BR112015023752B1 - Domínio de reconhecimento modular (mrd), complexo compreendendo mrd e cetuximabe, usos do complexo para inibir a angiogênese e tratar câncer e composição farmacêutica compreendendo o dito complexo - Google Patents

Domínio de reconhecimento modular (mrd), complexo compreendendo mrd e cetuximabe, usos do complexo para inibir a angiogênese e tratar câncer e composição farmacêutica compreendendo o dito complexo Download PDF

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Abstract

D O M Í N I O D E R E C O N H E C I M E N T O M O D U L A R ( M R D ) , COMPLEXOCOMPREENDENDO MRD E CETUXIMABE, USOS DO COMPLEXO PARAINIBIR A ANGIOGÊNESE E TRATAR CÂNCER E COMPOSIÇÃOFARMACÊUTICA COMPREENDENDO O DITO COMPLEXO.Composições contendo complexos monovalentes e multivalentemultiespecíficos tendo estruturas tais como anticorpos que suportam taisfuncionalidades de ligação são descritos. O uso de e método de composiçõescontendo complexos multiespecíficos monovalentes e multivalentes tendoestruturas, tais como anticorpos, que suportam tais funcionalidades de ligaçãotambém são descritos.

Description

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO Campo da Invenção
[001]Esta invenção diz respeito geralmente a composições contendo complexos multiespecíficos multivalentes e a composições contendo complexos multiespecíficos multivalentes e monovalente possuindo estruturas, tais como anticorpos, que suportam tais funcionalidades de ligação. A invenção também refere-se geralmente a métodos para fazer essas composições multiespecíficas e os usos de diagnóstico e terapêuticos destas composições.
Fundamentos
[002]Nos últimos anos, os esforços de descoberta de drogas têm-se centrado principalmente em agentes de identificação que modulam alvos individuais pré-selecionados. No entanto, os agentes direcionados para alvos individuais frequentemente mostram eficácias limitadas e perfis de segurança e de resistência pobres, como resultado da robustez, redundância, interferência, redes de sinalização compensatórias e as atividades da rede anti- ou contra- sinalização associadas ao alvo terapêutico. Consequentemente, os esforços de descoberta de drogas têm sido cada vez mais direcionados para a descoberta de novas terapias baseadas em multicomponentes.
[003]O desenvolvimento de moléculas bi específicas ou multiespecíficas que alvejam dois ou mais alvos simultaneamente oferecem uma nova e promissora solução para a descoberta de novos agentes de multialvos orientados por sistemas demonstrando eficácia melhorada e propriedades farmacológicas em relação a monoterapias convencionais. Numerosas tentativas para desenvolver moléculas multiespecíficas têm sido baseadas em domínios ou subdomínios semelhantes a imunoglobulina. Por exemplo, tradicionalmente, anticorpos bi específicos tem sido preparados através da ligação química de dois anticorpos monoclonais diferentes, ou através da fusão de duas linhas celulares de hibridoma para a produção de um hibridoma híbrido. Outras tecnologias baseadas em domínio tipo imunoglobulina que criaram moléculas multiespecíficas, e/ou multivalentes incluem dAbs, diacorpos, TandAbs, nanocorpos, BiTEs, SMIPs, DNLS, Afficorpos, Fynomers, Domínios unitz, Albu-dabs, DARTs, DVD-IG, corpos Covx, pepticorpos, scFv-Ig, SVD-Ig, dAb-Igs, Botões no buraco, DuoBodies ™ e triomAbs. Embora cada uma destas moléculas podem ligar um ou mais alvos, cada um deles apresenta desafios no que diz respeito à retenção da função típica de Ig (por exemplo, meia-vida, função efetora), produção (por exemplo, o rendimento, pureza), valência, reconhecimento do alvo simultâneo, e biodisponibilidade.
[004]Outras tentativas para gerar moléculas multiespecíficas e multivalentes têm contado com estruturas alternativas, polipeptídeos a base de VASP, polipeptídeo pancreático Avian (APP), tetranectina (baseado em CTLD3), Affilina (baseado em YB-cristalina/ubiquitina), amarrações, domínios SH3 , domínios PDZ, Tendamistat, transferrina, um domínio de repetição de consenso de anquirina (por exemplo, DARPins), dobras de proteína lipocalina (por exemplo, Duocalins), fibronectina (ver, por exemplo, o pedido de Publ. US Nos. 2003/0170753 e 20090155275 que são aqui incorporadas por referência), um domínio de proteína A (por exemplo, Afficorpos), tioredoxina. Outras tentativas têm contado com estruturas alternativas fundidas ou polipeptídeos associados de interesse com albumina (por exemplo, ALBUdAb (Domantis/GSK) e ALB-Kunitz (Dyax)), sequências de repetição não estruturadas de 3 ou 6 aminoácidos (por exemplo, tecnologia PASylation® e tecnologia XTEN ®), e as sequências que contêm domínios de repetição de elastina semelhantes (ver, por exemplo, Pedido de Patente N° 61/442, 106, que é aqui incorporado por referência). Até à data, estas tecnologias têm demonstrado potencial clínico limitado como plataformas robustas para o desenvolvimento de composições terapêuticas multiespecíficas e multivalentes.
[005]A complexidade genética da maioria das malignidades humanas e outros distúrbios sugerem fortemente que interferindo com um único alvo ou caminho associado com esses distúrbios é improvável que produza benefício terapêutico ótimo ou sustentado. Existe, portanto, uma grande necessidade desenvolver terapias multiespecíficas e multivalentes, tais como anticorpos multiespecíficos que são capazes de interferir com a atividade vários alvos e/ou mecanismos de sinalização ou para otimizar os benefícios terapêuticos de tratamentos direcionados a estes distúrbios.
BREVE RESUMO DA INVENÇÃO
[006]A invenção refere-se a composições contendo complexos multivalente, bem como monovalente e multivalente, multiespecíficos tendo estruturas, tais como anticorpos, que suportam tais funcionalidades de ligação. A invenção é baseada em parte na descoberta surpreendente de que as composições de ligação multiespecíficas e multivalentes, tais como os geradas utilizando a plataforma ZICORPO ™ (Zyngenia, Inc.; ver, por exemplo, Intl. Pub. N° WO 2009/088805, que é aqui incorporada por referência) demonstram atividade biológica sinérgica dramática em comparação com combinações de monoterapia convencionais. Esta atividade sinergística é esperada para estender a novas terapias, para tratar ou prevenir o câncer, as doenças ou distúrbios do sistema imune (por exemplo, doenças autoimunes, tais como, artrite reumatóide, e IBD), sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular ( por exemplo, acidente vascular cerebral, doenças do coração), sistema nervoso (por exemplo, mal de Alzheimer), doença infecciosa (por exemplo, HIV), e outras doenças ou distúrbios aqui descritos ou caso contrário conhecidos na técnica.
[007]Em uma modalidade, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífica a um paciente em necessidade da mesma. Em uma outra modalidade, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD multivalente e multiespecífico a um paciente em necessidade do mesmo.
[008]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para três ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para quatro ou mais alvos. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para cinco ou mais alvos. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos estão localizados em uma superfície celular. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos são alvos solúveis (fatores por exemplo, quimiocinas, citocinas, e fatores de crescimento). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos aqui descritos.
[009]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com câncer. Em uma outra modalidade os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com 1, 2, 3, 4 ou mais vias de sinalização diferentes ou modos de ação ou associados ao câncer.
[010]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em uma outra modalidade os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com 1, 2, 3, 4 ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune.
[011]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associadas com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa. Em uma outra modalidade os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com 1, 2, 3, 4, 5 ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose) , sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga monovalente, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos aqui descritos.
[012]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para três ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para quatro ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para cinco ou mais alvos.
[013]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para três ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para quatro ou mais alvos. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para cinco ou mais alvos. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, ou mais dos alvos estão associadas com a membrana celular. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, ou mais dos alvos são alvos solúveis (por exemplo, quimiocinas, citocinas, e fatores de crescimento). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a 1, 2, 3, 4, ou mais dos alvos aqui descritos.
[014]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com câncer. Em uma outra modalidade dos alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com 1, 2, 3, 4, ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados ao câncer.
[015]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em uma outra modalidade os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com 1, 2, 3, 4, ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune.
[016]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente liga a (1) um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno associado a tumor em uma célula de tumor, uma célula imune, uma célula doente, ou um agente infeccioso) e (2) um alvo em uma célula efetora. De acordo com uma modalidade, a ligação de um ou mais alvos pela composição multiespecífica multivalente e monovalente direciona uma resposta imune a uma célula, tecido, agente infeccioso, ou outro local de interesse, em um paciente. Em algumas modalidades a célula efetora é um leucócito, tal como uma célula T ou células assassinas naturais. Em outras modalidades, a célula efetora é uma célula acessória, tal como uma célula mielóide ou uma célula dendrítica.
[017]Em modalidades adicionais, composição multiespecífica multivalente e monovalente liga a (1) um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno associado a tumor em uma célula de tumor, uma célula imune, uma célula doente, ou um agente infeccioso) e (2) um alvo em um leucócito, tal como uma molécula receptora de células-T. De acordo com uma modalidade, a ligação de um ou mais alvos pela composição multiespecífica multivalente e monovalente direciona uma resposta imune a um agente infeccioso, célula, tecido, ou outro local de interesse, em um paciente. Por exemplo, em algumas modalidades a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo monovalente na superfície de uma célula T. Em modalidades particulares, a composição se liga a um alvo CD3 selecionado dentre CD3 delta, CD3 epsilon, gama CD3, zeta CD3, alfa TCR, beta TCR, e multimeros de proteínas no complexo (TCR) CD3. Em modalidades específicas a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD2. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo expresso em uma célula assassina natural. Assim, em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo selecionado a partir de: CD2, CD56, e CD161.
[018]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo expresso em uma célula acessória (por exemplo, mielóide). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo selecionado de: CD64 (p.ex., Fc gama RI), um MHC de classe 2 e a sua cadeia invariante, TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, e TLR6.
[019] [0019] De acordo com outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação (ou seja, é monovalente) para um alvo. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, tal como uma célula T (por exemplo, CD3), e vários sítios de ligação (ou seja, é multivalente) para um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno associado a tumor em uma célula de tumor, tal como um alvo aqui divulgado). Em outras modalidades, a composição multiespecífica contém sítios de ligação individuais para 2 alvos diferente (ou seja, se liga monovalentemente mais do que um alvo diferente). Em modalidades particulares, a célula ou tecido de interesse é uma célula de câncer, célula imune, célula doente, ou um agente infeccioso.
[020]Em algumas modalidades, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação para CD3. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação para CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno de tumor ou outro alvo aqui divulgado). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica tem um único sítio de ligação para CD3 e um único sítio de ligação para um alvo diferente (isto é, liga monovalentemente CD3 e um alvo diferente). Em outras modalidades, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente tem um único sítio de ligação para CD3 epsilon. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem um único sítio de ligação para CD3 epsilon e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno de tumor ou outro alvo aqui divulgado). Em outras modalidades, a composição multiespecífica tem um único sítio de ligação para CD3 epsilon e um único sítio de ligação para um alvo diferente (isto é, liga monovalentemente CD3 epsilon e um alvo diferente). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui múltiplos sítios de ligação para um alvo em uma célula de câncer selecionada dentre câncer da mama, câncer coloretal, câncer do endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma Não-Hodgkin, leucemia, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer de pâncreas e câncer de tireoide.
[021]Em modalidades adicionais, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente que tem um único sítio de ligação para um alvo (ou seja, que monovalentemente se liga a um alvo) a uma paciente em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, tal como uma célula T (por exemplo, CD3). Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, tal como uma célula T (por exemplo, CD3) e vários sítios de ligação a (isto é, é capaz de ligação multivalente) um alvo localizado em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica tem um único sítio de ligação para um alvo num leucócitos (por exemplo, CD3) e um único sítio de ligação para um alvo diferente. Em algumas modalidades, a célula de interesse é uma célula de tumor a partir de um câncer selecionado de câncer da mama, câncer colorretal, câncer do endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma Não-Hodgkin, leucemia, câncer da próstata, câncer da bexiga, câncer de pâncreas e câncer de tireoide. Em modalidades adicionais, a composição monovalente e multivalente multiespecífica tem múltiplos sítios de ligação para um alvo sobre um tumor neurológico. Em modalidades particulares, o tumor neurológico é um glioma (por exemplo, um glioblastoma, glioblastoma multiforme (GBM), e astrocitoma), ependimoma, oligodendroglioma, neurofibroma, sarcoma, meduloblastoma, tumor neuroectodérmico primitivo, adenoma da pituitária, neuroblastoma ou câncer das meninges ( por exemplo, meningioma, meningiosarcoma e gliomatosis).
[022]De acordo com outras modalidades, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que tem um única sítio de ligação para um alvo (ou seja, que se liga monovalentemente um alvo) e vários sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais diferentes alvos. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem sítios de ligação individuais para 2 alvos diferentes. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui múltiplos sítios de ligação para um alvo em uma célula de câncer selecionado dentre câncer da mama, câncer colorretal, câncer do endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma Não-Hodgkin, leucemia, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer de pâncreas e câncer de tireoide.
[023]Em modalidades adicionais, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que tem um único sítio de ligação para CD3 (por exemplo, CD3 epsilon) que liga monovalentemente CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes localizados em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula tumoral). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação a CD3 (por exemplo, CD3 epsilon) e um único sítio de ligação para um alvo diferente e também tem múltiplos sítios de ligação para um alvo localizado a uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui múltiplos sítios de ligação a um alvo em uma célula de câncer selecionado dentre câncer da mama, câncer colorretal, câncer do endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma Não- Hodgkin, leucemia, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer de pâncreas e câncer de tireoide.
[024]De acordo com outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação a (ou seja, liga-se monovalentemente) um alvo de superfície celular que requer multimerização para sinalização. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem um único sítio de ligação para um receptor do fator de crescimento. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação para um membro da superfamília de receptores TNF. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica adicionalmente tem um único sítio de ligação a um alvo diferente (isto é, se liga monovalentemente mais do que um alvo diferente).
[025]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica monovalente e multivalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) se liga a um sistema de transporte mediado por receptor de barreira hematoencefálica endógena (BBB) e é capaz de atravessar para o lado do cérebro (fluido cerebrospinal) da BBB. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem dois sítios de ligação para um ou mais antígeno alvo associado com um sistema de transporte mediado por receptor BBB endógeno. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem um único sítio de ligação para um alvo associado a um sistema de transporte mediado por receptor BBB endógeno (por exemplo, sistemas de transporte mediados pelo receptor da insulina, receptor de transferrina, receptor de leptina, receptores de lipoproteína, e o receptor de IGF). Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga adicionalmente a 1, 2, 3, 4, 5, ou mais alvos localizados no lado do cérebro do BBB. Em modalidades particulares, o anticorpo se liga a MRD contendo 1, 2, 3, 4, 5, ou mais alvos associados com uma doença ou distúrbio neurológico. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada a um paciente para tratar um câncer do cérebro, câncer metastático do cérebro, ou câncer primário do cérebro. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada a um paciente para o tratamento de lesão cerebral, acidente vascular cerebral, lesão da medula espinal, ou para controlar a dor.
[026]Em modalidades adicionais, alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa. Em uma outra modalidade, um alvo ligado pela composição multiespecífica multivalente e monovalente está associado com 1, 2, 3, 4, 5 ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma ou mais das doenças ou distúrbios acima. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos aqui descritos.
[027]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente é um ZICORPO™ (aqui referido como um "anticorpo contendo MRD", ou outros semelhantes). Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD contém sítios de ligação para três ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD contém 2 sítios de ligação para quatro ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD contém 2 sítios de ligação para cinco ou mais alvos.
[028]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém 2 sítios de ligação para três ou mais alvos. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém 2 sítios de ligação para quatro ou mais alvos. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém 2 sítios de ligação para cinco ou mais alvos. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos estão localizados em uma superfície celular. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos são alvos solúveis (por exemplo, quimiocinas, citocinas, e fatores de crescimento). Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD liga, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos aqui descritos.
[029]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) estão associados com o câncer. Em uma outra modalidade os alvos ligados pelo anticorpo contendo MRD estão associados com 1, 2, 3, 4 ou mais vias de sinalização diferentes ou modos de ação associados ao câncer.
[030]Em modalidades adicionais, um alvo ligado pela composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) está associado com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em uma outra modalidade os alvos ligados são anticorpo contendo MRD associado com 1, 2, 3, 4, 5 ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune.
[031]Em modalidades adicionais, um alvo ligado pela composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) está associado com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético, sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa. Em uma outra modalidade um alvo ligado pelo anticorpo contendo MRD é associado com 1, 2, 3, 4 ou mais diferentes vias de sinalização ou modos de ação associados com uma ou mais das doenças ou distúrbios acima. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga 1, 2, 3, 4 ou mais dos alvos aqui descritos.
[032]As composições multiespecíficas e multivalentes da invenção (por exemplo, anticorpos contendo MRD) oferecem a possibilidade alvejar seletivamente alvos múltiplos (por exemplo, receptores e alvos associados a microambiente) tendo por exemplo, mecanismos de ação diferentes, sobrepostos ou redundantes associados com a etiologia ou patofisiologia de uma doença ou distúrbio.
[033]Em modalidades adicionais, a invenção abrange uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que está covalentemente ou de outra forma associado com um agente citotóxico. De acordo com algumas modalidades, o agente citotóxico é ligada covalentemente a um anticorpo contendo MRD por um ligante. De acordo com algumas modalidades, o agente citotóxico é um agente quimioterapêutico, um agente inibidor do crescimento, uma toxina (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, de origem vegetal, ou animal, ou seus fragmentos), isótopo radioativo (ou seja, um radioconjugado), ou pró-fármaco. As composições da invenção são opcionalmente ligadas ao agente citotóxico por um ligante. Em modalidades particulares, um ligante fixa a composição multiespecífica multivalente e monovalente e o agente citotóxico é clivável por uma protease. Em modalidades particulares, um ligante fixa a composição multiespecífica multivalente e monovalente e o agente citotóxico é clivável sob pH baixo ou condições redutoras. Os métodos de utilização de composições de agentes citotóxicos composição da invenção (por exemplo, conjugados de fármacos de anticorpo contendo MRD) são também abrangidos pela invenção.
[034]Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas estão covalentemente ou de outra forma associadas com um agente citotóxico selecionado de, por exemplo, uma toxina, enterotoxina, neurotoxina, leucocidina ou hemolisina, um agente quimioterapêutico, uma porção de fármaco (por exemplo, um agente quimioterapêutico agente ou pró- fármaco), um antibiótico, um isótopo radioativo, um ligante quelante (por exemplo, DOTA, DOTP, DOTMA, DTP A e TETA), e uma enzima nucleolítica. Em modalidades particulares, o agente citotóxico é selecionado de auristatina e dolostantin, MMAE, MMAF, e um derivado de maitansinol (por exemplo, DM1 (N(2')-desacetil-N(2')-(3-mercapto-1-oxopropil)-maitansina), DM3 (N(2')- desacetil-N2-(4-mercapto-1-oxopentil-maitansina)), e DM4 (N(2')-desacetil-N2- (4-mercapto-4- metil-1-oxopentil)-maitansina). Em modalidades adicionais, a composição multivalente e multiespecífica é covalentemente ou de outra forma associada com um agente citostático.
[035]Em outras modalidades, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) é administrada em combinação com uma terapia de multialvejamento. Em uma modalidade, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada em combinação com um inibidor de proteína quinase de multialvejamento. Em uma outra modalidade, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada em combinação com um inibidor B de NF. Em uma modalidade adicional, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente é administrada em combinação com um inibidor de HDAC. Em uma outra modalidade, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada em combinação com um inibidor de HSP70 ou HSP90. Em uma outra modalidade, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente é administrada em combinação com quimioterapia.
[036]Em algumas modalidades, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) é administrada em combinação com uma terapia monoespecífica (por exemplo, um anticorpo monoclonal).
[037]Em algumas modalidades, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção é um anticorpo de comprimento completo que compreende pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD). Em algumas modalidades, o anticorpo de comprimento completo compreende múltiplos MRDs. Em modalidades adicionais, o anticorpo de comprimento completo compreende mais do que um tipo de MRD (isto é, MRDs múltiplos tendo as mesmas ou diferentes especificidades). Também incorporados na presente invenção estão variantes e derivados de tais complexos do anticorpo.
[038]Os MRDs dos anticorpos contendo MRD podem ser operacionalmente ligados aos anticorpos em qualquer local em que o anticorpo (por exemplo, o terminal amino da cadeia pesada ou da cadeia leve ou o terminal carboxila da cadeia pesada ou cadeia leve), pode estar ligado ao mesmo ou diferentes terminais, e são, opcionalmente, operativamente ligados uns aos outros ou ao anticorpo através de um ligante.
[039]Os anticorpos dos anticorpos contendo MRD podem ser qualquer molécula de imunoglobulina que se liga a um antígeno e podem ser de qualquer tipo, classe, ou subclasse. Em algumas modalidades, o anticorpo é humanizado ou humano. Em outras modalidades, os anticorpos incluem também modificações que não interferem com a sua capacidade para se ligar ao antígeno. Em modalidades particulares, as composições multiespecíficas multivalentes e (por exemplo, anticorpos contendo MRD) incluem modificações que aumentam a ADCC, diminuir ADCC, aumentam CDC, diminuem CDC ou, que aumente a meia-vida do anticorpo, ou diminua a meia-vida do anticorpo em comparação com o anticorpo sem a modificação.
[040]Os anticorpos das composições multiespecíficas e multivalentes (por exemplo, Anticorpos contendo MRD) da presente invenção podem ser qualquer anticorpo que se liga a um alvo de valor terapêutico ou de diagnóstico. Em modalidades preferidas, o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a um alvo validado. Em algumas modalidades, os anticorpos correspondentes são anticorpos contendo MRD em ensaios clínicos para aprovação regulatória. Em algumas modalidades, os anticorpos correspondentes aos anticorpos contendo MRD são comercializados.
[041]Em uma modalidade, o anticorpo se liga a um antígeno da superfície celular. Em outra modalidade, o anticorpo se liga a um fator angiogênico. Em uma outra modalidade, o anticorpo se liga a um receptor de angiogênico.
[042]Em algumas modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a um alvo selecionado de: EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, receptor do fator de crescimento I semelhante à insulina, VEGF, VEGF-R e antígeno da membrana específica da próstata. Em modalidades adicionais o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ao VEGF, VEGFR1, EGFR, ErbB2, IGF-IR, cMET, FGFR1, FGFR2, e CD20.
[043]Em uma modalidade, o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a EGFR. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é Erbitux®, nimotuzumab, ou zalutumumab (por exemplo, Genmab). Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que o anticorpo Erbitux® ou inibe competitivamente ligação do anticorpo Erbitux® a EGFR. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é o anticorpo Erbitux®. Em uma modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que anticorpo Erbitux®, nimotuzumab, zalutumumab (por exemplo, Genmab). Em uma outra modalidade específica, o componente de anticorpo, componente de MRD, e/ou anticorpo contendo MRD inibe competitivamente a ligação de anticorpo Erbitux®, nimotuzumab, zalutumumab a EGFR.
[044]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga EGFR e um alvo selecionado de: HGF, CD64, PCDCH 1, RON, cMET, ErbB2, ErbB3, IGF1R, PLGF, RGMa, PDGFRa, PDGFRB, VEGFR1, VEGFR2, TNFRSF10A (DR4), TNFRSFIOB (DR5), TNFRSF21 (DR6), IGF-1, 2, IGF2, CD3, CD4, e N G2d. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, Anticorpo contendo MRD) se liga, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a EGFR. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é nimotuzumab, zalutumumab. Dentro de modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é Erbitux®.
[045]Em uma modalidade específica, o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2. Em uma modalidade, o anticorpo é HERCEPTIN® (trastuzumab) ou anticorpo inibe competitivamente HERCEPTIN® (trastuzumab) a ligação do anticorpo a ErbB2.
[046]Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga a VEGF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como anticorpo AVASTIN® (bevacizumab), ou inibe competitivamente anticorpo AVASTIN®. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é o anticorpo AVASTIN®.
[047]Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um alvo que está associado com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em uma modalidade, o anticorpo se liga ao TNF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que HUMIRA® (adalimumab) de anticorpo ou anticorpo inibe competitivamente HUMIRA ®. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é o anticorpo HUMIRA ®. Em uma modalidade, o anticorpo se liga ao TNF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que anticorpo SIMPONI™ (Golimumab) ou inibe competitivamente anticorpo SIMPONI™. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é o anticorpo SIMPONI™.
[048]Em algumas modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a um alvo que está associado com uma doença ou distúrbio do metabolismo, cardiovascular, musculoesquelético, neurológica, ou sistema esquelético. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a um alvo que está associado com infecção ou doença de levedura, fúngica, viral ou bacteriana.
[049]A invenção também abrange MRDs, composições compreendendo MRDs (por exemplo, 0anticorpos e/ou outras composições), polinucleotídeos que codificam MRDs, os métodos de fabricação de MRDs e métodos de utilização dos MRDs da invenção. Em uma modalidade, o MRD é de cerca de 2 a 150 aminoácidos. Em uma outra modalidade, o MRD é de cerca de 2 a 60 aminoácidos. MRDs podem ser ligados a um anticorpo ou outros MRDs diretamente ou através de um ligante. Os MRDs podem ser qualquer peptídeo de ligação ao alvo. Em algumas modalidades, o alvo do MRD é um fator solúvel. Em outras modalidades, o alvo do MRD é uma proteína transmembranar, tal como um receptor da superfície celular. Em uma outra modalidade, o alvo do MRD é um antígeno celular. Em uma modalidade específica, o alvo do MRD é CD20.
[050]Em outra modalidade, o alvo do MRD é uma integrina. Em um aspecto, a sequência do peptídeo da integrina alvejando MRD é YCRGDCT (SEQ ID NO: 3). Em outro aspecto, a sequência do peptídeo da integrina direcionamento MRD é PCRGDCL (SEQ ID NO: 4). Em ainda outro aspecto, a sequência do peptídeo da integrina alvejando MRD é TCRGDCY (SEQ ID NO: 5). Em outro aspecto, a sequência do peptídeo da integrina alvejando MRD é LCRGDCF (SEQ ID NO: 6).
[051]Em uma modalidade adicional, o alvo do MRD é uma citocina angiogênica. Em um aspecto, a sequência do peptídeo da citocina angiogênica alvejando (isto é, a ligação) MRD é MGAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQQGLE (SEQ ID NO: 7).
[052]Em uma modalidade, o alvo do MRD é ErbB2. Em uma outra modalidade, o alvo ao qual se liga o MRD é ErbB3. Em uma modalidade adicional, o alvo ao qual se liga o MRD é o antígeno de superfície associado a um tumor ou uma molécula de adesão de células epiteliais (Ep-CAM).
[053]Em uma modalidade, o alvo ao qual se liga o MRD é VEGF. Em um aspecto, a sequência do peptídeo do VEGF alvejando MRD é VEPNCDIHVMWEWECFERL (SEQ ID NO: 13).
[054]Em uma modalidade, o alvo ao qual se liga o MRD é um fator de crescimento I semelhante a receptor de insulina (IGF1R). Um IGF1R ilustrativo alvejando DRM inclui, por exemplo, uma sequência de peptídeo possuindo a fórmula: NFYQCIDLLMAYPAEKSRGQWQECRTGG (SEQ ID NO: 37);
[055]Em uma modalidade, o alvo do MRD é um antígeno tumoral. O "antígeno tumoral", tal como aqui utilizado pode ser compreendido tanto como aqueles antígenos (incluindo mutações) exclusivamente expressos em células tumorais (isto é, antígenos específicos de tumor) e os antígenos expressos em células tumorais e células normais (por exemplo, antígenos tumorais sobre expressos em células ).
[056]Em uma modalidade, o alvo do MRD é um receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR). Em outra modalidade da presente invenção, o alvo do MRD é um fator angiogênico. Em uma modalidade adicional, o alvo do MRD é um receptor angiogênico.
[057]Em outra modalidade, o MRD é um peptídeo de repouso vascular.
[058]Em uma modalidade, o alvo do MRD é um fator de crescimento do nervo.
[059]Em uma outra modalidade, o anticorpo e/ou MRD se liga a EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, receptor do fator de crescimento I semelhante à insulina, ou antígeno de membrana específico da próstata.
[060]A presente invenção refere-se também a um polinucleotídeo isolado compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo contendo MRD. Em um aspecto, um vetor compreende uma sequência de polinucleotídeo que codifica um anticorpo contendo MRD. Em outro aspecto, a sequência de polinucleotídeo que codifica um anticorpo contendo MRD é operacionalmente ligada com uma sequência reguladora que controla a expressão do polinucleotídeo. Em um aspecto adicional, uma célula hospedeira compreende a sequência de polinucleotídeo que codifica um anticorpo contendo MRD.
[061]Os métodos para preparar composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são também fornecidos, assim como a utilização destas fusões MRD-anticorpo em aplicações de diagnóstico e terapias. A presente invenção também se refere a métodos de projeto e fazendo composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo um anticorpo de comprimento completo que compreende um MRD. Em um aspecto, o MRD é derivado de uma biblioteca de apresentação de fagos. Em um outro aspecto, o MRD é derivado a partir de ligantes naturais. Em um outro aspecto, o MRD é derivado tecnologia de exibição de levedura ou de exibição de RNA.
[062] A presente invenção também se refere a um método de tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio em um indivíduo (paciente) em necessidade do mesmo, compreendendo a administração de um anticorpo que compreende um MRD para o indivíduo (paciente). Em um aspecto, a doença é câncer. Em um outro aspecto, a angiogênese indesejada é inibida. Em um outro aspecto, a angiogênese é modulada. Em ainda outro aspecto, o crescimento do tumor é inibido.
[063]Algumas modalidades preveem métodos de tratamento ou prevenção de uma doença, distúrbio ou lesão que compreende a administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) para um paciente em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é câncer. Em outras modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é uma distúrbio do sistema imune. Em uma modalidade, o distúrbio do sistema imune é a inflamação. Em outra modalidade, o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune. Em uma modalidade adicional, o distúrbio do sistema imune é selecionado a partir do grupo que consiste em: artrite reumatóide, doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico, doença inflamatória do intestino, psoríase, diabetes, colite ulcerativa e esclerose múltipla. Em uma modalidade, a doença, distúrbio ou lesão é uma doença metabólica. Em uma outra modalidade, a doença, distúrbio ou lesão é uma doença infecciosa. Em modalidades específicas, a doença infecciosa é a infecção por vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou AIDS, botulismo, antraz, ou Clostridium difficile. Em outras modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é neurológico. Em uma modalidade específica, a doença neurológica, anomalia ou lesão é a dor. Em uma modalidade mais específica, a dor é, dor aguda ou dor crônica.
[064]Em outra modalidade, é proporcionado um método de tratamento ou prevenção compreendendo a administração de um agente terapêutico adicional, juntamente com um anticorpo que compreende um MRD. Em outras modalidades, os métodos de tratamento ou prevenção compreendem a administração de um anticorpo que compreende mais do que um tipo de MRD.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS/FIGURAS
[065]FIG. 1 mostra a representação esquemática dos diferentes modelos de moléculas multiespecíficas e multivalentes. MRDs são retratados como triângulos, círculos, diamantes e quadrados.
[066]FIG. 2A mostra um pepticorpo típico como uma fusão do terminal C com a cadeia pesada de Fc.
[067]FIG. 2B mostra um anticorpo contendo MRD com uma fusão MRD do terminal C com a cadeia leve do anticorpo.
[068]FIG. 2C mostra um anticorpo contendo MRD com uma fusão MRD do terminal com a cadeia leve do anticorpo.
[069]FIG. 2D mostra uma anticorpo contendo MRD com peptídeos MRD originais fundidos para cada terminal do anticorpo.
[070]FIG. 3 representa os resultados de um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) em que integrina e Ang2 foram ligadas por um anticorpo anti-integrina (JC7U) fundido com um Ang2 alvejando MRD (2xCon4).
[071]FIG. 4 representa os resultados de um teste ELISA em que a integrina e Ang2 foram ligados por um anticorpo anti-integrina (JC7U) fundido com um Ang2 alvejando MRD (2xCon4).
[072]FIG. 5 representa os resultados de um teste ELISA em que um anticorpo anti-ErbB2 foi fundido com um MRD que alveja Ang2.
[073]FIG. 6 representa os resultados de um teste ELISA em que um Ang2 alvejando MRD foi fundido a um anticorpo de ligação do receptor do fator de crescimento de hepatócitos (cMET).
[074]FIG. 7 ilustra os resultados de um teste ELISA em que uma integrina alvejando MRD foi fundida com um anticorpo de ligação a ErbB2.
[075]FIG. 8 representa os resultados de um teste ELISA em que uma integrina alvejando MRD foi fundida a um anticorpo de ligação do receptor do fator de crescimento de hepatócitos.
[076]FIG. 9 representa os resultados de um teste ELISA em que um receptor de fator de crescimento I semelhante à insulina alvejando MRD foi fundido com um anticorpo de ligação a ErbB2.
[077]FIG. 10 representa os resultados de um teste ELISA em que um MRD alvejando VEGF foi fundido com um anticorpo de ligação ao ErbB2.
[078]FIG. 11 descreve os resultados de um ELISA em que uma integrina alvejando MRD foi fundida com um anticorpo catalítico.
[079]FIG. 12 representa os resultados de um teste ELISA em que um Ang2 alvejando MRD foi fundido com um anticorpo catalítico.
[080]FIG. 13 representa os resultados de um teste ELISA em que uma integrina alvejando MRD e Ang2 alvejando MRD foram fundidos com um anticorpo de ligação a ErbB2.
[081]FIG. 14 representa os resultados de um teste ELISA em que uma integrina alvejando MRD foi fundida com um anticorpo de ligação a ErbB2.
[082]FIG. 15 representa os resultados de um teste ELISA em que uma integrina, Ang2, ou receptor do fator de crescimento semelhante à insulina-I alvejando MRD foi fundido com um ErbB2 ou anticorpo ligando a receptor de fator de crescimento de hepatócito com um peptídeo ligante curto.
[083]FIG. 16 representa os resultados de um teste ELISA em que uma integrina, Ang2, ou receptor do fator de crescimento semelhante à insulina-I alvejando MRD foi fundido com um ErbB2 ou anticorpo ligando ao receptor de fator de crescimento de hepatócito com um peptídeo ligante longo.
[084]FIG. 17A mostra as curvas de resposta de dose de fusões da proteína de ligação MRD-maltose (MBP) ensaiadas para ligação direta a Ang2.
[085]FIG. 17B indica proteínas de fusão MBP-MRD testadas, a sequência de aminoácidos do MRD, e os valores de EC50 (calculados usando um parâmetro de ajuste 4). O motivo de sequência MXD nos componentes MRD das fusões MRD-MBP é sublinhado e resíduos mutados estão em negrito e itálico.
[086]FIG. 18A ilustra os resultados de um ensaio de ligação direta de um zicorpo a base de HERCEPTIN® (isto é, um MRD contendo sequências de anticorpo HERCEPTIN®) anticorpo-MRDs e um anticorpo HERCEPTIN® ao Her2 (ErbB2) Fc na presença de Ang2 biotinilado. A ligação foi detectada com mAb de cadeia kappa anti-humano conjugado a HRP.
[087]FIG. 18B representa os resultados de um ensaio de ligação direta de um zicorpo a base de HERCEPTIN® (isto é, um MRD contendo sequências de anticorpo HERCEPTIN®) anticorpo-MRDs e um anticorpo HERCEPTIN® ao Her2 (ErbB2) Fc na presença de Ang2 biotinilado. A ligação foi detectada com peroxidase de rábano (HRP) conjugado a estreptavidina
[088]FIG. 19A ilustra os resultados de um ensaio de ligação direta de anticorpo MRDs e um anticorpo de AVASTIN® a VGF na presença de Ang2 biotinilado. A ligação foi detectada com mAb de cadeia kappa anti-humano conjugado a HRP.
[089]A FIG. 19B ilustra os resultados de um ensaio de ligação direta de anticorpo MRDs e um anticorpo AVASTIN® a VEGF na presença de Ang2 biotinilado. Ligação foi detectada com estreptavidina conjugada a HRP.
[090]FIG. 20A ilustra os resultados de um ensaio de citometria de fluxo que demonstra que o anticorpo-MRDs se liga simultaneamente a Her2 e Ang2 em células BT-474 de câncer da mama.
[091]FIG. 20B ilustra a ligação do anticorpo-MRDs a HER2 em células BT-474 de câncer da mama.
[092]FIG. 21 representa os resultados de um ensaio ELISA que demonstra o efeito inibitório de anticorpo-MRDs em TIE-2 ligando a placa Ang2 imobilizada.
[093]FIG. 22 representa os resultados de um ensaio de ligação competitiva que demonstra a inibição da ligação de anticorpo biotinilado por anticorpo-MRD e anticorpo não marcado.
[094]FIG. 23 representa os resultados de um ensaio de ligação competitiva que ilustra a inibição da ligação de anticorpo marcado a células BT- 474 por anticorpo de MRDs e anticorpo não marcado.
[095]FIG. 24A mostra as curvas de dose ajustada que ilustram a inibição da proliferação de células BT-474 por HERCEPTIN® com o MRD Im32 (SEQ ID NO: 8) fundido com a cadeia pesada e HERCEPTIN®.
[096]FIG. 24B representa as curvas de dose ajustadas que ilustram a inibição da proliferação de células BT-474 por HERCEPTIN® com o MRD Im32 fundido com a cadeia leve e HERCEPTIN®.
[097]FIG. 24C ilustra as curvas de dose ajustadas que ilustram a inibição da proliferação de células BT-474 por HERCEPTIN® com o MRD 2xCon4 fundido com a cadeia pesada e HERCEPTIN®.
[098]FIG. 25A ilustra os resultados de um ensaio de citotoxicidade ilustrando morte mediada por ADCC de células BT-474 por HERCEPTIN® com o MRD Im32 fundido com a cadeia pesada, HERCEPTIN® com o MRD Im32 fundido com a cadeia leve, e HERCEPTIN®.
[099]FIG. 25B ilustra os resultados de um ensaio de citotoxicidade ilustrando morte mediada por ADCC de células BT-474 por HERCEPTTN® com o MRD 2xCon4 fundido com a cadeia pesada, e HERCEPTIN®.
[0100]FIG. 26A mostra a inibição da proliferação de HUVEC por AVASTIN® com o MRD Im32 fundido com a cadeia pesada e AVASTIN® utilizando HUVECs obtidos a partir Glycotech (Gaithersburg, MD).
[0101]FIG. 26B mostra a inibição da proliferação de HUVEC por AVASTIN® com o MRD lm32 fundido com a cadeia pesada e AVASTIN® utilizando HUVECs obtidos a partir de Lonza.
[0102]FIG. 27 representa o efeito de RITUXIMAB®, HERCEPTIN®, e um anticorpo contendo MRD no volume do tumor in vivo.
[0103]FIG. 28 descreve o efeito de um aumento do anticorpo contendo MRD na fosforilação do receptor e ativação AKT em comparação com o efeito de um anticorpo em combinação com o MRD.
[0104]FIG. 29A descreve o efeito de um aumento do anticorpo contendo MRD bi específico sobre a proliferação celular em comparação com o efeito do anticorpo ou do anticorpo em combinação com o MRD.
[0105]FIG. 29B ilustra o efeito de um aumento anticorpo contendo MRD do penta específico sobre a proliferação celular em comparação com o efeito do anticorpo ou do anticorpo em combinação com o MRD.
[0106]FIG. 30 ilustra a eficácia aumentada de um anticorpo contendo uma HUMIRA contendo um MRD ligando Ang2 em um modelo de artrite em comparação com HUMIRA.
[0107]FIG. 31 mostra a inibição da sinalização induzida por EGF em células SK-BR3 por zicorpos.
[0108]FIG. 32 mostra a inibição da sinalização induzida por Heregulina em zicorpos SK-BR3.
[0109]FIG. 33 mostra a inibição da sinalização induzida por EGF e Heregulina em células SK-BR3 por zicorpos.
[0110]FIG. 34 mostra um gráfico de barras (A) e os resultados de citometria de fluxo (B) que descreve a regulação negativa da expressão do EGFR em células SK-BR3 por zicorpos.
[0111]FIG. 35 mostra a regulação negativa do EGFR nas células SKBR3 por zicorpos.
[0112]FIG. 36 mostra os efeitos citotóxicos de anticorpo contendo MRD expressando diferentes valências de um MRD agonizante de DR5 em três estruturas mAbs diferentes, utilizando um ensaio de viabilidade celular. FIG. 36 A, que demonstra um zicorpo baseado na estrutura tetravalente trastuzumab demonstra maior atividade citotóxica em relação ao correspondente zicorpos bivalentes. As FIGS. 36B-C demonstram que zicorpos à base de estrutura de anticorpo trastuzumab e palivizumab octavalente contendo oito cópias do MRD DR5, demonstram o aumento da atividade citotóxica em relação aos seus respectivos zicorpos tetravalentes correspondentes. As FIGS. 36D e demonstram que o multi-epitópico alvejamento de receptores não-DR5 (her2 e EGFR, respectivamente) aumenta a atividade citotóxica de um MRD alvejando DR5 tetravalente. FIG. 36F demonstra que a estrutura mab do zicorpo (por exemplo, cetuximab (CET), trastuzumab (TRA), e palivizumab (PAL)) pode influenciar a potência citotóxica aparente de MRDs alvejando DR5.
[0113]FIG. 37 demonstra que os peptídeos ligados a Ang podem diferir na ligação relativa Ang1 e Ang4. Os peptídeos ensaiadas são ANG100 (SEQ ID NO: 621), ANG126 (SEQ ID NO: 232); ANG129 (SEQ ID NO: 234); ANG156 (SEQ ID NO: 255); ANG157 (SEQ ID NO: 256); ANG163 (SEQ ID NO: 261); ANG179 (SEQ ID NO: 270); ANG200 (SEQ ID NO: 628); ANG303 (SEQ ID NO: 331); ANG318 (SEQ ID NO: 625); ANG335 (SEQ ID NO: 332); e ANG599 (SEQ ID NO: 367). DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0114]O que se segue proporciona uma descrição de composições multiespecíficas multivalentes e monovalentes (por exemplo, MRD molecular contendo anticorpos que contenham pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD)). A ligação de um ou mais MRDs a um anticorpo resulta em uma molécula multiespecífica da invenção, que retém as propriedades estruturais e funcionais de anticorpos ou anticorpos tradicionais otimizados Fc e podem ser prontamente sintetizados utilizando sistemas e técnicas de expressão de anticorpos convencionais. O anticorpo pode ser qualquer imunoglobulina de ligação ao antígeno adequada, e os MRDs podem ser qualquer peptídeo adequado de ligação alvejado. Os MRDs podem ser operativamente ligados a qualquer local no anticorpo, e a ligação pode ser direta ou indireta (por exemplo, por meio de um ligante químico ou polipeptídeo). As composições de anticorpos compreendendo um MRD, os métodos de fabricação de anticorpos que compreendem um MRD, e métodos de utilização de anticorpos compreendendo MRDs também são descritos nas seções abaixo.
[0115]A invenção também abrange MRDs, composições que compreendem MRDs, polinucleotídeos que codificam MRDs, os métodos de fabricação de MRDs e métodos de utilização dos MRDs da invenção.
[0116]Os títulos das seções aqui utilizados são apenas para fins de organização e não devem ser interpretados como limitando de qualquer forma o assunto descrito.
[0117]As técnicas convencionais de DNA recombinante podem ser usadas para a molécula, proteína, e a produção de anticorpos, bem como para a cultura de tecidos e transformação celular. As reações enzimáticas e técnicas de purificação são tipicamente realizadas de acordo com as especificações do fabricante ou como normalmente realizado na técnica utilizando procedimentos convencionais, tais como aquelas estabelecidas em Harlow et al. , Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed 1988.) E Sambrook et al, (Molecular Cloning:. A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)). (Ambos aqui incorporados por referência), ou tal como aqui descrito. Salvo definições específicas que são fornecidas, a nomenclatura utilizada em ligação com os procedimentos laboratoriais e técnicas de química analítica, química orgânica sintética, e química medicinal e farmacêutica aqui descritos, são as conhecidas e utilizadas na técnica. Podem ser utilizadas técnicas padrão para sínteses químicas, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação, distribuição e tratamento de pacientes. I. Definições
[0118]Os termos "complexos multivalentes e monovalente multiespecíficos", "complexos multivalentes e multiespecíficos", "Anticorpo contendo MRD", "moléculas de anticorpo-MRD", "moléculas de MRD- anticorpo", "anticorpos compreendendo um MRD" e "Zicorpos "são aqui utilizados indiferentemente e não englobam um pepticorpo. Cada um destes termos pode também ser aqui utilizado para se referir a um "complexo" da invenção. Complexos multiespecíficos multivalentes e monovalentes podem conter MRDs, anticorpos, agentes citotóxicos, e motivos de ligação além de MRDs que se ligam a um ou mais alvos. Por exemplo, um complexo multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) pode conter uma parte de ou com um derivado de, uma sequência de ligação contida no anticorpo (por exemplo, um único domínio de ligação, um ScFv, uma região CDR) e/ou também podem incluir um agente citotóxico (por exemplo, um agente terapêutico). Essas moléculas são também descritas no Pedido Provisório No. 61/481.063, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Os termos "complexo(s) multivalente e monovalente multiespecífico"e "complexos multivalentes e monovalentes multiespecíficos ", como aqui utilizado, consequentemente, referem-se a composições que são capazes de se ligar a 2 ou mais alvos, e que contêm um sítio de ligação e/ou múltiplos sítios de ligação para diferentes epitopo. Assim, este termo pretende incluir complexos contendo múltiplos sítios de ligação para cada epitopo diferente ligado pelo complexo, ou, alternativamente, que contêm pelo menos um único sítio de ligação para um epitopo diferente. Os epitopos podem ser diferentes no mesmo ou em diferentes alvos. Os alvos dos complexos multivalentes e multi específicos podem estar nas células iguais ou diferentes. Complexos multiespecíficos multivalentes e monovalentes podem ser multivalente e multiespecífico e, portanto, pode ligar dois ou mais alvos e têm dois ou mais sítios de ligação para cada um dos alvos vinculados pelo complexo. Complexos multiespecíficos multivalentes e monovalentes também podem ter um (ou mais) sítios de ligação individuais para um (ou mais) alvo(s) e vários sítios de ligação para outros alvos e, consequentemente, estes complexos são monovalentes (com respeito ao sítio de ligação único (s )), multivalente e multiespecífico. Além disso, os complexos multivalentes e monovalente multiespecíficos podem ser monovalente e multiespecífico e assim, conter apenas os sítios de ligação individuais para dois ou mais diferentes alvos.
[0119]O termo "complexo de droga-complexo multiespecífico multivalente e monovalente" ou "anticorpo contendo MRD-agente citotóxico"tal como aqui utilizado, refere-se a um complexo multivalente e monovalente multiespecífico contendo um ou mais agentes citotóxicos.
[0120]O termo "agente citotóxico"tal como aqui utilizado, inclui qualquer agente que seja prejudicial para as células, incluindo, por exemplo, a substância que inibe ou previne a função de células e/ou provoca destruição de células. O termo destina-se a incluir um agente quimioterapêutico, uma porção de fármaco (por exemplo, uma citocina ou pró-fármaco), um antibiótico, um isótopo radioativo, um ligante quelante (por exemplo, DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA e TETA), uma enzima nucleolítica , toxinas, tais como uma pequena molécula de toxina ou uma toxina enzimaticamente ativa de origem animal, bacteriana, fúngica, vegetal ou, incluindo fragmentos e/ou variantes destas toxinas. Em modalidades particulares, o agente citotóxico é um membro selecionado a partir de: auristatina, dolostantin, MMAE, MMAF, um derivado de maitansinol (por exemplo, DM1 (N(2')-desacetil-N(2')-(3-mercapto-1-oxopropil) - maitansina), DM3 (N(2')-desacetil-N2-(4- mercapto-1-oxopentil) -maitansina) e DM4 (N(2')-desacetil-N2-(4-mercapto-4-metil-1-oxopentil)-maitansina).
[0121]O termo "anticorpo"é aqui utilizado para se referir a moléculas de imunoglobulina que são capazes de ligar antígenos através de um domínio de ligação ao antígeno (isto é, sítio de combinação de anticorpo). O termo "anticorpo" inclui anticorpos policlonais, oligoclonais (misturas de anticorpos), e anticorpos monoclonais, quiméricos, de cadeia única, e anticorpos humanizados. O termo "anticorpo"também inclui anticorpos humanos. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) inter-conectadas por ligações de dissulfureto. Cada cadeia pesada é compreendida por uma região variável de cadeia pesada (aqui abreviada como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é compreendida por três domínios: CH1, CH2, e CH3. Cada cadeia leve é constituída por uma região variável da cadeia leve (aqui abreviada como VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é compreendida por um domínio, CL. As regiões VH e VL podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, designadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostos a partir do terminal amino para terminal carboxila na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Em outras modalidades, o anticorpo é um anticorpo de cadeia pesada homomérico (por exemplo, anticorpos de camelídeos) ao qual falta o primeiro domínio da região constante (CH1), mas retém uma cadeia pesada intacta de outra forma e é capaz de se ligar antígenos através de um domínio de ligação ao antígeno. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve em fusões anticorpo-MRD da invenção contêm um domínio de ligação funcional que interage com um antígeno.
[0122]O termo "anticorpo monoclonal" refere-se tipicamente a uma população de moléculas de anticorpo que contêm apenas uma espécie de sítio de combinação de anticorpo capaz de imunorreagir com um epitopo particular. Um anticorpo monoclonal apresenta assim tipicamente uma afinidade ligação única para qualquer epitopo com o qual imunorreage. Tal como aqui utilizado, um "anticorpo monoclonal", também pode conter uma molécula de anticorpo possuindo uma pluralidade sítios de combinação de anticorpo (isto é, uma pluralidade domínios variáveis), cada um imunoespecífico para um epitopo diferente, por exemplo, um anticorpo monoclonal bi específico. Assim, tal como aqui utilizado, um "anticorpo monoclonal" refere-se a uma população homogênea de anticorpos envolvidos no reconhecimento altamente específico e ligação de um ou dois (no caso de um anticorpo monoclonal bi específico) determinantes antigênicos, ou epitopos. Isto está em contraste com os anticorpos policlonais que incluem tipicamente diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes antigênicos. O termo "anticorpo monoclonal" refere-se a tais anticorpos feitos em qualquer número de maneiras, incluindo mas não se limitando a pelo hibridoma, seleção de fagos, expressão recombinante, levedura, e animais transgênicos.
[0123]Um "anticorpo específico duplo"é aqui utilizado para referir-se a uma molécula de imunoglobulina que contém imunoglobulinas de domínios duplos variáveis, em que o domínio duplo variável pode ser manipulado a partir de quaisquer dois anticorpos monoclonais.
[0124]O termo "anticorpos quiméricos"refere-se a anticorpos em que a sequência de aminoácidos da molécula de imunoglobulina é derivada a partir de duas ou mais espécies. Tipicamente, a região variável de ambas as cadeias leve e pesada corresponde à região variável de anticorpos derivados de uma espécie de mamíferos (por exemplo, ratinho, rato, coelho, etc.) com a especificidade e/ou afinidade pretendida enquanto que as regiões constantes são homólogas às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outras espécies (geralmente humana) para evitar desencadear uma resposta imune nas espécies.
[0125]O termo "anticorpo humanizado" refere-se a formas de anticorpos não humanos (p. ex., de murina) que são cadeias específicas de imunoglobulina, imunoglobulinas quiméricas, ou os seus fragmentos que contêm (p. ex., murina) sequências mínimas não-humanas. Tipicamente, os anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas em que os resíduos da região determinante de complementaridade (CDR) são substituídos por resíduos de CDR de uma espécie não humana (por exemplo, ratinho, rato, coelho, hamster), que tem a especificidade desejada e/ou afinidade (Jones et al, Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al, Nature 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al, Science 239: 1534- 1536 (1988)). Em alguns casos, a região de estrutura de resíduos Fv (FR) de uma imunoglobulina humana são substituídas pelos resíduos correspondentes em um anticorpo de uma espécie não humana que tem a especificidade e/ou afinidade pretendida. O anticorpo humanizado pode ser ainda modificado pela substituição de resíduos adicionais em qualquer região de estrutura Fv e/ou dentro dos resíduos não humanos substituídos, para refinar e otimizar a especificidade do anticorpo, afinidade e/ou capacidade. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente a totalidade pelo menos um, e tipicamente dois ou três, domínios variáveis contendo a totalidade ou substancialmente a totalidade das regiões CDR correspondem às da imunoglobulina não humana enquanto que todas ou substancialmente todas as regiões FR são as de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode também compreender uma região constante de imunoglobulina ou domínio (Fc), tipicamente a de uma imunoglobulina humana. Exemplos de métodos usados para gerar anticorpos humanizados são descritos nas Pat. No. 5225539, EUA Pat. N° 4816567, Morrison, Science 229: 1202 (1985); Oi et al, BioTechniques 4: 214 (1986); Cabilly et al, Taniguchi et al, em EP 171496; Morrison et al, EP 173494, WO86/01533; WO8702671; Boulianne et al. Nature 312: 643 (1984); e Neuberger et al, Nature 314: 268 (1985), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0126]Tal como aqui utilizado, anticorpos "humanos" incluem anticorpos que possuem a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina humana ou uma ou mais linhas germinais humanas e incluem anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulinas humanas ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas e que não expressam imunoglobulinas endógenas, tal como descrito acima e, por exemplo, em, Pat. No. 5.939.598 por Kucherlapati et al, um anticorpo humano podem ainda ser considerado "humano" mesmo se substituições de aminoácidos são feitas no anticorpo. Exemplos de métodos utilizados para gerar anticorpos humanos são descritos em: Pedido de Publ. Int. WO98/24893, WO92/01047, WO96/34096, e W096/33735.; Pedido de Patente Europeia. N° 0 598 877; Pat EUA. N °s 5.413.923, 5.625.126, 5.633.425, 5.569.825, 5.661, 016, 5.545.806, 5.814.318, 5.885.793, 5.916.771, e 5.939.598.; e Lonberg e Huszar, Int. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995), que são aqui incorporados por referência.
[0127]Um "sítio de combinação de anticorpo"é aquela porção estrutural de uma molécula de anticorpo compreendida de variável de cadeia pesada e leve e regiões hipervariáveis que se ligam especificamente a (imunorreage com) um antígeno. O termo "imunorreagir" nas suas várias formas significa ligação específica entre uma molécula contendo um determinante antígeno e uma molécula contendo um sítio de combinação de anticorpo tal como uma molécula de anticorpo completa ou uma sua porção.
[0128]Em anticorpos que ocorrem naturalmente, as seis "regiões determinantes de complementaridade" ou "CDR" presentes em cada domínio de ligação ao antígeno são sequências curtas, não-contíguas de aminoácidos que são especificamente posicionados de modo a formar o domínio de ligação ao antígeno do anticorpo assume as suas três configurações tridimensionais em um ambiente aquoso. A parte restante dos aminoácidos nos domínios de ligação do antígeno, referidas como regiões "estruturais", mostram menos variabilidade intermolecular. As regiões estruturais adotam largamente uma conformação de folha ß e as CDR formam voltas que ligam, e em alguns casos formam parte, da estrutura de folha ß. Assim, regiões de estrutura agem de modo a formar uma estrutura de suporte que proporciona o posicionamento para as CDRs na orientação correta por inter-cadeias, interações não covalentes. O domínio de ligação ao antígeno (isto é, sítio de combinação de anticorpo) formado pelas CDRs posicionadas define uma superfície complementar ao epitopo no antígeno imunorreativo. Esta superfície complementar promove a ligação do anticorpo ao seu epitopo cognato não- covalente. Os aminoácidos que compreendem as CDR e as regiões de estrutura, respectivamente, podem ser prontamente identificados para qualquer dada região variável de cadeia pesada ou leve de uma pessoa versada na técnica, uma vez que eles tenham sido definidos com precisão (ver, "Sequences of Proteins of Immunological Interest, "Kabat, E., et al, Departamento de Saúde e Serviços Humanos, (1983); e Chothia e Lesk, J. Mol Biol 196:.. 901 -917 (1987), que são aqui incorporados por referência ). "Anticorpo humanizado" ou "anticorpo quimérico"inclui anticorpos em que as sequências CDR derivadas da linha germinativa de outra espécie de mamífero, tal como um ratinho, foram enxertadas em sequências estruturais humanas.
[0129]Os termos "linfócito T", "célula T", "células T" e "população de células T,"são aqui utilizados indiferentemente para se referir a uma célula ou células que apresentam na sua superfície um ou mais antígenos característicos de células T, por exemplo, CD3 e CD11B. O termo inclui a descendência de uma célula T ou uma população de células T. Um "linfócito T" ou "células T" inclui uma célula que expressa CD3 na sua superfície celular e um receptor de antígeno de célula T (TCR) que reconhece o antígeno capaz de, quando exibido na superfície de células autólogas, ou qualquer matriz apresentando antígeno, em conjunto com uma ou mais moléculas do MHC ou, um ou mais moléculas não-clássicas MHC. O termo "células T" pode referir-se a todas as células T, incluindo, por exemplo, linfócitos que são fenotipicamente CD3+ p.ex., expressam CD3 na superfície celular.
[0130]Tal como aqui utilizado, CD3, é utilizado para referir coletivamente ou individualmente a uma molécula expressa como parte do receptor das células T e que tem um significado como normalmente atribuído na técnica. Nos seres humanos, o termo CD3 engloba todas as subunidades de CD3 conhecidas, por exemplo, CD3 delta, CD3 epsilon, CD3 gama, e CD3 zeta (TCR zeta), bem como CD3 alfa (TCR alfa), e CD3 beta (TCR beta) individual ou de forma combinada independentemente.
[0131]O termo "pepticorpo" refere-se a um peptídeo ou polipeptídeo que compreende menos do que, um anticorpo intacto completo. Um pepticorpo pode ser um domínio de Fc de anticorpo ligado a pelo menos um peptídeo. O pepticorpo não inclui regiões de anticorpos variáveis, um sítio de combinação de anticorpo, domínios CH1, ou domínios da região constante da cadeia leve de Ig.
[0132]O termo "de ocorrência natural", quando utilizado em ligação com materiais biológicos tal como moléculas de ácidos nucleicos, polipeptídeos, células hospedeiras e semelhantes, refere-se aqueles que se encontram na natureza e não modificados por um ser humano.
[0133]O termo "domínio", tal como aqui utilizado refere-se a uma parte de uma molécula ou estrutura que partilha características físicas ou químicas comuns, por exemplo hidrofóbico, polar, globular, domínios helicoidais ou propriedades, por exemplo, um domínio de ligação a proteína, um domínio de ligação a DNA ou um domínio de ligação ao ATP. Os domínios podem ser identificados pela sua homologia com motivos estruturais ou funcionais conservados.
[0134]Uma "substituição de aminoácidos conservativa"é aquela em que um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral semelhante. As famílias de resíduos de aminoácidos possuindo cadeias laterais semelhantes foram definidas na técnica, incluindo cadeias de base laterais (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Por exemplo, a substituição de fenilalanina por um tirosina é uma substituição conservativa. Em algumas modalidades, as substituições conservativas nas sequências dos polipeptídeos e anticorpos da presente invenção não revogam a ligação do anticorpo ou polipeptídeo contendo a sequência de aminoácidos para o antígeno(s) ao qual o polipeptídeo ou anticorpo se liga. Os métodos de identificação de nucleotídeos e substituições conservativas de aminoácidos e substituições não conservativas que não eliminam polipeptídeo ou a ligação ao antígeno são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Brummel et al, Biochem. 32: 1 180- 1 187 (1993) ; Kobayashi et al, Protein Eng 12 (10): 879884 (1999); e Burks et al, Proc Natl Acad Sci EUA 94: 412-417 (1997)).
[0135]Um "domínio de reconhecimento modular" (MRD) ou "peptídeo de ligação ao alvo"é uma molécula, tal como uma proteína, glicoproteína e semelhantes, que podem especificamente (não aleatoriamente) se ligar a uma molécula alvo. A sequência de aminoácidos de um MRD pode normalmente tolerar algum grau de variabilidade e ainda retêm um certo grau de capacidade se ligar à molécula alvo. Além disso, alterações na sequência podem resultar em alterações na especificidade ligação e na constante de ligação entre uma molécula alvo pré-selecionada e o sítio de ligação. Em uma modalidade, o MRD é um agonista do alvo ao qual se liga. Um agonista MRD refere-se a um MRD que de algum modo, aumenta ou melhora a atividade biológica das proteínas alvo do MRD ou tem atividade biológica comparável a um agonista conhecido da proteína alvo do MRD. Em uma outra modalidade, o MRD é um antagonista do alvo ao qual se liga. Um antagonista MRD refere-se a um MRD que bloqueia ou de alguma forma interfere a atividade biológica da proteína alvo do MRD ou tem atividade biológica comparável à de um antagonista ou inibidor conhecido da proteína alvo do MRD.
[0136]"Receptor de superfície celular" refere-se a moléculas e complexos de moléculas capazes de receber um sinal e a transmissão de um sinal através da membrana plasmática de uma célula. Um exemplo de um receptor da superfície celular da presente invenção é um receptor de integrina ativada, por exemplo, um receptor de integrina avß3ativada em uma célula metastática. Tal como aqui utilizado, "receptor de superfície celular" também inclui uma molécula expressa na superfície de uma célula que é capaz de ser ligada por um anticorpo contendo MRD da invenção.
[0137]Tal como aqui utilizado, um "sítio de ligação alvo" ou "sítio alvo" é qualquer sequência de aminoácidos conhecida, ou ainda a ser definida, possuindo a capacidade se ligar seletivamente a um agente pré-selecionado. Exemplos de sítios alvo de referência são derivados a partir dos ligantes de integrinas dependentes de RGD, ou seja fibrinogênio, fibronectina, vitronectina, fator de von Willebrand e semelhantes, a partir de receptores celulares, tais como ErbB2, VEGF, peptídeode migração vascular ou citocinas angiogênicas, de receptores de hormônios de proteína, tais como receptor do fator de crescimento I semelhante a insulina, receptor do fator de crescimento epidérmico e semelhantes, e a partir de antígenos tumorais.
[0138]O termo "epitopo" ou "determinante antigênico" são aqui utilizados indiferentemente e referem-se à porção de qualquer molécula capaz de ser reconhecida e ligada especificamente por um agente de ligação específico (por exemplo, um anticorpo ou um MRD). Quando a molécula é um polipeptídeo reconhecido, os epitopos podem ser formados a partir de aminoácidos contíguos e aminoácidos não contíguos e/ou outros grupos de superfície quimicamente ativos de moléculas, (tais como carboidratos) justapostos por dobragem terciária de uma proteína. Os epitopos formados a partir de aminoácidos contíguos são tipicamente mantidos sob desnaturação da proteína, enquanto que os epitopos formados por dobragem terciária são tipicamente perdidos na desnaturação da proteína. Um epitopo tipicamente inclui pelo menos 3, e mais geralmente, pelo menos 5 ou 8-10 aminoácidos em uma conformação espacial única.
[0139]Um anticorpo, MRD, anticorpo contendo MRD, ou outra molécula é dito "inibir competitivamente"ligação de uma molécula de referência para um determinado epitopo que se liga a esse epitopo na medida em que bloqueia, em algum grau, a ligação da molécula de referência para o epitopo. A inibição competitiva pode ser determinada por qualquer método conhecido na técnica, por exemplo, ensaios de competição de ELISA. Tal como aqui utilizado, um anticorpo, MRD, anticorpo contendo MRD, ou outra molécula pode ser dita para inibir competitivamente a ligação da molécula de referência para um dado epitopo, por exemplo, por pelo menos 90%, pelo menos 80%, pelo menos 70 %, pelo menos 60%, ou, pelo menos, 50%.
[0140]O termo "proteína" é definido como um polímero biológico que compreende unidades derivadas de aminoácidos ligados através de ligações peptídicas; uma proteína pode ser composta por duas ou mais cadeias.
[0141]Um "polipeptídeo de fusão" é um polipeptídeo constituído por pelo menos dois polipeptídeos e, opcionalmente, uma sequência de ligação para ligar operacionalmente os dois polipeptídeos em um polipeptídeo contínuo. Os dois polipeptídeos ligados em um polipeptídeo de fusão são tipicamente derivados de duas fontes independentes, e por isso um polipeptídeo de fusão compreende dois polipeptídeos ligados normalmente não encontrados ligados na natureza. Os dois polipeptídeos podem ser operacionalmente ligado diretamente por uma ligação peptídica ou podem ser indiretamente ligados através de um ligante ou de outro modo aqui descrito, conhecido na técnica.
[0142]O termo "operativamente ligado", tal como aqui utilizado, indica que duas moléculas estão ligadas de modo a reter cada atividade funcional. Duas moléculas estão "operativamente ligadas" se estão ligadas diretamente (por exemplo, uma proteína de fusão) ou indiretamente (por exemplo, através de um ligante).
[0143]O termo "ligante" refere-se a um peptídeo localizado entre o anticorpo e o MRD ou entre dois MRDs. Os ligantes podem ter desde cerca de 1 a 20 aminoácidos, de cerca de 2 a 20 aminoácidos, ou cerca de 4 a 15 aminoácidos. Um ou mais destes aminoácidos podem ser glicosilados, tal como é bem compreendido pelos peritos na técnica. Em uma modalidade, os 1 a 20 aminoácidos são selecionados entre glicina, alanina, prolina, asparagina, glutamina, e lisina. Em outra modalidade, um ligante é feito por uma maioria de aminoácidos que são desimpedimento estérico, tais como glicina e alanina. Assim, em algumas modalidades, o ligante é selecionado a partir poliglicinas (tal como (Gly)5, e (Gly)8), poli (Gli-Ala) e polialaninas. O ligante também pode ser um ligante não-peptídeo, tal como um ligante alquila, ou um ligante de PEG. Por exemplo, os ligantes de alquila, tais como: - NH- (CH2)S-C(O) -, em que s = 2-20 pode ser utilizado. Estes ligantes de alquila podem ainda ser substituídos por qualquer grupo não impedido estereoquimicamente, tais como alquila inferior (por exemplo, C1-C6) acila inferior, halogêneo (por exemplo, Cl, Br), CN, NH2, fenila, etc. Um não-peptídeo exemplar ligante é um ligante de PEG. Em certas modalidades, o ligante de PEG tem um peso molecular de cerca de 100 a 5000 kDa, ou cerca de 100 a 500 kDa. Os ligantes peptídicos podem ser alterados para formar derivados. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante de peptídeo não-ligante tais como uma alquila, ou um ligante de PEG. Em outras modalidades, o ligante é um "ligante clivável"que facilita a liberação de um agente citotóxico ou MRD dentro de uma célula ou na proximidade da célula.
[0144]"Célula alvo" refere-se a qualquer célula em um paciente (por exemplo, um ser humano ou animal) que pode ser alvo de uma composição multiespecífica e multivalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) ou MRD da invenção. A célula alvo pode ser uma célula que expressa ou sobre- expressa o sítio de ligação ao alvo, tal como um receptor de integrina ativado.
[0145]O termo "resposta imune" refere-se à ação de, por exemplo, linfócitos, células que apresentam antígenos, células fagocíticas, granulócitos e macromoléculas solúveis, produzidos pelas células acima ou do fígado (incluindo anticorpos, citocinas, e complemento) que resulta em danos seletivos a, destruição ou eliminação do corpo humano de patógenos invasores, células, ou tecidos infectados com patógenos, células cancerosas, ou, nos casos de autoimunidade e inflamação patológica, as células ou tecidos humanos normais.
[0146]Tal como aqui utilizado, o termo "célula efetora" refere-se a uma célula imune, que está envolvida na fase efetora de uma resposta imune, ao contrário das fases cognitivas e de ativação de uma resposta imune. Células imunes exemplificativas incluem uma célula de um mielóide ou de origem linfoide, por exemplo, linfócitos (por exemplo, células B e células T, incluindo células T citolíticas (CTLs)), células assassinas, células assassinas naturais, macrófagos, monócitos, eosinófilos, neutrófilos, células polimorfonucleares , granulócitos, mastócitos e basófilos). Algumas células efetoras expressam receptores específicos Fc e executam funções específicas do sistema imune. Em certas modalidades, uma célula efetora é capaz de induzir citotoxidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC), por exemplo, um neutrófilo capaz de induzir ADCC. Por exemplo, monócitos e macrófagos, que expressam o FcR, estão envolvidos na morte específica de células alvo que apresentam antígenos e outros componentes do sistema imune, ou que se ligam a células que apresentam antígenos. Em outras modalidades, uma célula efetora pode fagocitar um antígeno alvo ou célula alvo. A expressão de um FcR particular, em uma célula efetora pode ser regulada por fatores humorais, tais como citocinas. Por exemplo, a expressão de RI alfa-Fc foi encontrada para ser regulada para cima por G-CSF ou GM-CSF. Esta expressão aumentada aumenta a função efetora de células transportando RI alfa Fc contra alvos. Exemplos de funções de uma célula efetora incluem o fagocitose ou lise de um antígeno alvo ou uma célula-alvo.
[0147]"Célula alvo" refere-se a qualquer célula ou patógeno cuja eliminação seria benéfica em um paciente (por exemplo, um ser humano ou animal) e que pode ser alvejada por uma composição (por exemplo, anticorpo) da invenção.
[0148]"Paciente", "sujeito", "animal" ou "mamífero" são utilizados indiferentemente e referem-se a mamíferos, tais como pacientes humanos e primatas não-humanos, assim como animais experimentais, tais como coelhos, ratos e ratinhos, e outros animais. Os animais incluem todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos e não mamíferos, tais como ovelhas, cães, vacas, galinhas, anfíbios, e répteis. Em algumas modalidades, o paciente é um ser humano.
[0149]"Tratar" ou "tratamento" inclui a administração do anticorpo compreendendo um MRD da presente invenção para prevenir ou atrasar o aparecimento dos sintomas, complicações, ou indícios bioquímicos de uma doença, condição ou distúrbio, aliviando os sintomas ou prendendo ou inibindo a continuação do desenvolvimento da doença, condição ou distúrbio. O tratamento pode ser profilático (para prevenir ou retardar o início da doença, ou para prevenir a manifestação de sintomas clínicos ou subclínicos do mesmo) ou supressão terapêutica ou alívio de sintomas após a manifestação da doença, condição ou distúrbio. O tratamento pode ser com a composição de anticorpo-MRD sozinho, MRD sozinho, ou em combinação com qualquer um de um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[0150]Tal como aqui utilizados, os termos "farmaceuticamente aceitáveis"ou "fisiologicamente toleráveis"e as variações gramaticais destes, dado que se referem a composições, transportadores, diluentes e reagentes, são utilizados indiferentemente e significam que os materiais são capazes de administração a ou mediante um ser humano, sem produção de efeitos fisiológicos indesejáveis terapeuticamente proibitivos tais como náuseas, tontura, perturbação gástrica e semelhantes.
[0151]"Modulado" ou "modula" significa adaptação ou regulamento de amplitude, frequência, grau, ou atividade. Em um outro aspecto relacionado, a modulação pode ser modulada de forma positiva (por exemplo, um aumento da frequência, grau, ou atividade) ou negativamente modulada (por exemplo, uma diminuição da frequência, grau, ou atividade).
[0152]"Câncer", "tumor", ou "malignidade"são usados como termos sinônimos e referem-se a qualquer um de uma série de doenças que se caracterizam por uma proliferação descontrolada, anormal de células, a capacidade das células afetadas em espalhar localmente ou através da corrente sanguínea e sistema linfático para outras partes do corpo (metástases), bem como qualquer um de um número de características estruturais e/ou características moleculares. Um "tumor canceroso" ou "maligno de células" é entendido como uma célula que tem propriedades estruturais específicas, falta de diferenciação e de ser capaz de invasão e metástase. Exemplos de cânceres que podem ser tratados utilizando as fusões de anticorpo-MRD da invenção incluem tumores sólidos e cânceres hematológicos. Ainda, exemplos de cânceres que podem ser tratados utilizando as fusões de anticorpo-MRD da invenção incluem mama, pulmão, cérebro, osso, fígado, rins, cólon, cabeça e pescoço, ovário, hematopoiético (por exemplo, leucemia), e câncer da próstata. Outros exemplos de câncer que podem ser tratados utilizando as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia. Mais exemplos particulares de tais cânceres incluem câncer de células escamosas, câncer do pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não-pequenas, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritoneu, câncer hepatocelular, câncer gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma , câncer de colo do útero, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândulas salivares, câncer de rim, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer de tiroide, carcinoma hepático e vários tipos de cânceres de cabeça e pescoço. Outros tipos de câncer e de tumores que podem ser tratados usando composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) são aqui descritos ou caso contrário conhecidos na técnica.
[0153]Uma "quantidade eficaz" de um anticorpo, MRD, ou anticorpo contendo MRD tal como aqui divulgado é uma quantidade suficiente para realizar um objetivo especificamente afirmado de modo a provocar uma alteração observável no nível de uma ou mais atividades biológicas relacionadas com o alvo para o qual o anticorpo, MRD, ou anticorpo contendo MRD se liga. Em certas modalidades, a alteração aumenta o nível de atividade alvo. Em outras modalidades, a mudança diminui o nível de atividade alvo. Uma "quantidade eficaz" pode ser determinada empiricamente e de um modo rotineiro, em relação ao objetivo declarado.
[0154]O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade um anticorpo, MRD, anticorpo contendo MRD, e outras drogas multiespecíficas multivalentes da presente invenção, ou outro medicamento eficaz para "tratar" uma doença ou distúrbio em um paciente ou mamífero. No caso de câncer, a quantidade terapeuticamente eficaz do fármaco pode reduzir a angiogênese e neovascularização; reduzir o número de células cancerosas; reduzir o tamanho do tumor; inibir (ou seja, abrandar em alguma extensão ou parar) a infiltração de células de câncer em órgãos periféricos; inibir (ou seja, abrandar em alguma extensão ou parar) a metástase do tumor; inibir, até certo ponto, o crescimento tumoral ou a incidência de tumores; estimular as respostas imunes contra células cancerosas e/ou aliviar em certa medida um ou mais dos sintomas associados ao câncer. Veja a definição neste documento de "tratamento". Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" pode também referir-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar um resultado terapêutico desejado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição da invenção pode variar de acordo com fatores tais como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo, e a capacidade da composição para induzir uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais da composição terapêutica são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos.
[0155]Na medida em que o fármaco pode prevenir o crescimento e/ou matar células cancerosas existentes, pode ser citostático e/ou citotóxico. Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profiláctico desejado.
[0156]Onde modalidades da invenção são descritas em termos de um grupo de Markush ou outro agrupamento de alternativas, a presente invenção engloba não apenas o grupo total listado como um todo, mas também cada membro do grupo individualmente e todos possíveis subgrupos do grupo principal, e também um ou mais ausentes do grupo principal dos membros do grupo. A presente invenção também mostra a exclusão explícita de um ou mais de qualquer dos membros do grupo na invenção divulgada e/ou reivindicada. II. Domínios de Reconhecimento Modular (MRDs)
[0157]A presente invenção descreve uma abordagem baseada na adaptação de peptídeos de ligação do alvo ou domínios de reconhecimento modulares (MRDs) como fusões com anticorpos catalíticos ou não catalíticos.
[0158]Em certas modalidades, em que o componente de anticorpo da fusão MRD-anticorpo é um anticorpo catalítico, as fusões de anticorpo-MRD são eficazes para proporcionar o direcionamento para células tumorais ou moléculas solúveis, deixando a capacidade ativação de pró-fármaco do anticorpo intacto catalítico. MRDs também podem estender a capacidade ligação de anticorpos não catalíticos que preveem uma abordagem eficaz para estender a funcionalidade ligação de anticorpos, particularmente para fins terapêuticos.
[0159]Um aspecto da presente invenção relaciona-se com o desenvolvimento de um anticorpo de comprimento completo que compreende pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD). Em outra modalidade não exclusiva, o anticorpo de comprimento completo compreende mais do que um MRD, em que os MRDs têm especificidades iguais ou diferentes. Além disso, um único MRD pode ser constituído por uma repetição em tandem da mesma ou de diferente sequência de aminoácidos que pode permitir a ligação de um único MRD a múltiplos alvos e/ou a um epitopo de repetição a um dado alvo.
[0160]A interação entre um ligante de proteína e seu sítio receptor alvo muitas vezes tem lugar em uma interface relativamente grande. No entanto, apenas alguns resíduos chave na interface contribuem para a maior parte da ligação. Os MRDs podem imitar a ligação do ligante. Em certas modalidades, o MRD pode mimetizar a atividade biológica de um ligante (um MRD agonista) ou inibir a ligação competitiva de bioatividade do ligante (um MRD antagonista). MRDs em composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, contendo anticorpos MRD) também pode afetar alvos de outras formas, por exemplo, por neutralização, bloqueando, estabilizantes, agregação, ou reticulando o MRD alvo.
[0161]Considera-se que MRDs da presente invenção conterão geralmente uma sequência de peptídeo que se liga a sítios alvo de interesse e têm um comprimento de cerca de 2 a 150 aminoácidos, cerca de 2 a 125 aminoácidos, cerca de 2 a 100 aminoácidos, cerca de 2 a 90 aminoácidos, cerca de 2 a 80 aminoácidos, de cerca de 2 a 70 aminoácidos, cerca de 2 a 60 aminoácidos, cerca de 2 a 50 aminoácidos, cerca de 2 a 40 aminoácidos, de cerca de 2 a 30 aminoácidos, ou cerca de 2 a 20 aminoácidos. Está também contemplado que MRDs tem um comprimento de cerca de 10 a 150 aminoácidos, cerca de 10 a 125 aminoácidos, cerca de 10 a 100 aminoácidos, cerca de 10 a 90 aminoácidos, cerca de 10 a 80 aminoácidos, cerca de 10 a 70 amino ácidos, cerca de 10 a 60 aminoácidos, cerca de 10 a 50 aminoácidos, de cerca de 10 a 40 aminoácidos, de cerca de 10 a 30 aminoácidos, ou cerca de 10 a 20 aminoácidos. É ainda contemplado que MRDs tem um comprimento de cerca de 20 a 150 aminoácidos, cerca de 20 a 125 aminoácidos, cerca de 20 a 100 aminoácidos, cerca de 20 a 90 aminoácidos, cerca de 20 a 80 aminoácidos, cerca de 20 a 70 amino ácidos, cerca de 20 a 60 aminoácidos, cerca de 20 a 50 aminoácidos, de cerca de 20 a 40 aminoácidos, ou cerca de 20 a 30 aminoácidos. Em certas modalidades, os MRDs tem um comprimento de cerca de 2 a 60 aminoácidos. Em outras modalidades, os MRDs tem um comprimento de cerca de 10 a 60 aminoácidos. Em outras modalidades, os MRDs tem um comprimento de cerca de 10 a 50 aminoácidos. Em modalidades adicionais, os MRDs tem um comprimento de cerca de 10 a 40 aminoácidos. Em modalidades adicionais, os MRDs tem um comprimento de cerca de 10 a 30 aminoácidos.
[0162]Em algumas modalidades, um ou mais dos componentes MRD das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd de ou inferior a 5x10-3 M, 10-3 M, 5 x 10-4 M, 10-4 M, 5 x 10-5 M, 10-5 M, 5 x 10-6 M, 10-6 M, 5 x 10-7 M, 10-7 M, 5 x 10-8 M, 10-8 M, 5 x 10-9 M, 10-9 M, 5 x 10-10 M, 10-10 M, 5 x 10-11 M, 10-11 M, 5 x 10-12 M, 10-12 M, 5 x 10-13 M, de 10-13 M, 5 x 10-14 M, 10-14 M, 5 x 1015 M, ou 10-15 M. Em uma modalidade, um ou mais dos componentes MRD das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd ou inferior a 5 x 10-5 M. Em outra modalidade, um ou mais dos componentes do MRD multivalente e composições multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd ou inferior a 5 x 10-8 M. Em outra modalidade, um ou mais dos componentes MRD das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd ou menos do que 5 x 10-9 M. Em uma outra modalidade, um ou mais dos componentes MRD das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd ou inferior a 5 x 10-10 M. Em uma outra modalidade, um ou mais dos componentes do MRD multivalente e composições multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tem uma constante de dissociação Kd ou inferior a 5 x 10-11 M. Em uma outra modalidade, um ou mais dos componentes do MRD composições multivalente e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd ou inferior a 5 x 10-12 M.
[0163]Em modalidades específicas, um ou mais dos componentes MRD das Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) prenderem os seus alvos com uma taxa de dissociação (Koff) de menos do que 5 x 10-2 s-1, 10-2 s-1, 5 x 10-3 s-1, ou 10-3 s-1. Mais preferencialmente, um ou mais dos componentes MRD das Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) prenderem os seus alvos com uma taxa de dissociação (koff) de menos do que 5 x 10-4 s-1, 10-4 s-1 , 5 x 10-5 s-1, ou 10-5 s-1, 5 x 10-6 s-1, 10-6 s-1, 5 x 10-7 s-1, 10-7 s-1.
[0164]Em outras modalidades específicas, um ou mais dos componentes MRD das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) ligam os seus alvos com um na taxa (kon) superior a 103 M-1s-1, 5 x 103 M-1s-1, 104 M-1s-1, 5 x 104 M-1s-1. Mais preferencialmente, um ou mais dos componentes MRD de Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, MRD anticorpos contendo MRD) se ligam aos seu alvos com uma taxa (Kon) superior a 105 M-1s-1, 5 x 105 M-1s-1, 106 M-1s-1, 5 x 106 M-1s-1 ou 107 M-1s-1, 5 x 107 M-1s-1.
[0165]Em algumas modalidades, os MRDs são aficorpos. Aficorpos representam uma classe de proteínas de afinidade baseada em um domínio de proteína resíduo de 58-aminoácidos derivados a partir de um dos domínios da proteína estafilocócica A de ligação IgG. Estes três domínios feixe de hélice tem sido utilizados como uma estrutura para a construção de bibliotecas combinatórias de fagemídeo, desde que as variantes de aficorpo se ligam a uma molécula-alvo desejada, tal como um ou mais dos alvos aqui descritos, podem ser rotineiramente selecionada usando a tecnologia de apresentação em fagos (ver, por exemplo, Nord et al, Nat Biotechnol 15:772-7 (1997), e Ronmark et al, A, Eur J. Biochcm 2002; 269:2647-55). Mais detalhes de Aficorpos e métodos de produção dos mesmos são fornecidos por referência à Pat. No. 5,831, 012, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0166]Em outras modalidades, um MRD da invenção (por exemplo, um MRD em um anticorpo contendo MRD) contém um ou mais resíduos de aminoácidos ou sequências de resíduos de aminoácidos (incluindo derivados, análogos e miméticos destes) que são preferencialmente alvo de produtos químicos ou outros processos que covalentemente ou não covalentemente apontam uma entidade molecular para o MRD, em comparação com o MRD sem as sequências-alvo ou, preferencialmente, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD. Por exemplo, em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos do MRD contém um ou mais resíduos possuindo uma cadeia lateral reativa (por exemplo, cisteína ou lisina) que permite a ligação seletiva ou preferencial do MRD a agentes citotóxicos (por exemplo, drogas e pró- fármacos conjugados de toxinas, e ligantes bioativos) ou agentes de formação de imagem.
[0167]O uso desses MRDs "ligantes" para armar um anticorpo compreendendo MRD com uma "carga útil"que supera muitos dos problemas associados com a desestabilização de anticorpos e redução na atividade anticorpo que têm sido frequentemente observadas utilizando métodos convencionais para gerar imunotoxinas. O componente de "carga útil"de um complexo de anticorpo compreendendo MRD da invenção pode ser qualquer composição que confere um efeito terapêutico, de diagnóstico, prognóstico ou benéfico, ou que proporcionam uma vantagem na produção, purificação ou formulação de um anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, a carga útil é um fármaco quimioterapêutico, ou um pró-fármaco, tal como, doxorrubicina ou uma droga como maitansinol. Em modalidades adicionais, a carga útil é outro MRD, uma toxina, um fármaco quimioterapêutico, uma enzima catalítica, um pró-fármaco, um nuclídeo radioativo, um agente quelante (por exemplo, para a fixação de lantanídeos) ou outro componente de composições multivalente e multiespecíficas da invenção como aqui descrito.
[0168]Em modalidades não-exclusivas, o MRD não contém um domínio de ligação ao antígeno, ou outro domínio de anticorpo, tal como uma região constante, uma região variável, uma região determinante de complementaridade (CDR), uma região de estrutura, um domínio de Fc, ou uma região de articulação. Em uma modalidade não exclusiva, o MRD não contém um domínio de ligação ao antígeno. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD não contém três CDRs. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD não contém CDR1 e CDR2. Em ainda outra modalidade não exclusiva, o MRD não contém CDR1. Em uma modalidade não exclusiva, o MRD não é derivado de um ligante celular natural. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD não é um radioisótopo. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD não é um marcador de expressão de proteína, tal como a glutationa S -transferase (GST), His-tag, Sinalização, a hemaglutinina (HA), MYC ou uma proteína fluorescente (por exemplo, GFP ou RFP). Em outra modalidade não exclusiva, o MRD não se liga a albumina do soro. Em uma modalidade não exclusiva adicional, o MRD não é uma pequena molécula que é uma citotoxina. Em ainda uma outra modalidade não exclusiva, o MRD não tem atividade enzimática. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD tem um efeito terapêutico quando administrado isoladamente e/ou quando fundido com um Fc em um modelo de paciente ou animal. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD tem um efeito terapêutico quando administrado repetidamente sozinho e/ou quando fundido com um Fc em um modelo de paciente ou animal (por exemplo, 3 ou mais vezes ao longo de pelo menos seis meses).
[0169]Em algumas modalidades, o MRD é conformacionalmente constrangido. Em outras modalidades, o MRD não é conformacionalmente constrangido. Em algumas modalidades, o MRD contém um resíduo de cisteína. O resíduo de cisteína no MRD pode formar uma ligação inter-cadeias (por exemplo, entre as cisteínas dentro do mesmo MRD, MRDs ligados a peptídeo diferente, e um MRD e um peptídeo ligados a imunoglobulina). Em algumas modalidades, o MRD(s) associado com a ligação intercadeias está/estão associados com um domínio de ligação alvo de núcleo único. Em outras modalidades, o MRD (s) participando na ligação intercadeia está/estão associados com domínios de ligação ao alvo de núcleo múltiplo. Em uma modalidade alternativa, o resíduo de cisteína no MRD pode formar uma ligação inter-cadeias (por exemplo, entre as cisteínas de MRDs de ligação não peptídica ou um MRD e uma imunoglobulina que não estão ligados por uma ligação peptídica). Em algumas modalidades, o MRD (s) associado com a ligação intercadeias está/estão associados com um domínio de ligação ao alvo de um núcleo único (ou seja, 2 MRDs localizados em diferentes cadeias polipeptídicas formam uma ou mais ligações intercadeias e coletivamente formam um alvo sítio de ligação). Assim, por exemplo, a invenção engloba anticorpos contendo MRD, em que MRDs localizados no terminal carboxila da cadeia pesada interagem (por exemplo, através de ligação de dissulfureto) de modo a formar um único sítio de ligação ao alvo. Em outras modalidades, o MRD (s) associados com a ligação intercadeias está/estão associados com domínios de ligação ao alvo de núcleo múltiplo. Alternativamente, tal como é aqui discutido, o MRD pode conter um ou mais resíduos de cisteína (ou outro resíduo possuindo uma cadeia lateral reativa (por exemplo, lisina)) que permite a ligação seletiva ou preferencial do MRD a um agente citotóxico.
[0170]Em algumas modalidades, o MRD contém dois resíduos de cisteína fora do domínio de ligação ao alvo do núcleo. Em algumas modalidades, o MRD contém dois resíduos de cisteína localizados no interior do domínio de ligação ao alvo núcleo em cada extremidade do domínio de ligação ao alvo. Em algumas modalidades, uma primeira cisteína está localizada próxima do terminal da molécula (isto é, na extremidade C-terminal de um MRD no C-terminal de uma cadeia de ligação ou anticorpo, ou no N- terminal de um MRD no N-terminal de uma cadeia de ligação ou anticorpo). Assim, em algumas modalidades, uma primeira cisteína está localizada dentro de um aminoácido, dentro de dois aminoácidos, dentro de três aminoácidos, dentro de quatro aminoácidos, dentro de cinco aminoácidos, ou dentro de seis aminoácidos do terminal da molécula. Em algumas modalidades, uma segunda cisteína está localizada perto do local de fusão de MRD (isto é, na extremidade N-terminal de um MRD no terminal C de uma cadeia de ligação ou anticorpo ou na extremidade C-terminal de um MRD no terminal N de um ligante ou cadeia de anticorpo). Assim, em algumas modalidades, uma segunda cisteína está localizado dentro de um aminoácido, dentro de dois aminoácidos, dentro de três aminoácidos, dentro de quatro aminoácidos, dentro de cinco aminoácidos, dentro de 10 aminoácidos, ou no prazo de 1 aminoácidos da fusão MRD.
[0171]Em algumas modalidades, o MRD é tapado com resíduos estáveis. Em algumas modalidades, o MRD é tampado dissulfureto. Em algumas modalidades, o MRD não contém os sítios de clivagem.
[0172]Em algumas modalidades, o MRD foi selecionado para não conter epítopos de célula T humanos potenciais conhecidos.
[0173]Em algumas modalidades particulares, o MRD tem uma hidrofobicidade particular. Por exemplo, a hidrofobicidade MRDs pode ser comparada com base nos tempos de retenção determinados utilizando cromatografia de interação hidrófoba ou cromatografia inversa em fase líquida.
[0174]O MRD alvo pode ser qualquer molécula que é desejável para um anticorpo contendo MRD para interagir com. Por exemplo, o MRD alvo pode ser um fator solúvel ou uma proteína transmembranar, tal como um receptor da superfície celular. O MRD alvo também pode ser um componente extracelular ou um componente intracelular. Em certas modalidades não exclusivas, o MRD alvo é um fator que regula a proliferação celular, diferenciação, ou a sobrevivência. Em outras modalidades não-exclusivas, o MRD alvo é uma citoquina. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD alvo é um fator que regula a angiogênese. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD alvo é um fator que regula a adesão celular e/ou a interação célula-célula. Em certas modalidades não exclusivas, o MRD alvo é uma molécula de sinalização celular. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD alvo é um fator que regula uma ou mais respostas imunes, tais como, auto-imunidade, inflamação e respostas imunes contra as células cancerosas. Em outra modalidade não exclusiva, o MRD alvo é um fator que regula a adesão celular e/ou interação célula-célula. Em uma modalidade adicional não exclusiva, o MRD alvo é uma molécula de sinalização celular. Em outra modalidade, um MRD pode ligar um alvo que é em si um MRD. A capacidade se ligar a um MRDs alvo e bloco, aumenta, ou interfere com a atividade biológica do MRD alvo que pode ser determinada utilizando ou ensaios de modificação rotineiramente, bioensaios, e/ou modelos animais conhecidos na técnica para avaliar essa atividade.
[0175]Os MRDs são capazes de se ligarem ao seu respectivo alvo quando os MRDs estão ligados a um anticorpo. Em algumas modalidades, o MRD é capaz de se ligar ao seu alvo, quando não ligado a um anticorpo. Em algumas modalidades, o MRD é um agonista alvo. Em outras modalidades, o MRD é um antagonista do alvo. Em certas modalidades, o MRD podem ser utilizados para localizar um anticorpo contendo o MRD para uma área onde o MRD alvo está localizado.
[0176]A sequência da MRD pode ser determinada de várias maneiras. Por exemplo, sequências de MRD pode ser derivada a partir de ligantes naturais ou sequências conhecidas que se ligam a um local específico de ligação ao alvo. Adicionalmente, as tecnologias de apresentação em fagos têm emergido como um poderoso método para identificar peptídeos que se ligam ao alvo receptores e ligantes. Nas bibliotecas de exibição de fagos de peptídeos de ocorrência natural e de ocorrência não-natural (por exemplo,) sequências de peptídeos aleatórios podem ser exibidos por fusão com proteínas de revestimento de fagos filamentosos. Os métodos para elucidar os sítios de ligação sobre polipeptídeos utilizando vetores de exibição em fagos tem sido anteriormente descrito, em particular, em WO94/18221, que é aqui incorporado por referência. Os métodos envolvem geralmente a utilização de um sistema de vetor de expressão de superfície fagos (fagemídeo) filamentosos para a clonagem e expressão de polipeptídeos que se ligam ao local-alvo pré-selecionado de interesse.
[0177]Os métodos da presente invenção para a preparação de MRDs incluem a utilização de vetores de exibição em fagos para a sua vantagem particular de fornecer um meio para pesquisar uma população muito grande proteínas de exibição expressas e, assim, localizar um ou mais clones específicos que codificam para um desejado alvo de reatividade ligação. A capacidade dos polipeptídeos codificados pelos clones de se ligar a um alvo e/ou alterar a atividade biológica do alvo pode ser determinada utilizando ou ensaios de modificação rotineiramente e outras metodologias aqui descritas ou caso contrário conhecidas na técnica. Por exemplo, a tecnologia de apresentação em fagos pode ser utilizada para identificar e melhorar as propriedades de ligação de MRDs. Ver, por exemplo, Scott et al. , Science 249:386 (1990); Devlin et al, Science 249: 404 (1990); Pat EUA. Nos 5223409, 5733731, 5498530, 5432018, 5338665, 5922545.; e Int. Appl. Publ. N ° s WO96/40987 e WO98/15833.; que são aqui incorporadas por referência. Em bibliotecas de apresentação de peptídeos em fagos, natural e/ou em sequências de peptídeos de ocorrência não natural podem ser exibidos por fusão com proteínas de revestimento de fagos filamentosos. Os peptídeos exibidos podem ser eluídos por afinidade contra um alvo de interesse, se desejado. Os fagos retidos podem ser enriquecidos por sucessivos ciclos de purificação de afinidade e repropagação. Os melhores peptídeos de ligação podem ser sequenciados para identificar resíduos chave dentro de uma ou mais famílias de peptídeos estruturalmente relacionadas. Ver, por exemplo, Cwirla et al, Science 276: 1696-9 (1997), no qual foram identificadas duas famílias distintas. As sequências de peptídeos podem também sugerir quais os resíduos que podem ser substituídos com segurança por pesquisa de alanina ou por mutagênese ao nível do DNA. Bibliotecas de mutagênese podem ser criadas e rastreadas para otimizar mais a sequência dos melhores ligantes. Lowman, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26: 401 -424 (1997).
[0178]A análise estrutural da interação proteína-proteína pode também ser utilizada para sugerir peptídeos que simulam a atividade ligação de ligantes de proteína grandes. Em tal análise, a estrutura de cristal pode sugerir a identidade e a orientação relativa de resíduos críticos do ligante da proteína grande, a partir da qual um peptídeo tal como um MRD podem ser concebidos. Ver, por exemplo, Takasaki et al., Nature Biotech. 15: 1266-1270 (1997). Estes métodos analíticos também podem ser utilizados para investigar a interação entre um alvo e um MRD selecionado por exibição em fagos, que podem sugerir mais modificações dos MRDs para aumentar a afinidade ligação.
[0179]Outros métodos conhecidos na técnica podem ser utilizados para identificar MRDs. Por exemplo, uma biblioteca de peptídeos pode ser fundida com o terminal carboxila do repressor lac e expresso em E. coli. Outro método a base de E. coli permite exibição no exterior da célula com membrana por fusão com uma lipoproteína associada a peptídeoglicano (PAL). Estes e outros métodos são coletivamente referidos como "exibição de E. coli." Em outro método, a tradução do RNA aleatório é interrompida antes da liberação do ribossoma, resultando em uma biblioteca de polipeptídeos com o seu RNA associado ainda ligado. Isto e métodos relacionados são coletivamente referidos como "exibição de ribossoma." Outros métodos conhecidos empregam ligação química de peptídeos para o RNA. Ver, por exemplo, Roberts e Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 94: 12297-12303 (1997). Isto e métodos relacionados, são coletivamente referidos como "rastreio de peptídeos de RNA, exibição de RNA e exibição de mRNA." Bibliotecas de peptídeos derivados quimicamente foram desenvolvidas em que os peptídeos são imobilizados em materiais não biológicos estáveis, tais como hastes de polietileno ou resinas permeáveis por solvente. Outra biblioteca de peptídeos derivado quimicamente utiliza fotolitografia para digitalizar os peptídeos imobilizados em lâminas de vidro. Estes e outros métodos são coletivamente referidos como "rastreio de peptídeo químico."Rastreio de peptídeo químico pode ser vantajoso na medida em que permite a utilização de D-aminoácidos e outros análogos não naturais, assim como elementos não peptídicos. Ambos os métodos biológicos e químicos são revistos em Wells e Lowman, Curr. Opin. Biotechnol. 3: 355-362 (1992). Além disso, bibliotecas restritas, bibliotecas lineares e/ou bibliotecas focadas (composto de domínios estruturalmente relacionados que partilham significativa homologia de sequência primária) podem ser utilizadas para identificar, caracterizar, e modificar MRDs.
[0180]Um MRD melhorado que se liga especificamente a um alvo desejado, também podem ser preparado com base em uma sequência conhecida de MRD. Por exemplo, pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições conservadoras ou não conservadoras), deleções ou inserções podem ser introduzidas em uma sequência de MRD conhecido e o MRD resultante pode ser rastreado quanto a ligação ao alvo desejado e atividade biológica, tal como a capacidade para antagonizar a atividade biológica destino ou para agonizar atividade biológica do alvo. Em outra modalidade, os locais selecionados para a modificação são maturados por afinidade utilizando técnicas de exibição em fagos conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Lowman, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26: 401-4 24 (1997).
[0181]Qualquer técnica de mutagênese conhecida na arte pode ser utilizada para modificar nucleotídeos individuais em uma sequência de DNA, para fins de adição de aminoácido (s), substituição (ões) ou deleção (ões) na sequência do anticorpo, ou para criar/excluir sítios de restrição e sequências que codificam para os aminoácidos desejados (por exemplo, cisteína) para facilitar posteriores manipulações. Tais técnicas incluem, mas não estão limitados a, mutagênese química, em mutagênese direcionada ao local in vitro (Kunkel, Proc Natl Acad Sci EUA 82: 488 (1985); Hutchinson et al, J. Biol Chem 253:6551 (1978)), a mutagênese direcionada a oligonucleotídeos (Smith, Ann Rev. Genet 19: 423-463 (1985); Hill et al, Methods Enzymol 155:558-568 (1987)), extensão de sobreposição a base dePCR (Ho et al, Gene 77:51-59 (1989)), a mutagênese baseada em PCR megainiciador (Sarkar et al, Biotechniques 8: 404-407 (1990)), etc. As modificações podem ser confirmada por sequenciação de DNA.
[0182]Proteínas de fusão adicionais podem ser geradas através de técnicas de embaralhamento de gene, embaralhamento de motivo, embaralhamento de exon, e/ou de embaralhamento de códon (coletivamente referidos como "embaralhamento de DNA"). Arranjo combinatório de DNA pode ser utilizado para alterar as atividades de SYNAGIS® ou seus fragmentos (por exemplo, um anticorpo ou um seu fragmento, com afinidades mais elevadas e taxas de dissociação mais baixas). Ver, geralmente, EUA Pat. Nos. 5605793, 5,811,238, 5830721, 5834252, e 5837458, e Patten et al, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33 (1 997); Harayama et al, Trends Biotechnol. 16 (2): 76-82 (1998); Hansson, et al, J. Mol. Biol. 287: 265-76 (1999); Lorenzo et al, Biotechniques 24 (2):308- 313 (1998); EUA Appl. Publ. Nos 200.301 18.592 e 200.330.133.939; e pedido de Publ. Int. No. WO02/056910; cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0183]Além disso, MRDs podem ser identificados com base em seus efeitos em ensaios que medem caminhos ou atividades particulares. Por exemplo, ensaios que medem as vias de sinalização (por exemplo, estudos de fosforilação ou a multimerização), fluxos de canal iônico, os níveis intracelulares de AMPc, as atividades celulares tais como a migração, adesão, proliferação, ou apoptose, e a entrada viral, replicação, brotamento, ou integração pode ser usados para identificar, caracterizar e melhorar MRDs.
[0184]Variantes e derivados das MRDs que retêm a capacidade se ligar ao antígeno alvo estão incluídos dentro do escopo da presente invenção. Incluído dentro de variantes são variantes de inserção, deleção, e de substituição, bem como variantes que incluem MRDs aqui apresentados com aminoácidos adicionais no N-terminal e/ou C-terminal, incluindo a partir de cerca de 0 a 50, 0 a 40, 0 a 30 , 0 a 20 aminoácidos e semelhantes. Entende- se que um MRD particular da presente invenção pode ser modificado para conter um, dois, ou todos os três tipos de variantes. Variantes de substituição e de inserção podem conter aminoácidos naturais, os aminoácidos não convencionais, ou ambos. Em algumas modalidades, o MRD contém uma sequência com não mais do que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, ou 20 diferenças de aminoácidos quando comparados com uma sequência de MRD aqui descrita. Em algumas modalidades, as diferenças de aminoácidos são substituições. Essas substituições podem ser conservadoras ou não conservadoras na natureza e podem incluir aminoácidos não convencionais ou não-naturais. Em outras modalidades o MRD contém uma sequência que inibe competitivamente a capacidade uma sequência molecular contendo MRD aqui descrito para se ligar a uma molécula alvo. A capacidade um MRD para inibir competitivamente a outra sequência contendo MRD pode ser determinada utilizando técnicas conhecidas na arte, incluindo análise de ELISA e BIAcore.
[0185]A capacidade um MRD para se ligar ao seu alvo pode ser avaliada utilizando qualquer técnica que avalia interação molecular. Por exemplo, a interação MRD-alvo pode ser testada como descrito nos Exemplos adiante ou, alternativamente, usando ensaios in vivo ou in vitro, tais como western blots, radioimunoensaios de ligação, ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) imunoensaios "sanduíche", ensaios de imunoprccipitação, imunoensaios fluorescentes, imunoensaios de proteína A, e imuno- histoquímica (THC). Os ensaios que avaliam a capacidade um MRD para funcionalmente afetar seu alvo (por exemplo, ensaios para medir a sinalização, proliferação, migração, etc.) também podem ser utilizados para avaliar indiretamente a interação MRD-alvo.
[0186]O MRD melhorado, que tem uma meia-vida in vivo particular, também pode ser preparado com base em uma sequência de MRD conhecida. Por exemplo, pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições conservadoras ou não conservadoras), deleções ou inserções podem ser introduzidos em uma sequência de MRD conhecido e o MRD resultante pode ser rastreado para meia-vida aumentada. Assim, variantes e derivados de MRDs que retêm a capacidade se ligar ao alvo e ter uma meia-vida aumentada podem ser incluídos em Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD). Assim, em algumas modalidades, um MRD em um anticorpo contendo MRD tem uma meia-vida de, pelo menos, cerca de 5, pelo menos cerca de 10, pelo menos cerca de 15, pelo menos cerca de 20, pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 35, pelo menos cerca de 40, pelo menos cerca de 45, pelo menos cerca de 50, pelo menos cerca de 55, pelo menos cerca de 60, pelo menos cerca de 65, pelo menos cerca de 70, pelo menos aproximadamente 75, pelo menos cerca de 80, pelo menos cerca de 85, pelo menos cerca de 90, pelo menos cerca de 95, pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 1 10, pelo menos cerca de 120, pelo menos cerca de 130, pelo menos cerca de 140, ou pelo menos cerca de 150 horas. Em modalidades, um MRD em um anticorpo contendo MRD tem uma meia-vida de, pelo menos, cerca de 5, pelo menos cerca de 10, pelo menos cerca de 15, pelo menos cerca de 20, pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 30, pelo menos cerca de 35, pelo menos cerca de 40, pelo menos cerca de 45, pelo menos cerca de 50, pelo menos cerca de 55, pelo menos cerca de 60, pelo menos cerca de 65, pelo menos cerca de 70, pelo menos aproximadamente 75, pelo menos cerca de 80, pelo menos cerca de 85, pelo menos cerca de 90, pelo menos cerca de 95, pelo menos cerca de 100, pelo menos cerca de 1 10, pelo menos cerca de 120, pelo menos cerca de 130, pelo menos cerca de 140, ou pelo menos cerca de 150 horas.
[0187]Uma vez que a sequência do MRD foi elucidada, os peptídeos podem ser preparados por qualquer dos métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, os peptídeos de MRD podem ser sintetizados quimicamente e operativamente ligados ao anticorpo ou podem ser sintetizados utilizando tecnologia recombinante. Por exemplo, MRDs podem ser sintetizado em solução ou em um suporte sólido, utilizando técnicas conhecidas. Vários sintetizadores automáticos estão comercialmente disponíveis e podem ser utilizados de acordo com protocolos conhecidos. Ver, por exemplo, Tam et al, J. Am. Chem. Soe. 105: 6442 (1983); Merrifield, Science 232: 341-347 (1986); Barany e Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds., Academic Press, New York, 1 - 284; Barany et al, Tnt. J. Pep. Protein Res., 30: 705-739 (1987); e Pat US. No. 5.424.398, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0188]MRDs podem ser sintetizados com as moléculas ligadas covalentemente que não são aminoácidos, mas ajudam na purificação, identificação e/ou seguimento de um MRD in vitro ou in vivo, (por exemplo, biotina por reação com avidina ou moléculas marcadas com avidina ).
[0189]Os seguintes alvos MRD são descritos em mais detalhe por meio de apenas exemplo.
[0190]Em algumas modalidades aqui descritas, o MRD alveja uma integrina. O papel das integrinas, tais como avß3 e avß5 como marcadores associados a tumores tem sido bem documentado. Um estudo recente de 25 linhas de células humanas permanentes estabelecidas a partir de câncer de ovário avançado demonstrou que todas as linhas foram positivas para a expressão avß5 e muitas foram positivas para a expressão avß3. Os estudos mostraram também que avß3 e avß5 são altamente expressos em tecidos de tumor cervical humano malignos. As integrinas também demonstraram os efeitos terapêuticos em modelos animais de sarcoma, melanoma, câncer da mama e de Kaposi.
[0191]Um número de antagonistas avß3 e avß5 integrina estão em desenvolvimento clínico. Estes incluem peptídeos RGD cíclicos e imitadores de RGD de molécula pequena sintética. Dois antagonistas de integrina com base em anticorpos estão atualmente em ensaios clínicos para o tratamento de câncer. O primeiro é VITAXIN® (MEDI-522, Abegrein), a forma humanizada do anticorpo LM609 avß3 anti-humano de murina. Um estudo fase I de doses escalonadas em doentes com câncer demonstrou que VITAXIN® é seguro para utilização em humanos. Outro anticorpo em ensaios clínicos é CNT095, um Ab completamente humano que reconhece integrinas av. Um estudo CNT095 de Fase I em doentes com uma variedade tumores sólidos tem mostrado que é bem tolerada. Cliengitide (EMD 121974), um antagonista de peptídeo avß3 e avß5, também tem se mostrado seguro em ensaios de fase I. Além disso, tem havido numerosos estudos de drogas e direcionamento de imagem com base no uso de ligantes para estes receptores. Estas observações pré-clínicas demonstram a importância da segmentação avß3 e avß5 e estudos que envolvem o uso de anticorpos desta estratégia têm consistentemente relatado que a segmentação através destas integrinas é segura.
[0192]Ensaios clínicos também estão em andamento para os antagonistas de segmentação a5vß1 para o tratamento do melanoma metastático, carcinoma de células renais, e câncer do pulmão de células não pequenas (M200 (volociximab) e glioma maligno (RTA-161).
[0193]MRDs de ligação a integrina contendo um ou mais motivos de sequências de tripeptídeo RGD representam um exemplo de MRDs da invenção. Ligantes com o motivo RGD como um domínio mínimo de reconhecimento e a partir do qual MRDs da invenção podem ser derivados são bem conhecido, uma lista parcial das quais inclui, com o alvo integrina correspondente entre parênteses, fibronectina (a3ß1, a5ß1, avß1, a11bß3, avß3 e a3ß1) fibrinogênio (aMß2 e a11b ß 1) fator de von Willebrand (a11bß3 e avß3) e vitronectina (a 11bß3, avß3 e avß5).
[0194]Em uma modalidade, o MRD alvo contendo RGD é um membro selecionado a partir do grupo que consiste em: YCRGDCT (SEQ ID NO: 3); PCRGDCL (SEQ ID NO: 4); TCRGDCY (SEQ ID NO: 5); e LCRGDCF (SEQ ID NO: 6).
[0195]Um MRD que imite um sítio de ligação não dependente de RGD de um receptor de integrina e tendo a especificidade ligação ao alvo de um ligante de alta afinidade que reconhece a integrina selecionada está também contemplado na presente invenção. MRDs que se ligam a um receptor de integrina e interrompem a ligação e/ou a atividade sinalização da integrina são também contemplados.
[0196]Em algumas modalidades, o MRD alveja uma molécula angiogênica. A angiogênese é essencial para muitos processos fisiológicos e patológicos. Ang2 tem sido mostrado que atua como uma molécula pró- angiogênica. A administração de inibidores seletivos de Ang2 é suficiente para suprimir tanto a angiogênese tumoral e angiogênese da córnea. Portanto, a inibição de Ang2 sozinho ou em combinação com a inibição de outros fatores angiogênicos, tais como VEGF, pode representar uma estratégia antagiogênica eficaz para tratar pacientes com tumores sólidos.
[0197]Considera-se que MRDs úteis na presente invenção incluem aqueles que se ligam a receptores angiogênicos, fatores angiogênicos, e/ou Ang2. Em uma modalidade específica, um MRD da invenção se liga a Ang2. Em outras modalidades, o componente de ligação compreende um fragmento de TIE2 de ANG2 que se liga a TIE2. Em modalidades particulares, as composições da invenção se ligam de TIE2 e compreendem os aminoácidos 283-449 da ANG2 humana revelada em NCBI Ref. Seq. No. NP_001138,1.
[0198]Em uma modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a Ang2 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 136619 e 620, tal como estabelecido na Tabela 10. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação a Ang2 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 136-619 e 620. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de Ang2 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ TD NO: 620 e 136-619.
[0199]Em uma modalidade particular, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que liga a Ang2 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: DCFWYPNPEWCY (ANG100; SEQ ID NO: 621); KCPLLPDWASCH (ANG99; SEQ ID NO: 622); TCQDYPFWRYCH (ANG53; SEQ ID NO: 623); DCYF YPNPPHCY (ANG57; SEQ ID NO: 624); PHEECYFYPNPPHCYTMS (ANG318; SEQ ID NO: 625); DCAVYPNPPWCYKMEFG (ANG202; SEQ ID NO: 626); RPILCPLLPDW ISCHEWL (ANG205; SEQ ID NO: 627); e LWDDCYFFPNPPHCYNSP (ANG200; SEQ ID NO: 628). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete a ligação Ang2 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 621627 e 628. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de Ang2 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 621 -627 e 628.
[0200]Em uma modalidade, um MRD e/ou anticorpo contendo MRD liga a Ang2 e contém uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: GAQTNFMPMDDLEQRLYEQFI LQQGLE (SEQ ID NO: 9) (ANGa); LWDDCYFFP NPPHCYNSP (SEQ ID NO: l 1) (ANGB); LWDDCYSYPNPPHCYNSP (SEQ ID NO: 12) (CNAG); LWDDCYSFPNPPHCYNSP (SEQ ID NO: 15) (ANGd); DCAVYPNPPWCYKME FGK (SEQ ID NO: 16) (ANGe); PHEECYFY PNPPHCYTMS (SEQ ID NO: 17) (ANGf); e PHEECYSYPNPPHCYTMS (SEQ ID NO: 18) (ANGg).
[0201]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD compreende um Ang-2 ligando a peptídeo divulgado na US Pat. Nos. 7309483, 7205275, 7138370 7063965, 7063840, 7045302, 7008781, 6825008, 6645484, 6627415, 6455035, 6441, 137, 6433143, 6265564, 6, 166185, 5879672, 5814464, 5681, 714, 5650490, 5643755 e 5521, 073 ; e Pedido de Publicação U.S.. Nos. 2007/0225221, 2007/0093419, 2007/0093418, 2007/0072801, 2007/0025993, 2006/0122370, 2005/0186665, 2005/0175617, 2005/0106099, 2005/0100906, 2003/0236193, 2003/0229023, 2003/0166858, 2003/0166857, 2003/0162712, 2003/0109677, 2003/0092891, 2003/0040463, 2002/0173627 e 2002/0039992, e Pedido de Publicação Intern. Nos. WO2006/005361, WO/2006/002854, WO2004/092215, WO/2004/076650, WO2003/057134, WO/2000/075323, WO2000/065085, WO/1998/018914 ou WO 1995/021866, as divulgações de cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0202]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD contém um MRD que liga preferencialmente ANG2 sobre ANG1 e ANG4. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD contém um MRD possui uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: ANG100 (SEQ ID NO: 621), ANG156 (SEQ ID NO: 255), ANG318 (SEQ ID NO: 625) e ANG599 (SEQ ID NO: 367). Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD contém um MRD que se liga preferencialmente a ANG1 e ANG2 sobre Ang4. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD contém um MRD possui uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em: ANG126 (SEQ ID NO: 232), ANG129 (SEQ ID NO: 234), ANG179 (SEQ ID NO: 270) , ANG200 (SEQ ID NO: 628), ANG303 (SEQ ID NO: 331) e ANG335 (SEQ ID NO: 332). Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD contém um MRD que se liga a ANG1, ANG2 e Ang4. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD contém um MRD possuindo a sequência de ANG335 (SEQ ID NO: 332). Anticorpo contendo MRDs que competem para ligar ANG1, ANG2 e/ou ANG4 com uma ou mais dos MRDs acima e/ou anticorpo contendo MRD também são abrangidos pela invenção.
[0203]Em algumas modalidades, o MRD alveja o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Em uma modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga VEGF e contém uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NOS: 629-691 e 692, tal como apresentados na Tabela 11. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de FCEV com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NOS: 629691 e 692. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo do VEGF como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo constituído por: SEQ ID NOs: 692 e 629-691.
[0204]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga VEGF e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: ACV QVPWWLCI (VGF5; SEQ ID NO: 693); TCWKPTPWWLCD (VGF26; SEQ ID NO: 694); WCNGFPPNYPCY (VGF57; SEQ ID NO: 695); GCVKEAPWWLCV (VGF61; SEQ ID NO: 696); e WCNGFPANYPCY (VGF50; SEQ ID NO: 697). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de FCEV com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NOS: 693-696 e 697. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo do VEGF como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo constituído por: SEQ ID NOs: 697 e 693-696.
[0205]Em uma modalidade, a fusão anticorpo-MRD compreende um MRD com a sequência ATWLPPP (SEQ ID NO: 71), que inibe a angiogênese mediada pelo VEGF. Binetruy-Tournaire et al, EMBO J. 19: 1525-1533 (2000). Em modalidades adicionais, um anticorpo anti-VEGF contendo um MRD que tem como alvo o VEGF está contemplado na presente invenção. Os anticorpos anti-VEGF podem ser encontrados, por exemplo, em Presta et al., Cancer Research 57: 4593-4599 (1997); e Fuh et al., J. Biol. Chem. 281: 10 6625 (2006), cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0206]MRDs específicos para receptor do fator-I de crescimento tipo insulina (IGF1R) também pode ser utilizados na presente invenção. Em uma modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a IGF1R e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo constituído por: SEQ ID NOs: 1 698- 1 149 e 150, como apresentado na Tabela 12. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação do IGF1R com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: NO: 698-1149 e 1150. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IGF1R como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: NO: 698-1149 e 1150.
[0207]Em uma outra modalidade, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação do IGF1R com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: LCKEFPELCF (IGF 252; SEQ ID NO: 1 151) ; QPWEGYSWLY (IGF71; SEQ ID NO: 1 152); RITPSDLCKEFPELCF (IGF550; SEQ ID NO: 1 153); GFHHAYY Y RGQAGQGSATGGSSRITPSDLCKEFP ELCF (IGF2044; SEQ ID NO: 1 154); LCHGYPWYGPCQGQAGQGSATGGSGSTAS S RITPSDLCKEFPELCF (IGF2037: SEQ ID NO: 1 155); GSWCDHYPQPVMCLGQAG QGSATGGSSRITPSDLCKEFPELCF (IGF2039 SEQ ID NO: 1 156); e TFENAL YCLAYGICDKITLI (IGF2045; SEQ ID NO: 1 157). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação do IGF1R com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ TD NO: 1151-1156 e 1157. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IGF1R como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 1151 -1156 e 1157.
[0208]MRDs específicos de migração vascular são também contemplados para utilização na presente invenção. Um número de estudos caracterizaram a eficácia da ligação do peptídeode migração vascular para outras proteínas como IL12 ou drogas para direcionar a sua entrega em animais vivos.
[0209]Vários outros sítios de ligação alvejados estão contemplados como sendo o alvo das fusões anticorpo-MRD da presente invenção, incluindo, por exemplo, FGFR1, FGFR2, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, receptor de fator-1 de crescimento semelhante a insulina, e receptor do fator de crescimento de hepatócitos. MRDs podem ser direcionados para estes sítios de ligação alvo ou os ligantes correspondentes.
[0210]Em uma modalidade, o MRD se liga a IL-6. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a IL-6 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1158- 1731 e 1732, como apresentado na Tabela 13. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação a IL6 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1158- 1731 e 1732. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL-6 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1158- 1731e 1732.
[0211]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a IL-6 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: YCPWDPIMMQCA (ILB394; SEQ ID NO: 1733); LSNSCAW DPLLMNCIDTH (ILB227; SEQ ID NO: 1734); FNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB915; SEQ IDNO: 1735); INNLSPVCYWDPLLMDCI (ILB235; SEQ IDNO: 1736); VQY WEFETWEGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB914; SEQ ID NO: 1737); HQADDPFGQWGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB910; SEQ ID NO: 1738); PLWEQT WQYGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB916; SEQ ID NO: 1739); FNEDC MWDPLLMDCAYSPGQGSATGGSAAGGGSMCLTYEEICS (ILB790; SEQ ID NO: 1740); ISMPCH SWEHCLSLL (ILB754; SEQ ID NO: 1741); GWGRVCDADYCCWVVC (TLB753; SEQ ID NO: 1742); EYDWCMWEVK MFEEACWSLS (ILB909; SEQ ID NO: 1743); VLSECFEAYRVVCQALT (ILB913; SEQ ID NO: 1744); MGIRCQTWDHCLSIL (ILB911; SEQ ID NO: 1745); e QRYPCTTWEDCLVVL (ILB912; SEQ ID NO: 1746). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou Anticorpo contendo MRD que compete para IL6 a ligação com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1733-1745 e 1746. Em uma outra modalidade, a invenção engloba um e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL6 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1733-1745 e 1746.
[0212]Em uma modalidade, o MRD se liga a IL6R. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga IL6R e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1747-1908 e 1909, como apresentado na Tabela 14. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação IL6R com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1747- 1908 e 1909. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL6R como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1747- 1908 e 1909.
[0213]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga IL6R e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: DLLYCEWEMVVRECHGTI (ILC1 1 1; SEQ ID NO: 1910); EFVLCELAM VFRECHGAV (ILC82; SEQ ID NO: 1 191); ELIECDLEMVFNECHGAI (ILC85; SEQ ID NO: 1912); DYILCDLEMVFRECHGVL (ILC289; SEQ ID NO: 1913); EFILCELEMVIRECHGTT (ILC92; SEQ ID NO: 1914); PCE EAFAAYLE (ILC 1 10; SEQ ID NO: 1915); PCEEAFAAYLEEAYN (CIT 134; SEQ ID NO: 1916); ACEEAFASYLEENVM (ILC I OO; SEQ ID NO: 1917); DCNALFTGDLAW (ILC 145; SEQ ID NO: 1918); DEEWTCFP TLCSLWSE (ILC51; SEQ ID NO: 1919); EEEWTCFPSLCTIWSQ (ILC 163; SEQ ID NO: 1920); EEEWTCFPYLCSDWLQ (ILC168; SEQ ID NO: 1921); EEEWTCFP YLC SEWVH (ILC235; SEQ ID NO: 1922); QEEWTCFPYLCSYWAQ (ILC217; SEQ ID NO: 1923); GQDDCWPYYCDELEY (ILC54 SEQ ID NO: 1924); SCWTCIPEMVNCEAAH (ILC293; SEQ ID NO: 1925); YWAKCDYHEGWHHCELHP (TLC296, SEQ TD NO: 1926); VFWDCWYYGT WIECENTG (ILC295; SEQ ID NO: 1927); GDTPCQEWPYWCLPPY (ILC290; SEQ ID NO: 1928); HLISCEFHEKYVECVEVA (ILC291; SEQ ID NO: 1929); STDYC EVLEIQWVCYRPP (ILC294; SEQ ID NO: 1930); e QIVECWTEMDWHHCVLFF (ILC292 SEQ ID NO: 1931). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação IL6R com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1910-1930 e 1931. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL6R como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1910-1930 e 1931.
[0214]Em uma modalidade, o MRD se liga a IL17a. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga IL17a e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1932- 1989 e 1990, como apresentado na Tabela 15. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação IL17a com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1932-1989 e 1990. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL17a como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 19321989 e 1990.
[0215]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga IL17a e contém a sequência de aminoácidos LSLWCWLINDVNCSEPV (ILA72; SEQ ID NO: 1991) ou NPLWCWMFPADDPC VHPG (ILA20; SEQ ID NO: 1992). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação IL17a com um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1991, ou SEQ ID NO: 1992. Em uma outra modalidade, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de IL17a como um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1991, ou SEQ ID NO: 1992.
[0216]Em uma modalidade, o MRD se liga a TNFSF15 (TL1A). Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga TL1A e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1993-2234 e 2235, como apresentado na Tabela 16. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação TL1A com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1993-2234 e 2235. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de TL1A como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 1993-2234 e 2235.
[0217]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga TL1A e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: QDRVCWDFHQKLQFCELSM (TLA525; SEQ ID NO: 2236); YSSVCWDDTRE ALFYCETTV (TLA27; SEQ ID NO: 2237); EYALCWVEAQEK LEWCKGLN (TLA522; SEQ ID NO: 2238); DYEVCWDVHVDRLVYCDAPM (TLA523; SEQ ID NO: 2239); STEVCWDFIEQ LIWCSTFR (TLA35; SEQ ID NO: 2240); QSDVCW NQSHQLLQFCWESN (TLA54; SEQ ID NO: 2241); e DYAVCWDPDYG NLVWCNVLS (TLA524; SEQ ID NO: 2242). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação TL1A com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: 2236-2241 e 2242. Em uma outra modalidade, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de TL1A como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2236-2241 e 2242.
[0218]Em uma modalidade, o MRD se liga a TNFSF13b (BLyS). Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga BLyS e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: GDMGCWDWLTRTQV CSLLV (BLY50; SEQ ID NO: 2243); PRGTCWADPLT GQCVQVM (BLY47; SEQ ID NO: 2244); PAGMCFDNLTLQMVQCTSLK (BLY35 SEQ ID NO: 2245); GPWACYETPTRQMCVPVF (BLY69 SEQ ID NO: 2246); ERKA CYFDPLV QCLFVR (BLY60; SEQ ID NO: 2247); TMPTCFMDPLTHQCWPSV (BLY34; SEQ ID NO: 2248); HPGRCYDQLTYEWVTCWHLW (BLY31; SEQ ID NO: 2249); RADLCYHEHH NNECFFGM (BLY73; SEQ ID NO: 2250); e TGSSC WDILT QMVPC LTAW (BLY27; SEQ ID NO: 2251). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de BLyS com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ TD NO: 2243-2250 e 2251. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de BLyS como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2243-2250 e 2251.
[0219]Em uma modalidade, o MRD se liga a HER2/3.
[0220]Em uma outra modalidade, liga-se o MRD EGFR. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a EGFR e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2252-3090 e 3091, como apresentado na Tabela 17. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de EGFR com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2252-3090 e 3091. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de EGFR como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2252-3090 e 3091.
[0221]Em uma modalidade particular, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a EGFR e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: LTAPCYWTTWGKECLMLR (EGA79; SEQ ID NO: 3092); LNDNCYWTTWGRECYLLR (EGA191; SEQ ID NO: 3093); FSDPCYWTTWGR ECFLLP (EGA214; SEQ ID NO: 3094); LPEGCYWTTWGKECLLLP (EGA234; SEQ ID NO: 3095); LPQGCVWTNWGKECYLPL (EGA626; SEQ ID NO: 3096); LPEGCW WSQWGKECLLLP (EGA623; SEQ ID NO: 3097); LPQECYWAHWG ECYLPP (EGA625; SEQ ID NO: 3098); LPEGCWWAPWGKECLLHP (EGA673 SEQ ID NO: 3099); LPEDCWWSTWGRECLLPP (EGA990; SEQ ID NO: 3100); ADSWCHTL YWQLHHCASWE (EGA349; SEQ ID NO: 3101); EESLCHTLYRQLHNCRSLE (EGA406; SEQ ID NO: 3102); ADSLCLTEYLELLQCERWE (EGA466; SEQ ID NO: 3103); ADSLCQTRHQQLLDCERQE (EGA467; SEQ ID NO: 3104); PESWCHTLY WNLQHCLSQE (EGA433; SEQ ID NO: 3105); Y AEHC WQFPTD WICTLMT (EGA518; SEQ ID NO: 3106); YAEHCLMFPGDWICTLLP (EGA771; SEQ ID NO: 3107); YASHCSQFPGDWICSLMT (EGA772; SEQ ID NO: 3108); YAEHCRQ FPSDWICTLLP (EGA797; SEQ ID NO: 3109); YADHCSQFPNDWICTLLS (EGA926; SEQ ID NO: 31 10); Y AEHC S LFPTD WICTLM S (EGA958; SEQ ID NO: 31 1 1); e YAEHCSQFPSDWICSLLS (EGA917; SEQ ID NO: 31 12). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de EGFR com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3092-31 1 1 e 31 de 12. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de EGFR como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3092-3111 e 3112.
[0222]Em uma outra modalidade, o MRD se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a ErbB2 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 31 13-3494 e 3495 como apresentado na Tabela 18. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de ErbB2 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 31 13-3494 e 3495. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de ErbB2 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3113-3494 e 3495.
[0223]Em uma modalidade particular, a invenção engloba um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a ErbB2 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SAISCYVYQQHRHCDWDH (EGB417; SEQ ID NO: 3496); WSGYCEMKDHWAHCGHSE (EGB390; SEQ ID NO: 3497); e WSGYCETPSGWK ACRGNI (EGB858; SEQ ID NO: 3498). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de ErbB2 com um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3496, SEQ ID NO: 3497 ou SEQ ID NO: 3498. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de ErbB2 como um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3496, SEQ ID NO: 3497 ou SEQ ID NO: 3498.
[0224]Em uma outra modalidade, o MRD se liga a ErbB3. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ErbB3 contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3499-4086 e 4087, como apresentado na Tabela 19. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de ErbB3 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3499-4086 e 4087. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de ErbB3 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 3499-4086 e 4087.
[0225]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ErbB3 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SSETYCPFLNPYWYDQCMSRT (EGC 1077; SEQ ID NO: 4088); SEPYCPFLNPTWKSQCIART (EGC 180; SEQ ID NO: 4089); SQVSCP FQNPIWWSHCMELM (EGC42; SEQ ID NO: 4090); GSKPYCPFTNPIWYDECIKRS (EGC593; SEQ ID NO: 4091); ATEPYCPFLNPIWKAECLARS (EGC503; SEQ ID NO: 4092); KFLMCQVYPSEKWHVCVETL (EGC41 SEQ ID NO: 4093); e SKPYC PFTNPIW YDECIKRS GGGSGGGS Q AAAG GS YMHEPHMQ VLEIMN (EGC 1086; SEQ ID NO: 4094). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de ErbB3 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4088- 4093 e 4094. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de ErbB3 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4088- 4093 e 4094.
[0226]MRDs específicos a (ErbB4) receptor de fator I de crescimento tipo insulina também pode ser utilizado na presente invenção. Em uma modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga a ErbB4 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4095-4123 e 4124, como apresentado na Tabela 20. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação ErbB4 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4095 -4123 e 4124. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de ErbB4 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4095-4123 e 4124.
[0227]Em uma outra modalidade, MRD se liga a TNFRSF10B (DR5). Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga DR5 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ TD NO: 4125-4319 e 4320, como apresentado na Tabela 21. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de DR5 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4125-4319 e 4320. Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de DR5 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4125-43 19 e 4320.
[0228]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga DR5 e contém a sequência de aminoácidos de WDCLG LGQR QCVKL (DR5218; SEQ ID NO: 4321) ou FPRPCAEEDVIMTCRWRV (DR53; SEQ ID NO: 4322). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de DR5 com um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4321 ou SEQ ID NO: 4322. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de DR5 como um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4321 ou SEQ ID NO: 4322. Tal como aqui demonstrado, aumentando a valência de MRDs DR5 em um resultado de anticorpos contendo MRD em um aumento correspondente na citotoxicidade células mediadas por DR-5 (ver, Exemplo 46). Assim, em modalidades adicionais, a invenção abrange um anticorpo contendo MRD que contém pelo menos 4, pelo menos 6, pelo menos, 8 ou, pelo menos, 10 MRDs que se ligam a DR5. Além disso, tal como aqui demonstrado, aumentando o direcionamento multi-epitópico para um alvo com exceção de DR5 (por exemplo, ErbB2 e EGFR) em um anticorpo contendo MRD de ligação a DR5 correlaciona-se com o aumento de citotoxicidade celular mediada por DR5. Assim, em modalidades adicionais, a invenção engloba um anticorpo contendo MRD que se liga a DR5, pelo menos, dois epitopos diferentes de um alvo com exceção de DR5. Além disso, tal como aqui demonstrado, a estrutura de ligação de um anticorpo contendo MRD ligando a DR5 influencia o nível de citotoxicidade celular mediado por DR5 do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o sítio de combinação de anticorpo contendo MRD ligando a DR5 se liga uma molécula na superfície de uma célula alvo que expressa DR5. Em uma outra modalidade, o local de combinação do anticorpo contendo MRD liga uma molécula na superfície de uma célula e MRDs do anticorpo contendo MRD liga DR5 por meio de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais. Em modalidades alternativas, o sítio de combinação de anticorpo contendo MRD de ligação a não se liga a uma molécula na superfície de uma célula alvo que expressa DR5 na sua superfície. Em uma modalidade adicional, o local de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD não se liga uma molécula na superfície de uma célula alvo e MRDs do anticorpo contendo MRD liga DR5 por meio de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais.
[0229]Em modalidades adicionais, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que se liga DR4 (TNFRSF10A/ TRAIL R1). De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos 4, pelo menos 6, pelo menos 8 ou, pelo menos 10 MRDs que se ligam a DR4 (TNFRSF 10A/(TRAIL R1). Em modalidades adicionais, a invenção abrange um anticorpo contendo MRD que se liga DR4 e, pelo menos, dois epitopos diferentes de um alvo com exceção de DR4. Em algumas modalidades, o local de combinação de anticorpo contendo MRD de ligação a DR4 liga uma molécula na superfície de uma célula alvo expressando DR4. Em uma outra modalidade , o anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a uma molécula de na superfície de uma célula e MRDs do anticorpo contendo MRD liga a DR4 através de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 , 9, 10, ou mais. Em modalidades alternativas, o sítio de combinação de anticorpo contendo MRD de ligação a DR4 não se liga a uma molécula na superfície de uma célula alvo que expressa DR4 na sua superfície. Em uma outra modalidade, o local de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD não se liga a uma molécula na superfície de uma célula e MRDs do anticorpo contendo MRD alvo se liga a DR4 através de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9, 10, ou mais.
[0230]Em modalidades adicionais, a invenção engloba um anticorpo contendo MRD que se liga a uma molécula de sinalização da superfície celular. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos 4, pelo menos 6, pelo menos 8 ou, pelo menos 10 MRDs que se ligam à superfície celular da molécula sinalizadora. Em modalidades particulares, a superfície celular da molécula sinalizadora é um membro selecionado a partir de: c-Met, EGFR, ErbB2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR1 (por exemplo, FGFR1- IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIc), FGFR3, PDGFRA, PDGFRB, netrin, CD28, TNFRSF 1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF IB (TNFR2), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF21 ou TNFRSF25, TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF11A (RANK), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3) e LRP6. Em modalidades adicionais, a invenção engloba um anticorpo contendo MRD que se liga a molécula de sinalização da superfície celular e pelo menos dois epitopos diferentes de um alvo diferente da molécula de sinalização da superfície celular. Em algumas modalidades, o sítio de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a uma molécula na superfície de uma célula alvo que expressa a molécula de sinalização da superfície celular. Em uma outra modalidade, o anticorpo do anticorpo contendo MRD liga uma molécula na superfície de uma célula e MRDs do anticorpo contendo MRD liga a molécula de sinalização da superfície celular através de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4 , 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais. Em modalidades alternativas, o local de combinação de anticorpo de uma molécula de sinalização da superfície celular ligando ao anticorpo contendo MRD não se liga a uma molécula na superfície de uma célula alvo que expressa a molécula de sinalização da superfície celular. Em uma outra modalidade, o sítio de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD não se liga uma molécula na superfície de uma célula alvo e MRDs do anticorpo contendo MRD liga a molécula de sinalização de superfície da célula através de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais.
[0231]Em uma outra modalidade, o MRD liga-se ao CD19. Em algumas modalidades, a invenção abrange um MRD e/ou Anticorpo contendo MRD que se liga a CD19 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: STLTCQVWLEDWYECIEVD (CDA1; SEQ ID NO: 4323); PNWVCWET PWTYECLEIE (CDA16; SEQ ID NO: 4324); VLLH CFGEPQWMECVPYV (CDA26; SEQ ID NO: 4325); FSPFCQYFQEFGECHYLS (CD A33; SEQ ID NO: 4326); LLLRCM YEPYYWELQCVEVE (CDA48; SEQ ID NO: 4327); e YIYTCSFIWDYQEIYCSPEL (CDA53; SEQ ID NO: 4328). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete com a ligação de CD19 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4323-4327 e 4328. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou Anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de CD19 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4323-4327 e 4328.
[0232]Em algumas modalidades, o MRD se liga a uma proteína humana. Em algumas modalidades, o MRD se liga tanto a uma proteína humana e o seu ortólogo em camundongo, rato, coelho, ou hamster. III. Anticorpos
[0233]O anticorpo nas composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) aqui descritos podem ser qualquer imunoglobulina de ligação ao antígeno adequada. Em certas modalidades, as moléculas de anticorpo contendo MRD aqui descritas mantém as propriedades estruturais e funcionais de anticorpos monoclonais tradicionais. Assim, os anticorpos conservam as suas propriedades de ligação ao epitopo, mas também, vantajosamente, incorporam uma ou mais especificidades de ligação ao alvo.
[0234]Os anticorpos que podem ser utilizados nas composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) incluem, mas não estão limitados a, anticorpos monoclonais, multiespecíficos, humanos, humanizados, primatizados, e anticorpos quiméricos. Imunoglobulina ou moléculas de anticorpo da invenção podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse de molécula de imunoglobulina . Em modalidades específicas, os anticorpos são IgG1. Em outras modalidades específicas, os anticorpos são IgG3.
[0235]Os anticorpos que podem ser utilizados como parte das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) podem ser derivados naturalmente ou o resultado da engenharia recombinante (por exemplo, apresentação de fagos, xenorato, e sintética). Os anticorpos podem incluir modificações, por exemplo, para aumentar a meia-vida ou para aumentar ou diminuir a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou atividade citotoxicidadependente do complemento (CDC). Os anticorpos podem ser de ou derivados de qualquer origem animal, incluindo aves e mamíferos ou gerados sinteticamente. Em algumas modalidades, os anticorpos são anticorpos de humano, murino, burro, coelho, cabra, porquinho da índia, camelo, lhama, cavalo, ou galinha. Em modalidades específicas, os anticorpos são humanos.
[0236]Em certas modalidades, as porções da cadeia pesada de uma cadeia de polipeptídeo de um multímero são idênticas às de uma segunda cadeia de polipeptídeos do multímero. Em modalidades alternativas, os monômeros contendo porção de cadeia pesada da presente invenção não são idênticos. Por exemplo, cada monômero pode compreender um sítio de ligação alvo diferente, formando, por exemplo, um anticorpo bi específico.
[0237]Anticorpos biespecíficos, bivalentes, e os métodos para a sua preparação, são descritos, por exemplo na Pat. Nos. 5731,168; 5,807,706; 5,821, 333 e Publ. Pedido US Nos 2003/020734 e 2002/0155537; cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Anticorpos tetravalentes, biespecíficos e métodos para a sua preparação são descritos, por exemplo, em Publ. Pedido Intern. Nos. WO02/096.948 e WO00/44788, as divulgações de ambas as quais são aqui incorporadas por referência na sua totalidade. Veja-se genericamente, Publ. Pedido Inter. N° W093/17715, WO92/08802, WO91/00360, e WO92/05793.; Tutt et al. , J. Immunol. 147: 6069 (1991); Pat EUA. Nos 4.474.893.; 4.714.681; 4.925.648; 5.573.920; e 5601, 819; e Kostelny et al, J. Immunol. 148: 1547-1553 (1992).
[0238]As porções de cadeia pesada do componente de anticorpo das fusões de anticorpo MRD para utilização nos métodos aqui divulgados podem ser derivados de diferentes moléculas de imunoglobulina. Por exemplo, uma porção da cadeia pesada de um polipeptídeo pode compreender um domínio CH1 de uma molécula derivada de IgG1 e uma região de articulação derivada de uma molécula de IgG3. Em outro exemplo, uma porção de cadeia pesada pode compreender uma região de articulação derivada, em parte, a partir de uma molécula de IgG1 e, em parte, a partir de uma molécula de IgG3. Em outro exemplo, uma porção de cadeia pesada pode compreender uma região de articulação quimérica derivada, em parte, a partir de uma molécula de IgG1 e, em parte, a partir de uma molécula de IgG4.
[0239]Em algumas modalidades, os domínios do componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) ligam-se ao seu alvo de ligação com uma constante de dissociação ou Kd de menos que 5 x 10-3 M, 10-3 M, 5 x 10-4 M, 10-4 M, 5 x 10-5 M, 10-5 M, 5 x 10-6 M, 10-6 M, 5 x 10-7 M, 10-7 M, 5 X 10-8 M, 10-8 M, 5 x 10-9 M, 10-9 M, 5 x 10-10 M, 10-10 M, 5 X 10-11 M, 10-11 M, 5 x 10-12 M, 10-12 M, 5 x 1013 M, 10-13 M, 5 x 10-14 M, 10-14 M, 5 x 10-15 M, ou 10-15 M. Em uma modalidade, o componente de anticorpo das composições multivalente e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação Kd de ou inferior a 5 x 10-5 M. Em uma outra modalidade, a ligação ao antígeno do componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante ou Kd de menos que 5 x 10-8 M. Em uma outra modalidade dissociação, ligação ao antígeno do componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação ou Kd inferior a 5 X 10-9 M. Em uma outra modalidade, o componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem uma constante de dissociação ou Kd de menos que 5 x 1010 M. Em uma outra modalidade, o componente de anticorpo das composições multivalente e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tem uma constante de dissociação ou Kd de menos que 5 x 10-11 M. Em uma outra modalidade, o componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem uma constante de dissociação ou Kd de menos que 5 x 10-12 M.
[0240]Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ao seu alvo com uma velocidade dissociação (koff) de menos de 5 x 10-2 s-1, 10-2 seg-1, 5 x 10-3 s-1 ou 10-3 s-1. Mais preferivelmente, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ao seu alvo com uma velocidade dissociação (koff) de menos de 5 x 10-4 s-1, 10-4 s-1, 5 x 10-5 s-1, ou 10-5 s-1, 5 x 10-6 s-1, 10-6 s-1, 5 x 10-7 s-1, ou 10-7 s-1.
[0241]Em outras modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ao seu alvo com uma taxa (kon) de mais que 103 M-1 s-1, 5 x 103 M-1 s-1, 104 M-1 s-1, ou 5 x 104 M-1 s-1. Mais preferivelmente, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ao seu alvo com uma taxa (kon) de mais que 105 M-1 s-1, 5 x 105 M-1 s-1, 106 M-1 s-1, ou 5 x 106 M-1 s-1, ou 107 M-1 s-1.
[0242]Estratégias de maturação de afinidade e estratégias de embaralhamento de cadeia (por exemplo, embaralhamento de gene, embaralhamento de motivo, embaralhamento de exon, e/ou embaralhamento de códon (coletivamente referidos como "embaralhamento de DNA") são conhecidas na técnica e podem ser empregues para gerar uma elevada afinidade e/ou para alterar as atividades (por exemplo, ADCC e CDC) de composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, composições multiespecíficas e multivalentes (por exemplo, anticorpos contendo MRD)). Ver, por exemplo, Pat. Nos. 5,605,793, 5,811,238, 5,830,721, 5,834,252 e 5,837,458; e Patten et al, Curr. Opinion Biotechnol 8:724-733 (1997), Harayama, Trends Biotechnol 16 (2): 76-82 (1998) , Hansson et al, J. Mol Biol 287: 265-276 (1999) e Lorenzo e Blasco, Biotechniques 24 (2):308-313 (1998); cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Vantajosamente, estratégias de maturação de afinidade e estratégias de embaralhamento de cadeias podem ser rotineiramente aplicadas para gerar composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem também incluir variantes e derivados que melhoram a função de anticorpos e/ou propriedades farmacodinâmicas desejáveis.
[0243]Consequentemente, certas modalidades da invenção incluem uma fusão de anticorpo-MRD, no qual pelo menos uma fração de um ou mais dos domínios da região constante foi alterada de modo a proporcionar as características bioquímicas desejadas, tais como funções efetoras reduzidas ou aumentadas, a capacidade dimerização não covalentemente, capacidade aumentada para localizar o local de um tumor, meia-vida sérica reduzida ou meia-vida sérica aumentada, quando comparado com um anticorpo inalterado aproximadamente a mesma imunorreatividade. As alterações dos domínios de região constante podem ser substituições de aminoácido, inserções ou deleções.
[0244]"Citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos" ou "ADCC" refere-se a uma forma de citotoxicidade em que Ig secretado ligado a receptores Fc (FcRs), expressa em certas células citotóxicas (por exemplo, células Natural Killer (NK), neutrófilos, e macrófagos) permite que estas células efetoras citotóxicas localizem uma célula alvo comportando como antígeno subsequentemente matando a célula-alvo com citotoxinas. Os anticorpos IgG de alta afinidade específica direcionados para a superfície das células alvo "armam" as células citotóxicas e são necessários para tal morte. A lise da célula alvo é extracelular, exige um contato ou proximidade entre as células citotóxicas e células alvo, e não envolvem complemento.
[0245]Tal como aqui utilizado, o termo "aumento de ADCC" (por exemplo, referindo a células) destina-se a incluir qualquer aumento mensurável na lise celular, quando contactada com um variante de anticorpo contendo MRD quando comparada com a morte celular de uma mesma célula contactando um anticorpo contendo MRD que não tenha sido tão modificado de uma maneira que altera ADCC na presença de células efetoras (por exemplo, em uma proporção de células alvo: células efetoras de 1: 50), por exemplo, um aumento na lise celular de pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%, 250%, 300%, ou 325%.
[0246]Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para aumentar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) (ver, por exemplo, Bruhns et al, Blood 113:3.716-3.725 (2009); Shields et al., J. Biol CHCM 276: 6591 -6604 (2001); Lazar et al, Proc Natl Acad Sci EUA 103:4005-4010 (2006); Stavenhagen et al, Câncer Res, 67: 8882. -8890 (2007); Horton et al, Câncer Res. 68: 8049-8057 (2008); Zalevsky et al, Blood 113: 3.735-3.743 (2009); Bruckheimer et al, Neoplasia 11: 509-517 (2009); Allan et al, documento WO2006/020114; Strohl, Curr Op Biotechnol 20:685-691 (2009); e Watkins et al, documento WO2004/074,455, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que aumentam ADCC incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-S298A, E333A, 334A; IgG1-S239D, I332E; IgG1 -S239D, A330L, I332E; IgG1-P247I, A339D ou Q; IgG1-D280H, 290S, com ou sem S298D ou V; IgG1-F243L, R292P, Y300L; IgG1-F243L, R292P, Y300L, P396L; e IgG1-F243L, R292P, Y300L, V305I, P396L; em que a numeração dos resíduos na região Fc é como índice EU como em Kabat.
[0247]Em uma modalidade, uma proteína variante Fc tem atividade ADCC melhorada em relação a uma molécula comparável. Em uma modalidade específica, uma proteína variante Fc tem atividade ADCC que é pelo menos 2 vezes, ou, pelo menos, 3 vezes, ou pelo menos 5 vezes ou pelo menos 10 vezes ou, pelo menos, 50 vezes ou pelo menos 100 vezes maior do que a de uma molécula comparável. Em uma outra modalidade específica, uma proteína variante Fc tem ligação aumentada ao receptor Fc RIIIA gama Fc e atividade ADCC aumentada em relação a uma molécula comparável. Em outras modalidades, a proteína variante de Fc tem tanto atividade ADCC melhorada e meia-vida do soro melhorada em relação a uma molécula comparável.
[0248]A capacidade qualquer proteína variante Fc particular para mediar a lise da célula alvo por ADCC pode ser ensaiada usando técnicas conhecidas na técnica. Por exemplo, para avaliar a atividade ADCC uma composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) pode ser adicionada às células alvo em combinação com células efetoras imunes, que podem ser ativadas pelos complexos de antígeno-anticorpo, resultando em citólise da célula alvo. A citólise é geralmente detectada através da liberação de marcação (por exemplo, substratos radioativos, corantes fluorescentes ou proteínas intracelulares naturais) a partir das células lisadas. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células Natural Killer (NK). Os exemplos específicos de ensaios de CCDA in vitrosão descritos na Wisecarver et al, J. Immunol Methods 79: 277-282 (1985); Bruggemann et al, J. Exp. Med. 166:1351- 1361 (1987); Wilkinson et al, J. Immunol. Métodos 258: 183-191 (2001); Patel et al, J. Immunol. Métodos 184: 29-38 (1995). Alternativamente, ou adicionalmente, a atividade ADCC da composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) pode ser avaliada in vivo, p.ex., em um modelo animal tal como o divulgado em Clynes et al, PNAS EUA 95: 652- 656 (de 1998), e Pat. No. 7.662.925.
[0249]Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para diminuir ADCC (ver, por exemplo, Idusogie et al, J. Immunol 166:.. 2571 -2575 (2001); Sazinsky et al, Proc Natl Acad Sci EUA 105: 20.167-20.172 (2008); Davis et al, J. Rheumatol 34: 2204-2210 (2007); de Bolt et al, Eur J. Immunol 23:403-411 (1993); Alegre et al, Transplantation. 57:1537-1543 (1994); Xu et al, Cell Immunol 200:16-26 (2000); Cole et al, Transplantation, 68: 563-571 (1999); Hutchins et al, Proc Natl Acad Sci EUA 92: 11980-11984 (1995); Reddy et al, J. Immunol. 164: 1925-1933 (2000); Publ Int No. WO1997/11971 e WO2007/106.585; Pedido de Publ. U.S. 2007/0148167A1; McEarchern et al, Blood 109:1185-1192 (2007); Strohl, Curr Op Biotechnol 20: 685-691 (2009); e Kumagai et al, J. Clin Pharmacol 47: 1489-1497 (2007), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que diminui ADCC incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-K326W, E333S; IgG2-E333S; IgG1-N297A; IgG1-L234A, L235A; IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2-UE sequência 118260; Sequência de IgG4-UE 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330, A331 S; IgG1-C220S, C226S, C229S, P238S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; e IgG1-L234F, L235E, P331S.
[0250]Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para aumentar a fagocitose dependente de anticorpos de células (ADCP); (ver, por exemplo, Shields et al, J. Biol CHCM 276: 6591-6604 (2001); Lazar et al, Proc Natl Acad Sci EUA 03 1:4005-4010 (2006); Stavenhagen et al , Câncer Res, 67:. 8882-8890 (2007); Richards et ai, Mol Cancer Ther 7: 2517-2527 (2008); Horton et al, Câncer Res 68: 8.0498.057 (2008), Zalevsky et. al, Blood 113: 3735-3743 (2009); Bruckheimer et al, Neoplasia 11: 509-517 (2009); Allan et al, WO2006/020114; Strohl, Curr Op Biotechnol 20: 685-691 (2009); e Watkins et al, documento WO2004/074455, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contidas no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que aumentam ADCP incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-S298A, E333A, K334A; IgG1 -S239D, I332E; IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG1-P247I, A339D ou Q; IgG1-D280H, K290S com ou sem S298D ou V; IgG1-F243L, R292P, Y300L; lgGl-F243L, R292P, Y300L, P396L; lgGl-F243L, R292P, Y300L, V3051, P396L; IgG1- G236A, S239D, I332E.
[0251]Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para diminuir ADCP (ver, por exemplo, Sazinsky et al, Proc Natl Acad Sci EUA 105:20.167-20.172 (2008); Davis et al, J. Rheumatol. 34: 2204-2210 (2007); de Bolt et al, Eur J. Immunol 23: 403-411 (1993); Alegre et al, Transplantation, 57:1537- 1543 (1994); Xu et al, Cell Immunol 200: 16-20 (2000); Cole et al, Transplantation, 68:563-571 (1999); Hutchins et al, Proc Natl Acad Sci EUA 92:11980-11984 (1995); Reddy et al, J. Immunol 164:1925-1933 (2000); Publ Intl WO1997/11971 e WO2007/106585, US 2007/0148167, Publ; McEarchern et al , Blood 109:1185-1192 (2007); Strohl, Curr Op Biotechnol 20:685-691 (2009); e Kumagai et al, J. Clin Pharmacol 47:1489- 1497 (2007), cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que diminuem ADCC incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1 -N297A; IgG1 -L234A, L235A; IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2 UE sequência 118- 260; Sequência de IgG4- UE 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330, A331 S; IgG1-C220S, C226S, C229S, P238S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; e IgG1-L234F, L235E, P331S.
[0252]"Citotoxicidadependente do complemento" e "CDC" referem a lise de uma célula alvo na presença de complemento. A via de ativação do complemento é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema do complemento (C1q) a uma molécula, um anticorpo, por exemplo, complexado com um antígeno cognato. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio de CDC, por exemplo, como descrito em Gazzano-Santoro et al, J. Immunol. Methods 202:163 (1996), pode ser realizado. Em uma modalidade, uma proteína variante de Fc melhorou a atividade CDC em relação a uma molécula comparável. Em uma modalidade específica, uma proteína variante Fc tem atividade CDC que é pelo menos 2 vezes, ou, pelo menos, 3 vezes, ou pelo menos 5 vezes ou pelo menos 10 vezes, ou pelo menos 50 vezes, ou pelo menos 100 vezes maior do que que de uma molécula comparável. Em outras modalidades, a proteína variante de Fc tem tanto atividade CDC melhorada e meia-vida do soro aumentada em relação a uma molécula comparável.
[0253]Em certas modalidades, o componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD foi modificado para aumentar a citotoxicidadependente do complemento (CDC) (ver, por exemplo, (ver, por exemplo, Idusogic et al, J. Immunol 166:2571-2575 (2001); Strohl, Curr Op Biotechnol 20:685-691 (2009); e Natsume et al, Câncer Res 68:3863-3872 (2008), cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade) Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD aumenta CDC que incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1- 326A, E333A; e IgG1-K326W, E333S, IgG2-E333S.
[0254]Em uma modalidade, a presente invenção proporciona formulações, em que a região Fc compreende um resíduo de aminoácido de ocorrência não natural em uma ou mais posições selecionadas dentre o grupo que consiste em 234, 235, 236, 239, 240, 241, 243 , 244, 245, 247, 252, 254, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 296, 297, 298, 299, 313, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332 , 333, e 334 como enumerados pelo índice EU, tal como previsto em Kabat. Opcionalmente, a região Fc pode incluir um resíduo de aminoácido de ocorrência não natural nas posições adicionais e/ou alternativas conhecidas para um perito na técnica (ver, por exemplo, Patente dos EUA N°s 5.624.821, 6.277.375, e 6.737.056; e Pedido de Publ. Int. Nos. WO01/58957, WO02/06919, WO04/016750, WO04/029207, WO04/035752 e WO05/040217).
[0255]Em modalidades específicas de anticorpo contendo MRD da invenção contêm um variante Fc compreendendo pelo menos um resíduo de aminoácido de ocorrência não natural selecionado a partir do grupo que consiste em 234D, 234e, 234 N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 2341, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 2351, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 2401, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E , 241 R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247V, 247G, 252Y, 254T, 256E, 2621, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T , 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 269H, 269Y, 269F, 269R , 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296T, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299v, 200H, 299F, 299E , 313F, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327g, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 3281, 328V, 328T, 328H , 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 3301, 330F, 330R, 330H, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, e 332A como enumerados pelo índice EU, tal como previsto no Kabat. Opcionalmente, a região Fc pode compreender que resíduos de aminoácidos não ocorrem naturalmente adicionais e/ou alternativas conhecidas para um perito na técnica (ver, por exemplo, Patente dos EUA N °s 5.624.821, 6.277.375, e 6.737.056; E Publ. Int. N°s WO01/58957, WO02/06919, WO04/016750, WO04/029207, WO04/035752 e WO05/040217).
[0256]Em certas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica é uma fusão anticorpo-MRD, em que o componente de anticorpo foi modificado para aumentar o inibidor se ligar ao receptor Rllb gama Fc (ver, por exemplo, Chu et al, Mol Immunol 45:3926-3933 (2008)). Um exemplo de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que aumenta a ligação de inibidor do receptor Rllb gama Fc é IgG1-S267E, L328F.
[0257]Em certas modalidades, o componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD foram modificados para diminuir CDC (ver, por exemplo, Publ Int N.os WO1997/11971 e WO2007/106585; Publ. US 2007/0148167A1; McEarchern et al, Blood 109: 1185-1192 (2007); Hayden-Ledbetter et al, Clin Cancer. 15: 2739-2746 (2009); Lazar et al, Proc Natl Acad Sci. EUA 103: 40054010 (2006); Bruckheimer et al, Neoplasia 11: 509-517 (2009); Strohl, Curr Op Biotechnol 20: 685-691 (2009); e Sazinsky et al., Proc. Natl Acad Sci EUA 105: 20.167-20.172 (2008); cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD, que diminuem CDC incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-S239D, A330L, I332E; Seqüência EU IgG2 118-260; sequência EU IgG4 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330, A331S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; IgG1-L234F, L235E, P331S; e IgG1-C226S, P230S.
[0258]A meia-vida em um IgG é mediada pela sua ligação dependente do pH, ao receptor neonatal FcRn. Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para aumentar a ligação ao FcRn (ver, por exemplo, Petkova et al, Int Immunol 8 1:1759-1769 (2006); DallAcqua et al, J. Immunol.169: 5171 -51 80 (2002); Oganesyan et al, Mol Immunol 46: 1750-1755 (2009); DallAcqua et al, J. Biol Chem 281:23.51423.524 (2006), Hinton et al, J. Immunol 176: 346-356 (2006); Datta-Mannan et al, Drug Metab. Dispos 35:86-94 (2007); Datta-Mannan et al, J. Biol Chem 282: 1709-1717 (2007); Publ Int. No. WO2006/130834; Strohl, Curr Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Yeung et al, J. Immunol. 182: 7.663-7.671 (2009); cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade).
[0259]Em modalidades adicionais, o anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para se ligar seletivamente a FcRn a pH 6,0, mas não a pH 7,4. Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que aumentam a meia- vida incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-M252Y, S254T, T256E; IgG1-T250Q, M428L; IgG1-H433, N434Y; IgG1-N434A; e IgG1- T307A, E380A, N434A.
[0260]Em outras modalidades o componente de anticorpo da fusão anticorpo-MRD foi modificado para reduzir a ligação a FcRn (ver, por exemplo, Petkova et al, Int Immunol 18: 1759- 1769 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab Dispos 35: 86-94 (2007); Datta- Mannan et al, J. Biol Chem 282: 17091717 (2007); Strohl, Curr Op Biotechnol 20: 685-691 (2009); e Vaccaro et al, Nat Biotechnol 23:1283-1288 (2005), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Exemplos de modificações de engenharia de sequência Fc contida no componente de anticorpo das fusões anticorpo-MRD que diminuem a meia-vida incluem uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1- M252Y, S254T, T256E; H433, N434F, 436H; IgG1-I253A; e IgG1 - P257I, N434H ou D376V, N434H.
[0261]Em algumas modalidades, as fusões de anticorpo-MRD foram glicoengenheirada ou a porção Fc do anticorpo contendo MRD foi mutado para aumentar a função efetora, utilizando técnicas conhecidas na arte. Por exemplo, a inativação (através de mutações pontuais ou por outros meios) de um domínio de região constante pode reduzir a ligação ao receptor Fc do anticorpo modificado que circula aumentando assim a localização do tumor. Em outros casos, pode ser que as alterações da região constante consistentes com a presente invenção modere ligação a complemento e, assim, reduz a meia- vida no soro e associação não específica de uma citotoxina conjugada. Ainda outras modificações da região constante podem ser usadas para modificar as ligações de dissulfureto ou frações de oligossacáridos que permitem a localização aumentada devido ao aumento da especificidade do antígeno ou flexibilidade do anticorpo. O perfil fisiológico resultante, biodisponibilidade e outros efeitos bioquímicos das modificações, tais como a localização do tumor, biodistribuição e meia-vida no soro, podem ser facilmente medidos e quantificados utilizando técnicas imunológicas bem conhecidas sem experimentação indevida.
[0262]Os métodos para a geração de anticorpos que contêm regiões de ocorrência não natural de Fc são conhecidos na arte. Por exemplo, substituições de aminoácido e/ou deleções podem ser geradas por métodos de mutagênese, incluindo, mas não se limitando a, mutagênese dirigida ao local (Kunkel, Proc Natl Acad Sei EUA 82: 488-492 (1985)), mutagênese por PCR (Higuchi, em "PCR Protocols: A Guide para Methods and Applications", Academic Press, San Diego, pp 177-183 (1990)), e mutagênese de cassete (Wells et al, Gene. 34: 315-323 (1985).). Mutagênese dirigida ao local pode ser realizada através do método de PCR de sobreposição-extensão (Higuchi, em "PCR Technology: Principies and Applications for DNA Amplification", Stockton Press, Nova Iorque, pp 61-70 (1989).). Alternativamente, a técnica de ampliação de sobreposição-extensão de PCR (Higuchi, ibid.) pode ser utilizada para introduzir qualquer mutação desejada(s) em uma sequência alvo (o DNA de partida). Outros métodos úteis para a geração de anticorpos que contêm regiões de ocorrência não natural de Fc são conhecidos na arte (ver, por exemplo, US Pat. Nos. 5,624,821, 5,885,573, 5,677,425, 6,165,745, 6,277,375, 5,869,046, 6,121,022, 5,624,821, 5,648,260, 6,528,624, 6,194,551, 6,737,056, 6,821,505 e 6,277,375; Publ US No. 2004/0002587 e Publ Int. Nos WO94/29351, WO99/58572, WO00/42072, WO02/060919, WO04/029207, WO04/099249 e WO04/063351).
[0263]Composições multivalente e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) utilizadas de acordo com os métodos da invenção também incluem os derivados que são modificados, por exemplo, pela ligação covalente de qualquer tipo de molécula de anticorpo de tal modo que a ligação covalente não evita que o anticorpo se ligue especificamente ao seu epítopo cognato. Por exemplo, mas não a título de limitação, os derivados de anticorpos incluem os anticorpos que foram modificados, por exemplo, por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, ou derivatização por grupos protetores/bloqueadores conhecidos. Qualquer das numerosas modificações químicas pode ser realizada por técnicas conhecidas, incluindo, mas não se limitando a acetilação, formilação, etc. Além disso, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos.
[0264]De acordo com algumas modalidades o componente de anticorpo de composições da invenção foi concebido para conter um ou mais aminoácidos de cisteína livres tendo uma reatividade tiol dentro de uma faixa desejável (por exemplo, 0,6 a 1,0), em que anticorpo engenheirado de cisteína é preparado através um processo compreendendo a substituição de um ou mais resíduos de aminoácido de um anticorpo parental por cisteína. Em algumas modalidades um ou mais de resíduos de aminoácidos de cisteína livre estão localizados em uma cadeia leve. Em modalidades adicionais de um ou mais resíduos de aminoácidos de cisteína livre estão localizados em uma cadeia pesada. Em modalidades adicionais de um ou mais resíduos de aminoácidos de cisteína livre estão localizados em ambas as cadeias pesada e leve. Em algumas modalidades, a anticorpo contendo MRD engenheirado de cisteína contém um aminoácido de cisteína livre possuindo um valor de reatividade tiol na faixa de 0,6 a 1,0, e uma modificação de sequência na cadeia leve ou na cadeia pesada que é revelada na Pat. No. 7.855.275. Em outras modalidades, o anticorpo manipulado com cisteína contém um amino ácido de cisteína livre possuindo um valor de reatividade tiol na faixa de 0,6 a 1,0, e uma modificação de sequência na cadeia leve ou da cadeia pesada que não é revelada na Pat. No. 7.855.275, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência na sua totalidade.
[0265]Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD é modificado para conter um ou mais aminoácidos de selenocisteína livre ou um outro aminoácido não-natural, capazes de formar ligações de dissulfureto. Os anticorpos que contêm os mesmos e métodos para produzir estes anticorpos são conhecidos na arte. Ver, por exemplo, Hofer et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. 105 (34): 12451-12456 (2008); e Hofer et al, Biochem. 48 (50): 12.047-12.057 (2009), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades um ou mais resíduos de aminoácidos de selenocisteína livre estão localizados em uma cadeia leve. Em modalidades adicionais de um ou mais resíduos de aminoácido de selenocisteína livre estão localizados em uma cadeia pesada. Em modalidades adicionais de um ou mais resíduos de aminoácidos de selenocisteína livre estão localizados em ambas as cadeias pesada e leve.
[0266]Em certas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) têm sido modificadas de modo a não provocar uma resposta imune prejudicial no animal a ser tratado, por exemplo, em um ser humano. Em uma modalidade, o anticorpo é modificado para reduzir a imunogenicidade, utilizando técnicas reconhecidas na arte. Por exemplo, os componentes das composições de anticorpos multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem ser humanizados, primatizados, deimmunizados, ou quimerizados. Estes tipos de anticorpos são derivados de um anticorpo não humano, tipicamente um anticorpo de murídeo ou de primatas, que retém substancialmente ou retém as propriedades de ligação ao antígeno do anticorpo progenitor, mas que é menos imunogênico em humanos. Isto pode ser conseguido por vários métodos, incluindo (a) enxertar os domínios variáveis não-humanos completos para as regiões constantes humanas para gerar anticorpos quiméricos; (b) enxertar, pelo menos, uma parte de uma ou mais das regiões determinantes da complementaridade não-humanas (CDRs) em estruturas humanas e regiões constantes, com ou sem retenção de resíduos estruturais críticos; ou (c) transplantar os domínios variáveis não humanos inteiros, mas "camuflar" eles com seções tipo humanas por substituição de resíduos de superfície. Tais métodos estão descritos em Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sci. 81: 6851-6855 (1984); Morrison et al, Adv. Immunol. 44: 65-92 (1988); Verhoeyen et al, Science 239: 1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun. 28: 489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun. 31: 169-217 (1994), e Pat EUA. N ° s. 5,585,089, 5,693,761, 5,693,762, e 6,190,370, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0267]De-imunização pode também ser usada para diminuir a imunogenicidade um anticorpo contendo MRD. Tal como aqui utilizado, o termo "de-imunização"inclui modificação de um anticorpo contendo o MRD para modificar os epitopos de células T (ver, por exemplo, Int. Appl. Pub. W09852976A1, e WO0034317A2, cada se que é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Por exemplo, as sequências de VH e VL do anticorpo de partida são analisadas e um "mapa" de epítopo de célula T humana é gerado a partir de cada região V, que mostra a localização de epitopos em relação às regiões determinantes de complementaridade (CDRs) e outros resíduos chave dentro da sequência . Epítopos de células T individuais a partir do mapa de epítopo de célula T são analisados a fim de identificar substituições de aminoácidos alternativos com um baixo risco de alterar atividade do anticorpo final. Uma série de sequências alternativas de VH e VL são concebidas compreendendo combinações de substituições de aminoácidos e estas sequências são subsequentemente incorporadas em uma variedade anticorpos para utilização nos métodos de diagnóstico e de tratamento aqui descritos, que são então testados para a função. Normalmente, entre 12 e 24 anticorpos variantes são gerados e testados. Os genes da cadeia pesada e leve completos compreendendo as regiões V e C humanas modificados são então clonados em vetores de expressão e os plasmídeos subsequentes introduzidos em linhas celulares para a produção de anticorpo completo. Os anticorpos são então comparados em ensaios bioquímicos e biológicos adequados, e a variante ótima é identificada.
[0268]Muitos componentes de anticorpo diferentes das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) podem ser utilizados nos métodos aqui descritos. É contemplado que os anticorpos catalíticos e não catalíticos podem ser utilizados na presente invenção. Por exemplo, anticorpo 38C2 é um hibridoma secretor de anticorpos e tem sido previamente descrito em Pedido de Publ. int. WO97/21803. 38C2 contém um sítio de combinação de anticorpo que catalisa a reação de adição de aldol entre um doador alifático e um aceitador aldeído. Em um modelo de rato singeneico de neuroblastoma, a administração sistêmica de um pró- fármaco etopósido e injeção intra-tumoral de Ab 38C2 inibiram o crescimento do tumor.
[0269]O anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD (ou seja, o alvo do domínio de ligação antigênica) pode ser qualquer molécula que é desejável para uma fusão anticorpo-MRD para interagir com. Por exemplo, o anticorpo alvo pode ser um fator solúvel ou o anticorpo alvo pode ser uma proteína transmembranar, tal como um receptor da superfície celular. O anticorpo alvo pode ser também um componente extracelular ou um componente intracelular. Em certas modalidades, o anticorpo alvo é um fator que regula a proliferação celular, diferenciação, ou a sobrevivência. Em outras modalidades, o alvo é um anticorpo de citoquina. Em outra modalidade não exclusiva, o anticorpo alvo é um fator que regula a angiogênese. Em outra modalidade não exclusiva, o anticorpo alvo é um fator que regula uma ou mais respostas imunes, tais como, auto-imunidade, inflamação e respostas imunes contra as células cancerosas. Em outra modalidade não exclusiva, o anticorpo alvo é um fator que regula a adesão celular e/ou a interação célula-célula. Em certas modalidades não- exclusivas, o anticorpo alvo é uma molécula de sinalização celular. A capacidade um anticorpo para se ligar a um alvo e para bloquear, aumentar, ou interferir a atividade biológica do alvo do anticorpo pode ser determinada utilizando ou rotineiramente modificando ensaios, bioensaios, e/ou modelos animais conhecidos na arte para avaliar essa atividade .
[0270]Em algumas modalidades o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é um antígeno relacionado com uma doença. O antígeno pode ser um antígeno característico de um câncer particular, e/ou de um determinado tipo de célula (por exemplo, uma célula hiperproliferativa), e/ou um patógeno em particular (por exemplo, uma célula bacteriana (por exemplo, a tuberculose, a varíola, antraz)), um vírus (por exemplo, HIV), um parasita (por exemplo, malária, leichmaniose), uma infecção fúngica, um molde, um micoplasma, um antígeno do prion, ou um antígeno associado a uma doença do sistema imune.
[0271]Em algumas modalidades, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é um alvo que tenha sido validado em um modelo animal ou cenário clínico.
[0272]Em outras modalidades, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é um antígeno do câncer.
[0273]Em uma modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é: PDGFRA, PDGFRB, PDGF-A, PDGF-B, o PDGF-CC, PDGF-C, PDGF- D, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, VEGFC, VEGFD, neuropilina 2 (NRP2), betacelulina, PLGF, RET (reorganizados durante a transfecção) , TIE1, TIE2 (TE), CA125, CD3, CD4, CD7, CD10, CD 13, CD25, CD32, CD32b, CD44, CD49e (alfa integrina 5), CD55, CD64. CD90 (THY1), CD133 (prominina 1), CD147, CD 166, CD200, ALDH1, ESA, SHH, DHH, IHH, remendado1 (PTCH1), suavizado (SMO), WNT1, WNT2B, WNT3a, WNT4, WNT4A, WNT5A, WNT5B, WNT7B, WNT8A, WNT10A, WNT10b, WNT16B, LRP5, LRP6, FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Notch, Notch1, Notch3, Notch4, DLL4, Dentado, Dentado1, Dentado2, Dentado3, TNFSF1 (TNFb, LTa), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFRSF6 (Fas , CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF7 (CD27, ligante CD70), TNFRSF7 (CD27), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF13 (APRIL), TNFSF13b (BLyS), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF 17 (BCMA), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6) , TNFRSF25 (DR3), ANG1 (ANGPT1), Ang3 (ANGPTL1), Ang4 (ANGPT4), IL-1 alfa, IL 1 beta, IL1R1, IL1R2, IL2, IL2R, IL5, IL5R, IL6, IL6R, IL8, IL8R, IL10, IL10R, IL12, IL12R, IL13, IL13R, IL15, IL15R, IL18, IL18R, IL19, IL19R, IL21R, IL23, IL23R, MIF, XAG1, XAG3, REGIV, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, ALK, Ale1, ALK7, ALCAM, artemina, Axl, TGFb, TGFb2, TGFb3, TGFBRl, IGFIIR, BMP2, BMP5, BMP6, BMPRI, GDF3, GDF8, GDF9, N-caderina, E-caderina, VE-caderina, MACN, LI CAM (CD171), gangliosídeo GM2, ganglioside GD2, calcitonina, PSGR, DCC, CDCP1, CXCR2, CXCR7, CCR3, CCR5, CCR7, CCR10, CXCL1, CXCL5, CXCL6, CXCL8, CXCL12, CCL3, CCL4, CCL5, CCL1 1 , Claudinl, Claudin2, Claudin3, Claudin4, TMEFF2, neuregulina, MCSF, CSF, CSFR (aletas), GCSF, GCSFR, BCAM, HPV, hCG, SR1F, PSA, FOLR2 (receptor beta de folato), BRCA1, BRCA2, HLA-DR , ABCC3, ABCB5, HM1.24, LFA1, LYNX, S100A8, S100A9, SCF, fator de Von Willebrand, receptor de Lewis Y6, Lewis Y, CA G250 (CA9), integrina avb3 (CNTO95), integrina avb5, activina B1 alfa , receptores de leucotrienos B4 (LTB4R), receptor de neurotensina NT (NTR), 5T4 oncofetal antígeno, Tenascin C, MMP, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, MMP14, MMP26, catepsina G, catepsina H, catepsina L, SULF1, SULF2, MET , UPA, MHC1, MN (CA9), TAG-72, TM4SF1, Heparanase (HPSE), sindecam (SDCI), Efrina B2, Efrina B4, ou relaxina2. Em outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é CD 137, CD137L, CD1 52, 60 CD1, CD272, CD273, CD274, CD275 (ICOSL), CD276, receptor CD276, CD278 (ICOS), CD279, B7-H4, receptor B7H4, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CCL17, CCL21, CCL22, IL35, TNFRSF10b (DR5), ou GUC2c (MECIL). Um MRD que se liga a um dos objetivos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos objetivos acima são também englobados pela presente invenção. O anticorpo acima e alvos MRD e aqueles aqui descritos de outra forma se destinam a ser ilustrativos e não limitativos.
[0274]Em uma outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é CD 19, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44v6, TNFSF5 (Ligante CD40), TNFRSF5 (CD40), CD52, CD54 (ICAM), CD74, CD80, CD200 EPCAM (EGP2), a neuropilina 1 (NRP1), TEM1, mesotelina , TGFbeta 1, TGFBRII, fosfatidliserina, receptor alfa de folato (FOLR1), TNFRSF10A (TRAIL R1 DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2 DR5), CXCR4, CCR4, CCL2, HGF, CRYPTO, VLA5, TNFSF9 (Ligante 41BB), TNFRSF9 (41BB), CTLA4, HLA-DR, IL6, TNFSF4 (Ligante OX40), TNFRSF4 (OX40), MUC1, MUC 18, mucina CanAg, gangliosídeo GD3, EGFL7, PDGFRa, IL21, IGF 1, IGF2, CD117 (cKit), PSMA, SLAMF7, antígeno carcinoembriônico (CEA), FAP, avb3 integrina, ou integrina a5ß3. Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é CD70, LAG3 ou KIR. Um MRD que se liga a um dos alvos acima é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobados pela presente invenção.
[0275]Em modalidades particulares, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete pela ligação alvo com um anticorpo selecionado a partir de: siplizumab CD2 (por exemplo, MEDI-507, Medlmmune), blinatumomab CD19 CD3 (por exemplo, MT103, Micromet/Medlmmune); XMAB®5574 CD 19 (Xencor), SGN-19A CD 19 (Seattle Genetics), ASG-5ME (Agenesys e Seattle Genetics), MEDI-551 CD 19 (Medlmmune), CD22 epratuzumab (por exemplo, hLL2, Immunomedics/UCB), ozogamicina inotuzumab CD22 (Pfizer), CD30 iratumumab (por exemplo, SGN-30 (Seattle Genetics) e MDX-060 (Medarex)), XMAB®2513 CD30 (Xencor), brentuximab vedotin CD30 (por exemplo, SGN- 35, Seattle Genetics), gemtuzumab ozogamicina CD33 (por exemplo, Mylotarg®, Pfizer), lintuzurnab CD33 (por exemplo, anticorpo de Seattle Genetics), MOR2G2, CD38 (MorphoSys), daratumumab CD38 (por exemplo, anticorpo Gernnab), CD40 CP870893 (Pfizer), dacetuzumab CD40 (por exemplo, SGN40, Seattle Genetics), ANTOVA® CD40 (Biogen Idee), lueatxmnmiab CD40 (por exemplo, HCD 122, Novartis) XMAB®5485 CD40 (Xencor), teneliximub, ruplizumab CD40L (por exemplo, ANTOVA®) bivatuzumab mertansina CD44v6, CD52 alemtuzumab (por exemplo, CAMPATH®/MABCAMPATH®, Genzyme/Bayer), BI505 ICAM1 (BioInvent), milatuzumab CD74 (por exemplo, anticorpo de Immunomedics), galiximabe CD80 (Biogen Idee), BMS663513 4-1BB (Bristol-Myers Squibb), anticorpo CD200 Alexion (Alexion), EPCAM edrecolomab (por exemplo, MAM7-1A, PANOREX® (GlaxoSmithKline), EPCAM AT003 (Affitech)), EPCAM adecatumumab (por exemplo, MT201, Micromet), oportuzumab EPCAM monatox, anticorpo anti-NRPl Genentech, MORAB004 TEM1 (Morphotck), mesotelina MORAB009 (Morphotek), lerdelimumab TGFb1 (por exemplo, CAT- 152, Cambridge Antibody Tecnologia), metelimumab TGFb1 (por exemplo, CAT 192, Cambridge Antibody Technology), anticorpo anti-ImClone TGFBRII, bavituximab fosfatidilserina (por exemplo, um anticorpo da Peregrine (Peregrine Pharmaceuticals)), AT004 fosfatidilserina (Affitech), AT005 fosfatidilserina (Affitech), MORAB03 receptor alfa de folato (Morphotek), receptor alfa folato de câncer farletuzumab (por exemplo, MORAB003, Morphotek), CS1008 DR4 (Sankyo), DR4 mapatumumab (por exemplo, HGS-ETR1, Human Genome Sciences), LBY135 DR5 (ovartis), AMG66 DR5 (Amgen), Apomab DR5 (Genentech), PRO95780 (Genentech), lexatumumab DR5 (por exemplo, HGS- ETR2, Human Genome Sciences), Conatinmiab DR5 (por exemplo, AMG655, Amgen), tigatuzumab DR5 (por exemplo, CS-1008), AT009 CXCR4 (Affitech), AT008 R4CC (Affitech), CNTO-888 CCL2 (Centocor), AMG102 HGF (Amgen), anticorpo CRYPTO (Biogen Idee), M200 anticorpo VLA5 (Biogen Idee), CTLA4 ipilimumab (por exemplo, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex), belatacepte CTLA4 ECD (por exemplo, CP-675,206, Pfizer), IMMU114 HLA-DR (Immunomedics), apolizumab HLA-DR, toclizumab IL6R (por exemplo, ACTEMR®A/ROACTREMRA®, Hoffman-La Roche), OX86 OX40, pemtumomab PEM/MUC1 (Theragyn), ABX-Mal MUC-18 (Abgenix), clivatuzumab MUC-18 (por exemplo, hPAM4, Immunomedics), cantuzumab mertansina mucina CanAg, ecromeximab (Instituto Ludwig), anticorpo anti- EGFL7 Genentech, AMG820 RFCE (Amgen), olaratumab PDGFRa (por exemplo, anticorpo de Imclone (Imclone)), IL21 anticorpo Zymogenetics (genética Zymo), MEDI-573 IGF1/IGF2 (Medlmmune), AMG191 de c-kit (Amgen), etaracizumab (por exemplo, MEDI-522 , Medlmune), e MLN591 PSMA (Millennium Pharmaceuticals), SLAMF7 elotuzumab (por exemplo, HuLuc63, BMS), labctuzumab CEA (CEA-CIDE®, Immunomedics), sibrotuzumab FAP, CNT095 avb3 integrina (Centocor), VITAXIN® avb3 integrina (MedTmmune) , e a5ß1 voloximab (alvos de anticorpos estão em itálico). MRDs que competem para a ligação com um dos anticorpos alvo acima são abrangidos pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos anticorpos acima são também abrangidos pela invenção.
[0276]Em modalidades adicionais, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete pela ligação com um anticorpo alvo selecionado a partir de: MDX- 1342 CD 19 (BMS), SGN-CD19A CD 19 (Seattle Genetics), um anticorpo anti-CD20 descrito na patente US. No. 5.500.362, CD20 ofatumumab (por exemplo, ARZERRA®, GENMAB), veltuzumab CD20 (hA20, Takeda e Nycomed), PRO70769 CD2 fl (Genentech; ver, por exemplo, Intl Appl No. PCT7US2003/040426), AMG780 TIE2/Angl (Amgen), REGN910 ANG2 (Regeneron), e anticorpo anti-CD22 descrito na Pat. No. 5.789.554 (Immunomedics), lumiliximab CD23 (por exemplo, IDEC 152, Biogen), IDEC- 152 CD23 (Biogen), MDX-1401 CD 30 (BMS), HeFi-1 CD 30 (NCI), daratumumab CD38, um anticorpo anti-CD40 descrito em Pedido de Publ. Int. No. WO2007124299 (Novartis), IDEC-131 CD40L (Biogen), MDX-1411 CD70 (BMS), SGN-75 CD70 ADC (Seattle Genetics), HuMax-CD74™ CD74 ADC (Genmab), IDEC-1 14 CD80 ( Biogen), TRC 105 CD105/endoglin (Tracon), ABX-CBL CD147 (Amgen), RG 1 HuMax-TF™ Factor Tecidual (TF) (Genmab), HuMax-Her2™ ErbB2 (Genmab), Trastuzumab-DML ErbB2- DML (Genentech), AMG888 HER3 (Amgen e Daiichi Sankyo), HuMV833 VEGF (Tsukuba Research Lab, ver, por exemplo, Pedido de Publ. Int. No. WO/2000/034337), IMC-18F1 VEGFR1 (Imclone), IMC-1C1 1 VEGFR (Imclone), DC 101 VEGFR2 (Imclone), SB-102 EGFR (S Biomedix), mAb-806 EGFR (Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer), LMR-1 toxina EGFRvIII (IV AX, Instituto Nacional do Câncer), HuMax -EGFR EGFR (Genmab, ver, por exemplo, Pedido U.S. N ° 10/172,317), IMC-1 1F8 EGFR (Imclone), CDX-10 1 EGFRvIII (Avant Immunotherapeutics), zalumumab EGFR (Genmab), 425, EMD55900 e EMD62000 EGFR (Mcrck GAA, ver, por exemplo, US Pat. No. 5.558.864), ICR62 EGFR (Institute of Cancer Research, ver, por exemplo, Pedido de Publ. Int. No. WO95/20045), SC 100 EGFR (ScanCell e ISU Chemical), MOR201 FGFR-3 (Morphosys), ARGX-111 c-Met (Argen-X), HuMax-cMet™ cMET (Genmab), GC-1008 TGFbl (Genzyme), MDX-070 PMSA (BMS), huJ591 PSMA (Fundação Cornell Research), muJ591 PSMA (Fundação Cornell Research), GC1008 TGFb (Genzyme), NG-1 Ep-CAM (Xoma), MOR I 01 TCAM-1 (CD54) (Morphosys), MOR102 ICAM-1) (Morphosys), ABX-MA1 MUC18 (Abgenix), HumaLYM (Intracel), HumaRAD-HN (Intracel), HumaRAD-OV (Intracel), ARGX- 1 10 e ARGX-111 (Argen-X), HuMax -Lymphoma (Genmab e Amgen), Milatuzumab CD74 (por exemplo, IMMU-115, IMMU-110, Immunomedics), HuMax-Cancer Heparanase 1 (Genmab), Hu3S 193 Lewis (y) (Wyeth, Ludwig Institute of Cancer Research), RAV12 epitopo de carboidrato N-ligado (Raven), nimotuzumab (TheraCIM, hr3; YM Biosciences, ver, por exemplo, US Pat Nos. 5.891., 996 e 6.506.883), BEC2 GZ) J (Imclone), 90Ytacatuzumab tetraxetan alfa-fetoproteína (por exemplo, células B216 FP-CIDE®, Immunomcdics), KRN330 (IRIN), huA33 A33 (Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer), mAb epitopo glicosilada (NCI), REGN421 DLL4 (Regeneron), ASG-5ME SLC44A4 ADC (AGS-5), ASG-22ME Nectin-4 ADC, CDX-1307 (MDX-1307), HcGB (Celldex), proteína relacionada ao hormônio da paratireóide (PTH-rp) (UCB), MT293 colágeno clivado (TRC093/D93, Tracon), KW-2871 GD3 (Kyowa), KIR (1-7F9) KIR (Novo), A27.15 receptor de transferrina (Instituto Salk, consulte , por exemplo, Pedido de Publ. Int. No. WO2005/111082) e receptor de transferrina E2.3 (Salk Institute). MRDs que competem para a ligação com um dos anticorpos acima alvo são englobados pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos anticorpos acima são também abrangidos pela invenção. Em modalidades adicionais, um dos anticorpos acima descritos é o anticorpo do anticorpo contendo MRD.
[0277]Em modalidades particulares, o anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo selecionado a partir de: sipliziimab CD2 (por exemplo, MEDI-507, Medlmrm e), blinatumomab CD19 CD3 (por exemplo, MT103, Micromet/Medlmmune); XMAB®5574 CD19, (Xencor), SGN-19A CD19 (Seattle Genetics), ASG-5ME (Agenesys e Seattle Genetics), MEDI-551 CD19 (Medlmmune), CD22 epratuzumab (por exemplo, hLL2, Immunomedics/UCB), ozogamicina inotuzumab CD22, CD30 iratumumab (por exemplo, SGN-30 (Seattle Genetics) e MDX-060 (Medarex)), XMAB®2513 CD30 (Xencor), brentuximab vedotin CD30 (por exemplo, SGN-35, Seattle Genetics), CD33 gemtuzumab ozogamicina (por exemplo, Mylotarg®, Pfizer), Imtuzimiab CD33 (por exemplo, anticorpo de Seattle Genetics), MOR202 CD38 (MorphoSys), daraturnurnab CD38 (por exemplo, anticorpo de Genmab), CD40 CP870893 (Pfizer), dacctuzumab CD40 (por exemplo, SGN40, Seattle Genetics), ANTOVA® CD40 (Biogen Idee), CD40 lucatumumab (por exemplo, BCD 1 22, Novartis) XMAB®5485 CD40 (Xencor), teneliximab, ruplizumab CD40L (por exemplo, ANTOVA®), bivatuziimab mertansina CD44v6, CD52 alemtuzumab (por exemplo, CAMPATH ®/MABCAMPATH®, Genzyme/Bayer), BI505 ICAM1 (BioInvent), milatuzurnab CD74 (por exemplo, anticorpo de Immunomedics), CD80 galiximabe (Biogen Idee), BMS663513 4-IBB (Bristol-Myers Squibb), CD200 Alexion anticorpo (Alexion), EPCAM edrecolomab (por exemplo, MAM7- 1A, PANOREX® (linha GlaxoSmith), AT003 EPCAM (Affitech)), EPCAM adecatumumab (por exemplo, MT201, Micromet), oportuzumab monatox EPCAM, Genentech anticorpo anti-NRPl, MORAB004 TEM1 (Morphotek), MORAB009 mesothelin (Morphotek), lerdelimumab TGFb1 (por exemplo, CAT 152, Cambridge Antibody Technology), metelimumab TGFb1 (por exemplo, CAT 192, Cambridge Antibody Tecnologia), anticorpo anti-ImClone TGFBRll, bavituximab fosfatidilserina (por exemplo, anticorpo de Peregrine (Peregrine Pharmaceuticals)), AT004 fosfatidilserina (Affitech), AT005 fosfatidilserina (Affitech), MORAB03 receptor alfa de folato (Morphotek), farletuzumab receptor alfa folato de câncer (por exemplo, MORAB003, Morphotek), CS 1008 DR4 (Sankyo) , mapatumumab DR4 (por exemplo, HGS-ETR1, Human Genome Sciences), LBY135 DR5 (Novartis), AMG66 DR5 (Amgen), Apomab DR5 (Genentech), PRO95780 (Genentech), lexatumumab DR5 (por exemplo, HGS- ETR2, Human Genome Sciences ), conatumumab DR5 (por exemplo, AMG655, Amgen), tigatuzumab (por exemplo, CS-1008), AT009 CXCR4 (Affitech), AT008 CCR4 (Affitech), CNTO-888 CCL2 (Centocor), AMG 102 HGF (Amgen), anticorpo CIFRADO (Biogen Idee), anticorpo M200 VLA5 (Biogen Idee), CTLA4 ipilimumab (por exemplo, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex), belatacepte CTLA4 ECD (por exemplo, CP -675206, Pfizer), IMMU 1 14 HLA-DR ( Immunomedics), apolizumab HLA-DR, toclizumab IL6R (por exemplo, ACTEMR®A/ROACTREMRA®, Hoffman-Ta Roche) OX86 OX40, pemtumomab PEM/MUC1 (Theragyn), ABX-MA 1 MUC-18 (Abgenix), mucina mertansina cantuzumab CanAg, ecromeximab (Ludwig Institute), Genentech anti-EGFL7 anticorpo, AMG820 RFCE (Amgen), olaratumab PDGFRa (por exemplo, anticorpo de Imclone (Imclone)), anticorpo IL21 Zymogenetics (Zymogenetics), MEDI-573 IGF1/IGF2 (Medlmmune), AMG191 c-kit (Amgen), etaracizumab (por exemplo, MEDI-522, Medlmmune), MLN591 PSMA (Millennium Pharmaceuticals), SLAMF7 elotuzumab (por exemplo, HuLuc63, PDL), labetuzumab CEA (CEA-CIDE®, Immunomedics), sibrotuzumab FAP, CNT095 integrina avb3 (Centocor), VITAXF ® avbS integrina (Medlmmune), e a5ß1 voloximab (por exemplo, M200, PDL e Biogen Idee).
[0278]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é ALK1. Em uma modalidade, o anticorpo é PF-3446962 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que PF- 3.446.962. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação da PF-3446962 a ALK1. Composições Multivalenest e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que concorrem a ligação ALK1 com PF-3.446.962 também são abrangidos pela invenção.
[0279]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é CD22. Em uma modalidade, o anticorpo é inotuzumab (por exemplo, ozogamicina motuzumab CMC-544, PF-5.208.773; Pfizer). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que inotuzumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CD22 a inotuzumab. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação de CD22 com inotuzumab são também abrangidos pela invenção.
[0280]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é de CRYPTO. Em uma modalidade, o anticorpo é o anticorpo CRYPTO Biogen que avançou para a Fase I de ensaios clínicos (Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o anticorpo Biogen CRYPTO. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do anticorpo Biogen CRYPTO. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação CRYPTO com o anticorpo Biogen CRYPTO são também abrangidos pela invenção.
[0281]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é TNFSF5 (ligante de CD40). Em uma modalidade, o anticorpo é o anticorpo CD40L Biogen que avançou para a Fase I de ensaios clínicos (Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o anticorpo CD40L Biogen. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do anticorpo Biogen CD40L a CD40L. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação de CD40L com o anticorpo Biogen CD40L estão também abrangidos pela invenção.
[0282]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é CD80. Em uma modalidade, o anticorpo é galiximabe (Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que galiximabe. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CD80 a galiximabe. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação a CD80 com galiximabe são também abrangidos pela invenção.
[0283]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a CD80 e um alvo selecionado de: CD2, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, TNFRSF 10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), VEGFR1, VEGFR2 e VEGF. Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a CD80 e um alvo selecionado de: CD3, CD4 e NKG2D. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) se ligam a CD80 e também, pelo menos, se ligam a 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CD80. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é galiximabe. Em uma outra modalidade, o anticorpo do anticorpo contendo MRD liga uma molécula na superfície de uma célula e MRDs do anticorpo contendo MRD liga TNFRSF10B (DR5) através de um ou mais epitopos com uma valência de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais.
[0284]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é MCSF. Em uma modalidade, o anticorpo é PD-360324 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como PD- 360324. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PD-360324 a MCSF. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com MCSF PD-360324 são também abrangidos pela invenção.
[0285]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é CD44. Em uma modalidade, o anticorpo é PF-3475952 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que PF- 3.475.952. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PF-3.475.952 a CD44. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação de CD44 com PF-3.475.952 são também abrangidos pela invenção.
[0286]Em uma modalidade adicional, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é P-caderina (CDH3). Em uma modalidade, o anticorpo é PF-3, 732,010 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como PF-3.732.010. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PF-3.732.010 a P-caderina. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com o PF- caderina-P 3.732.010 são também abrangidos pela invenção.
[0287]Em uma outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é ANG2 (ANGPT2). Em uma modalidade, o anticorpo é MEDI3617 (Medlmmune). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que MEDI3617. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de MEDI3617 a ANG2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação ANG2 com MEDI3617 são também abrangidos pela invenção.
[0288]Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um ANG-2 do anticorpo de ligação divulgado na US Pat. Nos 7063965, 7063840, 6645484, 6627415, 6455035, 6433143, 6376653, 6166185, 5879672, 5814464, 5650490, 5643755, 5521073; Pedido de Publ. U.S. N ° s. 2011/0158978 (por exemplo, H4L4), 2006/0246071, 2006/0057138, 2006/0024297, 2006/0018909, 2005/0100906, 2003/0166858, 2003/0166857, 2003/0124129, 2003/0109677, 2003/0040463 e 2002/0173627; ou Pedido de Publ. Int. N ° s. O documento WO2006/020706, WO2006/045049, WO2006/068953, ou WO2003/030,833 (a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação ANG2 com estes anticorpos são também abrangidas pela invenção.
[0289]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga ANG2 e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: VEGF (ou seja, VEGFA), VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC ), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNF, FGFR3, EFNa1, EFNa2, ANG1, ANG2, IL1, IL1beta, IL6, IL8, IL18, HGF, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Notch1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU , VCAM-1, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a ANG2 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é MEDI3617, AMG780 ou REGN910. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é H4L4.
[0290]Em modalidades particulares, o anticorpo contendo MRD se liga ANG2 e TNF. Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD se liga ANG2 e IL6. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga a ANG2 e IL1. De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD administrado se liga ANG2, IL6 e TNF. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado se liga ANG2, IL1 e TNF. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga ANG2, IL1, IL6 e TNF.
[0291]Em modalidades particulares, o anticorpo contendo MRD liga-se a ANG2 e TNF e o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é adalimumab. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD compete com adalimumab para a ligação ao TNF.
[0292]Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ANG2. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação selecionado a partir de SAITAng ANG2-2-1, SAITAng-2-2, SAITAng-2- 3, 2-4-SAITAng ou outro anticorpo revelado em Pedido de Publ. Int. No. WO2009/142460. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo um anticorpo e/ou 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação ANG2 com um ou mais destes anticorpos estão também englobadas pela invenção.
[0293]Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a TIE2. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação de TIE2 divulgado na Pat. Nos 6.365.154 e 6.376.653.; Pedido de Publ. U.S. Nos 2007/0025993, 2006/0057138 e 2006/0024297, ou Pedido de Publ. Int. N °s WO2006/020706, WO2000/018437 e WO2000/018804 (a divulgação de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade). Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo um anticorpo e/ou 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação TIE com um ou mais destes anticorpos são também englobadas pela presente invenção .
[0294]Em certas modalidades, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é EGFR (ErbB1), ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, receptor do fator-I de crescimento semelhante a insulina, antígeno da membrana específica da próstata, uma integrina, ou cMet.
[0295]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a EGFR (ErbB1). Em uma modalidade específica, o anticorpo é Erbitux® (IMC-C225). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que Erbitux®. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de Erbitux® a EGFR. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe a dimerização do EGFR. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é matuzumab (por exemplo, EMD 72000, Merck Serono) ou panitumumab (por exemplo, VECTIBIX®, Amgen). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que matuzumabe ou panitumumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de matuzumabe ou panitumumab ao EGFR. Em outra modalidade, o anticorpo é o ABX-EGF (Immunex) ou MEDX-214 (Medarex). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o ABX-EGF ou MEDX- 214. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de ABX-EGF ou MEDX-214 a EGFR. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é zalutumumab (Genmab) ou nimotuzumab (Biocon). Em uma modalidade adicional, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que zalutumumab (Genmab) ou nimotuzumab (Biocon). Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de zalutumumab (Genmab) ou nimotuzumab (Biocon) a EGFR.
[0296]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga EGFR (ErbBl) e um alvo selecionado de: HGF, CD64, CDCP1, RON, cMET, ErbB2, ErbB3, IGF1R, PLGF, RGMa, PDGFRa, PDGFRB, VEGFR1, VEGFR2, TNFRSF 10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), IGF-1, 2, IGF2, CD3, CD4, NKG2D e toxóide do tétano. Em algumas modalidades, a composição multiespecíficas multivalente e monovalentes (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) liga-se, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a EGFR. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é matuzumabe, panitumumab, MEDX-214, ou ABX-EGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é nimotuzumab (Biocon) ou zalutumumab. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é Erbitux®.
[0297]Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD liga-se a ErbB1 e, adicionalmente, se liga ErbB3. Em algumas modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a ErbB1 e um MRD de o anticorpo contendo MRD se liga a ErbB3. Em uma modalidade particular, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é cetuximab. Em modalidades adicionais, o anticorpo no anticorpo contendo MRD compete para ligação ErbB1 com cetuximab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação ao ErbB1 selecionado de: nimotuzumab (Biocon), matuzumabe (Merck GAA), panitumumab (Amgen), zalutumumab (Genmab), MEDX-214, e ABX-EGF. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente de MRD e/ou anticorpo contendo MRD compete para ligação ao ErbB 1 com um anticorpo selecionado a partir de: nimotuzumab, matuzumabe, panitumumab, e zalutumumab. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB3 e um MRD do anticorpo contendo MRD liga-se a ErbB1. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo selecionado a partir de ligação ao ErbB3 MM121 (Merrimack), 8B8 (Genentech), AV203 (Aveo), e AMG888 (Amgen). Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente MRD e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação de ErbB3 com um anticorpo selecionado a partir de MM121, 8B8, AV203, e AMG888.
[0298]Em uma modalidade o anticorpo contendo MRD se liga especificamente a ErbB2 (Her2). Em uma modalidade específica, o anticorpo é o trastuzumab (por exemplo, HERCEPTIN®, Genentech/Roche). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o trastuzumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de trastuzumab a ErbB2. Um MRD que compete para a ligação com um dos anticorpos alvo acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos anticorpos acima também estão abrangidas pela invenção Assim, a invenção abrange anticorpo contendo MRD que compreendem, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem por alvo vinculativo com, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos anticorpos acima.
[0299]Em outras modalidades, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a ErbB2. Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que se liga especificamente ao mesmo epitopo que o anticorpo trastuzumab anti-ErbB2 (por exemplo, HERCEPTIN®, Genentech). Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente o trastuzumab anticorpo anti-ErbB2 de ligação a ErbB2. Em ainda outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é o trastuzumab anticorpo anti-ErbB2. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe HER2 dimerização. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe heterodimerização HER2 com HER3 (ErbB3). Em uma modalidade específica, o anticorpo é pertuzumab (por exemplo, OMNITARG® e phrMab2C4, Genentech). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como pertuzumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de ErbB2 a pertuzumab. Um MRD que compete para a ligação com um dos anticorpos alvo acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com um, dois ou mais dos anticorpos alvo acima estão também abrangidos pela invenção. Consequentemente, em uma modalidade em que o anticorpo no anticorpo contendo MRD é trastuzumab e 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs no anticorpo contendo MRD inibe competitivamente a ligação de ErbB2 por pertuzumab.
[0300]Em uma outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação a ErbB2 selecionado do grupo: MDX-210 (Medarex), tgDCC-EIA (Targeted Genetics), MGAH22 (MacroGenics), e pertuzumab (Genentech OMNITARG™, 2C4). Um MRD que compete para ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, ou 4 dos anticorpos acima estão também englobadas pela a invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com, pelo menos, 1, 2, 3 ou 4 dos anticorpos acima.
[0301]Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e, adicionalmente, se liga ErbB3. Em algumas modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e um MRD do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB3. Em uma modalidade particular, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é trastuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente MRD e/ou um anticorpo de contendo MRD compete para ligação de ErbB2 com trastuzumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação a ErbB2 selecionado a partir de: MDX-210 (Medarex), tgDCC-E1A (Targeted Genetics), MGAH22 (MacroGenics), e pertuzumab (OMNITARG ™). Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente MRD e/ou anticorpo contendo MRD compete para ligação ao ErbB2 com um anticorpo selecionado a partir de: MDX-210, tgDCC-Ela, MGAH22, e pertuzumab. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga ErbB3 e um MRD do anticorpo contendo MRD liga a ErbB2.
[0302]Em algumas modalidades, o anticorpo no anticorpo contendo MRD compreende os CDRs do anticorpo trastuzumab anti-ErbB2. As sequências de CDR de VH, VL e de trastuzumab são fornecidas na Tabela 1. Tabela 1
[0303]Em uma modalidade o anticorpo contendo MRD liga especificamente ErbB3 (Her3). Em uma modalidade específica, o anticorpo é MM121 (Merrimack Pharmaceuticals) ou AMG888 (Amgen). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que MM121 ou A G888. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de MM121 ou AMG888 a ErbB3. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é AV- 203 (AVEO). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que AV- 203. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de AV- 203. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um ou ambos os anticorpos acima são também abrangidos pela invenção.
[0304]Em uma modalidade o anticorpo contendo MRD especificamente liga a VEGF (VEGFA). Em uma modalidade específica, o anticorpo é o bevacizumab (por exemplo, Avastin, Genentech/Roche). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o bevacizumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de bevacizumab para VEGFA. Em outra modalidade, o anticorpo é MRD contendo AT001 (Affitech). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que AT001. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de AT001 para VEGFA. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um ou ambos anticorpos acima são também abrangidos pela invenção.
[0305]Em algumas modalidades, o anticorpo no anticorpo contendo MRD compreende os CDRs de bevacizumab do anticorpo anti-VEGF. As sequências CDR, VH e VL de bevacizumab e são fornecidas na Tabela 2. Tabela 2
[0306]Em outras modalidades específicas, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a VEGF. Em uma modalidade específica, o anticorpo é o bevacizumab (por exemplo, Avastin, Genentech). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o bevacizumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de bevacizumab a VEGF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é R84 (peregrino) ou 2C3 (peregrino). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que R84 ou 2C3. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de VEGF por R84 ou 2C3. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, ou 3 dos anticorpos acima estão também englobados pela presente invenção.
[0307]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a VEGF e, adicionalmente, se liga a um alvo angiogênico selecionado a partir de: VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, IIIc e FGFR2-), FGFR3, TNFSF2 (TNF), FGFR3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, IL6, IL8, IL18, HGF, TIE2, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT , GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Notch 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, VCAM-1, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD que se ligam a VEGF) e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é R85, 2C3 ou AT001. Em uma modalidade específica, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é bevacizumab.
[0308]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga VEGF e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: IL1 beta, fosfatidilserina, TNFSF11 (RANKL), TNFSF12 (TWEAK), IGF1,2, IGF2, IGF1, DKK1, SDF2, CXC3CL1 (fractalcina), esclerostina e toxóide tetânico e HGF. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a VEGF e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: ErbB3, EGFR, c-Met, VEGF, RON (MST1R), DLT4, PCDCH1 CD3 18), NRP1, ROB04, CD13, CTLA4 (CD 1 52), IC OS (CD278), CD20, CD22, CD30, CD33, CD80 e IL6R. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a VEGF e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é R85, 2C3 ou AT001. Em uma modalidade específica, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é bevacizumab.
[0309]Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se especificamente a VEGFR1. Em uma modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de Aflibercept (Regeneron) ao VEGFR1. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe dimerização de VEGFR1. Um MRD que compete para a ligação alvo com aflibercept está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com aflibercept estão também abrangidos pela invenção.
[0310]Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se especificamente a VEGFR2. Em uma modalidade específica, o anticorpo é ramucirumab (por exemplo, IMC1121B e IMC1C11, ImClone). Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe dimerização de VEGFR2. Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que ramucirumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de ramucirumab a VEGFR2. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de aflibercept a VEGFR2. Um MRD que compete para a ligação alvo com ramucirumab está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com ramucirumab ou aflibercept estão também abrangidos pela invenção.
[0311]Em outras modalidades, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a um receptor de FGF (por exemplo, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4 ou). Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que se liga especificamente a FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC). Em uma modalidade específica, o anticorpo é IMC-A1 (Imclone). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o IMC-A1. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de IMC-A1 a FGFR1. Em uma modalidade adicional, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de FP-1039 (Cinco Prime) a um ligante FGF de FGFR1. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que se liga especificamente a FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIB e FGFR2-IIIC). Em uma outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que se liga especificamente a FGFR3. Em uma modalidade específica, o anticorpo é IMC-A1 (Imclone). Em uma modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como PRO-001 (ProChon Biotech), R3Mab (Genentech) ou 1A6 (Genentech). Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do PRO-001 (ProChon Biotech), R3Mab (Genentech), ou 1A6 (Genentech). Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima ou armadilhas de ligante está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, Anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um ou mais dos anticorpos acima ou armadilhas de ligante estão também englobados pela presente invenção .
[0312]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a CD20. Em uma modalidade específica, o anticorpo é o rituximab (por exemplo, o RITUXAN®/MABTHERA®, Genentech/Roche/Biogen Idee). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o rituximab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CD20 a rituximab. Em uma modalidade adicional, o anticorpo é GA101 (Biogen Idec/Roche/Glycart). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que GA101. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CD20 a GA101. Em uma modalidade adicional, o anticorpo é PF-5.230.895 (SBI-087; Pfizer). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que PF-5.230.895. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PF-5.230.895 para CD20. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é ocrelizumab (por exemplo, 2H7; Genentech/Roche/Biogen Idee). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que ocrelizumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CD20 a ocrelizumab. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo contendo MRD é selecionado a partir de: obinutuzumab (por exemplo, GA101; Biogen Idec/Roche/Glycart), ofatumumab (por exemplo, ARZERRA® e HuMax-CD20 Genmab), veltuzumab (por exemplo, IMMU-160, Immunomedics ), AME-133 (Evolução Molecular Aplicada), SGN35 (Millennium), TG-20 (GTC Biotherapeutics), afutuzumab (Hoffman-La Roche) e PR0131921 (Genentech). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que um anticorpo selecionado a partir de: obinutuzumab, ofatumumab, veltuzumab, AME-133, SGN35, TG-20 e PR0131921. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de um anticorpo CD20 selecionado a partir de: obinutuzumab, ofatumumab, veltuzumab, AME-133, SGN35, TG-20, afutuzumab, PRO e 131921. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima também são abrangidos pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com 1, 2, 3, 4, 5, 6-alvo, ou mais dos anticorpos acima são também abrangidos pela invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos anticorpos acima .
[0313]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a CD20 e um alvo selecionado de: CD19, CD22, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, CD80, CD138, VEGFR1, VEGFR2, EGFR, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF1 0B ( DR5), TNF, NGF, VEGF, IGF1, 2, IGF2, IGF1 e RANKL. Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a CD20 e um alvo selecionado de: CD3, CD4 e NKG2D. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a CD20 e também ligam-se a 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CD20. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo selecionado a partir de: rituximab, GA101, PF-5.230.895, ocrelizumab obinutuzumab, ofatumumab, veltuzumab, AME-133, SGN35, TG-20, PRO afiituzumab e 131921.
[0314]Em uma modalidade o anticorpo contendo MRD liga especificamente IGF1R. Em uma modalidade específica, o anticorpo é selecionado de entre: cixutumumab (por exemplo, IMC-A12, Imclone), figitumumab (por exemplo, CP-751, 871, Pfizer), AMG479 (itumab GA, Amgen/Millennium), BIIB022 (Biogen Idee), SCH 717.454 (Schering-Plough), e R1507 (Hoffman La-Roche). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que um anticorpo selecionado a partir de: cixutumumab, figitumumab, AMG479, BIIB022, SCH 717.454, e R1507. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação IGF1R por um anticorpo selecionado a partir de: cixutumumab, figitumumab, AMG479, BIIB022, SCH 717.454, e R1507. Em uma modalidade específica, o anticorpo é figitumumab. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que figitumumab. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo inibe competitivamente a ligação IGF1R por figitumumab. Em uma modalidade específica adicional, o anticorpo é BIIB022. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que BIIB022. Em uma modalidade mais específica, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do IGF1R por BIIB022 IR. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD inibe dimerização de IGF1R. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação IGF1R com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais do anticorpos acima são também abrangidos pela invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação IGF1R com, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos anticorpos acima .
[0315]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga IGF1R e um alvo selecionado de: EGFR, ErbB2, ErbB3, PDGFRa, PDGFRB, cMet, TNFRSF 10A (DR4), TNFRSFI OB (DR5), CD20, NKG2D, VEGF, PGE2, IGF 1, IGF2 e IGF1, 2. Em modalidades adicionais, um anticorpo se liga contendo MRD IGFIR e um alvo selecionado de: CD3, CD4 e NKG2D. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam e IGF1R ligam a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a IGF1R. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é selecionado a partir de: cixutumumab, figitumumab, AMG479, BIIB022, SCH 717.454, e R1507.
[0316]Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga um alvo (por exemplo, ligante, receptor ou proteína acessória) associado com uma barreira hematoencefálica endógena (BBB) mediada pelo receptor do sistema de transporte (por exemplo, receptor da insulina, receptor de transferrina, receptor de leptina, receptor de lipoproteína, e os sistemas de transporte mediados por receptor de IGF) e é capaz de atravessar para o lado do cérebro do BBB. Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem 2, 3, 4, 5, ou mais sítios de ligação (isto é, é capaz de ligação multivalente) um antígeno alvo (por exemplo, ligante, receptor, ou proteína acessória) associado com um receptor de sistema de transporte mediado por BBB endógeno (por exemplo, o receptor da insulina, receptor de transferrina, receptor de leptina, receptor de lipoproteína, e a sistemas de transporte mediados pelo receptor de IGF). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação para um alvo associado a um sistema de transporte de BBB endógeno. Em outras modalidades, a composição multiespecífica polivalente e monovalente tem 2, 3, 4, 5, ou mais simples sítios de ligação para um alvo associado a um sistema de transporte mediado por receptor BBB endógeno. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga-se a 1, 2, 3, 4, 5, ou mais alvos localizados no cérebro (líquido cefalorraquidiano) ao lado do BBB. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga-se, adicionalmente, a 1, 2, 3, 4, 5, ou mais alvos localizados no lado do cérebro (fluido cerebrospinal) do BBB. Em modalidades particulares, o anticorpo contendo MRD liga-se a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos associados com uma doença ou desordem neurológica. Em modalidades particulares, a doença ou desordem neurológica é selecionada a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, mal de Alzheimer, mal de Parkinson, mal de Huntington, ALS, esclerose múltipla, neuromielite óptica e neuro-ATDS (por exemplo, a demência associada ao HIV ). Consequentemente, a invenção engloba métodos de tratamento de um paciente por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multivalente e monovalente multiespecífica para tratar uma doença ou desordem neurológica selecionada a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, mal de Alzheimer, mal de Parkinson, mal de Huntington, doença ALS, esclerose múltipla, neuromielite óptica e neuro-SIDA (por exemplo, a demência associada ao HIV). Em uma outra modalidade, a composição monovalente e multivalente multiespecífica é administrada a um paciente para tratar um câncer do cérebro, o câncer metastático do cérebro, ou câncer primário do cérebro. Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífica é administrada a um paciente para tratar um tumor neurológico, tais como, um glioma (por exemplo, um glioblastoma, glioblastoma multiforme (GBM), e o astrocitoma), ependimoma, oligodendroglioma, neurofibroma, sarcoma, meduloblastoma , tumor neuroectodérmico primitivo, adenoma pituitário, neuroblastoma ou câncer das meninges (por exemplo, meningioma, meningiosarcoma e gliomatosis). Em modalidades particulares da invenção compreende métodos de tratamento de um paciente por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífica para tratar uma doença neurodegenerativa.
[0317]Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga-se a um sistema de transporte endógeno de certificação mediada pelo receptor selecionado a partir do receptor da insulina, receptor de transferrina, receptor de leptina, receptor de lipoproteína, e os sistemas de transporte mediados por receptor de IGF.
[0318]Em algumas modalidades, a composição multivalente e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga-se ao receptor da transferrina. Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD se liga a um alvo selecionado de: receptor 1 de lipoproteína de baixa densidade (LRP- 1), um ligante de LRP-1 ou um seu fragmento funcional ou uma sua variante que se liga LRP-1, receptor 2 de lipoproteína de baixa densidade (PRL-2), um ligante de PRL-2 ou um fragmento funcional do mesmo ou um variante do mesmo que se liga a LRP-1, uma proteína de transferrina ou um seu fragmento funcional ou um variante do mesmo, o receptor de insulina, TMEM30A, receptor de leptina, receptor de IGF, um ligante IGFR ou um fragmento funcional ou um variante do mesmo, o receptor de difteria, um ligante do receptor da difteria ou um fragmento funcional ou um variante do mesmo, transportador de colina, um complexo que se liga ao receptor da colina, um transportador de aminoácidos (por exemplo, LAT1/CD98, SLC3A2, e SLC7A5), um ligante transportador de aminoácidos ou um fragmento funcional ou um variante do mesmo, RAGE, um ligante de RAGE ou um fragmento funcional ou um variante do mesmo, e um ligante SLC2A1 SLC2A1 ou um fragmento funcional ou um variante do mesmo.
[0319]Em modalidades adicionais, a composição multivalente e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga a RAGE. Em outras modalidades, a composição multivalente e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga-se a RAGE e um alvo selecionado de: Abeta, endothelin1, TNF, IL-6, MCSF, um AGE, um membro S 100, HMGB1, LPS e TLR2. Composições multivalentes e multiespecíficas que se ligam a RAGE e também se ligam a 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a RAGE.
[0320]Em modalidades adicionais, a composição multivalente e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga-se um antígeno alvo associado a um sistema de transporte mediado por receptor de barreira de sangue do cérebro (BBB) e também se liga a um antígeno alvo selecionado a partir de alfa-sinucleína, RGM A, NOGO A, NgR, OMgp MAG, CSPG, neurite inibindo semaforinas (por exemplo, semaforina 3A e Semaforina 4) uma efrina, A-beta, AGE (S 100 A, anfoterina), NGF, solúvel AB, aggrecan, midquina, neurocan, versicam, fosfacan, Te38, e PGE2, IL-1, IL1R, IL6, IL6R, IL12, IL18, IL23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (ligante CD40), CD45RB, CD52, CD200, VEGF, VLA4, TNF alfa, interferon gama, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CCR2, CB2, MIP 1a e MCP-1. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD tem um único sítio de ligação a um alvo associado com um sistema de transporte mediada pelo receptor de barreira hematoencefálica endógena (BBB) e ainda se liga a um alvo selecionado a partir de alfa-sinucleína, RGM A, Nogo A, NgR , OMgp MAG, CSPG, neurite inibindo semaforinas (por exemplo, Semaforina 3 A e Semaforina 4) uma efrina, A-beta, RAGE (S100 A, anfoterina), NGF, solúvel AB, aggrecan, midquina, neurocan, versicam, fosfacan, Te38, PGE2, IL-1, IL1R, IL6, IL6R, IL12, IL18, IL23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (ligante CD40), CD45RB, CD52, CD200, VEGF, VLA4, TNF alfa, interferon gama, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CCR2, CB2, MIP 1a e MCP-1.
[0321]Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD é administrado a um paciente para tratar uma doença ou desordem neurológica selecionada a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, mal de Alzheimer, mal de Parkinson, mal de Huntington, ALS, esclerose múltipla , neuromielite óptica e Neuro-SIDA (por exemplo, a demência associada ao HIV). Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para dois ou mais dos alvos acima referidos. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente contém 2 sítios de ligação para 3 ou mais alvos. Em modalidades adicionais, os alvos vinculados pela composição multiespecífica polivalente e monovalente estão associados com câncer. Em uma outra modalidade os alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica estão associados com 1, 2, 3, 4, 5 ou mais vias de sinalização ou modos de ação diferentes associados ao câncer.
[0322]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a integrina. Em uma modalidade específica, o anticorpo é selecionado de entre: MEDI-522 avb3 (VITAXIN®, Medlmmune), CNTO 95 a5b3 (Centocor), JC7U avß3, e volociximab a5b1 (por exemplo, M200, PDL e Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que um anticorpo selecionado a partir de: MEDI-522, CNTO 95, JC7U avß3, e volociximab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de integrina a um anticorpo selecionado a partir de: MEDI-522, CNTO 95, JC7U, e M200. Em uma modalidade específica, o anticorpo é natalizumab (por exemplo, TSABRI®, Biogen Idee). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o natalizumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação a integrina natalizumab. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais do anticorpos acima são também abrangidos pela invenção.
[0323]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a c-Met. Em uma modalidade específica, o anticorpo é selecionado dentre: MetMAb (OA-5D5, Genentech), AMG-102 (Amgen) e DN30. Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que um anticorpo selecionado a partir de: MetMAb), AMG-102 e DN30. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação cMET por um anticorpo selecionado a partir de: MetMAb (OA-5D5), AMG-102 e DN30. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, ou 3 dos anticorpos acima estão também englobados pela presente invenção .
[0324]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a c-Met e o anticorpo é selecionado dentre: 11E1, CE- 355,621, e LMH87 LA480. Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que um anticorpo selecionado a partir de: MetMAb), AMG-102 e DN30. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação cMET por um anticorpo selecionado a partir de: 11E1, CE-355.621, TA480 e LMH87. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (e.g. , Contendo MRD-anticorpos) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem pela ligação alvo com 1, 2, 3 ou 4 dos anticorpos acima estão também englobados pela invenção.
[0325]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga-se a cMET e um alvo selecionado de: ErbB2, ErbB3, EGFR, IGF1R, NRP1, RON, PDGFRa, PDGFRB, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, TGF beta, TGF beta R2, CD82, CD 152, NGF, BMP2, BMP4, BMP5, BMP9, BMP 10, BMPR-1A, ALK1, a3b1, integrina e HGF. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam e também cMET se ligam, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a cMET. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo selecionado a partir de: MetMAb, AMG-102 e DN30. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo selecionado a partir de: 11E1, CE-355,621, e LMH87 LA480.
[0326]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a MST1R (RON). Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga a RON e um alvo selecionado de: EGFR, ErbB2, ErbB3, VEGFR1, VEGFR2, cMET, CXCR4, VEGF, MST, MTSP1, CDCP1, EPHB2, NGF, CXCL12 e HGF (SF) . Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a MST1R e também se ligam a pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a MST1R.
[0327]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a HGF (SF). Em uma modalidade específica, o anticorpo é AMG-102 (Amgen) ou SCH 900.105 (AV-229, AVEO). Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como AMG-102 (Amgen) ou SCH 900.105 (AV-229, AVEO). Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do HGF por AMG-102 (Amgen) ou SCH 900.105 (AV-229, AVEO). Um MRD compete para ligação alvo com AMG-102 (Amgen) ou SCH 900.105 (AV- 229, AVEO) também é abrangida pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2 ou 3 dos anticorpos acima também são abrangidos pela invenção.
[0328]Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD liga a HGF e um alvo selecionado de: ErbB2, ErbB3, EGFR, IGF1R, NRP1, RON, PDGFRa, PDGFRB, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, o TGF-beta, TGF beta R2, CD82, CD 152, NGF, BMP2, BMP4, BMP5, BMP9, BMP10, BMPR-1A, ALK 1, A3b1 integrina, cMET, MST1R (RON), CXCR4, MST, MTSP1, CDCP1, EPHB2, NGF, CXCL12 NRPl e fosfatidilserina. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam a HGF também se ligam, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a HGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é AMG-102 ou SCH 900.105.
[0329]Em uma modalidade adicional, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a integrina a5b1 (VLA5). Em uma modalidade específica, o anticorpo é volociximab (por exemplo, M200 Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que volociximab. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação por volociximab a5b1 integrina. Um MRD que compete para a ligação com volociximab a5b1 integrina está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com volociximab a5b1 integrina são também abrangidos pela invenção.
[0330]Em uma outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é um antígeno associado a uma doença autoimune, doença inflamatória ou outro do sistema imune ou está associado com regulação de uma resposta imune.
[0331]Em outra modalidade o anticorpo contendo MRD melhora o desempenho das células apresentadoras de antígeno (p.ex., células dendríticas). Em uma modalidade, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é um membro selecionado de: CD 19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD28, CD30, CD30L, TNFSF14 (LUZ, HVEM ligando), CD70, ICOS, ICOSL (B7-H2), CTLA4, PD-1, PDL1 (B7-H1), B7-H4, B7-H3, PDL2 (B7-DC), BTLA, CD46, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2 ), HLA-DR, CD74, PD1, TNFRSF4 (OX40), TNFRSF9 (41BB), TNFSF4 (OX40 Ligante), TNFSF9 (41BB Ligante), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF13B (TACI) , TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF18 (GITR), MHC-1, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF14 (HVEM), FcgammaRTTB, e TL4R.
[0332]Em uma modalidade o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é um alvo immunoinibitório selecionado a partir de: IL1, IL-1 beta, IL1Ra, L-5, IL6, IL6R, CD26L, CD28, CD80, FcRn, e Fc gama esfregar. Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobadas pela presente invenção.
[0333]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a prostaglandina E2 (PGE2). Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga IL6R e um alvo selecionado de: EGFR, IGF1R, IL6R, TNF, NGF, beta IL-1, IL-6, IL17A, VEGF, IL15, IL18, S1P e Abeta. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a PGE2 e também se ligam, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobadas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga PGE2.
[0334]Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD modula a resposta imune, a homeostase celular imune, ou manutenção da tolerância imunológica através de ligação multiespecífica e multivalente de superfície de célula solúvel, ou moléculas associadas a matriz extracelular.
[0335]Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais citoquinas ou quimiocinas que modulam as respostas imunes, a homeostase celular imune, ou manutenção da tolerância imune. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga uma ou mais citoquinas ou quimiocinas selecionados a partir de: 1L1, IL2, a IL6, IL7, IL9, IL10, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23, Il35, IFNgama, IFNalfa, IFNbeta, CCL17, CCL21, CCL22, CXCL9, CXCL10, CXCL11, TGFbeta, luz e TLL a. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma quimiocina que modula a resposta imune através da migração de células imunes. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma quimiocina selecionada dentre CCL17, CCL22 e CCL21. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de fatores solúveis que modulam a atividade dos linfócitos T. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de fatores solúveis selecionados a partir de: IL2 e IFNgama; IL2 e IFNalfa; IL2 e TGFbeta1; IFNgama e TGFbeta1; e IFNalfa e TGFbeta1. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga-se um fator solúvel que modula a expressão de CD25 ou a expressão intracelular de FOXP3 em linfócitos T. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD liga-se a dois, três, quatro, cinco ou seis citocinas ou quimiocinas que modulam as respostas imunes, a homeostase celular imune, ou manutenção de fatores de tolerância imune.
[0336]Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas de superfície celular associadas que modulam a resposta imune, homeostase de célula imune, ou manutenção da tolerância imune. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga uma ou mais moléculas associadas de superfície celular selecionadas a partir de: PDL1, PDL2, PD1, CD80, CD86, CTLA4, B7-H2, ICOS, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA , MHC class1, MHC classe II, KIR, TCRalfa, TCRbeta, TCRgamma, LAG3, CD137, C137L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, CD40L, GAL9, TIM3, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10 e A2aR. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas de superfície celular que influenciam a migração de células imunes. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma molécula selecionada a partir de CCR4, CCR7, e CXCR3. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de moléculas de superfície celular que modulam a função incluindo linfócitos T. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de fatores solúveis selecionados a partir de: CD25 e CTLA4; PDL e CTLA4; B7-H3 e B7-H3R; B7- H4 e B7H4R; BTLA e HVEM; KIR e LAG3; A2aR e TIM3; TIM3 e CTLA4; PDL1 e PD1; PDL2 e PD1; e CD80 e CD86. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD antagoniza dois ou mais dos sinais inibitórios entregues aos linfócitos T através de receptores inibitórios. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD antagoniza dois ou mais sinais inibitórios entregues aos linfócitos T, incluindo um sinal transmitido através de uma receptor inibidor selecionado a partir de: PDL, CTLA4, BTLA, HVEM, KIR, LAG3, TIM3, e A2aR. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD aumenta os sinais co- estimulados fornecidos aos linfócitos T através de um ou mais dos receptores co-estimulados. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD aumenta dois ou mais sinais co-estimuladores fornecidos aos linfócitos T, incluindo um sinal emitido através de um receptor co-estimulador selecionado a partir de: CD28, ICOS, CD27 e OX40. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma molécula que modula a expressão de CD25 ou FOXP3 em linfócitos T. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD ligase a uma molécula que modula a expressão do CD39 em linfócitos T. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD liga-se a dois, três, quatro, cinco ou seis moléculas associadas a superfície celular que modulam as respostas imunes, a homeostase celular imune, ou manutenção da tolerância imunológica.
[0337]Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas da superfície celular expressas em células apresentadoras de antígeno. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas de superfície de células selecionados a partir de PDL1, PDL2, CD80, CD86, B7RP1, B7-H3, H4-B7, HVEM, CD137L, OX40, CD70, e GAL3. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma molécula em células apresentando antígeno que modula a expressão de CD25 ou FOXP3 em linfócitos T humanos. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de moléculas na superfície de uma célula acessória. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma combinação de moléculas selecionadas a partir de: CD80 e CD86; B7-H3 e H4-B7; PDL1 e PDL2; HVEM e B7-H2; CD137L e HVEM; GAL9 e OX40L; HVEM, PDL1 e PDL2; CD80, CD86 e HVEM; e B7-H3, H4 e B7-B7- H2. Os anticorpos contendo MRD podem ligar-se a um, dois, três, quatro, cinco seis, sete, oito ou mais moléculas da superfície celular expressas em células apresentadoras de antígenos.
[0338]Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas de superfície de célula sobre a superfície de células apresentadoras de antígeno e uma ou mais moléculas de superfície celular expressa na superfície de linfócitos T. O anticorpo contendo MRD pode ligar-se uma combinação de um, dois, três ou quatro moléculas de superfície celular expressas na superfície de células apresentadoras de antígeno humano e uma, dois, três ou quatro moléculas de superfície celular expressas na superfície de linfócitos T humanos. Em uma modalidade preferida, a combinação de moléculas ligadas pelo anticorpo contendo MRD dividem efeitos co- estimuladores ou inibidores sobre linfócitos T. Em uma outra modalidade preferida, a combinação de moléculas ligadas pelo anticorpo contendo MRD, estabilizam o contato célula-célula entre as células do sistema imune.
[0339]Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD antagoniza a função dos linfócitos T reguladores (Treg) por meio de antagonismo de moléculas solúveis e/ou receptores de superfície celular. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a uma ou mais moléculas solúveis e/ou um ou mais receptores de superfície celular que melhoram a função Treg coordenadamente. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a células Treg e inibe a sua função. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a células Treg e aumenta a sua função. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se uma ou mais moléculas selecionados a partir de: PDL1, PDL2, PD1, CD80, CD86, CTLA4, B7-H2, TCOS, B7-H3, H4-B7, HVEM, BTLA, MHC de classe I , MHC classe II, KIR, TCRalfa, TCRbeta, TCRgamma, LAG3, CD137, C137L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, CD40L, GAL9, TIM3, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 , TLR9, TLR10 e A2aR. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD se liga a células Treg e antagoniza a atividade um fator solúvel que atua sobre células T reguladoras.
[0340]As propriedades de ligação multivalentes e multiespecíficas de anticorpo contendo MRD da presente invenção permitem o desenho racional de agentes terapêuticos que preferencialmente direcionam a localização in vivo do anticorpo contendo MRD a locais anatômicos específicos em que o alvo do anticorpo e/ou componentes MRD dos anticorpos contendo MRD está presente. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD um sítio de inflamação por ligação do sítio de combinação de anticorpo de uma molécula caracterizada pela expressão aumentada no local da inflamação. De acordo com outras variantes, o anticorpo se liga a um local de combinação de molécula selecionado a partir de: uma molécula de adesão, uma integrina, MAdCAM, CD44 e CD45. De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD compreende ainda um MRD que se liga a uma molécula da superfície celular em uma Treg que aumenta a atividade Treg. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a um receptor co-estimulador selecionado a partir de: CD28, ICOS, CD27 e OX40. Em modalidades particulares da afinidade ligação do anticorpo contendo o MRD para o alvo no local da inflamação in vivo é de pelo menos 3 vezes, pelo menos, 10x, pelo menos, 30x ou, pelo menos, 100x a do anticorpo contendo MRD para a superfície da molécula de superfície celular a Treg
[0341]Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método para direcionar preferencialmente a localização in vivo de um anticorpo contendo MRD a um local de tumor. Em algumas modalidades, o sítio de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a um antígeno associado a um tumor e um MRD do anticorpo contendo MRD que se liga a uma molécula da superfície celular em uma Treg que suprime a função Treg. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a um receptor co-estimulador selecionado a partir de: PD 1, CTLA4, BTLA, HVEM, KIR, LAG3, TIM3, e A2aR. Em uma outra modalidade, o sítio de combinação de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a um antígeno associado a um tumor e um MRD se liga uma molécula da superfície celular em uma Treg que suprime a função Treg. Em uma modalidade adicional, o anticorpo se liga a um local de combinação de antígeno associado ao tumor e um MRD do anticorpo contendo MRD se liga uma molécula de superfície celular em linfócitos T efetoras que aumentam a atividade células T efetoras. Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a um receptor co-estimulador selecionado a partir de: CD28, ICOS, CD27 e OX40. Em modalidades particulares da afinidade ligação do anticorpo contendo MRD para o antígeno associado a um tumor in vivo, é, pelo menos, 3x, pelo menos, 10x, pelo menos, 30x ou, pelo menos, 100 vezes a do anticorpo contendo MRD para a molécula da superfície da célula Treg.
[0342]Em uma outra modalidade, o sítio de combinação de anticorpo e/ou um de um MRD de anticorpo contendo MRD se liga a um antígeno associado a um tumor, que proporciona um sinal inibidor a um linfócito T. Em modalidades particulares, anticorpo contendo MRD se liga a CD80 ou CD86. Em outras variantes, o anticorpo contendo MRD liga-se a B7H1, B7H3 ou B7H4.
[0343]Em uma outra modalidade o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é um alvo imunoestimulante (por exemplo, um agonista de um alvo associado a ativação de células imunes (tais como, TNFRSF9 (41BB) ou TNFRSF5 (CD40)) ou um antagonista de um ponto de controle imune inibidor (tal como CTLA-4)). Em uma modalidade, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é um alvo imuno-estimulador selecionado a partir de: CD25, CD28, CTLA-4, DP 1, PDL1, B7-H1, B7-H4, IL10, TGFbeta, TNFSF4 (OX40 ligando) , TNFRSF4 (OX40), TNFSF5 (CD40 Ligante), TNFRSF5 (CD40), TNFSF9 (41BB Ligante), TNFRSF9 (41BB), TNFSF14 (LUZ, HVEM Ligante), TNFRSF 14 (HVEM), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3 ), TNFSF18 (GITR ligando), e TNFRSF 18 (GITR). Em outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é um alvo imuno-estimulador selecionado a partir de: CD272 (BTLA), TIM3, GAL9, B7-DC (PDL2), e receptor de PDL2. Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobados pela presente invenção. Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD liga-se a 2, 3 ou todos os 4 alvos selecionados de CTLA-4, TNFRSF18 (GITR), 4-1BB, e TNFRSF5 (CD40). Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a CTLA-4 e TNFRSF9 (41BB). Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a CTLA-4 e TNFRSF18 (GITR). Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a CTLA-4 e TNFRSF5 (CD40). Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a TNFRSF5 (CD40) e TNFRSF9 (4 IBB). Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a TNFRSF4 (OX40) e TNFRSF9 (4 IBB). Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a PD1 e B7-H1. Em uma modalidade adicional o anticorpo contendo MRD aumenta uma resposta imune, tais como resposta anti -tumor do sistema imune ou uma resposta imune a uma vacina.
[0344]Em uma outra modalidade o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é uma citocina selecionada a partir de: IL1 alfa, IL-1 beta, IL-18, TNFSF2 (TNFa), LTalfa, LT beta, TNFSF11 (RANKL), TNFSF13b (BlyS), TNFSF13 (APRIL), IL6, IL7, IL10, IL12, IL15, IL17A, IL23, OncoStatinM, TGFbeta, BMP2-15, PDGF (por exemplo, PDGF-A, PDGF-B, o PDGF-CC, PDGF-C, PDGF-D), um membro da família FGF (por exemplo, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b e FGF 19), de VEGF (por exemplo, VEGFA e VEGFB), MIF, e um interferon de tipo I. Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multispecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobadas pela presente invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo , pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos alvos acima referidos.
[0345]Em uma outra modalidade o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é uma citocina selecionada a partir de: TNF, CD25, CD28, CTLA-4, PD1, PDL1, B7-H1, B7-H4, IL10, TGFbeta, TNFSF4 (OX40 ligando), TNFRSF4 (OX40), TNFSF5 (CD40 Ligante), TNFRSF5 (CD40), TNFSF9 (41BB ligante), TNFRSF9 (41BB), TNFSF14 (LUZ, HVEM ligante), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3), TNFSF18 (GITR ligante), e TNFRSF18 (GITR). Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobadas pela presente invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos alvos acima referidos.
[0346]Em uma modalidade o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é í IL1Ra, IL1Rb, IL2, IL3, IL45 IL7, IL10, mal l, IL15, IL16, IL17, IL17A, IL17F, IL18, IL19, IL25, IL32, IL33, o interferon beta, SCF, BCA1/CXCL13, CXCL1, CXCL2, CXCL6, CXCL13 , CXCL16, C3AR, C5aR, CXCR1, CXCR2, CXCR3 CCR1, CCR3, CCR4, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, ChemR23, CCL3, CCL5, CCL1 1, CCL13, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL24 , CCL25, CCL26, CCL27, MPL, GP130, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TREM1, trem2, FcRn, FcGamma RUB, oncostatina M, linfotoxina alfa (CPT), integrina beta 7 subunidade, CD49a ( integrina alfa 1), a.5b3 integrinas, MTF, ESM'i, WTF'i, catepsina B, catepsina D, catepsina, catepsina S, TNFSF2 (TNF), TNFSF3 (LTB), TNFRSF3 (LTBR), TNFSF6 (Fas Ligante ), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF8 (CD30 Ligante), TNFRSF8 (CD30), TNFSF9 (41BB Ligante), TNFRSF9 (4 IBB), TNFSF1 1 (RAN L), TNFRSF1 1A (RANK), TNFSF14 (LUZ, HVEM Ligante), TNFRSF14 (HVEM), TNFRSF16 (TFG), TNFSF18 (GITR Ligante), TNFRSF18 (GITR), TNFRSF 19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6), CD14, CD23 CD25, CD28, CD36, CD36L, CD39, CD52, CD91, CD153 , CD 164, CD200, CD200R, BTLA, CD80 (B7- 1), CD86 (B7-2), B7h, ICOS, ICOS L (B7- H2). MHC, CD, B7-H3, B7-EI4, B7x. SLAM, KIM-1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6, ou SLAMF7. Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobadas pela presente invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos alvos acima referidos. O anticorpo acima e alvos MRD e aqueles aqui descritos de outra forma se destinam a ser ilustrativos e não limitativos.
[0347]Em uma outra modalidade, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é TNFSF1A (TNF/TNF-alfa), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF7 (CD27, ligando CD70), TNFRSF7 (CD27), TNFSF 13B (BlyS), TNFSF13 (ABRIL), TNFRSF13B (TACI ), TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), TNFSF 15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF4 (OX40 Ligante), TNFRSF4 (OX40), TNFSF5 (CD40 Ligante), TNFRSF5 (CD40), IL1, IL-1 beta, IL1R, IL2R, IL4-Ra, IL5, IL5R, IL6, IL6R, IL9, IL12, IL13, IL14, IL15, IL15R, IL17F, IL17R, IL 17Rb, IL17RC, IL20, IL21 , IL22RA, IL23, IL23R, IL31, TSLP, TSLPR, interferon alfa, interferon gama, B7RP-1, c-kit, GMCSF, GMCSFR, CTLA-4, CD2, CD3, CD4, CD11a, CD18, CD20, CD22, CD26L, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD80, CD86, CXCR3, CXCR4, CCR2, CCR4, CCR5, CCR8, CCL2, CXCL10, PLGF, PD1, B7-DC (PDL2), B7-H1 (PDL1), integrina alfa 4, integrina A4B7 , C5, Rh, IgE, ou Rh. Um MRD que se liga a um dos alvos acima referidos é abrangido pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos alvos acima são também englobadas pela presente invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6 dos alvos acima referidos.
[0348]Em modalidades particulares, o anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação com o alvo: CD70 SGN-70 (Seattle Genetics), SGN-75 CD70 (Seattle Genetics), Belimumab BLyS (por exemplo, BENLYSTA®, Genoma Humano Ciências/linha GlaxoSmith), Atacicept BLyS/Abril (Merck/Serono), tweak (por exemplo, a Biogen mAb), anticorpos TLIA de CoGenesys/Teva (por exemplo, huml LD8, huni25B9, e humlB4 (US Appl. Publ. No. 2.009/0280116), OX40 mAb, huMAb OX40L (Genentech), rilonacept IL1 armadilha (por exemplo, ARCALYST®, Regeneron), catumaxomab IL1beta (por exemplo, REMOVAB®, Frescnius Biotech GmbH), Xoma052 ILlbeta (Lilly), ILlbeta canacinumab (por exemplo, 1LAR1S® (Novartis) e ACZ885 (Novartis)), AMG108 IlIr (Amgen), daclizumab IL2Ra (por exemplo, ZENAPAX®, Hoffman-La Roche), basiliximab IL2Ra (por exemplo, SIMULECT®, Novartis), AMGN-317 IL4a (Amgen), pascolizumab IL4 (PDL), mepolizumab IL5 (por exemplo, BOSATRIA®, GlaxoSmithKline), reslizumab IL5 (por exemplo, SCH55700, Ception Therapeutics), benralizumab IL5R (por exemplo, MEDI-563 Medlmmune), BIW-8405, IL5R (BioWa), etanercept TNFR2- fc (por exemplo, Enbrel®, Amgen), siltuximab IL6 (por exemplo, CNT0328, Centocor), CNT0136 IL6 (Centocor), CDP-IL6 6038 (UCB), AMGN IL6-220 (Amgen), REGN 88-IL6R (Regeneron), tocilizumab IL6R (por exemplo, ACTEMRA ™/ROACTEMRA ™, Chugai/Roche), MEDI-528 IL9 (Medlmmune), briakinumab IL12/I3 (por exemplo, ABT-874, Abbott), IL12 ustekinumab, IL23 (por exemplo, STELARA® e CNTO 1275 , Centocor), TNX-650 IL13 (Tanox), lebrikizumab IL13 (Genentech), IL13 tralokinumab (p.ex. , CAT354, por exemplo, Cambridge Antibody Technology), AMG714 IL15 (Amgen), CRB-15 IL15R (Hoffman La-Roche), AMG827 IL17R (Amgen), IL17RC anticorpo de Zymo genética/Merck Serono, IL20 anticorpos de Zymogenetics, IL20 anticorpos de Novo Nordisk, IL21 anticorpo da Novo Nordisk (por exemplo, NCT01038674), IL21 anticorpo Zymogenetics (Zymogenetics), IL22RA anticorpo da Zymogenetics, IL31 anticorpo da Zymogenetics, AMG157 TSLP (Amgen). MEDI-545 interferon alfa (Medlmmune), interferon alfa MED1-546 receptor (Medlmmune), AMG811 interferon gama (Amgen), INNO202 interferon gama (Innogenetics/Biotherapy Avançada), HuZAF interferon-gama (PDL), AMG557 B7RP1 (Amgen), AMG191 c-kit (Amgen), MORI 03 GMCSF (MorphoSys), mavrilimujmab GMCSFR (por exemplo ,. CAM-300!, Med lmmune), tremelimumab CTLA4 (por exemplo, CP-675,206, Pfizer), iplimumab CTLA4 (por exemplo, MDX-010, BMS/Medarex), alefacept CD2 (por exemplo, AMEV1VE®, Astellas), siplizumab CD2 (por exemplo, MEDT-507, MedTmmune), otelixizumab CD3 (por exemplo, TRX4, linha Tolerx/GlaxoSmith), teplizumab CD3 (por exemplo, MGA031, MacroGenics/Eli Lilly), visilizumab CD3 (por exemplo, NUVION®, PDL), muromonab-CD3 CD3 (Orto), ibalizumab (por exemplo, TMB-355 e TNX-355, TaiMed Biologics), zanolimumab CD4 (por exemplo, HuMax- CD4®, Genmab) , CD4 cedelizumab (Euroasian Chemicals), keliximab CD4, priliximab CD4 (por exemplo, cMT412, Centocor), BT-061 CD4 (BioTest AG), efalizumab CDlla. (por exemplo, Raptiva/XANELIM ™, Genentech/Roche/Merck-Serono), MLN01 CD 18 (Millennium Pharmaceuticals), epratuzumab CD22 (por exemplo, anticorpo Amgen) e hLL2; (Immunomedics/UCB)), asclizumab CD26L, CD30 iratumumab (por exemplo, SGN30 (Seattle Genetics) e MDX-060 (Medarex), SGN40 CD40 (Seattle Genetics), ANTOVA® ligando CD40 (Biogen Idee), abatacept CDHO CDH6 (por exemplo, Orencia®, Bristol-Myers Squibb), TC-01 1 PD1 (cura Tech), GITR (por exemplo, TRX518, (Tolerx), AT010 CXCR3 Affitech), MLN1202 CCR2 (Millennium Pharmaceuticals), AMG-761 CCR4 (Amgen), HGS004 CCR5 (Human Genome Sciences), PRO 140 (progenes), MDX-1338 CXCR4 (Medarex), CNTO-888 CCL2 (Centocor), ABN912 CCL2 (Novartis), MDX-1 100 CXCL10 (Medarex), TB-403 PLGF (Biolnvent ), natalizumab integrina Alfa4 subunidade (por exemplo, Tysabri®, Idee Biogen/Elan), Vedolizumab A4B7 integrina (por exemplo, MLN2, Millennium Pharmaceuticals/Takeda), eculizumab C5 Elogio (por exemplo, SOLIRIS®, Alexion), pexelizumab C5 Compliment (Alexion) , omalizumab IgE (por exemplo, XOLAIR®, Genentech/Roche/Novartis), talizumab (por exemplo, TNX-901, Tanox), toralizumab (IDEC 131, IDEC), eotaxina bertilimumab (por exemplo, ICO-008, ICOS Therapeutics Inc.), ozrolimupab Rh (por exemplo, Symoo1, Symphogen A/S), ou atorolimumab morolimumab (fator de Rh). Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais do anticorpos acima são também abrangidos pela invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD compreendendo, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para o alvo de ligação com, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 dos anticorpos acima .
[0349]Em modalidades particulares, o anticorpo do anticorpo contendo o MRD é: SGN-70 CD70 (Seattle Genetics), SGN-75 CD70 (Seattle Genetics), Belimumab BLyS (por exemplo, BENLYSTA®, Genoma Humano Sciences/GlaxoSmith Linc), BIIB023 TWEAK (Biogen Tdec), anticorpos TL1 A da CoGenesys/Teva (por exemplo, , 1 1 D8, 25B9, e uma B4 (US Appl. Publ. No. 2009/02801 16), OX40 mAb, huMAb OX40L (Genentech), catumaxomab ILlbeta (por exemplo, REMOVAB®, Fresenius Biotech GmbH), ILlbeta canakinumab (por exemplo, , ILARIS® (Novartis) e ACZ885 (Novartis)), AMGI 08 IL1R (Amgen), daclizumab IL2Ra (por exemplo, ZENAPAX®, Hoffman-La Roche), basiliximab IL2Ra (por exemplo, SIMULECT®, Novartis), AMGN-317 IL4a (Amgen), pascolizumab IL4 (PDL), mepolizumab IL5 (por exemplo, BOSATRIA®, GlaxoSmithKline), reslizumab IL5 (por exemplo, SCH55700, Ception Therapeutics), benralizumab IL5R (por exemplo, MEDI-563, Medlmmune) , BIW-8405, IL5R (BioWa), siltuximab IL6 (por exemplo, CNT0328, Centocor), CNTO-136 IL6 (Centocor), CDP-6038 IL6 (UCB), AMGN- 220 IL6 (Amgen), REGN-88 IL6R (Regeneron ), tocilizumab 1L6R (por exemplo, ACTEMRA™/ROACTEMRA™, Chugai/Roche), MED1-528 IL9 (Medlmmune), IL12 briakinumab/13 (por exemplo, ABT-874, Abbott), IL12 ustekinumab, IL23 (por exemplo, CNTO 1275, Centocor), IL13 lebrikizumab (Genentech), TNX-650 IL13 (Tanox), CAT354 IL13 (Cambridge Antibody Tecnologia), AMG714 IL15 (Amgen), CRB- 15 IL15R (Hoffman La-Roche), AMG827 IL17R (Amgen), anticorpo IL17RC de Zymogenetics/Merck Serono, IL20 anticorpo da Zymogenetics, IL20 anticorpo de Novo Nordisk, IL21 anticorpo de Novo Nordisk, anticorpo IL21 Zymogenetics (Zymogenetics), IL22RA anticorpo da Zymogenetics, IL31 anticorpo da Zymogenetics, AMG157 TSLP (Amgen), MEDI-545 interferon alfa (Medlmmune), MEDI-546 do receptor de interferon alfa (Medlmmune), AMG811 interferon gama (Amgen), INNO202 interferon gama (Imiogenetics/avançada Biotherapy), HuZAF interferon-gama (PDL), AMG557 B7RPJ (Amgen), AMG191 de c-kit (Amgen ), MOR 103 GMCSF (MorphoSys), CAM-3001 GMCSFR (Med lmmune), tremelimumabe CTLA4 (por exemplo, CP-675,206, Pfizer), iplimumab CTLA4 (por exemplo, MDX-010, BMS/Medarex), siplizumab CD2 (por exemplo, MEDI -507, Medlmmune), otelixizumab CD3 (por exemplo, TRX4, Tolerx/GlaxoSmithKline), muromonab-CD3 CD3 (Ortho), teplizumab CD3 (por exemplo, MGA031, MacroGenics/Eli Lilly), visilizumab CD3 (por exemplo, NUVION®, PDL), zanolimumab CD4 (por exemplo, HuMax- CD4®, Genmab), CD4 (Euroasian cedelizumab Chemicals), keliximab CD4, priliximab CD4 (por exemplo, CMT412, Centocor), BT-061 CD4 (BioTest AG), ibalizumab (por exemplo, 355 e TMB- TNX-355, TaiMed biopreparados), efalizumab CDlla (por exemplo, RAPTTVA®/XANELIM ™, Genentech/Roche/Merck Serono-), MLN01 CD 18 (Millennium Pharmaceuticals), epratuzumab CD22 (por exemplo, a Amgen anticorpo) e hLL2 (Immunomedics/UCB )), asclizumab CD26L CD30 iratumumab (por exemplo, SGN30 (Seattle Genetics) e MDX-060 (Medarex), SGN40 CD40 (Seattle Genetics), ANTOVA® ligando CD40 (Biogen Tdec), CT- 01 1 PD1 (Cure Tech), AT010 CXCR3 (Affitech), MLN3897 CCR1 (Millennium Pharmaceuticals), MLN 1202 CCR2 (Millennium Pharmaceuticals), AMG-761 R4CC (Amgen), HGS004 CCR5 (Human Genome Sciences), PRO 140 (progênies), MDX-1338 CXCR4 (Medarex), CNTO-888 CCL2 (Centocor), ABN912 CCL2 (Novartis), MDX-100 1 CXCL10 (Medarex), TB-403 PLGF (Biolnvent), natalizumab integrina Alfa4 subunidade (por exemplo, Tysabri®, Idee Biogen/Elan), Vedolizumab integrina A4B7 (por exemplo, MLN02, Millennium Pharmaceuticals/Takeda), eculizumab C5 Compliment (por exemplo, SOLIRIS ®, farmacêutica Alexion), omalizumab IgE (por exemplo, XOLAIR®, Genetech/Roche/Novartis), talizumab (por exemplo, TNX-901, Tanox), toralizumab (IDEC 131, 1DEC), eotaxina bertilimumab (por exemplo, ICO-008, iCo Therapeutics Inc.), ozrolimupab Rh (por exemplo, Sym001, Symphogen A/S), ou atorolimumab morolimumab (fator de Rh).
[0350]Em modalidades adicionais, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD compete pela ligação com um anticorpo alvo selecionado a partir de: oxelumab (por exemplo, RG4930; Genmab), AMG139 (Amgen), AMG181 (Amgen), CNTO 148 de TNF (Medarex ), um anticorpo anti-TNF descrita em Pat. No. 6.258.562 (BASF), Humicade® TNF (Celltech), HuM291 CDS receptor Fc (PDL), Mik-beta-1 a IL-2RB (CD122) (Hoffman LaRoche), REGN668 IL-4R (Regeneron), IL-6R sarilumab (por exemplo, REGN88, Regeneron), HuMax- Inflam IL-8 (por exemplo, HuMax-Inflam ™/MDX-018; Genmab e Medarex), anti-IL-12 e/ou anti-IL-12p40 anticorpos divulgados na Pat. No. 6,914, 128 (Abbott), HuMax-IL15 IL15 (Medarex e Genmab), ABX-IL8 IL8 (Abgenix), um anticorpo anti-IL-18 anticorpo descrito na US Appl. Bar. No. 2005/0147610 (Abbott), hCBE- 1 1 LTBR Biogen), HuMax-TAC IL-2RA (CD25) (Genmab, ver, por exemplo, Intl. Appl. Publ. No. WO2004045512, integrina Beta2 MLN01 (Xoma), D3H44 A 7F (Genentech), MT203 GMCSF (por exemplo, namilumab, Micromet e Takeda), IFXl/CaCP29 (InflaRx GmbH), CAT- 213 Eotaxina I (Cambridge Antibody Technologies), MDX-018 IL-8 (por exemplo, HuMax-Infiam ™; Medarex), REGN846 IL-4R (Regeneron, ver, por exemplo, US Appl Pub No. 20100291 107), REGN728 (Regeneron), RGN846 (Regeneron), T2-18C3 ILIA (MABpl;XBiotech), RA-18C3 ILIA (XBiotech) e CV18C3 ILIA (XBiotech). Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. As Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais dos anticorpos acima são também abrangidos pela presente invenção. Assim, a invenção abrange anticorpos contendo MRD alvo que compreendem pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dos anticorpos acima.
[0351]Em modalidades adicionais, um dos anticorpos acima descritos é o anticorpo do anticorpo contendo MRD.
[0352]Em uma modalidade adicional, o anticorpo o anticorpo contendo MRD se liga especificamente a CTLA4. Em uma modalidade específica, o anticorpo é tremelimumab (por exemplo, CP-675,206, Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que tremelimumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CTLA4 ao tremelimumab. Em uma modalidade específica adicional, o anticorpo é ipilimumab (por exemplo, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o ipilimumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CTLA4 ao ipilimumab. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem a ligação de CTLA4 com tremelimumabe ou ipilimumab são também abrangidas pela invenção.
[0353]Em uma modalidade adicional, o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga especificamente a TNFSF12 (TWEAK). Em uma modalidade específica, o anticorpo é o anticorpo TWEAK da Biogen que avançou para a Fase I de ensaios clínicos. Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o anticorpo Biogen TWEAK. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação do anticorpo a Biogen TWEAK. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com o anticorpo TWEAK Biogen TWEAK são também abrangidos pela invenção.
[0354]Em uma modalidade adicional, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a IL2Ra (CD25). Em uma modalidade específica, o anticorpo é daclizumab (por exemplo, ZENAPAX®). Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo como daclizumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de daclizumab para IL2Ra (CD25). Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para IL2Ra (CD25) de ligação com o daclizumab são também abrangidos pela invenção.
[0355]Em uma modalidade adicional, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a CD40 (TNFRSF5). Em uma modalidade específica, o anticorpo é CP- 870,893 CD40 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o CP-870,893. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de CP- 870,893 ao CD40. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação a CD40 com CP-870,893 são também abrangidas pela invenção.
[0356]Em uma modalidade adicional, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a integrina alfa 4. Em uma modalidade específica, o anticorpo é natalizumab (por exemplo, Tysabri®; Biogen Idee/Elan). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o natalizumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de integrina alfa 4 a natalizumab. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, MRD molecular contendo anticorpos) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação de integrina alfa 4 com natalizumab são também abrangidas pela invenção.
[0357]Em uma modalidade adicional, o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga especificamente a IL22. Em uma modalidade específica, o anticorpo é PF-5.212.367 (ILV- 094) (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que PF- 5.212.367. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PF- 5.212.367 de IL22. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com IL22 PF- 5.212.367 são também abrangidas pela invenção.
[0358]Em uma modalidade adicional, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga especificamente a MAdCAM. Em uma modalidade específica, o anticorpo é PF-547,659 (Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que PF-547.659. Em uma outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de PF-547.659 a MAdCAM. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação a MAdCAM com PF-547,659 são também abrangidos pela invenção.
[0359]Em uma modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD liga especificamente o TNF. Em uma modalidade específica, o anticorpo é adalimumab (por exemplo, Humira®/TRUDEXA®, Abbott). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que o adalimumab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de adalimumab ao TNF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é ATN- 103 (Pfizer). Em uma modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que ATN-103. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de NTA-103 ao TNF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é o infliximab. Em uma modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que o infliximab. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de infliximab a TNF. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é selecionado dentre: certolizumab (por exemplo, CIMZIA®, UCB), Golimumab (por exemplo, SIMPONI ™, Centocor), e AME-527 (Applied Molecular Evolution). Em uma modalidade, o anticorpo se liga ao mesmo epitopo que o certolizumab, Golimumab, ou AME-527. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente a ligação de certolizumab, Golimumab, ou AME-527, ao TNF. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, 3, 4, ou 5, um dos anticorpos acima são também englobadas pela presente invenção.
[0360]Em algumas modalidades, o anticorpo, em que o anticorpo compreende MRD contendo os CDRs de adalimumab anticorpo anti-TNF. As sequências de CDR de VH, VL de adalimumab e são fornecidos na Tabela 3. Tabela 3
[0361]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a TNF (isto é, o TNF alfa) e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: Te38, TL12, TL12p40, TL1 3, TL15, TL17, IL18, ILlbeta, IL23, MIF, PGE2 , PGE4, VEGF, TNFSF11 (RANKL), TNFSF13b (BlyS), GP130, CD22 e CTLA-4. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a TNF alfa, IL-6, e TNFSF13b (BLyS). Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a TNF alfa e TNFSF12 (TWEAK). Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD liga-se a TNF e TNFSF15 (TL1A). Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a TNF e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado dentre o NGF, SOST (esclerostina), LPA, IL17A, DKK, alfa Vbeta3, IL23p19, IL2, IL2RA (CD25), IL6, IL6R, IL12p40, IL6, IL10, IL21, IL22 e CD20 se liga a TNF. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a TNF alfa e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dessas metas são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga alfa-TNF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é adalimumab, infliximab certolizumab Golimumab, CNTO 148, AME-527 ou TN-103.
[0362]Em outras modalidades, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é IL6. Em algumas modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD é siltuximab (CNT0328, Centocor), CNTO-136 (Centocor), CDP-6038 (UCB), ou AMGN-220 (Amgen). Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete com siltuximab (CNT0328, Centocor), CNTO- 136 (Centocor), CDP-6038 (UCB), ou AMGN-220 (Amgen) para a ligação a IL6. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com 1, 2, ou mais dos anticorpos acima são também abrangidos pela invenção .
[0363]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a IL6. Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga a IL6 e um alvo selecionado de: IL1, IL1beta, IL1Ra, IL5, CDS, TNFRSF5 (CD40), PDL1, IL6R, IL17A, o TNF, o VEGF, TNFSF11 (RANKL) e PGE2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD que se ligam a IL-6) e também se ligam a pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a IL6. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é siltuximab, CNTO 136, CDP-6038 ou AMGN-220.
[0364]Em outras modalidades, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é IL6R. Em algumas modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD é REGN- 88 (Regeneron) ou tocilizumab (ACTEMRA™/ ROACTEMRA™, Chugai/Roche). Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete com siltuximab, REGN-88 (Regeneron) ou tocilizumab (ACTEMRA™/ROACTEMRA™, Chugai/Roche) para a ligação a TL6R. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um ou ambos os anticorpos acima são também abrangidos pela invenção.
[0365]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a IL6R. Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga a IL6R e um alvo selecionado de: CD8, TNFRSF5 (CD40), PDL1, IL6, IL17A, o TNF, o VEGF, TNFSF1 1 (RANKL) e PGE2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a IL6R também se ligam, pelo menos a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a IL6R. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é REGN-88 ou tocilizumab.
[0366]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD se liga a TNFSF15 (TL1A). De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD liga-se a TL1A e um alvo selecionado de: TNF, IFN alfa, IFN gama, IL-1, ILlbeta, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23 e IL32. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam e TL1A também se ligam, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e distúrbios, incluindo doença inflamatória do intestino e doenças autoimunes tais como artrite reumatóide. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a TL1a.
[0367]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD liga-se a interferon alfa. De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD liga-se a interferon alfa e TNFSF13b (BLyS). De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD liga-se a interferon alfa, TNFSF13b (BlyS), e uma armadilha de neutrófilos extracelular (NET). Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e desordens, incluindo doenças autoimunes tais como artrite reumatóide e lúpus eritematoso sistêmico. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a interferon alfa.
[0368]As Composições multivalentes e multiespecíficas da invenção também tem aplicações no tratamento de doenças ou desordens neurológicas, incluindo as doenças neurodegenerativas, dor e lesão ou trauma neural. Em modalidades particulares, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é: beta-amilóide (Abeta), beta-amilóide, fator D complementar, PLP, ROBO4, ROBO, GDNF, NGF, LINGO, ou miostatina. Em modalidades específicas, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é gantenerumab (por exemplo, R1450, Hoffman La-Roche), bapineuzumab beta amilóide 9 (Elan e Pfizer), solanezumab beta amilóide 9 (Eli Lilly), tanezumab NGF (por exemplo, RN624 , Pfizer), BIIB033 LINGO (Biogen Idee), PF-3446879 miostatina (Pfizer), ou stamulumab miostatina (Wyeth). Em uma modalidade particular, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é fulranumab (por exemplo, AMG-403;. Amgen/Millennium Em uma outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como gantenerumab, bapineuzumab, solarezumab, tanezumab, anticorpo LINGO da Biogen, ou stamulumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como fulranumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação ao alvo por gantenerumab, bapineuzumab, solarezumab, tanezumab, BIIB033, ou stamulumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de NGF por fulranumab. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima também está englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidos pela invenção.
[0369]Em uma modalidade adicional, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é beta amilóide. Em uma modalidade específica, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é RN-1219 (PF-4, 360,365; Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como RN1219. Em uma outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de beta-amilóide por RN1219. Um MRD que compete para a ligação com beta amilóide RN1219 está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação com beta amilóide RN1219 são também abrangidos pela invenção.
[0370]Em uma modalidade adicional, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é NGF. Em uma modalidade específica, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é tanezumab (por exemplo, RN624, Pfizer). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como tanezumab. Em uma outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de NGF por tanezumab. Um MRD que compete para a ligação de NGF com tanezumab está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação de NGF com tanezumab são também abrangidos pela invenção.
[0371]Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga a NGF e um alvo selecionado de: MTX, N G2d, RON, IL6R, ErbB3, TNFRSF21 (DR6), CD3, IGFR, DLL4, P1GF, CD20, EGFR, HER2 , CD 19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, cMET, NRP1, TNF, LINGO, HGF, IGF1, IGF1, 2, IGF2, NGF, Te38, NogoA, RGM A, MAG, OMgp, NgR, TNFSF12 (TWEAK) , PGE2, IL-1 beta, Semaforina 3A e Semaforina 4. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam e ao NGF também se ligam, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidas pelas a invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a NGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é tanezumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação de NGF com tanezumab. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é MEDI-578. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação de NGF com MEDI-578.
[0372]Em uma modalidade adicional, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é LINGO (por exemplo, LINGO1). Em uma modalidade específica, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é BIIB033 (Biogen Idee). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como BIIB033. Em uma outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação LINGO por BIIB033. Um MRD que compete para a ligação com LINGO BIIB033 está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação LINGO com BIIB033 são também abrangidos pela invenção.
[0373]Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD liga LINGO e um alvo selecionado de: MTX, NKG2D, RON, IL6R, ErbB3, TNFRSF21 (DR6), CD3, IGFR, DLL4, P1GF, CD20, EGFR, HER2, CD 19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, cMET, NRPl, TNF, TNFSF12 (TWEAK), HGF, IGF-1, IGF-1, 2, IGF2, NGF, Te38, NogoA, RGM A, MAG, OMgp, NgR, NGF, PGE2, IL-1 beta, Semaforina 3A e Semaforina 4. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a LINGO e também se ligam, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a LINGO. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é BIIB033.
[0374]Em uma modalidade específica, o alvo de um anticorpo de um anticorpo contendo o MRD é TNFSF12 (TWEAK). Em outra modalidade, o anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a TNFSF12 (TWEAK) e um alvo selecionado de: MTX, NKG2D, RON, IL6R, ErbB3, TNFRSF21 (DR6), CD3, IGFR, DLL4, PIGF, CD20, EGFR, HER2, CD 19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, cMET, NRP1, TNF, Lingo, HGF, IGF1, IGF1, 2, IGF2, NGF, Te38, n go A, RGM A, MAG, OMgp, NgR, NGF , PGE2, IL-1 beta, Semaforina 3A e Semaforina 4. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam a TNFSF12 (TWEAK) e também se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela presente invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a TNFSF12 (TWEAK). Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é BIIB023.
[0375]Em uma outra modalidade, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é: LDL oxidado, GPIIb, gpllla, PCSK9, Fator VIII, integrina a2bB3, AOC3, ou mesotelina. Em modalidades específicas, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é LDL oxidado BI-204 (Biolnvent), abeiximab GPIIb, gpllla (por exemplo, REOPRO, Eli Lilly), AMG-145 PCSK9 (Amgen), TB-402 do Fator VIII (Biolnvent), vapaliximab, ou a2bB3 tadocizumab integrina (Yamonochi Pharma). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como BI-204, abeiximab, AMG-145, TA- 402, ou tadocizumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação do BI-204, abeiximab, AMG-145, TA-402, vapaliximab, ou tadocizumab. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidos pela invenção.
[0376]Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD está associado com o crescimento do osso e/ou o metabolismo. Em certas modalidades, o anticorpo alvo do anticorpo contendo o MRD é TNFSF11 (RANKL). Em outras modalidades do anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é: DKK1, osteopontina, catepsina K, TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (Troy), ou esclerostina (CDP-7851 UCB Celltech). Em uma outra modalidade anticorpo alvo do anticorpo contendo MRD é TNFSF1 1 (RANKL). Em uma modalidade específica, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é denosumab (por exemplo, AMG-162, Amgen). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo que o denosumab. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de TNFSF11 (RANKL) por denosumab. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo é AMG617 ou AMG785 (por exemplo, CDP7851, Amgen). Em outra modalidade, o anticorpo liga-se especificamente ao mesmo epitopo como AMG617 ou AMG785. Em outra modalidade, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de esclerostina por AMG617 ou AMG785. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidos pela invenção.
[0377]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a TNFSF11 (RANKL). Em uma modalidade específica, um anticorpo contendo MRD se liga a TNFSF11 e um alvo selecionado de: esclerostina (SOST), endotelin-1, DKK1, IL1, IL6, IL7, IL8, IL1 1, IL17A, MCSF, IGF1, IGF2, IGF1, IGF1R 2, TNF, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8a, FGF8b, FGF18, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2- IIIb, IIIc e FGFR2-), FGFR3, TGF-beta, TGF beta R2, BMP2, BMP4, BMP5, BMP9, BMP10, BMPR- 1A, PDGF, PDGFRa, PDGFRB PTH, a proteína relacionada com PTH (PTHrP), e PGE2. Em uma modalidade particular, o anticorpo contendo MRD se liga a TNFSF 11 e DKK1. Em uma modalidade adicional o anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a DKK1. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a TNFSF11 e também se ligam a pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga-se a TNFSF11. De acordo com outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é denosumab, AMG617 ou AMG785.
[0378]Em modalidades adicionais, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo MRD é um antígeno bacteriano, um antígeno viral, um antígeno micoplasma, um antígeno do prião, um antígeno ou parasita (por exemplo, um infectando um mamífero).
[0379]Em outras modalidades, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é um antígeno viral. Em uma modalidade, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é antraz, hepatite b, raiva, vírus de Nipah, West Nile vírus, um vírus mengititis, ou CMV. Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete com a ligação com ABTHRAX® (Human Genome Sciences), exbivirumab, foravirumab, libivirumab, rafivirumab, regavirumab, sevirumab (por exemplo, MSL-109, Protovir), tuvirumab, raxibacumab, Nipah M102.4 vírus, ou MGAWNl® (MacroGenics) a antígeno meta vinculativo. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidas pela invenção. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidas pela invenção.
[0380]Em outras modalidades, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é RSV. Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo o MRD é motavizumab (por exemplo, NUMAX®, MEDI-577; Medlmmune) ou proteína de fusão F de RSV palivizumab (por exemplo, SYNAGIS®, Medlmmune). Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete com a proteína F de RSV motavizumab palivizumab ou fusão, para ligação ao alvo. Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD é felvizumab. Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete com felvizumab para ligação ao alvo. Um MRD que compete para a ligação está com um dos anticorpos acima alvo também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidos pela invenção.
[0381]Em outras modalidades, o alvo do anticorpo do anticorpo contendo o MRD é um antígeno bacteriano ou fúngico. Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação ao antígeno com nebacumab, edobacomab (por exemplo, E5), tcfibazumab (Inhibitcx), panobacumab (por exemplo, KBPA101, CNTA), pagibaximab (por exemplo, BSYX-A1 10, Biosynexus ), urtoxazumab, ou efungumab (por exemplo, MYCOGRAB®, Novartis). Em outras modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo o MRD é nebacumab, edobacomab, tefibazumab (Inhibitex), panobacumab, pagibaximab, urtoxazumab, ou efungumab. Um MRD que compete para a ligação alvo com um dos anticorpos acima está também englobado pela invenção. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, ou mais MRDs que competem para a ligação alvo com um, dois ou mais dos anticorpos acima estão também abrangidas pela invenção.
[0382]Em uma outra modalidade específica, o anticorpo no anticorpo contendo MRD é o anticorpo 38C2 catalítico. Em outra modalidade, o anticorpo liga-se ao mesmo epitopo que 38C2. Em outra modalidade, o anticorpo inibe competitivamente o 38C2.
[0383]Outros anticorpos de interesse incluem anticorpos de ligação A33. Antígeno A33 humano é uma glicoproteína de transmembrana da superfamília de Ig. A função do antígeno A33 humano no tecido do cólon normal e maligno ainda não é conhecido. No entanto, várias propriedades do antígeno A33 sugerem que é um alvo promissor para a imunoterapia do câncer do cólon. Estas propriedades incluem: (i) o padrão de expressão altamente restrito do antígeno A33, (ii) a expressão de grandes quantidades do antígeno A33 em células cancerígenas do cólon, (iii) a ausência de antígeno A33 secretado ou modificado, (iv) o fato que na ligação do anticorpo A33 ao antígeno A33, anticorpo A33 é internalizado e sequestrado em vesículas, e (v) o direcionamento do anticorpo A33 ao antígeno A33 expressando câncer do cólon em estudos clínicos preliminares. Fusão de um MRD direcionada a A33 com um anticorpo catalítico ou não catalítico iria aumentar a eficácia terapêutica dos anticorpos direcionados contra A33.
[0384]Em algumas modalidades, o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga a uma proteína alvo humana. Em algumas modalidades, o MRD se liga tanto a uma proteína humana e a seu ortólogo no murganho, rato, coelho, ou hamster.
[0385]Os anticorpos nas composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são capazes de ligar os seus respectivos alvos quando os MRDs são ligados ao anticorpo. Em certas modalidades, o anticorpo se liga ao seu alvo, independentemente. Em algumas modalidades, o anticorpo é um agonista alvo. Em outras modalidades, o anticorpo é um antagonista alvo. Em certas modalidades, o anticorpo pode ser usado para localizar um anticorpo contendo o MRD para uma área onde o anticorpo alvo está localizado.
[0386]Considera-se que os anticorpos utilizados na presente invenção podem ser preparados por qualquer método conhecido na arte. Por exemplo, moléculas de anticorpos e Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) podem ser "produzidas de forma recombinante", ou seja, produzidas utilizando tecnologia de DNA recombinante.
[0387]Os anticorpos monoclonais que podem ser utilizados como o componente de anticorpo das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) podem ser preparados utilizando métodos de hibridoma, tais como os descritos por Ohler e Milstein, Nature 256: 495 (1975). Usando o método do hibridoma, um ratinho, hamster, ou outro animal hospedeiro apropriado, é imunizado como descrito acima para elicitar a produção de anticorpos pelos linfócitos que irão se ligar especificamente a um antígeno imunizante. Os linfócitos podem ser imunizados in vitro. A seguir à imunização, os linfócitos são isolados e fundidos com uma linha apropriada de células de mieloma, utilizando, por exemplo, polietileno glicol, para formar células de hibridoma que podem então ser selecionadas a partir de linfócitos não fundidos e células de mieloma. Os hibridomas que produzem anticorpos monoclonais direcionados especificamente contra um antígeno escolhido, tal como determinado por imunoprecipitação, imunotransferência, ou por um ensaio de ligação in vitro (por exemplo, radioimunoensaio (RIA); ensaio de imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA)) podem, em seguida, ser propagados in vitro, por exemplo, usando métodos conhecidos (ver, por exemplo, Goding, Monoclonal Antibodies: Principies and Practice, Academic Press, 1986) ou in vivo, por exemplo, como tumores de ascites em um animal. Os anticorpos monoclonais podem então ser purificados a partir do meio de cultura ou fluido de ascites, tal como descrito para os anticorpos policlonais acima.
[0388]Os anticorpos monoclonais Alternativamente, também podem ser feitas usando métodos de DNA recombinante, por exemplo, como descrito na Pat. 4.816.567. Por exemplo, em uma abordagem polinucleotídeos que codificam um anticorpo monoclonal são isolados a partir de células B maduras ou de células de hibridoma, tais como por RT-PCR utilizando iniciadores oligonucleotídicos que amplificam especificamente genes que codificam as cadeias pesada e leve do anticorpo, e a sua sequência é determinada utilizando procedimentos convencionais. Os polinucleótidos isolados que codificam as cadeias pesadas e leves são então clonados em vetores de expressão adequados, os quais, quando transfectados para células hospedeiras tais como células E. coli, células COS de símio, células de ovário de hamster chinês (CHO), ou células de mieloma que não produzem de outro modo não proteína imunoglobulina, os anticorpos monoclonais são produzidos pelas células hospedeiras. Em outras abordagens, anticorpos monoclonais ou fragmentos de anticorpos recombinantes possuindo a imunorreatividade desejada podem ser isolados a partir de bibliotecas de apresentação de fagos que expressam CDRs da espécie desejada, utilizando técnicas conhecidas na arte (McCafferty et al, Nature 348:. 552-554 (1 990); Clackson et al, Nature 352: 624-628 (1991); e Marks et al, J. Mol Biol 222:581-597 (1991)).
[0389]O polinucleótido (s) que codifica um anticorpo monoclonal pode ainda ser modificado em um certo número de maneiras diferentes, usando tecnologia de DNA recombinante para gerar anticorpos alternativos. Por exemplo, sequências de polinucleótidos que codificam um ou mais MRDs e ligantes opcionais, podem ser operacionalmente fundidos, por exemplo, ao terminal 5 'ou 3' da sequência que codifica sequências de anticorpos monoclonais. Em algumas modalidades, os domínios constantes das cadeias leves e pesadas de, por exemplo, um anticorpo monoclonal de ratinho pode ser substituído (1) pelas regiões de, por exemplo, um anticorpo humano para gerar um anticorpo quimérico ou (2) para um polipeptídeo não imunoglobulina para gerar um anticorpo de fusão. As técnicas de direcionamento de local e mutagênese de alta densidade da região variável são conhecidas na arte e podem ser utilizadas para otimizar a especificidade, afinidade, etc., de um anticorpo monoclonal.
[0390]Em certas modalidades, o anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo humano. Por exemplo, os anticorpos humanos podem ser preparados diretamente utilizando várias técnicas conhecidas na arte. Os linfócitos B humanos imortalizados imunizados in vitro ou isolados a partir de um indivíduo imunizado que produz um anticorpo direcionado contra um antígeno alvo pode ser gerado (Ver, por exemplo, Cole et al, Monoclonal Antibodies and Câncer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985 ); Boemer et al, J. Immunol 147 (l):86-95 (1991); e Patente US N °s 5.750.373 e 6.787.637). Em uma modalidade, o anticorpo humano pode ser derivado a partir da "abordagem de minilocus", em que um lócus de Ig exógeno é imitado através de inclusão de genes individuais do lócus de Ig (ver, por exemplo, Pat. No. 5.545.807). Métodos de preparação de um anticorpo humano a partir de uma biblioteca de fagos, e opcionalmente otimizam a afinidade ligação são conhecidos na arte e descritos, por exemplo, em Vaughan et al, Nat. Biotech. 14: 309-314 (1996); Folhas et al, Proc. Nat'l. Acad. Sci. 95: 6157-6162 (1998); Hoogenboom et al., Nat. Biotechnology 23:1105-1116 (2005); Hoogenboom et al, J. Mol. Biol. 227:381 (1991); Persic et al, Gene 187: 9-18 (1997); Jostock et al, J. Immunol. Métodos 289: 65-80 (2004); Marks et al, J. Mol. Biol, 222: 581 (1991)); et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 88: 7978-7982 (1991); et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 91: 3809-3813 (1994); Yang et al, J. Mol. Biol. 254: 392403 (1995); e Barbas et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 89: 4457-4461 (1992). As técnicas para a geração e utilização de bibliotecas de fagos de anticorpos também são descritas em: US Pat. 5,545,807, 5969, 108, 6, 172, 197, 5885793, 6521, 404, 6544731, 6555313, 6582915, 6593081, 6300064, 6653068, 6706484, 7264963 e.; e Rothe et al, J. Mol. Bio. 130: 448-54 (2007) (cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade). Estratégias de maturação de afinidade e estratégias de rearranjo de cadeias (Marks et al, Bio/Technology 10: 779-783 (1992) (que aqui se considera incorporado por referência na sua totalidade) são conhecidos na técnica e podem ser empregues para gerar anticorpos humanos de elevada afinidade.
[0391]Os anticorpos também podem ser feitos em ratos, que são transgênicos para genes de imunoglobulina humana ou fragmentos destes genes, e que são capazes, após imunização, de produzir um repertório amplo de anticorpos humanos na ausência de produção de imunoglobulina endógena. Esta abordagem é descrita em: Lonberg, Nat. Biotechnol 23: 1117-1125 (2005), Green et al, Nature Genet. 7:13-21 (1994), e Lonberg et al. Nature 368: 856859 (1994); Pat EUA. N °s. 5.545.807, 5.545.806, 5.569.825, 5.625, 126, 5.633.425, 5.661.016, 6.596.541, 7.105.348, e 7.368.334 (cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade).
IV. Ligantes
[0392]As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da invenção podem conter um único ligante, ligantes múltiplos, ou nenhum ligante. Assim, um MRD pode ser operacionalmente ligado (ligante) ao anticorpo diretamente, ou operativamente ligado através de um peptídeo ligante opcional. Da mesma forma, um MRD pode ser operativamente ligado a um ou mais MRD (s) diretamente, ou operativamente ligado a um ou mais MRD (s) por um ou mais peptídeo (s) ligante opcional. Os ligantes podem ser de qualquer tamanho ou composição, desde que eles são capazes de se ligar operativamente a um MRD e um anticorpo de tal modo que o MRD permite o anticorpo contendo MRD a se ligar ao MRD alvo.
[0393]Em algumas modalidades, os ligantes têm cerca de 1 a 20 aminoácidos, cerca de 1 a 15 aminoácidos, cerca de 1 a 10 aminoácidos, de cerca de 1 a 5 aminoácidos, cerca de 2 a 20 aminoácidos, de cerca de 2 a 15 aminoácidos , cerca de 2 a 10 aminoácidos, ou cerca de 2 a 5 aminoácidos. O ligante também pode ter cerca de 4 a 15 aminoácidos. Em certas modalidades, o peptídeo ligante contém um ligante peptídico curto com a sequência de GGGS (SEQ ID NO: 1), um peptídeo ligante forma com a sequência SSGGGGSGGGGGGSS (SEQ ID NO: 2), ou um peptídeo de ligação de comprimento com a sequência SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID NO: 19). Em uma outra modalidade, o MRD é inserido na quarta volta da região constante da cadeia leve. Por exemplo, o MRD pode ser inserido entre as letras sublinhadas na seguinte sequência de aminoácidos: RTVAAPSVFIFPPSDEQLSGTASVVCLLNNFYPREAVQWKVDKLGTNSQESVT EQDSKDSTYSLSSTLTLSADYEKHKVYACEVTHQGLSLPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 102).
[0394]O ligante também pode ser um ligante não-peptídeo, tal como um ligante alquila, ou um ligante PEG. Por exemplo, os ligantes de alquila tal como --NH--(CH2)sC(O)-, em que s = 2-20 pode ser utilizado. Estes ligantes de alquila podem ainda ser substituídos por qualquer grupo não impedido estereoquimicamente, tais como alquila inferior (por exemplo, C1-C6) acila inferior, halogêneo (por exemplo, Cl, Br), CN, NH2, fenila, etc. Um exemplo de ligante não peptídeo é um ligante de PEG. Em certas modalidades, o ligante de PEG tem um peso molecular de cerca de 100 a 5000 kDa, ou cerca de 100 a 500 kDa.
[0395]Em algumas modalidades, o ligante é um "ligante clivável"que facilita a liberação de um MRD ou agente citotóxico na célula. Por exemplo, um ligante instável em meio ácido (por exemplo, hidrazona), ligante sensível a proteases (por exemplo, sensíveis a peptidase), ligante fotolábil, ligante de dimetila ou ligante contendo dissulfureto (Chari et al, Câncer Research. 52: 127-131 (1992);. Pat US 5.208.020; Pedido de Publ. US No. 20090110753) pode ser usado em que é desejável que a ligação covalente entre um MRD ou agente citotóxico e a composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é clivada intracelularmente, quando a composição é internalizada na célula. Os termos "intracelularmente clivada" e "clivagem intracelular" referem-se a um processo metabólico ou a reação dentro de uma célula em um conjugado anticorpo-fármaco (ADC) pelo qual a ligação covalente, ou seja, ligada por meio de um ligante entre o MRD e agente citotóxico, MRD e anticorpo, o anticorpo e o agente citotóxico, ou entre dois MRDs é quebrada, resultando no MRD e/ou agente citotóxico livre dissociado do anticorpo dentro da célula. As porções clivadas de zicorpo-ADC são assim metabolitos intracelulares.
[0396]Otimização de ligante pode ser avaliada utilizando as técnicas descritas nos Exemplos 1-18 e técnicas também conhecidas na arte. Os ligantes de preferência não devem perturbar a capacidade um MRD e/ou um anticorpo em se ligar moléculas alvo. V. Anticorpos Contendo MRDs
[0397]Utilizando os métodos aqui descritos, multi-especificidade e maior multi-valência pode ser alcançada através da fusão de MRDs a anticorpos.
[0398]Os MRDs das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) preparados de acordo com a presente invenção, podem ser operacionalmente ligados a um anticorpo através do peptídeo N-terminal ou C-terminal. O MRD pode ser operativamente ligado ao anticorpo na extremidade C-terminal da cadeia pesada do anticorpo, a extremidade N-terminal da cadeia pesada do anticorpo, a extremidade C- terminal da cadeia leve do anticorpo, ou a extremidade N-terminal da cadeia leve do anticorpo. Optimização da composição de MRD, posição de fixação MRD-anticorpo e a composição ligante pode ser realizada usando os ensaios de ligação descritos nos Exemplos 1-18 e bioensaios e outros ensaios conhecidos na arte para o alvo adequado no que diz respeito à atividade biológica.
[0399]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é um anticorpo contendo MRD descrito no Pedido US N ° 61/489.249, depositado em 24 de Maio de 2011, o qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0400]Em uma modalidade, composições multivalente e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) contém um MRD operacionalmente ligado a qualquer da cadeia pesada de anticorpo, cadeia leve do anticorpo, ou ambas cadeias pesada e cadeia leve. Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD ligado a um dos terminais da cadeia de anticorpo. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD da invenção contém pelo menos um MRD operacionalmente ligado a dois dos terminais da cadeia de anticorpo. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD operacionalmente ligado a três dos terminais da cadeia de anticorpo. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD operativamente ligado a cada um dos quatro terminais da cadeia de anticorpo (ou seja, os terminais N e C da cadeia leve e terminais N e C da cadeia pesada).
[0401]Em certas modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD tem pelo menos um MRD operativamente ligado ao terminal N da cadeia leve. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo contendo MRD tem pelo menos um MRD operativamente ligado ao terminal N da cadeia pesada. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo contendo MRD tem pelo menos um MRD operativamente ligado ao terminal C da cadeia leve. Em uma outra modalidade específica, o anticorpo contendo MRD tem pelo menos um MRD operativamente ligado ao terminal C da cadeia pesada.
[0402]Um anticorpo contendo MRD pode ser "multiespecífico"(por exemplo, bi específico, tetra específico, tri específico, penta específico ou de maior multi-especificidade), o que significa que reconhece e se liga a dois ou mais diferentes epitopos presentes em um ou mais antígenos diferentes (por exemplo, proteínas). Assim, se um anticorpo contendo MRD é "monoespecífico"ou "multiespecífico"(por exemplo, bi específico, tri específico, e tetra específico) refere-se ao número de diferentes epitopos que o anticorpo contendo MRD se liga. Os anticorpos podem ser multiespecíficos para epitopos diferentes de um polipeptídeo alvo (por exemplo, tal como aqui descrito) ou podem ser específicos para um polipeptídeo alvo, bem como para um epitopo heterólogo, tal como um polipeptídeo heterólogo alvo ou material de suporte sólido. A presente invenção contempla a preparação de anticorpos mono-, bi-, tri-, tetra-, e penta-específicos, bem como anticorpos de maior multi- especificidade. Em uma modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a dois epítopos diferentes. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga-se a dois epítopos diferentes simultaneamente. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD liga-se a três epítopos diferentes. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga-se a três epítopos diferentes simultaneamente. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD se liga a quatro epítopos diferentes. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD se liga a quatro epítopos diferentes simultaneamente. Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD se liga a cinco epitopos diferentes (ver, por exemplo, a fig. 2D). Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD se liga a cinco epítopos diferentes simultaneamente.
[0403]Em outras modalidades dois MRDs do anticorpo contendo MRD ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, pelo menos, dois MRDs do anticorpo contendo MRD-se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, pelo menos, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades dois MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades, pelo menos, dois MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades, pelo menos, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD-se ligam ao mesmo epitopo.
[0404]Em outras modalidades, o anticorpo e um MRD do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, o anticorpo e dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, o anticorpo e pelo menos um MRD do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, o anticorpo e, pelo menos, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo antígeno. Em outras modalidades, o anticorpo e um MRD do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades, o anticorpo e dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades, o anticorpo e pelo menos um MRD do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo. Em outras modalidades, o anticorpo e, pelo menos, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez MRDs do anticorpo contendo MRD se ligam ao mesmo epitopo.
[0405]A presente invenção também fornece dois ou mais MRDs que estão ligados a qualquer extremidade do terminal do anticorpo. Assim, em uma modalidade não exclusiva, dois, três, quatro, ou mais MRDs estão ligados operativamente ao terminal N da cadeia pesada. Em outra modalidade não exclusiva, dois, três, quatro, ou mais MRDs estão operativamente ligados ao terminal N da cadeia leve. Em outra modalidade não exclusiva, dois, três, quatro, ou mais MRDs estão operativamente ligados ao terminal C da cadeia pesada. Em outra modalidade não exclusiva, dois, três, quatro, ou mais MRDs estão operativamente ligados ao terminal C da cadeia leve. Prevê-se que estes MRDs podem ser os mesmos ou diferentes. Além disso, qualquer combinação de número de MRD e ligações podem ser usados. Por exemplo, dois MRDs podem ser operativamente ligados ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que contém um MRD ligado ao terminal C da cadeia leve. Do mesmo modo, três MRDs podem ser operativamente ligados ao terminal C da cadeia leve e dois MRDs podem ser operativamente ligados ao terminal N da cadeia leve.
[0406]Composições multivalentes ou multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem conter um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais do que dez MRDs.
[0407]Em uma modalidade, a composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém um MRD (ver, por exemplo, as Figs. 2B e 2C). Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém dois MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém três MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém quatro MRDs (ver, por exemplo, as Figs. 2B e 2C). Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém cinco MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém seis MRDs. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém entre dois e dez MRDs.
[0408]Em uma modalidade, a composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, dois MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos três MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, quatro MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, cinco MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, seis MRDs.
[0409]Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém dois MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém três diferentes MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém quatro MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém cinco MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém seis MRDs diferentes. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém entre dois e dez MRDs diferentes.
[0410]Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, dois MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, três diferentes MRDs. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, quatro MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, cinco MRDs diferentes. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém, pelo menos, seis MRDs diferentes.
[0411]Assim, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem ser MRD monoméricos (isto é, contendo um MRD no terminal de uma cadeia peptídica, opcionalmente ligado por um ligante) ou MRD multimérico (por exemplo, contendo mais de um MRD em conjunto, opcionalmente ligado por um ligante). As composições multivalentes e multiespecíficas multiméricas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem ser homo- multimérica (por exemplo, contendo mais do que um dos mesmos MRDs em conjunto opcionalmente ligado por ligante (s) (por exemplo, homodímeros, homotrímeros, homotetrâmeros etc.)) ou hetero multimérico (isto é, contendo dois ou mais MRDs em que existem, pelo menos, dois diferentes MRDs opcionalmente ligados por ligante (s) em que todos ou alguns dos MRDs ligados a um determinado terminal são diferentes (por exemplo, o heterodímero, heterotrímero, heterotetrâmero, etc.)). Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém dois MRDs monoméricos diferentes situados em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém três MRDs monoméricos diferentes situados em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém quatro MRDs monoméricos diferentes situados em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém cinco MRDs monoméricos diferentes situados em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém seis MRDs monoméricos diferentes situados em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0412]Em uma modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD dimérico e monomérica localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD homodimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD heterodimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0413]Em uma modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD multimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD homomultimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém pelo menos um MRD heteromultimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0414]Em uma modalidade alternativa, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) contém MRDs operacionalmente ligado a pelo menos dois terminais de imunoglobulina diferente. Em uma modalidade específica, os MRDs fundidos com, pelo menos, uma das imunoglobulinas são um multímero. Em uma modalidade, os MRDs fundidos com pelo menos um das imunoglobulinas são um homomultímero (isto é, mais do que um dos mesmos MRD operacionalmente ligados em conjunto, opcionalmente ligados através de um ligante). Em uma outra modalidade, os MRDs fundidos com, pelo menos, uma das imunoglobulinas são um heteromultimérico (isto é, dois ou mais diferentes MRDs operacionalmente ligados em conjunto, opcionalmente ligados através de um ligante). Em uma modalidade adicional, os MRDs fundidos com, pelo menos, uma das imunoglobulinas são um dímero. Em uma outra modalidade, os MRDs fundidos com pelo menos um das imunoglobulinas são um homodímero. Em uma outra modalidade, os MRDs fundidos com, pelo menos, uma das imunoglobulinas são um heterodímero.
[0415]Os vários MRDs podem ter como alvo o mesmo sítio de ligação ao alvo, ou dois ou mais diferentes sítios de ligação ao alvo. Onde os MRDs ligam-se a diferentes sítios de ligação ao alvo, os sítios de ligação podem ser os mesmos ou diferentes moléculas alvo.
[0416]Da mesma forma, o anticorpo e o MRD em uma composição multivalente e multiespecífica monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) podem ligar-se à mesma molécula alvo ou a diferentes moléculas alvo.
[0417]Em algumas modalidades, pelo menos um MRD e o anticorpo na composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) pode ligar-se a seus alvos simultaneamente. Em uma modalidade, cada MRD na composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) e o anticorpo pode ligar- se ao seu alvo simultaneamente. Portanto, em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga-se a dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais alvos simultaneamente.
[0418]A capacidade uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) para se ligar a múltiplos alvos pode ser ensaiada simultaneamente utilizando métodos conhecidos na arte, incluindo, por exemplo, os métodos descritos nos exemplos abaixo. Composições Multivalentes e multiespecíficas possuindo Especificidade monovalente
[0419]Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da invenção tem um único sítio de ligação para (ou seja, ligam-se monovalentemente) um alvo.
[0420]Em algumas modalidades, os domínios de um componente de anticorpo de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente de ligação ao antígeno da invenção liga-se a diferentes epítopos alvo (isto é, o anticorpo é biespecífico). O termo "anticorpo biespecífico"destina-se a incluir qualquer anticorpo, que tem duas especificidades de ligação diferentes, isto é, o anticorpo liga-se dois epitopos diferentes, que podem estar localizados no mesmo antígeno alvo ou, mais vulgarmente, em diferentes antígenos-alvo. Os métodos para preparar anticorpos biespecíficos são conhecidos na arte. (Ver, por exemplo, Millstein et al, Nature, 305:537-539 (1983); Traunecker et al, EMBO J. 10: 3655-3659 (1991); Suresh et al, Methods in Enzymology. 121:210 (1986 ); Kostelny et al, J. Immunol 148 (5): 1547-1553 (1992); Hollinger et al, Proc Natl Acad Sci EUA 90: 6444-6448 (1993); Gruber et al, J . Immunol. 152: 5368 (1994); Tutt et al, J. Immunol 147:60-69 (1991); Patente dos EUA N ° s 4.474.893, 4.676.980, 4.714.681, 4.925.648, 5.573.920, 5.601.819, 5.731, 168, 5.807.706, e 5,821, 333; Publ Int. N.os WO94/04690, WO91/00360, WO92/05793, WO92/08802, WO92/200373, WO93/17715, WO00/44788, e WO02/096948, EP 1870459A1 e EP 03089, o conteúdo de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade).
[0421]Um método para a geração de anticorpos biespecíficos foi denominado a estratégia de "botões-nos-furos"(ver, por exemplo, Intl. Publ. O documento WO2006/028936). O pareamento incorreto de cadeias pesadas de Ig é reduzido nesta tecnologia por mutação de aminoácidos selecionados que formam a interface dos domínios CH3 em IgG. Nas posições dentro do domínio CH3 em que as duas cadeias pesadas interagem diretamente, um aminoácido com uma cadeia lateral pequena (orifício) é introduzido na sequência de uma cadeia pesada e um aminoácido com uma grande cadeia lateral (botão) para o homólogo interagindo na localização do resíduo na outra cadeia pesada. Em algumas modalidades, as composições da invenção têm cadeias de imunoglobulina em que os domínios CH3 foram modificados por mutação de aminoácidos selecionados que interagem na interface entre dois polipeptídeos, de modo a formar de preferência um anticorpo biespecífico. Os anticorpos biespecíficos podem ser compostos de cadeias de imunoglobulina da mesma subclasse (por exemplo, IgG1 ou IgG3) ou subclasses diferentes (por exemplo, IgG1 e IgG3, ou IgG3 e IgG4)
[0422]Em uma modalidade, um componente de anticorpo biespecífico de uma composição multiespecífica e multivalentes (por exemplo, anticorpo contendo MRD) compreende uma mutação T366W na "cadeia de botões"e T366S, L368A, mutações Y407V na "cadeia de furo", e opcionalmente uma ponte de dissulfureto intercadeias adicional entre o CH3 por, por exemplo, a introdução de uma mutação Y349C para a "cadeia de botões"e uma mutação E356C ou uma mutação S354C para a "cadeia de furo;" R409D, mutações K370E na "cadeia de botões"e D399, mutações E357K na "cadeia de furos"; R409D, mutações K370E na "cadeia de botões"e D399K, mutações E357K na "cadeia de furos"; uma mutação T366W na "cadeia botões"e T366S, L368A, mutações Y407V na "cadeia de furos"; R409D, mutações K370E na "cadeia de botões"e D399K, mutações E357 na "cadeia de furos"; Y349C, mutações T366W em uma das cadeias e E356C, T366S, L368A, Y407V mutações na cadeia homólogo; Y349C, mutações T366W em uma cadeia e S354C, T366S, L368A, mutações Y407V na cadeia de contrapartida; Y349C, mutações T366W em uma cadeia e S354C, T366S, L368A, mutações Y407V na cadeia de contrapartida; e Y349C, mutações T366W em uma cadeia e mutações S354C, T366S, L368A, Y407V na cadeia homóloga (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[0423]Em algumas modalidades, um componente de anticorpo biespecífico de uma composição da presente invenção (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é um anticorpo IgG4 ou um anticorpo IgG4 modificado, ou contém uma cadeia pesada de IgG4 ou uma cadeia pesada de IgG4 modificado. Anticorpos IgG4 são moléculas dinâmicas que se submetem a troca braço Fab trocando uma cadeia pesada de IgG4 e cadeia leve em anexo de cadeia par pesada-leve de outra molécula IgG4, resultando assim em anticorpos biespecíficos. Consequentemente, troca de braço Fab trocando anticorpos contendo MRD-IgG4 acontece in vivo ou in vitro sob condições fisiológicas que vão levar a composições de anticorpos biespecíficos. Em modalidades particulares, uma cadeia pesada de IgG4 de uma composição da invenção contém uma substituição S228P. Esta substituição foi mostrada para inibir significativamente troca de braço Fab aos anticorpos IgG4 mutantes resultantes, e para assim reduzir a probabilidade troca de braço Fab entre um anticorpos recombinante e IgG4 endógeno. (Ver, por exemplo, Labrijn et al, Nat Biotechnol 27 (8): 767-71 (2009)). Em modalidades adicionais, uma cadeia pesada de IgG4 de uma composição da invenção contém uma substituição de Arg na posição 409 (por exemplo, com Lys, Ala, Thr, Met ou Leu), a Phe na posição 405 (por exemplo, com Lys, Ala , Thr, Met ou Leu) ou a Lys na posição 370. Em outras modalidades, a região CH3 de uma cadeia pesada de IgG4 de uma composição da invenção foi substituída com a região CHH3 de IgG1, IgG2 ou IgG3. Em modalidades adicionais, as interações entre um ou mais MRDs localizados na extremidade C-terminal das cadeias pesadas distintas (por exemplo, IgG4 ou IgG4 e IgG3) favorecem e/ou estabilizam heterodímeros entre as cadeias pesadas, ou de outra forma reduz troca de braço Fab do heterodímero.
[0424]Exemplos de componentes de anticorpos biespecíficos de composições multivalentes e multiespecíficas da invenção incluem, IgG4 e IgG1, IgG2 e IgG4, IgG2 e IgG4, IgG3 e IgG4, IgG1 e IgG3 de heterodímeros de cadeia. Tais anticorpos de cadeia pesada heterodimérica, rotineiramente podem ser manipulados, por exemplo, modificando os aminoácidos selecionados que formam a interface dos domínios CH3 em IgG4 humana de IgG1 e a IgG3 ou de modo a favorecer a formação de cadeia pesada heterodimérica. Em modalidades adicionais, as interações entre um ou mais MRDs localizados na extremidade C-terminal das cadeias pesadas ou estabiliza heteroméricos ou favorece a formação de estrutura heteromultimérica, respectivamente.
[0425]Os anticorpos IgG4 são conhecidos por ter diminuído a atividade ADCC e meia-vida em comparação com outras subclasses de imunoglobulinas, tais como, IgG1 e IgG3. Assim, baseados em formatos de subclasse IgG4 fornecem um formato atraente para o desenvolvimento de agentes terapêuticos que se ligam e bloqueiam os receptores de células, mas não destroem a célula alvo. Alternativamente, nas modalidades para que aumentaram a atividade efetora desejada, uma cadeia pesada de IgG4 de uma composição da presente invenção pode ser modificada tal como aqui descrito ou de outra forma conhecidos na arte, de modo a aumentar a função efetora (por exemplo, modificação dos resíduos em posições 327, 330 e 331; numeração de acordo com índice da EU de Kabat). Da mesma forma, onde o aumento da meia-vida é desejado, uma cadeia pesada de IgG4 de uma composição da invenção pode ser manipulada, como aqui descrito, ou de outra forma conhecido na arte para se ligar de forma mais seletiva ao FcRn a pH 6,0, mas não a pH 7,4, por exemplo, incorporando mutações localizadas na interface entre os domínios CH2 e CH3, tais como substituições em T250Q/M428L, bem como M252Y/S254T/T256E e H433K/N434F (numeração de acordo com o índice de Kabat UE).
[0426]Tal como exemplificado anteriormente, prevê-se que em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da presente invenção tem um único sítio de ligação para (ou seja, ligam-se monovalentemente) um alvo. Em algumas modalidades, o sítio de ligação único (isto é, sítio de ligação monovalente) é um antígeno de anticorpo de domínio de ligação. Em outras modalidades, o sítio de ligação único é um MRD. Assim, as composições multivalentes e multiespecíficas da invenção englobam (e podem ser rotineiramente modificados para incluir anticorpos) que contêm MRD que contêm 1, 2, 3, 4 ou mais sítios de ligação individuais para um alvo. O sítio de ligação único (s) pode ser fornecido por um ou mais MRDs localizados em qualquer um ou mais dos quatro terminais da cadeia pesada de imunoglobulina ou 4 terminais de cadeia leve de imunoglobulina. Além disso, sítio de ligação único pode ser fornecido por um dos domínios de ligação ao antígeno do anticorpo (em que um MRD do anticorpo contendo MRD liga ao mesmo epitopo alvo do outro domínio de ligação ao antígeno do anticorpo. Além disso, em uma modalidade específica, as composições da invenção englobam (e podem ser rotineiramente modificadas para incluírem MRD) anticorpos que contêm 1, 2, 3, 4 ou mais sítios de ligação individuais a um alvo e não se ligam a outro alvo bivalente.
[0427]Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem um único sítio de ligação para (ou seja, liga-se monovalentemente) um alvo de superfície celular que se forma (por exemplo, multímeros homômeros ou heterômeros). Em algumas modalidades, o sítio de ligação se liga a um único alvo da superfície celular que requer a multimerização para sinalização. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação que se liga a um alvo de superfície celular e inibe a ligação de uma outra molécula (tal como um ligante) para o alvo da superfície da célula. Em outras modalidades, a ligação do sítio de ligação único inibe a multimerização do alvo (por exemplo, multimerização homomérica e heteromérica). Em modalidades adicionais, a composição tem sítios de ligação individuais para diferentes alvos (ou seja, se liga mais monovalentemente a um alvo diferente). Em algumas modalidades, os múltiplos sítios de ligação individuais dos alvos da composição ligam na mesma célula. Em modalidades adicionais, os múltiplos sítios de ligação individuais de os alvos de ligação de composição de células diferentes. Numerosos receptores são conhecidos na técnica que requerem multimerização para afetar a sua função normal. Tais receptores são previstos para serem alvos de sítios de ligação individuais nas composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da invenção. Em algumas modalidades, a composição possui um único sítio de ligação para um receptor tirosina-quinase. Em algumas modalidades, a composição possui um único sítio de ligação para um receptor do fator de crescimento. Em modalidades adicionais da composição tem um único sítio de ligação para um receptor acoplado a proteína G. Em modalidades adicionais da composição tem um único sítio de ligação para um receptor de quimiocina. Em outras modalidades, a composição possui um único sítio de ligação para um membro da superfamília de receptores de TNF. Em modalidades particulares, a composição tem um único sítio de ligação para um receptor selecionado a partir de: RAGE, c-Met, ErbB2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb e FGFR2-IIIc), FGFR3, PDGFRA, PDGFRB, netrin, CD28, TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1 B (TNFR2), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF21 ou TNFRSF25, TNFRSF7 (CD27), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3), e LRP6.
[0428]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação (ou seja, se liga monovalentemente) a um alvo de superfície celular que se forma um multímero e múltiplos sítios (ou seja, se liga multivalentemente) a dois ou mais alvos diferentes. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente monovalente e tem um único sítio de ligação a um alvo da superfície da célula e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes. Em outras modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão localizados sobre a superfície de células. Em outras modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos ligados pelo multiespecífico composição multivalente e monovalentes são alvos solúveis (por exemplo, fatores, quimiocinas, citocinas, e de crescimento). Em modalidades adicionais, a composição liga-se a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos aqui descritos. Em outras modalidades, os alvos ligados pela composição são antígenos tumorais (incluindo antígenos de tumores e antígenos associados a tumores). Em modalidades adicionais, um alvo ligado pela composição está associada com uma doença ou distúrbio do sistema imunológico. Em outras modalidades, um alvo ligado pelo que a composição é associado com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0429]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD tem um único sítio de ligação para TNFRSF21 (DR6). De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD tem um único sítio de ligação para DR6 e se liga a um alvo selecionado de: Idade (S100 A, anfoterina), IL1, IL6, IL18, IL12, IL23, TNFSF12 (TWEAK), o TNF alfa, VEGF, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (ligante de CD40), interferon gama, GMCSF, FGF, CXCL13, MCP 1, CCR2, NogoA, RGM A, OMgp MAG, CPSG, LTNGO, alfa-sinucleína, uma semaforina (por exemplo, Semaforina 3A, Semaforina 4), uma efrina, VLA4, CD45, RB, C5, CD52 e CD200. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a DR6 e também se ligam, pelo menos, a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e distúrbios, incluindo distúrbios e doenças neurológicas tais como a esclerose múltipla e outras doenças neurodegenerativas. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a DR6.
[0430]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD tem um único sítio de ligação para TNFRSF25 (DR3). De acordo com outras variantes, o anticorpo contendo MRD tem um único sítio de ligação para a DR3 e se liga a um alvo selecionado de: TNF, IFN alfa, IFN gama, IL-1, IL1beta, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23 e IL32 . Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a DR3 e também se ligam a pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e distúrbios, incluindo doença inflamatória do intestino e doenças autoimunes tais como artrite reumatóide. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga DR3.
[0431]De acordo com outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpos contendo MRD) tem sítio de ligação múltipla a (ou seja, liga-se multivalentemente) um alvo de superfície celular que se forma (por exemplo, multímeros homômeros ou heterômeros). Em algumas modalidades, os múltiplos sítios de ligação ligam a um alvo de superfície celular que requer a multimerização para sinalização. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem múltiplos sítios de ligação para um alvo da superfície da célula. Em outras modalidades, a ligação dos vários sítios de ligação resultam na multimerização do alvo (por exemplo, a multimerização homomérica e heteromérica). Em modalidades adicionais, a composição possui múltiplos sítios de ligação para diferentes alvos (ou seja, se liga multivalentemente a mais de um alvo diferente). Em algumas modalidades, os múltiplos sítios de ligação individuais dos alvos da composição ligam na mesma célula. Em modalidades adicionais, os múltiplos sítios de ligação individuais ligam alvos de composição de células diferentes. Numerosos receptores são conhecidos na técnica que requerem multimerização para afetar a sua função normal. Tais receptores são previstos para serem alvos das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD). Em algumas modalidades, a composição possui múltiplos sítios de ligação para um receptor tirosina-quinase. Em algumas modalidades, a composição possui um sítio de ligação múltiplo de um receptor do fator de crescimento. Em modalidades adicionais a composição tem múltiplos sítios de ligação para um receptor acoplado a proteína G. Em modalidades adicionais a composição tem múltiplos sítios de ligação para um receptor de quimiocina. Em outras modalidades, a composição possui múltiplos sítios de ligação para um membro da superfamília de receptores de TNF.
[0432]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD liga-se a TNFRSF10A (DR4). Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga DR4 e um alvo selecionado de: ErbB2, EGFR, IGF 1R, TNFRSF10b (DR5), CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF9 (4 IBB), IL6, e IGF1, 2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a DR4 e também se ligam a, pelo menos, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e distúrbios, incluindo câncer, como câncer de mama, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, linfomas de células B, leucemia de células pilosas, leucemia linfocítica crônica de células B e melanoma. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a DR4. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é 1008 ou CS mapatumumab.
[0433]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD se liga TNFRSF10B (DR5). Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD liga a DR5 e um alvo selecionado de: ErbB2, EGFR, IGF1R, TNFRSF10A (DR4), CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD 138, sindecano, CD39, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF9 (41BB), IL6, e IGF1, 2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam de DR5 e também se ligam a, pelo menos, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças e distúrbios, incluindo câncer, como câncer de mama, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, linfomas de células B, leucemia de células pilosas, leucemia linfocítica crônica de células B, e melanoma. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga a DR5. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é LBY135, AMG66, Apomab, PRO95780, lexatumumab, conatumumab ou tigatuzumab.
Composições que Redirecionam Função de Célula Efetora
[0434]A invenção também abrange composições multivalentes e multiespecíficas, tais como, composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que são capazes de justaposição de células efetoras hospedeiras com células que são desejadas para serem eliminadas (por exemplo, células imunes, células cancerosas , células doentes, agentes infecciosos, e as células infectadas com agentes infecciosos). As funcionalidades multivalentes e multiespecíficas das composições da invenção são particularmente bem adequadas para redirecionar as respostas imunes do hospedeiro e proporcionar numerosas vantagens em relação às plataformas das composição multiespecíficas alternativas em desenvolvimento. Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, uma célula imune ou um antígeno de tumor em uma célula tumoral) e (2) um alvo em uma célula efetora, de modo a dirigir uma resposta imune à célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. O alvo (s) ao qual se liga composição multivalente e monovalente multiespecífica pode ser monomérica ou multimérica. Além disso, o alvo a que uma composição multivalente e multiespecífica monovalente monomérica liga pode ser homomultimérica ou heteromultimérica. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente se liga monovalente, a pelo menos, 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em modalidades adicionais, um ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente é um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos de tumor e antígenos de tumor/ associados ao câncer). As composições multivalentes e multiespecíficas também tem aplicações no tratamento de doenças e distúrbios incluindo, mas não se limitando a, doenças do sistema imunológico, sistema esquelético, sistema cardiovascular, e no sistema nervoso, bem como de doenças infecciosas. Assim, em algumas modalidades, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica é associado com uma doença ou distúrbio do sistema imune (por exemplo, uma doença ou desordem do sistema imune divulgado aqui, tal como a inflamação ou uma doença auto- imune (por exemplo, artrite reumatóide)). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica é associado com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose ou outra doença ou distúrbio do sistema esquelético como divulgado aqui). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica é associado com uma doença ou distúrbio do sistema cardiovascular (por exemplo, uma doença ou distúrbio do sistema cardiovascular aqui revelado). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica é associado com uma doença ou distúrbio do sistema nervoso (por exemplo, uma doença ou distúrbio do sistema nervoso aqui revelado). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica está associado com um agente infeccioso ou doença (por exemplo, uma doença infecciosa ou um agente aqui descrito).
[0435]As células efetoras que podem ser ligadas por uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) da invenção e incluem, mas não se limitam a, células T, monócitos/macrófagos e as células assassinas naturais.
[0436]Em uma modalidade, o alvo de uma célula para a qual uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) dirige uma resposta imune é um antígeno tumoral. As composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são previstos para serem capazes de se ligar virtualmente a qualquer tipo de tumor e qualquer tipo de antígeno de tumor. Exemplos de tipos de tumores que podem ser alvos incluem, mas não estão limitados a, um ou mais cânceres selecionados do grupo: câncer colorretal, esofágico, gástrico, câncer da cabeça e pescoço, câncer da tiróide, mieloma múltiplo, câncer renal, câncer do pâncreas, do pulmão câncer, câncer biliar, glioma, melanoma, câncer de fígado, câncer de próstata, câncer de mama e câncer de bexiga, câncer de ovário, câncer de colo uterino e câncer endometrial. Exemplos de tipos de tumores que podem ser alvos incluem cânceres hematológicos. Cânceres hematológicos que podem ser alvos incluem, mas não estão limitados a, um ou mais cânceres selecionados a partir do grupo do linfoma de Hodgkin, linfoma medular não-Hodgkin, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica, e leucemia mielóide crônica, leucemia mielóide aguda.
[0437]Exemplos de antígenos tumorais incluem ErbB1, ErbB2, ErbB3, VEGFR1, VEGFR2, EGFR III, CD 16, CD 19, CD20, oncostatina M, PSA, PSMA, integrina avb6, ADAM9, CD22, CD23, CD25, CD28, CD36, CD45, CD46, CD56, CD79a/CD79b, CD103, JAM-3, gp100 , ALCAM, PIP A, A33, carboxipeptidase M, E-cadberm, CA125, CD 4, CEA, CTLA-4, RAAG10, receptor de transferrina, p-15, GD2, MUM-1, MAGE-1, MAGE-3, SA , MOC31, MIC-1, EphA2, GAGE-1, GAGE-2, MART, ID31, CD44v3, CD44v6, e ROR1. Antígenos tumorais exemplares adicionais são aqui descritos e/ou conhecidos na técnica.
[0438]Em uma modalidade, o alvo de uma célula para a qual uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) direciona uma resposta imune é uma célula imune ou uma célula inflamatória.
[0439]Em algumas modalidades, a invenção abrange uma composição multiespecífica multivalente e monovalente que se liga a um antígeno de tumor que não é expresso nas próprias células tumorais, mas sim sobre as células vizinhas reativas e de tumor de apoio, não malignas compreendendo o estroma tumoral (ou seja , antígenos associados a tumores). O estroma tumoral composto por células endoteliais que formam novos vasos sanguíneos e por fibroblastos do estroma circundante da vasculatura tumoral. Em uma modalidade, uma composição multiespecífica e multivalente se liga monovalente um antígeno associado a tumor em uma célula endotelial. Em uma modalidade adicional, uma composição multiespecífica e multivalente se liga a um antígeno tumoral monovalente e também se liga a um antígeno associado a tumor em uma célula de fibroblasto. Em uma outra modalidade, uma composição multiespecífica monovalente e multivalente se liga a um antígeno tumoral e também liga a proteína de ativação de fibroblastos (FAP).
[0440]Os agentes infecciosos para o qual uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) pode direcionar uma resposta imune incluem, mas não estão limitados a, células procarióticas e eucarióticas, vírus (incluindo bacteriófago), corpos estranhos (por exemplo, toxinas), e organismos infecciosos, tais como fungos, e parasitas (por exemplo, parasitas de mamíferos), como aqui descritos e os agentes infecciosos associados a doenças infecciosas aqui descritas. O termo agentes infecciosos também pretende abranger outras células procarióticas e eucarióticas, vírus (incluindo bacteriófago), corpos estranhos (por exemplo, toxinas), e organismos infecciosos, tais como fungos e parasitas, de outro modo conhecidos na técnica.
[0441]De acordo com outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a (1) um alvo uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) tem um único sítio de ligação para um alvo em uma célula efetora, de modo a direcionar uma resposta imune à célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em algumas modalidades do sítio de ligação único é um MRD. Em outras modalidades, o sítio de ligação ao antígeno é um único domínio de ligação de anticorpo. Em outras modalidades, a ligação da composição multiespecífica multivalente e monovalente não desencadeia um sinal quando a composição se liga a um alvo em uma célula efetora. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga, pelo menos, a 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multivalente e monovalente multiespecífica estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multivalente e monovalente multiespecífica é um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos tumorais e antígenos do tumor/associados ao câncer). Em modalidades adicionais, um ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, um ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0442]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) um alvo em um leucócito, de modo a direcionar uma resposta imune à célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga, pelo menos, a 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multiespecífica monovalente e multivalente estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais da composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos aqui descritos. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente são um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos tumorais do antígenos tumorais e/associados ao câncer). Em modalidades adicionais, um ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, um ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0443]A invenção também abrange composições multivalentes e multiespecíficas que se ligam a um alvo expresso em leucócitos. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2 ) tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, de modo a direcionar uma resposta imune à célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga, pelo menos, a 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multiespecífica multivalente e monovalente estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais antígenos e tumor/antígenos associados ao câncer. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos vinculados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0444]Em uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo expresso em uma célula T. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) um alvo em uma célula T de modo a justapor células mielóides com a célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem sítios de ligação múltiplo (ou seja, liga-se multivalentemente) a um alvo em uma célula T. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação a (ou seja, liga-se monovalentemente) um alvo em uma célula T. Em algumas modalidades o sítio de ligação único é um MRD. Em outras modalidades, o sítio de ligação ao antígeno é um único domínio de ligação de anticorpo. Em outras modalidades, a ligação da composição multiespecífica monovalente e multivalente não desencadeia um sinal quando a composição se liga a um alvo em uma célula T. Em outras modalidades, a ligação da composição multiespecífica multivalente e monovalente não resulta na lise da célula T que expressa o alvo. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo selecionado a partir de: CD2, CD3, CD4, CDS, CD161, um receptor de quimiocina, CD95, e CCR5. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a, pelo menos, a 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multiespecífica multivalente e monovalente estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente é um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos tumorais e antígenos tumorais/associados ao câncer). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0445]De acordo com outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente monovalente e contém uma proteína de fusão contendo um ou mais peptídeos que se ligam a uma proteína na superfície de uma célula, tal como uma célula T. Em modalidades adicionais composição multivalente e monovalente multiespecífica liga sequências de proteína proximais da membrana alvo em uma célula que inibe ligação cruzada (por exemplo, a multimerização) da proteína-alvo ou as suas proteínas associadas. Em uma modalidade particular, a composição monovalente e multivalente multiespecífica liga a uma célula T e inibe a ligação cruzada da proteína celular ou suas proteínas associadas. Por exemplo, em uma modalidade, o anticorpo multivalente e multiespecífico compreende o terminal amino de 27 aminoácidos de CD3 epsilon madura. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente compreende uma proteína de fusão contendo uma ou mais proteínas correspondentes ao domínio G de uma proteína CD3 (por exemplo, CD3 epsilon, CD3 gama, CD3 alfa (TCRA) ou CD3 beta (TC B). Assim, em algumas modalidades, a proteína de fusão compreende um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de: GYYVCYPRGSKPEDANFYLYLR ARVC (SEQ ID NO: 21), YLYLRAR (SEQ ID NO: 22), YRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMC (SEQ ID NO: 23), e DKESTVQVH (SEQ ID NO: 24). Em modalidades adicionais, a composição compreende uma proteína de fusão contendo uma ou mais proteínas que correspondem a uma porção do domínio extracelular de uma proteína CD3 (por exemplo, CD3 epsilon, CD3 gama, CD3 alfa (TCRA) ou CD3 beta (TCRB)) que é capaz de se ligar a CD3, ou um multímero CD3. Assim, em algumas modalidades, a proteína de fusão compreende uma porção de uma proteína CD3 que é capaz de se ligar a CD3 ou um multímero CD3 em que a porção compreende um fragmento de ligação CD3 de um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de: KIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDI Y KDKESTVQVHYRMCQSCVELD (CD3 delta humano maduro ECD, SEQ ID NO: 25), QSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAK NITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLLGSNAKDPRGMYQCKGSQNSKPLQVYYR MCQNCIELN (CD3 gama humano maduro ECD, domínio tipo Ig em destaque; SEQ ID NO: 26), GNEEMGGITQTPYKVSISGTTViLTCPQYPGSElLWQHND NlGGDEDDKIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARV CENCMEMDVM (CD3 epsilon humano maduro ECD, Tg como domínio em destaque, SEQ TD NO: 27), e QSFGLLDPK (CD3 zeta humano maduro ECD, SEQ ID NO: 28), Em modalidades alternativas, a proteína de fusão compreende um fragmento de quimiocina que se liga a um alvo na superfície da célula. Em algumas modalidades, o fragmento de quimiocina é uma porção de uma quimiocina selecionado a partir de: CCL20 (LARC/Ckß4), CCL25 (TECK/Ckß15), CXCL12 (SDF-1), CXCL13 (BCA-1), CXCL16 (SRPSOX), e CX3CL1 (fractalcina). Em algumas modalidades, o fragmento de quimiocina é uma porção de uma quimiocina selecionado a partir de: CCL5 (RANTES), CCL8 (MCP-2), CXCL9 (MIG/CRG- 10), CXCL10 (IP-10/CRG-2) e CXCL11 (TAC/IP-9). Em algumas modalidades, o fragmento de quimiocina é uma porção de uma quimiocina selecionado a partir CCL3 (MIP-la) e CCL4 (MIP- 1B).
[0446]Em algumas modalidades, a invenção compreende um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga a CD3 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4329 -4492 e 4493, como apresentado na Tabela 22. Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de CD3 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4329-4492 e 4493. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga ao mesmo epitopo de CD3 como um polipeptídeo tendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4329-4492 e 4493.
[0447]Em modalidades particulares, a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga a CD3 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: IALMCSMHFDEVVWCSPYY (CD31916; SEQ ID NO: 4494); PLMLCRHM HFEYYC WPLA (CD3437; SEQ ID NO: 4495); PVICQWTLELQCSPWT (CD3914; SEQ ID NO: 4496); ILLECYWEDWRLVCSSLA (CD3434; SEQ ID NO: 4497); GTICWWHLEATCFATS (CD3702; SEQ ID NO: 4498); e LREICVKVPYGVVCQRLP (CD31913; SEQ ID NO: 4499). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou a composição multiespecífica multivalente e monovalente que compete para a ligação de CD3 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4494-4498 e 4499. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de CD3 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4494-4498 e 4499.
[0448]Em modalidades particulares, a composição se liga a um alvo selecionado dentre CD3, CD3 delta, CD3 epsilon, CD3 gama, CD3 zeta, TCR alfa, TCR beta, complexo de TCR, ou uma combinação heteromérica ou homomultimérica dos mesmos. Em uma outra modalidade, a composição ligase a CD3 epsilon. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno tumoral como aqui descrito ou de outra forma conhecido na técnica). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação a (ou seja, liga-se monovalentemente) CD3. Em outras modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica tem um único MRD que se liga a CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno de tumor, como revelado no presente documento ou de outra forma conhecido na técnica). Em outras modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica tem um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo único que liga CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno de tumor, tal como aqui ou de outro modo conhecido descrito na técnica). Em modalidades particulares, as composições de ligação de CD3 da invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0449]Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a CD3 humano e um CD3 ortólogo de um outro organismo. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 humano e um CD3 ortólogo de outro primata. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 humano e um CD3 ortólogo de macaco cinomolgo ou macaco rhesus. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 humano e um ortólogo CD3 de um primata selecionado a partir Saguinus oedipus e Callithrix jacchus). Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 humano e um CD3 ortólogo de macaco cinomólogo, e um CD3 ortólogo de ratinho ou rato. Em modalidades particulares, as composições da invenção ligação CD3 epsilon humano não são anticorpos de cadeia simples. Em modalidades particulares adicionais, as composições de ligação de CD3 da invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0450]De acordo com uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a CD3 epsilon humano. Em uma modalidade particular, a, composição multiespecífica multivalente e monovalente liga a proteína e CD3 epsilon humano possuindo a sequência de aminoácidos 23-207 NCBI estabelecidos na Seq. Ref. No. NP_000724. Em outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTT VILT (SEQ ID NO: 29). Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de QDGNEEMGGl (SEQ ID NO: 30). Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um polipeptídeo possuindo a sequência de aminoácidos de QDGNEEMGG (SEQ ID NO: 31). Em modalidades particulares, as composições da invenção ligação a CD3 epsilon humano não são anticorpos de cadeia simples.
[0451]Em algumas modalidades, uma composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) tem um único sítio de ligação para CD3 epsilon (isto é, liga monovalentemente a CD3 epsilon) e vários sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, uma célula B ou outro alvo aqui revelado). Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) compete pela ligação a CD3 com um anticorpo selecionado a partir de: OKT-3 otelixizumab, teplizumab, visilizumab, muromonab, X35-3, VIT3, BMA030 (BW264/56), CLB-T3/3, CRIS7, YTH12.5, F111409, CLB-T3.4.2, TR-66, WT31, WT32, SPV-T3b, 11D8, XIII-141, XIII46, XIII -87, 12F6, T3/RW2-8C8, T3/RW24B6, OKT3D, M-T301, SMC2 e F101.01. Em modalidades adicionais, um MRD de um anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD3 com um anticorpo selecionado a partir de: OKT-3 otelixizumab, teplizumab, visilizumab, muromonab X35-3, VIT3, BMA030 (BW264/56), CLB-T3/3, CRIS7, YTH12.5, F l 1 1409, CLB-T3.4.2, TR-66, WT31, WT32, SPV-T3b, 11D8, XIII-141, XIII46, XIII-87, 12F6, T3/RW2 -8C8, T3/RW24B6, OKT3D, M-T301, SMC2 e F101.01. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) compete para a ligação a CD3 com uma composição de ligação de CD3 descrito em Pedido de Publ. Int. Nos documentos WO2004/106380 e WO99/54440; Tunnacliffe et al. , Int. Immunol. 1:546-550 (1989); Kjer-Nielsen, PNAS 101:7675-7680 (2004); ou Salmeron et al, J. Immunol. 147: 3047- 3052 (1991).
[0452]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a CD3 epsilon humano e um CD3 epsilon ortólogo de um outro organismo. Em algumas modalidades, o multivalente e multiespecífico composição monovalente (por exemplo, um MRD molecular contendo anticorpo) liga-se CD3 epsilon humano e um CD3 epsilon ortólogo de outro primata. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 epsilon humano e um CD3 epsilon ortólogo de macaco cinomolgo ou de macaco rhesus. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 epsilon humano e um CD3 epsilon ortólogo de um primata selecionado a partir Saguinus oedipus e Callithrix jacchus. Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3epsilon humano e um CD3 epsilon ortólogo de macaco cinomólogo, e um CD3 epsilon ortólogo de ratinho ou rato. Em modalidades particulares, um MRD da composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 epsilon.
[0453]Em uma outra modalidade a composição monovalente e multivalente multiespecífica (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a CD3 delta humano. Em uma modalidade particular, a, composição multivalente e monovalente multiespecífica se liga a CD3 delta humano possuindo a sequência de aminoácidos 22-171 NCBI estabelecida na Ref. Seq. No. NP_000723. Em modalidades particulares, um MRD da composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 delta. Em outras modalidades, um antígeno de um anticorpo de domínio de ligação da composição multivalente e monovalente multiespecífica se liga a CD3 delta. Em modalidades particulares, as composições de ligação de CD3 epsilon humano da invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0454]Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga a proteína CD3 gama humana possuindo a sequência de aminoácidos 23-182 NCBI estabelecida na Ref. Seq. No. NP 000064. Em modalidades particulares, um MRD da composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a gama. Em modalidades particulares, um MRD da composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD3 gama. Em outras modalidades, um antígeno de um anticorpo de domínio da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a CD3 gama. Em modalidades particulares, CD3 gamma humanos ligando as composições da invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0455]Em uma modalidade adicional, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga a proteína CD3 zeta humana possuindo a sequência de aminoácidos 22-164 NCBI estabelecidos na Ref. Seq. No. NP 932170. Em modalidades particulares, um MRD da composição multivalente e monovalente multiespecífica se liga a CD3 zeta. Em outras modalidades, um domínio de ligação de antígeno de um anticorpo da composição monovalente e multivalente multiespecífica se liga a CD3 zeta. Em modalidades particulares, as composições de ligação de CD3 zeta humanos da invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0456]A invenção também abrange composições multivalentes e multiespecíficas que se ligam a um alvo expresso em células assassinas naturais. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) um alvo em uma das células assassinas naturais. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem sítios de ligação múltiplos para (ou seja, liga-se multivalentemente) um alvo em uma célula assassina natural. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação para (ou seja, liga-se monovalentemente) um alvo em uma célula assassina natural. Em algumas modalidades do sítio de ligação único é um MRD. Em outras modalidades, o sítio de ligação ao antígeno é um único domínio de ligação de anticorpo. Em outras modalidades, a ligação da composição multiespecífica multivalente e monovalente não desencadeia um sinal quando a composição se liga a um alvo em uma célula assassina natural. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo selecionado a partir de: KLRD1, KLRK1, KLRB1, 2B4 (CD244), KIR2D4, KIR2D5, e KIR3DL1. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo selecionado de: CD56, CD2, e CD161. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a, pelo menos, 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multiespecífica multivalente e monovalente estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente são um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos tumorais e antígenos de tumor/câncer associados). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente são associados com uma doença ou distúrbio do sistema imunológico. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associadas com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa.
[0457]Em uma modalidade particular, a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga NKGD2 e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: FSLFCYNVHGWWECFPVY (NKG1; SEQ ID NO: 4500); SLTWCMVEKLHYWVICDRVA (NKG4; SEQ ID NO: 4501); ILISCQEQWPVFQCYAVR (N G7; SEQ ID NO: 4502); HEEDCYWIEYQHCPRAT (N G9; SEQ ID NO: 4503); LEHLCTTYPMWFHCPEGA (N G12 SEQ ID NO : 4504); SGLVCFSRFDWWECVWTS (N G 14; SEQ ID NO: 4505); SLTRSRYQRFHYWVICDRVA (N G15; SEQ ID NO: 4506); e YTVACYYGVDQYWMCFSNS (G17; SEQ ID NO: 4507). Em uma modalidade adicional, a invenção abrange um MRD e/ou composição multiespecífica monovalente e multivalente que compete para a ligação de NKGD2 com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4500-4506 e 4507. Em uma outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) do anticorpo contendo MRD que se liga ao mesmo epitopo de NKGD2 como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir da grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4500-4506 e 4507.
[0458]Em algumas modalidades, a invenção compreende um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga a CD319 (CRACC) e contém uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: WRLDCWEHHEWDFWCWAHG (SEQ ID NO: 4508); SLYECWRVFVSFPRCPDGS (SEQ ID NO: 4509); LYLLCEHVHDKHWECGSWL (SEQ ID NO: 4510); IHLRCTYVEPLYML CSPYA (SEQ ID NO: 4511); TMMVECYMGYCYPTVF (SEQ ID NO: 4512); VLLRCQYVGV SHIKCKSVD (SEQ ID NO: 4513); LVLECFLIDAWYM CHTTG (SEQ ID NO: 4514); LRL YCIPVDHTFFKCTLYG (SEQ ID NO: 4515); YCIYRCQVQQCWMFPA (SEQ ID NO: 4516); WHIACWEMRDVHWYVCEFFV (SEQ ID NO: 4517); RVLQCKWVSSEYFQCVETS (SEQ ID NO: 4518); VVVECFQVKEMYWSCRPAV (SEQ TD NO: 4519); e YLMYCTALEYPYF QCRQMV (SEQ TD NO: 4520). Em outra modalidade, a invenção abrange um MRD e/ou anticorpo contendo MRD que compete para a ligação de CRACC com um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 4508-4519 e 4520. Em uma modalidade adicional , a invenção abrange um MRD e/ou uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que se liga ao mesmo epitopo de CRACC como um polipeptídeo possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO : 4508-4519 e 4520.
[0459]Em modalidades específicas, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD2. De acordo com uma modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga ao CD2 humano. Em uma modalidade particular, a composição multiespecífica multivalente e monovalente liga a proteína de CD2 humano possuindo a sequência de aminoácidos 25-209 estabelecidos no NCBI Ref. Seq. No. NP_001758. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica monovalente e multivalente tem múltiplos sítios de ligação para o CD2. Em algumas modalidades do sítio de ligação único é um MRD. Em outras modalidades, o sítio de ligação ao antígeno é um único domínio de ligação de anticorpo. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente possui um único sítio de ligação para o CD2. Em outras modalidades, a ligação da composição monovalente e multivalente multiespecífica para CD2 não desencadeia um sinal pela célula em que CD2 é expressa. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD2 e 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes (por exemplo, um antígeno tumoral como aqui descrito ou de outra forma conhecidos na técnica). Em modalidades particulares, as composições de ligação de CD2 da presente invenção não são anticorpos de cadeia simples.
[0460]Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) ligase o CD2 e um ortólogo humano de CD2 a partir de um outro organismo. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD2 e um ortólogo humano de CD2 a partir de outro primata. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD2 e um ortólogo humano de CD2 a partir de macaco cinomolgo ou de macaco rhesus.
[0461]Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a um alvo em uma célula mielóide. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se a (1) um alvo em uma célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) um alvo em uma célula acessória imune (por exemplo, células mielóides), de modo a justapor células mielóides com a célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente tem sítios de ligação múltiplos para (ou seja, liga-se multivalentemente) um alvo em uma célula mielóide. Em outras modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica tem um único sítio de ligação para (ou seja, liga-se monovalentemente) um alvo em uma célula acessória (por exemplo, células mielóides). Em algumas modalidades o sítio de ligação único é um MRD. Em outras modalidades, o sítio de ligação ao antígeno é um único domínio de ligação de anticorpo. Em outras modalidades, a ligação da composição multiespecífica multivalente e monovalente não provoca um sinal quando a composição se liga a um alvo em uma célula mielóide. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um receptor Fc gama selecionado a partir de CD 16 (ou seja, Fc gama RIII), CD64 (ou seja, Fc gama RI), e CD32 (ou seja, Fc gama RII). Em modalidades particulares, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a CD64 (ou seja, Fc gama RI). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e se liga a um alvo monovalente selecionado a partir, de MHC de classe 2 e a sua cadeia invariante, TLR1, TLR2, TLR4, TLR6 TLR5 e. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a, pelo menos, 2, 3, 4, ou 5 alvos na célula, tecido, ou agente infeccioso de interesse. De acordo com algumas modalidades, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais dos alvos da composição multiespecífica multivalente e monovalente estão localizados em uma superfície celular. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente são um antígeno de tumor (por exemplo, antígenos tumorais do tumor e/antígenos associados ao câncer). Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associados com uma doença ou distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos ligados pela composição multiespecífica multivalente e monovalente estão associadas com uma doença ou distúrbio do sistema esquelético (por exemplo, osteoporose), sistema cardiovascular, sistema nervoso, ou uma doença infecciosa
[0462]Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) liga-se um alvo de interesse em uma célula cancerosa. Em modalidades adicionais, composição multiespecífica multivalente e monovalente se liga a um alvo de interesse em uma célula imune. Noutras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e se liga a um alvo monovalente de interesse em uma célula doente. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) se liga a um alvo de interesse com um agente infeccioso (por exemplo, uma célula bacteriana ou um vírus).
[0463]De acordo com outras modalidades, a invenção abrange um método de tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção. Modalidades particulares são direcionadas a um método de tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que tem um único sítio de ligação para um alvo (isto é, que se liga a um alvo monovalentemente). Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, tal como uma célula T (por exemplo, CD3). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação para um alvo em um leucócito, tal como uma célula T (por exemplo, CD3) e vários sítios de ligação para (isto é, é capaz de ligar multivalentemente) um alvo localizado em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor em uma célula de tumor).
[0464]De acordo com outras modalidades, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que tem um único sítio de ligação para uma alvo (ou seja, que se liga monovalentemente a um alvo) e vários sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes.
[0465]Em modalidades adicionais, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração a um paciente que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que tem um único sítio de ligação para CD3 (por exemplo, CD3 epsilon) que se liga monovalentemente a CD3 e múltiplos sítios de ligação para 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos diferentes.
[0466]De acordo com algumas modalidades, a célula tumoral é a partir de um câncer selecionado de câncer da mama, câncer colorretal, câncer do endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma Não- Hodgkin, leucemia, câncer da próstata, câncer da bexiga , o câncer de pâncreas e câncer de tireoide.
[0467]Em algumas modalidades, o MRD (s) e o anticorpo no anticorpo contendo MRD são antagonistas dos seus respectivos alvos. Em outras modalidades, o MRD (s) e o anticorpo no anticorpo contendo MRD são agonistas do seu respectivo alvo. Ainda em outras modalidades, pelo menos um dos MRDs no anticorpo contendo MRD é um antagonista da sua molécula alvo e o anticorpo é um agonista da sua molécula alvo. Em ainda uma outra modalidade, pelo menos um dos MRDs do anticorpo contendo MRD é um agonista da sua molécula alvo, e o anticorpo é um antagonista da sua molécula alvo.
[0468]Em algumas modalidades, tanto o MRD (s) e o anticorpo no anticorpo contendo MRD ligam-se a fatores solúveis. Em algumas modalidades, tanto o MRD (s) e o anticorpo no anticorpo contendo ligam-se a moléculas da superfície celular. Em algumas modalidades, pelo menos um anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a uma molécula de superfície da célula e o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga a um fator solúvel. Em algumas modalidades, pelo menos um MRD no anticorpo contendo MRD se liga a um fator solúvel e o anticorpo no anticorpo contendo MRD se liga a uma molécula de superfície celular.
[0469]Uma composição multiespecífica monovalente e multivalente melhorada (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se liga especificamente a um alvo ou alvos desejado também pode ser preparada com base em um MRD anteriormente conhecido ou composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRDs). Por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 10-20, 20-30, 30-50, 50-100, 100-150, ou mais do que 150 substituições de aminoácidos, deleções ou inserções podem ser introduzidas em um MRD ou composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) sequência e o MRD resultante ou composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) podem ser rastreados para a ligação ao pretendido alvo ou alvos, para antagonizar a atividade alvo, ou para agonizar a atividade alvo, tal como descrito nos exemplos ou utilizando técnicas conhecidas na arte.
[0470]Sequências peptídicas adicionais podem ser adicionadas, por exemplo, para aumentar a estabilidade in vivo do MRD ou afinidade do MRD para o seu alvo.
[0471]Em certas modalidades, a ligação de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) com o seu alvo (por exemplo, uma célula) é aumentada em comparação com a ligação do MRD sozinho, anticorpo sozinho, e/ou uma combinação de anticorpo e o MRD. Em algumas modalidades, a ligação é de pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 75 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes, ou pelo menos cerca de 1.000 vezes melhorada.
[0472]Além disso, em algumas modalidades, a ligação de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) a um alvo (por exemplo, uma célula ou uma molécula que contém múltiplos epitopos) que expressam tanto o MRD alvo e o anticorpo alvo é aumentada em comparação com a ligação da composição multiespecífica monovalente e multivalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) a um alvo (por exemplo, uma célula ou uma molécula que contém múltiplos epitopos) que expressam apenas o MRD alvo ou apenas o anticorpo alvo. Em algumas modalidades, a ligação é de pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 75 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes, ou pelo menos cerca de 1000 vezes melhorada. Este aumento da avidez pode permitir composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo,-anticorpos contendo MRD) a se ligarem a alvos que tenham sido previamente difíceis de atingir, por exemplo, receptores acoplados à proteína G e as moléculas de carboidratos.
[0473]Além disso, em algumas modalidades, a ligação de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) a um MRD alvo é aumentada em uma região (por exemplo, do corpo) onde o alvo do anticorpo está localizado comparado a uma região onde o anticorpo alvo não é expresso, ou é expresso a um nível inferior. Em algumas modalidades, a ligação de uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) a um alvo de anticorpo é aumentado em uma região (por exemplo, do corpo) onde o MRD alvo é localizado em relação a uma região onde o MRD alvo não é expresso, ou é expressa a um nível inferior. Em algumas modalidades, a ligação é de pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 75 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes, ou pelo menos cerca de 1000 vezes melhorada.
[0474]Em modalidades preferenciais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) retém atividades específicas do anticorpo parental. Assim, em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, contendo anticorpo MRD) é capaz de induzir citotoxicidadependente do complemento. Em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é capaz de induzir citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é capaz de induzir apoptose. Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é capaz de reduzir o volume do tumor. Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) são capazes de inibir o crescimento do tumor.
[0475]Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) mostra propriedades de atividade ou farmacodinâmica melhorada em comparação com o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Assim, em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, contendo anticorpo MRD) tem uma maior avidez do que o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpos contendo MRD) resulta em um aumento da agregação do receptor em comparação com o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) antagoniza a atividade alvo em maior extensão do que o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) agoniza a atividade alvo em maior extensão do que o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Em uma outra modalidade, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem um perfil farmacodinâmico melhorado do que o anticorpo correspondente sem o MRD anexado.
[0476]Em uma outra modalidade, o anticorpo contendo MRD tem uma eficácia terapêutica maior do que a do anticorpo correspondente sem o MRD anexado.
[0477]Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem um ou mais dos seguintes efeitos: inibir a proliferação de células de tumor, reduzir a tumorigenicidade um tumor, inibir o crescimento tumoral, aumentar a sobrevivência do paciente, ocasionar morte de células tumorais, diferenciar células tumorigênicas para um estado não-tumorigênico, ou prevenir a metástase das células tumorais.
[0478]Em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é pelo menos tão estável como o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é mais estável do que o anticorpo correspondente sem o MRD anexado. Estabilidade MRD-anticorpo pode ser medida utilizando métodos conhecidos pelos especialistas na matéria, incluindo, por exemplo, técnicas de ELISA. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é estável no sangue inteiro a 37 ° C durante, pelo menos, cerca de 10 horas, pelo menos cerca de 15 horas, pelo menos cerca de 20 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 25 horas, pelo menos aproximadamente 30 horas, pelo menos cerca de 35 horas, pelo menos aproximadamente 40 horas, pelo menos cerca de 45 horas, pelo menos cerca de 48 horas, pelo menos cerca de 50 horas, pelo menos cerca de 55 horas, pelo menos cerca de 60 horas, pelo menos cerca de 65 horas, pelo menos aproximadamente 70 horas, pelo menos aproximadamente 72 horas, pelo menos aproximadamente 75 horas, pelo menos aproximadamente 80 horas, pelo menos aproximadamente 85 horas, pelo menos aproximadamente 90 horas, pelo menos cerca de 95 horas, ou pelo menos cerca de 100 horas.
[0479]Em certas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, contendo anticorpo MRD) tem pelo menos a mesma afinidade para os receptores de Fc como o anticorpo parental correspondente. Em outras modalidades não-exclusivas, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, contendo anticorpo MRD) tem pelo menos a mesma afinidade para os receptores do complemento como anticorpo parental correspondente. Em outras modalidades não- exclusivas, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem pelo menos a mesma meia-vida do anticorpo progenitor correspondente. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) pode ser expressa em níveis compatíveis com o anticorpo parental correspondente.
[0480]Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, contendo anticorpo MRD) tem uma maior afinidade para os receptores de Fc em comparação com o anticorpo progenitor correspondente. Em outras modalidades não-exclusivas, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem uma maior afinidade para os receptores do complemento em comparação com o anticorpo progenitor correspondente. Em outras modalidades não-exclusivas, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) tem uma meia-vida aumentada em comparação com o anticorpo progenitor correspondente. Em outras modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) pode ser expressa em níveis aumentados em comparação com a do anticorpo parental correspondente. Imunoconjugados (conjugados de fármaco de anticorpo contendo MRD)
[0481]A utilização de conjugados anticorpo-fármaco para a entrega local de agentes citotóxicos, permite a entrega direcionada do fármaco aos tumores, e a acumulação intracelular no seu interior, em que a administração sistêmica destes agentes de fármaco não conjugados pode resultar em níveis inaceitáveis de toxicidade para as células normais bem como as células tumorais procurou ser eliminado (Baldwin et al, Lancet páginas 603-05 (1986); Thorpe, "Antibody Carriers Of Citotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review". em Anticorpos monoclonais '84: aplicações biológicas e clínicas, Pinchera A. et ah, (ed.s), pp. 475-506) (1985)).
[0482]Em modalidades adicionais, a invenção abrange uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) que é covalentemente ou de outra forma associado com um agente citotóxico (carga) (por exemplo, como complexos de agentes multiespecíficos-citotóxicos multivalentes e monovalentes (por exemplo, anticorpo contendo complexos MRD-agentes citotóxicos). De acordo com algumas modalidades, o agente citotóxico é ligado covalentemente a uma composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) através de um ligante. De acordo com algumas modalidades, o ligante fixa a composição multiespecífica multivalente e monovalente e o agente citotóxico é clivável por uma protease. Em modalidades adicionais, o agente citotóxico é um agente quimioterapêutico, um agente inibidor do crescimento, uma toxina (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou origem animal, ou seus fragmentos), um isótopo radioativo (ou seja, um radioconjugado) ou uma pró-droga. Os métodos de utilização (Conjugados de fármaco de anticorpo contendo MRD) também são abrangidos pela invenção.
[0483]Os agentes citotóxicos que podem ser covalentemente ou de outra forma associados com composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) incluem, mas não estão limitados a qualquer agente que seja prejudicial para (por exemplo, matar) as células. As citotoxinas que são úteis nas composições e métodos da invenção incluem, inter alia, agentes alquilantes, agentes de intercalação, agentes anti- proliferativos, agentes anti-mititóticos, agentes de ligação de tubulina, alcalóides de vinca, enedinas, tricotecenos, podofilotoxinas ou derivados de podofilotoxina, a família pteridina de fármacos , taxanos, antraciclinas (por exemplo, daunorrubicina (anteriormente daunomicina) e doxorrubicina), antibióticos (por exemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina, dolastatinas (por exemplo, dolastatina 10, dolastatina 11, e dolastatina 15)), topoiosomerase inibidores, e platina complexo de agentes quimioterapêuticos (por exemplo, platina, cis).
[0484]Em algumas modalidades, as composições da invenção incluem um agente citotóxico que é um agente despolimerização da tubulina. Assim, em algumas modalidades, as composições da invenção incluem um ou auristatina um derivado de auristatina ou análogo. Em uma modalidade, as composições da invenção contêm monometil auristatina E (MMAE). Em outra modalidade, as composições da invenção contêm monometil auristatina F (MMAF). Em modalidades adicionais, uma composição imunoconjugada da invenção contém dolastatina ou um análogo ou derivado da Dolastatina peptídico, por exemplo, uma auristatina (ver, por exemplo, Pat. N ° s. 5.635.483, 5.780.588, e 5,663, 149).
[0485]Em modalidades adicionais, as composições da invenção incluem uma molécula de maitansinóide. Os maitansinóides são inibidores mitotóticos que atuam através da inibição da polimerização da tubulina. Os métodos de produção de e seu uso terapêutico são revelados, por exemplo, na Pat. Nos 5208020; 5416064, 6441163 e Pat Europeia. EP 0 425 235 B1; cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0486]Assim, em algumas modalidades, a citotoxina é um maitansinóide ou um derivado ou análogo de maitansinóide. As porções de fármaco maitansinóide são porções de fármaco atrativas em conjugados anticorpo-fármaco, porque eles são os seguintes: (i) relativamente acessível para preparar por fermentação ou modificação química ou derivatização dos produtos de fermentação, (ii) passível derivatização com grupos funcionais adequados para a conjugação através de ligantes não-dissulfureto aos anticorpos, (iii) estável no plasma, e (iv) eficazes contra uma variedade linhas celulares tumorais. Compostos de maitansina apropriados para utilização como porções de fármaco maitansinóide são bem conhecidos na arte, e podem ser isolados a partir de fontes naturais de acordo com métodos conhecidos, produzidos utilizando técnicas de engenharia genética (ver Yu et al, PNAS 99: 7968-7973 (2002)), ou maitansinol e análogos de maitansinol podem ser preparados sinteticamente de acordo com métodos conhecidos.
[0487]Em modalidades particulares as composições da invenção incluem o maitansinóide DM1 (N(2')-desacetil-N (2')-(3-mercapto-1-oxopropil)- maitansina). Em outras modalidades particulares as composições da invenção incluem o DM2 maitansinóide. Em modalidades adicionais, as composições da invenção incluem o DM3 maitansinol (N(2')-desacetil-N2-(4-mercapto-1- oxopentil) -maitansina) ou DM4 (N(2') -desacetil-N2- (4 - mercapto-4-metil- 1 - oxopentil) -maitansina).
[0488]Em algumas modalidades, as composições da invenção incluem um agente citotóxico que é um agente de alquilação. Em modalidades particulares, o agente citotóxico é selecionado de mecloretamina, tiotepa, clorambucil tioepa, melfalano, carmustina (BSNU), BCNU lomustina (CCNU), ciclotosfamida, bussulfano, dibromomanitol, e streptozoicina.
[0489]Em outras modalidades, as composições da invenção incluem um agente citotóxico que é um antimetabolito. Em modalidades particulares, o agente citotóxico é selecionado dentre metotrexato, diclorometotrexato, 6- mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5- fluorouracilo e 5-fluorouracil decarbazina.
[0490]Em modalidades adicionais, o conjugado de fármaco- composição multiespecífica multivalente (por exemplo, conjugado anticorpo contendo MRD-fármaco) é capaz de produzir quebras no DNA de cadeia dupla. Em outras modalidades, contendo o conjugado anticorpo contendo MRD- fármaco um membro da família de antibióticos de caliqueamicina é capaz de produzir quebras no DNA de cadeia dupla em concentrações sub-picomolares. Em outras modalidades, um conjugado de fármaco-composições multiespecíficas multivalentes (por exemplo, conjugado anticorpo contendo MRD-fármaco) contém caliqueamicina. Para a preparação de conjugados da família caliqueamicina, por exemplo, Pat. Nos. 5712374, 5714586, 5,739,116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001, e 5877296 (todas de American Cyanamid Company). Os análogos estruturais de caliqueamicina que podem estar contidos no conjugado de fármaco-composição multiespecífica multivalente (por exemplo, conjugado anticorpo contendo MRD-fármaco) da invenção incluem, mas não estão limitados a, gamma1I, alfa2I, alfa3I, N-. acetilamma1I, PSAG e teta1I (Hinman et al, Câncer Research 53: 3336-3342 (1993), e Lode et al, Câncer Research 58: 2925-2928 (1998).
[0491]Em outras modalidades, o conjugado de fármaco-composição multiespecífica multivalente (por exemplo, conjugado anticorpo contendo MRD- fármaco) das composições da invenção incluem um agente citotóxico selecionado a partir de adriamicina, doxorrubicina, mitomicina C, bussulfano, citoxina, clorambucil, etoposida, fosfato de etoposida, CC-1065, duocarmicina, W-2189, CC 1065, TAXOTERE (docetaxel), metopterina, aminopterina, topotecano, camptotecina, porfiromicina, bleomicina, teniposido, esperamicinas, mitramicina, antramicina (AMC), fludarabina, tamoxifeno, TAXOTERE (docetaxel), citosina-arabinósido (Ara-C), a adenosina arabinosido, cisplatina, carboplatina, platina cis-diclorodiamina (II) (DDP) cisplatina, cloroquina, ciclosporina A, docetaxel, paclitaxel, taxol, vinorrelbina, vindesina, citocalasina B, gramicidina D, brometo de etídio, emetina, mitomicina, ifosfamida, ciclofosfamida, tenoposido, carminomicina, porfiromicina, diona antracina dihidroxi, mitoxantrona, mitramicina, dactinomicina, actinomicina D, puromicina 1 - desidrotestosterona, adriamicina, glucocorticóides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, epithiolone, QFA, combretastatm, combretastatm fosfato A4, vinblastina, vincristina, colchicina, geldanamicina, doxorubicmchlorambucil, auristatina F fenileno diamina (AFP)), monometilauristatina, a família de agentes conhecidos colectivamente LL- E33288 complexo descrito na Pat. N ° s. 5.053.394, 5.770.710, assim como esperamicinas (Pat. No. 5.877.296) ou um seu derivado ou um seu análogo e derivados e seu análogo.
[0492]Toxinas adequadas adicionais e agentes quimioterapêuticos estão descritos em Remington Pharmaceutical Sciences, 19a ed. (Mack Publishing Co. 1995), e em Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7a ed. (MacMillan Publishing Co., 1985). Além disso, para uma discussão mais aprofundada de tipos de citotoxinas, ligantes e outros métodos que podem ser utilizados ou rotineiramente adaptados para conjugar agentes terapêuticos para o complexo anticorpo contendo MRD, ver, por exemplo,Pedido de Publ. Pat. Int. WO2007/059404; Saito et al. Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 199-215 (2003); Trail et al, Câncer Immunol Immunother. 52: 328-337 (2003); Payne, Cancer Cell 3: 207-212 (2003); Allen, Nat. Cancer Rev. 2: 750- 763 (2002); Pastan et al, Curr. Opin. Investig. Drugs 3: 1089- 1091 (2002); e Senter et al, Adv. Drug Deliv. Rev. 53: 247-264 (2001), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0493]Agentes quimioterapêuticos de citotoxina que podem ser usados nos imunoconjugados da presente invenção (por exemplo, conjugados composição multivalentes e multiespecíficas-fármacos, tais como conjugados anticorpo contendo MRD -fármaco) incluem lectinas tóxicas e planta ou a outras toxinas (por exemplo, ricina, abrina toxinas, modecina, botulina, e difteria). Prevê-se que múltiplas cópias de uma toxina ou combinações de várias toxinas pode, opcionalmente, ser acoplado a uma composição multiespecífica e multivalente da presente invenção (por exemplo, um anticorpo contendo MRD) proporcionando deste modo a citotoxicidade adicional. Toxinas enzimaticamente ativas e seus fragmentos que podem ser utilizados nas composições da presente invenção incluem, mas não estão limitados a cadeia A de difteria, fragmentos ativos não ligantes da toxina da difteria, cadeia A da exotoxina (Pseudomonas aeruginosa), exotoxina de Pseudomonas, Pseudomonas endotoxina, cadeia A de abrina, cadeia A de ricina, modecina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, ribonuclease, DNase I, enterotoxina de estafilococos A, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAP II, e PAP-S), Momordica inibidor de charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos. Veja, por exemplo, Pastan et ah, Cell 47: 641 (1986), Goldenberg et al, Jornal câncer para médicos 44:43 (1994) e Pedido de Publ. Int. Nos. W093/21232 e W093/21232, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0494]Tipicamente, porções de fármaco à base de peptídeos podem ser preparadas através da formação de uma ligação peptídica entre dois ou mais aminoácidos e/ou fragmentos de peptídeo. Tais ligações peptídicas podem ser preparadas, por exemplo, de acordo com o método de síntese em fase líquida (ver E. Schrõder e. Lubke, "The Peptides", Volume 1, pp. 76-136, 1965, Academic Press) que é bem conhecido no campo da química de peptídeos. As moléculas de fármaco auristatina/dolastatina podem ser preparadas de acordo com os métodos de: Pat. Nos 5.635.483 e 5.780.588.; Pettit et al, J. Am. Chem. Soe. 1 1 1: 5.463-5.465 (1989); Pettit et al, AntiCancer Drug Design 13: 243-277 (1998); Pettit et al, Synthesis 719-725 (1996); Pettit et al, J. Chem. Soe. Perkin Trans. 15: 859-863 (1996); e Doronina et al., Nat. Biotechnol 21 (7): 778-784 (2003).
[0495]De acordo com algumas modalidades, as composições da invenção compreendem um átomo altamente radioativo. Uma variedade isótopos radioativos estão disponíveis para a produção de composições multivalentes e multiespecíficas radioconjugadas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs). Exemplos incluem AT211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu. Quando o conjugado é utilizado para a detecção, que pode compreender um átomo radioativo para estudos sintiográficos, por exemplo tc99m ou I123, ou um marcador de spin para ressonância magnética nuclear (RMN), formação de imagem (também conhecida como formação de imagem de ressonância magnética, mri), tal como iodo-123 novamente, iodo-131, irídio-111, flúor-19, carbono-13, nitrogênio-15, oxigênio-17, gadolínio, manganês e ferro.
[0496]Os radiomarcadores ou outros marcadores podem ser incorporados no conjugado usando técnicas conhecidas na arte. Por exemplo, o peptídeo pode ser biossintetizado ou pode ser sintetizado por síntese química de aminoácidos utilizando precursores de aminoácidos adequados envolvendo, por exemplo, flúor-19 em vez de hidrogênio. Marcadores tais como tc99m ou I123, Re186, Re188 e In111 podem ser ligados através de um resíduo de cisteína no peptídeo. O ítrio-90 pode ser ligado através de um resíduo de lisina. O método IODOGEN (Fraker et al, Biochem Biophys Res Commun 80:49-57 (1978)) pode ser utilizado para incorporar iodo-123. "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy" (Chatal, CRC Press 1989) descreve outros métodos em pormenor que podem ser aplicados rotineiramente para rotular as composições da invenção.
[0497]Um ligante pode ser um "ligante clivável"que facilita a liberação de um fármaco na célula. Por exemplo, um ligante instável em meio ácido (por exemplo, hidrazona), sensível a protease (por exemplo, sensível a peptidase) ligante, ligante fotolábil, ligante de dimetila ou ligante contendo dissulfureto (Chari et al Câncer Research. 52: 127-131 (1992 ); Pat US 5,208,020, Patente US N ° 201, Publ 10.293.513) pode ser usado. Assim, a invenção engloba composições multivalentes e multiespecíficas que contêm um ou mais ligantes que podem conter qualquer uma de uma variedade grupos, como parte da sua cadeia que vai clivar in vivo, por exemplo, em uma célula, a uma taxa que é melhorada em relação às estruturas que não possuem tais grupos. Também são fornecidos conjugados dos braços ligantes com agentes terapêuticos e de diagnóstico. Os ligantes são úteis para formar análogos de pró-fármacos de agentes terapêuticos e ligar reversivelmente um agente terapêutico ou de diagnóstico (por exemplo, uma citotoxina ou MRD) a um agente de direcionamento, um marcador detectável, ou um suporte sólido. Os ligantes podem ser estáveis no plasma, de modo a não libertar um MRD ou agente citotóxico. No caso de citotoxinas os ligantes podem ser estáveis no plasma e lábil uma vez internalizado, de modo a liberar a citotoxina em uma forma ativa.
[0498]MRDs e/ou agentes citotóxicos são opcionalmente ligados um ao outro ou à composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) da invenção com um agente de ligação como aqui descrito, ou de outra forma conhecidos na arte. Os conjugados do anticorpo molecular contendo MRD com um MRD ou um agente citotóxico podem ser preparados utilizando uma variedade agentes de acoplamento de proteína bifuncionais conhecidos na arte, incluindo, mas não limitados a, agentes de acoplamento contendo um grupo selecionado a partir de: 6- maleimidocaproílo (MC), glicol maleimidocaproílo-polietileno ("MC (PEG) 6-OH"(passíveis de penhora para cisteínas de anticorpos)), maleimidopropanoila (MP), MPBH, valina-citrulina (val-cit (dipeptídeo exemplar em uma protease ligante clivável)) , metil-valina-citrulina ("Me-Val-CitN," um elemento de ligação em que uma ligação peptídica foi modificada para prevenir a sua clivagem por catepsina B) alanina-fenilalanina (ala-phe), p-aminobenziloxicarbonila (PAB (um exemplo de um componente ligante "auto imolativos")), valina-citrulina-p- aminobenziloxicaronila ("vc-PAB"), N-succinimidil 4- (2- piridiltio) pentanoato (SPP), N-succinimidil 4- (N-maleimidometil ) ciclo-hexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC), LC-SMCC, N-succinimidil (4-iodo-acetil) aminobenzoato (S1AB), TI (iminotiolano), SPDP (N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato), 6 - maleimidocaproil-valina-citrulina-p-aminobenziloxicarbonila (MC-vc-PAB), CH2CH2O- etilenooxi como uma ou mais unidades de repetição ("EO" ou "PEO"), BMPS, EMCS, GMBS, MBS, HBVS, SBAP, SIA, SMPB, SMPH, sulfo- EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SMCC, sulfo-SIAB, sulfo- SMPB, SVSB (succinimidil- (4-vinilsulfona) benzoato), derivados bifuncionais de imidoésteres (tal como adipimidato de dimetilo HC1), ésteres ativos (tais como suberato de dissuccinimidilo), aldeídos (tais como glutaraldeído), compostos bis-azido (tais como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazónio (tais como bis- ( p- diazoniobenzoil) etilenodiamina), diisocianatos (tais como tolueno-2,6-diisocianato), e compostos de flúor bis- activos (tais como 1, 5-difluoro-2,4-dinitrobenzeno). Componentes adicionais ligantes são conhecidos na arte e alguns são aqui descrito.
[0499]Em algumas modalidades, a composição multiespecífica e multivalente monovalente está covalentemente ligada a um agente citotóxico através de um ligante em 1-5, 5-10, 1-10, 1-20 ou sítios na composição multivalente e multiespecífica. De acordo com modalidades adicionais, a composição multiespecífica multivalente monovalente e está covalentemente ligado a um agente citotóxico através de um ligante em mais do que 2, 5 ou 10 sítios na composição multivalente e multiespecífica.
[0500]Em modalidades adicionais, o complexo da composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) está associado com um pró-fármaco. A síntese de pró-fármaco, a ligação química de anticorpos, e propriedades farmacodinâmicas são conhecidos na arte e podem ser aplicados rotineiramente para preparar e utilizar composições multivalentes e monovalentes da presente invenção que contêm pró-fármacos, tais como, composições de pró-fármaco- anticorpos contendo MRD. Ver, por exemplo, Publ. Int. No. WO96/05863 e na Pat EUA. No. 5.962.216, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0501]Alternativamente, uma proteína de fusão compreendendo um anticorpo e um agente citotóxico pode ser feita, por exemplo, por meio de técnicas recombinantes ou síntese peptídica. Uma molécula de DNA recombinante pode compreender regiões que codificam o anticorpo e porções citotóxicas do conjugado, quer adjacentes uma à outra ou separadas por uma região que codifica um peptídeo ligante que não destrói as propriedades desejadas do conjugado.
[0502]A composição multiespecífica multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) da invenção também pode ser conjugada com um isótopo radioativo para gerar radiofármacos citotóxicos, também referido como radioimunoconjugados. Exemplos de isótopos radioativos que podem ser conjugados com composições multivalentes e monovalentes multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) para utilização em diagnóstico ou terapêutica incluem, mas não estão limitados a, iodo131, índio111, ítrio90, e lutétio177. Métodos para a preparação de radioimmunconjugados são estabelecidos na arte. Exemplos de radioimunoconjugados estão comercialmente disponíveis, incluindo Zevalin™ (IDEC Pharmaceuticals) e Bexxar™ (Corixa Pharmaceuticals), e métodos semelhantes podem ser utilizados para preparar radioimunoconjugados utilizando os anticorpo contendo MRDs da invenção.
[0503]Os métodos para a conjugação de porções de ligante-fármaco para proteínas alvo de células, tais como anticorpos são conhecidos na arte e incluem aqueles descritos, por exemplo, na Pat. N ° s 5,208,020 e 6,441,163.; Pedido de Publ. Int. N °s. WO2005037992, WO2005081711, e WO2006/034,488, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Veja-se, também, por exemplo, Arnon et al. "Monoclonal Antibodies For immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", em Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Reisfeld et al, (eds.), 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985) pp..; Hellstrom et al. , "Antibodies for Drug Delivery", em Controlled Drug Delivery (2aEd.), Robinson et al, (eds.), Pp 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)..; Saito et al, Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 199-215 (2003); Trail et al, Cancer Immunol. Immunother. 52: 328-337 (2003); Payne, Cancer Cell 3: 207-212 (2003); Allen et al, Nat. Cancer Rev. 2: 750-763 (2002); Pastan et al, Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1.089-1.091 (2002); e Senter et al, Adv. Drug Deliv. Rev. 53: 247-264 (2001), o conteúdo de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0504]Em algumas modalidades, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção compreendendo um agente citotóxico (por exemplo, um conjugado de anticorpo contendo MRD- agente citotóxico) e pode geralmente ser aqui referido como um imunoconjugado. Em algumas modalidades, um imunoconjugado da invenção se liga a um alvo de superfície celular que é internalizado pela célula. Em outras modalidades, a ligação de um imunoconjugado da presente invenção (por exemplo, um conjugado de anticorpo contendo MRD-agente citotóxico) à superfície de uma célula-alvo resulta na internalização do imunoconjugado para dentro da célula in vitro. Em outras modalidades, a ligação do imunoconjugado para a superfície de células alvo resulta na internalização da composição para dentro da célula in vivo. Os métodos para o tratamento de um paciente aqui descrito pode compreender: a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um imunoconjugado (por exemplo, uma composição multiespecífica multivalente e monovalente da invenção compreendendo um agente citotóxico, tal como um conjugado de anticorpo contendo MRD-agente citotóxico) que compreende um agente citotóxico e se liga a um alvo que é internalizado em uma célula. Em algumas modalidades, o imunoconjugado compreende um agente citotóxico aqui divulgado. Em modalidades adicionais, o imunoconjugado compreende um agente citotóxico selecionado dentre um agente alquilante, um agente antiproliferativo, um agente de ligação à tubulina, alcalóide vinca, enediina, podofilotoxina, derivado de podofilotoxina, um membro da família de fármacos de pteridina, taxano, um dolastatina, inibidor topoiosomerase, ou um agente quimioterapêutico complexo de platina. Noutras modalidades, o agente é um maitansinóide citotóxica ou um derivado ou análogo de maitansinóide. Em modalidades específicas do agente citotóxica é o maitansinóide DM1, DM2, DM3 ou. Em modalidades adicionais, o agente citotóxico é um derivado de auristatina ou auristatina ou analógico. Em modalidades específicas do agente citotóxica é MMAE ou MMAF. Os agentes citotóxicos são opcionalmente ligados aos outros componentes do imunoconjugado por um ligante. Em algumas modalidades o agente citotóxico é ligado com os outros componentes do imunoconjugado por um ligante clivável de enzima. Em modalidades adicionais, o agente citotóxico é ligado com os outros componentes do imunoconjugado por um lingante lábil a ácido.
[0505]De acordo com outras modalidades, o agente citotóxica de um imunoconjugado da presente invenção tem uma potência do fármaco livre de menos de 10-7M, 10-8M, ou 10-9M. Em modalidades adicionais, a citoxina tem uma potência do fármaco livre de 10-8 a 10-11M.
[0506]Em modalidades, um alvo ligado por o imunoconjugado é selecionado a partir de CD 19, CD22, CD30, CD33, CD56, CD70, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133, CD 138, PSMA, EphA2, ErbB2 (CD340), SLC44A4, MN (anidrase carbónica IX), GPNMB (proteína de melanoma de glicoproteína não -metastática), cripto, e integrina aV. Em modalidades adicionais, um alvo ligado pelo imunoconjugado é selecionado a partir de CD1, CD 1a, CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD 1 1A, CD 14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD25, TNFRSF5 (CD40 ), CD64, CD74, CD79, CD105, CD174, CD205, CD227, CD326, CD340, MUC 16, EGP-1, EGP-2, receptor de EGF (ErbBl), ErbB2, ErbB3, o Fator H, FHL-1, FLt- 3, o receptor de folato, Ga 733, GROB, HMGB-1, factor de indutível hipoxia (HIF), HM1.24, HER-2/neu, insulina como fator de crescimento (ILGF), IFN-gama, IFN-alfa, IFN- beta, IL2R, IL4R, IL6R, IL13R, IL15R, IL17R, IL18R, IL2, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL18, IL25, IP- 10, IGF-1R, la, HM1.24, HCG, HLA- DR, ED-B, TMEFF2, EphB2, FAP (proteína de activação de fibroblastos), mesotelina, EGFR, TAG-72, o GD2 (codificada pelo gene B4GALNT1), e 5T4.
[0507]Em modalidades adicionais, um alvo ligado pelo imunoconjugado é um alvo mielóide e hematopoiético selecionado dentre CD33, CD64, TNFRSF5 (CD40), CD56, CD e 138. De acordo com outras modalidades, um alvo ligado pelo imunoconjugado é um alvo de carcinoma selecionado a partir de EpCam, GD2, EGFR, CD74, CD227, CD340, MUC 16, GD2, GPNMB, PSMA, cripto, TMEFF2, EphB2, 5T4, mesotelin, TAG-72, e MN.
[0508]Em outras modalidades, um alvo ligado por o imunoconjugado é um alvo de células B selecionado a partir de CD19/CD21, CD20, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD70, CD79a, CD79b, e CD205. Em modalidades adicionais, um alvo ligado pelo imunoconjugado é um alvo de células T selecionado a partir de CD25, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD70, CD205 e. Em outras modalidades, um alvo ligado por um alvo de células endoteliais selecionado a partir de CD 105, o FAP alvo de células do estroma, e o alvo vascular ED-B.
[0509]Em modalidades adicionais, um imunoconjugado da invenção se liga a um antígeno da superfície da célula de tumor e um segundo alvo que está associado com uma via de escape para resistir à quimioterapia. Em algumas modalidades, o antígeno da superfície da célula de tumor é um membro selecionado a partir do EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD 133, CD138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC.
[0510]Em outras modalidades, um imunoconjugado se liga a glicoproteína P (codificada pela MDR1) e um antígeno da superfície celular. Em modalidades particulares, o antígeno da superfície celular é um antígeno tumoral. Em outras modalidades, o antígeno tumoral é um membro selecionado a partir de: EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD 138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC. Em modalidades particulares, o imunoconjugado compete para a ligação de CD30 com SGN-35 (brentuximab). Em modalidades adicionais, o imunoconjugado compete para a ligação de ErbB2 com trastuzumab.
[0511]Em outras modalidades, liga-se um imunoconjugado MRP (multirresistência proteína associada) e um antígeno da superfície celular. Em modalidades particulares, o antígeno da superfície celular é um antígeno tumoral. Em outras modalidades, o antígeno tumoral é um membro selecionado a partir de: EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70 , CD133, CD 138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC. Em modalidades particulares, o imunoconjugado compete para a ligação de CD30 com SGN-35 (brentuximab). Em modalidades adicionais o imunoconjugado compete para a ligação de ErbB2 com trastuzumab.
[0512]Alternativamente, uma proteína de fusão compreendendo o anticorpo e agente citotóxico pode ser feitas por exemplo, por meio de técnicas recombinantes ou síntese peptídica. O comprimento de DNA pode compreender as respectivas regiões que codificam as duas porções do conjugado, quer adjacentes uma à outra ou separadas por uma região que codifica um peptídeo ligante que não destrói as propriedades desejadas do conjugado.
[0513]As modalidades seguintes são ainda proporcionadas para qualquer um dos imunoconjugados acima. Em uma modalidade, um imunoconjugado tem atividade morte celular in vitro ou in vivo. Em uma modalidade, o ligante é ligado ao anticorpo através de um grupo tiol no anticorpo. Em uma modalidade, o ligante é clivável por uma protease.Em uma modalidade, o ligante compreende uma val-cit dipeptídico. Em uma modalidade, o ligante compreende uma unidade p-aminobenzila. Em uma modalidade, a unidade p-aminobenzila está disposta entre o fármaco e um local de clivagem de protease no ligante. Em uma modalidade, a unidade p- aminobenzila p-aminobenziloxicarbonila é (PAB). Em uma modalidade, o ligante compreende 6-maleimidocaproíla. Em uma modalidade, 6- maleimidocaproíla está disposta entre o anticorpo e um local de clivagem de protease no ligante. As modalidades acima podem ocorrer isoladamente ou em qualquer combinação umas com as outras.
[0514]O anticorpo contendo MRD da presente invenção pode também ser a conjugação a uma enzima ativadora de pró-fármaco que converte um pró- fármaco (por exemplo, um agente peptidil cromoterapêutico, por exemplo, WO81/01145) para uma droga anti-câncer ativa. Ver, por exemplo, WO88/07378 e Pat EUA. No. 4.975.278 cujo conteúdo é aqui incorporado por referência na sua totalidade. O componente de enzima do imunoconjugado é de preferência capaz de atuar sobre um pró-fármaco de tal maneira, de modo a convertê-lo na sua forma citotóxica, mais ativa. Ver, por exemplo, Pastan et al. , Cell, 47: 641 (1986), e Goldenberg et al., Jornal de câncer para médicos, 44:43 (1994). As toxinas enzimaticamente ativas e seus fragmentos que podem ser utilizados incluem cadeia A de difteria, não obrigatória, fragmentos ativos da toxina de difteria, cadeia A da exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia A de ricina, abrina, cadeia, modecina, alfa-sarcina, Aleurites proteínas fordii, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos. Veja, por exemplo, W093/21232.
[0515]Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são conjugados com um radioisótopo, tal como, 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In, 105Rh, 153Sm, 105Rh, 153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re and 188Re usando qualquer um de uma série de bem quelantes -conhecido ou rotulagem direta. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD é acoplado a drogas ou pró-drogas, tais como linfocinas, interferon. As composições da invenção podem ser marcadas com reagentes de ligantes que se ligam, quelato ou outro complexo de um metal de radioisótopo em que o reagente é reativo com cisteína tiol do anticorpo, utilizando técnicas conhecidas na arte, tais como, os descritos em Current Protocols in Immunology , Volumes 1 e 2, Coligen et al, Ed. Wiley- Interscience, Nova Iorque, N.Y., Pubs. (1991). Ligantes quelantes que podem complexar um íon de metal e que podem ter utilização nas composições e métodos da invenção incluem DOTA, DOTP, DOTMA, DTP A e TETA (Macrocyclics, Dallas, Texas.). Os radionuclídeos podem ser segmentados através de complexação com os conjugados anticorpo-fármaco da invenção (Wu et al, Nature Biotechnology 23 (9): 1137-1146 (2005)). Reagentes ligantes tais como, DOTA-maleimida (4-maleimidobutiramidobenzil-DOTA) podem ser preparados pela reação de aminobenzil-DOTA com ácido 4-maleimidobutírico (Fluka) ativada com isopropilcloroformato (Aldrich), seguindo o procedimento do Axworthy et al, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 97 (4): 1802-1807 (2000)). Reagentes DOTA-maleimida reage com os aminoácidos cisteína livres dos anticorpos cisteína e fornecer um ligante complexante de metais em que o anticorpo (Lewis et al, Bioconj Chem 9:72-86 (1998)), quelantes ligantes reagentes de marcação, tais como, DOTA-NHS (1, 4,7, 10- tetraazaciclododecano- 1, 4,7, 10-tetracético mono ácido (éster de N- hidroxissuccinimida) são comercialmente disponíveis (Macrocyclics, Dallas, Texas.).
[0516]Os conjugados das composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpos contendo MRD) e citotoxina podem ser efetuados rotineiramente, utilizando uma variedade agentes de acoplamento de proteína bifuncionais, tais como, (2-piridilditiol) propionato (SPDP), derivados bifuncionais de N-succinimidil-3-, iminotiolano (IT), imidoésteres (tais como, adipimidato de dimetilo HCL), ésteres ativos (tais como, suberato de dissuccinimidilo), aldeídos (tais como, glutaraldeído), compostos bis-azido (tais como, bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados bis-diazônio ( tal como, bis- (p-diazoniobenzoil) - etilenodiamina), diisocianatos (tais como, 2,6- diisocianato de tolueno), e compostos de flúor bis-ativos (tais como, 1, 5- difluoro-2,4-dinitrobenzeno). Em modalidades específicas, a toxina é conjugada a um anticorpo contendo MRD através de um sistema ligante de enzima clivável (por exemplo, tal como, presente na SGN-35). Os conjugados de um anticorpo contendo MRD e uma ou mais toxinas de moléculas pequenas, tais como, uma caliqueamicina, maitansinóides, um tricoteno, e CC 1065, e os derivados destas toxinas que possuem atividade toxina, também pode ser usado.
[0517]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD pode ser complexado, ou têm MRDs que se ligam com outros ligantes imunologicamente ativos (por exemplo, quimiocinas, citocinas e anticorpos ou fragmentos destes) em que a molécula resultante se liga à célula neoplásica ou a outro alvo, bem como a quimiocina, citocinas, ou uma célula efetora, tais como, uma célula T. Em certas modalidades, estes conjugados podem ser gerados como proteínas de fusão. As enzimas desta invenção podem ser ligadas covalentemente ao anticorpo através de técnicas bem conhecidas na arte, tais como, a utilização dos reagentes de reticulação heterobifunctional discutidos acima. Alternativamente, proteínas de fusão compreendendo pelo menos a região de ligação ao antígeno de um anticorpo da invenção ligada a pelo menos uma porção funcionalmente ativa de uma enzima da invenção pode ser construída utilizando técnicas de DNA recombinante conhecidas na arte.
[0518]Em algumas modalidades, a extremidade N-terminal ou C- terminal do anticorpo ao qual um MRD é operativamente ligado nas fusões MRD-anticorpo é truncada. Em modalidades preferidas, este truncamento não prevene ou reduz a capacidade do anticorpo em se ligar ao seu antígeno alvo, através do seu domínio de ligação ao antígeno. Em outras modalidades, o truncamento não previne ou reduz a função efetora Fc, meia-vida e/ou a atividade ADCC. Em outras modalidades, MRDs estão ligados na região terminal da cadeia de anticorpo. Mais particularmente, em certas modalidades, o MRD está ligado a 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50 resíduos de aminoácido C-terminal da cadeia pesada. Em outras modalidades, o MRD está ligado a 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50 resíduos de aminoácido C-terminal da cadeia leve. Em modalidades adicionais, o MRD está ligado a 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50 resíduos de aminoácido N-terminal da cadeia pesada. Em outras modalidades, o MRD está ligado a 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50 resíduos de aminoácido N-terminal da cadeia leve. Assim, por exemplo, um MRD, que está ligada à extremidade N-terminal da cadeia pesada pode ser ligado ao primeiro, segundo, terceiro, aminoácido quarto, quinto, ou décimo da cadeia N-terminal da cadeia pesada. Por exemplo, uma fusão de anticorpo-MRD contendo um MRD ligado ao N-terminal da cadeia pesada pode conter aminoácidos 1-3 da sequência de cadeia pesada ligada à MRD, que está ligado ao aminoácido 4 da sequência da cadeia pesada.
[0519]Em certas modalidades, um ou mais MRDs estão ligados a um anticorpo que não o terminal do anticorpo de cadeias leve e pesada. O MRD pode ser ligado a qualquer porção do anticorpo que não impede a capacidade do anticorpo se ligar ao seu alvo. Assim, em algumas modalidades, o MRD está localizado fora do sítio de combinação de anticorpo. Por exemplo, o MRD pode ser localizado dentro de uma sequência de cadeia pesada ou dentro de uma sequência de cadeia leve. A título de exemplo apenas, o MRD pode ser localizado entre o domínio Fc e a região de articulação, entre a região de articuação e o domínio CH1 da cadeia pesada, entre o domínio CH1 e a região variável da cadeia pesada, ou entre a constante região e a região variável da cadeia leve.
[0520]Os inibidores de angiogênese que alvejam vias de sinalização do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) foram observadas para proporcionar melhores benefícios terapêuticos transitóros seguido de restauração do crescimento do tumor e progressão devido a uma capacidade aparente de tumores angiogênicos em se adaptar à presença destes inibidores. Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que as propriedades multivalentes e multiespecíficas de composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRDs) que se ligam a uma angiogênese alvo fornecendo estes compostos com uma capacidade estender benefícios terapêuticos anti- angiogênicos para além daqueles observados a partir de por exemplo, terapias de anticorpos monoclonais convencionais ligando vários alvos relacionados a angiogênese distinta e interrompendo, assim, mecanismos de resistência disponíveis para o tumor angiogênico.
[0521]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se 2 ou mais alvos selecionados a partir de: VEGF (ou seja, VEGFA), VEGFB, FGF 1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb e FGFR2-IIIc), FGFR3, TIE2, TNFSF2 (TNF), FGFR3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, IL6, IL8, IL18, HGF, PDGFA, PLGF, PDGFB , CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Notch 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, M1ACV, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a VEGF e 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga o VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é bevacizumab. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a VEGF e 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga o VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é bevacizumab.
[0522]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga o VEGF (ou seja, VEGFA) e, adicionalmente, se liga a um alvo angiogênico selecionado a partir de: VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1 -IIIC) , FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2- Illb, IIIc e FGFR2-), FGFR3, TNFSF2 (TNFa), FGFR3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, IL- 6, IL-8, IL-18, HGF, TIE2, PDGFA, P1GF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Notch 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7 , MMP9, MMP1 2, PLAU, VCAM-1, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo,anticorpos contendo MRD) que se ligam a VEGF e 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga o VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é bevacizumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação a VEGF com bevacizumab.
[0523]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a TNF alfa e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: Te38, IL-12, IL-12p40, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL -lbeta, IL-23, MIF, PEG2, PGE4, VEGF, TNFSF11 (RAN L), TNFSF13b (BLyS), GP130, CD-22, e CTLA-4. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a TNF alfa, IL-6, e TNFSF13b (BLyS). Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam ao TNF e 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a TNF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é adalimumab, certolizumab, Golimumab ou AME-527. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação ao TNF com adalimumab, certolizumab, Golimumab ou AME- 527.
[0524]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga IL1 alfa e IL1 beta. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a IL1 beta e TNFSF11 (RANKL). Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD liga a IL1 beta e um alvo selecionado a partir de IL13, IL17A, o TNF, o VEGF, PGE2, VEGFR1, VEGFR2, TNFSF12 (TWEAK) e TNF. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a IL1 beta e pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a IL1 beta. EM outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é Catumaxomab, Xoma052, canakinumab ou ACZ885. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD concorre para ligação IL1 alfa ou IL1 beta com catumaxomab, Xoma052, canacinumab ou ACZ885.
[0525]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a IL12 e ligase adicionalmente IL18 ou TNFSF12 (TWEAK). Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a CTLA- 4e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobadas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CTLA-4. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é briakinumab ou ustekinumabe. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação com o briakinumab IL12 ou ustekinumabe.
[0526]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a CTLA-4. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a CTLA4 e, adicionalmente, se liga a PDL-1 ou BTN02. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a CTLA-4 e um ou ambos destes alvos estão também englobadas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CTLA-4. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é tremelimumabe ou iplimumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação com tremelimumabe iplimumab ou CTLA-4.
[0527]Em uma modalidade adicional, anticorpo contendo MRD se liga a IL13. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a IL13 e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: IL1beta, IL4, IL9, IL13, IL25, um agonista LHR, MDC, MIF, PED2, SPRR2a, SPRR2b; TARC, TGF-beta e IL25. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a IL13 e um alvo selecionado a partir de IL5, ADAM8, uma LHR (agonista), IL23p19 e IgE. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD que se ligam a IL13) e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes objectivos são também abrangidos pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a IL13. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é TNX-650, ou lebrikizumab CAT354. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação com IL13 TNX-650, ou lebrikizumab CAT354.
[0528]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a RGM A. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a RGM A e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: RGM B, MAG, de NgR, NogoA, e OMgp CSPG . Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que se ligam a RGM A e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também abrangidas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a RGM A.
[0529]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a CD38 e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de CD20, TNFRSF5 (CD40) AL 1, o TNF, o VEGF, VEGFA, VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNFSF2 (TNF), FGFR3, VEGFR1, VEGFR2 e CD 138. Composições mutivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam-se a CD38 e, pelo menos, 1, 2 ou todos os 3 destes alvos estão também englobadas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD se liga a CD38. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a MOR202 ou daratumumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD38 ou com MOR202 daratumumab.
[0530]Em algumas modalidades de um anticorpo contendo MRD se liga aErbB1 (EGFR) e, adicionalmente, se liga a ErbB3. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo anticorpo contendo MRD liga-se a ErbB1. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é Erbitux®. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente de MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete pela ligação com ErbB L- Erbitux®. Em outra modalidade, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação ao ErbB1 selecionado a partir de: nimotuzumab, zalutumumab, matuzumab, panitumumab, MEDX-214, e ABX-EGF. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componentes MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para ligação ao ErbB1 com um anticorpo selecionado a partir de: nimotuzumab, zalutumumab, matuzumab, panitumumab, MEDX-214, e ABX- EGF.
[0531]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e ao IGF1R. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2, Ang2, e IGF1R. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é HuMax- Her2 ™ ou 1. De acordo com outras modalidades trastuzumab-MS, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é trastuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente de MRD, e/ou um anticorpo de contendo MRD concorre para ErbB2 de ligação com trastuzumab.
[0532]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: ErbB3, EGFR, TGF1R, c-met, o VEGF, RON (MST1R), DLL4, PLGF, CDCP1 (CD318), NRP1, TNFRSF10A (DR4) e TNFRSF10B (DR5). Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e, adicionalmente, se liga a um alvo selecionado de: CD2, CD3, CD4 e NKG2D. Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e IGF1, IGF2 ou IGF1, 2. Composições multiespecíficas e multivalntes (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que se ligam a ErbB2 e, adicionalmente, se ligam a 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobadas pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo anticorpo contendo MRD é HuMax-Hcr2 ™ ou trastuzumab-DML. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é trastuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente de MRD, e/ou um anticorpo de contendo MRD concorre para ErbB2 de ligação com trastuzumab.
[0533]Em algumas modalidades contendo um anticorpo se liga a ErbB2 e MRD, adicionalmente, se liga ErbB3. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo anticorpo contendo MRD é HuMax-Her2 ™ ou trastuzumab-DML. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo o MRD é trastuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente de MRD, e/ou um anticorpo de contendo MRD concorre para ErbB2 de ligação com trastuzumab. Em uma outra modalidade, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um anticorpo de ligação a ErbB2 selecionado a partir de: MDX-210 (Medarex), tgDCC-EIA (Targeted Genetics), MGAH22 (MacroGenics), e pertuzumab (OMNITARG™). Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componentes MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete com um anticorpo para a ligação selecionada a partir de ErbB2: MDX-210, tgDCC-EIA, MGAH22, e pertuzumab.
[0534]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e HER2/3. Em outras modalidades, um anticorpo contendo MRD se liga a ErbB2 e HER2/3 simultaneamente.
[0535]Os inibidores de angiogênese alvejando o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) vias de sinalização foram observadas para proporcionar na melhor das hipóteses benefícios terapêuticos transitórios seguido de restauração do crescimento do tumor e progressão devido a uma capacidade aparente de tumores angiogênicos para se adaptarem a presença destes inibidores. Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que as propriedades multivalentes e multiespecíficas de anticorpos contendo MRD que se ligam a um alvo de angiogênese fornecem estes compostos com uma capacidade estender benefícios terapêuticos anti-angiogênicos para além daqueles observados a partir de, por exemplo, terapias de anticorpos monoclonais convencionais ligando vários alvos angiogênese distintos relacionados e interrompendo, assim, mecanismos de resistência disponíveis para o tumor angiogênico.
[0536]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga PDGFRA e, adicionalmente, liga a um alvo selecionado a partir de: VEGFA, VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNFSF2 (TNFa), FGFR3, EFNa1, EFNa2, ANG1, ANG2, IL6, IL8, IL18, IGF1, IGF2, IGF1,2, HGF, TIE2, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, EGFR, cMET, Entalhe 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, VCAM1, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) ligam PDGFRA e ligam pelo menos 1, 2, 3, 4, ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades especificas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga PDGFRA. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é o olaratumab. Em outras modalidades, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação PDGFRA com olaratumab. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é MEDI-575. Em outras modalidades, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação PDGFRA com MEDI-575.
[0537]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga PDGFRB e adicionalmente liga a um alvo selecionado a partir de: VEGFA, VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1- IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNFSF2 (TNFa), FGFR3, EFNa1 , EFNa2, ANG1 , ANG2, IL6, IL8, IL18, IGF1 , IGF2, IGF1,2, HGF, TIE2, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, EGFR, cMET, Entalhe 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, VCAM1, e PDGFRA. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam PDGFRB e também ligam, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga PDGFRB.
[0538]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga VEGFR1 e adicionalmente se liga a um alvo angiogênico selecionado a partir de: VEGF (ou seja,, VEGFA), VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2- IIIb, e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNFSF2 (TNFa), FGFR3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, IL6, IL8, IL18, HGF, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR2, VEGFR3, Entalhe 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, VCAM1, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam VEGFR1 e adicionalmente ligam 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga VEGFR1. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é IMC- 18F1. Em outras modalidades, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação VEGFR1 com IMC-18F1.
[0539]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga VEGFR2 e adicionalmente liga um alvo selecionado a partir de: VEGF (ou seja,, VEGFA), VEGFB, FGF1, FGF2, FGF4, FGF7, FGF8b, FGF19, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIc), FGFR3, TNFSF2 (TNFa), FGFR3, NRP1, ROBO4, CD30, CD33, CD55 CD80, KIT, CXCL12, Entalhe1EFNa1, EFNa2, ANG1, ANG2, IL6, IL8, IL18, HGF, PDGFA, PLGF, PDGFB, CXCL12, KIT, GCSF, CXCR4, PTPRC, TIE2, VEGFR1, VEGFR3, Entalhe 1, DLL4, EGFL7, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avß3 integrina, TGFb, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, VCAM1, PDGFRA, e PDGFRB. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam VEGFR2 e adicionalmente ligam 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga VEGFR2. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é IMC-1C11 ou DC101. Em outras modalidades, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação VEGFR2 com IMC-1C11 ou DC101.
[0540]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga VEGFR2 e adicionalmente liga ANG2 ou TIE2. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga VEGFR2. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é IMC1C11, DC101 ou TTAC-0001. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação VEGFR2 com IMC-1C11, DC101 ou TTAC-0001. Em outras modalidades, o componente de ligação TIE2 compreende um fragmento de ANG2 que liga TIE2. Em modalidades particulares, o componente de ligação TIE2 compreende os aminoácidos 283-449 da ANG2 humana divulgada no NCBI Ref. Seq. N°. NP_001138.1.
[0541]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga DLL4 e adicionalmente liga um alvo selecionado a partir de: EGFR, PLGF, VEGFR1, VEGFR2 e VEGF. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam DLL4 e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é REGN421. Em outras modalidades, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação DLL4 com REGN421.
[0542]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a um anti-angiogênico e um alvo invasivo ou metastático do câncer. Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a um alvo angiogênico e também se liga a um alvo invasivo ou metastático de câncer selecionado a partir de: CXCL12, CXCR4 (por exemplo, CXCR4b), CCR7 (por exemplo, CXCR7b), CD44 (por exemplo, CD44v3 e CD44v6), a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a5ß1 integrina, avßl integrina, avß3 integrina, TGFb, avß5 integrina, a9ß1 integrina, a6ß4 integrina, aMß2 integrina, PD-1 , HGF, cMET, MMP2, MMP-7, MMP-9, MMP-12, VEGFA, VEGFB, e IGF1. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que liga um alvo angiogênico e também ligam 2, 3, 4, 5 ou mais desses alvos invasivos ou metastáticos de câncer também estão englobados nessa invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga VEGF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é bevacizumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, componente MRD, e/ou anticorpo contendo MRD compete para a ligação VEGF com bevacizumab.
[0543]Em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga 2 ou mais alvos associados com vias de sinalização de células distintas. Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com vias de sinalização redundante, sobreposta ou cruzada. Por exemplo, em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com PI3K/AKT/mTOR sinalizando (por exemplo, ErbB2, EGFR, IGF1R, Entalhe, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIb), FGFR3, FGFR4, GPCR, e/ou c-MET). Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0544]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a 2 ou mais alvos associados ao receptor tirosina Raf/MEK/MAPK sinalizando (por exemplo, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, FGFR1 (por exemplo, FGFR1- IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIb), FGFR3, FGFR4, CD28, RET, cMET, EGFR, ErbB2, Entalhe, Entalhe1, Entalhe3, Entalhe4, DLL1, DLL4, Chanfrado, Chanfrado1, Chanfrado2, e Chanfrado3. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) liga 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0545]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com SMAD sinalizando (por exemplo, Entalhe, TGFß, TGFßR1, TGFßR2, e um BMP). Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0546]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com JAK/STAT sinalizando (por exemplo, IFNgR1 , IFNgR3, IFNG, IFN-AR2, IFN- AR1, IFN alfa, IFN beta, IL6a receptor (GP130), IL6, IL12RB1, IL12, e EGFR). Assim, a invenção abrange um anticorpo contendo MRD que liga a 2 ou mais alvos selecionados a partir de WNT1, WNT2, WNT2b, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Entalhe, Entalhe1, Entalhe3, Entalhe4, DLL1, DLL4, Chanfrado, Chanfrado1, Chanfrado2, e Chanfrado3. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0547]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com NFkB sinalizando (por exemplo, BCR, TCR, IL1R, IL1, FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Entalhe, Entalhe1, Entalhe3, Entalhe4, DLL4, Chanfrado, Chanfrado1, Chanfrado2, Chanfrado3, TNFSF1 (TNFb, LTa), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), TNFRSF7 (CD27), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF13 (APRIL), TNFSF13B (BLYS), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFRSF5 (CD40), TNFSF2 (TNFa), TNFSF3 (LTb), TNFRSF3 (LTBR), TNFSF14 (LIGHT, Ligante HVEM), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF18 (Ligante GITR), TNFRSF18 (GITR), TNFSF4 (Ligante OX40), TNFRSF4 (OX40), TNFSF9 (Ligante 41BB), TNFRSF9 (41BB), um BMP, NGF, e TGF alfa). Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0548]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com proliferação celular (por exemplo, FGF1, FGF2, FGF7, FGF4, FGF10, FGF18b, FGF19, FGF23, FGFR1 (por exemplo, FGFR1- IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFRIIIB e FGFR-IIIC), FGFR3, FGFR4, TCR, TNFRSF5 (CD40), TLR1, TLR2, TLR3, TLR 4, TLR5, e TLR6). Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0549]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com a sinalização de receptor de ferramenta semelhante (por exemplo, TLR1 , TLR2, TLR3, TLR 4, TLR5, e TLR6).
[0550]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 2 ou mais alvos associados com sinalização celular B (por exemplo, mlg, Iga/Igß (CD79a/CD79b) heterodimeros (a/ß), CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD30, CD46, CD80, CD86, ICOSL (B7-H2), HLA-DR (CD74), PD1, PDL1, TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), BTLA, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF14 (HVEM), Fc gamma RIIB, IL4R e CRAC. Em uma modalidade particular, um anticorpo contendo MRD liga a CD19 e CD20. Em uma modalidade adicional, o anticorpo contendo MRD liga CD19, CD20, e CD22. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0551]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 1 ou mais marcadores de superfície celular B, selecionado a partir de: CD10, CD24, CD37, CD53, CD72, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD81, CD82, CD83, CD84 (SLAM5) e CD85. Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga a 1 ou mais marcadores de superfície celular B, selecionado a partir de: CD10, CD24, CD37, CD53, CD72, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD81, CD82, CD83, CD84 (SLAM5) e CD85. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes marcadores de superfície celular B.
[0552]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga CD19 e um alvo selecionado a partir de: CD20, CD22, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, CD80, CD138, VEGFR1, VEGFR2, EGFR, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), TNF, NGF, VEGF, IGF1,2, IGF2, IGF1 e TNFSF11 (RANKL). Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga CD20 e um alvo selecionado a partir de: CD3, CD4 e NKG2D. As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam CD19 e também ligam pelo menos 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos estão englobados nesta invenção. Em modalidades específicas, o componente do anticorpo do anticorpo contendo MRD liga CD19. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é MDX-1342, SGN- CD19A, XMAB®5574, SGN-19A, ASG-5ME ou MEDI-551. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, o componente MRD, e/ou o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD19 com MDX-1342, SGN-CD19A, XMAB®5574, SGN-19A, ASG-5ME ou MEDI-551.
[0553]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga CD22 e um alvo selecionado a partir de: CD19, CD20, CD23, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, CD80, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), VEGF, TNF e NGF. Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga CD22 e um alvo selecionado a partir de: CD3, CD4 e NKG2D. As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam CD22 e também ligam pelo menos 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos estão englobados nesta invenção. Em modalidades específicas, o componente do anticorpo do anticorpo contendo MRD liga CD22. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é epratuzumab ou inotuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, o componente MRD, e/ou o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD22 com epratuzumab ou inotuzumab.
[0554]Em modalidades adicionais, o componente do anticorpo do anticorpo contendo MRD é moxetumomab (CAT-8015, Cambridge Antibody Technologies). Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, o componente MRD, e/ou o anticorpo contendo MRD compete para a ligação CD22 com moxetumomab.
[0555]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga TNFRSF5
[0556](CD40) e um alvo selecionado a partir de: BCMA, TNFSF11 (RANKL), VEGFR1, VEGFR2, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), CD22, CD30, CD38, CD56 (NCAM), CD70, CD80, CD138, IL6, IGF1, IGF2, IGF1,2, BLyS, APRIL e NGF. Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD liga CD40 e uma alvo selecionado a partir de: CD3, CD4 e NKG2D. As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam CD40 e também ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos estão englobados nesta invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga CD40. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é CP870893, dacctuzumab, ANTOVA®, lucatumumab, XMAB®5485 ou teneliximab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, o componente MRD, e/ou o anticorpo contendo MRD compete para a ligação CD40 com CP870893, dacetuzumab, ANTOVA®, lucatumumab, XMAB®5485 ou teneliximab.
[0557]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD liga CD33 e um alvo selecionado a partir de: FLT3, CD44, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), CD80, MGC, VEGFR1, VEGFR2, IL1, IL6, TNF e VEGF. As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que ligam TNFRSF10Be também ligam pelos menos 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos estão englobados nesta invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga CD33. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é gemtuzumab ou lintuzumab. Em modalidades adicionais, o componente de anticorpo, o componente MRD, e/ou o anticorpo contendo MRD compete para a ligação CD33 com gemtuzumab ou lintuzumab.
[0558]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD ligam a 2 ou mais alvos associados com apresentação antigêno de sinalização celular (por exemplo, mIg, Iga/Igß (CD79a/CD79b) heterodimeros (a/ß), CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD28, CD30, CD30L, TNFSF14 (LIGHT, Ligante HVEM), CD70, ICOS, ICOSL (B7-H2), CTLA4, PD-1, PDL1 (B7-H1), B7-H4, B7-H3, PDL2 (B7-DC), BTLA, CD46, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), HLA-DR, CD74, PD1, TNFRSF4 (OX40), TNFRSF9 (41BB), TNFSF4 (Ligante OX40), TNFSF9 (Ligante 41BB), TNFRSF9 (41BB), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), BTLA, TNFRSF18 (GITR), MHC-1, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF14 (HVEM), Fcgamma RIIB, IL4R e CRAC). Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0559]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD liga 2 ou mais alvos associados com sinalização de receptor de células T (por exemplo, CD3, CD4, CD27, CD28, CD70, IL2R, LFA-1, C4, ICOS, CTLA-4, CD45, CD80, CD86, PG-1, TIM1 , TIM2, TIM3, TIM4, galectina 9, TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF25 (DR3), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF18, TNFRSF18 (GITR), TNFRSF4 (OX40), TNFSF4 (Ligante OX40), PD1, PDL1, CTLA4, TNFSF9 (Ligante 41BB), TNFRSF9 (41BB), TNFSF14 (LIGHT, Ligante HVEM), TNFSF5 (Ligante CD40), BTLA, e CRAC). Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0560]Em modalidades adicionais, um anticorpo contendo MRD se liga a um antígeno da superfície da célula de tumor e um segundo alvo que está associado com uma via de escape para resistir a quimioterapia. Em algumas modalidades, o antígeno da superfície da célula de tumor é um membro selecionado a partir de EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC.
[0561]Em outras formas e realização, um anticorpo contendo MRD liga glicoproteína-P (codificada por MDR1) e um antígeno da superfície celular. Em modalidades particulares, o antígeno da superfície celular é um antígeno tumoral. Em outras modalidades, o antígeno da superfície da célula de tumor é um membro selecionado a partir de EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1 , VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC. Em modalidades particulares, o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD30 com SGN-35 (brentuximab). Em modalidades particulares adicionais o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de ErbB2 com trastuzumab.
[0562]Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga MRP (Proteína associada Resistência Multidroga) e um antígeno de superfície celular. Em modalidades particulares, o antígeno de superfície celular é um antígeno tumoral. Em outras modalidades, o antígeno de tumor de superfície celular é um membro selecionado a partir de EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FGFR, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, IGF1-R, Cripto, SLC44A4 e GCC. Em modalidades particulares o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de CD30 com SGN-35 (brentuximab). Em modalidades particulares adicionais o anticorpo contendo MRD compete para a ligação de ErbB2 com trastuzumab.
[0563]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD se liga a um alvo terapêutico e um segundo alvo que está associado com uma via de escape para resistir ao efeito terapêutico resultante do direcionamento do alvo terapêutico. Por exemplo, em uma modalidade, um anticorpo contendo MRD liga-se a EGFR e um alvo selecionado a partir de MDR1, cMET, Entalhe, Entalhe1, Entalhe3, Entalhe4, DLL1, DLL4, Chanfrado, Chanfrado1, Chanfrado2, e Chanfrado3. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e monovalentes multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos.
[0564]Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2 e um fator angiogênico. Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2 e IGF1R. Em outra modalidade, o anticorpo alveja ErbB2 e pelo menos um MRD alveja um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga ao mesmo epitopo ErbB2 como trastuzumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em uma modalidade adicional, um anticorpo que inibe competitivamente a ligação de trastuzumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em modalidades adicionais, um anticorpo que compreende as sequências de SEQ ID N°s:59-64 está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em modalidades adicionais, o anticorpo trastuzumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R.
[0565]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a ErbB2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligada a uma Ang2 ligando MRD que se liga ao mesmo epitopo Ang2 como um MRD compreendendo a sequência MGAQTNFMPMDNDELLLYEQFILQQGLE SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligada a uma Ang2 ligando MRD que inibe competitivamente um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligada a um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8.
[0566]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2.
[0567]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligado diretamente a um anticorpo que se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um Ang2 ligando MRD está operacionalmente ligada a um anticorpo que se liga a ErbB2 através de um ligante.
[0568]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a ErbB2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo o IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligado a um IGF1R ligando MRD que se liga ao mesmo epitopo IGF1R como um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligado a um IGF1R ligando MRD que inibe competitivamente um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a ErbB2 está ligado a um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência SLFVPRPERK (SEQ ID N°:103). Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência ESDVLHFTST (SEQ ID N°:104). Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência LRKYADGTL (SEQ ID N°:105).
[0569]Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R ligando MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2.
[0570]Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R ligando MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um IGF1R ligando MRD está operacionalmente ligada a um anticorpo que se liga a ErbB2 através de um ligante.
[0571]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD alveja ErbB2 e HER2/3. Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD pode ligar-se a ErbB2 e HER2/3 simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a ErbB2 um anticorpo que se liga a ErbB2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo HER2/3. Em modalidades adicionais, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em outras modalidades, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2.
[0572]Em algumas modalidades, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que liga-se a ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um HER2/3 de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga a ErbB2 através de um ligante. Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD alveja ErbB2 e HER2/3.
[0573]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD pode ligar-se a ErbB2 e HER2/3 simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a HER2/3 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo ErbB2. Em modalidades adicionais, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a HER2/3. Em outras modalidades, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a HER2/3. Em modalidades adicionais, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga a HER2/3. Em modalidades adicionais, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD é operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga a HER2/3. Em algumas modalidades, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga a HER2/3. Em modalidades adicionais, pelo menos um ErbB2 de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga a HER2/3 através de um ligante.
[0574]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2, Ang2, e IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD compreende um anticorpo que tem como alvo a ErbB2, um MRD que tem como alvo Ang2, e um MRD que tem como alvo IGF1R. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão ligados no mesmo local em que o anticorpo anti- ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão ligados a diferentes locais em que o anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão sobre a cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão sobre a cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está na cadeia leve do anticorpo de ErbB2, e o MRD TGF1R está na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está na cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD TGF1R está na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo de ErbB2, e o MRD IGF1R está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD IGF1R está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD Ang2 está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreendem um anticorpo que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo IGF1R; e composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreendem um anticorpo que tem como alvo IGF1R, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo Ang2 também estão englobados pela invenção.
[0575]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2, Ang2, e HER2/3. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD compreende um anticorpo que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo Ang2, e um MRD que tem como alvo HER2/3. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e HER2/3 estão ligados ao mesmo local em que o anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e HER2/3 estão ligados a diferentes locais em que o anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e HER2/3 estão na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e HER2/3 estão na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está na cadeia leve do anticorpo ErbB2, e o MRD HER2/3 estão na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está na cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD HER2/3está na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD HER2/3 está no terminal V da cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD HER2/3 está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD Ang2 está no terminal C da cadeia leve de anticorpo anti-ErbB2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreendem um anticorpo que tem como alvo HER2/3, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo Ang2; e composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD)que compreendem um anticorpo que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo HER2/3 também estão englobados pela invenção.
[0576]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2, HER2/3, e IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD compreende um anticorpo que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo HER2/3, e um MRD que tem como alvo IGF1R. Em algumas modalidades, os MRDs HER2/3 e IGF1R estão ligados ao mesmo local em que o anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs HER2/3 e IGF1R estão ligados a diferentes locais em que o anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs HER2/3 e IGF1R estão na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs HER2/3 e IGF1R estão na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD HER2/3 está na cadeia leve do anticorpo ErbB2, e o MRD IGF1R está na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD HER2/3 está na cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD IGF1R está na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD HER2/3 está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD IGF1R está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, o MRD IGF1R está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo ErbB2, e o MRD HER2/3 está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti- ErbB2. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreende um anticorpo que tem como alvo HER2/3, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo IGF1R; e composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreende um anticorpo que tem como alvo IGF1R, um MRD que tem como alvo ErbB2, e um MRD que tem como alvo HER2/3 também estão englobados pela invenção.
[0577]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja ErbB2, Ang2, HER2/3, e IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD compreende um anticorpo que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo HER2/3, e um MRD que tem como alvo IGF1R. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão ligados à mesma cadeia do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão ligados a diferentes cadeias do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão na cadeia leve do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão na cadeia pesada do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão ligados ao mesmo terminal do anticorpo anti-ErbB2. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2, HER2/3, e IGF1R estão ligados a diferentes terminais do anticorpo anti-ErbB2. composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) compreendendo: um anticorpo que tem como alvo HER2/3, um MRD que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo Ang2, e um MRD que tem como alvo IGF1R; composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreende um anticorpo que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo HER2/3, e um MRD que tem como alvo IGF1R; e composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que compreende um anticorpo que tem como alvo IGF1R, um MRD que tem como alvo ErbB2, um MRD que tem como alvo HER2/3, e um MRD que tem como alvo Ang2 também estão englobados pela invenção.
[0578]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2ligado operacionalmente a um Ang2 de ligação MRD se liga a ambos ErbB2 e Ang2 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um IGF1R de ligação MRD se liga a ambos ErbB2 e IGF1R simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um HER2/3 de ligação MRD se liga a ambos ErbB2 e HER2/3 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um MRD Ang2, um MRD IGF1R, e/ou um MRD HER2/3 liga-se a ErbB2, Ang2, IGF1R, e/ou HER2/3 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um Ang2, IGF1R e/ou HER2/3 de ligação MRD(s) exibe atividade ADCC. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um Ang2, IGF1R, e/ou HER2/3 de ligação MRD(s) sub-regula a sinalização Akt. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD inibe a ligação de Ang2 para TIE2. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um IGF1R de ligação MRD(s) sub-regula a sinalização IGF1R. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um Ang2, IGF1R e/ou HER2/3 de ligação MRD(s) inibe a proliferação celular. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-ErbB2 operacionalmente ligado a um Ang2, IGF1R, e/ou HER2/3 de ligação MRD(s) inibe o crescimento do tumor.
[0579]Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD alveja VEGF e um fator angiogênico. Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD alveja VEGF e IGF1R. Em outra modalidade, o anticorpo alveja VEGF e pelo menos um MRD alveja um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga ao mesmo epitopo VEGF como bevacizumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em uma modalidade adicional, um anticorpo que inibe competitivamente a ligação bevacizumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou TGF1R. Em modalidades adicionais, um anticorpo que compreende as sequências de SEQ ID N°s:78-79 está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R. Em modalidades adicionais, o anticorpo bevacizumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico e/ou IGF1R.
[0580]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao VEGF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao VEGF está ligado a um Ang2 de ligação MRD que se liga no mesmo epitopo Ang2 como um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao VEGF está ligado a um Ang2 de ligação MRD que inibe competitivamente um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao VEGF está ligado a um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8.
[0581]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao VEGF.
[0582]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga ao VEGF. Em modalidades adicionais, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao VEGF por meio de um ligante.
[0583]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a VEGF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a VEGF está ligado a um IGF1R de ligação MRD que se liga ao mesmo epitopo IGF1R com um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a VEGF está ligado a um IGF1R de ligação MRD que competitivamente inibe um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a VEGF está ligado a um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:14. Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência SLFVPRPERK (SEQ ID N°:103). Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência ESDVLHFTST (SEQ ID N°:104). Em algumas modalidades, o anticorpo que liga ErbB2 está ligado a um MRD que codifica a sequência LRKYADGTL (SEQ TD N°:1 05).
[0584]Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao VEGF. Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao VEGF.
[0585]Em algumas modalidades, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga ao VEGF. Em modalidades adicionais, pelo menos um IGF1R de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao VEGF por meio de um ligante.
[0586]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja VEGF, Ang2, e IGF1R. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD compreende um anticorpo que tem como alvo VEGF, um MRD que tem como alvo Ang2, e um MRD que tem como alvo IGF1R. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão ligados ao mesmo local em que o anticorpo anti- VEGF. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão ligados a diferentes locais sobre o anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão sobre a cadeia leve do anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, os MRDs Ang2 e IGF1R estão sobre a cadeia pesada do anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está sobre a cadeia leve do anticorpo anti-VEGF, e o MRD IGF1R está sobre a cadeia pesada do anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está sobre a cadeia pesada do anticorpo anti-VEGF, e o MRD IGF1R está sobre a cadeia leve do anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, o MRD Ang2 está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo anti-VEGF, e o MRD IGF1R está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti-VEGF. Em algumas modalidades, o MRD IGF1R está no terminal N da cadeia pesada do anticorpo anti-VEGF, e o MRD Ang2está no terminal C da cadeia leve do anticorpo anti- VEGF.
[0587]Em algumas modalidades, o anticorpo anit-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD se liga a ambos anti- VEGF e Ang2 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- VEGF operacionalmente ligado a um IGF1R de ligação MRD se liga a ambos anti-VEGF e IGFR1 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD e um IGF1R de ligação MRD ligam-se a VEGF, Ang2, e IGF1R simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 e/ou TGF1R de ligação MRD(s) apresenta uma atividade ADCC. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 e/ou IGF1R de ligação MRD(s) sub-regula a sinalização VEGF. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD inibe a ligação de Ang2 para TIE2. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um IGF1R de ligação MRD inibe a sinalização do IGF1R. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 e/ou IGF1R de ligação MRD(s) inibe a proliferação celular. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-VEGF operacionalmente ligado a um Ang2 e/ou IGF1R de ligação MRD(s) inibe o crescimento do tumor.
[0588]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 ou o anticorpo VEGF contém um MRD que inibe a ligação de pertuzumab para ErbB2. Em algumas modalidades, um anitcorpo anti-ErbB2 contém pelo menos um MRD que se liga a Ang2 ou IGF1R e um MRD que inibe a ligação de pertuzumab para ErbB2. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-VEGF contém pelo menos um MRD que se liga a Ang2 ou IGF1R e um MRD que inibe a ligação de pertuzumab para ErbB2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ErbB2 contém um MRD que se liga a Ang2, um MRD que se liga a IGF1R, e um MRD que inibe a ligação de pertuzumab para ErbB2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-VEGF contém um MRD que se liga a Ang2, um MRD que se liga a IGF1R, e um MRD que inibe a ligação de pertuzumab para ErbB2.
[0589]Em modalidades específicas, o anticorpo contendo MRD alveja TNF e um fator angiogênico. Em outra modalidade, o anticorpo aveja TNF, e pelo menos um MRD tem como alvo um fator angiogênico. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga ao mesmo epitope TNF como adalimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em uma modalidade adicional, um anticorpo que competitivamente inibe a ligação de adalimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em modalidades adicionais, um anticorpo que compreende as sequências de SEQ ID N°s:80-85 está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em modalidades adicionais, o anticorpo adalimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em uma modalidade, um anticorpo que se liga ao mesmo epitopo de TNF como golimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em uma modalidade adicional, um anticorpo que competitivamente inibe uma ligação golimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico. Em modalidades adicionais, o anticorpo golimumab está operacionalmente ligado a pelo menos um MRD que tem como alvo um fator angiogênico.
[0590]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao TNF está operativamente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao TNF está ligado a um Ang2 de ligação MRD que se liga ao mesmo epitopo Ang2 como um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao TNF está ligado a um Ang2 de ligação MRD que inibe competitivamente um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8. Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga ao TNF está ligado a um MRD compreendendo a sequência de SEQ ID N°:8.
[0591]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada do anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada do anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve do anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve do anticorpo que se liga ao TNF.
[0592]Em algumas modalidades, pelo menos um Ang2 ligando MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga ao TNF. Em modalidades adicionais, pelo menos um Ang2 de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao TNF através de um ligante.
[0593]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD ligam-se a ambos TNF e Ang2 simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD exibe atividade ADCC. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD inibe a ligação do TNF para a superfície celular p55 e p75 de receptores TNF. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação a MRD superfícies de lise de células expressando TNF in vitro na presença de complemento. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD inibe a ligação de Ang2 para TIE2. Em modalidades adicionais, o anticorpo anti-TNF operacionalmente ligado a um Ang2 de ligação MRD reduzem os sinais e sintomas da artrite.
[0594]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja TNF e IL6. Em algumas modalidades, o anticorpo contend MRD é capaz de ligar TNF e IL6 simultaneamente. Assim, em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao TNF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo IL6. Em outras modalidades, um anticorpo que se liga ao IL6 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF.
[0595]Em algumas modalidades, pelo menos um TL6 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada do anticorpo que liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um IL6 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada do anticorpo que liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um IL6 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve do anticorpo que liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um IL6 de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve do anticorpo que liga ao TNF.
[0596]Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada do anticorpo que liga ao IL6. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada do anticorpo que liga ao IL6. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve do anticorpo que liga ao IL6. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve do anticorpo que liga ao IL6.
[0597]Em algumas modalidades, pelo menos um IL6 de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga ao TNF. Em modalidades adicionais, pelo menos um IL6 de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao TNF através de um ligante.
[0598]Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que se liga ao IL6. Em modalidades adicionais, pelo menos um TNF de ligação está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao IL6 através de um ligante.
[0599]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja TNF e BLyS. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é capaz de ligar TNF e BLyS simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao TNF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo BLyS. Em outras modalidades, um anticorpo que se liga ao BLyS está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF.
[0600]Em algumas modalidades, pelo menos um BLyS de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um BLyS de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um BLyS de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao TNF. Em algumas modalidades, pelo menos um BLyS de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga ao TNF.
[0601]Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a BLyS. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a BLyS. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal C da cadeia leve de um anticorpo que se liga a BLyS. Em algumas modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo que se liga a BLyS.
[0602]Em algumas modalidades, pelo menos um BLyS de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que liga-se ao TNF. Em modalidades adicionais, pelo menos um BLyS de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao TNF através de um ligante.
[0603]Em outras modalidades, pelo menos um TNF de ligação MRD está diretamente ligado operacionalmente a um anticorpo que liga-se ao BLyS. Em modalidades adicionais, pelo menos um TNF de ligação MRD está operacionalmente ligado a um anticorpo que se liga ao BLyS através de um ligante.
[0604]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja Ang2, TNF, e IL6. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é capaz de ligar Ang2, TNF, e IL6 simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a TNF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2 e um MRD que tem como alvo IL6. Em algumas modalidades, os Ang2 e IL6 de ligação MRDs estão localizados na mesma cadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e IL6 de ligação MRDs estão localizados no mesmo terminal do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e IL6 de ligação MRDs estão localizados em diferentes cadeias de anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e IL6 de ligação MRDs estão localizados em terminais diferentes do anticorpo.
[0605]Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a Ang2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF e um MRD que tem como alvo IL6. Em algumas modalidades, os TNF e IL6 de ligação MRDs estão localizados na mesma cadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF e IL6 de ligação MRDs estão localizados no mesmo terminal do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF e IL6 de ligação MRDs estão localizados em diferentes cadeias do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF e IL6 de ligação MRDs estão localizados em diferentes terminais do anticorpo.
[0606]Em algumas modalidades, o anticorpo que se liga a IL6 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2 e um MRD que tem como alvo TNF. Em algumas modalidades, os Ang2 e TNF de ligação MRDs estão localizados na mesma cadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e TNF de ligação MRDs estão localizados no mesmo terminal do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e TNF de ligação MRDs estão localizados em diferentes cadeias do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2 e TNF de ligação MRDs estão localizados em diferentes terminais do anticorpo.
[0607]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja Ang2, TNF, e BLyS. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é capaz de ligar Ang2, TNF, e BLyS simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao TNF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2 e um MRD que tem como alvo BLyS. Em outras modalidades, um anticorpo que se liga ao BLyS está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF e um MRD que tem como alvo Ang2. Em outras modalidades, um anticorpo que se liga ao Ang2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF e um MRD que tem como alvo BLyS. Em algumas modalidades, os Ang2, BLyS, e/ou TNF de ligação MRDs estão localizados na mesma cadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, Ang2, BLyS, e/ou TNF de ligação MRDs estão localizados no mesmo terminal do anticorpo. Em algumas modalidades, the Ang2, BLyS, e/ou TNF de ligação MRDs estão localizados em diferentes cadeias do anticorpo. Em algumas modalidades, os Ang2, BLyS, e/ou TNF de ligação MRDs estão localizados em diferentes terminais do anticorpo.
[0608]Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD alveja Ang2, TNF, IL6, e BLyS. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é capaz de ligar Ang2, TNF, IL6 e BLyS simultaneamente. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao TNF está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo IL6, e um MRD que tem como alvo BLyS. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao Ang2 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo TNF, um MRD que tem como alvo IL6, e um MRD que tem como alvo BLyS. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao IL6 está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo TNF, e um MRD que tem como alvo BLyS. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga ao BLyS está operacionalmente ligado a um MRD que tem como alvo Ang2, um MRD que tem como alvo IL6, e um MRD que tem como alvo TNF. Em algumas modalidades, os TNF, Ang2, IL6, e/ou BLyS de ligação MRDs estão localizados na mesma cadeia do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF, Ang2, IL6 e/ou BLyS de ligação MRDs estão localizados no mesmo terminal do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF, Ang2, IL6, e/ou BLyS de ligação MRDs estão localizados em diferentes cadeias do anticorpo. Em algumas modalidades, os TNF, Ang2, IL6 e/ou BLyS de ligação MRDs estão localizados em diferentes terminais do anticorpo. VI. Processos de Fabricação da Fusão Anticorpo-MRD
[0609]As composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpo contendo MRD) e MRDs podem ser produzidas por qualquer método conhecido na arte para a síntese de anticorpos, polipeptídeos, imunoconjugados e citotoxinas, em particular, por síntese química ou por técnicas de expressão recombinantes. Uma vantagem das composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) é que eles podem ser produzidos usando os protocolos que são conhecidos na arte para a produção de anticorpos. As moléculas de fusão anticorpo MRD podem ser codificadas por um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos. Assim, os polinucleotídeos aqui descritos podem codificar um MRD, uma cadeia pesada de anticorpo, uma cadeia leve de anticorpo, uma proteína de fusão compreendendo uma cadeia pesada de anticorpo e pelo menos um MRD, e/ou uma proteína de fusão compreendendo uma cadeia leve de anticorpo e pelo menos um MRD.
[0610]Consequentemente, a invenção proporciona construções de vetores compreendendo uma sequência(s) de polinucleotídeo que codifica composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) convencionais para clonagem e transformação podem ser utilizados para a preparação de linhas celulares que expressam as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da invenção.
[0611]Os vetores de expressão recombinantes que contêm uma sequência (s) polinucleótido que codifica composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da invenção podem ser preparados utilizando técnicas bem conhecidas. Os vetores de expressão incluem uma sequência de codificação polinucleotideo operacionalmente ligado a transcrição adequada ou sequências de nucleotídeos reguladoras translacionais, tais como, aqueles derivados a partir de mamífero, microbiano, viral ou genes de insetos. Exemplos de sequências reguladoras presentes nas construções de vetores de expressão incluem promotores de transcrição, operadores, intensificadores, sítios de ligação ribossômico de mRNA, e/ou outras sequências apropriadas que controlam a transcrição e tradução iniciação e terminação. As sequências nucleotídicas estão "operacionalmente ligadas" quando a sequência reguladora funcionalmente relacionada com a sequência de nucleotídeos para o polipeptídeo apropriado. Assim, uma sequência do promotor está operacionalmente ligada a, por exemplo, uma sequência de cadeia pesada do anticorpo MRD se a sequência de nucleotídeos promotora controla a transcrição da sequência de nucleotídeos apropriada.
[0612]A sequência de codificação de polinucleotídeo no vetor de expressão podem incluir sequências heterólogas adicionais que codificam polipeptídeos tais como, peptídeos de sinal que não estão naturalmente associadas com sequências de cadeia pesada e/ou leve de anticorpo. Por exemplo, uma sequência de nucleotídeos para um peptídeo de sinal (comando de secreção) pode ser fundida em enquadramento com a sequência de polipeptídeo de modo a que o anticorpo contendo MRD é secretado para o espaço periplasmático ou para o meio. Um sinal de peptídeo que é funcional nas células hospedeiras pretendidas aumenta a secreção extracelular do anticorpo apropriado. O sinal de peptídeo pode ser clivado do polipeptídeo quando da secreção do anticorpo a partir da célula. Exemplos de sequências que codificam sinais de secreção que podem ser incluídos nos vetores de expressão incluem os descritos em, por exemplo, U.S. Pat. N°s. 5.698.435, 5.698.417, e 6.204.023.
[0613]Uma variedade sistemas de vetor hospedeiro de expressão pode ser utilizada para expressar a sequência de codificação de um anticorpo contendo MRD.
[0614]As células hospedeiras úteis na presente invenção incluem, mas não estão limitados a microrganismos tais como, bactérias (por exemplo, E. coli, B. subtilis) transformadas com DNA de bacteriófago recombinante, DNA plasmídico ou vectores de expressão de DNA de cosmídeos contendo as sequências de codificação de anticorpo; fermento (por exemplo, Saccharomyces, Pichia) transformadas com vetores de expressão de levedura recombinantes contendo as sequências de codificação de anticorpo; sistemas de células de inseto infectadas com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, Baculovirus) contendo as sequências de codificação de anticorpo; sistemas de células vegetais infectadas com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, vírus do mosaico da couve- flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformadas com vetores de expressão plasmídeo recombinante (por exemplo, plasmídeo Ti) contendo sequências de codificação de anticorpo contendo MRD. Em modalidades particulares, os sistemas de células de mamífero são usadas para produzir as composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpo contendo MRD). Sistemas de células de mamífero normalmente utilizam construções de expressão recombinantes contendo promotores derivados do genoma de células de mamíferos (por exemplo, promotor metalotioneína) ou a partir de vírus de mamíferos (por exemplo, o promotor tardio do adenovírus; o promotor 7,5K do vírus vaccinia). Exemplos de células hospedeiras de mamífero úteis para produzir as composições multivalentes e multiespecíficas da invenção incluem, células CHO, células BHK, células NS0, as células SP2/0, células de mieloma YO, células de mieloma de rato P3X63, células PER, células PER.C6, células COS, células 293, células 3T3 e células de hibridoma.
[0615]Os vetores contendo os polinucleótidos que codificam as composições multivalentes e multiespecíficas da invenção (por exemplo, anticorpo contendo MRD) ou porções ou fragmentos dos mesmos, incluem vetores de plasmídeo, uma cadeia única e dupla vetores fágicos, bem como uma cadeia única e dupla RNA de vetores virais de RNA ou DNA. Os vectores podem ser rotineiramente introduzidos em células hospedeiras usando técnicas conhecidas para a introdução de DNA e de RNA nas células. Vetores fágico e viral podem também ser introduzidos em células hospedeiras sob a forma de vírus empacotado ou encapsulado usando técnicas conhecidas para a infecção e transdução. Além disso, os vetores virais podem ser replicação competente ou alternativamente, a replicação defeituosa. Alternativamente, os sistemas de tradução isentos de células também podem ser usadas para produzir a proteína usando RNAs derivados das construções de expressão de DNA, da invenção (veja, por exemplo, Intl. Appl. Publ. WO86/05807 e WO89/01036; e U.S. Pat. No. 5, 122,464).
[0616]Também aqui fornecido, são métodos de produção de um anticorpo contendo MRD, o método compreendendo: a cultura de uma célula hospedeira compreendendo um ou mais polinucleótidos ou um vetor de expressão compreendendo um ou mais polinucleótidos isolados em um meio em condições que permitam a expressão do referido um ou mais polinucleótido, em que o referido um ou mais polinucleótidos codifica um ou mais polipeptídeos que fazem parte de anticorpo contendo MRD; e recuperar o referido anticorpo contendo MRD.
[0617]Os procariotas úteis como células hospedeiras em produzir as composições do presente invento (por exemplo, MRDs) incluem organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, tais como, E. coli e B. subtilis. Os vetores de expressão para utilização em células hospedeiras procarióticas geralmente contém um ou mais genes marcadores fenotípicos selecionáveis (por exemplo, genes que codificam proteínas que conferem resistência a antibióticos ou que fornecem um requisito autotrófico). Exemplos de vetores de expressão hospedeiro procarióticos úteis incluem o pKK223-3 (Pharmacia, Uppsala, Sweden), pGEM1 (Promega, Wis., USA), pET (Novagen, Wis., USA) e pRSET (Invitrogen, Calif, USA) série de vetores (veja, por exemplo, Studier, J. Mol. Biol. 219:37 (1991) e Schoepfer, Gene 124:83 (1993)). Exemplos de sequências promotoras frequentemente utilizados em vetores de expressão em células hospedeiras procarióticas incluem T7, (Rosenberg et al., Gene 56: 125135 (1987)), da beta-lactamase (penicilinase), sistema promotor da lactose (Chang et al., Nature 275:615 (1978)); e (Goeddel et al., Nature 281 :544 (1979)), sistema promotor de triptofano (trp) (Goeddel et al, Nucl. Acids Res. 8:4057, (1980)), e o promotor tac (Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2aEd., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.).
[0618]Em modalidades alternativas, sistemas de células hospedeiras eucarióticas podem ser usadas, incluindo as células de levedura transformadas com vetores de expressão de levedura recombinante contendo a sequência de codificação de um anticorpo contendo MRD da presente invenção, tal como, os sistemas de expressão ensinados em U.S. Pat. Appl. N°. 60/344.169 e WO03/056914 (métodos para a produção de glicoproteína tipo humano em uma célula hospedeira eucariótica não humana) (os conteúdos de cada uma das quais são incorporadas por referência na sua totalidade). Exemplos de levedura que pode ser utilizado para produzir as composições da invenção, tais como, MRDs, incluem leveduras do género Saccharomyces, Pichia, Actinomycetes e Kluyveromyces. Os vetores de leveduras contêm normalmente uma sequência de origem de replicação de um plasmídeo de levedura 2mu, uma sequência de replicação autônoma (ARS), uma região promotora, sequências para poliadenilação, sequências para terminação da transcrição, e um gene marcador selecionável. Exemplos de sequências de promotores de levedura em construções de expressão incluem, promotores de metalotioneina, 3-fosfoglicerato-quinase (Hitzeman et al., J. Biol. Chem. 255:2073, (1980)) e outras enzimas glicolíticas, tais como, a enolase, desidrogenase de gliceraldeído-3-fosfato, hexocinase, piruvato-descarboxilase, fosfofrutocinase, isomerase de glucose-6-fosfato, mutase de 3-fosfoglicerato, cinase de piruvato, isomerase de triosefosfato, isomerase de fosfoglicose, e glucocinase. Vetores e promotores adequados adicionais para utilização em expressão de levedura, bem como os protocolos de transformação de levedura são conhecidas na arte. Veja, por exemplo Fleer et al., Gene, 107:285- 195 (1991) e Hinnen et al, Proc. Natl. Acad. Sci., 75:1929 (1978).
[0619]Sistemas de cultura de células de insetos e de plantas hospedeiras também são úteis para a produção das composições da invenção. Tais sistemas de células de hospedeiro incluem, por exemplo, sistemas de células de inseto infetadas com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, baculovirus) contendo a sequência de codificação de um anticorpo contendo MRD; sistemas de células vegetais infetadas com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, vírus do mosaico da couve- flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformadas com vetores de expressão plasmídeo recombinante (por exemplo., plasmídeo Ti) contendo a sequência de codificação de um anticorpo contendo MRD, incluindo, mas não se limitando a, os sistemas de expressão ensinado em U.S. Pat. N° 6.815.184, WO2004/057002, WO2004/024927, U.S. Pat. Appl. N°s. 60/365.769, 60/368.047, e WO2003/078614, o conteúdo de cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0620]Em modalidades alternativas, podem ser utilizados outros sistemas de células hospedeiras eucarióticas, incluindo sistemas celulares animais infectados com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, adenovírus, vírus vaccinia) incluindo linhas celulares manipuladas para conter múltiplas cópias do DNA que codifica um anticorpo contendo MRD quer estavelmente amplificadas (CHO/dhfr) ou instável amplificado em cromossomos de minuto dobrado (por exemplo, linhas celulares murinas). Em uma modalidade, o vetor que compreende o polinucleotídeo(s) que codifica o anticorpo contendo MRD da invenção é policistronico.
[0621]Exemplos de células de mamífero úteis para a produção destas composições incluem Exemplos de células de mamífero úteis para a produção destas composições incluem células 293 (por exemplo, 293T e 293F), células CHO, células BHK, células NS0, células SP2/0, células de mieloma YO, células de mieloma de rato P3X63, células PER, células PER.C6 (Crucell, Netherlands) ou células de hibridoma, outras células de mamífero. As células hospedeiras de mamífero exemplares adicionais que são úteis na prática da invenção incluem, mas não estão limitados a, para células VERY, Hela, COS, MDCK, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 e T47D, CRL7030 e HsS78Bst. Alguns exemplos de sistemas de expressão e métodos de seleção são descritos nas seguintes referências e referências aqui citadas: Borth et al, Biotechnol. Bioen. 71(4):266- 73 (2000-2001), em Werner et al, Arzneimittelforschung/Drug Res. 48(8):870- 80 (1998), em Andersen and Krummen, Curr. Op. Biotechnol. 13:117-123 (2002), em Chadd e Chamow, Curr. Op. Biotechnol. 12:188-194 (2001), e em Giddings, Curr. Op. Biotechnol. 12:450-454 (2001). Outros exemplos de sistemas de expressão e métodos de seleção são descritos em Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:355-359 (1984), Bittner et al, Methods in Enzymol. 153:51-544(1987)). Sequências de controle da transcrição e tradução de vetores de expressão para célula hospedeira de mamífero são frequentemente derivados de genomas virais. Sequências promotoras comumente utilizadas e sequências estimuladoras em vetores de expressão de mamíferos incluem, sequências derivadas de vírus de Polioma, Adenovírus 2, Vírus Símio 40 (SV40), e o citomegalovírus humano (CMV). Exemplos de vetores de expressão comercialmente disponíveis para utilização em células hospedeiras de mamífero incluem pCEP4 (Invitrogen®) e pcDNA3 (Invitrogen®).
[0622]Um número de sistemas de seleção pode ser utilizado em sistemas de expressão de vetores hospedeiros de mamífero, incluindo, mas não se limitando a, os genes do vírus herpes simplex timidina cinase, fosforibosiltransferase de hipoxantina-guanina e adenina fosforibosiltransferase (Lowy et al, Cell 22:817 (1980)), que podem ser empregadas em células tk, hgprt- ou aprt-, respectivamente. Além disso, a resistência anti-metabolito pode ser utilizada como a base de seleção para, por exemplo, dhfr, gpt, neo, hygro, trpB, hisD, ODC (ornitina-descarboxilase), e o sistema de glutamina-sintase.
[0623]Os métodos que são bem conhecidos dos peritos na arte podem ser utilizados para construir vetores de expressão contendo a sequência de codificação de um anticorpo contendo MRD, juntamente com os sinais de controle apropriados de tradução/transcrição. Estes métodos incluem técnicas de DNA recombinante in vitro, técnicas sintéticas e recombinação in vivo/recombinação genética. Veja, por exemplo, as técnicas descritas em Maniatis et al, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) e Ausubel et al, CURRENT PROTOCOLS TN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y (1989).
[0624]Uma variedade sistemas de vetor de expressão hospedeira pode ser utilizada para expressar a sequência de codificação contendo um anticorpo MRD. Uma cepa de células hospedeiras pode ser escolhida, que modula a expressão das sequências de anticorpo inserido, ou modifique e processe o produto do gene do anticorpo na forma específica desejada. Tais modificações (por exemplo, glicosilação) e processamento (por exemplo, a clivagem) de produtos proteicos podem ser importantes para a função da proteína. Diferentes células hospedeiras têm mecanismos característicos e específicos para o processamento pós-translacional e modificação de proteínas e produtos de genes. As linhas celulares ou sistemas hospedeiros apropriados podem ser escolhidos para assegurar a modificação correta e processamento do anticorpo ou uma sua porção expressa. Para este fim, podem ser utilizadas células hospedeiras eucarióticas que possuem a maquinaria celular para o processamento adequado do transcrito primário, glicosilação, e fosforilação do produto génico.
[0625]A expressão estável em geral atingem resultados mais reprodutíveis do que a expressão transiente e também é mais passível de produção em grande escala; No entanto, está dentro das habilitações dos peritos na arte, para determinar se a expressão transiente é melhor para uma situação particular. Em vez de utilizar vetores de expressão que contêm origens virais de replicação, as células hospedeiras podem ser transformadas com os ácidos nucleicos de codificação respectivo, controlados por elementos de controle de expressão apropriadas (por exemplo, promotor, intensificador, sequências, terminadores de transcrição, locais de poliadenilação, etc.), e um marcador selecionável. Após a introdução de DNA estranho, as células manipuladas podem ser deixadas crescer durante 1-2 dias num meio enriquecido, e depois serão mudadas para um meio seletivo. O marcador selecionável no plasmídeo recombinante confere resistência à seleção e permite a seleção de células que integraram de forma estável o plasmídeo nos seus cromossomas e crescem para formar focos que por sua vez podem ser clonados e expandidos em linhas celulares.
[0626]Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são expressos em níveis (títulos) comparáveis aos dos anticorpos. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são expressas, pelo menos, cerca de 10 µg/ml, pelo menos cerca de 20 µg/ml, ou pelo menos cerca de 30 µg/ml. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são expressas, pelo menos, cerca de 40 µg/ml ou pelo menos cerca de 50 µg/ml. Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são expressas, pelo menos, cerca de 60 µg/ml, pelo menos cerca de 70 µg/ml, pelo menos cerca de 80 µg/ml, pelo menos cerca de 90 µg/ml, pelo menos cerca de 95 µg/ml, pelo menos cerca de 100 µg/ml, pelo menos cerca de 110 µg/ml, pelo menos cerca de 120 µg/ml, pelo menos cerca de 130 µg/ml, pelo menos cerca de 140 µg/ml, pelo menos cerca de 150 µg/ml, pelo menos cerca de 160 µg/ml, pelo menos cerca de 170 µg/ml, pelo menos cerca de 180 µg/ml, pelo menos cerca de 190 µg/ml, ou pelo menos cerca de 200 µg/ml. Os níveis de expressão de uma molécula de anticorpo podem ser aumentados por amplificação do vetor e os métodos de utilização e ferramentas recombinante conhecidos na arte, incluindo estratégias de remodelação da cromatina para aumentar a expressão do transgene.
[0627]A presente invenção é ainda dirigida a um método para modificar o perfil de glicosilação de um anticorpo contendo MRD, que é produzida por uma célula hospedeira, compreendendo a expressão na referida célula hospedeira um ácido nucleico que codifica um anticorpo contendo MRD e um ácido nucleico que codifica para um polipeptídeo com uma atividade glicosiltransferase, ou um vetor que compreende tais ácidos nucleicos. Os genes com atividade glicosiltransferase incluem ß(1,4)-N- acetilglucosaminiltransferase III (GnTII), a-manosidase II (Manll), ß(1,4)- galactosiltransferase (GalT), ß(1,2)-N-acetilglucos aminiltransferase I (GnTI), e ß(1,2)-N-acetilglucosaminiltransferase II (GnTII). Em uma modalidade, uma combinação de genes com atividade glicosiltransferase são expressos na célula hospedeira (por exemplo, GnTIII e Man II). Da mesma forma, o método engloba também a expressão de um ou mais polinucleotídeo(s) que codifica o anticorpo contendo MRD em uma célula hospedeira na qual um gene de glicosiltransferase foi interrompido ou de outra forma desativada (por exemplo, uma célula hospedeira na qual a atividade do gene que codifica núcleo a1-6 fucosiltransferase foi eliminada).Em outra modalidade, o anticorpo contendo MRD pode ser produzido em uma célula hospedeira que expressa adicionalmente um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo com atividade GnTIII para modificar o padrão de glicosilação. Em uma modalidade específica, o polipeptídeo que tem atividade GnTIII um polipeptídeo de fusão que compreende o domínio de localização de Golgi de um polipeptídeo residente em Golgi. Em outra modalidade, a expressão do anticorpo contendo MRD em uma célula hospedeira que expressa um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo com atividade GnTIII resulta em um anticorpo contendo afinidade ligação com o MRD aumento do receptor Fc e o aumento da função efetora. Consequentemente, em uma modalidade, o presente invento é dirigido a uma célula hospedeira que compreende (a) um ácido nucleico isolado compreendendo uma sequência que codifica um polipeptídeo com atividade GnTIII; e (b) um polinucleotídeo isolado que codifica um anticorpo contendo MRD da presente invenção, tais como, um anticorpo quimérico, primatizado ou humanizado. Em outra modalidade, o polipeptídeo com atividade GnTIII é um polipeptídeo de fusão que compreende o domínio catalítico de GnT III e o de domínio localização do Golgi é o domínio de localização de manosidase II. Métodos para a geração de tais polipeptídeos de fusão e utilizando-os para produzir anticorpos com funções efetoras aumentadas estão descritos em U.S. Provisional Pat. Appl. N°. 60/495.142 e U.S. Pat. Appl. Publ. N°. 2004/0241817, cada um dos quais é aqui incorporado por referência.
[0628]As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) com glicosilação alterada produzida pelas células hospedeiras da invenção exibem normalmente níveis elevados de receptor de Fc de afinidade e/ou o aumento da função efetora de ligação como um resultado da modificação da célula hospedeira (por exemplo, por expressão de um gene de glicosiltransferase). O aumento da afinidade ligação ao receptor de Fc pode ser aumentada ligando a um receptor de ativação FCY tal como, o receptor de FcYRIIIa. O aumento da função efetora pode ser um aumento em um ou mais dos seguintes: aumento da citotoxicidadependente de anticorpos celular, aumento da fagocitose celular dependente do anticorpo (ADCP), aumento da secreção de citocina, aumento da imuno-complexo-mediado captação de antígeno por células apresentadoras de antígenos, o aumento da citotoxicidade celular mediada por Fc, o aumento da ligação a células NK, aumento da ligação de macrófagos, aumento da ligação a células polimorfonucleares (PMNs), aumento da ligação de monócitos, o aumento da reticulação de anticorpos ligados ao alvo, aumento da sinalização direta induzindo a apoptose, aumento da maturação de células dendríticas, e aumento da escorva célula T.
[0629]Uma vez que uma composição monovalente e multivalente multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) Uma vez que uma composição monovalente e multivalente multiespecíficas do a invenção ter sido produzido através de expressão recombinante, que pode ser purificado por qualquer método conhecido na arte para a purificação de uma molécula de imunoglobulina, por exemplo, por cromatografia (por exemplo, de troca iónica, de afinidade, particularmente por afinidade para o antígeno específico após a Proteína A e cromatografia de dimensionamento em coluna), centrifugação, solubilidade diferencial, ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação das proteínas. Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas da presente invenção ou os seus fragmentos são opcionalmente fundidos a sequências de polipeptídeo heterologo aqui descritos ou de outro modo conhecidas na arte, para facilitar a purificação. Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas ou os seus fragmentos são opcionalmente fundidos com sequências de polipeptídeo heterologo aqui descritos ou de outro modo conhecidas na arte, para facilitar a purificação. Mais particularmente, prevê-se que os ligantes (por exemplo, anticorpos e outras matrizes de afinidade) para MRDs ou outros componentes das composições multivalentes e multiespecíficas pode ser utilizado em colunas de afinidade para purificação por afinidade e que, opcionalmente, os MRDs ou outros componentes da composição multiespecíficas multivalente e monovalente que estão ligados por estes ligantes são removidos a partir da composição antes da preparação final das composições multivalentes e multiespecíficas usando técnicas conhecidas na arte. VII. Uso de Fusões Anticorpo-MRD
[0630]As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) aqui descritas são úteis em uma variedade aplicações, incluindo, mas não limitado a, métodos de tratamento terapêutico, tais como, o tratamento de câncer. Em certas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são úteis para inibir o crescimento do tumor, reduzindo a neovascularização, a redução de angiogenese, indução da diferenciação, a redução do volume do tumor, e/ou reduzir a tumorigenicidade um tumor. Os métodos de utilização podem ser in vitro, ex vivo, ou método in vivo. Terapias de câncer e as suas dosagens, as vias de administração e utilização recomendadas são conhecidos na especialidade e foram descritos na literatura, tais como o Physician's Desk Reference (PDR).
[0631]O PDR divulga as dosagens dos agentes que têm sido utilizados no tratamento de vários cânceres. O regime de dosagem e as dosagens destes fármacos quimioterapêuticos acima mencionados que são terapeuticamente eficazes dependerá do câncer específico que está sendo tratado, da extensão da doença e outros fatores familiares para o médico perito na arte e pode ser determinado pelo médico. O conteúdo do PDR são aqui expressamente incorporados na sua totalidade por referência. A edição de Physician's Desk Reference (PDR) (2006) divulga o mecanismo de ação e as doses preferidas de tratamento e os programas de dosagem para a talidomida (pág. 979-983), VELCADE® (pág. 2102-2106) e melfalano (pág. 976-979).
[0632]As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são formuladas, dosadas e administradas de uma forma consistente com a boa prática médica. Fatores para serem considerados neste contexto incluem a doença particular a ser tratada, o mamífero em particular a ser tratado, a condição clinica do paciente individual, a causa da doença, o local de entrega do agente, o método de administração, o programa de administração, e outros fatores conhecidos pelos praticantes de medicina. A gama de dosagem para a administração das composições multivalentes e multiespecíficas da presente invenção são aquelas suficientemente grandes para produzir o efeito desejado no qual os sintomas da doença mediados pela molécula alvo são melhoradas. A dosagem não deve ser tão grande que cause efeitos secundários adversos, tais como, síndromes de hiperviscosidade, edema pulmonar, insuficiência cardíaca congestiva, e afins. Geralmente, a dosagem irá variar com a idade, condição, sexo e extensão da doença no paciente e pode ser determinada por um perito na arte. A dosagem pode ser ajustada pelo médico individual na eventualidade qualquer complicação.
[0633]A preparação de uma composição farmacológica que contém ingredientes ativos dissolvidos ou dispersos nela é bem compreendida na arte. Tipicamente, tais composições são preparadas com injetáveis estéreis, quer como soluções ou suspensões líquidas, aquosas ou não aquosas. No entanto, formas sólidas adequadas para solução ou suspensões, em líquido, antes da utilização, também pode ser preparado. A preparação pode ser também emulsionada. Assim, um anticorpo MRD contendo composição pode tomar a forma de soluções, suspensões, comprimidos, cápsulas, formulações de libertação sustentada ou pós, ou outras formas de composição.
[0634]Em algumas modalidades, as composições da invenção (por exemplo, composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD)) são formuladas para assegurar ou otimizar a distribuição in vivo. Por exemplo, a barreira hemato-encefálica (BBB) exclui muitos compostos altamente hidrófilos e, se assim for desejado, as composições são preparadas de modo a aumentar a transferência através da BBB, através por exemplo, de formulação em lipossomas. Para os métodos de produção de lipossomas, ver, por exemplo, U.S. Pat. N°s. 4.522.811; 5.374.548; e 5.399.331. Os lipossomas podem compreender uma ou mais porções que são transportadas seletivamente para células ou órgãos específicos, assim, melhorar a entrega de drogas específicas (veja, por exemplo, Ranade Clin. Pharmacol. 29:685 (1989)).
[0635]As propriedades de ligação multivalentes e multiespecíficas das composições da invenção fornecem a concepção racional de agentes terapêuticos preferencialmente dirigidos para localizações anatómicas particulares de interesse in vivo. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD localiza o lugar de inflamação ou o lugar do tumor através da ligação do local de combinação do anticorpo de uma molécula caracterizada pela expressão aumentada no local da inflamação ou tumor, respectivamente. Em modalidades particulares, a afinidade ligação do local de combinação do anticorpo num anticorpo contendo MRD para o alvo in vivo é de pelo menos 3X, de pelo menos 10X, de pelo menos 30X ou de pelo menos 100X de que um ou mais alvos MRD ligadas pelo anticorpo contendo MRD (por exemplo, um antígeno de superfície que não é de outro modo considerado um alvo viável de anticorpo, tendo em conta, por exemplo, a expressão de superfície não-específica, ou afinidade ligação baixa destino associado com as tecnologias convencionais de anticorpos).
[0636]As formulações terapêuticas da invenção contêm opcionalmente veículos farmaceuticamente aceitáveis, excipientes ou estabilizadores (Remington's Pharmaceutical Sciences 18a edição, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042 [1990]). Os transportadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregues, e incluem tampões, antioxidantes, incluindo ácido ascórbico, metionina, vitamina E, metabissulfito de sódio, conservantes, isotonificante, estabilizadores, complexos de metal (por exemplo, complexos de proteína Zn), e/ou agentes quelantes, tais como EDTA. Transportadores fisiologicamente toleráveis são bem conhecidos na arte. Da mesma forma, composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da presente invenção podem incluir sais farmaceuticamente aceitáveis dos seus componentes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais de adição de ácido (formados com os grupos amino livres do polipeptídeo) que são formados com ácidos inorgânicos por exemplo, ácidos clorídrico ou fosfórico, ou ácidos orgânicos tais como acético, tartárico, mandélico e semelhantes. Os sais formados com os grupos carboxilo livres também podem ser derivados de bases inorgânicas, por exemplo, sódio, potássio, amónio, cálcio ou hidróxidos férricos, e bases orgânicas tais como isopropilamina, trimetilarmina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína e semelhantes.
[0637]Os excipientes adequados incluem, por exemplo, água, solução salina, dextrose, glicerol, etanol ou semelhantes e suas combinações. Excipientes adicionais úteis na formulação das composições da presente invenção incluem um agente que pode agir como: (1) um agente espessante, (2) um intensificador de solubilidade, e (3) um estabilizador. Tais excipientes incluem, mas não estão limitados a: álcoois de açúcar polihídricos (enumerados acima); aminoácidos tais como alanina, glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, lisina, ornitina, leucina, 2-fenilalanina, ácido glutâmico, treonina, etc.; açúcares orgânicos ou álcoois de açúcares, tais como sacarose, lactose, lactitol, trealose, estaquiose, manose, sorbose, xilose, ribose, ribitol, mioinisitose, mioinisitol, galactose, galactitol, glicerol, ciclitóis (por exemplo, inositol), polietileno-glicol; enxofre contendo agentes redutores, tais como ureia, glutationa, ácido tióctico, tioglicolato de sódio, tioglicerol, .alfa.- monotioglicerol e sulfato de sódio tio; proteínas de baixo peso molecular tais como albumina de soro humano, albumina de soro bovino, gelatina ou outras imunoglobulinas; polímeros hidrófilos tais como polivinilpirrolidona; monossacáridos (por exemplo, xilose, manose, frutose, glicose; dissacarídeos (por exemplo, a lactose, maltose, sacarose); sacaridos tri tais como rafinose, e polissacaridos tais como dextrano ou dextrina.
[0638]Os tampões são utilizados para controlar o pH em uma gama que permite otimizar a eficácia terapêutica, especialmente se a estabilidade é dependente do pH. Em algumas modalidades tampões estão presentes em uma concentração variando desde cerca de 1 mM a cerca de 200 mM, cerca de 1 mM a cerca de 100 mM ou cerca de 1 mM a cerca de 50 mM. Os agentes tamponantes adequados para utilização nas formulações da invenção incluem ambos os ácidos e sais orgânicos e inorgânicos destes. Por exemplo, citrato, fosfato, succinato, tartarato, fumarato, gluconato, oxalato, lactato, acetato. Além disso, tampões podem compreender sais de histidina e de trimetilamina tais como, Tris.
[0639]Estabilizadores, referidos como modificadores de tonicidade, estão presentes para ajustar ou manter a tonicidade uma composição líquida. Quando utilizado com amplo, biomoléculas carregadas, tais como proteínas e anticorpos, estabilizadores interagem com os grupos carregados das cadeias laterais de aminoácidos, para reduzir o potencial de interações inter e intra- moleculares. Exemplos de agentes de tonicidade úteis na preparação das formulações da invenção incluem álcoois de açúcar poli-hídricos, preferivelmente tri-hídricos ou álcoois de açúcares superiores, tais como glicerina, eritritol, arabitol, xilitol, sorbitol e manitol.
[0640]As composições líquidas podem também conter fases liquidas em adição à e para a exclusão de água. Exemplos destas fases líquidas adicionais são a glicerina, óleos vegetais, tais como, óleo de semente de algodão, ésteres orgânicos, tais como, oleato de etilo, e emulsões de água- óleo.
[0641]Em uma modalidade, uma composição terapêutica contém uma composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) em uma quantidade pelo menos 0,1 por cento em peso de fusão de anticorpo contendo MRD por peso da composição terapêutica total. Uma percentagem em peso é uma proporção em peso de anticorpo contendo MRD por composição total. Assim, por exemplo, 0,1 por cento em peso é 0,1 grama de anticorpo contendo MRD por 100 gramas de composição total.
[0642]As preparações para administração parentérica incluem soluções estéreis aquosas ou não-aquosas, suspensões, e emulsões. Exemplos de solventes não-aquosos são propileno glicol, polietileno glicol, óleos vegetais tais como azeite, e ésteres orgânicos injetáveis tais como oleato de etilo. Os veículos aquosos incluem água, soluções alcoólicas/aquosas, emulsões ou suspensões, incluindo meios salinos e tamponados. Na presente invenção, os transportadores farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, 0,01-0,1 M e de preferência 0,05 M, tampão de fosfato ou solução salina 0,8%. Outros veículos parenterais comuns incluem soluções de fosfato de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, Ringer com lactato, ou óleos fixos. Os veículos intravenosos incluem reabastecedores de fluidos e nutrientes, reabastecedores de electrolitos, tais como aqueles baseados em dextrose de Ringer, e semelhantes. Os conservantes e outros aditivos podem também estar presentes tais como, por exemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes e gases inertes e semelhantes.
[0643]Mais particularmente, as composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem tipicamente soluções aquosas estéreis (quando solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em tais casos, a composição deve ser estéril e deve ser fluida até ao ponto que exista seringabilidade fácil. Deve ser estável sob as condições de fabrico e armazenamento e terá de preferência ser conservada contra a ação contaminante de microrganismos, tais como bactérias e fungos. O transportador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido, e semelhantes), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e pela utilização de tensoativos. As formulações adequadas para utilização nos métodos terapêuticos aqui revelados são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., 16aed. (1980).
[0644]A prevenção da ação de microrganismos pode ser conseguida por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotonicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol, sorbitol, ou cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que atrasa a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
[0645]Em uma modalidade, as formulações de composições farmacêuticas da invenção compreendem um composto que é capaz de reduzir a viscosidade uma formulação aquosa compreendendo composições multivalentes e monovalentes multiespecíficas. Em uma modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecíficas é um anticorpo contendo MRD. Em uma outra modalidade, o composto que é capaz de reduzir a viscosidade da formulação é selecionado a partir do grupo consistindo de: metionina, arginina (por exemplo, arginina succinato), dipeptídeo de arginina, arginina tripéptida, poliarginina, homoarginina, N-hidroxi-L-nor-arginina, éster nitroarginina metílico, argininamide, éster arginina metil, éster etílico de arginina, lisina, lisinamide, lisina éster de metilo, histidina, éster de metilo de histidina, histamina, alanina, alaninamida, éster de metilo de alanina, 2-amino- 3-guanidino ácido propionico, guanidina, ornitina, agmatina, ácido guanidobutiric, citrulina, putrescina, cadaverina, espermidina, espermina e ureia. Em algumas modalidades, o composto está presente na formulação em uma concentração de pelo menos 10 mM, pelo menos 20 mM, pelo menos 50 mM ou pelo menos 100 mM. Em modalidades adicionais, o composto está presente na formulação em uma concentração de entre cerca de 10 mM e 1 M. Em outras modalidades, a concentração total de proteína presente na formulação é de pelo menos 50 mg/ml, pelo menos 75 mg/ml, pelo menos 100 mg/ml, pelo menos 150 mg/ml, pelo menos 200 mg/ml ou pelo menos 250 mg/ml.
[0646]O esquema de dosagem e as quantidades eficazes para utilizações terapêuticas e profiláticas, ou seja,, o “regime de dosagem”, dependerá de uma variedade fatores. Incluindo a causa, o estágio e a gravidade da doença ou enfermidade, a saúde, estado físico, a idade do mamífero a ser tratado, e o local e modo de entrega do anticorpo contendo MRD. A eficácia terapêutica e a toxicidade do complexo e formação pode ser determinada por farmacêutica, farmacológicos, toxicológicos padrão, e procedimentos de culturas de células ou em animais experimentais. Os dados obtidos a partir destes procedimentos pode do mesmo modo ser utilizados na formulação de uma gama de dosagens para uso humano. Além disso, o índice terapêutico (ou seja,, a dose terapeuticamente eficaz em 50 por cento da população dividido pela dose letal para 50 por cento da população (ED50/LD50)) pode ser prontamente determinada utilizando procedimentos conhecidos. A dosagem está preferencialmente dentro de uma gama de concentrações que inclui a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade, e pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregue, da sensibilidade do paciente, e da via de administração.
[0647]O regime de dosagem leva em consideração os parâmetros farmacocinéticos conhecidos na arte, tais como, a taxa de absorção do fármaco, a biodisponibilidade, metabolismo e eliminação (veja, por exemplo, Hidalgo-Aragones, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617 (1996); Groning et al., Pharmazie 51:337-341 (1996); Fotherby Contraception 54:59-69 (1996); e Johnson et al, J. Pharm. Sci. 84:1144-1146 (1995Está bem dentro do estado da arte para o clínico determinar o regime de dosagem para cada indivíduo a ser tratado. Além disso, as administrações únicas ou múltiplas de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpos contendo MRD) contendo as composições podem ser administradas dependendo da dosagem e da frequência conforme necessárias e toleradas pelo sujeito. A duração do tratamento profiláctico e terapêutico irá variar dependendo da doença ou condição particular a ser tratada. Algumas doenças são passíveis de tratamento agudo enquanto que outras requerem a longo prazo, terapia crônica. Quando o tratamento com um agente terapêutico adicional, (anticorpo contendo MRD) pode ser administrado em série ou simultaneamente com o agente terapêutico adicional.
[0648]As quantidades terapeuticamente eficazes de anticorpo contendo MRD da invenção variam de acordo com, por exemplo, os alvos do anticorpo contendo MRD e a potência de agentes citotóxicos conjugados englobados por várias modalidades da invenção. Assim, por exemplo, a dose terapeuticamente eficaz de uma composição de um multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que "limpa" um ligante solúvel, tal como, o TNF alfa, espera-se que seja maior do que para uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) que redireciona efetoras função celular T para um alvo em uma malignidade hematológica. Do mesmo modo, quantidades terapeuticamente eficazes de composições multivalente e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) compreendendo um agente citotóxico maitansinóide são suscetíveis de ser menor do que a dose de uma composição multiespecífico um multivalente e monovalente (por exemplo, anticorpo contendo MRD) compreendendo um agente quimioterapêutico menos potente, tais como, o taxol, ou o homólogo de uma composição multiespecífico multivalente e monovalente não contém um agente citotóxico.
[0649]De acordo com uma modalidade, uma dose terapeuticamente eficaz de uma composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é uma quantidade selecionada de cerca de 0,00001 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, de cerca de 0,00001 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, de cerca de 0,00001 mg/kg a cerca de 5 mg/kg, de cerca de 0,0001 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, de cerca de 0,0001 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, de cerca de 0,0001 mg/kg a cerca de 5 mg/kg, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, e de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 5 mg/kg de peso do corpo do paciente, em uma ou mais administrações diárias de dose, durante um ou vários dias.
[0650]De acordo com uma outra modalidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é uma quantidade tal que quando administrada em uma composição fisiologicamente tolerável é suficiente para atingir uma concentração plasmática de cerca de 0,1 microgram (µg) por mililitro (ml) a cerca de 100 µg/ml, de cerca de 1 µg/ml a cerca de 5 µg/ml, e, geralmente, sobre 5 µg/ml. Dito de outra forma, em outra modalidade, a dosagem pode variar de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 300 mg/kg, de cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 200 mg/kg, de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, em uma ou mais administrações diárias de dose, durante um ou vários dias.
[0651]Em algumas modalidades, a uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é administrado a cerca de 1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg a cerca de 5 mg/kg.
[0652]Em modalidades adicionais, o intervalo entre a administração da dose da composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é de cerca diariamente, cerca de duas vezes por semana, a cada semana, a cada outra semana, ou a cada três semanas. Em algumas modalidades, a composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrada pela primeira vez a uma dose de carga mais elevada e, subsequentemente, a uma dose de manutenção mais baixa.
[0653]Em outras modalidades, as composições terapêuticas da invenção compreendem composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpo contendo MRD) em uma quantidade pelo menos 0,1 por cento em peso de anticorpo por peso da composição terapêutica total. Uma percentagem em peso é uma proporção em peso de anticorpo/composição total. Assim, por exemplo, 0,1 por cento em peso é 0,1 grama de anticorpo- MRD por 100 gramas de composição total. De acordo com algumas modalidades, uma composição terapêutica que compreende uma composição monovalente e multivalente multiespecífico contém cerca de 10 microgramas (µg) por mililitro (ml) a cerca de 100 miligramas (mg) por ml de anticorpo como ingrediente ativo por unidade volume da composição. Em modalidades adicionais, uma composição terapêutica que compreende uma composição monovalente e multivalente multiespecífico contém cerca de 1 mg/ml a cerca de 10 mg/ml (ou seja, cerca de 0,1 a 1 por cento em peso) de anticorpo como ingrediente ativo por unidade volume da composição.
[0654]Tal como mostrado nos exemplos aqui apresentados, uma composição multivalente e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) pode ter um perfil de PK semelhante com um anticorpo correspondente. Assim, em algumas modalidades, um anticorpo-MRD é administrado em uma concentração de dosagem e regime que é o mesmo que o componente de anticorpo da molécula de anticorpo-MRD sozinho (Exemplo POR, um anticorpo comercial, ou um assim chamado "biológico similar" ou um "bio melhor" do mesmo). Da mesma forma, a composição multivalente e multiespecífica pode ter um perfil PK diferente de um anticorpo correspondente. Por exemplo, em modalidades em que as composições multivalentes e multiespecíficas redirecionam uma resposta de células T e/ou incluem um agente citotóxico, a concentração de dosagem deverá ser menor do que a do anticorpo correspondente. Nestes casos, as concentrações de dosagem terapeuticamente eficazes e regimes para estas composições podem ser rotineiramente determinadas utilizando fatores e critérios conhecidos na arte.
[0655]As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) não precisa ser, mas opcionalmente são, formulado com um ou mais agentes atualmente utilizados para prevenir ou tratar a doença em questão. A quantidade eficaz destes outros agentes depende da quantidade composição multivalente e monovalente multiespecífico presente na formulação, do tipo de doença ou tratamento, e outros fatores discutidos acima.
[0656]Como discutido acima, a dosagem apropriada da composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) dependerá do tipo de doença a ser tratada, como definido acima, da gravidade e curso da doença, da terapia anterior, da história clínica do paciente, e do critério do médico assistente. A composição multivalente e monovalente multiespecífico é adequadamente administrada ao paciente de uma vez ou durante uma série de tratamentos. De preferência, a composição multivalente e monovalente multiespecífico é administrada por infusão intravenosa, ou por injeções subcutâneas. De acordo com algumas modalidades, a composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrada parentericamente por injeção ou por infusão gradual ao longo do tempo. Embora a molécula alvo possa ser tipicamente acessada no corpo por administração sistémica e, portanto, mais frequentemente tratado por administração intravenosa de composições terapêuticas, outros tecidos e meios de administração são contempladas onde existe a probabilidade que o tecido alvo contenha a molécula alvo. Assim, a composição multivalente e monovalente multiespecífico pode ser administrada intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, subcutaneamente, intracavidade, transdermicamente, e podem ser entregues por meios peristálticos. Composições multivalentes e multiespecíficos também podem ser entregues por aerosol por vias respiratórias e pulmões. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo-MRD é administrada por infusão intravenosa. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo-MRD é administrada por injeção subcutânea.
[0657]As composições terapêuticas contendo uma composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) podem ser convencionalmente administradas intravenosamente, como por injeção de uma dose unitária, por exemplo. O termo "dose unitária"quando usado em referência a uma composição terapêutica do presente invento refere- se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagem unitária para o paciente, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o diluente requerido; ou seja,, transportador ou veículo. Em uma modalidade específica, as composições terapêuticas contendo um anticorpo monoclonal humano ou um polipeptídeo são administradas por via subcutânea.
[0658]As composições da invenção são administradas de um modo compatível com a formulação de dosagem, e em uma quantidade terapeuticamente eficaz. A quantidade a ser administrada depende do paciente a ser tratado, da capacidade do sistema do paciente em utilizar o ingrediente ativo, e grau de efeito terapêutico desejado. As quantidades precisas de ingrediente ativo necessário para serem administradas dependem do julgamento do praticante e são peculiares para cada indivíduo. No entanto, gamas de dosagem adequadas para aplicação sistémica são aqui revelados e dependem da via de administração. Os regimes adequados para a administração são também variáveis, mas são tipificados por uma administração inicial seguida de doses repetidas a um ou mais intervalos de uma hora por uma injeção subsequente ou outra administração. Alternativamente, a infusão intravenosa contínua suficiente para manter concentrações no sangue em gamas especificadas para terapias in vivo são contempladas.
[0659]Em outras modalidades, a invenção proporciona um método para o tratamento ou prevenção de uma doença, distúrbio ou lesão que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz ou quantidade profilaticamente eficaz da molécula de anticorpo-MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é câncer. Em outras modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é uma doença ou desordem do sistema imune, tais como, inflamação ou de uma doença autoimune.
[0660]Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são esperados ter pelo menos a mesma eficácia terapêutica como o anticorpo contido na MRD anticorpo contendo anticorpo quando administrado sozinho. Consequentemente, prevê-se que como composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem ser administrado a um paciente para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou dano ao qual o anticorpo contido no anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo contendo MRD, demonstra uma atividade benéfica razoavelmente correlacionadas no tratamento ou prevenção dessa doença, distúrbio ou lesão. Esta atividade benéfica pode ser demonstrada in vitro, num modelo animal in vivo, ou em ensaios clínicos humanos. Em uma modalidade, um anticorpo MRD contendo é administrado a um paciente para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma maneira que o anticorpo contido no anticorpo contendo MRD, demonstra a eficácia terapêutica ou profilática in vitro ou num modelo animal. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado a um paciente para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo contendo MRD, demonstra a eficácia terapêutica ou profilática em seres humanos. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado a um paciente para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo contendo MRD, foi aprovado por uma autoridade reguladora para o uso de tal tratamento ou prevenção.
[0661]Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com outra terapêutica para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo MRD, em combinação com o agente terapêutico, ou uma terapêutica diferente que funciona da mesma maneira como o agente terapêutico em combinação, demonstra a eficácia terapêutica ou profilática in vitro ou num modelo animal. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com outra terapêutica para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo MRD, em combinação com o agente terapêutico, ou uma terapêutica diferente que funciona da mesma maneira como o agente terapêutico em combinação, demonstra a eficácia terapêutica ou profilática em seres humanos. Em outra modalidade, um anticorpo contendo MRD, é administrado em combinação com outra terapêutica para tratar ou prevenir uma doença, distúrbio ou ferimentos para que o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD, ou um anticorpo que funciona da mesma forma que o anticorpo contido no anticorpo MRD, em combinação com o agente terapêutico, ou uma terapêutica diferente que funciona da mesma maneira como o agente terapêutico na combinação, foi aprovado por uma autoridade reguladora para utilização em tal tratamento ou prevenção. A administração de um anticorpo contendo MRD em combinação com mais do que um terapêutico, tal como descrito acima, também está abrangida pela invenção.
[0662]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que promove apoptose, inibe a apoptose, promove a sobrevivência celular, inibe a sobrevivência celular, promove a senescência das células doentes ou anormais, inibe a senescência celular, promove a proliferação celular, inibe a proliferação celular, promove a diferenciação celular, inibe a diferenciação celular, promove a ativação da célula, inibe a ativação das células, promove metabolismo celular, inibe o metabolismo celular, promove a adesão celular, inibe a adesão celular, promove o ciclo celular ou a divisão celular, inibe o ciclo celular ou a divisão celular, promove a replicação de DNA ou de reparação, inibe a replicação de DNA ou de reparação, promove a transcrição ou tradução, ou inibe a transcrição ou tradução.
[0663]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que induz apoptose ou senescência de células doentes ou anormais. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que agoniza, antagoniza ou reduz a atividade: EGFR, ErbB2, cMET, TNFa, TGFb, integrina avß3, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TNFR1 , TNFRSF10A (TRAIL R1 DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2 DR5), TNF, TRAIL, IFN beta, MYC, Ras, BCR, ABL, JNK, CKH2, CHK1, CDK1, RAC1, MEK, MOS, mTOR, AKT, NFkB, Ikk, IAP1, IAP2, XIAP, b-catenina, survivina, HDAC, HSP70, HSP90, proteassoma 20S, topoissomerase 1, MDM2, E2F, ou E2F1.
[0664]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que inibe a sobrevivência das células. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que antagoniza ou reduz a atividade: VEGF, VEGFR1, VEGFR2, IGF1R, IGF1, IGF2, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-CC, PDGF-C, PDGF-D, PDGFRA, PDGFRB, TFGa, TGFB3, PI3K, TNFSF13B (BLYS), TNFRSF13C (BAFFR), JNK, NFKB, SIP, integrina avß3, ou survivina.
[0665]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a proliferação celular. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que antagoniza ou reduz a atividade: VEGF, VEGFR, EGFR, ErbB2, NFKB, HIF, MUC1, MUC2, ou HDAC.
[0666]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a adesão celular. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que inibe ou reduz a atividade: MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, MMP12, PLAU, avßl integrina, avß3 integrina, avß5 integrina, TGFb, EPCAM, a1ß1 integrina, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a2ß1 integrina, a5ß1 integrina, a9ß1 integrina, a6ß4 integrina, aMß2 integrina, CEA, L1, Mel- CAM, ou HIF1. Em uma modalidade o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que inibe ou reduz a atividade avß3 integrina, avß5 integrina, ou a5ß1 integrina. Em modalidades específicas do anticorpo contendo MRD é administrada em combinação com: MEDI-522 (VITAXIN, Abegrin; Mcdlmmunc), ATN-161 (Attcnuon), EMD 121974 (Merck KGaA), CNTO 95 (Cenotocor), ou velociximab (M200, Laboratórios design proteína).
[0667]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a ativação das células. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que promove, inibe ou reduz a atividade: CD80, CD86, MHC, PDL2 (B7-DC), B7-H1, B7-H2 (ICOSL), B7-H3, B7-H4, CD28, CTLA4, TCR, PD1, CD80, ou ICOS.
[0668]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula o ciclo celular, divisão celular ou mitose. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que antagoniza ou reduz a atividade: PI3K, SMO, Ptch, HH, SHH, plk1, plk2, plk3, plk4, aurora A, aurora B, aurora C, CDK1, CDK2, CDK4, CHK1, CHK2, GSK3B, PAK, NEK2A, ROCK 2, MDM2, EGF (KSP), proteassoma 20S, HDAC, or survivina.
[0669]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a replicação ou reparação de DNA. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que antagoniza ou reduz a atividade: BRCA1, CHK1, CHK2, E2F, E2FL, MDM2, MDM4, ou PARP1.
[0670]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a transcrição ou tradução. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que antagoniza ou reduz a atividade: IGF1R, IGF1, IGF2, PDGFRA, PDGFRB, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-CC, PDGF- C, PDGF-D, KIT, MYC, CD28, CDK4, CDK6, mTOR, MDM2, HDAC, E2F, E2F1, ou HIF1 .
[0671]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula a migração, invasão ou metástase. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que inibe ou reduz a atividade: c-MET, RON, CXCR4, PI3K, AKT, MMP2, FN1, CATHD, AMF, avßl integrina, avß3 integrina, avß5 integrina, TGFb, alßl integrina, a2ß1 integrina, a4ß1 integrina, a2ß1 integrina, a5ß1 integrina, a9ß1 integrina, a6ß4 integrina, aMß2 integrina, ou HIF1.
[0672]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que regula o metabolismo da célula. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um composto que inibe ou reduz a atividade: ErbB2, EGFR, IGF1R, IGF1, IGF2, TGFa, ICOS, PI3K, VEGFR1, VEGFR2, mTOR, HIF1, ou HDAC.
[0673]De acordo com uma modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de uma ou mais de quinases de proteína. Em uma modalidade, por exemplo, por um ou mais MRDs ou o anticorpo do anticorpo contendo MRD). Em uma modalidade alternativa, o inibidor de quinase de proteína inibe uma quinase de proteína que não é um alvo do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor quinase de proteína inibe uma quinase de proteína. Em outras modalidades, o inibidor quinase de proteína inibe mais do que uma quinase de proteína.
[0674]Em algumas modalidades, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor (por exemplo, molécula pequena, anticorpo, etc,) de uma quinase de proteína selecionado a partir de: EGFR, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-Illb, e FGFR2-IIIb), FGFR3, ErbB2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Tie- 2, PDGFR, PDGFRB, RON, e c-Met. Em outras modalidades, o inibidor inibe uma quinase de proteína que não é direcionada pelo anticorpo contendo MRD. Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de uma ou mais quinases de proteínas selecionadas a partir de: EGFR, FGFR1 (por exemplo, FGFR1-IIIC), FGFR2 (por exemplo, FGFR2-IIIa, FGFR2-IIIb, e FGFR2-IIIb), FGFR3, ErbB2, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Tie-2, PDGFRA, PDGFRB, FIT3, ALK, RET, Kit, raf, p38, RON, c-Met, PI3K, ERK, FAK, AKT, SYK, JAK1, JAK2, JAK3, TYK2, S1P, FAK, PTK7, PKD1, PKA, PKC, PKG, PRKDC, Pim, CDK, plk, p38MAPK, SRC, ABL, FGR, FYN, HCK, LCK, LYN, YES, EPH4, BMK1, ERK5, mTOR, CHK1, CHK2, CSNK1G1, CSNK1G2, CSNK1G3, GSK3, BTK, JNK, Quinase Aurora, Aurora Quinase A, Aurora Quinase B, e Aurora Quinase C.
[0675]Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de quinase de proteína selecionado a partir de: mesilato de imatinibe (por exemplo,GLEEVEC™), gefitinibe (por exemplo, IRESSA™, Astra Zeneca), vandetanibe (por exemplo, ZACTIMA™, Astra Zeneca), erlotinibe (por exemplo, TARCEVA™, Genentech/OSI), sunitinibe (por exemplo, SUTENT™, Pfizer), lapatinibe (GSK), e o sorafenibe (por exemplo, NEXAVAR™, Bayer).
[0676]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de quinase de proteína selecionado a partir de: nilotinibe (por exemplo, AMN107, Novartis), dasatinibe (por exemplo, BMS 354825, BMS), ABT-869, botsutinibe (por exemplo, SKI- 606, Wyeth), cediranibe, recentibe, captastatine, AEE788 (Novartis), AZD0530 (AstraZeneca) Exel 7646/Exel 0999 Exelixis), cabozantinibe (por exemplo, XL184; Exelixis), XL880/GSK1363089 (Exelixis/GSK), ARQ-197 (Arqule e Daiichi Sankyo), Inno-406 (Innovive), SGS523 (SGX), PF-2341066 (Pfizer), CI1033 (Pfizer), motesanibe (por exemplo, AMG-706, Amgen), AG-013736 (Axitinibe), AMG-705 (Amgen), pegaptanibe (OSI/Pfizer), lestaurtinibe, ruxolitinibe, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348 JANEX-1 , tofacitinibe (Pfizer), INCB18424, LFM-A13, pazopanibe (por exemplo, GW786034B, GlaxoSmithKline), GW-572016, EKB-569 (Wyeth-Ayerst), vatalanibe (por exemplo, PTK787/ZK), AZD2171, MK-0457 (VX-680, Merck), PHA 739358 (Nerviano), mubritinibe (Takeda), E7080 (Eisai), fostamatinibe (Rigel/AstraZeneca), SGX523, SNS-032 (Sunesis), XL143, SNS-314 (Sunesis), SU6668 (Pfizer), AV-951 (AVEO), AV-412 (AVEO), tivizanibe (AVEO), PX-866 (Oncothyreon), canertinibe (CI-1033), NSC 109555, VRX0466617, UCN-01, inibidor CHK2 II, EXEL-9844, XL844, CBP501, PF-004777736, debromohimerialdisine, Go6976, AEG3482, cediranibe (por exemplo, RECENTIN™, AstraZeneca), semaxanibe (SU5416), SU5616, CGP,53716, mastinibe e ZD6474 (AstraZeneca).
[0677]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de quinase de proteína FGFR selecionado a partir de: sunitinibe, SU5402, PD173074, TKI258 (Novartis), BIBF 1120 (Boehringer Ingelheim), brivanibe (BMS- 582,664), E7080 (Eisai), e TSU-68 (Taiho).
[0678]Em uma modalidade adicional, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína de JAK1, JAK2, JAK3, ou SYK. Em outra modalidade o inibidor quinase de proteína é selecionado a partir de: lestaurtinibe, tofacitinibe, ruxolitinibe, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348, fostamatinibe, BAY 61-3606, e sunitinibe.
[0679]Em uma modalidade, um ErbB2 (HER2) de ligação anticorpo contendo MRD (por exemplo, um anticorpo de ligação MRD que se liga a ErbB2 por um ou mais MRDs ou o anticorpo do anticorpo contendo MRD) é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína ErbB2. Em uma outra modalidade específica um anticorpo contendo MRD baseado em anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína de ErbB2. Em uma modalidade, um ErbB2 que se liga ao anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com lapatinibe. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD baseado em anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com lapatinibe. Em uma modalidade, um ErbB2 que se liga ao anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com sunitinibe. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com sunitinibe. Em uma modalidade, um ErbB2 que se liga ao anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com neratinibe. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com neratanibe. Em uma modalidade, um ErbB2 que se liga ao anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com iapatinibe. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD baseado em anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com iapatinibe. Em uma modalidade adicional, um ErbB2 (HER2) que se liga ao anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína selecionado a partir de:canertinibe (GW-572016), AV-412 (AVEO), tivozanibe (AVEO), vandetanibe (por exemplo, ZACTIMA™, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI- 1033 (Pfizer), e EKB-569 (Wyeth-Ayerst). Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo trastuzumabe é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína selecionado a partir de: canertinibe (GW-572016), AV-412 (AVEO), tivozanibe (AVEO), vandetanibe (por exemplo, ZACTIMA™, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer), PX-866 (Oncothyreon), e EKB-569 (Wyeth-Ayerst).
[0680]Em outra modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD (por exemplo, um anticorpo de ligação MRD que se liga a EGFR por um ou mais MRDs ou o anticorpo do anticorpo contendo MRD) é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína de EGFR. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína de EGFR. Em uma modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com gefitinibe (por exemplo, IRESSA™, AstraZeneca). Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com gefitinibe (por exemplo, IRESSA™, AstraZeneca). Em uma modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com erlotinibe (por exemplo, TARCEVA™, Genentech/OSI). Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD baseado em anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com erlotinibe (por exemplo, TARCEVA™, Genentech/OSI). Em uma modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com lapatinibe. Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com lapatinibe. Em uma modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com sorafenibe (por exemplo, NEXAVAR™, Bayer). Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com sorafenibe (por exemplo, NEXAVAR™, Bayer). Em outra modalidade, um EGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína selecionado a partir de: canertinibe (GW-572016), ZD6474, AV-412 (AVEO), tivozanibe (AVEO), vandetanibe (ZACTIMA, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer), e EKB-569 (Wyeth-Ayerst). Em uma modalidade específica de um anticorpo contendo MRD à base de anticorpo cetuximabe é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína selecionado a partir de: canertinibe (GW-572016), ZD6474, AV-412 (AVEO), tivozanibe (AVEO), vandetanibe (ZACTIMA, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer), PX-866 (Oncothyreon), e EKB-569 (Wyeth-Ayerst).
[0681]Em uma modalidade, um VEGFA, VEGFR1, ou VEGFR2 ligação anticorpo contendo MRD (por exemplo, um anticorpo MRD de ligação que liga VEGFR1 por um ou mais MRDs ou o anticorpo do anticorpo contendo MRD) é administrado em combinação com um inibidor quinase de proteína de VEGR1, VEGFR2, ou VEGFR3. Em uma modalidade, o VEGFA, VEGFR1 ou VEGFRr2 ligação anticorpos contendo MRD é administrada em combinação com: sunitinibe, sorafenibe, pazopanibe (por exemplo, GW786034B), AZD2171, vatalanibe, ZD6474, AMG-706, ou AC013736.
[0682]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de proteassoma. Em uma modalidade específica, o inibidor é bortezomibe (por exemplo, VELCADE™). Em uma outra modalidade específica, o inibidor é PR-171 (Proteolix).
[0683]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de HDAC.
[0684]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com um inibidor de mTOR.
[0685]Em uma outra modalidade, um anticorpo contendo MRD i é administrado em combinação com um inibidor de NFKB.
[0686]Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um VEGFA ou VEGFR de ligação anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe compreendendo pelo menos um MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer colorretal por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe compreendendo pelo menos um MRD a um paciente com câncer colorretal. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer de mama pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe compreendendo pelo menos um MRD a um paciente com câncer de mama. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de carcinoma do pulmão de células não-pequenas por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe compreendendo pelo menos um MRD a um paciente com carcinoma de pulmão de células não- pequenas. Em outras modalidades, quantidades terapêuticas eficazes de bevacizumabe compreendendo Pelo Menos hum MRD são administrados a um paciente para o tratamento do câncer colorretal metastático, câncer metastático da mama, câncer do pâncreas metastático, carcinoma do pulmão de células não-pequenas metastático. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer através da administração a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe compreendendo Pelo Menos hum MRD a um paciente com carcinoma de células renais, glioblastoma multiforme, câncer do ovário, câncer de próstata, câncer do fígado ou câncer no pâncreas.
[0687]Combinação terapêutica e composições incluindo composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) da presente invenção e outro terapêutico também são abrangidas pela invenção, bem como métodos de tratamento utilizando essas composições. Em outras modalidades, as composições da invenção são administradas isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. As combinações podem ser administradas quer concomitantemente, por exemplo, como uma mistura, separadamente, mas simultaneamente ou concomitantemente; ou sequencialmente. Isto inclui as apresentações nas quais os agentes combinados são administrados em conjunto como uma mistura terapêutica e também procedimentos nos quais os agentes combinados são administrados separadamente, mas simultaneamente, por exemplo, como por meio de linhas intravenosas separadas no mesmo indivíduo. Administração "em combinação"inclui ainda a administração separada de um dos compostos terapêuticos ou agentes dado em primeiro lugar, seguido pelo segundo. Consequentemente, em uma modalidade, um VEGFA ou VEGFR ligando anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com 5-fluorouracilo, carboplatina, paclitaxel, ou interferão alfa. Em outra modalidade, bevacizumabe que compreende pelo menos um MRD é administrado em combinação com 5-fluorouracilo, carboplatina, paclitaxel, ou interferão alfa.
[0688]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um VEGFA ou VEGFR ligação do anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmoEm uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ranibizumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0689]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ErbB2 (HER2) ligação anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em várias modalidades, As composições multivalentes e multiespecíficos ligação-ErbB2 (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados a doentes que tenham sido previamente apresentados para responder a uma outra terapia à base de ErbB2 (por exemplo, HERCEPTIN, quimioterapia e/ou radiação) ou estão previstas para responder a uma outra terapia à base de ErbB2. Em outras modalidades, as composições de ligação multivalentes e multiespecíficos ErbB2 (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados a pacientes que já falharam em responder a uma outra terapia baseada ErbB2 ou estão previstos para deixar de responder a outra terapia à base de ErbB2.
[0690]Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de trastuzumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer de mama pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de trastuzumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente com câncer de mama. Em outras modalidades, quantidades terapêuticas eficazes de trastuzumabe que compreende pelo menos um MRD são administrados a um paciente no tratamento de câncer da mama metastático.
[0691]Em outra modalidade, um ErbB2 (HER2) ligação anticorpo contendo MRD é administrado em combinação com ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel, carboplatina, antraciclina, ou um maitansinóide. Em uma modalidade específica, trastuzumabe que compreende pelo menos um MRD é administrado em combinação com ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel, carboplatina, antraciclina, ou um maitansinóide.
[0692]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um CD20 de ligação anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um câncer hematológico compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de rituximabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento CD20 de NHL positivo através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente com CD20 NHL positivo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de CD20 para CLL positivo através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe que compreende pelo menos um MRD a um paciente com CD20 CLL positivo.
[0693]Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um CD20 de ligação a anticorpos contendo MRD é administrada em combinação com: ludarabine, ciclofosfamida, FC (fludarabina e ciclofosfamida), regime de quimioterapia com antraciclinas (por exemplo, CHOP (ciclofosfamida, adriamicina, vincristina e prednisona)), ou CVP (ciclofosfamida, prednisona, e vincristina) quimioterapia. Em uma modalidade específica, uma quantidade terapeuticamente eficaz de bevacizumabe que compreende pelo menos um MRD é administrado em combinação com: ludarabine, ciclofosfamida, FC (fludarabina e ciclofosfamida), regime de quimioterapia com base de antraciclina (por exemplo, CHOP (ciclofosfamida, adriamicina, vincristina e prednisona)), ou CVP (ciclofosfamida, prednisona, e vincristina) quimioterapia.
[0694]Qualquer das fusões anticorpo dos anticorpos contendo MRD e/ou MRDs que se ligam a CD20 pode ser utilizada de acordo com os métodos de tratamento de um distúrbio associado com o CD20, ou que pode ser tratada, visando as células que expressam CD20 (por exemplo, os cânceres hematológicos e doenças autoimunes). Em algumas modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo fusão MRD é selecionado a partir de rituximabe, ocrelizumabe, GA101 , e PF- 5.230.895.
[0695]A invenção também proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado liga a um alvo selecionado a partir de: CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, IL6R, TNFRSF1A, VLA4, CSF2, TNFSF5 (LIGANTE CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, IL1, IL1 beta, IL1RN, fator tecidular, MIF, MIP2, IL6, IL8, IL10, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TNF, TNFSF12 (TWEAK), LPS, CXCL13, VEGF, IFN alfa, IFN gamma, GMCSF, FGF, TGFb, C5, e CCR3. Composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção.
[0696]Em modalidades particulares, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga TNF e ANG2.
[0697] [0697] Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga IL1, IL12, e TNF. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga IL1, IL12, TNF e ANG2.
[0698]Em modalidades adicionais, o anticorpo contendo MRD administrado liga IL1, IL6 e TNF. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD liga IL1, IL6, TNF e ANG2.
[0699]Alvo selecionado a partir de: CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, IL6R, TNFRSF1A, VLA4, CSF2, TNFSF5 (LIGANTE CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, IL1, IL1 beta, IL1RN, fator tecidular, MIF, MIP2, IL6, IL8, IL10, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TNF, TNFSF12 (TWEAK), LPS, CXCL13, VEGF, IFN alfa, IFN gamma, GMCSF, FGF, TGFb, C5, e CCR3. Composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção.
[0700]Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD. Em uma modalidade específica, o anticorpo contendo MRD administrado liga a um alvo selecionado a partir de: CD1C, CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74, CD75, CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, IL2RA, IL1R2, IL6R, VLA4, HLA-DRA, HLA-A, ITGA2, ITGA3, CSF2, TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, TIE2, TNF, FASL, fator tecidular, MIF, MIP2, IL1, IL1 beta, IL1RN, IL2, IL4, IL6, IL8, IL10, IL11, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, 1COSL (B7-H2), MS4A1, IFN alfa, IFN beta1 , IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), PAFR, INHA, INHBA, DPP4, NT5E, CTLA4, B7.1/B7.2, LPS, VEGF, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CXCR4, CCR2 e CCR3. Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados para tratar a artrite reumatóide e as composições multivalentes e multiespecíficas se ligam a um alvo selecionado a partir de: CD19, CD20, CD45RB, CD52CD200, IL1, IL6, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23, TNF, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF13B (BLyS), VEGF, VLA4, IFN gamma, IFN alfa, GMCSF, FGF, C5, CXCL13 e CCR2. Em modalidades adicionais, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administradas para o tratamento de lúpus eritematoso sistêmico e as composições multivalentes e multiespecíficas ligam IFN alfa e TNFSF13B (BLyS). Em outras modalidades, As composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados para tratar a esclerose múltipla e as composições multivalentes e multiespecíficas se ligam a um alvo selecionado a partir de: ANG2, IL1, IL12, IL18, IL23, CXCL13, TNF, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), VEGF, VLA4, TNF, CD45RB, CD200, IFN gamma, GM-CSF, FGF, C5, CD52, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, AGE (S100 A, anfoterina), ICOSL (B7-H2), MS4A 1, IFN alfa, IFN beta1, IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), MCP1, CCR2 e CXCL13. Composições multivalentes e multiespecíficos que ligam, pelo menos, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção.
[0701]Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD de ligação a CD20 a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um CD20 de ligação a anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD rituximabe a um paciente em necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD rituximabe a um paciente em necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento do lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD rituximabe a um paciente que dele necessite. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD rituximabe a um paciente em necessidade do mesmo.
[0702]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD ocrelizumabe a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de artrite reumatóide, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD ocrelizumabe a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD ocrelizumabe a um paciente em necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD ocrelizumabe a um paciente em necessidade do mesmo.
[0703]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um PF5.230.895 anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de artrite reumatóide, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um PF5.230.895 anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um PF5.230.895 anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um PF5.230.895 anticorpo contendo MRD a um paciente em necessidade do mesmo.
[0704]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga a CD20. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado liga CD20 a um alvo selecionado a partir de: TNF, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (LIGANTE CD40), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF1A, CD45, RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, IL6R, VLA4, CSF2, RAGE, TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, TIE2, fator tecidular, MIF, MIP2, LPS, IL1, IL1 beta, IL1RN, IL6,IL6R, IL8, IL10, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, CXCL13, VEGF, IFN alfa, IFN gamma, GMCSF, FGF, C5, e CCR3. Composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam a CD20 e também ligam, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CD20. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é um rituximabe, ocrelizumabe, GA101 ou PF-5.230.895.
[0705]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga CD20. Em uma modalidade específica, o anticorpo contendo MRD administrado se liga a CD20 e um alvo selecionado a partir de: CD1C, CD3, CD4, CD19, CD21, CD22, CD23, CD24,CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74, CD75, CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, IL2RA, IL1R2, IL6R, VLA4, HLA-DRA, HLA-A, ITGA2, ITGA3, CSF2, TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, TIE2, TNF, FASL, fator tecidular, MIF, MIP2, IL1, IL1 beta, IL1RN, IL2, IL4, IL6, IL8, IL10, IL11, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TIE2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, ICOSL (B7-H2), MS4A1, IFN alfa, IFN beta1, IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), PAFR, INHA, INHBA, DPP4, NT5E, CTLA4, B7.1/B7.2, LPS, VEGF, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CXCR4, CCR2 e CCR3. Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados para o tratamento de artrite reumatóide e as composições multivalentes e multiespecíficas se ligam a CD20 e a um alvo selecionado a partir de: CD19, CD45RB, CD52, CD200, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23, TNF, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), VEGF, VLA4, IFN gamma, interferão alfa, GMCSF, FGF, C5, CXCL13 e CCR2. Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados para tratar a esclerose múltipla e as composições multivalentes e multiespecíficas ligam CD20 e a um alvo selecionado a partir de: ANG2, IL12, IL18, IL23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), VEGF, VLA4, TNF, CD45RB, CD200, IFN gamma, GM-CSF, FGF, C5, CD52, TIE2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ICOSL (B7-H2), MS4A 1, IFN alfa, IFN beta1, IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), CCR2 e CXCL13. Composições multivalentes e multiespecíficos que ligam a, pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga TNF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é selecionado a partir de rituximabe, ocrelizumabe, GA101 e PF-5.230.895.
[0706]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD ligação do TNF a um paciente em necessidade do mesmo. Em várias modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficos ligação do TNF (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados aos pacientes que tenham sido previamente apresentados para responder a outra terapia à base de TNF ou estão previstas para responder a outra terapia à base de TNF (por exemplo, os antagonistas de TNF, tais como, anti-TNF (por exemplo, HUMIRA), EMBREL, antagonistas de CD28, antagonistas de CD20, e antagonistas IL6/IL6R). Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas de ligação de TNF (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrada a pacientes que já não respondem à terapia com base em outro TNF ou estão previstas para deixar de responder a outra terapia à base de TNF.
[0707]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga TNF.
[0708]Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado liga TNF e um alvo selecionado a partir de: CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, IL6R, TNFRSF1A, VLA4, CSF2, TNFSF5 (LIGANTE CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, IL1, IL1 beta, IL1RN, fator tecidual, MIF, MIP2, IL6, IL8, IL10, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TNFSF12 (TWEAK), LPS, CXCL13, VEGF, IFN gamma, GMCSF, FGF, C5, e CCR3. Composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam TNF e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga TNF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD é selecionado a partir de adalimumabe, certolizumabe, golimumabe e AME-527.
[0709]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga TNF. Em uma modalidade específica, o anticorpo contendo MRD administrado liga TNF e um alvo selecionado a partir de: CD1C, CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24,CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74, CD75, CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, IL2RA, IL1R2, IL6R, VLA4, HLA-DRA, HLA-A, ITGA2, ITGA3, CSF2, TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, TIE2, FASL, fator tecidual, MIF, MIP2, IL1, IL1 beta, IL1RN, IL2, IL4, IL6, IL8, IL10, IL11, IL12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL23, TIE2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF 13B (BLyS), ANG2, ICOSL (B7-H2), MS4A1, IFN alfa, IFN beta1, IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), PAFR, INHA, INHBA, DPP4, NT5E, CTLA4, B7.1/B7.2, LPS, VEGF, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CXCR4, CCR2 e CCR3. Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados para tratar a artrite reumatóide e as composições multivalentes e multiespecíficas liga TNF e um alvo selecionado a partir de: CD19, CD20, CD45RB, CD52CD200, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF13B (BLyS), VEGF, VLA4, IFN gamma, interferão alfa, GMCSF, FGF, C5, CXCL13 e CCR2. Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contend MRD) são administrados para tratar a esclerose múltipla e as composições multivalentes e multiespecíficas liga TNF e um alvo selecionado a partir de: ANG2, IL12, IL18, IL23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (Ligante CD40), VEGF, VLA4, TNF, CD45RB, CD200, IFN gamma, GM-CSF, FGF, C5, CD52, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TIE2, TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (Ligante CD40), TNFSF6 (Ligante Fas), TNFSF8 (Ligante CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ICOSL (B7-H2), MS4A 1, IFN alfa, IFN beta1, IFN gamma, TNFSF7 (Ligante CD27, CD70), CCR2 e CXCL13. Composições multivalentes e multiespecíficos que ligam a, pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD liga TNF. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD selecionado a partir de adalimumabe, certolizumabe, golimumabe e AME- 527.
[0710]Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas de ligação TNF (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administrados a doentes que tenham sido previamente apresentadas para responder a uma terapia baseada em doença autoimune ou estão previstas para responder a outras terapias baseadas em doença autoimune (por exemplo, os antagonistas de TNF, tais como, anti-TNF (por exemplo, HUMIRA®), ENBREL®, antogonistas CD28, antogonistas CD20, antagonistas BLyS, e antagonistas IL6/IL6R). Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas de ligação TNF (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são administradas a pacientes que já não respondem à terapia com base a outra doença autoimune ou prevê-se que não respondam a outra terapia baseada doença autoimune.
[0711]Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de adalimumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0712]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ATN-103 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0713]Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de infliximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0714]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga-se a TNFSF15 (TL1A).
[0715]Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado liga TL1A e um alvo selecionado a partir de: TNF, IFN gamma, IL1, IL1beta, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL18, IL23 e IL32. Composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) que ligam TL1A e, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a TL1A.
[0716]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD de ligação IL22 a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 (ILV-094) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença auto-imune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de PF5.212.367 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0717]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD de ligação integrina alfa4 a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD natalizumabe a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD natalizumabe a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0718]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que liga-se a TNFSF5 (LIGANTE CD40) a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD CDP7657 a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD CDP7657 a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de CDP7657 composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0719]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo conte MRD que se liga TNFSF12 (TWEAK) a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) (que entrou em ensaios clínicos de fase 1) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz deanticorpo Biogen TNFSF12 (TWEAK) composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0720]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo contendo MRD que se liga CD25 a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de lúpus eritematoso sistêmico, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo contendo MRD daclizumabe a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de esclerose múltipla, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo contendo MRD daclizumabe a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, ou artrite reumatóide juvenil idiopática por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de daclizumabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0721]Proteínas de fusão anticorpo-MRD com anticorpos e/ou MRDs que se ligam a antigeios de câncer ou de outros alvos associados com a constituição do câncer, a progressão e/ou metástase são aqui descritos ou caso contrário conhecidos na técnica e podem ser utilizados de acordo com os métodos da invenção para tratar o câncer. Em modalidades específicas, as proteínas de fusão anticorpo-MRD compreende um anticorpo e/ou MRD que se liga a um alvo aqui identificado.
[0722]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD que se liga EGFR a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de cetuximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de cetuximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com câncer colorretal. Em outra modalidade, quantidades terapêuticas eficazes de cetuximabe composta de pelo menos um MRD são administrados a um paciente para tratar câncer coloretal metastático, câncer metastático da mama, câncer do pâncreas metastático, ou carcinoma do pulmão de células não- pequenas metastático. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de cetuximabe composta de pelo menos um MRD a um paciente com carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço.
[0723]Em outra modalidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD de ligação a EGFR é administrado em combinação com, irinotecano, FOLFIRI, quimioterapia à base de platina, ou terapia de radiação. Em uma modalidade específica, uma quantidade terapeuticamente eficaz de cetuximabe composta de pelo menos um MRD é administrado em combinação com, irinotecano, FOLFIRI, quimioterapia à base de platina, ou terapia de radiação.
[0724]Em certas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD aqui descrito a um paciente com necessidade do mesmo.
[0725]Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um câncer sólido por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um câncer sólido ligação anticorpo MRD aqui descrito (por exemplo, um anticorpo MRD que se liga um alvo associado a tumor sólido validado, tal como aqui descrito) a um paciente com necessidade do mesmo.
[0726]Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um câncer sólido por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD que se liga a um membro selecionado a partir do grupo consistindo de: IGFR1, ALK1, p-cadhcrin, CRYPTO, e alfa5 b1 integrina. Em outras modalidades, o componente de anticorpo do anticorpo MRD administrado é um membro selecionado a partir de: figitumumabe, CP-870893, PF-3.732.010, PF- 3.446.962, volociximabw, BIIB022, e o anticorpo Biogen CRYPTO.
[0727]Em algumas modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) aqui descrito são úteis no tratamento do câncer. Assim, em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de tratamento de câncer compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD a um paciente (por exemplo, um paciente (sujeito) com necessidade tratamento). Em certas modalidades, o câncer é um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em câncer coloretal, câncer do pâncreas, câncer do pulmão, câncer de ovário, câncer do fígado, câncer da mama, câncer cerebral, câncer do rim, câncer de próstata, câncer gastrointestinal, melanoma, câncer cervical, câncer de bexiga, glioblastoma, e câncer de cabeça e pescoço. Em certas modalidades, o câncer é o câncer de mama. Em certas modalidades, o paciente é um ser humano.
[0728]Outros exemplos de cânceres ou malignidades que podem ser tratadas com anticorpos contendo MRD e MRDs incluem, mas não estão limitados a: Leucemia Linfóide Infantil Aguda, Leucemia Linfóide Aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielóide aguda, Carcinoma Adrenocortical, câncer hepatocelular adulto (primário), câncer do fígado Adulto (primário), leucemia linfocítica aguda Adulto, Leucemia Mielóide Aguda Adulto, Doença de Hodgkin Adulto, linfoma de Hodgkin Adulto, leucemia linfocítica Adulto, linfoma de não-Hodgkin Adulto, câncer primário do fígado Adulto, sarcoma dos tecidos moles Adulto, linfoma relacionadas com a AIDS, Doenças malignas relacionadas com a AIDS, câncer anal, astrocitoma, câncer do duto biliar, câncer de bexiga, câncer de osso, glioma do tronco cerebral, tumores cerebrais, câncer da mama, câncer de pelve renal e ureter, linfoma Sistema Nervoso Central (primário), linfoma Sistema Nervoso Central, astrocitoma Cerebelar, astrocitoma cerebral, câncer cervical, câncer hepatocelular Infantil (primário), câncer do fígado infantil (primário), leucemia Linfóide Aguda infantil, leucemia Mielóide Aguda infantil, glioma Tronco Encefálico infantil, astrocitoma cerebelar infantil, astrocitoma cerebral infantil, tumores de células germinativas extracraniana infantil, Doença de Hodgkin na infância, o linfoma de Hodgkin na infância, glioma hipotalâmico e via visual infantil, Leucemia Linfóide infantil, meduloblastoma Infantil, o linfoma de Non-Hodgkin infantil, infância Tumores Neuroectodérmicos Pineal e primários Supratentoriais infantil, câncer primário do fígado infantil, rabdomiossarcoma Infantil, sarcoma dos tecidos moles infantil, glioma hipotalâmico e via visual infantil, leucemia linfocítica crônica, Leucemia mielóide crónica, câncer do cólon, linfoma cutâneio celular T, carcinoma ilhatoa celular endócrino pâncreas, Câncer de endométrio, ependimoma, câncer epitelial, câncer esofágico, Sarcoma de Ewing e tumores relacionados, câncer pancreático exócrino, tumor em células germinativas extracranianas, tumor em células germinativas extra gonodal, câncer extra hepático da via biliar, Câncer do olho, câncer de mama feminino, doença de Gaucher, câncer de vesícula biliar, câncer gástrico, Tumor carcinóide gastrointestinal, tumores gastrointestinais, tumores em células germinativas, Tumor Trofoblástico Gestacional, leucemia celular peluda, câncer na cabeça e pescoço, câncer hepatocelular, doença de Hodgkin, linfoma de Hodgkin, Hipergamaglobulinemia, câncer da hipofaringe, cânceres intestinais, melanoma intraocular, carcinoma de células da ilhota, câncer de pâncreas ilhota celular, Sarcoma de Kaposi, câncer do rim, câncer de laringe, câncer do lábio e cavidade oral, câncer do fígado, câncer do pulmão, Transtornos Linfoproliferativos, globulinemia Macro, câncer da mama masculino, mesotelioma maligno, Thymoma maligno, meduloblastoma, melanoma, mesotelioma, câncer do pescoço espinocelular metastático oculto primário, câncer do pescoço espinocelular metastático, mieloma múltiplo, neoplasia mieloma múltiplo/plasma celular, síndrome mielodisplásica, leucemia mielóide, Leucemia Mielóide, doenças mieloproliferativo, Câncer na Cavidade nasal e Seios paranasais, câncer de nasofaringe, Neuroblastoma, linfoma não-Hodgkin durante a gravidez, não melanoma do cancer de pele, câncer pulmonar de células não-pequenas, câncer do pescoço espinocelular metastático Primária Oculto, câncer de orofaringe, Sarcoma osteoartrite/fibroso maligno, Osteossarcoma/maligno histiocitoma fibroso, osteossarcoma/fibroso maligno, Histiocitoma de osso, câncer do ovário epitelial, tumor de ovário de células germinativas, tumor de ovário potencial de baixa malignidade, câncer do pâncreas, Paraproteinemias, purpura, câncer de paratireóide, câncer de pênis, feocromocitoma, tumor pituitário, Neoplasia celular plasma/mieloma múltiplo, linfoma Sistema Nervoso Central Primária, câncer primário de fígado, câncer de próstata, Câncer retal, câncer de células renais, cânceres de pelve renal e Ureter, Retinoblastoma, rabdomiossarcoma, câncer da glândula salivar, Sarcomas sarcoidose, Síndrome de Sézary, câncer da Pele, câncer pulmonar de pequenas células, câncer do intestino delgado, sarcoma de tecido mole, câncer do pescoço espinocelular, câncer de estômago, Tumores neuroectodérmico primitivo supratentorial e Pineal, linfoma célula T, câncer testicular, Timoma, câncer de tiróide, câncer de células transicionais da pelve renal e ureter, Câncer transicionais da pelve renal e ureter, Tumores Trofoblásticos, câncer de células renais Pelvis e Ureter, Câncer uretral, câncer uterino, Sarcoma uterino, câncer vaginal, glioma da via visual e hipotalâmico, câncer vulvar, Macroglobulinemia de Waldenstrom, e tumor de Wilms.
[0729]Em algumas modalidades, composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são úteis para inibir o crescimento do tumor. Em certas modalidades, o método de inibição do crescimento do tumor compreende o contato da célula com um anticorpo contendo MRD in vitro. Por exemplo, uma linha celular imortalizada ou uma linha celular de câncer que expressa um MRD alvo e/ou um anticorpo alvo é cultivada em meio a que se adiciona o anticorpo contendo MRD para inibir o crescimento do tumor. Em algumas modalidades, células tumorais são isoladas a partir de uma amostra do paciente, por exemplo, uma biopsia de tecido, efusão pleural, ou amostra de sangue e cultivados em meio ao qual é adicionado um anticorpo contendo MRD para inibir o crescimento do tumor.
[0730]Em algumas modalidades, o método de inibir o crescimento do tumor compreende o contato das células tumorais ou de tumor com uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo contendo MRD in vivo. Em certas modalidades, o contacto de uma célula de tumor ou o tumor é realizado num modelo animal. Por exemplo, composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) podem ser administradas a xenoenxertos em ratinhos imunocomprometidos (Por Exemplo, ratos NOD/SCID) para inibir o crescimento do tumor. Em algumas modalidades, câncer de células estaminais são isoladas a partir de uma amostra do paciente, por exemplo, uma biopsia de tecido, efusão pleural, ou amostra de sangue e em ratinhos imunocomprometidos injetado que são, em seguida, administrado um anticorpo contendo o MRD para inibir o crescimento de células tumorais. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado ao mesmo tempo ou pouco depois da introdução de células tumorigénicas no animal para prevenir o crescimento do tumor. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD é administrado como um agente terapêutico após as células tumorigénicas ter crescido para um volume especificado.
[0731]Em certas modalidades, o método de inibir o crescimento do tumor compreende a administração a um paciente (sujeito) uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD. Em certas modalidades, o paciente é um ser humano. Em certas modalidades, o paciente tem um tumor ou teve um tumor removido. Em certas modalidades, o tumor exprime um alvo de anticorpo. Em certas modalidades, o tumor sobre-expressa o MRD alvo e/ou o anticorpo alvo.
[0732]Em certas modalidades o crescimento tumoral inibido é selecionado do grupo que consiste em tumor cerebral, tumor colorrectal, tumor do pâncreas, tumor do pulmão, tumor do ovário, tumor do fígado, tumor da mama, tumor do rim, tumor da próstata, tumor gastrointestinal, melanoma, tumor cervical, tumor da bexiga, glioblastoma e tumor de cabeça e pescoço. Em certas modalidades, o tumor é um tumor da mama.
[0733]Em modalidades adicionais, composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são úteis para a redução da tumorigenicidade. Assim, em algumas modalidades, o método de redução da tumorigenicidade um tumor num paciente, compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) para o paciente. Em certas modalidades, o tumor compreende células- tronco do câncer. Em certas modalidades, a frequência de câncer de células estaminais no tumor é reduzido pela administração da composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD).
[0734]Em outras modalidades, composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) são úteis para o diagnóstico, tratamento ou prevenção de um distúrbio do sistema imunológico. Em uma modalidade, o distúrbio do sistema imunológico é a inflamação ou um distúrbio inflamatório. Em uma modalidade mais específica, o distúrbio inflamatório é selecionado a partir do grupo que consiste em asma, distúrbios alérgicos, e artrite reumatóide. Em outra modalidade, o distúrbio do sistema imunológico é uma doença autoimune. Distúrbios autoimunes, doenças ou condições que podem ser diagnosticadas, tratadas ou prevenidas utilizando composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) incluem, mas não estão limitados a, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia autoimune neonatal, púrpura trombocitopénica idiopática, neutropenia autoimune, citopenia autoimune, anemia hemolítica, síndrome antifosfolipídio, dermatite, enteropatia sensível ao glúten, encefalomielite alérgicas, miocardite, policondrite recidivante, doença cardíaca reumática, glomerulonefrite (por exemplo, nefropatia por IgA), esclerose múltipla, neurite, uveíte oftalmia, Poliendocrinopatias, púrpura (por exemplo, púrpura Henloch-scoenlein), Doença de Reiter, síndrome Stiff-Man, inflamação pulmonar autoimune, miocardite, IgA glomerulonefrite, doença depósito denso, cardiopatia reumática, síndrome de Guillain-Barré, diabetes mellitus insulino dependente, e ocular inflamatória autoimune, tiroidite autoimune, hipotiroidismo (ou seja,, tiroidite de Hashimoto, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus discóide, síndrome de Goodpasture, Pênfigo, Receptor autoimunes por exemplo, (a) Doença de Graves, (b), miastenia gravis, e (c), a resistência à insulina, anemia hemolítica autoimune, púrpura trombocitopênica autoimuneartrite reumatóide, esclerodermia com anticorpos anti-colagénio, doença mista do tecido conjuntivo, polirniositis/dermatomiosite, anemia perniciosa, doença de Addison idiopática, infertilidade, glomerulonefrite, tais como, glomerulonefrite primária e nefropatia por IgA, penfigóide bolhoso, síndrome de Sjogren, diabetes mellitus, e de drogas adrenérgico resistência (incluindo resistência a medicamentos adrenérgicos com asma ou fibrose cística), hepatite crónica ativa, cirrose biliar primária, outra falha glândula endócrina, vitiligo, vasculite, pós-MI, síndrome de cardiotomia, urticária, dermatite atópica, asma, miopatias inflamatórias, e outras inflamatória, granulomatosa, degenerativa, e distúrbios atróficos.
[0735]Em outra modalidade, o distúrbio do sistema imunológico diagnosticadas, tratadas ou prevenidas utilizando composições multivalentes e multiespecíficos (por exemplo, anticorpos contendo MRD) é selecionado a partir do grupo constituído por: doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), doença inflamatória do intestino, psoríase, diabetes, colite ulcerativa, esclerose múltipla, e artrite reumatóide. Em uma modalidade preferida, a doença autoimune é artrite reumatóide.
[0736]Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é administrado a um paciente para tratar uma doença ou desordem metabólica.
[0737]Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é administrado a um paciente para tratar uma doença cardiovascular ou distúrbio. Em uma modalidade, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpos contendo MRD) é administrada a um paciente para o tratamento de trombose, aterosclerose, ataque cardíaco, ou acidente vascular cerebral.
[0738]Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpos contendo MRD) é administrado a um paciente para tratar uma doença ou distúrbio músculo-esquelético.
[0739]Em outras modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é administrado a um paciente para tratar uma doença ou distúrbio do esqueleto. Em uma modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é administrada a um doente para tratar a osteoporose.
[0740]Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífica se liga (1) um alvo em uma célula ou tecido de interesse (Exemplo POR, um antígeno de tumor em uma célula de tumor) e (2) um alvo num leucócito, tal como uma molécula receptora de célula T. De acordo com uma modalidade, a ligação de um ou mais alvos pela composição multivalente e monovalente multiespecífico é utilizado para direcionar uma resposta imune a um agente infecioso, célula, tecido, ou outro local de interesse, em um paciente. Por exemplo, em algumas modalidades, um MRD de composição multivalente e monovalente multiespecífico se liga a um alvo na superfície de uma célula efetora. Assim, em algumas modalidades, um MRD da composição multivalente e monovalente multiespecífico se liga um alvo na superfície de uma célula T. Em modalidades específicas, um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a CD3. Em outras modalidades, um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a CD2. Em outras modalidades, um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga ao receptor de células T (TCR). De acordo com modalidades adicionais, um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a um alvo na superfície de uma das Células Assassinas Naturais. Assim, em algumas modalidades, um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a NKG2D receptor (Natural Assassino Grupo 2D). Em modalidades adicionais um MRD da composição monovalente e multivalente multiespecífico se liga a CD16 (ou seja,, Fc gamma RIII) CD64 (ou seja,, Fc gamma RI), ou CD32 (ou seja,, Fc gamma RII). Em modalidades adicionais, a composição multiespecífica contém mais de um sítio de ligação monoespecífico para alvos diferentes.
[0741]Assim, em algumas modalidades, uma composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) se liga a um alvo num leucócito e um antígeno de tumor em uma célula de tumor. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga NKG2D. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga NKG2D e um alvo selecionado a partir de ErbB2, EGFR, IGF1R, CD19, CD20, CD80 e EPCAM. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga CD3. Em modalidades particulares, o anticorpo contendo MRD se liga CD3 epsilon. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga CD3 e um alvo selecionado a partir de ErbB2, EGFR, IGF1R, CD19, CD20, CD80 e EPCAM. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga CD4. Em outras modalidades, o anticorpo contendo MRD se liga CD4 e um alvo selecionado a partir de ErbB2, EGFR, IGF1R, CD19, CD20, CD80 e EPCAM.
[0742]Em outras modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífico tem um único sítio de ligação (ou seja, é monoespecífico) para um alvo. Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífico tem um único sítio de ligação (ou seja, ser monoespecífico) para um alvo num leucócito, tal como, uma célula T (por exemplo, CD3) e se liga a um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno tumoral em uma célula tumoral, tais como, um alvo aqui revelado).
[0743]Em outras modalidades, a invenção é direcionada para o tratamento de uma doença ou distúrbio por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição monovalente e multivalente multiespecífico que possui um único sítio de ligação (ou seja, ser monoespecífico) para um alvo. Em algumas modalidades, a composição multiespecífica multivalente e monovalente administrada tem um único sítio de ligação (ou seja, ser monoespecífico) para um alvo num leucócito, tal como, uma célula T (por exemplo, CD3) e se liga a um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um tumor associado antígeno em uma célula de tumor). Em algumas modalidades, a célula tumoral é de um câncer selecionado de câncer de mama, câncer colorretal, câncer de endométrio, rim (células renais), câncer do pulmão, melanoma, Linfoma não-Hodgkin, leucemia, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer de pâncreas e câncer de tireóide.
[0744]Modalidades adicionais são dirigidas para a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição multivalente e monovalente multiespecífico para tratar uma doença ou distúrbio neurológico selecionado a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, ALS, esclerose múltipla, Neuromielite óptico e Neuro-AIDS (por exemplo, demência associada ao HIV). Em outra modalidade, a composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrado a um paciente para tratar um câncer do cérebro, câncer metastático do cérebro, ou câncer primário do cérebro. Em uma outra modalidade, a composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrado a um paciente para o tratamento de lesão cerebral, acidente vascular cerebral, lesão da medula espinhal, ou tratamento da dor. Em outras modalidades, a composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrado a um paciente para o tratamento de lesão cerebral, acidente vascular cerebral, ou lesão da medula espinhal, ou no tratamento da dor.
[0745]Em uma modalidade, ma quantidade terapeuticamente eficaz da composição monovalente e multivalente multiespecífico é administrado a um paciente para tratar uma infecção ou um sintoma associado com uma infecção causada por um agente infeccioso. Em algumas modalidades, a infecção é causada por um membro selecionado a partir de apovavirus (por exemplo, poliomavírus JC), tripanossomas, vírus do Nilo Ocidental, HIV, pneumonia estreptococos e Haemophilus influenzae, a encefalopatia espongiforme bovina, meningite, leucoencefalopatia multifocal progressiva (PML), Fase final de tripanossomíase neurológica, encefalite, e raiva.
[0746]De acordo com algumas modalidades, a composição monovalente e multivalente multiespecífico (por exemplo, anticorpo contendo MRD) é capaz de atravessar a barreira hemato-encefálica (BBB) e se ligar a um alvo localizado no lado do cérebro do BBB. Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífico possui um único sítio de ligação que se liga a um alvo (por exemplo, ligante, receptor ou proteína acessória) associado com um receptor de sistema de transporte mediado BBB endógeno. Em algumas modalidades, um único sítio de ligação da composição é um MRD. Em outras modalidades, um único sítio de ligação da composição é um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo. Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica, contém 1, 2, 3, 4, 5, ou mais sítios de ligação individuais (ou seja, liga-se monovalentemente) para um alvo associado a um sistema de transporte mediado por receptor endógeno BBB e a composição é capaz de atravessar para o lado do fluido cerebrospinal do BBB. Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífica, contém 1, 2, 3, 4, 5, ou mais sítios de ligação múltipla (ou seja, liga-se multivalentemente) para um alvo associado a um sistema de transporte mediado por receptor endógeno BBB e a composição é capaz de atravessar para o lado do fluido cerebrospinal do BBB. Em modalidades adicionais, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo contendo MRD é administrada a um paciente para tratar uma doença ou distúrbio neurológico selecionada a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, ALS, esclerose múltipla, neuromielite óptica e neuro-AIDS (por exemplo, demência associada ao HIV). Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífico tem um único sítio de ligação (ou seja, é monovalente para se ligar a um alvo particular (antigene)) ou dois ou mais sítios de ligação (ou seja, é monovalente para se ligar a um alvo particular) para um alvo selecionado a partir de alfa-sinucleína, RGM A, NOGO A, NgR, OMGp MAG, CSPG, inibição neurite semaforinas (Exemplo POR, Semaforina 3 A e Semaforina 4) uma efrina, A-beta, AGE (S100 A, anfoterina), NGF, A-B solúvel, aggrecan, midkine, neurocan, versican, fosfacan, Te38 e PGE2. Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica, além disso, tem um único sítio de ligação ou múltiplos sítios de ligação para um alvo selecionado a partir de IL1, IL1R, IL6, IL6R, IL12, IL18, IL23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (LIGANTE CD40), CD45RB, CD52, CD200, VEGF, VLA4, TNF alfa, interferão gama, GMCSF, FGF, C5, CXCL13, CCR2, CB2, MIP 1a, E MCP-1.
[0747]Em modalidades adicionais, a composição multivalente e monovalente multiespecífica é capaz de transferir para o lado do fluido cerebrospinal do BBB e é administrado a um paciente para tratar uma doença ou distúrbio neurológico selecionado a partir de: câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, doença de Alzheimer, doença de Parkinson , doença de Huntington, ALS, esclerose múltipla, neuromielite óptica e neuro-AIDS (Exemplo POR, demência associada ao VIH). Em outras modalidades, a invenção é dirigido para o tratamento de uma doença ou distúrbio através da administração de um anticorpo contendo MRD que tem um único sítio de ligação (ou seja, ser monoespecífico) para um alvo a um paciente com necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo contendo MRD administrado tem um único sítio de ligação (ou seja, ser monoespecífico) para um alvo num leucócito, tal como, uma célula T (por exemplo, CD3) e se liga a um alvo em uma célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno associado a tumor em uma célula de tumor).
[0748]Em algumas modalidades, a composição multivalente e monovalente multiespecífica é administrada a um paciente para tratar uma doença ou distúrbio neurológico selecionada a partir de câncer do cérebro, de uma doença neurodegenerativa, esquizofrenia, epilepsia, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, doença de Huntington, ALS, esclerose múltipla, neuromielite óptica e Neuro AIDS (por exemplo, demência associada ao HIV). Em modalidades adicionais, a composição monovalente e multivalente multiespecífica é administrado a um paciente para tratar um câncer do cérebro, câncer metastático do cérebro, ou câncer primário do cérebro. Em modalidades adicionais, a composição monovalente e multivalente multiespecífica é administrado a um paciente para o tratamento de lesão cerebral, acidente vascular cerebral, lesão da medula espinhal, ou dor. Assim, de acordo com algumas modalidades, a doença, distúrbio ou lesão tratada ou prevenida com um anticorpo contendo MRD- ou MRD da invenção é neurológica. Em uma modalidade, a doença neurológica, disturbio ou lesão está associada à dor, tais como, dor aguda ou dor crônica.
[0749]Em algumas modalidades a composição multivalente e monovalente multiespecífica se liga, a pelo menos, 1, 2, 3, 4, ou 5 alvos associados com uma doença ou distúrbio neurológico. Em uma modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) se liga a 1, 2, ou todos os 3 dos alvos RGM A; NgR, e NogoA. Em outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga 1, 2, 3, ou todos os 4 de RGM A, RGM B, e semaforina 3A ou semaforina 4. Em uma outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga a pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir de aggrecan, midkine, neurocan, versican, fosfacan, Te38, TNF alfa, NogoA, RGM A, MAG, e OMGp. Em outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga a pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir de aggrecan, midkine, neurocan, versican, fosfacan, Tc38 e TNF alfa. Em uma modalidade alternativa, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga a pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir NgR-p75, NgR-Troy, NgR-Nogo66 (Nogo), NgR- Lingo, Lingo-Troy, Lingo-p75, MAG e Omgp. Em outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga a pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir NGF, prostaglandina E2 (PGE2), TNF-alfa, IL1 beta, e IL6R.
[0750]Em uma modalidade adicional, a composição multivalente e monovalente multiespecífica liga a pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir alfa-sinucleína, RGM A e um ou mais mediadores pró- inflamatórios (por exemplo, TNF alfa, IL1, e MCP-1). Tais composições têm aplicações em, por exemplo, tratamento de doenças neurodegenerativas, tais como, doença de Parkinson.
[0751]Em outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica ligam-se e antagoniza (ou seja, é um antagonista de, por exemplo, inibe a atividade) 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir de RGM A, NOGO A, inibição neurite semaforinas, (por exemplo, semaforina 3A e semaforina 4), efrinas e alvos pró-inflamatórias (por exemplo, IL12, TNFSF12 (TWEAK), IL23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (LIGANTE CD40), IL18, VEGF, VLA4, TNF alfa, CD45RB, CD200, interferão gama, GMCSF, FGF, C5, CD52, e CCR2). Em uma modalidade adicional, a composição multivalente e monovalente multiespecífica ligam-se e antagoniza 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir de CD3, IL2, IL2R, IL6, IL6R, IL10, IL12p40, IL23, TGF beta, TNFRSF21 (DR6), fn14, CD20, LINGO, CXCL13 e CCL2. As composições têm aplicações no tratamento de, por exemplo, inflamação, neuro-regeneração e distúrbios neurodegenerativos, (tais como a esclerose múltipla). Composições multivalentes e multiespecífica que se ligam a, pelo menos, 1, 2, 3, 4, 5 ou mais destes alvos são também englobados pela invenção. Em modalidades específicas, o componente de anticorpo do anticorpo contendo MRD se liga a CD3, CD20, CD52, VLA4, TNF, TNFRSF21 (DR6), LINGO, CD3, interferão gama ou IL6.
[0752]Em outra modalidade, a composição multivalente e monovalente multiespecífica ligam-se e antagoniza (ou seja, é um antagonista de) 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos selecionados a partir de AGE (S100 A, anfotericina), citocinas pró- inflamatória (por exemplo, IL1, IL6, e TNF), quimiocinas (por exemplo, MCP 1), e as moléculas que inibem a regeneração neural (por exemplo, Nogo e RGM A). Estas composições têm aplicações no tratamento de, por exemplo, doenças neurodegenerativas crónicas tais como, a doença de Alzheimer. Em uma modalidade adicional, a composição da invenção liga-se, a pelo menos, 1, 2, 3, 4 ou 5 alvos que influenciam a geração e a sobrevivência neuronal, incluindo, por exemplo, antagonistas NGF, antagonistas IL1 ou IL1R, e A-beta. Estas composições têm aplicações no tratamento de, por exemplo, doenças neurodegenerativas crónicas tais como, a doença de Alzheimer.
[0753]Em uma modalidade adicional, a composição da invenção se liga a e antagoniza 1, 2, 3, 4, ou 5 alvos que interferem com a regeneração ou recuperação neural, incluindo NogoA, OMgp MAG, RGM A, CSPG, um ou mais astrócitos inibindo semaforinas (por exemplo, semaforina 3A e semaforina 4), efrinas, e citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, IL1, IL6, e TNF). Estas composições têm aplicações no tratamento de doenças neurodegenerativas e lesão ou trauma neural.
[0754]Na modalidade adicional, a composição multivalente e monovalente multiespecífica ligam-se e antagonizam (isto é, é um antagonista de) 1, 2, 3, 4, ou 5 alvos associados a dor, incluindo, mas não se limitando a,, NGF e SCN9A/NAV1.7. Tais composições têm aplicações em, por exemplo, o tratamento ou o alívio da dor e estados de dor associada.
[0755]Em modalidades adicionais, os alvos ligados pelas composições do presente invento ligam-se e antagoniza 1, 2, 3, 4, 5 ou mais mediadores e ou alvos solúveis ou de superfície celular implicada na inibição do crescimento ou recuperação de neurites. Em modalidades específicas, as composições da invenção se ligam a e antagonizam 1, 2, 3, 4, 5 ou mais alvos selecionados a partir de Nogo, Ompg, MAG, RGM A, semaforinas, efrinas, A-b solúvel, citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, IL1 e TNF alfa), quimiocinas (por exemplo, MIP 1a).
[0756] [0756] Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoria da dor pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz no alvo da dor ligando anticorpo MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoria da dor pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ligação de NGF anticorpo MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em outras modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoria da dor pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de tanezumumabe (por exemplo, Pfizer) compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0757]Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento de doença de Alzheimer por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um alvo de Alzheimer ligando anticorpo MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento de doença de Alzheimer por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD de ligação beta amilóide, a um paciente com necessidade do mesmo. Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento de doença de Alzheimer por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de RN1219 (PF-4.360.365; Pfizer) compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0758]Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD de ligação alvejando esclerose múltipla, a um paciente com necessidade do mesmo. Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD de ligação LINGO, a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo MRD que se liga a LINGO e TNFRSF21 (DR6) a um paciente com necessidade do mesmo. Em modalidades adicionais, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de anticorpo Biogen compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em outras modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de natalizumabe (por exemplo, TYSABRI®; Biogen) compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo Biogen LINGO compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0759]Em uma modalidade adicional, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ligação de CD20 ao anticorpo MRD, a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento ou melhoramento da esclerose múltipla através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do ocrelizumabe (Biogen Idee) compreendendo um MRD, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0760]Em outras modalidades, as composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) são úteis para o tratamento ou prevenção de uma doença infecciosa. As doenças infecciosas que podem ser tratadas ou prevenidas com composições multivalentes e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) incluem, mas não estão limitadas a, doenças associadas com a levedura, fúngica, viral e infecções bacterianas. Os vírus causadores de infecções virais que podem ser tratados ou prevenidos com composições multivalentes e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) incluem, mas não se limitam a, retrovírus (por exemplo, vírus linfotrópico para células T humanas (HTLV), tipos I e II e do vírus da imunodeficiência humana (HIV)), vírus da herpes (por exemplo, vírus herpes simplex (HSV) tipos I e II, Vírus Epstein-Barr, HHV6-HHV8 e citomegalovírus), adenovírus (por exemplo, o vírus da febre de Lassa), paramixovírus (por exemplo, vírus morbilbivírus, vírus humano respiratório sincicial, caxumba e pneumovírus), adrenovírus, bunyavírus (por exemplo, hantavirus), cornavírus, filovírus (por exemplo, vírus Ebola), flavivírus (por exemplo, o vírus da hepatite C (HCV), vírus da febre amarela e vírus da encefalite japonesa), hepadnavírus (por exemplo, vírus da hepatite B (HBV)), orthomyovírus (por exemplo, os vírus da gripe A, B e C (incluindo a gripe aviária, por exemplo, subtipo H5N1)), papovavírus (por exemplo, papilomavírus), picomavírus (por exemplo, rinovírus, enterovírus e os vírus da hepatite A), poxvírus, reovírus (por exemplo, os rotavírus), togavírus (por exemplo, vírus da rubéola), rabdovírus (por exemplo, vírus da raiva). Os agentes patogénicos microbianos causadores de infecções bacterianas incluem, mas não estão limitados a, Streptococcus pyogenes, pneumonia Streptococcus, gonorreia Neisseria, meningitidis Neissetia, Corynebacterium difteria, Clostridium botulinum, Clostridium pefringens, Clostridium tetani, Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumonia, Klebsiella ozaenae, Klebsiella rinoscleromotis, Staphylococcus aureus, Vibrio cólera, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter (Vibrio) fetus, Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Edwardsiella tarda, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Shigella dysenteriae, Shigellaflexneri, Shigella sonnei, Salmonella typhimurium, Treponema pallidum, Treponema pertenue, Treponema carateneum, Borrelia vincentii, Borrelia burgdorferi, Leptospira icterohemorrhagiae, Mycobacterium tuberculosis, Toxoplasma gondii, Pneumocystis carinii, Francisella tularensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsia prowazeki, Rickettsia Lsutsugumushi, Chlamydia spp., and Helicobacter pylori.
[0761]Em uma modalidade preferida, as composições multivalentes e multiespecífica (por exemplo, anticorpo contendo MRD) são administradas a um paciente para tratar ou prevenir o vírus da imunodeficiência (HIV) ou a AIDS humana, botulismo, antraz, ou Clostridium difficile. VIII Compostos ligados a MRD que não são Anticorpos
[0762]Em um grupo distinto de modalidades, um ou mais MRDs da invenção estão ligados operativamente ao amino e/ou terminal carboxi de um fragmento de imunoglobulina, tal como Fab, Fab', F(ab')2, pFc', ou Fc. Em algumas modalidades, os MRDs estão operativamente ligados a um polipeptídeo Fab ou Fc que contém um domínio de Ig adicional. Em algumas modalidades, os MRDs estão operativamente ligados ao grupo amino e/ou carboxilo terminal de um fragmento de imunoglobulina que também é operativamente ligado a um scFv. Em outras modalidades, os MRDs da invenção estão ligados operativamente a uma proteína de fusão Fc.
[0763]De acordo com este grupo de modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete a dez, ou mais do que dez MRDs estão ligados operativamente ao terminal amino e/ou terminal carboxi do fragmento de imunoglobulina. Estes MRDs estão opcionalmente ligados um ao outro ou para o fragmento de imunoglobulina através de um ligante. Em uma modalidade, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete a dez, ou mais do que dez, dos MRDs operativamente ligada ao terminal amino e/ou terminal carboxi do fragmento de imunoglobulina são os mesmos. Em outra modalidade, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete a dez, ou mais do que dez, dos MRDs operativamente ligados ao terminal amino e/ou terminal carboxi do fragmento de imunoglobulina são diferentes.
[0764]Os MRDs operativamente ligados ao fragmento de imunoglobulina podem ser monoméricos (isto é, contendo um MRD no terminal de uma cadeia de peptídeo ligado, opcionalmente através de um ligante) ou multiméricos (isto é, contendo mais de um MRD em conjunto, opcionalmente ligado por um ligante). Os MRDs podem ser homo-multiméricos (isto é, contendo mais do que um dos mesmos MRD em conjunto opcionalmente ligado por ligante(s) (por exemplo, homodímeros, homotrímeros, homotetrâmeros etc)) ou hetero-multiméricos (isto é, contendo dois ou mais MRDs em que existem, pelo menos, dois diferentes MRDs opcionalmente ligados por ligante(s) em que todos ou alguns dos MRDs ligados a um determinado terminal são diferentes (por exemplo, heterodímero)). Em uma modalidade, dois MRDs monoméricos diferentes estão localizados em diferentes terminais do fragmento de imunoglobulina. Em outra modalidade, três, quatro, cinco, seis ou mais diferentes MRDs monoméricos estão localizados em diferentes terminais do fragmento de imunoglobulina.
[0765]Em uma modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD dimérica e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD homodimérica e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD heterodimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0766]Em uma modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD multimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina. Em uma outra modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD homomultimérico e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0767]Em uma outra modalidade alternativa, o anticorpo contendo MRD contém pelo menos um MRD heteromultimérica e um monomérico localizado em diferentes terminais de imunoglobulina.
[0768]Várias MRDs que são operativamente ligadas ao fragmento de imunoglobulina podem ter como alvo o mesmo sítio de ligação ao alvo, ou dois ou mais diferentes sítios de ligação ao alvo. Onde as MRDs ligam-se a diferentes sítios de ligação ao alvo, os sítios de ligação podem ser as mesmas ou diferentes alvos. Do mesmo modo, um ou mais dos MRDs podem ligar-se para o mesmo alvo que o fragmento de imunoglobulina. Em algumas modalidades, pelo menos um dos MRDs e, se aplicável, o fragmento de imunoglobulina (por exemplo, em que o fragmento de imunoglobulina é um Fab), se ligam aos seus alvos simultaneamente. Em modalidades adicionais, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, ou mais do que dez MRDs, e se aplicável o fragmento de imunoglobulina, se ligam aos seus alvos simultaneamente.
[0769]A síntese de MRDs ligado operacionalmente a um fragmento de imunoglobulina e o ensaio destas MRDs e fragmento de imunoglobulina quanto à sua capacidade para se ligar, ou competir pela ligação com um ou mais alvos simultaneamente pode ser rotineiramente realizada utilizando métodos aqui descritos ou de outro modo divulgados conhecidos na arte.
[0770]Em uma modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligadas ou a um fragmento de imunoglobulina, se liga ao VEGF. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados ou a um fragmento de imunoglobulina, se liga ao mesmo epitopo que ranibizumabe (LUCENTIS®, Genentech). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados ou a um fragmento de imunoglobulina, inibe competitivamente a ligação ranibizumabe ao VEGF. Em uma modalidade adicional, o fragmento de imunoglobulina é um Fab. Em uma outra modalidade específica, o fragmento de imunoglobulina é ranibizumabe.
[0771]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um VEGFA OU VEGFR de ligação imunoglobulina MRD fusão de fragmento a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ligação VEGFA OU VEGFR fusão Fab-MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de ranibizumabe MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0772]Em outras modalidades os um ou mais MRDs da invenção estão ligados operativamente ao amino e/ou carboxilo terminal de uma proteína de fusão de Fc. A proteína de fusão de Fc pode conter fusões com qualquer sequência de proteína ou polipeptídeo de valor terapêutico, por exemplo, qualquer um dos alvos ou receptores de os alvos aqui descritos. Por exemplo, as fusões podem conter o domínio extracelular de receptores ou ligantes que funcionam tipicamente ou exibem parceiros cognatos melhorados de ligação em forma multimérica, incluindo, por exemplo, os receptores correspondentes à superfamília TNF-R (por exemplo, TNFR2, TACI, BCMA, HVEM, etc.), receptor superfamília IL (por exemplo, IL1-R-IL6R), superfamília VEGFR (por exemplo, VEGFR1-VEGR3), superfamília FGRFR (por exemplo, FGFR1-FGFR4), e superfamília B7 (por exemplo, CTLA)).
[0773]Em uma modalidade específica, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou mais MRDs está operacionalmente ligados a uma proteína de fusão VEGR1/VEGFR2-Fc. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que aflibercept (Regeneron). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibem competitivamente ligação a aflibercept VEGFA ou PLGF. Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão operacionalmente ligados a aflibercept.
[0774]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-VEGFR1/VEGFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer colorretal, câncer de próstata, ou câncer de pulmão de não pequenas células, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um VEGFA ou PLGF ligação de proteína de fusão de MRD-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um VEGFA ou PLGF ligação da proteína de fusão MRD-Fc e irinotecan, 5FU, oxaliplatina, doxetaxel, or FOLFOX6, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0775]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de aflibercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento de câncer colorretal, câncer de próstata, ou câncer do pulmão de não pequenas células, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de aflibercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento degeneração macular compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de aflibercept MRD e irinotecan, 5FU, oxaliplatina, doxetaxel, ou FOLFOX6, a um paciente com necessidade do mesmo.
[0776]Em uma modalidade específica, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou mais MRDs estão operacionalmente ligados a uma proteína de fusão CTLA4-Fc. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que o abatacept (ORENCIA®). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe competitivamente um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe competitivamente a ligação a CD80 abatacept a ligação a CD80 (B7-1) ou CD86 (B7-2). Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão ligados operativamente ao abatacept. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que belatacept (Bristol Myers Squibb). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe competitivamente a ligação de belatacept para CD80 (B7-1) ou CD86 (B7-2). Em uma modalidade adicional, o fragmento de imunoglobulina é um Fab. Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão operacionalmente ligados a belatacept.
[0777]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-CTLA4-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de abatacept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade específica, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de abatacept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade específica, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune a uma rejeição de enxerto, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de abatacept MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0778]Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de belatacept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma outra modalidade específica, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune a uma rejeição de enxerto, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de belatacept MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0779]Em uma outra modalidade específica, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou mais MRDs estão operacionalmente ligados a uma proteína de fusão TNFR2-Fc. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que o etanercept (ENBREL®). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe etanercept competitivamente a ligação ao TNF alfa. Em outra modalidade, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se liga ANG2. Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão ligados operativamente ao etanercept.
[0780]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD- TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, artrite reumatóide juvenil idiopática ou por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TNFR2-Fc a um paciente com necessidade do mesmo.
[0781]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD- etanercept-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de um distúrbio inflamatório, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de doença de Crohn, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da colite ulcerosa, pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite psoriática, espondilite anquilosante, psoríase, artrite reumatóide juvenil idiopática ou por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de etanercept MRD a um paciente com necessidade do mesmo.
[0782]Em uma outra modalidade específica, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou mais MRDs estão operacionalmente ligados a uma proteína de fusão TACI-Fc. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que atacicept (Merck/Serono). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe competitivamente a ligação de atacicept BLyS ou APRIL. Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão operacionalmente ligados a atacicept.
[0783]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TACI-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TACI-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TACI-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento do lúpus eritematoso sistêmico pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-TACI-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em outra modalidade, a invenção proporciona um método para suprimir uma resposta imune compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD atacicept a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença autoimune pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD atacicept a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento da artrite reumatóide, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD atacicept a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento do lúpus eritematoso sistêmico, por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD atacicept a um paciente com necessidade do mesmo.
[0784]Em uma outra modalidade específica, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou mais MRDs estão operacionalmente ligados a uma proteína de fusão de IL1R-Fc. Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados se ligam ao mesmo epitopo que o rilonacept (Regeneron). Em uma outra modalidade específica, um ou mais dos MRDs operacionalmente ligados inibe competitivamente a ligação de rilonacept a IL1R. Em uma outra modalidade específica, os MRDs estão operacionalmente ligados a rilonacept.
[0785]Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de prevenção de gota compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD-IL1R-Fc a um paciente com necessidade do mesmo. Em uma modalidade específica, a invenção proporciona um método de prevenção de gota compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de fusão MRD- rilonacept-Fc a um paciente com necessidade do mesmo.
[0786]Em algumas modalidades, a invenção abrange um complexo que compreende um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), em que o MRD compreende pelo menos duas cisteínas, em que uma primeira cisteína está localizada dentro dos primeiros dez aminoácidos do MRD, uma segunda cisteína está localizada dentro dos últimos dez aminoácidos do MRD, e em que o MRD compreende pelo menos cinco aminoácidos entre a referida primeira cisteína e a referida segunda cisteína. Em modalidades adicionais, o MRD compreende pelo menos 10, 15, 20, ou 25 aminoácidos entre a primeira cisteína e a segunda cisteína. Em algumas modalidades, o MRD compreende pelo menos um prolina entre a primeira cisteína e a segunda cisteína. Em outras modalidades, o MRD compreende pelo menos duas prolinas entre a primeira cisteína e a segunda cisteína. Em algumas modalidades, a primeira cisteína não é mais do que 5, 3, 3, 2, ou 1 aminoácidos longe do terminal N do complexo. Em algumas modalidades, a segunda cisteína não é mais do que 5, 3, 3, 2, ou 1 aminoácidos longe do terminal C do complexo. Em algumas modalidades, a meia-vida in vivo de um MRD em um complexo da invenção é aumentada em comparação com a semivida de um MRD num complexo correspondente em que pelo menos uma das cisteínas sofre mutação ou é eliminada. Em algumas modalidades, a afinidade ligação do MRD é pelo menos igual à afinidade ligação de um MRD num complexo correspondente em que pelo menos uma das cisteínas sofre mutação ou eliminada.
[0787]Em algumas modalidades, a invenção abrange um complexo que compreende um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), em que o anticorpo e a ligação MRD a diferentes alvos ou epitopos na mesma célula ou molécula, em que a ligação MRD agoniza ou antagoniza o MRD alvo sob condições fisiológicas, e em que o referido MRD não se ligam a e agonizam ou antagonizam o referido MRD alvo sob condições fisiológicas, na ausência do referido anticorpo. Em algumas modalidades, um MRD no complexo da invenção liga-se o MRD alvo na ausência do anticorpo com um EC50 superior a 0,01 nM, 0,1 nM, 0,5 nM, ou 0,7 nM sob condições fisiológicas.
[0788]Em algumas modalidades, a invenção abrange um complexo que compreende um anticorpo e pelo menos um MRD, em que o anticorpo e a ligação MRD a diferentes alvos ou epitopos em uma proteína heteromérico ou homomérico, em que a ligação MRD agoniza ou antagoniza o MRD alvo sob condições fisiológicas, e em que o referido MRD não se ligam a e agonizam ou antagonizam o referido MRD alvo sob condições fisiológicas, na ausência do anticorpo. Em algumas modalidades, um MRD no complexo da invenção ligase ao MRD alvo com uma EC50 superior a 0,01 nM, 0,1 nM, 0,5 nM, ou 0,7 nM sob condições fisiológicas.
[0789]Em algumas modalidades, a invenção abrange um método para inibir o crescimento de uma célula, compreendendo o contato da célula com um complexo multivalente e multiespecífico compreendendo um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), e um inibidor de proteína quinase. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um alvo selecionado a partir de: VEGF, VEGFR1, EGFR, ErbB2, IGF-IR, cMET, FGFR1, e FGFR2. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe um alvo do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe um alvo diferente do que o anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe mais do que uma proteína-quinase. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase é um membro selecionado a partir de: imatinib, gefitinib, vandetanib, erlotinib, sunitinib, lapatinib, e sorafenib.
[0790]Em algumas modalidades, a invenção abrange um método para inibição da angiogénese num paciente compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um complexo multivalente e multiespecífico que compreende um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), e um inibidor de proteína quinase. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um alvo selecionado a partir de: VEGF, VEGFR1, EGFR, ErbB2, IGF-IR, cMET, FGFR1, e FGFR2. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe um alvo do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe a um alvo diferente do que o anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe mais do que uma proteína- quinase. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase é um membro selecionado a partir de: imatinib, gefitinib, vandetanib, erlotinib, sunitinib, lapatinib, e sorafenib.
[0791]Em algumas modalidades, a invenção abrange um método para tratar um paciente com câncer que compreende a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um complexo multivalente e multiespecífico que compreende um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), e um inibidor de proteína quinase. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um alvo selecionado a partir de: VEGF, VEGFR1, EGFR, ErbB2, IGF-IR, cMET, FGFR1, e FGFR2. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe um alvo do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe a um alvo diferente do que o anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe mais do que uma proteína- quinase. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase é um membro selecionado a partir de: imatinib, gefitinib, vandetanib, erlotinib, sunitinib, lapatinib, e sorafenib.
[0792]Em algumas modalidades, a invenção abrange um método para tratar um doente possuindo uma doença ou distúrbio do sistema imunológico que compreende a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um complexo multivalente e multiespecífico compreendendo um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), e uma proteína inibidora de cinase. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio do sistema imunológico é a inflamação ou uma doença autoimune. Em outras modalidades, a doença autoimune é artrite reumatóide, doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico, doença inflamatória do intestino, psoríase, diabetes, colite ulcerativa, ou esclerose múltipla. Em modalidades adicionais, o anticorpo liga-se a TNF. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe um alvo que não é um alvo do anticorpo contendo MRD. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína quinase inibe mais do que uma proteína-quinase. Em outras modalidades, o inibidor de proteína quinase é um membro selecionado a partir de: lestaurtinib, tofacitinib, ruxolitinib, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348, fostamatinib, BAY 613606, e sunitinib.
[0793]Em algumas modalidades, a invenção abrange um complexo multivalente e multiespecífico que compreende um anticorpo e pelo menos um domínio de reconhecimento modular (MRD), em que o complexo tem um único sítio de ligação para um alvo da superfície da célula. Em algumas modalidades, o complexo multivalente e multiespecífico compreende 2 únicos sítios de ligação para epítopos diferentes no mesmo alvo. Em algumas modalidades, o complexo multivalente e multiespecífico tem 2, 3, 4, 5 ou mais sítios de ligação individuais para alvos diferentes. Em algumas modalidades, o complexo multivalente e multiespecífico tem um único sítio de ligação para um alvo num leucócito. Em algumas modalidades, o complexo multivalente e multiespecífico tem um único sítio de ligação para um alvo em uma célula T. Em algumas modalidades, o complexo multivalente e multiespecífico tem um único sítio de ligação para CD3. Em outras modalidades, o complexo tem um único sítio de ligação para CD3 epsilon. Em modalidades adicionais, o complexo tem um único sítio de ligação para um alvo em uma das células assassinas naturais. Em modalidades adicionais, o complexo tem vários sítios de ligação para um alvo em uma célula doente. Em algumas modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para 2, 3, 4, 5 ou mais alvos em uma célula doente. Em modalidades adicionais, o complexo tem vários sítios de ligação para um alvo em uma célula tumoral. Em outras modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para 2, 3, 4, 5 ou mais alvos em uma célula tumoral. Em algumas modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para um alvo em uma célula imune. Em outras modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para 2, 3, 4, 5 ou mais alvos em uma célula imune. Em algumas modalidades, o complexo tem um único sítio de ligação para um alvo em uma das células assassinas naturais. Em algumas modalidades, o complexo se liga a um alvo num leucócito e um alvo de uma célula de tumor. Em algumas modalidades, o complexo liga CD3 e CD19. Em outras modalidades, o complexo possui múltiplos sítios de ligação para um alvo de um agente infeccioso ou de uma célula infectada com um agente infeccioso. Em outras modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para 2, 3, 4, 5 ou mais alvos em um agente infeccioso ou uma célula infectada com um agente infeccioso. Em algumas modalidades, o complexo tem um único sítio de ligação para um alvo associado a uma barreira hematoencefálica endógena (BBB) mediada pelo receptor do sistema de transporte. Em outras modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para um alvo associado a um receptor BBB endógeno mediado pelo sistema de transporte. Em algumas modalidades, o complexo tem vários sítios de ligação para 2, 3, 4, 5 ou mais alvos associados a um receptor BBB endógeno mediado pelo sistema de transporte. Em algumas modalidades, o sítio de ligação único é um MRD. Em algumas modalidades, o sítio de ligação único é um domínio de ligação ao antígeno.
[0794]Em algumas modalidades, os complexos da presente invenção compreendem um agente citotóxico.
[0795]O polinucleótido que codifica uma cadeia pesada ou cadeia leve do anticorpo contendo MRD da invenção, vetores compreendendo estes polinucleótidos e células hospedeiras contendo esses vetores e/ou polinucleótidos, também estão abrangidos pela invenção.
[0796]Os exemplos seguintes destinam-se a ilustrar mas não limitar a invenção.
Exemplos Exemplo 1. Integrina Alvejando Moléculas de anticorpo-MRD
[0797]As moléculas de fusão anticorpo-MRD novas foram preparadas por fusão de uma integrina avß3 alvejando peptídeos para anticorpo catalítico 38C2. As fusões no terminal N e terminal C da cadeia leve e o terminal C da cadeia pesada foram mais eficazes. Utilizando citometria de fluxo, os conjugados de anticorpos se ligam de forma eficiente a integrina avß3 expressando células de câncer de mama humano. Os anticorpos conjugados também retiveram a atividade retro-aldol de seu anticorpo parental catalítica 38C2, tal como medido por metodolo e de ativação pró-fármaco doxorrubicina. Isto demonstra que a capacidade direcionamento celular e de anticorpo catalítico pode ser eficientemente combinada por quimioterapia seletiva. Exemplo 2. Angiogênico Citocina Alvejando Moléculas Anticorpo-MRD
[0798]Citocina angiogenico alvejando moléculas de fusão anticorpo- MRD foram construídos. O anticorpo utilizado foi 38C2, que foi fundida com um MRD contendo o peptídeo 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEEC EWDPWTC EHMLE (SEQ ID N°: 10)). O peptídeo contendo MRD foi fundido com o terminal N- ou C- da cadeia leve e o terminal C- da cadeia pesada. Resultados semelhantes foram encontrados com os outros peptídeos Ang2 MRD. Peptídeos adicionais Ang2 MRD incluem: MGAQTNFMPMDNDELLLYEQFILQQGLEGGSGSTASSGSGSSLGAQT NFMPMDNDELLLY (SEQ ID N°:20) (LM-2x-32); e AQQEECEWDPWTCEHM GSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEHMLE (SEQ ID N°: 10) (2xCon4).
[0799]Um perito na arte, tendo em conta os ensinamentos aqui descritos, irá apreciar que outras tais combinações criará MRDs ligação Ang2 funcional tal como aqui descrito. Exemplo 3 Fusões Anticorpo-MRD com anticorpos não catalíticos
[0800]Um anticorpo monoclonal de ratinho humanizado, o LM609, dirigidos para avß3 integrina humana foi previamente descrito (Rader, C. et. al, PNAS 95:8910-5 (1998)).
[0801]Um anticorpo monoclonal não catalítica AB humano, JC7U foi fundida com um MRD anti-Ang2 contendo 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEEC EWDPWTCEH MLE (SEQ ID N°: 10)) em qualquer dos terminais N- ou C- da cadeia leve. 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWT CEHMLE (SEQ ID N°:10)) foi estudado como uma fusão terminal N- à cadeia Kappa do anticorpo (2xCon4-JC7U) e como uma fusão terminal C- (JC7U- 2xCon4). Ambas as fusões manteve integrina e Ang2 de ligação. Como se mostra no painel da esquerda da Figura 3, ambas as construções de anticorpo (2xCon4-JC7U e JC7U-2xCon4) especificamente ligado a Ang2 recombinante tal como demonstrado por estudos de ELISA. A ligação a Ang2, contudo, é significativamente mais elevado com JC7U-2xCon4, que tem a 2xCon4 (SEQ ID N°:10) fundida no terminal C da cadeia leve do anticorpo. O painel da direita da Figura 3 representa a ligação de Ang2-JC7U e JC7U-Ang2 para integrina avß3. Os resultados mostram que a fusão de 2xCon4 (SEQ ID N°:10), com qualquer terminal N- ou C- da cadeia leve não afeta a ligação de mAb JC7U para avß3 integrina. A Figura 4 descreve um outro estudo de ELISA utilizando as mesmas construções de fusão anticorpo-MRD. Exemplo 4. Moléculas de fusão HERCEPTIN® - MRD
[0802]Outro exemplo de fusões MRD a um anticorpo não-catalítico são HERCEPTIN®- MRD construções de fusão. As fusões HERCEPTIN®-MRD são multifuncionais, ambas as pequenas moléculas antagonistas av integrina e o anticorpo-alvo integrina quimicamente programados mostram uma notável eficácia na prevenção de metástases do câncer de mama, por interferir com a adesão celular mediada por av e proliferação. As fusões HERCEPTIN®-MRD são multifuncionais, ambas as pequenas moléculas antagonistas av integrina e o anticorpo-alvo integrina quimicamente programados mostram uma notável eficácia na prevenção de metástases do câncer de mama, por interferir com a adesão celular mediada por av e proliferação. As fusões contendo MRD HERCEPTIN®-2xCon4 (que tem como alvo a ErbB2 e Ang2) e HERCEPTIN®- V114 (que tem como alvo a segmentação ErbB2 e VEGF) e HERCEPTIN®- RGD-4C-2xCon4 (que tem como alvo a ErbB2, ang2, e segmentação integrina) são eficazes. Exemplo 5. Moléculas de Anticorpo-MRD alvejando VEGF
[0803]Um anticorpo contendo um MRD que tem como alvo VEGF foi construído. A MRD que tem como alvo vl 14 (SEQ ID N°:13) foi fundido no terminal N- da cadeia Kappa de 38C2 e HERCEPTIN® usando um ligante. Expressão e teste das estruturas resultantes de fusão anticorpo-MRD demonstrou forte ligação a VEGF. Exemplo 6. Moléculas Anticorpo-MRD alvejando IGF1R
[0804]Fusão de um MRD que tem como alvo o IGF1R (SFYSCLESLVNGPAEKSRG QWDGCRKK (SEQ ID N°:14)) para o terminal N- da cadeia Kappa de 38C2 e HERCEPTIN® utilizando a sequência ligante longa como um conector foi estudada. Expressão e teste das resultantes construções de fusão anticorpo-MRD demonstrou forte ligação IGF1R. Os clones adicionais que mostra o elevado grau de ligação a IGR1R foram identificados depois de vários ciclos de mutagênese e rastreio das regiões descritas na Tabela 4. As sequências preferidas listadas na Tabela 5 ligam-se IGF1R e não apresentam significativas ou nenhuma afinidade ligação para o receptor da insulina, sugerindo assim a especificidade para IGF1R. Tabela 4: Modelo para posterior mutagênese. Tabela 5: Exemplo 7. Ligação ErbB2, Moléculas anticorpo-MRD alvejando Ang2
[0805]Um anticorpo foi construído, que contém um MRD que tem como alvo Ang2 (L17) (SEQ ID N°:7) fundido com a cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2. Tanto a sequência de ligante curto, a sequência de ligação longa ou o quarto ciclo da região constante da cadeia leve foi usada como um ligante. A Figura 5 representa os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- de um Ang2 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo de ligação curto (GGGS (SEQ ID N°:1)) (L17-sL-Her), uma fusão C-terminal de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo ligante curto (Her-sL-L17), uma fusão terminal C- da Ang2 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o quarto ciclo, na região constante da cadeia leve (Her-lo-L17), ou em uma fusão terminal N- de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo ligante longo (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID N°:19)) (L17-1L-Her). ErbB2 foi preso com diferentes graus por todas as construções. No entanto, Ang2 foi vinculado apenas pela Her-sL-L17 e L17-lL-Her.
Exemplo 8. Ligação de receptor de fator de crescimento de hepatócitos, moléculas anticorpo-MRD alvejando Ang2
[0806]Fusão de um MRD que tem como alvo Ang2 (L17) (SEQ ID N°:7) foi feita, quer ao terminal N ou terminal C- da cadeia leve do anticorpo Met, que se liga ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos. Tanto a sequência ligante curta ou a sequência de ligação longa foram usadas como um conector. A Figura 6 representa os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm a fusão do terminal N de Ang 2 alvejando MRD com o anticorpo Met com o peptído ligante curto (GGGS (SEQ ID N°:1)) (L17-sL-Met), fusão terminal N- da Ang2 alvejando MRD com o anticorpo com o peptídeo Met ligante longo (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID N°:19)) (L17-1L-Met), e a fusão do terminal C de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo Met com o peptídeo ligante longo (Mct-ILL17). Expressão e análise das estruturas resultantes de fusão anticorpo-MRD demonstraram forte ligação Ang2 quando o peptídeo longo ligante foi utilizado. Fusão do Ang2 alvejando MRD para o terminal C da cadeia leve do anticorpo resultou em ligeiramente mais elevado, em seguida, se ligar a Ang 2 a fusão de Ang2 direcionamento para o terminal N- da cadeia leve do anticorpo.
Exemplo 9. Ligação ErbB2, Moléculas Anticorpo-MRD Alvejando Integrina
[0807]Um anticorpo foi construído, que contém um MRD que tem como alvo integrina avß3 (RGD4C) com a sequência CDCRGDCFC (SEQ ID N°:106) fundido com a cadeia leve de um anticorpo HERCEPTIN® que se liga a ErbB2 (Her). Tanto a sequência de ligante curto, a sequência de ligação longa ou o quarto ciclo da região constante da cadeia leve foi usada como um ligante. A Figura 7 representa os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- da integrina avß3 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo de ligação curto (GGGS (SEQ ID N°:1)) (RGD4C-sL-Her), uma fusão terminal C- de integrina avß3 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo de ligação curto (Her-sL-RGD4C), uma fusão terminal C- da integrina avß3 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o quarto ciclo, na região constante da cadeia leve (Her-lo-RGD4C), ou uma fusão terminal N- de integrina avß3 alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo ligante longo (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID N°:19)) (RGD4C-1L-Her). ErbB2 foi preso com diferentes graus por todas as construções. No entanto, avß3 integrina foi vinculado apenas pela RGD4C-1L- Her.
Exemplo 10. Ligação de receptor do fator de crescimento de hepatócitos, moléculas anticorpo MRD alvejando Integrina
[0808]Um anticorpo foi construído, que contém um MRD que tem como alvo integrina avß3 (RGD4C) (SEQ ID N°:106) fundido com a cadeia leve de um anticorpo que se liga ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos (Met). Foram usadas construções de anticorpo-MRD contendo a sequência de ligação longa. A Figura 8 representa os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- da integrina avß3 alvejando MRD com anticorpo do receptor do fator de crescimento de hepatócitos (RGD4C-1L-Met), ou uma fusão terminal C- de integrina avß3 alvejando MRD com anticorpo do receptor do fator de crescimento de hepatócitos (Met-1L- RGD4C). O RGD4C-1L-Met demostrou forte ligação com integrina avß3
Exemplo: 11. Ligação ErbB2, moléculas anticorpo-MRD alvejando Receptor do fator de Crescimento I do tipo insulina
[0809]Os anticorpos foram construídos que contém um MRD que tem como alvo o fator-I de crescimento semelhante à insulina de receptores (RP) (SEQ ID N°:14) fundido com a cadeia leve de um anticorpo que se liga a ErbB2 (Her). Tanto o peptídeo ligante curto, o peptídeo de ligação longa ou o quarto ciclo da região constante da cadeia leve foi usada como um ligante (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-4289 (1992); U.S. Pat. N°. 5.677.171; e ATCC Deposit 10463, cada um dos quais é aqui incorporado por referência). A Figura 9 representa os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- de crescimento do tipo insulina fator-I de receptor alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo de ligação curto (RP-sL-Her), uma fusão terminal C- de insulina como fator-I de receptor de crescimento alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 e o peptídeo de ligação curto (Her-sL-RP), uma fusão terminal C- de insulina como fator-I de receptor de crescimento alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o quarto ciclo, na região constante da cadeia leve (Her-lo-RP), uma fusão terminal N- de insulina como fator-I de receptor de crescimento alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo ligante longo (RP-1L-Her), ou uma fusão terminal C- de insulina como fator-I de receptor de crescimento alvejando MRD com o anticorpo ErbB2 com o peptídeo ligante longo (Her-1L-RP). ErbB2 foi preso com diferentes graus por todas as construções. Fator-I de receptor de crescimento do tipo insulina foi ligado por RP-1L-Her.
Exemplo 12. Ligação ErbB2. Moléculas anticorpo-MRD alvejando VEGF
[0810]Fusão de um MRD que tem como alvo VEGF (VI 14) (SEQ ID N°:13) (Fairbrother W J., et al, Biochemistry 37:177754-177764 (1998)) foi feito para o terminal N- da cadeia leve de um anticorpo de ligação ErbB2 (Her). Um peptídeo de ligação médio (SSGGGGSGGGGGGSS (SEQ ID N°:2)) foi usado como um conector. A Figura 10 representa os resultados de um ELISA utilizando uma construção contendo uma fusão N-terminal de VEGF alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 com o peptídeo de ligação médio (VI 14-mL-Her). Expressão e teste da construção de fusão anticorpo-MRD resultante demonstrou forte VEGF e a ligação ErbB2.
Exemplo 13. Integrina Alvejando Moléculas Anticorpo-MRD
[0811]Fusão de um MRD que tem como alvo integrina avß3 (RGD) (SEQ ID N°:106) para o terminal N da cadeia leve de 38C2 utilizando o peptídeo ligante médio como um conector foi estudada. A Figura 11 demonstra que a expressão e teste do anticorpo-MRD construção de fusão resultante tinha forte ligação integrina avß3.
Exemplo 14. Ang2 Alvejando moléculas anticorpo-MRD
[0812]Fusão de um MRD que tem como alvo Ang2 (L 17) (SEQ ID N°:7) para o terminal C da cadeia leve de 38C2, utilizando a sequência ligante curta como um conector foi estudada. A Figura 12 demonstra que a expressão e ensaio da construção de fusão anticorpo-MRD resultante tinha ligação forte Ang2.
Exemplo 15. Ligação ErbB2, integrina e Ang2 alvejando moléculas anticorpo-MRD
[0813]Um MRD que tem como alvo integrina avß3 (RGD4C) foi ligada ao terminal N da cadeia leve de um anticorpo alvejando ErbB2 (Her) com um ligante médio, e uma Ang2 (L17) alvejando MRD foi ligado por um ligante curto para o terminal C do mesmo ErbB2 alvejando anticorpo (RGD4C-mL-Her-sL- L17). A Figura 13 demonstra que a fusão anticorpo-MRD resultande constrói ligação para integrina, Ang2, e ErbB2.
[0814]Da mesma forma, ErbB2 alvejando anticorpos (por exemplo, Her) com um IGF-1R MRD fundido com o terminal C da cadeia pesada ou o N- terminal da cadeia leve liga a IGF-1R imobilizado a taxas comparáveis. Além disso, ErbB2 alvejando anticorpos contendo um IGF-1R MRD fundido com o terminal N da cadeia leve e um Ang2 MRD fundido com o terminal C da cadeia pesada ligado a IGF-1R imobilizado a taxas comparáveis. Cada uma destas três composições multivalentes e multiespecíficas (por exemplo, anticorpo contendo MRD) também inibiram a ligação de IGF-1 para IGF-1R imobilizado. A molécula triespecífica (HERCEPTIN com IGF-1R e Ang2 MRDs) ligado a ambos ErbB2 superfície celular e Ang2 solúvel.
Exemplo 16. Ligação ErbB2, integrina - alvejando moléculas anticorpo- MRD
[0815]Um anticorpo foi construído que contém um MRD que tem como alvo integrina avß3 (RGD4C) fundido com o terminal N da cadeia pesada de um anticorpo que se liga a ErbB2 (Her) utilizando o meio ligante como um conector (RGD4C-mL-her-heavy). A Figura 14 descreve os resultados de um ELISA utilizando a construção. Ambos, integrina e ErbB2, foram ligados pela construção.
Exemplo 17. Ligação ErbB2 ou Receptor do Fator de Crescimento de hepatócitos, e integrina, Ang2 ou receptor fator-I de crescimento tipo insulina - alvejando moléculas anticorpo-MRD com o agente de ligação curto de peptideo
[0816]Moléculas de anticorpo de MRD foram construídos que contêm ErbB2 ou anticorpos do receptor de factor de crescimento de hepatócitos, e integrina avß3, Ang2 ou do tipo insulina receptor do factor-I de crescimento alvejando regiões MRD foram ligados com o peptídeo de ligação curto para a cadeia leve do anticorpo. A Figura 15 descreve os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- da Ang2 alvejando MRD fundido com o anticorpo ErbB2 (L17-sL-Her), uma fusão terminal N- de integrina MRD alvejando com o anticorpo ErbB2 (RGD4C-sL-Her), uma fusão terminal N- de crescimento factor-I do tipo insulina de receptor alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 (RP-sL-Her), uma fusão terminal C- de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao receptor do factor de crescimento de hepatócitos (L17-sL-Met), uma fusão terminal C- de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 (Her-sL-L17), uma fusão terminal C- da integrina alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 (Her-sL-RGD4C), ou uma fusão terminal C- de crescimento do tipo insulina factor-I de receptor alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 (Her- sL-RP). ErbB2 foi ligado com vários graus pelas construções de anticorpo- MRD, com a exceção da construção que contém o anticorpo do fator de crescimento de hepatócitos de ligação ao receptor. Antígeno foi vinculado apenas pela construção Her-sL-L17.
Exemplo 18. Ligação ErbB2 ou Receptor do Fator de Crescimento de hepatócitos, e integrina, Ang2 ou Crescimento do tipo insulina fator-I Receptor - Alvejando moléculas Anticorpo-MRD com o agente de ligação peptídico longo
[0817]Moléculas de Anticorpo-MRD foram construídos que contêm anticorpos que se ligam ErbB2 ou do receptor do fator de crescimento de hepatócitos, e integrina avß3, Ang2 ou receptor fator-I de crescimento tipo insulina alvejando regiões MRD ligadas com o peptídeo de ligação longo da cadeia leve do anticorpo. A Figura 16 descreve os resultados de um ELISA utilizando construções que contêm uma fusão terminal N- da Ang2 alvejando MRD fundido com o anticorpo ErbB2 (L17-1L-Her), uma fusão terminal N- de MRD-alvejando integrina com o anticorpo ErbB2 (RGD4C-1L-Her), uma fusão terminal N- do receptor fator-I de crescimento tipo insulina alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao ErbB2 (RP-1L-Her), uma fusão terminal C- de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos (L17-1L- Met), uma fusão terminal C- da integrina alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos (RGD4C-1L-Met), uma fusão terminal C- de Ang2 alvejando MRD com receptor de fator-I de crescimento tipo insulina aligação do anticorpo (Her- 1L-RP), uma fusão terminal C- de Ang2 alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos (Met-1L-L17), ou uma fusão terminal C- da integrina alvejando MRD com o anticorpo de ligação ao receptor do fator de crescimento de hepatócitos (Met-1L-RGD4C). Como mostrado na Figura 16, as fusões de anticorpo-MRD são eficazes para ligar o antígeno e ErbB2. Lu et al, J. Biol. Chem. 20:280(20):19665-19672 (2005); Lu et al, J. Biol. Chem.:279(4):2856-65 (2004).
Exemplo 19: Clonagem e expressão da Ang2 MRDs fundidos com Maltose proteína de ligação A. Clonagem de fusões MBP
[0818]Peptídeos de monômero e dímero foram expressos como proteínas de fusão de proteína de ligação maltose (MBP) utilizando uma forma modificada do sistema de vetores pMAL-p2 e expressão a partir de New England Biolabs (NEB; Beverly, Mass.) A sequência MRD gerado por PCR foi inserido num vetor pMAL a jusante do gene malE que codifica a MBP. Isso resulta em um vetor que codifica uma proteína-MRD de fusão de MBP. O vetor pMAL contém um forte promotor Ptac e é induzivel pelos IPTG. A série pMAL- p2 contém a sequência de sinal normal do malE, que dirige a proteína de fusão através da membrana citoplasmática. pMAL-p2 proteínas de fusão susceptíveis de ser exportados podem ser purificados a partir do periplasma através de choque osmótico. A purificação adicional pode ser realizada, por exemplo ligando-se a resina de amilose. B. Expression de proteínas de fusão MBP e fraccionamento de choque osmótico
[0819]Para a expressão de proteínas de fusão, culturas bacterianas crescidas durante a noite foram novamente diluídas em meio fesco a um OD A600 de, aproximadamente, 0,1. As culturas foram crescidas para um OD de, aproximadamente, 0,8 e induzidas com IPTG a uma operação de concentração de 0,3mM. As culturas foram incubadas com agitação durante aproximadamente 4 horas, após a qual bactérias foram centrifugadas durante 15 minutos, à 4700g. Bactérias sedimentadas foram ressuspensas em 30mM de Tris-HCl pH 7,4, 20% de sacarose, 1mM de EDTA. As células foram incubadas durante 20 minutos à temperatura ambiente (RT) antes da centrifugação durante 15 minutos à 4700g. Bactérias sedimentadas foram, em seguida, ressuspensas em MgSO4 frio com gelo, e incubou-se durante 20 minutos em gelo, com mistura periódica. Suspensões Celulares foram sonicadas (Misonix XL2020) durante 90 segundos. As células foram centrifugadas a 4 ° C durante 20 minutos à 4700g. O sobrenadante ("fração de choque osmótico") foi ajustado para 1XPBS usando 10x PBS (biopreparados de Qualidade, cat # 119-069-131) e filtrou-se através de filtro de 0,2 micron. Estas fracções de choque osmótico foram ensaiadas diretamente para a ligação a Ang2. C. Ligação direta de proteínas de fusão MBP
[0820] Para a detecção de ligação direta de fusão de MRD-MBP para Ang2, o seguinte ELISA foi realizado. Noventa e seis placas de poços foram revestidas durante a noite com rhAng2 (R & D cat # 623-AN) a 320ng/ml (100µl/poço). Poços foram bloqueadaos durante 3,25 horas com 250µl do tampão de bloqueio (Thermo cat # N502), seguido por 4 lavagens com tampão de 300µl (PBS, 0,1% de tween). Proteínas de fusão de MBP foram serialmente diluidas no tampão de bloqueio e adicionadas aos poços por 2 horas à de RT. Depois de se lavar (8x300µl tampão de lavagem), as amostras foram tratadas com de HRP-de ratinho anti MBP mAb (NEB, a Cat # E8038S), diluiu-se 1: 4000 no tampão de bloqueio. Depois de incubação durante 1 hora a de RT, poços foram lavados (8x300µl tampão de lavagem à) previamente à sua recepção 100µl de substrato TMB (da KPL Laboratórios). O desenvolvimento da cor foi parado com 100µl de H2SO4, e absorvância foi lido a 450 nm. D. Resultados
[0821]Fusões MRD-MBP foram ensaiadas quanto a ligação direta para Ang2. Frações de choque osmótico de culturas bacterianas induzidas foram serialmente diluídas e adicionadas aos poços Ang2 revestidos. Proteínas de fusão ligadas foram detectadas com de anti-MBP mAb. As curvas de resposta à de dose, são apresentadas na Figura 17A. Proteínas Analisada representam variantes mutacionais da sequência de MGAQTNFMPMDDDE LLLYEQFILQQGLE (L17D) (SEQ ID do NÃO: 107). Nesta série, o motivo MDD dentro de L17D foi mutado no primeiro D para todos os outros aminoácidos possíveis (com exceção da cisteína). Outros MRDs testados foram "lm32 KtoS" e um dímero de lm32 (2xLm32). Conforme apresentado na Figura 17B, vários mutantes MXD exibiram ligaçãona faixa de 0,1 a 100 nm. O dímero lm32 (2XLm32) exibiu uma afinidade maior do que 10 vezes para Ang2 do que qualquer um L17D ou "lm32 KTOS".
Exemplo 21: Expressão e purificação dos anticorpos contendo MRDs
[0822]Domínios de reconhecimento Molecular foram construídos e expressos em um vetor 3.3 pcDNA como proteínas de fusão quer com as cadeias pesadas ou leves de anticorpos. Para obter a produção de proteína, DNAs de plasmídeo que codificam as cadeias pesadas e leves dos anticorpos que contenham MRDs foram transformados primeiro dentro de bactérias quimicamente competentes, a fim para produzir grandes quantidades de DNA para a transfecção transiente. Transformantes únicos foram propagados em meios LB e purificou-se usando Kits de Plasmídeo Livre de Endotoxina de Qiagen. Resumidamente, as células a partir de uma cultura durante a noite foram lisadas; lisados foram clarificados e aplicados para uma coluna de troca iônica, e, em seguida, submetida a um passo de lavagem e eluiu-se com elevado teor de sal. Os plasmídeos foram precipitados, lavou-se, e ressuspenderam-se em água estéril.
[0823]Células HEK293T foram expandidas para o tamanho desejado final da batelada (cerca de 5 G) antes da transfecção. O plasmídeo purificado (1mg por litro de produção) foi complexado com reagente de transfecção polietilenimina (PEI), adicionado à cultura em balão de agitação, e incubou-se a 37 ° C. A cultura foi monitorizada diariamente para contagem de células, diâmetro de célula, e viabilidade. O meio condicionado foi colhido e armazenado a -80 ° C até purificação.
[0824]Os anticorpos que contem MRDs foram purificado a partir do meio condicionado usando cromatografia de afinidade. Sobrenadante da cultura foi filtrado clarificado e aplicado diretamente a um coluna contendo Sefarose A de Proteína recombinante (GE Healthcare). A coluna foi lavada, e anticorpos ligados que contenham MRDs foram eluidos por diminuição do pH tampão. Na sequência de eluição, frações de eluato foram imediatamente ajustadas até pH fisiológico. Seguindo purificação de afinidade Proterína A, uma etapa de polimento cromatográfico adicional opcional pode ser realizada conforme necessário.
[0825]As proteínas purificadas foram dialisadas em PBS, concentradas a ~ 1 - 4 mg/ml, filtradas estéreis, aliquotadas asseticamente, e armazenadas congeladas a -80 °C. Todas as etapas da purificação foram monitoradas por SDS-PAGE-Coomassie, e precauções foram tomadas durante a purificação a fim de manter os níveis de endotoxina tão mínimo quanto possível.
[0826]O produto final foi analisado para os níveis de endotoxina (EndoSafe), pureza (SDS—PAGE-Coomassie, SEC-HPLC analítico), identidade proteína (Western blot), e rendimento (ensaio de Bradford). Uma análise por HPLC de exclusão por tamanho adicional foi realizada para avaliar o nível de agregados.
[0827]Os dados apresentados na Tabela 6 indicam que os anticorpos contendo MRD podem ser expressos e purificados usando técnicas de convencionais.
Exemplo 22: Ligação simultânea de HER Lm32 (H) e HER Lm32 (L) a Her2 e Ang2 A. Métodos
[0828] [0828] Placas de noventa e seis poços foram revestidas durante a noite com rHER2-Fc (R&D cat # 1129-ER- 050) a 20 ng/ml (IQQpl/poço). Os poços são bloqueados durante 3,25 horas com 250 µl de tampão de bloqueio (Thermo Cat # N502), seguido de 4 lavagens com 300 µl de tampão de lavagem (PBS, 0,1% de Tween). Os anticorpos contendo MRDs (HER-lm32 (H), HER-lm32 (L), e AVA-lm32 (H)) e anticorpos (Herceptin) foram diluídos em série em tampão de bloqueio, contendo 1,94 µl/ml Ang2 biotinilado (R&D cat # BT633) e adicionados aos poços durante 2 horas à RT. Após lavagem (8x300 µl tampão de lavagem), as amostras paralelas receberam, ou conjugado-HRP de cadeia kapa anti-humana mAb- (Abcam, cat # ab79115-1) diluído 1: 1000 em tampão de bloqueio ou de conjugado HRP-estreptavidina (Thermo Scientific Cat # N100 ) diluído 1: 4000 em tampão de bloqueio. Após incubação durante 1 hora à temperatura ambiente, os poços foram lavados (tampão de lavagem 8x300 µl) antes de receber 100 µl de substrato TMB (KPL Laboratories). O desenvolvimento de cor foi parado com 100 µl de H2SO4 e a absorvância foi lida a 450 nm. B. Resultados
[0829]Tal como detectado com cadeia kappa anti-humana mAb, tanto um anticorpo baseado em HERCEPTIN® ou anticorpos baseados no HERCEPTIN® contendo MRDs se ligam ao Her2 Fc na presença de Ang2 de uma forma dependente da dose (Figura 18 A). Apenas os anticorpos contendo MRD a base de HERCEPTIN® (HER-Lm32 (H) e HER-Lm32 (L)) exibem ligação simultânea para Her2 Fc e Ang2, como detectado por conjugado de estreptavidina-HRP (Figura 18B).
Exemplo 23: ligação simultânea de AVA-lm32 (H) para VEGF e Ang2 A. Métodos:
[0830]Noventa-de seis placas de poços foram revestidas durante a noite com VEGF humano (PeproTech, Inc. Cat # 100-20) em 30 ng/ml (100 µl/poço). Poços foram bloqueados durante 3,25 horas com 250µl de tampão de bloqueio (Thermo cat # N502), seguido por 4 lavagens com 300 µl de tampão de lavagem (PBS, 0,1% de tween). Os anticorpos contendo MRDs (HER-lm32 (H) e AVA-lm32 (H)) e anticorpos (Avastinfi) foram serialmente diluídos no tampão de bloqueio, contendo 3,876 µg/ ml de Ang2 biotinilado (R & D cat # BT633) e adicionado aos poços por 2 horas à RT. Depois de lavar (8x300 µl tampão de lavagem), amostras paralelas receberam, ou conjugado-HRP de cadeia kapa anti-humana mAb- (Abcam, cat # ab79115-1) diluído 1: 1000 em tampão de bloqueio ou de conjugado HRP-estreptavidina (Thermo Scientific Cat # N100 ) diluído 1: 4000 em tampão de bloqueio. Após incubação durante 1 hora à temperatura ambiente, os poços foram lavados (tampão de lavagem 8x300 µl) antes de receber 100 µl de substrato TMB (KPL Laboratories). O desenvolvimento de cor foi parado com 100 µl de H2SO4 e a absorvância foi lida a 450 nm. 8. Resultados
[0831]À medida que detectado com cadeia de sangue humano antikapa mAb, tanto AVASTIN® e Anticorpos contendo MRD a bse de AVASTIN® ligam a VEGF na presença de Ang2 em um modo dependente da dose (Figura 19A). Apenas os anticorpos baseadosem AVASTIN® que contenham MRD (AVA-lm32(H)) exibiram ligação simultânea ao VEGF e Ang2, tal como detectado por estreptavidina conjugado a HRP(Figura 19B). Exemplo 24: Ligação simultânea de HER-lm32 (H) e HERlm (L) ao HER2 e Angiopoietina-2
[0832]A capacidade HER-lm32 (H) e HER-lm2 (G) em se ligar simultaneamente ao Her2 expresso na superfície de células de carcinoma da mama BT-474, e a Ang2 em solução, foi determinada por citometria de fluxo. Ig-FITC anti-humana de rato foi usada para a detecção da cadeia pesada dos anticorpos que contenham MRDs, e Ang2-biotina/estreptavidina-PE foi usada para a detecção do MRD lm32. As células que se ligam a HER2 e Ang2 simultaneamente deverão ser detectadas como positivas para a fluorescência dupla com FITC e PE.
[0833]Um milhão de HER2 células de carcinoma da mama positivas BT-474 foram incubadas com 1 µg HER-lm32 (H) or HER-lm32 (L) durante 25 minutos à RT. Após a lavagem, as células foram incubadas com 200 ng/ml Ang2 biotina (R & D Systems) por 25 minutos em temperatura ambiente e, em seguida, com 20 µl de Ig-FITC anti-humano de rato e Streptavidina-PE por 15 minutos. Depois de se lavar com 2 mL de tampão, as células foram analisadas por citometria de fluxo (FACS Canto II, BD).
[0834]De modo a confirmar a especificidade da ligação da proteína HER-lm32 (H) e HER-lm32 (l) HER2 em células BT-474, a ligação foi determinada na presença de um excesso de 10 vezes de HERCEPTIN®. Nestes experimentos, anticorpos contendo MRDs (1 µg) foram incubados com um milhão de células BT-474 na ausência ou presença, de 10 µg de HERCEPTIN® durante 25 minutos à RT. A ligação de anticorpos contendo MRDs para HER2 foi determinada por incubação com 200 ng/ml de biotina Ang2 seguido detecção com streptavidina-PE.
[0835]Os dados apresentados na Figura 20A demonstrar que tanto HER-lm32 (H) e HER-lm32 (L), se ligam simultaneamente a HER2 e Ang2. Em ambos os casos, as células exibiram fluorescência dupla brilhante nos canais de fluorescência FITC e PE. O fato de que HER lm32 (H) e HER-lm32 (L) se ligam a HER2 está completamente inibido por HERCEPTIN® (Figura 20B) indicando que a ligação é específica.
[0836]Em adição, ligação triespecífica foi demonstrada utilizando um anticorpo contendo dois MRDs distintos. Um aficorpo de ligação a EGFR e uma ligação Ang2 ao peptídeo (lm32) foram fundidas com a extremidade C-terminal das cadeias leves e pesadas de Herceptin, respectivamente. O anticorpo contendo MRD foi incubado com o EGFR +, linha de células epiteliais humanas A431-Her2. Anticorpo contendo MRD ligado a célula foi detectado com Ang2 biotinilado/estrepavidina-PE, AlexaFluor rotulado ErbB2- Fc, ou o combinação de Ang2/estrepavidina-PE e AlexaFluor rotulado ErbB2- Fc. Os resultados demonstraram que o anticorpo ligou simultaneamente receptor da superfície celular do EGFR e dois ligantes solúveis contendo MRD (ErbB2 e Ang 2).
[0837]Experimentos adicionais demonstraram que uma fusão de lm32 do terminal C da cadeia pesada de HERCEPTIN retieve a especificidade ligação e função Fc de HERCEPTIN. Herceptin e a de fusão HERCEPTIN-lm32 ligaram a Fcy-Rn com afinidades semelhantes (EC50s para HERCEPTIN e fusão HERCEPTIN lm-32 foram 2,17 e 2,84 µl/ml, respectivamente). O HERCEPTIN e a fusão HERCEPTIN-lm32 exibidiu a atividade ADCC comparável sobre células SK-BR-3. A fusão HERCEPTIN-lm32 e HERCEPTIN ligaram a Fcy-RI e Fcy-RIII com afinidades semelhantes. A fusão de HERCEPTIN- lm32 e HERCEPTIN ligou ao receptor de complemento C1q com afinidades semelhantes. Em adição, a fusão HERCEPTIN-lm32 ligou Ang2 com afinidade subnanomolar e antagonizada Ang2 de ligação para o receptor de Tie-2. A fusão de HERCEPTIN-lm32 atou o domínio com duração de extracelular de ErbB2 e proliferação induzida-Ang2 também inibida de células linfoendoteliais das espécies bovina primárias. A fusão de HERCEPTIN-lm32 e HERCEPTIN ligou o domínio com duração de extracelular de Her2 com parâmetros cinéticos semelhantes. Experimentos adicionais demonstraram que a fusão HERCEPTIN-lm32 foi tão eficaz como HERCEPTFN na inibição da proliferação de vários linhas celulares cultivadas de câncer da mama (BT-474, MDA-MB-361 e SK-BR-3). O efeito anti-Proliferativo da fusão HERCEPTIN- lm32 em SK-BR-3 de células não foi afetado pela presença de Ang2 (2 µg/ml) na cultura.
[0838]Ligação alvo simultânea foi observada para outras composições multivalentes e multiespecíficas (Por Exemplo, composições multivalentes e multiespecíficas (Por Exemplo, anticorpos contendo MRD-)). Por Exemplo, uma fusão de lm32 para o terminal C da cadeia pesada HUMIRA (HUM-lm32 (H)) foi capaz de simultaneamente se ligar a Ang 2 e TNFa. A mesma fusão foi capaz de ligar 293 células transientemente transfectadas com TNFa humano de comprimento inteiro com afinidade semelhante ao anticorpo o HUMIRA. HUM- lm32 (H) também foi capaz de inibir a interação de TNF com os seus receptores. HUM-lm32 (H) também ligou à superfície celular expressa e placa ligada a FcRn bem como a Fcy- RI e Fcy- RIII. Exemplo 25: Fusões de cadeia pesada contendo Anticorpo-MRDs liga a alvos
[0839]Para avaliar a capacidade dos anticorpos contendo lm32 para bloquear a interacção de Ang2 com o seu receptor de TIE2, o sua efeito sobre o Ang2 de ligação ao TIE2 solúvel ligação à placa foi determinado por ELISA.
[0840]Ang2 (R&D Systems, catálogo # 623-AN) foi revestida sobre um placa de 96-poços (Thermo Electron, cat # 3855) a 200 ng/mL em PBS durante a noite a 4 ° C. A placa foi, em seguida, incubada com 100 µL de solução de bloqueio (Thermo Scientific, cat # N502) por 1 hora, à RT. Depois de se lavar o a placa 4 vezes com 0,1% de Tween-20 em PBS, a placa de Ang2 ligado foi incubada com 0,5 µg/mL de TIE2 solúvel (R&D Systems, Cat # 313-TI), na ausência ou presença de várias concentrações de anticorpos contendo MRDs diluídos em série durante 1 hora à RT. Após a lavagem 4 vezes e incubado com 100 µL de 0,5 µg/ml de anticorpo anti TIE2 (Cat # BAM3313, R & D Systems) foi adicionado e incubado à temperatura ambiente durante 1 hora. A ligação a Ang2 de TIE2 foi detectada com 1: 1000 anti-rato-HRP de cabra diluído (BD Pharmingen, cat # 554,002 mil) durante 1 hora à RT. A placa foi lavada 4 vezes e incubou-se com 100 µL de reagente de TMB durante 10 minutos à RT. Depois de parar a reação com 100 µL de 0,36N de H2SO4, a placa foi lida a 450nm usando um espectrofotômetro.
[0841]Conforme apresentado na Figura 21A, HER-lm32 (H), HER-lm32 (L), e AVA-lm32 (H) inibiu a ligação TIE2 a Ang2 ligado a placa em uma maneira dependente de dose. Todos os anticorpos-contendo lm32 testados demonstraram efeitos inibitórios comparáveis com valores de IC-50 de 4 nM para HER-lm32 (H), 8 nM para HER-lm32 (L) e 3,3 nM para AVA-lm32 (H). Exemplo 26: Anticorpo-MRDs Contendo Fusões de Cadeia pesada ligando a alvos
[0842]Para determinar a especificidade e afinidade relativa de AVA- lm32 (H) ligando a VEGF, um ensaio de ligação competitiva foi realizado utilizando AVASTIN® rotulada com biotina.
[0843]AVASTIN® foi rotulado com biotina usando o EZ-Link NHS-LC- Biotin (Pierce, cat # 21336). VEGF (Peprotech, cat # 100-20) foi revestido sobre uma placa de 96-poços (Thermo Electron, cat # 3855) a 100 ng/mL em PBS durante a noite a 4 ° C. A placa foi, em seguida, incubadas com 100 µL de solução de bloqueio (Thermo Scientific, cat # N502) durante 1 hora à RT. Depois de se lavar a placa 4 vezes com 0,1% de Tween 20 em PBS, 50 µL de AVASTIN®-biotina em 150 ng/mL e 50 µL de várias concentrações de AVA- lm32 (H) ou AVASTIN® não marcado foram adicionados e incubou-se à RT durante 1 hora. A placa foi lavada 4 vezes e incubada com Estreptavidina-HRP (Thermo, cat # N100) em diluição 1: 1000 durante 1 hora à RT. A placa foi lavada 4 vezes e 100 µL de reagente de TMB foi adicionado. Depois de 10 minutos de incubação à RT, 100 µL de 0,36N de H2SO4 foram adicionados para parar a reação e a placa foi lida a 450 nm.
[0844]Os dados apresentados na Figura 22 demonstram que a AVA- lm32 (H) se liga especificamente ao VEGF-2. Ele inibe a ligação de AVASTIN® biotinilado ao VEGF em um modo dependente da dose. As curvas de resposta à dose geradas por AVA-lm32 (H) e AVASTIN® não marcado são sobreponíveis e indicam afinidades de ligação semelhantes. Exemplo 27: Ligação de HER-lm32 (H) e HER-lm32 (L) a HER2 expressa em células de câncer de mama
[0845]Para determinar a afinidade ligação relativa dos anticorpos contendo MRDs baseados em HERCEPTIN® a superfície da célula, em comparação com HERCEPTIN® HER2, um ensaio de ligação competitivo foi executado com Eu-rotulado HERCEPTIN®
[0846]HERCEPTIN® foi marcado com Eu3+ usando um kit de rotuçlação Europium de imunoensaio de fluorescência de lantanídeo de dissociação intensificada (DELFIA) (Perkin Elmer Life Sciences, cat # 1244302) na sequência das instruções do fabricante. O agente de rotulação é o Eu- quelato de N1- (p-isotiocinateobenzil) dietílenotriamina N1, N2, N3, N3- ácido tetraacético (DTTA). O grupo DTTA forma um complexo estável com Eu3 + e o grupo isotiocinato reage com grupos amino na proteína a um pH alcalino para formar uma ligação covalente estável de tio-ureia. HERCEPTIN® (0,2 mg em 200 mL de tampão bicarbonato de sódio pH 9,3) foi rotulado com 0,2 mg de agente de na rotulagem, a 4 °C durante a noite. UE-rotulado HERCEPTIN® foi purificado por coluna de centrifugação utilizando 50 mmol/L de tris-HCl a pH 7,5 e 0,9% tampão de eluição de NaCl.
[0847]O ensaio de ligação Eu-HERCEPTIN® foi realizado através da incubação de 0,5-1 milhões de células cancerosas da mama BT-474 ou SK- BR3 por poço em um placa de 96-poços com 2-5 nM de Eu-HERCEPTIN® na presença de várias concentrações de anticorpos contendo MRD baseados em HERCEPTIN® não marcados ou HERCEPTIN® durante 1 hora à RT . Eu- HERCEPTIN® não ligado foi removido por lavagem usando 200 µL de meio completo. As células foram, em seguida, resuspensas em 100 µL de meio completo e 80 µL de suspensão de células transferidos para uma isoplaca de 96-poços. As células foram incubadas com 100 µL de solução intensificadora Dclfia à RT durante 10 minutos e célula ligada Eu-HERCEPTIN® foi detectada por Envison (Perkin Elmer).
[0848]A inibição de curvas de ligação obtidas utilizando células BT-474 são apresentados em Figura 23. Ligação de Eu-HERCEPTIN® a BT-474 foi inibida por anticorpos HERCEPTIN® e anticorpos contendo MRDs a base decHERCEPTIN® em uma maneira dependente de dose. Foram observados valores IC-50 comparáveis: 4,7 nM para HER-lm32 (H), 5,7 nM para HER-lm32 (L), e 3,7 nM para HERCEPTIN® não rotulado. Exemplo 28: Inibição de proliferação de céluas de câncer de mama por Anticorpos contendo MRD a base de HERCEPTIN®
[0849]Células de câncer de mama SK-BR-3 sensíveis a HERCEPTIN que expressam receptor de HER2nco também foram testadas em um bioensaio. Células SK-BR-3 (2000 célula/poço) foram plaqueadas em placas de 96 poços (Costar) em meio de crescimento de McCoy completo contendo 2 mM de glutamina, pen/ estrep (Invitrogen) e 10% de FBS (HyClone). As células foram cultivadas durante 24 horas a 37 ° C, 5% de CO2, 85% de umidade. No dia seguinte, o meio de crescimento foi substituído por meio de inanição (meio de McCoy contendo glutamina 2 mM, Pen/Estrep, 0,5% de FBS). Nove diluições em série (intervalo de concentração de 5000 - 7,8 ng/ml) de HERCEPTIN® e anticorpos contendo MRD a base de HERCEPTIN® foram preparadas em meio de crescimento completo. Depois de 24 horas de incubação, o meio de inanição foi removido, e as diluições em série de HERCEPTIN® e anticorpos contendo MRD a base de HERCEPTIN® foram transferidso para as placas em triplicados. As células foram cultivadas por 6 dias. A proliferação foi quantificada utilizando o método de luminescência CellTiter Glo.
[0850]Os valores de IC50 determinados usando um modelo logístico de quatro-parâmetros como se segue: 0,49 +/- 0,17 nm para HER-lm32 (H), 0,81 +/- 0,19 nm para HER-lm2 (L), e 0,67 +/- 0,15 nm para HER-con4 (H). Todos os anticorpos contendo MRD com base em HERCEPTIN® testados foram capazes para inibir a proliferação de células de câncer de mama SK-BR-3 com valores de IC-50 subnanomolares. As curvas de resposta à de dose ajustadas representativas mostradas nas Figuras 24A-C demonstram que os anticorpos contendo MRDs a base de HERCEPTFN® inibem a proliferação celular com potência semelhante à HERCEPTIN®
Exemplo 29: Citotoxicidadependente de anticorpo de anticorpos contendo MRDs a base de HERCEPTIN®
[0851]Para avaliar a capacidade anticorpos contendo MRDs para mediar ADCC in vitro, um ensaio de citotoxicidade calculado com base no kit "reagentes DELFIA EUTDA de citotoxicidade ADO 116" (PerkinElmer) foi usada. Neste ensaio, as células alvo foram marcadas com um de fluorescência hidrofóbica de ligação intensificada (BADTA, cloreto de bis (acetoximetil) 2,2 ': 6', 2 "-terpiridina-6,6" - dicarboxilato). Sob entrada de células, BADTA é convertido a um composto hidrofílico (TDA, 2,2':6', 2 "-6,6 -terpiridina"ácido - dicarboxílico) por esterases citoplasmáticas mediadas de clivagem e não mais pode atravessar a membrana. Depois da lise da célula, TDA é liberado para um meio contendo solução de Eu3+ para formar um quelato fluorescente (EuTDA). A intensidade fluorescência é diretamente proporcional ao número de células lisadas.
[0852]HERCEPTIN® e anticorpos contendo MRD a base deHERCEPTIN® podme mediar ADCC sobre as células de câncer da mama positivas Her2 através da ligação ao receptor de HER2 na superfície das células-alvo e ativando as células efetoras presentes em PBMCs humanos interagindo com os seus receptores FcyRIII. Uma linha de células de câncer de mama humano positivo HER2 SK-BR-3 foi usada como uma linha de célula- alvo no ensaio de ADCC para demonstrar isto.
[0853]Células SK-BR-3 foram desligadas com 0,05% de tripsina- verseno e ressuspenderam a 1x106 céluas/mL em meio RPMI1640 contendo 2 mM de glutamina, Pen/estrep e 10% de FBS (meio de crescimento completo). 2x106 células em 2 ml de meios de comunicação social foram transferidos para 15 mL de tubo de e 10 µL e reagente BADTA foi adicionado. A suspensão de células foi misturada suavemente e colocada em uma incubadora a 37 °C, 5% emissões de CO2 e 85% da umidade para os 15 minutos. Sete diluições em série de 10x começando com 5 µg/mL de HERCEPTIN® ou anticorpos contendo MRD baseados em HERCEPTIN® foram preparados durante a rotulação de célula.
[0854]Depois de incubação com BADTA, as células foram lavadas 4 vezes em meio de crescimento completo contendo Probenecid 2,5 mM. Entre lavagens, as células foram levadas para baixo por centrifugation a 1000 rpm durante 3 minutos,. Depois da última lavagem, células SK-BR-3 rotuladas foram ressuspensas em 10 mL de meio de crescimento completo e 50 µL de células foram adicionados a cada poço da placa de 96 poços, exceto poços de fundo. 50 µL de diluições em série de HERCEPTIN® ou anticorpos contendo MRD baseados em HERCEPTIN® foram adicionados aos poços designados. As placas foram transferidas para a incubadora a 37 °C, 5% emissões de CO2 e 85% da umidade por 30 minutos.
[0855]PBMCs que foram purificadas a partir de sangue periférico humano um dia antes do ensaio de ADCC, foram lavados uma vez em RPMI1640 com glutamina 2 mM de, pen/estrep, 10% de FBS. 10 ml de suspensão de PBMCs com 2,5x106células/mL foi preparado. 100 µl de suspensão de PBMC foi transferido para poços que contenham células-alvo e HERCEPTIN® ou anticorpos contendo MRD a base de HERCEPTIN®, em triplicado. Os seguintes controles foram colocados em poços designados: A liberação espontânea (células alvo sem células efetoras), liberação máxima (células alvo lisadas) e fundo (meio sem células). As placas foram incubadas durante 2,5 horas em uma incubadora a 37 °C, 5% CO2 e 85% de umidade.
[0856]Depois de incubação, 20 µL de sobrenadante foi transferido para uma outra placa e 200 µL de solução Európio foi adicionado. As placas foram incubadas em um agitador de placas à RT durante 15 minutos. A fluorescência resolvida no tempo foi medida utilizando Leitor Multrotulado PerkinElmer EnVision 2,104.
[0857]A fórmula seguinte foi usada para calcular a percentagem de liberação específica: Liberação experimental (contagens) - Libertação espontânea (contagem) x100 Libertação máxima (contagens) - Libertação espontânea (contagem)
[0858]Os valores de IC50 calculados por um modelo logístico de quatro parâmetros foram como se segue: 0,213 +/- 0,077 nM para HER-lm32 (H), 0,204 +/- 0,036 nM para HER- lm32 (L), e 0,067 +/- 0,015 nM para HER-Con4 (H). Todos os anticorpos testados contendo MRDs demonstrou actividade ADCC robusta com subnanomolares valores IC-50. As curvas de resposta de dose equipada representativos mostrados nas Figuras 25A e 25B demonstram que os anticorpos contendo MRDs são capazes de mediar a citotoxicidade celular dependente com potência comparável à HERCEPTIN®.
[0859]Uma experiência semelhante foi conduzida na presença de Ang2. PBMC humanos foram ativados com 20 ng/ml de IL2 durante a noite e adicionados a células SK-BR-3 rotuladas com BADTA plaqueadas frescamente(10.000 células/poço). A razão efetor/alvo foi de 25/1. Após uma incubação de 4 horas, com diluições em série do HER-lm32 (H) ou HUMIRA na presença de 2 µg/ml de Ang2, Eu foi adicionado ao meio e TRFI medido no leitor Envision (Perkin-Elmer). HER-lm32 foi mais potente na mediação de ADCC, na presença de Ang2. Exemplo 30: Inibição da proliferação de células endoteliais por AVA- lm32 (H)
[0860]As atividades biológicas dos anticorpos bascd-Avastinfi contendo MRDs AVA-lm32 (H) foram testadas para determinar se podiam inibir a proliferação induzida por VEGF de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) de ensaio.
[0861]HUVEC foram obtidos a partir de Glycotech (Gaithersburg, MD) e Lonza na passagem 1 e passagem 3, respectivamente. As células foram cultivadas em meio basal de células endoteliais (EBM-2) com a adição de 2% de soro fetal de bovino (FBS) e quotas únicas (Lonza) a 37 °C, 5% CO2, 85% de umidade. Para experiências de inibição de proliferação, as células foram plaqueadas em placas de 96 poços (Costar) a 2000 células por poço em meio EBM-2 com 2% de FBS e cultivadas durante 24 horas. Nove diluições em série de AVASTIN® ou AVA-lm32 (H) foram preparados começando com 5 µg/mL em meio EBM-2 com 2% de FBS. VEGF (R & D Systems) foi adicionado a uma concentração final de 10 ng/mL para todas as diluições em série. Após incubação durante 15 minutos a 37 °C, 5% CO2, 85% de umidade, diluições em série foram adicionadas às células. Após 96 horas, CellTiter Glo foi adicionado às células. Após incubação à temperatura ambiente durante 1 minuto, a suspensão de células foi transferida para placas de 96 poços brancas opacas e foi medida utilizando Leitor de multirotulação de luminescência PerkinElmer En Visão 2104.
[0862]Tal como mostrado nas Figuras 26A e 26B, AVA-lm32 (H) exibiu uma atividade antiproliferativa dependente de dose de ambas as fontes de células HUVEC. Os valores de IC50 calculados a partir de 4 PL de curvas ajustadas indicam potência semelhante para AVA-lm32 (H) e AVASTIN® (valores de IC50 0,36 +/- 0,42 +/- 0,33 nM e 0,38 nM, respectivamente).
Exemplo 31: Anticorpos contendo MRD inibem proliferação de Tumor In Vivo
[0863]A fim determinar a eficácia das composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex, anticorpos contendo MRD) in vivo, a eficácia em um modelo de tumor de rato Colo5 foi avaliada. Nestas experiências, os tumores foram implantados no flanco direito de seis ratinhos nus atímicos do sexo feminino seis semanas de idade por injecção de 5 x 106células Colo205 suspensas em 100 de PBS. Três grupos de oito animais cada receberam injeções intraperitoneais de 5 mg/kg de anticorpo (HERCEPTIN, Rituxan) ou um anticorpo contendo o MRD (HER-2xCon4; "H2xCon4") em 100 µL de PBS a cada três dias começando no dia 6 após o implante do tumor. Os resultados apresentados na Figura 27, demonstram que o anticorpo contendo MRD foi mais eficaz na inibição do crescimento do tumor do que qualquer um ou HERCEPTIN® ou Rituximab®.
[0864]HERCEPTIN com lm32 fundido com o terminal C da cadeia pesada, também inibiu o crescimento tumoral em ambos os modelos dependentes Her2 e angiogênese de tumor xenoenxerto dependente. A fusão HERCEPTIN-lm32 teve um PK semelhante ao Herceptin em ambos os ratos e macacos após as injeções de dose única. Além disso, a fusão HERCEPTIN- lm32 era estável em sangue completo a 37 °C durante até 72 horas.
Exemplo 32: Ensaios moleculares para avaliar Anticorpos Contendo MRD
[0865]Composições multivalentes e multiespecíficas novas (p.ex., anticorpos contendo MRD) são geradas por alteração da sequência do MRD e/ou o anticorpo, através da alteração da localização em que o anticorpo é ligado ao MRD, e/ou alterando o ligante através do qual o MRD é ligado ao anticorpo. O potencial de ligação , estrutura e propriedades funcionais das composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) são avaliados utilizando técnicas conhecidas para medir a ligação às proteínas e função. As composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) são comparadas com somente o MRD, o anticorpo sozinho, e outras composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD).
[0866]Um anticorpo contendo MRD é testado utilizando um ensaio de fase sólida em que um alvo do MRD e/ou o anticorpo é imobilizado em uma superfície sólida e, em seguida, exposto a concentrações crescentes de um anticorpo contendo MRD marcado flourescentemente. A superfície sólida é lavada para remover o anticorpo não ligado contendo MRD e a quantidade de anticorpo contendo MRD ligado ao alvo é determinada diretamente pela quantificação da fluorescência. Em outra experiência, o alvo imobilizado é exposto a concentrações crescentes de um anticorpo contendo MRD não marcado e a quantidade anticorpo contendo MRD ligado ao alvo é determinada indiretamente pela utilização de um reagente marcado que se liga ao anticorpo contendo MRD.
[0867]Um anticorpo contendo MRD é testado utilizando um ensaio de fase líquida em que um alvo do MRD e/ou o anticorpo é adicionado a várias concentrações de um anticorpo contendo MRD é uma solução. A interação do alvo com o anticorpo contendo MRD é detectada pelo aparecimento de um complexo molecular de um composto alvo e anticorpo contendo MRD que difere da massa molecular (e mobilidade) do alvo não ligado e anticorpo não ligado contendo MRD.
[0868]Um anticorpo contendo MRD é também ensaiado em um ensaio baseado em células em que as células que expressam o alvo são incubadas na presença de concentrações crescentes de anticorpo contendo MRD. A ligação do anticorpo contendo MRD é detectada por separação de células ativadas por fluorescência. Além disso, a proliferação celular, a diferenciação celular, a fosforilação da proteína, a expressão da proteína, a expressão do mRNA, a composição da membrana, via de sinalização de actividade, e a viabilidade celular são avaliados.
[0869]Composições multivalentes e multiespecíficas úteis (p.ex. anticorpo contendo MRD) se ligam a ambos o alvo MRD e para o alvo do anticorpo. Além disso, composições multivalentes e multiespecíficas úteis (p.ex. anticorpo contendo MRD) afetam pelo menos um processo celular.
Exemplo 33: Identificação de MRDs com características melhoradas
[0870]Dois epítopos de células T potenciais foram identificados em lm32. A fim de identificar variantes lm32 que não contêm epítopos de células T, e, consequetemente, eram menos susceptíveis de produzir respostas imunes, as variantes dde eleção e mutação do peptídeo lm32 foram criadas. As variantes de lm32 listadas na Tabela 7 MRDs foram expressos como proteínas de fusão MBP e testados quanto à capacidade para se ligarem Ang2. Tabela 7
[0871]As variantes LM32 são então testadas quanto à sua capacidade para induzir proliferação e/ou liberação de citoquinas. Variantes LM32 que são funcionalmente ativas e reduzem o potencial imunogênico são identificadas. Um anticorpo contendo MRD compreendendo a variante LM32 fundido com a cadeia leve de HERCEPTIN®, e um anticorpo contendo MRD compreendendo a variante LM32 fundido com a cadeia pesada de HERCEPTIN®, um anticorpo contendo MRD compreendendo a variante de LM32 fundida com a cadeia leve de HUMIRA®, um anticorpo contendo MRD compreendendo a variante LM32 fundida com a cadeia pesada de HUMIRA®, anticorpo contendo MRD compreendendo a variante de LM32 fundida com a cadeia leve de AVASTIN®, e um anticorpo contendo MRD compreendendo a variante LM32 fundida para a cadeia pesada de AVASTIN® são criados. A variante LM32 contendo anticorpos são administradas a animais modelo e a representação de proteínas de plasma e tecido e de residência no plasma são medidos e comparados com os de HERCEPTIN®, Humira®, e AVASIN®. Além disso, os efeitos da variante LM32 contendo anticorpos sobre a proliferação celular, a angiogênese, a tumorigenicidade, os indicadores artríticos são comparados com os efeitos de HERCEPTFN®, Humira®, e AVASTIN®.
Exemplo 34: Ensaios In Vivo para avaliar Anticorpos Contendo MRD
[0872]A fim determinar a eficácia de composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) in vivo, os modelos animais são tratados com um anticorpo e um anticorpo contendo MRD e os resultados são comparados.
[0873]Os anticorpos anti-HER2 contendo MRD são testados no modelo in vivo seguinte. Células NIH-3T3 transfectadas com um plasmídeo de expressão de HER2 são injetadas em ratinhos nu/nu atímicos por via subcutânea em uma dose de 106células em 0,1 ml de solução salina tamponada com fosfato tal como descrito na Pat. N ° 6.399.063, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Nos dias 0, 1, 5, e depois cada 4 dias depois a 100 µg de um anticorpo HER2, um anticorpo HER2 contendo Ang2, um anticorpo HER2 contendo igf1r e anticorpo HER2 contendo um igf1r- Ang2 são injetados por via intraperitoneal. Ocorrência e tamanho do tumor são monitorados durante um mês. Aumentos na eficácia das composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) em comparação com os anticorpos são observados.
[0874]Anticorpos anti-VEGF contendo MRD são testados no modelo in vivo seguinte. Ratinhos RIP-TßAg são fornecidos com ração de açúcar alta e 5% de água com açúcar como descrito na Publicação US N ° 2008/0248033, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Nas 9-9,5 ou 1 1 -12 semanas de idade, os ratos são tratados duas vezes por semana, com injeções intra-peritoneais de 5 mg/kg de um anticorpo anti-VEGF, VEGF-Ang2 contendo, ifg1r contendo VEGF ou anticorpo Ang2 contendo igf1r. Os ratos de 9- 9,5 semanas são tratados durante 14 dias e, em seguida, examinados. O ratos de 11- 12 semanas são examinados após 7, 14 e 21 dias de tratamento. O pâncreas e baço dos ratos são removidos e analisados. Número do tumor é determinado dissecando cada tumor esférico e contando. A carga tumoral é determinada pelo cálculo da soma do volume de todos os tumores dentro do pâncreas de um rato. O efeito na angiogênese é determinado através do cálculo da média do número de ilhotas angiogênicas observadas. Aumentos na eficácia de composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex. anticorpos contendo MRD) em comparação com anticorpos são observados.
[0875]Os anticorpos contendo MRD anti-TNF são testados no modelo in vivo seguinte. Os ratinhos transgênicos (Tg197) são tratados com três injeções intra-peritoneais de anticorpo anti-TNF ou de anticorpo TNF contendo Ang2 em 1,5 µg/g, 15 µg/g ou 30 µg/g como na Pat. N ° 6,258,562, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Injeções continuam durante cerca de 10 semanas e alterações macroscópicas na morfologia conjunta são registradas a cada semana. Às 10 semanas, os ratinhos são sacrificados e o exame microscópico do tecido é realizado. Tamanho de junta é estabelecido como uma medição média na articulação do tornozelo direito usando um dispositivo de micrômetro e pontuações artríticas são gravados como segue: 1 = sem artrite; +/- = Leve (distorção conjunta); ++ = reumatóide moderada (inchaço, deformação articular); e +++ = artrite pesada (anquilose detectada em flexão e movimento severamente prejudicado). Pontuação histopatológica baseada na coloração de seções hematoxilinleosina comuns baseia-se como se segue; 0 = nenhuma doença detectável; 1 = proliferação da membrana sinovial; 2 = espessamento intenso 3 = destruição de cartilagem e erosão do osso. Aumentos na eficácia de composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) em comparação com anticorpos são observados.
Exemplo 35: Anticorpos Contendo MRD são Superiores para Combinações de Anticorpos e MRDs
[0876]De modo a comparar a eficácia de composições multivalentes e multiespecíficas (p.ex., anticorpos contendo MRD) para combinações de anticorpos e MRDs, o seu efeito sobre células SK-BR-3 tratadas com EGF foi estudado.
[0877]Células SK-BR-3 foram tratadas com HERCEPTIN, HERCEPTIN contendo um EGFR-MRD, HUMIRA contendo um EGFR-MRD ("MRD sozinho"), ou HERCEPTFN em combinação com HUMIRA contendo uma EGFR-MRD ("anticorpo mais MRD sozinho") durante 10 minutos ou 3 horas e estimulada com EGF durante 5 minutos. Os lisados celulares foram recolhidos e western blots foram usadas para determinar os níveis fosfotirosínicos ou fosfo-Akt. Os resultados são mostrados na Figura 28. O HERCEPTIN contendo um MRD-EGFR inibiu completamente fosforilação de receptor induzida por EGF e ativação AKT, enquanto HERCEPTFN, o MRD sozinho, e o anticorpo HERCEPTFN mais MRD sozinho teve pouco ou nenhum efeito.
[0878]Além disso, o efeito das composições multivalentes e multiespecíficos (p.ex., anticorpos contendo MRD) sobre a proliferação celular foi comparado com o efeito da combinação de anticorpos e MRDs. Nestas experiências, células MCF-7 de carcinoma da mama derivadas foram tratadas com um anticorpo HERCEPTFN contendo um MRD alvejando igf1r fundido com o terminal C da cadeia leve, HERCEPTFN sozinho, ou um anticorpo HUMIRA contendo o mesmo alvo igf1r MRD (" MRD sozinho "). Como mostrado na Figura 29A, o anticorpo contendo MRD inibiu a proliferação celular melhor do que HERCEPTFN sozinho ou sozinho o MRD.
[0879]As células MCF-7 foram também tratadas com um anticorpo penta-específico contendo MRD. Primeiro, foram mostradas estas composições multivalente e multiespecíficas penta-específicas (p.ex., anticorpos contendo MRD) para se ligar a cinco alvos. Um Ang2 alvejando MRD (LM32), e um MRD- alvejando EGFR foram fundidos com os terminais N e C, respectivamente, de um anticorpo HERCEPTFN. Além disso, um MRD avP3-alvo (eeti) e um MRD- alvejando igf1r foram fundidos com os terminais N e C, respectivamente, do mesmo anticorpo HERCEPTFN. Ang2, ErbB2, EGFR, IGF1R e avß3 foram revestidos em cavidades separadas de uma placa de 96 poços e incubaram-se com diluições em série do anticorpo contendo MRD. Anticorpo contendo MRD ligado foi detectado utilizando detector de IgG-kappa anti -humano. Os resultados demonstraram que o anticorpo contendo MRD ligaram a Ang2, ErbB2, EGFR, IGF1R e avß3 com afinidades de baixo nanomolar e sub-nanomolar que são comparávees às afinidades de ligação dos MRDs ou anticorpos individualmente.
[0880]Em seguida, a capacidadestas composições multivalentes e multiespecíficas penta-específicas (p.ex., anticorpos contendo MRD) que inibem a proliferação de células MCF-7 foi testada como descrito acima. Os resultados, apresentados na Figura 29B, demonstram que as composições multivalentes e multiespecíficas penta-específicas HERCEPTFN (p.ex., anticorpo contendo MRD) diminuiram a proliferação de forma mais eficiente do que o anticorpo Herceptin.
Exemplo 36: Anticorpos Anti-TNF-Contendo MRD
[0881]Um anticorpo contendo MRD que tem como alvo o TNF foi criado pela fusão de uma ligação MRD-Ang2 (LM32) para o terminal C da cadeia pesada HUMIRA e foi expresso em ambos os sistemas de expressão transiente e estável. O anticorpo contendo MRD ligado simultaneamente a TNFa e Ang2. O anticorpo contendo MRD ligado de superfície solúvel e células TNFa conservou a especificidade ligação e funções Fc de HUMIRA (p.ex., ligantes FcRn, FcgammaR1 e FcgammaR3) e também inibiu Ang 2 mediado por sinalização através de receptor Tie-2 de uma maneira dependente da dose com afinidade sub -nanomolar.
[0882]A fusão HUMIRA-LM32 também inibiu a citotoxicidade mediada por TNFa em células L929. As células foram cultivadas em placas de 96 poços durante a noite e tratadas com 1 ng/mL de TNF mais 1 µg/ml de actinomicina D na presença de HUMIRA ou HUMIRA-LM32 durante 24 horas a 37 ° C. Após incubação, 100 µL de reagente célula Titer-Glow foi adicionado, e a luminescência foi medida utilizando na InVision (Perkin-Elmer), após 15 minutos à temperatura ambiente. Os resultados demonstraram que o HUMIRA e HUMIRA-LM32 exibiram igual potência na inibição da citotoxicidade mediada por TNFa-em células L929 (HUMIRA IC50 = 19,0ng/ml; HUMIRA-LM32 IC50 = 18,9ng/mL).
[0883]Além disso, a fusão HUMIRA-LM32 exibida uma proteção dependente de dose de ratinhos transgênicos-hTNF de sinais clínicos de artrite em um modelo bem estabelecido do rato. Veja, p.ex., Keffer et al. EMBO J. 10: 4025-4031 (1991). Um estudo PK de dose única em ratos demonstraram que a fusão HUMIRA-lm32 e HUMIRA tem PK semelhantes e perfis de imunogenicidade semelhantes. No entanto, a fusão HUMIRA-lm32 mostrara aumento da eficácia neste modelo em comparação com HUMIRA sozinho quer quando medido por sintomas clínicos ou por histologia. Ver Figura 30.
Exemplo 37: Zicorpos inibem Sinalização Induzida por EGF
[0884]As células SK-BR3 foram plaqueadas a 0,5x106células/poço em placas de 6 poços e incubadas (37 ° C, 5% de CO2) durante 24 horas em cujo tempo as células foram tratadas com 10 µg/mL de bi- e tri- zicorpos específicos ou Herceptin em 1 mL de meio completo DMEM com FBS a 10% por 24 h a 37 °C. As células foram em seguida estimuladas com 100 ng/ml de EGF durante 5 minutos. Após a estimulação, as células foram foi rompidas em tampão de lise celular de 200 µL (Tris 10 mM-HCl (pH 7,5), 1% de Triton X-100, NaCl 150 mM, Glicerol a 10%, 1 vanadato de sódio mM, EDTA 5 mM e inibidores de protease). Os lisados celulares foram centrifugados a 14000 rpm durante 10 minutos a 4 ° C para remover os detritos celulares. Volume igual de 2x tampão de amostra e os lisados de células foram misturados e cozidos a 100 ° C durante 5 minutos, as proteínas foram resolvidas por SDS-PAGE a 10% e transferida para membranas PVDF (catálogo # LC2005, Invitrogen). As membranas foram bloqueadas com 3% de BSA, 0,1% Tween 20 durante a noite e incubadas com anticorpos para fosfo-AKT (catálogo # AF887, R & D Systems), fosfo-ERK (Catalog # AF1018, R&D Systems), e ERK total (MAB 1576, R&D Systems). Conjugado de raiz forte ou AP de anticorpos anti-coelho e anti-rato secundários (Invitrogen) foram usados para visualizar as proteínas imuno-reativas utilizando quimioluminescência ou reagentes de detecção de AP, respectivamente.
[0885]Um anticorpo biespecífico usado neste Exemplo compreende Herceptin e um EGFR- MRD (Her-EGFR) vinculativo. Outro anticorpo biespecífico compreende Herceptin pertuzumabe-scFv (que tem como alvo um epitopo HER2 diferente do que o anticorpo Herceptin) na extremidade C- terminal da cadeia pesada (Her-pertuzumabe (H)). Um anticorpo triespecífico compreende MRD Herceptin no C-terminal da cadeia pesada e de ligação a EGFR sobre uma extremidade C-terminal da cadeia leve scFv-pertuzumab. Outro anticorpo triespecífico compreende MRD Herceptin no C-terminal da cadeia leve e de ligação a EGFR sobre uma extremidade C-terminal da cadeia pesada scFv-pertuzumabe (Her-zEGFR (L) -Pert (H)). Outro anticorpo triespecífico um composto de ligação a EGFR MRD, e um pertuzumab-scFv tem como alvo um epitopo que HER2 diferente do que o anticorpo Herceptin (Her- Pert (L) zEGFR (H) e Her-zEGFR (L) -Pert (H).
[0886]Células SK-BR3 expressam níveis muito altos de HER2 e são sensíveis a efeitos antiproliferativos de Herceptin. A inibição de AKT constitutivamente ativado é um dos mecanismos para os efeitos anti- proliferativos de Herceptin em células que sobre-expressam HER2. Tal inibição pode ser superada através da adição de fatores de crescimento tais como EGF, IGF-1 e Heregulin (HRG) através da indução de sinalização intracelular pró-mitogênica. Como mostrado na Fig. 31, a ativação induzida por ERK e vias AKT em células SK-BR3 são mostradas como mostrado pelo aumento dos níveis de ERK e AKT fosforilados. Herceptin não teve nenhum efeito sobre a ativação induzida por EGF de vias de sinalização em células SK-BR3, enquanto Her-EGFR e os dois zicorpos tri-específicos com um peptídeo alvejando EGFR inibiu os efeitos de EGF. Em comparação com o anticorpo bi- específico que inibiu sinalização induzida por EGF apenas, anticorpos tri- específicos também inibiu os níveis constitutivamente ativos de Akt e ERK em células SK-BR3.
Exemplo 38: Zicorpos iibem a Sinalização Induzida por Heregulina
[0887]As células SK-BR3 foram plaqueadas a 0,5x 106células/poço em placas de 6 poços e cultivadas durante a noite. No dia seguinte, as células foram tratadas com 10 µg/mL de zicorpos bi- e tri- específicos ou Herceptin em 1 mL de meio DMEM completo com 10% de FBS durante 24 horas a 37 °C. As células foram em seguida estimuladas com 200 ng/mL de heregulina durante 10 minutos. A análise por Western blot foi realizada para detectar os níveis de Akt e ERK fosforilada e total tal como descrito no Exemplo 37.
[0888]Heregulina liga a HER3 e induz a ativação de vias de sinalização através da formação de heterodímero HER2-HER3. Como mostrado na Figura 32, ativação induzida por Heregulina de Akt e ERK em células SK-BR3. Herceptin e HER-EGFR não teve nenhum efeito na ativação de Akt induzida por Heregulin. Pertuzumab, mas não Herceptin, bloqueia formação do heterodímero HER2-HER3 mediado por Heregulina e sinalização. A Figura 32 mostra que, zicorpos bi- e tri- específicos compreendem uma ativação de Akt induzida por Heregulina inibida completamente por Pertuzumab-scfv em células SK-BR3.
Exemplo 39: Zicorpos inibem Sinalização induzida por Heregulina e EGF
[0889]As células SK-BR3 foram plaqueadas a 0,5x106 células/poço em placas de 6 poços e cultivadas durante a noite. No dia seguinte, as células foram tratadas com 10 µg/ml de zicorpos bi e tri-específico ou Herceptina em 1 mL de meio DMEM completo com 10% de FBS durante 24 horas. a 37 ° C. As células foram em seguida estimuladas com 100 ng/ml de EGF e 200 ng/mL de heregulina durante 10 minutos. A análise por Western blot foi realizada para detectar níveis de Akt e ERK total e fosforilado tal como descrito no Exemplo 37.
[0890]Combinação estimulada de células SK-BR3 com EGF e Heregulina resultou em ambos activação de ERK e AKT (Figura 33). Herceptina, HER-egfr e HER-pertuzuScfv eram ineficazes no bloqueio dos efeitos combinados de EGF e Heregulina. Zicorpos tri-específicos que continham tanto um peptídeo alvo EGFR e uma ativação de Akt e ERK induzida por Hergulina e EGF inibiu completamente scFv-pertuzumab em células SK-BR3.
Exemplo 40: Zicorpos subregulam EGFR de superfície celular
[0891]As células SK-BR3 foram plaqueadas a 0,5x106células/poço em placas de 6-poços e cultivadas durante a noite. No dia seguinte, as células foram tratadas com 10 µg/mL de zicorpos bi- e tri-específicos, Herceptina, Erbitux, EGF, e suas combinações, em 1 mL de meio DMEM completo com 10% de FBS durante 24 horas a 37 °C tal como indicado. As células foram destacadas e os níveis de EGFR nas células foi determinado por citometria de fluxo utilizando anticorpo anti-EGFR conjugado PE.
[0892]Os zicorpos utilizados neste experimento foram de um anticorpo Herceptina com um MRD ligando a EGFR no terminal C da cadeia pesada (HER-EGFR (H)); um anticorpo Humira com um MRD ligando a EGFR no terminal C da cadeia pesada de ligação a EGFR (HUM-EGFR (H)); Herceptina com um scFv-pertuzumab no terminal C da cadeia pesada (Her- perscfv (H)); Humira com um scFv-pertuzumabe no terminal C da cadeia pesada (HUM- perscfv (H)); Herceptin com scFv-pertuzumabe um no terminal C da cadeia leve e um MRD no terminal C da cadeia pesada de ligação a EGFR (Her- perscfv (L) -egfr (H)); Herceptin com um scFv-pertuzumabe no terminal C da cadeia pesada e um MRD no C-terminal da cadeia leve de ligação de EGFR (HER- perscfv (H) - EGFR (G)); e um anticorpo Humira com um MRD-ligação EGFR (HUM-EGFR).
[0893]Erbitux, EGF, e zicorpos bi- e tri-específico que contenham peptídeos de direcionamento EGFR regula negativamente os níveis de receptores EGFR na superfície da célula. Figuras 34A e B. Tratamento com HER-EGFR, durante 24 horas foi mais eficaz (61%) do que HUM-EGFR sozinho (27%) ou em combinação de HUM-EGFR mais Herceptina (41%) e Erbitux mais Herceptina (51%) (Figuras 34A e B). Isto indica que o alvo simultâneo de EGFR e HER2 em formato de zicorpo foi mais eficaz na regulação para baixo de EGFR do que uma combinação de dois anticorpos individuais. Além disso, o tratamento com anticorpos tri-específicos de que têm como alvo EGFR e dois epitopos diferentes de HER2 completamente sub regulados dos níveis (99%) do EGFR em células de SK- BR3.
Exemplo 41: Zicorpos de Expressão de EGFR subregulada
[0894]As células SK-BR3 foram plaqueadas a 0,5x106células/poço em placas de 6 poços e cultivadas durante a noite. No dia seguinte, as células foram tratadas com 10 µg/ml de zicorpos bi e tri-específico ou Herceptina em 1 mL de meio DMEM completo com 10% de FBS durante 24 horas a 37 ° C. Os lisados celulares foram preparados e análise por Western blot foi realizada para detectar EGFR usando Anticorpo EGFR (catálogo # 10951 MAB, R & D sistema) e os níveis totais ERK como descrito no Exemplo 37.
[0895]O tratamento com Herceptina e Her-pertuzumab scFv não teve nenhum efeito sobre os níveis de EGFR em células SK-BR3. HER-EGFR parcialmente subregulou proteína EGFR e degradação quase completa do EGFR foi observada em células tratadas com zicorpos tri-específicos.
Exemplo 42: Zicorpos aumentam potência de MRD
[0896]As experiências seguintes foram realizadas para analisar o efeito que tem sobre a fusão anticorpo MRD potência. Os poços individuais de uma placa de 96 poços foram revestidas com o IGF1R e ErbB2-Fc (HER2) (1 µg/mL) em proporções variáveis. Os poços foram lavados, e, em seguida, diluições em série de zicorpos foram adicionadas na presença de IGF-1 marcado com biotina. Os zicorpos utilizados foram um anticorpo Herceptin contendo um MRD-alvejando IGFR no terminal C da cadeia pesada (HER- IGFR (H)) e um anticorpo Humira contendo um MRD-alvejando IGFR no terminal C da cadeia pesada ( HUM-IGFR (H)). Limite de IGF-1 foi quantificado por adição de HRP-estreptavidina. Os resultados são mostrados na tabela abaixo. Tabela 8: Inibição de IGF-1 Binding IC50 (nM)
[0897]A inibição da ligação de IGF-1 foi semelhante para ambos os zicorpos testados quando as placas não continham Fc-ErbB2 (HER2) (IC50 HER-igfr (H) = 220 nM; IC50 HUM-igfr (H) = 240 nm ). Quando as placas continham tanto o anticorpo alvo e o alvo MRD, ligação a MRD alvo diminuiu drasticamente. Por exemplo, usando o zicorpo HER-igfr (H), inibição de ligação IGF-1 caiu de IC50 = 220 nm, quando o alvo do anticorpo não estava nas placas (razão de IGFR1R: HER2 = 1: 0) para IC50 = 1,44 quando o anticorpo alvo e MRD alvo estavam presentes nas placas, em quantidades equivalentes (razão de IGFR1R: HER2 = 1:1). Os dados indicam que o envolvimento de ambos anticorpo e MRD alvos por HER-igflr (H) aumenta a potência da baixa afinidade IGF-1R MRD> 1000 vezes. Em contraste, este efeito drástico não foi observado quando a mesma experiência foi realizada utilizando um zicorpo contendo o anticorpo Humira, que não se liga a HER2, embora o zicorpo continha a mesma MRD alvejando IGF1R. Assim, zicorpos bi-específicos exibem potência aumentada de MRD através de ligação acionada por avidez heterotípica.
Exemplo 43: Restrição conformacional pode aumentar Ligação a MRD e Estabilidade
[0898]A fim de determinar o efeito das restrições conformacionais em MRDs no contexto de um anticorpo contendo MRD, foram desenvolvidas diversas estruturas de MRD modificadas contendo cisteínas em vários locais. As cisteínas formam ligações de dissulfureto intermoleculares e, consequentemente, contem a conformação tridimensional das proteínas. O MRD que foi alterado nesta experiência foi MPM. A sequência de MPM, que é mostrada na tabela abaixo, é semelhante à sequência do LM32 (descrito acima), mas contém quatro alterações de aminoácidos: M5G, N16Q, L19A, e Q24E. O G na posição cinco em MPM minimiza o potencial de oxidação do resíduo de metionina, e L19A e Q24E remove sequências potencialmente imunogênicas. Nestas experiências, todos os MRDs foram fundidos com o terminal C da cadeia pesada de Herceptin.
[0899]As composições multivalentes e multiespecíficas resultantes (p.ex., anticorpo contendo MRD) foram então testadas quanto à ligação ao alvo e estabilidade. A estabilidade foi determinada por administração do anticorpos contendo MRD por injeção IV a ratos e comparar os níveis de MRD no plasma 15 minutos após a injeção para os níveis de MRD no plasma 2, 3, ou 4 dias pós-injeção. Os resultados são apresentados abaixo na Tabela 9. Tabela 9: Ligação e Estabilidade de MRDs restringidos
[0900]Os resultados demonstraram que a adição de dois resíduos de cisteína fora do domínio de ligação ao alvo núcleo (Exemplo POR, PMDQDEALLY em MPM) de um MRD pode aumentar a meia-vida MRD sem diminuir substancialmente a afinidade de ligação.
[0901]As construções que contêm uma cisteína situada próxima do terminal da molécula (p.ex., cerca de dois aminoácidos de distância a partir do terminal) e uma cisteína localizada na extremidade oposta (p.ex., domínio de ligação ao alvo, pelo menos cerca de 3 ou cerca de 4-7 aminoácidos fora do domínio de ligação de núcleo) e perto da proteína de fusão (p.ex., cerca de 4-6 aminoácidos de distância do ligante ou uma sequência de anticorpo) pode mostrar meia-vida aumentada sem diminuir substancialmente MRD a afinidade de ligação. Além disso, MRDs que incluem cisteínas dentro do local de ligação ao alvo, em particular, sobre uma ou outra extremidade do sítio de ligação ao alvo pode ser MRDs que têm tanto uma elevada estabilidade e eficiente de ligação ao alvo.
[0902]Composições multivalentes e multiespecíficas novas (p.ex., antricorpos contendo MRD) no qual os MRDs têm uma meia-vida in vivo longa e eficiente pode ser identificada por alteração da sequência do MRD a incluir, pelo menos, duas cisteínas. Os resíduos de cisteína podem ter, pelo menos, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 1 1, cerca de 12, cerca de 13, cerca de 14, cerca de 15, cerca de 16, cerca de 17, cerca de 18, cerca de 19, ou cerca de 20 aminoácidos de distância um do outro. A ligação potencial e meia-vida do MRD no anticorpo contendo MRD é avaliada utilizando técnicas conhecidas e os métodos aqui descritos. Anticorpos contendo MRD são administrados a ratos por via intravenosa. O plasma foi recolhido de ratos pouco depois da administração (p.ex., 15 minutos após a administração) e em um ponto de tempo posterior (p.ex., 2, 3, ou 4 dias após a administração). Composições multiespecíficas multivalentes e multiespecíficas úteis (p.ex., anticorpo contendo MRD) que se ligam de forma eficiente, tanto para o alvo e MRD são estáveis in vivo (p.ex., pelo menos cerca de 50% do MRD está presente 48 horas após a administração) são identificados.
Exemplo 44: Anticorpos Contendo MRD para Matar Célula T redirecionada
[0903]As moléculas de fusão anticorpo MRD foram preparadas por fusão de um peptídeo alvejando CD3 a um anticorpo anti-CD 19 e pela fusão de um peptídeo alvejando CD 19 de um anticorpo anti-CD3. Os anticorpos contendo MRD resultante são analisados por análise de citometria de fluxo em células Jurkat CD3-positivas, CMSP humanas e um número de linhas de célula de linfoma de célula B positivo C19 diferente (p.ex., SKW6.4, Blin I, BJAB, Daudi e Raji) para determinar as suas afinidades de ligação específicas para cada alvo. Desde BL60 e as linhas de células de plasmacitoma NCI e L363 são negativos tanto para CD3 e CD19, são utilizadas como células de controle negativo para determinar os anticorpos de especificidade contendo MRD. As células Jurkat CD3-negativas também podem ser usadas como uma população de células de controle negativo. As linhas de células são cultivadas em meio RPMI 1640 completo (Invitrogen) com 10% de FCS (GIBCO).
[0904]As células são lavadas com PBS e bloqueadas por ressuspensão em PBS com 10% humanos IgG (Innovative Research) e 0,1% NaN3 (tampão de bloqueio) durante 30 min a 4 °C. As células são então sedimentadas por centrifugação (100xg durante 5 min) seguido de incubação com o os anticorpos contendo MRD em tampão de bloqueio durante 30 minutos a 4 °C. As células são lavadas três vezes com PBS, e os anticorpos ligados contendo MRD de superfície celular são detectadas. A citometria de fluxo pode ser realizada com um BD FACScan.
Exemplo 45: Citotoxidade In Vitro de Anticorpos Contendo MRD para Matar Célula T redirecionada
[0905]Os anticorpos contendo MRD CD19/CD3 biespecíficos são ensaiados com respeito à sua capacidade para induzir a morte de células T redirecionadas de células de linfoma positivas CD19. As células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) são isoladas como células efetoras de cremes leucocitários frescos de dadores aleatórios, utilizando gradiente de centrifugação Lymphoprep™ (Nycomed/Axis-Shield PoC) a 100xg subsequente para remover as plaquetas. Células B positivas CD 19 estão esgotadas usando Dynabeads® CD 19 Pan B (Life Technologies). As populações de PBMC são analisadas por citometria de fluxo antes e após a depleção de células B positivas CD-19 por marcação com anticorpo de rato conjugado com FITC contra CD19 humano e contra-marcadas com um anticorpo anti-CD45 conjugado com PE. As PBMCs são incubadas durante a noite a 37 ° C sob 5% de CO2. Linhas de células B positivas CD-19 (p.ex., SKW6.4, Blin I, BJAB, Daudi e Raji) foram usadas como células alvo.
[0906]As células alvo foram incubadas em placas de 96 poços, utilizando meio RPMI 1640 completo (Tnvitrogen) com 10% de FCS (GTBCO) com diferentes densidades, de modo que a adição da mesma quantidade PBMC não estimulada resultou nas proporções de célula efetor-a-alvo diferente (E:T). Várias concentrações de anticorpos contendo MRD biespecíficos CD19/CD3 são então adicionados a cada poço, seguido da adição de PBMC não estimuladas. As placas são incubadas a 37 °C sob 5% de CO2 durante 3 horas. A citotoxicidade pode ser medida usando o ensaio de citotoxicidade DELFIA® EuTDA (Perkin Elmer) de placas de 96 poços de fundo redondo de acordo com as instruções do fabricante. Morte celular espontânea é medida por incubação das células alvo sem células efetoras ou anticorpos contendo MRD, e morte celular máxima é determinada por incubação das células alvo com 10% de Triton X-100. A fração de lise celular específica é calculada como a razão entre citotoxicidade mediada por efetor ( [morte celular experimental] - [morte celular espontânea]) e a citotoxicidade máxima esperada ( [morte celular máxima] - [morte celular espontânea]).
Exemplo 45: Eficácia in vivo de anticorpos Contendo MRD para Matar Célula T Redirecionada
[0907]As células de linfoma B de Raji são removidas a partir da cultura de células de rotina, lavadas em PBS, e preparadas como 1 x 107células/ml. Ratos NOD/SCID são então inoculados por via subcutânea com células 1 x 106células Raji com ou sem 5 x 106 PBMC (tal como preparado acima) em uma solução de 50% de Matrigel. Anticorpos contendo MRD Biespecífico CD19/CD3 são administrados por via intravenosa, 1 hora após a inoculação de células de linfoma. Como controles negativos, anticorpos contendo MRD biespecíficos direcionados a HER2 e CD3 (ou seja, uma ligação CD3 ao MRD fundido com um anticorpo anti-HER2 e uma ligação HER2 ao MRD fundido com um anticorpo anti-CD3) e HER 2 e CD19 (isto é, um CD-19 de ligação MRD fundido com um anticorpo anti-HER2 e uma ligação HER2 ao MRD fundido com um anticorpo anti-CD 19) e PBS também são administrados por via intravenosa 1 hora após a inoculação de células de linfoma. Anticorpos contendo MRD ou PBS são administrados uma vez por dia durante quatro dias após a dose inicial. Tumores subcutâneos são medidos com um compasso para determinar a taxa de crescimento para cada grupo de tratamento. O peso corporal dos ratinhos também é determinado duas vezes por semana, como um indicador da tolerabilidade do tratamento.
Exemplo 46: Zicorpos exibindo MRDs agonizando DR5 em estrutura mAb distinda
[0908]Os efeitos citotóxicos de vários zicorpos (isto é, anticorpos contendo MRD) que expressam diferentes valências de um DR5 (TNFRSF10B/TRAILR2) agonizante de MRD foram avaliados em três estruturas mAb diferentes, utilizando um ensaio de viabilidade celular. Resumidamente, diluições em série de oito Zicorpos (5 vezes, começando em 30 mg/mL) foram incubados com 104células COLO-205 em poços de placas de 96 poços, contendo 100 ml de meio RPMI suplementado com FBS a 10%. Após 48 horas a viabilidade celular foi medida por TitcrGlo® celular (Promcga). Os resultados representados na fig. 36A, demonstram que um zicorpo 2xdr51m (H) -TRA tetravalente, contendo quatro cópias do MRD DR5 fundido com a estrutura mAb trastuzumab, demonstrou maior atividade citotóxica em relação aos zicorpos bivalentes dr51m(H)-TRA, dr51m (L) -TRA e TRA-dr51m (H). Estes resultados demonstram que o aumento da valência dos agonistas MRDs DR5 correlaciona com o aumento da morte celular através do receptor do domínio de morte DR5.
[0909]Para investigar ainda mais o papel de valência em citotoxicidade celular mediada por DR5, dois zicorpos octa-valentes (2xdr51m (L) 2xdr51m (H) e -seu 2xdr51m (L) 2xdr51m (H) que compreendem um -PAL trastuzumab e palivizumab estrutura mAb, respectivamente) foram testadas quanto à sua capacidade para matar as células tumorais em comparação com um zicorpo COLO205 tetra-valente de modo idêntico com as mesmas especificidades.
[0910]Os zicorpos octavalentes 2xdr51m (L) 2xdr51m (H) e - 2xdr51m (L) 2xdr51 m (H) -PAL, contendo oito cópias do DR5 MRD, demonstrou maior atividade citotóxica em relação aos zicorpos tetravalentes 2xdr51m (H) - e 2xdr51m (H) -PAL (FIGS. 36B-C). Estes resultados estabelecem adicionalmente a correlação entre aumento de valência de ligação a DR5 e o aumento da atividade citotóxica (isto é, a morte celular).
[0911]Para explorar o efeito de especificidades de ligação não-DR5 adicional sobre a citotoxicidade zicorpos baseados em DR5, o Her2 -alvejando MRD (eb 18) foi fundido com o terminal C da cadeia pesada de trastuzumab, para se obter um zicorpo tri -específico, tetra-valente DR5, 2xDR5 (H) -tra-eb 18 (H). O MRD eb18 foi escolhido porque se liga a HER2 através de um epitopo que é distinto daquele reconhecido por trastuzumab. A segmentação multi-epitópica de HER2 aumentou a citotoxicidade do zicorpo (Fig. 36D). Estes resultados demonstram que um zicorpo capaz de multi-epitópico alvejar receptores não-DR5 (HER2) aumenta a atividade citotóxica de um MRDs alvejando DR5 tetra-valente.
[0912]Para explorar ainda mais o efeito de multi-especificidade na atividade citotóxica de Zicorpos baseados em DR5, o EGFR-alvo MRD (eb13) foi fundido com o terminal C da cadeia pesada do cetuximab (anti-EGFR), para se obter um zicorpo tri-específico, tetra-valente de DR5, 2xDR5 (H) -CET - eb13 (H). O MRD eb13 foi escolhido porque se liga através de um epítopo do EGFR que é diferente daquele reconhecido por cetuximab. O alvejamento multi-epitópico de EGFR aumentou a citotoxicidade do zicorpo (FIG. 36E). Estes resultados demonstram que um zicorpo capaz de alvejamento multi- epitópico de receptores não-DR5 (EGFR) aumenta a atividade citotóxica de um MRD tetra-valente alvejando DR5.
[0913]Para investigar o efeito da especificidade de estrutura MAb da atividade dos zicorpos baseados em DR5, a potência citotóxica de três zicorpos foi comparada, em que cada zicorpo foi construído com os mesmos MRDs DR5-alvo em uma estrutura diferente; cetuximab (CET), o trastuzumab (TRA), e palivizumab (PAL). Os resultados demonstram que a estrutura do zicorpo mAb pode influenciar a potência aparente citotóxica de MRDs alvejando DR5 (Fig. 36F).
Exemplo 47: Especificidade da MRDs ligando a Ang, Ang1, Ang2, e Ang4
[0914]A especificidade de um seleto grupo de ligação aos peptídeos Ang2 exibidos no fago para Ang1, Ang2 e Ang4 foi avaliada em um ELISA de ligação direta. Resumidamente, as placas ELISA foram revestidas com a proteína indicada a 0,1 ug/ml em PBS. As placas foram bloqueadas e os sobrenadantes de fago adicionados a uma diluição de 1: 10 em tampão de bloqueio. Os fagos não ligados foram removidos por lavagem com PBS 0,1% de Tween e fago ligado detectado utilizando um anticorpo monoclonal anti-M13 conjugado com HRP. Os peptídeos testados foram os seguintes: ANG100 (SEQ ID NO: 621), ANG126 (SEQ ID NO: 232); ANG129 (SEQ ID NO: 234); ANG156 (SEQ ID NO: 255); ANG157 (SEQ ID NO: 256); ANG163 (SEQ ID NO: 261); ANG179 (SEQ ID NO: 270); ANG200 (SEQ ID NO: 628); ANG303 (SEQ ID NO: 331); ANG318 (SEQ ID NO: 625); ANG335 (SEQ ID NO: 332); e ANG599 (SEQ ID NO: 367).
[0915]Os dados demonstram que todos os peptídeos de ligação a Ang ligam a Ang2, mas eles diferem na ligação relativa de Ang1 e Ang4 (Fig. 37). Estes dados demonstram que a especificidade fina de peptídeos de ligação a Ang pode diferir de um peptídeo a outro. A reatividade cruzada de MRDs com os membros da família Ang pode ser explorada em doenças caracterizadas pela expressão diferencial membro Ang-família.
Exemplo 48: Identificação de MRDs de ligação Alvo Exemplar
[0916]Os seguintes MRDs de ligação ao alvo exemplares foram identificados utilizando procedimentos essencialmente como aqui descritos.
[0917]Embora a invenção tenha sido descrita com referência aos Exemplos acima, será entendido que modificações e variações estão abrangidas no espírito e ecopo da invenção. Consequentemente, a invenção é apenas limitada pelas reivindicações que se seguem.
[0918]Este pedido reivindica o benefício sob 35 USC § 1 19 (e) dos Pedidos Provisórios Nos. 61/489.249, depositado em 24 de maio de 2011; 61/597.714, depositado em 10 de fevereiro, 2012; e 61/610.831 depositado em 14 março de 2012; cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Além disso, a divulgação do Pedido de Publ. US No. 2012/0100166 é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0919]Todas as publicações, patentes, pedidos de patentes, sites da Internet, e os números de acesso/sequências de bancos de dados (incluindo tanto polinucleotídeo e sequências polipeptídicas) citados são aqui incorporados por referência na sua totalidade para todos os fins na mesma medida como se cada publicação individual, patente, pedido de patente, o site da Internet, ou número de acesso/sequência de banco de dados foram especificamente e individualmente indicados para serem assim incorporados por referência.

Claims (6)

1. Domínio de reconhecimento modular (MRD) CARACTERIZADO pelo fato de que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3109.
2. Complexo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende o MRD, como definido na reivindicação 1 e cetuximabe.
3. Uso do complexo, como definido na reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para inibir a angiogênese em um paciente.
4. Uso do complexo, como definido na reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com câncer.
5. Uso do complexo, como definido na reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o medicamento é para uso em combinação com um inibidor de proteína quinase.
6. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende o complexo, como definido na reivindicação 2.
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