mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg或2.9mg)。在一些方面，该C1D1为0.3mg。
在一些方面，该C1D2为约3mg至约19.9mg(例如约3mg至约18mg、约3.1mg至约15mg、约3.2mg至约10mg、约3.3mg至约6mg或约3.4mg至约4mg，例如为约3mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5mg、5.2mg、5.6mg、5.8mg、6mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10mg、10.2mg、10.4mg、10.6mg、10.8mg、11mg、11.2mg、11.4mg、11.6mg、11.8mg、12mg、12.2mg、12.4mg、12.6mg、12.8mg、13mg、13.2mg、13.4mg、13.6mg、13.8mg、14mg、14.2mg、14.4mg、14.6mg、14.8mg、15mg、15.2mg、15.4mg、15.6mg、15.8mg、16mg、16.2mg、16.4mg、16.6mg、16.8mg、17mg、18.2mg、18.4mg、18.6mg、18.8mg、19mg、19.2mg、19.4mg、19.6mg或19.8mg)。在一些方面，该C1D2为约3.2mg至约10mg。在一些方面，该C1D2为约3.6mg。
在一些方面，该C1D2为约3mg至19.9mg(例如3mg至18mg、3.1mg至15mg、3.2mg至10mg、3.3mg至6mg或3.4mg至4mg，例如3mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5mg、5.2mg、5.6mg、5.8mg、6mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10mg、10.2mg、10.4mg、10.6mg、10.8mg、11mg、11.2mg、11.4mg、11.6mg、11.8mg、12mg、12.2mg、12.4mg、12.6mg、12.8mg、13mg、13.2mg、13.4mg、13.6mg、13.8mg、14mg、14.2mg、14.4mg、14.6mg、14.8mg、15mg、15.2mg、15.4mg、15.6mg、15.8mg、16mg、16.2mg、16.4mg、16.6mg、16.8mg、17mg、18.2mg、18.4mg、18.6mg、18.8mg、19mg、19.2mg、19.4mg、19.6mg或19.8mg)。在一些方面，该C1D2为3.2mg至10mg。在一些方面，该C1D2为3.6mg。
在一些方面，该C1D3为约20mg至约600mg(例如约30mg至约500mg、约40mg至约400mg、约60mg至约350mg、约80mg至约300mg、约100mg至约200mg或约140mg至约180mg，例如约20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，该C1D3为约80mg至约300mg。在一些方面，该C1D3为约160mg。
在一些方面，该C1D3为20mg至600mg(例如30mg至500mg、40mg至400mg、60mg至350mg、80mg至300mg、100mg至200mg或140mg至180mg，例如20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，该C1D3为80mg至300mg。在一些方面，该C1D3为160mg。
在一些方面，该方法仅包含单一给药周期(例如，包含C1D1、C1D2和C1D3的给药周期)。在其他方面，该给药方案进一步包含第二给药周期，该第二给药周期至少包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。在一些方面，该C2D1等于或大于该C1D3且为约20mg至约600mg(例如约30mg至约500mg、约40mg至约400mg、约60mg至约350mg、约80mg至约300mg、约100mg至约200mg或约140mg至约180mg，例如约20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，该C2D1为约80mg至约300mg。在一些方面，该C2D1为约160mg。
在一些方面，该C2D1为20mg至600mg(例如30mg至500mg、40mg至400mg、60mg至350mg、80mg至300mg、100mg至200mg或140mg至180mg，例如20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，该C2D1为80mg至300mg。在一些方面，该C2D1为160mg。在一些方面，该C2D1为159mg。
替代性地，在任何上述实施例中，该C1D1可为约0.01mg至约60mg(例如约0.05mg至约50mg、约0.01mg至约40mg、约0.1mg至约20mg、约0.1mg至约10mg、约0.1mg至约5mg、约0.1mg至约2mg、约0.1mg至约1.5mg、约0.1mg至约1.2mg、约0.1mg至约0.5mg或约0.2mg至约0.4mg，例如约0.3mg，例如0.3mg)，该C1D2可为约约0.05mg至约180mg(例如约0.1mg至约160mg、约0.5mg至约140mg、约1mg至约120mg、约1.5mg至约100mg、约2.0mg至约80mg、约2.5mg至约50mg、约3.0mg至约25mg、约3.0mg至约15mg、约3.0mg至约10mg、约3.0mg至约5mg或约3.0mg至约4.0mg，例如约3.6mg，例如3.6mg)，且该C1D3可为约约0.15mg至约1000mg(例如约0.5mg至约800mg、约1mg至约700mg、约5mg至约500mg、约10mg至约400mg、约25mg至约300mg、约40mg至约200mg、约50mg至约190mg、约140mg至约180mg或约150mg至约170mg，例如约160mg，例如160mg)；且在包含第二给药周期的方面，该C2D1可为约0.15mg至约1000mg(例如约0.5mg至约800mg、约1mg至约700mg、约5mg至约500mg、约10mg至约400mg、约25mg至约300mg、约40mg至约200mg、约50mg至约190mg、约140mg至约180mg或约150mg至约170mg，例如约160mg，例如160mg)。
在一些实例中，第一给药周期的长度为三周或21天。在一些实例中，该方法可包括分别在第一给药周期的第1天、第8天和第15天或大约第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。
另外的给药周期
在一些实例中，上述方法可包括三周或21天的第二给药周期。在一些情况下，该方法可包括在第二给药周期的第1天或大约第1天向受试者施用该C2D1。
在该方法至少包括第二给药周期的一些实例中，该方法可包括一个或多个额外给药周期。在一些实例中，该给药方案包含1至17个额外给药周期(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个额外给药周期，例如1-3个额外给药周期、1-5个额外给药周期、3-8个额外给药周期、5-10个额外给药周期、8-12个额外给药周期、10-15个额外给药周期、12-17个额外给药周期或15-17个额外给药周期，即，该给药方案包括一个或多个额外给药周期C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18和C19。在一些实施例中，一个或多个额外给药周期中的每一个的长度为7天、14天、21天或28天。在一些实施例中，一个或多个额外给药周期中的每一个的长度为5天至30天，例如5至9天、7至11天、9至13天、11至15天、13至17天、15至19天、17至21天、19至23天、21至25天、23至27天或25至30天。在一些实例中，一个或多个额外给药周期中的每一个的长度为三周或21天。在一些实例中，一个或多个额外给药周期中的每一个包含双特异性抗体的单一剂量。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的双特异性抗体的剂量等于该C2D1，例如为约20mg至约600mg(例如约30mg至约500mg、约40mg至约400mg、约60mg至约350mg、约80mg至约300mg、约100mg至约200mg或约140mg至约180mg，例如约20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的双特异性抗体的剂量为约160mg。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的双特异性抗体的剂量为约198mg。在一些方面，一个或多个额外给药周期中双特异性抗体的剂量等于该C2D1，例如为20mg至600mg(例如30mg至500mg、40mg至400mg、60mg至350mg、80mg至300mg、100mg至200mg或140mg至180mg，例如20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600mg)。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的双特异性抗体的剂量为160mg。在一些方面，一个或多个额外给药周期中的双特异性抗体的剂量为198mg。在一些实例中，该方法包含在一个或多个额外给药周期的第1天或大约第1天向受试者施用双特异性抗体的单一剂量。
在一些方面，每21天(Q3W)向受试者施用双特异性抗体，直至观测到进展性疾病，持续多至18个周期，或直至观测到微小残留病(MRD)。
在一些实例中，将该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体作为单一疗法施用至受试者。
B.IL-6和CD8+T细胞活化阈值
峰值IL-6水平
在本文所述的给药方案(例如，双步给药方案)的一些方面，来自患者或患者群体的样品中的峰值IL-6水平不超过临床显著性的阈值，例如与细胞因子释放综合征(CRS)的风险增加相关的阈值。峰值IL-6为在与FcRH5和CD3结合的双特异性抗体的剂量后的时段(例如，该剂量的输注结束(EOI)与施用下一剂量之间的时段)获取的最高测量或报导IL-6值。可在任何合适的样品中测量IL-6水平。在一些方面，在周边血液样品中测量IL-6水平。
在一些方面，在该C1D1与该C1D2之间，根据本文提供的方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过124、123、122、121、120、119、118、117、116、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101或100pg/mL)。例如，在一些方面，其中该C1D1在给药周期的第1天施用且该C1D2在给药周期的第8天施用，受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平在施用C1D1之后的第1天、第2-7天中的任一天或施用C1D2之前的第8天不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D1与该C1D2之间，根据该方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
在一些方面，在该C1D2与该C1D3之间，根据本文提供的方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过124、123、122、121、120、119、118、117、116、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101或100pg/mL)。例如，在一些方面，其中该C1D2在给药周期的第8天施用且该C1D3在给药周期的第15天施用，受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平在施用C1D1之后的第8天、第9-14天中的任一天或施用C1D3之前的第15天不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D2与该C1D3之间，根据该方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
在一些方面，在该C1D3之后，根据本文提供的方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过124、123、122、121、120、119、118、117、116、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101或100pg/mL)。例如，在一些方面，其中该C1D3在21天给药周期的第15天施用，受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平在施用C1D1之后的第15天或在给药周期的第16-21天中的任一天不超过125pg/mL。在一些方面，在该C1D3之后，根据该方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
在一些方面，在给药周期期间的任何时间点，根据本文提供的方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过124、123、122、121、120、119、118、117、116、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101或100pg/mL)。在一些方面，在治疗期间的任何时间点，根据本文提供的方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
在一些方面，本公开提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该C1D1为约0.2mg至约0.4mg(例如约0.20mg、0.21mg、0.22mg、0.23mg、0.24mg、0.25mg、0.26mg、0.27mg、0.28mg、0.29mg、0.30mg、0.31mg、0.32mg、0.33mg、0.34mg、0.35mg、0.36mg、0.37mg、0.38mg、0.39mg或0.40mg)；该C1D2大于该C1D1，且该C1D3大于该C1D2，其中在该C1D1与该C1D2之间；在该C1D2与该C1D3之间；和/或在该C1D3之后，根据该方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过100pg/mL)。
在一些方面，本发明提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该C1D1和该C1D2各自小于该C1D3，且其中该C1D1为约0.01mg至约2.9mg，该C1D2为约3mg至约19.9mg，且该C1D3为约20mg至约600mg；以及(b)第二给药周期包含双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1大于或等于C1D3且为约20mg至约600mg，其中在该C1D1与该C1D2之间；在该C1D2与该C1D3之间；和/或在该C1D3之后，根据该方法治疗的受试者的峰值IL-6水平或受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL(例如不超过100pg/mL)。
T细胞活化
在本文所述的双步给药方案的一些方面，在第一给药周期中受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2与该C1D3之间。例如，在某些方面，其中该C1D2在给药周期的第8天施用且该C1D3在给药周期的第15天使用，受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在施用该C1D2之后的第8天、第9-14天中的任一天或施用该C1D3之前的第15天。在一些方面，该第一给药周期中受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2的24小时内，例如发生在该C1D2的20小时、18小时、16小时、14小时或12小时内。
在一些方面，本公开提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该第一给药周期中受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2与该C1D3之间。
在一些方面，本发明提供了一种治疗患有癌症(例如，MM)的受试者的方法，其包含在至少包含第一给药周期的给药方案中向受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中该第一给药周期包含双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中该C1D1和该C1D2各自小于C1D3，且其中该第一给药周期中受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在该C1D2与该C1D3之间。
C.组合疗法
在一些实例中，将该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体以组合疗法的形式施用至受试者。例如，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与一种或多种额外治疗剂共施用。
i.托珠单抗和CRS的治疗
在一个实例中，该额外治疗剂为有效量的托珠单抗
Figure BDA0004161870440000581
在一些实例中，该受试者具有细胞因子释放综合征(CRS)事件(例如，在用该双特异性抗体治疗后具有CRS事件，例如在C1D1、C1D2、C1D3、C2D1或额外剂量的双特异性抗体后具有CRS事件)，且该方法进一步包括治疗该CRS事件的症状(例如，通过向受试者施用有效量的托珠单抗来治疗该CRS事件)同时中止用双特异性抗体治疗。在一些方面，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至该受试者。在一些方面，该CRS事件在治疗该CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化了，且该方法进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的托珠单抗以控制CRS事件，例如，以约8mg/kg的剂量向受试者静脉内施用一个或多个额外剂量的托珠单抗。
在一些方面，治疗该CRS事件的症状进一步包含用高剂量升压剂(例如，去甲肾上腺素、多巴胺、去羟肾上腺素、肾上腺素或升压素和去甲肾上腺素)治疗，例如，如表5A、5B和6中所述。
在其他实例中，托珠单抗作为前驱用药施用，例如在施用该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之前向受试者施用。在一些实例中，托珠单抗作为第1周期中的前驱用药施用，例如在该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和/或第三剂量(C1D3)之前施用。在一些方面，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至受试者。
CRS症状和分级
CRS可根据Lee等人,Blood,124：188-195,2014或Lee等人,Biol Blood MarrowTransplant,25(4)：625-638,2019建立的改良细胞因子释放综合征分级系统进行分级，如表5A中所述。除了诊断标准外，表5A和5B中还提供且引用了基于其严重程度的CRS管理建议，包括使用皮质类固醇和/或抗细胞因子疗法进行早期干预。
轻度至中度CRS和/或输注相关反应(IRR)的表达可包括诸如发烧、头痛和肌痛等症状，且可按指示使用镇痛药、解热药和抗组胺药对症治疗。CRS和/或IRR的严重或危及生命的表达，诸如低血压、心跳过速、呼吸困难或胸部不适，应按指示采用支持和复苏措施积极治疗，包括使用大剂量皮质类固醇、IV输液、入住加护病房和其他支持措施。严重CRS可能与其他临床后遗症有关，诸如播散性血管内凝血、毛细血管渗漏综合征或巨噬细胞活化综合征(MAS)。基于免疫的疗法所致的严重或危及生命的CRS的照护标准尚未确定；已经公布了使用抗细胞因子疗法(诸如托珠单抗)的病例报告和建议(Teachey等人,Blood,121：5154-5157,2013；Lee等人,Blood,124：188-195,2014；Maude等人,New Engl J Med,371：1507-1517,2014)。
如表5A所示，即使患有广泛合并症的受试者出现中度CRS表达也应密切监测，且考虑入住加护病房并使用托珠单抗。
施用作为前驱用药的托珠单抗
在一些方面，有效量的托珠单抗作为前驱用药(预防)施用，例如在施用该双特异性抗体之前向受试者施用(例如，在施用该双特异性抗体前约2小时施用)。使用作为前驱用药施用的托珠单抗可能会降低CRS的频率或严重程度。在一些方面，托珠单抗作为第1周期中的前驱用药施用，例如在该双特异性抗体的第一剂量(C1D1；第1周期，剂量1)、第二剂量(C1D2；第1周期，剂量2)和/或第三剂量(C1D3；第1周期，剂量3)之前施用。在一些方面，将托珠单抗以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的单一剂量静脉内施用至受试者。在一些方面，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至受试者。在一些方面，将托珠单抗以单一剂量经静脉内施用至受试者，该剂量对于体重30kg或更大(最大800mg)的患者为约8mg/kg且对于体重小于30kg的患者为约12mg/kg。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。
例如，在一个方面，该双特异性抗体与托珠单抗(
Figure BDA0004161870440000601
/
Figure BDA0004161870440000602
)共施用，其中首先向受试者施用托珠单抗(
Figure BDA0004161870440000603
/
Figure BDA0004161870440000604
)，且接着分别施用该双特异性抗体(例如，受试者用托珠单抗(
Figure BDA0004161870440000605
/
Figure BDA0004161870440000606
)预治疗)。
在一些方面，相对于未使用托珠单抗作为前驱用药的患者，使用托珠单抗作为前驱用药治疗的患者的CRS(例如，1级CRS、2级CRS和/或3+级CRS)的发生率降低。在一些方面，与未使用托珠单抗作为前驱用药治疗的患者相比，使用托珠单抗作为前驱用药治疗的患者需要较少干预来治疗CRS(例如，较少需要额外托珠单抗、IV输液、类固醇或O2)。在一些方面，相对于未使用托珠单抗作为前驱用药治疗的患者，在使用托珠单抗作为前驱用药治疗的患者中，CRS症状的严重程度降低(例如，仅限于发烧和寒颤)。
施用托珠单抗以治疗CRS
在一些方面，受试者在用治疗性双特异性抗体治疗期间经历CRS事件且施用有效量的托珠单抗以控制CRS事件。
在一些方面，受试者具有CRS事件(例如，在用双特异性抗体治疗后具有CRS事件，例如在双特异性抗体的第一剂量或后续剂量后具有CRS事件)，且该方法进一步包括在中止双特异性抗体治疗时治疗CRS事件的症状。
在一些方面，受试者经历CRS事件，且该方法进一步包括在中止双特异性抗体治疗时向受试者施用有效量的介白素6受体(IL-6R)拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗(
Figure BDA0004161870440000611
/
Figure BDA0004161870440000612
))来控制CRS事件。在一些方面，将该IL-6R拮抗剂(例如托珠单抗)以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的单一剂量静脉内施用至受试者。在一些方面，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至受试者。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。
在一些方面，CRS事件在治疗CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化了，且该方法进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的IL-6R拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗)来控制CRS事件，例如以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的剂量将一个或多个额外剂量的托珠单抗静脉内施用至受试者。在一些方面，将该一个或多个额外剂量的托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至该受试者。
在一些方面，该方法进一步包括向受试者施用有效量的皮质类固醇。将该皮质类固醇可静脉内施用至受试者。在一些方面，该皮质类固醇为甲泼尼松(甲泼尼龙)。在一些实例中，甲泼尼松以每天约1mg/kg至每天约5mg/kg，例如每天约2mg/kg的剂量施用。在一些实例中，皮质类固醇为地塞米松。在一些实例中，地塞米松以约10mg的剂量(例如，静脉内约10mg的单一剂量)或以约0.5mg/kg/天的剂量施用。
若单独施用IL-6R拮抗剂(例如托珠单抗)不能管理CRS事件，则可向受试者施用皮质类固醇，例如甲泼尼龙或地塞米松。在一些方面，治疗CRS事件的症状进一步包括用高剂量升压剂(例如，去甲肾上腺素、多巴胺、去羟肾上腺素、肾上腺素或升压素和去甲肾上腺素)治疗，例如，如表5A、5B和6中所述。表2和5A中提供了有关托珠单抗治疗严重或危及生命的CRS的详细信息。
按级别管理CRS事件
CRS事件的管理可根据CRS的级别(表2和5A)和合并症的存在进行定制。表2提供了按级别管理CRS综合征的建议。
表2.管理细胞因子释放综合征的建议
Figure BDA0004161870440000621
Figure BDA0004161870440000631
Figure BDA0004161870440000641
CRS＝细胞因子释放综合征；HLH＝噬血细胞性淋巴组织细胞增生症；ICU＝加护病房；IV＝静脉内；MAS＝巨噬细胞活化综合征。
注：CRS为一种以恶心、头痛、心跳过速、低血压、皮疹、呼吸急促，以及肾脏、凝血、肝脏和神经系统病症为特征的病症；其由自细胞释放细胞因子引起(Lee等人,Blood,124：188-195,2014)。
a关于症状分级的描述，参见表5A。
b基于Lee等人,Blood,124：188-195,2014的CRS管理指南。
c关于高剂量升压剂的描述和计算，参见表5B。
d若患者在下一次以50％降低的速率输注期间未经历CRS，则可在后续周期中将输注速率增加至初始速率。然而，若此患者经历另一CRS事件，则应根据事件的严重程度将输注速率降低25％-50％。
2级CRS事件的管理
若受试者在施用治疗性双特异性抗体后具有2级CRS事件(例如，不存在合并症或存在最小合并症的2级CRS事件)，则该方法可进一步包括治疗2级CRS事件的症状同时中止用双特异性抗体治疗。若随后至少连续三天2级CRS事件消退为≤1级CRS事件，则该方法可进一步包括在不改变剂量的情况下恢复用双特异性抗体治疗。另一方面，若2级CRS事件在治疗2级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为≥3级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用有效量的介白素6受体(IL-6R)拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗
Figure BDA0004161870440000651
)来管理2级或≥3级CRS事件。在一些实例中，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至该受试者。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。
若在施用治疗性双特异性抗体后受试者具有存在广泛合并症的2级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用第一剂量的IL-6R拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗
Figure BDA0004161870440000652
)来管理2级CRS事件，同时中止用双特异性抗体治疗。在一些实例中，将该第一剂量的托珠单抗以约8mg/kg的剂量经静脉内施用至受试者。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。在一些实例中，若2级CRS事件在两周内消退为≤1级CRS事件，则该方法进一步包括重新开始用降低的剂量的双特异性抗体进行治疗。在一些实例中，若事件发生在输注期间或输注后24小时内，则降低的剂量为前一周期的初始输注速率的50％。另一方面，若2级CRS事件在治疗2级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为≥3级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用一个或多个(例如，一、二、三、四、五个或更多个)额外剂量的IL-6R拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗)来管理2级或≥3级CRS事件。在一些特定实例中，2级CRS事件在治疗2级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为≥3级CRS事件，且该方法可进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的托珠单抗来管理2级或≥3级CRS事件。在一些实例中，将一个或多个额外剂量的托珠单抗以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的剂量静脉内施用至受试者。在一些实例中，该方法进一步包括向受试者施用有效量的皮质类固醇。可在一个或多个额外剂量的托珠单抗或其他抗IL-6R抗体的前、之后或与其同时施用皮质类固醇。在一些实例中，将该皮质类固醇经静脉内施用至受试者。在一些实例中，该皮质类固醇为甲泼尼龙。在一些实例中，甲泼尼龙以每天约1mg/kg至每天约5mg/kg，例如每天约2mg/kg的剂量施用。在一些实例中，皮质类固醇为地塞米松。在一些实例中，地塞米松以约10mg的剂量(例如，静脉内约10mg的单一剂量)或以约0.5mg/kg/天的剂量施用。
3级CRS事件的管理
若在施用治疗性双特异性抗体后受试者具有3级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用第一剂量的IL-6R拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗
Figure BDA0004161870440000661
)来管理3级CRS事件，同时中止用双特异性抗体治疗。在一些实例中，将该第一剂量的托珠单抗以约8mg/kg的剂量经静脉内施用至受试者。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。在一些实例中，受试者在用双特异性抗体治疗后的8小时内恢复(例如不发热且停止使用升压剂)，且该方法进一步包括恢复用降低剂量的双特异性抗体治疗。在一些实例中，若事件发生在输注期间或输注后24小时内，则降低的剂量为前一周期的初始输注速率的50％。在其他实例中，若3级CRS事件在治疗3级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为4级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用一个或多个(例如，一、二、三、四、五个或更多个)额外剂量的IL-6R拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗)来管理3级或4级CRS事件。在一些特定实例中，3级CRS事件在治疗3级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为4级CRS事件，且该方法进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的托珠单抗来管理3级或4级CRS事件。在一些实例中，将一个或多个额外剂量的托珠单抗以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的剂量静脉内施用至受试者。在一些实例中，该方法进一步包括向受试者施用有效量的皮质类固醇。可在一个或多个额外剂量的托珠单抗或其他抗IL-6R抗体的前、之后或与其同时施用皮质类固醇。在一些实例中，将该皮质类固醇经静脉内施用至受试者。在一些实例中，该皮质类固醇为甲泼尼龙。在一些实例中，甲泼尼龙以每天约1mg/kg至每天约5mg/kg，例如每天约2mg/kg的剂量施用。在一些实例中，皮质类固醇为地塞米松。在一些实例中，地塞米松以约10mg的剂量(例如，静脉内约10mg的单一剂量)或以约0.5mg/kg/天的剂量施用。
4级CRS事件的管理
若在施用治疗性双特异性抗体后受试者具有4级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用第一剂量的IL-6R拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗
Figure BDA0004161870440000671
)来管理4级CRS事件，且永久中止用双特异性抗体治疗。在一些实例中，将该第一剂量的托珠单抗以约8mg/kg的剂量经静脉内施用至受试者。可与托珠单抗组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变异体。在一些实例中，4级CRS事件可在治疗4级CRS事件的症状的24内解决。若4级CRS事件在治疗4级CRS事件的症状的24小时内未消退，则该方法可进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的IL-6R拮抗剂(例如抗IL-6R抗体，例如托珠单抗
Figure BDA0004161870440000672
)来管理4级CRS事件。在一些特定实例中，4级CRS事件在治疗4级CRS事件的症状的24小时内未消退，且该方法进一步包括向受试者施用一个或多个(例如，一、二、三、四、或五个或更个)额外剂量的托珠单抗来管理4级CRS事件。在一些实例中，将一个或多个额外剂量的托珠单抗以约1mg/kg至约15mg/kg，例如约4mg/kg至约10mg/kg，例如约6mg/kg至约10mg/kg，例如约8mg/kg的剂量静脉内施用至受试者。在一些实例中，该方法进一步包括向受试者施用有效量的皮质类固醇。可在一个或多个额外剂量的托珠单抗或其他抗IL-6R抗体的前、之后或与其同时施用皮质类固醇。在一些实例中，将该皮质类固醇经静脉内施用至受试者。在一些实例中，该皮质类固醇为甲泼尼龙。在一些实例中，甲泼尼龙以每天约1mg/kg至每天约5mg/kg，例如每天约2mg/kg的剂量施用。在一些实例中，皮质类固醇为地塞米松。在一些实例中，地塞米松以约10mg的剂量(例如，静脉内约10mg的单一剂量)或以约0.5mg/kg/天的剂量施用。
ii.皮质类固醇
在另一个实例中，该额外治疗剂为有效量的皮质类固醇。将该皮质类固醇可静脉内施用至受试者。在一些方面，该皮质类固醇为甲泼尼松。甲泼尼松可以约80mg的剂量施用至受试者。在其他方面，该皮质类固醇为地塞米松。地塞米松可以约80mg的剂量施用至受试者。在一些方面，在施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之前向受试者施用皮质类固醇(例如甲泼尼松或地塞米松)，例如在施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之前一小时施用。
iii.乙酰胺酚或对乙酰胺基酚
在另一个实例中，该额外治疗剂为有效量的乙酰胺酚或对乙酰胺基酚。该乙酰胺酚或对乙酰胺基酚可口服施用至受试者，例如以约500mg至约1000mg的剂量口服施用。在一些方面，将该乙酰胺酚或对乙酰胺基酚作为前驱用药施用至受试者，例如在施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之前施用。
iv.苯海拉明
在另一个实例中，该额外治疗剂为有效量的苯海拉明。该苯海拉明可口服施用至受试者，例如以约25mg至约50mg的剂量口服施用。在一些方面，将该苯海拉明作为前驱用药施用至受试者，例如在施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之前施用。
v.抗骨髓瘤剂
在另一个实例中，该额外治疗剂为有效量的抗骨髓瘤剂，例如增强和/或补充T细胞介导的骨髓瘤细胞杀伤的抗骨髓瘤剂。该抗骨髓瘤剂可为例如泊马度胺、达雷木单抗和/或B细胞成熟抗原(BCMA)定向疗法(例如，靶向BCMA的抗体-药物结合物(BCMA-ADC))。在一些方面，该抗骨髓瘤剂以四周的周期施用。
在一些方面，该抗骨髓瘤剂为泊马度胺。在一些方面，泊马度胺在28天周期的第1-28天以4mg的剂量口服施用。在一些方面，泊马度胺与地塞米松组合施用，例如与在28天周期的第1、8、15和22天施用的地塞米松组合施用。
在一些方面，该抗骨髓瘤剂为达雷木单抗。在一些方面，达雷木单抗通过静脉内输注(例如，3-5小时输注)以16mg/kg的剂量每周一次、每两周一次或每四周一次施用。在一些方面，达雷木单抗通过静脉内输注(例如，3-5小时输注)以16mg/kg的剂量施用，每周一次持续两个28天周期，每两周一次持续三个28天周期，以及每四周一次持续一个或多个额外周期。
vi.其他组合疗法
在一些方面，该一种或多种额外治疗剂包括PD-L1轴结合拮抗剂、免疫调节剂、抗肿瘤剂、化学治疗剂、生长抑制剂、抗血管生成剂、放射疗法、细胞毒性剂、基于细胞的疗法或其组合。
PD-L1轴结合拮抗剂
在一些方面，该额外治疗剂为PD-L1轴结合拮抗剂。术语“PD-L1轴结合拮抗剂”是指一种分子，其抑制PD-L1轴结合配偶体与其一个或多个结合配偶体的交互作用，从而消除由PD-1信号传递轴上的信号传递引起的T细胞功能障碍，其结果是恢复或增强T细胞功能(例如，增殖、细胞因子产生、靶细胞杀灭)。如本文所用，PD-L1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-L1或PD-L2)的相互作用引起的信号传导。在一些方面，PD-1结合拮抗剂为抑制PD-1与其一种或多种结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1到PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括抗PD-1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2的交互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-1结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-1介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-1结合拮抗剂为抗PD-1拮抗剂抗体。在具体方面，PD-1结合拮抗剂为MDX-1106(纳武利尤单抗(nivolumab))。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为MK-3475(帕博利珠单抗(pembrolizumab))。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为AMP-224。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为MED1-0680。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为PDR001(spartalizumab)。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为REGN2810(西米普利单抗)。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其任一种或多种结合配偶体(诸如PD-1或B7-1)的相互作用引起的信号传导。在一些方面，PD-L1结合拮抗剂为抑制PD-L1与其结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1到PD-1和/或B7-1的结合。在一些方面，该PD-L1结合拮抗剂包括抗PD-L1抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一种或多种结合配偶体(例如PD-1和B7-1)的相互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-L1结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-L1介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-L1结合拮抗剂为抗PD-L1拮抗剂抗体。在又一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MPDL3280A(阿托珠单抗)，以商品名TECENTRIQTM进行销售，其WHO药物信息(国际非专利药物名称)见：Recommended INN：List74，第29卷第3期，2015(见第387页)。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为YW243.55.S70。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MDX-1105。在另一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MSB0015718C。在又一具体方面，抗PD-L1拮抗剂抗体为MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”是指一种分子，其减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-1)的交互作用引起的信号转导。在一些方面，PD-L2结合拮抗剂为抑制PD-L2与其一种或多种结合伴侣的结合的分子。在具体方面，该PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些方面，该PD-L2结合拮抗剂包括抗PD-L2抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合伴侣(例如PD-1)的交互作用引起的信号转导的其他分子。在一个方面，PD-L2结合拮抗剂减少了由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白所介导或通过其表达的负共刺激信号(通过PD-L2介导的信号)，从而减轻了功能障碍T细胞的功能障碍(例如，增强效应子对抗原识别的反应)。在一些方面，PD-L2结合拮抗剂为免疫粘附素。
生长抑制剂
在一些方面，该额外治疗剂为生长抑制剂。示例性的生长抑制剂包括在S期以外的地方阻断细胞周期进程的药剂，例如诱导G1阻滞的药剂(例如DNA烷化剂，如他莫昔芬、强体松、达喀尔巴嗪、甲氧乙胺、顺铂、甲胺蝶呤、5-氟尿嘧啶或ara-C)或诱导M期阻滞的药剂(例如长春新碱、长春碱、紫杉烷(例如紫杉醇和多西紫杉醇)、多柔比星、表柔比星、道诺霉素、依托泊苷或博来霉素)。
放射疗法
在一些方面，该额外治疗剂为放射疗法。放射疗法包括使用定向γ射线或β射线对细胞造成足够的损害，从而限制其正常发挥功能的能力或完全破坏细胞。典型治疗为一次施用，且典型剂量范围为每天10至200单位(Grays)。
细胞毒性剂
在一些方面，该额外治疗剂为细胞毒性剂，例如抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如，甲胺蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)，多柔比星、霉法兰、丝裂霉素C、氯芥苯丁酸、道诺霉素或其他嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如核酸酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，包括其片段和/或变异体；以及抗肿瘤或抗癌剂。
抗癌疗法
在一些实例中，该方法包括向个体施用不同于双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体或除了双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体之外的抗癌疗法(例如，抗肿瘤剂、化学治疗剂、生长抑制剂、抗血管生成剂、放射疗法或细胞毒性剂)。
在一些实例中，该方法进一步包括向患者施用有效量的额外治疗剂。在一些实例中，该额外治疗剂选自抗肿瘤剂、化学治疗剂、生长抑制剂、抗血管生成剂、放射疗法、细胞毒性剂及其组合。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与化学疗法或化学治疗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与放射治疗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向疗法或靶向治疗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与免疫疗法或免疫治疗剂，例如单克隆抗体联合施用。在一些实例中，该额外治疗剂为针对共刺激分子的促效剂。在一些实例中，该额外治疗剂为针对共抑制分子的拮抗剂。
不希望受理论束缚，认为通过促进共刺激分子或通过抑制共抑制分子来增强T细胞刺激可促进肿瘤细胞死亡，从而治疗癌症或推迟癌症进展。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对共刺激分子的促效剂联合施用。在一些实例中，共刺激分子可包括CD40、CD226、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM或CD127。在一些实例中，针对共刺激分子的促效剂为结合CD40、CD226、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM或CD127的促效剂抗体。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对共抑制分子的拮抗剂联合施用。在一些实例中，共抑制分子可包括CTLA-4(也称为CD152)、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7-H3、B7-H4、IDO、TIGIT、MICA/B或精胺酸酶。在一些实例中，针对共抑制分子的拮抗剂为结合CTLA-4、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7-H3、B7-H4、IDO、TIGIT、MICA/B或精胺酸酶的拮抗剂抗体。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对CTLA-4(也称为CD152)的拮抗剂，例如阻断抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与伊匹木单抗(也称为MDX-010、MDX-101或
Figure BDA0004161870440000731
)联合施用。在某些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对B7-H3(也称为CD276)的拮抗剂，例如阻断抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与MGA271联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对TGF-β的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)或LY2157299联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与包含过继转移表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与包含过继转移包含显性失活TGFβ受体，例如显性失活TGFβII型受体的T细胞的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与包含HERCREEM方案(参见例如ClinicalTrials.gov标识符NCT00889954)的治疗联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对CD137的促效剂(也称为TNFRSF9、4-1BB或ILA)，例如活化抗体联合施用。在某些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对CD40的促效剂，例如活化抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与CP-870893联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对OX40(也称为CD134)的促效剂，例如活化抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗OX40抗体(例如AgonOX)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对CD27的促效剂，例如活化抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与CDX-1127联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的拮抗剂联合施用。在一些实例中，IDO拮抗剂为1-甲基-D-色胺酸(也称为1-D-MT)。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗体-药物结合物联合施用。在一些实例中，该抗体-药物结合物包含美登新碱或单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗NaPi2b抗体-MMAE结合物(也称为DNIB0600A或RG7599)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与曲妥珠单抗美坦新(也称为T-DM1、ado-曲妥珠单抗美坦新或
Figure BDA0004161870440000741
Genentech)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与DMUC5754A联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向内皮素B受体(EDNBR)的抗体-药物结合物，例如与MMAE结合的针对EDNBR的抗体联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗血管生成剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对VEGF，例如VEGF-A的抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与贝伐单抗(也称为
Figure BDA0004161870440000742
Genentech)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与针对血管生成素2(也称为Ang2)的抗体联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与MEDI3617联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗肿瘤剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CSF-1R(也称为M-CSFR或CD115)的药剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与抗CSF-1R(也称为IMC-CS4)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与干扰素，例如干扰素α或干扰素γ联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与Roferon-A(也称为重组干扰素α-2a)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与GM-CSF(也称为重组人颗粒球巨噬细胞集落刺激因子、rhu GM-CSF、沙格司亭(sargramostim)或
Figure BDA0004161870440000743
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-2(也称为阿地介白素或
Figure BDA0004161870440000751
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-12联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CD20之抗体联合施用。在一些实例中，靶向CD20的抗体为奥比妥珠单抗(也称为GA101或
Figure BDA0004161870440000752
)或利妥昔单抗。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向GITR的抗体联合施用。在一些实例中，该靶向GITR的抗体为TRX518。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与癌症疫苗联合施用。在一些实例中，该癌症疫苗为肽癌症疫苗，其在一些实例中为个性化肽疫苗。在一些实例中，该肽癌症疫苗为多价长肽、多肽、肽混合物、杂合肽或肽脉冲的树突细胞疫苗(参见例如Yamada等人,Cancer Sci.104:14-21,2013)。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与佐剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与包含TLR促效剂，例如Poly-ICLC(也称为
Figure BDA0004161870440000753
)、LPS、MPL或CpG ODN的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与肿瘤坏死因子(TNF)α联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-1联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与HMGB1联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-10拮抗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-4拮抗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与IL-13拮抗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与HVEM拮抗剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与ICOS促效剂联合施用，例如通过施用ICOS-L或针对ICOS的促效性抗体。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CX3CL1的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CXCL9的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CXCL10的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向CCL5的治疗联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与LFA-1或ICAM1促效剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与选择素促效剂联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与靶向疗法联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与B-Raf抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与维莫非尼(vemurafenib)(也称为
Figure BDA0004161870440000761
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与达拉非尼(dabrafenib)(也称为
Figure BDA0004161870440000762
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与厄洛替尼(也称为
Figure BDA0004161870440000763
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与MEK抑制剂，诸如MEK1(也称为MAP2K1)或MEK2(也称为MAP2K2)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与考比替尼(cobimetinib)(也称为GDC-0973或XL-518)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与曲美替尼(trametinib)(也称为
Figure BDA0004161870440000764
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与K-Ras抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与c-Met抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与奥那图珠单抗(onartuzumab)(也称为MetMAb)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与Alk抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与AF802(也称为CH5424802或艾乐替尼(alectinib))联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与BKM120联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与艾德昔布(idelalisib)(也称为GS-1101或CAL-101)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与哌立福辛(也称为KRX-0401)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与Akt抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与MK2206联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与GSK690693联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与GDC-0941联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与mTOR抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与西罗莫司(sirolimus)(也称为雷帕霉素)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与替西罗莫司(temsirolimus)(也称为CCI-779或
Figure BDA0004161870440000771
)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与依维莫司(everolimus)(也称为RAD001)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与利达福莫司(ridaforolimus)(也称为AP-23573、MK-8669或地福莫司(deforolimus))联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与OSI-027联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与AZD8055联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与INK128联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与双重PI3K/mTOR抑制剂联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与XL765联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与GDC-0980联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与BEZ235(也称为NVP-BEZ235)联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与BGT226联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与GSK2126458联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与PF-04691502联合施用。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与PF-05212384(也称为PKI-587)联合施用。
在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可与化学治疗剂联合施用。化学治疗剂为可用于治疗癌症的化合物。示例性化学治疗剂包括但不限于厄洛替尼(
Figure BDA0004161870440000772
Genentech/OSI Pharm.)、用于调节或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，抗体，例如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(
Figure BDA0004161870440000773
Genentech)；西妥昔单抗(
Figure BDA0004161870440000774
Imclone)；帕尼单抗(
Figure BDA0004161870440000775
Amgen)、利妥昔单抗(
Figure BDA0004161870440000776
Genentech/Biogen Idec)、帕妥珠单抗(
Figure BDA0004161870440000777
2C4，Genentech)或曲妥珠单抗(
Figure BDA0004161870440000778
Genentech)、EGFR抑制剂(EGFR拮抗剂)、酪胺酸激酶抑制剂，且化学治疗剂还包括具有镇痛、解热和消炎作用的非甾体消炎药(NSAID)。
在本文所述的方法涉及组合疗法，诸如上文提及的特定组合疗法的实例中，该组合疗法包括双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体与一种或多种额外治疗剂的共施用，且此类共施用可为组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或独立调配物中)或单独施用，在此情况下，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的施用可发生在施用该额外治疗剂或药剂之前、与其同时和/或在其之后。在一个实施例中，施用该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体和施用额外治疗剂或暴露于放射疗法可彼此发生在约一个月内，或发生在约一周、两周或三周内，或发生在约一天、两天、三天、四天、五天或六天内。
在一些方面，受试者不具有增加的CRS风险(例如，在用双特异性抗体或CAR-T疗法治疗期间未经历3+级CRS；不具有可检测循环浆细胞；和/或不具有广泛髓外疾病)。
D.癌症
本文所述的本发明的任何方法可用于治疗癌症，诸如B细胞增殖性病症，包括多发性骨髓瘤(MM)，其可为复发性或难治性(R/R)MM。在一些方面，患者已接受至少三个针对B细胞增殖性病症(例如，MM)的先前治疗方案，例如为4L+，例如已接受三个、四个、五个、六个或多于六个先前治疗方案。例如，患者可能已暴露于蛋白酶体抑制剂(PI)、免疫调节药物(IMiD)、自体干细胞移植(ASCT)、抗CD38疗法(例如抗CD38抗体疗法，例如达雷木单抗疗法)、CAR-T疗法或包含双特异性抗体的疗法。在一些实例中，患者已暴露于PI、IMiD和抗CD38疗法中的所有三者。可根据本文所述的方法用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体治疗的B细胞增殖性病症/恶性肿瘤的其他实例包括但不限于非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，其可为复发性或难治性DLBCL，以及其他癌症，包括生发中心B细胞样(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、活化B细胞样(ABC)DLBCL、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴性白血病(CLL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、小淋巴球性白血病(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LL)、瓦氏巨球蛋白血症(WM)、中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、B细胞幼淋巴球白血病、脾边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、脾淋巴瘤/白血病、无法分类、脾弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤、变异型毛细胞白血病、重链病(α重链病、γ重链病、μ重链病)、浆细胞骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿滤泡性淋巴瘤、原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞之大B细胞淋巴瘤、CNS之原发性DLBCL、原发性皮肤DLBCL、腿型、老年人EBV阳性DLBCL、与慢性炎症相关之DLBCL、淋巴瘤样肉芽肿、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、ALK阳性大B细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、HHV8相关多中心卡斯特莱曼病引起的大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤：B细胞淋巴瘤，无法分类，具有介于DLBCL与伯基特氏淋巴瘤之间的特征，以及B细胞淋巴瘤，无法分类，具有介于DLBCL与经典霍奇金氏淋巴瘤之间的特征。B细胞增殖性病症的其他实例包括但不限于多发性骨髓瘤(MM)；低级/滤泡性NHL；小淋巴球(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞NHL；大块病NHL；AIDS相关淋巴瘤；和急性淋巴母细胞白血病(ALL)；慢性骨髓母细胞性白血病；以及移植后淋巴增生性病症(PTLD)。癌症的更多实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性病，包括B细胞淋巴瘤。此类癌症的更具体实例包括但不限于低级/滤泡性NHL；小淋巴球(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞NHL；大块病NHL；AIDS相关淋巴瘤；和急性淋巴母细胞白血病(ALL)；慢性骨髓母细胞性白血病；和移植后淋巴增生性病症(PTLD)。可根据本文所述的方法用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体治疗的实体肿瘤包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric/stomach cancer)，包括胃肠道癌和胃肠道间质癌、胰脏癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney/renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、恶性雀斑样痣黑色素瘤、肢端雀斑样痣黑色素瘤、结节性黑色素瘤、以及与母斑病(phakomatoses)相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯氏综合征(Meigs'syndrome)、脑癌以及头颈癌和相关转移。在某些实施例中，适合用通过本发明抗体进行治疗的癌症包括乳癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰脏癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)、类癌、头颈癌、卵巢癌和间皮瘤。
E.先前抗癌疗法
在一些方面，受试者先前已接受B细胞增殖性病症(例如，MM)治疗。在一些方面，受试者已接受至少一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五个或多于十五个针对B细胞增殖性病症的治疗方案，例如为2L+、3L+、4L+、5L+、6L+、7L+、8L+、9L+、10L+、11L+、12L+、13L+、14L+或15L+。在一些方面，受试者已接受至少三个针对B细胞增殖性病症(例如，MM)的先前治疗方案，例如为4L+，例如已接受三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五个或多于十五个治疗方案。在一些方面，受试者患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)，例如患有4L+R/R MM。
在一些方面，先前治疗方案包括以下中的一项或多项：蛋白酶体抑制剂(PI)，例如硼替佐米、卡非佐米或伊沙佐米；免疫调节药物(IMiD)，例如沙利度胺、来那度胺或泊马度胺；自体干细胞移植(ASCT)；抗CD38剂，例如达雷木单抗
Figure BDA0004161870440000801
(美国专利号：7,829,673和美国公开号：20160067205A1)、“MOR202”(美国专利号：8,263,746)；艾沙妥昔单抗(SAR-650984)；CAR-T疗法；包含双特异性抗体的疗法；抗SLAMF7治疗剂(例如抗SLAMF7抗体，例如埃罗妥珠单抗)；出核抑制剂(例如塞利尼索)；以及组蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制剂(例如帕比司他)。在一些方面，该先前治疗方案包括抗体-药物结合物(ADC)。在一些方面，该先前治疗方案包括B细胞成熟抗原(BCMA)定向疗法，例如靶向BCMA的抗体-药物结合物(BCMA-ADC)。
在一些方面，该先前治疗方案包括蛋白酶体抑制剂(PI)、IMiD和抗CD38剂(例如达雷木单抗)中的所有三者。
在一些方面，B细胞增殖性病症(例如MM)难以用治疗方案治疗，例如难以用以下中的一项或多项治疗：达雷木单抗、PI、IMiD、ASCT、抗CD38剂、CAR-T疗法，包含双特异性抗体的疗法、抗SLAMF7治疗剂、出核抑制剂、HDAC抑制剂、ADC或BCMA定向疗法。在一些方面，B细胞增殖性病症(例如MM)难以用达雷木单抗治疗。
F.风险受益情形
用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体治疗，本文所述的方法可为患有癌症(例如多发性骨髓瘤(MM)，例如复发性或难治性(R/R)MM)，例如4L+R/R MM的患者带来改善的受益风险情形。在一些实例中，使用本文所述的导致在分次、剂量递增给药方案的背景下施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的方法的治疗可使得在使用本发明的分次、剂量递增给药方案用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体治疗后，相对于使用非分次给药方案用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体治疗，不良事件减少(例如，减少20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更高、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、或99％或更多)或完全抑制(100％减少)，该不良事件诸如细胞因子驱动的毒性(例如细胞因子释放综合征(CRS))、输注相关反应(IRR)、巨噬细胞活化综合征(MAS)、神经系统毒性、重度肿瘤溶解综合征(TLS)、嗜中性白血球减少症、血小板减少症、肝酵素升高和/或中枢神经系统(CNS)毒性。
G.安全性和疗效
i.安全性
在一些方面，小于15％(例如小于14％、小于13％、小于12％、小于11％、小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％)的使用本文所述的方法治疗的患者经历3级或4级细胞因子释放综合征(CRS)。在一些方面，小于5％的使用本文所述的方法治疗的患者经历3级或4级CRS。
在一些方面，小于10％(例如小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％)的使用本文所述的方法治疗的患者经历4+级CRS。在一些方面，小于3％的使用本文所述的方法治疗的患者经历4+级CRS。在一些方面，无患者经历4+级CRS。
在一些方面，小于10％(例如小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％)的使用本文所述的方法治疗的患者经历3级CRS。在一些方面，小于5％的使用本文所述的方法治疗的患者经历3级CRS。在一些方面，无患者经历3级CRS。
在一些方面，2+级CRS事件仅发生在第一治疗周期中。在一些方面，2级CRS事件仅发生在第一治疗周期中。在一些方面，不发生2级CRS事件。
在一些方面，小于3％的使用本文所述的方法治疗的患者经历4+级CRS，小于5％的使用本文所述的方法治疗的患者经历3级CRS，且2+级CRS事件仅发生在第一治疗周期。
在一些方面，不发生3+级CRS事件，且2级CRS事件仅在第一治疗周期中发生。
在一些方面，免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)的症状仅限于意识模糊、定向力障碍和表达性失语，且用类固醇解决。
在一些方面，小于10％(例如小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％)的使用本文所述的方法治疗的患者经历癫痫发作或其他3+级神经系统不良事件。在一些方面，小于5％的患者经历癫痫发作或其他3+级神经系统不良事件。在一些方面，无患者经历癫痫发作或其他3+级神经系统不良事件。
在一些方面，所有神经系统症状均为自限性的，或用类固醇和/或托珠单抗疗法解决。
ii.疗效
在一些方面，使用本文所述的方法治疗的患者的总体缓解率(ORR)为至少25％，例如为至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％。在一些方面，ORR为至少40％。在一些方面，ORR为至少45％(例如至少45％、45.5％、46％、46.5％、47％、47.5％、48％、48.5％、49％、49.5％或50％)、至少55％或至少65％。在一些方面，ORR为至少47.2％。在一些方面，ORR为约47.2％。在一些方面，ORR为75％或更高。在一些方面，至少1％的患者(例如至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的患者)具有完全缓解(CR)或极好部分缓解(VGPR)。在一些方面，ORR为40％-50％，且10％-20％的患者具有CR或VGPR。在一些方面，ORR为至少40％，且至少20％的患者具有CR或VGPR。
在一些方面，使用本文所述的方法治疗的患者的平均缓解持续时间(DoR)为至少两个月，例如至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少十个月、至少十一个月、至少一年或一年以上。在一些方面，平均DoR至少为四个月。在一些方面，平均DoR至少为五个月。在一些方面，平均DoR至少为七个月。
在一些方面，使用本文所述的方法治疗的患者的六个月无进展存活(PFS)率为至少10％，例如为至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％。在一些方面，六个月PFS率为至少25％。在一些方面，六个月PFS率为至少40％。在一些方面，六个月PFS率为至少55％。
H.施用方法
该方法可涉及通过任何合适的方式施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体(和/或任何额外治疗剂)，包括肠胃外、肺内和鼻内，且若需要局部治疗，则包括病灶内施用。肠胃外输注包括静脉内、皮下、肌肉内、动脉内和腹膜内施用途径。在一些实施例中，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体通过静脉内输注施用。在其他实例中，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体经皮下施用。
在一些实例中，与通过皮下注射施用的相同双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体相比，通过静脉注射施用的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体在患者中表达出更小的毒性反应(即，更少的非所欲作用)，或反之亦然。
在一些方面，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体在4小时(±15分钟)内静脉内施用，例如，第一剂量的该抗体在4小时±15分钟内施用。
在一些方面，第一剂量和第二剂量的该抗体以小于四小时(例如小于三小时、小于两小时或小于一小时)的中位输注时间静脉内施用，且另外剂量的该抗体以小于120分钟(例如小于90分钟、小于60分钟或小于30分钟)的中位输注时间静脉内施用。
在一些方面，第一剂量和第二剂量的该抗体以小于三小时的中位输注时间静脉内施用，且另外剂量的该抗体以小于90分钟的中位输注时间静脉内施用。
在一些方面，第一剂量和第二剂量的该抗体以小于三小时的中位输注时间静脉内施用，且另外剂量的该抗体以小于60分钟的中位输注时间静脉内施用。在一些方面，患者在抗FcRH5/抗CD3抗体的一次或多次施用期间住院(例如住院72小时、48小时、24小时或小于24小时)，例如在C1D1(第1周期，剂量1)或C1D1和C1D2(第1周期，剂量2)住院。在一些方面，患者在施用C1D1和C1D2后住院72小时。在一些方面，患者在施用C1D1和C1D2后住院24小时。在一些方面，患者在施用任何剂量的抗FcRH5/抗CD3抗体后未住院。
对于本文所述的所有方法，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体将以符合良好医学实践的方式调配、给药和施用。在这种情况下，考虑的因素包括正在治疗的具体病症、正在治疗的具体哺乳动物、个别患者的临床病情、病症的原因、药物递送部位、施用方法、施用日程和医疗从业者已知的其他因素。该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体不必但视情况与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论的病症的药剂一起调配。此类其他药剂的有效量取决于剂型中存在的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的量、病症或治疗的类型以及上述其他因素。该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可经一系列治疗适当地施用至患者。
I.抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体
本文所述的方法包括向患有癌症(例如多发性骨髓瘤，例如R/R多发性骨髓瘤)的受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体(即，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体)。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗体，该双特异性抗体包括具有第一结合结构域的抗FcRH5臂，该第一结合结构域包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ IDNO：1)；(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)；(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)；(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)；(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQ ID NO：5)；以及(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：6)。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体包含分别包含序列SEQ ID NO：17-20的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQ ID NO：21-24的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗体，该双特异性抗体包括具有包含以下六个HVR的第一结合结构域的抗FcRH5臂：(a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)；(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)；(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)；(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)；(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQID NO:5)；和(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)。在一些实例中，双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体包含分别包含序列SEQ ID NO：17-20的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQ ID NO：21-24的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)。
在一些实例中，双特异性抗体包含抗FcRH5臂，该抗FcRH5臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：7；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：8具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或8的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。因此，在一些实例中，第一结合结构域包含：VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：7；以及VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：8。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体，该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体包括具有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQ ID NO：9)；(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQID NO：10)；(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO：11)；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQ ID NO：12)；(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ ID NO：13)；以及(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ ID NO：14)。在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含分别包含序列SEQ ID NO：25-28的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQID NO：29-32的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体，该抗体包括具有包含以下六个HVR的第二结合结构域的抗CD3臂：(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQ ID NO:9)；(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQ IDNO:10)；(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO:11)；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)；(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ IDNO:13)；和(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)。在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含分别包含序列SEQ ID NO：25-28的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQ IDNO：29-32的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)。
在一些实例中，双特异性抗体包含抗CD3臂，该抗CD3臂包含第二结合结构域，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或15的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或16的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。因此，在一些实例中，该第二结合结构域包含：VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：15；以及VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:16。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗体，其包括(1)具有第一结合结构域的抗FcRH5臂，该第一结合结构域包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)；(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)；(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)；(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQ ID NO：5)；以及(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)；以及(2)具有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQ ID NO：9)；(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQ ID NO：10)；(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO：11)；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQ ID NO：12)；(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ ID NO：13)；以及(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ IDNO：14)。
在一些实例中，任何本文所述的方法可包括施用双特异性抗体，该双特异性抗体包括(1)具有包含以下六个HVR的第一结合结构域的抗FcRH5臂：(a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQ IDNO：2)；(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)；(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)；(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQID NO：5)；以及(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)；以及(2)具有包含以下六个HVR的第二结合结构域的抗CD3臂：(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQID NO:9)；(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)；(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO:11)；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)；(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)；和(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含(1)分别包含序列SEQ ID NO：17-20的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQ ID NO：21-24的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，以及(2)分别包含序列SEQ ID NO：25-28的重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如1、2、3或4个)，和/或分别包含序列SEQ ID NO：29-32的轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如1、2、3或4个)。在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含(1)分别包含序列SEQ ID NO：17-20的所有四个重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4，和/或分别包含序列SEQ ID NO：21-24的所有四个轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4，以及(2)分别包含序列SEQ ID NO：25-28的所有四个重链骨架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4，和/或分别包含序列SEQ ID NO：29-32的所有四个轻链骨架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含(1)抗FcRH5臂，其包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或7的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：8具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：8；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域；以及(2)抗CD3臂，其包含第二结合结构域，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或15的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与氨基酸序列SEQ ID NO：16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或16的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含(1)第一结合结构域，该第一结合结构域包含VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:7，以及VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：8；以及(2)第二结合结构域，该第二结合结构域包含VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:15，以及VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:16。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)，其中(a)H1包含与氨基酸序列SEQ ID NO：35具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：35，和/或(b)L1包含与氨基酸序列SEQ ID NO：36具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)，其中(a)H1包含氨基酸序列SEQ ID NO：35，和/或(b)L1包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含抗CD3臂，其包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，其中(a)H2包含与氨基酸序列SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：35，和/或(b)L2包含与氨基酸序列SEQ ID NO：38具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO:36。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含抗CD3臂，该抗CD3臂包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，其中(a)H2包含氨基酸序列SEQ ID NO：37，和/或(b)L2包含氨基酸序列SEQ ID NO:38。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含：抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)；以及抗CD3臂，其包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，且其中(a)H1包含与氨基酸序列SEQ ID NO：35具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：35；(b)L1包含与氨基酸序列SEQ ID NO：36具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：36；(c)H2包含与氨基酸序列SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO：37；以及(d)L2包含与氨基酸序列SEQ ID NO：38具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)的氨基酸序列或氨基酸序列SEQ ID NO:38。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体包含：抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)；以及抗CD3臂，其包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，且其中(a)H1包含氨基酸序列SEQ ID NO:35；(b)L1包含氨基酸序列SEQ ID NO:36；(c)H2包含氨基酸序列SEQ ID NO:37；和(d)L2包含氨基酸序列SEQ ID NO:38。
在一些实例中，该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体为Cevostamab。
在一些实例中，根据上述任一实施例的抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体可单独地或组合地并入任何特征，如下文第1-7部分中所述。
1.抗体亲和力
在某些实施例中，本文提供的抗体具有的解离常数(KD)为≤1μM、≤250nM、≤100nM、≤15nM、≤10nM、≤6nM、≤4nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更低，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一个实施例中，通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)来测量KD。在一个实施例中，RIA是Fab形式的所关注抗体及其抗原来进行的。例如，通过在连续系列未标记的抗原存在下用最小浓度的(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体涂覆的板捕获结合的抗原，来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为建立测定的条件，用溶于50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/mL捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)将
Figure BDA0004161870440000911
多孔板(Thermo Scientific)涂覆一整夜，然后用溶于PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白在室温(约23℃)下将其阻断。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目标Fab的系列稀释液混合(例如，与Presta等人在CancerRes.57：4593-4599(1997)中所述的抗VEGF抗体Fab-12的评估结果一致)。然后将目标Fab孵育一整夜；但是，可继续孵育更长时间(例如约65小时)，以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板上，在室温下进行孵育(例如，孵育1小时)。然后除去溶液，用溶于PBS中的0.1％聚山梨糖醇酯20(TWEEN-
Figure BDA0004161870440000912
)将板洗涤八次。当板干燥后，将闪烁剂(MICROSCINT-20TM；Packard)以150μL/孔的量加入，并利用TOPCOUNT TM伽玛计数器(Packard)进行10分钟计数。选择提供小于或等于最大结合浓度的20％的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。
根据另一实施例，使用
Figure BDA0004161870440000921
表面电浆子共振测定法来测量KD。例如，使用
Figure BDA0004161870440000922
-2000或
Figure BDA0004161870440000923
-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway，NJ)在37℃下用固定化抗原CM5芯片以约10反应单位(RU)进行测定。在一个实施例中，根据供货商的说明，用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIACORE,Inc.)。用10mM醋酸钠(pH4.8)将抗原稀释至5μg/mL(约0.2μM)，然后以5μL/min的流速注入，以获得大约10反应单位(RU)的偶合蛋白。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应的基团。在动力学测量中，将Fab在两倍连续稀释液(0.78nM至500nM)在37℃下以约25μL/min的流速注入含0.05％聚山梨糖醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性剂(PBST)的PBS中。通过同时拟合结合和解离感测图，使用简单的一对一Langmuir结合模型(
Figure BDA0004161870440000924
评估软件版本3.2)计算结合速率(kon或ka)和解离速率(koff或kd)。平衡解离常数(KD)由koff/kon比率计算得出。参见例如：Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若通过上述表面电浆子共振测定法测得的结合率(on-rate)超过106M-1s-1，则可以使用荧光淬灭技术测定结合率，该技术可测量37℃下PBS(pH7.2)中的20nM抗原抗体(Fab形式)在存在浓度升高的抗原的情况下荧光发射强度的增加或减少(激发波长＝295nm；发射波长＝340nm，带通16nm)，该抗原浓度可通过分光亮度计诸如停流分光亮度计(Aviv Instruments)或带有搅拌比色皿的8000系列SLM-AMINCOTM分光亮度计(ThermoSpectronic)测得。
2.抗体片段
在某些实施例中，本文提供在抗体(例如抗FcRH5/抗CD3 TDB)为结合FcRH5和CD3在抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv和scFv片段以及下文所述在其他片段。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见例如Pluckthün，The Pharmacology of MonoclonalAntibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)；也可参见WO 93/16185；以及美国专利第5,571,894号和第5,587,458号。关于包含补救受体结合抗原决定位残基且具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的论述，参见美国专利号5,869,046。
双功能抗体为具有两个抗原结合位点(其可以是二价或双特异性的)的抗体片段。参见例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。Hudson等人(Nat.Med.9：129-134，2003)中也描述了三功能抗体(Triabodies)和四功能抗体(tetrabodies)。
“单结构域抗体”是指包含抗体的重链可变结构域的全部或部分或抗体的轻链可变结构域的全部或部分的抗体片段。在某些实施例中，单结构域抗体为人单结构域抗体(Domantis,Inc.，Waltham,MA；参见例如美国第6,248,516B1号专利)。
抗体片段可由各种技术制造，包括但不限于如本文所述的完整抗体的蛋白水解消化以及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的产生。
3.嵌合和人源化抗体
在某些实施例中，本文提供的抗体(例如抗FcRH5/抗CD3 TDB)为嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于例如美国专利号4,816,567；和Morrison等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984)。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，来源于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人类灵长类动物如猴的可变区)和人恒定区。在又一个实例中，嵌合抗体为“类别转换”抗体，其中类或子类相比于其亲代抗体已发生变更。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些具体实例中，嵌合抗体为人源化抗体。典型地，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲代非人抗体的特异性和亲和力。一般而言，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR(或其部分)例如源自于非人抗体，且FR(或其部分)源自于人抗体序列。人源化抗体可选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施例中，人源化抗体中的一些FR残基经来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的对应残基取代，以例如恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法综述于例如Almagro和Fransson，Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中，并且进一步描述于例如：Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；US专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(具体描述了决定区(SDR)接枝)；Padlan，Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面重塑”)；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)；以及Klimka等人，Br.J.Cancer，83:252-260(2000)(描述了FR改组的“导向选择”法)。
可用于人源化的人框架区域包括但不限于：使用“最佳匹配”方法选择的框架区域(参见例如Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))；来源于轻链或重链可变区的特定子群的人抗体的共有序列的框架区域(参见例如：Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；以及Presta等人J.Immunol.，151：2623(1993))；人成熟的(体细胞突变)框架区域或人种系框架区域(参见例如Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；以及来源于筛选FR库的框架区峪(参见例如：Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)；和Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施例中，本文提供的抗体(例如抗FcRH5/抗CD3 TDB)为人抗体。可使用本领域中已知的各种技术生产人抗体。人抗体一般性描述于：van Dijk和van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)；和Lonberg，Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)。
可通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，该转基因动物已被修饰以响应于抗原攻击而产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体。这样的动物典型地包含全部或部分人免疫球蛋白基因座，其取代内源性免疫球蛋白基因座，或存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。在这样的转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被灭活。有关从转基因动物中获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg，Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。另请参见例如：美国专利号6,075,181和6,150,584(描述了XENOMOUSETM技术)；美国专利号5,770,429(描述了
Figure BDA0004161870440000941
技术)；美国专利号7,041,870(描述了K-M
Figure BDA0004161870440000942
技术)；以及美国专利申请公开号US 2007/0061900(描述了
Figure BDA0004161870440000951
技术)。由这样的动物产生的来源于完整抗体的人可变区可经进一步修饰，例如通过与不同的人恒定区结合来修饰。
人抗体还可通过基于杂交瘤的方法进行制备。用于生产人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系已有描述。(参见例如Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人,J.Immunol.,147：86(1991))。经由人类B细胞杂交瘤技术产生的人抗体还描述于Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。其他方法包括描述于例如以下文献中的：美国第7,189,826号专利(描述了由杂交瘤细胞系生产单克隆人IgM抗体)，和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)。人杂交瘤技术(Trioma技术)还描述于以下各项中：Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)，以及Vollmers和Brandlein,Methods and Findings inExperimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
人抗体也可以通过分离选自人源性噬菌体展示库的Fv克隆可变结构域序列来产生。然后可以将此可变结构域序列与所需的人恒定结构域结合。下文描述了从抗体文库中选择人抗体的技术。
5.多特异性抗体
在任一上述方面，本文所提供的抗FcRH5/抗CD3抗体为多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体为对至少两个不同位点具有结合特异性的抗体(例如单克隆抗体)，例如对免疫效应细胞和除免疫效应细胞以外的靶细胞上的细胞表面抗原(例如肿瘤抗原，例如FcRH5)具有结合特异性的抗体。在一些方面，结合特异性之一针对的是FcRH5，而其他结合特异性则针对CD3。
在一些方面，该细胞表面抗原可以低拷贝数在目标细胞上表达。例如，在一些方面，该细胞表面抗原以每一目标细胞少于35,000个拷贝数表达或存在。在一些实施例中，该低拷贝数细胞表面抗原以每一目标细胞100至35,000个拷贝数存在；每个目标细胞100至30,000个拷贝数存在；每个目标细胞100到25,000个拷贝数存在；每个目标细胞100至20,000个拷贝数存在；每个目标细胞100到15,000个拷贝数存在；每个目标细胞100到10,000个拷贝数存在；每个目标细胞100至5,000个拷贝数存在；每个目标细胞100至2,000个拷贝数存在；每个目标细胞100到1,000个拷贝数存在；或每个目标细胞100到500个拷贝数存在。该细胞表面抗原的拷贝数可例如使用标准的Scatchard图示来确定。
在一些实施例中，双特异性抗体可用于将细胞毒性剂定位于表达肿瘤抗原(例如FcRH5)的细胞。双特异性抗体可制成全长抗体或抗体片段。
制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein和Cuello,Nature 305：537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等人,EMBO J.10：3655(1991))，以及“杵-臼”工程化(参见例如美国专利第5,731,168号)。多特异性抗体的“杵和臼(Knob-in-hole)”工程可用于产生包含杵状物(Knob)的第一臂以及包含第一臂的杵状物可结合于其中的臼状物(hole)的第二臂。在一个实施例中，本发明的该多特异性抗体的杵状物可为抗CD3臂。替代性地，在一个实施例中，本发明的该多特异性抗体的杵状物可为抗-目标/抗原臂。在一个实施例中，本发明的该多特异性抗体的臼状物可为抗CD3臂。替代性地，在一个实施例中，本发明的该多特异性抗体的臼状物可为抗-目标/抗原臂。
多特异性抗体还可使用免疫球蛋白交叉(immunoglobulin crossover)(也称为Fab结构域交换或CrossMab格式)技术进行工程化(参见例如WO2009/080253；Schaefer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,108:11187-11192(2011))。多特异性抗体还可通过以下方法进行制备：用于制备抗体Fc-异二聚体分子的工程静电转向效应(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(参见例如美国专利第4,676,980号；以及Brennan等人,Science,229：81(1985))；使用白胺酸拉链产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用“双抗体”技术以用于制备双特异性抗体片段(参见例如Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；以及使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994))；以及按照例如Tutt等人J.Immunol.147：60(1991)所述的方法制备三特异性抗体。
本文还包括具有三个或更多个抗原结合位点的工程化抗体，包括“章鱼抗体”(Octopus antibodies)(参见例如US 2006/0025576A1)。
抗体或其抗体片段还可包括“双重作用FAb”或“DAF”，其包含结合至CD3以及另一种不同抗原(例如第二生物分子)的抗原结合位点(参见例如US 2008/0069820)。
6.抗体变异体
在一些方面，考虑了本发明的该双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的氨基酸序列变异体。例如，可能希望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。可通过将适当的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。这样的修饰包括例如抗体的氨基酸序列中的残基的缺失和/或插入和/或取代。可实施缺失、插入和取代的任意组合以得到最终构建体，前提条件是最终构建体具有所需的特征，例如，抗原结合特征。
a.取代、插入和缺失变异体
在某些实施例中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变异体。取代突变的所关注位点包括CDR和FR。保守性取代示于表3的“优选取代”标题下。表3中的“示例性取代”标题下提供了更多实质性变更，并且下文将参考氨基酸侧链类别进行进一步描述。可将氨基酸取代引入所关注抗体中，并筛选具有所需活性的产物，例如，保留/改善的抗原结合特征、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。
表3.示例性和优选氨基酸取代
Figure BDA0004161870440000971
Figure BDA0004161870440000981
氨基酸可根据常见的侧链特性进行分组：
(1)疏水性：正白胺酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp，Glu；
(4)碱性：His，Lys，Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；
(6)芳香族：Trp，Tyr，Phe。
非保守取代需要将这些类别中的一类的成员交换为另一类的成员。
一种类型的取代变异体涉及取代一个或多个亲代抗体(例如，人源化或人抗体)的高变区残基。通常，选择用于进一步研究的所得变异体将相对于亲代抗体在某些生物学特性(例如提高的亲和力、降低的免疫原性)上具有修饰(例如，改善)和/或基本上保留亲代抗体的某些生物学特性。示例性取代变异体是亲和性成熟的抗体，其可以方便地产生，例如，使用基于噬菌体展示的亲和性成熟技术，诸如本文所述的那些。简言之，一个或多个CDR残基发生突变，并且变异体抗体在噬菌体上展示并筛选出特定的生物学活性(例如，结合亲和力)。
可以在CDR中进行更改(例如，取代)，以改善抗体亲和力。这样的更改可以在CDR“热点”中进行，即由密码子编码的残基在体细胞成熟过程中高频经历突变(参见例如Chowdhury，Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或与抗原接触的残基，并测试所得变异体VH或VL的结合亲和力。通过构筑二级文库并从其中重新选择以实现亲和力成熟已描述于例如Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在亲和力成熟的一些实施方案中，透过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)中的任一种将多样性引入选择用于成熟的变异基因中。然后创建第二文库。然后筛选该文库，以识别具有所需的亲和性的任何抗体变异体。引入多样性的另一种方法涉及CDR定向方法，其中将若干CDR残基(例如，每次4-6个残基)随机化。可通过例如丙胺酸扫描诱变或建模以特异性识别参与抗原结合的CDR残基。特别地，CDR-H3和CDR-L3经常成为靶点。
在某些实施例中，在一个或多个CDR内可能发生取代、插入或缺失，只要这种修改不显著降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可在CDR中进行实质上不降低结合亲和力的保守性更改(例如，本文所提供的保守性取代)。例如，这样的更改可能在CDR中的抗原接触残基之外。在上文提供的变异体VH和VL序列的某些实施例中，每个CDR均未改变，或包含不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
如Cunningham和Wells(1989)(Science，244：1081-1085)所述，用于识别可能诱变的抗体残基或区域的一种有用的方法称为“丙胺酸扫描诱变”。在该方法中，识别残基或目标残基组(例如，带电荷的残基，诸如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)取代以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可在氨基酸位置引入更多取代，表明对初始取代具有良好的功能敏感性。替代性地或另外地，可使用抗原-抗体复合物的晶体结构来识别抗体与抗原之间的接触点。这样的接触残基和邻近残基可靶向或消除为取代的候选物。可筛选变异体以确定其是否包含所需的性质。
氨基酸序列插入包括胺基和/或羧基末端融合体的长度，从一个残基到包含一百个或更多残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N端甲硫胺酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变异体包括与抗体的N-或C-端与增加抗体的血清半衰期的酶(例如对于ADEPT)或多肽融合。
b.糖基化变异体
在某些实施例中，可改变本发明的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体以增加或减少抗体糖基化的程度。本发明的抗FcRH5抗体中添加或缺失糖基化位点可通过改变氨基酸序列以使得产生或去除一个或多个糖基化位点而方便地实现。
当该抗体包含Fc区时，可改变附着于该抗体的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体典型地包含分支的双触角寡糖，该寡糖通常由N-键联附着于该Fc区的CH2结构域的Asn297。例如参见Wright等人，TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸以及在双触角寡糖结构的“茎”中附着于GlcNAc的岩藻糖。在一些实施例中，可对本发明的抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善的性质的抗体变异体。
在一个实施例中，提供具有缺少(直接或间接地)附着于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体变异体。例如，这种抗体中的岩藻糖含量可为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。通过计算Asn297糖链中岩藻糖的平均含量来测定岩藻糖相对于通过MALDI-TOF质谱术测得的附着于Asn 297的所有糖结构(例如，复合物、杂合和高甘露糖结构)的总和的含量，例如，WO 2008/077546中所述。Asn297是指位于Fc区位置297附近的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；但是，Asn297也可以位于位置297上游或下游大约±3个氨基酸处，即由于抗体的微小序列变化而介于位置294和300之间。这类岩藻糖基化变异体可具有改善的ADCC功能。参见例如美国专利公开号US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”抗体变异体相关的出版物示例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO2003/085119；WO 2003/084570；WO2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US 2003/0157108 A1，Presta,L；和WO 2004/056312A1，Adams等人，尤其是在实例11中)；和敲除细胞系，诸如敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8的CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng，94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
进一步提供具有二等分的寡糖的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体，例如其中附着于抗体的Fc区的双天线型寡糖被GlcNAc一分为二。这种抗体变异体可具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。这种抗体变异体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利号6,602,684(Umana等人)；和US 2005/0123546(Umana等人)。还提供了在寡糖上具有至少一个附着于Fc区的半乳糖残基的抗体变异体。这种抗体变异体可具有改善的CDC功能。这种抗体变异体描述于例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c.Fc区变异体
在某些实施例中，可将一个或多个氨基酸修饰引入双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的Fc区，从而产生Fc区变异体(参见例如US 2012/0251531)。该Fc区变异体可包含人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，其在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如，取代)。
在某些实施例中，本发明考虑了一种具有一部分但非全部效应子功能的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体变异体，使其成为用于应用的所需的候选抗体变异体,其中抗体活体内半衰期很重要，但某些效应子功能(诸如补体和ADCC)为不必要或有害的。可实施活体外和/或活体内细胞毒性测定，以确认CDC和/或ADCC活性的下降/耗竭。例如，可实施Fc受体(FcR)结合测定，以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。介导ADCC的初代细胞NK细胞仅表达Fc(RIII，而单核细胞则表达Fc(RI、Fc(RII和Fc(RIII。FcR在造血细胞上的表达汇总于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)的第464页的表3中。用于评估所关注分子的ADCC活性的体外分析方法的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362中(参见例如Hellstrom,I.等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。替代性地，可采用非放射性分析方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性分析(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；以及CytoTox
Figure BDA0004161870440001021
非放射性细胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。用于这种测定的有用效应细胞包括周边血液单核细胞(PBMC)和自然杀手(NK)细胞。替代性地或另外地，可在例如Clynes等人在Proc.Natl Acad.Sci.USA95:652-656(1998)中公开的动物模型中在体内评估所关注分子的ADCC活性。还可实施C1q结合分析以确认该抗体无法结合C1q并因此缺乏CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为评估补体活化，可执行CDC分析(参见例如，Gazzano-Santoro等人J.Immunol.Methods202:163(1996)；Cragg,M.S.等人Blood.101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie Blood.103:2738-2743(2004))。FcRn结合和体内清除率/半衰期测定也可使用本领域中已知的方法进行(参见例如Petkova,S.B.等人Int'l.Immunol.18(12)：1759-1769，2006)。
效应子功能下降的抗体包括一个或多个Fc区残基238、265、269、270、297、327和329被取代的抗体(美国专利号6,737,056和8,219,149)。这种Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或更多个取代的Fc突变体，包括所谓的“DANA”Fc突变体，其中残基265和297被丙胺酸取代(美国专利号7,332,581和8,219,149)。
在某些实例中，抗体中野生型人Fc区的329位的脯胺酸被甘胺酸或精胺酸或氨基酸残基取代，足以破坏脯胺酸在Fc/Fc.γ受体界面内的脯胺酸夹心结构，该界面形成于Fc的脯胺酸329和FcgRIII的色胺酸残基Trp 87和Trp 110之间(Sondermann等人：Nature.406,267-273,2000)。在某些实施例中，该抗体包含至少一个其他氨基酸取代。在一个实施例中，该其他氨基酸取代为S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S，并且在另一个实施例中，该至少一个其他氨基酸取代为人IgG1 Fc区的L234A和L235A或人IgG4 Fc区的S228P和L235E(参见如US 2012/0251531)；并且在又一个实施例中，该至少一个其他氨基酸取代为人IgG1 Fc区的L234A和L235A和P329G。
描述了某些与FcR的结合得到改善或减弱的抗体变异体。(参见例如，美国专利号6,737,056；WO 2004/056312和Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些实施例中，抗体变异体包含具有一个或多个氨基酸取代的Fc区，该一个或多个取代改善了ADCC，例如该Fc区的位置298、333和/或334(残基的EU编号)处的取代。
在一些实施例中，在该Fc区中进行修改，得到修改(即改善或减少)的C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如美国专利号6,194,551、WO 99/51642和Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184(2000)所述。
具有增长的半衰期并改善了与新生儿Fc受体(FcRn)(其负责将母体IgG转移给胎儿，见Guyer等人，J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人，J.Immunol.24:249(1994))的结合的抗体描述于US2005/0014934A1(Hinton等人)中。那些抗体包含其中具有一个或多个取代的Fc区，其改善了Fc区与FcRn的结合。这种Fc变异体包括在一个或多个Fc区残基上发生取代的Fc变异体：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc区残基434的取代(美国专利号7,371,826)。
另请参见Duncan&Winter，Nature 322：738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；和WO 94/29351，其中涉及Fc区变异体的其他实例。
在一些方面，该抗FcRH5和/或抗CD3抗体(例如，双特异性抗FcRH5抗体)包含Fc区，其包含N297G突变(EU编号)。在一些方面，该双特异性抗FcRH5抗体的抗FcRH5臂包含N297G突变，和/或该双特异性抗FcRH5抗体的抗CD3臂包含Fc区，该Fc区包含N297G突变。
在一些实施例中，包含N297G突变的抗FcRH5抗体包含：抗FcRH5臂，该臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含以下六个HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO：1；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：2；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO：3；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：4；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO：5；以及(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：6；以及包含N297G突变的抗CD3臂。在一些实施例中，包含N297G突变的抗CD3臂包含以下六个HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：9；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：10；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：11；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：12；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：13；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：氨基酸序列SEQ ID NO:14。
在一些实施例中，包含N297G突变的抗FcRH5抗体包含:抗FcRH5臂，该臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：7，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：8；以及包含N297G突变的抗CD3臂。在一些实施例中，包含N297G突变的抗CD3臂包含(a)VH结构域，其包含SEQ ID NO：氨基酸序列SEQ IDNO：15，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:16。
在一些实施例中，含有N297G突变的抗FcRH5抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中，所述一个或多个重链恒定结构域选自：第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域以及第二CH3(CH32)结构域。在一些方面，该一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。在一些方面，该CH31和CH32结构域各自包含突起或空腔，且其中，该CH31结构域中的突起或空腔分别位于该CH32结构域的空腔或突起中。在一些方面，该CH31和该CH32结构域在所述突起和空腔之间的界面处相接。在一些方面，该CH21和CH22结构域各自包含突起或空腔，且其中，该CH21结构域中的突起或空腔分别位于该CH22结构域的空腔或突起中。在其他实例中，CH21和CH22结构域在该突起和空腔之间的界面处相接。在一些方面，该抗FcRH5抗体为IgG1抗体。
在一些实施例中，包含N297G突变的抗FcRH5抗体包含:抗FcRH5臂，该臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)VH结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：7，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：8；以及抗CD3臂，其中(a)该抗FcRH5臂包含T366S、L368A、Y407V和N297G氨基酸取代突变(EU编号)，以及(b)该抗CD3臂包含T366W和N297G取代突变(EU编号)。在一些实施例中，包含T366W和N297G突变的抗CD3臂包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：氨基酸序列SEQ ID NO：15，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQID NO:16。
在其他实施例中，包含N297G突变的抗FcRH5抗体包含抗FcRH5臂，该臂包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含(a)VH结构域，其包含SEQ ID NO：氨基酸序列SEQ ID NO：7，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO：8；以及抗CD3臂，其中(a)该抗FcRH5臂包含T366W和N297G氨基酸取代突变(EU编号)，以及(b)该抗CD3臂包含T366S、L368A、Y407V和N297G突变(EU编号)。在一些实施例中，包含N297G突变的抗CD3臂包含(a)VH结构域，其包含SEQ ID NO：氨基酸序列SEQ ID NO：15，以及(b)VL结构域，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:16。
d.半胱胺酸工程化抗体变异体
在某些实施例中，可能希望创建胱胺酸工程化抗体，例如“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基被胱胺酸残基取代。在特定实施例中，该被取代的残基出现在抗体的可进入位点。通过用半胱胺酸取代那些残基，反应性硫醇基团由此被定位在抗体的可进入位点，并可用于使抗体与其他部分(例如药物部分或连接符-药物部分)结合，以形成免疫结合物，如本文进一步所述。在某些实施例中，以下任何一个或多个残基可被半胱胺酸取代：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；以及重链Fc区的S400(EU编号)。半胱胺酸工程化抗体可按照例如，美国专利号7,521,541所述的方法产生。
e.抗体衍生物
在某些实施例中，本文提供的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可进一步经修饰以包含此项技术中已知且容易获得的额外非蛋白质部分。适用于抗体的衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)以及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛可在制造中具有优势。该聚合物可具有任何分子量，且可聚支链或无支链。附着至抗体的聚合物的数量可以变化，并且如果附着的聚合物超过一种，则它们可以为相同或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可基于以下考虑因素来确定，该考虑因素包括但不限于待改善的抗体的特殊性质或功能、抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗中等。
在另一实施例中，提供了可通过暴露于辐射而选择性加热的抗体和非蛋白质部分的结合物。在一个实施例中，该非蛋白质部分为碳纳米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605，2005)。辐射可具有任何波长，并且包括但不限于不损害普通细胞但是将非蛋白质部分加热至接近该抗体-非蛋白质部分的细胞被杀死的温度的波长。
7.带电区
在一些方面，结合FcRH5或CD3的结合结构域包含含有带电区(CR1)的VH1和含有带电区(CR2)的VL1，其中VH1中的CR1与VL1中的CR2形成电荷对。在一些方面，CR1包含碱性氨基酸残基，且CR2包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR1包含Q39K取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR1由Q39K取代突变组成。在一些方面，CR2包含Q38E取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR2由Q38E取代突变组成。在一些方面，结合CD3的第二结合结构域包含含有带电区(CR3)的VH2以及含有带电区(CR4)的VL2，其中VL2中的CR4与VH2中的CR3形成电荷对。在一些方面，CR4包含碱性氨基酸残基，且CR3包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR4包含Q38K取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR4由Q38K取代突变组成。在一些方面，CR3包含Q39E取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR3由Q39E取代突变组成。在一些方面，VL1结构域连接至轻链恒定结构域(CL1)结构域，而VH1连接至第一重链恒定结构域(CH1)，其中CL1包含带电区(CR5)，而CH1包含电带电区(CR6)，并且其中，CL1中的CR5与CH11中的CR6形成电荷对。在一些方面，CR5包含碱性氨基酸残基，且CR6包含酸性残基。在一些方面，CR5包含V133K取代突变(EU编号)。在一些方面，CR5由V133K取代突变组成。在一些方面，CR6包含S183E取代突变(EU编号)。在一些方面，CR6由S183E取代突变组成。
在其他方面，VL2结构域连接至CL结构域(CL2)，且VH2连接至CH1结构域(CH12)，其中，CL2包含带电区(CR7)，且CH12包含带区(CR8)，并且其中，CH12中的CR8与CL2中CR7形成电荷对。在一些方面，CR8包含碱性氨基酸残基，且CR7包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR8包含S183K取代突变(EU编号)。在一些方面，CR8由S183K取代突变组成。在一些方面，CR7包含V133E取代突变(EU编号)。在一些方面，CR7由V133E取代突变组成。
在其他方面，VL2结构域连接至CL结构域(CL2)，且VH2连接至CH1结构域(CH12)，其中(a)CL2在氨基酸残基F116、L135、S174、S176和/或T178(EU编号)处包含一个或多个突变，以及(b)CH12在氨基酸残基A141、F170、S181、S183和/或V185(EU编号)处包含一个或多个突变。在一些方面，CL2包含一个或多个下列取代突变：F116A、L135V、S174A、S176F和/或T178V。在一些方面，CL2包含下列取代突变：F116A、L135V、S174A、S176F和T178V。在一些方面，CH12包含一个或多个下列取代突变：A141I、F170S、S181M、S183A和/或V185A。在一些方面，CH12包含下列取代突变：A141I、F170S、S181M、S183A和V185A。
在其他方面，结合FcRH5或CD3的结合结构域包含含有带电区(CR1)的VH结构域(VH1)以及含有带电区(CR2)的VL结构域(VL1)，其中VL1中的CR2与VH1中的CR1形成电荷对。在一些方面，CR2包含碱性氨基酸残基，且CR1包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR2包含Q38K取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR2由Q38K取代突变组成。在一些方面，CR1包含Q39E取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR1由Q39E取代突变组成。在一些方面，结合CD3的第二结合结构域包含含有带电区(CR3)的VH域(VH2)以及含有带电区(CR4)的VL域(VL2)，其中VH2中的CR3与VL2中的CR4形成电荷对。在一些方面，CR3包含碱性氨基酸残基，且CR4包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR3包含Q39K取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR3由Q39K取代突变组成。在一些方面，CR4包含Q38E取代突变(Kabat编号)。在一些方面，CR4由Q38E取代突变组成。在一些方面，VL1结构域连接至轻链恒定结构域(CL1)且VH1连接至第一重链恒定域(CH11)，其中，CL1包含带电区(CR5)而CH11包含带电区CR6，并且其中，CH11中的CR6与CL1中的CR5形成电荷对。在一些方面，CR6包含碱性氨基酸残基，且CR5包含酸性氨基酸残基。在一些方面，CR6包含S183K取代突变(EU编号)。在一些方面，CR6由S183K取代突变组成。在一些方面，CR5包含V133E取代突变(EU编号)。在一些方面，CR5由V133E取代突变组成。
在其他方面，VL2结构域连接至CL结构域(CL2)且VH2连接至CH1结构域(CH12)，其中CL2包含带电区(CR 7)，且CH12包含带电区(CR8)，并且其中，CL2中的CR7与CH12中的CR8形成电荷对。在一些方面，CR7包含碱性氨基酸残基，且CR8包含酸性残基。在一些方面，CR7包含V133K取代突变(EU编号)。在一些方面，CR7由V133K取代突变组成。在一些方面，CR8包含S183E取代突变(EU编号)。在一些方面，CR8由S183E取代突变组成。
在其他方面，VL2结构域连接至CL结构域(CL2)，且VH2连接至CH1结构域(CH12)，其中(a)CL2在氨基酸残基F116、L135、S174、S176和/或T178(EU编号)处包含一个或多个突变，以及(b)CH12在氨基酸残基A141、F170、S181、S183和/或V185(EU编号)处包含一个或多个突变。在一些方面，CL2包含一个或多个下列取代突变：F116A、L135V、S174A、S176F和/或T178V。在一些方面，CL2包含下列取代突变：F116A、L135V、S174A、S176F和T178V。在一些方面，CH12包含一个或多个下列取代突变：A141I、F170S、S181M、S183A和/或V185A。在一些方面，CH12包含下列取代突变：A141I、F170S、S181M、S183A和V185A。在一些方面，该抗FcRH5抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中该一个或多个重链恒定结构域选自第一CH2结构域(CH21)、第一CH3结构域(CH31)、第二CH2结构域(CH22)、以及第二CH3结构域(CH32)。在一些方面，该一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。在一些方面，CH31和CH32各自包括突起(P1)或空腔(C1)，并且其中，该CH31中的P1或C1可分别定位在CH32中的C1或P1中。在一些方面，该CH31和该CH32在P1与C1之间的界面处相接。在一些方面，CH21和CH22各自包括突起(P2)或空腔(C2)，并且其中，该CH21中的P2或C2可分别定位在CH22中的C2或P2中。在一些方面，该CH21和该CH22在P2与C2之间的界面处相接。
J.重组方法和组合物
本发明的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体可使用重组方法和组合物产生，例如，如美国专利第4,816,567号中所述。在一个实施例中，提供了一种编码如本文所描述的抗FcRH5抗体的分离核酸。这种核酸可编码包含VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一个实施例中，提供了一种编码如本文所描述的抗CD3抗体的分离核酸。这种核酸可编码包含VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一实施例中，提供了一个或多个包含这种核酸的载体(例如，表达载体)。在另一实施例中，提供了包含这种核酸的宿主细胞。在一个这样的实施例中，宿主细胞包含(例如，已转化)：(1)包含核酸的载体，该核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列；或(2)包含核酸的第一载体，该核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列，以及包含核酸的第二载体，该核酸编码包含抗体的VH的氨基酸序列。在一个实施例中，该宿主细胞为真核细胞，例如中华仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施例中，提供了一种制备双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的方法，其中该方法包括在适合于抗体表达的条件下培养包含如上所述的编码抗体的核酸的宿主细胞，且可选择地从该宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收该抗体。
对于双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体的重组生产，将例如上述的编码抗体的核酸分离并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。这种核酸可通过常规方法(例如，使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)轻易地分离并定序。
1.制造双特异性抗体的双细胞法
在一些方面，本发明的抗体(例如双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体)使用包括两种宿主细胞系的方法制造。在一些方面，在第一宿主细胞系中产生抗体的第一臂(例如，包含臼状物区(hole region)的第一臂)，并在第二宿主细胞系中产生抗体的第二臂(例如，包含杵状物区(knob region)的第二臂)。从宿主细胞系中纯化出抗体的臂并在活体外组装。
2.制造双特异性抗体的单种细胞方法
在一些方面，本发明的抗体(例如双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体)使用包含单一宿主细胞系的方法制造。在一些方面，在单一宿主细胞系中产生并纯化抗体的第一臂(例如，包含臼状物区的第一臂)以及抗体的第二臂(例如，包含杵状物区的第二臂)。优选地，该第一臂和该第二臂在宿主细胞中以可比较的水平表达，例如在宿主细胞中均以高水平表达。相似的表达水平增加有效产生TDB的可能性，并降低TDB组件的轻链(LC)错误配对的可能性。该抗体的第一臂和第二臂各自可进一步包含导入电荷对的氨基酸取代突变，如本文第IIB(7)节所述。该电荷对促进双特异性抗体各个臂的重链和轻链同源对的配对，从而使错误配对最小化。
3.宿主细胞
适用于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，抗体可能在细菌中产生，特别是在无需糖基化和Fc效应子功能的情况下。有关抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国第5,648,237、5,789,199和5,840,523号专利。(也可参见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,HumanaPress,Totowa,NJ,2003),pp.245-254，描述了抗体片段在大肠杆菌中表达。)在表达后，该抗体可与细菌细胞糊中的可溶性部分分离，并可进一步纯化。
除原核生物以外，真核微生物(如丝状真菌或酵母菌)适用于克隆或表达编码抗体的载体的宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，从而导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见：Gerngross，Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适的宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴别出许多杆状病毒毒株，其可与昆虫细胞联合使用，尤其用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
植物细胞培养物也可以用作宿主。参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了在基因转殖植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，可使用适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例包括：由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的293或293细胞)；幼地鼠肾细胞(BHK)；小鼠赛特利细胞(例如Mather，Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；Buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；TRI细胞(例如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)所述)；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中华仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。有关某些适用于抗体生产的哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如：Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo主编，Humana Press，Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
K.免疫结合物
本发明还提供了免疫结合物，其包含本文的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体，该抗体结合至一种或多种细胞毒性剂，诸如化学治疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白毒素，细菌、真菌、植物或动物的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素。
在一个实施例中，免疫结合物是一种抗体-药物结合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物结合，该药物包括但不限于美登木素生物碱(参见美国第5,208,020和5,416,064号专利和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；澳瑞他汀，诸如单甲基澳瑞他汀药物部分DE和DF(MMAE和MMAF)(参见美国第5,635,483、5,780,588和7,498,298号专利)；尾海兔素；加利车霉素或其衍生物(参见美国第5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296号专利；Hinman等人,Cancer Res.53:3336-3342(1993)；以及Lode等人，Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类药物，诸如道诺霉素或阿霉素(参见Kratz等人，Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等人，J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；以及美国第6,630,579号专利)；甲胺蝶呤；长春地辛；紫杉烷类，诸如多西他赛、紫杉醇、拉洛紫杉醇、特赛紫杉醇和奥他紫杉醇；单端孢霉烯；以及CC1065。
在另一个实施例中，免疫结合物包含结合至酶活性毒素或其片段的本文所述的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来源于铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思子毒素A链、莫迪素A链、α-八迭球菌、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商陆蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制因子、姜黄素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、米托菌素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯族毒素。
在另一实施例中，免疫结合物包含结合至放射性原子以形成放射性结合物的本文所述的双特异性抗FcRH5/抗CD3抗体。多种放射性同位素可用于产生放射性结合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。当该放射性结合物用于检测时，它可能包含用于闪烁扫描研究的放射性原子，例如，tc99m或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记物，例如，碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
抗体和细胞毒性剂的结合物可使用多种双功能蛋白偶联剂进行制备，该双功能蛋白偶联剂例如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亚胺基硫烷(IT)、亚氨基酸酯的双功能衍生物(例如己二酸二甲酯盐酸盐(HCl))、活性酯(例如双琥珀酰亚胺辛二酸)、醛(例如戊二醛)、双迭氮化合物(例如双(对迭氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(例如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。举例而言，蓖麻毒蛋白免疫毒素可如Vitetta等人，Science 238:1098(1987)中所阐述的进行制备。碳14标记的1-异硫氰酸芐基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为一种用于将放射性核苷酸结合至抗体的示例性螯合剂。参见WO94/11026。连接符可以为促进细胞中细胞毒性药物释放的“可切割连接符”。例如，可使用酸不稳定的连接符、对肽酶敏感的连接符、光不稳定的连接符、二甲基连接符或含双硫键的连接符(Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利第5,208,020号)。
本文的免疫结合物或ADC明确考虑但不限于这种用交联剂制得的结合物，该交联剂包括但不限于可商购获得(例如从Pierce Biotechnology,Inc.(Rockford,IL.,U.S.A)商购获得)的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸酯)。
L.药物组合物和调配物
该抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体的药物组合物和调配物可通过将具有所需纯度的此类抗体与一种或多种可选的药用载体混合(Remington’sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))，以冻干调配物或水溶液的形式制备。药用载体在采用的剂量和浓度下通常对受体无毒，且包括但不限于：缓冲剂，诸如L-组胺酸/冰乙酸(例如，pH 5.8)、磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；张力剂，诸如蔗糖；稳定剂，诸如L-甲硫胺酸；抗氧化剂，包括N-乙酰-DL-色胺酸、抗坏血酸和甲硫胺酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基芐基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵；芐索铵氯化物；苯酚、丁醇或芐醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；氨基酸，例如甘胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺酸、组胺酸、精胺酸或离胺酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂(例如EDTA)；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐相对离子，例如钠；金属错合物(例如锌蛋白错合物)；和/或非离子界面活性剂，例如聚山梨醇酯20或聚乙二醇(PEG)。本文中示例性的药用载体进一步包括间质药物分散剂，例如，可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人类可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0004161870440001141
Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和用法(包括rHuPH20)描述于美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968中。在一个方面，sHASEGP与一种或多种附加的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶结合在一起。
示例性冻干抗体调配物如美国第6,267,958号专利所述。水溶性抗体调配物包括美国专利第6,171,586号和WO2006/044908中所述的，后者所述的调配物包括组胺酸-乙酸盐缓冲剂。
本文所述的调配物还可包含正在治疗的特定适应症所必须的多于一种活性成分，优选地，为那些相互无不利影响的具有互补活性的成分。例如，可期望进一步提供附加治疗剂(例如，化学治疗剂、细胞毒性剂、生长抑制剂和/或抗激素剂，诸如本文上文所述的那些)。这样的活性成分适宜地以对预期目的有效的量组合存在。
活性成分可以包载在例如透过凝聚技术或透过接口聚合制备的微囊(例如，分别为羟甲基纤维素微囊或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊)中、胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳、奈米颗粒和奈米囊(nanocapsule))中或粗滴乳状液中。这样的技术公开于Remington'sPharmaceutical Sciences(第16版，Osol,A.主编，1980)。
可以制备缓释制剂。缓释制剂的适当实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质是成形物品的形式，例如，膜或微囊。
用于体内施用的调配物通常是无菌的。无菌性可易于例如他通过无菌滤膜过滤来实现。
III.制品
在本发明的另一方面，提供了含有可用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料的制品。该制品包括容器和容器上或与容器相关的标签或药品说明书。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。该容器可以由多种材料，例如玻璃或塑料，形成。该容器可容纳组合物，该组合物本身或与对于治疗、预防和/或诊断病情有效的另一组合物结合使用，并可能具有无菌入口(例如，该容器可为具有可透过皮下注射针头穿孔的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂为本文所述的抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体。在一些方面，该制品包含至少两个容器(例如小瓶)，第一容器装有适合于C1D1(第1周期，剂量1)的量的组合物，且第二容器装有适合于C1D2(第1周期，剂量2)的量的组合物。在一些方面，该制品包含至少三个容器(例如小瓶)，第一容器装有适合于C1D1的量的组合物，第二容器装有适合于C1D2的量的组合物，且第三容器装有适合于C1D3的量的组合物。在一些方面，该容器(例如小瓶)可具有不同尺寸，例如可具有与其所含的组合物的量成比例的尺寸。包含与预期剂量成比例的容器(例如小瓶)的制品可例如增加便利性、最小化浪费和/或增加成本效益。该标签或包装说明书表明该组合物用于治疗所选病情(例如多发性骨髓瘤(MM)，例如复发性或难治性MM，例如4L+R/RMM)，且进一步包括与本文所述的给药方案中的至少一个相关的信息。此外，该制品可包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中该组合物包含本文所述的抗FcRH5/抗CD3双特异性抗体；以及(b)其中含有组合物的第二容器，其中该组合物包含另一细胞毒性剂或其他治疗剂。替代性地或另外地，该制品可进一步包含第二(或第三)容器，该容器包含药用缓冲剂，例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。从商业和使用者的角度来看，它可以进一步包含其他合适的材料，其中包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
IV.实例
以下为本发明的方法的实例。应理解，可鉴于上文所提供的一般说明来实践各种其他实施例，且该实例不意图限制权利要求的范围。
实例1.评估递增剂量的Cevostamab(BFCR4350A)在R/R MM患者中的安全性和有效性的I期试验
GO39775(NCT03275103)为开放式(open-label)、多中心、I期试验，其评估递增剂量的抗FcRH5/抗CD3 T细胞依赖性双特异性抗体(TDB)Cevostamab(BFCR4350A)在大约150名患者中的安全性和药物动力学，这些患者患有复发性或难治性多发性骨髓瘤，无针对MM的适当和可用的既定疗法，或对那些既定疗法不耐受。包括一个专门的扩展组，用于测试托珠单抗预治疗在Cevostamab治疗(组E)后对CRS的频率和/或严重程度的改善。
A.背景技术
Cevostamab(BFCR4350A)为一种人源化全长免疫球蛋白(Ig)G1抗片段可结晶受体样5/分化簇3(抗FcRH5/抗CD3)T细胞依赖性双特异性抗体(TDB)，其使用杵-臼技术在中国仓鼠卵巢细胞中产生(Atwell等人,JMol Bio,270：26-35,1997；Spiess等人,NatBiotechnol,31(8)：753-758,2013)(图24)。Cevostamab在基于EU编号的KFCR8534A和HCDT4425A半抗体的Fc区中包含N297G氨基酸取代，这导致非糖基化重链与Fcγ受体(FcγR)的结合最小，且因此减弱Fc效应子功能。
B.入选标准
此研究登记了具有预期会表达FcRH5抗原的R/R MM的病史且符合如下所概述的纳入和排除标准的患者。在登记之前的资格筛选过程中不需要确认FcRH5表达，但根据以下基本原理进行回顾性评估：
–非临床研究表明，Cevostamab在多种人MM细胞系和具有广泛FcRH5表达水平的原代人MM浆细胞(包括具有最小FcRH5表达的细胞)中广泛活跃于细胞杀伤，表明即使极低FcRH5表达水平也可能足以用于临床活动(Li等人,Cancer Cell,31：383-395,2017)。
–FcRH5为一种细胞表面抗原，其表达仅限于B谱系细胞，包括浆细胞。其在迄今为止测试的MM样品中以100％的流行率表达(Elkins等人,Mol Cancer Ther,11：2222-2232,2012；Li等人Cancer Cell,31：383-395,2017)。
ο对从所有患者获得的骨髓样品进行FcRH5表达的回顾性分析，且进行分析验证(例如，定量逆转录PCR、免疫组织化学和定量流式细胞术)。这些数据用于告知如何在后续研究中最佳地利用FcRH5表达筛选。
患者必须满足以下研究入组标准：
年龄≥18岁
东部肿瘤协作组(ECOG)机能状态为0或1
预期寿命至少12周
患者必须患有R/R MM，无针对MM的适当和可用的既定疗法，或对那些既定疗法不耐受
先前抗癌疗法的不良事件消退为≤1级，以下情况除外：
–任何级别的脱发
–周围感觉或运动神经病变必须已消退至≤2级
定义为以下至少一项的可测量疾病：
–血清单克隆蛋白(M-蛋白)≥0.5g/dL(≥5g/L)
–尿液M蛋白≥200mg/24hr
–血清游离轻链(SFLC)分析：涉及的SFLC≥10mg/dL(≥100mg/L)和异常SFLC比率(<0.26或>1.65)
如下的实验室值：
–肝功能
οAST和ALT≤3X ULN
ο总胆红素≤1.5X ULN；有记录的吉尔伯特综合征病史且总胆红素升高伴有间接胆红素升高的患者符合条件。
–血液学功能(第一剂Cevostamab之前的要求)
ο在第一剂Cevostamab之前14天内未输血的情况下血小板计数≥50,000/mm3
οANC≥1000/mm3
ο总血红蛋白≥8g/dL
ο由于MM相关的血球减少症(例如，由于广泛MM骨髓累及)不符合血液学功能标准的患者可在与医学监察员讨论且获得批准后纳入研究。患者可接受支持性照护以满足血液学功能合格标准(例如输血、G-CSF等)。
–肌酐≤2.0mL/dL和肌酐清除率(CrCl)≥30mL/min(计算或每24小时尿液收集)
–血清钙(白蛋白校正)水平等于或低于1级高钙血症(患者可接受高钙血症治疗以满足合格标准)
对于有生育能力的女性：同意禁欲(避免异性性交)或使用避孕措施。
对于男性而言：同意保持禁欲(避免异性性交)或使用避孕套，并且同意不捐赠精子。
C.排除标准
将符合任意以下标准的患者排除在研究之外：
怀孕或母乳哺育，或打算在研究期间或最后一剂研究药物之后3个月内怀孕。
有生育能力的女性必须在开始研究药物之前的7天内血清妊娠测试结果呈阴性。
在第一次Cevostamab输注之前的4周内曾使用任何单克隆抗体、放射免疫结合物或抗体-药物结合物作为抗癌疗法。
在第一次Cevostamab输注之前的12周内曾用嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法进行治疗。
在第一次Cevostamab输注之前的12周或药物的5个半衰期(以较短时间为准)内曾用全身免疫治疗药物，包括但不限于细胞因子疗法和抗CTLA4、抗PD-1和抗PD-L1治疗性抗体进行治疗。
与先前免疫治疗剂相关的已知治疗相关、免疫介导的不良事件如下：
–先前PD-L1/PD-1或CTLA-4抑制剂：≥3级不良事件，用替代疗法治疗的3级内分泌病除外
–治疗中止后未消退至基线的1-2级不良事件
在第一次Cevostamab输注之前的4周或药物的5个半衰期(以较短者为准)内用放疗、任何化学治疗剂或任何其他抗癌剂(研究性或其他)进行治疗。
在第一次Cevostamab输注之前的100天内进行自体干细胞移植(SCT)。
先前的同种异体SCT。
绝对浆细胞计数超过500个/微升或周边血液白血球的5％。
先前实体器官移植。
自体免疫性疾病病史，包括但不限于重症肌无力、肌炎、自体免疫性肝炎、全身性红斑性狼疮症、类风湿性关节炎、发炎性肠病、与抗磷脂综合征相关的血管血栓形成、韦格纳肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、修格连综合征(
Figure BDA0004161870440001191
syndrome)、格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome)、多发性硬化症、血管炎或肾丝球肾炎。
–有自体免疫相关甲状腺功能低下病史且接受稳定剂量甲状腺替代激素治疗的患者可有资格参加此研究。
具有确诊的进行性多灶性白质脑病病史的患者。
对单克隆抗体疗法(或重组抗体相关融合蛋白)的严重过敏或过敏性反应史。
具有已知淀粉样变性(例如，组织活检的阳性刚果红染色或等效物)病史的患者。
在重要器官附近有病变的患者可能会在肿瘤发作的情况下突然失代偿/恶化。
–与医疗监察员讨论后，患者可能符合条件。
可能影响方案顺应性或结果解释的其他恶性病变病史。
–允许有根治性皮肤基底癌或鳞状细胞癌或子宫颈原位癌病史的患者。
若恶性病变在第一次Cevostamab输注之前≥2年未治疗而处于缓解期，也将允许患有已接受治愈性治疗的恶性病变的患者。
当前或过往的CNS疾病史，诸如中风、癫痫、CNS血管炎、神经退化性疾病或MM累及CNS。
–允许有中风病史，在过去2年内未经历中风或短暂性脑缺血发作，且根据研究者的判断不具有残留神经功能缺损的患者。
–允许有癫痫病史，在过去2年内无癫痫发作且未接受任何抗癫痫药物治疗的患者。
可能限制患者对CRS事件充分缓解的能力的严重心血管疾病(例如但不限于纽约心脏协会III类或IV类心脏病、过去6个月内的心肌梗塞、不受控心律失常或不稳定心绞痛)需要补充氧气的有症状的活动性肺病。
研究登记时的已知活动性细菌、病毒、真菌、分枝杆菌、寄生虫或其他感染(不包括甲床真菌感染)，或在第一次Cevostamab输注之前4周内的任何需要用IV抗生素治疗的重大感染事件。
已知或疑似慢性活动性EBV感染。诊断慢性活动性EBV感染的指南由Okano等人,AmJ Hematol,80：64-69,2005提供。
在第一次Cevostamab输注之前14天内的最近大手术。
–允许方案规定的程序(例如骨髓活检)。
急性或慢性HBV感染的阳性血清学或PCR测试结果
–无法通过血清学测试结果确定HBV感染状态的患者必须通过PCR确定为HBV阴性才有资格参与研究。
急性或慢性HCV感染。
–HCV抗体阳性的患者必须通过PCR确定为HCV阴性才有资格参加研究。
已知的HIV血清阳性病史。
在第一次Cevostamab输注之前的4周内施用减毒活疫苗或预期在研究期间需要此类减毒活疫苗接受全身免疫抑制药物(包括但不限于环磷酰胺、硫唑嘌呤、胺甲喋呤、沙利度胺和抗肿瘤坏死因子药物)，皮质类固醇治疗除外，≤10毫克/天的泼尼松或等效物，在第一剂Cevostamab之前2周内，且若适用，托珠单抗前驱用药，在第一剂Cevostamab之前。
–接受急性、低剂量、全身性免疫抑制剂药物治疗(例如，用于恶心的单一剂量的地塞米松)的患者可在与医学监察员讨论且获得批准后加入研究。
–允许使用吸入性皮质类固醇。
–允许使用盐皮质激素管理起立性低血压。
–允许使用生理剂量的皮质类固醇管理肾上腺功能不全。
根据研究者的判断，在筛选之前12个月内有违禁药物或酒精滥用史
D.剂量和施用：Cevostamab
Cevostamab使用与体重无关的均一剂量。如实例2所述，各患者的Cevostamab剂量取决于其剂量水平分配。
Cevostamab针对FcRH5和CD3抗原的胞外结构域。抗FcRH5/抗CD3TDB的两个臂的接合导致用于治疗MM的FcRH5+恶性细胞的T细胞定向细胞杀伤。因此，在药理活性剂量下，在FcRH5+细胞存在下预计T细胞活化，包括细胞因子释放。因此，此I期研究(GO39775)中推荐的安全起始剂量的确定采用了基于活体外T细胞活化的最小预期生物效应水平(MABEL)方法。建议的患者起始剂量为0.05mg(基于70kg患者为0.7μg/kg)的均一剂量，且得到与MOLP-2细胞共培养的人周边血液单核细胞(PBMC)的活体外实验的支持。在食蟹猴中进行的4周剂量毒性研究也支持建议的Cevostamab起始剂量。
建议的起始剂量下的估计Cmax约为14ng/mL(范围为8-25ng/mL，基于40-120kg的体重范围，假设人体分布至中央隔室的体积为50mL/kg)。基于活体外人PBMC:MOLP-2共培养物的T细胞活化的50％有效浓度(EC50)值(58.8±41ng/mL，且考虑到供体变异性)，此估计的Cmax具有大约20％-25％的预测药理活性(基于计算[C/EC50+C]，其中C为0.05mg处的估计浓度；Saber等人,Regul Toxicol Pharmacol,81：448-456,2016；Saber等人,Society ofToxicology,abstract 1556,2017)。活体外人PBMC:MOLP-2共培养物中的T细胞活化为最敏感测定中的最敏感安全终点。此外，此预测的Cmax低于活体外人PBMC:MOLP-2共培养物中的EC50细胞因子释放(最小细胞因子释放，供体间变异性高；EC50值范围为63.6-289.25ng/mL)。基于Cevostamab的2.6nM单价解离常数(KD)，在此估计的Cmax下，CD3受体占有率计算为4％。
建议的起始剂量得到了食蟹猴的4mg/kg既定最高非严重毒性剂量(HNSTD)的支持。基于食蟹猴研究中达成的Cmax(分次剂量为4mg/kg剂量时，Cmax＝40.7μg/mL，且Cmax＝129μg/mL)，建议的0.05mg起始剂量具有2900-9200倍安全系数范围。基于体重归一化剂量的安全系数为5600(计算如下：剂量cynomolgus monkey,HNSTD/剂量human,proposed starting dose＝4mg/kg/0.7μg/kg)。0.01mg/kg的药理活性剂量还基于食蟹猴周边血液的B细胞计数、T细胞活化和细胞因子水平增加的变化而确定。建议的起始剂量下的估计Cmax比食蟹猴药理活性剂量下观察到的135ng/mL Cmax低约10倍。与针对人PBMC中的Cevostamab观察到的最小程度至中度(20％-40％)活体外B细胞杀伤相比，Cevostamab在食蟹猴活体内和活体外展现有效的B细胞杀伤。基于具有相似PK特征的其他治疗性IgG1抗体的PK模拟并未表明在固定剂量或针对体重调整剂量后的暴露变异性存在有临床意义的差异(Bai等人,Clin Pharmacokinet,51：119-135,2012)。在此基于模拟的评估的基础上，对此研究建议固定剂量。固定剂量已被用于且批准用于多种单克隆抗体(例如，
Figure BDA0004161870440001221
(奥比妥珠单抗)，美国包装说明书，Genentech USA,Inc.)。
Cevostamab使用标准医用注射器和注射泵或适用的IV袋通过IV输注向患者施用。兼容性测试表明，Cevostamab在延伸装置和聚丙烯注射器中是稳定的。药品通过注射泵经由IV输液器或IV袋输液递送，最终Cevostamab体积由剂量决定。
本文描述了接受Cevostamab的患者的住院要求。Cevostamab在可立即接触到训练有素的重症监护人员和设施的环境中施用，该人员和设施能够应对和管理医疗紧急情况。替代性地，通过皮下(SQ或SC)注射向患者施用Cevostamab。
所有Cevostamab剂量均向含水充足的患者施用。在第1周期和第2周期中，在施用各Cevostamab剂量之前1小时，或在后续周期中，若患者在先前剂量下经历CRS，则必须施用由20mg IV地塞米松或80mg IV甲泼尼龙组成的皮质类固醇前驱用药。自第3周期开始，对于先前剂量未发生CRS的患者，可停止皮质类固醇前驱用药。此外，除非有禁忌症，否则必须在施用Cevostamab之前施用口服乙酰胺酚或对乙酰胺基酚(例如500-1000mg)和25-50mg苯海拉明的前驱用药。对于无法获得苯海拉明的场所，可根据当地实践使用等效药物替代。
最初，在4小时(±15分钟)内施用Cevostamab。对于经历IRR的患者，输注可能会减慢或中断。在第1周期期间Cevostamab输注结束时，患者住院。在各后续Cevostamab输注后，至少对患者进行90分钟的发烧、受寒、寒颤、低血压、恶心或其他IRR体征和症状观察。此外，在不存在IRR的情况下，后续周期中Cevostamab的输注时间可能会减少至2小时。
经历患者内剂量递增的患者应在至少4小时内首次接受更高剂量的Cevostamab输注。
E.剂量和施用：托珠单抗
必要时施用托珠单抗，如下所述。根据可用临床数据的综述，可能需要在第1周期期间在施用Cevostamab之前施用托珠单抗。在一些方面，在施用Cevostamab之前，对所有患者施用托珠单抗。
CRS为潜在的危及生命的综合症状，由免疫效应细胞或靶细胞在过度和持续的免疫反应过程中过度释放细胞因子引起。CRS可由多种因素触发，包括感染有毒病原体，或由活化或增强免疫反应的药物引起，从而导致明显和持续的免疫反应。
无论诱发因素如何，严重或危及生命的CRS均为医疗紧急情况。若管理不成功，则可能导致严重的残疾或致命后果。目前的临床管理侧重于治疗个体体征和症状，提供支持性照护，且尝试使用高剂量皮质类固醇来抑制炎症反应。然而，此方法并非总是成功的，尤其在后期干预的情况下。此外，类固醇可能对T细胞功能产生负面影响，其可能降低免疫调节疗法在癌症治疗中的临床益处。
CRS与多种细胞因子的升高，包括IFN-γ、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的显著升高相关。新出现的证据表明IL-6为CRS的中心介质。IL-6为由多种细胞类型产生的促炎性多功能细胞因子，其已被证明参与多种生理过程，包括T细胞活化。
无论何种诱发因素，CRS均与高IL-6水平相关(Panelli等人,J Transl Med,2：17,2004；Lee等人,Blood,124：188-195,2014；Doessegger和Banholzer,Clin TranslImmunology,4：e39,2015)，且IL-6与CRS的严重程度相关，患有严重或危及生命的CRS(NCICTCAE 4级或5级)的患者的IL-6水平比未经历CRS或经历较轻CRS反应(NCI CTCAE 0-3级)的患者高得多(Chen等人,J Immunol Methods,434：1-8,2016)。
托珠单抗
Figure BDA0004161870440001241
为针对可溶性和膜结合IL-6R的重组人源化抗人单克隆抗体，其抑制IL-6介导的信号传递。用Cevostamab治疗出现严重CRS的患者可能受益于托珠单抗治疗。
2017年8月30日，美国食品和药物管理局批准托珠单抗用于治疗成人以及2岁和以上儿童患者的严重或危及生命的CAR-T细胞诱导的CRS。初步临床数据(Locke等人,Blood,130：1547,2017)表明，托珠单抗预防可通过在细胞因子释放之前阻断IL-6受体传递信号来降低CAR-T细胞诱导的CRS的严重程度。因此，托珠单抗前驱用药还可降低与Cevostamab相关的CRS的频率或降低其严重程度。基于分步分离的所有数据，若可能有利于进一步降低CRS的频率或严重程度，则托珠单抗可能需要在任一治疗组(即，组A或组B)的第1周期中作为前驱用药施用。可向患者施用一个或多于一个剂量的托珠单抗。托珠单抗标签允许多至四个间隔8小时的剂量，用于治疗CRS。CRS治疗可包括施用IV类固醇。
F.疾病特异性评估
在各治疗周期期间，根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)缓解标准(表4)评估患者的疾病缓解和进展。治疗周期在实例2中详细描述。
在C1D1给药前、第1周期目标剂量输注日与C2D1之间、第4周期之前或之时的7天内以及确认CR或疾病进展时，需要进行骨髓活检和抽吸。
在各周期开始时进行以下骨髓瘤特异性测试，自C1D1开始：
–血清蛋白电泳(SPEP)与血清免疫固定电泳(SIFE)
–SFLC
–定量Ig水平
应在筛选时和根据需要进行以下骨髓瘤特异性测试以确认缓解：
–用于M蛋白定量的24小时尿蛋白电泳(UPEP)与尿免疫固定电泳(UIFE)
表4中定义的所有缓解类别(严格完全缓解(sCR)、CR、VGPR、PR和最小缓解(MR))均需要进行以下确认评估：
–若先前存在髓外疾病，则进行CT扫描或MRI二维测量以根据IMWG标准确认尺寸减小
–若先前存在髓外疾病，则进行PET-CT扫描、CT扫描或MRI以确认完全解决
–即使在筛选时未进行UPEP，也需要24小时UPEP/UIFE来确认VGPR。
需要以下额外样本/评估来确认sCR或CR：
–SIFE
–SFLC
–即使筛选时未进行UPEP，也需要24小时UPEP/UIFE(在当地进行)以确认CR/sCR
–骨髓穿刺和活检
–若先前存在髓外疾病，则进行PET-CT扫描、CT扫描或MRI以确认完全解决
为确认疾病进展，需要满足以下各项：
–若怀疑M蛋白升高导致疾病进展，则应在两个连续周期的两个连续评估中进行SPEP、UPEP或SFLC分析。
–若在新骨病变或软组织浆细胞瘤的发展或现有骨病变或软组织浆细胞瘤的大小增加时怀疑病情进展，应进行骨骼检查/CT扫描/MRI且与基线影像学检查进行比较。
–若怀疑完全由MM引起的高钙血症导致病情进展，则当地实验室结果血清钙水平应为≥11mg/dL，且在第二次评估时确认。
所有在筛选时临床疑似髓外疾病或已知髓外疾病的患者均必须在筛选期间进行影像学检查，以评估髓外疾病的存在/程度。此可使用PET/CT、CT扫描或全身MRI进行。被发现患有髓外疾病的患者每12周(±7天)接受重复影像学检查(最好以与筛选时相同的方式进行)。临床怀疑病情进展时也应进行影像学检查。
骨骼检查在筛选时和临床指示时完成。平片和CT扫描均为评估骨骼疾病的可接受的影像学检查方式。影像学检查应包括头骨、长骨、胸部和骨盆。若在骨骼检查时发现浆细胞瘤，则应记录二维肿瘤测量值。若将PET/CT扫描或低剂量全身CT作为筛选的一部分进行，则可省略骨骼检查。
表4.国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一缓解标准(2016)
Figure BDA0004161870440001261
Figure BDA0004161870440001271
BM＝骨髓；CT＝计算机断层摄影；FLC＝无轻链；M蛋白＝单克隆蛋白；MRI＝核磁共振成像；PET＝正电子发射断层扫描；PFS＝无进展存活期；SPD＝直径乘积的和。
a应特别注意治疗后不同M蛋白的出现，尤其是在已达成常规CR的患者的情况下，通常与免疫系统的寡克隆重建有关。这些条带通常会随着时间的推移而消失，且在一些研究中，与更好的结果相关。此外，接受单克隆抗体的患者中IgGk的出现应与治疗性抗体区分开来。
b在一些情况下，可能在免疫固定时仍检测到原始M蛋白轻链同型，但伴随的重链成分已消失；即使无法检测到重链成分，也不将此视为CR，因为可能是克隆体进化为仅分泌轻链。因此，若患者患有IgAλ骨髓瘤，则要获得CR的资格，在血清或尿液免疫固定中应不可检测到IgA；若在无IgA的情况下检测到游离λ，则其必须伴随不同的重链同型(IgG、IgM等)。自Durie等人2006修改。需要在制定任何新疗法之前的任何时间进行两次连续评估(Durie等人2015)。
c浆细胞瘤测量值应取自PET/CT或MRI扫描的CT部分，或适用的专用CT扫描。对于仅有皮肤受累的患者，应使用尺子测量皮损。肿瘤大小的测量将由SPD确定。
d先前归类为达成CR的患者单独进行阳性免疫固定不会被视为进展。仅在计算无病存活期时才应使用CR复发的标准。
e若根据研究者的判断认为某个值为虚假结果(例如可能的实验室错误)，则在确定最低值时将不考虑该值。
fCRAB特征＝钙升高、肾功能衰竭、贫血、溶骨性病变。
实例2.研究设计
i.研究描述
患者被纳入两个组之一：单步剂量递增组(组A)或多步剂量递增组(组B)。该研究在全球大约20-25个地点招募了大约50-70名患者参加剂量递增组。Cevostamab以21天周期给药。具有可接受的毒性和临床受益证据的患者可继续接受Cevostamab最多17个周期，直至病情进展(根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)标准(表4)或不可接受的毒性确定，以先发生者为准)。如下所述，接受患者内剂量递增的患者除外；这些患者可继续接受最多17个周期的新的增加剂量的Cevostamab，直至病情进展或出现不可接受的毒性，以先发生者为准。完成17个治疗周期的患者可有资格接受Cevostamab再治疗。
将Cevostamab治疗的持续时间限制为17个周期的理由是3重的。首先，可最小化可能与延长治疗持续时间相关的慢性和/或累积毒性。其次，一旦停止Cevostamab治疗，有限的治疗持续时间提供了评估缓解持续时间的机会。最后，若满足上述标准，则将Cevostamab治疗限制在17个周期内为探索在初始Cevostamab治疗中达成客观缓解(PR或CR)或SD的患者用Cevostamab再治疗的可能性提供了机会。
完成17个周期的研究治疗(或再治疗，若符合条件)的患者将继续进行本文概述的肿瘤和其他评估，直至病情进展、开始新的抗癌疗法或退出研究参与，以先发生者为准。
在整个研究过程中以及最后一剂研究治疗后至少90天内，对所有患者的不良事件进行密切监测。不良事件根据美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准4.0版(NCICTCAE v4.0)进行分级，但细胞因子释放综合征(CRS)除外，其根据由Lee等人,Blood,124：188-195,2014确立的Modified Cytokine Release Syndrome Grading System，或由Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant,25(4)：625-638,2019确立且描述于表5A中的最新ASTCT Consensus Grading for Cytokine Release Syndrome进行分级。NCI CTCAE v4.0CRS分级量表是基于用单克隆抗体治疗后CRS的特征(Lee等人,Blood,124：188-195,2014)。T细胞定向疗法，包括双特异性药物(诸如博纳吐单抗)和授受细胞疗法(诸如表达CAR的工程化T细胞)导致T细胞活化释放的细胞因子的PD情形与那些与常规单克隆抗体相关的PD情形不同。因此，NCI CTCAE v4.0定义的CRS的临床特征可能不适用于T细胞定向疗法后的患者。
已经提出且发布了几种替代分级量表，其专门用于评估T定向疗法的CRS(Davila等人,Sci Transl Med,6：224ra25,2014；Lee等人,Blood,124：188-195,2014；Porter等人,Sci Transl Med,7：303ra139,2015)。Lee等人的分级系统是基于由CD19定向CAR-T细胞和博纳吐单抗(blinatumomab)治疗产生的CRS。其为对NCI CTCAE v4.0的修改，提供了进一步的诊断细节，包括考虑在CRS环境中可能发生的肝转胺酶瞬时升高。除了诊断标准外，表5A和5B中还提供且引用了基于其严重程度的CRS管理建议，包括使用皮质类固醇和/或抗细胞因子疗法进行早期干预。因此，纳入CRS分级量表允许使已公布和广泛采用的报告与管理指南保持一致。
表5A.细胞因子释放综合征分级系统
Figure BDA0004161870440001301
Lee 2014标准：Lee等人,Blood,124：188-195,2014。
ASTCT共识分级：Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant,25(4)：625-638,2019。
a低剂量升压剂：低于表5B所示剂量的单一升压剂。
b高剂量升压剂：如表5B中所定义。
*发烧定义为体温≥38℃，不可归因于任何其他原因。对于接着解热或抗细胞因子疗法(诸如托珠单抗或类固醇)的CRS患者，不再需要发烧来对后续CRS严重程度进行分级。在此情况下，CRS分级由低血压和/或缺氧驱动。
Figure BDA0004161870440001314
CRS级别由更严重事件确定：不可归因于任何其他原因是低血压或缺氧。例如，39.5℃的体温、需要1种升压剂的低血压和需要低流量鼻插管的缺氧被归为3级CRS。
Figure BDA0004161870440001315
低流量鼻插管定义为以≤6L/分钟输送氧气。低流量还包括漏氧输送，有时用于儿科。高流量鼻插管定义为以>6L/分钟输送氧气。
表5B.高剂量升压剂
Figure BDA0004161870440001311
min＝分钟；VASST＝升压素和败血性休克试验。
aVASST升压剂当量方程式：去甲肾上腺素当量剂量＝[去甲肾上腺素(μg/min)]+[多巴胺(μg/kg/min)÷2]+[肾上腺素(μg/min)]+[去羟肾上腺素(μg/min)÷10]。
ii.剂量递增和扩大组
用于治疗恶性血液病的单克隆抗体按基于3至4周周期的时间表施用。出于PK和安全性原因，第一治疗周期经常被修改，因为抗体以分割或分次剂量施用(
Figure BDA0004161870440001312
(奥比妥珠单抗)美国包装说明书，Genentech USA,Inc.)。以类似的方式，作为连续IV输注施用的靶向CD19的双特异性T细胞接合子博纳吐单抗采用分步给药策略治疗急性淋巴球白血病(ALL)(
Figure BDA0004161870440001313
(博纳吐单抗)美国包装说明书，Amgen,Inc.)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(Viardot等人,Blood,127：1410-1416,2016)。Cevostamab的非临床数据导致在第一剂量后出现急性细胞因子释放，而在后续剂量中则完全无释放或在较小程度上释放。因此，针对B细胞恶性肿瘤的T细胞接合抗体的集体非临床和临床数据表明，分步给药有可能最大限度地减少Cevostamab治疗时出现的毒性。因此，使用如本文所述的第1周期分步剂量方案来施用Cevostamab。
分步剂量方法的剂量之间的最佳比例未知，但根据其他双特异性分子的临床信息，C1D1(第1周期，第1天)剂量与C1D8(第1周期，第8天)剂量的1:3比率为Cevostamab的合理初始给药方案。然而，鉴于C1D1剂量可能为固定的，而C1D8剂量继续剂量递增，此研究可测试其他剂量之间的比率。
该研究的单步剂量递增组(组A)评估了在第一个21天周期的第1天和第8天通过IV输注，然后在各21天周期的第1天通过IV输注施用的Cevostamab的安全性、耐受性和药物动力学。在组A完成至少10个剂量群组的评估后，开始招募多步剂量递增组(组B)；然后，组B与组A并行运行。组B评估在第一个21天周期的第1、8和15天通过IV输注，然后在各21天周期的第1天通过IV输注施用的Cevostamab的安全性、耐受性和药物动力学。对于组A和组B两者，“目标剂量”均指周期1中施用的最高剂量；此“目标剂量”在后续周期的第1天施用。
组A(单步剂量递增组)
仅对于A组，为了尽量减少暴露亚治疗剂量的患者数量，最初各剂量递增群组均招募1名患者。转换为标准3+3设计是基于以下事件之一的发生：
–观察到未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因的≥2级不良事件；或
–在窗口1或窗口2中观察到任何DLT。
除非根据标准3+3设计，在招募第三名患者之前在前2名患者中观察到剂量限制性毒性(DLT)，否则剂量递增组至少由3名患者组成。
使用了两个剂量限制性毒性(DLT)评估窗口，如下所示：
–第一DLT评估窗口(窗口1，递增DLT窗口)由第1周期第1天(C1D1)与在第1周期第8天(C1D8)开始Cevostamab输注之间的时段组成。
第二DLT评估窗口(窗口2，目标剂量DLT窗口)定义为C1D8输注开始后14天的时段。
组C和F(单步剂量扩大组)
组C和组F为剂量扩大组，用于基于组A的紧急临床数据而获得单步Cevostamab治疗的安全性、耐受性、药物动力学和初步临床活性数据。基于组A的数据，为组C选择3.6mg/90mg的剂量水平，且该组为开放组。
组B(多步剂量递增组)
添加了多步剂量递增组(组B)以评估周期1的多步给药方案的安全性、耐受性和药物动力学。新出现的临床数据表明，多步剂量分割可有效减轻可能由TDB诱发的CRS相关不良事件(Budde等人,Blood,132：399,2018)。多步剂量递增组的建议起始剂量是基于研究的组A的可用临床数据。
C1D1的第一递增剂量小于或等于组A的最高DLT清除C1D1剂量。
基于递增指南，C1D8的第二递增剂量可为组A的DLT清除C1D1剂量的下一个允许的剂量水平。(例如，若3.6mg为最高清除的组A递增剂量，允许多至100％剂量增加，则组BC1D8的最高允许起始剂量将为7.2mg)。
最后，组A C1D15目标剂量自组A的最高DLT清除C1D8剂量开始。
组B使用标准3+3设计进行。除非根据标准3+3设计，在招募第三名患者之前在前2名患者中观察到DLT，否则剂量递增组至少由3名患者组成。在第1周期中，组B的患者接受2个递增剂量和一个目标剂量。此三个剂量在第1天、第8天和第15天间隔一周施用。
如下地使用DLT评估窗口：
–各递增剂量均具有一个DLT评估窗口，其被定义为递增剂量开始后7天的时段。若第1周期，第1天或第8天递增剂量分别小于或等于先前清除的第1周期，第1天或第8天递增剂量，则在组A或组B中，不需要该DLT评估窗口。
–目标剂量DLT评估窗口被定义为目标剂量Cevostamab输注开始后7天的时段。
剂量递增组的给药天数如图1所示。
组D和G(多步剂量扩大组)
组D和组G为剂量扩大组，用于基于组B的紧急临床数据，获得以不同剂量进行多步Cevostamab治疗的安全性、耐受性、药物动力学和初步临床活性数据。
所有剂量递增组
上述剂量递增规则旨在确保患者安全，同时最大限度地减少暴露于亚治疗剂量的研究治疗的患者数。出于此原因，单患者剂量递增组最初使用的剂量递增间隔不超过先前剂量水平的200％，且基于上述规则转换为标准3+3剂量递增设计和较低剂量递增间隔。
对于各剂量递增组，第一剂Cevostamab的治疗是错开的，以便第二名患者在第一名患者接受Cevostamab后至少72小时接受Cevostamab，以评估任何严重和意外的急性或亚急性药物或输注相关毒性；各组的后续患者的给药间隔至少错开24小时。剂量递增规则定义如下。
在完成DLT评估窗口之前由于DLT以外的原因而中止研究的患者被视为在评估剂量递增决定和最大耐受剂量(MTD)评估是无价值的，且由相同剂量水平的其他患者替换。在DLT评估窗口期间由于DLT以外的原因错过任何剂量的患者也将被替换。可能会替换在DLT评估窗口期间接受混淆DLT评估的支持性照护(包括放疗)(不包括下文作为DLT定义的一部分描述的支持性照护)的患者。
剂量限制性毒性的定义
对于患者的Cevostamab初始评估，重复给药的间隔为21天。如本文所述，剂量递增的DLT观察期为第一剂Cevostamab后的21天时段。在食蟹猴的非临床毒性研究中，此观察期允许自观察到的与Cevostamab相关的毒性充分恢复。
除非另有说明，否则所有不良事件(包括DLT)均根据NCI CTCAE v4.0进行分级。DLT根据临床实践进行治疗，且经由其解决方案进行监测。所有不良事件均被认为与Cevostamab有关，除非研究者明确将此类事件归因于另一明确可鉴定的原因(例如，疾病进展、伴随用药或先前存在的医疗状况)。
由于B细胞或T细胞减少而导致的B细胞减少、淋巴球减少症和/或白血球减少症不被视为DLT，因为其为基于此分子的非临床测试的Cevostamab治疗的预期药效(PD)结果。
DLT被定义为在DLT评估窗口期间发生的以下任何不良事件：
任何未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定的原因的4级或5级不良事件，但以下情况除外：
–4级淋巴球减少症，其为疗法的预期结果
–4级嗜中性球减少症，不伴有体温升高(口腔或鼓室温度为≥
100.4℉[38℃])且在有或无G-CSF的情况下在1周内改善至≤2级(或至大于或等于基线ANC的80％，以较低者为准)4级血小板减少症，未输注血小板(除非先前依赖输注)而在1周内改善至≤2级(或至大于或等于基线血小板计数的80％，以较低者为准)，且与研究者认为临床显著的出血无关。
任何未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定的原因的3级血液学不良事件，但以下情况除外：
–3级淋巴球减少症，其为疗法的预期结果。
–3级嗜中性球减少症，不伴有体温升高(口腔或鼓室温度为≥
100.4°F(38℃))且在有或G-CSF的情况下在1周内改善至≤2级(或至大于或等于基线ANC的80％，以较低者为准)。
3级血小板减少症，未输注血小板而在1周内改善至≤2级(或至大于或等于基线血小板计数的80％，以较低者为准)，且与研究者认为临床显著的出血无关。
任何未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定的原因的3级非血液学不良事件，但以下情况除外：
–3级恶心或呕吐，未前驱用药，或可用口服或IV止吐药管理，结果为在24小时内缓解至≤2级。
–不排除需要全胃肠外营养或住院的3级恶心或呕吐，且应将其视为DLT。
–持续≤3天的3级疲劳。
–3级实验室异常，无症状且在7天内消退至≤1级或基线。
如下定义的任何肝功能异常：
–AST或ALT>3X正常上限(ULN)且总胆红素>2X ULN，但以下情况除外：任何AST或ALT>3X ULN且总胆红素>2X ULN，其中不存在发生于≤2级CRS(根据Lee等人,Biol BloodMarrowTransplant,25：625-638,2019确立的标准定义；参见表5A)的情况下的个别实验室值超过等级3；且在<3天内消退至≤1级，将不被视为DLT。
–任何3级AST或ALT升高，但以下情况除外：
ο任何3级AST或ALT升高，在≤2级CRS(根据Lee等人,Biol Blood MarrowTransplant,25：625-638,2019确立的标准定义(表5A)的情况下发生且在<3天内消退至≤1级，将不被视为DLT。
映射至MedDRA高级组术语的任何2级神经系统毒性，来自由以下组成的清单：颅神经疾病(不包括肿瘤)、脱髓鞘疾病、脑病、精神障碍疾病、运动障碍(包括帕金森氏病)、神经系统病症病NEC(未在其他地方分类)、癫痫发作(包括亚型)、认知和注意力障碍和紊乱、交流障碍和紊乱、谵妄(包括精神错乱)，以及痴呆和遗忘症，未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因且在72小时内未消退至基线，将被视为DLT。
1级意识水平低下或1级构音障碍，未被研究者认为可归因于其他明确可鉴定原因且在72小时内未消退至基线，将被视为DLT。
未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因的任何级别癫痫发作将被视为DLT。
剂量递增规则
Cevostamab在第1周期中使用分步剂量法施用。对于组A，在C1D1(第1周期，第1天)给予的初始剂量(该分步剂量)少于在C1D8(第1周期，第8天)给予的第二剂量(目标剂量)。在C1D1和C1D8静脉内施用的初始剂量分别为0.05mg和0.15mg(图4A)。
患者在第1周期期间住院。对于博纳吐单抗和CAR-T疗法观察到治疗出现的毒性，尤其是CRS和神经系统毒性(Kochenderfer等人,Blood,119：2709-2720,2012；Grupp等人,New Engl J Med,368：1509-1518,2013)。这些毒性通常在第一次暴露于治疗剂时发生。虽然这些毒性的作用机制尚未完全清楚，但据信其为免疫细胞活化导致发炎性细胞因子释放的结果。对于CAR-T和博纳吐单抗，细胞因子释放的实验室和临床表达的发作通常发生在首次暴露于治疗剂的24小时内，且频率和严重程度随时间显著降低(Klinger等人,Blood,119：6226-6233,2012)。对于抗CD20/CD3 TDB BTCT4465A，也观察到类似的模式，大多数产生CRS的患者在C1D1剂量后24小时内发生CRS的发作。CRS的发作与血清介白素(IL)-6的增加密切相关，在C1D1给药完成后4-6小时最常观察到这种增加。因此，基于此先前临床经验，需要住院治疗，如本文所述。
对于组B，在第1天和第8天每周给予两次递增剂量，然后在第15天施用目标剂量。该目标剂量在最后一次递增剂量后7天施用。在C1D1、C1D8和C1D15静脉内施用的Cevostamab的起始剂量分别为1.2mg、3.6mg和60mg(图4B)。还测试分别在C1D1、C1D8和C1D15静脉内施用的0.3或0.6mg、3.6mg和90mg的剂量(图4B)。
第2周期第1天(C2D1)剂量对于组A必须在给予第1周期的目标剂量后至少14天给予，且对于组B必须在第1周期给予目标剂量后至少7天给予。此后，如上所述，Cevostamab在21天周期的第1天施用，但出于逻辑/行程安排原因，可在预定日期的最多±2天给予(即，剂量之间至少间隔19天)。C2D1剂量和所有后续剂量均等于第1周期目标剂量，除非需要调整剂量或发生患者内剂量递增。
对于各连续群组，递增剂量和目标剂量最多可增加至先前剂量水平的3倍，直至达到安全阈值(定义为在≥34％的患者中观察到未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因的≥2级不良事件的观察值)。一旦在给定群组的DLT窗口期间达到此安全阈值，则后续群组的对应剂量可增加多至前一剂量的2倍(说明性实例参见图2和3)。在给定群组的DLT窗口期间，在≤17％的≥6名患者中观察到DLT后，后续群组的对应剂量可增加不超过前一剂量的50％。
如上所述，DLT标准对于所有DLT评估窗口均为相同的。在做出剂量递增决定时，考虑了来自研究的两个组的全部安全性数据。然而，对于剂量递增决定，各研究组的DLT均为独立计算的。类似地，将分别确定组A和组B的MTD和最大达成剂量(MAD)。
递增剂量的剂量递增规则如下：
若给定群组中的前3名DLT可评估患者在递增剂量DLT窗口期间均未经历DLT，则可根据上述规则在下一群组中对递增剂量进行递增。
若前3名DLT可评估患者中有1名在递增剂量DLT窗口期间经历了DLT，则将该群组扩大至6名患者。若在递增剂量DLT窗口期间6名DLT可评估患者无进一步DLT，则后续群组的递增剂量可递增不超过先前C1D1剂量的50％。
若给定群中前3名DLT可评估患者中的2名或更多患者在递增剂量DLT窗口期间经历了DLT，则对应递增剂量MTD将被超过，且该递增剂量下的递增将停止。将使用由先前递增剂量水平和最高清除目标剂量水平组成的给药方案评估另外3名患者的DLT，除非已在该水平下评估了6名患者。
若超过剂量MTD时的递增剂量水平比之前测试的递增剂量高≥25％，则至少6名患者的额外剂量群组可按中间递增剂量进行评估，以作为MTD进行评估。
目标剂量的剂量递增规则如下：
–若给定群组中的前3名DLT可评估患者在目标剂量DLT窗口期间均未经历DLT，则可根据上述剂量递增规则在目标剂量DLT窗口的下一个最高剂量水平下进行下一群组的招募。
–若前3名DLT可评估患者中有1名在目标剂量DLT窗口期间经历了DLT，则该群组将扩大至6名相同剂量水平的患者。(注：若已证明给定水平的递增剂量超过递增剂量MTD，则该群组中纳入的其他患者将以较低、先前清除的递增剂量入组)。若6名DLT可评估患者在该目标剂量DLT窗口期间无进一步的DLT，则可继续进行下一群组的入组，该目标剂量增加不超过前一个目标剂量的50％。
若群组中有2名或更多名DLT可评估患者在该目标剂量DLT窗口期间经历了DLT，则该目标剂量MTD将被超过，且目标剂量的递增将停止，但以下情况除外：
–若在给定目标剂量下经历的所有DLT均报告为CRS或其症状，则可通过对递增剂量进行剂量递增(若上述标准允许)且使用较低、先前清除目标剂量来评估另外3名患者的DLT。若所有3名患者在新方案中均未出现CRS或其症状，则可使用更高的递增方案重新测试先前测试的目标剂量，且可继续递增。
–若在组B目标剂量下仅观察到CRS相关DLT，则在宣布目标剂量的MTD之前，可以使用更低、先前清除的目标剂量来探索额外递增方案。若可耐受新的递增方案，则可重新评估具有CRS相关DLT的原始目标剂量。
若已超过目标剂量MTD且未计划增加剂量，则将适用以下规则：
–可使用由最高清除递增剂量水平和最高清除目标剂量水平组成的给药方案评估另外3名患者的DLT，除非已在该水平评估了6名患者。
–若在任何剂量水平下超过目标剂量MTD，则6名DLT可评估患者中的少于2名(即<17％)经历DLT的最高目标剂量将被宣布为目标剂量MTD。
–若超过目标剂量MTD时的目标剂量水平比之前测试的目标剂量高≥25％，则至少6名患者的额外剂量群组可按中间目标剂量进行评估，以作为MTD进行评估。
可评估额外剂量群组以进一步表征剂量依赖性毒性，该剂量群组评估已证明不超过MTD的两个剂量水平之间的中间剂量水平。评估中间剂量水平的群组的招募可能与剂量递增组的招募同时发生，以鉴定MTD。
对于各剂量递增组，若在任何剂量水平下均未超过目标剂量MTD，则此研究中用于单个群组的递增和目标剂量的最高施用剂量将被宣布为MAD。
若在组B目标剂量下仅观察到CRS相关DLT，则在宣布目标剂量的MTD之前，可以使用更低、先前清除的目标剂量来探索额外递增方案。若可耐受新的递增方案，则可重新评估具有CRS相关DLT的原始目标剂量。
为获得额外安全性和PD数据以更好地充分告知推荐的II期剂量，可在以下剂量水平下招募更多患者：基于上述剂量递增标准已显示不超过MTD，且存在抗肿瘤活性和/或PD生物标记调节的证据。每个剂量水平最多可另外招募约3名患者。出于剂量递增决定的目的，这些患者将不包括在DLT可评估群体中。
患者内剂量递增
仅在剂量递增组A和B中，为了最大限度地收集相关剂量的信息且最大限度地减少患者暴露的对次优剂量的Cevostamab，可能允许患者内剂量递增。个别患者的Cevostamab剂量可增加至完整群组通过至少一个Cevostamab施用周期耐受的最高清除剂量水平。患者能够在以其最初指定的剂量水平完成至少两个周期后进行患者内剂量递增。在无任何符合DLT定义或需要施用后住院的不良事件的任何随后更高的清除剂量水平的至少一个周期后，可能会发生随后的患者内剂量递增。由于将以此方式进行患者体内剂量递增，因此可获得有关分步给药作为针对治疗出现毒性的缓解策略的其他信息。
一旦宣布了MTD且确定了推荐的II期剂量，便允许继续研究且继续耐受Cevostamab的患者将患者内剂量直接递增至推荐的II期剂量。
超过第1周期继续给药的规则
在DLT观察期内未经历DLT的患者有资格接受如下额外的Cevostamab输注：
持续的临床受益：患者必须不具有病情进展的临床体征或症状(将在各周期的第1天对患者的病情进展进行临床评估)。还将在各周期开始时根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)标准评估患者的进展情况(参见表4)。仅有生物化学病情进展(定义为在不存在器官功能障碍和临床症状的情况下单克隆副蛋白增加)且符合患者内剂量递增条件的患者可接受额外输注。为了根据IMWG标准确定患者经历患者内剂量递增后的病情进展，将在针对患者评估的各新剂量水平重新建立基线。
可接受的毒性：经历4级非血液学不良事件(4级肿瘤溶解综合征(TLS)可能除外)的患者应停止研究治疗，且不得进行再治疗。经历4级TLS的患者可考虑继续研究治疗。来自先前研究治疗输注的所有其他研究治疗相关不良事件必须在下一次输注时降至≤1级或基线级。可允许基于持续整体临床受益的例外情况。任何不归因于研究治疗的不良事件的治疗延迟可不需要停止研究治疗。若确定可维持临床获益，则可允许减少Cevostamab的剂量。
Cevostamab再治疗
最初因Cevostamab有缓解但随后在疗法完成后出现病情复发或进展的患者可受益于额外的Cevostamab治疗周期。为验证此假设，患者有资格进行如下所述的Cevostamab再治疗。若满足以下标准，则这些患者的Cevostamab剂量和时间表将是在再治疗时已被发现安全的剂量和时间表：
–在重新开始Cevostamab治疗时满足相关的资格标准。初始Cevostamab治疗的可管理和可逆的免疫相关不良事件是允许的，且不构成自体免疫性疾病的排除病史。
–根据IMWG标准，在初始Cevostamab治疗结束时以及治疗结束之后的至少一次治疗后肿瘤评估中，患者必须具有记录在案的客观缓解(完全缓解(CR)、极好部分缓解(VGPR)或部分缓解(PR))。
–患者在初始Cevostamab治疗期间不得出现与研究治疗相关的4级非血液学不良事件。
–在初始治疗期间经历2级或3级不良事件的患者必须已将这些毒性消退至≤1级。
–在完成初始Cevostamab治疗与重新开始Cevostamab治疗之间未进行干预性全身抗癌疗法。
在Cevostamab再治疗之前，必须获得重复骨髓活检和抽吸物以评估FcRH5表达状态和肿瘤微环境。
接受Cevostamab再治疗的患者的活动时间表将遵循目前在剂量递增或扩大中实施的活动时间表。完成17个周期的再治疗的患者将继续进行本文所述的肿瘤和其他评估，直至病情进展、开始新的抗癌疗法或退出研究参与，以先发生者为准。
药物动力学、药效学和抗药抗体采样时间表
Cevostamab施用后的PK采样时间表经设计以捕获足够数量的时间点处的Cevostamab暴露数据，以提供浓度-时间曲线的详细数据。此外，PD采样时间表经设计以提供T细胞活化的幅度和动力学、可能的周边血液B细胞耗竭和Cevostamab治疗后细胞因子释放的详细情形。这些数据用于理解剂量与暴露的关系，且支持基于PK和/或PD的剂量选择和Cevostamab作为单一药物以及与用于治疗MM的其他药物组合施用的时间表。针对Cevostamab的抗药抗体(ADA)可能对其受益-风险情形产生影响。因此，基于风险的策略(Rosenberg和Worobec,Biopharm International,17：22-26,2004；Rosenberg和Worobec,Biopharm International,17：34-42,2004；Rosenberg和Worobec,BiopharmInternational,18：32-36,2005；Koren等人,J Immunol Methods,333：1-9,2008)用于检测和表征Cevostamab对ADA的缓解。经验证的筛选和确认性分析用于在Cevostamab治疗之前、期间和之后的时间点检测ADA。此外，可评估ADA缓解与相关临床终点的相关性。
生物标志物评估
了解Cevostamab的作用机制且确定R/R MM患者的安全性临床活动的预后性和预测性生物标记，构成了在此研究中对其进行评估的基本原理。
Cevostamab施用后的生物标记采样时间表(来自周边血液、骨髓活检和抽吸物)经设计以提供以下详细信息：
–在DLT观察期内，细胞因子释放的时间进程与Cevostamab药物动力学和临床安全性相关。在DLT观察期之后对细胞因子水平的评估允许与慢性Cevostamab治疗观察到的任何慢性安全信号相关联。
–T细胞功能的表型标记和对Cevostamab治疗耐受的潜在标记的表达。这些实例包括但不限于T细胞活化和增殖以及PD-1和其他抑制分子在T细胞上的表达的标记。
–T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞计数的动态定量变化。
–监测微小残留病(MRD)且建立与客观缓解和存活率的相关性。
除了生物标记取样外，还获得骨髓活检和抽吸物。评估肿瘤免疫微环境的变化对于理解Cevostamab的作用机制、理解Cevostamab耐药性的潜在机制以及为Cevostamab与其他抗癌疗法的组合提供生物学原理而言是重要的。因此，采样计划经设计以使用表型和基因表达测定来捕获免疫细胞浸润中的定量和功能变化以及疾病生物学的变化。
如本文所述，在Cevostamab治疗后经历病情进展或病情复发的患者可有资格进行再治疗。鉴于Cevostamab治疗后FcRH5表达的丧失是对T细胞定向疗法产生耐药性的潜在机制(Topp等人,Lancet Oncol,16：57-66,2011)，应在Cevostamab再治疗之前自安全可及的部位获得重复活检，以确认FcRH5表达和评估肿瘤免疫状态。
QT/QTc评估
QT/QTc延长的评估基于ICH E14指南的建议。对食蟹猴的非临床研究显示在剂量≥0.1mg/kg下的心跳过速和随之而来的RR、PR和QT间期降低。在药理学匹配的时间点收集一式三份12导联心电图，且可选择由专门的集中ECG实验室进行评估，从而可评估Cevostamab暴露与任何QT/QTc间期变化之间的关系。
实例3.安全评估
这是第一项对人类施用Cevostamab的研究。下文描述了与施用Cevostamab相关的特定预期或潜在毒性，以及此试验中为避免或最小化这类毒性而采取的措施。
i.剂量和时间表修改
仅当患者的临床评估和实验室测试值可接受时，才会进行Cevostamab给药(以及托珠单抗在此给药，若适用)。本文描述了管理指南，包括针对特定不良事件的研究治疗剂量和时间表修改。应遵循以下有关剂量和时间表修改的指南：
一般而言，接受Cevostamab治疗且经历未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定的原因的4级不良事件的患者应永久停止所有研究治疗。然而，对于具有无症状的实验室变化的4级不良事件的患者而言，一旦消退达到≤1级，即可恢复研究治疗。
对于在第一剂Cevostamab下经历IRR或在后续剂量下IRR复发的风险升高的患者而言，输注速率应降低50％。若该患者在后续剂量下未经历IRR，则可基于研究者的判断而在输注期间使输注速率返回至初始速率。
一般而言，经历符合DLT定义的不良事件或其他3级不良事件，但该不良事件未被研究者视为可归因于另一明显可鉴定原因(例如疾病进展、伴随药物治疗，或先前存在的医疗状况)的患者将被允许延迟给药持续多至2周(或若获医学监察员批准，则更久)，以便从毒性中恢复过来。患者可继续接受额外Cevostamab输注，其限制条件为毒性已在2周内消退至≤1级(或对于实验室异常而言，恢复至大于或等于基线值80％)。
应当考虑降低Cevostamab后续输注的剂量。若预期降低的剂量(例如，达到在剂量递增期间评估的下一最高清除剂量水平)处于不存在Cevostamab PD活性迹象(例如，无血清细胞因子水平变化迹象)的剂量水平，则可停止患者的研究治疗。应当在仔细评估之后作出在DLT或其他研究治疗相关的3级毒性后继续治疗的决策，包括以下场景：
–若AST或ALT的升高>3X ULN和/或总胆红素>2X ULN，但无个别实验室值超过3级，且发生在≤2级CRS续<3天的情形下，则可继续Cevostamab给药而无需降低剂量。
–对具有3级贫血事件的患者，若根据机构惯例可通过红血球输注进行管理，则可继续给药而无需降低剂量。
–对具有3级或4级血小板减少症或嗜中性球减少症事件的患者，若根据机构惯例可通过输注(血小板)或颗粒性白血球群落刺激因子(GCSF)进行管理，则可继续给药而无需降低剂量。
具有3级或4级嗜中性球减少症或血小板减少症事件，且被视为是归因于疾病但无需输注或GCSF的患者可继续给药而无需降低剂量。任何在剂量降低时再次出现类似毒性的患者都应停止进一步的Cevostamab治疗。
对在额外2周之后不符合给药标准的患者停止研究治疗(除非医学监察员批准更久的给药延迟时间)，且如下所述针对安全性结果进行随访。在研究者对风险对比受益作出评估之后可允许基于正在进行的临床收益的诸多例外情况。另外，由于并非研究药物引起的毒性所致的治疗延迟可能不需要停药。
视治疗延迟的时间长短而定，患者可能需要重复递增给药。若患者的给药比其正常计划的给药延迟超过2至4周，则研究者应当与医学监察员协商以确定是否需要重复递增给药。若患者的给药比其正常计划的给药延迟超过4周，则必需重复递增给药。患者在首次重复递增输注Cevostamab之后将需要住院治疗。
ii.与Cevostamab相关的风险
Cevostamab的作用机制为针对表达FcRH5的细胞的免疫细胞活化；因此，可能会发生一系列事件，包括IRR、标靶介导的细胞因子释放，和/或过敏反应，伴有或未伴有紧急ADA。其他涉及T细胞活化的双特异性抗体疗法与IRR、CRS和/或过敏反应有关。
基于非临床数据，Cevostamab有可能导致血浆细胞因子水平快速增加。因此，鉴于Cevostamab的预期人类药理学，IRR可能在临床上与CRS的表达无法区分开来，CRS被定义为其特征在于恶心、头痛、心跳过速、低血压、皮疹和呼吸短促的病症(NCI CTCAE v.4.0)，其中T细胞与浆细胞和B细胞的接合导致T细胞活化和细胞因子释放。选择MABEL作为Cevostamab的初始给药和设计剂量递增方案专门用于最小化细胞因子过度释放的风险。
为了最小化IRR和CRS的风险和后遗症，在临床背景下在第1周期中，Cevostamab的施用历经至少4小时。皮质类固醇前驱用药必须如实例1中所述加以施用。
IRR和/或CRS的轻度至中度表达可能包括诸如发烧、头痛和肌痛的症状，且可根据指示用镇痛剂、解热剂和抗组胺药对症治疗。IRR和/或CRS的严重或危及生命的表达，诸如低血压、心跳过速、呼吸困难或胸部不适等，应当根据指示通过支持性和复苏性措施加以积极治疗，包括使用大剂量的皮质类固醇、静脉输液、入住加护病房和根据机构惯例采取的其他支持性措施。严重CRS可能与诸如播散性血管内凝血症、微血管渗透综合征或MAS的其他临床后遗症有关。基于免疫的疗法所致的严重或危及生命的CRS的照护标准尚未确定；已经公布了使用抗细胞因子疗法(诸如托珠单抗)的病例报告和建议(Teachey等人,Blood,121：5154-5157,2013；Lee等人,Blood,124：188-195,2014；Maude等人,New Engl J Med,371：1507-1517,2014)。CRS的分级遵循表5A中所述的改版分级量表。如表5A所示，即使患有广泛合并症的患者出现中度CRS表达也应密切监测，且考虑入住加护病房并使用托珠单抗。表6提供了有关托珠单抗治疗严重或危及生命的CRS的详细信息。
Figure BDA0004161870440001471
CRP：C-反应蛋白；eCRF：电子病例报告表；IL：介白素；PD：药效学；PK：药物动力学；TCZ：托珠单抗。
注：在不良事件eCRF上记录异常或恶化的临床显著异常。
a若重复TCZ剂量，则遵循第二TCZ剂量后的活动时间表。
b包括患者坐位或仰卧位时的呼吸频率、心率以及收缩压和舒张压，以及体温。
c临床数据库中应记录任何24小时内的最大值和最小值。
d记录伴随药物eCRF中的升压剂类型和剂量。
e包括钠、钾、氯化物、碳酸氢盐、葡萄糖和血尿素氮
f包括对细菌、真菌和病毒感染的评估。
g包括IL-6、可溶性IL-6R和sgp130。
h将在TCZ输注结束时进行血清TCZ PK和血浆IL-6PD标记的抽血，且将从未用于施用TCZ的手臂抽血。
iii.安全性参数和定义
安全性评估由监测和记录不良事件组成，包括严重不良事件和特别所关注的不良事件，执行方案特定的安全性实验室评估，测量方案特定的生命征象，并实施对研究的安全性评估至关重要的其他方案特定的测试。
iv.不良事件
根据ICH优良临床试验规范指南，不良事件是指接受药物的临床研究受试者所发生的任何不良医学事件(与起因无关)。因此，不良事件可以是以下任意一项：
与使用药品在时间上相关的任何不利和意外征象(包括实验室检查异常)、症状或疾病，无论是否被视为与该药品相关。
任何新疾病或现有疾病的恶化(已知病状的特征、频率或严重程度恶化)，不包括本文所述的例外情况。
基线期不存在间歇性病状(例如头痛)的复发。
与症状相关或导致研究治疗或伴随治疗改变或停止研究治疗的实验室值或其他临床测试(例如，ECG、X光)的任何恶化。
与方案规定的干预措施相关的不良事件，包括在分配研究治疗药物之前发生的不良事件(例如，筛选侵入性操作，如活体组织切片)。
v.严重不良事件
严重不良事件是指符合以下任何标准的任何不良事件：
–是致命的(即，不良事件实际上造成或导致死亡)
–有生命危险(即，研究者认为不良事件使患者立即面临死亡风险)。这不包括以更严重的形式发生或被允许继续发生可能导致死亡的任何不良事件。
–需要或延长住院病人的住院治疗。
–导致持续或严重的残疾/无行为能力(即，不良事件导致患者进行正常生活功能的能力受到严重破坏)
–是暴露于研究治疗的母亲所生的新生儿/婴儿中的先天性异常/出生缺陷
–在研究者的判断中属于重大医学事件(例如，可能危及患者或可能需要医学/外科干预以防止上述结果之一)
术语“重度”和“严重”不是同义词。严重程度是指不良事件的强度(例如，根据轻度、中度或重度，或根据NCI CTCAE分级)；该事件本身可具有相对较小的医学意义(例如，严重头痛，没有任何进一步的发现)。对各不良事件的严重程度和严重性进行独立评估。
特别关注的不良事件
本研究特别关注的不良事件如下：
根据海氏定律所定义的，包括ALT或AST升高以及胆红素升高或临床黄疸升高在内的潜在药物诱发性肝损伤病例。
研究药物疑似传播传染性病原体。任何病原性或非病原性生物，病毒或传染性颗粒(例如，离子蛋白传播性传染性海绵状脑病)均被视为传染性病原体。从临床症状或实验室发现可怀疑传染病的传播，这些临床症状或实验室发现表明接触药物的患者已感染。此术语仅适用于怀疑研究药物受到污染的情况。
DLT。
Cevostamab特有的特别关注的不良事件：
–≥2级IRR。
–≥2级神经系统不良事件。
–任何级别的CRS。
–任何疑似MAS/HLH。
–TLS(根据定义≥3级)。
–发热性嗜中性球减少症(根据定义≥3级)。
–任何级别的播散性血管内凝血(根据定义最低2级)。
–≥3级AST、ALT或总胆红素升高。
–任何符合方案定义的DLT标准的不良事件。
实例4.统计分析
描述性统计用于概述Cevostamab的安全性、耐受性、药物动力学和临床活性。根据所讨论的患者数目对数据进行描述和概述。所有分析均基于可评估安全性的群体，定义为接受任何量的研究药物的所有患者。
连续变量使用平均值、标准偏差、中位数和范围来概述；分类变量将使用计数和百分比呈现。所有概述均按群组呈现。
i.样本大小的确定
此试验的样本量是基于实例2中描述的剂量递增规则。此研究的递增阶段(组A和组B)计划招募约150名患者。此研究的各扩大组(组C、D、E、F和G)计划招募约30名患者。
此试验最初使用单患者剂量递增群组，但转换为标准的3+3设计，如上所述。鉴于不同的潜在DLT率，表7提供了在3名患者中未观察到DLT或在6名患者中观察到≤1个DLT的概率。
表7.观察到具有不同潜在DLT率的DLT的概率
Figure BDA0004161870440001501
ii.安全性分析
安全性分析包括接受任何量的研究药物的所有患者。经由不良事件概述、实验室测试结果变化、ECG变化、抗药抗体(ADA)变化和生命征象变化来评估安全性。概述按群组和总体呈现。将不良事件的逐字描述映像至MedDRA索引典术语。C1D1治疗时或治疗后发生的所有不良事件均按映像术语、适当的词库水平和NCI CTCAE毒性等级进行概述。此外，包括死亡在内的所有严重不良事件均单独列出。导致治疗中断的DLT和不良事件也单独列出。相关实验室和生命征象数据按时间显示。此外，当分级可用时，实验室数据按NCI CTCAE级别进行汇总。
iii.药物动力学分析
将个别和平均血清Cevostamab浓度与时间数据制成表格并按剂量水平作图。在数据允许的情况下，在适当时推导出以下PK参数：
–总暴露量(浓度-时间曲线下的面积(AUC))
–最大观测血清浓度(Cmax)
–最小观测血清浓度(Cmin)
–清除率
–稳态分布容积
可考虑房室、非房室和/或群体方法。这些参数的估计值被制成表格并汇总(平均值、标准偏差、变异系数、中值、最小值和最大值)。还计算其他参数，诸如积累比、半衰期和剂量比例。酌情进行额外的PK分析。
iv.活性分析
按群组概述所有患者的缓解评估数据和缓解持续时间。
客观缓解被定义为sCR、CR、VGPR或PR，如由使用IMWG缓解标准的研究者评估确定的。缺少或无缓解评估的患者被归类为无缓解者。对接受推荐的II期剂量的患者概述客观缓解率。
在有客观缓解的患者中，缓解持续时间被定义为自初始客观缓解至疾病进展或死亡的时间。若患者在研究结束前未经历疾病进展或死亡，则缓解持续时间在最后一次肿瘤评估当天进行审查。若在第一客观缓解后未进行肿瘤评估，则在第一客观缓解时对缓解持续时间进行审查。
v.免疫原性分析
概述了基线(基线患病率)和基线后(基线后发生率)的ADA阳性患者和ADA阴性患者的数目和比例。经由描述性统计分析和报告ADA状态与安全性、药物活性、PK和生物标记终点之间的关系。
在确定基线后发生率时，若患者在基线时呈ADA阴性或数据缺失，但在研究药物暴露后出现ADA缓解(治疗引起的ADA缓解)，或者他们在基线时呈ADA阳性且一种或多种基线后样本的滴度比基线样本的滴度(治疗增强的ADA缓解)至少高0.60滴度单位，则认为患者为ADA阳性。若患者在基线时呈ADA阴性或数据缺失且所有基线后样本均呈阴性，或者若其在基线时呈ADA阳性，但无任何基线后滴度至少比基线样本的滴度高0.60滴度单位的样本(治疗不受影响)，则患者被认为呈治疗后ADA阴性。
实例5.I期剂量递增研究的结果
实例1-4中描述的正在进行的GO39775 I期、多中心、开放式、剂量递增研究在R/RMM患者中研究了作为单一疗法的Cevostamab(图24)，对于这些患者无针对MM的适当和可用的既定疗法，或这些患者对那些既定疗法不耐受。在此研究中，Cevostamab以递增剂量方法(单步递增剂量和双步递增剂量方案)通过静脉内(IV)施用来减轻细胞因子释放综合征(CRS)。
当前临床疗效数据表明，Cevostamab在单步递增剂量(Cohen等人,Blood,136(增刊1)：42-43,2020)和双步递增剂量方案中均对已用尽可用治疗方案的重度预治疗R/R MM患者中表明有希望的临床活性。Cevostamab的安全性为可管理的，其中CRS为最常报告的不良事件(AE)。下文提供了研究GO39775的可用功效和安全性数据以及临床药理学数据。
截至这些实例中呈现的最终临床截止日期(CCOD)，已有163名患者入选了研究GO39775，其中160名患者以单步递增和双步递增方案接受Cevostamab单一疗法。总体而言，对于所有入选的163名患者，治疗的中位时间为51天(范围：1-703天)，中位数为3个治疗周期(范围：1至34个周期)。显示了初始治疗阶段的数据。截至CCOD，1名患者在完成初始治疗且随后复发后符合再次治疗的条件。
在此160名接受Cevostamab单一疗法的患者中，136名患者(85％)为三类难治性的且接受过两个或更多个先前治疗方案，42名患者(26％)接受过CAR-T或ADC BCMA靶向疗法，且经三类暴露(至少一种PI、一种IMiD和一种抗CD38 MAb)。表8描述了患者的人口统计数据和疾病特征。所有患者均接受了大量预治疗，中位数为6个先前疗法方案。此外，所有患者均接受过PI和IMiD的先前治疗，且141名患者(88％)接受过抗CD38 MAb。不同患者群体的患者特征非常相似。
表8.研究GO39775(ITT群体)中接受Cevostamab治疗的患者的基线特征概述
Figure BDA0004161870440001531
ADC＝抗体-药物结合物；BCMA＝B细胞成熟抗原；CAR-T＝嵌合抗原受体T细胞；CD38＝分化簇38；ECOG＝东部肿瘤协作组；IMiD＝免疫调节剂；ITT＝意向治疗；MAb＝单克隆抗体；PI＝蛋白酶体抑制剂。
a先前BCMA被定义为先前接受过BCMA靶向ADC或CAR-T疗法治疗且经三重暴露(PI、IMiD和aCD38 mAB)的患者，不包括暴露双特异性MAb疗法的患者。
b高风险细胞遗传学被定义为1q21增益、易位t(4；14)、易位t(14；16)和缺失17p。在所有患者(n＝160)中，71名(44.4％)有缺失或未知的细胞遗传学风险，且无法分类。
c三类难治性被定义为难以用IMiD、PI和CD38 MAb治疗的患者。
接受单步递增剂量方案和双步递增剂量方案的患者之间的人口统计数据和基线特征相似(表9)。共有54名患者接受过先前BCMA靶向疗法；其中51人还暴露过先前PI、IMiD和抗CD38疗法，且其中23人接受过先前ADC疗法，28人接受过先前CAR-T疗法，以及9人接受过先前双特异性mAb。
表9.人口统计数据和基线特征(GO39775)
Figure BDA0004161870440001541
Figure BDA0004161870440001551
BCMA＝B细胞成熟抗原；BMI＝身体质量指数；CD38＝分化簇38；ECOG＝东部肿瘤协作组；IMiD＝免疫调节药物；PI＝蛋白酶体抑制剂；Q3W＝每3周；RP2D＝推荐的II期剂量。
a所有患者是指组A-D中的所有患者；未展示组E的3名患者的数据。
b建议的RP2D和方案为0.3/3.6/160mg Q3W：Cevostamab在第1周期第1天以0.3mg(递增剂量)施用，在第1周期第8天以3.6mg(递增剂量)施用，在第1周期第15天和后续Q3W周期的第1天以160mg(目标剂量)施用。
cCevostamab在第1周期的第1天(递增剂量)和第8天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
dCevostamab在第1周期的第1天(递增剂量)、第8天(递增剂量)和第15天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
e观察到客观缓解的≥3.6mg/20mg剂量被视为临床活性剂量。
f在所有患者(n＝160)中，72(45.0％)、66(41.3％)、75(46.9％)、69(43.1％)、51(31.9％)名患者分别具有缺失或未知的扩增1q21、易位t(4；14)、易位t(11；14)、易位t(14；16)和TP53(17p)的缺失，且无法分类。
g包括接受过1次或多次先前BCMA疗法的患者。
疗效结果
在接受单次或双步递增剂量方案治疗的所有160名患者中，158名为疗效可评估的。疗效可评估患者定义为接受治疗且进行缓解评估的患者，其超过30天的治疗暴露，或在30天治疗暴露之前中止Cevostamab治疗。未进行缓解评估的疗效可评估患者被视为未缓解者。
从20mg的目标剂量(TD)开始观察到Cevostamab的临床活性；任何目标≥20mg的剂量水平均被视为活性剂量。观察到有临床意义的缓解率。缓解随着时间的推移而加深，且通常为持久的。中位随访时间为6.1个月(范围0.2-39.4)，预计中位DOR为15.6个月(95％CI：6.4，21.6)(表10)。
表10.根据IMWG缓解标准，针对以活性剂量治疗的疗效可评估患者和以>90mg的目标剂量治疗的患者的最佳总体缓解概述
Figure BDA0004161870440001561
Figure BDA0004161870440001571
ADC＝抗体-药物结合物；BCMA＝B细胞成熟抗原；CAR-T＝嵌合抗原受体T细胞；CD38＝分化簇38；CR＝完全缓解；IMiD＝免疫调节药物；IMWG＝国际骨髓瘤工作组；mAb＝单克隆抗体；mDOR＝修正的缓解持续时间；ORR＝客观缓解率；PI＝蛋白酶体抑制剂；PR＝部分缓解；RP2D＝推荐的II期剂量；sCR＝严格完全缓解；VGPR＝极好部分缓解。
a先前BCMA被定义为先前接受过BCMA靶向ADC或CAR-T疗法治疗且经三重暴露(PI、IMiD和aCD38 mAB)的患者。
b三类难治性被定义为难以用IMiD、PI和CD38 MAb治疗的患者。
c在剂量递增方案中观察到的活性，其中23名患者接受3.6mg的单次递增剂量，接着为132mg、160mg或198mg的目标剂量，且36名患者接受0.3/3.6/160mg的双步递增剂量。此子组的患者代表RP2D预期的活性，在GO39775研究中，仅7名BCMA后患者接受了治疗。
在以临床活性剂量治疗的先前BCMA靶向CAR-T或ADC的疗效可评估患者中，ORR为44％(17/39名患者)，95％CI：28-60。在CCOD时，这些患者中有11名处于持续缓解状态。6个月时的估计DOR率为65.5％(95％CI：40.8，90.1)。此子组的先前BCMA靶向CAR-T或ADC患者接受了中位数为7.5个的先前治疗方案，且高比例也为三类难治性(94％)。
以临床活性剂量治疗的三类难治性患者所示的ORR为42％(50/120名患者)，95％CI：33-51。在CCOD时，这些患者中有35名处于持续缓解状态。6个月时的估计DOR率为67.7％(95％CI：52.1，83.3)。此子组的患者接受了中位数为6个的先前治疗方案，且高比例也为五类难治性(81％)。
在临床活性剂量下，接受ADC化合物或CAR T细胞产品的先前BCMA患者的疗效似乎相似(47.4％相对于41.7％)。尽管基于小样本量，但在接受BCMA靶向双特异性抗体的患者中观察到的疗效有限，9名患者中仅1名显示出缓解。
在RP2D的建议剂量和时间表下，先前接受BCMA靶向疗法的患者和三类难治性患者的报告缓解率分别为42.9％(3/7名患者)和47.1％(16/34名患者)。
在研究GO39775中，所有组的剂量>90mg时，59名患者中有31名的ORR为53％(95％CI：39-66)。在大量预治疗的患者群体中，其中中位数为6个先前疗法方案(范围：2-18)，且研究的中位观察时间为6.1个月(范围：0.2-39.4)，61名缓解者的预计中位DOR为15.6个月(95％CI：6.4-21.6)。与当前的照护标准或已公布的晚期R/R MM方案的结果相比，这些疗效结果具有优势，例如使用塞利尼索/地塞米松、贝兰他单抗-马弗他丁(belantamabmafodotin)、美孚芬(melflufen)获得的结果，或来自对当前照护标准结果的MAMMOTH回顾性研究，显示出26％至31％的缓解率和4.4至11个月的中位DOR(Chari等人,N Engl J Med,381：727-738,2019；Gandhi等人,Leukemia,33：2266-2275,2019；Lonial等人,LancetOncol,21(2)：207-221,2020；Richardson等人,J Clin Oncol,39：757-767,2021)。
正在进行的研究GO39775的主要疗效结果如下：
·在探索的所有剂量中观察到的ORR为38.6％(158名患者中的61名，95％CI：30.7，46.5)。临床活性剂量被定义为TD≥20mg，即观察到第一次缓解时的剂量。活性剂量下的ORR为43.3％(141名患者中的61名，95％CI：35.0，51.9)。
·在61名缓解者中，21名在6个月时具有持续缓解，且8名患者在12个月时具有持续缓解。6个月时的估计DOR率为66％(95％CI：53，80)，且估计的中位DOR为15.6个月(95％CI：6.4-21.6)。
·在单步递增临床活性剂量中，ORR为45.0％(36/80名患者；95％CI：33.5-56.5)。第一次缓解时间的中位数为29天(范围：21-105)，且缓解随着时间的推移而加深，达到最佳总体缓解的中位时间为51天(范围：21-323)。观察到剂量缓解关系，在TD>3.6/90mg时具有更高活性，显示ORR为60.9％(14/23名患者，95％CI：38.8,83.0)，相比之下，3.6/20-90mg剂量下的ORR为38.6％(21/57名患者，95％CI：25.1，52.1)。截至CCOD，中位随访时间为9.3个月(范围：0.2，28.5)，且估计的中位DOR为15.6个月(95％CI：11.5，21.6)。
·在双步递增给药组中，ORR为41.0％(25/61名患者，95％CI：27.8-54.1)。中位随访时间短，为3.3个月(范围：0.5-18.5)，最佳总体缓解和≥VGPR的缓解仍为初步的，因为最近入组患者的缓解深度可能仍在发展。估计的中位DOR为8.3个月(95％CI：2.3-NE)。
·在RP2D(0.3/3.6/160mg)时，ORR为47.2％(17/36名患者，95％CI：30.4，64.5)，其中2.8％(1名患者)达成sCR，2.8％(1名患者)达成CR，且8.3％(3名患者)达成VGPR。
单步递增剂量方案的疗效(组A+组C)
在组A和组C中以临床活性剂量(≥3.6mg/20mg)治疗的80名疗效可评估患者中，36名患者(45.0％)有客观缓解(表11)。截至CCOD，该中位随访时间为9.3个月(范围：0.2-28.6)。36名缓解者的中位随访时间为11.2个月(范围：2.7-28.6个月)，且中位治疗时间为7.2个月(范围：0.3-30.2个月)。缓解者达到最佳总体缓解的中位时间为50天(范围：21-323天)。估计的中位DOR为15.6个月(95％CI：11.5，21.6)。在CCOD时，36名缓解者中有9名(25％)仍在接受治疗。
在剂量递增群组中观察到剂量-缓解关系，且在TD>3.6/90mg时报告了更高的缓解率，ORR为60.9％(95％CI：38.8，83.0)，相比之下，3.6/20-90mg剂量下的ORR为38.6％(95％CI：25.1，52.1)。
表11.根据IMWG缓解标准，在研究GO39775的单步递增剂量方案(组A和组C)中接受≥3.6/20mg剂量的疗效可评估患者的最佳总体缓解概述
Figure BDA0004161870440001601
CR＝完全缓解；IMWG＝国际骨髓瘤工作组；MR＝最小程度缓解；NE＝不可评估；ORR＝客观缓解率；PD＝病情进展；PR＝部分缓解；sCR＝严格完全缓解；SD＝病情稳定；VGPR＝极好部分缓解。
注：未缓解包括MR、SD、PD、临床复发或缺失/NE。
a在组A中，剂量<3.6mg/20mg(0.05mg/0.15mg至3.6mg/10.8mg)时未观察到客观缓解。
bORR被定义为根据IMWG缓解标准由研究者评估确定的达成sCR、CR、VGPR或PR的患者比例。
双步递增剂量方案的疗效(组B+组D)
在组B和组D的61名疗效可评估患者中，25名患者(41.0％)具有客观缓解(表12)。截至CCOD，该中位随访时间为3.3个月(范围：0.5-18.5)。25名缓解者的中位随访时间为3.3个月(范围：1.6-18.2个月)，且除一人外，其他所有人均仍在接受治疗，中位治疗时间为1.5个月(范围：0-12.0个月)。在CCOD时，18名缓解者(72.0％)仍在接受治疗。
在研究GO39775中，在RP2D(0.3/3.6/160mg)接受Cevostamab治疗的36名患者中，ORR为47.2％(17名患者)，2.8％(1名患者)达成sCR，2.8％(1名患者)达成CR，且8.3％(3名患者)达成VGPR。由于双步递增组的随访时间短，报告的VGPR或更好的缓解率可能被低估。
表12.根据IMWG缓解标准，在研究GO39775的双步递增剂量方案组(组B和组D)中对疗效可评估患者的最佳总体缓解概述
Figure BDA0004161870440001611
CR＝完全缓解；IMWG＝国际骨髓瘤工作组；MR＝微小缓解；NE＝不可评估；ORR＝客观缓解率；PD＝进行性疾病；PR＝部分缓解；RP2D＝推荐的II期剂量；sCR＝严格完全缓解；SD＝稳定疾病；VGPR＝极好部分缓解。
注：无缓解包括MR、SD、PD、临床复发或缺失/不可评估。
aRP2D和方案为0.3/3.6/160mg Q3W：Cevostamab在第1周期第1天以0.3mg(递增剂量)施用，在第1周期第8天以3.6mg(递增剂量)施用，在第1周期第15天和后续Q3W周期的第1天以160mg(目标剂量)施用。
bORR被定义为根据IMWG缓解标准由研究者评估确定的达成sCR、CR、VGPR或PR的患者比例。
安全性结果
表13中呈现的临床安全性数据包括研究GO39775中160名安全性可评估患者(被定义为接受Cevostamab治疗的患者)的数据：组A的68名患者和组C的31名患者(单步递增剂量方案)和组B的30名患者和组D的31名患者(双步递增剂量方案)。还呈现了以建议的RP2D和方案(0.3mg/3.6mg/160mg)治疗的患者以及在组A中以临床活性剂量(≥3.6mg/20mg)治疗的患者的临床安全性数据。
表13.GO39775(安全性可评估患者)中的不良事件概述
Figure BDA0004161870440001621
Figure BDA0004161870440001631
AE＝不良事件；ASTCT＝美国移植和细胞治疗学会；CRS＝细胞因子释放综合征；NCI CTCAE＝国家癌症研究所不良事件通用术语标准；Q3W＝每3周；RP2D＝推荐的II期剂量；SAE＝严重不良事件。
注：使用MedDRA 24.0版编码的AE的调查员文本。仅显示治疗紧急AE。百分比是基于栏标题中的N。
注：CRS的毒性级别通过ASTCT 2019标准进行评估，而所有其他非CRS事件通过NCICTCAE分级标准v4进行评估。
a“所有患者”是指组A-D中的所有患者，本文件中未展示组E的3名患者的数据。
b建议的RP2D和方案为0.3/3.6/160mg Q3W：Cevostamab在第1周期第1天以0.3mg(递增剂量)施用，在第1周期第8天以3.6mg(递增剂量)施用，在第1周期第15天和后续Q3W周期的第1天以160mg(目标剂量)施用。
cCevostamab在第1周期的第1天(递增剂量)和第8天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
dCevostamab在第1周期的第1天(递增剂量)、第8天(递增剂量)和第15天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
e包括在方案指定的AE报告期(即，研究治疗的最后一剂后90天或直至开始另一全身性抗癌疗法，以先发生者为准)内发生的因癌症进展导致的死亡，该等死亡可报告为具有致命结果的SAE。
总体而言，大多数报告的AE为低级别和可逆的。CRS为接受治疗的患者中最常报告的AE。在CCOD时未达到最大耐受剂量(MTD)。Cevostamab的安全性目前是可管理的，且将继续进一步表征。
接受单步递增剂量和双步递增剂量方案治疗的患者之间的安全性情形大致相似。如本文所述，在CRS/ICANS情形中注意到了差异。在0.3/3.6/160mg双步递增剂量方案和临床活性剂量下，安全性情形与研究的整体安全性可评估群体一致。在临床活性剂量范围内，无TD依赖性毒性的趋势。
与研究GO39775中的全部160名患者相比，三类难治性患者以及接受过先前PI、IMiD、抗CD38 MAb和BCMA靶向疗法的患者具有相似的安全性，如表14中所概述。
表15描述了与研究GO39775中的全部160名患者相比，这些群体中报告的最常报告的AE。尽管先前BCMA患者的子组较小，但与研究GO39775中的160名患者相比，在此群体和三类难治性群体的AE中看到了类似的趋势。
表14.在GO39775中，总体安全性可评估、先前BCMA和三类难治性群体中的不良事件概述
Figure BDA0004161870440001641
AE＝不良事件；MedDRA＝监管活动医学词典；NCI CTCAE＝国家癌症研究所不良事件通用术语标准；Q3W＝每3周；SAE＝严重不良事件。
注：使用MedDRA 24.0版编码的AE的调查员文本。仅显示治疗紧急AE。百分比是基于栏标题中的N。
注：细胞因子释放综合征(CRS)的毒性级别通过ASTCT 2019标准进行评估，而所有其他非CRS事件通过NCI CTCAE分级标准v4进行评估。
a“所有患者”是指组A-D中的所有患者，本文件中未展示组E的3名患者的数据。
b包括在方案指定的AE报告期(即，研究治疗的最后一剂后90天或直至开始另一全身性抗癌疗法，以先发生者为准)内发生的因癌症进展导致的死亡，该死亡可报告为具有致命结果的SAE。
表15.在研究GO39775中，总体安全性可评估、先前BCMA和三类难治性群体中的不良事件的频率≥15％
Figure BDA0004161870440001651
正在进行的研究GO39775的主要安全性结果如下：
·AE的总体发生率为99.4％(159名患者)。最常报告的AE为CRS(80.0％)、贫血(31.9％)、腹泻(26.3％)、咳嗽(23.1％)、恶心(21.9％)、嗜中性球减少症(18.1％)和输注相关反应(17.5％)。
·5名患者(3.1％)报告了致命AE(不包括疾病进展的5级AE)。死因包括3名患者的呼吸衰竭、急性肾损伤和HLH。HLH是唯一被认为与Cevostamab治疗相关的死亡。
·70名患者(43.8％)报告了严重AE(不包括疾病进展的5级AE)。最常报告的SAE为CRS(13.8％)和肺炎(6.3％)。
·99名患者(61.9％)报告了≥3级AE(不包括疾病进展的5级AE)。最常报告的3级AE为贫血(21.9％)、嗜中性球减少症(16.3％)和嗜中性球计数减少(13.8％)。
·16名患者(10％)报告了导致停用Cevostamab的AE。共有6名患者(4.4％)退出了与研究治疗相关的AE。5名患者(3.1％)报告了导致西沃司他单抗剂量修改的AE。
·在RP2D中，36名患者接受了治疗，且最常报告的AE为CRS(80.6％)。
CRS的时间和住院要求
在GO39775研究中，根据方案，患者需要在所有第1周期剂量期间住院至少72小时，以确保快速检测和管理CRS。为了患者的安全，在获得任何临床数据之前做出此决定。住院治疗已被证明是快速检测和治疗CRS的有效风险缓解措施；然而，无论患者是否患上CRS，且无论其恢复多快，均需要在医院住院48小时，从而给患者和医院增加了不应有的负担。基于正在进行的研究GO39775中的可用数据，目前的住院要求可能会减少到C1D1输注完成后至少住院24小时，以及C1D8和C1D15输注完成后至少住院48小时；若CRS的持续时间超过24或48小时，则患者仍需住院，且由于住院时间延长，该事件被视为严重不良事件(SAE)。若患者符合以下所有标准，则可在24小时(C1D1)或48小时(C1D8、C1D15)后出院：无正在进行的CRS的证据；无神经毒性的证据；生命征象和氧饱和度恢复至基线；归因于Cevostamab的异常实验室值正在向正常或基线改善。
在第1周期TD中未经历IRR或CRS的患者不需要在C2D1的下一剂量和后续剂量住院治疗。基于个体患者对第1周期初始剂量的耐受情况，考虑在后续剂量住院治疗。
在RP2D(0.3mg，C1D1)的第一递增剂量时，CRS发生率较低(36名患者中有7名，19.4％)，所有CRS事件均为1级，未报告ICANS症状，且除了2名患者(皆出现仅限于发烧和受寒的症状)外，所有患者均在24小时内发病(参见图36)。不需要输液或氧气干预，且报告CRS的7名患者中仅2名用托珠单抗和/或类固醇治疗长期发烧。所有事件在第二天(发病后24小时内)解决。
在RP2D(3.6mg，C1D8)的第二递增剂量下，所有CRS事件均在输注后48小时内发生。在RP2D(160mg，C1D15)的第一TD下，除一个CRS事件之外的所有CRS事件均在输注后48小时内发生。此患者在C1D15输注后56小时报告发生咳嗽、呼吸困难、发音困难和缺氧，需要低流量吸氧。所有事件均得到解决，且患者继续进行进一步的周期而未复发。
实例6.中间数据截止点的结果
第一数据截止点时的组A(单步剂量递增组)
在第一数据截止点时，51名患者被纳入组A。患者的中位年龄为62.0岁(范围：33–80岁)。28名患者具有高风险(HR)细胞遗传学(1q21、t(4；14)、t(14；16)或del(17p))。
先前疗法方案的中位数为6(范围：2-15)。先前治疗包括：
·蛋白酶体抑制剂(PI)(所有患者；94.1％难治)；
·免疫调节药物(IMiD)(所有患者，98.0％难治)；
·抗CD38单克隆抗体(mAb)(40名患者(78.4％)；92.5％难治)；
·CAR-T细胞、T细胞结合双特异性抗体(bsAb)或抗体药物结合物(ADC)(12名患者(23.5％))；以及
·自体干细胞移植(44名患者，86.3％)。
34名患者(66.7％)为三类难治性(≥1种PI、≥1种IMiD和≥1种抗CD38 mAb)，且48名患者(94.1％)难以用其最后一次疗法治疗。
剂量递增研究遵循典型的3+3设计。群组1中的患者在C1D1(第1周期，第1天)接受0.05mg分步剂量治疗，且在C1D8(第1周期，第8天)和以后接受0.15mg目标剂量治疗(图4A)。在群组2-6中未观察到DLT或活性。在群组7(C1D1：3.6mg；C1D8：20mg)中，第一次观察到部分缓解(PR)或更高的客观缓解。随着剂量递增至最高清除剂量(C1D1:3.6mg，C1D8：132mg)，继续观察到活性(图4A)。因此观察到Cevostamab在20mg和更高的目标剂量下具有活性。34名患者接受了有效剂量(3.6/20mg至3.6/90mg)的治疗。这些患者的基线人口统计数据在表16中示出。
组A的群组10分别在C1D1和C1D8用静脉内施用的3.6mg和90mg西沃司他单抗进行治疗(图4A)。
表16.组A的基线患者人口统计数据
基线特征 n＝34
年龄，中位数[范围] 62[33-75]
先前治疗方案，中位数[范围] 6[2-15]
先前IMID，n(％)，难治性[％] 34(100％)[98％]
先前PI，n(％)，难治性[％] 34(100％)[94％]
先前Dara，n(％)，难治性[％] 25(73％)[92％]
先前ASCT，n(％) 29(85％)
难以用最后一个方案治疗，n(％) 32(94％)
三类[PI、IMID、aCD38]难治性，n(％) 23(66％)
高风险细胞遗传学，n(％)* 19(56％)
*根据中心评估的高风险细胞遗传学：[1q21、t(4；14)、t(14；16)或del(17p)]
i.疗效
在本实例中使用的截止点，51名患者中有46名可评估疗效。在29名患者中的15名(51.7％)中，在3.6/20mg剂量水平和以上观察到缓解(表17和图8)。缓解包括3例严格完全缓解(sCR)、3例完全缓解(CR)、4例极好部分缓解(VGPR)和5例部分缓解(PR)(表17)。在活性剂量水平和以上，在具有HR细胞遗传学(9/17)、三类难治性疾病(10/20)和先前暴露于抗CD38 mAb(11/22)、CAR-T(2/3)或ADC(2/2)的患者中观察到缓解。15名患者中有6名在截止点时已缓解超过6个月。在一系列FcRH5表达水平下观察到缓解，包括在表达水平较低的患者中。
在单步分次组中治疗的大多数患者已接受六个或更多个先前治疗方案，如图5所示，例如，已接受蛋白酶体抑制剂(PI)、IMiD和/或抗CD38疗法(例如达雷木单抗)。先前接受过达雷木单抗的患者的ORR相似(50％，11/22)(图5)。在先前接受过针对B细胞成熟抗原的抗体-药物结合物(BCMA-ADC(2/3名患者))或嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法(2/5名患者)的患者中也观察到缓解。无论高风险细胞遗传学、先前方案数、先前使用的疗法或其他人口统计学分层如何，均观察到疗效。
群组10的十一名患者中有六名达到客观缓解：一名患者达到部分缓解(PR)，四名患者达到极好部分缓解(VGPR)，且一名患者达到完全缓解(CR)。首次缓解的时间因患者而异。大多数因治疗而缓解的患者在前三个治疗周期内均达成PR或更好。
图6示出针对Cevostamab疗法显示缓解的十三名患者中的每一位的治疗时间线。十三名缓解者中有六名保持六个月以上的缓解，且一些患者在治疗下已缓解接近一年。
表17.在单步剂量递增组的活性剂量水平(3.26/20mg和以上)下根据研究者评估的最佳总体缓解概述
Figure BDA0004161870440001691
1根据2016年IMWG统一缓解标准，达成sCR、CR、VGPR或PR的最佳总体缓解的患者；ORR，总体缓解率；CR，完全缓解；PR，部分缓解；sCR，严格CR；VGPR，极好PR；MR，最小限度的缓解；SD，病情稳定；PD，疾病进展。
ii.安全性
安全性的中位随访时间为6.2个月(范围：0.2–26.3个月)。几乎所有患者(49/51)均具有≥1种治疗相关的不良事件(AE)。最常见的治疗相关的AE为细胞因子释放综合征(CRS)，如由Lee等人,Blood,124：188-195,2014确立的标准所定义(表5A)。接受临床活性剂量的Cevostamab(≥3.6mg/20mg)治疗的46名患者中有42名(91％)经历CRS(表18-20)。
表18.CRS的频率和级别
Figure BDA0004161870440001701
*根据Lee等人,Blood,124：188-195,2014评估为3级(表5A)；若根据ASTCT分级量表(2019)进行评估，则为1级或2级(表5A)。
表19.在组A、B和C的第1天递增剂量后，第1周期中CRS的频率和级别
Figure BDA0004161870440001702
*组B的第一递增剂量。^由于在肝功能测试(LFT)中升高，根据Lee等人,Blood,124：188-195,2014评估为3级(表5A)；若根据ASTCT分级量表(2019)进行评估，则一个将为1级，而一个将为2级(表5A)。
表20.在组A和C的第8天目标剂量后，第1周期中CRS的频率和级别
Figure BDA0004161870440001711
*剂量：0.15(n＝1)、0.90(n＝4)、10.8(n＝3)不在表中，因为仅包括CRS剂量。
20名患者(43％)的CRS为1级，20名患者(43％)的CRS为2级，且2名患者(4.3％)的CRS为3级(均由于完全解决的短暂转胺酶升高)。1级和2级CRS的临床症状如图7所示。1级PRS的临床症状主要归因于发烧(发热)，通常可用退热药治疗，且不需要紧急干预。2级事件不需要加护病房(ICU)级别的照护。2级低血压的管理主要限于静脉输液(IVF)。一名患者在接受托珠单抗之前接受了单次低剂量升压剂。2级缺氧通过标准补充氧气进行管理。患者均不需要高流量氧气或机械换气法。未观察到4级或5级CRS事件。
CRS在第1周期(C1)中最常见(38名患者)，且在后续周期中不常见或不存在(4名患者)。若临床需要，CRS可通过照护治疗标准、类固醇或托珠单抗逆转。大多数CRS事件(49/58，84.5％)在2天内解决。38名CRS患者中有18名(47.3％)接受托珠单抗和/或类固醇治疗。
≥5名患者发生的其他治疗相关AE为嗜中性球减少症和淋巴球计数减少(各6名患者，11.8％)；天冬胺酸转胺酶升高；和血小板计数减少(各5名患者，9.8％)。≥3名患者发生的治疗相关3-4级AE(20名患者，39.2％)为淋巴球计数减少(6名患者，11.8％)；嗜中性球减少症(5名患者，9.8％)；贫血；以及血小板计数减少(各3名患者，5.9％)。未观察到与治疗相关的5级(致命)AE。导致停止治疗的治疗相关AE不常见(1名患者，2.0％)。在3.6/90mg群组中观察到一例剂量限制性毒性(DLT)，但未达到最大耐受剂量(MTD)。
在群组10(分别在C1D1和C1D8用3.6mg和90mg Cevostamab治疗的患者)中，观察到54.5％ORR(6/11名患者为缓解者)：一名患者达成部分缓解(PR)，四名患者达成极好部分缓解(VGPR)，且一名患者达成完全缓解(CR)(表17)。在96％(22/23)的患者中观察到CRS。10名患者(43％)的CRS为1级，11名患者(49％)为2级，1名患者(4.3％)为3级。在鉴定为缓解者的患者中未观察到显著慢性不良事件(AE)。因此，BFCR4305A为可耐受的，且在使用3.6/90mg给药方案的具有高度未满足需求的群体中产生有意义的深度缓解。
跨剂量水平未观察到明显的CRS剂量依赖性增加。非CRS不良事件(AE)在不同剂量水平下零星发生，无模式或剂量依赖性。在90mg剂量下，观察到3级(G3)肺炎、局限性肺炎(n＝1)和需要减少剂量的全身不适(n＝1)。在132mg剂量下，观察到G2足部水疱(n＝1)和需要减少剂量的不适和腹泻(n＝1)。
Cevostamab PK在测试的活性剂量水平下呈线性，且估计的半衰期支持Q3W给药方案。
iii.结论
Cevostamab单一疗法在严重预先治疗的R/R MM中表达出有希望的活性，在HR细胞遗传学、三类难治性疾病和/或先前暴露于抗CD38 mAb(例如达雷木单抗)、CAR-T或ADC的患者中观察到深度且持久的缓解，从而将FcRH5确立为MM的新靶点。毒性为可管理的，C1单步递增剂量有效地降低了严重CRS的风险，且允许升级至临床活性剂量。
第二数据截止点时的组A(单步剂量递增组)
在第二截止点时，53名患者已被纳入组A。在表21中示出了这些患者的基线特征。
表21.第二数据截止点时组A的基线特征
Figure BDA0004161870440001731
*1q21增益，21/53(40％)；t(4:14)，5/53(9％)；t(14；16)，0/53；del(17p)，10/53(19％)；*；PI，蛋白酶体抑制剂；IMiD，免疫调节药物；ADC，抗体-药物结合物；CAR-T，嵌合抗原受体T细胞疗法；ASCT，自体干细胞移植；BCMA，B细胞成熟抗原；
Figure BDA0004161870440001732
CAR-T，6/11；ADC，5/11。
i.安全性
中位随访时间为8.1个月(范围：0.2-30.4)。28名患者经历了严重AE。其中13名患者经历了治疗相关事件；其中6名患者经历的事件为CRS。
五名患者(9％)经历了导致退出的AE。对于其中两名患者，AE与治疗相关。一名患者经历了肺炎，且一名患者经历了脑膜炎。
七名患者(13％)经历了5级AE，其中包括恶性肿瘤进展(5名患者)和呼吸衰竭(2名患者)。未观察到治疗相关5级事件。
在3.6/90mg群组中，一名患者(2％)经历了Gr 3肺炎的DLT；未达到MTD。表22中概述了不良事件。
表22.第二数据截止点时组A的不良事件的频率和级别
N(％) 所有Gr(N＝53) 所有Gr 3-4(N＝53)
血液学AE(≥15％)
贫血 15(28) 10(19)
血小板减少症 9(17) 7(13)
嗜中性球减少症 9(17) 8(15)
血小板计数减少 8(15) 6(11)
淋巴球计数减少 8(15) 8(15)
非血液学AE(≥15％)
细胞因子释放综合征 40(76) 1(2)
低镁血症 15(28) 0
腹泻 15(28) 1(2)
输注相关反应 12(23) 0
低钾血症 11(21) 2(4)
低磷血症 10(19) 5(9)
恶心 10(19) 0
疲劳 9(17) 2(4)
AST升高 8(15) 1(2)
在五名或更多患者中发生的CRS事件为发热(39名患者，74％)、低血压(16名患者，30％)、心跳过速(14名患者，26％)、受寒(8名患者，15％)、意识模糊状态(7名患者，13％)和缺氧(5名患者，9％)。在两名或更多名患者中发生的神经系统事件为意识模糊状态(7名患者，13％)、头痛(4名患者，8％)、失语症(3名患者，6％)和认知障碍(2名患者，4％)。所有事件均发生在CRS的背景下，且由CRS解决方案解决。
所有CRS事件均由照护标准解决(托珠单抗，13名患者(33％)；类固醇，9名患者(23％))。表23和图17中概述了CRS事件。
表23.第二数据截止点时组A的CRS事件的频率和级别
Figure BDA0004161870440001751
CRS由Lee等人,Blood,124：188-195,2014标准评估。
Figure BDA0004161870440001752
由于Gr 4转胺酶短暂升高；
Figure BDA0004161870440001753
缺失的CRS发病时间被推算为23:59:59。
ii.疗效
53名患者中有51名可评估疗效。在≤3.6/10.8mg群组中未观察到缓解。在所有患者中，≥3.6mg/20mg群组(根据2016年IMWG统一缓解标准定义为PR、VGPR、CR或sCR的最佳缓解)的ORR为53％(18/34)；五药难治性患者的ORR为42％(7/17)；且先前暴露于抗BCMA的患者的ORR为63％(5/8)。
第一次缓解的中位数时间为29.5天(范围：21-105天)。最佳缓解的中位数时间为57.5天(范围：21-272)。无论标靶表达水平如何，均观察到缓解。在6/7名可评估的患者(≥VGPR)中，根据次世代定序(NGS)(<10-5)为MRD阴性。图18中概述了缓解率。
缓解者的中位随访时间为10.3个月(范围：2.7-19.5)。八名患者的缓解持续时间为6个月或更长时间，且四名患者在治疗后显示出持久的缓解。其中两名患者完成了17个治疗周期，且两名患者因AE提前终止治疗(图19)。
iii.结论
在第二数据截止点时收集的数据表明，Cevostamab的安全性为可管理的，C1单步递增给药有效地降低了严重CRS的风险。76％的患者(40/53)出现CRS，但仅2％(1名患者)为3级。
发现Cevostamab在大量预治疗的RR/MM患者中具有高活性，≥3.6mg/20mg组的ORR为53％(≥VGPR为32％)；五药难治性患者的ORR为42％；先前抗BCMA患者的ORR为63％；在6/7名可评估的患者(≥VGPR)中，根据次世代定序(NGS)(<10-5)为MRD阴性；且无论标靶表达水平如何，均缓解。
组B(多步剂量递增组)
组B的群组1分别在C1D1、C1D8和C1D16用静脉内(IV)施用的1.2mg、3.6mg和60mg西沃司他单抗进行治疗。组B的群组2分别在C1D1、C1D8和C1D16用1.2mg、3.6mg和90mg西沃司他单抗(IV)进行治疗。组B的群组3和4分别在C1D1、C1D8和C1D16用0.3或0.6mg、3.6mg和90mg西沃司他单抗(IV)进行治疗(图4B)。组D作为组B的扩展开放。
i.1.2mg双步剂量的安全性和疗效
九名患者接受了1.2mg双步剂量治疗：六名患者接受了1.2/3.6/60mg，且三名患者接受了1.2/3.6/90mg。九名患者中有八名在第一周期出现CRS；此八名患者中有六名在第一个1.2mg剂量时出现CRS(1级或2级)(图8；表18)。在C1D15目标剂量下也观察到2级CRS(图8)。双步分次并未阻止患者在C1D15的目标剂量下发生CRS。1.2mg剂量的CRS严重程度并不优于在单步分次组(组A和组C)中测试的3.6mg剂量。
ii.额外组B群组
开放额外群组3和4以研究低于1.2mg的递增剂量。基于观察到此剂量具有最低程度的药效学(PD)活化，即，有限的T细胞活化/增殖(图9)，且在此剂量下观察到Cevostamab的一些生物学效应，因此选择0.3mg的初始剂量作为最低剂量。还测试了0.05mg和0.15mg的初始剂量。
组C(单步剂量扩大组)
组C作为组A的扩展开放。组C的第一群组分别在C1D1和C1D8用静脉内施用的3.6mg和90mg西沃司他单抗治疗(图4A)。31名患者在数据截止点时入组。
i.安全性
组C的CRS发生率和严重程度与组A和组B一致(表18、19和24)。进行了缓解分析的预测因子；在多变量分析中未鉴定2+级CRS的显著预测因子。未观察到额外安全信号。
表24.组A、B和C的CRS情形
Figure BDA0004161870440001771
*组A群组的递增剂量为3.6mg**基于Lee等人,Blood,124：188-195,2014(表5A)
ii.疗效
未鉴定出组A与组C之间的人口统计数据存在明显差异。两个患者群体之间的基线FcRH5表达为相当的(图10A和图10B)。与组A一样，缓解的患者表达出深度缓解，且观察到多个极好部分缓解或完全缓解(VGPR/CR)。在整个FcRH5表达谱中观察到缓解，包括在低表达患者中(图10B)。
第三数据截止点时的结果
截至第三临床截止日期(CCOD)，对于患有大量预治疗的复发/难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)的患者，Cevostamab单一疗法继续显示出临床上有意义的活性和可管理的安全性。此实例展示了来自更大患者群组的最新安全性和有效性数据，包括比较周期(C)1单步递增和双步递增剂量以缓解细胞因子释放综合征(CRS)的结果。
i.方法
如上所述，Cevostamab(静脉内输注)以21天周期施用。在单步递增群组中，递增剂量(0.05-3.6mg)在C1第1天(D)施用且目标剂量(0.15-198mg)在C1D8施用。在双步递增群组中，递增剂量在C1D1(0.3-1.2mg)和C1D8(3.6mg)给予，且目标剂量(60-160mg)在C1D15给予。在两个方案中，该目标剂量均在后续周期的D1时给予。除非出现疾病进展或不可接受的毒性，否则Cevostamab持续总共17个周期。使用ASTCT标准(Lee等人,Biol Blood MarrowTransplant,25：625-638,2019)报告CRS(表5A)。
ii.结果
在第三数据截止点时，已招募160名患者(中位年龄：64岁，范围：33-82岁；男性：58.1％)；21.3％的患者患有髓外疾病。先前疗法方案的中位数为6(范围：2-18)。大多数患者(85.0％)为三类难治性(PI、IMiD、抗CD38抗体)。28名患者(17.5％)接受过≥1种先前CAR-T，13名患者(8.1％)接受过≥1种先前BsAb，27名患者(16.9％)接受过≥1种先前抗体-药物结合物(ADC)，且54名患者(33.8％)接受过≥1种先前抗BCMA靶向剂。
暴露的患者的中位随访时间为6.1个月。几乎所有人均具有≥1次不良事件(表25)。最常见的不良事件为细胞因子释放综合征(CRS)(128/160名患者[80.0％]；1级[Gr1]：42.5％；Gr 2：36.3％；Gr 3：1.3％)。在21名患者(13.1％)和34/211(16.1％)例CRS事件中观察到与CRS相关的免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)(Gr 1：8.5％；Gr 2：6.2％；Gr 3：1.4％)。大多数CRS事件发生在第1周期(87.2％)，在服用Cevostamab后24小时内出现(70.5％)，且在发病48小时内解决(83.4％)。在CRS患者中，43.8％的患者使用托珠单抗进行CRS管理，且25.8％的患者使用类固醇(两种药物均用于18.0％的患者)。在单步递增剂量递增(68名患者)中，3.6mg被选为最有效的C1D1单步递增剂量，用于限制第1周期中的CRS，在C1D8施用后未观察到CRS发生率或严重程度的目标剂量依赖性增加。同样，在双步递增剂量递增(30名患者)中，0.3/3.6mg被鉴定为首选C1D1/C1D8 DS剂量，用于限制第1周期中的CRS。值得注意的是，接受0.3/3.6mg/目标双步递增方案的患者的CRS总体发生率低于接受3.6mg/目标单步递增方案的患者(分别为77.3％[34/44]相对于88.2％[75/85])。0.3/3.6mg/目标双步递增群组的与CRS相关的ICANS率也低于3.6mg/目标SS群组(分别为4.5％[2/44]相对于21.2％[18/85])。
表25.不良事件概述
Figure BDA0004161870440001791
Figure BDA0004161870440001801
*列出的首选术语为发生率≥15％的术语；
Figure BDA0004161870440001803
研究人员认为与Cevostamab相关的AE；
Figure BDA0004161870440001802
仅Gr 3；**急性肾损伤，n＝1；噬血细胞性淋巴组织细胞增生症，n＝1；恶性肿瘤进展，n＝17；浆细胞骨髓瘤，n＝1；病情进展，n＝1；呼吸衰竭，n＝3；
Figure BDA0004161870440001804
噬血细胞性淋巴组织细胞增生症，n＝1。
AE，不良事件；SOC，系统器官类；TR，治疗相关。
在数据截止点时，可评估158/160名患者的疗效。在剂量递增中，在20-198mg目标剂量水平下观察到缓解，且数据表明临床疗效的目标剂量依赖性增加。中位缓解时间为29天(范围：20-179天)。开放两个剂量扩大群组：160mg剂量水平(54.5％，24/44名患者)的总缓解率(ORR)高于90mg剂量水平(36.7％，22/60)。在目标剂量水平>90mg时，先前暴露于CAR-T、BsAb、ADC和抗BCMA靶向剂的患者的ORR分别为44.4％(4/9名患者)、33.3％(3/9名患者)、50.0％(7/14名患者)和36.4％(8/22名患者)。所有缓解者(n＝61)的中位随访时间为8.1个月；估计的中位缓解持续时间为15.6个月(95％CI：6.4，21.6)。
iii.结论
在患有大量预治疗的R/R MM的患者中，Cevostamab单一疗法继续显示出具有临床意义的活性，ORR具有目标剂量依赖性增加，但CRS发生率未增加。缓解似乎是持久的，且在先前暴露于CAR-T、BsAb和ADC的患者中观察到缓解。与单次递增给药相比，0.3/3.6mg水平的双步递增给药似乎与改善C1安全性情形的趋势相关。
实例7.托珠单抗用于治疗CRS
发现托珠单抗在治疗FcRH5 TDB介导的CRS方面非常有效。在此实例中使用的数据截止处，在GO39775试验的82名患有CRS的患者中(数据包括具有3.6mg递增剂量的组A群组、组B和组C)，25名患者接受托珠单抗以治疗CRS。其中5名患者患有1级CRS，17名患者患有2级CRS，且3名患者患有3级CRS。19名患者的CRS症状在1天内消退，且5名患者的症状在3天内消退。25名患者中有24名在下一个周期继续接受Cevostamab给药。托珠单抗的早期干预有助于限制CRS向更高级别(例如，3级或更高)进展。
在C1D1向组A或组C的67名患者施用3.6mg剂量。56名(84％)患者在C1D1患有CRS：45％为1级(n＝30)，36％为2级(n＝24)，且4％为3级(n＝3)。16(24％)名患者在C1D8患有CRS：10％G1(n＝7)，13％G2(n＝9)。3名患者在C1D1未患CRS；3名患者因退出和PD而未服用C1D8剂量；2名患者在C1D8服用3.6mg的重复剂量，且在C1D1之后无额外CRS。C1D8的CRS发生率降低表明递增剂量C1D1正在减轻CRS(表18、19和24)。
大多数CRS病例用一剂托珠单抗解决。截至第二数据截止点，仅四名患者在24小时内需要两次剂量。无患者需要超过2个剂量来治疗CRS事件。
预计单一剂量的托珠单抗不会对安全性情形产生重大影响。在长期施用托珠单抗的情况下，鉴定出嗜中性球减少症的风险。在第1周期中，一部分患者出现了短暂、可逆且在生长因子支持下缓解的嗜中性球减少症。与未接受托珠单抗的患者相比，接受托珠单抗的GO39775患者未观察到更严重或持续性嗜中性球减少症的信号。
初步数据表明，与未接受托珠单抗的患者相比，接受托珠单抗的患者的缓解率无差异。9/22名接受托珠单抗以治疗CRS的患者(所有组；疗效可评估)有缓解。
实例8.组E：托珠单抗预防组
组E为剂量扩大组，用于根据来自组A、B和C的紧急临床数据，研究托珠单抗预治疗潜在地减轻与Cevostamab治疗相关的CRS事件的频率和/或严重程度的用途。
大约30名患者以3.6mg/90mg的单步Cevostamab给药方案加入E组。如上所述地进行Cevostamab给药，且如上所述地在C1期间继续使用现有的类固醇前驱用药。组E中的所有患者将在第1周期第1天Cevostamab剂量的前2小时接受单一剂量的8mg/kg托珠单抗IV(最大800毫克)作为前驱用药。体重低于30kg的患者将接受12mg/kg的剂量。
若初始数据证明在减轻C1D1的CRS方面具有可接受的安全性和疗效情形，但患者在后续剂量中经历CRS，则可制定额外剂量的8mg/kg托珠单抗(最大800mg)作为Cevostamab的后续第1周期剂量的前驱用药(图11C)。此外，根据来自组E的新数据，可对其他治疗组的第1周期Cevostamab剂量制定托珠单抗术前用药。在C1D1剂量之前施用可能会另外减轻C1D8剂量的CRS，因为在4周的给药间隔内，在RA患者的第一剂量后，8mg/kg托珠单抗剂量的受体占有率(RO)为>99％(Xu等人,Arthritis Rheumatol,71(增刊10),2019)。
组E的前3名患者的入组是错开的，因此各自的C1D1治疗间隔≥72小时进行。最初，测试了6+6安全试运行(图11B)。评估安全信号(例如，CRS情形恶化(3+级CRS)或重迭毒性)，且可扩大该组以招募约30名患者。或者，使用包括暂停安全审查的实验设计(图11A)。
突破性CRS按照现有方案进行管理。若CRS未解决，则可使用其他机构管理指南(例如，托珠单抗难治性CRS指南)。
对于所有患者，如针对Cevostamab剂量后发生的CRS的方案中所描述，应在指示时施用托珠单抗。
主要研究目标为评估接受托珠单抗预防与Cevostamab治疗的患者的2+级CRS发生率，以及评估托珠单抗预防与Cevostamab的安全性情形。还评估托珠单抗预防对疗效(例如ORR、DoR)的影响。
评估探索性生物标记(例如，PK/PD与IL6、sIL6R和PD生物标记的关系(例如，淋巴球瞬时减少、T细胞活化和增殖))。生物标记采样时间点如上所述；可能会做一些微小调整。在托珠单抗输注之前进行IL6和其他细胞因子水平的额外测量。在托珠单抗输注前，在C2D2和C3D1进行额外流式细胞术测量。
实例9.生物标记评估
I期剂量递增研究(GO39775；NCT03275103)研究了复发/难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)患者的Cevostamab单一疗法的药效学(PD)。检测到T细胞活化、增殖和细胞因子产生的早期PD变化且确认Cevostamab的作用模式，支持第1周期(C1)C1递增给药缓解R/R MM中的CRS，且提供对可能预测缓解的标记的深入理解。数据显示，在C1结束时，在有缓解的患者中可能观察到比在无缓解的患者中更高的周边CD8+T细胞扩增和TIL。
i.评估方法和患者群体
通过全血流式细胞术、血浆细胞因子电化学发光和数字ELISA在基线和C1内的多个时间点评估周边血液的药效学变化。通过骨髓活检双CD138/CD8免疫组织化学染色和骨髓抽吸流式细胞术，在第2周期(C2)之前在基线评估肿瘤生物标记。在此实例中使用的截止日期，53名患者中的43名(实例1-4和6)为生物标记可评估的，包括多至33名以临床活性剂量(在第1周期，第1天剂量为等于或高于3.6mg，且在第1周期，第8天剂量为等于或高于20mg)治疗的患者。在所有生物标记可评估患者中检测到骨髓瘤细胞上的FcRH5表达(图13)。通过流式细胞术对骨髓抽吸物中的骨髓瘤细胞检测到广泛的FcH5表达水平。数据表明，无论患者的FcRH5水平如何，均观察到Cevostamab所致的缓解。
ii.T细胞活化和增殖
在C1D1输注结束后24小时，在周边血液(PB)中观察到瞬时T细胞减少，且在C1D8恢复(图14A)。在C1D1输注后24-192小时观察到周边血液中的剂量依赖性PD变化。在0.3-1.8mg C1D1剂量后24小时观察到循环T细胞的可变减少，而在3.6mg C1D1剂量后观察到显著减少，且在C1D8恢复(192小时)。输注后24小时，通过CD8+和CD4+T细胞的CD69的上调(图14B)和血浆的IFN-γ的升高(中值比基线增加约150倍)检测到T细胞活化(图14C)，而T细胞增殖(Ki67+)在C1D8达到峰值。在3.6mg C1D1剂量下，CD8+T细胞活化和增殖比基线高20倍(图14B)。在C1D1和C1D8的输注结束(EOI)时检测到IFN-γ诱导，C1D1升高大于C1D8(目标剂量)升高(图14C)。
数据表明，无论C1的第一周期间基线CD8+T细胞含量如何，在第1周期结束时，由Cevostamab缓解的患者可能在周边血液中具有更明显的T细胞扩增(图16A)。
对配对骨髓活检患者子组(n＝19名患者)的分析显示，与无缓解的患者相比，有缓解的患者在治疗时(第1周期第9天与第1周期第21天之间的时间点)CD8+肿瘤浸润性T细胞(TIL)的水平更高(图16A和图16B)。
iii.细胞因子产生
接受亚有效剂量的患者在输注后观察到IL-6的最小限度升高，而在临床活性剂量(3.6mg/20mg剂量和以上)下观察到更一致的增加(≥100pg/ml)。在临床活性剂量下，在C1D1和C1D8的EOI处检测到IL-6升高，C1D1升高大于C1D8(目标剂量)升高(图15A)。IL-6水平在C1D1剂量后24小时内达到峰值，且IL-6增加的动力学与C1D1 3.6mg递增剂量下CRS风险的发生相关，但在C1D8目标剂量(20-132mg)下并非如此(图12和15B)。接受托珠单抗作为CRS治疗的一部分的患者如图15B所示。托珠单抗先前已显示由于托珠单抗可溶性IL-R复合物的形成而增加血浆中的可溶性IL-6(Nishimoto等人,Blood,112：3959-394,2008)。递增给药降低了严重CRS的风险，如由在27/33名患者(82％)中，与3.6mg C1D1分步剂量相比，C1D8目标剂量之后的IL-6水平更低所证明(参见实例6)。尽管剂量相对于C1D1剂量增加了多达36倍，但在C1D8剂量下未观察到3级CRS事件。
iv.药物动力学
Cevostamab的PK行为支持Q3W给药方案。Cevostamab的血清浓度在输注后达到峰值，且以多指数方式下降(图20)。观察到随着剂量在0.9/2.7mg至3.6/132mg范围内增加，暴露量(Cmax和AUC)一般呈线性增加。有证据表明，在较低剂量水平(0.05/0.15mg-0.3/0.9mg)下，标靶介导的药物处置会导致快速清除。
实例10.其他调配物
i.概述
在临床开发过程中，使用了额外的Cevostamab调配物和小瓶组态，如表26和27中所述。表26中提供了各Cevostamab小瓶组态的调配物组分的标称含量。
表26.Cevostamab药品调配物开发概述
Figure BDA0004161870440001841
Figure BDA0004161870440001851
表27.Cevostamab药品组态概述
Figure BDA0004161870440001852
ii.药品组分
药物物质
Cevostamab为药品中的唯一活性成分。药物物质制造过程、测试程序和发布标准(用于控制药物物质)在对应药物物质章节中给出。在药品制造过程中，通过稀释步骤改变药物物质中的药品Cevostamab、聚山梨醇酯20和甲硫胺酸的浓度。如药物物质和药品稳定性数据所证明，调配物中的赋形剂与活性药物之间不存在不兼容性。
赋形剂
3mg/mL和20mg/mL药品使用相同的缓冲液和赋形剂调配，目标pH为5.8。如下所述，与20mg/mL药品相比，3mg/mL药品用更大量的聚山梨醇酯20和甲硫胺酸调配。所有调配物赋形剂的基本原理如下所列，且对于3mg/mL和20mg/mL调配物均为相同的。
L-组胺酸/冰乙酸[5.8]
功能：将溶液pH维持在5.8的缓冲液。
浓度：在药物物质和药品中为20mM。
L-组胺酸在目标pH 5.8下提供缓冲能力。显示20mM的L-组胺酸浓度足以在药品的制造过程中以及药物物质和药品的储存过程中维持调配物pH。
缓冲系统(组胺酸乙酸盐)的总浓度为20mM。
蔗糖
功能：张力剂。
浓度：在药物物质和药品中为240mM。
240mM的蔗糖浓度足以达成等张性且为药物物质和药品提供稳定性。
聚山梨醇酯20
功能：界面活性剂，用于防止由表面吸附所致的损失，以及最大限度地减少可溶性聚集体和/或不溶性蛋白质颗粒的潜在形成。
浓度：在药物物质中为0.2mg/mL且在药品中为1.2mg/mL。
已显示药物物质中0.2mg/mL和调配物中1.2mg/mL的聚山梨醇酯20水平足以保护Cevostamab免受加工(例如冷冻和解冻)、处理以及储存和在用施用过程中可能出现的应力。
L-甲硫胺酸
功能：稳定剂。
浓度：在药物物质中为5mM L-甲硫胺酸，且在药品中为10mM L-甲硫胺酸。
5mM的L-甲硫胺酸药物物质浓度和10mM的药品浓度足以为Cevostamab药物物质和药品提供稳定性。
N-乙酰-DL-色胺酸
功能：抗氧化剂。
浓度：在药物物质和药品中为0.3mM N-乙酰-DL-色胺酸。
浓度为0.3mM的N-乙酰-DL-色胺酸足以为Cevostamab药物物质和药品提供稳定性。
iii.药品
调配物开发
开发了一种设计为静脉内(IV)输注或皮下(SC)注射溶液的单一剂量调配物，用于起始1期Cevostamab临床试验。药物物质和药品分别由含50mg/mL和20mg/mL Cevostamab的20mM L-组胺酸乙酸盐、240mM蔗糖、5mM L-甲硫胺酸、0.3mM N-乙酰-DL-色胺酸、0.2mg/mL聚山梨醇酯20，pH 5.8构成。由于药品制造过程中的稀释步骤，药品中的蛋白质浓度与药物物质中的蛋白质浓度不同。
开发了3mg/mL药品调配物，以使得能够以IV输注的形式递送后续临床试验中预期的更广泛剂量范围。此药品调配物由含3mg/mL Cevostamab的20mM L-组胺酸乙酸盐、240mM蔗糖、10mM L-甲硫胺酸、0.3mM N-乙酰-DL-色胺酸和1.2mg/mL聚山梨醇酯20，pH 5.8构成。由于稀释步骤，调配物与药物物质不同，该稀释步骤改变蛋白质、L-甲硫胺酸和聚山梨醇酯20在稀释为药品的过程中的浓度。在3mg/mL药品的开发过程中，药物物质组成不改变。
除了聚山梨醇酯20和L-甲硫胺酸外，20mg/mL和3mg/mL调配物的所有赋形剂和赋形剂浓度均相同。界面活性剂浓度是基于经设计以确定稀释药品在含盐水IV袋中的稳定性的研究来确定的。根据此研究的结果，发现1.2mg/mL聚山梨醇酯20足以确保药品稳定性，且因此选择用于3mg/mL药品调配物。L-甲硫胺酸作为稳定剂添加至药品调配物中。调配物开发研究表明，10mM L-甲硫胺酸足以确保3mg/mL药品调配物的稳定性。进行调配物研究以证明3mg/mL Cevostamab药品具有可接受的稳定性。
基于来自这些调配物开发研究的结果，选择由以下各项组成的液体调配物作为药品调配物：含3mg/mL Cevostamab的20mM组胺酸乙酸盐、240mM蔗糖、10mM L-甲硫胺酸、0.3mM N-乙酰-DL-色胺酸、1.2mg/mL聚山梨醇酯20，目标pH为5.8。
对于临床研究的开始，使用Cevostamab 40mg/小瓶(20mg/mL)。当前患者过渡到使用且新患者开始使用新开发的1.2mg/小瓶和60mg/小瓶药品。
物理化学和生物学特性
所有表征测试均在药物物质上进行。在下表28中提供药品批次的扩展表征。
表28.Cevostamab药品批次的扩展表征
Figure BDA0004161870440001871
当避光时，该调配物在推荐的2℃-8℃储存条件下保持稳定。
如3mg/mL药品代表性稳定性研究所示，在推荐的储存温度(2℃-8℃)下，可见或亚可见颗粒(≥10μm和≥25μm)未增加。
尺寸为≥2μm和≥5μm(外加≥10μm和≥25μm，其为控制系统的一部分)的亚可见粒子通过显影使用遮光法进行监测。这些评估作为在药品发布时和稳定性期间进行的扩展表征的一部分进行。
静脉内(IV)
作为预防措施，在此开发阶段使用在线过滤器(0.2μm)施用临床材料。
iv.制造过程开发
表29突出显示了药品制造过程中的变化。药物物质的制造过程无改变。BFCR350A的药品制造过程为标准的无菌制造程序。对于40毫克/小瓶药品(DP)，解冻的药物物质用调配物缓冲液稀释至20毫克/毫升，然后通过生物负载减少和无菌过滤步骤进行处理。接下来，将2mL稀释溶液装入6mL玻璃小瓶中、塞上塞子、盖上盖子、贴上标签且包装。对于1.2mg/小瓶和60mg/小瓶DP，解冻的药物物质用稀释缓冲液稀释至3mg/mL，然后通过生物负载减少和无菌过滤步骤进行处理。接下来，将0.4mL稀释溶液装入2mL玻璃小瓶中或将20mL稀释溶液装入50mL小瓶中。然后将小瓶塞上塞子、盖上盖子、贴上标签且包装。
表29.BFCR430A 20mg/mL DP和3mg/mL DP的制造过程比较
Figure BDA0004161870440001881
实例11.在正在进行的I期剂量递增研究中，接受Cevostamab治疗的复发性/难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)患者的FcRH5标靶表达
在招募晚期R/R MM患者(实施例1-8)的正在进行的Cevostamab 1期剂量递增研究(GO39775)中，Cevostamab作为单一疗法显示出有希望的活性和可管理的毒性。在先前暴露于标准和新兴疗法(包括抗BCMA)以及高风险细胞遗传学的患者中观察到缓解。
在此实例中，在GO39775中探索了基线(治疗前)FcRH5表达与基线患者和疾病特征(例如，先前疗法、细胞遗传学风险状态)之间的关系，以及基线FcRH5表达与Cevostamab单一疗法所致的缓解之间的关系。
在Cevostamab治疗之前收集骨髓抽吸物(BMA)。使用流式细胞术评估骨髓瘤细胞上的FcRH5细胞表面表达，且通过先前疗法比较患者之间的表达水平(报告为等效可溶性荧光染料(MESF)的分子)，且根据细胞遗传风险状态进行分层(由荧光原位杂交(FISH)确定)。
截至此实例中使用的CCOD，53名患者(中位年龄：62.0岁，范围：33-80)参加了研究。先前疗法方案的中位数为6(范围：2-15)。先前治疗包括蛋白酶体抑制剂(PI)(100％；94.1％难治性)；免疫调节药物(IMiD)(100％；98.0％难治)；抗CD38 mAb(81％；92％难治性)；以及自体干细胞移植(86％)。总体而言，72％的患者为三类难治性(≥1种PI、≥1种IMiD和≥1种抗CD38 mAb)，且94％的患者难以用其最后一次疗法治疗(表21)。
先前疗法的活性剂量水平的ORR大体一致。在接受≥3.6mg/20mg剂量的Cevostamab的患者中，总体缓解率(ORR)为53％(18/34)；先前暴露于达雷木单抗和抗BCMA药物的患者的缓解为一致的(图21)。先前疗法和治疗方案数目似乎不影响FcRH5表达。
在所有患者的骨髓瘤细胞上检测到FcRH5表达，具有足够的BMA样本用于基线生物标记评估(n＝44)。在迄今为止评估的R/R MM患者中，无论FcRH5表达水平如何，均观察到因Cevostamab所致的缓解；在活性剂量水平下未观察到因Cevostamab所致的缓解与基线FcRH5表达水平之间的明显关系(图13)。FcRH5表达似乎不受先前疗法的方案数或类型影响，包括先前抗BCMA剂(图22A-22C)。
在细胞遗传学高风险患者中存在更高FcRH5表达水平的趋势(图23A-23C)。在具有可评估细胞遗传学样本的患者(n＝28)中，25名患者具有高风险(HR；定义为存在以下一种或多种异常：1q21、t(4；14)、t(4,16)或del(17p))，且3名为标准风险(SR)。通过细胞遗传学风险分层的基线FcRH5表达在HR细胞遗传学患者中显示出更高表达的趋势；HR患者的中位数MESF为6329(最小值：352；最大值：44409)，且SD患者的中位数MESF为2591(最小值：766；最大值：4560)(图23A)。具有两种细胞遗传学异常的患者(n＝9)的MESF为8839(范围：2137-32381)，具有一种细胞遗传学异常的患者(n＝16)的MESF为5379(范围：352-44409)，且不具有细胞遗传学异常的患者(n＝3)的MESF为2591(范围：766–4560)(图23A)。具有和不具有1q21增益、t(4.14)与无t(4.14)和del(17p)与无del(17p)的患者的表达水平为一致的(图23B)。迄今未检测到具有t(14；16)的患者。在活性剂量群组中因Cevostamab所致的缓解与FcRH5的基线表达水平之间未观察到明显相关性。
这些数据进一步证实FcRH5为MM治疗的有希望的标靶。
实例12.剂量和适应症的基本原理
剂量
基于GO39775研究中产生的临床安全性和有效性、药物动力学(PK)和药效学(PD)数据以及PK-PD/暴露-缓解(E-R)分析的总体，0.3/3.6/160mg(第1周期第1天0.3mg和第1周期第8天3.6mg的双步递增剂量，接着为第1周期第15天和后续Q3W周期的第1天的160mg目标剂量(TD))被推荐作为用于患有R/R MM的患者的Cevostamab单一疗法给药方案。选择这些剂量和时间表不仅是为了确保整体安全性和CRS为可管理的，而且是为了使患者能够安全地接受TD，从而推动更高、更深且持久的缓解。
在正在进行的GO39775研究中，Cevostamab在大量预治疗的MM群体中显示出积极的受益/风险情形(中位数6个先前疗法方案；表9)。在观察到客观缓解的TD≥20mg(临床活性剂量)下，Cevostamab的总缓解率(ORR)为43.3％，且缓解被证明为持久的，中位缓解持续时间(DOR)为15.6个月(95％CI：6.4，21.6)。最常报告的不良事件(AE)，CRS(由美国移植和细胞治疗学会(ASTCT)2019年标准分级(Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant,25：625-638,2019))使用递增剂量进行有效管理以限制严重CRS的频率；3级CRS的发生率较低(总体为1.3％)，且未发生4级或5级CRS事件。CRS事件主要发生在第1周期期间，此时患者正在住院观察，从而能够迅速鉴定和管理CRS。非CRS AE也主要发生在早期周期中，且未观察到累积毒性。总体而言，Cevostamab对大量预治疗的MM患者具有明显的受益/风险，具有临床活性的有力证据以及可管理的安全性情形。
限制严重CRS的发生率且确保患者可安全地递增至临床活性剂量为1期研究的一个关键目标。为此，在递增和扩大中测试了单步和双步递增给药方案。如下文进一步详述，临床安全性、PK和PD数据确定了3.6mg单步递增方案和0.3/3.6mg双步递增方案，用于进一步评估剂量扩大。第一阶段研究的数据表明，单步递增和双步递增方案均有效地限制了严重CRS的发生率。然而，总体数据也表明，与单步递增方案相比，建议的双步递增方案进一步改善了Cevostamab的CRS情形。相对于3.6mg/TD单步递增剂量(88.2％)，在0.3/3.6mg/TD双步递增剂量(77.3％)下观察到较低CRS发生率。值得注意的是，相比于3.6mg/TD单步递增剂量(21.2％)，与伴随CRS的免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)一致的神经系统症状发生率在0.3/3.6mg/TD双倍递增剂量(4.5％)下显著更低(表30)。鉴于与ICANS一致的CRS情形和神经系统症状的这些有意义的改善，建议0.3/3.6mg双步递增。
表30.与目标剂量无关的单步递增和双步递增方案中与ICANS一致的神经系统症状概述
Figure BDA0004161870440001911
AE＝不良事件；CRS＝细胞因子释放综合征；ICANS＝免疫效应细胞相关神经毒性综合征；NAE＝神经系统不良事件；s/s＝体征/症状；TD＝目标剂量。
基于与较低TD相比缓解率的提高，同时保持可耐受的安全性情形，来自1期研究的数据支持建议的160mg Cevostamab TD。Cevostamab已在广泛的TD(0.15-198mg)范围内进行了测试，在20mg剂量下观察到初始临床活性。来自此剂量递增的数据显示缓解率随着TD的增加而增加，独立于单步相对于双步递增方案，且因此在90mg和160mg时均开放扩大组，以确认剂量-缓解关系。与剂量递增的结果一致，相比于较低的90mg TD(36.7％)，在160mgTD(54.5％)处观察到更高的ORR。暴露-缓解(E-R)和群体药物动力学-肿瘤生长抑制(PopPK-TGI)疗效分析证实了观察到的剂量-缓解关系，随着TD的增加，ORR和≥VGPR率的概率均显著提高(测试范围：0.15-198mg)。使用PopPK-TGI模型针对单步递增和双步递增剂量在匹配的TD水平下预测了类似的ORR和≥VGPR率。
重要的是，160mg剂量的安全性和耐受性与测试的其他较低活性剂量相当。在所测试的TD(0.15-198mg)中，未观察到暴露增加与关键安全事件风险之间存在显著的正E-R关系。在整个活动性TD中，后期周期的≥3级AE率仍然很低，且类似地，未观察到慢性累积毒性。综上所述，Cevostamab在所有TD中均显示出良好的耐受性，且有证据表明增加暴露可提高获得临床缓解的可能性，相信160mg TD可使患者的受益/风险比最大化。
总之，来自初始1期GO39975研究的数据表明，Cevostamab为晚期方案MM患者提供了积极的受益/风险。
A.0.3/3.6mg周期1，第1天/周期1，第8天(C1D1/C1D8)双步被推荐用于周期1递增剂量
T细胞接合双特异性疗法的新出现的数据表明，递增剂量为减轻CRS的有效方法，但递增剂量的最佳数量以及递增剂量限制CRS的机制尚不清楚。在研究GO39775中，测试了单步和双步递增方案，以告知RP2D的选择，其目标为：
1.限制严重、≥3级CRS的发生率；
2.将大多数CRS事件限制在患者住院观察的第一周期内，且在需要时允许及时干预；以及
3.能够安全地施用更高TD以提供抗骨髓瘤活性。
单步和双步递增方案均有效地限制了CRS的严重程度，且使患者能够安全地接受高达198mg的TD(迄今为止施用的最大给药剂量)。在1.3％的研究患者中观察到3级CRS事件，且未报告4级或5级CRS事件。160名患者中仅1名因CRS停止了Cevostamab治疗。类似地，两种递增方案的CRS事件均主要在初始周期内观察到，且在患者住院观察时发生。就此而言，两种递增方案均能够安全地管理CRS。
虽然任一递增方案有效地限制了严重CRS，但总体数据表明，与3.6mg单步递增方案相比，0.3/3.6mg双步递增方案进一步改善了CRS情形。如下详述，在双步递增方案中，0.3/3.6mg剂量被确定为最佳双倍递增方案，其在分步给药期间限制CRS，同时仍能安全地施用TD。与3.6mg单步递增方案相比，对此双步递增方案的剂量扩大的进一步测试表明，总体CRS情形有所改善：不仅CRS的总体发生率自88.2％降低至77.3％，而且1级CRS症状情形得到改善(图25)。
神经系统症状为T细胞接合疗法的另一个重要问题。在GO39775中，研究者归因于CRS的神经系统症状被捕获为CRS的体征和症状。任何不归因于CRS的神经系统症状均被视为不良事件。为了完整且不错过任何潜在的信号，所有这些症状/不良事件都进行了神经系统症状的审查，这些症状神经系统症状与Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant,25(4)：625-638,2019中定义的免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)一致。
与ICANS一致且被报告为CRS症状的神经系统症状被称为伴随CRS的ICANS，因为被认为与免疫效应细胞相关。报告为AE的神经系统事件为与ICANS定义一致的症状，但并非所有此等均由于免疫效应细胞活化，而可能是由于其他原因(例如基础疾病、伴随药物、硬膜下血肿)。这些被称为ICANS样NAE。
0.3/3.6mg双步递增方案似乎限制了与ICANS一致的神经系统症状的发生(即，伴随CRS的ICANS和ICANS样NAE)。使用3.6mg单步递增给药，85名患者中有18名(21.2％)经历了伴随CRS的ICANS(表24)；重要的是，所有事件均为1级或2级事件，但一个可逆的3级事件除外，表明伴随CRS的ICANS可由单步递增给药来管理。在0.3/3.6mg双步递增方案中，伴随CRS的ICANS发生率显著降低，44名患者中仅2名(4.5％)经历这些症状。对于这两名患者，伴随CRS的ICANS均仅限于1级，且不会在后续剂量中再次发生。总之，与ICANS一致的神经系统症状的严重程度有限，且可由任一递增方法进行管理。然而，0.3/3.6mg/TD双步递增剂量的伴随CRS的ICANS发生率较低的趋势有利于此方案。
递增方案之间观察到的CRS情形的差异不太可能是由于CRS干预(表31)或基线人口统计数据(表9)的变异性，其在方案组之间是相似的。鉴于与单步递增剂量相比，0.3/3.6mg双步递增方案改善了CRS和ICANS的各个方面，因此建议采用此方法来限制治疗先前BCMA和三类难治性MM的CRS发生率。
表31.研究GO39775的细胞因子释放综合征事件的管理
Figure BDA0004161870440001941
CRS＝细胞因子释放综合征；ICU＝加护病房；RP2D＝推荐的II期剂量；TD＝目标剂量；Q3W＝每3周。
注：百分比基于每列中经历CRS的患者人数。
aCevostamab单抗在第1周期的第1天(递增剂量)和第8天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
bCevostamab在第1周期的第1天(递增剂量)、第8天(递增剂量)和第15天(目标剂量)以及后续Q3W周期的第1天(目标剂量)施用。
c建议的RP2D和方案为0.3/3.6/160mg Q3W：Cevostamab在第1周期第1天以0.3mg(递增剂量)施用，在第1周期第8天以3.6mg(递增剂量)施用，在第1周期第15天以及后续Q3W周期的第1天以160mg(目标剂量)施用。
d所有患者是指组A-D中的所有患者；未提供组E的3名患者的数据。
推荐的0.3/3.6mg双步递增方案的总体CRS曲线被证明是可耐受的、可管理的和可逆的
在组B中测试了0.3mg、0.6mg和1.2mg的C1D1剂量。初始生物标记数据表明，与3.6mg剂量相比，0.3mg至1.2mg的剂量与更低的PD标记相关；在<0.3mg的剂量下未观察到PD。据观察，1.2mg剂量在3.6mg剂量时降低了CRS，但CRS的总体C1率无变化，且0.6mg剂量不足以减轻3.6mg的CRS，但足够高以诱导C1D1 CRS。这些数据表明，C1D1剂量在较窄的剂量范围内塑造了整体C1 CRS情形。与最大T细胞活化相关的C1D1剂量最有可能降低后续剂量的CRS发生率，但也导致更高级别的CRS和IL-6释放。引起次最大T细胞活化同时限制IL-6的C1D1剂量可改善整体CRS情形。
迄今为止产生的临床数据表明，无论TD如何，建议的0.3/3.6mg双步递增方案的总体CRS情形均具有良好的耐受性。在44名接受0.3/3.6mg双步递增方案治疗的患者中，有34名(77.3％)报告了总共60次CRS事件。在此方案中，最常报告的与CRS相关的症状(≥10％)包括发烧(75％的患者)、缺氧(27.3％)、受寒(25％)、心跳过速(18.2％)和低血压(15.9％)。
使用0.3/3.6mg双倍递增方案，95％的CRS事件发生在给药后48小时内(除2起事件外，所有事件均在24小时内发生)，其属于方案指定的住院窗口。超过第一周期的CRS事件很少发生，90.0％的CRS事件发生在初始周期内。在周期1后发生CRS事件的有限情况下，CRS事件大多为1级，且研究中无患者经历第1周期后发生的≥3级CRS事件。CRS的可预测发作以及各递增剂量和初始TD的强制性第1周期住院观察也确保了在住院环境中及时鉴定和管理CRS事件。
如上所述，使用0.3/3.6mg双步递增方案，伴随CRS的ICANS不常见、可逆且仅限于1级严重程度。大多数0.3/3.6mg双步递增方案的CRS事件为1级或2级，且可由支持性照护(乙酰胺酚、输液、低流量氧气)或托珠单抗和/或皮质类固醇逆转。共有34名采用此方案的患者经历了CRS，其中18名(52.9％)用托珠单抗或类固醇治疗，且7名(20.6％)用两者来治疗CRS(表25)。一名患者在TD时经历了3级CRS，因为缺氧迅速发生，需要高流量氧气。患者入住加护病房(ICU)且接受托珠单抗治疗，氧合迅速改善。CRS在48小时内完全解决，且患者继续研究且未经历任何额外CRS事件。无其他患者在0.3/3.6双递增方案中经历3级CRS。CRS包括与ICANS一致的神经系统症状，使用0.3/3.6mg双倍递增剂量是可管理的、可逆的，且除一名患者外，所有患者均限于≤2级。
总之，迄今为止产生的全部安全性数据表明，0.3/3.6mg双倍递增方案能够安全施用Cevostamab，且确保CRS事件为可管理和可逆的。
B.基于临床活性的阳性剂量反应和无目标剂量依赖性毒性，推荐160mg的目标剂量
基于使用疗效、安全性、PK、PD和PK-PD/E-R分析的组合进行的明确的受益/风险评估，推荐建议的160mg的TD。TD已在广泛范围(0.15-198mg)的剂量递增研究中进行了评估，且尚未达到最大耐受剂量(MTD)。在90mg TD时开放初始扩大组，以在单步递增方案中产生额外的安全性/有效性数据，同时并行地继续剂量递增。虽然来自研究GO39775组C扩大90mg的数据显示出正受益/风险比，但来自正在进行的剂量递增的新出现的数据表明，大于90mg的TD可进一步提高ORR，同时保持类似的安全性情形。为此，完成了160mg剂量的额外剂量扩大。如下详述，迄今为止收集的全部数据表明所有TD的安全性一致，且更高的TD增强了临床活性和患者获得深度缓解的机会。
目标剂量安全性
在所有测试的TD中，安全性情形保持一致且可管理。组A-D中共有160名可评估安全性的患者的中位数为3.5(范围：1-34)个治疗周期，且随访时间中位数为6.1(范围：0.2-39.4)个月。迄今为止，尚未鉴定出累积性或迟发性毒性。总体AE和CRS的发生率在初始治疗周期中最高，且接着在之后的周期中保持较低，且无随着TD升高而恶化的趋势。由于AE停止Cevostamab的情况很少见(16/160名患者，10.0％)，不受任何单一首选术语的驱动，且不依赖于TD，支持Cevostamab治疗在推荐的TD 160mg下的耐受性。
临床安全性数据和PK-PD/暴露-安全性分析表明，无论测试的递增剂量如何，增加的TD(0.15-198mg)并未显示出总体AE风险的显著正相关关系。
暴露-安全性分析表明，基于单步递增和双步递增给药方案的汇总数据，TD暴露与以下关键安全事件之间无显著的正相关关系：≥1级和≥2级CRS(图27A和27B以及图26)；与ICANS一致的≥1级神经系统症状(图28A和28B)；≥3级血球减少症(嗜中性球减少症、贫血和血小板减少症)；≥2级输注相关反应(IRR)；≥2级感染；和任何汇总的≥3级AE。
暴露-缓解分析
临床疗效数据表明，TD的增加与达成客观缓解和极好部分缓解或更好(≥VGPR)的可能性增加相关。如前所述，与较低TD相比，160mg TD导致ORR提高(参见表32)。
表32.在90mg和160mg的目标剂量下观察到的缓解者和≥VGPR率(研究GO39775)
Figure BDA0004161870440001971
≥VGPR＝极好部分缓解或更好。注：接受90或160mg目标剂量的患者，无论是单步还是双步，均被聚集用于缓解分析。
E-R和群体药物动力学-肿瘤生长抑制(PopPK-TGI)分析证实了观察到的临床剂量-缓解。
PopPK-TGI评估显示在测试的较高TD时预测的缓解估计值有所改善。为帮助进一步加深对Cevostamab暴露-疗效关系性质的理解，使用M蛋白的PopPK-TGI模型进行了评估。由于此模型使用群体建模方法将PK和M蛋白数据的纵向时间过程相关联，因此其可用于解释剂量水平和治疗缓解时间表的差异。与观察到的临床缓解数据(表32、11和12)一致，该模型预测在更高的测试TD下，ORR和≥VGPR的缓解估计值会有所改善。在160mg的建议TD下，预测的缓解率似乎接近平稳期(表33)。此评估的ORR和≥VGPR预测表明与观察到的临床数据具有合理的一致性。值得注意的是，对于单步递增和双步递增剂量，在匹配的TD水平下预测了相似的(<5％差异)ORR和≥VGPR率(表29)。这表明分步给药方案的选择不会强烈影响缓解概率。相同TD水平下的模型预测ORR的此相似性在具有相当大样本量的TD下观察到的临床数据中很明显(即，对于90mg TD：N＝41名患者的单步递增的ORR为37％；且N＝19名患者的双步递增的ORR为37％)。
表33.90mg和160mg目标剂量下模型预测的最佳ORR和≥VGPR率的比较
Figure BDA0004161870440001981
AUCss＝稳态浓度-时间曲线下面积；Cmin,ss＝稳态谷浓度；E-R＝暴露-缓解；ORR＝客观缓解率；PopPK＝群体药物动力学；TGI＝肿瘤生长抑制；VGPR＝极好部分缓解。
a使用来自ORR和≥VGPR终点D单步递增和双步递增给药方案的汇总数据进行暴露-疗效分析的逻辑回归建模结果。
基于测试TD(0.15mg-198mg)范围内的E-R分析，随着Cevostamab暴露量的增加，ORR和≥VGPR显著增加(AUCss和Cmin,ss)(图29、30A和30B)。这些E-R关系的性质似乎遵循Emax模型，其中160mg的TD接近这些临床终点的平稳期，使用来自单步递增和双步递增方案的汇总数据，表明198mg或更高的TD可能不会导致缓解率的实质性提高。鉴于这些经验模型无法区分给药方案对临床终点的影响，因此进行了汇总E-R评估。使用E-R模型估计的缓解率与PopPK-TGI估计值一致(表12)，且来自这些E-R模型的ORR和≥VGPR率证明与观察到的临床数据合理一致。
此外，作为敏感性分析，对AUCss和ORR之间的90mg-198mg TD范围进行的E-R分析保留了随着暴露量增加ORR的统计学显著改善(图31)，证实了与较低TD组群相比，160mg TD下的缓解率显著改善。
基于使用Cmin,ss作为暴露指标的E-R评估，在TD≥160mg时，显示谷浓度接近MM患者的Cevostamab的接近最大效应(即EC90)。模型得出的Cmin,ss的90％最大效应(EC90)为4.4μg/mL。值得注意的是，此E-R得出的临床EC90估计值与观察到的离体最大EC90相当(2.7μg/mL；范围：0.03μg/mL–2.7μg/mL)。该值来自于对患者来源的原代骨髓瘤细胞进行的离体T细胞依赖性细胞毒性测定，该测定通过将人骨髓瘤骨髓单核细胞(N＝4)与自健康供体分离的CD8+T细胞和不同浓度的Cevostamab共培养进行评估(Li等人,Cancer Cell,31：383-395,2017)。鉴于骨髓中效应细胞与T细胞比率的不确定性，观察到的最大EC90可能是相关药理学目标，特别是对于肿瘤负荷高的患者，从而支持MM患者对更高TD的需要。
总之，与较低TD相比，在测试范围内的较高TD提高了临床缓解的可能性，而无明显增加的不良事件风险。E-R分析和PopPK-TGI评估均证实，与较低剂量相比，160mg的TD提高了患者达成客观缓解和≥VGPR的可能性，且证明预测这些缓解的合理一致性。此外，基于PK-TGI评估，对于单步递增和双步递增给药方案，在相同的TD水平下预测了类似的ORR和≥VGPR率估计值。因此，基于使用疗效、安全性、PK、PD和PK-PD/E-R分析的组合进行的正受益/风险评估，推荐建议的160mg的TD。
选择0.3mg和3.6mg作为递增剂量的理由
最后要考虑的是，相对于0.3/3.6mg的分步水平，不同的递增剂量水平是否有可能改善Cevostamab的整体CRS曲线。基于临床疗效和安全性、PD和PK-PD/E-R分析的总体，认为对第1周期，第1天(C1D1)和/或第1周期，第8天(C1D8)递增剂量的额外变化不太可能改善Cevostamab CRS情形。
选择0.3mg作为C1D1双步递增剂量
0.3mg剂量被视为双步递增方案中的最佳第1周期第1天(C1D1)剂量，因为其能够在第二步降低CRS发生率，同时还限制整体C1D1 CRS发生率和严重程度。与C1D1 3.6mg剂量后的CRS发生率(80.0％，N＝85)相比，后续C1D8 3.6mg剂量的CRS发生率较低(54.5％N＝44)(图32)。类似地，0.3mg C1D1剂量似乎不仅降低了3.6mg剂量后的整体CRS发生率，而且也降低了3.6mg剂量后出现的≥2级CRS发生率(15.9％双步递增，30.6％单步递增)。
与此效应一致，PD数据表明，与在C1D1施用的3.6mg分步剂量相比，3.6mg剂量后的IL-6峰值水平在0.3mg之前更低(图33A-33C)。初始0.3mg剂量本身之后的整体CRS发生率较低，且仅限于1级。总之，临床和PD数据表明0.3mg剂量实现了在后续C1D8剂量下减弱CRS的目标。
临床和PK-PD/E-R分析不支持增加或减少C1D1剂量。0.6和1.2mg的剂量被测试为潜在C1D1剂量。与0.3mg剂量相比，在0.6和1.2mg C1D1剂量后，包括≥2级CRS事件在内的CRS发生率更高(图32)。此外，0.6和1.2mg C1D1剂量后的IL-6峰值水平高于0.3mg C1D1剂量后的水平，且与3.6mg C1D1剂量后的IL-6水平相似，与这些更高剂量下观察到的CRS风险增加一致(图34)，且表明将C1D1剂量增加至0.3mg以上将使安全性情形恶化。
另一方面，也没有必要减少C1D1剂量，因为PD数据表明低于0.3mg的C1D1剂量与T细胞活化不相关，表明这些剂量可能太低而无法在后续剂量中减弱CRS(图34)。如前所述，在0.3mg剂量下观察到的安全性情形为可接受的，CRS发生率低且未观察到2级事件。这些发现与E-R分析一致，其中与作为C1D1剂量的3.6mg相比，0.3mg递增剂量导致≥2级CRS的发生率显著降低(图35)。此外，在C1D1分步剂量(0.05-3.6mg)后，关键AE(CRS除外)和Cevostamab Cmax未发现显著的正E-R关系，表明进一步将第一剂量降至0.3mg以下几乎不会带来任何益处。总之，临床数据和PK-PD/E-R分析支持0.3mg作为最佳C1D1剂量。
选择3.6mg作为第1周期，第8天(C1D8)双步递增剂量
基于单步递增和双步递增剂量递增组中的全部数据选择3.6mg的第二递增剂量，且得到定量系统药理学(QSP)建模的支持。在单次和双步递增给药中，3.6mg递增剂量可有效限制第1周期，第8天(C1D8)或第1周期，第15天(C1D15)在较高TD下的CRS和≥2级CRS的频率(TDs为10.8至198mg)(图16)。
C1D8 3.6mg剂量的调整预计不会降低CRS的总体发生率。增加剂量可能会增加C1D8后CRS的发生率，而降低C1D8剂量可能会使CRS转移至TD。当在C1D1给药时，低于3.6mg(0.6mg和1.2mg)的测试剂量与2级CRS事件发生率相关，类似于3.6mg递增剂量后的事件发生率(表34，图32)。对于0.6mg和1.2mg的C1D1分步剂量，峰值IL-6浓度与3.6mg剂量相似(图34)。类似地，0.6、1.2和3.6mg剂量之间的T细胞活化相当(图34)。总而言之，PD和临床数据表明，0.6和1.2mg剂量与CRS的风险类似于推荐的3.6mg C1D8第二递增剂量相关。因此，降低C1D8剂量改善整体CRS情形的可能性很小。
表34.研究GO39775中按严重程度划分的细胞因子释放综合征事件-双步递增剂量方案(组B+D，安全性可评估的患者)
Figure BDA0004161870440002011
ASTCT＝美国移植和细胞治疗学会；CRS＝细胞因子释放综合征；D＝天；NCI CTCAE＝国家癌症研究所不良事件通用术语标准。
注：CRS事件的毒性等级通过ASTCT 2019标准评估，无论是收集的还是由程序得出的，而CRS的体征和症状通过NCI CTCAE分级标准v4进行评估。
鉴于在研究GO39775的双步方案中未测试3.6mg以外的替代C1D8剂量，使用探索性QSP模型进行了计算机评估，以评估替代C1D8剂量(0.3-40mg)对0.3/C1D8/160mg双步方案的CRS风险。一致地，该QSP模型预测，与0.3/3.6/160mg双步递增剂量方案相比，调整C1D83.6mg剂量预计不会显著降低总体CRS(≥1级CRS和≥2级CRS)的发生率(图32)，尽管在单独的C1D8和C1D15剂量下改变了≥1级CRS动力学。较低C1D8剂量(<3.6mg)降低了C1D8剂量的≥1级CRS风险，但增加了C1D15剂量的≥1级CRS风险。相比之下，尽管降低了C1D15剂量的≥1级CRS，但预计较高C1D8(>3.6mg)剂量会增加C1D8剂量的≥1级CRS风险。预计C1D8和C1D15剂量(改变的C1D8剂量)的2级CRS风险与3.6mg C1D8剂量相似。总之，探索性QSP模型仿真支持改变C1D8剂量改善整体CRS曲线的可能性很低。
综上所述，观察到的临床和PD数据以及QSP建模表明，3.6mg递增剂量安全地使患者能够递增至将推动临床活性的TD。
总之，1期GO39975研究中产生的数据表明，Cevostamab为晚期MM患者提供了积极的受益/风险。基于广泛的剂量发现，已经鉴定了给药方案，其使患者能够安全地接受临床活性剂量的Cevostamab，同时限制严重CRS的风险。
实例13.IL-6释放和CD8+T细胞活化
峰值IL-6
升高的IL6为CRS的显著致病因素。PD数据表明，与两种治疗方案的C1D1中测试的≥0.6mg分步剂量相比，0.3mg为具有边缘T细胞活化和最小IL-6升高的最低C1D1剂量。此与在0.3mg C1D1剂量下观察到的≥1级CRS的最低发生率一致，表明在C1D1高于0.3mg的剂量不会进一步改善CRS情形。
如图38所示，与≥0.6mg的剂量相比，双步递增方法中使用的0.3mg C1D1剂量的Cevostamab与较低IL-6释放相关。与≥0.6mg的剂量相比，0.3mg剂量之后的中位峰值IL-6水平(在一剂双特异性抗体之后的时段内测量或报告的最高IL-6值)更低，尽管这些剂量之间的CD8+T细胞活化情形相似，且用0.3mg剂量治疗的患者的平均峰值IL-6低于临床意义的100-125pg/mL阈值(图38)。在3.6mg剂量下，在0.3或0.6mg剂量之前观察到相当的中位峰值IL-6水平。与单步水平相比，显示双步给药中位峰值IL-6水平较低。
在C1D1分步剂量后，观察到峰值IL-6浓度与≥1级和≥2级CRS的概率之间存在统计显著关系(图40A和图40B)。
在施用目标剂量后，观察到IL-6峰值和≥1级CRS事件概率的显著趋势；未观察到IL-6峰值和≥2级CRS事件概率的明显趋势(图41A和图41B)。
进行药物动力学-药效学(PK-PD)评估以评估施用递增剂量和TD之后峰值IL-6浓度与Cevostamab暴露量之间的关系。对于递增剂量，使用单步递增和双递步递增给药方案的汇总数据进行线性回归分析，以评估递增剂量暴露(递增剂量Cmax和AUC0-7d)与在第1周期第1天施用递增剂量的时间至在第1周期施用后续递增/TD的时间的峰值IL6浓度之间的关系。此外，使用单步递增和双步递增给药方案的汇总数据进行线性回归分析，以评估TD暴露(TD Cmax和AUC7-21d/14-21d)与在周期1的第8天或第15天施用TD之后至施用后续TD的峰值IL-6浓度。
如图44所示，在0.05mg-3.6mg的测试递增剂量范围内的分步剂量暴露之后，观察到峰值IL-6水平的统计学显著升高。
值得注意的是，如图45所示，在TD暴露后未注意到峰值IL6水平的显著趋势。
CD8+T细胞活化
峰值CD8+T细胞活化在较低递增剂量(0.3mg和0.6mg)下延迟，表明药效学(PD)方面的生物学变化(图39)。此CD8+T细胞活化PD数据表明并非所有双步(DS)给药方案均为等效的。在0.3mg和0.6mg C1D1递增剂量中，在C1D9观察到最高的活化水平，而1.2mg剂量导致C1D2的峰值水平，类似于单步(SS)给药中的3.6mg。在3.6mg剂量的单步递增给药(C1D2)和双步递增给药(C1D9，0.3mg和0.6mg)后，中值百分比CD8+T细胞活化相当。
0.3mg和0.6mg的C1D1剂量不会减弱后续剂量的T细胞活化。
尽管观察到≥1级CRS的正趋势，但在C1D1分步剂量后，CD8+T细胞活化的百分比与≥1级和≥2级CRS的概率之间未观察到统计显著关系(图42)。在给药后24小时评估T细胞活化。
类似地，虽然观察到≥1级CRS的正趋势，但在目标剂量后CD8+T细胞活化的百分比与≥1级和≥2级CRS的概率之间未观察到统计显著关系(图43)。在给药后24小时评估T细胞活化。
实例14.临床药理学
临床药物动力学
在第1周期第8天或第15天施用TD后，Cevostamab暴露量(Cmax和AUC)通常随着研究GO39775中测试的剂量群组剂量的增加而增加(图37A和图37B)。此外，对于单步递增和双步递增给药方案，随着TD的增加，Cmax和AUC的比例增加是明显的。
大多数缓解者在药物浓度达到稳态时，即，以单步递增和双步递增时间表两者Q3W施用Cevostamab之后的第4周期结束(第84天)时达成初始缓解。
使用来自单步递增和双步递增给药方案的汇总数据，在测试的TD(0.15mg-198mg)范围内的暴露-疗效分析表明，随着Cevostamab暴露量的增加，最佳临床ORR和≥VGPR率统计显著增加(AUCss和Cmin,ss)。在160mg的TD下，显示稳态Cevostamab暴露量接近ORR和≥VGPR终点的平稳期。
此外，作为敏感性分析，对90mg–198mg的TD范围进行了Cevostamab暴露量(AUCss)与ORR之间的E-R评估。有趣的是，随着目标暴露量的增加，观察到ORR概率统计显著增加(图31)，证实了在作为建议的RP2D的建议剂量160mg下ORR的改善。
总而言之，临床数据和E-R分析显示ORR和≥VGPR率随着剂量/暴露量的增加而显著改善，在160mg TD处的暴露量接近单步递增和双递增给药方案的临床终点的平稳期。此外，基于敏感性分析，在90mg-198mg的TD范围内，在单步递增和双步递增方案中均观察到ORR显著改善。此外，160mg TD处的谷浓度(Cmin,ss)接近Cmin,ss的E-R模型估计的临床EC90(4.4μg/mL)。有趣的是，此临床EC90与离体最大值相当。EC90(2.7μg/mL)从使用来自多发性骨髓瘤患者的冷冻纯化骨髓单核细胞进行的离体T细胞依赖性细胞毒性试验中产生。与疗效的E-R评估一致，在使用PK-TGI模型测试的更高TD下预测了改善的缓解估计。此外，对于单步递增和双步递增给药时间表，在相同TD水平下预测了类似(<5％差异)的ORR估计值。
总之，测试的较高TD使临床缓解的可能性最大化，160mg的TD接近临床终点的平稳期。
Cevostamab关于CRS事件的暴露-安全关系
暴露-安全分析表明，在单步递增和双步递增给药时间表中测试的剂量水平(0.15mg-198mg)内，在第1周期第8天或第1周期第15天施用TD之后直至治疗结束，无证据表明TD暴露(TD Cmax和AUC7-21d/14-21d)与≥1级和≥2级CRS的频率之间存在明显关系。然而，在单步递增和双步递增给药时间表中，在测试的递增剂量范围(0.05mg-3.6mg)内，在Cevostamab分步剂量暴露(D Cmax和AUC0-7d)与≥1和≥2级CRS事件的频率之间观察到统计显著趋势。这些发现表明，3.6mg或0.3/3.6mg的递增剂量充分限制了整体急性CRS风险，同时最大限度地提高了安全边际，以允许将Cevostamab的TD进一步递增至198mg。
结论
综上所述，安全性、PK、PD和PK-PD/E-R分析继续支持通过分步剂量方法降低风险的安全性，其导致尽管在第1周期第8天/第15天、第2周期第1天和此后每3周在单步和双步递增给药时间表中施用剂量递增至最高198mg的TD，但所有CRS、≥2级CRS和≥1级ICANS的频率缺乏E-R关系。此表明3.6mg或0.3/3.6mg剂量足以限制整体急性安全风险(CRS和ICANS)，且使TD的安全边际最大化，最高可达198mg。此外，当在C1D1施用时，与3.6mg分步剂量相比，0.3mg剂量导致峰值IL6水平显著降低，其与E-R分析一致，其中0.3mg递增剂量导致≥2级CRS事件的发生率显著降低。
此外，未观察到Cevostamab分步剂量和TD暴露以及其他关注的关键AE，即，≥3级血球减少症(嗜中性球减少症、贫血和血小板减少症)、≥2级IRR、≥2级感染和≥3级的任何用于单步递增和双步递增时间表的汇总AE存在显著正E-R关系。
总之，无论测试的分步剂量如何，TD(最高198mg)均不会改变Cevostamab的整体风险情形。与单次递增3.6mg方案相比，在3.6mg剂量之前添加0.3mg剂量证明了CRS和ICANS情形的额外改善。
尽管出于清楚理解的目的通过图标和实例的方式略微详细地阐述了上述发明，但这些说明和实例不应解释为限制本发明范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均通过援引以其全文明确并入本文。
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<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 31
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 32
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 33
<211> 5620
<212> DNA
<213> 智人
<400> 33
gcagtttcag aacccagcca gcctctctct tgctgcctag cctcctgccg gcctcatctt 60
cgcccagcca accccgcctg gagccctatg gccaactgcg agttcagccc ggtgtccggg 120
gacaaaccct gctgccggct ctctaggaga gcccaactct gtcttggcgt cagtatcctg 180
gtcctgatcc tcgtcgtggt gctcgcggtg gtcgtcccga ggtggcgcca gcagtggagc 240
ggtccgggca ccaccaagcg ctttcccgag accgtcctgg cgcgatgcgt caagtacact 300
gaaattcatc ctgagatgag acatgtagac tgccaaagtg tatgggatgc tttcaagggt 360
gcatttattt caaaacatcc ttgcaacatt actgaagaag actatcagcc actaatgaag 420
ttgggaactc agaccgtacc ttgcaacaag attcttcttt ggagcagaat aaaagatctg 480
gcccatcagt tcacacaggt ccagcgggac atgttcaccc tggaggacac gctgctaggc 540
taccttgctg atgacctcac atggtgtggt gaattcaaca cttccaaaat aaactatcaa 600
tcttgcccag actggagaaa ggactgcagc aacaaccctg tttcagtatt ctggaaaacg 660
gtttcccgca ggtttgcaga agctgcctgt gatgtggtcc atgtgatgct caatggatcc 720
cgcagtaaaa tctttgacaa aaacagcact tttgggagtg tggaagtcca taatttgcaa 780
ccagagaagg ttcagacact agaggcctgg gtgatacatg gtggaagaga agattccaga 840
gacttatgcc aggatcccac cataaaagag ctggaatcga ttataagcaa aaggaatatt 900
caattttcct gcaagaatat ctacagacct gacaagtttc ttcagtgtgt gaaaaatcct 960
gaggattcat cttgcacatc tgagatctga gccagtcgct gtggttgttt tagctccttg 1020
actccttgtg gtttatgtca tcatacatga ctcagcatac ctgctggtgc agagctgaag 1080
attttggagg gtcctccaca ataaggtcaa tgccagagac ggaagccttt ttccccaaag 1140
tcttaaaata acttatatca tcagcatacc tttattgtga tctatcaata gtcaagaaaa 1200
attattgtat aagattagaa tgaaaattgt atgttaagtt acttcacttt aattctcatg 1260
tgatcctttt atgttattta tatattggta acatcctttc tattgaaaaa tcaccacacc 1320
aaacctctct tattagaaca ggcaagtgaa gaaaagtgaa tgctcaagtt tttcagaaag 1380
cattacattt ccaaatgaat gaccttgttg catgatgtat ttttgtaccc ttcctacaga 1440
tagtcaaacc ataaacttca tggtcatggg tcatgttggt gaaaattatt ctgtaggata 1500
taagctaccc acgtacttgg tgctttaccc caacccttcc aacagtgctg tgaggttggt 1560
attatttcat tttttagatg agaaaatggg agctcagaga ggttatatat ttaagttggt 1620
gcaaaagtaa ttgcaagttt tgccaccgaa aggaatggca aaaccacaat tatttttgaa 1680
ccaacctaat aatttaccgt aagtcctaca tttagtatca agctagagac tgaatttgaa 1740
ctcaactctg tccaactcca aaattcatgt gctttttcct tctaggcctt tcataccaaa 1800
ctaatagtag tttatattct cttccaacaa atgcatattg gattaaattg actagaatgg 1860
aatctggaat atagttcttc tggatggctc caaaacacat gtttttcttc ccccgtcttc 1920
ctcctcctct tcatgctcag tgttttatat atgtagtata cagttaaaat atacttgttg 1980
ctggtactgg cagcttatat tttctctctt ttttcatgga ttaaccttgc ttgagggctt 2040
taacaattgt attacttttt caaagaacta agctttagct tcattgattt ttttctattt 2100
aattgggttt tgctcttctc tttagcattg gaaacataga aatgctttct gatttctttg 2160
ggtagattta cgtattcagc ttcttgagat ggaagtttag atcactgatc cttcagcttg 2220
ttttcttttt tgtatacata gattttagga cgatatattt tcccttgagt tctgctttag 2280
ctgcagctct tatgttttga tatgcctctc tttattatcc ttcagttaaa aatatctttc 2340
aattcattgt tatataaaaa tatgtgccta gtttttaaca tctggagatt ttctagtttt 2400
gaaaaaaaca taagccaggc atggtggctc acacctgtat ccccagcact ttgggaggcc 2460
gagacgggag gatcgcctga gctcaggagt ttttacacca gcctgggaat aacagtgaga 2520
cattatctcc aaaaaaatta cctgggtatg gtgttgtgca cctgtagtcc cagctactct 2580
ggagactgag gtgggaggat tgtttgagct tgggaggttg aggctgcagg gagctgtgat 2640
cacaccactg cactctggcc tgagtgacag attgagaccc tgtctcaata aaagcaaaaa 2700
taaagaaaat aaaccatatg tgttgaacaa aggattaata aattaatttg agactccttc 2760
agggaatgac cacaatttat tgaaaatagc ctaaatgttg gagtcaggca tttctggatt 2820
catattttga catcatgctg tcatcttgaa caaaatgcct aacctttctg aacttcaact 2880
tccttgccac tcaaataagg attacaaaac ttaaaatgtg gtaagtacta aagacgacag 2940
caaaaattga gtccagcaca gagcttccta aataagcaag cactcaacag agttggttcc 3000
tttcttcctc ccctgcttga caatccagtt tcccacagga gcctttgtag ctgtagccac 3060
catggtcagt ccagggattc ttcactagcc ccttctcccc tggcagacat ccttgtggga 3120
gtttagtctt ggctcgacat gaggatgggg gtttgggacc agttctgagt gagaatcaga 3180
cttgccccaa gttgccatta gctccccctg cagaatgtct tcagaatcgg ggcccggtca 3240
gtctcctggg tgacctgctg ttttcctctt aagatccttt ccactttggt tgctgctttc 3300
gggactcatc gagtccttgc tcaacaggat accccttgaa gtggctgcct gggccacatc 3360
cccttccaaa caagaaatca aaatattaga aatcaatttt tgaaatttcc cctaggaaga 3420
ctcatttgag tgttcaagtt cagagccagt ggagacctta ggggagggtg gtcacaagga 3480
ttttgcacag tgctttagag ggtcccaggg agccacagag gtggtgaggg gctgggtgct 3540
cttttctccg tgcatgacct tgtgtgtcta tcttcattac cacaatgcct catctctacc 3600
tcctttcccc ctgtagttcc aacgtgggta tctttgccat ctctggcccg aaggactttc 3660
tgacctacat gtataaatac cccctcacaa tatatattac ttttcctata agtgacttct 3720
ctactggatt actggttgct catacacctc atattttact cgtaaatcta ctactccctg 3780
tctgcctact ccattctcat ttgctgtaga aaattctctt accatcccaa ctttcaccca 3840
ccatcatgct tacccaaagg ctgtgggaat gacctgggcc ctaatgcccc ttttctaaat 3900
tcctaaggct caccattttc ctattgtaat ggttcttgac cttataatgt ttgaggcacc 3960
ttttcaaata tagtcctttg atttcagact gaatacttga aaggacacac acacacatac 4020
gtaagtgcat atgactgcat acacccacac acacacacgt gcctgtatac agtcatatga 4080
tacatacaca aacacacgca cacaagcctg catacatcat atgccaacag tggggatatg 4140
ttctgagaaa tgcatcatta gatgattttg tcattgtgtg aacatcatag agtgtactta 4200
cactaaccta gatggtctaa cctactacac acccaggcta catggtatca cctattcctc 4260
ctaggctaca agcctgtaca gcgtgtgtct gtactaaatg ctgtgggcaa ttttaacctg 4320
atggtaaatg tttgtgtatc taaacatatc taaacataga aaaggtacag taaacatgca 4380
gtattataat cttatgagac cgtcatcata tatgtggtcc actgtttggg ccatcattgg 4440
ctgaaaagtg gttatgcgac acatgactgt atatatactt tcctgttaca acaacagtgt 4500
ctctcaatcc acagtaattg cagcatccag taggtcttac tttagccctg agtcaccatt 4560
tgtgtcaacg tgtttagtgc catgtccacg tctctcatgt aactggcaga gctatcaaat 4620
attttggcaa aacacattgt ttctttggct ttgccttggt aactttctgt gccttttgta 4680
gctcttgttt ggaagaagct caacccatgt ctgcacactg tgatacaagg gggacagcat 4740
cgacatcgac ttacttcttg gtgccttatt cctccttaga acaattccta aatctgtaac 4800
ttaagtttct caggaagatt ccatactgca cagaaaactg cttttgtggg tttttaaaag 4860
gcaagttgtt atatgtgctg gatagttttt aagtatgaca taaaaattgt ataaagtaaa 4920
atattaaaat acacctagaa tactgtataa ctttaagtca ttttatcaac acattgctaa 4980
tccagatatt ttcccgcagt ttttctttga ataacagagc aattaattta cttttactat 5040
gaagagtcat cattttagta tgtattttaa gcaatccacc aagaactcag taggcagctg 5100
agaggtgctg cccagagaag tggtgattag cttggcctta gctcacccac acaaagcaca 5160
acaggctttg aactattccc taacggggca tttattcttt tttttttttt tttttgggag 5220
acggagtctc gctgtcgccc aggctagagt gcagtggcgc gatctcggct cactgcaggc 5280
tccaccccct ggggttcacg ccattctcct gcctcagcct cccaagtagc tgggactgca 5340
ggcgcccgcc atctcgcccg gctaattttt tgtattttta gtagagacgg ggtttcaccg 5400
tgttagccag gatagggcat ttattcttga acttgattca gagaggcaca cattaccatt 5460
ctctaatcag aatgcaagta gcgcaaggcg gtggaaacta tggaattcgg aggcaggtga 5520
tgcattgggc gagtttatta acatctgtga ctctctagtt tgaaatttat ttgtaacaga 5580
caaaaatgaa ttaaacaaac aataaaagta taataaagaa 5620
<210> 34
<211> 300
<212> PRT
<213> 智人
<400> 34
Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys
1 5 10 15
Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Leu Cys Leu Gly Val Ser Ile Leu Val
20 25 30
Leu Ile Leu Val Val Val Leu Ala Val Val Val Pro Arg Trp Arg Gln
35 40 45
Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg Phe Pro Glu Thr Val Leu
50 55 60
Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro Glu Met Arg His Val
65 70 75 80
Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser Lys
85 90 95
His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Met Lys Leu
100 105 110
Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile Leu Leu Trp Ser Arg Ile
115 120 125
Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe Thr
130 135 140
Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp Cys
145 150 155 160
Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp Trp
165 170 175
Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr Val
180 185 190
Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp Val Val His Val Met Leu
195 200 205
Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly Ser
210 215 220
Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Thr Leu Glu Ala
225 230 235 240
Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln Asp
245 250 255
Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile Gln
260 265 270
Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys Val
275 280 285
Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser Glu Ile
290 295 300
<210> 35
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 36
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 37
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 38
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成结构体
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (121)

1.一种治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者的方法，其包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向所述受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，所述第一给药周期包含所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中，所述C1D1在约0.01mg至约2.9mg之间，所述C1D2在约3mg至约19.9mg之间，且所述C1D3在约20mg至约600mg之间。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述C1D1在约0.1mg至约1.5mg之间；所述C1D2在约3.2mg至约10mg之间；且所述C1D3在约80mg至约300mg之间。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述C1D1为约0.3mg；所述C1D2为约3.6mg；且所述C1D3为约160mg。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述给药方案进一步包含第二给药周期，所述第二给药周期包含所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，所述C2D1等于或大于所述C1D3且在约20mg至约600mg之间。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述C2D1在约80mg至约300mg之间。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述C2D1为约160mg。
7.一种治疗患有MM的受试者的方法，其包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向所述受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，所述第一给药周期包含所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中，所述C1D1在约0.2mg至约0.4mg之间，所述C1D2大于所述C1D1，且所述C1D3大于所述C1D2。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述C1D1为约0.3mg。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，所述C1D2在约3mg至约19.9mg之间。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述C1D2在约3.2mg至约10mg之间。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述C1D2为约3.6mg。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中，所述C1D3在约20mg至约600mg之间。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述C1D3在约80mg至约300mg之间。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述C1D3为约160mg。
15.根据权利要求7至14中任一项所述的方法，其中，所述给药方案进一步包含第二给药周期，所述第二给药周期包含所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，所述C2D1等于或大于所述C1D3且在约20mg至约600mg之间。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述C2D1在约80mg至约300mg之间。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述C2D1为约160mg。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中，所述第一给药周期的长度为21天。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述方法包括分别在所述第一给药周期的第1天、第8天和第15天或大约第1天、第8天和第15天向所述受试者施用所述C1D1、所述C1D2和所述C1D3。
20.根据权利要求4至6和权利要求15至19中任一项所述的方法，其中，所述第二给药周期的长度为21天。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述方法包括在所述第二给药周期的第1天或大约第1天向所述受试者施用所述C2D1。
22.根据权利要求4至6和权利要求15至21中任一项所述的方法，其中，所述给药方案包含一个或多个额外给药周期。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述给药方案包含四个额外给药周期，其中，所述四个额外给药周期中的每一个的长度为21天。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述四个额外给药周期各自包含所述双特异性抗体的单一剂量，其中，所述单一剂量在约80mg至约300mg之间，且其中，所述方法包括在所述四个额外给药周期中的每一个的第1天或大约第1天向所述受试者施用所述单一剂量。
25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述给药方案进一步包含多至17个额外给药周期，其中所述额外给药周期中的每一个的长度为21天。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述多至17个额外给药周期各自包含所述双特异性抗体的单一剂量，其中，所述单一剂量在约80mg至约300mg之间，且其中，所述方法包括在所述多至17个额外给药周期中的每一个的第1天或大约第1天向所述受试者施用所述单一剂量。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中，在所述C1D1与所述C1D2之间，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。
28.根据权利要求27所述的方法，其中，在所述C1D1与所述C1D2之间，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中，在所述C1D2与所述C1D3之间，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，在所述C1D2与所述C1D3之间，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法，其中，在所述C1D3之后，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过125pg/mL。
32.根据权利要求31所述的方法，其中，在所述C1D3之后，根据所述方法治疗的受试者群体的中位峰值IL-6水平不超过100pg/mL。
33.根据权利要求27至32中任一项所述的方法，其中，IL-6水平在周边血液样品中测量。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中，在所述第一给药周期中，所述受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在所述C1D2与所述C1D3之间。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，在所述第一给药周期中，所述受试者的CD8+T细胞活化的峰值水平发生在所述C1D2的24小时内。
36.一种治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者的方法，其包括在至少包含第一给药周期的给药方案中向所述受试者施用结合FcRH5和CD3的双特异性抗体，其中，所述第一给药周期包含所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)和第二剂量(C1D2)，其中，所述C1D1在约0.5mg至约19.9mg之间且所述C1D2在约20mg至约600mg之间。
37.根据权利要求36所述的方法，其中，所述C1D1在约1.2mg至约10.8mg之间且所述C1D2在约80mg至约300mg之间。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述C1D1为约3.6mg且所述C1D2为约198mg。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的方法，其中，所述第一给药周期的长度为21天。
40.根据权利要求39所述的方法，其中，所述方法包括分别在所述第一给药周期的第1天和第8天或大约第1天和第8天向所述受试者施用所述C1D1和所述C1D2。
41.根据权利要求36至40中任一项所述的方法，其中，所述给药方案进一步包含第二给药周期，所述第二给药周期包含所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中，所述C2D1等于或大于所述C1D2且在约20mg至约600mg之间。
42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述C2D1在约80mg至约300mg之间。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述C2D1为约198mg。
44.根据权利要求41至43中任一项所述的方法，其中，所述第二给药周期的长度为21天。
45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述方法包括在所述第二给药周期的第1天向所述受试者施用所述C2D1。
46.根据权利要求41至45中任一项所述的方法，其中，所述给药方案包含一个或多个额外给药周期。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述给药方案包含1至17个额外给药周期。
48.根据权利要求46或47所述的方法，其中，所述一个或多个额外给药周期中的每一个的长度为21天。
49.根据权利要求46至48中任一项所述的方法，其中，所述一个或多个额外给药周期中的每一个包含所述双特异性抗体的单一剂量。
50.根据权利要求49所述的方法，其中，所述方法包括在所述一个或多个额外给药周期的第1天向所述受试者施用所述双特异性抗体的单一剂量。
51.根据权利要求1至50中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含抗FcRH5臂，所述抗FcRH5臂包含第一结合结构域，所述第一结合结构域包含以下六个高变区(HVR)：
(a)HVR-H1，其包含RFGVH的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)；
(b)HVR-H2，其包含VIWRGGSTDYNAAFVS的氨基酸序列(SEQID NO:2)；
(c)HVR-H3，其包含HYYGSSDYALDN的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)；
(d)HVR-L1，其包含KASQDVRNLVV的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)；
(e)HVR-L2，其包含SGSYRYS的氨基酸序列(SEQ ID NO：5)；和
(f)HVR-L3，其包含QQHYSPPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：6)。
52.根据权利要求1至51中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含抗FcRH5臂，所述抗FcRH5臂包含第一结合结构域，所述第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQ ID
NO：7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO：8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
53.根据权利要求52所述的方法，其中，所述第一结合结构域包含：VH结构域，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；以及VL结构域，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含抗CD3臂，所述抗CD3臂包含第二结合结构域，所述第二结合结构域包含以下六个HVR：
(a)HVR-H1，其包含SYYIH的氨基酸序列(SEQ ID NO:9)；
(b)HVR-H2，其包含WIYPENDNTKYNEKFKD的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)；
(c)HVR-H3，其包含DGYSRYYFDY的氨基酸序列(SEQ ID NO:11)；
(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA的氨基酸序列(SEQID NO:12)；
(e)HVR-L2，其包含WTSTRKS的氨基酸序列(SEQ ID NO：13)；和
(f)HVR-L3，其包含KQSFILRT的氨基酸序列(SEQ ID NO：14)。
55.根据权利要求1至54中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含抗CD3臂，所述抗CD3臂包含第二结合结构域，所述第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQID NO：15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
56.根据权利要求55所述的方法，其中，所述第二结合结构域包含：VH结构域，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；以及VL结构域，其包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
57.根据权利要求1至56中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含：抗FcRH5臂，其包含重链多肽(H1)和轻链多肽(L1)；以及
抗CD3臂，其包含重链多肽(H2)和轻链多肽(L2)，且其中：
(a)H1包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；
(b)L1包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；
(c)H2包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；以及
(d)L2包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含去糖基化位点突变。
59.根据权利要求58所述的方法，其中，所述去糖基化位点突变降低所述双特异性抗体的效应子功能。
60.根据权利要求58或59所述的方法，其中，所述去糖基化位点突变为取代突变。
61.根据权利要求60所述的方法，其中，所述双特异性抗体在Fc区中包含降低效应子功能的取代突变。
62.根据权利要求1至61中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为单克隆抗体。
63.根据权利要求1至62中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为人源化抗体。
64.根据权利要求1至56或权利要求58至63中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为嵌合抗体。
65.根据权利要求1至56或权利要求58至64中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为结合FcRH5和CD3的抗体片段。
66.根据权利要求65所述的方法，其中，所述抗体片段选自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段组成的组。
67.根据权利要求1至64中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为全长抗体。
68.根据权利要求1至64和权利要求67中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体为IgG抗体。
69.根据权利要求68所述的方法，其中，所述IgG抗体为IgG1抗体。
70.根据权利要求1至56或权利要求58至69中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中，所述一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。
71.根据权利要求70所述的方法，其中，所述一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一重链恒定结构域配对。
72.根据权利要求70或71所述的方法，其中，所述CH31结构域和所述CH32结构域各自包含一个突起或空腔，且其中，所述CH31结构域中的所述突起或空腔分别可定位于所述CH32结构域中的所述空腔或突起中。
73.根据权利要求72所述的方法，其中，所述CH31结构域和所述CH32结构域在所述突起与空腔之间的界面处相遇。
74.根据权利要求70至73中任一项所述的方法，其中，所述CH21结构域和所述CH22结构域各自包含突起或空腔，且其中，所述CH21结构域中的所述突起或空腔分别可定位于所述CH22结构域中的所述空腔或突起中。
75.根据权利要求74所述的方法，其中，所述CH21结构域和所述CH22结构域在所述突起与空腔之间的界面处相遇。
76.根据权利要求73所述的方法，其中，所述抗FcRH5臂包含所述突起且所述抗CD3臂包含所述空腔。
77.根据权利要求76所述的方法，其中，所述抗FcRH5臂的CH3结构域包含含有T366W氨基酸取代突变(EU编号)的突起，且所述抗CD3臂的CH3结构域包含含有T366S、L368A和Y407V氨基酸取代突变(EU编号)的空腔。
78.根据权利要求1至77中任一项所述的方法，其中，将所述双特异性抗体作为单一疗法施用至所述受试者。
79.根据权利要求1至77中任一项所述的方法，其中，将所述双特异性抗体作为组合疗法施用至所述受试者。
80.根据权利要求79所述的方法，其中，将所述双特异性抗体与一种或多种额外治疗剂同时施用至所述受试者。
81.根据权利要求79所述的方法，其中，在施用一种或多种额外治疗剂之前，将所述双特异性抗体施用至所述受试者。
82.根据权利要求79所述的方法，其中，在施用一种或多种额外治疗剂之后，将所述双特异性抗体施用至所述受试者。
83.根据权利要求82所述的方法，其中，所述一种或多种额外治疗剂包含有效量的托珠单抗。
84.根据权利要求83所述的方法，其中，将托珠单抗通过静脉内输注施用至所述受试者。
85.根据权利要求83或84所述的方法，其中：
(a)所述受试者体重≥100kg，且将托珠单抗以800mg的剂量施用至所述受试者；
(b)所述受试者体重≥30kg且<100kg，且将托珠单抗以8mg/kg的剂量施用至所述受试者；或
(c)所述受试者体重<30kg，且将托珠单抗以12mg/kg的剂量施用至所述受试者。
86.根据权利要求83至85中任一项所述的方法，其中，在施用所述双特异性抗体之前2小时，将托珠单抗施用至所述受试者。
87.根据权利要求80至82中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种额外治疗剂包含有效量的泊马度胺、达雷木单抗或B细胞成熟抗原(BCMA)定向疗法。
88.根据权利要求1至87中任一项所述的方法，其中，将所述双特异性抗体通过静脉内输注施用至所述受试者。
89.根据权利要求1至87中任一项所述的方法，其中，将所述双特异性抗体经皮下施用至所述受试者。
90.根据权利要求1至89中任一项所述的方法，其中，所述受试者具有细胞因子释放综合征(CRS)事件，且所述方法进一步包括在暂停用所述双特异性抗体进行的治疗的同时治疗所述CRS事件的症状。
91.根据权利要求90所述的方法，其中，所述方法进一步包括向所述受试者施用有效量的托珠单抗以治疗所述CRS事件。
92.根据权利要求91所述的方法，其中，将托珠单抗以约8mg/kg的单一剂量经静脉内施用至所述受试者。
93.根据权利要求91或92所述的方法，其中，所述CRS事件在治疗所述CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化，所述方法进一步包括向所述受试者施用一个或多个额外剂量的托珠单抗以控制所述CRS事件。
94.根据权利要求93所述的方法，其中,将所述一个或多个额外剂量的托珠单抗以约8mg/kg的剂量经静脉内施用至所述受试者。
95.根据权利要求82所述的方法，其中，所述一种或多种额外治疗剂包含有效量的皮质类固醇。
96.根据权利要求95所述的方法，其中，将所述皮质类固醇经静脉内施用至所述受试者。
97.根据权利要求95或96所述的方法，其中，所述皮质类固醇为甲泼尼龙。
98.根据权利要求97所述的方法，其中，将甲泼尼龙以约80mg的剂量施用。
99.根据权利要求95或96所述的方法，其中，所述皮质类固醇为地塞米松。
100.根据权利要求99所述的方法，其中，将地塞米松以约20mg的剂量施用。
101.根据权利要求82和权利要求95至100中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种额外治疗剂包含有效量的对乙酰氨基酚或扑热息痛。
102.根据权利要求101所述的方法，其中，将对乙酰氨基酚或扑热息痛以约500mg至约1000mg之间的剂量施用。
103.根据权利要求101或102所述的方法，其中，将对乙酰氨基酚或扑热息痛经口服施用至所述受试者。
104.根据权利要求82和权利要求95至103中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种额外治疗剂包含有效量的苯海拉明。
105.根据权利要求104所述的方法，其中，将苯海拉明以约25mg至约50mg之间的剂量施用。
106.根据权利要求104或105所述的方法，其中，将苯海拉明经口服施用至所述受试者。
107.根据权利要求1至106中任一项所述的方法，其中，所述MM为复发性或难治性(R/R)MM。
108.根据权利要求107所述的方法，其中，个体已接受至少三个针对所述MM的先前治疗线。
109.根据权利要求108所述的方法，其中，所述个体已接受至少四个针对所述MM的先前治疗线。
110.根据权利要求107至109中任一项所述的方法，其中，所述个体已暴露于包含蛋白酶体抑制剂、IMiD和/或抗CD38治疗剂的先前治疗。
111.根据权利要求110所述的方法，其中，所述蛋白酶体抑制剂为硼替佐米、卡非佐米或艾沙佐米。
112.根据权利要求110所述的方法，其中，所述IMiD为沙利度胺、来那度胺或泊马度胺。
113.根据权利要求110所述的方法，其中，所述抗CD38治疗剂为抗CD38抗体。
114.根据权利要求113所述的方法，其中，所述抗CD38抗体为达雷木单抗、MOR202或艾沙妥昔单抗。
115.根据权利要求114所述的方法，其中，所述抗CD38抗体为达雷木单抗。
116.根据权利要求107至115中任一项所述的方法，其中，所述个体已暴露于包含以下的先前治疗：抗SLAMF7治疗剂、核输出抑制剂、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、自体干细胞移植(ASCT)、双特异性抗体、抗体-药物缀合物(ADC)、CAR-T细胞疗法或BCMA定向疗法。
117.根据权利要求116所述的方法，其中，所述抗SLAMF7治疗剂为抗SLAMF7抗体。
118.根据权利要求117所述的方法，其中，所述抗SLAMF7抗体为埃罗妥珠单抗。
119.根据权利要求116所述的方法，其中，所述核输出抑制剂为塞利尼索。
120.根据权利要求116所述的方法，其中，所述HDAC抑制剂为泛比司他。
121.根据权利要求116所述的方法，其中，所述BCMA定向疗法为靶向BCMA的抗体-药物缀合物。
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