CN117440826A - 用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药 - Google Patents

用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药 Download PDF

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CN117440826A CN202180088284.2A CN202180088284A CN117440826A CN 117440826 A CN117440826 A CN 117440826A CN 202180088284 A CN202180088284 A CN 202180088284A CN 117440826 A CN117440826 A CN 117440826A
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Abstract

本发明涉及治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患，诸如非霍奇金淋巴瘤)的受试者。更具体地，本发明涉及通过静脉内施用抗CD20/抗CD3双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来治疗患有B细胞增殖性疾患的受试者。

Description

用抗CD20/抗CD3双特异性抗体进行治疗的给药
序列表
本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且以全文引用的方式并入本文中。所述ASCII副本创建于2021年10月28日，命名为50474-234WO3_Sequence_Listing_10_28_21_ST25，并且大小为35,298个字节。
技术领域
本发明涉及治疗CD20阳性细胞增殖性疾患。更具体地，本发明涉及通过施用与抗分化簇20(CD20)和抗分化簇3(CD3)结合的双特异性抗体来治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者。
背景技术
癌症的特征是细胞亚群不受控制的生长。癌症是发达国家的主要死因，也是发展中国家的第二大死因，每年新诊断的癌症病例超过1400万，癌症死亡人数超过800万。因此，癌症护理代表了一项重大且不断增加的社会负担。
CD20阳性细胞增殖性疾患诸如B细胞增殖性疾患是癌症相关死亡的主要原因。例如，非霍奇金淋巴瘤(NHL)进展迅速，如果不加治疗，则是致命的。在美国，B细胞淋巴瘤大约占所有NHL病例的80％至85％。弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的NHL类型，大约占所有NHL诊断的30％至40％，其次是滤泡性淋巴瘤(FL；占所有NHL诊断的20％至25％)和套细胞淋巴瘤(MCL；占所有NHL诊断的6％至10％)。B细胞慢性淋巴细胞白血病(CLL)是成人中最常见的白血病，美国每年大约有15,000例新病例(美国癌症协会，2015)。
双特异性抗体能够同时结合细胞毒性细胞(例如T细胞，经由与分化簇3(CD3)结合)和癌细胞(例如B细胞，经由与CD20结合)上的细胞表面抗原，目的是经结合的细胞毒性细胞将破坏经结合的癌细胞。但是，此类基于抗体的免疫疗法的使用可能受到不利作用的限制，这些不利作用包括细胞因子驱动的毒性(例如细胞因子释放综合征(CRS))、输注相关反应(IRR)、严重肿瘤溶解综合征(TLS)和中枢神经系统(CNS)毒性。
因此，对于开发实现更有利的获益-风险特征的对用于治疗CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患)的治疗性双特异性抗体(例如，与CD20和CD3结合的双特异性抗体)进行给药的有效方法，该领域存在未满足的需求。
发明内容
本发明涉及治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患)的受试者的方法，这些方法通过施用(例如，静脉内施用)与抗分化簇20(CD20)和抗分化簇3(CD3)结合的降低不利副作用(诸如细胞因子驱动的毒性，诸如CRS)风险的双特异性抗体来实施。
本发明部分地基于以下发现：涉及在多个给药周期(例如，其中第一给药周期为递增、分次给药周期)内施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)的给药方案可有效治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患)的受试者，同时降低毒性(例如，细胞因子释放综合征)，所述多个给药周期包括相对较高的第三剂量(C1D3)和/或第二给药周期的剂量(C2D1)(“负荷剂量”)(该第二给药周期的剂量在量上大于第三给药周期的剂量(C3D1)和/或额外给药周期的剂量(基础剂量))。负荷剂量可在关键的第0天至第42天时段内(在此期间患者可能存在来自先前疗法的残留抗CD20单克隆抗体)并且对于那些具有高肿瘤负荷的患者提高有效性。分步给药降低细胞因子释放综合征毒性，并且施用低于负荷剂量的基础剂量可潜在地降低慢性毒性(例如，中性粒细胞减少症、感染等)。
在一个方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约50mg；并且(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
在一些实施例中，C1D3为50mg至200mg(例如，50mg至175mg、50mg至150mg、50mg至125mg、50mg至100mg、50mg至75mg、50mg至70mg、52mg至100mg、52mg至75mg、50mg至180mg、55mg至150mg、55mg至100mg、55mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约60mg)。在一些实施例中，C1D3为约60mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg。在一些实施例中，C1D2为约2mg。在一些实施例中，C2D1在量上与C1D3约等同。
在一些实施例中，分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，在第二给药周期的第1天向受试者施用C2D1。
在一些实施例中，第一给药周期和第二给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，第二给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，在第二给药周期之后，给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。在一些实施例中，在第二给药周期之后，给药方案包括6至15个额外给药周期(例如，六至十个额外给药周期(例如，六个额外给药周期、七个额外给药周期、八个额外给药周期、九个额外给药周期或十个额外给药周期)或11至15个额外给药周期(例如，11个额外给药周期、12个额外给药周期、13个额外给药周期、14个额外给药周期或15个额外给药周期))。在一些实施例中，额外给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。
在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量(例如，基础剂量)大于C1D1并且小于C1D3和/或C2D1(例如，负荷剂量)。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量(例如，基础剂量)为C1D3和/或C2D1(例如，负荷剂量)的20％至80％(例如，20％至70％、20％至60％、20％至55％、30％至80％、30％至70％、40％至70％、45％至70％、40％至60％、45％至55％、48％至52％；例如，约50％)。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量为C1D3和/或C2D1(例如，负荷剂量)的约50％。
在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量为约30mg。
在另一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
在一些实施例中，C1D3和C2D1(例如，负荷剂量)各自为20mg至200mg(例如，20mg至175mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至75mg、30mg至175mg、40mg至175mg、45mg至175mg、50mg至175mg、30mg至150mg、40mg至100mg、45mg至75mg、50mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；约20mg、约30mg、约45mg，或例如约60mg)。在一些实施例中，C1D3和C2D1各自为约60mg。在一些实施例中，C3D1为C2D1的约20％至约80％(例如，约20％至约70％、约20％至约60％、约20％至约55％、约30％至约80％、约30％至约70％、约40％至约70％、约45％至约70％、约40％至约60％、约45％至约55％、或约48％至约52％；例如，约40％、约45％、约50％、约55％或约60％)。在一些实施例中，C3D1为C2D1的约50％。在一些实施例中，C3D1为约12mg至约48mg(例如，约12mg至约42mg、约12mg至约36mg、约12mg至约30mg、约18mg至约48mg、约18mg至约42mg、约24mg至约42mg、约27mg至约42mg、约24mg至约36mg、约27mg至约33mg、约28mg至约32mg；例如，约24mg、约27mg、约30mg、约33mg或约36mg)。在一个特定实施例中，C3D1为约30mg。
在一些实施例中，C3D1为约30mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg。在一些实施例中，C1D2为约2mg。
在一些实施例中，分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，在第二给药周期的第1天向受试者施用C2D1，并且在第三给药周期的第1天向受试者施用C3D1。在一些实施例中，第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，第二给药周期和/或第三给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，在第三给药周期之后，给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。在一些实施例中，在第三给药周期之后，给药方案包括5至14个额外给药周期(例如，五至十个额外给药周期(例如，五个额外给药周期、六个额外给药周期、七个额外给药周期、八个额外给药周期、九个额外给药周期或十个额外给药周期)或11至14个额外给药周期(例如，11个额外给药周期、12个额外给药周期、13个额外给药周期、14个额外给药周期))。在一些实施例中，额外给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量(例如，基础剂量)。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1约等同。
在一额外方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1(例如，基础剂量)在量上为约等同的。
在一些实施例中，C1D3和C2D1(例如，负荷剂量)各自为20mg至200mg(例如，20mg至175mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至75mg、30mg至175mg、40mg至175mg、45mg至175mg、50mg至175mg、30mg至150mg、40mg至100mg、45mg至75mg、50mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约60mg)。在一些实施例中，C1D3和C2D1各自为约60mg。
在一些实施例中，C3D1为C2D1的约20％至约80％(例如，约20％至约70％、约20％至约60％、约20％至约55％、约30％至约80％、约30％至约70％、约40％至约70％、约45％至约70％、约40％至约60％、约45％至约55％、或约48％至约52％；例如，约40％、约45％、约50％、约55％或约60％)。在一些实施例中，C3D1为C2D1的约50％。在一些实施例中，C3D1为约12mg至约48mg(例如，约12mg至约42mg、约12mg至约36mg、约12mg至约30mg、约18mg至约48mg、约18mg至约42mg、约24mg至约42mg、约27mg至约42mg、约24mg至约36mg、约27mg至约33mg、约28mg至约32mg；例如，约24mg、约27mg、约30mg、约33mg或约36mg)。在一个特定实施例中，C3D1为约30mg。
在一些实施例中，其中C3D1为约30mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg。在一些实施例中，C1D2为约2mg。
在一些实施例中，分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，分别在第二给药周期至第八给药周期的第1天向受试者各自施用C2D1至C8D1。在一些实施例中，给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，第一给药周期之后的给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，在第八给药周期之后，给药方案包括一个或多个额外给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1至C8D1(例如，基础剂量)中的任一者约等同。
在另一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在包括八个或更多个21天或28天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1(例如，基础剂量)各自为约30mg。在一些实施例中，第一给药周期之后的给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，受试者接受过针对CD20阳性细胞增殖性疾患的在先全身性疗法。在一些实施例中，受试者接受过针对CD20阳性细胞增殖性疾患的一线全身性疗法和二线全身性疗法。在一些实施例中，受试者在该在先全身性疗法的24个月内已表现出CD20阳性细胞增殖性疾患的进展。
在一些实施例中，在先全身性疗法包括抗CD20抗体。在一些实施例中，抗CD20抗体为利妥昔单抗。在一些实施例中，抗CD20抗体为奥滨尤妥珠单抗。
在一些实施例中，在先全身性疗法包括化学治疗剂。在一些实施例中，化学治疗剂为烷化剂。在一些实施例中，烷化剂为苯达莫司汀。在一些实施例中，化学治疗剂为来那度胺。
在一些实施例中，在先全身性疗法包括放射免疫疗法。在一些实施例中，放射免疫疗法为替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)。
在一些实施例中，在先全身性疗法包括磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂。在一些实施例中，磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂选自由以下各项组成的组：艾代拉利司(idelalisib)、阿培利司(alpelisib)、库潘尼西(copanlisib)和度维利塞。
在一些实施例中，在先全身性疗法包括CAR-T疗法。
在一些实施例中，受试者是人。
在本发明的任何方法的一些实施例中，双特异性抗体静脉内施用。
在又一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于50mg；并且(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
在一些实施例中，C1D3为50mg至200mg(例如，50mg至175mg、50mg至150mg、50mg至125mg、50mg至100mg、50mg至75mg、50mg至70mg、52mg至100mg、52mg至75mg、50mg至180mg、55mg至150mg、55mg至100mg、55mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约60mg)。
在另一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
在又一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1(例如，基础剂量)在量上为约等同的。
在一些实施例中，C1D3和C2D1(例如，负荷剂量)各自为20mg至200mg(例如，20mg至175mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至75mg、30mg至175mg、40mg至175mg、45mg至175mg、50mg至175mg、30mg至150mg、40mg至100mg、45mg至75mg、50mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约20mg、约30mg、约45mg或约60mg)。在一些实施例中，C1D3和C2D1各自为约60mg。
在另一方面，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在包括八个或更多个21天或28天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1(例如，基础剂量)各自为约30mg。在一些实施例中，第一给药周期之后的给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，完全缓解率为至少约15％(例如，约15％至约30％、约15％至约40％、约15％至约50％、约15％至约60％、约15％至约75％、约15％至约80％、约15％至约90％、约15％至约100％、约20％至约100％、约20％至约75％、约20％至约50％、约25％至约100％、约25％至约75％、约25％至约50％、约30％至约75％、约30％至约100％、或约30％至约50％；例如，约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％)。在一些实施例中，完全缓解率为至少约45％(例如，约45％至约60％、约45％至约70％、约45％至约80％、约45％至约95％、约45％至约100％、约50％至约100％、约50％至约95％、或约50％至约75％；例如，约45％、约50％、约55％或约60％)。
在一些实施例中，客观缓解率为至少约60％(例如，约60％至约70％、约60％至约80％、约60％至约90％、或约60％至约100％；例如，约60％、约65％、约70％、约75％、约80％或约85％)。在一些实施例中，在治疗开始后约20个月的客观缓解率为至少约70％(例如，约70％至约80％、约70％至约90％、约70％至约95％、或约70％至约100％；例如，约70％、约75％、约80％、约85％或约90％)。
在一些实施例中，在治疗开始后约24个月的客观缓解率为至少约75％(例如，约75％至约80％、约75％至约90％、约75％至约95％、约75％至约100％、约80％至约100％、或约90％至约100％；例如，约75％、约80％、约85％或约90％)。
在一些实施例中，中位缓解持续时间(mDOR)为至少约12个月(例如，至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月；例如，在约12个月与约14个月之间、在约12个月与约16个月之间、在约12个月与约18个月之间、或在约12个月与约20个月之间；例如，约12个月、约14个月、约16个月或约18个月)。在一些实施例中，mDOR为至少约20个月(例如，至少约22个月、至少约24个月、至少约26个月、至少约28个月、至少约30个月、至少约32个月、至少约34个月或至少约36个月；例如，在约20个月与约24个月之间、在约20个月与约30个月之间、在约20个月与约36个月之间、在约20个月与约48个月之间、在约20个月与约60个月之间、在约20个月与约72个月之间、在约24个月与约36个月之间、在约24个月与约48个月之间、在约24个月与约60个月之间、在约36个月与约48个月之间、或在约36个月与约60个月之间；例如，约20个月、约24个月、约28个月、约32个月、约36个月、约40个月、约48个月、约56个月或约60个月)。在一些实施例中，受试者群体具有在该群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率，并且其中该群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率为至少约60％(例如，约60％至约70％、约60％至约80％、约60％至约90％、或约60％至约100％；例如，约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％)。
在一些实施例中，在施用双特异性抗体后，受试者群体表现出细胞因子释放综合征，并且其中受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约25％(例如，小于或等于约23％、小于或等于约20％、小于或等于约18％、小于或等于约16％、小于或等于约15％、小于或等于约14％、小于或等于约13％、小于或等于约12％、小于或等于约11％、小于或等于约10％；例如，在约1％与约25％之间、在约5％与约25％之间、在约10％与约25％之间、在约15％与约25％之间、在约20％与约25％之间、在约5％与约15％之间、在约5％与约10％之间、在约1％与约15％之间、或在约1％与约10％之间；例如，约24％、约22％、约20％、约18％、约16％、约14％、约12％、约10％、约8％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％或约0％)。在一些实施例中，受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约10％。
在一些实施例中，具有2级或更高级别(如美国移植和细胞疗法学会，2018；ASTCT所定义；例如，在2级与5级之间的级别，例如2级、3级、4级或5级)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约10％(例如，小于或等于约9％、小于或等于约8％、小于或等于约7％、小于或等于约6％、小于或等于约5％、小于或等于约4％、小于或等于约3％、小于或等于约2％、小于或等于约1％；例如，在约0.1％至约10％之间、在约0.5％与约10％之间、在约1％与约10％之间、在约1％与约7％之间、在约1％与约5％之间、在约1％与约3％之间、或在约5％与约10％之间；例如，约10％、约8％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％或约0％)。在一些实施例中，具有2级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约5％(例如，小于或等于约4％、小于或等于约3％、小于或等于约2％、小于或等于约1％；例如，在约0％与约5％之间、在约1％与约5％之间、在约2％与约5％之间、在约3％与约5％之间、在约4％与约5％之间、在约1％与约3％之间、在约2％与约5％之间、或在约0％与约2％之间；例如，约5％、约4％、约3％、约2％、约1％或约0％)。在一些实施例中，具有3级或更高级别(如ASTCT所定义；例如，在3级与5级之间的级别，例如3级、4级或5级)的细胞因子释放综合征的比率为约0。
在一些实施例中，CD20阳性细胞增殖性疾患为B细胞增殖性疾患。在一些实施例中，CD20阳性细胞增殖性疾患为复发性或难治性B细胞增殖性疾患。在一些实施例中，CD20阳性细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)或慢性淋巴样白血病(CLL)。在一些实施例中，NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施例中，DLBCL为Richter转化。在一些实施例中，NHL为滤泡性淋巴瘤(FL)。在一些实施例中，FL为1级、2级、3a级或3b级FL。在一些实施例中，FL为转化的FL。在一些实施例中，NHL为套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)。
在一些实施例中，双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含以下六个高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含GYTFTSYNMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含AIYPGNGDTSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含VVYYSNSYWYFDV(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASSSVSYMH(SEQID NO:4)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含APSNLAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含QQWSFNPPT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列。
在一些实施例中，双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
在一些实施例中，第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL结构域。
在一些实施例中，双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含以下六个HVR：(a)HVR-H1，其包含NYYIH(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含WIYPGDGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DSYSNYYFDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA(SEQ IDNO:12)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含WASTRES(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含TQSFILRT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。
在一些实施例中，双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
在一些实施例中，第二结合结构域包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL结构域。
在一些实施例中，双特异性抗体包含(a)抗CD20臂，其包含(i)重链，该重链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；以及(b)抗CD3臂，其包含(i)重链，该重链包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些抗体中，(a)抗CD20臂包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链，并且(b)抗CD3臂包含含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，双特异性抗体为人源化抗体。在一些实施例中，双特异性抗体为嵌合抗体。
在一些实施例中，双特异性抗体为结合CD20和CD3的抗体片段。在一些实施例中，抗体片段选自由以下各项组成的组：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段。
在一些实施例中，双特异性抗体为全长抗体。
在一些实施例中，双特异性抗体为IgG抗体。在一些实施例中，IgG抗体为IgG1抗体。
在一些实施例中，IgG抗体在氨基酸残基N297(EU编号)处包含导致糖基化的缺失的突变。在一些实施例中，在氨基酸残基N297处的突变为取代突变。在一些实施例中，在氨基酸残基N297处的突变降低Fc区的效应子功能。在一些实施例中，突变为N297G或N297A突变。
在一些实施例中，双特异性抗体在Fc区中包含降低效应子功能的突变。在一些实施例中，突变为取代突变。在一些实施例中，取代突变在氨基酸残基L234、L235、D265和/或P329(EU编号)处。在一些实施例中，取代突变选自由以下各项组成的组：L234A、L235A、D265A和P329G。
在一些实施例中，双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中所述一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。在一些实施例中，所述一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。
在一些实施例中，CH31和CH32结构域各自包含突起或腔，并且其中CH31结构域中的突起或腔分别可定位在CH32结构域中的腔或突起中。在一些实施例中，CH31和CH32结构域在突起与腔之间的界面处相接。
在一些实施例中，双特异性抗体的抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变(EU编号)。在一些实施例中，双特异性抗体的抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。在一些实施例中，(a)抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变，并且(b)抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
在一些实施例中，给药方案进一步包括向受试者施用PD-1轴结合拮抗剂。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂以在约1100mg至约1300mg之间(例如，在约1150mg至约1250mg之间、在约1175mg至约1225mg之间、在约1190mg至约1210mg之间；例如，1200mg±5mg，例如，1200±2.5mg，例如，1200±1.0mg，例如，1200±0.5mg；例如，约1200mg)的剂量施用。在特定实施例中，PD-1轴结合拮抗剂以约1200mg的剂量施用。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂在包括施用双特异性抗体的第一给药周期之后的每个给药周期的第1天(±1天)施用。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂为阿替利珠单抗。在一些实施例中，受试者是人。
附图说明
本申请文件含有至少一幅彩色绘图。在提出请求并支付必要的费用后，专利局将提供带有彩色附图的本专利或专利申请的拷贝。
图1为示出莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药的概述的示意图。垂直条指示施用的莫妥珠单抗的相对量。描述了1/2/60/30(mg)的阶梯负荷-基础给药。在第1周期第1天(C1D1)向患者施用约1mg莫妥珠单抗的第一阶梯剂量，然后在第1周期第8天(C1D8)施用约2mg莫妥珠单抗的第二阶梯剂量。接着在第1周期第15天(C1D15)向患者施用约60mg莫妥珠单抗的第一阶梯剂量，然后在第2周期第1天(C2D1)施用约60mg莫妥珠单抗的第二阶梯剂量。此后，在每个后续周期的第1天向患者施用约30mg莫妥珠单抗的基础剂量。最初在第3周期第1天(C3D1)至第8周期第1天(C8D1)向患者施用6个基础剂量。在8个治疗周期后未实现CR的患者继续接受约30mg莫妥珠单抗的基础剂量，持续8个或17个额外治疗周期。基础＝基础剂量；C＝周期；CR＝完全缓解；D＝天；负荷＝负荷剂量；Q3w＝每个给药周期给药一次，即约每三周一次；阶梯＝阶梯剂量。
图2为示出以莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药(即，1/2/60/30给药)施用的患者相对于基线的肿瘤变化％的图。箭头指示代表发生疾病进展(PD)或部分缓解(PR)的患者的线。黑线代表疾病稳定的患者。剩余的线代表发生完全缓解(CR)的患者。
图3为示出GO29781研究的剂量递增部分的设计的示意图。最初，莫妥珠单抗在每个周期的第1天(A组)以单一非分次静脉内(IV)剂量给予。随后修改第1周期给药，使得A组剂量递增停止并且莫妥珠单抗剂量递增如下进行：B组：利用第1周期递增IV给药方案进行莫妥珠单抗剂量递增；以及E组：利用第1周期递增IV给药方案进行莫妥珠单抗剂量递增，同时从第2周期开始，通过IV输注施用阿替利珠单抗(抗PD-L1单克隆抗体(mAb))；供参考。A＝阿替利珠单抗；C＝周期；D＝天；DL＝剂量水平；MAD＝最大评定剂量。
图4为示出GO29781研究的非霍奇金淋巴瘤(NHL)扩展队列和慢性淋巴细胞白血病(CLL)剂量递增/扩展队列的设计的示意图。DLBCL＝弥漫性大B细胞淋巴瘤；FL＝滤泡性淋巴瘤；MCL＝套细胞淋巴瘤；NHL＝非霍奇金淋巴瘤；RP2D＝推荐II期剂量；R/R＝复发性/难治性；trFL＝转化滤泡性淋巴瘤。a可测试基于A组、B组和E组剂量递增的多个扩展队列。bR/RDLBCL/trFL的扩展队列入组至多约20例患者，基于B组RP2D的扩展队列除外，该扩展队列入组至多约80例患者。cR/R FL的扩展队列入组至多约20例患者，基于B组RP2D的扩展队列除外，该扩展队列入组至多约80例患者。d仅测试基于B组剂量递增的扩展队列。e剂量递增与NHL类似地进行(见图3)的氨基酸序列。f可测试基于B组剂量递增的多个扩展队列。
图5为示出GO29781研究的B组的示例性剂量递增过程的示意图。列出的剂量仅用于说明目的。AE＝不良事件；DLT＝剂量限制性毒性；HLH＝噬血细胞性淋巴组织细胞增生症；MTD＝最大耐受剂量。剂量水平以毫克(mg)为单位。a方案允许A组递增至最大12.8mg；此处显示的2.8mg为A组中最高清除的C1剂量。b确定C1D1剂量的标准提供于实例中。c与莫妥珠单抗的已确定或潜在风险相关的不良事件，例如细胞因子释放综合征(CRS)、HLH、神经毒性、肿瘤溶解综合征(TLS)、中性粒细胞减少症、血小板减少症和肝酶升高。
图6A为示出GO29781研究中的第1周期剂量递增(B组)的剂量限制性毒性(DLT)评定窗口的示意图。窗口A：C1D1至C1D8，施用莫妥珠单抗；窗口B：C1D8至C1D15，施用莫妥珠单抗；窗口C：C1D15至C1D21。
图6B为示出在GO29781研究中在第1周期剂量递增(B组)中观察DLT的三个示例性情形的一组示意图。示意图代表示出在6例患者的剂量递增队列中两个DLT的时间的实例，不代表所有可能的情形。aDLT可评估患者为接受C1D1、C1D8和C1D15剂量或发生DLT的患者。
图7为示出GO29781研究的E组中的评定窗口的示意图。
图8为示出GO29781研究的E组的示例性剂量递增过程的示意图。列出的剂量仅用于说明目的。剂量水平以mg为单位。a给定E组队列的开始取决于B组递增中的以下情况：1)清除第1周期DLT评定期；及2)证明第2周期的安全性和耐受性。b在不存在构成莫妥珠单抗潜在风险的DLT和≥2级不良事件的情况下，第2周期莫妥珠单抗递增遵循相应的B组剂量。c在<17％的患者中，第2周期DLT导致相比于先前的第2周期第1天莫妥珠单抗剂量水平，第2周期剂量递增增量降低至≤50％。在本实例中，如果B组剂量递增规则允许100％剂量递增增量，则第2周期剂量递增不需要与B组中相应的第2周期剂量水平保持一致。d一旦达到第2周期MTD，第2周期剂量水平可能不再进一步递增。可使用最高清除的第2周期莫妥珠单抗剂量水平与阿替利珠单抗组合测试基于B组递增的更高的第1周期剂量水平。
图9为示出GO29781研究中的初始研究治疗持续时间及再治疗或继续研究治疗的选择的示意图。CR＝完全缓解；PD＝疾病进展；PR＝部分缓解；SD＝疾病稳定。a允许遵循初始治疗的治疗流程进行额外的多轮再治疗。b遵循莫妥珠单抗+阿替利珠单抗初始治疗的治疗流程。c应安排扫描以避免/尽可能减小第8周期与第9周期之间的任何剂量延迟。
图10为一组图，示出A组、B组和E组的患者以不同给药方案施用莫妥珠单抗后的血浆样品中的IL-6含量。在第1周期的第1天、第8天和第15天(分别标记为“C1D1”、“C1D8”和“C1D15”)，分别在施用C1D1、C1D2和C1D3剂量后0小时(立即)、4小时、10小时和24小时以及在施用C2D1和C4D1剂量后0小时(立即)和4小时采集血浆样品。血浆IL-6含量以pg/mL为单位报告。
图11为示出施用不同剂量的莫妥珠单抗(x轴)的B组患者中任何级别、2级及3+级细胞因子释放综合征(CRS)的比率的图。AE＝不良事件，即CRS。
图12为报告A组中患者经历的不良事件的表格，按莫妥珠单抗剂量分组。AE＝不良事件；PD＝疾病进展。
图13为报告B组中患者经历的不良事件的表格，按莫妥珠单抗剂量分组。AE＝不良事件；PD＝疾病进展。
具体实施方式
本发明涉及治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性(MZL))或复发性或难治性CLL)的受试者(或受试者群体)的方法，这些方法通过在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施。在一些情况下，第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg。在一些情况下，第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。在一些情况下，C1D3和C2D1统称为“负荷剂量”。
在一些情况下，本发明的特征在于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)，其中第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
如前文所述，本发明部分地基于以下发现：涉及在多个给药周期(例如，其中第一给药周期为递增、分次给药周期)内施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)的给药方案可有效治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患)的受试者，同时降低毒性(例如，细胞因子释放综合征)，所述多个给药周期包括相对较高的第三剂量(C1D3)和/或第二给药周期的剂量(C2D1)(“负荷剂量”)(该第二给药周期的剂量在量上大于第三给药周期的剂量(C3D1)和/或额外给药周期的剂量(基础剂量))。负荷剂量可在关键的第0天至第42天时段内(在此期间患者可能存在来自先前疗法的残留抗CD20单克隆抗体)并且对于那些具有高肿瘤负荷的患者提高有效性。分步给药降低细胞因子释放综合征毒性，并且施用低于负荷剂量的基础剂量可潜在地降低慢性毒性(例如，中性粒细胞减少症、感染等)。
I.一般技术
本领域技术人员通常容易理解并且通常使用常规方法来使用本文描述或参考的技术和程序，诸如，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；CurrentProtocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编,(2003))；Methods inEnzymology系列(Academic Press,Inc.):PCR 2:A Practical Approach(M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R.Taylor编(1995))，Harlow和Lane编(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney编(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编，1984)；Methods in Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis编辑，1998)AcademicPress；Animal Cell Culture(R.I.Freshney)，编辑，1987)；Introduction to Cell andTissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell and TissueCulture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths，和D.G.Newell，编辑，1993-8)J.Wiley和Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell，编辑)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos，编辑，1987)；PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等人，编辑，1994)；CurrentProtocols in Immunology(J.E.Coligan等人，编辑，1991)；Short Protocols inMolecular Biology(Wiley和Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty编，IRLPress,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean，编辑，Oxford University Press,2000)；Using Antibodies:A LaboratoryManual(E.Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；TheAntibodies(M.Zanetti和J.D.Capra，编辑，Harwood Academic Publishers,1995)；和Cancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita等人，编辑，J.B.LippincottCompany，1993)中所述的广泛使用的方法。
II.定义
应当理解，本文所述的发明的方面和实施例包括“包含”、“由以下组成”及“基本上由以下组成”所指的方面和实施例。
除非另外指出，否则如本文所用，单数形式“一(a/an)”及“该/所述”包括复数个所指物。
如本文所用的术语“约”是指为此技术领域中的技术人员容易知晓的相应值的常见误差范围。在本文中提及“约”值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的实施例。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长不受控制为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于血液癌症诸如成熟B细胞癌症，不包括霍奇金淋巴瘤，但包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)诸如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(其可以为复发性或难治性DLBCL)。癌症可以为B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL。在一些情况下，癌症的具体实例包括生发中心B细胞样(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、活化B细胞样(ABC)DLBCL、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤(PMLBCL)、小淋巴细胞白血病(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LL)、华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia,WM)、中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma,BL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、脾边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、脾脏淋巴瘤/白血病(无法分类)、脾脏弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤、变异型毛细胞白血病、重链病(α重链病、γ重链病、μ重链病)、浆细胞骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿淋巴结边缘区淋巴瘤、小儿滤泡性淋巴瘤、原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、CNS的原发性DLBCL、原发性皮肤DLBCL(腿型)、老年EBV阳性DLBCL、与慢性炎症相关的DLBCL、淋巴瘤样肉芽肿、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、ALK阳性大B细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、HHV8相关多中心卡斯尔曼病(Castleman disease)引起的大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤：具有在DLBCL与伯基特氏淋巴瘤之间特征的无法分类的B细胞淋巴瘤，以及具有在DLBCL与典型霍奇金淋巴瘤之间特征的无法分类的B细胞淋巴瘤。癌症的另外的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤，包括B细胞淋巴瘤。此类癌症的更特定的实例包括但不限于多发性骨髓瘤(MM)；低级/滤泡性NHL；小淋巴细胞(SL)NHL；中级别/滤泡性NHL；中级别弥漫性NHL；高级别免疫母细胞NHL；高级别淋巴母细胞NHL；高级别小非截切细胞NHL；大块病NHL；AIDS相关淋巴瘤；和急性淋巴母细胞白血病(ALL)；慢性骨髓胚细胞性白血病；以及移植后淋巴增殖性疾患(PTLD)。
如本文所用，术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性还是良性，以及所有前癌性和癌性细胞和组织。
术语“癌症”、“癌性”、“细胞增生性疾患”、“增生性疾患”和“肿瘤”在本文中并不互相排斥。
“病症”是将受益于治疗的任何病状，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患该病症的病理性病状。
术语“细胞增殖性疾病”和“增殖性疾病”是指与某种程度的异常细胞增殖相关的病症。在一个实施例中，所述细胞增殖性病症为癌症。在另一实施例中，细胞增殖性病症是肿瘤。
术语“B细胞增殖性疾患”或“B细胞恶性肿瘤”是指与某种程度的异常B细胞增殖相关的疾病，并且包括例如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和骨髓增生异常综合征。在一个实施例中，B细胞增殖性疾患为淋巴瘤，诸如非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括例如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如，复发性或难治性DLBCL或Richter转化)、FL(例如，复发性和/或难治性FL或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、高级别B细胞淋巴瘤或PMLBCL)。在另一个实施例中，B细胞增殖性疾患为白血病，诸如慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变型，诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指试图改变待治疗受试者的自然进程的临床干预，并且可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善预后。在一些实施例中，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
如本文所用，疾患或疾病的“延迟进展”意指延缓、阻碍、减缓、延迟、稳定和/或推迟疾病或疾患(例如，CD20阳性细胞增殖性疾患，例如B细胞增殖性疾患，例如NHL，例如DLBCL)的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或待治疗的个体。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患该病。例如，晚期癌症，诸如转移的发展，可能被延迟。
“减少”或“抑制”意指引起整体降低的能力，例如，总体降低20％或以上、50％或以上，或75％、85％、90％、95％或以上。在某些实施例中，减少或抑制可以指，相对于用骨髓增生异常综合征静脉内施用，使用本发明的分次、剂量递增给药方案用抗CD20/抗CD3双特异性抗体治疗之后，减少或抑制不期望的事件，诸如细胞因子驱动的毒性(例如，细胞因子释放综合征(CRS))、输注相关反应(IRR)、巨噬细胞活化综合征(MAS)、神经系统毒性、严重肿瘤溶解综合征(TLS)、中性粒细胞减少症、血小板减少症、肝酶升高和/或中枢神经系统(CNS)毒性。在其他实施例中，减少或抑制可以指由抗体Fc区介导的抗体的效应子功能，此类效应子功能具体包括补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
如本文所用，“施用”意指给予受试者一定剂量的化合物(例如，双特异性抗体)或组合物(例如，药物组合物，例如包含双特异性抗体的药物组合物)的方法。本文所述方法中利用的化合物和/或组合物可静脉内施用(例如，通过静脉内输注)。
治疗剂(例如，双特异性抗体)的固定剂量(fixed dose,flat dose)是指不考虑患者的体重或体表面积(BSA)而施用于患者的剂量。因此，固定剂量并非以mg/kg剂量或mg/m2剂量提供，而是以绝对量的治疗剂提供。
“受试者”或“个体”为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于灵长类动物(例如，人及非人灵长类动物，诸如猴)、驯养动物(例如，牛、羊、猫、犬和马)、兔和啮齿动物(例如，小鼠和老鼠)。在某些实施例中，受试者或个体是人。
“个体缓解”或“缓解”可使用任何指示对受试者有益的终点来评定，包括但不限于：(1)在某种程度上抑制疾病进展(例如，CD20阳性细胞增殖性疾患，例如B细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL的进展)，包括减慢及完全停止；(2)减小肿瘤大小；(3)抑制(即，减少、减缓或完全停止)癌细胞浸润到邻近的周围器官和/或组织中；(4)抑制(即，减少、减慢或完全停止)转移；(5)在某种程度上减轻与CD20阳性细胞增殖性疾患(例如B细胞增殖性疾患)相关联的一种或多种症状；(6)增加或延长生存期，包括总生存期和无进展生存期；和/或(7)降低治疗后给定时间点的死亡率。
如本文所用，“完全缓解”或“CR”是指所有靶病灶(即，疾病的所有证据)的消失。
如本文所用，“部分缓解”或“PR”是指以基线靶病灶的最长直径总和(SLD)为参考，SLD减少至少30％，或以基线靶病灶的直径乘积(SPD)为参考，SPD减少至少50％。
如本文所用，“客观缓解率”(ORR)是指完全缓解(CR)率与部分缓解(PR)率之和。
如本文所用，“客观缓解持续时间”或“缓解持续时间”(DOR)定义为从首次出现记录的客观缓解到疾病进展或在治疗的最后一次给药后30天内因任何原因死亡(以先发生者为准)的时间。
“持续应答”是指在停止治疗后对减少肿瘤生长的持续效果。例如，与给药阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以保持相同或更小。在一些实施例中，持续应答的持续时间至少与治疗持续时间相同、至少为治疗持续时间的1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0倍长度。
受试者对药物和治疗的“有效应答”或受试者的“应答性”和类似措词是指赋予处于患疾病或疾患诸如癌症的风险下或患有该疾病或疾患的受试者的临床或治疗有益效果。在一个实施例中，这种益处包括以下一个或多个：延长存活(包括总存活和无进展存活)；导致客观缓解(包括完全缓解或部分缓解)；或改善癌症的体征或症状。
对治疗“无有效反应”的受试者是指没有以下任一项的受试者：延长存活(包括总生存期和无进展生存期)；导致客观缓解(包括完全缓解或部分缓解)；或改善癌症的征兆或症状。
术语“生存”是指患者仍然存活，且包括总生存期以及无进展生存期。
如本文所用，“总存活期”(OS)是指一组中在特定持续时间后，例如从诊断或治疗之时起1年或5年，存活的受试者的百分比。
如本文所用，“无进展生存期”(PFS)是指在治疗期间和治疗后正在治疗的疾病(例如，CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)未恶化的时间长度。无进展存活期可包括患者经历完全应答或部分应答的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。
如本文所用，“稳定性疾病”或“SD”是指以自治疗开始以来的最小SLD作为参考，靶病灶既没有充分缩小以符合PR，也没有充分增加以符合PD。
如本文所用，“疾病进展”或“PD”是指以自治疗开始或一个或多个新病灶的存在以来记录的最小SLD为参考，靶病灶的SLD增加至少20％，或以最小SPD为参考，靶病灶的SPD增加至少50％。
如本文所用，疾患或疾病的“延迟进展”意指延缓、阻碍、减缓、延迟、稳定和/或推迟疾病或疾患(例如，CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，NHL(例如，DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL或Richter转化)、FL(例如，复发性和/或难治性FL或转化的FL)、MCL、MZL、高级别B细胞淋巴瘤或PMLBCL)或CLL))的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或待治疗的受试者。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著延迟实际上可以涵盖预防，因为受试者不会罹患该疾病。例如，在晚期癌症中，中枢神经系统(CNS)转移的发展可能会延缓。
如本文所用，术语“减少或抑制癌症复发”是指减少或抑制肿瘤或癌症复发或肿瘤或癌症进展。
“减少或抑制”是指引起整体降低20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的能力。减少或抑制可指正在治疗的疾患(例如，CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，NHL(例如，DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL或Richter转化)、FL(例如，复发性和/或难治性FL或转化的FL)、MCL、MZL、高级别B细胞淋巴瘤或PMLBCL)或CLL))的症状、转移瘤的存在或大小或者原发性肿瘤的大小。
“延长生存”是指相对于未治疗的患者(例如，相对于未用药物治疗的患者)，或相对于不以指定水平表达生物标志物的患者和/或相对于使用批注的抗肿瘤剂治疗的患者，增加了治疗患者的总生存或无进展生存。客观应答是指可测量的应答，包括完全应答(CR)或部分应答(PR)。
本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。
“抗体片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“全长抗体”、“完整抗体”及“全抗体”在本文中可互换地用于指代具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
“结合结构域”是指与靶表位、抗原、配体或受体特异性结合的化合物或分子的一部分。结合结构域包括但不限于抗体(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人源化抗体和嵌合抗体)、抗体片段或其部分(例如，Fab片段、Fab'2、scFv抗体、SMIP、结构域抗体、双抗体、微抗体、scFv-Fc、亲和体、纳米抗体以及抗体的VH和/或VL结构域)、受体、配体、适体和其他具有鉴定出的结合配偶体的分子。
本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，该C末端区包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施例中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文另有说明，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等人所述(Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达，1991)。
抗体的“类别”是指抗体的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1，以及IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。
如本文所用，术语IgG“同种型”或“亚类”是指由免疫球蛋白恒定区的化学和抗原特征定义的免疫球蛋白的任何亚类。
“框架”或“FR”是指除高变区(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由以下四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常在VH(或VL)中以如下序列出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
“人共有框架”是这样的框架，其表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基。一般而言，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自于可变结构域序列的亚组。一般而言，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中所述的亚组。在一个实施例中，对于VL，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组κI。在一个实施例中，对于VH，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组III。
出于本文目的的“受体人框架”是这样的框架，其包含来源于如下所定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与所述人免疫球蛋白框架或人共有框架相同的氨基酸序列，或者其可以包含氨基酸序列变化。在一些实施例中，氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少，或2个或更少。在一些实施例中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人源化”抗体是指这样的嵌合抗体，其包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些实施例中，人源化抗体将基本上包含所有的至少一个，通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有HVR(例如CDR)对应于非人抗体的HVR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。“人源化形式”的抗体，例如非人抗体，是指已经进行过人源化的抗体。
“人抗体”是这样的抗体，该抗体具有的氨基酸序列对应于由人或人细胞产生的抗体的氨基酸序列，或来源于利用人抗体全套库或其他人抗体编码序列的非人源的抗体的氨基酸序列。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人类抗体，包括噬菌体展示文库。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。还可用于制备人单克隆抗体的方法如Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,AlanR.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)所述。另见vanDijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可通过向转基因动物施用抗原来制备人抗体，该转基因动物已经修饰以对抗原攻击产生应答而产生此类抗体，但其内源基因座已失效，例如免疫异种小鼠(参见例如关于XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584)。另见例如Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)关于经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见例如Kindt等人,KubyImmunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007))。单个VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可分别使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域来进行分离，以筛选互补VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用的术语“高变区”或“HVR”是指在序列中高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触点”)的抗体可变结构域的区域每一种。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1、H2、H3)，并且三个在VL中(L1、L2、L3)。本文中的示例性HVR包括：
(a)存在于氨基酸残基26至32(L1)、50至52(L2)、91至96(L3)、26至32(H1)、53至55(H2)和96至101(H3)处的高变环(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)存在于氨基酸残基24至34(L1)、50至56(L2)、89至97(L3)、31至35b(H1)、50至65(H2)和95至102(H3)处的CDR(Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；
(c)存在于氨基酸残基27c至36(L1)、46至55(L2)、89至96(L3)、30至35b(H1)、47至58(H2)和93至101(H3)的抗原接触点(MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；以及
(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)和94-102(H3)。
除非另外指明，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如，FR残基)在本文中根据Kabat等人(出处同上)编号。
“免疫缀合物”是与一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)缀合的抗体。
当用于描述本文公开的各种抗体时，术语“分离的抗体”是指已经从表达它的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收的抗体。其自然环境的污染物组分是通常会干扰对于多肽的诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其他蛋白或非蛋白溶质。在一些实施例中，通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)测定，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如：Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。在优选的实施例中，抗体将被纯化到(1)通过使用旋转杯测序仪足以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或被纯化到(2)通过SDS-PAGE在非还原或还原条件使用考马斯蓝或最好是银染测定为均质。经分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为不会存在多肽天然环境的至少一种成分。然而，通常，分离的多肽将通过至少一个纯化步骤进行制备。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中产生，此类变体通常以少量形式存在)之外，包括该群体的单个抗体具有同一性和/或结合相同表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂中的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，按照根据本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法，以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，在本文中描述了用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法。
“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量，包括本文所述的那些方法。下文描述用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施例。
“亲和力成熟的”的抗体是指在一个或多个高变区(HVR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致了抗体对抗原的亲和力的改善。
术语“抗CD3抗体”和“结合CD3的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合CD3，使得所述抗体可用作靶向CD3的诊断和/或治疗剂。在一个实施例中，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量的，抗CD3抗体与不相关的非CD3蛋白的结合程度小于该抗体与CD3的结合程度的约10％。在某些实施例中，与CD3结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施例中，抗CD3抗体与CD3的表位结合，该表位在来自不同物种的CD3中是保守的。
除非另外指明，否则如本文所用的术语“分化簇3”或“CD3”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然CD3，该脊椎动物来源包括诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)，包括例如CD3ε、CD3γ、CD3α和CD3β链。该术语涵盖“全长”的未加工CD3(例如，未加工或未修饰的CD3ε或CD3γ)，以及通过细胞中加工产生的任何形式的CD3。该术语还涵盖CD3的天然存在变体，包括，例如，剪接变体或等位基因变体。CD3包括，例如，长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000064)。
术语“抗CD20抗体”和“结合CD20的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合CD20，使得所述抗体可用作靶向CD20的诊断和/或治疗剂。在一个实施例中，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量的，抗CD20抗体与不相关的非CD20蛋白的结合程度小于该抗体与CD20的结合程度的约10％。在某些实施例中，与CD20结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施例中，抗CD20抗体与CD20的表位结合，该表位在来自不同物种的CD20中是保守的。
除非另外指明，否则如本文所用的术语“分化簇20”或“CD20”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然CD20，该脊椎动物来源包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。该术语包括“全长”的未加工CD20，以及通过细胞中加工产生的任何形式的CD20。该术语还涵盖CD20的天然存在变体，包括，例如，剪接变体或等位基因变体。CD20包括例如人CD20蛋白(参见例如NCBI RefSeq编号NP_068769.2和NP_690605.1)，其长度为297个氨基酸并且可例如从缺少5'UTR的一部分的变异mRNA转录本(参见例如NCBIRefSeq编号NM_021950.3)或更长的变异mRNA转录本(参见例如NCBI RefSeq编号NM_152866.2)产生。
术语“抗CD20/抗CD3双特异性抗体”、“双特异性抗CD20/抗CD3抗体”及“结合CD20和CD3的抗体”或其变体指多特异性抗体(例如双特异性抗体)，其能够以足够的亲和力与CD20和CD3结合，使得该抗体可用作靶向CD20和/或CD3的诊断和/或治疗剂。在一个实施例中，结合CD20和CD3的双特异性抗体与无关的非CD3蛋白和/或非CD20蛋白的结合程度小于该抗体与CD3和/或CD20的结合程度的约10％，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量的。在某些实施例中，与CD20和CD3结合的双特异性抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施例中，结合CD20和CD3的双特异性抗体与在来自不同物种的CD3之间保守的CD3表位和/或在来自不同物种的CD20之间保守的CD20表位结合。下文“治疗方法-与CD20和CD3结合的双特异性抗体”讨论了抗CD20/抗CD3双特异性抗体的实例。在一个实施例中，与CD20和CD3结合的双特异性抗体为莫妥珠单抗。
如本文所用，术语“莫妥珠单抗”是指具有国际非专利药名(INN)清单117(WHODrug Information，第31卷，第2期，2017年，第303页)或CAS登记号1905409-39-3的抗CD20/抗CD3双特异性抗体。
如本文所用，术语“结合”、“特异性结合”或“具有特异性”是指可测量和可再现的相互作用，诸如靶与抗体之间的结合，在分子(包括生物分子)的异质群体的存在下，其确定靶的存在。例如，与靶标(其可以是表位)特异性结合的抗体是与其结合其他靶标相比具有更大亲和力、亲合力、更容易和/或持续时间更长的结合该靶标的抗体。在一个实施例中，抗体与无关靶标的结合程度为该抗体与抗原结合的小于约10％，例如，通过放射免疫分析(RIA)所测量。在某些实施例中，与靶标特异性结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的解离常数(KD)。在某些实施例中，抗体与蛋白上的表位特异性地结合，该表位在不同物类的蛋白之间具有保守性。在另一个实施例中，特异性结合可以包括但不要求排他结合。如本文所用的术语可例如通过具有对于靶标的如下KD的分子来展示：10-4M或更低、替代性地10-5M或更低、替代性地10-6M或更低、替代性地10-7M或更低、替代性地10-8M或更低、替代性地10-9M或更低、替代性地10-10M或更低、替代性地10-11M或更低、替代性地10-12M或更低；或者通过具有在如下范围中的KD的分子来展示：10-4M至10-6M或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M。如技术人员将理解的，亲和力与KD值是负相关的。对抗原的高亲和力是通过低KD值来衡量的。在一个实施例中，术语“特异性结合”是指分子结合到具体多肽或具体多肽上的表位而基本上不结合到任何其他多肽或多肽表位的结合。
相对于参照多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对候选序列与参考多肽序列并引入空位(如果必要的话)以实现最大的序列同一性百分比之后，并且在不考虑将任何保守取代作为序列同一性的组成部分的情况下，候选序列中的氨基酸残基与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或软件。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，为了本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成氨基酸序列同一性％的值。ALIGN-2序列比较计算机程序由基因泰克公司(Genentech,Inc.)编写，并且源代码已经与用户文档一起提交到U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在那里以美国版权登记号TXU510087注册。ALIGN-2程序可从基因泰克公司(Genentech,Inc.,South SanFrancisco,California)公开获得，或者可以从该源代码编译。ALIGN-2程序应经编译以在操作系统上使用，该/>操作系统包括数字/>V4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置并且不变。
在采用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(其可以另选地表达为给定氨基酸序列A具有或包含与给定氨基酸序列B的某一氨基酸序列同一性％)计算如下：
100乘以分数X/Y
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序对A和B的比对中评分为相同匹配的氨基酸残基的数目，而其中Y是B中氨基酸残基的总数。应当理解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另外特别指明，否则本文所使用的所有氨基酸序列同一性％的值是如前一段中所述使用ALIGN-2计算机程序获得的。
术语“药物制剂”是指处于允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对于将被施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的制剂。
“药用载体”是指药物制剂中除活性成分外的对受试者无毒的成分。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂，或防腐剂。
如本文所用，术语“化学治疗剂”是指可用于治疗癌症诸如CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或边缘区淋巴瘤(MZL))或复发性或难治性CLL)的化合物。化学治疗剂的实例包括EGFR抑制剂(包括小分子抑制剂(例如厄洛替尼(基因泰克/OSI Pharm.)；PD 183805(CI 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗咻基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-，二盐酸盐，Pfizer Inc.)；ZD1839，吉非替尼/>(4-(3'-氯-4'-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，AstraZeneca)；ZM 105180((6-氨基-4-(3-甲基苯基-氨基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，Boehringer Ingelheim)；PKI-166((R)-4-[4-[(1-苯乙基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟苯基)-4-[(1-苯乙基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(Wyeth)；AG1478(Pfizer)；AG1571(SU 5271；Pfizer)；以及双重EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼(/>GSK572016或N-[3-氯-4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺))；酪氨酸激酶抑制剂(例如EGFR抑制剂；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如TAK165(Takeda)；CP-724,714，ErbB2受体酪氨酸激酶之口服选择性抑制剂(Pfizer和OSI)；双重HER抑制剂，诸如EKB-569(可从Wyeth获得)，其优先结合EGFR但同时抑制HER2和EGFR过表达细胞；PKI-166(Novartis)；泛HER抑制剂，诸如卡那替尼(CI-1033；Pharmacia)；Raf-1抑制剂，诸如反义剂ISIS-5132(ISIS Pharmaceuticals)，其抑制Raf-1信号传导；非HER靶向酪氨酸激酶抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(/>Glaxo SmithKline)；多靶点酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(/>Pfizer)；VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如瓦他拉尼(PTK787/ZK222584,Novartis/Schering AG)；MAPK细胞外调节激酶I抑制剂CI-1040(Pharmacia)；喹唑啉，诸如PD 153035,4-(3-氯苯胺)喹唑啉；吡啶并嘧啶；嘧啶并嘧啶；吡咯并嘧啶，诸如CGP 59326、CGP 60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶，4-(苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；姜黄素(二阿魏酰甲烷，4,5-双(4-氟苯氨基)邻苯二甲酰亚胺)；含有硝基噻吩部分的酪氨酸；PD-0183805(Warner-Lamber)；反义分子(例如，那些与HER编码核酸结合的分子)；喹喔啉(美国专利号5,804,396)；色氨酸(美国专利号5,804,396)；ZD6474(Astra Zeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；泛HER抑制剂，诸如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/Lilly)；PKI 166(Novartis)；GW2016(Glaxo SmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；Semaxinib(Pfizer)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)；以及雷帕霉素(西罗莫司，/>))；蛋白酶体抑制剂，诸如硼替佐米(/>Millennium Pharm.)；双硫仑；表没食子儿茶素没食子酸酯；盐孢菌素A；卡非佐米；17-AAG(格尔德霉素)；根赤壳菌素；乳酸脱氢酶A(LDH-A)；氟维司群(/>AstraZeneca)；利妥唑(/>Novartis)，菲那舒那(finasunate)(Novartis)；奥沙利铂(/>Sanofi)；5-FU(5-氟尿嘧啶)；亚叶酸；洛那米布(SCH 66336)；索拉非尼(/>Bayer Labs)；AG1478，烷化剂，诸如噻替哌和/>环磷酰胺；烷基磺酸盐，诸如硫酸布他卡因、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替派和乌瑞替派；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷酰胺、三伸乙基硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺；多聚乙酰(尤其是布拉他辛及布拉他西酮)；喜树碱(包括拓扑替康和抗癌妥)；苔藓抑素；卡拉汀(Callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素(尤其是隐藻素1和隐藻素8)；肾上腺皮质激素(包括泼尼松和泼尼松龙)；醋酸环丙孕酮；5α-还原酶，包括非那雄胺和度他雄胺)；伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、莫西司他多拉司他(mocetinostat dolastatin)；阿地白介素、滑石倍癌霉素(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑素；氮芥类，诸如氮芥苯丁酸、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、盐酸甲氧氮芥、霉法兰、新氮芥、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1和加利车霉素ω1)；蒽环抗生素，包括蒽环抗生素A；双膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素；以及新制癌素生色团及相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、重氮丝氨酸、放线菌素C、卡拉比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、地托比星、6-二氮-5-氧-L-正白氨酸、吗咻基代阿霉素、氰基吗咻基代阿霉素、2-吡咯并-阿霉素及脱氧阿霉素)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-Fu)；叶酸类似物诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫脒嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类诸如卡鲁睪酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睪内酯；抗肾上腺素类诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶、安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；伊佛米新；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；洛尼达明；美登素类生物碱类诸如美登素及安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；/>多糖复合物(JHSNatural Products)；雷佐生；根霉素；西索菲兰；螺旋锗；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇行菌素)；乌拉坦；长春地辛；达喀尔巴嗪；甘露醇氮；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托星；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺、塞替派；苯丁酸氮芥；/>(吉西他滨)；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；诺凡酮；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基喋呤；卡培他滨/>伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素诸如视黄酸；以及上述任一者的药用盐、酸、前药和衍生物。
化学治疗剂还包括(i)对肿瘤具有调节或抑制激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素及选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬柠檬酸盐)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和/>(柠檬酸托瑞米芬)；(ii)抑制酶芳香化酶的芳香化酶抑制剂，其酶调节肾上腺的雌激素生成，例如4(5)-咪唑、氨基戊二酰亚胺、/>(醋酸甲地孕酮)、/>(伊析美斯坦；Pfizer)、Formestanie、Fadrozole、(伏洛唑)、/>(利妥唑；Novartis)和/>(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、柳普林和戈舍瑞林；布舍瑞林、Tripterelin、甲羟孕酮醋酸酯、己二烯雌酚、普力马、氟甲孕酮、所有反式维甲酸、芬太尼以及曲沙西他滨(1,3-二氧胞嘧啶核苷类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，尤其是那些抑制与异常细胞增殖有关的信号通路中的基因表达的寡核苷酸，诸如PKC-Alpha、Ralf和H-Ras；(vii)核酶，诸如VEGF表现抑制剂(例如/>)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如和/>(ix)生长抑制剂，包括长春花(例如长春新碱和长春花碱)、/>(温诺平)、紫杉烷(例如紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇和多西紫杉醇)、拓扑异构酶II抑制剂(例如阿霉素、表柔比星、柔红霉素、依托泊苷和博来霉素)和DNA烷化剂(例如他莫昔津、达喀尔巴嗪、二氯甲基二乙胺、顺铂、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和ara-C)；以及(x)上述任一者的药用盐、酸、前驱药和衍生物。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指对细胞有害(例如，造成细胞死亡、抑制增殖或以其他方式阻碍细胞功能)的任何试剂。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂；酶及其片段，诸如溶核酶；以及毒素，诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体。示例性细胞毒性剂可以选自抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂、LDH-A抑制剂、脂肪酸生物合成抑制剂、细胞周期信号传导抑制剂、HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂和癌症代谢抑制剂。在一种情况下，细胞毒性剂为铂类化疗剂(例如，卡铂或顺铂)。在一种情况下，细胞毒性剂为EGFR的拮抗剂，例如N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(例如，厄洛替尼(erlotinib))。在一种情况下，细胞毒性剂为RAF抑制剂，例如BRAF和/或CRAF抑制剂。在一种情况下，RAF抑制剂为维罗非尼(vemurafenib)。在一种情况下，细胞毒性剂为PI3K抑制剂。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”是指一种分子，该分子抑制PD-1轴结合配偶体与其一个或多个结合配偶体的相互作用以消除由PD-1信号传导轴上的信号传导引起的T细胞功能障碍，其结果是恢复或增强T细胞功能(例如，增殖、细胞因子产生、靶细胞杀伤)。如本文所用，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-L1、PD-L2)相互作用产生的信号传导的分子。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂为抑制PD-1与其结合配偶体中的一者或多者结合的分子。在具体方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括抗PD-1抗体及其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽以及其它减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用产生的信号传导的分子。在一个实施例中，PD-1结合拮抗剂可减少由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的通过PD-1的信号传导所介导的或通过其的负共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞功能障碍较少(例如，提高效应子对抗原识别的应答)。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个具体方面，PD-1结合拮抗剂为MDX-1106(纳武单抗)。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为帕博利珠单抗(以前称为lambrolizumab(MK-3475))。在另一具体方面，PD-1结合拮抗剂为AMP-224。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂为MDX-1106(纳武利尤单抗)。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂为MK-3475(帕博利珠单抗)。在一些实施例中，PD-1结合拮抗剂是MED1-0680。在一些情况下，PD-1结合拮抗剂为PDR001(斯巴达珠单抗(spartalizumab))。在一些情况下，PD-1结合拮抗剂为REGN2810(西米普利单抗(cemiplimab))。在一些情况下，PD-1结合拮抗剂是BGB-108。在其他情况下，PD-1结合拮抗剂为帕洛利单抗(prolgolimab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、信迪利单抗(sintilimab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)或特瑞普利单抗(toripalimab)。
PD-1轴结合拮抗剂的其他实例包括西米普利单抗、帕洛利单抗、卡瑞利珠单抗、信迪利单抗、替雷利珠单抗、特瑞普利单抗、多塔利单抗(dostarlimab)、瑞弗利单抗(retifanlimab)、斯巴达珠单抗、萨善利单抗(sasanlimab)、派安普利单抗(penpulimab)、CS1003、HLX10、SCT-I10A、SHR-1316、CS1001、恩沃利单抗(envafolimab)、TQB2450、ZKAB001、LP-002、赛帕利单抗(zimberelimab)、巴替利单抗(balstilimab)、杰诺单抗(genolimzumab)、BI 754091、西利单抗(cetrelimab)、YBL-006、BAT1306、HX008、CX-072、IMC-001、KL-A167、布格利单抗(budigalimab)、CX-188、JTX-4014、609A、Sym021、LZM009、F520、SG001、APL-502、柯希利单抗(cosibelimab)、洛达利单抗(lodapolimab)、GS-4224、INCB086550、FAZ053、TG-1501、BGB-A333、BCD-135、AK-106、LDP、GR1405、HLX20、MSB2311、MAX-10181、RC98、BION-004、AM0001、CB201、ENUM 244C8、ENUM 388D4、AUNP-012、STI-1110、ADG104、AK-103、LBL-006、hAb21、AVA-004、PDL-GEX、INCB090244、KD036、KY1003、LYN192、MT-6035、VXM10、YBL-007、ABSK041、GB7003、JS-003和HS-636。
术语“PD-L1结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-1或B7-1)相互作用产生的信号传导的分子。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1与其结合配偶体结合的分子。在具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1至PD-1和/或B7-1的结合。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂包括抗PD-L1抗体，其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其他减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L1与其一个或多个结合配偶体(诸如PD-1或B7-1)相互作用产生的信号传导。在一个实施例中，PD-L1结合拮抗剂可减少由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的通过PD-L1的信号传导所介导的或通过其的负共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞功能障碍较少(例如，提高效应子对抗原识别的应答)。在一些实施例中，PD-L1结合拮抗剂为抗PD-L1抗体。在一个具体实施例中，抗PD-L1抗体为阿替利珠单抗(也称为MPDL3280A)。在另一具体实施例中，抗PD-L1抗体为MDX-1105。在仍另一具体方面，抗PD-L1抗体为MEDI4736。
如本文所用，术语“阿特珠单抗”是指具有国际非专利药名(INN)清单112(WHODrug Information，第28卷，第4期，2014年，第488页)或CAS登记号1380723-44-3的抗PD-L1拮抗剂抗体。
术语“PD-L2结合拮抗剂”是指减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其一种或多种结合配偶体(诸如PD-1)的相互作用产生的信号传导的分子。在一些实施例中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2与其结合配偶体中的一者或多者结合的分子。在具体方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些实施例中，PD-L2拮抗剂包括抗PD-L2抗体，其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其他减少、阻断、抑制、消除或干扰由PD-L2与其结合配偶体(诸如PD-1)中的一者或多者相互作用产生的信号传导的分子。在一个实施例中，PD-L2结合拮抗剂可减少由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的通过PD-L2的信号传导所介导的或通过其的负共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞功能障碍较少(例如，提高效应子对抗原识别的应答)。在一些实施例中，PD-L2结合拮抗剂为免疫粘附素。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包括的说明书，其含有涉及此类治疗产品的使用的有关适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
III.治疗方法
本文提供了治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者的方法，这些方法通过在至少包括第一给药周期和第二给药周期(例如，第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期)的给药方案中向受试者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施。
本文还提供了治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者群体的方法，这些方法通过在至少包括第一给药周期和第二给药周期(例如，第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期)的给药方案中向受试者中的一者或多者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施。
在一些情况下，第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg。在一些情况下，第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。在一些情况下，本发明的特征在于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)，其中第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。在本发明的任何方法的一些情况下，给药方案提供了细胞因子释放综合征比率的降低。
首先讨论给药方案，然后讨论抗CD20/抗CD3双特异性抗体。然后讨论抗体的各种形式和特性，以及可用于所公开的之方法中的另外的治疗剂。
A.给药方案
在一些情况下，本发明提供了一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者(例如，人受试者)的方法，该方法通过在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约50mg；并且(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
在一些情况下，C1D3为50mg至200mg(例如，50mg至175mg、50mg至150mg、50mg至125mg、50mg至100mg、50mg至75mg、50mg至70mg、52mg至100mg、52mg至75mg、50mg至180mg、55mg至150mg、55mg至100mg、55mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约60mg)。在一些实施例中，C1D3为约60mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg和/或C1D2为约2mg。在一些实施例中，C2D1在量上与C1D3约等同。
在一些情况下，分别在或约在第一给药周期(例如，21天给药周期)的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，在第二给药周期(例如，21天或28天给药周期)的第1天向受试者施用C2D1。
在一些情况下，在第二给药周期之后，给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。例如，在一些实施例中，在第二给药周期之后，给药方案包括6至15个额外给药周期(例如，六至十个额外给药周期(例如，六个额外给药周期、七个额外给药周期、八个额外给药周期、九个额外给药周期或十个额外给药周期)或11至15个额外给药周期(例如，11个额外给药周期、12个额外给药周期、13个额外给药周期、14个额外给药周期或15个额外给药周期))。
在一些实施例中，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量(例如，莫妥珠单抗)。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。
在一些情况下，双特异性抗体的额外单一剂量大于C1D1并且小于C1D3和/或C2D1。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量为C1D3和/或C2D1的20％至80％(例如，20％至70％、20％至60％、20％至55％、30％至80％、30％至70％、40％至70％、45％至70％、40％至60％、45％至55％、48％至52％；例如，约50％)。在特定情况下，双特异性抗体的额外单一剂量为C1D3和/或C2D1的约50％。
在一些情况下，双特异性抗体的额外单一剂量为约30mg。
在一些情况下，本发明的特征在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者的方法，该方法通过在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。在一些情况下，C1D3和C2D1各自为20mg至200mg(例如，20mg至175mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至75mg、30mg至175mg、40mg至175mg、45mg至175mg、50mg至175mg、30mg至150mg、40mg至100mg、45mg至75mg、50mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约20mg、约30mg、约45mg或约60mg)。在一些实施例中，C1D3和C2D1各自为约60mg。在一些实施例中，C3D1为C2D1的20％至80％(例如，20％至70％、20％至60％、20％至55％、30％至80％、30％至70％、40％至70％、45％至70％、40％至60％、45％至55％、或48％至52％；例如，约40％、约45％、约50％、约55％或约60％)。在一些实施例中，C3D1为C2D1的约50％。在一些实施例中，C3D1为约12mg至约48mg(例如，约12mg至约42mg、约12mg至约36mg、约12mg至约30mg、约18mg至约48mg、约18mg至约42mg、约24mg至约42mg、约27mg至约42mg、约24mg至约36mg、约27mg至约33mg、约28mg至约32mg；例如，约24mg、约27mg、约30mg、约33mg或约36mg)。在一个特定实施例中，C3D1为约30mg。
在一些情况下，C3D1为约30mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg。在一些实施例中，C1D2为约2mg。例如，在特定情况下，C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约30mg。
在一些情况下，分别在或约在第一给药周期(例如，21天给药周期)的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，在第二给药周期的第1天向受试者施用C2D1，并且在第三给药周期的第1天向受试者施用C3D1(例如，其中第二给药周期和第三给药周期为21天或28天给药周期)。
在一些实施例中，在第三给药周期之后，本发明的给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。例如，在一些情况下，在第三给药周期之后，给药方案包括5至14个额外给药周期(例如，五至十个额外给药周期(例如，五个额外给药周期、六个额外给药周期、七个额外给药周期、八个额外给药周期、九个额外给药周期或十个额外给药周期)或11至14个额外给药周期(例如，11个额外给药周期、12个额外给药周期、13个额外给药周期、14个额外给药周期))。
在一些实施例中，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1约等同。
本发明的特征还在于一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者的方法，该方法通过在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
在一些情况下，C1D3和C2D1各自为20mg至200mg(例如，20mg至175mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至75mg、30mg至175mg、40mg至175mg、45mg至175mg、50mg至175mg、30mg至150mg、40mg至100mg、45mg至75mg、50mg至70mg、55mg至65mg、58mg至62mg；例如，约20mg、约30mg、约45mg或约60mg)。在一些实施例中，C1D3和C2D1各自为约60mg。在一些实施例中，C3D1为C2D1的20％至80％(例如，20％至70％、20％至60％、20％至55％、30％至80％、30％至70％、40％至70％、45％至70％、40％至60％、45％至55％、或48％至52％；例如，约40％、约45％、约50％、约55％或约60％)。在一些实施例中，C3D1为C2D1的约50％。在一些实施例中，C3D1为约12mg至约48mg(例如，约12mg至约42mg、约12mg至约36mg、约12mg至约30mg、约18mg至约48mg、约18mg至约42mg、约24mg至约42mg、约27mg至约42mg、约24mg至约36mg、约27mg至约33mg、约28mg至约32mg；例如，约24mg、约27mg、约30mg、约33mg或约36mg)。在一个特定实施例中，C3D1为约30mg。在一些实施例中，C1D1为约1mg。在一些实施例中，C1D2为约2mg。
在一些情况下，分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用C1D1、C1D2和C1D3。在一些实施例中，分别在第二给药周期至第八给药周期的第1天向受试者各自施用C2D1至C8D1。在一些实施例中，给药周期为21天给药周期或28天给药周期。在一些实施例中，在第八给药周期之后，给药方案包括一个或多个额外给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为21天给药周期。在一些实施例中，额外给药周期为28天给药周期。
在一些情况下，额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，在每个额外给药周期的第1天向受试者施用双特异性抗体的额外单一剂量。在一些实施例中，双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1至C8D1中的任一者约等同。
在一些实施例中，给药方案进一步包括向受试者施用PD-1轴结合拮抗剂。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂以在约1100mg至约1300mg之间(例如，在约1150mg至约1250mg之间、在约1175mg至约1225mg之间、在约1190mg至约1210mg之间；例如，1200mg±5mg，例如，1200±2.5mg，例如，1200±1.0mg，例如，1200±0.5mg；例如，约1200mg)的剂量施用。在特定实施例中，PD-1轴结合拮抗剂以约1200mg的剂量施用。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂在包括施用双特异性抗体的第一给药周期之后的每个给药周期的第1天(±1天)施用。在一些实施例中，PD-1轴结合拮抗剂为阿替利珠单抗。在一些实施例中，受试者是人。
本发明进一步提供了治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者的方法，这些方法通过在包括八个或更多个21天或28天给药周期的给药方案中向受试者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1各自为约30mg。在一些实施例中，第一给药周期之后的给药周期为28天给药周期。
在任何前述方法的一些情况下，受试者接受过针对CD20阳性细胞增殖性疾患的在先全身性疗法(例如，针对B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)的在先全身性疗法)。在一些情况下，受试者接受过针对CD20阳性细胞增殖性疾患的一线全身性疗法和二线全身性疗法(例如，本文提供的给药方案可为三线疗法)。在一些实施例中，受试者在任何在先全身性疗法的24个月内已表现出CD20阳性细胞增殖性疾患的进展。
在一些情况下，在先全身性疗法包括抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗或奥妥珠单抗)。在一些情况下，在先全身性疗法包括化学治疗剂，例如烷化剂(例如，苯达莫司汀)。在一些实施例中，在先全身性疗法包括来那度胺。在一些情况下，在先全身性疗法包括放射免疫疗法(例如，替伊莫单抗)。在一些情况下，在先全身性疗法包括磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(例如，艾代拉利司、阿培利司、库潘尼西或度维利塞)。在一些情况下，在先全身性疗法包括CAR-T疗法。
本发明还提供了治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者群体的方法，这些方法通过在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者中的一者或多者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于50mg；并且(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
在其他特定情况下，本发明包括一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者群体的方法，该方法通过在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者中的一者或多者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
本文还提供了一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者群体的方法，该方法通过在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者中的一者或多者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体来实施，其中：(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg(例如，约0.02至约1.8mg、约0.02至约1.6mg、约0.02至约1.4mg、约0.02至约1.2mg、约0.05至约1.8mg、约0.1至约1.8mg、约0.4至约1.8mg、约0.6至约1.8mg、约0.8至约1.8mg、约0.5至约1.5mg、约0.8至约1.2mg；例如，约1mg)，C1D2为约0.05mg至约4.0mg(例如，约0.05至约3.5mg、约0.05至约3.0mg、约0.05至约2.5mg、约0.05至约2.2mg、约0.1至约3.5mg、约0.5至约3.5mg、约1.0至约3.5mg、约1.5至约3.5mg、约1.8至约3.5mg、约1.0至约3.0mg、约1.5至约2.5mg；例如，约2mg)，并且C1D3大于约20mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
本发明的方法还包括治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者群体，该治疗通过在包括八个或更多个21天或28天给药周期的给药方案中向受试者中的一者或多者施用(例如，静脉内施用)与CD20和CD3结合的双特异性抗体(例如，莫妥珠单抗)来实施，其中：(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中C3D1至C8D1各自为约30mg。在一些实施例中，第一给药周期之后的给药周期为28天给药周期。
在一些实施例中，具有2级或更高级别(如美国移植和细胞疗法学会，2018；ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约10％(例如，小于或等于约9％、小于或等于约8％、小于或等于约7％、小于或等于约6％、小于或等于约5％、小于或等于约4％、小于或等于约3％、小于或等于约2％、小于或等于约1％；例如，在约0.1％至约10％之间、在约0.5％与约10％之间、在约1％与约10％之间、在约1％与约7％之间、在约1％与约5％之间、在约1％与约3％之间、或在约5％与约10％之间；例如，约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％或约0％)。在一些实施例中，具有2级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约5％(例如，小于或等于约4％、小于或等于约3％、小于或等于约2％、小于或等于约1％；例如，在约0％与约5％之间、在约1％与约5％之间、在约2％与约5％之间、在约3％与约5％之间、在约4％与约5％之间、在约1％与约3％之间、在约2％与约5％之间、或在约0％与约2％之间；例如，约5％、约4％、约3％、约2％、约1％或约0％)。在一些实施例中，具有3级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率为约0。
本文所述的任何方法可涉及监测受试者的细胞因子释放综合征(CRS)，例如在开始上述任何方法之后的CRS事件。当前的临床管理侧重于治疗受试者病征和症状，提供支持性护理，并且试图使用高剂量皮质类固醇来抑制炎性反应。但是，该方法并非始终能够成功，尤其在后期干预的情况下。本文所述的方法使用的CRS分级标准由美国移植和细胞疗法学会(ASTCT)发布，用于定义轻度、中度、重度或危及生命的CRS并且协调跨临床试验的报告，以便快速识别和治疗CRS(Lee等人,Biology of Blood and MarrowTransplantation.25(4):625-638,2019)。ASTCT标准旨在客观、易于应用并且更准确地对CRS的严重程度进行分类。该修订的CRS分级系统如下表1所示。
表1.CRS分级系统
ASTCT＝美国移植和细胞疗法学会；BiPAP＝双相气道正压通气；CPAP＝持续气道正压通气；CRS＝细胞因子释放综合征；CTCAE＝不良事件通用术语标准。
发热定义为不可归因于任何其他原因的体温≥38℃。对于接着接受解热药或抗细胞因子疗法(诸如托珠单抗或类固醇)的CRS受试者，不再需要通过发热来对后续CRS严重程度进行分级。在该情况下，CRS分级由低血压和/或缺氧确定。
CRS级别由更严重事件确定：不可归因于任何其他原因的低血压或缺氧。例如，将具有39.5℃的体温、需要1种血管加压药的低血压以及需要低流量鼻导管的缺氧的受试者归类为3级CRS。
低流量鼻导管定义为以≤6L/分钟递送氧气。低流量亦包括递送漏氧，有时用于儿科。高流量鼻导管定义为以>6L/分钟递送氧气。
CRS与多种细胞因子的升高(包括IFNγ、IL-6和TNF-α含量的显著升高)相关联。新出现的证据表明(特别是)IL-6为CRS的中心介质。IL-6是由多种细胞类型产生的促炎性多功能细胞因子，其已被证明参与多种生理过程，包括T细胞活化。无论何种激发剂，CRS均与高含量IL-6相关联(Nagorsen等人,Cytokine.25(1):31-5,2004；Lee等人,Blood.124(2):188-95,2014)；Doesegger等人,Clin.Transl.Immunology.4(7):e39,2015)，并且IL-6与CRS的严重程度相关，与未经历CRS或经历较轻CRS(0至3级)的受试者相比，经历4级或5级CRS事件的受试者具有更高的IL-6含量(Chen等人,J.Immunol.Methods.434:1-8,2016)。
因此，使用抑制IL-6介导的信号传导的药剂阻断IL-6的炎症性作用以控制在两步分次、剂量递增给药方案期间在受试者中观察到的CRS为类固醇治疗的替代方案，预计其不会对T细胞功能产生负面影响或降低抗CD20/抗CD3双特异性抗体疗法在治疗CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患)中的有效性或临床获益。
托珠单抗是一种针对可溶性及膜结合IL-6R的重组人源化抗人单克隆抗体，其抑制IL-6介导的信号传导(参见例如WO 1992/019579，其通过引用以其整体并入本文)。
如果在施用双特异性抗体后，受试者发生细胞因子释放综合征(CRS)事件，则该方法可进一步包括向受试者施用有效量的白介素6受体(IL-6R)拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗 )来管理该事件。在一些情况下，以约8mg/kg的单一剂量向受试者静脉内施用托珠单抗。可替代托珠单抗或与其组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、伏巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变体。
如果受试者的CRS事件在施用IL-6R拮抗剂以治疗CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化，则该方法可进一步包括向受试者施用一个或多个额外剂量的IL-6R拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗)以管理CRS事件。如果通过施用IL-6R拮抗剂不能管理CRS事件，则可以向受试者施用皮质类固醇，诸如甲泼尼龙或地塞米松。
CRS事件的管理可根据CRS的阶段及合并症的存在进行定制。例如，如果在施用双特异性抗体后，受试者不存在合并症或存在最小合并症的情况下发生2级细胞因子释放综合征(CRS)事件，则该方法可进一步包括治疗2级CRS事件的症状，同时中止用双特异性抗体治疗。如果2级CRS事件之后消退为≤1级CRS事件持续至少连续三天，则该方法可进一步包括在不改变剂量的情况下恢复用双特异性抗体治疗。另一方面，如果2级CRS事件在治疗2级CRS事件的症状的24小时内未消退或恶化为≥3级CRS事件，则该方法可进一步包括向受试者施用有效量的白介素-6受体(IL-6R)拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗 )来管理2级或≥3级CRS事件。在一些情况下，以约8mg/kg的单一剂量向受试者静脉内施用托珠单抗。可替代托珠单抗或与其组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、伏巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变体。
如果在施用双特异性抗体后，受试者在存在广泛合并症的情况下发生2级、3级或4级CRS事件，则该方法可进一步包括本领域已知的减轻CRS事件的方法，诸如向受试者施用第一剂量的IL-6R拮抗剂(例如，抗IL-6R抗体，例如托珠单抗)来管理CRS事件，同时中止用双特异性抗体治疗。可替代托珠单抗或与其组合使用的其他抗IL-6R抗体包括沙利鲁单抗(sarilumab)、伏巴利珠单抗(vobarilizumab)(ALX-0061)、SA-237及其变体。在一些情况下，该方法进一步包括向受试者施用有效量的皮质类固醇，诸如甲泼尼龙或地塞米松。
在一些情况下，本发明的方法引起完全缓解率为至少约15％(例如，15％至30％、15％至40％、15％至50％、15％至60％、15％至75％、15％至80％、15％至90％、15％至100％、20％至100％、20％至75％、20％至50％、25％至100％、25％至75％、25％至50％、30％至75％、30％至100％、或30％至50％；例如，约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％)。在一些实施例中，完全缓解率为至少约45％(例如，45％至60％、45％至70％、45％至80％、45％至95％、45％至100％、50％至100％、50％至95％、或50％至75％；例如，约45％、约50％、约55％或约60％)。在一些实施例中，客观缓解率为至少约60％(例如，60％至70％、60％至80％、60％至90％、或60％至100％；例如，约60％、约65％、约70％、约75％、约80％或约85％)。在一些实施例中，在治疗开始后约20个月的客观缓解率为至少约70％(例如，70％至80％、70％至90％、70％至95％、或70％至100％；例如，约70％、约75％、约80％、约85％或约90％)。在一些实施例中，在治疗开始后约24个月的客观缓解率为至少约75％(例如，75％至80％、75％至90％、75％至95％、75％至100％、80％至100％、或90％至100％；例如，约75％、约80％、约85％或约90％)。在一些实施例中，中位缓解持续时间(mDOR)为至少约12个月(例如，至少约14个月、至少约16个月、或至少约18个月；例如，在12个月与14个月之间、在12个月与16个月之间、在12个月与18个月、或在12个月与20个月之间；例如，约12个月、约14个月、约16个月或约18个月)。在一些实施例中，mDOR为至少约20个月(例如，至少约22个月、至少约24个月、至少约26个月、至少约28个月、至少约30个月、至少约32个月、至少约34个月、或至少约36个月；例如，在20个月与24个月之间、在20个月与30个月之间、在20个月与36个月之间、在20个月与48个月之间、在20个月与60个月之间、在20个月与72个月之间、在24个月与36个月之间、在24个月与48个月之间、在24个月与60个月之间、在36个月与48个月之间、或在36个月与60个月之间；例如，约20个月、约24个月、约28个月、约32个月、约36个月、约40个月、约48个月、约56个月或约60个月)。在一些实施例中，受试者群体具有在该群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率，并且其中该群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率为至少约60％(例如，60％至70％、60％至80％、60％至90％、或60％至100％；例如，约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％)。
在一些实施例中，在施用双特异性抗体后，受试者群体表现出细胞因子释放综合征，并且其中受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约25％(例如，小于或等于约23％、小于或等于约20％、小于或等于约18％、小于或等于约16％、小于或等于约15％、小于或等于约14％、小于或等于约13％、小于或等于约12％、小于或等于约11％、或小于或等于约10％；例如，在约1％与约25％之间、在约5％与约25％之间、在约10％与约25％之间、在约15％与约25％之间、在约20％与约25％之间、在约5％与约15％之间、在约5％与约10％之间、在约1％与约15％之间、或在约1％与约10％之间；例如，约5％、约10％、约15％、约20％或约25％)。在一些实施例中，受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约10％(例如，小于或等于约9％、小于或等于约8％、小于或等于约7％、小于或等于约6％、小于或等于约5％、小于或等于约4％、小于或等于约3％、小于或等于约2％、或小于或等于约1％；例如，在约0.1％至约10％之间、在约0.5％与约10％之间、在约1％与约10％之间、在约1％与约7％之间、在约1％与约5％之间、在约1％与约3％之间、或在约5％与约10％之间；例如，约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％或约8％)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起受试者群体的中位无进展生存期(PFS)为大于四个月(例如，至少4.5个月、至少5个月、至少5.5个月、至少6个月、至少6.5个月、至少7个月、至少7.5个月、至少8个月、至少8.5个月、至少9.0个月、至少9.5个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约4个月与约48个月之间、在约4个月与约36个月之间、在约4个月与约24个月之间、在约4个月与约12个月之间、在约4个月与约10个月；在约4个月与约8个月之间、在约8个月与约24个月之间、在约12个月与约24个月之间、或在约8个月与约16个月之间；例如，约4.5个月、约5个月、约5.5个月、约6个月、约6.5个月、约7个月、约7.5个月、约8个月、约8.5个月、约9.0个月、约9.5个月、约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有FL(例如，复发性和/或难治性FL)的受试者群体的中位PFS为大于四个月(例如，至少4.5个月、至少5个月、至少5.5个月、至少6个月、至少6.5个月、至少7个月、至少7.5个月、至少8个月、至少8.5个月、至少9.0个月、至少9.5个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约4个月与约48个月之间、在约4个月与约36个月之间、在约4个月与约24个月之间、在约4个月与约12个月之间、在约4个月与约10个月之间；在约4个月与约8个月之间、在约8个月与约24个月之间、在约12个月与约24个月之间、或在约8个月与约16个月之间；例如，约4.5个月、约5个月、约5.5个月、约6个月、约6.5个月、约7个月、约7.5个月、约8个月、约8.5个月、约9.0个月、约9.5个月、约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位PFS为大于或等于约两个月(例如，至少2个月、至少2.5个月、至少3个月、至少3.5个月、至少4个月、至少4.5个月、至少5个月、至少5.5个月、至少6个月、至少6.5个月、至少7个月、至少7.5个月、至少8个月、至少8.5个月、至少9.0个月、至少9.5个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约2个月与约48个月之间、在约2个月与约36个月之间、在约2个月与约24个月之间、在约2个月与约12个月之间、在约2个月与约10个月之间；在约2个月与约8个月之间、在约2个月与约6个月之间、在约2个月与约4个月之间、在约4个月与约12个月之间、在约8个月与约12个月之间、或在约4个月与约8个月之间；例如，约2.5个月、约3个月、约3.5个月、约4个月、约4.5个月、约5个月、约5.5个月、约6个月、约6.5个月、约7个月、约7.5个月、约8个月、约8.5个月、约9.0个月、约9.5个月、约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位PFS为大于6.3个月(例如，至少6.5个月、至少6.7个月、至少7个月、至少7.3个月、至少7.5个月、至少8个月、至少8.5个月、至少9.0个月、至少9.5个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约6个月与约48个月之间、在约6个月与约36个月之间、在约6个月与约24个月之间、在约6个月与约12个月之间、在约6个月与约10个月之间；在约6个月与约8个月之间、在约8个月与约24个月之间、在约12个月与约24个月之间、或在约8个月与约16个月之间；例如，约6.3个月、约6.5个月、约7个月、约7.5个月、约8个月、约8.5个月、约9.0个月、约9.5个月、约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位PFS为至少6.7个月。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位PFS为至少7.3个月。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位PFS为至少8.0个月。
在一些情况下，本发明的给药方案引起受试者群体的中位总生存期(OS)为大于9.5个月(例如，至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约9个月与约48个月之间、在约9个月与约36个月之间、在约9个月与约24个月之间、在约9个月与约12个月之间、在约10个月与约18个月之间；在约12个月与约24个月之间、在约18个月与约36个月之间、在约12个月与约36个月之间、或在约24个月与约48个月之间；例如，约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有FL(例如，复发性和/或难治性FL)的受试者群体的中位OS为大于9.5个月(例如，至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约9个月与约48个月之间、在约9个月与约36个月之间、在约9个月与约24个月之间、在约9个月与约12个月之间、在约10个月与约18个月之间；在约12个月与约24个月之间、在约18个月与约36个月之间、在约12个月与约36个月之间、或在约24个月与约48个月之间；例如，约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位OS为大于9.5个月(例如，至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少13个月、至少14个月、至少15个月、至少16个月、至少17个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约9个月与约48个月之间、在约9个月与约36个月之间、在约9个月与约24个月之间、在约9个月与约12个月之间、在约10个月与约18个月之间；在约12个月与约24个月之间、在约18个月与约36个月之间、在约12个月与约36个月之间、或在约24个月与约48个月之间；例如，约10个月、约11个月、约12个月、约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位OS为大于12.5个月(例如，至少13个月、至少14个月、至少14.6个月、至少15个月、至少15.8个月、至少16个月、至少17个月、至少17.3个月、至少18个月、至少20个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月或更长时间；例如，在约13个月与约48个月之间、在约13个月与约36个月之间、在约13个月与约24个月之间、在约16个月与约60个月之间、在约24个月与约36个月之间；在约12个月与约24个月之间、在约18个月与约36个月之间、在约24个月与约36个月之间、在约24个月与约48个月之间；例如，约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约20个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月、约54个月或更长时间)。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位OS为大于14.6个月。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位OS为大于15.8个月。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体的中位OS为大于17.3个月。
在一些情况下，本发明的给药方案引起受试者群体中的完全缓解(CR)率为至少约42％(例如，至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更大，例如42％至45％、45％至50％、50％至55％、55％至60％、60％至65％、65％至70％、70％至75％或更大，例如约42％、约45％、约50％、约55％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更大)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有FL(例如，复发性和/或难治性FL)的受试者群体中的CR率为至少约50％。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有FL(例如，复发性和/或难治性FL)的受试者群体中的CR率为至少约55％(例如，至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更大，例如55％至60％、60％至65％、65％至70％、70％至75％或更大，例如约42％、约45％、约50％、约55％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更大)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约20％(例如，至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％)。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约42％(例如，至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更大，例如42％至45％、45％至50％、50％至55％、55％至60％、60％至65％、65％至70％、70％至75％或更大，例如约42％、约45％、约50％、约55％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更大)。
在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约50％(例如，至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更大，例如50％至55％、55％至60％、60％至65％、65％至70％、70％至75％或更大，例如约42％、约45％、约50％、约55％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更大)。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约55％。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约60％。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约65％。在一些情况下，本发明的给药方案引起患有DLBCL(例如，复发性和/或难治性DLBCL)的受试者群体中的CR率为至少约20％。
B.与CD20和CD3结合的双特异性抗体
本发明提供了与CD20和CD3结合的双特异性抗体(即抗CD20/抗CD3抗体)，这些双特异性抗体可用于治疗CD20阳性细胞增殖性疾患，例如B细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL、3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)。
在一些情况下，本发明提供了一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含具有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含GYTFTSYNMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含AIYPGNGDTSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含VVYYSNSYWYFDV(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASSSVSYMH(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含APSNLAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含QQWSFNPPT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含分别含有SEQ ID NO:17至SEQ ID NO:20的序列的重链框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)，和/或分别含有SEQ ID NO:21至SEQ IDNO:24的序列的轻链框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)。在一些情况下，双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQID NO:7的序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:8的序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。因此，在一些情况下，第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL结构域。
在一些情况下，本发明提供了一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含具有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)HVR-H1，其包含NYYIH(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含WIYPGDGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DSYSNYYFDY(SEQ IDNO:11)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含WASTRES(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含TQSFILRT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含分别含有SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:28的序列的重链框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)，和/或分别含有SEQ ID NO:29至SEQ ID NO:32的序列的轻链框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)。在一些情况下，双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:15的序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:16的序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。因此，在一些情况下，第二结合结构域包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL结构域。
在一些情况下，本发明提供了一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含(1)具有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)HVR-H1，其包含GYTFTSYNMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含AIYPGNGDTSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含VVYYSNSYWYFDV(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASSSVSYMH(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含APSNLAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含QQWSFNPPT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列；以及(2)具有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个HVR：(a)HVR-H1，其包含NYYIH(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含WIYPGDGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DSYSNYYFDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含WASTRES(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含TQSFILRT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含(1)分别含有SEQ IDNO:17至SEQ ID NO:20的序列的重链框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4(1)中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)，和/或分别含有SEQ ID NO:21至SEQ ID NO:24的序列的轻链框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)以及(2)分别含有SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:28的序列的重链框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)，和/或分别含有SEQ ID NO:29至SEQ ID NO:32的序列的轻链框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含(1)含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ IDNO:7的序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ IDNO:8的序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域，以及(2)含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:15的序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:16的序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含(1)第一结合结构域，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列，以及(2)第二结合结构域，其包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL结构域。
在一些情况下，抗体为莫妥珠单抗，其具有国际非专利药名(INN)清单117(WHODrug Information，第31卷，第2期，2017年，第303页)或CAS登记号1905409-39-3。在一些实施例中，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含(1)含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含(a)重链，其包含与SEQ ID NO:51具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:51的序列；(b)轻链，其包含与SEQ ID NO:52具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:52的序列；或(c)如(a)中的重链和如(b)中的轻链，以及(2)含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含(a)重链，其包含与SEQ ID NO:53具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ IDNO:53的序列；(b)轻链，其包含与SEQ ID NO:54具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:54的序列；或(c)如(a)中的重链和如(b)中的轻链。在一些实施例中，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含(1)含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链，以及(2)含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链和含有SEQID NO:54的氨基酸序列的轻链。
下表2中提供了莫妥珠单抗的氨基酸序列。
表2.莫妥珠单抗的序列ID
抗CD20/抗CD3双特异性抗体可以使用重组方法和组合物来生产，例如，如美国专利号4,816,567中所述。
在一些情况下，根据上述任何上述实施例的抗CD20/抗CD3双特异性抗体可以单独或以组合并入任何特征，如下面第C部分所述。
C.抗体形式和特性
本文所述的方法可进一步包括上述任何抗体，其中抗体单独或组合地包含如下文所述的任何特征。
1.抗体亲和力
在某些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(KD)。
在一个实例中，通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量KD。在一个实例中，采用目的抗体的Fab形式及其抗原进行RIA。例如，Fab对抗原的溶液结合亲和力是通过在一系列未标记的抗原滴定存在下用最小浓度的(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原来测量的(参见例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了确定用于测定法的条件，用在50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)包被多孔板(Thermo Scientific)过夜，并且随后在室温(大约23℃)，用在PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白阻断二至五小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目标Fab的系列稀释液混合(例如，与Presta等人，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将目的Fab孵育过夜；然而，孵育可以持续更长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，一小时)。随后移除溶液并且用在PBS中的0.1％聚山梨酯20/>洗涤该板八次。当板已干燥时，添加150μL//孔的闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，并且用TOPCOUNTTM计数器(Packard)对板计数十分钟。选择给出小于或等于20％最大结合的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。
根据另一种情况，使用表面等离子体共振测定法测量KD。例如，使用/>或/>(/>Inc.,Piscataway,NJ)在25℃用固定的抗原CM5芯片以约10个响应单位(RU)进行测定。在一种情况下，根据供应商说明书，用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)及N--羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化的葡聚糖生物感测器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM醋酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，之后以5μL/分钟的流量进行注射以获得大约10响应单位(RU)的偶联蛋白。注射抗原之后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。关于动力学测量，在25℃以约25μL/min的流速注射在含有0.05％聚山梨酯20/>表面活性剂(PBST)的PBS中的Fab的两倍连续稀释液(0.78nM至500nM)。使用简单的一对一Langmuir结合模型(Evaluation Software 3.2版)，通过同时拟合缔合与解离感测器图来计算缔合速率(kon)与解离速率(koff)。平衡解离常数(KD)计算为比率koff/kon。参见例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果通过上述表面等离子体共振测定得出缔合速率超过106M-1s-1，则可通过使用荧光淬灭技术测定缔合速率，即如在分光计诸如配备止流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯所测得的，在浓度渐增的抗原存在下，在25℃测量PBS pH 7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的增加或减少。
2.抗体片段
在某些情况下，本文提供的抗CD20/抗CD3双特异性抗体为抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv、和scFv片段，以及下文描述的其他片段。有关某些抗体片段的综述，参见Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见，例如，Pluckthün在The harmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburg and Moore eds，(Springer-Verlag,New York)，第269-315页(1994)中所述；还可参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。关于对包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。
双体抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。关于三体抗体和四体抗体的描述也可参见Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)。
单结构域抗体为包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些情况下，单结构域抗体为人单结构域抗体(Domantis,Inc.，Waltham，MA；参见，例如，美国专利号6,248,516B1)。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)产生，如本文所述。
3.嵌合和人源化抗体
在某些情况下，本文提供的抗CD20/抗CD3双特异性抗体为嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于例如：美国专利号4,816,567；和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物(诸如猴)的可变区)和人恒定区。在另一个实例中，嵌合抗体为其中类别或亚类已经与亲本抗体的类别或亚类改变的“类别转换”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些情况下，嵌合抗体为人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以减少对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR，例如CDR(或其部分)源自非人抗体，而FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实例中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，HVR残基所来源于的抗体)的相应残基置换，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法综述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中，并且进一步描述于例如Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；Queen等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面再塑”)；Dall’Acqua et al.,Methods 36:43-60(2005)(描述“FR改组”)；和Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改组的“导向选择”方法)。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳匹配”方法选择的框架区(参见例如Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993))；衍生自具有轻链或重链可变区的特定子组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及衍生自筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体为人抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体。对人抗体的一般性描述可参见：van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
可以通过以下方式来制备人抗体：将免疫原施用于转基因动物，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发而产生具有人可变区的完整人抗体或完整抗体。此类动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，所述全部或部分人免疫球蛋白基因座替代内源性免疫球蛋白基因座，或者在动物的染色体外存在或随机整合至动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被灭活。关于从转基因动物得到人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如描述XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述技术的美国专利号5,770,429；描述K-M/>技术的美国专利号7,041,870，以及描述/>技术的美国专利申请公开号US2007/0061900)。可以进一步修饰来自由此类动物产生的完整抗体的人可变区，例如通过与不同的人恒定区组合。
人抗体也可以通过基于杂交瘤的方法制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系。(参见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991))。通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也可参见如下描述：Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。另外的方法包括例如在美国专利号7,189,826(描述了从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)中描述的那些方法。人类杂交瘤技术(Trioma技术)也描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and ClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)中。
人抗体还可以通过分离选自人源噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列产生。然后可以将此类可变结构域序列与预期的人恒定结构域结合。从抗体文库中选择人抗体的技术描述如下。
5.源自文库的抗体
本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体可通过筛选组合文库中具有所需活性的抗体来分离。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选此类文库以获得具有所需结合特征的抗体。此类方法综述于例如：Hoogenboom等人,收录于Methods inMolecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编,Human Press,Totowa,NJ,2001)中，并且进一步描述于McCafferty等人,Nature 348:552-554；Clackson等人,Nature 352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury，收录于Methodsin Molecular Biology 248:161-175(Lo主编，Human Press，Totowa，NJ，2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的所有组成成分通过聚合酶链式反应(PCR)单独克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以从该噬菌体文库中筛选抗原结合噬菌体，如以下文献所述：Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)。噬菌体通常将抗体片段展示为单链Fv(scFv)片段或Fab片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而无需构建杂交瘤。替代性地，可克隆初始组库(例如，来自人)以提供针对广泛的非自身抗原和自身抗原的抗体的单一来源，而无需任何免疫，如以下文献所述：Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)。最后，还可通过以下方式来合成初始文库：克隆来自干细胞的未重排的V基因区段；以及使用含有随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区域并完成体外重排，如以下文献所述：Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利号5,750,373，以及美国专利公开号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
在本文中从人抗体文库分离出的抗CD20/抗CD3双特异性抗体或抗体片段被认为是人抗体或人抗体片段。
6.抗体变体
在某些情况下，设想到本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体的氨基酸序列变体。如本文详细描述的，可以基于所需的结构和功能特性优化抗CD20/抗CD3双特异性抗体。例如，可能期望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内残基的缺失、和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以实现最终构建体，前提条件为最终构建体具有所需特征，例如，抗原结合。
a.取代、插入和缺失变体
在某些情况下，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗CD20/抗CD3双特异性抗体变体。用于取代突变的目的位点包括HVR和FR。保守置换在表3中的“优选置换”标题下示出。更多实质性改变提供于表3的“示例性置换”标题下，并且在下文参考氨基酸侧链类别进行了进一步描述。可以将氨基酸取代引入目的抗体中，并且对产物进行所需活性(例如，保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC)筛选。
表3.示例性和优选的氨基酸取代
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可根据共同的侧链特性将氨基酸分组：
(1)疏水性；正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；
(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代将需要用这些类别中的一个的成员交换另一类别。
一种类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化抗体或人抗体)的一个或多个高可变区残基。通常，相对于亲本抗体，选为用于进一步研究的一个或多个所得变体将在某些生物学特性方面(例如，亲和力增加、免疫原性降低)有改变(例如，改善)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。示例性取代变体是亲和力成熟抗体，其可例如使用诸如本文所述的那些基于噬菌体展示的亲和力成熟技术方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变并且将变体抗体展示在噬菌体上并针对特定生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。
例如，可改变(例如，取代)HVR，以改善抗体亲和力。此类改变可发生于HVR“热点”中，即由体细胞成熟过程中发生高频突变的密码子编码的残基(参见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或与抗原接触的残基(检测所得变体VH或VL的结合亲和力)。通过构建并自二级文库重新选择来进行亲和力成熟已在例如Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编,Human Press,Totowa,NJ,2001)中有所描述。在亲和力成熟的一些实例中，通过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸定向突变)中的任一者将多样性引入出于成熟目的而挑选的可变基因中。然后创建一个二级文库。随后对该文库进行筛选以鉴别具有所需亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及HVR定向方法，其中将若干HVR残基(例如，每次4至6个残基)随机化。参与抗原结合的HVR残基可例如使用丙氨酸扫描突变或建模来特异性地鉴定。具体而言，常常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实例中，置换、插入或缺失可出现在一个或多个HVR内，只要此类改变基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如，可在HVR中进行基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文提供的保守性取代)。此类改变可以在HVR的抗原接触残基之外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些情况下，每个HVR保持不变，或包含不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
可用于鉴别可被靶向诱变的抗体残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science，244:1081-1085所述。在此方法中，鉴别残基或一组靶残基(例如，带电残基，诸如Arg、Asp、His、Lys和Glu)并用中性或带负电的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可在对初始取代展示功能敏感性的氨基酸位置引入其他取代。可替代地或另外地，利用抗原-抗体复合物的晶体结构鉴定抗体与抗原之间的接触点。可靶向或消除作为取代的候选的此类接触残基和相邻残基。可筛选变体以确定它们是否具备期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及一个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括与增加抗体的血清半衰期的酶(例如，对于ADEPT)或多肽的抗体的N末端或C末端的融合。
b.糖基化变体
在某些情况下，可改变本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体以增加或降低抗体糖基化的程度。本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体添加或缺失糖基化位点可以通过改变氨基酸序列以创建或去除一个或多个糖基化位点来方便地实现。
当抗体包含Fc区时，附接于其上的碳水化合物可以被改变。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含支链的、双触角寡糖，该双触角寡糖通常通过N-键结连接至Fc区的CH2结构域的Asn297。参见例如Wright等人,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及附接于双触角寡糖结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些情况下，对本发明的抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善的特性的抗体变体。
在一种情况下，提供了抗CD20/抗CD3双特异性抗体变体，其具有缺乏(直接或间接)附接至Fc区的岩藻糖的碳补液合物结构。例如，此类抗体中岩藻糖的含量可以为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。岩藻糖的量通过相对于通过MALDI-TOF质谱测得的与Asn 297连接的所有糖结构(例如，复合、杂合和高甘露糖结构)的总和计算糖链内在Asn297处的岩藻糖的平均量来确定，例如，如WO 2008/077546中所述。Asn297是指位于Fc区中约297位的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；然而，由于抗体中的微小序列变化，Asn297也可以位于297位上游或下游大约±3个氨基酸，即在294位和300位之间。此类岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能。参见例如，美国专利公开号US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。有关“去岩藻糖化”或“岩藻糖缺陷型”抗体变体包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)所述的方法制备三特异性抗体。能够产生去岩藻糖化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞(Ripka等人,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US 2003/0157108A1，Presta,L；和WO 2004/056312A1，Adams等人，尤其是在实例11中)，以及敲除基因的细胞系，诸如敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8的CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；以及WO 2003/085107)。
基于上述原因，在一些情况下，本发明的方法涉及在分次、剂量递增给药方案的背景下向受试者施用抗CD20/抗CD3双特异性抗体变体，该变体包含去糖基化位点突变。在一些情况下，去糖基化位点突变降低了抗体的效应子功能。在一些情况下，去糖基化突变是一种取代突变。在一些情况下，抗体包含在Fc区中的取代突变，其降低了效应子功能。在一些情况下，取代突变在氨基酸残基N297、L234、L235和/或D265(EU编号)处。在一些情况下，取代突变选自由以下项组成的组：N297G、N297A、L234A、L235A、D265A和P329G。在一些情况下，取代突变在氨基酸残基N297处。在一种优选情况下，取代突变为N297A。
在一些实施例中，抗CD20/抗CD3双特异性抗体的抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变(EU编号)。在一些实施例中，抗CD20/抗CD3双特异性抗体的抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。在一些实施例中，(a)抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变，并且(b)抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
抗CD20/抗CD3双特异性抗体变体进一步提供有二等分的寡糖，例如，其中附接至抗体的Fc区的双触角寡糖被GlcNAc二等分。此类抗体变体可具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)、美国专利号6,602,684(Umana等人)和US 2005/0123546(Umana等人)中。还提供了在连接于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这样的抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；以及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c.Fc区变体
在某些情况下，可将一个或多个氨基酸修饰引入本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体的Fc区中，从而生成Fc区变体(参见例如US 2012/0251531)。Fc区变体可包含人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，其在一个或多个氨基酸位置上包含氨基酸修饰(例如取代)。
在某些情况下，本发明设想到了具有一些但不是全部效应子功能的抗CD20/抗CD3双特异性抗体变体，这使其成为应用的期望候选物，其中体内的抗体的半衰期为重要的而某些效应子功能(诸如补体和ADCC)为不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定，以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消耗。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达汇总于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中。用于评估目标分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362中(参见例如Hellstrom,I.等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。替代性地，可以采用非放射性测定方法(参见，例如，用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；以及CYTOTOX 非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI))。用于此类测定法的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。替代性地或另外地，目标分子的ADCC活性可以在体内进行评定，例如在诸如Clynes等人Proc.Natl Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中公开的动物模型中进行评定。也可以进行C1q结合测定以确认抗体不能结合C1q，因此缺乏CDC活性。参见，例如，WO 2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评定补体活化，可以执行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人,Blood.101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie Blood.103:2738-2743(2004))。FcRn结合和体内清除/半衰期测定也可以使用本领域已知的方法执行(参见例如Petkova,S.B.等人,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应子功能的抗体包括具有一个或多个Fc区残基238、265、269、270、297、327和329的取代的那些(美国专利号6,737,056和8,219,149)。此类Fc突变体包括在第265、269、270、297和327位氨基酸位置处的两个或多个处具有取代的Fc突变体，包括所谓的“DANA”Fc突变体，其残基265和297被取代为丙氨酸(美国专利号7,332,581和8,219,149)。
在某些情况下，抗体中野生型人Fc区的位置329处的脯氨酸被甘氨酸或精氨酸或足够大的氨基酸残基取代，从而破坏在Fc的脯氨酸329与FcγRIII的色氨酸残基Trp 87和Trp 110之间形成的Fc/Fcγ受体界面内的脯氨酸夹层(Sondermann等人：Nature 406,267-273(20Jul.2000))。在某些情况下，抗体包含至少一个进一步的氨基酸取代。在一种情况下，进一步的氨基酸取代为S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S，并且在又一种情况下，该至少一个另外的氨基酸取代为人IgG1Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E(参见例如US 2012/0251531)，并且在又一种情况下，该至少一个另外的氨基酸取代为人IgG1 Fc区的L234A和L235A以及P329G。
描述了具有改善的或降低的与FcR的结合的某些抗体变体。(参见例如美国专利号6,737,056；WO 2004/056312；以及Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。)
在某种情况下，抗体变体包含具有一个或多个氨基酸取代的Fc区，取代改善ADCC，例如，在Fc区的298、333和/或334位(残基的EU编号)处的取代。
在一些情况下，在Fc区中进行改变，引起改变(即改善或减少)的C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如美国专利号6,194,551、WO 99/51642和Idusogie等人J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。
具有延长的半衰期和改善的新生儿Fc受体(FcRn)结合、负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))的抗体描述于US 2005/0014934 A1(Hinton等人)中。那些抗体包含Fc区，该Fc区中具有改善Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代。此类Fc变体包括在以下Fc区残基中的一处或多处具有取代的Fc变体：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如对Fc区残基434的取代(美国专利号7,371,826)。
有关Fc区变体的其他实例，另外参见：Duncan和Winter，Nature322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；以及WO 94/29351。
在一些方面，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含Fc区，该Fc区包含N297G突变(EU编号)。
在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中所述一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。在一些情况下，一个(种)或多个(种)重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。在一些情况下，CH31和CH32结构域各自包含突起或空腔，并且其中CH31结构域中的突起或空腔分别可定位在CH32结构域中的空腔或突起中。在一些情况下，CH31和CH32结构域在介于所述突起与空腔之间的界面处相遇。在一些情况下，CH21和CH22结构域各自包含突起或空腔，并且其中CH21结构域中的突起或空腔分别可定位在CH22结构域中的空腔或突起中。在其他情况下，CH21和CH22结构域在所述突起与空腔之间的界面处相遇。在一些情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体为IgG1抗体。
d.经半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些情况下，可期望产生经半胱氨酸工程化改造的抗CD20/抗CD3双特异性抗体，例如“thioMAbs”，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在具体实例中，置换的残基存在于抗体的可接近位点处。如本文进一步描述的，通过用半胱氨酸取代那些残基，从而将反应性硫醇基团定位于抗体的可接近位点，并且可用于将抗体与其他部分(诸如药物部分或接头-药物部分)缀合，以产生免疫缀合物。在某些情况下，用半胱氨酸取代一些残基中的任何一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；以及重链Fc区的S400(EU编号)。可例如美国专利号7,521,541中所述生成半胱氨酸工程化改造的抗体。
e.抗体衍生物
在某些情况下，可进一步修饰本文提供的抗CD20/抗CD3双特异性抗体，以使其含有本领域已知且易于获得的另外的非蛋白质部分。适合于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇以及它们的混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在制造中可具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可以具有支链或不具有支链。附接至抗体的聚合物的数目可变，并且如果附接了多于一个聚合物，那么它们可以为相同或不同的分子。通常，可基于以下考虑因素测定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体待改善的特定特性或功能、抗体衍生物是否将用于限定条件下的疗法等。
在另一个实例中，提供了抗体和可通过暴露于辐射而选择性地加热的非蛋白质性部分的缀合物。在一种情况下，非蛋白质部分为碳纳米管(Kam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可具有任何波长，并且包括但不限于对普通细胞没有伤害、但是将非蛋白质性部分加热至抗体-非蛋白质性部分近端的细胞被杀死的温度的波长。
7.重组生产方法
本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体可以使用重组方法和组合物来生产，例如，如美国专利号4,816,567中所述，该专利通过引用整体并入本文。
为重组生产抗CD20/抗CD3双特异性抗体，将编码抗体的核酸分离并且插入至一个或多个载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序来容易地对此类核酸进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是当不需要糖基化和Fc效应功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如美国专利No.5,648,237、No.5,789,199和No.5,840,523。(另见Charlton，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo,B.K.C.主编，HumanaPress，Totowa，NJ(2003)，第245-254页，描述抗体片段在大肠杆菌中的表达。)抗体可在表达后在可溶性级分中从细菌细胞糊中分离，并且可以进一步纯化。
除了原核生物外，诸如丝状真菌或酵母等真核微生物也是用于编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主，所述真核微生物包括这样的真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经“人源化”，从而使得产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定出了许多可以与昆虫细胞一起使用的杆状病毒株，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例包括：由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)所述的293或293细胞；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；TRI细胞(例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述)；MRC5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo主编，Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268页(2003)。
8.免疫缀合物
本发明还提供了免疫缀合物，其包含与一种或多种细胞毒性剂缀合的本发明的抗CD20/抗CD3双特异性抗体，所述一种或多种细胞毒性剂为诸如化疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的蛋白质毒素、酶活性毒素，或它们的片段)或放射性同位素。
在一些情况下，免疫缀合物为抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体缀合至一种或多种药物，包括但不限于美登木素类(参见美国专利号5,208,020、5,416,064和欧洲专利EP 0425 235 B1)；澳瑞他汀(auristatin)，诸如单甲基澳瑞他汀药物部分DE和DF(MMAE和MMAF)(参见美国专利号5,635,483和5,780,588以及7,498,298)；多拉司他汀；卡奇霉素或其衍生物(参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296；Hinman等人,Cancer Res.53:3336-3342(1993)；和Lode等人,Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类药物，诸如柔红霉素或多柔比星(参见Kratz等人,Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等人,Bioorganic&Med.Chem.Letters16:358-362(2006)；Torgov等人,Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等人,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等人,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；以及美国专利号6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地碱；紫杉烷，诸如多西他赛、紫杉醇、拉罗他赛、特塞他赛和奥他他赛(ortataxel)；单端孢霉毒素和CC1065。
在另一种情况下，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的抗CD20/抗CD3双特异性抗体，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白质A链、相思豆毒蛋白质A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲霉素、油桐蛋白、石竹黄素蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂、姜黄素、巴豆素、肥皂草抑制剂、明胶、米托菌素、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌素。
在另一种情况下，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的抗CD20/抗CD3双特异性抗体。多种放射性同位素可用于制备放射性缀合物。实例包括211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb以及Lu的放射性同位素。当放射性缀合物用于检测时，它可能包含用于闪烁显像研究的放射性原子，例如99mTc或123I，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)的自旋标记物，诸如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白偶联剂，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨基酯的双官能衍生物(诸如己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备抗体和细胞毒剂的缀合物。例如，可以如Vitetta等人，Science238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为一种示例性螯合剂，用于将放射性核苷酸缀合至抗体。参见WO94/11026。连接基可以为促进细胞中细胞毒性药物释放的“可切割连接基”。例如，可以使用对酸不稳定的接头、肽酶敏感的接头、对光不稳定的接头、二甲基接头或含二硫键的接头(Chari等人,Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。
本文的缀合物或ADC明确设想到但不限于用交联剂制备的此类缀合物，包括但不限于市售的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.，Rockford，IL，U.S.A)BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC以及磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)。
D.另外的治疗剂
在一些情况下，本文所述的方法包括组合施用双特异性抗CD20/抗CD3抗体与另外的治疗剂(例如，抗体-药物缀合物(ADC)和/或另外的化学治疗剂和/或)。在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与一种或多种选自环磷酰胺、多柔比星、利妥昔单抗和泼尼松龙的另外的化疗剂共同施用。在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与CHOP共同施用，其中将长春新碱替换为ADC。在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与抗CD19抗体药物缀合物、抗CD22抗体药物缀合物、抗CD45抗体药物缀合物或抗CD32抗体药物缀合物共同施用。
在一些实例中，另外的治疗剂为抗CD79b ADC，例如美国专利号8,088,378(其通过引用以其整体并入本文)中描述的任何抗CD79b抗体药物缀合物。在一些情况下，抗CD79b抗体药物缀合物包含抗CD79b结合结构域，该抗CD79b结合结构域包含选自以下项的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变区(HVR)：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ IDNO:37的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些情况下，抗CD79b抗体药物缀合物包含抗79b结合结构域，该抗79b结合结构域包含以下HVR中的所有六个：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些情况下，抗CD79b抗体药物缀合物包含分别含有SEQID NO:39至SEQ ID NO:42的序列的重链框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)，和/或分别含有SEQ ID NO:43至SEQ ID NO:46的序列的轻链框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4中的至少一个(例如，1个、2个、3个或4个)。在一些情况下，抗CD79b抗体药物缀合物包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQ ID NO:47具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:47的序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO:48具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:48的序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。因此，在一些情况下，第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VL结构域。
在一些情况下，抗CD79b抗体与毒素诸如单甲基澳瑞他汀E(MMAE，即维多汀(vedotin))连接。在一些情况下，抗CD79b抗体药物缀合物为帕罗托珠单抗维多汀(免疫球蛋白G1-κ奥瑞他汀E缀合物，抗-[智人CD79B(免疫球蛋白相关CD79β)]，与奥瑞他汀E缀合的人源化单克隆抗体；γ1重链(1-447)[人源化VH(智人IGHV3-23*04(76.50％)-(IGHD)-IGHJ4*01)[8.8.10](1-117)-智人IGHG1*03(CH1 R120>K(214)(118-215)，铰链(216-230)，CH2(231-340)、CH3(341-445)，CHS(446-447))(118-447)]，(220-218')-带有κ轻链的二硫化物(1'-218')[人源化V-KAPPA(智人IGKV1-39*01(85.90％)-IGKJ1*01)[10.3.9](1'-111')-智人IGKC*01(112'-218')]；二聚体(226-226”:229-229”)-双二硫化物；经由可切割的马来酰亚胺己酰基-缬胺酰基-瓜胺酰基-对氨基芐氧羰基(mc-val-cit-PABC)型接头，以平均3至4个半胱胺酰基，与单甲基奥瑞他汀E(MMAE)缀合；也称为RG-7596或RO5541077-000)，如国际非专利药品名称(INN)清单110(WHO Drug Information，第27卷，第4期，2016，第443页)所定义。帕罗托珠单抗维多汀也称为IUPHAR/BPS编号8404、KEGG编号D10761或CAS登记号1313206-42-6。帕罗托珠单抗维多汀-piiq也可互换地称为“polatuzumab vedotin-piiq”、“huMA79bv28-MC-vc-PAB-MMAE”或“DCDS4501A”。在一些情况下，抗CD79b抗体或抗CD79b ADC包含SEQ ID NO:49的重链序列和SEQ ID NO:50的轻链序列。
在一些情况下，另外的治疗剂为生物调节剂。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与一种或多种选自以下各项的生物调节剂共同施用：BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)、来那度胺PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉利司/>)、PI3K抑制剂(诸如阿培利司、库潘尼西或度维利塞)、PD-1轴结合拮抗剂、曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206、乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)、MGA271、针对TGFβ的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k，以及表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移，例如包含显性负TGFβ受体，例如显性抑制TGFβII型受体的T细胞的过继转移。
在本文所述的一些方法中，给药方案可包括施用一种或多种另外的治疗剂。例如，在特定情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体可与奥妥珠单抗或托珠单抗共同施用，其中首先向受试者施用奥妥珠单抗或托珠单抗/> 然后分开施用双特异性抗CD20/抗CD3抗体(例如，受试者用奥妥珠单抗/>或托珠单抗/> 进行预治疗)。在一些情况下，将托珠单抗作为另外的治疗剂施用的目的是减少与CRS相关的某些副作用的影响。在一些情况下，受试者用托珠单抗进行预治疗，作为针对CRS的预防性方法。在一些情况下，针对CRS的预防性治疗包括施用托珠单抗和/或阿达木单抗(adalimumab)。
在一些情况下，PD-1结合拮抗剂为抗PD-1抗体。在本文公开的方法和用途中可以利用多种抗PD-1抗体。在本文的任何情况下，PD-1抗体可以与人PD-1或其变体结合。在一些情况下，抗PD-1抗体为单克隆抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为选自由以下各项组成的组的抗体片段：Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段。在一些情况下，抗PD-1抗体是人源化抗体。在其他情况下，抗PD-1抗体为人抗体。示例性抗PD-1拮抗剂抗体包括纳武利尤单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、MEDI-0680(AMP 514)、PDR001(斯巴达珠单抗(spartalizumab))、REGN2810(西米普利单抗(cemiplimab))、BGB-108、帕洛利单抗(prolgolimab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、信迪利单抗(sintilimab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)、特瑞普利单抗(toripalimab)、多塔利单抗(dostarlimab)、瑞弗利单抗(retifanlimab)、萨善利单抗(sasanlimab)、派安普利单抗(penpulimab)、CS1003、HLX10、SCT-I10A、赛帕利单抗(zimberelimab)、巴替利单抗(balstilimab)、杰诺单抗(genolimzumab)、BI 754091、西利单抗(cetrelimab)、YBL-006、BAT1306、HX008、布格利单抗(budigalimab)、CX-188、JTX-4014、609A、Sym021、LZM009、F520、SG001、AM0001、ENUM244C8、ENUM 388D4、STI-1110、AK-103和hAb21。在一些情况下，抗PD-1抗体是纳武单抗(CAS登记号：946414-94-4)。纳武单抗(百时美施贵宝/Ono)，也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和为WO 2006/121168中所述的抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为帕博利珠单抗(CAS登记号：1374853-91-4)。帕博利珠单抗(默克)，也称为MK-3475、Merck 3475、派姆单抗、SCH-900475和/>为WO 2009/114335中所述的抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为MEDI-0680(AMP-514；阿斯利康)。MEDI-0680是人源化IgG4抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为PDR001(CAS注册号1859072-53-9；诺华)。PDR001是人源化IgG4抗PD-1抗体，可阻断PD-L1和PD-L2与PD-1的结合。在一些情况下，抗PD-1抗体为REGN2810(再生元公司(Regeneron))。REGN2810是人抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为BGB-108(百济神州)。在一些情况下，抗PD-1抗体为BGB-A317(百济神州)。在一些情况下，抗PD-1抗体为JS-001(上海君实生物)。JS-001是人源化抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为STI-A1110(索伦托公司(Sorrento))。STI-A1110是人抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为INCSHR-1210(因赛特医疗公司(Incyte))。INCSHR-1210是人IgG4抗PD-1抗体。在一些情况下，抗PD-1抗体为PF-06801591(辉瑞)。在一些情况下，抗PD-1抗体为TSR-042(也称为ANB011；Tesaro/AnaptysBio)。在一些情况下，抗PD-1抗体为AM0001(ARMO Biosciences)。在一些情况下，抗PD-1抗体为ENUM 244C8(Enumeral BiomedicalHoldings)。ENUM 244C8是抗PD-1抗体，可抑制PD-1的功能而不阻止PD-L1与PD-1的结合。在一些情况下，抗PD-1抗体为ENUM 388D4(Enumeral Biomedical Holdings)。ENUM 388D4是抗PD-1抗体，可竞争性抑制PD-L1与PD-1的结合。在一些情况下，抗PD-1抗体包含来自以下专利中所述的抗PD-1抗体的六个HVR序列(例如，三个重链HVR和三个轻链HVR)和/或重链可变结构域和轻链可变结构域：WO 2015/112800、WO 2015/112805、WO 2015/112900、US20150210769、WO2016/089873、WO 2015/035606、WO 2015/085847、WO 2014/206107、WO2012/145493、US 9,205,148、WO 2015/119930、WO 2015/119923、WO 2016/032927、WO2014/179664、WO 2016/106160和WO 2014/194302。
在其他情况下，PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在其他情况下，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。AMP-224也称为B7-DCIg，为PCT公开号WO 2010/027827和WO 2011/066342中所述的PD-L2-Fc融合可溶性受体。
在一些情况下，PD-L1结合拮抗剂为抗PD-L1抗体。本文考虑并描述了多种抗PD-L1抗体。在本文的任何情况下，分离的抗PD-L1抗体可以结合人PD-L1，例如UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZQ7-1中所示的人PD-L1，或其变体。在一些情况下，抗PD-L1抗体能够抑制PD-L1与PD-1之间和/或PD-L1与B7-1之间的结合。在一些情况下，抗PD-L1抗体是单克隆抗体。在一些情况下，抗PD-L1抗体为选自由以下各项组成的组的抗体片段：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段。在一些情况下，抗PD-L1抗体是人源化抗体。在一些情况下，抗PD-L1抗体是人抗体。示例性抗PD-L1抗体包括阿替利珠单抗、MDX-1105、MEDI4736(德瓦鲁单抗(durvalumab))、MSB0010718C(阿维单抗(avelumab))、SHR-1316、CS1001、恩沃利单抗(envafolimab)、TQB2450、ZKAB001、LP-002、CX-072、IMC-001、KL-A167、APL-502、柯希利单抗(cosibelimab)、洛达利单抗(lodapolimab)、FAZ053、TG-1501、BGB-A333、BCD-135、AK-106、LDP、GR1405、HLX20、MSB2311、RC98、PDL-GEX、KD036、KY1003、YBL-007、HS-636、LY3300054(Eli Lilly)、STI-A1014(Sorrento)和KN035(苏州康宁杰瑞)。在一些情况下，抗PD-L1抗体包含可裂解的部分或接头，当被(例如，通过肿瘤微环境中的蛋白酶)裂解时，该部分或接头激活抗体抗原结合结构域以使其结合其抗原，例如，通过移除非结合空间部分进行。在一些情况下，抗PD-L1抗体为CX-072(CytomX Therapeutics)。在一些情况下，抗PD-L1抗体包含来自以下专利中描述的抗PD-L1抗体的六个HVR序列(例如，三个重链HVR和三个轻链HVR)和/或重链可变结构域和轻链可变结构域：US 20160108123、WO 2016/000619、WO2012/145493、美国专利号9,205,148、WO 2013/181634或WO 2016/061142。可用于本发明方法的抗PD-L1抗体的示例及其制备方法在国际专利申请公开号WO 2010/077634和美国专利号8,217,149中描述，其各自通过引用整体并入本文。
在其他情况下，PD-L2结合拮抗剂是抗PD-L2抗体(例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗PD-L2抗体)。在一些情况下，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
PD-1轴结合拮抗剂(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体(例如，阿替利珠单抗))的有效量为每三周(Q3W)在约80mg至约2000mg之间(例如在约100mg至约1600mg之间，例如在约200mg至约1600mg之间，例如在约300mg至约1600mg之间，例如在约400mg至约1600mg之间，例如在约500mg至约1600mg之间，例如在约600mg至约1600mg之间，例如在约700mg至约1600mg之间，例如在约800mg至约1600mg之间，例如在约900mg至约1500mg之间，例如在约1000mg至约1400mg之间，例如在约1050mg至约1350mg之间，例如在约1100mg至约1300mg之间，例如在约1150mg至约1250mg之间，例如在约1175mg至约1225mg之间，例如在约1190mg至约1210mg之间，例如1200mg±5mg，例如1200±2.5mg，例如1200±1.0mg，例如1200±0.5mg，例如1200mg)的固定剂量。在一些情况下，PD-1轴结合拮抗剂(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体(例如，阿替利珠单抗))的有效量为每三周约1200mg(例如每三周1200mg±10mg，例如1200±6mg，例如1200±5mg，例如1200±3mg，例如1200±1mg，例如1200±0.5mg，例如1200mg)的固定剂量。在一些情况下，PD-1轴结合拮抗剂(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体(例如，阿替利珠单抗))以每三周约200mg至约1400mg的剂量(例如以每三周约200mg至约1200mg的剂量，例如以每三周约200mg至约1000mg的剂量，例如以每三周约200mg至约800mg的剂量，例如以每三周约200mg至约600mg的剂量，例如以每三周约200mg至约500mg的剂量，例如以每三周约200mg至约450mg的剂量，例如以每三周约250mg至约450mg的剂量)施用。
在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗和一种或多种化疗剂共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗和CHOP共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗和ADC共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗和CHOP共同施用，其中将长春新碱替换为ADC。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与选自以下项的ADC共同施用：抗CD19抗体药物缀合物、抗CD22抗体药物缀合物、抗CD45抗体药物缀合物和抗CD32药物缀合物。
在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗以及一种或多种选自以下各项的生物调节剂共同施用：BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)、来那度胺PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉利司/>)、PI3K抑制剂(诸如阿培利司、库潘尼西或度维利塞)、PD-1轴结合拮抗剂、曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206、乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)、MGA271、针对TGFβ的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k，以及表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移，例如包含显性负TGFβ受体，例如显性抑制TGFβII型受体的T细胞的过继转移。
在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与利妥昔单抗、一种或多种化学治疗剂以及一种或多种选自以下各项的生物调节剂共同施用：BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)、来那度胺PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉利司/>)、PD-1轴结合拮抗剂、曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206、乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)、MGA271、针对TGFβ的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k，以及表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移，例如包含显性负TGFβ受体，例如显性抑制TGFβII型受体的T细胞的过继转移。
在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗和一种或多种化疗剂共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗和CHOP共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗和ADC共同施用。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗和CHOP共同施用，其中将长春新碱替换为ADC。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与选自以下各项的ADC共同施用：抗CD79b抗体药物缀合物(诸如US 8,088,378和/或US 2014/0030280任一者中所述的抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE或抗CD79b抗体药物缀合物，或帕罗托珠单抗维多汀)、抗CD19抗体药物缀合物、抗CD22抗体药物缀合物、抗CD45抗体药物缀合物和抗CD32药物缀合物。在一种情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗以及一种或多种选自以下各项的生物调节剂共同施用：BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)、来那度胺PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉利司)、PI3K抑制剂(诸如阿培利司、库潘尼西或度维利塞)、PD-1轴结合拮抗剂、曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206、乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)、MGA271、针对TGFβ的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k，以及表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移，例如包含显性负TGFβ受体，例如显性抑制TGFβII型受体的T细胞的过继转移。
在一些情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体与奥妥珠单抗以及一种或多种选自以下各项的生物调节剂共同施用：BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)、来那度胺PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉利司/>)、PI3K抑制剂(诸如阿培利司、库潘尼西或度维利塞)、PD-1轴结合拮抗剂、曲美木单抗(tremelimumab)(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206、乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)、MGA271、针对TGFβ的拮抗剂，例如美特木单抗(metelimumab)(也称为CAT-192)、弗雷木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k，以及表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(例如细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移，例如包含显性负TGFβ受体，例如显性抑制TGFβII型受体的T细胞的过继转移。
在一些情况下，附加疗法包括烷化剂。在一种情况下，烷化剂为4-[5-[双(2-氯乙基)氨基]-1-甲基苯并咪唑-2-基]丁酸及其盐。在一种情况下，烷化剂为苯达莫司汀。
在一些情况下，附加疗法包括BCL-2抑制剂。在一个实施例中，BCL-2抑制剂是4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基环己-1-烯-1-基]甲基}哌嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺及其盐。在一种情况下，BCL-2抑制剂是venetoclax(CAS#：1257044-40-8)。
在一些情况下，附加疗法包含磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂。在一种情况下，PI3K抑制剂抑制δ同种型PI3K(即P110δ)。在一些情况下，PI3K抑制剂是5-氟-3-苯基-2-[(1S)-1-(7H-嘌呤-6-基氨基)丙基]-4(3H)-喹唑啉酮及其盐。在一些情况下，PI3K抑制剂是idelalisib(CAS#：870281-82-6)。在一种情况下，PI3K抑制剂抑制PI3K的α和δ同种型。在一些情况下，PI3K抑制剂是2-{3-[2-(1-异丙基-3-甲基-1H-1,2-4-三唑-5-基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮杂-9-基]-1H-吡唑-1-基}-2-甲基丙酰胺及其盐。在一些情况下，PI3K抑制剂是taselisib(CAS号：1282512-48-4)。在一些情况下，PI3K抑制剂是2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺及其盐。在一些情况下，PI3K抑制剂是库潘尼西(CAS号：1032568-63-0)。在一些情况下，PI3K抑制剂是8-氯-2-苯基-3-[(1S)-1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-1(2H)-异喹啉酮及其盐类。在一些情况下，PI3K抑制剂是度维利塞(CAS号：1201438-56-3)。在一些情况下，PI3K抑制剂是(2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]-1,2-吡咯烷二甲酰胺及其盐。在一些情况下，PI3K抑制剂是阿培利司(CAS号：1217486-61-7)。在一些情况下，PI3K抑制剂是2-[(1S)-1-[4-氨基-3-[3-氟-4-(1-甲基乙氧基)苯基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基]-6-氟-3-(3-氟苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮及其盐。在一些情况下，PI3K抑制剂是厄布利塞(umbralisib)(CAS号：1532533-67-7)。
在本发明的进一步方面，附加疗法包含布鲁顿(Bruton)酪氨酸激酶(BTK)抑制剂。在一种情况下，BTK抑制剂是1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮及其盐。在一种情况下，BTK抑制剂是依鲁替尼(CAS#：936563-96-1)。在一些情况下，BTK抑制剂是(7S)-4,5,6,7-四氢-7-[1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺及其盐。在一些情况下，BTK抑制剂是泽布替尼(zanubrutinib)(CAS号：1691249-45-2)。在一些情况下，BTK抑制剂是4-[8-氨基-3-[(2S)-1-(1-氧代-2-丁炔-1-基)-2-吡咯烷基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-2-吡啶基苯甲酰胺及其盐。在一些情况下，BTK抑制剂是阿卡替尼(acalabrutinib)(CAS号：1420477-60-6)。
在一些情况下，附加疗法包括沙利度胺或其衍生物。在一种情况下，沙利度胺或其衍生物是(RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮及其盐。在一种情况下，沙利度胺或其衍生物是lendalidomide(CAS#：191732-72-6)。
在本文所述的方法涉及联合疗法诸如上文提及的特定联合疗法的情况下，联合疗法包括双特异性抗CD20/抗CD3抗体与一种或多种另外的治疗剂的施用，并且此类共同施用可以组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或独立制剂中)或分开施用，在此情况下，抗CD20/抗CD3双特异性抗体的施用可发生在施用一种或多种另外的治疗剂之前、与其同时和/或在其之后。在一个实施例中，施用抗CD20/抗CD3双特异性抗体施用另外的治疗剂或接受放射疗法可彼此发生在约一个月内，或发生在约一周、两周或三周内，或发生在约一天、两天、三天、四天、五天或六天内。在特定情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体可与奥妥珠单抗共同施用，其中首先向受试者施用奥妥珠单抗/>然后分开施用双特异性抗CD20/抗CD3抗体(例如，受试者用奥妥珠单抗/>进行预治疗)。在另一特定情况下，双特异性抗CD20/抗CD3抗体和抗CD79b ADC可与托珠单抗共同施用，其中首先向受试者施用托珠单抗 然后分开施用双特异性抗CD20/抗CD3抗体(例如，受试者用托珠单抗/>进行预治疗)。在一些情况下，将托珠单抗作为另外的治疗剂施用的目的是减少与CRS相关的某些副作用的影响。在一些情况下，受试者用托珠单抗进行预治疗，作为针对CRS的预防性方法。在一些情况下，针对CRS的预防性治疗包括施用托珠单抗和/或阿达木单抗(adalimumab)。
本文所述的方法可引起正在用抗CD20/抗CD3双特异性抗体治疗的患有CD20阳性细胞增殖性疾患(例如，B细胞增殖性疾患(例如，复发性或难治性B细胞增殖性疾患)，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL；例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL；例如，Richter转化)、滤泡性淋巴瘤(FL；例如，1级FL、2级FL、3级FL(例如，3a级FL或3b级FL)或转化的FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL))或慢性淋巴样白血病(CLL)，例如复发性或难治性NHL(例如，复发性或难治性DLBCL、复发性或难治性FL、复发性或难治性MCL或复发性或难治性MZL)或复发性或难治性CLL)的受试者具有改善的获益获益-风险特征。在一些情况下，相对于用抗CD20/抗CD3双特异性抗体使用非分次给药方案进行治疗，使用本文所述的引起在分次、剂量递增给药方案的背景下施用抗CD20/抗CD3双特异性抗体的方法进行治疗导致在用抗CD20/抗CD3双特异性抗体使用本发明的分次、剂量递增给药方案治疗后，不良事件诸如细胞因子驱动的毒性(例如，细胞因子释放综合征(CRS))、输注相关反应(IRR)、巨噬细胞活化综合征(MAS)、神经系统毒性、严重肿瘤溶解综合征(TLS)、中性粒细胞减少症、血小板减少症、肝酶升高和/或肝毒性减少(例如，减少20％或更大、25％或更大、30％或更大、35％或更大、40％或更大、45％或更大、50％或更大、55％或更大、60％或更大、65％或更大、70％或更大、75％或更大、80％或更大、85％或更大、90％或更大、95％或更大、96％或更大、97％或更大、98％或更大、或99％或更大例如，在20％与100％之间、在20％与90％之间、在20％与80％之间、在20％与70％之间、在20％与60％之间、在20％与50％之间、在20％与40％之间、在20％与30％之间、在40％与100％之间、在60％与100％之间、在80％与100％之间、在30％与70％之间、在40％与60％之间、在30％与50％之间、在50％与80％之间、或在90％与100％之间；例如，约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％或约100％)或完全抑制(100％减少)。
对于本文所述的所有方法，抗CD20/抗CD3双特异性抗体以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。在该背景下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾患、所治疗的特定哺乳动物、个体受试者的临床病症、疾患的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。抗CD20/抗CD3双特异性抗体不是必须地而是任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论的疾患的药剂共同配制。此类其他药剂的有效量取决于制剂中存在的抗CD20/抗CD3双特异性抗体的量、疾患或治疗的类型，以及上面讨论的其他因素。抗CD20/抗CD3双特异性抗体可以通过一系列治疗适当地施用于受试者。
在一些情况下，可用于本发明的另外的治疗剂包括治疗性抗体，诸如阿仑单抗贝伐单抗(/>基因泰克)；西妥昔单抗(/>Imclone)；帕尼单抗(/>Amgen)、利妥昔单抗(/>基因泰克/Biogen Idec)、帕妥珠单抗(/>2C4，基因泰克)、曲妥珠单抗(基因泰克)和托西莫单抗(/>Corixia)。与本发明的化合物联合用作药剂的具有治疗潜力的另外的人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗、阿利珠单抗、巴比妥珠单抗、莫比伐珠单抗(bivatuzumab mertansine)、布雷努单抗(briakinumab)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、塞妥珠单抗(certolizumab pegol)、西孚昔珠单抗(cidfusituzumab)、西土珠单抗(cidtuzumab)、达利珠单抗、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄利珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、吉妥珠单抗奥唑米星、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、伊匹单抗、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、莫维珠单抗、莫妥维珠单抗(motovizumab)、那他珠单抗、尼妥珠单抗、诺罗维珠单抗(nolovizumab)、奴马维珠单抗(numavizumab)、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥玛珠单抗、帕丽珠单抗、帕考珠单抗(pascolizumab)、培孚昔单抗(pecfusituzumab)、培土珠单抗(pectuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、拉利维珠单抗(ralivizumab)、兰尼单抗、瑞丽维珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗(reslizumab)、瑞希维珠单抗(resyvizumab)、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢丽珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗、西利珠单抗、松妥珠单抗(Sontuzumab)、替珠单抗(tacatuzumab tetraxetan)、他度珠单抗(tadocizumab)、坦昔妥单抗(tafasitamab)、他利珠单抗、替非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗、托利珠单抗(toralizumab)、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、土库昔珠单抗(tucusituzumab)、乌马维珠单抗(umavizumab)、乌珠单抗、尤特克单抗(ustekinumab)和维西珠单抗(visilizumab)。
IV.药物组合物和制剂
本文所述的任何抗体(例如，抗CD20/抗CD3双特异性抗体)均可用于药物组合物和制剂中。本文所述的抗体和/或其他药剂的药物组合物和制剂通过将此类具有所需纯度的一种、两种或所有三种药剂与一种或多种任选的药用载体混合(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编(1980))，制成冻干制剂或水溶液的形式。药用载体在所用的剂量和浓度下对受治疗者一般无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。
示例性的冻干抗体制剂描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体制剂包括在美国专利号6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，后一者中的制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲剂。
本文的制剂还可含有多于一种对于所治疗的特定适应症是必需的活性成分，优选是具有不会彼此不利地影响的互补活性的活性成分。例如，可以期望进一步提供另外的治疗剂(例如，化疗剂、细胞毒性剂、生长抑制剂和/或抗激素剂，诸如上文所述的那些)。此类活性成分适当地以对预期目的有效的量组合存在。
活性成分可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合而制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中；包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中；或包埋在粗乳液中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences第16版(Osol,A.编)中。(1980)。
可以制备缓释制备物。缓释制备物的合适实例包括含有抗体的固态疏水聚合物的半透性基质，所述基质是例如膜或微胶囊等成型制品的形式。
待用于体内施用的制剂通常是无菌的。例如，无菌可以通过无菌过滤膜过滤而容易地实现。
V.试剂盒和制品
在本发明的另一方面，提供了一种试剂盒或制品，其含有可用于治疗、预防和/或诊断上述疾患的物质。该试剂盒或制品包括容器以及在该容器上或与该容器相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由多种材料(诸如玻璃或塑料)形成。该容器容纳组合物，该组合物本身或与另一种组合物组合能够有效地治疗、预防和/或诊断病症，并且所述容器可以具有无菌进入口(例如，所述容器可以是具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本文所述的抗CD20/抗CD3双特异性抗体。标签或包装插页指示该组成物用于治疗选择的病况(例如，B细胞增殖性疾患，例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)，例如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，例如复发性或难治性DLBCL)，并且进一步包括与本文所述的给药方案中的至少一种相关的信息。此外，试剂盒或制品可包括(a)第一容器，该第一容器中含有组合物，其中该组合物包含本文所述的抗CD20/抗CD3双特异性抗体；以及(b)第二容器，该第二容器中含有组合物，其中该组合物包含另外的细胞毒性剂或其他治疗剂。替代性地或除此之外，试剂盒或制品可进一步包括第二(或第三)容器，该二(或第三)容器包含药用缓冲剂，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏液和右旋糖溶液。还可以包括从商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
VI.实施例
可以根据以下编号的实施例中的任一个来定义本文描述的技术的一些实施例：
1.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
2.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
3.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
4.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
5.根据实施例1至4中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3为50mg至200mg。
6.根据实施例5所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3为约60mg。
7.根据实施例1至6中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D1为约1mg。
8.根据实施例1至7中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D2为约2mg。
9.根据实施例1至8中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C2D1在量上与C1D3约等同。
10.根据实施例1至9中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用或将施用C1D1、C1D2和C1D3。
11.根据实施例1至10中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第二给药周期的第1天向受试者施用或将施用C2D1。
12.根据实施例1至11中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一给药周期和第二给药周期为21天给药周期。
13.根据实施例1至12中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一给药周期为21天给药周期并且第二给药周期为28天给药周期。
14.根据实施例1至13中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第二给药周期之后，给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。
15.根据实施例14所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第二给药周期之后，给药方案包括6至15个额外给药周期。
16.根据实施例14或15所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为21天给药周期。
17.根据实施例15或16所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为28天给药周期。
18.根据实施例14至17中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。
19.根据实施例18所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在每个额外给药周期的第1天向受试者施用或将施用双特异性抗体的额外单一剂量。
20.根据实施例18或19所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量大于C1D1并且小于C1D3和/或C2D1。
21.根据实施例18至20中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量为C1D3和/或C2D1的20％至80％。
22.根据实施例21所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量为C1D3和/或C2D1的约50％。
23.根据实施例18至22中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量为约30mg。
24.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
25.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
26.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
27.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
28.根据实施例24至27中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为20mg至200mg。
29.根据实施例28所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为约60mg。
30.根据实施例24至29中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为C2D1的20％至80％。
31.根据实施例30所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为C2D1的约50％。
32.根据实施例24至31中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为约30mg。
33.根据实施例24至32中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D1为约1mg。
34.根据实施例24至33中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D2为约2mg。
35.根据实施例24至34中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用或将施用C1D1、C1D2和C1D3。
36.根据实施例24至35中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第二给药周期的第1天向受试者施用或将施用C2D1，并且在第三给药周期的第1天向受试者施用或将施用C3D1。
37.根据实施例24至36中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期为21天给药周期。
38.根据实施例24至36中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一给药周期为21天给药周期，并且第二给药周期和第三给药周期为28天给药周期。
39.根据实施例24至38中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第三给药周期之后，给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。
40.根据实施例39所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第三给药周期之后，给药方案包括5至14个额外给药周期。
41.根据实施例39或40所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为21天给药周期。
42.根据实施例39或40所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为28天给药周期。
43.根据实施例39至42中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。
44.根据实施例43所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在每个额外给药周期的第1天向受试者施用或将施用双特异性抗体的额外单一剂量。
45.根据实施例43或44所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1约等同。
46.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
47.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中所述C3D1大于所述C1D1并且小于所述C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
48.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
49.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
50.根据实施例46至49中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为20mg至200mg。
51.根据实施例50所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为约60mg。
52.根据实施例46至51中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为C2D1的20％至80％。
53.根据实施例52所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为C2D1的约50％。
54.根据实施例46至53中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C3D1为约30mg。
55.根据实施例46至54中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D1为约1mg。
56.根据实施例46至55中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D2为约2mg。
57.根据实施例46至56中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中分别在或约在第一给药周期的第1天、第8天和第15天向受试者施用或将施用C1D1、C1D2和C1D3。
58.根据实施例46至57中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中分别在第二给药周期至第八给药周期的第1天向受试者各自施用C2D1至C8D1。
59.根据实施例46至58中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中给药周期为21天给药周期。
60.根据实施例46至58中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一给药周期为21天给药周期，并且第二给药周期至第八给药周期为28天给药周期。
61.根据实施例46至60中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在第八给药周期之后，给药方案包括一个或多个额外给药周期。
62.根据实施例61所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为21天给药周期。
63.根据实施例61所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期为28天给药周期。
64.根据实施例61至63中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中额外给药周期中的一个或多个包括双特异性抗体的额外单一剂量。
65.根据实施例64所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在每个额外给药周期的第1天向受试者施用或将施用双特异性抗体的额外单一剂量。
66.根据实施例64或65所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体的额外单一剂量在量上与C3D1至C8D1中的任一者约等同。
67.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
68.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
69.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
70.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
71.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，该方法包括在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
72.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
73.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
74.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
75.根据实施例1至74中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者接受过针对CD20阳性细胞增殖性疾患的在先全身性疗法。
76.根据实施例75所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者接受过所述CD20阳性细胞增殖性疾患的一线全身性疗法和二线全身性疗法。
77.根据实施例75或76所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者在该在先全身性疗法的24个月内已表现出CD20阳性细胞增殖性疾患的进展。
78.根据实施例75至77中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在先全身性疗法包括抗CD20抗体。
79.根据实施例78所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中抗CD20抗体为利妥昔单抗。
80.根据实施例78所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中抗CD20抗体为奥妥珠单抗。
81.根据实施例75至80中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在先全身性疗法包括化学治疗剂。
82.根据实施例81所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中化学治疗剂为烷化剂。
83.根据实施例82所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中烷化剂为苯达莫司汀。
84.根据实施例81所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中化学治疗剂为来那度胺。
85.根据实施例75至84中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在先全身性疗法包括放射免疫疗法。
86.根据实施例85所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中放射免疫疗法为替伊莫单抗。
87.根据实施例75至86中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在先全身性疗法包括磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂。
88.根据实施例87所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂选自由以下各项组成的组：艾代拉利司、阿培利司、库潘尼西和度维利塞。
89.根据实施例75至88中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在先全身性疗法包括CAR-T疗法。
90.根据实施例1至89中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者是人。
91.根据实施例1至90中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体静脉内施用。
92.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
93.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
94.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
95.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于50mg；并且
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
96.根据实施例91至95中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为50mg至200mg。
97.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
98.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
99.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
100.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；并且
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1。
101.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
102.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
103.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
104.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约0.02mg至约2.0mg，C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1在量上与C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中C3D1大于C1D1并且小于C2D1；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1在量上为约等同的。
105.根据实施例97至104中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中C1D3和C2D1各自为20mg至200mg。
106.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
107.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
108.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
109.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
110.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，该方法包括在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
111.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其用于治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
112.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
113.一种与CD20和CD3结合的双特异性抗体在制造治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的药物中的用途，其中该双特异性抗体配制用于在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向受试者施用，其中：
(a)第一21天给药周期包括双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中C1D1为约1mg，C1D2为约2mg，并且C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，
其中C3D1至C8D1各自为约30mg。
114.根据实施例92至113中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者群体具有完全缓解率，其中该完全缓解率为该群体中具有完全缓解的受试者的比率，并且其中该完全缓解率为至少约15％。
115.根据实施例114所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中完全缓解率为至少约25％。
116.根据实施例115所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中完全缓解率为至少约35％。
117.根据实施例116所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中完全缓解率为至少约45％。
118.根据实施例92至117中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者群体具有客观缓解率，其中该客观缓解率为该群体中具有客观缓解的受试者的比率，并且其中该客观缓解率为至少约60％。
119.根据实施例92至118中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在治疗开始后约20个月的客观缓解率为至少约70％。
120.根据实施例92至119中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在治疗开始后约24个月的客观缓解率为至少约75％。
121.根据实施例92至120中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者群体具有中位缓解持续时间(mDOR)，其中mDOR为该群体中的受试者的缓解持续时间的中位数，并且其中mDOR为至少约12个月。
122.根据实施例121所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中mDOR为至少约20个月。
123.根据实施例92至122中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者群体具有在该群体中具有至少12个月的mDOR的受试者的比率，并且其中该群体中具有至少12个月的mDOR的受试者的比率为至少约60％。
124.根据实施例92至123中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在施用双特异性抗体后，受试者群体表现出细胞因子释放综合征，并且其中受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约40％。
125.根据实施例124所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者群体中细胞因子释放综合征的比率小于或等于约10％。
126.根据实施例92至125中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中具有2级或更高级别(如美国移植和细胞疗法学会，2018；ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约20％。
127.根据实施例126所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中具有2级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约5％。
128.根据实施例92至127中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中具有3级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率为约0％。
129.根据实施例92至128中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体静脉内施用。
130.根据实施例1至128中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中CD20阳性细胞增殖性疾患为B细胞增殖性疾患。
131.根据实施例1至130中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中CD20阳性细胞增殖性疾患为复发性或难治性B细胞增殖性疾患。
132.根据实施例1至131中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中CD20阳性细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)或慢性淋巴样白血病(CLL)。
133.根据实施例132所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
134.根据实施例133所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中DLBCL为Richter转化。
135.根据实施例134所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中NHL为滤泡性淋巴瘤(FL)。
136.根据实施例135所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中FL为1级、2级、3a级或3b级FL。
137.根据实施例135或136所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中FL为转化的FL。
138.根据实施例135所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中NHL为套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)。
139.根据实施例1至138中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含以下六个高变区(HVR)：
(a)HVR-H1，其包含GYTFTSYNMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；
(b)HVR-H2，其包含AIYPGNGDTSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；
(c)HVR-H3，其包含VVYYSNSYWYFDV(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；
(d)HVR-L1，其包含RASSSVSYMH(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；
(e)HVR-L2，其包含APSNLAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；以及
(f)HVR-L3，其包含QQWSFNPPT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列。
140.根据实施例1至139中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，该第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
141.根据实施例140所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL结构域。
142.根据实施例1至141中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含以下六个HVR：
(a)HVR-H1，其包含NYYIH(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；
(b)HVR-H2，其包含WIYPGDGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；
(c)HVR-H3，其包含DSYSNYYFDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；
(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；
(e)HVR-L2，其包含WASTRES(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；以及
(f)HVR-L3，其包含TQSFILRT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。
143.根据实施例1至142中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，该第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
144.根据实施例143所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中第二结合结构域包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL结构域。
145.根据实施例1至144中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含(a)抗CD20臂，其包含(i)重链，该重链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；以及(b)抗CD3臂，其包含(i)重链，该重链包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
146.根据实施例145所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中(a)抗CD20臂包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链，并且(b)抗CD3臂包含含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链。
147.根据实施例1至146中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为人源化抗体。
148.根据实施例1至147中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为嵌合抗体。
149.根据实施例1至148中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为结合CD20和CD3的抗体片段。
150.根据实施例149所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中抗体片段选自由以下各项组成的组：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段。
151.根据实施例1至148中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为全长抗体。
152.根据实施例1至148和151中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为IgG抗体。
153.根据实施例152所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中IgG抗体为IgG1抗体。
154.根据实施例152或153所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中IgG抗体在氨基酸残基N297(EU编号)处包含导致糖基化的缺失的突变。
155.根据实施例154所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在氨基酸残基N297处的突变为取代突变。
156.根据实施例154或155所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中在氨基酸残基N297处的突变降低Fc区的效应子功能。
157.根据实施例154至156中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中突变为N297G或N297A突变。
158.根据实施例153至155中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体在Fc区中包含降低效应子功能的突变。
159.根据实施例158所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中突变为取代突变。
160.根据实施例159所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中取代突变在氨基酸残基L234、L235、D265和/或P329(EU编号)处。
161.根据实施例160所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中取代突变选自由以下各项组成的组：L234A、L235A、D265A和P329G。
162.根据实施例1至148和151至161中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中所述一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。
163.根据实施例162所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中所述一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。
164.根据实施例162或163所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中CH31和CH32结构域各自包含突起或腔，并且其中CH31结构域中的突起或腔分别可定位在CH32结构域中的腔或突起中。
165.根据实施例164所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中CH31和CH32结构域在突起与腔之间的界面处相接。
166.根据实施例140或141所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变(EU编号)。
167.根据实施例143或144所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
168.根据实施例145或146所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中(a)抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变，并且(b)抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
169.根据实施例1至138中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体为莫妥珠单抗
170.根据实施例1至169中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者是人。
171.根据实施例1、5至24、28至46、50至67、71和75至91中任一项所述的方法，该方法进一步包括向受试者施用PD-1轴结合拮抗剂。
172.根据实施例171所述的方法，其中PD-1轴结合拮抗剂以在约1100mg至约1300mg之间的剂量施用。
173.根据实施例172所述的方法，其中PD-1轴结合拮抗剂以约1200mg的剂量施用。
174.根据实施例172所述的方法，其中PD-1轴结合拮抗剂在包括施用双特异性抗体的第一给药周期之后的每个给药周期的第1天施用。
175.根据实施例2至23、25至45、47至66、68至70和72至91中任一项所使用的双特异性抗体或用途，其中双特异性抗体配制用于与PD-1轴结合拮抗剂一起使用。
176.根据实施例171所使用的双特异性抗体或用途，其中PD-1轴结合拮抗剂将以在1100mg至约1300mg之间的剂量施用。
177.根据实施例172所使用的双特异性抗体或用途，其中PD-1轴结合拮抗剂将以约1200mg的剂量施用。
178.根据实施例172所使用的双特异性抗体或用途，其中PD-1轴结合拮抗剂将在包括施用双特异性抗体的第一给药周期之后的每个给药周期的第1天施用。
179.根据实施例171至178中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中PD-1轴结合拮抗剂为阿替利珠单抗。
180.根据实施例171至179中任一项所述的方法、所使用的双特异性抗体或用途，其中受试者是人。
VII.实例
以下是本发明的方法的实例。应当理解，在给出以上提供的一般描述的情况下，可以实践各种其他实施方案。
实例1.莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药
本研究评估莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药在复发性或难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的安全性、耐受性和药代动力学。在第1周期之前两个剂量期间给予患者阶梯剂量，然后给予作为第1周期的第三剂量和第2周期的第一剂量的两个负荷剂量，接着在后续周期中给予基础剂量。
图1描绘了该研究的给药方案的概述。在第1周期第1天向患者施用约1mg莫妥珠单抗的第一阶梯剂量，然后在第1周期第8天施用约2mg莫妥珠单抗的第二阶梯剂量。接着在第1周期第15天向患者施用约60mg莫妥珠单抗的第一阶梯剂量，然后在第2周期第1天施用约60mg莫妥珠单抗的第二阶梯剂量。此后，在每个后续周期的第1天向患者施用约30mg莫妥珠单抗的基础剂量。最初在第3周期第1天至第8周期第1天向患者施用6个基础剂量。在8个治疗周期后未实现CR的患者继续接受约30mg莫妥珠单抗的基础剂量，持续6个或15个额外治疗周期(分别为总共8个或17个额外周期)。
莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药(例如，C1D1：1mg，C1D8：2mg，C1D15：60mg，C2：60mg，C3+：30mg)的安全性和耐受性在复发性或难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者中进行评估(n＝153)。结果汇总于下表4中：
表4.莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药的安全性和耐受性
Lee 2014标准：Lee等人,Blood,124:188-195,2014。
第一CRS事件的中位发作时间为16天(范围为1天至29天)。CRS事件的中位持续时间为3天(范围为1天至19天)。
在三例患者中观察到四起3级或3级以上CRS事件，其中一例患者经历2起此类事件。两例患者均具有增加重度CRS的风险的疾病特征，并且在C1D1的1mg剂量后经历了CRS(2级)。第一例经历4级CRS事件的患者具有30％的骨髓浸润、脾肿大，并且处于白血病期，基线时循环恶性细胞为48％。在研究第23天，在输注计划的60mg剂量中的11mg后发生了4级CRS(C1D15，由于发热而延迟给药8天)。该事件在7天内消退。在因PD中止治疗之前，患者接受了两个额外的周期(与C2D1 9mg剂量相关联的3级CRS；已消退)。第二例经历3级CRS事件的患者在基线时具有30％的骨髓浸润、脾肿大和循环异常淋巴样细胞。在研究第28天，发生了3级CRS(在研究第26天施用C2D1 60mg剂量，由于十二指肠梗阻而延迟给药4天)。CRS事件的特征为4级转氨酶升高，无缺氧或低血压。该事件已消退，并且患者继续研究治疗，在进行同种异体干细胞移植之前实现部分缓解。在以登记剂量治疗的所有153例R/R NHL患者中，153例患者中的3例(2％)发生了3级或3级以上CRS。
基于1/2/60/30mg剂量下肿瘤大小的变化，评估莫妥珠单抗的阶梯负荷-基础给药。结果如图2.平均而言，在第2周期结束时(即第42天或第一次肿瘤扫描结束时)，在缓解者中两次60mg剂量后观察到肿瘤大小减少>50％。拟定的负荷剂量后30mg基础剂量的给药方案最大限度地减少了患者随时间推移的不必要的高PK暴露，并且降低了慢性或累积毒性的潜在风险。
实例2.一项开放标签、多中心、I/Ib期试验，评估递增剂量的莫妥珠单抗(BTCT4465A)作为单一药剂及与阿替利珠单抗组合在患有复发性或难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病的患者中的安全性、有效性和药代动力学
本实例描述了GO29781，一项莫妥珠单抗的I/Ib期、多中心、开放标签、剂量递增研究，其中莫妥珠单抗作为单一药剂以及与阿替利珠单抗组合向具有预期表达CD20的R/R血液系统恶性肿瘤(包括B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL))的患者施用。该研究在全球大约45至50个研究中心在剂量递增阶段期间入组大约130至226例患者(100至166例NHL患者和30至60例CLL患者)，并且在扩展阶段期间入组大约290至520例患者。
A.目的
本研究评估莫妥珠单抗在患有复发性或难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)的患者中的安全性、耐受性和药代动力学，如下所述：
·按第1周期非分次剂量计划作为单一药剂静脉内(IV)施用(A组)；
·按第1周期分步剂量计划作为单一药剂IV施用(B组)；
·按第1周期分步剂量计划作为单一药剂IV施用，并且从第2周期开始同时施用阿替利珠单抗(E组)。
本研究确定了莫妥珠单抗在R/R NHL和CLL患者中的最大耐受剂量(MTD)和剂量限制性毒性(DLT)，如下所述：
·按第1周期非分次剂量计划IV施用(A组)；
·按第1周期分步剂量计划IV施用(B组)；
·按第1周期分步剂量计划作为单一药剂IV施用，并且从第2周期开始同时施用阿替利珠单抗(E组)。
本研究根据安全性、药代动力学(PK)和药效学数据确定了莫妥珠单抗作为单一药剂以及与阿替利珠单抗组合用于R/R NHL和CLL患者的推荐II期剂量和计划。此外，本研究评估莫妥珠单抗使用第1周期分步给药计划，作为单一药剂(B组)以及与阿替利珠单抗组合(E组)用于患有R/R弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和转化滤泡性淋巴瘤(FL)的患者以及患有R/R FL的患者的有效性，如独立审查机构根据标准NHL缓解标准评定的完全缓解(CR)率所测量。
本研究评定针对莫妥珠单抗和阿替利珠单抗(当与莫妥珠单抗组合给予时)的抗药物抗体(ADA)的发生率，以及它们与相关临床结局的关系。
当评估莫妥珠单抗作为单一药剂以及与阿替利珠单抗组合的有效性并非如上所述的主要目标时，本研究对莫妥珠单抗作为单一药剂以及与阿替利珠单抗组合在患有R/RNHL和CLL患者中的抗肿瘤活性进行初步评定。
B.研究设计
研究说明
图3提供了研究的剂量递增部分的概述，并且图4描绘了剂量扩展阶段。最初，莫妥珠单抗在每个周期的第1天(A组)以单一非分次IV剂量给予。随后修改第1周期给药，使得A组剂量递增停止并且莫妥珠单抗剂量递增如下进行：
·莫妥珠单抗剂量递增利用第1周期递增IV给药方案(B组)。
入组递增B组可能不一定同时开始。
莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合的剂量递增(E组)也基于在B组递增中测试的莫妥珠单抗剂量水平进行。
在确定了单一药剂莫妥珠单抗以及莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合的推荐II期剂量(RP2D)和计划后，在适应症特异性扩展队列中进行莫妥珠单抗作为单一药剂以及与阿替利珠单抗组合的临床活性的进一步评定(图4)的氨基酸序列。
除NHL中的剂量递增及扩展以外，也可以在CLL中进行单独递增和扩展。剂量递增和剂量扩展的规则与针对NHL递增和扩展所述的规则相同。
剂量递增阶段
该研究的剂量递增阶段评定通过IV输注施用的
莫妥珠单抗的安全性、耐受性和药代动力学。最多可以入组五个剂量递增组(图3)：
·A组：第1周期非分次单一药剂莫妥珠单抗递增，IV输注(已停止入组剂量递增A组，以优先评定莫妥珠单抗的其他给药计划和途径)；
·B组：第1周期递增单一药剂莫妥珠单抗递增，IV输注；
·E组：第1周期递增单一药剂莫妥珠单抗递增，同时施用阿替利珠单抗，从第2周期开始，IV输注。
剂量递增C组(在单一剂量的奥妥珠单抗后的第1周期非分次单一药剂莫妥珠单抗；IV输注)已被移除。
最初，A组中的剂量递增队列由1例患者组成。转换为标准3+3设计基于本文提供的标准进行。随后，除非根据标准3+3设计，在入组第三例患者之前在前2例患者中观察到DLT，否则剂量递增队列至少由3例患者组成。
B组和E组中的剂量递增队列从一开始便基于标准3+3设计。
对于每个剂量递增队列，用第一剂量的莫妥珠单抗的治疗错开，使得第二例患者在第一例入组患者接受第一剂量的莫妥珠单抗后至少72小时接受莫妥珠单抗，以便评定任何严重和意外急性药物或输注/注射相关毒性；每个队列中后续患者的给药与在先患者施用结束交错至少24小时。在已证明不超过MTD的剂量水平下，入组额外患者以获得额外的安全性和药效学数据，无需交错的患者入组。
表现出可接受的安全性和临床获益证据(如本文定义)的患者可以每21天继续接受莫妥珠单抗或莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合最多8个或17个周期，直至确认客观疾病进展或不可接受的毒性，以先发生者为准。基于对初始治疗的临床缓解，用莫妥珠单抗或莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合的再治疗如本文所详述。
先前在血液系统恶性肿瘤中的临床试验经验表明，根据所治疗的患者群体，可能会观察到不同的毒性特征。具体地，由于存在大量循环肿瘤细胞和/或总体疾病负担的差异，莫妥珠单抗对CLL患者的毒性可能与对NHL患者的毒性不同。由于CLL患者毒性特征和/或MTD的该潜在差异，为NHL和CLL患者提供单独的剂量递增。在NHL患者中进行初始剂量递增。在CLL患者中启动剂量递增由申办方自行决定并且遵循适用的B组剂量递增规则。CLL中累积的第1周期起始剂量水平至少比相应NHL剂量递增中已清除DLT评定窗口的最高累积第1周期剂量低一个剂量水平。
莫妥珠单抗剂量水平与患者体重无关(固定/统一给药)。50μg的起始剂量基于人体的最低预期生物学效应水平(MABEL)。
剂量限制性毒性的定义
尽管CRS根据改良的细胞因子释放综合征分级系统(表5)进行分级，但对于剂量递增决定，与CRS相关的DLT则根据美国国家癌症研究院不良事件通用术语(NCI CTCAE)v4.0基于受试者体征和症状以及实验室数据进行定义。剂量限制性毒性(DLT)根据临床实践进行治疗，并且在其消退过程中进行监测。所有不良事件均应被认为与莫妥珠单抗有关，除非研究者明确将此类事件归因于另一明确可鉴定的原因(例如，记录的疾病进展、伴随用药或预先存在的医疗状况)。B细胞减少、由于B细胞减少导致的淋巴细胞减少症和/或白细胞减少症将不被视为DLT，因为它们是莫妥珠单抗治疗的预期药效学结局。
表5.改良的细胞因子释放综合征分级系统
Lee 2014标准：Lee等人,Blood,124:188-195,2014。
低剂量血管加压药：低于表6所示剂量的单一血管加压药。高剂量血管加压药：如表6中所定义。
表6.高剂量血管加压药
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min＝分钟；VASST＝加压素和感染性休克试验。
VASST血管加压药当量公式：去甲肾上腺素当量剂量＝[去甲肾上腺素(μg/min)]+[多巴胺(μg/kg/min)÷2]+[肾上腺素(μg/min)]+[去羟肾上腺素(μg/min)÷10]。
出于剂量递增的目的，DLT评定期由以下时段定义，具体取决于指定的剂量递增组：
·A组和B组：第1周期第1天至第1周期第21天。
–对于B治疗组，21天DLT评定期细分为三个窗口，如本文所述。
–对于B治疗组，在C1D8和/或C1D15给药剂量延迟的情况下，DLT评定期相应延长至C1D15施用日期后7天。
·E组：第2周期第1天至第2周期第21天
DLT被定义为在DLT评定期间发生的以下任何不良事件：
·任何未被研究者视为可归因于另一明确可鉴定的原因的4级不良事件，但以下情况除外：
–4级中性粒细胞减少症，未伴有体温升高(呈单次口腔温度≥38.3℃(101℉)或口腔温度≥38.0℃(100.4℉)持续≥1小时的形式)并且在1周内改善为≤2级(或≥基线值的80％，以较低者为准)。
–4级淋巴细胞减少，其为疗法的预期结局。
–4级白细胞减少，其为疗法的预期结局。
–仅对于CLL患者：中性粒细胞减少症根据美国国家癌症研究所赞助的工作组(NCI-WG)的定义进行分级(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)；由于研究治疗前的骨髓受累，绝对中性粒细胞计数(ANC)<1000/mm3无法基于ANC来评估DLT
–仅针对CLL患者：血小板减少症基于NCI-WG定义进行分级(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)；由于研究治疗前的骨髓受累，血小板计数<20,000/μL将无法基于血小板计数来评估DLT。
–仅针对CLL患者：贫血基于NCI-WG定义进行分级(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)；在不输注红细胞(RBC)的情况下在1周内改善至3级，并且在另一周内进一步改善至2级的4级贫血将不视为DLT。
·任何未被研究者视为可归因于另一明确可鉴定的原因的3级血液学不良事件，但以下情况除外：
–3级淋巴细胞减少，其为疗法的预期结局。
–3级白细胞减少，其为疗法的预期结局。
–3级中性粒细胞减少症，未伴有体温升高(呈单次口腔温度≥38.3℃(101℉)或口腔温度≥38.0℃(100.4℉)持续≥1小时的形式)并且在1周内改善为≤2级(或≥基线值的80％，以较低者为准)。
仅针对CLL患者：中性粒细胞减少症基于NCI-WG慢性淋巴细胞白血病分级量表进行分级(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)；由于研究治疗前的骨髓受累，ANC<1000/mm3无法基于ANC来评估DLT。
–3级血小板减少症，在未输血小板的情况下在1周内改善至≤2级(或基线值的≥80％，以较低者为准)，并且与研究者认为临床显著的出血无关。
仅针对CLL患者：血小板减少症基于NCI-WG定义进行分级
(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)；由于研究治疗前的骨髓受累，血小板计数<20,000/μL将无法基于血小板计数来评估DLT。
–仅针对CLL患者：3级贫血(基于NCI-WG慢性淋巴细胞白血病分级量表(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)，在不输注RBC的情况下在1周内改善至2级。
·任何未被研究者视为可归因于另一明确可鉴定的原因的3级非血液学不良事件，但以下情况除外：
–未预先用药的情况下，出现3级恶心或呕吐，或24小时内可透过口服或IV止吐药缓解至≤2级。不排除需要全胃肠外营养或住院的3级恶心或呕吐，并且应将其视为DLT。
–持续≤3天的3级疲劳。
–在≤2级CRS(表5)的背景下发生并且持续<3天的CRS的3级(NCI CTCAE v4)受试者体征及症状将不被视为DLT。
–无症状且研究者认为在临床上无明显意义的3级实验室异常。
·如下定义的任何肝功能异常：
–天冬氨酸转氨酶(AST)或丙氨酸转氨酶(ALT)>3×正常值上限(ULN)并且总胆红素>2×ULN。任何AST或ALT 3×ULN并且总胆红素>2×ULN，
其中无个别实验室值超过3级并且持续时间<3天将不被视为DLT。
–任何3级AST或ALT升高，但以下情况除外：任何持续<3天的3级AST或ALT升高将不被视为DLT。
剂量递增规则以及最大耐受剂量的确定
A组、B组和E组剂量递增的具体规则如下文所详述。单个组剂量递增的启动由申办方自行决定。在每次剂量递增决定之前，均对相关的人口统计学、AE、实验室、剂量施用以及可用的PK和药效学数据(例如，血清细胞因子和T细胞活化的标志物)进行审查。
根据以下规则确定患者能否针对DLT评定进行评估：
·接受研究治疗并且在DLT评定窗口中继续研究的患者被视为DLT可评估的。
·在完成DLT评定窗口之前由于DLT以外的原因中止单一药剂莫妥珠单抗或莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合治疗的患者被认为无法评估剂量递增决定以及MTD确定结果，并且替换为另一例相同剂量水平的患者。
·仅对于入组B组的患者：对于非DLT不良事件，在计划的C1D1、C1D8或C1D15剂量后剂量延迟超过7天的患者可能无法评估DLT，并且可以被替换。对于剂量延迟7天或更少的患者，将DLT窗口延长至实际C1D15剂量后7天。
·仅针对E组中的患者：如果入组患者经历任何在第2周期组合治疗开始前未完全恢复至基线水平的治疗中出现的毒性，则该患者被认为无法评估剂量递增决定以及MTD确定结果，并且替换为另一例相同剂量水平和计划的患者。
·可以替换在DLT评定窗口期间接受混淆DLT评估的支持性护理(不包括本文作为DLT定义的一部分所述的支持性护理)的患者。
基于对实时安全性治疗及可用的初步PK数据的审查，可在认为适当时停止或修改剂量递增。
为获得额外安全性和药效学数据以更好地充分提供RP2D信息，可在以下剂量水平下入组额外患者：基于上述剂量递增标准已显示不超过MTD，并且存在抗肿瘤活性和/或药效学生物生物标志物调节的证据。每个剂量水平最多可另外入组大约三例患者。出于剂量递增决定的目的，这些患者将不包括在DLT可评估的群体中。
C.入选标准
患者必须满足以下条件才能进入研究：
·年龄≥18岁
·根据研究人员的判断，能够依从研究方案
·东部肿瘤协作组活动状态为0或1
·预期寿命为至少12周
·下列经组织学证实的预计表达CD20抗原的血液系统恶性肿瘤中的一者的病史，在至少一种在先全身性治疗方案后复发或未能缓解，并且无预期可改善生存期的可用疗法(例如，标准化疗、自体干细胞移植(SCT)、CAR-T)：
–剂量递增：
·1级至3b级FL；边缘区淋巴瘤(包括脾脏、结节和结节外)；转化惰性NHL；Richter转化；DLBCL；原发性纵隔B细胞淋巴瘤；小淋巴细胞性淋巴瘤；或套细胞淋巴瘤。
–剂量扩展：
·DLBCL/转化的FL队列：患者在至少两种在先全身性治疗方案(包括至少一种含有蒽环类药物的在先方案，以及至少一种含有抗CD20定向疗法的在先方案)后复发或未能缓解。入组研究的转化FL患者的数量可能有限。转化的FL为入组DLBCL队列的合格诊断，但对转化FL的标准疗法而言为复发性或难治性的。
·FL队列：1级、2级、3a级或3b级FL；患者在接受至少两种在先全身性治疗后复发或未能缓解，并且接受过抗CD20定向疗法和烷化剂的在先治疗。FL扩展队列中的患者可能难以用抗CD20定向疗法和烷化剂进行治疗。
·MCL队列：患者在至少一种包含经批准的布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂的在先治疗方案后复发或未能缓解。如果在参与临床试验期间接受过BTK抑制剂，则患者已接受治疗剂量水平的治疗。
·Richter转化队列：患者在至少一种在先全身性治疗方案后复发或未能缓解。患者在一种或多种在先治疗方案中接受过蒽环类药物和抗CD20定向疗法。
–CLL：
·在不存在DLT的NHL剂量递增队列中观察到药效学生物标记调节和/或抗肿瘤活性的证据后，申办方可自行决定在CLL患者中启动单独的剂量递增。具有Richter转化的CLL为入组CLL递增队列的合格诊断。
·NHL患者至少有一个二维可测量的病灶(通过计算机断层扫描(CT)扫描或磁共振成像(MRI)确定的淋巴结病灶最大尺寸>1.5cm或淋巴结外病灶最大尺寸>1.0cm)。
·对于患有DLBCL或转化的FL的患者，提供初始组织病理学诊断的病理报告(如果有)。转化FL的患者也应提供疾病转化时的病理报告(如果有)。如果完成，将提供在初始诊断时对组织进行的所有测试的结果，包括但不限于评估源细胞、B细胞淋巴瘤2和MYC异常的测试。
·同意提供如下肿瘤样品：
–对于具有多个二维可测量的病灶(通过CT扫描或MRI确定的淋巴结病灶最大尺寸>1.5cm或淋巴结外病灶最大尺寸>1.0cm)的NHL患者，同意根据研究者的决定从安全可及的部位进行活检。在上次在先抗癌疗法的最后一个剂量与莫妥珠单抗的第一剂量之间的任何时间获得的活检可能是可接受的。
–对于患有CLL的患者：骨髓活检和抽吸物。
–无法进行活检程序的患者可能有资格入组研究。在此类情况下，应
提供存档肿瘤组织样品(石蜡块或至少15张未染色的载玻片)。
·由在先抗癌疗法引起的不良事件消退为≤1级。
·仅针对CLL患者：循环淋巴细胞计数>5000/μL血液。不需要通过CT扫描可测量的疾病。
·实验室值如下：
–肝功能
AST和ALT≤3×正常值上限(ULN)
总胆红素≤1.5×ULN；有记录的吉尔伯特综合征病史并且总胆红素升高伴有间接胆红素升高的患者符合条件
–血液学功能
在第一剂量的莫妥珠单抗之前14天内，在未输血的情况下的血小板计数≥75,000/mm3
ANC≥1000/mm3
在第一剂量的莫妥珠单抗之前21天内，在未输血的情况下的总血红素≥10g/dL。
由于NHL/CLL广泛的骨髓受累和/或疾病相关的血细胞减少症(例如，免疫性血小板减少症)，不符合血液学功能标准的患者可以入组研究。
–通过Cockcroft-Gault方法或其他机构标准方法(例如，基于核医学肾扫描)确定的血清肌酐≤ULN或估计的肌酐CL≥60mL/min。
·在首次莫妥珠单抗施用前6个月内接受过阿仑单抗、氟达拉滨、克拉屈滨或喷司他丁治疗的患者仅在经医学监查员确认后才能入组。
D.排除标准
·将满足以下任何标准的患者排除在研究之外：
·无法遵守方案规定的住院和活动限制
·妊娠或哺乳，或者计划在研究期间或在最后一剂莫妥珠单抗后3个月内以及最后一剂托珠单抗后3个月内妊娠(如果适用)
–非绝经后(≤12个月的非疗法所致闭经)或经手术绝育(切除卵巢和/或子宫)的女性必须在研究药物启动前的14天内具有阴性血清妊娠试验结果。
如果在接受首次研究治疗前14天内未进行血清妊娠试验，则必须提供阴性尿妊娠试验结果(在研究治疗前7天内进行)。
·首次莫妥珠单抗施用前4周内使用过任何单克隆抗体、放射免疫缀合物或抗体-药物缀合物
·在首次莫妥珠单抗施用前12周或五个半衰期(以较短者为准)内曾用全身性免疫治疗剂治疗，这些免疫治疗剂的作用机制涉及T细胞，包括但不限于细胞因子疗法以及抗CTLA-4、抗PD-1和抗PD-L1治疗性抗体
·与在先免疫治疗剂(例如，免疫查核点抑制剂疗法)相关的治疗出现的免疫相关不良事件如下：
–≥3级不良事件，用替代疗法治疗的3级内分泌病除外
–治疗中止后未消退至基线的1级至2级不良事件
–对于某些在先治疗，诸如CAR-T细胞疗法，在与医学监查员讨论并且确认后，可允许具有在先免疫相关≥3级不良事件(例如CRS)的患者入组。
·在首次莫妥珠单抗输注之前4周或药物的五个半衰期(以较短者为准)内用任何化学治疗剂治疗或用任何其他抗癌剂(研究性或其他)治疗·在首次莫妥珠单抗施用前2周内接受过放射疗法治疗。
·如果患者在首次莫妥珠单抗施用前4周内接受过放射疗法，则患者必须在放射场外具有至少一个可测量病灶。仅具有一个先前接受过辐照但随后发生进展的可测量病灶的患者符合条件。
·在首次莫妥珠单抗施用前100天内接受过自体SCT
·在首次莫妥珠单抗施用前30天内接受过在先CAR-T疗法治疗
·患有R/R DLBCL或R/R转化的FL的患者目前有资格进行自体SCT·在先同种异体SCT
·在先实体器官移植
·自身免疫病病史，包括但不限于心肌炎、肺炎、重症肌无力、肌炎、自身免疫性肝炎、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、炎症性肠病、与抗磷脂综合征相关联的血管血栓形成、韦氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、干燥综合症、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome)、多发性硬化症、血管炎或肾小球肾炎
–有远期病史或自身免疫病控制良好的患者，在与医疗监查员讨论并且确认后，可能有资格入组。患有1型糖尿病且正在接受胰岛素方案的患者符合该研究的条件。
–有自身免疫性相关的甲状腺功能减退症病史并且正在接受稳定剂量的甲状腺替代激素的患者可能符合该研究的条件。
–有疾病相关免疫性血小板减少性紫癜或自身免疫性溶血性贫血病史的患者符合该研究的条件。
–如果满足以下所有条件，患有湿疹、银屑病、慢性单纯性苔藓或仅具有皮肤病表现的白癜风(例如，银屑病关节炎患者除外)的患者符合该研究的条件：
皮疹必须覆盖<10％的身体表面积
疾病被良好控制在基线并且仅需要使用低效局部皮质类固醇。
在过去12个月内没有发生需要补骨脂素加紫外线A辐射、甲氨蝶呤、类视黄醇、生物制剂、口服钙调神经磷酸酶抑制剂或高效或口服皮质类固醇的潜在病症的急性恶化
·有巨噬细胞活化综合征(MAS)/噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)病史的患者
·有确诊为进行性多灶性白质脑病病史的患者
·对单克隆抗体疗法(或重组抗体相关融合蛋白)有重度变应性、过敏反应史
·有可能影响方案依从性或结果解释的其他恶性肿瘤病史
–允许有治愈性治疗的皮肤基底细胞癌或鳞状细胞癌或宫颈原位癌病史的患者。
–如果恶性肿瘤在首次莫妥珠单抗施用之前≥2年未治疗而处于缓解期，则也将允许患有已接受治愈性治疗的恶性肿瘤的患者。
·当前或既往CNS淋巴瘤病史
·当前或既往CNS疾病史，诸如卒中、癫痫、CNS血管炎或神经退化性疾病
–允许有卒中病史，在过去2年内未经历卒中或短暂性脑缺血发作，并且根据研究者的判断不具有残留神经功能缺损的患者。
–有癫痫病史，在过去2年内无癫痫发作并且未接受任何抗癫痫药物治疗的患者仅允许进入扩展队列。
·重大心血管疾病(诸如纽约心脏协会III级或IV级心脏病、最近6个月内的心肌梗塞、不稳定心律失常或不稳定心绞痛)
·重大活动性肺部疾病(例如，支气管痉挛和/或阻塞性肺病)
·研究入组时的已知活动性细菌、病毒、真菌、分枝杆菌、寄生虫或其他感染(不包括甲床的真菌感染)，或首次莫妥珠单抗施用之前4周内的任何需要IV抗生素治疗或住院治疗的重大感染事件(与抗生素疗程完成有关)
·已知或疑似慢性活动性爱泼斯坦-巴尔病毒感染
·首次莫妥珠单抗施用前4周内的最近大手术
–允许方案规定的程序(例如，肿瘤活检和骨髓活检)。
·急性或慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的血清学或聚合酶链式反应(PCR)检测结果呈阳性
–无法通过血清学试验结果(www.cdc.gov/hepatitis/hbv/pdfs/serologicchartv8.pdf)确定HBV感染状态的患者必须通过PCR确定为HBV阴性才有资格参加研究。
急性或慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染
–HCV抗体阳性的患者必须通过PCR检测为HCV阴性才有资格参加研究。
·HIV感染的血清学试验结果呈阳性
·在研究治疗的第一剂量前4周内施用过减毒活疫苗或预期在研究期间将需要此类减毒活疫苗
–在B细胞恢复到正常范围之前，患者在接受研究治疗期间或末次给药后不得接受减毒活疫苗(例如，)。应在研究治疗的第一剂量前至少4周给予灭活疫苗或类毒素，以产生足够的免疫力。
–灭活流感疫苗只应在流感季节接种。
–研究者应审查本研究中考虑的潜在研究患者的疫苗接种状况，并且在研究前遵循美国疾病控制和预防中心关于成人接种任何其他旨在预防传染病的非活疫苗的指南。
药品
莫妥珠单抗
莫妥珠单抗使用与体重无关的统一给药。每例患者的莫妥珠单抗剂量将取决于方案中详述的剂量水平分配。
莫妥珠单抗使用标准医用注射器和注射泵或适用的IV袋通过IV输注向患者施用。相容性测试表明，莫妥珠单抗在延伸装置和聚丙烯注射器中保持稳定。当IV施用时，药品用注射泵经由IV输液器或IV袋递送，最终莫妥珠单抗体积由剂量决定。
莫妥珠单抗在可立即接触到训练有素的重症监护人员和设施的环境中施用，这些人员和设施能够应对并且管理医疗紧急情况。
莫妥珠单抗用于补液充足的患者。由地塞米松20mg IV或甲泼尼龙80mg IV组成的皮质类固醇前驱用药在施用每个莫妥珠单抗剂量前1小时施用。基于研究者的评定结果，对于B组患者的第3周期及以后的周期或E组患者的第4周期及之后的周期，施用此皮质类固醇前驱用药可以为任选的。但是，如果患者经历CRS，
则以后续剂量施用类固醇前驱用药，直至未观察到额外的CRS事件。此外，在施用莫妥珠单抗之前，可按照标准机构实践施用口服对乙酰氨基酚或扑热息痛(例如500mg至1000mg)和/或50mg至100mg苯海拉明
前驱用药。将基于IMC的建议做出修改皮质类固醇前驱用药要求的决定。
推荐的CRS管理详见表7。
表7.接受莫妥珠单抗的患者的细胞因子释放综合征的管理
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BiPAP＝双相气道正压通气；CPAP＝持续气道正压通气；CRS＝细胞因子释放综合征；G-CSF＝粒细胞集落刺激因子；HLH＝噬血细胞性淋巴组织细胞增生症。
按照Lee等人(Blood,124:188-195,2014)所述的方法进行CRS分级。
托珠单抗应以8mg/kg IV的剂量施用(仅体重≥30kg的参与者为8mg/kg；体重<30kg的参与者为12mg/kg；不建议每次输注超过800mg的剂量)；根据需要每8小时重复一次(最多4剂)。
对于接受类固醇治疗CRS的患者，强烈建议考虑抗真菌预防。
例如，甲泼尼龙IV 1000mg/天，持续3天，然后快速减量，以每12小时250mg持续2天，以每13小时125mg持续2天，再以每12小时60mg持续2天。
如果在第1周期第1天或第1周期第8天莫妥珠单抗施用后在分步给药队列中发生3级CRS，则应与医学监查员讨论下一个莫妥珠单抗剂量，并且应考虑降低剂量。根据个体风险-获益评定结果，可考虑重复相同的分步剂量的例外情况。
对于正在获益并且已从不良事件中完全康复的患者，可考虑恢复使用莫妥珠单抗。仅在研究者(或适当的代表)和医学监查员均记录批准后，患者才能用莫妥珠单抗进行重新用药。除非满足以下所有标准，否则不考虑进一步治疗：
·主要研究者/治疗医师所做的个体风险-获益评定有利于继续治疗；
·患者已从先前的毒性中恢复，并且具有足够的器官功能/储备以接受后续剂量；
·患者已充分同意与继续治疗相关的风险，并且决定接受后续剂量；
·与申办方讨论了上述风险-获益评定和患者评估；
·后续剂量计划良好并且采取预防措施，包括降低剂量、将输液速率减慢至50％或更低、强制住院和加强前驱用药。
对于IV莫妥珠单抗施用，最初，莫妥珠单抗在4小时±15分钟内输注。对于经历输注相关症状的患者，可以减慢或中断输注。在每个莫妥珠单抗剂量后，观察患者至少90分钟，确定其是否出现发热、发冷、寒颤、低血压、恶心或CRS的其他体征及症状。在不存在输注相关不良事件的情况下，第2周期及之后的周期的莫妥珠单抗的输注时间可缩短至2小时±15分钟。接受患者内剂量递增的患者应历经至少4小时接受第一次更高剂量的莫妥珠单抗输注。下表8列出了用于处理注射部位反应的管理指南。
表8.注射部位反应的管理指南
阿替利珠单抗和托珠单抗
在本研究中，阿替利珠单抗的剂量水平为在第2周期的第1天及每个后续21天周期的第1天通过IV输注施用1200mg。
托珠单抗根据标准方法进行配制、制备和处理。
莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合的剂量、施用和依从性
当莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合给予时，应如上所述施用莫妥珠单抗。阿替利珠单抗输注应在莫妥珠单抗输注完成后至少1小时开始。在本研究中，阿替利珠单抗的剂量水平为在第2周期的第1天及每个后续21天(Q3W)的第1天通过IV输注施用1200mg。
最初，当莫妥珠单抗在第2周期中与阿替利珠单抗组合给予时，在4小时±15分钟内输注莫妥珠单抗。从第3周期开始，在不存在输注相关不良事件的情况下，莫妥珠单抗的输注时间可以缩短至2小时±15分钟。
阿替利珠单抗的施用在受监测的环境中进行，在该环境中，可以立即接触到训练有素的人员以及足够的设备和药物来管理潜在的危重反应。根据表9中概述的说明施用阿特珠单抗输注。
表9.第一次和后续阿特珠单抗输液的施用
IRR＝输注相关反应。
下面提供了特定不良事件的管理指南。下面提供了治疗中断或中止的指南。不允许对阿特珠单抗进行剂量调整。
E.伴随疗法
伴随疗法包括患者从筛选前7天到研究完成/中止访视期间使用的任何药物(例如，处方药、非处方药、草药或顺势疗法、营养补充剂)。
使用口服避孕药、激素替代疗法或其他维持疗法的患者应继续使用。
从筛选期开始到DLT评定期完成，在不存在DLT的情况下，不应开始同时使用造血生长因子诸如促红细胞生成素、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(沙格司亭)或血小板生成素(奥普瑞白介素、艾曲泊帕)或增加剂量。DLT评定期结束后或已记录到DLT后，
允许根据药品说明书、机构实践和/或已发布的指南中提供的说明开始使用造血生长因子或对其进行剂量和计划调整。
允许根据药品说明书、机构实践和/或已发布的指南(Smith等人，2015)中提供的说明进行G-CSF(非格司亭、培非格司亭)的预防性和治疗性使用。当绝对中性粒细胞计数(ANC)<500/mm3时应开始生长因子支持，除非有医学禁忌；如果禁用生长因子，则应与医学监查员讨论。
允许对病毒、真菌、细菌或肺孢子虫感染进行抗感染预防，并且应根据机构实践进行。
经历莫妥珠单抗输注相关症状的患者可如本文所述进行对症治疗。允许根据已发布的建议和/或机构实践治疗重度CRS或HLH。
鉴于莫妥珠单抗的预期药理学，细胞因子的瞬时释放可能抑制CYP450酶并且引起药物-药物相互作用。基于非临床模型，在第一周期之前24小时内，细胞因子水平可能最高。在后续周期期间，随着CD20+细胞数量的减少，预计细胞因子水平将显著降低。可能具有最高的药物-药物相互作用风险的患者为接受作为CYP450底物并且具有窄治疗指数的伴随药物的患者(表10)。应监测此类伴随药物的毒性，并且相应地调整剂量。
表10.敏感的体内CYP底物以及治疗范围窄的CYP底物的实例
AUC＝浓度-时间曲线下面积；P-g＝P-糖蛋白。
敏感的CYP底物是指与已知CYP抑制剂共同施用时，血浆AUC值显示增加5倍或更高的药物。
治疗范围窄的CYP底物是指其暴露-反应关系表明其暴露水平通过伴随使用CYP抑制剂的小幅增加可能会导致严重的安全性问题(例如，尖端扭转型室性心动过速)的药物。
使用CYP2B6抑制剂时，这些底物的AUC未增加5倍或更多，但其代表迄今为止评估的可用抑制剂研究的最敏感的底物。
瑞格列奈也是OATP1B1的底物，仅在研究药物对OATP1B1的抑制作用已被排除的情况下，才适合作为CYP2C8底物。
由于许多CYP3A底物(例如，地瑞纳韦、马拉韦罗)也是P-gp的底物，因此观察到的暴露增加可能是由于CYP3A和P-gp两者的抑制。
肝脏中的CYP450酶被感染和炎性刺激物(包括细胞因子，诸如IL-6)下调。与未接受托珠单抗治疗的患者相比，接受托珠单抗治疗的患有类风湿性关节炎的患者抑制IL-6信号传导可能使CYP450活性恢复至更高水平，从而使得作为CYP450底物的药物的代谢增加。体外研究表明，托珠单抗有可能影响多种CYP酶(包括CYP1A2、CY2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的表达。托珠单抗对CYP2C8或转运体的影响未知。奥美拉唑(通过CYP2C19和CYP3A4代谢)和辛伐他汀(通过CYP3A4代谢)的体内研究显示，在托珠单抗的单一剂量后1周，暴露量分别降低多达28％和57％。
托珠单抗对CYP酶的影响可能与治疗指数窄的CYP450底物临床相关(表10)，其中剂量经过单独调整：
在接受这些类型的药品治疗的患者中开始或中止使用托珠单抗后，应进行有效性(例如华法林)或药物浓度(例如环孢菌素或茶碱)的治疗监测，并且根据需要调整药物的单个剂量。
当托珠单抗与有效性降低不可取的CYP3A4底物药物(例如，口服避孕药、洛伐他汀、阿托伐他汀)共同施用时，处方者应谨慎行事。
托珠单抗对CYP450酶活性的影响可能在停止治疗后持续数周。
F.使用改良的CRS分级量表的依据
在本研究中，莫妥珠单抗治疗引起的CRS不良事件的分级和治疗基于Lee等人(Blood,124:188-195,2014)发表的标准，并且描述于表5中。对于剂量递增决策，根据NCICTCAE v4.0，基于受试者体征和症状以及实验室数据定义与CRS相关的DLT。
NCI CTCAE v4.0 CRS分级量表基于用单克隆抗体治疗后CRS的特征(Lee等人,Blood,124:188-195,2014)。T细胞定向疗法，包括双特异性药物(诸如莫妥珠单抗)及过继细胞疗法(诸如表达CAR的工程化T细胞)，导致T细胞活化释放的细胞因子的药效学特征与常规单克隆抗体相关联的那些特征不同。因此，NCI CTCAE v4.0定义的CRS的临床特征可能不适用于那些接受T细胞定向疗法后的患者。
已经提出并且发表了若干替代分级量表，其专门用于评估T定向疗法的CRS(Davila等人,Sci Transl Med,6:224ra25,2014；Lee等人,Blood,124:188-195,2014；Porter等人,Sci Transl Med,7:303ra139,2015)。Lee等人的分级系统基于由CD19定向CAR-T细胞及博纳吐单抗(blinatumomab)治疗产生的CRS。该分级系统是对NCI CTCAE v4.0的改良，提供了进一步的诊断细节，包括考虑在CRS环境中可能发生的肝转氨酶瞬时升高。除诊断标准以外，实例8C也提供并且引用了基于严重程度的CRS管理建议，包括使用皮质类固醇和/或抗细胞因子疗法进行早期干预。因此，纳入CRS分级量表允许使已发表并且广泛采用的报告与管理指南之间保持一致。
G.结局量度
安全性结局量度
使用以下主要安全结果量度评定莫妥珠单抗的安全性和耐受性：
·当莫妥珠单抗作为单一药剂IV或SC给予时，DLT的发生率和性质。·当莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合给予时，DLT的发生率和性质。另外使用以下次要安全性结局量度评定安全性和耐受性：
·不良事件(AE)的发生率、性质和严重程度。
·针对莫妥珠单抗和阿替利珠单抗的抗药物抗体(ADA)的发生率及其与临床结局的关系。
·生命体征和临床实验室值的变化。
药代动力学结局量度
在数据允许的适当情况下，以下PK参数衍生自施用后莫妥珠单抗的血清浓度-时间曲线：
·总暴露量(浓度-时间曲线下面积[AUC])
·最大血清浓度(Cmax)
·最小血清浓度(Cmin)
·清除率(CL)
·稳态分布容积(Vss)。
在适用的情况下，对阿替利珠单抗和托珠单抗的血清谷值浓度和最大浓度进行汇总，酌情并且在数据允许的情况下进行。可考虑房室、非房室和/或群体方法。也可以计算其他参数，诸如蓄积比、t1/2和剂量比例。
活性结局量度
本研究的活性结局量度如下：
·研究者评定的客观缓解，定义为部分缓解(PR)或完全缓解(CR)，如研究者使用针对NHL(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)和CLL(Hallek等人,Blood,111:5446-5456,2008)的规范标准所评定的。
·研究者评定的客观缓解持续时间，定义为首次出现记录的客观缓解，直至如研究者所评定的疾病进展或复发或因任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
·研究者评定的PFS，定义为从首次研究治疗到研究者评定的首次出现疾病进展或因任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
B组和E组R/R DLBCL和转化的FL扩展队列以及R/R FL扩展队列中的其他活性结局量度如下：
·独立审查机构(IRF)的客观缓解，定义为PR或CR，如IRF使用针对NHL的规范标准(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)所评定的。
·IRF评定的客观缓解持续时间，定义为首次出现记录的客观缓解，直至如IRF所评定的疾病进展或复发或因任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
·IRF评定的CR持续时间，定义为首次出现记录的CR，直至如IRF所评定的疾病进展或复发或因任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
·研究者评定的CR持续时间，定义为首次出现记录的CR，直至如研究者所评定的疾病进展或复发或因任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
·IRF评定的PFS，定义为从首次研究治疗到如IRF所评定的首次出现疾病进展或任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。
·OS，定义为从首次研究治疗到任何原因导致死亡的日期的时间。
患者报告结局量度
NHL扩展队列中用于评估患者报告结局(PRO)的健康相关生活质量(HRQoL)和健康状况量度如下：
·基于欧洲癌症研究和治疗组织生活质量问卷核心30(EORTC QLQ-C30)的HRQoL汇总统计数据以及较基线的变化。
·基于癌症疗法-淋巴瘤功能评定(FACT-Lym)子量表的疾病相关症状的汇总统计数据以及较基线的变化。
·患者参加研究期间的EQ-5D-5L数据的描述性结果。
实例3.研究设计
A组：第1周期非分次、单一药剂莫妥珠单抗递增(IV输注)
入组GO29781研究的剂量递增A组的患者在每个21天周期的第1天通过IV输注接受莫妥珠单抗。莫妥珠单抗施用应在每个周期的第1天进行，但出于后勤/计划原因，可在计划日期最多±2天(即，两个剂量之间至少间隔19天)给予。
基于MABEL，A组的莫妥珠单抗的起始剂量为50μg。剂量递增取决于DLT评定窗口期间的临床观察结果。
A组剂量递增继续直至达到不高于约12.8mg的剂量水平或达到在≥6例患者中的≥17％中观察到DLT的剂量水平，以较低者为准。
基于累积的安全性数据，并且优先评定第1周期分步给药以减轻细胞因子驱动的毒性，已停止入组剂量递增A组，并且随后接受单一药剂莫妥珠单抗治疗的患者将入组剂量递增B组。
B组：第1周期递增单一药剂莫妥珠单抗递增(IV输注)
入组GO29781研究的剂量递增B组的患者在第1周期的第1天、第8天和第15天通过IV输注接受莫妥珠单抗。在第2周期及之后，莫妥珠单抗在每个21天周期的第1天给予，其中第2周期的第1天为第1周期第15天给药后7天。出于后勤/计划原因，莫妥珠单抗可在第2周期的计划日期最多±1天(即，第1周期第15天给药后至少6天)，以及第3周期及之后的计划日期±2天(即，两个剂量之间至少间隔19天)给予。
B组第1周期的累积起始剂量比A组第1周期最高清除剂量水平高50％。第1周期第1天、第8天和第15天的起始剂量水平基于A组剂量递增中评定的第1周期最高清除剂量，并且在表11中指明，其中第1周期第15天起始剂量对应于A组第1周期最高清除剂量。第1周期第15天剂量是在后续周期(第2周期及之后)的第1天施用的剂量水平。
B组的剂量递增采用标准3+3设计。B组剂量递增过程的一个实例示于图5.图中列出的剂量仅用于说明目的。根据以下描述的规则开始第1周期的剂量水平并且随后对在第1周期的第1天、第8天和第15天施用的莫妥珠单抗的剂量进行调整(另见图6A和6B以及表12和13)。在审查实时安全性数据和初步PK数据的基础上，可根据需要停止或修改剂量递增。基于对剂量递增和扩展的全部数据的审查，IMC可能建议将剂量递增增加至先前剂量水平的100％。
表11.莫妥珠单抗剂量递增：分步递增的起始剂量水平(B组)
C＝周期；D＝天。
本文提供了用于确定第1周期第1天剂量的标准。第1周期第15天剂量水平是在第2周期及之后的第1天施用的剂量水平。
表12.第1周期分步莫苏妥珠单抗分步剂量递增规则，IV输注(B组)：在给定队列中<17％的≥3例DLT可评估患者中观察到DLT
AE＝不良事件；C＝周期；D＝天。
剂量调整在每个队列的基础上进行。
与莫妥珠单抗潜在风险相关联的不良事件，例如CRS、HLH、肝酶升高(例如，天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其同时发生与CRS或HLH一致的体征或症状并且在72小时内未消退，并且研究者不认为其可归因于另一明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化。
C1D1剂量可基于来自A组递增的信息固定。
C1D1剂量可基于来自A组递增的信息或基于在B组递增中评定的队列中的C1D1与C1D7之间观察到的安全性、PK和药效学数据的总体进行固定。
该规则的唯一例外是C1D1剂量的初始递增，其在第1周期的累积剂量增量≤100％的条件下，可以从0.4mg的起始剂量递增至1.0mg的剂量；随后的C1D1剂量递增增量不得超过先前C1D1剂量水平的100％。
该规则的唯一例外是C1D1剂量的递增，其在第1周期的累积剂量增量≤50％的条件下，可以从0.4mg的起始剂量递增至1.0mg的剂量；随后的C1D1剂量递增增量不得超过先前C1D1剂量水平的50％。
DLT可评估患者为接受C1D1、C1D8和C1D15剂量的患者。在完成C1给药之前中止研究治疗的患者无法评估DLT。
基于对剂量递增和扩展的全部数据的审查，IMC可能建议将剂量递增增加至先前剂量水平的100％。
这些情形描述于图6B中。AE＝不良事件；C＝周期；D＝天。剂量调整在每个队列的基础上进行。图中示出6例患者的剂量递增队列中的两个DLT的时间。
DLT可评估患者是接受C1D1、C1D8和C1D15剂量或发生DLT的患者。在无DLT的情况下在完成C1给药之前中止研究治疗的患者无法评估DLT。如果患者在完成C1给药之前发生DLT并且中止研究治疗，并且尚未超过C1D1和C1D8组合MTD，则可以入组另一例患者以评估累积的C1MTD。
通过后验概率方法(Thall和Simon,Biometrics,50(2):337-349,1994)。例如，如果在2/4、2/5、2/6、3/7、3/8、3/9、3/10、4/11、4/12、4/13、4/14或5/15例患者中观察到DLT，则真实DLT率≥20％的机率≥80％。
基于对剂量递增和扩展的全部数据的审查，IMC可能建议将剂量递增增加至先前剂量水平的100％。下表13概述了剂量递增指南。
表13.第1周期分步莫苏妥珠单抗分步剂量递增规则，IV输注(B组)：在给定队列中≥17％的≥3例DLT可评估患者中观察到DLT
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第1周期剂量递增根据基于3+3剂量递增设计的以下规则发生，并且图6A和6B以及表12和13中：
·每个队列最初至少入组3例患者，除非前2例入组的患者经历了方案定义的DLT，在此情况下，终止入组队列。
·如果在DLT评定窗口期间满足以下条件，则剂量递增可能以前一个累积第1周期剂量的≤100％的累积第1周期剂量继续：
–在任何患者中均未观察到未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因的DLT；
–在≤34％的至少3例患者中观察到2级或以上不良事件，这些事件基于其已知作用机制(例如，CRS、HLH、肝酶升高
(例如，天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其同时发生与CRS或HLH一致的体征或症状并且在72小时内未消退，且研究者不认为其可归因于另一明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化)构成可归因于莫妥珠单抗的潜在风险。
·第1周期第1天、第1周期第8天和第1周期第15天剂量中的每一者均可以前一个对应剂量水平的≤100％的剂量增量递增，前提条件是累积周期剂量增量保持在≤100％。
–该规则的唯一例外是第1周期第1天剂量的初始递增，其可以从0.4mg的起始剂量(表11)递增至1.0mg的剂量，前提条件为第1周期累积剂量增量为≤100％；随后的第1周期第1天剂量递增增量不得超过前一个第1周期第1天剂量水平的100％。
–第1周期第1天剂量可固定于满足第1周期第1天A组剂量递增安全性数据的以下标准的剂量：
第1周期第1天剂量不高于任何患者在DLT评定窗口(第1周期的第1天至第21天)期间没有DLT的A组中的最高剂量。
第1周期第1天剂量不高于A组中的最高剂量，该最高剂量使≤34％的至少3例患者经历≥2级AE，这些AE基于其已知作用机制(例如CRS、HLH、肝酶升高(例如，天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其同时发生与CRS或HLH一致的体征或症状并且在72小时内未消退，并且研究者不认为其可归因于另一明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化)构成可归因于莫妥珠单抗的潜在风险。
–第1周期第8天和第1周期第15天剂量的递增可酌情继续。
·如果在≥34％的至少3例患者观察到2级或以上不良事件，这些不良事件基于其作用机制(例如CRS、HLH、肝酶升高(例如，天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其同时发生与CRS或HLH一致的体征或症状并且在72小时内未消退，并且研究者不认为其可归因于另一明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化)构成可归因于莫妥珠单抗的潜在风险，则：
–连续队列之间之间隔累积第1周期增加将为前一个累积第1周期剂量水平的≤50％。
–连续队列之间的单个第1周期第1天、第1周期第8天和第1周期第15天剂量水平之间隔增加将为先前相应剂量水平的≤50％。
该规则的唯一例外是第1周期第1天剂量的初始递增，其可以从0.4mg的起始剂量(表11)递增至1.0mg的剂量，前提条件为不超过一个上述的≥2级AE发生在第1周期第1天与第1周期第7天之间，并且第1周期累积剂量增量为≤50％。
后续第1周期第1天剂量递增增量不得超过前一个第1周期第1天剂量水平的50％。
–如果在第1周期第1天与第1周期第7天之间观察到不良事件，并且先前未固定第1周期第1天剂量，则在随后的队列中，第1周期第1天剂量可固定于先前测试的第1周期第1天剂量水平，其中在第1周期第1天与第1周期第7天之间未观察到此类定义的不良事件。第1周期第8天及第1周期第15天剂量的递增可酌情继续。
·如果前3位DLT可评估的患者中有1位经历了DLT，则该队列将扩展到6位患者。在做出任何剂量递增决定之前，对所有患者进行DLT评估。
–如果在给定队列中<17％的患者中观察到DLT(例如，在6例DLT可评估患者中的1例中观察到DLT)，则可以根据图6A和表12中描述的剂量递增规则继续进行下一个队列的入组。
–如果在给定队列中≥17％的患者中观察到DLT，则图6B和表13中描述的剂量递增规则将适用。
·累积MTD定义为在第1周期第15天与第1周期第21天(图6B中详述的窗口C)之间的期间，在<17％的最少6例患者中导致DLT的最高累积第1周期剂量水平。
–如果发现第1周期累积剂量超过MTD，则另外3例患者在先前测试的第1周期累积剂量下进行DLT评估，以将其评估为MTD，除非已在该剂量下评估了6例患者。
–如果超过MTD的第1周期累积剂量水平比先前测试的第1周期累积剂量高≥25％，则至少6例患者的额外剂量队列可按第1周期中间累积剂量进行评估，以作为MTD进行评估。
第1周期第1天剂量不得超过第1周期第1天MTD。
E组：第1周期分步单一药剂莫妥珠单抗递增，同时施用阿替利珠单抗，从第2周期开始(IV输注)
随着相应的B组剂量递增队列完成其第1周期DLT评定期(图6A和6B)并且根据IMC审查显示在第2周期为安全且可耐受的，继续进行GO29781研究中的E组剂量递增。E组递增中的第1周期第1天、第8天和第15天莫妥珠单抗剂量水平与B组递增中的相应队列的那些剂量水平相同。E组递增中的第2周期莫妥珠单抗剂量不得超过B组递增的第1周期第15天最高清除剂量。
基于B组递增所述的第1周期分步计划，莫妥珠单抗作为单一药剂通过IV输注施用。从第2周期第1天以及每个后续周期的第1天开始，阿替利珠单抗与莫妥珠单抗在同一天施用。莫妥珠单抗剂量最初等于第1周期第15天的莫妥珠单抗剂量。首先施用莫妥珠单抗，接着施用阿替利珠单抗，在莫妥珠单抗输注完成后至少1小时开始阿替利珠单抗输注。出于后勤/计划原因，莫妥珠单抗及阿替利珠单抗的第2周期第1天施用可在第2周期的计划日期最多±1天(即在第1周期第15天给药后至少6天)，以及第3周期及之后的计划日期±2天(即两个剂量之间至少间隔19天)给予。
下面列出了E组剂量递增的剂量递增规则，并且汇总于图7和表14中。E组剂量递增过程的一个实例示于图8中；图中列出的剂量仅用于说明目的。
与莫妥珠单抗的已确定或潜在风险相关联的不良事件，例如CRS、HLH、肝酶升高(例如，天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其与CRS或HLH一致的体征或症状同时发生且在72小时内未消退且研究者不认为其可归因于另一明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化。
表14.第1周期分步莫妥珠单抗递增以及从第2周期开始同时施用阿替利珠单抗，IV输注(E组)的剂量递增规则
窗口提供于图7.AE＝不良事件；C＝周期；CRS＝细胞因子释放综合征；D＝天；DLT＝剂量限制性毒性；HLH＝噬血细胞性淋巴组织细胞增生症；IMC＝内部监查委员会；MTD＝最大耐受剂量；TLS＝肿瘤溶解综合征。注释：剂量调整在每个队列的基础上进行。
IMC可根据对全部数据的审查建议剂量递增增量，只要推荐的剂量水平比B组莫妥珠单抗最大评定剂量低不超过一个剂量水平即可。
·莫妥珠单抗的起始剂量为先前在B组递增中测试过的剂量，已完成第1周期DLT评定期，并且在第2周期中已被证明是安全且可耐受的。阿替利珠单抗在第2周期第1天首次与莫妥珠单抗组合施用。
·DLT评定期从第2周期第1天延伸至第2周期第21天。如果入组患者在第1周期(单独使用莫妥珠单抗)期间经历任何治疗出现的毒性，在第2周期第1天(研究第22天)计划开始组合治疗之前未完全消退至基线水平，则将该患者视为无法评估剂量递增决定和MTD确定，并且被另一例相同剂量水平和计划的患者替换。在E组第1周期期间报告的不良事件不直接用于B组剂量递增决定。但是，基于全部可用安全性数据，B组给药和计划可基于E组第1周期递增中的第1周期治疗出现的毒性进行修改。
·随着相应的B组剂量递增队列完成其第1周期DLT评定期(图6)并且并基于IMC审查显示在第2周期中安全且可耐受，将继续进行E组中的莫妥珠单抗剂量递增。E组递增中的第2周期莫妥珠单抗剂量不得超过B组递增的第1周期第15天最高清除剂量。
E组中的剂量递增最初遵循B组规则。IMC可基于对剂量递增和扩展中的全部安全性数据的审查而建议在先前的剂量水平上增加剂量，只要推荐的剂量水平比B组莫妥珠单抗最大评定剂量低不超过一个剂量水平即可。
MTD定义为在<17％的至少6例患者中导致DLT的第2周期最高剂量水平。如果发现第2周期剂量超过MTD，则另外3例患者在先前测试的第2周期剂量下进行DLT评估，以将其评估为MTD，除非已在该剂量下评估了6例患者。
–如果超过MTD的第2周期剂量比先前测试的第2周期累积剂量高≥25％，则至少6例患者的额外剂量队列可按第2周期中间剂量进行评估，以作为MTD进行评估。
–如果发现首个测试的第2周期剂量超过MTD，则可以测试莫妥珠单抗的较低剂量。将基于IMC对累积安全性数据的审查，决定测试较低的莫妥珠单抗剂量与阿替利珠单抗的组合。
–如果已在B组递增中清除了更高的第1周期累积剂量水平，则可以使用最高清除的第2周期莫妥珠单抗剂量水平与阿替利珠单抗的组合来测试该第1周期剂量水平和计划。
·在测试的E组递增中最高的单个莫妥珠单抗剂量不得超过在B组递增中鉴定为MTD的最高单个剂量。
实例4.患者内剂量递增和持续给药
A.患者内剂量递增
为了最大限度地收集相关剂量的信息并且最大限度地减少患者接受的次优剂量的莫妥珠单抗，可允许患者内剂量递增。在每个指定的剂量递增组内，单个患者的莫妥珠单抗剂量可增加至完成队列在至少一个莫妥珠单抗施用周期内耐受的最高清除剂量水平。患者能够在以其最初指定的剂量水平完成至少两个周期后进行患者内剂量递增。在无任何符合DLT定义或需要施用后住院的不良事件的任何随后更高的清除剂量水平的至少一个周期后，可能发生随后的患者内剂量递增。
一旦宣布MTD并且确定了RP2D，对于继续进行研究并且继续耐受莫妥珠单抗的患者，允许直接将患者内剂量递增至RP2D。
对于B组剂量递增的患者，允许从第3周期开始(在第1周期中的分次给药和第2周期中的非分次给药后)进行患者内剂量递增。对于E组患者，允许从第4周期开始(在第1周期中的莫妥珠单抗单一药剂给药以及第2周期和第3周期中与阿替利珠单抗组合给药后)进行莫妥珠单抗的患者内剂量递增。不允许阿替利珠单抗递增。
B.在剂量限制性毒性观察期之后继续给药的规则
在DLT观察期内未经历DLT的患者有资格接受如下额外的研究治疗周期：
·对于入组剂量递增A组的患者，每21天经由相同的施用途径以相同的剂量水平给予莫妥珠单抗(施用日为每个周期的第1天)。
·对于入组剂量递增B组的患者，从第1周期第15天剂量后7天(研究第22天)开始，每21天以与第1周期第15天剂量相同的剂量水平给予莫妥珠单抗(输注日为每个周期的第1天)。
·对于入组剂量递增E组的患者，每21天给予莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合(输注日为每个周期的第1天)。
·在每个治疗组内，申办方保留在第3周期第1天或之后测试较低剂量水平的选择，以确定后期周期中的较低剂量是否足以维持临床有效性。
如果满足以下标准，可给予额外剂量的莫妥珠单抗：
·持续的临床获益：患者无疾病进展(PD)的临床体征或症状；不需要在DLT窗口结束时进行放射学肿瘤评估，以便最大程度减少不必要的辐射暴露。在每个周期的第1天对患者的疾病进展进行临床评定。
–对于NHL患者，疾病进展应通过放射学成像进行确认，如修订的恶性淋巴瘤缓解标准(Cheson等人J Clin Oncol,25:579-586,2007)。在完成研究治疗期之前，发生放射学疾病进展的NHL患者通常不符合接受进一步莫妥珠单抗治疗的条件。但是，在有限的情况下，可允许在明显的放射学疾病进展后进行治疗。
–在完成研究治疗期之前经历NCI-WG指南(Hallek等人,Blood,111(12):5446-5456,2008)定义的疾病进展的CLL患者不符合接受进一步莫妥珠单抗治疗的条件。
·可接受的毒性：经历4级非血液学不良事件(4级肿瘤溶解综合征(TLS)可能除外)的患者应中止研究治疗，并且不得进行再治疗。经历4级TLS的患者可考虑继续研究治疗。到下一次施用时，在先研究治疗药物施用引起的所有其他研究治疗药物相关不良事件已降至≤1级或基线级别。在研究者与患者仔细评估及讨论获益-风险并且获得医学监查员的批准后，可允许基于正在进行的总体临床获益的例外情况。如果根据本文概述的规则确定可维持临床获益，则可以允许降低莫妥珠单抗的剂量。
表现出如上所述的可接受的安全性和临床获益证据的患者可继续接受如本文所述的研究治疗。在无疾病进展的情况下完成研究治疗的患者将继续接受监测，包括定期安排的肿瘤评定，直至中止治疗后访视(例如，由于发生进展)。如本文所述，患者可选择再治疗出现的复发性疾病。
实例5.发生疾病进展后的治疗
A.发生疾病进展后非霍奇金淋巴瘤的治疗
实体瘤癌症免疫疗法的经验表明，由于免疫细胞的流入，缓解的肿瘤最初可能增大，该现象被称为“假性进展”(Wolchok等人,Clin Can Res,15(23):7412-7420,2009)。在淋巴瘤免疫疗法的背景下尚未描述假性进展，但莫妥珠单抗和/或阿替利珠单抗疗法最初可通过诱导T细胞流入肿瘤来增加肿瘤大小和代谢活性。鉴于此，如果观察到临床疾病进展，强烈建议重复肿瘤活检。另外，如果研究者认为NHL患者尽管存在由修订的恶性淋巴瘤缓解标准(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)定义的疾病进展的放射学证据，但仍在获得临床获益，则该患者可在满足以下标准的前提下继续研究治疗：
·不存在指示明确疾病进展的症状和体征(包括实验室值的恶化)。
·美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态未下降。
·在包括中心气道、大血管和其他器官或组织在内的关键解剖部位不存在肿瘤进展，在这些器官或组织中，预计继发于肿瘤进展的功能受损将导致重度和/或不可逆转的残疾或死亡。
强烈建议对放射学进展明显但仍继续研究治疗的患者进行重复肿瘤活检，以评定肿瘤体积的增加是否由免疫细胞浸润或肿瘤细胞增生所致，前提条件为此类活检可安全地对非目标病灶进行。如果基于研究者的判断、临床因素或与肿瘤细胞增生一致的活检结果怀疑有真正进展，或者如果在随后的肿瘤评定中确认放射学疾病进展，则患者不符合接受当前分配治疗组的进一步研究治疗的条件。使用单一药剂莫妥珠单抗的患者可考虑与如本文所述的阿替利珠单抗进行组合治疗。
B.莫妥珠单抗/阿替利珠单抗治疗持续时间和疾病进展后的再治疗
根据对初始治疗的抗肿瘤缓解，最初由于作为单一药剂或与阿替利珠单抗组合的莫妥珠单抗而缓解或疾病稳定的患者可以从研究治疗的最初八个周期之后的额外周期中获益。此外，在接受单一药剂莫妥珠单抗治疗时出现疾病进展的患者可能从添加阿替利珠单抗中获益。
为测试这些假设，患者符合莫妥珠单抗再治疗或在最初八个周期之后继续研究治疗的条件，无论作为单一药剂或与阿替利珠单抗组合，如本文所述。研究再治疗剂量和计划为先前已在剂量递增中证明安全的剂量，前提条件是满足以下标准：
·在重新开始莫妥珠单抗治疗时满足相关的资格标准，但以下情况除外：
–允许使用莫妥珠单抗的在先疗法
–除非有临床指征，否则无需重复血清学检测以证明人类免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)状态。重复EBV和巨细胞病毒(CMV)定量聚合酶链式反应(PCR)。
–允许初始研究治疗的可管理且可逆的免疫相关不良事件，并且不构成自身免疫病的排除病史。
·在初始研究治疗期间，患者未经历研究者不认为可归因于另一明确可鉴定原因的4级非血液学不良事件，TLS可能除外。
·在初始治疗期间经历研究者不认为可归因于另一个明确可鉴定原因的2级或3级AE的患者已将这些毒性消退至≤1级。
·在首次再治疗施用后，患者可能需要住院治疗。
·在完成初始研究治疗与重新开始研究治疗之间，不施用干预性全身性抗癌疗法。
强烈建议在发生疾病进展后进行再治疗的患者在安全可及的部位进行重复肿瘤活检以评定：1)CD20表达状态以及2)肿瘤和免疫微环境的变化/状态。提供书面知情同意书但在疾病进展时无适合活检的病灶的患者在研究者与医学监查员之间讨论后仍可考虑进行研究药物再治疗。
对接受再治疗的患者施用的研究治疗的剂量及计划由医学监查员确定，并且采用已完成DLT观察期的先前测试的剂量和计划。
初始研究治疗的持续时间以及在研究治疗的最初八个周期之后再治疗或继续研究治疗的选择描述于图9中。表12中描述了基于研究治疗的性质和时间的莫妥珠单抗与或不与阿替利珠单抗一起施用的剂量和计划/途径。
对于最初接受单一药剂莫妥珠单抗的患者：
·除非在完成八个周期前观察到PD或不可接受的毒性，否则莫妥珠单抗给予八个周期。如果观察到PD，则考虑用莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合来治疗患者。
·6个月(±2周)时的肿瘤评定应安排在第8周期第1天之后但在第9周期第1天之前，以便确定研究治疗的持续时间。
·在接受八个治疗周期后实现完全缓解(CR)的患者不接受任何额外的莫妥珠单抗周期并且接受监测；如果在完成初始单一药剂莫妥珠单抗治疗后观察到PD，则可以开始单一药剂莫妥珠单抗再治疗。用莫妥珠单抗治疗可继续至少八个额外周期。
·除非观察到PD或不可接受的毒性，否则在接受八个治疗周期后实现PR或维持疾病稳定(SD)的患者继续接受单一药剂莫妥珠单抗，最多持续总共17个周期。
–如果在17个治疗周期后实现CR，则按照对使用莫妥珠单抗实现CR的患者所述进行监测。
–如果在17个治疗周期后实现PR或SD，则继续监测患者。
–如果观察到PD，则考虑用莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合来治疗患者。
对于最初接受莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合(作为初始治疗或作为单一药剂莫妥珠单抗PD后的再治疗)的患者：
·除非在完成八个周期前观察到PD或不可接受的毒性，否则组合治疗给予八个周期。如果观察到PD，则患者将中止研究治疗。
·6个月(±2周)时的肿瘤评定应安排在第8周期第1天之后但在第9周期第1天之前，以确定研究治疗的持续时间。
·在接受八个治疗周期后实现CR的患者不再接受任何额外的组合治疗周期并且接受监测。如果在组合治疗完成后观察到PD，则可以开始组合再治疗。
·除非观察到PD或不可接受的毒性，否则在接受八个治疗周期后实现PR或维持SD的患者继续接受组合治疗，最多持续总共17个周期。
–如果在17个治疗周期后实现CR，则按照对使用莫妥珠单抗实现CR的患者所述进行监测。
–如果完成总共17个周期时实现PR或SD，则继续监测患者。
–如果在组合治疗中观察到PD，则患者将中止研究治疗。
对于不可接受的毒性，可随时中止研究治疗。根据医学监查员的判断并且与研究者协商后，患者可能符合接受额外研究再治疗的条件，前提条件为继续满足上述再治疗标准。
接受再治疗的患者的评定计划遵循目前在剂量递增或扩展中实施的评定计划。例如，遵循第1周期双步分次计划再治疗的患者遵循B组评定计划。
研究治疗持续时间和再治疗的规则适用于剂量递增和剂量扩展队列。
表15.莫妥珠单抗治疗/再治疗：施用剂量和计划/途径
实例6.剂量扩展阶段
本研究的剂量扩展阶段旨在获得研究治疗剂量达到MTD/最大评估剂量(MAD)的额外安全性、耐受性、PK和初步临床活性数据。
来自扩展队列的所有可用安全性数据均在持续的基础上进行评估，以评定所研究的剂量水平的耐受性。在扩展阶段研究的莫妥珠单抗剂量水平始终不超过在剂量递增阶段有资格作为MTD的最高剂量水平。另外，对于每个扩展队列，均进行中期分析，以便指导在出现过度毒性时可能的提前停止入组。
如方案中所述的表现出可接受的安全性和临床获益证据的患者可继续每21天接受一次莫妥珠单抗，持续多达8或17个周期(见图9)，直至记录到客观疾病进展或不可接受的毒性，以先发生者为准。
根据评定计划进行安全性和有效性评估。对于因疾病进展以外的原因中止研究治疗的患者，包括完成初始莫妥珠单抗治疗的患者，在研究治疗的最终剂量后进行额外评估，如治疗后评定计划中所概述。完成研究治疗的患者继续接受肿瘤评定，直至发生疾病进展并且有资格接受如本文所述的莫妥珠单抗再治疗。
A.NHL的单一药剂莫妥珠单抗剂量扩展
患者入组以在如下单独的适应症特异性扩展队列中接受莫妥珠单抗：
·R/R DLBCL和转化的FL：可入组测试剂量等于或低于来自A组和B组递增的MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组最多大约20例患者，但基于B组RP2D的扩展队列可入组大约80例患者。
·R/R FL：可入组测试剂量等于或低于来自A组和B组递增的MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组最多大约20例患者，但基于B组RP2D的扩展队列可入组大约80例患者。
·R/R MCL：可入组测试剂量等于或低于来自A组和B组递增的MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组最多大约20例患者。
·R/R Richter转化：可入组测试剂量等于或低于来自B组递增的MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，该队列可入组大约10至20例患者。
在审查剂量递增中的累积安全性数据后，将在剂量递增中评定的莫妥珠单抗剂量及计划由IMC与研究者协商确定(如果从时间角度有必要及可能)。可评定超过一种莫妥珠单抗剂量水平和计划。在鉴定RP2D之前，可以先前确定为安全并且在剂量递增期间证明临床活性证据的剂量开始扩展队列。申办方可基于正在进行的临床数据审查来决定启动或暂停任何给定扩展队列的入组(图4)。
B.在NHL中使用莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合的剂量扩展
患者入组扩展队列，将接受剂量低于E组递增中确定的莫妥珠单抗第2周期MTD的阿替利珠单抗和莫妥珠单抗。以下适应症特异性扩展队列的规模与单一药剂莫妥珠单抗相似：
·R/R DLBCL和转化的FL：可入组测试剂量等于或低于第2周期MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组大约20例患者，但基于E组RP2D的扩展队列可入组大约80例患者。
·R/R FL：可入组测试剂量等于或低于第2周期MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组大约20例患者，但基于E组RP2D的扩展队列可入组大约80例患者。
·R/R MCL：可入组测试E组剂量等于或低于第2周期MTD的扩展队列。假设本文定义的安全性和活性足够，每个队列可入组最多大约20例患者。
在审查剂量递增中的累积安全性数据后，将在剂量扩展中评定的莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合的剂量和计划基于IMC建议并且与研究者协商确定(如果从时间角度有必要及可能)。可评定超过一种与阿替利珠单抗组合的莫妥珠单抗剂量水平和计划。在鉴定RP2D之前，可以先前确定为安全并且在剂量递增期间证明临床活性证据的剂量开始扩展队列。申办方可基于正在进行的临床数据审查来决定启动或暂停任何给定扩展队列的入组(图4)。
C.CLL中的剂量递增和扩展
CLL患者的剂量递增规则与NHL患者使用的规则相同。CLL患者的起始剂量比相应NHL剂量递增中已清除DLT评定窗口的剂量低不超过一个剂量水平。
可以被确定为安全并且证明在CLL B组剂量递增期间具有临床活性的剂量测试最多大约10例患者的扩展队列，以评定CLL中的莫妥珠单抗。CLL扩展队列独立进行，并且可能采用与NHL患者不同的剂量和计划。
实例7.安全性的评定
以下描述安全性问题管理的信息基于预期的药理学和作用机制、非临床研究的结果、单一药剂剂量递增研究的初步安全性结果、已发表的有关类似分子的数据以及已确定的阿替利珠单抗的安全性特征。
采取措施以确保参与本试验的患者的安全，包括使用严格的纳入和排除标准以及密切监测，如下所述。用于DLT评估目的的患者的入组交错进行，以便每个剂量递增队列中的前2例患者相隔≥72小时施用相应的第1周期第1天治疗。每个队列中的后续患者交错进行，以便相隔≥24小时施用其第1周期第1天治疗。
密切监测所有患者的毒性。除非另有说明，否则在每个剂量前使用NCI CTCAEv4.0分级量表对患者进行临床毒性评定。CRS严重程度根据改良的细胞因子释放综合征分级系统进行分级(表5)。在试验期间以及最后一剂研究治疗后最多90天或直至开始另一次全身性抗癌疗法(以先发生者为准)记录所有不良事件和严重不良事件。为至少部分减轻潜在的未知风险，在第1周期之后的给药仅限于未表现出不可接受的毒性或令人信服的疾病进展证据的患者。
本文描述了与施用莫妥珠单抗和阿替利珠单抗相关联的特定预期或潜在毒性，以及本试验中旨在避免或最大程度减小此类毒性所采取的措施。
A.莫妥珠单抗和阿替利珠单抗施用与住院治疗
莫妥珠单抗和阿替利珠单抗的施用在临床环境中进行，在该临床环境中可立即接触到重症监护病房以及受过培训以监测和应对医疗紧急情况的工作人员。神经病学就诊服务应随时可用，以解决任何可能因莫妥珠单抗治疗而引起的神经系统不良事件，并且应随时提供具有急性透析能力的肾病学就诊服务，以解决任何可能伴随肿瘤溶解综合征(TLS)的肾毒性。
所有入组A组剂量递增的患者均需要住院监测，包括在莫妥珠单抗施用期间或之后，在首次莫妥珠单抗施用至第1周期第1天完成莫妥珠单抗施用后至少72小时内住院治疗。
所有入组B组剂量递增队列以按双步分次计划接受莫妥珠单抗的患者均需要住院监测，包括在莫妥珠单抗施用期间或之后，在莫妥珠单抗输注至超过任何先前测试的剂量水平的任何单独剂量的莫妥珠单抗输注完成后至少72小时住院治疗。
该剂量通常对应于第1周期第15天施用的莫妥珠单抗的剂量。除非研究者酌情决定并且与医学监查员协商有临床指征，否则无需因施用先前评定的剂量而住院治疗。可能需要此类住院治疗的实例包括但不限于在相同或相似的剂量下在先观察到的可能归因于莫妥珠单抗的≥2级不良事件(例如CRS、HLH、肝酶升高(例如天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或总胆红素升高，其与CRS或HLH一致的体征或症状同时发生并且在72小时内未消退，且研究者不认为其可归因于其他明确可鉴定的原因)、神经毒性、TLS、中性粒细胞减少症和/或血小板减少症恶化)相同或相似的剂量，以及TLS监测和预防。
基于现有的临床安全性数据，对于接受经测试安全且可耐受的剂量水平的莫妥珠单抗的患者，在任何给药日后均不强制住院。这适用于入组B组剂量递增回填时段、B组扩展队列的患者，并且适用于那些需要住院接受研究的患者，并且患者应在莫妥珠单抗施用后在有临床指征时住院。
从第2周期开始，所有入组E组剂量递增以接受莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合的患者均接受住院监测，包括在莫妥珠单抗施用期间或之后，在第2周期第1天的莫妥珠单抗和阿替利珠单抗输注至莫妥珠单抗和阿替利珠单抗输注完成后至少72小时住院治疗。
后续周期期间的住院要求基于第一周期(或对于E组为第二周期)的临床病程确定；在第1周期或E组的第2周期期间发生3级CRS、注射部位反应或TLS的患者也可能住院至后续剂量施用结束后至少72小时，并且考虑如本文所述的剂量减低。
对于所有治疗组，基于IMC的建议并且与研究者协商(如果从时间角度有必要及可能)，做出修改或中止扩展队列的住院要求的决定。
B.剂量和计划调整
仅当患者的临床评定和实验室检查值可接受时，才进行莫妥珠单抗和阿替利珠单抗(在适用的情况下)给药。如果计划的给药与排除给药的假期重合，则给药应在最近的下一个日期开始，随后的给药按适用的21天计划继续。
研究治疗可以因毒性管理而酌情延迟。单一药剂莫妥珠单抗和阿替利珠单抗联合疗法剂量调整的具体指南如下所述。
下文描述了管理指南，包括针对特定不良事件的研究治疗剂量和计划调整。
莫妥珠单抗剂量和计划调整
·对于在莫妥珠单抗的第一剂量时发生CRS或在后续剂量时发生复发性CRS的风险增加的患者，输注时间可延长至多达8小时。
·经历符合DLT定义的不良事件、3级不良事件或严重不良事件的患者允许将莫妥珠单抗给药延迟多达2周，以便从毒性中恢复。
–在B组和E组的第1周期双步分次期间，如果不存在临床上显著的症状，尽管有血液学实验室异常，仍可施用莫妥珠单抗；对于贫血和血小板减少症，不需要输血。
–对于那些未被研究者认为可归因于另一明确可鉴定原因的不良事件(例如，记录的疾病进展、伴随用药或预先存在的医疗状况)，患者可继续接受额外剂量的莫妥珠单抗，前提条件是在上述时段内，毒性已消退至≤1级。
对于降低的实验室值，异常应已消退至≤1级的下限，或恢复至基线值的≥80％，以较低者为准。
对于中性粒细胞减少症，ANC应消退至≤2级或恢复至基线值的≥80％，以较低者为准。
对于增加的实验室值，异常应已消退至≤1级的上限，或恢复至基线值的≥120％，以较高者为准。
在此类患者中随后施用莫妥珠单抗的剂量通常应降低，例如降低至剂量递增期间评定的下一个最高清除剂量水平。如果降低至无莫妥珠单抗药效学活性证据(例如，无血清细胞因子水平变化证据)的剂量水平，则患者可中止研究治疗。
–应在研究者与患者仔细评估并且讨论风险与获益，并且获得医学监查员批准后，决定在DLT或其他研究治疗相关的3级毒性后以降低的剂量继续进行治疗，但以下情况除外：
如果AST或ALT升高>3×ULN和/或总胆红素升高>2×ULN，但无个别实验室值超过3级，发生持续<3天的≤2级CRS(表5)的背景下，可以在获得医学监查员批准后继续莫妥珠单抗给药而无需降低剂量。
对于3级CRS(表5)，应降低下一个莫妥珠单抗剂量，并且如果耐受较低的剂量，则可以增加后续剂量。如果在第1周期第1天或第1周期第8天莫妥珠单抗施用后在分步给药队列中发生3级CRS，则应与医学监查员讨论下一个莫妥珠单抗剂量，并且应考虑降低剂量(表7)。
对于在持续<3天的≤2级CRS(表5)的背景下发生的3级(NCI CTCAE v4)单个CRS体征和症状，可以在获得医学监查员批准后继续莫妥珠单抗给药而无需降低剂量。
对于入组扩展队列的患者，在研究者进行个体获益-风险评定并且与医学监查员协商后，做出有关剂量和计划调整的决定。
任何在降低的剂量下再次出现类似毒性的患者均应中止进一步的莫妥珠单抗治疗。
患者不得以发生不良事件时的莫妥珠单抗剂量进行再治疗，除非该不良事件归因于另一明确可鉴定的原因。
·在额外2周后不满足给药标准的患者中止研究治疗，并且对其安全性结局进行随访。在研究者评估风险与获益并且获得医学监督员批准后，可允许基于持续临床获益的例外情况。在研究者评定风险与获益并且获得医学监查员批准后，可能不需要因并非归因于莫妥珠单抗的毒性而延迟疗法。
–对于B组患者，如果剂量延迟导致6周或更长时间的无治疗间期，则需要在剂量延迟后的第一周期的第1天、第8天和15天对莫妥珠单抗进行双步分次。
–对于E组患者，如果剂量延迟导致6周或更长时间的无治疗间期，则需要在剂量延迟后的第一周期的第1天、第8天和15天对莫妥珠单抗进行双步分次，并且继续用阿替利珠单抗治疗应在剂量延迟后的第二周期开始。
·对于按第1周期分步计划(B组和E递增或扩展)接受莫妥珠单抗的患者，如果在第1周期第1天、第1周期第8天和/或第1周期第15天给药之后发生严重不良事件或特别关注的不良事件，则莫妥珠单抗(以及适用的阿替利珠单抗)的治疗延迟最多14天，并且/或者随后的莫妥珠单抗剂量的修改可由医学监查员与治疗研究医师协商后自行决定。
如果患者在第1周期出现毒性，需要中断莫妥珠单抗>7天，则应通知医学监查员，并且患者可能需要在恢复计划的治疗计划之前以先前耐受的最高剂量重复使用莫妥珠单抗。
因PD以外的原因中止研究治疗的患者应继续接受随访。
莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合的剂量和计划调整
·下文概述了在特定不良事件后延迟或中止阿替利珠单抗治疗的指南。
·在第2周期及之后，经历明显归因于莫妥珠单抗或阿替利珠单抗的3级至4级不良事件的患者可在不良事件初步改善并且在与医学监查员讨论并获得批准后继续使用其他药剂进行治疗。
C.与莫妥珠单抗相关联的风险
基于迄今为止使用莫妥珠单抗的临床数据，下文描述了以下已知的疑似风险。
与莫妥珠单抗相关联的已知风险
细胞因子释放综合征
莫妥珠单抗的作用机制为针对CD20阳性细胞的免疫细胞活化；因此，可能发生一系列事件，包括输注相关反应(IRR)靶标介导的细胞因子释放和/或过敏反应伴有或未伴有突发ADA。其他CD20定向疗法和免疫调节疗法与IRR、细胞因子释放综合征(CRS)和/或过敏反应相关联(美国包装插页(USPI)；/>USPI；/>USPI)。研究GO29781中报告了莫妥珠单抗施用后的CRS。
虽然CRS是与莫妥珠单抗相关联的已知风险，但随着临床数据的积累，正在进行全面表征。迄今为止，使用莫妥珠单抗观察到的CRS的严重程度大多为轻度至中度，并且包括诸如发热、头痛和肌痛等症状，并且因根据指示使用镇痛药、解热药和抗组胺药对症治疗而缓解。
重度或危及生命的CRS表现，诸如低血压、心动过速、呼吸困难或胸部不适，应根据指示积极采用支持性和复苏性措施进行治疗，包括使用托珠单抗和/或高剂量皮质类固醇、IV输液以及符合机构实践的其他支持性措施。重度CRS可能与其他临床后遗症相关联，诸如弥散性血管内凝血、毛细血管渗漏综合征，或者可能表现为噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。基于免疫的单克隆抗体疗法导致的重度或危及生命的CRS的护理标准尚未确定；CD19 CAR-T的病例报告及建议已发表(Teachey等人,Blood,121(26):5154-5157,2013；Lee等人,Blood,124(2):188-195,2014；Maude等人,New Engl J Med,371(16):1507-1517,2014；Neelapu等人,Nat Rev Clin Oncol,15:47-62,2018；另见FDA批准的两种描述CRS风险管理的产品(USPI；/>USPI))。
可能与嵌合抗原受体(CAR)-T细胞疗法以及因此潜在的其他T细胞接合疗法后的重度CRS风险增加相关联的疾病相关因素包括(但不限于)淋巴瘤骨髓受累、结外疾病、Richter转化、B细胞淋巴细胞增多症以及循环外周恶性细胞的存在。
为最大程度降低CRS的风险和后遗症，在临床环境中历经至少4小时施用莫妥珠单抗。如本文所述地施用皮质类固醇前驱用药。遵循莫妥珠单抗的CRS管理指南汇总于表7中，CRS分级遵循表5中所述的改良的分级量表。鉴于莫妥珠单抗的作用机制，IRR与CRS可能无法区分，因此其评估及治疗是相同的。治疗研究者与医学监查员之间应立即讨论≥3级CRS的管理。如表7所示，即使患有广泛合并症的患者出现中度CRS表现也应密切监测，并且考虑进入ICU和托珠单抗施用。
接受莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合治疗的患者发生的输注相关反应/细胞因子释放综合征
在接受莫妥珠单抗与阿替利珠单抗组合治疗的患者中，根据IRR/CRS事件的时间，可能无法将IRR/CRS事件归因于莫妥珠单抗或阿替利珠单抗。因此，对于经历IRR或CRS事件的患者，管理(包括在后续周期中对给药的任何修改)将遵循以下一般指南：
·在第1周期(单一药剂莫妥珠单抗施用)期间，经历3级CRS事件(表7)的患者可以在获得医学监查员批准之后继续在第2周期及以后接受组合治疗。如本文所述，应降低后续周期的莫妥珠单抗剂量。对于分步给药队列，如果3级CRS事件发生在第1周期第1天或第1周期第8天，则应与医学监查员讨论莫妥珠单抗的下一剂量，并且应考虑降低剂量。莫妥珠单抗输注应历经至少4小时内施用。
·在第2周期及之后，经历3级CRS事件患者可在研究医师与医学监查员之间讨论后在后续周期中接受莫妥珠单抗，该事件在莫妥珠单抗输注期间或之后但在阿替利珠单抗输注之前开始，并且因此仅归因于莫妥珠单抗。应如本文所述降低莫妥珠单抗的下一剂量。
在第2周期及之后，对于经历4级CRS事件的患者，应按照表7永久停用莫妥珠单抗，该事件在莫妥珠单抗输注期间或之后但在阿替利珠单抗输注之前开始，并且因此仅归因于莫妥珠单抗。在毒性完全消退并且获得医学监查员批准后，在该情况下可继续施用单一药剂阿替利珠单抗。
·在第2周期及之后，经历无法区分归因于莫妥珠单抗或阿替利珠单抗的3级CRS事件的患者可在后续周期中继续治疗，并且在研究医师与医学监查员之间讨论后降低莫妥珠单抗剂量。
·在第2周期及之后，对于经历无法区分归因于莫妥珠单抗或阿替利珠单抗的4级CRS事件的患者，应永久停用阿替利珠单抗和莫妥珠单抗。
中性粒细胞减少症
中性粒细胞减少症具有与其他CD20定向疗法以及博纳吐单抗(USPI)相关的已知类别效应，并且是莫妥珠单抗的已知风险。在研究GO29781中观察到莫妥珠单抗治疗后出现可逆性中性粒细胞减少症。一些发生中性粒细胞减少症的患者已接受生长因子支持和/或临时治疗。
应密切监测经历3级至4级中性粒细胞减少症的患者，并且在适用的情况下进行更频繁的评定。对于3级或更高级别的治疗中出现的中性粒细胞减少症事件，应考虑如本文所述的剂量延迟和/或剂量调整。
与莫妥珠单抗相关联的潜在风险
噬血细胞性淋巴组织细胞增生症
已在博纳吐单抗以及CAR过继性T细胞疗法中报道了具有成人发作继发性或反应性巨噬细胞活化综合征/噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(MAS/HLH)特征的CRS(USPI；Teachey等人,Blood,121(26):5154-5157,2013；Lee等人,Blood,124(2):188-195,2014)。(注：就GO29781方案而言，MAS与HLH被视为同义词。)研究GO29781报告了一例致命的继发性HLH病例，患者有慢性活动性EBV感染的证据(通过EBV编码的小RNA原位杂交评定为EBV阳性)。
虽然重度CRS和继发性HLH具有重叠的表现和症状，但继发性HLH可能由其他病况(包括感染、自身免疫病和恶性肿瘤)引起(Ramos-Casals等人,Lancet,383:1503-1516,2014)。这些病况在研究患者群体中的流行使得重度CRS和HLH之间的区分以及诱发因素的鉴定具有挑战性。例如，在一个系列中，B细胞恶性肿瘤与反应性HLH相关联的最常见的恶性肿瘤(Rivière等人,Am J Med,127:1118-1125,2014)。此外，EBV活动性感染是HLH最常见的感染原因之一(Hashemi-Sadraei等人,Case Rep Hematol 2015,491567,2015；Schram和Berliner,Blood,125:2908-2914,2015)，而再激活潜伏EBV可能发生在患有CLL的患者中(Rath等人,Haematologica,93:1424-1426,2008)，其继而可能导致HLH(Lim等人,LeukLymphoma,55:2938-2941,2014)。尚不清楚莫妥珠单抗治疗是否进一步提高具有其他危险因素的患者发生HLH的风险。
在包括莫妥珠单抗的T细胞接合疗法的环境中，与继发性HLH相比，CRS的可能性大得多。考虑到症状的重叠表现，对这些患者的管理应主要集中在CRS的治疗上(见表7)。
在非典型病例诸如迟发性CRS(过去完成了莫妥珠单抗的分步给药)或难治性CRS中，应开始对HLH进行检查。
HLH的支持性管理大体上与CRS相似。HLH的具体诊断、监测和管理指南如下所述。
如果满足以下八项标准中的五项，则患者应被归类为具有HLH：
·发热≥38.5℃
·脾肿大
·由以下中的至少两者组成的外周血细胞减少：
·血红素<90g/L(9g/dL)(<4周龄婴儿为<100g/L(10g/dL))
·血小板计数<100x 109/L(100,000/μL)
·ANC<1.0×109/L(1000/μL)
·空腹三酸甘油酯>2.992mmol/L(265mg/dL)和/或纤维蛋白原<1.5g/L(150mg/dL)
·骨髓、脾脏、淋巴结或肝脏中的噬红细胞作用
·自然杀手细胞活性低或不存在
·铁蛋白>500mg/L(500ng/mL)
·相比于经年龄调整的实验室特定标准，可溶性白介素2(IL-2)受体(可溶性CD25)升高≥2倍标准偏差
患者住院时应采取以下诊断和监测措施：
·频繁(例如，每4小时)的生命体征和体格检查，包括评估脾肿大；
·连续(至少每天)监测血清化学、全血细胞计数、肝功能检测(LFT)、铁
蛋白、PT/PTT、纤维蛋白原、D-二聚体和甘油三酯；
·考虑骨髓和/或淋巴结活检以评定噬血作用和活动性感染，包括评定T/B/NK细胞中的EBV蛋白定位；
·完整的传染病检查包括：
–血培养物(细菌和真菌)
–尿液培养物和尿液分析
–放射学评定(例如，胸部X片或CT扫描)
–评定活动性病毒感染，包括但不限于EBV和CMV
·如果可用，评定可溶性CD25并且评定NK细胞功能
·应考虑使用DNA对可能与HLH相关的突变进行探索性基因检测，例
如PRF1、MUNC13-4、STXBP2(Zhang等人,Blood,118:5794-5798,
2011)。
具有疑似HLH的患者应根据表16中的指南进行治疗。在确诊为HLH的情况下，应永久中止研究治疗。
表16.疑似噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的管理指南
注射部位反应
已经观察到SC施用抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗后的局部注射部位反应(Assouline等人,Lancet Haematol,c128-338,2016)。其中大多数的严重程度为轻度至中度(欧洲药品管理局，产品特性总结(EMA SPC))。由于CD4+和CD8+T细胞(Mueller等人,Frontiers in Immunology,332,2014)以及B细胞(Egbuniwe等人,TrendsImmunol,36:102-111,2015)存在于皮肤中，因此莫妥珠单抗SC施用后可能发生局部反应。因此，莫妥珠单抗注射部位反应的风险未知。SC施用莫妥珠单抗后经历局部注射部位反应的患者应根据
表8中详述的指南进行管理。
神经毒性
在莫妥珠单抗治疗后出现CRS和/或肝功能检测(LFT)升高的背景下，已观察到脑病。
在施用莫妥珠单抗的食蟹猴中报告了神经毒性，并且经常在接受博纳吐单抗和CD19 CAR T细胞疗法治疗的患者中报告(USPI；Kochenderfer等人,J ClinOncol,印刷前在线发表于2014年8月25日；Maude等人,New Engl J Med,371(16):1507-1517,2014)。接受博纳吐单抗或CAR T细胞疗法的患者报告的症状包括头痛、意识模糊、失语、脑病、震颤、癫痫发作及其他神经事件。在这些环境下，毒性的病因尚不确定，并且可能不因细胞因子定向疗法(诸如托珠单抗)而缓解，但随着治疗的中断及皮质类固醇的使用，通常会有所改善(/>USPI；Viardot等人,American Society of HematologyAnnual Meeting 2010,Abstract 2880,2010；Kochenderfer等人,J Clin Oncol,印刷前在线发表于2014年8月25日)。在接受博纳吐单抗治疗的B细胞ALL患者中，在约50％的患者中观察到神经毒性；在约15％的患者中观察到≥3级神经毒性。大多数神经系统不良事件在博纳吐单抗中断后消退，一些患者需要中止治疗(/>USPI)。基于现有的临床数据，使用莫妥珠单抗观察到的神经系统不良事件的严重程度较轻，并且发作早。最常见的神经系统事件包括头痛、头晕和失眠。
肿瘤溶解综合征
肿瘤溶解综合征(TLS)是抗肿瘤疗法在血液系统恶性肿瘤(包括NHL)中的已知药效学效应。已在博纳吐单抗、CAR T细胞疗法和其他CD20定向疗法中报告了TLS(USPI；/>USPI；/>USPI；Porter等人,N Engl J Med,365(8):725-733,2011)。TLS的固有风险取决于所治疗的恶性肿瘤和个体患者特征(Coiffier等人,J Clin Oncol,26:2767-2778,2008)。如果使用莫妥珠单抗治疗导致大量肿瘤细胞快速破坏，则理论上存在TLS风险。
在NHL患者中，莫妥珠单抗发生TLS的风险预计在具有巨大肿块(在TLS的背景下定义为筛选CT扫描中任何≥10cm的病灶)和治疗前乳酸脱氢酶(LDH)水平升高的患者中最高，特别是在存在脱水或肾功能受损的情况下。在CLL患者中，莫妥珠单抗发生TLS的风险预计在绝对淋巴细胞计数≥25×109/L或任何淋巴结病灶≥10cm的患者中最高，尤其是在存在脱水或肾功能受损的情况下。虽然与滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤和小细胞淋巴瘤相比，DLBCL、转化淋巴瘤和MCL可能具有更高的TLS风险(Cairo等人,Br J Haematol,149:578-586,2010)，但任何基于肿瘤类型的风险分层都将与疗法的有效性一起考虑(Howard等人,New Engl J Med,364(19),1844-1854,2011)。
由于莫妥珠单抗具有强大的B细胞杀伤潜力，因此所有患者都将根据以下预防指南接受TLS预防。
在因第1周期研究治疗施用(或对于E组为第2周期)而入院或在剂量递增后住院治疗时，应获取并且检查患者的血清化学和血液学实验室样品，并且根据下文所述的指南启动预防措施。
所有患者都将在每次莫妥珠单抗施用前接受TLS预防治疗，A组为C1D1，B组和E组为C1D1、C1D8、C1D15，并且E组为C2D1输注。预防指南包括以下内容：
·补液，其由在莫妥珠单抗的第一剂量前24小时至48小时开始摄入约2L/天至3L/天的液体组成。
–如果患者因施用研究治疗而住院治疗，则应在莫妥珠单抗施用结束时开始以150mL/小时至200mL/小时的速率进行IV补液，并且在此后持续至少24小时。
–如果患者在门诊接受研究治疗，则在莫妥珠单抗施用后至少24小时内，液体摄入量应维持在2L/天至3L/天。
–对于具有特殊医疗需求的个体，应考虑调整补液率。
·施用降尿酸药剂：
–别嘌呤醇(例如，在给药前72小时开始口服300mg/天，并且随后持续3天至7天)，用于根据研究者的判断判定为发生TLS的风险低或中等的患者。
–对于在莫妥珠单抗治疗前尿酸水平升高的患者，或被认为具有TLS高风险的患者：应施用拉布立酶(例如，在莫妥珠单抗的第一剂量前30分钟内0.2mg/kg IV，并且随后每天施用，持续最多5天)，除非有禁忌(USPI)。
–使用别嘌呤醇/拉布立酶治疗应按上述规定继续，或者如果观察到TLS的实验室证据，则持续至血清尿酸或其他实验室参数正常化。
–如果研究者认为使用别嘌呤醇或拉布立酶治疗是禁忌或由于其他原因不合适，则应联系医学监查员以获取进一步的指导。
感染
由于莫妥珠单抗预期的作用方式导致显著的B细胞耗竭，因此莫妥珠单抗可能与感染风险增加相关联。已在接受其他CD20定向疗法以及博纳吐单抗(USPI；USPI；/>USPI)的患者中报告了感染。因此，不应在存在活动性重度感染的情况下使用莫妥珠单抗。
研究者在考虑将莫妥珠单抗用于有复发性或慢性感染史或具有可能使患者易受感染的潜在病况的患者时应谨慎行事。在开始抗生素或其他治疗之前，感染的体征和症状应进行迅速评估并且适当采样用于细菌学调查。
应特别注意在先接受过显著免疫抑制治疗(诸如高剂量化学疗法)的患者。进行性多灶性白质脑病(PML)与用CD20定向疗法(包括利妥昔单抗和奥妥珠单抗)进行治疗相关联。任何出现新发神经系统表现的患者均应考虑PML的诊断，并且应咨询神经科医生，并且应根据临床指征进行诊断程序(包括脑部MRI和腰椎穿刺)。但是，应注意，莫妥珠单抗的初始剂量后新发的神经系统不良事件更有可能由于莫妥珠单抗的急性效应，因为与利妥昔单抗相关联的PML通常发生在长期暴露后(Carson等人,Blood,113(20):4834-4840,2009)。
血小板减少症
血小板减少症与其他CD20定向疗法以及博纳吐单抗(USPI)相关联。在研究GO29781中观察到莫妥珠单抗治疗后出现可逆性血小板减少症。
在食蟹猴中的莫妥珠单抗非临床试验中，血液学结果包括在莫妥珠单抗暴露的第一天内的WBC、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和血小板计数短暂减少，随后在第4天至第8天之间恢复或反弹恢复。
应密切监测患者的血小板减少症；应定期进行实验室检查，直至事件消退。根据机构实践输注血液制品(例如，输注血小板)由主治医师酌情决定。还应考虑使用所有可能使血小板减少症相关事件恶化的伴随疗法，诸如血小板抑制剂和抗凝剂。
对于3级或更高级别的治疗中出现的血小板减少症事件，应考虑剂量延迟和/或剂量调整。
肝酶升高和肝事件
据报告，使用博纳吐单抗(USPI)时肝酶升高，通常但不仅限于CRS的情况下。在CRS的情况之外，大约6％的患者发生了≥3级肝酶升高。几乎所有肝酶升高均在博纳吐单抗治疗中断或继续治疗时消退。一些肝酶升高已消退的患者成功重新用药，表明它是首剂效应而非直接毒性(/>Drug Approval Package)。在莫妥珠单抗治疗后，已观察到2级CRS的情况下的瞬时3级AST升高以及3级肝性脑病/LFT 4级升高。
在食蟹猴中的莫妥珠单抗非临床试验中，观察到血清总胆红素以及CRP、纤维蛋白原、PT和aPTT呈剂量依赖性增加，与莫妥珠单抗诱导的细胞因子释放和急性期蛋白反应一致，凝血系统活化程度最低。肝脏中可能与药物相关的显微镜检查结果包括单细胞肝细胞变性/坏死及门管区免疫细胞浸润。所有结果均示出可逆性的证据。
免疫原性(抗药物抗体)
与任何重组抗体一样，莫妥珠单抗可能引发免疫应答，并且患者可能会产生针对该分子的抗体。密切监测患者对莫妥珠单抗的任何潜在免疫应答，其可能影响该药剂的获益-风险特征。
肿瘤炎症/爆发
研究GO29781中报告了与肿瘤炎症/爆发相关联的不良事件。与莫妥珠单抗的作用机制一致，肿瘤爆发很可能是由于在莫妥珠单抗施用后T细胞流入肿瘤部位，并且可能与假性进展相关联。迄今为止观察到的与肿瘤爆发相关联的不良事件在初始莫妥珠单抗施用后发作的时间很短。在疾病进展后再次接受莫妥珠单抗治疗的患者中也可能发生肿瘤爆发。基于新出现的安全性数据，肿瘤爆发已表现为肿瘤疼痛、通过临床或放射学评定已知的淋巴结或结外病灶的大小增加，以及新的或恶化的胸腔积液。此外，根据肿瘤大小和解剖位置，肿瘤爆发可能对重要结构(包括气道、大血管、胃肠道(穿孔和出血的风险)和/或主要器官)造成大量影响。如果此类表现在时间上与早期莫妥珠单抗给药相关联，则治疗医师/研究者应将那些事件视为肿瘤爆发并且报告为“肿瘤爆发”或“肿瘤炎症”。对于在关键解剖部位具有肿瘤的患者，治疗医师/研究者应在莫妥珠单抗治疗前联系医学监查员讨论风险评定和缓解策略，并且应密切监测患者的肿瘤爆发。
D.评定不良事件的严重程度和因果关系
除非另有说明，否则使用NCI CTCAE(v4.0)的不良事件严重程度分级量表评定不良事件严重程度。表17用于评定NCI CTCAE中未明确列出的不良事件的严重程度。
表17.NCI CTCAE中未明确列出的事件的不良事件严重程度分级量表
NCI CTCAE＝美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准。注释：基于最新版本的NCI CTCAE(v5.0)。
工具性日常生活活动是指准备饭菜、购买杂货或衣服、使用电话、管理金钱等。
日常生活中的自理活动包括洗澡、穿衣和脱衣、自己饮食、上厕所和服药，这些都是由非卧床不起的患者进行的。
研究者应利用他们对患者的了解、事件周围的情况以及对任何潜在替代原因的评估来确定不良事件是否被认为与研究药物有关，相应地指出“是”或“否”。应考虑以下指南(另见表18)：
·事件发生与开始研究药物的时间关系
·事件的过程，特别考虑剂量减低、研究药物停用或重新引入研究药物(如果适用)的影响
·事件与研究药物或类似治疗的已知关联
·事件与所研究的疾病的已知关联
·患者存在风险因素或使用已知会增加事件发生率的伴随用药
·存在已知与事件发生相关的非治疗相关因素
表18.因果归因指南
对于接受联合疗法的患者，针对每个方案规定的疗法单独评定因果关系。
实例8.统计考虑和分析计划
A.样品体量的确定
GO29781试验的样本量基于本文所述的剂量递增规则。该研究的计划入组在剂量递增阶段大约有130例至226例患者(100例至166例NHL患者和30例至60例CLL患者)并且在扩展阶段大约有290例至520例患者。B组和E组的R/R DLBCL/trFL和R/R FL扩展队列各入组大约80例患者。
B.剂量递增阶段
该研究的剂量递增阶段主要设计用于评定安全性、耐受性和药代动力学。该试验最初使用单一患者剂量递增队列，但转换为基于上述标准的标准3+3设计。鉴于不同的潜在DLT率，表19提供了在3例患者中未观察到DLT或在6例患者中观察到≤1个DLT的概率。例如，如果真实潜在DLT率为20％，则在3例患者中未观察到DLT的机率为51％，且在6例患者中观察到≤1个DLT的机率为66％。
表19.观察到具有不同潜在DLT率的DLT的概率
C.剂量扩展阶段
该研究的剂量扩展阶段设计用于评定安全性和有效性信号。表20提供了当不良事件的真实潜在机率范围为1％至20％时，在10、20、40和80例患者中观察到至少一起不良事件的机率。例如，如果真实潜在不良事件发生率为5％，则在40例患者中观察到至少一起不良事件的机率为87％，并且在80例患者中为98％。
对于B组和E组的R/R DLBCL/trFL和R/R FL扩展队列，将估计完全缓解率，以及Clopper-Pearson精确95％ CI。
对于B组和E组的R/R DLBCL/trFL扩展队列：观察到的CR率为30％和35％，80例患者的样本量将分别产生(20％,41％)和(25％,46％)的95％ CI，即，排除低于20％的真实CR率。另外，在5％的双侧显著性水平下，80例患者将提供85％的功效来检测CR率从20％增加至35％(增加15％)。
对于B组和E组的R/R FL扩展队列：观察到的CR率为24％和28％，80例患者的样本量将分别产生(15％,35％)和(18％,39％)的95％CI，即，排除低于14％的真实CR率。另外，在5％的双侧显著性水平下，80例患者将提供83％的功效来检测CR率从14％增加至28％(增加14％)。
对于B组和E组的R/R FL扩展队列：观察到的CR率为24％和28％，80例患者的样本量将分别产生(15％,35％)和(18％,39％)的95％CI，即，排除低于14％的真实CR率。另外，在5％的双侧显著性水平下，80例患者将提供83％的功效来检测CR率从14％增加至28％(增加14％)。
申办方可以在B组和E组的R/R FL扩展队列中入组超过80例患者，以从至少60例难以用CD20疗法及烷化剂两者治疗的R/R FL患者中获得数据以进行统计分析。观察到的CR率为25％，60例患者的样本量将产生(15％，38％)的95％ CI；即排除低于8％的真实CR率。
将在研究的扩展阶段进行中期分析，以出于不可接受的毒性和无效性而暂停或停止患者入组。总之，在每个扩展队列中至少进行一次持续安全性监测，并且定期针对无效性进行中期分析。如果在扩展队列中出现不可接受的毒性或缓解率低于预期，则可以停止入组。
表20.10、20、40和80例患者的扩展队列的安全性信号检测
D.治疗组可比性总结
人口统计学和基线特征(诸如年龄、性别、体重、恶性肿瘤类型、恶性肿瘤持续时间和基线ECOG体能状态)使用连续变量的平均值、标准偏差、中位数和范围以及分类变量的比例进行总结。所有总结均总体并且按剂量水平和研究臂来呈现。
研究药物施用数据按剂量水平和研究臂进行总结。
最终分析基于直至研究中止时收集的患者数据。所有分析均基于安全性可评估群体(定义为接受任何量的研究治疗的患者)。所有总结均根据指定的剂量水平呈现。
E.安全性分析
安全性分析包括接受任何量的研究治疗的所有患者。
通过汇总不良事件、实验室检查结果的变化、ECG的变化、ADA的变化和生命体征的变化来评定安全性。
所有收集的不良事件数据均按指定的剂量水平和患者数量列出。在第1周期第1天治疗时或治疗后发生的所有不良事件按映射的术语、适合的同义词库水平和NCI CTCAEv4.0毒性等级进行汇总。此外，所有严重不良事件(包括死亡)均单独列出并且汇总。还单独列出导致治疗中止的DLT和不良事件。
F.药代动力学分析
莫妥珠单抗的单个和平均血清浓度相对于时间的数据按剂量水平制表并且绘图。通过估计总AUC、Cmax、Cmin、CL和Vss(酌情用于收集的数据)来汇总莫妥珠单抗的药代动力学。将这些参数的估计值制表并且汇总。评估了患者间变异性和药物积累。
在适用的情况下，对阿替利珠单抗和托珠单抗的血清谷值浓度和最大浓度进行汇总，酌情并且在数据允许的情况下进行。可考虑房室、非房室和/或群体方法。酌情进行额外的PK分析。
G.活性分析
由研究者评定的缓解评定数据、PFS和缓解持续时间按剂量水平、计划和研究臂对所有患者进行总结。估计客观缓解率(ORR)。研究者评定的客观缓解定义为CR或PR，如使用规范标准的研究者评定所确定。将缺失或无应答评定的患者归类为无应答者。
在研究者评定的客观缓解的患者中，缓解持续时间定义为从初始CR或PR至研究者确定的疾病进展或死亡的时间。如果患者在研究结束前未经历疾病进展或因任何原因导致的死亡，则缓解持续时间在末次肿瘤评定当天进行删失。
研究者评定的PFS定义为从研究治疗第一天(第1周期第1天)到研究者所确定的疾病进展或死亡(以先发生者为准)的时间。如果患者未经历PD或死亡，则PFS在末次肿瘤评定当天进行删失。
H.R/R DLBCL和转化的FL扩展队列以及R/R FL扩展队列在B组RP2D和E组RP2D的活性分析
主要功效终点
主要有效性终点为独立审查机构(IRF)评定的CR率，定义为基于使用NHL规范标准的IRF评定，最佳总体缓解为CR的患者的比例(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)。将缺失或无缓解评定的患者归类为非完全缓解者。
对接受治疗的患者群体与历史对照之间关于CR率的比较进行测试。假设R/RDLBCL和转化的FL扩展队列的对照CR率为20％(历史对照见表21)，并且假设R/R FL扩展队列的对照CR率为14％(历史对照见表22)。
表21.患有R/R DLBCL/转化的FL的患者的临床试验数据总结
/>
CR：完全缓解，作为最佳缓解；CRu：未确认的完全缓解，作为最佳缓解；CT：计算机断层扫描；DLBCL：弥漫性大B细胞淋巴瘤；FL：滤泡性淋巴瘤；NHL：非霍奇金淋巴瘤；ORR：客观缓解率；PET：正电子发射断层扫描；PR：部分缓解；R/R DLBCL：复发性/难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤。
利妥昔单抗加吉西他滨和奥沙利铂的数据来自Mounier等人,Haematologica,98:1726-1731,2013。匹杉琼的数据包括53例患有DLBCL的患者、10例患有转化的惰性淋巴瘤的患者和1例患有3级FL的患者(Pettengell等人,Lancet Oncol,13:696-706,2012)。利妥昔单抗加苯达莫司汀的数据来自Dang等人,Br J Haematol,doi:10.1111/bjh.14820[电子版优先印刷版发表],2017。博纳吐单抗的数据来自Viardot等人,Blood,127:1410-1416,2016和Goebeler等人,J Clin Oncol,34:1104-1111,2016。阿基仑赛的数据来自Neelapu等人,Blood,128:LBA-6,2016。帕罗托珠单抗维多汀加苯达莫司汀与利妥昔单抗的数据来自POLIVYTM USPI。
表22.先前用两线或更多线在先全身性疗法治疗的患有R/R FL的患者的临床试验数据总结
/>
CR：完全缓解，作为最佳缓解；mDOR：缓解持续时间的中位数；FL：滤泡性淋巴瘤；ORR：客观缓解率；mPFS：无进展存活期的中位数。
基于总体缓解率，艾代拉利司(Gopal等人,N Engl J Med,370:1008-1018,2014)和库潘尼西(ALIQOPATM；Dreyling等人,Ann Oncol,25:76-82,2017)加速获批用于该适应症。持续获批用于该适应症可能取决于验证性试验中对临床获益的验证和描述。
以下假设在B组RP2D和E组RP2D的每个R/R DLBCL和转化的FL扩展队列中以0.05的显著性水平进行检验：
Ho：CR率＝20％对Ha：CR率≠20％
以下假设在B组RP2D和E组RP2D的每个R/R FL扩展队列中以0.05的显著性水平进行检验：
Ho：CR率＝14％对Ha：CR率≠14％
提供了使用Clopper-Pearson方法计算CR率的精确95％置信区间。利用精确二项式检验评估B组RP2D的单一药剂莫妥珠单抗治疗或E组RP2D的莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合是否导致CR率的统计学显著增加。
次要功效终点
继发性有效性终点包括：
·研究者评定的CR率，定义为基于使用NHL规范标准的研究者评定，最佳总体缓解为CR的患者的比例(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)。提供了使用Clopper-Pearson方法计算CR率的精确95％置信区间。
·ORR，定义为基于使用NHL规范标准，最佳总体缓解为PR或CR的患者的比例(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)。ORR由IRF和研究者进行评定。提供了使用Clopper-Pearson方法计算ORR的精确95％置信区间。
·完全缓解的持续时间，定义为从最初出现记录的CR直至记录的疾病进展或任何原因引起的死亡(以先发生者为准)的时间。完全缓解的持续时间将由IRF和研究者使用NHL规范标准进行评定。提供了Kaplan-Meier估计值。利用Brookmeyer-Crowley方法构建完全缓解的中位持续时间的95％置信区间。
·缓解的持续时间，定义为从最初出现记录的PR或CR直至记录的疾病进展或任何原因引起的死亡(以先发生者为准)的时间。缓解的持续时间由IRF和研究者使用NHL规范标准进行评定。将提供Kaplan-Meier估计值。利用Brookmeyer-Crowley方法构建缓解的中位持续时间的95％置信区间。
·PFS，定义为从首次研究治疗到首次出现疾病进展或任何原因导致死亡(以先发生者为准)的时间。PFS由IRF和研究者使用NHL规范标准进行评定。提供了Kaplan-Meier估计值。利用Brookmeyer-Crowley方法构建缓解的中位PFS的95％置信区间。利用Kaplan-Meier方法估计6个月PFS和1年PFS，以及使用Greenwood公式的标准误差和相应的95％ CI。
·OS，定义为从首次研究治疗到任何原因导致死亡的日期的时间。提供了Kaplan-Meier估计值。利用Brookmeyer-Crowley方法构建缓解的中位OS的95％置信区间。利用Kaplan-Meier方法估计6个月OS和1年OS，以及使用Greenwood公式的标准误差和相应的95％ CI。
I.患者报告结局分析
对于所有调查问卷，患者报告结局(PRO)可评估群体包括NHL扩展队列中具有基线评定以及至少一次基线后评定的所有患者。EORTC QLQ-C30和FACT-Lym分量表根据使用者手册进行评分。计算所有时间点的汇总统计数据以及较基线评分的变化。使用重复测量混合模型检查每个队列的纵向特征。每个队列中还报告了从基线达到或超过每项量度的最小重要差异的患者比例。对于EQ-5D-5L，根据VAS和指数效用评分较基线的变化计算健康状态的汇总统计数据。将结果用于更完整的健康经济学数据分析。
J.探索性药效学分析
探索性药效学分析包括在可用时评定肿瘤组织和血液中的药效学生物标志物。酌情进行额外的药效学分析。
K.中期分析
对该研究的扩展部分进行持续安全性监测和中期分析，以指导在任何给定扩展队列中出现不可接受的毒性或扩展队列中的缓解率低于预期的情况下可能的提前停止入组。
利用后验概率方法(Thall和Simon,Biometrics,50(2):337-349,1994)评估扩展队列中的毒性(包括在剂量递增队列的DLT评定期间发生的DLT率)。如果在任何扩展队列中的任何时间，观察到的DLT数量表明真实DLT率≥20％的机率为大约80％，则可能会暂停对队列的累积，并且IMC将开会以确定是否应停止该队列的进一步入组和/或提供如本文所述的其他建议。
在每个扩展队列中，还定期进行至少一次针对无效性的中期分析。如果中期分析表明研究治疗的ORR低于历史对照，则可以停止入组扩展队列。具体地，如果使用具有非信息先验的后验机率方法，真实ORR≤25％的机率为大约80％，则可以停止入组。在所有情况下，基于无效性而停止入组扩展队列的决定均在与研究者协商后做出。
L.免疫原性分析
在使用莫妥珠单抗和阿替利珠单抗治疗之前、期间及之后，采用经过验证的筛选、滴定和确证分析来评定ADA。免疫原性分析群体由至少具有一项ADA评定的所有患者组成。如果患者在所有时间点均为ADA阴性，则认为患者为ADA阴性。如果患者在基线时为ADA阳性但没有任何基线后样品的滴度比基线样品的滴度高至少4倍，则认为患者不受治疗影响。如果患者在基线时为ADA阴性或缺失数据然后在研究药物施用后产生ADA应答，则认为患者具有治疗诱导的ADA应答。如果患者在基线时为ADA阳性并且一个或多个基线后样品的滴度比基线样品的滴度至少高4倍(即，至少0.60滴度单位)，则认为患者具有治疗增强的ADA应答。
ADA状态与安全性、有效性、PK和生物标志物终点之间的关系也可以酌情评定，并且经由亚组分析以描述性方式报告。
实例9.莫妥珠单抗的临床数据总结
研究GO29781中莫妥珠单抗的评估正在进行中。在本研究中，根据A组、B组和E组中的以下给药计划对莫妥珠单抗进行研究(注：不存在C组)。
·按第1周期非分次剂量计划作为单一药剂静脉内施用(A组)。
·按第1周期分步剂量计划作为单一药剂静脉内施用，递增第1周期第1天、第1周期第8天和第1周期第15天剂量水平，然后在后续周期的第1天施用最高剂量水平(B组)。
·按第1周期分步剂量计划作为单一药剂静脉内施用，并且从第2周期开始同时施用阿替利珠单抗(E组)。
A.安全性
已在A组给药计划中测试了0.05mg至2.8mg的剂量。E组给药计划的剂量递增正在进行中。基于剂量递增组中的任何给药计划，尚未达到莫妥珠单抗的最大耐受剂量(MTD)。
截至2020年1月21日，研究GO29781中共有432例患者接受过莫妥珠单抗治疗。最常观察到的与莫妥珠单抗相关的不良事件是CRS，发生在31％的安全性可评估患者中。这些事件中的大多数为使用改良的CRS分级系统(Lee等人,Blood,124(2):188-195,2014)的1级至2级，除了在B组中以1.0/2.0/13.5mg、1.0/2.0/27.0mg和1.0/2.0/60.0/30.0mg治疗的患者中观察到的四起3级事件，以及在B组中以1.0/2.0/60.0/30.0mg治疗的患者中观察到的一起4级事件。174例患者(40％)报告了严重不良事件；在90例患者(21％)中，研究者评定的严重不良事件与莫妥珠单抗有关。五十例患者经历了具有致命结局的不良事件：45例患者经历了恶性肿瘤进展(报告为不良事件)，1例患者患有噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)，1例患者患有肺炎，2例患者患有脓毒症，并且1例患者患有念珠菌脓毒症。
莫妥珠单抗诱导血浆IL-6的短暂升高，大多数患者在第1周期第1天剂量的4小时至6小时内出现峰值水平，并且在24小时时返回至基线(图10)的氨基酸序列。在研究GO29781的A组中，患者在所有周期接受单一剂量水平的莫妥珠单抗，对IL-6增加的幅度无明显的剂量依赖性。在B组和E组中，在第一剂量后观察到最高水平的IL-6，即使随后在双步分次期间以及以后的周期中施用更高剂量的莫妥珠单抗时也是如此。IL-6相对于基线的动力学以及倍数变化与AE的发生率相关，最显著的是CRS。经历CRS的患者在第一周期内表现出更高的IL-6峰值水平；但是，在具有和不具有CRS的患者之间存在明显重叠。IL-6缓解与安全性特征相结合，表明可使用分步给药方案施用可耐受且可能更有效的更高剂量的莫妥珠单抗。
截至2020年1月21日，在研究GO29781中治疗的B组患者中，未观察到治疗相关AE或3级AE患者与莫妥珠单抗剂量水平之间的明显关联，其中使用第1周期分步给药方案以单一药剂形式施用莫妥珠单抗。在B组患者中测试的不同剂量水平下观察到的CRS发生率提供于图11.这表明分步给药可能是一种有效的安全缓解策略，其还可提供非剂量依赖性暴露-安全性特征。A组和B组中的所有不良事件的总结可分别参见图12和13。
此外，在E组中观察到的不良事件表明，当皮下施用或与阿替利珠单抗组合施用莫妥珠单抗时，总体安全性特征并不比B组中在迄今为止测试的剂量水平下观察到的安全性特征更差。基于目前的数据，在E组中未观察到与单一药剂莫妥珠单抗显著不同的出乎意料或无法管理的毒性或与阿替利珠单抗相关联的已知毒性。
基于总体安全性、有效性和PK特征，已将B组第1天的莫妥珠单抗剂量水平固定为1mg，第8天的剂量水平固定为2mg，并且仅第15天的剂量水平继续剂量递增。截至2019年5月6日，1mg/2mg/60mg剂量水平已完成剂量限制性毒性(DLT)评定期。
B.活性
在截至2020年1月21日的临床截止日期的GO29781研究中，在所有治疗组的主要有效性群体的415例患者中，60例患者(39％)具有研究者评定的客观缓解(CR或部分缓解(PR))。总体而言，110例患者(27％)具有CR，76例患者(18％)具有PR，52例患者(13％)疾病稳定(SD)，并且160例患者(39％)发生疾病进展(PD)，作为研究者使用修订的恶性淋巴瘤缓解标准(Cheson等人,J Clin Oncol,25:579-586,2007)评定的最佳总体缓解。在A组(第1周期固定莫妥珠单抗给药；n＝33例患者)中，5例患者(15.2％)具有CR，1例患者(3％)具有PR，6例患者(18.2％)实现疾病稳定(SD)，并且20例患者(60.6％)发生疾病进展(PD)。在B组(第1周期递增莫妥珠单抗给药；n＝336例患者)中，92例患者(27％)具有CR，63例患者(19％)具有PR，41例患者(12％)实现疾病稳定(SD)，并且124例患者(37％)发生疾病进展(PD)。在E组(第1周期递增莫妥珠单抗给药和第2+周期莫妥珠单抗+阿替利珠单抗给药；n＝24例患者)中，8例患者(33％)具有CR，2例患者(8％)具有PR，4例患者(17％)实现疾病稳定(SD)，并且10例患者(42％)发生疾病进展(PD)。在惰性和侵袭性NHL组织学中观察到客观缓解，包括FL、DLBCL、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)、Richter转化、MCL、边缘区淋巴瘤(MZL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、转化的FL以及其他转化的惰性NHL。
C.临床药代动力学和免疫原性
来自A组(0.05mg至2.8mg固定剂量，每3周(Q3W)给药)和B组(第1/8/15天的0.4/1/2.8mg至1/2/60mg第1周期分步剂量，然后是Q3W给药)的临床PK数据在正在进行的I/Ib期(GO29781)研究中进行了分析。
莫妥珠单抗血清药物浓度在输注结束时(大约4小时)达到Cmax，并且以多阶段方式下降，α半衰期为约3天至4天，并且表观半衰期(t1/2)为约6天至11天。表观t1/2估计值比IgG1抗体21天的典型t1/2短，并且可能反映了在所有测试剂量水平下由于靶标介导的药物处置对药物清除的影响。在测试的剂量范围内，莫妥珠单抗PK暴露以近似剂量成比例的方式增加。观察到中等药代动力学变异性。通过具有时间依赖性清除率的2室PK模型很好地描述了莫妥珠单抗IV施用后的群体PK。当与阿替利珠单抗组合给药时，莫妥珠单抗的PK保持相似。
在迄今为止接受测试的352例患者中，1例患者检测到针对莫妥珠单抗的抗药物抗体(ADA)。该患者完成了8个周期的莫妥珠单抗SC治疗并且在此期间呈ADA阴性。疾病进展后，患者接着再接受莫妥珠单抗与阿替利珠单抗的组合治疗额外的13个周期，并且患者在组合治疗期间在第2、3、4、6、8和12周期出现莫妥珠单抗ADA。针对莫妥珠单抗的ADA的存在对药物暴露和安全性无明显影响。该患者的阿替利珠单抗抗体测试呈阴性。
VIII.其他实施例
尽管为了清楚理解的目的先前已通过举例说明和实施方案相当详细地描述了本发明，但是这些描述和实施方案不应解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均全文以引用方式明确地并入。
序列表
<110> 基因泰克公司 (Genentech, Inc.)
<120> 用抗 CD20/抗 CD3 双特异性抗体进行治疗的给药
<130> 50474-234WO3
<150> US 63/188,545
<151> 2021-05-14
<150> US 63/109,863
<151> 2020-11-04
<160> 54
<170> PatentIn 版本 3.5
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Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
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<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5 10
<210> 34
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn
1 5 10 15
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 39
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 40
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
1 5 10
<210> 41
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 44
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 44
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 45
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 46
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 47
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 48
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 49
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 50
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 51
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 52
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 53
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 54
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (138)

1.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，所述方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于约50mg；并且
(b)所述第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述C1D3为50mg至200mg。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述C1D3为约60mg。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述C1D1为约1mg。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述C1D2为约2mg。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述C2D1在量上与所述C1D3约等同。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中分别在或约在所述第一给药周期的第1天、第8天和第15天向所述受试者施用所述C1D1、所述C1D2和所述C1D3。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在所述第二给药周期的第1天向所述受试者施用所述C2D1。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述第一给药周期和所述第二给药周期为21天给药周期。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述第一给药周期为21天给药周期并且所述第二给药周期为28天给药周期。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中在所述第二给药周期之后，所述给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。
12.根据权利要求11所述的方法，其中在所述第二给药周期之后，所述给药方案包括6至15个额外给药周期。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述额外给药周期为21天给药周期。
14.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述额外给药周期为28天给药周期。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法，其中所述额外给药周期中的一个或多个包括所述双特异性抗体的额外单一剂量。
16.根据权利要求15所述的方法，其中在每个额外给药周期的第1天向所述受试者施用所述双特异性抗体的所述额外单一剂量。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量大于所述C1D1并且小于所述C1D3和/或所述C2D1。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量为所述C1D3和/或所述C2D1的20％至80％。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量为所述C1D3和/或所述C2D1的约50％。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量为约30mg。
21.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，所述方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于约20mg；
(b)所述第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1在量上与所述C1D3约等同；并且
(c)所述第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中所述C3D1大于所述C1D1并且小于所述C2D1。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述C1D3和所述C2D1各自为20mg至200mg。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述C1D3和所述C2D1各自为约60mg。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，其中所述C3D1为所述C2D1的20％至80％。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述C3D1为所述C2D1的约50％。
26.根据权利要求21至25中任一项所述的方法，其中所述C3D1为约30mg。
27.根据权利要求21至26中任一项所述的方法，其中所述C1D1为约1mg。
28.根据权利要求21至27中任一项所述的方法，其中所述C1D2为约2mg。
29.根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中分别在或约在所述第一给药周期的第1天、第8天和第15天向所述受试者施用所述C1D1、所述C1D2和所述C1D3。
30.根据权利要求21至29中任一项所述的方法，其中在所述第二给药周期的第1天向所述受试者施用所述C2D1，并且在所述第三给药周期的第1天向所述受试者施用所述C3D1。
31.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中所述第一给药周期、所述第二给药周期和所述第三给药周期为21天给药周期。
32.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中所述第一给药周期为21天给药周期，并且所述第二给药周期和所述第三给药周期为28天给药周期。
33.根据权利要求21至32中任一项所述的方法，其中在所述第三给药周期之后，所述给药方案进一步包括一个或多个额外给药周期。
34.根据权利要求33所述的方法，其中在所述第三给药周期之后，所述给药方案包括5至14个额外给药周期。
35.根据权利要求33或34所述的方法，其中所述额外给药周期为21天给药周期。
36.根据权利要求33或34所述的方法，其中所述额外给药周期为28天给药周期
37.根据权利要求33至36中任一项所述的方法，其中所述额外给药周期中的一个或多个包括所述双特异性抗体的额外单一剂量。
38.根据权利要求37所述的方法，其中在每个额外给药周期的第1天向所述受试者施用所述双特异性抗体的所述额外单一剂量。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量在量上与所述C3D1约等同。
40.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，所述方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1在量上与所述C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中所述C3D1大于所述C1D1并且小于所述C2D1；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1在量上为约等同的。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述C1D3和所述C2D1各自为20mg至200mg。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述C1D3和所述C2D1各自为约60mg。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述C3D1为所述C2D1的20％至80％。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述C3D1为所述C2D1的约50％。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的方法，其中所述C3D1为约30mg。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的方法，其中所述C1D1为约1mg。
47.根据权利要求40至46中任一项所述的方法，其中所述C1D2为约2mg。
48.根据权利要求40至47中任一项所述的方法，其中分别在或约在所述第一给药周期的第1天、第8天和第15天向所述受试者施用所述C1D1、所述C1D2和所述C1D3。
49.根据权利要求40至48中任一项所述的方法，其中分别在所述第二给药周期至所述第八给药周期的第1天向所述受试者各自施用所述C2D1至所述C8D1。
50.根据权利要求40至49中任一项所述的方法，其中给药周期为21天给药周期。
51.根据权利要求40至49中任一项所述的方法，其中所述第一给药周期为21天给药周期，并且所述第二给药周期至所述第八给药周期为28天给药周期。
52.根据权利要求40至51中任一项所述的方法，其中在所述第八给药周期之后，所述给药方案包括一个或多个额外给药周期。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述额外给药周期为21天给药周期。
54.根据权利要求52所述的方法，其中所述额外给药周期为28天给药周期。
55.根据权利要求52至54中任一项所述的方法，其中所述额外给药周期中的一个或多个包括所述双特异性抗体的额外单一剂量。
56.根据权利要求55所述的方法，其中在每个额外给药周期的第1天向所述受试者施用所述双特异性抗体的所述额外单一剂量。
57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述双特异性抗体的所述额外单一剂量在量上与所述C3D1至所述C8D1中的任一者约等同。
58.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，所述方法包括在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约1mg，所述C1D2为约2mg，并且所述C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1各自为约30mg。
59.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者的方法，所述方法包括在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约1mg，所述C1D2为约2mg，并且所述C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1各自为约30mg。
60.根据权利要求1至59中任一项所述的方法，其中所述受试者接受过针对所述CD20阳性细胞增殖性疾患的在先全身性疗法。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述受试者接受过针对所述CD20阳性细胞增殖性疾患的一线全身性疗法和二线全身性疗法。
62.根据权利要求60或61所述的方法，其中所述受试者在所述在先全身性疗法的24个月内已表现出所述CD20阳性细胞增殖性疾患的进展。
63.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述在先全身性疗法包括抗CD20抗体。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗CD20抗体为利妥昔单抗。
65.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗CD20抗体为奥妥珠单抗。
66.根据权利要求60至65中任一项所述的方法，其中所述在先全身性疗法包括化学治疗剂。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述化学治疗剂为烷化剂。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述烷化剂为苯达莫司汀。
69.根据权利要求66所述的方法，其中所述化学治疗剂为来那度胺。
70.根据权利要求60至69中任一项所述的方法，其中所述在先全身性疗法包括放射免疫疗法。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述放射免疫疗法为替伊莫单抗。
72.根据权利要求60至71中任一项所述的方法，其中所述在先全身性疗法包括磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂选自由以下各项组成的组：艾代拉利司、阿培利司、库潘尼西和度维利塞。
74.根据权利要求60至73中任一项所述的方法，其中所述在先全身性疗法包括CAR-T疗法。
75.根据权利要求1至74中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
76.根据权利要求1至75中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体静脉内施用。
77.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，所述方法包括在至少包括第一给药周期和第二给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于50mg；并且
(b)所述第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)。
78.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，所述方法包括在至少包括第一给药周期、第二给药周期和第三给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于约20mg；
(b)所述第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1在量上与所述C1D3约等同；并且
(c)所述第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中所述C3D1大于所述C1D1并且小于所述C2D1。
79.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，所述方法包括在包括八个或更多个给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约0.02mg至约2.0mg，所述C1D2为约0.05mg至约4.0mg，并且所述C1D3大于约20mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1在量上与所述C1D3约等同；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)，其中所述C3D1大于所述C1D1并且小于所述C2D1；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1在量上为约等同的。
80.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，所述方法包括在包括八个或更多个21天给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约1mg，所述C1D2为约2mg，并且所述C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1各自为约30mg。
81.一种治疗患有CD20阳性细胞增殖性疾患的受试者群体的方法，所述方法包括在包括21天给药周期和七个或更多个28天给药周期的给药方案中向所述受试者施用与CD20和CD3结合的双特异性抗体，其中：
(a)第一21天给药周期包括所述双特异性抗体的第一剂量(C1D1)、第二剂量(C1D2)和第三剂量(C1D3)，其中所述C1D1为约1mg，所述C1D2为约2mg，并且所述C1D3为约60mg；
(b)第二给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C2D1)，其中所述C2D1为约60mg；
(c)第三给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C3D1)；
(d)第四给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C4D1)；
(e)第五给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C5D1)；
(f)第六给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C6D1)；
(g)第七给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C7D1)；并且
(h)第八给药周期包括所述双特异性抗体的单一剂量(C8D1)，其中所述C3D1至所述C8D1各自为约30mg。
82.根据权利要求77至81中任一项所述的方法，其中所述受试者群体具有完全缓解率，其中所述完全缓解率为所述群体中具有完全缓解的受试者的比率，并且其中所述完全缓解率为至少约15％。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述完全缓解率为至少约25％。
84.根据权利要求83所述的方法，其中所述完全缓解率为至少约35％。
85.根据权利要求84所述的方法，其中所述完全缓解率为至少约45％。
86.根据权利要求77至85中任一项所述的方法，其中所述群体具有客观缓解率，其中所述客观缓解率为所述群体中具有客观缓解的受试者的比率，并且其中所述客观缓解率为至少约60％。
87.根据权利要求77至86中任一项所述的方法，其中在治疗开始后约20个月的客观缓解率为至少约70％。
88.根据权利要求77至87中任一项所述的方法，其中在治疗开始后约24个月的客观缓解率为至少约75％。
89.根据权利要求77至88中任一项所述的方法，其中所述受试者群体具有中位缓解持续时间(mDOR)，其中所述mDOR为所述群体中的受试者的缓解持续时间的中位数，并且其中mDOR为至少约12个月。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述mDOR为至少约20个月。
91.根据权利要求77至90中任一项所述的方法，其中所述受试者群体具有在所述群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率，并且其中所述群体中具有至少12个月的DOR的受试者的比率为至少约60％。
92.根据权利要求77至91中任一项所述的方法，其中在施用所述双特异性抗体后，所述受试者群体表现出细胞因子释放综合征，并且其中所述受试者群体中所述细胞因子释放综合征的比率小于或等于约40％。
93.根据权利要求92所述的方法，其中所述受试者群体中细胞因子释放综合征的所述比率小于或等于约10％。
94.根据权利要求77至93中任一项所述的方法，其中具有2级或更高级别(如美国移植和细胞疗法学会，2018；ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率小于或等于约20％。
95.根据权利要求94所述的方法，其中具有2级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的所述比率小于或等于约5％。
96.根据权利要求77至95中任一项所述的方法，其中具有3级或更高级别(如ASTCT所定义)的细胞因子释放综合征的比率为约0％。
97.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体静脉内施用。
98.根据权利要求1至97中任一项所述的方法，其中所述CD20阳性细胞增殖性疾患为B细胞增殖性疾患。
99.根据权利要求1至98中任一项所述的方法，其中所述CD20阳性细胞增殖性疾患为复发性或难治性B细胞增殖性疾患。
100.根据权利要求1至99中任一项所述的方法，其中所述CD20阳性细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)或慢性淋巴样白血病(CLL)。
101.根据权利要求100所述的方法，其中所述NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
102.根据权利要求101所述的方法，其中所述DLBCL为Richter转化。
103.根据权利要求100所述的方法，其中所述NHL为滤泡性淋巴瘤(FL)。
104.根据权利要求103所述的方法，其中所述FL为1级、2级、3a级或3b级FL。
105.根据权利要求103或104所述的方法，其中所述FL为转化的FL。
106.根据权利要求100所述的方法，其中所述NHL为套细胞淋巴瘤(MCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)。
107.根据权利要求1至106中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，所述第一结合结构域包含以下六个高变区(HVR)：
(a)HVR-H1，其包含GYTFTSYNMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；
(b)HVR-H2，其包含AIYPGNGDTSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；
(c)HVR-H3，其包含VVYYSNSYWYFDV(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列；
(d)HVR-L1，其包含RASSSVSYMH(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列；
(e)HVR-L2，其包含APSNLAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列；以及
(f)HVR-L3，其包含QQWSFNPPT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列。
108.根据权利要求1至107中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含含有第一结合结构域的抗CD20臂，所述第一结合结构域包含(a)重链可变(VH)结构域，其包含与SEQID NO:7的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)轻链可变(VL)结构域，其包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
109.根据权利要求108所述的方法，其中所述第一结合结构域包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL结构域。
110.根据权利要求1至109中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，所述第二结合结构域包含以下六个HVR：
(a)HVR-H1，其包含NYYIH(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列；
(b)HVR-H2，其包含WIYPGDGNTKYNEKFKG(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列；
(c)HVR-H3，其包含DSYSNYYFDY(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列；
(d)HVR-L1，其包含KSSQSLLNSRTRKNYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列；
(e)HVR-L2，其包含WASTRES(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列；以及
(f)HVR-L3，其包含TQSFILRT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。
111.根据权利要求1至110中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含含有第二结合结构域的抗CD3臂，所述第二结合结构域包含(a)VH结构域，其包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；(b)VL结构域，其包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；或(c)如(a)中的VH结构域和如(b)中的VL结构域。
112.根据权利要求111所述的方法，其中所述第二结合结构域包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH结构域和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL结构域。
113.根据权利要求1至112中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含(a)抗CD20臂，其包含(i)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；以及(b)抗CD3臂，其包含(i)重链，所述重链包含与SEQ IDNO:53的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，和(ii)轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
114.根据权利要求113所述的方法，其中(a)所述抗CD20臂包含含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链，并且(b)所述抗CD3臂包含含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链。
115.根据权利要求1至114中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为人源化抗体。
116.根据权利要求1至115中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为嵌合抗体。
117.根据权利要求1至116中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为结合CD20和CD3的抗体片段。
118.根据权利要求117所述的方法，其中所述抗体片段选自由以下各项组成的组：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段。
119.根据权利要求1至116中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为全长抗体。
120.根据权利要求1至116和119中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为IgG抗体。
121.根据权利要求120所述的方法，其中所述IgG抗体为IgG1抗体。
122.根据权利要求120或121所述的方法，其中所述IgG抗体在氨基酸残基N297(EU编号)处包含导致糖基化的缺失的突变。
123.根据权利要求122所述的方法，其中在氨基酸残基N297处的所述突变为取代突变。
124.根据权利要求122或123所述的方法，其中在氨基酸残基N297处的所述突变降低Fc区的效应子功能。
125.根据权利要求122至124中任一项所述的方法，其中所述突变为N297G或N297A突变。
126.根据权利要求121至123中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在所述Fc区中包含降低效应子功能的突变。
127.根据权利要求126所述的方法，其中所述突变为取代突变。
128.根据权利要求127所述的方法，其中所述取代突变在氨基酸残基L234、L235、D265和/或P329(EU编号)处。
129.根据权利要求128所述的方法，其中所述取代突变选自由以下各项组成的组：L234A、L235A、D265A和P329G。
130.根据权利要求1至116和118至129中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含一个或多个重链恒定结构域，其中所述一个或多个重链恒定结构域选自第一CH1(CH11)结构域、第一CH2(CH21)结构域、第一CH3(CH31)结构域、第二CH1(CH12)结构域、第二CH2(CH22)结构域和第二CH3(CH32)结构域。
131.根据权利要求130所述的方法，其中所述一个或多个重链恒定结构域中的至少一个与另一个重链恒定结构域配对。
132.根据权利要求130或131所述的方法，其中CH31和CH32结构域各自包含突起或腔，并且其中CH31结构域中的所述突起或所述腔分别可定位在CH32结构域中的所述腔或所述突起中。
133.根据权利要求132所述的方法，其中所述CH31和CH32结构域在所述突起与所述腔之间的界面处相接。
134.根据权利要求108或109所述的方法，其中所述抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变(EU编号)。
135.根据权利要求111或112所述的方法，其中所述抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
136.根据权利要求113或114所述的方法，其中(a)所述抗CD20臂进一步包含T366W和N297G取代突变，并且(b)所述抗CD3臂进一步包含T366S、L368A、Y407V和N297G取代突变(EU编号)。
137.根据权利要求1至106中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体为莫妥珠单抗。
138.根据权利要求1至137中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
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