JP2022122865A - 抗ｌｙ６ｇ６ｄ抗体及び使用方法 - Google Patents

抗ｌｙ６ｇ６ｄ抗体及び使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１）抗体及びそれを使用する方法を提供する。【解決手段】抗リンパ球抗原６ファミリーメンバーＧ６Ｄ（ＬＹ６Ｇ６Ｄ）に結合する単離された抗体であって、ここで、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含み、前記Ｌ１は、特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む、抗体を提供する。【選択図】なし

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年１２月１１日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーであって、名前は５０４７４－１８４ＪＰ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２．１１．２０＿ＳＴ２５で、サイズは１４６，１２７バイトである。
発明の分野
本明細書に提供されるのは、抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１）抗体及びそれを使用する方法である。
癌は依然として、ヒトの健康を脅かす最も致命的な脅威の一つである。米国では、癌は毎年１７０万人以上の新規患者に影響を及ぼし、心臓病に次いで２番目多い死因であり、約４人に１人が死亡している。特に結腸直腸癌（ＣＲＣ）は、米国における癌死亡原因の第３位であり、進行ＣＲＣ患者の５年生存率は低い。ＣＲＣのような癌は、社会的な脅威と負担を大きく増大させている。
癌治療への長期的なアプローチとしては、化学療法、放射線療法、固形腫瘍を除去する手術が含まれる。最近では、二重特異性抗体を用いた免疫療法が開発されている。このような二重特異性抗体は、細胞傷害性細胞及び腫瘍細胞上の細胞表面抗原を同時に結合することができ、結合した細胞傷害性細胞が結合した腫瘍細胞を破壊することを目的とする。
この分野では、癌（例えば、ＣＲＣ）治療において使用する効果的な二重特異性抗体をベースとする免疫療法（例えば、双二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体ベースの免疫療法）を開発するためのアンメットニーズが、存在している。
本発明は、癌治療用の組成物を提供する。また、製剤及び使用方法も提供される。
第１の態様において、本発明は、抗リンパ球抗原６ファミリーメンバーＧ６Ｄ（ＬＹ６Ｇ６Ｄ）に結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む：（ａ）配列番号４又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５、配列番号１１２、又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、前記Ｌ１は、以下のＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む：（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列又は配列番号９９－１０７のいずれかを含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、前記Ｌ１は、以下のＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む：（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、前記Ｌ１は、以下のＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む：（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号９９－１０７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む：（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、前記Ｌ１は、以下のＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む：（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１２又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、Ｌ１は、以下のＣＤＲを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む：（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、（ａ）前記ＶＨ１は、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；（ｂ）前記ＶＬ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；又は、（ｃ）前記抗体は、（ａ）のＶＨ１と（ｂ）のＶＬ１を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＨ１は、以下のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む：（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。いくつかの態様において、前記ＶＨ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＨ１は、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。いくつかの態様において、前記ＶＨ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＬ１は、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）（配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。いくつかの態様において、前記ＶＬ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＬ１は、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。いくつかの態様において、前記ＶＬ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む：
別の態様において、前記開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン（ＶＨ１）を含み、前記Ｌ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（ＶＬ１）を含む。
別の態様において、前記開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン（ＶＨ１）を含み、前記Ｌ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（ＶＬ１）を含む。
いくつかの態様において、前記抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定したように、３７℃で約１００ｐＭから約１０ｎＭの間のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドと結合する。いくつかの態様において、前記抗体は、６．０ ｎＭ又はそれ以下；４ ｎＭ又はそれ以下；又は２ ｎＭ又はそれ以下のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドと結合する。
いくつかの態様において、前記抗体は、モノクローナル、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。
いくつかの態様において、前記抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄを結合する抗体断片である。いくつかの態様において、前記抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。
いくつかの態様において、前記抗体は完全長抗体又はＩｇＧ抗体である。
いくつかの態様において、前記抗体は、単特異制抗体、多特異性抗体、又は二重特異性抗体である。
いくつかの態様において、前記二重特異制抗体は、分化抗原群３（ＣＤ３）に結合し、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）及び軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで、Ｈ２はＶＨドメイン（ＶＨ２）を含み、Ｌ２はＶＬドメイン（ＶＬ２）を含む。
いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３ポリペプチドに結合することができる。いくつかの態様において、前記ヒトＣＤ３ポリペプチド又は前記カニクイザルＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３εポリペプチドである。いくつかの態様において、前記ヒトＣＤ３ポリペプチド又は前記カニクイザルＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３γポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、前記抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定したように、３７℃で約１ｎＭから約５００ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、２５０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する。いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、１００ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する。いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する。いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する。いくつかの態様において、前記ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する。
いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、以下のＣＤＲを含む：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、ＶＬ２は、以下のＣＤＲを含む：（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）Ｓ配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；（ｂ）前記ＶＬ２は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；又は、（ｃ）前記抗体は、（ａ）のＶＨ２及び、（ｂ）のＶＬ２を含む。いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ＶＬ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、以下のＣＤＲを含む：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；及び、前記ＶＬ２は、以下のＣＤＲを含む：（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
いくつかの態様において、（ａ）前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；（ｂ）前記ＶＬ２は、配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；、又は、（ｃ）前記抗体は、（ａ）のＶＨ２及び、（ｂ）のＶＬ２を含む。いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ＶＬ２は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。
いくつかの態様において、前記ＶＨ２は、以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。
いくつかの態様において、前記ＶＬ２は以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。
いくつかの態様において、前記ＶＬ２は以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。
いくつかの態様において、前記Ｈ１及びＨ２はそれぞれ、さらに重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、前記Ｌ１及びＬ２はそれぞれ、さらに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｋ突然変異を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３Ｅ突然変異を含む。いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｅ突然変異を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３Ｋ突然変異を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｅ突然変異を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３Ｋ突然変異を含む。いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｋ突然変異を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３Ｅ突然変異を含む。
別の態様において、前記開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、ここで、前記二重特異性抗体は、以下を含む：重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインと、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインとを有し、ここで、各Ｈ１及びＨ２は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、各Ｌ１及びＬ２は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで：（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５、配列番号１１２又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列又は配列番号９９－１０７のいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。；及び、（ｄ）Ｈ１の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。いくつかの態様において、（ａ）本ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）本ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。；及び、（ｄ）Ｈ１の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。
（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号９９～１０７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。；及び、（ｄ）Ｈ１の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。
いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；及び、（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。；及び、（ｄ）Ｈ１の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１１２又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。；及び、（ｄ）Ｈ１の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、及び／又は、Ｈ２の本ＶＨが位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の本ＶＬが位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。
別の態様において、本発明は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、ここで、前記二重特異性抗体が、以下を含む：重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインと、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメイン、ここで、各Ｈ１及びＨ２は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、各Ｌ１及びＬ２は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで：（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５、配列番号１１２又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号ＮＯ．６を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列又は配列番号９９～１０７のいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む；及び、（ｄ）Ｈ１の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む；及び、（ｄ）Ｈ１の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバトナンバリング）。いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号９９－１０７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む；及び、（ｄ）Ｈ１の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。
いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む；及び、（ｄ）Ｈ１の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。いくつかの態様において、（ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１１２又は１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲを含む：（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；（ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む；及び、（ｄ）Ｈ１の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨが位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬが位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）。
いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＶＨは、Ｑ３９（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬは、Ｑ３８（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＶＨは、位置Ｑ３９（Ｋａｂａｔ番号）でのアミノ酸置換をさらに含み、Ｌ２の前記ＶＬは、位置Ｑ３８（Ｋａｂａｔ番号）でのアミノ酸置換をさらに含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＶＨはＱ３９Ｅ（カバットナンバリング）突然変異を含み、Ｌ１の前記ＶＬはＱ３８Ｋ突然変異を含み、Ｈ２の前記ＶＨはＱ３９Ｋ突然変異を含み、Ｌ２の前記ＶＬはＱ３８Ｅ突然変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＶＨはＱ３９Ｋ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＶＬはＱ３８Ｅ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＶＨはＱ３９Ｅ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＶＬはＱ３８Ｋ突然変異（カバットナンバリング）を含む。
いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、及び／又はＬ２の前記ＶＬは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｌ１の前記ＶＬは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、Ｈ２の前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、Ｌ２の前記ＶＬは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、Ｈ１の前記ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｌ１の前記ＶＬは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記Ｈ１のＦｃ領域の第１のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３１）及び前記Ｈ２のＦｃ領域の第２のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３２）は、それぞれ、突起又は空洞を含み、及びここで、前記ＣＨ３１における突起又は空洞が、前記ＣＨ３２における空洞又は突起にそれぞれ位置決め可能である。いくつかの態様において、ＣＨ３１及びＣＨ３２は、突起と空洞との間の界面で会合する。
いくつかの態様において、前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は突起を含み、前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は空洞を含む。いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、又はＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）、又はそれらの組み合わせを含む空洞を含む；又は（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。
いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む；又は、（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含み、及び、（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む；又は、（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。
いくつかの態様において、前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は空洞を含み、前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は突起を含む。いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、又はＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）又はそれらの組み合わせを含む空洞を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；又は、（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；又は、（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方を含む。いくつかの態様において、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含み、及び、（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む。
いくつかの態様において、前記Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域、又はそのＦｃ領域の変異体である。いくつかの態様において、前記Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体である。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体は、それぞれ、グリコシル化の欠如をもたらすアミノ酸残基Ｎ２９７（ＥＵナンバリング）の突然変異を含む。いくつかの態様において、前記アミノ酸残基Ｎ２９７での変異は置換変異である。いくつかの態様において、前記アミノ酸残基Ｎ２９７の変異はＦｃ領域のエフェクター機能を低下させる。
いくつかの態様において、前記置換変異はＮ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａの変異である。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体はそれぞれＮ２９７Ｇ変異を含む。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体は、それぞれＦｃ領域のエフェクター機能を低下させる変異を含む。
いくつかの態様において、前記Ｆｃ領域のエフェクター機能を低下させる変異は置換変異である。いくつかの態様において、前記置換変異は、アミノ酸残基Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／又はＰ３２９（ＥＵナンバリング）にある。いくつかの態様において、前記置換変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、又はＰ３２９Ｇ変異である。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体はそれぞれＰ３２９Ｇ変異を含む。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体はそれぞれＮ２９７Ｇ及びＰ３２９Ｇを含む。
いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが、Ｌ２３４Ａ又はＬ２３５Ａ変異をさらに含む。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異をさらに含む。
いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であって、それぞれが、以下の置換変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）及び残基Ｇ２３６の欠失（ＥＵナンバリング）をさらに含む。いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域の変異体である。
いくつかの態様において、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプＦｃ領域変異体であって、それぞれが、以下の置換変異Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）、及び残基Ｇ２３６の欠失（ＥＵナンバリング）を含む。
いくつかの態様において、前記Ｆｃ複合体の前記Ｆｃ領域は、エフェクターレスＦｃ領域である。
いくつかの態様において、前記Ｈ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、Ｌ２は配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、Ｌ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、Ｌ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号９のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号８のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号９のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６７のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号９のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号８のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号９のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６７のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体を特徴とし、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、及び、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み。ここで：（ａ）Ｈ１は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、及び、（ｄ）Ｌ２は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、前記抗体は、約１０ｍｌ／ｋｇ／日から約３５ｍｌ／ｋｇ／日の間の静脈注射後のクリアランスを有する。
別の態様において、本開示は、前記いずれかの態様の前記抗体をコードする１つ以上の単離された核酸、又はＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する結合ドメインを含むその一部を特徴とする。
別の態様において、本開示は、前記の態様の１つ以上の単離された核酸を含む１以上のベクターを特徴とする。
別の態様において、本開示は、前記の態様の１つ以上のベクターを含む１つ以上の宿主細胞を特徴とする。
いくつかの態様において、前記１つ以上の宿主細胞は、１つ以上の哺乳類宿主細胞である。いくつかの態様において、前記１つ以上の哺乳動物宿主細胞は、１つ以上のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞である。
いくつかの態様において、前記１つ以上の宿主細胞は、１つ以上の原核生物宿主細胞である。いくつかの態様において、前記１つ以上の原核生物宿主細胞は、１つ以上の大腸菌宿主細胞である。
別の態様において、本開示は、前記のいずれかの態様の前記抗体を製造する方法を特徴とし、前記方法は、前記のいずれかの態様の１以上の宿主細胞を培地中で培養することを含む。いくつかの態様において、本方法は、１以上の宿主細胞又は培養培地から抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を回収することをさらに含む。
別の態様において、本開示は、前記のいずれかの態様の前記抗体を含む組成物を特徴とする。いくつかの態様において、前記組成物はさらに、製薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤を含む。いくつかの態様において、前記製薬学的に許容される賦形剤は、緩衝剤、担体、安定剤、又は防腐剤である。いくつかの態様において、前記組成物は医薬組成物である。
別の態様において、本開示は、医薬として使用するための前記の態様のいずれかの前記抗体を特徴とする。
別の態様において、本開示は、それを必要とする被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の治療又は進行の遅延に使用するための、前記の態様のいずれか１つの前記抗体又は前記の態様のいずれか１つの前記組成物を特徴とする。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は結腸直腸癌である。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）又は低頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｌ）のマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）ステータスを有する。
別の態様において、本開示は、被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の治療又は進行を遅延させるための医薬の製造において、前記のいずれかの態様の前記抗体又は前記いずれかの態様の前記組成物を使用することを特徴とする。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は結腸直腸癌である。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は、ＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌を治療又は進行を遅延させる方法であって、前記方法は、前記いずれかの態様の前記抗体又は前記いずれかの態様の前記組成物を前記被験者に投与することを含むことを特徴とする。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は結腸直腸癌である。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は、ＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する。
別の態様において、本開示は、前記の態様のいずれかの前記抗体を含むキットと、被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の治療又は進行を遅延させるために前記抗体を使用するための指示書を含むパッケージインサートを含むことを特徴とする。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は結腸直腸癌である。いくつかの態様において、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は、ＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する。いくつかの態様において、前記被験者はヒトである。
別の態様において、本開示は、ＣＤ３に結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、以下のＣＤＲを含む結合ドメインを含む。（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、以下を含む：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；又は、（ｃ）（ａ）のようなＶＨと（ｂ）のようなＶＬ。いくつかの態様において、前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ＶＬは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＣＤ３に結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、以下のＣＤＲを含む結合ドメインを含む。（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、前記抗体は、以下を含む：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；又は、（ｃ）（ａ）のようなＶＨと（ｂ）のようなＶＬ。いくつかの態様において、前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、前記ＶＬは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、前記ＶＨは以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。
いくつかの実施形態において、前記ＶＨは以下のＦＲを含む：（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び、（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４。
いくつかの実施形態において、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。
いくつかの実施形態において、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び、（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４。
いくつかの実施形態において、前記抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した場合に、３７℃で約１ｎＭから約５００ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態において、前記抗体は、ＫＤが２５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、又は５ｎＭ以下のヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する。
いくつかの態様において、前記抗体は、モノクローナル、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。
いくつかの実施形態において、前記抗体がＣＤ３に結合する抗体断片である。いくつかの実施形態において、前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、前記抗体が完全長抗体である。
いくつかの実施形態において、前記抗体がＩｇＧ抗体である。
いくつかの実施形態において、前記抗ＣＤ３抗体が単一特異性抗体である。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む結合ドメインである。（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、前記抗体は、以下を含む：（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；又は、（ｃ）（ａ）のようなＶＨと（ｂ）のようなＶＬ。いくつかの実施形態において、前記ＶＨは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ＶＬは、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。
別の態様において、本開示は、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体を特徴とし、ここで、前記抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本出願ファイルには、カラーで作成された少なくとも１つの図面が含まれている。本特許又は特許出願のカラー図面付きの写しは，申請に応じて、申し込みと必要な手数料を支払うことにより、特許庁から提供される。
図１Ａは、癌ゲノムアトラス（ＴＣＧＡ）のキロベースミリオンあたりの正規化された読み取り（ｎＲＰＫＭ）における正常（黒）及び腫瘍（赤）組織でのＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＬＹ６Ｇ６Ｆの発現を示すプロットである。ＬＹ６Ｇ６Ｄは大腸腫瘍組織で有意に過剰発現している。 図１Ｂは、公開ＧＴＥｘプロジェクトデータのｎＲＰＫＭの正常組織におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＬＹ６Ｇ６Ｆの発現を示すプロットである。 図１Ｃは、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）、低頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｌ）、又は高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）のマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）ステータスを有する結腸直腸癌（ＣＲＣ）におけるｎＲＰＫＭにおけるＬＹ６Ｇ６Ｄの発現を示すボックスプロットの集合である。ＣＲＣのＭＳＩ状態と予後の関連を示した。 図２Ａは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに対する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を示す正常な大腸組織の顕微鏡写真である。 図２Ｂは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに対し弱度（１＋）ＩＨＣ染色を示す原発性大腸腫瘍の顕微鏡写真である。 図２Ｃは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに対し中度（２＋）ＩＨＣ染色を示す原発性大腸腫瘍の顕微鏡写真である。 図２Ｄは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに対し強度（３＋）ＩＨＣ染色を示す原発性大腸腫瘍の顕微鏡写真である。 図３Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ１Ｇ４アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ Ｔ細胞依存性二重特異性抗体（ＴＤＢ）による、ドナー＃１又はドナー＃２からの１０ＸヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞（ヒト大腸癌細胞株）のインビトロ殺傷を示す一対のグラフである。各ＴＤＢのＥＣ５０値が一覧表示される。 図３Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢで処理した後の、ＮＳＧ（商標）マウスにおける異種移植ＨＴ５５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示す一連のグラフである。マウスは、健康なドナーＰＢＭＣを用いてヒト化した。送達ビヒクル及びＰＭＢＣを含むか、又はＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを含むがＰＭＢＣを含まない治療が対照として提供される。 図３Ｃは、キメラ又はヒト化された抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによる、ヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフ及び、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおけるキメラ又はヒト化された１Ｇ４アームの親和性を示す別表である。 図３Ｄは、キメラ又はヒト化された抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢで処理した後のＮＳＧ（商標）マウスの異種移植ＨＴ５５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示す一連のグラフである。マウスは、健康なドナーＰＢＭＣを用いてヒト化した。送達ビヒクル及びＰＭＢＣを含むか、又はＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを含むがＰＭＢＣを含まない治療が対照として提供される。 図４Ａは、ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドの構造的相同性モデルにおける操作されたグリコシル化部位（赤丸、ピンク丸、緑丸、及び青丸）の位置を示すリボン図である。グリコシル化部位は、抗体結合への影響に基づいて色分けされている。赤丸で示された部位でのグリコシル化は、１Ｇ４の結合を阻害した。ピンク丸で示された部位でのグリコシル化は、１６Ｄ７の結合を阻害した。青丸で示された部位でのグリコシル化は、１Ｇ４又は１６Ｄ７の結合を阻害しなかった。緑丸は、Ｆｃへのリンカーのグリコシル化部位をマークしている。 図４Ｂは、示された残基に操作されたグリコシル化部位を含むＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの候補抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の結合を示すチャートである。Ｘでマークされた細胞は、結合が検出されなかったことを示している。Ｗでマークされた細胞は、結合が有意に減少したことを示している。 図４Ｃは、ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドの第１配向及び１８０°回転された第２配向における構造的相同性モデルにおける操作されたグリコシル化部位の位置を示す一対の図である。図４Ａのビン１、ビン２、ビン３、ビン４の抗体の結合を阻害したグリコシル化部位は、それぞれ緑、紫、青、オレンジの丸で示されている。 図４Ｄは、注釈付きのＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチド配列であり、グリコシル化変異の影響を受けるアミノ酸残基は図４Ｃのように色分けされ、図４Ａのビン１、２、３、及び４は下線で示されている。 図４Ｅは、４つの異なるエピトープビンに配置されたウサギ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体クローンを示す図である。ビン１は、３つの配列群を含み、２０Ａ１２、ｒｆ．１Ｇ４、６Ｅ１０、及び４Ｈ７を含む。ビン２は、６つの配列群を含み、ｆ．１６Ｄ７を含む。ビン３と４は、それぞれ３つの配列グループを含んでいる。 図４Ｆは、図４Ｅのビン１、２、３又は４からの示された抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームと抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームを含むウサギ抗ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢのＨＴ５５細胞（ヒト大腸癌細胞株）への結合を示すグラフである。結合は、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として測定される。 図４Ｇは、図４Ｅのビン１、２、３又は４からの抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームと抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによる、ヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。 図４Ｈは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して測定された、Ｌｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの１Ｇ４及びウサギ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体６Ｅ１０、２０Ａ１２、及び４Ｈ７の結合を示す一連のグラフである。ウサギ抗体は、ウサギ可変ドメインとヒト定常ドメインを有するキメラ抗原結合断片（Ｆａｂｓ）として発現させた。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＦａｂをフロースルーした。各グラフの下にＫＤを表示している。 図５Ａは、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（２セル）（配列番号２２）の重鎖可変領域のアミノ酸配列をＫａｂａｔ番号順に示す図である。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３が示されている。カバットナンバリングシステムに従ったＣＤＲ配列には、下線が引かれている。 図５Ｂは、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（２セル）（配列番号２３）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列をＫａｂａｔ番号順に示す図である。ＣＤＲのＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３が示されている。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図５Ｃは、フレームワーク領域（ＦＲ）２（配列番号１０）におけるＱ３９Ｅのアミノ酸置換変異（ボックス）を含む２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（１セル）の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す図である。この重鎖可変領域配列は、ＴＤＢの単細胞製造に特に有用である。相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示されている。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図５Ｄは、ＦＲ２（配列番号１１）におけるＱ３８Ｋ変異（ボックス）を含む２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（１セル）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す図である。この軽鎖可変領域配列は、ＴＤＢの単細胞製造に特に有用である。相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示されている。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図６Ａは、ＬＹ６Ｇ６Ｄ（ＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮ；配列番号７８）のアミノ酸残基９４～１０３を含むポリペプチドに結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）を示すタンパク質構造モデルである。 図６Ｂは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体のＦａｂを含む１０個のオーバーレイ複合体を示すタンパク質構造モデルの領域である。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２をリボン図として示す。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示し、アミノ酸残基を標識した。 図６Ｃは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の重鎖（ＨＣ；ピンク）及び軽鎖（ＬＣ；緑）を示すタンパク質構造モデルの領域である。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示し、アミノ酸残基を標識した。 図６Ｄは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体のＨＣ（ピンク）及びＬＣ（緑）を示すタンパク質構造モデルの領域である。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４－１０３を含むポリペプチドは、１．０σ（青）で輪郭が描かれた２Ｆｏ－Ｆｃ電子密度マップを備えたスティック図として示されている。 図６Ｅは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体を示すタンパク質構造モデルの領域である。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の重鎖可変領域のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３（それぞれＨ１、Ｈ２、Ｈ３）と、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の軽鎖可変領域のＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３（それぞれＬ１、Ｌ２、Ｌ３）は、リボンモデルでラベル付けされ、色で示されている。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示す。 図６Ｆは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体を示すタンパク質構造モデルの領域である。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は、空間充填モデルとして示されている。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の重鎖可変領域のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３（それぞれＨ１、Ｈ２、Ｈ３）と、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の軽鎖可変領域のＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３（それぞれＬ１、Ｌ２、Ｌ３）を標識している。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の選択された残基が標識され、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２とＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドとの相互作用が赤い破線で示されている。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示す。 図７Ａは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した１Ｇ４抗体を示すタンパク質構造モデルの領域である。１Ｇ４の重鎖可変領域のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３と、１Ｇ４の軽鎖可変領域のＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、リボンモデルでラベル付けされ、色で示されている。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示す。 図７Ｂは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９４～１０３に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体を示すタンパク質構造モデルの領域である。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の重鎖可変領域のＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３と、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の軽鎖可変領域のＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、リボンモデルでラベル付けされ、色で示されている。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３を含むポリペプチドを棒グラフで示す。 図７Ｃは、ＬＹ６Ｇ６Ｄ（ＨＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮＳ；配列番号８７）のアミノ酸残基９３～１０４を含むポリペプチドに結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）の重鎖（配列番号９６）及び軽鎖（配列番号９７）を示すタンパク質構造モデルであり、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２が相互作用する特定の残基（オレンジ色及び下線）を示すＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９３～１０４の配列図である。これらの各残基は、Ｆａｂから５Å以内に配置されている。 図７Ｄは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９３～１０４を含むポリペプチド（ＨＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮＳ；配列番号８７）に結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）の重鎖（配列番号９６）及び軽鎖（配列番号９７）を示すタンパク質構造モデルの領域である。ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドと相互作用する２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の残基が標識されている。ＨＣは残基が２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２重鎖にあることを示し、ＬＣは残基が２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２軽鎖にあることを示す。 図７Ｅは、ＬＹ６Ｇ６Ｄ（ＨＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮＳ；配列番号８７）のアミノ酸残基９３～１０４を含むポリペプチドに結合した１Ｇ４抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）の重鎖（配列番号９４）及び軽鎖（配列番号９５）を示すタンパク質構造モデルであり、１Ｇ４が相互作用する特定の残基（オレンジ色及び下線）を示すＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９３～１０４の配列図である。これらの各残基は、Ｆａｂから５Å以内に配置されている。 図７Ｆは、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基９３～１０４を含むポリペプチド（ＨＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮＳ；配列番号８７）に結合した１Ｇ４抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）の重鎖（配列番号９４）及び軽鎖（配列番号９５）を示すタンパク質構造モデルの領域である。ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドと相互作用する１Ｇ４の残基が標識されている。ＨＣは残基が１Ｇ４重鎖にあることを示し、ＬＣは残基が１Ｇ４軽鎖にあることを示す。 図８Ａは、「ホール」領域を形成するＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異とＮ２９７Ｇ変異を有するＦｃ領域とを含む抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの製造を示す概略図であり、「ノブ」領域を形成するＴ３６６Ｗアミノ酸置換変異及びＮ２９７Ｇ変異を有するＦｃ領域を含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）とペアになり、ここで、抗ＣＤ３アーム及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームは、完全長ＩｇＧ１Ｋ ＴＤＢを形成する。 図８Ｂは、２つの宿主細胞株（２セル技術）を用いた二重特異性抗体の製造ワークフローを示す模式図である。ホール領域を含む抗体の第１のアームは、第１の宿主細胞株で生成され、ノブ領域を含む抗体の第２のアームは、第２の宿主細胞株で生成される。抗体のアームは宿主細胞株から精製され、インビトロで組み立てられる。 図８Ｃは、単一の宿主細胞株（１セル技術）を用いた二重特異性抗体の製造のワークフローを示す模式図である。ホール領域を含む抗体の第１のアームとノブ領域を含む抗体の第二のアームは、単一の宿主細胞株から産生され、精製される。抗体の第１のアーム及び第２のアームは、図８Ｄ又は図８Ｅに示すようなアミノ酸置換変異を含む。 図８Ｄは、単一の細胞株を用いて作製された二重特異性抗体を示す図である。電荷対を導入するアミノ酸置換変異を示す。電荷対は、以下を含む：第１のアームのＶＨにおけるＱ３９Ｋ置換変異と第１のアームのＶＬにおけるＱ３８Ｅ置換変異；第１のアームのＣＨ１におけるＳ１８３Ｅ置換変異と第１のアームのＣＬにおけるＶ１３３Ｋ置換変異；第２のアームのＶＨにおけるＱ３９Ｅ置換変異及び第２のアームのＶＬにおけるＱ３８Ｋ置換変異；ならびに第２のアームのＣＨ１におけるＳ１８３Ｋ置換変異及び第２のアームのＣＬにおけるＶ１３３Ｅ置換変異。 図８Ｅは、単一の細胞株を用いて作製された二重特異性抗体を示す図である。アミノ酸置換変異を示す。電荷対を導入するアミノ酸置換変異を示す。電荷対は、以下を含む：第１のアームのＶＨのＱ３９Ｅ置換変異と第１のアームのＶＬのＱ３８Ｅ置換変異；第２のアームのＶＨのＱ３９Ｋ置換変異と第２のアームのＶＬのＱ３８Ｅ置換変異；及び第２のアームのＣＨ１のＳ１８３Ｅ置換変異と第２のアームのＣＬのＶ１３３Ｋ置換変異。この抗体はまた、第１のアームのＣＨ１におけるロゼッタＹＴ６５変異Ａ１４１Ｉ、Ｆ１７０Ｓ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３Ａ、及びＶ１８５Ａ変異と、第１アームのＣＬにおけるＦ１１６Ａ、Ｌ１３５Ｖ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７６Ｆ、及びＴ１７８Ｖ変異、を含む。 図９Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。ＴＤＢは０．０１～１０，０００ｎｇ／ｍＬの間の濃度で提供された。 図９Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化は、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を用いて測定した。 図９Ｃは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（２セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１０Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ｖ１アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。ＴＤＢは０．０１～１０，０００ｎｇ／ｍＬの間の濃度で提供された。 図１０Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ｖ１アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１０Ｃは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ｖ１アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１０Ｄは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＳＮＶｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアーム、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ６Ｅ１０．ｖ２３アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。 図１１Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣｏｌｏ３２０ＤＭ、ＨＴ５５、及びＬＳ１０３４細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。 図１１Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢのＣｏｌｏ３２０ＤＭ、ＨＴ５５及びＬＳ１０３４細胞に対する抗原結合能をＦＡＣＳにより測定した一連のグラフである。 図１１Ｃは、細胞ペレット及び異種移植腫瘍サンプルにおけるＩＨＣ染色を示す一連の顕微鏡写真である。 図１１Ｄは、健康なドナーからのヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞を、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１もしくは４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによって、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１もしくは４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによって、２４時間後に殺傷することを示すグラフである。 図１１Ｅは、健康なドナーからのヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞を、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１もしくは４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによって、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１もしくは４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによって、４８時間後に殺傷することを示すグラフである。各ＴＤＢのＫＤは括弧内に示されている。 図１１Ｆは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによる、１０人のドナーからのヒトＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでの死滅を示すグラフである。 図１１Ｇは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１１Ｈは、１０人のＰＢＭＣドナーの細胞殺傷とＣＤ８＋Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値を示す表である。 図１１Ｉは、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ、ＨＴ５５、及びＬＳ１０３４細胞における抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１２は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢで処理した後のマウスの異種移植ＣＯＬＯ３２０ＤＭ腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示すグラフである。マウスは、健康なドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いてヒト化した。対照として、デリバリービークルとＰＭＢＣを含む処理、又はＴＤＢを含み、ＰＭＢＣを含まない処理が提供されている。 図１３Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームｒｂ６Ｅ、ｒｂ１１Ａ１１、ｒｂ５Ｄ３、ｒｂ７Ｆ２、ｒｂ２０Ｆ１２、ｒｂ２０Ａ１２、ｒｂ５Ｅ４、ｒｂ３Ａ４、ｒｂ１７Ｆ１１、ｒｂ４Ｈ７、ｒｂ３Ｄ３、又はヒト化１Ｇ４と、抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１３Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームｒｂ６Ｅ、ｒｂ１１Ａ１１、ｒｂ５Ｄ３、ｒｂ７Ｆ２、ｒｂ２０Ｆ１２、ｒｂ２０Ａ１２、ｒｂ５Ｅ４、ｒｂ３Ａ４、ｒｂ１７Ｆ１１、ｒｂ４Ｈ７、ｒｂ３Ｄ３、又はヒト化１Ｇ４と抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１３Ｃは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームｒｂ６Ｅ、ｒｂ１１Ａ１１、ｒｂ５Ｄ３、ｒｂ７Ｆ２、ｒｂ２０Ｆ１２、ｒｂ２０Ａ１２、ｒｂ５Ｅ４、ｒｂ３Ａ４、ｒｂ１７Ｆ１１、ｒｂ４Ｈ７、ｒｂ３Ｄ３、又はヒト化１Ｇ４と抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによる、ドナー＃２からのＰＭＢＣを補充したＨＴ５５細胞のインビトロでの殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。 図１３Ｄは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームｒｂ６Ｅ、ｒｂ１１Ａ１１、ｒｂ５Ｄ３、ｒｂ７Ｆ２、ｒｂ２０Ｆ１２、ｒｂ２０Ａ１２、ｒｂ５Ｅ４、ｒｂ３Ａ４、ｒｂ１７Ｆ１１、ｒｂ４Ｈ７、ｒｂ３Ｄ３、又はヒト化１Ｇ４と、抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１３Ｅは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームｒｂ６Ｅ、ｒｂ１１Ａ１１、ｒｂ５Ｄ３、ｒｂ７Ｆ２、ｒｂ２０Ｆ１２、ｒｂ２０Ａ１２、ｒｂ５Ｅ４、ｒｂ３Ａ４、ｒｂ１７Ｆ１１、ｒｂ４Ｈ７、ｒｂ３Ｄ３、又はヒト化１Ｇ４と抗ＣＤ３アーム４０Ｇ５ｃとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１４Ａは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セルシステム）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＴＤＢによるドナー＃１からのＰＭＢＣを補充されたＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。ＷＴ ３８Ｅ４．ｖ１配列に対して相対的に変異したＭＤ２、ＭＤ３及びＭＤ４の特定の残基を括弧内に示す。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。 図１４Ｂは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セルシステム）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）及び抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１４Ｃは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セルシステム）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と、抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１５Ａは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セルシステム）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＴＤＢによる、ドナー＃２からのＰＭＢＣを補充されたＨＴ５５細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける細胞毒性の％として定量化される。 図１５Ｂは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ４＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１５Ｃは、２セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び１セルシステムを用いて組み立てられ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と、抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ２、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ３、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４．ｖ１（ＷＴ）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢによるＣＤ８＋Ｔ細胞のインビトロ活性化を示すグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化をＦＡＣＳを用いて測定した。 図１６Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢでの処理後のＮＳＧ（商標）マウスにおける異種移植ＬＳ１０３４腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示すグラフである。マウスは、健康なドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いてヒト化した。送達ビヒクル及びＰＭＢＣを含むか、又はＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを含むがＰＭＢＣを含まない治療が対照として提供される。「３＋」は、細胞株のＬＹ６Ｇ６Ｄ ＩＨＣスコアを示す。 図１６Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＴＤＢの単回投与後のＬＳ１０３４ ＮＳＧ（商標）マウスにおけるＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの血清濃度（μｇ／ｍＬ単位）を示すグラフである。 図１６Ｃは、図１６Ａに示された腫瘍体積アッセイのための生データを示す一連のグラフである。 図１７Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢでの処理後のＮＳＧ（商標）マウスにおける異種移植ＨＴ５５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示すグラフである。マウスは、健康なドナーＰＢＭＣを用いてヒト化した。対照として、デリバリービークルとＰＭＢＣを含む処理、又はＴＤＢを含み、ＰＭＢＣを含まない処理が提供されている。「２＋」は、細胞株のＬＹ６Ｇ６Ｄ ＩＨＣスコアを示す。 図１７Ｂは、図１７Ａに示された腫瘍体積アッセイのための生データを示す一連のグラフである。 図１７Ｃは、ジェネリック免疫グロブリン薬物動態（ＧＲＩＰ）ＥＬＩＳＡを用いて測定した、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＴＤＢの単回投与後のＨＴＴ５５ＮＳＧ（商標）マウスにおけるＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの血清濃度（μｇ／ｍＬ）を示すグラフである。 図１８は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（２セル）と抗ＣＤ３アーム４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１と抗ＧＤ Ｂ５６抗体を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの５ｍｇ／ｋｇ単回静脈内投与後の重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおける血清濃度（μｇ／ｍＬ単位）を示すグラフ及び表である。Ｃｍａｘ：最大血清濃度；ＡＵＣ０－２８：曲線下面積；ＣＬ：クリアランス率；ｔ１／２：半減期。 図１９は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの毒性試験をサイノモルグス猿（ｃｙｎｏ）を用いて実施した場合の概略図と表である。 図２０Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量で静脈内投与した後のカニクイザルにおける血清濃度（μｇ／ｍＬ）を示すグラフである。 図２０Ｂは、１ｍｇ／ｋｇのＴＤＢを単回静脈内投与した後の、抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０５Ｇｃアームと組み合わせた様々な腫瘍標的化アームを含むＴＤＢの血清濃度（単位：μｇ／ｍＬ）及びクリアランス（ＣＬ）を示すグラフ及び表である。 図２１は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを１５ｍｇ／ｋｇで投与した動物Ｎｏ．６００３の脳内の血管周囲／血管単核浸潤を示す一連の顕微鏡写真である。左上のパネルは、コントロール（正常）の髄膜血管を示している。左下のパネルは、動物Ｎｏ．６００３の髄膜血管の異常を示している。右図は、異常な髄膜血管の拡大図である。 図２２Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のサイトカインＧ－ＣＳＦ、ＩＬ－１Ｒａ、ＭＣＰ－１、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１３、及びＩＬ－８（ｐｇ／ｍＬ）の濃度を示す一連のグラフ、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示す一連のグラフである。 図２２Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ；ｐｇ／ｍＬ）の濃度、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示す散布図である。 図２３Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のフローサイトメトリーアッセイにおいてＣＤ３＋／ ＣＤ４＋／ ＣＤ５＋ＣＤ２５発現Ｔヘルパー（Ｔｈ）リンパ球（左パネル）及びＣＤ３＋／ ＣＤ８＋／ ＣＤ５＋ＣＤ２５発現Ｔ細胞毒性（Ｔｃ）リンパ球（右パネル）としてゲートされた細胞のパーセント、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示す一対のグラフである。測定は、処理前（Ｄａｙ－７）及び処理当日（Ｄａｙ １ Ｐｒｅ）の７日間で行い、平均化した（プレドーズ平均）。輸液終了（ＥＯＩ）後、２時間後、６時間後、２４時間後、１６８時間後に測定をした。軽度のＴ細胞活性化を示すピークが矢印で示されている。 図２３Ｂは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のフローサイトメトリーアッセイにおいてＣＤ４５＋／ＣＤ３＋Ｔリンパ球としてゲートされた細胞のパーセント、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示すグラフである。Ｔ細胞の回復を示すピークを矢印で示す。 図２３Ｃは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のフフローサイトメトリーアッセイにおいてＣＤ４５＋／ＣＤ２０＋Ｂリンパ球としてゲートされた細胞のパーセント、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示すグラフである。Ｂ細胞の回復を示すピークを矢印で示す。 図２３Ｄは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回投与量を指示された投与量でサイノモルグスサルに投与した後のフローサイトメトリーアッセイにおいてＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞としてゲーティングされた細胞のパーセント、及び対照（未処理）のサイノモルグスサルにおけるサイトカインの濃度を示すグラフである。 図２４Ａは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定された、ヒト（左パネル）及びカニクイザル（右パネル）のＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの結合を示す一対のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図２４Ｂは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定された、ヒト（左パネル）及びカニクイザル（右パネル）のＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームを含む６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの結合を示す一対のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図２４Ｃは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定された、ヒト（左パネル）及びカニクイザル（右パネル）のＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの結合を示す一対のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図２４Ｄは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定された、ヒト（左パネル）及びカニクイザル（右パネル）のＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アーム及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームを含むＬｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの結合を示す一対のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図２５は、ＢＩＡコアアッセイを用いて測定されたヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１（左パネル）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）及び抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１（中央パネル）、又は抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）及び抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４（右パネルの結合を示す一連のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図２６Ａは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）及び抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４ｖ１（ＷＴ）を含む１セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アーム（ＷＴ）を含む、２セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢでの処理後のＮＳＧ（商標）マウスにおける異種移植ＨＴ５５腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ２）を示すグラフである。対照として、デリバリービークルとＰＭＢＣを含む処理、又はＴＤＢを含み、ＰＭＢＣを含まない処理が提供されている。 図２６Ｂは、図２６Ａに示された腫瘍体積アッセイのための生データを示す一連のグラフである。 図２７は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アーム（ＷＴ）を含む、２セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４アームを含む１セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢｓの血清濃度（μｇ／ｍＬ単位）を示すグラフである。 図２８は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（１セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４アームを含む１セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム（２セル）と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アーム（ＷＴ）を含む２セルシステムを用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの血清濃度（μｇ／ｍＬ単位）を示すグラフである。 図２９Ａは、抗ＣＤ３クローン３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）、及び３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４）のＶＬのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示される。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図２９Ｂは、抗ＣＤ３クローン３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）、及び３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４）のＶＨのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示される。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図２９Ｃは、抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１、ＭＤ１、３８Ｅ４ｖ１．Ｓ４３Ｐ、３８Ｅ４ｖ１．Ｔ５１Ａ、３８Ｅ４ｖ１．Ｋ５５Ｅ、及び３８Ｅ４ｖ１．Ｋ８９Ｔアームを含む一過性トランスフェクション産生アッセイの結果を示すグラフである。 図２９Ｄは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム又は抗ＦｃＲＨ５アームと、標的アーム軽鎖（ＬＣ）ＤＮＡと抗ＣＤ３アームＤＮＡとの比率（標的アームＬＣ：ＣＤ３ ＬＣ）を変化させた単一アミノ酸置換（括弧内に示す）を有する抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１（ＷＴ）、ＭＤ１、又は変異体３８Ｅ４ｖ１アームとを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢに対して産生された適切に対になった二重特異性抗体のパーセントを示すグラフである。 図２９Ｅは、抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、ＭＤ１、ＭＤ４、又は３８Ｅ４ｖ１ Ｋ５５Ｅを含む単一特異性２価抗ＣＤ３抗体を、ＣＢ－１７ ＳＣＩＤマウスに５ｍｇ／ｋｇの単回投与した後の血清濃度（μｇ／ｍＬ）を示すグラフである（時間点ごとにｎ＝３）。抗ｇＤ抗体を対照として示す。個々のデータポイント（記号）は、接続された平均値（実線）とともに示す。 図２９Ｆは、フレームワーク領域（ＦＲ）２におけるＱ３８Ｅのアミノ酸置換変異（ボックス）を含む抗ＣＤ３クローン３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、ＭＤ１、ＭＤ４のＶＬのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。この軽鎖可変領域配列は、ＴＤＢの単細胞製造に特に有用である。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示される。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図２９Ｇは、フレームワーク領域（ＦＲ）２におけるＱ３９Ｋのアミノ酸置換変異（ボックス）を含む抗ＣＤ３クローン３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、ＭＤ１、ＭＤ４のＶＨのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。この重鎖可変領域配列は、ＴＤＢの単細胞製造に特に有用である。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３は、コンタクト、チョーシア、カバットの定義に従って示される。カバットの定義に従ったＣＤＲ配列には下線が引かれている。 図３０は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ１Ｇ４アームの２つの製造レプリケートについての一過性トランスフェクション生産アッセイの結果を示すグラフである。抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１及び抗ＧＦＲ１アームを対照として提供する。 図３１Ａは、ＣＤＲ－Ｌ３のグリコシル化部位、及びＣＤＲ－Ｈ１とＣＤＲ－Ｌ２の２つのシステイン残基の間のジスルフィド結合を示すウサギクローン２０Ａ１２の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）の図表である。 図３１Ｂは、ウサギ２０Ａ１２のＣＤＲを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２の変種と、ヒト軽鎖フレームワーク領域であるｈＩＧＫＶ．１－５、ｈＩＧＫＶ．１－３９、及びｈＩＧＫＶ．４－１、ならびにヒト重鎖フレームワーク領域であるｈＩＧＨＶ．３－２３及びｈＩＧＨＶ．３－３０の結合をＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した一連のグラフである。ヒト生殖細胞配列のｒｂ．２０Ａ１２配列に対するパーセントの同一性、及び各変異体におけるＶｅｒｎｉｅｒ位置の数を示す。 図３１Ｃは、ｒｂ．２０Ａ１２配列に対する種々のヒトＶＬ生殖細胞配列のパーセント同一性；各ヒト生殖細胞配列におけるＶｅｒｎｉｅｒ位置の数；及びヒトにおける生殖細胞配列の有病率を示す表である。 図３１Ｄは、ｒｂ．２０Ａ１２配列に対する種々のヒトＶＨ生殖細胞配列のパーセント同一性；各ヒト生殖細胞配列におけるＶｅｒｎｉｅｒ位置の数；及びヒトにおける生殖細胞配列の有病率を示す表である。
図３２Ａは、ＣＤＲ－Ｌ３のグリコシル化部位、及びＣＤＲ－Ｈ１とＣＤＲ－Ｌ２の２つのシステイン残基の間のジスルフィド結合を示すウサギクローン２０Ａ１２の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）の図である。 図３２Ｂは、ＣＤＲ－Ｌ３におけるグリコシル化部位、及びＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｌ２の２つのシステイン残基間のジスルフィド結合を除去するＣ３５Ｓ及びＣ５０Ａアミノ酸置換変異を示す、ヒト化された２０Ａ１２変異体２０Ａ１２．ｖ１のＬＣ及びＨＣの図である。２０Ａ１２．ｖ１は、ｈＩＧＨＶ．３－２３のＶＨフレームワーク領域とｈＩＧＫＶ．１－３９のＶＬフレームワーク領域を含む。ヒトフレームワーク領域は、２０Ａ１２ウサギ配列に由来するＶｅｒｎｉｅｒ残基を含むように、９つの位置（丸）で改変されている。 図３２Ｃは、ＣＤＲ－Ｌ３におけるグリコシル化部位、及びＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｌ２の２つのシステイン残基間のジスルフィド結合を除去するＣ３５Ｓ及びＣ５０Ａアミノ酸置換変異を示す、洗練されたヒト化２０Ａ１２変異体のＬＣ及びＨＣの図である。洗練された変形体２０Ａ１２は、ｈＩＧＨＶ．３～２３のＶＨフレームワーク領域とｈＩＧＫＶ．１～５のＶＬフレームワーク領域を含む。ヒトフレームワーク領域は、２０Ａ１２ウサギ配列に由来するＶｅｒｎｉｅｒ残基を含むように、４つの位置（丸）で修飾されている。 図３２Ｄは、一対の図であり、ｒｂ．２０Ａ１２及びその様々なヒト化変異体のＫＤを示す表である。中央の欄は、ｈＩＧＨＶ．３－２３のヒトフレームワーク領域重鎖（Ｈ）配列とヒトフレームワーク領域軽鎖（Ｌ）配列との相対的なアミノ酸置換変異で、アミノ酸位置をウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基に戻す変異を示す。 図３３Ａは、ｒｂ．６Ｅ１０配列に対する種々のヒトＶＬ生殖細胞配列のパーセント同一性；各ヒト生殖細胞配列におけるＶｅｒｎｉｅｒ位置の数；及びヒトにおける生殖細胞配列の有病率を示す表である。 図３３Ｂは、ｒｂ．６Ｅ１０配列に対する種々のヒトＶＨ生殖細胞配列のパーセント同一性；各ヒト生殖細胞配列におけるＶｅｒｎｉｅｒ位置の数；及びヒトにおける生殖細胞配列の有病率を示す表である。 図３４Ａは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して測定された、ｒｂ．２０Ａ１２及びｒｂ．２０Ａ１２可変ドメイン及びヒト定常領域を有する様々なキメラＦａｂのＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの結合を示す一連のグラフである。キメラＦａｂｓの各々は、以下のように、ＣＤＲ－Ｈ１のＣ３５及びＣＤＲ－Ｈ２のＣ５０）の各々におけるアミノ酸変異を含む：Ｃ３５Ｓ－Ｃ５０Ａ（ＳＡ）、Ｃ３５Ｓ－Ｃ５０Ｓ（ＳＳ）、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ａ（ＩＡ）、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ｓ（ＩＳ）、及びＣ３５Ｉ－Ｃ５０Ｉ（ＩＩ）。各キメラＦａｂのＫＤを示す。 図３４Ｂは、配列ＮＮＴを有するｒｂ．２０Ａ１２のＣＤＲ－Ｌ３におけるグリコシル化部位を示す配列図であり、ＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合のためのＢＩＡコアアッセイを用いて測定された、グリコシル化部位にアミノ酸置換変異を有する上述の洗練されたヒト化２０Ａ１２軽鎖配列の変異体のＫＤを示す表である。 図３４Ｃは、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定されたウサギ２０Ａ１２のＦａｂ変種、図３４Ｂのグリコシル化部位でのＱＮＴアミノ酸置換変異を有する、Ｃ３５Ｉ及びＣ５０Ａ（ＩＡ）変異を含むウサギ２０Ａ１２、及びＬＹ６Ｇ６Ｄへの図３４Ｂのグリコシル化部位でのＱＮＴアミノ酸置換変異を有する洗練されたヒト化２０Ａ１２のＦａｂ変種の結合を示す一連のグラフである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－ＦｃをＰｒｏｔｅｉｎ Ａチップに捕捉し、３７℃でＦａｂを流した。 図３４Ｄは、図３４Ｂのグリコシル化部位におけるＱＮＶ、ＳＮＶ、ＧＮＴ、及びＳＮＡアミノ酸置換変異を有する洗練されたヒト化２０Ａ１２軽鎖配列のＦａｂ変種のＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの結合を示す一連のグラフであり、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定される。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－ＦｃをＰｒｏｔｅｉｎ Ａチップに捕捉し、３７℃でＦａｂを流した。 図３５Ａは、図３２Ａのウサギ２０Ａ１２を示す図であり、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した場合の、ＬＹ６Ｇ６Ｄに対する図示された抗体の結合を示すグラフである。 図３５Ｂは、洗練されたヒト化２０Ａ１２変異体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２を示す図であり、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定されたような、ＬＹ６Ｇ６Ｄへの図示された抗体の結合を示すグラフである。 図３６は、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２、６Ｅ１０．ｖ１１４、及び１Ｇ４のヒト及びｃｙｎｏ ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの結合を示すグラフと、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定された各アッセイのＫＤを要約した表のセットである。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。 図３７は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ．１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームについての一過性トランスフェクション産生アッセイの結果を示すグラフである。コントロールとして、抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１と抗ＦＧＦＲ１アームが用意されている。 図３８は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（洗練された２０Ａ１２．ｖｅｒ１）アームに対する非特異的クリアランスのためのバキュロウイルス（ＢＶ）ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す表である。 図３９は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームを含むＴＤＢの分子評価（ＭＡ）解析結果を示す表である。緑色の着色は、明らかな問題が確認されなかったアッセイを示している。 図４０Ａは、ｒｂ．２０Ａ１２のＣＤＲと、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－２３又はｈＩＧＨＶ．３－３０のＶＨフレームワーク領域と、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５、ｈＩＧＫＶ．１－３９又はｈＩＧＫＶ．４－１のＶＬフレームワーク領域を含むヒト化変異体２０Ａ１２のアミノ酸配列を示す配列アラインメントであり、それぞれがウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基を有する。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４０Ｂは、ｒｂ．２０Ａ１２とヒト化変異体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ．１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２のアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４０Ｃは、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－２３のＶＨ、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５のＶＬ、及びヒト化２０Ａ１２変異体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ．１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ．１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２に存在するラビットＶｅｒｎｉｅｒ残基を楕円で示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４１は、６Ｅ１０ｖ１ Ｆａｂの分子評価（ＭＡ）分析結果を示す表である。緑のカラーリングは明らかな問題点が確認されなかったアッセイを示し、赤のカラーリングは問題点が確認されたことを示している。 図４２は、ＢＩＡコアアッセイを用いて測定された、ウサギ６Ｅ１０のＣＤＲ及びヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－５３、ｈＩＧＨＶ．４－４、又はｈＩＧＨＶ．３－４８のＶＨフレームワーク領域と、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５、ｈＩＧＫＶ．３－２０、又はｈＩＧＫＶ．４－１のＶＬフレームワーク領域とを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム６Ｅ１０の変異体の結合を示す一連のグラフである。各変異体のＶｅｒｎｉｅｒ位置の数を表示している。 図４３Ａは、ｒｂ．６Ｅ１０のＣＤＲとヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－５３、ｈＩＧＨＶ．４－４、又はｈＩＧＨＶ．３－４８のＶＨフレームワーク領域と、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５、ｈＩＧＫＶ．３－２０、又はｈＩＧＫＶ．４－１のＶＬフレームワーク領域とを含む６Ｅ１０のヒト化変異体のアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４３Ｂは、ｒｂ．６Ｅ１０及びヒト化変異体６Ｅ１０．ｖ２３及び６Ｅ１０．ｖ１１４のアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４３Ｃは、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－５３＊０１のＶＨ、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－２０＊０１のＶＬ、及びｒｂ．６Ｅ１０及びヒト化６Ｅ１０変異体６Ｅ１０．ｖ１１４のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。ｒｂ．６Ｅ１０及び６Ｅ１０．ｖ１１４に存在するラビットＶｅｒｎｉｅｒ残基を楕円で示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。 図４３Ｄは、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－４８＊０１のＶＨ、ヒト生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５＊０１のＶＬ、及びｒｂ．６Ｅ１０及びヒト化６Ｅ１０変異体６Ｅ１０．ｖ２３のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す配列アラインメントである。ｒｂ．６Ｅ１０及び６Ｅ１０．ｖ２３に存在するラビットＶｅｒｎｉｅｒ残基を楕円で示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３を示す。配列間で異なる残基が強調表示されている。
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において、値又はパラメータについての「約」の参照は、それ自体がその値又はパラメータに向けられた側面を含む（及び説明する）。
本明細書に記載された本発明の態様において、「含む」、「からなる」、及び「本質的にからなる」などの側面を含むことが理解される。
本明細書で使用される用語「Ｌｙ６Ｇ６Ｄ」又は「リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１」は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）のような哺乳類を含む、任意の脊椎動物由来の任意のネイティブＬｙ６Ｇ６Ｄを指し、「完全長」であり、未処理のＬｙ６Ｇ６Ｄ、ならびに細胞内での処理から生じる任意の形態のＬｙ６Ｇ６Ｄを包含する。この用語はまた、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を含む、Ｌｙ６Ｇ６Ｄの自然発生的な変異体も包含する。Ｌｙ６Ｇ６Ｄは、Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６－Ｄ、Ｃ６ｏｒｆ２３、巨核球強化遺伝子転写体１（ＭＥＧＴ１）、及びＮＧ２５とも呼ばれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９５１，５４６号にＴＡＴ２０１として開示されており、配列番号７５のアミノ酸配列及び配列番号７６のヌクレオチド配列であるＤＮＡ２３４４４１を有する。Ｌｙ６Ｇ６Ｄは、例えば、１３３アミノ酸の長さを有するヒトＬｙ６Ｇ６Ｄタンパク質（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿０６７０７９．２）を含む。
用語「抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体」及び「ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する抗体」とは、ＬＹ６Ｇ６Ｄを標的とする際の診断及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性を有して、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合可能である抗体を指す。一実施形態において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体が非関連非ＬＹ６Ｇ６Ｄタンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、抗体のＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合の約１０％未満である。特定の実施形態において、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する抗体は、解離定数（ＫＤ）が≦１μＭ、≦２５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦６ｎＭ、≦４ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍから１０－１３Ｍまで、例えば、１０－９Ｍから１０－１３Ｍまで）である。特定の実施形態において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、異なる種のＬＹ６Ｇ６Ｄ間で保存されているＬＹ６Ｇ６Ｄのエピトープに結合する。
本明細書で使用されるように、「分化クラスター３」又は「ＣＤ３」という用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）のような哺乳類を含む、任意の脊椎動物由来の任意のネイティブＣＤ３を指し、例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３α、及びＣＤ３β鎖を含む。「完全長」この用語は、未処理のＣＤ３（例えば、未処理又は未修飾ＣＤ３ε又はＣＤ３γ）、及び細胞内での処理から生じるＣＤ３の任意の形態を包含する。この用語はまた、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を含む、ＣＤ３の自然発生的な変異体を包含する。ＣＤ３としては、例えば、長さ２０７アミノ酸であるヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿０００７２４）、長さ１８２アミノ酸であるヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ Ｎｏ．ＮＰ＿００００６４）などが挙げられる。
用語「抗ＣＤ３抗体」及び「ＣＤ３に結合する抗体」とは、ＣＤ３を標的とする診断及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性を有して、ＣＤ３に結合可能である抗体を指す。一実施形態において、抗ＣＤ３抗体が非関連非ＣＤ３タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、抗体のＣＤ３への結合の約１０％未満である。特定の実施形態において、ＣＤ３に結合する抗体は、≦１μＭ、≦２５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭの解離定数（ＫＤ）を有する（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍから１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍから１０－１３Ｍ）。特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、異なる種のＣＤ３間で保存されているＣＤ３のエピトープに結合する。
本明細書において、「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片（例えば、ビスＦａｂ）を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、合計の非共有性相互作用の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する特異的結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当該技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例示的及び例示的な態様は、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体とは、改変などを有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有し、そのような改変により抗体の抗原に対する親和性が改善される抗体を指す。
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」、及び「全抗体」とは、本明細書で、ネイティブ抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、ビス－Ｆａｂ；Ｆｖ；Ｆａｂ；Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ；Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
「単一ドメイン抗体」とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全部又は一部を含む抗体断片を指す。特定の態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照されたい）。シングルドメイン抗体の例としては、ＶＨＨが挙げられるが、これらに限定されない。
「Ｆａｂ」断片は、抗体のパパイン消化によって生成された抗原結合断片であり、Ｈ鎖（ＶＨ）の可変領域ドメイン、及び１重鎖（ＣＨ１）の第１の定常ドメインとともにＬ鎖全体からなる。抗体のパパイン消化により、２つの同一のＦａｂ断片が生成される。抗体のペプシン処理は、２価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結Ｆａｂ断片におおよそ対応する単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を産出し、抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に付加的な数個の残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が、遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。
「Ｆｖ」は、密接な非共有結合にある１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、かつ抗原結合特異性を抗体に与える６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖から各３つループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、しばしば結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有している。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なるかもしれないが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６の位置にあるアミノ酸残基から、又はＰｒｏ２３０の位置にあるアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の製造又は精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換えエンジニアリングすることによって、除去されてもよい。従って、無傷抗体の組成物は、全Ｌｙｓ４４７残基が除去された抗体集団、除去されたＬｙｓ４４７残基がない抗体集団、及びＬｙｓ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含んでもよい。
「機能的Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションなどが含まれる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と結合することを必要とし、そして、例えば、本明細書の定義に開示されているように、様々なアッセイを使用して評価することができる。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、ネイティブに見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。固有配列ヒトＦｃ領域には、固有配列ヒトＩｇＧ ｌ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡのアロタイプ）；固有配列ヒトＩｇＧ ２ Ｆｃ領域；固有配列ヒトＩｇＧ ３ Ｆｃ領域；及び固有配列ヒトＩｇＧ ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらのネイティブに存在する変種が含まれる。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換によってネイティブ配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１から約１０のアミノ酸置換、より好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して約１から約５のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異体Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列のＦｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域との少なくとも約８０％の相同性、好ましくは少なくとも約９０％の相同性、又はより好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有するであろう。
本明細書で使用される「Ｆｃ複合体」とは、二量体を形成するために共に相互作用する２つのＦｃ領域のＣＨ３ドメイン、又は特定の態様において、２つのＦｃ領域が二量体を形成するために相互作用し、ここで、ヒンジ領域のシステイン残基及び／又はＣＨ３ドメインは、結合及び／又は力（例えば、ファンデルワールス、疎水性力、水素結合、静電力、又はジスルフィド結合）を介して相互作用することを指す。
本明細書で使用される「Ｆｃ成分」とは、Ｆｃ領域のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン又はＣＨ３ドメインを指す。
「ヒンジ領域」は、一般に、ＩｇＧ（ＥＵナンバリング）の約残基２１６から約２３０まで、ＩｇＧ（カバットナンバリング）の約残基２２６から約２４３まで、又はＩｇＧ（ＩＭＧＴユニークナンバリング）の約残基１から約１５までの間で延びていると定義される。
Ｆｃ領域の「下部ヒンジ領域」は、通常、ヒンジ領域のすぐＣ末端の残基、すなわち、Ｆｃ領域の残基２３３～２３９（ＥＵナンバリング）の伸長として定義される。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換によってネイティブ配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１から約１０のアミノ酸置換、より好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して約１から約５のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異体Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、及び最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
「Ｆｃ受容体」又は 「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表している。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体のアレル変異形及び代替としてはスプライシング形態を含め、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が挙げられ、これらは、主にそれらの細胞質ドメインの点で異なる同様のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質側ドメイン内に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（レビューＭ．ｉｎ Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）をレビューされている．今後特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語により包含されている。この用語には、母体のＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体ＦｃＲｎも含まれる（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
本明細書で言及される「ノブ－イントゥ－ホール」又は「ＫｎＨ」技術という用語は、それらが相互作用する界面において、一方のポリペプチドに突起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することによって、インビトロ又はインビボで２つのポリペプチドを共にペアリングすることを指示する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ相互作用界面、ＣＬ：ＣＨ１界面又はＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、ＵＳ２００７／０１７８５５２，ＷＯ ９６／０２７０１１，ＷＯ ９８／０５０４３１ ａｎｄ Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６：７８１－７８８）。これは、多重特異性抗体の製造中に、２つの異なる重鎖のペアリングを一緒に駆動するのに特に有用である。例えば、Ｆｃ領域にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一の可変ドメインをさらに構成してもよいし、同一、類似、又は異なる軽鎖可変ドメインと対をなす異なる重鎖可変ドメインをさらに構成してもよい。ＫｎＨ技術はまた、２つの異なる受容体細胞外ドメインを一緒にペアリングするために、又は異なる標的認識配列を構成する任意の他のポリペプチド配列を使用することができる。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に４つのＦＲドメインから構成されている：ＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３，ａｎｄ ＦＲ４．従って、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）における次の配列において現れる。ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４．
「ＣＨ１領域」又は「ＣＨ１ドメイン」は、ＩｇＧ（ＥＵナンバリング）の残基約１１８から残基２１５まで、ＩｇＧ（カバットナンバリング）の残基約１１４から残基２２３まで、又はＩｇＧ（ＩＭＧＴユニークナンバリング）の残基約１．４から残基１２１までの残基の伸長を含む（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ Ｖ，Ｄｕｒｏｕｘ Ｐ，Ｊａｂａｄｏ－Ｍｉｃｈａｌｏｕｄ Ｊ，Ｆｏｌｃｈ Ｇ，Ａｏｕｉｎｔｉ Ｓ，Ｃａｒｉｌｌｏｎ Ｅ，Ｄｕｖｅｒｇｅｙ Ｈ，Ｈｏｕｌｅｓ Ａ，Ｐａｙｓａｎ－Ｌａｆｏｓｓｅ Ｔ，Ｈａｄｉ－Ｓａｌｊｏｑｉ Ｓ，Ｓａｓｏｒｉｔｈ Ｓ，Ｌｅｆｒａｎｃ Ｇ，Ｋｏｓｓｉｄａ Ｓ．ＩＭＧＴ（登録商標），ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）２５ ｙｅａｒｓ ｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｊａｎ；４３（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ４１３－２２）。ＩＬ－１５ポリペプチド又はＩＬ－１５Ｒαポリペプチドは、ＣＨ１ドメインの第１の残基に直接共有結合されていてもよく、又は代替的に、ＣＨ１の第１の残基に対してＣ末端の位置にある残基に共有結合されていてもよい。代替的な態様において、ＩＬ－１５ポリペプチド又はＩＬ－１５Ｒαポリペプチドは、本明細書で定義されるようにリンカーを介してＣＨ１に共有結合されていてもよい。
ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」は、通常、ＩｇＧの約残基２４４から約３６０まで（カバットナンバリング）、ＩｇＧの約残基２３１から約３４０まで（ＥＵナンバリング）、又はＩｇＧの約１．６から約１２５まで（ＩＧＭＴユニークナンバリング）に及ぶ。ＣＨ２ドメインは、他のドメインと密接に対になっていないという点でユニークである。むしろ、インタクトネイティブＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間には、２つのＮ－ｌｉｎｋｅｄ分岐炭水化物鎖が介在している。炭水化物は、ドメインとドメインのペアリングの代わりを提供し、ＣＨ２ドメインの安定化を助けることが推測されている。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５）．
「ＣＨ３ドメイン」は、Ｆｃ領域のＣ末端残基からＣＨ２ドメインへの伸長（すなわち、ＩｇＧ（カバットナンバリング）の約３６１から約４７８のアミノ酸残基まで、ＩｇＧ（ＥＵナンバリング）の約３４１から約４４７のアミノ酸残基まで、又はＩｇＧ（ＩＧＭＴユニークナンバリング）の約１．４から約１３０のアミノ酸残基まで）を含む。
「ＣＬドメイン」又は「定常軽ドメイン」は、Ｃ末端残基の光鎖可変ドメイン（ＶＬ）への延伸を含む。抗体の軽鎖は、κ（κ）（「Ｃκ」）又はλ（λ）（「Ｃλ」）の軽鎖領域であってもよい。Ｃκ領域は、一般に、ＩｇＧ（Ｋａｂａｔ又はＥＵナンバリング）の約１０８から約２１４の残基まで、又はＩｇＧ（ＩＭＧＴユニークナンバリング）の約１．４から約１２６の残基まで延びている。Ｃ残基は、一般に、約１０７ａ残基から約２１５残基（カバットナンバリング）まで、又は約１．５残基から約１２７残基（ＩＭＧＴユニークナンバリング）まで延びる（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ Ｖ，Ｄｕｒｏｕｘ Ｐ，Ｊａｂａｄｏ－Ｍｉｃｈａｌｏｕｄ Ｊ，Ｆｏｌｃｈ Ｇ，Ａｏｕｉｎｔｉ Ｓ，Ｃａｒｉｌｌｏｎ Ｅ，Ｄｕｖｅｒｇｅｙ Ｈ，Ｈｏｕｌｅｓ Ａ，Ｐａｙｓａｎ－Ｌａｆｏｓｓｅ Ｔ，Ｈａｄｉ－Ｓａｌｊｏｑｉ Ｓ，Ｓａｓｏｒｉｔｈ Ｓ，Ｌｅｆｒａｎｃ Ｇ，Ｋｏｓｓｉｄａ Ｓ．ＩＭＧＴ（登録商標），ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）２５ ｙｅａｒｓ ｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｊａｎ；４３（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ４１３－２２）。
あらゆる脊椎動物種からの軽鎖（ＬＣ）は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に区別されたタイプのいずれかに割り当てることができる。それらの重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには５つのクラスがある：それぞれα、δ、γ、ε、μと指定された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ。γ及びαクラスは、ＣＨの配列及び機能の比較的軽微な違いに基づいて、さらにサブクラスに分かれ、例えば、ヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。
本明細書で使用されるように、用語「荷電領域」とは、荷電領域とそのコグナート荷電領域とが反対の全体的な相対的な電荷を有する場合に、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の塩基性アミノ酸又は酸性アミノ酸を有するコグナート荷電領域と電荷対を形成することができる、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の塩基性アミノ酸又は酸性アミノ酸を含むポリペプチドの位置を指す。
本明細書で使用されるように、「電荷ペア」という用語は、全体的に反対の電荷を持つ２つの荷電領域の間に形成される結合を指す。
用語「キメラ」抗体とは、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」とは、抗体の重鎖が持つ一定ドメインや一定領域の種類を指す。抗体には大きく分けて５つのクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に分かれてもよい。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、又はμと呼ばれる。
「ヒト抗体」とは、ヒト又はヒト細胞が産生した抗体、又はヒト抗体レパートリーなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有するものを指す。このヒト抗体の定義では、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体は特に除外されている。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で知られている様々な技術を用いて作製することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１，１９９１；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１，１９９１。また、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５，１９９１．Ｓｅｅ ａｌｓｏ ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４，２００１に記載されている方法が利用可能である。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば免疫化されたキセノマウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関して米国特許第 ６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１０３：３５５７－３５６２，２００６ ｒｅｇａｒｄｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｖｉａ ａ ｈｕｍａｎ Ｂ－ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙも参照されたい。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の中から選択されたものの中で、最も一般的に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークのことである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行われる。一般に、シーケンスのサブグループは、カバット ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３で記述のように、サブグループである。一態様において、ＶＬの場合、サブグループは、カバット ｅｔ ａｌ．ｓｕｐｒａで記述のように、サブグループカッパＩである。一態様において、ＶＨの場合、サブグループは、カバット ｅｔ ａｌ．ｓｕｐｒａで記述のように、サブグループカッパＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様において、ヒト化抗体は、実質的に少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのすべてを含み、ここで、すべて又は実質的にすべてのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）は、非ヒト抗体のものに対応し、そしてすべて又は 実質的にすべてのＦＲはヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体のＦＲのすべて又は実質的にすべてのＦＲがヒト抗体のＦＲに対応する特定の態様において、ヒト化抗体のＦＲのいずれかは、非ヒトＦＲ（複数可）からの１つ以上のアミノ酸残基（例えば、ＦＲの１つ以上のＶｅｒｎｉｅｒ位置残基）を含んでいてもよい。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体の「ヒト化形態」とは、例えば非ヒト抗体のように、ヒト化を受けた抗体を指す。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）は、一般的に類似した構造を有しており、各ドメインは４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）と３つのハイパーバリアブル領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）．を参照されたい）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であるかもしれない。さらに、特定の抗原を結合する抗体から、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングするために、抗原を結合する抗体からＶＨドメイン又はＶＬドメインを用いて、それぞれ単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７，１９９３；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８，１９９１．を参照されたい。
本明細書で使用される「ハイパーバリアブル領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、抗体可変ドメインの各領域のうち、配列がハイパーバリアブルである領域（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）を指す。一般的に抗体はＶＨに３つ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、ＶＬに３つ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）の６つのＣＤＲを含む。例示的なＣＤＲは、本明細書では以下のものを含む：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７）；
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（カバット ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；及び、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、及び９３～１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５，１９９６）。
別段の指示がない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン内の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において、カバット ｅｔ ａｌ．ｓｕｐｒａに準じてナンバリングされている。
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これによりｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することができる。ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）；Ｍａｌｍｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８３：７－１３，１９９５を参照されたい。
「ターゲティングドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、受容体に特異的に結合する化合物又は分子の一部を指す。標的化ドメインには、抗体（例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、及びキメラ抗体）、抗体断片又はその一部（例えば、ビス－Ｆａｂ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、及び抗体のＶＨ及び／又はＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、ペプチド標的化ドメイン（例えば、システイン結び目タンパク質（ＣＫＰ）など）、及び同定された結合パートナーを有する他の分子が含まれるが、これらに限定されない。ターゲティングドメインは、それが結合する抗原を標的化し、遮断し、作動し、又は拮抗することができる。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同一のエピトープを結合している抗体を指すが、例えば、自然に生じる突然変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の製造中に生じる可能性のある変異体抗体を除いて、そのような変異体は、一般的に微量に存在する。典型的には、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられている。このように、修飾子「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の性質を示しており、特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法及び本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。
用語「多重特異性抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、多エピトピック特異性を有する抗体を対象とする。一つの態様において、多重特異性抗体は、２つの異なる標的（例えば、二重特異性抗体）に結合する。このような多特異性抗体としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない：重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体であって、ＶＨ／ＶＬユニットが多エピトープ特異性を有するもの；各ＶＨ／ＶＬユニットが異なるエピトープに結合する２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体；各単一可変ドメインが異なるエピトープに結合している、２つ以上の単一可変ドメインを有する抗体；完全長抗体；Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ジアボディ、二重特異性ジアボディ及びトライアボディなどの抗体断片；共有結合又は非共有結合で連結された抗体断片。「ポリエピトープ特異性」とは、同じターゲット又は異なるターゲット上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。「単特異性」とは、１つの抗原のみを結合する能力を指す。一つの態様において、単特異性ビエピトープ抗体は、同じ標的／抗原上の２つの異なるエピトープを結合する。一つの態様において、単特異性ポリエピトープ抗体は、同じ標的／抗原の複数の異なるエピトープに結合する。ある態様において、多重特異性抗体は、５μΜ～０．００１ ｐＭ、３μΜ～０．００１ ｐＭ、１μΜ～０．００１ ｐＭ、０．５μΜ～０．００１ ｐＭ、又は０．１μΜ～０．００１ ｐＭの親和性を有する各エピトープに結合するＩｇＧ抗体である。
「ネイキッド抗体」とは、異種部位（例えば、細胞毒性部位）又は放射性標識に結合していない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬製剤中に存在していてもよい。
「ネイティブ抗体」とは、様々な構造を持つネイティブに存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５万ダルトンのヘテロテトラメリック糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端までの各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、これに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端までの各軽鎖は、可変軽領域（ＶＬ）を有し、可変軽領域又は軽鎖可変領域とも呼ばれ、その後に一定軽領域（ＣＬ）が続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）、λ（ラムダ）と呼ばれる２種類のいずれかに割り当てられてもよい。
本明細書で使用されるように、用語「免疫アドヘキシン」は、異種タンパク質（「アドヘキシン」）の結合特異性と免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能とを組み合わせた分子を指す。構造的には、免疫アドヒシンは、抗体の抗原認識結合部位以外のアミノ酸配列である所望の結合特異性を有するアミノ酸配列（すなわち、抗体の定常領域と比較して「異種」である）と、免疫グロブリン定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧのＣＨ２及び／又はＣＨ３配列）とが融合して含む。アドヘシン及び免疫グロブリン定常ドメインは、必要に応じてアミノ酸スペーサーによって分離され得る。例示的なアドヒーシン配列は、受容体の一部又は関心のあるタンパク質に結合するリガンドを構成する連続したアミノ酸配列を含む。アドヒーシン配列はまた、関心のあるタンパク質を結合する配列であってもよいが、受容体又はリガンド配列ではない配列（例えば、ペプチボディ中のアドヒーシン配列）である。このようなポリペプチド配列は、様々な方法で選択又は同定することができ、ファージディスプレイ技術やハイスループットソーティング法などが含まれる。免疫アドヘキシン中の免疫グロブリン定常ドメイン配列は、任意のｆ免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、又はＩｇＭから得ることができる。
「化学療法剤」には、癌の治療に有用な化合物が含まれている。化学療法剤の例としては、以下及びその製薬学的に許容される塩、酸及び前記のいずれかの誘導体が挙げられる：エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、エピガロカテキンガレート、サリノスポラミドＡ、カーフィルゾミブ、１７－ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラジコール、乳酸脱水素酵素Ａ（ＬＤＨ－Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）アストラゼネカ社）、スニチブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ファイザー／スーゲン）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、ノバルティス）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、ノバルティス）、フィナサン酸塩（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、ノバルティス）。オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、サノフィ）、５－ＦＵ（５－フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、ワイエス）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、グラクソ・スミス・クライン）。ロナファミブ（ＳＣＨ ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤 ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；ベンゾドパ、カルボクロン、メトレドパ、ウレドパなどのアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスファミド、トリエチレンチオホスファミド、トリメチルメラミンなどのエチレンイミン類及びメチルメラミン類；アセトジェニン類（特にブラータシン及びブラータシノン）；カンプトテシン類（トポテカン及びイリノテカン；ブリオスタチン；カリースタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシンの合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾン及びプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；フィナステリド及びデュタステリドを含む５α－リダクターゼ）；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレタロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン。クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレスタミン、メクロレスタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード。カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンのようなニトロソウレア；エニジン系抗生物質のような抗生物質（例えば、Ｅ．ｇ．，カリチェマイシン、特にカリチェマイシンγ１Ｉ及びカリチェマイシンω１Ｉ（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９４ ３３：１８３－１８６）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスパーマイシン。同様に、ネオカルジノスタチン発色団及び関連する発色団エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン。カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、デオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン。オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピュロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトゾシン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの抗メタボローム剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ。アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフリジン、エノシタビン、フロクスリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、ドロモスタノロンプロピオン酸塩、エピチオスタノール、メピチオステイン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロステインなどの抗アドレナール。フロリン酸などの葉酸補充剤；エースグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジキオン；エルフォミチン；酢酸エリプティニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンティナン；ロニダイニン；メイタンシンやアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳナチュラルプロダクツ、ユージーン、オレゴン）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジキオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）。ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；マイトブロニトール；マイトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タクソール（パクリタキセル；ブリストル・マイヤーズ・スクイブ・オンコロジー、プリンストン、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォフリー）、パクリタキセルのアルブミン設計ナノ粒子製剤（アメリカン・ファーマシューティカル・パートナーズ、シャウンバーグ、イリノイ州）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（パクリタキセル；ブリストル・マイヤーズ・スクイブ・オンコロジー、プリンストン、Ｎ．Ｊ．）。）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル、ドキセタキセル、サノフィ－アベンティス）、クロランブシル、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチンやカルボプラチンなどのプラチナアナログ、ビンブラスチン、エトポシド（ＶＰ－１６）、イフォスファミド、マイトキサントロン、ビンクリスチン；ナベルバイン（ビノレルビン）；ノバンドロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ゼローダ）；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド類。
化学療法剤はまた、以下を含む：（ｉ）抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）など、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）を含む、タモキシフェン（クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロキシフェン、ヨードキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びファレストン（クエン酸トレミフィ ン）；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メグストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エクセメスタン。ファイザー）、フォルメスタニー、ファドロゾール、リビソール（登録商標）（ボロゾール）、フェマーラ（登録商標）（レトロゾール；ノバルティス）、及びアリミデックス（登録商標）（アナストロゾール；アストラゼネカ）；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロライド及びゴセレリンのような抗アンドロゲン剤；ブセレリン、トリプテレリン、メドロキシプロゲステロン酢酸塩、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、全トランスレチオン酸、フェンレチニド及びトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤；（ｖ）リピドキナーゼ阻害剤；ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常細胞増殖に関与するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－α、Ｒａｌｆ及びＨ－Ｒａｓ；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））、ＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えばアロベクチン（登録商標）、ロイベクチン（登録商標）、ＶＡＸＩＤ（登録商標）；プロロイキン（登録商標）、ｒＩＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；及び（ｉｘ）前記のいずれかの製薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
化学療法剤には、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）などの抗体も含み、パニツムズマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、及び抗体医薬複合体であるゲムツズマブオゾガミシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）も含む。本発明の化合物と組み合わせた薬剤としての治療可能性を有する追加のヒト化モノクローナル抗体には、以下のものが含まれる：アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピヌズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セロリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ。エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マッツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ。ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクセリズマブ、ペクセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レスリビズマブ、ロベリズマブ、ルピズマブ、シブロツズマブ シプリズマブ、ソントゥズマブ、タカタツズマブテトラキセタン、タドキシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブセルモレウキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、及びインターロイキン－１２ ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子組換えされた、ヒト配列のみの完全長ＩｇＧ１λ抗体である抗インターロイキン－１２（ＡＢＴ－８７４／Ｊ６９５、ワイスリサーチ、アボットラボラトリーズ）。
化学療法剤はまた、「ＥＧＦＲ阻害剤」を含み、これは、ＥＧＦＲに結合するか、又はそうでなければＥＧＦＲと直接相互作用し、ＥＧＦＲのシグナル伝達活性を阻害又は低減する化合物を指し、「ＥＧＦＲ拮抗剤」と代替的に呼ばれる。このような薬剤の例としては、ＥＧＦＲに結合する抗体や低分子が挙げられる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例としては、以下のものが挙げられる：ＭＡｂ ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０６）、ＭＡｂ ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）及びその変種、例えばキメラ化された２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ）及びリシェイプされたヒト２２５（Ｈ２２５）（参照、ＷＯ ９６／４０２１０、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）；ＩＭＣ－１１Ｆ８、完全ヒト型ＥＧＦＲ標的抗体（イムクローン）；ＩＩ型変異型ＥＧＦＲを結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０号）；米国特許第５，８９１，９９６号に記載されているようなＥＧＦＲを結合するヒト化抗体及びキメラ抗体；及びＡＢＸ－ＥＧＦ又はパニツムマブ（ＷＯ９８／５０４３３、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照されたい）などのＥＧＦＲを結合するヒト抗体；ＥＭＤ ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ３２Ａ：６３６－６４０（１９９６）を参照されたい）；ＥＭＤ７２００（マツズマブ）（ＥＧＦとＴＧＦ－αの両方のＥＧＦＲ結合を競合させるＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３およびＥ７．６．３として知られ、米国特許第６，２３５，８８３号に記載の完全ヒト抗体；ＭＤＸ－４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；及びｍＡｂ８０６又はヒト化ｍＡｂ８０６（Ｊｏｈｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５－３０３８４（２００４））．抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞毒性剤に抱合され、それにより免疫抱合体を生成し得る（例えば、欧州特許第６５９，４３９号Ａ２，Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照されたい）。ＥＧＦＲ拮抗剤としては、米国特許第５，６１６，５８２号、同第５，４５７，１０５号、同第５，４７５，００１号、同第５，６５４，３０７号、同第５，６７９，６８３号、同第６，０８４，０９５号、同第６，２６５，４１０号、同第６，４５５，５３４号、同第６，５２１，６２０号、同第６，５９６，７２６号、同第６，７１３，４８４号、同第５，７７０，５９９号、同第６，１４０，３３２号、同第５，８６６，５７２号、同第６，３９９，６０２号、同第６，３４４，４５９号、同第６，６０２，８６３号、同第６，３９１，８７４号、同第６，３４４，４５５号、同第５，７６０，０４１号、同第６，００２，００８号、及び同第５，７４７，４９８号、ならびに以下のＰＣＴ公報：ＷＯ９８／１４４５１、ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６、及びＷＯ９９／２４０３７に記載の化合物等の小分子を含む。特定の小分子ＥＧＦＲ拮抗剤としては、ＯＳＩ－７７４（ＣＰ－３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標） Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ １８３８０５（ＣＩ １０３３、２－プロペンアミド、Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［３－（４－モルホリニル）プロポキシ］－６－キナゾリニル］－、ジヒドロクロリド、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））４－（３’－クロロ－４’－フルオロアニリノ）－７－メトキシ－６－（３－モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６－アミノ－４－（３－メチルフェニル－アミノ）－キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ－１３８２（Ｎ８－（３－クロロ－４－フルオロ－フェニル）－Ｎ２－（１－メチル－ピペリジン－４－イル）－ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－２，８－ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ－１６６（（Ｒ）－４－［４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール）；（Ｒ）－６－（４－ヒドロキシフェニル）－４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン）；ＣＬ－３８７７８５（Ｎ－［４－［（３－ブロモフェニル）アミノ］－６－キナゾリニル］－２－ブチンアミド）；ＥＫＢ－５６９（Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－３－シアノ－７－エトキシ－６－キナゾリニル］－４－（ジメチルアミノ）－２－ブチンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ ５２７１、Ｐｆｉｚｅｒ）；及び二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６又はＮ－［３－クロロ－４－［（３－フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］－６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］－２－フラニル］－４－キナゾリンアミン）が挙げられる。
化学療法剤としては、「チロシンキナーゼ阻害剤」、例えば、前段落に記載のＥＧＦＲ標的薬物；小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５；ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択的阻害剤であるＣＰ－７２４，７１４（Ｐｆｉｚｅｒ及びＯＳＩ）；二重ＨＥＲ阻害剤、例えば、ＥＧＦＲに優先的に結合するが、ＨＥＲ２及びＥＧＦＲ過剰発現細胞の両方を阻害するＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ－ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）；経口ＨＥＲ２及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤；ＰＫＩ－１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；ｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤、例えば、カネルチニブ（ＣＩ－１０３３、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；Ｒａｆ－１阻害剤、例えば、Ｒａｆ－１シグナル伝達を阻害するＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス薬剤ＩＳＩＳ－５１３２；非ＨＥＲ標的ＴＫ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）；多標的チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）；ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧから入手可能）；ＭＡＰＫ細胞外制御キナーゼＩ阻害剤ＣＩ－１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；キナゾリン、例えば、ＰＤ １５３０３５，４－（３－クロロアニリノ）キナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ピロロピリミジン、例えば、ＣＧＰ ５９３２６、ＣＧＰ ６０２６１、及びＣＧＰ ６２７０６；ピラゾロピリミジン、４－（フェニルアミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５－ビス（４－フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチルホスチン；ＰＤ－０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ－Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲコード核酸に結合するもの）、キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号）；トリホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎ）（米国特許第５，８０４，３９６号）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤、例えば、ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ ３５２１、Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＩＮＣ－１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）；又は以下の特許公報：米国特許第５，８０４，３９６号、ＷＯ１９９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）、ＷＯ１９９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）、ＷＯ１９９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）、ＷＯ１９９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）、ＷＯ１９９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）、ＷＯ１９９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）、及びＷＯ１９９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）のいずれかに記載されるものが挙げられる。
化学療法剤としては、デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＢＣＧ生、ベバシズマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、レナリドミド、レバミゾール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ－２６、６－ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート、及びゾレドロン酸、ならびにそれらの製薬学的に許容される塩も挙げられる。
化学療法剤としては、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバリン酸チクソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン－１７－ブチレート、ヒドロコルチゾン－１７－バレレート、プロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン－１７－ブチレート、クロベタゾン－１７－プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバリン酸フルオコルトロン及び酢酸フルプレドニデン；免疫選択的抗炎症ペプチド（ＩｍＳＡＩＤｓ）、例えばフェニルアラニン－グルタミン－グリシン（ＦＥＧ）及びそのＤ体形態（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）；抗リウマチ薬、例えばアザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ－ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノシクリン、スルファサラジン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）遮断剤、例えばエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セトリズマブペゴール（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標））、インターロイキン１（ＩＬ－１）遮断剤、例えばアナキンラ（ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標））、Ｔ細胞共刺激遮断剤、例えばアバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標））、インターロイキン６（ＩＬ－６）遮断剤、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））；インターロイキン１３（ＩＬ－１３）遮断剤、例えばレブリキズマブ；インターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断剤、例えばロンタリズマブ；ベータ７インテグリン遮断剤、例えばｒｈｕＭＡｂ Ｂｅｔａ７；ＩｇＥ経路遮断剤、例えば抗Ｍ１プライム；分泌ホモ三量体ＬＴａ３及び膜結合ヘテロ三量体ＬＴａ１／β２遮断剤、例えば抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）；放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；種々の調査剤、例えばチオプラチン、ＰＳ－３４１、フェニルブチレート、ＥＴ－１８－ＯＣＨ３、及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ－７３９７４９、Ｌ－７４４８３２）；ポリフェノール、例えばケルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸及びその誘導体；オートファジー阻害剤、例えばクロロキン；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルチシン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９－アミノカンプトテシン）；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えばクロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；ならびに上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）；ワクチン、例えばＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン；ペリフォシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ－７７９；チピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピクサントロン；ロナファルニブ（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに前記のうちのいずれかの製薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体；ならびに前記のうち２つ以上の組み合わせが挙げられる。
また、化学療法剤には、鎮痛作用、解熱作用、抗炎症作用を有する非ステロイド性抗炎症剤も含まれる。ＮＳＡＩＤｓには、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤を含む。非ステロイド性抗炎症薬の具体例としては、アスピリン、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、ナプロキセンなどのプロピオン酸誘導体、インドメタシン、スルリンダック、エトドラック、ジクロフェナクなどの酢酸誘導体、ピロキシカム、メロキシカムなどのエノリック酸誘導体。テノキシカム、ドロキシカム、ローノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸などのフェナム酸誘導体、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブなどのＣＯＸ－２阻害剤が挙げられる。非ステロイド性抗炎症薬は、関節リウマチ、変形性関節炎、炎症性関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性痛風、月経困難症、転移性骨痛、頭痛や片頭痛、術後の痛み、炎症や組織損傷による軽度から中等度の痛み、発熱、イレウス、腎疝痛などの症状の緩和に適応となる。
本明細書で使用される「細胞毒性剤」という用語は、細胞の機能を阻害又は防止し、及び／又は細胞の死滅又は破壊を引き起こす物質を意味する。細胞毒性剤には、以下が含まれるが、これらに限定されるものではない：放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビン、メルファラン、ミトマイシンＣ メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の介在剤）；成長阻害剤；核分解酵素などの酵素及びその断片。抗生物質；その断片及び／又は変種を含む、細菌、真菌、植物又は動物由来の低分子毒素又は酵素的に活性な毒素のような毒素；及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤。
「疾患」とは、問題の疾患に哺乳動物を素因付けるそれらの病理学的条件を含むが、これらに限定されない慢性及び急性の疾患又は疾患を含むが、治療から利益を得るであろうあらゆる状態である。ある態様において、疾患は、癌、例えば、結腸直腸癌である。
「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」という用語は、ある程度の細胞の異常増殖を伴う疾患を指す。ある態様では、細胞増殖疾患は癌である。ある態様において、細胞増殖性疾患は、腫瘍である。
本明細書で使用される「腫瘍」とは、悪性であるか良性であるかを問わず、すべての新芽細胞の増殖及び増殖、ならびにすべての前癌性及び癌性の細胞及び組織を指す。本明細書で言及される「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語は、相互に排他的ではない。
「癌」及び「癌性」という用語は、制御されていない細胞増殖／増殖によって典型的に特徴付けられる哺乳類の生理的状態を指すか、又は説明する。癌の態様としては、固形腫瘍癌と非固形腫瘍癌がある。固形癌腫瘍には、結腸直腸癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、膵臓癌、又は前立腺癌、又はそれらの転移形態が含まれるが、これらに限定されない。癌はＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌である可能性がある。
ある態様において、癌は結腸直腸癌である。本明細書で使用されるように、「結腸直腸癌」、「ＣＲＣ」、「大腸癌」、又は「腸癌」という用語は、大腸、例えば結腸又は直腸から発生する癌を指す。いくつかの態様において、ＣＲＣは、左側の腫瘍、すなわち、遠位結腸（例えば、横結腸の遠位３分の１、脾臓屈曲部、下行結腸、シグモイド結腸、又は直腸）に発生する腫瘍である。他の態様において、ＣＲＣは、右側の腫瘍、すなわち、近位結腸（例えば、横結腸の近位３分の２、上行結腸、及び盲腸）に発生する腫瘍である。右側部腫瘍はＯＳの低下と関連している可能性がある。ある態様において、ＣＲＣは転移性である。いくつかの態様において、ＣＲＣは、「マイクロサテライト安定」（「ＭＳＳ」）又は「低頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｌ」）のマイクロサテライト不安定性ステータスを有している。他の態様において、ＣＲＣは、「高頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｈ」）のマイクロサテライト不安定性ステータスを有している。ある態様において、このＣＲＣはＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性（ＬＹ６Ｇ６Ｄ＋）のＣＲＣである。
本明細書で使用されるように、「マイクロサテライト不安定性状態」又は「ＭＳＩ状態」は、患者の腫瘍組織におけるマイクロサテライトの安定性の特徴付けを意味する。患者の腫瘍組織は、「高頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｈ」）、「低頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｌ」）、又は「マイクロサテライト安定性」（「ＭＳＳ」）として特徴付けられ得る。ＭＳＩ状態は、例えば、ＭＳＩ分析システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のようなＰＣＲベースのアプローチを使用して評価することができ、これは、ＭＳＩを検出するための５つの擬単形性モノヌクレオチドリピート（ＢＡＴ－２５、ＢＡＴ－２６、ＮＲ－２１、ＮＲ－２４、及びＭＯＮＯ－２７）、及び正常サンプルと腫瘍サンプル間の同一性を確認するための２つのペンタヌクレオチド座（ＰｅｎｔａＣ及びＰｅｎｄａＤ）を含む。各マイクロサテライト座の塩基の大きさは、例えば、ゲル電気泳動によって決定することができ、２つ以上のモノヌクレオチド座が生殖細胞ＤＮＡと比較して長さが異なる場合、腫瘍はＭＳＩ－Ｈと指定されることがある。例えば、Ｌｅ ｅｔ ａｌ．ＮＥＪＭ ３７２：２５０９－２５２０，２０１５を参照されたい。
ある態様において、ＣＲＣの病期は、米国癌合同委員会（ＡＪＣＣ）／国際癌対策連合（ＵＩＣＣ）の悪性腫瘍のＴＮＭ分類システムに従って評価される。ＴＮＭシステムでは、癌はＴ（腫瘍の大きさ）、Ｎ（触診可能な結節）、及び／又はＭ（転移）の文字で指定される。Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４は、原発病変の大きさの増大を記述する。Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４は、さらに、癌の状態、例えば局所進行についてのさらなる情報を提供するために、ａ又はｂ（例えば、Ｔ４ａ又はＴ４ｂ）に分類されてもよい。Ｎ０、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３は結節浸潤が進行していることを示す；Ｍ０及びＭ１は遠隔転移の有無を反映している。いくつかの態様において、個体のＣＲＣは、ステージＩ、ステージＩＩ、又はステージＩＩＩのＣＲＣ、例えば、ステージＩ、ステージＩＩ、又はステージＩＩＩの大腸癌である。ある態様において、個体はＩＶ期のＣＲＣを有していない。ある態様において、個体は転移性ＣＲＣを有していない。ある態様において、基準集団における個体のＣＲＣは、Ｉ期、ＩＩ期、ＩＩＩ期、又はＩＶ期のＣＲＣ、例えば、Ｉ期、ＩＩ期、ＩＩＩ期、又はＩＶ期の大腸癌である。
ある態様において、癌は乳癌である。乳癌のさらなる態様には、ホルモン受容体陽性（ＨＲ＋）乳癌、例えば、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）乳癌、プロゲステロン受容体陽性（ＰＲ＋）乳癌、又はＥＲ＋／ＰＲ＋乳癌を含む。乳癌の他の態様には、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）の乳癌を含む。また乳癌のさらなる態様には、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む。ある態様において、乳癌は初期の乳癌である。ある態様において、癌は肺癌である。肺癌のさらなる態様には、表皮成長因子受容体陽性（ＥＧＦＲ＋）肺癌を含む。肺癌の他の態様には、表皮成長因子受容体陰性（ＥＧＦＲ－）肺癌を含む。肺癌の他の態様には、非小細胞肺癌、例えば扁平上皮肺癌又は非扁平上皮肺癌を含む。肺癌の他の態様には、小細胞肺癌を含む。ある態様において、癌は頭頸部癌である。頭頸部癌のさらなる態様には、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む。ある態様において、癌は膀胱癌である。膀胱癌のさらなる態様には、尿路上皮性膀胱癌（ＵＢＣ）、筋浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）、又は非筋浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）を含む。ある態様において、癌は腎臓癌である。腎臓癌のさらなる態様には、腎細胞癌を含む。ある態様において、癌は肝臓癌である。肝臓癌のさらなる態様には、肝細胞癌を含む。ある態様において、癌は前立腺癌である。前立腺癌のさらなる態様には、去勢抵抗性前立腺癌を含む。ある態様において、癌は転移性固形癌である。ある態様において、転移性固形癌とは、転移性のメラノーマ、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌などである。ある態様において、癌は非固形癌である。非固形癌には、血液学的癌、例えばＢ細胞リンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。Ｂ細胞リンパ腫のさらなる態様には、例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は菌状息肉腫（ＭＦ）を含む。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、以下のものが挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化。
「補体依存性細胞毒性」又は「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的細胞を溶解することを指す。古典的な補体経路の活性化は、補体系の第１構成要素（Ｃ１ｑ）が、（適切なサブクラスの）抗体に結合することによって開始される。補体活性化を評価するには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されているようなアッセイを行うことができる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」又は「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、マクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を含む標的細胞に特異的に結合し、その後、細胞傷害剤で標的細胞を殺すことを可能にする細胞傷害性の一形態を指す。抗体は細胞傷害性細胞を「武装」させ、そのような殺傷には絶対に必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２，１９９１の４６４ページの表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号又は第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施することができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９５：６５２－６５６，１９９８に開示されているインビボにての動物モデルで評価することができる。
本明細書で使用される「複合体」又は「複 合 体」とは、ペプチド結合ではない結合及び／又は力（例えば、ファンデルワールス、疎水性、親水性の力）を介して互いに相互作用する２つ以上の分子の結合を指す。ある態様において、複合体はヘテロ多量体である。本明細書で使用される「タンパク質複合体」又は「ポリペプチド複合体」という用語は、タンパク質複合体中のタンパク質に共役した非タンパク質実体を有する複合体（例えば、毒素又は検出剤のような化学分子を含むが、これらに限定されない）を含むことが理解されるべきである。
本明細書で使用されるように、疾患又は疾患の「進行を遅らせる」とは、疾患又は疾患（例えば、細胞増殖性疾患、例えば、癌）の発生を延期する、妨げる、遅らせる、遅らせる、安定化させる、及び／又は延期することを指す。この遅延は、病歴及び／又は治療を受けている個人に応じて、様々な長さの時間を持つことができる。当技術に熟練した者には明らかなように、十分な遅延又は有意な遅延は、実質的には、個人が病気を発症しないという予防を包含することができる。例えば、転移の発生などの末期癌では、転移の発生が遅れることがある。
化合物の「有効量」は、例えば、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又はその組成物（例えば、医薬組成物）の「有効量」は、特定の疾患（例えば、細胞増殖性疾患、例えば、癌）の測定可能な改善又は予防のような所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な最小量である。本明細書における有効量は、患者の病状、年齢、性別、体重などの要因、及び個人における所望の応答を引き出す抗体の能力に応じて変化し得る。有効量はまた、治療の毒性又は有害な効果が治療上有益な効果よりも重要である量である。予防的使用のための有益な又は所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的及び／又は行動学的症状、その合併症、及び疾患の発症中に現れる中間的な病理学的表現型を含む、リスクの除去又は軽減、重症度の軽減、又は疾患の発症の遅延などの結果が含まれる。治療的使用のために、有益な又は所望の結果は、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に苦しんでいる人の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の減少、標的化のような他の薬剤の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／又は生存期間の延長のような臨床的結果を含む。癌又は腫瘍の場合、有効量は、癌細胞の数を減少させる効果；腫瘍の大きさを減少させる効果；癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害する（すなわち、ある程度まで遅くする、又は好ましくは停止させる）効果；腫瘍の転移を阻害する（すなわち、ある程度まで遅くする、又は好ましくは停止させる）効果；腫瘍の成長をある程度まで阻害する（すなわち、ある程度まで遅くする、又は好ましくは停止させる）効果；及び／又は疾患に関連する症状のうちの１つ以上をある程度まで緩和する効果を有する。有効量は、１回の投与でも、複数回の投与でもよい。本発明の目的のために、薬剤、化合物、又は医薬組成物の有効量とは、直接的又は間接的に予防的又は治療的治療を達成するのに十分な量である。臨床で理解されるように、薬物、化合物、又は医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、又は医薬組成物と組み合わせて達成されてもよいし、達成されなくてもよい。このように、「有効量」は、１つ又は複数の治療剤を投与する文脈で考えられ、１つ又は複数の他の薬剤と組み合わせて、望ましい結果が得られるか、又は達成される場合には、単一の薬剤が有効量で投与されると考えられ得る。
エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。いくつかの態様において、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、ヒドロキシルラジカルフットプリントによって決定される。いくつかの態様において、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、結晶学的に決定される。
本明細書で使用される場合、「成長阻害剤」とは、インビトロ又はインビボで細胞の成長を阻害する化合物又は組成物を指す。ある態様において、成長阻害剤は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を阻害又は減少させる成長阻害抗体である。別の態様において、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を有意に減少させるものであってもよい。成長阻害剤の態様としては、細胞周期の進行を（Ｓ相以外の場所で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止やＭ相停止を誘導する薬剤などが挙げられる。古典的なＭ相遮断薬としては、ビンカス（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害薬（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシン）が挙げられる。Ｇ１を停止させる薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレスタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、及びアラＣなどのＤＮＡアルキル化剤である。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ “Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ” ｂｙ Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば、１３頁に記載されている。タキサン類（パクリタキセルとドセタキセル）は、いずれもイチイの木に由来する抗癌剤である。ヨーロッパのイチイ由来のドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標），Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標），Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルとドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、脱重合を防ぐことで微小管を安定化させ、その結果、細胞の有糸分裂を阻害する。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞、及びそのような細胞の子孫を含む細胞を指す。宿主細胞には「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらの細胞には、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫が、継代数に関係なく含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではなくても、突然変異を含んでいる可能性がある。元々形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する変異体の子孫は、本明細書に含まれる。
本明細書で使用されるように、「ベクター」という用語は、それが連結された別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。用語には、自己複製核酸構造体としてのベクター、及びそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある種のベクターは、それらが操作的に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
「免疫接合体」とは、細胞疾患剤を含むがこれらに限定されない、１つ以上の異種分子に接合された抗体のことである。
「免疫調節剤」という用語は、免疫系の応答又は免疫系の機能を修飾する分子のクラスを指す。免疫調節剤には、ＰＤ－１軸結合拮抗剤、Ｔ細胞依存性二重特異性抗体、及びｍＲＮＡベースの個別化癌ワクチン、ならびにサリドマイド（α－Ｎ－フタルイミド－グルタルイミド）及びその類似体、ＯＴＥＺＬＡ（登録商標）（アプレミラスト）、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）（レナリドマイド）及びＡＣＴＩ－ＭＩＤ（商標）（ポマリドマイド）、ならびにそれらの製薬学的に許容される塩又は酸が含まれるが、これらに限定されるものではない。
「被験者」や「個体」とは、哺乳類のことである。哺乳類としては、家畜化動物（例えば、牛、羊、猫、犬、馬など）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。ある態様において、被験者や個体はヒトである。
「単離された」タンパク質又はペプチドは、その自然環境の構成要素から分離されたものである。いくつかの態様において、タンパク質又はペプチドは、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点集束（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって決定されるように、９５％以上又は９９％以上の純度に精製される。
「単離された」核酸とは、核酸分子が自然環境の構成要素から分離されたものを指す。単離核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が、染色体外に存在するか、又は本来の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子が含まれる。
用語「ＰＤ－１軸結合拮抗剤」とは、ＰＤ－１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞の機能不全を除去するように、ＰＤ－１軸結合パートナーとその結合パートナーのいずれか１つ以上との相互作用を阻害する分子を意味し、その結果、Ｔ細胞の機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺傷）を回復又は増強することになる。本明細書で使用されるように、ＰＤ－１軸結合拮抗剤は、ＰＤ－１結合拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤、及びＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤を含む。
用語「ＰＤ－１結合拮抗剤」とは、ＰＤ－１と、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２などの１つ以上の結合パートナーとの相互作用の結果として生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、侵害、又は妨害する分子を指す。いくつかの態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１の１つ以上の結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合拮抗剤には、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、免疫アドヘキシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、侵害、又は妨害する他の分子が含まれる。一つの態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、機能不全Ｔ細胞をより機能不全に陥らせないように（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強するように）、ＰＤ－１を介してシグナル伝達を媒介するＴリンパ球上に発現された細胞表面タンパク質によって媒介される、又はそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－１抗体である。特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＡＭＰ－２２４である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＭＥＤ１－０６８０である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤はＰＤＲ００１である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤はＲＥＧＮ２８１０である。別の特定の態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤はＢＧＢ－１０８である。
「ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤」という用語は、ＰＤ－Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、又は妨害する分子を指す。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１の結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１及び／又はＢ７－１への結合を阻害する。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、免疫アデシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１、Ｂ７－１などの１つ以上の結合パートナーとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少、遮断、阻害、侵害、又は妨害する他の分子を含む。一つの態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、機能不全Ｔ細胞をより機能不全に陥らないように（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強するように）するために、ＰＤ－Ｌ１を介してシグナル伝達を媒介するＴリンパ球上に発現された細胞表面タンパク質によって媒介される、又はそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ、ＷＨＯ医薬品情報（医薬品国際固有名称）とともにＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）として販売、おすすめのＩＮＮ：Ｌｉｓｔ ７４，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．３，２０１５（ｐａｇｅ ３８７を参照されたい））である。特定の態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＤＸ－１１０５である。別の特定の態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＳＢ００１５７１８Ｃである。依然として別の特定の態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である。
用語「ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤」とは、ＰＤ－Ｌ２とＰＤ－１などの１つ以上の結合パートナーのいずれかとの相互作用の結果として生じるシグナル伝達を減少させたり、遮断したり、阻害したり、妨害したりする分子を指す。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２の１つ以上の結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を阻害する。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ２拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合断片、免疫アデシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ２とＰＤ－１などの１つ以上の結合パートナーのいずれかとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、侵害する、又は妨害する他の分子を含む。一つの態様において、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、機能不全Ｔ細胞をより機能不全に陥らせないように（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強するように）、ＰＤ－Ｌ２を介してシグナル伝達を媒介するＴリンパ球上に発現された細胞表面タンパク質によって媒介される、又はそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、免疫アドヘキシンである。
本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、別段の記載がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）のような哺乳類を含む、任意の脊椎動物源からの任意のネイティブタンパク質を指す。この用語には、「完全長」、未処理のタンパク質、及び細胞内での処理から生じるタンパク質のあらゆる形態が含む。この用語はまた、タンパク質の自然に発生する変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性 」は、最大パーセントの配列同一性を達成するために配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後、保存的置換を配列同一性の一部として考慮しないで、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントのアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野の熟練の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公知のコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。しかし、本明細書の目的のために、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９にユーザードキュメントと共に提出され、ここでは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７に基づいて登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、カリフォルニア州南サンフランシスコのＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から公開されていますが、ソースコードからコンパイルすることもできる。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステム上で使用するためにコンパイルされなければならない。すべてのシーケンス比較パラメータはＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変化しない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列の比較に使用される状況では、特定のアミノ酸配列Ｂ（又は、特定のアミノ酸として表現することもできます）に対する、特定のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性 所与のアミノ酸配列Ｂ）と、それとともに、又はそれに対して特定の％アミノ酸配列同一性を有する又は含む配列Ａは、以下のように計算される：
１００掛ける分数Ｘ／Ｙ、
ここで、Ｘは、Ａ及びＢの配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一の一致としてスコアされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡからＢの％アミノ酸配列同一性は、ＢからＡの％アミノ酸配列同一性と等しくないことが理解されるであろう。特に明記されない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されているように得られる。
用語「医薬品製剤」とは、そこに含まれる有効成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、かつ、製剤が投与されるであろう被験者に許容できない毒性を有する追加成分を含まない製剤をいう。
「製薬学的に許容される担体」とは、有効成分以外の医薬製剤中の成分であって、被験者に無毒であるものを指す。製薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
「放射線療法」とは、細胞の正常な機能を制限したり、細胞を完全に破壊したりする能力を制限するために、細胞に十分な損傷を誘発するために、指向性ガンマ線又はベータ線を使用すること指す。治療の投与量及び期間を決定するために、当技術分野で知られている多くの方法が存在することが理解されるであろう。代表的な治療法は１回投与で、代表的な投与量は１日１０～２００単位（グレイズ）である。
本明細書で使用されるように、「治療」（及び「治療」又は「治療」のようなその文法的なバリエーション）は、治療される個体の自然な経過を変化させる試みの臨床的介入を意味し、予防のために、又は臨床病理学の経過中に実施することができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の防止、症状の軽減、疾患の直接的又は間接的な病理学的影響の軽減、転移の防止、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの態様において、本発明の抗体（例えば、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）は、疾患の発生を遅らせるため、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
「減らす」又は「抑制する」ということは、全体的な減少、例えば２０％以上、５０％以上、又は７５％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の減少を引き起こす能力を指す。特定の態様において、還元又は阻害は、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、そのようなエフェクター機能は、具体的には、相補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を含む。
本発明によれば、「ワクチン」という用語は、投与により免疫応答、特に細胞性免疫応答を誘導し、病原体又は癌細胞のような疾患細胞を認識して攻撃する医薬製剤（医薬組成物）又は製品に関する。ワクチンは、病気の予防や治療のために使用されることがある。ワクチンは癌ワクチンかもしらない。本明細書で使用される「癌ワクチン」は、癌に対する被験者の免疫応答を刺激する組成物である。癌ワクチンは、典型的には、癌に関連する物質又は細胞（抗原）の供給源から構成されており、それは、被験者に対して自己由来（自己由来）又は他者由来（他者由来）であり、抗原に対する免疫応答をさらに刺激し、増強するための他の成分（例えば、アジュバント）とともに、被験者に投与される。癌ワクチンは、対象の免疫系を刺激して、１つ又は複数の特定の抗原に対する抗体を産生し、及び／又はそれらの抗原を有する癌細胞を攻撃するためのキラーＴ細胞を産生する結果となり得る。
用語「個別化癌ワクチン」（「ＰＣＶ」）とは、個々の癌患者のニーズや特別な状況に適応した癌ワクチンを指す。いくつかの態様において、例えば、ＰＣＴ Ｐｕｂ．Ｎｏｓ．ＷＯ２０１４／０８２７２９ ａｎｄ ＷＯ２０１２／１５９７５４に記載されているように、ＰＣＶは、患者の癌細胞に存在する１つ以上の癌特異的な体細胞変異に対する免疫応答を刺激する。癌特異的体細胞変異は、患者の任意の癌細胞、例えば、腫瘍細胞、例えば、循環腫瘍細胞に存在してもよい。いくつかの態様において、次世代シークエンシングを用いて癌特異的な体細胞変異が発見される。いくつかの態様において、癌特異的体細胞変異を構成するポリペプチド又は癌特異的体細胞変異を構成するポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＲＮＡ、例えば、インビトロ転写ＲＮＡ）を患者に投与して、患者の免疫応答を刺激する。
本明細書で使用されるように、「投与」とは、化合物（例えば、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）の投与量を被験者に与える方法を指す。いくつかの態様において、本明細書の方法で利用される組成物は、静脈内投与される。本明細書に記載の方法で利用される組成物は、例えば、筋肉内、静脈内、皮内、経皮、動脈内、腹腔内、腹腔内、頭蓋内、関節内、胸腔内、気管内、鼻腔内、静脈内、静脈内、膣内、直腸内、局所的に投与することができる。腫瘍内、腹膜内、腹膜下、皮下、結膜下、静脈内、粘膜内、腹腔内、眼内、口腔内、局所、吸入、注射、注入、連続注入、標的細胞を直接局所的に灌流浴、カテーテル、搾り取り、クリーム、又は脂質組成物で投与する。投与方法は、様々な要因（例えば、投与される化合物又は組成物、及び治療される状態、疾患又は疾患の重症度）に依存して変化し得る。
ＩＩ．組成物及び方法
一つの態様において、本発明は、部分的には、抗リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１（抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ）抗体に基づく。抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり、ＬＹ６Ｇ６Ｄ又はその断片に加えて、第二の生物学的分子、例えば、Ｔ細胞の表面抗原、例えば、クラスター分化３（ＣＤ３）に結合する。本発明の抗体は、例えば、細胞増殖性疾患、例えば癌、例えば結腸直腸癌（ＣＲＣ）（例えばＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性ＣＲＣ）の治療又は進行を遅らせるため、又はそのような疾患を有する被験者における免疫機能を増強するために有用である。
Ａ．例示的な抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体
一つの態様において、本発明は、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離抗体を提供する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチド（配列番号７５）又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチド（配列番号 ７７）に結合する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄ（例えば、ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄ）のアミノ酸９３～１０４（配列番号８７）、９４～１０３（配列番号７８）、又は９９～１０１（配列番号７９）を含む、又はその中にあるエピトープに結合する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄの残基Ａｒｇ９４、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２、及びＡｓｎ１０３のうちの１つ、２つ、３つ、又はすべての４つの残基に結合する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄの残基Ａｒｇ９４、Ａｓｐ９５、Ｃｙｓ９６、Ｔｙｒ９７、Ｌｅｕ９８、Ｇｌｙ９９、Ａｓｐ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２及びＡｓｎ１０３を含むエピトープに結合する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄの残基Ａｒｇ９４、Ａｓｐ９５、Ｃｙｓ９６、Ｔｙｒ９７、Ｌｅｕ９８、Ｇｌｙ９９、Ａｓｐ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２及びＡｓｎ１０３を含むエピトープに結合する。
ＬＹ６Ｇ６Ｄエピトープは、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体のＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインがエピトープのペプチド断片に結合することによって決定されてもよい。ＬＹ６Ｇ６Ｄエピトープは、アラニン走査突然変異誘発により決定されてもよい。一つの実施形態では、ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインの変異したＬＹ６Ｇ６Ｄに対する結合の２０％、３０％、５０％、８０％以上の減少は、アラニンスキャニング変異誘発アッセイで変異したＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸残基がＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインのエピトープ残基であることを示す。代替的に、ＬＹ６Ｇ６Ｄエピトープを質量分析によって決定してもよい。いくつかの実施形態では、エピトープは、結晶学的手法（例えば、結晶学的手法）によって決定される。
いくつかの実施形態では、ＬＹ６Ｇ６Ｄエピトープは、特定の条件（例えば、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ｔｒｉｓ、１０ｍｇ／ｍｌでｐＨ７．５）で溶解した抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体Ｆａｂを、ＬＹ６Ｇ６Ｄペプチドのモル過剰（例えば、２倍モル過剰）と組み合わせて、座位又は垂下ドロップ蒸気拡散フォーマットで沈殿物のマトリックスを最初にスクリーニングすることによって、結晶学的方法によって決定されてもよい。最適化された結晶は、例えば、７０％ ｖ／ｖメチルペンタンジオールを含むリザーバー溶液と、ｐＨ７．５で０．１ Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液との１：１混合物から成長させてもよい。リザーバーは、凍結防止剤として使用することができる。また、液体窒素中に急激に浸漬することにより、結晶を極低温に移行させてもよい。
結晶の回折データは、ビームラインで収集してもよい。記録された回折は、ＨＫＬ２０００のようなプログラムを使用して統合され、スケーリングされてもよい。
この構造は、例えば、Ｐｈａｓｅｒのようなプログラムを用いて、分子置換（ＭＲ）によって段階的に行われてもよい。例えば、ＭＲ検索モデルは、ＨＧＦＡ／Ｆａｂ複合体の結晶構造（ＰＤＢコード：２Ｒ０Ｌ）に由来するＦａｂサブユニットである。ＬＹ６Ｇ６Ｄペプチドは、Ｆｏ－Ｆｃマップに基づいて構造に組み込まれている。続いて、最尤目標関数、異方性個別Ｂ因子精緻化法、ＴＬＳ精緻化法を用いたプログラムＲＥＦＭＡＣ５及びＰＨＥＮＩＸで構造を精緻化し、収束を達成してもよい。
いくつかの態様において、本発明は、以下から選ばれる少なくとも１種、２種、３種、４種、５種又は６種のＣＤＲを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列又は配列番号９９～１０７のいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５、配列番号１１２、又は配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３又は配列番号：９９～１０７のいずれかのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、本発明は、以下の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの事例では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号１０もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１１もしくはその配列に対する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。特定の事例では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２（１セル及び２セル製造変異体を含む）、又はその誘導体もしくはクローン親族であり得る。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン又は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有する。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン又は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有する。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでいてもよい。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでいてもよい。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４の４つのすべてを含み、及び／又は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有していてもよい。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでいてもよい。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでいてもよい。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４の４つのすべてを含み、及び／又は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有していてもよい。
前記のいずれかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体はヒト化されていてもよい。一つの実施形態では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、前記の実施形態のいずれかと同様にＣＤＲを含み、さらにアクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
本発明のさらなる態様において、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、キメラ抗体又はヒト抗体である。一つの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ジアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の態様において、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトＩｇＧ抗体（例えば、インタクトＩｇＧ１抗体）、又は本明細書で定義されるような他の抗体クラス又はアイソタイプである。
さらなる態様において、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、以下のセクション１～８に記載されているように、単独で又は組み合わせて、いずれかの特徴を組み込んでもよい。
Ｂ．例示的な抗ＣＤ３抗体
別の態様において、本発明は、分化クラスター３（ＣＤ３）（例えば、ＣＤ３ε及び／又はＣＤ３γ）に結合する単離された抗体を提供し、以下の６つのＣＤＲ配列を有する。（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３又は配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）配列番号１４又は配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号２１、５５、９０又は９２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列、配列番号２１又は５５と２０のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ配列及びＶＨ配列、又は配列番号９０又は９２と８９のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ配列及びＶＨ配列。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、ヒトＣＤ３ポリペプチド又はカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ３ポリペプチドに結合する。いくつかの事例では、ヒトＣＤ３ポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチド（配列番号８０）又はカニクイザルＣＤ３εポリペプチド（配列番号８１）である。いくつかの事例では、ヒトＣＤ３ポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３ポリペプチドは、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチド（配列番号８２）又はカニクイザルＣＤ３γポリペプチド（配列番号８３）である。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、ヒトＣＤ３εのアミノ酸１－２６（配列番号８４）又は１－２７（配列番号８５）からなるＣＤ３断片（例えば、ヒトＣＤ３ε）内のエピトープに結合する。
いくつかの態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＣＤ３抗体を提供する。
いくつかの態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３の６つのすべてを含む結合ドメインを有する抗ＣＤ３抗体を提供する。
いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、配列番号２０又は８９の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２１又は９０の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有していてもよい。特定の事例では、抗ＣＤ３抗体は、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、又はその誘導体もしくはクローン親戚であり得る。
いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、配列番号２０又は８９の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号５５又は９２の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有していてもよい。特定の事例では、抗ＣＤ３抗体は、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４又はその誘導体もしくはクローン親戚であり得る。
いくつかの態様において、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３又は配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでもよく、及び／又は、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７又は配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３又は４）を含んでいてもよい。
いくつかの態様において、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの４つのすべてを含み、及び／又は（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。
いくつかの態様において、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの４つのすべてを含み、及び／又は（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。
前記の実施形態のいずれかでは、抗ＣＤ３抗体は、ヒト化されていてもよい。一つの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、前記の実施形態のいずれかと同様にＣＤＲを含み、さらに、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
別の態様において、抗ＣＤ３抗体が提供され、ここで、抗体は、前記のいずれかの実施形態のようなＶＨ及び前記のいずれかの実施形態のようなＶＬを含み、ここで、可変ドメイン配列の一方又は両方が翻訳後修飾を含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書で提供される抗ＣＤ３抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の実施形態では、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＣＤ３抗体、又は配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗ＣＤ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。特定の実施形態では、ヒトＣＤ３εのアミノ酸１－２６（配列番号８４）又は１－２７（配列番号８５）からなるＣＤ３断片（例えば、ヒトＣＤ３ε）内のエピトープに結合する抗体が提供される。
本発明のさらなる態様において、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＣＤ３抗体は、モノクローナル抗体である。他の実施形態では、抗ＣＤ３抗体はキメラ抗体又はヒト抗体である。一つの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトＩｇＧ抗体（例えば、インタクトＩｇＧ１抗体）、又は本明細書で定義される他の抗体クラス又はアイソタイプである。
さらなる態様において、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＣＤ３抗体は、以下のセクション１～８に記載されているように、単独で又は組み合わせて、いずれかの特徴を組み込んでもよい。
１．抗体親和性
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦２５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦６ｎＭ、≦４ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍから１０－１３Ｍまで、例えば、１０－９Ｍから１０－１３Ｍまで）の解離定数（ＫＤ）を有する。
一つの実施形態では、ＫＤは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一つの実施形態では、ＲＩＡは、関心のある抗体のＦａｂバージョンとその抗原を用いて実行される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識された抗原でＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（サーモサイエンティフィック）は、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）の５μｇ／ｍｌで一晩コーティングされ、その後、室温（約２３℃）で２～５時間、ＰＢＳ中の２％（ｗ ／ ｖ）ウシ血清アルブミンでブロックされている。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］－抗原を、関心のあるＦａｂの連続希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致する）。次いで、関心のあるＦａｂを一晩インキュベートする；しかしながら、平衡に達することを達するために、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物は、室温でのインキュベーションのためのキャプチャープレートに移される（例えば、１時間）。その後、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄した。プレートが乾燥したときに、シンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）の１５０μｌ／ウェルを添加し、プレートを１０分間ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）でカウントする。競合結合アッセイでの使用のために、最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度が選択されている。
別の実施形態によれば、ＫＤはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いたアッセイは、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて３７℃で約１０応答単位（ＲＵ）で実施する。一つの実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ社）を、当業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈し、５μｌ／分の流量で注入する前に５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈して、結合タンパク質の約１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入に続いて、未反応基をブロックするために１Ｍエタノールアミンを注入する。キネティクス測定のために、Ｆａｂ（０．７８ ｎＭ～５００ ｎＭ）の２倍のシリアル希釈は、約２５μｌ／分の流量で３７℃で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）とＰＢＳに注入される。結合率（ｋｏｎ、又はｋａ）と解離率（ｋｏｆｆ、又はＫｄ）は、単純な１対１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して、同時に結合と解離センサーグラムをフィッティングすることによって計算される。平衡解離定数（ＫＤ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）．を参照されたい。表面プラズモン共鳴アッセイでオンレートが１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オン率は、ストップフローを装備した分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は攪拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）のような分光光度計で測定されるように増加する濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ、ｐＨ７．２．中の２０ｎＭ抗原抗体（Ｆａｂ形式）の３７℃における蛍光発光強度（励起＝２９５ ｎｍ、発光＝３４０ ｎｍ、１６ ｎｍバンドパス）の増加又は減少を測定する蛍光消光法を使用して決定することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した３７℃で約１ｎＭから約５００ｎＭの間のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドを結合する。は、≦１μＭ、≦２５０ ｎＭ、≦１００ ｎＭ、≦４０ ｎＭ、≦３０ ｎＭ、≦１５ ｎＭ、≦１０ ｎＭ、≦６ ｎＭ、≦４ ｎＭ、≦２ ｎＭ、≦１ ｎＭ、≦０．１ ｎＭ、≦０．０１ ｎＭ、又は≦０．００１ ｎＭのＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄを結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、約１００ｎＭと０．０１ｎＭの間；約５０ｎＭと５ｎＭの間；約４０ｎＭと１０ｎＭの間；約３５ｎＭと１５ｎＭの間；又は約３０ｎＭと２０ｎＭの間のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドを結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ３抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定される場合に、３７℃で約１００ｐＭから約１０ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３ポリペプチドを結合する。（例えば、≦ １μＭ、≦ ２５０ ｎＭ、≦ １００ ｎＭ、≦ ４０ ｎＭ、≦ ３０ ｎＭ、≦ １５ ｎＭ、≦ １０ ｎＭ、≦ ５ ｎＭ、≦ ２ ｎＭ、≦ １ ｎＭ、≦ ０．１ ｎＭ、≦ ０．０１ ｎＭ、又は≦ ０．００１ ｎＭ の ＫＤ で人 ＣＤ３ と結合する）いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ３抗体は、約１００ｎＭと０．０１ｎＭの間；約５０ｎＭと５ｎＭの間；約４０ｎＭと１０ｎＭの間；約３５ｎＭと１５ｎＭの間；又は約３０ｎＭと２０ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３ポリペプチドを結合する。
２．抗体断片
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体）は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、及び以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体断片のレビューとしては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の参照には、例えばＰｌｕｃｋｔｈｕｅｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい；また、ＷＯ ９３／１６１８５を参照されたい；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を構成し、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価または二特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎら．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）においても説明されている。
シングルドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全部又は一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．６，２４８，５１６ Ｂ１）である。
抗体断片は、本明細書に記載されているように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体）は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一つの例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれから変更された「クラス切り替え」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、例えば、ＨＶＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。任意にヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
ヒト化された抗体及びその作製方法については、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）でレビューし、さらに以下に記載する：Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトの記述）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（リサーフェシングについての記述）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（ＦＲシャッフルについての記述）；ａｎｄ Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）ａｎｄ Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフルの「ガイド付き選択」アプローチの記述）。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、以下のものが含まれるが、これらに限定されるものではない：「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；ａｎｄ Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照された）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）；及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）ａｎｄ Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。
４．ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体）は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で知られている様々な技術を用いて作製することができる。ヒト抗体は、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）で一般的に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべて又は一部を含むか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに統合されている。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法のレビューについては、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載した米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載した米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載した米国特許第７，０４１，８７０号；及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載した米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。このような動物によって生成された無傷の抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変されてもよい。
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマを用いた方法で作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されているものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成されてもよい。そのような可変ドメイン配列は、次に、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術を以下に記載する。
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体）は、所望の活性又は活性を有する抗体のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。そのような方法については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）でレビューし、さらに下に記載されている：ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）。
特定のファージディスプレイ方法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中でランダムに再結合され、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように抗原結合ファージのスクリーニングを行うことができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＦａｂ断片として、抗体断片をディスプレイする。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）によって記載されているように、免疫化を行わずに、広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダムな配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、非常に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されているように、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報には、例えば、以下のようなものがある：米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号、及び２００９／０００２３６０号。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
６．多重特異性抗体
前記のいずれかの態様において、本明細書で提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。も２つの異なる部位に対する結合特異性を有する抗体（例えば、モノクローナル抗体）である。いくつかの態様において、二重特異性抗体は、ＬＹ６Ｇ６Ｄの２つの異なるエピトープに結合してもよい。いくつかの態様において、結合特異性の一方はＬＹ６Ｇ６Ｄに対するものであり、他方は任意の他の抗原（例えば、第二の生物学的分子、例えば、Ｔ細胞の表面抗原、例えば、ＣＤ３）に対するものである。いくつかの態様において、結合特異性の一方は、ＣＤ３に対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原、例えば、腫瘍抗原）に対するものである。いくつかの態様において、結合特異性の一方はＬＹ６Ｇ６Ｄに対するものであり、他方はＣＤ３に対するものである。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、（ａ）重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含む重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインと、（ｂ）重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ２）を含む重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ２）を含む軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを有する。
いくつかの側面において、以下を含む第１の結合ドメインを有する抗ＣＤ３抗体は、免疫エフェクター細胞以外の標的細胞上の細胞表面抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ）に結合する第２の結合ドメインを有していてもよい：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３又は配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４又は配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、例えば３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４。
いくつかの態様において、細胞表面抗原は、標的細胞上で低コピー数で発現してもよい。例えば、いくつかの態様において、細胞表面抗原は、標的細胞あたり３５，０００コピー未満で発現又は存在する。いくつかの態様において、低コピー数細胞表面抗原は、標的細胞あたり１００と３５，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と３０，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と２５，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と２０，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と１５，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と１０，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と５，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と２，０００コピーの間；標的細胞あたり１００と１，０００コピーの間；又は標的細胞あたり１００と５００コピーの間に存在する。細胞表面抗原のコピー数は、例えば、標準的なスカチャードプロットを用いて決定することができる。
例えば、いくつかの側面において、以下の６つすべてを含む結合ドメインを有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインを有していてもよい：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。いくつかの態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄを結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号３４～３７の配列を含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、及びＦＲ－Ｈ４の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）、及び／又はそれぞれ配列番号３８～４１の配列を含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）を含む。他の態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄを結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号３４、５８、３６、及び３７の配列を含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、及びＦＲ－Ｈ４の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）を含み、及び／又は、３８、６１、４０及び４１の配列を含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４の少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）を含む。いくつかの側面において、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する第１の結合ドメインは、例えば、本明細書に記載の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２が有するような以下のものを含んでもよい：ａ）配列番号１０の配列を有するか、又はその配列を有する、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ１ドメイン、及び ｂ）配列番号１１の配列を有するか、又は有する少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ１ドメイン。いくつかの態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する第１の結合ドメインは、（ａ）配列番号５９の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨ１ドメインと、（ｂ）配列番号６０の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬ１ドメインを含む。
ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインを有する前記抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体のいくつかの態様において、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、以下から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲを含む：ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；ｅ）配列番号１３又は配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び ｆ）配列番号１４又は配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、以下の６つのすべてを含む：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの態様において、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、以下の６つすべてを含む結合ドメインを含む：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。
いくつかの事例では、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するか、又は配列番号２０の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨ２ドメインを含み、及び／又は、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するか、又は配列番号２１の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬ２ドメインを含む。特定の事例では、抗ＣＤ３抗体は、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１、又はその誘導体もしくはクローン親戚であり得る。
いくつかの事例では、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、配列番号２０の配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するか、又は配列番号２０の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＨ２ドメイン、及び／又は、配列番号５５の配列と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性）を有するか、又は配列番号５５の配列を有するアミノ酸配列を含むＶＬ２ドメインを有していてもよい特定の事例では、抗ＣＤ３抗体は、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４又はその誘導体もしくはクローン親戚であり得る。
いくつかの態様において、ＣＤ３に結合する第２のドメインは、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３又は配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）を含んでいてもよく、及び／又は、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７また配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、又は４）を含んでいてもよい。
いくつかの態様において、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの４つのすべてを含み、及び／又は（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ２ドメイン及び／又は配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ２ドメインを有していてもよい。他の態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ２ドメイン及び／又は配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ２ドメインを有していてもよい。
いくつかの態様において、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４のうちの４つのすべてを含み、及び／又は（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４のうちの４つのすべてを含む。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、腫瘍抗原、例えばＬｙ６Ｇ６Ｄを発現する細胞に細胞疾患性薬剤を局在化するために使用されてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３），ＷＯ ９３／０８８２９，及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブインホール」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されるものではない。多重特異性抗体の 「ノブインホール」エンジニアリングは、ノブを含む第１のアームと、第１のアームのノブが結合するホールを含む第２のアームを生成するために利用されてもよい。本発明の多重特異性抗体のノブは、一実施形態では抗ＣＤ３アームであってもよい。代替的に、本発明の多重特異性抗体のノブは、一実施形態では、抗標的／抗原アームであってもよい。本発明の多重特異性抗体のホールは、一実施形態では抗ＣＤ３アームであってもよい。代替的に、本発明の多重特異性抗体のホールは、一実施形態では、抗標的／抗原アームであってもよい。多重特異性抗体はまた、免疫グロブリンクロスオーバー（Ｆａｂドメイン交換又はＣｒｏｓｓＭａｂフォーマットとしても知られている）技術を用いて工学的に作製されてもよい（例えば、ＷＯ２００９／０８０２５３；Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０８：１１１８７－１１１９２（２０１１）を参照されたい）。多特異性抗体はまた、以下の方法により製造することができる：抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を製造するための静電ステアリング効果をエンジニアリング的に利用する方法（ＷＯ ２００９／０８９００４Ａ１）；２個以上の抗体又は断片を架橋する方法（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）；二重特異性抗体を製造するためにロイシンジッパーを利用する方法（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい）；二重特異性抗体断片を製造するために「ダイアボディ」技術を利用する方法（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を利用する方法（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているように三重特異性抗体を調製する方法。
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を有する設計された抗体もまた、ここに含まれる。（例えば、ＵＳ ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）
本明細書における抗体又は断片は、ＣＤ３、ならびに別の異なる抗原（例えば、第２の生物学的分子）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
７．抗体変異体
いくつかの態様において、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列変異体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、例えば高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び第二の生物学的分子、例えばＣＤ３、本発明のＴＤＢ抗体又はその変種など）が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を向上させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することにより、又はペプチド合成により調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／又は挿入、及び／又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終的な構築物が所望の特性、例えば抗原結合性を有することを条件として、最終的な構成体に到達するために行うことができる。
ａ．置換、挿入、及び欠失変異体
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。保守的な置換は、「好ましい置換」の見出しの下で表１に示されている。より実質的な変化は、「例示的な置換」の見出しの下で、及びアミノ酸側鎖クラスに関して以下でさらに説明されるように、表１に提供されている。アミノ酸置換は、関心のある抗体に導入して、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、又は改善されたＡＤＣＣ又はＣＤＣのためにスクリーニングされた生成物を得ることができる。
Figure 2022122865000001
アミノ酸は、一般的な側鎖の特性に従ってグループ化できる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ，Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ．
保守的でない代用は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを意味する。
ある種の置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般的に、さらなる研究のために選択された結果の変異体は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）において修飾（例えば、改善）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。例示的な置換変異体は、本明細書に記載されているようなファージディスプレイベースのアフィニティー成熟技術を使用して、例えば便利に生成され得るアフィニティー成熟抗体である。簡単に言えば、１つ以上のＣＤＲ残基が変異され、そしてファージ上に表示された変異体抗体が、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）のためにスクリーニングされる。
抗体親和性を向上させるために、例えば、ＣＤＲにおいて改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基、及び／又は抗原に接触する残基で行われてもよく、結果として生じる変異体ＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリからの構築と再選択による親和性成熟化はここに記載されている。（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラーを起こしやすいＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指示突然変異誘発など）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。その後、セカンダリライブラリが作成される。その後、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニン走査突然変異誘発又はモデル化を用いて、特異的に同定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３とＣＤＲ－Ｌ３が狙われることが多い。
特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保守的な改変（例えば、本明細書で提供されるような保守的な置換）は、ＣＤＲにおいて行われてもよい。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ中の抗原接触残基の外側であってもよい。前記で提供された変異体ＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１以上、２以上、又は３以上のアミノ酸置換を含まない。
突然変異誘発の標的となり得る抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれている。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）の残基又はグループを同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換は、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。代替的に又は追加的に、抗体と抗原の間の接触点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。このような接触残基や隣接する残基は、置換候補として標的化されてもよいし、排除されてもよい。変異体は、所望の特性を含むかどうかを判断するためにスクリーニングされることがある。
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さのアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、ならびに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体のＮ末端又はＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が含まれる。
ａ．グリコシル化変異体
特定の実施形態では、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体（例えば、好ましくはＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び第二の生物学的分子、例えば、ＣＤ３）は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように変更することができる。本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体へのグリコシル化部位の追加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が生成又は除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって便利に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を構成する場合、抗体に付着している糖質を変化させてもよい。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ－連結によって一般的に結合された分岐したバイアンテナリーオリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびにバイアンテナリーオリゴ糖構造の「茎」のＧｌｃＮａｃに付着したフコースを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変は、特定の改良された特性を有する抗体変異体を作成するために行われてもよい。
一実施形態では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）付着したフコースを欠く炭水化物構造を有するものが提供される。このような抗体中のフコースの量は、例えば、１％以上８０％以下、１％以上６５％以下、５％以上６５％以下、又は２０％以上４０％以下であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定されたように、Ａｓｎ２９７（例えば、複合体構造、ハイブリッド構造、及び高マンノース構造）に付着したすべての糖鎖構造の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流又は下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。このようなフコシル化変異体は、ＡＤＣＣの機能を改善している可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「デフコシル化」又は「フコース欠乏症」抗体変異体に関連する公報の例としては、以下のものが挙げられる：ＵＳ ２００３／０１５７１０８；ＷＯ ２０００／６１７３９；ＷＯ ２００１／２９２４６；ＵＳ ２００３／０１１５６１４；ＵＳ ２００２／０１６４３２８；ＵＳ ２００４／００９３６２１；ＵＳ ２００４／０１３２１４０；ＵＳ ２００４／０１１０７０４；ＵＳ ２００４／０１１０２８２；ＵＳ ２００４／０１０９８６５；ＷＯ ２００３／０８５１１９；ＷＯ ２００３／０８４５７０；ＷＯ ２００５／０３５５８６；ＷＯ ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）．デフコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、以下のものが挙げられる：Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ ｃｅｌｌｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；ＵＳ Ｐａｔ Ａｐｐｌ Ｎｏ ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；ａｎｄ ＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ａｔ Ｅｘａｍｐｌｅ １１），ａｎｄ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ｓｕｃｈ ａｓ ａｌｐｈａ－１，６－ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ，ＦＵＴ８，ｋｎｏｃｋｏｕｔ ＣＨＯ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；ａｎｄ ＷＯ２００３／０８５１０７）。
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び抗ＣＤ３抗体変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に付着したバイアンテナリーオリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されているような二分されたオリゴ糖をさらに提供する。そのような抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有していてもよい。そのような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；及び米国２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。このような抗体変異体は、ＣＤＣの機能を改善している可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、ＷＯ １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）；ＷＯ １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｂ．Ｆｃ領域変異体
特定の実施形態では、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体のＦｃ領域に、１つ以上のアミノ酸修飾を導入してもよい（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する、好ましくは高親和性を有する、本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び第二の生物学的分子、例えばＣＤ３、それによってＦｃ領域の変異体を生成する（例えば、ＵＳ ２０１２／０２５１５３１を参照されたい）。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置でのアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでいてもよい。
特定の実施形態では、本発明は、いくつかの、しかしすべてではないがエフェクター機能を有する抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体変異体を企図しており、これは、抗体のインビボでの半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要であるか、又は劇症的である用途には望ましい候補とするものである。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボの細胞毒性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（従ってＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために実施することができる。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）のページ４６４の表３にまとめてある。関心分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ法を採用してもよい（ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞毒性試験法（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）、及び ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性試験法（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的又は追加的に、関心のある分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルで評価することができる。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、ＷＯ ２００６／０２９８７９及びＷＯ ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる。例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１０１：１０４５－１０５２（２００３）；ａｎｄ Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ Ｂｌｏｏｄ．１０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定はまた、当技術分野で知られている方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６））。
エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上が置換されたものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号及び第８，２１９，１４９号）。このようなＦｃ変異体には、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上のアミノ酸位置で置換されたＦｃ変異体が含まれ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換された、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号及び第８，２１９，１４９号）。
特定の実施形態では、抗体中の野生型ヒトＦｃ領域の位置３２９のプロリンは、Ｆｃのプロリン３２９とＦｃｇＲＩＩＩ（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．４０６，２６７－２７３，２０００）のトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃ．γ．受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基、又はグリシンもしくはアルギニンで置換される。特定の実施形態では、抗体は、少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。一実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、又はＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、又はヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり（例えば、米国２０１２／０２５１５３１を参照されたい）、そしてまだ別の実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇである。
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ ２００４／０５６３１２，及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
ある特定の実施形態では、抗体変異形は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、改変は、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ ９９／５１６４２、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、改変された（すなわち、改善された又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらすＦｃ領域において行われる。
半減期が増加し、母体のＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）ａｎｄ Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ又は複数の置換をそこに有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域の残基の１つ以上に置換を有するものが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４、例えばＦｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｆｃ領域の変種の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及びＷＯ ９４／２９３５１も参照されたい。
いくつかの態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体（例えば、二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）は、Ｎ２９７Ｇ変異を含むＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、以下の６つのＣＤＲを含む第１の結合ドメインを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームを含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；及び 抗ＣＤ３アーム。
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、以下を含む第一の結合ドメインを含む抗ＣＤ３アームを含む：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び抗ＣＤ３のアーム。他の実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、以下を含む第一の結合ドメインを含む抗ＣＤ３アームを含む：ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び抗ＣＤ３アーム。
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、ここで、１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの態様において、１つ以上の重鎖定常ドメインの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対になっている。いくつかの態様において、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインはそれぞれ、突起又は空洞を構成し、ＣＨ３１ドメインにおける突起又は空洞が、ＣＨ３２ドメインにおける空洞又は突起にそれぞれ位置決め可能である。いくつかの態様において、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、前記突起と空洞との間の界面で会合する。いくつかの態様において、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインはそれぞれ、突起又は空洞を構成し、ここで、ＣＨ２１ドメインにおける突起又は空洞が、ＣＨ２２ドメインにおける空洞又は突起にそれぞれ位置決め可能である。他の実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、前記突起と空洞との間の界面で会合する。ある態様において、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＣＤ３抗体は、以下のような第１の結合ドメインを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームを含む：（ａ）配列番号１０又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１１又は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び抗ＣＤ３アーム、ここで、（ａ）抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換変異を含み、（ｂ）抗ＣＤ３アームは、Ｔ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ変異を含む抗ＣＤ３抗体は、以下のような第１の結合ドメインを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームを含む：（ａ）配列番号１０又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１１又は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び抗ＣＤ３アーム、ここで、（ａ）抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームは、Ｔ３６６Ｗ、及びＮ２９７Ｇ置換変異を含み、（ｂ）抗ＣＤ３アームは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換変異を含む。
ｃ．システイン改変抗体変異体
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン人工抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望ましいかもしれない。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書にさらに記載されるように、抗体を薬物部位やリンカー薬物部位などのような他の部位にコンジュゲートするために使用することができる。特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つ以上がシステインで置換されていてもよい：軽鎖のＶ２０５（カバットナンバリング）；ヘビーチェーンのＡ１１８（ＥＵナンバリング）；及び 重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン人工抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成することができる。
ｄ．抗体誘導体
特定の実施形態では、本明細書で提供される本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）で結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）、及び第二の生物学的分子、例えば、ＣＤ３）は、当技術分野で知られており、かつ容易に入手可能な非保護性部位をさらに含むように改変されていてもよい。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体。ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキサイド／エチレンオキサイドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば ｇ．，グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のため、製造上の利点があるかもしれない。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に付着しているポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが付着している場合には、同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかなどの考慮事項に基づいて決定することができるが、これらに限定されるものではない。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非保護性部位のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非保護性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を与えないが、抗体非保護性部位に近位の細胞が死滅する温度まで非保護性部位を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
８．荷電領域
いくつかの態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄ又はＣＤ３を結合する結合ドメインは、荷電領域（ＣＲ１）を含むＶＨ１と荷電領域（ＣＲ２）を含むＶＬ１を含み、ＶＨ１中のＣＲ１はＶＬ１中のＣＲ２と電荷対を形成する。いくつかの態様において、ＣＲ１は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ２は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ１はＱ３９Ｋ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ１はＱ３９Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ２はＱ３８Ｅ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ２はＱ３８Ｅ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＤ３を結合する第２の結合ドメインは、荷電領域（ＣＲ３）を含むＶＨ２と荷電領域（ＣＲ４）を含むＶＬ２を含み、ＶＬ２のＣＲ４はＶＨ２のＣＲ３と電荷対を形成している。いくつかの態様において、ＣＲ４は塩基性アミノ酸残基を構成し、ＣＲ３は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ４はＱ３８Ｋ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ４はＱ３８Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ３はＱ３９Ｅ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ３はＱ３９Ｅ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＶＬ１ドメインは軽鎖定常ドメイン（ＣＬ１）ドメインに連結され、ＶＨ１は第１重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）に連結され、ここで、ＣＬ１は荷電領域（ＣＲ５）を有し、ＣＨ１は荷電領域（ＣＲ６）を有し、ここで、ＣＬ１のＣＲ５はＣＨ１１のＣＲ６と電荷対を形成している。いくつかの態様において、ＣＲ５は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ６は酸性残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ５はＶ１３３Ｋ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ５はＶ１３３Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ６は、Ｓ１８３Ｅ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ６はＳ１８３Ｅ置換変異からなる。
他の態様において、ＶＬ２ドメインはＣＬドメイン（ＣＬ２）に連結され、ＶＨ２はＣＨ１ドメイン（ＣＨ１２）に連結され、ＣＬ２は荷電領域（ＣＲ７）を構成し、ＣＨ１２は荷電領域（ＣＲ８）を構成し、ＣＨ１２のＣＲ８はＣＬ２のＣＲ７と電荷対を形成する。いくつかの態様において、ＣＲ８は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ７は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ８は、Ｓ１８３Ｋ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ８はＳ１８３Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ７はＶ１３３Ｅ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ７はＶ１３３Ｅ置換変異からなる。
他の態様において、ＶＬ２ドメインはＣＬドメイン（ＣＬ２）に連結され、ＶＨ２はＣＨ１ドメイン（ＣＨ１２）に連結され、ここで、（ａ）ＣＬ２は、アミノ酸残基Ｆ１１６、Ｌ１３５、Ｓ１７４、Ｓ１７６、及び／又はＴ１７８（ＥＵナンバリング）における１つ以上の変異を含み、（ｂ）ＣＨ１２は、アミノ酸残基Ａ１４１、Ｆ１７０、Ｓ１８１、Ｓ１８３、及び／又はＶ１８５（ＥＵナンバリング）における１つ以上の変異を含む。いくつかの態様において、ＣＬ２は以下の置換変異のうちの１つ以上を含む：Ｆ１１６Ａ、Ｌ１３５Ｖ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７６Ｆ、及び／又はＴ１７８Ｖ。いくつかの態様において、ＣＬ２は以下の置換変異を含む。Ｆ１１６Ａ、Ｌ１３５Ｖ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７６Ｆ、及び／又はＴ１７８Ｖ。いくつかの態様において、ＣＨ１２は以下の置換変異のうちの１つ以上を含む。Ａ１４１Ｉ、Ｆ１７０Ｓ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３Ａ、及び／又はＶ１８５Ａ。いくつかの態様において、ＣＨ１２は以下の置換変異からなる。Ａ１４１Ｉ、Ｆ１７０Ｓ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３Ａ、及び／又はＶ１８５Ａ。
他の態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄ又はＣＤ３を結合する結合ドメインは、荷電領域（ＣＲ１）を含むＶＨドメイン（ＶＨ１）と、荷電領域（ＣＲ２）を含むＶＬドメイン（ＶＬ１）を含み、ＶＬ１中のＣＲ２はＶＨ１中のＣＲ１と電荷対を形成する。いくつかの態様において、ＣＲ２は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ１は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ２はＱ３８Ｋ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ２はＱ３８Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ１はＱ３９Ｅ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ１はＱ３９Ｅ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＤ３を結合する第２の結合ドメインは、荷電領域（ＣＲ３）を含むＶＨドメイン（ＶＨ２）と荷電領域（ＣＲ４）を含むＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２のＣＲ３はＶＬ２のＣＲ４と電荷対を形成している。いくつかの態様において、ＣＲ３は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ４は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ３はＱ３９Ｋ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ３はＱ３９Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ４はＱ３８Ｅ置換変異（カバットナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ４はＱ３８Ｅ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＶＬ１ドメインは軽鎖定常ドメイン（ＣＬ１）に連結され、ＶＨ１は第１の重鎖定常ドメイン（ＣＨ１１）に連結され、ここで、ＣＬ１は荷電領域（ＣＲ５）を含み、ＣＨ１１は荷電領域（ＣＲ６）を含み、ＣＨ１１のＣＲ６はＣＬ１のＣＲ５と電荷対を形成する。いくつかの態様において、ＣＲ６は塩基性アミノ酸残基を含み、ＣＲ５は酸性アミノ酸残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ６はＳ１８３Ｋ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ６はＳ１８３Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ５はＶ１３３Ｅ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ５はＶ１３３Ｅ置換変異からなる。
他の態様において、ＶＬ２ドメインはＣＬドメイン（ＣＬ２）に連結され、ＶＨ２はＣＨ１ドメイン（ＣＨ１２）に連結され、ＣＬ２は荷電領域（ＣＲ７）を含み、ＣＨ１２は荷電領域（ＣＲ８）を含み、ＣＬ２のＣＲ７はＣＨ１２のＣＲ８と荷電対を形成する。いくつかの態様において、ＣＲ７は塩基性アミノ酸残基を構成し、ＣＲ８は酸性残基を含む。いくつかの態様において、ＣＲ７はＶ１３３Ｋ置換変異（ＥＵナンバリングを含む。いくつかの態様において、ＣＲ７はＶ１３３Ｋ置換変異からなる。いくつかの態様において、ＣＲ８はＳ１８３Ｅ置換変異（ＥＵナンバリング）を含む。いくつかの態様において、ＣＲ８はＳ１８３Ｅ置換変異からなる。
他の態様において、ＶＬ２ドメインはＣＬドメイン（ＣＬ２）に連結され、ＶＨ２はＣＨ１ドメイン（ＣＨ１２）に連結され、ここで、（ａ）ＣＬ２は、アミノ酸残基Ｆ１１６、Ｌ１３５、Ｓ１７４、Ｓ１７６、及び／又はＴ１７８（ＥＵナンバリング）における１つ以上の変異を含み、（ｂ）ＣＨ１２は、アミノ酸残基Ａ１４１、Ｆ１７０、Ｓ１８１、Ｓ１８３、及び／又はＶ１８５（ＥＵナンバリング）における１つ以上の変異を含む。いくつかの態様において、ＣＬ２は以下の置換変異のうちの１つ以上を含む：Ｆ１１６Ａ、Ｌ１３５Ｖ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７６Ｆ、及び／又はＴ１７８Ｖ。いくつかの態様において、ＣＬ２は以下の置換変異を含む。Ｆ１１６Ａ、Ｌ１３５Ｖ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７６Ｆ、及び／又はＴ１７８Ｖ。いくつかの態様において、ＣＨ１２は以下の置換変異のうちの１つ以上を含む：Ａ１４１Ｉ、Ｆ１７０Ｓ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３Ａ、及び／又はＶ１８５Ａ。いくつかの態様において、ＣＨ１２は以下の置換変異を含む：Ａ１４１Ｉ、Ｆ１７０Ｓ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３Ａ、及び／又はＶ１８５Ａ。いくつかの態様において、抗ＦｃＲＨ５抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、ここで、１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ２ドメイン（ＣＨ２１）、第１のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３１）、第２のＣＨ２ドメイン（ＣＨ２２）、及び第２のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３２）を含む。いくつかの態様において、１つ以上の重鎖定常ドメインの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対になっている。いくつかの態様において、いくつかの側面において、ＣＨ３１及びＣＨ３２はそれぞれ、突起（Ｐ１）又は空洞（Ｃ１）を含み、ここで、ＣＨ３１におけるＰ１又はＣ１は、ＣＨ３２におけるＣ１又はＰ１にそれぞれ位置決め可能である。いくつかの態様において、ＣＨ３１及びＣＨ３２は、Ｐ１とＣ１との間の界面で会合する。いくつかの態様において、ＣＨ２１及びＣＨ２２はそれぞれ、（Ｐ２）又は空洞（Ｃ２）を構成し、ＣＨ２１におけるＰ２又はＣ２は、ＣＨ２２におけるＣ２又はＰ２にそれぞれ位置決め可能である。いくつかの態様において、ＣＨ２１及びＣＨ２２は、Ｐ２とＣ２との間の界面で会合する。
Ｂ．組換え方法及び組成物
本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、好ましくはＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び第二の生物学的分子、例えば、ＣＤ３）及び／又は本発明の抗ＣＤ３抗体（例えば、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４））は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているような組換え方法及び組成物を用いて製造することができる。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体をコードする単離核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを構成するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしていてもよい。別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体をコードする単離核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを構成するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしていてもよい。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（例えば、形質転換された）以下を含む：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターとを含むベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を作製する方法が提供され、ここで、方法は、前記のように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養すること、及び任意に宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体の組換え生産のために、例えば、上述したように、抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞でのさらなるクローニング及び／又は発現のために、抗体をコードする核酸を１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離され、配列決定され得る。
１．二重特異性抗体を製造するための２セル法
いくつかの態様において、本発明の抗体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、例えば、抗ＣＤ３アーム及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームを有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２））は、２つの宿主細胞株を含む方法を用いて製造される。いくつかの態様において、抗体の第１のアーム（例えば、ホール領域を含む第１のアーム）が第１の宿主細胞株で産生され、抗体の第２のアーム（例えば、ノブ領域を構成する第２のアーム）が第２の宿主細胞株で産生される。抗体のアームは宿主細胞株から精製され、インビトロで組み立てられる。
２．二重特異性抗体を製造するための１セル法
いくつかの態様において、本発明の抗体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）は、単一の宿主細胞株を含む方法を用いて製造される。いくつかの態様において、抗体の第１のアーム（例えば、ホール領域を構成する第１のアーム）及び抗体の第２のアーム（例えば、ノブ領域を構成する第２のアーム）は、単一の宿主細胞株中で産生され、そして単一の宿主細胞株から精製される。好ましくは、第１のアーム及び第２のアームは、宿主細胞において同等のレベルで発現され、例えば、両方とも宿主細胞において高レベルで発現される。類似のレベルの発現は、効率的なＴＤＢ生産の可能性を高め、ＴＤＢ成分の軽鎖（ＬＣ）ミスペアリングの可能性を低下させる。抗体の第１のアーム及び第２のアームは、それぞれ、本明細書のセクションＩＩＢ（８）に記載されているように、電荷対を導入するアミノ酸置換変異をさらに含んでいてもよい。電荷対は、二重特異性抗体の各アームの重鎖と軽鎖のコグナート対のペアリングを促進し、ミスペアリングを最小限に抑えることができる。
３．宿主細胞
抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。バクテリアにおける抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、及び第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４，ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ．も参照されたい）発現後、本発明の抗体は、細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌や酵母などの真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４），ａｎｄ Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。
また、グリコシル化抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物の細胞の例としては、植物細胞、昆虫細胞などが挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、昆虫細胞と組み合わせて使用することができ、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用することができる。
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、第６，０４０，４９８号、第６，４２０，５４８号、第７，１２５，９７８号、及び第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
また、脊椎動物の細胞を宿主として用いることもできる。例えば、懸濁液中での生育に適応した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、以下のものがある：ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）記載の２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカ緑猿腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；水牛ラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳類宿主細胞株のレビューについては、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）。
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに、好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）で結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、及び第二の生物学的分子、例えばＣＤ３、本発明のＴＤＢ抗体又はその変種）は、当技術分野で知られている様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物学的活性を同定し、スクリーニングし、又は特徴付けることができる。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体又は抗ＣＤ３抗体は、その抗原結合活性について、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって試験される。
別の態様において、競合アッセイは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合するために本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体と競合する抗体を同定するため、又はＣＤ３に結合するために本発明の抗ＣＤ３抗体と競合する抗体を同定するために使用されてもよい。
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＬＹ６Ｇ６Ｄは、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する第１の標識抗体と、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合するために第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。コントロールとして、固定化されたＬＹ６Ｇ６Ｄは、第１の標識抗体を含む溶液中でインキュベートされるが、第２の非標識抗体を含む溶液中ではインキュベートされない。第一抗体のＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合を許容する条件下でインキュベーションした後、過剰の未結合抗体を除去し、固定化されたＬＹ６Ｇ６Ｄに関連するラベルの量を測定する。固定化されたＬＹ６Ｇ６Ｄに関連するラベルの量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第２の抗体がＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合のために第１の抗体と競合していることを示している。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。別の例示的な競合アッセイは、固定化されたＣＤ３と、ＣＤ３に結合する第１の標識抗体とを含み、ここで、アッセイは、上述のように実行される。
２．活性測定
一つの態様において、生物学的活性を有するその抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ（例えば、腫瘍の表面上のＬＹ６Ｇ６Ｄ）、又はそのペプチド断片に結合することを、インビボ、インビトロ、又はエクスビボのいずれかで含むことができる。本発明の多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、１つの抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム、例えば２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２、及び第２の生物学的分子、例えば細胞表面抗原、例えばＣＤ３を認識する１つのアームを有するＴＤＢ抗体）の場合、生物学的活性はまた、例えば、エフェクター細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）活性化）、エフェクター細胞集団の拡大（すなわち、Ｔ細胞数の増加）、標的細胞集団の減少（すなわち、細胞表面でＬＹ６Ｇ６Ｄを発現する細胞の集団の減少）、及び／又は標的細胞殺傷を含むことができる。インビボ及び／又はインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体が提供される。特定の実施形態では、本明細書の実施例に詳細に記載されているように、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。
さらに、細胞は、ＧｌｕｔａＭａｘ、ペニシリン、ストレプトマイシンを添加した１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地で洗浄し、９６ウェルＵ底プレートに約２０万個の浮遊細胞を添加する。細胞は、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０を３７℃で加湿した標準細胞培養インキュベーター中で培養してもよい。ＢＪＡＢ細胞殺傷アッセイのために、２０，０００ ＢＪＡＢ細胞は、２４時間のＴＤＢ抗体の様々な濃度の存在下で、アッセイあたりの比率を示すように、ｈｕＰＢＭＣｓ又は精製されたＴ細胞のいずれかとして、エフェクター細胞とインキュベートすることができる。
Ｄ．免疫接合体
本発明はまた、化学療法剤又は薬剤、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片）、又は放射性同位体のような１つ又は複数の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートした、本明細書では抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体を含む免疫複合体を提供する。
一実施形態では、免疫コンジュゲートは、抗体が１種以上の薬剤にコンジュゲートされた抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、この中には、抗体が、以下を含むがこれらに限定されない：メイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、第５，４１６，０６４号及び欧州特許ＥＰ ０ ４２５ ２３５ Ｂ１を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部位ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）のようなオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号及び第５，７８０，５８８、ならびに第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、第５，７１４，５８６号、第５，７３９，１１６号、第５，７６７，２８５号、第５，７７０，７０１号、第５，７７０，７１０号、第５，７７３，００１号及び第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６－３３４２（１９９３）；Ｌｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５－２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７－５２３（２００６）；Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２（２００６）；Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７－７２１（２００５）；Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９－８３４（２０００）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６－４３４３（２００２）；及び米国特許第６，６３０，５７９号）；メトトレキサート；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルのようなタキサン；トリコテセン；及びＣＣ１０６５。
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａからの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的活性毒素又はその断片に複合体化される、本明細書に記載される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体を含む。
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子にコンジュゲートされた本明細書に記載されているような抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体を含み、放射性物質を形成する。放射性物質の製造には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としてはＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性物質が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとも呼ばれる）のためのスピンラベル、例えば再びヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでいてもよい。
抗体と細胞疾患剤のコンジュゲートは、例えば、各種の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる：Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、及び二活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように、リシン免疫トキシンを調製することができる。炭素１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、抗体にラジヌクレオチドを共役させるための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内での細胞傷害性薬物の放出を促進する「開裂性リンカー」であってもよい。例えば、酸－ラビリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、フォトラビリンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。
本明細書に記載の免疫複合体又はＡＤＣは、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）以下のものを含むがこれらに限定されない架橋試薬を用いて調製されたそのような複合体を明示的に想起する：ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施形態では、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体のいずれか（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）であり、第二の生物学的分子、例えばＣＤ３）は、生物学的試料中のＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又はＣＤ３の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用される「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の実施形態では、生物学的試料は細胞又は組織を含む。
一実施形態では、診断又は検出の方法で使用するための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体が提供される。さらなる態様において、生物学的試料中のＬＹ６Ｇ６Ｄの存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態では、方法は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体とＬＹ６Ｇ６Ｄとの結合を許容する条件下で、生物学的試料を本明細書に記載の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体と接触させ、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体とＬＹ６Ｇ６Ｄとの間に複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法又はインビボ法であってもよい。
別の実施形態では、診断又は検出の方法で使用するための抗ＣＤ３抗体が提供される。さらなる態様において、生物学的試料中のＣＤ３の存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、抗ＣＤ３抗体とＣＤ３との結合を許容する条件下で、生物学的試料を本明細書に記載の抗ＣＤ３抗体と接触させ、抗ＣＤ３抗体とＣＤ３との間に複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法又はインビボ法であってもよい。
特定の実施形態では、標識された抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ及び／又は抗ＣＤ３抗体が提供される。ラベルには、直接検出されるラベル又は部位（例えば、蛍光ラベル、発色性ラベル、電子密度ラベル、化学発光ラベル、放射性ラベルなど）、及び酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される部位（例えば、酵素又はリガンドなど）が含まれるが、これらに限定されるものではない。例示的なラベルには、以下のものが含まれる：放射性同位元素３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体のようなフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、ルシフェラーゼ、例えば ホタルルシフェラーゼ及び細菌性ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼのような複素環オキシダーゼ、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼのような色素前駆体を酸化するために過酸化水素を用いる酵素、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定したフリーラジカル、及びそのようなものと結合したもの。
Ｆ．医薬品製剤
本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、好ましくは高親和性（例えば。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び第二の生物学的分子、例えばＣＤ３）を、所望の程度の純度を有するそのような抗体を、１つ以上の任意の製薬学的に許容される担体と混合することによって調製する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．１９８０））の形態で、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。製薬学的に許容される担体は、一般的に、採用される用量及び濃度において受領者に無毒であり、以下を含むが、これらに限定されるものではない：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド。血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジンなどのアミノ酸。単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖類；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。本明細書において例示的な製薬学的に許容される担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ）のような初期薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼのような１つ以上の付加的なグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８号に記載されているものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン酢酸緩衝液を含む。
本明細書の製剤はまた、治療される特定の適応症に必要に応じて２以上の活性成分を含んでもよく、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含んでもよい。例えば、追加の治療剤（例えば、化学療法剤、細胞疾患剤、成長阻害剤、及び／又は抗ホルモン剤、例えば、上述の本明細書で言及されているようなもの）をさらに提供することが好ましい場合がある。このような有効成分は、意図された目的に有効な量で配合されているのが好適である。
活性成分は、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフィア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマクロエマルジョン中にそれぞれ、例えば、共保存技術によって又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ（メチルメタシル酸塩）マイクロカプセル中に捕捉されていてもよい。そのような技術が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
持続放出性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透膜性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えば、成形品、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用する製剤は、一般に無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成され得る。
Ｇ．治療方法及び組成物
本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体及び／又は抗ＣＤ３抗体のいずれか（例えば、好ましくはＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、好ましくは高親和性（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、及び第二の生物学的分子、例えばＣＤ３、好ましくは高親和性、例えば２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２などの抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム、及び３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４などの抗ＣＤ３アームを有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）を治療方法に使用することができる。
一つの態様において、医薬として使用するための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体が提供される。さらなる態様において、細胞増殖性疾患（例えば、癌、例えば、結腸直腸癌）の治療又は進行を遅らせるための使用のための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、が提供される。いくつかの実施形態では、癌はＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性結腸直腸癌）である。特定の実施形態では、治療方法で使用するための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体が提供される。特定の実施形態において、本発明は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）を提供し、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の有効量を個体に投与することを含む細胞増殖性疾患を有する個体を治療する方法において使用するための方法を提供する。そのような一実施形態では、方法はさらに、例えば以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを含む。さらなる実施形態では、本発明は、細胞増殖性疾患を有する個体における免疫機能を増強するための使用のための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）を提供する。特定の実施形態において、本発明は、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、第二の生物学的分子、例えばＣＤ３に結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）（例えば、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化させる）の有効量を個体に投与し、エフェクター細胞集団を拡大（増加）させ、標的細胞（例えば、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体によって認識された第二の生体分子を発現する細胞、例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体）集団を減少させ、及び／又は標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を殺すことを含む、細胞増殖性疾患を有する個体における免疫機能を増強する方法における使用のための抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を提供する。前記の実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様において、本発明は、医薬品の製造又は調製における抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の使用を提供する。一実施形態では、本発明の医薬は、細胞増殖性疾患（例えば、癌、例えば、結腸直腸癌）の治療のためのものである。いくつかの実施形態では、癌はＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性結腸直腸癌）である。さらなる実施形態では、本発明の薬剤は、細胞増殖性疾患を有する個体に薬剤の有効量を投与することを含む、細胞増殖性疾患を治療する方法における使用のためのものである。そのような一実施形態では、方法はさらに、例えば以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを含む。さらなる実施形態では、本発明の薬剤は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化し、エフェクター細胞集団を拡大（増加）し、標的細胞集団（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄを発現する細胞の集団）を減少させ、及び／又は個体内の標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を殺すためのものである。さらなる実施形態において、本発明の薬剤は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化し、エフェクター細胞集団を拡大（増加）し、標的細胞集団（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄを発現する細胞集団）を減少させ、及び／又は標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるために、薬剤の有効量を個人に投与することを含む、細胞増殖性疾患を有する個人における免疫機能を増強する方法における使用のためのものである。前記の実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様において、本発明は、細胞増殖性疾患（例えば、癌、例えば、結腸直腸癌）を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、癌はＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性結腸直腸癌）である。一実施形態では、方法は、そのような細胞増殖性疾患を有する個体に、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの有効量を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法はさらに、例えば以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを含む。前記の実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様において、本発明は、細胞増殖性疾患を有する個体における免疫機能を増強する方法を提供する。一実施形態では、方法は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化し、エフェクター細胞集団を拡大（増加）し、標的細胞集団を減少させ（例えば、ＬＹ６Ｇ６Ｄを発現する細胞の集団）、及び／又は標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を殺すために、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）の有効量を個体に投与することを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の有効量を投与することにより、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、小腸癌、大小腸癌、又は転移性腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、転移性膵臓腺癌）であってもよい腺癌（例えば、転移性結腸直腸腺癌、転移性胃腺癌、転移性膵臓腺癌）を治療する方法を提供する、例えば、本発明の二重特異性ＴＤＢ抗体、例えば、抗ＬＹ６Ｇ６ＤターゲティングＴＤＢ、例えば、高親和性抗ＣＤ３アームを有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ、例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４のような抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄアーム、及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２のような抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄアームを有する抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢが挙げられる。ある態様において、癌は、「マイクロサテライト安定型」（「ＭＳＳ」）又は「低頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｌ」）のマイクロサテライト不安定性ステータスを有する。他の態様において、この癌は「高頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｈ」）というマイクロサテライト不安定性のステータスを有する。ある態様において、ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌である。
いくつかの局面において、本発明は、本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、例えば本発明のＴＤＢを標的とした抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄなど、高親和性抗ＣＤ３アームを有するＬｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢなど、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１や３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４のようなものと抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄアームなど、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２などの二重特異性ＴＤＢ抗体のような有効量を投与することにより、大腸癌、例えば、「マイクロサテライト安定」（「ＭＳＳ」）又は「低頻度マイクロサテライト不安定性」（「ＭＳＩ－Ｌ」）のマイクロサテライト不安定性ステータスを有する結腸直腸癌、を治療する方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は、例えば、前記の治療方法のいずれかで使用するために、本明細書で提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体のいずれか（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）を含む医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬製剤は、本明細書で提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体のいずれかと、製薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体のいずれかと、例えば本明細書に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
本発明の抗体（及び／又は任意の追加治療剤）は、非経口投与、肺内投与、鼻腔内投与、及び局所治療のために所望される場合には鼻腔内投与を含む任意の適切な手段によって投与することができる。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、皮下投与などがある。いくつかの実施形態では、抗体は静脈内投与によって投与される。他の実施形態では、抗体は皮下投与によって投与される。いくつかの実施形態では、皮下注射によって投与された抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、静脈注射によって投与された同じ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体よりも患者において毒性の低い応答を示す。投与は、投与が短期間であるか慢性的であるかに部分的に依存して、例えば、静脈内注射又は皮下注射のような注射によって、任意の好適な経路によって行うことができる。本明細書では、様々な時点での単回又は複数回の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投与スケジュールが企図されている。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。この文脈で考慮すべき因子には、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール、及び当業者に知られている他の因子が含まれる。抗体は、当該疾患を予防又は治療するために現在使用されている１種以上の薬剤と一緒に製剤化されている必要はないが、任意に製剤化される。このような他剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、疾患の種類や治療法など、上述した他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されている投与量と同じ投与量で、又は本明細書に記載されている投与量の約１～約９９％、又は経験的／臨床的に適切であると判断される任意の投与量で、及び任意の投与経路で使用される。
疾患の予防又は治療のために、本発明の抗体の適切な投与量（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体、例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）（単独で又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、予防又は治療目的で抗体を投与するかどうか、以前の治療法、患者の臨床歴及び抗体に対する反応、及び主治医の裁量に依存する。本発明の抗体は、好適には、患者に一度に又は一連の治療にわたって投与される。
一般的な提案として、ヒトに投与される抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）の治療的に有効な量は、１つ以上の投与であっても、患者体重の約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、使用される抗体は、約０．０１～約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０１～約１ｍｇ／ｋｇを、例えば１日に投与する。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体は、２１日サイクルの１日目に、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、又は約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。投与は、単回投与でもよいし、輸液等の複数回投与（例えば、２回又は３回）でもよい。数日以上の繰り返し投与の場合、状態にもよるが、一般的には疾患症状の所望の抑制が起こるまで治療を継続することになる。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、又は約１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組み合わせ）の１つ又は複数の用量を患者に投与することができる。そのような用量は、間欠的に、例えば、毎週又は３週間ごとに投与してもよい（例えば、患者が約２回から約２０回、又は例えば約６回の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の用量を受けるように）。最初の高負荷用量を投与し、その後、１つ又は複数の低負荷用量を投与してもよい。この治療の進行状況は、従来の技術やアッセイで簡単にモニターすることができる。
Ｈ．その他の治療薬
本発明の抗体は、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて治療に用いることができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。特定の実施形態では、追加の治療剤は、以下の通りである：化学療法剤、成長阻害剤、細胞毒性剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、又は他の薬剤、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）拮抗剤（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、インターフェロン、サイトカイン、本発明の抗ＣＤ３抗体以外の抗体、例えば、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ ＶＥＧＦ、又はＶＥＧＦ受容体の１つ又は複数に結合する抗体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、又は別の生理活性又は有機化学物質。
上述したそのような併用療法は、併用投与（ここでは、２つ以上の治療剤が同一又は別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与を包含し、この場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤又は薬剤の投与に先立って、同時に、及び／又はそれに続いて、行われ得る。一実施形態では、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、約１ヶ月以内、又は約１、２、３週間以内、又は約１、２、３、４、５、又は６日以内に、互いに発生する。本発明の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、第二の生体分子、例えばＣＤ３に結合する本発明の二重特異性抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体）もまた、放射線治療と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、追加の治療は、手術、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイルス治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、又は前記の組み合わせであってもよい。さらなる療法は、アジュバント療法又はネオアジュバント療法の形態であり得る。いくつかの実施形態では、追加の治療は、低分子酵素阻害剤又は抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態では、追加の治療は、副作用制限剤（例えば、抗吐き気剤などのような、治療の副作用の発生及び／又は重症度を軽減することを意図した剤）の投与である。いくつかの実施形態では、追加の治療は手術である。いくつかの実施形態では、追加の治療は、放射線治療及び手術の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ（例えば、抗ＣＤ３アーム（例えば、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４）及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）は、以下の任意の１つ又は複数の組成物（例えば。製剤））を、以下のいずれかの１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、又はすべての１１種のような１種又はそれ以上の追加の治療剤と一緒に投与される：ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５－フルオロウラシルとロイコボリンの併用）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ケープオックス（ＸＥＬＯＸ．カペシタビンとオキサリプラチンの併用）、ロイコボリン（フォリン酸）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、レゴラフェニブ（ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標））、イリノテカン（ＣＰＴ－１１；ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、及びＦＬＯＸ（５－フルオロウラシルとオキサリプラチンの併用）。他の実施形態では、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、１つ以上の追加の治療剤、例えば、以下のいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０つ、又はすべての１１つの追加の治療剤の前に投与される：ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５－フルオロウラシルとロイコボリンの併用）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ケープオックス（ＸＥＬＯＸ．カペシタビンとオキサリプラチンの併用）、ロイコボリン（フォリン酸）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、レゴラフェニブ（ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標））、イリノテカン（ＣＰＴ－１１；ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、及びＦＬＯＸ（５－フルオロウラシルとオキサリプラチンの併用）。他の実施形態では、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、１つ以上の追加の治療剤、例えば、以下のいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０つ、又はすべての１１つの追加の治療剤の後に投与される：ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５－フルオロウラシルとロイコボリンの併用）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ケープオックス（ＸＥＬＯＸ．カペシタビンとオキサリプラチンの併用）、ロイコボリン（フォリン酸）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、レゴラフェニブ（ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標））、イリノテカン（ＣＰＴ－１１；ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、及びＦＬＯＸ（５－フルオロウラシルとオキサリプラチンの併用）。
ｉ．成長阻害剤
いくつかの態様において、追加の治療剤は、成長阻害剤である。例示的な成長阻害剤には、Ｓ相以外の場所で細胞周期の進行を阻害する剤、例えば、Ｇ１停止を誘導する剤（例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、又はアラＣなどのＤＮＡアルキル化剤）又はＭ相停止（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキサン類（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、又はブレオマイシン）を誘導する薬剤が挙げられる。
ｉｉ．放射線治療
いくつかの態様において、追加の治療剤は、放射線治療である。放射線療法には、細胞が正常に機能する能力を制限するか、又は細胞を完全に破壊するために、細胞に十分な損傷を誘発するために、指向性ガンマ線又はベータ線を使用することが含まれる。代表的な治療法は１回投与で、代表的な投与量は１日１０～２００単位（グレイ（Ｇｙ））である。
ｉｉｉ．細胞疾患性薬剤
いくつかの態様において、追加の治療剤は、細胞毒性剤、例えば、細胞機能を阻害又は防止する物質、及び／又は細胞死又は細胞破壊を引き起こす物質である。細胞毒性剤には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬剤（例えば、以下のものが含まれる。メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の介在剤）；成長阻害剤；核分解酵素などの酵素及びその断片。抗生物質；その断片及び／又は変種を含む、細菌、真菌、植物又は動物由来の低分子毒素又は酵素的に活性な毒素のような毒素；及び抗腫瘍剤又は抗癌剤。
ｉｖ．免疫調節剤
いくつかの局面において、追加の治療剤は、免疫調節剤、例えば、ＰＤ－Ｌ１軸結合拮抗剤であり、これは、ＰＤ－１結合拮抗剤、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤、又はＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤であってもよい。ＰＤ－１（プログラム細胞死１）は、本技術において、「プログラム細胞死１」、「ＰＤＣＤ１」、「ＣＤ２７９」、及び 「ＳＬＥＢ２」とも呼ばれる。例示的なヒトＰＤ－１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｑ１５１１６に示されている。ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）は、本技術において、「プログラム細胞死１リガンド１」、「ＰＤＣＤ１ＬＧ１」、「ＣＤ２７４」、「Ｂ７－Ｈ」、及び 「ＰＤＬ１」とも呼ばれる。例示的なヒトＰＤ－Ｌ１はＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｑ９ＮＺＱ７．１に示されている。ＰＤ－Ｌ２（プログラム細胞死リガンド２）は、当技術分野では、「プログラム細胞死１リガンド２」、「ＰＤＣＤ１ＬＧ２」、「ＣＤ２７３」、「Ｂ７－ＤＣ」、「Ｂｔｄｃ」、及び 「ＰＤＬ２」とも呼ばれている。例示的なヒトＰＤ－Ｌ２は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｑ９ＢＱ５１に示されている。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２は、ヒトＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２である。
いくつかの態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、ＰＤ－１のリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２である。別の例では、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、ＰＤ－Ｌ１の結合リガンドへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－Ｌ１結合パートナーは、ＰＤ－１及び／又はＢ７－１である。別の例では、ＰＤ－Ｌ２結合拮抗剤は、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－Ｌ２結合リガンドパートナーは、ＰＤ－１である。拮抗剤は、抗体、その抗原結合断片、免疫アデシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドであってもよい。
いくつかの態様において、ＰＤ－１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体）である。
いくつかの態様において、ＰＤ－Ｌ１結合拮抗剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば以下に記載されるような抗体である。いくつかの態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間、及び／又はＰＤ－Ｌ１とＢ７－１との間の結合を阻害することができる。いくつかの態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。いくつかの態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト化抗体である。いくつかの態様において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト抗体である。
いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、共抑制分子（例えば、ＣＴＬＡ－４拮抗剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＴＩＭ－３拮抗剤（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、又はＬＡＧ－３拮抗剤（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体））に対して指示された拮抗剤、又はそれらの任意の組み合わせである。
いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴに対して向けられた拮抗剤（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体）である。
いくつかの態様において、いくつかの局面において、追加の治療剤は、以下の通りである：５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；イリノテカン；カペシタビン；オキサリプラチン；セツキシマブ；ベバシズマブ；パニツムマブ；アフリベルセプト、レゴラフェニブ；ラムシルマブ、ＴＡＳ－１０２（トリフルリジン及びチピラシル）；ペムブロリズマブ；ニボルマブ；ニボルマブ及びイピリムマブ；ベムラフェニブ；ＦＯＬＦＯＸＩＲＩ及びベバシズマブは、ＢＲＡＦ及び／又はＭＥＫ阻害剤と組み合わせた抗ＥＧＦＲ療法であり、必要に応じて細胞毒性薬を含む。ＦＯＬＦＯＸ ／ ＦＯＬＦＩＲＩ及び抗ＥＧＦＲ療法；又はＦＯＬＦＯＸ／ＦＯＬＦＩＲＩ／ＦＯＬＦＯＸＩＲＩ及びベバシズマブ。
Ｉ．製造品目
本発明の別の態様において、上述の疾患の治療、予防及び／又は診断に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造品は、容器と、容器上の又は容器に関連付けられたラベル又はパッケージインサートを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、状態を治療、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又はパッケージの挿入物は、組成物が選択された状態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）組成物を含む第１の容器を含み、この組成物は本発明の抗体を含み、（ｂ）組成物を含む第２の容器を含み、この組成物は細胞疾患性又は他の治療剤をさらに含む。本発明の本実施形態における製造物品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示すパッケージインサートをさらに含んでいてもよい。代替的に又は追加的に、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液などの薬剤学的に許容される緩衝剤を含む第２の（又は第３の）容器をさらに含んでもよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、注射器など、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
ＩＩＩ．実施例
以下に、本発明の方法及び組成物の例を示す。前記で提供された一般的な説明から、他の様々な側面が実施され得ることが理解され、実施例は、特許請求の範囲を限定することを意図していない。
実施例１．ＬＹ６Ｇ６Ｄは結腸直腸癌細胞の表面マーカーであり、正常組織での発現は限られている。
ヒト正常組織及び腫瘍組織におけるリンパ球抗原６ファミリーメンバーＧ６Ｄ（ＬＹ６Ｇ６Ｄ）（配列番号７５）の発現を、Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）（Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３７５（１２）：１１０９－１１１２）及びＧｅｎｏｔｙｐｅ－Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＧＴＥｘ）ｄａｔａ（Ｐｉｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ，１１，ｅ１００４２２０，２０１５）及び免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて評価した。
Ａ．ＬＹ６Ｇ６Ｄの発現
図１Ａは、ＴＣＧＡデータにおけるヒト組織の正常組織及び腫瘍組織におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ及びリンパ球抗原６ファミリーメンバーＧ６Ｆ（ＬＹ６Ｇ６Ｆ）の発現を示す図である。腫瘍組織では、ＬＹ６Ｇ６Ｄの発現が最も高い適応症は大腸であり、ＬＹ６Ｇ６Ｄは大腸腫瘍組織でのみ有意に過剰発現している。正常な大腸組織は、はるかに低いレベルではあるが、ＬＹ６Ｇ６Ｄの発現を示す。ＬＹ６Ｇ６Ｆの注目すべき発現（＞１ ｎＲＰＫＭ）は、ほとんどの場合、大腸腫瘍組織に見られる。図１Ｂは、ＧＴＥｘプロジェクトの公開データにおける正常組織におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＬＹ６Ｇ６Ｆの発現を示す。ＬＹ６Ｇ６Ｄは、前立腺、精巣、子宮頸部、膣組織で最も高発現しており、正常な大腸組織や皮膚サンプルのサブセットでもかなりの発現が認められる。ＬＹ６Ｇ６Ｆは血液中に最も多く発現し、次いで精巣、脾臓、甲状腺、肺組織と続く。
Ｂ．ＭＳＳ及びＭＳＩ－Ｌ ＣＲＣにおけるＬＹ６Ｇ６Ｄの発現
ＬＹ６Ｇ６Ｄ は、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）の状態がマイクロサテライト安定（ＭＳＳ）、低頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｌ）、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）の結腸直腸癌（ＣＲＣ）で最も高発現しており、ＭＳＳ の ＣＲＣ は予後が悪い（図 １Ｃ）。
Ｃ．ＬＹ６Ｇ６ＤのＩＨＣ染色
ヒトＣＲＣ腫瘍をＬＹ６Ｇ６Ｄで染色した。原発性ＣＲＣの約２０％がＩＨＣによりＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性と同定された。１４１の組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）原発性大腸腫瘍を評価した。２１個の腫瘍が弱（１＋）ＩＨＣ染色（１４％）を示し、５個が中（２＋）染色を示し、４個が強（３＋）染色を示した（合計６－７％）（図２Ａ）。図。２Ｂ－２Ｄは、原発性大腸腫瘍組織におけるＬＹ６Ｇ６Ｄの弱い（１＋）、中程度（２＋）、及び強い（３＋）ＩＨＣ染色を示している。
実施例２．抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アーム、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄクローン生成、エピトープマッピング、ヒト化における製造ライアビリティー
Ａ．抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームの製造ライアビリティー
キメラ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含む抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、ＨＴ５５細胞（ヒト大腸癌細胞株）をインビトロで殺傷し（図３Ａ）、ＮＳＧ（商標）マウスの異種移植ＬＳ１０３４及びＨＴ５５腫瘍に対するｉｎ ｖｉｖｏ活性を示した（図３Ｂ）。１Ｇ４はマウスハイブリドーマ抗体であり、キメラ１Ｇ４（ｃｈ１Ｇ４）は、１Ｇ４のマウス可変ドメイン（ＶＨ、ＶＬ）を、ＣＨ２にＮ２９７Ｇのアミノ酸置換変異を持ち「ホール」領域を構成するヒト重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）とヒト軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）にそれぞれ遺伝的に融合させたマウス／ヒトキメラ抗体である。１Ｇ４アームのヒト化バージョンを生成し、インビトロ及びインビボでの有効性を示した（図３Ｃ及び３Ｄ）。
ヒト化１Ｇ４軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ２（ＷＡＳＴＲＩＳ；配列番号１１０）のアミノ酸残基Ｗ５０について、分子評価（ＭＡ）ライアビリティーが確認された。簡潔に言えば、ヒト化ＩＧ４を、フリーラジカルを発生させることが知られている低分子であるＡＡＰＨ（２，２－アゾビス（２－アミジノプロパン）ジヒドロクロライド）を用いた化学的条件下でのストレス試験（例えば、Ｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９８（１２）：４４８５－４５００，２００９を参照されたい）、及び変化するｐＨでの熱的条件下でのストレス試験（４０℃、ｐＨ５．５での２週間の熱的ストレス試験）を実施した。軽鎖残基Ｗ５０は、ＡＡＰＨストレス後に酸化が増加した（７２．０％酸化）ことが確認された。
熱応力測定は、製品の保存期間にわたる安定性を模倣している。サンプルを２０ｍＭ酢酸Ｈｉｓ、２４０ｍＭスクロース、ｐＨ５．５に緩衝交換し、１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。各サンプルの１ ｍＬを４０℃で２週間ストレスをかけ、２番目のサンプルを対照として－７０℃で保存した。その後、両方のサンプルをトリプシンで消化し、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）－質量分析（ＭＳ）分析を使用して分析可能なペプチドを作成した。試料中の各ペプチドについて、保持時間（液体クロマトグラフィーを用いて測定したもの）、高分解能の正確な質量及びペプチドイオン断片化情報（アミノ酸配列情報）を取得した。抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）は、データセットからの関心のあるペプチド（例えば、ネイティブ及び修飾ペプチドイオン）について、＋／－１０ ｐｐｍのウィンドウで生成され、ピークは面積を決定するために統合された。各サンプルの相対的な修飾割合は、修飾ペプチドの面積を修飾ペプチドの面積とネイティブペプチドの面積で割ったから１００を掛け、その値を取ることによって計算された。
さらに、１Ｇ４アームは、生産のための一過性のトランスフェクションアッセイに失敗した（図３０）。Ｗ５０は１８個の代替アミノ酸（Ｃｙｓを除く）すべてで置換されたが、結合親和性は置換によって影響を受けるようであった。最後に、図３Ａに示すように、１Ｇ４アームは、高親和性３８Ｅ４．ｖ１アームとペアリングした場合にのみ有効であるが、低親和性４０Ｇ５ｃとペアリングした場合には有効ではない。このようにして、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の新たな発見キャンペーンが行われた。
Ｂ．ウサギ抗ｈｕＬＹ６Ｇ６Ｄ ｍＡｂｓの生成
抗ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄ（ｈｕＬＹ６Ｇ６Ｄ）モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）をウサギで作製した。ニュージーランド白ウサギをヒトＬｙ６Ｇ６Ｄで免疫し、Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ，９（２），２０１４の改変プロトコールを用いて、免疫したウサギから単一Ｂ細胞を単離した。この修飾されたワークフローは、ＩｇＧ＋ｈｕＬｙ６Ｇ６Ｄ＋Ｂ細胞の単一ウェルへの直接ＦＡＣＳソーティングを含んだ。Ｂ細胞培養上清を、ヒトＬｙ６Ｇ６Ｄ及び無関係な対照タンパク質との結合についてＥＬＩＳＡでアッセイを行った。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ特異的Ｂ細胞を溶解し、直ちに－８０℃で凍結保存し、分子クローニングまで保存した。各ウサギＢ細胞モノクローナル抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を、前記のように抽出したｍＲＮＡから発現ベクターにクローニングした（Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ＰｌｏＳ ＯＮＥ，９（２），２０１４）。個々の組換えウサギ抗体をＥｘｐｉ２９３細胞で発現させた後、プロテインＡで精製した。精製した抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ抗体を、機能活性アッセイと速度論的スクリーニングに供した。約２８０の抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ ＥＬＩＳＡ＋クローンが生成された。９６個のクローンは、その後、以下に記載されるように、４つの異なるエピトープビニンググループにビンニングされた。
Ｃ．糖鎖設計されたＬＹ６Ｇ６Ｄを用いた速度論的解析と抗ＬＹ６Ｇ６Ｄエピトープビニング
アレイベースのＳＰＲイメージングシステム（Ｃａｒｔｅｒｒａ（登録商標）、米国）は、１Ｇ４を含む９６のウサギ抗ｈｕＬＹ６Ｇ６Ｄモノクローナル抗体のパネルのキネティクステストとエピトープのビニングのために使用された。エピトープビニングのために、ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドは、分子の表面全体にグリコシル化部位を導入するように設計された（図４Ａ及び４Ｂ）。サイトは、ネイティブ配列からの破壊を最小限に抑えてグリコシル化サイトを追加しやすいように選択した。候補の抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を、グリコエンジニアリングされたＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドとの相互作用について試験した（図４Ｂ）。精製した抗体を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）で１０μｇ／ｍｌに希釈した。アミンカップリングを用いて、ＳＰＲセンサープリズムＣＭＤ ２００Ｍチップ（ＸａｎＴｅｃ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ、ドイツ）にＳＰＲｉ－Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（商標）（Ｃａｒｔｅｒｒａ（登録商標）、米国）を用いて抗体を直接固定化し、９６個の抗体のアレイを作成した。分析には、ＩＢＩＳ ＭＸ９６ ＳＰＲｉ（Ｃａｒｔｅｒｒａ（登録商標），ＵＳＡ）を使用し、固定化リガンドとの結合を評価した。キネティック解析のために、ヒトＬｙ６Ｇ６Ｄを０～３００ｎＭの３倍希釈で３分間注入し、その後、１０分間の解離期間を経た。エピトープビニングのために、ヒトＬｙ６Ｇ６Ｄの各グリコシル化変異体を最初に５０ｎＭで４分間注入し、次いで、１０μｇ／ｍｌでの個々のモノクローナル抗体の第２の４分間注入を行った。サイクル間のｐＨ１．５で１０ｍＭグリシンで表面を再生した。実験は、ＨＢＳ－Ｔ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０）のランニングバッファー中で２５℃で行った。キネティックデータはＳｃｒｕｂｂｅｒ ２．０（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて処理し、エピトープビニングデータはＷａｓａｔｃｈビニングソフトウェアツール（Ｃａｒｔｅｒｒａ（登録商標），ＵＳＡ）を用いて処理した。
Ｇ９９Ｎ．Ｌ１０１Ｓアミノ酸置換変異を有する糖質改変ＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドにおいて、１Ｇ４及びウサギ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体２０Ａ１２のＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドへの結合が阻害された（図４Ｂ）。他のウサギ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体の結合は、Ｐ６０Ａ．Ｐ６１Ｓ、Ａ７３Ｎ．Ｈ７５Ｓ、Ｖ８０Ｓ、Ｖ８０Ｎ、Ｔ８２Ｎ、又はＤ８７Ｎのアミノ酸置換変異によって様々に阻害された（図４Ｂ）。ウサギ抗体クローン及び１Ｇ４を、グリコエンジニアリングアッセイの結果に基づいて、４つの異なるエピトープビンに配置した（図４Ｅ）。ビン１は３群の配列を含み、１Ｇ４、２０Ａ１２、６Ｅ１０、及び４Ｈ７を含み、ビン４は６群の配列を含み、ｆ．１６Ｄ７を含み、ビン３及び４はそれぞれ３群の配列を含む。グリコシル化変異によって影響を受けるアミノ酸残基は色分けされ、ビン１、２、３、及び４は図４Ｄ（配列番号８８）において下線で示されている。図４Ｃに示すように、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体１Ｇ４及び１６Ｄ７は、抗原の反対側にあるエピトープを結合する。
Ｄ．細胞ベースの細胞毒性アッセイ
Ｌｙ６Ｇ６Ｄ陽性腫瘍細胞株を標的とするウサギ抗体の新しいパネルの能力を評価するために、抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームと異なるウサギ抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームとのペアを含む二重特異性Ｔ細胞依存性抗体（ＴＤＢ）を作製した。各エピトープビン（ビン１、ビン２、ビン３及びビン４）からの代表的なウサギ抗体を、「ノブ」領域を含むＦｃ領域、キメラウサギ可変ドメイン、及びＮ２９７Ｇ及びＴ３６６Ｗの変異を有するヒト定常ドメインを有するハーフ抗体に再フォーマットした。精製後、「ノブ 」抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアームを、「ホール 」領域を構成するＦｃ領域を有する抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃアームでアニーリングし、ＨＴ５５細胞への結合及びインビトロでの殺傷についてアッセイを行った（図４Ｆ、４Ｇ、及び１３Ａ～１３Ｅ）。１Ｇ４を含むビン１（例えば、２０Ａ１２及び６Ｅ１０）からのウサギ抗体は、ＨＴ５５細胞の結合及び殺傷の両方において最も効果的であることがわかった。
Ｅ．キネティック解析
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄウサギ抗体のＬＹ６Ｇ６Ｄに対する結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００マシン（ＧＥヘルスケアライフサイエンス社）を用いて決定した。簡単に言えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップは、サプライヤーの指示に従って、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬で活性化された。キネティクス測定のために、Ｌｙ６Ｇ６Ｄタンパク質をチップに結合して、各フローセル内で約１００の応答単位（ＲＵ）を達成した。未反応のカップリング基は１Ｍエタノールアミンでブロックした。ウサギ抗体は、ウサギ可変ドメインとヒト定常ドメインを有するキメラ抗原結合断片（Ｆａｂｓ）として発現させた。Ｆａｂｓの１０倍連続希釈液を３７℃のＨＢＳ－Ｐ緩衝液中に３０μＬ／ｍｉｎの流量で注入した。結合率（ｋａ）及び解離率（ｋｄ）は、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０）を用いて計算した。平衡解離定数（ＫＤ）は、比ｋｄ／ｋａとして算出した（図４Ｈ）。
Ｆ．ウサギ抗体のヒト化
Ｂｉｎ １ウサギモノクローナル抗体２０Ａ１２及び６Ｅ１０は、後述するようにヒト化した。残留数はＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による。
２０Ａ１２のヒト化
ウサギ抗体のヒト化における一つの課題は、ウサギの配列とヒトの配列の違いが、げっ歯類の配列とヒトの配列の違いよりも大きいことである。このようにして、２０Ａ１２のヒト化には複数のフレームワークが適用された。
ウサギ抗体の超可変領域、すなわちＶＬドメインの２４－３４位（Ｌ１）、５０－５６位（Ｌ２）、８９－９７位（Ｌ３）、及びＶＨドメインの２６－３５位（Ｈ１）、５０－６５位（Ｈ２）、及び９５－１０２位（Ｈ３）を、それぞれ２つのヒトアクセプターフレームワークにグラフトした。ヒト軽鎖生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．１－５、ｈＩＧＫＶ．１－３９、及びｈＩＧＫＶ．４－１に基づいてｒｂ．２０Ａ１２軽鎖の変異体を生成し、ヒト重鎖生殖細胞配列ｈＩＧＨＶ．３－２３及びｈＩＧＨＶ．３－３０に基づいてｒｂ．２０Ａ１２重鎖の変異体を生成した（図３１Ｂ、３１Ｃ、及び４０Ａ）。これらの生殖細胞配列は、それらの高い血清有病率及びｒｂ．２０Ａ１２との高い配列同一性に基づいて選択された（図３１Ｃ及び３１Ｄ）。ＶＬ ＣＤＲ ＫＶ１－５＊０１とＶＨ ＣＤＲ ＨＶ３－２３＊０１を選択して解析を行った。完全ヒトフレームワーク領域を構成する配列２０Ａ１２は、図３２ＤのＬ２Ｈ１０として示されている。
ヒト化２０Ａ１２変異体をＦａｂｓとして評価した。ヒト生殖細胞フレームワーク（ＶＬ及びＶＨ）は、各Ｖｅｒｎｉｅｒ位置がウサギ抗体配列（すなわち、ｒｂ２０Ａ１２）に存在するアミノ酸を構成するように、すべての推定ウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置で改変された。ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置は、既知の齧歯類のＶｅｒｎｉｅｒ位置に基づいて特定された。すべての重鎖及び軽鎖のＶｅｒｎｉｅｒ位置がウサギのアミノ酸に戻された変異体は、図３２ＤにおいてＬ１Ｈ１（ｈｕ２０Ａ１２．Ｌ１Ｈ１）と呼ばれる。重鎖及び軽鎖ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置がすべてヒトアミノ酸を構成する変異体をＬ２Ｈ１０という。各ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置が抗体又はｈｕＬＹ６Ｇ６Ｄの結合親和性に影響を与えるかどうかを評価するために、ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置を、対応するヒト配列のアミノ酸、すなわちＫＶ１－５＊０１又はＨＶ３－２３＊０１に個別に戻した。軽鎖変種Ｌ２が１つ、重鎖変種Ｈ２－Ｈ９が８つ追加で作られた。Ｌ２は、ＫＶ１－５＊０１配列に対するＰ４３Ａアミノ酸置換変異を含む。Ｈ２～Ｈ９は、それぞれ、ＨＶ３－２３＊０１配列に対するＱ２Ｖ、Ｉ４８Ｖ、Ａ４９Ｓ、Ｋ７１Ｒ、Ｓ７３Ｎ、Ｖ７８Ｌ、Ｆ９１Ｙ、Ｐ１０５Ｒのアミノ酸置換変異を含む。変異体抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて、完全ヒトフレームワーク配列を含む親クローン（Ｌ２Ｈ１０）の結合親和性と比較した（図３２Ｄ）。ウサギ重鎖残基Ｓ７３、Ｔ７６、Ｖ７８、Ｐ１０５は、上述した変異体抗体の結合親和性評価に基づいて、キーとなるウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基と決定した。
図３２Ｃは、ウサギ重鎖残基Ｓ７３、Ｔ７６、Ｖ７８、及びＰ１０５と、他のすべてのウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置におけるヒト残基とを含むヒト化２０Ａ１２の洗練バージョンを示す。磨かれたヒト化２０Ａ１２はまた、後述するように、Ｃ３５Ｓ又はＣ３５ＩとＣ５０Ａのアミノ酸置換を含むように改変された。また、Ｓ７３、Ｖ７８、Ｐ１０５ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基、追加のウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基Ｔ７６、及びＣ３５ＳとＣ５０Ａのアミノ酸置換をヒト生殖細胞ＨＶ３－３０＊１にグラフトし、さらにヒト化された洗練版ｒｂ．２０Ａ１２を生成した。
ウサギ抗体の約２０～４０％は余分なシステイン残基を含んでいる。例えば、ウサギ２０Ａ１２クローンは、ＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ２にシステイン対を含む（ＣＤＲ－Ｈ１におけるＣ３５及びＣＤＲ－Ｈ２におけるＣ５０）（図３１Ａ；図４０Ｂ）。この２つの位置のシステインは共通して存在し、ジスルフィド結合を形成していると考えられる。このシステイン対を除去するために、ｒｂ．２０Ａ１２のＣ３５とＣ５０を同時にＣ３５Ｓ－Ｃ５０Ａ、Ｃ３５Ｓ－Ｃ５０Ｓ、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ａ、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ｓ、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ｉ、及びＣ３５Ｇ－Ｃ５０Ｔに変異させ、変異体をＬＹ６Ｇ６Ｄに結合するかどうかを評価した。それぞれの変異体は、ウサギの可変ドメイン及びヒトの定常領域を有するキメラＦａｂｓの形で評価された。変異体ｒｂ２０Ａ１２．ＩＡ（Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ａ）は、親和性のほとんどを保持していることがわかった（ＫＤ ０．８６ ｎＭ）（図３４Ａ及び３４Ｃ）。このようにして、Ｃ３５Ｉ－Ｃ５０Ａの変異は、上述した研磨されたヒト化２０Ａ１２重鎖配列に含まれていた。
さらに、ウサギ２０Ａ１２軽鎖配列には、ＣＤＲ３にグリコシル化モチーフ（ＮＮＴ）が含まれており（図３２Ａ及び図４０Ｂ）、この部位がグリコシル化されていることが確認された。このグリコシル化部位を除去するために、ウサギ／ヒトキメラのバックボーンに一連の変異体が作られた。ＮＮＴは、ＱＮＴ、ＱＮＶ、ＳＮＡ、ＳＮＶ、ＡＮＴ、ＧＮＴ、ＮＮＶ、又はＮＮＡに置き換えられた（図３４Ｂ）。ＱＮＴ、ＱＮＶ、ＳＮＶ、ＧＮＴ、及びＳＮＡの置換を、前記で説明した研磨ヒト化２０Ａ１２軽鎖配列に組み込み、ＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合についてアッセイを行った（図３４Ｂ～３４Ｄ）。
２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２
ヒト化されたｒｂ．２０Ａ１２抗体として２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２変異体を選択した。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２
２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は、ＫＶ１－５＊０１のＶＬフレームワーク領域、アミノ酸置換Ｓ７３、Ｔ７６、Ｖ７８、Ｐ１０５で修飾されたＣＤＲ ＨＶ３－２３＊０１のＶＨフレームワーク領域（ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置に由来）、及びｒｂ．２０Ａ１２のＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ２のシステイン残基をそれぞれＩ及びＡで置換し、ＣＤＲ－Ｌ３のグリコシル化部位におけるＮＮＴからＱＮＴへの変異を有する）（図３２Ａ、４０Ｂ、及び４０Ｃ）を含む。ＫＤはｒｂ．２０Ａ１２では０．２３ｎＭ、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２では０．１４ｎＭである。
ＬＹ６Ｇ６Ｄへの結合
ヒト化されたｒｂ．２０Ａ１２変異体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２、ヒト化されたｒｂ．６Ｅ１０変異体６Ｅ１０．ｖ１１４、及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームをＴＤＢとして抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃアームとペアにし、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイでヒト及びサイノモルグスＬＹ６Ｇ６Ｄに対する親和性を試験した。ウサギ２０Ａ１２、ウサギ６Ｅ１０、及びヒト化２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２及び２０Ａ１２．ＳＮＶｖ１２を、抗原結合断片（Ｆａｂｓ）として結合するために追加的にアッセイを行った。ｒｂ６Ｅ１０ Ｆａｂを除き、ＬＹ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、２５℃でアッセイを行いＴＤＢを３７℃で流した。結果を以下の表２に示す。
Figure 2022122865000002
２つのヒト化ｒｂ．２０Ａ１２変異体、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２を、一過性トランスフェクション産生アッセイで評価した。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞へのトランスフェクションの１日後に、増殖培地を独自の生産培地に交換した。生産培地を添加した１日後に上清を採取し、Ｆｃ結合ＥＬＩＳＡを用いて抗体価を評価した。生産量は３８Ｅ４ｖ１に対して正規化された。コントロールとして、ａＦＧＦＲ１．ノブが設けられている。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ．１及び２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２はいずれも許容可能な収率を有していた（図３７）。
２０Ａ１２．ｖ１、２０Ａ１２．ｖ１．ｐｏｌｉｓｈｅｄ（２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）、及び１Ｇ４はすべて、３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃ抗ＣＤ３アームのいずれかと対になった場合に、ＢＶ ＥＬＩＳＡアッセイ（非定型クリアランスのリスクに関するインビトロテスト；Ｈｏｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ，４：７５３－７６０，２０１２）において良好な結果を示した（図３８）。結果は ＢＶ ＥＬＩＳＡ 法における高結合シグナルのコントロールとして使用された抗体である抗 Ｌｙｅ６Ｅ で正規化したものである。
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２と抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢについて、熱応力試験及びＡＡＰＨ酸化応力試験を用いて分子評価ライアビリティーを評価した。ライアビリティーは特定なかった（図３９）。
ヒト化されたｒｂ．２０Ａ１２変異体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２、ヒト化されたｒｂ．６Ｅ１０変異体６Ｅ１０．ｖ１１４、及び抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４アームをＴＤＢとして抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームとペアにし、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイでヒト及びサイノモルグスＬＹ６Ｇ６Ｄに対する親和性を試験した。ＬＹ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。１Ｇ４アームを構成するＴＤＢのＫＤは、ヒト及びｃｙｎｏ ＬＹ６Ｇ６Ｄの両方において、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム又は６Ｅ１０．ｖ１１４アームのＫＤよりも実質的に高かった（図３６）。
ｒｂ．６Ｅ１０のヒト化
６Ｅ１０のヒト化には複数のフレームワークを適用した。ｒｂ６Ｅ１０ ＶＬ ＣＤＲをヒト生殖細胞配列ＫＶ１－５＊０１及びＫＶ３－２０＊０１にグラフトし、ＶＨ ＣＤＲをヒト生殖細胞配列ＨＶ３－５３＊０１及びＨＶ３－４８＊０１にグラフトした（図４３Ａ）。これらの生殖細胞配列は、それらの高い血清有病率及びｒｂ．６Ｅ１０との高い配列同一性に基づいて選択された（図３３Ａ及び３３Ｂ）。２０Ａ１２について上述したように、ウサギ抗体からのすべてのＶＬ及びＶＨＶｅｒｎｉｅｒ位置を、それぞれのヒト生殖細胞フレームワークにグラフトした。全てのウサギのアミノ酸がＶｅｒｎｉｅｒ位置にあるグラフトをバージョン１（ＫＶ１－５／ＨＶ３－５３のためのｈｕ．６Ｅ１０．ｖ１ａ；ＫＶ１－５／ＨＶ３－４８のためのｈｕ．６Ｅ１０．ｖ１ｂ；及びＫ３－２０／ＨＶ３－５３のためのｈｕ．６Ｅ１０．ｖ１ｃ）と称する。各生殖細胞に対して軽鎖変異体を５種類追加し（ＫＶ１－５：Ｌ２－Ｌ６、ＫＶ３－２０：Ｌ２－Ｌ６）、ＨＶ３－５３に対して重鎖変異体（Ｈ２－Ｈ１１）を１０種類追加した。ＫＶ１－５軽鎖については、前記の変異体抗体の結合親和性評価に基づいて、Ａｌａ２、Ｐｈｅ３６及びＡｒｇ４３（Ｌ３）をウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基のキー残基と決定した（データは示さない）。同様に、ＫＶ３－２０軽鎖についても、Ａｌａ２、Ｐｈｅ３６及びＶａｌ５８（Ｌ４）が、ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ残基の鍵となることが決定された。重鎖については、ＨＶ３－５３＊０１（Ｈ１１）へのＣＤＲグラフトは、ｈｕＬｙ６Ｇ６Ｄへの親和性を維持するのに十分であることが確認された。ウサギのＶｅｒｎｉｅｒ位置は含まれない。生殖細胞ＨＶ３－４８＊０１（３－４８Ｈ２）に追加のＣＤＲグラフトを作製した。重鎖Ｈ１１は６Ｅ１０ｖ１１４としてＫＶ３－２０．Ｌ４と対になった。重鎖ＨＶ３－４８．Ｈ２を６Ｅ１０ｖ２３としてＫＶ１－５．Ｌ３と対にした（図４３Ａ－４３Ｄ）。
６Ｅ１０ｖ１変異体の分子評価（ＭＡ）アッセイの結果を図４１に示す。ＣＤＲ－Ｈ２中のＤ（５４）Ｇ及びＤ（５８）Ｙは、２週間で３０．２％の異性化の増加を有する不安定なものであることが判明した。
実施例３．抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体ｈｕ．２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の配列と結晶構造
実施例２に記載したように、１Ｇ４（実施例２）と重複するエピトープを有するヒト化ウサギ抗体２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は、強力な抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体として同定された。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は、３７℃でＴＤＢとしてヒトＬｙ６Ｇ６Ｄに対して高い結合親和性を示し（ＫＤは約２ｎＭ、１Ｇ４では約１６ｎＭ）、ヒト及びカニクイザルＬＹ６Ｇ６Ｄと同等の結合親和性を示し、ＢＶ ＥＬＩＳＡ法、発現試験、分子評価（ＭＡ）熱酸化試験において良好な結果を示した。１セル製造のための電荷対を構成するように修飾された変異体を含む２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２のアミノ酸配列、及びＬＹ６Ｇ６Ｄに結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の結晶構造を以下に記載する。
Ａ．２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２のアミノ酸配列
２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図５Ａ及び図５Ｂに示す（配列番号２２及び２３）。１セル製造のための電荷対を構成するように改変された２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の亜種の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図５Ｃ及び５Ｄに示す（配列番号１０及び１１）。
Ｂ．ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の結晶構造解析
ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合した２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の結晶構造を決定するために、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸９３～１０４を含むポリペプチド（配列番号 ７８）を、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）と共結晶化した（図６Ａ～６Ｆ）。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２－ＬＹ６Ｇ６Ｄ複合体の結晶構造を２．２Å，Ｒ／Ｒｆｒｅｅ １９．９／２４．３％に分解した（Ｐ１スペースグループ：８２，１３８，１３９，６８，７５，９０．）。１０個の２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２ Ｆａｂをテストした。ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基９４～１０３は、全１０コピーに結合して分解された。このＬｙ６Ｇ６Ｄ ９４－１０３ポリペプチドは、抗Ｌｙ６Ｇ６Ｄ １Ｇ４の結晶構造において二量体を形成し、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２とモノマーとして結合していた。
Ｃ．２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２対１Ｇ４の結晶構造
また、ＬＹ６Ｇ６Ｄのアミノ酸９３～１０４を含むポリペプチド（配列番号８７）を、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２抗体（配列番号９６～９７）の断片抗原結合領域（Ｆａｂ）又は１Ｇ４のＦａｂ（配列番号９４、９５）と共結晶化した。ペプチドバックボーンのコンフォメーションは、ジスルフィドステープルによる１Ｇ４構造と２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２構造の間で類似していたが、側鎖は有意なコンフォメーション移動度を示した（図７Ａ及び７Ｂ）。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２及び１Ｇ４は、図７Ｃ～７Ｆ及び表３及び４に示すように、ＬＹ６Ｇ６Ｄペプチドの異なる残基に結合していることがわかった。
図７Ｃ及び７Ｄは、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２とＬＹ６Ｇ６Ｄとの相互作用を示す。ＬＹ６Ｇ６Ｄと相互作用する２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の残基は、図７Ｄで標識されている。表３は、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２ Ｆａｂ：ＬＹ６Ｇ６Ｄ複合体の界面残基をまとめたものである。ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄ上の２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２ Ｆａｂのエピトープは、残基Ａｒｇ９４、Ａｓｐ９５、Ｃｙｓ９６、Ｔｙｒ９７、Ｌｅｕ９８、Ｇｌｙ９９、Ａｓｐ１００、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２及びＡｓｎ１０３からなる（ＲＤＣＹＬＧＤＬＣＮ）。これらの各残基は、Ｆａｂから５Å以内に配置されている。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２ Ｆａｂは、ＣＤＲＨ１からの重鎖残基Ａｓｎ３１、Ａｓｎ３２、Ａｌａ３３、Ｍｅｔ３４、ＣＤＲＨ２からのＳｅｒ５２、及びＣＤＲＨ３からのＡｒｇ９８、Ｇｌｙ９９、及びＡｓｐ１００を利用し、ＣＤＲＬ３からの軽鎖残基Ｔｈｒ９１、Ｓｅｒ９２、Ｐｈｅ９３、及びＡｒｇ９４を利用してＬＹ６Ｇ６Ｄと相互作用する。
Figure 2022122865000003
図７Ｅ及び７Ｆは、１Ｇ４とＬＹ６Ｇ６Ｄとの相互作用を示す。ＬＹ６Ｇ６Ｄと相互作用する１Ｇ４の残基は、図７Ｆで標識されている。表４は、１Ｇ４ Ｆａｂ：ＬＹ６Ｇ６Ｄ複合体の界面残基をまとめたものである。ヒトＬＹ６Ｇ６Ｄ上の１Ｇ４ Ｆａｂのエピトープは、残基Ｈｉｓ９３、Ａｓｐ９５、Ｃｙｓ９６、Ｔｙｒ９７、Ｌｅｕ９８、Ｇｌｙ９９及びＡｓｐ１００で構成されており、これらの残基はそれぞれＦａｂの５Å以内に位置している。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２とは異なり、１Ｇ４はＬＹ６Ｇ６Ｄ残基Ａｒｇ９４、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２、又はＡｓｎ１０３と相互作用することが見出されなかった。従って、ＬＹ６Ｇ６Ｄ残基Ａｒｇ９４、Ｌｅｕ１０１、Ｃｙｓ１０２、及びＡｓｎ１０３は、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２によって一意に結合されるエピトープ残基である。
１Ｇ４ Ｆａｂは、ＣＤＲＨ１からの重鎖残基Ｔｈｒ３１、Ｔｙｒ３、Ｖａｌ３３、ＣＤＲＨ３からのＡｒｇ９９、Ａｓｎ１００、ＣＤＲＬ３からの軽鎖残基Ｓｅｒ９７、Ｔｙｒ９８、Ｓｅｒ９９、Ａｌａ１００を利用してＬＹ６Ｇ６Ｄと相互作用する。
Figure 2022122865000004
実施例４．インビトロＴＤＢ活性アッセイ
細胞毒性、細胞結合、Ｔ細胞活性化、及び細胞殺傷
抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１又は４０Ｇ５ｃのいずれかと対になったＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２又はその変種を有するＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）を、中程度のＬＹ６Ｇ６Ｄを内因性に発現するＨＴ５５細胞（ヒト大腸癌細胞株）を用いて、インビトロ活性について試験を行った（図９Ａ－９Ｃ、１０Ａ－１０Ｄ、及び１１Ｆ－１１Ｈ）。４０Ｇ５ｃ及び３８Ｅ４ｖ１は、ヒトＣＤ３εのＮ末端２７アミノ酸にまたがるＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）結合ペプチドで免疫したマウスから得られたヒト化ハイブリドーマ抗体である。４０Ｇ５ｃは、ＣＤ３に対して比較的低い親和性を有することが以前に観察されているが、３８Ｅ４ｖ１は高い親和性を有することが観察されている（米国公開第２０１５－０１６６６６１号）。
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、健常者ドナーの全血からフィコール勾配により単離し、エフェクター細胞として使用した。ヒトＰＢＭＣ及びＨＴ５５細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）の共培養物を、ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの様々な濃度の存在下でインキュベートした。７２時間のインキュベーション後、標的細胞の殺傷及びＴ細胞の活性化を測定した。標的細胞殺傷は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおける発光強度（ＲＬＵ）を測定することにより、パーセント細胞毒性として定量化した。標的細胞殺傷の割合は、以下の式を用いて算出した。
標的細胞殺傷％率＝｛（非処理ウェル中のＲＬＵ－ＴＤＢ処理ウェル中のＲＬＵ）／（非処理ウェル中のＲＬＵ）｝×１００。
ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を用いて測定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞については、ＣＤ６９及びＣＤ２５の表面発現を検出し、ＣＤ６９＋ＣＤ２５＋であったＣＤ８＋Ｔ細胞の割合をＣＤ８＋Ｔ細胞活性化として報告した。
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、用量依存的にＨＴ５５に対してインビトロでＴ細胞活性化（図９Ｂ、９Ｃ、１０Ｂ、１０Ｃ、１１Ｇ、１１Ｉ）及び標的細胞殺傷（図９Ａ、１０Ａ、１０Ｄ、１１Ｄ－１１Ｆ、１１Ｈ）を誘導するのに強力であった。高親和性抗ＣＤ３アーム３８Ｅ４ｖ１と対になった場合、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は１Ｇ４と同等のインビトロ細胞殺傷力を有していた。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと低親和性抗ＣＤ３アーム４０Ｇ５ｃアームを対にした場合、３８Ｅ４ｖ１アームよりも細胞殺傷力は低いが、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと４０Ｇ５ｃアームを含むＴＤＢは、１Ｇ４アームと４０Ｇ５ｃアームを含むＴＤＢよりも大きな細胞殺傷力を有していた。（図１１Ｄ及び１１Ｅ）。また、ウサギ２０Ａ１２は、１Ｇ４よりもＨＴ５５細胞に対して高い結合親和性を示した（図４Ｆ）。
１０名の健康なヒトドナーからのＰＭＢＣを用いたアッセイにおいて、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含むＴＤＢによる平均細胞死ＥＣ５０は約１．０４ ｎｇ／ｍｌ（７ ｐＭ）であり、平均ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化ＥＣ５０は約８７ ｎｇ／ｍｌ（５８３ ｐＭ）であった（図１１Ｆ－１１Ｈ）。細胞殺傷及びＣＤ８＋Ｔ細胞活性化はまた、異なるレベルのＬＹ６Ｇ６Ｄを発現するＣｏｌｏ３２０ＤＭ（ヒトＤｕｋｅｓ’タイプＣ、結腸直腸腺癌細胞株）及びＬＳ１０３４（ヒトＤｕｋｅｓ’タイプＣ、大腸腺癌細胞株）細胞（図１１Ａ）において試験された（図１１Ｂ及び図１１Ｉ）。
実施例５．Ｉｎ ｖｉｖｏでのＴＤＢ活性とクリアランスアッセイ
Ａ．腫瘍体積
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含む候補ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを、ＮＳＧ（商標）マウスの異種移植ＬＳ１０３４及びＨＴ５５腫瘍に対するｉｎ ｖｉｖｏ活性について試験した（図１６Ａ－１６Ｃ １７Ａ－１７Ｃ）。マウスは、健康なドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いてヒト化した。対照として、デリバリービークルとＰＭＢＣを含む処理、又はＴＤＢを含み、ＰＭＢＣを含まない処理を行った。ＴＤＢの血清濃度は、ＴＤＢの単回投与後、ジェネリック免疫グロブリン薬物動態（ＧＲＩＰ）ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，８－２０，２００８）を使用して測定した。
ＬＳ１０３４腫瘍（ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＩＨＣスコア３＋）及びＨＴ５５腫瘍（ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＩＨＣスコア２＋）に対する、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム及び抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性が確立された。ＬＳ１０３４及びＨＴ５５腫瘍モデルでは、高親和性抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アーム（１ｍｇ／ｋｇ、単回投与、ＩＶ、Ｄ０）を含むＴＤＢの方がより大きな有効性が観察された（図１６Ａ及び１７Ａ）。有効性及びＰＫは、３８Ｅ４．ｖ１を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢでは用量依存性を示し、３８Ｅ４ｖ１を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢと４０Ｇ５ｃを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢでは血清中のＰＫにわずかな差が認められた（図１６Ａ－１６Ｃ及び図１７Ａ－１７Ｃ）。抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢのｉｎ ｖｉｖｏでの有効性もまた、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ腫瘍に対して試験された（図１１Ｊ）。
Ｂ．ＳＣＩＤマウスのクリアランス
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２と抗ＣＤ３ ４０Ｇ５ｃ又は３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢのクリアランスを、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを用いて、ＧＲＩＰ ＥＬＩＳＡ法を用いて５ｍｇ／ｋｇの抗体を単回静脈内投与した後に測定した（図１８）。クリアランス率（７．６７ｍＬ／日／ｋｇ）は、３８Ｅ４ｖ１抗ＣＤ３抗体群と対になった他のＴＤＢと同等であった。クリアランスレートは８．６～１６ｍＬ／ｋｇ／日であった。２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２と３８Ｅ４ｖ１を含むＴＤＢは、ＳＣＩＤマウスにおいて許容可能な薬物動態（ＰＫ）を示し、対照抗体である抗ｇＤ ５Ｂ６と比較して、全身性ＣＬに２倍以下の差を示した。ＬＹ６Ｇ６Ｄの２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２と３８Ｅ４ｖ１のアームを含むＴＤＢは、非結合種ではＰＫライアビリティー（非定型ＰＫ）は認められなかった。すべての投与溶液は、公称投与量の±２０％以内に回収された。
実施例６．カニクイザルの安全性アッセイ
Ａ．カニクイザルの毒性試験
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの毒性試験をカニクイザル（ｃｙｎｏ）を用いて実施した。この研究は、反復群と時差投与群による適応がなされていた（図１９）。グループ２は、１日目（Ｄ１）にＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを単回投与（１ｍｇ／ｋｇ）で点滴静注した。第３群、第４群、第５群には単回投与（それぞれ２、４、８ｍｇ／ｋｇ）の点滴静注を行い、第６群には単回投与（１５ｍｇ／ｋｇ）の点滴静注を行った。Ｄ８については、病理組織学的評価のために末期壊死を行った（図１９）。本研究の目的は、健康な動物を対象にＬＹ６Ｇ６Ｄのリスクを軽減し、投与量の範囲を試験することである。過去のＴＤＢでの経験に基づき、ＰＫ／ＰＤ及び標準毒性のエンドポイントが含まれていた。
静脈内ＰＫは、ＧＲＩＰ ＥＬＩＳＡ法を用いて全治療群で評価した。その結果、用量に比例した全身被曝（用量正規化ＡＵＣ０－７）よりも大きな被曝が認められた。クリアランス（ＣＬ）はＴＤＢの用量（４ ｍｇ／ｋｇ以上）の増加に伴い減少し、これらの用量では標的媒介性薬物処分（ＴＭＤＤ）が飽和していることが示唆された（ＣＤ３媒介、末梢血中）（図２０Ａ；表５）。１ｍｇ／ｋｇ用量でのＰＫは、ｃｙｎｏにおける他のＴＤＢの過去のデータと同等であった、例えば、約２０ｍＬ／ｋｇ／日のＣＬを示したｇＤ／３８Ｅ４ｖ１ ＴＤＢ（図２０Ａ及び２０Ｂ）。投与溶液は公称値の±２０％以内で回収された。
Figure 2022122865000005
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２と抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの単回静脈内投与は、１５ｍｇ／ｋｇまでの用量で良好な忍容性を示した。臨床観察では、獣医師による治療は行われておらず、死亡率、体重、食物摂取に影響はなかった。１５ｍｇ／ｋｇの投与では、動物番号６００１で嘔吐（中等度）が認められ、動物番号６００３では投与後４－５時間目にのみ顔面蒼白と震え（軽度）が認められた。臨床病理学的には炎症や肝疾患の証拠はなく、軽度のＣ反応性蛋白（ＣＲＰ）上昇が認められた（図２２Ｂ）。解剖病理学的には、１５ｍｇ／ｋｇの投与で１匹の動物（動物番号６００３、軽度の振戦が認められた）の脳に血管周囲／血管性単核浸潤が認められた（図２１）。
サイトカインＧ－ＣＳＦ、ＩＬ－１Ｒａ、ＭＣＰ－１、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１３、ＩＬ－８及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の濃度を、処理後に測定した（図２２Ａ及び２２Ｂ）。いくつかのサイトカインは、１ｍｇ／ｋｇ以上の用量で軽度の濃度上昇を示した。用量反応関係は明らかではなかった。ＭＣＰ－１ ａｔの軽度の増加は、＞４ｍｇ／ｋｇで観察された（図２２Ａ）。すべての変化は、治療後２４時間でベースラインに戻っていた。
Ｔヘルパー（Ｔｈ）リンパ球を発現するＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ５＋ＣＤ２５、Ｔ細胞傷害性（Ｔｃ）リンパ球を発現するＣＤ３＋／ＣＤ８＋／ＣＤ５＋ＣＤ２５、ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４５＋／ＣＤ２０＋Ｂリンパ球、及びＣＤ４５＋／ＣＤ１６＋ナチュラルキラー細胞の数をフローサイトメトリーにより測定した（図２３Ａ～２３Ｄ）。測定は、治療前（Ｄａｙ－７）及び治療当日（Ｄａｙ １ Ｐｒｅ）の７日間で行い、平均化してプレドーズ平均を提供した。輸液終了後、２時間後、６時間後、２４時間後、１６８時間後に測定した。軽度のＴ細胞活性化（図２３Ａ）、Ｔ細胞回復（図２３Ｂ）、Ｂ細胞回復（図２３Ｃ）を示すピークが観察された。
実施例７．親和性測定のためのＢＩＡｃｏｒｅアッセイ
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アーム（図２４Ａ）又は４０Ｇ５Ｃアーム（図２４Ｂ）を含むＴＤＢを、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて、ヒト及びｃｙｎｏ Ｌｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する親和性をアッセイした。Ｌｙ６Ｇ６Ｄ－Ｆｃをチップ上に直接固定化し、３７℃でＴＤＢを流した。抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ１Ｇ４アームおよび抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アーム（図２４Ｃ）または４０Ｇ５Ｃアーム（図２４Ｄ）を含むＴＤＢについて同様のアッセイを行った。これらのアッセイの結果を表６に示す。
Figure 2022122865000006
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１アームを含む２セルシステムを用いて製造されたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、ヒト及びカニクイザルＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチド及びヒト及びカニクイザルＣＤ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対して高い結合親和性を有していた（表７）。
Figure 2022122865000007
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４．ｖ１（左側パネル、２セル生産方式で生産）、３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ１（中央パネル、１セル生産方式で生産）、又は３８Ｅ４．ｖ１ ＭＤ４アーム（右側パネル、１セル生産方式で生産）を含むＴＤＢを、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて、ヒトＬｙ６Ｇ６Ｄポリペプチドに対する親和性についてアッセイした（図２５）。これらのアッセイの結果を表８に示す。
Figure 2022122865000008
実施例８．１セル製造のためのＭＤ１及びＭＤ４抗ＣＤ３アームの開発
Ａ．１セル、２セルの製造システム
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体（例えば、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２）は、図８Ａに示すように、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ特異性を有する第１のアームと抗ＣＤ３特異性を有する第２のアームを有するＬＹ６Ｇ６Ｄ Ｔ細胞依存性二重特異性抗体（ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）として製造された。ＴＤＢは、２セルシステム（図８Ｂ）又は１セルシステム（図８Ｃ）のいずれかを用いて製造した。１セル製造のためには、第一アーム及び第二アームが宿主細胞内で同等のレベルで発現されることが重要である：発現レベルの大きな差は、軽鎖（ＬＣ）のミスペアリングの可能性を高め、ＴＤＢの正しいペアリングの可能性を低下させる。抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームは相対的に発現が悪いのに対し、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２は高度に発現している（図３７）。ＴＤＢアセンブリを評価するための過渡トランスフェクションアッセイにおいて、３８Ｅ４ｖ１アームと２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、それぞれのアームをコードするＤＮＡの比率を１：１６の比率に変更しても、８０％を超える正しいペアリングに到達しなかった（図２９Ｄ）。
抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームの２つの変種、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）及び３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４）は、３８Ｅ４ｖ１よりも改善された発現を有するように開発され、従って、１セルフォーマットＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ（例えば、抗ＬＹ６Ｇ６Ｄアーム２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２を有する１セルフォーマットＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢ）の改善された製造を可能にした。ＭＤ１及びＭＤ４は、好ましいＬＣ－ミスペア不純物比（すなわち、正しく形成されたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢの高純度）を有すること、及び野生型３８Ｅ４ｖ１と同等のインビトロ効力、ｉｎ ｖｉｖｏ効力、及びＰＫを有することが見出された。
１セルシステムを用いて製造されたＴＤＢは、図８Ｄ又は８Ｅに示すように、本明細書に記載されているように、電荷対を導入するアミノ酸置換変異を含むように追加的に改変された。
Ｂ．２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２の１セル変異体
１セルシステムでの製造を容易にするために、２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームの重鎖及び軽鎖配列は、電荷対を導入するアミノ酸置換変異を構成するように改変された（図５Ｃ、５Ｄ、及び８Ａ－８Ｅ）。
Ｃ．３８Ｅ４ｖ１発現変異体ＭＤ１及びＭＤ４の生成
１セルシステムでの製造に適した３８Ｅ４ｖ１の発現改善変異体を作製するために、３８Ｅ４ｖ１のＶＬ配列を、後述するように、３８Ｅ４ｖ１よりも優れた発現を有する抗ＣＤ３抗体である４０Ｇ５ｃからの残基で修飾した。２つの３８Ｅ４ｖ１変異体３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）及び３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４）は、マウスの野生型（ＷＴ）３８Ｅ４ｖ１と比較して、良好なＬＣ－ミスペア不純物比とインビトロ効力、ｉｎ ｖｉｖｏ効力、及びＰＫを有する。
低親和性抗ＣＤ３抗体４０Ｇ５ｃの軽鎖配列に由来する１つ以上のアミノ酸置換を含む３８Ｅ４ｖ１軽鎖可変領域（ＶＬ）の変異体を生成した（図２９Ａ）。３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１ ＶＬは、３８Ｅ４ｖ１：Ｓ４３Ｐ、Ｔ５１Ａ、Ｋ５５ＥおよびＫ８９Ｔの配列に対して４つのアミノ酸置換を含む（図２９Ａ）。ＭＤ４ ＶＬは、Ｓ４３ＰとＴ５１Ａの置換のみを含む（図２９Ａ）。また、Ｓ４３Ｐ、Ｔ５１Ａ、Ｋ５５Ｅ、又はＫ８９Ｔのアミノ酸置換のみを含む変異体も生成された。すべての３８Ｅ４ｖ１変異体は、３８Ｅ４ｖ１の重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含んでいた（図２９Ｂ）。
Ｃ．一過性のトランスフェクションアッセイ
３８Ｅ４ｖ１、ＭＤ１、及び３８Ｅ４ｖ１に対するＳ４３Ｐ、Ｔ５１Ａ、Ｋ５５Ｅ、又はＫ８９Ｔアミノ酸置換のみを含む変異体の発現レベルを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）１１－９宿主細胞における一過性トランスフェクションアッセイで評価した。
トランスフェクションの１日後に、増殖培地を生産培地に交換した。生産培地を添加した１日後に上清を採取し、Ｆｃ結合ＥＬＩＳＡを用いて抗体価を評価した。生産量は３８Ｅ４ｖ１に対して正規化された。３８Ｅ４ｖ１軽鎖は、抗体発現の収量を制限しているように見える。意外なことに、３８Ｅ４ｖ１軽鎖の個々の位置を、より低親和性の抗ＣＤ３抗体４０Ｇ５ｃ（Ｓ４３Ｐ、Ｔ５１Ａ、又はＫ８９Ｔ）からの残基で置き換えることは、収率のわずかな改善をもたらし（図２９Ｃ）、これらの変更を、Ｓ４３Ｐ、Ｔ５１Ａ、Ｋ５５Ｅ、Ｋ８９Ｔアミノ酸置換のすべてを含むＭＤ１変異体で組み合わせたとき、収率のより実質的な増加が観察された（図２９Ａ及び２９Ｃ）。
ＴＤＢアセンブリのための一過性のトランスフェクションアッセイにおいて、発現が改善された３８Ｅ４ｖ１変異体ＭＤ１及びＭＤ４は、標的アーム（抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ）軽鎖（ＬＣ）ＤＮＡと抗ＣＤ３アームＤＮＡの比率が１：４の場合、インタクトな抗体の９５％のアセンブリに達したのに対し、３８Ｅ４ｖ１は、ＬＣ ＤＮＡと抗ＣＤ３アームＤＮＡの比率が１：１６の場合でも、８０％を超える適切なペアリングに達しなかった（図２９Ｄ）。成功した細胞株開発クローンｘＦｃＲＨ５を対照として提供する。従って、ＭＤ１及びＭＤ４は、適切にペアリングされた二重特異性抗体を高い割合で生成することができる。
Ｄ．バインディングキネティクスアッセイ
３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１及びＭＤ４アームの結合速度は、高親和性野生型抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アーム（ＷＴ）に匹敵するヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ３リガンドへの親和性を示した（表９）。このようにして、ＭＤ１及びＭＤ４変異体は、３８Ｅ４ｖ１の高い親和性を保持した。アッセイでは、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて行った：２７ｍｅｒヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ３ポリペプチドをビオチンにコンジュゲートし、ＳＡ ＣＭ５チップ上に固定化し、ＴＤＢを３７℃で１００μｌ／分で流した。
Figure 2022122865000009
Ｅ．薬物動態アッセイ
様々な抗ＣＤ３アームの薬物動態（ＰＫ）を評価するために、３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、ＭＤ１、ＭＤ４及び３８Ｅ４ｖ１．Ｋ５５ＥのＰＫプロファイルを、各変異体の単回投与後のＣＢ－１７ ＳＣＩＤマウスで測定した。抗ｇＤ抗体をコントロールとして使用した。抗ｇＤ抗体は、単純ヘルペスウイルスの糖タンパク質Ｄエピトープを標的とした非結合性コントロールＩｇＧである。すべての抗体は、ＦｃγＲ媒介エフェクター機能を減衰させるために、Ｎ２９７Ｇ変異を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する単特異的な二価の抗ＣＤ３抗体として試験された。
雌のＣＢ－１７．ＳＣＩＤマウスの６群（群あたりｎ＝１２；チャールズリバーラボラトリーズ、２５１）を、各抗体を５ｍｇ／ｋｇの用量で単回静脈内投与した。便宜上、雌マウスを使用した。歴史的に見ても、雄マウスと雌マウスを用いたＰＫ試験では違いは観察されていない。血液サンプルは、最大２１日間、選択された時点（各時間点について３回のレプリケート）で大腿静脈を介して収集された。血清中の総抗体濃度は、検出限界１５．６ ｎｇ／ｍＬのＧＲＩＰ ＥＬＩＳＡ（抗ヒトＩｇＧでコートし、抗ヒトＩｇＧで検出したプレート）で測定し、ＰＫ評価に使用した。投与液回収率は、抗ＧＤ、３８Ｅ４ｖ１、４０Ｇ５ｃ、ＭＤ１、ＭＤ４、及び３８Ｅ４ｖ１．Ｋ５５Ｅについて、それぞれ１１１％、１１０％、１０６％、９７．８％、１０３％、及び１０６％であった。投与量の回収率は２０％以内であった；従って、さらなる分析には公称投与量が使用された。
ＰＫプロファイルは、異なる時点で異なるマウスからプールされた。データ分析には、公称サンプル採取時間と実際の用量溶液濃度を使用した。ノンコンパートメント分析（ＮＣＡ）のパラメータは、スパースサンプリングとＩＶボーラス入力を用いて、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）６４を用いて推定した。標準誤差値を提供した。マウスは、イソフルラン（５％イソフルラン、Ｏ２を２Ｌ／ｍｉｎで）で麻酔した後、安楽死させた。すべての手順は、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって設定されたガイドラインと原則に準拠し、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって認定された施設で実施された。
抗ＣＤ３抗体変異体はマウスＣＤ３と交差反応しないため、抗ＣＤ３抗体変異体を含むＴＤＢのマウスＰＫプロファイルは、標的結合がない場合の変異体のＰＫと非特異的消去率を比較する機会を提供した。抗ＣＤ３抗体変異体の血清濃度－時間プロファイルを、抗ｇＤ対照（図２９Ｅ）とともに評価した。各群のＰＫデータをＮＣＡ（表１０）で特徴づけた。
抗ＣＤ３抗体変異体を投与された群と比較して、抗ＧＤを投与された群が最も高い曝露量を示した。４０Ｇ５ｃ投与群は、そのＡＵＣｌａｓｔ値に基づく曝露量が抗ｇＤ投与群と比較してわずかに低く、他の抗ＣＤ３抗体変異体と比較して最も高い曝露量を示した。一方、３８Ｅ４ｖ１は、他の抗ＣＤ３抗体変異体と比較して、そのＡＵＣｌａｓｔに基づく曝露量が最も低かった。
ＭＤ１、ＭＤ４、Ｋ５５Ｅの３つの変異体のうち、ＭＤ１はそのＡＵＣｌａｓｔに基づく曝露量が最も高く、そのＰＫプロファイルは４０Ｇ５ｃ投与群と同様であった。ＭＤ４投与群は３つの変異体の中でＡＵＣｌａｓｔに基づく曝露量が最も低く、ＰＫプロファイルは３８Ｅ４ｖ１投与群と同様であった。さらに、ＭＤ１はマウスのＡＵＣｉｎｆに基づいて３８Ｅ４ｖ１の曝露を～３倍改善した。さらに、抗ｇＤ、４０Ｇ５ｃ及び３８Ｅ４ｖ１．ＭＤ１投与群のＶｓｓ値は、３８Ｅ４ｖ１、ＭＤ４及びＫ５５Ｅ投与群のＶｓｓ値と比較して約２倍低い値を示した（表１０）。
Figure 2022122865000010
標準誤差の値は、該当する場合に提供されている。Ｃｍａｘ＝観察された最大血清濃度、ＡＵＣｌａｓｔ＝時刻０から２８日目の最後に測定された時間点までの血清濃度時間曲線の下の面積。ＡＵＣｉｎｆ＝時刻０から無限大に外挿した血清濃度時間曲線下の面積。ＣＬ＝クリアランス。Ｖｓｓ＝定常状態での分布の体積 ｔ１／２＝終末半減期。
３８Ｅ４ｖ１が４０Ｇ５ｃと比較して低曝露であることを考慮して、次に、観察された低曝露に非特異的に寄与しうるＣＤ３群の特徴があるかどうかを評価した。カニクイザルにおける抗体クリアランスの理論的リスク評価を提供する配列ベースの計算ツールであるｉｎ ｓｉｌｉｃｏ Ｃｌｅａｒａｎｃｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ（ｉＣＡＴ）を用いて、３８Ｅ４ｖ１及び４０Ｇ５ｃの抗体可変領域（Ｆｖ）電荷及び疎水性を推定した（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１１１：１８６０１－６，２０１４）。この評価は、Ｆｖドメイン配列から計算されたパラメータに基づいている。抗ＣＤ３ ２価抗体について、ｉＣＡＴスコアを評価した。３８Ｅ４ｖ１の計算されたＦｖ電荷は、許容可能なｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの範囲外である＋７．６であった（許容範囲はＦｖ電荷≧０及び≦＋６．２を含む）一方、４０Ｇ５ｃの計算されたＦｖ電荷は＋５．６で許容範囲内であった。計算されたＦｖ電荷は、ＭＤ１は＋４．７、ＭＤ４は＋７．６であった。このように、ＭＤ１は３８Ｅ４ｖ１と比較してＦｖ電荷が改善され、サイノモルグス猿でのクリアランスのための許容可能な理論上のリスクを有していた。
さらに、抗ＣＤ３変異体をバキュロウイルス（ＢＶ）ＥＬＩＳＡを用いて試験した。ＢＶ ＥＬＩＳＡは、非特異的クリアランスの評価に使用されるインビトロツールである（Ｈｏｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ，４：７５３－７６０，２０１２）。この評価は、バキュロウイルス粒子への非特異的結合のＥＬＩＳＡ検出に基づいており、迅速なクリアランスのためにリスクの高い抗体を識別することができる。３８Ｅ４ｖ１のＢＶ ＥＬＩＳＡスコアは１．１５であり、許容可能なｉｎ ｖｉｖｏクリアランスの予測範囲外であった（ＢＶ ＥＬＩＳＡスコアが１．０を超えると、高速クリアランスの可能性が高いことを示す）。一方、ＢＶ ＥＬＩＳＡスコアはＭＤ１が０．１５、ＭＤ４が０．７２であり、ＭＤ１、ＭＤ４ともに許容範囲内であった。興味深いことに、ＭＤ４はｉｎ ｖｉｖｏでのさらなる試験のためのＢＶ ＥＬＩＳＡ試験に合格したが、ｉｎ ｖｉｖｏマウスのＰＫデータは、ＭＤ１と比較してＭＤ４は３８Ｅ４ｖ１の曝露を改善しなかったことを示した。
実施例９．１セルシステムで産生された抗体のＴＤＢ活性アッセイ
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１（ＭＤ１）、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４（ＭＤ４）、又は３８Ｅ４ｖ１（ＷＴ）アームを含む１細胞系（図８Ｃ～８Ｅ）を用いて組み立てられた候補ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを、インビトロ活性、インビボ活性、及びＣＤ３ポリペプチドとの親和性について試験した。抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームを含む２細胞系（図８Ｂ）を用いて組み立てられたＴＤＢをコントロールとして使用した。
Ａ．インビトロでの細胞毒性、細胞結合、Ｔ細胞活性化
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アーム及び抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１、３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４、又は３８Ｅ４ｖ１アーム（ＷＴ）を含む１細胞系を用いて組み立てられたＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを、健康なドナーからのＰＢＭＣを補充したＨＴ５５細胞におけるインビトロ活性、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化について試験した（図１４Ａ－１４Ｃ及び１５Ａ－１５Ｃ）。殺傷は、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ（登録商標）アッセイにおけるパーセント細胞毒性として定量化し、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、実施例２に記載したように、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を用いて測定した。ＴＤＢはすべて１ｍｇ／ｋｇで投与した。変異体３８Ｅ４ｖ１アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、ＨＴ５５に対するインビトロでのＴ細胞活性化（図１４Ｂ、１４Ｃ、１５Ｂ、１５Ｃ）及び標的細胞殺傷（図１４Ａ及び１５Ａ）の誘導において強力であった。ＭＤ１及びＭＤ４変異体は、このようにして３８Ｅ４ｖ１のインビトロでの高い効力を維持しながら、１セルシステムでの製造性を向上させている。
Ｂ．インビボ活性
抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ ２０Ａ１２．ＱＮＴｖ１２アームと、１セルシステムを用いて組み立てられた変異体３８Ｅ４ｖ１抗ＣＤ３アームを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを、ＮＳＧ（商標）マウスの異種移植ＨＴ５５腫瘍に対するｉｎ ｖｉｖｏ活性について試験した（図２６Ａ及び２６Ｂ）。マウスは、健康なドナー末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いてヒト化した。対照として、デリバリービークルとＰＭＢＣを含む処理、又はＴＤＢを含み、ＰＭＢＣを含まない処理を行った。抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４アームを含む１セル変異体は、２細胞のＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢと同等の腫瘍退縮を示した。
ＴＤＢのクリアランスは、ＨＴ５５腫瘍モデルマウス及びＳＣＩＤマウスにおいて、ＧＲＩＰ ＥＬＩＳＡ法を用いて抗体の単回投与後に測定した（図２７及び２８）。抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４アームを含む１細胞変異体のＰＫは、２セルＴＤＢと同等であった。１細胞ＴＤＢ変異体については、ＰＫライアビリティー（例えば、非定型ＰＫ）は同定されなかった。投与溶液は公称値の±２０％以内で回収された。
Ｃ．ＣＤ３への親和性のアッセイ
抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ１又は３８Ｅ４ｖ１ ＭＤ４アームで構成された１細胞システムを用いて構築された候補ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢは、抗ＣＤ３ ３８Ｅ４ｖ１アームで構成された１細胞システム又は２細胞システムを用いて構築されたＴＤＢと同等のＣＤ３に対する親和性を有していた：したがって、ＭＤ１および ＭＤ４は、３８Ｅ４ｖ１と同様に、高親和性の抗ＣＤ３アームであった（表１１）。アッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて行った。２７ｍｅｒヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ３ポリペプチドをビオチンにコンジュゲートし、ＳＡ ＣＭ５チップ上に固定化した。ＬＹ６Ｇ６Ｄ ＴＤＢを３７℃で流した。
Figure 2022122865000011
前述の本発明は、理解を明確にする目的で、図示及び例示の方法によりある程度詳細に説明されてきたが、これらの説明及び例示は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用されたすべての特許文献及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれている。

Claims (166)

  1. 抗リンパ球抗原６ファミリーメンバーＧ６Ｄ（ＬＹ６Ｇ６Ｄ）に結合する単離された抗体であって、ここで、前記抗体は、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
    （ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
    （ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン（ＶＨ１）を含み、前記Ｌ１は、以下のＣＤＲ：
    （ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、
    を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン（ＶＬ１）を含む、抗体。
  2. 請求項１に記載の抗体であって、ここで、（ａ）ＶＨ１が、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；（ｂ）ＶＬ１が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；又は（ｃ）抗体が、（ａ）のＶＨ１と（ｂ）のＶＬ１を含む、抗体。
  3. 請求項１又は２に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ１は、以下のフレームワーク領域（ＦＲ）：
    （ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  4. 請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  5. 請求項１又は２に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ１は、以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  6. 請求項１、２及び５のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、抗体。
  7. 請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ１は以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  8. 請求項１～４及び７のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  9. 請求項１、２、５及び６のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ１は以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  10. 請求項１、２、５、６及び９のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ１は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  11. ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体であって、ここで、前記抗体は重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン（ＶＨ１）を含み、Ｌ１は配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（ＶＬ１）を含む、抗体。
  12. ＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する単離された抗体であって、ここで、前記抗体は重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）を含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインを含み、ここで、前記Ｈ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン（ＶＨ１）を含み、Ｌ１は配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（ＶＬ１）を含む、抗体。
  13. 請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した場合に、３７℃で約１００ｐＭと１０ｎＭの間のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドに結合する、抗体。
  14. 請求項１３に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が６．０ ｎＭ以下のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドに結合する、抗体。
  15. 請求項１４に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が４ ｎＭ以下のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドに結合する、抗体。
  16. 請求項１５に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が２ ｎＭ以下のＫＤでヒトＬＹ６Ｇ６Ｄポリペプチドに結合する、抗体。
  17. 請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体がモノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、抗体。
  18. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体がＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する抗体断片である、抗体。
  19. 請求項１８に記載の抗体であって、ここで、前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、抗体。
  20. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が完全長抗体である、抗体。
  21. 請求項１～１７及び２０のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体がＩｇＧ抗体である、抗体。
  22. 請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が単一特異性抗体である、抗体。
  23. 請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が多重特異性抗体である、抗体。
  24. 請求項２３に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が二重特異性抗体である、抗体。
  25. 請求項２４に記載の抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体は、分化抗原群（cluster of differentiation）３（ＣＤ３）に結合し、重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで、Ｈ２はＶＨドメイン（ＶＨ２）を含み、Ｌ２はＶＬドメイン（ＶＬ２）を含む、抗体。
  26. 請求項２５に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインは、ヒトＣＤ３ポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３ポリペプチドに結合することができる、抗体。
  27. 請求項２６に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＣＤ３ポリペプチド又は前記カニクイザルＣＤ３ポリペプチドが、それぞれ、ヒトＣＤ３εポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３εポリペプチドである、抗体。
  28. 請求項２６に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＣＤ３ポリペプチド又は前記カニクイザルＣＤ３ポリペプチドが、それぞれ、ヒトＣＤ３γポリペプチド又はカニクイザルＣＤ３γポリペプチドである、抗体。
  29. 請求項２５～２８のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した場合に、３７℃で約１ｎＭから５００ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  30. 請求項２９に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインが、２５０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  31. 請求項３０に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインが、１００ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  32. 請求項３１に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインは、１５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  33. 請求項３２に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインは、１０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  34. 請求項３３に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＤ３結合ドメインは、５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  35. 請求項２５～３４のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ２は、以下のＣＤＲ：
    （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
    （ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    を含み、前記ＶＬ２は以下のＣＤＲ：
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、
    を含む、抗体。
  36. 請求項３５に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；（ｂ）前記ＶＬ２は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；又は（ｃ）前記抗体が、（ａ）のＶＨ２と（ｂ）のＶＬ２を含む、抗体。
  37. 請求項３５又は３６に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  38. 請求項３５～３７のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  39. 請求項２５～３４のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ２は、以下のＣＤＲ：
    （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；及び
    （ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    を含み、前記ＶＬ２は以下のＣＤＲ：
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、抗体、
    を含む、抗体。
  40. 前記結合ドメインが、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ２、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ２、又は（ｃ）（ａ）と同様のＶＨ２及び（ｂ）と同様のＶＬ２、を含む、請求項３９に記載の抗体。
  41. 請求項３９又は４０に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨ２が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  42. 請求項３９～４１のいずれか１項に記載の抗体であって、前記ＶＬ２が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、抗体。
  43. 請求項３５、３６、３９、及び４０のいずれか１項に記載の抗体であって、前記ＶＨ２が以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  44. 請求項３５、３６、３９、及び４０のいずれか１項に記載の抗体であって、前記ＶＨ２が以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  45. 請求項３５、３６、３９、４０及び４３のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ２は以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  46. 請求項３５、３６、３９、４０及び４４のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬ２は以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  47. 請求項２５～４６のいずれか一項に記載の抗体であって、前記Ｈ１及びＨ２がそれぞれ重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）をさらに含み、前記Ｌ１及びＬ２がそれぞれ軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）をさらに含む、抗体。
  48. 請求項４７に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換基を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換基を含む、抗体。
  49. 請求項４７又は４８に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｋ突然変異を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３Ｅ突然変異を含む、抗体。
  50. 請求項４９に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｅ突然変異を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３Ｋ突然変異を含む、抗体。
  51. 請求項４７又は４８に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｅ突然変異を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３Ｋ突然変異を含む、抗体。
  52. 請求項５１に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｋ突然変異を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３Ｅ突然変異を含む、抗体。
  53. ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで前記二重特異性抗体は以下：重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで、各Ｈ１及びＨ２は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、各Ｌ１及びＬ２は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで：
    （ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲ：
    （ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    を含み、
    （ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲ：
    （ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｖｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    を含み、
    （ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、かつ／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み；かつ
    （ｄ）Ｈ１の前記ＶＨは位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬは位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含み、かつ／又はＨ２の前記ＶＨは位置Ｑ３９でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬは位置Ｑ３８でのアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）、抗体。
  54. ＬＹ６Ｇ６Ｄ及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで前記二重特異性抗体は以下：重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで、各Ｈ１及びＨ２は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）を含み、各Ｌ１及びＬ２は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、ここで：
    （ａ）前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲ：
    （ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｖ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｖｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    を含み、
    （ｂ）前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の６つのＣＤＲ：
    （ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｉｖ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｖ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｖｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３；
    を含み、
    （ｃ）Ｈ１の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、かつ／又はＨ２の前記ＣＨ１は、Ｓ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＣＬは、Ｖ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換を含み；かつ
    （ｄ）Ｈ１の前記ＶＨは位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ１の前記ＶＬは位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含み、及び／又はＨ２の前記ＶＨは位置Ｑ３９でアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬは位置Ｑ３８でアミノ酸置換を含む（すべてカバットナンバリング）、抗体。
  55. 請求項５３又は５４に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＶＨはＱ３９（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換基を含み、Ｌ１の前記ＶＬはＱ３８（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換基を含む、抗体。
  56. 請求項５５に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換基を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３（ＥＵナンバリング）でのアミノ酸置換基を含む、抗体。
  57. 請求項５６に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＶＨは、さらに位置Ｑ３９（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換を含み、Ｌ２の前記ＶＬは、さらに位置Ｑ３８（カバットナンバリング）でのアミノ酸置換を含む、抗体。
  58. 請求項５７に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＣＨ１がＳ１８３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＣＬがＶ１３３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＣＨ１がＳ１８３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＣＬがＶ１３３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含む、抗体。
  59. 請求項５８に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＶＨはＱ３９Ｅ（カバットナンバリング）変異を含み、Ｌ１の前記ＶＬはＱ３８Ｋ変異を含み、Ｈ２の前記ＶＨはＱ３９Ｋ変異を含み、Ｌ２の前記ＶＬはＱ３８Ｅ変異（カバットナンバリング）を含む、抗体。
  60. 請求項５７に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＣＬはＶ１３３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＣＨ１はＳ１８３Ｋ突然変異（ＥＵナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＣＬはＶ１３３Ｅ突然変異（ＥＵナンバリング）を含む、抗体。
  61. 請求項６０に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＶＨはＱ３９Ｋ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｌ１の前記ＶＬはＱ３８Ｅ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｈ２の前記ＶＨはＱ３９Ｅ突然変異（カバットナンバリング）を含み、Ｌ２の前記ＶＬはＱ３８Ｋ突然変異（カバットナンバリング）を含む、抗体。
  62. 請求項５３及び５５～６１のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ／又はＬ２の前記ＶＬは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  63. 請求項６２に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＶＨは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｌ１の前記ＶＬは配列番号１１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  64. 請求項５４～６１のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、Ｈ２の前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ／又はＬ２の前記ＶＬは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、抗体。
  65. 請求項６４に記載の抗体であって、ここで、Ｈ１の前記ＶＨは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、Ｌ１の前記ＶＬは配列番号１１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  66. 請求項２５～６５のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ１のＦｃ領域の第１のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３１）及び前記Ｈ２のＦｃ領域の第２のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３２）は、それぞれ突起又は空洞を含み、かつ、ここで、前記ＣＨ３１の前記突起又は前記空洞が、前記ＣＨ３２の前記空洞又は前記突起内にそれぞれ位置することが可能であることを特徴とする、抗体。
  67. 請求項６６に記載の抗体であって、ここで、前記ＣＨ３１と前記ＣＨ３２が、前記突起と前記空洞との間の界面で会合する、抗体。
  68. 請求項６６又は６７に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は突起を含み、前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は空洞を含む、抗体。
  69. 請求項６６～６８のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；（ｂ）前記前記Ｈ２のＦｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、又はＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）、又はその組み合わせを含む空洞を含む；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である、抗体。
  70. 請求項６９に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む；又は、（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である、抗体。
  71. 請求項７０に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含み、（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖのアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む、抗体。
  72. 請求項６６又は６７に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は空洞を含み、前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は突起を含む、抗体。
  73. 請求項６６、６７、又は７２のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、又はＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）、又はそれらの組み合わせを含む空洞を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である、抗体。
  74. 請求項７３に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含む；（ｂ）前記Ｈ２の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む；又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である、抗体。
  75. 請求項７４に記載の抗体であって、ここで、（ａ）前記Ｈ１の前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３１は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖのアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む空洞を含み、（ｂ）前記第２重鎖ポリペプチドの前記Ｆｃ領域の前記ＣＨ３２は、Ｔ３６６Ｗアミノ酸置換変異（ＥＵナンバリング）を含む突起を含む、抗体。
  76. 請求項６６～７５のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域、又はそのＦｃ領域変異体である、抗体。
  77. 請求項７６に記載の抗体であって、ここで、前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体である、抗体。
  78. 請求項７７に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体は、それぞれ、グリコシル化の非存在をもたらすアミノ酸残基Ｎ２９７（ＥＵナンバリング）での変異を含む、抗体。
  79. 請求項７８に記載の抗体であって、ここで、アミノ酸残基Ｎ２９７における前記変異が置換変異である、抗体。
  80. 請求項７８又は７９に記載の抗体であって、ここで、アミノ酸残基Ｎ２９７における前記変異が、前記Ｆｃ領域のエフェクター機能を低下させる、抗体。
  81. 請求項７９又は８０に記載の抗体であって、ここで、前記置換変異がＮ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａの変異である、抗体。
  82. 請求項８１に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体はそれぞれＮ２９７Ｇ変異を含む、抗体。
  83. 請求項７７～８２のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体は、それぞれ、前記Ｆｃ領域のエフェクター機能を低下させる変異を含む、抗体。
  84. 請求項８３に記載の抗体であって、ここで、Ｆｃ領域のエフェクター機能を低下させる前記変異が置換変異である、抗体。
  85. 請求項８４に記載の抗体であって、ここで、前記置換変異がアミノ酸残基Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／又はＰ３２９（ＥＵナンバリング）にある、抗体。
  86. 請求項８５に記載の抗体であって、ここで、前記置換変異がＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、又はＰ３２９Ｇ変異である、抗体。
  87. 請求項８６に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域の変異体はそれぞれＰ３２９Ｇ変異を含む、抗体。
  88. 請求項８２～８７のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体は、それぞれＮ２９７Ｇ及びＰ３２９Ｇの変異を含む、抗体。
  89. 請求項８２～８８のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体がヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが前記Ｌ２３４Ａ又はＬ２３５Ａ変異をさらに含む、抗体。
  90. 請求項８９に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体がヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが前記Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異をさらに含む、抗体。
  91. 請求項８２～８８のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体がヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが、以下の置換変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）、及び残基Ｇ２３６の欠失（ＥＵナンバリング）をさらに含む、抗体。
  92. 請求項９１に記載の抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体がヒトＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域変異体である、抗体。
  93. 請求項８２～８８のいずれか一項に記載に抗体であって、ここで、前記ヒトＩｇＧアイソタイプＦｃ領域変異体がヒトＩｇＧ４アイソタイプＦｃ領域変異体であり、それぞれが、以下の置換変異Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）、及び残基Ｇ２３６の欠失（ＥＵナンバリング）をさらに含む、抗体。
  94. 請求項８９～９３のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記Ｆｃ複合体のＦｃ領域がエフェクターレスＦｃ領域である、抗体。
  95. 請求項６６～９４のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ１は配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記Ｌ２は配列番号９のアミノ酸配列を含む、抗体。
  96. 請求項９５に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記Ｌ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含む、抗体。
  97. 請求項９５に記載の抗体であって、ここで、前記Ｈ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記Ｌ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含む、抗体。
  98. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  99. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  100. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  101. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  102. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  103. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）を含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  104. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号８のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  105. ＬＹ６Ｇ６ＤとＣＤ３に結合する二重特異性抗体であって、ここで、前記二重特異性抗体が、重鎖ポリペプチド（Ｈ１）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ１）とを含むＬＹ６Ｇ６Ｄ結合ドメイン、および重鎖ポリペプチド（Ｈ２）と軽鎖ポリペプチド（Ｌ２）とを含むＣＤ３結合ドメインを含み、ここで：
    （ａ）Ｈ１は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）Ｈ２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み；かつ
    （ｄ）Ｌ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体。
  106. 請求項１～１０５のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体は、約１０ｍｌ／ｋｇ／日から約３５ｍｌ／ｋｇ／日の間の静脈内注射後のクリアランスを有する、抗体。
  107. 請求項１～１０６のいずれか１項に記載の抗体をコードする１つ以上の単離された核酸、又はＬＹ６Ｇ６Ｄに結合する結合ドメインを含むその一部分。
  108. 請求項１０７に記載の１つ以上の単離された核酸を含む１つ以上のベクター。
  109. 請求項１０８に記載の１つ以上のベクターを含む１つ以上の宿主細胞。
  110. 請求項１０９に記載の１つ以上の宿主細胞であって、ここで、前記１つ以上の宿主細胞が、１つ以上の哺乳類宿主細胞である、宿主細胞。
  111. 請求項１１０に記載の１つ以上の宿主細胞であって、ここで、前記１つ以上の哺乳動物宿主細胞は、１つ以上のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞である、宿主細胞。
  112. 請求項１０９に記載の１つ以上の宿主細胞であって、ここで、前記１つ以上の宿主細胞が、１つ以上の原核生物宿主細胞である、宿主細胞。
  113. 請求項１１２に記載の１つ以上の宿主細胞であって、ここで、前記１つ以上の原核生物宿主細胞が、１つ以上の大腸菌宿主細胞である、宿主細胞。
  114. 請求項１～１０６のいずれか１項に記載の抗体を製造する方法であって、請求項１０９に記載の１つ以上の宿主細胞を培養液中で培養することを含む、方法。
  115. 請求項１１４に記載の方法であって、前記抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を前記１つ以上の宿主細胞又は前記培養液から回収することをさらに含む、方法。
  116. 請求項１～１０６のいずれか１項に記載の抗体を含む組成物。
  117. 請求項１１６に記載の組成物であって、製薬学的に許容される賦形剤又は希釈剤をさらに含む、組成物。
  118. 請求項１１７に記載の組成物であって、ここで、前記製薬学的に許容される賦形剤が緩衝剤、担体、安定剤、又は防腐剤である、組成物。
  119. 請求項１１８に記載の組成物であって、ここで、前記組成物が医薬組成物である、組成物。
  120. 医薬として使用するための請求項１～１０６のいずれか一項に記載の抗体。
  121. それを必要とする被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の治療すること又は進行を遅延させることにおける使用のための、請求項１～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１６～１１９のいずれか一項に記載の組成物。
  122. 請求項１２１の使用のための前記抗体又は組成物であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌が結腸直腸癌である、抗体又は組成物。
  123. 請求項１２２の使用のための前記抗体又は組成物であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌は、マイクロサテライト安定型（ＭＳＳ）又は低頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｌ）のマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）ステータスを有する、抗体又は組成物。
  124. 被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の進行を治療又は遅延させるための医薬の製造における、請求項１～１０６及び１２０のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１６～１１９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  125. 請求項１２４に記載の使用であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌は結腸直腸癌である、使用。
  126. 請求項１２５に記載の使用であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌はＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する、使用。
  127. それを必要とする被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の進行を治療又は遅延させる方法であって、請求項１～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１６～１１９のいずれか一項に記載の組成物を前記被験者に投与することを含む、方法。
  128. 請求項１２７に記載の方法であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌は結腸直腸癌である、方法。
  129. 請求項１２８に記載の方法であって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌はＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する、方法。
  130. 請求項１～１０６のいずれか１項に記載の抗体と、被験者におけるＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌の治療又は進行を遅延させるための前記抗体の使用に関する説明書を含むパッケージインサートとを含むキット。
  131. 請求項１３０に記載のキットであって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性癌が結腸直腸癌である、キット。
  132. 請求項１３１に記載のキットであって、ここで、前記ＬＹ６Ｇ６Ｄ陽性の癌はＭＳＳ又はＭＳＩ－ＬのＭＳＩステータスを有する、キット。
  133. 請求項１３０～１３２のいずれか一項に記載のキットであって、ここで、前記被験者がヒトである、キット。
  134. ＣＤ３に結合する単離された抗体であって、以下のＣＤＲ：
    （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、
    を含む結合ドメインを含む、抗体。
  135. 請求項１３４に記載の抗体であって、ここで、前記抗体は以下：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；又は（ｃ）（ａ）のＶＨと（ｂ）のＶＬ、を含む、抗体。
  136. 請求項１３４又は１３５に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  137. 請求項１３４～１３６のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬが配列番号２１のアミノ酸配列を含む、抗体。
  138. ＣＤ３に結合する単離された抗体であって、以下のＣＤＲ：
    （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；
    （ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び
    （ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、
    を含む結合ドメインを含む、抗体。
  139. 請求項１３８に記載の抗体であって、ここで、前記抗体は以下：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；又は（ｃ）（ａ）のＶＨと（ｂ）のＶＬ、を含む、抗体。
  140. 請求項１３８又は１３９に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、抗体。
  141. 請求項１３８～１４０のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬが配列番号５５のアミノ酸配列を含む、抗体。
  142. 請求項１３４、１３５、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨが以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  143. 請求項１３４、１３５、１３８、及び１３９のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＨが以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ１；
    （ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ２；
    （ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ３；及び
    （ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｈ４、
    を含む、抗体。
  144. 請求項１３４、１３５、１３８、１３９、及び１４２のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬが以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  145. 請求項１３４、１３５、１３８、１３９、及び１４３のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記ＶＬが以下のＦＲ：
    （ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ１；
    （ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ２；
    （ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ３；及び
    （ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＦＲ－Ｌ４、
    を含む、抗体。
  146. 請求項１３４～１４５のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて測定した場合に、３７℃で約１ｎＭから約５００ｎＭの間のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドを結合する、抗体。
  147. 請求項１４６に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、２５０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  148. 請求項１４７に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、１００ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  149. 請求項１４８に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、１５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  150. 請求項１４９に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、１０ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  151. 請求項１５０に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、５ｎＭ以下のＫＤでヒトＣＤ３εポリペプチドに結合する、抗体。
  152. 請求項１３４～１５１のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化又はキメラである、抗体。
  153. 請求項１３４～１５２のいずれか１項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体がＣＤ３に結合する抗体断片である、抗体。
  154. 請求項１５３に記載の抗体であって、ここで、前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される、抗体。
  155. 請求項１３４～１５２のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体が完全長抗体である、抗体。
  156. 請求項１３４～１５５のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗体がＩｇＧ抗体である、抗体。
  157. 請求項１３４～１５６のいずれか一項に記載の抗体であって、ここで、前記抗ＣＤ３抗体が単一特異性抗体である、抗体。
  158. 請求項１３４～１５７のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離核酸、又はＣＤ３に結合する結合ドメインを含むその一部分。
  159. 請求項１５８に記載の単離核酸を含むベクター。
  160. 請求項１５９に記載のベクターを含む宿主細胞。
  161. 請求項１６０に記載の宿主細胞であって、ここで、前記宿主細胞が哺乳類宿主細胞である、宿主細胞。
  162. 請求項１６１に記載の宿主細胞であって、ここで、前記哺乳動物宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞である、宿主細胞。
  163. 請求項１６０に記載の宿主細胞であって、ここで、前記宿主細胞が原核生物宿主細胞である、宿主細胞。
  164. 請求項１６３に記載の宿主細胞であって、ここで、前記原核宿主細胞が大腸菌宿主細胞である、宿主細胞。
  165. 請求項１３４～１５７のいずれか一項に記載の抗体の製造方法であって、前記方法は、請求項１６０に記載の宿主細胞を培養液中で培養することを含む、方法。
  166. 請求項１６５に記載の方法であって、ここで、前記方法はさらに、前記抗ＬＹ６Ｇ６Ｄ抗体を前記宿主細胞又は前記培養液から回収することを含む、方法。
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