CN115515615A - Pilra抗体及其使用方法 - Google Patents

Pilra抗体及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115515615A
CN115515615A CN202180017565.9A CN202180017565A CN115515615A CN 115515615 A CN115515615 A CN 115515615A CN 202180017565 A CN202180017565 A CN 202180017565A CN 115515615 A CN115515615 A CN 115515615A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antigen
pilra
binding fragment
human
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180017565.9A
Other languages
English (en)
Inventor
S·梁
S·诺尔
L·梁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Alexite Co ltd
Original Assignee
Alexite Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alexite Co ltd filed Critical Alexite Co ltd
Publication of CN115515615A publication Critical patent/CN115515615A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本公开提供了特异性结合人PILRA的抗体及其抗原结合片段以及包含此类抗体或其抗原结合片段的组合物。在特定方面，所述特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与配体的结合和/或减少细胞表面PILRA。在其他方面，所述抗体或抗原结合片段可用于治疗与骨髓细胞功能障碍相关的疾病或疾患。

Description

PILRA抗体及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年2月18日提交的美国临时申请号62/978,106和2020年9月8日提交的63/075,440的权益，所述临时申请各自特此以引用的方式整体并入。
参考通过EFS-WEB以电子方式提交的序列表
以电子方式提交的序列表(名称：4503_009PC02_Seqlisting_ST25.txt；大小：52,063字节；和创建日期：2021年2月12日)的内容以引用的方式整体并入本文。
1.技术领域
本公开涉及特异性结合人PILRA的抗体、包含此类抗体的组合物，以及制备和使用特异性结合人PILRA的抗体的方法。
2.背景技术
2型成对免疫球蛋白样受体α(PILRA)是在骨髓系的各种先天免疫细胞上表达的细胞表面受体，所述先天免疫细胞诸如单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞(在CNS中)、树突状细胞和中性粒细胞。PILRA是含有细胞内ITIM结构域和细胞外IgV结构域的抑制性受体，并且其配体包括特定的唾液酸化O-糖基化蛋白。PILRA也是单纯疱疹病毒1(HSV-1)的进入受体。PILRA基因中天然存在的等位基因导致编码的PILRA蛋白中的错义变体(G78至R78)。PILRA的R78变体与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)风险降低相关。据报道，这种变体还通过改变对PILRA唾液酸结合口袋的通路来减少PILRA与其若干配体的结合。已提出这种变体通过在HSV-1复发期间减少小胶质细胞中的抑制性信号传导和减少小胶质细胞感染来保护个体免受阿尔茨海默氏病的侵害。
鉴于PILRA的表达和功能，本文提供了特异性结合人PILRA的抗体。此类抗体可通过阻断PILRA与配体的结合和/或通过下调细胞表面PILRA来减少PILRA的抑制性信号传导。此类抗体可用于活化骨髓细胞和治疗需要活化骨髓细胞的疾病，包括癌症和神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默氏病。本文提供了这些和其他组合物和方法。
3.发明内容
本文提供了特异性结合人PILRA的分离的抗体及其抗原结合片段及其使用方法。
在本文提供的一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与其一个或多个配体的结合。在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段下调细胞表面PILRA。在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与其一个或多个配体的结合，并且PILRA下调细胞表面PILRA。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段阻断人PILRA(SEQ ID NO：1)的残基Arg126与PILRA的一个或多个配体的结合。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段在37℃下30分钟后下调细胞表面PILRA至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。
在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段包含以下的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1、VH CDR2、VH CDR3以及轻链可变区(VL)CDR1、CDR2和CDR3序列：分别为SEQ ID NO：4-9；分别为SEQ ID NO：10-15；分别为SEQ ID NO：16-21；或分别为SEQ ID NO：22-27。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合片段竞争性抑制参考抗体与人PILRA的结合，其中参考抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO：28和29；分别为SEQ ID NO：30和31；分别为SEQ ID NO：32和33；或分别为SEQ ID NO：34和35。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合片段与包含重链可变区和轻链可变区的抗体结合相同的人PILRA表位，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO：28和29；分别为SEQ ID NO：30和31；分别为SEQ ID NO：32和33；或分别为SEQ IDNO：34和35。
在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段包含选自由hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001组成的组的抗体的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些方面，CDR是Kabat定义的CDR、Chothia定义的CDR、IMGT定义的CDR或AbM定义的CDR。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：28、30、32或34的氨基酸序列。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：29、31、33或35的氨基酸序列。
在一些方面，抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO：28和29；分别为SEQ ID NO：30和31；分别为SEQ ID NO：32和33；或分别为SEQ ID NO：34和35。在一些方面，特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段是包含重链可变区和轻链可变区的人源化形式或抗体，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO：28和29；分别为SEQID NO：30和31；分别为SEQ ID NO：32和33；或分别为SEQ ID NO：34和35。
在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含SEQ ID NO：28、30、32或34的氨基酸序列。
在一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中轻链可变区包含SEQ ID NO：29、31、33或35的氨基酸序列。
在本文提供的下调细胞表面PILRA的抗体或其抗原结合片段的一些方面，下调是剂量依赖性的。
在本文提供的阻断PILRA与其一个或多个配体结合的抗体或其抗原结合片段的一些方面，抗体或其抗原结合片段阻断人PILRA(SEQ ID NO：1)的残基Arg126与PILRA的一个或多个配体的结合。
在本文提供的阻断PILRA与其一个或多个配体结合的抗体或其抗原结合片段的一些方面，阻断是剂量依赖性的。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段活化骨髓细胞。在一些方面，抗体或其抗原结合片段促进骨髓细胞分化。在一些方面，抗体或其抗原结合片段增加骨髓细胞产生MIP1b。在一些方面，抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与NPDC1的结合。在一些方面，骨髓细胞的活化、骨髓细胞分化的促进、MIP1b产生的增加和/或配体结合的阻断是剂量依赖性的。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合食蟹猴PILRA。在一些方面，抗体或其抗原结合片段不结合人PILRB。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA的细胞外结构域。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：1的氨基酸20-197中的表位。
在一些方面，抗体2175B不竞争性抑制抗体或其抗原结合片段与人PILRA的结合。
在一些方面，抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区。在一些方面，重链恒定区是选自由人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4同种型组成的组的同种型。在一些方面，抗体或抗原结合片段包含经工程改造以降低效应子功能的Fc结构域。
在一些方面，抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区，其中重链恒定区是人IgG1重链恒定区，并且其中轻链恒定区是人IgGκ轻链恒定区。
在一些方面，抗体或抗原结合片段是单克隆抗体。在一些方面，抗体或其抗原结合片段是鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，抗体或抗原结合片段是全长抗体。在一些方面，抗体或抗原结合片段是抗原结合片段。在一些方面，抗原结合片段是Fab、Fab′、F(ab′)2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体(intrabody)、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab′)3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。
在一些方面，如权利要求1-34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含可检测标记。
在本文提供的一些方面，分离的多核苷酸包含编码本文提供的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或重链的核酸分子。在一些方面，核酸分子编码SEQ ID NO：28、30、32或34的VH。
在一些方面，分离的多核苷酸包含编码本文提供的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区或轻链的核酸分子。在一些方面，核酸分子编码SEQ ID NO：29、31、33或35的VL。
在一些方面，分离的多核苷酸包含编码本文提供的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或重链以及抗体或其抗原结合片段的轻链可变区或轻链的核酸分子。
在本文提供的一些方面，分离的载体包含本文提供的多核苷酸。
在本文提供的一些方面，宿主细胞包含(a)本文提供的多核苷酸，(b)本文提供的载体，或(c)包含本文提供的编码轻链可变区或轻链的多核苷酸的第一载体和包含本文提供的编码重链可变区或重链的多核苷酸的第二载体。在一些方面，宿主细胞选自由以下组成的组：大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)、酵母菌、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10细胞、植物细胞、昆虫细胞和组织培养物中的人细胞。
在本文提供的一些方面，产生结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段的方法包括培养本文提供的宿主细胞，从而表达核酸分子并产生抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述方法还包括从培养物中分离抗体或其抗原结合片段。
在本文提供的一些方面，特异性结合人PILRA的分离的抗体或其抗原结合片段由本文提供的多核苷酸编码或通过本文提供的方法产生。
在本文提供的一些方面，药物组合物包含本文提供的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂。
在本文提供的一些方面，用于下调细胞表面PILRA的方法包括使在其表面表达PILRA的细胞与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触。
在一些方面，用于抑制PILRA与PILRA配体结合的方法包括在PILRA配体的存在下使PILRA与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触，任选地其中PILRA和/或PILRA配体在细胞上表达。在一些方面，PILRA配体是NPDC1。在一些方面，PILRA配体在T细胞上表达。
在一些方面，用于增加骨髓细胞活化的方法包括使骨髓细胞与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触。在一些方面，骨髓细胞活化是Fc受体介导的。
在一些方面，用于促进骨髓细胞分化的方法包括使骨髓细胞与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触。
在一些方面，用于增加骨髓细胞产生MIP1b的方法包括使骨髓细胞与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触。
在一些方面，接触是在体外。在一些方面，接触是在受试者中。
在一些方面，治疗患者的癌症的方法包括向患者施用治疗有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。在一些方面，癌症是其中骨髓细胞已浸润肿瘤微环境的实体瘤。在一些方面，癌症选自胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌(任选地其中肾癌是肾透明细胞癌)、胰腺癌和乳腺癌。在一些方面，所述方法还包括施用抑制性免疫检查点分子的拮抗剂。在一些方面，免疫检查点分子是PD-1或PD-L1。在一些方面，PD-1的拮抗剂是抗PD-1抗体或其抗体片段。在一些方面，抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：纳武利尤单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、MEDI-0680(AMP-514)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(SHR-1210)、替雷利珠单抗(tislelizumab)(BGB-A317)和斯巴达珠单抗(spartalizumab)(NPVPDR001、NVS240118、PDR001)。在一些方面，PD-L1的拮抗剂是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。在一些方面，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：阿替利珠单抗(atezolizumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)(MEDI4736)、BMS-936559、MSB0010718C和rHigM12B7。在一些方面，同时施用特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段和抑制性免疫检查点分子的拮抗剂。在一些方面，依次施用特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段和抑制性免疫检查点分子的拮抗剂。
在一些方面，治疗患者的骨髓细胞功能障碍或缺陷的疾病或疾患的方法包括向患者施用治疗有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。在一些方面，疾病或疾患是神经退行性疾病。在一些方面，神经退行性疾病是阿尔茨海默氏病。在一些方面，患者携带PILRA的G78变体。
在一些方面，活化患者的先天免疫系统的方法包括向患者施用有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。
在一些方面，用于检测样品中PILRA的方法包括使样品与本文提供的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物接触。在一些方面，样品获自人受试者。在一些方面，样品是癌症样品。
4.附图说明
图1A示出了原代CD4+T细胞或Jurkat细胞与PILRA Fc或IgG1同种型对照的结合。(参见实施例1.)
图1B示出了抗PILRA抗体抑制PILRA Fc与CD4+T细胞的结合。(参见实施例1.)
图2A示出了代表性FACS图，其示出了用媒介物、mIgG1或PILRA Fc mIgG1处理的骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)上的CD14与CD86表达。(参见实施例2.)
图2B示出了在用mIgG1同种型对照或PILRA Fc处理后来自三名不同供体的活化骨髓细胞相对于媒介物处理的细胞的百分比。(参见实施例2.)
图3示出了PILRA Fc对MDSC产生MIP1b的影响。(参见实施例3.)
图4示出了抗鼠PILRA抗体对NPDC1 Fc与小鼠PILRA结合的影响。(参见实施例5.)
图5示出了抗人PILRA抗体对PILRA Fc与人T细胞结合的影响。
(参见实施例7.)
图6示出了抗人PILRA抗体对细胞表面PILRA的影响。(参见实施例8.)
图7示出了肿瘤(每列左侧的点和空心框)和匹配的健康样品(每列右侧的点和实心框)的PILRA mRNA表达水平。*指定p＜0.01。(参见实施例9.)
图8示出了PILRA Fc与抗PD-L1组合在同基因MC38肿瘤模型中的作用。(参见实施例10.)
图9示出了hPA-002、hPA-005和hPA-004显示出与表达PILRA的细胞的竞争性结合，而Ab 2175B没有显示出与表达PILRA的细胞的竞争性结合。(参见实施例12.)
图10A示出了U937亲本细胞、U937对照细胞和U937 PILRA OE细胞中PILRA的相对量的图表。(参见实施例13.)
图10B示出了用IgG、hPA-002、hPA-005和hPA-004处理的U937亲本细胞、U937对照细胞和U937 PILRA OE细胞中的MCP-1产生。
(参见实施例13.)
图10C示出了用IgG、hPA-002、hPA-005和hPA-004处理的U937亲本细胞、U937对照细胞和U937 PILRA OE细胞中的RANTES产生。(参见实施例13.)
图11示出了不同浓度的抗PILRA抗体对U937PILRA OE细胞中MCP-1产生的影响。(参见实施例14.)
图12示出了hPA-002、hPA-005和hPA-004增强原代人单核细胞中的Fc受体活化。(参见实施例15.)
图13提供了人PILRA(SEQ ID NO：1)和人PILRB(SEQ ID NO：68)蛋白质序列的比对。
图14A和图14B提供了具有不同于PILRB标记的氨基酸的PILRA(氨基酸32-150，其中Met添加到N末端)结构的示意图(基于Kuroki等人PNAS 111：877-8882(2014)；结构代码3WV0)。
5.具体实施方式
本文提供了特异性结合PILRA(例如，人PILRA)的抗体(例如，单克隆抗体)及其抗原结合片段。抗人PILRA抗体及其抗原结合片段可例如阻断人PILRA与配体的结合和/或下调细胞表面人PILRA。本文提供了示例性抗人PILRA抗体，其证明了这些活性。阻断人PILRA与配体的结合和/或下调细胞表面人PILRA减少PILRA的抑制性信号传导，从而导致骨髓细胞的活化和分化。这些活性可以促进抗肿瘤免疫并对抗神经退行性疾病的机制，所述神经退行性疾病诸如阿尔茨海默氏病和其他与功能障碍的小胶质细胞相关的疾病。
还提供了编码此类抗体及其抗原结合片段的分离的核酸(多核苷酸)，诸如互补DNA(cDNA)。还提供了包含编码此类抗体及其抗原结合片段的核酸(多核苷酸)的载体(例如，表达载体)和细胞(例如，宿主细胞)。还提供了制备此类抗体及其抗原结合片段的方法。
在其他方面，本文提供了用于使用此类抗体以例如调节PILRA活性的方法。例如，可通过改变PILRA与其一个或多个配体的结合来调节PILRA活性。在一些方面，本文提供的抗人PILRA抗体用于阻断人PILRA与配体的结合和/或下调细胞表面人PILRA。
在其他方面，本文提供的抗人PILRA抗体用于在体外或体内活化骨髓细胞，诸如巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和小胶质细胞。在其他方面，本文提供的抗人PILRA抗体用于治疗其中骨髓细胞功能障碍或缺陷的疾病，例如，需要骨髓细胞活化、骨髓细胞分化或先天免疫系统活化的疾病。在一些方面，此类疾病包括但不限于癌症和神经退行性疾病，诸如阿尔茨海默氏病。特别地，据报道减少PILRA与其若干配体结合的PILRA的R78变体与阿尔茨海默氏病的风险降低相关。因此，在一些方面，降低PILRA功能(例如，通过阻断PILRA与配体的结合和/或下调细胞表面人PILRA)的抗人PILRA抗体将可用于治疗阿尔茨海默氏病。还提供了相关组合物(例如，药物组合物)、试剂盒和方法。
5.1术语
如本文所用，术语“PILRA”是指哺乳动物PILRA多肽，包括但不限于天然PILRA多肽和PILRA多肽的同工型。“PILRA”涵盖全长、未加工的PILRA多肽以及由细胞内加工产生的PILRA多肽形式。如本文所用，术语“人PILRA”是指包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的多肽；SEQ ID NO：1的天然存在的变体，包括但不限于其中G或R存在于SEQ ID NO：1的位置78处的变体；和加工形式的SEQ ID NO：1，包括但不限于缺少其信号肽(例如，来自SEQ ID NO：1的氨基酸1-19)的SEQ ID NO：1。“PILRA多核苷酸”、“PILRA核苷酸”或“PILRA核酸”是指编码任何PILRA的多核苷酸，包括上述那些。
术语“抗体”意指通过免疫球蛋白分子可变区内的至少一个抗原识别位点识别并特异性结合靶标的免疫球蛋白分子，所述靶标诸如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述的组合(例如，糖蛋白)。如本文所用，术语“抗体”涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和任何其他免疫球蛋白分子，只要抗体表现出所需的生物活性。抗体可以是五种主要类别的免疫球蛋白中的任一类：基于它们的重链恒定结构域(分别称为α、δ、ε、γ和μ)的身份，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。不同类别免疫球蛋白具有不同且众所周知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸的、融合蛋白的一部分或缀合至其他分子，诸如毒素、放射性同位素等。
术语“抗体片段”是指抗体的一部分。“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”或“抗原结合区”是指与抗原结合的抗体部分。抗原结合片段可含有抗体的抗原决定区(例如，互补决定区(CDR))。抗体的抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。抗体的抗原结合片段可来源于任何动物物种，诸如啮齿动物(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)和人，或者可人工产生。
术语“抗PILRA抗体”、“PILRA抗体”和“与PILRA结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合PILRA的抗体，以使所述抗体用作PILRA活性的诊断、治疗和/或调节剂。抗PILRA抗体与不相关、非PILRA蛋白的结合程度可小于抗体与PILRA的结合的约10％，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量。抗PILRA抗体可仅与PILRA结合而不与PILRB结合，或者抗PILRA抗体可与PILRA和PILRB结合。
“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指参与单个抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合的同源抗体或抗原结合片段群。这与通常包括针对不同抗原决定簇的不同抗体的多克隆抗体形成对比。术语“单克隆”抗体或其抗原结合片段涵盖完整和全长单克隆抗体以及抗体片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白、以及包含抗原识别位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指以包括但不限于杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物的多种方式制备的此类抗体及其抗原结合片段。
如本文所用，术语“可变区”或“可变结构域”可互换使用并且在本领域中是常见的。可变区通常是指抗体的一部分，通常是轻链或重链的一部分，通常为成熟重链中的约氨基末端110至120个氨基酸或110至125个氨基酸和成熟轻链中的约90至115个氨基酸，所述氨基酸在抗体之间的序列差异很大，并且用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中更高度保守的区域称为框架区(FR)。不希望受任何特定机制或理论的束缚，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在一些方面，可变区是人可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠CDR和人框架区(FR)。在一些方面，可变区是灵长类动物(例如，非人灵长类动物)可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠CDR和灵长类动物(例如，非人灵长类动物)框架区(FR)。
术语“VL”和“VL结构域”可互换使用，以指代抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH结构域”可互换使用，以指代抗体的重链可变区。
术语“Kabat编号”和类似术语在本领域中是公认的，并且是指对抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，CDR可根据Kabat编号系统确定(参见例如，，Kabat EA和Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci 190：382-391和Kabat EA等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department ofHealth and Human Services，NIH出版号91-3242)。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35(其任选地可在35之后包括一个或两个另外的氨基酸(在Kabat编号方案中称为35A和35B))(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)和氨基酸位置95至102(CDR3)处。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)处。在一些方面，本文所述的抗体的CDR已根据Kabat编号方案确定。
而Chothia是指结构环的位置(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32与H34之间变化，具体取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入物置于H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅35A存在，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。AbM高变区代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且由OxfordMolecular的AbM抗体建模软件使用。
Figure BDA0003819579330000141
如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”是可互换的并且具有本领域常见的含义。恒定区是抗体部分，例如，轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可表现出各种效应子功能，诸如与Fc受体的相互作用。相对于免疫球蛋白可变结构域，免疫球蛋白分子的恒定区通常具有更保守的氨基酸序列。在某些方面，抗体或抗原结合片段包含足以产生抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的恒定区或其部分。
如本文所用，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“重链”在关于抗体使用时可指任何不同的类型，例如，阿尔法(α)、德尔塔(δ)、伊普西龙(ε)、伽马(γ)和缪(μ)，其分别产生抗体的IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类别，包括IgG的亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链氨基酸序列是本领域众所周知的。在一些方面，重链是人重链。
如本文所用，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“轻链”在关于抗体使用时可指任何不同的类型，例如，卡帕(κ)或拉姆达(λ)。轻链氨基酸序列是本领域众所周知的。在一些方面，轻链是人轻链。
术语“嵌合”抗体或其抗原结合片段是指其中氨基酸序列来源于两个或更多个物种的抗体或其抗原结合片段。通常，轻链和重链的可变区对应于源自一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的具有所需特异性、亲和力和能力的的抗体或其抗原结合片段的可变区，而恒定区与源自另一物种(通常是人)的抗体或其抗原结合片段中的序列同源，以避免在所述物种中引发免疫反应。
术语“人源化”抗体或其抗原结合片段是指非人(例如，鼠)抗体或抗原结合片段的形式，其为含有最少非人(例如，鼠)序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段。通常，人源化抗体或其抗原结合片段是人免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力(“CDR接枝的”)的残基替换(Jones等人，Nature321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534-1536(1988))。人源化抗体或其抗原结合片段可通过取代Fv框架区中和/或替换的非人残基内的另外的残基来进一步修饰，以细化和优化抗体或其抗原结合片段的特异性、亲和力和/或能力。一般来讲，人源化抗体或其抗原结合片段将包含VH和VL，其包含基本上全部的至少一个、且通常两个或三个对应于非人免疫球蛋白的CDR区，而全部或基本上全部的FR区为人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗或其抗原结合片段还可包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)(通常为人免疫球蛋白恒定区或结构域)的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于美国专利5，225,539；Roguska等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，91(3)：969-973(1994)和Roguska等人，Protein Eng.9(10)：895-904(1996)中。在一些方面，“人源化抗体”是表面重塑的(resurfaced)抗体。
术语“人”抗体或其抗原结合片段意指具有源自人免疫球蛋白基因座的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，其中此种抗体或抗原结合片段使用本领域已知的任何技术制备。人抗体或其抗原结合片段的此定义包括完整或全长抗体及其片段。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体或其抗原结合片段)的单一结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另外说明，如本文所用的“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体或其抗原结合片段和抗原)之间1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可用解离常数(KD)来表示。亲和力可以本领域已知的多种方式测量和/或表达，所述方式包括但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD由koff/kon的商计算得出，而KA由kon/koff的商计算得出。kon是指例如抗体或其抗原结合片段与抗原的缔合速率常数，并且koff是指例如抗体或其抗原结合片段从抗原的解离速率常数。kon和koff可通过本领域普通技术人员已知的技术(诸如
Figure BDA0003819579330000161
或KinExA)来确定。
“阻断(blocking)”或“阻断(block)......”或“抑制性”或“抑制......”的抗体是当抗体结合到靶蛋白时减少或抑制(部分或完全)其靶蛋白与一个或多个配体结合，和/或当抗体结合到靶蛋白时减少或抑制(部分或完全)靶蛋白的一种或多种活性或功能的抗体。
“下调”其靶蛋白的抗体减少靶蛋白在细胞表面上的表达。
如本文所用，“表位”是本领域中的术语，并且是指抗体或其抗原结合片段可特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可例如来自一个或多个多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续或非连续表位)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合的表位可通过例如NMR光谱、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定、氢/氘交换与质谱联用(例如，液相色谱电喷雾质谱)、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，丙氨酸扫描或其他定点诱变作图)来确定。对于X射线晶体学，可使用本领域的任何已知方法来完成结晶(例如，Giegé R等人，(1994)ActaCrystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4)：339-350；McPherson A(1990)Eur JBiochem 189：1-23；Chayen NE(1997)Structure 5：1269-1274；McPherson A(1976)J BiolChem 251：6300-6303)。抗体或其抗原结合片段与其抗原的晶体可使用众所周知的X射线衍射技术进行研究，并且可使用计算机软件诸如X-PLOR(Yale University，1992，由Molecular Simulations，Inc.分销；参见例如，Meth Enzymol(1985)第114和115卷，Wyckoff HW等人编；U.S.2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr DBiol Crystallogr 49(Pt 1)：37-60；Bricogne G(1997)Meth Enzymol 276A：361-423，Carter CW编；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt10)：1316-1323)细化。诱变作图研究可使用本领域技术人员已知的任何方法来完成。关于诱变技术(包括丙氨酸扫描诱变技术)的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)J BiolChem 270：1388-1394以及Cunningham BC和Wells JA(1989)Science 244：1081-1085。
与参考PILRA抗体“结合至相同表位”的PILRA抗体是指与参考PILRA抗体接触相同PILRA氨基酸残基的抗体。PILRA抗体与参考PILRA抗体结合至相同表位的能力使用肽扫描诱变或高通量丙氨酸扫描诱变来确定(参见Davidson和Doranz，2014 Immunology 143，13-20)。在后一种方法中，可通过将每个单独的氨基酸残基突变为丙氨酸(或者如果氨基酸残基是丙氨酸，则突变为另一个残基诸如丝氨酸)并测试每个突变体与抗PILRA抗体或其抗原结合片段的结合，来生成PILRA或其一部分(例如，胞外结构域)的综合文库。结合所需的氨基酸，并且因此是表位残基，通过免疫反应性的丧失来鉴定。
如本文所用，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”在抗体或其抗原结合片段的上下文中是类似的术语。这些术语指示抗体或其抗原结合片段通过其抗原结合结构域结合至表位，并且所述结合需要抗原结合结构域与表位之间的互补性。因此，与人PILRA“特异性结合”的抗体(例如，SEQ ID NO：1)也可与其他物种的PILRA(例如，食蟹猴PILRA)和/或由其他人等位基因产生的PILRA蛋白结合，但与不相关的非PILRA蛋白(例如，其他含有ITIM结构域的免疫调节蛋白)的结合程度小于例如通过放射免疫测定(RIA)测量的抗体与PILRA结合的约10％。
如果抗体优先结合给定表位或重叠表位，从而在一定程度上阻断参考抗体与所述表位的结合，则称所述抗体“竞争性抑制”参考抗体与所述表位的结合。竞争性抑制可通过本领域已知的任何方法(例如，竞争ELISA测定)来确定。可以说抗体竞争性抑制参考抗体与给定表位的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是自然界中未发现的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已被纯化到不再呈其于自然界中发现的形式的程度的那些。在一些方面，分离的抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。如本文所用，“基本上纯的”是指至少50％纯(即，不含污染物)、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯的材料。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可在本文中互换，以指代任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是直链或支链的，其可包含经修饰的氨基酸，并且其可间杂有非氨基酸。所述术语还涵盖已被天然修饰或通过介入修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，诸如与标记组分缀合。所述定义中还包括，例如，含有氨基酸(包括例如，非天然氨基酸等)的一种或多种类似物以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解，由于本公开的多肽基于抗体，在一些方面，多肽可以单链或缔合链出现。
如本文所用，术语“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如原代细胞、培养物中的细胞或来自细胞系的细胞。在一些方面，术语“宿主细胞”是指用核酸分子转染的细胞和此种细胞的后代或潜在后代。此种细胞的后代可能与用核酸分子转染的亲本细胞不同，例如，由于在后续世代中可能发生的突变或环境影响或核酸分子整合到宿主细胞基因组中。
术语“药物制剂”是指以允许活性成分的生物活性有效的形式的制剂，并且其不含有对将施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的其他组分。制剂可以是无菌的。
如本文所用，术语“施用(administer)”、“施用(administering)”、“施用(administration)”等是指可用于将药物(例如，抗人PILRA抗体或其抗原结合片段)递送至所需生物作用位点的方法。可与本文所述的剂和方法一起使用的施用技术见于例如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，现行版本，Pergamon；和Remington’s，PharmaceuticalSciences，现行版本，Mack Publishing Co.，Easton，Pa中。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。受试者可以是哺乳动物，诸如非人动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠、小鼠、猴或其他灵长类动物等)。在一些方面，受试者是食蟹猴。在一些方面，受试者是人。
术语“治疗有效量”是指有效治疗受试者的疾病或疾患的药物(例如，抗人PILRA抗体或其抗原结合片段)的量。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小或负担；抑制(即，在一定程度上减缓并且在一些方面阻止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即在一定程度上减缓并且在一些方面阻止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状；和/或导致有利的反应，诸如延长的无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)或总生存期(OS)、完全反应(CR)、部分反应(PR)或在一些情况下稳定的疾病(SD)、疾病进展(PD)的减少、减少的进展时间(TTP)或其任何组合。就药物可预防生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制性和/或细胞毒性的。
诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(totreat)”或“缓解(alleviafing)”或“缓解(to alleviate)”的术语是指治愈、减缓诊断的病理学疾患或病症、减轻所述疾患或病症的症状和/或停止所述疾患或病症的进展的治疗措施。因此，需要治疗的人包括那些已经被诊断患有或怀疑患有所述病症的人。在一些方面，如果患者表现出以下中的一项或多项，则受试者根据本文提供的方法针对癌症得到了成功的“治疗”：癌细胞数量减少或完全不存在癌细胞；肿瘤大小减小；癌细胞向外周器官的浸润(包括例如癌症扩散到软组织和骨中)受到抑制或不存在；肿瘤转移受到抑制或不存在；肿瘤生长受到抑制或不存在；与特定癌症相关的一种或多种症状得到缓解；发病率和死亡率降低；生活质量改善；肿瘤的致瘤性、致瘤频率或致瘤能力降低；肿瘤中癌症干细胞的数量或频率降低；致瘤细胞向非致瘤状态分化；延长的无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)或总生存期(OS)、完全反应(CR)、部分反应(PR)、稳定的疾病(SD)、疾病进展(PD)的减少、减少的进展时间(TTP)或其任何组合。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理疾患，其中细胞群的特征在于细胞生长不受调控。此类癌症可包括实体瘤，例如其中骨髓细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞、中性粒细胞、小胶质细胞或其他先天免疫细胞)已浸润肿瘤微环境的实体瘤。此类癌症的实例包括但不限于胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌(例如，肾透明细胞癌)、胰腺癌和乳腺癌。癌症可以是“PILRA阳性癌症”。此术语是指包含表达PILRA mRNA或蛋白质的细胞(例如，已浸润癌症的骨髓细胞)的癌症。癌症可以是具有“增加的PILRA”mRNA或蛋白质的癌症。这是指比同一组织的健康版本具有更多PILRA(例如，在已浸润癌症的骨髓细胞上)的癌症。
如本公开和权利要求中所使用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述”包括复数形式。
应当理解，每当在本文用措辞“包含”来描述方面时，还提供以“由......组成”和/或“基本上由......组成”描述的其他类似方面。在本公开中，“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“含有”和“具有”等可意指“包括(includes)”、“包括(including)”等；“基本上由......组成(consisting essentially of)”或“基本上由......组成(consistsessentially of)”是开放式的，允许超过所列举的内容的存在，只要所列举的内容的基础或新颖特征不会因超过所列举的内容的存在而改变，但将现有技术方面排除在外。
除非特别说明或从上下文中显而易见，如本文所用，术语“或”被理解为包含的。本文在短语中使用的术语“和/或”诸如“A和/或B”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”、和“B”。类似地，在短语中使用的术语“和/或”诸如“A、B和/或C”旨在涵盖以下方面中的每一种：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
如本文所用，术语“约”和“大约”在用于修饰数值或数值范围时，指示高于所述值或范围至多10％和低于所述值或范围至多10％的偏差保持仍在所述数值或范围的预期含义内。应当理解，每当在本文用措辞“约”或“大约”数值或范围来描述方面时，还提供涉及特定数值或范围的其他类似方面。
本文提供的任何组合物或方法可与本文提供的任何其他组合物和方法中的一种或多种组合。
5.2抗体
在一个方面，本文提供了特异性结合PILRA(诸如人、鼠或食蟹猴PILRA)的抗体(例如，单克隆抗体，诸如嵌合、人源化或人抗体)及其抗原结合片段。在特定的方面，本文提供了特异性结合人PILRA的抗体(例如，单克隆抗体，诸如嵌合、人源化或人抗体)及其抗原结合片段。人、食蟹猴和鼠PILRA的氨基酸序列是本领域已知的，并且在本文中也如分别由SEQID NO：1-3表示的那样提供。
人PILRA：
Figure BDA0003819579330000221
在一些方面，设想上述人PILRA序列缺乏其信号序列。例如，人PILRA序列可包含SEQ ID NO：1的氨基酸20-303。上述人PILRA序列(SEQ ID NO：1)代表变体序列，其中精氨酸(R)存在于位置78处，并且由与保护免受阿尔茨海默氏病相关的等位基因编码。在一些方面，设想了变体PILRA序列，其中位置78被甘氨酸(G)占据。如SEQ ID NO：1所示，人PILRA的其他特征包括来自约氨基酸20-197的胞外结构域(ECD)，其中IgV结构域来自约氨基酸32-150，并且ITIM基序来自约氨基酸267-272和296-301。
食蟹猴PILRA：
Figure BDA0003819579330000231
在一些方面，设想上述食蟹猴PILRA序列缺乏其信号序列。例如，食蟹猴PILRA序列可包含SEQ ID NO：2的氨基酸24-307。
鼠PILRA
Figure BDA0003819579330000232
在一些方面，设想上述鼠PILRA序列缺乏其信号序列。例如，鼠PILRA序列可包含SEQ ID NO：3的氨基酸32-302。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA(例如，SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：1的氨基酸20-303，或其中R或G位于位置78处的任一前述序列)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA和食蟹猴PILRA(例如，SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的氨基酸24-307)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA但不结合食蟹猴PILRA(例如，SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的氨基酸24-307)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA但不结合鼠PILRA(例如，SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：3的氨基酸32-302)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA(并且任选地结合食蟹猴PILRA)和人PILRB(例如，如下所示的SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：68的氨基酸20-227)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段结合人PILRA(并且任选地结合食蟹猴PILRA)，但不结合人PILRB。
人PILRB的序列在下面提供为SEQ ID NO：68。
Figure BDA0003819579330000241
在一些方面，设想上述人PILRB序列缺乏其信号序列。例如，人PILRB序列可包含SEQ ID NO：68的氨基酸20-227。图13提供了人PILRA和人PILRB的氨基酸序列的比对。PILRA的以下氨基酸与PILRB中的氨基酸不同：P11(信号序列中)、L14(信号序列中)、S22(信号序列中)、T63、A64、D66、R78、K106、Q116、Q118、S133、W139、E143、S148、T156-M163、L169、T175、T176、Q182、G183、R185、R186、D188、I192和E195。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA的胞外结构域(SEQID NO：1的氨基酸20-197)。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表1和表2中列出的抗体的六个CDR(即，表1中列出的抗体的三个VH CDR和表2中列出的相同抗体的三个VL CDR)。
表1.VH CDR氨基酸序列1
Figure BDA0003819579330000251
1表1中的VH CDR是根据Kabat确定的。
表2.VL CDR氨基酸序列2
Figure BDA0003819579330000252
2表2中的VL CDR是根据Kabat确定的。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表3中列出的抗体的VH。
表3：可变重链(VH)氨基酸序列
Figure BDA0003819579330000253
Figure BDA0003819579330000261
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表4中列出的抗体的VL。
表4：可变轻链(VL)氨基酸序列
Figure BDA0003819579330000262
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表3和表4中列出的抗体的VH和VL(即，表3中列出的抗体的VH和表4中列出的相同抗体的VL)。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表5中列出的抗体的一个、两个、三个或所有VH框架区。
表5.VH FR氨基酸序列3
Figure BDA0003819579330000271
3表5中描述的VH框架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定的。换句话说，VHCDR由Kabat确定，并且框架区是可变区中围绕CDR的氨基酸残基，格式为FRI、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表6中列出的抗体的一个、两个、三个或所有VL框架区。
表6.VL FR氨基酸序列4
Figure BDA0003819579330000281
4表6中描述的VL框架区是基于CDR的Kabat编号系统的边界确定的。换句话说，VLCDR由Kabat确定，并且框架区是可变区中围绕CDR的氨基酸残基，格式为FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合人PILRA，并且包含表5和表6中列出的抗体的四个VH框架区和四个VL框架区(即，表5中列出的抗体的四个VH框架区和表6中列出的相同抗体的四个VL框架区)。
在某些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段可通过其单独的VL结构域或单独的VH结构域或单独的3个VL CDR或单独的3个VH CDR进行描述。参见例如，Rader C等人，(1998)PNAS 95：8910-8915，其以引用的方式整体并入本文，描述了通过以下方式进行小鼠抗αvβ3抗体的人源化：鉴定分别来自人轻链或重链文库的互补轻链或重链，从而产生具有与原始抗体的亲和力一样高或更高亲和力的人源化抗体变体。还参见Clackson T等人，(1991)Nature 352：624-628，其以引用的方式整体并入本文，描述了通过使用特定VL结构域(或VH结构域)并且筛选互补可变结构域的文库来产生结合特定抗原的抗体的方法。如通过ELISA确定，筛选产生了14个特定VH结构域的新伴侣和13个特定VL结构域的新伴侣，它们是强结合剂。还参见Kim SJ和Hong HJ，(2007)J Microbiol 45：572-577，其以引用的方式整体并入本文，描述了通过使用特定VH结构域并且筛选互补VL结构域的文库(例如，人VL文库)来产生结合特定抗原的抗体的方法；所选择的VL结构域继而可用于指导选择另外的互补(例如，人)VH结构域。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据Chothia编号方案确定，所述编号方案是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如，Chothia C和Lesk AM，(1987)，J MolBiol 196：901-917；A1-Lazikani B等人，(1997)J Mol Biol 273：927-948；Chothia C等人，(1992)J Mol Biol227：799-817；Tramontano A等人，(1990)J Mol Biol215(1)：175-82；和美国专利号7,709,226)。通常，当使用Kabat编号惯例时，Chothia CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34，Chothia CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56，并且Chothia CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102，而Chothia CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34，ChothiaCDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56，并且Chothia CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97。当使用Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32与H34之间变化，具体取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入物置于H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅35A存在，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。
在某些方面，本文提供了特异性结合人PILRA并且包含表3和表4中列出的抗体的Chothia VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段。在一些方面，特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含一个或多个CDR，其中Chothia和Kabat CDR具有相同的氨基酸序列。在一些方面，本文提供了特异性结合人PILRA并且包含KabatCDR和Chothia CDR的组合的抗体及其抗原结合片段。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据如描述于Lefranc M-P，(1999)The Immunologist 7：132-136和Lefranc M-P等人，(1999)Nucleic Acids Res 27：209-212中的IMGT编号系统来确定。根据IMGT编号方案，VH-CDR1位于位置26至35处，VH-CDR2位于位置51至57处，VH-CDR3位于位置93至102处，VL-CDR1位于位置27至32处，VL-CDR2位于位置50至52处，并且VL-CDR3位于位置89至97处。在一些方面，本文提供了特异性结合人PILRA并且包含表3和表4中列出的抗体的IMGT VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段，例如，如描述于Lefranc M-P(1999)同上和Lefranc M-P等人，(1999)同上中。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据MacCallumRM等人，(1996)J MolBiol 262：732-745来确定。还参见例如，Martin A.“Protein Sequence and StructureAnalysis of Antibody Variable Domains，”于Antibody Engineering中，Kontermann和Dübel编，第31章，第422-439页，Springer-Verlag，Berlin(2001)。在一些方面，本文提供了特异性结合人PILRA并且包含如通过MacCallum RM等人的方法确定的表3和表4中列出的抗体的VH和VL CDR的抗体或其抗原结合片段。
在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据AbM编号方案确定，所述编号方案是指AbM高变区，其代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且由OxfordMolecular的AbM抗体建模软件(Oxford Molecular Group，Inc.)使用。在一些方面，本文提供了特异性结合人PILRA并且包含如通过AbM编号方案确定的表3和表4中列出的抗体的VH和VL CDR的抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，本文提供了包含重链和轻链的抗体。关于重链，在一些方面，本文所述的抗体的重链可以是阿尔法(“α”)、德尔塔(“δ”)、伊普西龙(“ε”)、伽马(“γ”)或缪(“μ”)重链。在一些方面，所述抗体的重链可包含阿尔法(“α”)、德尔塔(“δ”)、伊普西龙(“ε”)、伽马(“γ”)或缪(“μ”)重链。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中列出的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含人伽马(γ)重链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中列出的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含IgG1重链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中列出的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含IgG2(例如，IgG2a或IgG2b)重链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中列出的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含IgG4重链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表3中列出的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含本文所述或本领域已知的人重链的氨基酸。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中进行描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
关于轻链，在一些方面，本文所述的抗体的轻链是κ轻链。在一些方面，本文所述的抗体的轻链是λ轻链。在一些方面，本文所述的抗体的轻链是人κ轻链或人λ轻链。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中列出的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中列出的序列，并且其中轻链的恒定区包含人λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表4中列出的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ或λ轻链恒定区的氨基酸序列。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中进行描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含VH结构域和VL结构域，其包含本文所述的任何抗人PILRA抗体的氨基酸序列，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体包含VH结构域和VL结构域，其包含本文所述的任何抗人PILRA抗体的氨基酸序列，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，恒定区包含人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。
人恒定区的非限制性实例在本领域中进行描述，例如参见Kabat EA等人(1991)同上。
示例性Fc结构域
在一些方面，抗PILRA抗体，并且特别是如本文提供的抗人PILRA抗体，可包含Fc结构域。在一些方面，Fc结构域是人IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4同种型。
在某些方面，Fc结构域具有IgG1同种型。在一些方面，抗PILRA抗体含有鼠IgG1 Fc结构域。在一些方面，抗人PILRA抗体含有人IgG1 Fc结构域(hIgGl)，例如，如SEQ ID NO：69中提供的。
Figure BDA0003819579330000331
在一些方面，抗人PILRA抗体的人IgG1 Fc结构域结合活化Fc受体。在某些方面，活化Fc受体选自FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIc以及FcγRIIIa和FcγRIIIb中的任何一种或多种。
在一些方面，抗人PILRA抗体的人IgG1 Fc结构域不与FcγRIII(CD16)和/或C1q结合或结合减少。在一些方面，抗人PILRA抗体的人IgG1 Fc结构域分别具有降低的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和/或补体结合活性，这在每种情况下可减少抗PILRA抗体结合的细胞(例如，骨髓细胞)的不希望的杀伤。上述效果可通过某些氨基酸修饰来实现，例如“NSLF”突变，其中人IgG1 Fc结构域含有突变N325S和L328F(通过IgGl Fc结构域的EU编号)，如例如SEQ ID NO：70所示。在另一方面，人IgG1 Fc结构域包含对应于K322A(EU编号)的突变，例如，如SEQ ID NO：71中提供的。
Figure BDA0003819579330000332
Figure BDA0003819579330000341
对人IgG1 Fc结构域的示例性修饰列于下表7中。
表7：对人IgG1 Fc结构域的示例性修饰
Figure BDA0003819579330000342
在本文提供的抗PILRA抗体的某些方面，Fc结构域具有IgG2同种型。在一些方面，抗PILRA抗体含有鼠IgG2 Fc结构域，例如鼠IgG2a(mIgG2a)。在一些方面，抗人PILRA抗体含有人IgG2 Fc结构域(hIgG2)。在一些方面，抗人PILRA抗体的人IgG2 Fc结构域结合活化Fc受体。在某些方面，活化Fc受体选自FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIc以及FcγRIIIa和FcγRIIIb中的任何一种或多种。
在本文提供的抗PILRA抗体的某些方面，Fc结构域具有IgG4同种型。在一些方面，抗人PILRA抗体含有人IgG4 Fc结构域(hIgG4)，例如，如SEQ ID NO：72中提供的。在一些方面，抗人PILRA抗体的人IgG4 Fc区结合活化Fc受体。在某些方面，活化Fc受体选自FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIc以及FcγRIIIa和FcγRIIIb中的任何一种或多种。在某些方面，人IgG4 Fc区包含对应于S228P(通过EU编号)的突变，例如，如SEQ ID NO：73中提供的。
Figure BDA0003819579330000343
Figure BDA0003819579330000351
在一些方面，可将本文所述的任何恒定区突变或修饰引入本文所述的具有两个重链恒定区的抗体或其抗原结合片段的一个或两个重链恒定区。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中(i)重链包含有包含表1中列出的抗体的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4-6、10-12、16-18或22-24)的VH结构域；(ii)轻链包含有包含表2中列出的相同抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：7-9、13-15、19-21或25-27)的VL结构域；(iii)重链还包含恒定重链结构域，其包含人IgG1重链恒定结构域的氨基酸序列；并且(iv)轻链还包含恒定轻链结构域，其包含人κ轻链恒定结构域的氨基酸序列。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中(i)重链包含有包含表3中列出的抗体的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：28、30、32或34)的VH结构域；(ii)轻链包含有包含表4中列出的相同抗体的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：29、31、33或35)的VL结构域；(iii)重链还包含恒定重链结构域，其包含人IgG1重链恒定结构域的氨基酸序列；并且(iv)轻链还包含恒定轻链结构域，其包含人κ轻链恒定结构域的氨基酸序列。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含作为人框架区或衍生自人框架区的框架区(例如，VH结构域和/或VL结构域的框架区)。人框架区的非限制性实例在本领域中进行描述，例如参见Kabat EA等人(1991)同上。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含作为灵长类动物(例如，灵长类动物)框架区或衍生自灵长类动物(例如，灵长类动物)框架区的框架区(例如，VH结构域和/或VL结构域的框架区)。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含一个、两个、三个或四个VH框架区(FR)，其具有本文所述的上文表5中列出的抗体的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：36-39、44-47、52-55或60-63)。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含一个、两个、三个或四个VL框架区(FR)，其具有本文所述的上文表6中列出的抗体的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：40-43、48-51、56-59或64-67)。在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段包含一个、两个、三个或四个VH框架区，其具有本文所述的上文表5中列出的抗体的氨基酸序列；以及一个、两个、三个或四个VL框架区，其具有本文所述的上文表6中列出的相同抗体的氨基酸序列(例如，(i)SEQ ID NO：36-39、44-47、52-55或60-63和(ii)SEQ ID NO40-43、48-51、56-59或64-67)。
抗体活性
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段下调细胞表面PILRA。下调PILRA的抗人PILRA抗体将具有降低抑制性信号传导的效果，所述抑制性信号传导原本会导致细胞表面PILRA与其配体的接合。
在一些方面，与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下的细胞表面PILRA水平相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段下调细胞表面PILRA(例如，在293细胞上异位表达的人PILRA)。在一些方面，与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下，在37℃下30分钟后的细胞表面PILRA水平相比，在存在抗人PILRA抗体的情况下，在37℃下30分钟后的细胞表面PILRA下调至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。在一些方面，与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下，在37℃下30分钟后的细胞表面PILRA相比，在存在抗人PILRA抗体的情况下，在37℃下30分钟后的细胞表面PILRA下调约10％至约50％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下，在37℃下2小时后的细胞表面PILRA水平相比，在存在抗人PILRA抗体的情况下，在37℃下2小时后的细胞表面PILRA下调至少30％、至少40％、至少50％或至少60％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下，在37℃下2小时后的细胞表面PILRA水平相比，在存在抗人PILRA抗体的情况下，在37℃下2小时后的细胞表面PILRA下调约30％至约60％。下调百分比可通过例如在存在或不存在抗人PILRA抗体或存在抗人PILRA抗体或对照抗体的情况下，将在冰上与37℃下指示时间点孵育后检测到的细胞表面PILRA水平标准化来计算。
下调可例如使用实施例8中公开的测定来测量。下调可通过例如在含有抗人PILRA抗体或不合抗体或对照抗体的情况下，孵育唾液酸酶处理的异位表达人PILRA的293细胞(例如，在37℃下30分钟)并检测细胞表面人PILRA来测量。细胞表面人PILRA可例如使用FACS来检测。下调可取决于抗人PILRA抗体的剂量。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合。假定结合PILRA-Fc并阻断PILRA-Fc与T细胞结合的抗人PILRA抗体阻断PILRA-Fc与T细胞上的PILRA配体的结合。预计具有这种活性的抗体同样会起到阻断内源性PILRA与PILRA配体结合的作用，从而抑制内源性PILRA的抑制性信号传导。
在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少70％。在一些方面，例如与存在对照抗体的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少75％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少80％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少85％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少90％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少95％。在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合100％。在一些方面，例如与存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合约70％至约95％或约70％至约98％。在一些方面，例如与存在对照抗体或片段的情况下PILRA-Fc与人T细胞的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合约80％至约95％。
结合的阻断可例如使用实施例7中公开的测定来测量。结合的阻断可例如通过以下步骤来测量：在4℃下将抗人PILRA抗体或其抗原结合片段与约5μg/ml PILRA Fc一起孵育30min，然后在4℃下加入人T细胞30min，洗涤细胞并检测结合的PILRA Fc。结合的PILRAFc可例如使用流式细胞术来检测。结合的阻断可取决于抗人PILRA抗体的剂量。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与一个或多个PILRA配体的结合。PILRA配体包括糖基化蛋白质，诸如具有PTPXP、PTPXXP、PXTPXP或PXTPXXP基序的那些。示例性配体包括COLEC12、NPDC1、CLEC4G和PIANP，以及HSV-1糖蛋白B。众所周知，PILRA(SEQ ID NO：1)中的氨基酸Arg126对唾液酸相互作用至关重要(参见例如，Rathore等人，PLOS Genetics 14：e1007427(2018))，并且与PILRB中相应氨基酸不同的氨基酸Arg78、Trp139和Glul43(参见图13)位于Arg126附近(分别为约
Figure BDA0003819579330000391
约
Figure BDA0003819579330000392
和约
Figure BDA0003819579330000393
)(参见图14A和图14B)。在人PILRA与人PILRB之间存在差异的位于图14A和图14B中提供的晶体结构中的另外的氨基酸是T63、A64、D66、K106、Q116、Q118、S133和S148。
在一些方面，阻断PILRA与其一个或多个配体结合的抗人PILRA抗体可通过测试抗体阻断PILRA-Fc与一个或多个PILRA配体结合的能力来鉴定，其中此种配体以可溶形式表达或在细胞表面表达。在一些方面，阻断PILRA与其一个或多个配体结合的抗人PILRA抗体可通过测试抗体阻断表达细胞表面PILRA的细胞与一个或多个PILRA配体结合的能力来鉴定，其中此种配体以可溶形式表达或在细胞表面表达。
在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下的结合相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与一个或多个PILRA配体(包括但不限于以上提供的那些)的结合。结合的阻断可例如使用实施例5中公开的测定来测量。结合的阻断可例如通过以下步骤来测量：将表达PILRA的抗体与约5μg/ml的配体一起孵育(例如，在约4℃下约30min)，再次孵育(例如，在约4℃下约30min)，洗涤细胞并检测结合的配体。结合的配体可例如使用流式细胞术来检测。结合的阻断可取决于抗人PILRA抗体的剂量。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段活化骨髓细胞(例如，巨噬细胞(诸如“M1”巨噬细胞)、小胶质细胞、树突状细胞、中性粒细胞、粒细胞和其他骨髓源性细胞诸如骨髓源性抑制剂细胞(“MDSC”))。通过活化骨髓细胞，抗人PILRA抗体能够活化先天免疫系统，例如，这可促进抗肿瘤反应，并且在小胶质细胞的情况下，可促进CNS中对抗神经退行性疾患的环境。
在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下骨髓细胞的活化相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段活化骨髓细胞(诸如上文所述的那些)。实施例2或3中公开的测定可用于评估骨髓细胞(例如，MDSC)的活化。骨髓细胞(例如，MDSC)的活化可例如通过检测与在不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下的活化相比，在存在抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的情况下细胞产生的MIP1b的量来评估。骨髓细胞(例如，MDSC)的活化可取决于抗人PILRA抗体的剂量。
在一些方面，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段促进骨髓细胞的分化(例如，促进单核细胞分化成巨噬细胞(诸如“M1”巨噬细胞)或树突状细胞，或促进其他骨髓前体分化成小胶质细胞、树突状细胞、中性粒细胞和其他骨髓源性细胞诸如骨髓源性抑制剂细胞(“MDSC”))。通过促进骨髓细胞的分化，抗人PILRA抗体能够活化先天免疫系统，例如，这可促进抗肿瘤反应(例如，通过肿瘤微环境中的M1巨噬细胞)，并且在小胶质细胞的情况下，可促进CNS中对抗神经退行性疾患的环境。
在一些方面，例如与不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下骨髓细胞的分化相比，本文所述的免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段促进骨髓细胞(诸如上文所述的那些)的分化。实施例2中公开的测定可用于评估骨髓细胞(例如，MDSC)的分化。骨髓细胞(例如，MDSC)的分化可例如通过检测与在不存在抗体或片段或存在对照抗体或片段的情况下的分化相比，在存在抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的情况下CD14loCD86hi细胞的量来评估。骨髓细胞(例如，MDSC)的分化可取决于抗人PILRA抗体的剂量。
结合相同表位/竞争性抑制的抗体
在另一方面，本文提供了与本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001)结合至人PILRA的相同表位的抗体或其抗原结合片段。
在另一方面，本文提供了与本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001)结合至人PILRA的重叠表位的抗体或其抗原结合片段。具有重叠表位的抗体与PILRA的至少一个或多个相同氨基酸残基接触。
竞争性结合测定可用于确定两种抗体是否结合至重叠表位。竞争性结合可在其中待测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原诸如PILRA(例如，人PILRA)的特异性结合的测定中确定。许多类型的竞争性结合测定是已知的，例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli C等人，(1983)Methods Enzymol 9：242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland TN等人，(1986)J Immunol 137：3614-9)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow E和Lane D，(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborPress)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel GA等人，(1988)Mol Immunol25(1)：7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung RC等人，(1990)Virology 176：546-52)；和直接标记RIA.(Moldenhauer G等人，(1990)Scand J Immunol 32：77-82)。通常，这种测定涉及使用与固体表面或携带此种抗原的细胞结合的纯化抗原(例如，PILRA诸如人PILRA)、未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白。竞争性抑制可通过在存在测试免疫球蛋白的情况下确定结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争抗体过量存在时，它会抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或更多。竞争结合测定可使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的形式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定在96孔板上。然后使用放射性或酶标记测量未标记的抗体阻断标记的抗体与抗原结合的能力。关于更多细节参见例如，Wagener C等人，(1983)J Immunol 130：2308-2315；Wagener C等人，(1984)J Immunol Methods 68：269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50：4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21：523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11：391-407andAntibodies：A Laboratory Manual，Ed Harlow E和Lane D编辑同上，第386-389页。
在一些方面，使用表面等离子共振
Figure BDA0003819579330000421
进行竞争性结合测定，例如通过“串联方法”，诸如Abdiche YN等人，(2009)Analytical Biochem 386：172-180所描述的方法，由此将PILRA抗原固定在芯片表面，例如CM5传感器芯片上，然后将抗PILRA抗体在芯片上运行。为了确定抗体或其抗原结合片段是否竞争性抑制本文所述的抗PILRA抗体的结合，首先将抗PILRA抗体在芯片表面上运行以达到饱和，然后加入潜在的竞争抗体。然后可相对于非竞争对照确定和量化竞争抗体或其抗原结合片段的结合。
在一些方面，使用Fortebio Octet竞争性结合来确定PILRA抗体或其抗原结合片段竞争性抑制另一种PILRA抗体或其抗原结合片段与PILRA的结合。
在另一方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001)与人PILRA结合的抗体，如使用本领域技术人员已知或本文所述的测定(例如，ELISA竞争性测定或悬浮阵列或表面等离子共振测定)确定的。“竞争性抑制”的抗体也可称为与参考抗体“竞争结合”的抗体。
在特定方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)抗体与人PILRA结合的抗体或抗原结合片段，其中抗体包含具有SEQ IDNO：28中列出的氨基酸序列的VH结构域和具有SEQID NO：29中列出的氨基酸序列的VL结构域。
在特定方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)抗体与人PILRA结合的抗体或抗原结合片段，其中抗体包含具有SEQ ID NO：30中列出的氨基酸序列的VH结构域和具有SEQ ID NO：31中列出的氨基酸序列的VL结构域。
在特定方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)抗体与人PILRA结合的抗体或抗原结合片段，其中抗体包含具有SEQ ID NO：32中列出的氨基酸序列的VH结构域和具有SEQ ID NO：33中列出的氨基酸序列的VL结构域。
在特定方面，本文提供了竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)抗体与人PILRA结合的抗体或抗原结合片段，其中抗体包含具有SEQ ID NO：34中列出的氨基酸序列的VH结构域和具有SEQ ID NO：35中列出的氨基酸序列的VL结构域。
在一些方面，本文提供了结合人PILRA并且不竞争性抑制2175B与人PILRA结合的抗体或抗原结合片段。
抗原结合片段
在一些方面，提供了本文所述的抗PILRA抗体诸如抗人PILRA抗体的抗原结合片段。示例性抗原结合片段包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)2和scFv，其中Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv包含如本文所述的抗人PILRA抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列。Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv可通过本领域技术人员已知的任何技术产生，包括但不限于下文第5.3节中讨论的那些技术。在一些方面，抗原结合片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv)还包含延长抗体体内半衰期的部分。所述部分也称为“半衰期延长部分”。可使用本领域技术人员已知的用于在体内延长抗原结合片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv)的半衰期的任何部分。例如，半衰期延长部分可包括Fc区、聚合物、白蛋白或白蛋白结合蛋白或化合物。聚合物可包括天然或合成的、任选取代的直链或支链聚亚烷基、聚亚烯基、聚氧化亚烷基、多糖、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、甲氧基聚乙二醇、乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。取代基可包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基。在一些方面，抗原结合片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv)可通过添加一个或多个C端氨基酸来修饰，以附接半衰期延伸部分。在一些方面，半衰期延长部分是聚乙二醇或人血清白蛋白。在一些方面，抗原结合片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2或scFv)融合至Fc区。
可将抗PILRA抗体(诸如抗人PILRA抗体)或其抗原结合片段融合或缀合(例如，共价或非共价连接)至可检测标记或物质。可检测标记或物质的实例包括酶标记，诸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，诸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)和锝(99Tc)；发光标记，诸如鲁米诺；和荧光标记，诸如荧光素和罗丹明，以及生物素。此类标记的抗体或其抗原结合片段可用于检测PILRA(例如，人PILRA)蛋白。参见例如下文第5.4和5.5节。
5.3抗体产生
免疫特异性结合人PILRA的抗体及其抗原结合片段可通过本领域已知的用于合成抗体和抗原结合片段的任何方法产生，例如通过化学合成或通过重组表达技术。除非另有说明，否则本文所述的方法采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交和本领域技术范围内的相关领域的常规技术。这些技术在例如本文引用的参考文献中进行描述，并在文献中充分解释。参见例如，Sambrook等人，(2001)Molecular Cloning：ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY；Ausubel FM等人，CurrentProtocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons(1987和年度更新)；CurrentProtocols in Immunology，John Wiley&Sons(1987和年度更新)；Eckstein(编)(1991)Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach，IRL Press；Birren B等人，(编)(1999)Genome Analysis：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress。
在某个方面，本文提供了制备一种免疫特异性结合人PILRA的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括培养本文所述的细胞或宿主细胞(例如，包含编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸的细胞或宿主细胞)。在某个方面，本文提供了制备一种免疫特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括使用本文所述的细胞或宿主细胞(例如，包含编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸的细胞或宿主细胞)表达(例如，重组表达)抗体或其抗原结合片段。在一些方面，细胞是分离的细胞。在一些方面，编码多核苷酸已被引入细胞中。在一些方面，所述方法还包括纯化从细胞或宿主细胞获得的抗体或抗原结合片段的步骤。
用于产生多克隆抗体的方法是本领域已知的(参见例如，第11章，于：ShortProtocols in Molecular Biology，(2002)第5版，Ausubel FM等人编，John Wiley andSons，New York)。
可使用本领域已知的多种技术制备单克隆抗体或其抗原结合片段，包括使用杂交瘤、重组和噬菌体展示技术、基于酵母的呈递技术或其组合。例如，单克隆抗体或其抗原结合片段可使用杂交瘤技术产生，包括本领域已知的和例如Harlow E和Lane D，Antibodies：A Laboratory Manual，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling GJ等人，于：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563681(Elsevier，N.Y.，1981)中教导的，或如描述于Kohler G&Milstein C(1975)Nature 256：495中的那些技术。可用于选择和产生本文所述的抗体的基于酵母的呈递方法的实例包括公开于例如WO2009/036379A2；WO2010/105256；和WO2012/009568中的那些，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，单克隆抗体或抗原结合片段是由克隆细胞(例如，产生重组抗体或抗原结合片段的杂交瘤或宿主细胞)产生的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段免疫特异性结合人PILRA，如通过例如ELISA或本领域或本文提供的实施例中已知的其他抗原结合测定确定的。在一些方面，单克隆抗体或其抗原结合片段可以是嵌合或人源化抗体或其抗原结合片段。在一些方面，单克隆抗体或其抗原结合片段可以是Fab片段或F(ab′)2片段。本文所述的单克隆抗体或其抗原结合片段可例如通过如描述于Kohler G和Milstein C(1975)Nature256：495中的杂交瘤方法制备或可例如使用例如本文所述的技术从噬菌体文库中分离。用于制备克隆细胞系和由此表达的单克隆抗体及其抗原结合片段的其他方法在本领域中是众所周知的(参见例如，第11章，于：ShortProtocolsinMolecularBiology，(2002)第5版，AusubelFM等人，同上)。
本文所述的抗体的抗原结合片段可通过本领域技术人员已知的任何技术产生。例如，本文所述的Fab和F(ab′)2片段可通过使用诸如以下的酶对免疫球蛋白分子进行酶蛋白水解切割来产生：木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab′)2片段)。Fab片段对应于四聚体抗体分子的两个相同臂之一，并且含有与重链的VH和CH1结构域配对的完整轻链。F(ab′)2片段含有通过铰链区中的二硫键连接的四聚体抗体分子的两个抗原结合臂。
此外，本文所述的抗体或其抗原结合片段也可使用本领域已知的各种噬菌体展示和/或基于酵母的呈递方法来产生。在噬菌体展示方法中，将蛋白质展示在携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。特别地，编码VH和VL结构域的DNA序列从动物cDNA文库(例如，受影响组织的人或鼠cDNA文库)中扩增。通过PCR将编码VH和VL结构域的DNA与scFv接头重组在一起并克隆到噬菌粒载体中。将载体电穿孔于大肠杆菌中，并且用辅助噬菌体感染大肠杆菌。这些方法中使用的噬菌体通常是丝状噬菌体(包括fd和M13)，并且VH和VL结构域通常重组融合至噬菌体基因III或基因VIII。可用抗原，例如使用标记的抗原或结合或捕获至固体表面或珠的抗原选择或鉴定表达结合特定抗原的抗体或其抗原结合片段的噬菌体。可用于制备本文所述的抗体或片段的噬菌体展示方法的实例包括公开于以下中的那些：Brinkman U等人，(1995)J Immunol Methods 182：41-50；Ames RS等人，(1995)JImmunol Methods 184：177-186；KettleboroughCA等人，(1994)EurJImmunol24：952-958；PersicL等人，(1997)Gene187：9-18；Burton DR和BarbasCF(1994)AdvanImmunol57：191-280；PCT申请号PCT/GB91/001134；国际公布号WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401和WO 97/13844；以及美国专利号5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
人源化抗体或其抗原结合片段可选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
5.3.1多核苷酸
在某些方面，本文提供了多核苷酸，其包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段或其免疫特异性结合人PILRA的结构域(例如，可变轻链区和/或可变重链区)的核苷酸序列，以及载体，例如，包含用于在宿主细胞(例如，大肠杆菌和哺乳动物细胞)中重组表达的此类多核苷酸的载体。
在特定方面，本文提供了包含编码以下抗体或抗原结合片段的核苷酸序列的多核苷酸：免疫特异性结合人PILRA并且包含如本文所述的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，以及与此类抗体或抗原结合片段竞争以结合至人PILRA(例如，以剂量依赖性方式)的抗体或抗原结合片段，或结合至与此类抗体或抗原结合片段的表位相同的表位的抗体或抗原结合片段。
本文还提供了包含编码多肽的核苷酸序列的多核苷酸，所述多肽包含选自由SEQID NO：28-35组成的组的序列。在一些方面，包含所述多肽的抗体或其抗原结合片段免疫特异性结合人PILRA。
本文还提供了试剂盒、载体或宿主细胞，其包含(i)包含编码SEQ ID NO：28的核苷酸序列的第一多核苷酸和(ii)包含编码SEQ ID NO：29的核苷酸序列的第二多核苷酸。本文还提供了试剂盒、载体或宿主细胞，其包含(i)包含编码SEQ ID NO：30的核苷酸序列的第一多核苷酸和(ii)包含编码SEQ ID NO：31的核苷酸序列的第二多核苷酸。本文还提供了试剂盒、载体或宿主细胞，其包含(i)包含编码SEQ ID NO：32的核苷酸序列的第一多核苷酸和(ii)包含编码SEQ ID NO：33的核苷酸序列的第二多核苷酸。本文还提供了试剂盒、载体或宿主细胞，其包含(i)包含编码SEQ ID NO：34的核苷酸序列的第一多核苷酸和(ii)包含编码SEQ ID NO：35的核苷酸序列的第二多核苷酸。在包含此类第一多核苷酸和第二多核苷酸的试剂盒中，第一多核苷酸和第二多核苷酸可在相同的载体中或可在不同的载体中。在包含此类第一多核苷酸和第二多核苷酸的宿主细胞中，第一多核苷酸和第二多核苷酸可在相同的载体中或可在不同的载体中。
在一些方面，本文提供了多核苷酸，其包含编码三个VH结构域CDR(例如，含有本文所述的任一种抗体的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，参见表1)的多肽)的核苷酸序列，例如，其中三个VH结构域CDR在VH的背景下。在一些方面，本文提供了多核苷酸，其包含编码三个VL结构域CDR(例如，含有本文所述的任一种抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，参见表2)的多肽)的核苷酸序列，例如，其中三个VL结构域CDR在VL的背景下。在一些方面，本文提供了多核苷酸(或多核苷酸的组合)，其包含编码抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列，所述抗人PILRA抗体或其抗原结合片段包含(i)三个VH结构域CDR，例如，含有本文所述的任一种抗体的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，参见表1)的多肽，例如，其中三个VH结构域CDR在VH的背景下；以及(ii)三个VL结构域CDR，例如，含有本文所述的任一种抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，参见表2)的多肽，例如，其中三个VL结构域CDR在VL的背景下。
在一些方面，本文提供了多核苷酸，其包含编码抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其包含VH结构域的片段的核苷酸序列，所述VH结构域含有例如包含本文所述的氨基酸序列的FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4(例如参见表1和表5，例如通过表中名称鉴别的特定抗体的VH CDR和VH FR)。在一些方面，本文提供了多核苷酸，其包含编码抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其包含VL结构域的片段的核苷酸序列，所述VL结构域含有例如包含本文所述的氨基酸序列的FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4(例如参见表2和表6，例如通过表中名称鉴别的特定抗体的VL CDR和VL FR)。
在一些方面，多核苷酸包含编码重链可变区(例如，包含SEQ ID NO：28、30、32或34的氨基酸序列的VH)和重链恒定区(例如，人伽马(γ)重链恒定区)的核酸序列。
在一些方面，多核苷酸包含编码轻链可变区(例如，包含SEQ ID NO：29、31、33或35的氨基酸序列的VL)和轻链恒定区(例如，人λ或κ轻链恒定区)的核酸序列。
本文还提供了编码本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其例如通过以下方式优化的结构域的多核苷酸：密码子/RNA优化、用异源信号序列替换和消除mRNA不稳定性元件。通过在mRNA中引入密码子变化(例如，由于遗传密码的简并性，编码相同氨基酸的密码子变化)和/或消除抑制区来产生编码抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，重链、轻链、VH结构域或VL结构域)的优化核酸以进行重组表达的方法可通过相应地调整描述于例如美国专利号5,965,726；6,174,666；6,291,664；6,414,132；和6,794,498中的优化方法来进行。
编码本文所述的抗体或其抗原结合片段或其结构域的多核苷酸可使用本领域众所周知的方法(例如，PCR和其他分子克隆方法)从来自合适来源(例如，杂交瘤)的核酸产生。例如，使用可与已知序列的3′和5′端杂交的合成引物的PCR扩增可使用从产生感兴趣的抗体的杂交瘤细胞获得的基因组DNA进行。此类PCR扩增方法可用于获得包含编码抗体或其抗原结合片段的轻链和/或重链的序列的核酸。此类PCR扩增方法可用于获得包含编码抗体或其抗原结合片段的可变轻链区和/或可变重链区的序列的核酸。可将扩增的核酸克隆到载体中以在宿主细胞中表达并用于进一步克隆，例如以产生嵌合和人源化抗体或其抗原结合片段。
本文提供的多核苷酸可以是例如RNA形式或DNA形式。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA，并且DNA可以是双链的或单链的。如果是单链的，则DNA可以是编码链或非编码(反义)链。在一些方面，多核苷酸是缺乏一个或多个内源性内含子的cDNA或DNA。在一些方面，多核苷酸是非天然存在的多核苷酸。在一些方面，多核苷酸是重组产生的。在一些方面，多核苷酸是分离的。在一些方面，多核苷酸是基本上纯的。在一些方面，多核苷酸从天然组分中纯化。
5.3.2细胞和载体
在某些方面，本文提供了包含多核苷酸的载体(例如，表达载体)，所述多核苷酸包含编码抗人PILRA抗体及其抗原结合片段或其结构域的核苷酸序列，以用于在宿主细胞、优选哺乳动物细胞中重组表达。本文还提供了细胞，例如宿主细胞，其包含用于重组表达本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段(例如，人或人源化抗体或其抗原结合片段)的此类载体。在一些方面，本文提供了用于产生本文所述的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在宿主细胞中表达此类抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，特异性结合人PILRA的本文所述的抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，本文所述的重链或轻链)的重组表达涉及构建含有编码抗体或其抗原结合片段或其结构域的多核苷酸的表达载体。一旦获得编码本文所述的抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，重链或轻链可变结构域)的多核苷酸，就可通过使用本领域众所周知的技术的重组DNA技术生产用于产生抗体或其抗原结合片段的载体。因此，本文描述了通过表达含有编码核苷酸序列的抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，轻链或重链)的多核苷酸来制备蛋白质的方法。本领域技术人员众所周知的方法可用于构建含有抗体或其抗原结合片段或其结构域(例如，轻链或重链)编码序列和适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。还提供了可复制载体，其包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段、重链或轻链、重链或轻链可变结构域、或重链或轻链CDR的可操作地连接至启动子的核苷酸序列。此类载体可例如包括编码抗体或其抗原结合片段的恒定区的核苷酸序列(参见例如，国际公布号WO 86/05807和WO 89/01036；以及美国专利号5,122,464)，并且可将抗体或其抗原结合片段的可变结构域克隆到这样的载体中以表达整个重链、整个轻链或整个重链和轻链两者。
可通过常规技术将表达载体转移至细胞(例如，宿主细胞)，然后可通过常规技术培养所得细胞以产生本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的六个CDR，即VH、VL、VH和VL、重链、轻链、或重链和轻链的抗体或其抗原结合片段)或其结构域(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的VH、VL、VH和VL、重链或轻链)。因此，本文提供了宿主细胞，其含有编码本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的六个CDR，即VH、VL、VH和VL、重链、轻链、或重链和轻链的抗体或其抗原结合片段)或其结构域(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的VH、VL、VH和VL、重链或轻链)的可操作地连接至启动子以在宿主细胞中表达此类序列的多核苷酸。在一些方面，对于双链抗体或其抗原结合片段的表达，单独编码重链和轻链两者的载体可在宿主细胞中共表达以表达整个免疫球蛋白，如下文详述。在一些方面，宿主细胞含有包含编码本文所述的抗体的重链和轻链(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的重链和轻链)或其结构域(例如，hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的VH和VL)的多核苷酸的载体。在一些方面，宿主细胞含有两种不同的载体，第一载体，所述第一载体包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的多核苷酸；以及第二载体，所述第二载体包含编码本文所述的抗体的轻链或轻链可变区(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的六个CDR的抗体)或其结构域的多核苷酸。在一些方面，第一宿主细胞包含第一载体，所述第一载体包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的多核苷酸；并且第二宿主细胞包含第二载体，所述第二载体包含编码本文所述的抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的六个CDR的抗体或其抗原结合片段)的多核苷酸。在一些方面，第一细胞表达的重链/重链可变区与第二细胞的轻链/轻链可变区相关以形成本文所述的人PILRA抗体或其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的六个CDR的抗体或其抗原结合片段)。在一些方面，本文提供了包含此种第一宿主细胞和此种第二宿主细胞的宿主细胞群。
在一些方面，本文提供了载体群，其包含第一载体，所述第一载体包含编码本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的轻链/轻链可变区的多核苷酸；以及第二载体，所述第二载体包含编码本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的重链/重链可变区(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的CDR的抗体或其抗原结合片段)的多核苷酸。替代地，可使用编码并能够表达重链和轻链多肽的单一载体。
多种宿主表达载体系统可用于表达本文所述的抗体及其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的CDR的抗体或其抗原结合片段)(参见例如，美国专利号5,807，715)。此类宿主表达系统代表可产生并随后纯化感兴趣的编码序列的媒介物，但也代表当用适当的核苷酸编码序列转化或转染时可原位表达本文所述的抗体或其抗原结合片段的细胞。这些包括但不限于微生物，诸如用重组噬菌体DNA、质粒DNA或含有抗体编码序列的粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，毕赤酵母(SaccharomycesPichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus)，CaMV；烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus)，TMV)感染或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统(例如，绿藻，诸如莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii))；或具有含有源自哺乳动物细胞基因组(例如，金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如，COS(例如，COS1或COS)、CHO、BHK、MDCK、HEK 293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa、和NIH 3T3、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20和BMT10细胞)。在一些方面，用于表达本文所述的抗体及其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的CDR的抗体或其抗原结合片段)的细胞是CHO细胞，例如来自CHO GS SystemTM(Lonza)的CHO细胞。在一些方面，用于表达本文所述的抗体的细胞是人细胞，例如人细胞系。在一些方面，哺乳动物表达载体是pOptiVECTM或pcDNA3.3。在一些方面，细菌细胞诸如大肠杆菌，或真核细胞(例如，哺乳动物细胞)，特别是用于表达整个重组抗体分子的细胞，用于表达重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞与载体诸如来自人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件是抗体的有效表达系统(Foecking MK和Hofstetter H(1986)Gene 45：101-105；和Cockett MI等人，(1990)Biotechnology 8：662-667)。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段由CHO细胞或NS0细胞产生。
此外，可选择调节插入序列的表达或以所需特定方式修饰和加工基因产物的宿主细胞株。蛋白质产物的此类修饰(例如，糖基化)和加工(例如，切割)可有助于蛋白质的功能。为此，可使用具有适当加工初级转录物、糖基化和基因产物磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。此类哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、VERO、BHK、Hela、MDCK、HEK293、NIH 3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(不内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O、COS(例如，COS1或COS)、PER.C6、VERO、HsS78Bst、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20、BMT10和HsS78Bst细胞。在一些方面，本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段(例如，包含hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001的CDR的抗体或其抗原结合片段)是在哺乳动物细胞诸如CHO细胞中产生的。
一旦通过重组表达产生了本文所述的抗体或其抗原结合片段，其可通过本领域已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法进行纯化，例如通过色谱法(例如，离子交换、亲和力，特别是通过蛋白质A后对特定抗原的亲和力和大小柱色谱法)、离心、差异溶解度或通过任何其他用于纯化蛋白质的标准技术。此外，本文所述的抗体或其抗原结合片段可融合至本文所述或以其他方式在本领域中已知的异源多肽序列以促进纯化。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段是分离或纯化的。通常，分离的抗体或其抗原结合片段是基本上不含具有与分离的抗体或其抗原结合片段不同的抗原特异性的其他抗体或其抗原结合片段的抗体或其抗原结合片段。例如，在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段的制备基本上不合细胞物质和/或化学前体。
5.4药物组合物
本文提供了包含如本文所述的抗PILRA抗体(诸如抗人PILRA抗体)或其抗原结合片段的组合物。在一些方面，具有所需纯度的抗体或其抗原结合片段存在于包含例如生理上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂的制剂中(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒。适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，所述溶液可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，所述混悬液可包含助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
在一些方面，药物组合物包含如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载剂(参见例如，Gennaro，Remington：The Science and Practice ofPharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus，第20版.(2003)；Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，LippencottWilliams and Wilkins(2004)；Kibbe等人，Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，PharmaceuticalPress(2000))。在一些方面，本文所述的药物组合物用作药物。将用于体内施用的组合物可以是无菌的。这易于通过经由例如无菌过滤膜过滤来实现。
本文所述的药物组合物可用于在体内或体外发挥生物学作用。例如，本文所述的药物组合物可用于活化骨髓细胞、促进骨髓细胞分化、抑制PILRA与其一个或多个配体的结合和/或表达此类配体的细胞(例如，T细胞)和/或下调细胞表面PILRA。
本文所述的药物组合物可用于治疗疾病或疾患，诸如将通过以下方式缓解的疾病或疾患：活化骨髓细胞、促进骨髓细胞分化、抑制PILRA与其一个或多个配体的结合和/或表达此类配体的细胞(例如，T细胞)和/或下调细胞表面PILRA。本文所述的药物组合物可用于治疗骨髓细胞功能障碍(例如，活动减退)或缺陷的疾病或疾患，例如需要骨髓细胞活化或分化的疾病或疾患，或需要活化先天免疫系统的疾病或疾患。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于治疗疾病或疾患，诸如癌症。如本文所述可治疗的癌症的实例可包括实体瘤，例如其中骨髓细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞、中性粒细胞、小胶质细胞(在CNS中)或其他先天免疫细胞)已浸润肿瘤微环境的实体瘤。可通过本文提供的药物组合物治疗的此类癌症的实例包括但不限于胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌(例如，肾透明细胞癌)、胰腺癌和乳腺癌。其他癌症包括但不限于卵巢癌、肉瘤、结直肠癌、肺癌、黑色素瘤、膀胱癌、肝癌和子宫癌。在一些方面，癌症是造血系统癌症，诸如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些方面，癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些方面，癌症是原发性肿瘤。在一些方面，癌症是源自任何上述类型癌症的第二位点处的转移性肿瘤。在一些方面，癌症是PILRA阳性癌症。在一些方面，癌症是具有增加的PILRA(例如，增加的PILRA mRNA和/或增加的PILRA蛋白)的癌症。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于治疗神经退行性疾病。在一些方面，神经退行性疾病的特征在于功能障碍(例如，低活性)或缺陷的骨髓细胞，诸如小胶质细胞。在一些方面，神经退行性疾病是免疫介导的神经退行性疾病。在一些方面，神经退行性疾病选自阿尔茨海默氏病、痴呆、额颞叶痴呆(FTD)、血管性痴呆、轻度认知障碍、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏病(Huntington’sdisease)、Tau病、多发性硬化症、免疫介导的神经病(诸如神经性疼痛)、Nasu-Hakola病、小儿发病的白质脑病、成人发病的伴有轴突球体和色素性胶质细胞的白质脑病(ALSP)和边缘主导年龄相关TDP43脑病(LATE)。
在一些方面，本文提供的药物组合物用于抑制HSV-1感染。在一些方面，本文提供的药物组合物用于抑制HSV-1复发。
5.5用途和方法
在各个方面，本文提供了使用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物的体外和体内方法。在一个方面，提供了一种活化骨髓细胞的方法，所述方法包括将细胞暴露于抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或其药物组合物。在另一方面，提供了一种促进骨髓细胞分化的方法，所述方法包括将细胞暴露于抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或其药物组合物。在另一方面，提供了一种抑制PILRA与其一个或多个配体结合的方法，所述方法包括使PILRA与抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其药物组合物在其一个或多个配体的存在下接触。示例性配体包括糖基化蛋白质，诸如具有PTPXP、PTPXXP、PXTPXP或PXTPXXP基序的那些。示例性配体包括例如，COLEC12、NPDC1、CLEC4G和PIANP以及HSV-1糖蛋白B。在某些方面，PILRA和/或其一个或多个配体在细胞上表达。在另一方面，提供了一种下调细胞表面PILRA的方法，所述方法包括将在其表面表达PILRA的细胞暴露于抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或其药物组合物。
5.5.1治疗用途和方法
在一些方面，本文提供了用于增加有需要的受试者(例如，人受试者)中骨髓细胞活化的方法，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，本文提供了用于促进有需要的受试者(例如，人受试者)中骨髓细胞分化的方法，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，提供了这样的方法，其中将如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的药物组合物施用于有需要的受试者(例如，人受试者)，以抑制受试者中PILRA与其一个或多个配体(例如，NPDC1)的相互作用。在一些方面，提供了这样的方法，其中将如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物施用于有需要的受试者(例如，人受试者)，以下调受试者中的细胞表面PILRA。
在一些方面，施用抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其药物组合物以实现任何两种或更多种上述效果。
在一些方面，本文提供了治疗将通过以下方式缓解的疾病或疾患的方法：活化骨髓细胞、促进骨髓细胞分化、抑制PILRA与其一个或多个配体的结合和/或下调细胞表面PILRA。此类方法可包括向有需要的患者(例如，人患者)施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了治疗其中骨髓细胞功能障碍(例如，活动减退)或缺陷的疾病或疾患，例如需要骨髓细胞活化或分化的疾病或疾患，或需要活化先天免疫系统的疾病或疾患的方法。此类方法可包括向有需要的患者(例如，人患者)施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。如本文进一步描述的，其中骨髓细胞功能障碍的疾病或疾患可包括癌症或神经退行性疾病。
在一些方面，本文提供了治疗癌症的方法。治疗癌症的方法可包括向有需要的患者(例如，人患者)施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，本文提供了治疗癌症的方法，其中所述癌症是实体瘤。实体瘤包括其中骨髓细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞、中性粒细胞、小胶质细胞(CNS中)或其他先天免疫细胞)已浸润肿瘤微环境的实体瘤。如本文提供的可治疗的此类癌症的实例包括但不限于胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌(例如，肾透明细胞癌)、胰腺癌和乳腺癌。其他癌症包括但不限于卵巢癌、肉瘤、结直肠癌、肺癌、黑色素瘤、膀胱癌、肝癌和子宫癌。
在一些方面，待通过本公开的方法治疗的癌症包括但不限于造血癌症，诸如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些方面，待通过本公开的方法治疗的癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些方面，癌症可以是原发性肿瘤。在一些方面，癌症可以是源自任何上述类型癌症的第二位点处的转移性肿瘤。
在一些方面，待通过本公开的方法治疗的癌症是PILRA阳性癌症。在一些方面，待通过本发明的方法治疗的癌症是具有增加的PILRA(例如，增加的PILRA mRNA和/或增加的PILRA蛋白)的癌症。
在一些方面，提供了一种治疗癌症的方法，其中所述方法包括施用抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其药物组合物，并且其中所述方法还包括施用抑制性免疫检查点分子的拮抗剂。在一些方面，抑制性检查点分子是PD-1(程序性细胞死亡蛋白-1)或其配体PD-L1(程序性死亡配体-1)。在一些方面，PD-1的拮抗剂是PD-1的抗体。PD-1抗体包括例如OPDIVO(纳武利尤单抗)、KEYTRUDA(帕博利珠单抗)、MEDI-0680(AMP-514；WO2012/145493)、卡瑞利珠单抗(SHR-1210)、替雷利珠单抗(BGB-A317)或斯巴达珠单抗(NPVPDR001、NVS240118、PDR001)。由融合至IgG1的Fc部分的PD-L2(B7-DC)的胞外结构域组成的称为AMP-224的重组蛋白也可用于拮抗PD-1受体。在一些方面，PD-L1的拮抗剂是PD-L1的抗体。PD-L1抗体包括例如，TECENTRIQ(阿替利珠单抗)、度伐利尤单抗(MEDI4736)、BMS-936559(W02007/005874)、MSB0010718C(WO2013/79174)或rHigM12B7。在一些方面，抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或其药物组合物与放射疗法和/或化疗剂组合施用。
在一些方面，本文提供了抑制HSV-1感染和/或HSV-1复发的方法。抑制HSV-1感染和/或复发的方法可包括向有需要的患者(例如，人患者)施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了治疗神经退行性疾病的方法。治疗神经退行性疾病的方法可包括向有需要的患者(例如，人患者)施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的其药物组合物。在一些方面，神经退行性疾病的特征在于功能障碍(例如，低活性)或缺陷的骨髓细胞，诸如小胶质细胞。小胶质细胞是先天免疫细胞，其专门驻留在脑中，并且起巨噬细胞的作用，通过吞噬作用清除碎片和死亡神经元，并为维持脑健康提供其他支持功能。在一些方面，患者具有神经退行性疾病的症状，并且施用如本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或如本文所述的其药物组合物以治疗神经退行性疾病。在一些方面，患者有发展神经退行性疾病的风险，并且施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物以降低风险、减缓发作或预防神经退行性疾病。
在一些方面，神经退行性疾病是免疫介导的神经退行性疾病。在一些方面，神经退行性疾病选自阿尔茨海默氏病、痴呆、额颞叶痴呆(FTD)、血管性痴呆、轻度认知障碍、帕金森氏病、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏病(Huntington’s disease)、Tau病、多发性硬化症(MS)、免疫介导的神经病(诸如神经性疼痛)、Nasu-Hakola病、小儿发病的白质脑病、成人发病的伴有轴突球体和色素性胶质细胞的白质脑病(ALSP)和边缘主导年龄相关TDP43脑病(LATE)。
阿尔茨海默氏病
阿尔茨海默氏病(AD)是最常见形式的痴呆症。所述疾病没有治愈方法，随着疾病进展而恶化，并且最终导致死亡。大多数情况下，AD在65岁以上的人群中被诊断出来。然而，发病率较低的早发性阿尔茨海默氏病可能发生得更早。阿尔茨海默氏病的常见症状包括行为症状，诸如难以记住最近发生的事件；认知症状、混乱、易怒和攻击性、情绪波动、语言障碍和长期记忆丧失。随着疾病的进展，身体功能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默氏病在变得完全明显之前会在未知且可变量的时间内发展，并且它可能会在多年未确诊的情况下进展。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗阿尔茨海默氏病。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有阿尔茨海默氏病的个体中的一种或多种PILRA活性。
痴呆
痴呆是一种非特异性综合征(即，一组体征和症状)，其表现为先前未受损的人的整体认知能力严重丧失，超出正常衰老的预期。由于独特的全球性脑损伤，痴呆可能是静态的。替代地，痴呆可能是进行性的，由于身体的损伤或疾病而导致长期衰退。虽然痴呆症在老年人群中更为常见，但它也可能发生在65岁之前。受痴呆影响的认知领域包括但不限于记忆力、注意力广度、语言和问题解决。一般来说，在个体被诊断患有痴呆之前，症状必须存在至少六个月。
示例性形式的痴呆包括但不限于额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、语义性痴呆和路易体痴呆。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗痴呆。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有痴呆的个体中的一种或多种PILRA活性。
额颞叶痴呆
额颞叶痴呆(FTD)是一种由脑额叶进行性退化引起的疾患。随着时间的推移，退化可能会进展到颞叶。FTD的患病率仅次于阿尔茨海默氏病(AD)，占老年痴呆症病例的20％。FTD的临床特征包括记忆缺陷、行为异常、性格改变和语言障碍(Cruts，M.和VanBroeckhoven，C.，TrendsGenet.24：186-194(2008)；Neary，D.等人，Neurology51：1546-1554(1998)；Ratnavalli，E.、Brayne，C.、Dawson，K.和Hodges，J.R.，Neurology58：1615-1621(2002))。
很大一部分FTD病例以常染色体显性方式遗传，但即使在一个家庭中，症状也可跨越从具有行为障碍的FTD到原发性进行性失语症，再到皮质基底节退化。FTD与大多数神经退行性疾病一样，可通过患病脑中特定蛋白质聚集体的病理存在来表征。从历史上看，FTD的首次描述认识到神经原纤维缠结或Pick体中存在过度磷酸化的Tau蛋白的神经元内积累。微管相关蛋白Tau的因果作用得到了几个家族中编码Tau蛋白的基因突变鉴定的支持(Hutton，M.等人，Nature393：702-705(1998)。然而，大多数FTD脑没有显示过度磷酸化Tau的积累，但确实表现出对泛素(Ub)和TARDNA结合蛋白(TDP43)的免疫反应性(Neumann，M.等人，Arch.Neurol.64：1388-1394(2007))。大多数具有Ub包涵体(FTD-U)的FTD病例显示出携带颗粒蛋白前体基因突变。
在一些方面，施用本公开的如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗FTD。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有FTD的个体中的一种或多种PILRA活性。
帕金森氏病
帕金森氏病，其可称为特发性或原发性帕金森氏病、运动迟缓僵硬综合征(HRS)或激动性麻痹，是一种影响运动系统控制的神经退行性脑病症。脑中产生多巴胺的细胞的进行性死亡导致帕金森氏症的主要症状。大多数情况下，帕金森氏病在50岁以上的人群中被诊断出来。帕金森氏病在大多数人中是特发性的(原因不明)。然而，遗传因素也在所述疾病中起作用。
帕金森氏病的症状包括但不限于手、手臂、腿、下巴和面部的震颤、四肢和躯干的肌肉僵硬、动作迟缓(运动徐缓)、姿势不稳、行走困难、神经精神问题、语言或行为变化、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉和睡眠问题。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗帕金森氏病。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有帕金森氏病的个体中的一种或多种PILRA活性。
肌萎缩侧索硬化症(ALS)
如本文所用，肌萎缩侧索硬化症(ALS)或运动神经元病或Lou Gehrig病可互换使用，并且是指具有多种病因的衰弱性疾病，其特征在于快速进行性虚弱、肌肉萎缩和肌束颤动、肌肉痉挛、说话困难(构音障碍)、吞咽困难和呼吸困难。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗ALS。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有肌萎缩侧索硬化症的个体中的一种或多种PILRA活性。
亨延顿氏病
亨廷顿氏病(HD)是由亨廷顿基因(HTT)中的常染色体显性突变引起的遗传性神经退行性疾病。亨廷顿基因内的细胞因子-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)三联体重复序列的扩增导致产生由所述基因编码的突变形式的亨廷顿蛋白(Htt)。这种突变的亨廷顿蛋白(mHtt)是有毒的，并且会导致神经元死亡。亨廷顿氏病的症状最常出现在35至44岁之间，尽管它们可以出现在任何年龄。
亨廷顿氏病的症状包括但不限于运动控制问题、不稳、随机运动(舞蹈症)、异常眼球运动、平衡障碍、癫痫发作、咀嚼困难、吞咽困难、认知问题、言语改变、记忆障碍、思维困难、失眠、疲劳、痴呆、性格改变、抑郁、焦虑和强迫行为。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗亨廷顿氏病(HD)。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有亨廷顿氏病的个体中的一种或多种PILRA活性。
Tau病
Tau病或Tau病变是一类由脑内微管相关蛋白tau聚集引起的神经退行性疾病。阿尔茨海默氏病(AD)是最广为人知的tau病，并且涉及tau蛋白在神经元内以不溶性神经原纤维缠结(NFT)的形式积累。其他tau病和病症包括进行性核上性麻痹、拳击员痴呆(慢性创伤性脑病)、与染色体17连锁的额颞叶痴呆和帕金森神经机能障碍、Lytico-Bodig病(关岛帕金森-痴呆复合征)、缠结为主的痴呆、神经节神经胶质瘤和神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅中毒脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatzdisease)、脂褐质沉积症、皮克氏病(Pick’s disease)、皮层基底退化、嗜银颗粒病(AGD)、亨廷顿氏病、以及额颞叶退化。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗tau病。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有tau病的个体中的一种或多种PILRA活性。
多发性硬化症
多发性硬化症(MS)也可称为播散性硬化症或播散性脑脊髓炎。MS是一种炎症性疾病，其中脑和脊髓轴突周围的脂肪髓鞘受损，导致脱髓鞘和疤痕以及广泛的体征和症状。MS会影响脑和脊髓中的神经细胞有效相互交流的能力。神经细胞通过向称为轴突的长纤维发送称为动作电位的电信号进行交流，所述轴突包含在称为髓鞘的绝缘物质中。在MS中，身体自身的免疫系统会攻击并破坏髓磷脂。当失去髓磷脂时，轴突不再有效地传导信号。MS发病通常发生在年轻人中，并且在女性中更常见。
MS的症状包括但不限于感官变化，诸如敏感性或麻刺感丧失；刺痛感或麻木，诸如感觉减退和感觉错乱；肌肉无力；阵挛；肌肉抽搐；移动困难；协调和平衡困难，诸如共济失调；言语问题，诸如构音障碍，或吞咽问题，诸如咽下困难；视觉问题，诸如眼球震颤、视神经炎，包括幻视和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难；不同程度的认知障碍；抑郁或不稳定心情的情绪症状；Uhthoff现象(Uhthoffs phenomenon)，它是现有症状由于暴露于高于通常的环境温度的恶化；以及莱尔米体征(Lhermitte′s sign)，它是当弯曲颈部时行进到背部的触电感。
在一些方面，施用如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，可预防、降低风险、和/或治疗MS。在一些方面，施用抗人PILRA抗体、抗原结合片段或药物组合物可调节患有MS的个体中的一种或多种PILRA活性。
施用和给药
如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段或如本文提供的其药物组合物可通过任何合适的方式施用，所述方式包括肠胃外、肺内、鼻内、肿瘤内、病灶内施用、脑脊髓内、颅内、脊柱内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径。肠胃外输注包括肌内、以推注方式或通过经一段时间连续输注的静脉内施用、动脉内、关节内、腹膜内或皮下施用。在一些方面，施用是静脉内施用。在一些方面，施用是皮下施用。
如本文提供的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段，或如本文提供的其药物组合物，当单独使用或与一种或多种其他另外的治疗剂组合使用时，适当的剂量和给药方案将取决于待治疗的疾病、疾病的严重程度和病程、施用途径和其他因素。
在一些方面，本文提供了用作药物的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。
在一些方面，本文提供了用于治疗癌症的方法中的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。在一些方面，本文提供了用于治疗受试者癌症的方法的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物，所述方法包括向受试者施用有效量的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。
在一些方面，本文提供了用于治疗神经退行性疾病的方法中的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。在一些方面，本文提供了用于治疗受试者神经退行性疾病的方法的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物，所述方法包括向受试者施用有效量的抗体或其抗原结合片段或本文提供的药物组合物。
5.5.2检测和诊断用途
本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段(参见例如第5.2节)可用于使用本领域技术人员已知的经典方法测定生物样品中的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)水平，所述方法包括免疫测定，诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀或蛋白质印迹。合适的抗体测定标记是本领域已知的，并且包括酶标记，诸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，诸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)和锝(99Tc)；发光标记，诸如鲁米诺；和荧光标记，诸如荧光素和罗丹明，以及生物素。此类标记可用于标记本文所述的抗体或其抗原结合片段。替代地，识别本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段的第二抗体或其抗原结合片段可被标记并与抗人PILRA抗体或其抗原结合片段组合使用以检测PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)水平。
测定PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的表达水平旨在包括直接(例如，通过确定或估计绝对蛋白质水平)或相对地(例如，通过与第二生物样品中的疾病相关蛋白质水平进行比较)定性或定量测量或估计第一生物样品中的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)水平。可测量或估计第一生物样品中的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)表达水平，并与标准PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)水平进行比较，所述标准取自从未患所述病症的个体获得的第二生物样品或通过对未患所述疾病的个体群体的水平求平均来确定。如本领域将理解的，一旦“标准”PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)水平已知，它就可重复用作比较的标准。
如本文所用，术语“生物样品”是指从受试者、细胞系、组织或其他可能表达PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的细胞来源获得的任何生物样品。用于从动物(例如，人)获得组织活检和体液的方法在本领域中是众所周知的。
本文所述的抗人PILRA抗体可用于预后、诊断、监测和筛选应用，包括本领域技术人员众所周知和标准的体外和体内应用，并基于本说明书。用于体外评估和评估免疫系统状态的预后、诊断、监测和筛选测定和试剂盒和/或免疫反应可用于预测、诊断和监测以评估患者样品，包括已知或怀疑患有免疫系统功能障碍、癌症或神经退行性疾病诸如阿尔茨海默氏病的患者。
本文所述的抗人PILRA抗体及其抗原结合片段可携带可检测或功能性标记。当使用荧光标记时，目前可用的显微镜和荧光活化细胞分选仪分析(FACS)或本领域已知的两种方法程序的组合可用于鉴定和定量特异性结合成员。本文所述的抗人PILRA抗体或其抗原结合片段可携带荧光标记。示例性荧光标记包括例如反应性和缀合的探针，例如氨基香豆素、荧光素和德克萨斯红、Alexa Fluor染料、Cy染料和DyLight染料。抗人PILRA抗体可携带放射性标记，诸如同位素3H、14C、32P、35S、36C1、51Cr、57Co、58Co、59Fe、67Cu、90Y、99Tc、111In、117Lu、121I、124I、125I、131I、198Au、211At、213Bi、225Ac和186Re。当使用放射性标记时，本领域已知的当前可用的计数程序可用于鉴定和定量抗人PILRA抗体或抗原结合片段与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的特异性结合。在标记是酶的情况下，可通过本领域已知的任何目前使用的比色法、分光光度法、荧光分光光度法、电流分析法或气体计量技术来完成检测。这可通过在允许抗体或其抗原结合片段与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)之间形成复合物的条件下使样品或对照样品与抗人PILRA抗体或其抗原结合片段接触来实现。在样品和对照中检测并比较在抗体或其抗原结合片段与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)之间形成的任何复合物。鉴于本文所述的抗体或其抗原结合片段与人PILRA的特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段可用于特异性检测细胞表面上的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)表达。本文所述的抗体或其抗原结合片段也可用于通过免疫亲和纯化来纯化PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)。
本文还包括可制备成用于定量分析PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的存在程度的测试试剂盒形式的测定系统。系统或测试试剂盒可包含标记的组分，例如标记的抗体或抗原结合片段，以及一种或多种另外的免疫化学试剂。有关试剂盒的更多信息，参见例如下文第5.6节。
在一些方面，本文提供了用于体外检测样品中的PILRA蛋白(例如在，人PILRA蛋白)的方法，所述方法包括使所述样品与抗体或其抗原结合片段接触。在一些方面，本文提供了本文提供的抗体或其抗原结合片段用于体外检测样品中的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的用途。在一些方面，本文提供了用于检测受试者或获自受试者的样品中的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的抗体或其抗原结合片段或本文提供的组合物。在一些方面，本文提供了本文提供的用作诊断剂的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，抗体包含可检测标记。
5.6试剂盒
本文提供了包含本文所述的一种或多种抗体或其抗原结合片段的试剂盒。在一些方面，本文提供了一种药物包装或试剂盒，其包含一个或多个容器，所述一个或多个容器填充有本文所述的药物组合物的一种或多种成分，诸如本文提供的一种或多种抗体或其抗原结合片段。任选地与此类容器相关联的可以是由管理药品或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通知，所述通知反映了制造、使用或销售机构对人施用的批准。
本文还提供了可用于检测方法的试剂盒。在一些方面，试剂盒在一个或多个容器中包含本文所述的抗体或其抗原结合片段，优选纯化的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文所述的试剂盒含有可用作对照的基本上分离的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)。在一些方面，本文所述的试剂盒还包含不与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)反应的对照抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文所述的试剂盒含有一种或多种元件，所述一种或多种元件用于检测抗体或其抗原结合片段与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的结合(例如，抗体或其抗原结合片段可缀合至可检测底物，诸如荧光化合物、酶底物、放射性化合物或发光化合物，或识别第一抗体或其抗原结合片段的第二抗体或其抗原结合片段可缀合至可检测底物)。在一些方面，本文提供的试剂盒可包括重组产生的或化学合成的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)。试剂盒中提供的PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)也可附接至固体支持物。在一些方面，上述试剂盒的检测工具包括附接PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的固体支持物。此种试剂盒还可包括未附接的报告基因标记的抗人抗体或其抗原结合片段，或小鼠/大鼠抗体或其抗原结合片段。在此方面，抗体或其抗原结合片段与PILRA蛋白(例如，人PILRA蛋白)的结合可通过所述报告基因标记的抗体或其抗原结合片段的结合来检测。
6.实施例
提供本节(即第6节)中的实施例以作说明而非限制。
实施例1：抗PILRA抗体抑制PILRA与T细胞的结合
为了测试人PILRA与T细胞结合的能力，使用了可溶性人PILRAhIgG1 Fc构建体(“PILRA Fc”)。PILRA Fc的氨基酸序列提供于SEQ ID NO：74中。
Figure BDA0003819579330000701
Figure BDA0003819579330000711
PILRA Fc或hIgG1同种型对照与原代CD4+T细胞或Jurkat细胞在4℃下孵育30分钟。将细胞洗涤两次，然后用抗人IgG1 Alexa647检测结合的PILRA Fc或IgG1同种型对照。在BD FACS Canto上获得细胞，并计算平均荧光强度。如图1A所示，在CD4+T细胞和Jurkat细胞上检测到PILRA Fc的结合。
测试了抗PILRA抗体抑制PILRA Fc与T细胞结合的能力。假定结合PILRA-Fc并阻断PILRA-Fc与T细胞结合的抗PILRA抗体阻断PILRA-Fc与T细胞上的PILRA配体的结合。预计具有这种活性的抗体同样会起到阻断内源性PILRA与其T细胞上的配体结合的作用，从而抑制内源性PILRA的抑制性信号传导。
为了测试抗PILRA抗体抑制PILRA Fc与T细胞结合的能力，首先将PILRA Fc与10ug/ml抗PILRA抗体、同种型对照IgG1或FACS缓冲液在4℃下仅孵育30分钟。添加来自2名健康供体的CD4+细胞并进一步孵育另外的30分钟。洗涤两次后，与CD4+T细胞结合的PILRAFc用抗人IgG Alexa647检测。相对于仅存在FACS缓冲液时的PILRA Fc结合程度计算了在抗PILRA抗体或同种型对照存在下的PILRA Fc结合程度。抗人PILRA抗体2175B(R&D Systems)部分抑制PILRA Fc结合(图1B)。相比之下，抗人PILRA抗体2175D(R&DSystems)对结合没有影响，并且抗人PILRA绵羊多克隆抗体(R&DSystems)增加了结合(图1B)。总之，PILRA Fc与T细胞的结合可能会受到抑制或增强，这取决于所使用的抗人PILRA抗体。
实施例2：PILRA调节骨髓源性抑制剂细胞的分化和活化
为了确定PILRA在骨髓细胞活化和分化中的作用，通过用100ng/ml GM-CSF和100ng/mlIL-6培养5天，从3名健康供体的单核细胞中产生骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)。然后收获细胞并用媒介物或用增加剂量的mIgG1同种型对照或人PILRA Fc(mIgG1)构建体(“PILRA mFc”)处理。氨基酸序列PILRA mFc构建体提供于SEQ ID NO：75中。
Figure BDA0003819579330000721
PILRA mFc用作可溶性拮抗剂，结合这些细胞上表达的PILRA配体，并阻止它们与细胞表面内源性PILRA受体的相互作用。处理3天后，收获细胞并通过CD14和CD86染色检查MDSC的活化。CD14是在从未成熟骨髓细胞类型分化为更成熟的骨髓细胞类型时下调的骨髓标志物。CD86是骨髓细胞上的活化标志物、适应性免疫反应的有效活化剂和原型M1基因。
图2A提供了代表性FACS图，其示出了用媒介物、mIgG1或PILRAmFc处理的MDSC上的CD14与CD86表达。用PILRAmFc处理增加了CD14loCD86hi(活化的)骨髓细胞的百分比，表明阻断PILRA的抑制信号增强了这些细胞向更成熟和活化的表型的分化。因此，预期阻断性抗PILRA抗体在促进骨髓细胞的活化和分化方面具有相当的效果。
图2B示出了在用mIgG1同种型对照或PILRA mFc处理来自3名供体(955、956和957)的MDSC后活化骨髓细胞相对于媒介物处理的细胞的百分比。PILRAmFc在来自所有3名供体的MDSC样品中增加了活化的骨髓细胞，如通过CD14loCD86hi(活化的)骨髓细胞的百分比测量的。
实施例3：PILRAFc诱导MDSC产生MIP1b
为了进一步探索PILRA在骨髓细胞活化中的作用，通过用100ng/mlGM-CSF和100ng/ml IL-6培养血源性单核细胞5天，从2名供体中产生骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)。然后收获细胞并用媒介物或用增加剂量的hIgG1同种型对照或PILRAFc处理(如实施例1)。PILRA Fc用作可溶性拮抗剂，结合这些细胞上表达的PILRA配体，并阻止它们与细胞表面内源性PILRA的相互作用。处理3天后，收获条件培养基并测定MIP1b(CCL4)。MIP1b是一种化学引诱剂，其促进骨髓细胞和淋巴细胞的募集。相对于hIgG1同种型对照，使用PILRA Fc的PILRA拮抗作用诱导了MIP1b产生，这与增加的骨髓细胞活化一致(图3)。
实施例4：抗小鼠PILRA抗体不结合人PILRA
如下产生针对鼠PILRA的抗体。用鼠PILRA(mPILRA)蛋白免疫C57BL/7PILRA-/-PILRB1-/-PILRB2-/-小鼠，并使用标准方法制备杂交瘤。通过FACS评估了135个含有抗体的条件培养基样品与亲本293F细胞或异位表达人PILRA(hPILRA)、人PILRB(hPILRB)、食蟹猴PILRA(cPILRA)、mPILRA或鼠PILRB(mPILRB1)的293细胞的结合。简而言之，将含有抗体的条件培养基与293细胞在4℃下孵育30min，洗涤两次，然后用抗小鼠IgG Alexa 647检测。通过流式细胞术在FACS Canto II上分析细胞，并且对于所有细胞系，计算每种条件培养基的相对于293个亲本细胞的MFI值。结果报告在表8中。使用大于5倍结合的截止值将15种抗体鉴定为mPILRA结合剂。在这些结合剂中，10种抗体还显示出与表达鼠PILRB(mPILRB)的细胞的结合(>5倍)，并且1种抗体与表达食蟹猴PILRA(cPILRA)的细胞结合(>5倍)。这15种mPILRA结合剂均未与表达hPILRA或hPILRB的细胞结合。
表8：抗鼠抗体与PILRA和PILRB的结合
Figure BDA0003819579330000741
实施例5：抗小鼠PILRA抗体可增加或减少NPDC1与PILRA表达细胞的结合
评估了135个含有上述实施例4中所述抗体的条件培养基样品调节神经增殖分化和对照蛋白1(NPDC1)Fc与异位表达小鼠PILRA的293细胞的结合。简而言之，将含有抗体的条件培养基样品与表达小鼠PILRA的293细胞在4℃下孵育30分钟，然后将5ug/mlNPDC1hIgG1 Fc(“NPDC Fc”)添加到此混合物中。在4℃下孵育30分钟后，洗涤细胞并用抗人IgG Alexa 647检测细胞结合的NPDC1hIgG1Fc。通过流式细胞术在FACSCantoII上分析细胞，并且对于所有细胞系，计算在条件培养基存在下的NPDC1Fc结合相对于单独NPDC1Fc结合的百分比。结果在图4中示出。鉴定了10种破坏NPDC-1的阻断性抗小鼠PILRA抗体(mPA-001至mPA-009)。鉴定了5种增加NPDC1Fc结合的抗小鼠PIRLA抗体(mPA-011至mPA-015)。
实施例6：抗人PILRA抗体的产生
如下产生针对人PILRA的抗体。用人PILRA蛋白免疫C57BL/7PILRA-/-PILRB1-/-PILRB2-/-小鼠，并使用标准方法制备杂交瘤。通过FACS评估了300个含有抗体的条件培养基样品与亲本293细胞或异位表达hPILRA、hPILRB、cPILRA、mPILRA或mPILRB的293细胞的结合。简而言之，将含有抗体的条件培养基与293细胞在4℃下孵育30分钟，洗涤两次，然后用抗小鼠IgG Alexa 647检测。通过流式细胞术在FACS Canto II上分析细胞，并且对于所有细胞系，计算每种条件培养基的相对于293个亲本细胞的MFI值。结果显示在表9中。使用大于5倍结合的截止值将六种抗体鉴定为人PILRA结合剂。在这些结合剂中，一种抗体还显示出与表达人PILRB和食蟹猴PILRA的293细胞的结合。未鉴定出结合小鼠PILRA的抗体。
表9：抗人抗体与PILRA和PILRB的结合
Figure BDA0003819579330000761
实施例7：抗人PILRA抗体抑制PILRA与T细胞的结合
评估了含有如上述实施例6中所述的抗体的300个条件培养基样品抑制PILRA Fc与人CD3+T细胞结合的能力。简而言之，将含有抗体的条件培养基样品与1.25ug/ml PILRAFc在4℃下孵育30min，然后添加到人T细胞中。在4℃下孵育30分钟后，洗涤细胞并用抗人IgG Alexa 647检测结合的PILRA Fc。通过流式细胞术在FACSCanto II上分析细胞，并且对于所有细胞系，计算在条件培养基存在下的PILRA Fc结合相对于单独PILRA Fc结合的PILRA Fc结合量(MFI)和百分比。鉴定了六种阻断性抗人PILRA抗体(图5)。
实施例8：抗人PILRA抗体下调细胞表面PILRA
测试了抗人PILRA抗体下调细胞表面PILRA的能力。将来自上述实施例6中公开的杂交瘤活动的纯化抗体(10μg/ml)与唾液酸酶处理的异位表达人PILRA的G78变体的293细胞在冰上或在37℃下孵育30分钟或2小时。然后用荧光标记的绵羊抗人PILRA(1μg/ml，R&DSystems)检测表面PILRA，并使用流式细胞术在FACS Canto II上进行分析。人PILRA下调的百分比是通过对与在37℃下相比在冰上孵育指定时间点后检测到的表面PILRA水平进行标准化来计算的。结果在图6中示出，表明抗人PILRA抗体可下调细胞表面人PILRA。
实施例9：PILRA在肿瘤中的表达
为了比较PILRA在肿瘤和健康组织中的表达，分析了来自TCGA的癌症样品和来自GTEX的正常样品的RNAseq数据的PILRA表达。结果在图7中示出，其中每个点代表一个单独的样品。这些结果表明胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌和胰腺癌(每列左侧，显示点和未填充的框)与相应的健康组织(每列右侧，显示点和填充框)相比，PILRA表达增加。不受理论束缚，增加的表达至少归因于表达PILRA的骨髓细胞的浸润。
实施例10：阻断PILRA信号转导与抗PD-L1抗体组合减少肿瘤生长
使用PILRA-Fc与抗PD-L1抗体的组合检查阻断PILRA信号传导对肿瘤生长的影响。mPILRA mIgG1 Fc可与PILRA配体结合并阻止细胞表面PILRA的信号传导，因此作为PILRA通路的拮抗剂。在这些测定中，C57BL/6小鼠皮下接种MC38结肠癌细胞。对小鼠给药抗体同种型对照(13mg/kg)、抗PD-L1(3mg/kg)或mPILRA mIgG1 Fc(10mg/kg)和抗PD-L1抗体(3mg/kg)的组合，每周两次，持续3周。
图8示出了所得肿瘤体积(左图)和存活率(右图)。与仅接受抗PD-L1抗体的小鼠组相比，在第17天和第20天在接受mPILRA mIgG1 Fc与抗PD-L1抗体组合的小鼠组中观察到肿瘤生长减少的趋势。此外，与仅接受抗PD-L1抗体的小鼠组相比，在接受mPILRA mIgG1 Fc与抗PD-L1抗体组合的小鼠组中观察到存活率增加的趋势。这些数据表明，阻断PILRA信号转导与抗PD-L1抗体组合可减少肿瘤生长并提高存活率。
实施例11：hPA-002是一种高效配体阻断剂
为了计算这些抗体的配体阻断效力，评估纯化的抗hPILRA抗体阻断PILRA Fc与来自3名不同供体的人CD3+T细胞结合的能力。计算每个抗体的IC50值(平均值+标准误差)，并且它们在表10中示出。
表10：阻断配体结合的抗体IC50值
抗体 IC50±SEM(nM)
2175B 1.7±0.47
hPA-002 0.75±0.08
hPA-005 1.9±0.2
hPA-004 1.7±0.6
hPA-002抗体比2175B抗体更有效地阻断PILRA Fc的结合。hPA-005和hPA-004具有与2175B相似的效力。
实施例12：hPA-002、hPA-005和hPA-004而不是2175B竞争性结合PILRA
检查hPA-002、hPA-005、hPA-004和/或2175B是否竞争性结合PILRA，将293FShPILRA表达细胞与未标记的2175B、hPA-002、hPA-005或hPA-004在冰上孵育30分钟。然后，以5μg/ml的浓度添加Alexa 647缀合的hPA-002，并进一步孵育30分钟。洗涤后，通过流式细胞术评估结合的A647缀合的hPA-002的量。结果在图9中示出，表明未标记的hPA-002、hPA-005和hPA-004阻断hPA-002A647的结合，而2175B不阻断hPA-002A647的结合。这些数据表明hPA-005和hPA-004竞争性抑制hPA-002与hPILRA的结合，但2175B不竞争性抑制hPA-002与hPILRA的结合。
实施例13：hPA-002、hPA-005和hPA-004增强Fc受体活化骨髓细胞
如本实施例中所述，使用U937骨髓细胞系和衍生物评估抗PILRA抗体对Fc受体介导的活化的影响。产生了U937亲本细胞、表达对照(加扰)载体的U937细胞(U937对照细胞)和异位表达人PILRA的U937细胞(PILRA OE细胞)。对细胞进行FACS分析以确定PILRA表达的相对量。FACS分析显示PILRA OE细胞表达高水平的PILRA，比U937亲本细胞或U937对照细胞高约17倍，而U937亲本细胞和U937对照细胞表达最低量的PILRA。(还参见图10A.)
为了确定hPA-002、hPA-005和hPA-004对Fc受体活化骨髓细胞的影响，将96孔板用30μg/mL PBS中的鼠IgG2a(mIgG2a)涂覆过夜，然后用PBS洗涤。将U937亲本细胞、U937对照细胞和PILRA OE细胞添加到mIgG2a涂覆的孔中或未处理的孔中。将可溶性IgG(阴性对照)、hPA-002、hPA-005和hPA-004以10μg/mL添加到孔中。48小时后，评估条件培养基的趋化因子产生(MCP-1，图10B；RANTES，图10C)。
与未处理的孔中的细胞相比，涂覆mIgG2a的孔中的U937亲本细胞、U937对照细胞和PILRA OE细胞显示出增加的MCP-1和RANTES产生(比较图10B与图10C中的黑条与白条)，这表明行为与hIgG1相似的结合板的mIgG2a与细胞结合并通过Fc受体活化它们。与涂覆有mIgG2a的孔中的U937亲本细胞和U937对照细胞相比，涂覆有mIgG2a的孔中的PILRA OE细胞显示出MCP-1和RANTES产生的增加较少，这表明PILRA的过表达抑制了Fc介导的骨髓细胞活化(图10B和图10C)。图10B和图10C还证明了与仅在对照IgG或培养基存在下具有Fc受体活化的PILRA OE细胞相比，抗PILRA抗体(hPA-002、hPA-005和hPA-004)增加了具有Fc受体活化的PILRAOE细胞(在用mIgG2a涂覆的孔中)中MCP-1和RANTES的产生。与没有Fc受体活化的PILRA OE细胞(在未用mIgG2a处理的孔中)相比，抗PILRA抗体(hPA-002、hPA-005和hPA-004)也增加了具有Fc受体活化的PILRA OE细胞(在用mIgG2a涂覆的孔中)中MCP-1和RANTES的产生。在有或没有mIgG2a处理的情况下，抗PILRA抗体对U937亲本细胞或U937对照细胞没有一致的影响。因此，这些数据表明PILRA过表达抑制Fc受体介导的骨髓细胞活化，并且抗PILRA阻断抗体诸如hPA-002、hPA-005和hPA-004可增强Fc受体介导的骨髓细胞活化。
实施例14：抗PILRA抗体对MCP-1产生的剂量反应效应
为了检查不同浓度的抗PILRA抗体对U937 PILRA OE细胞中MCP-1产生的剂量反应效应，将96孔板用30μg/mL PBS中的mIgG2a涂覆过夜，然后用PBS洗涤。将U937 PILRA OE细胞添加到mIgG2a涂覆的孔中，并将可溶性IgG(阴性对照)、hPA-002、hPA-005、hPA-004和2175B抗体以不同的浓度添加到孔中(图11)。48小时后，评估条件培养基的MCP-1产生。
图11示出了抗PILRA抗体hPA-002、hPA-005和hPA-004剂量依赖性地增加MCP-1产生，但抗PILRA抗体2175B抑制MCP-1产生。这些数据表明hPA-002、hPA-005和hPA-004是PILRA拮抗剂，而2175B是PILRA激动剂。不同的功能活性与实施例12(图9)中的数据一致，这表明hPA-002、hPA-005和hPA-004而非2175B表现出竞争性结合，这表明hPA-002、hPA-005、和hPA-004而非2175B与PILRA的不同区域结合。
实施例15：hPA-002、hPA-005和hPA-004增强原代人单核细胞中的Fc受体活化
为了确定抗PILRA抗体(hPA-002、hPA-005和hPA-004)对原代人单核细胞中Fc受体介导的活化的影响，将96孔板用30μg/mL PBS中的mIgG2a涂覆过夜，然后用PBS洗涤。将来自两名不同供体的原代人单核细胞添加到mIgG2a涂覆的孔或未处理的孔中。将可溶性IgG(阴性对照)、hPA-002、hPA-005和hPA-004抗体以10μg/mL添加到孔中。48小时后，评估条件培养基的MCP-1产生(图12)。
在图12中，与未处理的孔中的原代人单核细胞相比，用mIgG2a涂覆的孔中的原代人单核细胞显示出增加的MCP-1产生，这表明板结合的mIgG2a通过Fc受体活化原代人单核细胞。抗PILRA抗体hPA-002、hPA-005和hPA-004增加了具有Fc受体介导的活化的原代人单核细胞中的MCP-1产生，其中hPA-002显示出最强的作用。这些数据表明抗PILRA抗体可增强原代人单核细胞中Fc受体介导的活化。
***
本发明的范围不受本文所述的特定方面的限制。事实上，根据上文的描述和附图，除所述之外的对本发明的各种修改对于本领域的技术人员是显而易见的。此类修改旨在落入所附权利要求的范围内。
本文中所引用的参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)出于所有目的以引用的方式整体并入本文，其程度如同每个单独参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)具体地和单独地被指示为出于所有目的以引用的方式整体并入。
其他实施方案在以下权利要求内。
序列表
<110> 艾莱克特有限责任公司(ALECTOR LLC)
<120> PILRA抗体及其使用方法
<130> 4503.009PC02
<150> US 62/978,106
<151> 2020-02-18
<150> US 63/075,440
<151> 2020-09-08
<160> 75
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 303
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser
35 40 45
Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala
50 55 60
Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Arg Gln Ser
65 70 75 80
Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg
85 90 95
Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile
100 105 110
Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu
115 120 125
Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly
130 135 140
Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Gln Arg Pro
145 150 155 160
Ser Ser Met Thr Thr Thr Trp Arg Leu Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr
165 170 175
Gly Leu Arg Val Thr Gln Gly Lys Arg Arg Ser Asp Ser Trp His Ile
180 185 190
Ser Leu Glu Thr Ala Val Gly Val Ala Val Ala Val Thr Val Leu Gly
195 200 205
Ile Met Ile Leu Gly Leu Ile Cys Leu Leu Arg Trp Arg Arg Arg Lys
210 215 220
Gly Gln Gln Arg Thr Lys Ala Thr Thr Pro Ala Arg Glu Pro Phe Gln
225 230 235 240
Asn Thr Glu Glu Pro Tyr Glu Asn Ile Arg Asn Glu Gly Gln Asn Thr
245 250 255
Asp Pro Lys Leu Asn Pro Lys Asp Asp Gly Ile Val Tyr Ala Ser Leu
260 265 270
Ala Leu Ser Ser Ser Thr Ser Pro Arg Ala Pro Pro Ser His Arg Pro
275 280 285
Leu Lys Ser Pro Gln Asn Glu Thr Leu Tyr Ser Val Leu Lys Ala
290 295 300
<210> 2
<211> 307
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 食蟹猴PILRA
<400> 2
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu
1 5 10 15
Leu Leu Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Ala Gly Ser Gly
20 25 30
Pro Ser Gly Pro Tyr Gly Val Thr Gln Arg Lys His Leu Ser Ala Pro
35 40 45
Met Gly Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr His Pro Trp Glu
50 55 60
Leu Ala Ala Ala Pro Asn Met Lys Ile Ser Trp Arg Arg Gly Asn Phe
65 70 75 80
His Gly Glu Phe Phe Tyr Arg Thr Arg Pro Ala Phe Ile His Glu Asp
85 90 95
Tyr Ser Asn Arg Leu Leu Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Asp Arg Gly
100 105 110
Leu Leu Arg Ile Trp Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe
115 120 125
Cys Arg Val Glu Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Arg Trp Gln
130 135 140
Ser Ile Glu Gly Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr
145 150 155 160
Thr Gln Arg Pro Ser Ser Met Thr Thr Thr Arg Arg Pro Ser Ser Ala
165 170 175
Thr Thr Thr Ala Gly Leu Arg Val Thr Gln Gly Lys Arg His Ser Asp
180 185 190
Ser Trp His Leu Ser Leu Lys Thr Ala Val Gly Val Thr Val Ala Val
195 200 205
Ala Val Leu Gly Ile Met Ile Leu Gly Leu Ile Cys Leu Leu Arg Trp
210 215 220
Arg Arg Arg Lys Gly Gln Gln Arg Thr Lys Ala Thr Thr Pro Ala Lys
225 230 235 240
Glu Pro Phe Gln Asn Thr Glu Glu Pro Tyr Glu Asn Ile Arg Asn Glu
245 250 255
Gly Gln Asn Thr Asp Pro Lys Pro Asn Pro Lys Asp Asp Gly Ile Val
260 265 270
Tyr Ala Ser Leu Ala Leu Ser Ser Ser Thr Ser Pro Arg Val Pro Pro
275 280 285
Ser His His Pro Leu Lys Ser Pro Gln Asn Glu Thr Leu Tyr Ser Val
290 295 300
Leu Lys Val
305
<210> 3
<211> 302
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 鼠PILRA
<400> 3
Met Ala Leu Leu Ile Ser Leu Pro Gly Gly Thr Pro Ala Met Ala Gln
1 5 10 15
Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ser Ala Cys Leu His Ala Gly Asn Ser Glu
20 25 30
Arg Ser Asn Arg Lys Asn Gly Phe Gly Val Asn Gln Pro Glu Ser Cys
35 40 45
Ser Gly Val Gln Gly Gly Ser Ile Asp Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Phe
50 55 60
Pro Trp Lys Leu Ala Lys Asp Pro Gln Met Ser Ile Ala Trp Arg Trp
65 70 75 80
Lys Asp Phe His Gly Glu Phe Ile Tyr Asn Ser Ser Leu Pro Phe Ile
85 90 95
His Glu His Phe Lys Gly Arg Leu Ile Leu Asn Trp Thr Gln Gly Gln
100 105 110
Thr Ser Gly Val Leu Arg Ile Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Gln Thr
115 120 125
Arg Tyr Phe Gly Arg Val Phe Leu Gln Thr Thr Glu Gly Ile Gln Phe
130 135 140
Trp Gln Ser Ile Pro Gly Thr Gln Leu Asn Val Thr Asn Ala Thr Cys
145 150 155 160
Thr Pro Thr Thr Leu Pro Ser Thr Thr Ala Ala Thr Ser Ala His Thr
165 170 175
Gln Asn Asp Ile Thr Glu Val Lys Ser Ala Asn Ile Gly Gly Leu Asp
180 185 190
Leu Gln Thr Thr Val Gly Leu Ala Thr Ala Ala Ala Val Phe Leu Val
195 200 205
Gly Val Leu Gly Leu Ile Val Phe Leu Trp Trp Lys Arg Arg Arg Gln
210 215 220
Gly Gln Lys Thr Lys Ala Glu Ile Pro Ala Arg Glu Pro Leu Glu Thr
225 230 235 240
Ser Glu Lys His Glu Ser Val Gly His Glu Gly Gln Cys Met Asp Pro
245 250 255
Lys Glu Asn Pro Lys Asp Asn Asn Ile Val Tyr Ala Ser Ile Ser Leu
260 265 270
Ser Ser Pro Thr Ser Pro Gly Thr Ala Pro Asn Leu Pro Val His Gly
275 280 285
Asn Pro Gln Glu Glu Thr Val Tyr Ser Ile Val Lys Ala Lys
290 295 300
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链CDR1
<400> 4
Thr Phe Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链CDR2
<400> 5
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链CDR3
<400> 6
Val Glu Asp Tyr Gly Asn Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链CDR1
<400> 7
His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp Leu Asn
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链CDR2
<400> 8
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链CDR3
<400> 9
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链CDR1
<400> 10
Thr Phe Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链CDR2
<400> 11
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Phe Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链CDR3
<400> 12
Ile Glu Asp Tyr Gly Ser Tyr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链CDR1
<400> 13
His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp Leu Asn
1 5 10
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链CDR2
<400> 14
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链CDR3
<400> 15
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链CDR1
<400> 16
Ser Phe Gly Val Ala Val Gly
1 5
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链CDR2
<400> 17
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链CDR3
<400> 18
Ile Ala Asp Tyr Gly Asn His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链CDR1
<400> 19
His Ala Ser Gln Asn Ser His Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链CDR2
<400> 20
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链CDR3
<400> 21
Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链CDR1
<400> 22
Thr Phe Gly Met Gly Val Gly
1 5
<210> 23
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链CDR2
<400> 23
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链CDR3
<400> 24
Ile Glu Asp Tyr Gly Asn Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链CDR1
<400> 25
His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链CDR2
<400> 26
Lys Ala Ser Asn Leu His Thr
1 5
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链CDR3
<400> 27
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 28
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002可变重链
<400> 28
Gln Val Thr Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Glu Asp Tyr Gly Asn Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002可变轻链
<400> 29
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Val Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 30
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005可变重链
<400> 30
Gln Val Ile Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Phe Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Thr Arg Ile Glu Asp Tyr Gly Ser Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005可变轻链
<400> 31
Asp Val Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Asn Ile Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004可变重链
<400> 32
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Met Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Ala Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Phe
20 25 30
Gly Val Ala Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Ser Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Thr Arg Ile Ala Asp Tyr Gly Asn His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004可变轻链
<400> 33
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ser His Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 34
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001可变重链
<400> 34
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Phe
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Glu Asp Tyr Gly Asn Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001可变轻链
<400> 35
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile His Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 36
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链框架区1
<400> 36
Gln Val Thr Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链框架区2
<400> 37
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 38
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链框架区3
<400> 38
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002重链框架区4
<400> 39
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 40
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链框架区1
<400> 40
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys
20
<210> 41
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链框架区2
<400> 41
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 42
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链框架区3
<400> 42
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr
1 5 10 15
Val Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-002轻链框架区4
<400> 43
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链框架区1
<400> 44
Gln Val Ile Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链框架区2
<400> 45
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 46
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链框架区3
<400> 46
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005重链框架区4
<400> 47
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 48
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链框架区1
<400> 48
Asp Val Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Pro Ile Thr Ile Thr Cys
20
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链框架区2
<400> 49
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Asn Ile Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 50
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链框架区3
<400> 50
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-005轻链框架区4
<400> 51
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 52
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链框架区1
<400> 52
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Met Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Ala Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn
20 25 30
<210> 53
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链框架区2
<400> 53
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 54
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链框架区3
<400> 54
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004重链框架区4
<400> 55
Trp Gly Gln Gly Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 56
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链框架区1
<400> 56
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys
20
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链框架区2
<400> 57
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链框架区3
<400> 58
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-004轻链框架区4
<400> 59
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链框架区1
<400> 60
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 61
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链框架区2
<400> 61
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 62
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链框架区3
<400> 62
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ala Asn Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001重链框架区4
<400> 63
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链框架区1
<400> 64
Asp Ile Gln Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys
20
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链框架区2
<400> 65
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 66
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链框架区3
<400> 66
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hPA-001轻链框架区4
<400> 67
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 68
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln Pro Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser
35 40 45
Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Ile Val
50 55 60
Pro Asn Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser
65 70 75 80
Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg
85 90 95
Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile
100 105 110
Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu
115 120 125
Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly
130 135 140
Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Thr Trp Arg
145 150 155 160
Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly Leu Arg Val Thr Glu Ser Lys
165 170 175
Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser Leu Asp Thr Ala Ile Arg Val
180 185 190
Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr Val Ile Leu Gly Leu Leu Cys
195 200 205
Leu Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg Lys Gly Ser Arg Ala Pro Ser
210 215 220
Ser Asp Phe
225
<210> 69
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG1 Fc结构域
<400> 69
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 70
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 突变的人IgG1 Fc
<400> 70
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Ala
100 105 110
Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 71
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 突变的人IgG1 Fc
<400> 71
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 72
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4 Fc
<400> 72
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 73
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 突变的人IgG4 Fc
<400> 73
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 74
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 可溶性人PILRA hIgG1 Fc
<400> 74
Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu Tyr Gly Val
1 5 10 15
Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser Val Glu Ile
20 25 30
Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala Pro Asp Val
35 40 45
Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr Ser
50 55 60
Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe Leu
65 70 75 80
Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn Leu
85 90 95
Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp Thr
100 105 110
Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Ser Ile Thr Gln Gly Gln Gln Arg Thr Lys Ala Thr Thr Pro Ala Arg
130 135 140
Glu Pro Phe Gln Asn Thr Glu Glu Pro Tyr Glu Asn Ile Arg Asn Glu
145 150 155 160
Gly Gln Asn Thr Asp Pro Lys Leu Asn Pro Lys Leu His Leu Thr Gln
165 170 175
Ser Thr Ser Gln Pro Pro Ser Pro Gln Glu Pro Pro Glu Arg Asp Pro
180 185 190
Val Leu Cys Leu Lys Gly Leu Thr Asn Gly Gln Pro Ser Gln Asp Ala
195 200 205
Asp Asp Asp Asp Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 75
<211> 428
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PILRA mFc
<400> 75
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser
35 40 45
Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala
50 55 60
Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser
65 70 75 80
Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg
85 90 95
Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile
100 105 110
Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu
115 120 125
Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly
130 135 140
Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Gln Arg Pro
145 150 155 160
Ser Ser Met Thr Thr Thr Trp Arg Leu Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr
165 170 175
Gly Leu Arg Val Thr Gln Gly Lys Arg Arg Ser Asp Ser Trp His Ile
180 185 190
Ser Leu Glu Thr Ala Gly Gly Ser Gly Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys
195 200 205
Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe
210 215 220
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val
225 230 235 240
Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
245 250 255
Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro
260 265 270
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro
275 280 285
Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val
290 295 300
Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
305 310 315 320
Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys
325 330 335
Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp
340 345 350
Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro
355 360 365
Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser
370 375 380
Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala
385 390 395 400
Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His
405 410 415
His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
420 425

Claims (74)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与其一个或多个配体的结合并下调细胞表面PILRA。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断人PILRA(SEQ ID NO：1)的残基Arg126与PILRA的一个或多个配体的结合。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。
4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在37℃下30分钟后下调细胞表面PILRA至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。
5.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA并且包含以下的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1、VH CDR2、VH CDR3以及轻链可变区(VL)CDR1、CDR2和CDR3序列：
(a)分别为SEQ ID NO：4-9；
(b)分别为SEQ ID NO：10-15；
(c)分别为SEQ ID NO：16-21；或
(d)分别为SEQ ID NO：22-27。
6.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其竞争性抑制参考抗体与人PILRA的结合，其中所述参考抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：
(a)分别为SEQ ID NO：28和29；
(b)分别为SEQ ID NO：30和31；
(c)分别为SEQ ID NO：32和33；或
(d)分别为SEQ ID NO：34和35。
7.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与包含重链可变区和轻链可变区的抗体结合相同的人PILRA表位，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：
(a)分别为SEQ ID NO：28和29；
(b)分别为SEQ ID NO：30和31；
(c)分别为SEQ ID NO：32和33；或
(d)分别为SEQ ID NO：34和35。
8.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自由hPA-002、hPA-005、hPA-004或hPA-001组成的组的抗体的VH CDR1、VHCDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
9.如权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR是Kabat定义的CDR、Chothia定义的CDR、IMGT定义的CDR或AbM定义的CDR。
10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：28、30、32或34的氨基酸序列。
11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：29、31、33或35的氨基酸序列。
12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区包含以下的氨基酸序列：
(e)分别为SEQ ID NO：28和29；
(f)分别为SEQ ID NO：30和31；
(g)分别为SEQ ID NO：32和33；或
(h)分别为SEQ ID NO：34和35。
13.一种如权利要求12所述的抗体的人源化形式。
14.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：28、30、32或34的氨基酸序列。
15.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：29、31、33或35的氨基酸序列。
16.如权利要求5-15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与其一个或多个配体的结合并下调细胞表面PILRA。
17.如权利要求16所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断人PILRA(SEQ ID NO：1)的残基Arg126与其一个或多个配体的结合。
18.如权利要求16或17所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断PILRA-Fc与人T细胞的结合至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。
19.如权利要求5-18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段在37℃下30分钟后下调细胞表面PILRA至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。
20.如权利要求1-4和16-19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述下调是剂量依赖性的。
21.如权利要求1-4和16-20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述阻断是剂量依赖性的。
22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段活化骨髓细胞。
23.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段促进骨髓细胞分化。
24.如权利要求1-23中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增加骨髓细胞产生MIP1b。
25.如权利要求1-24中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断PILRA与NPDC1的结合。
26.如权利要求22-25中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述骨髓细胞的活化、所述骨髓细胞分化的促进、所述MIP1b产生的增加和/或所述配体结合的阻断是剂量依赖性的。
27.如权利要求1-26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合食蟹猴PILRA。
28.如权利要求1-27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不结合人PILRB。
29.如权利要求1-28中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：1的氨基酸20-197中的表位。
30.如权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体2175B不竞争性抑制所述抗体或其抗原结合片段与人PILRA的结合。
31.如权利要求1-30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区。
32.如权利要求31所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区是选自由人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4同种型组成的组的同种型。
33.如权利要求32所述的抗体或其抗原结合片段，其包含经工程改造以降低效应子功能的Fc结构域。
34.如权利要求1-33中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区，其中所述重链恒定区是人IgG1重链恒定区，并且其中所述轻链恒定区是人IgGκ轻链恒定区。
35.如权利要求1-34中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是单克隆抗体。
36.如权利要求1-35中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或其抗原结合片段。
37.如权利要求1-36中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为全长抗体。
38.如权利要求1-36中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为抗原结合片段。
39.如权利要求38所述的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是Fab、Fab′、F(ab′)2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab′)3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。
40.如权利要求1-39中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含可检测标记。
41.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-40中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或重链的核酸分子。
42.如权利要求41所述的分离的多核苷酸，其中所述核酸分子编码SEQ ID NO：28、30、32或34的VH。
43.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-40中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区或轻链的核酸分子。
44.如权利要求43所述的分离的多核苷酸，其中所述核酸分子编码SEQ ID NO：29、31、33或35的VL。
45.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-35中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或重链以及权利要求1-40中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区或轻链的核酸分子。
46.一种分离的载体，其包含权利要求41-45中任一项所述的多核苷酸。
47.一种宿主细胞，其包含(a)权利要求41-45中任一项所述的多核苷酸，(b)权利要求46所述的载体，或(c)包含权利要求41或42所述的多核苷酸的第一载体和包含权利要求43或44所述的多核苷酸的第二载体。
48.如权利要求47所述的宿主细胞，其选自由以下组成的组：大肠杆菌、假单胞菌属、芽孢杆菌属、链霉菌属、酵母菌、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、HepG2、SP2/0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10细胞、植物细胞、昆虫细胞和组织培养物中的人细胞。
49.一种产生结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养权利要求47或48所述的宿主细胞，从而表达所述核酸分子并产生所述抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述方法还包括从所述培养物中分离所述抗体或其抗原结合片段。
50.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人PILRA并且由权利要求41-45中任一项所述的多核苷酸编码或通过权利要求49所述的方法产生。
51.一种药物组合物，其包含权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的赋形剂。
52.一种用于下调细胞表面PILRA的方法，所述方法包括使在其表面表达PILRA的细胞与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触。
53.一种用于抑制PILRA与PILRA配体结合的方法，所述方法包括在PILRA配体的存在下使PILRA与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触，任选地其中所述PILRA和/或所述PILRA配体在细胞上表达。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述PILRA配体是NPDC1和/或其中所述PILRA配体在T细胞上表达。
55.一种用于增加骨髓细胞活化的方法，所述方法包括使所述骨髓细胞与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触。
56.一种用于促进骨髓细胞分化的方法，所述方法包括使所述骨髓细胞与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触。
57.一种用于增加骨髓细胞产生MIP1b的方法，所述方法包括使所述骨髓细胞与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触。
58.如权利要求52-57中任一项所述的方法，其中所述接触是在体外。
59.如权利要求52-57中任一项所述的方法，其中所述接触是在受试者中。
60.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症是其中骨髓细胞已浸润肿瘤微环境的实体瘤。
62.如权利要求60或权利要求61所述的方法，其中所述癌症选自胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌(任选地其中所述肾癌是肾透明细胞癌)、胰腺癌和乳腺癌。
63.如权利要求60-62中任一项所述的方法，所述方法还包括施用抑制性免疫检查点分子的拮抗剂，任选地其中所述免疫检查点分子是PD-1或PD-L1。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述拮抗剂是PD-1的拮抗剂，其是抗PD-1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、MEDI-0680(AMP-514)、卡瑞利珠单抗(SHR-1210)、替雷利珠单抗(BGB-A317)和斯巴达珠单抗(NPVPDR001、NVS240118、PDR001)。
65.如权利要求63所述的方法，其中所述拮抗剂是PD-L1的拮抗剂，其是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，任选地其中所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：阿替利珠单抗、度伐利尤单抗(MEDI4736)、BMS-936559、MSB0010718C和rHigM12B7。
66.如权利要求63-65中任一项所述的方法，其中同时施用所述特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段和所述抑制性免疫检查点分子的所述拮抗剂。
67.如权利要求63-65中任一项所述的方法，其中依次施用所述特异性结合人PILRA的抗体或其抗原结合片段和所述抑制性免疫检查点分子的所述拮抗剂。
68.一种治疗患者的骨髓细胞功能障碍或缺陷的疾病或疾患的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述疾病或疾患是神经退行性疾病。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述神经退行性疾病是阿尔茨海默氏病，任选地其中所述患者携带PILRA的G78变体。
71.一种活化患者的先天免疫系统的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物。
72.一种用于检测样品中PILRA的方法，所述方法包括使所述样品与权利要求1-40和50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求51所述的药物组合物接触。
73.如权利要求72所述的方法，其中所述样品获自人受试者，任选地其中所述样品是癌症样品。
74.如权利要求55所述的方法，其中所述骨髓细胞活化是Fc受体介导的。
CN202180017565.9A 2020-02-18 2021-02-17 Pilra抗体及其使用方法 Pending CN115515615A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062978106P 2020-02-18 2020-02-18
US62/978,106 2020-02-18
US202063075440P 2020-09-08 2020-09-08
US63/075,440 2020-09-08
PCT/US2021/018354 WO2021167964A1 (en) 2020-02-18 2021-02-17 Pilra antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115515615A true CN115515615A (zh) 2022-12-23

Family

ID=74870886

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180017565.9A Pending CN115515615A (zh) 2020-02-18 2021-02-17 Pilra抗体及其使用方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230220074A1 (zh)
EP (1) EP4106788A1 (zh)
JP (1) JP2023513834A (zh)
KR (1) KR20220143048A (zh)
CN (1) CN115515615A (zh)
AU (1) AU2021224572A1 (zh)
BR (1) BR112022016368A2 (zh)
CA (1) CA3166155A1 (zh)
IL (1) IL295188A (zh)
MX (1) MX2022010021A (zh)
WO (1) WO2021167964A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2024007267A (es) * 2021-12-17 2024-08-06 Denali Therapeutics Inc Anticuerpos anti-pilra, usos de estos y métodos y reactivos relacionados.
WO2024054848A1 (en) * 2022-09-06 2024-03-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Enhancement of phagocytosis

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
CA1319120C (en) 1985-04-01 1993-06-15 John Henry Kenten Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
EP0768377A1 (en) 1988-09-02 1997-04-16 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
WO1992009690A2 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
DK1471142T3 (da) 1991-04-10 2009-03-09 Scripps Research Inst Heterodimere receptor-biblioteker under anvendelse af fagemider
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
ES2313867T3 (es) 1991-12-02 2009-03-16 Medical Research Council Produccion de anticuerpos anti-auto de repertorios de segmentos de anticuerpo expresados en la superficie de fagos.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
EP1231268B1 (en) 1994-01-31 2005-07-27 Trustees Of Boston University Polyclonal antibody libraries
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
CA2491864C (en) 2001-07-12 2012-09-11 Jefferson Foote Super humanized antibodies
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
KR101888321B1 (ko) 2005-07-01 2018-08-13 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체
EP2127672A4 (en) * 2007-01-12 2011-03-09 Univ Osaka INHIBITORS OF HERPESVIRUS INFECTION, METHOD FOR INHIBITING HERPESVIRUS INFECTION AND ITS USE
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8691730B2 (en) 2007-09-14 2014-04-08 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
JP2011507882A (ja) * 2007-12-20 2011-03-10 シェーリング コーポレイション Ｆｄｆ０３抗体およびそれの使用
WO2011084357A1 (en) * 2009-12-17 2011-07-14 Schering Corporation Modulation of pilr to treat immune disorders
EP2593594B1 (en) 2010-07-16 2017-09-27 Adimab, LLC Antibody libraries
WO2012088383A2 (en) * 2010-12-23 2012-06-28 Genentech, Inc. PILR alpha INTERACTIONS AND METHODS OF MODIFYING SAME
EP2699264B1 (en) 2011-04-20 2018-03-14 Medlmmune, LLC Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
PT2785375T (pt) 2011-11-28 2020-10-29 Merck Patent Gmbh Anticorpos anti-pd-l1 e usos destes
WO2019126472A1 (en) * 2017-12-22 2019-06-27 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease

Also Published As

Publication number Publication date
US20230220074A1 (en) 2023-07-13
KR20220143048A (ko) 2022-10-24
IL295188A (en) 2022-09-01
EP4106788A1 (en) 2022-12-28
WO2021167964A1 (en) 2021-08-26
JP2023513834A (ja) 2023-04-03
AU2021224572A1 (en) 2022-08-25
CA3166155A1 (en) 2021-08-26
MX2022010021A (es) 2022-11-09
BR112022016368A2 (pt) 2023-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11254743B2 (en) Anti-CD33 antibodies and methods of use thereof
EP3798230B1 (en) Therapeutic antibodies
JP6847037B2 (ja) 抗ｃｄ７３抗体とａ２ａ受容体阻害薬とを含む併用治療薬及びその使用
EP3594240B1 (en) Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
WO2017071625A1 (zh) 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
AU2016223095B2 (en) Antibodies to tau and uses thereof
TW201902933A (zh) 對flt3具特異性之抗體及其用途
MX2010012142A (es) Anticuerpos para receptor de productos finales de glucacion avanzada (rage) y usos de los mismos.
CN115916166A (zh) 针对cd3和cd20的双特异性抗体
EP3898691A1 (en) Trem2 antibodies and uses thereof
CA3108808A1 (en) Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
EP3898667A2 (en) Modified antibody fcs and methods of use
KR20230048439A (ko) 항-par-2 항체 및 이의 사용 방법
US20230220074A1 (en) Pilra antibodies and methods of use thereof
CN113906050A (zh) 抗EphA4抗体
WO2023028525A2 (en) Pilra antibodies and methods of use thereof
CN113614107A (zh) Cd31竞争剂及其用途
CN112512638A (zh) 抗siglec-7抗体及其使用方法
CN111295395A (zh) 抗体和使用方法
CA3161206A1 (en) Methods of use of anti-cd33 antibodies
WO2024182579A2 (en) Pilra antibodies and methods of use thereof
EP4454659A2 (en) Anti-par-2 antibodies and methods of use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40077030

Country of ref document: HK

SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination