JP2011507882A - Fdf03抗体およびそれの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は免疫学および医薬品の分野に関連する。さらにとりわけ、本発明はインビボにおける抗腫瘍活性を高めるためのFDF03活性の調節、およびそのような調節を媒介する化合物の同定に関連する。
免疫細胞の活性化の閾値は、自己および異種抗原の認識を通して受け取られる、活性化ならびに阻害シグナルによって調節される。活性化または阻害受容体に影響する遺伝的欠損は、免疫機構を、自己と非自己との間を識別することができない状態にし、これは自己免疫または感染性因子および形質転換された細胞に対する異常な応答を引き起こす(例えば、非特許文献1および非特許文献2を参照のこと)。
本発明は、免疫応答の重大な調節因子としての、FDF03受容体の生理学的な役割に関連する。マウスのモデルにおいて、FDF03受容体の阻害形態を刺激することは、原発性の腫瘍および副産物の両方への抗腫瘍免疫反応性の増大ならびに転移の負荷の低減を結果として生じ、このことはFDF03が免疫学的監視における重要なプレーヤーであることを示唆する。したがって、本発明の目的は、特にがんにおける免疫反応性を変えるためのFDF03の調節に関連する。FDF03受容体を調節する薬剤を同定する能力は、免疫応答の外部調節を可能にし、さらに、腫瘍の免疫学的監視の増進が、発癌および腫瘍増殖を防げない場合、少なくとも低減することを可能にし得る。
異なる定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者によって普通に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で参照される全ての特許、公開された特許出願および他の出版物ならびにGenBankおよび他のデータベース由来の配列は、その全容が参照によって援用される。本節で示される定義が、参照によって本明細書に援用される特許、公開された特許出願および他の出版物ならびにGenBankおよび他のデータベース由来の配列で示される定義に反するまたはそうでなければ矛盾する場合、本節で示される定義が、参照によって本明細書に援用される定義に優先する。
本明細書において特徴とされるのは、被験体の腫瘍に対する、細胞に媒介される応答を、刺激するまたは増大させるための方法であり、これは、この方法を必要としている被験体へ、FDF03阻害受容体の生物学的な活性を刺激する、または阻害および活性化の両方のFDF03受容体に結合する薬剤を投与することを含む。さらに本明細書において特徴とされるのは、標的に対する、細胞の細胞傷害性を上昇させる方法であり、これは、細胞に、FDF03活性を調節する薬剤の有効量を投与することを含み、ここで、FDF03阻害受容体の活性は高められる。さらに、本明細書において特徴とされるのは、腫瘍の微小環境によって誘導される免疫抑制性環境を和らげる方法である。
本明細書において特徴とされるのは、がんを防ぐまたは処置する方法であり、これは、がんを防ぐまたは処置することを必要としている被験体に、FDF03阻害受容体の生物学的な活性を刺激する有効量の薬剤を投与することを含む。いくつか実施形態において、がんは皮膚がんである。
(D.治療学の組成物、方法)
本発明は、例えば、増殖性の病状および障害(がん、腫瘍、新脈管形成、悪液質、がん悪液質、食欲不振、および前がん障害(例えば、形成異常症)を含む)の処置における使用のためのFDF03抗体を提供する。
本発明は、診断のキットにおけるFDF03タンパク質、その断片、核酸、およびその断片を提供する。結合組成物(FDF03の検出のための抗体または抗体断片、ならびにそれらの代謝産物および分解産物を含む)もまた提供される。一般に、キットは、FDF03ポリぺプチド、もしくはその抗原性断片のいずれか、それらへの結合組成物、または核酸(例えば、核酸のプローブもしくはプライマー)を含む区画を有する。核酸のプローブもしくはプライマーは、FDF03の活性化または阻害形態のいずれかをコードしている核酸に、ストリンジェント条件下で特異的にハイブリダイズする。
(I.一般的な方法)
分子生物学における標準的方法は、記載されている(Maniatisら(1982)Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY;SambrookおよびRussell(2001)Molecular Cloning,3rd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, NY;Wu(1993)Recombinant DNA,Vol.217,Academic Press,San Diego,CA)。標準的方法はまたAusbelら(2001)Current Protocols in Molecular Biology,Vols.1−4,John Wiley and Sons,Inc.New York,NYに載っており、これは、細菌の細胞におけるクローニングおよびDNA変異誘発(Vol.1)、哺乳動物の細胞および酵母におけるクローニング(Vol.2)、複合糖質およびタンパク質の発現(Vol.3)ならびにバイオインフォマティクス(Vol.4)を記載している。
FDF03活性化受容体−Ig融合タンパク質を構築した。これはヒトIgG1のFc部分に融合されたマウスFDF03活性化受容体の細胞外のドメインからなった。上記細胞外残基(アミノ酸29−192に対応する、例えば、GenBank Accession No.Q9UKJ0を参照のこと)を、プラスミドLL1091を産生するため、修飾されたpCDM8.Ig発現プラスミド(E.E Batesら(1998)Mol Immunol.35:513)のXho1部位にサブクローン化した。LL1091を、可溶性FDF03活性化受容体−Ig融合タンパク質を産生するために293T細胞中で一時的に発現させた。Lewisラットを、融合タンパク質を用いて免疫した。ハイブリドーマ融合物を、免疫したFDF03活性化受容体−Ig融合タンパク質(そして、陰性の対照として、無関係のヒトIg融合タンパク質)に対する、ELISAによって選別した。
DX173抗体は、活性化および阻害の両方のマウスFDF03受容体を認識する。ラットの抗ヒトIL−4 mAb(25D2)を対照として用いた。平板培養された4T1腫瘍細胞をトリプシン処理し(TrypLE)そしてFBSを除去するためにPBS(45ml)中で2回洗浄した。細胞をその後、1.0×106細胞/mlの濃度でPBS中に再懸濁し、そして氷上に置いた。マウスに200μL(2.0×105 細胞)を皮下に注射した。注射を膝から1.5CM尾側の左側腹部および膝から約0.5CM腹側の左側腹部に行った。
DX276 Abは、阻害FDF03を認識し、ならびにDX173 Abは、活性化および阻害の両方のFDF03を認識する。平板培養されたCT26腫瘍細胞を、トリプシン処理し(TrypLE)そしてFBSを除去するためにPBS(45ml)中で2回洗浄した。細胞をその後、1.0×106細胞/mlの濃度でPBS中に再懸濁し、そして氷上に置いた。マウスに200μL(2.0×105細胞)を皮下に注射した。注射を膝から1.5CM尾側の左側腹部および膝から約0.5CM腹側の左側腹部に行った。腫瘍移植後7日目に、動物を、表2において記載しているように、腫瘍の大きさの視覚的評価に基づいて4群に無作為に割り当てた(一群当たりn=6)。腫瘍移植後8日目に、動物はまた、PBS(緩衝液の対照)、1mgのIgG1アイソタイプmAb(PAB557)(Ab対照)、1mgの抗FDF03二重特異的mAb(DX173)、または1mgの抗FDF03阻害mAb(DX276)のいずれかの皮下注射(250μL容量にて)を受けた。動物を、3週間にわたって、このレジメンを用いて週当たり3回処置した(全9回の処置)。
Claims (18)
- 腫瘍増殖の阻害を必要としている被験体に、FDF03阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法。
- 前記薬剤は前記FDF03阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片である、請求項1に記載の方法。
- 前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項2に記載の方法。
- 前記腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍である、請求項1に記載の方法。
- 前記被験体はヒトである、請求項1に記載の方法。
- 転移の負荷の低減を必要としている被験体に、FDF03阻害受容体の生物学的な活性を刺激するまたは高める薬剤を投与することを含む、被験体における転移の負荷を低減するための方法。
- 前記薬剤は前記FDF03阻害受容体に特異的なアゴニスト抗体もしくは部分的なアゴニスト抗体またはこれらの抗体の断片である、請求項6に記載の方法。
- 前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項7に記載の方法。
- 前記被験体はヒトである、請求項6に記載の方法。
- 腫瘍増殖の阻害を必要としている被験体に、FDF03阻害受容体およびFDF03活性化受容体に結合する薬剤を投与することを含む、被験体における腫瘍増殖を阻害するための方法。
- 前記薬剤は前記FDF03阻害受容体および前記FDF03活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗体の断片である、請求項10に記載の方法。
- 前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項11に記載の方法。
- 前記腫瘍は原発性のまたは転移性の腫瘍である、請求項10に記載の方法。
- 前記被験体はヒトである、請求項10に記載の方法。
- 転移の負荷の低減を必要としている被験体に、FDF03阻害受容体およびFDF03活性化受容体に結合する薬剤を投与することを含む、転移の負荷を低減するための方法。
- 前記薬剤は前記FDF03阻害受容体および前記FDF03活性化受容体に結合する二重特異的抗体またはこの抗体の断片である、請求項15に記載の方法。
- 前記抗体はヒト化抗体、完全なヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項16に記載の方法。
- 前記被験体はヒトである、請求項15に記載の方法。
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