CN115916166A - 针对cd3和cd20的双特异性抗体 - Google Patents

针对cd3和cd20的双特异性抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN115916166A
CN115916166A CN202180041298.9A CN202180041298A CN115916166A CN 115916166 A CN115916166 A CN 115916166A CN 202180041298 A CN202180041298 A CN 202180041298A CN 115916166 A CN115916166 A CN 115916166A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dose
administered
bispecific antibody
ser
val
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180041298.9A
Other languages
English (en)
Inventor
T.艾哈迈迪
M.古普塔
T.R.李
R.奥利维里
D.德马尔科
I.海姆斯特拉
C.邱
B.艾略特
A.阿扎里扬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jian Mabao
Original Assignee
Jian Mabao
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jian Mabao filed Critical Jian Mabao
Publication of CN115916166A publication Critical patent/CN115916166A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及双特异性抗体(bsAb)和此类抗体在治疗受试者的疾病中的用途。此外，为B细胞非霍奇金淋巴瘤(B‑NHL)的治疗提供了有利的治疗方案。

Description

针对CD3和CD20的双特异性抗体
技术领域
本发明涉及靶向CD3和CD20两者的双特异性抗体(bsAb)以及此类抗体在治疗受试者疾病中的用途。此外，提供了有利的治疗方案。
背景技术
单克隆抗体(mAb)已显示对癌症的治疗高度成功。改善抗体治疗的另一种有前景的方法是通过将T细胞特异性地募集至表达抗原的癌细胞。这可以通过利用靶向T细胞和抗原表达细胞两者的bsAb来实现。然而，主要由于双特异性抗体的低功效、严重的副作用(细胞因子风暴)和免疫原性，最初的临床研究相当令人失望。双特异性抗体的设计和应用进展部分克服了细胞因子释放综合征的初始障碍，并提高了临床有效性，而无剂量限制性毒性(Garber,2014,Nat.Rev.Drug Discov.13:799-801)。
CD20分子，也称为人B淋巴细胞限制性分化抗原或Bp35，在超过90％来自外周血或淋巴样器官的B细胞表面上发现，并在早期前B细胞发育期间表达，并保持至浆细胞分化。CD20存在于正常B细胞和恶性B细胞两者上。特别是，CD20在超过90％的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)上表达，但在造血干细胞、前B细胞、正常浆细胞或其他正常组织上未发现。通过靶向CD20治疗癌症以及自身免疫性和免疫性疾病的方法是本领域已知的。
例如，嵌合CD20抗体利妥昔单抗(rituximab)已被用于或建议用于治疗癌症，如B-NHL和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。人单克隆抗CD20抗体奥法木单抗(ofatumumab)已被用于或建议用于治疗其他各种CLL适应症，滤泡性淋巴瘤(FL)、视神经脊髓炎(NMO)、弥漫性和复发-缓解型多发性硬化(RRMS)。
目前，靶向CD20和CD3两者的双特异性抗体正在开发中。例如，WO2011028952特别描述了使用Xencor的XmAb双特异性Fc域技术生成的CD3xCD20双特异性分子，WO2014047231描述了使用Regeneron Pharmaceuticals的FcΔAdp技术生成的REGN1979和其他CD3xCD20双特异性抗体，并且Sun等人(2015,Science Translational Medicine 7,287ra70)描述了使用“旋钮入孔(knobs-into-holes)”技术构建的靶向B细胞的抗CD20/CD3T细胞依赖性双特异性抗体。这类双特异性抗体目前正在临床试验中测试用于人体的特定适应症。
正在开发的特别关注的双特异性抗体是艾可瑞妥单抗(epcoritamab)(DuobodyCD3xCD20；GEN3013)(Engelberts et al.,2020,EBioMedicine,Vol.52,102625,WO2016110576和WO2019155008，通过引用并入本文)。
尽管目前有治疗方案可用于治疗CD20+癌症，如B-NHL，但仍需要进一步的治疗选择，因为仍有患者复发或对目前可用的治疗难治。艾可瑞妥单抗是候选药物，其可以增加可能使患有癌症(如B-NHL)的患者获益的多种治疗选择。
因此，本发明的一个目的是提供通过使用本文所述的靶向CD3xCD20的双特异性抗体(如艾可瑞妥单抗)治疗癌症的手段和方法，以及提供本文所述的靶向CD3xCD20的双特异性抗体(如艾可瑞妥单抗)用于治疗癌症。
提供了就此类方法或用途(如用于已知或鉴定为CD20阳性的癌症，如B-NHL)而言有利的具体剂量范围和/或给药方案。更特别地，本文提供了就治疗患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级别B细胞淋巴瘤(FL)的患者而言有利的具体剂量范围和/或给药方案。本文提供的剂量范围和/或给药方案被评估为安全用于人和/或在B-NHL治疗中高度有效。
附图说明
图1.群体PK模型预测靶标介导的药物处置(target-mediated drugdisposition，TMDD)饱和。对于每个剂量，模拟100例虚拟患者，并用盒须图汇总模型预测的TMDD饱和，表示中位数(中间水平条)、第25和第75百分位数(下铰链和上铰链)、1.5*四分位距(须)和离群值(点)。
图2：人PK/PD建模分析概述。
图3：观察和校准模型预测的艾可瑞妥单抗剂量递增试验响应率的比较。观察到的艾可瑞妥单抗剂量递增试验响应率和作为艾可瑞妥单抗暴露量三分位数的函数的90％ CI分别用靠近的圆圈和误差条表示。模型预测的试验响应率和90％预测区间由实线和阴影区显示。
图4：FL的综合PK/PD模型预测的三聚体形成。对于每个剂量，用盒须图汇总用于模拟的100例虚拟患者和模型预测的前84天内形成的三聚体的平均数量(按肿瘤细胞数量归一化)，表示中位数(中间水平条)、第25和第75百分位数(下铰链和上铰链)、1.5*四分位距(须)和离群值(点)。
图5：DLBCL/HGBCL的综合药代动力学/药效学模型预测的三聚体形成。对于每个剂量，模拟艾可瑞妥单抗扩展试验中的100例虚拟患者，并用盒须图汇总模型预测的前84天内形成的三聚体的平均数量(按肿瘤细胞数量归一化)。
图6：FL患者的综合PK/PD模型预测的艾可瑞妥单抗扩展试验响应率。对于每个剂量，模拟艾可瑞妥单抗扩展试验中的100例虚拟患者，并用盒须图汇总模型预测的试验响应率，表示中位数(中间水平条)、第25和第75百分位数(下铰链和上铰链)、1.5*四分位距(须)和离群值(点)。
图7：DLBCL/HGBCL患者的综合PK/PD模型预测的艾可瑞妥单抗扩展试验响应率。对于每个剂量，模拟艾可瑞妥单抗扩展试验中的100例虚拟患者，并用盒须图汇总模型预测的试验响应率，表示中位数(中间水平条)、第25和第75百分位数(下铰链和上铰链)、1.5*四分位距(须)和离群值(点)。
发明详述
本文的术语“免疫球蛋白”是指一类结构相关的糖蛋白，其由两对多肽链组成，一对轻(L)低分子量链和一对重(H)链，所有四条通过二硫键相互连接。免疫球蛋白的结构已得到充分的表征。参见例如Fundamental Immunology Ch.7(Paul,W.,ed.,2nd ed.RavenPress,N.Y.(1989))。简而言之，每条重链通常由重链可变区(本文缩写为VH或VH)和重链恒定区(本文缩写为CH或CH)组成。重链恒定区通常由三个域CH1、CH2和CH3组成。铰链区是重链CH1和CH2域之间的区，并且具有高度柔性。铰链区中的二硫键是IgG分子中两条重链之间相互作用的一部分。每条轻链通常由轻链可变区(本文缩写为VL或VL)和轻链恒定区(本文缩写为CL或CL)组成。轻链恒定区通常由一个域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为高变性区(或高变区，其在结构上确定的环的序列和/或形式上可以是高变的)，也称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL通常由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(另见Chothia andLesk J.Mol.Biol.196,901-917(1987))。除非另有说明或与上下文相矛盾，否则本文的CDR序列是根据IMGT规则定义的(Brochet X.,Nucl Acids Res.2008；36:W503-508 andLefranc MP.,Nucleic Acids Research1999；27:209-212；还参见互联网http地址http://www.imgt.org/)。除非另有说明或与上下文相矛盾，否则在本发明中参考的恒定区中的氨基酸位置是根据EU编号(Edelman et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.1969May；63(1):78-85；Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,FifthEdition.1991NIH Publication No.91-3242)。例如，本文的SEQ ID NO:15根据EU编号列出IgG1重链恒定区的氨基酸位置118-447。
如本文所用，术语“对应于位置……的氨基酸”是指人IgG1重链中的氨基酸位置编号。通过与人IgG1比对，可以发现其他免疫球蛋白中相应的氨基酸位置。因此，一个序列中“对应于”另一序列中的氨基酸或片段的氨基酸或片段是使用标准序列比对程序如ALIGN、ClustalW或类似程序，通常在默认设置下来比对的，并且与人IgG1重链具有至少50％、至少80％、至少90％或至少95％的同一性。如何比对序列或序列中的片段并由此确定与根据本发明的氨基酸位置的序列中的对应位置在本领域中认为是众所周知的。
本发明上下文中的术语“抗体”(Ab)是指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的片段或其任一衍生物，其在典型生理条件下具有特异性结合抗原的能力，有显著时间段的半衰期，如至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约2小时、至少约4小时、至少约8小时、至少约12小时、约24小时或更长、约48小时或更长、约3、4、5、6、7或更多天等，或任何其他相关的功能定义的时期(如足以诱导、促进、增强和/或调节与抗体结合抗原相关的生理反应和/或足以使抗体募集效应器活性的时间)。免疫球蛋白分子的重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合域。如本文所用，术语“抗体结合区”是指与抗原相互作用并包含VH和VL区两者的区。本文使用的术语抗体不仅包含单特异性抗体，还包含多特异性抗体，其包含多种，如两种或更多种，例如三种或更多不同的抗原结合区。抗体(Ab)的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和补体系统的组分，如C1q，C1q是补体激活的经典途径中的第一组分。如上所述，除非另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文中的术语抗体包括作为抗原结合片段的抗体片段，即保留与抗原特异性结合的能力。已经表明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来进行。涵盖在术语“抗体”内的抗原结合片段的实例涵盖包括(i)Fab’或Fab片段，由VL、VH、CL和CH1域组成的单价片段，或如WO2007059782(Genmab)中所述的单价抗体；(ii)F(ab’)2片段，二价片段，其包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段；(iii)主要由VH和CH1域组成的Fd片段；(iv)基本上由抗体单臂的VL和VH域组成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward et al.,Nature341,544-546(1989))，其基本上由VH域组成，也称为域抗体(Holt et al；TrendsBiotechnol.2003Nov；21(11):484-90)；(vi)骆驼或纳米抗体(Revets et al；Expert OpinBiol Ther.2005Jan；5(1):111-24)和(vii)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个域VL和VH由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，从而使它们能够制成单蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链抗体或单链Fv(scFv)，参见例如Bird et al.,Science 242,423-426(1988)和Huston et al.,PNAS USA 85,5879-5883(1988))。除非另有说明或上下文明确指出，否则此类单链抗体涵盖在术语抗体内。尽管此类片段通常包括在抗体的含义内，但它们共同且各自独立地是本发明的独特特点，展示出不同的生物学特性和效用。本文进一步讨论了本发明上下文中的这些和其他有用的抗体片段，以及此类片段的双特异性形式。还应理解，术语抗体，除非另有说明，还包括多克隆抗体、单克隆抗体(mAb)、抗体样多肽、嵌合抗体和人源化抗体，以及保留与抗原(抗原结合片段)特异性结合能力的抗体片段，其由任何已知技术提供，如酶促切割、肽合成和重组技术。产生的抗体可以具有任何同种型。如本文所用，术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的免疫球蛋白类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM)。当本文提及特定的同种型，例如IgG1，该术语不限于特定的同种型序列，例如特定的IgG1序列，但用于指示抗体在序列上更接近该同种型，例如IgG1，而不是其他同种型。因此，例如本发明的IgG1抗体可以是天然存在的IgG1抗体的序列变体，包括恒定区中的变异。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指单分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单结合特异性和亲和力。因此，术语“人单克隆抗体”是指显示单结合特异性的抗体，其具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。人单克隆抗体可以由杂交瘤生成，该杂交瘤包括融合至永生化细胞的从转基因或转染色体非人动物如转基因小鼠获得的B细胞，该非人动物具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。
本发明上下文中的术语“双特异性抗体”或“bs”或“bsAb”是指具有由不同抗体序列定义的两个不同抗原结合区的抗体。双特异性抗体可以是任何形式。
当在本文中使用时，术语“半分子”、“Fab臂”和“臂”是指一个重链-轻链对。
当双特异性抗体描述为包含“衍生自”第一亲本抗体的半分子抗体和“衍生自”第二亲本抗体的半分子抗体时，术语“衍生自”表示双特异性抗体是通过任何已知的方法通过将来自所述第一和第二亲本抗体中的每一个的半分子重组为所得的双特异性抗体产生的。在此上下文中，“重组”不旨在受任何特定重组方法的限制，因此包括用于产生下文所述的双特异性抗体的所有方法，包括例如通过半分子交换(也称为“受控Fab臂交换”)，以及在核酸水平和/或通过在同一细胞中共表达两个半分子进行重组。
当在抗体的上下文中使用时，术语“全长”表示抗体不是片段，而是含有通常在自然界中发现的特定同种型的所有域，例如，IgG1抗体的VH、CH1、CH2、CH3、铰链、VL和CL域。全长抗体可以是工程化的。“全长”抗体的实例是艾可瑞妥单抗。
当在本文中使用时，除非与上下文相矛盾，否则术语“Fc区”是指由免疫球蛋白的两条重链的Fc序列组成的抗体区，其中所述Fc序列至少包含铰链区、CH2域和CH3域。
当在本文中使用时，术语“第一和第二CH3区之间的异二聚体相互作用”是指在第一CH3/第二CH3异二聚体蛋白中第一CH3区和第二CH3区之间的相互作用。
当在本文中使用时，术语“第一和第二CH3区的同二聚体相互作用”是指第一CH3/第一CH3同二聚体蛋白中的第一CH3区和另一个第一CH3区之间的相互作用以及第二CH3/第二CH3同二聚体蛋白中第二CH3区和另一个第二CH3区之间的相互作用。
如本文所用，在抗体与预定抗原结合的上下文中的术语“结合”通常是以对应于当使用作为配体的抗体和作为分析物的抗原，通过例如在OctetHTX仪器中生物层干涉法(BioLayer Interferometry，BLI)技术确定时约10-6M或更小，例如10-7M或更小，如约10-8M或更小，如约10-9M或更小，约10-10M或更小或约10-11M或更小的KD的亲和力的结合，并且其中抗体以对应于KD的亲和力结合预定抗原，该KD比其结合预定抗原或密切相关抗原之外的非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD低至少十倍，如低至少100倍，例如低至少1,000倍，如低至少10,000倍，例如低至少100,000倍。具有较低结合KD的量取决于抗体的KD，使得当抗体的KD非常低时，那么与抗原结合的KD比与非特异性抗原结合的KD低的量可能至少是10,000倍(即抗体是高度特异的)。
如本文所用，术语“KD”(M)是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。如本文所用，亲和力和KD是负相关的，即更高的亲和力旨在指更低的KD，而更低的亲和力旨在指更高的KD。
在优选的实施方案中，本发明的抗体是分离的。如本文所用“分离的抗体”旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。在优选的实施方案中，特异性结合CD20和CD3的分离的双特异性抗体另外基本上不含特异性结合CD20或CD3的单特异性抗体。
如本文所用，术语“CD3”是指人分化簇3蛋白，它是T细胞共受体蛋白复合物的部分并且由四个不同的链构成。也在其他物种中发现CD3，因此，术语“CD3”不限于人CD3，除非与上下文相矛盾。在哺乳动物中，该复合物含有CD3γ(gamma)链(人CD3γ链UniProtKB/Swiss-Prot No P09693或食蟹猴CD3γUniProtKB/Swiss-Prot No Q95LI7)、CD3δ(delta)链(人CD3δUniProtKB/Swiss-Prot No P04234或食蟹猴CD3δUniProtKB/Swiss-Prot NoQ95LI8)、两条CD3ε(epsilon)链(人CD3εUniProtKB/Swiss-Prot No P07766；食蟹猴CD3εUniProtKB/Swiss-Prot No Q95LI5；或恒河猴CD3εUniProtKB/Swiss-Prot No G7NCB9)和CD3ζ-链(zeta)链(人CD3ζUniProtKB/Swiss-Prot No P20963，食蟹猴CD3ζUniProtKB/Swiss-Prot No Q09TK0)。这些链与称为T细胞受体(TCR)的分子缔合并在T淋巴细胞中生成激活信号。TCR和CD3分子共同构成TCR复合物。
“CD3抗体”或“抗CD3抗体”是特异性结合抗原CD3，特别是人CD3ε(epsilon)的抗体。
术语“人CD20”或“CD20”是指人CD20(UniProtKB/Swiss-Prot No P11836)，包括由细胞(包括肿瘤细胞)天然表达或用CD20基因或cDNA转染的在细胞上表达的CD20的任何变体、同种型和物种同源物。物种同源物包括恒河猴CD20(恒河猴(macaca mulatta)；UniProtKB/Swiss-Prot No H9YXP1)和食蟹猴CD20(食蟹猴(macaca fascicularis)；UniProtKBNoG7PQ03)。
“CD20抗体”或“抗CD20抗体”是与抗原CD20，特别是人CD20特异性结合的抗体。
“CD3xCD20抗体”、“抗CD3xCD20抗体”、“CD20xCD3抗体”或“抗CD20xCD3抗体”是双特异性抗体，其包含两个不同的抗原结合区，其中一个与抗原CD20特异性结合，另一个与抗原CD3特异性结合。
本文的术语“DuoBody-CD3xCD20”是指IgG1双特异性CD3xCD20抗体，包含分别在SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25中定义的第一重链和轻链对，并且包含在SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27中定义的第二重链和轻链对。第一重链和轻链对包含与人CD3ε(epsilon)结合的结合区，第二重链和轻链对包含与人CD20结合的结合区。第一结合区包含如SEQ IDNO.6和7中定义的VH和VL序列，并且第二结合区包含如SEQ ID NO.13和14中定义的VH和VL序列。该双特异性抗体可以如WO 2016/110576中所述制备。
本发明还提供包含实施例的抗体的重链、轻链、VL区、VH区或一种或多种CDR的功能变体的抗体。在抗体的上下文下使用的重链、轻链、VL、VH或CDR的功能变体仍然允许抗体保留“参考”和/或“亲本”抗体的至少相当大的比例(至少约90％、95％或更多)的功能特征，包括对CD20和/或CD3的特定表位的亲和力和/或特异性/选择性、Fc惰性和PK参数(如半衰期、Tmax、Cmax)。
此类功能变体通常保留与亲本抗体的相当大的序列同一性和/或重链和轻链的长度基本相似。两个序列之间的同一性百分比是考虑到缺口的数量和每个缺口(其为了实现两个序列的最佳比对而需要引入)的长度，序列共享的相同位置数量的函数(即，同源性％＝相同位置的数目/位置的总数目x100)。两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比可以是例如使用E.Meyers and W.Miller,Comput.Appl.Biosci 4,11-17(1988)的算法确定的，其已纳入ALIGN程序(2.0版)，使用PAM120权重残基表，缺口长度罚分12和缺口罚分4。此外，两个氨基酸序列之间的百分比同一性可以使用Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.48,444-453(1970)算法确定。
示例性变体包括与亲本抗体序列的重链和/或轻链、VH和/或VL和/或CDR区主要相差保守取代的变体；例如，变体中的10个，如9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代可以是保守氨基酸残基取代。
在本发明的上下文中，保守取代可以通过下表中反映的氨基酸类别内的取代来定义：
保守取代的氨基酸残基类别
Figure BDA0003987869340000091
在本发明的上下文中，除非另有说明，否则以下符号用于描述突变；i)给定位置的氨基酸取代写成例如K409R，意指409位的精氨酸取代赖氨酸；ii)对于特定变体，使用特定的三字母或一字母代码，包括代码Xaa和X，以表示任何氨基酸残基。因此，在409位用精氨酸取代赖氨酸被称为：K409R，而在409位赖氨酸被任何氨基酸残基取代称为K409X。如果第409位赖氨酸缺失，则用K409*表示。
术语“表位”是指能够特异性结合抗体的蛋白质决定簇。表位通常由如氨基酸或糖侧链等分子的表面分组组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于，在变性溶剂的存在下，与前者的结合而不是后者的结合会丢失。表位可以包含直接参与结合的氨基酸残基和不直接参与结合的其他氨基酸残基，如被特异性抗原结合肽有效阻断或覆盖的氨基酸残基(换言之，氨基酸残基在特异性抗原结合肽的足迹内)。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中可变区衍生自非人物种(例如衍生自啮齿动物)且恒定区衍生自不同物种如人的抗体。开发用于治疗应用的嵌合单克隆抗体以降低抗体免疫原性。如在嵌合抗体的上下文中使用的术语“可变区”或“可变域”是指包含免疫球蛋白重链和轻链两者的CDR和框架区的区。嵌合抗体可以通过使用Sambrook et al.,1989,Molecular Cloning:A laboratory Manual,New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Ch.15中所述的标准DNA技术产生。嵌合抗体可以是基因或酶工程重组抗体。产生嵌合抗体在技术人员的知识范围内，因此，根据本发明的嵌合抗体的产生可以通过本文所述以外的其他方法进行。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指基因工程改造的非人抗体，其含有人抗体恒定域和经修饰以含有与人可变域高度序列同源性的非人可变域。这可以通过将共同形成抗原结合位点的六个非人抗体互补决定区(CDR)移植到同源人受体框架区(FR)上来实现(参见WO92/22653和EP0629240)。为了完全重建亲本抗体的结合亲和力和特异性，可能需要将来自亲本抗体(即非人抗体)的框架残基替换为人框架区(回复突变)。结构同源性建模可能有助于识别框架区中对抗体结合特性很重要的氨基酸残基。因此，人源化抗体可包含非人CDR序列，主要是人框架区，任选地包含相对于非人氨基酸序列的一个或多个氨基酸回复突变，以及完全人恒定区。在Duobody-CD3XCD20中使用的CD3臂的VH和VL代表人源化抗原结合区。任选地，可以应用不一定是回复突变的额外氨基酸修饰以获得具有优选特征(如亲和力和生化特性)的人源化抗体。
如本文所用，术语“人抗体”是指具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体可以包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。在Duobody-CD3XCD20中使用的CD3臂的VH和VL代表人抗原结合区。本发明的人单克隆抗体可以通过多种技术产生，包括常规单克隆抗体方法，例如Kohler andMilstein,Nature 256:495(1975)的标准体细胞杂交技术。尽管体细胞杂交程序是优选的，但原则上，可以使用其他产生单克隆抗体的技术，例如，B淋巴细胞的病毒或致癌转化或使用人抗体基因库的噬菌体展示技术。用于制备分泌人单克隆抗体的杂交瘤的合适动物系统是鼠系统。在小鼠中产生杂交瘤是非常成熟的过程。用于分离免疫的脾细胞进行融合的免疫方案和技术是本领域已知的。融合配偶体(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。因此，人单克隆抗体可以例如使用携带部分人免疫系统而不是小鼠或大鼠系统的转基因或转染色体小鼠或大鼠产生。因此，在实施方案中，人抗体获自携带人种系免疫球蛋白序列而不是动物免疫球蛋白序列的转基因动物，如小鼠或大鼠。在此类实施方案中，抗体衍生自引入动物中的人种系免疫球蛋白序列，但最终抗体序列是通过体细胞超突变和内源性动物抗体机制的亲和力成熟进一步修饰所述人种系免疫球蛋白序列的结果，参见例如Mendezetal.1997Nat Genet.15(2):146-56。在Duobody-CD3XCD20中使用的CD3臂的VH和VL代表人抗原结合区。
术语“还原条件”或“还原环境”是指底物，这里是抗体铰链区中的半胱氨酸残基，更可能被还原而不是被氧化的条件或环境。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)旨在指代已引入表达载体，例如编码本发明抗体的表达载体的细胞。重组宿主细胞包括例如转染瘤，如CHO、CHO-S、HEK、HEK293、HEK-293F、Expi293F、PER.C6或NS0细胞以及淋巴细胞。
术语“治疗”是指施用有效量的本发明的治疗活性抗体以缓解、改良、阻止或根除(治愈)症状或疾病状态。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效达到所需治疗结果的量。抗体的治疗有效量可根据个体的因素，如疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体在个体中引发所需反应的能力等而变化。治疗有效量也是其中抗体或抗体部分的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。
如本文所用，术语“缓冲剂”表示药学上可接受的缓冲剂。术语“缓冲剂”涵盖将溶液的pH值保持在例如可接受范围内的那些试剂，并且包括但不限于醋酸盐、组氨酸、
Figure BDA0003987869340000111
(三(羟甲基)氨基甲烷)、柠檬酸盐、琥珀酸盐、羟乙酸盐等。通常，如本文所用的“缓冲剂”具有适用于约5至约6、优选约5.5的pH范围的pKa和缓冲能力。
如本文所用，“表面活性剂”是通常用于药物配制剂中以防止药物吸附到表面和/或聚集的化合物。此外，表面活性剂降低了两种液体之间或液体和固体之间的表面张力(或界面张力)。例如，示例性表面活性剂在以非常低的浓度(例如，5％w/v或更小，如3％w/v或更小，如1％w/v或更小，如0.4％w/v或更小，如低于0.1％w/v或更小，如0.04％w/v)存在时可以显著降低表面张力。表面活性剂是两亲性的，这意味着它们通常由亲水和疏水或亲油基团构成，因此能够在水溶液中形成胶束或类似的自体组装结构。已知的药用表面活性剂包括甘油单油酸酯(glycerol monooleate)、苄索氯铵(benzethonium chloride)、多库酯钠(sodium docusate)、磷脂(phospholipids)、聚烷基醚(polyethylene alkyl ethers)、月桂基硫酸钠(sodium lauryl sulfate)和三辛精(tricaprylin)(阴离子表面活性剂)；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、柠檬酰亚胺(citrimide)、西吡氯铵(cetylpyridiniumchloride)和磷脂(阳离子表面活性剂)；和α生育酚、单油酸甘油酯(glycerolmonooleate)、肉豆蔻醇(myristyl alcohol)、磷脂、泊洛沙姆(poloxamers)、聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(polyoxyethylene castoroil derivative)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(polyoxyethylene sorbintan fattyacid ester)、聚氧乙烯硬脂酸酯(polyoxyethyl enesterarate)、聚乙二醇羟基硬脂酸酯(polyoxyl hydroxystearate)、聚乙二醇甘油酯(polyoxylglycerides)、聚山梨酯(polysorbates)如聚山梨酯20或聚山梨酯80、丙二醇二月桂酸酯(propylene glycoldilaurate)，丙二醇单月桂酸酯(propylene glycol monolaurate)、脱水山梨糖醇酯蔗糖棕榈酸酯(sorbitan esters sucrose palmitate)、蔗糖硬脂酸酯(sucrose stearate)、三辛精(tricaprylin)和TPGS(非离子和两性离子表面活性剂)。
本文中感兴趣的“稀释剂”是药学上可接受的(对人施用安全且无毒)并且可用于制备药物组合物的稀释物。优选地，本发明组合物的此类稀释物仅稀释抗体浓度而不稀释缓冲剂和稳定剂。因此，在优选的实施方案中，稀释剂含有与本发明的药物组合物中存在的相同浓度的缓冲剂和稳定剂。进一步的示例性稀释剂包括无菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH缓冲溶液(优选为醋酸盐缓冲剂)、无菌生理盐水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在优选的实施方案中，稀释剂包含醋酸盐缓冲剂和山梨糖醇或基本上由醋酸盐缓冲剂和山梨糖醇组成。
术语“药物组合物”和“药物配制剂”在本文中可互换使用。
实施方案
在一个方面，本发明提供了治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，该方法包括向有此需要的受试者皮下(sc)施用双特异性抗体，该双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中所述双特异性抗体以至少24mg的剂量施用。
在另一方面，本发明提供了治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，该方法包括向有此需要的受试者皮下施用为具有惰性Fc区的全长抗体的双特异性抗体，该双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中所述双特异性抗体以至少24mg的剂量施用。
在又一方面，本发明提供了治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，该方法包括向有此需要的受试者皮下施用为全长抗体的双特异性抗体，该双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中所述双特异性抗体以至少24mg的剂量施用。
在另一方面，本发明提供了治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，该方法包括向有此需要的受试者皮下施用包含惰性Fc区的双特异性抗体，该双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中所述双特异性抗体以至少24mg的剂量施用。
可以理解的是，当本文提及治疗方法，即治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，该方法包括向有此需要的人受试者皮下施用根据本发明的双特异性抗体，其优选为全长抗体和/或包含惰性Fc区时，措辞不同地，也提及根据本发明的双特异性抗体，用于治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)，该用途包含向有此需要的人受试者皮下施用根据本发明的双特异性抗体，其优选为全长抗体和/或包含惰性Fc区。因此，在本文提及用如本文定义的靶向CD3和CD20的双特异性抗体治疗B-NHL的方法的情况下，也提及所述靶向CD3和CD20的双特异性抗体用于治疗人受试者的B-NHL。
在进一步的方面，本发明提供了治疗B-NHL的方法，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，其中所述第一抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.1、2和3中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.4中所列序列、序列GTN和如SEQ ID NO.5中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3，以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，其中所述第二抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.8、9和10中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.11中所列序列、序列DAS和如SEQ ID NO.12中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。
在还进一步的方面，本发明提供了治疗B-NHL的方法，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6；并且其中可变轻链区包含SEQ IDNO:7；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14。
非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一种疾病实体，其特征在于来自淋巴样组织的细胞的恶性转化。本文定义的B细胞来源的NHL(“B-NHL”或“B细胞NHL”)在NHL的更大背景下构成一组不同的赘生物。由病理学家采用标准分类标准(基于组织活检)对这些进行诊断，并确定B-NHL亚型的区别，标准分类标准包括组织学形态学特征、表面标志物(免疫组织化学/流式细胞术)、染色体异常/易位(核型分析、荧光原位杂交(FISH))和分子(基因突变)结果。基于WHO分类对B-NHL进行诊断和分类，其通过引用并入本文(Swerdlow SH,Campo E,HarrisNL,et al.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(Revised ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2017)；Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2008))。
简而言之，B-NHL通常分为惰性(生长缓慢)和侵袭性亚型。侵袭性B-NHL具有高sKi67表达，而惰性B-NHL具有相对较低的sKi67表达。概括地说，惰性淋巴瘤对治疗有响应，并保持处于控制下(缓解)，具有多年的长期生存但未治愈。侵袭性淋巴瘤通常需要强化治疗，其中一些具有永久治愈的良好前景。侵袭性B-NHL包括：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)。惰性B-NHL包括滤泡性淋巴瘤(FL)、边缘区淋巴瘤(MZL)和小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)。弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的NHL类型，占所有NHL诊断的大约30％-40％，其次是FL(占所有NHL诊断的20％-25％)。大多数B细胞淋巴瘤表达B细胞标志物，如CD19、CD20、CD22和CD79b。B细胞恶性肿瘤的生物学异质性反映在个体疾病的临床过程和结果中。惰性疾病，如FL、MZL、SLL演变缓慢，具有8-10年的中位生存。相反，更具侵袭性的疾病如DLBCL/HGBCL，如果不及时治疗，具有6个月的中位生存。大多数患者诊断有淋巴瘤时的中位年龄为大约60-65岁(WHO，2008)。
因此，根据本发明的方法进一步包括B-NHL的治疗，其中所述B-NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、边缘区淋巴瘤(MZL)和小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)。
在另一方面，本文提供的根据本发明的方法包括FL、HGBCL或DLBCL的治疗。在又一方面，本文提供的根据本发明的方法包括FL的治疗。在另一方面，本文提供的根据本发明的方法包括HGBCL的治疗。在另一方面，本文提供的根据本发明的方法包括DLBCL的治疗。在另一进一步的方面，本文提供的根据本发明的方法包括HGBCL和/或DLBCL的治疗。在又一方面，本文提供的根据本发明的方法包括FL、MCL、HGBCL或DLBCL的治疗。在另一方面，本文所述的根据本发明的方法包括MCL的治疗。
本文定义的“DLBCL/HGBCL”或“DLBCL和HGBCL”或“DLBCL或HGBCL”是指分类为弥漫性大B细胞淋巴瘤或高级别B细胞淋巴瘤的B-NHL，其根据Swerdlow SH,Campo E,HarrisNL,et al.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2008)和Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,etal.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(Revised ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2017)中定义的WHO分类，通过引用并入本文。
本文定义的“FL”(即滤泡性淋巴瘤)是指起源于特定类型B细胞的B-NHL，该B细胞称为中心细胞和中心母细胞，通常形成滤泡或滤泡样结构。FL通常病程缓慢，持续数年基本不变。FL可以根据Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification ofTumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues(ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2008)和Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of Tumours ofHaematopoietic and Lymphoid Tissues(Revised ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2017)中定义的WHO分类进行分类，通过引用并入本文。
“MCL”，即套细胞淋巴瘤，包括具有染色体易位t(11；14)导致细胞周期蛋白D1表达的B细胞淋巴瘤，还包括CD5+。本文定义的MCL包括分类为MCL的B-NHL，其根据Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic andLymphoid Tissues(ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2008)和Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and LymphoidTissues(Revised ed.4th).Lyon,France:IARC Press(2017)中定义的WHO分类，通过引用并入本文。
关于待施用至少24mg的双特异性抗体的剂量或任何其他规定剂量，可以理解为该剂量是指代表全长抗体的双特异性抗体的量，如实施例部分中定义的艾可瑞妥单抗。因此，虽然说法不同，可以将根据本发明施用的双特异性抗体的剂量称为施用至少24mg的双特异性抗体的剂量，其中所述剂量相当于至少24mg的艾可瑞妥单抗的剂量。当例如，将使用的抗体与全长抗体(如艾可瑞妥单抗)的分子量有显著差异时，可以确定待施用抗体的量。本文定义的因此所需的抗体量可以通过将抗体的分子量除以全长抗体(如艾可瑞妥单抗)的重量，并将其结果乘以本文所述的指定剂量来计算。只要双特异性抗体在血浆半衰期、Fc惰性和/或对CD3和CD20的结合区特征方面(即在CDR和表位结合特征方面)与Duobody CD3xCD20具有高度相似的特征，例如Duobody CD3xCD20的功能变体，则可以根据本发明考虑此类抗体，并以与本文定义的全长抗体(如艾可瑞妥单抗)的剂量相对应的剂量施用。
如所述，与CD3和CD20结合的双特异性抗体待皮下施用。因此，双特异性抗体在药物组合物中配制，使得其与皮下(s.c.)施用相容，即具有允许以本文定义的选定剂量进行药学上可接受的s.c.施用的配制剂和/或浓度。优选通过注射进行皮下施用。例如，已经描述与可以考虑的皮下配制剂相容的Duobody CD3xCD20的配制剂(例如WO2019155008中所述，通过引用并入本文)。根据本发明的双特异性抗体的优选配制剂可以使用三水乙酸钠、乙酸、氢氧化钠、山梨醇、聚山梨酯80、注射用水配制，具有5.5的pH。
根据本发明的双特异性抗体的适当药物组合物可以包含双特异性抗体、20-40mM醋酸盐、140-160mM山梨醇和表面活性剂(如聚山梨酯80)，并且具有5.3-5.6的pH。根据本发明的用于双特异性抗体的适当药物配制剂可能包含浓度范围为5-100mg/mL的抗体，例如48或60mg/mL的双特异性抗体、30mM醋酸盐、150mM山梨醇、0.04％w/v聚山梨酯80，并且具有5.5的pH。此类配制剂可以用例如配制剂缓冲剂适当稀释，以允许适当的剂量和皮下施用。在任何情况下，适当选择药物组合物的体积，以允许抗体的皮下施用。例如，待施用体积的范围为约0.3mL至3mL，如0.3mL至3mL。待施用体积可以是0.5mL、0.8mL、1mL、1.2mL、1.5mL、1.7mL、2mL或2.5mL。待施用体积可以是0.5mL。待施用体积可以是0.8mL。待施用体积可以是1.2mL。待施用体积可以是1.5mL。待施用体积可以是1.7mL。待施用体积可以是2mL。待施用体积可以是2.5mL。在一个实施方案中，用于s.c.施用的优选体积为约1mL。在另一个实施方案中，用于s.c.施用的优选体积为1mL。
如所述，根据本发明的方法(或CD3xCD20抗体的用途)是用于治疗患有B-NHL的人患者。可以理解，根据本发明的方法可能是首次，也可能是提供给此类患者的首次治疗的一部分。然而，患者可能已经经受B-NHL的既往治疗。既往治疗可以包括一种或多种化学疗法、放射疗法、免疫疗法和靶向疗法或其组合，但可以不限于这些。最常见的护理标准包括用CD20单克隆抗体、烷化剂和蒽环类药物单独或联合治疗。可以理解，根据本发明的方法和用途也可以联合其他合适的治疗使用。
例如，用于首次治疗侵袭性NHL的最常见化疗组合称为CHOP并且含有4种药物：环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松。与单独的CHOP(也称为R-CHOP)相比，添加抗CD20单克隆抗体(如利妥昔单抗)已显示出改善。用R-CHOP诱导是DLBCL一线治疗的护理标准，也是FL中更多可用的一线护理标准治疗之一。在DLBCL中，二线治疗包括强化救助治疗(利妥昔单抗/地塞米松/高剂量阿糖胞苷/顺铂[R-DHAP]、利妥昔单抗/异环磷酰胺/卡铂/依托泊苷[R-ICE]或利妥昔单抗/吉西他滨/地塞米松/顺铂[R-GDP])，随后，如果化疗敏感，则进行高剂量化疗与自体造血干细胞移植(HDT-ASCT)。对于因年龄或合并症而不符合接受强化救助治疗和HDT-ASCT的DLBCL患者，二线治疗包括利妥昔单抗/吉西他滨/奥沙利铂(R-GemOx)和利妥昔单抗/苯达莫司汀(RB)。DLBCL晚期复发没有明确的护理标准，但干预包括同种异体造血干细胞移植、来那度胺、伊布替尼和嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法(Chavez et al.,Best Pract Res Clin Haematol,2018Jun；31(2):135-146)。
因此，在进一步的实施方案中，在根据本发明的方法中，患有B-NHL的人受试者在根据本发明的治疗之前已经接受至少一线治疗。在另一个实施方案中，患有B-NHL的人受试者在根据本发明的治疗之前已经接受一线治疗。在另一个进一步的实施方案中，患有B-NHL的人受试者在根据本发明的治疗之前已经接受两线治疗。在又一个进一步的实施方案中，患有B-NHL的人受试者在根据本发明的治疗之前已经接受三线治疗。在另一个进一步的实施方案中，患有B-NHL的受试者在根据本发明的治疗之前已经接受超过三线治疗。在另一个进一步的实施方案中，患有B-NHL的受试者在根据本发明的治疗之前已经接受1、2、3或更多线治疗。在进一步的实施方案中，既往治疗线包括R-CHOP。在又一个进一步的实施方案中，既往治疗线包括CAR-T细胞疗法。
将患有B-NHL的人受试者分类为CD20阳性癌症。因此，此类人受试者可能接受的既往癌症治疗包括抗CD20 mAb，也可能包括靶向CD20的工程T细胞，例如CAR-T疗法(SchusterSJ,Bishop MR,Tam CS,et al.Tisagenlecleucel in adult relapsed or refractorydiffuse large B-cell lymphoma.N Engl J Med.2019；380(1):45-56)。在此类治疗或任何其他治疗期间，B-NHL可能对所述治疗难治或复发。因此，在本发明的一个方面，所述人受试者在用双特异性抗体治疗前已经接受用CD20单特异性抗体，如利妥昔单抗治疗。此外，在上述既往CD20单特异性抗体治疗期间，B-NHL癌症复发，或B-NHL癌症对所述治疗难治。此类既往CD20单特异性抗体治疗可能是其中以组合方法使用CD20单特异性抗体的治疗。
在进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以至少40mg的剂量施用。在另一个进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以范围为30mg至100mg或35mg至90mg的剂量施用。更优选地，在另一个进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以范围为40mg至70mg的剂量施用。在另一个进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以至少为48mg的剂量施用。在另一个进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以至少为60mg的剂量施用。也可以考虑以60mg的剂量施用所述双特异性抗体。在另一个实施方案中，所述双特异性抗体以72mg的剂量施用。在又一个进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以84mg的剂量施用。
在还进一步的实施方案中，所述双特异性抗体以40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67或69mg的剂量施用。在优选的实施方案中，所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
所述剂量优选每周施用，并且所述剂量优选施用(至少)4次。在所述每周施用后，施用间隔可以降低至每两周施用一次，也称为双周施用。此类双周施用可以进行(至少)6次。在所述双周施用后，间隔时间可以进一步降低至每四周一次。可以进行此类每四周施用持续延长的时期。
可以理解，在上述情况下，如上所提及的本文的所述剂量也可以称为全剂量或固定剂量(flat dose)，其中例如，所述每周剂量、所述每两周剂量和/或所述每四周剂量以相同的水平施用。因此，当选择48mg的剂量时，优选在每个每周施用、每个双周施用和每个每四周施用，每次施用相同的48mg剂量。在施用所述剂量(可以称为全剂量或固定剂量)之前，可以施用引发剂量(priming dose)或者引发和随后的中间(第二引发)剂量。这可能是有利的，因为它可以有效减轻CRS风险和严重性，这是用根据本发明的结合CD3和CD20的双特异性抗体治疗期间可能发生的副作用。与固定剂量或全剂量相比，此类引发剂量或引发和中间剂量的剂量较低。
因此，在根据本发明的方法或用途中，在所述每周施用前，可以施用所述双特异性抗体的引发剂量。所述引发剂量优选在施用所述每周剂量的第一剂之前一周施用。可以选择在20-2000μg范围，优选地在50-1000μg范围，更优选地在70-350μg范围的引发剂量。可以选择的引发剂量为80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、350、400、450、500、600、700、800、900或1000μg。可以选择的优选引发剂量为160μg的全长双特异性抗体。
此外，在根据本发明的方法或用途中，在施用所述引发剂量后和施用所述每周剂量前，可以施用所述双特异性抗体的中间剂量。所述引发剂量优选施用2周，并且所述中间剂量施用1周，然后施用所述每周剂量的第一剂。通常从引发剂量与固定剂量或全剂量之间的范围中选择所述中间剂量。所述中间剂量可以选择在200-8000μg范围内，或优选在400-4000范围内，更优选在600-2000μg范围内。可以选择的中间剂量为200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500或1600μg。可以选择的优选中间剂量为800μg的全长双特异性抗体。
因此，在另一个实施方案中，本发明的方法或用途中可能考虑的有利给药方案可能包括以28天的周期皮下施用双特异性抗体，其中
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
在又进一步的实施方案中，本发明的方法和用途中可能考虑的有利给药方案可能包括以28天周期皮下施用双特异性抗体，其中
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
在另一个实施方案中，本发明的方法和用途中可能考虑的有利给药方案可能包括以28天的周期皮下施用双特异性抗体，其中
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用60mg剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
在又一个进一步的实施方案中，本发明的方法和用途中可能考虑的有利给药方案包括以28天的周期皮下施用双特异性抗体，其中
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用60mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
在一个实施方案中，替代地，在第一周期的第1天和第8天，选择80μg的引发剂量和800μg的中间剂量。在一个实施方案中，替代地，在第一周期的第1天和第8天，选择80μg的引发剂量和1200μg的中间剂量。在一个实施方案中，替代地，在第一周期的第1天和第8天，选择80μg的引发剂量和1600μg的中间剂量。在另一个实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，选择160μg的引发剂量和1200μg的中间剂量。在另一个实施方案中，在第一周期的第1天和第8天，选择160μg的引发剂量和1600μg的中间剂量。
如所述，此类用途和方法有利于B-NHL的治疗，更优选地FL、DLBCL和/或HGBCL的治疗。使用如上概述的治疗方案连续维持根据本发明的所述治疗。当发展疾病进展、发生不可接受的毒性或患者死亡时，可以终止治疗。
当在人受试者中使用利用基于免疫细胞和双特异性抗体的方法(通过激活免疫效应细胞，如通过接合CD3发挥作用)的手段和方法时，可能发生细胞因子释放综合征(CRS)(Lee et al.,Biol Blood Marrow Transplant.2019Apr；25(4):625-638，其通过引用并入本文)。因此，CRS缓解在根据本发明的方法和用途中是优选的。作为CRS缓解的部分，根据本发明，在施用至少24mg剂量(即全剂量或固定剂量)前，高度优选选择引发剂量和/或中间剂量。CRS可以根据标准实践进行分类(例如，如Lee et al.,Biol Blood MarrowTransplant.2019Apr；25(4):625-638中所概述，其通过引用并入本文)。CRS可能包括细胞因子，例如促炎性细胞因子，例如IL-6、TNF-α或IL-8的过度释放，可能导致不良反应，如发热、恶心、呕吐和寒战。因此，尽管双特异性抗体(如艾可瑞妥单抗)具有独特的抗肿瘤活性，但其免疫作用方式可能触发不必要的“副作用”，即诱导不必要的炎症反应。因此，患者可以进一步经受合并治疗、防治和/或前驱用药(premedication)，例如镇痛药、解热药和/或抗炎药物，以减轻可能的CRS症状。
在一个实施方案中，根据本发明的方法和用途中的所述人受试者用细胞因子释放综合征的防治治疗。优选地，此类防治包括皮质类固醇的施用。在一个实施方案中，所述防治与双特异性抗体在同一天施用。所述防治也可在第二天施用，更优选地在随后的第2天和第3天施用。任选地，所述防治可以进一步在第4天施用，可以理解，在与进一步用药(如防治)相关时，第2、3和4天是相对于第1天施用的双特异性抗体的施用。因此，当例如在第15天的周期中施用抗体并施用防治时，相当于第2、3和4天的所述防治是周期的第16、17和18天。在进一步的实施方案中，所述防治是在双特异性抗体施用当天和随后的第2-3天施用，并且第4天是任选的。当所述防治与双特异性抗体在同一天施用时，所述防治优选在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。可能优选的皮质类固醇是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量或其等效物，包括口服剂量。
此外，在一个实施方案中，根据本发明的方法和用途中的人受试者用前驱用药治疗以减少对注射的反应。在一个实施方案中，所述前驱用药包括抗组胺药的施用。在另一个实施方案中，所述前驱用药包括解热药的施用。在进一步的实施方案中，所述前驱用药包括全身性抗组胺药和解热药。可以选择的抗组胺药是苯海拉明，例如为50mg的静脉内或口服剂量或其等效物。可以选择的解热药是对乙酰氨基酚，例如为650-1000mg的口服剂量或其等效物。更优选地，所述前驱用药与双特异性抗体在同一天施用，更优选在双特异性抗体注射前，如在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。
可以理解，所述前驱用药和/或防治将至少在治疗的初始阶段施用。更优选地，在双特异性抗体的前4次施用期间。例如，所述防治可以在双特异性抗体施用的首个28天周期内按上文所述施用。所述前驱用药优选地在所述第一个周期期间施用。
通常，初始治疗期间的反应风险在数次施用后消退，例如前4次施用(第一周期)后消退。因此，当人受试者未经历CRS时，可以停止CRS的防治用药。然而，优选地，当人受试者经历大于1级的CRS时，可以继续CRS防治。同样，前驱用药也任选地继续。
在进一步的实施方案中，在如本文所述的根据本发明的方法和用途中，当人受试者在周期1中第4次施用双特异性抗体后经历大于1级的CRS时，所述防治在第二28天周期期间施用。此外，当人受试者在先前周期的双特异性抗体末次施用中经历大于1级的CRS时，所述防治在后续周期期间继续。任何前驱用药可以任选地在第2周期期间施用。进一步的前驱用药也可以任选地在后续周期期间施用。
在一个实施方案中，施用CRS的前驱用药和防治，包括抗组胺药，所述抗组胺药可以是苯海拉明，例如为50mg的静脉内或口服剂量或其等效物，以及解热药，所述解热药可以是对乙酰氨基酚，例如为650-1000mg的口服剂量或其等效物，以及施用皮质类固醇，该皮质类固醇可以是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量或其等效物，所述前驱用药和防治在双特异性抗体施用前30-120分钟施用。在随后的第2天、第3天和任选地第4天，施用进一步的防治，包括全身施用皮质类固醇，该皮质类固醇可以是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量或其等效物。优选地，在随后的第2、3和4天，施用所述进一步的防治，包括全身施用皮质类固醇，该皮质类固醇可以是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量或其等效物。根据本发明，此类前驱用药和防治优选地在双特异性抗体的前4次施用期间施用。例如，在如本文所述的首个28天周期的双特异性抗体施用期间。此外，后续周期，如在先前周期的末次施用期间发生大于1级的CRS，可以包括相同的施用时间表，其中作为施用时间表的部分的前驱用药是任选的。
在本文提供的有利剂量和/或治疗方案下，CRS可以得到良好管理，同时允许有效控制和/或治疗B-NHL。如实施例部分所示，在本文所述的方法和用途中，在所述人受试者中，可能发生可管理的细胞因子释放综合征CRS。接受根据本发明的治疗的人受试者可能具有根据标准实践定义的1级的CRS。接受根据本发明的治疗的人受试者可能具有根据标准实践定义的2级的可管理的CRS。因此，接受根据本发明的治疗的人受试者可能具有根据标准实践定义的1级或2级的可管理的CRS。根据CRS的标准分类，1级CRS包括发热至至少38℃、无低血压、无缺氧，并且2级CRS包括发热至至少38℃加低血压，不需要血管加压药和/或缺氧，需要低流量鼻插管吸氧或吹氧。这种可管理的CRS可发生在第1周期。接受根据本发明的治疗的人受试者在所述治疗期间也可能具有根据标准实践定义的大于2级的CRS。因此，接受根据本发明的治疗的人受试者在所述治疗期间也可能具有根据标准实践定义的3级的CRS。此类可管理的CRS可能在周期1和后续周期期间进一步发生。
所述人受试者在根据本发明的方法和用途中可能经历发热。还可能发生疲乏和注射部位反应。人受试者可能经历神经毒性、部分性癫痫发作、与CRS相关的失写症或与CRS相关的意识模糊状态。此外，可以观察到所述人受试者不出现肿瘤溶解综合征。
由于艾可瑞妥单抗的安全性概况，可能不需要患者住院来施用艾可瑞妥单抗。在进一步的实施方案中，用于B-NHL治疗的根据本发明的方法和用途涉及在门诊环境中施用艾可瑞妥单抗。在门诊环境中施用不涉及住院。在另一个实施方案中，患者仅为首次全剂量施用而住院。例如在周期1的第15天施用所述首次全剂量，其中第1天和第8天分别涉及递增剂量，如本文所述。在本文所述的方法和用途中，用于门诊使用的艾可瑞妥单抗的优选剂量包括全剂量，其可以高达60mg。更优选地，门诊施用的剂量为48mg。在另一个实施方案中，用于B-NHL治疗的根据本发明的方法和用途涉及仅仅在门诊环境中施用艾可瑞妥单抗。
如本文所述，在根据本发明的方法和用途中，旨在靶向CD3和CD20的根据本发明的双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列。
CDR1、CDR2和CDR3区可以使用本领域已知的方法从可变重链和轻链区鉴定。可以根据IMGT对所述可变重链和轻链区的CDR区进行注释(参见Lefranc MP.et al.,NucleicAcids Research,27,209-212,1999]and Brochet X.Nucl.Acids Res.36,W503-508(2008))。因此，在根据本发明的方法和用途中还公开，旨在靶向CD3和CD20的根据本发明的双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，其中所述第一抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.1、2和3中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.4中所列序列、序列GTN和如SEQ ID NO.5中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3，以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，其中所述第二抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.8、9和10中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.11中所列序列、序列DAS和如SEQ ID NO.12中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。
在又进一步的实施方案中，在根据本发明的方法和用途中，双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID NO:6；并且其中可变轻链区包含SEQ IDNO:7；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中可变重链区包含SEQ ID No:13；并且其中可变轻链区包含SEQ ID No:14。
如所述，根据本发明的双特异性抗体最优选是全长抗体，并且可以具有惰性Fc区。更优选地，CD3的第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体，如WO2015001085中描述的H1L1(其通过引用并入本文)和/或CD20的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体，如WO2004035607中描述的克隆7D8(其通过引用并入本文)。双特异性抗体可以由两个半分子抗体产生。两个半分子抗体中的每一个包含，例如SEQ ID NO.6和7以及SEQ ID NO.13和14中列出的各自第一和第二结合臂。半抗体可在CHO细胞中产生，并且双特异性抗体可以通过例如Fab臂交换生成。在一个实施方案中，根据本发明的所述双特异性抗体是Duobody CD3xCD20的功能变体。
可以根据本发明考虑各种恒定区或其变体。然而，最优选地，根据本发明的双特异性抗体包含人IgG1恒定区，如SEQ ID NO.15中定义的人IgG1恒定区，或任何其他合适的IgG1同种异型。如所述，双特异性抗体的第一结合臂优选地衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体，因此包含λ轻链恒定区。更优选地，本文定义的所述第一结合臂包含如SEQ IDNO.22中定义的λ轻链恒定区。此外，所述双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体，因此包含κ轻链恒定区。更优选地，所述第二结合臂包含如SEQ ID NO.23中定义的κ轻链恒定区。
可以理解，因为恒定区是双特异性抗体的一部分，所述恒定区可能包含修饰以允许高效形成/生产双特异性抗体和/或提供惰性Fc区。此类修饰是本领域已知的。
本领域已知双特异性抗体的不同格式和用途(由Kontermann；Drug DiscovToday,2015Jul；20(7):838-47and；MAbs,2012Mar-Apr；4(2):182-97综述)并且不一定限于任何特定的双特异性格式或生产其的方法。例如，双特异性抗体可以包括但不限于：(i)具有互补CH3域以强制异源二聚化的双特异性抗体；)，所谓的旋钮入孔分子(Genentech，WO9850431)、CrossMAbs(Roche，WO2011117329)或静电匹配分子(Amgen，EP1870459和WO2009089004；Chugai，US201000155133；Oncomed，WO2010129304)。
优选地，本发明的双特异性抗体包含Fc区，包括具有第一Fc序列的第一重链，其包含第一CH3区，以及具有第二Fc序列的第二重链，其包含第二CH3区，其中第一和第二CH3区的序列不同，并且使得所述第一和第二CH3区之间的异二聚体相互作用强于所述第一和第二CH3区的同源二聚体相互作用中的每一个。关于这些相互作用以及如何实现这些相互作用的更多详细信息在WO2011131746和WO2013060867(Genmab)中提供，其通过引用在此并入。在优选的实施方案中，根据本发明的方法和用途中的双特异性抗体在所述第一重链中包含(i)对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的F405的位置处的氨基酸L，并且在所述第二重链中包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的K409的位置处的氨基酸R为R，反之亦然。
根据本发明，抗体可能包含Fc区的修饰以使抗体的Fc区为惰性或非活化。因此，本文公开的双特异性抗体，可能修饰一条或两条重链，使得相对于不具有此类修饰的双特异性抗体，该抗体诱导Fc介导的效应器功能的程度更低。Fc介导的效应器功能可以通过测定T细胞上Fc介导的CD69表达(即CD3抗体介导的Fcγ受体依赖性CD3交联导致的CD69表达)、通过与Fcγ受体结合、通过与C1q结合或通过诱导Fc介导的FcγR交联来测量。特别地，可以修饰重链恒定序列，使得Fc介导的CD69表达在与野生型(未修饰)抗体相比时降低至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少99％或100％，其中所述Fc介导的CD69表达在基于PBMC的功能测定中测定，例如WO2015001085的实施例3中所述。重链和轻链恒定序列的修饰也可能导致C1q与所述抗体的结合降低。与未修饰抗体相比，该降低可以为至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或100％，并且可以通过ELISA测定C1q结合。此外，可以修饰Fc区使得所述抗体的Fc介导的T细胞增殖与未修饰的抗体相比降低至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少99％或100％，其中所述T细胞增殖在基于PBMC的功能测定中测量。可以经修饰的氨基酸位置的实例，例如在IgG1同种型抗体中，包括位置L234和L235。因此，根据本发明的抗体可以包含第一和第二重链，并且其中在第一和第二重链中，对应于根据Eu编号的人IgG1重链中的位置L234和L235的位置处的氨基酸残基分别为F和E。此外，D265A氨基酸取代可以降低与所有Fcγ受体的结合，并防止ADCC(Shields et al.,2001,J.Biol.Chem.(276):6591-604)。因此，根据本发明的抗体可以包含第一和第二重链，其中在第一和第二重链中，对应于根据Eu编号的人IgG1重链中的位置D265的位置处的氨基酸残基为A。
在根据本发明的方法和用途中，提供了最优选的双特异性抗体，其中所述第一和第二重链，在对应于人IgG1重链中的位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸分别为F、E和A。在这些位置具有这些氨基酸的抗体是具有惰性Fc区或非活化Fc区的抗体的实例。
在本申请中，具有三个氨基酸取代L234F、L235E和D265A的组合和另外地本文公开的K409R或F405L突变的抗体可以分别用后缀“FEAR”或“FEAL”命名。
如所述，本文将野生型IgG1重链恒定区的氨基酸序列鉴别为SEQ ID NO:15。与上述公开的实施方案一致，本发明的抗体可以包含携带F405L取代的IgG1重链恒定区，并且可以具有SEQ ID NO:17中所列的氨基酸序列和/或携带K409R取代的IgG1重链恒定区，并且可以具有SEQ ID NO:18中所列的氨基酸序列，并且具有使Fc区惰性或非活化的进一步取代。因此，包含在根据本发明的双特异性抗体中的最且高度优选的IgG1重链恒定区的组合是携带L234F、L235E、D265A和F405L取代的IgG1重链恒定区的氨基酸序列(如本文鉴定为SEQ IDNO:19)和携带L234F、L235E、D265A和K409R取代的IgG1重链恒定区的氨基酸序列(如本文鉴定为SEQ ID NO:20)。
在一个进一步高度优选的实施方案中，本文所述的方法和用途中的双特异性抗体包含具有分别如SEQ ID NO.24和25中定义的重链和轻链的第一结合臂，以及具有如SEQ IDNO.26和27中定义的重链和轻链的第二结合臂。此类抗体在本文中可以称为DuobodyCD3xCD20。此外，此类抗体的变体可以考虑用于本文所述的方法和用途。在又进一步的实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是艾可瑞妥单抗(CAS 2134641-34-0)或其生物类似物。
进一步的实施方案
1.双特异性抗体，其包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其用于治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)，其中所述治疗包括将所述双特异性抗体以至少24mg的剂量皮下施用于有此需要的人受试者。
2.双特异性抗体，其为全长抗体，所述双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其用于治疗人受试者的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)，其中所述治疗包括将所述双特异性抗体以至少24mg的剂量皮下施用于有此需要的人受试者。
3.根据实施方案1或2使用的双特异性抗体，其中所述B-NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、边缘区淋巴瘤和小淋巴细胞淋巴瘤。
4.根据实施方案1或2使用的双特异性抗体，其中所述B-NHL是FL、HGBCL或DLBCL。
5.根据实施方案1-4中任一项使用的双特异性抗体，其中所述受试者在用所述双特异性抗体治疗之前已接受CD20单特异性抗体，诸如利妥昔单抗治疗。
6.根据实施方案5使用的双特异性抗体，其中在所述用CD20单特异性抗体治疗期间，所述癌症复发。
7.根据实施方案5使用的双特异性抗体，其中在所述用CD20单特异性抗体治疗期间，所述癌症对所述治疗难治。
8.根据实施方案5-7中任一项使用的双特异性抗体，其中所述CD20单特异性抗体用于联合治疗中。
9.根据实施方案1-8中任一项使用的双特异性抗体，其中所述患者接受进一步的所述B细胞NHL的既往治疗线。
10.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以至少40mg的剂量施用。
11.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以40mg至100mg范围内的剂量施用。
12.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以至少48mg的剂量施用。
13.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以至少60mg的剂量施用。
14.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
15.根据实施方案1-9中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体以60mg的剂量施用。
16.根据实施方案1-15中任一项使用的双特异性抗体，其中所述剂量每周施用。
17.根据实施方案16使用的双特异性抗体，其中所述每周施用进行至少4次。
18.根据实施方案16或17使用的双特异性抗体，其中在所述每周施用后，所述抗体每两周施用一次。
19.根据实施方案18使用的双特异性抗体，其中所述双周施用进行(至少)6次。
20.根据实施方案18或19使用的双特异性抗体，其中在所述每两周施用一次后，所述抗体所每四周施用一次。
21.根据实施方案16-20中任一项使用的双特异性抗体，其中在施用所述每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的引发剂量。
22.根据实施方案21使用的双特异性抗体，其中所述引发剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前一周施用。
23.根据实施方案21或22使用的双特异性抗体，其中所述引发剂量在50-350μg的范围内。
24.根据实施方案21-23中任一项使用的双特异性抗体，其中所述引发剂量为160μg。
25.根据实施方案21-24使用的双特异性抗体，其中在施用所述引发剂量之后和施用所述每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。
26.根据实施方案25使用的双特异性抗体，其中所述引发剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前两周施用，并且所述中间剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前一周施用。
27.根据实施方案25或26中任一项使用的双特异性抗体，其中所述中间剂量在600-1200μg的范围内。
28.根据实施方案25-27中任一项使用的双特异性抗体，其中所述中间剂量为800μg。
29.根据实施方案25-28中任一项使用的双特异性抗体，所述用途包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
30.根据实施方案25-28中任一项使用的双特异性抗体，其中所述用途包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
31.根据实施方案25-28中任一项使用的双特异性抗体，其中所述用途包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用60mg剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1，8，15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
32.根据实施方案25-28中任一项使用的双特异性抗体，其中治疗方法包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用60mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
33.根据实施方案29-32中任一项使用的双特异性抗体，其中所述B-NHL是FL、DLBCL和/或HGBCL。
34.根据实施方案1-33中任一项使用的双特异性抗体，其中所述受试者在所述使用期间具有1级或2级的可管理的细胞因子释放综合征(CRS)。
35.根据实施方案1-34中任一项使用的双特异性抗体，其中所述受试者不经历肿瘤溶解综合征。
36.根据实施方案1-35中任一项使用的双特异性抗体，其中所述受试者用细胞因子释放综合征(CRS)的防治治疗。
37.根据实施方案36使用的双特异性抗体，其中所述防治包括皮质类固醇的施用。
38.根据实施方案36-37使用的双特异性抗体，其中所述防治与所述双特异性抗体在同一天施用。
39.根据实施方案38中任一项使用的双特异性抗体，其中所述防治在随后的第2-3天并且任选地第4天，或随后的第2-4天施用。
40.根据实施方案38-39中任一项使用的双特异性抗体，其中当所述防治与所述双特异性抗体在同一天施用时，所述防治在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。
41.根据实施方案37-40中任一项使用的双特异性抗体，其中所述皮质类固醇是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量，或其等效物，包括口服剂量。
42.根据实施方案1-41中任一项使用的双特异性抗体，其中所述人受试者用前驱用药治疗以减少对注射的反应。
43.根据实施方案42使用的双特异性抗体，其中所述前驱用药包括抗组胺药的施用。
44.根据实施方案42-43中任一项使用的双特异性抗体，其中所述前驱用药包括解热药的施用。
45.根据实施方案42-44中任一项使用的双特异性抗体，其中所述抗组胺药是苯海拉明，例如为50mg的静脉内或口服剂量，或其等效物。
46.根据实施方案43-45中任一项使用的双特异性抗体，其中所述解热药是对乙酰氨基酚，例如为650-1000mg的口服剂量，或其等效物。
47.根据实施方案42-45中任一项使用的双特异性抗体，其其中所述前驱用药与所述双特异性抗体在同一天施用。
48.根据实施方案47使用的双特异性抗体，其中所述前驱用药在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。
49.根据实施方案29-48中任一项使用的双特异性抗体，其中如实施方案35-41中定义的所述防治在第一周期期间施用。
50.根据实施方案29-49中任一项使用的双特异性抗体，其中如实施方案42-48中定义的所述前驱用药在第一周期期间施用。
51.根据实施方案49和50使用的双特异性抗体，其中当人受试者在周期1中第四次施用双特异性抗体后经历大于1级的CRS时，所述防治在第二周期期间施用。
52.根据实施方案51使用的双特异性抗体，其中当人受试者在先前周期的双特异性抗体末次施用中经历大于1级的CRS时，所述防治在后续周期期间继续。
53.根据实施方案51或52使用的双特异性抗体，其中所述前驱用药任选地在第二周期期间施用。
54.根据实施方案53使用的双特异性抗体，其中所述前驱用药任选地在后续周期期间施用。
55.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，其中所述第一抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.1、2和3中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.4中所列序列、序列GTN和如SEQ ID NO.5中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3，以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，其中所述第二抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.8、9和10中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.11中所列序列、序列DAS和如SEQ ID NO.12中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。
56.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含由SEQID NO:6定义的可变重链区和由SEQ ID NO:7定义的可变轻链区；以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含由SEQ ID No:13定义的可变重链区和由SEQ ID No:14定义的可变轻链区。
57.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体。
58.根据实施方案57使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含如SEQ IDNO.22中定义的λ轻链恒定区。
59.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体。
60.根据实施方案59使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含如SEQ IDNO.23中定义的κ轻链恒定区。
61.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
62.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含惰性Fc区。
63.根据实施方案62使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体在第一和第二重链中包含分别对应于第一重链和第二重链的SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸F，E和A。
64.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体在所述第一重链中包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的F405的位置处的氨基酸L，并且其中所述第二重链包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的K409的位置处的氨基酸R为R，反之亦然。
65.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在第一和第二重链中包含分别对应于第一重链和第二重链的SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的位置L234、L235和D265的位置处氨基酸F、E和A，并且其中所述第一重链中对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的F405的位置处的氨基酸L，并且其中所述第二重链包含对应于SEQ IDNO:15的人IgG1重链中的K409的位置处的氨基酸R为R，反之亦然。
66.根据实施方案65使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含如SEQ IDNO.19和20中定义的恒定区。
67.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含分别如SEQ ID NO.24和25中定义的重链和轻链，以及如SEQ ID NO.26和27中定义的重链和轻链。
68.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，所述双特异性抗体由分别如SEQ ID NO.24和25中定义的重链和轻链，以及如SEQ ID NO.26和27中定义的重链和轻链组成。
69.根据前述实施方案中任一项使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
序列
表1.粗体和下划线是分别对应于位置234和235；265；405和409的FE；A；L和R，所述位置是根据EU编号。在可变区中，根据IMGT定义注释的所述CDR区加下划线。
Figure BDA0003987869340000351
Figure BDA0003987869340000361
Figure BDA0003987869340000371
Figure BDA0003987869340000381
实施例
DuoBody-CD3xCD20
DuoBody-CD3xCD20是识别T细胞抗原CD3和B细胞抗原CD20的bsAb。DuoBody-CD3xCD20触发T细胞介导的对CD20表达细胞的有力杀伤。DuoBody-CD3xCD20具有规则的IgG1结构。
两种亲本抗体，IgG1-CD3-FEAL(人源化IgG1λ,CD3ε特异性抗体，其具有分别如SEQID NO.24和25中所列的重链和轻链序列)，以及IgG1-CD20-FEAR(衍生自人IgG1κCD20特异性抗体7D8，其具有分别如SEQ ID NO.26和27中所列的重链和轻链序列)作为单独的生物中间体制造。每个亲本抗体含有生成DuoBody分子所需的CH3域中的互补突变之一(分别为F405L和K409R)。亲本抗体包含Fc区的三个额外突变(L234F、L235E和D265A；FEA)。使用标准悬浮细胞培养和纯化技术，在哺乳动物中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中产生亲本抗体。DuoBody-CD3xCD20随后通过受控Fab臂交换(cFAE)过程制造(Labrijn et al.2013,Labrijn et al.2014,Gramer et al.2013)。混合亲本抗体，并经受受控还原条件。这导致亲本抗体分离，在再氧化下，重新组装。通过这种方式，获得了高纯度的DuoBody-CD3xCD20制备物(约93-95％)。进一步精制(polishing)/纯化后，获得最终产物，接近100％纯度。使用理论消光系数ε＝1.597mL·mg-1cm-1，通过280nm处的吸光度测量DuoBody-CD3xCD20浓度。最终产物贮存在4℃下。DuoBody-CD3xCD20的糖基化谱表明其主要含有核心岩藻糖基化N连接的双触角聚糖(bi-antennary glycans)，具有不同程度的末端半乳糖。对于生产的产品，获得了国际专利名称，即艾可瑞妥单抗。
将DuoBody-CD3xCD20(5mg/mL或60mg/mL)制备为无色至淡黄色的无菌透明溶液，作为皮下(SC)注射液用浓缩物提供。DuoBody-CD3xCD20含有缓冲剂和补强剂(tonicifyingagents)。对于皮下注射产品，所有赋形剂(三水醋酸钠、乙酸、氢氧化钠、山梨醇、聚山梨酯80、注射用水)及其在配制产品中的量均在药学上可接受。将适当剂量重构至约1mL体积，用于皮下注射。
临床试验：剂量递增
GCT3013-01(NCT03625037)是一项在患者中的开放标签、2部分(剂量递增和扩展)试验，人受试者为18岁或以上患有有记录的CD20+成熟B细胞赘生物，和复发性和/或难治性B细胞NHL。
选择固定的剂量施用方法以简化剂量施用，因为预期T细胞(即GEN3013功能的效应细胞)的数量与患者的体重和/或体表面积无关。EMA人用抗癌药品评价指南(Guidelineon the Evaluation of Anti-cancer Medicinal Products in Man，EMA，2012；EMA，2017)承认基于体型的给药的科学支持力度较弱，并建议使用i.a.PK数据进行建模和模拟，以确定给药策略。因此，本文中剂量递增部分的目的是建立艾可瑞妥单抗的最大耐受剂量(MTD)和/或达成给药策略。
剂量递增部分包括加速和标准滴定。初始剂量水平为单个受试者队列(加速滴定)，可选择将队列扩展至最多2名额外受试者，以获得额外的药代动力学(PK)/药效学和生物标志物数据。标准滴定部分包括用于剂量限制性毒性(DLT)评价的标准3个受试者队列，如果在DLT评价期间(即第1周期，28天)均未经历≥2级毒性，则入组至少2名可评价受试者。剂量递增是基于所有可用数据，并且加速滴定部分的增量不超过半log10(3.2倍)增加，且标准滴定部分的增量不超过100％(2倍)增加。
在剂量递增部分，61名受试者目前已接受治疗(表2)。在初始队列1-5中，受试者先暴露于全(固定)剂量的艾可瑞妥单抗，然后接受较低的引发剂量。除引发剂量外，队列6还引入了中间剂量(1.5mg)，以最小化引发剂量与连续递增全剂量之间的差距，并降低细胞因子释放综合征(CRS)的风险和发生率。未发生DLT，并且已审查0.004(队列1的引发剂量)至48mg(队列11和11A的全剂量)的剂量继续入组是安全的。尚未达到MTD。
表2列出了向受试者队列施用的计划的周期1剂量。例如，在队列8中，在前28天周期的第1天施用0.04mg的引发剂量，第8天施用0.5mg的中间剂量，随后在第15天和第22天施用6mg的全(固定)剂量。后续28天周期(如果施用)包括在周期2中，在28天周期的第1、8、15和22天施用固定剂量，从周期3-6起，在28天周期的第1和15天施用固定剂量，从周期7起，在28天周期的第1天施用固定剂量。
表2.GCT3013-01中各队列的计划给药
Figure BDA0003987869340000411
预防急性注射反应的前驱用药由在周期1期间艾可瑞妥单抗施用前30-120分钟施用的苯海拉明50mg IV或口服(PO)(或等效物)和扑热息痛(对乙酰氨基酚)650-1000mg PO(或等效物)组成。对于周期1的首次4剂艾可瑞妥单抗，CRS缓解药物防治由在艾可瑞妥单抗施用前30-120分钟施用的泼尼松龙100mg IV(或等效的口服或IV剂量的皮质类固醇)，然后是在艾可瑞妥单抗施用后第2天和第3天的额外泼尼松龙100mg IV(或等效物，包括口服剂量)组成(即皮质类固醇，共连续3天)。如果第4次艾可瑞妥单抗施用后发生高于1级的CRS，则在第2周期(第1、2和3天)及以后继续防治施用与选择的前驱用药。
其他靶向CD3的化合物或药物已报告从意识模糊至致死性脑水肿的神经系统症状。因此，在研究中，使用最初为嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗开发的相关评估工具、CAR-T细胞相关毒性10点神经学评估(CARTOX-10)和美国移植和细胞治疗学会(ASCTC)免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)评估，在每次给药、治疗结束时和有临床指征时进行神经系统症状的密切监测。CRS防治方案覆盖了施用以降低细胞因子释放相关ICANS风险和严重性的药物方案，即在艾可瑞妥单抗施用当天的泼尼松龙100mg IV(或等效物，包括口服剂量)、苯海拉明50mg IV或口服(PO)(或等效物)和扑热息痛(对乙酰氨基酚)650-1000mgPO(或等效物)，然后是在艾可瑞妥单抗施用后第2天和第3天的额外泼尼松龙100mg IV(或等效物，包括口服剂量)(即泼尼松龙，共连续3天)。
人口统计学
在入组的各种B细胞NHL亚型中，根据WHO 2008或WHO 2016指南对患者进行分类(Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of Tumours ofHaematopoietic and Lymphoid Tissues(ed 4th).Lyon,France:IARC Press；2008；Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.WHO Classification of TumoursofHaematopoietic and Lymphoid Tissues(Revised ed 4th)。由于WHO2016和WHO 2008指南之间的DLBCL和HGBCL分类存在重叠，因此将诊断为DLBCL或HGBCL的患者定义为分类为DLBCL/HGBCL的一组。
在接受各种B细胞NHL亚型治疗的61名患者中，45例(73.8％)患有分类为DLBCL/HGBCL的疾病，11例(18.0％)受试者为FL。其他B细胞NHL包括MCL(3名患者)、MZL(1名患者)和SLL(1名患者)。
来自58名患者的基线疾病特征数据在临床数据库中可用，大多数患者在筛选时为Ann Arbor III期(25.9％)或IV期(51.7％)，并且大多数存在结外疾病(58.6％)。自淋巴瘤诊断的中位时间为26.7个月(范围6-330个月)，并且自末次复发或进展的中位时间为1.6个月(范围0-88个月)。大多数患者对最后一线治疗(67.2％)和/或最近的抗CD20疗法(63.8％)难治，并且6.9％有既往CAR T疗法。既往治疗线的中位数为3(范围1-18)，最常见的是利妥昔单抗(100％)、烷化剂(98.3％)和蒽环类药物(89.7％)；23名受试者(39.7％)具有>3的既往治疗线。
临床功效
根据Lugano标准(Cheson,et al.(2014).J Clin Oncol 32,3059-3068)，在特定的时间点通过放射成像评估对治疗的响应，并且必要时进行组织活检，包括FDG-PET上的代谢活性、通过CT/MRI对有限数量的靶病变大小进行的评估以及任何新病变的存在。筛选时患有FDG高摄取肿瘤的患者例如使用Deauville 5分量表(DS)用FDG-PET-CT进行后续疾病评估(Barrington,et al.(2014)J Clin Oncol 32,3048-3058)。对于患有非高摄取或可变FDG高摄取肿瘤的患者，进行颈部/胸部/腹部/骨盆/其他已知病变的CT扫描与IV造影或在一些情况下进行MRI，以评价响应。响应标准包括计算多达6个可测量的主要病变的垂直直径乘积之和(SPD)，并比较每次后续扫描时该SPD的变化，以及考虑任何新病变的出现。当实施FDG-PET时，根据显示最高摄取的靶病变应用总体DS。在一些情况下，需要进行组织活检以阐明或确认响应。
表表3表示响应可评价群体(n＝53)的最佳总体响应(BOR)，其包括所有组织学和所有剂量中接受至少1剂试验药物和至少1次基线后响应评估或截至2020年05月05日已死亡的受试者。排除了在研究期间接受冠状动脉旁路移植(CABG)手术的1名受试者和患有COVID-19并随后死亡的1名受试者。总体响应率(ORR)为34.0％，并且疾病控制率(DCR)为52.8％。
表3.试验GCT3013-01最佳总体响应，按研究者评估的Lugano分类。
Figure BDA0003987869340000451
在接受至少6.0mg全剂量的患有R/R DLBCL/HGBCL的响应可评价受试者中，8/19(42.1％)响应，4名(21.1％)达到CR，4名(21.1％)达到PR，并且4名(21.1％)另外的受试者达到SD。在数据截止时接受至少0.76mg全剂量的患有FL的响应可评价受试者中，7/8(87.5％)达到PR并且1/8(12.5％)达到SD。
下表列出了DLBCL/HGBCL(全剂量≥6mg)和FL(全剂量≥0.76mg)受试者的靶病变最大减少(即所有靶病变SPD的最佳百分比变化)和按研究者的BOR。
表4.GCT3013-01中剂量递增部分的功效结果
Figure BDA0003987869340000452
Figure BDA0003987869340000461
-受试者ID列出匿名患者标识号。
-B细胞NHL亚型包括DLBCL/HGBCL和FL。
-响应类别包括完全响应(CR)、部分响应(PR)、疾病稳定(SD)和疾病进展(PD)，其中根据如上所述广泛接受的Lugano标准，基于放射学成像与基线扫描的比较评估响应，包括测量一组定义的代表性病变的SPD和出现的任何新病变。
-可用时，报告SPD中最佳％变化访视的5分PET得分；如果多次访视的SPD中最佳％变化相同，则报告这些访视的最低5分PET得分。
对于未分类为DLBCL/HGBCL和FL的患者，接受0.76mg全剂量治疗的MZL患者在第8周影像学扫描时显示SD。对于MCL，1名患者达到CR，并且另1名患者达到SD。
总之，在剂量递增期间，皮下施用的艾可瑞妥单抗在B-NHL中，特别在DLBCL/HGBCL和FL中显示出抗肿瘤活性，包括在一些患者中在极低剂量下的若干响应。DLBCL/HGBCL组的大多数响应(CR、PR)见于至少6mg的全剂量时，FL组的所有响应见于至少0.76mg的全剂量时。
临床安全性
所有受试者的所有治疗中出现的不良事件的概述列于表5A和5B。
表5A.治疗中出现的不良事件汇总
Figure BDA0003987869340000471
Figure BDA0003987869340000481
表5B
Figure BDA0003987869340000482
GCT3013-01剂量递增的安全性数据集，列出观察到的TEAE。
注：对于每名受试者，具有相同AE的多例不良事件仅计数一次。百分比是基于N、每个队列的受试者数目或总数。
相关*＝(可能)相关，包括关系缺失的AE。
1.队列12(全剂量60mg)中3名患者的数据未包括上述安全性分析中。队列12中的所有3名患者均已接受1-2次60mg剂量，并且在60mg剂量后未报告不良事件。
2.致死性AE是由于疾病进展/安乐死所致，与治疗无关。
在安全性分析中评价的58名受试者中，58名(100％)受试者经历至少1起治疗中出现的不良事件(TEAE)；69.0％的受试者具有3级或4级TEAE(表5A和5B)。4种最常见的TEAE为发热(69.0％)、CRS(56.9％)、疲乏(41.4％)和注射部位反应(41.4％)。11名(19.0％)受试者有导致死亡的TEAE，9名(15.5％)受试者有恶性赘生物进展(淋巴瘤进展)并且1名(1.7％)受试者因“安乐死”(也是在疾病进展背景下)。1名(1.7％)患者死于冠状病毒感染(COVID-19)。认为这些事件均与艾可瑞妥单抗不相关。
39名(67.2％)受试者报告严重不良事件(SAE)。最常报告的SAE为发热(25.9％)、恶性赘生物进展(15.5％)和肺部感染(6.9％)。
仅7名受试者(12.1％)发生导致永久性中止治疗的TEAE，并且所有这些事件均涉及疾病进展。5名(8.6％)受试者报告恶性赘生物进展事件，1名(1.7％)受试者经历部分癫痫发作(在可能累及CNS的淋巴瘤背景下)，并且1名(1.7％)受试者经历因基础疾病所致的呼吸困难。
35名(60.3％)受试者中发生了特别关注的不良事件(AESI)；其中，33名(56.9％)受试者经历1级或2级CRS；无患者因CRS终止治疗。4名(6.9％)受试者经历神经毒性(1名[1.7％]受试者[0.76mg]经历1级部分性癫痫发作；1名[1.7％]受试者[12mg]患有1级CRS相关失写症；1名[1.7％]受试者[12mg]患有3级CRS相关意识模糊状态；1名[1.7％]受试者[12mg]在流感和软脑膜疾病背景下患有3级意识模糊)。
总之，施用的剂量高达并包括60mg(含)时，治疗耐受良好。未观察到剂量限制性毒性并因此未达到最大耐受剂量。无严重(3级或更高)CRS事件并且无治疗相关死亡。
临床响应和作用机制的评价
还研究了药效学(PD)生物标志物，以评价对艾可瑞妥单抗的临床响应和作用机制(MOA)。使用外周血进行生物标志物分析，分别使用流式细胞术和免疫测定法评价艾可瑞妥单抗对循环免疫细胞和细胞因子的影响。艾可瑞妥单抗诱导循环B细胞快速且持续消减(如果既往抗CD20治疗后在基线时存在)。在首次给药的6h内观察到外周CD4+和CD8+T细胞短暂降低，并且后续给药诱导CD8+和CD4+T细胞相比基线扩增。此外，激活标志物CD69和CD279在CD4+和CD8+T细胞上上调。与临床响应相关的生物标志物的探索性分析表明，在对艾可瑞妥单抗部分或完全响应的患者中，活化和总T细胞(CD8+和CD4+两者)扩增更大且IFNγ水平更高的趋势。
在剂量递增期间实施艾可瑞妥单抗的递增给药和SC施用，以减轻CRS。观察到CRS相关细胞因子IL-6和TNF中度升高。在不同的B-NHL分类中一致观察到T细胞和细胞因子的这些PD生物标志物变化。其他生物标志物分析正在进行并将提供更新的数据。
艾可瑞妥单抗的作用机制涉及靶向T细胞表面抗原CD3和B细胞表面抗原CD20，触发T细胞介导的CD20阳性细胞杀伤。DuoBody-CD3xCD20显示诱导T细胞活化和扩增，导致对恶性B细胞的有力T细胞介导的细胞毒性，并且观察到的数据与证实艾可瑞妥单抗治疗B-NHL的临床活性的作用机制一致。
建模
由于在我们的临床试验中每个队列组评估的患者数量较少，我们采用建模方法分析患者数据，以获得艾可瑞妥单抗治疗DLBCL和FL的最佳皮下剂量。
从0.0128mg至48mg全剂量治疗患者获得血浆艾可瑞妥单抗浓度与时间药代动力学(PK)数据。使用可用的PK数据和Monolix群体PK建模软件(MonolixSuite)开发了艾可瑞妥单抗皮下施用的群体PK模型。具有一级吸收、线性和michaelis-menten消除的一室模型被确定为最能描述PK数据的模型。
基于群体PK模型，艾可瑞妥单抗表现出缓慢的吸收，Tmax为2.96(48.7％)天(几何平均值和CV)。模型预测艾可瑞妥单抗的终末半衰期为9.58(112％)天(几何平均值和CV)。值得注意的是，s.c.施用的艾可瑞妥单抗表现出翻转动力学，其中吸收率慢于消除率。因此，终末半衰期代表吸收半衰期并且与剂量无关。在48mg的全剂量下，稳态下的Cmax为3.30E6(75.0％)pg/mL(几何平均值和CV)。群体PK分析显示艾可瑞妥单抗表现出靶标介导的药物处置(TMDD)。使用群体PK模型的模拟显示，靶标介导的药物处置的饱和(>90％)在剂量水平>12mg处发生，表明血浆中CD3和CD20的接合和饱和(见图1)。
然而，正如群体PK模型所预测的那样，血浆中靶标的接合和饱和与功效评估并不是最相关的。作用部位(肿瘤附近)处的接合和饱和更相关。此外，对于双特异性抗体，两个靶标的饱和序贯发生，高亲和力靶向臂(CD20)首先达到饱和，然后是低亲和力靶向臂(CD3)。随着双特异性抗体浓度接近CD20臂的KD值，三聚体的形成(双特异性抗体交联CD3和CD20)增加。随着双特异性抗体浓度增加超过CD20臂的KD值，三聚体浓度最终达到平台。平台之后，一旦双特异性抗体浓度超过CD3臂的KD值，三聚体浓度开始下降。因此，最大三聚体形成发生在CD3和CD20的完全饱和之前。因此，存在双特异性抗体将达到最大三聚体形成进而达到最大功效的最佳范围。
为了定量预测肿瘤中三聚体的形成，建立了半机制模型。最初，使用临床前猴数据开发了半机制PK/PD模型。猴中艾可瑞妥单抗研究生成了丰富的数据，包括i.v.和s.c.施用的剂量范围(跨越3个数量级，单剂量和多剂量)、密集PK数据、相对时间数据的血液T细胞计数、相对时间数据的血液B细胞计数以及相对时间数据的活化T细胞亚群计数。
开发的模型利用基于最小生理学的PK模型(mPBPK)以提供组织中艾可瑞妥单抗浓度的生理学相关预测。该模型还考虑了T细胞和B细胞从血液运输至组织和背部、T/B细胞的动态产生和死亡，以及维持T/B细胞稳态的反馈机制。基于CD3和CD20的测量KD值，该模型纳入了艾可瑞妥单抗(血液和组织中)对T细胞上CD3和B细胞上CD20的结合以及CD3和CD20的交联()。该模型将三聚体的形成与T细胞的活化，随后是T细胞的扩增关联。然后，活化T细胞诱导B细胞的消除。使用基于群体的建模方法和Monolix软件，将开发的PK/PD模型同时拟合至PK、T细胞计数、活化T细胞计数和B细胞计数数据。
基于模型诊断，如观测与预测、残差与预测、和残差与时间、模型参数估计精确，PK/PD模型能够很好地描述PK/PD数据(血浆浓度、血液T细胞计数、血液活化T细胞计数和血液B细胞计数数据)。
随后，根据基于猴数据开发的PK/PD模型的结构开发了综合人PK/PD模型。人PK/PD建模分析的概述显示于图2。该模型利用非临床和临床PK和功效数据预测三聚体形成和功效。使用Monolix软件拟合模型(群体PK模型和猴PK/PD模型)。使用带有mrgsolve包的R(Microsoft)进行模拟。该模型纳入了mPBPK模型以预测肿瘤病变中的艾可瑞妥单抗浓度。该模型还纳入了T细胞、B细胞和肿瘤细胞计数，以及CD3和CD20在这些细胞上的表达。此外，该模型纳入了艾可瑞妥单抗对CD3和CD20的动态结合以及三聚体的形成。最后，PK/PD模型纳入了三聚体形成和T细胞活化导致的肿瘤动力学和肿瘤杀伤。
人PK/PD模型利用猴PK/PD模型估计的一些相关参数。人PK/PD模型参数基于可用的临床数据或文献中的人特定值。通过将mPBPK模型拟合至临床PK数据，获得PK子模型参数。三聚体形成子模型参数是基于患者生物标志物数据(例如，T细胞计数、B细胞计数、肿瘤细胞计数)、体外测量(例如，CD3和CD20的艾可瑞妥单抗KD(分别为16nM和5.4nM))和/或文献值(例如，T细胞上的CD3表达、B细胞/肿瘤细胞上的CD20表达)。肿瘤动态子模型参数是基于文献值(例如，肿瘤生长速率)、患者肿瘤大小数据(例如，基线肿瘤大小)或通过将人PK/PD模型预测的响应率校准至艾可瑞妥单抗剂量递增试验中观察到的响应率(例如，肿瘤杀伤率)进行估计。校准后的模型很好地描述了艾可瑞妥单抗剂量递增试验中观察到的响应率(基于病变大小的变化)(图3)，因此，该模型经验证用于计算机模拟分析来预测最佳剂量。
因此，随后使用综合人PK/PD模型进行临床试验模拟，纳入关键模型参数的个体变异性。模型参数的变异性是基于艾可瑞妥单抗剂量递增试验中观察到的个体间变异性(例如，T细胞、B细胞和基线肿瘤大小、PK参数)或基于文献值(例如，CD3、CD20表达、肿瘤生长速率)。对FL和DLBCL/HGBCL进行单独模拟，通过不同的肿瘤生长速率进行区分。对于DLBCL/HGBCL，使用1个月的肿瘤倍增时间，而对于FL，使用6个月的肿瘤倍增时间。
人PK/PD模型(图4和图5)显示，在FL和DLBCL/HGBCL中，当艾可瑞妥单抗剂量≥48mg时，三聚体形成达到平台。此外，在FL和DLBCL/HGBCL中，PK/PD模型预测功效的平台(预测的扩展试验响应率)在艾可瑞妥单抗剂量≥48mg(图6和7)时发生。基于模型预测，利用患者的可用临床数据，可以选择的艾可瑞妥单抗的最佳剂量为48mg。
进一步分析I
继上述结果后，患者继续进行评估和/或接受治疗，并且将更多患者用艾可瑞妥单抗治疗。
在该较晚的评估时间点，入组的患者总数为67名，其包括了45名患者(67％)患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、12名(18％)患有滤泡性淋巴瘤(FL)和4名(6％)患有套细胞淋巴瘤(MCL)。患者接受过大量预治疗，DLBCL患者的中位(范围)既往治疗线是3(1-6)，以及FL患者是4.5(1-18)，以及MCL患者是4(3-5)；共有6名患者接受过既往CAR-T疗法。超过一半的患者(37/67；55％)对他们最近的全身疗法难治，并且35/67(52％)对他们最近的抗CD20mAb疗法难治。
在8.3个月的中位总体随访时，25名患者(37％)正在进行治疗。DLBCL患者的中位随访时间为8.3个月并且FL患者为8.8个月。艾可瑞妥单抗耐受良好，并且没有由于治疗相关不良事件(AE)的中止。最常见的治疗突发AE(TEAE)为发热(70％)、局部注射部位反应(48％)和疲乏(45％)。随着剂量增加，特别感兴趣的TEAE与既往报告一致：CRS事件均为1/2级(58％)，无3/4级事件，并且观察到有限的神经毒性(6％；1级：3％；3级：3％；均为一过性)。
没有剂量限制性毒性、肿瘤溶解综合征或发热性中性粒细胞减少事件，也没有由治疗相关AE引起的死亡。患有DLBCL和FL的可评价患者的抗肿瘤活性显示于表6。在接受≥12mg艾可瑞妥单抗的18名DLBCL患者中，总体响应率(ORR)为66.7％，6名患者实现完全响应(CR)。在接受≥48mg艾可瑞妥单抗(48mg RP2D n＝4；60mg n＝3)的7名患者中，均实现响应，包括2名患者实现CR。所有既往用CAR-T疗法治疗的DLBCL患者均实现响应(4/4：2名CR；2名部分响应[PR])。在接受≥0.76mg艾可瑞妥单抗的所有8名FL患者中，ORR为100％，2名患者实现CR。
表6.艾可瑞妥单抗在患有R/RB-NHL的可评价患者中的抗肿瘤活性
Figure BDA0003987869340000531
Figure BDA0003987869340000541
基于数据快照。响应评估是基于由研究者评估的Lugano 2014响应标准(改良的响应可评价群体)。
a排除1名COVID-19患者。
b仅4名患者进行PET扫描(直到最近的方案修正前为非强制性的)
此外，共有4名MCL患者接受艾可瑞妥单抗治疗，1名患者(母细胞样(blastoid)；6mg)在接受引发剂量后1周疾病迅速恶化后死亡(C1D1)，1名患者(12mg)在第6周评估时产生SD，但在第12周为PD，1名患者(母细胞样，48mg)在第6周评估时产生PR，但在第12周为PD，1名患者(多形性；引发剂量0.16mg，中间剂量0.8mg，24mg)在第6周评估时产生深度结构和代谢CR，其在最近的响应评估时持续(第24周：SPD＝0cm2；DS＝1)。4名MCL患者中的3名在周期1经历6例CRS事件，其均为1级(即，仅发热)并在发作的48hr内消退(#1，引发剂量40μg，中间剂量，全剂量6mg，引发剂量后24hr内发生1次CRS发作；#2，引发剂量0.16mg，中剂量0.8mg，全剂量24mg，2次CRS发作：在引发剂量后4天首次发作，在中间剂量后4天再次发作；#3引发剂量0.16mg，中剂量0.8mg，全剂量48mg，3次CRS发作：在引发剂量后24hr内首次发作，在中间剂量后3天再次发作，并且在首次全剂量后24hr第三次发作)。CRS事件均未导致计划的下次艾可瑞妥单抗施用延迟、艾可瑞妥单抗剂量改变或研究中止。总之，艾可瑞妥单抗在MCL中表现出活性和良好的耐受性。
这些结果表明，艾可瑞妥单抗继续表现出良好的安全性概况，无≥3级CRS事件和有限的神经毒性，支持门诊施用。结果显示了显著的单药功效，包括在重度预治疗的FL、MCL和DLBCL患者中的完全响应。
除评估安全性和功效参数外，还从患者(包括接受范围为0.0128-60mg的艾可瑞妥单抗的患者)中收集了进一步的数据，用于进一步PK/PD分析。该进一步的数据分析表明，艾可瑞妥单抗表现出缓慢的吸收，Tmax为2.8天，并且终末半衰期为8.67天，以及靶标介导的处置(TMD)。如上所示，该模型预测TMD的饱和发生在剂量水平≥48mg时，表明血液中CD3和CD20的接合和饱和。此外，该模型能够描述在临床观察到的暴露-响应关系并且使用PK/PD模型的临床试验模拟再次证明在FL和DLBCL中48mg剂量可以达到最佳三聚体形成和临床响应。暴露-不良事件分析显示，在评价的剂量范围内，艾可瑞妥单抗暴露与细胞因子释放综合征(CRS)风险之间呈平坦关系。
进一步分析II
在以上呈现的结果的另一次进一步随访中，患者继续进行评估和/或接受艾可瑞妥单抗治疗。
在该较晚的评估时间点，入组的患者总数为68名，其包括了46名患者(68％)患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、12名(18％)患有滤泡性淋巴瘤(FL)和4名(6％)患有套细胞淋巴瘤(MCL)。患者接受过大量预治疗，DLBCL患者的中位(范围)既往治疗线是3(1-6)，以及FL患者是4.5(1-18)，以及MCL患者是4(3-5)；共有6名(9％)患者接受过既往CAR-T疗法。大多数患者(59/68；87％)对他们最近的全身疗法难治，并且60/68(88％)对他们最近的抗CD20mAb疗法难治。
在10个月的中位随访持续时间时，17名患者(25％)正在进行治疗。DLBCL患者的中位随访时间为7个月并且FL患者为12个月。在施用的剂量高达60mg时，未观察到剂量限制性毒性并且未达到最大耐受剂量。艾可瑞妥单抗耐受良好，并且没有由于治疗相关不良事件(AE)的中止。最常见的治疗突发AE(TEAE)为发热(69％)、局部注射部位反应(47％)和疲乏(43％)。大多数不良事件为1-2级。随着剂量增加，特别感兴趣的TEAE与既往报告一致：CRS事件均为1/2级(59％)，无3/4级事件(见表7)，并且观察到有限的神经毒性(6％；1级：3％；3级：3％；均为一过性，中位数[范围]为1.5[<1-3]天，并且用标准治疗进行管理)。1名患者患有肿瘤溶解综合征，3级，与疾病进展相关。
观察到大多数CRS事件发生在周期1，第2个全剂量48mg时无CRS事件。大多数事件在周期1发生并消退。消退的中位时间(范围)为2(1.0-9.0)天。尽管剂量递增至推荐的48mg以及60mg剂量，但无3级或更高的CRS事件。通过施用途径、递增剂量和皮质类固醇预治疗减轻了CRS风险。
表7.与CRS相关的不良事件
Figure BDA0003987869340000561
患有DLBCL、FL和MCL的可评价患者的抗肿瘤活性显示于表8。在接受12-60mg艾可瑞妥单抗的22名DLBCL患者中，总体响应率(ORR)为68％，10名患者实现完全响应(CR)。在接受48-60mg艾可瑞妥单抗(48mg RP2Dn＝8；60mg n＝3)的11名DLBCL患者中，10名患者实现响应，包括6名患者为CR。所有既往用CAR-T疗法治疗且响应可评价的DLBCL患者均实现响应(4/4：2名CR；2名部分响应[PR])。在接受0.76-48mg艾可瑞妥单抗的所有10名FL患者中，ORR为90％，5名患者实现CR。在接受12-48mg艾可瑞妥单抗的5名FL患者中，ORR为80％，3名患者实现CR。
没有其他MCL患者接受艾可瑞妥单抗治疗。简言之，在4名患者中，1名患者(母细胞样；6mg)在推定疾病快速恶化后接受引发剂量后1周死亡，无响应评估(C1D1)，1名患者(12mg)在第6周评估时产生SD，但在第12周时为PD，1名患者(母细胞样，48mg)在第6周评估时产生PR，但在第12周时为PD，并且1名患者(多形性；引发剂量0.16mg，中间剂量0.8mg，24mg)在第6周评估时产生深度结构和代谢CR，其在最近的响应评估时持续(第24周：SPD＝0cm2；DS＝1)。
表8.艾可瑞妥单抗在患有R/RB-NHL的可评价患者中的抗肿瘤活性
Figure BDA0003987869340000562
Figure BDA0003987869340000571
*响应评估是基于由研究者评估的Lugano 2014响应标准(改良的响应可评价群体)。
Figure BDA0003987869340000572
包括3名在确定RP2D前接受60mg剂量的患者。
Figure BDA0003987869340000573
名患者发生母细胞样/多形性MCL；1名患者的组织学不详。§排除因COVID-19而在首次评估前中止的1名患者。||排除因心后(CABG)手术而在首次评估前中止的1名患者。
Figure BDA0003987869340000574
响应率是基于可评价患者的数量(定义为有至少1次基线后疾病评估或在无基线后疾病评估的情况下死亡的患者)。**包括在响应评估前死亡的1名患者。
Figure BDA0003987869340000575
6/10名患者通过PET扫描进行响应评价(直到最近的方案修正前为非强制性的)
关于上述PK/PD模型，使用从患者中获得的进一步的数据不断更新。获得的结果与图1和图3-7中描绘的结果高度相似。对于FL和DLBCL，总体结论保持不变，预测的三聚体形成从48-192mg达到平台，并且预测的响应率从48mg开始达到平台。还进行了暴露-不良事件分析，表明引发剂量、中间剂量和全剂量的2级CRS总体风险较低，且艾可瑞妥单抗Cmax与2级CRS之间呈平坦关系。基于模型和临床试验模拟，将48mg全剂量鉴定为生物有效剂量，这导致与不良事件的风险相权衡的充分靶标调节和临床活性。
结论
基于良好的安全性概况连同令人印象深刻的功效概况与高响应率(包括完全响应)，至少在复发性或难治性DLBCL/HGBCL、FL和MCL患者中，艾可瑞妥单抗具有作为同类最佳治疗的潜力。这些数据支持艾可瑞妥单抗未来在门诊施用。根据临床功效、安全性数据和PK/PD建模，DLBCL/HGBCL和FL以及一般B-NHL的推荐全剂量可以是至少48mg。根据目前可用的数据，可以预期的60mg全剂量。可以推荐48mg的全剂量。在0.16mg的引发剂量和0.80mg的中间剂量下观察到的安全性数据，以及这些剂量后所有CRS事件仅为轻度至中度(≤gr.2)严重性并且经标准CRS管理后消退的观察结果，表明可以推荐分别为0.16mg和0.80mg的引发剂量和中间剂量。因此，可以推荐周期1在28天周期的第1、8、15和22天分别施用0.16mg、0.80mg、48mg和48mg。此外，可以推荐周期1后施用的周期包括在周期2-3中，在28天周期的第1、8、15和22天施用全剂量，从周期4-9开始，在28天周期的第1和15天施用全剂量，并且从周期10往后，在28天周期的第1天施用全剂量。对于周期1的所有4次每周剂量，可以推荐连续3-4天如本文所概述的防治和前驱用药用于CRS缓解，并且当周期1中第4次每周艾可瑞妥单抗施用后注意到CRS>gr.1时继续。目前，临床试验采用该给药方案，推荐48mg全剂量，并在i.a.FL、MCL和DLBCL/HGBCL中进行扩展，并且已在HDT-ASCT失败或不适合HDT-ASCT的复发性、难治性DLBCL中启动一项III期试验。
剂量递增和扩展部分以及III期试验共计169名受试者在3项正在进行的艾可瑞妥单抗试验中接受治疗：GCT3013-01(总共n＝153名受试者；剂量递增部分68名受试者，扩展部分85名受试者)、GCT3013-04(n＝14名受试者；剂量递增部分7名受试者，扩展部分7名受试者)和GCT3013-05(n＝2名受试者)。
GCT3013-01是一项I/II期开放标签试验，研究艾可瑞妥单抗在复发性、进展性或难治性B细胞淋巴瘤受试者中的安全性和初步功效。患者已在剂量递增部分接受治疗，其结果已在上文进行广泛描述。下文提供了上述结果的进一步更新。继剂量递增后，在扩展部分，患者在28天周期中接受艾可瑞妥单抗皮下治疗，周期1内，第1天0.16mg，第8天0.8mg，第15和22天48mg；周期2-3第1、8、15和22天48mg；周期4-9第1、15天48mg；并且周期10+，第1天48mg。本试验已入组153名受试者。
GCT3013-05是一项艾可瑞妥单抗的随机开放标签III期临床试验，其中首批患者已接受治疗。入组的患者为既往ASCT失败或筛选时不适合ASCT的R/R DLBCL受试者。将功效与护理标准治疗进行比较，护理标准治疗涉及R-GemOx，其为利妥昔单抗联合吉西他滨和奥沙利铂；以及利妥昔单抗联合苯达莫司汀。在28天周期中皮下施用艾可瑞妥单抗，在周期1内，第1天0.16mg，第8天0.8mg，第15和22天48mg；在周期2-3第1、8、15和22天48mg；在周期4-9第1和15天48mg；并且在周期10+在第1天48mg。本试验已入组2名受试者。
GCT3013-04是一项I/II期开放标签试验队列，研究艾可瑞妥单抗在日本复发性或难治性(R/R)B-NHL受试者中的安全性和初步功效。患者已在剂量递增和扩展部分接受治疗，其中患者在28天周期中接受艾可瑞妥单抗皮下治疗，周期1内；第1天0.16mg；第8天0.8mg；第15和22天48mg；周期2-3，第1、8、15和22天48mg；周期4-9，第1天和第15天48mg；周期10+，第1天48mg。本试验已入组14名受试者。
表9：按队列的剂量-GCT3013-01剂量递增部分
Figure BDA0003987869340000591
Figure BDA0003987869340000601
注：为了桥接引发和连续递增全剂量之间的差距，在1.5mg全剂量水平给药前添加中间剂量的艾可瑞妥单抗。
周期1中的末次施用(即全剂量)在周期2及以后继续进行。
a.队列2的1名受试者由于在剂量限制毒性期(即28天)结束前中止试验(疾病进展)而仅接受引发剂量并被替换。
b.意图用于平行评价的队列。
68名受试者在GCT3013-01剂量递增部分已接受艾可瑞妥单抗治疗，包括15名受试者(22.1％)在数据截止时继续在3-60mg给药组接受艾可瑞妥单抗(2名受试者在3mg组、1名受试者在6mg、2名受试者在12mg、4名受试者在24mg、4名受试者在48mg和2名受试者在60mg)。在已中止治疗的53名受试者中，46名受试者因疾病进展而中止。在GCT3013-01剂量递增部分中治疗的68名受试者中，中位年龄为67.5岁并且大多数受试者(45名，66.2％)为男性。从淋巴瘤诊断至首次给药的中位时间为29.7个月。自最近复发(recurrence)、复发(relapse)或进展的中位时间为1.6个月。在入组的各种B-NHL亚型中，46名受试者(67.6％)患有DLBCL，并且12名受试者(17.6％)患有FL。入组患者患有以下疾病类型：弥漫性大B细胞淋巴瘤，即新发(28)、转化(17)或未知(1)；高级别B细胞淋巴瘤(3)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(1)、滤泡性淋巴瘤(12)、套细胞淋巴瘤(4)、小淋巴细胞淋巴瘤(1)和边缘区淋巴瘤(1)。接受全剂量的患者包括弥漫性大B细胞淋巴瘤，即新发(9)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(1)、滤泡性淋巴瘤(1)和套细胞淋巴瘤(1)。
85名受试者在GCT3013-01扩展部分接受艾可瑞妥单抗治疗，包括61名受试者(71.8％)在数据截止时继续接受艾可瑞妥单抗；50名受试者继续在侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤(aNHL)队列中，并且11名受试者继续在惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤(iNHL)队列中。在已中止治疗的24名受试者(28.2％)中，14名受试者因疾病进展而中止。在GCT3013-01扩展部分中治疗的85名受试者中，中位年龄为68.0岁并且大多数受试者(60名，70.6％)为男性。从淋巴瘤诊断至首次给药的中位时间为24.9个月。自最近一次难治或复发的中位时间为1.13个月。在入组的各种B-NHL亚型中，71名受试者(83.5％)患有DLBCL，13名受试者(15.3％)患有FL。在侵袭性NHL队列中，大多数受试者患有DLBCL，即新发(44)、转化(17)、不适用(5)、未知(3)、缺失(1)；并且1名患者患有高级别B细胞淋巴瘤。在惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤队列的受试者中，12名患有滤泡性淋巴瘤1-3A级并且1名为未知级别。
表10.受试者分布-GCT3013-01扩展部分
Figure BDA0003987869340000611
注：根据FAS中的受试者数目计算百分比。
aNHL＝侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤；FAS＝全分析集；iNHL＝惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤。
a.FAS和安全性集包括暴露于艾可瑞妥单抗的所有受试者。
b.疾病进展包括临床进展和记录的影像学疾病进展两者。
药效学
艾可瑞妥单抗诱导循环B细胞的快速和持续消减(在具有可检测B细胞的患者亚组中，由于既往抗CD20治疗，大多数受试者中不存在B细胞)。用针对CD19的抗体检测B细胞。后续给药以大于12mg的剂量诱导循环T细胞相对于基线的扩增以及循环IFNγ、IL-6和TNFα(通过血清免疫测定法)的中度升高。在首次SC给药后6小时内观察到外周CD4+和CD8+T-细胞短暂减少，这与在其他双特异性抗体中看到的T细胞着边一致。重要的是，后续给药诱导T细胞相对于基线的扩增。采用递增剂量和SC施用艾可瑞妥单抗，以减轻CRS。艾可瑞妥单抗的SC施用导致中度IFNγ、IL-6和TNFα升高。
功效
在剂量递增部分，治疗响应的评价是基于根据Lugano标准(Cheson et al.,2014)的研究者评估。使用全分析集时，患有DLBCL的18/46名受试者(39.1％)实现响应(部分响应或完全响应的受试者视为响应者)。在FL受试者中，9/12名(75.0％)实现响应(表11)。
Figure BDA0003987869340000631
Figure BDA0003987869340000641
Figure BDA0003987869340000651
安全性和耐受性
GCT3013-01剂量递增部分中的所有68名受试者均经历至少1例治疗中出现的不良事件(TEAE)。4种最常见的TEAE为发热(69.1％)、CRS(58.8％)、注射部位反应(47.1％)和疲乏(44.1％)。总计80.9％的受试者具有至少1例3级或更高的TEAE。有13名受试者具有导致死亡的TEAE(11名受试者具有恶性肿瘤进展，1名实施安乐死[也在疾病进展背景下]，1名受试者患有COVID-19[冠状病毒疾病2019]感染性肺炎)。认为这些事件均与艾可瑞妥单抗不相关。46名(67.6％)受试者报告SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为发热(19名受试者，27.9％)，报告为CRS症状(见第4.6.2.2节)。导致永久性中止治疗的TEAE发生率较低(13.2％的受试者)。特别关注的不良事件(AESI)包括以下：40名受试者(58.8％)经历CRS，4名受试者(5.9％)经历研究者认为由免疫介导的神经系统症状，以及1名受试者(1.5％)经历临床肿瘤溶解综合征。在eCRF的单独AESI页中记录AESI。符合严重性标准的AESI相关症状报告为SAE，总体诊断为主要事件。在GCT3013-01剂量递增部分治疗的68名受试者中，46名(67.6％)已经历至少1例SAE。共有24名受试者(35.3％)经历认为与艾可瑞妥单抗相关的SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为发热(19名受试者，27.9％)，报告为CRS症状。
GCT3013-01扩展部分的85名受试者中的76名(89.4％)已经历至少1例TEAE(表12)。3种最常见的TEAE为CRS(47.1％)、疲乏(18.8％)和发热(18.8％)(表13)。总计40.0％受试者具有至少1例3级或更高的TEAE(表14)。有7名受试者具有导致死亡的TEAE。1名受试者经历导致死亡的TEAE，研究者认为这与艾可瑞妥单抗相关(免疫效应细胞相关神经毒性综合征[ICANS])。55.3％的受试者报告了SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为CRS(25名受试者，29.4％)。导致永久性中止治疗的TEAE发生率较低(5.9％的受试者)。AESI包括以下：40名受试者(47.1％)经历CRS，3名受试者(3.5％)经历ICANS，并且1名受试者(1.2％)经历临床肿瘤溶解综合征。
如所述，GCT3013-01扩展部分中治疗的85名受试者中的7名(8.2％)经历导致死亡的TEAE。1名受试者经历导致死亡的TEAE，研究者认为这与艾可瑞妥单抗相关。该受试者是1名72岁的女性，患有IV期非GCB DLBCL，和糖尿病、高血压、高脂血症的病史以及肺癌所致的右肺上叶切除术。筛选时，受试者有胰腺、脾脏和主动脉旁淋巴瘤受累。在0.16mg艾可瑞妥单抗的引发剂量后2天，受试者经历持续腹痛，随后被诊断为3级胰腺炎，接受多次重复剂量的吗啡治疗，并根据成像确定为进行性淋巴瘤。中间剂量0.8mg的艾可瑞妥单抗后4天，报告了2级ICANS，随后恶化至4级。此外，在脑成像时观察到1级脑缺血。研究药物被撤回。受试者状况恶化，并且该受试者在中间剂量0.8mg的艾可瑞妥单抗后17天死亡，报告死亡为由于ICANS。然而，1名有长期糖尿病、高血压、高脂血症、可能的微血管病(新发多灶性脑梗死、脾梗塞、凝血障碍的实验室证据和肾功能障碍提示)病史的受试者中，高血氨症引起的代谢性脑病，以及吗啡使用的活性代谢物积累(其依赖于功能性肾脏进行清除)，很可能是神经毒性的混杂因素。已知在不存在CRS的情况下治疗神经系统症状的托珠单抗(tocilizumab)施用不必要，其通过增加循环IL-6水平增加神经毒性的可能性，并可能导致本病例中神经毒性的恶化。
表12.治疗中出现的不良事件的汇总-GCT3013-01扩展部分
Figure BDA0003987869340000671
Figure BDA0003987869340000681
注：根据安全性集中的受试者数目计算百分比。
使用监管活动医学词典(MedDRA)v23.1和不良事件通用术语标准(CTCAE)v5.0对不良事件进行分类，并且每个类别仅计数一次。根据(Lee et al.,2019)对细胞因子释放综合征进行分级，并根据Cairo-Bishop(Coiffier et al.,2008)对临床肿瘤溶解综合征进行分级。
aNHL＝侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤；ICANS＝免疫效应细胞相关神经毒性综合征；iNHL＝惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤；TEAE＝治疗中出现的不良事件。表13：>10％的受试者中发生的治疗中出现的不良事件-GCT3013-01扩展部分
Figure BDA0003987869340000682
注：根据安全性集中的受试者数目计算百分比。
使用监管活动医学词典(MedDRA)v23.1对不良事件进行分类，并且每个优选术语最多计数一次。
表14：按系统器官分类和优选术语的3级或更高的治疗期间不良事件-GCT3013-01扩展部分
Figure BDA0003987869340000691
Figure BDA0003987869340000701
Figure BDA0003987869340000702
注：根据安全性集中的受试者数目计算百分比。
使用监管活动医学词典(MedDRA)v23.1和不良事件通用术语标准(CTCAE)v5.0对不良事件进行分类，并且每个系统器官分类最多计数一次且每个优选术语最多计数一次。
aNHL＝侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤；COVID-19＝2019年冠状病毒病；iNHL＝惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤；TEAE＝治疗中出现的不良事件。
GCT3013-01扩展部分中治疗的85名受试者中的47名(55.3％)经历至少1例SAE(表23)。共有28名受试者(32.9％)经历认为与艾可瑞妥单抗相关的SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为CRS(25名受试者，29.4％)(表15)。
表15.按系统器官分类和优选术语的认为与艾可瑞妥单抗相关的严重治疗中出现的不良事件-GCT3013-01扩展部分
Figure BDA0003987869340000711
注：根据安全性集中的受试者数目计算百分比。
使用监管活动医学词典(MedDRA)v23.1对不良事件进行分类，并且每个系统器官分类最多计数一次且每个优选术语最多计数一次。
aNHL＝侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤；iNHL＝惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤；TEAE＝治疗中出现的不良事件。
在GCT3013-01扩展部分中治疗的85名受试者中共有5名(5.9％)经历导致永久性中止试验药物的TEAE：各有1名受试者经历肺赘生物、恶性赘生物进展、腹痛、肝毒性、高胆红素血症、进行性多灶性白质脑病、转氨酶升高、免疫效应细胞相关神经毒性综合征和呼吸衰竭(表16)。2名受试者经历多例导致永久性中止治疗的TEAE：1名受试者经历肺赘生物和呼吸衰竭；1名受试者因疾病进展而经历腹痛、肝毒性、高胆红素血症和转氨酶升高。
表16.按系统器官分类和优选术语的导致永久性中止治疗的治疗中出现的不良事件-GCT3013-01扩展部分。
Figure BDA0003987869340000721
注：根据安全性集中的受试者数目计算百分比。
使用监管活动医学词典(MedDRA)v23.1对不良事件进行分类，并且每个系统器官分类最多计数一次且每个优选术语最多计数一次。
aNHL＝侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤；iNHL＝惰性B细胞非霍奇金淋巴瘤；NHL＝治疗中出现的不良事件。
特别感兴趣的不良事件
下文是艾可瑞妥单抗AESI的汇总：
细胞因子释放综合征，在86名受试者中报告，包括GCT3013-01剂量递增部分的40名受试者、GCT3013-01扩展部分的40名受试者和GCT3013-04剂量递增部分的6名受试者。根据(Lee et al.,2019)对CRS进行分级。除GCT3013-01扩展部分中的2例事件和GCT3013-04剂量递增部分中的1例事件为3级外，所有CRS事件均为1级或2级。
神经毒性在艾可瑞妥单抗方案中被列为AESI。在GCT3013-01试验的剂量递增部分，根据CARTOX-10量表进行神经学评估(Neelapu et al.,2017)。将符合ICANS的疑似免疫介导的神经系统症状记录为单独的AESI。在GCT3013-01试验和GCT3013-04试验的扩展部分中，使用ICANS的确切术语报告ICANS病例。报告为AESI的神经系统症状在GCT3013-01中的7名受试者中报告，包括剂量递增部分的4名受试者和扩展部分的3名受试者，并且GCT3013-04剂量递增部分无受试者。
临床肿瘤溶解综合征在2名受试者中报告，包括GCT3013-01剂量递增部分的1名受试者、GCT3013-01扩展部分的1名受试者并且GCT3013-04剂量递增部分无受试者。根据Cairo-Bishop对临床肿瘤溶解综合征进行分级(Coiffier et al.,2008)。2例肿瘤溶解综合征事件均为3级。
临床数据的汇总
这汇总了GCT3013-01的数据(剂量递增和扩展部分的安全性、剂量递增部分的功效和剂量递增部分的PK)和GCT3013-04剂量递增部分的安全性数据。未发生DLT，未达到MTD，并且RP2D被宣布为48mg的全剂量。GCT3013-01剂量递增部分的所以68名受试者经历至少1例TEAE；80.9％的受试者具有至少1例3级或更高的TEAE。最常见的TEAE为发热、CRS、注射部位反应和疲乏。有13名受试者具有导致死亡的TEAE(11名受试者具有恶性肿瘤进展，1名实施安乐死[也在疾病进展背景下]，并且1名受试者患有COVID-19感染性肺炎)。67.6％的受试者报告了SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为发热，报告为CRS症状。13.2％的受试者报告导致永久性中止治疗的TEAE。AESI包括以下：40名受试者经历CRS，4名受试者经历研究者认为免疫介导的神经系统症状，并且1名受试者经历临床肿瘤溶解综合征。
GCT3013-01扩展部分共76名受试者(89.4％)经历至少1例TEAE；40.0％的受试者经历至少1例3级或更高的TEAE。最常见的TEAE为CRS、疲乏和发热。7名受试者具有导致死亡的TEAE(疾病进展、身体健康状况普遍恶化、COVID-19、肝毒性、恶性赘生物进展和免疫效应细胞相关神经毒性综合征各1名受试者)。55.3％的受试者报告了SAE。认为与试验药物相关的最常见SAE为CRS。5.9％的受试者中报告了导致永久性中止治疗的TEAE。AESI包括以下：40名受试者经历CRS，3名受试者经历ICANS，并且1名受试者经历临床肿瘤溶解综合征。
GCT3013-04剂量递增部分的所有7名受试者均经历至少1例TEAE；71.4％的受试者具有至少1例3级或更高的TEAE。最常见的TEAE为CRS和注射部位红斑。无受试者经历导致治疗中止的TEAE、SAE或导致死亡的TEAE。2名受试者经历导致剂量调整的TEAE。6名受试者(85.7％)中发生了CRS的AESI。
艾可瑞妥单抗施用诱导循环B细胞的快速和持续消减(在具有可检测B细胞的受试者亚组中，由于既往抗CD20治疗，大多数患者中不存在B细胞)以及外周T细胞和循环IFNγ的增加。
在患者中未观察到针对艾可瑞妥单抗的显著ADA(滴度≥1)。
在GCT3013-01剂量递增部分中，对于合并所有剂量水平，ORR为44.1％；对于RP2D水平(48mg)，ORR为66.7％。
类别效应
艾可瑞妥单抗所属的一类化合物(即双特异性T细胞接合物)报告的不良反应包括CRS、神经系统症状和感染。
B细胞消减可能导致感染风险增加。应根据最佳医疗实践管理感染。应在艾可瑞妥单抗治疗期间和之后监测有风险受试者的潜伏性病毒感染，例如乙型肝炎或巨细胞病毒。GCT3013-01试验和GCT3013-04试验递增部分共有58名受试者经历感染。GCT3013-01扩展或GCT3013-04剂量递增部分中未报告艾可瑞妥单抗相关感染。
艾可瑞妥单抗和其他靶向CD3和嵌合抗原受体T细胞的化合物或药物曾报告CRS。密切监测生命体征，特别是体温、血压和血氧饱和度，以及血液学、肝脏和肾脏参数的实验室评估，对于确保根据需要及时开始支持性护理非常重要。基于(Lee et al.,2019)和(Neelapu et al.,2017)的支持性护理包括但不限于：
·输注盐水
·全身性糖皮质激素、抗组胺药、解热药
·血压支持
·通气支持
·针对IL-6R、IL-6或IL-1的单克隆抗体(例如，托珠单抗、司妥昔单抗(siltuximab)和/或阿那白滞素)
实施了额外的CRS风险降低措施，包括与周期1中艾可瑞妥单抗施用相关的连续4天防治性皮质类固醇施用。大多数CRS事件已报告为1级和2级；仅3名受试者报告了3级CRS。
GCT3013-01和GCT3013-04剂量递增部分中总计86名受试者报告了至少1例CRS事件。大多数病例为1级或2级CRS，而3级CRS仅发生在3名患者中，表明1级或2级CRS是非常常见的事件，而3级似乎很常见。其中，40名(58.8％)受试者(20名受试者-1级；20名受试者-2级)在GCT3013-01剂量递增部分中，40名(47.1％)受试者(24名受试者-1级；14名受试者-2级；2名受试者-3级)在GCT3013-01扩展部分中，并且6名(85.7％)受试者(4名受试者-1级；1名受试者-2级；1名受试者-3级)在GCT3013-04剂量递增部分中。在经历CRS事件的86名受试者中，25名报告为SAE。所有CRS病例经评估均与艾可瑞妥单抗相关，且恢复/消退。未报告危及生命或致死性CRS病例。无CRS导致治疗中止。
其他靶向CD3的化合物或药物报告了范围为意识模糊至致死性脑水肿的神经系统症状。应根据ICANS评价进行神经学评估(Lee et al.,2019)。ICANS分级需要评估10点免疫效应细胞相关脑病评分以及评估4个其他神经学领域：意识水平、癫痫发作、运动症状和颅内压升高/脑水肿体征，可能发生伴或不伴脑病(参见方案)。治疗期间密切监测精神状态对于确保根据需要及时开始支持性护理非常重要。支持性护理包括但不限于：
·开始IV补液
·暂停口服摄入
·避免引起中枢神经系统抑制的药物
·开始皮质类固醇
·抗细胞因子疗法
·抗惊厥疗法
共有7名受试者经历与神经系统症状(AESI)相关的不良事件。GCT3013-01扩展部分的3名受试者发生ICANS，其中1名为致死性。7名受试者中的4名来自GCT3013-01剂量递增部分，并且经历3例严重AESI(3级意识水平低下、3级睡眠过度、1级部分性癫痫发作)和2例非严重AESI(1级书写困难和1级失写症)。
序列表
<110> 健玛保
<120> 针对CD3和CD20的双特异性抗体
<130> P158-WO-PCT
<160> 27
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala
1               5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 2
Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
1               5                   10
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 3
Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1               5                   10                  15
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 4
Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr
1               5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 5
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1               5
<210> 6
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体可变域序列
<400> 6
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
    50                  55                  60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
            100                 105                 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210> 7
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体可变域序列
<400> 7
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
                85                  90                  95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 8
Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr Ala
1               5
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 9
Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile
1               5
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 10
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1               5                   10                  15
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 11
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1               5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体CDR序列
<400> 12
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr
1               5
<210> 13
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体可变域序列
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Asp Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Thr Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体可变域序列
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
            100                 105
<210> 15
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人
<400> 15
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 16
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体恒定区
<400> 16
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 17
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体恒定区
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 18
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体恒定区
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 19
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体恒定区
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 20
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体恒定区
<400> 20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1               5                   10                  15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
        35                  40                  45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
    50                  55                  60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65                  70                  75                  80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
                85                  90                  95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
            100                 105
<210> 22
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1               5                   10                  15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
            20                  25                  30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
        35                  40                  45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
    50                  55                  60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65                  70                  75                  80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
                85                  90                  95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
            100                 105
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 23
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
        35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
    50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
                85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105
<210> 24
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体重链序列
<400> 24
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
    50                  55                  60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
            100                 105                 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
        115                 120                 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
    130                 135                 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
                165                 170                 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
            180                 185                 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
        195                 200                 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
    210                 215                 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225                 230                 235                 240
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
                245                 250                 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
            260                 265                 270
Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
        275                 280                 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
    290                 295                 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305                 310                 315                 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
                325                 330                 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
            340                 345                 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
        355                 360                 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
    370                 375                 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385                 390                 395                 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser
                405                 410                 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
            420                 425                 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
        435                 440                 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
    450
<210> 25
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体轻链序列
<400> 25
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
            20                  25                  30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
        35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
                85                  90                  95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
            100                 105                 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
        115                 120                 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
    130                 135                 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145                 150                 155                 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
                165                 170                 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
            180                 185                 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
        195                 200                 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
    210                 215
<210> 26
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体重链序列
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Asp Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Thr Ile Ser Trp Asn Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
        115                 120                 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
    130                 135                 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145                 150                 155                 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
                165                 170                 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
            180                 185                 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
        195                 200                 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
    210                 215                 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu
225                 230                 235                 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
                245                 250                 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser
            260                 265                 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
        275                 280                 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
    290                 295                 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                 310                 315                 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
                325                 330                 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
            340                 345                 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
        355                 360                 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
    370                 375                 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                 390                 395                 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
                405                 410                 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
            420                 425                 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
        435                 440                 445
Ser Pro Gly
    450
<210> 27
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体轻链序列
<400> 27
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210

Claims (68)

1.治疗人受试者中的B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者皮下施用作为全长抗体的双特异性抗体，所述双特异性抗体包含
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID NO:6的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID NO:7的CDR1、CDR2和CDR3序列；和
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID No:13的CDR1、CDR2和CDR3序列；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID No:14的CDR1、CDR2和CDR3序列；
其中所述双特异性抗体以至少24mg的剂量施用。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述B-NHL选自下组：弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级别B细胞淋巴瘤(HGBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、边缘区淋巴瘤和小淋巴细胞淋巴瘤。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述B-NHL是FL、HGBCL或DLBCL。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述受试者在用所述双特异性抗体治疗之前已接受用CD20单特异性抗体，诸如利妥昔单抗治疗。
5.根据权利要求4所述的方法，其中在所述用CD20单特异性抗体治疗期间，所述癌症复发。
6.根据权利要求4所述的方法，其中在所述用CD20单特异性抗体治疗期间，所述癌症对所述治疗难治。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中所述CD20单特异性抗体用于联合治疗中。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述患者接受进一步的所述B细胞NHL的既往治疗线。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以至少40mg的剂量施用。
10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以40mg至100mg范围内的剂量施用。
11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以至少48mg的剂量施用。
12.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以至少60mg的剂量施用。
13.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以48mg的剂量施用。
14.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体以60mg的剂量施用。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述剂量每周施用。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述每周施用进行至少4次。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中在所述每周施用后，所述抗体每两周施用一次。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述双周施用进行(至少)6次。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中在所述每两周施用一次后，所述抗体每四周施用一次。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其中在施用所述每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的引发剂量。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述引发剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前一周施用。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述引发剂量在50-350μg的范围内。
23.根据权利要求20-22中任一项所述的方法，其中所述引发剂量为160μg。
24.根据权利要求20-23所述的方法，其中在施用所述引发剂量之后且施用所述每周剂量之前，施用所述双特异性抗体的中间剂量。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述引发剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前两周施用，并且所述中间剂量在施用所述每周剂量的第一剂之前一周施用。
26.根据权利要求24或25中任一项所述的方法，其中所述中间剂量在600-1200μg的范围内。
27.根据权利要求24-26中任一项所述的方法，其中所述中间剂量为800μg。
28.根据权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述治疗方法包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
29.根据权利要求24-27所述的方法，其中所述治疗方法包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用48mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用48mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用48mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用48mg的剂量。
30.根据权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述治疗方法包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用引发剂量，在第8天施用中间剂量，并且在第15、22天施用60mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；以及
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
31.根据权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述治疗方法包括以28天的周期皮下施用所述双特异性抗体，其中：
a)在第一周期的第1、8、15和22天，在第1天施用160μg的引发剂量，在第8天施用800μg的中间剂量，并且在第15、22天施用60mg的剂量；用于第一周期；
b)在周期2-3的第1、8、15和22天，施用60mg的剂量；
c)在周期4-9的第1、15天，施用60mg的剂量；
d)在进一步的后续周期的第1天，施用60mg的剂量。
32.根据权利要求28-31中任一项所述的方法，其中所述B细胞NHL是FL、DLBCL和/或HGBCL。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述受试者期间具有在1级或2级的可管理的细胞因子释放综合征(CRS)。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述受试者不经历肿瘤溶解综合征。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述受试者用细胞因子释放综合征(CRS)的防治治疗。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述防治包括皮质类固醇的施用。
37.根据权利要求35-36中任一项所述的方法，其中所述防治与所述双特异性抗体在同一天施用。
38.根据权利要求37中任一项所述的方法，其中所述防治在随后的第2-3天并且任选地第4天，或随后的第2-4天施用。
39.根据权利要求37-38中任一项所述的方法，其中当所述防治与所述双特异性抗体在同一天施用时，所述防治在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。
40.根据权利要求36-39中任一项所述的方法，其中所述皮质类固醇是泼尼松龙，例如为100mg的静脉内剂量，或其等效物，包括口服剂量。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述人受试者用前驱用药治疗以减少对注射的反应。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述前驱用药包括抗组胺药的施用。
43.根据权利要求41-42中任一项所述的方法，其中所述前驱用药包括解热药的施用。
44.根据权利要求41-43中任一项所述的方法，其中所述抗组胺药是苯海拉明，例如为50mg的静脉内或口服剂量，或其等效物。
45.根据权利要求43-44中任一项所述的方法，其中所述解热药是对乙酰氨基酚，例如为650-1000mg的口服剂量，或其等效物。
46.根据权利要求41-45中任一项所述的方法，其中所述前驱用药与所述双特异性抗体在同一天施用。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述前驱用药在所述双特异性抗体施用前30-120分钟施用。
48.根据权利要求28-47中任一项所述的方法，其中如权利要求35-40中定义的所述防治在第一周期期间施用。
49.根据权利要求28-48中任一项所述的方法，其中如权利要求41-47中定义的所述前驱用药在第一周期期间施用。
50.根据权利要求48和49所述的方法，其中当人受试者在周期1中第四次施用所述双特异性抗体后经历大于1级的CRS时，所述防治在第二周期期间施用。
51.根据权利要求50所述的方法，其中当所述人受试者在先前周期的所述双特异性抗体的末次施用中经历大于1级的CRS时，所述防治在后续周期期间继续。
52.根据权利要求49和50所述的方法，其中所述前驱用药任选地在第二周期期间施用。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述前驱用药任选地在后续周期期间施用。
54.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，其中所述第一抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.1、2和3中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.4中所列序列、序列GTN和如SEQ ID NO.5中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3，以及
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，其中
所述第二抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO.8、9和10中所列序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO.
11中所列序列、序列DAS和如SEQ ID NO.12中所列序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。
55.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含：
(i)第一结合臂，其包含与人CD3ε(epsilon)结合的第一抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID NO:6；并且其中所述可变轻链区包含SEQID NO:7；和
(ii)第二结合臂，其包含与人CD20结合的第二抗原结合区，包含可变重链区和可变轻链区，其中所述可变重链区包含SEQ ID No:13；并且其中所述可变轻链区包含SEQ ID No:14。
56.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的第一结合臂衍生自人源化抗体，优选衍生自全长IgG1,λ(lambda)抗体。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述双特异性抗体包含如SEQ ID NO.22中定义的λ轻链恒定区。
58.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体的第二结合臂衍生自人抗体，优选衍生自全长IgG1,κ(kappa)抗体。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述双特异性抗体包含如SEQ ID NO.23中定义的κ轻链恒定区。
60.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是具有人IgG1恒定区的全长抗体。
61.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含惰性Fc区。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述双特异性抗体在第一和第二重链中包含在分别对应于所述第一重链和所述第二重链两者的SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸F、E和A。
63.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在所述第一重链中包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的F405的位置处的氨基酸L，并且其中所述第二重链包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的K409的位置处的氨基酸R，为R，反之亦然。
64.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体在第一和第二重链中包含分别对应于所述第一重链和所述第二重链两者的SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的位置L234、L235和D265的位置处的氨基酸F、E和A，并且其中所述第一重链中包含在对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的F405的位置处的氨基酸L，并且其中所述第二重链包含对应于SEQ ID NO:15的人IgG1重链中的K409的位置处的氨基酸R，为R，反之亦然。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述双特异性抗体包含如SEQ ID NO.19和20中定义的恒定区。
66.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体包含分别如SEQID NO.24和25中定义的重链和轻链，以及如SEQ ID NO.26和27中定义的重链和轻链。
67.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述双特异性抗体由分别如SEQ IDNO.24和25中定义的重链和轻链，以及如SEQ ID NO.26和27中定义的重链和轻链组成。
68.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述双特异性抗体是艾可瑞妥单抗或其生物类似物。
CN202180041298.9A 2020-05-08 2021-05-07 针对cd3和cd20的双特异性抗体 Pending CN115916166A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063022212P 2020-05-08 2020-05-08
US63/022,212 2020-05-08
US202063078667P 2020-09-15 2020-09-15
US63/078,667 2020-09-15
US202063121690P 2020-12-04 2020-12-04
US63/121,690 2020-12-04
PCT/EP2021/062231 WO2021224499A1 (en) 2020-05-08 2021-05-07 Bispecific antibodies against cd3 and cd20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115916166A true CN115916166A (zh) 2023-04-04

Family

ID=75870647

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180041298.9A Pending CN115916166A (zh) 2020-05-08 2021-05-07 针对cd3和cd20的双特异性抗体

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20230227570A1 (zh)
EP (1) EP4146175A1 (zh)
JP (1) JP2023524149A (zh)
KR (1) KR20230008775A (zh)
CN (1) CN115916166A (zh)
AU (1) AU2021267402A1 (zh)
BR (1) BR112022022730A2 (zh)
CA (1) CA3176436A1 (zh)
IL (1) IL297986A (zh)
MX (1) MX2022013797A (zh)
WO (1) WO2021224499A1 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022053657A1 (en) * 2020-09-10 2022-03-17 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
US20230312757A1 (en) 2020-09-10 2023-10-05 Genmab A/S Bispecific antibodies against cd3 and cd20 for treating chronic lymphocytic leukemia
KR20230066583A (ko) 2020-09-10 2023-05-16 젠맵 에이/에스 미만성 대 b-세포 림프종을 치료하기 위한 조합 요법에서의 cd3 및 cd20에 대한 이중특이적 항체
US20230357440A1 (en) * 2020-09-10 2023-11-09 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
AU2021339954A1 (en) 2020-09-10 2023-04-13 Genmab A/S Bispecific antibody against CD3 and CD20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
WO2023198839A2 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genmab A/S Bispecific antibodies against cd3 and cd20
WO2023204290A1 (ja) * 2022-04-21 2023-10-26 愛知県 多重特異性ナノ粒子
US20240174761A1 (en) 2022-11-02 2024-05-30 Genmab A/S Bispecific antibodies against cd3 and cd20 for treating richter's syndrome

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
AU751659B2 (en) 1997-05-02 2002-08-22 Genentech Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DK3284753T3 (da) 2002-10-17 2021-07-05 Genmab As Humane monoklonale antistoffer mod cd20 til anvendelse i behandlingen af multipel sclerose
US7741568B2 (en) 2005-01-13 2010-06-22 The Wiremold Company Downward facing receptacle assembly for cable raceway
KR101374454B1 (ko) 2005-03-31 2014-03-17 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 회합제어에 의한 폴리펩티드 제조방법
AU2006317242A1 (en) 2005-11-28 2007-05-31 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
JP6157046B2 (ja) 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
EP3505636A1 (en) 2009-04-27 2019-07-03 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
TWI426920B (zh) 2010-03-26 2014-02-21 Hoffmann La Roche 雙專一性、雙價抗－ｖｅｇｆ／抗－ａｎｇ－２抗體
SG10201800757TA (en) 2010-04-20 2018-02-27 Genmab As Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
CN104114579B (zh) 2011-10-27 2020-01-24 健玛保 异二聚体蛋白的生成
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
ME03675B (me) * 2013-07-05 2020-10-20 Genmab As Humanizovana ili himerna anтi-cd3 antiтela
CN107660214B (zh) 2015-01-08 2022-02-08 根马布股份公司 针对cd3和cd20的双特异性抗体
BR112018000696A2 (pt) * 2015-07-15 2018-09-18 Genmab As ?anticorpo, métodos para reduzir e para aumentar a afinidade de ligação de um anticorpo que se liga ao cd3 humano, para tratar e para diagnosticar uma doença, para produzir um anticorpo e para detectar a presença de antígeno de cd3, construto de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, e, kit?
EP3464370A1 (en) * 2016-06-01 2019-04-10 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd20 and cd3 for use in the treatment of lymphoma
US20210032358A1 (en) * 2018-02-09 2021-02-04 Genmab A/S Pharmaceutical compositions comprising bispecific antibodies directed against cd3 and cd20 and their uses
KR20220047808A (ko) * 2019-08-15 2022-04-19 젠맵 에이/에스 Cd3 및 cd20에 대해 지시된 이중특이적 항체를 포함하는 제약 조성물 및 그의 용도
AU2021339954A1 (en) * 2020-09-10 2023-04-13 Genmab A/S Bispecific antibody against CD3 and CD20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
US20230357440A1 (en) * 2020-09-10 2023-11-09 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
WO2022053657A1 (en) * 2020-09-10 2022-03-17 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021224499A1 (en) 2021-11-11
MX2022013797A (es) 2022-11-30
US20210371538A1 (en) 2021-12-02
BR112022022730A2 (pt) 2023-02-14
AU2021267402A1 (en) 2022-11-24
IL297986A (en) 2023-01-01
CA3176436A1 (en) 2021-11-11
KR20230008775A (ko) 2023-01-16
JP2023524149A (ja) 2023-06-08
EP4146175A1 (en) 2023-03-15
US20230227570A1 (en) 2023-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN115916166A (zh) 针对cd3和cd20的双特异性抗体
US11608383B2 (en) Bispecific antibody against CD3 and CD20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
US11858995B2 (en) Bispecific antibodies against CD3 and CD20 for treating chronic lymphocytic leukemia
US11548952B2 (en) Bispecific antibody against CD3 and CD20 in combination therapy for treating diffuse large B-cell lymphoma
KR20230066391A (ko) 여포성 림프종을 치료하기 위한 조합 요법에서의 cd3 및 cd20에 대한 이중특이적 항체
JP2023541860A (ja) びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
KR20210131997A (ko) 항-btla 항체
KR20230066392A (ko) 미만성 대 b-세포 림프종을 치료하기 위한 조합 요법에서의 cd3 및 cd20에 대한 이중특이적 항체
WO2023198839A2 (en) Bispecific antibodies against cd3 and cd20
TW202345895A (zh) 在用於治療瀰漫性大型ｂ細胞淋巴瘤之組合療法中針對ｃｄ３和ｃｄ２０之雙特異性抗體

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40089030

Country of ref document: HK