KR20210119448A

KR20210119448A - Cd31 경쟁인자(competitor) 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20210119448A
Application number: KR1020217026266A
Authority: KR
Inventors: 로렌스 브레삭; 세르주 게레이로; 다미앙 툴로르주
Original assignee: 앙세파
Priority date: 2019-01-23
Filing date: 2020-01-23
Publication date: 2021-10-05
Also published as: BR112021014574A2; JP2022523047A; SG11202107941TA; WO2020152290A1; MX2021008672A; AU2020211728A1; ZA202105154B; CA3127520A1; CN113614107A; US20220089765A1; EP3914616A1; IL284962A

Abstract

본 발명은 단리된 항-사람 CDS 8 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 이를 암호화하는 핵산 및 발현 벡터에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 신경변성 질환, 신경염증 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 눈 질환, 노화-관련 질환, 암 및 전이로부터 선택된 질환을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, CDS 8 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물에 관한 것이다.

Description

CD31 경쟁인자(COMPETITOR) 및 이의 용도

발명의 분야

본 발명은 질환의 예방 및/또는 치료 분야에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 질환의 예방 및/또는 치료에 유용한 화합물에 관한 것이며, 상기 화합물은 CD31의 경쟁인자(competitor)이다.

배경

혈소판 내피 세포 부착 분자-1(Platelet endothelial cell adhesion molecule)-1(PECAM-1)으로 또한 공지된 CD31은 6개의 세포외 면역글로불린(Ig)-유사 동족체 도메인, 19개 잔기 막관통 도메인(transmembrane domain), 및 118개 잔기 세포질성 테일(cytoplasmic tail)로 이루어진 130 kDa 제I형 막관통 당단백질이다(Newman and Newman, 2003. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23:953-964). 따라서, CD31은 세포 부착 분자의 Ig 상과(superfamily)에 속한다. CD31은 Ig-유사 도에인 1뿐만 아니라 2개의 다른 리간드, αVβ3 인테그린 및 CD38을 포함하는 특이항체의 상호작용을 통해, Ig-유사 도메인(Ig-like domain) 1-3을 포함하는 이호성 상호작용(heterophilic interaction)을 통해 자체적으로 결합할 수 있다(Newman, 1997. J Clin Invest. 99(1):3-8).

CD31 발현은 내피 세포에서 주로 관찰되며, 여기서 이는 구성적 마커로서 뿐만 아니라(Kalinowska & Losy, 2006. Eur J Neurol. 13(12):1284-90), 대부분 혈소판, 단핵구, 호중구, T 및 B 세포 서브세트(subset)를 포함하는 조혈 계통의 비-적혈구 세포로 고려된다(Wang et al., 2003. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 284(3):H1008-17). CD31 특이항체의 상호작용은 내피 세포 세포간 연결부의 주요 성분이며, 이는 또한 백혈구-내피 이행(leukocyte-endothelial transmigration)(누출(diapedesis))의 공정에 관련되어, 염증 동안 조직내로 백혈구의 침투를 허용한다(Ilan & Madri, 2003. Curr Opin Cell Biol. 15(5):515-24).

CD31은 메탈로프로테이나제-의존성 절단 후, 막 형태 및 가용성 형태 둘 모두 하에 발견된다(Ilan et al., 2001. FASEB J. 15(2):362-72). 가용성 CD31(sCD31)의 증가된 순환 수준은 일부 염증성 질환, 예를 들면, 죽상경화증 및 패혈증에서 관찰되었고(Feng et al., 2016. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 20(19):4082-4088; Kjaergaard et al., 2016. APMIS. 124(10):846-55), 이는 sCD31이 음성 피드백 루프 양식(negative feedback loop pattern)에서 추가의 백혈구 이행을 감소시키는데 관련되어 있다는 사실을 반영할 수 있다(Muller et al., 1993. J Exp Med. 178(2):449-60). 흥미롭게도, 증가된 뇌척수액(CSF) sCD31 수준은 또한 중증 신경변성 질환, 예를 들면, 다발 경화증(Losy et al., 1999. J Neuroimmunol. 99(2):169-72, Kuenz et al., 2005. J Neuroimmunol. 167(1-2):143-9), HIV-뇌염(Eugenin et al., 2006. J Leukoc Biol. 79(3):444-52), 신생물딸림성 뇌-근육-다신경증(paraneoplastic encephalo-myelo-polyneuropathy)(Dziewulska et al., 2000. Folia Neuropathol. 38(1):29-33), 뿐만 아니라 대뇌 허혈(cerebral ischemia)(Zaremba and Losy, 2002. Acta Neurol Scand. 106(5):292-8)에서 관찰되었다. 이러한 증가된 뇌 sCD31 수준의 일반적인 이해는 이것이 혈액-뇌 장벽(blood-brain barrier)(BBB)의 파괴를 나타내며, 이는 임의의 신경-염증 반응에 대해 전형적이다(Kalinowska and Losy, 2006. Eur J Neurol. 13(12):1284-90).

그러나, 허혈성 뇌졸중(ischemic stroke) 후 뇌 sCD31 수준은 (i) 신경학적 뇌졸중 중증도(neurological stroke severity) 및 (ii) 기능 장애(functional disability)의 정도와 긍정적으로 관련된 것으로 밝혀졌다(Zaremba and Losy, 2002. Central-European J Immunol. 27:90-96). 따라서, 본 출원인은 sCD31이 신경변성 과정에 활성적으로 관여하였는지에 대해 의문을 품었다. 실제로, sCD31은 또한 뉴우런(neuron)에 대해 자체적으로 독성일 수 있다. 예측치않게도, 출원인은 sCD31이 독성이 아니지만, 매우 대조적으로 시험관내에서 뉴우런을 강력하게 보호하였음을 발견하였다. 이러한 결과는 뇌에서 CD31 발현이 BBB의 내피 세포에 한정되므로 특히 놀라운 것이다(Williams et al., 1996. J Neurosci Res. 45(6):747-57). sCD31의 신경보호 효과는 중화 클론(neutralizing clone) Moon-1 항-CD31 항체의 존재하에서 뿐만 아니라 길항적 항-CD38 항체(클론 OKT10 또는 AT13/5)에 의해서도 길항되었으며, sCD31의 신경보호 효과가 이의 리간드 CD38과의 상호작용을 통해 매개됨을 입증한다. 더욱이, sCD31의 신경보호 효과는 sCD31과 CD38 사이의 상호작용을 모사(mimic)하는 것으로 이미 밝혀진 작용적(길항성) 항-CD38 항체에 의해 재현된다(Deaglio et al., 1998. J Immunol. 160(1):395-402). 특히, 작용적 항-CD38 항체(클론 HB7)의 신경보호 효과는, sCD31의 효과와 같이, 길항적 항-CD38 항체(클론 OKT10 또는 AT13/5)의 존재하에서 억제되었다.

CD38은 긴 C-말단 세포외 도메인 및 짧은 N-말단 세포질성 도메인을 지닌 45 kDa 제II형 막관통 당단백질이다. CD38은 수 개의 생물학적 활성, 예를 들면, 내재화(internalization)를 통한 수용체-매개된 기능, 타이로신 포스포릴화-매개된 기능 및 효소-매개된 기능을 포함한다. 또한, 일부 특이적인 항-CD38 항체는 제WO2018224683호에 개시된 바와 같이, 암의 치료시 관심있는 것(to be of interest)으로 보고되었다. 본 출원인은 본원에서, sCD31 또는 작용적 항-CD38 항체(클론 HB7)의 신경보호 효과는 타이로신 포스포릴화가 억제된 경우 길항되었음을 발견하였다.

요약

본 발명은 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하며; 바쿠올린-1의 존재하에서 억제되는, 세포내에서의 리소좀 세포외유출(lysosomal exocytosis)을 유도한다.

일 구현예에서, 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 모노클로날(monoclonal)이다.

일 구현예에서, 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 사람화되어 있다.

일 구현예에서,

a) 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄의 가변 영역(HCVR)은 3개의 다음의 상보성 결정 영역(complementary-determining region; CDR):

- V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4),

- V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5), 및

- V _H -CDR3: X₄X₅X₆X₇X₈YX₉X₁₀X₁₁X₁₂GMDV(서열 번호: 6)을 포함하고;

상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄(LCVR)의 가변 영역은 3개의 다음의 CDR을 포함한다:

- V _L -CDR1: AGTSSDVGGX₁₃X₁₄X₁₅VS(서열 번호: 21),

- V _L -CDR2: X₁₆DSX₁₇RPS(서열 번호: 22), 및

- V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23);

여기서:

X₁은 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₄는 Ser(S) 및 빈 위치(empty position)로부터 선택되고;

X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)로부터 선택되고;

X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)으로부터 선택되고;

X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 상기 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:

- 서열 번호: 7을 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 10을 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 15를 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 24를 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 29를 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 V_L-CDR3;

서열 번호: 8을 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 11을 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 16를 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 25를 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 VL-CDR3;

서열 번호: 9를 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 12를 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 17을 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 25를 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 V_L-CDR3;

서열 번호: 7을 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 13을 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 19를 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 27을 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 32를 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 V_L-CDR3;

서열 번호: 9를 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 14를 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 20을 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 28을 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 V_L-CDR3; 또는

서열 번호: 9를 갖는 V_H-CDR1, 서열 번호: 14를 갖는 V_H-CDR2, 서열 번호: 16을 갖는 V_H-CDR3, 서열 번호: 28을 갖는 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 갖는 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 갖는 V_L-CDR3를 포함한다.

- 서열 번호: 33을 갖는 HCVR 및 서열 번호: 39를 갖는 LCVR;

- 서열 번호: 34를 갖는 HCVR 및 서열 번호: 40을 갖는 LCVR;

- 서열 번호: 35를 갖는 HCVR 및 서열 번호: 40을 갖는 LCVR;

- 서열 번호: 36을 갖는 HCVR 및 서열 번호: 41을 갖는 LCVR;

- 서열 번호: 37을 갖는 HCVR 및 서열 번호: 42를 갖는 LCVR; 또는

- 서열 번호: 38을 갖는 HCVR 및 서열 번호: 42를 갖는 LCVR을 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화(encoding)하는 핵산에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터(vector)에 관한 것이다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서, 신경변성 질환(neurodegenerative disease); 신경염증 질환(neuroinflammatory disease); 염증 질환(inflammatory disease); 자가면역 질환(autoimmune disease); 대사 질환(metabolic disease); 눈 질환(ocular disease); 노화-관련 질환(age-related disease); 및 암(cancer) 및 전이(metastasis)로부터 선택된 질환의 예방 및/또는 치료시 사용하기 위한, CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 상기 질환은 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis); 파킨슨 질환(Parkinson's disease) 및 관련 장애; 알츠하이머 질환(Alzheimer's disease) 및 관련 장애; 헌팅톤 질환(Huntington disease); 다발 경화증(multiple sclerosis); 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis); 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus); 당뇨병(diabetes); 비만(obesity); 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis); 노화-관련 황반 변성(age-related macular degeneration); 및 녹내장으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 적어도 하나의 소염 사이토킨(anti-inflammatory cytokine)의 수준을 증가시키는데 사용하기 위한, CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 상기 소염 사이토킨은 인터루킨-10(IL-10)이다.

일 구현예에서, 본 발명의 임의의 방법에서 사용하기 위한 화합물은 펩타이드, 키메라 펩타이드(chimeric peptide), 항체, 이의 항원-결합 단편, 항원-결합 항체 모사체(mimetic), 올리고뉴클레오타이드 및 소 유기 분자로부터 선택되고; 상기 화합물은:

- 게니스테인의 존재하에서 억제되는, 세포내에서 별개의 세포질성 기질의 타이로신 포스포릴화를 유도하고/하거나;

- 바쿠올린-1의 존재시 억제되는, 세포내에서 리소좀 세포외배출을 유도한다.

일 구현예에서, 본 발명의 임의의 방법에서 사용하기 위한 화합물은 본 발명에 따른 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

일 구현예에서, 본 발명의 임의의 방법에서 사용하기 위한 화합물은:

- 사람 CD31의 Ig-유사 도메인 1-3을 포함하는 펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 315번을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체; 또는

- 면역글로불린의 Fc 도메인에, 사람 혈청 알부민에, 바람직하게는 사람 혈청 알부민의 도메인 III에, 또는 트랜스페린에 융합된, 사람 CD31의 Ig-유사 도메인 1-3을 포함하는 키메라 펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 315번을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체이다.

정의

달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 관련 분야에서 기술자에게 일반적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다. 편의상, 명세서, 실시예 및 청구범위에 사용된 특정 용어 및 구의 의미가 제공된다.

본원에 사용된 바와 같은 "아피틴(Affitin)"은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 지닌 인공 단백질을 지칭한다. 이들은 고세균 도메인(archaeal domain)에 속하는 미생물인, 설폴로부스 악시도칼다리우스(Sulfolobus acidocaldarius)에서 발견된, DNA 결합 단백질 Sac7d로부터 구조적으로 유래된다. Sac7d의 결합 표면에서 아미노산을 무작위처리(randomizing)함으로써, 예컨대, Sac7d의 결합 계면의 11개 잔기의 무작위적 치환에 상응하는 변이체를 생성함으로써, 아피틴 라이브러리를 생성시키고 수득되는 단백질 라이브러리를 리보소옴 디스플레이의 라운드(round)에 적용시킴으로써, 친화성을 다양한 표적, 예를 들면, 펩타이드, 단백질, 바이러스 및 세균에 대해 지시할 수 있다. 아피틴은 항체 모사체이며 생명공학에서 도구로 개발되고 있다. 이는 또한 다양한 효소에 대한 특이적인 억제제로서 사용되었다(Krehenbrink et al., 2008. J Mol Biol. 383(5):1058-68). 기술자는 당해 분야에 공지된, 특히 국제 특허원 제WO2008068637호 및 상기 인용된 공보에 개시된 바와 같은 필요한 결합 특성을 지닌 아피틴, 특히 파아지 디스플레이(phage display)의 생성 및/또는 리보솜 디스플레이 라이브러리의 생성 및 본원에 개시된 바와 같은 항원을 사용한 이의 스크리닝을 용이하게 개발할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 "항체" 또는 "면역글로불린"은 임의의 관련된 특이적인 면역반응성을 지니거나 지니지 않고 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄의 조합을 갖는 단백질을 지칭한다. "항체"는 목적한 항원에 대해 유의적으로 공지된 특이적인 면역반응성 활성을 갖는 이러한 조립체(assembly)를 지칭한다. 이 용어는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 재조합 항체, 이특이적 항체, 다특이적 항체(multispecific antibody) 및 변형된 항체를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 공지된 방법을 사용하여 변형시킨 항체 또는 항체 결합 단편을 포함하는 것으로 또한 이해될 것이다. 예를 들면, 생체내(in vivo)에서 청소율(clearance)을 지연시키고 보다 바람직한 약동학적 프로파일을 수득하기 위하여, 항체 또는 이의 결합 단편은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 변형시킬 수 있다. 항체 또는 이의 결합 단편에 PEG를 커플링(coupling)시키고 부위-특이적으로 접합시키는 방법은 예컨대, 문헌: Leong et al., 2001. Cytokine. 16(3):106-19; Delgado et al., 1996. Br J Cancer. 73(2):175-82에 기술되어 있다.

항체 및 면역글로불린은 이들 사이에 쇄간 공유결합성 연결(interchain covalent linkage)의 존재 또는 부재하에, 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 척추동물 시스템내에서 기본적인 면역글로불린 구조는 비교적 잘 이해된다. 일반적인 용어 "면역글로불린"은 생화학적으로 구별될 수 있는 항체의 5개의 명백한 부류를 포함한다. 다음의 논의가 일반적으로 면역글로불린 분자의 IgG 부류에 관한 것이지만, 항체의 모든 5개의 부류는 본 발명의 범위내에 있다.

IgG와 관련하여, 면역글로불린은 약 23 kDa의 분자량의 2개의 동일한 폴리펩타이드 경쇄, 및 약 53 내지 70 kDa의 분자량의 2개의 동일한 중쇄를 포함한다. 4개의 쇄는 "Y" 구조내에 이황화물 결합에 의해 접합되고, 여기서 경쇄는 "Y"의 입구에서 출발하여 가변 영역을 통해 연속되는 중쇄를 괄호로 묶는다. 항체의 경쇄는 카파(κ) 또는 람다(λ)로 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 κ 또는 λ 경쇄와 결합될 수 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 서로 공유결합으로 결합되고, 2개의 중쇄의 "테일(tail)" 영역은 공유결합성 이황화물 연결 또는 면역글로불린이 하이브리도마, B 세포 또는 유전적으로 가공된 숙주 세포에 의해 생성되는 경우 비-공유결합성 연결에 의해 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 구조의 2갈래 말단에서의 N-말단으로부터 각각의 쇄의 하단에서의 C-말단까지에 이른다. 당해 분야의 기술자는 중쇄가 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε)과 이들 중 일부 서브부류(예컨대, γ1 내지 γ4)로 분류된다. 이는 항체의 "부류"를 각각 IgG, IgM, IgA IgD 또는 IgE로 결정하는 당해 쇄의 특성이다. 면역글로불린 서브부류 또는 "동형(isotype)"(예컨대, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 등)은 잘 특성화되어 있고 기능적 전문화를 부여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 부류 및 동형 각각의 변형된 버젼은 본 개시내용의 측면에서 기술자에게 용이하게 확인될 수 있고 따라서, 본 발명의 영역 내에 있다.

상기 나타낸 바와 같이, 항체의 가변 영역은 항체가 항원 상의 에피토프(epitope)를 선택적으로 인식하여 이에 구체적으로 결합하도록 한다. 즉, 항체의 경쇄 가변 도메인(VL 도메인) 및 중쇄 가변 도메인(VH 도메인)을 결합하여 3-차원 항원 결합 부위를 정의하는 가변 영역을 형성한다.

이러한 4부(quaternary) 항체 구조는 "Y"의 각각의 아암(arm)의 말단에 존재하는 항원 결합 부위를 형성한다. 보다 구체적으로, 항원 결합 부위는 V_H 및 V_L 도메인 각각에 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 정의된다.

치료학적 항체를 개발하기 위한 수개의 조사는 Fc 영역을 가공(engineering)하여 이들의 요구된 약리학 활성에 보다 우수하게 맞춰진 분자의 생성을 허용하는 항체 특성을 최적화하도록 한다. 항체의 Fc 영역은 이의 혈청 반감기 및 효과기 기능(effector function), 예를 들면, 상보체-의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC) 및 항체-의존성 세포 포식작용(phagocytosis)(ADCP)을 매개한다. CH2 도메인과 CH3 도메인 사이의 계면에 위치한 수개의 돌연변이, 예를 들어, N297A, N297G, L234A/L235A, L235E, T250Q/M428L, M252Y/S254T/T256E 및 H433K/N434F는 FcRn에 대한 결합 친화성 및 생체내 IgG1의 반감기를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 증가된 FCrN 결합과 증진된 반감기 사이에 직접적인 관계가 항상 존재하지는 않는다. 치료학적 항체의 효능을 증진시키기 위한 한가지 접근법은 이의 혈청 지속성을 증가시킴으로써, 보다 높은 순환 수준, 거의 빈번하지 않은 투여, 및 감소된 투여량을 허용하는 것이다.

Fc 영역을 가공하는 것은 항체의 효과기 기능을 감소시키거나 증가시키기 위해 요구되는 것이 바람직할 수 있다. 세포-표면 분자, 특히 면역 세포 또는 뉴우런 상의 세포-표면 분자를 표적화하는 항체의 경우, 효과기 기능을 폐지(abrogating)하는 것이 요구된다. 역으로, 종양학 사용을 위해 의도된 항체의 경우, 증가하는 효과기 기능은 치료학적 활성을 증진시킬 수 있다. 4개의 사람 IgG 동형은 활성화 Fcγ 수용체(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIIa), 억제성 FcγRIIb 수용체, 및 상이한 친화성을 지닌 상보체의 제1 구성성분(C1q)과 결합하여, 매우 상이한 효과기 기능성 생성한다.

FcγRs 또는 C1q에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역(hinge region) 및 CH2 도메인내에 위치한 잔기에 의존한다. CH2 도메인의 2개의 영역은 FcγRs 및 C1q 결합에 중요하며 IgG2 및 IgG4 내에 유일한 서열을 갖는다.

본원에 사용된 바와 같은, "항체-의존성 세포-매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는 특정의 세포독성 세포(예컨대, NK 세포, 호중구, 단핵구 및 대식구) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcRs)에 결합된 분비된 항체가 이러한 세포독성 효과기 세포를 항원을 지닌 표적 세포에 특이적으로 결합하여 후속적으로 표적 세포를 사멸시킬 수 있도록 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 목적한 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위하여, 시험관내(in vitro) ADCC 검정, 예를 들면, 특허 US5,500,362 또는 US5,821,337에 기술된 것을 수행할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "항체-의존성 식세포작용" 또는 "옵소닌화(opsonization)"는 세포-매개된 반응을 지칭하고 여기서 FcγRs를 발현하는 비-특이적인 세포독성 세포는 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식하여 후속적으로 표적 세포의 식세포작용을 유발한다.

본원에 사용된 바와 같은 "안티칼린(anticalin)"은 항원에, 즉, 단백질 또는 소 분자 중 어느 하나에 결합할 수 있는 인공 단백질을 지칭한다. 이들은 천연적으로 결합하는 단백질의 계열인 사람 리포칼린으로부터 유래된 항체 모사체이다. 안티칼린은 크기가 약 180개 아미노산이고 질량이 약 20 kDa로 거의 8배 더 작다(Kolmar & Skerra, 2008. FEBS J. 275(11):2667). 특이적인 결합 특성으로 특히 안티칼린의 분비 및 선택을 허용하는 안티칼린 파아지(phage) 디스플레이 라이브러리가 생성되었다. 기술자는 특히 유럽 특허 EP1270725, 미국 특허 US8,536,307, 문헌: Schlehuber & Skerra (2002. Biophys Chem. 96(2-3):213-28) 및 상기 인용된 공보에 개시된 것으로서, 당해 분야에 공지된 방법, 특히, 파아지 디스플레이 및/또는 리보소옴 디스플레이 라이브러리(ribosome display library)의 생성 및 본원에 개시된 바와 같은 항원을 사용한 이의 스크리닝을 사용하여 요구된 결합 특성을 지닌 안티칼린을 용이하게 개발할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "항원-결합 항체 모사체"는 인공 단백질, 펩타이드, 핵산, 및 보다 일반적으로 항체의 것을 모사하는 항원에 결합하는 능력을 지닌 임의의 화학적 화합물을 지칭한다.

이러한 모사체는 올리고뉴클레오타이드 압타머(aptamer)(oligonucleotide aptamer), 뿐만 아니라 아피틴(affitin), 안티칼린 및 펩타이드 압타머를 포함한다. 아피틴, 안티칼린 및 펩타이드 압타머는 세균 발현 시스템을 포함하는 다수의 발현 시스템에서 또는 조합 화학에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 본 발명은 특히 CD31과의 경쟁과 관련하여, 본원에 기술된 항체의 특징을 지닌 아피틴, 안티칼린, 펩타이드 압타머 및 다른 유사한 항원-결합 항체 모사체(예를 들면, 올리고뉴클레오타이드 압타머)를 제공한다.

본원에 사용된 바와 같은, "항체의 항원-결합 단편"은 가능하게는 이의 천연 형태로, CD38에 대한 항원-결합능을 나타내는, 전체 항체보다 더 적은 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 부분 또는 영역, 즉, 본 발명의 항체의 구조의 일부에 상응하는 분자를 지칭하며; 이러한 단편은 특히 상응하는 전체 항체의 항원-결합 특이성과 비교하여 상기 항원에 대해 동일하거나 실질적으로 동일한 항원-결합 특이성을 나타낸다. 유리하게는, 항원-결합 단편은 전체 항체와 유사한 결합 친화성을 갖는다. 그러나, 상응하는 전체 항체와 관련하여 감소된 항원-결합 친화성을 갖는 항원-결합 단편이 본 발명 내에 또한 포함된다. 항원-결합능은 항체와 표적 단편 사이의 친화성을 측정함으로써 결정할 수 있다. 이러한 항원-결합 단편은 또한 항체의 "기능성 단편'으로서 지정될 수 있다.

항체의 항원-결합 단편은, 임의의 제한없이, Fv, dsFv, scFv, Fab, Fab', F(ab')₂, 및 단일-도메인 항체를 포함한다. Fv 단편은 소수성 상호작용에 의해 함께 연합된 항체의 V_L 및 V_H 도메인으로 이루어지고; dsFv 단편 내에서, V_H:V_L 헤테로이량체는 이황화물 결합에 의해 안정화되고; scFv 단편에서, V_L 및 V_H 도메인은 가요성(flexible) 펩타이드 링커(linker)를 통해 서로 연결됨으로써 단일-쇄 단백질을 형성한다. Fab 단편은 항체의 파파인 분해(papain digestion)에 의해 수득가능한 단량체성 단편이고; 이들은 이황화물 결합을 통해 함께 결합된, 전체 L 쇄, 및 H 쇄의 V_H-C_H1 단편을 포함한다. F(ab')₂ 단편은 힌지 이황화물 아래의 항체의 펩신 분해에 의해 생산될 수 있고; 이는 2개의 Fab' 단편, 및 추가로 면역글로불린 분자의 힌지 영역의 일부를 포함한다. Fab' 단편은 힌지 영역내 이황화물 결합을 절단함으로써 F(ab')₂ 단편으로부터 수득될 수 있다. F(ab')₂ 단편은 2가인데, 즉, 이들은 천연의 면역글로불린 분자와 같이, 2개의 항원 결합 부위를 포함하고; 다른 한편으로는, Fv(Fab의 가변 부분을 구성하는 V_H-V_L 이량체), dsFv, scFv, Fab, 및 Fab' 단편은 1가인데, 즉, 이들은 단일 항원-결합 부위를 포함한다. 이러한 본 발명의 기본 항원-결합 단편은 함께 조합하여 다가 항원-결합 단편, 예를 들면, 디아보디(diabody), 트리아보디(tribody) 또는 테트라보디(tetrabody)를 수득할 수 있다. 이러한 다가 항원-결합 단편은 또한 본 발명의 부분이다.

본원에 사용된 바와 같은, "이특이적 항체"는 제1 항원에 대해 특이적인 적어도 하나의 영역(예컨대, 제1 항체의 가변 영역으로부터 유래됨), 및 제2 항원에 대해 특이적인 적어도 제2의 영역(예컨대, 제2 항체의 가변 영역으로부터 유래됨)을 지님으로써 2개의 상이한 항원을 인식하는 항체를 지칭한다. 이특이적 항체는 2개의 표적 항원에 특이적으로 결합하므로 다특이적 항체의 하나의 유형이다. 2개 이상의 상이한 항원을 인식하는 다특이적 항체는 재조합 DNA 방법에 의해 생산될 수 있거나 임의의 통상의 방법에 의해 화학적으로 생산된 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이특이적 항체는 모든 항체 또는 항체의 접합체, 또는 2개의 상이한 항원을 인식할 수 있는 항체의 중합체 형태를 포함한다. 이특이적 항체는 환원되고 재형성되어 이의 2가 특성을 보유하는 항체 및 화학적으로 커플링되어 각각의 항원에 대해 수개의 항원 인식 부위를 가질 수 있는 항체, 예를 들면, BiME(이특이적인 대식구 향상 항체), BiTE(이특이적인 T 세포 인게이저(bispecific T cell engager)), DART(이중 친화성 재표적화(retargeting)); DNL(덕-앤드-록(dock-and-lock)), DVD-Ig(이중 가변 도메인 면역글로불린), HAS(사람 혈청 알부민), kih(놉스 인투 홀스(knobs into holes))를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은, "CD31"은 혈소판 내피 세포 부착 분자-1(PECAM-1), PECA1, GPIIA', EndoCAM 또는 CD31/EndoCAMas로 또한 공지되고, 문헌: Newman & Newman (2003. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23:953-964)에 기술된 130 kDa 제I형 막관통 당단백질을 지칭한다. 본 발명에서, 용어 "CD31"은 보다 특히 포유동물 종(species)으로부터의 CD31, 심지어 보다 특히 사람 CD31을 지칭한다. 바람직하게는, 용어 "사람 CD31"은 NP_000433 NCBI 수탁 번호에 의해 참고된, 서열 번호: 1의 아미노산 서열의 단백질을 지칭한다. 본원에 기술된 바와 같은 사람 CD31의 아미노산의 번호매김(numbering)은 서열 번호: 1에 나타내고 NP_000433 NCBI 수탁번호에 의해 참고된 사람 CD31 서열의 아미노산의 번호매김에 상응한다.

본원에 사용된 바와 같은 "CD38"은 문헌: Malavasi et al. (2008. Physiological Review. 88:841-886)에 기술된 바와 같이, T10, 사이클릭 ADP-리보스 하이드롤라제 1, ADPRC1으로 또한 공지된 45kDa 제II형 막관통 당단백질을 지칭한다. 본 발명에서, 용어 "CD38"은 보다 특히 내지 특히 포유동물 종, 심지어 보다 특히 사람 CD38로부터의 것을 지칭한다. 바람직하게는, 용어 "사람 CD38"은 NP_001766 NCBI 수탁 번호에 의해 지칭된 서열 번호: 2의 아미노산 서열의 단백질을 지칭한다. 본원에 기술된 바와 같은 사람 CD38의 아미노산의 번호매김은 서열 번호: 2로 나타내고 NP_001766 NCBI 수탁 번호에 의해 참고된 사람 CD38 서열의 아미노산의 번호매김에 상응한다.

본원에 사용된 바와 같은 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견된 비-연속성 항원 조합 부위를 의미한다. CDR은 표 1의 규칙에 따라(문헌: Kabat et al., 1991. Sequence of proteins of immunological interest(5^th ed.). Bethesda, MD: U.S. Dep. of Health and Human Services; 및 Chothia and Lesk, 1987. J Mol Biol. 196(4):901-17로부터 유추된 바와 같음), 또는 IMGT "콜리어 드 파를(collier de perle)" 알고리즘의 적용에 의해 확인되었다. 이와 관련하여, 본 발명의 서열의 정의를 위해, 영역/도메인의 한계결정은 참고 시스템에 따라 변할 수 있는 것이 주목된다. 따라서, 본 발명에 정의된 영역/도메인은 항체의 가변 도메인의 전체 길이의 서열내에 관련 서열의 길이 또는 국재화(localization)에서 대략 +/- 10%의 변화를 나타내는 서열을 포함한다.

[표 1]

본원에 사용된 바와 같은 "키메라 항체(chimeric antibody)"는 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 배선(germline)으로부터 유래된 가변 도메인의 서열이 다른 포유동물 종, 예를 들면, 사람의 배선으로부터 유래된 불변 도메인의 서열에 이식된 항체를 지칭한다. 유리하게는, 본 발명에 따른 모노클로날 항체가 키메라 모노클로날 항체인 경우, 후자는 사람 불변 영역을 포함한다. 비-사람 항체로부터 출발하여, 키메라 항체는 당해 분야의 기술자에게 잘 공지된 유전적 재조합 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 키메라 항체는 중쇄 및 경쇄에 대해 재조합 DNA, 예를 들면, 프로모터(promoter) 및 비-사람 항체의 가변 영역을 암호화하는 서열, 및 사람 항체의 불변 영역을 암호화하는 서열을 클로닝(cloning)함으로써 생산될 수 있다. 키메라 항체의 제조 방법에 대해서는, 예컨대, 문헌: Verhoeyn et al. (1988. Science. 239(4847):1534-6)을 참고할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "상보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 상보체의 존재하에서 표적 세포의 분해를 지칭한다. 전통적인 보체 경로의 활성화는 상보체 시스템의 제1 구성성분을 이의 동계(cognate) 항원에 결합된 항체에 결합시킴으로써 개시된다. 상보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정, 예를 들면, 문헌: Gazzano-Santoro et al., 1997. J Immunol Methods. 202(2):163-71에 기술된 것을 수행할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물"은 CD38에 특이적으로 결합함으로써 CD38과 내인성 CD31 상호작용을 바꾸는(shunting), 약제학적 용도에 적합한 임의의 분자를 지칭한다. 이러한 화합물은 항체, 이의 항원-결합 단편, 항원-결합 항체 모사체, 소 유기 분자, 올리고뉴클레오타이드 및 재조합 단백질을 포함한다.

조성물, 약제학적 조성물 또는 의약과 관련하여, "로 필수적으로 이루어지다(이루어진)"는 본원에서 본 발명에 따른 화합물이 상기 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약 내 생물학적 활성을 지닌 단지 하나의 제제(agent)임을 의도하기 위해 사용된다.

본원에 사용된 바와 같은, "에피포트(epitope)"는 이에 대해 항체 또는 이의 결합 단편이 결합된 단백질 또는 단백질들에 위치한 아미노산의 특이적인 정렬을 지칭한다. 에피토프는 흔히 분자, 예를 들면, 아미노산 또는 당 측쇄의 화학적으로 활성인 표면 그룹화로 이루어지며, 특이적인 3차원 구조적 특성 뿐만 아니라 특이적인 전하 특성을 갖는다. 에피토프는 선형(또는 순차적) 또는 구조적, 즉, 필수적으로 연속적이지 않을 수 있는 항원의 다양한 영역내 2개 이상의 서열을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 "단편 결정화가능한 영역" 또는 "Fc" 또는 "Fc 영역"은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 배제한, 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인 및 이러한 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단을 지칭한다.

IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc는 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3 및, Cγ1과 Cγ2 사이의 힌지를 포함한다.

Fc 영역의 경계부는 변할 수 있지만, 사람 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 이의 카복실-말단에 대해 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 정의되며, 여기서 번호매김은 문헌: Kabat et al., 1991 (Sequences of proteins of immunological interest (5^th ed.). Bethesda, MD: U.S. Dep. of Health and Human Services)에 나타낸 EU 색인에 따른다. 카밧(Kabat)에 나타낸 바와 같은 EU 색인은 문헌: Kabat et al., 1991 (상기 참고)에 기술된 바와 같은 사람 IgG1 EU 항체의 잔기 번호매김을 지칭한다. Fc는 단리시 당해 영역, 또는 항체, 항체 단편, 또는 Fc 융합 단백질의 문맥에서 당해 영역을 지칭할 수 있다.

Fc 단편은 도메인 C_H1을 제외한 중쇄의 불변 영역, 즉, 하부 경계부 영역 및 불변 도메인 C_H2 및 C_H3 또는 C_H2 내지 C_H4(동형에 의존)로 천연적으로 이루어진다.

본 발명의 의미에서, 항체의 Fc 단편은 천연적일 수 있거나 다양한 방식으로 변형될 수 있으며, 단 이는 FcR 수용체에 결합하기 위한 기능성 도메인(IgG에 대한 FcγR 수용체), 및 바람직하게는 수용체 FcRn에 결합하기 위한 기능성 도메인을 포함한다. 변형은 Fc 단편의 특정 일부의 결실을 포함할 수 있고, 단 후자는 수용체 FcR(IgG에 대한 수용체 FcγR)에 결합하기 위한 기능성 도메인, 및 바람직하게는 수용체 FcRn에 결합하기 위한 기능성 도메인을 함유한다. 항체 또는 항체의 Fc 단편의 변형은 또한 항체의 생물학적 특성에 영향을 미칠 수 있는 아미노산의 다양한 치환을 포함할 수 있고, 단, 후자는 수용체 FcR에 결합하기 위한 기능적 도메인, 및 바람직하게는 수용체 FcRn에 결합하기 위한 기능성 도메인을 함유한다.

특히, 항체가 IgG인 경우, 이는 WO2000042072, WO2004029207, WO2004063351 또는 WO2004074455에 기술된 바와 같이, 수용체 FcγRIII(CD16)에 대한 결합을 향상시키는 것으로 의도된 돌연변이를 포함할 수 있다. 수용체 FcRn에 대한 결합을 향상시키고, 따라서 항체의 생체내 반감기를 향상시키는 돌연변이는 또한 예를 들면, WO2000042072, WO2002060919, WO2010045193 또는 WO2010106180에 기술된 바와 같이, 존재할 수 있다. 다른 돌연변이, 예를 들어, 상보체의 단백질에 대한 결합을 감소시키거나 증가시키고, 따라서 상보체 의존성 세포독성(Complement Dependent Cytotoxicity)(CDC) 반응을 감소시키거나 증가시키는 다른 돌연변이는 예를 들면, WO1999051642 또는 WO2004074455에 기술된 바와 같이 존재하거나 존재하지 않을 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "Fc-융합 단백질"은 다른 펩타이드에 직접 연결되거나, 링커를 사용하여 다른 펩타이드에 연결된 면역글로불린 Fc 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은, "골격 영역" 또는 "FR"은 가변 영역의 부분이지만, CDR의 부분이 아닌(예컨대, CDR의 카밧/초티아 정의를 사용하여) 아미노산 잔기를 포함한다. 따라서, 가변 영역 골격은 길이가 약 100 내지 120개 아미노산이지만 CDR의 외부 아미노산 만을 포함한다:

HCVR에 대한 구체적인 예의 경우 및 카밧/초티아에 의해 정의된 바와 같은 CDR의 경우:

- FR1은 초티아/AbM 정의에 따른 아미노산 1 내지 25, 또는 카밧 정의에 따라 뒤의 5개 잔기를 포함하는 가변 영역의 도메인에 상응할 수 있고;

- FR2는 아미노산 36 내지 49를 포함하는 가변 영역의 도메인에 상응할 수 있고;

- FR3은 아미노산 67 내지 98을 포함하는 가변 영역의 도메인에 상응할 수 있고;

- FR4는 가변 영역의 말단에 아미노산 104 내지 110의 가변 영역의 도메인에 상응할 수 있다.

경쇄의 골격 영역은 LCVR의 CDR 각각에 의해 유사하게 분리된다. 천연적으로 존재하는 항체에서, 각각의 단량체성 항체 상에 존재하는 6개의 CDR은, 항체가 수성 환경에서 이의 3차원 구조를 추정하므로, 구체적으로 위치하여 항원 결합 부위를 형성하는 아미노산의 짧은, 비-연속 서열이다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 나머지는 아미노산 서열내에서 분가간 가변성이 거의 없으며 골격 영역으로 명명된다. 골격 영역은 주로 β-시이트 구조(β-sheet structure)를 채택하고 CDR은 연결되어, 일부 경우에 β-시이트 구조의 부분을 형성하는 루프(loop)를 형성한다. 따라서, 이러한 골격 영역은 쇄간, 비-공유결합성 상호작용에 의해 정확한 배향으로 6개의 CDR을 위치시키기 위해 제공되는 스캐폴드(scaffold)를 형성하기 위해 작동한다. 위치된 CDR에 의해 형성된 항원 결합 부위는 면역반응성 항원에서 에피토프에 대해 상보성인 표면을 정의한다. 이러한 상보성 표면은 면역반응성 항원 에피토프에 대한 항체의 비-공유결합성 결합을 촉진한다. CDR의 위치는 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 확인될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 "중쇄 영역"은 면역글로불린 중쇄의 불변 도메인으로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 영역을 포함하는 단백질은 C_H1 도메인, 힌지(예컨대, 상부, 중간, 및/도는 하부 힌지 영역) 도메인, C_H2 도메인, C_H3 도메인, 또는 이의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편은 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역(예컨대, 힌지 부위, C_H2 도메인, 및 C_H3 도메인)을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편은 적어도 불변 도메인의 영역(예컨대, C_H2 도메인 중 모두 또는 일부)을 결여하고 있다. 특정의 구현예에서, 불변 도메인 중 적어도 하나, 및 바람직하게는 모두는 사람 면역글로불린 중쇄로부터 유래된다. 예를 들면, 하나의 바람직한 구현예에서, 중쇄 영역은 전체 사람 힌지 도메인을 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, 중쇄 영역은 전체 사람 Fc 영역(예컨대, 사람 면역글로불린으로부터의 힌지, C_H2 및 C_H3 도메인 서열)을 포함한다. 특정의 구현예에서, 중쇄 영역의 구성적 불변 도메인은 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래된다. 예를 들면, 단백질의 중쇄 영역은 IgG1 분자로부터 유래된 C_H2 도메인 및 IgG3 또는 IgG4 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 불변 도메인은 상이한 면역글로불린 분자의 영역을 포함하는 키메라 도메인이다. 예를 들면, 힌지는 IgG1 분자로부터의 제1 영역 및 IgG3 또는 IgG4 분자로부터의 제2 영역을 포함할 수 있다. 상기 나타낸 바와 같이, 중쇄 영역의 불변 도메인이 변형되어 천연적으로 존재하는(야생형) 면역글로불린 분자로부터의 아미노산 서열내에서 변할 수 있음을 당해 분야의 통상의 기술자는 이해할 것이다. 즉, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편은 중쇄 불변 도메인(C_H1, 힌지, C_H2 또는 C_H3) 및/또는 경쇄 불변 도메인(CL) 중 하나 이상에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 예시적인 변형은 하나 이상의 도메인내 하나 이상의 아미노산의 첨가, 결실 또는 치환을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 "힌지 영역"은 C_H1 도메인을 C_H2 도메인에 결합시키는 중쇄 분자의 영역을 포함한다. 이러한 힌지 영역은 대략 25개의 잔기를 포함하며 가용성이므로, 2개의 N-말단 결합 영역이 독립적으로 움직이도록 한다. 힌지 영역은 3개의 별개의 도메인으로 아분(subdividing)될 수 있다: 상부, 중간, 및 하부 힌지 도메인(Roux et al., 1998. J Immunol. 161(8):4083-90).

본원에 사용된 바와 같은 "사람 혈청 알부민 융합 단백질"은 링커를 사용하거나 사용하지 않고 사람 혈청 알부민의 적어도 하나의 도메인에 융합시킨 펩타이드로 구성된 재조합 단백질을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 "사람화된 항체"는 비-사람 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체 또는 이의 결합 단편을 지칭한다. 이는 예컨대, 비-사람 항체 아미노산 서열을 변경시켜 사람 배선 면역글로불린 서열에서 발견된 아미노산을 혼입시킴에 의해, 사람 세포로 제조될 수 있는 보다 근접하게 닮은 항체로 변형된 가변 및 불변 영역을 갖는 비-사람 세포에 의해 제조된 항체를 포함한다.

본 발명에 따른 사람화된 항체 또는 이의 결합 단편은 예를 들면, CDR내에서 사람 배선 면역글로불린 서열(예컨대, 시험관내에서 무작위 또는 부위-지시된 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 유도된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 용어 "사람화된 항체"는 또한 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 사람 골격 서열에 이식된 항체 및 이의 결합 단편을 포함한다. 다시 말해서, 용어 "사람화된 항체"는 수용체 사람 항체의 CDR이 공여자 비-사람 항체, 예컨대, 마우스 항체로부터의 CDR로 대체된 항체 또는 이의 결합 단편을 지칭한다. 사람화된 항체 또는 이의 결합 단편은 또한 골격 서열내 공여자 기원의 잔기를 포함할 수 있다. 사람화된 항체 또는 이의 결합 단편은 또한 사람 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 사람화된 항체 및 이의 결합 단편은 또한 수용체 항체에서 도 또는 도입된 CDR 또는 FR 서열내에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 사람화는 당해 분야에 공지된 방법, "슈퍼사람화(superhumanizing)" 항체(예컨대, Tan et al., 2002. J Immunol. 169(2):1119-25) 및 "재표면화(resurfacing)"(예컨대, Staelens et al., 2006. Mol Immunol. 43(8):1243-57; Roguska et al., 1994. Proc Natl Acad Sci USA. 91(3):969-73)과 같은 기술을 사용하여 수행할 수 있다(예컨대, Jones et al., 1986. Nature. 321(6069):522-5; Riechmann et al., 1988. Nature. 332(6162):323-7; Verhoeyen et al., 1988. Science. 239(4847):1534-6; Presta, 1992. Curr Opin Biotechnol. 3(4):394-8; 특허 US4,816,567).

본 발명에 따라 항체 또는 이의 결합 단편을 사람화하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 사람화된 항체 또는 이의 결합 단편을 제조하는데 사용될, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 사람 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키는데 매우 중요하다. 소위 "베스트-핏(best-fit)" 방법에 따라서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편의 가변 도메인의 서열을 공지된 사람 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 이후에 마우스 서열에 가장 근접한 사람 서열을 사람화된 항체에 대한 사람 골격(FR)으로서 허용한다(Sims et al., 1993. J Immunol. 151(4):2296-308; Chothia & Lesk, 1987. J Mol Biol. 196(4):901-17).

본 발명에 따라 항체 또는 이의 결합 단편을 사람화하기 위한 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특수한 서브그룹(subgroup)의 모든 사람 항체의 컨센수스 서열(consensus sequence)로부터의 특수한 FR을 이용한다. 동일한 골격을 수개의 상이한 사람화된 항체에 대해 사용할 수 있다(Carter et al., 1992. Proc Natl Acad Sci USA. 89(10):4285-9; Presta et al., 1993. J Immunol. 151(5):2623-32). CD38에 대한 고 친화성 및 다른 양호한 생물학적 특성을 보유하면서 항체가 사람화되는 것이 또한 중요하다. 이러한 목표를 달성하기 위하여, 바람직한 방법에 따라서, 사람화된 항체 및 이의 결합 단편을 모 및 사람화된 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 다양한 개념적인 사람화된 생성물의 분석 공정으로 제조한다. 3차원 면역글로불린 모델이 일반적으로 이용가능하고 당해 분야의 기술자에게 익숙하다. 선택된 후보물 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 구조를 나열하고 나타내는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이러한 디스플레이의 점검은 후보물 면역글로불린 서열의 작용화에 있어서 잔기의 유사한 역할의 분석, 즉, 이의 에피토프에 결합하는 후보물 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, CDR 잔기를 컨센수스 및 유입(import) 서열로부터 선택하여 조합시킴으로써 목적한 항체 특성, 예를 들면, CD38에 대한 증가된 친화성이 달성되도록 할 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로 및 가장 실질적으로 연관된다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편을 사람화하기 위한 다른 방법은 면역화를 위해 사람 면역계의 부분들을 수반하는 유전자이식(transgenic) 또는 염색체이식(transchromosomic) 동물을 사용하는 것이다. 숙주로서, 이러한 동물은 기능성 사람 면역글로불린 유전자에 의해 대체된 이의 면역글로불린 유전자를 가졌다. 따라서, 이러한 동물에 의해 또는 이러한 동물의 B 세포로부터 제조된 하이브리도마에서 생산된 항체는 이미 사람화되어 있다. 이러한 유전자이식 또는 염색체이식 동물의 예는 제한없이 다음을 포함한다:

- 특허 US5,939,598, US6,075,181, US6,114,598, US6,150,584 및 US6,162,963에 기술된 제노마우스(Xenomouse)(Abgenix, 캘리포니아주 프레몬트(Fremont) 소재);

- 문헌: Lonberg et al., 1994. Nature. 368(6474):856-859; Lonberg & Huszar, 1995. Int Rev Immunol. 13(1):65-93; Harding & Lonberg, 1995. Ann N Y Acad Sci. 764:536-46; Taylor et al., 1992. Nucleic Acids Res. 20(23):6287-95; Chen et al., 1993. Int Immunol. 5(6):647-56; Tuaillon et al., 1993. Proc Natl Acad Sci USA. 90(8):3720-4; Choi et al., 1993. Nat Genet. 4(2):117-23; Chen et al., 1993. EMBO J. 12(3):821-30; Tuaillon et al., 1994. J Immunol. 152(6):2912-20; Taylor et al., 1994. Int Immunol. 6(4):579-91; Fishwild et al., 1996. Nat Biotechnol. 14(7):845-51에 기술된 HuMAb 마우스^®(Medarex, Inc.);

- 특허원 WO2002043478에 기술된 KM 마우스^®;

- 문헌: Tomizuka et al., 2000. Proc Natl Acad Sci USA. 97(2):722-7에 기술된 TC 마우스; 및

- 특허원 WO2008151081; Geurts et al., 2009. Science. 325(5939):433; Menoret et al., 2010. Eur J Immunol. 40(10):2932-41; Osborn et al., 2013. J Immunol. 190(4):1481-90에 기술된 OmniRat™(OMT, Inc.).

사람화된 항체 및 이의 결합 단편은 또한 다양한 다른 기술에 따라, 예를 들면, 면역화를 위해, 사람 항체 레퍼토리를 발현하도록 가공된 다른 유전자이식 동물을 사용하거나(Jakobovitz et al., 1993. Nature. 362(6417):255-8), 파아지 디스플레이 방법(phage display method)을 사용하여 항체 레퍼토리를 선택함으로써 생산할 수 있다. 이러한 기술은 기술자에게 공지되어 있고 본원에 개시된 바와 같은 모노클로날 항체 또는 이의 결합 단편으로부터 출발하여 시행할 수 있다.

일부 구현예에서, HCVR 및 LCVR(또는 이의 CDR)을 포함하는 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편은 제1 불변 도메인(C_H1 및/또는 C_L)을 포함할 수 있고, 이의 아미노산 서열은 완전히 또는 실질적으로 사람이다.

일부 구현예에서, 특히 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편이 사람 치료학적 용도로 의도된 경우, 이는 전체 불변 영역, 또는 이의 적어도 일부분이 완전한 또는 실질적인 사람 아미노산 서열을 갖는 것이 전형적이다. 따라서, C_H1 도메인, 힌지 영역, C_H2 도메인, C_H3 도메인 및 C_L 도메인(및 존재하는 경우 C_H4 도메인) 중 하나 이상, 또는 이의 임의의 조합은 이의 아미노산 서열과 관련하여 완전하게 또는 실질적으로 사람일 수 있다. 유리하게는, C_H1 도메인, 힌지 영역, C_H2 도메인, C_H3 도메인 및 C_L 도메인(및 존재하는 경우 C_H4 도메인)은 모두 완전한 또는 실질적인 사람 아미노산 서열일 수 있다.

사람화된 또는 키메라 항체 또는 이의 결합 단편의 불변 영역의 문맥에서 용어 "실질적으로 사람"은 사람 불변 영역과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 아미노산 서열 동일성을 지칭한다.

이와 관련하여, 용어 "사람 아미노산 서열"은 배선, 재정렬되고 체세포적으로 돌연변이된 유전자를 포함하는, 사람 면역글로불린 유전자에 의해 암호화된 아미노산 서열을 지칭한다. 본 발명은 또한 "완전한 사람 힌지 영역"의 존재가 표현적으로 요구되는 구현예를 제외하고는, 사람 서열과 관련하여 하나 이상의 아미노산 첨가, 결실 또는 치환에 의해 변경된 "사람" 서열의 불변 도메인을 포함하는 단백질을 고려한다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편 내 "완전한 사람 힌지 영역"의 존재는 항체의 면역원성을 최소화하고 이의 안정성을 최적화하는데 유리할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실이 중쇄 및/또는 경쇄의 불변 영역, 특히 Fc 영역 내에서 이루어질 수 있는 것으로 고려된다. 아미노산 치환은 아미노산의 상이한 천연적으로 존재하는 아미노산, 또는 비-천연 또는 변형된 아미노산에 의한 대체를 생성할 수 있다. 다른 구조적 변형, 예를 들면, 글리코실화 양식에서의 변화(예컨대, N- 또는 O-연결된 글리코실화 부위의 첨가 또는 결실에 의해)가 또한 허용된다. 항체 또는 이의 결합 단편의 의도된 사용에 따라서, Fc 수용체에 대한 이의 결합 특성과 관련하여 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편을 변형시키는 것, 예를 들면, 효과기 기능을 조절하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들면, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역내에 도입함으로써, 당해 영역내에 쇄간 이황화물 결합 형성을 허용할 수 있다. 이렇게 생성된 단독이량체성 항체는 개선된 효과기 기능을 가질 수 있다(Caron et al., 1992. J Exp Med. 176(4):1191-5; Shopes, 1992. J Immunol. 148(9):2918-22).

본원에 사용된 바와 같은 "초가변 루프"는, 초가변 루프(HV)가 구조를 기반으로 정의된 반면, CDR은 서열 가변성을 기반으로 정의되고(Kabat et al., 1991. Sequences of proteins of immunological interest (5^th ed.). Bethesda, MD: U.S. Dep. of Health and Human Services) HV 및 CDR의 한계가 일부 V_H 및 V_L 도메인에서 상이할 수 있으므로, 상보성 결정 영역(CDR)과 엄격하게 동일어는 아니다. V_L 및 V_H 도메인의 CDR은 전형적으로 본원에서 상기에 이미 설명한 바와 같이 카밧/초티아 정의에 의해 정의될 수 있다.

2개 이상의 아미노산 서열, 또는 2개 이상의 핵산 서열 사이의 관계에서 사용된 경우 "동일성" 또는 "동일한"은 2개 이상의 아미노산 잔기 또는 핵산 잔기의 스트링(string) 사이의 매치(match)의 수로 결정된 것으로서, 아미노산 서열 또는 핵산 서열 사이의 서열 관련성(sequence relatedness) 정도를 지칭한다. "동일성"은 특수한 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 초점이 맞추어진 갭(gap) 정렬(존재하는 경우)을 지닌 보다 작은 2개 이상의 서열 사이에 동일한 매치의 퍼센트를 측정한다.

관련된 아미노산 서열 또는 핵산 서열의 동일성은 공지된 방법에 의해 용이하게 계산될 수 있다. 이러한 방법은 문헌: Lesk A. M. (1988). Computational molecular biology: Sources and methods for sequence analysis. New York, NY: Oxford University Press; Smith D. W. (1993). Biocomputing: Informatics and genome projects. San Diego, CA: Academic Press; Griffin A. M. & Griffin H. G. (1994). Computer analysis of sequence data, Part 1. Totowa, NJ: Humana Press; von Heijne G. (1987). Sequence analysis in molecular biology: treasure trove or trivial pursuit. San Diego, CA: Academic press; Gribskov M. R. & Devereux J. (1991). Sequence analysis primer. New York, NY: Stockton Press; Carillo et al., 1988. SIAM J Appl Math. 48(5):1073-82을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

동일성을 측정하는 바람직한 방법을 설계하여 시험한 서열 사이에 가장 큰 매치를 수득한다. 동일성을 측정하는 방법은 공공 이용가능한 컴퓨터 프로그램에 기술되어 있다. 2개의 서열 사이에 동일성을 측정하기 위한 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법은 GCG 프로그램 패키지, 예를 들면, GAP(Genetics Computer 그룹, 위스콘신주, 매디슨 소재의 위스콘신 대학(University of Wisconsin); Devereux et al., 1984. Nucleic Acids Res. 12(1 Pt 1):387-95), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA (Altschul et al., 1990. J Mol Biol. 215(3):403-10)를 포함한다. BLASTX 프로그램은 국립 생물정보 센터(National Center for Biotechnology Information)(NCBI) 및 다른 공급원(BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894)으로부터 공공 이용가능하다. 잘 공지된 스미쓰 워터맨 알고리즘(Smith Waterman algorithm)을 또한 사용하여 동일성을 측정할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "의약"은 대상체 또는 환자, 예를 들면, 포유동물, 특히 사람에게 투여하기에 적합한 조성물을 포함함을 의미한다. 일반적으로, "의약"은 멸균되고 일반적으로 대상체내에서 바람직하지 않은 반응을 유발할 수 있는 오염물질을 함유하지 않는다(예컨대, 의약 속의 화합물(들)은 약제학적 등급이다). 의약은 다수의 상이한 투여 경로, 예를 들면, 경구, 협측(buccal), 직장, 비경구, 복강내, 피내, 피하, 비강내, 척추강내, 척추옆(perispinal) 등을 통해 이를 필요로 하는 대상체에 대한 투여용으로 설계될 수 있다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료학적 적용에 의존한다. 전형적인 바람직한 형태는 경구, 주사가능하거나 주입가능한 용액이다.

본원에 사용된 바와 같은 "변형된 항체"는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 분자에 상응하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 단편은 기능적으로 상이한 분자와 연관되어 있다. 본 발명의 변형된 항체는 화학적 또는 생물학적 그룹 또는 분자, 예를 들면, PEG 중합체 또는 생체내에서 프로테아제 절단에 대한 보호, 항체 또는 기능성 단편의 안정성 및/또는 반감기의 증진에 적합한 다른 보호 그룹 또는 분자와의 공유결합성 부착, 이식, 화학적 결합을 포함하는 임의의 적합한 부착 형태로부터 야기된 융합 키메라 단백질 또는 접합체일 수 있다. 유사한 기술을 사용하여, 특히 화학적 커플링 또는 이식에 의해, 변형된 항체를 생물학적 활성 분자와 함께 제조할 수 있으며, 상기 활성 분자는 예를 들면 독소, 특히 슈도모나스 외독소 A, 식물 독소 리신의 A 쇄 또는 사포린 독소, 특히 치료학적 활성 성분, 항체 또는 기능성 단편을 사람 신체의 특수한 세포 또는 조직에 대해 표적화하기에 적합한 벡터(예를 들면, 특히 단백질 벡터) 중에서 선택될 수 있거나, 이는 특히 항체의 단편이 사용되는 경우, 표지 또는 링커와 연관될 수 있다. 항체 또는 이의 기능성 단편의 PEG화(PEGylation)는 특히 치료학적 적용을 위해, 숙주에 대한 활성 물질의 전달 조건을 개선시키므로, 특히 흥미로운 구현예이다. PEG화는 항체 또는 기능성 단편의 인식 부위와의 간섭을 방지하는데 특이적인 부위일 수 있고, 고 분자량 PEG를 사용하여 수행할 수 있다. PEG화는 항체 또는 기능성 단편의 서열내 존재하는 유리 시스테인 잔기를 통하거나 항체 또는 기능성 단편의 아미노 서열내 첨가된 유리 시스테인 잔기를 통해 달성될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "모노클로날 항체"는 상이한 아미노산 서열의 항체의 혼합물을 함유하는 "폴리클로날 항체" 제제와는 대조적으로, 일반적인 중쇄 및 일반적인 경쇄 아미노산 서열을 공유하는, 항체 분자의 제제를 지칭하는 것으로 의도된다. 해독 후 변형(예를 들면, 중쇄의 C-말단 라이신의 절단, 아스파라긴 잔기의 탈아미드화 및/또는 아스파르테이트 잔기의 이성체화)과 관련된, 단백질 서열내 특정의 차이가 그럼에도 불구하고 모노클로날 항체 조성물 속의 개개 항체 사이에 존재할 수 있다. 변경인자(modifier) "모노클로날"은 임의의 특수한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 고려되지 않아야 한다. 모노클로날 항체는 파아지, 세균, 효모 또는 리보소옴 디스플레이와 같은 수개의 공지된 기술에 의해서 뿐만 아니라 문헌: Kohler et al. (1975. Nature. 256(5517):495-7)에 최초로 기술된, 하이브리도마-유래된 항체에 의해 예시된 전통적인 방법에 의해 생성될 수 있다. 따라서, 용어 "모노클로날"은 하나의 핵산 클론으로부터 유래된 모든 항체를 지칭하기 위해 사용된다.

본원에 사용된 바와 같은 "올리고뉴클레오타이드"는 DNA, RNA를 포함하는 짧은 뉴클레오타이드 분자 뿐만 아니라 변형된 뉴클레오타이드(예를 들면, 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 뉴클레오타이드)에 관한 것이다. 특히, 상기 올리고뉴클레오타이드는 200개 이하의 뉴클레오타이드, 보다 특히 50개 미만의 뉴클레오타이드로 이루어진다.

본원에 사용된 바와 같은, "올리고뉴클레오타이드 압타머(aptamer)"는 이의 유일한 3차원 구조로 폴딩(folding)되는 경우, 고 친화성 및 특이성으로 소 분자 리간드 또는 단백질 표적에 선택적으로 결합할 수 있는 짧은 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 "펩타이드"는 적어도 아미노산으로 구성된 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 펩타이드는 또한 다당류 쇄 또는 다른 해독 후 변형과 같은 다른 분자 그룹을 지닐 수 있다. "재조합 펩타이드"는 재조합 수단에 의해 생산, 발현, 생성 또는 단리된 펩타이드, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 박현 벡터를 사용하여 발현된 펩타이드를 지칭한다. 재조합 펩타이드는 예를 들면, 키메라 펩타이드를 포함한다. "키메라 펩타이드"는 별도의 단백질 또는 단백질 단편을 원래 암호화한 2개 이상의 유전자의 결합(joining)을 통해; 또는 2개 이상의 단백질 또는 단백질 단편의 융합을 통해 생성된 펩타이드를 지칭한다. 키메라 펩타이드는 예를 들면, 사람 혈청 알부민(HSA) 또는 HSA의 특수한 도메인(예를 들면, 예컨대, 도메인 III), 또는 트랜스페린(transferrin)(Strohl, 2015. BioDrugs. 29(4): 215-239에서와 같이)에 융합된 펩타이드를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 "펩타이드 압타머"는 이의 표적 항원에서 특이적인 부위에 결합하기 위해 선택된 작은 조합 단백질을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은, "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 생산, 발현, 생성 또는 단리된 항체, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체; 재조합 조합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체; 사람 면역글로불린 유전자로 인해 유전자이식성인 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체; 또는 특수한 면역글로불린 유전자 서열(예를 들면, 사람 면역글로불린 유전자 서열)이 다른 DNA 서열과 함께 조립된 임의의 다른 방식으로 생산, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 지칭한다. 재조합 항체는 예를 들면, 키메라 및 사람화된 항체를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 "작은 유기 분자"는 저 분자량 유기 화합물(5000 Da이하, 보다 특히 2000 Da 이하, 및 대부분 특히 약 1000 Da 이하)을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 "대상체"는 포유동물, 바람직하게는 사람을 지칭한다. 일 구현예에서, 대상체는 의약 보호의 수령을 기다리거나, 수령받고 있거나 의학적 과정의 대상이었거나/이거나/일 것이거나, 질환의 발달에 대해 모니터링되는 "환자, 즉, 온혈 동물, 보다 바람직하게는 사람, 사육 및 농장 동물, 및 동물원, 운동경기, 또는 애완 동물, 예를 들면, 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼 등을 지칭한다. 바람직하게는, 포유동물은 영장류, 보다 바람직하게는 사람이다.

본원에 사용된 바와 같은, "치료학적 유효량"은 대상체에 대해 유의적인 부정적 부작용을 유발하지 않고, (1) 표적화된 질환(들)의 발병을 지연 또는 예방하거나; (2) 표적화된 질환(들)의 하나 이상의 증상의 진행, 악화(aggravation), 또는 저하(deterioration)를 지연 또는 정지시키거나; (3) 표적화된 질환(들)의 증상의 완화를 야기하거나; (4) 표적화된 질환(들)의 중증도 또는 발생정도를 감소시키거나; 또는 (5) 표적화된 질환(들)을 치유하는 것을 목표로 하는 제제(예컨대, CD38 결합에 대해 CD31과 경쟁하는 화합물)의 수준, 양 또는 농도를 의미한다. 치료학적 유효량은 표적화된 질환(들)의 발병 전에, 예방 또는 방지 작용을 위해 투여될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 치료학적 유효량은 표적화된 질환(들)의 개시 후, 치료학적 작용을 위해 투여될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, "치료하는" 또는 "치료" 또는 "완화"는 치료학적 또는 예방학적(prophylactic)(또는 예방적(preventative)) 척도 둘 다를 지칭하고; 여기서 목표는 표적화된 질환(들)을 지연시키는(또는 줄이는) 것이다. 치료가 필요한 것은 표적화된 질환(들)을 이미 지닌 것 뿐만 아니라 표적화된 질환(들)을 가진 것으로 예측된 것을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 가변 도메인 V_H 및 V_L의 특정 영역이 항체 중 서열에서 전적으로 상이하고 이의 표적 항원에 대해 각각의 특수한 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에서 균일하게 분포되지 않는다. 이는 항원 결합 부위의 부분을 형성하는 V_L 도메인 및 V_H 도메인 각각에서 "초가변 루프"로 불리는 3개의 분절내에서 농축된다. Vλ 경쇄 도메인의 제1, 제2 및 제3 초가변 루프는 본원에서 L1(λ), L2(λ) 및 L3(λ)로서 지칭되며 V_L 도메인 내에 잔기 24-33(9, 10 또는 11개의 아미노산 잔기로 이루어진 L1(λ)), 49-53(3개의 잔기로 이루어진 L2(λ)) 및 90-96(6개의 잔기로 이루어진 L3(λ))를 포함하는 것으로 정의될 수 있다(Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

Vκ 경쇄 도메인의 제1, 제2 및 제3의 초가변 루프는 본원에서 L1(κ), L2(κ) 및 L3(κ)로 지칭되고 VL 도메인내에서 잔기 25-33(6, 7, 8, 11, 12 또는 13개의 잔기로 이루어진 L1(κ)), 49-53(3개의 잔기로 이루어진 L2(κ)) 및 90-97(6개의 잔기로 이루어진 L3(κ))로 정의될 수 있다(Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

V_H 도메인의 제1, 제2 및 제3의 초가변 루프는 본원에서 H1, H2 및 H3으로 지칭되고 V_H 도메인 내에서 잔기 25-33(7, 8 또는 9개의 잔기로 이루어진 H1), 52-56(3 또는 4개의 잔기로 이루어진 H2) 및 91-105(길이가 매우 가변성인 H3)를 포함하는 것으로 정의될 수 있다(Morea et al., 2000. Methods. 20(3):267-79).

달리 나타내지 않는 한, 용어 L1, L2 및 L3 각각은 V_L 도메인의 제1, 제2 및 제3의 초가변 루프를 지칭하고, V_κ 및 V_λ 동형 둘 다로부터 수득된 초가변 루프를 포함한다. 용어 H1, H2 및 H3 각각은 V_H 도메인의 제1, 제2 및 제3의 초가변 루프를 지칭하고, 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε)을 포함하는, 임의의 공지된 중쇄 동형으로부터 수득된 초가변 루프를 포함한다. 초가변 루프 L1, L2, L3, H1, H2 및 H3은 본원의 상기에 정의된 바와 같은, "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"의 부분을 각각 포함할 수 있다.

상세한 설명

본 발명은 CD38 결합에 대한 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31의 세포외 도메인과 경쟁한다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31의 세포외 도메인의 Ig-유사 도메인 1 내지 3과 경쟁한다.

서열 번호: 1로 나타낸 사람 CD31의 아미노산 서열은 다음의 특징을 포함한다: 아미노산 1 내지 27번의 신호 펩타이드(signal peptide); 아미노산 34 내지 121번으로부터의 Ig-유사 도메인 1; 아미노산 145 내지 233번으로부터의 Ig-유사 도메인 2; 아미노산 236 내지 315번으로부터의 Ig-유사 도메인 3; 아미노산 328 내지 401번으로부터의 Ig-유사 도메인 4; 아미노산 424 내지 493으로부터의 Ig-유사 도메인 5; 아미노산 499 내지 591로부터의 Ig-유사 도메인 6; 아미노산 592 내지 601로부터의 근접-막 도메인(juxta-membrane membrane); 아미노산 602 내지 620으로부터의 막관통 도메인 및 아미노산 621 내지 738로부터의 세포질성 도메인.

따라서, 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD31의 세포외 도메인, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 601번 또는 28 내지 601번과 경쟁한다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD31의 Ig-유사 도메인 1-3, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 315번 또는 28 내지 315번 또는 1 내지 327번 또는 28 내지 327번과 경쟁한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 펩타이드(예를 들면, 재조합 펩타이드 또는 키메라 펩타이드), 항체, 이의 항원-결합 단편, 항원-결합 항체 모사체, 올리고뉴클레오타이드 및 작은 유기 분자를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD38, 바람직하게는 사람 CD38에 특이적으로 결합한다.

본 발명에 따른 화합물과 CD38 사이의 특이적인 결합은 상기 화합물이 CD38에 대해 주목할만한 친화성을 나타냄을 내포한다.

CD38에 대한 본 발명에 따른 화합물의 친화성은 당해 분야의 기술자로부터 잘 공지된 다양한 방법으로 결정할 수 있다. 이러한 방법은 바이오센서 분석(biosensor analysis)(예를 들면, 예컨대, Biacore 분석), Blitz 분석 및 Scatchard 플롯(plot)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

대안적으로 또는 추가로, 본 발명에 따른 화합물이 CD38에 결합하는지 여부는 특히 상기 화합물과 이의 CD38 또는 단편(특히, CD38의 에피토프를 포함하거나 이로 이루어진 단편)의 반응을 상기 화합물과 CD38 또는 이의 단편 이외의 단백질 또는 항원의 반응과 비교함으로써 용이하게 시험할 수 있다.

일 구현예에서 본 발명에 따른 화합물이 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체인 경우, "주목할만한 친화성"은 약 10^-7 M, 바람직하게는 약 10^-8 M 이상 더 강력한 K_D-친화성 상수에 의해 정의될 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체와 CD38 사이의 결합은 K_D-친화성 상수가 약 10^-7 M 내지 약 10^-12 M, 바람직하게는 약 10^-8 내지 약 10^-12, 보다 바람직하게는 약 10^-9 M 내지 약 10^-11 M인 경우, 특히 K_D-친화성 상수가 약 10^-10 M인 경우 특이적인 것으로 고려된다.

일 구현예에서 본 발명에 따른 화합물이 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체인 경우, 상기 화합물은 바람직하게는 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 것으로서, CD38에 대해 약 10^-7 M 이하, 바람직하게는 약 10^-8 이하, 보다 바람직하게는 약 10^-9 M 이하, 심지어 보다 바람직하게는 약 10^-10 M 이하의 K_D-친화성 상수를 갖는다.

일 구현예에서 본 발명에 따른 화합물이 작은 유기 분자인 경우, "주목할만한 친화성"은 약 10^-6 M의 K_D-친화성 상수에 의해 정의될 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 작은 유기 분자와 CD38 사이의 결합은 바람직하게는 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 바와 같이, K_D-친화성 상수가 약 10^-6 M 내지 약 10^-10 M, 바람직하게는 약 10^-7 M 내지 약 10^-9 M, 특히 K_D-친화성 상수가 약 10^-8 M의 범위인 경우 특이적인 것으로 고려된다.

일 구현예에서 본 발명에 따른 화합물이 올리고뉴클레오타이드인 경우, "주목할만한 친화성"은 약 200 nM 이상인 K_D-친화성 상수로 정의될 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드와 CD38 사이의 결합은 바람직하게는 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 바와 같이 K_D-친화성 상수가 약 10 nM 내지 약 200 nM, 바람직하게는 약 50 nM 내지 약 150 nM의 범위, 특히 K_D-친화성 상수가 약 100 nM인 경우 특이적인 것으로 고려된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD38내에서 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD38내에서 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합한다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 선형이다. 일 구현예에서, 상기 에피토프는 구조적(conformational)이다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 71, 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2개의 연속적인(contiguous) 또는 비-연속적인 아미노산 잔기를 포함한다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 1번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38에서 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 아미노산 잔기 1번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 1번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 1번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 70번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 70번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 70번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 70번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 189번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 189번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 189번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 189번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 219번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 219번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 219번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 219번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 233번 내지 아미노산 잔기 300번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 233번 내지 아미노산 잔기 296번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 233번 내지 아미노산 잔기 294번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 233번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 241번 및 아미노산 잔기 273번 내지 아미노산 잔기 285번 전체에, 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 254번 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 275번 또는 다른 종으로부터 동종 CD38내 상응하는 아미노산 잔기 전체에 연장된다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 254번 및 시스테인 275번을 포함하는 제5(페널티메이트(penultimate)) C-말단 이황화물 루프 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함한다. 특히, 사람 CD38의 제5(페널티메이트) C-말단 이황화물 루프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 285번, 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함한다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 287번, 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함하지 않는다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 290번, 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함하지 않는다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 287번 및 시스테인 290번 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함하지 않는다.

일 구현예에서, 상기 에피토프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 287번 및 시스테인 296번을 포함하는 제6 C-말단 이황화물 루프, 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함하지 않는다. 특히, 사람 CD38의 제6 C-말단 이황화물 루프는 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 285 번 내지 아미노산 잔기 300번, 또는 다른 종으로부터의 동종 CD38내 상응하는 시스테인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 신경독(neurotoxin) MPP⁺에 의해 유도된 미토콘드리아 억제로부터 도파민작동성 뉴우런(dopaminergic neuron)을 직접 보호한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음의 특성을 갖는다:

- 이는 미토콘드리아 복합체 I 억제로 인한 에너지 결핍에 대해, 특히 미토콘드리아 신경독 MPP⁺에 대해 도파민작동성 뉴우런을 보호하고/하거나;

- 이는 사람 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용하여 시험관내에서 소염성 사이토킨 인터류킨-10(IL-10)의 방출을 증가시키고/시키거나;

- 이는 마우스에게 주사되는 경우 생체내에서 IL-10 수준을 증가시킨다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하고 타이로신 포스포릴화를 유도한다. 특히, 본 발명에 따른 화합물은 게니스테인(genistein)의 존재하에서 억제되는 별개의 세포질성 기질의 타이로신 포스포릴화를 유도한다.

포스포릴화된 별개의 세포질성 기질의 예는 c-cbl 원종양유전자(proto-oncogene), 단백질 키나제 syk, 포스파티딜이노시톨-3 키나제의 p85 소단위(subunit), 포스포리파제 C-γ(PLC-γ), Raf-1/MAP 키나제, CD3-ζ/ZAP-70 신호전달 경로를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하여, CD38 내재화를 개시(trigger)한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하며, 리소좀 세포외유출을 유도한다. 특히, 본 발명에 따른 화합물은 바쿠올린-1의 존재하에서 억제된 리소좀 세포외유출을 유도한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포 식세포작용(ADCP) 및/또는 상보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개, 개시 또는 향상시키지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 CD31 펩타이드, 바람직하게는 사람 CD31 펩타이드이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD31의 세포외 도메인을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD31의 세포외 도메인의 단편이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 사람 CD31의 Ig-유사 도메인 1-3을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 601번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 601번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 591번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 591번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 493번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 493번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 401번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 401번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 315번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 315번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 233번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 233번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 1 내지 121번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 121번을 포함하거나 이로 이루어진 펩타이드 또는 이의 변이체이다.

일 구현예에서, 본원의 상기에 기술된 바와 같은 펩타이드의 변이체는 상기 펩타이드와 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 국소 동일성(local identity)을 공유한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 키메라 CD31 펩타이드, 바람직하게는 키메라 사람 CD31 펩타이드이다

일 구현예에서, 키메라 CD31 펩타이드는 면역글로불린의 Fc 도메인에 융합된, 본원의 상기에 정의된 바와 같은 CD31 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어짐으로써 Fc-융합 단백질을 형성한다.

일 구현예에서, 키메라 CD31 펩타이드는 사람 혈청 알부민에 융합된, 본원의 상기 정의된 바와 같은 CD31 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어짐으로써 사람 혈청 알부민 융합 단백질을 형성한다.

일 구현예에서, 키메라 CD31 펩타이드는 사람 혈청 알부민의 하나 또는 수개의 도메인에 융합된, 본원의 상기 정의된 바와 같은 CD31 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어짐으로써 사람 혈청 알부민 융합 단백질을 형성한다. 특히, 키메라 CD31 펩타이드는 사람 혈청 알부민의 도메인 III에 융합된, 본원의 상기 정의된 바와 같은 CD31 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사람 혈청 알부민의 도메인 III"은 ALB 유전자(Uniprot 수탁 번호 및 버젼: P02768-1, 1990년 4월 1일자로 마지막 변경됨; Checksum: F88FF61DD242E818)에 의해 암호화된 사람 혈청 알부민에 상응하는, 서열 번호: 43에 나타낸 서열의 아미노산 잔기 404 내지 601번을 포함하거나 이로 이루어진다.

일 구현예에서, 키메라 CD31 펩타이드는 트랜스페린에 융합된, 본원의 상기 정의된 바와 같은 CD31 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어짐으로써 트랜스페린-융합 단백질을 형성한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 항-CD38 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 항-CD38 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 HB7; 랫트(rat) 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 90; 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 AT1; 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 T16; 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 IB4; 및 CD31과 특이적으로 경쟁할 수 있는 이의 돌연변이된, 재조합(키메라 및 사람화된 것 포함), 이특이적인 및 변형된 항체를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 HB7; 랫트 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 90; 및 CD31과 특이적으로 경쟁할 수 있는 이의 돌연변이된, 재조합(키메라 및 사람화된 것 포함), 이특이적 및 변형된 항체를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 마우스 항-사람 CD38 모노클로날 항체 클론 HB7; 및 CD31과 특이적으로 경쟁할 수 있는 이의 돌연변이된, 재조합(키메라 및 사람화된 것 포함), 이특이적 및 변형된 항체를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

다음의, 및 달리 표현하여 언급하지 않는 한, CDR 번호매김 및 정의는 초티아 정의에 따른다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약술됨)을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: X₄X₅X₆X₇X₈YX₉X₁₀X₁₁X₁₂GMDV(서열 번호: 6) 또는 이의 변이체,

여기서:

X₁은 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₄는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)로부터 선택되고;

X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5) 또는 이의 변이체; 및

여기서:

X₁은 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₄는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)로부터 선택되고;

X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)로부터 선택되고;

X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고, 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRS(서열 번호: 10) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSDDYYYDYGMDV(서열 번호: 15) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 B08은 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRS(서열 번호: 10) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSDDYYYDYGMDV(서열 번호: 15) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B05"로 명명되고, 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNN(서열 번호: 8) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRY(서열 번호: 11) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C05는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V_H-CDR1: GFTFSNN(서열 번호: 8) 또는 이의 변이체;

V_H-CDR2: SGSSRY(서열 번호: 11) 또는 이의 변이체; 및

V_H-CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B06"으로 명명되고, 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRN(서열 번호: 12) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSYSSYGSGNGMDV(서열 번호: 17) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C06은 3개의 다음의 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRN(서열 번호: 12) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSYSSYGSGNGMDV(서열 번호: 17) 또는 이의 변이체.

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: YGSSRD(서열 번호: 13) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSGYYFGYGMDV(서열 번호: 19) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D06은 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: YGSSRD(서열 번호: 13) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSGYYFGYGMDV(서열 번호: 19) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B07"로 명명되고, 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGSGMDV(서열 번호: 20) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D07은 3개의 다음의 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGSGMDV(서열 번호: 20) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B10"으로 명명되고, 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D10은 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체;

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체; 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약술됨)을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGX₁₃X₁₄X₁₅VS(서열 번호: 21) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: X₁₆DSX₁₇RPS(서열 번호: 22) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체,

여기서:

X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)로부터 선택되고;

X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체,

여기서:

X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)로부터 선택되고;

X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;

X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;

X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYSVS(서열 번호: 24) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: DDSNRPS(서열 번호: 29) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 B08은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYSVS(서열 번호: 24) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: DDSNRPS(서열 번호: 29) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C05"로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C05는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C06"으로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C06은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D06"으로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYYVS(서열 번호: 27) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: SDSYRPS(서열 번호: 32) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D06은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYYVS(서열 번호: 27) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: SDSYRPS(서열 번호: 32) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D07"로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D07은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D10"으로 명명되고 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D10은 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체;

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:

- 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: X₄X₅X₆X₇X₈YX₉X₁₀X₁₁X₁₂GMDV(서열 번호: 6) 또는 이의 변이체; 및

- 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함하고:

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체;

여기서:

X₁은 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;

X₄는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)으로부터 선택되고;

X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)으로부터 선택되고;

X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)으로부터 선택되고;

X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)으로부터 선택되고;

X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)으로부터 선택된다.

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5) 또는 이의 변이체, 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR을 포함한다:

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체;

여기서:

X₁은 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₄는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;

X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)으로부터 선택되고;

X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)으로부터 선택되고;

X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)으로부터 선택되고;

X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)으로부터 선택되고;

X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)으로부터 선택되고;

X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)으로부터 선택되고;

X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)으로부터 선택되고;

X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)으로부터 선택된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고, 다음을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRS(서열 번호: 10) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSDDYYYDYGMDV(서열 번호: 15) 또는 이의 변이체; 및

- 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYSVS(서열 번호: 24) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: DDSNRPS(서열 번호: 29) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 B08은 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRS(서열 번호: 10) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSDDYYYDYGMDV(서열 번호: 15) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYSVS(서열 번호: 24) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: DDSNRPS(서열 번호: 29) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C05"로 명명되고, 다음을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNN(서열 번호: 8) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRY(서열 번호: 11) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C05는 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNN(서열 번호: 8) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRY(서열 번호: 11) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C06"으로 명명되고, 다음을 포함한다:

적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRN(서열 번호: 12) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSYSSYGSGNGMDV(서열 번호: 17) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 C06은 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRN(서열 번호: 12) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSYSSYGSGNGMDV(서열 번호: 17) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSSYVS(서열 번호: 25) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D06"으로 명명되고, 다음을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: YGSSRD(서열 번호: 13) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSGYYFGYGMDV(서열 번호: 19) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYYVS(서열 번호: 27) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: SDSYRPS(서열 번호: 32) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D06은 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNY(서열 번호: 7) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: YGSSRD(서열 번호: 13) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSGYYFGYGMDV(서열 번호: 19) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGSYYVS(서열 번호: 27) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: SDSYRPS(서열 번호: 32) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D07"로 명명되고, 다음을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGSGMDV(서열 번호: 20) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D07은 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGSGMDV(서열 번호: 20) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D10"으로 명명되고, 다음을 포함한다:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체; 및

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

일 구현예에서, 클론 D10은 다음을 포함한다:

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 HCVR:

V _H -CDR1: GFTFSNS(서열 번호: 9) 또는 이의 변이체,

V _H -CDR2: SGSSRD(서열 번호: 14) 또는 이의 변이체, 및

V _H -CDR3: SSSSYYYSGNGMDV(서열 번호: 16) 또는 이의 변이체; 및

- 3개의 다음 CDR을 포함하는 LCVR:

V _L -CDR1: AGTSSDVGGNSYVS(서열 번호: 28) 또는 이의 변이체,

V _L -CDR2: YDSYRPS(서열 번호: 30) 또는 이의 변이체, 및

V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23) 또는 이의 변이체.

CDR의 변이체는 상이한 아미노산에 의해 치환되는 1, 2 또는 3개의 아미노산을 가짐을 특징으로 하는 본원의 상기에 정의된 바와 같은 임의의 CDR을 지칭한다.

CDR의 변이체는 특수한 CDR에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 가짐을 특징으로 하는 본원의 상기에 정의된 바와 같은 임의의 CDR을 지칭한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고, 서열 번호: 33에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C05"로 명명되고, 서열 번호: 34에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C06"으로 명명되고, 서열 번호: 35에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D06"으로 명명되고, 서열 번호: 36에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D07"로 명명되고, 서열 번호: 37에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D10"으로 명명되고, 서열 번호: 38에 나타낸 서열을 갖는 HCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고, 서열 번호: 39에 나타낸 서열을 갖는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C05"로 명명되고, 서열 번호: 40에 나타낸 서열을 갖는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C06"으로 명명되고, 서열 번호: 40에 나타낸 서열을 갖는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D06"으로 명명되고, 서열 번호: 41에 나타낸 서열을 갖는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D07"로 명명되고, 서열 번호: 42에 나타낸 서열을 ㄱ자는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D10"으로 명명되고, 서열 번호: 42에 나타낸 서열을 갖는 LCVR 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은

- 본원의 상기에 정의된 바와 같은 HCVR; 및

- 본원의 상기에 정의된 바와 같은 LCVR을 포함한다.

- 서열 번호: 33, 34, 35, 36, 37 및 38로부터 선택된 HCVR; 및

- 서열 번호: 39, 40, 41 및 42로부터 선택된 LCVR을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 B08"로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 33으로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 39로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C05"로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 34로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 40으로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 C06"으로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 35로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 40으로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D06"으로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 36으로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 41로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D07"로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 37로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 42로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 실시예에 따라 "클론 D10"으로 명명되고 다음을 포함한다:

- 서열 번호: 38로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 HCVR; 및

- 서열 번호: 42으로 나타낸 바와 같은 서열을 갖는 LCVR.

HCVR 및/또는 LCVR의 변이체는 특수한 HCVR 및/또는 LCVR과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 가짐을 특징으로 하는 본원의 상기에 정의된 바와 같은 임의의 HCVR 및/또는 LCVR을 지칭한다.

HCVR 및/또는 LCVR의 변이체는 상이한 아미노산으로 치환된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 아미노산을 가짐을 특징으로 하는 본원의 상기에 정의된 바와 같은 임의의 HCVR 및/또는 LCVR을 지칭한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 유의적인 친화성을 가지지 않으므로 CD3에 대해 결합하는 유의적인 능력을 가지지 않는다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-CD3/항-CD38 이특이적인 항체가 아니다. 실례로, 항-CD3/항-CD38 이특이적인 항체는 WO2016071355에 개시되어 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 키메라 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 사람 불변 영역 및 다른 종으로부터의 가변 영역, 예를 들면, 예컨대, 쥐(murine) 가변 영역을 포함하는 중쇄 및/또는 경쇄를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 사람화되어 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 사람화되어 있고, 바람직하게는 사람화된 모노클로날 항체 또는 항원-결합 단편이고, 보다 바람직하게는 다음을 포함한다:

- 사람 κ LCCR로부터 유래된 경쇄 불변 영역(LCCR), 및

- 사람 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4(야생형 또는 돌연변이된) HCCR로부터 유래된 중쇄 불변 영역(HCCR).

- 사람 κ LCCR로부터 유래된 경쇄 불변 영역(LCCR), 및

- D297A 또는 D297G 돌연변이를 포함하는 사람 IgG1으로부터 유래되거나 S228P 돌연변이를 포함하는 사람 IgG4로부터 유래된 중쇄 불변 영역(HCCR).

본 발명에 따른 사람화된 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 사람 대상체(subject)에게 투여되는 경우 쥐 버젼보다 덜 면역원성인(또는 완전히 비-면역원성인) 이점을 갖는다.

당해 분야의 기술자에게 잘 알려져 있는 바와 같이, HCCR의 IgG 동형의 선택은 특이적인 기능이 요구되는지의 여부 및 생체내 반감기에 대한 적합성의 필요성에 초점을 둔다. 예를 들어, 암 세포의 선택적인 근절을 위해 설계된 항체는 전형적으로 상보체 활성화 및 항체-의존성 세포-매개된 세포독성에 의한 효과기(effector)-매개된 세포 사멸을 허용하는 활성 동형을 필요로 한다. 사람 IgG1 및 IgG3(보다 짧은 반감기) 동형 둘 다 모두, 특히 사람 IgG1 동형(야생형 및 변이체)은 이러한 기준을 충족시킨다. 특히, HCCR의 IgG 동형(특히 사람 야생형 및 변이체 IgG1 동형)에 따라서, 항체는 CDC, ADCC 및/또는 ADCP 메카니즘을 통해 세포에 대해 세포독성일 수 있다(Salfeld, 2007. Nat Biotechnol. 25(12):1369-72; Irani et al., 2015. Mol Immunol. 67(2 Pt A):171-82). 실제로, 단편 결정화가능한 (Fc) 영역은 다양한 보조 분자와 상호작용하여 간접적인 효과기 기능, 예를 들면, 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포 식세포작용(ADCP) 및 상보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 변형되어 ADCC, ADCP 및/또는 CDC를 향상시킬 수 있다. 이러한 변형은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

예를 들면, 낮은 푸코즈 함량을 포함하는 항체는 FcγRIII 수용체를 통해 ADCC 반응을 향상시키는 것으로 알려져 있다(참고: 예컨대, 국제 특허 공보 제WO2014140322호). 따라서, 본 발명에 따른 항체는 낮은 푸코즈 함량을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "푸코즈 함량"은 각각의 항체의 각각의 중쇄의 Fc 단편의 N297 잔기에 부착된 N-글리칸내 푸코실화된 형태의 퍼센트를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "낮은 푸코즈 함량"은 65% 이하의 푸코즈 함량을 지칭한다. 유리하게는, 푸코즈 함량은 65% 이하, 바람직하게는 60%, 55% 또는 50% 이하, 또는 심지어 45%, 40%, 35%, 30%, 25% 또는 20% 이하이다. 그러나, 푸코즈 함량이 0일 필요는 없으며, 이는 예를 들면, 5%, 35 10%, 15% 또는 20% 이상일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 상이한 유형의 글리코실화(올리고만노즈의 N-글리칸 또는 비안테터리 복합체 유형(biantennary complex type)의 N-글리칸의 경우에 N-아세틸글루코스아민(GlcNAc) 잔기 또는 갈락토즈 잔기를 양분하는 가변 비율을 갖는, 비안테너리 복합체 유형을 추가로 포함할 수 있으며, 단, 이들은 낮은 푸코즈 함량을 갖는다(참고: 예컨대, 국제 특허 공보 WO2007048077). 예를 들면, 약하게 푸코실화된 N-글리칸을 갖는 항체는 유럽 특허 공보 EP1176195 또는 국제 특허 공보 WO2001077181 또는 WO2012041768에 기술된 바와 같이 수득할 수 있다.

올리고만노즈 유형의 N-글리칸은 비안테너리 복합체 유형의 N-글리칸과 비교하여 감소된 생체내 반감기를 갖는다. 결과적으로, 유리하게는, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상기 정의된 바와 같이, 비안테너리 복합체 유형의 Fc 단편 글리칸 구조의 이의 N-글리코실화 부위에 낮은 푸코즈 함량을 갖는다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 변형되어 혈액-뇌 장벽(blood-brain barrier)(BBB)을 가로지르는 전달을 촉진시킨다. 예컨대, 비경구적으로 투여된 경우, BBB를 통한 이의 교차를 촉진시키기 위해 항체를 변형시키는 수단 및 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 예컨대, 문헌: Yu et al., 2011. Sci Transl Med. 3(84):84ra44; Atwal et al., 2011. Sci Transl Med. 3(84):84ra43; 및 국제 특허 공보 WO2015031673 및 WO2016208695에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 치료학적 모이어티, 즉, 약물에 접합된다. 일 구현예에서, 치료학적 모이어티는 세포독, 화학치료제, 사이토킨, 면역억제제, 면역 자극인자, 분해성 펩타이드 및 방사선동위원소로부터 선택된다. 이러한 접합체는 본원에서 "항체 약물 접합체" 또는 "ADC"로 지칭된다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 본원의 상기에 기술된 바와 같은 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산이다.

일 구현예에서, 단리된 핵산은 정제된다.

일 구현예에서, 단리된 핵산은 다음까지 정제된다:

(1) 흡광성 방법 또는 형광성 방법에 의해(예를 들면, 예컨대, 260 및 280 nm(A260/280)에서의 흡광성의 비를 측정함에 의해) 80 중량%, 85 중량%, 90 중량%, 91 중량%, 92 중량%, 93 중량%, 94 중량%, 95 중량% 이상, 및 가장 바람직하게는 96 중량%, 97 중량%, 98 중량% 또는 99 중량% 이상의 핵산; 또는

(2) 아가로즈 겔 전기영동에 의해 및 인터컬레이팅제(intercalating agent), 예를 들면, 에티디움 브로마이드, SYBR 그린(Green), 겔그린(GelGreen) 등을 사용하여 나타낸 바와 같은 균질성.

당해 분야의 기술자는 본원에 개시된 임의의 HCVR 및/또는 LCVR을 암호화하는 핵산 서열을 설계할 수 있음이 용이하게 이해될 것이다.

당해 분야의 기술자는 핵산 서열을 변형시켜 예컨대, 코돈 최적화에 의한, 예컨대, 재조합 생산율을 증진시키는 것을 목표로 하는 분자 생물학 방법에 친숙함이 또한 이해된다. 궁극적으로, 본 출원은 본원에 개시된 바와 같은 임의의 HCVR 및/또는 LCVR을 암호화하는 임의의 핵산을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 본원에 상기 기술된 바와 같은 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산을 포함하는 발현 벡터이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 발현 벡터는 조절 요소에 작동적으로 연결된, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편의 HCVR을 암호화하는 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 발현 벡터는 조절 요소에 작동적으로 연결된, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편의 LCVR을 암호화하는 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 발현 벡터는 다음을 포함한다:

- 조절 요소에 작동적으로 연결된, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편의 HCVR을 암호화하는 서열, 및

- 조절 요소에 작동적으로 연결된, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 결합 단편의 LCVR을 암호화하는 서열.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 항원-결합 항체 모사체이다.

항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대해 본원에 개시된 모든 구현예는 본 발명에 따른 항원-결합 항체 모사체에 대해 필요한 변경이 가해져서(mutatis mutandis) 바뀌어진다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물은 작은 유기 분자이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물을 포함하거나, 이로 이루어지거나 이로 필수적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물; 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

용어 "약제학적으로 허용되는 부형제"는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항세균제, 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 상기 부형제는 동물, 바람직하게는 사람에게 투여하는 경우 부작용, 알레르기 또는 다른 원치않은 반응을 생산하지 않는다. 사람 투여의 경우, 제제(preparation)는 규제 기관, 예를 들면, FDA 사무국 또는 EMA에 의해 요구되는 바와 같은 멸균성, 발열원성, 및 일반적인 안전성 및 순도 표준을 충족시켜야 한다.

이러한 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 부형제는 이온 교환체(ion exchanger), 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민, 완충제 물질, 예를 들면, 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화된 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예를 들면, 프로타민 설페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로즈-계 물질(예컨대, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈), 폴리에틸렌 글리콜, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지(wool fat)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 대상체에게 주사될 수 있는 제형에 대해 약제학적으로 허용되는 비히클(vehicle)을 포함한다. 이는 특히 등장성, 멸균, 염수 용액(인산일나트륨, 인산이나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 염화마그네슘 등 또는 이러한 염의 혼합물), 또는 첨가시, 멸균수 또는 생리학적 염수의 경우에 따라서, 주사가능한 용액의 구성을 허용하는 무수, 특히 동결-건조된 조성물일 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명에 따라 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물을 포함하거나 이로 이루어지거나 이로 필수적으로 이루어진 의약에 관한 것이다. 본 발명은 또한 의약의 제조 또는 제작을 위해 본원에 개시된 바와 같이 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에게 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약을 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 약물로서 사용하기 위한, 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 질환을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약에 관한 것이다.

일 구현예에서, 질환은 대상체에서 증가된 가용성 CD38 수준에 기인하거나 이에 의해 유발된 것에 관한 것이다. 특히, 증가된 가용성 CD38 수준은 혈액 샘플(예를 들면, 전혈, 혈장 및 혈청, 바람직하게는 혈장 샘플), 뇌척수액 샘플 및/또는 근육 생검에서 검출될 수 있다.

일 구현예에서, 질환은 다음을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 신경변성 질환; 신경염증 질환; 염증 질환; 자가면역 질환; 대사 질환; 눈 질환; 노화-관련 질환 및 노화; 및 암 및 전이. 일 구현예에서, 질환은 신경변성 질환, 신경염증 질환, 염증 질환, 자가면역 질환 및 이의 조합을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

본 개시내용은 또한 열거된 질환의 증상을 포함한다.

신경변성 질환의 예는 파킨슨 질환(Parkinson's disease) 및 관련 장애, 예를 들면, 파킨슨 질환, 파킨슨-치매(Parkinson-dementia), 상염색체 열성 PARK2 및 PARK6-연결된 파킨슨병(autosomal recessive PARK2 and PARK6-linked Parkinsonism), 비전형 파킨슨 증후군(atypical parkinsonian syndrome), 예를 들면, 진행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy), 피질기저 변성 증후군(corticobasal degeneration syndrome), 루이체 치매(Lewy bodies dementia), 다계통 위축증(multiple system atrophy), 과들루페 파킨슨병(Guadeloupean Parkinsonism) 및 리티고-보티그 질환(Lytigo-bodig disease); 운동 뉴우런 질환(motor neuron disease), 예를 들면, 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 전측두엽 치매(frontotemporal dementia), 진행성 숨뇌 마비(progressive bulbar palsy), 거짓연수 마비(pseudobulbar palsy), 원발 가쪽 경화증(primary lateral sclerosis), 진행성 근 위축증(progressive muscular atrophy), 척수 근 위축증(spinal muscular atrophy) 및 폴리오-후 증후군(post-polio syndrome); 신경-염증 질환(neuro-inflammatory disease); 알츠하이머 질환(Alzheimer's disease) 및 관련 장애, 예를 들면, 알츠하이머 장애의 조기 단계(early stage of an Alzheimer's disorder), 알츠하이머 장애의 경증 단계(mild stage of an Alzheimer's disorder), 알츠하이머 장애의 중간 단계(moderate stage of an Alzheimer's disorder), 알츠하이머 장애의 경증 내지 중간 단계(mild to moderate stage of an Alzheimer's disorder), 알츠하이머 장애의 진전된 단계(advanced stage of an Alzheimer's disorder), 경도 인지 장애(mild cognitive impairment), 혈관 치매(vascular dementia), 혼합 치매(mixed dementia), 픽 질환(Pick's disease), 은친화성 그레인 치매(argyrophilic grain disease), 후부 피질 위축증(posterior cortical atrophy), 베르니케 코르사코프 증후군(Wernicke-Korsakoff Syndrome); 프리온 질환(prion disease); 리소좀 축적 질환(lysosomal storage disease); 백색질형성장애증(leukodystrophy); 헌팅톤 질환(Huntington's Disease); 다발 경화증(multiple sclerosis); 다운 증후군(Down syndrome); 척추 및 연수 근 위축증(spinal and bulbar muscular atrophy); HIV-관련 신경 신경인식 장애(HIV-Associated Neurocognitive Disorder); 투렛 증후군(Tourette Syndrome); 상염색체 우성 척수소뇌성 기능저하(autosomal dominant spinocerebellar ataxia); 프리드리히 운동실조(Friedreich's Ataxia); 충치신경 팔리돌루시안 위축증(Dentatorubral pallidoluysian atrophy); 근긴장 디스트로피(myotonic dystrophy); 조현병(schizophrenia); 노화 관련 기억 손상(age associated memory impairment); 자폐증(autism) 및 자폐증 스펙트럼 장애(autism spectrum disorder); 주의력 결핍 과잉 행동 장애(attention-deficit hyperactivity disorder); 만성 통증(chronic pain); 알코올-유도된 치매(alcohol-induced dementia); 진행성 실어증(progressive non-fluent aphasia); 의미적 치매(semantic dementia); 강직성 하반신 마비(spastic paraplegia); 섬유근통(fibromyalgia); 라임후 질환(post-Lyme disease); 신경장애(neuropathy); 금단 증상(withdrawal symptom); 알파 질환(Alpers' disease); 뇌-눈-얼굴-골격 증후군(cerebro-oculo-facio-skeletal syndrome); 윌슨 질환(Wilson's disease); 코케인 증후군(Cockayne syndrome); 리 질환(Leigh's disease); 뇌에 철이 축적된 신경변성(neurodegeneration with brain iron accumulation); 안구간대경련-근간대경련 증후군(opsoclonus myoclonus syndrome); 알파-메틸아실-CoA 라세마제 결핍증(alpha-methylacyl-CoA racemase deficiency); 안데르만 증후군(andermann syndrome); 아트 증후군(Arts syndrome); 마리네스코-쇼그렌 증후군(Marinesco-Sjogren syndrome); 미코콘드리아 막 단백질-관련 신경변성(mitochondrial membrane protein-associated neurodegeneration); 판토테네이트 키나제-관련 신경변성(pantothenate kinase-associated neurodegeneration); 경화성 백혈구뇌증이 있는 다낭성 지방막 골다공증(polycystic lipomembranous osteodysplasia with sclerosing leukoencephalopathy); 리보플라빈 전달체 결핍 신경병증(riboflavin transporter deficiency neuronopathy); 및 모세혈관환장성 운동실조증(ataxia telangiectasia)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 신경변성 질환을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 "클론 B08" 또는 "클론 D06"으로 명명된 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.

용어 "신경염증 질환" 및 "염증성 탈수초 질환(inflammatory demyelinating disease)"은 뇌 또는 척추의 하나 이상의 부위의 염증이 존재하는 질환을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용될 수 있다. 당해 용어는, 그러나 완전히게 동일하지는 않고, 당해 분야의 기술자는 수초탈락(demyelination)이 흔히 염증 후 발달하지만, 신경염증 질환이 필수적으로 수초탈락을 요구하지 않음을 인식할 것이다.

신경염증 질환의 예는 다발 경화증(multiple sclerosis); 급성 산재성 뇌척수염(acute disseminated encephalomyelitis); 시신경염(optic neuritis); 횡단 척수염(transverse myelitis); 시속신경수염(neuromyelitis optica) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 예에서, 2차 신경염증을 지닌 일차 상태(primary conditions with secondary neuroinflammation)(예컨대, 2차 신경염증을 지닌 외상성 뇌 손상(traumatic brain injury with secondary neuroinflammation))는 본 개시내용과 관련되므로 신경염증 질환으로 고려될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 신경염증 질환의 예방 및/또는 치료시 사용하기 위한 "클론 B08"로 명명된 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.

염증 질환의 예는 관절염(arthritis)(예를 들면, 골관절염(osteoarthritis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 척추관절병증(spondyloarthropathy) 및 건선 관절염(psoriatic arthritis)); 천식(예를 들면, 아토피성 천식(atopic asthma), 비아토피성 천식(nonatopic asthma), 알레르기 천식(allergic asthma), 운동-유발 천식(exercise-induced asthma), 약물-유발 천식(drug-induced asthma), 직업성 천식(occupational asthma) 및 말기 단계 천식(late stage asthma)); 염증성 창자 질환(inflammatory bowel disease)(예를 들면, 크론 질환(Crohn's Disease), 궤양성 결장염(ulcerative colitis) 및 대장염(colitis)); 염증성 피부 장애(inflammatory skin disorder)(예를 들면, 건선(psoriasis), 아토피성 피부염(atopic dermatitis) 및 접촉 과민증(contact hypersensitivity)); 다발 경화증(multiple sclerosis); 골다공증(osteoporosis); 힘줄염(tendonitis); 알레르기 장애(allergic disorder)(예를 들면, 비염(rhinitis), 결막염(conjunctivitis) 및 두드러기(urticaria)); 숙주에 대한 상해(손상 또는 감염 포함)에 대한 반응시 염증(inflammation in response to an insult to the host); 이식 거부(transplant rejection); 이식체 대 숙주 질환(graft versus host disease); 패혈증(sepsis); 및 전신 홍반 루푸스(systematic lupus erythematosus)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 염증 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 따라 "클론 B08", "클론 C05", "클론 D06" 또는 "클론 D07"로 명명된 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.

자가염증 질환의 예는 원형 탈모증(alopecia areata); 강직성 척추염(ankylosing spondylitis); 관절염(arthritis); 항인지질 증후군(antiphospholipid syndrome); 자가면역 애디슨 질환(autoimmune Addison's disease); 자가면역 용혈 빈혈(autoimmune hemolytic anemia); 자가면역 내이 질환(autoimmune inner ear disease)(또한 메니에르 질환(Meniere's disease)으로 공지됨); 자가면역 림프증식 증후군(autimmune lymphoproliferative syndrome); 자가면역 혈소판감소 자색반(autoimmune thrombocytopenic purpura); 자가면역 용혈 빈혈(autoimmune hemolytic anemia); 자가면역 간염(autoimmune hepatitis); 베체트 질환(Bechet's disease); 크론 질환(Crohn's disease); 제1형 진성 당뇨병(diabetes mellitus type 1); 사구체 신염(glomerulonephritis); 그레이브스 질환(Graves' disease); 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome); 염증성 창자 질환(inflammatory bowel disease); 낭창성 신염(lupus nephritis); 다발 경화증(multiple sclerosis); 중근 근무력증(myasthenis gravis); 수포창(pemphigus); 악성 빈혈(pernicous anemia); 결절성 바달성 동맥염(polyarteritis nodosa); 다발근육염(polymyositis); 원발 쓸개관 간경화증(primary biliary cirrhosis); 건선(psoriasis); 레이노 현상(Raynaud's phenomenon); 류마티스 열(rheumatic fever); 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis); 피부 경화증(scleroderma); 소그렌 증후군(Sjogren's syndrome); 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus); 궤양성 결장염(ulcerative colitis); 백반(vitiligo); 및 베게너 과립교합증(Wegener's granulamatosis)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환을 예방 및/또는 치료하는데 사용하기 위한, 본 발명에 따라 "클론 B08", "클론 C05", "클론 D06" 또는 "클론 D07"로 명명된 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.

대사 질환(metabolic disease)의 예는 당뇨병(예컨대, 제1형 당뇨병, 제2형 당뇨병, 임신성 당뇨병(gestational diabetes); 고혈당증(hyperglycemia); 인슐린 내성(insulin resistance); 내당능 장애(impaired glucose tolerance); 과인슐린증(hyperinsulinism); 당뇨병성 합병증(diabetic complication); 이상지질혈증(dyslipidemia); 과콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia); 고중성지질혈증(hypertriglyceridemia); HDL 저콜레스테롤혈증(hypocholesterolemia); LDL 저콜레스테롤혈증 및/또는 HLD 비-콜레스테롤혈증(non-cholesterolemia); VLDL 고단백혈증(VLDL hyperproteinemia); 이상지질단백혈증(dyslipoproteinemia); 아포지질단백질 A-1 저단백혈증(apolipoprotein A-1 hypoproteinemia); 대사 증후군(metabolic syndrome); 증후군 X(syndrome X); 비만(obesity); 비-알코올성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver disease)(NAFLD); 비알코올성 지방간염(nonalcoholic steatohepatitis); 및 부신 백색질형성장애증(adrenal leukodystrophy)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "암"은 1차 또는 2차 암 뿐만 아니라, 재발형, 전이성 및/또는 다중-약물 내성 암을 포함함을 의미한다.

암의 예는 유방 암(breast cancer); 전립선 암(prostate cancer); 폐 암(lung cancer); 난소 암(ovarian cancer); 직장결장 암(colorectal cancer); 뇌 암(brain cancer)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 암의 다른 비-제한적 예는 감도 암(biliary tract cancer); 방광 암(bladder cancer); 뇌 암(brain cancer), 예를 들면, 교아세포종(glioblastoma) 및 수모세포종(medulloblastoma); 유방 암(breast cancer); 자궁경부 암(cervical cancer); 융모막 암종(choriocarcinoma); 결장 암(colon cancer); 자궁내막 암(endometrial cancer); 식도 암(esophageal cancer); 위 암(gastric cancer); 혈액학적 신생물(hematological neoplasm), 예를 들면, 급성 림프성(acute lymphocytic) 및 골수성 백혈병(myelogenous leukemia); 다발 골수종(multiple myeloma); AIDS-관련 백혈병(AIDS-associated leukemia) 및 성인 T-세포 백혈병 림프종(adult T-cell leukemia lymphoma); 상피내 신생물(intraepithelial neoplasm), 예를 들면, 보웬 질환(Bowen's disease) 및 페제트 질환(Paget's disease); 간 암(liver cancer); 폐 암(lung cancer); 림프종(lymphoma), 예를 들면, 호지킨 질환(Hodgkin's disease) 및 림프구성 림프종(lymphocytic lymphoma); 신경아세포종(neuroblastoma); 경구 암(oral cancer), 예를 들면, 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma); 난소 암(ovarian cancer), 예를 들면, 상피 세포, 기질 세포, 배아 세포 및 간엽 세포에서 발생된 암; 췌장 암(pancreatic cancer); 전립선 암(prostate cancer); 직장 암(rectal cancer); 육종(sarcoma), 예를 들면, 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 섬유육종(fibrosarcoma) 및 골육종(osteosarcoma); 피부 암(skin cancer), 예를 들면, 흑색종(melanoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 기저세포 암(basocellular cancer) 및 편평 세포 암(squamous cell cancer); 고환 암(testicular cancer), 예를 들면, 배아 종양(germinal tumor), 예를 들면, 정상피종(seminoma), 비-정상피종(non-seminoma), 기형종(teratoma), 융모막 암종(choriocarcinoma); 기질 종양(stromal tumor) 및 생식 세포 종양(germ cell tumor); 갑상선 암(thyroid cancer), 예를 들면, 갑상선 선암종(thyroid adenocarcinoma) 및 수질 암종(medullar carcinoma); 및 신장 암(renal cancer), 예를 들면, 선암종(adenocarcinoma) 및 빌름스 종양(Wilms' tumor)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 암의 여전히 다른 예는 림프종(lymphoma), 육종(sarcoma) 및 암종(carcinoma), 예컨대, 섬유육종(fibrosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골원성 육종(osteogenic sarcoma), 척색종(chordoma), 혈관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종(lymphangiosarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 림프관내피모세포육종(lymphangioendotheliosarcoma), 유윙 종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 결장 암종(colon carcinoma), 췌장 암(pancreatic cancer), 유방 암(breast cancer), 난소 암(ovarian cancer), 전립선 암(prostate cancer), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 한성 암종(sweat gland carcinoma), 피지선 암종(sebaceous gland carcinoma), 유도모양 암종(papillary carcinoma), 유두모양 샘암종(papillary adenocarcinoma), 낭샘암종(cystadenocarcinoma), 수질 암종(medullary carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 신장 세포 암종(renal cell carcinoma), 간세포암(hepatoma), 담즙 관 암종(bile duct carcinoma), 융모막 암종(choriocarcinoma), 저앙피종(seminoma), 태생성 암종(embryonal carcinoma), 빌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부 암(cervical cancer), 고환 종양(testicular tumor), 폐 육종(lung carcinoma), 비-소 세포 폐 암종(non-small cell lung carcinoma), 소 세포 폐 암종(small cell lung carcinoma), 방광 암종(bladder carcinoma), 상피 암종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수모세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 뇌실막종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관모세포종(hemangioblastoma), 속귀신경집종(acoustic neuroma), 희소돌기아교세포종(oligodendroglioma), 수막종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경아세포종(neuroblastoma), 망막아종(retinoblastoma); 백혈병(leukemia), 예컨대, 급성 림프성 백혈병(acute lymphocytic leukemia) 및 급성 골수세포 백혈병(acute myelocytic leukemia)(골수모구(myeloblastic), 전골수구(promyelocytic), 골수단핵구(myelomonocytic), 단핵구(monocytic) 및 적백혈병(erythroleukemia)); 만성 백혈병(chronic leukemia)(만성 골수구(chronic myelocytic)(과립구(granulocytic)) 백혈병 및 만성 림프성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia)); 및 진성다혈구증(polycythemia vera), 림프종(lymphoma)(호지킨 질환(Hodgkin's disease) 및 비-호지킨 질환(non-Hodgkin's disease)), 다발 골수종(multiple myeloma), 발덴스트롬마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia) 및 중쇄를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

눈 질환의 예는 노화-관련 황반 변성(age-related macular degeneration), 녹내장(glaucoma), 황반 부종(macular edema), 당뇨병성 망막병증(diabetic retinopathy), 포도막염(uveitis), 알레르기 결막염(allergic conjunctivitis), 공막염(scleritis), 각막염(keratitis), 각결막염(keratoconjunctivitis), 버날 결막염(vernal keratoconjunctivitis), 아토피 결막염(atopic keratoconjunctivitis), 반흔 결막염(cicatrizing conjunctivitis), 안검염(blepharitis), 내안구염(enophthalmitis), 망막염(retinitis), 망막증(retinopathy), 맥락막염(choroiditis), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome) 및 망막 괴사(retinal necrosis)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

또한 "유기체 노화(organismal aging)"로 지칭되는 "노화(Aging)"는 노화-관련 질환에 의해 나타나며, 이의 발생은 나이에 따라 증가한다. 노화로부터의 사망은 노화-관련 질환으로부터의 사망을 의미한다. 노화의 억제 또는 완화는 하나, 일부 또는 대부분의 노화-관련 질환을 지연시킨다. 느린 노화는 지연된 노화-관련 질환으로 나타난다. 느린 노화는 건강한 노화 유형으로 고려된다.

노화-관련 질환의 예는 양성 종양(benign tumor); 심혈관 질환(cardiovascular disease), 예를 들면, 뇌졸중(stroke), 죽상경화증(atherosclerosis) 및 고혈압(hypertension); 혈관종(angioma); 골다공증(osteoporosis); 인슐린-내성(insulin-resistance) 및 제II형 당뇨병(type II diabetes), 에를 들면, 당뇨병성 망막병증(diabetic retinopathy) 및 신경병증(neuropathy); 알츠하이머 질환; 파킨슨 질환; 노화-관련 황반 변성; 관절염; 지루성 각화증(seborrheic keratosis); 자외선 각화증(actinic keratosis); 광노화된 피부(photoaged skin); 피부 점(skin spot); 피부 암; 전신 홍반 루푸스; 건선; 평활근 세포 증식(smooth muscle cell proliferation) 및 혈관 손상 후 내막 비후화(intimal thickening following vascular injury); 염증(inflammation); 관절염; 화학치료요법의 부작용(side effects of chemotherapy); 양성 전립선 비대증(benign prostatic hyperplasia); 뿐만 아니라 이의 발생이 젊은 사람에서보다 노인 사람에서 더 높은 흔하지 않은 질환을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 질환은 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis); 파킨슨 질환 및 관련된 장애; 알츠하이머 질환 및 관련된 장애; 헌팅톤 질환(Huntington disease); 다발 경화증(multiple sclerosis); 류마티스 관절염; 전신 홍반 루푸스; 당뇨병; 비만; 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis); 노화-관련 황반 변성(age-related macular degeneration); 및 녹내장을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 질환은 근위축성 측색 경화증; 파킨슨 질환 및 관련된 장애; 알츠하이머 질환 및 관련된 장애; 및 다발 경화증을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 질환은 근위축성 측색 경화증이다. 일부 구현예에서, 질환은 다발 경화증이다. 일부 구현예에서, 질환은 파킨슨 질환 및 관련된 장애이다. 일부 구현예에서, 질환은 알츠하이머 질환 및 관련된 장애이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 방법은 유기체 노화를 지연시키기 위한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따라 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 유기체 노화를 지연시키는데 사용하기 위한 것이다.

본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약을 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 적어도 하나의 소염성 사이토킨의 수준을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 적어도 하나의 소염성 사이토킨의 수준을 증가시키는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약에 관한 것이다.

소염성 사이토킨의 예는, 인터류킨-10(IL-10), 형질전환 성장 인자 ß(TGF-ß), 인터류킨-1ra(IL-1ra), 인터류킨-4(IL-4), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-11(IL-11), 인터류킨-13(IL-13) 및 인터류킨-22(IL-22)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

대상체에서 혈액 사이토킨 수준을 측정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들면, 하기 실시예 단락에서 기술된 것과 같은, ELISA 시험의 사용을 포함한다.

특히, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약을 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 IL-10의 수준을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 IL-10의 수준을 증가시키는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약에 관한 것이다.

대상체로부터의 혈액 샘플 속에서 IL-10 수준을 측정하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 예컨대, ELISA 시험의 사용을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 음성 대조군 분자의 투여와 비교하여 대상체의 혈액 속에서 적어도 100%, 200%, 300%, 특히 적어도 400% 및 보다 특히 적어도 500% 까지 IL-10 수준의 증가를 개시한다.

일 구현예에서, 대상체는 동물이다. 일 구현예에서, 대상체는 포유동물이다.

포유동물의 예는 영장류(예를 들면, 사람 및 비-사람), 축우(cattle)(예를 들면, 소), 말, 돼지, 양, 염소, 개 및 고양이를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

바람직한 구현예에서, 대상체는 사람이다.

일 구현예에서, 대상체는 성인(예컨대, 사람 나이로 18세 이상인 대상체 또는 생식능을 획득한 후의 대상체)이다. 다른 구현예에서, 대상체는 어린이(예를 들면, 사람 나이로 18세 이하의 대상체 또는 생식능을 획득하기 전의 대상체)이다.

일 구현예에서, 대상체는 남성이다. 일 구현예에서, 대상체는 여성이다.

일 구현예에서, 대상체는 신경변성 질환; 신경염증 질환; 염증 질환; 자가면역 질환; 대사 질환; 눈 질환; 노화-관련 질환; 및 암 및 전이를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환으로 진단된다/되었다.

일 구현예에서, 대상체는 근위축성 측색 경화증; 파킨슨 질환 및 관련된 장애; 알츠하이머 질환 및 관련된 장애; 헌팅톤 질환; 다발 경화증; 류마티스 관절염; 전신 홍반 루푸스; 당뇨병; 비만; 비-알코올성 지방간염; 노화-관련 황반 변성; 및 녹내장을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환으로 진단된다/되었다.

일 구현예에서, 대상체는 신경변성 질환; 신경염증 질환; 염증 질환; 자가면역 질환; 대사 질환; 눈 질환; 노화-관련 질환; 및 암 및 전이를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환으로 발달할 위험에 있다.

일 구현예에서, 대상체는 근위축성 측색 경화증; 파킨슨 질환 및 관련된 장애; 알츠하이머 질환 및 관련된 장애; 헌팅톤 질환; 다발 경화증; 류마티스 관절염; 전신 홍반 루푸스; 당뇨병; 비만; 비-알코올성 지방간염; 노화-관련 황반 변성; 및 녹내장을 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환으로 발달한 위험에 있다.

일 구현예에서, 대상체는 증가된 혈장 수용성 CD38 수준으로 진단된다/되었다.

일 구현예에서, 대상체는 증가된 뇌척수액 가용성 CD38 수준으로 진단된다/되었다.

일 구현예에서, 대상체는 근육 생검에서 증가된 가용성 CD38 수준으로 진단된다/되었다.

가용성 CD38 수준을 검출하고 측정하는 방법은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있다. 특히, 가용성 CD38 수준을 검출하고 측정하기 위한 수단 및 키트(kit)는 상업적으로 이용가능하다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 대상체에게 투여하기 위해 제형화될 것이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 전신계로 또는 국소적으로 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 주사에 의해, 경구적으로, 국소적으로, 비강으로, 협측으로(buccally), 직장으로, 질로(vaginaly), 기관내로, 내시경술에 의해, 경점막으로, 또는 경피 투여에 의해 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 투여, 바람직하게는 전신계적으로 투여되어야 한다.

주사용으로 채택된 제형의 예는 예를 들면, 멸균 수성 액체, 젤제, 분산제, 유제, 현탁제와 같은 액제, 사용 전에 액체의 첨가시 액제 또는 현탁제를 제조하기 위해 사용하기 적합한 고체 형, 예를 들면, 산제, 리포좀 형태 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

전신계 주사의 예는 정맥내(iv), 피하, 근육내(im), 피내(id), 복강내(ip), 척추옆 주사(perispinal injection) 및 관류(perfusion)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

일 구현예에서, 주사된 경우, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 멸균성이다. 멸균 조성물을 수득하기 위한 방법은 GMP 합성(여기서 GMP는 "우수의약품제조관리기준(Good manufacturing practice)"을 나타낸다)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

조성물의 멸균 주사가능한 형태는 수성 또는 유성 현탁제일 수 있다. 이러한 현탁제는 적합한 분산제(dispersing agent) 또는 습윤제(wetting agent) 및 현탁제(suspending agent)를 사용하여 당해 분야에 공지된 기술에 따라 제형화할 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 무-독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 속의 멸균 주사가능한 액제 또는 현탁제일 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액(Ringer's solution) 및 등장성 염화나트륨 용액이 있을 수 있다. 또한, 멸균성의, 고정 오일이 용매 또는 현탁화 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 임의의 배합 고정 오일, 예를 들면, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 사용할 수 있다. 지방산, 예를 들면, 올레산 및 이의 글리세리드 유도체, 특히 이의 폴리옥시에틸화된 버젼의 올리브 오일 또는 피마자 오일과 같은 천연의 약제학적으로 허용되는 오일에서와 같이, 주사가능한 제제에서 유용하다. 이러한 오일 액제 또는 현탁제는 또한 장쇄 알코올 희석제 또는 분산제, 예를 들면, 카복시메틸 셀룰로즈 또는 유제 및 현탁제를 포함하는 약제학적으로 허용되는 투여량 형태의 제형에 일반적으로 사용된 유사 분산제를 함유할 수 있다. 다른 일반적으로 사용된 계면활성제, 예를 들어, 트윈(Tween), 스판(Span) 및 다른 유화제(other emulsifying agent) 또는 약제학적으로 허용되는 고체, 액체, 또는 다른 투여량 형태의 제작시 일반적으로 사용된 생이용능 향상제가 제형의 목적을 위해 또한 사용될 수 있다.

다른 적합한 투여 경로가 또한 본 발명에서 고려됨이 이해될 것이고, 투여 방식은 정상적인 의학적 판단 영역내에서 주치의가 궁극적으로 결정할 것이다. 주사(iv, ip, im 등)에 의한 투여와는 별도로, 다른 경로, 예를 들면, 분무화(nebulization)(Respaud et al., 2014. MAbs. 6(5):1347-55; Guilleminault et al., 2014. J Control Release. 196:344-54; Respaud et al., 2015. Expert Opin Drug Deliv. 12(6):1027-39) 또는 피하 투여(Jackisch et al., 2014. Geburtshilfe Frauenheilkd. 74(4):343-349; Solal-Celigny, 2015. Expert Rev Hematol. 8(2):147-53)가 이용가능하다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 바람직하게는 정맥내 또는 피하 투여 경로를 사용하는 경우, 혈액-뇌 장벽(BBB)을 횡단할 수 있다.

BBB를 횡단하여 정맥내 주사된 경우 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약을 전달하는 방법은, 특히 상기 화합물이 항체인 경우, 당해 분야에 공지되어 있다. 더욱이, 수개의 공보는 모노클로날 항체의 정맥내 주사가 혈액-뇌 장벽(BBB)를 효과적으로 횡단하였음을 입증하였다. 정맥내 주사된 모노클로날 항체의 뇌 농도의 약동학적 모델링은 혈장 mAb 농도 중 대략 0.4%가 뇌에서 발견됨을 입증하였다(Shah & Bets, 2013. MAbs. 5(2):297-305). 아두카누맙 및 ABBV-8E12의 뇌/혈장 비는 사람에서 각각 1.3% 및 0.385%에 이르는 것으로 밝혀졌다(Sevigny et al. 2016. Nature. 537(7618):50-6; West et al., 2017. J Prev Alz Dis. 4(4):236-241). 또한, 수개의 전략이 개발되어 이특이적인 항체 표적화 인슐린 수용체 또는 트랜스페린 수용체의 사용하거나(고찰을 위한 참고: Neves et al., 2016. Trends Biotech. 34(1):36-48) 문헌: Konofagou et al., 2012. Curr Pharm Biotechnol. 13(7):1332-45에 기술된 바와 같이, 초음파-유도된 BBB 개봉(ultrasound-induced BBB opening)을 사용함을 포함하는 BBB 횡단을 증진시켰다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량으로 투여되어야 한다.

이러한 치료학적 양은 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 투여에 의해 예방 및/또는 치료되는 것으로 고려되는 질환에서 상기 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 투여 효과의 평가를 포함하는 통상의 시험에 의해 당해 분야의 기술자에 의해 측정될 수 있다.

예를 들면, 이러한 시험은 특히 대상체의 생물학적 샘플로부터의 상기 질환의 마커(marker)(생물학적 및/또는 임상적) 특성의 세트에서 본 발명에 따른 상기 전술한 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 상이한 양의 정량적 및 정성적 효과 둘 다를 분석함으로써 시행할 수 있다.

그러나, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 총 1일 사용량은 건전한 의학적 판단 영역내에서 주치의에 의해 결정될 것임이 이해될 것이다. 임의의 특수한 환자에 대한 구체적인 치료학적 유효 용량 수준은 다양한 인자, 예를 들면, 치료되는 질환 및 질환의 중증도; 사용된 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 활성; 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 사용된 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 속도; 치료 기간; 사용된 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약과 함께 또는 동시에 사용된 약물; 및 의학 분야에 잘 공지된 유사 인자에 의존할 것이다. 예를 들면, 목적한 치료학적 효과를 달성하는데 요구되는 화합물의 용량보다 더 낮은 수준에서 출발하고 목적한 효과가 달성될 때까지 투여량을 서서히 증가시키는 것이 당해 분야의 기술내에 있다. 각각의 치료에 요구되는 총 용량은 다수 용량 또는 단일 용량으로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 약 0.1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 약 45 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 2.5 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 20 mg/kg이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 약 15 mg/kg이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 약 10 μg/kg 내지 약 4 mg/kg(사람 등가 용량(human equivalent dose(HED)), 약 40 μg/kg 내지 약 3.6 mg/kg(HED), 약 80 μg/kg 내지 약 3.2 mg/kg(HED), 약 200 μg/kg 내지 약 2.8 mg/kg(HED), 약 400 μg/kg 내지 약 2.4 mg/kg(HED), 약 800 μg/kg 내지 약 2 mg/kg(HED)의 범위이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 약 1.2 mg/kg(HED)이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회 이상이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 매일, 격일, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 매주, 격주, 3주마다 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 매달, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다 투여되어야 한다.

바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 12시간마다, 24시간마다, 36시간마다, 48시간마다, 60시간마다, 72시간마다, 96시간마다 투여되어야 한다.

바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 60시간 마다 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 급성 투여용이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 만성 투여용이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 치료학적 유효량은 약 5일, 7일, 10일, 14일, 21일, 28일, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 1년 이상 동안 투여되어야 한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약은 치료학적 약물 전에, 동시에 또는 후에 투여되어야 한다.

본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약과 동시-투여용으로 적합한 치료학적 약물의 일부 예는 제한없이, 면역억제제, 세포독, 화학치료제, 사이토킨, 면역 자극인자, 분해 펩타이드(lytic peptide) 및 방사선동원원소를 포함한다.

본원에 나열된 것들 중에서 선택될 수 있지만 이에 한정되지 않는, 특수한 치료학적 약물과 본 발명에 따른 화합물, 조성물, 약제학적 조성물 또는 의약의 동시-투여가 예방 및/또는 치료될 질환 또는 상태에 의존할 것임은 당해 분야의 기술자에 의해 이해될 것이다.

면역억제제의 예는 제한없이, mTOR 억제제, 예를 들면, 예컨대, 시롤리무스, 에메롤리무스, 리다포롤리무스, 템시롤리무스, 우미롤리무스 및 조타롤리무스; IL-1 수용체 길항제, 예를 들면, 예컨대, 아나킨라; 항대사제, 예를 들면, 예컨대, 아자티오프린, 레플루모미드, 메토트렉세이트, 마이코페놀산 및 테리프루노미드; IMiD, 예를 들면, 예컨대, 아프레밀라스트, 레날리도미드, 포말리도미드 및 탈리도미드; 및 항체, 예를 들면, 예컨대, 에쿨리주맙, 아달리무맙, 아펠리모맙, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙, 인플릭시맙, 네렐리모맙, 메폴리주맙, 오말리주맙, 파랄리모맙, 엘실리모맙, 레브리키주맙, 우스테키누맙, 세쿠키누맙, 무로모납-CD3, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 클레놀릭시맙, 켈릭시맙, 자놀리무맙, 에팔리주맙, 에를리주맙, 오비누투주맙, 리툭시맙, 오크렐리주맙, 파스콜리주맙, 고밀릭시맙, 루밀릭시맙, 테넬릭시맙, 토랄리주맙, 아셀리주맙, 갈릭시맙, 가빌리모맙, 루플리주맙, 벨리무맙, 블리시비모드, 이필리무맙, 트레멜리무맙, 베르틸리무맙, 베르틸리무맙, 레르델리무맙, 메텔리무맙, 나탈리주맙, 토실리주맙, 오둘리모맙, 바실릭시맙, 다클리주맙, 이놀리모맙, 졸리모맙 아리톡스, 아토롤리무맙, 세델리주맙, 폰톨리주맙, 마슬리모맙, 모롤리무맙, 펙셀리주맙, 레슬리주맙, 로벨리주맙, 시플리주맙, 탈리주맙, 텔리모맙 아리톡스, 바팔릭시맙, 페팔리모맙, 아바타셉트, 벨라타셉트, 에타네르셉트, 페그수네르셉트, 아플리베르셉트, 알레파셉트 및 릴로나셉트를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

세포독의 예는 제한없이, 방사성핵종(예컨대, ³⁵S, ¹⁴C, ³²P, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ⁸⁹Zr, ²⁰¹Tl, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁵⁷Cu, ²¹³Bi, 및 ²¹¹At), 접합된 방사성핵종, 및 화학치료제를 포함한다. 세포독의 추가의 예는 항대사제(예컨대, 5-플루오로우리실(5-FU), 메토트렉세이트(MTX), 플루다라빈 등), 항-미소관제(예컨대, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜치킨, 탁산(예를 들면, 파클리탁셀 및 도세탁셀) 등), 알킬화제(예컨대, 사이클로파스파미드, 멜팔란, 비스클로로에틸니트로소우레아(BCNU) 등), 백금제(예컨대, 시스플라틴(또한 cDDP로 명명됨), 카르보플라틴, 옥살리플라틴, JM-216, CI-973 등), 안트라사이클린(예컨대, 독소루비신, 다우노루비신 등), 항생제(예컨대, 미토마이신-C), 토포이소머라제 억제제(예컨대, 에토포시드, 테노포시드, 및 캄프토테신), 또는 다른 세포독성제, 예를 들면, 리신, 디프테리아 독소(DT), 슈도모나스 외독소(PE) A, PE40, 아브린, 사포린, 미국자리공 바이러스 단백질(pokeweed viral protein), 에티디움 브로마이드, 글루코코르티코이드, 안트락스 독소 및 기타를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

화학치료제의 예는, 제한없이, 백금 배위 화합물(예를 들면, 예컨대, 시스플라틴, 카르보플라틴 또는 옥살리플라틴); 탁산 화합물(예를 들면, 예컨대, 파클리탁셀 또는 도세탁셀); 토포이소머라제 I 억제제(예를 들면, 예컨대, 이리노테칸 또는 토포테칸); 토포이소머라제 II 억제제(예를 들면, 예컨대, 에토포시드 또는 테니포시드); 빈카 알칼로이드(예를 들면, 예컨대, 빈블라스틴, 빈크리스틴 또는 비노렐빈); 항-종양 뉴클레오시드 유도체(예를 들면, 예컨대, 5-플루오로우라실, 겜시타빈 또는 카펙시타빈); 알킬화제(예를 들면, 예컨대, 질소 무스타드 또는 니트로소우레아, 사이클로포스파미드, 클로람부실, 카르무스틴 또는 로무스틴; 항-종양 안트라사이클린 유도체(예를 들면, 예컨대, 다우노루비신, 독소루비신, 이리다루비신 또는 미톡산트론); 항-HER2 항체(예를 들면, 예컨대, 트라스투주맙); 에스트로겐 수용체 길항제 또는 선택적 에스트로겐 수용체 조절인자(예를 들면, 예컨대, 타목시펜, 토레미펜, 드롤록시펜, 파슬로덱스 또는 랄록시펜); 아로마타제 억제제(예를 들면, 예컨대, 엑세메스탄, 아나스트로졸, 레트라졸 또는 보로졸); 분화제(differentiating agent)(예를 들면, 예컨대, 레티노이드, 비타민 D 및 레티노산 대사 차단제 [RAMBA], 예를 들면, 아쿠탄); DNA 메틸 트랜스퍼라제 억제제(예를 들면, 예컨대, 아자사이티딘); 키나제 억제제(예를 들면, 예컨대, 플라보페리돌, 이마티닙 메실레이트 또는 게피티닙); 파르네실트랜스퍼라제 억제제; 및 HDAC 억제제를 포함한다.

사이토킨의 예는, 제한없이, 케모킨(예를 들면, 예컨대, CCL1, CCL2/MCP1, CCL3/MIP1α, CCL4/MIP1β, CCL5/RANTES, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18/PARC/DCCK1/AMAC1/MIP4, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CXCL1/KC, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8/IL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCL17, CX3CL1, XCL1 및 XCL2), 종양 괴사 인자(예를 들면, 예컨대, TNFA, 림포톡신(Lymphotoxin), TNFSF4, TNFSF5/CD40LG, TNFSF6, TNFSF7, TNFSF8, TNFSF9, TNFSF10, TNFSF11, TNFSF13, TNFSF13B 및 EDA) 및 인터류킨(예를 들면, 예컨대, IL-1α, IL-1β, IL-1Ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, IL-34, IL-35, IL-36α, IL-36β, IL-36γ, IL-36Ra, IL-37, IL-38, IFNα, IFNβ, IFNκ, IFNω 및 GM-CSF)을 포함한다.

면역 자극인자의 예는, 제한없이, 필그라스팀, 페그필그라스팀, 레노그라스팀, 몰그라모스팀, 사르그라모스팀, 안세스팀, 알빈테르페론, 인터페론 알파, 페그인터페론 알파, 인터페론 베타, 페그인터페론 베타, 인터페론 감마, 알데스류킨, 오프렐베킨, 성장 호르몬, 면역시아닌, 페그아데마제, 프롤락틴, 타소네르민, 하스타민 디하이드로클로라이드, 폴리 ICLC, 비타민 D, 렌티난, 플레릭사포르, 로퀴니멕스, 미파무르티드, 글라티라머 아세테이트, 티모펜틴, 티모신 α1, 티뮬린, 폴리이노신:폴리사이티딜산, 피도티모드, 바실러스 칼메트-구에린 백신(Bacillus Calmette-Guerin vaccine), 흑색종 백신 및 시풀레우셀-T 백신을 포함한다.

분해 펩타이드의 예는, 제한없이, 독소(예를 들면, 예컨대, 디프테리아 독소 또는 슈도모나스 외독소)를 포함한다.

방사선동위원소의 예는, 제한없이, 테크네튬의 방사선핵종(예컨대, Tc-99 및 Tc-97), 칼륨(예컨대, K-40), 루비듐(예컨대, Rb-82), 요오드(예컨대, I-123, I-124, I-125, I-129, I-131), 세슘(예컨대, Cs-135, Cs-137), 코발트(예컨대, Co-60), 팔라듐(예컨대, Pd-103, Pd-107), 카드뮴(예컨대, Cd-113), 스트론튬(예컨대, Sr-89, Sr-90), 유로퓸(예컨대, Eu-55), 주석(예컨대, Sn-121, Sn-126), 인(예컨대, P-32, P-33), 탈륨(예컨대, Tl-201), 인듐(예컨대, In-111), 갈륨(예컨대, Ga-67, Ga-68), 이트륨(예컨대, Y-90), 이리듐(예컨대, Ir-192), 비스무쓰(예컨대, Bi-213), 라듐(예컨대, Ra-223, Ra-225), 및 루테늄(예컨대, Ru-106)을 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물의 제조 방법에 관한 것이며, 이는 본원의 상기에 상세히 설명한 바와 같이, CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물을 선택하는 단계를 포함한다.

일 구현예에서 화합물이 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체인 경우, 방법은 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 바와 같이, CD38에 대한 K_D 값이 10^-7 M 이하, 바람직하게는 10^-8M 이하, 보다 바람직하게는 10^-9 M 이하, 심지어 보다 바람직하게는 1.10^-10 M 이하인 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체를 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다.

일 구현예에서 화합물이 작은 유기 분자인 경우, 방법은 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 바와 같이, CD38에 대해 10^-6 M 이하, 바람직하게는 10^-7M 이하, 보다 바람직하게는 1.10^-8 M 이하의 K_D 값으로 CD31 결합을 대체하는 작은 유기 분자를 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다.

일 구현예에서 화합물이 올리고뉴클레오타이드인 경우, 방법은 바이오센서 분석, 특히 Biacore 분석에 의해 측정될 수 있는 바와 같이, CD38에 대해 200 nM 이하, 바람직하게는 150 nM 이하, 보다 바람직하게는 100 nM 이하의 K_D 값으로 CD31 결합을 대체하는 올리고뉴클레오타이드를 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다.

상기 나타낸 바와 같이, CD31과 경쟁하는 화합물의 능력은 FACS 또는 Biacore 분석으로 시험할 수 있다.

일 구현예에서 화합물이 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체인 경우, 본 발명에 따른 화합물을 제작하는 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같이, CD38 내에서 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체를 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

바람직하게는, CD38 내에서 적어도 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체를 선택하는 단계는 다음에 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체를 선택하는 단계를 포함한다:

- 적어도 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 아미노산 잔기 220번 내지 아미노산 잔기 285번에 걸쳐 연장되는 적어도 하나의 에피토프; 및/또는

- 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 254번 및/또는 275번; 및/또는

- 서열 번호: 2를 지닌 사람 CD38의 시스테인 254번 및 시스테인 275번을 포함하는 제5 C-말단 이황화물 루프(loop).

일 구현예에서 화합물이 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체인 경우, 본 발명에 따른 화합물의 제조 방법은 ADCC, ADCP 및/또는 CDC를 매개하거나, 개시하거나 향상시키지 않는 항체, 이의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 항체 모사체를 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 방법은 적어도 하나, 바람직하게는 적어도 2개, 보다 바람직하게는 3개의 다음 특성을 갖는 화합물을 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다:

- 이는 미토콘드리아 복합체 I 억제로 인한 에너지 결핍에 대해, 특히 미토콘드리아 신경독 MPP⁺에 대해 도파민성 뉴우런을 보호하고/하거나;

- 이는 마우스에게 투여되는 경우 생체내 IL-10 수준을 증가시킨다.

일 구현예에서, 방법은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하고, 게니스테인의 존재하에서 억제되는 별개의 세포질성 기질의 타이로신 포스포릴화를 유도하는 화합물을 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다.

일 구현예에서, 방법은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하고, CD38 내재화를 개사하는, 화합물을 선택하는 단계를 포함하거나, 이로 이루어진다.

일 구현예에서, 방법은 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하고, 리소좀 세포외배출을 유도하는 화합물을 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다. 특히, 방법은 바쿠올린-1의 존재하에 억제된 리소좀 세포외배출을 유도하는 화합물을 선택하는 단계를 포함하거나 이로 이루어진다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물, 특히 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량에 대해 반응에 민감한, 신경변성 질환, 신경염증 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 눈 질환, 노화-관련 질환 및 노화, 및 암 및 전이를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환에 대한 치료가 요구되는 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 CD38 수준을 측정함을 포함한다.

본 발명은 또한 생물마커(biomarker)로서, 특히, 상기 개인이 본 발명에 따른 화합물의 유효량, 특히 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량에 대해 반응하기에 민감한지의 여부를 결정하기 위해, 신경변성 질환, 신경염증 질환, 염증 질환, 자가면역 질환, 대사 질환, 눈 질환, 노화-관련 질환 및 노화, 및 암 및 전이를 포함하거나 이로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환에 대한 치료가 요구되는 개체(individual)내에서 CD38 수준의 측정의 용도에 관한 것이다.

일 구현예에서, CD38 수준은 혈장 CD38 수준이다. 일 구현예에서, CD38 수준은 뇌척수액 CD38 수준이다. CD38 수준을 측정하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고, 채택된 항-CD38 항체를 사용한 ELISA 검정을 포함할 수 있다. ELISA에 적합한 항체는 예컨대, R&D SYSTEMS®로부터 구입할 수 있다.

일부 구현예에서, 방법은 상기 개체내에서 측정된 CD38 수준을 참고 값과 비교하는 단계를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 참고 값은 건강한 개체 또는 건강한 개체의 그룹에서 CD38 수준을 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "건강한 개체(들)"은 임의의 상기 언급한 질환을 가지지 않은 개체(들)을 지칭한다. 일 구현예에서, 참고 값과 비교한 상기 개체내에서 측정된 CD38 수준에 있어서 통계적으로 유의적인 증가는 개체가 질환의 치료시 본 발명에 따른 항-CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대해 반응하는데 민감함을 나타낼 수 있다.

도 1은 MPP⁺-유도된 도파민생성(DA) 세포 사멸에 대한 sCD31의 신경보호 효과를 나타내는 플롯(plot)이다. sCD31(0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺ (3 μM)로 처리한 중뇌 배양물(midbrain culture)에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 처리; # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 2는 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대한 sCD31의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 항-CD31 항체 클론 Moon-1(1 μg/ml), 길항성 항-CD38 항체 클론 OKT10(OKT, 1 μg/ml), 또는 길항성 항-CD38 항체 클론 AT13/5(1 μg/ml)의 존재 또는 부재하에서 sCD31(1 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리한 중뇌 배양물 속에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 처리; # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 3은 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대한 작용성 항-CD38 항체 클론 HB7의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 길항성 항-CD38 항체 클론 OKT10(OKT, 1 μg/ml), 또는 길항성 항-CD38 항체 클론 AT13/5(1 μg/ml)의 존재 또는 부재하에서 작용성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리한 중뇌 배양물 속에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 처리; # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 4는 타이로신 키나제 게니스테인의 존재 또는 부재하에서 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대한 sCD31 또는 작용성 항-CD38 항체 클론 HB7의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 타이로신 키나제 억제제인, 게니스테인(GENI, 10 nM)의 존재 또는 부재하에서 sCD31(1 μg/ml) 또는 작용성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리한 중뇌 배양물 속에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 처리; # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 5는 리소좀 세포외배출 억제제 바쿠올린-1 또는 엔도시딘2의 존재 또는 부재하에서 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대한 sCD31 또는 작용성 항-CD38 항체 클론 HB7의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 리소좀 성숙 및 세포외배출의 둘 다의 억제제인, 바쿠올린-1(VAC, 10 μM), 또는 엔도시딘2(40 μM)의 존재 또는 부재하에서 sCD31(1 μg/ml) 또는 작용성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리한 중뇌 배양물 속에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 처리; # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 6은 흑질 치밀집(substantia nigra pars compacta)내 다수의 DA(TH⁺) 뉴우런에서 시험관내 MPTP 마우스 모델에서 피하 주사된(15 mg/kg iv, MPTP 주사 2일 전) 작용성 항-CD38 HB7 항체의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 결과는 대조군(PBS-주사된) 마우스의 %로 나타낸다. PBS 그룹: n= 5; MPTP 그룹: n= 6; MPTP + HB7 15 mg/kg iv 그룹: n= 8. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군 (PBS-주사된) 그룹. # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPTP 그룹.
도 7은 마우스내 IL-10 수준에 있어서 작용성 항-CD38 클론 HB7의 정맥내 주사의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군(PBS-주사된) 그룹.
도 8은 CD31과 경쟁하는 항-CD38 항체를 확인하는데 사용된 공정을 나타내는 도해(scheme)이다.
도 9는 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대해 파아지 디스플레이 또는 항-CD38 항체 클론 HB7에 의해 확인된 신규한 사람화된 항-CD38 항체(클론 A02, B06, B08, B09, C05, C06, C08, D03, D04, D06, D07, D10, E03, E05, E08, F07)의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 항-CD38 항체(클론 A02, B06, B08, B09, C05, C06, C08, D03, D04, D06, D07, D10, E03, E05, E08, F07; 0.5 μg/ml) 또는 항-CD38 항체 클론 HB7(0.5 μg/ml)에 노출시키거나 노출시키지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리된 중뇌 배양물 속에서의 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 10은 리소좀 세포외배출 억제제 바쿠올린-1의 존재 또는 부재하에서 MPP⁺-유도된 DA 세포 사멸에 대해 파아지 디스플레이로 확인된 신규한 사람화된 항-CD38 항체(클론 B08, C05, C06, D06 및 D07)의 신경보호 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 리소좀 세포외배출의 억제제인, 바쿠올린-1(VAC, 10 μM)의 존재하에서 항-CD38 항체(클론 B08, C05, C06, C08, D06 및 D07; 1 μg/ml)에 노출되거나 노출되지 않은 5 내지 7 DIV 사이의 MPP⁺(3 μM)로 처리된 중뇌 배양물 속에서 DA(TH⁺) 세포 생존. 결과는 상응하는 대조군 배양물의 %로 나타낸다. # P <0.05 일원 ANOVA 대 MPP⁺ 처리.
도 11은 흑질 치밀집내 DA(TH⁺) 뉴우런의 수에 있어서 생체내 6-OHDA 마우스 모델에서 뇌내 주사된(0.1 mg/kg icv, 6-OHDA icv 주사와 동시에) 항-CD38 항체(클론 HB7, B08 또는 D06)의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 결과는 대측성(병변이 없는) 측면의 %로 나타낸다. PBS 그룹: n=8(PBS); 6-OHDA + PBS 그룹: n= 8(PBS); 6-OHDA + HB7 0.1 mg/kg icv 그룹: n= 10(HB7 icv 0.1 mg/kg); 6-OHDA + B08 0.1 mg/kg icv 그룹: n= 7(B8 icv 0.1 mg/kg); 6-OHDA + D06 0.1 mg/kg icv 그룹: n= 7(D6 icv 0.1 mg/kg). $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군(PBS-주사된) 그룹. # P <0.05 일원 ANOVA 대 6-OHDA 그룹.
도 12는 흑질 치밀집내 DA(TH⁺) 뉴우런의 수에 있어서 생체내 6-OHDA 마우스 모델에서 정맥내 주사된(15 mg/kg iv, 6-OHDA icv 주사 1일 전) 항-CD38 항체(클론 B08 또는 다라투무맙, DARA)의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 결과는 대측성(병변이 없는) 측면의 %로 나타낸다. PBS 그룹: n=8(PBS); 6-OHDA 그룹: n= 8(PBS); 6-OHDA + B08 15 mg/kg iv 그룹: n= 10(B8 iv 15 mg/kg); 6-OHDA + 다라투무맙 15 mg/kg iv 그룹: n= 10(DARA iv 15 mg/kg). $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군(PBS-주사된) 그룹. # P <0.05 일원 ANOVA 대 6-OHDA 그룹.
도 13은 흑질 치밀집내 DA(TH⁺) 뉴우런의 수에 있어서 생체내 6-OHDA 마우스 모델에서 정맥내 주사된(15 mg/kg iv, 6-OHDA icv 주사 2일 전) 항-CD38 항체의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 결과는 대측성(병변이 없는) 측면의 %로 나타낸다. PBS 그룹: n=12(PBS); 6-OHDA +PBS 그룹: n= 12(PBS); 6-OHDA + B08 15 mg/kg iv 그룹: n= 12(B8 iv 15 mg/kg). $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군(PBS-주사된) 그룹. # P <0.05 일원 ANOVA 대 6-OHDA 그룹.
도 14는 3명의 건강한 공여자로부터의 사람 말초 단핵 세포를 사용한 소염성 사이토킨 IL-10의 방출에 있어서 항-CD38 항체(클론 HB7, B08, C05, D06 또는 D07)의 효과를 나타내는 막대 그래프이다(혼주된 결과). $ P <0.05 일원 ANOVA 대 대조군(PBS-처리된) 그룹.
도 15a 및 도 15b는 도해 및 그래프의 세트이다. (도 15a)는 프로토콜을 나타내는 도해이다. (도 15b)는 임상 점수에 있어서 생체내 EAE 마우스 모델에서 정맥내(15 mg/kg iv, MOG 주사 후 10 및 20일째) 주사된 항-CD38 항체(클론 B08)의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. PBS 그룹: n=10(PBS); B08 15 mg/kg iv 그룹: n= 10(B8 15 mg/kg iv). * P <0.05 2원 ANOVA 대 PBS 그룹. ** P <0.01 2원 ANOVA 대 PBS 그룹. 임상 점수는 실시예 9, 단락 2.4b에 기술된 바와 같이 계산된다.
도 16a 및 도 16b는 도해 및 그래프의 세트를 나타낸다. (도 16a)는 프로토콜을 나타내는 도해이다. (도 16b)는 결장 길이에서 생체내 DSS 마우스 모델에서 정맥내(15 mg/kg iv, D0에서 주사됨) 주사된 항-CD38 항체(클론 B08 또는 다라투무맙, DARA)의 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 비-DSS 그룹: n= 5(PBS; 백색 바아(bar)); DSS + PBS 그룹: n=6(PBS; 검정색 바아); DSS + DARA 15 mg/kg iv 그룹: n=7(DARA iv 15 mg/kg; 검정색 바아); DSS + B08 15 mg/kg iv 그룹: n=6(B8 iv 15 mg/kg; 검정색 바아). $ P <0.05 일원 ANOVA 대 비-DSS 그룹. # P <0.05 일원 ANOVA 대 DSS 그룹.
도 17은 건강한 대조군(HC) 또는 근위축성 측색 경화증(ALS)을 지닌 환자에서 혈장 CD38 수준을 나타내는 막대 그래프이다. HC 그룹: n=46; ALS 그룹: n=40. *** P<0.001, t-시험 대 HC 그룹.

실시예

본 발명은 다음의 실시예에서 추가로 기술되나 본 발명의 기술적 영역이 이러한 실시예에 한정되지는 않는다.

실시예 1: sCD31에 의한 중뇌 도파민생성 뉴우런의 시험관내 신경보호는 CD38과의 상호작용을 통해 매개된다.

미토콘드리아 신경독 MPP ⁺ 에 대한 보호

본 발명자는 여기서 sCD31이, DA 세포 사멸이 DA 신경독 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라하이드로피리딘(MPTP)의 활성 대사산물인 1-메틸-4-페닐피리디늄(MPP⁺)을 사용한 미토콘드리아 중독에 의해 유발된 상황에서 신경호보성임을 보고한다.

이러한 목적을 위해, 자발적으로 발생하는 DA 세포 사멸은 K⁺(30 mM) 및 MK801(5 μM), 원치않는 흥분성 독 공격을 방지하는데 사용된 글루타메이트 수용체의 탈분극 농도를 조합한 치료에 의해 방지하였다. 이후에, 배양물을 3 μM MPP⁺에 시험관내(DIV)에서 5와 7일 사이에서 노출시켜 DA 뉴우런의 대략 50% 손실을 달성하였다. 배양물을 쥐 sCD31(서열 번호: 3)에 중독 기간 동안 노출시킨 경우, MPP⁺-유도된 DA 세포 손실은 당해 화합물(도 1)에 의해 36 ng/mL의 EC₅₀으로 방지되었다.

특히, 이러한 시험관내 세포 배양 설정에서 말초 면역 세포가 존재하지 않으므로, 이러한 효과는 실제로 직접적인 신경보호 효과이며, 면역 세포 상에 국재화된 CD38을 사용한 가능한 간섭에 기인하지 않는다(문헌: Hara-Yokoyama et al., 2008. Int Immunopharmacol. 8(1):59-70에 나타낸 바와 같음).

sCD31의 신경보호 효과는 항-CD31 항체 클론 Moon-1 또는 길항성 항-CD38 항체(클론 OKT-10 또는 AT13/5)의 존재하에서 길항된다.

CD31은 3개의 리간드: CD31 자체, CD38 및 αVβ3 인테그린과 상호작용하는 것으로 알려져 있다(Kalinowska & Losy, 2006. Eur J Neurol. 13(12):1284-90). 그러나, CD31은 뉴우런 세포내에서 발현되지 않는다(Williams et al., 1996. J Neurosci Res. 45(6):747-57). CD31과 CD38의 상호작용은 항-CD31 항체 클론 Moon-1의 존재하에서 또는 길항성 항-CD38 항체에 의해 길항되는 것으로 이미 밝혀졌다(Deaglio et al., 1996. J Immunol. 156(2):727-34; Deaglio et al., 1998. J Immunol. 160(1):395-402).

sCD31의 신경보호 효과가 CD38을 통해 매개되는지의 여부를 시험하기 위하여, 본 발명자는 전술된 MPP⁺ 시험관내 모델에서 항-CD31 항체 클론 Moon-1(1 μg/mL) 또는 길항성 항-CD38 항체(클론 OKT10 또는 AT13/5, 1 μg/mL)의 존재 또는 부재하에서 sCD31(1 μg/mL)의 신경보호 효과를 연구하였다.

본 발명자는, sCD31의 신경보호 효과가 CD38과의 상호작용을 통해 매개됨을 의미하는, sCD31의 신경보호 효과가 항-CD31 항체 클론 Moon-1 또는 길항성 항-CD38 항체 클론 OKT10 또는 AT13/5의 존재하에서 길항되었는지를 관찰하였다(도 2).

sCD31의 신경보호 효과는 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)에 의해 재생된다.

길항성 항-CD38 항체는 CD38에 대한 CD31 결합의 생물학적 효과를 재생하는 화합물이다(Deaglio et al., 1998. J Immunol. 160(1):395-402). 따라서, sCD31과 유사하게, 길항성 항-CD38 항체는 또한 신경보호성일 수 있다.

본 발명자는 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/mL)이 MPP⁺ 시험과내 모델에서 DA 뉴우런을 보호할 수 있었으며, 이러한 신경보호 효과는 길항성 항-CD38 항체(클론 OKT10 또는 AT13/5, 1 μg/mL)의 존재하에 길항되었음을 관찰하였다(도 3).

sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체의 신경보호 효과는 타이로신 포스포릴화/타이로신 키나제의 활성화를 필요로 한다.

본원에서 앞서 언급한 바와 같이, CD38은 내재화를 통한 수용체-매개된 기능, 타이로신 포스포릴화-매개된 기능 및 효소-매개된 기능을 포함하는 다기능성 분자이다. 앞서의 연구는 작용성(클론 HB7) 또는 길항성(클론 OKT10 또는 AT13/5) 항-CD38 항체가 시험관내에서 CD38 효소 활성을 조절하는데 실패하였음을 입증하였다(Deckert et al., 2014. Clin Cancer Res. 20(17):4574-83). 결과적으로, 본 발명자는 sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체가 타이로신 키나제의 억제제인, 게니스테인을 사용함에 의해, 이의 신경보호 효과를 매개하는 타이로신 포스포릴화를 필요로 하는지를 측정하기를 원하였다.

본 발명자는, MPP⁺ 시험관내 모델에서, sCD31(1 μg/mL) 또는 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/mL)의 신경보호 효과가 타이로신 키나제 억제제 게니스테인(GENI, 10 nM)의 존재하에 길항되었음을 관찰하였으며, 이는 타이로신 포스포릴화가 DA 뉴우런을 보호하는데 필수적임을 시사한다(도 4).

sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체의 신경보호 효과는 리소좀 세포외배출을 통해 매개된다.

sCD31 및 길항성 항-CD38 항체는 CD38 수준에서 작용함으로써 그러나 상이한 작용 메카니즘을 통해 도파민생성 뉴우런을 둘 다 보호할 수 있음을 추정할 수 있다. 이러한 가능성 배제시키기 위해, 본 발명자는 MPP⁺ 시험관내 모델에서, sCD31(1 μg/mL) 또는 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7, 1 μg/mL)의 신경보호 효과가 리소좀 성숙의 억제제 및 Ca²⁺-의존성 리소좀 세포외배출 바쿠올린-1 및 엔도시딘2의 존재하에서 둘 다 길항되었음을 관찰하였다(도 5).

길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)는 생체내에서 신경보호성이다.

길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)가 또한 생체내에서 신경보호성인지의 여부를 측정하기 위하여, 본 발명자는 MPTP의 반복된 복강내 주사 후 흑질 치밀집의 도파민생성 뉴우런이 변성된 마우스 모델에서 당해 항체 15 mg/kg 용량을 피하 주사하였다. MPTP는 혈관 내 장벽을 횡단하는 능력을 가지며 성상세포에 의해 MPP⁺로 전환된다. 미토콘드리아 복합체 I의 억제제인, MPP⁺는 도파민 수송인자를 통해 도파민생성 뉴우런내에서 우선적으로 수송됨으로써, 도파민생성 집단의 특이적인 세포 사멸을 생성한다. 이러한 모델은 신경보호 및 신경복구(neurorepair) 전략의 평가에 대한 시험 시스템으로서 집중적으로 사용되어 왔다(Dauer & Przedborski, 2003. Neuron. 39(6):889-909).

본 발명자는 15 mg/kg 용량에서의 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)의 정맥내 주사가 MPTP-유도된 신경변성으로부터 흑질 치밀집의 도파민 생성 뉴우런을 강력하게 보호하였음을 관찰하였다.

결론

전적으로, 본 실시예에 나타낸 데이타는 sCD31이 시험관내에서 신경보호성이고, 이의 효과는 CD38과의 상호작용을 통해 매개됨을 나타내었다. 이러한 효과는 항-CD31 항체 또는 길항성 항-CD38 항체의 존재하에 길항된다.

또한, CD38에 대한 sCD31의 결합을 모사하는 길항성 항-CD38 항체는 또한 신경보호 효과를 유도할 수 있으며, 상기 효과는 길항성 항-CD38 항체의 존재하에 길항된다.

신경보호 효과가 sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체에 의해 유도되는지에 상관없이, 타이로신 포스포릴화/타이로신 키나제의 활성화는 상기 신경보호 효과를 유도하는데 필수적임이 밝혀졌다. 더욱이, 수득되는 신경보호 효과는 리소좀 성숙 및 Ca²⁺-의존성 리소좀 세포외배출에 기인함이 밝혀졌다.

최종적으로, 길항성 항-CD38 항체는 정맥내 투여 경로를 사용하여 광범위하게 사용된 MPTP 마우스 모델에서 생체내 신경보호성임이 밝혀졌으므로, 길항성 항-CD38 항체가 BBB를 횡단할 수 있고 이의 표적과 맞물릴 수 있음을 입증한다.

따라서, 이러한 데이타는 신경변성 및 신경염증 질환의 치료를 위한 sCD31 및 길항성 항-CD38 항체의 치료학적 역할을 시사한다.

실시예 2: IL-10 수준에 대한 sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)의 생체내 효과

길항성 항-CD38 항체(클론 HB7)는 생체내에서 IL-10을 증가시킨다.

길항성 항-CD38 항체의 소염 특성이 생체내에서 또한 관찰되었는지를 시험하기 위하여, 본 발명자는 항-CD38 항체 클론 HB7(15 mg/kg)을 마우스에게 정맥내 주사하였다.

주사한지 8일 후, 본 발명자는 IL-10 수준이 6배 증가한 것을 관찰하였다(도 7).

결론

전적으로, 본 실시예에 나타낸 데이타는 sCD31 및 길항성 항-CD38 항체 둘 다가 생체내에서 IL-10의 강력한 방출을 유도하고, 면역조절에서의 역할 및 염증에 대한 역할을 시사하였다. 실제로, IL-10은 Th1 사이토킨, MHC 제II 부류 항원, 및 대식구 상의 공-자극성 분자의 발현을 하향조절하고; B 세포 생존, 증식, 및 항체 생산을 향상시키며; NF-κB 활성을 차단하고; JAK-STAT 신호전달 경로를 조절하는 것으로 널리 알려져 있다.

더욱이, IL-10은 특히 종양 전이를 억제함으로써, 암을 치료하는데 효과적인 것으로 또한 밝혀졌다(Sun et al., 2000. J Immunother. 23(2):208-14). IL-10 유전자이식 마우스(Groux et al., 1999. J Immunol. 162(3):1723-9)에서 형질감염된 종양 세포 또는 IL-10를 사용한 투여로부터 IL-10의 발현은 1차 종양 성장의 제어 및 감소된 전이 부담(metastatic burden)(Fujii et al., 2001. Blood. 98(7):2143-51; Berman et al., 1996. J Immunol. 157(1):231-8)을 초래한다.

따라서, 이러한 데이타는 염증 질환 및 암의 치료를 위한 sCD31 및 길항성 항-CD38 항체의 치료학적 역할을 시사한다.

실시예 3: 파아지 디스플레이에 의한 CD31과 경쟁하는 길항성 항-CD38 항체의 확인

CD38에서 CD31의 생물학적 효과를 재생하는 신규의 사람화된 항체를 생성시키기 위하여, 본 발명자는 15억개 서열을 함유하는 scFv의 파아지 디스플레이 라이브러리를 사용하였다(Philibert et al., 2007. BMC Biotechnol. 7:81).

제1 선택 라운드를 수행하여 사람 CD38 세포외 도메인에 결합하는 scFv를 확인하였다(도 8). 95개의 선택된 scFv 중에서, 52개는 FACS에 의해 CD38⁺ 저켓(Jurkat) T 세포에 결합함이 확인되었다. 이러한 52개의 확인된 결합제를 서열분석하여, CD38에 결합하는 16개의 풍부하지 않은 scFv를 확인하였다. 이러한 결합제를 클로닝하고 상응하는 IgG를 CHO 세포내에서 생산하였다.

이후에, 16개의 풍부하지 않은 IgG(클론 A02, B06, B08, B09, C05, C06, C08, D03, D04, D06, D07, D10, E03, E05, E08, F07)를 우선 MPP⁺ 시험관내 모델(각각의 클론에 대해 0.5 μg/mL )에서, 이후에 선택된 항체의 패널 상에서 Biacore에 의해 CD31의 사람 세포외 도메인과의 경쟁 검정에 의해 시험하였다.

MPP⁺ 시험관내 모델에서, 수개의 사람화된 항-CD38 항체 클론은 신경보호성임이 밝혀졌다(도 9). 특히, 4개의 클론(B08, C05, D06 및 D10)은 참고 길항성 항-CD38 항체 클론 HB7(0.5 μg/mL)보다 더 강력한 신경보호 효과를 나타낸다.

클론 B08, C05, C06, D06 및 D07의 신경보호 효과를 리소좀 세포오배출 억제제 바쿠올린-1(VAC, 10 μM)의 존재하에서 길항시켰으며, 이는 이러한 항체가 sCD31의 생물학적 효과를 재생함을 시사한다(도 10).

실시예 4: 생체내 신경변성 모델에서 B08 및 C06 항-CD38 항체의 신경보호 특성

본 발명자는 B08 또는 D06 항-CD38 항체가 산화 스트레스에 의해 유도된 신경변성에 대해 생체내에서 신경보호성이었는지의 여부를 측정하는데 목표를 두었다. 마우스에게 우측 선조체내에 6-하이드록시도파민(6-OHDA)을 투여하였다. 6-OHDA는 도파민의 유사체이므로, 이는 도파민 수송인자를 통해 도파민생성 뉴우런내에서 수송되어, 특이적인 변성 및 우측 흑질 치밀집의 도파민생성 뉴우런의 손실을 야기한다. 이는 신규 증상제(symptomatic agent) 및 신경보호 및 신경복구 전략의 평가를 위한 시험 시스템으로서 집중적으로 사용되었다(Galindo et al., 2014. In Kostrzewa (Ed.), Handbook of neurotoxicity (1^st Ed., pp. 639-651). New York: Springer-Verlag). 6-OHDA를 우측 선조체내에 치우쳐서 주사하고, 각각의 마우스는 이의 자체 대조군이다.

마우스에게 0.1 mg/kg의 HB7, B08 및 D06 항-CD38 항체를 뇌내로 주사하였다. 본 발명자는 6-OHDA, B08 및 D06 항-CD38 항체와 동시에 뇌내(icv) 주사된 0.1 mg/kg의 농도에서 우측 흑질 치밀집의 도파민생성 뉴우런을 통계적으로 유의적으로 보호하였다(도 11). 본 발명자는 또한 HB7 항-CD38 항체가 도파민생성 뉴우런을 통계적으로 유의적으로 보호하는데 실패하였음을 관찰하였다.

흥미롭게도, B08 항-CD38 항체와 관련하여, 6-OHDA icv 주사 1일 전 정맥내 주사(iv, 15 mg/kg)된 경우 이러한 신경보호 효과가 또한 관찰되었다(도 12). 두드러지게, 항-CD38 항체 다라투무맙(DARA, 15 mg/kg iv)는 신경보호 활성을 입증하는데 실패하였다.

신경변성 공정이 진행되는 경우 B08 항-CD38 항체가 또한 뉴우런을 보호할 수 있는지의 여부를 이해하기 위하여, 본 발명자는 6-OHDA icv 주사 2일 후 B08 항-CD38 항체(15 mg/kg에서 iv)를 주사하였다. 본 발명자는 심지어 변성이 시작된 후에도 B08 항-CD38 항체의 강력한 신경보호 활성을 여전히 관찰하였다(도 13). 이는 B08 항-CD38 항체의 강력한 신경보호 효과를 입증한다.

결론적으로, B08 및 D06 항-CD38 항체의 신경보호 효과는 HB7 항-CD38 항체로 관찰된 것보다 더 우수한 효능임을 입증되었다. 두드러지게, 이러한 신경보호 효과는 신경변성 공정이 진행중인 경우 화합물이 정맥내 투여될 때 여전히 관찰된다.

실시예 5: 시험관내에서 B08, C05, D06 및 D07 항-CD38 항체의 소염 특성

길항성 항-CD38 항체(클론 B08, C05, D06 및 D07)가 소염 특성을 지니는지의 여부를 측정하기 위하여, 본 발명자는 3명의 건강한 공여자로부터의 사람 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용하여 시험관내에서 소염성 사이토킨 IL-10의 방출에서의 이의 효과를 평가하였다. 본 발명자는 항-CD38 항체(클론 B08, C05, D06 및 D07) 모두는 IL-10 방출을 통계적으로 유의적으로 증가시켰으므로, 소염 특성을 입증함을 관찰하였다(도 14). 중요하게는, HB7은 당해 검정에서 배양물 사람 PBMC 속에서 IL-10 방출을 통계적으로 유의적으로 증가시키는데 실패하였고, 이는 HB7 항-CD38 항체보다 B08, C05, D06 및 D07 항-CD38 항체의 더 높은 소염 효과를 입증한다.

결론적으로, 클론 B08, C05, D06 및 D07에 의해 나타난 바와 같이, 길항성 항-CD38 항체는 시험관내에서 PBMC로부터 IL-10 방출을 증가시킨다. 또한, IL-10은 염증의 일반적인 메카니즘에 포함되며 다수의 자가면역 질환에서 보고되었고, 클론 B08, C05, D06 및 D07에 의해 나타난 바와 같이, 길항성 항-CD38 항체는 염증 및/또는 자가면역 질환을 치료 및/또는 예방하는 새로운 전략을 제공한다.

실시예 6: 다발 경화증(MS), 자가면역, 신경-염증 질환의 실험적 자가면역 뇌척수염(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis)(EAE) 마우스 모델에서 B08 항-CD38 항체의 신경보호 효과

다발경화증(MS)은 질환의 발병에서 면역계에 대한 중요한 역할이 예측되는 사람 중추 신경계(CNS)의 진행성 염증 및 탈수초 질환(demyelinating disease)이다(Lassmann, 2008. J Neurol Sci. 274(1-2):45-7). EAE는 중추 신경계에 영향을 미치고 사람 MS에 대한 모델을 구성하는 마우스내에서 유도된 질환이다. 미엘린 올리고덴드로사이트 당단백질(myelin oligodendrocyte glycoprotein)(MOG)과 혼합된 완전 프루이드 보조제(Complete Freund's Adjuvant)(CFA)가 들어있는 유액의 피하 주사 후, 면역 반응은 말초에서 시작하여, 2주 내에, CNS내에서 염증을 유발한다. 동시에, 본 발명자는 진행성 상승 마비(progressive ascending paralysis)(꼬리로부터 뒷다리로부터 앞다리까지)를 관찰하였다. B08 항-CD38 항체가 당해 질환에서 유리한 효과를 가질 수 있는지의 여부를 측정하기 위하여, 본 발명자는 당해 항체(증상 발병시(MOG 주사 후 10일째) 및 20일 째에 15 mg/kg)를 주사하였다. 본 발명자는 B08 항-CD38 항체가 PBS-주사된 마우스와 비교하여 임상 점수를 유의적으로 감소시켰음을 관찰하였다(도 15).

결론적으로, 길항성 항-CD38 항체(클론 B08)는 증상 발병시 정맥내 주사된 경우 자가-면역, 신경-염증 질환의 EAE 마우스 모델에서 임상 점수를 완화시킨다.

실시예 7: 덱스트란 설페이트 나트륨(DSS)-유도된 결장염 마우스 모델에서, 생체내 B08 길항성 항-CD38 항체의 소염 특성

순수한 염증 모델에서 B08 길항성 항-CD38 항체의 효과를 입증하기 위하여, 본 발명자는 덱스트란 설페이트 나트륨(DSS)-유도된 결장염 마우스 모델에서 이의 효과를 시험하기로 결정하였다. DSS의 투여는 결장 내피 세포에 대한 이의 독성으로 인하여 사람 궤양성 결장염-유사 병리를 유발하며, 이는 촉망된 점막 장벽 기능을 생성한다. 사람 병리학과 유사한 임상적 관찰, 예를 들어, 체중 감소, 설사 및 대변 속의 잠혈(occult blood)이 DSS 모델에서 일반적으로 관찰된다. 더욱이, 결장 길이의 축소는 당해 모델의 특징이다. 중요하게도, 연구는 DSS 결장염이 림프구, 호중구 및 대식구의 활성화를 포함함을 시사한다(Eichele and Kharbanda, 2017. World J Gastroenterol. 23(33):6016-29).

본 발명자는 B08 항-DC38 항체(15 mg/kg, iv)의 투여가 결장 길이의 축소의 감소를 통계적으로 유의적으로 억제하였음을 관찰하였다(도 16).

결론적으로, 길항성 항-CD38 항체(클론 B08)는 염증성 창자 질환의 DSS 마우스 모델에서 결장 길이를 증가시킨다.

실시예 8: sCD31 또는 길항성 항-CD38 항체의 치료학적 사용을 위한 생물마커로서 CD38 수준의 용도

본 발명자는 sCD31 및 CD38에 대한 sCD31의 결합을 재생하는 일부 항-CD38 항체가 신경보호성이었음을 관찰하였다. 따라서, 본 발명자는 CD38 수준을 측정하는 것이 이러한 항-CD38 치료로부터 유리할 수 있는 환자를 확인하는 것이 유용할 수 있는지의 여부를 평가하였다. 본 발명자는 혈장 CD38 수준이 건강한 대조군(HC)과 비교하는 경우 ALS 환자로부터의 혈장 샘플에서 강력하게 증가하였음을 관찰하였다(도 17). 이는 CD38 수준이 항-CD38 항체를 본원에 기술된 바와 같이 투여한 환자를 선택하기 위한 마커로서 사용될 수 있음을 시사하였다.

실시예 9: 실시예 1 내지 7에 대한 물질 및 방법

1- 시험관내 실험

1.10 중뇌 세포 배양

동물을 실험 동물의 보호 및 사용에 대한 안내서(Guide for the Care 및 Use of Laboratory Animals)(National Research Council, 1996), 유럽 지침(European Directive) 86/609, 및 지역 기관 동물 보호 및 사용 위원회의 지침(the guidelines of the local institutional animal care and use committee)에 따라 처리하였다. 배양물을 임신령 15.5 위스타(Wistar) 랫트 배아(Janvier Breeding Center, 프랑스, 르 게네스 스트 이슬레(Le Genest St Isle))의 배쪽 중뇌로부터 제조하였다. 중뇌 조직 조각의 기계적 분쇄로 수득된 현탁액 중 해리된 세포를 기술한 바와 같이(Michel et al., 1997. J Neurochem. 69(4):1499-507) 보레이트 완충제 pH 8.3 속에 희석된 1 mg/mL 폴리에틸렌이민으로 예비코팅된(precoated) 조직 배양 지지체 상에 1.2-1.5×10⁵개의 세포/cm²의 밀도로 씨딩(seeding)하였다. 이후에, 소 태아 혈청의 농도가 2.5%이어서 배양물의 초기 성숙을 선호하게 되는 경우, 처음 3 DIV를 제외하고는, 배양물을 5 mM 글루코즈, 5% 말 혈청, 및 0.5%의 소 태아 혈청으로 보충된 N5 배지 속에서 유지시켰다(Guerreiro et al., 2008. Mol Pharmacol. 74(4):980-9). 이를 배지의 70%를 대체함으로써 매일 공급하였다. 정규적으로, 중뇌 배양물을 Nunc 24-웰 배양 플레이트(Thermofischer Scientific, 뉴욕주 로체스터) 위에 확립시켰다. 이러한 배양물은 전적으로 도파민생성이었던 타이로신 하이드록실라제 (TH)⁺ 뉴우런을 함유함에 주목한다(Traver et al., 2006. Mol Pharmacol. 70(1):30-40). TH⁺ 뉴우런은 이러한 배양물 속에 존재하는 뉴우런 세포의 총 수의 대략 1 내지 2%를 나타내었다. DA 뉴우런의 생존의 평가는 기술한 바와 같이 TH에 대해 면역양성인 세포를 계수함으로써 수행하였다(Toulorge et al., 2011. Faseb J. 25(8):2563-73).

1.2- MPP ⁺ 중독 모델

MPP⁺를 사용한 처리를 배양물 속에서 수행하였으며 여기서 자발적 사멸 공정은 앞서 기술한 바와 같이 원치않는 흥분독성 공격을 방지하기 위한 글라타메이트 수용체 길항제 MK801(5 μM)의 존재하에서, K⁺(30 mM)의 탈분극화 농도에 대한 장기간 노출에 의해 방지되었다(Douhou et al., 2001. J Neurochem. 78(1):163-74). MPP⁺ 및 잠재적인 신경보호 분자를 사용한 처리는 5 내지 7 DIV 사이에서 수행하였다.

1.3- 뉴우런 생존의 정량화

배양물을 12분 동안 둘베코 인산염-완충된 염수(Dulbecco's phosphate-buffered saline)(PBS) 중 4% 포름알데하이드를 사용하여 고정시킨 다음, 하기한 항체와 함께 24시간 동안 4℃에서 항온처리하기 전에 PBS로 2회 세척하였다. 1/5000로 희석된 모노클로날 항-TH 항체(ImmunoStar, Inc., 위스콘신주 허드슨)를 사용하여 DA 뉴우런의 생존을 평가하였다. 항체를 0.2% 트리톤 X-100을 함유하는 PBS 속에서 희석시켰다. 1차 항체의 검출은 항-마우스 IgG 항체의 알렉사 플루오르(Alexa Fluor-488) 접합체를 사용하여 수행하였다.

1.4- 사람 PBMC 세포 배양

3명의 건강한 자원자(공여자 1: 여성, 23세; 공여자 2: 남성 29세; 공여자 3: 여성, 20세)를 혈액 공여자로 제공하였다. 정맥 혈액(5 mL)을 헤파린처리된 튜브내로 수집하고 즉시 가공하였다. 요약하면, 혈액을 예비-가온된 RPMI 1640 배지 속에서 1/1로 희석하였다. PBMC를 피콜(Ficoll) 용액(Sigma; 300×g, 30 min) 속에서 구배 원심분리를 사용하여 단리하였다. 단리된 PBMC를 1 용적의 예비-가온된 RPMI 1640 배지 속에 재-현탁시키고 다시 원심분리(300×g, 30 min)하였다. PBMC를 10% 사람 혈청(Sigma-Aldrich)이 보충된 RPMI 1640 배지 속에 mL당 10⁷개의 세포의 농도로 재-현탁시켰다. 세포를 96웰 미세플레이트(웰당 100 μL) 속에 씨딩하였다. 시험 화합물(10 μg/ml), LPS(500 ng/mL) 및 인터페론-γ 1B(100 ng/mL)를 이식 직후 PBMC 배양물에 가하였다. 24시간 후, 세포 배양 상층액을 수집하고 추가의 가공을 위해 80℃에서 동결시켰다.

1.5- IL-10 ELISA 검정

세포 배양 상층액 속의 IL-10 수준을 ELISA 사람 IL-10 키트(Ozyme®)를 사용하여 제조업자가 명시한 사용 지침에 따라 검정하였다.

1.6- 통계적 분석

2개의 그룹 사이의 샘플 비교를 스튜던츠 t 시험(Student's t test)으로 수행하였다. 단일의 참고 그룹에 대한 다중 비교를 변량의 일원 분석(one-way analysis of variance)에 이어 가능한 경우 던넷 시험(Dunnett's test)으로 이루었다. 모든 쌍식 비교(pairwise comparison)가 요구되는 경우, 스튜던츠-뉴막-케울스 시험(Student-Newman-Keuls test)을 사용하였다. S.E.M. 값은 적어도 3개의 독립된 실험으로부터 유도하였다.

2- 생체내 실험

2.1- 동물

동물은 실험 동물의 보호 및 사용에 대한 안내서(National Research Council, 1996), 유럽 지침 2010/63/EU, 및 지역 기관 동물 보호 및 사용 위원회의 지침에 따라 처리하였다. 모든 연구를 위해, 8 내지 10주령의 수컷 C57Bl/6 마우스(Janvier, 프랑스)를 사용하였다. 이를 오전 8시에 광을 비추는 12:12시간 광/암 주기로 유지하였다. 실온은 20℃에서 유지시키고, 표준 식이(diet) 및 수돗물을 자유로이 접근하도록 하였다.

2.2- 6-OHDA 및 MPTP 마우스 모델

a) 실험 설계

2마리의 생체내 마우스 모델을 사용하였다: 6-OHDA 마우스 모델 및 MPTP 마우스 모델. 6-OHDA 마우스 모델의 경우, 중독 프로토콜은 우측 선조체내에 6-OHDA의 편측 정위 선조체 주사(unilateral stereotaxic intrastriatal injection)를 기반으로 하였다. 치료의 뇌내 또는 정맥내 주사를 정위 수술 과정 1일 전, 정위 수술 과정 동안에 6-OHDA와 동시체, 또는 6-OHDA 주사 2일 후에 이루었다. 동물을 정위 수술 과정 8일 후 희생시켰다.

MPTP 마우스 모델의 경우, MPTP(20 mg/kg)를 4회 주사하였다. 항-CD38 클론 HB7 항체의 정맥내 주사는 MPTP 주사 2일 전에 수행하였다. 마우스를 MPTP 주사 7일 후에 희생시켰다.

b) 정위 수술 과정

편측 6-OHDA 마우스 모델의 경우, 동물은 클로랄 하이드레이트(400 mg/kg, i.p.)를 사용하여 마취시키고 마우스에 대해 채택된 정위 프레임(stereotactic frame)에 두었다. 주사는 해밀톤 주사기(Hamilton syringe)를 사용하여 다음의 조화(coordinate)로 수행하였다: AP: + 0.85 cm, ML: ± 2 cm, DV: - 3.4 cm(atlas of Franklin and Paxinos, 1997에 상응함). 시험 치료제의 존재 또는 부재하에서 PBS 속에 희석된 6-OHDA 5 μg을 함유하거나 함유하지 않는 2.5 μL의 총 용적을 주사하였다. 침을 주사 후 빼기 전에 10분 동안 그대로 두었다.

c) 조직 제조

마우스를 경부 탈구로 희생시키고, 목을 베어 뇌 및 혈액 샘플을 수집하였다. 뇌를 파라포름알데하이드 용액(4%) 속에 1일 동안 고정시킨 후 슈크로즈(30%) 속에 2일 동안 침지시키고 추가의 분석을 위해 -80℃에서 동결시켰다.

d) 뇌 슬라이싱, 면역형광성 및 뉴우런 열거

각각의 뇌를 동결박편제작기(freezing microtome)를 사용하여 -30℃에서 슬라이싱하였다. 각각의 슬라이스의 두께는 20 μm이었다. 슬라이싱은 흑질(알렌 마우스 뇌(Allen Mouse Brain)에 따라 슬라이스 51 내지 63으로부터 80개 슬라이스) 주변에서 수행하였다.

이후에, 슬라이스를 PBS에서 세척하고 항-타이로신 하이드록실라제와 함께 항온처리하여 도파민생성 뉴우런(Abcam®)을 2일 동안 4℃에서 교반하면서 염색하였다. 슬라이스를 DAPI(Sigma Aldrich®)의 존재하에서 상응하는 제2 항체와 함께 항온처리하여 세포의 핵을 2시간 동안 실온에서 염색하고 젤라틴-코팅된 슬라이드 위에 올려놓았다.

슬라이스를 Hamamatsu ORCE-ER 카메라가 장착된 Nikon TE2000 U 및 axiocam 503 모노 카메라가 장착된 Zeiss Axio Vert.A1을 사용하여 영상화하였다. 영상 분석은 Image J 소프트웨어 또는 Zen(Zeiss®)을 사용하여 수행하였다.

2.3- IL-10 ELISA 검정

수집 튜브(Microvette® 500 EDTA-K3, SARSTEDT) 속에 수집된 혈액 샘플을 분당 3000회 회전에서 15분 동안 원심분리하였다. 상층액(혈장)을 수집하고 튜브로 이전시키고 -80℃에서 추가의 분석을 위해 동결시켰다. 혈장 샘플 속의 IL-10 수준을 ELISA IL-10 키트(BioLegend®)를 사용하여 제조업자가 명시한 사용 지침에 따라 검정하였다.

2.4- EAE 마우스 모델

a) 실험 설계

동물을 이소플루란의 흡입(15분)을 통해 마취시켰다. 마우스를 완전 프루언드 보조제(Complete Freund's Adjuvant) 중 100 μg의 MOG 펩타이드 35-55 및 500 μg의 HKMT(열-사멸시킨 마이코박테리운 투베르쿨로시스)를 함유하는 유액(emulsion)의 피하 주사로 면역화시켰다. 2시간 후, 동물에게 0일 및 2일째에 500 ng의 백일해 독(pertussis toxin)의 복강내 주사로 제공하였다. 시험 화합물을 유액 피하 주사 후 10 및 20일째에 정맥내 주사하였다. 동물을 28일째에 희생시켰다.

b) 임상 점수 평가

면역화 후, 동물을 체중 및 임상 증상에 대해 매일 모니터링하였다. 임상 점수를 다음의 등급에 따라 등급화하였다: 0: 임상 신호 없음; 0.5: 부분적인 꼬리 쳐짐; 1: 마비된 꼬리, 정상 걸음걸이; 1.5: 마비된 꼬리, 조화롭지 않은 운동, 뒷다리 마비; 2: 한쪽 뒷다리 마비 또는 꼬집음에 대해 반응하지 않음; 2.5: 한쪽 뒷다리 마비 및 다른 뒷다리의 약화; 3: 2개의 뒷다리 마비; 3.5: 2개의 뒷다리 마비 및 앞다리 약화; 4: 빈사 상태(moribund state).

2.5- DSS 마우스 모델

a) 실험 설계

실험 결장염을 마우스에서 3% (w/v) DSS를 함유하는 음료수를 5일 동안 임의로(ad libitum) 제공함으로써 유도한 반면, 대조군 마우스에게는 수돗물만 제공하였다. DSS 치료가 시작되면 시험 화합물을 정맥내 투여하였다(15 mg/kg). DSS 치료의 개시 후 9일째에 마우스를 희생시켰다.

b) 통계적 분석

통계적 분석 및 도면을 소프트웨어 Sigma Plot을 사용하여 작성하였다. 적용 조건이 중요한 경우, 상이한 시험을 데이타에 따라 수행할 수 있다: 일원 또는 이원 ANOVA 및 사후 시험(post hoc test).

SEQUENCE LISTING <110> ENCEFA BRESSAC Laurence GUERREIRO Serge TOULORGE Damien <120> CD31 COMPETITORS AND USES THEREOF <130> CV - 1204/PCT <150> EP19305086.1 <151> 2019-01-23 <160> 43 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 738 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD31 <400> 1 Met Gln Pro Arg Trp Ala Gln Gly Ala Thr Met Trp Leu Gly Val Leu 1 5 10 15 Leu Thr Leu Leu Leu Cys Ser Ser Leu Glu Gly Gln Glu Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Ile Asn Ser Val Asp Met Lys Ser Leu Pro Asp Trp Thr Val Gln 35 40 45 Asn Gly Lys Asn Leu Thr Leu Gln Cys Phe Ala Asp Val Ser Thr Thr 50 55 60 Ser His Val Lys Pro Gln His Gln Met Leu Phe Tyr Lys Asp Asp Val 65 70 75 80 Leu Phe Tyr Asn Ile Ser Ser Met Lys Ser Thr Glu Ser Tyr Phe Ile 85 90 95 Pro Glu Val Arg Ile Tyr Asp Ser Gly Thr Tyr Lys Cys Thr Val Ile 100 105 110 Val Asn Asn Lys Glu Lys Thr Thr Ala Glu Tyr Gln Val Leu Val Glu 115 120 125 Gly Val Pro Ser Pro Arg Val Thr Leu Asp Lys Lys Glu Ala Ile Gln 130 135 140 Gly Gly Ile Val Arg Val Asn Cys Ser Val Pro Glu Glu Lys 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Val Arg Pro Glu Val 130 135 140 Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys 145 150 155 160 Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro 165 170 175 Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys 180 185 190 Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu 195 200 205 Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys 210 215 220 Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val 225 230 235 240 Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser 245 250 255 Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly 260 265 270 Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile 275 280 285 Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu 290 295 300 Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp 305 310 315 320 Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser 325 330 335 Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly 340 345 350 Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val 355 360 365 Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys 370 375 380 Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu 385 390 395 400 Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys 405 410 415 Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu 420 425 430 Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val 435 440 445 Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His 450 455 460 Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val 465 470 475 480 Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg 485 490 495 Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe 500 505 510 Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala 515 520 525 Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu 530 535 540 Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys 545 550 555 560 Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala 565 570 575 Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe 580 585 590 Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly 595 600 605 Leu

Claims

단리된 항-사람(isolated anti-human) CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD31, 바람직하게는 사람 CD31과 경쟁하여; 바쿠올린-1(vacuolin-1)의 존재하에서 억제되는, 세포내에서 리소좀 세포외배출(lysosomal exocytosis)을 유도하는 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항에 있어서, 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날(monoclonal)인 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 사람화되어 있는 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
a) 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄의 가변 영역(HCVR)이 3개의 다음의 상보성-결정 영역(complementary-determining region; CDR):
- V _H -CDR1: GFTFSNX₁(서열 번호: 4),
- V _H -CDR2: X₂GSSRX₃(서열 번호: 5), 및
- V _H -CDR3: X₄X₅X₆X₇X₈YX₉X₁₀X₁₁X₁₂GMDV(서열 번호: 6)을 포함하고;
b) 상기 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄의 가변 영역(LCVR)이 3개의 다음의 CDR:
- V _L -CDR1: AGTSSDVGGX₁₃X₁₄X₁₅VS(서열 번호: 21),
- V _L -CDR2: X₁₆DSX₁₇RPS(서열 번호: 22), 및
- V _L -CDR3: STRVFGGGT(서열 번호: 23)을 포함하는 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서;
여기서:
X₁는 Tyr(Y), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;
X₂는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;
X₃은 Tyr(Y), Asp(D), Asn(N) 및 Ser(S)로부터 선택되고;
X₄는 Ser(S) 및 빈 위치(empty position)로부터 선택되고;
X₅는 Ser(S) 및 빈 위치로부터 선택되고;
X₆은 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;
X₇은 Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;
X₈은 Tyr(Y), Ser(S), Asp(D) 및 Gly(G)로부터 선택되고;
X₉는 Tyr(Y) 및 Gly(G)로부터 선택되고;
X₁₀은 Ser(S), Tyr(Y) 및 Phe(F)로부터 선택되고;
X₁₁은 Gly(G) 및 Asp(D)로부터 선택되고;
X₁₂는 Asn(N), Tyr(Y) 및 Ser(S)로부터 선택되고;
X₁₃은 Ser(S) 및 Asn(N)로부터 선택되고;
X₁₄는 Ser(S) 및 Tyr(Y)로부터 선택되고;
X₁₅는 Tyr(Y), 및 Ser(S)로부터 선택되고;
X₁₆은 Tyr(Y), Ser(S) 및 Asp(D)로부터 선택되고;
X₁₇은 Tyr(Y) 및 Asn(N)로부터 선택되는 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이:
- 서열 번호: 7을 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 10을 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 15를 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 24를 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 29를 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3;
- 서열 번호: 8을 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 11을 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 16을 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 25를 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3;
- 서열 번호: 9를 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 12를 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 17을 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 25를 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3;
- 서열 번호: 7을 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 13을 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 19를 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 27를 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 32를 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3;
- 서열 번호: 9를 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 14를 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 20을 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 28을 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3;
- 서열 번호: 9를 지닌 V_H-CDR1, 서열 번호: 14를 지닌 V_H-CDR2, 서열 번호: 16을 지닌 V_H-CDR3, 서열 번호: 28을 지닌 V_L-CDR1, 서열 번호: 30을 지닌 V_L-CDR2 및 서열 번호: 23을 지닌 V_L-CDR3을 포함하는, 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편이:
서열 번호: 33을 지닌 HCVR 및 서열 번호: 39를 지닌 LCVR;
서열 번호: 34를 지닌 HCVR 및 서열 번호: 40을 지닌 LCVR;
서열 번호: 35를 지닌 HCVR 및 서열 번호: 40을 지닌 LCVR;
서열 번호: 36을 지닌 HCVR 및 서열 번호: 41을 지닌 LCVR;
서열 번호: 37을 지닌 HCVR 및 서열 번호: 42를 지닌 LCVR; 또는
서열 번호: 38을 지닌 HCVR 및 서열 번호: 42를 지닌 LCVR을 포함하는, 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화(encoding)하는 핵산.
제7항에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터(vector).
신경변성 질환(neurodegenerative disease); 신경염증 질환(neuroinflammatory disease); 염증 질환(inflammatory disease); 자가면역 질환(autoimmune disease); 대사 질환(metabolic disease); 눈 질환(ocular disease); 노화-관련 질환(age-related disease); 및 암(cancer) 및 전이(metastatis)로부터 선택된 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한, CD38에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물.
제9항에 있어서, 상기 질환이, 근위축성 측색 경화증(amyotrophic lateral sclerosis); 파킨슨 질환(Parkinson's disease) 및 관련 장애; 알츠하이머 질환(Alzheimer's disease) 및 관련 장애; 헌팅톤 질환(Huntington disease); 다발 경화증(multiple sclerosis); 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis); 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus); 당뇨병(diabetes); 비만(obesity); 비-알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis); 노화-관련 황반 변성(age-related macular degeneration); 및 녹내장(glaucoma)으로부터 선택되는, 사용하기 위한 화합물.
이를 필요로 하는 대상체, 특히 상기 대상체의 혈액 속에서 적어도 하나의 소염 사이토킨(anti-inflammatory cytokine)의 수준을 증가시키는데 사용하기 위한, CD38 결합에 대해 CD31과 특이적으로 경쟁하는 화합물.
제11항에 있어서, 상기 소염 사이토킨이 인터루킨-10(IL-10)인, 사용하기 위한 화합물.
제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 펩타이드, 키메라 펩타이드(chimeric peptide), 항체, 이의 항원-결합 단편, 항원-결합 항체 모사체(mimetic), 올리고뉴클레오타이드 및 소 유기 분자(small organic molecule)로부터 선택되고; 상기 화합물이:
- 게니스테인(genistein)의 존재하에서 억제되는, 세포내에서 별개의 세포질성 기질의 타이로신 포스포릴화를 유도하고/하거나;
- 바쿠올린-1의 존재시 억제되는, 세포내에서 리소좀 세포외배출을 유도하는 화합물.
제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항-사람 CD38 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 사용하기 위한 화합물.
제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이:
- 사람 CD31의 Ig-유사 도메인(Ig-like domain) 1-3을 포함하는 펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 315번을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체; 또는
- 면역글로불린의 Fc 도메인에, 사람 혈청 알부민에, 바람직하게는 사람 혈청 알부민의 도메인 III에, 또는 트랜스페린에 융합된, 사람 CD31의 Ig-유사 도메인 1-3을 포함하는 키메라 펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 1의 아미노산 28 내지 315번을 포함하는 펩타이드 또는 이의 변이체인, 사용하기 위한 화합물.